Brevet FR3041656A1 (20170331)
REVENDICATIONS1. Utilisation de cellules de la matrice pour la préparation d'un microfollicule pileux.\n<CLM>\1\tProcédé de préparation d'un microfollicule pileux comprenant au moins une étape de mise en culture des cellules de la matrice en présence d'une quantité efficace d'un inhibiteur de ROCK pendant une période de temps suffisante pour permettre une 10 différentiation desdites cellules en kératinocytes positifs pour les marqueurs K85 K35.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 2 dans lequel l'inhibiteur de ROCK est Y27632. 15\n<CLM>\1\tProcédé selon les revendications 2 et 3, dans lequel la quantité efficace de l'inhibiteur de ROCK est de I à 100 4114. 20\n<CLM>\1\tProcédé selon les revendications .2 à 4, dans lequel la quantité efficace de l'inhibiteur de ROCK est de 5 à.25 p.M.\n<CLM>\1\tProcédé selon les revendications 2 à 5, dans lequel la quantité efficace de l'inhibiteur de ROCK est de 10 JIM.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'Une quelonqtie des revendications 2 à 6, dans lequel les cellules de la matrice -.Sont cultivées en présence de l'inhibiteur.ROCK pendant au moins 2 jours et de préférence pendant au moins 3 jours.\n<CLM>\1\tProcédé selon les revendications 2 à 7 caractérisé en ce que les kératinocytes positifs pour les marqueurs K85 K35 arrivent à confluence en formant des clusters réguliers. 25 30 3041656 16\n<CLM>\1\tProcédé selon les revendications 2 à 8, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes a- Isoler le follicule sur uri support b- Découper sur ledit support immergé dans un milieu de culture la région bulbaire au-dessus de la papille dermique: c- Récupérer les cellules de la matrice sous forme d'agrégat cellulaire sur ledit support. d- Amplification des cellules de la matrice en présence d'un inhibiteur de ROCK; e- Récupération des kératinocytes positifs pour les marqueurs K35 K85. f- Culture des kératinocytes obtenus à l'étape e) en culture 3D.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 9 caractérisé en ce que l'étape f), les kératinocytes sont mise en culture en un nombre compris entre 1000 et 4000 cellules et de préférence en un nombre de 3000 cellules.\n<CLM>\1\tProcédé selon les revendications 2 à 10, caractérisé en ce que le milieu nutritif est un milieu 3F.\n<CLM>\1\tMicrofollicule pileux susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 2 à\n<CLM>\1\t13. Microfollicule pileux selon la revendication 12 caractérisé en ce qu'il est constitué de cellules issues de l'amplification et de la différentiation de cellules de la matrice en présence d'un inhibiteur de ROCK. '14. Microfollicule pileux selon les revendications 13, caractérisé en ce que l'inhibiteur de ROCK est Y27632 3041656\n<CLM>\1\tMicrofollicule pilleux selon l'une des revendications 12 à 14 pour le traitement prophylactique ou thérapeutique d'un état de pilosité réduite. 10\n<CLM>\1\tMicrofollicule pilleux selon l'une des revendications 12 à 14 pour le traitement de l'alopécie.\n<CLM>\1\tUtilisation d'un microfollicule pileux tel que décrit selon l'une des revendications 12 à 15 1.6 pour le test in vitro d'effets d'actifs sur les propriétés pileuses.\n<CLM>\1\tUtilisation d'un inicrefolliCule pileux selon la revendication 17 pour l'identification de composé.rncidulateur de la pOusse des poils et/ou des cheveux 20\n<CLM>\1\tProcédé de criblage de produit en vue d'identifier de nouveaux actifs comprenant une étape (a) de mise en contact dudit produit à tester avec un microfollicule pileux selon l'une quelconque des revendications 12 à 16 puis une étape (b) d'analyse de l'effet dudit 25 produit sur au moins un paramètre de l'équivalent de cuir chevelu et une étape (c) de sélection du produit modifiant ledit paramètre. 30 17 5