Brevet FR3067466A1 (20181214)

REVENDICATIONS1. Utilisation in vitro d'au moins une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose pour le marquage de cellules souches cancéreuses pulmonaires, choisie parmi les lectines Ulex Europaeus agglutinin 1 (UEA-1), Agaricus Bisporus agglutinin (ABA), Amaranthus Caudatus agglutinin (ACA), jacaline, GSL-I et GSL-II Griffonia Simplicifolia lectin I (GSL-I) et Griffonia Simplicifolia lectin II (GSL-II), pour obtenir des cellules souches cancéreuses pulmonaires marquées, dans un échantillon biologique, notamment au moins deux lectines choisies parmi UEA-1, ABA, ACA, jacaline, GSLI et GSL-II, en particulier le mélange de GSL-I et GSL-II, notamment au moins trois lectines choisies parmi UEA-1, ABA, ACA, jacaline, GSL-I et GSL-II , en particulier le mélange de UEA-1, jacaline et ABA, ou le mélange de UEA-1, jacaline et ACA.\n<CLM>\1\tUtilisation in vitro selon la revendication 1, dans laquelle ledit marquage de cellules souches cancéreuses pulmonaires est réalisé avec une lectine conjuguée à un marqueur choisi parmi : - un fluorophore en particulier choisi parmi la rhodamine, FITC ou l'Alexa Fluor - un radio-isotope en particulier choisi parmi l'iode 125, le tritium ou le technétium, - une enzyme utilisant un substrat chromogène ou luminescent, ladite enzyme étant en particulier choisie parmi la peroxydase de raifort (HRP), la phosphatase alcaline, la glucose oxydase ou la P-galactosidase, - des billes d'or ou - la biotine.\n<CLM>\1\tUtilisation in vitro selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle ledit marquage de cellules souches cancéreuses pulmonaires est réalisé avec une lectine conjuguée et est suivi de la détection desdites cellules souches cancéreuses pulmonaires marquées via la détection de la lectine conjuguée.\n<CLM>\1\tUtilisation in vitro selon l'une des revendications 1 à 3, dans laquelle ledit marquage de cellules souches cancéreuses pulmonaires avec une lectine conjuguée à un 38 marqueur est suivi de l'isolement desdites cellules souches cancéreuses pulmonaires marquées, dans laquelle ledit marqueur est la biotine et ledit isolement est réalisé via un support fonctionnalisé avec de la streptavidine ou de l'avidine constitué de billes magnétiques et en présence d'un aimant, ou dans laquelle ledit marqueur est un fluorophore et ledit isolement est réalisé en cytométrie en flux.\n<CLM>\1\tUtilisation in vitro selon l'une des revendications 1 à 4, dans laquelle ledit échantillon biologique est un échantillon biologique pulmonaire.\n<CLM>\1\tProcédé in vitro de détection de cellules souches cancéreuses pulmonaires, dans un échantillon biologique, comprenant: (a) une étape de marquage des cellules souches cancéreuses pulmonaires avec au moins une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, choisie parmi les lectines UEA-1, ABA, ACA, jacaline, GSL-I et GSL-II, ladite lectine étant conjuguée à un marqueur choisi parmi : un fluorophore, un radio-isotope, une enzyme, des billes d'or ou de la biotine, pour obtenir un échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses pulmonaires sont marquées par au moins une lectine, suivi d' (b) une étape de détection desdites cellules souches cancéreuses pulmonaires marquées par au moins une lectine.\n<CLM>\1\tProcédé in vitro d'isolement de cellules souches cancéreuses pulmonaires, dans un échantillon biologique comprenant : (a) une étape de marquage des cellules souches cancéreuses pulmonaires avec au moins une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, les lectines UEA-1, ABA, ACA, jacaline, GSL-I et GSL-II, ladite lectine étant conjuguée à la biotine ou à un fluorophore, pour obtenir un échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses pulmonaires sont marquées par au moins une lectine, suivi d' 39 (b) une étape d'isolement desdites cellules souches cancéreuses pulmonaires marquées par au moins une lectine, ladite étape d'isolement étant réalisée via un support fonctionnalisé avec de la streptavidine ou de l'avidine constitué par des billes magnétiques et en présence d'un aimant, lorsque ladite lectine est conjuguée à la biotine, et ladite étape d'isolement étant réalisée par tri cellulaire en cytométrie en flux, lorsque ladite lectine est conjuguée à un fluorophore.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro du risque de récidive du cancer pulmonaire et/ou de l'agressivité du cancer pulmonaire pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer pulmonaire, comprenant une étape de marquage des cellules souches cancéreuses pulmonaires d'un échantillon biologique pulmonaire avec au moins une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose choisie parmi les lectines UEA-1, ABA, ACA, jacaline, GSL-I et GSL-II, pour obtenir des cellules souches cancéreuses pulmonaires marquées par au moins une lectine dans ledit échantillon.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic selon la revendication 8, comprenant les étapes de : (a) Marquage des cellules souches cancéreuses pulmonaires avec au moins une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose choisie parmi les lectines UEA-1, ABA, ACA, jacaline, GSL-I et GSL-II, pour obtenir des cellules souches cancéreuses pulmonaires marquées par au moins une lectine dans ledit échantillon biologique, ladite lectine étant conjuguée à un marqueur choisi parmi un fluorophore ou de la biotine, (b) Isolement des cellules souches cancéreuses pulmonaires marquées par ladite au moins une lectine conjuguée : - lors du marquage avec une lectine conjuguée la biotine, ledit isolement est effectué via un support fonctionnalisé avec de la streptavidine ou de l'avidine, en particulier ledit support fonctionnalisé est constitué de billes magnétiques 40 fonctionnalisées avec de la streptavidine ou de l'avidine et ledit isolement est effectué par tri cellulaire magnétique en présence d'un aimant, ou - lors du marquage avec une lectine conjuguée un fluorophore, ledit isolement est effectué par tri cellulaire en cytométrie en flux. (c) Nouveau marquage des cellules souches cancéreuses pulmonaires isolées avec au moins une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose choisie parmi les lectines UEA-1, ABA, ACA, jacaline, GSL-I et GSL-II, pour obtenir des cellules souches cancéreuses pulmonaires isolées et marquées, ladite lectine étant conjuguée à un marqueur choisi parmi un fluorophore, un radio-isotope, une enzyme, des billes d'or ou de la biotine, (d) Détection desdites cellules souches cancéreuses pulmonaires isolées et marquées par - microscopie en fluorescence ou lecteur de fluorescence lorsque la lectine est conjuguée à un fluorophore, ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via un fluorophore conjugué à la streptavidine ou à l'avidine; - microscopie à luminescence ou lecteur de luminescence lorsque la lectine est conjuguée à une enzyme utilisant un substrat chimioluminescent, ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via une enzyme utilisant un substrat chimioluminescent conjuguée à la streptavidine ou à l'avidine - gamma caméra lorsque la lectine est conjuguée à un radio-isotope, ou lorsque que la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via un radio-isotope conjugué à la streptavidine ou à l'avidine ; - microscopie UV/visible ou lecteur d' absorbance lorsque la lectine est conjuguée à une enzyme utilisant un substrat chromogène, ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via une enzyme utilisant un substrat chromogène conjuguée à la streptavidine ou à l'avidine ; - microscopie électronique lorsque la lectine est conjuguée à des billes d'or, ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via des billes d'or conjuguées à la streptavidine ou à l'avidine ; (e) Eventuellement quantification des cellules souches cancéreuses pulmonaires ; 41 (f) Comparaison de l'intensité de la détection de cellules souches cancéreuses pulmonaires dans ledit échantillon biologique par rapport à l'intensité de la détection de cellules souches cancéreuses pulmonaires dans un échantillon sain jouxtant l'échantillon biologique, et éventuellement comparaison de la quantification de cellules souches cancéreuses pulmonaires dans ledit échantillon biologique par rapport à la quantification de cellules souches cancéreuses pulmonaires dans un échantillon sain jouxtant l'échantillon biologique (g) Déduction du risque de récidive du cancer pulmonaire et/ou de l'agressivité du cancer pulmonaire pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer pulmonaire à partir de la présence et éventuellement de la quantité de cellules souches cancéreuses pulmonaires.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic selon la revendication 8, comprenant les étapes de : (a) Marquage des cellules souches cancéreuses pulmonaires avec au moins une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose choisie parmi les lectines UEA-1, ABA, ACA, jacaline, GSL-I et GSL-II, pour obtenir des cellules souches cancéreuses pulmonaires marquées par au moins une lectine dans ledit échantillon biologique, ladite lectine étant conjuguée à un marqueur choisi parmi un fluorophore, un radio-isotope, une enzyme, des billes d'or ou de la biotine, (b) Détection desdites cellules souches cancéreuses pulmonaires marquées par - microscopie en fluorescence ou lecteur de fluorescence lorsque la lectine est conjuguée à un fluorophore ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via un fluorophore conjugué à la streptavidine ou à l'avidine; - microscopie à luminescence ou lecteur de luminescence lorsque la lectine est conjuguée à une enzyme utilisant un substrat chimioluminescent, ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via une enzyme utilisant un substrat chimioluminescent conjuguée à la streptavidine ou à l'avidine 42 - gamma caméra lorsque la lectine est conjuguée à un radio-isotope, ou lorsque que la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via un radio-isotope conjugué à la streptavidine ou à l'avidine ; - microscopie UV/visible ou lecteur d'absorbance lorsque la lectine est conjuguée à une enzyme utilisant un substrat chromogène, ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via une enzyme utilisant un substrat chromogène conjuguée à la streptavidine ou à l'avidine ; - microscopie électronique lorsque la lectine est conjuguée à des billes d'or, ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via des billes d'or conjuguées à la streptavidine ou à l'avidine ; (c) Eventuellement quantification des cellules souches cancéreuses pulmonaires ; (d) Comparaison de l'intensité de la détection de cellules souches cancéreuses pulmonaires dans ledit échantillon biologique par rapport à l'intensité de la détection de cellules souches cancéreuses pulmonaires dans un échantillon sain jouxtant l'échantillon biologique, et éventuellement comparaison de la quantification de cellules souches cancéreuses pulmonaires dans ledit échantillon biologique par rapport à la quantification de cellules souches cancéreuses pulmonaires dans un échantillon sain jouxtant l'échantillon biologique; (e) Déduction du risque de récidive du cancer pulmonaire et/ou de l'agressivité du cancer pulmonaire pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer pulmonaire à partir de la présence et éventuellement de la quantité de cellules souches cancéreuses pulmonaires.\n<CLM>\1\tKit de diagnostic in vitro du risque de récidive du cancer pulmonaire et/ou de l'agressivité du cancer pulmonaire pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer pulmonaire, comprenant au moins une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose choisie parmi les lectines UEA-1, ABA, ACA, jacaline, GSL-I et GSL-II, ladite lectine étant conjuguée à la biotine, et des billes magnétiques fonctionnalisées avec de la streptavidine, et éventuellement au moins une lectine choisie parmi les lectines UEA- 43 1, ABA, ACA, jacaline, GSL-I et GSL-II, conjuguée à un fluorophore, un radio-isotope, une enzyme ou des billes d'or, ou comprenant au moins une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose choisie parmi les lectines UEA-1, ABA, ACA, jacaline, GSL-I et GSL-II, ladite lectine étant conjuguée un fluorophore, et éventuellement au moins une lectine choisie parmi les lectines UEA-1, ABA, ACA, jacaline, GSL-I et GSL-II, conjuguée à la biotine, un radio-isotope, une enzyme ou des billes d'or.