Brevet FR3051252A1 (20171117)
REVENDICATIONS1. Méthode de diagnostic in vitro d'un cancer urologique comprenant la comparaison d'un sécrétome de cellules isolées à partir d'un échantillon d'urine d'un patient à diagnostiquer par rapport : - soit à un sécrétome de référence obtenu à partir de sécrétions de cellules saines isolées d'un échantillon d'urine d'une personne saine, - soit à un sécrétome de référence obtenu à partir de sécrétions de cellules saines dérivées de cultures de lignées cellulaires standard caractéristiques d'un organe urologique déterminé, ledit sécrétome et ledit sécrétome de référence étant constitués de l'ensemble des composants formant leurs sécrétions respectives.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro d'un cancer urologique selon la revendication 1, comprenant la détermination d'au moins une différence d'un composant entre le sécrétome de cellules isolées à partir d'un échantillon d'urine d'un patient à diagnostiquer et le sécrétome de référence, correspondant notamment à - la présence d'un composant en plus forte ou en plus faible concentration, - l'absence d'un composant, dans le sécrétome de cellules isolées à partir d'un échantillon d'urine dudit patient à diagnostiquer, par rapport audit composant dans le sécrétome de référence ; - la présence d'un composant dans le sécrétome de cellules isolées à partir d'un échantillon d'urine dudit patient à diagnostiquer, lequel est absent dans le sécrétome de référence.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro d'un cancer urologique selon l'une des revendications 1 ou 2, dans laquelle ledit patient à diagnostiquer est diagnostiqué comme présentant un cancer urologique lorsqu'au moins une différence d'un 3051252 92 composant est observée entre le sécrétome de cellules isolées à partir d'un échantillon d'urine dudit patient à diagnostiquer et le sécrétome de référence.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro d'un cancer urologique selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, comportant les étapes suivantes : - récupération des sécrétions produites par les cellules isolées à partir d'un échantillon d'urine d'un patient à diagnostiquer - analyse des composants desdites sécrétions, dit sécrétome, produites par lesdites cellules isolées à partir d'un échantillon d'urine dudit patient à diagnostiquer ; - comparaison dudit sécrétome analysé, de cellules isolées à partir d'un échantillon d'urine de la personne à diagnostiquer, par rapport à un sécrétome de référence analysé, obtenu à partir de cellules saines isolées d'un échantillon d'urine d'une personne saine, ou obtenu à partir de lignées cellulaires standard dérivées de reins, de vessie, de prostate, - détermination de la présence d'un cancer urologique lorsqu'au moins une différence d'un composant est observée entre ledit sécrétome de cellules isolées à partir d'un échantillon d'urine dudit patient à diagnostiquer et ledit sécrétome de référence, et - détermination de la localisation dudit cancer urologique dans la vessie, les reins ou la prostate, selon que la au moins une différence d'un composant est observée par rapport à un sécrétome de référence obtenu pour la vessie, les reins ou la prostate.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro d'un cancer urologique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle les cellules isolées sont cultivées sur un milieu de culture en 2D comportant un tapis cellulaire de cellules épithéliales confluentes surmonté d'un tapis cellulaire de fibroblastes confluents.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro d'un cancer urologique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle ledit milieu de culture en 2D présente au moins un repli de manière à former un milieu de culture en 3D, mimant la structure d'au moins 3051252 93 une glande exocrine composée de structure acinaire/canaliculaire et comportant ledit tapis cellulaire de cellules épithéliales surmonté dudit tapis cellulaire de fibroblastes.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro d'un cancer urologique selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans laquelle ladite analyse du sécrétome est réalisée par spectrométrie de masse sans séparation préalable des composants dudit sécrétome, pour obtenir un spectre de masse spécifique du sécrétome des cellules isolées à partir de l'échantillon, et notamment comprenant la comparaison du spectre de masse d'un sécrétome de cellules isolées à partir d'un échantillon d'urine du patient diagnostiquer par rapport à un spectre de masse d'un sécrétome de référence obtenu à partir de cellules saines isolées d'un échantillon d'urine d'une personne saine.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro d'un cancer urologique selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans laquelle la_localisation dudit cancer urologique est effectuée dans les reins, la vessie ou la prostate par la comparaison du spectre de masse du sécrétome de cellules isolées à partir d'un échantillon d'urine du patient à diagnostiquer par rapport aux spectres de masse des sécrétomes de référence obtenu séparément à partir de cellules saines de reins, de vessie et de prostate, isolées d'un échantillon d'urine d'une personne saine, et la détermination d'au moins une différence entre le spectre de masse du sécrétome de cellules isolées à partir d'un échantillon d'urine du patient à diagnostiquer et au moins un desdits sécrétomes de référence de reins, de vessie ou de prostate.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro d'un cancer urologique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans laquelle les composants présents dans les sécrétions constituant le sécrétome sont des protéines, des peptides, des acides aminés, et de biomarqueurs nucléiques (ADN, ARN, miARN et ARNi) et notamment les composants constituant le sécrétome comprennent les protéines suivantes : PSA, PCA3, KLK15, SPINK1, PRSS3, cathepsine D, Apolipoprotéine PLK2, et comprennent les biomarqueurs nucléiques suivants : miR-141, miR-375, transcrits de fusion TMPRSS2-ERG, les gènes codant pour SFPR1 et BNC1, les gènes codant pour l'hydrolase Gamma-glutamyl (GGII), l'inhibiteur de liaison au diazépam (DBI), et le facteur de transcription E2F3. 3051252 94\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro d'un cancer urologique selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans laquelle les composants constituant le sécrétome de cellules saines de prostate isolées à partir d'un échantillon d'urine d'une personne saine, comprennent les protéines suivantes : PSA, PCA3, KLK15, SPINK1 et PRSS3, et comprennent l'ARN de fusion TMPRSS2-ERG et les miARN miR-141 et miR-375.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro d'un cancer urologique selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans laquelle les composants constituant le sécrétome de cellules saines de reins isolées à partir d'un échantillon d'urine d'une personne saine, comprennent la protéine cathepsine D, et comprennent les biomarqueurs nucléiques suivants : les gènes codant pour SFPR1 et BNC1.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro d'un cancer urologique selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans laquelle les composants constituant le sécrétome de cellules saines de vessie isolées à partir d'un échantillon d'urine d'une personne saine, comprennent les protéines suivantes : Apolipoprotéine A-I et PLK2, et les biomarqueurs nucléiques suivants : les gènes codant pour l'hydrolase Gammaglutamyl (GGII), l'inhibiteur de liaison au diazépam (DBI), et le facteur de transcription E2F3.