FR 2051570 A1 19710409 FR 7019991 A 19700601 La présente invention a pour objet de nouveaux composés polypeptidiques répondant à la formule générale S-CH2-CHX-CO-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-X dans laquelle X représente un atome d'hydrogène, le groupe amino ou un groupe de formule R-CO-NH- ou R'-O-CO-NH-, dans lesquels R signifie un groupe alkyle, ou un groupe aryle ou aralkyle éventuellement substitués, et R' signifie un groupe alkyle ou alcényle, ou un groupe aryle ou aralkyle éventuellement substitués, le reste R' ne pouvant pas être éliminé par l'acide trifluoro-acétique, et Y représente un groupe L-prolinamide ou L-proline-L-valinamide, et dans laquelle un reste L-séryle peut être remplacé par un reste L-thréonyle ou L-alanyle, un reste L-asparaginyle par un reste L'aspartyle, L-gluta minyle ou L-glutamyle, un reste L-thréonyle par un reste L'séryle ou L'alanyle, un reste L-lysyle par un reste BOC-L-lysyle, L-ornithyle ou L-arginyle, un reste L-glutaminyle par un reste Le L-glutamyle, L-aspara- ginyle ou L-aspartyle, un reste L-glutamyle par un reste OTB-L-glutamyle, L-gluta minyle, L-asparaginyle ou L-aspertyle, un reste L-leucyîe par un reste L-tyrosyle, un reste L-tyrosyle par un reste L-phénylalangle et un reste L-arginyle par un reste L-ormithyle ou L-lysyle9 ainsi que leurs sels d'addition d'acides et leurz complexes de métaux lourds. L'invention concerne également um procédé de préparation des nouveaux composés et leur application en thérapeutique, à titre de principes actifs de médicaments Lorsque X représente le groupe @@@ino ou un groupe de formule R-CO-NH- ou R'-O-CO-NH-, l'amino-acide répondant à la formule HS-CH2-CHX-COOH se présente sous la forme L. Dans le groupe de formule R-CO-NH-, R peut représenter par exemple le groupe éthyle , éthyle, propyleg tertio-butyle ou un reste phényle ou benzyle, éventucllemert substitués par un atome d'halogène, un groupe alcoxy inférieur ou le groupe nitro. Dans le groupe de formule R-O-CO-i-, R' peut représenter par exemple le groupe propyles allyle, benzyle, p-nitrobenzyle, p-chlorobenzyle, p-bromobenzyle, le reste p-azobenzyle ou-p-méthoxy-azobenzyle. Les différents amino-acides qui figurent dans la formule représentée ci-dessus, peuvent être remplacés par d'autres aminoacides naturels ou des dérivés de ceux-ci. C'est ainsi par exemple qu'on peut remplacer Ser par Thr ou Ala en position 2, 5, 13 et 29, Asn par Asp, Gln ou Glu en position 3 et 26, Thr par Ser ou Ala en position 6, 21, 25, 27 et 31, Lys par BOC-Lys, Orn ou Arg en position 11 et 18, Gîn par Glu, Asn ou Asp en position 14 et 20, Glu par OTB-Glu, Gîn, Asn ou-Asp en position 15, Leu par Tyr en position 19, Tyr par Phe en position 22 et Arg par Orn ou Lys en position 24. Les nouveaux composés polypeptidiques de l'invention peuvent être préparés selon les méthodes généralement connues pour la synthèse de composés de ce type. Les amino-acides sont alors associés, dans l'ordre où ils figurent dans la formule. re- présentée ci-dessus, soit isolément, soit par petites séquences peptidiques préalablement formées. Le couplage des amino-acides et/ou des usités peptidi ou un peptide ques est effectué, par exemple, en faisant réagir un amino-acide/ dont le groupe a-amino est protégé et le groupe carboxylique terminal activé, avec un amino-acide ou un peptide ayant le groupe a-amino libre et le groupe carboxylique terminal libre ou protégé. On peut également faire réagir un amino-acide ou un peptide dont le groupe a-amino est activé et le groupe carboxylique terminal protégé, avec un amino-acide ou un peptide ayant le groupe carboxylique terminal libre et le groupe a-amino protégé. Le groupe carboxylique peut être activé, par exemple, par transformation en aidez en anhydride d'acide, en imidazolide, en isoxazolide ou en un ester activé, ou par réaction au moyen d'un carbodiimide ou du N,N'-carbonyl-diimidazole. Comme méthode de condensation, on utilise de préférence la méthode de couplage au carbodiimide, à l'azide, à 11 ester activé, à l'anhydride d'acide et la méthode de Merrifield. Le produit final peut éventuellement contenir un groupe protecteur dans la molécule terminale de L-hémicystine; on peut introduire ce groupe protecteur à n 'importe quel stade de la préparation du produit final avant la dernière étape. Au dernier stade de la condensaton, il est conseillé d'utiliser des méthodes qui ne provoquent pas de racémisation ou qui ne provoquent qu'une racémisation peu importante, de préf é- rence la méthode de couplage à l'azide ou à l'ester activé, en employant, pour l'activation, de préférence le N-hydroxy-succinimide. Au cours de la synthèse des nouveaux composés polypeptidiques, les groupes fonctionnels libres qui ne participent pas à la réaction peuvent être protégés de la manière suivante: Dans la séquence partielle B décrite ci-après, on utilise le groupe nitro pour bloquer le groupe guanidino du reste de l'arginine; cependant on peut également employer d'autres groupes protecteurs appropriés, tels que le groupe tosyle, pnitro-benzyloxycarbonyle ou le groupe 2-(isopropyloxyearbonyl)- 3,4,5,6-tétrachlorobenzoyle. Dans la synthèse, il est également possible d'avoir recours à l'effet protecteur de la protonisation du groupe guanidino. Dans la synthèse des nouveaux composés polypeptidiques, le groupe tert.-butyloxy convient très bien pour bloquer le groupe r-carboxylique,par exemple dans la séquence partielle D décrite ci-après; cependant, on peut également utiliser d'autres groupes protecteurs, tels que le groupe méthoxy, éthoxy, tert.amyloxy, amide ou benzyloxy. Pour bloquer le groupe W-anlino du reste de la lysine, par exemple dans la séquence partielle C décrite ci-après, on peut utiliser un groupe tert.-alcoxycarbonyle, de préférence le groupe tert.-butoxycarbonyle. Dans les séquences partielles EF et EF3 décrites ciaprès9 on utilise de préférence le groupe benzyle ou trityle pour protéger les groupes mercapto. A la fin de la synthèse, on élimine habituellement les restes benzyle ou trityle, utilisés pour protéger les groupes SH,par traitement avec du sodium dans de l'ammoniac liquide. On a trouvé maintenant que l'on obtient des rendements particulièrement bons en produits finals en effectuant l'élimination des groupes protecteurs benzyle ou trityle ainsi que la préparation de la liaison S-S avant le dernier stade. Au cours de la préparation des nouveaux composés poly peptidiquess la transformation d'un groupe mercapto protégé ou d'un groupe amino protégé en groupes libres ainsi que la transformation d'un groupe carboxylique modifié en groupe carboxylique libre, peut être effectuée selon des méthodes connues, par traitement avec des agents hydrolysants ou réducteurs. Les produits de départ utilisés dans la préparation des nouveaux composés polypeptidiques sont connus ou peuvent être préparés selon les méthodes connues appliquées dans la chimie des peptides, les amino-acides étant associés les uns aux autres, soit un par un, soit par petites séquences peptidiques préalablement formées. Les nouveaux composés polypeptidiques peuvent être obtenus et utilisés soit tels quels, soit sous forme de leurs sels ou de leurs complexes de métaux lourds. Couine sels, on peut citer ceux qui dérivent d'acides organiques, comme l'acide acétique, l'acide lactique, l'acide succinique, l'acide benzoMque, l'acide salicylique, l'acide méthane-sulfonique, l'acide toluène-sulfonique ainsi que des acides polymères, comme l'acide tannique et la carboxyméthylcellulose, et ceux qui dérivent d'acides minéraux, comme les acides halohydriques, par exemple l'acide chlorhydrique, ou l'acide sulfurique èt l'acide phosphorique. Comme complexe de métal lourd, on peut citer, par exemple, celui du-zinc divalent. Les nouveaux composés polypeptidiques de l'invention se signalent par d'intéressantes propriétés pharmacodynamiques. C'est ainsi qu'ils abaissent le taux du calcium sanguin, en particulier les taux anormalement élevés, et, en tant qu'antagonistes de la parathormonen ils produisent un bilan positif du calcium dans l'os. L'activité biologique des nouveaux composés polypepti diques peut être miseen évidence par par 'hypoealcémie qu'ils provo- quent chez le rat. On utilise des rats maltes pesant entre 100 et 130 g maintenus au jeûne pendant 16 heures et hydratés avec une solution physiologique de chlorure de sodium. On prélève chez l'animal environ 1 ml de sang à partir du plexus veineux rétroorbitaire. On injecte ensuite dans la queue, par voie intraveineuse, 1 ml/kg d'une solution du composé à essayer dans de l'acide acétique 0,2N et une heure plus tard on prélève à nouveau du sang.Après coagulation, on centrifuge les échantillons de sang, on sépare le sérum surnageant9 on le dilue avec une solution à 0,25 d'acide éthylènediamine-tétra-acétique et on déter- mine le taux de calcium au moyen d'un spectrophotomètre à absorption. La différence entre les valeurs trouvées avant et après administration de la substance donne la mesure de l'hypocalcémie. Les activités sont calculées selon la méthode décrite par M.A. Kumar et coll. dans J. Endoctrine 3, 469 (1965). Les résultats obtenus sont comparés à ceux obtenus avec un échantillon étalon de thyrocalcitonine provenant du "Medical Research Council't (MRC); l'activité est exprimée en unités MRC par mg de peptide (10 milli-unités provoquent chez le rat une basse de 10%, soit 1 mg/100 ml, du taux de calcium dans le sérum).Dans cet essai, les nouveaux composés polypeptidiques possèdent une activité de 3000-5000 unités MRC/mg de peptide Les nouveaux composés peuvent par conséquent être uti- lisés en thérapeutique pour le traitement de tous les états dans lesquels on désire obtenir une baisse de la calcémie ou- exercer une influence sur le métabolisme osseux, comme par exemple les hypercalcémies provoquées par une insuffisance de thyrocalcitonine endogène résultant dune inactivité du tissu thyroïdien ou dune hyper-para-thyroidie. Les composés de l'invention sont également indiqués pour le traitement de toutes les ostéopathies provoquées par un catabolisme osseu trop élevé ou des ostéopathies dans lesquelles on désire provoquer une fixation accrue du calcium dans l'os, comme par exemple les ostéoporoses de diverses. origines (telles que l'ostéoporose post-olimatérique, l'ostéoporose post-traumatique, l'ostéoporose corticothérapique ou due à l'immobilité), les fractures, les ostéomalacies, le rachitisme et I'osteodystrophie due 2 une insuffisance rénale. On pourra également utiliser les composés de l'invention en combinaison avec du calcium ou des phosphates. La dose à administrer dépend de l'action désirée ainsi que du mode d'application. En général, on obtient des résultats satisfaisants en administrant des doses quotidiennes comprises entre environ 70 et 700 unités, soit en une seule fois, soit en plusieurs fractions. Pour l'application intramusculaire, les formes d'application appropriées contiennent environ - 70 à 700 unités de substance active, en mélange avec un support liquide. Un avantage des composés polypeptidiques de l'invention répondant à la formule générale dans laquelle X représente un groupe de formule R-CO-NH- ou R'-O-CO-NH-,consiste en leur stabilité vîs-à-vis de l'action protéolytique des aminopeptidases. Les nouveaux composés de 1'invention,ainsi que leurs sels d'addition d'acides et leurs complexes de métaux lourds, peuvent être utilisés commè médicaments, par exemple sous forme de préparations pharmaceutiques. Celles-ci' renferment la substance active en mélange avec un excipient minéral ou organique, approprié pour l'administration par la voie parentérale. Comme excipients, on utilisera des produits qui ne réagissent pas avec les nouveaux composés, tels que la gélatine, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le talc, les huiles végétales, l'alcool benzylique, la gomme arabique, les polyalkylène-glycols, la vaseline, le chlolestérol ou d'autres excipients pharmaceutiques connus. Les préparations pharmaceutiques liquides peuvent autre par exemple des solutions, des suspensions ou des émulsions. On peut les stériliser et/ou leur ajouter des adjuvants, tels que des agents de conservation, des stabilisants, des mouillants ou des émulsionnants. Les nouveaux composés peuvent également être administrés sous forme de préparations retard. Les exemples suivants illustrent la présente invention sans aucunement en limiter la portée. Les températures sont exprimées en degrés centigrades. Le pouvoir rotatoire c est égal à l'unité. Dans la présente description on fait usage des abréviations suivantes: : Z = benzyloxycarbonyl Bzl = benzyl BOC = tert.-butyloxycarbonyl Trt = trityl = triphénylméthyl OTB = tert. -butyloxy ONP = ester p-nitrophénylique OCP = 2,4,5-trichlorophénoxy OMe = méthoxy OEt = éthoxy NO2 = nitro Ser = L-séryl Asn = L-asparaginyl Leu = L-leucyl Thr = L-thréonyl Val = L-valyl Tyr = L-tyrosyl Arg = L-arginyl Gln = L-glutaminyl Glu = L-glutamyl His = L-histidyl Pro = L-prolyl Gly = glycyl Lys = L-lysyl Cys = L-cystéinyl Piv = pivaloyl MCP = ss-mercaptopropionyl OSu = ester de N-hydroxysuccinimide- EOC = éthoxy-carbonyl DCHA = dicyclo-hexylamine Séquence partielle A : H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 a). H-Thr-Pro-NH2 .HCl On dissout à -5 134 g de Z-Thr-NH-NH2 dans 2 litres diacide chlorhydrique IN et on ajoute 0,55 1 de nitrite de sodium IN à la solution ainsi obtenue. Au bout de 5 minutes, on ajoute du carbonate de potassium jusqutà pH 9, on extrait l'axide ainsi obtenu avec de l'acétate d'éthyle et on ajoute successivement une solution de 80 g de chlorhydrate de H-Pro-NH2 dans 100 ml d'eau, 500 ml de diméthylformamide et 77 ml de triéthylamine. On évapore acétate d'éthyle à 200 sous pression réduite et on abandonne pendant la nuit à une température de 250.On évapore la solution restante sous pression réduite, on dissout le résidu dans de acétate d'éthyle, on lave la solution successivement à l?eau, à l'acide chlorhydrique dilué et avec une solution aqueuse de carbonate de calcium, puis on sèche sur sulfate de sodium. On évapore sous pression réduite, on dissout dans de l'acétate d'éthyle chaud et on refroidit. On obtient ainsi le Z-Thr-Pro-NH2 fondant à 148 ; [a]D = -72 dans l'acide acétique à 95%. On dissout ensuite 90 g de Z-Thr-Pro-NH2 dans 2 litres de dioxanne et 260 ml d'acide chlorhydrique 1N et on hydrogène à 200, sous pression atmosphérique et en présence d'un catalyseur au palladium. On filtre, on evapore la solution sous pression réduite, on lave le résidu cristallin à l'acétate d'éthyle, ce qui donne le H-Thr-Pro-NH2 .HCl fondant à 216 ; [a]D20 = -64 dans l'acide acétique à 95%. b) Z-Ser-Gly-NHNH2 On dissout 14,5 g de Z-Ser-OH dans 100 ml de chloroforme et on ajoute 6,1 g de N-méthylmorpholine; on ajoute ensuite goutte à goutte 8,2 g de chloroformiate dtisobutyle. Au bout de 10 minutes, on ajoute une solution de 6,6 g d'ester éthylique de glycine dans 50 ml de chloroforme et on agite pendant une heure à la température ambiante. On lave le mélange réactionnel successivement avec de l'ammoniaque diluée et avec une solution d'acide chlorhydrique, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore la phase organique. Après recristallisation dans de l'acétate d'éthyle, on obtient le Z-Ser-Gly-OEt fondant à 103 ; [a]D20 = +3 dans le diméthylformamide.On dissout 19,4 g de Z-Ser-Gly-OEt dans 270 ml d'alcool éthylique, on ajoute 27 ml d'hydrate d'hydra- zine à la solution ainsi obtenue et on abandonne pendant 2 jours à la température ambiante. On sépare par filtration le produit cristallin, on le lave au méthanol et on le sèche. On obtient ainsi le Z-Ser-Gly-NHNYH2 fondant à 180 ; [A]D 20 =+2 dans le diméthylformamide. c) H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 On ajoute 25 ml d'une solution d'acide chlorhydrique 4N dans de l'éther diéthylique à 200 ml de diméthylformamide et on y dissout 11 g de Z-Ser-Gly-NHNH2. On ajoute ensuite goutte à goutte, à -10 , 5,4 ml de nitrite de tert.-butyle, puis 18 ml de triéthylamine et on filtre. On dissout en meme temps 12 g de H-Thr-Pro-NH2 . HCl dans 100 ml de diméthylformamide, on ajoute 6,2 ml de triéthylamine, on sépare par filtration le chlorhydrate de triéthylamine qui a précipité et on ajoute au filtrat la solu- tion de dipeptide-azide obtenue précédemment.On abandonne pendant 2 heures à 00, on évapore à siccité on dissout le résidu dans un mélange de 500 ml de méthanol et de 100 ml d'eau et on fait passer la solution ainsi obtenue à travers une colonne de 100 ml de Dowex-50 (sous sa forme H+). On évapore et on oristalli- se le résidu dans un mélange de méthanol et d'acétate éthyle. On obtient ainsi le Z-Ser-Gly-Thr-Pro-NR2 fondant à 1320 (avec décomposition) ; [a]D20 = -22 dans le diméthylformamide On dissout 22 g de Z-Ser-Gly-Thr-Pro-NH@ dans un mélange de 440 ml de méthanol et de 88 ml d'eau et on hydrogène à 20 , sous pression atmosphérique en présence de charbon palladien On filtre la solution ainsi obtenue on l'évapore a siccité, on ave le résidu d'évaporation à à l'éther et on le sèche On obtient ain- si le H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 fondant à 95- (avec décomposition); [&alpha;]D20= -27 dans le diméthylformamide. Séquence partielle B : BOC-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2 a) Z-Asn-Thr-Gly-OEt On dissout 43 g de Z-Thr-G;u-OEt dans 500 ml de diméthyl formamide et on hydrogène à la température ambiante et sous pression atmosphérique, en présence de charbon palladié. On filtre la solution ainsi obtenues on ajcute 60 g de Z-Asn-OCP, on abandonne pendant 16 heures à 25 , on évapore jusqu a un volume environ 250 ml, on ajoute de l'acétate d'éthyle, on lave avec de l'acide chlorhydrique dilué, on seche sur sulfate de sodium et on évapore à siccité On lave le résidu d'évaporation à l'acéàtate d'éthyle et on le sèche. On obtient ainsi le Z-Asn-Thr Gly-OEt fondant à 225 ; [a]D20= -40 dans le diméthlformamide. b) Z-Thr-Asn-Thr-Gly-OEt On dissout 29 g de Z-Asn-Thr-Gly-OEt dans 700 ml de diméthylformamide, on hydrogène la solution ainsi obtenue à la température ambiante sous pression atmosphérique et en présence de charbon palladié, on la filtre et on ajoute au filtrat le Z-Thr-N3 préparé à partir de 30 g de Z-Thr-NHNH2 (voir séquence partielle A a)). On abandonne pendant 12 heures à 00, on évapore à siccité et on lave le résidu successivement à l'eau, à l'éther et à l'éthanol. On obtient ainsi le Z-Thr-Asn-Thr-Gly-OEt fondant à 230 ; [a]D20= -8 dans le diméthylformamide. c) BOC-Arg-Thr-Asn-Thr-GlyNHNH2 On dissout 22 g de Z-Thr-Asn-Thr-Gly-OEt dans 700 ml de diméthylformamide, on hydrogène la solution ainsi obtenue à la température ambiante, sous pression atmosphérique et en présence de charbon palladié et on la filtre. On dissout 23 g de Boc-Arg (NO2)-OH dans 500 ml de diméthylacétamide, on ajoute 12 ml de triéthylamine, on refroidit à -10 , on ajoute 9,4 ml de chloroformiate d'isobutyle, on laisse la réaction se poursuivre pendant 10 minutes et on ajoute la solution du tétrapeptide obtenue précédemment. On abandonne pendant 30 minutes à 250, on ajoute 100 ml d'eau, on traite la solution ainsi obtenue par de l'Amberlite IRA-410 (sous sa forme OH) jusqu'à réaction négative au chlore, on filtre et on évapore à siccité. On lave le résidu d'évaporation successivement au chloroforme, à l'acétate d'éthyle et à 1 t éther et on sèche. On obtient ainsi le BOC-Arg(N02)-Thr Asn-Thr-Gly-OEt fondant à environ 100 ; [a]D20=-4 dans le diméthylformamide. On dissout 12 g de BOC-Arg(N02)-Thr-Asn-Thr-Gly-OEt dans un mélange de 200 ml d'acide acétique et de 40 ml d'eau, on hydrogène la solution ainsi obtenue à 200, sous pression atmosphérique et en présence de charbon palladium on la filtre et on l'évapore à siccité à 200 et sous pression réduite On dissout le résidu dans du diméthylformamide et on évapore. On répète ce traitement jusqueå disparition complète de l'acide acétique.On dissout le résidu dans 120 ml de diméthylformamide, on ajoute 6 ml d'hydrate d'hydrazine, on abandonne pendant 16 heures à 250, on évapore, on lave le résidu successivement à l'éther, avec un mélange à parts égales de méthanol et éther, puis de nouveau à l'éther et on le sèche. On obtient ainsi le BOC-Arg-Thr-Asn-Thr Gly-NHNH2 fondant à 175Q (avec décomposition); [a]D20= 420 dans un mélange à parts égales de diméthylformamide et d'acide chlorhydrique lN. Séquence partielle AB: H-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 On dissout 13,5 g de BOC-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2 (séquence partielle B) dans 270 ml d'un melange de diméthylformamide et d'eau dans le rapport 8:2, on refroidit la solution ainsi obtenue à -150, on ajoute 40 ml d'une solution 4N d'acide chlorhydrique dans du dioxanne et 2,5 ml de nitrite de tert.- butyle. On agite pendant 10 minutes à -15 , on ajoute 28 ml de triéthylamine, on sépare par filtration, on ajoute 10,5 g de H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 (séquence partielle A) et on agite pendant 16 heures à 00. On évapore ensuite à siccité on lave le résidu d'évaporation à l'éther et on le sèche.On dissout le résidu dans du méthanol, on ajoute un dixième en volume d'eau et 7 fois la quantité de chloroforme, puis on fait passer la solution ainsi obtenue à travers une colonne de 500 g de gel de silice. On élue avec des quantités oroissantes de méthanol et on évapore, ce qui donne le BOC-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NYH2. On met ce produit en suspension dans 200 ml d'une solution 4N d'acide chlorhydrique dans du dioxanne et on agite pendant 2 heures à 250. On évapore à siccité, on dissout le résidu d'évaporation dans de l'acide acétique 0,2N, on traite par de l'Amberlite-IRA- 410 (sous sa forme acétate) et on lyophilise la solution aqueuse ainsi obtenue.On. lave ensuite le résidu successivement à éther, à l'acétate éthyle et à nouveau à l'éther et on sèche sur des tournures d'hydroxyde de sodium. On obtient ainsi le diacétate de H-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 fondant à 1950 (avec décomposition); [a]D20 -64 dans un mélange à parts égales de diméthylformamide et d'acide chlorhydrique 1N. Séquence partielle C: Z-His-Lys (BOFC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH a) H-Thr-Tyr-Pro-OH On dissout 176 g de Z-Tyr (Z) -Pro-OMe dans un litre d'un mélange de méthanol et d'acide chlorhydrique lN, on hydrogène la solution ainsi obtenue à 200 sous pression atmosphérique et en présence de charbon palladié et on filtre.On évapore le filtrat, on dissout le résidu dans 400 mi de diméthylformamide, on ajoute à O 100 mi de triéthylamine, on sépare par r'iltration le chlorhydrate de triéthylamine qui a cristallise et on ajoute au filtrat le Z-Thr-N3 @préparé à partir de 87 g de Z-Thr-NHNH2 ; voir séquence partielle A a)i. On abandonne ensuite pendant 16 heures à 00, on évapore à siccité, on dissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle et on lave la solution ainsi obtenue successivement à l'acide chlorhydrique dilué et à l'ammoniaque diluée, on la sèche et on l'évapore. On pulvérise le résidu d'évaporation dans de l'heptane, on lave à l'éther de pétrole et on sèche.On obtient ainsi le Z-Thr-Tyr-Pro-OMe fondant à 800 (avec décomposition) ; [a]D20= -23 dans le diméthylformamide. On dissout 53 g de Z-Thr-Tyr-Pro-OMe dans 530 ml de méthanol, on ajoute 100 ml d'hydroxyde de sodium 2N, on abandonne pendant une heure à 250, on ajoute 50 ml d'acide chlorhydrique 2N, on évapore jusqu'à un volume d'environ 200 ml, on ajoute encore 100 ml d'eau et on règle le pH à 10. On lave ensuite la solution aqueuse à deux reprises à acétate d'éthyle, on règle le pH à 1 au moyen d'acide chlorhydrique 4N, on extrait avec de l'acétate d'éthyle le tripeptide qui a précipité, on le sèche et on l'éva- pore. Le Z-Thr-Tyr-Pro-OH ainsi obtenu fond à 800; [a]20= -23 dans le diméthylformamide.On dissout le résidu d'évaporation dans un mélange de 500 ml de dioxanne et de 100 ml d'eau et on hydrogène la solution ainsi obtenue à 200, sous pression atmos phérique et en présence dXun catalyseur au palladium On filtre, on évapore le filtrat à siccité, on lave le résidu à l'éther et on le sèche. On obtient ainsi le H-Thr-Tyr-Pro-OH fondant à 180 (avec décomposition) ; [a]D20= - 31 dans l'acide acétique à 95%. b) Z-Leu-Gln-OMe Qn dissout 70 d de Z-Gln-OH dams 1,5 litre de dioxanne et on ajoute progressivement une solution éthérée de diazométhane jusqu'à ce que la solution réactionnelle prenne une coloration jaune. On évapore ensuite et on traite le résidu blanc par de l'éther. On obtient ainsi le Z-Gln-OMe fondant à 136 ; [a]D20=-21 dans le diméthylformamide. On dissout 71 g de Z-Gln-OMe dans 1,7 litre de méthanol et on ajoute ensuite à la solution ainsi obtenue 5 g de palladium à 10% sur charbon actif, qu'on a délayé au préalable avec 59 ml d'acide chlorhydrique 4N.On hydrogène ensuite le tout pendant 5 heures à la température ambiante et sous pression atmosphérique. L'hydrogène absorbé correspond en viron à 83% de la quantité théorique. On sépare le catalyseur par filtration et on évapore complètement le filtrait, ce qui donne le H-Gln-OMe . HCl sous forme d'une huile visqueuse. On dissout 64 g de Z-Leu-OH dans 200 ml d'acétonitrile, on ajoute 27,7 g de N-hydroxy-succinimide a la solution ainsi obtenue qu'on refroidit à 100. On ajoute ensuite une solution de 50 g de dicyclo-hexylcarbodiimide dans 100 ml d'acétonitrile, et au bout d'environ 30 minutes, on sépare la dicyclc-hexyl-urée par filtration. Au filtrat ainsi obtenu, on ajoute 47,3 g de H Gln-OMe . HCl en solution dans du diméthylformamide et, en même temps, une quantité équivalente de N-méthyl-morpholine. On abandonne pendant 4 heures et on évapore. On dissout le résidu déva- poration dans de l'acétate d'éthyleet on lave la solution ainsi obtenue successivement avec une solution à 5,% de bicarbonate de sodium, avec de l'acide chlorhydrique IN et à l'eau On sèche la phase organique sur sulfate de sodium et on l'évapore sous pres sion réduite. Après reoristallisation dans du méthanol et de l'éther, on obtient le Z-Leu-Gln-OMe fondat à 179 ; [a]D20=-16 dans le diméthylformamide. c) Z-Lys (BOC)-Leu-Gln-OMe On dissout 42 g de Z-Leu-Gln-Ome dans 1500 ml de méthanol et, à la solution ainsi obtenue, on ajoute 16 g de palladium à 10% sur charbon actif qu'on a au préalable délayé avec 25,8 mi d'acide chlorhydrique 4N. On hydrogène le tout pendant 8 heures à la température ambiante et sous pression atmosphérique. L'hydrogène absorbé correspond à 95% de la quantité théorique. On sépare le catalyseur par filtration et on évapore le filtrat. On obtient ainsi le H-Leu-Gln-OMe . HCl sous forme d'une mousse. On dissout ensuite le H-Leu-Gln-OMe . HCl dans 300 ml de diméthylformamide et on ajoute 34 g de Z-Lys (BOC)-OCP et 8,4 mi de triéthylamine.Après avoir agité le mélange réactionnel, on l'abandonne pendant 16 heures. On évapore ensuite le mélange réactionnel sous pression réduite, on traite le résidu dtêvaporation par de l'eau et on filtre. On dissout ensuite le produit dans une faible quantité de méthanol et on fait précipiter par addition d'éther. On filtre et on sèche, ce qui donne le Z-Lys (BOC)-Leu-Gln-OMe ; [a]D20=-21 dans le diméthylformamide. d/Z-His-Lys (BOC)-Leu-Gln-NH-NH2 On dissout 38 g de Z-Lys (BOC) -Leu-Gln-OMe dans 300 ml de diméthylSormamide, on ajoute 15 g de charbon palladié à 10%, on hydrogène à la température ambiante. et sous pression atmosphérique et on sépare le catalyseur par filtration. On ajoute ensuite du Z-His-N3' préparé à partir de 25,2 g de Z-His-NHNH2, on abandonne le mélange réactionnel pendant 5 heures à 20 , on évapore on dissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle, on laye à l'eau, on sèche sur sulfate de sodium, on évapore et on lave ie résidu à l'éther. On obtient ainsi le Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-OMe fondant à 1200 (avec décomposition), [a]20 = -19 dans le diméthylformamide. On dissout 33 g de Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-OMe dans 330 ml de méthanol, on ajoute 7,5 ml d'hydrate d'hydrazine à la solution ainsi obtenue, on abandonne pendant 2 jours à 250 et on évapore ensuite à siccité. On dissout le résidu d'évaporation dans du diméthylformamide, on évapore et on répète ce traitement jusqu'à disparition complète de l'hydrazine. On lave le rés successivement à l'éther, à l'eau et de nouveau à l'éther et on sèche. On obtient ainsi le Z-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-NH-NH2 fondant à 199 ; [a] 20= -220 dans le méthanol. D e) Z-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH On dissout 40 g de Z-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-NH-NH2 dans 400 ml de diméthylformamide, on refroidit la solution ainsi obtenue à -2Q0, on ajoute 75 ml d'un mélange de dioxanne et d'acide chlorhydrique 2N et ensuite 6 ml de nitrite de tert. -butyle. On agite le mélange réactionnel pendant 10 minutes à -200, on ajoute 30 ml de triéthylamine et 20 g de H-Thr-Tyr-Pro-OH, puis on laisse la réaction se poursuivre pendant 16 heures à 250. On évapore ensuite à siccité, on lave le résidu d'évaporation successivement à l'6ther, à l'acide acétique dilué3 à nouveau à l'éther et enfin à l'acétate d'éthyle chaud.On seche ensuite sous vide poussé, ce qui donne le Z-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Tyr-Pro-OH fondant à 215 (avec décomposition) ; [a]D20 = -23 dans le dim éthylformamide. Séquence partielle Cl : Z-His-Lys (BOC) -Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH a) H-Thr-Tyr-Pro-OH Voir séquence partielle C a). b) Z-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH On dissout 40,1 g de Z-Gln-ONP et 38,4 g de H-Thr-Tyr Pro-OH dans 500 ml de diméthylformamide et on ajoute 12,2 ml de N-méthylmorpholine. On abandonne la solution pendant 16 heures à la température ambiante et on l'évapore ensuite complètement sous pression réduite. On reprend le résidu d'évaporation par un mélange d'acétate d'éthyle et de n-butanol dans le rapport 10:1 et on lave avec un mélange à parts égales d'acide sulfurique 1N et d'une solution à 30 de chlorure de sodium,puis avec une solution à 15% de chlorure de sodium. Après séchage sur sulfate de sodium, on évapore complètement la phase organique sous pression réduite. On dissout le résidu dans un mélange à parts égales de chloroforme et de méthanol et on filtre à travers une colonne de gel de silice (20 fois la quantité).On obtient ainsi le Z-Gln Thr-Tyr-Pro-OH sous forme d'une mousse ; [a]D20=-19 dans le diméthylformamide. c) Z-Lys (BOC) -Tyr-OMe On dissout 143,9 g de Z-Lys(BOC)-OH . DCHA dans 600 ml de diméthylformamide chaud, on refroidit la solution ainsi obtenue à 350 et on ajoute une solution de 65,1 g de H-Tyr-OMe . HCl dans 200 ml de diméthylformamide, ce qui provoque la cristallisation de DCHA . HC1. Après filtration, on ajoute 30 g de Nhydroxysuccinimide au filtrat ainsi obtenu, on refroidit à -15 et on ajoute une solution de 53,6 g de dicyclohexylcarbodiimide dans 200 ml d'acétonitrile. On agite le mélange réactionnel pendant 15 heures à 0 , on sépare la dicyclohexyl-urée par filtration et on évapore le filtrat sous pression réduite.On dissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle, on lave la solution ainsi obtenue successivement avec une solution à 5 de bicarbonate de sodium, à l'eau, à l'acide sulfurique 1N et de nouveau à l'eau, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore. On obtient ainsi le Z-Lys (BOC)-Tyr-OMe sous forme d'une mousse ; [a]D20=-6 dans le méthanol. d) Z-His-Lys (BOC)-Tyr-NHNH2 On dissout 113,5 g de Z-Lys(BOC)-Tyr-OMe dans 2 litres de méthanol, on ajoute une suspension. de 10 g de palladium à 10% sur charbon actif dans 50 mi d'acide chlorhydrique 4N et on hydrogène à la température ambiante et sous pression atmosphéri que Au bout de 3 heures, la quantité d'hydrogène absorbée correspond à 90% de la quantité théorique. On sépare le catalyseur par filtration et on évapore complètement le filtrat sous pression réduite Le H-Lys(BOC)-Tyr-OMe . HCl ainsi obtenu sous forme d'une mousse, se comporte comme un constituant unique lors de la chromatographie en couche mince. On le couple avec Z-His-N3 en procédant comme suit: On dissout 88,5 g de Z-His-NHNH2 dans 1800 ml de diméthylformamide, on refroidit la solution ainsi obtenue à -20 , on ajoute 405 ml d'une solution 3,7N d'acide chlorhydrique dans de l'éther et on ajoute goutte à goutte )6,6 ml de nitrite de tert.butyle. Après avoir agité pendant 10 minutes à -20 , on ajoute 270 ml de triéthylamine et une solution de H-Lys(BOC)-Tyr-OMe HCl dans 600 ml de diméthylformamide contenant 27,3 ml de triéthyl amine.Au bout de 5 heures, on sépare par filtration le chlorhydrate de triéthylamine qui a cristallisé et on évapore complè- tement le filtrat sous vide poussé On dissout le résidu dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'eau dans le rapport 2 : 1, on lave la phase organique à 4 reprises avec une solution à 15% de chlorure de sodium on sèche sur sulfate de sodium et on évapore. On dissout le résidu dans un mélange de chloroforme et de méthanol dans le rapport 98:2 et on filtre la. solution ainsi obtenue à travers une colonne de gel de silice (25 fois la quantité), ce qui donne le Z-His-Lys (BOC)-Tyr-OMe à l'état amorphe ; [a]D20= -11 dans le diméthylformamide. On dissout 90,4 g de Z-His-Lys (BOC)-Tyr-OMe dans 300 ml de méthanol et on ajoute 20 mi dthydra- te d'hydrazine. On laisse cristalliser pendant 2 jours l'hydrazi- de ainsi formé, On ajoute 300 ml d'éther, on essore, on lave à l'éther et on sèche sous pression réduite On obtient ainsi le Z-His-Lys (BOC)-Tyr-NHNH2 fondant à 187 ; [a]D20 = -24 dans le diméthylformamide. e) Z-His-Lys (BOC) -Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH On dissout 36,7 g de Z-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH dans 500 mi de diméthylformamide, on ajoute 15 g de palladium à 10% sur charbon actif, on hydrogène à la température ambiante et sous pression atmosphérique et on sépare ensuite le catalyseur par filtration. Le filtrat contient le H-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH que l'on couple avec Z-His-Lys (BOC)-Tyr-N3 de la manière suivante: On dissout 40,4 g de Z-His-Lys (BOC)-Tyr-NHNH2 dans 400 ml de diméthylformamide on refroidit la solution ainsi obtenue à -20 , on ajoute 88 ml d'un mélange de dioxanne et d'acide chlorhydrique 2N et ensuite 7,3 ml de nitrite de tert. -butyle. Après avoir agité pendant 10 minutes à -20 , on ajoute 37 mi de triéthylamine ainsi que la solution de diméthylformamide contenant le H-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH. On abandonne pendant 5 heures à 20 puis on évapore complètement sous pression réduites on dissout le résidu dans un mélange d'acétate d'éthyle et de n-butanol dans le rapport 5:1, on lave à l'acide acétique dilué n ajoutant une solution de chlorure de sodium, on scohe sur sulfate de sodium et on concentre par évaporation On. traite soigneusement l'huile ainsi obtenue par de l'éther, on essore et on sèche sous vide poussé. On obtient ainsi le Z-His-Lys (BOC) -Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro OH fondant à 193 ; [a]D20=-33 dans le diméthylformamide. Séquence partielle ABC : H-His-Lys (BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyn-Pro-Arg Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 On dissout 10 g d'heptapsptflde (séquence partiellé C) dans 100 mi de diméthylformamide, on évapore, on dissout le résidu dans 100 mi de diméthylSormamide, on ajoute 15 g de N hydroxy-suceinimide, on refroidit k 0 , on ajoute 5 g de dicyclo- hexylcarbodilmide et on laisse la réaction se poursuivre pendant 3 heures. On sépare ensuite par filtration la dicyclohexyl-urée qui a précipité, on évapore jusqu'à un volume de 30 ml et on fait précipiter par addition d'éthers ce qui donne le Z-His-Lys (BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-OSu.On lave le résidu à l'éther, puis on le dissout dans 100 mi de diméthylformamide, on ajoute 10 g de nonapeptide-amide (séquence partielle AB) et on laisse la réaction se poursuivre pendant 16 heures. On ajoute 500 ml d'acétate d'éthyle et on filtre. On dissout le résidu dans du diméthylformamide, on ajoute 10 mi d'acide acétique et on fait précipiter à nouveau avec de-l'acétate d'éthyle. On filtre, on lave à l'acétate d'éthyle et à l'éther et on sèche. On obtient ainsi le triacétate de Z-His-Lys (BOC ) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 ; [a] D0= ,190 dans le diméthylformamide.On dissout le produit ainsi obtenu dans de-l'acide acétique à 80%, puis on ajoute 5 g de charbon palladié et on hydrogène à la température ambiante et sous pression atmosppéri- que. On filtre, on évapore à siccité à 200 et sous vide poussé, et on lave le résidu à l'éther. Après séchage sur des tournures d'hydroxyde de potassium, on obtient le triacétate de H-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 fondant à 1700 (avec décomposition); [alD0= -53 dans l'acide acétique 1N. Séquence partielle ABC: H-His-Lys (BOC) -Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg- Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 En procédant de la manière décrite pour la préparation de la séquence partielle ABC, on obtient,à partir de 10 C d'heptapeptide (séquence partielle Cl) et de 10 g de nonapeptide (séquence partielle AB), le triacétate de H-His-Lys(BOC)-Tyr-Gln Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-thr-Pro-Nh2 fondant à 1660 (avec décomposition); @@@@@ 500 dans l'acide acétique 1N. Séquence partielle D: Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu- NHNH2 a) Z-Glu (OTB) -Leu-OMe On dissout 151 g de Z-Glu(OTB)-OH et 54 g de N-hydroxysuccinimide dans 700 ml d'acétonitrile et on refroidit à -200, On ajoute ensuite une solution de 96,5 g de dicyclohexylcarbodiimide dans 350 ml d'acétonitrile9 on laisse reposer pendant environ 30 minutes, et on sépare par filtration la dicyclohexyl-urée qui s'est formée. On ajoute au filtrat ainsi obtenu 71,2 g de H-Leu OMe, puis on abandonne pendant 4 heures et on évapore sous pression réduite.Au résidu solide ainsi obtenu, on ajoute un mélange d'acétate d'éthyle et d'eau dans le rapport 2:1 On lave ensuite la phase organique successivement avec une solution à 5% de bi- - carbonate de sodium, à l'eau et à acide sulfurique dilué (pH 3), on lave à neutralité, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore. On dissout le résidu dans du chloroforme contenant 1% de méthanol et on filtre à travers une colonne de gel de silice (10 fois la quantité). On obtient ainsi le Z-Glu (OTB)-Leu-OMe fondant à 310; [a]D20=-12 dans le diméthylformamide b) H-Gln-Glu(OTB)-Leu-OMe On dissout 118 g de Z-Glu(OTB)-Leu-OMe dans 2 litres de méthanol. A la solution ainsi obtenue, on ajoute 15 g de palladium à 10 sur charbon actif qu'on a délayé au préalable avec 63 ml d'acide chlorhydrique 4N. On hydrogène pendant 2 heures à la température ambiante et sous pression atmosphérique. L'hydrogène absorbé correspond à 85% de la quantité théorique. On sépare le catalyseur par filtration et on évapore complètement le filtrat, ce qui donne le H-Glu (OTB) -Leu-OMe . HCl sous forme d'une mousse amorphe. On dissout 91,7 g de Z-Gln-ONP et 938 g de H-Glu(OTB)- Leu-OMe . Hcl dans 500 ml de diméchylformamide et on ajoute 51 ml de N-méthyl morpholine à la solution ainsi obtenue. On abandonne le mélange réactionnel pendant 15 heures à la température ambiant te et on évapore ensuite complètement sous pression réduite. On traite à fond par de l'eau le résidu ainsi obtenu, puis on filtre. On recristallise le produit dans du méthanol, ce qui donne le Z-Gln-Glu (OTB) -Leu-OMefondant à 210 (avec décomposition) ; [a]D20=-40 dans le diméthylformanide. On dissout 44n4 g de Z-Gln-Glu(OTB)-Leu-OMe dans 1200 ml d'un mélange à parts égales de méthanol et de diméthylformamide. A la solution ainsi obtenue, on ajoute 15 g de palla dium à 10% sur charbon actif dans 50 ml d'eau et on hydrogène pendant environ 2 heures; la. quantité d'hydrogène absorbée correspond presque à la quantité théorique. On sépare le catalyseur par filtration et on évapore le filtrat sous pression réduite. On dissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle et on lave la solution ainsi obtenue à trois reprises avec une solution saturée de chlorure de sodium. On sèche la phase organique sur sulfate de sodium et on évapore le filtrat jusqu a environ un tiers du volume initial, Après addition d'éther de pétrole, on sépare par filtration le tripeptide solide qui s'est formé. On obtient ainsi le H-Gln-Glu(OTB)-Leu-OMe fondant à 1230; [a] 20= 014 dans le diméthylformamide. e) ZLys (BOC) -Leu-Ser-OMe On dissout 43 g de H-Leu-Ser-OMe . HCl et 80 g de Z-Lys (BOC)-OCP dans 400 ml de diméthylformamide, on ajoute 22 ml de triéthylamine à la solution ainsi obtenue, on l'abandonne: pendant 25 heures à 25 , on filtre la triéthylamine qui a précipité et on évapore le filtrat à siccité. On dissout le résidu dans de l'acétate d'éthyle, on lave à l'acide chlorhydrique dilué ainsi au'avec une solution diluée de bicarbonate de potassium, on sèche sur sulfate de sodium, on filtre et on évapore. On recristallise le résidu dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, ce qui donne le Z-Lys (BOC)-Leu-Ser-OMe fondant à 110 ; [a]D20=-14 dans le diméthylformamide. d) Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-NHNH2 On dissout 158 g de Trt-Gly-OH dans 2 litres de dichlorométhane et 72 ml de triéthylamine, on refroidit la solution ainsi obtenue à -5 , on ajoute 50 mi de chloroformiate d'éthyle et on agite pendant 10 minutes à -50. On dissout simultanément 300 g de Z-Lys(BOC)-Leu-Ser-OMe dans 3 litres d'un mélange de dioxanne et d'eau dans le rapport 8:2, on hydrogène en présence de charbon palladie à la température ambiante et sous pression atmosphérique, on filtre et on évapore On dissout le résidu dans du chloroforme et on ajoute l'anhydride mixte obtenu ci-dessus. On abandonne pendant une heure à 0 , on lave la solution chloroformique à l'acide acétique dilue, puis avec une solution diluée de bicarbonate de potassium, on sèche et on évapore à siccité. On dissout le résidu dans 1250 ml de méthanol, on ajoute 175 ml d'hydrate d'hydrazine et on abandonne pendant 16 heures à 250. On évapore jusqu'à obtenir un volume de 500 ml, on ajoute de l'eau, on filtre, on lave le résidu à l'eau et on sèche sur anhydride phosphorique. On obtient ainsi le Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser NHNH2 fondant à 204 ; [a]D20=-6 dans le diméthylformamide. e) Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu-NHNH2 On dissout 76 g de Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-NHNH2 dans 300 ml de diméthylformamide, on refroidit la solution ainsi obtenue à -20 , on ajoute 75 ml d'un mélange de dioxanne et d'acide chlorhydrique 4N, puis 11,6 ml de nitrite de tert. -butyle. On agite ensuite le mélange réactionnel pendant 10 minutes à -15 , on ajoute 70 ml de triéthylamine et 49,5 g de H-Gln-Glu (OTB) -Leu OMe. On agite pendant 16 heures à 0 , puis on sépare par filtration le chlorhydrate de triéthylamine qui a precipité, on évapore le filtrat jusqu'à obtenir un volume d'environ 100 ml et on ajoute de l'eau au résidu d'évaporation.On filtre le résidu qui a précipité, on le lave soigneusement à l'eau et on le sèche à 500 sous vide poussé. On extrait le résidu par ébullition avec de l'acétate d'éthyle on le lave à l'éther et on le sèche, ce qui donne le Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu-OMe fondant à 2340; [a]D20 -20 dans le diméthylformamide On le dissout dans 200 ml de diméthylformamide, on ajoute 4 ml d'hydrazine et on abandonne pendant 24 heures à 250 On évapore jusqu'à obtenir un volume d'environ 100 ml, puis on ajoute 500 ml d'eau, on sépare par filtration le produit qui a précipité, on lave à l'eau jusqu'à neutralité et on sèche à 500 sur de l'anhydride phosphorique.On obtient ainsi le Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu-NHNH2 fondant à 2650; [s]D20= -180 dans un mélange de diméthylformamide et dgeau dans le rapport 8:2 Séquence partielle ABCD: H-Gly-Lys (Boc) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB)- Leu-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 On dissout 3 g d'heptapeptide-hydrazide (séquence partielle D) dans 30 ml de diméthylformamide, on refroidit la solution ainsi obtenue à -200, on ajoute 2 ml d'un mélange de dioxanne et d'acide chlorhydrique 4N et ensuite 0,3 ml de nitrite de tert. -butyle. On agite le mélange réactionnel pendant 10 minutes à -20 , on ajoute 2 ml de triéthylamine et 3 g d'hexadécapeptideamide (séquence partielle ABC), on agite pendant 16 heures à 00 et on évapore à siccité. On lave le résidu à 0 successivement à l'acide acétique dilué et à l'eau, on filtre, on dissout le résidu dans un mélange de méthanol et d'eau dans le rapport 9:1 et on filtre la solution ainsi obtenue sur gel de silice.On évapore ensuite le résidu, on le lave à l'acétate d'éthyle, on le dissout dans 200 m1 d'aeide acétique à 80%, on abandonne la solution ainsi obtenue pendant 4 heures à 25 , on l'évapore à siccité à 200, on lave le résidu successivement à l'éther, à l'acétate d'éthyle et de nouveau à l'éther, on le filtre et on le sèche. On obtient ainsi le triacétate trihydraté de H-Gly-Lys(BOC)-Leu Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr- Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 fondant à 240 (avec décompvsi- tion); [a jD0 -38 dans l'acide acétique. Séquence partielle D1: Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Gln-Lou-NHNH2 a) Z-Gln-Leu-OMe On dissout 40,1 g de Z-Gln-ONP et 19,1 g de H-Leu-OMe HCl dans 300 ml de diméthylformamide, on ajoute 34,1 ml de Nméthylmorpholine et on abandonne le mélange réactionnel pendant 15 heures à 200, en l'agitant de temps en temps. On évapore ensuite complètement la solution sous vide poussé. Le résidu est traité à fond par de l'eau, puis séparé par filtration. Après cristallisation dans du méthanol, on obtient le Z-Gln-Leu-OMe fondant à 1680; 20 -110 dans le diméthylformamide. D- = b) H-Gln-Gln-Leu-OMe On dissout 27,8 g de Z-Gln-Leu-OMe dans 130 ml d'acide acétique glacial et on ajout 220 ml d'acide bromhydrique à 40 dans de l'acide acétique glacial. On abandonne la solution pendant une heure, en l'agitant de temps en temps. Après avoir évaporé complètement sous pression réduite on pulvérise le résidu ainsi obtenu dans de l'éther anhydre. Après filtration, on obtient le H-Gln-Leu-OMe . HBr fortement hygroscopique; on l'introduit imprégné d'éther dans une étuve et on le sèche à la température ambiante. On dissout 77,5 g de Z-Gln-ONP et 81,4 g de H-Gln-Leu OMe . HBr dans 750 ml de diniéthylformamîde et on ajoute 66,5 ml de N-méthylmorpholine à la solution ainsi obtenue. On abandonne pendant 15 heures à la température ambiante et on évapore ensuite complètement sous pression réduite. On traite à fond par de l'eau le résidu ainsi obtenu et on filtre. Après essorage, on traite le résidu par de l'acétone et on le sépare de la phase d'acétone au moyen d'une presse. Après séchage sous pression réduite, on obtient le Z-Gln-Gln-Leu-OMe fondant à 2380; [a]20 160 dans le diméthylformamide.On dissout 54,8 g de Z-Gln-Gln-Leu-OMe dans 1200 ml de diméthylformamide. On ajoute à la solution ainsi obtenue une suspension de 10 g de palladium à 10 sur charbon actif dans 70 ml d'eau et on hydrogène pendant environ une heure à la température ambiante et sous pression atmosphérique; l'hydrogène absorbé correspond à la quantité théorique On sépare le catalyseur par filtration et on évapore complètement le filtrat sous pression réduite. On recristallise le résidu dans un mélange de méthanol et d'éther, ce qui donne le H-Gln-Gln-Lou-OMe fondant à 151 ; [a]D20=-10 dans le diméthylformamide. c) Z-Lys (BOC) -Leu-Ser-OMe Voir séquence partielle D c) d) Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-NHNH2 Voir séquence partielle D d). e) Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-NHNH2 En procédant de la maniere décrite pour la préparation de la séquence partielle D e) et en remplaçant le H-Gln-Glu(OTB) Leu-OMe par la même quantité de H-Gln-Gln-Leu-OMe, on obtient le Trt-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-NHNH2 fondant à 270 ; [a]D20 -12 dans un mélange de diméthylformamide et d'eau dans le rapport 8:2 Séquence partielle ABCDl :H-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 En procédant de la manière décrite pour la préparation de la séquence partielle ABCD et en remplaçant la séquence partielle D par la même quantité de la séquence partielle D1, on obtient le triacétate trihydraté de H-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln- Gln-Leu-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser Gly-Thy-Pro-NH2 fondant à 245 (avec décomposition) ; [a]D20=-40 dans l'acide acétique. Séquence partielle ABC1D: H-=Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB)- Leu-His-Lys (BOC) -Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 En procédant de la manière décrite pour la préparation de la séquence partielle ABCD et en remplaçant la séquence partielle ABC par une quantité égale de la séquence partielle ABC1, on obtient le triacétate trihydraté de H-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser Gln-Glu (OTB) -Leu-His-OLys (BOC) -Tyr-Gln-Thr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 fondant à 2300 (avec décomposition); 20 [a]D@@=-40 dans l'acide acétique. Séquence partielle ABClDl : H-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Gln-Leu His-Lys (BOC) -Tyr-Gln-Thr-Pro-Arg-Thr Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-thr-Pro-NH2 En procédant de la manière déorite pour la préparation de la séquence partielle ABCD et en remplaçant la séquence par tielle ABC par une quantité équivalente de la séquence partielle ABC1 et la séquence partielle D par une quantité équivalente de la séquence partielle Dl, on obtient le triacétate trihydraté de H-Gly-Lys (Boc)-Leu-Ser-Gln-Gln-Len-His-Lys (BOC)-Tyr-Gln-Thr-Tyr Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH3 fondant à 2550 (avec décomposition) ; [a]D20=-41 dans l'acide acétique. Séquence partielle E : H-Thr-Cys (Bzl) -Val-Leu-OH a) H-Cys (Bzl) -Val-Leu-OMe. HBr On dissout 21 g de Z-Cys(Bzl)-OCP et 12,3 g de H-Val- Leu-OMe . HCl dans 120 ml de diméthylformamide. A la solution ainsi obtenue, on ajoute 5,9 ml de triéthylamine, on abandonne pendant 16 heures à 250 et on ajoute de l'acétate d'éthyle. On lave ensuite à l'acide chlorhydrique dilué, on sèche sur sulfate de sodium, on évapore à siccité et on cristallise le résidu dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther diéthylique. On obtient ainsi le Z-Cys (Bzl)-Val-Leu-OMe fondant à 160 ; [a]D20=-28 dans le diméthylformamide.On dissout le produit ainsi obtenu dans 210 ml d'une solution à 40% d'acide bromhydrique dans de l'acide acétique glacial, on abandonne pendant 1 heure à 250, on évapore à siccité et on recristallise le résidu dans un mélange d'isopropanol et d'éther diéthylique. On obtint ainsi le H-Cys(Bzl) Val-=Leu-OMe . HBr fondant à 168 ; [a]D20= +24 dans le diméthylformamide. b) H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe . 1,3 HBr On dissout 20 g de Z-Thr-NHNH2 dans 350 ml de diméthylformamide, on refroidit la solution ainsi obtenue à -200, on ajoute 100 ml d'une solution d'acide chlorhydrique 2N dans du dioxanne et 10 ml de nitrite de tert. -butyle. On laisse reposer pendant 10 minutes à -200, puis on ajoute 45 ml de triéthylamine et 25,5 g de H-Cys (Bzl)-Val-Leu-OMe. HBr et on agite le mélange ainsi obtenu pendant 16 heures à 00. On évapore à siccité, on dissout le résidu dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'eau, on lave la phase organique à l'acide chlorhydrique dilué, on sèche sur sulfate de sodium, on évapore et on recristallise le résidu dans de l'acétate d'éthyle.On obtient ainsi le Z-Thr-Cys (Bzl)-Val-Leu-OMe fondant à 208 ; [a]D20=-27 dans le diméthylformamide. On dissout 20 g du tétrapeptide obtenu ci-dessus dans 200 ml d'un mélange à parts égales d'acide trifluoro-acétique et d'acétate d'éthyle. Dans la solution ainsi obtenue,on introduit, pendant une heure et à 0 , un courant d'acide brombydrique gazeux, on évapore ensuite et on recristallise le résidu dans un mélange de méthanol et d'éther diéthylique. On obtient ainsi le H-T4r- Cys (Bzl)-Val-Leu-OMe . 1,3 HBr fondant à 202 ; [a]D20=-10 dans le diméthylformamide. c) H-Thr-Cys (Bzl) -Val-Leu-OH On dissout 372 g de H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe . 1,3 HBr dans 1800 ml de méthanol, on ajoute 900 ml d'hydroxyde de sodium 2N, on abandonne pendant une heure à 25 , on ajoute 240 ml d'acide acétique glacial et on laisse reposer pendant 2 heures à 00. On sépare par filtration le précipité cristallin qui s'est formé, on le lave à l'acide acétique In, ainsi ouis à l'eau, et on le sèche à 500 sous vide poussé. On obtient/le H-Thr-Cys (Bzl) -Val- Leu-OH fondant à 219 ; [a]D20= -53 dans l'ammoniaque IN. Séquence partielle F : BOC-Cys (Bzl) -Ser-Asn-=Leu-Ser-NHNH2 a) H-Asn-Leu=Ser-OMe. HCl On dissout 43 g de H-Leu-Ser-OMe. HCl et 53 g de BOC Asn-ONP dans 400 ml de diméthylformamide, on ajoute 22 ml de triéthylamine à la solution ainsi obtenue qu'on abandonne pendant 16 heures à 250, puis on évapore à siccité et on recristallise le résidu dans le méthanol On obtient ainsi le BOC-Asn-Leu Ser-OMe fondant à 1900; [a]D20= -24 dans le diméthylformamide. On dissout le produit ainsi obtenu dans 500 ml dtune solution 4N d'acide chlorhydrique dans du méthanol , On abandonne la solution ainsi obtenue pendant une heure à 25 g on évapore à siccité, on dissout le résidu dans du méthanol et on fait précipiter par addition d'éther diéthylique. On obtient ainsi le H-Asn-Leu-Ser OMe. HCl fondant à 180 ; [a]D20=-23 dans le diméthylformamide. b) H-Ser-Asn-Leu-Ser-OMe . HCl On dissout 39,5 g de BOC-Ser-NHNH2 dans 500 ml de diméthylformamide, on refroidit à -200, on ajoute 200 ml d'une solution 2N d'acide chlorhydrique dans du dioxanne et ensuite 20 ml de nitrite de tert. -butyle. On laisse reposer 10 minutes à 200, puis on ajoute 90 ml de triéthylamine et 38 g de H-Asn-Leu Ser-OMe . HC1, on agite pendant 16 heures à 0 , on évapore à siccité et on recristallise le résidu dans un mélange de chloro forme et d'éther diéthylique. On obtient ainsi le BOC-Ser-Asn Leu-Ser-OMe fordant à 135 ; [a]D20= -22 dans le diméthylformamide. On dissout le produit ainsi obtenu dans 420 ml d'une solution 4N d'acide chlorhydrique dans du méthanol, on abandonne la solution ainsi obtenue pendant une heure à 250, on évapore à siccité et on recristallise dans un mélange de méthanol et d'acétate d'éthyle. On obtient ainsi le H-Ser-Asn-Leu-Ser-OMe , HCl fondant à 155 (avec décomposition) ; [a]D20= -15 dans le diméthylformamide. c) BOC-Cys (Bzl) -Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 On dissout 18,5 g de H-Ser-Asn-Leu-Ser-OMe O HCl et 18 g de BOC-Cys(Bzl)-ONP dans 100 mi de diméthylformamide, on ajoute successivement 10 ml d'eau, 3,5 mi d'acide acétique et 5,6 ml de triéthylamine, on abandonne pendant 16 heures à 250, on évapore à siccité et on recristallise dans le méthanol. On obtient ainsi 20 le DOC-Cys (Bzl) -Ser-Asn-Leu-Ser-OMe @@@@@@@ a 102 ; [a]D =-@@ dans le diméthylformamide. On dissout le produit ainsi obtenu dans 200 ml de diméthylformamide, tout en chauffant légèrement, et on ajoute 200 ml de méthanol et 20 ml d'hydrate d'hydrazine à la solution ainsi obtenue.On abandonne ensuite pendant 16 heures à 300, on fait précipiter par addition d'éther diéthylique, on lave le précipité avec un mélange à parts égales d'éther diéthylique et de méthanol et on sèche, ce qui donne le BOC-Cys(Bzl)-Ser-Asn Leu-Ser-NRMl2 fondant à 2240. [a]20- D - 150 dans le diméthylformami- de. Séquence partielle EF : BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val Leu-OH On dissout 18,4 g de Boc-Cys (Bzl) -Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 séquence partielle F) dans 150 ml de diméthylformamide, on refroidit la solution ainsi obtenue à -200, on ajoute 40 ml d'une solution 2N diacide chlorhydrique dans du dioxanne et 15 ml de nitrlte de tert.-butyle. On laisse reposer 10 minutes à 200, puis on ajoute 28 ml de triéthylamine et-16,2 g de H-Thr-Cys(Bzl)-Val Leu-OH (séquence partielle E) et on agite pendant 16 heures à 250; on filtre, on évapore la solution et on lave le résidu à fond avec de l'acide acétique In. On obtient ainsi le BOC-Cys (Bzl)-Ser Asn-Leu-Ser-Thr-Cys (Bzl) -Val-Leu-OH fondant à 217 ; [a]D20= -17 dans le diméthylformamide.On dissout le produit ainsi obtenu dans 5 litres d'ammoniac séché et on ajoute du sodium métallique jusqu'à coloration bleu foncé, tout en agitant et en maintenant l'ammoniac en ébullition On ajoute du chlorure d'ammonium afin de décolorer la solution, on évapore à siccité et on lave soigneusement le résidu à l'acide acétique 1N et à l'acétone. Après séchage, on obtient le BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH fondant à 2480 (avec décomposition); [a]D0= -410 dans un mélange de diméthylformamide et d'eau dans le rapport 3:1.On dissout le nonapeptide ainsi obtenu dans 5 litres d'ammoniaque O,OlN, on ajoute sous agitation de l'eau oxygénée 1N jusqu a réaction négative au nitroprussiate, puis 200 ml d'acide acétique glacial, on filtre et on lyophilise. On obtient ainsi le BOC-Cys-Ser-Asn-Leu Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH fondant à 2380 (avec décomposition); [a]D20= -18 dans un mélange de diméthylformamide et d'eau dans le rapport 3:1. Séquence partielle EFl : Piv-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val Leu-OH On dissout le BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu- OH (séquence partielle EF) dans 300 ml diacide trifluoro-acétique, on laisse reposer la solution ainsi obtenue pendant 30 minutes à 250, on évapore, on lave le résidu à l'acétate d'éthyle et on le dissout dans 300 ml de diméthylformamide On ajoute à la solution ainsi obtenue 30 g de pivalate de p-nitrophényle préparé de la manière décrite ci-après, ainsi que 14 ml de triéthylamine, on laisse reposer pendant 16 heures à 250, on évapore, on lave le résidu au chloroforme, on le dissout dans 300 ml de diméthylformamide, on ajoute 50 ml d'eau et 50 g de Dowex-50 et on agite pendant 15 minutes.Après cela, on filtre, on lave la résine ainsi obtenue avec du diméthylformamide et on évapore le filtrat à siccité. On lave le résidu d'abord au chloroforme, puis à l'acétate d'éthyle, et on le sèche. On obtient ainsi le Piv-Cys Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH fondant à 343 ; [a]D2= -17 dans un. niélange de diméthylformamide et d'eau dans le rapport 3:1. Préparation du pivalate de p-nitrophényle On dissout 95 g d'acide pivalique et 131 g de p-nitro- phénol dans un litre d'acétate éthyle, on ajoute 197 g de dicyolohexylcarbodiimide, on agite pendant 2 heures à 25 , on filtre, on évapore le filtrat et on recristallise le résidu dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole. On obtient ainsi le pivalate de p-nitrophényle fondant à 1040 Séquence partielle EF2 : EOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val Leu-OH En procédant selon la méthode décrite pour la préparation de la séquence partielle EFl et en partant de la séquence partielle EF et de carbonate de p-nitrophényle et d'éthyle, pre- paré comme décrit ci-après, on obtient le EOC-Cys-Ser-Asn-Leu- Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH fondant à 263 : [a]D20= 210 dans un mélan ge de diméthylformamide et d'eau dans le rapport 3:1. Carbonate de p-nitrophényle et d'éthyle On dissout 200 g de p-nitrophénol et 113 mi de pyridine dans 1200 mi d'acétate d'éthyle, on refroidit la solution ainsi obtenue à 00, on ajoute sous agitation 156 nil de chloroformiate on continue d'agiter pendant encore 30 minutes à 0 , on lave à lleau, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore à siccité. On dissout lé résidu d'évaporation dans l'éther diéthyli que et, par addition d'éther de pétrole, on fait cristalliser le carbonate de p-nitrophényle et d'éthyle; il fond à 650. Séquence partielle F3 : Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NH-NH2 a) H-Asn-Leu-Ser-OMe. HCl Voir séquence partielle F a). b) H-Ser-Asn-Leu-Ser-OMe . HC1 Voir séquence partielle F b). c) Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 En procédant de la manière décrite pour la préparation de la séquence partielle F e) et en partant de 18,5 g de H-Ser Asn-Leu-Ser-OMe . HCl et de 13,5 g de Bzl-MCP-ONP, on obtient le Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 fondant à 251% ; [a]D20=-16 dans le diméthylformamide. Séquence partielle EF3: MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu NHNH2 On dissout 16,2 g de Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 (séquenoe partielle F3) dans 150 ml de diméthylformamide. on re f@@@@@@ @@ @@@@@@@@ @@@@@ @@@@@@@ @ @@@@@ @@ @@@@@@ @@ @@ @@@@@ froidit la solution ainsi obtenue à -200, on ajoute 40 ml d'une solution 2N d'acide chlorhydrique dans du dioxanne et 15 ml de nitrite de tert.-butyle. On laisse reposer 10 minutes à -20 , puis on ajoute 28 ml de triéthylamine et 24,8 g de H-Thr-Cys(Bzl) Val-Leu-OMe . 1,3 HBr (séquence partielle E b-)) et--on agite pendant 16 heures à 25 . On filtre, on évapore la solution et on lave le résidu à fond avec du méthanol chaud.On obtient ainsi le Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys (Bzl)-Val-Leu-OMe fordant à 244 ; [a]D20=022 dans le diméthylformamide. On dissout le produit ainsi obtenu dans 100 ml de diméthylformamide à une température de 6O0,on ajoute 10 ml d'hydrate d'hydrazine et on laisse reposer pendant 2 heures à 600, ce qui fait cristalliser le nonapeptide-hydrazide qui stest formé. On le lave successivement à l'éther diéthylique, à l'eau et au méthanol et on le sèche sur anhydride phosphorique sous vide poussé. I1 fond à 2650; i20 - 350 dans un mélange de diméthylformamide et d'eau dans le rapport 3:1. On dissout le produit ainsi obtenu dans- 5 litres d'ammoniac séché et on ajoute du sodium métallique jusqu'à coloration bleu foncé, tout en agitant et en maintenant l'ammoniac en ébullition. Afin de décolorer la solution, on ajoute du chlorure d'ammonium,puis on fait passer un courant d'air jusqu'à réaction négative au nitroprussiate.On évapore à siccité et on lave à fond le résidu à l'eau et à lzacétone. Après séchage, on obtient le MCP-Ser-Asn-Lou-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-NHNH2 fondant à 2780; @@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@ [a]D20 = -19 dans un mélange de diméthylformamide et d'eau dans le rapport 3:1. Exemple 1 BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys (BOC) -Lou-Ser-Gln Glu (OTB) -Leu-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 On dissout 1 g de nonapeptide (séquence partielle EF) dans 10 ml de diméthylformamide, on ajoute 1,5 g de N-hydroxysuccinimide et 0,52 g de dicyclohexylcarbodiimide, on agite pendant 6 heures à 25 , on filtre et on évapore le filtrat à siccité. On lave le résidu à l'acétate d'éthyle et à l'éther diéthylique et on le sèche. On obtient ainsi le BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Tnr- gys-Val-Leu-OSu fondant à 2420 que lion dissout dans 10 ml de diméthylformamide. On ajoute à la solution ainsi obtenue 3,1 g de diacétate de tricosapeptide (séquence partielle ABCD) et 1,2 g de N-hydroxysuccinimide et on agite pendant 16 heures à 250.On évapore à siccité, on lave le résidu successivement à l['éther diéthylique, au chloroforme et à l'acétone On obtient ainsi à l'état brut le dotriacontapeptide protégé que l'on dissout dans 50 ml d'un mélange de chloroforme, de méthanol et d'eau dans le rapport 70:30:5. On verse la solution ainsi obtenue sur une colonne de gel de silice d'un diamètre de 5 cm et d'une hauteur de 100 cm,préalablement équilibrée au moyen du mélange spécifié ci dessus. On effectue l'élution avec du méthanol dont on augmente progressivement la concentration. On évapore les fractions réunies contenant le peptide à l'état pur, on les lave à l'éther diéthylique et on les sèche sur hydroxyde de potassium sous vide poussé.On obtient ainsi diacétate trihydraté du composé cité dans le titre fondant à 230 (avec décomposition) ; [a]D20= -45 dans l'acide acétique à 50. Exemple 2 H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Tnr Pro-NH2 On dissout, sous atmosphère d'azote, 3,3 g de diacétate trihydraté de dotriacontapeptide protégé (exemple 1) dans 100 ml d'acide 'crifluoro-acétique, on laisse-reposer la solution pendant 15 minutes à 200 et on evapore à siccité. On dissout le résidu d'évaporation dans 300 ml d'acide acétique 0,2N, on traite la solution ainsi obtenue par 20 ml d'Amberlite IRA-410 sous sa forme acétate, on lyophilise, on lave à l'éther diéthylique et -qn sèche sur hydroxyde de potassium sous vide poussé.On obtient ainsi l'hexa-acétate décahydraté du composé cité dans le titre ; il fond à 220 (avec décomposdition) ; [a]D20= -46 dans l'acide acétique à 50 . En procédant de la manière décrite respectivement à l'exemple 1 et à exemple 2, on peut également préparer les composés suivants: Exemple 5 Piv-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys (BOC)-Leu-Ser-Gln Glu (OTB) -Leu-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 En procédant de la manière déorite à l'exemple l et en partant des séquences partielles EFl et ABCD, on obtient le diacétate trihydraté du composé cité dans le titre : il fond à 220 (avec décomposition) ; [a]D20=-45% dans l'acide acétioque à 50%. Exemple 4 Piv-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- Leu-His-Lys-Lou-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr Pro-NH2 En procédant de la manière décrite à l'exemple 2 et en partant du dotriacontapeptide obtenu à l'exemple 3 on obtient l'hexa-acétate octahydraté du composé cité dans le titre; il fond à 2160 (avec décomposition) [a}20= 49 dans acide acé tique à 50%. Exemple 5 EOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys (BOC)-Leu-Ser-Gln Glu (OTB) -Lau-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 En procédant de la manière déorite à l'exemple l et en partant des séquences partiolles EF2 et ABCD, on obtiont lc diacé tats trihydraté du composé cité dans le titre ; il fond à 230 (avec décomposition) ; [a]D20= -45 dans l'acide acétique à 50%. Exemple 6 EOC-Cy's-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-C4s-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-GlySer-Gly-Thr- Pro-NH2 En procédant de la manière décrite à exemple 2 et en partant du dotriacontapeptide obtenu à l'exemple 5, on obtient l'hexa-acétate octahydraté du composé cité dans le titre; il fond à 240 (avec décompositin) ; [a]D20= -52 dans l'acidc acétique à 50%. Exemple 7 BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys (BOC)-Leu-Ser-Gln Gln-Leu-His-Lys (BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Tbr-Asn-Thr-Gly-Ser Gly-Thr-Pro-NH2 En procédant de la manière déorite à l'exemple l et en partant des séquences partielles EF et ABCDL, on obtient le diacétate trihydraté du composé cité dans le titre9 ll fond à 2350 (avec décomposition); [a]D20= 460 dans l'acide acétique à 50 . Exemple 8 H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu His-Lys-leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 En procédant de la manière décrite à l'exemple 2 et en partant du dotriacontapeptide obtenu à l'exemple 7, on obtient l'hexa-acétate décahydraté du compose cité dans le titre; il 20 Iond a 230- (avec decomposition) ; [a]D =-40 dans l'acide acetique à 50%. Exemple BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Se-Thr-Cys-Val (BOC ) -Leu-Ser-Gln Glu (OTB)-Leu-His-Lys (Boc) -Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 En procédant de la manière décrite à exemple 1 et en partant des séquences partielles EF et ABClD, on obtient le diacétate trihydraté du composé cité dans le titre ; il fond à 230 (avec décomposition) ; [a]D20= -45 dans l'acide acétique à 50%. Exemple 10 H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-CysWal-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- -His-Ls-Tr-Gln-Tnr-Tr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr- Pro-NH2 En procédant de-la manière décrite à l'exemple 2 et en partant du dotriacontapeptide obtenu à l'exemple 9, on obtient l'hexa-acétate décahydraté du composé cité dans le titre; il fond à 2160 (avec décomposition); [a]20= -43 dans l'acide acétique à 50%. Exemple 11. BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys (Boc)-Leu-Ser-Gln Gln-Leu-His-Lys (Boc)-Tyr-ln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser Gly-Thr-Pro-NH2 En procédant de la manière décrite à l'exemple 1 et on partant des séquences partielles EF et ABCLDl, on obtient le diacétate trihydraté du composé cité dans le titre ; il fond à 235 (avec décomposition) ; [a]D20= -43 dans un mélange d'acide acétique IN et de méthanol dans le rapport 2:1. Exemple 12 H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Gln Leu-His-Lys-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr Pro-NH2 En procédant de la manière décrite à exemple 2 et en partant du dotriacontapeptide de l'exemple 11, on obtient l'hesa- acétate décahydraté du composé cité dans le titre; il fond à 2160 (avec décomposition); [a]D0= 430 dans l'acide acétique 1N. Exemple 13 MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-=Cys-Val-Leu-Gly-Lys (BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu (OTB)-Leu-His-Lys (BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 On dissout, à -20 , 1,05 g d'octapeptide-hydrazide (séquence partielle EF3) dans un mélange de 50 nil de diméthylformamide et de 1,2 ml d'un mélange de dioxanne et d'acide chlorhydrique 2N. On ajoute 0,116 mi de nitrite de tert. -butyle, on agite pendant 10 minutes à 20 , on ajoute 1,4 ml de triéthylamine et 3,1 g de diacétate de tricosapeptide (séquence partielle ABCD) et 5 ml d'eau. On agite pendant 16 heures à 00, on évapore à siccité et on lave le résidu à l'éther diéthylique, au chloroforme et à l'acétone.On dissout le peptide brut ainsi obtenu dans 100 ml d'acide acétique 0,3N, on traite par 20 mi d'Amberlite IRA-410 (sous sa forme acétate) et on ajoute 50 ml d'hydroxyde de d'ammonium 0,6N. On ajuste le pH à 6,5 et on fait passer la solution ainsi obtenue à travers une colonne de carboxyméthylcellulose (10 cm de diamètre et 100 cm de hauteur) équilibrée avec une solution tampon d'acétate d'ammonium 0,15N. On élue avec une solution tampon d'acétate d'ammonium de concentration et de pH oroissants (0,15N à 0, 4N et ph 6,5 à pH 7,0). On réunit les fractions qui contiennent le polypeptide à l'état pur, on les lyophilise à trois reprises, on lave le résidu à l'éthanol puis à l'éther diéthylique et on le sèche sous vide poussé sur hydroxy- de de potassium. On obtient ainsi le diacétate trihydraté du composé cité dans le titre; il fond à 2300 (avec décomposition); [a]D20=-45 dans l'acide acétique à 50%. Exemple 14 MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Gln-Glu-Leu His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro NH2 En procédant de la maniere décrite à exemple 2 et en partant du dotriacontapeptide obtenu à l'exemple 13, on obtient l'hexa-acétate octahydraté du composé cité dans le titre; il fond à 220 (avec décomposition); [a]D20 = -60 dans l'acide acétique à 50%. REVENDICATIONS 1.- Nouveaux composés polypeptidiques caraetérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale S-Ch2-CHX-CO-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg Thr-Asn-Thr-Gly- Ser-Gly-Thr-Y dans laquelle X représente un atome d'hydrogène, le groupe amino ou un groupe de formule R-CO-NH- ou R'-O-CO-NH-, dans lesquels R signifie un groupe alkyle, ou un groupe aryle ou aralkyle éventuellement substitués, et R' signifie un groupe alkyle ou alcényle, ou un groupe aryle ou aralkyle éventuellement substitués, le reste R' ne pouvant pas être éliminé par l'acide trifluoro-acétique, et Y représente un groupe L-prolinamide ou L-proline-L-valinamide, et dans laquelle un reste L-séryle peut être remplacé par un reste L-thréonyle ou L-alanyle, un reste L-asparaginyle par un reste L-aspartyle, L-gluta minyle ou L-glutamyle, un reste L-thréonyle par un reste L-séryle ou L-alanyle > un reste L-lysyle par un reste BOC-L-lysyle, L-ornithyle ou L-arginyle, un reste L-glutaminyle par un reste L-glutamyle, L-aspara ginyle ou L-aspartyle, un reste L-glutamyle par un reste OTB-L glutamyle, L-gluta minyle, L-asparaginyle ou L-aspartyîe, un reste L-leucyle par un reste L-tyrosyleg un reste L-tyrosyle par un reste L-phénylalangyle et un reste L-arginyle par un reste L-ornithyle ou L-lysyle, et les sels que ces composés forment avec des acides minéraux ou organiques, et leurs complexes de métaux lourds 2.- Nouveaux composés polypeptidiques caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule SCH2-CHX-CO-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys -Val-Leu-Gly-Lys-Leu Ser-Gln-Glu-Leu-His -Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-rg-Thr-Asn-Thr- Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 dans laquelle X représente un atome d hydrogènes le groupe amino ou un groupe de formule R-CO-NS- ou R-O-CO-NH-, dans lesquels R signifie un groupe alkyle, ou un groupe aryle ou aralkyle devenu tuellement substitués, et R' signifie un groupe alkyle ou alcényle, ou un groupe aryle ou araîkyle éventuellement substitués, le reste R' ne pouvant pas être éliminé par l'acide trifluoroacétique, et dans laquelle le reste 1-glutamyle peut être remplacé par un reste tert. -butyloxy-L-glutamyle ou L-glutaminyle, le reste L-lysyle par un reste tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyle et le reste L-leucyle par un reste L-tyrosyle, et les sels que ces composés forment avec des acides minéraux ou organiques et leurs complexes de métaux lourds. 3. - Le BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys (BOC) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTB) -Leu-His-Lys (BOC) -Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 et les sels que ce composé forme avec des acides minéraux ou organiques, et ses complexes de métaux lourds. 4.- Le H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 et les sels que ce composé forme avec des acides minéraux ou organiques, et ses complexes de métaux lourds. 5.- Un procédé de préparation des nouveaux composés polypeptidiques spécifiés à la revendication 1, caractérisé par le fait qu'on fait réagir les acides aminés dans ltordre où lXs figurent dans la formule générale représentée à la revendication 1, soit isolément, soit par petites séquences peptidiques préalablement formées, et, le cas échéant, on transforme ensuite les composés polypeptidiques ainsi obtenus en leurs sels par réaction avec des acides minéraux ou organiques, ou en leurs complexes de métaux lourds. 6. - Un procédé de préparation des nouveaux composés polypeptidiques spécifiés à la revendication 2, caractérisé par le fait que, avantageusement après avoir protégé les groupes amino et carboxyliques ne devant pas participer à la réaction, on condense un polypeptide de formule S-CH2-CHX-CO-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH dans laquelle X a la signification donnée à la revendication 2, ou un dérivé de ce polypeptide ayant un groupe carboxylique terminal activé, avec un polypeptide répondant à la formule H-Gly-Lys -Leu-S er-Gln-Glu-Leu-Hi s-Lys -Leu-Gln-Thr- Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 dans laquelle le reste L-glutamyle peut ê'sre remplacé par un reste tert. -butyloxy-L-glutamyle ou L-glutaminyle, le reste Llysyle par un reste tert. -butyloxycarbonyl-L-lysyle et le reste L-leucyle par un reste L-tyrosyle, ou un dérivé de ce polypeptide ayant un groupe a-amino activé, puis on libère les groupes amino et carboxyliques qui avaient été protégés et, le cas échéant, on transforme ensuite les composés polypeptidiques ainsi obtenus en leurs sels par réaction avec des acides minéraux ou organiques, ou en leurs complexes de métaux lourds. 7. - Un procédé selon la revendication 6, caractérisé par le fait que le groupe carboxylique terminal du polypeptide est activé par transformation en azide ou en ester activé. 8.- Un procédé selon la revendication 7, caractérisé par le fait qu'on utilise, pour la transformation en ester activé, le N-hydroxysuccinimide. 9.- Un procédé de préparation du polypeptide répondant à la formule BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Yal=Leu-Gly-Lys(BOC)- Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 de ses sels et de ses complexes de métaux lourds, caractérisé par le fait qu'on condense le polypeptide de formule BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH après transformation en ester de Nhydroxysuccinimide, avec le polypeptide de formule H-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC) Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr Pro-NH2 et, le cas échéant, on transforme le polypeptide ainsi obtenu en ses sels par réaction avec des acides minéraux ou organiques, ou en ses complexes de métaux lourds. 10.- Un procédé de préparation du polypeptide répondant à la formule H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 de ses sels et de ses complexes de métaux lourds, caractérisé par le fait qu'a partir du polypeptide de formule BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys (BOC) Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 on élimine les groupes protecteurs tert.-butyloxy et tert.- butyloxycarbonyl, et, le cas échéant, on transforme le polypeptide ainsi obtenu en ses sels par réaction avec des acides minéraux ou organiques. 11.- Un médicament utilisable en particulier pour abaisser le taux de la calcémie et favoriser la minéralisation de l'os et caractérisé en ce qu'il contient, à titre de principe actif, un nouveau composé polypeptidique répondant à la formule S-CH2-CHX-CO-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys- Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Y dans laquelle X représente un atome d'hydrogène, le groupe amino ou un groupe de formule R-CO-NH- ou R'-O-CO-NH-, dans lesquels R signifie un groupe alkyle, ou un groupe aryle ou aralkyle éventuellement substitués, et R' signifie un groupe alkyle ou alcényle, ou un groupe aryle ou aralkyle éventuellement substitués, le reste R' ne pouvant pas être éliminé par l'acide- trifluoro-acétique, et Y représente un groupe L-prolinamide ou L-proline-L-valinamide, et dans laquelle un reste L-séryle peut être remplacé par un reste L-thréonyle ou L-alanyle, un reste L-asparaginyle par un reste L=aspartyle, L-gluta- minyle ou L-glutamyle, un reste L-thréonyle par un restes L-séryle ou L-alanyle, un reste L-lysyle par un reste BOC-L-lysyle, L-ornithyle ou L-arginyle, un reste L-glutaminyle par un reste L-glutamyle, L-aspara ginyle ou L-aspartyle, un reste L-glutamyle par un reste OTB-L-glutamyle, L-gluta minyle, L-asparaginyle ou L-aspartyle, un-reste L-leucyle par un reste L-tyrosyle, un reste L-tyrosyle par un reste L-phénylalanyle et un reste L-arginyle par un reste L-ornithyle ou L-lysyle, à l'état de base libre ou sous forme d'un sel d'addition d'acides ou de complexe de métal lourd acceptable du point de vue pharmaceutique. . 12.- Un médicament utilisable en particulier pour abaisser le taux de la calcémie et favoriser la minéralisation de l'os et caractérisé en ce qu'il contient, à titre de principe actif, un nouveau composé polypeptidique répondant à la formule S-Ch2-CHX-CO-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-leu S er-Gln-Glu-Leu-Hi s-Lys Leu-Gln-Thr-TyrPro-Arg-Thr-Asn-Thr- Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-Ml2 dans laquelle X représente un atome d'hydrogène, le groupe amino ou un groupe de formule R-CO-NH- ou R'-O-CO-NH-, dans lesquels R signifie un groupe alkyle, ou un groupe aryle ou aralkyle éventuellement substitués, et R' signifie un groupe alkyle ou alcényle, ou un groupe aryle ou araikyle éventuellement substitués, le reste R' ne pouvant pas eAtre éliminé par acide trifluoroacétique, et dans laquelle le reste L-glutamyle peut eAtre remplacé par un reste tert. -butyloxy-L-glutamyle ou L-glutaminyle, le reste L-lysyle par un reste tert. -butyloxycarbonyl-L-lysyle et le reste L-leucyle par un reste L-tyrosyle, à ltétat de base libre ou sous forme d2un sel d'addition d'acides ou de complexe de métal lourd acceptable du point de vue pharmaceutique. 13. - Un médicament utilisable en particulier pour abaisser le taux de-la calcémie et favoriser la minéralisation de l'os et caractérisé en ce qu9il contient, à titre de principe actif, un nouveau composé polypeptidique répondant à la formule H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly- Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 à l'état de base libre ou sous forme d'un sel d'addition d'acides ou de complexe de métal lourd acceptable du point de vue pharmaceutique. 14.- Une composition pharmaceutique caractérisée en ce quelle contient le principe actif spécifié à l'une quelconque des revendications ll à 13 en association avec des excipients et véhicules acceptables du point de vue pharmaeeutique.