Brevet FR3044680A1 (20170609)
REVENDICATIONS1. Utilisation d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement UEA-1 ou TJA-II, en tant que premier moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales, pour la mise en oeuvre d'un procédé de détection et/ou de quantification desdites cellules souches cancéreuses colorectales. Utilisation selon la revendication 1, d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose et d'au moins un second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales, de préférence un anticorps anti-OCT4. Utilisation selon la revendication 2, d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, d'un anticorps anti-OCT4 et d'au moins une lectine reconnaissant l'antigène T, avantageusement choisie parmi ACA, ABA et Jacaline. Utilisation selon la revendication 3, dans laquelle un moyen de révélation A de la lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement choisi parmi un chromophore, un fluorophore, et une enzyme capable de réduire un substrat chromogène B est conjugué à de la streptavidine, ladite lectine reconnaissant le motif 20 fucose a 1-2 galactose étant biotinylée.\n<CLM>\1\tUtilisation selon l'une des revendications 2 à 4, dans laquelle un moyen de révélation C de l'anticorps anti-OCT4, avantageusement choisi parmi un chromophore, un fluorophore, ou une enzyme capable de réduire un substrat chromogène D est lié à un 25 anticorps secondaire reconnaissant l'anticorps anti-OCT4.\n<CLM>\1\tUtilisation selon l'une des revendications 1 à 5, dans laquelle l'échantillon biologique colorectal est une coupe histologique. 30\n<CLM>\1\tUtilisation selon l'une des revendications 1 à 6, dans laquelle : - l'échantillon biologique est une coupe histologique, - la lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose est UEA-1 biotinylée, - le moyen de révélation A est une péroxydase de raifort, 1.2.\n<CLM>\1\t4. 3044680 5 25 à un anticorps - le substrat chromogène B est la diaminobenzidine, - le moyen de révélation C est une phosphatase alcaline liée secondaire, - le substrat chromogène D est le 3-amino-4-méthoxybenzamide.\n<CLM>\1\tProcédé de détection et/ou de quantification in vitro des cellules souches cancéreuses colorectales dans un échantillon biologique colorectal, comprenant une étape de révélation d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose dans un échantillon biologique colorectal marqué par ladite lectine. 10\n<CLM>\1\tProcédé de détection et/ou de quantification in vitro selon la revendication 8, comprenant les étapes de : (a) marquage des cellules souches cancéreuses colorectales avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose dans ledit échantillon biologique, 15 pour obtenir des cellules souches cancéreuses colorectales marquées dans ledit échantillon biologique, (b) révélation de ladite lectine dans l'échantillon biologique colorectal, (c) détection et/ou quantification des cellules souches cancéreuses colorectales marquées par ladite lectine dans ledit tissu biologique.\n<CLM>\1\tUtilisation d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, et éventuellement d'un anticorps anti-OCT4, pour le diagnostic in vitro du risque de récidive d'un cancer colorectal et/ou de l'agressivité d'un cancer colorectal pour définir la valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro du risque de récidive et/ou de l'agressivité d'un cancer colorectal pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal comprenant les étapes de : (a3) marquage des cellules souches cancéreuses colorectales avec un anticorps anti-OCT4 dans une coupe histologique d'un tissu colorectal, pour obtenir des cellules souches cancéreuses colorectales dans ladite coupe histologique, (b3) mise en contact de la coupe histologique obtenue à l'étape (a3) avec un anticorps secondaire reconnaissant l'anticorps anti-OCT4 lié à un moyen de révélation C, 3044680 26 (c3) révélation de l'anticorps anti-OCT4, (d3) marquage des cellules souches cancéreuses colorectales de la coupe histologique obtenue à l'étape (c3) avec une lectine biotinylée reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose et éventuellement au moins une lectine biotinylée 5 reconnaissant l'antigène T, pour obtenir des cellules souches cancéreuses colorectales marquées par la lectine biotinylée reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose et la éventuellement au moins une lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T dans la coupe histologique, (e3) mise en contact de la coupe histologique obtenue à l'étape (d3) avec de la 10 streptavidine, de l'avidine ou un anticorps anti-biotine lié à un moyen de révélation A, (f3) révélation de la lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose et de l'éventuellement au moins une lectine reconnaissant l'antigène T, (g3) détection et/ou quantification des cellules souches cancéreuses colorectales 15 dans la coupe histologique obtenue à l'étape (f3), (h3) déduction du risque de récidive et/ou de l'agressivité d'un cancer colorectal pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal à partir de la présence et/ou le nombre de cellules souches cancéreuses colorectales. 20\n<CLM>\1\tKit comprenant : - une lectine biotinylée reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose et éventuellement au moins une lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T, avantageusement choisie parmi ABA, ACA et Jacaline, 25 - de la streptavidine liée à une péroxydase de raifort, - un anticorps anti-OCT4, - un anticorps secondaire reconnaissant l'anticorps anti-OCT4 lié à une phosphatase alcaline.