Brevet FR3046420A1 (20170707)
REVENDICATIONS1. Procédé de fabrication d'une bio-encre pour dépôt additif, dans lequel : (a) On approvisionne une première solution comprenant entre 5% et 40% massiques de gélatine (de préférence entre 6% et 30% massiques) et entre 0 % et 5% massiques de NaCI ; (b) (On approvisionne une seconde solution comprenant entre 15% et 35% massiques d'alginate (de préférence entre 1% et 8% massiques) et entre 0% et 5% de NaCI ; (c) On approvisionne une troisième solution comprenant entre 1% et 15% massiques de fibrinogène (de préférence entre 3% et 15% massiques), et optionnellement des cellules vivantes en suspension ; (d) On crée un mélange comprenant : environ 35% à 65% volumiques de la première solution ; environ 15% à 35% volumiques de la seconde solution ; environ 15% à 35% volumiques de la troisième solution ; ces proportions étant choisies de manière à s'additionner à 100%, et dans lequel procédé : - l'ordre des étapes (a),(b) et (c) est indifférent, - la teneur en NaCI est choisie de manière à ce que dans ladite première solution et ladite seconde solution réunies elle est comprise entre 0,2% et 5% massiques, de préférence entre 0,2 et 3% massiques, et encore plus préférentiellement entre 0,4% et 2% massiques.\n<CLM>\1\tBio-encre susceptible d'être obtenue à partir du procédé selon la revendication\n<CLM>\1\t3. Procédé de fabrication d'un substitut de tissu corporel, dans lequel : (i) on approvisionne une bio-encre selon la revendication 2 ; (ii) on approvisionne une solution aqueuse (dite « solution de polymérisation ») comprenant entre 1% à 5% massiques d'ions de calcium et entre 5 U/mL et 40 U/mL (et de préférence entre 10 U/mL et 30 U/mL) de thrombine ; 3046420 19 (iii) on porte ladite bio-encre à une température T1 supérieure à son point de gélification et on la dépose sur un substrat se trouvant à une température T2 inférieure au point de gélification de ladite bio-encre, où elle gélifie pour former un objet de forme tridimensionnelle contrôlée dit « objet imprimé 5 brut » ; (iv) on traite ledit objet imprimé brut avec ladite solution de polymérisation pour consolider ledit objet imprimé brut en un substitut de tissu corporel ; (v) optionnellement, dans le cas où ladite bio-encre comporte des cellules vivantes, on incube ledit précurseur de substitut corporel dans un milieu de 10 culture cellulaire.\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 3, dans lequel T1 est compris entre 27°C et 32°C et T2 est comprise entre 4°C et 20°C. 15\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 3 ou 4, dans lequel le traitement dudit objet imprimé brute avec ladite solution de polymérisation est effectué par trempage, à une température T3 supérieure à T1 et de préférence comprise entre 35°C et 38°C. 20\n<CLM>\1\tProcédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, dans lequel o ledit précurseur de tissu corporel est un précurseur de substitut cutané, et o ladite bio-encre comprend des cellules vivantes en suspension qui sont des fibroblastes ; o ladite incubation est effectuée à une température comprise entre 36°C et 25 38°C et comprend une première phase d'incubation comprise entre huit et quarante jours, et une deuxième phase d'incubation entre cinq et dix jours, sachant qu'entre la première et la deuxième phase on dépose sur la surface dudit substitut cutané une suspension aqueuse de kératinocytes. 30\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 6, dans lequel ledit objet imprimé brut comprend une surface supérieure sensiblement plate et présente une répartition homogène de fibroblastes, qui est comprise entre 0,5 et 10 x 105 (et de préférence entre 1 et 5 x\n<CLM>\1\tfibroblastes par cm2 de surface supérieure plate. 35\n<CLM>\1\tProcédé selon la revendication 7, dans lequel la quantité de kératinocytes déposées est comprise entre 0,5 et 10 x 105 (et de préférence entre 1 et 5 x\n<CLM>\1\tkératinocytes par cm2 de surface supérieure plate. 3046420 20\n<CLM>\1\tSubstitut de tissu corporel susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à\n<CLM>\1\t10. Substitut de tissu corporel selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'il s'agit 5 d'un substitut cutané comprenant : o une couche de derme comprenant des fibroblastes, o une couche d'épiderme, et o une couche cornée comprenant des kératinocytes. 10