Brevet FR3051921A1 (20171201)
REVENDICATIONS1. Dispositif d'éclairage pour microscopie de fluorescence à onde évanescente comprenant : un substrat (SB) transparent à la lumière dans au moins une plage spectrale et présentant, dans ladite plage spectrale, un indice de réfraction supérieur à celui de l'eau; - au moins un dispositif émetteur de lumière (EL) agencé à l'intérieur dudit substrat, adapté pour émettre un rayonnement lumineux dans ladite plage spectrale en direction d'une surface (S) du substrat, ledit dispositif émetteur de lumière étant agencé de telle sorte qu'au moins une portion dudit rayonnement atteigne ladite surface avec un angle d'incidence supérieur ou égal à un angle limite de réflexion totale interne pour une interface entre ledit substrat et de l'eau ; et - au moins un masque opaque (MO), agencé à l'intérieur ou à la surface dudit substrat de manière à intercepter une portion dudit rayonnement qui, en l'absence dudit masque, atteindrait ladite surface avec un angle d'incidence inférieur audit angle limite.\n<CLM>\1\tDispositif selon la revendication 1 dans lequel ledit ou au moins un dit dispositif émetteur de lumière (ELD, ELD1, ELD2) présente une émission lumineuse de type directionnel, avec un diagramme d'émission présentant un maximum suivant une direction oblique par rapport à ladite surface du substrat.\n<CLM>\1\tDispositif selon la revendication 2 comprenant une pluralité de dits dispositifs émetteurs de lumière (ELD1, ELD2) présentant des émissions lumineuses de type directionnel avec des diagrammes d'émission présentant des maxima suivant des directions obliques respectives, 30 différentes entre elles, par rapport à ladite surface du substrat. 3051921 16\n<CLM>\1\tDispositif selon l'une des revendications précédentes comprenant : - soit une pluralité de dits dispositifs émetteurs de lumière (EL1, EL2, EL3), agencés de manière symétrique autour d'un axe (AS) 5 perpendiculaire à ladite surface du substrat ; - soit un dit dispositif émetteur de lumière (ELA) en forme d'anneau.\n<CLM>\1\tDispositif selon l'une des revendications précédentes 10 comprenant une pluralité de dits dispositifs émetteurs de lumière (ELa, ELb, ELc) adaptés pour émettre ledit rayonnement lumineux dans des portions différentes de ladite plage spectrale.\n<CLM>\1\tDispositif selon l'une des revendications précédentes 15 comprenant également : une première couche transparente (C1), agencée à la surface dudit substrat et présentant un indice de réfraction inférieur à celui dudit substrat, de telle sorte qu'au moins une portion du rayonnement lumineux émis par ledit ou lesdits dispositifs émetteurs de lumière atteigne 20 une interface entre le substrat et la première couche transparente avec un angle d'incidence supérieur ou égal à un angle limite de réflexion totale interne pour cette interface ; et - une deuxième couche transparente (C2), agencée à la surface de ladite première couche transparente opposée audit substrat, 25 présentant un indice de réfraction supérieur à celui de ladite première couche ; lesdites première et deuxième couche présentant des épaisseurs inférieures à au moins une longueur d'onde du rayonnement lumineux émis par ledit ou lesdits dispositifs émetteurs de lumière. 3051921 17\n<CLM>\1\tDispositif selon l'une des revendications précédentes comprenant également une couche métallique (CM) déposée à sa surface éclairée par ledit ou lesdits dispositifs émetteurs de lumière. 5\n<CLM>\1\tSystème de microscopie de fluorescence à onde évanescente comprenant : - un dispositif d'éclairage selon l'une des revendications précédentes ; et - un objectif de microscope (OBJ) agencé pour observer 10 une surface (S) dudit dispositif d'éclairage, ou d'une lamelle de microscope posée sur ladite surface, et ayant un axe optique (AO) orthogonal à ladite surface et décalé par rapport au ou aux dispositifs émetteurs de lumière du dispositif d'éclairage. 15\n<CLM>\1\tProcédé d'éclairage pour microscopie de fluorescence à onde évanescente comprenant des étapes consistant à : - mettre un substrat (SB) transparent à la lumière dans au moins une plage spectrale en contact avec un milieu (MA) présentant, dans ladite plage spectrale, un indice de réfraction inférieur à celui dudit substrat ; 20 - activer un dispositif émetteur de lumière (EL) agencé à l'intérieur dudit substrat transparent pour qu'il émette un rayonnement lumineux dans ladite plage spectrale en direction d'une surface (S) du substrat, ledit dispositif émetteur de lumière étant agencé de telle sorte qu'au moins une portion dudit rayonnement atteigne ladite surface avec un angle 25 d'incidence supérieur ou égal à un angle limite de réflexion totale interne pour une interface entre ledit substrat et ledit milieu optique moyennant quoi des ondes évanescentes (0E) sont générées à la surface dudit substrat. 30\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 9 dans lequel au moins un masque opaque (MO) est agencé à l'intérieur ou à la surface dudit substrat de manière à intercepter une portion dudit rayonnement qui, en l'absence dudit 3051921 18 masque, atteindrait ladite surface avec un angle d'incidence inférieur audit angle limite.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 9 ou 10 dans 5 lequel ledit milieu est aqueux.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 9 à 11 dans lequel ledit ou au moins un dit dispositif émetteur de lumière présente une émission lumineuse de type directionnel, avec un diagramme d'émission présentant un 10 maximum suivant une direction oblique par rapport à ladite surface du substrat.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 9 à 12 dans lequel : 15 - une première couche transparente (C1) est agencée à la surface dudit substrat et présente un indice de réfraction inférieur à celui dudit substrat, de telle sorte qu'au moins une portion du rayonnement lumineux émis par ledit ou lesdits dispositifs émetteurs de lumière atteigne une interface substrat - première couche transparente avec un angle d'incidence supérieur 20 ou égal à un angle limite de réflexion totale interne pour cette interface ; et - une deuxième couche transparente (C2) est agencée à la surface de ladite première couche transparente opposée audit substrat et présente un indice de réfraction supérieur à celui de ladite première couche ; lesdites première et deuxième couche présentant des 25 épaisseurs inférieures à au moins une longueur d'onde du rayonnement lumineux émis par ledit ou lesdits dispositifs émetteurs de lumière.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 9 à 13 dans lequel une couche métallique (CM) est agencée à la surface dudit substrat ou à sa 30 proximité, de telle sorte que des plasmons de surface sont excités par lesdites ondes évanescentes. 3051921 19\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 9 à 14 dans lequel un échantillon (ECH) contenant au moins un fluorophore est amené en contact de la surface dudit substrat ou à sa proximité, de telle sorte qu'une émission fluorescente dudit fluorophore soit excitée par lesdites ondes 5 évanescentes, ou des ondes évanescentes associées auxdits plasmons de surface, et dans lequel au moins une image de fluorescence dudit échantillon est acquise au moyen d'un objectif de microscope.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 15 dans lequel : 10 - ledit ou lesdits dispositifs émetteurs de lumière sont agencés de telle sorte que lesdites ondes évanescentes présentant des longueurs de pénétration différentes en correspondance de différents points de la surface dudit substrat ; - ledit substrat est déplacé par rapport audit échantillon et 15 une pluralité d'images de fluorescence sont acquises pour une pluralité de différentes positions relative entre l'échantillon et le substrat, de telle sorte qu'un même point de l'échantillon soit exposé à des ondes évanescentes de longueurs de pénétration différentes ; - le procédé comprenant également une étape de 20 reconstruction d'une image tridimensionnelle d'une distribution des fluorophores à l'intérieur de l'échantillon à partir desdites images de fluorescence. 25