Brevet FR3048001A1 (20170825)
REVENDICATIONS1. Méthode de dosage des D-dimères spécifiques de la maladie thromboembolique veineuse dans un échantillon de plasma de patient, ladite méthode comprenant le dosage habituel des D-dimères de l'échantillon effectué selon une méthode immunoturbidimétrique ou immuno-enzymatique d'une part, ainsi que, d'autre part, la mesure dynamique de la formation de fibrine de ce même échantillon, ladite mesure dynamique comprenant les étapes suivantes : a) mélange de l'échantillon de plasma, non dilué, avec du facteur tissulaire et des phospholipides ; b) incubation du mélange obtenu à l'étape a), puis ajout d'ions calcium dans le mélange obtenu, pour initier la génération de thrombine et la formation d'un caillot ; c) mesure de la variation de densité optique (DDO) du caillot en formation de l'étape b), à une seule longueur d'onde comprise entre 350 et 800 nm, de préférence à la longueur d'onde de 540 nm, pendant une durée de préférence inférieure à 10 minutes ; d) déteimination du profil de formation du caillot analysé en c), i.e. détermination du temps de formation de la fibrine mesuré par la tangente de la courbe, et de la DDO de l'échantillon mesurée au temps d'atteinte du plateau de polymérisation de la fibrine ; e) calcul des D-dimères résultant de la dégradation de la fibrine intravasculaire à partir du temps de formation de la fibrine mesuré en d) et de la DDO de l'échantillon mesurée au temps d'atteinte du plateau de polymérisation de la fibrine déterminée en d), et exprimés en unités équivalentes au fibrinogène initial (FEU); f) détermination du taux de D-dimères obtenu en e), par rapport à un seuil, de préférence au seuil de 0.5 pg/mL, ce qui permet notamment de déterminer la probabilité d'une thrombose veineuse ; g) déduction des produits de dégradation du fibrinogène (PDFg), générés par l'hyperfibrinolyse présente dans les états d'activation de la coagulation ; et h) détermination des D-dimères spécifiques de la thrombose veineuse, à partir du taux de D-dimères obtenu en f), des PDFg obtenus en g), et du temps de formation de la fibrine obtenu en d) par rapport à un seuil.\n<CLM>\1\tMéthode de dosage des D-dimères spécifiques de la maladie thromboembolique veineuse dans un échantillon de sang total de patient, ladite méthode comprenant le dosage habituel des D-dimères de l'échantillon effectué selon une méthode immuno- 3048001 46 turbidimétrique ou immuno-enzymatique d'une part, ainsi que la mesure dynamique de la formation de fibrine de ce même échantillon, d'autre part, ladite mesure dynamique comprenant les étapes suivantes : a) mélange de l'échantillon biologique de sang total avec du facteur tissulaire et des phospholipides ; b) incubation du mélange obtenu à l'étape a), puis ajout d'ions calcium ; c) mesure de la variation temporelle des propriétés physiques du caillot de fibrine en formation b), de préférence par thromboélastographie, rhéométrie ou par analyse d'images, pendant une durée de préférence inférieure à 10 minutes; d) détermination du profil de formation du caillot analysé en c), i.e. détermination du temps de formation de la fibrine mesuré par la tangente de la courbe, et de l'amplitude au temps d'atteinte du plateau de polymérisation de la fibrine ; e) calcul des D-dimères résultant de la dégradation de la fibrine intravasculaire à partir du temps de formation de la fibrine et de l'amplitude au temps d'atteinte du plateau de polymérisation de la fibrine déterminés en d), et exprimés en unités équivalentes au fibrinogène initial (FEU) ; f) détermination du taux de D-dimères obtenu en e) par rapport à un seuil, de préférence au seuil de 0.5 i_tg/mL, pour déterminer la probabilité d'une thrombose veineuse ; g) déduction des produits de dégradation du fibrinogène (PDFg), générés par l'hyperfibrinolyse présente dans les états d'activation de la coagulation ; et h) détermination des D-dimères spécifiques de la thrombose veineuse, à partir du taux de D-dimères obtenu en f), des PDFg obtenus en g) et du temps de formation de la fibrine obtenu en d) par rapport à un seuil.\n<CLM>\1\tMéthode selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le facteur tissulaire de l'étape a) est présent en une concentration comprise entre 0.5 et 5 pM, de préférence 2 pM.\n<CLM>\1\tMéthode selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le mélange de l'étape a) comprend des ions calcium.\n<CLM>\1\tMéthode selon l'une des revendications 1, 3 ou 4, caractérisée en ce que l'échantillon de plasma est un échantillon de plasma pauvre en plaquettes. 3048001 47\n<CLM>\1\tMéthode selon l'une des revendications 2 à 4, caractérisée en ce que l'échantillon de sang total est un échantillon de sang total citraté.\n<CLM>\1\tMéthode selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que l'échantillon a un volume compris entre 1 'IL et 300 iaL, de préférence compris entre 50 µL et 200e.\n<CLM>\1\tMéthode selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que l'étape b) comprend l'incubation du mélange obtenu à l'étape a) pendant un temps compris entre 20 secondes et 400 secondes, de préférence compris entre 60 secondes et 300 secondes, à une température comprise entre 30°C et 40°C.\n<CLM>\1\tMéthode selon l'une des revendications 1, 3 à 5, 7 ou 8, caractérisée en ce que la mesure de la densité optique de l'étape c) se fait à la même longueur d'onde que celle utilisée pour le dosage habituel des D-dimères, effectué selon une méthode immunoturbidimétrique ou immuno-enzymatique.\n<CLM>\1\tMéthode selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisée en ce qu'au moins les étapes c) et d) sont réalisées sur un automate de diagnostic ou sur un analyseur de biologie délocalisée, de préférence sur un analyseur de coagulation.\n<CLM>\1\tMéthode selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisée en ce que des taux élevés de D-dimères spécifiques de la thrombose veineuse, mesurés en h) sont représentatifs de l'étendue de l'embolie pulmonaire ou de la localisation de la thrombose veineuse profonde.