Brevet FR3072097A1 (20190412)

REVENDICATIONS1. Procédé de détection d'au moins une molécule monocaténaire d'acides nucléiques cible (1), le procédé comprenant des étapes de : a) génération d'un écoulement (5) de liquide (12) comprenant au moins une nanoparticule (3) magnétique de type coeur-coquille dans un micro-canal (2) d'un microsystème (7), et une pluralité de molécules monocaténaires d'acides nucléiques sondes (20) attachées à la nanoparticule (3), chaque molécule monocaténaire d'acides nucléiques sonde (20) étant adaptée pour être au moins partiellement hybridée à une molécule monocaténaire d'acides nucléiques cible (1) en formant un duplex, au moins une partie (11) du micro-canal (2) étant agencée dans l'entrefer d'un électroaimant (10) ; b) génération d'un champ magnétique (6) alternatif dans la partie (11) du micro-canal (2) au moyen de l'électroaimant (10), le champ magnétique (6) alternatif présentant une intensité et une fréquence adaptées pour entraîner une hyperthermie magnétique des nanoparticules (3) de sorte à provoquer une dénaturation du duplex formé par la molécule monocaténaire d'acides nucléiques sonde (20) et par la molécule monocaténaire d'acides nucléiques cible (1) ; c) détection de la molécule monocaténaire cible (1) dispersée dans le liquide (12).\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1, dans lequel le micro-canal (2) présente une géométrie et l'écoulement (5) de liquide (12) présente une vitesse moyenne telles que la ou les nanoparticules (3) soient transportées en 30 moyenne pendant plus de 8 secondes dans la partie (11) du micro-canal (2).\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel la largeur Le de l'entrefer est inférieure à 5 mm. 28\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 3, dans lequel la nanoparticule (3) comprend un coeur en matériau ferromagnétique ou ferrimagnétique et une coquille en silice entourant le coeur. 5\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 4, dans lequel le coeur de la nanoparticule (3) est en maghémite.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 4 ou 5, dans lequel le coeur de la nanoparticule (3) présente une longueur et une largeur, et dans lequel la 10 longueur moyenne du coeur de la ou des nanoparticules (3) est supérieure à 20 nm.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 4 à 6, dans lequel le coeur de la ou des nanoparticules (3) comprend un agrégat (14) de noyaux (21) 15 ferromagnétiques ou ferrimagnétiques, l'agrégat (14) comprenant en moyenne au moins deux noyaux.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendication 4 à 7, dans lequel le rapport moyen de la longueur sur la largeur des nanoparticules (3) est supérieur à 1,5. 20\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 8, dans lequel la température de fusion des duplex (4) est adaptée pour que strictement plus de la majorité des duplex (4) soient dénaturés lors de l'étape b) du procédé. 25\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 9, dans lequel, l'étape c) de détection de la molécule monocaténaire cible (1) dispersée dans l'écoulement (5) est mise en oeuvre par électrochimie en imposant une différence de potentiel électrique entre deux électrodes, les électrodes étant en partie agencées dans le micro-canal (2).\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 10, dans lequel au moins un couple d'électrodes (15), comprenant une électrode de travail (16) et une contre-électrode (17), est agencé dans le micro-canal (2), en aval de la partie (11) du micro-canal (2) agencé dans l'entrefer de l'électroaimant (10), dans le sens de l'écoulement (5). 29\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 10 ou 11, dans lequel des molécules monocaténaires d'acides nucléiques sondes (18) sont attachées à une surface de l'une des électrodes (15), lesdites molécules monocaténaires étant 5 adaptées pour être au moins partiellement hybridées à la ou aux molécules monocaténaires d'acides nucléiques cibles (1).\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 10 à 12, dans lequel l'une des électrodes (15) comprend au moins une couche mince (19) choisie parmi une 10 couche mince d'or, une couche mince de platine et une couche mince de carbone.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 10 à 13, dans lequel le liquide (12) comprend un intercalant redox du duplex et un couple de composés redox. 15\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 14, comprenant une étape antérieure à l'étape a) dans laquelle la ou les nanoparticules (3) munie(s) des molécules monocaténaires d'acides nucléiques sondes (20), sont mélangées à un échantillon à tester. 20\n<CLM>\1\tEnsemble de détection d'au moins une molécule monocaténaire d'acides nucléiques cible (1), l'ensemble comprenant : - un électroaimant (10) présentant un entrefer (9), - un micro-canal (2) dans lequel peut s'écouler un liquide (12), le micro-canal 25 comprenant au moins une partie (11) agencée dans l'entrefer de l'électroaimant (10), - au moins une nanoparticule (3) magnétique de type coeur-coquille, et une pluralité de molécules monocaténaires d'acides nucléiques sondes (20) attachées à la nanoparticule (3), chaque molécule monocaténaire d'acides 30 nucléiques sonde (20) étant adaptée pour être au moins partiellement hybridée à une molécule monocaténaire d'acides nucléiques cible (1) en formant un duplex, dans lequel l'électroaimant (10) étant propre à générer un champ magnétique (6) alternatif présentant une intensité et une fréquence adaptées pour 35 entraîner une hyperthermie magnétique de la ou des nanoparticule(s) (3) 30 lorsque la ou les nanoparticule(s) sont transportées par le liquide dans la partie (11) du micro-canal agencée dans l'entrefer de l'électroaimant (10), de sorte à provoquer une dénaturation du duplex formé par la molécule monocaténaire d'acides nucléiques sonde (20) et par la molécule 5 monocaténaire d'acides nucléiques cible (1).\n<CLM>\1\tEnsemble selon la revendication 16, comprenant en outre au moins deux électrodes agencées au moins en partie dans le micro-canal (2), une différence de tension entre les électrodes étant propre à être contrôlée pour 10 détecter par électrochimie la molécule monocaténaire cible (1) dispersée dans l'écoulement (5).\n<CLM>\1\tEnsemble selon la revendication 17, comprenant des molécules monocaténaires d'acides nucléiques sondes (18) attachées à une surface de 15 l'une des électrodes (15), lesdites molécules monocaténaires étant adaptées pour être au moins partiellement hybridées à la ou aux molécules monocaténaires d'acides nucléiques cibles (1).\n<CLM>\1\tEnsemble selon l'une des revendications 17 et 18, dans lequel l'une des 20 électrodes (15) comprend au moins une couche mince (19) choisie parmi une couche mince d'or, une couche mince de platine et une couche mince de carbone.