Brevet FR3046795A1 (20170721)
REVENDICATIONS1. Procédé de détermination de la capacité de production de biofilm par un microorganisme comprenant les étapes suivantes: a) Introduire dans des contenants de culture comprenant un milieu de culture liquide approprié au développement dudit microorganisme au moins deux particules magnétiques ou magnétisables, lesdites particules reposant sur une surface immergée dans le milieu de culture, b) Introduire et ensemencer indépendamment le milieu de culture des contenants obtenus à l'étape a) avec ledit microorganisme à une concentration comprise de 1x10-1 à 1x10-6 McFarland (McF), chaque milieu comprenant indépendamment une concentration différente de microorganismes, c) maintenir les milieux de culture ensemencés dans des conditions permettant un développement dudit microorganisme, d) application d'un champ magnétique capable de mettre en mouvement lesdites au moins deux particules reposant sur une surface immergée dans le milieu de culture, e) détermination de la capacité de production de biofilm par le microorganisme par observation et mesure de l'agrégation desdites particules comme suit : - l'absence d'agrégation desdites particules apparaissant à une concentration comprise de 1x10-6à 1x10-4 McF correspondant à un microorganisme fort producteur de biofilm, - l'absence d'agrégation desdites particules apparaissant à partir d'une concentration supérieure à 1x10-4 et inférieure à 1x10-2 McF correspondant à un microorganisme producteur intermédiaire de biofilm, - l'absence d'agrégation desdites particules apparaissant à partir d'une concentration supérieure ou égale à 1x10-2 McF 3046795 56 correspondant à un microorganisme faible producteur de biofilm, - une agrégation desdites particules quelle que soit la concentration correspondant à un microorganisme non 5 producteur de biofilm.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1 dans lequel le procédé comprend une étape e') de détermination de la valeur de l'Index Biofilm (BFI) pour chacun des milieux par : 10 - analyse des composantes des couleurs rouge, vert bleu des pixels de l'image permettant de déterminer la densité de particules par pixel, - calcul de la corrélation entre les particules, - calcul de la densité d'agrégation des particules exprimée en 15 BFI , et détermination de l'indice de formation potentielle du biofilm par contenant (BPc) selon la formule (I) suivante : BPc= [1-(BFle / BFIn)] (I) 20 dans laquelle BFIe correspond à la valeur de l'index biofilm dans le milieu ensemencé et BFIn correspond à la valeur de l'index biofilm dans un contenant ne comprenant pas de microorganismes, une valeur de BFc supérieure ou égale à 0,26 indiquant la formation de biofilm. 25\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 2, dans lequel la capacité de production de biofilm par le microorganisme est déterminée par comparaison de la valeur de BPc en fonction de la concentration de microorganismes comme suit : 30 - une valeur de BPc supérieure ou égale à 0,26 à partir d'une concentration de microorganismes comprise de 1x10-6 à 1x10- 3046795 57 4 McF correspondant à un microorganisme fort producteur de biofilm, - une valeur de BPc supérieure ou égale à 0,26 à partir d'une concentration de microorganismes supérieure à 1x10-4 et 5 inférieure à 1x10-2 McF correspondant à un microorganisme producteur intermédiaire de biofilm, - une valeur de BPc supérieure ou égale à 0,26 à partir d'une concentration de microorganismes de 1x10-2 McF correspondant à un microorganisme faible producteur de 10 biofilm, - une valeur de BPc inférieure à 0,26 quelque soit la concentration correspondant à un microorganisme non producteur de biofilm. 15\n<CLM>\1\tProcédé de classification de microorganismes comprenant les étapes suivantes: a) Introduire dans des contenants de culture comprenant un milieu de culture liquide approprié au développement dudit microorganisme au moins deux particules magnétiques ou 20 magnétisables, lesdites particules reposant sur une surface immergée dans le milieu de culture, b) Introduire et ensemencer indépendamment le milieu de culture des contenants obtenus à l'étape a) avec ledit microorganisme à une concentration comprise de 1x10-1 à 1x10-6 McF, chaque 25 milieu comprenant indépendamment une concentration différente de microorganismes, c) maintenir les milieux de culture ensemencés dans des conditions permettant un développement dudit microorganisme, d) appliquer un champ magnétique capable de mettre en 30 mouvement lesdites au moins deux particules reposant sur une surface immergée dans le milieu de culture dans le but d'obtenir 3046795 58 une agrégation desdites au moins deux particules, e) classer le microorganisme en fonction par observation de l'agrégation desdites particules comme suit : - catégorie I : absence d'agrégation desdites particules 5 apparaissant à une concentration comprise de 1x10-6 à 1x10-4 McF - catégorie II : absence d'agrégation desdites particules apparaissant à partir d'une concentration supérieure à 1x10-4 et inférieure à 1x10-2 McF correspondant à un microorganisme 10 producteur intermédiaire de biofilm, - catégorie III : absence d'agrégation desdites particules apparaissant à partir d'une concentration supérieure ou égale à 1x10-2 McF correspondant à un microorganisme faible producteur de biofilm, 15 - catégorie IV : agrégation desdites particules quelle que soit la concentration correspondant à un microorganisme non producteur de biofilm.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 2 0 précédentes, comprenant six contenants de culture dans lesquels la concentration de microorganismes à l'étape b) est respectivement de 1x10- 6 McF, 1x10-5 McF, 1x10-4 McF, 1x10-3 McF, 1x10-2 McF et 1x10-1 McF.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 25 précédentes dans lequel le maintien des milieux de culture ensemencés dans des conditions permettant un développement dudit microorganisme est réalisé pendant 1 à 8 heures, de préférence 4 à 6 heures.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 30 précédentes, dans lequel lesdites, au moins deux particules sont des particules chargées électriquement, magnétiques ou magnétisables ou 3046795 59 recouvertes d'au moins une couche magnétique ou magnétisable.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel lesdites, au moins deux, particules sont 5 soumises à un champ électromagnétique, éventuellement appliqué par impulsion.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel lesdites, au moins deux, particules sont 10 soumises à une augmentation progressive du champ électromagnétique.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ledit champ magnétique est généré par des moyens générateurs de champ en mouvement. 15\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel lesdites, au moins deux, particules sont éclairées au moyen d'une source lumineuse pour détecter son mouvement. 20\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel lesdites, au moins deux, particules sont génératrices d'un signal.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication précédente, dans lequel 25 lesdites, au moins deux, particules sont excitables, fluorescentes ou phosphorescentes ou radioactives ou chimioluminescentes.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'un desdits compartiments ne comprend pas 30 ledit microorganisme, ledit compartiment représentant un témoin du milieu.