Brevet FR3038914A1 (20170120)
REVENDICATIONS1. Biomasse de Thraustochytrides comprenant, en poids par rapport au poids de la matière sèche, au moins 35%, préférentiellement au moins 45% de protéines, pouvant aller jusqu'à plus de 60% de protéines, en particulier de 45 à 55% de protéines, et au moins 20%, de préférence au moins 30% de matière grasse, et éventuellement entre 5 et 250 ppm, de préférence entre 150 et 200 ppm de caroténoïdes.\n<CLM>\1\tBiomasse selon la revendication 1, caractérisé en ce que des caroténoïdes ont une teneur par rapport à la matière grasse en astaxanthine entre 5 et 30%, une teneur en phoenicoxanthine entre 15 et 30% et une teneur en bêta-carotènes entre 0 et 30%.\n<CLM>\1\tBiomasse selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la matière grasse a une teneur de 25 à 60%, de préférence de 40 à 60% en acides gras polyinsaturés choisi parmi AA, DHA et EPA.\n<CLM>\1\tBiomasse selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que lesdits Thraustochytrides sont de l'ordre des Thraustochytriales, préférentiellement de la sous-classe des Thraustochytriaceae, encore plus préférentiellement d'un genre choisi dans le groupe comprenant Aurantiochytrium, Aplanochytrium, Botryochytrium, Japonochytrium, Oblongichytrium, Parietichytrium, Schizochytrium, Sicyoidochytrium, Thraustochytrium et Ulkenia.\n<CLM>\1\tBiomasse selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que lesdits Thraustochytrides sont choisis parmi les genres Aurantiochytrium et Schizochytrium, préférentiellement parmi les espèces Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/2 ; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/3 ; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/4 ; Aurantiochytrium mangrovei, CCAP 4062/5 ; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/6 ; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/1 ; Schizochytrium sp. 4087/3 ; Schizochytrium sp. CCAP 4087/1 ; Schizochytrium sp. CCAP 4087/4 ; Schizochytrium sp. CCAP 4087/5.\n<CLM>\1\tProcédé de production d'une biomasse telle que définie dans l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il comprend : 3038914 36 a. une première étape de culture des Thraustochytrides dans des conditions de hétérotrophie ou mixotrophie dans un milieu de culture approprié, à une température comprise entre environ 24°C et 35°C et dans des conditions pouvant favoriser la production de protéines à une teneur d'au 5 moins 35% de protéines en poids par rapport au poids de la matière sèche ; b. une deuxième étape de culture dans des conditions de hétérotrophie ou de mixotrophie à une température entre environ 18°C et 25°C et inférieure à celle de l'étape a) dans des conditions pouvant favoriser 10 l'accumulation de matière grasse jusqu'à au moins 20%, de préférence au moins 30%, et favorisant l'accumulation du DHA, EPA et/ou AA au sein de la matière grasse jusqu'à entre 25% et 60%, de préférence entre 40 et 60% de la matière grasse et jusqu'à l'obtention d'une densité de culture d'au moins 40 g/L en matière sèche, préférentiellement au moins 60 g/L, 15 plus préférentiellement au moins 80 g/L ; c. une troisième étape de récupération de la biomasse obtenue à la deuxième étape par séparation de ladite biomasse du milieu de culture (la récolte), éventuellement suivi d'une homogénéisation ; et, le cas échéant d. une quatrième étape de séchage de la biomasse récupérée à la troisième 20 étape.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 6, caractérisé en ce la culture est éclairée, de préférence, avec la lumière de longueur d'onde entre 435 et 475 nm, pendant au moins 18 heures, de préférence au moins 24 heures].\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que la culture est 25 éclairée pendant au moins les dernières 18 heures de culture, de préférence pendant au moins les dernières 24 heures de culture.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que la culture est éclairée à partir d'environ 24-50 heures de culture, de préférence, à partir de 45 heures de culture et jusqu'à la fin de la culture. 30\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 6 à 9, caractérisé en ce que ledit milieu de culture approprié est un milieu défini comprenant une source de carbone, une source d'azote, une source de phosphore et des sels. 3038914 37\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 10, caractérisé en ce que ledit milieu défini comprend des sels choisis parmi les sels de calcium, de cobalt, de manganèse, de magnésium, de zinc, de nickel, de cuivre, de potassium, de fer, de sodium, et leurs mélanges, avantageusement choisis 5 parmi le chlorure de calcium, le chlorure de cobalt, le chlorure de manganèse, le sulfate de magnésium, le sulfate de zinc, le sulfate de nickel, le sulfate de cuivre, le sulfate de potassium, le sulfate ferreux, le sulfate de potassium, le molybdate de sodium, le sélénite de sodium, le chlorure de sodium et leurs mélanges. 10\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 6 à 11, caractérisé en ce que la première étape a) de culture est réalisée en mode dit "batch", en mode dit "fed batch" ou en mode continu.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que la culture en "fed batch" comprend une première étape divisée en deux sous-étapes, une 15 première sous-étape a1) de croissance dans le milieu de culture approprié jusqu'à l'obtention d'une densité de culture d'au moins 20 g/L, préférentiellement au moins 40 g/L, plus préférentiellement au moins 60 g/L, encore plus préférentiellement au moins 80 g/L, suivie d'une deuxième sous-étape a2) de production dans laquelle on ajoute au milieu de culture, 20 simultanément ou successivement, une ou plusieurs solution(s) d'enrichissement en source de carbone, en source d'azote et en source de phosphore.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que, à l'étape a2), la teneur en source de carbone est maintenue entre 5 et 200 g/L, 25 préférentiellement entre 10 et 50 g/L, la teneur en source d'azote est maintenue entre 0,5 et 5 g/L, préférentiellement entre 0,5 et 2 g/L et la teneur en source de phosphore est maintenue entre 0,5 et 5 g/L, préférentiellement 0,5 et 2 g/L.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 14, caractérisé en ce 30 que l'éclairement est variable et/ou discontinu, de préférence sous formes de flashs.\n<CLM>\1\tBiomasse susceptible d'être obtenue par un procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à\n<CLM>\1\t3038914 38\n<CLM>\1\tUtilisation non thérapeutique d'une biomasse telle que décrite à l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou 16 dans les domaines cosmétiques et en alimentation humaine ou animale.\n<CLM>\1\tUtilisation non thérapeutique d'une biomasse de Thraustochytrides telle que 5 décrite à l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou 16 pour l'amélioration de la performance des animaux, évaluée par la mesure de l'indice de consommation, du gain de poids ou encore du "Feed Conversion Ratio".\n<CLM>\1\tComposition cosmétique ou pharmaceutique pour l'homme ou les animaux comprenant une biomasse telle que décrite à l'une quelconque des 10 revendications 1 à 5 ou\n<CLM>\1\t20. Aliment caractérisé en ce qu'il comprend une biomasse telle que décrite à l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou\n<CLM>\1\t21. Aliment selon la revendication 20 caractérisé en ce qu'il est destiné à l'alimentation humaine, en particulier, un aliment adapté aux enfants, 15 adolescents, adultes ou personnes âgées ,\n<CLM>\1\tAliment pour animaux d'élevage, caractérisé en ce qu'il comprend entre 1% et 60%, de préférence entre 1% et 20%, plus préférentiellement entre 3% et 8% d'une biomasse telle que décrite selon l'une des revendications 1 à 5, ou\n<CLM>\1\t20\n<CLM>\1\tBiomasse selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou 16 pour son utilisation en thérapie.\n<CLM>\1\tAliment pour aquaculture, caractérisé en ce qu'il comprend entre 1% et 60%, de préférence entre 1% et 20%, plus préférentiellement entre 3% et 8% d'une biomasse telle que décrite selon l'une des revendications 1 à 5, ou 16.