Brevet FR3040178A1 (20170224)
REVENDICATIONS1. Procédé d'évaluation de la réponse d'une tumeur à un traitement cassant l'ADN à partir d'un prélèvement de cellules de ladite tumeur (de préférence par biopsie), dans lequel : (a) On prépare un échantillon cellulaire à partir des cellules prélevées sur ladite tumeur ; (b) On soumet ledit échantillon cellulaire à un traitement cassant l'ADN caractérisé par une dose D, (c) on détermine sur ledit échantillon cellulaire le nombre moyen de foci nucléaires obtenus avec un marqueur pH2AX aux temps d'observation t (ces nombres moyens étant appelé respectivement NpH2Ax(t)), lesdits temps d'observation t étant le temps t=0 min (appelé tO, état avant administration de ladite dose D) et au moins un temps d'observation sélectionné parmi t = t1, t2, t3 et t4 après administration de ladite dose D; (d) on détermine au moins un paramètre ou score permettant de caractériser la réponse de l'échantillon audit traitement cassant l'ADN, en utilisant au moins les nombres moyens NpH2Ax(t), et dans lequel procédé - t4 est une valeur fixe qui représente le temps pour lequel le taux de cassures ADN atteint sa valeur résiduelle, et qui est avantageusement choisie entre 6 fois t3 et 8 fois t3, mais doit être dans ce cas être au moins de 12 heures, et de préférence comprise entre 12h et 48h, et qui est encore plus préférentiellement d'environ 24 heures ; - t3 est une valeur fixe qui représente le temps au bout duquel environ 25% des cassures double-brin (CDB) sont réparées dans des cellules témoins issues de patients radiorésistants, et qui est avantageusement choisie entre 3 fois t2 et 5 fois t2, mais doit dans ce cas être au moins de 2,5 heures et au plus de 6 heures, et est de préférence comprise entre 3 heures et 5 heures, et est encore plus préférentiellement environ 4 heures ; - t2 est une valeur fixe qui représente le temps au bout duquel environ 50% des CDB sont réparées dans des cellules témoins issues de patients radiorésistants, et qui est avantageusement choisie entre 5 fois t1 et 7 fois t1, mais qui doit dans 3040178 22 ce cas être au moins de 35 minutes et au plus de 90 minutes, et est de préférence compris entre 45 minutes et 75 minutes, et est encore plus préférentiellement environ 60 minutes ; - t1 est une valeur fixe qui représente le temps au bout duquel le nombre de CDB 5 reconnues atteint son maximum dans des cellules témoins issues de patients radiorésistants, et qui est avantageusement choisie entre 5 minutes et 15 minutes après l'arrêt de l'irradiation, de préférence entre 7,5 minutes et 12,5 minutes, et encore plus préférentiellement à environ 10 minutes. 10\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1, dans lequel ledit traitement cassant l'ADN est sélectionné dans le groupe formé par : - une irradiation avec un rayonnement ionisant ; - un traitement avec au moins un principe actif pharmaceutique, - un traitement qui combine une irradiation avec un rayonnement ionisant et un 15 traitement avec au moins un principe actif pharmaceutique.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, dans lequel ladite tumeur est une tumeur solide ou liquide. 20\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel on détermine les nombres moyens NpH2Ax(t) à t= tO, t1, t2, t3 et t4.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel on détermine comme paramètre ou score de la réponse de la tumeur à un traitement cassant l'ADN 25 au moins un paramètre sélectionné dans le groupe formé par : la fraction cellulaire survivante après une dose D fractionnée en n doses d (SF(d,D)) le paramètre TCD50, le paramètre TCD95, le paramètre TCP, le volume de la tumeur.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel on établit le 30 paramètre TCD95 à partir du nombre de cellules survivantes au traitement cassant l'ADN avec une dose D, de préférence par la relation Gy) 2 TCD95 = 142.8 x N( + 8.57 No où No représente le nombre de cellules tumorales initiales, N(2 Gy) représente le nombre de cellules survivantes à t4 après irradiation avec un rayonnement ionisant d'une dose de 2 Gy de traitement cassant l'ADN, ladite 35 dose étant de préférence une dose de rayonnement ionisant comprise entre 0,5 Gt 3040178 23 et 5 Gy, de préférence entre 1 Gy et 3 Gy, et encore plus préférentiellement de 2 Gy.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 5 ou 6, dans lequel on établit le paramètre TCD95 à partir du nombre de foci yH2AX de cellules survivantes au 5 traitement cassant l'ADN avec une dose D, de préférence par la relation TCD95 = 142.8 x e ) (NH2Ax(29Gy,24h.)+4', I" + 8.57 où NH2Ax(2Gy,24h) représente le nombre de foci H2AX au temps t4 après une dose D de traitement cassant l'ADN, ladite dose étant de préférence une dose de rayonnement ionisant de 2 Gy, 0 représente la tolérance de la cellule (exprimée en nombre de cassures double-brin) et fl le paramètre en Gy-2 du modèle linéaire 10 quadratique relatif au type de tissu tumoral.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, dans lequel on établit le paramètre TCP à partir du nombre de cellules survivantes après traitement cassant l'ADN avec une dose D, de préférence par la relation TCP(D) = e-NAD) 15 où N représente le nombre de cellules survivantes après une dose D de traitement cassant l'ADN, ladite dose étant de préférence une dose de rayonnement ionisant de 2 Gy.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 8 dans lequel on établit le paramètre TCP à partir du nombre de nombre de foci yH2AX de cellules survivantes 20 au traitement cassant l'ADN avec une dose D de traitement cassant l'ADN, de préférence par la relation (71 XNH2AX(C1,24h) TCP(D) = e-Noie ` e +13dD) où NH2Ax(d, 24h) représente le nombre de foci de H2AX dans les cellules survivantes au temps t4 après une dose d de traitement cassant l'ADN, ladite dose 25 étant de préférence une dose de rayonnement ionisant de 2 Gy.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans lequel on établit la survie des cellules de la tumeur après un traitement cassant l'ADN avec une dose D fractionnée en n doses d de préférence par la relation : 3040178 24 xNH2Ax(d,24h)+,6vD) SF (d, D) = e où : NH2AX représente le nombre de foci de H2AX dans cellules tumorales survivantes à 24h post-irradiation, 0 représente la tolérance de la cellule (unité : nombre de cassures double-brin), D est la dose en Gy 5 d est la dose en Gy par fraction, n est le nombre de fractions, fi est le paramètre en Gy-2 du modèle linéaire quadratique relatif au type de tissu tumoral. 10\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 10, dans lequel on établit la proportionnalité de ladite fraction cellulaire survivante après une dose D fractionnée en n doses d avec le rapport d'intensités des signaux recueillis par imagerie avant et après le traitement par radiothérapie, de préférence selon la formule : Ii I F = cxSF(d,D)=cxe (71 xNH2AX(d,24h)-EfiVD) 15 où : If est l'intensité du signal dans le volume traité à la fin du traitement, I, est l'intensité du signal dans le volume traité avant le traitement, C est une constante de proportionnalité. 20\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 11, dans lequel on établit le volume de la tumeur après un traitement cassant l'ADN avec une dose D (ce volume étant exprimé par le paramètre V(D)) à partir de la survie des cellules de la tumeur, de préférence par la relation V(D) = 1 + e-a.No(SF(D)-SF(D50)) où : 25 - N est de nombre de cellules survivantes après une irradiation avec une dose D, Vo 3040178 25 - VO est le volume initial de la tumeur, - SF(D) est la fraction de cellules survivantes à une dose D, - a est la constante de variation du volume par nombre de cassures de l'ADN, - D50 est la dose en Gy pour laquelle il est observé une réduction de 50% du 5 volume de la tumeur.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 12, dans lequel on établit le volume de la tumeur après un traitement cassant l'ADN avec une dose D (ce volume étant exprimé par le paramètre V(D)) à partir du nombre de cellules survivantes, de 10 préférence par la relation V (D) = 1 + e-a(N(D)-N(D50)) où : - N est de nombre de cellules survivantes après une irradiation avec une dose D, - VO est le volume initial de la tumeur, - N(D) est le nombre de cellules survivantes à une dose D, 15 - a est la constante de variation du volume par nombre de cassures de l'ADN, - D50 est la dose en Gy pour laquelle il est observé une réduction de 50% du volume de la tumeur.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 12, dans lequel on établit le 20 volume de la tumeur après un traitement cassant l'ADN à une dose D fractionnée en n doses d et ce à partir du nombre de foci yH2AX de cellules survivantes au traitement cassant l'ADN, de préférence par la relation V (d, D) = Vo (71 x N H2AX(d,24h) +13dD., ,n5o x N H2Ax(d,24h) +13dD5o), 1 + e- a'l \ j°(e- 0 )-e e J où : No représente le nombre de cellules tumorales initiales, 25 0 représente la tolérance de la cellule (unité : nombre de cassures double-brin), Vo 3040178 26 D50 est la dose pour laquelle on trouve une réduction du volume de la tumeur de 50%, n50 est le nombre de fractions pour lequel on trouve une réduction du volume de la tumeur de 50% 5 a est une constante de variation du volume par nombre de cassures, fl représente le paramètre en Gy-2 du modèle linéaire quadratique relatif au type de tissu tumoral.