Brevet FR3075823A1 (20190628)

REVENDICATIONS1. Procédé d'analyse d'un échantillon cellulaire comportant : - fournir une puce micro-fluidique (1) comportant : o un premier puits (2a) rempli par un échantillon cellulaire émettant une première réponse cellulaire contenant au moins un biomarqueur; o une première chambre d'analyse (3a) possédant une première entrée d'analyse connectée fluidiquement au premier puits (2a) au moyen d'un premier canal de sortie (5a) et une sortie d'évacuation débouchant dans la première chambre d'analyse (3a) et distincte de la première entrée d'analyse, o des éléments de captation (6a) disposés sur une paroi de la première chambre d'analyse (3), les éléments de captation (6a) étant configurés pour capturer ledit au moins un biomarqueur circulant depuis le premier puits (2a) jusqu'à la première chambre d'analyse (3a) ; - appliquer un premier flux de liquide alimentant le premier puits (2a) de sorte que la première réponse cellulaire soit emmenée depuis le premier puits (2) jusqu'à la sortie d'évacuation à travers la première chambre d'analyse (3a), ledit au moins un biomarqueur circulant dans la première chambre d'analyse pour être capté par les éléments de captation (6a), - analyser les éléments de captation (6a).\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon la revendication précédente comportant la fourniture d'au moins un réactif de révélation configuré pour réagir avec ledit au moins un biomarqueur représentatif de la première réponse cellulaire capté par les éléments de captation (6a), ledit au moins un réactif de révélation traversant la première chambre d'analyse (3a) simultanément ou postérieurement au passage dudit au moins un biomarqueur dans la première chambre d'analyse (3a), l'analyse des éléments de captation (6a) étant réalisée en recherchant ledit au moins un réactif de révélation. 42\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon la revendication précédente comportant appliquer un deuxième flux sur une entrée additionnelle de la puce micro-fluidique (1), l'entrée additionnelle débouchant dans le premier canal de sortie (5a) par une première jonction se trouvant entre le premier puits (2a) et la première chambre 5 d'analyse (3a) de sorte que le deuxième flux pénètre dans la première chambre d'analyse (3a), le deuxième flux comportant ledit au moins un réactif de révélation de sorte que ledit au moins un réactif de révélation soit dépourvu de contact avec l'échantillon cellulaire. 10\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon la revendication précédente comportant le remplissage du premier canal de sortie (5a), après la première jonction, alternativement par le premier flux comportant ledit au moins un biomarqueur et par le deuxième flux comportant ledit au moins un réactif de révélation. 15\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon la revendication 3 dans lequel, la première jonction est associée à un mélangeur configuré pour mélanger le premier flux avec le deuxième flux dans le premier canal de sortie (5a) après la première jonction.\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans 20 lequel la puce micro-fluidique (1) comporte un deuxième puits (2b) comportant un échantillon cellulaire additionnel émettant une deuxième réponse cellulaire comportant un biomarqueur additionnel, le deuxième puits (2b) étant connecté fluidiquement à la première chambre d'analyse (3a) par un deuxième canal de sortie (5b) rejoignant le premier canal de sortie (5a) avant la première chambre 25 d'analyse (3a), un générateur de flux alimentant les premier et deuxième puits (2a, 2b) de manière à emmener le biomarqueur et le biomarqueur additionnel représentatifs respectivement des première et deuxième réponses cellulaires dans la première chambre d'analyse (3a) et délivrer des premier et deuxième flux laminaires à l'intérieure de la première chambre d'analyse (3a), le 30 biomarqueur et le biomarqueur additionnel étant présents respectivement dans les premier et deuxième flux laminaires. 43\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le premier puits (2a) est rempli par l'échantillon cellulaire avant la fermeture du premier puits (2a) par une couche de couverture (8), la couche de couverture (8) formant au moins partiellement les parois latérales de la première 5 chambre d'analyse (3a).\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la première chambre d'analyse (3a) est fermée au moyen d'une paroi d'analyse (6) comportant les éléments de captation (6a). 10\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon la revendication précédente, comportant le démontage de la paroi d'analyse (6) pour réaliser l'analyse des éléments de captation (6a) hors de la première chambre d'analyse (3a). 15\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon la revendication précédente, dans lequel la puce (1) est définie dans un substrat (A), le substrat (A) définissant un fond et une paroi latérale du premier puits (2) et une rainure formant le premier canal de sortie (5a) et dans lequel le procédé d'analyse comporte la fermeture de manière étanche du premier puits (2) et du premier canal de sortie (5a) au 20 moyen d'un couche de couverture (8) amovible.\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon la revendication précédente, dans lequel la couche de couverture (8) définit une ouverture (8a) formant un anneau fermé autour de la première chambre d'analyse (3a) et dans lequel le procédé comporte, après 25 l'installation de la couche de couverture (8), l'installation d'une surface d'analyse (6a) fermant la première chambre d'analyse (3a) de manière étanche, la surface d'analyse (6) comportant les éléments de captation (6a).\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon l'une quelconques des revendications 9 à 11, dans 30 lequel les parois latérales du premier canal de sortie (5a) sont au moins partiellement formées dans la couche de couverture (8).