Brevet FR3040180A1 (20170224)
REVENDICATIONS1. Procédé d'évaluation de l'effet supplémentaire cassant l'ADN d'un agent de contraste iodé injecté à un individu dans le cadre d'un examen d'imagerie médicale utilisant des rayons X, sur un tissu prélevé sur ledit individu, dans lequel procédé : (a) On approvisionne des cellules d'un tissu à évaluer qui a été prélevé (de préférence par biopsie) sur un individu ; (b) On disperse et/ou amplifie lesdites cellules pour obtenir un échantillon cellulaire ; (c) On met en contact ledit échantillon cellulaire avec un milieu à tester, ledit milieu à tester comprenant ledit agent de contraste iodé et/ou des ions d'iodure ; (d) On soumet ledit échantillon cellulaire en contact avec ledit milieu à tester à une dose absorbée Dtherap ou Dscan déterminée de rayonnement ionisant, sachant que : Dscan représente la dose de rayons X utilisée pour un examen d'imagerie médicale, Dtherap représente la dose de rayonnement ionisant administrée lors d'une séance de radiothérapie qui suit un examen d'imagerie médicale utilisant des rayons X ; (e) On détermine sur l'échantillon cellulaire à l'issue de l'étape (d) le nombre de cassures double brin de l'ADN, et/ou un biomarqueur représentant ce nombre, et/ou le nombre de micronoyaux.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1, dans lequel lesdits rayons X sont générés avec une anode en tungstène.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel (a) On soumet ledit échantillon cellulaire à l'issue de l'étape (d) en contact avec un milieu à tester (qui comprend avantageusement des ions d'iodure, mais pas d'agent de contraste iodé) à une dose déterminée de rayons gamma Dthérap (Dthérap étant comprise de préférence entre 0,5 Gy et 4 Gy, plus préférentiellement entre 1 Gy et 3 Gy, encore plus préférentiellement entre 1,7 Gy et 2,3 Gy, et typiquement de 2 Gy) ; et puis ([3) On détecte sur l'échantillon cellulaire le nombre de cassures double brin de l'ADN, et/ou un biomarqueur représentant ce nombre, et/ou le nombre de micronoyaux. 3040180 26\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel : - On détermine sur ledit échantillon cellulaire n'ayant pas encore été mis en contact avec le milieu à tester le nombre moyen de foci nucléaires obtenus 5 avec les marqueurs pH2AX et pATM aux temps d'observation t (ces nombres moyens étant appelé respectivement NpH2Ax(t) et NpATO)), obtenus dans une condition sans irradiation (0 Gy) et aussi au temps t= t4, où t4 est une valeur fixe qui représente le temps pour lequel le taux de cassures ADN atteint sa valeur résiduelle, et qui doit être au moins de 12 10 heures, et de préférence comprise entre 12h et 48h, et qui est encore plus préférentiellement d'environ 24 heures ; et puis - On détermine sur ledit échantillon cellulaire à l'issue de l'étape (d) le nombre moyen de foci nucléaires obtenus avec les marqueurs pH2AX et pATM aux temps d'observation t et pour la dose Dscan) (ces nombres moyens étant 15 appelés respectivement N pH2AX(t, Dscan)) et NpATM(t, Dscan)), ledit temps d'observation étant t = t4.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 4, dans lequel on détermine sur ledit échantillon cellulaire à l'issue de l'étape (a) le nombre moyen de foci 20 nucléaires obtenus avec les marqueurs pH2AX et pATM aux temps d'observation t et pour la dose Dthérap (Gy) (ces nombres moyens étant appelé respectivement NpH2Ax(t, Dthérap)) et NpATO, Dthérap)), ledit temps d'observation étant t = t4.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, dans lequel on effectue les 25 déterminations à l'étape (a) et/ou à l'étape (3) également à des temps d'observations t1 et/ou t2 et/ou t3, sachant que - t4 est avantageusement choisie entre 6 fois t3 et 8 fois t3, mais doit être au moins de 12 heures, et de préférence comprise entre 12h et 48h, et encore plus préférentiellement d'environ 24 heures ; 30 - t3 est une valeur fixe qui représente le temps au bout duquel environ 25% des cassures double-brin (CDB) sont réparées dans des cellules témoins issues de patients radiorésistants, et qui est avantageusement choisie entre 3 fois t2 et 5 fois t2, mais doit dans ce cas être au moins de 2,5 heures et au plus de 6 heures, et est de préférence comprise entre 3 heures et 5 heures, et est encore plus préférentiellement environ 4 heures ; - t2 est une valeur fixe qui représente le temps au bout duquel environ 50% des CDB sont réparées dans des cellules témoins issues de patients radiorésistants, et qui est avantageusement choisie entre 5 fois t1 et 7 fois t1, 3040180 27 mais qui doit dans ce cas être au moins de 35 minutes et au plus de 90 minutes, et est de préférence compris entre 45 minutes et 75 minutes, et est encore plus préferentiellement environ 60 minutes ; - t1 est une valeur fixe qui représente le temps au bout duquel le nombre de 5 CDB reconnues atteint son maximum dans des cellules témoins issues de patients radiorésistants, et qui est avantageusement choisie entre 5 minutes et 15 minutes après l'arrêt de l'irradiation, de préférence entre 7,5 minutes et 12,5 minutes, et encore plus préférentiellement à environ 10 minutes. 10\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 6, dans lequel t1 est compris entre 8 minutes et 12 minutes, t2 est compris entre 50 minutes et 70 minutes, t3 est compris entre 3,5 heures et 4,5 heures, et t4 est compris entre 22 heures et 26 heures.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 6 ou 7, dans lequel t1 est 10 minutes, t2 est 60 minutes, t3 est 4 heures, t4 est 24 heures, et dans laquelle, de 15 préférence, Dtherap est 2 Gy.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans lequel à l'étape (h) ledit milieu à tester comprend des ions d'iode.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 9, dans lequel : _si N MI ipH2A)(t21., Dthérap) N'IDA-m(t2, Dthérap) et NIpATK(t1, 20 Dthérap) > 30, alors on considère que l'échantillon cellulaire est radiorésistant à l'effet iode : il est dit « de Groupe I » ; - si (NlpH2Ax(t4, Dthérap) > 8 ou NIMN(t4, Dthérap) > 24), alors on considère que l'échantillon cellulaire est radiosensible à l'effet iode : il est dit « de Groupe III » 25 - pour toutes les autres conditions on considère que le risque est modéré : l'échantillon cellulaire est dit « de Groupe II ».\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, dans lequel à l'étape (h) ledit milieu à tester comprend un agent de contraste iodé. 30\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 11, dans lequel - si NIpH2AX(t4, Dscan) NpH2A)*4, Dscan)) 8 , alors on considère que l'échantillon 35 cellulaire est radiosensible à l'effet iode : il est dit « de Groupe III » ; 3040180 28 - Pour toutes les autres conditions on considère que le risque est modéré : l'échantillon cellulaire est dit « de Groupe I I ».\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, dans lequel on détermine 5 l'effet supplémentaire cassant l'ADN d'un agent de contraste iodé, ledit procédé étant caractérisé en ce que : (i) ledit milieu à tester comprend des ions d'iode (de préférence une solution contenant 10 .tM d'iodure de sodium) mais pas d'agent de contraste, (ii) on détermine la dose supplémentaire uniquement sur la base du nombre de foci H2AX 10 au temps t4, et de préférence en utilisant la formule suivante : NIpH2AX (t4, Dthérap NpH2AX (t4, Dthérap D sup = X Dthérap NpH2AX (t4, Dthérap où : N ipH2Ax est le nombre de foci de pH2AX obtenu avec irradiation en présence d'ions iode, NpH2AX est le nombre de foci de pH2AX obtenu avec irradiation sans ions iode. 15\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, dans lequel on détermine l'effet supplémentaire cassant l'ADN d'un agent de contraste iodé, ledit procédé étant caractérisé en ce que : (i) ledit milieu à tester comprend des ions d'iode (de préférence une solution contenant 10 20 .tM d'iodure de sodium) mais pas d'agent de contraste iodé, (ii) on détermine la dose supplémentaire sur la base du nombre de foci H2AX obtenus dans une condition sans irradiation (0 Gy) et aussi aux temps t1, t2, t3 et t4, et de préférence selon la méthode suivante : - dans une première étape, on détermine les nombres de foci H2AX obtenus 25 dans une condition sans irradiation (0 Gy) et aussi aux temps t1, t2, t3 et t4 pour l'échantillon de cellules irradiées sans produit de contraste iodés, - dans une deuxième étape on calcule les paramètres brec, brep et to dans la formule 1 1 NH2AX(t,Dthérap) - I Dthérap (1 1 + br't)(1 + brep(t to)) où : 30 I : nombre de CDB induite de l'ADN équivalent à 40 CDB par Gy pour les rayons X, 3040180 29 bref: inverse du temps au bout duquel 50% des CDB sont reconnues [min-1], brep : inverse du temps au bout duquel 50% des CDB reconnues sont réparées [min-1], 5 to : décalage moyen entre la reconnaissance et la réparation des CDB ; - dans une troisième étape on détermine les nombres de foci H2AX obtenus aux obtenus dans une condition sans irradiation (0 Gy) et aussi aux temps t1, t2, t3 et t4 pour l'échantillon de cellules irradiées avec le produit de contraste iodé, 10 - dans une quatrième étape on calcule la dose équivalente D1 de l'irradiation avec le produit de contraste iodé en utilisant les paramètres brec, brep et to déterminés à la deuxième étape, en utilisant la formule : 1 1 N H2AX(t, Di) = 1D1(1 1 + brect)(1 + b'p(t - to)) - dans une cinquième étape on détermine le surplus de dose dû au produit de 15 contraste iodé Dsup selon la formule : Dsup=D1-Dtherap\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, dans lequel on utilise entre 5 et 25 mg d'iode par ml de produit de contraste iodé, et de préférence entre 10 et 20 mg. 20\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 15 dépendante de la revendication 15, dans lequel on utilise le nombre de foci H2AX uniquement au temps t4, et de préférence en utilisant la formule suivante : NipH2AX (t4, Dscan) - NpH2AX (t4, Dscan D sup = X Dscan NpH2AX (t4, Dscan) 25 où : N ipH2Ax est le nombre de foci de pH2AX obtenu avec irradiation en présence d'un agent de contraste iodé, NpH2Ax est le nombre de foci de pH2AX obtenu avec irradiation sans agent de contraste iodé.