Brevet FR3046796A1 (20170721)
REVENDICATIONS1. Procédé de détermination de la capacité de production de biofilm par un microorganisme comprenant les étapes suivantes: a) Introduire dans des contenants de culture comprenant un milieu de culture liquide approprié au développement dudit microorganisme au moins deux particules, lesdites particules reposant sur une surface immergée dans le milieu de culture, b) Introduire et ensemencer indépendamment le milieu de culture des contenants obtenus à l'étape a) avec ledit microorganisme à une concentration comprise de 1x10-1 à 1x10-6 McFarland (McF), chaque milieu comprenant indépendamment une concentration différente de microorganismes, c) maintenir les milieux de culture ensemencés dans des conditions permettant un développement dudit microorganisme, d) appliquer un champ capable de mettre en mouvement lesdites au moins deux particules reposant sur une surface immergée dans le milieu de culture, e) détermination de la capacité de production de biofilm par le microorganisme par observation et mesure de l'agrégation desdites particules comme suit : l'absence d'agrégation desdites particules apparaissant à une concentration comprise de 1x10-6 à 1x104 McF correspondant à un microorganisme fort producteur de biofilm, l'absence d'agrégation desdites particules apparaissant à partir d'une concentration supérieure à 1x10-4 et inférieure à 1x10-2 McF correspondant à un microorganisme producteur intermédiaire de biofilm, l'absence d'agrégation desdites particules apparaissant à partir d'une supérieure ou égale à 1x102 McF correspondant à un microorganisme faible producteur de biofilm, une agrégation desdites particules quelle que soit la 3046796 56 concentration correspondant à un microorganisme non producteur de biofilm.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1 dans lequel le procédé 5 comprend une étape e') de détermination de la valeur de l'Index Biofilm (BFI) pour chacun des milieux par : analyse des composantes des couleurs rouge, vert bleu des pixels de l'image permettant de déterminer la densité de particules par pixel, 10 calcul de la corrélation entre les particules, calcul de la densité d'agrégation des particules exprimée en BFI, et détermination de l'indice de formation potentielle du biofilm par contenant (BPc) selon la formule (I) suivante : 15 BPc= [1-(BFle / BFIn)] (I) dans laquelle BFIe correspond à la valeur de l'index biofilm dans le milieu ensemencé et BFIn correspond à la valeur de l'index biofilm dans un contenant ne comprenant pas de microorganismes (contrôle négatif). 20\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 2, comprenant une étape e") postérieure ou simultanée à l'étape e') de la détermination de la valeur seuil (S) selon la formule (II) suivante : S= 1 - [(mBFIn - 3 X stmBFln)/2] / mBFIn (II) dans laquelle mBFIn est égale à la moyenne des BFI des contrôles 25 négatifs, stmBFln est également à la déviation standard de la moyenne des BFI des contrôles négatifs calculée.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 3, dans lequel la capacité de production de biofilm par le microorganisme est déterminée par 30 comparaison de la valeur de BPc en fonction de la concentration de microorganismes comme suit : - une valeur de BPc supérieure ou égale à la valeur seuil S à 3046796 57 partir d'une concentration de microorganismes comprise de 1x10-6 à 1x1 McF correspondant à un microorganisme fort producteur de biofilm, une valeur de BPc supérieure ou égale à la valeur seuil S à 5 partir d'une concentration de microorganismes supérieure à 1x10-4 et inférieure à 1x10-2 McF correspondant à un microorganisme producteur intermédiaire de biofilm, une valeur de BPc supérieure ou égale à la valeur seuil S à partir d'une concentration de microorganismes de 1x102 McF 10 correspondant à un microorganisme faible producteur de biofilm, une valeur de BPc inférieure à la valeur seuil S quelque soit la concentration correspondant à un microorganisme non producteur de biofilm. 15\n<CLM>\1\tProcédé de classification de microorganismes comprenant les étapes suivantes: a) Introduire dans des contenants de culture comprenant un milieu de culture liquide approprié au développement dudit 20 microorganisme au moins deux particules, lesdites particules reposant sur une surface immergée dans le milieu de culture, b) Introduire et ensemencer indépendamment le milieu de culture des contenants obtenus à l'étape a) avec ledit microorganisme à une concentration comprise de 1x10-1 à 1x10-6McF, chaque milieu 2 5 comprenant indépendamment une concentration différente de microorganismes, c) maintenir les milieux de culture ensemencés dans des conditions permettant un développement dudit microorganisme, d) appliquer un champ capable de mettre en mouvement lesdites au 30 moins deux particules reposant sur une surface immergée dans le milieu de culture préférentiellement dans le but d'obtenir une agrégation, préférentiellement sous forme de spot, desdites au 3046796 58 moins deux particules, e) classer le microorganisme par observation de l'agrégation desdites particules comme suit : catégorie I : absence d'agrégation desdites particules 5 apparaissant à une concentration comprise de 1x10-6 à 1x10-4 McF correspondant à un microorganisme fort producteur de biofilm catégorie II : absence d'agrégation desdites particules apparaissant à partir d'une concentration supérieure à 1x10-4 10 et inférieure à 1x102 McF correspondant à un microorganisme producteur intermédiaire de biofilm, catégorie III : absence d'agrégation desdites particules apparaissant à partir d'une concentration supérieure ou égale à 1x10-2 McF correspondant à un microorganisme faible 15 producteur de biofilm, catégorie IV : agrégation desdites particules quelle que soit la concentration correspondant à un microorganisme non producteur de biofilm. 20\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant six contenants de culture dans lesquels la concentration de microorganismes à l'étape b) est respectivement de 1x10- 6 McF, 1x10-5 McF, 1x10-4 McF, 1x10-3 McF, 1x10-2 McF et 1x10-1 McF. 25\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel le maintien des milieux de culture ensemencés dans des conditions permettant un développement dudit microorganisme est réalisé pendant 1 à 8 heures, de préférence 4 à 6 heures. 30\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 dans lequel le maintien des milieux de culture ensemencés dans des conditions permettant un développement dudit microorganisme est réalisé 3046796 59 pendant 5 à 12 temps de génération dudit microorganisme.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel lesdites, au moins deux particules sont des 5 particules chargées électriquement, magnétiques ou magnétisables ou recouvertes d'au moins une couche magnétique ou magnétisable.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel lesdites, au moins deux, particules sont soumises 10 à un champ électromagnétique, éventuellement appliqué par impulsion.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel lesdites, au moins deux, particules sont soumises à une augmentation progressive du champ. électromagnétique. 15\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ledit champ est magnétique et est généré par des moyens générateurs de champ en mouvement. 20\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel lesdites, au moins deux, particules sont éclairées au moyen d'une source lumineuse pour détecter son mouvement.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 25 précédentes, dans lequel lesdites, au moins deux, particules sont génératrices d'un signal.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication précédente, dans lequel lesdites, au moins deux, particules sont excitables, fluorescentes ou 30 phosphorescentes ou radioactives ou chimioluminescentes.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 3046796 60 précédentes, dans lequel l'un desdits compartiments ne comprend pas ledit microorganisme, ledit compartiment représentant un témoin du milieu.