Brevet FR3078076A1 (20190823)

REVENDICATIONS1. Méthode d'évaluation de la teneur en matière organique biodégradable d'un 5 échantillon aqueux comprenant les étapes successives suivantes : - répartition de différentes fractions de l'échantillon aqueux dans au moins quatre cellules de mesure renfermant chacune une souche bactérienne unique, non pathogène, isolée du milieu naturel, lesdites souches bactériennes appartenant au panel suivant : Firmicutes, Actinobacteria, et Proteobacteria, 10 notamment Betaproteobacteria et Gammaproteobacteria ; - ajout dans chaque cellule d'un marqueur de l'activité métabolique des bactéries, tel qu'un marqueur fluorescent et/ou coloré de l'activité respiratoire des dites bactéries ; - placement des cellules de mesure dans une enceinte thermostatée ; 15 - suivi par spectrophotométrie de l'activité bactérienne de chaque fraction d'échantillon pendant au moins une, de préférence trois heures, le résultat final et/ou les résultats cinétiques relatifs à chaque fraction fournissant des informations sur l'activité métabolique des bactéries, et donc une évaluation de la teneur globale en matière organique biodégradable de l'échantillon aqueux. 20\n<CLM>\1\tMéthode selon la revendication 1, caractérisée en ce que chaque cellule de mesure est préparée selon les étapes successives suivantes : - isolement et culture de la souche bactérienne sélectionnée, - lavage pour éliminer toute impureté carbonée, 25 - puis conditionnement dans ladite cellule avec ajout d'un agent protecteur de la souche bactérienne vis-à-vis de la lyophilisation, - lyophilisation de la souche bactérienne pour sa conservation, - puis, avant son utilisation pour l'évaluation de la teneur en matière organique dégradable d'un échantillon aqueux, réhydratation et régénération au moyen 30 d'une solution aqueuse de régénération de type tampon NPK, et maintien de la souche bactérienne dans un incubateur pendant environ vingt heures permettant aux bactéries de consommer le carbone résultant des résidus 15 cellulaires de bactéries mortes pendant les étapes précédentes (dénommée étape d'épuisement de la partie carbonée).\n<CLM>\1\tMéthode selon la revendication 2, caractérisée en ce que la phase de 5 lyophilisation est précédée d'une phase de congélation dans une plage de -20°C à -80°C, la lyophilisation ayant lieu à une température inférieure à - 40 °C sous une pression inférieure à 0,10 mbar.\n<CLM>\1\tMéthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, 10 caractérisée en ce que le marqueur de l'activité métabolique des bactéries est la résazurine, le suivi de l'activité métabolique des bactéries étant réalisé par colorimétrie et/ou par spectrophotométrie de fluorescence.\n<CLM>\1\tMéthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, 15 caractérisée en ce que les souches bactériennes sont choisies parmi : Acinetobacter towneri, Paracoccus pantotrophus, Arthrobacter aurescens, Proteus mira buis, Bacillus funiculus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus mycoides, Bacillus subtilis subsp. Subtilis, Pseudomonas putida, Bosea vestrisii, Budvicia aquatica, Rhizobium radiobacter, Comamonas denitrificans, 20 Rhodococcus rhodochrous, Comamonas testosteroni, Sphingobium yanoikuyae, Corynebacterium pseudodiphtheriticum, Staphylococcus auricularis, Cupriavidus necator, Staphylococcus sp., Enterobacter helveticus, Thauera linaloolentis, Esche richia cou, Variovorax paradoxus, Paracoccus denitrificans, Zoo gloea resiniphila. 25\n<CLM>\1\tMéthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les différentes fractions de l'échantillon aqueux sont réparties dans au moins 6, de préférence au moins 8, cellules de mesure renfermant chacune une souche bactérienne appartenant à l'un des groupes 30 suivants : - groupe A: Bacillus funiculus, Bosea vestrisii, Zoo gloea resiniphila, Paracoccus pantotrophus, Budvicia aquatica, ou Acinetobacter towneri, 16 - groupe B: Thauera linaloolentis, Comamonas denitrificans, Comamonas testosteroni, Bacillus mycoides, ou Rhodococcus rhodochrous, - groupe C: Pseudomonas aeruginosa, Cupriavidus necator, ou Pseudomonas putida, 5 - groupe D: Escherichia cou, ou Enterobacter helveticus, - groupe E: Variovorax paradoxus, - groupe F: Staphylococcus auricularis, ou Corynebacterium pseudodiphtheriticum, - groupe G: Paracoccus denitrificans, ou Proteus mirabilis, 10 - groupe H: Rhizobium radiobacter, Bacillus subtifis subsp. Subtifis, Staphylococcus sp., Sphingobium yanoikuyae, ou Arthrobacter aurescens.\n<CLM>\1\tMéthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les différentes fractions de l'échantillon aqueux sont 15 réparties dans des cellules de mesure renfermant chacune une souche bactérienne unique comprenant au moins les huit souches bactériennes suivantes : Bacillus subtifis subsp. Subtifis, Budvicia aquatica, Comamonas testosteroni, Corynebacterium pseudodiphtheriticum, Cupriavidus necator, Esche richia cou, Proteus mira buis, Pseudomonas putida, Rhodococcus 20 rhodochrous, Variovorax paradoxus.\n<CLM>\1\tKit pour réaliser l'évaluation de la teneur en matière organique biodégradable d'un échantillon aqueux, ledit kit comprenant : - au moins quatre cellules de mesure, de préférence six cellules, de préférence 25 encore huit cellules de mesure, chacune renfermant une souche bactérienne unique, non pathogène, isolée du milieu naturel, et lyophilisée en présence d'un agent de protection, - un marqueur d'activité métabolique desdites bactéries, - une notice détaillée de mise en oeuvre de la méthode conforme à l'une des 30 revendications précédentes. 17\n<CLM>\1\tKit selon la revendication 8, caractérisé en ce que les cellules de mesure sont des flacons transparents, fermés, de préférence sous la forme de tubes individuels ou agencés en microplaques.\n<CLM>\1\tUtilisation de la méthode d'évaluation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, pour la quantification de la teneur en matière organique biodégradable d'un échantillon aqueux de stations d'épuration, d'effluents industriels ou d'effluents d'élevage ou d'eaux naturelles telles que les eaux de surface, les eaux souterraines ou les eaux marines.\n<CLM>\1\tUtilisation de la méthode d'évaluation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, pour la détermination de la demande biologique en oxygène (DB05), par traitement statistique des données, obtenues lors du suivi spectrophotométrique de l'activité bactérienne dans chaque fraction d'échantillon, mettant en oeuvre une méthode multivariée, tel qu' un algorithme par apprentissage supervisé de type réseau de neurones, permettant de corréler les résultats de ladite méthode à la valeur correspondante de DB05 de la norme ISO 5815.