Brevet FR3044312A1 (20170602)
REVENDICATIONS1. Polypeptide dérivé de la protéine p-ORF2 du virus de l'hépatite E comprenant au moins la séquence d'acides aminés 394-660, numérotés par rapport à une protéine p- ORF2 de 660 acides aminés, dans laquelle les trois cystéines en positions 627, 630 et 638 ont été mutées ou, pour une protéine p-ORF2 de longueur différente, au moins la séquence d'acides aminés correspondant aux acides aminés 394-660 de la protéine pORF2 de 660 acides aminés, dans laquelle les trois cystéines situées aux trois positions correspondant aux positions 627, 630 et 638 de la protéine p-ORF2 de 660 acides aminés ont été mutées.\n<CLM>\1\tPolypeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce que les mutations sont mises en oeuvre en remplaçant les trois cystéines par tout acide aminé à l'exception de la proline, des acides aminés dont les chaînes latérales sont chargées et des acides aminés dont les chaînes latérales comportent un cycle aromatique benzénique.\n<CLM>\1\tPolypeptide selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que les mutations sont mises en oeuvre en remplaçant les trois cystéines par un acide aminé choisi parmi l'alanine, la glycine, la thréonine, la valine et la sérine.\n<CLM>\1\tPolypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les mutations consistent à substituer les cystéines par le même acide aminé.\n<CLM>\1\tPolypeptide selon la revendication 4, caractérisé en ce que les mutations sont mises en oeuvre en remplaçant les trois cystéines par de la sérine.\n<CLM>\1\tPolypeptide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il consiste en le polypeptide de séquence d'acides aminés 394-660, numérotés par rapport à une protéine p-ORF2 de 660 acides aminés, dans laquelle les trois cystéines en positions 627, 630 et 638 ont été mutées ou, pour une protéine p-ORF2 de longueur 3044312 44 différente, de séquence d'acides aminés correspondant aux acides aminés 394-660 de la protéine p-ORF2 de 660 acides aminés, dans laquelle les trois cystéines situées aux trois positions correspondant aux positions 627, 630 et 638 de la protéine p-ORF2 de 660 acides aminés ont été mutées. 5\n<CLM>\1\tPolypeptide selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comporte également un ou plusieurs acides aminés n'appartenant pas à la protéine p-ORF2 ou en ce qu'il est marqué. 10\n<CLM>\1\tAcide nucléique isolé comprenant une séquence de nucléotides codant pour le polypeptide tel que défini dans l'une des revendications 1 à 7 ou une séquence complémentaire à ladite séquence codante.\n<CLM>\1\tVecteur d'expression comprenant une séquence d'acide nucléique telle que définie 15 dans la revendication\n<CLM>\1\t10. Cellule hôte comprenant une séquence de nucléotides codant pour le polypeptide tel que défini dans l'une des revendications 1 à 7 ou une séquence complémentaire à ladite séquence codante ou un vecteur d'expression tel que défini dans la revendication\n<CLM>\1\t20\n<CLM>\1\tProcédé de détermination par immunoessai de la présence d'une réponse anticorps dirigée contre la protéine p-ORF-2 du virus de l'hépatite E dans un échantillon biologique issu d'un sujet, susceptible de contenir les anticorps de ladite réponse, lequel comprend les étapes suivantes : 25 - mettre en contact ledit échantillon biologique avec un polypeptide tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 7, - détecter un signal émis par la liaison entre ledit polypeptide et lesdits anticorps, s'ils sont présents, en utilisant un marqueur capable d'émettre un signal détectable, - comparer le signal ainsi obtenu avec un signal de référence S préalablement déterminé 30 avec deux populations de témoins, l'une ayant développé lesdits anticorps et l'autre 3044312 45 n'ayant pas développé lesdits anticorps, - un signal inférieur audit signal de référence S signifiant que l'échantillon ne contient pas lesdits anticorps, et - un signal supérieur audit signal de référence S signifiant que l'échantillon contient 5 lesdits anticorps.\n<CLM>\1\tProcédé de détermination par immunoessai du taux d'anticorps dirigés contre la protéine p-ORF-2 du virus de l'hépatite E dans un échantillon biologique issu d'un sujet, susceptible de contenir lesdits anticorps, lequel comprend les étapes suivantes : 10 - mettre en contact ledit échantillon biologique avec un polypeptide tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 7, - détecter un signal émis par la liaison entre ledit polypeptide et lesdits anticorps, s'ils sont présents, en utilisant un marqueur capable d'émettre un signal détectable, - transformer le signal détecté en un taux d'anticorps. 15\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 11 ou 12, caractérisé en ce que les anticorps recherchés sont des IgM ou des IgG.\n<CLM>\1\tUtilisation d'un procédé tel que défini dans l'une quelconque des revendications 11 à 20 13 pour l'aide au diagnostic in vitro, pour le diagnostic in vitro d'une infection au virus de l'hépatite E chez un sujet susceptible d'être infecté, pour le suivi thérapeutique d'un sujet infecté par le virus de l'hépatite E ou pour faire des études épidémiologiques de la séroprévalence des anticorps anti-HEV dans une population ou dans un territoire géographique donné. 25\n<CLM>\1\tUtilisation d'un procédé tel que défini dans la revendication 11 ou 12 pour déterminer si un sujet a besoin d'être vacciné ou revacciné contre le virus de l'hépatite E, dans laquelle les anticorps recherchés sont des IgG. 30\n<CLM>\1\tTrousse pour la détermination par immunoessai de la présence de la réponse 3044312 46 anticorps ou du taux d'anticorps dirigés contre la protéine p-ORF-2 du virus de l'hépatite E chez un sujet susceptible d'avoir produit ces anticorps, comprenant un polypeptide tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à\n<CLM>\1\t5\n<CLM>\1\tTrousse selon la revendication 16, comprenant également au moins un échantillon contrôle positif qui est un échantillon contenant un taux donné d'anticorps dirigés contre la protéine p-ORF-2 du virus de l'hépatite E.