FR 2070133 A1 19710910 FR 7037300 A 19701015 70 373C!) î 2070133 Plusieurs procédés pour extraire des substances anticancérigènes à partir des basidiocarpes de certaines espèces de basidiomycètes ont été décrits, par exemple, dans les demandes de brevets au Japon publiées sous les n" 18196/1962, 16048/1968 5 et 25563/1968. Cependant, ces procédés possèdent l'inconvénient qu'il est difficile de produire en grosse quantité cette substance cancérigène lorsque les basidiocarpes sont utilisés comme produit de base. La présente invention concerne une substance compor-10 tant un polysaccharide possédant une activité anticancérigène et elle concerne un procédé pour la production de cette substance. Le mot "polysaccharide" désigne ici non seulement un polysaccharide lui-même mais aussi un complexe polysaccharide-protéine (mucopolysaccharide;. 15 La substance contenant le polysaccharide suivant la présente invention est extraite à partir d'un mycélium d'une espèce appartenant aux basidiomycètes ou à partir d'un bouillon de culture de l'espèce appartenant aux basidiomycètes. On a déjà proposé des procédés pour extraire une sub-20 stance anticancérigène à partir des basidiocarpes d'une espèce appartenant aux basidiomycètes. Cependant, ces procédés présentent plusieurs inconvénients, une production à l'échelle commerciale de la substance anticancérigène est difficile du fait que l'on utilise des basidiocarpes comme produit de départ, et étant 25 donné qu'on ne possède encore aucune explication claire des propriétés physico-chimiques du constituant actif de la substance anticancérigène, les moyens de purification du produit final sont encore insuffisants de sorte que le constituant actif n'est pas suffisamment pur. 30 La présente invention permet de produire en masse une substance anticancérigène en utilisant comme produit de départ un mycélium d'une espèce appartenant aux basidiomycètes, en particulier un bouillon de culture obtenu par incubation de l'espèce appartenant aux basidiomycètes. On a découvert que le constituant 35 actif de la substance anticancérigène obtenu à partir de ces produits de départ est un polysaccharide. En outre, après avoir étudié les propriétés physico-chimiques du constituant actif, on a trouvé un moyen de purification efficace pour obtenir un produit plus pur. 40 La présente invention se propose de fournir un procédé 70 37300 2 2070133 pour extraire avantageusement une substance anticancérigène contenant un polysaccharide comme constituant actif à partir d'une espèce de basidiomycètes ou d'un bouillon de culture de cette espèce. La présente invention se propose encore de fournir une 5 substance anticancérigène très pure dont le constituant actif est un polysaccharide mais n'ayant aucune action néfaste sur les corps vivants. Dans la présente invention l'expression "bouillon de culture" est utilisée pour désigner le milieu de culture dans 10 lequel on a fait incuber intentionnellement une espèce de fongus. Les espèces de basidiomycètes pouvant être utilisées dans la présente invention sont celles indiquées dans les tableaux 1 à 6 lorsque l'on utilise les mycelia comme produit de départ, et celles indiquées dans les tableaux 7 à 19 lorsque 15 l'on utilise les bouillons de culture comme produit de départ. Lorsque l'on utilise le mycélium comme produit de départ, celui-ci peut être d'origine naturelle ou artificielle. Dans la présente invention le mycélium peut être utilisé directement ou en conserve en le lavant avec de l'eau puis en le séchant à basse 20 température. Lorsque l'on utilise le bouillon de culture d'une espèce appartenant aux basidiomycètes comme produit de départ, on peut utiliser le bouillon de culture ordinaire. Pour isoler la substance efficace à partir de ces produits de départ, lorsque l'on utilise le mycélium comme pro-25 duit de départ celui-ci est extrait avec de l'eau chaude ou une solution aqueuse chaude, ou lorsqu'on utilise le bouillon de culture comme produit de départ, ce bouillon peut être filtré pour obtenir le mycélium. Cependant, les deux produits de départ peuvent être utilisés après avoir été mélangés. 30 La température du solvant utilisée pour l'extraction n'est pas particulièrement critique si elle n'est pas supérieure à 120°C. Il est préférable que cette température soit comprise entre 60 et 100°C. Pour l'extraction il est préférable d'utiliser un mycélium précédemment réduit en poudre mais cela n'est pas 35 indispensable. On utilise habituellement de l'eau chaude comme solvant extracteur mais on peut utiliser un solvant aqueux contenant un solvant organique soluble dans l'eau, un acide, une base, un sel, etc. Le temps nécessaire à l'extraction varie suivant la température d'extraction. Ce traitement dure de pré-40 férence entre 30 minutes et 10 heures à une température de 60°C 70 37300 3 2070133 à 100 C. En outre, il est préférable de réaliser l'extraction en agitant le produit dans un récipient en verre, un récipient dont la surface intérieure est revêtue de verre, un récipient émaillé ou un récipient en acier inoxydable. 5 L'extrait obtenu de la façon décrite ci-dessus à par tir du mycélium est soumis à un filtrage ou à une séparation centrifuge pour supprimer les constituants solides, puis à un traitement de purification comme on le verra ci-après. Lorsque l'on utilise un bouillon de culture comme 10 produit de départ, on sépare le bouillon du mycélium, on le concentre puis on le soumet à un traitement de purification décrit ci-dessous. L'extrait liquide ou le bouillon filtré ainsi obtenu contient des substances non nécessaires, par exemple des pro-15 téines libres, des acides nucléiques, des sucres réducteurs, etc, en plus du polysaccharide qui est le constituant actif de la substance anticancérigène. Ainsi, le traitement de purification est nécessaire pour supprimer ces substances non souhaitées. Le traitement de purification suivant la présente 20 invention est effectué en supprimant les substances non nécessaires, en particulier les constituants dangereux pour le corps humain tels les protéines libres. De plus, ce traitement de purification peut être réalisé avantageusement en combinant plusieurs moyens, par exemple la déprotéinisation, la déionisa-25 tion (y compris la désacidification et l'élimination des sels) et, si nécessaire, en éliminant d'autres produits organiques. Cette purification peut s'effectuer par extraction, séparation centrifuge, filtrage, traitement à l'acide, élimination des sels, dialyse et échange d'ions. 30 La déprotéinisation de l'extrait liquide est réalisée en y ajoutant un acide, par exemple de l'acide sulfurique, de l'acide chlorhydrique, de l'acide nitrique, de l'acide acétique, de l'acide trichloroacétique, de l'acide picrique, de l'acide sulfo-salicylique, de l'acide tannique, etc, dans une proportion 35 de 0,1 - :% en poids pour précipiter les protéines libres, en séparant ces protéines de l'extrait liquide et en faisant passer celui-ci à travers une colonne contenant une résine échangeuse d'anions, (dont il sera question dans le traitement de purification dans le cas où l'on utilise un bouillon de culture comme 70 37300 2070133 une membrane de dialyse, par exemple une feuille de cellophane, pour réaliser la désacidification. Dans une variante, la déprotéinisation peut être réalisée directement par échange d'ions. On ajoute une quantité appropriée de solvant soluble 5 dans l'eau, par exemple de l'alcool, de l'acétone etc, à l'extrait liquide déprotéinisé pour former un précipité. Dans une variante, on ajoute un sel tel le sulfate d'ammonium, le chlorure de potassium, etc, ou de l'hydroxyde de barium à l'extrait liquide déprotéinisé, le précipité résultant étant dissous dans 10 l'eau et la solution étant alors soumise à une dialyse ou à un échange d'ions. Le précipité obtenu en utilisant l'hydroxyde de barium est lavé à l'aide d'acide bromhydrique pour supprimer l'hydroxyde de barium résiduel. A la fin de la dialyse ou de l'échange d'ions, le 15 liquide est concentré et on y ajoute un alcool, dans une proportion de 3 à 10 fois le volume de liquide, pour former un précipité qui est alors séché à basse température, ou on lave le produit avec de l'alcool puis avec de l'acétone et on le sèche à basse température, ce qui permet d'obtenir une substance pul-20 vérulente blanc-grisâtre non-hygroscopique possédant une activité anticancérigène. Pour supprimer les substances non nécessaires contenues dans le bouillon de culture, par exemple les protéines libres, les acides nucléiques libres, les sucres réducteurs, les 25 différents ions, les vitamines, etc, il existe plusieurs méthodes, par exemple la concentration, le traitement à l'acide, l'extraction, la dialyse, l'échange d'ions, etc, ou une combinaison de ces traitements. Pour supprimer les protéines libres on peut utiliser un acide inorganique ou un acide organique tel l'acide 30 trichloroacétique, l'acide sulfurique, l'acide chlorhydrique, l'acide acétique glacial, l'acide sulfo-salicylique, l'acide • picrique, l'acide tannique, ou un acide semblable. De préférence un tel acide est utilisé dans une proportion de 0,1 à z% du liquide total. L'extraction permet de supprimer les protéines 35 libres et peut être réalisée en utilisant un solvant organique insoluble dans l'eau, par exemple le tétrachlorure de carbone, le chloroforme, le chlorure de méthylène, l'alcool isoamylique, l'acétate éthylique, etc. La dialyse qui permet de supprimer les sucres infé-40 rieurs, les aminoacides libres, différents sels, différents 70 37300 5 2070133 acides nucléiques, etc, peut être réalisée en utilisant une membrane semi-perméable telle une membrane de cellophane, une membrane de collodion, une membrane d'intestin, etc. L'échange d'ions est réalisé en utilisant une résine échangeuse d'anions et de 5 cations. Comme résine échangeuse de cations on peut utiliser par exemple, Amberlite IR-120 B, Amberlite 200, Amberlite IR-122, Amberlite IR-123, Amberlite XE-100, Amberlite IRC-50 et Amberlite IRC-84 (ces produits sont vendus par Rohm & Haas) ; Dowex 50W (vendu par Dow Chemical.1 ; Duolite C-3, Duolite C-10, Duolite 10 C-20, Duolite C-25, Duolite C-27, Duolite ES-63, Duolite ES-SO et Duolite CS-101 (ces produits sont vendus par Diamond Alkali) ; et Diaion SK-1A, Diaion SK-1B, Diaion SK-102, Diaion SK-103, Diaion SK-104, Diaion SK-106, Diaion SK-110, Diaion SK-112, Diaion SK-116, Diaion SK-1, Diaion PK-204, Diaion PK-2Q8, Diaion PK-212, 15 Diaion PK-216 et Diaion PK-22S (ces produits sont vendus par Mitsubishi Chemical Industry Co.s Ltd). Comme résine échangeuse d'anions on peut utiliser par exemple, Amberlite IRA-400, Amberlite IRA-401, Amberlite IRA-402, Amberlite IRA-405, Amberlite IRA-425, Amberlite IRA-900, Amberlite IRA-904, Amberlite IRA-410, 20 Amberlite IRA-411, Amberlite IRA-911, Amberlite IRA-910, Amberlite IR-45, Amberlite IRA-93, Amberlite IRA-68 et Amberlite IR-4B (ces produits sont vendus par Rohm & Haas) ; Dowex 1, Dowex 2, Dowex 44, Dowex 21K et Dowex 11 (vendus par Dow Chemical), et Duolite A-2, Duolite A-4, Duolite A-6, Duolite A-7, Duolite ES-25 15, Duolite A-3OT, Duolite A-30B, Duolite A-41, Duolite A-43, Duolite ES-57, Duolite A-40, Duolite A-40LC, Duolite A-42, Duolite A-42LC, Duolite A-101, Duolite A-101D, Duolite A-102, Duolite A-102D et Duolite ES-111 (ces produits sont vendus par Diamond Alkali). Les protéines libres sont éliminées à l'aide des trai-30 tements précédents, en particulier par le traitement à l'acide. La désacidification et la décoloration sont obtenues par échange d'ions. On peut citer en particulier le Duolite S-30 ou Duolite ES-33 (produits de Diamond Alkali'» et des produits semblables qui ont une action importante pour la décoloration. Pour sup-35 primer les acides nucléiques il est très efficace de passer le liquide à traiter dans du Dowex 50WX2 (type H; et Dowex 44 (type 0H'. Pour isoler la substance efficace suivant la présente invention de l'extrait liquide ou du bouillon purifié de la 40 façon décrite ci-dessus, il existe différents procédés pour former 70 37300 6 2070133 des précipités, par exemple l'ultrafiltration, la concentration par évaporation ou un processus semblable, le traitement à l'acétate de plomb, l'élimination des sels, le traitement par un solvant organique fortement polaire, etc. 5 L'expression "élimination des sels" désigne ici l'ad dition d'hydroxyde de barium ou d'un sel inorganique soluble dans l'eau, par exemple le sulfate d'ammonium, le sel comestible, le chlorure de potassium, le carbonate de barium ou un produit semblable, dans l'extrait liquide pour précipiter le produit 10 final. L'addition de solvant organique fortement polaire, comprenant les alcools solubles dans l'eau et les cétones tels le rnéthanol, 1'éthanol-propanol, le butanol, l'acétone, etc, sert aussi à précipiter le produit final. Le traitement à l'acétate de plomb consiste à ajouter 15 de l'acétate de plomb dans l'extrait liquide pour précipiter le produit final sous forme de son sel de plomb. Le produit final peut être obtenu à partir du précipité contenant du plomb en éliminant le plomb de ce précipité, par exemple en introduisant du sulfure d'hydrogène dans une pâte constituée par le précipité 20 afin d'éliminer le plomb sous forme de sulfure, de plomb. Comme décrit ci-dessus, le but du traitement de purification suivant la présente invention est d'éliminer les substances non nécessaires, constituées principalement par des protéines, de l'extrait liquide ou du bouillon, et d'isoler la 25 substance efficace, constituée par un polysaccharide, du liquide purifié résultant. La substance efficace obtenue par les traitements précédemment décrits possède les caractéristiques suivantes : poudre blanc - grisâtre, non dialysable, ne possédant aucun point 30 de fusion précis, carbonisée par un chauffage important, insoluble dans les solvants organiques et les acides organiques courants et soluble dans l'eau. Une solution aqueuse à 10% de cette substance est neutre alors qu'une solution aqueuse à 0,1% ne présente aucune caractéristique d'absorption dans le domaine 35 ultraviolet. Lorsque cette substance efficace est soumise, dans une solution de borate de sodium à 0,05 mole, à une électro-phorèse en utilisant une membrane d'acétate de cellulose à une tension de 20 à 25 V/cm pendant 90 minutes, on détecte uniquement 40 une tache du côté de l'anode. 70 37300 7 2070133 Cependant, lorsque la solution aqueuse à 0,1% est hydrolysée en ajoutant de l'acide sulfurique pour rendre la solution normale et en chauffant cette solution pendant 5 heures à 100 C, puis est neutralisée en y ajoutant du carbonate de barium, 5 puis est soumise à une analyse chromatique sur papier, on détecte inévitablement du glucose. Cette substance ne dévie pas du point initial lorsqu'elle est soumise à différentes analyses chromatiques sur papier. On ajoute de l'acide sulfurique à une solution aqueuse 10 à 0,1% de façon à la rendre normale puis on l'hydrolyse à 100 C pendant 5 heures. Lorsque la solution hydrolysée est neutralisée à l'aide de carbonate de barium puis est soumise à une analyse chromatique sur papier, on détecte nécessairement du glucose. L'hydrolysat de la substance efficace suivant la pré-15 sente invention est positif pour toutes les réactions telles que la réaction à 1'anisaldéhyde, la réaction de Molisch, la réaction à l'anthrone, la réaction au triptophane-acide sulfurique, la réaction à l'acide chromotropique-acide sulfurique, la réaction au carbazole-cystéine-acide sulfurique, la réaction à l'aniline-20 acide chlorhydrique, la réaction au résorcinol-acide chlorhydrique, la réaction de Tollens et la réaction au thioglycol-acide sulfurique, mais négatif à la réaction au chlorure ferrique et à la réaction de Fehling. D'après les caractéristiques précédentes la substance 25 efficace obtenue suivant la présente invention est un polysaccharide . La substance efficace suivant la présente invention n'a aucune action anti-microbienne pour les bactéries, les fongi et les levures, par exemple Staphylococcus aureus, Escherichia 30 coli, Bacillus subtilis, Aspergillus nigel, Candida albicans,etc, et par conséquent elle est tout à fait différente des agents anticancérigènes antibactériens obtenus à partir d'espèces appartenant aux actinomycètes. En outre, cette substance ne présente aucune cyto-35 toxicité ni aucun effet secondaire comme c'est le cas des agents anticancérigènes classiques, par exemple une diminution du nombre des leucocytes, une anémie du foie ou d'autres organes, une atrophie de la rate, une perte de poids et une perte d'appétit. La toxicité aiglle (DL^q) de la substance suivant la présente 40 invention est supérieure à 20 g/kg pour une administration orale 70 37300 8 2070133 et supérieure à 100 mg/kg pour une injection sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse. L'action anticancérigène de la substance suivant la présente invention est confirmée par l'expérience suivante : 5 On inocule par voie intrapéritonéale des cellules cancéreuses de tumeur d'Ehrlich ou de sarcome 180 à une souris de type ICR-JCL pesant 20 g. Après une semaine, lorsque le développement d'ascite est jugé suffisant on injecte six millions de cellules, par voie sous-cutanée dans la région axillaire, à 10 plusieurs autres souris. Ces souris sont divisées en plusieurs groupes comportant respectivement dix individus, au premier groupe on administre uniquement du sérum physiologique et à chacun des autres groupes on administre respectivement des agents anticancérigènes contenant la substance suivant la présente in-15 vention. La première administration est faite par voie intrapéritonéale une semaine après l'injection des cellules, les administrations suivantes étant répétées neuf fois tous les deux jours. On observe les tumeurs transplantées sur ces souris et cinq jours après la dernière administration on détermine l'aug-20 mentation moyenne du poids des souris et celles-ci sont autopsiées pour vérifier les effets secondaires. Les résultats de l'expérience décrite ci-dessus sont représentés dans les tableaux 1 à 19 donnés ci-après. Exemple 1 : 25 On ajoute 30 litres d'eau distillée à 2 kg de mycélium, séché et haché, de Aleurodiscus amorphus Rabenh. Dans un récipient de verre équipé d'un condenseur à reflux,le mélange est porté à 95-100°C pendant 3 heures en l'agitant pour réaliser l'extraction. Le mélange, après s'être refroidi à la température ambiante, 30 est filtré à l'aide d'un filtre en toile et le filtrat est concentré de façon qu'il n'en reste qu'un litre. On ajoute 700 grammes de sulfate d'ammonium au filtrat et le mélange est laissé une nuit dans une chambre réfrigérée. Au matin suivant, le précipité formé est filtré à l'aide d'un papier filtre et le précipité 35 recueilli sur le papier est lavé six fois avec quatre litres, c'est-à-dire 24 litres en tout, d'une solution de sulfate d'ammonium saturé. Le précipité est alors dissous dans l'eau pour obtenir environ un litre et la solution aqueuse est introduite dans un tube de cellulose de Visking et est soumis à une dialyse 40 à l'eau courante pendant 40 heures. Après concentration du 70 37300 9 2070133 liquide recueilli sur la membrane pour obtenir un litre, on ajoute 100 ml d'acide trichloroacétique à 10% pour éliminer les protéines libres et le mélange est décoloré à l'aide de 10 grammes de carbone actif puis est filtré. Le filtrat est soumis à une autre 5 dialyse à l'eau courante pendant 40 heures et le liquide recueilli est concentré pour obtenir 100 ml. Le précipité formé par l'addition de 400 ml d'éthanol est lavé avec de l'êthanol à 90%, de l'êthanol à 99% et de l'acétone et est séché pour obtenir 60 grammes d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. 10 La substance obtenue par le procédé précédemment men tionné est un polysaccharide comme cela a été vérifié par plusieurs expériences. Cette substance et les autres polysaccharides obtenus à partir d'un mycélium appartenant à d'autres espèces de basidiomycètes, suivant le procédé précédemment mentionné, sont 15 testés pour déterminer leur activité anticancérigène, les résultats étant donnés dans le tableau 1 donné pages suivantes. Les mycelia utilisés sont obtenus par une incubation réalisée de la façon suivante : Composition : 20 Peptone 5 g Extraits de levure 3 g Phosphate primaire de potassium 0,3 g Phosphate secondaire de potassium 0,3 g Sulfate de magnésium (heptahydrate) 0,3 g 25 Glucose 30 g Eau 1 litre pH = 6,0 On verse 150 ml du milieu liquide de la composition ci-dessus dans un millier de fioles Erlenmeyer d'une contenance 30 d'un litre. Ces fioles sont bouchées avec du coton, stérilisées pendant 30 minutes à 120°C et on y introduit séparément, de façon usuelle, une souche bactérienne d'Aleurodiscus amorphus Rabenh qui provient d'un milieu de culture. Après une période d'incubation de 20 jours de la culture contenue dans les fioles, 35 à une température de 23-25°C, le contenu des fioles est filtré. Le mycélium recueilli sur le filtre est lavé avec 50 litres d'eau puis séché. TABLEAU 1 (1) O Famille Micro-organisme Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) OU ou o o Tricholomataceae II 11 11 Corticiaceae Hydnaceae Polyporaceae tt I! ?î M I! tl II II Phyllotopsis nidulans (Fr.) Slng. Pleurocybella porrigens (Fr.) Sing. Hohenbuehelia serotina (Fr.) Sing. Schizophyllum commune Fr. Panus rudis Fr. Sparassis crispa Fr. Aleurodiscus amorphus Rabenh. Corticium chrysocreas Berk. et Curt. Stereum ostea (Bl. et Nees) Fr. Creolophus spathulatus Imazeki. Lopharia mirabilis (Berk. et Br.) Pat. Coriolus pubescens (Fr.) Quel. Tyromyces lacteus (Fr.) Murr. Polyporus confluens (A. et S.) Fr. Microporus affinis (Blume et Nees) Runtze. Trametes gibbosa Fr. Cryptoporus volvatus (PK.) Hubb. Trametes albida (Fr.) Bourdot et Garzin Ganoderma lucidum (Fr. ) Karst. Hirschioporus abientinus (Fr.) Donk. 80 70 60 70 80 100 100 90 90 100 60 80 100 80 70 60 60 70 70 70 NO O O «uni OU 0L> TABLEAU 1 (2) -4 O u> Famille Micro-organisme Taux d'inhibition de la croissance co du sarcome 180 (% o ; O Polyporaceae Tyromyces incarnatus Imazeki 90 Mucronoporaceae Phellinus igniarius (Fr.) Quel. 70 n Inonotus tabacinus (Mont.) Karst. 70 Tremellales Tremellodon gelatinosum (scop.) Fr. 70 ir Holtermannia corniformis kobayashi 80 Meruliaceae Meruluis tremellosus Fr. 70 Tricholomataceae Panellus stipticus (Fr.) Karst. 60 KJ O ■-4 O uj lu 70 37300 12 2070133 Exemple 2 : On ajoute 45 litres d'eau distillée à 3 kg de mycélium, séché et pulvérisé, de Grifola gigantea (Fr.) Pilât. Dans un récipient revêtu de verre et équipé d'un condenseur à reflux, on 5 porte le mélange à 90°C pendant 5 heures en l'agitant pour réaliser une extraction. Le mélange, après l'avoir laissé refroidir à la température ambiante, est filtré sur toile et le filtrat est concentré pour obtenir un volume de 5 litres. Le liquide concentré est traité pendant 30 minutes dans une centrifugeuse 10 avec une accélération de 1500 g et la solution qui surnage est mélangée, en agitant, avec 4250 g de sulfate d'ammonium, est mise pour une nuit dans une chambre réfrigérée et est filtrée le matin suivant. Le précipité est recueilli et dissous dans l'eau et la solution est introduite dans une colonne contenant. 15 de 1'Amberlite IR-120B activé par de l'acide chlorhydrique 1-N puis dans une colonne contenant du Duolite A-7 activé avec de la soude caustique 1-N de façon à éliminer le sulfate d'ammonium. Le produit qui se dégage est alors concentré pour obtenir un volume d'un litre, homogénéisé par addition de'4 litres d'éthanol 20 et filtré. Le précipité est lavé avec de l'êthanol puis avec de l'acétone, et séché pour obtenir 55 g d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. La substance obtenue suivant le procédé précédemment mentionné est un polysaccharide comme on peut le vérifier par 25 les différentes expériences mentionnées ci-dessus. Cette substance et les autres polysaccharides obtenus, suivant le procédé décrit ci-dessus, à partir d'un mycélium appartenant à d'autres espèces de basidiomycètes sont testés pour déterminer leur activité anticancérigène, les résultats étant fournis dans le 30 tableau 2 donné pages suivantes. Le mycélium utilisé est obtenu suivant le procédé décrit dans l'exemple 1. Exemple 3 : On ajoute 16 litres d'eau distillée à un kilogramme 35 de mycélium, séché et pulvérisé, de Lexitextum bicolor (Pers) Lentz. On place le mélange dans un récipient émaillé et on le porte, en l'agitant, à une température de 98-100°C pendant 3,5 heures pour réaliser une extraction. Le mélange, après avoir refroidi à la température ambiante, est filtré sur toile et le 40 filtrat est concentré sous une faible pression pour obtenir un TABLEAU 2 (1) •-I O Famille Micro-organisme Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%.: U) tJO o o Panus Pleurotus Crepidotus Paxillaceae Phylacteriaceae Corticiaceae Hydnaceae Polyporaceae If II n ii ti it n M Panus conchatus (Fr.) Fr. Pleurotus ostreatus (Fr.) Quel. Crepidotus subsphaerosporus (Lange) KUhn et Romagn. Paxillus panuoides (Fr.) Fr. Gyrophana lacrymans (Fr.) Pat. Stereum purpureum Fr. Hericium erinaceum (Fr.) Pers. Hydnum repandum Fr. Sarcodontia copelandii (Pat) Imazeki comb. nov. Echinodontium japanicum Imazeki Sistotremraa confluens Fr. Trametes cinnabarina Fr. Daedaleopsis confragosa (Fr.) Schroet. Favolus arcularius (Fr.) Ames Gloeoporus amorphus (Fr.) Clem. et Shear. Fomitopsis castanea Imaz. Ischnoderma resinosum (Fr.) Karst. Grifola frondosa (Fr.) S.F. Gray Amauroderma scopulosum (Berk.) Imaz. Grifola gigantea (Fr.) Pilât 70 80 60 60 70 80 70 70 70 90 60 90 90 90 60 80 70 80 90 90 OJ K> O O CU U» TABLEAU 2 (2) •>4 O OU ou o o Famille Hicro-organisme Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Polyporaceae îl Muer onop or ace ae t! II Auriculariales n Dacryomycotales Meruliaceae Fistulinaceae Tyromyces caesius (Fr.) Karst. Trametes sanguinea (Fr.) Lloyd Elfvingia applanata (Pers.) Karst. Cryptoderma pini (Fr.) Imazeki Hymenochaete mougeotii (Fr.) Çke. Phellinus robustus (Karst.) Bourd. et Galz. Auricularia mesenterica (Dicks) Pers. Auricularia polytricha (Mont.) Sacc. Calocera viscosa Fr. Cystidiophorus castaneus (Lloyd) Imazeki comb. nov. Fistulina hepatica Fr. 70 90 80 60 80 70 60 80 90 90 90 hO O O ou LU 70 37300 15 2070133 volume de 1,5 litres. On ajoute de l'acide acétique glacial au liquide concentré dans une proportion suffisante pour rendre la solution normale et le liquide est bien agité, on le laisse pendant 24 heures dans une chambre réfrigérée et on le soumet à une 5 séparation centrifuge avec une accélération de 10 000 g pendant 25 minutes. Le liquide qui surnage est introduit dans un tube contenant de la cellophane et on réalise une dialyse à l'eau courante pendant 48 heures. Le liquide contenu dans la membrane est concentré sous pression réduite pour obtenir 1,5 litres, 10 mélangé avec 1275 g de sulfate d'ammonium, agité vigoureusement, laissé toute une nuit dans un endroit frais et soumis le matin suivant à un traitement centrifuge avec une accélération de 1250 g pendant 20 minutes. Le précipité résultant est dissous dans 2 litres d'eau distillée et est soumis à une ultrafiltration 15 à l'aide d'une membrane de Diaflo UM-2 (Amicon Corporation,U.S.A.) 2 à une pression de 5 kg/cm pendant 120 heures, tout en y versant 60 litres d'eau distillée. Le liquide résiduel est séché à basse température pour obtenir 19 g d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre qui est un complexe polysaccharide-protéine. 20 La substance obtenue suivant le procédé précédemment mentionné est un polysaccharide comme on peut le vérifier par les différentes expériences mentionnées ci-dessus. Cette substance et les autres polysaccharides obtenus, suivant le procédé décrit ci-dessus, à partir d'un mycélium appartenant à d'autres espèces 25 de basidiomycètes sont testés pour déterminer leur activité anticancérigène, les résultats étant fournis dans le tableau 3 donné pages suivantes. Le mycélium utilisé est obtenu suivant le procédé décrit dans 1'exemple 1. 30 Exemple 4 : On ajoute 35 litres d'eau distillée à un kilogramme de mycélium, séché et pulvérisé, de Microporus flabelliformis (Fr.) Kuntze. Dans un récipient en acier inoxydable muni d'un condenseur à reflux et d'un agitateur, le mélange est porté à 35 95-98°C, en agitant, pendant 5 heures pour réaliser une extraction. Après avoir laissé refroidir le mélange à la température ambiante celui-ci est filtré sur toile. Le résidu est porté, avec 30 autres litres d'eau distillée, à une température de 98-100°C pendant 3 heures, en agitant, pour réaliser une autre extraction 40 et le mélange, après avoir été refroidi à la température ambiante, TABLEAU 3 (1) *-4 O Famille Micro-organisme Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) UJ -«4 UJ o> o Poxillaceae Clavariaceae ti Corticiaceae II I ! Polyporaceae U II M It II II I! Il Cantharellaceae Polyporaceae Hygrophoropsis bicolor Hongo Clavulina cristata (Fr.) Schroet. Clavariadelphus pistillaris (Fr.) Donk. Stereum hiugense Imazeki Lexitextum bicolor (Pers.) Lentz. Echinodontium tsugicola (F. Henn. et Shirai) Imaz, Trametes trogii Berkeley Fomitopsis rhodophaea (Lev.) Imaz. Coltricia pusilla Imazeki et Ysk. Kobayashi Polyporellus picipes (Fr.) Karst. Hirschioporus versatilis (Berk.) Imaz. Laetiporus versisporus (Lloyd) Imazeki Rigidoporus durus (Jungh.) Imaz. Polyporellus squamousùs (Fr.) Karst. Rigidoporus ulmarius (Fr.) Imaz. Coriolus pargamenus (Fr.) Pat Tyromyces guttulatus (PK.) Murr. Cantharellus floccosus Schw. Polyporus tuberaster Fr. Daedaleopsis nipponica Imazeki 90 70 80 70 90 70 60 80 60 80 60 60 50 60 70 90 80 60 70 80 i—1 CTv fo o ■^1 o LU LU TABLEAU 3 (2) ~"-4 O UJ uj o O Famille Mi cr o-organi sme Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Mucronoporaceae 1! tî Tî Dacryomycetales Tremellales Inonotus hispidus (Fr.) Karst. Hymenochaete intricata Lloyd Pyrrhoderma sendaiense (Yasuda) Imaz. Inonotus sciurinus Imazeki Hymenochaete rubiginosa (Fr.) Lév. Dacryomyces aurantius (Schw.} Farlaw. Protodaedalea hispida Imazeki 80 70 50 50 90 70 70 t-1 «•j hO O --4 O LU LU 70 37300 18 2070133 est filtré sur toile. Ces filtrats sont combinés et concentrés sous pression réduite pour obtenir un volume de 5 litres. On ajoute 4 kg de sulfate d'ammonium et le mélange est bien agité, on laisse ce mélange une nuit à 5-8°C et on le soumet le jour 5 suivant à une séparation centrifuge avec une accélération de 1300 g pendant 20 minutes. Le précipité est dissous dans un litre d'eau distillée et est soumis à une ultrafiltration avec un ultrafiltre modèle 2000 (Amieon Corporation) comportant une membrane de Diaflo UM-2 (Amicon Corporation), à une température de 2 10 5-10°C, une pression de 5 kg/cm et pendant 200 heures. Le liquide contenu dans la membrane est placé dans une fiole Erlenmeyer et on aj oute de 1'acide tannique dans une proportion de 3% en poids du mélange total. Le mélange est agité pendant 30 minutes et est soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 300 g 15 pendant 20 minutes. Le liquide qui surnage est soumis à une ultrafiltration, en utilisant de nouveau un ultrafiltre modèle 2000 comportant une membrane de Diaflo, à une température de 2 5-8°C, une pression de 5 kg/cm et pendant 200 heures. On ajoute de l'êthanol à ce liquide, la quantité d'éthanol étant trois fois 20 celle du liquide. Le mélange est bien agité et le précipité formé est séparé par filtrage à l'aide d'un papier filtre. Le précipité recueilli sur le papier filtre est lavé avec 5 litres d'éthanol à 75%, puis avec 3 litres d'éthanol à 95% et finalement avec un litre d'éthanol à 99%, puis est encore lavé avec un litre d'acé-25 tone et séché sous pression réduite pour obtenir 23 g de substance pulvérulente blanc-grisâtre. La substance obtenue suivant le procédé précédemment mentionné est un polysaccharide comme on peut le vérifier par les différentes expériences mentionnées ci-dessus. Cette substance 30 et les autres polysaccharides obtenus, suivant le procédé décrit ci-dessus, à partir d'un mycélium appartenant à d'autres espèces de basidiomycètes sont testés pour déterminer leur activité anti-cancérigène, les résultats étant fournis dans le tableau 4 donné pages suivantes. 35 Le mycélium utilisé est obtenu suivant le procédé décrit dans l'exemple 1. Exemple 5 : On ajoute 75 litres d'eau distillée à 2,5 kg de mycélium, séché et pulvérisé, de Coliolus hirsutus (Fr.) Quel. Le 40 mélange est porté dans un récipient en verre, en agitant, à une TABLEAU 4 (1) -4 O LU Famille Micro-organisme Taux d1 inhibition de la croissance --4 du sarcome 180 CD O O Corticiaceae Cotylidia diaphana (Scw. ) Lentz 60 M Stereum princeps (Jungh.) Lév. 70 1? lï Gloeostereum incarnatum S. Ito et Imai Stereum frustulosum Fr. 50 90 H Cymatoderma lamellatum (Berk. et Curt.) Reid 70 Polyporaceae Daedaleopsis styracina (P. Henn. et Shir.) Imazeki GO n Gloeophyllum saepiarium (Fr.) Karst. 80 i-1 vO M Fomitopsis officinalis (Fr.) Bond, et Sing. 80 II Coriolus consors (Berkj Imaz. 60 ! t Tyromyces sambuceus (Lloyd) Imaz. 80 11 Polyoporus pes-caprae Fr. 90 tl Microporus flabelliformis (Fr.) Kuntze 100 U Coriolus flabelliformis (Fr.) Kuntze 70 II Fomes fomentarius (Fr.) Kickx 80 1E Ganoderma neo-japonicum Imaz. 80 hO O ir Trametes dickinsii Berk. 70 u Oxyporus ravidus (Fr.) Bond, et Sing. 60 O !ï Hirschioporus fusco-violaceus (Fr.) Donk. 60 U) u» tt is Coltricia perennis (Fr.) Murrill Favolus alveolarius (Fr.) Quel. 80 80 TABLEAU 4 (2) O UJ Famille Micro-organisme Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) q ; ; ! o Mucronoporaceae Coltricia cinnamomea (Fr.) Murrill 60 tî Phellinus hartigii (Allesh. et Schnabl.) Imazeki 70 tî Onnia orientalis (Lloyd) Imazeki 60 n Inonotus kanehirae (Yasuda) Imazeki, comb. nov. 80 Tremellales Tremella foliacea Fr. 60 Tricholomataceae Hymenostilbe sphinghum (Scw.) Petch 70 SJ o ^-4 O LO UJ 70 37300 21 2070133 température de 95-100°C pendant 3 heures en ajoutant de temps à autre une quantité adéquate d'eau distillée pour extraire et concentrer le liquide de façon que le volume total soit de 25 litres à la fin de l'extraction. On laisse le mélange refroidir 5 à la température ambiante et on le filtre tout d'abord sur toile puis à l'aide d'un papier filtre, et le filtrat est concentré sous pression réduite pour obtenir un volume de 2,5 litres. On ajoute 2 kg de sulfate d'ammonium à ce liquide et le mélange est vigoureusement agité, on le laisse reposer une nuit et on le fil-10 tre le matin suivant à l'aide d'un papier filtre. Le résidu recueilli sur le papier filtre est lavé avec une solution saturée de sulfate d'ammonium (10 litres) et dissous dans 2,5 litres d'eau distillée. La solution est alors passée à travers une colonne contenant du Duolite C-25-D puis à travers une colonne 15 contenant de 1'Amberlite IRA-400 pour éliminer le sulfate d'ammonium et le produit qui se dégage est concentré sous pression réduite pour obtenir 500 ml et est passé dans une colonne contenant du Sephadex G-75. On ajoute 10 litres d'eau dans la colonne et on recueille une fraction contenant une substance possédant un 20 poids moléculaire maximal, et on la fait sécher à basse température pour obtenir 3,26 g de substance pulvérulente blanc-grisâtre. La substance obtenue suivant le procédé précédemment mentionné est un polysaccharide comme on peut le vérifier par les différentes expériences mentionnées ci-dessus. Cette substance 25 et les autres polysaccharides obtenus, suivant le procédé décrit ci-dessus, à partir d'un mycélium appartenant à d'autres espèces de basidiomycètes sont testés pour déterminer leur activité anticancérigène, les résultats étant fournis dans le tableau 5 donné pages suivantes. 30 Le mycélium utilisé est obtenu suivant le procédé décrit dans l'exemple 1. Exemple 6 : On ajoute 2 litres d'eau distillée à 50 g de mycélium, séché et pulvérisé, de Coriolus versicolor (Fr.) Quel. Le mélange 35 est agité dans un récipient en verre à une température de 60"C pendant une heure puis à une température de 95°C pendant 3 heures pour réaliser l'extraction, est laissé refroidir à la température ambiante puis est filtré à l'aide d'un papier filtre. On ajoute 1,5 litres d'eau distillée au résidu et le mélange est agité à 40 une température de 95°C pendant 3 heures pour réaliser une autre TABLEAU 5 (1) --4 O Famille Micro-organisme Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%'; UJ -■4 U> O O Corticiaceae II II 11 Polyporaceae n il m ii it n il il n n Mucronoporaceae Stereum rugosum Fr. Stereum hirsu-tum (Fr.) S.F. Gray Cymatoderma elegans Jungh. Stereum roseo-carneum (Scw.) Fr. Cotylidia decolorans (Berk. et Curt.) Welden Porodisculus pendulus (Schw.) Murrill Fomitopsis cytisina (Berk.) Bond, et Sing. Polyporus caeruleoprus Peck Fomitopsis pinicola (Fr.) Karst. Polyporellus brumalis (Fr.) Karst. Coriolus hirsutus (Fr.) Quel. Coriolellus heteromorphus (Fr.) Bond, et Sing. Coriolus conchifer (Schw.) Pat. Fomitopsis latissima (Bres.) Imazeki, comb. nov. Polyporellus elegans (Fr.)'Karst. Polyporus dispansus Lloyd Trachyderma tsunodae (Yasuda) Imazeki Lenzites betulina Fr. Cryptoderma mc-gregorii (Bres.) Imaz. Hymenochaete yasudai Imazeki 50 70 60 60 100 60 60 90 80 90 90 70 70 80 90 60 60 90 70 60 ro N) hO O ->4 O LU LU TABLEAU 5 (2) ~^4 O Famille Mucronoporaceae Tremellales II Dacryomycetales Auriculariales Meruliaceae Tricholomataceae Micr o-organi sme Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Phellinus setulosus (Lloyd) Imaz. Cryptoderma citrinum Imazeki Cryptoderma lamaoese (Murr.) Imazeki Phellinus gilvus (Fr.; Pat. Cryptoderma yamanoi Imazeki Tremella fuciformis Berk. Phlogiotis helvelloides (Fr.) Martin Guepinia spathularia Fr. Auricularia auricula-judae (Fr.) Quel. Phlebia strigoso-zonata (Scw.) Lloyd Lampteromyces japonicus (Kawam.) Sing. 50 80 80 90 70 60 70 80 70 60 80 UJ UJ o o N> co K> O O UJ UJ 70 37300 24 2070133 extraction, est laissé refroidir à la température ambiante puis est filtré à l'aide d'un entonnoir de BUchner. Ces filtrats sont combinés et concentrés sous pression réduite pour obtenir 150 ml et sont soumis, dans un tube de Visking contenant de la cellulose, 5 à une dialyse à l'eau courante pendant 48 heures. Le liquide recueilli dans la membrane est concentré sous pression réduite pour obtenir un volume de 100 ml et est soumis à un traitement centrifuge avec une accélération de 4000 g pendant 15 minutes pour éliminer les matières insolubles. 10 On ajoute de l'êthanol au liquide qui surnage, le volume d'éthanol étant égal à quatre fois celui du liquide, et le tout est agité. Le précipité est alors soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes, 15 lavé successivement avec de l'êthanol à 75%, de l'êthanol à 95%, de l'êthanol à 99% et de l'acétone, puis est séché sous pression réduite pendant 5 heures à une température de 40°C pour obtenir 3 g d'une substance pulvérulente grisâtre qui représente 6% du poids du mycélium de départ. Cette substance est un polysaccha-20 ride brut. On ajoute 81 ml d'eau distillée à 9 g de la substance pulvérulente grisâtre obtenue en répétant trois fois le processus mentionné ci-dessus et le mélange est agité. On ajoute ensuite une solution saturée d'hydroxyde de barium, en agitant, de façon 25 à rendre la normalité du liquide égale à 0,1 et on prélève une petite quantité du précipité formé par une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 20 minutes. On ajoute ensuite, en agitant, une solution saturée d'hydroxyde de barium au liquide qui surnage de façon que la normalité finale soit 30 égale à 0,3 puis le liquide est soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 3000 g pendant 15 minutes. On n'utilise pas le liquide qui surnage et on ajoute 100 ml d'une solution d'hydroxyde de barium 0,3-N au précipité. Après avoir été agité le mélange est soumis à une autre séparation centri-35 fuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes pour recueillir le précipité. On ajoute 500 ml d'eau distillée au précipité et le mélange est agité puis.est de nouveau soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes. Ce traitement de lavage à l'eau est répété cinq fois 40 puis on recommence un traitement de lavage similaire en utilisant 70 37300 25 2070133 300 ml de méthanol à chaque fois pour effectuer la déshydratation. On ajoute 70 ml de solution méthanolique à 2,4% de bromure d'hydrogène au précipité résultant. Le mélange est secoué dans un agitateur à secousses pendant 15 minutes puis est filtré 5 à l'aide d'un papier filtre. On répète trois fois l'opération mentionnée précédemment pour le résidu recueilli sur le papier filtre en utilisant une solution méthanolique à 2,4% de bromure d'hydrogène et on recommence cinq fois un traitement similaire en utilisant du méthanol à la place de la solution méthanolique 10 pour éliminer le bromure d'hydrogène. Lorsque l'on ajoute 150 ml d'eau au précipité obtenu précédemment et que le mélange est agité le liquide devient fortement acide. La neutralisation à l'aide de soude caustique 0,3 - N provoque la formation d'un gel. Ce gel est porté à une 15 température de 60-70°C pendant 30 minutes puis est soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes. On ajoute 200 ml d'eau au précipité résultant et le mélange est agité et est soumis à une séparation centrifuge effectuée dans les mêmes conditions. On ajoute 250 ml de soude 20 caustique 0,1 - N au gel résultant et le mélange est porté, en agitant, à une température de 60-70cC, ce qui provoque la dissolution de la plus grande partie du gel. Les matières insolubles sont éliminées par une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 30 minutes, et le liquide qui surnage est 25 neutralisé avec de l'acide acétique et est concentré sous pression réduite pour obtenir un volume de 80 ml. On ajoute 320 ml d'éthanol au liquide concentré et le précipité formé est lavé successivement avec de l'êthanol à 75%, de l'êthanol à 95%, de l'êthanol à 99% et de l'acétone, et est séché à une température de 40°C 30 pendant 5 heures sous pression réduite pour obtenir 3,03 g d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. La substance obtenue suivant le procédé précédemment mentionné est un polysaccharide comme on peut le vérifier par les différentes expériences mentionnées ci-dessus. Cette substance 35 et les autres polysaccharides obtenus, suivant le procédé décrit ci-dessus, à partir d'un mycélium appartenant à d'autres espèces de basidiomycètes sont testés pour déterminer leur activité anticancérigène, les résultats étant fournis dans le tableau 6 donné pages suivantes. Le mycélium utilisé est obtenu suivant le 40 procédé décrit dans l'exemple 1. TABLEAU 6 (1) O Famille Micro-organisme Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 UJ -«4 U> O O Corticiaceae II II Polyporaceae n n H II II II H 11 II II M II II II Stereum annosum Berk. et Br. Stereum spectabile Klotzsch Stereum umbrinum Berk. et Curt. Stereum taxodii Lentz et McKay Stereum roseum Yasuda Coltrica dependens (Berk. et Curt.) Imaz. Polyporus ovinus Fr. Fomitopsis insularis (Murr.) Imaz. Gano-derma tsugae Murrill Grifola albicans Imazeki Coriolus versicolor (Fr.) Quel. Grifola umbellata (Fr.) Pilât Piptoporus betulinus (Fr.) Karst. Daedaleopsi\S tricolor (Fr.) Bond, et Sing. Ganoderma boninense Pat. Fomitopsis rosea (Fr.) Karst. Trametes orientalis (Yas.) Imaz. Favolus emerici (Cooke) Imazeki Fomitopsis pubertatis (Lloyd) Imaz. Fomitopsis vinosa (Berk.) Imaz. 70 60 50 90 60 70 60 60 70 80 100 80 90 90 70 70 80 60 90 60 Ni cr\ Si O -^1 O UJ U> TABLEAU 6 (2) "-4 O Famille Mucronoporaceae Tremellales Meruliaceae Micro-organisme Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%"> Cryptoderma cercidiphyllum Imaz. Phaeolus schweinitzii (Fr. » Pat. Inonotus cuticularis (Fr. ') Karst. Fuscoporia obliqua (Fr.) Aoshima Exidia glandulosa Fr. Merulius aureus Fr. 80 80 50 60 90 60 OU -4 U) o o N3 «-J K> O "-4 O lk> uj 70 37300 28 2070133 Exemple 7 : Suivant le procédé décrit dans l'exemple 1, on fait incuber du Cryptodermaderma mc-gregorii (Bres.; Imaz et le bouillon de culture est filtré sur toile pour éliminer le mycélium. 5 Le filtrat résultant (100 litres) est concentré sous pression réduite pour obtenir un volume de 15 litres, on ajoute 12,75 kg de sulfate d'ammonium et on agite pour dissoudre le sel. La solution est laissée une nuit dans une chambre réfrigérée et est soumise le matin suivant à une séparation centrifuge avec une 10 accélération de 6000 g pendant une heure. Le liquide qui surnage n'est pas utilisé et le précipité est dissous dans 3 litres d'eau distillée. On ajoute 2550 g de sulfate d'ammonium à la solution et le mélange est laissé une nuit dans une chambre réfrigérée et est soumis le matin suivant à une séparation cen-15 trifuge avec une accélération de 6000 g pendant une heure. Ce traitement est répété cinq fois et le précipité est dissous dans 3 litres d'eau distillée. La solution est filtrée à l'aide d'un papier filtre n°2 et le filtrat est introduit dans un tube contenant de la cellophane et est soumis à une dialyse à l'eau 20 courante pendant 50 heures. Le liquide résiduel contenu dans le tube est concentré à la température ambiante sous une pression inférieure à la pression atmosphérique pour obtenir un volume d'un litre, et on y ajoute de l'acide trichloroacétique dans une proportion suffisante pour obtenir une solution à 4% en poids 25 qui est alors laissée une nuit dans une chambre réfrigérée et est soumise à une séparation centrifuge avec une accélération de 10 000 g pendant une heure. Le liquide qui surnage est transféré dans un tube contenant de la cellophane et est encore soumis à une dialyse à une température de 10°C pendant 150 heures. Le 30 liquide contenu dans le tube est concentré à la température ambiante sous une pression réduite pour obtenir un volume d'un litre et on y ajoute 3 litres d'éthanol et on laisse le mélange reposer une nuit. Le matin suivant, le précipité résultant est isolé par séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g 35 pendant 15 minutes, lavé successivement avec de l'êthanol absolu, de l'acétone et de l'éther puis est séché pour obtenir 19,2 g d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. Le tableau 7 donné pages suivantes fournit le résultat des expériences sur l'activité anticancérigène du mucopolysac-40 charide obtenu de la façon décrite ci-dessus et de ceux obtenus, 70 37300 29 2070133 suivant le procédé décrit ci-dessus ou un procédé semblable, à partir d'autres espèces de basidiomycètes; Exemple 8 : On filtre sur toile un bouillon de culture de Ganoderme 5 tsugae Murrill, obtenu dans les mêmes conditions que celui décrit dans l'exemple 7, pour éliminer le mycélium. 45 litres du filtrat sont concentrés à la température ambiante sous pression réduite pour obtenir un volume de 4,5 litres et les matières insolubles sont éliminées par séparation centrifuge avec une 10 accélération de 1300 g pendant 20 minutes. On ajoute 3285 g de sulfate d'ammonium au liquide qui surnage et le mélange est bien agité, et on laisse ce mélange reposer une nuit dans une chambre réfrigérée puis on le soumet le matin suivant à une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 20 minutes. Le 15 précipité est recueilli, homogénéisé avec 3 litres de solution saturée de sulfate d'ammonium et soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 20 minutes. Le précipité est dissous dans un litre d'eau distillée et la solution est introduite dans une colonne contenant de 1'Amberlite IR-120B 20 activé avec de l'acide chlorhydrique, pour éliminer une partie des protéines et une partie du sulfate d'ammonium. La colonne est alors lavée avec 5 litres d'eau distillée et la solution lavée est combinée avec le produit qui se dégage et concentrée à la température ambiante sous pression réduite pour obtenir un volume 25 de 1,5 litres. On ajoute de l'acide trichloroacétique au liquide concentré dans une proportion suffisante pour obtenir une solution à 3,5% en poids que l'on laisse alors reposer une nuit dans une chambre réfrigérée, et que l'on soumet le matin suivant à une séparation centrifuge avec une accélération de 10 000 g pen-30 dant 40 minutes pour précipiter les protéines. Le liquide qui surnage est introduit dans une colonne contenant du Duolite A-7 activé avec de la soude caustique à 4% pour éliminer le sulfate d'ammonium résiduel et les matières colorantes. La colonne est lavée avec 5 litres d'eau distillée et la solution lavée ainsi 35 que le produit dégagé obtenu précédemment sont combinés, puis concentrés à la température ambiante sous une pression inférieure à la pression atmosphérique pour obtenir un volume de 1,5 litres. On ajoute 4,5 litres d'éthanol au liquide concentré et le mélange est laissé reposer une nuit et est soumis le matin suivant à une 40 séparation centrifuge avec une accélération de 1400 g pendant TABLEAU 7 (1) ->4 O Analyse Teneur Dose Taux d'inhi Taux d'inhi LU élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la N uj O Famille Micro-organisme sucre croissance croissance C H (%) du sarcome de la tumeur o 180 (%)• d'Ehrlich (%) Hygrophoraceae Hygrophorus turundus (Fr.) 41,26 6,94 0,69 300 80 90 Fr, f. sphagnophilus (Peck) Smith et Hesler II Hygrophorus suzukaensis Hongo 40,07 5,43 0,92 II 80 70 II Hygrophorus hypothejus 41,55 5,55 0,34 II 70 80 u> O (Fr.) Fr. II Hygrophorus punicea (Fr.) Karst. 40,12 5,09 0,13 I? 90 100 Tricholomataceae Phyllotopsis nidulans (Fr.) Sing. 39,18 5,44 0,59 il 100 90 ii Collybia dryophila (Fr.) Quel. 40,35 6,54 0,7.1 n 90 90 ti Tricholoma flavovirens 39,76 5,27 0,74 ii 60 70 (Fr.) Lundell n Panus rudis Fr. 40,86 5,18 0,17 n 60 70 1! Mycena acicula (Fr.)Sing. 38,51 6,11 0,32 H 80 90 K> Il Mycena sanguinolenta 38,52 6,20 0,27 tl 60 60 O (Fr.) Quel. 60 -^4 r—\ II Filoboletus manipularis (Berk.) Sing. 39,76 5,13 0,55 II 60 V—j uj Amanitaceae Volv^riella volvacea 38,14 6,23 0,24 II 100 90 UJ (Fr.; Sing. var. nigricans (Kawam. ) Hongo TABIEAU 7 (2) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Amanitaceae Amanita vaginata (Fr.) Quel. 40,98 6,80 11 Volvariella speciosa (Fr.) Sing. 38,22 5,79 Agaricaceae Lepiota aurantioflava Hongo 42,42 6,03 M Leucocoprinus otsuensis Hongo 40,76 5,78 Coprinaceae Coprinus patouillardii Quel. 38,33 5,92 ii Panaeolus fimicola (Fr.) Quel. 42,43 6,36 n Psathyrella hydrophila (Fr.) A.H. Smith 40,72 5,53 Bolbitiaceae Conocybe antipoda (Lasch) KUhn. 40,85 6,04 1! Agrocybe praecox (Fr.) Fayod 42,33 5,07 Strophariaceae Pholiota flammans (Fr.) Quel 41,58 6,11 ii Pholiota squarrosa (Fr.) 39,46 5,85 Quel. Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi- en mg/Kg bition de la bition de la sucre croissance croissance (%) du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) 0,19 300 80 80 0,23 11 90 80 0,71 " 80 90 0,82 " 60 60 0,13 " 100 100 0,74 " 60 70 0,63 11 60 70 0,52 " 70 80 0,52 11 100 100 0,41 " 90 100 0,31 " 100 90 TABLEAU 7 (3) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Cortinariaceae tî 11 Phodophyllace Boletaceae Boletaceae Russulaceae 11 u Clavariaceae Cortinarius subdelibutus Hongo Cortinarius subarmillatus Hongo Inocybe asterospora Quel Cortinarius violaceus (Fr.) S.F. Gray Clitopilus prunulus (Fr.) Quel Phylloporus rhodoxanthus (Schw.) Bres. Boletus regius Krombh. Boletus edulis Fr. Boletinus cavipes (Opat.) Kalchbr. Lactarius gracilis Hongo Russula crustosa Peck Lactarius piperatus (Fr.) S.F. Gray Clavulina cristata (Fr.) Schroot. 38,45 42,25 38,47 39,70 39,92 38,01 38,52 39,83 40,98 42,33 42,54 38,78 5,45 6,59 5,85 6,94 5,71 5,20 6,15 5,46- 6,85 5,99 5,62 6,83 42,56 5,07 O Teneur Dose en mg/Kg sucre Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (%) U» UJ o o 0,17 0,21 0,56 0,33 0,73 0,99 0,19 0,87 0,26 0,72 0,39 0,27 0,67 300 80 100 80 100 70 90 80 100 70 90 70 80 90 90 100 70 90 80 80 90 90 90 100 70 70 80 u> fo SJ O "-4 O UJ UJ TABLEAU 7 (4) •-4 O Analyse élémentaire Teneur en Dose mg/Kg Taux d'inhibition de la Taux d'inhibition de la OU ou o O Famille Micr o-organi sme C H sucre (%) croissance du sarcome 180 (%) croissance de la tumeur d'Ehrlich (%) Clavariaceae Clavariadelphus pistillarls (Fr.) Donk 39,51 6,83 0,53 300 80 70 Corticiaceae Stereum hiugense Imazeki 42,95 6,80 0,77 f! 80 70 Hyonaceae Creolophus spathulatus Imazeki 40,17 5,37 0,57 M 80 70 Polyporaceae Trametes trogii Berkeley 41,08 5,52 0,68 II 70 60 CO Polyporaceae Fomitopsis rhodophaea (Lev.) Imaz. 42,95 5,31 0,93 II 80 70 u> II Coltricia pusilla Imazeki et Ysk. Kobayashi 40,02 5,11 0,60 tt 100 90 11 Polyporellus picipes (Fr.) Karst. 41,41 6,94 0,61 II 70 60 11 Daedaleopsis styracina (P.Henn et Shir.) Imazeki 42,30 6,31 0,97 tl 80 90 11 Gloeophyllum saepiarium (Fr.) Karst. 38,35 6,88 0,22 11 60 60 M Fomitopsis officinalis (Fr.) Bond, et Sing. 42,94 5,16 0,61 H 80 80 ho O Mucronoporaceae Cryptoderma MC-gregorii (Bres.) Imaz. 41,31 6,05 0,61 11 70 60 O TI Hymenochaete yasudai Tmfl Tolr-f 40,89 5,25 0,93 t! 70 80 ou ou TABLEAU 7 (5) O Analyse élémentaire Teneur en Dose mg/Kg Taux d'inhibition de la Taux d'inhibition de la Famille Micro-organisme C H sucre (V croissance du sarcome 180 (%) croissance de la tumeur d'Ehrlich (%) Mucronoporaceae Tremella fuciformis Berk. 41,09 5,68 0,14 300 80 90 Auriculariales Auricularia polytricha (Mont.) Sacc. 41,07 6,99 0,43 II 90 80 Crepidotaceae Rhodophyllus murraii (Berk. et Curt.) Sing 39,03 6,23 0,65 11 90 100 Phylacteriaceae Calodon cyathiformis (Fr.) Quel. 40,27 6,18 0,98 rt 80 90 Meruliaceae Meruluis tremellosus Fr. 42,28 5,48 0,50 n 90 80 U> UJ O o co •P- hO O O UJ UJ 70 37300 35 2070133 20 minutes pour recueillir le précipité résultant qui est alors homogénéisé avec 2 litres d'éthanol à 75% et soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 1400 g pendant 20 minutes. Ce traitement est répété cinq fois et finalement le 5 précipité est lavé successivement avec de l'êthanol absolu, de l'acétone et de l'éther et est séché pour obtenir 2,5 g de substance pulvérulente blanc-grisâtre. Le tableau 8 donné pages suivantes fournit les résultats des expériences sur l'activité anticancérigène du mucopolysac-10 charide obtenu de la façon décrite ci-dessus et de ceux obtenus, suivant le procédé décrit ci-dessus ou un procédé semblable, à partir d'autres espèces de basidiomycètes. Exemple 9 : On cultive dans les mêmes conditions que celles 15 décrites dans l'exemple 7 du Fomitopsis pinicola (Fr.) Karst et le bouillon (27 litres) est concentré à la température ambiante sous une pression inférieure à la pression atmosphérique pour obtenir un volume de 3 litres. On ajoute de l'acide acétique au liquide concentré dans une proportion suffisante pour obtenir 20 une solution 1-N qui est alors agitée vigoureusement, on laisse reposer cette solution pendant 15 heures dans une chambre réfrigérée et on l'a soumet à une séparation centrifuge avec une accélération de 10 000 g pendant 50 minutes. Le liquide qui surnage est introduit dans un tube contenant de la cellophane et 25 on le soumet à une dialyse à l'eau courante pendant 80 heures, puis le liquide contenu dans le tube est concentré à la température ambiante sous pression réduite^ pour obtenir un volume de 3 litres. On ajoute 2550 g de sulfate d'ammonium au liquide concentré et le mélange est bien agité, laisse ce mélange reposer 30 une nuit dans une chambre réfrigérée et on le soumet le matin suivant à une séparation centrifuge avec une accélération de 1300 g pendant 30 minutes. Le précipité recueilli est homogénéisé à l'aide d'un litre de solution saturée de sulfate d'ammonium et est soumis à une autre séparation centrifuge avec une accélêra-35 tion de 1300 g pendant 30 minutes. Ce traitement est répété trois fois et le précipité résultant est dissous dans 3 litres d'eau distillée. La solution est filtrée à l'aide d'un papier filtre n 2 et le filtrat est passé successivement à travers une colonne contenant de 1'Amberlite IR-120B et une colonne contenant du 40 Duolite S-30. Les colonnes sont lavées avec 3 litres d'eau dis- TABLEAU 8 (1) Analyse élémentaire Famille Micifo-orgânisme C H Hygrophoraceal Hygrophorus cruentus Hongo 38,33 5,75 11 Hygrophorus stagninus Hongo 39,83 6,09 11 Hygrocybe turunda (Fr.) Karst. 41,42 6,84 II Hygrophorus russula (Fr.) Quel. 41,27 5,79 Tricholomataceae Lepista subnuda Hongo 38,27 5,01 11 Tricholomopsis platyphylla (Fr.) Sing. 38,74 6,46 11 Tricholoma irinum (Fr.) Kummer 42,29 6,00 11 Collybia confluens (Fr.) Kummer 41,55 5,24 11 Xerula pudens (S.F.Gray) Sing. 39,37 5,28 M Mycena pura (Fr.) Kummer 41,49 6,94 1! Marasmius purpureostriatus Hongo 41,62 5,43 Il Tricholoma album (Fr.) Quel. 41,32 5,09 O Teneur Dose en mg/Kg sucre Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) LU ^4 U» O O 0,45 0,60 0,33 0,98 0,99 0,46 0,50 0,47 0,85 0,93 0,85 0,88 300 90 80 80 100 90 80 80 70 80 60 60 80 80 70 70 100 100 90 70 80 70 70 60 90 U) t*o o o OO LU TABLEAU 8 (2) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Tricholomataceae Resupinatus rhacodium (Bork. et Cuit) Sing. 40,38 5,44 11 Marasmiellus delicatellus (Peck) Sing. 39,44 6,54 11 Mycena galericulata (Fr.) Quel. 42,05 5,27 Amanitaceae Amanita echinocephala (Vitt.) Quel. 38,73 5,18 M Amanita rubrolvata (vata) Imai 41,96 6,11 Agaricaceae Lepiota pseudogranlos (Berk. et Br.) Sacc. 40,51 6,20 i» Lepiota clypeolaria (Fr.) Quel 38,06 5,13 Coprinaceae Coprinus stercorarius Fr. 40,35 6,28 11 Panaeolus subbalteatus (Berk. et Br.) Sacc. 42,98 6,80 Bolbitiaceae Agrocybe paludosa (Lange) Ktfhn. et Romagn. 42,87 5,79 Cortinariaceae Inocybe maculata Boud. 41,37 6,03 u Hebeloma sacchariolens 40,59 5,78 (Fr.) Quel. O Teneur Dose en mg/Kg sucre (%) Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) U> "-4 UJ O O 0,72 0,87 0,62 0,40 0,16 0,89 0,20 0,20 0,21 0,24 0,74 0,79 300 100 80 70 80 80 100 100 60 90 90 80 70 100 70 60 70 90 100 100 60 80 100 70 80 w O O UU TABLEAU 8 (3) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Cortinariaceae Gymnopilus liquiritiae (Fr.) Karst 39,41 5,92 ii Hebeloma sinuosum (Fr.) Quel 41,52 6,36 n Cortinarius sangiuneus (Fr.) Fr. 39,04 5,53 Phodophyllaceae Rhodophyllus omiensis Hongo 39,99 6,04 Boletaceae Boletus violaceofuscus Chiu 42,53 5,07 1! Boletus pulverulentus Opat. 41,80 6,11 !f Boletinus pictus (Peck) Peck 41,81 5,85 Russtilaceae Russula pseudodelica Lange 41,82 5,45 M Russula niigatensis Hongo et Matsuda 40,95 6,59 u Lactarius subplinthogalus Coker 42,00 6,77 Corticiaceae Lexitextum bicolor (Pers.) 40,36 6,29 Lentz. Teneur Dose en mg/Kg sucre Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (7=) d'Ehrlich (%) ■^4 O UJ UJ O O 0,76 0,38 0,29 0,63 0,29 0,74 0,32 0,47 0,45 0,73 0,96 300 80 80 60 80 60 90 80 80 60 90 80 90 70 60 90 60 80 70 80 60 100 80 u> co O O UJ UJ TABLEAU 8 (4) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Corticiaceae Cotylidia diajjhana (Schw.) Lentz! 42,57 5,72 11 Stereum princeps (Jungh.) Lev. 39,71 6,89 Phylacteriaceae Bankera fuligineo-alba (Fr.) Pouz. 41,27 5,81 n Polyozellus multiplex (Underw.) Murr. 40,46 6,83 Polyporaceae Coriolus consors (Berk.) Imaz. 41,54 5,70 1! Tyromyces sambucêus (Lloyd) Imaz. 38,06 6,25 n Coltricia dependens (Berk. et Curt.) Imaz. 38,67 5,63 M Polyporus ovinus Fr. 39,07 6,68 M Fomitopsis insularis (Murr.) Imaz. 40,96 6,87 n Ganoderma tsugae Murrill 39,58 6,49 Mucronoporaceae Phellinus setulosus (Lloyed) Imaz. 40,44 6,80 H Holtermannia corniformis Kobayashi 38,45 6,84 Teneur Dose en mg /Kg sucre Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) -•4 O U» UJ o o 0,94 0,52 0,65 0,90 0,77 0,47 0,25 0,76 0,16 0,19 0,33 0,49 300 90 70 80 90 80 90 100 100 100 60 70 80 90 60 90 80 90 90 100 100 100 60 60 70 lo vo SJ O o u> UJ TABLEAU 8 (5) Analyse T eneur Dose Taux d'inhi Taux d'inhi élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la Famille Micro-organisme sucre croissance croissance C H (%) du sarcome de la tumeur , 180 (%) d'Ehrlich (%) Crepidotaceae Rhodophyllus coelestinus 140,68 6,00 Os68 300 70 80 (Fr.) Quel var. violaceus (Kauffm.) A.H.Smith Clavariaceae Clavaria purpurea Fr. 40,20 5,28 0,87 U 80 70 "->4 O uj UJ CD O O hO O O u> UJ 70 37300 41 2070133 tillée et la solution lavée est combinée au produit de dégagement précédemment obtenu et est concentrée à la température ambiante sous une pression inférieure à la pression atmosphérique pour obtenir un volume d'un litre. On ajoute 3 litres d'éthanol au 5 liquide concentré et un précipité, formé en laissant reposer le mélange une nuit, est filtré en utilisant un papier filtre n 5C (Toyo Filter Paper Co., Ltd.j. Le précipité recueilli sur le papier filtre est lavé successivement avec de l'alcool absolu, de l'acétone et de l'éther puis est séché pour obtenir 4,2 g 10 d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. Le tableau 9 donné pages suivantes fournit le résultat des expériences sur l'activité anticancérigène du mucopolysac-charide obtenu de la façon décrite ci-dessus et de ceux obtenus, suivant le procédé décrit ci-dessus ou un procédé semblable, à 15 partir d'autres espèces de basidiomycètes. Exemple 10 : Composition (I) : Peptone 10 g. Extraits de levure 2 g. 20 Extraits de malt 2 g. Phosphate primaire de potassium 0,1 g. Phosphate secondaire de potassium 0,1 g. Sulfate de magnésium (heptahydrate) 0,1 g. Glucose 50 g. 25 Carbonate de calcium 1,5 g. Eau 1 litre pH = 6,5 Un mycélium de Tramets gibbosa Fr., qui a été obtenu par une incubation préliminaire dans 300 ml d'un milieu de cul-30 ture possédant la composition (I.) à une température de 23-25 °C pendant quatre jours suivant la méthode statique, est homogénéisé avec 100 ml de sérum physiologique et est injecté dans 23 litres d'un milieu de culture se troxivant dans une cuve de fermentation d'une contenance de 36 litres. 35 Le milieu de culture possède la composition suivante et a été stérilisé à une température de 120cC pendant 30 minutes puis refroidi : Composition (II) : Peptone 10 g. 40 Extraits de levure 2 g. TABLEAU 9 (1) -4 O CjO --4 U> O O Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur Dose Taux d'inhi-en mg/Kg bition de la sucre croissance (%) du sarcome 180 (7c) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (70) Hygrophoraceae Hygrophorus subviolaceus Peck 41,78 6,08 0,63 300 90 100 II Hygrophorus sciophanus (Fr.) Fr. f.minor Hongo. 40,34 6,17 0,98 " 80 70 ■ U Hygrocybe aurantia Murr. 39,32 5,34 0,96 " 80 90 If Camarophyllus pratensis (Fr.) Karst. 40,92 6,06 0,17 " 100 100 •p- N5 Tricholomataceae Lyophyllum fallax (Peck) Ktfrn. et Romagn. 41,97 5,29 0,11 90 100 i II Mycena roseomarginata Hongo 38,64 6,39 0,29 " 80 90 II Xeromphalina curtipes Hongo 41,19 5,19 0,95 80 70 11 Tricholoma acerbum (Fr.) Quel. 42,35 6,25 0,80 " 70 70 II Oudemansiella mucida (Fr.) Hoehnel 40,12 6,63 0,35 " 80 90 NJ II Pseudohiatula esculenta (Fr.) Sing. ssp. pini Sing. 41,37 6,18 0,14 60 60 O O 11 Mycena osmundicola Lange 40,22 5,63 0,97 " 60 70 U> UJ II Tricholoma albobrunneum (Fr.) Quel. 41,32 5,89 0,33 " 80 70 TABLEAU 9 (2) Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Amanitaceae Amanita lutescens Hongo 38,13 6,69 tt Amanita fuliginea Hongo 38,65 5,96 Agricaceae Macrolepiota rachodes (Vitt.) Sing. 40,86 5,10 Agricaceae Agaricus campestris Fr. 41,29 6,05 11 Lepiota cygnea Lange 41,94 5,76 Coprinaceae Coprinus lagopus (Fr.) Fr. 40,66 5,61 TI Coprinus flocculosus Fr. 42,75 5,26 tl Psathyrella gracilis (Fr.) Quel. 38,16 5,72 Bolbitiaceae Conocybe aurea (J.SchaefÊ) Ktfhn et Romagn. 39,86 6,76 Strophariaceae Pholiota lubrica (Fr.) Sing. 38,91 5,71 it Pholiota name ko (T.Ito) S. Ito et Imai 38,67 6,64 Cortinariaceae Cortinarius pholideus (Fr.) Fr. 42,45 6,59 ti Cortinarius flexipes (Fr.) Fr. 39,18 5,82 -4 O UJ —_— Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi- LO en mg/Kg bition de la bition de la ^ sucre croissance croissance (7o) du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) 0,87 300 0,18 " 0,15 " 0,89 " 0,79 " 0,85 " 0,43 " 0,72 " 0,73 " 0,61 " 0,74 " 0,51 " 0,69 " 100 80 70 80 90 100 100 60 90 90 80 70 80 90 90 80 80 90 90 100 60 100 100 70 70 70 o o UJ uj Famille Mi cro-organi sme Cortinariaceae Phodophyllaceae Boletaceae rr Boletaceae Russulaceae II 11 Clavariaceae ii Cortinarius cinnamomeus (Fr.) S.F.Gray Galerina tibiicystis (Atk.) Ktfhner Cortinarius collinitus (Fr.) Fr. Rhodophyllus mycenoides Hong Xerocomus parvulus Hongo Leccinum rugosiceps (Peck) Sing. Boletus rubellus Krombh. Lactalius vellereus (Fr.) Fr. Russula Sangunea Fr. Lactarius deliciosus (Fr.) S,F.Gray var. Clavaria fumosa Fr. Clavulinopsis miyabeana (S.Ito) S. Ito TABLEAU 9 (3) ">4 O U) -•4 UJ O O Analyse Teneur Dose élémentaire en mg/Kg sucre C H Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) 41,73 6,16 0,89 300 80 90 41,97 6,44 0,74 60 60 41,70 6,37 0,39 " 80 90 38,88 6,75 0,82 " 60 60 39,85 6,65 0,15 " 90 90 39,65 5,05 0,94 80 70 40,68 5,94 0,59 80 90 40,58 6,34 0,33.. 11 60 60 42,21 5,53 0,41 90 90 40,55 5,88 0,67 80 80 38,81 5,65 0,98 " 90 100 41,05 5,73 0,83 " 70 70 •p- -p- K> O >4 O UJ UJ TABLEAU 9 (4) UJ Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur en sucre (%) Dose mg/Kg Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (%) uj o o Corticiaceae Gloeostereum incamatum S. Ito et Imai 40,74 5,48 0,71 300 80 80 II Stereum rugosum Fr. 42,39 6,28 0,94 II 90 80 Hydnaceae Steccherinum ochraceum (Fr.) S.F.Gary 41,77 6,02 0,22 11 80 90 M Hericium laciniatum (Leers) Banker 38,18 5,76 0,59 II 90 80 •p-Ln Polyporaceae Grifora ablicans Imazeki 41,70 6,77 0,97 ir 100 90 n Porodisculus pendulus (Schw.) Murrill 39,96 6,29 0,50 n 100 90 ii Fomitopsis cytisina (Berk) Bond et Sing. 40,81 5,72 0,99 il 100 100 M Polyporus caeruleoprus Peck 39,50 6,89 0,52 u 60 60 Polyporaceae Fomitopsis pinicola (Fr.) Karst 39,96 5,81 0,52 70 80 Mucronoporaceae Cyclomyces fuscus Kunze 41,54 6,83 0,85 n 100 100 K> o II Cryptoderma pini (Fr.) Imazeki 42,47 6,87 0,65 it 100 100 *-4 O Auriculaviales Auricularia auriculajudae (Fr.) Quel. 42,17 6,49 0,31 M 70 80 «Ht u> UJ Crepidotaceae Rhodophyllus salmoneus TPeck) Sing. 38,92 5,85 0,80 n 60 60 TABLEAU 9 (5) Analyse Teneur Dose Taux d'inhi Taux d'inhi , élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la Famille Micro-organisme sucre croissance croissance C H (%) du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) Phylacteriaceae Calodon zonatus (Fr.) 41,39 6,97 0,32 300 100 90 Karst. -4 O LU --4 LU O O -P- a\ K> O ^4 O LU LU 70 37300 47 2070133 Extraits de malt 2 g. Phosphate primaire de potassium 0,1 g. Phosphate secondaire de potassium 0,1 g. Sulfate de magnésium (heptahydrate) 0,1 g. 5 Glucose 50 g. Résine de silicones 0,05 g. Carbonate de calcium 1,5 g. Eau 1 litre pH = 6,5 10 Le milieu de culture est soumis à une incubation aéro bique pendant 10 jours en agitant à une vitesse de 110-120 tours par minute, une température de 23-25°C et avec un débit d'air de 0,15 litre/litre/minute. Le bouillon (15 litres) est filtré sur toile et le 15 filtrat est concentré à la température ambiante sous pression réduite pour obtenir un volume d'un litre. On ajoute 850 g de sulfate d'ammonium au liquide concentré et le mélange est bien agité, on le laisse reposer une nuit dans une chambre réfrigérée et on le soumet le matin suivant à une séparation centrifuge 20 avec une accélération de 1600 g pendant 20 minutes. Le précipité résultant est dissous dans un litre d'eau distillée et la solution est soumise à une ultrafiltration en utilisant un ultrafiltre modèle 2000 comportant une membrane de Diaflo UM-2 (Amicon Corpo- 2 ration, U.S.A.) sous une pression de 7 kg/cm pendant 150 heures. 25 Le liquide recueilli dans le filtre est transféré dans un becher d'une contenance de 3 litres et on y ajoute de l'acide trichloroacétique dans une proportion suffisante pour obtenir une solution à 37o en poids qui est alors agitée, laissée reposer une nuit dans une chambre réfrigérée et soumise le matin suivant à une 30 séparation centrifuge avec une accélération de 10 000 g pendant une heure. Le liquide qui surnage est introduit dans une colonne contenant du Duolite A-7 traité avec une solution de soude caustique à -+%. La colonne est lavée avec 3 litres d'eau distillée et la solution lavée est combinée avec le produit de 35 dégagement précédemment obtenu et est concentrée sous pression réduite pour obtenir un volume d'un litre. On ajoute 3 litres d'acétone au liquide concentré et le précipité résultant est lavé avec de l'acétone pur puis avec de l'éther, et est séché pour obtenir 3,0 g d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. „-j.0 Le tableau 10 donné pages suivantes fournit le résultat TABLEAU 10 (1) Analyse Teneur Dose Taux d'inhi Taux d'inhi élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la Famille Micro-organisme sucre croissance croissance C H (%) du sarcome 180 (%) de la tumeur d'Ehrlich (%) ^4 O UJ UJ O o Hygrophoraceae Hygrouphorus arbustivus Fr. 41,47 5,71 0,44 300 80 70 11 Hygrophorus lilacinogri-seus Hongo 40,74 6,20 0,58 " 80 90 H Hygrocybe laeta (Fr.) Karst 39,76 5,17 0,21 " 70 80 11 Hygrocybe marchii (Bres.) Sing. 40,56 5,48 0,66 90 100 Tricholomataceae Tricholomopsis sasae Hongo 38,59 6,08 0,72 100 100 M Tricholoma saponaceum (Fr.) Kummer var. squamosum (Cooke) Rea 39,22 6,23 0,68 " 90 90 Collybia cookei (Bres.) J.D.Arnold 42,42 5,08 0,49 " 60 70 n Oudemansiella venoso-lamellata (Imazeki et Toki) Imaz. et Hongo 41,01 6,37 0,29 " 100 100 11 Tricholoma ustale (Fr.) Kummer 41,21 5,21 0,31 " 90 90 n Marasmius siccus (Schw.) Fr. Lyophyllum cinerascens (Konr.) Konr. et Maubl. 40,60 6,22 0,89 " 60 60 it 41,18 6,43 0,85 " 80 90 ■P-co bo o o _u UJ UJ TABLEAU 10 (2) Famille Micro-organi sme Analyse élémentaire C H Tricholomataceae II U Amanitaceae I! tl Coprinaceae Bolbitiaceae Strophariaceae 6,69 5,47 38,29 5,94 Tricholoma virgatum (Fr. 39,62 6,43 Gill. Lentinus lepideus Fr. 40,56 Mar a smiu s gr aminum 40,fi 5 (Libert'' Berk. et Br. Xeromph alina cautici-nalis (Fr.) KUhner Amanita flavipes Imai 39,62 6,06 Amanita farinosa Schw. 42,49 5,72 Pluteus cervinus (Secr.; 39,08 5,40 Quel. Psathyrella pennata (Fr.) 39,16 5,90 Konr. et Maubl. Coprinus macrorhizus (Fr.) 41,34 6,43 Rea Agrocybe arvaris (Fr.) 42,57 5,81 Fayod var Tuberigena (Quel.) Konr. et Maubl, Agrocybe cylindraceae 40,42 6,88 (Fr.> Maire Naematoloma gracile Hongo 38,39 5,94 Pholiota spumosa (Fr.) 42,94 6,83 Sing. —1 O U) ->4 Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi- tu en mg/Kg bition de la bition de la ° sucre croissance croissance (%) du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%} 0,84 300 70 60 60 80 90 100 80 100 90 80 100 90 80 70 70 90 fo 90 70 100 100 70 100 80 90 70 ■p- vO K> O O LU Famille Micro-organisme Cortinariaceae I! n n u Boletaceae Russulaceae Clavariaceae Inocybe trechispora (Berk.) Karst Inocybe umbratica Quel. Inocybe calospora Quel. Cortinarius turmalis Fr. Cortinarius mucifuluus (Fr.) Fr. Pulveroboletus auriflammeus (Berk. et Curt) Sing. Xerocomus badius (Fr.) Kîfhner. Lactarius subzonarius Hongo Russula metachroa Hongo Russula cyanoxantha (Secr) Fr. Clavariadeiphus ligula (Fr.) Donk Ramaria apiculata (Fr.) Donk TABLEAU 10 (3) --4 O U) u> o o Analyse Teneur Dose élémentaire en mg/Kg sucre C H Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) 39,90 5,76 0,10 300 100 100 39,27 5,43 0,88 " 90 100 38,24 6,97 0,84 " 80 90 41,23 5,41 0,27 " 70 60 39,96 5,96 0,83 " 100 90 O 39,67 6,61 0,42 " 70 60 42,90 6,57 0,29 " 60 . 70 41,05 5,23 0,72 !' 80. 70 38,46 6,13 0,23 " 70 80 42,19 5,64 0,19 " 70 60 ho o 38,26 5,08 0,66 " 60 60 -^1 O 40,97 6,34 0,56 " 70 60 u> UJ TABLEAU 10 (4) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Corticiaceae Cymatoderma lamellatum (Berk. et Curt.) 41,71 5,90 Hyndnaceae Lopharia mirabilis (Berk. et Br.) Pat. 39,99 5,87 Polyporaceae Polyporellus brumalis (Fr.) Karst. 42,65 6,34 ii Coriolus pubescens (Fr.) Quel. 40,55 5,53 n Tyromyces lacteus (Fr.) Murr. 38,26 6,15 n Polyporus confluens (A. et S.) Fr. 39,23 6,10 M Microporus affinis (Blume et Nees) Kuntze 38,20 5,59 u Trametes gibbosa Fr. 39,25 5,86 Mucronoporaceae Hymenochaete mougeotii (Fr.) Cke. 42,50 6,13 u Auricularia mesenterica (Dicks.) Pers. 38,96 6,63 Mucronoporaceae Calocera viscosa Fr. 41,73 6,16 Agaricaceae Agaricus bisporus (Lange) 39,35 6,80 Sing. ~-4 O Teneur Dose en mg/Kg sucre (%) Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) uj *-4 (jj O O 0,45 300 90 100 0,65 " 80 70 0,79 " 80 70 O CM o 70 80 0,71 " 90 80 0,53 " 80 90 0,20 " 70 80 0,25 " 80 90 0,22 " 60 60 0,90 " 60 60 0,49 " 60 60 0,44 90 100 Ln M NJ O O LU uj TABLEAU 10 (5) Analyse Teneur Dose Taux d'inhi Taux d'inhi élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la Famille Mi cro-organisme sucre croissance croissance C H du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) Crepidotaceae Rhodocybe mundula (Lasch) 40,94 6,61 0,16 300 90 100 Sing. Phylacteviaceae Calodon graveolens (Fr.) 40,53 6,21 0,40 1! 70 80 Quel O U» -^1 LU O O Ui K> K> O "^4 O _a UJ UJ 70 37300 53 2070133 des expériences sur l'activité anticancérigène du mucopolysac-charide obtenu de la façon décrite ci-dessus et de ceux obtenus, suivant le procédé décrit ci-dessus ou.un procédé semblable, à partir d'autres espèces. 5 Exemple 11 : Composition : Extraits de malt (Difco) 50 g. Eau 1 litre On introduit 200 ml d'un milieu possédant la composi-10 tion ci-dessus, appelé bouillon d'extrait de malt, dans 220 flacons d'incubation d'une contenance d'un litre. Les flacons sont bouchés avec du coton, stérilisés pendant 30 minutes à une température de 120°C, laissés reposer pour refroidir puis on y introduit un mycélium de Fomitopsis castanea Imaz. qui a été cultivé 15 séparément. On laisse s'effectuer une incubation statique à une température de 25-28°C pendant 20 jours et le bouillon fermenté est filtré sur toile pour éliminer le mycélium. Le filtrat est ensuite soumis à une ultrafiltration en utilisant une membrane de Diaflo UM-2 sous une pression de 7,0 kg/cm pour obtenir un volume 20 total de 3 litres, puis le liquide est soumis, à une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes pour éliminer le résidu. On ajoute 2550 g de sulfate d'ammonium au liquide qui surnage et le mélange est laissé reposer pendant une nuit et est soumis le matin suivant à une séparation centrifuge 25 avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes. Le précipité résultant est homogénéisé avec 3 litres d'une solution saturée de sulfate d'ammonium et est soumis à une autre séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes. Ce traitement est répété cinq fois puis le liquide est introduit dans une 30 colonne contenant de 1'Amberlite IR-200 activé avec de l'acide chlorhydrique 1-N. La colonne est lavée avec un litre d'eau distillée et la solution lavée est combinée avec le produit dégagé précédemment, est laisséereposer une nuit dans une chambre réfrigérée et est soumise le matin suivant à une séparation centrifuge 35 avec une accélération de 10 000 g pendant 30 minutes. Le précipité résultant n'est pas utilisé et le liquide qui surnage est introduit dans une colonne comprenant du Dowex-1 activé. Le produit qui se dégage est concentré à la température ambiante sous une pression réduite pour obtenir un volume d'un litre, on y ajoute 3 40 litres d'éthanol et le précipité résultant est filtré, lavé avec 70 37300 54 2070133 de l'alcool absolu, de l'acétone et de l'éther puis séché pour obtenir 10,8 g d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. Le tableau 11 donné pages suivantes fournit le résultat des expériences sur l'activité anticancérigène du mucopolysac-5 charide obtenu de la façon décrite ci-dessus et de ceux obtenus, suivant le procédé décrit ci-dessus ou un procédé semblable, à partir d'autres espèces. Exemple 12 : 40 grammes de poudre de maîs et un litre d'eau sont 10 bouillis à 100°C pendant 3 heures en ajoutant continuellement de l'eau, puis on laisse le mélange se refroidir, on le filtre et on ajoute 10 g de sucre de canne au filtrat. On introduit 180 ml du bouillon dit d'extrait de maîs préparé d'après les proportions ci-dessus dans 813 flacons d'incubation d'une contenance d'un 15 litre. Les flacons sont fermés avec du coton, stérilisés pendant 30 minutes à une température de 120°C, laissés refroidir à la température ambiante puis on y introduit un mycélium de Rigidoporus ulmarius (Fr.) Imaz. précédemment préparé. On laisse incuber statiquement à une température de 23-27°C pendant 20 jours 20 et le mycélium est éliminé du milieu de culture fermenté. Le filtrat est alors concentré à la température ambiante sous une pression inférieure à la pression atmosphérique pour obtenir un volume de 10 litres. On ajoute 8,5 kg de sulfate d'ammonium au liquide concentré et le mélange est bien agité, laissé reposer une 25 nuit dans une chambre réfrigérée et filtré le lendemain matin. Le précipité recueilli sur le papier filtre est lavé avec 5 litres de solution saturée de sulfate d'ammonium, dissous dans 2 litres d'eau distillée puis soumis à une dialyse à l'eau courante pendant 60 heures en utilisant un tube contenant de la cellophane. 30 La solution contenue dans le tube est concentrée pour obtenir un volume d'un litre et on y ajoute de l'acide trichloroacétique dans une proportion suffisante pour obtenir une solution à 3,5% en poids que l'on laisse alors reposer une nuit dans une chambre réfrigérée et que l'on soumet le matin suivant à une séparation 35 centrifuge avec une accélération de 10 000 g pendant 30 minutes. Le précipité n'est pas utilisé et le liquide qui surnage est soumis à une ultrafiltration en utilisant une membrane de Diaflo UM-2, possédant un diamètre de 150 non, sous une pression de 7kg/cm . Le lavage et le filtrage sont réalisés en utilisant 40 160 litres d'eau distillée et 1'ultrafiltration permet de concen- TABLEAU 11 (1) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Hygrophoraceae Hygrophorus pantoleucus Hongo 41,92 5,15 t? Hygrophorus reai Maire 40,95 5,12 tî Hygrocybe flavescens (Kauffum) Sing. 41,45 6,12 Tricholomataceae Glitocybe cancdicans (Fr.) Kummer 40,08 5,18 n Mycena amicta (Fr.) Quel. 39,85 6,55 ! ï Lypophyllum aggregatum (Secr.) Ktfhner 40,84 5,83 II Clitocybe clavipes (Fr.) Quel. 41,78 6,98 1T Pleurocybella porrigens (Fr.) Sing 38,17 5,39 f! Armillariella mellea (Fr. ) Karst. 39,76 5,86 n Omphalina rustica (Fr.) Quel. 38,44 5,18 Amanitaceae Amanita longistriata Imai 40,66 5,68 Amanita phalloides (Fr.) 39,24 5,57 Secr. O Teneur Dose en mg/Kg sucre Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (% ) tu u) o o 0,12 300 90 100 90 60 70 100 70 100 70 80 60 100 100 100 80 60 80 100 60 90 80 80 70 90 Ui Ln K> O O —a tx> lu TABLEAU 11 (2) ">4 O Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur en sucre (%) Dose mg/Kg Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (%) OU o o Agaricaceae Cystoderma granulosum (Fr.) Fayod 39,73 6,54 0,43 300 80 80 H Agraricus arvensis Fr. 41,60 5,00 0,79 M 100 100 11 Cystoderma amianthinum (Fr.) Fayod 42,37 6,46 0,33 M 100 100 Coprinaceae Coprinus phlyctidosporus Romagn. 39,67 6,49 0,12 11 70 80 Ui os it Coprinus atramentarius (Fr.) Fr. 40,28 5,80 0,83 11 100 100 Strophariaceae Pholiota terrestris Overh. 38,15 5,41 0,11 U 60 60 II Stropharia aeruginosa (Fr.) Quel. 38,19 6,61 0,41 11 70 60 Cortinariaceae Cortinarius aurantiofulvus Hongo 41,81 6,47 0,16 H 80 70 u Cortinarius semisanguineus (Fr.) Gill. 38,86 5,63 0,25 11 90 i 80 u Inocybe lutea Kobayasi et Hongo 40,91 -5,30 0,58 11 90 80 O *wi ii Gymnopilus spectabilis (Fr.) A.H. Smith ' 41,71 5,45 0,19 11 60 70 O u Cortinarius bovinus Fr. 40,66 5,33 0,68 ir 90 80 OU OU Phodophyllaceae Rhodophyllus pulchellus 42,96 5,67 0,70 it 60 60 Famille Mi cr o-organi sme Boletaceae 11 Russulaceae ii u Clavariaceae Corticiaceae Hydnaceae 11 Polyporaceae n Xerocomus subtomentosus (Fr.: Quel. Boletellus retisporus (Pat. et Baker) Sing. Xerocomus astraeicola Imazeki. Russula adusta (Fr.) Fr. Russula foetens Fr. Lactarius acris (Fr.) S.F. Gray Clavulinopsis helveola (Fr.) Corner Stereum annosum Berk. et Br Hericium erinaceum (Fr.) Pers. Hydnum repandum Fr. Favolus arcularius (Fr.) Ames Gloeoporus amorphus (Fr.) Clem et Shear Fomitopsis castanea Imaz. TABLEAU 11 (3) *»4 O LU OU o o Analyse élémentaire C H Teneur en sucre Dose Taux d'inhi-mg/Kg bition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (%. 42,83 6,44 0,77 300 70 70 41,60 5,63 0,54 " 100 90 42,17 6,25 0,52 ii 80 80 38,69 5,12 0,53 H 80 80 loi •-J 41,93 5,26 0,43 n 70 70 39,30 6,25 0,37 ii 100 100 39,29 6,76 0,15 ■ 60 60 42,31 6,95 0,26 ii 90 100 38,33 6,27 0,27 u 90 80 38,84 6,41 0,62 n 90 90 ho o 39,48 6,21 0,50 m 90 100 38,31 5,81 0,96 n 90 90 o —a 39,69 5,15 0,72 h 90 100 ou ou TABLEAU 11 (4) O uj u> o o Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur en sucre fc9 Dose mg/Kg Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (7c) Polyporaceae Ischnoderma resinosum (Fr.) Karst. 41,99 5,76 0,79 300 70 ' 80 Mucronoporaceae Inonotus tabacinus (Mont.) Karst. 39,86 6,97 0,44 100 90 Tremellales Tremella foliacea Fr. 39,13 5,60 0,40 " 90 90 Mucronoporaceae Dacryomyces aurantius (Schw.) Farlow 39,21 6,47 0,53 " 60 60 Bolbitiaceae Bolbitius variicolor Atkinson 41,27 6,57 0,27 " 60 60 Crepidotaceae Rhodophyllus clypeatus (Fr.) Quel. 38,27 5,54 0,31 " 100 100 Gomphidiaceae Gomphidius roseus (Fr.) Karst. 41,15 6,58 0,58 " 90 80 Strobilomycetaceae Boletellus russellii (Frost) Gilb. 38,18 5,29 0,50 " 60 60 Cantharellaceae Cantharellus infundibili-formis (Scop.) Fr. 42,95 5,65 0,28 " 70 80 Phylacteriaceae Sarcodon scabrosus (Fr.) 39,14 5,65 0,11 " 90 90 Ln co ho o --4 o uu lu 70 37300 59 2070133 trer le liquide pour obtenir un volume de 600 ml. On ajoute 1,8 litres d'éthanol et on laisse le mélange reposer une nuit dans une chambre réfrigérée et on le soumet le matin suivant à une séparation centrifuge avec une accélération de 1600 g pendant 5 20 minutes. Le précipité est dissous dans 3 litres d'eau distillée et on élimine l'êthanol sous pression réduite en ajoutant continuellement de l'eau. Le séchage à basse température de ce liquide fournit 29,1 g d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. Le tableau 12 donné pages suivantes fournit le résultat 10 des expériences sur l'activité anticancérigène du mucopolysac-charide obtenu de la façon décrite ci-dessus et de ceux obtenus, suivant le procédé décrit ci-dessus ou un procédé semblable, à partir d'autres espèces de basidiomycètes. Exemple 13 : 15 Composition : Glucose 50 g. Phosphate primaire de potassium 5 g. Nitrite d'ammonium 10 g. Sulfate de magnésium (heptahydrate) 2,5 g. 20 Chlorure ferrique trace Eau 1 litre On introduit 150 ml du milieu de culture possédant la composition ci-dessus, appelé milieu de Pefer, dans 177 flacons d'incubation d'une contenance d'un litre. Les flacons sont fermés 25 avec du coton, stérilisés à une température de 121°C pendant 30 minutes et refroidis à la température ambiante. On introduit un mycélium de Fomes fomentarius (Fr.) Kickx, préparé précédemment, dans ce milieu de culture et on laisse incuber statiquement à une température de 23-25°C pendant 22 jours. Le bouillon incubé est 30 alors filtré sur toile et concentré à la température ambiante sous une pression réduite pour obtenir un volume d'un litre. On ajoute de l'acide trichloroacétique, en agitant, au liquide concentré dans une proportion suffisante pour obtenir une solution à 47o en poids que l'on laisse alors reposer une nuit dans une 35 chambre réfrigérée et que l'on soumet le lendemain matin à une séparation centrifuge avec une accélération de 10 000 g pendant 30 minutes. Le précipité n'est pas utilisé et le liquide qui surnage est introduit dans une colonne contenant du Duolite A-7 activé avec de la soude caustique à 4%. La colonne est lavée 40 avec 3 litres d'eau distillée et l'eau de lavage ainsi que le TABLEAU 12 (1) Analyse élémentaire Famille . Micro-organisme C H Hygrophoraceae Hygrophorus hypothejus (Fr.) Fr. f. pinetorum (Hongo) Hongo 41,16 6,32 II Hygrocybe ovina (Fr.) Kuhn. 38,65 6,04 Tricholomataceae Tricholomopsis battibusina Hongo 41,12 5,29 Mycena floccipes (Fr.) Ktfhn. 40,72 5,22 n Laccaria laccata (Fr.) Berk. et Br. 39,44 6,16 n Clitocybe acromelalga lchimura 40,15 5,88 ii Clitocybe odora (Fr.) Quel. 38,14 5,86 n Amillariella tabescens (Fr.) Sing 39,61 5,37 M Tricholoma vaccintua (Fr.) Quel. 41,99 5,87 Amanitaccae Amanita pseudoporphyria Hongo 38,61 6,47 n Amanita pantherina (Fr.) Secr. 38,08 6,65 Teneur Dose en mg/Kg sucre 0,39 300 Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) --4 O uj uj cd O 60 60 0,34 0,25 0,33 0,78 0,80 0,87 0,15 0,38 0,30 0,38 100 60 80 70 80 70 70 70 100 70 100 60 90 60 80 60 70 80 90 80 O K) O O UJ UJ TABLEAU 12 (2) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Amanitaceae Amanita inaurata Secr. 42,07 5,63 Agaricaceae Lepiota americana (Peck) Peck 41,87 6,81 M Agaricus placomyces Peck 41,97 5,22 11 Macrolepiota procera (Fr.) Sing. 42,13 5,72 II Lepiota seminuda (Lasch) Gill. 40,68 6,53 Coprinaceae Coprinus angulatus Peck 38,29 6,61 n Coprinus micaceus (Fr.) Fr. 40,95 5,26 Strophariaçeae Psilocybe fasciata Hongo 41,83 5,36 n Pholiota astragalina (Fr.) Sing. 41,45 6,13 Cortînariaceae Cortinarius melliolens P,D.Orton 41,48 6,79 u Cortinarius subalboviola-ceus Hongo 39,62 6,70 u Cortinarius rubicundulus (Rea) Pearson 38,61 5,11 u Inocybe pracetervisa Quel. 39,57 5,70 --4 O Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi- en mg/Kg bition de la bition de la sucre croissance croissance (7o) du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) uu CO O o 0,21 300 70 60 0,14 " 80 70 0,47 " 60 60 0,47 100 100 0,26 " 70 60 0,54 60 60 0,96 " 70 80 0,87 80 80 0,53 " 70 60 0,32 " 80 70 0,40 " 90 100 0,40 11 70 80 0,96 " 100 100 cr» hO o "-4 O lu uj TABLEAU 12 (3) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Cortinariaceae Galerina hypnorum (Fr.) KtThner 40,29 6 ,52 Phodophyllaceae Rhodophyllus acutoconicus Hongo 38,10 5 ,97 Boletaceae Xerocomus chrysenteron (St Amans) Quel. 41,86 5 ,46 n Gyroporus castaneus (Fr.) Quel. 41,87 6 ,03 tî Leccinum aurantiacum S.F. Gray 38,22 5 ,70 Russulaceae Russula vesca Fr. 38,29 5 ,40 H Russula rubescens Beardslee 40,98 6 ,97 u Lactarius violascens Fr. 42,03 5 ,33 Clavariaceae Clavaria vermicularis Fr. 41,05 5 ,80 Corticiaceae Stereum spectabile Klot-zsch 40,61 5 ,29 Hydnaceae Sarcodontia copelandii (Pat.) Imazeki comb. nov. 42,99 5 ,53 Polyporaceae Grifola frondosa (Fr.) 39,06 6 ,77 S.F. Gray O Teneur Dose en mg/Kg sucre Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) U» -^1 U) O o 0,76 300 90 80 0,1-3 "• 70 60 0,13 " 100 90 0,92 " 80 70 0,66 11 90 100 0,99 " ' 90 90 0,47 " 70 60 0,24 60 60 0,49 " 90 80 0,57 " 80 70 0,74 " 100 100 0,32 " 100 90 ro K> O O U> U> TABLEAU 12 (4) ° LU 1 Analyse Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi- lu élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la O Famille Micro-organisme sucre croissance croissance O C H (%) du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) polyporaceae Hirschioporus versetilis (Berk.) Imaz 42,65 5,37 0,25 300 70 70 t! Laetiporus versisporus (Lloyd) Imazeki 39,01 5,47 0,43 90 100 ! ! Il Rigidoporus durus (Jungh) Imaz. Polyporellus squamosus (Fr.) Karst 42,71 40,48 6,74 5,25 0,62 " 0,17 100 80 100 90 cr> w 1! Rigidoporus ulmarius (Fr.) Imaz. 42,01 5,21 0,97 " 70 80 Mucronoporaceae Inonotus hipsidus (Fr,) Karst. 38,51 5,47 0,11 " 80 70 n Hymenochaete intricata Lloyd Pyrrhoderma sendaiense (Yasuda) Imaz. 39,57 5,09 0,84 11 60 60 tî 42,37 6,80 0,99 " 70 60 n Inonotus sciurinus Imazeki 40,60 5,06 0,63 " 60 70 to Tremellales Protodaedalea hispida Imazeki 39,51 5,81 0,32 " 70 80 O ^4 r-> Crepidotaceae Rodophyllus mammosus (Fr.) Quel. 42,22 6,10 0,96 " 100 100 i * r—A lu lu Cantharellaceae Cantharellus floccosus Schw. 38,24 6,75 0,23 100 90 70 37300 64 2070133 produit dégagé précédemment obtenu sont combinés et concentrés à la température ambiante sous pression réduite pour obtenir un volume d'un litre. On ajoute 850 g de sulfate d'ammonium au liquide concentré et le mélange est agité, on le laisse reposer 5 une nuit dans une chambre réfrigérée et on le soumet le matin suivant à une séparation centrifuge avec une accélération de 1600 g pendant 15 minutes. Le précipité est recueilli et dissous dans 2 litres d'eau distillée et la solution est soumise à une ultrafiltration en utilisant une membrane de Diaflo UM-2 à une 10 pression de 7,0 kg/cm . Le lavage est effectué en utilisant 30 litres d'eau distillée et la concentration par ultrafiltration se poursuit jusqu'à ce que le volume global soit égal à un litre. Le liquide contenu dans le filtre est alors successivement passé à travers des colonnes de Duolite C-25D activé et d'Amberlite 15 IRA-400, et les colonnes sont lavées avec 2 litres d'eau distillée, l'eau de lavage étant combinée avec le produit dégagé précédemment obtenu et concentrée à la température ambiante sous une pression inférieure à la pression atmosphérique pour obtenir un volume d'un litre. On ajoute 3 litres d'éthanol au liquide 20 concentré et on laisse reposer le mélange une nuit dans une chambre réfrigérée. Le précipité formé est filtré en utilisant un papier filtre n°5C et le résidu est lavé avec 3 litres d'éthanol à 80% et dissous dans un litre d'eau distillée. On élimine l'êthanol sous pression réduite en ajoutant continuellement de 25 l'eau à la solution, et la solution est alors séchée à basse température pour obtenir 3,7 g d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. des expériences sur l'activité anticancérigène du mucopolysac-30 charide obtenu de la façon décrite ci-dessus et de ceux obtenus, suivant le procédé décrit ou un procédé semblable, à partir d'autres espèces. Exemple 14 : Le tableau 13 donné pages suivantes fournit le résultat 35 Composition : Glucose 40 g. Corn-steep Nitrite de sodium Phosphate primaire de potassium Carbonate de calcium Eau 20 g. 3 g. 0,5 g. 3 g. 40 1 litre TABLEAU 13 (1) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Hygrophoraceae Hygrophorus lucorum Kalchbr. 39 ,66 6 ,47 Camarophyllus virgirleus (Fr.) Karst 39 ,26 6 ,23 Laccaria proxima (Boud.) Pat. 39 ,23 6 ,69 Tricholoma sulphureum (Fr.) Kummer. 42 ,60 5 ,35 Collybia peronata (Fr.) Kummer 42 ,43 5 ,55 Macrocystidia cucumis (Fr . ) Heitn 39 ,70 6 ,69 Mycena rorida (Fr.) Quel. 41 ,98 6 ,90 Marasmius chamaeeyparidis Hongo 41 ,89 5 ,86 Lampteromyes japonicus (Kawam.) Sing. 38 ,79 5 ,74 Tricholoma robustum (Fr.) Ricken 38 ,03 6 ,39 Melanoleuca verrucipes (Fr.) Sing. 42 ,35 5 ,15 O UJ ^ Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi- UJ en mg/Kg bition de la bition de la O sucre croissance croissance O (%) du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) 0,71 300 100 90 0,50 " 60 60 0,54 60 70 0,36 " 90 80 ON Ln 0,23 " 60 60 0,54 " 100 90 0,31 " 100 90 0,82 " 60 70 0,98 11 80 70 0,14 100 100 K5 o 0,12 " 90 100 o UJ UJ Famille Micro-organisme TABLEAU 13 (2) Analyse élémentaire C H Teneur en sucre Dose Taux d'inhi-mg/Kg bition de la croissance du sarcome 180 Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (%) O ou ou O O Tricholomataceae Hohenbuehelia serotina (Fr.) Sing. 40,33 6,90 0,15 300 70 70 n Pleurotus ostreatus (Fr.) Quel. 41,80 5,98 0,26 H 60 60 Tî Cantharellula cyathiformis (Fr.) Sing. 41,20 5,39 0,78 0? 80 70 ON ON Amanitaceae Amanita spissacea Imai 40,92 6,16 0,25 U 90 100 Agricaceae Coprinus plicatilis (Fr.) Fr. f. microsporus (Ktftin) Hongo et Aoki. 38,82 5,56 0,47 11 70 80 n Coprinus plicatilis (Fr.) Fr. 39,40 6,21 0,28 n 100 90 Amanitaceae Amanita agglutinata (Berk. et Curt.) Sing. 39,13 5,52 0,47 ii 100 90 Bolbitiaceae Conosybe tenera (Fr.) Fayod. 39,44 6,23 0,41 n 90 100 T t Conocybe lactea (Lange) Metrod 41,71 5,00 0,50 u 100 90 K> O Cortinariaceae Inocybe obscura (Rers.) Gill 41,56 5,87 0,61 ti 60 60 «^1 O n Inocybe kasugayamensis Hongo 41,06 5,20 0,88 il 90 80 uj uj TABLEAU 13 (3) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Cortinariaceae Cortinarius watamukiensis Hongo 42 ,31 5 ,40 If Inocybe fastigiata (Fr.) Quel. 42 ,37 6 ,73 11 Cortinarius elatior Fr. 41 ,58 5 ,38 Crepidotaceae Crepidotus sulphurinus Imaz. et Toki 41 ,18 5 ,48 M Clitopilus lignyotus Hongo 38 ,24 5 ,55 11 Rhodophyllus sinuatus (Fr.) Sing. 40 ,54 5 ,44 Phodophyllaceae Rhodophyllus chamaecyparis Hongo 41 ,38 5 ,95 Boletaceae Porphyrellus subvirens Hongo 38 ,08 5 ,19 M Phylloporus rhodoxanthus (Schw.) Bres. 40 ,28 6 ,65 T! Tylopilus felleus (Fr.) Karst. 38 ,65 6 ,51 Russulaceae Russula subnigricans Hongo 40 ,17 5 ,17 ii Russula delica Fr. 42 ,82 5 ,60 O UJ Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi- uo en mg/Kg bition de la bition de la O sucre croissance croissance O (%) du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) 300 60 60 60 70 70 100 90 100 70 60 100 100 100 100 80 100 100 100 60 70 90 100 100 100 ON ^1 O *-4 O u> u> TABLEAU 13 (4) ° LU Analyse Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi-élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la o Famille Micro-organisme sucre croissance croissance o C H (%) du sarcome de la tumeur 180 (70 d'Ehrlich (%) Russulaceae Lactarius volemus Fr. 38,00 5,98 0,94 300 80 90 Corticiaceae Stereum umbrinus Berk. et Curt. 40,28 5,76 0,76 80 90 n Stereum taxodii Lentz * et Mckay 38,07 5,53 0,62 " 90 60 Hydnaceae E chinodontium j ap onicum Imazeki 42,44 6,02 0,11 11 60 60 ON 03 Polyporaceae Polyporus pes-caprae Fr. 41,64 6,35 0,89 80 90 Microporus flabelliformis (Fr.) Kuntze 42,16 5,94 0,34 , " 90 100 II Coriolus biformis (Klotz) Pat. 38,41 5,91 0,21 " 70 60 II Fomes fomentarius (Fr.) Kickx 39,75 5,65 0,42 70 70 II Ganoderma neo-japonicum Imaz. 42,75 5,20 0,57 " 80 90 Coriolus versicolor (Fr.) Quel 38,19 6,01 0,59 80 90 O O Mucronoporaceae it Hymenochaete erubiginosa (Fr.) Lev Hymenostilbe sphinghum (Schw.) Petch 39,58 39,58 6,53 5,51 0,19 0,30 " 90 60 90 60 U» u» TABLEAU 13 (5) O 00 ou o o Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur en sucre Dose Taux d'inhi-mg/Kg bition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (%) Tremellodon gelatinosum Fr. Leucocoprinus luteus (Secr.) Locquin Lepiota hystrix Muller et Lange Pholiota adiposa (Fr.) Quel. Strobilomycetaceae B oletellus floriformis Imazeki Tremellales Agaricaceae M Strophariaceae 40,75 5,47 0,30 300 90 90 38,23 6,57 0,37 n 70 80 41,35 6,92 0,70 il 70 70 42,58 6,10 0,84 n 70 80 40,31 6,98 0,97 it 80 70 CTi VO iro o •^4 O UJ UJ 70 37300 70 2070133 On introduit 200 ml du milieu de culture possédant la composition précédente dans 1324 flacons d'incubation d'une contenance d'un litre, on porte à une température de 120°C pendant 30 minutes pour la stérilisation puis on refroidit à la tempéra-5 ture ambiante. On introduit alors un mycélium de Gandoderma boninense Pat, préparé précédemment, dans le milieu de culture et on laisse incuber statiquement à une température de 20-23°C pendant 21 jours. Le bouillon incubé est filtré pour éliminer le mycélium et le filtrat est concentré à température ambiante sous 10 une pression réduite pour obtenir un volume de 10 litres. On ajoute 30 litres d'éthanol à la solution concentrée et le mélange est laissé reposer une nuit dans une chambre réfrigérée et est filtré le lendemain matin à l'aide d'un papier filtre. Le résidu recueilli sur le filtre est lavé de façon répétée avec de l'étha-- 15 nol absolu puis avec de l'acétone pure et de l'éther, puis est séché. Le solide séché est dissous dans un litre d'eau distillée et les matières insolubles sont éliminées par filtrage en utilisant un papier filtre n°5C. On ajoute 850 g de sulfate d'ammonium au filtrat et le mélange est bien agité, on le. laisse reposer une 20 nuit dans une chambre réfrigérée et on le soumet le lendemain matin à une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes. Le précipité est recueilli, homogénéisé avec un litre de solution saturée de sulfate d'ammonium et soumis à une autre séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g 25 pendant 15 minutes. Ce traitement est répété six fois et le précipité est dissous dans un litre d'eau distillée et filtré à l'aide d'un papier filtre n°2. Le filtrat est passé successivement dans des colonnes de Duolite C-27 activé et drAmberlite IR-401, ces colonnes sont lavées avec 2 litres d'eau distillée et l'eau 30 de lavage est combinée avec le produit dégagé et concentrée à température ambiante sous une pression réduite pour obtenir un volume de 830 ml. On ajoute 2490 ml d'acétone pure au liquide concentré et le mélange est laissé reposer une nuit dans une chambre réfrigérée et est soumis le matin suivant à une sépara-35 tion centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes. Le précipité est recueilli, lavé avec 3 litres d'acétone à 75% et dissous dans 3 litres d'eau distillée. L'acétone est éliminée en ajoutant continuellement de l'eau dans la solution sous pression réduite, et la solution est séchée à basse température 40 pour obtenir 36,7 g d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. 70 37300 71 2070133 Le tableau 14 donné pages suivantes fournit le résultat des expériences sur l'activité anticancérigène du mucopolysac-charide obtenu de la façon décrite ci-dessus et de ceux obtenus, suivant le procédé décrit ou un procédé semblable, à partir 5 d'autres espèces. Exemple 15 : Composition : composition suivante, appelé milieu de Sabouraud, dans 220 flacons d'incubation d'une contenance d'un litre, on ferme ces flacons avec du coton, on les porte à une température de 120'C 15 pendant 30 minutes pour les stériliser et on les fait refroidir à la température ambiante. On injecte un mycélium de Ganoderma lucidum (Fr.) Karst, précédemment préparé, dans le milieu de culture et on laisse incuber statiquement à une température de 24-26°C pendant 18 jours. Le bouillon incubé est filtré sur toile 20 pour éliminer le mycélium et le filtrat est concentré à la température ambiante sous pression réduite pour obtenir un volume de 3,3 litres, et est soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 1300 g pendant minutes pour éliminer le précipité. On ajoute 2460 g de sulfate d'ammonium au liquide qui 25 surnage et le mélange est bien agité, on le laisse reposer une nuit dans une chambre réfrigérée et on le soumet le matin suivant à une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 20 minutes. Le précipité résultant est recueilli, homogénéisé avec 3,3 litres d'une solution saturée de sulfate d'ammonium puis 30 est soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 20 minutes. Ce traitement est répété huit fois et le précipité résultant est dissous dans 3 litres d'eau distillée. La solution est passée successivement à travers des colonnes échangeuses d'ions contenant du Dowex-50W et de 1'Amberlite IR-401, 35 les colonnes sont lavées avec 3 litres d'eau distillée et l'eau de lavage ainsi que le produit dégagé sont combinés et sont soumis à une ultrafiltration. Après avoir effectué un lavage avec 30 litres d'eau distillée, on poursuit 1'ultrafiltration jusqu'à ce que le volume total du liquide soit égal à 1,1 litres, puis le 40 liquide est passé dans une colonne contenant du Duolite S-30 10 Peptone Glucose Eau 10 g. 40 g. 1 litre On introduit 220 ml du milieu de culture possédant la Famille Mi cr o - or g ani sme Hygrophoraceae Tricholomataceae Hygrophorus leucophaeus (Fr.) Gill. Hygrocybe psittacina (Fr.) Karst. Dictyopanus pusillus (Lev) Sing. Armillariella ectypa (Fr.) Sing. Collybia maculata (Fr.) Kummer Collybia erythropus (Fr.) Kummer Marasmius maximus Hongo Mycena polygramma (Fr.) S.F.Gray Lyophyllum ulmarium (Fr.) KUhner Laccharia tortilis (Fr.) Boud Pleurotus cornucopiae (Pers.) Rolland Marasmiellus fibula (Fr.) Sing. -vl TABLEAU 14 (1) O U> Analysé Teneur Dose Taux, d'inhi- Taux d'inhi-élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la q sucre croissance croissance q C H (%') du sarcome de la tumeur 180 (7o) d'Ehrlich (%) 41,52 5,80 0,50 300 60 70 39,74 5,73 0,87 n 100 100 41,54 6,56 0,46 ii 60 70 40,44 6,14 0,61 ii 90 100 ro 42,64 5,02 0,81 Mi * 100 100 38,00 5,31 0,77 iî , " 60 60 41,33 6,96 • 0,23 n : 70 70 38,81 ; 6,97 0,23 ir 7° 60 39,14 40,76 5,95 5,30 0,82 0,11 u u 60 100 60 100 K> O 38,14 5,59 0,54 n 80 70 O U) ou 41,81 5,93 0,53 n 60 70 TABLEAU 14 (2) •^1 O lu ■^1 lu O O Famille Hiero-organi sme Analyse élémentaire C H Teneur Dose Taux d'inhi-en mg/Kg bition de la sucre croissance (%) du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (?01 60 60 60 60 80 70 60 60 100 90 90 100 70 60 60 60 90 90 100 90 100 100 60 70 60 60 Tricholomataceae Macrocystidia cucumis (Fr. ) Heim var latifolia (Lange) Imazeki et Hongo 42,81 5, 85 0,70 Amanitaceae Amanita spreta (Peck) Sacc 40,39 6, 27 0,58 u Amanita esculenta Hongo et Matsuda 42,72 5, 61 0,96 Agricaceae Lepiota flava Beeli 39,59 6, 07 0,44 n Lepiota castanea Quel. 40,20 5, 79 0,39 Coprinaceae Pseudocoprinus dissemi-natus (Fr.) KUhner 40,23 6, 71 0,43 Bolbitiaceae Conocybe blattaria (Fr.) KUhn. (sensu KUhn.) 42,84 6, 27 0,42 Cortinariaceae Inocybe bispora Hongo 39,94 5, 15 0,34 11 Inocybe subvolvata Hongo 38,94 5, 88 0,43 fl Cortinarius vibratilis (Fr.) Fr. 40,88 5, 38 0,39 n Inocybe lacera (Fr.)Quel. 39,46 5, 31 0,23 n Galerina marginata (Fr.) KUhner 42,56 5, 35 0,61 il Gymnopilus aeruginosus (Peck) Sing. 40,00 6, 78 0,15 300 us hO O O «■™dl U» lu TABLEAU 14 (3) -a o Famille Mlcro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur en sucre (%) Dose mg/Kg Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (%) 37300 Phodophyllaceae Rhodophyllus babingtonii (Blox.) Quel. £. japonicus Hongo 40,04 5,93 0,18 300 90 100 Boletaceae Boletus satanas Lenz 41,62 5,51 0,13 II 100 100 n Suillus luteus (Fr.) S.F. Gray 39,26 5,68 0,54 M 90 80 -^i Russulaceae Russula laurocerasi Melser 39,56 5,30 0,16 n 90 80 -p- 11 Russula aurata Fr. 39,48 6,81 0,86 1! 70 60 n Russula nigricans Fr. 39,91 6,90 0,20 n 60 60 u Lactrarius camphoratus Fr. 41,90 6,46 0,26 M 70 70 Corticiaceae Aleurodiscus amorphus Rabenh. 42,88 6,99 0,89 n 100 100 n Stereum purpureum Fr. 42,26 5,98 0,90 n 70 60 Hydnaceae Sistotremma confluens Fr. 42,53 6,11 0,74 100 100 Phylacteriaceae Hydnellum caeruleum (Pers.) Karst. 40,12 6,06 0,80 M 60 60 K) Polyporaceae tî Grifola umbellata (Fr.) Pilât Piptoporus betulinus (Fr.) Karst. 42,25 38,62 5,83 5,39 0,55 0,53 1! II 70 60 80 60 O O Uo lu ii Daedaleopsis tricolor (Fr. ) Bond, et Sing. 39,99 6,16 0,90 It 90 90 TABLEAU 14 (4) •*«1 O Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur en sucre Dose mg/Kg Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (%; Polyporaceae Ganoderma boninense Pat. 41,57 6,13 0,51 300 100 100 tî Coriolus hirsutus (Fr.) Quel. 42,48 5,68 0,17 tî 90 10 Mucronoporaceae Coltricia cinnamomea (Fr., Murrill 39,65 5,95 0,76 II 90 100 Tremellales Phlogiotis helvelloides (Fr.; Martin 39,99 5,85 0,64 ff 100 100 Geoglossaceae Geolossum fallax Durand 40,27 5,65 0,44 1! 70 c'.O S tr ophar i ac e ae Naematoloma squamosum (Fr. ) Sing. Bar. var. thraustum (Kalchbr.j Imazeki et Hongo 42,72 6,00 0,13 Il 90 100 Crepidotaceae Crepidotus subsphaerosporus (Lange; KUhn et Romagn. 39,84 6,50 0,32 1! 100 100 Gomphidiaceae Gomphidius rutilus (Fr.) Lundell et Nannfeldt 42,96 5,53 0,97 60 60 Strobilomycetaceae Porhyrellus fusisporus (Kawam.) Imazeki et Hongo 38,37 5,69 0,75 II 70 70 Cantharellaceae Cantharellus cibarius Fr. 41,47 6,58 0,31 II 80 70 ou *■4 u) O O »vl Ol KJ) O •^1 O OU OU 70 37300 76 2070133 activé avec de l'acide chlorhydrique à 4% et de la soude caustique à 4%. La colonne est lavée avec 3 litres d'eau distillée et l'eau de lavage est combinée avec le produit dégagé et concentrée à la température ambiante sous pression réduite pour obtenir un volume 5 de 1,1 litres. On ajoute 3,3 litres d'éthanol au liquide concentré, on le laisse reposer une nuit dans une chambre réfrigérée et on le soumet le matin suivant à une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes. Le précipité résultant est dissous dans 3 litres d'eau distillée et on élimine 10 l'êthanol sous pression réduite à température ambiante en ajoutant continuellement de l'eau dans la solution. On sèche le liquide résiduel à basse température et on obtient 2,1 g d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. Le tableau 15 donné pages suivantes fournit le résultat 15 des expériences sur l'activité anticancérigène du mucopolysac-charide obtenu de la façon décrite ci-dessus et de ceux obtenus, suivant le procédé décrit ou un procédé semblable, à partir d'autres espèces. Exemple 16 : 20 Composition : Glucose 100 g. Peptone 10 g. Phosphate primaire d'ammonium 2 g. Sulfate de magnésium (heptahydrate) 0,5 g. 25 Chlorure de calcium 0,1 g. Nitrite de potassium 2g. Eau 1 litre On introduit 100 ml du milieu de culture possédant la composition précédente dans un agitateur à secousses d'une con- 30 tenance de 500 ml, on stérilise ce flacon pendant 20 minutes 2 sous une pression de 1 kg/cm et on y introduit une faible quantité de mycélium de Grifola gigantia (Fr.) Pilât et on laisse incuber en vibrant à une température de 23-25°C pendant 5 jours en utilisant un appareil secoueur (110 oscillations/minute). Le 35 bain incubé ainsi obtenu est ajouté à 30 litres d'un milieu de culture dans un récipient en acier inoxydable stérilisé d'une contenance de 50 litres, et on laisse incuber à l'air en agitant pendant 7 jours à une température de 23-25°C, à 500 tours par minute et avec un débit d'air de 0,3 litre/litre/minute. Le 40 milieu de culture est filtré sur toile et le filtrat est concentré TABLEAU 15 (1) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Hygrophoraceae Hygrocybe turunda (Fr.) Karst. f. macrospora (Hongo) Hongo 38,62 5,67 M Hygrocybe amoena (Lasch) Ricken 40,11 6,50 Tricholomitaceae Laccaria nigra Hongo 38,80 5,20 M Mycena laevigata (Lasch) Quel Asterophora lycoperdoides S.F. Gray 41,80 5,47 11 41,74 6,29 tî Tricholoma portentosum (Fr.) Quel. 40,67 5,17 II Tricholoma flavobrunneum (Fr.) Quel. 38,18 5,69 U Panus conchatus (Fr.) Fr. 40,38 6,40 11 Oudemansiella radicata (Fr.) Sing. 39,95 6,06 Amanitaceae Amanita griseofarinosa Hongo 41,72 5,19 M Pluteus aurantiorugosus (Trog) Sacc. 39,71 5,88 11 Pluteus leoninus (Fr.) 42,62 6,70 Quel. *-4 O Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi- t*J en tpg/Kg bition de la bition de la sucre croissance croissance (%) du sarcome de la tumeur zr 180 (%) d'Ehrlich (%) ° 0,33 300 70 70 0,47 80 70 0,43 60 60 0,73 100 90 0,86 " 60 60 0,36 70 60 0,96 " 80 70 0,47 100 100 0,36 " 100 90 0,61 " 90 90 K> O «-4 0,46 " 100 90 O mmmk U> 0,98 " 90 80 UJ TABLEAU 15 (2) --4 O Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur en sucre (%). Dose mg/Kg Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (%) 37300 Amanitaceae Amanita rubescens (Fr.) S.F„ Gray 40,82 5,39 0,63 * 300 80 90 Agaricaceae Lepiota japonica Kawam. et Hongo 38,21 5,26 0,71 11 80 70 M Agaricus subrutilescens (Kanfftn.) Hotson et S tu rite 39,38 6,17 0,62 M 100 100 U Leucoco-prinus denudatus (Rab.) Sing. f. major Hongo. 42,71 5,09 0,33 U 80 70 00 Coprinaceae Psathyrella obtusata (Fr.) A.H. Smith 41,15 5,52 0,26 M 90 80 H Coprinus comatus (Fr.) S.F. Gray 39,54 6,71 0,16 II 100 90 Cortinariaceae Inocybe macrosperma Hongo 42,63 6,38 0,80 U 90 90 M Inocybe cincinnata (Fr.) Quel. 40,61 6,69 0,45 M 60 60 II Galerina rubiginosa (Fr.) Ktfhner 38,18 6,13 0,60 U 60 70 ro o Strophaviaceae Stropharia rugosoannulata Farlow 38,33 6,63 0,11 11 90 80 o * ir Naematoloma sublateritium (Fr.) Karst. 39,97 6,65 0,14 Tï 60 70 u» uj TABLEAU 15 (3) --4 O Taux d'inhi uj Analyse Teneur Dose Taux d'inhi >-4 élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la UJ Famille Micro-organisme sucre croissance croissance O C H m du sarcome de la tumeur o 180 (%) d'Ehrlich (%) Crepidotaceae Tubaria furfuracea (Fr.) 41,77 6,87 0,10 300 80 90 Gill. H Rhodophyllus aeruginosus 42,94 5,18 0,95 U 60 70 (Hiroe) Hongo Rhodophyllaceae Rhodophyllus bisporus 38,84 6,04 0,16 n 80 90 Hongo Boletaceae Pulvevoboletus retipes 38,11 5 ,29 0,76 ti 80 70 vO (Berk. et Curt.) Sing. U Pulveroboletus ravenellii 38,45 5,21 0,62 M 60 70 (Berk. et Curt.) Murr. Russulaceae Russula emetica (Fr.) 38,12 5,09 0,27 n 100 90 S.F. Gray U Russula sororia Fr. 39,96 6,08 0,66 n . 60 60 II Lactarius chrysorrheus Fr. 41,32 6,18 0,56 60 70 Clavariaceae Ramaria aurea (Fr.) Quel. 41,15 6,84 0,50 n 60 60 ii Ramaria botrytis (Rers.) 41,42 6,64 0,26 u 60 60 Ricken o --4 Cantharellaceae Cantharellus pallidus 38,67 5,81 0,71 M 60 70 O Lloyd MMaJl fil ■t Craterellus covnucopioides 41,57 6,98 0,12 60 70 uj (Fr.) Pers TABLEAU 15 (4) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Corticiaceae Stereum roseum Yasuda 39,69 5,55 tî Stereum rugosum Fr. 38,11 5,40 Meruliaceae Phlebia strigoso-zonata (Schw.) Lloyd 42,29 6,14 Polyporaceae Coriolellus heteromorphus (Fr.) Bond, et Sing. 41,85 6,11 M Coriolus conchifer (Schw.) Pat 39,48 5,42 II Fomitopsis latissima (Bres.) Imazeki, comb, nov. 38,53 6,43 II Polyporellus elegans (Fr.) Karst. 40,33 5,73 II Cryptoporus volvatus (PK.) Hubb. 38,14 6,45 II Trametes albida (Fr.) Bourdot et Galzin 39,94 6,16 II Ganoderma lucidum (Fr.) Karst. 42,85 5,21 Mucronoporaceae Cryptoderma cercidiphyllum Imaz. 40,36 5,89 n Phaeolus schweinitzii (Fr. )42,21 5,60 Pat. Teneur Dose en mg/Kg sucre Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) ^4 O LU —I lu O O 0,56 0,85 0,99 0,26 0,55 0,59 0,56 0,35 0,64 0,16 0,94 0,17 300 90 60 80 80 80 70 60 80 60 80 90 80 80 60 90 70 90 70 60 90 70 70 100 80 Co O KJ> O ">«4 O LU LU TABLEAU 15 (5) O Analyse Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi- élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la u> Famille Micro-organisme sucre croissance croissance o C H (7o) du sarcome de la tumeur o 180 (7.) d'Ehrlich (%) Strobilanycetaceae Strobilomyces floccopus 41,79 5,74 0,63 300 80 70 (Fr.) Karst. co K> O ^1 O U> U» 70 37300 82 2070133 à la température ambiante sous pression réduite pour obtenir un volume de 3 litres. On ajoute de l'acide trichloroacétique au liquide concentré dans une proportion suffisante pour obtenir une solution à 3,3% en poids que l'on laisse alors reposer une nuit 5 dans une chambre réfrigérée et que l'on soumet le matin suivant à une séparation centrifuge avec une accélération de 10 000 g pendant 30 minutes. On n'utilise pas le précipité et le liquide qui surnage est introduit dans un tube contenant de la cellophane et soumis à une dialyse à l'eau courante pendant 50 heures. Le 10 liquide contenu dans le tube est concentré à la température ambiante sous une pression réduite pour obtenir un volume d'un litre, puis on ajoute 800 g de sulfate d'ammonium et le mélange est bien agité, est laissé reposer une nuit dans une chambre réfrigérée et est soumis le matin suivant à une séparation cen-15 trifuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes. Le précipité est recueilli, homogénéisé avec 3 litres d'une solution saturée de sulfate d'ammonium et soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes. Ce traitement est répété trois fois et le précipité résultant est 20 dissous dans 3 litres d'eau distillée. La solution est successivement passée à travers des colonnes contenant de 1'Amberlite IR-120B activé et du Duolite A-4 et les colonnes sont lavées avec 3 litres d'eau distillée. Le produit qui se dégage et l'eau de lavage sont combinés, concentrés à la température ambiante 25 sous pression réduite pour obtenir un volume d'un litre et passés à travers une colonne contenant du Sephadex G-75 gorgé d'eau. Une fraction contenant des substances possédant un poids moléculaire plus élevé est concentrée sous pression réduite pour obtenir un volume d'un litre, on y ajoute 3 litres de méthanol et le mélange 30 est laissé reposer une nuit dans une chambre réfrigérée et est soumis le matin suivant à une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes. Le précipité résultant est recueilli et dissous dans un litre d'eau distillée et on élimine l'êthanol sous pression réduite en ajoutant continuellement de 35 l'eau à la solution. On sèche à basse température le liquide résiduel et on obtient 3,9 g d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. Le tableau 16 donné pages suivantes fournit le résultat des expériences sur l'activité anticancérigène du mucopolysaccharide obtenu de la façon décrite ci-dessus et de ceux obtenus,suivant le 40 procédé décrit ou un procédé semblable, à partir d'autres espèces. TABLEAU 16 (1) O Famille Micro-organisme Analyse Teneur Dose élémentaire en mg/Kg sucre C H (%) Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) (JU -^1 UJ o o Hygrophorus Imazeki Hongo 40,86 5,73 0,78 300 70 70 Hygrocybe cantharellus (Schw.) Lge. 38,23 6,13 0,59 100 90 Lyophyllum carbonarium (Vel.) Moser 42,12 5,70 0,21 " 70 80 Tricholoma fulvocastaneum Hongo 40,94 5,09 0,12 " 90 80 co w Cantharellula umbonata (Fr.) Sing. 38,11 5,93 0,34 100 100 Mycena roseocandida (Peck) Sacc. 39,43 6,41 0,29 " 80 90 Lacçaria amethystina (Fr.) Berk. et Br. 42,36 6,71 0,57 " 80 80 Tricholomopsis rutilans (Fr.) Sing. 38,04 5,10 0,60 " 60 60 Tricholoma muscarium Kawamura 41,13 6,39 0,86 " 60 70 K> O Lentiniis edodes (Berk.) Sing. 40,85 6,65 0,32 " 70 80 Marasmiellus adonis (Fr.) Sing. 38,61 6,10 0,44 " 70 60 O LU Mycena vulgaris (Fr.) Quel. 40,85 5,90 0,18 " 100 100 Lu TABLEAU 16 (2) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C . H Amanitaceae Amanita virosa Seer, 39,61 5,07 II Pluteus nanus (Fr.) Kummer 40,19 5,93 H Amanita vaginata (Fr.) Quel. var. fulva (Fr. ) GilL 40,17 5,74 Agaricaceae Lepiota atrosquamulosa Hongo 42,75 6,85 M Lepiota cristata (Fr.) Quel. 39,16 5,84 Coprinaceae Psathyrella spadiceogrisea (Fr.) Maire 39,66 5,72 u Coprinus radians (Desm.) Fr. Bolbitius demangei (QuéL.) Sacc. et D. Sacc. 42,35 6,12 Bolbitiaceae 39,72 6,19 II Agrocybe pediades (Fr.) Fayod 40,29 5,40 Strophariaceae Pholiota lenta (Fr.) Sing. 40,23 5,47 II Psilocybe venenata (Imai) Imazeki et Hongo 40,07 5,43 C ortinariaceae Cortinarius salor Fr. 42,76 5,51 n Cortinarius hemitrichus (Fr.) Fr. 39,29 5,09 O Teneur Dose en mg/Kg sucre i/o/ \ Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (7o) d'Ehrlich (%) U> u> o o 300 80 90 80 80 100 80 70 80 70 80 80 80 60 80 80 90 90 80 70 80 80 90 90 60 90 70 00 K> O *-4 O —à uf (JL> TABLEAU 16 (3) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Cortinariaceae Inocybe sphaerospora Koboyashi 40,06 5,93 11 Galerina tibiicystis (Atk.) Ktfhner 38,90 5,61 n Galerina clavata (Vel.) Ktfhner 42,82 5,05 Boletaceae Tylopilus virens (Chiu) Hongo 39,94 5,88 11 Suillus aeruginascens (Secr.) Snell 41,32 5,45 Russulaceae Lactarius pominsis R olland 42,05 6,34 ii Russula flavida Frost et Peck 42,72 6,44 11 Lactarius flavidulus Imai 42,72 5,91 Clavariaceae Clavulinopsis pulchra (Peck) Corner 42,19 5,20 Corticiaceae Stereum hirsutum (Fr.) S.F. Gray 41,05 6,79 Hydnaceae Echinodontium tsugicola (P.Henn. et Shirai) Im. 38,63 6,36 Polyporaceae Hirschioporus abietinus (Fr.) Donk 40,58 5,31 ■-4 O Teneur Dose en mg/Kg sucre (%) Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) U> uo o o 0,74 300 80 70 0,52 " 70 60 0,36 " 60 60 0,28 " 60 60 0,19 " 100 90 0,95 " 80 90 0,85 " 80 90 0,94 " 100 100 0,35 " 70 70 0,12 " 100 100 0,70 " 90 80 0,29 " 100 100 oo Ul K> O O UJ U> TABIEAU 16 (4) *^4 O Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur en sucre (%) Dose mg/Kg Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (%) Polyporaceae Tyromyces incarnatus Imazeki 40,84 5,70 0,17 300 90 100 11 Amauroderma scopulosum (Berk.) Imaz. 39,84 5,18 0,12 M 90 80 11 Grifola gigantea (Fr.) Pilât 40,74 6,68 0,13 II 80 90 Polyporaceae Tyromyces caesius (Fr.) Karst 39,10 5,85 0,56 II 90 100 U Trametes sanguinea (Fr.) Lloyd Elfvingia applanata (Bars.) Karst. 42,20 6,44 0,62 11 70 60 II 41,69 6,20 0,18 II 90 90 Mucronoporaceae Inonotus cuticularis (Fr.) Karst. 40,99 5,77 0,99 II 90 100 n Cryptoderma citrinum Imazdd. 40,67 6,00 0,22 If 70 80 Crepidotaceae Rhodophyllus nitidus Quel 41,40 5,34 0,15 M 60 70 Paxillaceae Paxillus atrotomentosus (Fr.) Fr. 40,78 5,74 0,14 II 80 70 Cantharellaceae Craterellus aureus Berk et Curt. 42,11 6,97 0,72 II 80 80 Phylacteriaceae Sarcodon aspratus (Berk) S. Ito 41,18 6,19 0,31 II 80 70 uj uj O O co ON to O ■^1 o UJ UJ 70 37300 87 2070133 Exemple 17 : Composition : Sucre de canne 50 g. Nitrite d'ammonium 10 g. 5 Phosphate primaire de potassium 5 g. Sulfate de magnésium (heptahydrate) 2,5 g. Phosphate de calcium 2,5 g. Eau 1 litre On introduit 180 ml du milieu de culture possédant la 10 composition ci-dessus, appelé milieu de Mayer, dans 205 flacons d'incubation d'une contenance d'un litre, on stérilise ces flacons sous pression à une température de 120rC pendant 30 minutes et on les laisse refroidir à la température ambiante. On injecte un mycélium de Cryptoderma lamaoense (Murr.! Imazeki, préparé 15 précédemment, dans le milieu de culture et on laisse incuber de façon statique à une température de 25-27°C pendant 20 jours. Le bouillon incubé est filtré sur toile et concentré à la température ambiante sous une pression réduite pour obtenir un volume de 2,5 litres, on ajoute 2 kg de sulfate d'ammonium et 20 on agité le mélange, on le laisse reposer une nuit et on le soumet le matin suivant à une séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes. Le précipité est recueilli et dissous dans 3 litres d'eau distillée et la solution est passée à travers une colonne contenant de 1'Amberlite IR-200 25 activé. La colonne est lavée avec un litre d'eau distillée, et l'eau de lavage et le produit dégagé sont combinés, laissés reposer une nuit dans une chambre réfrigérée et filtrés le matin suivant à l'aide d'un papier filtre. Le filtrat est passé à travers une colonne contenant du Duolite A-6 et la colonne est 30 lavée avec 3 litres d'eau distillée, le filtrat et l'eau de lavage sont combinés, concentrés à la température ambiante sous une pression réduite pour obtenir un volume d'un litre. On ajoute 20 g d'acétate de plomb, en agitant, au liquide concentré et on continue d'agiter pendant une heure. Le mélange est laissé repo-35 ser une nuit dans une chambre réfrigérée et est soumis le matin suivant à une séparation centrifuge avec une accélération de 3000 g pendant 30 minutes. Le précipité est recueilli, homogénéisé avec un litre d'eau distillée et de nouveau soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 3000 g pendant 40 30 minutes. Ce traitement est répété cinq fois et le précipité 70 37300 es /U d 2070133 résultant est mis en suspension dans un litre d'eau. On fait passer du sulfure d'hydrogène dans la suspension pendant 30 minutes et le précipité résultant est filtré. Le filtrat est placé dans un évaporateur et on le laisse évaporer sur un bain de sable 5 en ajoutant continuellement de l'eau et, après 10 heures, on le laisse sécher complètement sans ajouter d'eau. Le produit solide séché est dissous dans un litre d'eau distillée et filtré à l'aide d'un papier filtre n°5C, et le filtrat est successivement passé à travers des colonnes contenant du Duolite C-25D activé, 10 de 1'Amberlite LRA-410 et du Duolite S-30. Les colonnes sont lavées avec un litre d'eau distillée et l'eau de lavage est combinée avec le produit qui se dégage et concentrée à la température ambiante sous pression réduite pour obtenir un volume d'un litre. On ajoute 3 litres de méthanol au liquide concentré 15 et le mélange est laissé reposer une nuit dans une chambre réfrigérée. Le précipité résultant est recueilli par séparation centrifuge avec une accélération de 1500 g pendant 15 minutes puis est dissous dans un litre d'eau distillée. On élimine le méthanol sous pression réduite à la température ambiante en ajoutant 20 continuellement de l'eau à la solution, et le liquide résiduel est séché à basse température, et on obtient 8,0 g d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. Le tableau 17 donné pages suivantes fournit le résultat des expériences sur l'activité anticancérigène du mucopolysac-25 charide obtenu de la façon décrite ci-dessus et de ceux obtenus, suivant le procédé décrit ou un procédé semblable, à partir d'autres espèces. . Exemple 18 : Composition : 30 Pêptone 1 g. Glucose 3g. Extraits de malt 0,5 g. Phosphate primaire de potassium 0,1 g. Eau 1 litre 35 On introduit 80 ml d'un milieu de culture possédant la composition précédente dans 96 flacons Erlenmeyer d'une contenance de 500 ml, on stérilise les flacons pendant 15 minutes 2 sous une pression de 1 kg/cm . On introduit de façon habituelle - une faible quantité de mycélium dé Phellinus robutus (Karst) 40 Bourd. et Galz, provenant d'un milieu de culture, dans les dif- TABLEAU 17 (1) --4 O Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur en sucre (%) Dose mg/Kg Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (%) eu lu O O Hy grophorac eae Hygrophorus dichrous Hongo 40,70 5,60 0,16 300 100 90 Hygrophorus cuspidatus Peck 42,64 6,22 0,90 90 100 Hygrocybe acutoconica (Clem) Sing. f. japonica Hong. 41,53 5,91 0,82 60 70 Lyophyllum semitale (Fr.) Ktfhn 41,88 5,68 0,66 " 90 100 Tricholoma orirubens Quel. 40,55 5,36 0,89 " 70 60 Pseudohiatula ohshimae (Hongo et Matsuda) Hongo et Masuda 40,76 6,22 0,11 " 70 70 Mycena filopes (Fr.) Kummer 39,61 6,92 0,27 " 100 100 Melanoleuca melaleuca (Fr.) Murr 41,89 6,34 0,94 80 70 Mycena stylobâtes (Fr.) Kummer 38,40 6,34 0,75 " 80 70 Clitocybe fragrans (Fr.) Quel. 41,64 6,63 0,86 " 80 80 Baeospora rayosura (Fr.) Sing. Mycena alcalina (Fr. ) Quel. 42,36 49,35 5.30 5.31 0,35 " 0,24 100 100 100 100 00 vo O O LU uj TABLEAU 17 (2) O Analyse Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi- —t élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la qj Famille Micro-organisme sucre croissance croissance o G H (%) du sarcome de la tumeur o 180 (%) d'Ehrlich (%) Tricholomataceae Clitocybe infundibuliformJs 42,69 (Fr.) Quel. 5,56 0,16 300 70 80 11 Mycena subaquosa A.H. Smith 38,95 6,48 0,20 " 70 60 Amanitaceae Amanita vaginata (Fr.) Vitt. var. Punctata 38,22 5,00 0,38 " 60 60 t! Volvariella subtaylori Hongo 39,48 5,58 0,23 " 60 70 tî Amanita muscaria (Fr.) S.F. Gray 41,34 6,27 0,16 " 60 60 II Volvariella bombycina (Fr.) Sing. 38,14 5,26 0,86 " 100 100 Bolbitiaceae Conocybe fragilis (Peck) Ktfhn 39,98 6,43 0,38 " 60 70 Cortinariaceae Inocybe Kobayasii Hongo 41,42 6,16 0,31 " 80 90 II Hebeloma radicosum (Fr.) Ricken 41,73 6,09 0,96 " 80 70 II Galerina pseudocanerina Sing. 38,94 6,65 0,25 " 100 100 II Inocybe praetervisa Quel. 38,95 6,87 0,91 90 80 II Rozites caperata (Fr.) Karst. 41,14 6,08 0,66 70 70 O ho o ->4 O LU LU TABLEAU 17 (3) ~~4 O Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur en sucre (%) Dose mg/Kg Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (%) eu UJ O O Rhodophyllaceae Rhodophyllus violaceus (Murr.) Sing. 39,45 5,89 0,67 300 90 80 Boletoceae Tylopilus areolatus Hongo 40,45 5,42 0,40 90 100 II Suillus granulatus (Fr.) Kuntze 38,15 6,16 0,67 " 80 70 Russulaceae Lactarius nigroviolascens Atk var marginatus Sm. et Hesl 39,34 6,25 0,14 " 100 100 11 Russula lepida Fr. 40,54 5,14 0,14 " 100 90 H Russula virescens (Zanted.) Fr. 39,42 5,14 0,90 " 70 70 U Lactarius hatsudake Tanaka 39,29 6,32 0,84 " 100 90 Cantharellaceae Cantharellus cinereus Fr. 39,15 6,22 0,45 H 90 100 Corticiaceae Cymatoderma elegans Jungh 40,83 5,32 0,11 M . 80 70 1! Stereum roseo-carneum (Schw.) Fr. 39,55 6,24 0,68 " 70 60 Meruliaceae Cystidiophorus castaneus (Lloyd) Imazeki comb. nov. 39,76 5,63 0,55 " 70 60 Polyporaceae Coriolus pargamenus (Fr.) Pat. 39,46 5,04 0,18 60 60 11 Tyromyces guttulatus (Pk.) Murr. 38,60 6,79 0,20 " 100 90 vo (-» hO O O UJ UJ TABLEAU 17 (4) ■^4 O Analyse Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi- ^ élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la ^ Famille Micro-organisme sucre croissance croissance C H , du sarcome de la tumeur q 180 (%) d'Ehrlich (%) Polyporaceae Cantharellus floccosus Schw. 40,96 6,05 0,46 300 , 60 60 II Polyporus tuberaster Fr. 39,19 5,59 0,78 11 80 90 fï Daedaleopsis nipponica Imazeki 40,80 5,99 0,73 11 100 90 II Trametes dickinsii Berk 42,00 6,76 0,90 n 100 100 Mucronoporaceae Cryptoderma lamaoense (Murr.) Imazeki 38,88 5,15 0,64 11 80 70 M Phellinus gilvus (Fr.) 39,37 6,10 0,19 M 60 60 Pat. KJ O O OU OU 70 37300 93 /u 5 2070133 férents flacons et on laisse incuber à une température de 26-28°C pendant 5 jours en utilisant un appareil secoueur rotatif dont le rayon de rotation est de 3,5 cm et tournant à 250 tours par minute. 5 Le milieu de culture incubé (5 litres) est soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 10 000 g pendant 15 minutes, et le liquide qui surnage est passé à travers une colonne contenant du Duolite S-30 activé avec de la soude caustique à 4%, puis à travers une colonne contenant de l'Amber-10 lite IR-120B activé avec de l'acide chlorhydrique 1-N et finalement à travers une colonne de Duolite A-7 active avec de la soude caustique à 4%. Les colonnes sont lavées avec 5 litres d'eau distillée et l'eau de lavage ainsi que le produit dégagé sont combinés et concentrés à la température ambiante sous une pres-15 sion réduite pour obtenir un volume de 500 ml. On ajoute 1,5 litres d'éthanol au liquide concentré et le mélange est bien agité. Le précipité résultant est soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 3000 g pendant 15 minutes, et le précipité résultant est homogénéisé avec un litre d'éthanol 20 à 75% et est de nouveau soumis à une séparation centrifuge avec une accélération de 3000 g pendant 15 minutes. Ce traitement est répété cinq fois et le précipité finalement obtenu est dissous dans 3 litres d'eau distillée. On élimine l'êthanol sous pression réduite en ajoutant continuellement de l'eau distillée et le 25 liquide résiduel est séché à basse température pour obtenir 1,2 g d'une substance pulvérulente.blanc-grisâtre. Le tableau 18 donné pages suivantes fournit le résultat des expériences sur l'activité anticancérigène du mucopolysac-charide obtenu de la façon décrite ci-dessus et de ceux obtenus, 30 suivant le procédé décrit ou un procédé semblable, à partir d'autres espèces. Exemple 19 : Un mycélium de Fomitopsis pubertatis (Lloyd) Imaz., cultivé dans un bouillon de culture, est introduit de façon 35 classique dans 500 ml de malt-steep dans un flacon Erlenmeyer d'une contenance de 3000 ml, et on laisse incuber statiquement à une température de 25°C pendant 13 jours. Le bouillon est homogénéisé et on introduit 3 ml de bouillon homogénéisé dans 153 flacons vibreurs d'une contenance de 500 ml contenant chacun 40 100 ml de malt-steep stérilisé, et on laisse incuber à une Famille Micro-organisme Hygrophoraceae Hygrophorus pseudococci- neus Hongo " Hygrocybecconica (Fr.) Karst. " Hygrocybe minutula (Pk.) Murr. Tricholomataceae Lyophyllum transforme (Britz.) Sing. 11 Marasmius cohaerens (Fr.) Quel. 11 Tricholoma matsutake (S. Ito et Imai) Sing. " Xerula chrysopepla (Berk. et Curt.) Sing. " Mycena crocata (Fr.) Quel. " Catathelasma imperiale (Fr.) Sing. " Xeromphalina campanella (Fr.) Kuhner et Maire Amanitaceae Limacella glioderma (Fr.) Maire Agaricaceae Lepiota praetervisa Hongo 18 (1) •^1 O Analyse Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi- ^ élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la ^ sucre croissance croissance o C H (%) du sarcome de la tumeur o 180 (%) d'Ehrlich (%) 41,25 5,34 0,62 300 70 70 41,96 5,94 0,66 n 90 80 40,18 6,72 0,54 n 70 60 38,06 5,33 0,84 n 100 90 42,69 5,63 0,80 ti 60 70 39,07 6,02 0,32 IT 80 70 38,56 5,06 0,77 tl 70 80 42,05 5,02 0,56 II 70 60 42,38 6,38 0,25 II 90 90 42,09 5,68 0,70 II 60 70 42,38 6,79 0,29 II 60 60 40,98 6,96 0,37 II 60 70 vû •p» ro o -->1 o Ou u> TABLEAU 18 (2) Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Agaricaceae Melanophyllum echinatum (Fr.) Sing. 40,09 5,44 Coprinaceae Coprinus insignis Peck 38,13 6,66 tt Coprinus friesii Quel. 38,71 6,99 rr Psathyrella velutina (Fr.) Sing. 38,47 6,43 Poxillaceae Hygrophoropsis bicolor Hongo 38,50 5,43 I! Poxillus involutus (Fr.) Fr. 40,18 6,62 Bolbitiaceae Agrocybe erebia (Fr.) Ktfhner 41,63 5,39 Strophariaceae Psilocybe subcaerulipes Hongo 41,93 6,52 tt Naematoloma fasciculare (Fr.) Karst. 41,49 5,45 Cortinariaceae Cortinarius hinnuleus Fr. 38,94 5,28 u Inocybe lanuginella (Schroet.) Lange 38,26 6,17 tt Cortinarius triumphans 41,79 5,19 ■^1 O Teneur Dose Taux d'inhi- Taux d'inhi- ^ en mg/Kg bition de la bition de la ^ sucre croissance croissance 0 (%) du sarcome de la tumeur t~> 180 .(%) d'Ehrlich (%) 0,30 300 60 60 70 90 100 70 70 60 90 80 90 70 100 70 100 100 80 70 70 80 90 90 70 100 Ln ho o o ——1 tju OO TABLEAU 18 (3) Analyse élémentaire Famille Micro-organisme C H Boletaceae Suillus grevillei (Klotzsch) Sing. 42,26 5,94 11 Suillus bovinus (Fr.) Kuntze 38,47 5,53 Russulaceae Lactarius subpiperatus Hongo 38,75 6,68 n Russula senecis Imai 42,54 5,72 n Lactarius subvellereus Peck 40,03 6,99 Clavariaceae Clavulinopsis fusiformis (Fr.) Corner 38,86 5,29 11 Ramaria flava (Fr.) Quel. 40,23 6,27 Corticiaceae Cotylidia decolorans (Berk. et Curt.) Welden 38,83 6,85 n Sparassis crispa Fr. 38,18 5,41 Meruliaceae Merulius aureus Fr. 38,42 5,40 Polyporaceae Oxyporus ravidus (Fr.) Bond et Sing. 41,56 6,38 tt Hirschioporus fusco-violaces (Fr.) Donk 42,01 5,57 II Coltricia perennis (Fr.) 39,08 5,87 Murr. O Teneur Dose en mg/Kg sucre Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) OU -vl UJ O O 300 60 90 60 60 100 60 80 70 70 60 VO ON 80 80 80 70 70 80 100 100 70 80 100 100 100 60 80 90 KJ O O UJ UJ TABUEAU 18 (4) O Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur Dose en mg/Kg sucre Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (7a) Polyporaceae Favolus alveolarius (Fr.) Quel. 39,43 5,39 0,77 300 70 60 n Fomitopsis rosea (Fr.) Karst. 42,83 5,28 0,78 " 80 90 n Trametes orientalis (Yas.) Imas: 40,20 6,97 0,91 " 80 80 Mucronoparaceae Phellinus robustus (Karst.) Bourd. et Galz 38,70 5,69 0,69 " 60 70 «t Phellinus igniarius (Fr.) Quel. 42,95 6,52 0,43 " 70 80 » Phellinus hartigii (Allesch. et Schnabl) Imazeki ' 40,07 5,41 0,67 " 100 90 Crepidotaceae Rhodophyllus hirtipe» (Fr.) Lang« 41,97 5,23 0,23 " 60 60 Phylacteriacea Calodon suaveolens (Seop.) Karst. 40,57 5,77 0,88 " 100 100 H Thelephora multlpartita Fr. 39,98 6,42 0,98 " 60 70 U) u> o o vo K> O "*•4 O UJ u> 70 37300 98 2070133 température de 25°C pendant 4 jours avec une amplitude d'oscillation de 7 cm et une fréquence de 120 cycles par minute. On élimine le mycélium du milieu de culture obtenu de la façon décrite ci-dessua, et on fait passer ce milieu de cul-5 ture â travers une colonne de Duolite S-30 activé avec de la soude caustique â 4%. La colonne est lavée avec 10 litres d'eau distillée et l'eau de lavage est combinée avec le produit qui se dégage et est concentrée sous une pression réduite pour obtenir un volume d'un litre. On ajoute de l'acétate de plomb en agitant 10 efficacement le liquide eoneantré de façon à obtenir une solution à 10% en poids que l'on laisse alors reposer une nuit dans une chambre réfrigérée. Le matin suivant le précipité résultant est recueilli par séparation centrifuge avec une accélération de 10 000 g pendant 15 minutes, rais en suspension dans un litre 15 d'eau distillée puis soumis de nouveau à une séparation centrifuge avec une accélération de 10 000 g pendant 15 minutes. Ce traitement est répété trois fois et le précipité résultant est mis en suspension dans un litre d'eau distillée. On introduit une quantité suffisante de sulfure d'hydrogène.dans 20 la suspension. Après avoir reposé 2 heures, la suspension est filtrée à 11 aide d'un papier filtre n°2 sur lequel on a déposé line fine couche de carbone actif Darco 6 60. On ajoute continuellement dé l'eau, et le filtrat résultant est concentré à une teafsérafcure de 65°C sous une pression réduite jusqu'à ce que le 25 sulfure d'hydrogène ait complètement disparu, puis est séché à basse température pour obtenir 4,6 g d'une substance pulvérulente blanc-grisâtre. Le tableau 19 donné pages suivantes fournit le résultat des expériences sur l'activité anticancérigène du mueopolysac-30 charide obtenu de la façon décrite et de ceux obtenus, suivant le procédé décrit ou un procédé semblable, à partir d'autres espèces » 0 TABLEAU 19 (1) Famille Micro-organisme Analyse élémentaire G H Hygrophoraceae Hygrophorus subcinnàbatinus Hongo 42,98 6,95 11 Hygrophorus capreolarius (Kolchbr) Sacc (non Imai) 40,79 5,79 11 Hygrocybe minlata (Fr.) Karst. 39,49 5,87 Tricholomataceae Clitocybe geotropa (St. Amans) Quel. 38,32 6,44 11 Catathelasma ventricosum (Peck) Sing. 40,24 5,37 ri Lepista nuda (Fr.) W.G. Smith 41,43 5,10 u Tricholoma sejunctum (Fr.) Quel. 39,82 6,38 n Panellus stipticus (Fr.) Karst. 41,69 5,53 u Flammulina velutipes (Fr.) Sing. 42,38 5,86 u Mycena haematopus (Fr.) Quel. 39,37 6,46 Amanitaceae Amanita Vaginata (Fr.) Quel. var. alba (Fr.) GUI. 40,84 6,53 "*-4 O Teneur Dose en mg/Kg sucre Taux d'inhi- Taux d'inhibition de la bition de la croissance croissance du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) OU --4 UU O O 0,99 300 70 60 0,60 " 90 90 0,50 80 70 0,65 " 90 80 0,95 " 80 80 0,79 " 90 100 0,42 " 90 90 0,94 " 80 70 0,93 " 70 80 0,62 " 100 100 0,40 " 70 60 vo vo ho o "xj o UJ U) TABLEAU 19 (2) Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Amanitaceae Pluteus atrofuscus Hongo 38,23 6,06 Agaricaceae Lepiota alborubescens Hongo 40,57 5,70 II Lepiota acutesquamosa (Weinm) Gill. 38,12 5,90 11 Phaeolepiota aurea (Fr.) Maire 39,86 5,35 Caprinaceae Coprinus cortinatus Lange 39,73 5,41 II Agrocybe farinacea Hongo 40,60 5,19 Cortinariaceae Inocybe cookei Bres 41,68 6,09 II Hebeloma spoliatum (Fr.) Karst. 40,69 6,77 M Cortinarius variicolor (Fr.) Fr. 40,42 6,41 VI Cortinarius torvus (Fr.) Fr. 42,58 5,99 Phodophyllaceae Rhodophyllus ater Hongo 41,94 6,59 Boletaceae Pulveroboletus cramesinus (Secr.) Sing. 42,65 5,51 II Boletus erythropus Fr. 39,90 6,11 Russulaceae Russula lilacea Quel. 38,76 5,47 O Teneur Dose en mg/Kg sucre Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (7c) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (7o ) U> --4 UJ O O 300 100 90 100 80 70 100 70 80 90 80 70 100 60 90 80 70 h-* O O 100 90 70 100 100 60 100 90 80 100 100 70 KJ O *■*4 O UJ UJ TABLEAU 19 (3) ^4 O Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur en sucre (%) Dose mg/Kg Taux d'inhibition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (70) Russulaceae Russula xerampellna (Secr.) Fr. 39,33 6,82 0,24 300 70 80 ff Lactarius hygrophoroides Berk et Br. 42,30 5,36 0,17 II 70 70 Corticimceae Corticium chrysocreas Berk. et Curt. 41,91 5,53 0,47 11 60 60 it Streum ostea. (Bl. et Nees) Fr. 40,33 5,27 0,97 II 80 90 Phylaeteriaceae Hydnellum ferrugineum (Fr.) Karst. 42,53 6,18 0,81 U 100 100 IJ Boletopsis leucomelas (Fr.) Fayod 41,45 5,20 0,56 VI 80 70 Polyporaceae Favolus eoerici (Cooke) Imazeki 40,01 5,37 0,51 M 70 80 tt Fomitopsis pubertatis (Lloyd) Imaz. 42,48 6,65 0,92 II 70 70 1! Fomitopsis vinosa (Berk) Imaz. 42,21 5,71 0,34 n 70 60 H Polyporus dispansus Lloyd 39,47 5,73 0,86 VI 90 100 n Trachyderma tsunodae (Yasuda) Imazeki 41,25 5,14 0,82 u 100 100 ii Lenzite* betulina Fr. 38,92 5,96 0,51 tl 90 80 eu U) O o K> o •^1 o ■«Il U) eu Famille Micro-organisme Mucronoporaceae m ii h n n Clavariaceae n Stropharlaceae Crepldotaceae Corticiaceae Onnia orientails (Lloyd) Imazeki Inonotus kanehirae (Yaduda) Imazeki, comb. nov. Fuscoporia obliqua (Fr.) Aoshima Exidia glandulosa Fr. Guepinia spethulariu Fr. Cryptoderma yamanoi Imazeki Lentaria mucida (Fr.) Corner Clavaria zollltigerl Lev. em. Over Kuehneromyces mutabilis (Fr.) Sing. et Sm. Rhodophyllus crassipes (Imaz, et Toki) Imaz. et Hongo Stereum gausapatum Fr. TABLEAU 19 (4) O Analyse Teneur Dose Taux d'inhi Taux d'inhi élémentaire en mg/Kg bition de la bition de la sucre croissance croissance C H (*) du sarcome de la tumeur 180 (%) d'Ehrlich (%) 41,61 6,21 0,12 300 100 100 40,76 5,43 0,91 t* 70 80 41,52 5,97 0,63 H 70 80 40,81 6,02 0,34 H 100 90 38,96 5,64 0,41 îî 80 70 40,16 6,83 0,94 I! 60 60 41,38 5,92 0,72 1! 90 80 38,30 5,37 0,76 Il 80 70 41,43 5,25 0,45 U 100 90 41,25 6,32 0,16 fl 80 90 UJ ^>4 UJ O O S K> O ^4 O 40,63 6,04 0,94 90 100 UJ UJ TABLEAU 19 (5) O Famille Micro-organisme Analyse élémentaire C H Teneur en sucre Dose Taux d'inhi-mg/Kg bition de la croissance du sarcome 180 (%) Taux d'inhibition de la croissance de la tumeur d'Ehrlich (%) UJ UJ o o Phylacteriaceae Gyrophana lacrymans (Fr.) 41,54 5,61 0,81 300 Pat. Fistulinaceae Fistulina hepatica Fr. 42,85 6,77 0,83 60 80 60 90 o LO O O —a UJ U» 70 37300 104 REVENDICATIONS 2070133 1. Polysaccharide possédant une activité anticancérigène, caractérisé par le fait qu'il est obtenu à partir d'un extrait liquide d'un mycélium d'une espèce de fongi appartenant aux basidiomycètes ou à partir d'un milieu de culture de ces 5 espèces, ladite substance étant constituée par un solide amorphe soluble dans l'eau non hygroscopique et non dialysable, faisant toujours apparaître du glucose lorsqu'elle est hydrolysée à l'aide d'acide sulfurique 1-N, réagissant négativement à la réaction au chlorure ferrique en prouvant -l'existence de phénols 10 et à la réaction de Fehling en prouvant l'existence de sucres réducteurs, réagissant positivement à la réaction à l'anisal-déhyde, la réaction de Molisch, la réaction à l'anthrone, la réaction au triptophane-acide sulfurique, la réaction à l'acide chromotropique-acide sulfurique, la réaction au carbazole-15 cystéine-acide sulfurique, la réaction à 1'aniline-acide chlorhydrique, la réaction au résorcinol-acide chlorhydrique, la réaction de Tollens et la réaction au thioglycol-acide sulfurique, faisant apparaître uniquement une tache du côté de l'anode lorsqu'elle est soumise à une électrophorèse, dans une solution de 20 borate de sodium à 0,05 mole, en utilisant une membrane d'acétate de cellulose à une tension de 20-25 V/cm pendant 90 minutes, et présentant une activité antimicrobienne pour les bactéries, les fongi et les levures telles que Staphylococcus aureus, Esche-richia coli, Bacillus subtilis, Aspergillus nigey, Candida albi-25 cans, etc. 2. Procédé pour préparer un polysaccharide possédant une activité anticancérigène, caractérisé par le fait qu'il consiste à éliminer les substances non nécessaires, constituées principalement par les protéines libres, d'un extrait liquide 30 d'un mycélium d'une espèce appartenant aux basidiomycètes ou d'un milieu de culture de ces espèces, puis à isoler, à partir du liquide résultant, la substance constituée par un polysaccharide suivant la revendication 1. 3. Procédé suivant la revendication 2, caractérisé 35 par le fait que l'on utilise un extrait liquide obtenu en extrayant le mycélium avec de l'eau chaude ou un solvant aqueux chaud. 4. Procédé suivant la revendication 3, caractérisé 70 37300 105 2070133 par le fait que l'extraction est réalisée à une température comprise entre 60°C et 100°C, 5. Procédé suivant les revendications 2, 3 et 4, prises dans leur ensemble, caractérisé par le fait que l'on élimine le 5 précipité formé en acidifiant un extrait liquide du mycélium, et que le liquide résultant est soumis à une combinaison de traitements comprenant la dialyse, l'extraction des sels, la filtration d'un gel, 1'ultrafiltration, le traitement par résines échangeuse s d'ions, le traitement de décoloration, le traitement de 10 précipitation à l'aide d'un solvant organique fortement polaire et le traitement à l'acétate de plomb, ce qui permet d'éliminer les substances non nécessaires constituées principalement par des protéines libres. 6. Procédé suivant la revendication 2, caractérisé 15 par le fait que l'on élimine le précipité formé en acidifiant un milieu de culture d'une espèce de fongi appartenant aux basidiomycètes, et que le liquide résultant est soumis à une combinaison de traitements comportant la dialyse, l'extraction des sels, la filtration d'un gel, 1'ultrafiltration, le traitement 20 par résines échangeuses d'ions, le traitement de décoloration, le traitement de précipitation à l'aide d'un solvant organique fortement polaire et le traitement à l'acétate de plomb, ce qui permet d'éliminer les substances non nécessaires constituées principalement par des protéines libres. 25 7. Procédé suivant les revendications 2, 3, 4, 5 et 6 prises dans leur ensemble, caractérisé par le fait qu'un polysaccharide possédant une activité anticancérigène est précipité et isolé en ajoutant un solvant organique fortement polaire à l'extrait liquide ou au milieu de culture dans lequel les sub-30 stances non nécessaires, constituées principalement par des protéines libres, ont été éliminées. 8. Procédé suivant la revendication 7, caractérisé par le fait que le solvant organique fortement polaire peut être constitué par un ou plusieurs produits choisis parmi le groupe 35 constitué par le méthanol, l'êthanol, le propanol et l'acétone. 9. Procédé suivant les revendications 1, 2, 3, 4, 5, 7 et 8, prises dans leur ensemble, caractérisé par le fait que l'on utilise un extrait liquide d'un mycélium d'une espèce de fongi appartenant aux basidiomycètes choisie parmi le groupe constitué 40 par les espèces appartenant à l'ordre Auriculariales, Tresaellales, 70 37300 106 2070133 Dacyomycetaies, les espèces appartenant aux familles Corticiaceae, Merulicaceae, Fistulinaceae, Hydnaceae, Phylacteriaceae et Polyporaceae et les espèces Phyllotopsis nidulans (Fr.) Sing, Pleuro-cybella porrigens (Fr.) Sing, Hohenbuehelia serotina (Fr.) Sing, 5 Schiso-phyllum commune Fr., Panus rudis Fr., Panellus stipticus (Fro) Karst, Panus conchatus (Fr.) Fr., Pleurotus ostreatus (Fr.), Crepidotus subssphaerosporus (Lange) KUhn. et Romagn, Paxillus panuoides (Fr.) Fr., Hygrophoropsis bicolor Hongo et Lampteromyces japonicus (Kawam.) Sing. 10 10. Procédé suivant les revendications 1, 6, 7 et 8, prises dans leur ensemble, caractérisé par le fait que l'on utilise un milieu de culture d'une espèce appartenant aux basidiomycètes choisie parmi le groupe constitué par les espèces appartenant à l'ordre Tremellales et Suriculariales et les espèces 15 appartenant aux familles Hvgrophoraceae, Fricholomataceae, Amanitaceae, Agaricaceae, Coprinceae, Bolbitaceae, Strophariaceae, Cortinaricaces, Rhodophyllaceae, Boletaceae,Russulaceae, Clava-riaceae, Corticiaceae, Hydnaceae s Polyporaceae, Mucronoporaeceae, Geoglossaceae, Xylariceae, Crepidotaceae2 Phylacteriaceae, Meru-20 liaceae et Pezizaceae. 11. Substance anticancérigène caractérisée par le fait qu'elle est constituée par 1© polysaccharide suivant la revendication 1