Brevet FR3071315A1 (20190322)

REVENDICATIONS1. Procédé de quantification d'un extrait de plante contenant au moins une anthocyane contenu dans une matrice végétale complexe, ledit extrait de plante étant présent dans la matrice végétale complexe à des doses comprises entre 1 et 200 mg/kg et contenant entre 0,5% et 5% d'anthocyanes totales, ledit procédé comprenant les étapes : (1) d'extraction d'un échantillon de la matrice végétale complexe, ladite étape d'extraction comprenant les étapes a. placer un échantillon de la matrice végétale complexe à traiter dans au moins un solvant apolaire, b. procéder à au moins une extraction dudit échantillon placé dans au moins un solvant apolaire sous atmosphère inerte, de préférence sous azote, c. placer la matrice végétale non extraite à l'étape b. dans au moins un solvant constitué d'un alcool, d. procéder à au moins une extraction de l'extrait placé dans au moins un solvant constitué d'un alcool sous atmosphère inerte, de préférence sous azote, e. récupérer l'extrait liquide obtenu à l'étape d. comprenant au moins un solvant et au moins une anthocyane, f. évaporer la totalité du solvant pour obtenir un extrait séché, g. solubiliser l'extrait séché dans un volume connu de solvant polaire acidifié, ledit solvant polaire étant choisi entre l'eau, un alcool et un mélange d'alcool et d'eau, h. centrifuger ledit extrait solubilisé, i. collecter le surnageant ; et (Il) de quantification d'au moins une anthocyane dans ledit surnageant.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la matrice végétale complexe est un aliment pour bétail contenant en tant qu'additif un extrait de plante contenant au moins une anthocyane.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que - le solvant apolaire est choisi parmi le chloroforme, le dichlorométhane, l'hexane et l'acétate d'éthyle; - l'alcool est choisi parmi l'éthanol, le méthanol et le butanol et est additionné d'un acide ; - l'eau est choisie parmi l'eau osmosée, distillée ou ultrafiltrée.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'acide contenu dans le solvant polaire acidifié - est choisi dans le groupe comprenant l'acide formique, l'acide acétique et l'acide trifluoroacétique ; - représente entre 0, 1% et 5% du solvant polaire acidifié. 14\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que les solvants d'extraction polaire et apolaire sont portés - à une température supérieure à la température ambiante, de préférence entre 30°C et 200°C, de manière tout à fait préférée entre 30°C et 100°C ; et - à une pression supérieure à la pression atmosphérique, de préférence entre 5 et 150 bars, de manière tout à fait préférée entre 50 et 100 bars.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que la durée de chaque extraction est comprise entre 1 et 60 minutes, de préférence entre 1 et 15 minutes.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce l'étape (Il) de quantification comprend les étapes j. préparer des aliquotes dudit surnageant additionnées d'une gamme de quantités connues d'au moins une anthocyane ; et k. quantifier au moins une anthocyane en LA-PLC-MS/MS.