FR 3068892 A1 20190118 FR 1770756 A 20170713 UTILISATION D'UN EXTRAIT D'AGROPYRON REPENS COMME AGENT ACTIF ANTI LIPOGENESE. L'invention concerne l'utilisation cosmétique d'un extrait d'Agropyron repens comme agent amincissant et plus particulièrement comme agent anti lipogenèse. La peau est un organe de revêtement recouvrant la totalité de la surface corporelle. Elle est constituée de trois couches : de la partie la plus superficielle à la plus profonde on retrouve l'épiderme, le 115 derme et l'hypoderme ou tissu adipeux. Ce dernier représente à 20% du poids corporel chez un individu de poids moyen (Kanitakis, 2002). Deux dépôts majeurs, le tissu adipeux sous-cutané et le tissu adipeux viscéral, ont été identifiés. Les taux les plus importants de graisse, environ 80% chez les personnes normo-pondérés, se situent sous la peau, principalement dans les régions glutéo-fémorales et abdominales (Pandne Jakné & Grizelj, 2016). Le tissu adipeux est rattaché à la partie 25 inférieure du derme par des expansions de fibres de collagène. Son épaisseur est variable : mince sur le front, il se développe largement sur des zones particulières (cuisses, abdomen). La localisation anatomique du tissu adipeux est un véritable caractère sexuel secondaire. Chez 30 l'homme, il est prépondérant au-dessus de la ceinture, au niveau de l'abdomen et des épaules, alors que chez la femme, il se concentre au-dessous de la ceinture, dans la partie basse de l'abdomen et au niveau des hanches, fesses et cuisses. Cette localisation liée au sexe est fortement soulignée en cas d'obésité dont on distingue deux formes, la forme androïde et la forme gynoïde. Le tissu adipeux remplit plusieurs 5 fonctions : plastique, assurant pour une grande partie le modelage des formes du corps ; et un rôle de protection mécanique contre les chocs. En tant que réservoir énergétique de lipides, le tissu adipeux conserve également la chaleur du 10 corps et contrôle la mobilisation des lipides par deux activités métaboliques principales : la lipogenèse (synthèse des acides gras et triglycérides et stockage du surplus d'énergie) et la lipolyse (hydrolyse des triglycérides en cas de besoin énergétique) (Luo & Liu, 15 2016). Le tissu adipeux n'est pas uniquement un organe de stockage dont l'excès de développement est cause d'obésité et des troubles métaboliques qui l'accompagnent comme le diabète de type II ; il est également un véritable 20 organe endocrine. Cette fonction lui a été attribuée il y a maintenant plus de 20 ans par la découverte de la leptine, une hormone secrétée par le tissu adipeux en réponse à la prise alimentaire et inhibant l'appétit en régulant les circuits neuronaux localisés dans le cerveau (Choe, Huh, Hwang, Kim, & Kim, 2016; Dani & Casteilla, 2006). Le tissu adipeux est constitué d'adipocytes matures et d'une fraction stroma-vasculaire (SVF). Les adipocytes matures constituent la majorité de la masse du tissu adipeux ; le nombre des adipocytes matures varie quant à lui de 1 à 2 millions par gramme de tissu adipeux comparé aux 4 à 6 millions de cellules de la SVF par gramme de tissu adipeux. Les cellules de la SVF sont essentiellement les cellules précurseurs des adipocytes (les préadipocytes, pour 30% environ du nombre total de cellules du tissu adipeux), mais aussi des leucocytes, des macrophages, des cellules endothéliales et des fibroblastes ; tous jouant un 5 rôle majeur dans la régulation métabolique (Raajendiran, Tsiloulis, & Watt, 2016). Les préadipocytes sont déjà « engagés » dans une voie de différenciation menant à la formation des adipocytes, mais d'autres cellules progénitrices pluripotentes existent aussi dans la SVF. Ces 10 cellules, nommées hMADS (« human multi-potent adipose derived stem »), possèdent une forte capacité d'autorenouvellement et peuvent, à l'état clonal, se différencier en plusieurs types cellulaires (Dani & Casteilla, 2006). 15 L'adipogenèse consiste en la transformation des préadipocytes du tissu adipeux en adipocytes. L'adipogenèse suit un processus très contrôlé où différents facteurs de transcription et protéines régulatrices agissent successivement pour former les adipocytes matures. 20 Pendant les premières heures de l'adipogenèse, en particulier, s'opère une modification profonde du « paysage chromatinien » (le ouverture de l'ADN et expression des gènes) qui coïncide avec la liaison coopérative de nombreux facteurs de transcription (ou facteurs trans) précoces, 25 incluant C/EBP-13, C/EBP-Ô et stat5a ou encore le facteur trans à doigt à zinc ZNF-638. La liaison de ces facteurs trans permet la liaison d'autres facteurs au cours de la différenciation du préadipocyte, en particulier, PPAR-y, via la liaison avec un cofacteur p204 (Proença et al., 30 2014). Dans les adipocytes, les triglycérides (TAG), les constituants cellulaires majeurs du tissu adipeux, sont stockés dans une unique et large inclusion lipidique, appelée « gouttelette lipidique ». Les gouttelettes lipidiques sont présentes dans pratiquement toutes les cellules eucaryotes, y compris les levures. Contrairement aux organites vésiculaires qui sont entourés 5 par une bicouche de phospholipides (tout comme les membranes cellulaires), les gouttelettes lipidiques ne sont entourées que d'une seule monocouche de phospholipides qui délimite un contenu très hydrophobe et contient pour l'essentiel des triglycérides et des esters de stérols. Différentes 10 protéines sont à la surface de ces gouttelettes lipidiques, la plus connue étant la périlipine, qui stabilise ces organites et régule la lipolyse dans le tissu adipeux (Roingeard, 2013). Dans le tissu adipeux, ces gouttelettes 15 occupent 80 à 90 % du volume de l'adipocyte, et une position centrale, déplaçant le noyau, le cytosol et les organelles restantes à la périphérie de la cellule proches de la membrane cellulaire. Pour la synthèse de TAGs, trois molécules 20 d'acides gras sont associées à une molécule de glycérol. Il existe très peu de lipogenèse de novo dans le tissu adipeux humain (avec formation d'acides gras à partir de substrats non lipidiques). Les acides gras de TAGs sont issus d'acides gras libres liés à l'albumine provenant de la circulation 25 sanguine, ou encore de l'hydrolyse des TAGs transportés dans le sang par des lipoprotéines. La régulation hormonale est très importante dans le métabolisme lipidique : tandis que l'insuline augmente l'absorption de glucose et stimule la lipogenèse, 30 la leptine, à l'inverse, limite le stockage des lipides en induisant, entre autres, le relargage du glycérol des adipocytes et en inhibant la synthèse des acides gras (Proença et al., 2014). La demanderesse a mis en évidence l'effet inhibiteur d'un extrait d'Agropyron repens sur la 5 lipogenèse ce qui lui permet d'exercer une action préventive sur l'augmentation du tissu adipeux sous-cutané. L'invention concerne donc l'utilisation cosmétique d'un extrait d'Agropyron repens comme agent amincissant et plus particulièrement comme agent anti 10 lipogenèse. L'extrait d'Agropyron repens peut également être avantageusement utilisé dans une composition amincissante. L'utilisation selon l'invention est 15 particulièrement adaptée à une application topique sur des peaux saines. Dans le cadre de la présente invention, on désigne par peau saine une peau qui ne présente pas de pathologie cutanée. On entend donc par utilisation cosmétique une utilisation non thérapeutique. 20 L'utilisation selon l'invention est particulièrement adaptée à une application topique sur la peau du visage aussi bien qu'à une application sur la peau du corps. 25 Agropyron repens est une plante vivace appartenant à la famille des Poaceae. Elle peut mesurer de 40 cm à plus d'l mètre de hauteur. Ses feuilles sont plates et pointues, de largeur variable entre 3 et 10 mm. La plante 30 est dotée de tiges dressées et surmontées d'inflorescences. Ces inflorescences sont formées d'épillets disposés sur deux rangs par alternance et peuvent mesurer jusqu'à 30 cm de long. Les graines (entre 25 et 40 par tiges) issues des fleurs sont rarement fertiles. Agropyron repens est une plante native des régions tempérées d'Europe et d'Asie centrale. De nos jours, 5 elle est présente à travers le monde. On la trouve aussi bien en Australie, en Nouvelle Zélande, en Asie, qu'en Afrique. Agropyron repens possède des propriétés nutritives et thérapeutiques. Elle est traditionnellement 10 utilisée pour ces vertus apaisantes, diurétiques et toniques. Elle aurait la propriété de nettoyer les organes filtrants que sont les reins, la rate et le foie. Elle serait utilisée en traitement d'infections urinaires telles que les cystites. En décoction, Agropyron repens permet de 15 soulager les inflammations de la prostate. La pâte réalisée à partir des feuilles est utilisée pour lutter contre l'hémiplégie, les blessures traumatiques, les maux de tête ou l'urticaire. Agropyron repens est également utilisée par les femmes comme régulateur hormonal. Elle est notamment 20 utilisée après l'accouchement dans le but de faire désenfler les seins et réduire les abcès après l'allaitement, mais aussi contre les troubles de la ménopause. En usage externe la plante est utilisée pour lutter contre l'eczéma. 25 L'utilisation cosmétique selon la présente invention met préférentiellement en oeuvre un extrait d'Agropyron repens ou une composition cosmétique comprenant un tel extrait. L'extrait d'Agropyron repens selon 30 l'invention est préférentiellement un extrait des racines et des rhizomes de la plante. L'extrait d'Agropyron repens utilisé dans la présente invention est de préférence un extrait hydrosoluble obtenu par macération à chaud. Selon un mode particulier de l'invention l'extrait est obtenu selon un procédé comprenant au moins les étapes suivantes : - Sélection et nettoyage des racines et 5 rhizomes - Addition du mélange de solvants, eau (40 à 60%) et glycérine (40 à 60%) avec un ration plante/solvants de 1/5 à 1/20 10 - Macération à 80°C pendant 24 heures - Extraction par pressage - Addition éventuelle de conservateurs (sorbate de potassium, benzoate de sodium) - Filtration 15 On obtient ainsi un extrait hydro glycériné d'Agrqpyron repens. L'extrait des racines et rhizomes d'Agrqpyron repens ainsi obtenu est un liquide transparent de couleur brun pâle. Il présente les caractéristiques 20 analytiques suivantes : - Densité à 20°C = 1,120 - 1,180 g/m1 - pH = 4.0 - 5.0 - Teneur en sucres = 0.1 - 0.5% On peut se procurer un extrait d'Agropyron 25 repens auprès de la société PROVITAL. La demanderesse a démontré que l'extrait d'Agrqpyron repens utilisé selon l'invention ainsi que la composition cosmétique le comprenant peuvent être utilisés 30 par application sur la peau saine comme agent amincissant et plus particulièrement comme agent anti-lipogenèse. De par son effet sur la prévention de l'augmentation du tissu adipeux sous-cutané, l'extrait d'Agrqpyron repens prévient et/ou retarde aussi les manifestations cutanées visibles à la surface de la peau : la cellulite et/ou les capitons. En conséquence l'extrait d'Agropyron repens peut être utilisé dans une composition cosmétique 5 amincissante, anti-cellulite et/ou anti-capitons. On entend par composition cosmétique une formulation convenant à une application cutanée, comprenant l'extrait d'Agropyron repens ainsi que des excipients cosmétiquement acceptables. 10 C'est ainsi que la composition cosmétique peut comprendre outre l'extrait d'Agropyron repens un ou plusieurs agents de formulation ou additifs d'usage connu et classique dans les compositions cosmétiques tels que, à titre d'exemples et de façon non limitative, des 15 adoucissants, des colorants, des actifs filmogènes, des tensioactifs, des parfums, des conservateurs, des émulsionnants, des huiles, des glycols, des vitamines comme la vitamine E, des filtres UV, etc. Grâce à ses connaissances en matière de cosmétique, l'homme du métier 20 saura quels agents de formulation ajouter aux compositions de l'invention et en quelles quantités en fonction des propriétés recherchées. Les compositions cosmétiques peuvent se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier dans 25 le domaine de la cosmétologie sans autre restriction galénique que l'application sur le visage et sur le corps. De façon avantageuse, les compositions cosmétiques peuvent de manière non limitative se présenter sous la forme d'un gel, d'une crème, d'une lotion, d'un masque, d'une huile, 30 d'un lait ou d'un spray. De préférence, l'extrait d'Agropyron repens est utilisé à la concentration de 0,01% à 10% en poids d'extrait par rapport au poids total de la composition. Avantageusement, de 0,01% à 5% en poids d'extrait par rapport au poids total de la composition. Les exemples ci-après concernent, d'une 5 part l'évaluation de l'effet d'un extrait d'Agropyron repens sur la lipogenèse ; d'autre part les exemples ci-après concernent des exemples d'utilisation de l'extrait d'Agropyron repens objet de la présente invention. Les exemples font référence à la figure 10 1 qui représente l'effet d'un extrait d'Agropyron repens sur des préadipocytes humains en culture. I.EVALUATION DE L'ACTIVITE D'UN EXTRAIT D'AGROPYRON REPENS SUR DES PRE ADIPOCYTES HUMAINS. 15 A.MATERIELS ET METHODES 1) culture cellulaire Afin d'évaluer l'effet de l'extrait d'Agropyron repens sur l'accumulation lipidique, des 20 préadipocytes humains issus de sujets (trois donneurs différents) ayant subi une dermolipectomie ont été utilisés. Les préadipocytes ont été isolés par digestions enzymatiques (collagénase) et centrifugations de prélèvements de tissu adipeux sous-cutané, puis mis en 25 culture pendant 10 à 12 jours dans du milieu DMEM/F12 complété avec un cocktail de différenciation ( Hauner, H., Skurk, T., & Wabitsch, M. (2001). Cultures of human adipose precursor cells. Methods in Mblecular Biology (Clifton, NJ), /55, 239-247. http://doi.org/10.1385/1-59259-231- 30 7:239) en présence ou non de l'extrait d'Agropyron repens aux concentrations de 0,05 % et 0,1 %, concentrations testées non cytotoxiques. Le milieu de culture est renouvelé tous les 2-3 jours. Le cocktail de différenciation comprend 10 de l'insuline, de la dexaméthasone et de la rosiglitazone (un agoniste de PPARy). L'extrait d'Agropyron repens est un extrait hydrosoluble des rhizomes et racines de la plante obtenu 5 par macération à chaud tel que décrit précédemment. Les 4 conditions expérimentales suivantes sont réalisées : - Une condition contrôle de différenciation, où les préadipocytes sont cultivés pendant 10 10 jours environ en présence d'un cocktail de différenciation (« contrôle différencié ») - Une condition contrôle d'absence de différenciation, où les préadipocytes sont cultivés le même nombre de jours en absence d'un cocktail de différenciation 15 (« contrôle NON différencié ») - Une condition test avec l'extrait d'Agropyron repens à 0.05%, où les préadipocytes sont cultivés le même nombre de jours en présence d'un cocktail de différenciation. 20 - Une condition test avec l'extrait d'Agropyron repens à 0.1%, où les préadipocytes sont cultivés le même nombre de jours en présence d'un cocktail de différenciation. 25 2) Fixation et marquages Les préadipocytes humains sont ensuite fixés en formaline puis les triglycérides des gouttelettes lipidiques marqués avec un colorant fluorescent spécifique, l'AdipoRed (Lonza, PI-7009) et les noyaux des cellules 30 marqués au DAPI. 3) Acquisitions et post-traitements 11 Les marquages AdipoRed et DAPI sont ensuite quantifiés par acquisition et traitement d'images selon la méthode suivante : - L'acquisition de sept microphotographies 5 sur cinq niveaux pour chaque puit de culture est réalisée avec un système d'imagerie comprenant un microscope inversé à fluorescence à champ large, Axio Observer Z1, auquel est couplé un système ApoTome équipé d'une caméra mono axiocam 506 (grossissement objectif x10 et ouverture numérique 10 0,3). - La quantification de l'accumulation des lipides par traitement d'image est exécutée sous ImageJ. Le traitement d'image mis en place consiste à nettoyer les différents types de bruits numériques, à homogénéiser le 15 fond des images et ensuite à éliminer ce fond contenant des structures non pertinentes. - La détermination du nombre de noyaux au DAPI permettant la normalisation des résultats est réalisée avec un algorithme de détection et de séparation de forme 120 s'appuyant sur la taille et la circularité des noyaux. -Des images résultats obtenues avec ce traitement sont extraites les informations de surface de fluorescence (AdipoRed) détectée rapportées au nombre de noyaux détectés. 25 4) Analyses statistiques - Les résultats obtenus ont été analysés statistiquement par One Way ANOVA et un test de Fisher avec le logiciel Prism 6. Ce test permet de comparer la 30 différence des moyennes de chacune des conditions par rapport au contrôle et d'obtenir une p-value (p) qui reflète la probabilité que la différence entre deux moyennes soit due au hasard. En biologie, la significativité est 12 communément admise comme suit : * : p REVENDICATIONS1) Utilisation cosmétique d'un extrait d'Agrqpyron repens comme agent amincissant. 2) Utilisation cosmétique selon la revendication 1, dans laquelle l'extrait d'Agropyron repens est un agent anti lipogenèse. 3) Utilisation cosmétique selon les revendications 1 ou 2, dans laquelle l'extrait d'Agrqpyron repens prévient l'augmentation du tissu adipeux sous cutané. 4) Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle l'extrait d'Agrqpyron repens prévient et/ou retarde les manifestations cutanées de l'augmentation du tissu adipeux que sont la cellulite et/ou les capitons. 5) Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle l'extrait d'Agrqpyron repens est un extrait des racines et des rhizomes de la plante. 6) Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle l'extrait d'Agrqpyron repens est un extrait hydro soluble. 7) Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle l'extrait d'Agrqpyron repens est un extrait hydro glycériné. 16 8) Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle l'extrait d'Agrqpyron repens est utilisé dans une 5 composition cosmétique à la concentration de 0,01 à 10% en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition, de préférence de 0,01 à 5% en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition. 10