FR 2085632 A1 19711231 FR 7013046 A 19700410 La présente invention est relative a de nouveaux dérivés dta- cide glycylglycolique, à un procédé pour les préparer et à leurs applications, notamment en thérapeutique humaine et vétérinaire. Les nouveaux dérivés de l'invention répondent à la formule dans laquelle R1, R2 et R3, qui peuvent être identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe alcoyle inférieur, notamment un groupe méthyle. L'invention comprend également les sels d'addition des composés de formule (I) obtenus par addition avec des acides et des bases minéraux ou organiques. On citera notamment les sels formés avec les acides chlorhydrique, sulfurique, phosphorique, acétique, benzotque, citrique, fumarique, lactique, malonique, malique, nicotinique, succinique, tartrique, etc*. Ces sels peuvent être préparés par des procédés bien connus. L'invention a encore pour objet un procédé de préparation des composés de formule (I), caractérisé en ce qu'on soumet à une hydrogénolyse catalytique un composé de formule X - CH2 - COO - CH2 - COO - CH2 - C6H5 dans lequel X est un groupement C6H5 - CH2 - O - CO - NH- ou R1, R2 et R3 étant tels que définis précédemment, et on recueille le composé de formule (I) ainsi obtenu. L'hydrogénolyse catalytique est effectuée a4sztageusement en présence de charbon palladié de préférence à IO % de palladium en poids. Suivant un mode de mise en oeuvre du procédé de l'invention, pour préparer le composé de formule (Iy dans lequel R1 = R2 = R3-H on fait d'abord réagir de la N-carbobenzyloxyglycine sur de la triéthylamine et du monochloracétate de benzyle et on soumet à lthydrogênolyse catalytique le O- (N-carbobenzyloxyglycyl)-glycolate de benzyle ainsi obtenu. La réaction avec la triéthylamine et le monochloracétate de benzyle s'effectue habituellement dans l'acétate d'éthyle. Ce mode de mise en oeuvre est illustré par les équations réactionnelles suivantes L'hydrogénolyse du triester obtenu en (2) donne l'acide O-glycylglycolique cherché de formule + H3 N - CH2 - COO - CH2 - COO- (il) Le O-(N-carbobenzyloxyglycyl)-glycolate de benzyle a été décrit par H. Gibian et K. Lübke dans Ann. Chem.I96I, 644, 130 Suivant un autre mode de mise en oeuvre du procédé de ltinven tion, pour préparer les composés de formule (i) dans lesquels au moins un des symboles R1, R2 et R3 est autre que l'hydrogène, on fait réagir du O-monochloracétyl-glycolate de benzyle sur une amine de formule et on soumet ensuite le drivé de formule ainsi obtenu à lthydrogénolyse catalytique. La réaction du O-monochloracétyl-glycolate de benzyle sur l'a- mine est effectuée normalement dans l'acétate d'éthyle. Pour préparer le O-monochloracétyl-glycolate de benzyle, qui est un composé connu, on peut faire réagir de l'acide monochloracé- tique sur de la triéthylamine et du monochloracétate de benzyle en milieu d'acétate d'éthyle. Lorsque R1=R2=R3=CH3, on obtient ainsi l'acide O-(N,N,N-trimé thylglycyl )-glycolique de formule Les exemples non limitatifs suivants sont donnés à titre d'illustration de l'invention. Exemple 1 - Préparation de l'acide 0-glyeyl-glycolique (Formule I; R1 = R2 = R3 = H; désigné ci-après "dérivé 1") a) Synthèse du O-(N-carbobenzyloxyglycyl)-glycolate de benzyle. 20,9 g de N-carbobenzyloxyglycine (0,1 mole) et I0,1 g de tri Sthylamlne sont traités par I6j5 g de monochloracétate de benzyle (0,09 mole)en milieu d'acétate d'éthyle anhydre à reflux et en agitant pendant 6 heures. On laisse refroidir, on filtre les cristaux de chlorhydrate de triéthylamine formés et on lave le filtrat avec un mélange eau/acétate d'éthyle (1 : 1). Or recueille la phase organique, on l'évapore et on traite le résidu par de l'éther de pétrole. Le produit désiré cristallise. b) Hydrogénolyse du O-(N-carbobenzyloxyglycyl)-glycolate de benzyle 3,57 g (0,01 mole) du triester préparé en a) ci-dessus sont mis en suspension dans 50 ml d'eau; on ajoute 500 mg de catalyseur (charbon actif à IO % en poids de palladium). Le mélange est agité sous atmosphère d'hydrogène pendant 1 heure. On élimine alors le catalyseur par centrifugation et on évapore le solvant sous vide. On obtient des cristaux blancs dont le point de fusion après recristallisation dans un mélange eau/éthanol 1/3 est de 2O00C avec décomposition (rendement: 85 -). Analyse - C % H % Calculé pour C4H7N02 47,50 6,44 Trouvé 46,90 6,21 Exemple 2 - Préparation de l'acide O(N,N,N-triméthylglycyl)-glyco- lieue (formule I ; R1- R2=R3=CH3 désigné ci-après "dérivé 2" (sous forme de chlorure) a) Synthèse du O-monochloracétyl-glycolate de benzyle On dissout dans I00 ml d'acétate d'éthyle anhydre 9,45 g d'acide monochloracétique (0,1 mole) et I0,1 g de triéthylamine (0,1 mole). On ajoute ensuite 16,5 g (0,09 mole) de monochloracétate de benzyle et on chauffe à reflux pendant 6 heures en agitant. On refroidit, on sépare le chlorhydrate de triéthylamine formé et on évapore le solvant. Le résidu est traité par un mélange d'eau et d'éther; la phase éthérée est recueillie, séchée sur du sulfate de sodium anhydre, ensuite évaporée, et le résidu est distillé. (EbI5 = I80 C). Rendement 44 %. b) Synthèse du chlorure de O-(N,N,N-triméthylglycyl)-glycolate de benzyle 2,42 g de l'ester préparé en a) ci-dessus (0,01 mole) sont traités à -5 C dans l'acétate d'éthyle anhydre par 1 ml de triméthylamine. Après 2 heures, on laisse réchauffer le mélange à la température ambiante, et on continue à agiter pendant 15 heures. On filtre, on recueille le précipité, on le lave à l'éther et on le sèche. On obtient, après recristallisation dans l'alcool, des cristaux dont le point de fusion est de I62 C. Rendement: 90 %. c)Hydrogénolyse du chlorure de O-(N,N,N-triméthylglycyl)glycolate de benzyle 3,0 g de chlorure de O-(N,N,N-triméthylglycyl)-glycolate de benzyle (0,01 mole) sont dissous dans 50 ml d'eau. L'hydrogénolyse s'effectue dans les mêmes conditions qu 'a' l'Exemple 1. Ensuite, on filtre pour éliminer le catalyseur, on évapore liteau, et on recristallise le composé dans un mélange d'eau et d'éthanol (1 : 3). On obtient des cristaux dont le point de fusion est de 2100 C. Analyse - C% HÇ Calculé pour C7H14O4NCl 39,40 7,50 6,56 Trouvé 39,I0 7,40 6,60 Les nouveaux dérivés de l'invention possèdent des propriétés pharmacologiques intéressantes, notamment hépatoprotectrice, normolipémiante et hypocholestérolémiante qui les rendent précieux en thérapeutique. Les résultats des études toxicologique, pharmacologique et clinique qui sont rapportés ci-apres, montrent l'intérêt thérapeutique remarquable des dérivés de l'invention. Etude toxicologique Cette étude a montré que les dérivés de l'invention bénéficient d'une excellente tolérance. Des doses de 3 g/kg administrées par la voie sous-cutanée au rat et à la souris n'ont provoqué aucun phénomène d'intolérance. Des doses supérieures administrées aux mêmes espèces animales par tubage gastrique ont également été parfaitement tolérées. De même, en ce qui concerne la toxicité chronique et la toxicité retardée, il n'a jamais été possible de mettre en évidence le moindre trouble ou la moindre intolérance locale ou générale. Etude pharmacologique Cette étude a eu pour but d'étudier l'action hépatoprotectrice et antistéatosique des dérivés de l'invention ainsi que leurs effets normolipémiants et hypocholestérolémiants. 10) Action protectrice vis-à-vis de l'intoxication expérimentale au tétrachlorure de carbone On administre à des rats Wistar, tous les 3 Jours, par la voie intrapéritonéale, 2 ml de tétrachlorure de carbone par kg de poids corporel. On constate que la mortalité est nettement inférieure chez les animaux ayant reçu en même temps les dérivés de l'inven- tion. Les résultats sont consignés dans le tableau suivant Pourcentage de mortalité C Cl4 Produit administré : Au IOème jour : Au 20ème jour Lot A : : O : 90 : I00 Lot B : I00 mg/kg 20 dérivé I Lot C : + : 100 mg/kg : O 25 dérivé 2 2 ) Action protectrice vis-à-vis de la stéatose expérimentale provoquée - L'expérimentation est effectuée sur des rats Wistar jeunes (moins de 2 mois) soumis à un régime hyperlipidique riche en glucides, hypoprotidique et carencé en choline. Ce régime provoque en un mois une surcharge lipidique qui est évaluée, après sacrifice, par l'examen macroscopique du tissu hépatique (surcharge notée arbitrairement de 1 à 4 en fonction de son intensite) et par-dosage des lipides hépatiques. Le résultats suivantes montrent une stéatose nettement moins marqué chez les animaux traités avec les dérivés de l'invention. N Lot : Régime : Produit : Lipides hépatiques : Stéatose :administré en g pour I00 g de : hépatique foie frais Lot A : 0 :0 4,88 : 0 Lot B : + : 0 : IO,91 : 3,4 Lot C : c 1 I00 mg/kg : 5,95 . 1,8 . du dérivé 1 Lot D : + : IOO mg/kg : 6,100 : 2,2 :du dérivé 2: 3 ) Action normolipémiante et hypocholestérolemiante Les essais ont mis en évidence l'action favorable des dérivés de l'invention vis-à-vis des déséquilibres provoqués par des régimes hypercholestérolémiques et hyperlipidiques. L'expérimentation a porté pendant I5 jours sur des lapins,les lots traités recevant en outre le dérivé de l'invention à la dose de I00 mg/kg. A la fin de l'essai, on constate par rapport au lot témoin non traité a) pour le cholestérol, une diminution des taux de 41 % (dé- rivé 1) et de 38 % (dérivé 2). b) pour les lipides totaux, une diminution des taux de 49 ffi (dérivé 1) et de 55 ç (dérivé 2). c) pour les triglycérides, une diminution des taux de 55 % (dérivé 1) et de 54 % (dérivé 2). En outre, les foies et les aortes, après sacrifice des animaux, font l'objet d'un contrôle anatomo-pathologique. On constate que l'importance des infiltrations graisseuses du foie et des lésions athéromateuses aortiques (notées de 1 à 5 en fonction de leur gravité) est de 4,6 pour le lot témoin, de 2,1 et de 2,00 pour les lots traités respectivement par les dérivés I et2. Les résultats de cette étude pharmacodynamique montrent que les dérivés de l'invention a) sont doués d'une action protectrice vis-à-vis de l'intoxicF tion par le tétrachlorure de carbone et de la stéatose expérimentale; b) produisent une nette action normolipémiante et hypocholestérolémiante; c) bénéficient d'une très faible toxicité et d'une excellente tolérance. L'invention a donc encore pour objet un médicament présentant, en particulier, une activité hépatoprotectrice, normolipémiante et hypocholestérolémiante, caractérisé en ce qu'il contient, à titre de principe actif, un dérivé de formule (I) précitée ou un sel d'addition thérapeutiquement administrable de ce dérivé formé avec une base ou un acide. Le principe actif est particulièrement l'acide O-glycylglycolique ou l'acide O-(N,N,N-triméthyl-glycyl)-glycolique. Le médicament de l'invention est avantageusement formulé en doses unitaires pour l'administration par voie orale, telles que comprimés, comprimés dragéifiés, gélules, ou encore sous forme de granulés. Il est également présenté sous forme de soluté injectable. Dans ces formes pharmaceutiques, le principe actif est associé aux véhicules ou excipients usuels appropriés. Chaque dose unitaire peut contenir de Q,05 g à 0,250 g de principe actif et les doses journalières administrables peuvent varier de 0,05 g à 1,0 g. On donnera ci-après, à titre d'exemples non limitatifs, quelques formulations du médicament de l'invention. Formule N 1 - Comprimés Dérivé 1 . . . . . . . . . . . . . 0,050 g Lévulose . . . . . . . . . . . . . O,OIO Talc . . . . . . . -. . . . . . . . O,OIO Glucose . . . . . . . . . .q.s.p. 1 comprimé Formule N 2 - Comprimés dragéifiés Noyau Dérivé 2 . . . . . . . . . 0,075 g Glucose . . . . . . . . . . O,OIO Talc . . . . . . . . . . . 0,005 Stéarate de magnésium . . . 0,005 Enrobage Gomme laque . . . . . . . . O,OIO Gomme arabique . . . . . . 0,005 Talc . . . . . . . . . . .. O,OIO Cire blanche . . . . . . . 0,005 Sucre cristallisé ..q.s.p. 1 comprimé dragéifié Formule N 3 - Gélules Dérivé 1 . . . . . . . . . 0,100 g Talc . . . . . . . . . . . 0,005 Stéarate de magnésium . . . 0,010 Formule N 4 - Granulés Dérivé I . . . . . . . . . 1 g Excipient . . . . . .q.s.p. 100 g de granulés Formule N 5 - Soluté injectable Dérivé 2 . . . . . . . . 0,100 g Excipient isotonique q.s.p. 3 ml Etude clinique Le médicament de l'invention a été avantageusement utilisé en thérapeutique humaine et vétérinaire. I1 exerce une action protectrice vis-à-vis du foie contre"tartes les agressions et rétablit l'intégrité de la cellule hépatique. En outre, il agit sur le métabolisme lipidique en le normalisant et évite la surcharge graisseuse du foie. On rapporte ci-après, à titre d'exemples, quelques observatiocs cliniques de patients traités par le médicament de l'invention. Observation N 1 Monsieur Z... Roger, agé de 40 ans, consulte pour asthénie, inappétence, subictère, constipation et amaigrissement de 3 kg environ. Dans ses antécédents, on relève une hépatite virale, 3 mois auparavant. On lui prescrit un traitement par les comprimés-dragéifiés de la formule N 2 à la dose journalière de 3 pendant 4 semaines. L'évolution clinique est favorable. On constate une amélioration rapide de tous les signes généraux et fonctionnels avec disparition de la fatigue et reprise de l'appétit, ainsi qu'une amélioration du bilan biologique communiqué ci-après Résultats et tolérance excellents. Bilan biologique Avant traitement Après traitement Poids 62 kg 64 kg Urée sanguine 0,40 g p 1000 0,38 g p 1000 Glycémie 1,18 g p 1000 1,00 g p 1000 Cholestérol total 1,90 g p 1000 1,80 g p 1000 Cholestérol estérifié 1,10 g p 1000 1,30 g p 1000 Lipides totaux 9,00 g p 1000 7,5 g p 1000 Observation NO 2 Monsieur B.... Louis, àgé de 66 ans, consulte pour éthylisme avec troubles dyspeptiques: pituite matinale, nausées, ballonnements, pesanteur épigastrique. On lui prescrit un traitement par le médicament de la formule N 3 précitée à la dose journalière de 3 gélules pendant 6 semaines. L'amélioration des signes cliniques est considérable en fin de traitement. Les signes digestifs ont presque entièrement disparu. On note également une nette amélioration du bilan biologique. Tolérance et résultats excellents. Bilan biologique Avant traitement Après traitement Poids 6I kg 64 kg Bilirubine D 6 mmg 4 mmg Bilirubine I O O Cholestérol total 2,IO g p 1000 1,90 g p 1000 Cholestérol estérifié 2,00 g p 1000 2,00 g p 1000 Lipides totaux 10 g p 1000 8,7 g p 1000 Observation N" 3 L'enfant P Robert, àgé de 4 ans, souffre d'hypotrophie, paleur et troubles digestifs, avec signes d'insuffisance hépatique. L'interrogatoire apprend que l'enfant a jusqu'ici été mal alimenté, ne se nourrissant pratiquement que de lait. Aucun régime alimentaire n'a été prescrit à ce jour, et l'enfant ne mange Jamais ni viande, ni fruits. A l'examen, on est frappé par la pâleur, la maigreur, la dénutrition et la tristesse de l'enfant. Son poids est de In,900 kg. Son taux de globules rouges est de 3.200.000 et il existe une forte hypochromie. On note en outre quelques signes de rachitisme et d'insuffisance hépatique mineure accompagnée de constipation. On lui prescrit un traitement comprenant un régime alimentaire varié et équilibré, du fer et les granulés de la formule Na 4 précitée à la dose de 3 cuillerées à café par jour , I5 jours par mois, pendant 3 mois. Les résultats sont rapides: reprise de l'appétit, augmentation pondérale de 1,500 kg en 3 semaines, disparition de la constipation. Résultats et tolérance excellents. Observation NO 4 L'enfant C .... André, Agé de 6 ans, souffre de vomissements acétonémiques alternant avec des périodes d'état nauséeux accompagnées de migraine, constipation, état subictérique, prurigo. L'enfant se plaint en outre de douleurs diffuses et assez mal localisées dans la région épigastrique. On lui prescrit un traitement basé sur plusieurs cures mensuelles du médicament de la formule N" 4 précitée à la dose de 3 cuillerées à café de granulés par jour. On y associe un régime qui sera poursuivi pendant plusieurs mois. Trois semaines plus tard, on constate qu'il ne s'est plus produit de vomissements, que l'appétit est meilleur et plus régulier, que la céphalée et la constipation ont disparu. Tolérance et ré résultats excellents Observation Na 5 Madame Marie-Jeanne J augée de 41 ans est une personne d'aspect pléthorique. Elle souffre, depuis son enfance, de dyspepsie et d'intolérance à certaines graisses ainsi qu'à de nombreux médicaments. La prise d'antibiotiques déclenche régulièrement des manifestations hépatiques avec vomissements bilieux suivis d'asthénie et de céphalée. Elle présente en plus régulièrement une pesanteur épigastrique et des ballonnements post-prandiaux, avec endolorissement de l'hy- pocondre droit, tous ces troubles semblant s'aggraver dans la période prémenstruelle. On lui prescrit les gélules de la formule N" 3 à raison de 3 par jour pendant 15 jours par mois, ce traitement devant durer plusieurs mois. L'amélioration clinique apparat rapidement: disparition des signes fonctionnels et surtout de l'intolérance aux antibiotiques, la malade ayant pu suivre après 3 mois un traitement par la tétracycline. Le bilan biologique est amélioré comme en témoigne le tableau ci-après. Résultats et tolérance excellents. Bilan biologique Avant traitement Après traitement Urée sanguine 0,45 g p 1000 0,42 g p 1000 Cholestérol total 2,80 g p 1000 2,70 g p 1000 Cholestérol estérifié 2,IO g p 1000 2,I5 g p 1000 Lipides totaux 9,2 g p 1000 8,5 g p 1000 Observation N" 6 Monsieur T Maurice, âgé de 55 ans, souffre d'éthylisme avec dénutrition, anorexie barre épigastrique avec pituite matinale. On lui prescrit un traitement par le soluté injectable de la formule N 5 précitée à raison de 3 injections par semaine pendant 1 mois. Le malade réussit à restreindre légèrement la consommation d'alcool dont il ne percevait pas l'importance. A la fin du traitement, on note une amélioration considérable des signes généraux et fonctionnels, avec disparition de la barre épigastrique et de la pituite matinale. Le bilan biologique est également amélioré. Résultats et tolérance excellents. Bilan biologique Avant traitement Après traitement Poids 58 kg 62 kg Urée sanguine 0,52 g p 1000 0,45 g p 1000 Lipides totaux 7,50 g p 1000 6,00 g p 1000 Cholestérol total 2,20 g p 1000 1,90 g p 1000 Les résultats de la présente étude clinique montrent que le médicament de l'invention a) bénéficie d'une excellente tolérance biologique et cliniqu en particulier, son administration au cours de traitements prolongés (plusieurs mois) ne donne lieu à aucune intolérance. b) produit d'excellents résultats thérapeutiques dans ses effets hépatotrophique et normolipémiant. I1 est indiqué dans le traitement de l'insuffisance hépatique et de ses manifestations: troubles digestifs, nausées, pituites matinales, migraines, éthylisme, états précirhotiques, cirrhoses, hépatites infectieuses ou d'intoxication et dans le traitement des hyperlipémies et hypercholestérolémies. 1 - Des dérivés d'acide glycylglycolique, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule dans laquelle R1, R2 et R3, qui peuvent être identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe alcoyle inférieur, et leurs sels d'addition avec des bases et des acides minéraux et organiques. 2 - L'acide O-glycylglycolique de formule H3N- CH2 - COO - CH2 - COO et ses sels. 3 - L'acide O-(N,N,N-trimdthyl-glycyl)-glycolique de formule et ses sels 4 - Un procédé de préparation des dérivés d'acide glycylglycolique suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'on soumet à une hydrogénolyse catalytique un composé de formule X - CH2 - COO - CH2 - COO - CH2 - C H dans lequel X est un groupement C6H5 - CH2 - O - CO - NH- ou R1, R2 et R3 étant tels que définis à la revendication 1, et on recueille le composé de formule (I) ainsi obtenu. 5 - Un procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce que, pour préparer le composé de formule (I) dans lequel R1 = R2 = R3 = H, on fait d'abord réagir de la N-carbobenzyloxyglycine sur de la triéthylamine et du monochloracétate de benzyle et on soumet à i 'hydrogénolyse catalytique le O-(N-carbobenzyloxyglycyl)glycolate de benzyle ainsi obtenu. 6 - Un procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce que, pour préparer les composés de formule (I) dans lesquels au moins un des symboles R1, R2 et R3 est autre que l'hydrogène, on fait réagir du O-monochloracétyl-glycolate de benzyle sur une amine de formule et on soumet ensuite le dérivé de formule ainsi obtenu à lthydrogénolyse catalytique. 7 - Un procédé suivant l'une quelconque des revendications 4 à 6, caractérisé en ce que lthydrogénolyse est effectuée en présence de charbon palladié comme catalyseur. 8 - Un médicament présentant en particulier une activité hépatoprotectrice, normolipémiante et hypocholestérolémiante, caractérisé en ce qu'il contient, à titre de principe actif, un dérivé d'acide glycylglycolique suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3 ou un sel thdrapeutiquement administrable de celui-ci. 9 - Un médicament suivant la revendication 8, caractérisé en ce qu'il est présenté sous une forme convenant à l'administration orale ou parentérale, le principe actif étant associé aux véhicules ou excipients appropriés à ces formes pharmaceutiques. IO - Un médicament suivant la revendication 8 ou 9, caractérisé en ce qu'il est présenté sous forme de doses unitaires contenant chacune de 0,05 à 0,250 g de principe actif.