Brevet FR3049866A1 (20171013)
REVENDICATIONS1. Extrait de feuilles de tabac contenant au moins 5% en poids, par rapport au poids total de l'extrait sec, de protéines de masse moléculaire supérieure à kDa et essentiellement exempt de molécules de masse moléculaire inférieure à 10 kDa, lesdites protéines étant de préférence choisies parmi le groupe constitué des familles de protéines suivantes : peroxidase anionique formant de la lignine, glucan endo-1,3-béta-glucosidase, endochitinase, 10 protéine liée à la pathogénèse, osmotine et inhibiteur de protéinase ainsi que leurs mélanges.\n<CLM>\1\tExtrait de feuille de tabac selon la revendication 1, caractérisé en ce que la teneur en molécules de masse moléculaire inférieure à 10 kDa est inférieure à 5% en poids par rapport au poids total de l'extrait, de préférence inférieure 2,5% en poids, et mieux encore inférieure à 1 % en poids.\n<CLM>\1\tExtrait de feuilles de tabac selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce qu'il est susceptible d'être obtenu par un procédé d'extraction par un solvant aqueux d'un broyat de feuilles de tabac séchées suivie d'une séparation des résidus solides de la solution d'extrait de broyat de feuilles de tabac séchées puis d'une diafiltration à volume constant de la solution d'extrait de broyat de feuilles de tabac séchées sans résidu solide avec un solvant aqueux en une quantité allant de 2 à 12 fois en volume, de préférence 3 à 10 fois en volume, de préférence 4 à 8 fois en volume, de préférence 6 fois en volume, par rapport au volume de l'extrait et avec une membrane ayant un seuil de coupure à 10 kDa.\n<CLM>\1\tExtrait de feuilles de tabac selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une protéine appartenant à la famille des glucan endo-1,3-béta-glucosidases, et de préférence choisie(s) parmi l'isoforme acide PR-Q' de la béta-1,3- endoglucanase (PR36401 selon la base UniProt), l'isoforme vacuolaire basique GLB de la béta-1,3-endoglucanase (P27666 selon la base UniProt), et leurs mélanges. 3049866\n<CLM>\1\tExtrait de feuilles de tabac selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une protéine appartenant à la famille des endochitinases, et de préférence choisie(s) parmi l'endochinitase P acide (P17513 selon la base UniProt), l'endochinitase Q 5 acide (P17514 selon la base UniProt), l'endochinitase B (P24091 selon la base UniProt), et leurs mélanges.\n<CLM>\1\tExtrait de feuilles de tabac selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend au moins de l'osmotine (P14170 selon la base UniProt). 10\n<CLM>\1\tExtrait de feuilles de tabac selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une peroxidase anionique formant de la lignine (P11965 selon la base UniProt).\n<CLM>\1\tExtrait de feuilles de tabac selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une protéine liée à la 15 pathogénèse, et de préférence choisie(s) parmi la protéine R liée à la pathogénèse (P13046 selon la base UniProt), la protéine PR-4A liée à la pathogénèse (PR29062 selon la base UniProt), la protéine PR-4B liée à la pathogénèse (PR29063 selon la base UniProt), et leurs mélanges.\n<CLM>\1\tExtrait de feuilles de tabac selon l'une quelconque des revendications 20 précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend au moins une protéine appartenant à la famille des inhibiteurs de protéinase, et de préférence choisie(s) parmi l'inhibiteur de protéinase I-B (Q03199 selon la base UniProt), l'inhibiteur de protéinase I-A (Q03198 selon la base UniProt), et leurs mélanges. 25\n<CLM>\1\tExtrait de feuilles de tabac selon au moins l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la teneur en protéines dans l'extrait sec est d'au moins 10% en poids, de préférence au moins 15% en poids, de préférence au moins 20% en poids par rapport au poids total de l'extrait sec. 3049866 36\n<CLM>\1\tComposition pharmaceutique comprenant à titre de principe actif un extrait de feuilles de tabac selon l'une quelconque des revendications précédentes ainsi qu'un excipient pharmaceutiquement acceptable.\n<CLM>\1\tComposition pharmaceutique selon la revendication 11, caractérisée en ce 5 que les protéines présentes dans ledit extrait de feuilles de tabac sont présentes en une quantité allant de 50 à 300 ug/nnL, de préférence de 60 à 200 ug/nnL, de préférence entre 80 et 150 ug/nnL.\n<CLM>\1\tComposition pharmaceutique selon la revendication 11 ou la revendication 12 pour son utilisation dans le traitement de l'addiction au tabac. 10\n<CLM>\1\tComposition pharmaceutique pour son utilisation dans le traitement de l'addiction au tabac selon la revendication 13, caractérisée en ce qu'elle est présentée sous forme propre à une administration par injection sous cutanée.\n<CLM>\1\tComposition pharmaceutique pour son utilisation dans le traitement de l'addiction au tabac selon la revendication 13 ou la revendication 14, 15 caractérisée en ce que la composition pharmaceutique est présentée sous une forme de dosage de 0,03 mL à 10 mL, de préférence de 0,1 mL à 5 mL, de préférence de 0,5 à 2 mL.\n<CLM>\1\tProcédé de préparation d'un extrait de feuilles de tabac selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, comprenant les étapes suivantes : 20 a. Séchage et broyage de feuilles de tabac pour obtenir un broyat de feuilles de tabac séchées, b. Extraction du broyat de feuilles de tabac séchées sous agitation mécanique avec un solvant aqueux, de préférence une solution tampon aqueuse à pH compris entre 6,0 et 8,5, 25 c. Séparation des résidus solides de la solution de l'extrait du broyat de feuilles de tabac séchées par filtration ou centrifugation afin d'obtenir une solution d'extrait de broyat de feuilles de tabac séchées sans résidu solide, d. Diafiltration à volume constant de la solution obtenue à l'étape c avec 30 un solvant, de préférence un solvant aqueux, en une quantité allant de 3049866 37 2 à 12 fois en volume, de préférence 3 à 10 fois en volume, de préférence de 4 à 8 fois en volume, de préférence 6 fois en volume, par rapport au volume de l'extrait, et avec une membrane ayant un seuil de coupure à 10 kDa, 5 e. Eventuellement lyophilisation de la solution protéique obtenue à l'étape d.