FR 3065877 A1 20181109 FR 1754010 A 20170505 1 EXTRAITS D'AIGUILLES DE SAPIN, COMPOSITIONS ET UTILISATIONS DOMAINE DE L'INVENTION La prÃ©sente invention concerne le domaine de la cosmÃ©tique, de la dermo-cosmÃ©tique et/ou de la nutraceutique. Plus particuliÃ¨rement, l'invention s'intÃ©resse Ã des compositions comprenant un extrait d'aiguilles de sapin, notamment de l'espÃ¨ce Ables alba, et Ã leur utilisation en tant qu'actif cosmÃ©tique ou dermo-cosmÃ©tique, ou en tant qu'actif nutraceutique. ÃTAT DE LA TECHNIQUE Si en premier lieu, l'application d'un produit cosmÃ©tique vise Ã embellir, la cosmÃ©tologie est devenue aujourd'hui une vÃ©ritable science basÃ©e sur des recherches accrues en biologie et en chimie. Ainsi, le consommateur de produits cosmÃ©tiques ne vise plus seulement Ã amÃ©liorer son apparence physique, mais Ã©galement, Ã prendre soin de son corps afin de conserver une bonne santÃ© tout au long de sa vie. La recherche et/ou l'Ã©laboration d'actifs ou de principes actifs s'est souvent orientÃ©e vers l'utilisation de ressources naturelles ; en particulier, l'exploitation de vÃ©gÃ©taux. Parmi les plantes d'intÃ©rÃªts, le sapin est un arbre conifÃ¨re appartenant au genre Abies. Il est originaire des rÃ©gions tempÃ©rÃ©es de l'hÃ©misphÃ¨re nord. L'utilisation d'extraits de sapin a dÃ©jÃ Ã©tÃ© mise en oeuvre pour la synthÃ¨se de produits dermo-cosmÃ©tiques. Par exemple, la demande FR 1550215 dÃ©crit un extrait aqueux de graines de sapin et son utilisation en tant qu'agent cosmÃ©tique. La demande FR 1550217 quant Ã elle dÃ©crit une huile de graines de sapin et son utilisation en tant qu'agent cosmÃ©tique. Les aiguilles de sapin sont Ã©galement connues sous forme de dÃ©coction ou tisanes, notamment pour leurs vertus expectorantes, leur teneur en vitamine C ou leur propriÃ©tÃ©s olfactives. La Demanderesse a acquis une forte expertise dans l'extraction d'actifs Ã partir de plantes et s'intÃ©resse particuliÃ¨rement aux propriÃ©tÃ©s des extraits issus de composÃ©s naturels. 3065877 2 La Demanderesse a constatÃ© que son procÃ©dÃ© d'extraction permet d'obtenir des extraits d'intÃ©rÃªts cosmÃ©tique, dermocosmÃ©tique et/ou nutraceutique Ã partir d'aiguilles de sapin. Les aiguilles de sapin sont aplaties et denses, et elles ont un aspect laquÃ©. En outre, elles sont piquÃ©es sur deux rangÃ©es. Chaque annÃ©e, les conifÃ¨res produisent de nouvelles 5 aiguilles et perdent une partie de leurs vieilles aiguilles. La perte annuelle du feuillage est donc un phÃ©nomÃ¨ne naturel. La rÃ©colte d'aiguilles de sapin ne produit ainsi aucun traumatisme Ã l'arbre, et s'inscrit dans une dÃ©marche de dÃ©veloppement durable. Ã la connaissance de la Demanderesse, l'intÃ©rÃªt des extraits d'aiguilles de sapin ont Ã©tÃ© trÃ¨s peu, voire pas explorÃ©s en cosmÃ©tique et en nutraceutique. Or, il existe toujours un 10 besoin de trouver de nouveaux actifs permettant de limiter la prise de poids ou encore de rÃ©duire le poids corporel ; de lutter contre les effets du vieillissement ; et de soigner d'attÃ©nuer les imperfections de la peau telles que notamment les rougeurs ou les cicatrices superficielles, de cicatriser les plaies superficielles ou encore d'attÃ©nuer l'hyperpigmentation de la peau. 15 De maniÃ¨re surprenante, la Demanderesse a mis en Ã©vidence qu'un extrait d'aiguilles de sapin pouvait Ãªtre utilisÃ© comme actif cosmÃ©tique et/ou dermocosmÃ©tique ou comme actif nutraceutique, comme agent amincissant, antiÃ¢ge, lissant, hydratant et/ou Ã©claircissant de la peau. D'autre part, la Demanderesse a constatÃ© de maniÃ¨re inattendue et surprenante qu'un 20 extrait d'aiguilles de sapin prÃ©sente simultanÃ©ment des propriÃ©tÃ©s rÃ©gulatrices du mÃ©tabolisme et de l'assimilation des lipides et des glucides par l'inhibition de la lipase, de l'alpha amylase et de l'alpha glucosidase. L'extrait prÃ©sente Ã©galement des propriÃ©tÃ©s inhibitrices de la collagÃ©nase, de la hyaluronidase et un pouvoir antioxydant qui n'avaient jamais Ã©tÃ© reportÃ©es dans l'art antÃ©rieur. 25 RÃSUMÃ La prÃ©sente invention concerne un extrait d'aiguilles de sapin, caractÃ©risÃ©e en ce qu'il comprend de 5 Ã 50 % de composÃ©s polyphÃ©noliques en poids par rapport au poids total 3065877 3 de l'extrait sec ; de 0 Ã 40 % de sucres en poids par rapport au poids total de l'extrait sec ; de 0 Ã 30 % de protÃ©ines en poids de protÃ©ines par rapport au poids total de l'extrait sec ; et de 2 Ã 30 % de masse sÃ¨che en poids par rapport au poids total de l'extrait. La prÃ©sente invention porte Ã©galement sur une composition comprenant un extrait 5 d'aiguilles de sapin tel que dÃ©crit dans l'invention, en association avec au moins un excipient acceptable. Selon un mode de rÃ©alisation, la composition de l'invention est caractÃ©risÃ©e en ce que l'excipient est cosmÃ©tiquement acceptable et que la composition est sous forme de gel, lait, crÃ¨me, lotion, Ã©mulsion, huile, baume ou onguent. 10 Selon un mode de rÃ©alisation, la composition de l'invention est caractÃ©risÃ©e en ce que l'excipient est nutraceutiquement acceptable et que la composition est sous forme solide, liquide ou gel, notamment sous forme poudre, comprimÃ© sÃ©cable ou non, pelliculÃ© ou non, sous forme orodispersible, ou encore sous forme de granule, de capsule, de gÃ©lule, d'ampoule. 15 La prÃ©sente invention concerne en outre un actif cosmÃ©tique ou dermocosmÃ©tique caractÃ©risÃ© en ce qu'il comprend un extrait d'aiguilles de sapin ou une composition selon l'invention. L'invention a Ã©galement pour objet un actif nutraceutique, caractÃ©risÃ© en ce qu'il comprend un extrait d'aiguilles de sapin ou une composition selon l'invention. 20 Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'un extrait, d'une composition ou d'un actif de l'invention, en tant qu'agent amincissant, notamment pour limiter et/ou rÃ©duire la prise de poids ; et/ou rÃ©duire, maintenir et/ou amÃ©liorer le poids corporel chez un individu. La prÃ©sente invention concerne Ã©galement l'utilisation d'un extrait d'aiguilles de sapin, 25 d'une composition ou d'un actif selon l'invention, en tant qu'agent antiÃ¢ge et/ou agent lissant de la peau, notamment pour prÃ©venir et/ou attÃ©nuer le vieillissement de la peau et/ou l'apparition des signes de vieillissement de la peau. 3065877 4 La prÃ©sente invention concerne en outre l'utilisation d'un extrait d'aiguilles de sapin, d'une composition ou d'un actif selon l'invention, en tant qu'agent antioxydant et/ou cicatrisant, notamment pour prÃ©venir et attÃ©nuer les rougeurs ou les cicatrices superficielles de la peau. 5 Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'un extrait, d'une composition ou d'un actif de l'invention, en tant qu'agent Ã©claircissant de la peau, notamment des peaux ethniques, ou pour lutter contre l'hyperpigmentation de zones de la peau, en particulier contre les tÃ¢ches de pigmentation liÃ©es Ã l'Ã¢ge. La prÃ©sente invention concerne Ã©galement l'utilisation d'un extrait d'aiguilles de sapin, 10 d'une composition ou d'un actif selon l'invention, en tant qu'agent hydratant de la peau, pour protÃ©ger l'hydratation de la peau et/ou pour hydrater la peau. L'invention a en outre pour objet une mÃ©thode de soin cosmÃ©tique comprenant l'administration d'un extrait d'aiguilles de sapin, d'une composition ou d'un actif selon 1 ' invention. 15 DÃFINITIONS Dans la prÃ©sente invention, les termes ci-dessous sont dÃ©finis de la maniÃ¨re suivante : Le terme Â« extrait Â» concerne une prÃ©paration liquide, semi-solide ou solide, obtenue par extraction d'aiguilles de sapin. Selon un mode de rÃ©alisation selon l'invention, 20 l'extrait est aqueux. Selon un autre mode de rÃ©alisation selon l'invention, l'extrait aqueux est ensuite sÃ©chÃ©, par toute mÃ©thode connue de l'homme du mÃ©tier. Au sens de la prÃ©sente invention, le terme Â« extrait aqueux Â» inclut l'extrait obtenu directement par un procÃ©dÃ© enzymatique ou hydroalcoolique ou subcritique ou de macÃ©ration aqueuse, ainsi que ledit extrait ayant subi une Ã©tape de sÃ©chage et Ã©tant rendu sec. De 25 prÃ©fÃ©rence, l'extraction est biologique, trÃ¨s prÃ©fÃ©rentiellement enzymatique. Le terme Â« actif Â» concerne un ingrÃ©dient qui possÃ¨de une activitÃ© prÃ©cise Ã l'origine de l'efficacitÃ© du produit cosmÃ©tique et/ou dermocosmÃ©tique ou nutraceutique. 3065877 5 Les termes Â« cosmÃ©tiquement acceptable Â» concernent un composant qui est utilisable en contact avec la peau sans effet secondaire tel que toxicitÃ©, irritation ou rÃ©ponse allergique. Le terme Â« nutraceutique Â» concerne un produit fabriquÃ© Ã partir de substances 5 alimentaires, mais rendu disponible sous forme de liquide ou solide, et qui s'avÃ¨re avoir un effet physiologique bÃ©nÃ©fique ou protecteur contre des conditions chroniques, et notamment dans la lutte contre le vieillissement, contre les irritations cutanÃ©es ou les cicatrices superficielles, en tant qu'agent Ã©claircissant de la peau. Selon un mode de rÃ©alisation, le terme Â« nutraceutique Â» est Ã©galement appelÃ© 10 Â« alicament Â» ou Â« aliment fonctionnel Â». Selon un mode de rÃ©alisation, le terme Â« nutraceutique Â» inclut, mais ne se limite pas aux, complÃ©ments alimentaires. Le terme Â« antioxydant Â» concerne un agent qui diminue ou empÃªche l'oxydation d'autres substances. Un antioxydant peut protÃ©ger les cellules contre les effets des espÃ¨ces rÃ©actives d'oxygÃ¨ne. 15 Le terme Â« anti-Ã¢ge Â» concerne un agent possÃ©dant la propriÃ©tÃ© de prÃ©venir, retarder et/ou de lutter contre les effets du vieillissement de la peau et des tissus. PrÃ©cÃ©dant une valeur chiffrÃ©e, le terme Â« environ Â» signifie plus ou moins 10 % de ladite valeur. 20 DESCRIPTION DÃTAILLÃE La prÃ©sente invention concerne un extrait issu d'aiguilles de sapin. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention est un extrait aqueux. Selon un mode de rÃ©alisation, le sapin dont est issu l'extrait de l'invention est du genre Abies. Selon un mode de rÃ©alisation, le sapin dont est issu l'extrait de l'invention est 25 sÃ©lectionnÃ© parmi le groupe comprenant Abies alba, Abies amabilis, Abies cephalonica, Abies concolor, Abies fraseri, Abies grandis, Abies honwlepis, Abies lasiocarpa, Abies nordmanniana, Abies borisii-regis, Abies pinsapo, Abies procera, et Abies sibirica. Selon un mode de rÃ©alisation prÃ©fÃ©rÃ©, le sapin dont est issu l'extrait de l'invention, est un sapin de l'espÃ¨ce Abies alba. 3065877 6 Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention n'est pas un extrait d'aiguilles de pin, du genre Pinus. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention est un extrait aqueux. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention n'est pas une solution huileuse, ni une Ã©mulsion. 5 Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend des composÃ©s polyphÃ©noliques, des sucres et/ou des protÃ©ines. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend des composÃ©s polyphÃ©noliques. Selon un mode avantageux de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend de 0,1 Ã 50 g/L ; de prÃ©fÃ©rence de 1 Ã 20 g/L ; de prÃ©fÃ©rence de 3 Ã 10 g/L de 10 composÃ©s polyphÃ©noliques. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend de 5 Ã 9 g/L de composÃ©s polyphÃ©noliques. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend environ 5, 6, 7, 8 ou 9 g/L de composÃ©s polyphÃ©noliques. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend de 1 Ã 95 % ; de 15 prÃ©fÃ©rence, de 5 Ã 50 % ; plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 10 Ã 30 % de composÃ©s polyphÃ©noliques en poids par rapport au poids total de l'extrait sec. Selon un mode particulier de l'invention, l'extrait de l'invention comprend de 10 Ã 17 % de composÃ©s polyphÃ©noliques en poids par rapport au poids total de l'extrait sec. Selon un mode de rÃ©alisation, la quantitÃ© de composÃ©s polyphÃ©noliques est mesurÃ©e aprÃ¨s atomisation de 20 l'extrait. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend des composÃ©s polyphÃ©noliques tels que des lignanes, de l'acide homovanillique, et de l'acide pcoumarique. Selon un premier mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention ne comprend pas de sucres. 25 Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend des sucres, de prÃ©fÃ©rence des oligosaccharides (mono et di-polysaccharides). Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend des hÃ©tÃ©rosides, comme par exemple de la picÃ©Ã¯ne ou de la salicinÃ©rÃ©Ã¯ne. Selon un mode avantageux de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend 3065877 7 de 0,01 Ã 100 g/L ; de prÃ©fÃ©rence, de 1 Ã 60 g/L ; plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 5 Ã 50 g/L ; encore plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 8 Ã 30 g/L de sucres. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend de 10 Ã 25 g/L de sucres. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend environ 3,8, 10, 12, 15, 18, 20, 23 ou 25 g/L de sucres. 5 Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend de 0 Ã 50 %; de prÃ©fÃ©rence, de 1 Ã 45 % ; plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 5 Ã 40 ",/0 ; encore plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 10 Ã 35 % de sucres en poids par rapport au poids total de l'extrait sec. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend de 0 Ã 40 % de sucres en poids par rapport au poids total de l'extrait sec. Selon un mode particulier de 10 rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend de 12 Ã 32 % de sucres en poids par rapport au poids total de l'extrait sec. Selon un mode de rÃ©alisation, la quantitÃ© de sucres est mesurÃ©e aprÃ¨s atomisation de l'extrait. Selon un premier mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention ne comprend pas de protÃ©ines. 15 Selon un second mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend des protÃ©ines. Dans ce mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention peut comprendre de 0,01 Ã 50 g/L ; de prÃ©fÃ©rence de 0,5 Ã 30 g/L ; plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 1 Ã 20 g/L ; encore plus prÃ©fÃ©rentiellement de 1,5 Ã 10 g/L de protÃ©ines. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend de 2 Ã 5 g/L de protÃ©ines. 20 Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend de 0 Ã 30 %; de prÃ©fÃ©rence, de 0,5 Ã 25 ; plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 1 Ã 20 %; encore plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 2 Ã 15 % de protÃ©ines en poids par rapport au poids total de l'extrait sec. Selon un mode particulier de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend de 3 Ã 12 9/0 de protÃ©ines en poids par rapport au poids total de l'extrait sec. Selon un mode de 25 rÃ©alisation, la quantitÃ© de protÃ©ines est mesurÃ©e aprÃ¨s atomisation de l'extrait. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend des composÃ©s polyphÃ©noliques, des sucres et des protÃ©ines. En particulier, selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend des composÃ©s polyphÃ©noliques, des sucres et des protÃ©ines dans des proportions telles que dÃ©crites ci-dessus. 3065877 8 Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention est un extrait aqueux qui comprend de 0 Ã 90 % ; de prÃ©fÃ©rence, de 1 Ã 50 % ; plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 2 Ã 30 % ; encore plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 3 Ã 20 % de masse sÃ¨che en poids par rapport au poids total de l'extrait. Selon un mode particulier de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention comprend de 5 3 Ã 10 % de masse sÃ¨che en poids par rapport au poids total de l'extrait. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait aqueux est sÃ©chÃ©, atomisÃ©, lyophilisÃ© ou dÃ©shydratÃ© et comprend de 95 Ã 100 % de matiÃ¨re sÃ¨che. Dans la prÃ©sente invention, le terme Â« extrait aqueux Â» est aussi utilisÃ© en rÃ©fÃ©rence Ã un tel extrait. L'extrait selon l'invention peut Ãªtre obtenu par toute mÃ©thode d'extraction connue de 10 l'homme du mÃ©tier. Selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© d'extraction comprend une Ã©tape de macÃ©ration aqueuse. Selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© d'extraction comprend une Ã©tape de macÃ©ration hydro-alcoolique ; de prÃ©fÃ©rence, eau-Ã©thanol. Selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© d'extraction comprenant une Ã©tape d'extraction Ã l'eau subcritique. 15 Cependant, la Demanderesse a acquis une expertise dans l'extraction de composÃ©s d'intÃ©rÃªts Ã partir de vÃ©gÃ©taux, ayant l'avantage de fournir des produits non contaminÃ©s par des composÃ©s ou solvants chimiques. En particulier, la Demanderesse a acquis une expertise dans le domaine des procÃ©dÃ©s d'extraction biologique, de prÃ©fÃ©rence enzymatique. Selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© d'extraction comprend au moins 20 une Ã©tape d'hydrolyse enzymatique. Selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© d'extraction est rÃ©alisÃ© suivant le procÃ©dÃ© dÃ©crit dans la demande de brevet internationale W02011045387. Ainsi, l'invention concerne Ã©galement un procÃ©dÃ© d'extraction d'aiguilles de sapin et l'extrait d'aiguilles de sapin susceptible d'Ãªtre obtenu par ledit procÃ©dÃ©, comprenant au 25 moins les Ã©tapes suivantes : le mÃ©lange d'aiguilles de sapin prÃ©alablement broyÃ©es et d'eau, et l'incubation de ce mÃ©lange avec au moins une enzyme ou un mÃ©lange enzymatique. 3065877 9 Selon un mode de rÃ©alisation, les aiguilles de sapin sont issues du genre Ables ; de prÃ©fÃ©rence de l'espÃ¨ce Abies alba. Selon un mode de rÃ©alisation du procÃ©dÃ© de l'invention, on mÃ©lange les aiguilles de sapin broyÃ©es et l'eau dans un ratio massique de la quantitÃ© d'aiguilles de sapin sur la quantitÃ© 5 d'eau compris de 0 Ã 50; de prÃ©fÃ©rence, de 0,1 Ã 10; plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 1 Ã 5 ; encore plus prÃ©fÃ©rentiellement de 1 Ã 4. Puis, on introduit une quantitÃ© d'enzyme ou de mÃ©lange enzymatique de plus de 0 Ã 20 % ; de prÃ©fÃ©rence, de 1 Ã 10 % ; plus prÃ©fÃ©rentiellement, d'environ 5 % en poids par rapport au poids du mÃ©lange aiguilles de sapin/eau. 10 Selon un mode de rÃ©alisation, l'enzyme ou le mÃ©lange enzymatique comprend au moins une enzyme choisie parmi les cellulases, les hÃ©micellulases, les pectinases ou les protÃ©ases. Selon un mode de rÃ©alisation, le mÃ©lange enzymatique comprend une cellulase et une hÃ©micellulase. Selon un mode de rÃ©alisation, le mÃ©lange enzymatique comprend une cellulase et une pectinase. Selon un mode de rÃ©alisation, le mÃ©lange enzymatique 15 comprend une pectinase et une hÃ©micellulase Selon un mode de rÃ©alisation, le mÃ©lange enzymatique est constituÃ© d'une cellulase, d'une hÃ©micellulase, d'une pectinase et d'une protÃ©ase. Selon un mode de rÃ©alisation, le mÃ©lange enzymatique est constituÃ© d'une cellulase, d'une hÃ©micellulase et d'une protÃ©ase. Selon un mode de rÃ©alisation, le mÃ©lange enzymatique est constituÃ© d'une cellulase, d'une hÃ©micellulase et d'une pectinase. 20 Selon un mode de rÃ©alisation, le mÃ©lange enzymatique comprend de 1 Ã 50 % d'une hÃ©micellulase, d'une cellulase et d'une pectinase, et de 1 Ã 100 % d'un mÃ©lange de protÃ©ases. Selon un mode de rÃ©alisation, la quantitÃ© de mÃ©lange enzymatique ajoutÃ©e au mÃ©lange d'aiguilles de sapin prÃ©alablement broyÃ©es et d'eau va de 1 Ã 15 % en poids ; de 25 prÃ©fÃ©rence, de 2 Ã 10 % en poids ; plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 3 Ã 8 % en poids. Selon un mode particulier de rÃ©alisation, la quantitÃ© de mÃ©lange enzymatique ajoutÃ©e au mÃ©lange d'aiguilles de sapin prÃ©alablement broyÃ©es et d'eau est d'environ 5 % en poids. Selon un mode de rÃ©alisation, l'incubation du mÃ©lange d'aiguilles de sapin prÃ©alablement broyÃ©es et d'eau avec l'enzyme ou le mÃ©lange enzymatique est rÃ©alisÃ©e Ã une tempÃ©rature 3065877 10 comprise dans une gamme de 30Â°C Ã 80Â°C; de prÃ©fÃ©rence, de 40Â°C Ã 60Â°C; plus prÃ©fÃ©rentiellement Ã environ 50Â°C. Selon un mode de rÃ©alisation, l'incubation avec l'enzyme ou le mÃ©lange enzymatique est rÃ©alisÃ©e sous agitation, situÃ©e entre 50 et 1000 rpm ; de prÃ©fÃ©rence, entre 100 et 500 rpm. 5 Selon un mode prÃ©fÃ©rÃ© de rÃ©alisation, l'incubation avec l'enzyme ou le mÃ©lange enzymatique est rÃ©alisÃ©e sous une agitation Ã environ 100 ou 150 rpm. Selon un autre mode prÃ©fÃ©rÃ© de rÃ©alisation, l'incubation avec l'enzyme ou le mÃ©lange enzymatique est rÃ©alisÃ©e sous une agitation Ã environ 200 ou 250 rpm. Selon un autre mode prÃ©fÃ©rÃ© de rÃ©alisation, l'incubation avec l'enzyme ou le mÃ©lange enzymatique est rÃ©alisÃ©e sous une 10 agitation Ã environ 300 rpm. Selon un autre mode prÃ©fÃ©rÃ© de rÃ©alisation, l'incubation avec l'enzyme ou le mÃ©lange enzymatique est rÃ©alisÃ©e sous une agitation Ã environ 400 rpm. Selon un mode de rÃ©alisation, l'incubation avec l'enzyme ou le mÃ©lange enzymatique est rÃ©alisÃ©e pendant une durÃ©e comprise dans une gamme de lh Ã 8h; de prÃ©fÃ©rence, de 2h Ã 6h ; plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 3h Ã 5h ; encore plus prÃ©fÃ©rentiellement pendant environ 15 4h. Selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© de prÃ©paration de l'invention comprend en outre une Ã©tape de dÃ©sactivation des enzymes avant et/ou aprÃ¨s leur introduction dans le mÃ©lange aiguilles de sapin/eau. Selon un mode de rÃ©alisation, la dÃ©sactivation des enzymes est rÃ©alisÃ©e par les techniques connues de l'homme du mÃ©tier ; de prÃ©fÃ©rence, 20 par chauffage et/ou par microondes. Selon un mode particulier de rÃ©alisation, la dÃ©sactivation des enzymes est rÃ©alisÃ©e par chauffage Ã environ 85Â°C pendant environ 10 minutes. Selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© de prÃ©paration de l'invention ne comprend pas d'Ã©tape d'incubation avec une enzyme ou un mÃ©lange enzymatique. Ainsi, selon un mode 25 de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© d'extraction n'est pas un procÃ©dÃ© enzymatique. Selon ce mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© d'extraction comprend le mÃ©lange d'aiguilles de sapin prÃ©alablement broyÃ©es et d'eau. Selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© de prÃ©paration de l'invention comprend en outre une Ã©tape de centrifugation. 3065877 11 Selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© de prÃ©paration de l'invention comprend en outre une Ã©tape d'incubation avec une composition huileuse, de prÃ©fÃ©rence de l'huile. Cette Ã©tape supplÃ©mentaire de lavage a l'avantage d'extraire de l'extrait final toutes les molÃ©cules lipophiles, telles que des terpÃ¨nes, des pesticides ou des allergÃ¨nes, et facilite 5 notamment la filtration, la concentration et le sÃ©chage. Ainsi, selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© d'extraction d'aiguilles de comprend au moins les Ã©tapes suivantes : le mÃ©lange d'aiguilles de sapin prÃ©alablement broyÃ©es et d'eau, l'incubation de ce mÃ©lange avec au moins une enzyme ou un mÃ©lange 10 enzymatique, et le lavage avec une composition huileuse. Ainsi, selon un autre mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© d'extraction d'aiguilles de comprend au moins les Ã©tapes suivantes : le mÃ©lange d'aiguilles de sapin prÃ©alablement broyÃ©es et d'eau, et 15 le lavage avec une composition huileuse. Selon un mode de rÃ©alisation, on introduit une quantitÃ© d'huile allant de 0.1 Ã 15 % en poids par rapport au poids des aiguilles de sapin ; de prÃ©fÃ©rence, allant de 2 Ã 12 %; plus prÃ©fÃ©rentiellement allant de 5 Ã 10 Â°,/c. ; plus prÃ©fÃ©rentiellement, une quantitÃ© d'huile d'environ 8 % en poids par rapport au poids des aiguilles de sapin. 20 Selon un mode de rÃ©alisation, l'huile est ajoutÃ©e dans le mÃ©lange rÃ©actionnel 1 Ã 3h aprÃ¨s le dÃ©but de la rÃ©action, de prÃ©fÃ©rence environ 2h. Selon un mode de rÃ©alisation, l'incubation avec l'huile est rÃ©alisÃ©e pendant une durÃ©e allant de 1 Ã 3h; de prÃ©fÃ©rence environ 2h. Selon un mode de rÃ©alisation, l'incubation avec l'huile est rÃ©alisÃ©e Ã une tempÃ©rature 25 comprise dans une gamme de 30Â°C Ã 80Â°C; de prÃ©fÃ©rence, de 40Â°C Ã 60Â°C; plus prÃ©fÃ©rentiellement Ã environ 50Â°C. Selon un mode particulier de rÃ©alisation, l'huile est une huile vÃ©gÃ©tale. Selon un mode prÃ©fÃ©rÃ© de rÃ©alisation, l'huile est de l'huile de tournesol. 3065877 12 Selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© de prÃ©paration de l'extrait de l'invention est rÃ©alisÃ© Ã un pH compris dans une gamme de 4 Ã 7; de prÃ©fÃ©rence, Ã un pH d'environ 5. Selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© de prÃ©paration de l'extrait de l'invention comprend en outre une Ã©tape de filtration de l'extrait. 5 Selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© de prÃ©paration de l'extrait de l'invention comprend en outre une Ã©tape de concentration de l'extrait. Les procÃ©dÃ©s de concentration d'extraits sont connus de l'homme du mÃ©tier. Des exemples de procÃ©dÃ©s de concentration d'extraits incluent, mais ne se limitent pas Ã , la concentration sous vide, le passage sur une colonne de concentration, et autres. 10 Selon un mode de rÃ©alisation, le procÃ©dÃ© de prÃ©paration de l'extrait de l'invention comprend en outre une Ã©tape de sÃ©chage. Les procÃ©dÃ©s de sÃ©chage d'extraits sont connus de l'homme du mÃ©tier. Des exemples de procÃ©dÃ©s de sÃ©chage d'extraits incluent, mais ne se limitent pas Ã , l'atomisation, la lyophilisation, et autres. L'invention porte Ã©galement sur un extrait d'aiguilles de sapin obtenu ou susceptible 15 d'Ãªtre obtenu par l'un des procÃ©dÃ©s de prÃ©paration tels que dÃ©crits ci-dessus. En particulier, selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention est obtenu ou susceptible d'Ãªtre obtenu par un procÃ©dÃ© enzymatique, de prÃ©fÃ©rence comprenant une Ã©tape d'incubation au moins une enzyme choisie parmi les cellulases, les hÃ©micellulases, les pectinases ou les protÃ©ases. Selon un autre mode de rÃ©alisation, l'extrait de l'invention est 20 obtenu ou susceptible d'Ãªtre obtenu par un procÃ©dÃ© non enzymatique, de prÃ©fÃ©rence comprenant une Ã©tape de macÃ©ration avec de l'eau. L'invention concerne Ã©galement une composition comprenant l'extrait de l'invention en tant qu'actif en cosmÃ©tique, en dermocosmÃ©tique et/ou actif en nutraceutique. Selon un mode de rÃ©alisation, la composition de l'invention comprend au moins un extrait de 25 l'invention en tant qu'actif cosmÃ©tique ou dermocosmÃ©tique, et au moins un excipient. Selon un mode de rÃ©alisation, la composition de l'invention est une composition cosmÃ©tique et comprend un excipient cosmÃ©tiquement acceptable. Selon un autre mode 3065877 13 de rÃ©alisation, la composition de l'invention est une composition dermocosmÃ©tique et comprend un excipient dermocosmÃ©tiquement acceptable. Les excipients acceptables et leurs quantitÃ©s sont ceux classiquement utilisÃ©s dans les domaines considÃ©rÃ©s et bien connus par l'homme du mÃ©tier. 5 Dans un mode de rÃ©alisation, la composition de l'invention comprend une teneur en extrait de l'invention d'au moins 1 % ; de prÃ©fÃ©rence, d'au moins 5 % ; plus prÃ©fÃ©rentiellement d'au moins 10 % ; encore plus prÃ©fÃ©rentiellement d'au moins 15 % en poids par rapport au poids total de la composition. Dans un mode de rÃ©alisation, la composition de l'invention comprend une teneur en 10 extrait de l'invention allant de 0 Ã 90 %; de prÃ©fÃ©rence, de 1 Ã 80 %; plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 5 Ã 70 %; encore plus prÃ©fÃ©rentiellement, de 10 Ã 60 % en poids par rapport au poids total de la composition. Selon un mode de rÃ©alisation, la composition de l'invention comprend une teneur en extrait de l'invention allant de 10 Ã 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ou 90 % en poids par rapport au poids total de la composition. 15 Dans un mode de rÃ©alisation, la composition cosmÃ©tique ou dermocosmÃ©tique de l'invention peut comprendre en outre au moins un actif additionnel, par un exemple un extrait naturel ou un actif cosmÃ©tique ou dermocosmÃ©tique. Selon un mode de rÃ©alisation, la composition ne comprend pas d'association avec une cytokine et/ou une enzyme. La composition cosmÃ©tique ou dermocosmÃ©tique selon l'invention peut Ã©galement 20 contenir les adjuvants habituels dans le domaine de la cosmÃ©tique ou de la dermocosmÃ©tique tels que les gÃ©lifiants, les Ã©paississants, les conservateurs, les solvants, les parfums, les agents chÃ©lateurs, les absorbeurs d'odeur, les filtres chimiques ou minÃ©raux, les pigments minÃ©raux, les tensioactifs, les polymÃ¨res et les matiÃ¨res colorantes. Les quantitÃ©s de ces diffÃ©rents adjuvants sont celles classiquement utilisÃ©es 25 dans les domaines considÃ©rÃ©s. Dans un mode de rÃ©alisation, la composition cosmÃ©tique ou dermocosmÃ©tique de l'invention est administrÃ©e topiquement sur le visage et le corps. Selon un mode de rÃ©alisation, la composition de l'invention est avantageusement appliquÃ©e sur la peau du 3065877 14 visage, c'est-Ã -dire la peau de la face, du cou, du dÃ©colletÃ© et/ou du contour des yeux et sur la peau des mains. Selon un autre mode de rÃ©alisation, la composition de l'invention est avantageusement appliquÃ©e sur la peau du corps, en particulier de l'abdomen, des cuisses, des hanches, des fesses, des seins, des bras. La composition de l'invention peut 5 alors Ãªtre sous forme, par exemple, de gel, lait, crÃ¨me, lotion, Ã©mulsion, huile, baume, onguent. Dans un mode de rÃ©alisation, la composition cosmÃ©tique ou dermocosmÃ©tique de l'invention est administrÃ©e par voie orale. Selon un mode particulier de rÃ©alisation, la composition cosmÃ©tique ou dermocosmÃ©tique de l'invention est administrÃ©e sous forme 10 de poudre, de comprimÃ© sÃ©cable ou non, pelliculÃ© ou non, de granule, de capsule, de gÃ©lule, ou d'ampoule. L'invention a Ã©galement pour objet un nutraceutique comprenant un extrait aqueux d'aiguilles de sapin selon l'invention, ou une composition comprenant un tel extrait. Selon un mode de rÃ©alisation, le nutraceutique ou la composition nutraceutique de 15 l'invention est sous une forme adaptÃ©e connue de l'homme du mÃ©tier pour une administration par voie orale, parentÃ©rale, entÃ©rale, de prÃ©fÃ©rence orale, telle que, mais non limitÃ©e aux poudres, comprimÃ©s sÃ©cables ou non, pelliculÃ©s ou non, de granules, de capsules, de gÃ©lules, d'ampoules. Suivant un mode de rÃ©alisation prÃ©fÃ©rÃ©, le nutraceutique selon l'invention est sous forme de comprimÃ© sÃ©cable. Suivant un autre mode de 20 rÃ©alisation prÃ©fÃ©rÃ©, le nutraceutique selon l'invention est sous forme de comprimÃ© orodispersible. L'invention a Ã©galement pour objet un actif comprenant un extrait d'aiguilles de sapin ou une composition tels que dÃ©crits ci-dessus. Selon un mode de rÃ©alisation, l'actif de l'invention est un actif cosmÃ©tique ou 25 dermocosmÃ©tique. Selon un autre mode de rÃ©alisation, l'actif de l'invention est un actif nutraceutique. 3065877 15 L'invention concerne Ã©galement l'utilisation d'un extrait, d'une composition cosmÃ©tique, dermocosmÃ©tique ou nutraceutique, ou d'un actif cosmÃ©tique, dermocosmÃ©tique ou nutraceutique de l'invention. Nos expÃ©riences, qui sont discutÃ©es en dÃ©tail ci-dessous, ont montrÃ© que les extraits 5 aqueux des aiguilles de sapin inhibent la lipase, l'a-amylase et/ou l'a-glucosidase (voir Exemples 8 Ã 10). En outre, nos rÃ©sultats prouvent une diminution de la masse grasse et de la prise de poids dans un modÃ¨le in vivo (voir Exemple 12). La prÃ©sente invention concerne donc l'utilisation de l'extrait, de la composition ou de l'actif de l'invention pour limiter et/ou rÃ©duire la prise de poids chez un individu. En 10 particulier, selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention est utile pour rÃ©duire la masse grasse d'un individu ; de prÃ©fÃ©rence, la masse de graisse sous-cutanÃ©e, ou les surcharges graisseuses sous-cutanÃ©es, et/ou la masse hÃ©patique. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention peut Ãªtre utilisÃ© comme agent amincissant. 15 L'invention a Ã©galement pour objet l'utilisation d'extrait d'aiguilles de sapin ou d'une composition contenant un tel extrait, pour diminuer le poids corporel d'un individu. En particulier, selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention est utile pour rÃ©duire, maintenir ou amÃ©liorer le poids corporel chez un mammifÃ¨re. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention est utile pour 20 inhiber l'activitÃ© des lipases, des amylases, de prÃ©fÃ©rence l'a-amylase, et/ou des glucosidases, de prÃ©fÃ©rence l'a-glucosidase. Les glucides sont des composÃ©s nutritionnels prÃ©sents dans un large Ã©ventail de denrÃ©es alimentaires. Ils sont un groupe de nombreux composÃ©s diffÃ©rents qui se produisent dans une variÃ©tÃ© de tailles et de configurations. Tous les hydrates de carbone sont composÃ©s 25 d'une ou de plusieurs unitÃ©s de sucre reliÃ©es ensemble par des liaisons glycosidiques. Les glucides complexes, tels que l'amidon, sont des molÃ©cules relativement grandes constituÃ©es de nombreuses unitÃ©s rÃ©pÃ©titives dans une structure Ã ramifications multiples. Une variÃ©tÃ© d'enzymes digestives fonctionne de maniÃ¨re sÃ©quentielle pour casser les glucides complexes en des unitÃ©s absorbables. Dans une premiÃ¨re Ã©tape, les enzymes 3065877 16 salivaires et pancrÃ©atiques connues sous le nom d'amylases cassent de gros hydrates de carbone en plus petites unitÃ©s d'oligo- et de disaccharides. Dans une des Ã©tapes finales de la digestion des glucides, les enzymes a-glucosidases dans la bordure de la brosse de l'intestin grÃªle cassent les disaccharides (maltose et saccharose) dans leurs unitÃ©s de 5 monosaccharides respectives, qui peuvent ensuite Ãªtre absorbÃ©es par le corps. Des Ã©tudes indiquent qu'un niveau disproportionnÃ© de glucides dans l'alimentation peut contribuer Ã l'obÃ©sitÃ©. L'inhibition de l'a-amylase et/ou de l'a-glucosidase par l'extrait de l'invention a donc pour effet de limiter et/ou empÃªcher l'absorption des glucides et peut Ãªtre utilisÃ©e pour 10 prÃ©venir et/ou lutter contre l'obÃ©sitÃ©. La prÃ©sente invention concerne Ã©galement l'utilisation de l'extrait, de la composition ou de l'actif de l'invention pour limiter l'absorption de glucides contenus dans une denrÃ©e alimentaire. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention est utile pour 15 inhiber l'activitÃ© des amylases, de prÃ©fÃ©rence l'a-amylase, et/ou des glucosidases, de prÃ©fÃ©rence l'a-glucosidase. Par ailleurs, les lipases sont des enzymes hydrosolubles capables d'effectuer l'hydrolyse de fonctions esters et sont spÃ©cialisÃ©es dans la transformation de glycÃ©rides (triglycÃ©rides, diglycÃ©rides, monoglycÃ©rides) en glycÃ©rol et en acides gras. Ã l'intÃ©rieur des adipocytes, 20 les acides gras sont estÃ©rifiÃ©s en triglycÃ©rides. Le stockage des triglycÃ©rides est stimulÃ© par l'insuline qui active la lipase et la pÃ©nÃ©tration des acides gras. L'inhibition des lipases a donc pour effet de diminuer l'absorption des graisses par l'organisme. L'inhibition de lipases par l'extrait de l'invention a donc pour effet de limiter et/ou empÃªcher l'absorption des lipides et peut Ãªtre utilisÃ©e pour prÃ©venir et/ou lutter contre l'obÃ©sitÃ©. 25 La prÃ©sente invention concerne Ã©galement l'utilisation de l'extrait, de la composition ou de l'actif de l'invention pour limiter l'absorption de lipides contenus dans une denrÃ©e alimentaire. 3065877 17 Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention est utile pour inhiber l'activitÃ© des lipases. L'inhibition des lipases a Ã©galement un effet sur la cellulite. En effet, la cellulite correspond Ã une augmentation du nombre et du volume des adipocytes oÃ¹ s'accumule la 5 graisse dans l'hypoderme. Le stockage des acides gras est associÃ© Ã une augmentation de la taille des adipocytes, conduisant Ã la formation de cellulite. L'inhibition de la lipase par l'extrait de l'invention freine donc l'entrÃ©e des acides gras dans les adipocytes. L'invention a donc pour objet l'utilisation d'extrait d'aiguilles de sapin ou d'une composition contenant un tel extrait, pour rÃ©duire la cellulite chez un Ãªtre vivant. Selon 10 un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention peut Ãªtre utilisÃ© comme agent anticellulite. En outre, la Demanderesse a dÃ©montrÃ© que l'extrait de l'invention comprend des composÃ©s polyphÃ©noliques (voir Exemple 1), notamment de l'acide phÃ©nolique, de l'acide p-coumarique, des lignanes et des tanins, ainsi que de la vitamine C et des fibres 15 alimentaires. L'acide coumarique contribue Ã la diminution du cholestÃ©rol (en particulier le LDL-cholestÃ©rol). Ainsi, l'invention porte Ã©galement sur l'utilisation d'extrait d'aiguilles de sapin ou d'une composition contenant un tel extrait, pour rÃ©duire et/ou maintenir le taux de cholestÃ©rol chez un individu. La teneur en acide p-coumarique a Ã©galement un effet sur la prise de 20 poids (rÃ©duire de la prise de poids, diminuer/maintenir du poids corporel), le mÃ©tabolisme glucidique (limiter l'absorption de glucides) et lipidique (limiter l'absorption de lipides) tels que dÃ©crits ci-dessus. Selon un mode de rÃ©alisation, l'inhibition des enzymes lipase, a-amylase et ci-glucosidase telle que dÃ©crite ci-dessus et la teneur de l'extrait de l'invention en acide p-coumarique ont un effet synergique effet sur la prise de poids, le 25 mÃ©tabolisme glucidique et lipidique tels que dÃ©crits ci-dessus. Le collagÃ¨ne est l'une des principales protÃ©ines structurales de la peau produit par les fibroblastes. Ses principales fonctions consistent Ã (1) fournir Ã la peau une fermetÃ© mÃ©canique grÃ¢ce Ã sa structure rigide en triple-hÃ©lice, (2) amortir le tissu conjonctif, et 3065877 18 (3) maintenir l'adhÃ©sion cellulaire. En particulier, il permet de renforcer et tendre la peau afin de la protÃ©ger des stimuli ou contraintes extÃ©rieures. Avec le temps, la dÃ©gradation du collagÃ¨ne endogÃ¨ne par les collagÃ©nases conduit Ã (i) une diminution de l'Ã©lasticitÃ© et la souplesse de la peau, et (ii) Ã l'apparition de rides. 5 L'invention a pour objet l'utilisation d'extrait d'aiguilles de sapin ou d'une composition contenant un tel extrait, comme agent antiÃ¢ge. Dans la prÃ©sente invention, il est dÃ©montrÃ© une forte action de l'extrait ou la composition de l'invention sur le collagÃ¨ne cutanÃ©. En particulier, selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention est utile pour inhiber l'activitÃ© des collagÃ©nases et hyaluronidases (voir Exemples 5 et 6). 10 Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention est utile pour prÃ©venir et/ou lutter contre le vieillissement cutanÃ©. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention est utile pour prÃ©venir et/ou lutter contre le photo-vieillissement. Les rÃ©sultats des essais biologiques rÃ©alisÃ©s par la Demanderesse montrent aussi que 15 l'extrait d'aiguilles de sapin de l'invention prÃ©sente une action anti-glycation (voir Exemple 7). Ainsi, l'extrait selon l'invention permet de renforcer les fibres Ã©lastiques de la matrice extracellulaire Ainsi, l'extrait ou la composition de l'invention est utile comme composition anti-Ã¢ge, notamment pour prÃ©venir et/ou attÃ©nuer le vieillissement de la peau et/ou l'apparition des 20 signes de vieillissement de la peau. Les signes de vieillissement de la peau sont notamment les rides et/ou ridules, le relÃ¢chement cutanÃ©, la perte d'Ã©lasticitÃ© des fibres cutanÃ©es, une peau flÃ©trie, une peau amincie, et une peau terne et/ou sans Ã©clat. L'extrait selon l'invention prÃ©sente des propriÃ©tÃ©s antioxydantes (voir Exemple 3). Ainsi, un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'un extrait ou d'une 25 composition de l'invention pour ses propriÃ©tÃ©s antioxydantes. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention est utile pour lutter et/ou prÃ©venir l'oxydation de la peau. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention est utile comme agent antioxydant ou anti-radicalaire. 3065877 19 L'extrait ou d'une composition de l'invention peut Ãªtre utilisÃ© pour prÃ©venir ou attÃ©nuer les imperfections de la peau telles que les rougeurs ou les cicatrices superficielles. En particulier, l'extrait ou la composition de l'invention est utile comme agent lissant. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention est utile pour 5 rÃ©duire et/ou attÃ©nuer les cicatrices d'acnÃ©. Selon un autre mode de rÃ©alisation l'extrait ou la composition de l'invention est utile pour rÃ©duire et/ou attÃ©nuer les cicatrices liÃ©es Ã l'Ã¢ge. Selon un autre mode de rÃ©alisation l'extrait ou la composition de l'invention est utile pour rÃ©duire et/ou attÃ©nuer les cicatrices liÃ©es Ã une brÃ»lure. Selon un autre mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention est utile pour rÃ©duire et/ou attÃ©nuer 10 les cicatrices liÃ©es Ã une coupure. L'extrait selon l'invention prÃ©sente des propriÃ©tÃ©s inhibitrices de la tyrosinase (voir Exemple 4). Ainsi, selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait, la composition ou l'actif de l'invention est utile pour Ã©claircir la peau ou pour lutter contre l'hyperpigmentation de zones de la peau, en particulier contre les tÃ¢ches de pigmentation liÃ©es Ã l'Ã¢ge. 15 Les rÃ©sultats des essais biologiques rÃ©alisÃ©s par la Demanderesse montrent que l'extrait d'aiguilles de sapin de l'invention prÃ©sente une action inhibitrice de hyaluronidase (voir Exemple 6). La hyaluronidase est une enzyme de dÃ©gradation de l'acide hyaluronique, polymÃ¨re hygroscopique Ã la longue structure linÃ©aire qui garantit un stockage en eau durable et profond au coeur du derme et assurent par lÃ -mÃªme de bonnes propriÃ©tÃ©s 20 mÃ©caniques Ã la peau (souplesse, Ã©lasticitÃ©...). L'inhibition de l'activitÃ© hyaluronidase permet donc de protÃ©ger l'hydratation de la peau. Ainsi, l'invention porte Ã©galement sur l'utilisation de l'extrait, de la composition ou de l'actif selon l'invention pour protÃ©ger l'hydratation cutanÃ©e et/ou pour hydrater la peau d'un individu. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait selon l'invention peut Ãªtre utilisÃ© 25 comme agent hydratant de la peau. L'extrait selon l'invention prÃ©sente des propriÃ©tÃ©s inhibitrices de l'acide yaminobutyrique transaminase (voir Exemple 11). L'acide y-aminobutyrique transaminase intervient dans la dÃ©gradation du neurotransmetteur GABA, l'acide y-aminobutyrique, qui 3065877 20 est le principal neurotransmetteur inhibiteur du systÃ¨me nerveux central chez les mammifÃ¨res. Ainsi, l'invention porte Ã©galement sur l'utilisation d'un extrait ou d'une composition selon l'invention pour inhiber le systÃ¨me nerveux central. En particulier, selon un mode 5 de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition selon l'invention peut Ãªtre utilisÃ© comme agent relaxant ou calmant. Les analyses phytochimiques des extraits d'aiguilles de sapin ont rÃ©vÃ©lÃ© des teneurs Ã©levÃ©es en manganÃ¨se (voir Exemple 13). En particulier, les extraits d'aiguilles de sapin contiennent au moins 0,3 mg de manganÃ¨se pour 100 g d'extrait. 10 Par consÃ©quent, l'invention concerne Ã©galement l'utilisation d'un extrait, d'une composition ou d'un actif de l'invention pour assurer un mÃ©tabolisme Ã©nergÃ©tique normal, la formation normale du tissu conjonctif et/ou maintenir la santÃ© des os chez un Ãªtre vivant. L'invention porte aussi sur l'utilisation d'un extrait, d'une composition ou d'un actif de 15 l'invention pour protÃ©ger les cellules d'un Ãªtre vivant contre les radicaux libres. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention peut Ãªtre utilisÃ© comme agent antioxydant. L'invention concerne Ã©galement une mÃ©thode de soin cosmÃ©tique, dermocosmÃ©tique ou nutraceutique comprenant l'administration d'un extrait, d'une composition ou d'un actif 20 de l'invention Ã un Ãªtre vivant. Dans la prÃ©sente invention, par Â« soin cosmÃ©tique, dermocosmÃ©tique ou nutraceutique Â» on entend un soin non thÃ©rapeutique. Par Â« Ãªtre vivant Â», on entend tout mammifÃ¨re, de prÃ©fÃ©rence, un Ãªtre humain. Selon un mode de rÃ©alisation, l'invention s'adresse aux femmes. Selon un mode de rÃ©alisation, l'invention s'adresse aux hommes. Selon un mode 25 de rÃ©alisation, l'invention s'adresse aux adultes (personnes de plus de 18 ans). Selon un mode de rÃ©alisation, l'invention s'adresse aux adolescents (personnes entre 8 et 18 ans). Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait, la composition ou l'actif de l'invention est administrÃ© par voie orale. 3065877 21 Selon un mode de rÃ©alisation, l'administration est effectuÃ©e Ã un moment antÃ©rieur Ã la consommation des glucides par l'individu. Selon un mode particulier de rÃ©alisation, l'administration se fait entre 1 seconde et 30 minutes avant la consommation des glucides. Selon un mode avantageux de rÃ©alisation, l'administration est effectuÃ©e entre 10 et 5 25 minutes avant la consommation des glucides. Selon un mode prÃ©fÃ©rÃ© de rÃ©alisation, l'administration est effectuÃ©e environ 15 minutes avant la consommation des hydrates de carbone. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait, la composition ou l'actif de l'invention est administrÃ© Ã plusieurs reprises Ã un individu sur une pÃ©riode de temps. Selon un mode de 10 rÃ©alisation, l'extrait, la composition ou l'actif de l'invention est administrÃ© au moins une fois par jour. Selon un autre mode de rÃ©alisation, l'extrait, la composition ou l'actif de l'invention est administrÃ© deux fois par jour. Selon un autre mode de rÃ©alisation, l'extrait ou la composition de l'invention est administrÃ© avant chaque repas. Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait, la composition ou l'actif de l'invention est administrÃ© avec des repas 15 contenant des glucides plusieurs fois par jour pendant une pÃ©riode d'environ 1 mois. L'invention concerne Ã©galement une mÃ©thode non-thÃ©rapeutique pour limiter et/ou empÃªcher l'absorption des glucides et/ou des lipides chez un Ãªtre vivant. Selon un mode de rÃ©alisation, la mÃ©thode non-thÃ©rapeutique est utile pour rÃ©duire, maintenir ou amÃ©liorer le poids corporel chez un Ãªtre vivant. 20 Selon un mode de rÃ©alisation, l'extrait, la composition ou l'actif de l'invention est administrÃ©e par voie topique. Selon un mode de rÃ©alisation, l'application est effectuÃ©e topiquement sur la peau du visage, des mains et/ou du corps, de prÃ©fÃ©rence les zones sensibles visÃ©es par l'utilisation. Par exemple, l'application peut Ãªtre rÃ©alisÃ©e simplement sur la peau ou accompagnÃ©e d'un massage de la peau avec la composition de la prÃ©sente 25 invention. Selon un mode de rÃ©alisation, il est recommandÃ© de masser la peau jusqu'Ã pÃ©nÃ©tration complÃ¨te de la composition dans la peau. Selon un mode de rÃ©alisation, la quantitÃ© Ã appliquer de l'extrait ou de la composition de l'invention est suffisante pour que la surface de peau soit totalement couverte par l'extrait ou la composition de l'invention. 3065877 22 Selon un mode de rÃ©alisation, la mÃ©thode de soin comprend l'application d'un extrait ou d'une composition de l'invention Ã un Ãªtre humain par une application quotidienne, hebdomadaire ou mensuelle. Selon un mode de rÃ©alisation, l'application est rÃ©alisÃ©e au moins une fois par jour. Selon un mode de rÃ©alisation, la composition est administrÃ©e le 5 matin en tant que soin de jour et/ou le soir au coucher en tant que soin de nuit. L'invention concerne Ã©galement une mÃ©thode de soin cosmÃ©tique amincissant du corps humain, caractÃ©risÃ© en ce qu'il consiste Ã appliquer Ã la surface de la partie du corps concernÃ© un extrait ou une composition selon l'invention. Selon un mode de rÃ©alisation, la mÃ©thode de soin est destinÃ©e Ã diminuer les surcharges graisseuses sous-cutanÃ©es. 10 Selon un mode de rÃ©alisation, la mÃ©thode de soin est destinÃ©e Ã limiter et/ou rÃ©duire la prise de poids. Selon un mode de rÃ©alisation, la mÃ©thode de soin est destinÃ©e Ã rÃ©duire, maintenir ou amÃ©liorer le poids corporel. Selon un mode de rÃ©alisation, la mÃ©thode de soin est destinÃ©e Ã limiter l'absorption de glucides contenus dans une denrÃ©e alimentaire. Selon un mode de rÃ©alisation, la mÃ©thode de soin est destinÃ©e Ã limiter l'absorption de 15 lipides contenus dans une denrÃ©e alimentaire. Selon un mode de rÃ©alisation, la mÃ©thode de soin est destinÃ©e Ã rÃ©duire la cellulite. Selon un mode de rÃ©alisation, la mÃ©thode de soin est une mÃ©thode de soin pour lutter contre le vieillissement de la peau, comprenant l'application d'un extrait ou d'une composition de l'invention. 20 Selon un mode de rÃ©alisation, la mÃ©thode de soin est une mÃ©thode de soin antiÃ¢ge. Selon un mode de rÃ©alisation, la mÃ©thode de soin est utile pour prÃ©venir la formation de rides et/ou ridules. L'invention concerne Ã©galement une mÃ©thode de soin cosmÃ©tique ou dermocosmÃ©tique pour lutter contre les imperfections de la peau, comprenant l'application d'un extrait ou 25 d'une composition de l'invention. Selon un mode de rÃ©alisation, la mÃ©thode de soin est utile pour prÃ©venir ou attÃ©nuer les irritations de la peau telles que les rougeurs de la peau. Selon un mode de rÃ©alisation, la mÃ©thode de soin est utile pour prÃ©venir ou attÃ©nuer les cicatrices superficielles de la peau. 3065877 23 L'invention concerne Ã©galement une mÃ©thode de soin cosmÃ©tique ou dermocosmÃ©tique pour lutter contre l'oxydation cutanÃ©e comprenant l'application d'un extrait tel que dÃ©fini selon l'invention en tant qu'actif, ou d'une composition selon l'invention. L'invention concerne Ã©galement une mÃ©thode de soin cosmÃ©tique ou dermocosmÃ©tique 5 pour lutter contre la cellulite comprenant l'application d'un extrait tel que dÃ©fini selon l'invention en tant qu'actif, ou d'une composition selon l'invention. Un autre objet de l'invention concerne une mÃ©thode de soin cosmÃ©tique ou dermocosmÃ©tique pour protÃ©ger l'hydratation de la peau et/ou hydrater la peau comprenant l'application d'un extrait tel que dÃ©fini selon l'invention en tant qu'actif, ou 10 d'une composition selon l'invention. BRÃVE DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1 est un histogramme montrant le poids de diffÃ©rents organes (graisses sous-cutanÃ©e, pancrÃ©as, foie, reins, gastrocnemius, et plantaris) chez des rates soumises Ã un 15 rÃ©gime alimentaire standard ou gras, et ayant reÃ§u un extrait de l'invention ou non. Figure 2 est un graphe montrant le poids de rates soumises Ã un rÃ©gime alimentaire standard ou gras, et ayant reÃ§u un extrait de l'invention ou non, en fonction du temps. Figure 3 est un graphe montrant le taux de triglycÃ©rides, de cholestÃ©rol total et de cholestÃ©rol HDL de rates soumises Ã un rÃ©gime alimentaire standard ou gras, et ayant reÃ§u 20 un extrait de l'invention ou non. EXEMPLES La prÃ©sente invention se comprendra mieux Ã la lecture des exemples suivants qui illustrent non-limitativement l'invention. 3065877 24 Exemple 1 : Extraits Pour chaque extraction, une caractÃ©risation de la teneur de l'extrait de l'invention en phÃ©nols, en sucres, en protÃ©ines et en matiÃ¨re sÃ¨che a Ã©tÃ© rÃ©alisÃ©e selon les protocoles ci-dessous. 5 Dosage des phÃ©nols Un volume de 200 d'Ã©chantillon Ã doser (l'extrait de l'invention ou l'acide gallique, considÃ©rÃ© comme une molÃ©cule reprÃ©sentative des composÃ©s phÃ©noliques, Ã diffÃ©rentes concentrations pour la gamme d'Ã©talonnage) a Ã©tÃ© mÃ©langÃ© Ã 1000 [iL de rÃ©actif de FolinCiocalteu (10 %) et 800 iL de solution de carbonate de sodium (7 %), puis le mÃ©lange a 10 Ã©tÃ© incubÃ© pendant 30 min dans l'obscuritÃ©. L'absorbance Ã 760 nm est ensuite mesurÃ©e. Chaque Ã©chantillon est prÃ©parÃ© en triplicat. Par comparaison avec la courbe d'Ã©talonnage, la concentration en phÃ©nols totaux de l'extrait de l'invention a ensuite Ã©tÃ© dÃ©terminÃ©e. Dosage des sucres 15 AprÃ¨s prÃ©cipitation des protÃ©ines contenues dans l'extrait et interfÃ©rant avec le dosage des sucres, les extraits de l'invention ont Ã©tÃ© diluÃ©s. Un volume de 400 1.i1_, d'Ã©chantillon Ã doser (l'extrait de l'invention ou une solution standard en sucres comprenant 0,15 g/L de glucose et 0,15 g/L de fructose, Ã diffÃ©rentes concentrations pour la gamme d'Ã©talonnage) a Ã©tÃ© mÃ©langÃ© Ã 4001aL de rÃ©actif cuprique. Le mÃ©lange est ensuite fortement agitÃ© puis 20 incubÃ© 10 min Ã 100Â°C et refroidi 10 min dans un bain d'eau froide. Un volume de 400 pi, de rÃ©actif arsÃ©nomolybdique et 5 mL d'eau distillÃ©e ont ensuite Ã©tÃ© ajoutÃ©s au mÃ©lange et incubÃ© pendant 10 min Ã tempÃ©rature ambiante. L'absorbance Ã 500 nm est ensuite mesurÃ©e. Chaque Ã©chantillon est prÃ©parÃ© en triplicat. Par comparaison avec la courbe d'Ã©talonnage, la concentration en sucres de l'extrait de 25 l'invention a ensuite Ã©tÃ© dÃ©terminÃ©e. 3065877 25 Dosage de protÃ©ines Un mÃ©lange dans des matras a Ã©tÃ© rÃ©alisÃ©, comprenant environ 300 mg de catalyseur (Ã partir d'une prÃ©paration comprenant 1 g de sÃ©lÃ©nium amorphe, 1 g de sulfate de cuivre et 50 g de sulfate de sodium), 500 nt d'extrait de l'invention et 4 mL d'acide sulfurique 5 concentrÃ©. Un mÃ©lange contrÃ´le a Ã©tÃ© rÃ©alisÃ©, comprenant le catalyseur et l'acide sulfurique, sans extrait. Les matras ont ensuite Ã©tÃ© raccordÃ©s au rÃ©cupÃ©rateur de vapeurs Â« BÃ¼chi Scrubber K-415 Â». Puis, aprÃ¨s prÃ©chauffage de la rampe de minÃ©ralisation Â« BÃ¼chi Digestion Unit K-424 Â» pendant 10 Ã 15 min, l'ensemble tubes - collecteur a Ã©tÃ© transfÃ©rÃ© sur la rampe. 10 Les Ã©chantillons ont Ã©tÃ© chauffÃ©s jusqu'Ã clarification du liquide qui, en fin de minÃ©ralisation, prÃ©sente une teinte verdÃ¢tre. Une Ã©tape de distillation a ensuite Ã©tÃ© rÃ©alisÃ©e Ã l'aide d'un distillateur automatique Â« BÃ¼chi Distillation Unit K-335 Â» et la solution obtenue a ensuite Ã©tÃ© titrÃ©e avec une solution titrante d'acide chlorhydrique Ã 0,02 M. 15 La concentration massique de protÃ©ines en g/L a Ã©tÃ© dÃ©terminÃ©e selon l'Ã©quation suivante : avec [ProtÃ©ines]m : la concentration massique en protÃ©ines (g/L), [HC1] : la concentration molaire de la solution titrante d'acide chlorhydrique 20 (mol/1), Veq : le volume Ã©quivalent de l'Ã©chantillon (mL), Vtemom : le volume Ã©quivalent du tÃ©moin (mL), MN : la masse molaire de l'azote (g/mol), VÃ©chantillon le volume de l'Ã©chantillon (mL), 25 6,25 : le coefficient permettant de passer de la concentration en azote Ã la concentration en protÃ©ines. 3065877 26 Dosage de la matiÃ¨re sÃ¨che L'extrait de l'invention a Ã©tÃ© pesÃ©, puis placÃ© dans une Ã©tuve Ã 105Â°C pendant au moins 24h avant d'Ãªtre Ã nouveau pesÃ©. Le pourcentage de matiÃ¨re sÃ¨che de l'extrait (aprÃ¨s incubation dans l'Ã©tuve) a ensuite Ã©tÃ© 5 calculÃ© par rapport au poids total de l'extrait (avant incubation dans l'Ã©tuve). Extrait 1 : Extraction par hydrolyse enzymatique L'extrait de l'invention est obtenu selon le protocole suivant. Dans un rÃ©acteur ont Ã©tÃ© introduits entre 110 et 350 g d'aiguilles de sapin (Abies alba), de l'eau et 5 % en poids d'un mÃ©lange enzymatique un mÃ©lange de 1-50 % d'une 10 hÃ©micellulase, d'une cellulase et d'une pectinase, et de 1-100 % d'un mÃ©lange de protÃ©ases. Le ratio aiguilles de sapin/eau est compris dans une gamme allant de 2,5 Ã 4. Le mÃ©lange rÃ©actionnel est ensuite incubÃ© Ã une tempÃ©rature d'environ 50Â°C sous agitation. L'agitation est comprise dans une gamme d'environ 100 Ã 400 rpm. Le pH de ce mÃ©lange est compris dans une gamme d'environ 3,0 Ã 4,0. Puis une Ã©tape de 15 centrifugation est rÃ©alisÃ©e Ã 9000 rpm pendant 20 min Ã tempÃ©rature ambiante. Finalement, une phase aqueuse a Ã©tÃ© extraite et caractÃ©risÃ©e. L'extrait comprend des polyphÃ©nols (entre 5 et 9 g/L), des sucres (entre 10 et 18 g/L), et des protÃ©ines (entre 1,5 et 4,5 g/L). L'extrait aqueux est caractÃ©risÃ© par une matiÃ¨re sÃ¨che moyenne comprise entre 3 et 9 %. 20 Ainsi, l'extrait comprend entre 10 et 15 % de polyphÃ©nols en poids par rapport au poids total de l'extrait sec ; entre 20 et 32 % de sucres en poids par rapport au poids total de l'extrait sec ; et entre 4 et 8 % de protÃ©ines en poids par rapport au poids total de l'extrait sec. D'autres mÃ©langes enzymatiques comprenant un mÃ©lange de pectinases et de cellulases, 25 un mÃ©lange de pectinases et d'estÃ©rases, ou des pectinases seules ont Ã©galement Ã©tÃ© testÃ©s (dans les mÃªmes conditions d'extraction que dÃ©crites ci-dessus). Les teneurs en 3065877 27 polyphÃ©nols, sucres et protÃ©ines, ainsi que la matiÃ¨re sÃ¨che moyenne, se sont rÃ©vÃ©lÃ©es similaires aux valeurs dÃ©crites ci-dessus. Extrait 2 : Extraction sans enzyme L'extrait de l'invention est obtenu selon le protocole suivant. 5 Dans un rÃ©acteur ont Ã©tÃ© introduits 110 g d'aiguilles de sapin (Abies alba) et de l'eau. Le ratio aiguilles de sapin/eau est d'environ 2,5. Le mÃ©lange a Ã©tÃ© rÃ©alisÃ© pendant une durÃ©e de 4 heures Ã une tempÃ©rature de 50Â°C sous agitation. Finalement, une phase aqueuse a Ã©tÃ© extraite et caractÃ©risÃ©e. L'extrait aqueux comprend des polyphÃ©nols (environ 5,7 g/L), des sucres (environ 10 6,2 g/L), et des protÃ©ines (environ 5,1 g/L). L'extrait aqueux est caractÃ©risÃ© par une matiÃ¨re sÃ¨che moyenne d'environ 4,8 Â°A. Ainsi, l'extrait comprend environ 12 % de polyphÃ©nols en poids par rapport au poids total de l'extrait sec ; environ 13 % de sucres en poids par rapport au poids total de l'extrait sec ; et environ 10 % de protÃ©ines en poids par rapport au poids total de l'extrait sec. 15 Extrait 3 : Extraction avec huile L'extrait de l'invention est obtenu selon le protocole suivant. Dans un rÃ©acteur ont Ã©tÃ© introduits 109 kg d'aiguilles de sapin (Abies alba) prÃ©alablement broyÃ©es et 424.5 L d'eau. Le ratio aiguilles de sapin/eau est d'environ 3,9. Le mÃ©lange a Ã©tÃ© rÃ©alisÃ© pendant une durÃ©e de 4 heures Ã une tempÃ©rature de 50Â°C sous agitation. 20 AprÃ¨s 3,5 heures de macÃ©ration avec l'eau, un volume d'huile de tournesol reprÃ©sentant 16 % du volume total est ajoutÃ© au mÃ©lange. Le mÃ©lange a Ã©tÃ© rÃ©alisÃ© pendant une durÃ©e de 2h Ã une tempÃ©rature de 50Â°C sous agitation. Finalement, une phase aqueuse a Ã©tÃ© extraite et caractÃ©risÃ©e. 3065877 28 L'extrait aqueux comprend des polyphÃ©nols (environ 5,6 g/L), des sucres (environ 3,8 g/L), et des protÃ©ines (environ 1,23 g/L). L'extrait aqueux est caractÃ©risÃ© par une matiÃ¨re sÃ¨che moyenne d'environ 3,3 %. Ainsi, l'extrait comprend environ 17 % de polyphÃ©nols en poids par rapport au poids total 5 de l'extrait sec ; environ 12 % de sucres en poids par rapport au poids total de l'extrait sec ; et environ 3,7 Â°,/0 de protÃ©ines en poids par rapport au poids total de l'extrait sec. Exemple 2 : Compositions Compositions cosmÃ©tiques Compositions nutraceutiques 10 - Formule gÃ©lule DÃ©signations Pourcentage Additifs (exemple maltodextrine) 0 Ã 90 % Extrait dÃ©shydratÃ© d'aiguilles de sapin selon l'invention 10 Ã 100 Â°A Formule comprimÃ© Ã croquer DÃ©signations Pourcentage Lactose compression directe 48,2 Amidon de riz 0,9 Extrait dÃ©shydratÃ© d'aiguilles de sapin selon l'invention 50 MagnÃ©sium stÃ©arate 0,9 IngrÃ©dient CrÃ¨me Eau 80,40 ')/0 Conservateur 0,60 % 5% Simulsol 165 PEG-100 stearate and glycerl stearate 5% Lanol 14F Myreth-3-myristate Extrait aqueux d'aiguilles de sapin selon l'invention Ables alba leaf extract 2% 3% Huile vÃ©gÃ©tale Sepigel 305 polyacrylamide and C13-C14 isoparaffin and laureth7 4% 3065877 29 Formule comprimÃ© orodispersible DÃ©signations Pourcentage Lactose compression directe 48,3 Croscarniellose sodique 2,0 Mannitol 27,7 Extrait dÃ©shydratÃ© d'aiguilles de sapin selon l'invention 20 ArÃ´me 0,4 MagnÃ©sium stÃ©arate 0,6 Formules liquides A et B Exemple 3 : Action antioxydante - tests DPPH et ORAC 5 Le but de ces expÃ©riences est de monter que les extraits aqueux d'aiguilles de sapin (Abies alba) ont une activitÃ© antioxydante. - Test 0 C Principe Le potentiel antioxydant de l'extrait de l'invention a Ã©tÃ© testÃ© Ã l'aide de la mÃ©thode de 10 dosage ORAC (Oxygen Radical Absorbance Capacity). Ce dosage est basÃ© sur l'oxydation d'une sonde fluorescente. Dans ce test, les radicaux libres prÃ©sents dans l'Ã©chantillon rÃ©agissent avec une sonde fluorescente ce qui a pour consÃ©quence de diminuer son intensitÃ©. Plus le nombre de radicaux est Ã©levÃ© dans l'Ã©chantillon, plus l'intensitÃ© de la sonde est faible. 15 L'ajout d'un composÃ© antioxydant dans l'Ã©chantillon permet d'absorber les radicaux libres et donc, permet de prolonger la durÃ©e de fluorescence de la sonde. Extrait glycÃ©rinÃ© DÃ©signation MacÃ©rÃ¢t glycÃ©rinÃ© GlycÃ©rine 80 40 Formule liquide A (c/c) Formule liquide B (c/c) Eau Alcool Ã 95 % Acide citrique 9,5 20 0 0 0.5 Extrait d'aiguilles de sapin selon l'invention 10 10 3065877 30 Pour dÃ©terminer si un composÃ© prÃ©sente une activitÃ© antioxydante, on compare la fluorescence de la sonde obtenue avec le composÃ© d'intÃ©rÃªt, et la fluorescence obtenue avec un antioxydant de rÃ©fÃ©rence. Si le composÃ© prÃ©sente une activitÃ© antioxydante, son activitÃ© est donnÃ©e en mol d'Ã©quivalent de la rÃ©fÃ©rence par gramme de masse sÃ¨che du 5 composÃ© d'intÃ©rÃªt. Protocole Dans cette Ã©tude, la rÃ©fÃ©rence est le TroloxÂ® (ou acide 6-hydroxy-2,5,7,8- tÃ©tramÃ©thylchromane-2-carboxylique) et la sonde fluorescente est la fluorescÃ©ine. Une solution tÃ©moin (T) a Ã©tÃ© rÃ©alisÃ©e par dissolution de TroloxÂ® dans un tampon 10 phosphate Ã pH 7,4. La concentration en TroloxÂ® dans la solution tÃ©moin est de 1 mM. La solution Ã analyser (S) est une solution comprenant l'extrait de l'invention tel que dÃ©crit prÃ©cÃ©demment. Cette solution est rÃ©alisÃ©e dans un tampon phosphate Ã pH 7,4. La fluorescence de la sonde a Ã©tÃ© mesurÃ©e au cours du temps pour chacune des solutions (S) et (T). 15 RÃ©sultats Le dosage ORAC a permis de mettre en Ã©vidence une activitÃ© antioxydante de l'extrait aqueux d'aiguilles de sapin (1679 ttmol de Trolox'Vg de masse sÃ¨che). - Test DPPH Principe 20 Le potentiel anti-radicalaire d'une substance peut Ãªtre testÃ© Ã l'aide d'une mÃ©thode colorimÃ©trique appelÃ©e test DPPH, en utilisant des radicaux de substitution tels que le radical 1,1-diphÃ©nyle-2-picrylhydrazi1 appelÃ© DPPH. A tempÃ©rature ambiante et en solution, le radical DPPH prÃ©sente une coloration violette intense. Son passage Ã la forme non radicalaire, aprÃ¨s saturation de ses couches 3065877 31 Ã©lectroniques s'accompagne d'une disparition de cette coloration suivant l'Ã©quation suivante : DPPHÂ° + AH > DPPH-H + La diminution de l'intensitÃ© de la coloration d'une solution contenant le radical DPPH, 5 appelÃ©e solution de DPPH, est suivie par mesure colorimÃ©trique Ã 517 nm. Elle permet de se rendre compte de la capacitÃ© de piÃ©geage des composÃ©s Ã©tudiÃ©s par rapport Ã celle du DPPHÂ°. La diminution de l'absorbance met ainsi en Ã©vidence les propriÃ©tÃ©s antiradicalaires des composÃ©s Ã©tudiÃ©s. Protocole 10 Un volume de 25 pi, d'extrait aqueux de l'invention ou de solution tÃ©moin d'acide ascorbique est injectÃ© dans des tubes Ã hÃ©molyses protÃ©gÃ©s de la lumiÃ¨re. Une solution de DPPH Ã 6.10-5 mol/L est ajoutÃ©e pour obtenir un volume final de 1 mL. AprÃ¨s agitation et incubation pendant 30 min Ã tempÃ©rature ambiante et Ã l'abri de la lumiÃ¨re, l'absorbance de la solution est mesurÃ©e Ã 517 nm. 15 RÃ©sultats On observe une diminution trÃ¨s nette de l'absorbance Ã 517 nm en prÃ©sence d'extrait de l'invention. La dose d'extrait de l'invention pour inhiber 50 % des radicaux libres est de 0,09 % de l'extrait sec. Le dosage DPPH a donc permis de mettre en Ã©vidence une activitÃ© antioxydante de l'extrait aqueux d'aiguilles de sapin. 20 Exemple 4 : Action dÃ©pigmentante Le but est de montrer qu'un extrait d'aiguilles de sapin selon l'invention a des propriÃ©tÃ©s dÃ©pigmentantes. Principe La tyrosinase est une enzyme clÃ© qui catalyse les deux premiÃ¨res Ã©tapes de la voie de 25 synthÃ¨se de la mÃ©lanine. L'activitÃ© de cette enzyme peut Ãªtre dÃ©terminÃ©e par mesure de l'oxydation de la L-DOPA (L-3,4-dihydroxyphenylalanine) en dopachrome, un 3065877 32 intermÃ©diaire de synthÃ¨se de la mÃ©lanine, en utilisant une tyrosinase de champignon. Une inhibition de la production de dopachrome correspond donc Ã une inhibition de la tyrosinase et Ã une inhibition de la synthÃ¨se de mÃ©lanine. Protocole 5 MatÃ©riel Tyrosinase from Mushroom > 1000 U/mg (ref Sigma T3824), Tampon Phosphate de sodium pH 7.2 (ref Sigma 32048), Tyrosine (ref Sigma T2900000), Acide koj igue (ref Sigma 1(3125). 10 MÃ©thode L'extrait de l'invention est diluÃ© dans du tampon phosphate de sodium pH 7.2 (dilutions finales 1/2.5 Ã 1/160) puis est incubÃ© avec la tyrosinase (9 U/puits) pendant 5 minutes Ã 35Â°C dans des plaques 96 puits. La tyrosine (2 mM) est ensuite ajoutÃ©e au mÃ©lange et la rÃ©action est suivie par lecture de la DO Ã 492 nm pendant 5 minutes (apparition du 15 dopachrome) Ã l'aide d'un spectrophotomÃ¨tre Ã lecteur de microplaques (Optima Fluostar, BMG Labtech). Un tÃ©moin nÃ©gatif est rÃ©alisÃ© sans addition d'extrait (tampon) et un tÃ©moin positif (acide koj igue) est Ã©galement testÃ©. Le calcul du pourcentage d'inhibition de l'activitÃ© tyrosinase par les extraits est effectuÃ© en rapportant la DO de l'extrait Ã la DO du tÃ©moin nÃ©gatif (sans extrait). La dilution de 20 l'extrait qui inhibe 50 % de l'activitÃ© tyrosinase (IC50) est calculÃ©e Ã partir des Ã©quations des courbes dose-rÃ©ponse. RÃ©sultats L'extrait de l'invention prÃ©sente une IC50 pour l'activitÃ© tyrosinase supÃ©rieure Ã 2 % et un pourcentage d'inhibition de l'activitÃ© tyrosinase de 40 %. L'extrait prÃ©sente donc une 25 activitÃ© anti-tyrosinase et par consÃ©quent une activitÃ© inhibitrice de la synthÃ¨se de la mÃ©lanine. 3065877 33 Exemple 5 : ActivitÃ© inhibitrice de la collagÃ©nase Principe Ce test permet de dÃ©terminer l'activitÃ© enzymatique de la collagÃ©nase, enzyme dÃ©gradant les liaisons peptidiques du collagÃ¨ne. 5 Le collagÃ¨ne est une protÃ©ine qui a pour fonction de confÃ©rer aux tissus une rÃ©sistance mÃ©canique Ã l'Ã©tirement, il est notamment indispensable aux processus de cicatrisation. Il existe plusieurs typeq de collagÃ¨ne, chacun possÃ¨de une structure propre et se retrouve dans des organes particuliers (le collagÃ¨ne de type I intervient dans la formation de la peau, des tendons, des os... le type III se retrouve au niveau du systÃ¨me cardiovasculaire). 10 Le test se base sur la dÃ©gradation par la collagÃ©nase d'un substrat (N-[3-(2- Furyl)acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala ou FALGPA) qui absorbe Ã 345 nm. La diminution de l'absorbance correspond donc Ã la dÃ©gradation du substrat, elle peut Ãªtre empÃªchÃ©e ou ralentie en prÃ©sence d'inhibiteur. Des inhibiteurs connus de la collagÃ©nase sont les tanins. L'acide tannique sert donc de contrÃ´le positif. 15 Protocole Le test est rÃ©alisÃ© en plaque 96 puits. 5 pL d'Ã©chantillon, soit l'extrait selon l'invention Ã tester, soit l'acide tannique utilisÃ© comme tÃ©moin positif Ã une concentration de 75 1.1g/mL, sont mÃ©langÃ©s Ã 5 tL de collagÃ©nase Ã 10 U/mL (Sigma, C6885), dans un volume de 50 pL de tampon tricine 50 mM. AprÃ¨s une incubation de 5 min Ã tempÃ©rature 20 ambiante, le substrat FALGPA est ajoutÃ© au mÃ©lange rÃ©actionnel (90 1.11_, Ã 0.25 mM, Sigma, F5135). Une cinÃ©tique de 40 min est alors dÃ©marrÃ©e, avec une lecture Ã 325 nm toutes les 5 min. RÃ©sultats L'extrait selon l'invention prÃ©sente une activitÃ© inhibitrice de la collagÃ©nase. En 25 effet, l'extrait selon l'invention Ã 0,5 % prÃ©sente une activitÃ© inhibitrice de la collagÃ©nase de 62,5 %. L'extrait de l'invention prÃ©sente donc une activitÃ© inhibitrice de la collagÃ©nase significative. 3065877 34 Exemple 6 : ActivitÃ© inhibitrice de la hyaluronidase Principe Le rÃ©actif utilisÃ© est le Stains-all (1-ethy1-2-(3-(1-ethylnaphto-(1.2-D)-*thiazolin-2-Y ; 1-ethy1-2-(3-(1-ethylnaphto(1.2-D)), qui forme un complexe colorÃ© bleu avec les 5 oligosaccharides de haut poids molÃ©culaire de l'acide hyaluronique non dÃ©gradÃ© par la hyaluronidase. Les petits fragments issus de la dÃ©gradation de l'acide hyaluronique ne complexent pas avec le Stains-all, ce qui entraÃ®nent une diminution de la coloration. La coloration bleue est dosÃ©e par spectromÃ©trie Ã 650 nm et rend compte de la quantitÃ© d'acide hyaluronique natif prÃ©sent et donc de l'activitÃ© de la hyaluronidase. 10 Protocole Le test est rÃ©alisÃ© en plaque 96 puits. Un volume de 10 uL d'Ã©chantillon, soit l'extrait selon l'invention Ã tester, soit la Quercetine utilisÃ©e comme tÃ©moin positif Ã une concentration de 10 %, est mÃ©langÃ© Ã 90 uL de hyaluronidase 3000 U/mg (Sigma, T7755), dans du Tampon phosphate 200 mM pH 7,4. Un volume de 100 uL du substrat 15 d'acide hyaluronique sont ajoutÃ©s au mÃ©lange rÃ©actionnel (15 mg/5 mL, Sigma, 53747). Une mesure de l'absorbance Ã 650 nm est rÃ©alisÃ©e Ã 37Â°C aprÃ¨s l'addition du Stains-all : 0.00125 % (100 uL, Sigma E9379). RÃ©sultats L'extrait selon l'invention prÃ©sente une activitÃ© inhibitrice de la hyaluronidase. En 20 effet, l'extrait selon l'invention Ã 50 % prÃ©sente une activitÃ© inhibitrice de la hyaluronidase de 21,2 %. Exemple 7 : ActivitÃ© d'inhibition de la glycation Principe La rÃ©action non enzymatique se base sur l'interaction entre des sucres rÃ©ducteurs et des 25 protÃ©ines (la glycation). Ainsi, la glycation est rÃ©alisÃ©e entre le sÃ©rum bovine albumine (B SA) et la glycolaldÃ©hyde. 3065877 Protocole Le test est rÃ©alisÃ© en plaque 96 puits. Un volume de 100 nt d'Ã©chantillon, soit l'extrait selon l'invention Ã tester, soit l'Aminoguanidine utilisÃ© comme tÃ©moin positif Ã une concentration de 1 Â°A, est mÃ©langÃ© Ã 100 nt de BSA Ã 15 mg/mL (Sigma, A9418), dans 5 du tampon PBS. AprÃ¨s une incubation de 1 heure Ã 37Â°C, le substrat glycolaldÃ©hyde est ajoutÃ© au mÃ©lange rÃ©actionnel (50 nL Ã 0.025 M, Sigma, G6805). Une cinÃ©tique de 40 min est alors dÃ©marrÃ©e, avec une lecture de l'absorbance Ã 325 nm toutes les 5 min. AprÃ¨s une incubation de 24 Ã 48h Ã 37Â°C, l'Ã©mission Ã 460 nm d'une excitation Ã 360 nm est mesurÃ©e. 10 RÃ©sultats L'extrait selon l'invention prÃ©sente une activitÃ© inhibitrice de la glycation. En effet, l'extrait selon l'invention Ã 5 % prÃ©sente une activitÃ© inhibitrice de la glycation de 87 %. L'extrait de l'invention prÃ©sente donc une activitÃ© inhibitrice de la glycation significative. 15 Exemple 8 : ActivitÃ© d'inhibition de l'amylase Principe Ce test permet de dÃ©terminer l'action d'un ingrÃ©dient sur l'activitÃ© enzymatique de l'a-amylase, enzyme intervenant dans la dÃ©gradation de l'amidon et la libÃ©ration du glucose. Le substrat utilisÃ© pour tester l'activitÃ© de cette enzyme est 2-Chloro-4-nitrophenyl-a-D- 20 maltotrioside. Lorsque ce substrat est dÃ©gradÃ©, on observe une coloration jaune absorbant Ã 405 nm. L'inhibiteur de rÃ©fÃ©rence utilisÃ© dans ce test est l'acarbose Ã 5 ps/mL. Protocole Une solution Ã©quivalente Ã une prÃ©paration contenant 10 % de phase aqueuse est constituÃ©e. La quantitÃ© de lyophilisat Ã dissoudre dans le tampon est calculÃ©e sur la base 25 de la matiÃ¨re sÃ¨che. Par la suite des dilutions en cascade sont rÃ©alisÃ©es. La valeur de PIC 50 est calculÃ©e Ã partir des rÃ©sultats obtenus. 3065877 36 Un mÃ©lange est rÃ©alisÃ© avec 50 uL d'Ã©chantillon ou tampon (tÃ©moin), 25 uL d'enzyme a-amylase (5 unitÃ©s/mL dans du tampon phosphate). Ce mÃ©lange est incubÃ© pendant 10 min Ã 37Â°C. Un volume de 25 uL de p-NPG (5 mM dans du tampon phosphate) est ensuite rajoutÃ© et le mÃ©lange obtenu est incubÃ© pendant 20 min Ã 37Â°C. Une lecture Ã 405 nm est 5 rÃ©alisÃ©e Ã la suite de cette incubation. L'IC50 sur l'a-amylase est ensuite calculÃ©e pour chaque Ã©chantillon. RÃ©sultats L'extrait selon l'invention prÃ©sente une activitÃ© inhibitrice de l'a-amylase. En effet, l'extrait selon l'invention Ã une dose de 1,5 % prÃ©sente une activitÃ© inhibitrice de 10 l'a-amylase comprise entre 50 et 60 Â°A. L'extrait de l'invention prÃ©sente un IC50 compris 0,1 et 0,2 Â°A. L'extrait de l'invention prÃ©sente donc une activitÃ© inhibitrice de l'a-amylase significative. Exemple 9 : ActivitÃ© d'inhibition de la glucosidase Principe 15 Ce test permet de dÃ©terminer l'action d'un ingrÃ©dient sur l'activitÃ© enzymatique de la glucosidase, enzyme intervenant dans la dÃ©gradation de l'amidon et la libÃ©ration du glucose. Le substrat utilisÃ© pour tester l'activitÃ© de cette enzyme est p-nitrophenyl-alphaD-glucopyranoside. Lorsque ce substrat est dÃ©gradÃ©, on observe une coloration jaune absorbant Ã 405 nm. L'inhibiteur de rÃ©fÃ©rence utilisÃ© dans ce test est l'acarbose Ã 20 10 ug/mL. Protocole Une solution Ã©quivalente Ã une prÃ©paration contenant 10 % de phase aqueuse est constituÃ©e. La quantitÃ© de lyophilisat Ã dissoudre dans le tampon est calculÃ©e sur la base de la matiÃ¨re sÃ¨che. Par la suite des dilutions en cascade sont rÃ©alisÃ©es. La valeur de 25 l'IC50 est calculÃ©e Ã partir des rÃ©sultats obtenus. 3065877 37 Un mÃ©lange est rÃ©alisÃ© avec 60 tL d'Ã©chantillon ou tampon (tÃ©moin), 50 tL d'enzyme aglucosidase (0,2 unitÃ©s/mL dans du tampon phosphate). Ce mÃ©lange est incubÃ© pendant 10 min Ã 37Â°C. Un volume de 50 !IL de substrat p-NPG (5 mM dans du tampon phosphate) est ensuite rajoutÃ© et le mÃ©lange obtenu est incubÃ© pendant 20 min Ã 37Â°C. 5 Une lecture Ã 405 nm est rÃ©alisÃ©e Ã la suite de cette incubation. L'IC50 sur l'a-glucosidase est ensuite calculÃ©e pour chaque Ã©chantillon. RÃ©sultats L'extrait selon l'invention prÃ©sente une activitÃ© inhibitrice de l'a-glucosidase. En effet, l'extrait selon l'invention Ã une dose de 0,78 % prÃ©sente une activitÃ© inhibitrice de 10 l'a-glucosidase d'environ 100 Â°A. L'extrait de l'invention prÃ©sente un IC50 infÃ©rieur Ã 0.06 %. L'extrait de l'invention Ã faible concentration prÃ©sente donc une activitÃ© inhibitrice de l'a-glucosidase trÃ¨s significative. Exemple 10 : ActivitÃ© d'inhibition de la lipase Principe 15 Le test se base sur la dÃ©gradation par la lipase de son substrat. Le produit de la dÃ©gradation du substrat est excitÃ© Ã 520 nm et Ã©met une fluorescence Ã 600 nm. Une diminution de la fluorescence est associÃ©e Ã une non dÃ©gradation du substrat. L'inhibiteur de rÃ©fÃ©rence utilisÃ© dans ce test est l'orlistat Ã 100 p.M. Protocole 20 Le substrat est prÃ©parÃ© en solubilisant 3,75 mg du substrat dans 50 mL de tampon acÃ©tate Ã 50 mM pH 5. Une solution Ã©quivalente Ã une prÃ©paration contenant 10 % de phase aqueuse est constituÃ©e. La quantitÃ© de lyophilisat Ã dissoudre dans le tampon est calculÃ©e sur la base de la matiÃ¨re sÃ¨che. Par la suite des dilutions en cascade sont rÃ©alisÃ©es. La valeur de 25 l'IC50 est calculÃ©e Ã partir des rÃ©sultats obtenus. 3065877 38 Dans une microplaque noire, un mÃ©lange est rÃ©alisÃ© avec 50 1.iL d'Ã©chantillon ou tampon (tÃ©moin), 50 1.1L de substrat (Ã 0,1 mM dans du tampon phosphate) et 50 iaL d'enzyme lipase pancrÃ©atique (1 mg/mL). Ce mÃ©lange est incubÃ© pendant 45 min Ã 40Â°C. Une lecture de l'Ã©mission Ã 610 nm aprÃ¨s excitation Ã 520 nm est rÃ©alisÃ©e au cours de 5 l'incubation (toutes les 2 min). L'IC50 sur l'a-glucosidase est ensuite calculÃ©e pour chaque Ã©chantillon. RÃ©sultats L'extrait selon l'invention prÃ©sente une activitÃ© inhibitrice de la lipase pancrÃ©atique. En effet, l'extrait selon l'invention Ã une dose de 0,78 % prÃ©sente une activitÃ© inhibitrice de 10 la lipase d'environ 100 %. L'extrait de l'invention prÃ©sente un IC50 infÃ©rieur Ã 0,03 Â°A. L'extrait de l'invention prÃ©sente donc une activitÃ© inhibitrice de la lipase trÃ¨s significative Ã faible concentration. Exemple 11 : ActivitÃ© d'inhibition de l'acide y-aminobutyrique transaminase Principe 15 Ce test permet de dÃ©terminer l'action d'un ingrÃ©dient sur l'activitÃ© enzymatique de l'acide y-aminobutyrique transaminase (GABAT) intervenant dans la dÃ©gradation du neurotransmetteur GABA. Lorsque le GABA est catabolisÃ© par le GABAT le NAD est transformÃ© en NADH. La production de ce dernier est suivie Ã 340 nm. L'inhibiteur de rÃ©fÃ©rence utilisÃ© dans ce test est le gamma vinyl GABA (GVG). 20 Protocole Le test est rÃ©alisÃ© en plaque 96 puits. Un tampon de 190 iaL composÃ© de potassium pyrophosphate, a-kÃ©troglutarate, Pyridoxa1-5'-phosphate et NAD+ est rÃ©alisÃ©. Un volume de 20 1.1L d'homogÃ©nat de cerveau de rat contenant le GABAT et un volume de 10 1.1L d'extrait ou de vigabatrine (1 mmol, Y0001400) sont ajoutÃ©s. La microplaque est ensuite 25 incubÃ©e Ã 37Â°C pendant 15 minutes. Le substrat (20 !IL de GABA, 115 mM, Sigma A2129) est ensuite ajoutÃ©. La lecture de l'absorbance s'effectue Ã une longueur d'onde de 340 nm, Ã une tempÃ©rature de 37Â°C, avec Ã un pas de 30 secondes. 3065877 39 RÃ©sultats Les rÃ©sultats sont prÃ©sentÃ©s dans le Tableau 1. Tableau 1 : Ãvaluation de l'effet de l'extrait de l'invention sur l'activitÃ© de l'acide yaminobutyrique transaminase ActivitÃ© de l'acide y- aminobutyrique transaminase (moyenne. n=3) Inhibiteur GVG (vigabatrine) 1 mmol 100 0.33 mmol 100 0.11 mmol 100 0.036 mmol 88 0.01 mmol 86 Extrait d'aiguilles de sapin 5% 100 2.50% 93 1.25% 50 0.60% 27 0.30 % 15 5 Les rÃ©sultats montrent un effet d'inhibition de l'activitÃ© de l'acide y-aminobutyrique transaminase significatif, et cet effet est dose-dÃ©pendant. Exemple 12 : Effets de l'extrait de l'invention in vivo Protocole Des rates Winstar de deux mois au dÃ©but de l'expÃ©rience (170-180 g) ont Ã©tÃ© Ã©levÃ©es dans 10 des cages individuelles. Elles ont Ã©tÃ© acclimatÃ©es pendant une durÃ©e de 2 semaines avant le au dÃ©but de l'expÃ©rience, avec une prise alimentaire d'environ 20 g par jour. Un groupe contrÃ´le de 3 individus ont ensuite Ã©tÃ© soumis Ã un rÃ©gime standard A04 comprenant 3339 kcal par kg de pellet (soit 16 % de protÃ©ines, 3 % de lipides, et 60 'vo de carbohydrates). Deux autres groupes de 3 individus ont Ã©tÃ© soumis Ã un rÃ©gime gras 15 206HF comprenant 5505,3 kcal par kg de pellet (soit 20 % de protÃ©ines, 36 % de lipides et 36,7 % de carbohydrates). Parmi ces 2 groupes, un groupe a reÃ§u l'extrait de l'invention 3065877 Ã une dose de 100 mg par jour dÃ¨s le dÃ©but du rÃ©gime gras ; l'autre a reÃ§u un placebo (eau). L'extrait de l'invention a Ã©tÃ© obtenu selon le protocole d'extraction avec huile dÃ©crit dans l'Exemple 1, lyophilisÃ© puis conservÃ© Ã tempÃ©rature ambiante jusqu'Ã utilisation. Avant 5 administration, l'extrait a Ã©tÃ© prÃ©parÃ© Ã 10 % (soit 10 g d'extrait lyophilisÃ© pour 100 mL d'eau) et stockÃ© Ã 4Â°C. L'extrait a Ã©tÃ© administrÃ© aux rates par gavage de 1,0 mL/j our (soit 100 mg/jour), du lundi au vendredi (soit un total de 700 mg en une semaine). L'expÃ©rience a Ã©tÃ© rÃ©alisÃ©e sur une pÃ©riode de 8 semaines, les individus ayant Ã©tÃ© pesÃ©s 2 fois par semaine et la prise alimentaire mesurÃ©e 1 fois par semaine. Au terme de la 10 pÃ©riode de 8 semaines, les rates ont Ã©tÃ© soumises Ã un jeÃ»ne d'un jour puis sacrifiÃ©es. Les individus ont Ã©tÃ© pesÃ©s ; leurs organes ont Ã©tÃ© prÃ©levÃ©s, pesÃ©s puis stockÃ©s Ã -80Â°C. Un prÃ©lÃ¨vement de sang a Ã©galement Ã©tÃ© rÃ©alisÃ©, ainsi qu'un bilan lipidique et glycÃ©mique. RÃ©sultats Les rÃ©sultats du poids des organes en fonction du rÃ©gime alimentaire et de l'administration 15 d'un extrait selon l'invention sont prÃ©sentÃ©s dans la Figure 1. Le poids de la graisse sous- cutanÃ©e et du foie des animaux soumis Ã un rÃ©gime gras et traitÃ©s avec un extrait de l'invention est similaire Ã celui du groupe contrÃ´le soumis Ã un rÃ©gime normal et non traitÃ©s. Au contraire, le groupe contrÃ´le soumis Ã un rÃ©gime gras mais non traitÃ©s par l'extrait de l'invention prÃ©sente un poids Ã©levÃ© de ces deux organes. 20 Le poids des autres organes, pancrÃ©as, reins, gastrocnemius et plantaris, reste stable quel que soit le rÃ©gime alimentaire. L'administration in vivo d'un extrait selon l'invention permet donc de rÃ©duire le poids de certains organes, et plus spÃ©cifiquement de rÃ©duire le poids de la graisse sous-cutanÃ©e et du foie. 25 Les rÃ©sultats du poids des animaux en fonction du rÃ©gime alimentaire et de l'administration d'un extrait selon l'invention sont prÃ©sentÃ©s dans la Figure 2. La courbe de poids des animaux soumis Ã un rÃ©gime gras et traitÃ©s avec un extrait de l'invention est 3065877 41 similaire Ã celle du groupe contrÃ´le soumis Ã un rÃ©gime normal et non traitÃ©s, contrairement au groupe soumis Ã un rÃ©gime gras et non traitÃ©s. L'administration d'un extrait selon l'invention permet donc de limiter la prise de poids. En outre, il a Ã©tÃ© observÃ© une diminution des triglycÃ©rides, tandis que le taux de 5 cholestÃ©rol 1-1DL reste stable (Figure 3). D'aprÃ¨s l'ensemble de ces rÃ©sultats, l'extrait de l'invention peut donc Ãªtre utilisÃ© pour rÃ©duire la masse corporelle d'un individu, et Ã©galement limiter et/ou rÃ©duire la prise de poids chez un individu. Exemple 13 : Analyses phytochimiques des extraits de l'invention 10 Des extraits aqueux selon l'invention ont Ã©tÃ© prÃ©parÃ©s selon les protocoles d'extraction 1 et 2 dÃ©crits dans l'Exemple 1. Une analyse phytochimique a ensuite Ã©tÃ© rÃ©alisÃ©e. L'extrait 1 comprend 9,09 mg de manganÃ¨se pour 100 g d'extrait, et l'extrait 2 en comprend 9,49 mg. REVENDICATIONS1. Extrait aqueux d'aiguilles de sapin, caractÃ©risÃ©e en ce qu'il comprend de 5 Ã 50 % de composÃ©s polyphÃ©noliques en poids par rapport au poids total de l'extrait sec ; de 0 Ã 40 % de sucres en poids par rapport au poids total de l'extrait sec ; de 0 Ã 30 % de protÃ©ines en poids de protÃ©ines par rapport au poids total de l'extrait sec ; et de 2 Ã 30 % de masse sÃ¨che en poids par rapport au poids total de l'extrait. 2. Composition comprenant un extrait aqueux d'aiguilles de sapin selon la revendication 1 en association avec au moins un excipient acceptable. 3. Composition selon la revendication 2, caractÃ©risÃ©e en ce que l'excipient est cosmÃ©tiquement acceptable et que la composition est sous forme de gel, lait, crÃ¨me, lotion, Ã©mulsion, huile, baume ou onguent. 4. Composition selon la revendication 2, caractÃ©risÃ©e en ce que l'excipient est nutraceutiquement acceptable et que la composition est sous forme solide, liquide ou gel, notamment sous forme poudre, comprimÃ© sÃ©cable ou non, pelliculÃ© ou non, sous forme orodispersible, ou encore sous forme de granule, de capsule, de gÃ©lule, d'ampoule. 5. Actif cosmÃ©tique ou dermocosmÃ©tique caractÃ©risÃ© en ce qu'il comprend un extrait aqueux d'aiguilles de sapin selon la revendication 1 ou une composition selon l'une quelconque des revendications 2 Ã 4. 6. Actif nutraceutique, caractÃ©risÃ© en ce qu'il comprend un extrait aqueux d'aiguilles de sapin selon la revendication 1 ou une composition selon l'une quelconque des revendications 2 Ã 4. 7. Utilisation d'un extrait aqueux d'aiguilles de sapin selon la revendication 1, d'une composition selon l'une quelconque des revendications 2 Ã 4 ou d'un actif selon l'une des revendications 5 ou 6, en tant qu'agent amincissant, notamment pour 3065877 43 limiter et/ou rÃ©duire la prise de poids ; et/ou rÃ©duire, maintenir et/ou amÃ©liorer le poids corporel chez un individu. 8. Utilisation d'un extrait aqueux d'aiguilles de sapin selon la revendication 1, d'une composition selon l'une quelconque des revendications 2 Ã 4 ou d'un actif selon 5 l'une des revendications 5 ou 6, en tant qu'agent antiÃ¢ge et/ou agent lissant de la peau, notamment pour prÃ©venir et/ou attÃ©nuer le vieillissement de la peau et/ou l'apparition des signes de vieillissement de la peau. 9. Utilisation d'un extrait aqueux d'aiguilles de sapin selon la revendication 1, d'une composition selon l'une quelconque des revendications 2 Ã 4 ou d'un actif selon 10 l'une des revendications 5 ou 6, pour la prÃ©paration d'une composition antioxydante et/ou cicatrisante. 10. Utilisation d'un extrait aqueux d'aiguilles de sapin selon la revendication 1, d'une composition selon l'une quelconque des revendications 2 Ã 4 ou d'un actif selon l'une des revendications 5 ou 6, en tant qu'agent Ã©claircissant de la peau, 15 notamment des peaux ethniques, ou pour lutter contre l'hyperpigmentation de zones de la peau, en particulier contre les tÃ¢ches de pigmentation liÃ©es Ã l'Ã¢ge. 11. Utilisation d'un extrait aqueux d'aiguilles de sapin selon la revendication 1, d'une composition selon l'une quelconque des revendications 2 Ã 4 ou d'un actif selon l'une des revendications 5 ou 6, en tant qu'agent hydratant de la peau, pour protÃ©ger 20 l'hydratation de la peau et/ou pour hydrater la peau. 12. MÃ©thode de soin cosmÃ©tique, non thÃ©rapeutique, comprenant l'administration d'un extrait aqueux d'aiguilles de sapin selon la revendication 1, d'une composition selon l'une quelconque des revendications 2 Ã 4 ou d'un actif selon l'une des revendications 5 ou 6.