Brevet FR3067928A1 (20181228)

REVENDICATIONS1. Procédé de conservation d'un échantillon d'un ensemble de bactéries aérobies et anaérobies autres que des bactéries lactiques, 5 notamment des bactéries du microbiote intestinal, comprenant les étapes successives suivantes dans lesquelles : a) on prépare un dit échantillon d'un ensemble de dites bactéries par dilution dans un milieu aqueux de conservation comprenant une combinaison d'agents protecteurs comprenant (a1) au moins un 10 composé antioxydant et (a2) au moins un sucre, et (a3) des protéines de lait, et b) on réalise une congélation dudit échantillon récupéré à l'étape a) dans de l'azote liquide à environ -196°C pendant pas plus de 1 minute, de préférence pendant 30 à 50 secondes, et 15 c) on réalise une lyophilisation du dit échantillon ainsi congelé pour obtenir un lyophilisat.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'à l'étape a), on prépare un dit échantillon qui est un échantillon clinique de selles par dilution desdites selles dans un milieu aqueux de conservation, et 20 on filtre la dispersion obtenue à pour en retirer au moins les débris de tailles supérieures à 2mm.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'à l'étape a), on dilue ledit échantillon dans un milieu aqueux de conservation comprenant au moins la combinaison d'agents protecteurs 25 comprenant (al) au moins un composé antioxydant et (a2) au moins deux sucres différents, et (a3) des protéines de lait.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les protéines de lait sont sous forme de lait entier, de préférence à 30 une concentration pondérale dans le dit milieu de conservation d'au moins 5%, de préférence 10%.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 3 ou 4, caractérisé en ce que les dits agents protecteurs comprennent une combinaison de composés antioxydants choisi parmi l'acide ascorbique, l'acide urique et le glutathion.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que les dits agents protecteurs comprennent une combinaison de composés antioxydants consistant dans de l'acide ascorbique à une concentration de lg/L, de l'acide urique à une concentration de 0,4g/L et du glutathion à une concentration de 0,1g/L.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les dits agents protecteurs comprennent au moins un sucre choisi parmi le saccharose et le tréhalose. 8 Procédé selon l'une des revendications 1 à 7 caractérisé en ce que les dits agents protecteurs comprennent au moins un dit sucre à une concentration pondérale dans le dit milieu de conservation d'au moins 5%, de préférence 10%.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce 20 que le dit milieu de conservation est un milieu tampon à PH de 7 à 7.5 comprenant dans de l'eau les sels KCL, CaC12, MgC12,KH2PO4, Na2HPO4, NaCL et KOH ainsi qu'au moins un dit agent protecteur.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que le dit milieu de conservation comprend : 25 (al) une combinaison de composés antioxydants consistant dans de l'acide ascorbique à une concentration de 1g/L, de l'acide urique à une concentration de 0,4g/L et du glutathion à une concentration de 0,1g/L, et 31 (a2) du saccharose à une concentration pondérale dans le dit milieu de conservation de 5%, et du tréhalose à une concentration pondérale dans le dit milieu de conservation de10%, et (a3) des protéines de lait à une concentration pondérale dans le 5 dit milieu de conservation de 10%.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que le dit échantillon comprend au moins les bactéries aérobies et bactéries anaérobies suivantes : Staphylococcus aureus, Enterobacter aerogenes, Escheri chia cou, Klebsiella oxytoca, Streptococcus 10 agalactiae, Serra tia marcescens, Proteus mirabilis, Staphylococcus epidermidis, Bacillus circulans, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus hominis et Achetobacter baumanll.\n<CLM>\1\tProcédé l'une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que le dit échantillon comprend au moins les bactéries anaérobies strictes 15 suivantes : Bacteroides fragilis, Bactero ides nord/i, Bacteroides thetaiotaomicron, Clostidium butyricum, Clostridium massilioamazoniensis, Clostridium beijerinckii, Clostridium irregular Finegoldia magna, Propionibacterium acnes, Propionibacterium avidum, Haemophilus influenzae.\n<CLM>\1\tProcédé l'une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que à l'étape c) l'échantillon congelé est déposé dans un lyophilisateur pendant au moins 12h à une température d'au moins 0°C et à une pression de vide poussé de pas plus de lmbar.\n<CLM>\1\tLyophilisat d'échantillon d'un ensemble de bactéries aérobies 25 et anaérobies du microbiote intestinal autres que des bactéries lactiques, obtenu par un procédé selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisé en ce qu'il comprend : - au moins un agent protecteur consistant dans au moins la combinaison d'agents protecteurs consistant dans (al) au moins un 32 composé antioxydant et (a2) au moins un sucre, et (a3) des protéines de lait, et - une quantité de bactéries vivantes, de préférence au nombre de : 5 - au moins 108 CFU/mL bactéries de chacune des catégories des bactéries aérobies et respectivement bactéries anaérobies mises en culture après 48h de conservation à 4°C, et - au moins 108 CFU/mL bactéries de chacune des catégories des bactéries aérobies et respectivement bactéries anaérobies mise en 10 culture après 6 semaines de conservation à 4°C.\n<CLM>\1\tLyophilisat selon la revendication 14 caractérisé en ce que le dit échantillon est un échantillon clinique de selles humaines.