Brevet FR3043554A1 (20170519)
REVENDICATIONS1. Procédé d'obtention d'un extrait aqueux enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides à partir d'une 5 matière végétale comprenant les étapes suivantes: a) on met en présence la matière végétale avec de l'eau ; b) on ajoute de l'acide éthylène diamine tétraacétique (EDTA) tétrasodique dans le mélange obtenu en a) à un pH compris entre 10,5 et 11; 10 c) on ajuste ensuite le pH du mélange obtenu en b) à une valeur comprise entre 6 et 8 ; d) on purifie le mélange obtenu en c) de manière à éliminer la matière végétale solide résiduelle et obtenir un extrait brut aqueux purifié ; et 15 e) on contrôle le pH et on le réajuste si nécessaire à une valeur comprise entre 6 et 8, préférentiellement entre 6 et 6,5.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que dans l'étape a) on met en présence la matière végétale avec de l'eau dans un rapport matière végétale / eau de 4 à 20% 20 (poids/poids).\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 ou 2 caractérisé en ce que l'étape b) de traitement par l'acide éthylène diamine tétraacétique (EDTA) tétrasodique est réalisée sous agitation pendant un temps d'au moins 1h et à une température comprise 25 entre 20 et 80°C.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisé en ce qu'à l'étape d) on centrifuge le mélange obtenu en c).\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 4 caractérisé en ce que l'étape e) est précédée par au moins une filtration de 30 l'extrait brut aqueux obtenu en d) et préférentiellement par des 3043554 61 filtrations successives de l'extrait brut aqueux en abaissant le seuil de filtration de 20-50 pm à 0,1-0,30 pm.\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il comprend une étape additionnelle d'hydrolyse 5 réalisée avant l'étape c) , soit directement sur le mélange obtenu en b), soit sur le surnageant après centrifugation du mélange obtenu en b) et élimination de la matière végétale résiduelle, par action d'au moins une enzyme choisie parmi une carbohydrase, une cellulase et/ou une protéase, pendant au moins 1h, à une 10 température comprise entre 45 et 65°C et à un pH compris entre 6 et 8,5.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il comprend une étape de désactivation de l'enzyme à une température comprise entre 65 et 80°C pendant au moins 1h, cette étape de 15 désactivation étant réalisée directement après l'étape d'hydrolyse ou entre 2 des étapes de filtrations successives précédant l'étape e).\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que de la terre de diatomée ou de la silice à 20 une concentration de 10 à 20 g/kg sont ajoutées dans le mélange avant l'étape d).\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la concentration en EDTA tétrasodique est comprise entre 2 et 15 mM, préférentiellement 10 mM. 25\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la matière végétale est broyée avant d'être mise en présence d'eau dans l'étape a).\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la matière végétale est une partie de 30 plante choisie parmi les graines, les fruits, les bulbes, les fleurs, les feuilles, les racines, le germe ou encore les tourteaux et les drêches. 3043554 62\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la matière végétale est choisie parmi les familles des Passifloraceae, Malvaceae, Punicaceae, Actinidiaceae, Myrtaceae, Clusiaceae, Caricaceae, Malphigiaceae, Ericaceae, Grossulariaceae, Solanaceae, Poaceae, Fabaceae, Malvaceae, Bombacaceae, Cucurbitaceae, Chenopodiaceae, Rosaceae, Rutaceae, Liliaceae, Iridaceae, Amaryllidaceae, Alliaceae.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que la matière végétale est choisie parmi les espèces Hibiscus esculentus (gombo), Adansonia digitata (baobab), Chenopodium quinoa (quinoa), Lens esculenta (lentille), Oryza sativa (germe de riz) , Cucurbita pepo (courge) , Rosa centifolia (rose), Citrus aurantium (oranger amère), Lilium candidum (lis), Lilium tigrinum (lis tigré), Passiflora alata (grenadille). 14.Extrait aqueux de matière végétale, enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisé en ce qu'il comprend en poids du poids total de l'extrait, 5-60 g/kg d'extrait sec et 10-1000 mg/kg de petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, de 0,5 à 30 g/kg de fragments protéiques et de 0,5 à 50 g/kg de sucres et et ne comprend pas d'ADN.\n<CLM>\1\tExtrait selon la revendication 14, caractérisé en ce qu'il est dilué dans un solvant et comprend en poids du poids total de l'extrait, 5-35 g/kg d'extrait sec, 0,5-20 g/kg de fragments protéiques, 0,5-30 g/kg de sucres, et 10-500 mg/kg de petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides.\n<CLM>\1\tComposition comprenant, en tant qu'agent actif anti30 âge, une quantité efficace de l'extrait de l'une des revendications 13 à 15, et un milieu physiologiquement acceptable. 3043554 63\n<CLM>\1\tComposition selon la revendication 16, caractérisée en ce que l'extrait est présent à une concentration comprise entre 1 et 5% en poids du poids total de la composition.\n<CLM>\1\tComposition selon l'une des revendications 16 à 18, 5 caractérisée en ce qu'elle est formulée pour être appliquée topiquement sur la peau.\n<CLM>\1\tUtilisation cosmétique de la composition de l'une des revendications 16 à 18 pour lutter contre les signes du vieillissement cutané. 10\n<CLM>\1\tUtilisation cosmétique de la composition de l'une des revendications 16 à 18 pour améliorer l'hydratation de la peau.