Brevet FR3048285A1 (20170901)
REVENDICATIONS1. Procédé de réalisation d'une réaction immunohistochimique caractérisé en ce qu'il comprend : ^ Un agencement d'une préparation d'un échantillon (25) pour le traitement d'une réaction comprenant des antigènes sur un support (20) de sorte à être en vis-à-vis d'une tête de nébulisation (2) ; 10 ^ Une projection par nébulisation d'une pluralité de gouttelettes (5) correspondant à un volume prédéfini d'un réactif (15) comprenant des anticorps dans une région du support comprenant l'échantillon (25), ladite projection étant générée par un mode de vibration de l'élément piézoélectrique (3). 15\n<CLM>\1\tProcédé de réalisation d'une réaction immunochimique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend : ^ Une analyse du marquage (31) des réactions anticorps-antigène à partir d'un dispositif d'imagerie pour quantifier une proportion de 20 réactions positives.\n<CLM>\1\tProcédé de réalisation d'une réaction immunochimique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'un mode vibratoire d'une membrane perforée (4) excitée par l'élément piézoélectrique (3) est 25 configuré pour générer une projection desdites gouttelettes à travers les ouvertures de la membrane de sorte que l'énergie cinétique desdites gouttelettes soit comprise dans une gamme de valeurs prédéterminées de sorte à : ^ préserver l'intégrité des anticorps expulsés, 30 ^ favoriser par une action mécanique les rencontres anticorps- antigènes ^ limiter les dommages causés sur les antigènes lors de l'impact des gouttelettes sur les sites antigéniques de l'échantillon (25). 3048285 23\n<CLM>\1\tProcédé de réalisation d'une réaction immunochimique selon la revendication 1, caractérisé en ce que le débit d'éjection des gouttelettes est compris entre 4m1/minute et 30 ml/minute.\n<CLM>\1\tProcédé de réalisation d'une réaction immunochimique selon la revendication 1, caractérisé en ce que le cône d'émission (7) du nuage de gouttelettes (5) définit une région d'impact sur le support dans laquelle les gouttelettes sont réparties de manière homogène sur l'échantillon (25), la vitesse d'éjection, la fréquence de vibration de l'élément piézoélectrique (3) et la distance (8) entre la sortie d'éjection (7) de la tête de nébulisation (2) et le support (20) étant configurées pour définir une surface d'impact comprise entre 200 mm2 et 4000 mm2.\n<CLM>\1\tProcédé de réalisation d'une réaction immunochimique selon la revendication 1, caractérisé en ce que les anticorps sont dilués en volume dans une gamme de valeur entre un taux de 1/15000 et un dixième, soit 1/10, dans la solution définissant le réactif.\n<CLM>\1\tProcédé de réalisation d'une réaction immunochimique selon la revendication 1, caractérisé en ce que la fréquence de vibration de l'élément piézoélectrique (3) est comprise entre 70kHz et 120KHz de manière à favoriser la création de gouttelettes (5) dont le diamètre est inférieur à 100 pm.\n<CLM>\1\tProcédé de réalisation d'une réaction immunochimique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'un récipient (10) comprenant le réactif (15) est agencé de sorte à établir un contact avec la tête de nébulisation (2) qui comprend l'élément piézoélectrique.\n<CLM>\1\tProcédé de réalisation d'une réaction immunochimique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'une étape de préparation de l'échantillon pour le traitement d'une réaction comprend le paraffinage d'un premier échantillon comprenant des antigènes et une découpe 3048285 24 d'une fine tranche du premier échantillon pour fournir un échantillon (25) pour le traitement d'une réaction.\n<CLM>\1\tProcédé de réalisation d'une réaction immunochimique selon la 5 revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend une étape de démasquage des sites antigéniques soit par un traitement enzymatique, soit par un traitement par élévation de température.\n<CLM>\1\tProcédé de réalisation d'une réaction immunochimique selon la 10 revendication 1, caractérisé en ce qu'une étape de contre-coloration ou de coloration subséquente à la projection des anticorps est réalisée sur l'échantillon pour révéler les zones d'intérêts des réactions anticorps-antigènes. 15\n<CLM>\1\tDispositif de projection (1) d'un réactif (15) comprenant des anticorps, lesdits anticorps étant dilués dans une proportion prédéfinie dans le réactif (15), ledit dispositif (1) comprenant une tête de nébulisation (2) comportant un élément piézoélectrique (3) excitant une portion du réactif (15) pour générer une pluralité de gouttelettes (5) d'un volume 20 de réactif (15) dans un cône d'éjection (7), ledit dispositif de projection (1) comprenant, en outre, un emplacement apte à recevoir un support (20) sur lequel un échantillon (25) d'une préparation peut être disposé.\n<CLM>\1\tDispositif de projection (1) selon la revendication 12, caractérisé en ce 25 qu'il comprend une membrane perforée (4) dont au moins un mode propre est configuré pour être excité par l'élément piézoélectrique (3), ladite membrane perforée (4) réalisant l'éjection des gouttelettes à travers ses ouvertures afin de générer un nuage de gouttelettes vers le support (20). 30\n<CLM>\1\tDispositif de projection (1) selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il comprend un récipient (10) dans lequel le réactif (15) est stocké, ledit dispositif de projection (1) comprenant des moyens de prélèvement (11) d'un volume prédéfini de réactif (15) acheminant ledit volume au sein de la tête de nébulisation (2) pour sa projection, 3048285 25 le dispositif de projection (1) réalisant un contact entre le récipient (10) et la tête de nébulisation (2) pour propager les ondes émises par l'élément piézoélectrique (3) de manière à homogénéiser la concentration du réactif (15) stocké dans le récipient (10). 5 15 Dispositif de projection (1) selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il comprend un guide d'éjection canalisant les gouttelettes générées dans une région d'impact, ledit guide comprenant une base circulaire formant une extrémité supérieure ayant une fixation pour io rendre le guide solidaire de la tête de nébulisation (2) et une seconde extrémité inférieure formant une base rectangulaire destinée à déboucher sur une lame rectangulaire dont les dimensions correspondent au prolongement des dimensions de la base rectangulaire. 15 16.Utilisation d'un dispositif de projection (1) comprenant une tête de nébulisation (2) et un élément piézoélectrique (3) pour générer un mode propre d'une membrane perforée (4) afin de projeter un réactif comprenant des anticorps dilués selon une proportion prédéfinie. 20