Brevet FR3067360A1 (20181214)

REVENDICATIONS1. Milieu de culture solide spécifique pour la culture et isolement sélectif d'une bactérie Enterococcus hirae constitué de nutriments autres que des sucres d'un milieu de culture de base pour la culture des entérocoques dépourvu d'esculine, comprenant des inhibiteurs de bactéries Gram négatif et de bactéries Gram positif autres que les entérocoques et de préférence au moins un composé antifongique caractérisé en ce qu'il comprend : - comme seul sucre du mannitol, et - comme seul colorant, un indicateur coloré qui change de couleur à un pH inférieur au pH dudit milieu de culture spécifique correspondant à l'acidification dudit milieu de culture spécifique résultant de la consommation du mannitol.\n<CLM>\1\tMilieu de culture spécifique selon la revendication 1 caractérisé en ce que le 15 pH dudit milieu de culture spécifique est de 7,3 +/- 0,2 et 'Indicateur coloré est le pourpre de bromocrésol.\n<CLM>\1\tMilieu de culture spécifique selon l'une des revendications 1 ou 2 caractérisé en ce qu'il comprend au moins 10 g/L de mannitol.\n<CLM>\1\tMilieu de culture spécifique selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisé 20 en ce qu'il comprend des nutriments autres que le mannitol dans une concentration de pas plus de 20g/L, de préférence d'au moins 10 g/L\n<CLM>\1\tMilieu de culture spécifique selon l'une des revendications 1 à 4 caractérisé en ce qu'il comprend comme indicateur coloré du pourpre de bromocrésol à une concentration d'au moins 25 mg/L. 25\n<CLM>\1\tMilieu de culture spécifique selon l'une des revendications 1 à 5 caractérisé en ce qu'il comprend comme indicateur coloré du pourpre de bromocrésol à une concentration d'au moins 50 mg/L. 17\n<CLM>\1\tMilieu de culture spécifique selon l'une des revendications 1 à 6 caractérisé en ce qu'il comprend comme nutriments autres que des sucres d'un milieu de culture de base pour la culture des entérocoques : des vitamines, des sels minéraux métalliques et des composés azotés.\n<CLM>\1\tMilieu de culture spécifique selon la revendication 7 caractérisé en ce qu'il comprend comme source de vitamines, sels essentiels et composés azotés : - un extrait de viande de boeuf, et - la protéose-peptone.\n<CLM>\1\tMilieu de culture spécifique selon la revendication 8 caractérisé en ce qu'il 10 comprend : - un extrait de viande de boeuf à la concentration de 1 g/L, et - la protéose-peptone à la concentration de 10 g/L.\n<CLM>\1\tMilieu de culture spécifique selon l'une des revendications 1 à 9 caractérisé en ce qu'il comprend un produit gélifiant choisi de préférence parmi les géloses et 15 agar, de préférence dans une proportion pondérale de 0,5 à 5%, de préférence encore de 1 à 2%.\n<CLM>\1\tMilieu de culture spécifique selon l'une des revendications 1 à 10 caractérisé en ce qu'il comprend inhibiteurs de bactéries Gram négatif et de bactéries Gram positif autres que les entérocoques : 20 - du chlorure de sodium à une concentration d'au moins 20 g/L, et - de l'azoture de sodium, et - de l'acide nalidixique.\n<CLM>\1\tMilieu de culture spécifique selon l'une des revendications 1 à 10 caractérisé en ce qu'il comprend les composants suivants, de préférence dans les 25 quantités et proportions pondérales suivantes pour 1L: -Protéose-peptone 10 g (1%) -Extrait de viande de boeuf : 1 g (0,1%) -Chlorure de sodium : 60 g (6%) -Mannitol 10 g (1%) 18 5 -Azoture de sodium : -Cycloheximide : -Acide nalidixique -Pourpre de bromocrésol : -Agar : 0,15 g (0,015%) 0,05 g (0,005%) 0,25 g (0,025%) 0,05 g (0,005%) g (1,5%)\n<CLM>\1\tProcédé de culture et isolement sélectif d'une bactérie Enterococcus hirae caractérisé en ce qu'on cultive un échantillon de prélèvement biologique contenant ou susceptible de contenir une bactérie Enterococcus hirae et/ou des bactéries Enterococcus autres que Enterococcus hirae, à une température de 37°C durant un 10 temps suffisant pour faire apparaitre une coloration de bactéries Enterococcus autres que Enterococcus hirae par ledit colorant dans undit milieu de culture spécifique selon l'une des revendications 1 à\n<CLM>\1\t14. Procédé de culture selon la revendication 13 caractérisé en ce qu'on sélectionne une bactérie Enterococcus hirae dans un échantillon testé comprenant 15 d'autres bactéries choisies parmi E faecalls, E. faecium, E. casselifla vus, E. gallinarum et E. raffinosus.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 13 ou 14 caractérisé en ce qu'on réalise les étapes suivantes : a) on effectue une série de plusieurs dilutions du prélèvement de départ, de 20 préférence d'au moins 10-5 à partir d'un échantillon de selle à raison de 0,10 à 0,50 g/mL de tampon PBS, et b) un échantillon de chacune des dilutions est ensemencé sur le dit milieu de culture spécifique solide, de préférence d'un échantillon de 100 microlitres de selle diluée sur le dit milieu de culture spécifique solide, et 25 c) au bout de 72 heures d'incubation à 37°C, on détecte une dite bactérie Enterococcus hirae si on identifie une colonie de bactérie non décolorée par rapport audit colorant de pourpre de bromocrésol, et d) de préférence, on confirme que la dite colonie de bactérie non décolorée est de l'espèce Enterococcus hirae par une technique d'identificatiaq par 30 spectrométrie de masse de type MALDI-TOF.