Brevet FR3068364A1 (20190104)

REVENDICATIONSI. Souche mutante de Sarcocystidae dans laquelle les fonctions des deux protéines MIC1 et MIC3 essentielles à la virulence sont supprimées respectivement par une délétion totale du gène mic/ codant pour la protéine MIC1 et par une délétion totale du gène mic3 codant pour la protéine MIC3, caractérisée en qu'elle contient au moins un acide nucléique codant respectivement pour au moins un antigène hétérologue immunogène et les moyens nécessaires à son expression, sous réserve que lorsque ladite souche mutante contient un acide nucléique codant pour un antigène hétérologue immunogène, ladite souche mutante est dépourvue de gène de sélection, ledit au moins un antigène hétérologue immunogène étant un antigène hétérologue immunogène de virus, de parasite ou de bactérie.\n<CLM>\1\tSouche mutante de Sarcocystidae selon la revendication 1, dans laquelle ladite souche mutante est une souche du genre Toxoplasma spp., en particulier une souche de l'espèce Toxoplasma gondii.\n<CLM>\1\tSouche mutante de Sarcocystidae selon la revendication 1, dans laquelle ladite souche mutante est une souche du genre Neospora spp., en particulier une souche de l'espèce Neospora caninum.\n<CLM>\1\tSouche mutante de Sarcocystidae selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle contient au moins deux acides nucléiques codant respectivement pour au moins deux antigènes hétérologues immunogènes, en particulier au moins deux acides nucléiques codant respectivement pour au moins deux antigènes hétérologues immunogènes de virus, ou en particulier au moins deux acides nucléiques codant respectivement pour au moins deux antigènes hétérologues immunogènes de bactérie, en particulier au moins deux acides nucléiques codant respectivement pour au moins deux antigènes hétérologues immunogènes de parasites.\n<CLM>\1\tSouche mutante de Sarcocystidae selon l'une des revendications 1 à 4, dans laquelle ledit au moins un antigène hétérologue immunogène est un antigène du virus Influenza choisi parmi 202 la protéine de SEQ ID NO : 211 (fragment N-ter du virus influenza humain), ou la protéine de SEQ ID NO : 214 (fragment N-ter de la protéine M2e du virus influenza du porc), ou la protéine de SEQ ID NO : 212 (fragment N-ter de la protéine M2 du virus influenza aviaire de type I) ou la protéine de SEQ ID NO: 213 (fragment N-ter de la protéine M2 du virus influenza aviaire de type II), la protéine de SEQ ID NO : 209, la protéine de SEQ ID NO: 206, la protéine de SEQ ID NO 253, la protéine de SEQ ID NO : 233 ou la protéine de SEQ ID NO :255, ou ledit au moins un antigène hétérologue immunogène est un antigène de la bactérie Chlamydia abortum choisi parmi la protéine CPAF de SEQ ID NO : 289 , la protéine MOMP de SEQ ID NO : 297, la protéine PmpG de SEQ ID NO :270, la protéine de fusion de SEQ ID NO : 288, la protéine de fusion de SEQ ID NO : 296 ou la protéine de fusion de SEQ ID NO: 304 ou ledit au moins un antigène hétérologue immunogène est un antigène du parasite Leishmania infantum choisi parmi la protéine KMP11 de SEQ ID NO : 259, ou la protéine NH36 de SEQ ID NO: 269, ou la protéine CYP1 de SEQ ID NO: 279, ou la protéine de fusion de SEQ ID NO: 257, ou la protéine de fusion de SEQ ID NO: 267, ou la protéine de fusion de SEQ ID NO :\n<CLM>\1\t6. Souche mutante de Sarcocystidae selon l'une des revendications 1 à 2 et 4 à 5, dans laquelle ladite souche mutante est une souche de Toxoplasma gondii dans laquelle la fonction de la protéine MIC1 est supprimée par une délétion totale du gène mic/ codant pour la protéine MIC1 et la fonction de la protéine MIC3 est supprimée par une délétion totale du gène mic3 codant pour la protéine MIC3, ladite souche étant dépourvue de gène de sélection, et contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO: 311 codant pour un antigène hétérologue immunogène du virus Influenza de séquence SEQ ID NO : 253, ou contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO :310 codant pour un antigène hétérologue immunogène du virus Influenza de séquence SEQ ID NO : 206, ou contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO: 312 codant pour un antigène hétérologue immunogène du virus Influenza de séquence SEQ ID NO : 255, ou contenant deux acides nucléiques de séquence SEQ ID NO : 311 et SEQ ID NO : 310 codant respectivement pour deux antigènes hétérologues immunogènes du virus Influenza de séquence SEQ ID NO : 253, et de séquence SEQ ID NO : 206, 203 ou contenant deux acides nucléiques de séquence SEQ ID NO : 312 et SEQ ID NO : 310 codant respectivement pour deux antigènes hétérologues immunogènes du virus Influenza de séquence de séquence SEQ ID NO : 255 et de séquence SEQ ID NO : 206, ou contenant deux acides nucléiques de séquence SEQ ID NO : 312 et SEQ ID NO : 311 codant respectivement pour deux antigènes hétérologues immunogènes du virus Influenza de séquence de séquence SEQ ID NO : 255 et de séquence SEQ ID NO : 253, ou contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO: 265 codant pour un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID : 257, ou contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO: 275 codant pour un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID : 267, ou contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO: 277 codant pour un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID : 285, ou contenant deux acides nucléiques de séquence SEQ ID NO: 265 et de séquence SEQ ID NO: 275 codant respectivement pour un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID: 257 et un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID : 267, ou contenant deux acides nucléiques de séquence SEQ ID NO: 265 et de séquence SEQ ID NO: 277 codant respectivement pour un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID: 257 et un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID : 285, ou contenant deux acides nucléiques de séquence SEQ ID NO: 275 et de séquence SEQ ID NO: 277 codant respectivement pour un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID: 267 et un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID : 285, ou contenant trois acides nucléiques de séquence SEQ ID NO: 265, de séquence SEQ ID NO: 275 et de séquence SEQ ID NO: 277, codant respectivement pour un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID: 257, un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID : 267, et un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID :\n<CLM>\1\t204\n<CLM>\1\tSouche mutante de Sarcocystidae selon l'une des revendications 1 et 3 à 5, dans laquelle ladite souche mutante est une souche de Neospora caninum dans laquelle la fonction de la protéine MIC1 est supprimée par une délétion totale du gène mie/ codant pour la protéine MIC1 et la fonction de la protéine MIC3 est supprimée par une délétion totale du gène mic3 codant pour la protéine MIC3, ladite souche étant dépourvue de gène de sélection et contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO: 311 codant pour un antigène hétérologue immunogène du virus Influenza de séquence SEQ ID NO : 253, ou contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO :310 codant pour un antigène hétérologue immunogène du virus Influenza de séquence SEQ ID NO : 206, ou contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO: 312 codant pour un antigène hétérologue immunogène du virus Influenza de séquence SEQ ID NO : 255, ou contenant deux acides nucléiques de séquence SEQ ID NO : 312 et SEQ ID NO : 310 codant respectivement pour deux antigènes hétérologues immunogènes du virus Influenza de séquence de séquence SEQ ID NO : 255 et de séquence SEQ ID NO : 206, ou contenant deux acides nucléiques de séquence SEQ ID NO : 312 et SEQ ID NO : 311 codant respectivement pour deux antigènes hétérologues immunogènes du virus Influenza de séquence de séquence SEQ ID NO : 255 et de séquence SEQ ID NO : 253, ou contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO: 265 codant pour un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID : 257, ou contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO: 275 codant pour un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID : 267, ou contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO: 277 codant pour un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID : 285, ou contenant deux acides nucléiques de séquence SEQ ID NO: 265 et de séquence SEQ ID NO: 275 codant respectivement pour un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID: 257 et un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID : 267, ou contenant deux acides nucléiques de séquence SEQ ID NO: 265 et de séquence SEQ ID NO: 277 codant respectivement pour un antigène hétérologue immunogène de Leishmania 205 , infantum de séquence SEQ ID: 257 et un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID : 285, ou contenant deux acides nucléiques de séquence SEQ ID NO: 275 et de séquence SEQ ID NO: 277 codant respectivement pour un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID: 267 et un antigène hétérologue immunogène de Leishmania infantum de séquence SEQ ID : 285, ou contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO: 294 codant pour un antigène hétérologue immunogène de Chlamydia abortus de séquence SEQ ID : 288, ou contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO: 302 codant pour un antigène hétérologue immunogène de Chlamydia abortus de séquence SEQ ID : 296, ou contenant un acide nucléique de séquence SEQ ID NO: 292 codant pour un antigène hétérologue immunogène de Chlamydia abortus de séquence SEQ ID :\n<CLM>\1\t8. Procédé d'obtention d'une souche mutante de Sarcocystidae selon l'une des revendications 1 à 7, dans laquelle ladite souche mutante est une souche de Toxoplasma gondii ou de Neospora caninum dans laquelle la fonction de la protéine MIC1 est supprimée par une délétion totale du gène mic/ codant pour la protéine MIC1 et la fonction de la protéine MIC3 est supprimée par une délétion totale du gène mic3 codant pour la protéine MIC3 ladite souche étant dépourvue de gène de sélection et contenant au moins un acide nucléique codant respectivement pour au moins un antigène hétérologue immunogène comprenant : - une étape A de délétion totale du gène mic3, - une étape B de délétion totale du gène mia, les étapes A et B pouvant être réalisée dans un ordre A suivi de B ou B suivi de A, puis - une étape C de modification génétique de la souche avec l'insertion aléatoire d' au moins un plasmide comportant un acide nucléique codant pour un antigène hétérologue immunogène, et un gène de sélection, 206 - une étape D de validation de la souche ayant intégrée le plasmide de l'étape C par PCR et/ou immunofluorescence et/ou profil de résistance, - une étape E de suppression du gène de sélection par une méganucléase, en particulier la méganucléase IcreI - une étape F de validation de la souche comportant la suppression du gène de sélection de l'étape E par PCR et/ou immunofluorescence et/ou profil de résistance.\n<CLM>\1\tProcédé d'obtention d'une souche mutante de Sarcocystidae selon la revendication 8 dans laquelle : une étape A comprenant ou constituée de la délétion du gène mic3 par recombinaison homologue et insertion d'une cassette de sélection encadrée par deux sites de recombinaison spécifique identiques , suivi de l'excision de ladite cassette de sélection par une enzyme permettant la recombinaison spécifique, ladite enzyme étant en particulier la Cre-recombinase, suite à laquelle un seul des deux sites de recombinaison spécifique encadrant la cassette reste intégré au locus dudit gène mic3 délété, une étape B comprenant ou constituée de la délétion du gène mic/ par recombinaison homologue et insertion d'une cassette de sélection encadrée par deux sites de recombinaison spécifique identiques, suivi de l'excision de ladite cassette de sélection par une enzyme permettant la recombinaison spécifique, ladite enzyme étant en particulier la Cre-recombinase, suite à laquelle un seul des deux sites de recombinaison spécifique encadrant la cassette reste intégré au locus dudit gène mic/ délété les deux sites de recombinaison spécifique encadrant la cassette de sélection insérée au locus du gène mic/ étant différents des deux sites de recombinaison spécifique encadrant la cassette de sélection insérée au locus du gène mic3 les étapes A et B pouvant être réalisée dans un ordre A suivi de B ou B suivi de A, puis - une étape C de modification génétique de la souche avec l'insertion aléatoire d'au moins un plasmide comportant un acide nucléique codant pour un antigène hétérologue immunogène, et un gène de sélection, 207 ' - une étape D de validation de la souche ayant intégrée le plasmide de l'étape C par PCR et/ou immunofluorescence et/ou profil de résistance, - une étape E de suppression du gène de sélection par une méganucléase, en particulier la méganucléase IcreI - une étape F de validation de la souche comportant la suppression du gène de sélection de l'étape E par PCR et/ou immunofluorescence et/ou profil de résistance.\n<CLM>\1\tSouche mutante de Sarcocystidae selon l'une des revendications 1 à 7 pour son utilisation comme médicament, en particulier comme vaccin ou immunostimulant.\n<CLM>\1\tSouche mutante de Sarcocystidae selon l'une des revendications 1 à 7 pour son utilisation dans la prévention de pathologies d'origine virale, parasitaire ou bactérienne chez un mammifère, ledit mammifère étant choisi parmi les ovidés, les caprins, les porcins, les bovins, les équidés, les camélidés, les canidés ou les félidés, ou chez un oiseau, en particulier pour son utilisation dans la prévention de la grippe aviaire, en particulier pour son utilisation dans la prévention de la leishmaniose, en particulier pour son utilisation dans la prévention de la chlamydiose.