FR 2108799 A1 19720526 FR 7036049 A 19701006 L'action anti-inflammatoire par voie générale de certains enzymes, leurs propriétés pharmacologiques et leurs applications thérapeutiques sont bien connues (cf. Sherry et Fletcher, Clinical Pharmacology and Therapeutics, Vol. 1, page 202:"Proteolytic enzymes: a therapeutic evaluation"). D'une façon générale, les enzymes utilisés en thérapeutique pour leur action anti-inflammatoire (tels que ribonucléase, trypsine, chymotrypsine, bromélaine, amylase, ficine, papaïne, etc...) sont de nature protéique et de ce fait sont particulièrement sensibles à la chaleur, aux phénomènes d'hydratation et d'adsorption; certains de ces enzymes, en particulier ceux doués de propriétés protéolytiques (trypsine, chymotrypsine) s'hydrolysent spontanément en solution aqueuse avec perte de leur activité; l'activité de ces enzymes est influencée aussi par la nature des cations présents; c'est ainsi que la ribonucléase.est inhibée par les ions magnésium; enfin, ces enzymes lors de leur administration doivent être soustrais à l'action du suc gastri quequi supprime leur activité thérapeutique. L'ensemble de ces propriétés rend particulièrement difficile la mise au point de préparations galéniques stables, pour la voie orale, renfermant à la fois de la ribonucléase et un autre enzyme anti-inflammatoire, une telle association ayant un effet de synergie. Or, l'administration par la voie orale présente un double avantage : ctest la plus commode pour le patient et elle évite le choc protéique qui peut se produire avec l'administration par la voie parentérale. La présente invention å donc pour objet une forme pharmaceutique particulière d'un mélange de ribonucléase et d'un autre enzyme anti-inflammatoire permettant l'administration par la voie orale d'un tel mélange en lui conservant son efficacité. I1 ressort de ce qui précède que toutes les préparations où lesdits enzymes seraient en solution aqueuse (solutions, élixirs, sirops, etc...) sont à proscrire parce qu'elles perdent leur activite en quelques heures. Lesformes galéniques sèches, où les enzymes seraient mélangés à des excipients d'hydratation connue et contrôlée, présentent d'autres difficultés explicitées ci-après a)- I1 a été trouvé, après de multiples essais, que les excipients insolubles dans l'eau, parmi les plus couramment utilisés tels que talc, amidon, stéarate de magnésium, etc..., ne doivent pas être employés. En effet, lors du contrôlejànalytique de mélanges préparés à sec d'enzymes avec de tels excipients, on constate qu'il est impossible de retrouver intéÓralement-l'activité enzymatique; et ceci vraisemblablement par suite de phénomènes d'adsorption (lors de la mise en solution aqueuse pour l'analyse), suivis ou non de dénaturation au contact de lâ surface des excipients insolubles finement divisés. b)- Si l'on restreint le choix des excipients à ceux qui sont hydrosolubles (sucres, Sorbitol, par exemple), on observe qu'il faut écarter toute préparation pharmaceutique incluant un mouillage à l'eau (à cause de la sensibilité des enzymes à l'hydrolyse) ou à l'alcool (à cause de la dénaturation qui en résulterait). Le mélange des poudres doit se faire uniquement à sec et ceci exclut la forme granulée qui nécessite un mouillage. L'incorporation des enzymes à un granulé hydrosoluble préparé à l'avance est à déconseiller en raison de la difficulté d'obtenir une homogénéité de répartition. Les seules préparations orales acceptables sont donc celles dans lesquelles les excipients sont pulvérulents et hydrosolubles et les mélanges effectués à sec. Ces formes pharmaceutiques sont les comprimés, les gélules, les cachets et les sachets, qui appellent les remarques suivantes 1)- Les comprimés constituent une forme a priori séduisante car l'application d'un vernis entérosoluble les soustrait aisément à l'action du suc gastrique. Mais il a été observé que toute compression, probablement par suite des échauffements locaux qu'elle provoque, inactive plus ou moins fortement les enzymes; la ribonucléase présente plus particulièrement ce phénomène. 2)- Parmi les autres formes restant, les cachets et les sachets doivent être écartés car ils ne se prêtent pas à une protection vis à vis du suc gastrique. 5 Les gélules représentent donc la seule forme utilisable qui permette une préparation galénique par voie orale satisfaisante pour les enzymes. Encore faut-il que ceux-ci soient mélangés à un ou plusieurs excipients hydrosolubles, que le mélange non granulé glisse facilement dans les appareils de répartition et que les gélules terminées soient protégées au moment du passage dans l'estomac par un revêtement gastro-résistant et entérosoluble. Cette dernière condition peut être obtenue par recouvrement des élules avec des vernis à base de laques naturelles ou synthétiques, qui sont, de façon connue, gastro-résistants et entérosolubles. -Les deux premières conditions en revanche doivent être examinées de près. Le ou les excipients hydrosolubles choisis doivent être compatibles avec les enzymes à mettre en oeuvre. C'est ainsi que, pour la chymotrypsine par exemple et la ribonucléase, l'excipient assurant la meilleure conservation est le lactose préalablement séché sous vide vers 70-80 C. Mais un tel excipient ne permet pas à la poudre de glisser correctement dans les appareils de répartition gélules, de sorte que les poids répartis sont inégaux. On pallie d'ordinaire un tel inconvénient par addition de'lubrifiants secs, tels que stéarate de magnésium ou talc; or, on a vu que de tels excipients sont à proscrire. Il a été trouvé suivant la présente invention que les polyoxyéthylène-glycols sont des lubrifiants tout à fait satisfaisants, qu'ils s'incorporent aisément à l'excipient hydrosoluble tel que le lactose, qu'ils sont inertes vis à vis des enzymes considérés, notamment la chymotrypsine et la ribonucléase, et enfin, qu'étant solubles dans l'eau, ils laissent à ces enzymes toute leur activité. Ils rendent donc possible la présentation en gélules d'un mélange de ribonucléase et d'un autre enzyme anti-inflammatoire. Les polyoxyéthylène-lycols utilisables sont de préférence ceux qui sont solides et, plus particulièrement, ceux de poids moléculaire moyen compris entre 4 000 et 6 000. Ces polyoxyéthylène-glycols doivent être de qualité pharmaceutique et répondre aux spécifications de la Pharmacopée Française. Les indications des préparations enzymatiques suivant l'invention sont notamment les suivantes : oedèmes, inflammations pré- et post-opératoires en traumatologie et en chirurgie. EXEMPLE DE PREPARATION GALENIQUE SUIVANT L'INVENTION Ribonucléase ....................... 1 mg Chymotrypsine Codex ................ 5 mg Lactose Codex ..................... 100 mg Polyoxyéthylène-glycol 6000 Codex ....... 2 mg pour une géiule recouverte d'un vernis gastro-résistant et entérosoluble. Pour fabriquer les gélules, le mode opératoire ci-aprè. peut être suivi a)- Préparer l'excipient en dissolvant le polyoxyéthylène-glycol dans l'alcool éthylique absolu et en incorporant uniformément cette solution au lactose Sécher ensuite sous vide à 70-80 C une nuit. b)- Mélanger ribonucléase et chymotrypsine en évitant échauffement et toute humidité et ajouter progressivement l'excipient. c)- Répartir mécaniquement en gélules. d)- Recouvrir les gélules d'un vernis entérosolubles et gastro-résistant (solution de gomme laque, d' "Eudragit" (nom déposé d'un produit de la Société Rohm & Haas, Allemagne Fédérale) etc...). La préparation ainsi obtenue est stable un an à la température ambiante comme le démontrent les dosages d'activité enzymatique-sur substrats spécifiques : dosage de la chymotrypsine par hydrolyse de la N-acétyl tyrosine selon la-pharmacopée française et dosage de la ribonucléase selon Kalnitsky par hydrolyse de l'acide ribonucléique. RESULTATS SUR LA PREPARATION aussitôt la fabrication au bout d'un an achevée Essai de résistance en milieu gastrique 2 heures 1 heure 55 minutes Essai de désagrégaton en milieu intestinal : 10 minutes : 15 minutes Dosage de la ribonuoléase : 1,1 mg : 1,05 mg Dosage de la chymotrypsine : 5,2 mg : 4,9 mg La préparation ainsi obtenue conserve toutes les propriétés anti-inflammatoires des enzymes que l'on peut déterminer par exemple sur l'oedème expérimental de la patte postérieure du rat après injection locale d'ovalbumine. Augmentation moyenne des volumes des pattes oedématisées par l'ovalbumine : le h : 2e h : 3e h : 24e h Témoin : 0,79 : 0,72 : 0,90 : 0,21 Animaux traités par : 60 mg/kg (voie orale) : 0,52 : 0,38 : 0,42 : 0,12 Animaux traités par 180 mg/kg (voie orale) : 0,58 : 0,24 : 0,18 : 0,04 ta quantité de ces gélules administrables à l'homme est de 1 à 6 par jour,-les indications étant celles mentionnées ci-dessus. CAS CLINIQUE A.L; - 4 mois Phimosis -plastie dorsale du prépuce On administre 2 jours avant l'intervention l'alphachymotrypsine par voie orale (2 comprimés par jour), ce qui n'empêche pas la formation d'un hématome et d'un oedème post-opératoire ainsi que des douleurs locales intenses empêchant l'enfant de s'endormir. A la fin du 1er jour suivant l'intervention, on passe au traitement par la préparation suivant l'invention de la formule ci-dessus (3 gélules par jour pendent 3 jours) qui produit une régression rapide de l'oedème du prépuce résorbé à la 48e heure, ainsi que la disparition des douleurs, l'enfant étant capable de s'endormir tranouillement. Trois jours après l'opération, le malade peut quitter l'hopital. REVENDICATIONS 1..Préparations galéniques anti-inflammatoires pour voie orale à base de ribonucléase et d'un autre enzyme anti-inflammatoire, caractérisées en ce qu'elles sont constituées par des gélules recouvertes d'un revêtement gastro-résistant et entérosoluble, ces gélules ren fermant.la ribonucléase et l'autre enzyme incorporés à un excipient hydrosoluble constitué par une substance hydrosoluble compatible avec lesdits enzymes et par un polyoxyéthylène-glycol. 2.- PréparationsMsuivant la revendication f, caractériséesen ce que le polyoxyéthylène-glycol est un polyoxyéthylène-glycol solide de poids moléculaire moyen compris entre 4 000 et 6 000. 3.- Préparations suivant la revendication 1 ou 2, caractérisées en ce que l'autre enzyme est choisi parmi la trypsine,-la chymotrypsine, la bromélaine, l'amylase, la ficine, la papaine. 4.- Préparations suivant la revendication 3, caractérisées en ce que l'autre enzyme est la chymotrypsine et ladite substance hydrosolu ble est le lactose. 5.- Préparations suivant la revendication 4, caractérisées en ce que chaque gélule contenant 1 mg de ribonucléase, 5 mg de chymotrypsine, 100 mg de lactose et 2 mg de polyoxyéthylène-glycol de poids moléculaire moyen 6 000.