Brevet FR3078627A1 (20190913)

REVENDICATIONS1. Procédé de préparation d'un mélange homogène de microbiote fécal provenant d'au moins deux donneurs présélectionnés comprenant les étapes suivantes : a. le prélèvement d'au moins un échantillon de microbiote fécal desdits donneurs présélectionnés, b. dans un délai inférieur à 5 minutes suivant le prélèvement, le placement de l'échantillon obtenu en a) dans un dispositif de collecte étanche à l'oxygène, c. le contrôle qualitatif des échantillons prélevés et l'exclusion des échantillons ne répondant pas aux critères qualitatifs, d. l'ajout à chacun des échantillons retenus après l'étape de contrôle c) d'une solution aqueuse saline comprenant au moins un agent cryoprotecteur et/ou un agent de charge, e. la filtration des échantillons obtenus à l'issue de l'étape d) pour former une série d'inocula, f. le regroupement desdits inocula pour former un mélange d'inocula, g. l'homogénéisation dudit mélange obtenu à l'étape f), notamment par agitation manuelle ou à l'aide d'un dispositif d'agitation, les étapes b) et d) à g) étant réalisées en anaérobiose.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les donneurs sont présélectionnés selon les critères de présélection suivants : i. ayant entre 18 et 60 ans, ii. ayant un Indice de Masse Corporel (IMC) entre 18 et 30, iii. absence d'antécédents personnels de maladies infectieuses graves, de troubles métaboliques et neurologiques, ou de dépression, iv. absence de prise récente de médicaments pouvant détériorer la composition du microbiote intestinal, v. absence d'apparition récente de symptômes associés à une maladie gastro intestinale, tels que fièvre, diarrhée, nausée, vomissement, douleur abdominale, jaunisse, absence d'historique de maladies infectieuses graves, notamment le SIDA, l'hépatite etc. vi. absence de voyages récents dans des pays tropicaux vii. absence de comportement sexuel à risque, 5 viii. absence de blessure, piercing et/ou tatouage récent(s), ix. absence de fatigue chronique récente, x. absence de réaction allergique récente, xi. optionnellement ayant un régime alimentaire divers. 10\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que les critères qualitatifs des échantillons de l'étape c) comprennent : - consistance de l'échantillon entre 1 et 6 selon l'échelle de Bristol, - absence de sang et d'urine dans l'échantillon, 15\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que les critères qualitatifs des échantillons de l'étape c) comprennent : absence des bactéries suivantes : Campylobacter, Clostridium difficile (toxin A/B), Salmonella Yersinia enterocolitica, Vibrio sp., Shiga-like toxinproducing E.coli (STEC) stxl/stx2, des bactéries multi résistantes, Bêta- 20 lactamase à spectre étendu (BLSE) - Entérocoques résistant à la vancomycine et aux glycopeptides (ERV, GRE) et Listeria monocytogenes, bactéries résistantes aux carbapénémases, absence des parasites suivants : Cryptosporidium parvum, Cyclospora sp., Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Blastocystis hominis, Helminths, 25 Strongyloides stercoralis, Isospora sp., Microsporidies et Dientamoeba fragilis, absence des virus suivants : Adenovirus F40/41, Astrovirus, Norovirus, Rotavirus A, Sapovirus et Picornavirus (Aichi Virus and enterovirus), 36 absence des bactéries suivantes : E.coli enteroaggregative (EAEC), E.coli enteropathogenic (EPEC), E.coli enterotoxigenic (ETEC) It/st, Shigella/Enteroinvosive E.coli (EIEC) et Plesiomonas shigelloides. 5\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'au moins un agent cryoprotecteur et/ou agent de charge est un polyol, un di-, tri- ou polysaccaride ou leur mélange et un agent de charge.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que la solution 10 aqueuse saline comprend maltodextrine et tréhalose.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la filtration à l'étape e) est réalisée avec un filtre comprenant des pores de diamètre inférieur ou égal à 0,5 mm, de préférence inférieur ou égal à 265 'lm. 15\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que le temps entre la collecte de l'échantillon et la fin de l'étape g) est moins de 76 heures.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que l'étape g) 20 d'homogénéisation est réalisée à une température entre 2°C et 25°C, de préférence entre environ 2 et 6°C, plus préférentiellement à environ 4°C.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il comprend l'étape de transfert suivante : 25 h. le transfert du mélange homogénéisé obtenu à l'étape g) : i. dans des poches d'inoculum pour stockage à une température d'environ -50°C à -80°C, de préférence, à -80°C, ou pour stockage à une température entre environ 2 à 6 °C pour utilisation du mélange 30 sous 16 heures environ, ou pour stockage à une température entre 10 à 25 °C pour utilisation du mélange sous 4 heures environ, 37 ii. dans un dispositif de lyophilisation pour lyophilisation.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que le mélange homogène de microbiote fécal provient d'au moins quatre donneurs, de 5 préférence d'au moins cinq donneurs.\n<CLM>\1\tMélange homogène de microbiote fécal susceptible d'être obtenu selon l'une des revendications 1 à 11 pour son utilisation dans la transplantation de microbiote fécal allogénique. 10\n<CLM>\1\tMélange homogène de microbiote fécal susceptible d'être obtenu selon l'une des revendications 1 à 11 caractérisé en ce que le mélange a un indice de Simpson supérieur à 15, de préférence\n<CLM>\1\t15\n<CLM>\1\tMélange homogène de microbiote selon la revendication 12 ou 13 pour son utilisation dans le traitement des dysbioses intestinales.\n<CLM>\1\tMélange homogène de microbiote selon la revendication 12 ou 13 pour son utilisation dans le traitement de la maladie du greffon contre l'hôte (GvHD). 20\n<CLM>\1\tMélange homogène de microbiote selon la revendication 12 ou 13 pour son utilisation dans le traitement de la dysbiose intestinale iatrogène et/ou des pathologies et complications associées comprenant la septicémie, le choc septique et les troubles gastro-intestinaux, y compris la diarrhée, la mucite, les douleurs 25 abdominales et les saignements gastro-intestinaux.\n<CLM>\1\tMélange homogène de microbiote selon la revendication 12 ou 13 pour son utilisation pour le traitement de l'infection à Clostridium difficile et la diarrhée associée (CDI), la maladie intestinale inflammatoire (IBD), le syndrome du côlon 30 irritable (IBS), la constipation idiopathique, la maladie coeliaque, la maladie de Crohn, l'obésité et l'obésité morbide, l'autisme, la sclérose en plaques, la diarrhée du voyageur, l'infection vaginale chronique (y compris la cystite et les mycoses), 38 les infections des os et des articulations, la maladie de Parkinson, le diabète de type Il, les allergies alimentaires, le cancer, la leucémie réfractaire, la maladie d'Alzheimer, la schizophrénie et les troubles bipolaires, la dysbiose intestinale associée à une chimiothérapie anticancéreuse ou à une immunothérapie et la 5 maladie alcoolique et non-alcoolique du foie.