FR 3068218 A1 20190104 FR 1756153 A 20170630 La présente invention a pour objet un mélange antibactérien contenant du 4-(3-éthoxy-4- hydroxyphényl)butan-2-one et de la chlorphénésine, ainsi qu'une composition cosmétique contenant un tel mélange. Le 4-(3-éthoxy-4-hydroxyphényl)butan-2-one (composé cétonique) est une substance in- téressante en tant que conservateur de compositions cosmétiques pour protéger les compositions de la contamination microbienne, comme décrit dans la demande VVO 2011/039445. Toutefois, il est souhaitable de pouvoir incorporer ledit composé cétonique en concentra- tion réduite dans des compositions, notamment cosmétiques ou dermatologiques, tout en conservant une bonne performance de conservation antimicrobienne. Il est donc recherché à cet effet des associations du composé cétonique avec d'autres avec d'autres composés ayant une efficacité antimicrobienne. Les inventeurs ont découvert, de façon inattendue, que l'association du 4-(3-éthoxy-4- hydroxyphényl)butan-2-one avec la chlorphénésine permet d'obtenir un mélange antimicrobien présentant une synergie d'activité antimicrobienne, en particulier sur les moisissures, notamment sur Aspergillus figer. Les résultats de l'exemple 1 décrit ci-après montrent l'activité antimicrobienne synergique obtenue avec les mesures de concentrations minimales inhibitrices (CMI) faites avec plusieurs mélanges. L'activité antimicrobienne est considérée comme étant synergique lorsque le mélange antimicrobien permet d'obtenir un pourcentage de croissance de la souche inférieur ou égal à 25 %, voire inférieur ou égal à 20 %. De façon plus précise, l'invention a pour objet un mélange antimicrobien comprenant, ou constitué (ou consistant en), de la 4-(3-éthoxy-4-hydroxyphényl)butan-2-one et de la chlorphénésine. L'invention a également pour objet une composition, notamment cosmétique ou dermato- logique, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, le dit mélange décrit précédemment. L'invention a encore pour objet un procédé de traitement cosmétique non thérapeutique des matières kératiniques comprenant l'application sur les matières kératiniques d'une composition telle que décrite précédemment. Le procédé peut être un procédé cosmé- tique de soin ou de maquillage ou de nettoyage des matières kératiniques. La 4-(3-éthoxy-4-hydroxyphényl)butan-2-one est un composé de formule 2 HO La chlorphénésine correpsond au composé 3-(4-Chlorophenoxy)-1,2-propanediol (n° CAS: 104-29-0) de formule : 5 Avantageusement, la 4-(3-éthoxy-4-hydroxyphényl)butan-2-one et de la chlorphénésine sont présents dans ledit mélange en une teneur telle que le ratio pondéral 4-(3-éthoxy-4- 10 hydroxyphényl)butan-2-one / chlorphénésine va de 0,1 à 0,9, de préférence allant de 0,1 à 0,7, et préférentiellement allant de 0,15 à 0,6. Le composé 4-(3-éthoxy-4-hydroxyphényl)butan-2-one peut être présent dans la composition selon l'invention, en une teneur allant de 0,01 % à 5 % en poids, par rapport au poids 15 total de la composition, de préférence allant de 0,01 % à 3 % en poids, préférentiellement allant de 0,01 à 2, 5 % en poids, et plus préférentiellement allant de 0,01 à 2 % en poids. L'invention a aussi pour objet une composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, le mélange antimicrobien décrit précédemment. On entend par milieu physiologiquement acceptable, un milieu compatible avec les matières kératiniques d'êtres humains tels que la peau, le cuir chevelu, les cheveux, les ongles. Le dit milieu peut comprendre un ou plusieurs ingrédients additionnels, distinct du composé cétonique et du chlorphénésine. La composition peut comprendre au moins un ingrédient additionnel choisi parmi l'eau, les huiles, les polyols ayant de 2 à 10 atomes de carbone, les gélifiants, les tensioactifs, les polymères filmogènes, les matières colorantes, les parfums, les charges, les filtres UV, les extraits végétaux, les actifs cosmétiques et dermatologiques, et les sels. 20 25 30 3 La composition selon l'invention peut comprendre une phase aqueuse. La composition peut comprendre de l'eau qui peut être présente en une teneur allant de 5 % à 90 % en poids, par rapport au poids total de la composition, et de préférence allant 5 de 35 % à 75% en poids. La composition peut comprendre en outre un polyol miscible à l'eau à la température ambiante (25 °C) notamment choisi parmi les polyols ayant notamment de 2 à 10 atomes de carbones, de préférence ayant de 2 à 6 atomes de carbone, tels que la glycérine, le pro- 10 pylène glycol, le 1,3-propanediol, le butylène glycol, le pentylène glycol, l'hexylène glycol, le dipropylène glycol, le diéthylène glycol, la diglycérine. Avantageusement, la composition selon l'invention comprend du 1,3-propanediol, notamment en une teneur allant de 0,1 à 20 % en poids, par rapport au poids total de la composition, et de préférence allant de 0,1 à 10 % en poids, préférentiellement allant de 0,5 à 5 % en poids. 15 Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous forme d'émulsions huiledans-eau (H/E) ou eau-dans-huile (E/H) ou multiple (triple : E/H/E ou H/E/H), de solutions huileuses, de gels huileux, de solutions aqueuses, de gels aqueux, de compositions solides. Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles. 20 Les compositions selon l'invention peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse. Elles peuvent être éventuellement appliquées sur la peau sous forme d'aérosol. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, et par exemple sous 25 forme de stick ou de poudre compacte. La composition selon l'invention peut notamment se présenter sous la forme : - d'un produit de maquillage, notamment de la peau du visage, du corps ou des lèvres ou des cils 30 - d'un gel ou lotion après-rasage; de produit de rasage ; - d'un déodorant (stick, roll-on, aérosol) - d'une crème dépilatoire; - sous la forme d'une composition d'hygiène corporelle telle qu'un gel douche ou un shampooing; 35 - d'une composition pharmaceutique; - d'une composition solide telle qu'un savon ou un pain de nettoyage; - d'une composition aérosol comprenant également un agent propulseur sous pression.; - d'une lotion de mise en plis, d'une crème ou d'un gel coiffant, d'une composition de teinture, d'une composition de permanente, d'une lotion ou d'un gel antichute, d'un après shampooing ; - d'une composition de soin ou de nettoyage de la peau. 4 L'invention a aussi pour objet un procédé de préparation d'une composition, notamment cosmétique ou dermatologique, comprenant une étape de mélange du 4-(3-éthoxy-4- hydroxyphényl)butan-2-one, de la chlorphénésine, et d'un ou plusieurs ingrédients additionnels, notamment cosmétiques ou dermatologiques, tels que ceux décrits 5 précédemment. L'invention est illustrée plus en détail dans l' exemple suivant. Les teneurs des ingrédients sont exprimées en pourcentage pondéral. 10 Exemple 1: détermination de la synergie d'activité antimicrobienne en CMI sur la souche microbienne Aspergillus figer La démonstration d'un effet de synergie d'activité antimicrobienne avec un mélange de 4-(3-éthoxy-4-hydroxyphényl)butan-2-one (appelée substance A) et de chlorphénésine 15 (appelée substance B) est réalisé par le calcul de l'indice de synergie (ou FIC index), se- lon la formule suivante FIC Index = (CMIa avec B/CMIa) + (CMIb avec A/CM1b) avec : 20 - CMIa avec B: concentration minimale en produit A dans l'association A + B per- mettant d'obtenir un effet inhibiteur - CMIb avec A: concentration minimale en produit B dans l'association A + B permettant d'obtenir l'effet inhibiteur. - CMIa : concentration minimale inhibitrice du produit A seul. 25 - CMIb : concentration minimale inhibitrice du produit B seul. Cette formule a été décrite pour la première fois dans l'article de F.C. Kull, P.C. Eisman, H.D. Sylwestrowka, and R.L. Mayer, Applied Microbiology 9:538-541, 1961. Pour chaque composé testé seul, la CMI est considérée comme la première concentra- 30 tion permettant l'obtention d'un pourcentage de croissance microbienne inférieur ou égal à 25%,. Concernant les associations testées, CMIa avec b et CMIb avec a sont les concentrations respectives de A et de B dans les associations permettant l'obtention d'un pourcentage de 35 croissance microbienne inférieur ou égal à 25%. Interprétation du FIC Index : Lorsque la valeur du FIC index est inférieure ou égale à 1, on considère que l'association des composés testés présente un effet synergique. 40 La synthèse des résultats obtenus est présentée dans les tableaux suivants. On a utilisé la souche microbienne Aspergillus figer ATCC 6275, et un milieu de culture liquide bouillon Sabouraud additionné de monopalmitate de sorbitane polyoxyéthyléné (20 0E) (Tween 40 de chez Croda) et de Phytagel© BioReagent, à double concentration.(soit un mélange de 5 g de Phytagel +0,6 g tween 40 + 60g bouillon Sabouraud). On utilise une microplaque 96 puits à une température d'incubation de 32,5 °C. La durée d'incubation de la microplaque est de 24 à 48h en aérobiose. 5 Essai Pour chaque composé : A = composé 4-(3-éthoxy-4-hydroxyphényl)butan-2-one B = composé chlorphénésine 5 On a préparé une solution mère à 10 % (poids/volume) en mélangeant 1 g de composé dans 9 ml de solution aqueuse d'agar à 1%0 . des dilutions successives ont été effectuées avec la solution d'agar à 1%0 - Essai des composés A et B seul 50pL de chacune des solutions filles obtenues contenant le composé A ou B est ajouté 10 dans les puits de la microplaque. On y ajoute également 100p1 de bouillon nutritif liquide de Sabouraud ensemencé par la souche Aspergillus figer et 50pL de solution aqueuse d'agar à 1%0 . - Essai des composés A et B en mélange 50pL de chacune des solutions filles obtenues contenant le composé A et 50pL de cha- 15 cune des solutions filles obtenues contenant le composé B sont ajoutées dans les puits de la microplaque. On y ajoute également 100p1 de bouillon nutritif liquide de Sabouraud ensemencé à double concentration par la souche Aspergillus figer. Témoin de croissance microbienne On a également réalisé un témoin positif de croissance microbienne. Le témoin positif de 20 croissance microbienne correspond au mélange de 100p1 d'une solution aqueuse d'agar 1%0 avec 100p1 de bouillon nutritif liquide de Sabouraud ensemencé à double concentration par la souche Aspergillus figer en l'absence des composés A et B. Témoin d'absorbance des composés A et B seul On a réalisé parallèlement un témoin d'absorbance des composés A et B seul. Ce témoin 25 correspond à 100p1 de bouillon nutritif liquide de Sabouraud stérile à double concentration + 100p1 du composé A ou B à double concentration. Dans les trois cas (témoin absorbance, témoin de croissance et essai) le volume final présent dans chacun des puits de la microplaque est de 200pL. Dans les deux cas (essai et témoin), l'inoculum représente la concentration de la souche 30 Aspergillus figer présente dans le volume final des puits (200pL) et est compris entre 2 et 6.105 ufc/ml en Aspergillus figer. La concentration minimale inhibitrice (CM1) de chaque composé A et B seul et en association a été déterminée de façon connue à l'aide des mesures de densité optique à la longueur d'onde de 620 nm. 35 On a obtenu les résultats suivants : concentrations testées (en % poids) 0 A 0,0625 A 0,125 A 0,25 A 0 B 79 41 5 0,0125 B 71 46 26 2 0,25B 38 3 2 2 (FIC 0,75) (FIC 1) 6 0,5 B 1 1 1 2 CMI A seul en % CMI B seul en % CMI de composé chaque en mélange FIC Index A% B% 0,25 0,5 0,0625 0,25 0,75 Synergie Ratio A/B = 0,25 Les résultats obtenus montrent une synergie de l'activité inhibitrice pour les mélanges : i) 0,0625 % de A et 0,25 % de B soit ratio A/B = 0,25 5 ii) 0,125 % de A et 0,25 % de B soit ratio A/B = 0,5 Exemple 2 : détermination de l'activité antimicrobienne du mélange antimicrobien 10 L'efficacité antimicrobienne du mélange antimicrobien 4-(3-éthoxy-4- hydroxyphényl)butan-2-one + chlorphénésine (rapport pondéral respectif de 0,16) a été évaluée par la méthode du Challenge Test. Protocole 15 La méthode du challenge-test consiste en une contamination artificielle de l'échantillon par des souches microbiennes de collection (bactéries, levures et moisissures) et en une évaluation du nombre de micro-organismes revivifiables sept jours après l'inoculation. Afin de mettre en évidence l'effet du mélange antimicrobien l'activité antimicrobienne 20 d'une formule cosmétique contenant 0,05 % de 4-(3-éthoxy-4-hydroxyphényl)butan-2-one et 0,3 % de chlorphénésine a été comparée avec la même formule seule (témoin), après inoculation d'environ 106 UFC (Unités formant des colonies)/gramme de formule cosmétique. 25 Formule cosmétique On a préparé une émulsion huile-dans-eau de soin du visage ayant la composition suivante (teneurs en pourcentage pondéral) : Tristéarate de sorbitan (SPAN 65 V de chez Croda) 0,9 % Mélange mono/distéarate (36/64) de glycéryle / stéarate de potassium (Tegin Pellets de chez Goldschmidt) 3 % Stéarate de polyéthylèneglycol (40 motifs d'oxyde d'éthylène) 2 % 4-(3-éthoxy-4-hydroxyphényl)butan-2-one 0,05 % Chlorphénésine 0,3 % Propane-1,3-diol 3 % Mélange d'huile minérale, de cire microcristalline et de paraffine (VASELINE BLANCHE CODEX 236 de chez Aiglon) 4 % Fraction liquide de beure de karité (Shea Olein de chez Olvea) 1 % 30 35 7 Cyclopentadimethylsiloxane 5 % Alcool cétylique 4 % Huile de noyau d'abricot 0,3 % Polyisobutène hydrogéné (PARLEAM de chez NOF Corporation) 7,2 % 5 Myristate de myristyle 2 % Acide stéarique 1,2 % Caféine 0,1 % Acide citrique 0,2 % Glycérine 3 % 10 Hydroxyde de sodium 0,05% Eau qsp 100% Formule témoin A: Formule similaire à la précédente contenant 0,05 % 4-(3-éthoxy-4- hydroxyphényl)butan-2-one et sans chlorphénésine (0,3 % compensé par 15 l'eau) Formule témoin B: Formule similaire contenant 0,3 % de chlorphénésine et sans 4-(3- éthoxy-4-hydroxyphényl)butan-2-one (0,05 % compensé par l'eau 20 Cultures de microorganismes 5 cultures pures de microorganismes ont été utilisées. GERMES Milieu de repiquage T° ATCC Escherichia cou i (Ec) Trypto-caséine soja 35°C 8739 Enterococcus faecalis (Ef) Trypto-caséine soja 35°C 33186 Pseudomonas aeruginosa (Pa) Trypto-caséine soja 35°C 19429 Candida albicans (Ca) Sabouraud 35°C 10231 Aspergillus figer (An) Malt 35°C 6275 ATCC = American Type Culture Collection 25 Les souches de bactéries gram - (Escherichia cou i et Pseudomonas aeruginosa), bactérie gram + (Enterococcus faecalis), levure (Candida albicans), et moisissure (Aspergillus niger) sont ensemencées dans du milieu de repiquage, respectivement la veille de 30 l'inoculation pour les bactéries et la levure, et 5 jours avant l'inoculation pour la moisis- sure. Le jour de l'inoculation : - on prépare respectivement pour les bactéries et la levure, une suspension dans du di- 35 luant Tryptone sel, de manière à obtenir au spectrophotomètre une suspension de densité optique comprise entre 35% et 45% de lumière transmise à 544 nm; - pour la moisissure, on prélève les spores en lavant l'agar avec 6 à 7 ml de solution de 8 récolte et on récupère la suspension dans un flacon ou un tube stérile. Après avoir homogénéisé la suspension microbienne, on introduit dans chaque pilulier 0,2 ml d'inoculum (les suspensions sont utilisées pures: entre 1x108 et 3x108 UFC par ml) et 5 on homogénéise parfaitement à l'aide d'une spatule la suspension microbienne dans les 20 g de produit (= formule cosmétique). Le taux de micro-organismes présents dans le produit correspond après homogénéisation à une concentration de 106 germes par gramme de produit soit l'inoculation à 1% d'un 10 inoculum à 108 germes par ml. Après 7 jours de temps de contact entre les germes et le produit à 22°C ± 2°C et à l'obscurité, on réalise des dilutions décimales et on dénombre le nombre de microorganismes revivifiables restant dans le produit. 15 Résultats Nb d'UFC/ gramme de produit à T7 jours E.coli P. aerugi- E. faecalis C. albi- A. figer nosa cans Mélange anti- REVENDICATIONS1. Mélange antimicrobien comprenant de la 4-(3-éthoxy-4-hydroxyphényl)butan-2-one et de la chlorphénésine. 5 2. Mélange antimicrobien selon la revendication précédente, caractérisé en ce qu'il comprend du 4-(3-éthoxy-4-hydroxyphényeutan-2-one et de la chlorp.hénésine en .quantités telles que le rapport. pondéral 4-(3-éthoxy-4-hydroXyphényl)butan-2one / chlorphénésine va de 0,1 à 0,9., -de préférence va de 0,1 à 0,7, et: préférentiellement va de 10 0,15 à 0.,.6.. 3, Mélange antimicrobien selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il a une activité antimicrobien à l'encontre des moisissures, en particulier sur Aspergiesniger. 15 4. Composition .comprenant, dans un .milieu physiologiquement acceptable, un mélange antimicrobien selon l'une des revendications 1 à 3. 5. Composition selon la revendication précédente, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un ingrédient additionnel choisi parmi l'eau, les huiles, les polyols ayant de 2 à 10 20 atomes de carbone, les gélifiants, les tensioactifs, les polymères filmogènes, les matières colorantes, les parfums, les charges, les filtres UV, les extraits végétaux, les actifs cosmétiques et dermatologiques, et les sels. 6. Composition selon l'Une desrevendications 4 ou 5, caractérisée en ce que la 4-(3-éthoxy25 4-hydroxyphényl)butan-2-one est présente en une teneur allant de 0,01 .% â 5 % en poids, par rappôrt au poids total de la composition, de préférence allant de 0,01 % à 3 % en poids, et préférentiellement allant de .0,01 à 2,5 % en poids.