Brevet FR3038616A1 (20170113)
REVENDICATIONS1. Procédé pour purifier et concentrer au moins un fragment d'acides nucléiques d'une taille supérieure à 20 pb susceptible d'être présent dans un échantillon, le procédé comprenant les étapes suivantes : a) mise en contact d'au moins un desdits fragments avec une solution d'un polymère polycationique en vue de former un complexe entre ledit au moins un fragment d'acides nucléiques et le polymère polycationique, b) fixation du complexe obtenu à l'étape a) sur une résine échangeuse de cations par agitation lente ou douce et c) élution dudit au moins un fragment d'acides nucléiques de la résine échangeuse de cations par application d'une force d'agitation, ledit procédé étant caractérisé en ce que les étapes a) à c) du procédé sont réalisées à un pH compris entre environ 6,0 et 10,0, avantageusement entre environ 7,5 et 9,5, et de manière particulièrement avantageuse entre environ 8 et 9, le pH de chacune de ces étapes pouvant être identique ou différent l'un de l'autre.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit fragment d'acides nucléiques est un fragment d'ADN simple brin, un fragment d'ADN double brin, de l'ADN génomique ou de l'ARN.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce que la force d'agitation correspond à une agitation mécanique choisie parmi une agitation par agitateur orbital, par agitateur linéaire, par thermomixer, par ultrasons ou par micro-ondes.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'agitation mécanique est réalisée à une température comprise entre environ 30°C et 100°C, avantageusement à une température comprise entre environ 60°C et 80°C et de manière particulièrement avantageuse à une température d'environ 75°C. 3038616 27\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'agitation mécanique est réalisée par un agitateur orbital, à une température comprise entre environ 30°C et 100°C, avantageusement à une température comprise entre environ 60°C et 80°C et de manière particulièrement avantageuse à une température 5 d'environ 75°C.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la résine échangeuse de cations présente une capacité d'échange d'ions au moins égale à 2 mEq/g, de préférence au moins égale à 10 mEq/g et en particulier comprise entre 10 et 30 mEq/g. 10\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le polymère polycationique est choisi dans le groupe comprenant la poly-L-lysine (PLL), des dendrimères greffés de lysine (DGL), le polyéthylènimine (PEI) ou la polyamidoamine (PAMAM).\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le polymère 15 polycationique est la poly-L-lysine utilisée sous forme d'une solution à une quantité comprise entre 0,1 et 10 mg, de préférence à une quantité d'environ 1mg par échantillon.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend en outre une étape de récupération après l'étape d'élution dudit au 20 moins un fragment d'acides nucléiques.\n<CLM>\1\tUtilisation du procédé selon l'une des revendications précédentes pour la détection de bactéries, la détection de virus et la détection de parasites et de séquences nucléiques eucaryotes.\n<CLM>\1\tKit pour purifier et concentrer au moins un fragment d'acides nucléiques à partir 25 d'un échantillon susceptible d'en contenir en utilisant le procédé selon l'une des revendications 1 à 8, ledit kit comprenant un polymère polycationique soluble en phase homogène, une résine échangeuse de cations et une solution tampon à un pH compris entre 6,0 et 10,0.