FR 3063903 A1 20180921 FR 1752287 A 20170320 1 NOUVEAUX COMPOSES, COMPOSITIONS ET METHODES POUR LE TRAITEMENT DE LA RESISTANCE A L'INSULINE [0001] La présente invention concerne des inhibiteurs de l'interaction entre la protéine Grb14 et le récepteur de l'insuline pour une utilisation à des fins thérapeutiques, notamment pour le traitement de l'insulinorésistance ainsi que pour la prévention et le traitement de pathologies associées à l'insulinorésistance. L'invention concerne également un procédé de synthèse de ces inhibiteurs et des compositions pharmaceutiques comprenant lesdits inhibiteurs. [Art antérieur [0002] Depuis de nombreuses années, il y a une forte augmentation des maladies métaboliques telles que le diabète, notamment le diabète de type 2, l'obésité, le syndrome métabolique et le diabète pré-gestationnel. Ainsi, l'Organisation Mondiale de la Santé estime en 2016 à plus de 400 millions le nombre de diabétiques dans le monde et indique que la prévalence mondiale du diabète chez les adultes de plus de 18 ans est passée de 4,7`)/0 en 1980 à 8,5`)/0 en 2014. [0003] Le diabète de type 2 représente 90% des diabètes rencontrés dans le monde. Il est en grande partie le résultat d'une surcharge pondérale et de la sédentarité. Le coût annuel des soins de santé aux États-Unis pour le diabète était estimé à 245 milliards de dollars en 2012. La prévention et le traitement des maladies métaboliques telles que le diabète de type 2 sont devenus une priorité majeure en matière de soins de santé. En outre, l'homéostasie anormale du glucose est associée directement et indirectement à l'hypertension et aux altérations du métabolisme des lipides, et les patients atteints de diabète de type 2 ont un risque significativement accru de complications macrovasculaires et microvasculaires, telles que l'hypertension artérielle, la microangiopathie diabétique, ou la macroangiopathie diabétique. [0004] Les stratégies thérapeutiques actuelles utilisées pour lutter contre la majorité de ces maladies métaboliques et leurs conséquences visent à améliorer la sécrétion de l'insuline ou ses actions au niveau des différents tissus cibles. La metformine est généralement recommandée comme traitement de première intention. D'autres médicaments incluent : les autres biguanides, les sulfonylurées, les thiazolidinediones, les inhibiteurs de dipeptidyl peptidase-4, les inhibiteurs de l'alpha-glucosidase, les glinides, les Réf [0519-IDF03] 3063903 2 fibrates, les inhibiteurs de SGLT2 et les analogues du glucagon-like peptide-1 (GLP1). La plupart des sujets n'ont pas initialement besoin d'insuline, mais une insulinothérapie peut éventuellement être associée à un médicament administré par voie orale. [0005] Néanmoins, la majorité de ces maladies métaboliques est associée à une 5 insulinorésistance et cette dernière est initiée bien en amont de l'état diabétique. Ainsi, dans une étude récente, il est estimé qu'aux États-Unis, plus de 37 (3/0 des adultes sont pré-diabétiques (Menke A et al., 2015), conditions comportant la plupart du temps le développement d'une insulinorésistance. L'insulinorésistance entraîne une altération de la signalisation insulinique et une réduction de l'efficacité des approches thérapeutiques 10 conventionnelles. Pour les conditions pré-diabétiques, la résistance à l'insuline se développe avant le début de l'hyperglycémie et est associée à une augmentation de la production d'insuline. Après plusieurs années, l'augmentation de la sécrétion d'insuline ne suffit plus à compenser la résistance des tissus insulino-dépendants à l'insuline et le sujet devient hyperglycémique. Les cellules bêta du pancréas ne peuvent plus produire 15 suffisamment d'insuline pour compenser la diminution de la sensibilité à l'insuline, elles commencent à perdre leur fonction et l'apoptose est déclenchée. Ainsi, parallèlement au développement de l'insulinorésistance, se produit une perte progressive de la masse fonctionnelle des cellules du pancréas. A terme, cette perte de masse fonctionnelle de cellules est telle que le pancréas n'est plus capable de compenser la perte de sensibilité à 20 l'insuline, conduisant ainsi à l'apparition du diabète de type 2. Pourtant, aucun des médicaments habituellement utilisés pour le traitement du diabète n'est reconnu pour bloquer durablement l'évolution naturelle de la pathologie. Ainsi, plus de la moitié de la population « pré-diabétique » va développer un diabète de type 2 après 4 à 5 ans de traitement. Par exemple, la metformine ne réduirait le risque de diabète que de 4%. 25 [0006] En outre, tous les antidiabétiques oraux actuels présentent des effets secondaires importants qui réduisent très fortement leur rapport bénéfice/risque lors d'un traitement chronique de prévention chez des sujets asymptomatiques. Ainsi, des risques accrus d'insuffisance cardiaque ou de cancer de la vessie associés aux traitements contenant les insulinosensibilisateurs tels que la rosiglitazone ou la pioglitazone (appartenant à la famille 30 des thiazolidinediones) ont entrainé leur retrait du marché par diverses autorités de santé. [0007] Grb14 est un adaptateur moléculaire fortement exprimé dans les tissus insulinosensibles (foie, tissu adipeux, muscle), qui se lie au récepteur de l'insuline activé et inhibe son activité catalytique. L'expression de Grb14 est augmentée dans le tissu adipeux Réf [0519-IDF03] 3063903 3 de patients diabétiques de type 2 ainsi que dans différents modèles animaux d'insulinorésistance, suggérant que cette protéine pourrait être impliquée dans la diminution de la signalisation de l'insuline. Les domaines peptidiques des protéines de la famille Grb7 impliqués dans l'inhibition de l'activité tyrosine kinase des récepteurs de 5 l'insuline ont été identifiés dans W0200055634, néanmoins cette demande de brevet ne propose pas de molécules pouvant efficacement traiter l'insulinorésistance. Ainsi, il existe un besoin pour de nouveaux composés capables de répondre aux problèmes engendrés par les traitements existants, permettant un traitement de l'insulinorésistance et permettant ainsi une prévention ou un traitement des pathologies associées à l'insulinorésistance. 10 'Problème technique' [0008] L'invention a donc pour but de remédier aux inconvénients de l'art antérieur. En particulier, l'invention a pour but de proposer de nouveaux inhibiteurs de l'interaction entre Grb14 et le récepteur de l'insuline pour une utilisation à des fins thérapeutiques. Ces molécules pouvant notamment être utilisées dans des compositions pharmaceutiques à 15 des fins thérapeutiques. [0009] Plus particulièrement, la présente invention propose de nouvelles compositions à base de ces inhibiteurs pour une utilisation dans le traitement de l'insulinorésistance. Typiquement, les compositions et les procédés fournis par les inventeurs peuvent être utilisés pour traiter un sujet souffrant d'une insulinorésistance. Ainsi, les compositions et 20 les procédés fournis par les inventeurs peuvent être utilisés pour traiter un sujet souffrant, à risque de souffrir ou susceptible de souffrir d'une pathologie associée à l'insulinorésistance. [0010] Un autre objectif de la présente invention est de fournir un procédé de préparation de ces composés. 25 "Brève description de l'invention' [0011] A cet effet, l'invention porte sur un composé inhibiteur de l'interaction entre une protéine Grb14 et un récepteur de l'insuline choisi dans le groupe constitué des composés appartenant à la famille des isoxazoles sulfamides de formule (I), leurs sels, solvates et/ou 30 diastéréoisomères, Réf [0519-IDF03] 3063903 4 (I) dans laquelle : - le groupement R1 représente un groupe alkyle à chaine linéaire, cyclique ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone, et - les groupements R2, R3, R4 et R5 sont identiques ou différents et représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle à chaine linéaire, cyclique ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone ; ou dans le groupe constitué des composés appartenant à la famille des dioxothioxotetrahydro-pyrimidinylidène de formule (Il), leurs sels, solvates, et/ou diastéréoisomères, 15 dans laquelle : le groupement R6 représente un groupe alkyle à chaine linéaire, cyclique ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone ou un groupe -(alkyle en Cl-05)-aryle, ledit aryle étant substitué par un ou plusieurs groupes choisis 20 parmi les groupements suivants : -0O21:111, COR12, -0C(0)1:113, -S(0)R14, - OR16, -S R16, -S02R17, -CON R18R13, -0002R205 Réf [0519-IDF03] 5 10 3063903 5 le groupement R7 représente un atome d'hydrogène ou un groupe carboxyle, le groupement R8 représente un atome d'hydrogène ou un groupe aryle, et le groupement R9 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkoxyle, 5 les groupements R11 à R20, sont identiques ou différents et représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle à chaine linéaire, cyclique ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone, pour son utilisation à des fins thérapeutiques. 10 [0012] Contrairement aux inhibiteurs d'interaction protéine-protéine tels que les anticorps monoclonaux ou les peptides, le composé inhibiteur de l'interaction entre une protéine Grb14 et un récepteur de l'insuline selon l'invention est une petite molécule. Par petite molécule, il faut comprendre, au sens de l'invention, un composé naturel ou de synthèse possédant un poids moléculaire inférieur à 1200 Da, par exemple compris entre 200 et 15 1100 Da, et de préférence entre 300 et 900 Da. Comme cela sera détaillé ci-après, les composés de formule générale (I) et (II) sont non toxiques, pénètrent les membranes et stimulent notamment la voie PI3K. Il existe en outre une spécificité d'inhibition de l'interaction Grb14/IR par rapport à l'interaction Grb10/IR. [0013] Avantageusement, les compositions de l'invention sont utilisées pour augmenter 20 la lipogenèse et réduire la néoglucogenèse et notamment augmenter l'action de l'insuline sur l'expression des gènes impliqués dans la lipogenèse et la néoglucogenèse. [0014] Avantageusement, les inhibiteurs selon l'invention sont des composés non toxiques qui pénètrent les membranes et stimulent notamment la voie PI3K. De plus, ces molécules bloquent spécifiquement l'interaction entre Grb14 et les récepteurs de l'insuline 25 et n'interfèrent pas sur l'interaction entre Grb10 et les récepteurs de l'insuline. Ces composés sont utiles pour des interventions thérapeutiques pour le traitement de l'insulinorésistance et la prévention ou le traitement des pathologies associées à l'insulinorésistance. 30 [0015] Selon d'autres caractéristiques optionnelles du composé inhibiteur : - le composé inhibiteur de formule (I) est tel que : - le groupement R1 représente un groupe alkyle à chaine linéaire ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone, Réf [0519-IDF03] 3063903 6 - les groupements R2 et R3 représentent un atome d'hydrogène, et - les groupements R4 et R5 représentent un groupe méthyle. le composé inhibiteur de formule (1) est choisi dans le groupe constitué des composés de formule (la) ou (lb), leurs sels, solvates, et/ou diastéréoisomères. 10 - le composé inhibiteur de formule (Il) est choisi dans le groupe constitué des composés de formule (11c), (11d), (11e), ou (11f) 0 OH HN NH s (11c) HN NH s (11d) Réf : [0519-IDF03] 5 o CH3 CH3 H3Co (la) (lb) 3063903 (11e) CH3 (11f) leurs sels, solvates et/ou diastéréoisomères. - le composé inhibiteur selon l'invention est destiné à une utilisation en tant qu'insulinosensibilisateur. 10 [0016] L'invention porte en outre sur une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé inhibiteur de formule (1) ou de formule (11) selon l'invention. [0017] Selon d'autres caractéristiques optionnelles de la composition : - la composition pharmaceutique selon l'invention comprend en outre au moins un autre ingrédient actif choisi parmi : les sulfonylurées, les biguanides tels que la 15 metformine, les thiazolidinediones, les analogues de GLP1 tels que l'exenatide ou le liraglutide, les inhibiteurs de la dipeptidyl peptidase-4 tels que la gliptine, la sitagliptine, la vildagliptine, la saxagliptine, la linagliptine, la gemigliptine ou l'alogliptine, les inhibiteurs de l'alpha-glucosidase, les glinides, les fibrates ou les inhibiteurs de SGLT2 tels que la canaglifozine. 20 - la composition pharmaceutique selon l'invention est destinée à une utilisation à des fins thérapeutiques chez un sujet soumis à l'insulinothérapie ladite insulinothérapie comprenant de l'insuline ou un analogue de l'insuline. Réf [0519-IDF03] 7 HN NH 5 3063903 8 - la composition pharmaceutique selon l'invention est un produit de combinaison pour une utilisation simultanée, conjointe ou séparée, ou séquentielle à des fins thérapeutiques. 5 [0018] L'invention porte en outre sur le composé inhibiteur selon l'invention ou sur la composition pharmaceutique selon l'invention pour leur utilisation dans le traitement de l'insulinorésistance ainsi que pour la prévention ou le traitement d'une pathologie associée à l'insulinorésistance. [0019] Selon d'autres caractéristiques optionnelles de cette utilisation : 10 - la pathologie associée à l'insulinorésistance est sélectionnée parmi : le syndrome métabolique, le syndrome des ovaires polykystiques, l'obésité, le diabète prégestationnel, le diabète de type 2, l'hyperglycémie, la lipodystrophie, la néphropathie diabétique ou les complications cardiovasculaires telles que l'hypertension artérielle, la microangiopathie diabétique, ou la macroangiopathie 15 diabétique. - le composé inhibiteur selon l'invention est administré à une dose comprise entre 50 mg et 250 mg par jour, de préférence entre 100 mg et 200 mg par jour. [0020] L'invention porte en outre sur un procédé de synthèse d'un composé inhibiteur 20 selon la formule (I), ou ses diastéroisomères, comprenant une étape de condensation d'un sulfamide de formule (V) NH2 (y) dans laquelle : 25 - les groupements R4 et R5 sont identiques ou différents et représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle à chaine linéaire, cyclique ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone ; Réf [0519-IDF03] 3063903 9 avec un dérivé d'acide acrylique de formule (IV) 0 R1 (IV) dans laquelle : 5 - le groupement R1 représente un groupe alkyle à chaine linéaire, cyclique ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone, et - les groupements R2 et R3 sont identiques ou différents et représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle à chaine linéaire, cyclique ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone. 10 [0021] En outre, selon une caractéristique optionnelle de ce procédé de synthèse, ladite étape de condensation est réalisée en présence de DIPEA (N-Ethyl-N-(propan-2- yl)propan-2-amine) et d'un réactif de couplage peptidique sélectionné parmi l'HATU (1- [Bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate) et le réactif de Ghosez (1-Chloro-N,N,2-trimethylpropenylamine). 15 [0022] D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaitront à la lecture de la description suivante donnée à titre d'exemple illustratif et non limitatif, en référence aux Figures annexées qui représentent : - Figure 1, l'effet inhibiteur du composé de formule (la) (Comp. la) selon l'invention 20 (barres noires) sur l'interaction IR/Grb14 mesurée par la technique de BRET IR-Luc/ Grb14-YFP en système acellulaire, comparé au contrôle (barres blanches), en présence ou en absence d'une stimulation préalable à l'insuline (Ins.) à 100 nM. Les résultats, exprimés en pourcentage du contrôle DMSO (Diméthylsulfoxide), sont la moyenne calculée sur la base de 2 à 8 expériences indépendantes (** 25 p 95% par inspection du spectre RMN 1H ; Rf = 0,33 (AcOEt) ; F = 150- 151 °C ; IR (AIR) : y 3315, 3112, 3060, 2839, 2774, 1673, 1625, 1589, 1540, 1526, 1497, 5 1419, 1368, 1334, 1348, 1253, 1189, 1162 cm-1 ; RMN1H (250 MHz, DMSO-d6) : Ô 10,95 (1H, bs, H6), 10,60 (1H, s, H12), 7,88 (2H, d, J= 9,0 Hz, H9), 7,72 (2H, d, J= 9,0 Hz, H10), 7,37 (1H, d, J= 15,5 Hz, H14), 6,80 (1H, d, J= 3,3 Hz, H17), 6,37 (1H, d, J= 15,5 Hz, H15), 6,28 (1H, d, J =3,3 Hz, H18), 2,35 (3H, s, H23), 2,10 (3H, s, H21), 1,63 (3H, s, H22) ; RMN 130 (75 MHz, DMSO-d6) : Ô 164,2 (013), 161,4 (05), 155,6 (03), 154,9 (019), 10 trouvé : 438,1075 [M+Na] ; calculé pour C201-121N3Na05S :438,1094. 15 1.2 : Optimisation des conditions de synthèse [00109] La réaction de condensation d'un sulfamide de formule (V) avec un dérivé d'acide acrylique de formule (IV) est difficile à réaliser à cause de la faible réactivité du sulfamide de formule (V) couplée à la présence de deux sites potentiellement nucléophiles. Différentes méthodes de synthèse du composé de formule (I) ont été évaluées de façon à 20 comparer les rendements de synthèse du composé de formule (I) à partir de l'acide (E)-3- (5-methylfuran-2-yl)acrylique et du sulfisoxazole selon les conditions de couplage. [00110] Comme cela est présenté dans le tableau 1, selon les conditions réactionnelles et le réactif de couplage utilisé, le rendement de synthèse du composé de formule (la) varie de 17 à 44%. 25 Tableau 1 Conditions Rendement de formule (la) HATU, DIPEA, DMF, pw, 70 °C, 25 min 44% HATU, DIPEA, DMF, ta, 48 h 28% EDCI, HOBt, Et3N, THF, ta, 48 h 25% EDCI, DIPEA, DMF, ta, 48 h 17% IBCF, DIPEA, DMF, pw, 70 °C, 25 min 19% Réf : [0519-IDF03] 149,4 (16), 143,7 (C11), 133,5 (08), 128,2 (014), 128,0 (09), 118,8 (010), 117,1(015), 116,9 (17), 109,2 (18), 105,1 (04), 13,5 (023), 10,3 (021), 5,8 (022) ; SMHR: m/z 3063903 36 Réactif de Ghosez, DIPEA, DOM, ta, 72 h 32% [00111] Ainsi, il apparait de ces expérimentations que les inventeurs ont identifié des conditions permettant d'atteindre de hauts rendements en composés inhibiteurs de formule (I) et plus particulièrement en composés inhibiteurs de formule (la ou lb). 5 [00112] Par exemple, associés à la DIPEA, l'HATU et le Réactif de Ghosez semblent être les réactifs de couplage peptidique permettant d'obtenir les meilleurs rendements dans ces expérimentations de synthèse. De même, les solvants DMF et le DOM permettent d'atteindre les rendements les plus élevés notamment lors de l'utilisation d'une irradiation par microonde. 10 Exemple 2: Evaluation de l'effet inhibiteur des composés selon l'invention par une méthode de BRET acellulaire [00113] Des composés selon l'invention ont été évalués expérimentalement pour leur effet 15 inhibiteur sur l'interaction IR-Grb14 par une technique de BRET en système acellulaire décrite brièvement ci-après. [00114] D'une part, des cellules HEK293T ont été transfectées avec un vecteur codant pour le récepteur de l'insuline fusionné à la luciférase (IR-Luc). Avant leur lyse, les cellules transfectées avec IR-Luc ont été stimulées ou non avec 100 nM d'insuline pendant 10 20 minutes. Les lysats IR-Luc ont été récupérés puis purifiés sur des billes de sépharose couplées à de la lectine de germe de blé (WGL pour Wheat Germ Lectin). Les récepteurs IR-Luc ont alors été élues puis congelés dans l'azote liquide avant d'être stockés à -80 °C. D'autre part, des cellules HEK293T ont été transfectées soit avec un vecteur codant pour la protéine Grb14 fusionnée à la YFP (Grb14-YFP), soit avec le plasmide vide 25 pcDNA3. Les cellules transfectées avec Grb14-YFP ou avec le plasmide vide pcDNA3 ont été lysées 48 h après transfection. Après centrifugation, les lysats sont récupérés et congelés à --80 °C. [00115] Les récepteurs de l'insuline (IR-Luc) partiellement purifiés à partir de cellules stimulées ou non avec l'insuline ont été incubés 20 minutes avec les composés inhibiteurs 30 selon l'invention suspendus dans du DMSO. Les extraits cellulaires provenant de cellules transfectées avec Grb14-YFP (ou le plasmide vide pcDNA3) ont ensuite été ajoutés puis après 40 minutes d'incubation, la coelenterazine a été ajoutée et la lecture du BRET a été Réf [0519-IDF03] 3063903 37 initiée. Les résultats sont exprimés en pourcentage du signal de BRET obtenu en présence des molécules testées par rapport au signal de BRET du contrôle DMSO. [00116] Les résultats de cette évaluation sont illustrés dans le cas du composé de formule (la) selon l'invention à la figure 1 et reportés dans le tableau 2 ci-dessous dans le cas des 5 autres composés selon l'invention en présence d'une stimulation à l'insuline (100 nM). Tableau 2. Composé évalué % signal BRET / Contrôle DMS0 (50 uM) a 39%(+/- 16%) lb 58% /- 12%) I c 75%(+/- 13%) Ild 69%(+/- 18%) I e 65% 1-20%) tif 65%(+/- 7%) Comparatif IVa 91% /- 12%) Comparatif Va 98% /- 5%) Comparatif IVa + Va 98% /- 8%) Comparatif A 103% /- 15%) Comparatif B 93% /- 7%) Comparatif C 103% +/- 8%) Comparatif D 121% +/- 8%) Comparatif E 98% /- 9%) Comparatif F 93% /- 24%) [00117] Les composés selon l'invention induisent une diminution du signal de BRET entre 10 le récepteur de l'insuline et la protéine Grb14. Par exemple, à une concentration de 50 pM, le composé de formule Ilc diminue de 25 (3/0 le signal de BRET entre le récepteur de l'insuline et la protéine Grb14. Le composé de formule (la) induit quant à lui une diminution significative de 60 % du BRET IR-Grb14 à 50 pM. [00118] De plus, comme cela est présenté dans la figure 1, une diminution significative du 15 signal de BRET de 50 % par le composé de formule (la) est également observée en Réf [0519-IDF03] 3063903 38 absence de stimulation avec l'insuline. En outre, des études complémentaires ont confirmé, pour les composés selon l'invention, la présence d'un effet dose-réponse sur la diminution du signal de BRET. [00119] Au contraire, certains composés partageant des similarités de structure avec les 5 composés selon l'invention ne parviennent pas à induire une diminution significative du signal de BRET entre le récepteur de l'insuline et la protéine Grb14. [00120] Par exemple, l'activité des composés (IVa) et (Va) entrant dans la synthèse du composé de formule (la) a été testé via la technique de BRET en système acellulaire détaillée précédemment. Les composés de formule (IVa) et (Va) pris individuellement, 10 ajoutés séparément ou simultanément, ne permettent pas de réduire l'interaction IR- Grb14. Ainsi, l'activité inhibitrice du composé de formule (la) ne dépend donc pas d'une structure partielle de ce composé et la molécule est nécessaire dans son intégralité. [00121] De plus, comme cela est détaillé dans le tableau 2, les composés A et B proches structurellement des composés de formule (la) ou (lb), ne permettent pas une diminution 15 significative du signal de BRET. En outre, ces essais comparatifs montrent l'importance pour les composés de formule générale (I) du cycle furane (cf. comparatif composé B) ainsi que du substituant en position R1 (cf. comparatif composé A). [00122] De même, comme cela est détaillé dans le tableau 2, les composés C, D, E et F proches structurellement des composés de formule générale (II), ne permettent pas une 20 diminution significative du signal de BRET. Ces résultats confirment la nécessité d'un substituant sur l'aryle en R6 (cf. comparatif composé C), en outre ce substituant est nucléophile (cf. comparatif composé D) sans être un halogène (cf. comparatif composé E). Ces résultats montrent également l'importance de la présence d'un atome de carbone lié à un atome de soufre en position 2 du cycle pyrimidine (cf. comparatif composé F). 0 CH3 Composé IVa NH2 Composé Va Réf [0519-IDF03] 3063903 39 o NH / Composé Comparatif A Composé Comparatif B Exemple 3: Validation de l'effet inhibiteur par une méthode de 5 coimmunoprécipitation [00123] L'effet inhibiteur des composés selon l'invention sur l'interaction IR-Grb14 a été confirmé dans des expériences de co-immunoprécipitation en système acellulaire. Les extraits de IR-Luc stimulés ou non par l'insuline ont été pré-incubés pendant 20 minutes en absence ou en présence de 50 pM de composé selon l'invention avant d'être incubés 10 avec l'extrait cellulaire contenant la protéine de fusion Grb14-YFP pendant 40 minutes. Une immunoprécipitation dirigée contre la YFP permet d'analyser par Western blot la quantité de récepteur qui est restée associée avec la protéine Grb14. [00124] Comme attendu, l'association entre les protéines IR et Grb14 est beaucoup plus importante avec les récepteurs provenant de cellules stimulées à l'insuline qu'avec les Réf : [0519-IDF03] CH3 CH3 Composé Comparatif C Composé Comparatif E Composé Comparatif D rcH3 0 Composé Comparatif F HN OH 3063903 récepteurs provenant de cellules non stimulées par l'hormone (figure 2). On observe que le composé de formule (la) selon l'invention diminue de 60 (3/0 la quantité de récepteurs de l'insuline associés à la protéine Grb14 en présence d'insuline. Enfin, des expériences de coimmunoprécipitation en système acellulaire montrent également une inhibition dose 5 dépendante par le composé de formule (la), de la quantité de IR immunoprécipitée avec Grb14. En effet, dans cette série d'expériences, la quantité d'IR-Luc co-précipitée est diminuée de 20 (3/0 à une concentration de 25 pM et de 50 % à une concentration de 50 pM (résultats non montrés). 10 Exemple 4 : Spécificité de l'action des composés selon l'invention 4.1 : Action spécifique sur le domaine TK (tyrosine kinase) du récepteur de l'insuline [00125] Des cellules HEK 2931 co-transfectées avec une construction ne portant que le domaine tyrosine kinase du récepteur fusionné à la luciférase (IRTK48-RLuc) et la protéine Grb14 fusionnée à la YFP ont été incubées pendant 4 heures en présence de 15 composés selon l'invention. En absence de sous-unités a, le domaine tyrosine kinase du récepteur de l'insuline s'autophosphoryle de manière spontanée, il n'est donc pas nécessaire d'ajouter de l'insuline pour stimuler l'interaction IRTK-Grb14. [00126] L'analyse par Western blot de la quantité d'IRTK48-Rluc co-précipitée avec les protéines Grb14 (figure 3A) montre que la quantité de domaine tyrosine kinase du 20 récepteur de l'insuline coimmunoprécipitée avec la protéine Grb14 est diminuée de 75 (3/0 par le composé de formule (la), 50 pM. Ce résultat indique que le composé de formule (la) entre dans les cellules et diminue l'interaction entre le domaine kinase du récepteur de l'insuline et la protéine Grb14. Le composé de formule (la) agit donc bien au niveau du domaine tyrosine kinase du récepteur de l'insuline, seule partie du récepteur présente 25 dans la construction utilisée pour cette expérience. Cela confirme que les composés selon l'invention inhibent l'interaction IR-Grb14 en agissant spécifiquement sur le domaine kinase du récepteur de l'insuline. 4.2 : Action spécifique sur Grb14 30 [00127] Afin de tester la spécificité du composé de formule (la) sur cette interaction IRTK- Grb14, la même expérience a été réalisée avec des cellules HEK 2931 co-transfectées Réf [0519-IDF03] 3063903 41 avec une construction ne portant que le domaine tyrosine kinase du récepteur fusionné à la luciférase et la protéine Grb10 fusionnée à la YFP. En effet, la protéine Grb10 se lie également au récepteur de l'insuline phosphorylé et inhibe son activité catalytique. [00128] La figure 3B, présentant la quantification par densitométrie des signaux révélés, 5 montre que le composé de formule (la) ne modifie pas les quantités de domaine tyrosine kinase du récepteur de l'insuline co-immunoprécipitées avec la protéine Grb10. Ainsi, le composé de formule (la) semble spécifique de l'interaction IRTK-Grb14, puisqu'il n'inhibe pas l'interaction IRTK-Grb10. 10 Exemple 5 : Absence de toxicité des composés selon l'invention 5.1 : Toxicité sur cellules HEK293T [00129] Afin d'étudier l'effet du composé de formule (la) sur la croissance et la survie 15 cellulaire, des cellules HEK293T ont été cultivées pendant 72 h à différentes concentrations de sérum (0,1 (3/0, 1 (3/0, 10 (3/0), en absence ou en présence de composé de formule (la) (50 ou 100 pM). La fluorescence des cellules a été mesurée avant et après traitement à l'aide d'un réactif comportant de la résazurine. Sachant que l'intensité de la fluorescence est corrélée au nombre de cellules vivantes, la croissance des cellules est 20 estimée en rapportant la fluorescence mesurée à 72 h de traitement à celle mesurée à ta. La présence de sérum favorise la croissance cellulaire. On observe ainsi, au bout de 72 h, une augmentation de la population cellulaire de 7 fois à 0,1 (3/0 de sérum et de 10 fois à 1 ou 10 (3/0 de sérum. [00130] Comme cela est présenté dans la figure 4, que ce soit à une faible concentration 25 de sérum 0,1 % (afin de mesurer la survie cellulaire) ou à une forte concentration de sérum 10 (3/0 (afin de mesurer la prolifération cellulaire), le composé de formule (la) à 50 pM et 100 pM ne modifie pas le taux de croissance cellulaire. 5.1 : Toxicité in vivo 30 [00131] Une étude de toxicité à doses répétées a également été réalisée chez des souris C57BI/6J (12 mâles, âgés de 8 semaines). Les souris ont été traitées quotidiennement soit par gavage avec 30 mg/kg/jour de composé de formule (la) dilué dans de la carboxymethylcellulose 0,5 (3/0 ; soit par injection intrapéritonéale avec 30 mg/kg/jour de Réf [0519-IDF03] 3063903 42 composé de formule (la) dilué dans du DMSO, soit avec du DMSO seul, pendant une durée de 15 jours. [00132] Avant le début des traitements, les souris avaient un poids corporel similaire. Après 12 jours de traitements, aucune différence de prise de poids n'a été observée entre 5 les différents groupes, quel que soit le traitement. De plus, quel que soit le mode d'administration du composé selon l'invention, il est possible d'observer une diminution de la glycémie mesurée à l'état post-absorptif. Enfin, aucune différence sur l'aspect du foie n'a par ailleurs été observée chez ces souris. [00133] Le composé de formule (la) selon l'invention n'a donc pas d'effet toxique 10 détectable. Exemple 6 : Activation de la voie P13-Kinase par les composés selon l'invention 6.1 : Recrutement de la protéine Akt à la membrane 15 [00134] Pour mesurer l'activité de la voie PI-3 kinase par la technique de BRET, des cellules HEK293T sont transfectées avec des plasmides permettant d'une part l'expression du domaine PH (Pleckstrin Homology) de la protéine Akt qui a été fusionné à la luciférase et et d'autre part une séquence d'adressage à la membrane qui a été fusionnée à la protéine YFP. Lorsque le domaine PH d'Akt est recruté à la membrane par 20 les PIP3, un transfert d'énergie entre la luciférase qui est couplée au domaine PH d'Akt et la protéine YFP membranaire a lieu. Le signal de BRET mesuré est un témoin de la production de PIP3 à la membrane et est un reflet de l'activation de la voie PI-3 kinase/Akt en temps réel sur des cellules. [00135] Les résultats de cette évaluation sont illustrés dans le cas du composé de formule 25 (la) selon l'invention dans la figure 5 et reportés dans le tableau 3 ci-dessous dans le cas des autres composés selon l'invention. Tableau 3. Delta de BRET Ild t 67 (+7-33) Ile t 96 (+1-50) lift 54 (+/- 4 ) Réf [0519-IDF03] 3063903 43 la t 86 (+/- 4 ) 1 t 119 (+/- 26) Composé Comparatif IVa * -61 (+/- 35) Composé Comparatif Va* -27 (+/- 23) Composé Comparatif IVa +Va* -75 (+/- 14) * en présence d'insuline ; t sans insuline [00136] Comme cela est présenté dans la figure 5A, l'insuline (5 nM) induit une augmentation rapide du signal de BRET (delta de BRET d'environ 100). Le composé de formule (la) (50 pM) augmente le recrutement de la protéine Akt à la membrane en absence (delta de BRET d'environ 86) et en présence (delta de BRET d'environ 121) de 5 5 nM d'insuline. Plus le composé de formule (la) est concentré plus la production de PIP3 à la membrane est augmentée. En outre, l'effet du composé de formule (la), en absence d'insuline, est détectable dès 5 pM, avec une augmentation significative du signal de BRET à 10 pM (résultats non montrés). Cet effet est également observé pour les autres composés inhibiteurs selon l'invention comme cela est présenté dans le tableau 3. 10 [00137] L'inhibition de l'activité tyrosine kinase du récepteur de l'insuline dans ce système, en pré-incubant les cellules pendant 1 h avec 25 pM de l'inhibiteur de tyrosine kinase AG1024 entraine une chute très importante du signal de BRET. L'insuline (5 nM) et le composé de formule (la) (50 pM) n'ont plus d'effet sur le recrutement de la protéine Akt à la membrane (Figure 5A). 15 [00138] De la même façon que précédemment, l'effet des composés comparatifs de formule (IVa) et de formule (Va) entrant dans la synthèse du composé de formule (la) sur la voie PI3K/Akt a été testé en présence de 5 nM d'insuline. A la différence du composé de formule (la), les composés de formule (IVa) et de formule (Va) (ajoutés séparément ou simultanément) n'ont pas d'effet sur le recrutement de la kinase Akt à la membrane en 20 absence de l'hormone. De plus, en présence d'insuline, le composé de formule (Va) n'a pas non plus d'effet sur la production de PIP3 à la membrane. Le composé de formule (IVa) quant à lui, diminue seul le recrutement de la protéine Akt à la membrane d'environ 50 (3/0 et d'au moins 60 (3/0 lorsqu'il est combiné au composé de formule (Va). [00139] Par ailleurs, comme cela est présenté dans la figure 5B, l'effet du composé de 25 formule (la) sur l'augmentation de la production de PIP3 à la membrane n'a pas été retrouvé dans tous les systèmes cellulaires. En effet, dans des cellules MCF7 (cellules Réf [0519-IDF03] 3063903 44 tumorales mammaires) qui surexpriment le récepteur de l'IGF-1 par rapport au récepteur de l'insuline (Zhang et al., 2007), le composé de formule (la) (50 pM) n'a pas d'effet sur la production de PIP3 à la membrane (en absence et en présence de 100 nM d'insuline). Ceci suggère que le composé de formule (la) ne stimule pas la voie PI3K/Akt dans des 5 cellules cancéreuses qui surexpriment le récepteur de l'IGF-1. Enfin, les composés selon l'invention augmentent l'interaction Ras/Raf que les cellules soient stimulées ou non par l'insuline (résultats non montrés). [00140] Les composés selon l'invention induisent donc une activation des voies PI3K/Akt. Ces composés potentialisent l'effet de l'insuline, mais présentent également un effet 10 activateur en absence de l'hormone. De plus, l'effet du composé de formule (la) sur l'activation de la voie PI3K/Akt est significatif dès 10 pM. Enfin, l'effet du composé de formule (la) sur l'activation de la voie PI3K/Akt dépend de l'activité TK du récepteur de l'insuline, prouvant une spécificité d'action. 15 6.2: Expression des gènes de la néoglucogenèse [00141] Pour étudier l'effet inhibiteur de l'insuline sur l'expression de gènes de la néoglucogenèse, des hépatocytes de souris en culture primaire ont été pré-incubés avec 10 nM de glucagon. [00142] Comme présenté dans la figure 6, le glucagon induit fortement l'expression des 20 gènes clés de la néoglucogenèse que sont la PEPCK et la G6Pase, et l'ajout d'insuline à 1 nM inhibe d'environ 60 à 70 (3/0 l'expression de ces gènes. Le composé de formule (la) induit une diminution significative d'environ 20 (3/0 de l'expression de la PEPCK et de la G6Pase induite par le glucagon. Ainsi, les composés selon l'invention diminuent également, même en l'absence d'insuline, l'expression des gènes de la néoglucogenèse 25 induite par le glucagon dans des hépatocytes en culture primaire. 6.3: Expression des gènes de la lipogenèse [00143] La stimulation de la lipogenèse en réponse à l'insuline se fait au niveau transcriptionnel notamment grâce à l'activation du facteur de transcription SREBP-1c 30 (Sterol Regulatory Element Binding Protein 1c). Ce facteur de transcription une fois activé et clivé migre dans le noyau et régule l'expression des enzymes clés de la lipogenèse (ACC, FAS et SCD1). Réf [0519-IDF03] 3063903 [00144] Brièvement, les hépatocytes de souris en culture primaire sont cultivés en présence de 5 mM de glucose (G5) ou 25 mM de glucose (G25) et 10 nM d'insuline pendant 24 h. La quantification relative des ARNm est réalisée par RT-qPCR et les valeurs sont rapportées à la quantification du gène 18S du même échantillon afin de normaliser 5 les résultats. [00145] Comme présenté dans la figure 7, en condition G25i (G25, avec insuline 10 nM) on observe une augmentation de 60 (3/0 de l'expression de l'ARN messager de SREBP-1c ainsi qu'une augmentation de l'expression de ses gènes cibles ACC (de 650 (3/0), FAS (de 150%) et SCD1 (de 160 (3/0). De façon intéressante, l'ajout du composé de formule (la) en 10 condition G25i accentue l'effet de l'insuline sur l'expression de ces gènes. L'effet de l'hormone sur l'expression de SREBP-1c et de ses gènes cibles ACC, FAS et SCD1 est ainsi augmenté d'environ 60 `Vo. Ainsi, il y a potentialisation de l'effet de l'insuline sur la lipogenèse par les composés selon l'invention. 15 [00146] Ces exemples, sans limiter l'invention, confirment que les composés selon l'invention diminuent significativement l'interaction IR-Grb14 de façon reproductible. Non toxiques, ces composés pénètrent les membranes et stimulent les voies PI3K/Akt et MAP kinases. Ils entraînent également une augmentation de la production de PIP3 et activent la voie Ras/Raf à l'état basal. Enfin, ils améliorent l'effet de l'insuline dans des hépatocytes 20 de souris en culture primaire, potentialisant notamment l'effet de l'insuline sur l'expression des gènes de la lipogenèse et de la néoglucogénèse. Ainsi, en diminuant l'interaction IRGrb14, les composés selon l'invention augmentent la signalisation de l'insuline et s'avèrent être des composés prometteurs pour un usage thérapeutique, notamment pour le traitement de l'insulinorésistance. 25 REFERENCES B. Desbuquois, N. Carré, A. F. Burnol. Regulation of insulin and type 1 insulin-like growth factor signaling and action by the Grb10/14 and SH2B1/B2 adaptor proteins. FEBS J. 2013 30 Feb;280(3):794-816. doi: 10.1111/febs.12080. Lowenna J. Holt and Kenneth Siddle. Grb10 and Grb14: enigmatic regulators of insulin action - and more? Biochem J. 2005 Jun 1; 388(Pt 2): 393-406.doi: 10.1042/BJ20050216. Réf [0519-IDF03] 3063903 46 Andy Menke et al. Prevalence of and Trends in Diabetes Among Adults in the United States, 1988-2012. JAMA. 2015;314(10):1021-1029. doi:10.1001/jama.2015.10029. Expert panel on detection, evaluation and treatment of high blood cholesterol in adults. 5 Executive summary of the third report on the National cholesterol education program (NCEP) expert panel on detection, evaluation and treatment of high blood cholesterol in adults (Adult treatment panel III). JAMA 2001; 285 : 2486-97. P.H Stahl, C.G. Wermuth. Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use. Wiley, 10 2011. 388 pages. E. Pontiki, D. Hadjipavlou-Litina, K. Litinas, O. Nicolotti, A. Carotti (2011) Design, synthesis and pharmacobiological evaluation of novel acrylic acid derivatives acting as lipoxygenase and cyclooxygenase-1 inhibitors with antioxidant and anti-inflammatory activities. 15 European journal of medicinal chemistry 46: 191-200 U. Uciechowska, J. Schemies, R.C. Neugebauer, E.M. Huda, M.L. Schmitt, R. Meier, E. Verdin, Manfred Jung, and W. Sippl. Thiobarbiturates as Sirtuin lnhibitors: Virtual Screening, Free-Energy Calculations, and Biological Testing. ChemMedChem 2008, 3, 20 1965 - 1976 World Health Organization. Definition, diagnosis and classification of diabetes mellitus and its complications. Classification of diabetes mellitus and its complications. Report of a WHO consultation 1999. 25 P. Zimmet, G. Alberti, J. Shaw. Nouvelle définition globale du syndrome métabolique : du syndrome métabolique : raisonnement et résultats. Diabetes'Voice 2005 ; 50:3 31-33. Réf [0519-IDF03] REVENDICATIONS1. Composé inhibiteur de l'interaction entre une protéine Grb14 et un récepteur de l'insuline choisi dans le groupe constitué des composés appartenant à la famille des isoxazoles sulfamides de formule (I), leurs sels, solvates et/ou diastéréoisomères 0 (I) dans laquelle : - le groupement R1 représente un groupe alkyle à chaine linéaire, cyclique ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone, et les groupements R2, R3, R4 et R5 sont identiques ou différents et représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle à chaine linéaire, cyclique ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone ; pour son utilisation à des fins thérapeutiques. 2. Composé inhibiteur de formule (I) pour son utilisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que : le groupement R1 représente un groupe alkyle à chaine linéaire ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone, - les groupements R2 et R3 représentent un atome d'hydrogène, et - les groupements R4 et R5 représentent un groupe méthyle. 3. Composé inhibiteur pour son utilisation selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il est choisi dans le groupe constitué des composés de formule (la) ou (lb), Réf : 10519-1DF031 3063903 H3C CH3 48 0 CH3 Ni/ (:) \ 6/ NH C1-13 (la) (lb) leurs sels, solvates, et/ou diastéréoisomères. 4. Composé inhibiteur pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, pour le traitement de l'insulinorésistance. 5. Composition pharmaceutique comprenant au moins un composé inhibiteur selon l'une des revendications 1 à 3 pour son utilisation à des fins thérapeutiques. 6. Composition pharmaceutique selon la revendication 5, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un autre ingrédient actif choisi parmi : les sulfonylurées, les biguanides tels que la metformine, les thiazolidinediones, les analogues de GLP1 tels que l'exenatide ou le liraglutide, les inhibiteurs de la dipeptidyl peptidase-4 tels que la gliptine, la sitagliptine, la vildagliptine, la saxagliptine, la linagliptine, la gemigliptine ou l'alogliptine, les inhibiteurs de l'alpha-glucosidase, les glinides, les fibrates ou les inhibiteurs de SGLT2 tels que la canaglifozine. 7. Composition pharmaceutique pour son utilisation selon l'une des revendications 5 ou 6, pour le traitement de l'insulinorésistance. 8. Composé inhibiteur pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, pour la prévention ou le traitement d'une pathologie associée à l'insulinorésistance. Réf : [0519-IDF03] 3063903 49 9. Composé inhibiteur pour son utilisation selon la revendication 8, caractérisé en ce que la pathologie associée à l'insulinorésistance est sélectionnée parmi : le syndrome métabolique, l'obésité, le syndrome des ovaires polykystiques, le diabète prégestationnel, le diabète de type 2, l'hyperglycémie, la lipodystrophie, la néphropathie diabétique ou les complications cardiovasculaires telles que l'hypertension artérielle, la microangiopathie diabétique, ou la macroangiopathie diabétique. 10. Procédé de synthèse d'un composé selon la formule (I), ou ses diastéréoisomères, tel que défini à la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comprend une étape de condensation d'un sulfamidé de formule (V) NH2 (y) dans laquelle : - les groupements R4 et R5 sont identiques ou différents et représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle à chaine linéaire, cyclique ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone ; avec un dérivé d'acide acrylique de formule (IV) 0 R1 dans laquelle : - le groupement R1 représente un groupe alkyle à chaine linéaire, cyclique ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone, et Réf : [0519-IDF03] 3063903 50 - les groupements R2 et R3 sont identiques ou différents et représentent un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle à chaine linéaire, cyclique ou ramifiée contenant jusqu'à 5 atomes de carbone. 11. Procédé de synthèse selon la revendication 10 caractérisé en ce que ladite étape de condensation est réalisée en présence de DIPEA (N-Ethyl-N-(propan-2-yl)propan-2- amine) et d'un réactif de couplage peptidique sélectionné parmi l'HATU (1- [Bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2, 3-triazolo[4,5-b]pyridiniu m 3-oxide hexafluorophosphate) et le réactif de G hosez (1-Chloro-N,N,2- trimethylpropenylamine). Réf : [0519-IDF03]