FR 2162076 A1 19730713 FR 7242454 A 19721129 La présente invention concerne de nouveaux complexes d'amphotéricine B comprenant 1 - de l'amphotéricine B et un anion acide, 2 - de l'amphotéricine B et au calcium, et 3 - de l'amphvtéricine B, un anion acide et un ion calcium. L'amphotériciiue B est un polyène macrolide possèdant des propriétés antiforgiques. On l'obtient par cuíture d'un organisme et extraction à partir de cette : ture. L'amphotéricine B est essentiellement une lactone macrocyclique dr poids oleculaire élevé, appelée plus souvent macrolide, possédant un groupe chromophore constitué de quatre à sept doubles liaisons conjuguées. Outre le noyau lactone de taille élevée, l'amphotéricine B possède d'autres groupes caractéristiqus et en particulier un groupe sucre aminé. On peut trouver une étude générale des antibiotiques du type macrolides dans l'ouvrage de Kirk-Othmer, Encyclopedia of Chemical Technology, Seconde Edition, Volume 12, pages 632 et suivantes, une discussion générale sur les antibiotiques du type polyènes se trouvant également dans le même ouvrage, Volume 16, pages 133 et suivantes. Bien que l'on ait reconnu à l'amphotéricine B des caractéristiques intéressantes, en particulier des propriétés antifongiques puissantes et une difficulté apparente deschamp4pcnsà développer rapidement des souches ou formes résistant à l'amphotéricine B, son utilisation a été limitée par une absence de solubilité dans l'eau convenable des formes de l'amphotéricine B qui sont par ailleurs stables et intéressantes. L'invention a par conséquent pour objet une forme plus soluble de l'amphotéricine B. L'invention concerne également une forme d'amphotéricine B stable à la fois à sec et en solution. L'invention concerne en outre un procédé de préparation de ces nouvelles formes d'amphotéricine B. Ces objets de l'invention et d'autres encore apparaitront à la lecture de la description ci-après. L'invention concerne de nouvelles formes solubles d'amphotéricine B, qui sont vraisemblablement des complexes. I - Le premier type d'amphotéricine B stabilisée et solubilisée comprend de l'amphotéricine B et un anion d'un acide mono- ou polycarboxylique organique comportant jusqu'a' 20 atomes de carbone. A titre d'exemples d'acides, on peut citer les acides acétique, oxalique, propanoique, malonique, méthyl-2 propanorque, butanoique, succinique, diméthyl-2,2 butanoique, fumarique, cLtriqt, malt lue, glutarique, pentanoique, hexanoique, octanoique, nonoique, décanoique, undécanotque, dodécanoique, palmitique, ricinoléique, oléique, stéarique et éthylènediaminetetracétique. On peut préparer ce type d'amphotéricine B par addition de l'acide carboxylique organique, ou d'un sel soluble de cet acide, à une solution alcoolique pratiquement anhydre (ne contenant pas plus de 1 % d'eau environ) d'amphotéricine. On utilise de préférence le méthanol comme alcool, mais on peut utiliser n'importe quel alcool soluble dans l'eau ou miscible à l'eau. On agite pendant peu de temps, par exemple pendant 2 à 30 mn environ, le mélange dtamphotéricine B et de l'acide carboxylique organique (contenant un excès d'acide, par exemple 0,5 à 20 moles environ d'acide par mole d'amphotéricine B) et on ajuste ensuite le pH jusqu'à neutralité. On chauffe alors le mélange modérément à 35-65"C environ, en mélangeant pendant 30 mn à 2 h environ. Puis on réajuste le pH à neutralité et on refroidit le mélange lentement, en 30 mn à 4 h environ. On filtre le solide et on le sèche. II - Le second type d'amphotéricine B comprend l'amphotéricine et un ion calcium. Ce type d'amphotericine B solubilisée et stabilisée peut être obtend par addition d'ions Ca à une solution alcoolique pratiquement anhydre (ne contenant pas plus de 1 % d'eau environ) d'amphotéricine B et en suivant le mode opératoire du paragraphe I ci-dessus. On peut ajouter les ions calcium sous forme d'un sel soluble tel que par exemple CaC12. On ajoute les ions calcium à raison de 0,2 à 0,8 ion-gramme environ par mole d'amphotéricine, et de préférence à raison de 0,4 à 0,6 ion-gramme/mole d'amphotéricine B et mieux encore à raison de 0,5 ion-gramme environ par mole d'amphotéricine B. III - Le troisième type d'amphotéricine B comprend l'amphotéricine B, un ion Ca et l'anion d'un acide carboxylique organique comportant jusqu'à 20 atomes de carbone Ce type d'amphotericine B stabilisée et solubilisée peut être obtenu par addition du calcium et de l'acide carboxylique organique à une solution alcoolique pratiquement anhydre (ne contenant pas plus de 1 7 d'eau environ) d'amphotéricine B et en suivant le mode opératoire donné dans le paragraphe I ci-dessus. L'acide peut être employé tel quel ou sous forme d'un sel de métal alcalin ou alcalino-terreux soluble.On ajoute ie calcium dans les quantités indiquées dans le paragraphe II cidessus pour une mole d'amphotéricine B et l'acide carboxylique organique en excès, en utilisant par exemple 0,5 à 20 moles d'acide environ par mole d'amphotéricine B, comme il est indiqué dans le paragraphe I ci-dessus. Le complexe de métal alcalino-terreux de l'amphotéricine B conserve l'activité antifongique de l'amphotéricine B, est stable à sec et soluble dans l'eau. Un avantage particulier du complexe de métal alcalinoterreux est qu'il permet la préparation de solutions aqueuses plus concentrées pouvant être ut: isées telles quelles ou traitées. Ces solutions aqueuses concentrées peuvent être utilisées pour contrôler la population fongique dans l'appareil digestif de la volaille par addition à l'eau de boisson, par exemple à une concentration de 2 à 28 g environ par litre. fies complexes d'amphotéricine B selon l'invention sont solubles dans l'eau à la fois dans des conditions fortement acides et fortement alcalines, mais ont une solubilité moindre pour un pu neutre ou proche de la neutralité. La solubilité maximale des complexes de l'amphotéricine B selon l'invention se manifeste à pH 2 environ et à pH 10 environ. Les complexes selon l'invention sont moins solubles dans le méthanol que 1'amphotéricine B. 40 mg des complexes selon l'invention sont solubles dans 750 ml de méthanol tandis que 100 mg d'amphotéricine B sont solubles dans 750-ml de méthanol. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée. EXEMPLE 1 Complexe amphotéricine-calcium-acide oxalique 717 g d'une poudre mycélienne d'amphotéricine B brute contenant 35,0 g de substance active et 0,85 % de calcium sont solubilisés dans 14 litres de méthanol à l'aide de 39,9 ml d'HCl 6 N. On filtre la solution. A cette solution (contenant 32,6 g de substance active), on ajoute 163 ml de méthanol contenant 35,0 g d'acide oxalique. Le pH est de 2,1. Au bout de 5 mn d'agitation, on ajoute 51 ml d'ammoniaque concentrée pour ajuster le pH à 7,0. On chauffe alors le mélange à 45-500C et on maintient en suspension pendant 1 h. On ajuste le pH (6,6) à 7,0 en ajoutant encore de l'ammoniaque concentrée. On refroidit alors le mélange à température ambiante, en 2 h, on filtre etoniehe le gâteau de filtration humide (95 g)sous vide à 45-50 C pendant une nuit pour obtenir 33,1 g de complexe cristallin. Ce complexe a une solubilité dans l'eau d 3,44 g/l à pH 2. Ce complexe présente une bande d'absorption dans l'infrarouge à 6,2-6,3 /u et possede un diagramme de diffraction des rayons X.On confirme la présence d'acide oxalique par chromatographie sur couche mince de cellulose microcristalline du type "Avicel" dans un système pentanol-l-HCOOH-H2 O (20 : 20 . 1) avec visualisation à la lumière ultraviolette (R.- = 0,2) 100 mg du complexe ci-dessus ajoutés à 750 ml de méthanol se solubilisent à 40 =/5. Au contraire, 100 mg d'amphotéricine B sont totalement solubies dans 750 ml de méthanol, Lorsque l'on ajoute 100 mg de ce complexe à 80 ml de méthanol et que l'on ajuste le pH 1 9,5 (avec de la triéthylamine), on constate une solubilité de 35 %; au cûr-rare, 100 mg d'amphotéricine B sont totalement solubles dans 80 ml de méthanol. EXEMPLE ' Amphotéricine-anion acide On solubilise 42,64 g d'amphotéricine B contenant 40,0 g de substance active dans 10,0 1 de méthanol à l'aide de 7,0 ml d'HC1 5,8 N. On filtre la solution. A cette solution on ajoute une solution de 400 ml de méthanol contenant 40 g d'acide succinique. Le pH tombe à 4,05 et on l'ajuste à 7,0 à i' aide de 29,6 ml d'ammoniaque concentrée. La suspension de cristaux formée est chauffée à 45-50"C, maintenue en suspension pendant 60 mn, refroidie à température ambiante pendant 2 h, filtrée et séchée pendant une nuit à 45-500C. Le complexe cristallin obtenu pèse 34,2 g. Ce complexe a une solubilité dans l'eau de 28,0 g/l à pH 2. Par ailleurs, l'amphotéricine B a une solubilité dans l'eau inférieure à l g/l à pH 2. Le diagramme de rayons X est analogue à celui du complexe de l'exemple 1. Lorsque l'on ajoute 100 mg de ce complexe à 80 ml de méthanol et que l'on ajuste le pH à 9,5 (avec de la triéthylamine), on constate une solubilité de 35 %, tandis que 100 mg d'amphotéricine B sont totalement solubles dans 80 ml de méthanol. EXEMPLE 3 Complexe amphotéricine-calcium On solubilise 134,0 g de poudre mycélienne d'amphotéricine B brute contenant 7,0 g de substance active et 0,85 % de calcium dans 2,8 1 de méthanol anhydre avec 7,2 ml d'HCl 5,8 N à pH 4,0. On filtre les matières solides et on ajuste le pH du filtrat à 2,1 à l'aide de 0,95 ml d'HCl 5,8 N puis on ajuste le pH à 7,0 à l'aide d'ammoniaque concentrée. La suspension de cristaux tormée est chauffée à 45-50"C, maintenue en suspension pendant O mn, refroidie à température ambiante pendant 2 h, filtrée et séchée pendant une nuit à 45-50CC. Le complexe cristallin obtenu pèse 5,84 g et a une teneur en calcium de 0,49 %. Ce complexe a une solubilité dans l'eau de 2,96g/l à pH 2. Par ailleurs, l'amphotéricine B a une solubilité dans l'eau inférieure à 1 g/l à pH 2. Lorsque l'on ajoute 100 mg de ce complexe à 80 ml de méthanol et que l'on ajuste le pH a 9,5 (avec de la triéthylamine), on constate une solubilité de 17 70, tandis que 100 mg d'amphotéricine B sont totalement solubles dans 80 ml de méthanol. REVENDICATIONS 1 - Nouveau complexe d'amphotéricine B caractérisé en ce qu'il comprend environ 1 mole d'amphotéricine B et 0,5 à 20 ions-grammes environ d'un anion dérivé d'un acide carboxylique alcanoique organique comportant jusqu'à 20 atomes de carbone, d'un acide alcanoique hydroxylé comportant jusqu'à 20 atomes de carbone ou d'un acide alkylènediaminetétracétique dans I.equti t le radical alkylène est en C2-C4. Complexe d'amphotéricine B, caractérisé en ce qu'il contient environ 1 mole d'amphotéricine B et 0,2 à 0,8 ion-gramme d'ion calcium. 3 - Complexe d'amphotéricine B selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il contient 0,4 à 0,6 ion-gramme d'ion calcium par mole d'ampho téricine. 4 - Complexe d'amphotéricine B selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient 0,2 à 0,8 ion-gramme environ d'ion calcium par mole d'amphotéricine. 5 - Complexe d'amphotéricine B selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'il contient 0,4 à 0,6 ion-gramme environ d'ion calcium par mole d 'amphotéricine B. 6 - Complexe d'amphotéricine B selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on le prépare par réaction d'une mole environ d'amphotéricine B avec 0,5 à 20 moles environ d'un acide carboxylique organique. 7 - Procédé de préparation d'un complexe d'amphotéricine B contenant de l'amphotéricine B, 1'anion d'un acide mono- ou polycarboxylique ayant jusqu'à 20 atomes de carbone et/u un ion calcium, caractérisé en ce que l'on fait réagir de l'amphotéricine B avec un acide mono- ou polycarboxylique organique ayant jusqu'à 20 atomes de carbone ou avec une source d'ions calcium,ou avec ces deux substances précitées. 8 - Nouveaux médicaments utilcs notamment comme agents antifongiques caractérisés en ce qu'ils consistent en complexesd'amphotéricine B selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 9 - Compositions pharmaceutiques caractérisées en ce quelles comprennent comme ingrédient actif l'un au moins des médicaments selon la revendication 8 en association avec un excipient pharmaceutiquement acceptable. 10 - Formes pharmaceutiques appropriées à l'administration des compositions selon la revendication 9.