Brevet FR3075401A1 (20190621)

REVENDICATIONS1. Microscope de fluorescence a champ large pour ('observation d'un plan objet dans un milieu objet tridimensionnel apte a emettre une lumiere de fluorescence en reponse a une lumiere d'illumination, caracterise en ce qu'il comprend une premiere voie optique pour la lumiere d'illumination, une deuxieme voie optique pour la lumiere d'illumination et la lumiere de fluorescence et une troisieme voie optique pour la lumiere de fluorescence, dans lequel la premiere voie comprend un modulateur spatial (1) limitant le champ du microscope a champ large, dans lequel la deuxieme voie s'etend entre le plan objet et un separateur (3), dichroique vis-a-vis de la lumiere d'illumination et de la lumiere de fluorescence, dans lequel la troisieme voie s'etend entre la deuxieme voie et une camera (4) apte a detecter la lumiere de fluorescence, dans lequel le microscope comprend un moyen optique pour conjuguer le modulateur spatial (1) avec le plan objet pour la lumiere d'illumination et pour conjuguer le plan objet avec la camera (4) pour la lumiere de fluorescence et dans lequel la troisieme voie comprend un element optique dispersif pour la lumiere de fluorescence.\n<CLM>\1\tMicroscope a champ large selon la revendication 1, dans lequel le moyen optique comprend un objectif de microscope (2) dispose sur la deuxieme voie.\n<CLM>\1\tMicroscope a champ large selon la revendication 1, dans lequel le moyen optique comprend un premier objectif de microscope dispose sur la premiere voie et un second objectif de microscope dispose sur la deuxieme voie.\n<CLM>\1\tMicroscope a champ large selon la revendication 1, dans lequel ('element optique dispersif est un prisme (5).\n<CLM>\1\tDispositif selon la revendication 1, dans lequel le modulateur spatial (1) est une matrice de micro-miroirs (DMD).\n<CLM>\1\tDispositif selon la revendication 1 dans lequel le modulateur spatial (1) est un disque tournant.\n<CLM>\1\tProcede pour la calibration a une premiere longueur d'onde du microscope a champ large selon la revendication 1, comprenant les etapes suivantes: - disposer dans un voisinage du plan objet un milieu objet apte a emettre de la lumiere de fluorescence dans une premiere bande spectrale contenant la premiere longueur d'onde, en reponse a une premiere lumiere d'illumination, - disposer sur la troisieme voie un premier filtre interferentiel apte a selectionner spectralement un voisinage de la premiere longueur d'onde, 18 - illuminer sequentiellement par la premiere lumiere d'illumination, chaque point du champ large du microscope dans le plan objet, au moyen du modulateur spatial (1), - enregistrer une premiere image de chaque point du champ large du microscope, sur la camera (4), 5 - enlever le premier filtre interferentiel de la troisieme voie.\n<CLM>\1\tProcede selon la revendication 7 pour la calibration a une deuxieme longueur d'onde du microscope a champ large selon la revendication 1, consistant a repeter les etapes de la revendication 7 avec un deuxieme filtre interferentiel, apte a selectionner spectralement un 10 voisinage de la deuxieme longueur d'onde, pour obtenir une deuxieme image de chaque point du champ large du microscope, enregistree avec le deuxieme filtre interferentiel sur la camera (4).\n<CLM>\1\tProcede d'utilisation du microscope a champ large selon la revendication 1, calibre selon le procede de la revendication 8, comprenant les etapes suivantes: 15 - disposer au voisinage du plan objet, un echantillon apte a emettre une lumiere de fluorescence dans un spectre de longueurs d'onde comprenant le voisinage de la premiere longueur d'onde et le voisinage de la seconde longueur d'onde, en reponse a une lumiere d'illumination, - illuminer le champ large du microscope selon une grille de points, au moyen du modulateur spatial (1), 20 - enregistrer l'image de chaque point de la grille pour le spectre de longueurs d'onde, sur la camera (4), - repeter les deux etapes ci-dessus en appliquant des translations a la grille dans le champ large du microscope, au moyen du modulateur spatial (1), jusqu'a avoir enregistre une image pour le spectre de longueurs d'onde de chaque point du champ large du microscope sur la camera (4), 25 - deduire par traitement d'image, une premiere image d'un point de rechantillon a la premiere longueur d'onde, a partir de la premiere image de ce point a la premiere longueur d'onde, obtenue par le procede de calibration et de l'image de ce point pour le spectre de longueurs d'onde, - deduire par traitement d'image, une deuxieme image du point de l'echantillon a la deuxieme 30 longueur d'onde, a partir de l'image de ce point a la deuxieme longueur d'onde, obtenue par le procede de calibration et de l'image de ce point pour le spectre de longueurs d'onde.\n<CLM>\1\tProcede selon la revendication 9 pour obtenir une image spectrale d'un echantillon, sectionnee le long d'un axe optique du microscope a champ large, dans lequel le traitement 35 d'image comprend l'etape suivante: - supprimer le fond continu dans les images enregistrees par la camera (4).