Brevet FR3078781A1 (20190913)

REVENDICATIONS1. Utilisation in vitro d'au moins une lectine pour le marquage de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants, choisie parmi les lectines Maackia amurensis lectin II (MAH-II), Euonymus europaeus lectin (EEL), Psophocarpus tetragonolobus lectin I (PTL-I) et Griffonia Simplicifolia lectin II (GSL-II), pour obtenir des cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants marquées, dans un échantillon biologique notamment au moins deux lectines choisies parmi MAH-II, EEL, PTL-I et GSL-II, en particulier les deux lectines MAH-II et EEL.\n<CLM>\1\tUtilisation in vitro selon la revendication 1, dans laquelle au moins deux lectines sont utilisées, lesdites au moins deux lectines étant en quantité égale ou en quantité inégale, notamment en quantité inégale dans un ratio en poids de 2 :1, et de préférence les deux lectines étant MAH-II/EEL en quantité inégale dans un ratio en poids de 2 :1.\n<CLM>\1\tUtilisation in vitro selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, dans laquelle la lectine MAH-II reconnait les glycanes 0-liés, en particulier le motif disialyl-T [NeuAc a2-3Gal al -3(NeuAc a2-6)Ga1NAc], la lectine PTL-I reconnait les glycanes 0-liés, en particulier les motifs Gal a 1-3(Fuc a 1-2)Gal et Ga1NAc a 1-3(Fuc a 1-2)Gal des antigènes B et A, la lectine EEL reconnait les glycanes galactosylés, en particulier le motif Gal a 1-3(Fuc a 1-2)Gal de l'antigène B et le motif Fuc a 1-2Galf31-3G1cNAc de l'antigène H, et la lectine GSL-II reconnait les glycanes N-liés, en particulier les glycanes N-liés tri ou tétra antennés agalactosylés.\n<CLM>\1\tUtilisation in vitro selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 , dans laquelle ledit cancer est un cancer du sein, de l'utérus, de la prostate et des ovaires, de l'endomètre, de la thyroïde ou des glandes surrénales. 45\n<CLM>\1\tUtilisation in vitro selon la revendication 1, dans laquelle ledit marquage de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants est réalisé avec une lectine conjuguée à un marqueur choisi parmi : - un fluorophore en particulier choisi parmi la rhodamine, FITC ou l'Alexa Fluor 5 - un radio-isotope en particulier choisi parmi l'iode 125, le tritium ou le technétium, - une enzyme utilisant un substrat chromogène ou luminescent, ladite enzyme étant en particulier choisie parmi la peroxydase de raifort (HRP), la phosphatase alcaline, la glucose oxydase ou la f3-galactosidase, - des billes d'or ou 10 - la biotine.\n<CLM>\1\tUtilisation in vitro selon la revendication 1 ou 5, dans laquelle ledit marquage de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants est réalisé avec une lectine conjuguée et est suivi 15 de la détection desdites cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants marquées via la détection de la lectine conjuguée.\n<CLM>\1\tUtilisation in vitro selon l'une des revendications 1 ou 5, dans laquelle ledit marquage de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants avec 20 une lectine conjuguée à un marqueur est suivi de l'isolement desdites cellules souches cancéreuses de cancers hormono-dépendants marquées, dans laquelle ledit marqueur est la biotine et ledit isolement est réalisé via un support fonctionnalisé avec de la streptavidine ou de l'avidine constitué de billes magnétiques et en présence d'un aimant, ou 25 dans laquelle ledit marqueur est un fluorophore et ledit isolement est réalisé en cytométrie en flux.\n<CLM>\1\tUtilisation in vitro selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans laquelle ledit échantillon biologique est un échantillon d'organes cibles de cancers hormono- 30 dépendants.\n<CLM>\1\tProcédé in vitro de détection de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants, dans un échantillon biologique, comprenant: 46 (a) une étape de marquage des cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants avec au moins une lectine choisie parmi les lectines MAH-II, EEL, PTL-I et GSL-II, ladite lectine étant conjuguée à un marqueur choisi parmi : un fluorophore, un radio-isotope, une enzyme, des billes d'or ou de la biotine, 5 pour obtenir un échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants sont marquées par au moins une lectine, suivi d' (b) une étape de détection desdites cellules souches cancéreuses d'organes cibles de 10 cancers hormono-dépendants marquées par au moins une lectine.\n<CLM>\1\tProcédé in vitro d'isolement de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants, dans un échantillon biologique comprenant : (a) une étape de marquage des cellules souches cancéreuses d'organes cibles de 15 cancers hormono-dépendants avec au moins une lectine choisie parmi les lectines MAH-II, EEL, PTL-I et GSL-II, ladite lectine étant conjuguée à la biotine ou à un fluorophore, pour obtenir un échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants sont marquées par au moins une lectine, 20 suivi d' (b) une étape d'isolement desdites cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants marquées par au moins une lectine, ladite étape d'isolement étant réalisée via un support fonctionnalisé avec de la streptavidine ou de l'avidine constitué par des billes magnétiques et en présence d'un 25 aimant, lorsque ladite lectine est conjuguée à la biotine, et ladite étape d'isolement étant réalisée par tri cellulaire en cytométrie en flux, lorsque ladite lectine est conjuguée à un fluorophore.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro du risque de récidive de cancers hormono-dépendants 30 ou non hormono-dépendant et/ou de l'agressivité du cancers hormono-dépendants ou non hormono-dépendant pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique de cancers hormono-dépendants ou non hormono-dépendants, comprenant les étapes de : 47 (a) Marquage des cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormonodépendants d'un échantillon biologique avec au moins une lectine choisie parmi les lectines MAH-II, EEL, PTL-I et GSL-II, pour obtenir des cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants marquées 5 par au moins une lectine dans ledit échantillon biologique, ladite lectine étant conjuguée à un marqueur choisi parmi un fluorophore ou de la biotine, (b) Isolement des cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormonodépendants marquées par ladite au moins une lectine conjuguée : 10 - lors du marquage avec une lectine conjuguée la biotine, ledit isolement est effectué via un support fonctionnalisé avec de la streptavidine ou de l'avidine, en particulier ledit support fonctionnalisé est constitué de billes magnétiques fonctionnalisées avec de la streptavidine ou de l'avidine et ledit isolement est effectué par tri cellulaire magnétique en présence d'un aimant, ou 15 - lors du marquage avec une lectine conjuguée un fluorophore, ledit isolement est effectué par tri cellulaire en cytométrie en flux. (c) Nouveau marquage des cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants isolées avec au moins une lectine choisie parmi les lectines MAH-II, EEL, PTL-I et GSL-II, pour obtenir des cellules souches 20 cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants isolées et marquées par le nouveau marquage, ladite lectine étant conjuguée à un marqueur choisi parmi un fluorophore, un radio-isotope, une enzyme, des billes d'or ou de la biotine, (d) Détection desdites cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers 25 hormono-dépendants isolées et marquées par le nouveau marquage - microscopie en fluorescence ou lecteur de fluorescence lorsque la lectine est conjuguée à un fluorophore, ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via un fluorophore conjugué à la streptavidine ou à l'avidine; - microscopie à luminescence ou lecteur de luminescence lorsque la lectine est 30 conjuguée à une enzyme utilisant un substrat chimioluminescent, ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via une enzyme utilisant un substrat chimioluminescent conjuguée à la streptavidine ou à l'avidine 48 - gamma caméra lorsque la lectine est conjuguée à un radio-isotope, ou lorsque que la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via un radio-isotope conjugué à la streptavidine ou à l'avidine ; - microscopie UV/visible ou lecteur d'absorbance lorsque la lectine est conjuguée 5 à une enzyme utilisant un substrat chromogène, ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via une enzyme utilisant un substrat chromogène conjuguée à la streptavidine ou à l'avidine ; - microscopie électronique lorsque la lectine est conjuguée à des billes d'or, ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via des billes d'or 10 conjuguées à la streptavidine ou à l'avidine ; (e) Éventuellement quantification des cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants ; (f) Comparaison de l'intensité de la détection de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants dans ledit échantillon biologique 15 par rapport à l'intensité de la détection de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants dans un échantillon sain jouxtant l'échantillon biologique, et éventuellement comparaison de la quantification de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants dans ledit 20 échantillon biologique par rapport à la quantification de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants dans un échantillon sain jouxtant l'échantillon biologique (g) Déduction du risque de récidive de cancers hormono-dépendants ou non hormonodépendants et/ou de l'agressivité de cancers hormono-dépendants ou non- 25 hormono-dépendants pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique de cancers hormono-dépendants ou non hormono-dépendants à partir de la présence et éventuellement de la quantité de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants. 30\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro du risque de récidive de cancers hormono-dépendants ou non hormono-dépendants et/ou de l'agressivité de cancers hormono-dépendants ou non hormono-dépendants pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique de cancers hormono-dépendants ou non hormono-dépendants, comprenant les étapes de : 49 (a) Marquage des cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormonodépendants d'un échantillon biologique avec au moins une lectine choisie parmi les lectines MAH-II, EEL, PTL-I et GSL-II, pour obtenir des cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants marquées 5 par au moins une lectine dans ledit échantillon biologique, ladite lectine étant conjuguée à un marqueur choisi parmi un fluorophore, un radio-isotope, une enzyme, des billes d'or ou de la biotine, (b) Détection desdites cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants marquées par 10 - microscopie en fluorescence ou lecteur de fluorescence lorsque la lectine est conjuguée à un fluorophore ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via un fluorophore conjugué à la streptavidine ou à l'avidine; - microscopie à luminescence ou lecteur de luminescence lorsque la lectine est conjuguée à une enzyme utilisant un substrat chimioluminescent, ou lorsque la 15 lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via une enzyme utilisant un substrat chimioluminescent conjuguée à la streptavidine ou à l'avidine - gamma caméra lorsque la lectine est conjuguée à un radio-isotope, ou lorsque que la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via un radio-isotope conjugué à la streptavidine ou à l'avidine ; 20 - microscopie UV/visible ou lecteur d'absorbance lorsque la lectine est conjuguée à une enzyme utilisant un substrat chromogène, ou lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via une enzyme utilisant un substrat chromogène conjuguée à la streptavidine ou à l'avidine ; - microscopie électronique lorsque la lectine est conjuguée à des billes d'or, ou 25 lorsque la lectine est conjuguée à la biotine et est détectée via des billes d'or conjuguées à la streptavidine ou à l'avidine ; (c) Éventuellement quantification des cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants ; (d) Comparaison de l'intensité de la détection de cellules souches cancéreuses 30 d'organes cibles de cancers hormono-dépendants dans ledit échantillon biologique par rapport à l'intensité de la détection de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants dans un échantillon sain jouxtant l'échantillon biologique, 50 et éventuellement comparaison de la quantification de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants dans ledit échantillon biologique par rapport à la quantification de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants dans un échantillon 5 sain jouxtant l'échantillon biologique; (e) Déduction du risque de récidive de cancers hormono-dépendants ou non hormonodépendants et/ou de l'agressivité de cancers hormono-dépendants ou non hormono-dépendants pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique de cancers hormono-dépendants ou non hormono-dépendants à 10 partir de la présence et éventuellement de la quantité de cellules souches cancéreuses d'organes cibles de cancers hormono-dépendants.\n<CLM>\1\tKit de diagnostic in vitro du risque de récidive de cancers hormono-dépendants ou non hormono-dépendants et/ou de l'agressivité de cancers hormono-dépendants ou non 15 hormono-dépendants pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique de cancers hormono-dépendants ou non hormono-dépendants, comprenant au moins une lectine choisie parmi les lectines MAH-II, EEL, PTL-I et GSL-II, ladite lectine étant conjuguée à la biotine, et des billes magnétiques fonctionnalisées avec de la streptavidine, et éventuellement au moins une lectine 20 choisie parmi les lectines MAH-II, EEL, PTL-I et GSL-II, conjuguée à un fluorophore, un radio-isotope, une enzyme ou des billes d'or, ou comprenant au moins une lectine choisie parmi les lectines MAH-II, EEL, PTL-I et GSL-II, ladite lectine étant conjuguée un fluorophore, et éventuellement au moins une lectine choisie parmi les lectines MAH-II, EEL, PTL-I et GSL-II, conjuguée à la 25 biotine, un radio-isotope, une enzyme ou des billes d'or. 51