FR 2027356 A1 19700925 FR 6945316 A 19691229 La présente invention concerne un antibiotique nouveau et utile ses dérivés et ses procédés de produo:tion Il concerne plus particulièrement un nouvel antibiotique sous des formes variées, et ses procédés de production par fermentation2 de même que sa concentration, sa récupération, sa purification, son isolement, et la production de ses dérivés. L'invention comporte dans son étendue une substance antibiotique sous des formes diluéesg comme des concentrés bruts, et sous formes cristallines pures. L'antibiotique désiré et ses dérivés présentent une haute activité vis-à-vis d'une variété de mi croorganisme qui comprend des bactéries Gram positives et Gram négatives,-des mycobactérles, des champignons et des bactériopha ges. On a observé in vitro sur quelques virus une forte action pour les détruire. Leurs possibilités d'arreter la croissance et le développement de certaines tumeurs transplantables et pro voquées,- est-une autre propriété antibiotique importante.Les propriétés antibiotiques des composés les rendent d'une grande utilisé comme agents thérapeutiques dans le traitement de nom breuses maladies. L'antibiotique conforme à l'invention est pro duit par un procédé de fermentation dans des conditions contre lées, dans lequel on utilise une espèce de Streptomyces jusqu'à présent inconnue. LE MICROORGANISME Le microorganisme utilisé pour la production de cet anti biotique est une espèce récemment découverte de Streptomyces iso lée à partir d'un échantillon d'impureté recueilli à-Musashi- Koganei au Japon. Une culture de l'organisme vivant a été déposée, et ajoutée à la collection permanente de réserve de la Collection Américaine de Culture, Rockville, Maryland aux Etats-Unis d'Amé rique. On lui a donné le numéro ATCC 21 55) et il est désigné dans la suite comme variété de Streptomyces achromogenes tomay- myceticus. Il est bien entendu qu'en ce qui concerne la production du nouvel antibiotique, l'invention ne se limite pas à l'utilisation de l'organisme particulier décrit, ou d'organismes qui répondent tout à fait aux caractéristiques microscopiques et de croissance décrites ici, que l'on donne à titre illustratif. On désire essen tiellement et on se propose d'inclure l'utilisatin d'espèces mu tantes produites à partir de l'organisme désiré par des moyens variés comme les rayons Xg les radiations ultraviolettes, l'ypérite azotée, l'exposition aux phages. On-désire aussi et on se propose d'inclure tout organisme sans tenir compte-de son apparence ou de son comportement physiologique, que l'on peut développer par des-moyens de transformation, de transduction, de recombinaison génétique, ou d'autres procédés génétiques utilisant un acide nucléique pour former l'espèce décrite, par lesquels on a acquis la possibilité d'élaborer le pro duit-décrit ici9 ou d'effectuer la transformation biologique décrite ici. Pour isoler et caractériser le microorganisme, ontagite une fraction d'échantillon d'impureté dans de l'eau distillée stérile et on la dépose dans le milieu à base d'agar de Krainsky. Après avoir incubé à 300C, pendant sept- jours, on isole des colonies de variété de Streptomyces achromogenes tomaymicèticus ATCC 21 353 à partir du milieu, et on les fait pousser ensuite dans le milieu d'agar de Bennett. MORPHOLOGIE MICROSCOPIQUE La morphologie de la variété de Streptomyces achromogenes tomay-myceticus ATCC 21 353 qui a poussé dans le milieu de Czapek à 30 C. pendant dix à quatorze jours, est donnée ci-après. La conidie est sphérique ou ovoïde avec une surface polie..On observe un long mycelium aérien ramifié et à-chatne droite ou faiblement incurvé, avec une faible --croissance. CARACTERISTIQUES PHYSIOLOGIQUES ET DE CULTURE Les caractéristiques physiologiques et de culture due la nouvelle espèce de S. achrome var tomay-myceticus ATCC 21 353 dans un certain nombre de miliewsont données ci-après. L'obse rvu tion a été faite après dix à quatorze-jours d'incubation à 30 c. Le temps d'incubation et la température sont les mêmes que ceux indiqués ici, sauf indication contraire. Agar de Czapek - Croissance blanche à jaune pâle de la colonie, faible croissance du mycelium aérien blanc pulvérulent; pas de pigment soluble. Agar amidon-ammoniaqué - Croissance faiblement grisâtre avec mycelium aérien gris foncé pulvérulent; pas de pigment roluble.On constate une faible action diastasique. Agar glucose-asparigine - Croissance blanche à légèrement ivoire de la colonie, pas de croissance ou faible croissance du mycelium aérien blanc pulvérulent, pas de pigment soluble. Agar malate de calcium - Croissance crémeuse aveo~mycelium aérien blanc à gris foncé pulvérulent; pas de pigment soluble. Le malate de calcium est solubilisé. Agar tyrosine - Croissance végétative incolore ou légèrement brune sans mycelium aérien et sans pigment soluble. Bouillon d'agar - Croissance crémeuse de la colonie sans mycelium aérien; pigment soluble brun produit. Pas de production d'hydrogène sulfuré après sept jours d'incubation. Agar de Bennett - Croissance légère.ment crémeuse de la 3310nie; pas de mycelium aérien et pas de pigment soluble. Après incubation à 370C., croissance brune de la colonie avec un mycelium aérien gris foncé pulvérulent et production d'un pigment soluble brun. Bouillon de glucose - Croissance crémeuse de la colonie avec un pigment soluble brun; pas de croissance de mycelium aérien. Solution de glucose de Czapek - Faible croissance superficielle incolore de la colonie, et faible croissance du mycelium aérien pulvérulent, pas de pigment soluble. Le nitrate n'est pas ou peu réduit en nitrite. Gélatine stabilisée - Croissance crémeuse sans mycelium aérien et sans pigment soluble après une incubation de ?l 3 jours de 15 à 20 C. Il y a une faible liquéfaction de gélatine. Lait de tournesol - La culture crolt comme un noyau crémeux à la surface Il y a production d'un pigment soluble brun, faiblement grisâtre. Il ay a une légère peptonisation, mais pas de coagule on. Fécule de pommes de terre - Croissance végétative crémeuse grisâtre avec une surface plissée; faible croissance du mycelium aérien blanc pulvérulent; production de pigment soluble brun foncé. Agar de cellulose - Il n'y a pas de croissance avec des ions ammonium ou nitrate utilisés comme source de l'azote. UTILISATION DE SOURCES DE CARBONE L'utilisation de sources de carbone a été effectuée selon la méthode de Pridham et Gottlieb après sept jours d'incubation à 300C (a) Les substrats fréquemment utilisés comprennent; le glu esse, le xylose, le mannose, le fructose et le mannitol. (b) Les substrats modéremment utilisés comprennent: l'ara- binose, le rhomnose, le saccharose, le lactose, le tréhalose, le raffinose et llinositol. (c) Le substrat peu utilisé est : la salicine. L ANTIBIOTIQUE On produit le nouvel antibiotique de ltinvention lorsque la variété de Streptomyces achromogenes tomaymyceticus se développe dans un milieu nutritif dans des conditions aérobies, immergées contrôlées. On peut utiliser une grande variété de milieux nutritifs dans la phase de croissance du procédé. On a maintenant trouvé que les meilleurs résultats étaient obtenus lorsque l'on utilisait un milieu aqueux contenant une source de carbone assimilable et une source d'azote assimilable, ou une matière du type protéique.On comprend dans les sources de carbone assimilables des alcools pelyhydriques et des mono-, di- et poly-saccharoses tels que le glucose, le fructose, le saccharse, le sucre, la cassonade, l'amidon, l'amidon de blé, le galactose, la dextrine, la glycérine, les mélasses et les composés identiques.Les matérieux du type protéique comprennent des protéines non modifiées et des produits de dégradation des protéines, en particulier creux qui se forment à partir de l'hydrolyse de protéines Les composés azotés assimilables et les matériaux du type protéique peuvent comprendre de la liqueur de blé macérée, de la levure, de la levure de bière, autolysée avec des solides laiteux, de la farine de soja, de la farine d'arachide, de la farine de graines de coton, de la farine de blé, des solides laiteux, des produits de digestion pancréatique de la caséine; des résidus de distillation solubles, des liqueursp-ptoniques animales, des extraits de farine, des peptones, de la farine de poisson, de extrait de levure, des petits morceaux de farine et d'os, et des matières inorganiques comme des nitrates et des sels d'ammonium. Ces sources de carbone et d'azote bien qu'utilisées avantageusement sous forme combinée, n' ont pas besoin d'être pures pour être utilisées, de la même façon que des matières moins pures, qui contiennent des traces de facteurs de croissance et des quantités considérables de matières nutritives minérales, sont appropriées pour cette utilisation.Si on le désire, elles peuvent être alimentées par des sels minéraux comme le chlorure de sodium, le chlorure de potassium et des agents tampon comme le carbonate de calcium et le phosphate de calcium. On peut ajouter si nécessaire un agent anti-moussant comme de la paraffine liquide, des huiles grasses ou des silicones, au milieu de fermentation. Pour une croissance et un développement maXimE de la variété de Streptomyces achromogenes tomaymyceticus, on doit ajuster le pH du bouillon de culture avant inoculation de l'organisme entre environ 5,5 et 8,0, et de préférence entre environ 6,0 et 7,0. On a observé que durant la période de croissance de l'orga- nisme et la production de l'antibiotique, le milieu peut continuer à garder un pH compris entre environ 6,o et 6,5. Il apparat que la production d'antibiotique est optimale et maximale lorsque la température du bouillon de culture est maintenue entre environ 25 et 37 C pendant 40 à 80 heures environ. Au bout de cette période, on a formé une quantité substantielle d'antibiotique. Comme on le préfère pour la production d'autres antibiotiques en quantité importante, les conditions de culture aérobie immergée dépendent du choix de production engrande quantité de l'antibiotique. Pour la production de petites quantités d'antibiotique, on peut effectuer le procédé de culture immergée dans des petits ballons ou flacons qui sont, soit remués, soit agités par des procédés mécaniques convenables. Cependant, lorsqu'on désire de grands volumes du milieu nutritif inoaulé,on peut les élever dans de grandes cuves ou réservoirs habituellement employés dans l'industrie de la fermentation.Pour la production de grandes quantités, il est préférable d'utiliser la forme végétative de l'organisme pour l'inoculation de la production, et des cuves et des réservoirs pour éviter un retard dans la croissance de la production de l'antibiotique. Par conséquent, il est préférable d'sabord de produire un inoculum végétatif de l'organisme en inoculant une quantité relativement faible de bouillon de culture avec des spores de l'organisme, et ensuite de transporter l'inoculum végétatif d'une façon aseptique aux vastes réservoirs ou cuves. Le milieu, dans lequel l'inoculum végétatif est produit, peut être le même ou différent de celui utilisé pour la production de l'antibiotique. L'agitation et l'aération du mélange de culture peuvent être effectuées par des moyens variés. On peut utiliser un agitateur ou procédé mécanique semblable pour tourner ou remuer le ferments des procédés variés de pompage, ou le passage d'air stérile à travers le milieu. On peut réaliser l'aération par l'injection d'air stérile dans le mélange de fermentation ou en pulvérisant, en faisant gicler, en répandant le mélange dans ou à travers une atmosphère. Après avoir séparé l'antibiotique conforme à l'invention de tout le bouillon,par filtration ou centrifugation, on peut le récupérer à partir du milieu de culturo par des techniqeus d'extraction ou d'absorption, que l'on utilisecouramment en relation avec la récupération d'autres antibiotiques. On peut offectuer l'extraction par l'utilisation de solvants de préférence des solvants organiques polairos compronant des alcools comme la méthanol, l'éthanol, la propanol, l'isopropanol, 1 butanol, des esters alkyl d'acides gras comme l'acétate d'éthyle ; des cétones comme l'acétone ; des hydrocarbures chlorés comme le chloroforme ; et la pyridine. On peut utiliserj également d'autres solvants aux caractéristiques semblables. La combinaison de ces solvants est utilisée avantageusement.L'autibiotique peut être également récupéré dans le bouillon de culture par un agent absorbant comme de la terre d'infusoires, de l'alumine activée, du gel de sili cc, du charbon actif et ds l'acide silicique. L'antibiotique est facilement élué de l'absorbant par un solvant organique polaire dans lequel il est soluble. Un procédé convenable do récupéra- tion de l'antibiotique à partir de l'extrait ou de l'élust comporte l'évaporation du solvant dans un relativement faible volume et la précipiration de l'antibiotique par addition d'un solvant miscible où il est soluble. L'antibiotique est ensuite purifié par recristallisation ou par chromatographic. Les solvants appropriés de rocristallisation sont l'acétone en solution aqucuse, le méthanol en solution aqueuse, et tout utre solvant dans lequel l'antibiotique est insoluble. Les agents absorbants utilisés pour la récupération de l'antibiotique pouvant également servir d'une façon officace pour la purification par chromatographie. Des éluants utilisés en liaison avec la récupération de l'antibiotique pouvent également servir. L'antibiotique qui est isolé par les procédés qui sont coux mentionnés ci-dessus se préseats sous for@@ de poudre. LES DERIVES Les dérivés de l'antibiotique sont préparés par des procédés de traitement de l'antibiotique, isolésde l'extrait ou de l'éluat ou non isolés, par des alcools, thioalcools et dialkylamines. Les dérivés conformes à l'invention répondont a la formule suivante dans laquelle R est un groupement oroyalkyl inférieur, un groupe ment aryl oxyalkyl inferieur, un groupement thioalkyl inférieur, un groupement aryl thioalkyl inférieur ou diaminoalkyl inférieur. On peut effectuer cette réaction par des procédés comprenant simplement la dissolution de la poudre d'antibioticiue dans des alcools, thioalcools ou dialkylamines de formule RH dans laquelle R est un alcoxy inférieur, un alcoxy inférieur ary le, un alkylthio inférieur ou un dialkyl (i (inférieur) imino, et le refroidissement de la solution pour former des produits cristallisés. Les exemples d'alcools sont les alcools aliphatiques inférieurs ayant de 1 à 6 atomes de carbone, et les alcools aromati- ques ayant de 7 à 8 atomes de carbone. Comme alcool aliphatique inférieur, on utilise avantageusement le "éthanol, l'éthanol, le propanol et 1 'isopropanol ; commealcools aromatiques on utilise l'alcool benzylique.Lcs exemples de thioalcools sont le nethanethiol, l'éthanothiol, le propanethiol, l'isopropanethiol et le toluène thiol. Parmi les dialkylamines (inférieur) on peut citer : la diméthylamine, la diéthylamine, la dipropylamine, la méthyléthylamine et la méthylpropylamine. D'autres alcools, thioalcools, et dialkylamines qui ne sont pas spécifiquement indiqués ici peuvent être également utilisés. Pour une préparation optimale et maximale des dérivés, on peut effectuer avantageusement la reaction dans un solvant inerte.Les exemple de solvants sont le chlorure de méthylène, le chloroforme, le tétrachlorure de carbone et l'acétate d'éthyle. La température de réaction n'est pas limitée, mais on effectuo de préférence la réaction à des tempé- ratures coprises entre 25 C et 35 C. Il est bien entendu que l'addition des alcools, sus-cités des thioalcools, et des dialkylamines de formule RH, provoque l'introduction du radical R desdits composés an position Il sur le cycle. Le composé de formule (I) peut être facilement transformé en un composé de formule suivante On peut effectuer l'élimination d'un substituant en position II sur le cycle par des procédés de dissolution du composé de formule (I) dans un solvant comme le n-hexane, l'acétonitriles l'acétone, le chloroforme ou l'acétate 'méthyle. On peut utiliser efficacement un excès desdits solvants. Cette réaction d'élimination est réalisée de préférence à température ambiante, mais on peut également utiliser une température élevée pour favoriser la réaction et diminuer le temps de réaction. Le précipité formé en solution peut être recueilli par des techniques habituelles comme la filtration, la décantation, ou la centrifugation. En utiIísant lesgprocédés de préparation du composé de formule (I) on peut facilement transformer le composé de formule (II) en un composé de formule (I). Les conditions et solvants utilisés pour la préparation du.composé (I) peuvent être efficacement appliqués à cette réaction. Les procédés de préparation des composés de formule I peuvent servir à transâormer immédiatement les composés de formule II en composés de formule I. Les conditions et les solvants mis en oeuvre dans la préparation des composés de formule I peuvent également être appliqués. Les composés de formule (I) et (II) peuvent être transformés par acylation en un composé de formule suivante dans laquelle R'1 estun groupe alkylcarbonyl inferieur, un groupe aryl alkylcarbonyl inférieur, ou un groupe arylcarbonyl et Y est -NH-CHR- ou -N=CH-, dans lequel Rest le même qu'indiqué ci-dessus, On peut effectuer la reaction d'acylation enmélangeant le composé avec un agent ayant dans un solvant tel que la pyridine On peut utiliscr tout agent acylant capable de fournir un radical acyle quoi réagit avec un groupe hydroxyle en position 8. Parmi ceux-ci on trouve des acides, des acides halogénés, des anhydrides d'acides, et des esters d'acide.Les exemples d'agent acylant sont l'acide acétique, l'acide propinique, l'acide benzoïque, l'acide p-bromobenzoïque, leurs chlorures et bromures, leurs anhydrides, leurs esters méthyli ques et éthyliques. On peut effectuer l'addition de tels agents acy- lants à tompérature ambiante ou en refroidissant la solution. Les opé- rations qui comprennent la nise en place du mélange réactionnel et le refroidissement ou le versement d'un agent acylant dans un bain de glace, conduisent à la préparation de composés acylés.Ces composés acylés peuvent être cristallisés par dissolution d'un précipité dans un solvant tel que l'acétonitrile ou le méthanol obtenu par filtration d'une préparation suivie d'une chromatographie du filtrat sur gel de silice,ou par lavage du filtrat avec de l'eau.Les composé sés cristallisés pouvant être isolés d'une solution par des techniques habituelles comme la filtration. Les composés de formule (I) ot (II) peuvent être de plus transform és par alkylation en un composé de formule suivante : dans laquelle R"1 est un groupe alkyl inférieur et Y est le même qu' indiqué ci-dessus. On peut effectuer la réaction d'alkylation en mélangeant le composé avec un agent allylant dans un solvant tel que le méthanol.On peut utiliser tout agent alkylant capable de fournir un radical allrrle qui réagit avec un groupe hydroxyle sur la position 8 du composé. Parmi ceux-ci on peut citer les diazoalcanes et les sulfates ce dialkyle. Comme exemples d'agents d'alkylation, on peut indiquer le diazométllane, le diazoéthane, et le sulfate de diméthyle . On peut realiser cette réaction d'alkylation d'une façon efficace en refroidissant le mélange réactionnel. Un procédé de préparation actuellement préféré comprend la mise en place de la solution dans un réfrigératueur la concentratinn à sec9 la dissolution dans du méthanol, I'addition d'éther à une solution de méthanol et le refroidissement de la solution éthérée à OOC. La préparation de composés alkylés peut être isolée par des techniques habituelles comme la filtration. Les composes de formule (III)' et (IV) où Y est -N=CHpeuvent être facilement transformés en un composé où Y est -NH CHR-, où R est le même qu'indiqué ci-dessus. La réaction utilisée pour la conversion du composé de formule (II) en un composé de formule (I) peut être également employée. Par commodité et pour donner un mode de réalisation simple des composés de cette invention, touts les formules décrites précédemment sont représentées par la formule suivante dans laquelle R1 est lthydrogèneg un groupe alkyl inférieur,un groupe alkylcarbonyl inférieur, un groupe aryl alkylcarbonyl inférieur ou un groupe arylcarbonyl, et Y est le même qu'indiqué ci-dessus, dans laquelle le groupe aryl inférieur possède 1 à 6 atomes de carbone et le groupe alkyl inférieur aryle possède de 7 à 8 atomes de carbone. L'antibiotique et ses dérivés produits par les procédés cités ci-après, présentent une haute activité contre un certain nombre de microorganismes. On donne maintenant une description de l'utilité du composé 11-méthoxy de formule I en tant qu'agent antimicrobien. L'activité du composé est exprimée par sa concentration d'inhibition minimum (MIC) qui est déterminée par la méthode habituelle de dilution en série de l'agar. Les tests sont réalisés pour des bactéries en utilisant un milieu de bouillon de glucose et pour les champignons et la levure en utilisant un milieu de Sabouraud. Il y a incubation du milieu test pendant 24 à 72 heures à 300C, et les MIC sont exprimés par la concentration du composé en mcg/ml qui inhibe la croissance de l'organisme. Les tests ont été effectués avec le composé méthoxy-II de formule (I) et la suite représente les résultats. Organismes tests Concentration d T inhibition minimum Staphylococcus aureus 209-P 632 Bacillus substilis ArUCC 6633 12,5 Corynebacterium xerosis 25,0 Sarcina lutea 25,0 Escherichia coli 1000 Pseudomonas aeruginosa 100,0 Proteus volgaris 100,0 Aspergillus niger 50,0 Penicillium chrysogenum Q-176 25,0 Saccharomyces cerevisiae 50,0 Torula utilis 50,0 Candida albicans 50,0 On mentionne ci-après les résultats des tests in vitro du composé méthoxy-II contre les bactériophages. Les tests ont ét6 effectués en ajoutant un ml d'une suspension, contenant 2x104 particules du phage test par ml, dans un tampon 0,01X-tris-HCl (pH 7,2) à chaque dilution (i ml) d'échantillon du composé à tester dans le tampon précédemment.Le mélange (0,1 ml) qui incube pendant une heure à 370C est versé dans un vase de Pétri avec 1,5% d'agar nutritif. Le dénombrement des phages est réalisé par la méthode de stilliréaction avec la souche concernée dans laquelle la quantité qui rend inactif exactement 50% des phages est exprimée en mg par ml. Phages tests Concentration désactivant 50% des phages phage Escherichia coli T1 0, 1 phage Escherichia coli T2 3,2 phage Escherichia coli T3 032 phage Escherichia coli T4 332 phage Escherichia coli # 1,0 phage Escherichia coli p 12,5 -phage Escherichia coli MS-2 12,5 phage Bacillus subtilis M-2 0,2 phage Bacillus subtiles SP-10 992 Phages tests (suite) Concentration désactivant 50% des des phages phage Lactobacillus acidophilus J1 50,0 phage Pseudomonas aeruginoea P1 12,5 On a trouvé que certains de ces composés étaient également efficaces cort-re les virus et les tumeurs.Le composé méthoxy-II de formule (I) est actif in vitro contre le DNA virus herpes simplex hominis. Dans ces essais, des doses de 0,1 et 0,05 mg/ml en solution dans l'eau distillée avec 19% de diméthylsulfoxyde sont mélangées dans des tubes avec des quantités égales de virus en suspension dans une solution de Hanks IN, la dilution allant de 10 à 3,5. Après différents temps de contact à 220C, la dose de 0,2 ml qui est titrée avant d'être en solution de Hanks comme Lu95, a été injectée dans le péritoine de groupes choisis au hasard de dix souris mâles, pour la souche NMRJ et un poids de 15 à 19g. Comme contrôle on a injecté à dix souris 0,2 ml de mélange de virus en suspension et une solution d'eau distillée avec 10% de DMSO comme indiqué ci-dessus sans le composé méthoxy-II. Comme résultats5 le taux de mortalité à 100% du groupe contrôlé a été abaissé à 20% après une heure et quatre heures de contact, et à 0% après six heures de contact. Cela signifie que la virulence du DNA a été complètement ou partiellement annihilée par 1'action du composé méthoxy-II. Le composé méthoxy-II présente une inhibition complète pour des tumeurs ascites transplantables variées, telles que llEhrlich Careinoma et le Cr. Sarcoma 180 de la souris, la souche NMRJ, et pour les souches AH 66R du Yoshida Sarcoma et AH 130 pour les rats de Wistar. Il est aussi efficace en administration intratumorale contre le Carcino Sarcoma solide de Walker.Les souches de leucémie L1210-S et L1210-R (résistant au mercaptopurine-6) smnt partiellement inhibées : 26-50% (L121.-S) et 51-75St (L1210-R) de prolongation de survies avec la dose bien tolérée de 0,125 mg par kg I.P. pour quatre applications en quatre jours consécutifs. Dans tous ces tests avec les tumeurs acides transplantables, les souris et rats ont été transplantés avec une quantité distincte de cellules ou de matières cellulaires en solution de Hanks, la dose de ce produit, assurant 100% de survie. Des groupes choisis au hasard composés de huit animaux par dose, pour les rats et de dix animaux par dose pour les souris sont traités pour la première fois quatre heures après la transplantation avec la dose de eomposé méthoxy-II5 suivi par l'application quotidienne de la même dose les trois jours suivants. Les solutions sont préparés dan-s le triéthylèneglycol avec 90% d'eau distillée. Une dose simple est de 0,5 ml pour 20g chez la souris et 1 ml pour 100g chez le rat, elle- est donc finalome t calculée par kg. L'activité du composé méthoxy-II dépend donc de la dose, mais une inhibition de 99% apparalt déjà avec um- concentration de 0 0625 mg/kg I.P. dans les tumeurs ascites comme l'Ehrlich Carcinoma et le Cr. Sarcoma 180 de la souris, et avec 0,1 mg/kg I.P et 0,05 mg/kg I.P dans le Yoshida Sarcoma AH 66 R et le Yoshida Sarcoma AH 130 du rat. Toutes les doses mentionnésappli quées dans les essais chiinio-thérapeutiques, sont bien tolérés par les animaux testés. Les composés désires conformes à l'invention peuvent être utilisés comme médicaments- sous forme de préparation pharmaceuti que qui contiennent l'antibiotique eu ses dérivés mélangés à un support pharmaceutique acceptable,. organique ou inorganique, soli de ou liquide pour l'administration orale ou parentérale. Les préparations pharmaceutiques peuvent avoir un aspect solide comme les cachets, les comprimés ou les dragées ou un aspect liquide comme les solutions, suspensions ou émulsions. Si on le désire, on peut ajouter dans les préparations précédentes des produits annexes comme par exemple des agents préservants, des stabili sants, des mouillants ou des émulsifiants, des sels pour faire varier la pression osmotique, et des agents tampons.Tandis que la posologie des composés varie d'un composé à l'autre et également suiv-.nt l'âge /l'état de chaque patient, on donne généralement des doses de 20 mg/kg pour traiter. des maladies contre lesquelles 1'antibiotique ou ses dérivés sont utilisés. Les exemples suivants ont pour but d'illustrer le procédé de l'invention, mais ne doivent pas limiter sa portée. EXEMPLE 1 La croissance végétative et les spores de la variété Streptomyces achromogenes tomnymycetiuis ATCC 21 3535 élevés sur des plans d'agar ont été transportés dans un ballon de 504 ml con tenant 100 ml du milieu suivant. Produits Pourcentage en poids Lactose Extrait de viande Extrait de levure 1 Polypeptone 1 Chlorure de sodium 0,25 Ce milieu est stérilisé et inoculé à partir de plans d'agar. Il est agité pendant trois jours à 300C. Dans un réservoir en acier de deux tonnes on place mille litres d'un bouillon de fermentation ayant la composition suivante. Produits Pourcentge en poids Lactose 3 Extrait de viande 1 Extrait de levure 1 Polypeptone 1 Chlorure de sodium 0,25 Monophosphate de potassium 1,5 Diphcsphate de sodium(12H20) 0,43 Le pH du milieu est ajusté à 6,1. Le bouillon de culture est stérilisé par chauffage sous pression à environ 120C pendant trente minutes. Le bouillon est refroidi et on ajoute d'une façon aseptique 1 ml environ de la culture inoculante précédente.L'organisme se développe dans le bouillon pendant 50 à 60 heures à une température de 300C. Pendant la période de croissanve, le bouillon est agité et on souffle au travers de l'air stérile à la vitesse environ 1 000 litres d'air stérile par minute sur un agitateur qui tourne à 350 tours par minute. Après que la fermentation soit terminée, le mycelium est éliminé par centrifugation. La partie surnageante est traitée par absorption d'une substance active sur environ 5 kg de charbon aa- tif et en le mélangeant pendant 30 minutes. Après filtration du mélange , le charbon actif est extrait par 100 litres d'un mélange de pyridine, d'ammoniaque, d'éthanol et d'eau danslerapport de lO: 3 :80 :l0,et en le chauffant à 45 C pendant trente minutes, suivie de la réertraction du charbon actif. L'extrait est concentré sous pression réduite à 50 C, et lyophilisé pour donner 1,6 kg de poudres. Les poudres sont lavées avec environ 10 litres de n-hexane dissous dans l'eau et on ajuste le pH de la solution entre 2 et 3.La solution acidifiée est extraite par quatre frac- tions de 5 litres de chloroforme. Le chloroforme extrait est lavé avec une solution aqueuse de bicarbonate de soude à 5%, séché sur du sulfate de sodium et concentré sous pression réduite à 500C en un résidu huileux3 que l'on traite par de l'éther de pétrole. La filtration de la solution d'éther de pétrole donne environ 20g de poudres que l'won dissout dans 100 ml d'acétate d'éthyle,que l'on absorbe sur une colonne d'acide silicique, et que l'on élue avec environ 8 litres d'acétate d'éthyle. L'éluat est concentré presque jusqu a sec et on ajoute ensuite 30 ml de méthanol.Le précipité se forme dans la solution de méthanol en le laissant à -20 C pendant deux jours, et on le filtre pour obtenir environ i 1,8 g de produit cristallisé brut que l'on dissout ensuite dans environ 30 ml de méthanol chaud; On laisse reposer la solution de méthanol pendant deux jours à -200C pour obtenir 1,2g de 1,2,3,10,11,11a-hexahydro-2-éthylidène-7,11-diméthoxy-8-hydroxy 5H-pyrrolo (2,1-c) (1,4) benzodiazépine-5-one, sous forme cristal lisée pure, fondant à 145-146,5 C (dé composé). Analyse calculée pour C16H20N204 C - H O N 63,16 6,58 21,05 9,21 Trouvé 62,95 6,66 21,25 9,05 Le spectre d'absorption ultraviolet de ce- composé dans le méthanol présente des pics principaux à 224 m/u( =36000) et 320 m/u ( # =3600) et des pics secondaires à 237 m ( =30000) et 260 m/u (C =9000), comme le montre la figure 1. Le spectre d'absorption infrarouge dans le suspensoide de Nujol présente des bandes à 3 340,1 640, 1 570, 1 510, 1 425 > 1 290, 1 265, 1 210, 1 190; 1 180g 1 070, 830, 800, ET 765 cm-1 comme le montre la figure II. On peut aussi extraire avec trois fractions de 30 litres de chloroforme, 100 litres de bouillon de fermentation produit comme dans l'exemple I précédent, que l'on a amené à pH=2 avec de l'acide chlorhydrique. Les couches de chloroforme sont ras semblées et concentrées jusqu'à 10 litres, et l'on ajoute en suite -10 litres de méthanol. La solution est ultérieurement con centrée jusqu'à 300 ml par lente addition de méthanol. La solu tion de méthanol est placée dans un réfrigérateur afin de donner un précipité que l'on filtre et lave avec de l'acétate d'éthyle. La poudre obtenue est dissoute dans du méthanol chaud et on la laisse reposer à froid afin de faire précipiter un produit cris tallisé que l'on ristallise dans le méthanol pour obtenir 2 g de 1,2,3,10,11,11a-hexahydro-2-éthylidène-7, 11-diméthoxy-8-hy droxy-5H-pyrrolo(2,1-c) (1,4) bonzodiazépine -s-oe. EXEMPLE 2 On extrait avec trois fractions de trente litres d'acétate d'éthyle, 100 litres du bouillon de fermentation produit dans Il'exemple 1, que l'on a amené à pH=2 avec de l'acide chlorhydrxue. L'extrait est concentré à see et dissous dans de petites quantités de chloroforme. La solution passe sur une colonne remplie de gel de silice. La colonne de gel de silice est éluée par un mélange de solvants1 l'acétate d'éthyle et le chloroforme dans le rapport de 3 à 1. L'éluat est concentré à sec et dissous dans le n-hexane pour former un précipité. Le précipité est filtré, dissous dans le chloroforme et chromatographié comme indiqué précédemment pour obtenir de la poudre. La poudre est dissoute dans l'méthanol et mise àrefroidir pour former un produit cristallisé que l'on recristallise dans l'éthanol pour obtenir des aiguilles jaunâtres de 1,2, 3,10,11,11a-hexahydro-2-éthylidène-7-méthoxy-8-hydroxy-11-éthoxy5H-pyrrolo(2,1-c) (1,4) benzodiazépine5-one, fondant à 134-136 C (décomposé). Analyse calculée pour C17H22N204 C H O N 64,13 6,97 20,10 8,80 Trouvé: 63,85 7s02 20,77 8,44 Il se produit des pics d'absorption ultraviolets dans l'é- thanol à 225 m/u ( IL. = 38 000) et 325 m/u ( # = 6 700), et des pics secondaires à 235 m/u (; = 35 000) et 262 m (# = 11 000) comme la figure 3. Il y a des bandes d'absorption ultraviolettes dans le Nujol à 3 350, 1 640g 1 600, 1 570, 1 513, 1425, 1 290, 1 265, 1 210 1 190, 1 160, 1 130, 1 070g 890, 835, 800, 765, 710 cm comme le montre la figure 4. EXEMPLE 3 Une solution de 1g de 1,2,3,10,11, 11a-hexahydro-7, 11-diméthoxy-8-hydroxy-5H-pyrrolo(2, 1-c) (1 ,4)benzodiazépin-5-one avec un extrait de chloroforme ou d'acétate d'éthyle est concentrée en une petite quantité, que l'on traite-avec du n-hexane pour former un précipité. Le précipité est filtré et lavé avec de l'éther, en le refroidissant pour obtenir une poudre jaunâtre d'environ 700 mg de 1,2,3, 11a-tétrahydro-2-éthylidène-7-méthoxy-8-hydroxy-5H-pyrrolo (2,1-c) (1,4) benzodiazépin-5-one, fondant à 108-112 C (décomposé). Analyse calculée pour C15H16N 03 C H O N 66,16 5,92 17,63 10,29 Trouvé : 66,04 6,02 17,55 10,41 EXEMPLE 4 A une solution de 100 mg de 1,2,3,10,11, 11a-hexahydro-2- éthylidène-8-hydroxy-7,11-diméthoxy-5H-pyrrolo (2,1-c) (1,4) benzodiazépine-5-one, dans 5 ml de pyridine, on ajoute, goutte à goutte 0,2 ml d'anhydride acétique tout en refroidissant la solution. On laisse reposer une nuit le mélange réactionnel à température ambiante, et on le verse dans un bain de glace pour obtenir un précipité que l'on filtre, lave dans l'eau, dissout dans 1 ml de méthanol et met à refroidir. Le précipité obtenu est recristallisé dans le méthanol pour donner des aiguilles jaunâtres dc 1,2, 3,10,11,11a-hexahydro-2-éthylidène-7,11-diméthoxy-8-acétyloxy 5H-pyrroio(2,1-c) (1S4) benzodiazépine-5-one, fondant à 132-133 C. Analyse calculée pour C18H22N205 C . H O N 62,41 6,40 23 > 10 8,09 Trouvée 62,30 6,53 23,24 7,95 EXEMPLE 5 A une solution de 300 mg de 1,2,3,10,11a-hexahydro-2-éthy- lidène-7,11-diméthoxy-8-hydroxy-5H-pyrrolo (2,1-c) (1,4) benzodia zépim-5-one,dans 5 ml de pyridine, on ajoute 400 mg d'anhydride p-bromobenzoique. On laisse reposer le mélange réactionnel une nuit pour donner un précipité que lton filtre, lave dans le chloroforme, lave avec une solution aqueuse de bicarbonate de soude à 5% et d'acide chlorhydrique 2N et concentre en une petite quan- tité.On l'adsorbe sur une colonne en gel de silice et l'on élue avec un mélange de chloroforme et d'acétate d'éthyle dans le rapport 8 à 1. L'éluat est concentré pour former du 1,2,3,10,11,11a- hexahydro-2-éthylidène-7,11-diméthoxy-8-p-bromobenzoyloxy-5H-pyrrolo-(2,1-c) (1,4) benzodiazepins-5-one que l'on traite avec de l'acétonitrile pour obtenir des aiguilles blanches de 1,2,3,1 la- tétrahydro-2-éthylidène-7-méthoxy-8-p-bromobenzoyloxy-5H-pyrrolo [2,1-c] [1,4] benzodiazépine-5-one, fondant à 204-205 C. Analyse calculée pour C22H19 N204Br C H O N Br 58,02 4,17 14,07 6,15 17,58 Trouvé : 58,12 4,25 14,00 6,50 17,58 EXEMPLE 6 A une solution de 100mg de 1,2,3,10,11,11a-hexahydro-2- éthylidène-7,11-diméthoxy-8-hydroxy-5H-pyrrolo (2,1-c) (1,4) benzodiazépine-5-one, on ajoute goutte à goutte une solution éthérée de diazométhane. On laisse reposer le mélange réactionnel une nuit à froids on le concentre à sec et on le dissout dans 10 ml 'ether, suivi par l'addition de 10 ml d'éthanol et on maintient la solution à 0 C pour obtenir des aiguilles jaunâtres de 1,2,3,10,11,11a-hexahydro-7,8,11-triméthixy-5H-pyrrolo (2,1-c) (1,4) benzodiazépine -5-one fondant à 88 C. Analyse calculée pour C17H22N204 C H O N 64,13 2,97 20,10 8,80 Trouvé : 64,33 7,05 20,24 8,60 EXEMPLE 7 A une solution de 0,54 g de 1,2,3,11a-tétrahydro-2-éthylidène-7-méthoxy-8-hydroxy-5H-pyrrolo (2,1-c) (1,4) benzodiazépine5-pne, dans 5 ml de dichlorométhane, on ajoute 0,25g d' -toluène- thiol. Après 5 heures d'agitation, on laisse reposer le mélange réactionnel pendant 4 jours à température ambiante. La distillation de dichlercméthane sous pression réduite et à température inférieure à 50 C, donne une poudre jaune qui est purifiée par chromatographie on cauche mince afin d'obtenir 0 > 14 g de 1,2,3, 10, 11, 11a-hexahydro-2-éthylidène-7-méthoxy-8-hydroxy-11-benzylthio 5H-pyrrolo(2,1-c) (1,4)benzodiazépine-5-one.Elle est ensuite recristallisée dans du benzène en un produit cristallisé pur, fondant à 143-1450C.(décomposé). Analyse calculée pour C22H24N203S : C H N 66,72 6,11 7,07 Trouvé 66,70 6,00 6,52 EXEMPLE 8 A une solution de 0,27 g de 1,2,3,11a-tétrahydro-2-éthyli- dène-7-méthoxy-8-hydroxy-5H-pyrrolo (2,1-c) (1,4) benzodiazépine-5 one dans 5 ml de dichlorométhane, on ajoute lg5 ml d'éthanethiol. On laisse reposer la solution pendant 6 jours, et on concentre le mélange réactionnel sous pression réduite, ce qui laisse un résidu que l'on dissout dans l'eau. On ajoute du dichiorométhane pour former une couche de aichlorométhane que l'on sépare, lave avec de l'eau et sèche sur du sulfate de magnésium.La distillation d'un solvant de la solution donne 0,2g de 1,2,3,10,11,11a-hexahy- dro-2-éthylidène-7-méthoxy-8-hydroxy-11-éthylthio-5H-pyrrolo (2,1 -c) (1,4) benzodiazépinc-50one, eristallisé jaune, fondant à 70 740C (décomposé) Analyse calculée pour C17H22N20DS N 8,65 Trouvé : 8,15 EXEMPLE 9 A une solution de O > 54g de 1,2,3,11a-tétrahydro-2-éthylidè- ne-7- méthoxy-8-hydroxy-5H-pyrrolo (2,1-c) (1,4) benzodiazépine 5-one, dans 5 cm de dichlorométhane, on ajoute une solution de 1,2 g de diméthylamine. Après 5 heures d'agitation, on laisse reposer le mélange réactionnel pendant 4 jours. La couche de di chlorométhane est séparée, lavée avec de l'eau et séchée sur du sulfate de magnésium.On élimine ensuite un solvant sous pression réduite pour laisser u-ne poudre brune faiblement jaunâtre de ,2, 3,10,11,11a-hexahydro-2-éthylidène-7-méthoxy-8-hydroxy-11-dimé thylamino-5H-pyrrolo (2,1-c) (1,4) benzodiazépine-5-one (0,3g). Elle est ensuite purifiée par chromatographie on couche mince sur gel de silice pour obtenir un produit cristallisé, pur brun jau nâtre, fondant à 65-680C(décomposé) EXEMPLE 10 A une solution de 0,27 g de 1,2,3,11a-téttahydro-2-éthyli dène-7-méthoxy-8-hydroxy-5H-pyrrolo (2,1-c) (1,4) benzodiazépine 5-one dans 5 ml de dichlorométhane, on a ajouté 1,5 ml de métha nol et le mélange a été agité pendant 5 jours. Le mélange réac tionnel a été concentré sous pression réduite et refroidi dans un réfrigérateur pour former le précipité qui après filtration avait l'aspect d'une substance cristalline et était de la 1,2,3,10,11, 11a-hexahydro-2-éthylidène-7,11-diméthoxy-8-hydroxy-5H-pyrrolo (2,1-c) (1,4) benzodiazépine-5-one qui fond à 145-146,50C en se dé composant. EXEMPLE ll Une formule injectable sous forme d'ampoule a la composi tion suivante 1,2,3,10,11, 11a-hexahydro-2-éthylidène-7-11-diméthoxy 8-hydroxy-5H-pyrrolo (2,1-c) (1,4)-benzodiazépine-5-one..... 0,02 g Ethanol................................................. 10,00 ml Eau distillée 0 100,O0ml Hydroxyde de sodium....................................q.s pH ....................................................7,5 REVENDICATIONS 1 - Procédé de préparation d'un compose de formule dans laquelle R1 est l'hydrogène, un groupe alkyl inférieur, lzn groupe alkylcarbonyl inférieur, un groupe aryl alkylcarbonyle inférieur ou arylcarbonyleet Y est -N=CH- ou -NH-CHR-, caractérisé en ce que R est un groupe oxyalkyl inférieur, un groupe aryl oxyalkyl inférieur, un groupe thioalkyl inférieur, un groupe aryl thioalkyl inférieur ou un groupe diaminoalkyl inférieur, qui com porte (I) la culture d'une variété de Streptomyces achromogenes tateyamensis ATCC 21 353 ou de ses espèces mutantes très voisines dans un milieu nutritif dans des conditions aérobies immergées, et la production d'une substance antibiotique dans ledit milieu jusqu'à ce que l'on ait une quantité importante; ou (2) le traitement de l'antibiotique, isolé ou non du bouillon de culture avec de l'alcool pour obtenir un composé de formule dans laquelle m est un groupe oxyalkyl inférieur ou un groupe aryl oxyalkyl inférieur; ou (3) la transformation d'un composé de formule (I) dans un solvant non alcoolique en un composé de formule ou (4) l'acylatlon d'un composé des formules (I) et (II) avec un agent acylant pour obt@nir un composé de formule dans laquelle R1' est un groupe alkyl infériour un carbonyl aklyl inférieur aryle ou un carbonyl aryl et Y à la même signification que ci-dessus; (ou) (5)l'alkylation d'un composé de formules: (I) et (II) par un agent alkylant pour obtenir un composé de formule : dans laquelle R"1 est un groupe alkyl inférieur et Y est - N = CH - ou - NH-CHR- dans lesquels R a la même significa tion que ci-dessus. (6) le transformation d'un composé de formule (VI) dans laquel- le Y est -NH-CHR- - dans lequel R à la même signification que ci-dessus, dans un solvant non alcoolique en un composé de formule : dans laquelle R''1 2 la signification précédente; et (7) la réaction d'unoemposé de formule (II) avec un alcool, un thioalcool ou une dialkylamine pour obtenir un composé de formule (I) dans laquelle R est un groupe oxyalkyl inférieur, un groupe aryl oxyalkyl inférieur, un groupe thioalkyl inférieur, un groupe aryl thioalkyl inférieur ou un groupe dialkylamino inférieur. 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on prépare un composé de formule (V). 3 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on produit une substance antibiotique par un procédé qui comporte la culture de la variété Streptomyces achromogenes tateyamensis ATCC 21 353 ou ses espèces mutantes très voisines dans un milieu nutritif dans des conditions aérobies immergées, et la-production de ladite substance antibiotique dans ledit milieu Jusqu'à ce qu'on er. ait une quantité importante. 4 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'un composé de formule dans laquelle R est un groupe oxyalkyl inférieur, est préparé par des procédés qui comprennent la culture de la variété de Streptomyces achromogenes tateyamensis ATCC 21 353 ou de ses es- pèces mutantes très voisines dans un milieu nutritif dans des oonditions aérobies immergées la production de l'antibiotique dans le bouillon de culture, l'extraction dudit antibiotique à partir du bouillon de culture et le traitement dudit antibiotique par un alcool. 5 - Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'organisme est la variété de Streptomyces achromogenes tateyamensis ATCC 21 353. 6 - Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'on inclut l'opération d'extraction du bouillon de culture à un pH d'environ 2 à 3 par un solvant polaire organique miscible à l'eau. 7 - Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que le milieu de culture est maintenu à une température d'environ 250C à 35 C, et la croissance de l'organisme se déroule pendant une période d'environ 50 à 60 heures. 8 - Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'alcool est le méthanol ou l'éthanol. 9 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'un composé de formule (II) est obtenu par traitement d'un composé de formule (Ij, dans laquelle R est un groupe alkyl inférieur, dans un solvant organique non alcoolique. 10 - Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'un solvant organique non alcoolique est le- n-hexane. 11 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on inclt l'opération d'alkylation d'un composé de formule dans dans laquelle R est un groupe oxyalkyl inférieur, par un agent alkylant. 12 - Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce qu'un agent alkylant est le diazométhane. 13 - Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'on indu l'opération d'acylation d'un composé de formule (I ), dans laquelle R est un groupe oxyalkyl inférieur, par un agent ayant. 14 - Procédé selon la revendication 1), caractérisé én ce qu'un agent acylant est l'anhydride acétique ou l'anhydride pbromobenzoïque. 15 - Procédé selon la revendication 1g caractérisé en ce qu'on Inclut l'étape de réaction dîun composé de formule ( avec un thioalcool ou une dialkylamine. 16 - Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce qu'un thioalcool est le méthanethiol ou l'S -toluènethiol. 17 - Procédé selon la revendication 15 caractérisé en ce qu une dialkylamine est la diméthylamine. 18 Procédé selnn la revendication 1, caractérisé en ce qu'on inclue l'opération-de transformation d'un composé de fbrmule (IV), dans laquelle R"1 est un groupe arylalkylcarbonyl inférieur et R est un groupe oxyalkyl inférieur, dans un solvant organique non alcoolique, en un composé de formule (V). 19 - Procédé selon la revendication 18, caractérisé en ce mouton utilise l'acétonitrile comme solvant organique non al coolique 20 - Composé de formule dans laquelle R1 est l'hydrogène, un groupe alkyl inférieur, un groupe alkylcarbonyl inférieur, un groupe aryl alkylcarbonyl inférieur ou aryl carbonyl et Y est -N=CH- ou -NH-CHR-;caractérisé en ce que R est un groupe oxyalkyl inférieur, un groupe aryl oxyalkyl inférieur, thioalkyl inférieur, aryl thioalkyl inférieur ou diaminoalkyl inférieur. 21 - Composé selon la revendication 20 caractérisé en ce que R1 est lthydrogène et Y est -N=CH-. 22 - Composé selon la revendication 20, caractérisé en ce que R1 est le groupe oxy p-bromobenzyl et Y est -N=CH. 23 - Composé selon la revendication 20 caractérisé en ce que R1 est 1thydrogène et Y est -NH-CHR-, où R est le groupe oxyméthyle. 24 - Composé selon la revendication 20 caractérisé en ce que R1 est l'hydrogène et Y est -NH-CHR-, où R est le groupe oxyéthyle. 25 - Composé selon la revendication 20, caractérisé en ce que R1 est le groupe méthylcarbonyl et Y est -NH-CHR-, où R est le groupe oxyméthylc. 26 - Composé selon la revendication 20, caractérisé en ce que R1 est le groupe oxy p-bromobenzyl et Y est -NH-CHR-, où R est le groupe oxyméthyle. 27 - Composé selon la revendication 20, caractérisé en ce que R1 est le groupe méthyl et Y est -NH-CHR-, où R est le groupe oxyméthyle. 28 - Composé selon la revendication 20,caractérisé en ce que R est l'hydrogène et Y est -NH-CHR-,où R est le groupe thio benzoyle. 29 - Composé selon la revendication 20 caractérisé en ce que R1 est l'hydrogène et Y est -NH-CHR-, où R est le groupe thiobenzuyle. 30 - Composé selon la revendication 20, caractérisé en ce que R1 est l'hydrogène et Y est -NH-CHR-où R est le groupe diaminométhyle.