Brevet FR3075820A1 (20190628)

REVENDICATIONS1. Molécule d'ADN double-brin comprenant une première molécule d'ADN double-brin (1) reliée à une deuxième molécule d'ADN double-brin (2) par au moins une liaison covalente qui n'est pas une liaison phosphodiester, avantageusement par une longe, ladite longe étant avantageusement une molécule d'ADN double-brin.\n<CLM>\1\tMolécule d'ADN double-brin selon la revendication 1, dans laquelle ladite longe est attachée par au moins une liaison covalente qui n'est pas une liaison phosphodiester à la première molécule d'ADN double-brin (1) et par au moins une liaison covalente qui n'est pas une liaison phosphodiester à la deuxième molécule d'ADN double-brin (2).\n<CLM>\1\tMolécule d'ADN double-brin selon la revendication 1 ou_2, dans laquelle ladite longe est attachée à la première molécule d'ADN double-brin (1) par une première liaison covalente entre la première extrémité de ladite longe et une région intermédiaire de la première molécule d'ADN double-brin (1) et à la deuxième molécule d'ADN double-brin (2) par une deuxième liaison covalente entre la deuxième extrémité de ladite longe et une région intermédiaire de la deuxième molécule d'ADN double-brin (2).\n<CLM>\1\tMolécule d'ADN double-brin selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle une première molécule à tester est liée à une première extrémité de la ladite première molécule d'ADN double-brin (1) et une deuxième molécule à tester est liée à une première extrémité de la ladite deuxième molécule d'ADN double-brin (2).\n<CLM>\1\tMolécule d'ADN double-brin selon la revendication 4, dans laquelle ta deuxième extrémité de ladite première molécule d'ADN double-brin (1) est liée à un premier support et la deuxième extrémité de ladite deuxième molécule d'ADN double-brin (2) est liée à un deuxième support, avantageusement dans laquelle au moins un des deux supports est un support mobile.\n<CLM>\1\tMolécule d'ADN double-brin selon l'une quelconque des revendications 4 ou 5, dans laquelle : - ladite première molécule d'ADN double-brin (1) et/ou ladite deuxième molécule d'ADN double-brin (2) a une longueur de 300 à 5000 paires de bases, de préférence de 650 à 1500 paires de bases ; 71 - ta première extrémité de la première molécule d'ADN double-brin (1) et/ou la première extrémité de la deuxième molécule d'ADN double-brin (2) à une longueur de 10 à 150 paires de bases, avantageusement de 30 à 50 paires de bases ; et/ou - ladite longe à une longueur d'environ 300 à environ 50 000 paires de bases, avantageusement d'environ 500 à 10 000 paires de bases, plus avantageusement d'environ 600 à 3000 paires de bases.\n<CLM>\1\tMolécule d'ADN double-brin selon l'une quelconque des revendications 4 à 6, dans laquelle ladite première et/ou ladite deuxième molécule à tester est sélectionnée dans le groupe composé des molécules suivantes : polymères, acides aminés, peptides, polypeptides, protéines, nucléosides, nucléotides, polynucléotides, oligonucléotides, sucres, polysaccharides, petites molécules, drogues, aptamères, antigènes, anticorps, lipides, lectines, hormones, vitamines, virus, fragments de virus, nanoparticules, molécules cellulaires de surface, et facteurs de transcription.\n<CLM>\1\tMolécule d'ADN double-brin selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, pour une utilisation dans la mesure des interactions entre au moins deux molécules à tester.\n<CLM>\1\tDispositif comprenant la molécule d'ADN double-brin telle que décrite dans l'une quelconque des revendications 1 à 7 avec ses supports.\n<CLM>\1\tMolécule d'ADN double-brin comprenant une première molécule d'ADN double-brin (A) et une deuxième molécule d'ADN double-brin (B), ladite molécule d'ADN double-brin (A) comprenant un site de clivage qui est présent uniquement dans ladite molécule d'ADN double-brin (A), ladite molécule d'ADN double-brin (A) étant reliée à la molécule d'ADN double-brin (B) par deux liaisons covalentes qui ne sont pas des liaisons phosphodiesters, de part et d'autre dudit site de clivage.\n<CLM>\1\tProcédé de fabrication de la molécule d'ADN double-brin telle que décrite dans l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il comprend l'étape suivante : a) le clivage de ta molécule d'ADN double-brin (A) telle que décrite dans la revendication 10 audit site de clivage, générant ainsi une molécule d'ADN double-brin comprenant une première molécule d'ADN double-brin (1) et une deuxième molécule d'ADN double-brin (2). 72\n<CLM>\1\tMolécule d'ADN double-brin obtenue par te procédé selon la revendication\n<CLM>\1\t13. Procédé de caractérisation d'une interaction entre au moins deux molécules à tester liées à une molécule d'ADN double-brin telle que décrite dans l'une quelconque des revendications 1 à 7 ou telle que comprise dans le dispositif de la revendication 9, comprenant : a) l'application d'une force physique basse, FLF, à la molécule d'ADN double-brin, qui permet aux molécules à tester de s'associer ; b) l'application d'une force physique haute, FHF, à la molécule d'ADN double-brin, qui permet de déterminer si les molécules à tester sont associées ou dissociées ; et c) la détection d'un changement dans les propriétés conformationnelles de la molécule d'ADN comprenant : ta détermination de l'extension zu entre la deuxième extrémité de ta première molécule d'ADN double-brin (1) et la deuxième extrémité de la deuxième molécule d'ADN double-brin (2) à l'étape a) ; la détermination des extensions ZHF-A et zi-IF_D entre ta deuxième extrémité de la première molécule d'ADN double-brin (1) et la deuxième extrémité de la deuxième molécule d'ADN double-brin (2), à l'étape b) ; et la comparaison des extensions zu, zHF-A, et ZHF-D, en fonction du temps t.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 13, selon lequel la force physique à l'étape a) est de 0,01 pN à 0,4 pN et/ou selon lequel la force physique à l'étape b) est de 0,5 à 70 pN, avantageusement de 0,5 à 40 pN.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 13 ou 14, selon lequel la caractérisation de l'interaction comprend la détermination d'au moins une des caractéristiques choisies parmi : le temps caractéristique d'association, le temps caractéristique de dissociation, la constante de vitesse de dissociation, l'énergie d'activation de dissociation, la distance séparant l'état de transition du complexe lors de la dissociation, et la constante d'équilibre de dissociation.