Brevet FR3042507A1 (20170421)
REVENDICATIONS1. Procédé d'analyse d'un échantillon pour la présence éventuelle de levures de l'espèce Brettanomyces bruxellensis résistantes aux sulfites, caractérisé en ce que : - on procède à une étape de détection de la présence éventuelle, 5 dans ledit échantillon, de levures de l'espèce Brettanomyces bruxellensis appartenant au groupe génétique des levures triploïdes oenologiques, - et, si on détecte une telle présence, on déduit que ledit échantillon contient des levures de l'espèce Brettanomyces bruxellensis résistantes aux sulfites. 10\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon la revendication 1, selon lequel ladite étape de détection comprend la détection, pour des levures contenues dans ledit échantillon, d'un marqueur moléculaire spécifique des levures de l'espèce Brettanomyces bruxellensis du groupe génétique des levures triploïdes oenologiques. 15\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon la revendication 2, selon lequel ledit marqueur moléculaire est associé à la protéine de séquence d'acides aminés SEQ ID No:\n<CLM>\1\t4. Procédé d'analyse selon l'une quelconque des revendications 2 à 3, selon lequel ledit marqueur moléculaire est constitué par tout segment d'au 20 moins 90 nucléotides successifs de la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID No: 2 ou de toute séquence nucléotidique présentant avec ladite séquence SEQ ID No: 2 un degré d'homologie supérieur ou égal à 90 % sur 80 % ou plus de la séquence.\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon l'une quelconque des revendications 2 à 25 4, selon lequel ladite étape de détection comprend : 3042507 21 - l'extraction d'acides nucléiques de levures contenues dans ledit échantillon, - l'amplification d'un locus contenant ledit marqueur moléculaire par réaction de polymérisation en chaine, - et la détection dudit marqueur moléculaire dans l'ADN ainsi amplifié.\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon la revendication 5, selon lequel la réaction de polymérisation en chaine met en oeuvre au moins une amorce nucléotidique de séquence contenant une séquence choisie parmi les séquences SEQ ID No: 3 et SEQ ID No:\n<CLM>\1\t7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 2 à 6, selon lequel ladite étape de détection comprend : - l'isolement, à partir dudit échantillon, de colonies de levures de l'espèce Brettanomyces bruxellensis, - l'extraction d'acides nucléiques de chacune de ces colonies, - et la détection, dans chacun des extraits d'acides nucléiques ainsi obtenus, dudit marqueur moléculaire.\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon l'une quelconque des revendications 2 à 7, comprenant une étape de vérification que les levures pour lesquelles est mise en oeuvre la détection dudit marqueur moléculaire appartiennent à 20 l'espèce Brettanomyces bruxellensis.\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, selon lequel ladite étape de détection comprend la détermination de la quantité de levures de l'espèce Brettanomyces bruxellensis appartenant au groupe génétique des levures triploïdes oenologiques présentes dans ledit 25 échantillon.\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon la revendication 9, selon lequel ladite détermination est mise en oeuvre par réaction de polymérisation en chaine 3042 50 7 22 quantitative.\n<CLM>\1\tProcédé d'analyse selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, comprenant une étape de détermination de la quantité de levures à l'espèce Brettanomyces bruxellensis présentes dans ledit échantillon. 5\n<CLM>\1\tUtilisation d'un couple d'amorces nucléotidiques apte à amplifier, par réaction de polymérisation en chaine, une séquence nucléotidique spécifique des levures de l'espèce Brettanomyces bruxellensis appartenant au groupe génétique des levures triploïdes oenologiques, pour l'analyse de la présence éventuelle, dans un échantillon, de levures de l'espèce 10 Brettanomyces bruxellensis résistantes aux sulfites.\n<CLM>\1\tUtilisation selon la revendication 12, selon laquelle ledit couple d'amorces nucléotidiques est apte à amplifier un segment d'au moins 90 nucléotides successifs de la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID No: 2 ou de toute séquence nucléotidique présentant avec ladite 15 séquence SEQ ID No: 2 un degré d'homologie supérieur ou égal à 90 % sur 80 % ou plus de la séquence.\n<CLM>\1\tKit pour la mise en oeuvre d'un procédé d'analyse selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce qu'il comprend : - un couple d'amorces nucléotidiques pour l'amplification, par réaction de polymérisation en chaine, d'une séquence nucléotidique spécifique des levures de l'espèce Brettanomyces bruxellensis appartenant au groupe génétique des levures triploïdes oenologiques ; - et un couple d'amorces nucléotidiques pour l'amplification, par réaction de polymérisation en chaine, d'une séquence nucléotidique 25 témoignant de l'appartenance d'une levure à l'espèce Brettanomyces bruxellensis.\n<CLM>\1\tKit selon la revendication 14, comportant : - un couple d'amorces nucléotidiques pour l'amplification, par réaction 3042507 23 de polymérisation en chaine, d'un segment d'au moins 90 nucléotides successifs de la séquence nucléotidique de séquence SEQ ID No: 2 ou de toute séquence nucléotidique présentant avec ladite séquence SEQ ID No: 2 un degré d'homologie supérieur ou égal à 90 % sur 80 % ou plus de la 5 séquence ; - et/ou un couple d'amorces nucléotidiques de séquences contenant respectivement les séquences SEQ ID No: 5 et SEQ ID No: 6.