Brevet FR3071508A1 (20190329)

REVENDICATIONS1. Un procédé in vitro pour obtenir un modèle ex vivo de peau inflammée comprenant les étapes suivantes : a) injecter, dans le derme d'une biopsie de peau saine préalablement prélevée chez un mammifère, une composition comprenant une quantité efficace pour l'activation des cellules T résidentes du derme d'un anticorps anti-CD3 et d'un anticorps anti-CD28, et optionnellement d'IL-2, b) incuber la biopsie de peau injectée obtenue à l'étape a) en présence d'une composition comprenant une quantité efficace, pour obtenir la polarisation des cellules T activées à l'étape a) en LTh1 et/ou LTh17 et la synthèse de marqueurs de l'inflammation, d'au moins un mélange d'IL-113, d'IL23 et de TGF-(3.\n<CLM>\1\tLe procédé selon la revendication 1, dans lequel l'étape a) est réalisée manuellement.\n<CLM>\1\tLe procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel l'étape b) d'incubation dure à minima 5 jours.\n<CLM>\1\tLe procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, lequel comprend entre les étapes a) et b) une étape supplémentaire a') de dépôt de la biopsie de peau injectée obtenue à l'issue de l'étape a) sur une matrice liquide apte à se solidifier, ladite matrice étant elle-même contenue dans un insert pour culture cellulaire dont le fond est constitué d'une membrane poreuse et ledit insert étant disposé dans un container ou puits, de sorte à permettre, une fois la matrice solidifiée, le maintien de l'intégrité 3D de la biopsie de peau.\n<CLM>\1\tLe procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel les concentrations dans la composition injectée à l'étape a) du procédé sont comprises entre : - entre 10 ng/p.I et 100 ng/p.1, de préférence entre 20 ng/p.I et 80 ng/p.1, et de manière particulièrement préférée de 30 ng/p.I à 70 ng/p.I pour les anticorps anti-CD3 et anti-CD28, et optionnellement, 40 - entre 1 ng/ml à 20 ng/ml, de préférence de 2 ng/ml à 15 ng/ml, et de manière particulièrement préférée de 4 ng/ml à 12 ng/ml pour l'IL-2.\n<CLM>\1\tLe procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel les concentrations dans le au moins un mélange la composition utilisée à l'étape b) 5 du procédé sont comprises entre : - entre 1 ng/ml et 50 ng/ml, de préférence entre 5 ng/ml et 30 ng/ml, et de manière particulièrement préférée de 7 ng/ml à 15 ng/ml pour l'IL-113 et le TGFI3, et - entre 10 ng/ml à 100 ng/ml, de préférence de 20 ng/ml à 80 ng/ml, et de 10 manière particulièrement préférée de 30 ng/ml à 60 ng/ml pour l'IL-23.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, lequel vise en outre à évaluer l'efficacité anti-inflammatoire d'un composé et comprend les étapes supplémentaires suivantes : c) mettre en contact, avec un composé candidat, le modèle de peau 15 inflammée obtenu à l'issue de l'étape b) et comprenant des cellules T polarisées en LTh1 et/ou LTh17 ; d) mesurer le niveau d'expression d'au moins deux marqueurs de l'inflammation dans le modèle de peau inflammée; e) comparer le niveau d'expression desdits au moins deux marqueurs de 20 l'inflammation obtenus à l'étape d) avec leur niveau d'expression contrôle ; f) identifier l'efficacité anti-inflammatoire dudit composé candidat lorsque le niveau d'expression desdits au moins deux marqueurs de l'inflammation mesuré à l'étape d) est inférieur à leur niveau d'expression contrôle.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendications 7, lequel comprend également à l'étape d) la 25 mesure du niveau d'expression d'au moins trois, notamment d'au moins quatre, de préférence d'au moins cinq et, de manière particulièrement préférée, d'au moins six marqueurs de l'inflammation choisis parmi IL-8, IL-17A, IL-22, IL-23, IFNy, TNFa, 5100A7, 5100A8, 5100A9, 5100Al2, SERPINB3, SERPINB4, SERPINB13, DEFB4, KRT6A, KRT16, KRT17, CXCL9, CXCL10, CCL18, CCL20. 41\n<CLM>\1\tModèle ex vivo de peau inflammée comprenant un derme, un épiderme, des annexes épidermiques et des cellules Th1 et/ou Th17, lequel est susceptible d'être obtenu par un procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 et est caractérisé par l'expression d'au moins deux marqueurs de 5 l'inflammation, voir d'au moins trois ou d'au moins quatre, de préférence d'au moins cinq et, de manière particulièrement préférée, d'au moins six marqueurs de l'inflammation choisis parmi IL-8, IL-17A, IL-22, IL-23, IFNy, TNFa, S100A7, S100A8, S100A9, S100Al2, SERPINB3, SERPINB4, SERPINB13, DEFB4, KRT6A, KRT16, KRT17, CXCL9, CXCL10, CCL18, CCL20. 10\n<CLM>\1\tInsert pour culture cellulaire (10), apte à être contenu dans un container ou un puits de boite de culture, et dont le fond est constitué d'une membrane poreuse (40), ledit insert contenant le modèle ex vivo de peau inflammée (30) selon la revendication 9 enserré dans une matrice solidifiée (20), ladite matrice étant en contact avec le bord interne de l'insert et la membrane poreuse, 15 l'épiderme du modèle ex vivo de peau inflammée étant en contact avec l'atmosphère et le derme et les annexes épidermiques du modèle ex vivo de peau inflammée étant immergés dans la matrice solidifiée.\n<CLM>\1\tUtilisation du modèle ex vivo de peau inflammée selon la revendication 9 ou de l'insert pour culture cellulaire selon la revendication 10 pour identifier des 20 composés anti-inflammatoires, en particulier anti-psoriasiques.\n<CLM>\1\tKit pour la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 comprenant une biopsie de peau saine préalablement prélevée chez un mammifère, une composition A comprenant une quantité efficace d'un anticorps anti-CD3 et d'un anticorps anti-CD28, et 25 optionnellement d'IL-2, d'une composition B comprenant au moins un mélange d'IL-113, d'IL-23 et de TGF-P, et optionnellement un dispositif d'injection.