Brevet FR3072686A1 (20190426)

REVENDICATIONS1. Procédé pour produire un baculovirus recombinant dont le génome comprend un ou plusieurs transgène(s) codant chacun une enzyme de maturation des protéines et n transgènes codant chacun un polypeptide d'intérêt, ledit procédé comprend les étapes de : a) Préparer, dans une cellule d'insecte, un génome de baculovirus recombinant capable de se répliquer qui comprend un ou plusieurs transgène(s) codant chacun une enzyme de maturation des protéines et n transgènes codant chacun un polypeptide d'intérêt, par recombinaison homologue entre : al) un génome de baculovirus déficient pour la réplication dans lequel n gènes essentiels à la réplication virale sont non-fonctionnels et qui comprend un ou plusieurs transgène(s) codant chacun une enzyme de maturation des protéines, et a2) n vecteurs de transfert comprenant chacun: i) une séquence nucléotidique permettant de restaurer la fonction d'un des n gènes essentiels à la réplication virale non-fonctionnel, ii) un des n transgènes codant un polypeptide d'intérêt, l'ensemble des séquences nucléotidiques i) des n vecteurs de transfert étant capables de restaurer la réplication du génome de baculovirus déficient pour la réplication, n étant un nombre entier au moins égal à 2 ; et b) Générer un baculovirus recombinant dans une cellule d'insecte qui comprend le génome de baculovirus recombinant obtenu à l'étape a).\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1, dans lequel génome de baculovirus déficient pour la réplication de l'étape al) est préparé, dans une cellule bactérienne, par recombinaison homologue entre : - un génome de baculovirus déficient pour la réplication dans lequel n gènes essentiels à la réplication virale sont non-fonctionnels, et - une ou plusieurs séquence(s) nucléotidique(s) comprenant chacune un ou plusieurs transgène(s) codant chacun une enzyme de maturation des protéines. 63\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, dans lequel les gènes essentiels à la réplication virale sont sélectionnés parmi 1629 (ORF9), Pk1 (ORF10), lef-1 (ORF14), 0RF34, lef-11 (0RF37), p47 (ORF40), lef8 (ORF50), DNA.1 domain (ORF51), 0RF53, vp1054 (0RF54), Lef-9 (0RF62), DNA Pol (0RF65), lef-3 (0RF67), 0RF73, 0RF75, ORF81, p95 (0RF83), vp39 (0RF89), lef-4 (ORF90), p33 (0RF92), helicase (0RF95), vp80 (ORF104), ORF106-107, odv-ec43 (ORF109), gp64/67 (0RF128), 0RF132, 0RF133, odvec27 (0RF144), 0RF146, ie1 (0RF147), lef-2 (ORF6).\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel les n gènes essentiels à la réplication virale non-fonctionnels sont chacun adjacents à un gène non-essentiel à la réplication virale.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 4, dans lequel le gène non-essentiel à la réplication virale est sélectionné parmi Ph (ORF 8), ORF11, ORF13, egt (ORF15), v-ubiquitin (0RF35), 39K (0RF36), 0RF38, p43 (0RF39), lef-12 (ORF41), pcna (0RF49), 0RF52, 0RF55, Fp (ORF61), 0RF63, gp37 (0RF64), ORF68, 0RF72, 0RF74, 0RF82, cg30 (0RF88), ORF91, pif-4 (0RF96), he65 (ORF105), ORF108, ORF110, cathepsine (0RF127), p24 (0RF129), pp34 (ORF131), 0RF134, 0RF145, odv-e56 (0RF148), ORF5.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel les n transgènes codant un polypeptide recombinent chacun au niveau d'un gène non-essentiel à la réplication virale adjacent à un gène essentiel à la réplication virale non fonctionnel.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel l'enzyme de maturation des protéines est choisie parmi une peptidase signal, une furine, une proprotéine convertase, une glycosyltransférase, une glycosidase, une protéine chaperone, une disulfide isomérase, une acyltransférase, une méthyltransférase, une hydroxylase, une transglutami nase, une farnésyltransférase, une géranylgéranyl-transférase, une Nmyristoyltransférase, une palmityltransférase, une protéine kinase, une phosphatase, une transpeptidase, une carboxylase, une ubiquitine ligase.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 2 à 7, dans lequel le ou les transgène(s) codant une enzyme de maturation des protéines recombinent chacun au niveau d'un gène non-essentiel à la réplication virale, de préférence au niveau d'un gène non- 64 essentiel à la réplication virale non-adjacent à un gène essentiel à la réplication virale non fonctionnel:-\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 8, dans lequel le gène non-essentiel à la réplication virale est sélectionné parmi ptp (ORF1), cb( (ORF3), ORF4, ORF7, odv-e26 (ORF16), ORF17, ORF18, ORF19, ARIF-1 ORF20-21, pif2 (0RF22), protéine F (0RF23), iap1 (0RF27), lef6 (0RF28), 0RF29, ORF30, sod (ORF31), fgf (0RF32), gta (0RF42), 0RF43, 0RF44, 0RF45, odv-e66 (ORF46), 0RF47, 0RF56, ORF57, chaB-like (0RF58/59), chaB-like (ORF60), mtase (0RF69), hcf-1 (ORF70), iap2 (ORF71), 0RF86, 0RF87, ORF111, ORF114, pif3 (ORF115), ORF116, ORF117, pif1 (ORF119), ORF120, ORF121, 0RF122, pk2 (0RF123), 0RF124, lef7 (0RF125), chitinase (0RF126), gp16 (ORF130), p35 (0RF135), p26 (0RF136), p10 (0RF137), p74 (0RF138), 0RF149, ORF150, ie2 (ORF151), pe38 (0RF153) et 0RF154.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans lequel la cellule d'insecte est sélectionnée parmi Sf9, Sf21, Tn5-b14, les lignées cellulaires de lépidoptères sensibles au baculovirus AcMNPV, les lignées Sf21, de préférence Sf9. 11.. Procédé selon l'une quelconque des revendications 2 à 10, dans lequel la cellule bactérienne est E. cou i sélectionnées parmi DH1OB et EL350\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, dans lequel le génome de baculovirus déficient pour la réplication est obtenu à partir d'un génome de baculovirus sélectionné parmi ou dérivé du génome de BmNPV, AcMNPV, ApNPV, BsSNPV, CfMNPV, EoSNPV, HaNPV, HzNPV, LdMNPV, MbMNPV, OpMNPV, SIMNPV, SeMNPV ou TeNPV, de préférence AcMNPV.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, dans lequel n est un nombre entier allant de 2 à 31, par exemple allant de 2 à\n<CLM>\1\t14. Baculovirus recombinant ou génome de baculovirus recombinant, susceptible d'être obtenu par le procédé de production selon l'une des revendications 1 à 13, comprenant : a) un ou plusieurs transgène(s) codant chacun une enzyme de maturation des protéines, et b) n séquences nucléotidiques de formule (I) : 65 [transgène codant un polypeptide d'intérêt]-[séquence nucléotidique intercalaire]-[gène essentiel à la réplication virale fonctionnel] (I), ladite séquence d'acides nucléiques intercalaire est constituée de 0 à 600 pb, ledit gène essentiel à la réplication virale fonctionnel est sélectionné parmi 1629 (ORF9), Pk1 (ORF10), lef-1 (ORF14), 0RF34, lef-11 (0RF37), p47 (ORF40), lef8 (ORF50)1 DNA] domain (ORF51), 0RF53, vp1054 (0RF54), Lef-9 (0RF62), DNA Pol (0RF65), lef-3 (0RF67), 0RF73, 0RF75, ORF81, p95 (0RF83), vp39 (0RF89), lef-4 (ORF90), p33 (0RF92), helicase (0RF95), Vp80 (ORF104), ORF106-107, odv-ec43 (ORF109), gp64/67 (0RF128), 0RF132, 0RF133, odv-ec27 (0RF144), 0RF146, ie1 (0RF147), lef-2 (ORF6); n étant un nombre entier au moins égal à\n<CLM>\1\t15. Baculovirus recombinant ou génome de baculovirus recombinant selon la revendication 14, ne comprenant pas n gènes non-essentiels à la réplication virale choisis parmi Ph (ORF 8), ORF11, ORF13, egt (ORF15), v-ubiquitin (0RF35), 39K (0RF36), 0RF38, p43 (0RF39), lef-12 (ORF41), pcna (0RF49), 0RF52, 0RF55, Fp (ORF61), 0RF63, gp37(0RF64), 0RF68, 0RF72, 0RF74, 0RF82, cg30 (0RF88), ORF91, pif-4 (0RF96), he65 (ORF105), ORF108, ORF110, Cathepsine (0RF127), p24 (0RF129), pp34 (ORF131), 0RF134, 0RF145, odv-e56 (0RF148), ORF5.\n<CLM>\1\tJeu d'éléments de recombinaison homologue comprenant : a) un génome de baculovirus déficient pour la réplication dans lequel n gènes essentiels à la réplication virale sont non-fonctionnels et qui comprend un ou plusieurs transgène(s) codant chacun une enzyme de maturation des protéines ; b) n vecteurs de transfert comprenant chacun: i) une séquence d'acides nucléiques permettant de restaurer la fonction d'un des n gènes essentiels à la réplication virale non-fonctionnel, ii) un transgène codant un polypeptide d'intérêt, n étant un nombre entier au moins égal à\n<CLM>\1\t17. Cellule comprenant un baculovirus recombinant ou un gènome de baculovirus recombinant selon l'une quelconque des revendications 14 ou 15 ou un jeu d'éléments de recombinaison homologue selon la revendication\n<CLM>\1\t66\n<CLM>\1\tUtilisation d'un baculovirus recombinant ou d'un génome de baculovirus recombinant selon l'une quelconque des revendications 14 ou 15 ou d'une cellule selon la revendication 17 pour la production de n polypeptides d'intérêt.