FR 3065735 A1 20181102 FR 1753616 A 20170426 1 DISPOSITIF DE CULTURE MICROBIOLOGIQUE COMPRENANT UN FEUILLET D'HYDROGEL POLYSACCHARIDIQUE DESHYDRATE La prÃ©sente invention appartient au domaine de la microbiologie et de la culture de microorganismes sur milieux solides et semi-solides. Elle a trait plus spÃ©cifiquement aux solutions alternatives proposÃ©es aux milieux de culture gÃ©losÃ©s traditionnels, destinÃ©s notamment Ã la culture, la dÃ©tection et/ou l'identification de microorganismes prÃ©sents dans un Ã©chantillon Ã analyser. Dans le domaine du diagnostic clinique ou vÃ©tÃ©rinaire, ainsi que celui du contrÃ´le microbiologique industriel (en particulier dans les industries agroalimentaire, pharmaceutique et cosmÃ©tique), les supports de culture solides et semi-solides -plus communÃ©ment dÃ©signÃ©s par milieux (de culture) gÃ©losÃ©s ou gÃ©loses nutritives - constituent des outils prÃ©cieux pour la dÃ©tection et l'Ã©tude des microorganismes potentiellement pathogÃ¨nes et/ou infectieux. Apparus Ã la fin du XIXÃ¨me siÃ¨cle avec l'utilisation de l'agar agar comme agent gÃ©lifiant, les milieux de culture solidifiÃ©s ont rapidement et profondÃ©ment rÃ©volutionnÃ© la pratique de la microbiologie. DÃ¨s lors, les microorganismes Ã dÃ©tecter, Ã identifier et/ou Ã Ã©tudier ont Ã©tÃ© apprÃ©hendÃ©s, observÃ©s et manipulÃ©s Ã Ã©chelle macroscopique, sous forme de colonies, c'est-Ã -dire des amas cellulaires visibles Ã l'oeil nu et poussant Ã la surface de ces milieux de culture solides. Ce faisant, de nouvelles perspectives analytiques et expÃ©rimentales ont vu le jour, et des amÃ©liorations et simplifications de techniques prÃ©existantes ont Ã©tÃ© rendues possibles. A cet Ã©gard, on citera tout particuliÃ¨rement les techniques d'isolement de microorganismes sur milieu gÃ©losÃ©, qui restent aujourd'hui encore trÃ¨s largement employÃ©es dans de nombreuses mÃ©thodes d'analyses microbiologiques, compte tenu de leur grande simplicitÃ© d'exÃ©cution. Il s'agit essentiellement des techniques d'isolement par Ã©puisement, de la technique des quadrants. Ces techniques d'isolement sur milieu gÃ©losÃ© consistent Ã disperser, sur la surface du milieu de culture solide, les cellules d'un dÃ©pÃ´t d'Ã©chantillon biologique Ã analyser. Cette dispersion est exÃ©cutÃ©e, par exemple, grÃ¢ce Ã des moyens/outils mÃ©caniques que l'on fait glisser sur la surface du milieu de culture selon un parcours particulier. A 3065735 2 l'issue de ce processus de dispersion, les cellules arrivÃ©es Ã la fin du parcours d'Ã©talement se retrouvent individualisÃ©es, sÃ©parÃ©es les unes des autres. Chacune de ces cellules individualisÃ©es se dÃ©veloppe alors pour former in fine une colonie de culture pure, c'est-Ã -dire un amas cellulaire renfermant des microorganismes, tous gÃ©nÃ©tiquement identiques. 5 Chaque colonie pourra alors faire l'objet d'une analyse morphologique (examen de la forme de la colonie, son Ã©lÃ©vation, la rÃ©gularitÃ© des bords...), directement sur ce mÃªme milieu de culture ou sur d'autres milieux. Ces cellules pourront aussi Ãªtre collectÃ©es Ã des fins de conservation en vue d'analyses complÃ©mentaires ultÃ©rieures. Outre le fait d'offrir aux microorganismes un support adaptÃ© Ã leur croissance 10 et dÃ©veloppement, les milieux de culture gÃ©lifiÃ©s/solidifiÃ©s, classiquement Ã base0 de gÃ©lose, ont l'avantage de pouvoir prÃ©senter des niveaux de duretÃ© et des Ã©tats de surface qui les rendent parfaitement adaptÃ©s aux opÃ©rations d'isolement et d'Ã©talement des cellules, et en particulier aux forces de pression et de friction exercÃ©es par les outils et instrumentations dÃ©veloppÃ©s Ã cet effet (cf par exemple, EP 0 242 114, WO 2005/071055). 15 Les milieux de culture gÃ©losÃ©s connaissent cependant quelques inconvÃ©nients majeurs. A ce titre, on notera une prÃ©paration, qui lorsqu'elle est artisanale, requiert du temps (au moins une heure) et de nombreuses opÃ©rations (pesage des ingrÃ©dients, dissolutions, autoclavage, coulage, rÃ©partition en boites de Petri). Egalement, comme cela est le cas pour les milieux de culture liquides, ces milieux solides ou semi-solides sont 20 extrÃªmement sensibles Ã toute forme de contamination biologique. Enfin, du fait de la grande difficultÃ© pour en assurer la stÃ©rilitÃ©, les milieux gÃ©losÃ©s Â« artisanaux Â» doivent Ãªtre prÃ©parÃ©s de faÃ§on extemporanÃ©e ou quasi-extemporanÃ©e. Il existe Ã©galement des milieux gÃ©losÃ©s produits industriellement. Ces milieux gÃ©losÃ©s prÃªts Ã l'emploi ont des durÃ©es de pÃ©remption courtes, qui ne dÃ©passent guÃ¨re 25 quelques mois. Cette durÃ©e de pÃ©remption limitÃ©e peut notamment s'expliquer pour partie par la prÃ©sence d'eau dans les milieux. Par ailleurs, pour en garantir une stÃ©rilitÃ© optimale et un niveau de performances acceptable, ils sont soumis Ã des mesures draconiennes en termes de conditionnement (traitement stÃ©rilisant aux UV, double emballage...), d'acheminement et de conservation (un stockage entre 2Â°C et 8Â°C, Ã l'abri de la lumiÃ¨re). Ces nombreuses 30 contraintes impactent sur les coÃ»ts de vente et d'utilisation des milieux gÃ©losÃ©s industriels. Pour remÃ©dier aux inconvÃ©nients prÃ©citÃ©s, des alternatives aux milieux de 3065735 3 culture gÃ©loses ont Ã©tÃ© proposÃ©es. Il s'agit en particulier de dispositifs de culture microbiologique prÃªts Ã l'emploi, industriellement produits, qui ont la particularitÃ© d'intÃ©grer des compositions nutritives, Ã©ventuellement sÃ©lectives et/ou discriminantes, dÃ©shydratÃ©es et activables par simple (rÃ©)hydratation. De ce fait, outre des modalitÃ©s de 5 conservation/stockage peu contraignantes (Ã l'abri de l'humiditÃ© et des fortes tempÃ©ratures), leur durÃ©e de pÃ©remption peut atteindre plusieurs annÃ©es. A ce titre, la compagnie 3M (Etats-Unis) propose une gamme de dispositifs de culture microbiologique industriels dÃ©nommÃ©e PetrifilmTM. Ces dispositifs, notamment 10 dÃ©crits dans EP 0 070 310 ou EP 0 620 844 ou encore EP 0 832 180, sont formÃ©es de deux films Ã©tanches Ã l'eau, apposÃ©s l'un sur l'autre. A l'interface, la face interne de chacun des deux films est recouverte d'une composition adhÃ©sive permettant d'y faire adhÃ©rer une fine couche de poudre(s) hydrosoluble(s) Ã froid. Pour certains des dispositifs PetrifilmTM, l'une des faces internes des films est 15 recouverte d'une premiÃ¨re poudre, qui correspond Ã une composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e et micronisÃ©e. L'autre face interne est quant Ã elle recouverte d'une seconde poudre, qui correspond Ã un agent gÃ©lifiant (tel que la gomme de guar et/ou la gomme de xanthane) micronisÃ©. Pour d'autres dispositifs PetrifilmTM, les deux faces internes sont recouvertes 20 d'une mÃªme poudre, formÃ©e par un mÃ©lange entre une composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e et micronisÃ©e, et un agent gÃ©lifiant Ã©galement micronisÃ©. Ces dispositifs PetrifilmTM sont destinÃ©s Ã la dÃ©tection et/ou au dÃ©nombrement de microorganismes prÃ©sents dans un Ã©chantillon Ã analyser. Pour ce faire, le dispositif de culture est ouvert en soulevant le film supÃ©rieur, transparent. Un volume d'Ã©chantillon Ã 25 analyser (liquide ou prÃ©alablement rendu liquide) d'une grande fluiditÃ©, Ã©ventuellement prÃ©alablement diluÃ© et fluidisÃ©, est dÃ©posÃ© au centre du film infÃ©rieur. Le film supÃ©rieur est repositionnÃ© sur le film infÃ©rieur. Au contact de l'eau prÃ©sent dans l'Ã©chantillon Ã analyser, le gÃ©lifiant forme un hydrogel qui amÃ©liore la fixation des cellules au support de culture. Cette mÃªme eau permet aussi de solubiliser et d'activer le milieu de culture. En comprimant 30 quelque peu l'Ã©chantillon entre les deux films, l'Ã©chantillon est Ã©talÃ© sur une plus grande surface de culture. Le dispositif de culture microbiologique est finalement incubÃ© Ã la tempÃ©rature et pendant la durÃ©e prescrites avant la lecture des rÃ©sultats. 3065735 4 De par leur conception, les dispositifs PetrifilmTM ne permettent pas de mettre en oeuvre les mÃ©thodes d'isolement et/ou les mÃ©thodes d'Ã©talement comme on pourrait le faire sur un milieu de culture gÃ©losÃ©, et ne sont pas compatibles avec les outils et instrumentations dÃ©veloppÃ©s Ã cet effet (cf par exemple, EP 0 242 114, WO 2005/071055). 5 On connait Ã©galement les dispositifs de culture Compact DryTM, dÃ©veloppÃ©s par la compagnie NISSUI PHARMACEUTICAL (Japon), dont le support de culture microbiologique est formÃ© par une feuille en matÃ©riau fibreux absorbant, intÃ©grant dans sa masse une composition nutritive dÃ©shydratÃ©e, Ã©ventuellement Ã©galement sÃ©lective et/ou 10 discriminante (cf par exemple, EP 1 179 586). Pour ce faire, une suspension alcoolique est prÃ©parÃ©e en mÃ©langeant, dans de l'Ã©thanol, une composition de milieu de culture, un adhÃ©sif soluble Ã la fois dans l'eau et dans l'Ã©thanol (par exemple, le poly[oxyde d'Ã©thylÃ¨ne] et l'hydroxypropylcellulose) et un agent gÃ©lifiant soluble dans l'eau mais insoluble dans l'Ã©thanol (par exemple, la gomme de 15 caroube, la gomme de guar, la carragÃ©nine, l'hydroxyÃ©thylcellulose). Cette suspension alcoolique est utilisÃ©e pour imprÃ©gner la feuille en matÃ©riau fibreux absorbant. AprÃ¨s sÃ©chage, ladite feuille forme un support de culture dÃ©shydratÃ©, prÃªt Ã l'emploi, de longue conservation, activable par simple rÃ©hydratation. Ces dispositifs Compact DryTM sont destinÃ©s Ã la dÃ©tection et/ou au 20 dÃ©nombrement de microorganismes prÃ©sents dans un Ã©chantillon Ã analyser. Pour ce faire, un volume d'Ã©chantillon Ã analyser (liquide ou prÃ©alablement rendu liquide) d'une grande fluiditÃ©, Ã©ventuellement prÃ©alablement diluÃ©, est ensemencÃ© Ã l'aide d'une pipette sur le support de culture en recouvrant un maximum de surface. Le dispositif de culture est alors incubÃ© pendant la durÃ©e et Ã la tempÃ©rature prescrites, avant lecture des rÃ©sultats. 25 Les techniques d'isolement ainsi que les techniques d'Ã©talement classiquement utilisÃ©es sur les milieux gÃ©losÃ©s ne sont difficilement rÃ©alisables avec ce type de support de culture. En effet, du fait de leur nature fibreuse, ces supports de culture ont une surface irrÃ©guliÃ¨re avec de nombreuses aspÃ©ritÃ©s qui entravent le glissement continu et rÃ©gulier des outils et instruments habituellement utilisÃ©s pour Ã©taler et disperser les cellules 30 sur la surface d'un milieu gÃ©losÃ© classique. Egalement, les cellules ont tendance Ã se dÃ©velopper en profondeur dans l'Ã©paisseur du support poreux, ce qui peut rendre difficile la visualisation/identification des colonies formÃ©es. 3065735 5 Dans WO 2015/104501, la Demanderesse propose aussi des dispositifs de culture microbiologique prÃªts Ã l'emploi, dÃ©diÃ©s Ã la dÃ©tection, Ã l'identification et/ou Ã l'Ã©numÃ©ration de microorganismes. Ces dispositifs sont Ã©galement basÃ©s sur un support de culture en matÃ©riau fibreux et absorbant incorporant, dans son Ã©paisseur, une composition de 5 milieu de culture. L'incorporation de la composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e dans l'Ã©paisseur du support de culture est rÃ©alisÃ©e par une technique d'imprÃ©gnation Ã sec. Comme pour les dispositifs Compact DryTM, du fait de leur nature fibreuse, ces supports de culture ont une surface irrÃ©guliÃ¨re avec de nombreuses aspÃ©ritÃ©s ; ces dispositifs ne sont donc pas compatibles avec les techniques et les outils dÃ©veloppÃ©s jusqu'Ã prÃ©sent pour 10 l'isolement et l'Ã©talement des cellules sur la surface d'un milieu gÃ©lose classique. Egalement, comme pour les dispositifs Compact DryTM, les cellules se dÃ©veloppent en profondeur dans l'Ã©paisseur du support poreux. Pour remÃ©dier Ã ces dÃ©fauts, dans WO 2014/013089 et WO 2015/107228, la Demanderesse propose de recouvrir cette surface fibreuse d'une couche superficielle apte Ã 15 en parfaire l'Ã©tat de surface. Dans WO 2014/013089, il est ainsi proposÃ© d'utiliser une membrane de (micro)filtration aux pores suffisamment Ã©troites pour empÃªcher la diffusion des cellules vers les couches sous-jacentes, et pour former par la mÃªme occasion une surface de rendu relativement lisse. Ladite membrane de (micro)filtration peut Ãªtre rÃ©alisÃ©e Ã base de un ou 20 plusieurs matÃ©riaux choisis parmi le latex, le polytÃ©trafluoroÃ©thylÃ¨ne, le poly(vinylidÃ¨ne) fluoride, le polycarbonate, le polystyrÃ¨ne, le polyamide, le polysulfone, le polyÃ©thersulfone, la cellulose, la nitrocellulose. En alternative, dans WO 2015/107228, il est proposÃ© un recouvrement par une couche poreuse de composition comprenant un mÃ©lange de pigments de kaolin, de talc, 25 de dioxyde de titane, et/ou de carbonate de calcium, et d'un liant de type latex styrÃ¨ne butadiÃ¨ne, latex styrÃ¨ne acrylique ou carboxyle mÃ©thyle cellulose. MalgrÃ© des rÃ©sultats biologiques probants, de tels supports de culture sont commercialement peu viables Ã l'heure actuelle, notamment car leur fabrication Ã Ã©chelle industrielle nÃ©cessiterait d'importants investissements financiers. 30 La prÃ©sente invention a ainsi pour objet de proposer un dispositif de culture microbiologique qui, tout en offrant une durÃ©e de pÃ©remption longue, y compris Ã 3065735 6 tempÃ©rature ambiante, procure une rÃ©elle alternative aux milieux de culture gÃ©lose traditionnels, tant sur le plan de la fertilitÃ© que sur la compatibilitÃ© avec les opÃ©rations mÃ©caniques d'Ã©talement et de dispersion des cellules. Un autre objectif de la prÃ©sente invention est de pouvoir proposer un 5 dispositif de culture microbiologique qui soit compatible avec les contraintes d'une exploitation industrielle et commerciale, notamment en termes de coÃ»t de production et de rentabilitÃ©. En particulier, la prÃ©sente invention vise Ã proposer un dispositif de culture microbiologique de conception et de fabrication adaptÃ©es aux installations et moyens de production actuellement utilisÃ©s dans l'industrie des milieux et dispositifs de culture 10 microbiologique. La prÃ©sente invention propose donc un dispositif de culture microbiologique comprenant : - une piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant ayant une face supÃ©rieure au moins sensiblement 15 plane et incorporant dans son Ã©paisseur une composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e (sÃ¨che ou sÃ©chÃ©e), - reposant sur ladite piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant, un feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© et rÃ©hydratable Ã tempÃ©rature ambiante, en particulier Ã des tempÃ©ratures comprises entre 5Â°C et 40Â°C ; ledit feuillet d'hydrogel dÃ©shydratÃ© Ã©tant apposÃ© 20 directement sur la face supÃ©rieure de ladite piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant, ou indirectement au travers d'une membrane permÃ©able intercalaire. Selon l'invention, ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© a Ã©tÃ© prÃ©parÃ© par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de composition Ã base d'eau et d'au 25 moins un gÃ©lifiant polysaccharidique. Ce feuillet d'hydrogel dÃ©shydratÃ© a la particularitÃ© d'Ãªtre rÃ©hydratable Ã tempÃ©rature ambiante, c'est-Ã -dire qu'il recouvre sa texture et ses propriÃ©tÃ©s d'hydrogel par simple absorption d'une composition aqueuse, sans nÃ©cessiter aucun traitement thermique additionnel. 30 Lors de son utilisation, le dispositif de culture microbiologique selon l'invention doit Ãªtre hydratÃ© pour Ãªtre activÃ©. Pour ce faire, la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant est imbibÃ©e avec une quantitÃ© d'eau ou une composition aqueuse. La composition de milieu 3065735 7 de culture, initialement prÃ©sente dans un Ã©tat sec, est ainsi solubilisÃ©e et activÃ©e. Au contact mÃªme de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant, ou au travers d'une membrane permÃ©able intercalaire, le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© se rÃ©hydrate Ã son tour, presque instantanÃ©ment et Ã tempÃ©rature ambiante. En se gonflant du liquide provenant de la 5 piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant, le feuillet d'hydrogel se restructure pour donner une fine couche d'hydrogel (ou pellicule d'hydrogel) gorgÃ©e d'une composition de milieu de culture solubilisÃ©e et activÃ©e. L'ensemencement de l'Ã©chantillon Ã analyser sur le feuillet d'hydrogel polysaccharidique peut Ãªtre effectuÃ© aussi bien avant qu'aprÃ¨s rÃ©hydratation de ce dernier. 10 Dans ce systÃ¨me rÃ©hydratÃ©, la couche d'hydrogel polysaccharidique procure Ã la surface du dispositif de culture microbiologique un effet de lubrification qui facilite les opÃ©rations mÃ©caniques d'Ã©talement et de dispersion des cellules. Egalement, par sa consistance molle, elle favorise l'implantation des microorganismes au plus prÃ¨s des ingrÃ©dients nutritifs et des agents actifs du milieu de culture. Quant Ã la piÃ¨ce en matÃ©riau 15 absorbant, outre son rÃ´le dans la conservation et la distribution de la composition de milieu de culture, sa structure participe Ã la rigiditÃ© et la fermetÃ© globales de la surface du dispositif de culture microbiologique, assurant sa compatibilitÃ© Ã l'Ã©gard des forces de pression et de friction qu'exercent les outils et instrumentations utilisÃ©s pour Ã©taler et disperser les cellules. 20 Avant d'aller plus loin dans la description de l'invention, les dÃ©finitions ci- aprÃ¨s sont donnÃ©es afin de faciliter la comprÃ©hension de l'exposÃ© de l'invention. L'expression Â« milieu de culture Â» fait rÃ©fÃ©rence Ã une composition nutritive permettant la croissance et le dÃ©veloppement de cellules, plus particuliÃ¨rement des bactÃ©ries, des moisissures et/ou des levures. Ces milieux permettent de rÃ©pondre aux besoins 25 nutritionnels des microorganismes Ã cultiver. SchÃ©matiquement, on trouve dans leur composition : - de l'eau (gÃ©nÃ©ralement de l'eau distillÃ©e ou dÃ©ionisÃ©e) stÃ©rile, - au moins un glucide, Ã titre de source carbonÃ©e et d'Ã©nergie, - ainsi que d'autres Ã©lÃ©ments nutritifs (notamment, acides aminÃ©s, facteurs de 30 croissance, vitamines, minÃ©raux, oligo-Ã©lÃ©ments, sels de fer, citrate de sodium, chlorure de sodium...) apportÃ©s sous la forme de compositions chimiquement complexes telles que des mÃ©langes de peptones (de lait, de viande et/ou de fÃ©cules de 3065735 8 pomme de terre, de maÃ¯s...), des extraits de levures, de sÃ©rum, et/ou des extraits de tissus d'origine animale ou vÃ©gÃ©tale... Ã©galement divers sels, permettant d'Ã©tablir une osmolaritÃ© adÃ©quate au milieu, et de tamponner le pH. 5 Un milieu de culture au sens de la prÃ©sente invention peut Ã©ventuellement dÃ©montrer une certaine sÃ©lectivitÃ© Ã l'Ã©gard de microorganismes cibles, c'est-Ã -dire qu'il favorise le dÃ©veloppement de ces microorganismes cibles plutÃ´t que celui de la flore annexe, et/ou qu'il inhibe et/ou ralentit le dÃ©veloppement de la flore annexe. Cet effet sÃ©lectif peut notamment Ãªtre obtenu grÃ¢ce Ã l'emploi d'agents Ã effet inhibiteur pour la flore annexe ou 10 d'agents Ã effet activateur pour les microorganismes cibles. Egalement, un milieu de culture au sens de la prÃ©sente invention peut Ã©ventuellement dÃ©montrer des aptitudes de discrimination permettant de diffÃ©rencier, de distinguer visuellement les diffÃ©rentes catÃ©gories de microorganismes poussant sur ce mÃªme milieu de culture. A cet effet, le milieu de culture intÃ¨gre avantageusement une composante chromogÃ©nique et/ou 15 fluorogÃ©nique permettant une observation visuelle des microorganismes en fonction d'activitÃ©s mÃ©taboliques particuliÃ¨res qu'ils expriment. La composition et la formulation de nombreux milieux de culture sont dÃ©crites notamment dans le HANDBOOK OF MICROBIOLOGICAL MEDIA (2010 ; 4Ã¨me Edition). 20 Le terme Â« Ã©chantillon Â» fait rÃ©fÃ©rence Ã un prÃ©lÃ¨vement effectuÃ© Ã des fins d'analyse ou Ã une petite partie ou petite quantitÃ© de ce prÃ©lÃ¨vement. L'invention vise plus spÃ©cifiquement des Ã©chantillons biologiques contenant ou suspectÃ©s de contenir des microorganismes Ã dÃ©tecter et/ou Ã analyser. Ces Ã©chantillons biologiques peuvent Ãªtre d'origine humaine, animale, vÃ©gÃ©tale ou environnementale. Ils peuvent aussi avoir une 25 origine industrielle et provenir de prÃ©lÃ¨vements opÃ©rÃ©s sur un produit manufacturÃ© ou un produit en cours de fabrication, ou sur des instruments, des installations rencontrÃ©s dans un environnement industriel. Les secteurs industriels visÃ©s ici sont plus particuliÃ¨rement les industries agroalimentaire, pharmaceutique, cosmÃ©tique et vÃ©tÃ©rinaire, les dispositifs mÃ©dicaux, la microbiologie des contrÃ´les environnementaux (eaux, air, surfaces). 30 Les termes Â« microorganismes Â» et Â« cellules Â» sont utilisÃ©s ici de faÃ§on Ã©quivalente et font rÃ©fÃ©rence Ã des bactÃ©ries, des levures, des moisissures et/ou des amibes. Par Â« moyens/outils d'isolement/Ã©talement Â», on entend les instruments 3065735 9 mÃ©caniques aptes Ã Ãªtre utilisÃ©s dans la mise en oeuvre des techniques d'isolement (par exemple, la technique d'Ã©puisement, la technique des stries ou des cadrans), des techniques d'Ã©talement ou de nappage cellulaire (par exemple, en vue d'un dÃ©nombrement cellulaire ou de la rÃ©alisation de tests de susceptibilitÃ© aux antibiotiques), comme ceux qui sont 5 couramment utilisÃ©s sur les milieux de culture gÃ©losÃ©s traditionnels. Ces instruments mÃ©caniques, utilisÃ©s manuellement ou de faÃ§on automatisÃ©e, permettent de rÃ©aliser un ou plusieurs dÃ©pÃ´ts ponctuels de microorganismes sur la surface du milieu de culture, et en glissant sur cette surface, ils en Ã©talent les cellules. A titre d'exemples non exhaustifs, on peut citer les oÃ«ses, les anses de platine, les tiges rodÃ©es, des billes, les Ã©taloirs, les ringards 10 ou rÃ¢teaux. Selon l'invention, le dispositif de culture microbiologique proposÃ© est formÃ©, pour l'essentiel, de la combinaison entre une piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant incorporant dans son Ã©paisseur une composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e, et un feuillet d'hydrogel 15 polysaccharidique Ã©galement dÃ©shydratÃ©, ayant la capacitÃ© de se rÃ©hydrater Ã tempÃ©rature ambiante. Par ses dimensions, le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© recouvre tout ou partie la face supÃ©rieure de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant. A propos de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant, qui compose la couche 20 interne/profonde du dispositif de culture microbiologique selon l'invention et qui fait office de rÃ©servoir Ã une composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e, sa structure, sa conception et ses dimensions sont largement dÃ©crites ou suggÃ©rÃ©es par EP 1 179 586, WO 2015/104501, WO 2014/013089, WO 2015/107228. De nombreux matÃ©riaux absorbants, hydrophiles et non hydrosolubles, 25 peuvent Ãªtre utilisÃ©s pour rÃ©aliser la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant d'un dispositif de culture microbiologique selon l'invention. Ces matÃ©riaux sont principalement choisis pour leur pouvoir absorbant, leur capacitÃ© de rÃ©tention des liquides aqueux et leur facultÃ© Ã laisser les liquides aqueux les traverser. 30 Avantageusement et selon l'invention, ladite piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant est rÃ©alisÃ©e Ã partir d'un substrat de fibres courtes non-tissÃ©es, constituant un ensemble ayant une intÃ©gritÃ© et une cohÃ©rence mÃ©canique. Les substrats particuliÃ¨rement adaptÃ©s sont en 3065735 10 fibre cellulosique naturelle (comme le coton) ou synthÃ©tique (comme la rayonne), en fibre cellulosique modifiÃ©e (par exemple, la carboxymÃ©thylcellulose, la nitrocellulose), en fibre de polymÃ¨res chimiques absorbants (tels que les sels de polyacrylate, les copolymÃ¨res acrylate/acrylamide). Selon un mode de rÃ©alisation prÃ©fÃ©rÃ©, ladite piÃ¨ce en matÃ©riau 5 absorbant est en textile non-tissÃ© rÃ©alisÃ© en fibre de cellulose, notamment le coton. L'incorporation d'une composition de milieu de culture dans la masse d'une piÃ¨ce rÃ©alisÃ©e en matÃ©riau fibreux peut Ãªtre rÃ©alisÃ©e de diverses faÃ§ons. Elle peut se faire par des techniques dites d'imprÃ©gnation en phase liquide 10 (cf. par exemple, CN 102337324 ou WO 2005/061013). Ces techniques consistent Ã imbiber un matÃ©riau absorbant d'une composition de milieu de culture, formulÃ©e en solution dans un solvant volatile (par exemple, l'eau, un alcool). Une fois bien imbibÃ©, le sÃ©chage du matÃ©riau absorbant est rÃ©alisÃ© par Ã©vaporation du solvant. Elle peut Ã©galement se faire par des techniques dites d'imprÃ©gnation Ã sec. 15 Ces techniques visent Ã transfÃ©rer, dans l'Ã©paisseur d'une piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant, une composition poudreuse, en l'occurrence un milieu de culture prÃ©parÃ© sous la forme d'une poudre ou d'un assemblage de poudres. A cet effet, les particules de ladite composition poudreuse sont saupoudrÃ©es sur la surface de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant, puis sont mises en vibration, sous l'action d'ondes ultrasonores (cf. par exemple, FR 2 866 578) ou bien 20 sous l'action d'un champ Ã©lectrique alternatif (cf par exemple, WO 2015/044605, WO 2010/001043 ou WO 99/22920). Ces particules pÃ©nÃ¨trent et s'enfoncent alors progressivement dans les cavitÃ©s du corps poreux. Pour la fabrication d'un dispositif de culture microbiologique selon l'invention, les techniques d'imprÃ©gnation Ã sec mettant en oeuvre un champ Ã©lectrique 25 alternatif se sont rÃ©vÃ©lÃ©es particuliÃ¨rement adaptÃ©es pour permettre l'incorporation d'une composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e dans l'Ã©paisseur d'un matÃ©riau absorbant. De ce fait, les enseignements techniques dispensÃ©s par WO 2015/044605, WO 2010/001043 et WO 99/22920 font partie intÃ©grante de la prÃ©sente description. 30 Selon l'invention, la quantitÃ© de solution du milieu de culture activÃ© (hydratÃ©) et la concentration de ses constituants conditionnent, d'une part, le choix du matÃ©riau de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant (notamment au vu de sa capacitÃ© de rÃ©tention d'eau) et celui des 3065735 11 dimensions de cette piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant et, d'autre part, la quantitÃ© de poudre de milieu de culture Ã y incorporer, et rÃ©ciproquement. Avantageusement, avant calandrage Ã©ventuel, ladite piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant prÃ©sente une masse surfacique comprise entre 50 g.m-2 et 150 g.m-2, et 5 prÃ©fÃ©rentiellement entre 90 g.m-2 et 110 g.m-2, pour une Ã©paisseur avantageusement encore comprise entre 0,5 mm et 10 mm, et plus prÃ©fÃ©rentiellement entre 1 mm et 4 mm. Selon un mode de rÃ©alisation prÃ©fÃ©rÃ©, une fois l'incorporation de la composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e achevÃ©e, la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant est 10 avantageusement soumise Ã une opÃ©ration de calandrage. Le calandrage, par la pression et la tempÃ©rature de chauffe gÃ©nÃ©rÃ©es, amÃ©liore la rÃ©tention de la composition du milieu de culture dÃ©shydratÃ©e dans l'Ã©paisseur de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant, ainsi que sa stabilitÃ© dans le temps. Le calandrage a Ã©galement pour avantage d'amÃ©liorer la planÃ©itÃ© de la surface de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant, et d'accroitre le pouvoir capillaire de cette derniÃ¨re. 15 Le calandrage se fait avantageusement Ã une tempÃ©rature prÃ©conisÃ©e comprise entre 30Â°C et 60Â°C. Une tempÃ©rature infÃ©rieure Ã 60Â°C permet de ne pas dÃ©naturer les composÃ©s thermolabiles. EP 1 179 586, WO 2015/104501, WO 2014/013089 et WO 2015/107228, 20 commentÃ©s plus haut dans la prÃ©sente description, dÃ©crivent des supports de culture microbiologique qui intÃ¨grent Ã©galement dans leurs structures des couches en matÃ©riau poreux incorporant une composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e. Ces couches ainsi dÃ©crites peuvent donc Ãªtre reprises telles quelles pour Ãªtre utilisÃ©es dans la conception des dispositifs de culture microbiologique selon la prÃ©sente invention. 25 Selon un mode de rÃ©alisation particuliÃ¨rement prÃ©fÃ©rÃ© de la prÃ©sente invention, la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant incorporant dans son Ã©paisseur une composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e reprend avantageusement les caractÃ©ristiques techniques du support poreux imprÃ©gnÃ© Ã sec dÃ©crit par WO 2015/104501. 30 Avantageusement, la quantitÃ© de composition de milieu de culture formulÃ©e en poudre et incorporÃ©e dans l'Ã©paisseur de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant est comprise entre 0,01 g.cm-3 et 0,1 g.cm-3, de prÃ©fÃ©rence entre 0,02 g.cmi et 0,09 g.cml, et plus 3065735 12 prÃ©fÃ©rentiellement encore entre 0,03 g.cm-3 et 0,06 g.cm-3. S'agissant du feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© constitutif d'un dispositif de culture microbiologique selon l'invention, sa composition et son Ã©paisseur 5 ont Ã©tÃ© choisies pour crÃ©er une structure de surface pleine, de faible Ã©paisseur, ayant une intÃ©gritÃ© et une tenue mÃ©caniques suffisantes pour permettre une prÃ©hension et des manipulations faciles. Par ailleurs et de maniÃ¨re intrinsÃ¨que, ce feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© forme un matÃ©riau hyper-absorbant et rÃ©hydratable Ã tempÃ©rature ambiante, en particulier Ã des tempÃ©ratures comprises entre 5Â°C et 40Â°C, si bien 10 qu'au contact de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant prÃ©alablement imbibÃ©e d'eau, il se gonfle de la composition de milieu de culture liquide et forme une couche d'hydrogel aux propriÃ©tÃ©s nutritives, Ã©ventuellement sÃ©lectives et/ou discriminantes. Sur cette couche d'hydrogel, les cellules inoculÃ©es sont ainsi dÃ©posÃ©es au plus prÃ¨s des constituants de la composition du milieu de culture. 15 Alors que les opÃ©rations d'Ã©talement sont souvent traumatisantes pour les cellules, celles-ci Ã©tant gÃ©nÃ©ralement dÃ©placÃ©es en dÃ©pit de leur adhÃ©rence au support de culture, avec un dispositif de culture microbiologique selon l'invention, grÃ¢ce Ã la grande mallÃ©abilitÃ© de l'hydrogel (Ã©ventuellement des propriÃ©tÃ©s thixotropiques), les cellules ne sont pas brutalement dÃ©crochÃ©es de leur support mais sont entraÃ®nÃ©es en mouvement avec la 20 micro-fraction d'hydrogel qui les entoure. Selon l'invention, le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est avantageusement un feuillet d'hydrogel dÃ©shydratÃ© de gellane, de xanthane, de gallactomannane, d'amidon et/ou d'un mÃ©lange de ces hydrogels. Ledit feuillet d'hydrogel 25 dÃ©shydratÃ© est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de composition Ã base d'eau et d'au moins un gÃ©lifiant polysaccharidique. Ledit gÃ©lifiant polysaccharidique est prÃ©fÃ©rentiellement choisi parmi une gomme de gellane, une gomme de xanthane, une gomme de galactomannane (par exemple, une gomme de graine de caroube ou une gomme de guar), de l'amidon et un mÃ©lange de ceux-ci. 30 Avantageusement et selon l'invention, le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel 3065735 13 polysaccharidique prÃ©alablement prÃ©parÃ©e en mÃ©langeant Ã un litre d'eau, 0,1 Ã 30 g d'au moins un gÃ©lifiant polysaccharidique. Selon un premier mode de rÃ©alisation prÃ©fÃ©rÃ©, le feuillet d'hydrogel 5 polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de gellane, prÃ©alablement prÃ©parÃ©e en mÃ©langeant Ã un litre d'eau, 10 Ã 20 g de gomme de gellane et, prÃ©fÃ©rentiellement, 13 Ã 15 g de gomme de gellane. Selon une variante de rÃ©alisation, le feuillet d'hydrogel polysaccharidique 10 dÃ©shydratÃ© est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de xanthane, prÃ©alablement prÃ©parÃ©e en mÃ©langeant Ã un litre d'eau, 0,2 Ã 10 g de gomme de xanthane, de prÃ©fÃ©rence de l'ordre de 0,5 g de gomme de xanthane. Selon une deuxiÃ¨me variante de rÃ©alisation, le feuillet d'hydrogel 15 polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de xanthane et de gallactomannane, prÃ©alablement prÃ©parÃ©e Ã partir d'un mÃ©lange de gomme de xanthane et de gomme de graine de caroube. Le ratio pondÃ©ral [gomme de xanthane]/[gomme de graine de caroube] est avantageusement comprise entre 1:2 et 2:1, de prÃ©fÃ©rence de l'ordre de 1:1. 20 Selon une troisiÃ¨me variante de rÃ©alisation, le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel d'amidon, de prÃ©fÃ©rence d'amidon de pomme de terre, prÃ©alablement prÃ©parÃ©e en mÃ©langeant Ã un litre d'eau, 0,5 Ã 15 g d'amidon. 25 Selon une quatriÃ¨me variante de rÃ©alisation, le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de gellane et d'amidon, de prÃ©fÃ©rence d'amidon de pomme de terre, prÃ©alablement prÃ©parÃ©e Ã partir d'un mÃ©lange de gomme de gellane et d'amidon. Le ratio pondÃ©ral [gomme de 30 gellane]/[amidon] est avantageusement compris entre 40:1 et 2 :3. A partir d'une composition d'hydrogel polysaccharidique, un feuillet 3065735 14 polysaccharidique dÃ©shydratÃ© peut Ãªtre prÃ©parÃ© de multiples faÃ§ons. Par exemple, l'hydrogel peut Ãªtre coulÃ© ou Ã©talÃ© en une couche continue sur une surface non-adhÃ©rente. Cette couche continue peut Ã©galement Ãªtre obtenue par une mÃ©thode de couchage. La couche d'hydrogel est ensuite sÃ©chÃ©e/dÃ©shydratÃ©e, puis dÃ©coupÃ©e Ã la forme et aux dimensions souhaitÃ©es. 5 La prÃ©paration du feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© peut Ã©galement Ãªtre effectuÃ©e par une mÃ©thode de moulage, suivie d'une Ã©tape de dÃ©shydratation. Selon un mode prÃ©fÃ©rÃ© de rÃ©alisation de l'invention, le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est avantageusement renforcÃ© structurellement par voie 10 chimique au moyen d'un additif de renfort choisi parmi le glycÃ©rol, l'Ã©thylÃ¨ne glycol et le polyÃ©thylÃ¨ne glycol. L'ajout dudit additif de renfort est effectuÃ© au cours de la prÃ©paration de la composition d'hydrogel polysaccharidique. Avantageusement, cet ajout est effectuÃ© Ã l'Ã©tape de mÃ©lange du gÃ©lifiant et de l'eau, prÃ©alable Ã l'Ã©tape de dÃ©shydratation. Dans ce contexte, un feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© selon 15 l'invention comprend, en outre, au moins un additif de renfort choisi parmi le glycÃ©rol, l'Ã©thylÃ¨ne glycol et le polyÃ©thylÃ¨ne glycol. Avantageusement et selon l'invention, ledit additif de renfort est du glycÃ©rol. Selon un mode de rÃ©alisation de l'invention particuliÃ¨rement prÃ©fÃ©rÃ©, ledit 20 feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est un feuillet d'hydrogel de gellane dÃ©shydratÃ© comprenant, en outre, du glycÃ©rol. Un tel feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est prÃ©parÃ© Ã partir de gomme de gellane et de glycÃ©rol. Le ratio pondÃ©ral [gomme de gellane]/glycÃ©rol utilisÃ© dans cette prÃ©paration est avantageusement compris entre 2 :1 et 1 :8, prÃ©fÃ©rentiellement entre 2 :7 25 et 2 :9, et est typiquement de l'ordre de 1 :4. Selon un mode de rÃ©alisation avantageux de l'invention, ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© comprend, en outre, au moins un agent durcisseur choisi parmi les sels de cation divalent. De prÃ©fÃ©rence, l'agent durcisseur est choisi parmi le 30 chlorure de magnÃ©sium (MgC12), le chlorure de calcium (CaC12), le sulfate de magnÃ©sium (MgSO4) et le chlorure de manganÃ¨se (MnC12). Avantageusement et selon l'invention, l'agent durcisseur est MgC12. 3065735 15 Avantageusement et selon l'invention, ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est un feuillet d'hydrogel de gellane dÃ©shydratÃ© comprenant, en outre, au moins un agent durcisseur choisi parmi MgC12, CaC12, MgSO4 et MnC12. L'agent durcisseur est avantageusement MgC12. Le ratio pondÃ©ral gellane/MgC12 est 5 avantageusement compris entre 100:1 et 3 :2, prÃ©fÃ©rentiellement entre 30:1 et 1:3, et est typiquement de l'ordre de 15: 1. Un tel feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est prÃ©parÃ© Ã partir de gomme de gellane et de MgC12. Le ratio pondÃ©ral [gomme de gellane]/MgC12 utilisÃ© dans cette prÃ©paration est avantageusement compris entre 100:1 et 3 :2, prÃ©fÃ©rentiellement entre 10 30:1 et 1:3, et est typiquement de l'ordre de 15: 1. Selon un mode de rÃ©alisation particulier de l'invention, ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est un feuillet d'hydrogel de gellane dÃ©shydratÃ© comprenant, en outre, au moins un agent plastifiant comme, par exemple, une huile de 15 silicone. L'utilisation d'un agent plastifiant permet d'obtenir des hydrogels dÃ©shydratÃ©s de plus grandes souplesse et flexibilitÃ©. L'avantage est ainsi de pouvoir prÃ©parer de grandes surfaces d'hydrogel dÃ©shydratÃ©, par exemple en de longues bandes pouvant Ãªtre mises en rouleaux et conservÃ©es ainsi jusqu'Ã leur dÃ©coupe en feuillets aux dimensions appropriÃ©es aux dispositifs de culture microbiologique selon l'invention. 20 L'incorporation de l'agent plastifiant est effectuÃ©e au cours de la prÃ©paration de la composition d'hydrogel polysaccharidique. Avantageusement, cette incorporation est effectuÃ©e Ã l'Ã©tape de mÃ©lange du gÃ©lifiant et de l'eau, prÃ©alablement Ã l'obtention du feuillet polysaccharidique dÃ©shydratÃ©. 25 Selon un mode particulier de rÃ©alisation de l'invention, le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© incorpore dans son Ã©paisseur des composÃ©s chromogÃ©niques et/ou fluorogÃ©niques permettant une observation visuelle des microorganismes en fonction d'activitÃ©s mÃ©taboliques particuliÃ¨res qu'ils expriment. Ces composÃ©s peuvent Ãªtre, par exemple, des substrats synthÃ©tiques permettant la mise en Ã©vidence d'activitÃ©s enzymatiques 30 dÃ©finies, des indicateurs colorÃ©s de pH. L'incorporation des composÃ©s chromogÃ©niques et/ou fluorogÃ©niques est effectuÃ©e au cours de la prÃ©paration de la composition d'hydrogel polysaccharidique. 3065735 16 Avantageusement, cette incorporation est effectuÃ©e Ã l'Ã©tape de mÃ©lange du gÃ©lifiant et de l'eau, prÃ©alablement Ã l'obtention du feuillet polysaccharidique dÃ©shydratÃ©. Avantageusement et selon l'invention, outre la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant et 5 le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ©, un dispositif de culture microbiologique selon l'invention peut Ã©galement comprendre une membrane permÃ©able intercalaire, disposÃ©e entre ladite piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant et ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ©. La composition, la conception et l'Ã©paisseur de cette membrane permÃ©able 10 intercalaire sont choisies de sorte que cette derniÃ¨re entrave le moins possible le transfert des liquides entre la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant et le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© ou la couche d'hydrogel polysaccharidique rÃ©hydratÃ©. A cet Ã©gard, elle peut Ãªtre rÃ©alisÃ©e Ã partir d'un substrat en fibre cellulosique naturelle (comme le coton) ou synthÃ©tique (comme la rayonne), en fibre cellulosique modifiÃ©e (par exemple, la 15 carboxymÃ©thylcellulose, la nitrocellulose), en fibre de polymÃ¨res chimiques absorbants (tels que les sels de polyacrylate, les copolymÃ¨res acrylate/acrylamide) ou en fibres protÃ©iques stables (comme la soie, la laine). Dans le cadre de la prÃ©sente invention, cette membrane permÃ©able intercalaire, optionnelle, peut Ãªtre utilisÃ©e Ã des fins trÃ¨s diverses, comme par exemple : 20 - pour apporter un renfort mÃ©canique et/ou une rigiditÃ© supplÃ©mentaire Ã l'ensemble du systÃ¨me, ou uniquement au feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© et Ã la couche d'hydrogel polysaccharidique rÃ©hydratÃ©, - pour amÃ©liorer le contact de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant avec le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© et /ou avec la couche d'hydrogel 25 polysaccharidique rÃ©hydratÃ©, - pour faire office de couche rÃ©servoir pour la conservation de composÃ©s particuliers, destinÃ©s Ã Ãªtre mÃ©langÃ©s Ã la composition de milieu de culture solubilisÃ©e en provenance de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant avant d'Ãªtre acheminÃ©s vers la couche d'hydrogel polysaccharidique rÃ©hydratÃ©, 30 - pour amÃ©liorer le contraste et l'observation des colonies poussant Ã la surface du dispositif de culture microbiologique. Selon un mode particulier de rÃ©alisation, ladite membrane permÃ©able 3065735 17 intercalaire est utilisÃ©e en vue d'amÃ©liorer le contraste et l'observation des colonies poussant Ã la surface du dispositif de culture microbiologique. A cet effet, elle est choisie suffisamment opaque Ã la lumiÃ¨re et d'une grande blancheur (par exemple, une blancheur CIE au moins Ã©gale Ã 65). 5 La conception des dispositifs de culture biologique selon l'invention et les modalitÃ©s d'utilisation de ceux-ci permettent aux principaux Ã©lÃ©ments constitutifs, tels que notamment : - la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant, 10 - le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ©, et - l'Ã©ventuelle membrane permÃ©able intercalaire, de pouvoir avantageusement Ãªtre fabriquÃ©s, conditionnÃ©s et stockÃ©s sÃ©parÃ©ment et de maniÃ¨re totalement indÃ©pendante. Ceci reprÃ©sente un rÃ©el atout industriel, tant d'un point de vue commercial que logistique. Ceci reprÃ©sente Ã©galement un avantage significatif pour 15 l'utilisateur qui dispose de la possibilitÃ© de combiner Ã dessein les diffÃ©rents Ã©lÃ©ments constitutifs du dispositif de culture microbiologique selon l'invention, et d'adapter par lui-mÃªme le dispositif de culture microbiologique aux microorganismes auxquels il porte un intÃ©rÃªt tout particulier. De faÃ§on similaire, un dispositif de culture microbiologique selon l'invention 20 peut Ãªtre conditionnÃ© et commercialisÃ© sous diffÃ©rentes formes, notamment : - un dispositif de culture microbiologique, composite, prÃ©alablement montÃ© et assemblÃ©, dans lequel la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant est surmontÃ©e d'un feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ©, avec Ã©ventuellement une membrane permÃ©able intercalaire ; 25 - un dispositif de culture microbiologique en kit, que l'utilisateur assemblera par lui- mÃªme ; un tel kit comprend au moins une piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant, au moins un feuillet d'hydrogel dÃ©shydratÃ©, Ã©ventuellement au moins une membrane permÃ©able intercalaire. 30 Que le dispositif de culture microbiologique selon l'invention soit conditionnÃ© prÃ©assemblÃ© ou conditionnÃ© pour pouvoir Ãªtre assemblÃ© de faÃ§on extemporanÃ©e par un utilisateur, pour faciliter la manipulation de celui-ci : 3065735 18 - la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant, - le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (ou la couche d'hydrogel polysaccharidique rÃ©hydratÃ©), et - l'Ã©ventuelle membrane permÃ©able intercalaire, 5 peuvent avantageusement Ãªtre maintenus solidaires entre eux par des moyens techniques avantageusement appliquÃ©s sur le pourtour de ces diffÃ©rents Ã©lÃ©ments, tels que : - un systÃ¨me d'agrafe, d'Ã©pingle, - une composition d'adhÃ©sif, appliquÃ©e linÃ©airement ou ponctuellement, - un systÃ¨me de blocage disposÃ© Ã l'intÃ©rieur d'un rÃ©ceptacle (par exemple, le 10 rÃ©ceptacle d'une boÃ®te de Petri) spÃ©cifiquement conÃ§u pour recevoir ledit dispositif de culture microbiologique ; les diffÃ©rents Ã©lÃ©ments constitutifs du dispositif de culture microbiologique selon l'invention sont, dans ce cas, de forme et de dimensions adaptÃ©es Ã celles dudit rÃ©ceptacle, et le rebord dudit rÃ©ceptacle est muni sur sa(ses) face(s) interne(s) d'organes mÃ©caniques de rÃ©tention, de type ergots, 15 faisant saillie hors de la surface. L'invention concerne Ã©galement un dispositif de culture microbiologique tel que prÃ©cÃ©demment dÃ©crit, et prÃ©sentÃ© sous la forme d'un kit Ã assembler. Un dispositif de culture microbiologique en kit Ã assembler, selon l'invention, comprend ainsi : 20 - au moins une piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant ayant une face supÃ©rieure au moins sensiblement plane et incorporant dans son Ã©paisseur une composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e, - au moins un feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© et rÃ©hydratable Ã tempÃ©rature ambiante, en particulier Ã des tempÃ©ratures comprises entre 5Â°C et 40Â°C , et 25 Ã©ventuellement - optionnellement, au moins une membrane permÃ©able intercalaire. Selon un aspect particulier de la prÃ©sente invention, celle-ci propose Ã©galement un feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© et rÃ©hydratable Ã tempÃ©rature 30 ambiante, en particulier Ã des tempÃ©ratures comprises entre 5Â°C et 40Â°C. Ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© et rÃ©hydratable Ã tempÃ©rature ambiante est destinÃ© Ã Ãªtre utilisÃ© comme support de culture microbiologique. 3065735 19 Avantageusement, un feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© et rÃ©hydratable selon l'invention est caractÃ©risÃ© par tout ou partie des caractÃ©ristiques techniques ci-aprÃ¨s listÃ©es : - ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est un feuillet 5 d'hydrogel dÃ©shydratÃ© de gellane, de xanthane, de galactomannane, d'amidon ou un mÃ©lange de ceux-ci, - ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© a Ã©tÃ© prÃ©parÃ© par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de composition Ã base d'eau et d'au moins un gÃ©lifiant polysaccharidique choisi parmi une gomme de gellane, une gomme de xanthane, 10 une gomme de galactomannane, de l'amidon et un mÃ©lange de ceux-ci, - ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel polysaccharidique prÃ©parÃ©e en mÃ©langeant Ã un litre d'eau, 0,1 Ã 30 g d'au moins un des gÃ©lifiants polysaccharidiques prÃ©cÃ©demment Ã©noncÃ©s, 15 - ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de gellane, prÃ©alablement prÃ©parÃ©e en mÃ©langeant Ã un litre d'eau, 10 Ã 20 g de gomme de gellane et, prÃ©fÃ©rentiellement, 13 Ã 15 g de gomme de gellane, - ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est obtenu par 20 dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de xanthane, prÃ©alablement prÃ©parÃ©e en mÃ©langeant Ã un litre d'eau, 0,2 Ã 10 g de gomme de xanthane, - ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de xanthane et de gallactomannane, prÃ©alablement prÃ©parÃ©e Ã partir d'un mÃ©lange de gomme de xanthane et de gomme de graine de caroube, 25 - ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel d'amidon, prÃ©alablement prÃ©parÃ©e en mÃ©langeant Ã un litre d'eau, 0,5 Ã 15 g d'amidon, - ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de gellane et d'amidon, prÃ©parÃ©e Ã partir d'un 30 mÃ©lange de gomme de gellane et d'amidon, avec un ratio pondÃ©ral [gomme de gellane]/[amidon] compris entre 40:1 et 2 : 3, - ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est renforcÃ© 3065735 20 structurellement par voie chimique au moyen d'un additif de renfort choisi parmi le glycÃ©rol, l'Ã©thylÃ¨ne glycol et le polyÃ©thylÃ¨ne glycol, - ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© comprend, en outre, au moins un agent durcisseur choisi parmi les sels de cation divalent - notamment MgC12, 5 CaC12, MgSO4 et MnC12 - ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© comprend, en outre, au moins un agent plastifiant comme, par exemple, une huile de silicone. D'autres buts, caractÃ©ristiques et avantages de l'invention apparaÃ®tront au vu 10 de la description qui va suivre et des exemples dÃ©veloppÃ©s ci-aprÃ¨s, qui se rÃ©fÃ¨rent aux figures annexÃ©es et dans lesquelles : - la Figure 1 est une reprÃ©sentation schÃ©matisÃ©e d'un dispositif de culture microbiologique selon l'invention, et de son principe gÃ©nÃ©ral d'utilisation ; - la Figure 2 est une photographie montrant un exemple de feuillets 15 d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© en fin de processus de sÃ©chage/dÃ©shydratation ; - les Figures 3 Ã 13 rassemblent des photographies de cultures et d'isolements de souches bactÃ©riennes effectuÃ©s sur des dispositifs de culture microbiologique selon l'invention. Ces exemples ont pour but de faciliter la comprÃ©hension de l'invention, sa 20 mise en oeuvre et son utilisation. Ces exemples sont donnÃ©s Ã titre explicatif et ne sauraient limiter la portÃ©e de l'invention. EXEMPLES 25 A/ - Dispositif de culture microbiologique selon l'invention, et principe gÃ©nÃ©ral d'utilisation Tel que reprÃ©sentÃ© Ã la Figure 1, un dispositif de culture microbiologique selon l'invention se compose, en premier lieu, d'une piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1, plus ou 30 moins Ã©paisse et d'un feuillet 2, d'Ã©paisseur moindre. Dans l'exemple reprÃ©sentÃ©, ces deux Ã©lÃ©ments 1 et 2 sont de forme sensiblement carrÃ©e. La piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1, rÃ©alisÃ©e en matÃ©riau hydrophile et non 3065735 21 hydrosoluble, incorpore dans son Ã©paisseur une composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e. Le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2 est quant Ã lui formÃ© par sÃ©chage/dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel polysaccharidique, et sa structure mÃ©canique peut Ãªtre renforcÃ©e au moyen d'une armature fibreuse, par exemple un tissÃ©. 5 La piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1 et le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2 peuvent Ãªtre fournis dÃ©jÃ prÃ©assemblÃ©s, solidarisÃ©s, ou bien alors sous la forme de deux Ã©lÃ©ments mÃ©caniquement indÃ©pendants. La conception et la fabrication de cette piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1 et de ce feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2 seront dÃ©crites plus en dÃ©tails dans la 10 suite des exemples. A titre de caractÃ©ristique secondaire, un rÃ©ceptacle 4 est associÃ© au dispositif de culture microbiologique pour en faciliter la manipulation, notamment pour l'Ã©tape de rÃ©hydratation et activation du dispositif, et pour tout dÃ©placement (par exemple, un transfert 15 de la paillasse Ã l'incubateur). L'utilisation d'un dispositif de culture microbiologique selon l'invention nÃ©cessite une activation du dispositif grÃ¢ce Ã une hydratation par la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1, par de l'eau 4. 20 Pour ce faire, le dispositif de culture microbiologique selon l'invention est placÃ© Ã l'intÃ©rieur du rÃ©ceptacle 4, avec le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2 tournÃ© vers le haut. Le rÃ©ceptacle 4 Ã©tant de plus grande surface que celle du dispositif de culture, on verse l'eau 5 dans le rÃ©ceptacle 4 en prenant soin de ne pas en verser directement sur le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2. Le volume d'eau utilisÃ© est plus 25 ou moins calibrÃ© pour pouvoir humidifier suffisamment la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1 et solubiliser la composition de milieu de culture qu'elle renferme. Une autre faÃ§on d'opÃ©rer consiste Ã verser dans le fond du rÃ©ceptacle 4, le volume d'eau appropriÃ©, puis d'y dÃ©poser la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1, surmontÃ©e du feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2. On prendra soin de ne pas placer le 30 feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2 directement en contact avec l'eau libre, de faÃ§on Ã ce que le dispositif soit effectivement hydratÃ© uniquement par la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1. 3065735 22 Lorsque le dispositif de culture microbiologique selon l'invention est fourni avec la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1 et le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2 sous la forme de deux Ã©lÃ©ments mÃ©caniquement indÃ©pendants, l'Ã©tape d'hydratation peut alors Ãªtre rÃ©alisÃ©e d'une troisiÃ¨me maniÃ¨re. La piÃ¨ce en matÃ©riau 5 absorbant 1 est alors placÃ©e Ã l'intÃ©rieur du rÃ©ceptacle 4. Dans le rÃ©ceptacle 4 et Ã©ventuellement directement sur cette piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1, on verse une quantitÃ© d'eau 5 suffisante pour bien imbiber la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1. On vient ensuite en recouvrir la surface avec le feuille d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2. 10 Au cours de l'activation d'un dispositif de culture microbiologique selon l'invention, l'hydratation par la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1 permet, dans un premier temps, de solubiliser la composition de milieu de culture contenue dans l'Ã©paisseur de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1. Dans un deuxiÃ¨me temps, cette activation se poursuit par l'hydratation du feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2, appliquÃ© sur la surface 15 de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1. Cette rÃ©hydratation du feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2 fait apparaitre, Ã la surface de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1, une couche d'hydrogel polysaccharidique rÃ©hydratÃ© 2' et gonflÃ©, non pas simplement par l'eau provenant de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1 mais plutÃ´t par une solution de milieu de culture en provenance de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1. 20 Ainsi activÃ©, le dispositif de culture cellulaire est prÃªt Ã recevoir l'Ã©chantillon Ã analyser. Une fois l'Ã©chantillon inoculÃ© sur le dispositif, notamment par des opÃ©rations d'Ã©talement et de dispersion des cellules, par exemple, au moyen d'une oÃ«se 6, l'ensemble est incubÃ© Ã une tempÃ©rature et pour une durÃ©e Ã©tablies, avant lecture des rÃ©sultats. 25 Par sa consistance et sa texture bien particuliÃ¨res, la couche/pellicule d'hydrogel polysaccharidique rÃ©hydratÃ© 2' d'un dispositif de culture microbiologique selon l'invention permet de crÃ©er une surface de culture, Ã la fois lubrifiÃ©e et adhÃ©rente pour les cellules, apte Ã recevoir les microorganismes et permettre leur isolement par des opÃ©rations et moyens mÃ©caniques habituellement utilisÃ©s pour Ã©taler les cellules sur la surface d'un 30 milieu gÃ©lose classique. Par ailleurs, du fait de sa grande exposition aux Ã©changes gazeux et aux phÃ©nomÃ¨nes d'assÃ¨chement et Ã ses propriÃ©tÃ©s hyper-absorbantes, cette couche/pellicule d'hydrogel polysaccharidique 2' va pouvoir s'auto-rÃ©gÃ©nÃ©rer, tout au long de la pÃ©riode 3065735 23 d'incubation et de faÃ§on continue, de la solution de milieu de culture provenant de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1. Comme Ã©galement reprÃ©sentÃ© Ã la Figure 1, le dispositif de culture 5 microbiologique peut Ã©galement intÃ©grer une membrane permÃ©able intercalaire 3 venant s'intercaler entre la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1 et le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2. RÃ©alisÃ©e dans un matÃ©riau permÃ©able, cette membrane permÃ©able intercalaire 3, optionnelle, peut Ãªtre utilisÃ©e Ã des fins trÃ¨s diverses, comme par exemple : - pour apporter un renfort mÃ©canique et/ou une rigiditÃ© supplÃ©mentaire Ã l'ensemble 10 du systÃ¨me, ou alors uniquement au feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2 et Ã la couche d'hydrogel polysaccharidique rÃ©hydratÃ© 2', - pour amÃ©liorer le contact de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1 avec le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2 et/ou avec la couche d'hydrogel polysaccharidique rÃ©hydratÃ© 2', 15 - pour faire office de couche rÃ©servoir pour la conservation de composÃ©s particuliers destinÃ©s Ã Ãªtre mÃ©langÃ©s Ã la composition de milieu de culture solubilisÃ©e en provenance de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1, avant d'atteindre la couche d'hydrogel polysaccharidique rÃ©hydratÃ© 2', - pour amÃ©liorer le contraste et l'observation des colonies poussant Ã la surface du 20 dispositif de culture microbiologique. B/ - Fabrication des diffÃ©rents Ã©lÃ©ments constitutifs d'un dispositif de culture microbiologique selon l'invention B1/ - La piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant intÃ©grant dans son Ã©paisseur une 25 composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e S'agissant de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant 1 entrant dans la constitution d'un dispositif de culture microbiologique selon l'invention, celle-ci est faÃ§onnÃ©e Ã partir d'un support tridimensionnel, de structure ouverte, poreuse, apte Ã recevoir en son sein, aussi bien un liquide (en particulier, un liquide aqueux) que des particules solides de 30 granulomÃ©trie adaptÃ©e. Pour les exemples et les essais qui vont suivre, les dispositifs de culture 3065735 24 microbiologique testÃ©s comprennent une piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant intÃ©grant une composition de milieu de culture, sÃ¨che ou dÃ©shydratÃ©e, confectionnÃ© Ã partir du non-tissÃ© Airlaid SCA95NN81, de la compagnie SCA (SuÃ¨de). Ce non-tissÃ© bicomposant PET/CoPET (Polyester/coPolyester) a Ã©tÃ© spÃ©cialement traitÃ© pour pouvoir Ãªtre adhÃ©sivÃ©, par simple 5 pressage Ã chaud (calandrage), sans ajout de colle. Il se caractÃ©rise Ã©galement par une masse surfacique, avant calandrage (ou non-calandrÃ©), de l'ordre de 95 g.m-2 pour une Ã©paisseur de 2 mm. A partir de ce non-tissÃ©, des piÃ¨ces d'Ã peu prÃ¨s 6 cm de cÃ´tÃ© ont Ã©tÃ© dÃ©coupÃ©es. L'incorporation d'une composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e, dans la masse mÃªme de ces piÃ¨ces en matÃ©riau fibreux, a Ã©tÃ© rÃ©alisÃ©e avec une technique 10 d'imprÃ©gnation Ã sec. A cet effet, environ 0,2 g d'une composition de milieu de culture formulÃ©e sous forme de poudre est saupoudrÃ©e sur chaque piÃ¨ce de non-tissÃ© dÃ©coupÃ©e. L'ensemble est placÃ© entre deux Ã©lectrodes appliquant un voltage de 3200 V.mm-1, pendant 15 secondes, avec une humiditÃ© relative comprise entre 35 % et 45 %. Une fois l'imprÃ©gnation Ã sec achevÃ©e, les piÃ¨ces de non-tissÃ©s sont 15 calandrÃ©es Ã 60Â°C en appliquant une pression de 3.105 Pa.cm-2. B2/ - Les milieux de culture formulÃ©s en poudre En vue de tester les dispositifs de culture microbiologique selon l'invention, diffÃ©rentes compositions de milieu de culture dÃ©shydratÃ©es ont Ã©tÃ© utilisÃ©es. Celles-ci 20 reprennent la composition des milieux de culture gÃ©losÃ©s distribuÃ©s par la sociÃ©tÃ© bioMÃ©rieux (France), Ã l'exception de l'agar agar et autres agents texturants. Il s'agissait plus particuliÃ¨rement des milieux de la gamme chromIDÂ® (par exemple, chromIDÂ® CPS Elite, chromIDÂ® S. aureus, chromIDÂ® P. aeruginosa, chromIDÂ® VRE, chromIDÂ® Salmonella Elite). 25 Les dispositifs de culture microbiologique selon l'invention, ainsi Ã©laborÃ©s, ont alors pu Ãªtre testÃ©s pour la dÃ©tection et l'isolement de bactÃ©ries telles que Escherichia coh, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, Clostridium freundii, Streptococcus agalactiae et Serratia marcescens. Une sÃ©lection de rÃ©sultats obtenus est prÃ©sentÃ©e aux Figures 3 Ã 15, sous 30 forme de photographies. 3065735 25 B3/ - Les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© Les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2, qui entrent dans la constitution des dispositifs de culture microbiologique selon l'invention, sont conÃ§us avant tout de telle faÃ§on que, une fois rÃ©hydratÃ©s, ils puissent offrir aux microorganismes un 5 support adaptÃ© Ã leur croissance et dÃ©veloppement. La composition et la consistance de ces feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2 ont Ã©galement Ã©tÃ© spÃ©cifiquement Ã©tudiÃ©es pour obtenir des surfaces adaptÃ©es aux opÃ©rations d'isolement et d'Ã©talement des cellules, que ces feuillets d'hydrogel polysaccharidique soient dans un Ã©tat rÃ©hydratÃ© ou dÃ©shydratÃ©. 10 Pour les exemples et les essais qui vont suivre, les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2 constitutifs de dispositifs de culture microbiologique selon l'invention ont Ã©tÃ© prÃ©parÃ©s en procÃ©dant selon la mÃ©thode gÃ©nÃ©rale ci-aprÃ¨s. a) PrÃ©paration des hydrogels polysaccharidiques : - Faire chauffer 500 mL d'eau distillÃ©e stÃ©rile dans un flacon en verre sur plaque 15 chauffante. - Rajouter le(s) gÃ©lifiant(s) en quantitÃ© dÃ©finie et attendre que le mÃ©lange soit homogÃ¨ne et translucide en continuant de chauffer (porter Ã Ã©bullition). - AprÃ¨s dissolution complÃ¨te, rajouter le glycÃ©rol, homogÃ©nÃ©iser et ajouter le(s) sel(s) de cation divalent servant de liant et d'a gent durcisseur, homogÃ©nÃ©iser et 20 porter Ã Ã©bullition. - RÃ©partir 7 ml dans des boÃ®tes de PÃ©tri de 47 mm de diamÃ¨tre. - Laisser refroidir sur la paillasse. - DÃ©mouler les piÃ¨ces d'hydrogel Ã l'aide d'un scalpel. b) DÃ©shydratation des hydrogels polysaccharidiques : 25 - Enserrer les piÃ¨ces d'hydrogels entre deux feuilles de papier absorbant. - Placer l'ensemble au four, Ã une tempÃ©rature de l'ordre de 40Â°C, pendant environ 6 heures ; l'opÃ©ration peut Ã©galement Ãªtre effectuÃ©e pendant au moins une nuit, dans une Ã©tuve Ã chaleur sÃ¨che, portÃ©e Ã 32Â°C. La Figure 2 est un photographie montrant les feuillets d'hydrogel dÃ©shydratÃ© 30 Ã la sortie du four. Avant passage au four ou Ã l'Ã©tuve, l'Ã©paisseur des piÃ¨ces d'hydrogel est de l'ordre de 3 mm. AprÃ¨s dÃ©shydratation, les feuillets font moins d'l mm d'Ã©paisseur. 3065735 26 Les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© 2 d'un dispositif de culture de microbiologique selon l'invention ont Ã©tÃ© dÃ©clinÃ©s sous diffÃ©rentes versions, en faisant varier, notamment : 5 - la nature du gÃ©lifiant polysaccharidique (par exemple, gomme de gellane, gomme de xanthane, gommes de galactomannane, amidon, alginate de sodium, pectine, mÃ©thylcellulose et hydroxymÃ©thylcellulose), - la proportion entre l'eau et le gÃ©lifiant, utilisÃ©e lors de l'Ã©tape de prÃ©paration des hydrogels polysaccharidiques, 10 - la nature et la quantitÃ© des Ã©ventuels agents durcisseurs utilisÃ©s dans la prÃ©paration des hydrogels polysaccharidiques, - la nature et la quantitÃ© des additifs Ã©ventuellement utilisÃ©s pour amÃ©liorer les propriÃ©tÃ©s physico-chimiques des hydrogels polysaccharidiques (hydratÃ©s) et/ou des feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ©. 15 B4/ - La membrane permÃ©able intercalaire (optionnelle) En vue d'amÃ©liorer le contraste et l'observation des colonies poussant Ã la surface du dispositif de culture microbiologique, une membrane opaque Ã la lumiÃ¨re et d'une grande blancheur (par exemple, une blancheur CIE au moins Ã©gale Ã 65) peut Ãªtre 20 intercalÃ©e entre la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant et le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ©. Cette membrane permÃ©able intercalaire peut consister en une feuille de papier absorbant, de composition cellulosique. C/ - Evaluation des dispositifs de culture microbiologique selon l'invention 25 Pour les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© qui prÃ©sentent une surface pleine, une intÃ©gritÃ© structurelle et la tenue mÃ©canique satisfaisante, des essais ont Ã©tÃ© menÃ©s en vue d'Ã©valuer leur capacitÃ© Ã pouvoir constituer des supports de culture microbiologique Ã la fois performants et compatibles avec les opÃ©rations et les moyens mÃ©caniques d'Ã©talement et de dispersion des cellules. 30 Dans ce contexte, des cultures bactÃ©riennes ont Ã©tÃ© rÃ©alisÃ©es notamment avec des souches d'Escherichia colt, d'Enterococcus faecalis, de Proteus mirabilis de 3065735 27 Staphylococcus aureus, de Serratia marcescens, de Pseudomonas aeruginosa, d'Enterobacter cloacae, Clostridium freundii et de Cronobacter sakazaki. En fonction des bactÃ©ries d'intÃ©rÃªt Ã cultiver, les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© Ã tester sont associÃ©s Ã des piÃ¨ces en matÃ©riau absorbant incorporant dans leur Ã©paisseur une 5 composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e particuliÃ¨re. La particularitÃ© de cette composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e rÃ©side dans le fait qu'elle a Ã©tÃ© choisie pour pouvoir Ãªtre adaptÃ©e Ã la croissance et au dÃ©veloppement des bactÃ©ries d'intÃ©rÃªt, et qu'elles intÃ¨grent des composantes chromogÃ©niques facilitant l'identification visuelle de ces bactÃ©ries d'intÃ©rÃªt. 10 Pour ce faire, les piÃ¨ces en matÃ©riau absorbant, qui incorporent dans leur Ã©paisseur une composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e, sont placÃ©es dans des boÃ®tes de Petri de 90 mm de diamÃ¨tre, puis humidifiÃ©es avec 6-7 mL d'eau distillÃ©e stÃ©rile. On surmonte alors ces piÃ¨ces en matÃ©riau absorbant d'un feuillet d'hydrogel polysaccharidique 15 dÃ©shydratÃ©. Une fois l'hydratation de la piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant rÃ©alisÃ©e, le milieu de culture activÃ© et la couche d'hydrogel polysaccharidique rÃ©gÃ©nÃ©rÃ©e, le dispositif de culture microbiologique est ensemencÃ© par 10 ul d'une solution calibrÃ©e Ã une charge bactÃ©rienne thÃ©orique de 107 ufc.m1-1. L'Ã©chantillon cellulaire est dÃ©posÃ© au moyen d'une premiÃ¨re oÃ«se sur le premier cadran de la surface d'hydrogel. Le deuxiÃ¨me cadran est ensemencÃ© avec une 20 nouvelle oÃ«se en Ã©tirant plusieurs stries Ã partir du premier cadran. Le troisiÃ¨me cadran est ensemencÃ© comme le deuxiÃ¨me sans changer d'oÃ«se. Le quatriÃ¨me cadran est ensemencÃ© par des stries non Ã©tirÃ©es Ã partir du second cadran. Les boÃ®tes sont placÃ©es dans une jarre avec un peu d'eau de faÃ§on Ã ce que les dispositifs de culture microbiologique ne se dessÃ¨chent pas. L'ensemble est alors incubÃ© Ã 25 37Â°C pendant, 24 heures. Quelques-uns des rÃ©sultats obtenus ont Ã©tÃ© compilÃ©s et prÃ©sentÃ©s aux Figures 3 Ã 13, sous la forme de photographies. 30 A la Figure 3, sont exposÃ©es des photographies de cultures et d'isolements d'E. cou menÃ©s sur des dispositifs de culture microbiologique dont les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© ont Ã©tÃ© obtenus Ã partir d'hydrogels de gellane 13 g/L (c'est-Ã - 3065735 28 dire 13 g de gomme de gellane pour llitre d'eau), de structure renforcÃ©e au glycÃ©rol, Ã raison de 43 mL/L (c'est-Ã -dire 43 mL de glycÃ©rol par litre d'eau utilisÃ© dans la prÃ©paration de l'hydrogel), et durcis avec : - 3A : du MgC12, Ã raison de 1 g/L (c'est-Ã -dire 1 g de MgC12 par litre d'eau utilisÃ© 5 dans la prÃ©paration de l'hydrogel) ou - 3B : du MgSO4, Ã raison de 1 g/L. La gomme de gellane utilisÃ©e ici pour prÃ©parer les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© est du Gelrite , distribuÃ© par la sociÃ©tÃ© CARL ROTH GmbH, Allemagne. 10 Que l'agent durcisseur soit du MgC12 ou du MgSO4, les rÃ©sultats obtenus sont trÃ¨s similaires. Les colonies d'E. cou poussent Ã la surface du feuillet d'hydrogel. Elles prÃ©sentent une trÃ¨s belle taille et une trÃ¨s belle coloration. Leur morphotype correspond Ã celle des colonies d'E. cou poussant sur une gÃ©lose chromogÃ©nique de rÃ©fÃ©rence telle que le chromIDÂ® CPS Elite. 15 A la Figure 4, sont exposÃ©es des photographies d'une culture et d'un isolement d'E. cou menÃ©s sur un dispositif de culture microbiologique dont le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© a Ã©tÃ© obtenu Ã partir d'un hydrogel de gellane 15 g/L, de structure renforcÃ©e au glycÃ©rol, Ã raison de 43 mL/L, et durci avec du CaC12, Ã 20 raison de 1 g/L. La gomme de gellane utilisÃ©e ici est du GelriteÂ®. Par rapport aux exemples prÃ©cÃ©dents, les colonies d'E. cou apparaissent plus petites, avec une lÃ©gÃ¨re diffusion de la coloration en pÃ©riphÃ©rie. 25 A la Figure 5, est exposÃ©e une photographie de cultures et d'isolements d'E. cou menÃ©s sur des dispositifs de culture microbiologique dont les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© ont Ã©tÃ© obtenus Ã partir d'hydrogels de gellane 15 g/L, de structure renforcÃ©e au glycÃ©rol, Ã raison de 43 mL/L, et durcis avec : - 5A : du MgC12, Ã raison de 1 g/L, ou 30 - 5B : du MgC12, Ã raison de 5 g/L. La gomme de gellane utilisÃ©e ici est du GelzanTM, distribuÃ© par la sociÃ©tÃ© CP KELCO, Etats-Unis. 3065735 29 Avec 1 g/L de MgC12, les colonies d'E. coli poussant Ã la surface du feuillet d'hydrogel, prÃ©sentent une trÃ¨s belle taille et une trÃ¨s belle coloration. Leur morphotype correspond Ã celle des colonies d'E. coli poussant sur une gÃ©lose chromogÃ©nique de rÃ©fÃ©rence telle que le chromIDÂ® CPS Elite (Figure 5, partie 5C). 5 Avec 5 g/L de MgC12, les colonies sont plus petites. Sans MgC12, les colonies sont trÃ¨s diffuses (Figure 5, partie 5D). A la Figure 6, sont exposÃ©es des photographies de cultures et d'isolements d'E. faecalis menÃ©s sur des dispositifs de culture microbiologique dont les feuillets 10 d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© ont Ã©tÃ© obtenus Ã partir d'hydrogels de gellane 15 g/L, de structure renforcÃ©e au glycÃ©rol, Ã raison de 43 mL/L, et durcis avec : - 6A : du MgC12, Ã raison de 1 g/L, - 6B : du MgC12, Ã raison de 2 g/L, ou - 6C : du MgC12, Ã raison de 5 g/L. 15 La gomme de gellane utilisÃ©e ici est du GelzanTM Les colonies d'E. faecalis poussant Ã la surface du feuillet d'hydrogel, sont identiques, en taille, en couleur et en morphotype, aux colonies d'E. faecalis poussant sur une gÃ©lose chromogÃ©nique de rÃ©fÃ©rence telle que le chromIDÂ® CPS Elite. 20 A la Figure 7, sont exposÃ©es des photographies de cultures et d'isolements de P. mirabilis menÃ©s sur des dispositifs de culture microbiologique dont les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© ont Ã©tÃ© obtenus Ã partir d'hydrogels de gellane 15 g/L, de structure renforcÃ©e au glycÃ©rol, Ã raison de 43 mL/L, et durcis avec : - 7A : du MgC12, Ã raison de 1 g/L, 25 - 7B : du MgC12, Ã raison de 2 g/L, ou - 7C : du MgC12, Ã raison de 5 g/L. La gomme de gellane utilisÃ©e ici est du GelriteÂ®. Les colonies de P. mirabilis poussant Ã la surface du feuillet d'hydrogel sont identiques, en taille, en couleur et en morphotype, aux colonies de P. mirabilis poussant sur 30 une gÃ©lose chromogÃ©nique de rÃ©fÃ©rence telle que le chromIDÂ® CPS Elite. A la Figure 8, est exposÃ©e une photographie de cultures et d'isolements 3065735 30 d'E. coli menÃ©s sur des dispositifs de culture microbiologique dont les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© ont Ã©tÃ© obtenus Ã partir d'hydrogels de gellane Ã 13 g/L ou 15 g/L, de structure renforcÃ©e au glycÃ©rol, Ã raison de 43 mL/L, et durcis avec du CaC12 utilisÃ© Ã 1 g/L ou 2 g/L : 5 - 8A, 8A' : gomme de gellane 13 g/L, CaC12 1 g/L, - 8B, 8B' : gomme de gellane 13 g/L, CaC12 2 g/L, - 8C, 8C' : gomme de gellane 15 g/L, CaC12 1 g/L, - 8D, 8D' : gomme de gellane 15 g/L, CaC12 2 g/L La gomme de gellane utilisÃ©e ici est du GelzanTM 10 Les quatre dispositifs de culture microbiologique testÃ©s ici donnent des rÃ©sultats trÃ¨s similaires. Par rapport aux exemples de la Figure 5, dans lesquels MgC12 est utilisÃ© pour durcir les hydrogels, E. coli forme ici des colonies de taille lÃ©gÃ¨rement plus petites. 15 A la Figure 9, est exposÃ©e une photographie de cultures et d'isolements d'E. faecalis menÃ©s sur des dispositifs de culture microbiologique dont les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© ont Ã©tÃ© obtenus Ã partir d'hydrogels de gellane 15 g/L, de structure renforcÃ©e au glycÃ©rol, Ã raison de 43 mL/L, et durcis avec : - 9A : du CaCl2 1 g/L 20 - 9B : du CaC12 2 g/L - 9C : du CaC12 3 g/L. La gomme de gellane utilisÃ©e ici est du GelzanTM Alors que les exemples prÃ©cÃ©dents correspondant Ã la Figure 8 laissent prÃ©sager un certain avantage Ã utiliser MgC12 plutÃ´t que CaC12 pour la culture d'E. coli, ce 25 constat est moins Ã©vident pour la culture d'E. faecalis. A la Figure 10, sont exposÃ©es des photographies d'une culture et d'un isolement d'E. coli menÃ©s sur un dispositif de culture microbiologique dont le feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© a Ã©tÃ© obtenu Ã partir d'un hydrogel de gellane 30 15 g/L, de structure renforcÃ©e au glycÃ©rol, Ã raison de 43 mL/L, et durci avec du MnC12, Ã raison de 1 g/L. La gomme de gellane utilisÃ©e ici est du GelriteÂ®. 3065735 31 Par rapport Ã une culture d'E cou sur le milieu de rÃ©fÃ©rence chromID CPS Elite, les colonies d'E. cou apparaissent ici plus petites, mais leur coloration est notablement intensifiÃ©e par le CaC12. 5 A la Figure 11, sont exposÃ©es des photographies de cultures et d'isolements d'E. cou menÃ©s sur des dispositifs de culture microbiologique dont les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© ont Ã©tÃ© obtenus Ã partir d'hydrogels polysaccharidiques de compositions variÃ©es : - 1 : gomme de gellane 15 g/L (plus prÃ©cisÃ©ment du PhytagelTM, distribuÃ© par la 10 sociÃ©tÃ© Sigma Aldrich, Etats-Unis), GlycÃ©rol 43mL/L, MgC12 1 g/L, - 11A2: - 11B1: - 11B2 : - 11B3 : 15 - 11B4: - 11C1: - 11C2 - 111)1 : 20 - 11D2 : gomme de gellane gomme de gellane gomme de gellane gomme de gellane gomme de gellane gomme de gellane gomme de gellane 30 g/L (PhytagelTM), GlycÃ©rol 43mL/L, MgC12 1 g/L, 25 g/L (Gelritec)), GlycÃ©rol 43mL/L, MgC12 1 g/L, 20 g/L (Gelritec)), GlycÃ©rol 43mL/L, MgC12 1 g/L, 8 g/L (Gelritec)), GlycÃ©rol 43mL/L, MgC12 1 g/L, 6 g/L (Gelritec)), GlycÃ©rol 43mL/L, MgC12 1 g/L, 20 g/L (GelzanTM), GlycÃ©rol 43mL/L, MgC12 1 g/L, 8 g/L (GelzanTM), GlycÃ©rol 43mL/L, MgC12 1 g/L, gomme de xanthane 0,5 g/L, distribuÃ©e par la sociÃ©tÃ© SIGMA ALDRICH, France, gomme de xanthane 10 g/L - 11E1, 11E1' : amidon de pomme de terre 0,5 g/L, distribuÃ© par la sociÃ©tÃ© CARL ROTH GmbH, Allemagne. - 11E2, 11E2' : amidon de pomme de terre 15 g/L 25 A la Figure 12, sont exposÃ©es des photographies de cultures et d'isolements d'E. cou menÃ©s sur des dispositifs de culture microbiologique dont les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© ont Ã©tÃ© obtenus Ã partir d'hydrogels de gellane 15 g/L (en l'occurrence, du Gelrite ), durcis avec du MgC12 Ã raison de 1 g/L, et dont la structure a Ã©tÃ© renforcÃ©e au glycÃ©rol Ã diffÃ©rentes concentrations 30 - 12A : 32 mL/L - 12B : 52 mL/L - 12C : 62 mL/L 3065735 32 En augmentant la concentration de glycÃ©rol des hydrogels, E. coli forment de plus grosses colonies, qui semblent nÃ©anmoins moins bombÃ©es et plus Ã©talÃ©es sur les hydrogels. 5 A la Figure 13, sont exposÃ©es des photographies de cultures et d'isolements de microorganismes menÃ©s sur des dispositifs de culture microbiologique dont les feuillets d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© ont Ã©tÃ© obtenus Ã partir d'un hydrogel de GelzanTM 15 g/L, durcis avec du MgC12, Ã raison de 1 g/L. Ces dispositifs de culture microbiologique ont Ã©tÃ© testÃ©s Ã©galement avec 10 succÃ¨s pour la culture et la dÃ©tection de Streptococcus agalactiae (13A), de Serratia marcescens, (13B), et pour la co-culture et la co-dÃ©tection de S. marcescens et S. aureus (13C). REVENDICATIONS1. Dispositif de culture microbiologique, comprenant : - une piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant (1) ayant une face supÃ©rieure, au moins sensiblement plane et incorporant dans son Ã©paisseur une composition de milieu de culture 5 dÃ©shydratÃ©e, - reposant sur ladite piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant (1), un feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) et rÃ©hydratable Ã des tempÃ©ratures comprises entre 5Â°C et 40Â°C ; ledit feuillet d'hydrogel dÃ©shydratÃ© (2) Ã©tant apposÃ© directement sur. la face supÃ©rieure de ladite piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant (1), ou indirectement au travers d'une 10 membrane permÃ©able intercalaire (3). 2. Dispositif de culture microbiologique selon la revendication 1, dans lequel ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) est un feuillet d'hydrogel dÃ©shydratÃ© de gellane, de xanthane, de galactomannane, d'amidon et/ou d'un mÃ©lange de ceux-ci. 3. Dispositif de culture microbiologique selon la revendication I ou 2, dans lequel 15 ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) a Ã©tÃ© prÃ©parÃ© par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de composition Ã base d'eau et d'au moins un gÃ©lifiÃ¢nt polysaccharidique choisi parmi une gomme de gellane, une gomme de xanthane, une gomme de galactomannane, de l'amidon et un mÃ©lange de ceux-ci. 4. Dispositif de culture microbiologique selon la revendication 3, dans lequel ledit 20 feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel polysaccharidique prÃ©parÃ©e en mÃ©langeant Ã un litre d'eau, 0,1 Ã 30 g d'au moins un gÃ©lifiant polysaccharidique. 5. Dispositif de culture microbiologique selon l'une quelconque des revendications 1 Ã 4, dans lequel ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) est obtenu par 25 dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de gellane, prÃ©alablement prÃ©parÃ©e en mÃ©langeant Ã un litre d'eau, 10 Ã 20 g de gomme de gellane et, prÃ©fÃ©rentiellement, 13 Ã 15 g de gomme de gellane. 6. Dispositif de culture microbiologique selon l'une quelconque des revendications 1 Ã 4, dans lequel ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) est obtenu par 3065735 34 - dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de xanthane, prÃ©alablement prÃ©parÃ©e en mÃ©langeant Ã un litre d'eau, 0,2 Ã 10 g de gomme de xanthane. 7. Dispositif de culture microbiologique selon l'une quelconque des revendications 1 Ã 4, dans lequel ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) est obtenu par 5 dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de xanthane et de gallactomannane, prÃ©alablement prÃ©parÃ©e Ã partir d'un mÃ©lange de gomme de xanthane et de gomme de graine de caroube. 8. Dispositif de culture microbiologique selon l'une quelconque des revendications 1 Ã 4, dans lequel ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel d'amidon, prÃ©alablement prÃ©parÃ©e en mÃ©langeant Ã 10 un litre d'eau, 0,5 Ã .15 g d'amidon. 9. Dispositif de culture microbiologique selon l'une quelconque des revendications 1 Ã 4, dans lequel ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) est obtenu par dÃ©shydratation d'une couche d'hydrogel de gellane et d'amidon, prÃ©parÃ©e Ã partir d'un mÃ©lange de gomme de- gellane et d'amidon, avec un ratio pondÃ©ral [gomme de 15 gellane]/[amidon] compris entre 40 :1 et 2 :3. 10. Dispositif de culture microbiologique selon la revendication 4, dans lequel ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) est renforcÃ© structurellement par voie chimique au moyen d'un additif de renfort choisi parmi le glycÃ©rol, l'Ã©thylÃ¨ne glycol et le polyÃ©thylÃ¨ne glycol. 20 11. Dispositif de culture microbiologique selon l'une quelconque des revendications prÃ©cÃ©dentes, dans lequel ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) comprend, en outre, au moins un agent durcisseur choisi parmi les sels de cation divalent. 12. Dispositif de culture microbiologique selon l'une quelconque des revendications prÃ©cÃ©dentes, dans lequel ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) 25 comprend, en outre, au moins un agent durcisseur choisi parmi le chlorure de magnÃ©sium (MgC12), le chlorure de calcium (CaC12), le sulfate de magnÃ©sium (MgSO4) et le chlorure de manganÃ¨se (MnC12). 13. Dispositif de culture microbiologique selon l'une quelconque des revendications prÃ©cÃ©dentes, dans lequel ledit feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) 3065735 35 comprend, en outre, au moins un agent plastifiant. 14. Dispositif de culture microbiologique selon l'une quelconque des revendications 10 Ã 12, caractÃ©risÃ© en ce que, non-calandrÃ©e, ladite piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant (1) prÃ©sente une masse surfacique comprise entre 50 g.m-2 et -150 g.m-2, pour une Ã©paisseur comprise 5 entre 0,5 mm et 10 mm. 15. Dispositif de culture microbiologique en kit Ã assembler, comprenant : - au moins une piÃ¨ce en matÃ©riau absorbant (1) ayant une face supÃ©rieure au moins sensiblement plane et incorporant dans son Ã©paisseur une composition de milieu de culture dÃ©shydratÃ©e, 10 - au moins un feuillet d'hydrogel polysaccharidique dÃ©shydratÃ© (2) et rÃ©hydratable Ã des tempÃ©ratures comprises entre 5Â°C et 40Â°C, et - optionnellement, au moins une membrane permÃ©able intercalaire (3). 16. Dispositif de culture microbiologique en kit Ã assembler selon la revendication 15, permettant le montage d'un dispositif de culture microbiologique tel que dÃ©fini par l'une 15 quelconque des revendications 1 Ã 14.