Brevet FR3078977A1 (20190920)

REVENDICATIONS1. Procédé d'extraction d'acides nucléiques à partir d'un échantillon comprenant des protéines et/ou polysaccharides, ledit procédé comprenant une étape de capture des acides nucléiques par mise en contact de l'échantillon avec un support solide approprié, par exemple un support solide à base de silice, caractérisé en ce que, avant l'étape de capture, ledit procédé comprend une étape de traitement de l'échantillon avec au moins un réactif pour le masquage des fonctions amines et/ou acides carboxyliques des protéines et/ou polysaccharides de l'échantillon.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le réactif de masquage des fonctions amines est choisi parmi des agents acylants ou alkylants.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le réactif de masquage est choisi parmi les agents acylants de formule (I) suivante : 0 R)LLG (I) où R est un groupe organyle, organyloxy, ou organylamino LG est un groupe partant choisi dans le groupe constitué par les halogènes, les groupes organyloxy et organylamino.4.\n<CLM>\1\t6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le réactif de masquage est un agent acylant choisi dans le groupe constitué par les esters activés, les halogénures d'acide, les chloroformiates, les anhydrides, les esters de carbonate activés, et le carbonyle diimidazole. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le réactif de masquage est un anhydride choisi parmi l'anhydride acétique, l'anhydride propanoïque, l'anhydride isobutyrique, l'anhydride butanoïque ou l'anhydride benzoïque. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le réactif de masquage est un agent alkylant choisi dans le groupe constitué par les halogénures d'alkyles, les composés diazoïques, et les aldéhydes. 33\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le réactif de masquage est choisi parmi les amines, les alcools et les thiols pour le masquage des fonctions acides carboxylique des protéines, en combinaison avec un agent de couplage. 5\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'agent de couplage peut être choisi parmi les carbodiimides, par exemple l'1-éthyle-3-(3- diméthylaminopropyle)carbodiimide (EDC), le di-iso-propylcarbodiimide (DIC) et le dicyclohexylcarbodiimide (DCC). 10\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes pour l'extraction d'acides nucléiques d'un échantillon biologique et comprenant les étapes suivantes : a. la lyse des cellules, par exemple par mise en contact de l'échantillon biologique avec un tampon de lyse, b. le traitement du lysat avec le réactif de masquage des fonctions amines et/ou 15 acides carboxyliques des protéines et/ou polysaccharides de l'échantillon, c. la capture des acides nucléiques par mise en contact du lysat traité avec un support solide approprié, par exemple un support solide à base de silice, d. le cas échéant, le lavage du support avec un tampon de lavage et, e. le cas échéant, l'élution des acides nucléiques. 20\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce que le support solide approprié est constitué de particules de silice, notamment des particules de silice magnétique. 25\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 9 ou 10, caractérisé en ce que l'échantillon biologique est un échantillon de sang, de plasma ou de sérum.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 9 à 11, caractérisé en ce que l'étape de capture est effectuée en présence d'agents chaotropiques. 30\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 9 à 12, caractérisé en ce qu'il ne comprend pas l'utilisation de protéases pour l'élimination des protéines.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 9 à 13, caractérisé en ce qu'aucun solvant organique n'est ajouté avant ou pendant l'étape de capture des acides nucléiques. 34\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 9 à 14, caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire de détection d'acides nucléiques d'intérêt, notamment par amplification des acides nucléiques extraits. 5\n<CLM>\1\tKit d'extraction d'acides nucléiques comprenant au moins i. un réactif de masquage des fonctions amines et/ou acides carboxyliques des protéines et/ou polysaccharides tel que défini à l'une des revendications 1 à 8, 10 ii. un support solide approprié pour l'extraction des acides nucléiques, par exemple un support solide à base de silice, iii. le cas échéant, un catalyseur de la réaction de masquage des fonctions amines et/ou acides carboxyliques à l'aide du réactif, iv. le cas échéant, un agent de couplage. 15\n<CLM>\1\tKit d'extraction d'acides nucléiques selon la revendication 16, caractérisé en ce que le réactif de masquage est l'anhydride acétique ou sa forme sèche, l'acétate de NHydroxy succinimide, 20\n<CLM>\1\tUtilisation d'un réactif de masquage des fonctions amines et/ou acides carboxyliques des protéines et/ou polysaccharides tel que défini à l'une des revendications 1 à 8, pour l'inhibition de nucléase.\n<CLM>\1\tUtilisation selon la revendication 18, caractérisée en ce que la nucléase est 25 comprise dans un lysat obtenu par lyse d'un échantillon biologique, par exemple, en vue d'une amplification et/ou détection d'un acide nucléique dans l'échantillon.