Brevet FR3044017A1 (20170526)
REVENDICATIONS1. Chromosome artificiel bactérien (BAC), caractérisé en ce que ledit BAC comprend des séquences d'acide nucléique 5 rétroviral codant pour les protéines gag et pol, et une protéine env dans lequel chacune des séquences d'acide nucléique rétroviral est disposée sous la forme d'hybrides d'expression 10 individuels à l'intérieur du BAC.\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon la revendication 1, qui comprend en outre des séquences d'acide nucléique qui codent pour l'ARN génomique d'une particule de 15 vecteur rétroviral.\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon la revendication 1 ou la revendication 2, qui comprend en outre le gène auxiliaire rev. 20\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel les séquences d'acide nucléique rétroviral sont dérivées d'un rétrovirus choisi parmi les lentivirus, les alpha-rétrovirus, 25 les gamma-rétrovirus ou les rétrovirus mousseux.\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon la revendication 4, dans lequel les séquences d'acide nucléique rétroviral sont dérivées d'un lentivirus choisi dans le 30 groupe constitué du VIH-1, VIH-2, VIS, VIF, VAIE et Visna. 3044017 45\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon la revendication 5, dans lequel les séquences d'acide nucléique rétroviral sont dérivées du VIH-1.\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel la protéine env ou un substitut fonctionnel de celle-ci est dérivée du virus de la stomatite vésiculaire.\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, qui comprend en outre un élément régulateur de transcription.\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon la 15 revendication 8, dans lequel l'élément régulateur de transcription est un promoteur CMV.\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, qui comprend en outre un 20 isolant.\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon la revendication 10, dans lequel un isolant est présent entre chacune des séquences d'acide nucléique rétroviral. 25\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, qui comprend en outre un ou plusieurs transgènes. 30\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, qui comprend en outre un site d'entrée dans le ribosome interne (IRES). 3044017 46\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon l'une quelconque des revendications i à 13, qui comprend en outre un signal polyA. 5\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, qui comprend en outre une séquence d'intron.\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon l'une 10 quelconque des revendications 1 à 15, qui comprend en outre un site de clonage multiple (MCS)\n<CLM>\1\tChromosome artificiel bactérien selon l'une quelconque des revendications 1 à 16 pour une utilisation 15 dans un procédé de production de particules de vecteur rétroviral.\n<CLM>\1\tProcédé de production d'une particule de vecteur rétroviral défectif en réplication, comprenant 20 (a) l'introduction du chromosome artificiel bactérien selon l'une quelconque des revendications 1 à 16 dans une culture de cellules hôtes mammifères ; et (b) la culture des cellules hôtes mammifères dans des conditions peimettant de produire la particule de vecteur 25 rétroviral défectif en réplication.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 18, dans lequel la cellule hôte mammifère est une cellule HEK\n<CLM>\1\t30\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 18 ou la revendication 19, dans lequel l'étape d'introduction (a) est réalisée en utilisant la lipofection, l'électroporation ou un 3044017 47 dé de transfection à base chimique, comme le traitement au pnosphate de calcium.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 18 5 à 20, dans lequel l'étape de culture (b) est réalisée par incubation de la cellule hôte mammifère dans des conditions humidifiées.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 10 18 à 21, comprenant en outre l'isolation de la particule de vecteur rétroviral défectif en réplication.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 22, dans lequel l'isolation est réalisée en utilisant un filtre, comme une 15 membrane de faible liaison aux protéines.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 22 ou la revendication 23, dans lequel les particules de vecteur rétroviral défectif en réplication sont isolées moins de 72 20 heures après l'étape d'introduction (a).\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 24, dans lequel les particules de vecteur rétroviral défectif en réplication sont isolées entre 48 et 72 heures après l'étape d'introduction 25 (a)\n<CLM>\1\tParticule de vecteur rétroviral défectif en réplication obtenue par le procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à\n<CLM>\1\t30