Brevet FR3075798A1 (20190628)

REVENDICATIONS1. Procédé d'extraction de molécules hydrosolubles intracellulaires essentiellement non-destructif de microalgues unicellulaires, ledit procédé comprenant : - une étape de fourniture de microalgues unicellulaires, lesdites microalgues étant dépourvues de paroi cellulaire secondaire ou ayant une paroi cellulaire secondaire d'épaisseur inférieure ou égale à 0.5 ,i,m ; - une étape de placement desdites microalgues dans un milieu de faible conductivité électrolytique pour former une suspension de microalgues, la conductivité électrolytique totale de ladite suspension de microalgues ayant une valeur allant de 15 et 40 ,I,S.crn-1 à 25°C; - une étape d'application d'un champ électrique pulsé sur ladite suspension de microalgues afin d'obtenir une suspension de microalgues temporairement perméabilisées, ledit champ électrique pulsé ayant une force électrique allant de 0,5 à 1 kV.cm-1; et, - une étape d'incubation de ladite suspension de microalgues temporairement perméabilisées, afin d'obtenir des microalgues appauvries en molécules hydrosolubles intracellulaire en suspension dans un milieu enrichi en molécules hydrosolubles extraites, ladite étape d'incubation permettant la diffusion de molécules hydrosolubles intracellulaires desdites microalgues au moins temporairement perméabilisées dans le milieu de faible conductivité électrolytique.\n<CLM>\1\tProcédé d'extraction selon la revendication 1, dans lequel lesdites microalgues sont des microalgues unicellulaires de l'ordre des Chlamydomonadales, préférentiellement de la famille Haematococcaceae et de manière davantage préférée du genre Haematococcus.\n<CLM>\1\tProcédé d'extraction selon la revendication 2, dans lequel lesdites microalgues étant des microalgues unicellulaires de l'espèce Haematococcus pluvialis, telle la souche déposée au Culture Collection of Algae and Protozoa, Scottish Marine Institute, au Royaume-Uni et ayant comme numéro d'ordre : CCAP 34/19 Haematococcus pluvialis. 30\n<CLM>\1\tProcédé d'extraction selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la densité desdites microalgues dans ladite suspension de microalgues est inférieure ou 32 égale à 106 cellules/mL de milieu de faible conductivité électrolytique ; et, de préférence de l'ordre de 105 cellules/mL de milieu de faible conductivité électrolytique.\n<CLM>\1\tProcédé d'extraction selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel 5 ledit champ électrique pulsé a des impulsions de durée comprise entre 14,us et 10 ms ; de préférence a des impulsions de durée comprise entre 0,1 ms et 5 ms ; et, de manière très préférentielle a des impulsions de durée comprise entre 1 ms et 3 ms.\n<CLM>\1\tProcédé d'extraction selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel 10 ladite étape d'incubation a une durée allant de 3 à 45 minutes; de préférence a une durée allant de 5 à 10 minutes.\n<CLM>\1\tProcédé d'extraction selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel lesdites molécules hydrosolubles sont des protéines. 15\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 7, dans lequel lesdites protéines ont un poids moléculaire allant jusqu'à 120 kDa et préférentiellement un poids moléculaire allant jusqu'à 150 kDa sur gel d'électrophorèse et allant jusqu'à 165 kDa par spectrométrie de masse. 20\n<CLM>\1\tProcédé d'extraction selon l'une 7 ou 8, dans lequel au moins 50% desdites protéines extraites est issu des chloroplastes desdites microalgues.\n<CLM>\1\tProcédé d'extraction selon l'une quelconque des revendications précédentes, ledit procédé comprenant une étape de séparation des microalgues appauvries en molécules 25 hydrosolubles extraites et du milieu enrichi en lesdites molécules hydrosolubles extraites.\n<CLM>\1\tProcédé d'extraction selon la revendication 10, ledit procédé comprenant une étape de récupération/régénération desdites microalgues appauvries en molécules hydrosolubles extraites après ladite étape de séparation, ladite étape de récupération/régénération consistant en une incubation desdites microalgues appauvries en molécules hydrosolubles dans un milieu nutritif adapté à la culture desdites microalgues.