FR 2125423 A1 19720929 FR 7204739 A 19720211 a présente invention concerne un nouvel antibiotique, appelé antibiotique YA 56, et son procédé de préparation. Elle concerne en outre la production par fermentation, la concentration et la séparation de cet antibiotique et la préparation de ses sels. De plus, elle concerne les antibiotiques sous la forme diluée, la forme de concentrés bruts et la formeure. L'antibiotique YA 56 de la présente invention inhibe efficacement la croissance de bactéries Gram-positives, de bactéries Gram-négatives et de tumeurs animales telles que le carcinome d'Ehrlich. Parmi les souches productrices de YA 56de la présente invention, on mentionne la souche Streptomyces Sp. MCRL 0387 qui a été isolée d'un échantillon de sol recueilli à Taipei, République de Chine (Formose). les caractéristiques de morphologie, de culture et de physiologie ont permis de reconnaître que cette souche est une forme variante de Streptom;yces humidus. Comme autre exemple de souches produisant l'antibiotique YA 56 de la présente invention, on mentionne Streptomyces sp. NCRt 0432 qui est une forme mutante obtenue par irradiation ultraviolette de Streptomyces sp.MCRI 0387. Des cultures viables de 8treptomyces sp. MCRL 0387 et de Streptom:yces Sp. MCRL 0432 ont été déposées dans la collection de cultures des services de recherche agronomique (Agricultural Research Service Culture Collection) du Ministère de l'Agriculture des Etats-Unis d'Amérique, Peoria, Illinois, Etats-Unis d':Améri- que, où elles ont été enregistrées sousles N01NRRII 3885 et respectivement NRRL 3886. Ces souches présentent les caractéristiques microbiologiques suivantes Caractéristiques morphologiques Ces caractéristiques ont été observées conformément à la méthode de Sharling et Gottlieb "International Journal of Systematic 3acte-rioloty", volume 16, pages 314-340 (1966). les résultats sont les suivants Streptomyces sp. Ir.CRL 0387 se développe convenablement et forme des mycéliums aériens pulvérulents de couleur grisâtre sur divers milieux. Sur le milieu gélosé à l'extrait de levure et l'extrait de malt ou sur le milieu gélosé à la farine d'avoine, des taches noires humides (hygroscopiques) sont formées dans les mycéliums aériens, et ces taches s'étendent parfois sur toute la surface. A l'examen microscopique, on constate que les mycéliums aériens forment des spirales ouvertes, non verticilliées. tes conidiospores sont formés en chalnes d'au moins 10 spores ovales phalangioformes de 0,8-1,0 micron x 1,2-1,4 micron. La surface des spores est lisse. Streptomyces sp. MCRL 0432 se développe bien sur divers milieux et ses mycéliums aériens pulvérulents bleuissent à maturité. A l'examen microscopique, on constate que les mycéliums forment des spirales nettes, non verticilliées. tes conidiospores sont disposées en chaines d'au moins 10 spores ovales. La surface des spores est lisse. tes mycéliums aériens de Streptomyces sp. MCRt 0432 n'ont pas de caractère hygroscopique, sur aucun milieu. Température et plI de développement tes souches sont aérobies et se développent bien à 370C dans la gamme de pH de 6,0 à 8,0. Toutefois, aucun développement ne peut Qtre observé à une température inférieure à 100C et supérieure à 500C, quel que soit le pH, et à un pH égal à 4,quellepue soit la température. Caractéristiques de culture On observe ces caractéristiques après culture de chacune des souches pendant trois semaines sur des milieux expérimentaux décrits dans le "Manual of Patent Examining Proceeding" du Japon, section "Industry of Applied Microbiology". tes résultats sont donnés sur le tableau I. te nom de la teinte et le numéro entre parenthèses correspondent à la terminologie utilisée dans "Color Harmony Manual", 4ème Edition, publié par la 1,Container Corporation of America". TABLEAU T Milieu ( C) Souches MCRL 0387 MCRL 0432 Gélose au I. Incolore, Incolore, saccharose et au transparente transparente nitrate de sodium (270C) II. Blanc brunâtre Incolore (ivoire clair 2ca) III. Pulvérulente, Pulvérulente, gris-brun (cen- blanche dres: 5fe) avec des mouchetures blanches IV. Pas de production Pas de production Gélose au glu- I. Incolore, Jaune pale cose et à l'as- transparente (ivoire : 2db) paragine (27 C) II. Blanc brunâtre Jaune pale (ivoire clair : (bambou : 2fb) 2ca) III. Pulvérulente, Pulvérulente, gris à gris-brun blanc bleuatre (cendres : Sfe) (gris d'eau : 19dc) IV. Pas de production Pas de production Gélose au gly- I.Incolore à jaune Jaune pâle cérol et à l'as- pâle (1 ca) (ivoire : 2db) paragine (27 OC) II. Jaune pile (bam- Jaune pâle bou : 2fb) (ivoire : 2db) III. Pulvérulente, Pulvérulente, gris d'argent gris (e) (3fe) IV. Pas de production Pas de production Gélose à 1'ami- I. Incolore, trans- Incolore don et aux sels parente minéraux (270C) II, Jaune pale (par- Vert-jaune pâle chemin: : 1 (24 1/2dc) 1/2db) TABLEAU I (suite) Milieu (OC) SoucheS NCRt 0387 MCRI 0432 III. Pulvérulente, Pulvérulente, gris-brun blanc bleuâtre (bois de rose : (gris d'eau : 19dc) 5ge) avec mou chetures blanc ches IV. Pas de production Pas de production Gélose à la I.Jaune pale (per- Brun (brun épice tyrosine le : 2ba) clair : 4 lg) vert olive foncé (24 t/2 pn) au centre de la co lonie II. Vert grisâtre Brun (5ng) (vert gui : 24 (1/21i) III. Pulvérulente, Pulvérulente, gris-brun vert-jaune pâle (cendres : 5fe) (24 1/2dc) IV. Pas de production Pas de production Gélose nutri- I. Vert-jaune pâle Incolore à jaune tive (37 C) (jaune pastel : pale (perle 1db) 2 Ba) II. Jaune pale (pas- Gris jaunâtre tel : 1 1/2fb) (teinte jaune à jaune pâle 1ba) (bambou: 2fb) III.Pulvérulente, Gris jaunâtre gris-brun (cen- (teinte jaune dre : 5fe) avec 1 ba) mouchetures blan ches IV. Pas de production Pas de production Gélose à la I. Jaune pale (bambou: Incolore à jaune levure et au 2gc) pale (invoire maltose (270C) 2db) IIOJaune pale (bambou: Vert jaunatre 2fb) pale (mastic 1 1/2ec) TABLEAU I (suite) Milieu , ( C ) Souches MCRL 0387 MCRL 0432 III. Pulvérulente, Pulvérulente, gris-brun (cen- gris-vert clair dres : 5fe). tes (gris baie de colonies devien- laurier : 22fe) nent humides et présentent des masses graisseu ses foncées de spores IV. Pas de production Pas de production Gélose à la I. Incolore à jaune Jaune pâle (ivoire farine d'avoine pâle (1 ca) 2db) (270C) II. Jaune pâle Gris-brun clair (froment clair : (mastic : 1dc) 2ea) III.Pulvérulente, Pulvérulente, blanc gris-brun (cen- bleuté (gris d'eau dres : 5 fe). 19dc tes colonies deviennent hu mides et pré sentent des mas ses de spores graisseuses et foncées IV. Pas de production Pas de production Remarque : I : couleur de la surface des mycéliums du substrat II : couleur de ltenvers de la colonie III : couleur de la colonie IV : pigment soluble Caractéristiques physiologiques es caractéristiques sont indiquées sur le tableau II. TABlEAU II Souches MCRL 0387 MCRT 0432 tiqué faction de la gélatine Positive Positive Hydrolyse de l'amidon Positive Positive Coagulation du lait écrémé Positive Po sitive Peptonisation du lait écrémé Positive Négative Formation d'un pigment analogue à la mélanine i) sur milieu gélosé à la tyrosine Négative Négative ii) sur milieu gélosé à la peptone, à la levure et au fer Négative Négative Assimilation des sources de carbone L'assimilation des sources de carbone par les souches a été examinée conformément à la méthode de Pridham et Gottlieb. Les résultats sont donnés sur le Tableau III. TABlEAU III Sources de carbone Souches MCRt 0387 MCRS 0432 tarabinose + + D-xylose + D-glucose + + D-fructose + + Saccharose + Inositol + + t-rhamnose + Raffinose + D-mannitol + + Remarque + : assimilation positive - : pas d'assimilation Si l'on considère le fait caractéristique que les mycéliums aériens de Streptomyces sp. NCRt 0387 s'humidifient progressivement pendant la culture et présentent une masse foncée et graisseuse (hygroscopique) de spores, on doit ranger cette souche dans le groupe de Streptomyces hygroscopicus. D'après H. D. Tresner et Alma Dietz, les souches de ce groupe sont encore divisées en deux groupes, à savoir les souches du type Streptomyces h:s,groscopicus et les souches du type Streptomyces platensis, d'après la micromorphologie de leurs spores ('tApplied Microbiology, volume 15, pages 637-639 (1967) ibid., volume 16, pages 935-941 (1968)). D'après la propriété susmentionnée des souches de l'invention, Streptomyces sp. MCRI 0387 est définie comme étant une souche du type Streptomyces platensis. La souche Streptomyces humidus, connue pour sa production de dihydrostreptomycine ou d'humidine, est également une souche du type Streptomyces Platensis. Ainsi, les caractéristiques microbiologiques de Streptomyces sp. MCRt 0387 ont été comparées avec celles de Streptomyces humidus décrites dans le brevet japonais N 12 647/1960. On les a comparées également avec celles de la culture authentique ISP-5263 de Streptomyces humidus.On a constaté que Streptomyces sp. MCRt 0387 et Streptomyces humidus présentent beaucoup d'analogie dans leurs caractéristiques microbiologiques, excepté que Streptomyces sp. MCRl 0387 ne produit pas de dihydrostreptomycine ni d'humidine. Par conséquent, Streptomyces sp. MCRl 0387 a été déterminée comme souche variante de Streptomyces humidus. Par ailleurs, attendu que Streptomyces sp. MCRl 0432 peut former des spirales des mycéliums aériens de couleur bleue, cette forme mutante appartient également à un groupe dtactino- mycètes de type non chromogène. Toutefois, étant donné que les mycéliuns aériens de cette forme mutante ntont~pas de caractère hygroscopique, sur quelque milieu que ce soit, Streptomyces sp. MCRI 0432 ne peut plus outre rangé dans le groupe de Streptomyces hygroscopicus. On doit en même temps remarquer que le caractère hygroscopique des mycéliums aériens de Streptomyces sp. MCRI 0387 est susceptible de disparaître lorsque la souche est cultivée successivement pendant plusieurs générations, bien que cette caractéristique soit nettement observée dans la souche d'origine isolée d'un échantillon de sol. De plus, on doit remarquer que la forme mutante ou variante naturelle ou artificielle de Streptomyces sp. MCRI 0387 ou Streptomyces sp. MCRI 0432 peut à l'occasion former des mycéliums aériens blancs, perdre son aptitude à former des mycéliums aériens ou produire un pigment soluble. Ainsi, il y a lieu de remarquer que la présente invention n'est pas limitée à l'utilisation de Streptomyces sp. MCRI 0387 et Streptomyces sp. MCRL 0432, mais couvre également les formes mutantes ou variantes naturelles ou artificielles de ces souches. De plus, on doit remarquer que toutes les formes mutantes ou variantes, naturelles ou artificielles de Streptomyces sp. MCRI 0387 ou Streptomyces sp. MCRL 0432, lorsqu'elles produisent l'antibiotique YA 56, sont englobées dans l'expression "souche productrice de YA 56 de Streptomyces humidus" ou toute expression équivalente de la présente invention. Conformément à ltinvention, le nouvel antibiotique YA 56 peut être préparé par fermentation d'une souche productrice de YA 56 de Streptomyces humidus, par exemple la souche Streptomyces sp. NCH 0387, la souche Streptomyces sp. MCPt 0432 ou leur forme mutante ou variante dans des conditions aérobies dans un milieu nutritif aqueux, l'antibiotique étant ensuite isolé du bouillon de fermentation. La fermentation peut être conduite en culture sous agitation par secousses ou en culture submergée dans des conditions aérobies. Comme composants du milieu nutritif, on peut utiliser les sources classiques auxquelles on a eu recours dans la culture d'un actino.mycète . Par exemple, la peptone, ltextrait de viande, la levure, l'extrait soluble de mais, la farine de graine de coton, la poudre de graine de soja, la poudre d'arachide, l'hydrolysat de protéine, des nitrates minéraux et le sulfate d'ammonium conviennent comme sources d'azote. Des exemples de sources convenables de carbone comprennent le glucose, le lactose, le maltose, l'amidon, le glycérol et l'iuile de graine de soja.Des exemples de sources convenables d'éléments minéraux comprennent le chlorure, les phosphates et les sulfates de sodium et le carbonate de calcium. Une petite quantité de soufre et/ou d'un ion de métal lourd tel que l'ion cuivre peut être ajoutée au milieu de fermentation. La présence de l'ion cuivre dans le milieu améliore de façon particulièrement efficace le rendement en antibiotique YA 56. Lorsque la fermentation est effectuée en culture submergée, on peut encore ajouter au milieu de fermentation un agent anti-mousse tel qu'une huile de silicone, une huile végétale, une huile minérale ou un agent tensioactif.On préfère conduire la fermentation à un pH voisin de la neutralité et à une température de 25 à 350C, notamment de 27 à 30 C. Pendant le cours de la fermentation, la concentration de l'activité antibiotique dans le milieu de fermentation peut être aisément déterminée au moyen de la méthode à la plaque à cuvettes, en utilisant Bacillus subtilis ou Escherichia coli. te rendement maximal de l'antibiotique YA 56 peut être obtenu au bout d'environ 5 à 8 jours de fermentation. t'antibiotique YA 56 est accumulé, principalement,dans la partie liquide du bouillon de fermentation. Par conséquent, après le développement des micro-organismes, les-mycéliums et les autres composants solides sont éliminés du bouillon de fermentation par filtration et/ou centrifugation, en utilisant, le cas échéant, de la terre de diatomées comme auxiliaire de filtration. te filtrat,ou la solution surnageante, est adsorbé sur une matière adsorbante telle que le charbon activé ou la bentonite, ou introduit dans une colonne de résine d'échan.E- de cations fables telle que le copolymère d'acide méthacrylique et de divinylbenzne fabriqué par la firme Rohm & Ilaas Co. ttd. et vendu sous le nom de "Amberlite IRC-50", ou une colonne de résine non ionique telle qu'une résine à matrice poreuse (fabriquée par la firme Diamond Shamrock Chemical Company et vendue sous le nom de "Duolite S-30") ou un copolymère de méthacrylate et de divinylbenzène (fabriqué par la firme Mitsubishi Chemical Industries ttd. et vendu sous le nom de "High porous polymer HP-20").Ensuite, la matière adsorbante ou la colonne est éluée avec un solvant approprié. Lorsqu'on utilise le charbon activé, la bentonite ou la résine à matrice poreuse comme matière adsorbante, un mélange (pH 1,2) d'acide chlorhydrique aqueux 0,1 N et de méthanol convient comme solvant d'élut ion. Par contre, lorsqu'on utilise le copolymère d'acide méthacrylique et de divinylbenzène, une solution alcaline faible (par exemple une solution aqueuse à 10 ffi de bicarbonate de sodium ou à 10 % de carbonate de sodium) ou une solution acide (par exemple une solution aqueuse d'acide chlorhydrique de pH égal à 2,0 ou un mélange à un pH de 1,2, d'acide chlorhydrique aqueux 0,1 N et d'acétone) peut outre utilisée comme solvant d'élution. te pH de l'éluat ainsi obtenu est ajusté à la neutralité ou à une valeur légèrement alcaline et l'éluat est concentré sous pression réduite. On obtient par lyophilisation de la solution concentrée, une poudre brute de l'antibiotique YA 56. A titre de variante, l'antibiotique YA 56 peut entre séparé par addition de méthanol à la solution concentrée, élimination des matières insolubles puis mélange de la solution concentrée avec de l'acétone pour précipiter la pouire/brute de 11 antibiotique. La purification de l'antibiotique brut peut ètre effectuée par chromatographie sur alumine ou par addition d'un solvant approprié à la solution de l'antibiotique brut. A titre de variante, la purification de l'antibiotique brut peut outre effectuée par filtration sur gel en utilisant un polysaccharide réticulé non ionique tel que le dextrane réticulé (fabriqué par la firme Pharmacia Fine Chemical Co. et vendu sous le nom de "Sephadex G-15") ou un dextrane réticulé alkylé (fabriqué par la m8me firme et vendu sous le nom due " SephadexLH-20"). Si la fermentation conforme à l'invention est conduite en présence de l'ion cuivre, l'antibiotique YA 56 est également obtenu sous la forme d'un chélate de cuivre. Dans ce cas, l'élimination de l'ion cuivre de l'antibiotique YA 56 peut être effectuée aisément par traitement chimique, par exemple par traitement du chélate de cuivre avec l'hydrogène sulfuré. t'antibiotique YA acide la présente invention contient principalement deux composants : YA 56-X et YA 56-Y. Ceci peut etre démontré par le fait que l'antibiotique YA 56, sous la forme du chlorhydrate ou de la base libre,peut etre divisé en deux taches de R f égaux à 0,30 (composant X) et à 0,45 (composant Y) sur papier chromatographique développé avec un mélange de n-butanol:pyridine:acide acétique:eau (15:10:3:12) (chromatographie ascendante ; la détection est effectuée par essai biologique en utilisant Bacillus subtilis). tes proportions de ces deux composants peuvent varier en fonction de la souche productrice de YA 56 utilisée et/ou des conditions de fermentation, d'extraction ou de purification, mais le composant Y est en général contenu dans un rapport de moins de 40 parties en poids pour 100 parties en poids du composant X. La séparation de l'antibiotique YA 56 en chacun de ses composants (c'est-à-dire YA 56-X et YA 56-Y) peut autre effectuée par filtration su/gel, par exemple en utilisant un dextrane réticulé, par chromatographie sur papier ou par une combinaison de ces procédés. Par exemple, l'antibiotique YA 56 (chélate de cuivre) est adsorbé sur une colonne de dextrane réticulée (préalablement lavée avec un acide) et lss colonne est éluée avec une solution aqueuse de chlorure de sodium 0,2 M. Dans ce cas, l'antibiotique YA 56 (chélate de cuivre) est divisé en deux zones de couleur bleue sur la colonne. Ainsi, lorsqu'on élue encore la colonne avec la même solution de chlorure de sodium que précédemment, les éluats contenant YA 56-X puis les éluats contenant YA 56-Y sont obtenus respectivement. Par lyophilisation des éluats contenant YA 5G-X ou YA 56-Y, on obtient une poudre de l'antibiotique correspondant sous la forme du chélate de cuivre. A titre de variante, l'antibiotique YA 56 (chélate de cuivre) peut être divisé en chacun de ses composants par chromatoeraphie sur papier, avec développement au moyen d'un mélange de n-butanol:pyridine:acide acétique:eau (15:10:3:12). Dans ce dernier cas, on isole YA 56-X (chélate de cuivre) et YA 56-Y (chélate de cuivre) des taches de valeurs respectives de Rf égales à 0,3 et 0,45, par élution de chacune des taches avec de l'eau, puis lyophilisation de l'éluat. En répétant la chromatographie sur colonne de chacun de ces composants, sur une colonne de dextrane réticulé ou de dextrane réticulé alkylé, on peut les isoler dans un état pur. En outre, l'élimination de l'ion cuivre de chacun de ces composants est facile à effectuer par traitement du chélate de cuivre correspondant avec l'hydrogène sulfuré. tes propriétés physicochimiques des antibiotiques ainsi obtenus sont données ci-après (1) Aspect tes antibiotiques YA 56, YA 56-X et YA 56-Y se présentent tous sous la forme d'une poudre amorphe blanche (2) Point de fusion YA 56 (chlorhydrate) : 182-1920C (décomposition) YA 56-X (chlorhydrate) : 198-2020C (décomposition) YA 56-Y : 188-197 C (décomposition) (3) Analyse L'analyse élémentaire des antibiotiques est indiquée sur le tableau IV. TABlEAU IV YA 56-X YA 56-Y YA 56 (chlorhydrate) (chlorhy drate) Carbone 42,93 + 1,0 42,85 + 1,0 44,08 - 45,37 Hydrogène 5,73 + 0,5 5,55 + 0,5 6,03 - 6,22 Azote 16,14 + 0,5 14,64 + 0,5 15,35 - 16,40 Soufre 4,85 + 0,5 3,57 + 0,5 2,57 - 4,44 Chlore 2,75 + 0,5 Traces 0,51 - 3,87 Teneur en cendres 0 0 1,25 - 2,01 (4) Poids moléculaire et formule moléculaire Etant donné que YA 56-X et YA 56-Y ont un poids moléculaire élevé et qu'ils ntont pas été obtenus sous la forme cristalline pure, il est difficile de déterminer le poids moléculaire et la formule moléculaire de ces composants. En outre, si lton considère les résultats de l'analyse élémentaire mentionnée ci-dessus, le poids moléculaire de YA 56-X et celui de YA 56-Y pourraient être représentés respectivement par (1800 - 2200)n et (1500 - 2000)n, n étant un nombre entier. (5) Spectre d'absorption de la lumière ultraviolette (dans l'eau) YA 56-X présente des bandes maximales d'absorption à 234,5 m (E11cm % = 155,9) et 295 m (E11 %cm = 36,9) ... Voir figure 1. YA 56-Y présente des bandes d'absorption maximale à 240-241 m (E11 cm% = 117,5) et 297 m (E11cm% = 36,4) ... voir figure 2. YA-56 présente une absorption maximale à 235-136 m E11cm% = 116 - 170) et 295 m (21 % = 27-37). (6) Spectre d'absorption infrarouge (dans la paraffine liquide) YA 56-X : figure 3 3300,1700 (épaulement), 1645, 1545, 1410, 1140, 1113, 1065, 1030, 995 cm YA 56-Y : figure 4 3230, 1690 (épaulement), 1640, 1545, 1410, 1155, 1110, 1065, 1025, 1000 cm-1 YA 56 : 3230, 1700 (épaulement), 1642, 1545, -1 1140, 1110, 1065, 1030, 995 cm (7) Solubilité YA 56, YA 56-X et YA 56-Y sont tous très solubles dans liteau, solubles dans le méthanol, légèrement solubles dans méthanol et insolubles dans d'autres solvants organiques. (8) Réaction colorée Les résultats sont indiqués sur le tableau V. TABlEAU V YA 56-X YA 56-Y YA 56 Réaction de Molish Positive Positive Positive Réaction à l'anthrone " " " Réaction de Dragendorff " " " Réaction d'Ehrlich " t, " Réaction de Sakaguchi Négative Négative Réaction de Pauly Positive Positive Positive Réaction du biuret Négative Négative Négative Réaction à la ninhydrine 11 Il Il Réaction d'Elson-Morgan " " " Réaction au chlorure ferrique " " 'I Réaction à la liqueur de Fehling " " " Réaction de Tollens " " " Solution de permanganate de potassium Décolora- Décolora- Dé colora- tion tion tion (9) Stabilité l'activité (%) des antibiotiques, après conservation à 250C,est indiquée sur le tableau VI. TABLEAU VI Composant Activité, %, après conser vation pendant 15 30 60 120 180 240 mn mn mn mn mn mn (pH 2,0) 85 58 45 30 25 25 YA 56-X (pH 9,0) 100 99 91 91 88 71 (pH 2,0) 100 85 63 25 17 12 YA 56-Y (pH 56-Y (pH 9,0) 93 91 83 80 75 70 Remarques pH 2,0 : te pH de la solution aqueuse de l'antibiotique est ajusté à 2,0 avec de l'acide chlorhydrique îN. Au bout d'une période déterminée de temps, indiquée sur le tableau VI, le pH de la solution est ajusté à 7,0 avec une solution d'hydroxyde de sodium 1N, puis l'activité de l'antibiotique dans ladite solution est mesurée. pH 9,0 : t'antibiotique est dissous dans une solution tampon à l'acide borique. Au bout d'une période déterminée de temps indiquée sur le tableau VI, le pH de la solution est ajusté à 7,0 avec une solution tampon à l'acide phosphorique (pH 7,0) puis l'activité de l'antibiotique dans ladite solution est mesurée. (10) tes valeurs de R f des antibiotiques obtenus par chromatographie sur papier (méthode ascendante) en utilisant le papier-filtre Toyo NO 51 A sont indiquées sur le tableau VII. La détection a été effectuée par un essai biologique en utilisant Bacillus subtilis ou Escherichia coli. TABLEAU VIII Solvant YA 56-X YA 56-Y YA 56 n-butanol saturé d'eau 0,00 0,00 0,00 Acétone : eau (1:1) 0,05 0,05 0,05 Phénol : eau (3:1) 0,93 0,93 0,93 n-butanol:méthanol:eau (4:1:2) 0,10 0,10 0,10 n-butanol:méthanol: eau:hélianthine (40 ml:10ml:20 ml:1,5g) 0,47 0,47 0,47 benzène:eau (4:1) 0,03 0,03 0,03 n-butanol:pyridine:acide acétique: eau (15:10:3:12) 0,30 0,45 0,30 0,45 n-butanol:acide acétique :eau (4:1:5) (on utilise la phase supérieure) 0,23 0,31 0,23 0,31 0,0 fo 0,05 0,05 0,05 1,0 fo 0,82 0,49 0,82 Solution aqueuse de chlorure 0,49 d' ammonium 2,0 % 0,85 0,54 0,85 0,54 5,0 % 0,90 0,61 0+90 0,61 10 % 0,93 0,63 0,93 0,63 20 fo 0,98 0,67 0,98 0,67 (11) Formation d'un sel tes antibiotiques YA 56, YA 56-X et YA 56-Y sont basiques et peuvent être transformés d'une manière classique en leurs sels d'addition d'acides.Par exemple, les sels d'addition d'acides minéraux tels que le chlorhydrate, le bromhydrate, le sulfate et le phosphate, et les sels d'addi tion d'acides organiques tels que l'acétate, le pyruvate, le tartrate, le succinate, le malonate et l'aspartate, sont faciles à obtenir lorsqu'on utilise l'acide minéral ou organique correspondant. (12) Composé de chélation les propriétés physicochimiques des antibiotiques sous la forme du chélate de cuivre sont les suivantes YA 56-X (chlorhydrate du chélate de cuivre) : le spectre d'absorption de la lumière ultra-violette et le spectre d'absorp- tion infrarouge du composé sont indiqués sur les figures 5 et respectivement 6. le chromatogramme du composé, établi par chromatographie sur papier et développé au moyen d'une solution aqueuse de chlo-rure d'ammonium, est indiqué sur la figure 7. YA 56-Y (chélate de cuivre) : le spectre d'absorption de la lumière ultra-violette et le spectre d'absorption infrarouge du composé sont indiqués sur les figures 8 et respectivement 9. te chromatogramme sur papier de ce composé, développé au moyen d'une solution aqueuse de chlorure d'ammonium, est indiqué sur la figure 10. (13) Analyse des amino-acides les antibiotiques YA 56-X et YA 56-Y sont hydrolysés à l'acide chlorhydrique 61 tes amino-acides entrant dans la composition de lthydrolysat sont titrés par chromatographie sur papier et au moyen d'un auto-analyseur d!aminoacides. On constate que ces antibiotiques se composent de diverses substances dont la réaction à la ninhydrine est positive. En outre, on ne trouve aucune trace de thréonine dans les hydrolysats, bien que les structures chimiques de la plupart des hydrolysats n'aient pas été déterminées avec certitude. L'activité biologique des antibiotiques est la suivante (1) loxicité La toxicité aiguë des antibiotiques de la présente invention est relativement faible. Par exemple, lorsquton administre l'antibiotique YA 56, YA 56-X ou YA 56-Y par voie intraveineuse à une dose de 50 mg/kg à des souris, on n'observe aucun cas mortel, mdme 30 jours après l'administration. (2) Activité contre les tumeurs animales les antibiotiques de la présente invention exercent une puissante activité anti-tumorale contre les tumeurs animales expérimentales. Par exemple, le développement de l'ascite tumorale chez la souris est totalement inhibé lorsque l'antibiotique YA 56-X est administré par voie intrapéritonéale à des souris à une dose de 3,2 mg/kg/jour pendant cinq jours après l'implantation intrapéritonéale du carcinome d'ascite de Frlich auxdites souris.t'antibiotique YA 56-Y inhibe également la croissance de l'ascite tumorale chez les souris par injection quotidienne du composé à une dose de 6,3 mg/kg. D'autre part, l'antibiotique YA 56 est administré à une chienne batarde dont le vagin est atteint d'une tumeur vénérienne à croissance spontanée. te médicament est administré par voie intraveineuse à une dose de 5 mg/kg deux fois par semaine pendant une période de quatre semaines. La tumeur a disparu trente jours après la fin de l'administration. (3) Activité contre les cellules de Hela tes antibiotiques YA 56, YA 56-X et YA 56-Y provoquent la dégénérescence des cellules de Hela à une dose de 6,25 llg/ml. (4) Spectre antibactérien tes antibiotiques YA 56, YA 56-X et YA 56-Y exercent leur activité contre divers micro-organismes. l'activité antimicrobienne in vitro des antibiotiques, déterminée par la méthode de double-dilutions en série est indiquée sur le tableau VIII. tes résultats sont basés sur l'activité après 24 heures d'incubation0 TABLEAU VIII Organismes Milieu Concentration inhibi trice minimale ( g/ml) YA 56-X YA 56-Y Staphylococcus aureus FDA-209P I 12,5 0,78 Staphylococcus aureus FDA-209P, Jc-1 I 12,5 0,78 Staphylococcus aureus Terashima I 6,25 1,56 Staphylococcus aureus Smith I 12,5 1,56 Streptococcus hemolyticus II > 100 > 25 Diplococcus pneumoniae II > 100 > 25 Corynebacterium diphtaeriae Pard William II 3,12 0,39 Hemophilus pertussis II 1,56 3,12 Neisseria meningitidis 69480 II 3,12 3,12 Neisseria gonorrhoeae Yoshioka II 1,56 0,78 Bacillus subtilis PCI-21 9 I 0,19 0,04 Esoherichia coli NIHJ Jc-2 I 0,39 12,5 Shigella flexneri 2a I 0,19 3,12 Salmonella typhi T-58 I 25 3,12 Proteus vulgaris I 0,39 > 25 Xlebsiella pneumonie I 0,39 1,56 Pseudomonas aeruginosa I 12,5 > 25 Mycobacterium tubeculosis H37RV III 0,39 0,19 Remarques Milieu I : Milieu gélosé à l'infusion de coeur Milieu Il : Milieu gélosé à l'infusion de coeur, contenant 10 fo de sérum de cheval Milieu III : Milieu de Kironner En se basant sur l'ouvrage de Umezawa, intitulé "Index of Antibiotics from Actinomycetes" (University Park Press, Pennsylvanie, Etats-Unis d'Amérique, 1967), les antibiotiques YA 56, YA 56-X et YA 56-Y se rangent dans le même groupe que la Phléomycine (brevetsfjaponais NO 1965/1961 et NO 10697/1961) et la bléomycine (brevet japonais NO 8117/1965). Comme décrit dans ces brevets japonais, ces antibiotiques connus sont produits par Streptomyces verticillus (actinomycète formant des verticilles) et on les isole du bouillon de fermentation sous la forme d'un mélange de plusieurs ingrédients actifs. En outre, lorsqu'on compare les antibiotiques de la présente invention avec ces antibiotiques connus, on constate que les antibiotiques YA 56, YA 56-X et YA 56-Y ont une grande analogie avec la bléomycine en ce qui concerne leurs propriétés biologiques, tandis qu'ils sont analogues à la phléomycine en ce qui concerne leurs propriétés physicochimiques. Toutefois, conformément à l'index d'Umezawa, la bléomycine contient de la thréomycine parmi ses constituants.Ainsi, les antibiotiques de la présente invention diffèrent nettement de la bléomycine en ce que la thréonine nta pas été décelée dans les hydrolysats des antibiotiques YA 56-X et YA 56-Y. Bien quton ne dispose pas d'informations détaillées sur la structure chimique de la phléomycine, les antibiotiques de la présente invention peuvent en outre distingués sur la base des faits suivants. Premièrement, on sait que la réaction de Molisch appliquée à la phléomycine est négative ("Journal of Antibiotics", volume 12, 1950, pages 285-289 ; Ibid., volume 17 (1964), pages 194-199), tandis que les antibiotiques YA 56, YA 56-X et YA 56-Y ont une réaction de Molisch positive. Deuxièmement, la phléomycine est décelée à un Rf de 0,55-0,70 ou sous la forme de deux à six taches ayant une valeur de R f in férieure à 0,81, sur papier chromatographique développé au moyen d'une solution aqueuse à 10 54 de chlorure d'ammonium, l'antibiotique YA 56-X ayant une valeur de Rf de 0,93 dans les m8mes conditions. ta valeur de Rf de l'antibiotique YA 56-Y dans les conditions indiquées ci-dessus est identique à celle de la phléomycine. Toutefois, l'antibiotique YA 56-Y peut aussi etre différencié de la phléomycine par développement du papier chromatographique au moyen du mélange de n-butanol: pyridine:acide acétique eau (15:10:3:12).En fait; tandis que l'antibiotique YA 56-Y est décelé à une valeur de R de 0,45 sur le papier chromatographique, la phléomycine est décelée sous la forme d'une tache (queue) de Rf égal à 0,37, dans les mimes conditions. D'après ce qui précède, les antibiotiques YA 56, YA 56-X et YA 56-Y sont nettement différents de la bléomycine et de la phléomycine. les exemples suivants illustrent la mise en oeuvre pratique et actuellement préférée de la présente invention. Dans ces exemples, l'activité est mesurée par la méthode. biologique à la plaque à cuvettes en utilisant Bacillus subtilis ou Escherichia coli comme micro-organisme sensible. lorsqu'on utilise E. coli comme micro-organisme, on estime l'activité avec un échantillon de YA 56-X pur (chlorhydrate) à 1000 pg/mg (dans ce cas, l'activité d'un échantillon de YA 56-Y pur correspond à 4 g/mg). Par ailleurs, lorsqu'on utilise B. subtilis, on estime l'activité au moyen d'un échantillon de YA 56-Y pur, à 1000 ilg/mg (dans ce cas, l'activité d'un échantillon de de-YA 56-X pur correspond à 960 pg/mg. Exemple 1 (Culture) On charge 100 mI d'un milieu nutritif aqueux contenant 3,0 cgo d'amidon, 4,0 f de farine de graine de coton, 0,2 % d'extrait de levure, 0,5 % de chlorure de sodium, 0,3 % de carbonate de calcium et 0,002 ç de sulfate cuivrique dans une ficle de 500 ml qu'on agite par secousses. On stérilise le milieu et on inocule dans ce dernier, dans des conditions aseptiques, le micro-organisme Streptomyces sp. MCRI 0387. On effectue la culture à 270C pendant 48 heures sous agitation par secousses. On charge 15 litres d'un milieu nutritif aqueux contenant les ingrédients indiqués ci-dessus dans un appareil de fermentation d'une contenance de 30 litres et on stérilise le milieu à 1200C pendant 20 minutes par autoclavage. On inocule au milieu, dans des conditions aseptiques, 0,1 litre du milieu de fermentation obtenu dans ltopération précédente. On cultive le milieu à 270C pendant 48 heures sous aération et sous agitation. On obtient ainsi 15 litres d'une culture d'ensemencement. On charge dans une cuve de fermentation de 2000 litres, 1500 litres d'un milieu nutritif aqueux contenant 10 % d'une dextrine, 2,0 % de farine de graine de coton, 0,3 % de carbonate de calcium, 0,5 5t0 de chlorure de sodium et 0,002 ffi de sulfate cuivrique. On stérilise le milieu à 12O0C pendant 20 minutes par autoclavage. Après refroidissement, on inocule dans des conditions aseptiques 15 litres de la culture d'ensemencement dans le milieu, et on cultive ce dernier pendant 165 heures. On effectue la culture à 25-300C sous aération (670-800 litres/mn) et sous agitation à 225 tr/mn, cependant qu'on maintient la pression interne à 0,5 bar. le bouillon de fermentation ainsi obtenu a une activité totale de 1550 x 107 llg lorsqu'on utilise E. coli comme microorganisme d'essai et une activité totale de 285 x 103 g lorsqu'on utilise B. subtilis comme micro-organisme. Exemple 2 (Extraction et séparation de l'antibiotique YA 56 (chélate de cuivre)). On ajuste à 6,8 le pH du bouillon de fermentation obtenu dans l'exemple 1 et on filtre ce bouillon à l'aide de terre de diatomées. es composants solides sont lavés à l'eau. te filtrat et les eaux de lavage sont rassemblées. la solution obtenue est versée sur une colonne de 20 litres de résine à matrice poreuse (fabriquée par la firme Diamond Shamrock Chemical Company et vendue sous le nom de "Duolite S-30"), chargée dans un tube en acier inoxydable (28 cm x 200 cm). les ingrédients actifs sont adsorbés sur la résine. Après passage de la solution sur la colonne, cette dernière est lavée avec 200 litres d'eau et 50 litres d'acétone aqueuse à 80 %. Ensuite, la colonne est éluée avec 100 litres d'un mélange d'acide chlorhydrique 0,1 N et d'acétone (2:8). On ajuste le pH de l'élut à 6,5-6,8 avec une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium 55. On concentre ltéluat sous pression réduite puis on le lyophilise.On obtient 210 g de l'antibiotique YA 56 brut (chlorhydrate du chélate de cuivre) sous la forme-d'une poudre brune. On extrait 210 g de l'antibiotique brut avec 0,5 litre de méthanol, à trois reprises. On rassemble les extraits méthanoliques. Ensuite, on concentre la solution rassemblée à 0,8 litre sous pression réduite. On ajoute 9 litres d'acétone à la solution concentrée et on recueille par filtration la poudre précipitée (55 g). On dissout la poudre dans 100 ml d'eau. On verse la solution aqueuse sur une colonne (8 cm x 200 cm)de 7,5 kg d'oxyde d'alumine. Par développement de la colonne avec de l'eau, on obtient 250 ml d'une première fraction (fraction I), 1320 ml d'une deuxième fraction (fraction I::) et 10730 ml d'une troisième fraction (fraction III), comme effluents successifs. Parmi les fractions mentionnées ci-dessus, ltantibiotique est principalement élué dans la deuxième. Ainsi, on ajuste à 6,5-6,8 le pH de la fraction II avec de l'acide chlorhydrique 1 N, puis on lyophilise cette fraction. On obtient ainsi une poudre de couleur vert bleuâtre qu'on extrait avec 125 ml de méthanol. L'extrait méthanolique est concentré à 50 ml sous pression réduite. ta solution concentrée est versée sur ure colonne (5 cm x 135 cm)- de dextrane réticulé alkylé (fabriqué par la firme Pharmacia Fine Chemical CO. et vendu sous le nom de "Sephadex IJI-20"). En développant la colonne avec du méthanol, on obtient succes siveent,comme effluents, 550 ml d'une première fraction (fraction IV), 250 ml d'une deuxième fraction (fraction V) et 1670 ml d'une troisième fraction (fraction VI). La fraction V, avec laquelle l'antibiotique est principalement élué, est concentré à 95 ml sous pression réduite. Après l'addition dtun excès d'acétone à la solution concentrée, on recueille par centrifugation les précipités résultants et on les sèche, en sorte qu'on obtient 1,5 g d'une poudre de couleur bleue. On soumet de nouveau la poudre à une chromatographie sur colonne de dextrane réticulé alkylé (fabriqué par la firme Pharmacia Fine Chemical Co. et vendu sous le nom de "Sephadex tH-20"), en utilisant le méthanol comme solvant. On concentre à 30 ml sous pression réduite 70 ml de l'éluat ainsi obtenu. On ajoute à la solution concentrée un excès d'acétone et on recueille par centrifugation les précipités résultants. On obtient 500 mg d'une poudre bleue de l'antibiotique YA 56 (hydrochlorhydrate du chélate de cuivre). La poudre a une activité de 877 g/mg lorsqu'on utilise B. coli comme micro-organisme d'essai et une activité de 239 ,ug/mg lorsqu'on utilise B. subtilis. On rassemble les fractions I, III, IV et VI obtenues dans les opérations mentionnées ci-dessus. Ensuite, on soumet la solution rassemblée à une chromatographie sur colonnes, à savoir sur une colonne d'oxyde d'aluminium, une colonne de dextrane réticulé ("Sephadex G-15" de la firme Pharmacia Fine Chemical Co.) et une colonne de dextrane réticulé alkylé ("Sephadex I;H-20" de la même firme), successivement. On traite de la même manière l'éluat ainsi obtenu. On obtient 370 mg de l'antibiotique YA 56 (chlorhydrate du chélate de cuivre. L'antibiotique ainsi obtenu a une activité de 1000 sug/mg lorsqu'on utilise E. coli comme micro-organisme d'essai et une activité de 65,3 ,ug/mg lorsqu'on utilise B. subtilis. Exemple 3 (Séparation et purification de l'antibiotique YA 56) On dissout 800 mg de l'antibiotique YA 56 (chlorhydrate du chélate de cuivre) obtenu dans l'exemple 2 dans 55 ml de méthanol absolu, et on introduit dans la solution de l'hy- drogène sulfuré gazeux anhydre pendant 4-5 mn à la température ambiante. te précipité brun obtenu est séparé par centrifugation. Le filtrat jaune pâle est évaporé sous pression réduite, pour chasser le méthanol. le résidu ainsi obtenu est séché sous vide jusqu'à ce qu'il ne se dégage plus d'odeur d'hydrogène sulfuré. te résidu séché est dissous dans 25 ml de méthanol et on ajoute à la solution sept fois son volume d'acétone. te précipité blanc résultant est recueilli par filtration, lavé à l'acétone et séché. On dissout dans 15 ml de méthanol 0,7 g de la poudre blanche ainsi obtenue. On verse la solution méthanolique sur une colonne (5 cm x 135 cm) de dextrane réticulé alkylé ("Sephadex lH-20" de la firme Pharmacia Fine Chemical Co). On élue la colonne avec du méthanol et on recueille 370 ml de la fraction montrant une activité biologique. les fractions ainsi recueillies sont rassemblées et concentrées à 20 ml sous pression réduite. On ajoute à la solution concentrée 150 ml d'acétone. te précipité blanc résultant est recueilli par centrifugation et séché. On obtient 580 mg du chlorhydrate de l'antibiotique YA 56 sous la forme d'une poudre blanche. Exemple 4 (Séparation et purification de l'antibiotique YA 56-X) On fait bouillir pendant deux heures avec deux litres d'acide chlorhydrique 1N 2,4 litres de dextrane réticulé ("Sephadex G-1 51 de la firme Pharmacia Fine Chemical Co.). Après refroidissement, on lave le gel de dextrane avec de l'eau jusqutà ce que l'eau de lavage ait un pH de 6,2 environ. Ensuite, on charge le gel de dextrane dans un tube de 5 cm de diamètre et de 135 cm de hauteur. On dissout 1,78 g de l'antibiotique YA 56 (chlorhydrate de chélate de cuivre) obtenu dans l'exemple 2, dans une solution aqueuse de chlorure de sodium 0,02 il et on verse la solution sur la colonne susmentionnée de gel de dextrane.Par développement de la colonne avec une solution aqueuse 0,2 M de chlorure de sodium, on obtient respectivement 245 ml de la fraction contenant llan- tibiotique YA 56-X puis 1400 ml de la fraction contenant l'aqtibiotiq-le YA 56-Yo On obtient 1 ,21 g de poudre bleue par lyophilisation de 245 ml de la fraction contenant l'antibiotique YA 56-X, ta poudre contient une faible quantité de chlorure de sodium. Ainsi, on dissout la poudre dans 18 ml d'un mélange de méthanol et d'eau (5:1) et on verse la solution sur une colonne de 2,4 litres de dextrane réticulé alkylé ("Sephadex SH-20" de la firme Pharmacia Fine Chemical Co.) . Par développement de la colonne au méthanol, on obtient 190 ml de la fraction bleue douée d'activité biologique. ta fraction ainsi recueillie est concentrée à 20 ml sous pression réduite. On ajoute cinq fois son volume d'acétone à la solution concentrée pour précipiter une poudre bleue0 La poudre (237 mg sous la forme sèche) est recueillie par centrifugation puis dissoute dans 5 ml de méthanol. La solution méthanolique est de nouveau soumise à une chromatographie sur colonne de dextrane réticulé ("Sephadex G-15" de la firme Pharmacia Fine Chemical Co.) en utilisant le méthanol comme solvant.La fraction de R f égale à 0,30, comme déterminé sur papier chromatographique (solvant:n-butanol:pyridine:acide acétique:eau = 15:10:3:12) est recueillie. La solution recueillie est concentrée sous pression réduite. On ajoute un excès d'acétone à la solution concentrée. te précipité résultant est recueilli par filtration puis séché. On obtient 167 mg d'une poudre bleue de l'antibiotique YA 56-X (chlorhydrate du chélate de cuivre). On dissout 150 mg de l'antibiotique YA 56-X (chlorhydrate du chélate de cuivre) dans 15 ml de méthanol absolu et on introduit dans la solution, à la température ambiante, de l'hydrogène sulfuré gazeux anhydre. On recueille par centrifugation le précipité brun résultant. On évapore le filtrat jaune pâle sous pression réduite pour chasser le méthanol. Après séchage sous vide, on soumet le résidu à une chromatographie sur une colonne de dextrane réticulé alkylé ("Sephadex LH-20" de la firme Pharmacia Fine Chemical Co.) en utilisant le méthanol comme solvant. On recueille la fraction présentant l'activité biologique. On ajoute à la solution recueillie un excès d'acétone. On recueille par centrifugation le précipité blanc résultant, on le lave à l'acétone puis on le sèche. On obtient 97,5 mg de l'antibiotique YA 56-X (chlorhydrate) sous la forme d'une poudre blanche. Exemple 5 (Séparation et purification de l'antibiotique YA 56-Y) On lyophilise 1400 ml de la fraction contenant l'anti- biotique YA 56-Y, obtenue dans l'exemple 4, pour former 5,5 g d'une poudre bleue. Cette poudre contient une petite quantité de chlorure de sodium. On dissout la poudre dans 30 ml d'un mélange de méthanol et d'eau (5:1) et on verse la solution sur une colonne (5 cm x 135 cm) de dextrane réticulé alkylé (Sephadex IE-20" de la firme Pharmacia Fine Chemical Co.). En éluant la colonne avec du méthanol, on obtient 300 ml d'une fraction bleue douée d'activité biologique. la fraction ainsi recueillie est concentrée à 30 ml sous pression réduite.On ajoute 200 ml d'acétone à la solution concentrée et on recueille par centrifugation la poudre bleue précipitée. la poudre bleue ainsi obtenue (400 mg sous la forme séchée) est purifiée par chromatographie sur une colonne de dextrane réticulé (vendu sous le nom de "Sephadex G-I 5" par la firme Pharmacia Fine Chemical Co.) puis sur une colonne de dextrane réticulé alkylé (vendu sous le nom de "Sephadex tH-20" par la même firme), comme décrit dans l'exemple 4. On obtient 78 mg de l'antibiotique YA 56-Y (chélate de cuivre). On dissout 60 mg de l'antibiotique YA 56-Y (chélate de cuivre) dans 6 ml de méthanol absolu, et on introduit dans la solution, à la température ambiante, de l'hydrogène sulfuré gazeux anhydre. On sépare par centrifugation les précipités bruns résultants.On évapore le filtrat jaune pâle sous pression réduite pour chasser le méthanol et on sèche le résidu sous vide. te résidu séché est dissous dans 2,5 ml de méthanol. On ajoute à la solution 20 ml d'acétone. te précipité blanc résultant est recueilli par centrifugation, lavé à l,acéofle puis séché ; on obtient ainsi 58 mg d'une poudre blanche. On dissout la poudre blanche dans 1,5 ml de méthanol. On soumet la solution mthanolique à une chromatographie sur colore e (1,8 cm x 90 cm) de dextrane réticulé alkylé (vendu sous le nom de "ephadex tH-20" par la firme Pharmacia Fine Chemical Co.) en utilisant le méthanol comme solvant. On rassemble les fractions de Rf égal à 0,45 dans la chromatographie sur papier (solvant, n-butanol:pyridine: acide acétique: eau = 15:10:3:12). On ajoute un excès d'acétone aux fractions rassemblées. On recueille par centrifugation les précipités résultants, on les lave à l'acétone puis on les sèche. On obtient 34,4 mg de l'antibiotique YA 56-Y sous la forme d'une poudre blanche RE'SrE ND IC AT IORS 1. Procédé de production de l'antibiotique YA 56, caractérisé par le fait qu'il consiste à cultiver une souche productrice de YA 56 de Streptomyces humidus dans un milieu nutritif aqueux dans des conditions aérobies pour produire un bouillon de fermentation, puis à isoler cet antibiotique du bouillon. 2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que la souche produisant l'antibiotique YA 56 est une souche de Streptomvces humidus var. sp. MCRI 0387 ou 0432. 3. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que la culture est effectuée à un pH voisin de la neutralité. 4. Procédé suivant la rçvendication 1, caractérisé par le fait que la culture est effectuée entre 25 et 350C. 5. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que la culture est effectuée dans un milieu nutritif aqueux contenant des sources de carbone assimilable, d'azote assimilable et de sels minéraux. 6. Procédé de production de l'antibiotique YA 56, caractérisé par le fait qu'il consiste à cultiver une souche productrice de YA 56 de Streptomyces humidus dans un milieu nutritif aqueux contenant des sources de carbone assimilable, d'azote assimilable et de sels minéraux à un pH voisin de la neutralité et à 25-35 C dans des conditions aérobies, le cas échéant en présence d'ions cuivre, pour produire un bouillon de fermentation, puis à isoler cet antibiotique du brouillon. 7. Procédé suivant l'une des revendicationl et 6, caractérisé par le fait coton isole l'antibiotique du bouillon de fermentation par filtration ou centrifugation de ce bouillon, introduction du filtrat ou de la solution surnageante dans une colonne de résine d'échange cationique faible ou d'un adsorbant choisi entre le carbone activé, la bentonite, une résine à matrice poreuse et un copolymère de méthacrylate et de divinyl benzène, puis extraction de l'antibiotique de la résine ou de l'adsorbant. 8. Procédé suivant la revendication 7, caractérisé par le fait qu'on soumet ensuite l'antibiotique à une chromatographie sur colonne d'oxyde d'alumine, de dextrane réticulé ou de dextrane réticulé alkylé, puis on récupère l'antibiotique retenu sur la colonne. 9. Procédé suivant l'une des revendications 7 et 8, caractérisé par le fait qu'on soumet ensuite l'antibiotique à une chromatographie sur colonne de dextrane réticulé pour séparer l'antibiotique YA 56 en deux composants YA 56-X et YA 56-Y, puis à isoler chacun des composants de la colonne par élut ion avec une solution aqueuse de chlorure de sodium. 10. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 7 à 9, caractérisé par le fait que l'antibiotique ou les antibiotiques séparés sous la forme de chélate de cuivre sont ensuite traités avec de l'hydrogène sulfuré pour en éliminer l'ion cuivre. 11. Un antibiotique, YA 56, particulièrement efficace pour inhiber la croissance de bactéries Gram-positives, de bactéries Gram-négatives et de tumeurs animales, caractérisé par le fait qu'il se présente sous la forme d'une poudre amorphe blanche ayant les propriétés suivantes : il a un pH alcalin et des bandes d'absorption maximale dans l'ultra-violet à 235-236 mu (: m 116-170) et à 295 mll (E1 5tm 27-30) cm des bandes d'absorption infrarouge à 3230, 1700 (épaulement), -1 1642, 1545, 1140, 1110, 1065, 1030 et 995 cm ; il est très le dans soluble dans lteau,soluble dans/méthanol et peu soluble/l'éthanol il donne un résultat positif dans la réaction de Molisch, la réaction à l'anthrone, la réaction de Dragendorff, la réaction d'Ehrlich et la réaction de Pauly et un résultat négatif dans la réaction au biuret, la réaction à la ninhidrine, la réaction d'Elson-Morgan, la réaction au chlorure ferrique, la réaction à la liqueur de Fehling et la réaction de Tollens ; il décolore une solution aqueuse de permanganate de potassium ; dans la chromatographie sur papier, il a des valeurs de R f de 0,05 (solvant:acétone-eau (1:1)), 0,93 (solvant phénol-eau (3:1)), 0,10 (solvant : n-butanol-eau (4:1:2)), 0,47 (solvant : n-butanol-méthanol-eau-hélianthine (40 ml 10 ml:20 ml:1,5 g)), 0,03 (solvant : benzène-eau (4:1)), 0,30 et 0,45 (solvant : n-butanol-pyridine-acide acétique-eau (15:10:3:12)), 0,23 et 0,31 (solvant : n-butanol:acide acétique: eau (4:1:5)) et 0, 93 et 0,63 (solvant : chlorure d'ammonium en solution aqueuse à 10 %) ; en outre, son sel d'addition d'acide chlorhydrique a un point de fusion de 182-4 92 0C (décomposition) et contient du carbone, de l'hydrogène, de l'azote, du soufre et du chlore dans les proportions suivantes exprimées en poids Carbone 44,1 à 45,4 % Hydrogène 6,0 à 6,2 % Azote 15,4 à 16,4 % Soufre 2,6 à 4,4 Vo Chlore 0,5 à 3,9 % 12.Antibiotique YA 56-X, particulièrement efficace pour inhiber la croissance de bactéries Gram-positives, de bactéries Gram-négatives et de tumeurs animales, caractérisé par le fait qu'il se présente sous la forme d'une poudre amorphe blanche et qu'il a les propriétés suivantes son pH est alcalin, et il présente des bandes d'absorption maximale à 234,5 m (E11cm% 155,9) et 295 m (E11cm% 36,9) ; il présente des bandes d'absorption infrarouge à 3300, 1700 (épaulement), 1645, 1545, 1410, 1140, 1113, 1065, 1030 et 995 cm ; il est très soluble dans l'eau, soluble dans le méthanol et peu soluble dans méthanol; il donne des résultats positifs dans la réaction de Molisch, la réaction à l'anthrone, la réaction de Dragendorff, la réaction d'Ehrlich et la réaction de Pauly et des résultats négatifs dans la réaction de Sakaguchi, la réaction au biuret, la réaction à la ninhydrine la réaction d'Elson-crgan , la réaction au chlorure ferrique, la réaction à la liqueur de Fehling et la réaction de Tollens il décolore use solution aqueuse de permanganate de potassium dans la cllromatographie sur papier, il a des valeurs de Rf de 0,05 (solvant : acétone-eau (1:1)), 0,93 (solvant : phénoleau (3:1)), 0,10 (solvant : n-butanol-méthanol-eau (4:1:2)), 0,47 (solvant : n-butanol-méthanol-eau-hélianthine (40 ml:10 ml: 20 ml:1,5 g)), 0,03 (solvant : benzène-eau (4:1)), 0,30 (solvant n-butanol-pyridine-acide acétique-eau (15:10:3:2)), 0,23 (solvant : n-butanol-acide acétique-eau (4:1:5)) et 0,93 (solvant chlorure d'ammonium en solution aqueuse à 10 fo) ; son sel d'addition d'acide chlorhydrique a un point de fusion de 198-2020C (décomposition) et il contient les éléments carbone, hydrogène, azote, soufre et chlore dans les proportions suivantes en poids Carbone 42,9 Vo Hydrogène 5,7 Vo Azote 16,1 Vo Soufre 4,9 % Chlore 2,8 ffi 13.Antibiotique YA 56-Y, particulièrement efficace pour inhiber la croissance de bactéries Gram-positives, de bactéries Gram-négatives et de tumeurs animales, caractérisé amorphe par le fait qu'il se présente sous la forme d'une poudre blanche / et qu'il a les propriétés suivantes : son pH est alcalin et il présente des bandes d'absorption maximale à 240-241 m (E11cm% 117,5) et 297 m (E11cm % 36,4) ; il présente des bandes d'absorption infrarouge à 3230, 1690 (épaulement), -1 1640, 1542, 1410, 1155, 1110, 1065, 1025 et 1000 cm ; il est très soluble dans l'eau, soluble dans le méthanol et peu soluble dans méthanol ; il donne des résultats positifs dans la réaction de Molisch, la réaction à l'anthrone, la réaction de Dragendorff, la réaction d'Ehrlich et la réaction de Pauly, et des résultats négatifs dans la réaction de Sakaguchi, la réaction du biuret, la réaction à la ninhidrine, la réaction d'Elson-Morgan , la réaction au chlorure ferrique, la réaction à la liqueur ae Fehling et la réaction de Tollens, il décolore une solution aqueuse de permanganate de potassium ; dans la chrotrtographie sur papier, il a des valeurs de Rf de 0,05 (sol vant : acétone-eau (1:1)), 0,93 (solvant : phénol-eau (3:1)), 0,10 (solvant:n-butanol-néthanol-eau (4:1:2)), 0,47 (solvant: n-butanol-méthanol-eau-liélianthine (40 ml:10 ml:20 ml:1,5 g)), 0,03 (solvant : benzène-eau (4:1)), 0,45 (solvant :n-butanol- pyridine-acide acétique-eau (15:10:3:12)), 0,31 (solvant n-butanol-acide acétique-eau (4:1:5)) et 0,63 (solvant solution aqueuse à 10 ó de chlorure d'ammonium) ; il a un carbone point de fusion de 188-19700 (décomposition)et contient les éléme.sj hydrogène, azote et soufre dans les proportions suivantes en poids Carbone 42,6 % Hydrogène 5,6 f Azote 14,6 Vo Soufre 3,6 % 14. Un sel d'addition d'acide de la substance de base suivant l'une des revendications 11, 12 et 13. 15. Un sel d'addition d'acide chlorhydrique de la substance de base suivant l'une des revendications 11 et 12. 16. Un chélate de cuivre suivant l'une quelconque des revendications 11 à 15.