Brevet FR3071506A1 (20190329)

REVENDICATIONS1. Procédé de modification de la morphologie de champignons filamenteux agrégés de type coagulant comprenant: a) l'encapsulation des spores desdits champignons filamenteux dans la phase dispersée d'une émulsion eau-dans-huile, b) la germination des spores encapsulées dans ladite phase dispersée de l'émulsion, c) la récupération des spores germées non agrégées, ladite émulsion étant obtenue par mise en oeuvre d'un dispositif microfluidique, d) la mise en culture des spores germées en milieu liquide.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le champignon filamenteux de morphologie agrégée de type coagulant est choisi de préférence parmi les espèces Aspergillus oryzae, Aspergillus piger ou Aspergillus nidulans, et plus préférentiellement parmi les souches appartenant à l'espèceAspergillus oryzae.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que la phase dispersée de l'émulsion est une phase aqueuse comprenant au moins de l'eau, des spores de champignon à encapsuler en suspension dans un milieu de culture liquide.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la phase huileuse de l'émulsion comprend au moins une huile biocompatible n'interférant pas dans la croissance de micro-organisme, de préférence au moins une huile fluorée.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que la phase huileuse comprend au moins un tensioactif, de préférence biocompatible.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le dispositif microfluidique comprend un premier conduit microfluidique alimenté en phase aqueuse contenant en suspension les spores à encapsuler, et un deuxième conduit microfluidique alimenté en phase huileuse, le premier conduit débouchant dans le deuxième conduit et formant une jonction fluidique avec ce dernier. 16\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que les premier et deuxième conduits microfluidiques ont une section pouvant s'inscrire dans un cercle de diamètre compris entre 1 !lm et 1 mm ; de préférence entre 50 et 500 !lm, et en particulier de l'ordre de 125 !lm.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 7, caractérisé en ce que la phase 5 aqueuse de l' émulsion se présente sous la forme de gouttes dispersées dans la phase huileuse, lesdites gouttes présentant un diamètre compris entre 10 !lm et 1 mm, de préférence entre 50 et 500 !lm, et plus préférentiellement entre environ 140 et 150 !lm.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que dispositif microfluidique d'encapsulation comprend, en outre : 10 - un moyen d'injection, dans le premier conduit dudit dispositif, d'une suspension formée par la phase aqueuse et par les spores à encapsuler, ledit moyen d'injection étant par exemple d'une seringue avec un pousse-seringue; et - un moyen d'injection, dans le deuxième conduit du dispositif, de la phase huileuse; ledit moyen d'injection étant par exemple une seringue avec un pousse-seringue. 15\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 8 ou 9, caractérisé en ce que la concentration de spores dans la phase aqueuse et les débits d'injection des phases sont adaptés de manière à avoir en moyenne entre 1 et 10 spores par goutte, de préférence 1 spore par goutte.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le 20 dispositif microfluidique d'encapsulation comprend, en outre un conduit microfluidique de sortie, permettant la récupération de l'émulsion, présentant une section pouvant s'inscrire dans un cercle de diamètre compris entre 125 et 1 5001..tm, de préférence entre 500 et 1 0001..tm, et en particulier de l'ordre de 750 !lm.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que 25 l'étape b) de germination est opérée sous agitation à température ambiante, en particulier entre 20 et 30°C, de préférence à 24°C, le temps nécessaire à la germination des spores, de préférence entre 1 et 40h, préférentiellement entre 10 et 30 heures, et plus préférentiellement encore environ 19h. 17\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'étape c) de récupération des spores germées est mise en oeuvre par déstabilisation de l'émulsion, de préférence par rinçage au moyen d'une phase huileuse dépourvue de tensioactif, jusqu'à ce que la concentration en tensioactif soit trop faible pour assurer la 5 stabilité de la dispersion des gouttes de phase aqueuse dans la phase huileuse.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'étape d) de mise en culture des spores germées est opérée sous agitation entre 20 et 30°C, de préférence 24°C, dans un milieu permettant la croissance de microorganismes filamenteux, de préférence milieu riche. 10\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la mise en culture est utilisée comme étape préliminaire à l'ensemencement d'un bioréacteur ou toute autre installation permettant la propagation et la croissance du champignon filamenteux encapsulé.