FR 2035899 A1 19701224 FR 7010587 A 19700324 La présente invention concerne l'utilisation de certaines benzophénones substituées comme inhibiteurs de lipases bactériennes. tes lipases bactériennes, produites en particulier par Corynebacterluni acnes et Staphylococcus albus, hydrolysent les triglycérides du sébum pour produire des acides gras libres. On a reconnu que ces acides gras libres, lorsqu'ils se trouvent sur la peau humaine, sont le principal facteur de la pathogénèse de l'acné vulgaire. L'invention propose d'utiliser certaines benzophénones substituées comme inhibiteurs de l'activité de lipase de la flore bactérienne. Lorsque les benzophénones substituées de l'invention sont appliquées localement dans des zones atteintes d'acné vulgaire, elles inhibent la production d'acides gras libres par les lipases bactériennes. La teneur en acides gras libre du sébum est ainsi réduite. L'invention concerne par conséquent un procédé dtinhibi- tion des lipases bactériennes par utilisation des benzophénones substituées. Elle concerne également une composition pharmaceutique contenant ces benzophénones substituées. ille offre en outre de nouveaux composés qui montrent une activité importanted'inhibi- tion de lipases bactériennes. t'invention concerne typiquement l'utilisation comme inhibiteurs de lipases bactériennes, de composés répondant à la formule dans laquelle chaque symbole R désigne un groupe méthyle ou un ha halogène, R' désigne un atome drhydrogène, un groupe méthyle ou un atome halogène et R" désigne un groupe hydroxy ou méthyle ou un atome d'halogène ; n est égal à 1, 2 ou 3 et lorsque n est égal à 2, les symboles R" peuvent être semblables ou différents. Des composés typiques qui peuvent être utilisés conformément à l'invention comprennent, à titre non limitatif, les suivants 2,3',4,6-tétraméthyl-4'-hydroxybenzophénone, 2,4,6-triméthyl-4'- fluorobenzophénone, 2,4,6-triméthyl-4'-hydroxybenzophénone, 2,4,6 triméthyl-2 r -hydroxybenzophénone, 2,6-diméthyl-3'-fluoro-4 t -hydro- xybenzophénone, 2,4, 6-trifluoro-3 '-méthylbenzophénone, 2, 6-dibromo 3 '-méthyl-4 '-hydroxybenzophénone, 2, 6-dichloro-4 '-hydroxybenzophé- none, 2,4,6-trichloro-3'-méthylbenzophénone, 2,2',4,6-tétrachloro- 4'-méthylbenzophénone, 2,4,4',6-tétrafluorobenzophénone, 2,6-diméthyl-2',4'-dichlorobenzophénone, 2,6-diméthyl-4-fluoro-3',5'-dichlo- robenzophénone, 2,6-diméthyl-3'-hydroxy-4'-fluorobenzophénone, 2,3', 4,6-tétraméthyl-4'-fluorobenzophénone, 2,4,6-triméthyl-2'-fluoro4'-hydroxybenzophénone, 2,2' , 4, 6-tétraméthyl-4 t-hydroxybenzophénone, 2,4,6-triméthyl-2i-hydroxy-4'-fluorobenzophénone, 2,6-diméthyl-4'- fluorobenzophénone, 2, 6-dîméthyl-4, 4 '-difluorobenzophénone, 2,3' , 6- triméthyl-4'-fluorobenzophénone, 2,3 '-6-triméthyl-4-fluoro-4 '-hy- droxybenzophénone, 2,3',6-triméthyl-4-fluoro-4'-hydroxybenzophénone, 2,4,4', 6-tétraméthyl-3 '-hydroxybenzophénone, 2,4,5',6-tétraméthyl 3' -hydroxybenzophénone, 2,3',4,5'-6-pentaméthylbenzophénone et 2,3', 4,5',6-pentaméthyl-4'-hydroxybenzophénone. tes composés de l'invention peuvent être utilisés dans une composition pharmaceutique qui convient pour l'application locale en vue d'offrir un soulagement symptomatique de l'acné vulgaire. A titre d'exemple , on peut préparer une pommade hydrophile contenant de la 2,3'-4,6'-tétraméthyl-4'-hydroxybenzophénone (5 % en poids), du dipropylène-glycol et du polyéthylène-glycol, en ajoutant la 2,31,4, 6-tétraméthyl-4' -hydroxybenzophénone à une solution chaude de dipropylène-glycol dans le polyéthylène-glycol ("Carbowax" poids moléculaire 1000). Par agitation, on obtient une suspension trouble. En laissant refroidir à la température ambiante, on obtient une pommade de consistance correcte. On peut préparer des pommades contenant 5 à 20 % en poids des benzophénones substituées. On peut aussi obtenir une préparation du type d'une crème servant de support pour l'ingrédient actif. On mélange un polyéthylène-glycol (poids moléculaire de 200-300) contenant 6 % de 2,6diméthyl-3'-fluoro-4'-hydroxybenzophénone, avec de l'alcool benzylique, du benzoate de benzyle et du stéarate de sodium. On obtient une crème visqueuse transparente. On peut préparer des crèmes de ce type contenant 3 à 20 % en poids de la benzophénone substituée. tes composés actifs de l'invention peuvent aussi être incorporés dans des compositions pharmaceutiques sous la forme de bâtons applicateurs solides ( la benzophénone est dissoute dans un solvant organique visqueux non volatil et non toxique tel que l'isopropylène-glycol, puis on ajoute un agent de durcissement tel - qu'un polyglycéride, un polyéthylène-glycol ou l'alcool cétylique une fois que le mélange est homogène, on peut le mouler à la forme désirée) ou sous la forme de lotions. Ces dernières peuvent être des suspensions du type huile-dans-eau ou eau-dans-huile, en utilisant des cires et des esters qui sont non-toxiques et du type que l'on utilise généralement en pratique. L'activité des diverses benzophénones substituées de l'invention se mesure en détectant l'inhibition de la lipase bactérienne des triglycérides. Etant donné que cet enzyme (produit par les bactéries de la peau) hydrolyse les triglycérides du sébum (par exemple la tripalmitine) en donnant des acides gras libres, il est facile de contrôler un marquage au carbone radio-actif du substrat de tripalmitine. La préparation brute de lipase de S.albus s'obtient à partir d'un milieu de culture de-1' organisme r qu-' on -filtre dan des-eondi- tions stériles et quton concentre au sixième environ de son volume, par dialyse sous pression. Le milieu concentré est lyophilisé et la matière obtenue est utilisée comme enzyme. Le substrat destiné à l'incubation est un milieu de composition suivante Volume pour un essai Tampon au phosphate de potassium 0,2M (pH = 7,0) 0,34 ml Emulsion de tripalmitine à 0,0125M (tripalmitine à carboxyle marqué au C14, 0,5 g, 2,6 curie ; 0,56 g de "Tween 60"; 0,44 g de "Span 20 ; eau en quantité suffisante pour 50 ml 0,33 ml Enzyme, 100 mg/3,3 ml 0,33 ml 10 mg/0,5 ml de benzophénone substituée (dans le diméthylsulfoxyde) 0,01 -ml Concentration finale-0,2 mg/ml 1,01 ml te mélange défini ci-dessus est mis à incuber dans des tubes à essai pendant 60 minutes à 370C, en agitant par secousses. On prépare en outre un témoin qui contient 0,1 ml de diméthylsulfoxyde seulement, en plus du tampon, de la tripalmitine et de l'en- zyme. Après l'incubation, la réaction est arrêtée par addition de 0,1 ml d'acide sulfurique 10 . Le mélange est agité par secousses avec 5 ml d'un mélange d'extraction (30 ml d'isopropanol, 7,5 ml d'iso-octane, 0,75 ml d'acide sulfurique 1N.) Après repos pendant 15 minutes, on ajoute 3 ml dtiso-octane et 2 ml d'eau. Après agitation par secousses et centrifugation pendant 5 minutes, on prélève 3,5 ml de la phase supérieure (iso-octane) et on les traite avec 1 ml d'éthanol en solution alcaline (50 ml d'éthanol, 45 ml d'eau, 5 ml d'hydroxyde de sodium 1N et 0,1 %0 de bleu de thymol) pour éliminer les acides gras libres.Après agitation par secousses et centrifugation, on prélève 0,5 ml de la phase supérieure (isooctane) et on transfère cette prise d'essai dans 20 ml de phosphore en vue d'un comptage de radio-activité. On détermine la radio-activité de la tripalmitine restant à la fin de la période de l'incubation et on calcule le pourcentage d'inhibition de lthydrolyse de la tripalmitine. tes résultats sont donnés sur le tableau. TABLEAU Composé Inhibition %, à 0,2 mg/ml. 2,3' , 4, 6-tétraméthyl-4 '-hydroxybenzophénone 87 2,4,6-triméthyl-4'-fluorobenzophénone 89 2,4,6-triméthyl-4'-hydroxybenzophénone 99 2,4,6-triméthyl-2'-hydroxybenzophénone 88 2,4,6-triméthyl-2'-bromobenzophénone 79 tes composés de la présente invention se préparent d'une fa çon générale par condensation d'un halogénure d'acide aromatique (de préférence le chlorure) de formule (dans laquelle X est un radical halogéno et les symboles R et R' répondent aux définitions données ci-dessus) avec un hydrocarbure aromatique de formule (dans laquelle R" et n répondent aux définitions déjà données) en présence d'un équivalent moléculaire de chlorure anhydre d1alumi- nium. La réaction se développe rapidement et donne des produits purs, en un fort rendement. On peut utiliser comme solvant un excès de benzène ou de sulfure de carbone ; dans un cas ou dans l'autre, la réaction est exothermique pendant un certain temps et peut être achevée par un bref chauffage au reflux. Lorsque la benzophénone finale contient un substituant hydroxyle (c'est-à-dire lorsque R" désigne un groupe hydroxy) la présence de ce groupe hydroxyle phénolique modifie le comportement de la réaction décrite ci-dessus, car le groupe hydroxyle phénolique réagit initialement avec un équivalent de chlorure d'aluminium, et on doit donc utiliser un excès de ce dernier. Une variante de cette réaction, que l'on peut utiliser, produit des cétones phénoliques par chauffage d'esters de phénol avec le chlorure d'aluminium. Cette réaction s'effectue selon le schéma suivant dans lequel R, R', R" et n répondent aux définitions données cidessus. Comme on l'a mentionné, cettekéaction est intéressante principalement lorsque la position finale du substituant hydroxyle est la position 4', bien que la réaction donne également le groupe hydroxyle en position 2'. Lorsqu'on désire que le groupe hydroxyle oit fixé en position 3', le groupe hydroxyle du composé aromatique en réaction doit être bloqué pendant la réaction et éliminé ensuite, après la formation de la cétone. tes exemples suivants illustrént le procédé de préparation des composés de l'invention EXEMPLE 1 On chauffe au reflux pendant 6 heures un échantillon de 24 g d'acide 2,4,6-triméthylbenzolque du commerce dans 25 ml de chlorure de thionyle contenant une goutte de diméthylformamide. te mélange réactionnel est refroidi, l'excès de chlorure de thionyle est chassé par évaporation sous vide et le produit est lavé trois fois avec 10 ml de benzène pour éliminer les dernières traces de chlorure de thionyle. On récupère 30 g de chlorure de 2,4,6-triméthylbenzoyle brut On ajoute un échantillon de 2 g de o-crésol à 3 g du chlorure de 2,4,6-triméthylbenzoyle brut et on agité la solution obtenue jusqu'à ce que le dégagement de gaz chlorhydrique se calme, ce qui apparaît au bout de 30 minutes.On chauffe ensuite la solution à environ 800C pendant 15 à 30 minutes pour achever la réaction. te gaz chlorhydrique restant est chassé sous pression réduite. le mélange réactionnel est ensuite versé dans une solution froide d'hydroxyde de sodium à 10 fo, puis extrait deux fois. à l'éther. la phase d'éther est lavée deux fois à l'eau par écoulement en sens contraire, puis elle est déshydratée sur du sulfate de magnésium et concentrée sous vide. L'ester, à savoir le benzoate de (2-méthylphényl)-2,4,6-triméthyle, est obtenu sous la forme d'un solide cristallisé fondant à 58-600C. Spectre ultraviolet s max 2670, % 60 ; it max 2390 % 236. Un échantillon de 1,5 g de benzoate de (2-méthylphényl)2,4,6-triméthyle est broyé en une poudre fine que l'on ajoute à 1,0 g de chlorure d'aluminium. On élève la température de 35 à 1400C en une demi-heure et on maintient la masse fondue à 400 pendant encore 20 minutes. On refroidit le mélange réactionnel et on ajoute 30 ml d'acide chlorhydrique 1N. On chauffe le mélange au bain-marie bouillant pour décomposer les sels d'aluminium. On sépare par décantation la phase aqueuse de la phase huileuse et on lave le produit brut deux fois avec de l'eau, puis on le dissout dans de l'hydroxyde de sodium 1N.et on chauffe la solution à 700 au bain-marie bouillant. On sépare par filtration la portion insoluble de la base, et on acidifie le filtrat avec de l'acide chlorhydrique concentré,puis on isole sur un filtre 1,1 g de 2,3',4,6- tétraméthyl-4'-hydroxybenzophénone brute, La benzophénone obtenue comme produit est purifiée en utilisant la chromatographie en couche mince sur des plaques de gel de silice G de 10 x 1000 W dans un système à 3 fo de méthanol/chloroforme. Après recristallisation dans le méthanol, on obtient 400 mg de 2,3',.4,6-tétraméthyl-4'-hydroxybenzophénone pur fondant à 2022030C, spectre ultraviolet : s max 2960,f 678. EXEMPLE 2 Préparation de la 2.4,6-triiaéthvl-4'-fluoro- benzophénone On ajoute à 2,5 g de chlorure de 4-fluorobenzoyle, 5 ml d'une solution de 1,9 g de mésitylène dans le sulfure de carbone. On ajoute ensuite 2,3 g de chlorure d'aluminium et on chauffe le mélange au reflux pendant 4 heures. A la fin de cette période de chauffage, on verse le mélange réactionnel dans une solution d'acide chlorhydrique et on extrait la solution au benzène. On distille la fraction organique sous pression réduite et on recueil le le produit, à savoir la 2,4,6-triméthyl-4'-fluorobenzophénone. Cette dernière a un point de fusion de 78 à 3900. EXEMPlE3 Préparation de la 2,4,6-triméthyl-3'-fluoro-4'- hydroxybenzophénone En utilisant le même mode opératoire général que celui de l'exemple 1, on fait réagir de l'acide 2,4,6-triméthylbenzolque avec du chlorure de thionyle pour obtenir le chlorure de 2,4,6 triméthylbenzoyle, qu'on fait réagir avec le 2-fluorophénol. te produit de condensation, à savoir le benzoate de (2-fluorophinyl)- 2,4,6-triméthyle, est ensuite transposé en 2-4,6-triméthyl- 3 '- flu o- ro-4'-hydroxybenzophénone. EXEMPLE 4 Préparation de la 2,3' 4.5' 6-pentaméthylbenzophénone En utilisant le même mode opératoire général que celui de l'exemple 2, on fait réagir du chlorure de 2,6-diméthylbenzoyle avec du p-fluorobenzène en présence de chlorure d'aluminium. te composé récupéré est la 2,6-diméthyl-4'-fluorobenzophénone. EXEMPLE 5 En utilisant le même mode opératoire général que celui de l'exemple 1, on prépare les composés suivants : 2,3',6-triméthyl- 4-fluoro-4'-hydroxybenzophénone, 2,6-diméthyl-3'-fluoro-4'-hydroxy- benzophénone, 2,3',4,5',6-pentaméthyl-4'-hydroxybenzophénone et 2,2',4,6-tétraméthyl-4'-hydroxybenzophénone par réaction du chlorure de 2,6-diméthyl-4-fluorobenzoyle avec le 2-méthylphénol ; réaction du chlorure de 2,6-diméthylbenzoyle avec le 2-fluorophénol ;-réac- tion du 2,4,6-triméthylbenzoyle avec le 2,5-diméthylphénol ; et ré action du chlorure de 2,4,6-triméthylbenzoyle avec le 3-méthylphénol, respectivement. On fait tout d'abord réagir les composés de manière k obtenir lester intermédiaire qui est le 2,6-diméthyl-4-fluorobenzoate de 2-méthylphényle, le 2,6-diméthylbenzoate de 2-fluorophényle, le 2,4,6-triméthylbenzoate de 2,6-diméthylphényle et le 2,6-dimé thylbenz oate de 3-méthylphényle, respectivement. Après transposition comme décrit dans l'exemple 1, on récupére respectivement la 2,3',6-triméthyl-4-fluoro-4'-hydroxybenzophé- none, la 2,6-diméthyl-3'-fluoro-4'-hydroxybenzophénone, la 2,3', 4,5' ,6-pentaméthyl-4 ' -hydroxybenzophénone et la 2,2',4,6-tétramé- thyl-4' -hydroxybenzophénone. EXEMPLE 6 En suivant le même mode opératoire général que celui donné dans l'exemple 1, on prépare la 2,6-dibromo-3'-mdthyl-4'-hydroxy- benzophénone et la 2,4,6-trichloro-3'-méthylbenzophénone par les réactions respectives du chlorure de 2,6-dibromobenzoyle t du chlorure de 2,4,6-trichloro-3'-méthylbenzoyle avec le o-crésol. REVENDICATIONS 1. Composition inhibitrice de lipase bactérienne, caractérisée par le fait qu'elle contient un support pharmaceutique additionné d'un inhibiteur de lipase bactérienne de formule (dans laquelle chaque symbole R représente un groupe méthyle ou un atome d'halogène, R' désigne un atome d'hydrogène, un groupe méthyle ou un atome d'halogène et chaque symbole R" représente un groupe hydroxy ou méthyle ou un atome 'd'halogène, n est égal à 1, 2 ou 3 et lorsque n est égal à 2 ou 3, les symboles R" peuvent être semblables ou différents. 2. Composition suivant la revendication 1, caractérisée par le fait que la benzophénone substituée est la 2,3',4,6-tétraméthyl 4t-hydroxybenzophénone. 3. Composition suivant la revendication 1, caractérisée par le fait que laâbenzophénone substituée est la 2,4,6-triméthyl-4'fluorobenzophénone. 4. Composition suivant la revendication 1, caractérisée par le fait que la benzophénone substituée est la 2,6-diméthyl-3'-fluoro 4' -hydroxybenz ophénone. 5. Composition suivant la revendication 1, caractérisée par le fait que la benzophénone substituée est la 2,3',6-triméthyl-4fluoro-4'-hydroxybenzophénone. 6. Composition suivant la revendication 1, caractérisée par le fait que la benzophénone substituée est la 2,3',4,5',-6-pentamé- thylb enz ophénone. 7. Benzophénone substituée, caractérisée par le fait qu'elle répond à la formule générale: dans laquelle chaque symbole R représente un groupe méthyle ou un atome d'halogène, R' désigne un atome d'hydrogène, un groupe méthyle ou un atome d'halogène et chaque symbole R" représente un groupe hydroxy, un groupe méthyle ou un atome d'halogène, n est égal à 1, 2 ou 3 et lorsque n est égal à 2 ou 3, les symboles R" peuvent être semblables ou différents, mais lorsque n est égal à 1, R" ne peut pas désigner un groupe hydroxyle en position 4. 8. Benzophénone substituée suivant la revendication 7, caractérisée par le fait qu'elle est la 2,3',4,6-tétraméthyl-4t- hydroxybenzophénone. 9. Benzophénone substituée suivant la revendication 7, caractérisée par le fait qu'elle est la 2,4,6-triméthyl-4'-fluorobenzophénone. 10. Procédé de préparation d'une benzophénone substituée, répondant à la formule générale caractérisé par le fait qu'il consiste à faire réagir un halogénure d'acide aromatique de formule générale '(dans laquelle chaque symbole R désigne un groupe méthyle ou un atome d'hydrogène, R' représente un atome d'hydrogène, un groupe méthyle ou un atome d'halogène et X désigne un halogène) avec un hydrocarbure aromatique de formule dans laquelle chaque symbole R" désigne un groupe hydroxy, un groupe méthyle ou un atome d'halogène et les deux symboles R" peuvent être semblables ou différents, et n est égal à 1, 2 ou 3 en présence de chlorure anhydre d'aluminium.