Brevet FR3038324A1 (20170106)
REVENDICATIONS1. Composition de cryoconservation comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable : a) de la sérum albumine humaine, b) au moins un saccharide, c) du DMSO et de la L-cystéine ou du coenzyme Q10, et d) des cellules à visée thérapeutique, à l'exception de lymphocytes infiltrant la tumeur, 10 lesdits lymphocytes infiltrant la tumeur étant obtenus par culture in vitro de lymphocytes infiltrant la tumeur à partir de prélèvement de nodules cutanés en transit, ganglion ou métastase d'un patient atteint d'un mélanome de stade 3 ou 4, ladite culture comprenant l'émergence desdits lymphocytes infiltrant la tumeur contenus dans le prélèvement de nodules cutanés en transit, ganglion ou métastase, puis la stimulation des lymphocytes infiltrant la 15 tumeur issus de l'étape d'émergence, puis enfin l'amplification des lymphocytes infiltrant la tumeur stimulés.\n<CLM>\1\tComposition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le saccharide est choisi parmi les monosaccharides, les disaccharides et les trisaccharides. 20\n<CLM>\1\tComposition selon la revendication 2, caractérisée en ce que le saccharide est un disaccharide choisi parmi le tréhalose et le saccharose.\n<CLM>\1\tComposition selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la sérum albumine 25 humaine est présente en quantité comprise entre 2 et 10% en poids par rapport au poids total de composition, de préférence entre 2.5 et 6% en poids.\n<CLM>\1\tComposition selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le saccharide est présent en concentration comprise entre 0.05M et 1M, de préférence entre 0.07M et 0.5M. 30\n<CLM>\1\tComposition selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que les cellules à visée thérapeutique sont choisies parmi les cellules immunitaires, telles que les cellules NK, les monocytes, les lymphocytes T naturels ou génétiquement modifiés tels que les lymphocytes T régulateurs et les lymphocytes T ayant un récepteur antigénique chimérique (CAR), les 3038324 12 myoblastes humains, les cellules souches hématopoïétiques, les cellules souches mésenchymateuses, les cellules cardiaques et toutes autres cellules naturelles ou génétiquement modifiées.\n<CLM>\1\tComposition selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle comprend : a) de la sérum albumine humaine, de préférence en quantité comprise entre 2.5 et 6% en poids, b) du tréhalose, de préférence en concentration comprise entre 0.05M et 0.5M, c) du DMSO et de la L-cystéine, de préférence respectivement en quantité comprise entre 2 et 10 15% en poids, et en concentration comprise entre 0.5mM et 2mM, et d) des cellules à visée thérapeutique, à l'exception de lymphocytes infiltrant la tumeur, lesdits lymphocytes infiltrant la tumeur étant obtenus par culture in vitro de lymphocytes infiltrant la tumeur à partir de prélèvement de nodules cutanés en transit, ganglion ou métastase d'un patient atteint d'un mélanome de stade 3 ou 4, ladite culture comprenant 15 l'émergence desdits lymphocytes infiltrant la tumeur contenus dans le prélèvement de nodules cutanés en transit, ganglion ou métastase, puis la stimulation des lymphocytes infiltrant la tumeur issus de l'étape d'émergence, puis enfin l'amplification des lymphocytes infiltrant la tumeur stimulés. 20\n<CLM>\1\tProcédé de cryoconservation d'au moins un échantillon de cellules à visée thérapeutique, comprenant les étapes suivantes : i) mélange de l'échantillon de cellules à visée thérapeutique avec: a) de la sérum albumine humaine, b) au moins un saccharide, et 25 c) du DMSO et de la L-cystéine ou du coenzyme Q10, puis ii) congélation du mélange obtenu à l'étape i), lesdites cellules à visée thérapeutique étant à l'exception de lymphocytes infiltrant la tumeur, lesdits lymphocytes infiltrant la tumeur étant obtenus par culture in vitro de lymphocytes infiltrant la tumeur à partir de prélèvement de nodules cutanés en transit, ganglion ou 30 métastase d'un patient atteint d'un mélanome de stade 3 ou 4, ladite culture comprenant l'émergence desdits lymphocytes infiltrant la tumeur contenus dans le prélèvement de nodules cutanés en transit, ganglion ou métastase, puis la stimulation des lymphocytes infiltrant la tumeur issus de l'étape d'émergence, puis enfin l'amplification des lymphocytes infiltrant la tumeur stimulés. 3038324 13\n<CLM>\1\tProcédé de cryoconservation selon la revendication 8, caractérisé en ce que la congélation ii) est effectuée jusqu'à une température comprise entre -100°C et -180°C, de préférence comprise entre -140°C et -160°C.\n<CLM>\1\tProcédé de cryoconservation selon l'une des revendications 8 ou 9, caractérisé en ce que la congélation ii) est réalisée en plaçant le mélange obtenu en i) dans un récipient immergé dans un mélange d'isopropyl alcool à +4°C, le tout étant mis à une température comprise entre -70°C et -100°C.\n<CLM>\1\tProcédé de cryoconservation selon l'une des revendications 8 à 10, caractérisé en ce que la congélation ii) est effectuée à l'aide d'un congélateur programmé.\n<CLM>\1\tUtilisation d'une composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable : a) de la sérum albumine humaine, b) au moins un saccharide, et c) du DMSO et de la L-cystéine ou du coenzyme Q10, pour la cryoconservation d'au moins un échantillon de cellules à visée thérapeutique, à l'exception de lymphocytes infiltrant la tumeur, lesdits lymphocytes infiltrant la tumeur étant obtenus par culture in vitro de lymphocytes infiltrant la tumeur à partir de prélèvement de nodules cutanés en transit, ganglion ou métastase d'un patient atteint d'un mélanome de stade 3 ou 4, ladite culture comprenant l'émergence desdits lymphocytes infiltrant la tumeur contenus dans le prélèvement de nodules cutanés en transit, ganglion ou métastase, puis la stimulation des lymphocytes infiltrant la tumeur issus de l'étape d'émergence, puis enfin l'amplification des lymphocytes infiltrant la tumeur stimulés.