Brevet FR3043695A1 (20170519)
REVENDICATIONS1. Procédé d'obtention d'un extrait aqueux enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides à 5 partir d'une matière végétale comprenant les étapes suivantes: a) on met en présence la matière végétale avec de l'eau ; b) on ajoute de l'acide éthylène diamine tétraacétique (EDTA) tétrasodique dans le mélange obtenu en a) à un pH compris entre 10,5 et 11; 10 c) on ajuste ensuite le pH du mélange obtenu en b) à une valeur comprise entre 6 et 8 ; d) on purifie le mélange obtenu en c) de manière à éliminer la matière végétale solide résiduelle et obtenir un extrait brut aqueux purifié ; et 15 e) on contrôle le pH et on le réajuste si nécessaire à une valeur comprise entre 6 et 8, préférentiellement entre 6 et 6,5.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que 20 dans l'étape a) on met en présence la matière végétale avec de l'eau dans un rapport matière végétale / eau de 4 à 20% (poids/poids).\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 ou 2 25 caractérisé en ce que l'étape b) de traitement par l'acide éthylène diamine tétraacétique (EDTA) tétrasodique est réalisée sous agitation pendant un temps d'au moins lh et à une température comprise entre 20 et 80°C. 30\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisé en ce qu'à l'étape d) on centrifuge le mélange obtenu en c). 3043695 53\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 4 caractérisé en ce que l'étape e) est précédée par au moins une filtration de l'extrait brut aqueux obtenu en d) et préférentiellement par des filtrations successives de l'extrait brut aqueux en abaissant le seuil de filtration de 20-50 pm à 0,1-0,30 pm.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il comprend une étape additionnelle d'hydrolyse réalisée avant l'étape c), soit directement sur le mélange obtenu en b), soit sur le surnageant après centrifugation du mélange obtenu en b) et élimination de la matière végétale résiduelle, par action d'au moins une enzyme choisie parmi une carbohydrase, une cellulase et/ou une protéase, pendant au moins lh, à une température comprise entre 45 et 65°C et à un pH compris entre 6 et 8,5.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend une étape de désactivation de l'enzyme à une température comprise entre 65 et 80°C pendant au moins lh, cette étape de désactivation étant réalisée directement après l'étape d'hydrolyse ou entre 2 des étapes de filtrations successives précédant l'étape e).\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que de la terre de diatomée ou de la silice à une concentration de 10 à 20 g/kg sont ajoutées dans le mélange avant l'étape d).\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la concentration en EDTA tétrasodique est comprise entre 2 et 15 mM, préférentiellement 10 mM. 3043695 54\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la matière végétale est broyée avant d'être mise en présence d'eau dans l'étape a). 5\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la matière végétale est une partie de plante choisie parmi les graines, les fruits, les bulbes, les feuilles, les racines, le germe ou encore le tourteau obtenu après transformation. 10\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la matière végétale est choisie parmi les espèces Hibiscus esculentus (gombo), Adansonia digitata (baobab), Chenopodium quinoa (quinoa), Lens esculenta 15 (lentille), Oryza sativa (germe de riz), Cucurbita pepo (courge).\n<CLM>\1\tExtrait aqueux de matière végétale, enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides susceptible 20 d'être obtenu par le procédé selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il comprend en poids du poids total de l'extrait, 5-60 g/kg d'extrait sec et 10-1000 mg/kg de petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. 25\n<CLM>\1\tExtrait selon la revendication 13, caractérisé en ce qu'il comprend en outre de 0,5 à 30 g/kg de fragments protéiques et de 0,5 à 50 g/kg de sucres.\n<CLM>\1\tExtrait selon la revendication 14, caractérisé en ce 30 qu'il est dilué dans un solvant et comprend en poids du poids total de l'extrait, 5-35 g/kg d'extrait sec, 0,5-20 g/kg de fragments protéiques, 0,5-30 g/kg de sucres, et 10-500 mg/kg de petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. 3043695 55\n<CLM>\1\tComposition comprenant, en tant qu'agent actif anti-âge, une quantité efficace d'un extrait selon l'une des revendications 13 à 15, et un milieu physiologiquement acceptable. 5\n<CLM>\1\tComposition selon la revendication 16, caractérisée en ce que l'extrait est présent à une concentration comprise entre 1 et 5% en poids du poids total de la composition. 10\n<CLM>\1\tComposition selon l'une des revendications 16 ou 17, caractérisée en ce qu'elle est formulée pour être appliquée topiquement sur la peau.\n<CLM>\1\tUtilisation cosmétique de la composition selon l'une 15 des revendications 16 à 18 pour lutter contre les signes du vieillissement cutané.\n<CLM>\1\tUtilisation cosmétique de la composition selon l'une des revendications 16 à 18 pour améliorer l'hydratation de la 20 peau.