FR 3073140 A1 20190510 FR 1760496 A 20171108 Composition pour améliorer la santé des animaux d'élevage L'invention concerne une composition pour améliorer la santé des animaux, notamment des mammifères d'élevage. Les mammifères naissent avec un tube digestif stérile. L'apparition de la flore intestinale dépend donc, essentiellement, de l'environnement et des particularités physiologiques de chaque espèce. Dans ces conditions, c'est le colostrum ingéré pendant les premiers jours de vie qui protègera en principe le nouveau-né contre les infections digestives. Cette protection n'est possible que si le colostrum maternel est lui-même qualitativement et quantitativement adapté et approprié. La protection immunitaire mammaire prend pour point de départ un processus immunitaire intestinal ce qui impacte inévitablement la mise en place de cette immunité. Il en résulte l'apparition possible d'infections néonatales chez le jeune mammifère dès la 24ème ou 48ème heure de vie, en raison d'une protection insuffisante et ce jusqu'au 21ème jour, date d'apparition de l'immunité locale. L'industrie des aliments pour animaux est de plus en plus considérée comme ayant un rôle à jouer pour assurer l'utilisation responsable des antimicrobiens alimentaires dans la production animale. Les décideurs demandent aux producteurs d'aliments pour animaux, aux agriculteurs, aux vétérinaires et aux organismes de réglementation de travailler ensemble pour déterminer les meilleures pratiques d'élevage et d'hygiène et des alternatives viables, afin de réduire l'utilisation d'antibiotiques chez les animaux d'élevage et d'améliorer le bien-être des animaux. Pour répondre aux nouvelles exigences de l'agriculture moderne, et tenant compte des contraintes biologiques des mammifères, il est nécessaire de mettre au point une méthode de protection de l'environnement d'élevage et de la flore intestinale des 25 nouveau-nés. L'art antérieur propose des applications sur les mamelles des femelles dans le but de traiter les mammites, par exemple la demande RU2612009. Toutefois, ces méthodes ont pour objectif de traiter les mamelles des femelles, mais ne visent pas à améliorer la santé des nouveau-nés. 30 D'autres méthodes connues de l'état de la technique visent quant à elles à traiter l'environnement d'élevage des nouveau-nés afin de favoriser leur croissance et leur bien-être. Malgré ces tentatives, le besoin de proposer une amélioration des conditions favorable au bon développement des nouveau-nés demeure. 35 L'invention vise à remédier à ce manque. Un objet de l'invention est de proposer une méthode de prévention des risques sanitaires et d'amélioration de la performance de l'élevage de mammifères, ainsi qu'une 2 composition microbienne. Aussi, l'invention concerne une composition comprenant ou consistant essentiellement en un mélange : a. d'au moins une souche de bactérie du genre Bacillus, notamment une souche de 5 Bacillus subtilis, et b. d'au moins une souche de bactérie lactique, pour son utilisation dans le cadre de la prévention ou le traitement des infections contractées par un nouveau-né de mammifères d'élevage au moment de la naissance, notamment les infections digestives ou respiratoires, 10 ladite composition étant appliquée, sur le périnée et/ou sur la ou les mamelles de la femelle allant donner ou ayant donné naissance audit nouveau-né de mammifères d'élevage, l'application étant réalisée avant et/ou après la mise-bas. L'invention repose sur la constatation surprenante faite par les inventeurs que l'utilisation combinée d'au moins une souche de bactérie lactique et au moins une souche 15 de Bacillus, lorsqu'elles sont appliquées, avant ou après la mise bas, sur le périnée et/ ou la ou les mamelles de femelles permettent de protéger, dès le plus jeune âge (dès la mise bas), les nouveau-nés contre les infections néfastes à leur développement, et ainsi favoriser et améliorer leur croissance. La composition telle qu'utilisée dans l'invention présente l'avantage d'avoir une action 20 interne à l'animal et dans son environnement extérieur, permettant de créer une flore de barrière dès le plus jeune âge. Dans l'invention, par « mamelles et/ou périnée », on entend que l'application se fait soit sur le périnée seul, soit sur une ou plusieurs mamelles seules, soit en combinant des applications sur le périnée et au moins sur une mamelle, voire toutes les mamelles. Avantageusement, dans l'invention une application sur le périnée peut couvrir soit une application sur le périnée seul, soit une application intra vaginale, soit une application à la fois sur le périnée et intra vaginale. Avantageusement, dans l'invention, une application sur la ou les mamelles correspond à une application externe réalisée sur les mamelles des femelles 30 mammifères, mais peut aussi correspondre à une application intra mammaire desdites mamelles desdites femelles de mammifères. Les applications intra mammaires sont réalisées au moyen, par exemple, de seringues introduites dans le conduit des trayons des mamelles desdites femelles de mammifères. L'homme du métier connaît les techniques les plus appropriées pour 35 réaliser de telles applications intra mammaires. Dans l'invention il est important que ce soit la femelle qui met bas le nouveau-né à traiter qui reçoive l'application de la composition susmentionnée. En effet, l'intérêt est 3 que le nouveau dès qu'il est expulsé de l'utérus de la femelle soit en contact avec le périnée traité, et/ou que ses premières tétées se fassent sur une mamelle traitée. Par « au moins une souche de bactérie du genre Bacillus» on entend qu'une souche, ou deux souches, ou trois souches ou plus de Bacillus peuvent être utilisées dans le 5 contexte de l'invention. De la même manière, par « au moins une souche de bactérie lactique », on entend qu'une souche, ou deux souches, ou trois souches ou plus, peuvent être utilisées dans la composition définie ci-dessus. Par souche de bactéries, on entend dans l'invention l'ensemble des individus (bactéries) issus de repiquages successifs d'une colonie bactérienne. 10 En d'autres termes, une souche est une partie d'une espèce bactérienne différente des autres bactéries de la même espèce par une différence mineure mais identifiable. Une souche est également définie comme une population de bactéries qui descend d'un seul organisme ou de la culture isolat pur. Les souches d'une même espèce peuvent différer légèrement de l'autre à bien des égards. 15 L'application sur le périnée et/ou la ou les mamelles est réalisée dans des conditions où la totalité ou la quasi-totalité des parties soient recouvertes par la composition selon l'invention. En effet, il n'est pas forcément nécessaire que la partie traitée soit complètement recouverte, l'essentiel est que la quantité de composition soit suffisante pour que le nouveau-né soit en contact avec suffisamment de bactéries pour le protéger 20 contre les infections. L'application de la composition selon l'invention étant réalisée avant et/ou après la mise bas, cela signifie que - la composition est appliquée sur le périnée, avant, après ou avant et après la mise bas, 25 - la composition est appliquée sur la ou les mamelles, avant, après ou avant et après la mise bas, ou encore - la composition est appliquée sur le périnée et la ou les mamelles, avant, après ou avant et après la mise bas. Les applications mamelles et/ou périnée peuvent être réalisées simultanément, 30 séparément ou étalées dans le temps. Avantageusement, l'invention concerne la composition pour l'utilisation susmentionnée, dans laquelle la composition bactérienne comprend : - au moins l'une des trois souches de Bacillus subtilis suivantes : NOL01, NOL02, NOL03, lesdites souches étant déposées à la CNCM sous les numéros respectifs : 35 CNCM 1 - 4606, CNCM 1-5043 et CNCM 1 - 4607, et - au moins la souche de bactérie lactique: Lactococcus lactis spp lactis 1 souche NOL11, ladite souche étant déposée à la CNCM sous le numéro CNCM 1 - 4609. 4 L'invention concerne l'utilisation d'au moins une souche choisie parmi les souches NOL01, NOLO2 et NOLO3 et au moins la souche NOL11. Aussi, l'invention couvre les 7 combinaisons suivantes : - NOLO1 et NOL11, 5 - NOLO2 et NOL11, - NOLO3 et NOL11, - NOL01, NOLO2 et NOL11, - NOL01, NOLO3 et NOL11, - NOL02, NOLO3 et NOL11, et 10 - NOL01, NOL02, NOLO3 et NOL11. Toutes ces souches ont été déposées à la collection nationale des microorganismes (CNCM) à l'Institut Pasteur à Paris, selon le traité de Budapest. Plus avantageusement, l'invention concerne la composition pour son utilisation susmentionnée, ladite composition comprenant de 104 à 1011 colonies bactériennes de 15 Bacillus et de 104 à 1011 colonies bactériennes de bactérie lactique, les colonies bactériennes étant par mL ou g de composition. En d'autres termes, dans ce mode de réalisation avantageux, si la composition selon l'invention est sous forme liquide, ladite composition comprendra de 104 à 1011 colonies bactériennes de Bacillus par mL de composition et de 104 à 1011 colonies bactériennes 20 de bactérie lactique par mL de composition. Si par contre la composition est sous forme non aqueuse, voire déshydratée, ladite composition comprendra de 104 à 1011 colonies bactériennes de Bacillus par g de composition et de 104 à 1011 colonies bactériennes de bactérie lactique par g de composition. 25 Dans l'invention, de 104à 1011 colonies bactériennes signifie : environ 104, environ 5. 104, environ 105, environ 5.105, environ 106, environ 5.106, environ 107, environ 5.107, environ 108, environ 5.108, environ 109, environ 5.109, environ 1010, environ 5.1010 ou environ 1011 colonies bactériennes. Une application particulière pour la femelle mammifère est de 105 à 1011 colonies 30 bactériennes par femelle, pour chacune des applications. C'est-à-dire que chaque bactérie sera présente de 105 à 1011 colonies bactériennes par femelle pour l'application périnée, et de 105 à 1011 colonies bactériennes par femelles pour l'application mamelle. L'homme du métier sait aisément comment déterminer ce nombre de bactéries, notamment par comptage soit manuel (en utilisant une lame de Malassez) ou en utilisant 35 un compteur de cellule automatique, ou par dilution puis ensemencement sur gélose et comptage des colonies. Encore plus avantageusement, l'invention concerne l'utilisation telle que définie 5 précédemment, où ladite au moins une souche de Bacillus est sous forme sporulée et/ou sous forme végétative. Les bactéries lactiques sont quant à elle toujours sous forme végétatives. Aussi la composition selon l'invention comprend au moins une souche de Bacillus sous forme 5 sporulée et au moins une souche de bactérie lactique sous forme végétative, ou comprend au moins une souche de Bacillus sous forme végétative et au moins une souche de bactérie lactique sous forme végétative. De manière avantageuse, l'invention concerne une composition pour son utilisation telle que définie ci-dessus, ladite composition étant appliquée, sur le périnée et/ou sur la 10 ou les mamelles de la femelle allant donner ou ayant donné naissance audit nouveau-né de mammifères d'élevage, l'application étant réalisée avant et/ou après la mise bas, ladite femelle étant dans un environnement préalablement traité avec ladite composition. Dans l'invention, il est avantageux qu'avant l'application sur la ou les mamelles et/ou le périnée des femelles, l'environnement d'élevage desdites femelles soit traité avec la 15 composition selon l'invention avant que lesdites femelles soient introduites dans ledit environnement. L'application dans l'environnement permet de contrôler et/ou d'orienter la flore bactérienne de l'environnement des femelles en diminuant la pression pathogène. Elle peut se faire en nébulisation ou pulvérisation des bâtiments d'élevage, incorporation à la 20 litière... On observe moins de contamination des animaux car il y a moins de foyers pathogènes. Une telle application joue sur les pathogènes vivants ou survivants dans l'environnement. Les modes d'épandage dans l'environnement sont la pulvérisation, la nébulisation, le recouvrement des surfaces par des mousses ou encore le saupoudrage de poudre de composition selon l'invention. 25 De manière avantageuse, l'invention concerne la composition pour l'utilisation susmentionnée, ladite composition consistant essentiellement en - les trois souches de Bacillus subtilis suivantes : NOL01, NOL02, NOL03, lesdites souches étant déposées à la CNCM sous les numéros respectifs : CNCM 1- 4606, CNCM 1-5043 et CNCM 1 - 4607, et - la souche de bactérie lactique: Lactococcus lactis spp lactis 1 souche NOL11, ladite souche étant déposée à la CNCM sous le numéro CNCM 1 - 4609. Il est particulièrement avantageux que la composition comprenne les trois souches de bactéries Bacillus subtilis susmentionnées, sous forme végétative ou sporulée, et la souche de bactérie lactique susmentionnée, sous forme végétative De manière encore plus avantageuse, l'invention concerne la composition susmentionnée pour son application susmentionnée, où lesdites infections sont des infections intestinales notamment les diarrhées néonatales, les entérites, la 6 salmonellose, des infections respiratoires et en particulier la rhinite, la pasteurellose, la bordetellose, les infections cutanées et en particulier les ulcères, les épidermites, les nécroses, et les infections au niveau du système locomoteur notamment les boiteries infectieuses. 5 En effet, la flore que constitue la composition selon l'invention, comme illustré dans les exemples ci-dessous, sera ingérée par les nouveau-nés et permettra de contrôler et/ou d'orienter la flore présente dans les systèmes digestifs et/ou respiratoires en diminuant la pression pathogène existante ou entrante (les systèmes digestif et respiratoire étant des voies d'entrée possibles de pathogènes responsables de 10 pathologies liées à d'autres systèmes de l'organisme). Un autre effet sera la stimulation les défenses naturelles des animaux. La flore joue également directement sur la santé digestive des animaux et limite les entrées d'autres pathogènes, ce qui est avantageux tant que le nouveau-né n'a pas acquis son immunité définitive. De manière avantageuse, l'invention concerne l'utilisation susmentionnée, où ladite 15 composition est appliquée sur le périnée et/ou la ou les mamelles par pulvérisation, étalement, saupoudrage ou trempage. L'homme du métier, selon le mode d'application utilisé, saura choisir le matériel le plus approprié, et notamment préférera une composition liquide pour la pulvérisation ou le trempage et favorisera une composition déshydratée pour une application par 20 saupoudrage. Il est également prévu une méthode de prévention ou de traitement des infections contractées par un nouveau-né de mammifères d'élevage au moment de la naissance, notamment les infections digestives, la méthode comprenant une étape d'application sur le périnée et/ou sur la ou les mamelles de la femelle allant donner ou ayant donné 25 naissance audit nouveau-né de mammifères d'élevage, l'application étant réalisée avant et/ou après la mise bas, d'une dose efficace d'une composition comprenant, ou consistant essentiellement en un mélange : a. d'au moins une souche de bactérie du genre Bacillus, notamment une souche de Bacillus subtilis, et 30 b. d'au moins une souche de bactérie lactique. En particulier, il est prévu une méthode telle que définie ci-dessus, où ladite composition comprend - au moins l'une des trois souches de Bacillus subtilis suivantes : NOL01, NOL02, NOL03, lesdites souches étant déposées à la CNCM sous les numéros respectifs : 35 CNCM 1- 4606, CNCM 1-5043 et CNCM 1- 4607, et - au moins la souche de bactérie lactique: Lactococcus lactis spp lactis 1 souche NOL11, ladite souche étant déposée à la CNCM sous le numéro CNCM 1- 4609, 7 et en particulier où ladite composition comprend - les trois souches de Bacillus subtilis suivantes : NOL01, NOL02, NOL03, lesdites souches étant déposées à la CNCM sous les numéros respectifs : CNCM 1- 4606, CNCM 1-5043 et CNCM 1 - 4607, et 5 - la souche de bactérie lactique: Lactococcus lactis spp lactis 1 souche NOL11, ladite souche étant déposée à la CNCM sous le numéro CNCM 1- 4609. Dans la méthode décrite ci-dessus, les quantités de bactéries mentionnées plus haut sont applicables. L'invention concerne en outre un kit de prévention des infections digestives, 10 respiratoires ou autres, des nouveau-nés de mammifères d'élevage comprenant essentiellement : - au moins une composition telle que définie précédemment, et - au moins un moyen d'application de ladite composition sur le périnée et/ou la ou les mamelles de la femelle ayant donné ou allant donner naissance audit nouveau-né de 15 mammifères d'élevage. Le kit selon l'invention peut se composer d'un mélange prédéfini de bactéries tel que défini ci-dessus, ou de plusieurs flacons ou sachets séparés comprenant une ou plusieurs souches bactériennes selon l'invention. Les moyens d'applications contenus dans le kit susmentionnés peuvent être des 20 pinceaux pour une application par étalement, des cartouches à utiliser pour une pulvérisation, un pulvérisateur, un outil de trempage ou tout autre moyen permettant une application telle que définie ci-dessus notamment la pulvérisation, l'étalement, le saupoudrage ou le trempage. L'invention sera mieux comprise et illustrée à la lecture des exemples et des figures 25 suivantes : BREVE DESCRIPTION DES FIGURES La figure 1 est un graphique montrant la probabilité de survenue d'une diarrhée chez les porcelets dans une case, en fonction du temps (en jours) après la naissance (t=0), sur les lots 1 à 3 (courbes A à C) traités avec un antibiotique, et le lot 4, traité seulement 30 avec la composition selon l'invention (courbe D). La figure 2 est un graphique montrant la probabilité de mortalité (à l'exclusion de la mortalité éliminés « petits ») chez les porcelets dans une case, en fonction du temps (en jours) après la naissance (t=0), sur les lots 1 à 3 (courbes A à C) traités avec un antibiotique, et le lot 4, traité seulement avec la composition selon l'invention (courbe D). 35 EXEMPLES Exemple 1 L'objectif de cet essai est de réduire l'utilisation des antibiotiques en élevages. Cette 8 volonté s'accompagne d'un fort investissement de développement de toutes les solutions alternatives : vaccination, conduite d'élevage, biosécurité et produits de substitution... Agir sur les écosystèmes bactériens qui interagissent avec l'animal est donc une voie prometteuse et l'utilisation de flores de barrière s'inscrit dans cette démarche. 5 Cet essai montre les résultats obtenus chez un éleveur déjà utilisateur de flores de barrière en péri mise-bas et qui souhaitait réévaluer son protocole (une nouvelle formulation de la flore de barrière ainsi qu'un rythme d'application allégé). Matériel et méthodes L'élevage suivi est un élevage de 700 truies naisseur engraisseur en sélection 10 multiplication (5 bandes de 120 truies). L'essai s'est déroulé sur 2 bandes à l'intérieur desquelles 3 lots de 40 truies ont été constitués en respectant une répartition homogène des rangs de portée. Le protocole d'application comprend la pulvérisation de la composition selon l'invention dans l'environnement, sur les mamelles et le périnée des truies ainsi qu'une administration probiotique aux truies via la machine à soupe. 15 Le tableau 1 résume les protocoles de pulvérisation appliqués. L'ensemble des truies a reçu une dose de probiotiques à l'auge de J-3 à J1 par rapport à la mise bas. Tableau 1 : Protocoles de pulvérisation des flores Lot 1 - témoin Lot 2 - témoin Lot 3- témoin Lot 4 essai Rythme d'application Ancien Ancien Nouveau allégé Nouveau allégé Formule Ancienne Nouvelle Nouvelle Nouvelle Bande 1 + 2 1 1 + 2 2 Antibiotique sur oui oui oui non porcelets J-3 Environnement Environnement Environnement Environnement J-2 J-1 Mamelles et périnée Mamelles et périnée Mamelles et périnée Mamelles et périnée JO : Mise bas J1 Mamelles et périnée Mamelles et périnée Mamelles et périnée Mamelles et périnée J4 Mamelles et périnée Mamelles et périnée 20 Pour les lots 1 à 3, l'éleveur a réalisé une injection d'antibiotique aux porcelets au moment des soins il s'agit donc des lots témoins ; il a accepté de suspendre cette administration sur une partie des porcelets correspondant au lot 4, il s'agit donc du lot test. En effet, l'antibiotique a un effet sur la composition selon l'invention et annule donc son effet potentiel. Les lots 1 à 3 représentent donc les lots témoins positifs (traités aux 25 antibiotiques) et le lot 4, le lot essai, représente une application sur les mamelles et le 9 périnée. On réalise ensuite un enregistrement quotidien sur les critères suivants : Notation des fèces : 0 Normales, 1 Molles (dégradé), 2 Bouses, 3 Liquides, Propreté des porcelets : 0 souillés REVENDICATIONS1. Composition comprenant ou consistant essentiellement en un mélange : a. d'au moins une souche de bactérie du genre Bacillus, notamment une souche de Bacillus subtilis, et b. d'au moins une souche de bactérie lactique, pour son utilisation dans le cadre de la prévention ou le traitement des infections contractées par un nouveau-né de mammifères d'élevage au moment de la naissance, notamment les infections digestives ou respiratoires, ladite composition étant sous une forme adaptée pour être appliquée, sur le périnée et/ou sur la ou les mamelles de la femelle allant donner ou ayant donné naissance audit nouveau-né de mammifères d'élevage, Composition pour son utilisation selon la revendication 1, ladite composition étant sous une forme adaptée pour être appliquée avant et/ou après la mise-bas. Composition pour son utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle la composition bactérienne comprend : - au moins l'une des trois souches de Bacillus subtilis suivantes : NOL01, NOL02, NOL03, lesdites souches étant déposées à la CNCM sous les numéros respectifs : CNCM 1 - 4606, CNCM 1-5043 et CNCM 1- 4607, et - au moins la souche de bactérie lactique: Lactococcus lactis spp lactis 1 souche NOL11, ladite souche étant déposée à la CNCM sous le numéro CNCM 1- 4609. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, ladite composition comprenant de 104 à 1011 colonies bactériennes de Bacillus et de 104 à 1011 colonies bactériennes de bactérie lactique, les colonies bactériennes étant par mL ou g de composition. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, où ladite au moins une souche de Bacillus est sous forme sporulée et/ou sous forme végétative. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, ladite composition étant sous une forme adaptée pour être appliquée, sur le périnée et/ou sur la ou les mamelles de la femelle allant donner ou ayant donné naissance 35 audit nouveau-né de mammifères d'élevage. 10 2. 15 3. 20 4. 25 5. 30 6. 12 7. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, ladite composition consistant essentiellement en - les trois souches de Bacillus subtils suivantes : NOL01, NOL02, N0L03, lesdites souches étant déposées à la CNCM sous les numéros respectifs :CNCM I - 4606, 5 CNCM 1-5043 et CNCM I - 4607, et - la souche de bactérie lactique : Lactococcus lactis spp lactis 1 souche NOL11, ladite souche étant déposée à la CNCM sous le numéro CNCM 1- 4609. 8. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, où lesdites infections sont des infections intestinales notamment les diarrhées néonatales, les entérites, la salmonellose, des infections respiratoires et en particulier la rhinite, la pasteurellose, la bordetellose, les infections cutanées et en particulier les ulcères, les épidermites, les nécroses, et les infections au niveau du système locomoteur notamment les boiteries infectieuses 9. Composition pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, où ladite composition est sous une forme adaptée pour être appliquée sur le périnée et/ou la ou les mamelles par pulvérisation, étalement, saupoudrage ou trempage. 10. Kit de prévention des infections digestives, respiratoires ou autres, des nouveau- nés de mammifères d'élevage comprenant essentiellement : - au moins une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, et - au moins un moyen d'application de ladite composition sur le périnée et/ou la ou les mamelles de la femelle ayant donné ou allant donner naissance audit nouveau-né de mammifères d'élevage.