Brevet FR3068366A1 (20190104)

REVENDICATIONS1. Procédé in vitro de production de progéniteurs érythroïdes comprenant la mise en contact de cellules souches hématopoïétiques avec un milieu de culture cellulaire adapté à la croissance et/ou différentiation des cellules de la lignée hématopoïétique et 5 comprenant un inducteur d'autophagie et une hormone glucocorticorde.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1, dans lequel l'inducteur d'autophagie est le SMER-28 (Small Molecule Enhanc,er of Rapamycin 28). 10\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel l'hormone glucocorticoïde est la dexaméthasone.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel le milieu de culture comprend en outre un activateur de la voie 111F (Hypoxya Inductible Factor), 15 de préférence un inhibiteur de la prolyl hydroxylase (PHIS), et de manière encore préférée du DMOG (diméthyloxalylglycine).\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel les cellules souches hématopoïétiques sont obtenues par différenciation de cellules souches 20 pluripotentes, en particulier des cellules souches embryonnaires (ES) ou des cellules souches pluripotentes induites (iPS), ou sont isolées à partir d'un échantillon de sang de patient, de sang de cordon ombilical ou placentaire, ou encore à partir d'un échantillon de moelle osseuse, lesdites cellules souches embryonnaires étant dérivées de la masse cellulaire interne du blastocyste et étant obtenues sans destruction de l'embryon dont elles 25 sont issues.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel les cellules souches hématopoïétiques sont génétiquement modifiées pour surexprimer HTERT (Human Telomerase Reverse Transcriptase) et BMI (B lymphoma Mo-MLV 30 insertion region 1 homolog). 40\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 6, dans lequel les cellules souches hématopoïétiques sont en outre génétiquement modifiées pour sut-exprimer: - un ou plusieurs facteurs de transcription de la voie des CEN (Core Erythroid Network), de préférence LMO2 (um domain only\n<CLM>\1\t; et/ou un ou plusieurs gènes de la voie EPO-R/JAK2/STAT5/13CL-XL, de préférence BCL-XL (B-oeil Lymphoma-extra large).\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans lequel les cellules souches hématopoïétiques sont immortalisées et/ou comprennent un gène suicide.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans lequel les cellules sont cultivées dans ledit milieu de culture pendant au moins 20 jours, de préférence pendant au moins 40 jours, de manière encore préféré pendant au moins 60 jours.\n<CLM>\1\tUtilisation d'un milieu de culture cellulaire tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 4 pour la production et/ou l'amplification de progéniteurs érythroïdes. 20\n<CLM>\1\tCellule souche hématopoïétique génétiquement modifiée telle que définie dans l'une quelconque des revendications 6 à\n<CLM>\1\t12. Procédé in vitro de production d'érythrocytes comprenant : - la production de progéniteurs érythroïdes selon le procédé de l'une quelconque 25 des revendications 1 à 9 ; et - l'induction de la maturation des progéniteurs érythrordes.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 12, dans lequel la maturation des progéniteurs érythroïdes est induite par culture desdits progéniteurs dans un milieu de différenciation 30 érythrocytaire. 15 41\n<CLM>\1\tMilieu de culture cellulaire adapté à la croissance et/ou à la différentiation des cellules de la lignée hématopoïétique et comprenant une hormone glucocorticoïde, de préférence de la dexaméthasone, en particulier à une concentration comprise entre 0,01 triM et 0,1 mM, et un inhibiteur d'autophagie, de préférence du SMER-28, en particulier 5 à une concentration comprise entre 2 11M et 30 MM, et optionnellement un activateur de la voie 111F, de préférence du DMOG, en particulier à une concentration comprise entre 75 gM et 350\n<CLM>\1\tTrousse pour la production de progéniteurs érythroïdes et/ou d'érythrocytes 10 comprenant : - un milieu de culture tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou 14; et/ou - des cellules souches hématopoïétiques génétiquement modifiées selon la revendication 11; et - optionnellement, un guide contenant des instructions pour l'utilisation d'une telle trousse.\n<CLM>\1\tUtilisation d'une trousse selon la revendication 15 pour produire des progéniteurs érythroïdes et/ou des érythrocytes.20