FR 2096825 A1 19720303 FR 7024581 A 19700702 Cette invention concerne des nouveaux stéroïdes physiologiquement actifs, leurs procédés de préparation et des nouveaux intermédiaires utiles dans leur préparation. Plus particulièrement, cette invention concerne les stéroides ayant les formules dans lesquelles R est un groupement alcoyle inférieur ou aralcoyle et R1 et R2 sont des groupements hydroxy ou acyloxy, X est un halogène, et Z représente une liaison simple ou double. Les radicaux acyle et acyloxy préférés sont ceux des acides carboxyliques d'hydrocarbures ayant moins de douze atomes de carbone, tels que représentés par les acides alcanorques inférieurs (par exemple, acides acétique, propionique, butyrique et tert pentanoSque), les acides alcénorques inférieurs, les acides aryl carboxyliquesmonocycliques (par exemple, acides benzoîque et toluique), les acides aryl alcanoîques inférieurs monocycliques (par exemple1 acides phènacétique et -phénylpropionique), les acides cycloalcane carboxyliques et les acides cycloalcène carboxyliques et les acides cycloalcyne carboxyliques. Les nouveaux composés de cette invetnion sont des substances pharmacologiquement actives qui possèdent une activité anti-androgène (c'est-à-dire qu'ilsulhibcnt les actions des androgènes), et qui peuvent entre utilisées dans le traitement des états tels que l'acné hyperandrogène. On peut formuler les composés pour une telle administration, la concentration et/ou la dose posologique étant base sur l'activité du composé particulier et sur les exigences du patient. On peut préparer les composés de cette invention en partant de lla-hydroxy- t3-A-norandrostène-2,17-dione. On peut préparer les esters sulfoniques de la substance de départ en la faisant réagir avec des halogénures de sulfonyle, généralement en présence d'une base organique, par exemple la pyridine. Des exemples d'halogénures de sulfonyle sont le chlorure de tosyle, le chlorure de méthanesulfonyle, le chlorure de propanesulfonyle, le chlorure d'hexanesulfonyle, le bromure d'isobutylsulfonyle, et etc. On forme ainsi les dérivés esters 11&alpha;-sulfoniques de la substance de départ. Ensuite on peut déshydrosulfoner ces intermédiaires pour former le dérivé #9(11) de cette invention (tS3'9(t A-norandrostadiène- 2,17-dione). Pour former cet intermédiaire on peut utiliser comme agent de déshydrosulfonation l'acétate de sodium anhydre dans l'acide propionique,ou tout autre réactif comme le méthoxyde de sodium dans le méthanol. On effectue cette réaction dans des conditions de reflux. Lorsqu'on fait réagir ce dérivé #9(11) avec le N-bromoacétamide dans le dioxane aqueux en présence d'acide perchlorique il donne la 9&alpha;-bromo-11ss-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione intermédiaire. En traitant ce dernier composé par l'acétate de potassium dans l'alcool on obtient la 9ss,11ss-époxy-#3-A-norandrostène- 2,17-dione correspondante. On peut ensuite faire réagircet intermédiaire avec les acides fluorhydrique, chlorhydrique ou bromhydrique pour obtenir les composés 9&alpha;-halo-11ss-hydroxy de l'invention. Sinon, on peut préparer les composés de cette invention, les 9-halo-11 -hydroxy- g -A-norandrostène-2,17-diones, en utilisant la 9&alpha;-halo-11ss-hydroxy-A-norprogestérone comme substance de départ.Lorsqu'on soumet cette substance de départ d l'action d'un micro-organisme du genre Fusarium ou à l'action de ses enzymes dans des conditions oxydantes et de préférence aérobies, il se forme les composés 9&alpha;-halo-11ss-hydroxy-#3-A- norandrostène-2,17-diones. Pour préparer ces composés de l'invention, on peut tout d'abord soumettre le réactif de départ à l'action des enzymes d'un micro-organisme du-genre Fusarium dans des conditions oxy- dantes. On peut effectuer cette oxydation de la meilleure manière soit en introduisant le réactif de départ dans une culture aérobie du micro-organisme soit en mettant ensemble dans un milieu aqueux les composés, de l'air, et les enzymes de cellules non proliférantes du micro-organisme Eh généràl, les conditions de culture du micro-org-anisme pour les besoins de cette invention sont (à l'exception de::l'in troduction du réactif de départ à transformer)-- les mêmes que celles de culture de divers autres micro-organismes pour la production d'antibiotiques et d'autres substances analogues. On fait développer le micro-organisme en aérobiose au contact (dans ou-sur) d'un milieu de fermentation approprié. Un milieu approprié comporte essentiellement une source de carbone et d'énergie. Cette dernière peut être un glucide, par exemple mélasses, glucose, maltose, amidon ou dextrine, un acide gras, un corps gras et/ou le composé lui-même. Cependant, le milieu comprend de préférence une source assimilable de carbone et d'énergie en plus du stéroïde.Parmi les corps gras utilisables pour le besoin de cette invention se trouvent l'huile de saindoux, l'huile de soja, l'huile de graine de lin, l'huile de graine de coton, l'huile d'arachide, l'huile de noix de coco, l'huile de maïs, l'huile de ricin, l'huile de sésame, l'huile de palme brute, le suif de mouton domestique, l'huile de baleine, l'huile diolive, la tristéarine, la tripalmitine, la trioléine et la trilaurine. Parmi les acides gras utilisables pour le besoin de cette invention se trouvent l'acide stéarique, l'aciee palmitique, l'acide oléique, l'acie linoléique et l'acide myristique. La source de facteurs azotés utilisable pour les besoins de cette invention peut être organique (par exemple, farine de soja, liqueur de cornsteep, extrait de levure, extrait de viande et/ou solubles de distillerie) ou synthétique (c'est- & dire comportant des composés minéraux ou organiques synthétisables, simples, tels que sels d'ammonium, nitrates alcalins, amino-acides ou urée). On doit maintenir un apport d'air stérile convenable pendant la fermentation, par exemple par les méthodes classiques consistant à exposer une grande surface du milieu à l'air ou bien en utilisant une culture aérée submergée. On peut ajouter le composé a la culture pendant la période d'incubation, ou bven l'introduire dans le milieu avant la stérilisatior ou l'ensemencement. La gamme préférée (mais non limitative) de concentration du composé dans la culture est environ 0,01% a environ 0,1%. La période de culture (ou plutôt le temps pendant lequel le composé est soumis à l'action de l'enzyme) peut varier considérablement, la gamme d'environ vingt-quatre à quatre vingt seize heures étant réalisable, mais non limitante. Outre le fait d'avoir une activité anti-androgène, les composés 9&alpha;-halo-11ss-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17-diones de l'invention, sont utilisés comme intermédiaires dans la préparationnde composés 9&alpha;-halo-#3-A-norandrostène-2ss,11ss,17ss- triols qui sont utiles comme agents anaboliques. En faisant réagir la 9&alpha;-halo-11ss-hydroxy-#3-A-norandrostène- 2,17-dione avec un agent réducteur, par exemple borohydrure de sodium, à température élevée, on obtient le 9&alpha;-halo triol. On peut acyler ce composé en utilisant un anhydride d'acide et une base organique, par exemple l'anhydride acétique et la pyridine, pour former les dérivés 2,17-diacyloxy de l'invention. Lorsqu'on utilise des conditions d'acylation plus sévères comme un anhydride d'acide et l'acide perchlorique (ou analogue), il se forme alors les dérivés 2,11,17-triacyloxy. L'invention peut être illustrée par les exemples suivants; toutes les températures sont en degrés centigrades sauf spécification contraire Exemple 1 Ester mésylique de 11&alpha;-hydroxy-#3-norandrosténe-2,17-dione On laisse à 60 pendant 20,5 heures un mélange de 300 mg de 11&alpha;-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione et de 0,35 ml de chlorure de méthanesulfonyle dans 5 ml de pyridine. On dilue le mélange de réaction avec de l'eau et on l'extrait par le chloroforme. On lave les extraits chloroformiques avec de l'acide chlorhydrique 2 N et une solution saline à 8%, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore à sec.La crystallisation du résidu dans le mélange chloroforme-éther isopropylique donne 346 mg d'ester mésylique de 11&alpha;-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17- dione (II), p.f. 182-184 . On prépare l'échantillon analytique en recristallisant dans le mélange chloroforme-éther isopropylique, p.f. 185-187 , [&alpha;] D23 + 53 (EtOH), # KBr 5,73, 5,92, 6,13, et 7,48 et 8,63 ; # maxEtOH 229m (16.700),# CDCl3TMS 8,99 (s, 18-Me), 8,66 (s, 19-Me), 6,94 (s, 11&alpha;-CH3-SO2O-), 4,99 (6 raies 11ss-H) et 4,16 (s, 3-H). Anal. Calculé pour C19H26O5S (366,46) : S,= 8,75 Trouvé : S = 8,63 Exemple 2 #3,9(11)-A-norandrostadiène-2,17-dione On porte au reflux pendant quatre heures un mélange de 750 mg d'ester mésylique de 11&alpha;-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione et de 2,25 g d'acétate de sodium anhydre dans 25 ml d'acide propionique. On dilue le mélange de réaction à l'eau, on le neutralise au carbonate de potassium et on l'extrait par le chloroforme. On lave les extraits chloroformiques avec une solution saline à 8%, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore à sec. La cristallisation du résidu dans l'éther isopropylique donne 351 mg de #3,9(11)-A-norandrostadiène-2,17-dione(III), p.f. 125-126 . Une recristallisation dans l'éther isopropylique donne l'échantillon analytique, p.f. 130-132 , [&alpha;]D28 + 143 (EtOH); # KBr 5,75, 5,85 (transp.), 5,92, 6,10 et 6,16 ; # maxEtOH 230 m (15.800); # CDCl3TMS 9,03 (s, 18-Me), 8,60 (s, 19-Me), 4,88 (m, 11-H), et 4,2-9 (s, 3-H) Anal. Calculé pour C18H2202 (270,36) : C = 79,96, H = 8,20 Trouvé C = 80,06, H = 8,29 Exemple 3 9&alpha;-Bromo-11ss-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione On laisse à l'obscurité pendant trois heures un mélange de 100 mg de#3,9(11)-A-norandrostadiène-2,17-dione, 102 mg de N-bromoacétamide et 0,085 mg d'acide perchlorique 0,5 N dans 2 ml de dioxane.On ajoute goutte a goutte une solution de sulfite de sodium à 5% pour éliminer la couleur du brome et ensuite on dilue le mélange de réaction à l'eau. On recueille le précipité par filtration pour obtenir 58 mg de 9&alpha;-bromo-11ss-hydroxy- A-norandrostène-2,17-dione (IV), p.f. 158-159 (d). On prépare l'échantillon analytique par recristallisation dans le mélange acétone-hexane, p.f. 162-163 (d), [&alpha;] D25 + 67 ; # KBr 2,92, 5,80, 5,92 et 6,16 ; # EtOH 234 m (13.300). 5,80, 5,92 et 6,16fi max 234 m @ Anal. Calculé pour C18H2303Br (367,28) : C = 58,85; H = 6,31 Trouvé : C = 58,93t H = 6,21 Exemple 4 9ss-11ss-Epoxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione On agite un mélange de 1,21 g de 9&alpha;-bromo-11ss-hydroxy-#3- A-norandrostène-2,17--dione et 12 ml de solution de carbonate de potassium à 10% dans 120 ml de méthanol pendant deux heures, à la température ambiante,sous azote, on le concentre et on le dilue avec de l'eau.On recueille le précipité par filtration pour obtenir 446 mg de 9ss-11ss-époxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione (V), p.f. 162-164 On prépare l'échantillon analytique par recristallisation dans le mélange éther-éther de pétrole (p.e. 30-75 ), p.f. 164-166 ; [&alpha;] D27 + 57 ; # KBr 5,85 (b) et 6,14 # maxEtOH 234 m (13.000). Anal. Calculé pour C18H2203 (286,36) : C = 75,49; H = 7,74 Trouvé -: C = 75,51;. H = 7,79 Exemple 5 9&alpha;-Fluoro-11ss-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione (A) On traite une solution de 673 mg de 9ss-11ss-époxy-#3-A- norandrostène-2,17-dione dans 1 ml de tétrahydrofurane et 10 ml de chloroforme, à 200, par 1 ml de fluorure d'hydrogène. On laisse le; mélange de réaction à 0 pendant 22 heures et on le verse dans un mélange de chloroforme et d'eau, on neutralise avec du bicarbonate de sodium, et on sépare la couche chloroformi- que. On lave la couche chloroformique avec de l'eau et une solution saline à 8%, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore a sec. La cristallisation du résidu dans le mélange chloroforme-éther isopropylique donne 483 mg de 9&alpha;-fluoro-11ss-hydroxy-#3-A- norandrostène-2,17-dione (VI), p.f. 234-236 . On prépare l'échantillon analytique par recristallisation dans le mélange acétoneéther isopropylique, p.f. 244-245 , [&alpha;] D29 + 96 ; # KBr 2,92, 5,81, 5,92 et 6,16 ; # maxEtOH 230 m (15.600), # CDCl3TMS 8,84 max CDCl3 (s, 18-Me), 8,44 (s, 19-Me), 5,79 (m, ll -H) et 4,23 (s, 3-H). Anal. Calculé pour C18H2303F (306,36) : C = 70,56; H = 7,57 Trouvé : C = 70,64; H = 7,50 Exemple 6 9&alpha;-Fluoro-11ss-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione (A) FERMENTATION - On met en suspension dans 5 ml de solution aqueuse de lauryl sulfate de sodium à 0,01% ce qui s' est développé a la surface de chacune de@ deux cultures sur gélose inclinée, âgées de deux semaines, de Fusarium javanicum var. ensiforme (QM-524) (Army Quartermaster, Natick, Mass.), les cultures inclinées contenant comme milieu nutritif (A) Glucose 10 grammes Extrait de levure 2,5 grammes K2HPO4 1 gramme Gélose 20 grammes Eau distillée pour 1 litre ai utilise des portions de 1 ml de cette suspension pour ensemen- cer six flacons d'Erlenmeyer de 250 ml contenant chacun 50 ml du milieu stérilisé suivant (B) Dextrose 10 grammes Liqueur de "cornsteep" 6 grammes NH4H2P04 3 grammes Extrait de levure 2,5 grammes CaCO3 2,5 grammes Eau distillée pour 1 litre Après 72 heures d'incubation à 250 C en effectuant une agitation rotative en continu (280 cycles/minute; rayon de 5 cm), on transfère des quantités de 10% (vol./vol.) dans 34 flacons d'Erlenmeyer de 250 ml contenant chacun 50 mi du milieu B fraichement stérilisé plus 300 microgrammes/ml de 9&alpha;-fluoro-11ss- hydroxy-A-norprogestérone. On introduit le stéroïde en ajoutant a chaque flacon 0,25 ml d'une solution stérile (60 mg/ml) du stéroïde dans le N,N-diméthylformamide. On fait fermenter un total de 510 mg. Après 72 heures d'incubation ultérieure, en utilisant les memes conditions que celles décrites précédemment, on rassemble le contenu des flacons et on filtre ensuite le bouillon sur un tampon de purification Seitz. On lave les flacons, le mycélium et le tampon avec des portions successives de 50 ml d'eau chaude. Les liquides de lavage et le filtrat réunis ont un volume de 2000 ml. (B) ISOLEMENT - On extrait le-filtrat ainsi obtenu trois fois avec des portions de 600 ml de chloroforme. On lave les extraits chloroformiques trois fois avec des portions de 600 ml d'eau, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore à sec. La cristallisation du résidu dans le mélange acétone-éther isopropylique donne 254 mg de 9o'-fluoro-1111-hydroxy- Exemple 7 9&alpha;-Chloro-11ss-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione En suivant le mode opératoire de l'Exemple 5 mais en rempla çant le fluorure d'hydrogène par du chlorure d'hydrogène on obtient la 9&alpha;-chloro-11ss-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17- dione. Exemple 8 9oe-Fluoro-ll -acétoxy- -A-norandrostène-2 , 17 -d ione On ajoute une solution de 0,0033 ml d'acide perchlorique dans 0,3 ml d'anhydride acétique à 450 mg de 9&alpha;-fluoro-11ss- hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione dans 10 ml d'anhydride acétique. On agite le mélange de réaction à la température ambiante pendant 0,5 heure et on le verse dans le mélange eauglace et on 11 extrait par le chloroforme. On lave les extraits chloroformiques avec une solution de bicarbonate de sodium saturée, une solution saline à 8%, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore a sec pour obtenir la 9&alpha;-fluoro-11ss-acétoxy- norandrostène-2,17-dione. Exemple 9 9&alpha;-Bromo-11ss-acétoxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione; 9&alpha;-Chloro-11ss-acétoxy-#3-A-norandrostène0-2,17-dione. En suivant le mode opératoire donné dans l'Exemple 8 mais en remplaçant la 9&alpha;-fluoro-11ss-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17- dione par la 9&alpha;-bromo-11ss-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17- dione et la 9&alpha;-chloro-11ss-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17- dione on obtient la 9o'-bromo-1l11-acétoxy Exemple 10 9&alpha;-Fluoro-#3-A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol On porte au reflux pendant 16 heures un mélange de 100 mg de 9&alpha;-fluoro-11ss-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione et de 150 mg de borohydrure de sodium dans 2 ml de solution d'hydroxyde de sodium 2 N et 25 ml de méthanol, on le verse dans de l'eau, on l'acidifie et on l'extrait pat le chloroforme. On lave les extraits chloroformiques avec une solution saline a 8%, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore à sec. La cristallisation du résidu dans l'acétate d'éthyle donne 20 mg de 9&alpha;-fluoro-#3- A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol, p.f. 200-201 .Une recristallisation dans l'acétate d'éthyle donne l'échantillon analytique, p.f. 207-208 ; # d-DMSOTMS 9,13 (s, 18-Me) , 8,63 (s, 19-Me) et 4,72 (s, 3-H). Anal. Calculé pour C18H2703F (310,40) : C = 69,65; H = 8,77 Trouvé : C = 69,69; H - 8,79 Exemple 11 Ester 2,17-diacétique de 9&alpha;-fluoro-#3-A-norandrostène-2ss,11ss, 1713-triol En suivant ie mode opératoire donné dans l'Exemple 4, mai en remplaçant le # 3-A-norandrostène-2ss,17ss-diol par le 9&alpha;- fluoro- #3-A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol on obtient l'exter 2,17-diacétique du 9&alpha;-fluoro-#3-A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-, triol. Exemple 12 Ester 2,11,17-triacétique du 9-fluor---A-norandrostène-2P- 11ss,17ss-triol En suivant le mode opératoire donné dans l'Exemple 7 mais en remplaçant le 17&alpha;-méthyl-#3-A-norandrostène-2ss,17ss-diol par le 9&alpha;-fluoro-#3-A-norandrostène-2ss,11ss-17ss-triol ou l'ester 2,17-diacétique du 9&alpha;-fluoro-#3-A-norandrostène-2ss,11ss,17ss- triol on obtient l'ester 2,11,17-triacétique du 9&alpha;-fluoro-#3- A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol. Alors que l'on a décrit divers modes de réalisation de l'invention les compositions et méthodes décrites ne doivent pas etre considérées comme limitant le champ de l'invention, car il est entendu que des changements y sont possibles et en outre il est prévu que chaque élément cité dans l'une des revendications qui suivent doit être considéré comme se rapportant à tous les éléments équivalents pour réaliser sensiblement les mêmes résultats d'une manière sensiblement identique ou équivalente, ceci couvrant l'invention largement sous quelque forme que son principe puisse être utilisé. REVENDICATIONS 1. Composes de formules dans lesquelles R est un groupement alcoyle inférieur ou aralcoyle et R1 et R2 sont des groupements hydroxy ou acyloxy, X est un halogène, et Z représente une simple ou double liaison. 2. 11&alpha;-Hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione ou ester mésylique. 3. # 3,9(11)-A-norandrostadiène-2,17-dione. 4.9&alpha;-Bromo-11ss-hydroxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione. 5. 9ss,11ss-Epoxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione. 6. 9&alpha;-Fluoro-11ss-hydroxy- ss 3-A-norandrostène-2,17-dione. 7. 9a-Chloro-llf5-hydroxy- /\3-A-norandrostène-2,17-dione. 8. 9&alpha;-Fluoro-11ss-acétoxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione. 9. 9&alpha;-Bromo-11ss-acétoxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione ou 9&alpha;-chloro-11ss-acétoxy-#3-A-norandrostène-2,17-dione. 10. 9&alpha;-Fluoro-#3-A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol. 11. 9a-Fluoro- a 3-A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol, ester 2,17-diacétique. 12. 9&alpha;-Fluoro-#3-A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol, ester 2,11,17-triacétique. 13. Une composition thérapeutiquement active comprenant comme ingrédient actif un composé selon la revendication 1.