Brevet FR3070046A1 (20190215)

REVENDICATIONS1. Milieu de culture liquide polyvalent pour culture en atmosphère aérobie de bactéries anaérobies ou bactéries aérobies comprenant un milieu de culture de base pour bactéries aérobies et anaérobies caractérisé en ce qu'il comporte en outre le mélange de composés antioxydants suivants: hydrosulfure de sodium (Na2S), LCystéine, acide ascorbique, glutathion, catalase, ubiquinol et acide lipoïque.\n<CLM>\1\tMilieu de culture selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend les dits composés antioxydants aux quantités et proportions pondérales suivantes pour 1L : lo - Hydrosulfure de sodium : au moins 0,25 g (0,025%), de préférence de 0,25 g - L-Cystéine : - Acide ascorbique : 15 - Glutathion : - Catalase : 20 - Ubiquinol : - Acide lipoïque : à 0,5 g (0,025 à 0,05 °/0) au moins 0,25 g (0,025%), de préférence de 0,25 g à 0,5 g (0,025 à 0,05 °/0) au moins 0,5 g (0,05%), de préférence de 0,5 à 1 g (0,05 à 0,1 0/0) au moins 0,1 g (0,01%), de préférence de 0,1 à 0,5 g (0,01 à 0,05 °/0) au moins 0,06 g (0,006%), de préférence de 0,06 à 0,16 g (0,006 à 0,016 °/0) au moins 0,06 g (0,006%), de préférence de 0,06 à 0,16 g (0,006 à 0,016 °/0) au moins 0,01 g (0,001%), de préférence de 0,01 à 0,015 g (0,001 à 0,0015 °/0) 25\n<CLM>\1\tMilieu de culture selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il comprend en outre les composants nutritifs suivants dans le dit milieu de culture de base : - plusieurs sources de carbone et d'azote, de préférence choisies parmi 5 un extrait de levure, un sel d'acétate et une peptone trypsique, - une source de phosphore, de préférence un sel de phosphate, - au moins un sucre, - au moins un sel de métaux choisis parmi K, Mg, Na et Ca, de préférence NaCI, - ainsi que - au moins une substance tampon régulateur de pH pour ajuster le pH de 7 à 8, de préférence K2HPO4, ouNaHCO3 pour ajuster le pH à 7,5, - au moins unes vitamine ou facteur de croissance.\n<CLM>\1\tMilieu de culture selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ledit milieu de culture de base est un milieu acellulaire conventionnel de bactérie comprenant des composants choisis parmi un extrait de broyat ou lysat de tissu pluricellulaire, un digestat enzymatique, notamment un digestat enzymatique de caséine, soja et/ou de tissu animal, une peptone, un extrait de levure, un sucre tel que dextrose ou glucose, un sel NaCI et/ou Na2PO4.\n<CLM>\1\tMilieu de culture selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que ledit milieu de culture de base est un milieu de culture liquide pour culture de 26 bactéries anaérobies dans un échantillon sanguin, selle, crachat ou sécrétion vaginale.\n<CLM>\1\tMilieu de culture selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que ledit milieu de culture de base comprend les composants nutritifs suivants: 5 - Hydrolisat de caséine ; - Protéose peptone ; - Extrait de levure ; - Glucose, - Chlorure de sodium (NaCI) ; et 10 - un facteur de croissance : a-cétoglutarate.\n<CLM>\1\tMilieu de culture selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend 15 les composants suivants dans les quantités et proportions pondérales suivantes pour 1L : - Hydrolisat de caséine: 15 g (1,5 %) - Proteose peptone: 15 g (1,5 °/0) - Extrait de levure: 10 g (1 0/0) - a-cétoglutarate : 2 g (0,2 °/0) - Chlorure de sodium (NaCI) : 5 g (0,5 °/0) - Glucose: 10 g (1 %) 20 - Dipotassium phosphate (K2HPO4) : 0,83 g (0,083 °/0) 27 - Hydrosulfure de sodium (Na2S) : 0,5 g (0,05 °/0) - L-Cystéine : 0,5 g (0,05 °/0) - Acide ascorbique : 1 g (0,1 °/0) - Glutathion : 0,1 g (0,01 %) 5 - Catalase : 0,16 g (0,016 °/0) - Ubiquinol : 0,16 g (0,016 °/0) - Acide lipoïque : 0,010 g (0,001 °/0) Le pH de la solution étant ajusté à 7,5±0,2 avec du KOH 10M.\n<CLM>\1\tProcédé de culture in vitro d'une bactérie aérobie ou anaérobie sous 10 atmosphère aérobie avec un milieu de culture selon l'une des revendications 1 à\n<CLM>\1\t9. Procédé de culture selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'on réalise une culture d'une dite bactérie dans un échantillon de sang, selle, crachat ou sécrétion vaginale.\n<CLM>\1\tProcédé de culture selon la revendication 8 ou 9, caractérisé en ce que on 15 réalise une culture d'une dite bactérie anaérobie stricte choisie parmi Akkermansia muaniphila, Bacteroides fragllis, Bacteroides nordi, Bacteroides thetalotaomicron, Clostndkim beifeinnckii, Clostndkim butyricum, Clostndkim massilloamazonfensis, Clostndkim Irregulare, finegoldia magna, Propionibacterkim acnes et Propionibacterium avidum, Prevotella dentkola et Prevotella histicola. 20