FR 2100978 A1 19720324 FR 7128240 A 19710802 La présente invention concerne de nouveaux dérivés de l'insuline et leur préparation. Ces composés répondent à la formule générale I H-Gly-Ile- (chaSne A) insuline X-Phe-Val- (chatne B) dans laquelle X désigne - un reste alcanoyle de 1 à 18 atomes de carbone, qui peut porter des groupes carboxy > hydroxy, alcoxy inférieurs, phénoxy, benzoxy, mercapto, alkylthio inférieurs, phénylthio ou benzylthto, - un reste cyclo-alcanoyle ayant de 4 à -9 atomes de carbone, - le groupe trifluoracétyle, - le groupe benzoyle, - un reste phényl-alcanoyle ayant de 1 à 3 atomes de carbone dans la partie alcanoyle, qui peut porter, sur le noyau phényle, un ou plusieurs atomes d'halogènes ou groupes méthyle, éthyle, phényle, nitro, hydroxy, alcoxy inrérieurs, phénoxy, benzyloxy, alkylthio inférieurs, phényl thio, benzylthio, cyano, carboxy, alcoxy carbonyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone dans la partie alkyle, groupes amino, acylamino ou sulfo nyle, - un reste d'acide carboxylique hétéro-aromatique à 5 ou 6 chaînons, l'un des hétéro-atomes étant O, N ou S et N, un reste alcoxy-carbonyle ou benzyloxy-carbonyle ou - le reste d'un acide amino-carboxylique qui dérive d'un a-amino-acide naturel de ses D-énantiomères ou d'un acide U -amino-carboxylique ayant de 1 à 6 atomes de carbone, dont le groupe amino peut porter un groupe acyle et, éventuellement aussi, un groupe alkyle de 1 à4 atomes de carbone ou des groupes phényle ou benzyle et dont les groupes hydroxy ou mercapto portent des groupes alkyl phényles inférieurs ou benzyle et d'autres grou pes amine peuvent titre bloqués par un groupe acyle, ou X désigne un reste peptidique contenant Jus qu'à 6 des 20 L-a -amino-acides qui existent dans la nature dans des peptides et des protéines, à l'exception de la cystéine. L'invention concerne également un procédé de préparation de ces composés selon lequel on fait réagir la Na AI), NE (B29)-di-tertiobutyloxy-carbonyl-insuline avec un excès d'un dérivé activé d'un acide carboxylique X-OH, où X a la signification donnée ci-dessus, et on traite le produit réactionnel avec un acide fort. Comme produit de départ convenant pour la N,N-di- tertiobutyloxy-carbonyl-insuline on peut utiliser de l'insuline provenant de diverses origines, de préférence l'insuline bovine ou porcine ou un mélange de ces deux insulines dans n importe quel rapport de mélange. Des dérivés activés d'acides carboxyliques X-OH sont, par exemple, des chlorures, des azides, des anhydrides mixtes ou symétriques ou internes mais on n'utilisera pas de chlorures d'acides carboxyliques, si X désigne un reste peptidique ou le reste d'un acide aminé. On utilisera, de plus, des esters actifs formés par des composés hydroxyliques ayant une valeur pK qui va de 4,0 à 8,0.A titre de tels composés hydroxyliques on utilisera, en particulier, des composés usuels dans la chimie des peptides,tels que le 4-nitro-phénol, le 2,4-dinitro-phénol, le 2,4,5-trichloro-phénol, le penta chloro-phénol, le pentafluoro-phénol, le N-hydroxy-succinimide, le N-hydroxy-phtalimide, le 1-hydroxy-benzotriazole ou la 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro- 1,2, 3-benzotriazine. Il y a avantage à utiliser un excès allant jusqu'à 6 équivalents, de préférence de 1,5 à 4 équivalents, de dérivé d'acide activé. Comme acides carboxyliques de formule X-OH on envisagera les acides mentionnés dans les exemples et dans le tableau ; on mentionnera, de plus, par exemple, comme acides carboxyliques hétérocycliques, l'acide pyrrole-carboxylique, indole-carboxylique, indolyl-carboxylique > imidazolylcarboxylique, benzimidazolyl-carboxylique, triazole-carboxylique, iso-quinoléyl-carboxylique ou pyromycique. Au cours de la réaction de la Na (Ai), (B 9)-di- tertiobutyloxy-carbonyl-insuline, son groupe aminé encore 31 libre, relié à la phényl-alanine , réagit sélectivement avec l'un des dérivés d'acides carboxyliques activé conformément à l'invention. Il est étonnant ici que, malgré l'excès de dérivé d'acide carboxylique utilisé, aucun autre groupe fonctionnel, qui sont cependant nombreux dans la molécule, ne soit attaqué. La Na (Ai) NS (B29)-di-tertiobutyloxy~carbonyl- insuline est bien connue. On la prépare, par exemple, d'après le brevet belge NO 739 511, en mettant ou dissolvant 1 mmole d'insuline dans 30 à 70 fois la quantité en poids d'un N,N-dialkyl-carboxamide qui peut contenir jusqu'à 25 % d'eau. Comme dialkyl-carboxamide on utilisera, par exemple le diméthylformamide, le diméthyl-acétamide, le diéthyl-formamide ou la N-méthyl-pyrrolidone. On ajoute ensuite de 20 à 75mnoles de tertiobutyloxy-carbonyl-azide et une solution tampon dans de 2,5 à 4 fois la quantité en volume, par rapport au poids de l'insuline utilisée, et on agite pendant 3 à 6 heures à 35-40oC environ. Comme solution tampon on peut utiliser, par exemple, un tampon de bicarbonate alcalin normal ou de phosphate alcalin ayant un pH de 8,0 à 9,0. On peut faire monter la température réactionnelle aussi à 5O0C environ, mais on préfère une température qui va de 35à 400C. Pour isoler la di-tertiobutyloxy-carbonyl-insuline formée (Boc2-insuline) on fait précipiter soit directement avec de I'éther, soit que l'on porte la solution à siccité sous vide à une température de bain maximale de 500 C, éventuellement après une neutralisation préalable avec de l'acide acétique. On triture ensuite avec de I'éther, on fait digérer avec 5 à 10 fois la quantité en poids d'acide acétique à 1 - 2 % et d'eau et on sèche sous vide sur P2O5. Pour la réaction avec les dérivés d'acides carboxyliques actifs conformes à l'invention, on dissout avantageusement le produit dans environ 20 à 50 fois la quantité de pyridine à 60 - 100 ss environ. A la place de la pyridine on peut mettre en jeu aussi l'un des N,N-dialkyl-carboxamides mentionnés ci-dessus ou des solvants, tels que le tris-diméthylamide de l'acide phosphorique, le diméthyl-sulfoxyde ou la tétraméthyl-urée. On effectue avantageusement la réaction avec le dérivé d'acide carboxylique actif pendant de 1 à 20 heures, de préférence de 3 à 6 heures, à la température ambiante. Lorsqu'il se forme un trouble (ce qui indique le commencement de la dénaturation) on termine la réaction. En raccourcissant ou prolongeant respectivement le temps de réaction il est possible aussi d'opérer soit à 4OcC environ soit à O - îO0C. Lors de cette réaction, des groupes fonctionnels, dans la mesure où ils ne portent pas, comme groupes aminés, l'un des restes acyles conformes à l'invention, doivent titre bloqués, le cas échéant, au moyen de groupes protecteurs au cours de la réaction. Comme groupes protecteurs on utilise, de préférence, le reste tertiobutyloxy-carbonyle ou d'autres groupes protecteurs qui sont éliminés dans les mêmes conditions comme le reste tertio-butyloxy-carbonyle, par exemple le groupe tertio-amyloxy-carbonyle, adamantyloxy-carbonyle ou isobornyloxy-carbonyle. Des groupes hydroxy peuvent être protégés en étant transformés en groupes éthers tertio-butyliques et des groupes carboxy en groupes esters tertio-butyliques. Comme restes acyles utilisés comme substituants des groupes aminés, on mentionnera, par exemple, des restes acyles aliphatiques inférieurs, tels que le reste formyle, acétyle ou propionyle, ainsi que le reste benzoyl-alkyloxycarbonyle ayant de 7 à 4 atomes de carbone dans la partie alkyle, des restes phénoxy-carbonyle ou benzyloxy-carbonyle. Comme acides -amino-carboxyliques ayant de 1 à 6 atomes de carbonate, on utilisera de préférence la ss~ao anine, l'acide Y -amino-butyrique ou l'acide 6 -amino- caproique. La réaction une fois terminée, on fait précipiter le produit réactionnel avec de l'éther, on le conserve pendant i à 2 heures dans 10 fois environ la quantité en poids d'un acide fort, par exemple l'acide trifluoro-acétique ou chlorhydrique dans de l'acide acétique glacial, on fait précipiter de nouveau avec de l'éther > de acétate d'éthyle ou de l'acétone et on sépare ou cristallise ensuite, de manière connue, dans de liteau en ajustant au point iso-électrique. Dans la plupart des cas, lesproduits réactionnels sont purs selon les analyses par chromatographie et électrophorèse après avoir cristallisé ou précipité une ou deux fois. On peut avoir recours aussi à la chromatographie sur gel de dextranne réticulé (par exemple, Sephadex 50 de la Société Pharmacia, Uppsala) pour la purification. On peut préparer, de la manière la plus simple les dérivés actifs d'acides carboxyliques des acides 11-OK de base, dans la mesure où les chlorures d t acides, azides ou esters actifs ne sont pas connus dans lalittérature, en faisant réagir 1 mole de 11 acide carboxylique X-OH avec 1 mole de dicyclohexyl-carbodi-imide et 1 à 1,2 mole d'un des composés hydroxyliques conformes à l'invention et susceptibles de former des esters actifs, dans un des solvants mentionnés Comme autres solvants convenant pour cette réaction on envis2bera aussi le tétrahydrofuranne, l'acétate d'éthyle, le chloroforme ou le chlorure de méthylène.La réaction une fois terminée on sépare l'urée formée par filtration, on élimine le solvant par distillation sous vide et on fait recristalliser le résidu avantageusement dans un alcool, par exemple l'éthanol ou l'isopropanol. Si le dérivé actif n?a pas tendance à cristalliser, il peut être utilisé directement en solution. On peut utiliser pour preparer le composé activé l'un des solvants mentionnés ci-dessus convenant pour la réaction d'acylation ultérieure. Comme cela a déjà été démontré par la préparation de nombreux dérivés d'insuline nouveaux ayant des restes X les plus divers, le procédé conforme à l'invention est généralement applicable. On peut utiliser aussi des dérivés d'acides carboxyliques qui ne sont pas mentionnés expressis-verbis dans le mémoire descriptif et dans les revendications, après l'activation pour la réaction avec le produit intermédiaire Boc2-insuline si d'autres groupes fonctionnels, qui peuvent être présents dans l'acide carboxylique X-OH, sont protégés de la manière conforme à l'invention. Les nouveaux dérivés de l'insuline possèdent la même, ou presque la mimez activité que l'insuline mais ils se distinguent de l'insuline par leurs propriétés physiques modifiées, par exemple par le changement de solubilité ou le déplacement du point iso-électrique, ce qui a pour effet que, par exemple, des mono-Na ( )-acyl-insulines sont encore facilement solubles à un pH de 6,5. Ces propriétés de solubilité modifiées permettent l'utilisation spéciale des composés conformes à l'invention comme médicaments hypoglycémiants. A l'aide des nouveaux composés on peut préparer des compositions qui contiennent une composante facilement soluble et une composante peu soluble, ce qui permet d'ajuster un rapport souhaité entre le temps et l'effet. Ces compositions sont aussi stables du point de vue physique de sorte qu'elles peuvent entre utilisées à des fins thérapeutiques à la place de l'insuline elle-mame ou en association avec de l'insuline. Les composés conformes à l'invention montrent, de plus, une affinité plus faible à l'égard des anticorps de l'insuline et conviennent donc pour le traitement du diabète sucré m8me lorsque des titres en anticorps élevés nécessiteraient de grandes quantités d'insuline lors du traitement. Les exemples de ccmposés cités dans le tableau sont préparés suivant la mdthode générale indiquée, à l'exception de la méthode mentionnée sous c) a) qui n'est pas appliquée lorsque X désigne un reste peptidique ou un reste d'acide aminé. Les exemples suivants illustrent la présente invention. Pour caractériser les insulines acylées on se sert de l'électrophorèse sur papier (pendant 6 heures, à 200 volts, dans un mélange d'acide acétique et d'acide formique de pH 2, coloration avec du bleu de bromophénol), de la chromatographie sur papier, de l'analyse de l'acide aminé (AA) et, éventuellement, de l'analyse élémentaire. Dans le cas de l'analyse de l'acide aminé (AA) on a indiqué les valeurs calculées entre parenthèses après les valeurs trouvées. W désigne la vitesse de migration de l'insuline acylée lors de l'électrophorèse sur papier dans les conditions mentionnées, par rapport à l'insuline (valeur 1). EXEMPLES Méthode générale de préparation des dérivés acylés de l'insuline conformes à l'invention a) On dissout 1 g (0,167mmole) d'insuline dans 70 ml de diméthyl-acétamide à 80 . On ajoute 1,45 g (10 mmoles) de tertiobutyloxy-carbonyl-azide et 3,3 ml (3,3 mmoles) d'une solution de bicarbonate de sodium et on agite pendant 5 heures à 3500. On concentre ensuite la solution sous vide à une température de bain maximale de 50 C. On triture le résidu avec de l'éther et on obtient 1,275 g d'un produit contenant du sel qui donne, après digestion avec 20 ml d'acide acétique à 2 , 945 mg de Na (Ai) > (B29) di-tertiobutyloxy- carbonyl-insuline ("Boc2-insuline"). b) On dissolut, dans 3 ml de diméthylformamide, 1 mmole d'un acide X-OH, éventuellement protégé conformément à l'invention, et 1,2 mmole d'un composé hydroxylique servant pour l'activation, tel que le 4-nitro-phénol, le 2 > 4- dinitro-phénol, le 2,4,5-trichloro-phénol, le pentachlorophénol, le pentafluoro-phénol, le N-hydroxy-succinimide, le lI-hyd-roxy-phtalimide, le i-hydroxy-benzotriazole ou la 3-hydroxy-4-oso-3,4-dShydro-1,2,3-benzotriazine. On refroidit à OOC et on ajoute 210 mg de dicyclohexyl-carbodiimide, on laisse monter lentement à la température ambiante et on continue à agiter pendant 3 heures à -la température ambiante. Après séparation de l'urée par filtration on élimine le solvant par distillation sous vide et on recristallise le résidu dans de l'éthanol ou de l'isopropanol. Si une telle cristallisation n' est pas possible, on fait réagir la solution des acides carboxyliques activés suivant l'exemple c) directement avec la Boc2-insuline préparée suivant a). c) a) On dissout 620 mg (0,1 mole) de Boc2-insuline, préparée suivant a) dans 12 ml de tris-diméthylamide de l'a cide phosphorique. On ajoute 0,026 026 ml (0,2 mmole) de N-éthyl- morpholine et 0,2 mmole d'un chlorure d'acide carboxylique conforme à l'invention, on agite pendant 1 à 2 heures à la température ambiante et on fait précipiter le produit réactionnel avec 60 ml d'éther ou d'acétone. p) On ajoute 0,3 mmole d'un azide conforme à l'invention à 620 mg (0,1 mmole) de Boc2-insuline dans 20 ml de diméthylformamide à 4-10 C. On agite, en fonction de la constitution de l'azide, pendant de 6 à 20 heures à 4 - 1000 puis on fait précipiter le produit réactionnel avec de l'éther ou de l'acétate d'éthyle. y) On dissout 620 mg (0,1 mmole) de Boc2-insuline dans 15 ml de diméthyl-acétamide et on ajoute 0,6 ml (0,2 mmole) de la solution d'un dérivé d'acide activé préparée suivant b) ou 0,2 mmole d'un dérivé actif d'un acide X-OH, isolé par recristallisation sous une forme pure. Après avoir agité pendant de 3 à 5 heures à la température ambiante on fait précipiter le produit réactionnel avec de l'éther ou de l'acétate d'éthyle. d) On dissout un composé préparé suivant c) dans 6 ml d'acide trifluoro-acétique et on conserve la solution pendant 1 heure à la température ambiante. On fait ensuite précipiter le produit réactionnel libéré de groupes protecteurs avec de l'éther. La purification est effectuée par dissolution dans de l'eau et précipitation du composé au point iso-électrique. La chromatographie du composé sur une colonne (100 x 2,5 cm) remplie de "Sephadex G-50" (Société Pharmacia Uppsala), avec de l'acide acétique à 0,5 à 1 % servant de solvant et d'éluant permet une bonne purification. Dans le tableau suivant sont donnés des exemples de composés conformes à l'invention. Les acides de départ de formule X-OH sont connus dans la littérature. Les dérivés activés sont désignés par les abréviations suivantes -ONp ester 4-nitro-phénylique -Dnp ester 2,4-dinitro-phénylique -OTcp ester 2 4, 5-trichloro-phénylique -OPcp ester pentachloro-phénylique -OSu ester de N-hydroxy-succinimide -OPht ester de N-hydroxy-phtalimide -Obt ester de l-hydroxy-benzotriazole -OObt ester de 3-hydroxy-4-oxo 3,4-dihydro-l,2,3-benzotriazine TABLEAU I Composé de formule Activation Rendement Analyse (W) générale I X-OH (en mg) - acide acétique -OSu 524 0,94 - acide proprionique -ONp 530 0,94 - acide butyrique -OPcp 532 o,g4 - acide n-valérique anhydride sy- 530 0,93 métrique - acide trimé thyl-acéti que chlorure 490 0,93 - acide pélargonique -C9 " 564 0,92 - acide laurique Cl2 " 570 O > 91 - acide stéarique C18 " 608 0,90 - acide glycolique -OObt 542 0,94 - acide lactique -OObt 550 0,93 - acide ss-hydroxy- -OObt 498 0,93 propionique - éther benzylique de l'acide glycolique -ONp 535 0,93 - acide phénoxy-acétique -ODnp 572 0992 - éther méthylique de l'acide lactique -OPcp 581 0 > 93 - acide éthyl-thio-acétique -Obt 602 0,94 - acide cyclopropane- -Obt 597 0,94 carboxylique - acide cyclopentane- chlorure 610 0,93 carboxylique - acide cyclo-hexane- chlorure 593 0,93 carboxylique T A P L E A U I (suite) Composé de formule Activation Rendement Analyse générale I X-OH (en mg) (w) - acide cyclo-octane carboxylique -OSu 584 0,92 - acide succinique anhydride 587 o,go - acide glutarique anhydride 589 0,90 - acide trifluoro-acétique ester méthylique 598 0,94 - acide benzolque -ONp 543 0,93 - acide phénylacétique -ONp 558 0,93 - acide 2-méthyl-benzoique chlorure 588 93 - acide 2-éthyl-benzoTque chlorure 595 0,93 - acide 4-phénylbenzoIque chlorure 605 0,91 - acide 2-chloro-benzolque chlorure 601 0,92 - acide 4-bromo-benzoique chlorure 600 0,92 - acide 4-iodo-benzoïque -OSu 610 0,92 - acide 3-nitro-benzolque chlorure 605 0 > 93 - acide salicyclique -OObt 594 0,92 - éther méthylique de l'acide salicylique -OTcp 588 0,92 - éther phénylique de l'acide salicylique -Obt 598 o,g3 - éther benzylique de l'acide salicylique -Obt 602 0,92 - éther S-méthylique de l'acide 3-mercapto benzoïque -OSu 588 0,92 - acide 4-cyano-benzoique -OSu 585 0,93 - acide phtalique anhydride 604 0,91 - ester monométhylique de l'acide téréphtalique-OTcp 602 0,92 - acide 4-amino-benzolque -Obt 593 1,00 - acide N-acétyl-anthranili que -Obt 601 0,93 - acide 3-sulfo-benzoique -OObt 592 o,86 - acide dichloro-salicylique -OObt 601 0,93 - acide 3-chloro-4-nitro benzoïque OTcp 607 0,93 - acide 3-chloro-4-méthyl- benzolque -ONp 601 0,93 - acide 5-nitro-phtalique anhydride 787 o,go - acide nicotinique -OObt 602 0,98 - acide quinoléine-4 carboxylique -OObt 603 o,g8 T A B L E A U I (suite et fin) Composé de formule Activation Rendement Analyse générale I X-Q1I (en mg) (W) - acide thiazole-4 carboxylique -OObt 597 0,94 - carbonate de mono-éthyle -ONp 555 0,94 - carbonate de mono-benzyle -ONp 563 0 > 93 T A B L E A U II Composé de formule Activation Rendement Analyse générale I, X-OH (en mg) - glycine -OSu 581 AA Gly=4,98(5) - acide glutamique -OTcp 573 AA Glu=8,06(8) - acide asparagique -Obt 578 AA Asp=4,05(4) - lysine -OSu 591 AA Lys=2,03(2) - arginine -ONp 590 AA Arg=2,0I(2) - D-alanine -OSu 582 AA Ala=4,02(4) - valine -ONp 598 AA Val=5,94(6) - leucine -OTcp 600 AA Leu=6,9l(7) - isoleucine -OTcp 598 AA Ile=2,0l(2) - méthionine -ONp 593 AA Met=O,96(l) - sérine -OObt 589 AA Ser=3,88(4) - thréonine -OObt 601 AA Thr=1,92(2) - asparagine -ONp 584 AA Asp=3,96(4) - D-phényl-alanine -ONp 600 AA Phe=4,00(4) - tyrosine -OObt 601 AA Tyr=4,86(5) - tryptophane -OObt 589 AA Trp=0,96(l) - histidine azide 601 AA His=3,02(3) - N-formyl-L-proline -OObt 605 W 0,93 - N,N-di-acétyl-lysine -OPht 602 W= 0,92 - acide hippurique azide 597 W= 0,93 - isobutyloxy-carbonyl glycine -OObt 598 W 0,93 - éthyloxy-carbonyl-L- alarftne -ONP 589 W= 0,93 - phényloxy-carbonyl-L leucine -OSu 601 W 0,92 - benzyloxy-carbonyl-L- norleucine -OTcp 601 W 0 > 92 T A B L E A U tI (suite et fin) Composé de formule Activation Rendement Analyse générale I, X-OH (en mgY - benzyloxy-carbonyl- -ONp 600 W = O,93 sarcosine - benzyloxy-carbonyl- N-phényl-glycine -OPcp 596 W = 0,92 - formyl-L-méthionine -OPht 601 W = 0,93 - O-benzyl-D-sérine -OSu 601 AA Met=1,01 - S-méthyl-L-cystéine -OSu 597 AA Cys (CH3) 0,94 - S-benzyl-L-cystéine -OSu 600 AA Cys (Bzl)= ov93 - Ser-Tyr-Ser-Met azide 610 AA Ser=4,91 Met=l,O0 - Z-Glu-His-OH3E azide 591 AA His=2,96 - Z-Phe-Arg-Trp-Gly-OH -OObt 612 AA Arg=2,02(2) - Z-Lys-Pro-Val-Gly-Lys Lys-OH * azide 610 AA Lys=4,02(4) - Z-Phe-Phe-Tyr-OH -OSu 600 AA Phe=4,99(5) - Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-OH azide 605 AA Met=0,98(1) Ser=4,89(5) groupe carboxyle protégé au cours de la réaction sous la forme d'ester tertiobutylique. REE ND I CATI O NS 1.- Dérivés acylés de l'insuline répondant-à la formule générale H-Gly-Ile- ....... (chaîne A) X-Phe-Val- (chaîine B)# insuline dans laquelle X désigne un reste alcanoyle ayant de 1 à 18 atomes de carbone qui peut porter des groupes carboxy > hydroxy, alcoxy inférieur, phénoxy, benzoxy, mercapto, alkylthio inférieur > 'phényl-thio- ou benzylthio, un reste cycloalcanoyle ayant de 4 à 9 atomes de carbonate, le reste trifluoroacétyle, le reste benzoyle, un reste phényl-alcanoyle ayant de 7 à 3 atomes de carbone dans la partie alcanoyle et qui peut porter, dans la partie phényle, un ou plusieurs atomes d'halogènes ou groupes méthyle, éthyle, phényle, nitro, hydroxy, alcoxy inférieur, phénoxy, benzyloxyl alkyl-thio inférieur, phényl-thio, benzyl-thio, cyano, carboxy > alcoxy-carbonyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone dans la partie alkyle, amino > acyl amino ou sulfonyle, un reste d'acide carboxylique hétéro-aromatique à 5 ou 6 chaînons, ou les hétéro-atomes étant 0, N ou S et N, un reste alkyloxy-carbonyle ou benzyloxy-carbonyle ou le reste d'un acide amino-carboxylique qui dérive d'un acide a-aminé naturel, de ses D-énantiomères ou d'un aci de > -amino-carboxylique ayant de 1 à 6 atomes de carbonate, dont le groupe amino peut portèr un reste acyle et, de plus, un reste alkyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone, un reste phényle ou benzyle et dont les groupes hydroxy ou mercapto portent des groupes alkyl-phényles inférieurs ou benzyles et d'autres groupes amino sont bloqués par un reste acyle ou X désigne un reste peptidique comportant jusqu'à 6 des acides L- a-ami nEs, à l'exception de la cystéine, qui se trouvent dans la nature dans des peptides et des protéines. 2.- Procédé de préparation des dérivés acylés de 1 t insuline spécifiés dans la revendication procédé caractérisé en ce qu'on fait réagir la N&alpha;(A1), N# (B29)-di-tertiobutyloxy- carbonyl-insuline avec un excès d'un dérivé activé d'un acide carboxylique X-OH, X ayant la signification donnée dans la revendication 1, et on traite ensuite le produit réactionnel avec un acide fort. 3. - Des préparations pharmaceutiques ayant la même activité que l'insuline, caractérisées par le fait qu'elles contiennent un dérivé acylé de l'insuline tel que spécifié dans la revendication 1. 4.- Procédé de fabrication de préparations pharmaceutiques ayant la même activité que l'insuline, procédé caractérisé en ce qu'on présente un dérivé acylé de l'insuline tel que spécifié dans la revendication 1, éventuellement en association avec des véhicules et/ou des stabilisants, sous une forme pharmaceutique appropriée.