Brevet FR3044681A1 (20170609)
REVENDICATIONS1. Utilisation, en tant que premier moyen de marquage, d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement UEA-1 ou TJA-II, pour la mise en oeuvre d'un procédé de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales.\n<CLM>\1\tUtilisation selon la revendication 1, d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose et d'un second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales, avantageusement choisi parmi une lectine reconnaissant l'antigène T, notamment ABA, Jacaline et ACA ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, notamment choisi dans le groupe constitué de ABA et ACA ; ABA et Jacaline ; et Jacaline et ACA, avantageusement Jacaline et ACA.\n<CLM>\1\tUtilisation selon l'une des revendications 1 à 2, dans laquelle la ou les lectines sont liées à un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales, avantageusement constitué de billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps anti-biotine, les lectines étant biotinylées ; d'un fluorophore lié de manière covalente à la lectine ; ou d'un fluorophore conjugué à de la streptavidine, à de l'avidine ou à un anticorps anti-biotine, les lectines étant biotinylées.\n<CLM>\1\tUtilisation selon l'une des revendications 1 à 3, dans laquelle : - la lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose est biotinylée, - une première lectine reconnaissant l'antigène T est biotinylée, - une deuxième lectine reconnaissant l'antigène T est biotinylée, - le moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules est constitué de billes magnétiques sur lesquelles sont greffées de la streptavidine. lesdites lectines étant avantageusement UEA-1, Jacaline et ABA ou ACA, dans un rapport molaire de 625 à 12500: 16 à 320: 1 à 20, avantageusement 5000 à 7000: 50 à 250 : 5 à 15, notamment dans un rapport molaire 6250: 160:\n<CLM>\1\t3044681 23\n<CLM>\1\tKit comprenant en tant que premier moyen de marquage une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement UEA-1 ou TJA-II, et une lectine reconnaissant l'antigène T, avantageusement choisie parmie ABA, ACA et Jacaline, ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, avantageusement choisi dans le groupe 5 constitué de ABA et ACA ; ABA et Jacaline ; et Jacaline et ACA, avantageusement Jacaline et ACA.\n<CLM>\1\tKit selon la revendication 5 comprenant UEA-1, Jacaline et ACA dans un rapport 6250: 160:\n<CLM>\1\t10\n<CLM>\1\tKit selon l'une des revendications 5 ou 6, comprenant en outre un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules, avantageusement constitué de billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps antibiotine, les lectines étant biotinylées, d'un fluorophore lié de manière covalente à la lectine, ou 15 d'un fluorophore conjugué à de la streptavidine, à de l'avidine ou à un anticorps anti-biotine, les lectines étant biotinylées.\n<CLM>\1\tKit selon l'une des revendications 5 à 7, comprenant : - une lectine biotinylée reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, 20 - une première lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T, - une deuxième lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T, - un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules, avantageusement des billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine, 25 lesdites lectines étant avantageusement UEA-1, Jacaline, ABA ou ACA dans un rapport molaire de 625 à 12500 : 16 à 320 : 1 à 20, avantageusement 5000 à 7000 : 50 à 250 : 5 à 15, notamment dans un rapport molaire 6250: 160:\n<CLM>\1\t9. Procédé in vitro de détection et éventuellement d'isolement des cellules 30 souches cancéreuses colorectales, comprenant l'étape de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales d'un échantillon biologique colorectal avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement UEA-1 ou TJA-II. 3044681 24\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 9, comprenant les étapes de : (a) marquage des cellules souches cancéreuses colorectales avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, pour obtenir un échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses colorectales sont 5 marquées, (b) mise en contact de l'échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses sont marquées avec un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules, (c) détection des cellules souches cancéreuses colorectales, 10 (d) éventuellement isolement des cellules souches cancéreuses colorectales.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 9 ou 10, dans lequel l'étape (a) est mise en oeuvre avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose en tant que premier moyen de marquage et un second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses 15 colorectales, avantageusement choisi dans le groupe constitué de ABA, Jacaline et ACA ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, notamment choisi dans le groupe constitué de ABA et ACA ; ABA et Jacaline ; et Jacaline et ACA, avantageusement Jacaline et ACA.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 11, dans lequel les lectines sont UEA-1, 20 Jacaline et ACA dans un rapport molaire 6250: 160:\n<CLM>\1\t13. Procédé selon la revendication 12, dans lequel la ou les lectines sont liées à un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales, avantageusement constitué de billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la 25 streptavidine, de l'avidine ou un anticorps anti-biotine, les lectines étant biotinylées, d'un fluorophore lié de manière covalente à la lectine, ou d'un fluorophore conjugué à de la streptavidine, à de l'avidine ou à un anticorps anti-biotine, les lectines étant biotinylées.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic in vitro du risque de récidive du cancer colorectal et/ou 30 de l'agressivité du cancer colorectal pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal, comprenant une étape de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales d'un échantillon biologique colorectal avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement UEA-1 ou TJA-II. 3044681 25\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic selon la revendication 14, comprenant les étapes de : (a) marquage des cellules souches cancéreuses colorectales avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, pour obtenir un échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses sont marquées, 5 (b) mise en contact de l'échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses sont marquées avec un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules, (c) détection et éventuellement quantification des cellules souches cancéreuses colorectales, 10 (d) déduction du risque de récidive du cancer colorectal et/ou de l'agressivité du cancer colorectal pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal à partir de la présence et éventuellement de la quantité de cellules souches cancéreuses colorectales. 15\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic selon la revendication 14 ou 15, dans laquelle l'étape (a) est mise en oeuvre avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose en tant que premier moyen de marquage et un second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales, avantageusement choisi parmi une lectine reconnaissant l'antigène T notamment ABA, Jacaline ou ACA ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, 20 notamment ABA et ACA ; ABA et Jacaline ; ou Jacaline et ACA, avantageusement Jacaline et ACA.\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic selon la revendication 16, dans laquelle les lectines sont UEA-1, Jacaline et ACA dans un rapport molaire 6250: 160:\n<CLM>\1\t25\n<CLM>\1\tMéthode de diagnostic selon l'une des revendications 14 à 17, dans laquelle le moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules est constitué de billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps antibiotine, les lectines étant biotinylées ; d'un fluorophore lié de manière covalente à la lectine ; 30 ou d'un fluorophore conjugué à de la streptavidine, à de l'avidine ou à un anticorps anti- biotine, les lectines étant biotinylées.