Brevet FR3038620A1 (20170113)
REVENDICATIONS1. Procédé de détection d'une présence ou d'une absence d'au moins une première zone d'inhibition (9) ledit procédé comportant les étapes consistant à : a. Fournir un milieu de culture gélosé (2) ; b. Fournir un échantillon (1) contenant ou susceptible de contenir des microorganismes sous forme liquide ; c. Déposer un volume de l'échantillon (1) sous forme liquide selon une zone de dépôt (8) s'étendant selon un axe (7) à la surface du milieu de culture gélose ; d. Effectuer un dépôt d'une quantité déterminée d'un agent chimique (5) à la surface du milieu de culture gélosé (2), ledit dépôt définissant une zone potentielle d'inhibition (6), l'axe de la zone de dépôt de l'échantillon intersectant la zone potentielle d'inhibition ; e. Incuber ledit milieu de culture gélosé (2); f. Déterminer la présence ou l'absence de ladite première zone d'inhibition (9);\n<CLM>\1\tProcédé de détection selon la revendication précédente, l'échantillon contenant une culture de microorganismes de type connu, l'aire de la zone potentielle d'inhibition étant définie par ledit type de microorganismes\n<CLM>\1\tProcédé de détection selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'étape c) consiste à : c. Déposer un volume de l'échantillon sous forme liquide en ligne continue selon une zone de dépôt s'étendant selon un axe à la surface du milieu de culture gélose ; 3038620 32\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication précédente, caractérisé en ce que la concentration de l'échantillon est comprise entre 0,0005 Mc Farland et 0,5 Mc Farland\n<CLM>\1\tProcédé de détection selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'étape c) consiste à : 5 c. Déposer un volume de l'échantillon sous forme liquide en gouttelettes selon une zone de dépôt s'étendant selon un axe à la surface du milieu de culture ;\n<CLM>\1\tProcédé de détection selon la revendication précédente, caractérisé en ce que les gouttelettes déposées sont espacées d'un pas prédéterminé P, préférentiellement prédéterminé par l'aire de la zone potentielle d'inhibition et/ou le diamètre des 10 gouttelettes déposées\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication précédente, caractérisé en ce que les gouttelettes déposées sont espacées d'un pas millimétrique, préférentiellement d'un millimètre\n<CLM>\1\tProcédé de détection selon les revendications 5 à 7, caractérisé en ce que le volume de chaque gouttelette déposée est compris entre lnL et 101.tL 15\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la quantité de microorganismes contenue dans chaque goutte déposée est connue et comprise entre 1 microorganisme par goutte et 106 microorganismes par goutte, préférentiellement 104 microorganismespar goutte\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 5 à 9, caractérisée en ce qu'il comprend une étape 20 qui consiste à Déterminer le nombre de gouttelettes inhibées (1c) dans la zone potentielle d'inhibition et/ou le nombre de gouttelettes non inhibées (1 a) dans la zone de dépôt de l'échantillon ;\n<CLM>\1\tProcédé de détection selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'étape d) consiste à : 3038620 33 d. Effectuer un dépôt d'un support imprégné (3) d'une quantité déterminée d'un agent chimique à la surface du milieu de culture gélose, ledit support définissant une zone potentielle d'inhibition, la zone de dépôt de l'échantillon intersectant la zone potentielle d'inhibition ; 5\n<CLM>\1\tProcédé de détection selon la revendication précédente, caractérisé en ce que le support imprégné est un disque contenant une quantité déterminée d'agent chimique\n<CLM>\1\tProcédé de détection selon la revendication précédente, caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire consistant à : - Mesurer la distance entre le centre du disque et la première zone d'inhibition afin 10 d'estimer la sensibilité des microorganismes contenus dans l'échantillon à l'agent chimique ;\n<CLM>\1\tProcédé de détection selon la revendication précédente, caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire consistant à : - Classer le microorganisme selon une classification à trois critères : Sensible, 15 Intermédiaire ou Résistant, à partir d'un abaque de sensibilité correspondant au microorganisme présent dans l'échantillon et à l'agent chimique ;\n<CLM>\1\tProcédé de détection selon la revendication 11, caractérisé en ce que le support imprégné est une bandelette contenant un gradient de concentration d'agent chimique, le dépôt du volume de l'échantillon sous forme liquide étant effectué parallèlement et de façon 20 adjacente au grand bord de ladite bandelette ;\n<CLM>\1\tProcédé de détection selon la revendication précédente, caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire consistant à : - localiser une frontière entre la première zone d'inhibition et la zone de croissance des microorganismes ; 25 - déterminer une concentration minimale inhibitrice de l'agent chimique à partir de la localisation de ladite frontière ;