Brevet FR3037970A1 (20161230)
REVENDICATIONS1. Kit de PCR contenant au moins deux couples d'amorces spécifiques à un motif d'intérêt à identifier sur un acide nucléique, lesdits couples étant adaptés pour générer, pour ledit motif, au moins deux amphficats différenciables soit par leur taille, soit par leur marquage, soit par une combinaison de ces caractéristiques.\n<CLM>\1\tKit de PCR selon la revendication 1, caractérisé en ce que lesdits couples d'amorces sont adaptés pour générer, pour chaque motif, des amplificats dont la taille diffère de plusieurs bases.\n<CLM>\1\tKit de PCR selon la revendication 1, caractérisé en ce que lesdits couples d'amorces sont adaptés pour générer, pour chaque motif, des amplificats dont la taille diffère d'une base.\n<CLM>\1\tKit de PCR selon la revendication 1 ou 2 ou 3, caractérisé en ce que lesdits couples d'amorces sont adaptés pour générer, pour chaque motif, des amplificats portant un marqueur différent.\n<CLM>\1\tKit selon l'une des revendications précédentes, contenant : - un couple d'amorces de référence adapté pour amplifier spécifiquement le motif A, produisant un amplificat de taille T (T paires de base), marqué avec un marqueur M, et - un couple d'amorces modifiées adapté pouramplifier spécifiquement le motif A, produisant un amplificat de taille T' différent de T par une, deux, trois ou quatre paires de base en plus ou en moins, marqué avec un marqueur M' différent de M. 3037970\n<CLM>\1\tKit selon l'une des revendications précédentes, contenant, pour chaque motif d'intérêt à identifier sur un acide nucléique, trois couples d'amorces spécifiques dudit motif, lesdits couples étant adaptés pour générer au moins trois amplificats différenciables par leur taille et/ou par leur marquage.\n<CLM>\1\tKit selon l'une des revendications précédentes, contenant un couple d'amorces de référence capable d'amplifier spécifiquement le motif A, produisant un amplificat de taille T (T paires de base), marqué avec un marqueur M, et au moins deux autres couples d'amorces choisis parmi : - un couple d'amorces modifiées adapté pour amplifier spécifiquement le motif A, produisant un amplificat ayant une taille T' différent de T par une, deux, trois ou quatre paires de base en plus ou en moins, ledit amplificat étant marqué avec un marqueur M, - un couple d'amorces modifiées adapté pouramplifier spécifiquement le motif A, produisant un amplificat ayant une taille T, ledit amplificat étant marqué avec un marqueur M' différent de M, et - un couple d'amorces modifiées adapté pour amplifier spécifiquement le motif A, produisant un amplificat ayant une taille T' différent de T par une, deux, trois ou quatre paires de base en plus ou en moins, ledit amplificat étant marqué avec un marqueur M' différent de M.\n<CLM>\1\tMéthode permettant de détecter au moins un motif d'acide nucléique d'intérêt dans un échantillon biologique, caractérisée en ce qu'elle utilise un kit selon l'une des revendications 1-7.\n<CLM>\1\tMéthode selon la revendication 8, comprenant les étapes suivantes : a) Obtention d'un échantillon biologique contenant des acides nucléiques, b) Mise en contact de l'échantillon biologique avec les couples d'amorces décrits dans les revendications 1-7 et des réactifs nécessaires à l'amplification desdits acides nucléiques, c) Amplification desdits acides nucléiques dans les conditions appropriées, d) Détection des amplificats obtenus au moyen d'un système de détection à deux dimensions 3037970 e) Génération d'un profil génétique en fonction des amplificats détectés à l'étape d).\n<CLM>\1\tMéthode selon la revendication 8, caractérisée en ce que ledit système de détection est l'électrophorèse capillaire.\n<CLM>\1\tLa méthode selon l'une quelconque des revendications 8 à 10, dans laquelle ledit motif d'intérêt est un STR.\n<CLM>\1\tMéthode selon la revendication 8, dans laquelle, pour détecter ledit motif nucléique d'intérêt, on compare toutes les combinaisons de n pics détectés dans l'échantillon pour chaque n-ALC, avec des n-ALC attendus contenus dans une liste préalablement établie.\n<CLM>\1\tMéthode selon la revendication 8 prise seule ou en combinaison avec la revendication 12, dans laquelle, pour détecter ledit motif nucléique d'intérêt, on met en oeuvre les étapes suivantes : a) détection de tous les n-ALC valides dans l'échantillon testé, b) attribution de chaque n-ALC valide à un motif d'intérêt recherché.\n<CLM>\1\tMéthode selon la revendication 9 prise seule ou en combinaison avec l'une des revendications 10 à 13, caractérisée en ce que l'étape de détection et de génération d'un profil génétique d) et e), et le cas échéant les étapes d'amplification et de mise en contact, sont réalisées de façon automatique.