Brevet FR3075817A1 (20190628)

REVENDICATIONS1. Puce micro-fluidique (1) comportant : - un premier puits (2a) destiné à recevoir un échantillon biologique, - un premier canal d'entrée (4a) destiné à alimenter le premier puits (2a) avec un premier liquide, le premier canal d'entrée (4a) se terminant par une première entrée débouchant dans le premier puits (2a), - un premier canal de sortie (5a) ayant une première extrémité formée par une première sortie du premier puits (2a) pour évacuer le premier liquide, - une première chambre d'analyse (3a) possédant une première entrée d'analyse connectée au premier puits (2a) au moyen du premier canal de sortie (5a) et une sortie d'évacuation débouchant dans la première chambre d'analyse (3a) et distincte de la première entrée d'analyse, caractérisée en ce que la première entrée et la première sortie du premier puits (2a) définissent un premier axe différent et non parallèle à un deuxième axe défini par la première entrée d'analyse et la sortie d'évacuation de la chambre d'analyse (3a).\n<CLM>\1\tPuce micro-fluidique selon la revendication 1 dans laquelle le premier puits (2a) comporte des parois latérales et au moins une paroi de fond ou de sommet définies dans un substrat (A) et dans laquelle le substrat (A) définit au moins le fond de la première chambre d'analyse (3a).\n<CLM>\1\tPuce micro-fluidique (1) selon la revendication précédente dans laquelle le premier puits (2) est formé par une cavité débouchant sur une face du substrat (A).\n<CLM>\1\tPuce micro-fluidique (1) selon la revendication précédente, dans laquelle le premier puits (2a) est fermé au moyen d'une couche de couverture (8) et dans laquelle la première chambre d'analyse (3a) est fermée par une paroi d'analyse (6) comportant des éléments de captation (6a) configurés pour capturer au moins un biomarqueur du liquide circulant dans la première chambre d'analyse 43 (3a), la paroi d'analyse (6) étant séparée du substrat (A) définissant le premier puits (2a) par la couche de couverture (8).\n<CLM>\1\tPuce micro-fluidique (1) selon la revendication 4, dans laquelle les parois 5 latérales de la première chambre d'analyse (3a) sont partiellement formées dans le substrat (A), la première chambre d'analyse (3a) étant formée par une première cavité débouchant sur la face du substrat (A), la couche de couverture (8) définissant un anneau entourant la première cavité et formant partiellement les parois latérales de la première chambre d'analyse (3a). 10\n<CLM>\1\tPuce micro-fluidique (1) selon la revendication 4, dans laquelle la couche de couverture (8) définit au moins un orifice traversant formant un anneau entourant la sortie du premier canal de sortie (5a), l'anneau défini dans la couche de couverture (8) formant complètement ou partiellement les parois 15 latérales de la première chambre d'analyse (3a), la face du substrat (A) formant une paroi de fond de la première chambre d'analyse (3a).\n<CLM>\1\tPuce micro-fluidique (1) selon l'une quelconque des revendications 4 à 6 dans laquelle la couche de couverture (8) est montée de manière amovible. 20\n<CLM>\1\tPuce micro-fluidique (1) selon l'une des revendications 4 à 7 dans laquelle les parois latérales du premier canal de sortie (5a) sont formées par une rainure dans la face du substrat (A), la couche de couverture (8) refermant le premier puits (2a) et le premier canal de sortie (5a) jusqu'à la première chambre 25 d'analyse (3a).\n<CLM>\1\tPuce micro-fluidique (1) selon l'une des revendications 4 à 7 dans laquelle le premier canal de sortie (5a) est défini par une rainure formée dans la couche de couverture (8) qui referme le premier puits (2a). 30\n<CLM>\1\tPuce micro-fluidique (1) selon l'une quelconques des revendications 4 à 9 comportant un canal additionnel (4b, 5b) connecté au premier canal de sortie 44 (5a) entre la sortie du premier puits (2a) et la première chambre d'analyse (3a), le canal additionnel (4b, 5b) étant avantageusement formé par une rainure additionnelle dans la face du substrat (A) et/ou dans la couche de couverture (8). 5\n<CLM>\1\tPuce micro-fluidique (1) selon l'une quelconque des revendications précédentes dans laquelle la première chambre d'analyse (3a) comporte des première et deuxième entrées d'analyse définissant respectivement des première et deuxième directions d'introduction de liquide dans la première 10 chambre d'analyse (3a), les première et deuxième entrées d'analyse étant agencées de sorte que les première et deuxième directions d'introduction de liquide soient sécantes dans la première chambre d'analyse (3a).\n<CLM>\1\tPuce micro-fluidique (1) selon l'une quelconque des revendications 15 précédentes comportant une évacuation (7) reliée à la sortie d'évacuation de la première chambre d'analyse (3a) et des premier et deuxième septums configurés pour fermer de manière étanche le premier canal d'entrée (4a) et l'évacuation (7). 20\n<CLM>\1\tPuce micro-fluidique (1) selon l'une quelconque des revendications 4 à 12 dans laquelle la distance séparant la paroi d'analyse (6) et le fond de la première chambre d'analyse (3a) est inférieure à 2 mm.\n<CLM>\1\tLaboratoire (20) sur puce micro-fluidique comportant : 25 - une puce micro-fluidique (1) selon l'une quelconque des revendications 4 à 13, la puce micro-fluidique comportant une couche de couverture (8) refermant le premier puits (2a) et une paroi d'analyse (6) refermant la première chambre d'analyse (3a) de manière amovible, la paroi d'analyse (6) étant munie d'éléments de captation (6a) configurés pour capturer au 30 moins un biomarqueur du liquide circulant dans la première chambre d'analyse (3a) et issu du premier puits (2a) ; 45 - un générateur de flux connecté au premier canal d'entrée (4a) de la puce micro-fluidique (1), le générateur de flux étant configuré pour émettre au moins un premier flux de liquide destiné à traverser au moins le premier puits (2a) rempli par un échantillon cellulaire et la chambre d'analyse (3), 5 le premier flux de liquide ayant un débit compris entre 0,1pL/min et 2 mL/min de sorte que le flux de liquide qui s'écoule dans la première chambre d'analyse (3a) soit laminaire dans au moins une moitié de la première chambre d'analyse (3a) comportant la sortie d'évacuation. 10\n<CLM>\1\tLaboratoire (20) sur puce micro-fluidique selon la revendication précédente dans lequel le générateur de flux est connecté à un canal additionnel (4b) de la puce micro-fluidique et dans lequel le générateur de flux est configuré pour : - appliquer un premier flux sur le premier canal d'entrée (4a) de manière à alimenter le premier puits (2a) pendant une première période, le premier 15 flux comportant un premier liquide comportant au moins des nutriments, - appliquer un flux additionnel sur le canal additionnel (4b) comportant des réactifs configurés pour réagir avec des biomarqueurs caractéristiques d'une réponse cellulaire de l'échantillon biologique contenu dans le premier puits (2a), les éléments de captation (6a) étant configurés pour 20 capter et/ou réagir avec les biomarqueurs.\n<CLM>\1\tProcédé de réalisation d'une puce micro-fluidique comportant les étapes successives suivantes : - fournir une puce micro-fluidique (1) selon la revendication 3, 25 - refermer le premier puits (2a) au moyen d'une couche de couverture (8) définissant un trou traversant qui forme au moins partiellement les parois latérales de la première chambre d'analyse (3a), - refermer la première chambre d'analyse (3a) au moyen d'une paroi d'analyse (6) comportant des éléments de captation (6a) configurés pour 30 capturer des biomarqueurs du liquide circulant dans la première chambre d'analyse (3a).