Brevet FR3049060A1 (20170922)
REVENDICATIONS1. Dispositif de préparation d'un échantillon sanguin, caractérisé en ce qu'il comporte une carte (1) micro-fluidique qui comporte : - Un canal d'injection (10) par lequel peut être injecté ledit échantillon sanguin, - Une première chambre (11) dans laquelle débouche ledit canal d'injection, ladite première chambre étant dédiée à la mise en oeuvre d'une opération d'extraction de protéines à analyser présentes dans ledit échantillon sanguin, - Une deuxième chambre (12) reliée à ladite première chambre de manière à recevoir un premier échantillon comportant les protéines à analyser extraites dans ladite première chambre, ladite deuxième chambre étant dédiée à la mise en oeuvre d'une opération de digestion des protéines à analyser présentes en vue d'obtenir un deuxième échantillon incluant des peptides digérés et des protéines non digérées, - Une troisième chambre (13) reliée à ladite deuxième chambre de manière à recevoir ledit deuxième échantillon incluant les peptides digérés et les protéines non digérées, ladite troisième chambre étant dédiée à la mise en oeuvre d'une opération de purification et de stabilisation des peptides digérés.\n<CLM>\1\tDispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comporte un support de déplétion présent dans la première chambre (11) pour capturer des protéines majoritaires présentes dans ledit échantillon sanguin.\n<CLM>\1\tDispositif selon la revendication 2, caractérisé en ce que le support de déplétion comporte des billes (110) présentes dans la première chambre et greffées avec un ou plusieurs composants de capture adaptés aux protéines majoritaires à capturer.\n<CLM>\1\tDispositif selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce que le support de déplétion comporte des piliers positionnés dans la première chambre (11) et greffées avec un ou plusieurs composants de capture adaptés aux protéines majoritaires à capturer.\n<CLM>\1\tDispositif selon l'une des revendications 2 à 4, caractérisé en ce que la première chambre (11) est réalisée sous la forme d'un serpentin dont les surfaces fonctionnalisées forment le support de déplétion. 3049060 13\n<CLM>\1\tDispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comporte un support d'enrichissement présent dans la première chambre (11) pour fixer et enrichir les protéines à analyser présentes dans l'échantillon sanguin.\n<CLM>\1\tDispositif selon la revendication 6, caractérisé en ce que le support 5 d'enrichissement comporte des billes présentes dans la première chambre et greffées avec un ou plusieurs composants d'enrichissement adaptés aux protéines à enrichir.\n<CLM>\1\tDispositif selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce que le support d'enrichissement comporte des piliers positionnés dans la première 10 chambre et greffées avec un ou plusieurs composants d'enrichissement adaptés aux protéines à enrichir.\n<CLM>\1\tDispositif selon l'une des revendications 6 à 8, caractérisé en ce que la première chambre (11) est réalisée sous la forme d'un serpentin dont les surfaces forment le support d'enrichissement. 15\n<CLM>\1\tDispositif selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il comporte un canal (120) débouchant dans la deuxième chambre (12), destiné à une injection d'une enzyme ou d'un mélange d'enzymes pour la mise en oeuvre de l'opération de digestion.\n<CLM>\1\tDispositif selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que la 20 deuxième chambre comporte une surface recouverte au moins partiellement d'une enzyme ou d'un mélange d'enzymes pour la mise en oeuvre de l'opération de digestion.\n<CLM>\1\tDispositif selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que la deuxième chambre comporte un volume interne destiné à stocker une 25 enzyme ou un mélange d'enzymes sous forme lyophilisée pour la mise en oeuvre de l'opération de digestion.\n<CLM>\1\tDispositif selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce qu'il comporte des moyens de séparation agencés pour séparer le plasma et les cellules sanguines présentes dans l'échantillon sanguin. 30\n<CLM>\1\tDispositif selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisé en ce qu'il comporte une colonne de chromatographie liquide en phase inverse logée dans la troisième chambre pour accrocher, stabiliser et/ou séparer les peptides digérés.\n<CLM>\1\tDispositif selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisé en ce qu'il comporte : 3049060 14 - Une première vanne (V1) agencée sur le canal d'injection pour commander une ouverture ou une fermeture dudit canal, - Une deuxième vanne (V2) agencée pour commander le transfert du premier échantillon de la première chambre vers la deuxième chambre, 5 - Une troisième vanne (V3) agencée pour commander le transfert du deuxième échantillon de la deuxième chambre vers la troisième chambre.\n<CLM>\1\tSystème de préparation d'un échantillon sanguin comportant un automate programmable, caractérisé en ce qu'il comporte un dispositif de préparation d'un échantillon sanguin conforme à l'une des revendications 1 à 15 et en 10 ce que l'automate programmable comporte une unité de traitement destinée à exécuter des modules logiciels adaptés pour générer des commandes à destination d'actionneurs selon une séquence déterminée en fonction des différentes étapes de préparation de l'échantillon sanguin sur ledit dispositif.\n<CLM>\1\tProcédé de préparation d'un échantillon sanguin, caractérisé en ce qu'il est 15 mis en oeuvre dans le dispositif tel que défini dans l'une des revendications 1 à 15 et en ce qu'il comporte les étapes suivantes : - Extraction dans la première chambre de protéines à analyser présentes dans ledit échantillon sanguin, - Digestion dans la deuxième chambre des protéines à analyser présentes 20 dans un premier échantillon comportant les protéines à analyser extraites dans ladite première chambre en vue d'obtenir un deuxième échantillon incluant des peptides digérés et des protéines non digérées, - Séparation dans la troisième chambre entre les peptides digérés et les protéines non digérées. 25\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 17, caractérisé en ce que l'étape d'extraction est réalisée par déplétion des protéines majoritaires du plasma ou enrichissement des protéines à analyser.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 17 ou 18, caractérisé en ce que l'étape de séparation est mise en oeuvre par chromatographie liquide sur une colonne 30 de type phase inverse.