FR 3052668 A1 20171222 FR 1655630 A 20160616 EXTRAIT DE CELLULES INDIFFERENCIEES DE MIMOSA PUDICA ET SES UTILISATIONS EN DERMO-COSMETIQUE DESCRIPTION La présente invention concerne une préparation issue d'une culture in vitro de cellules indifférenciées de Mimosa pudica ainsi que son procédé de préparation; une composition cosmétique ou dermatologique comprenant ladite préparation ; et ses utilisations pour le traitement des troubles inflammatoires cutanés, comme agent antioxydant dont le traitement des stress oxydatifs dus à la pollution environnementale, et comme agent anti-âge. Mimosa pudica est une plante médicinale utilisée en Asie depuis plusieurs siècles pour soigner l'inflammation. Mimosa pudica Linn. (Fabaceae) est connu pour ses vertus antidiabétiques (Martes 1995), antidépressive (Molina 1999), anti-inflammatoire (Patel 2014), antioxydant (Patro 2016), antibactérien (Bhakuni 1969). Elle est utilisée également dans la cicatrisation des plaies (Paul et al., 2010. Int J Bio Med Res 1(4) :223-227). L'extrait méthanolique des feuilles de Mimosa pudica contient des molécules actives telles que: terpènes, flavonoïdes, glycosides, alcaloïdes, quinines, phénols, tannins, saponins et coumarin (Gandhiraja et al. 2009). Les molécules phénoliques contenues expriment une forte activité anti-oxydante (Zhang et al. 2011. Pharmacogn. Mag 4 :35- 39 ). Cependant, une molécule majeure isolée de la plante, est très remarquée par sa toxicité : la mimosine. Il s'agit un acide aminé non protéique (beta-N(3-hydroxy-4- pyridone)-alpha-amino propionic acid). Il a été montré que la mimosine induisait chez l'animal des effets indésirables tels que : perte d'appétit, perte de cheveux, troubles de reproduction (Kulp K.S. 1996. Toxicology and applied pharmacology.139 :356-364). Il a également été démontré qu'elle inhibait la germination des graines ou la synthèse de l'ADN des cellules mises en culture (Williams RD et al., 2007. Allelopathy J. 19(2) :423430 ; Stuenzi et al., 1979). Il semble que la mimosine soit synthétisée par la plante afin de se défendre contre les ruminants qui broutent la plante : elle provoque des troubles digestifs chez l'animal. La présence de mimosine dans les extraits de Mimosa pudica est un facteur limitant pour la valorisation de cette plante médicinale. Une approche consisterait à trouver des moyens de purification pour l'éliminer, mais cette voie 1 3052668 alourdit les procédés et nécessite un contrôle accru et par conséquent un coût de revient plus élevé. La littérature est abondante pour les préparations d'extraits avec des solvants polaires et non polaires. Le document KR 10-1064848 décrit des extraits à partir de la plante 5 par des solvants organiques tels : l'éthanol, l'acétate d'éthyle, pour le traitement des maladies auto-immunes. Dans le cadre de la présente invention, la Demanderesse a mis en évidence une nouvelle valorisation de Mimosa pudica via une voie alternative : la culture in vitro de cellules indifférenciées, totipotentes. En effet, il a été remarqué de manière 10 surprenante que la culture de ces cellules en bioréacteur permet d'obtenir une préparation significativement appauvrie en mimosine ; ladite préparation présentant des propriétés très intéressantes pour le traitement des troubles inflammatoires cutanés, des stress oxydatifs, et du vieillissement cutané. Ces propriétés ont été plus particulièrement surprenantes lorsqu'une étape de bioconversion est réalisée en cours 15 de procédé, cette étape conduisant à l'obtention de nouveaux métabolites qui potentialisent plus particulièrement l'activité anti-oxydante. De manière inattendue, la Demanderesse a constaté que ces métabolites font partie des N-phenylpropenoyl-L amino acid (NPA). Les NPA en tant que tels sont connus et très recherchés pour leur activité pharmacologique intéressante (Hensel et al. Planta Med. 2007; 73: 142 - 150; 20 Zeng et al. J. Agric. Food Chem. 2011 ; 59: 5342-5350). A ce jour, il n'était pas connu que la plante Mimosa pudica contienne des anti-oxydants comme les NPA. Dans les dermatoses inflammatoires, dans les lésions de la peau des patients atteints de la dermatite atopique au niveau de l'épiderme, on observe une surexpression de cytokine TSLP (Thymic stromal lymphopoietin) qui joue un rôle crucial dans la 25 pathogénèse des maladies allergiques médiée par une réponse cellulaire type Th2 (Takai et al. 2012. Allergology Int. 61 :3-17). Le TSLP est décrit comme responsable du prurit souvent présent en dermatite atopique ou dans le psoriasis. Nous démontrons pour la première fois qu'un extrait CCV de Mimosa pudica obtenu par le procédé selon l'invention présente des activités anti-oxydantes et anti-inflammatoires et montre 30 notamment une inhibition très forte de TSLP dans le modèle in vitro de la dermatite atopique. Nous démontrons également qu'en absence de la Mimosine dans nos extraits, un extrait de CCV de Mimosa pudica selon l'invention conserve l'activité pharmacologique anti-inflammatoire. 2 3052668 Le procédé d'obtention de la préparation, objet de la présente invention, consiste en la dédifférenciation cellulaire à partir de matériel végétal issu de Mimosa pudica, puis en la culture de cellules en suspension à l'état indifférencié afin d'obtenir rapidement une biomasse fine, abondante, homogène et stérile de cette plante. La culture cellulaire 5 rend modulable les voies de biosynthèse de cette plante à l'échelle cellulaire. La présente invention vise donc une préparation issue d'une culture in vitro de cellules indifférenciées de Mimosa pudica, une composition cosmétique ou dermatologique comprenant ladite préparation et ses utilisations en cosmétologie et/ou en dermatologie et plus préférentiellement pour le traitement des troubles inflammatoires 10 cutanés, comme agent anti-oxydant dont le traitement des stress oxydatifs dus à la pollution environnementale (tabac, air pollué intérieur et extérieur par des agents chimiques ou des allergènes), et comme agent anti-âge. C'est ainsi que la présente invention concerne un procédé de préparation in vitro d'un extrait cellulaire de Mimosa pudica présentant une teneur en 15 mimosine inférieure à 5 ng/g de matière sèche comprenant les étapes suivantes : a. Fourniture de matériel végétal stérile de Mimosa pudica, b. Dédifférenciation des cellules du matériel végétal, c. Mise en culture en suspension des cellules indifférenciées dans un milieu 20 liquide permettant leur maintien dans l'état indifférencié, d. Culture de propagation d'une biomasse de cellules indifférenciées dans le milieu de culture, e. arrêt de la propagation et obtention d'un extrait cellulaire présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g de matière sèche. 25 Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que le matériel végétal de Mimosa pudica est choisi dans le groupe constitué par feuille, tige, pétiole, racine, graine, fleur et bourgeon. Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que l'étape b) de dédifférenciation est réalisée sur un milieu 30 solide comprenant un ou plusieurs facteurs de croissance. Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisée en ce que le un ou plusieurs facteurs de croissance comprend une hormone choisie dans le groupe constituée par les auxines, les cytokines, les gibbérellines et leurs mélanges. 3 3052668 Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que l'étape b) de dédifférenciation est répétée permettant l'obtention de cals de cellules dédifférenciés. Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est 5 caractérisé en ce que l'étape c) est réalisée dans un milieu liquide comprenant un ou plusieurs facteurs de croissance Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que le ou les facteurs de croissance sont les mêmes que celui ou ceux du milieu de dédifférenciation. 10 Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que l'étape d) de culture de propagation est réalisée par des repiquages ou dilutions successifs dans le milieu de culture liquide jusqu'à obtention d'une densité de cellules constante. Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est 15 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes supplémentaires suivantes : f. séparation liquide/solide, g. récupération d'un extrait cellulaire consistant en la biomasse séparée du milieu de culture présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g de matière sèche. 20 Dans un autre mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce qu'il comprend les étapes supplémentaires suivantes : f. séparation liquide/solide, g. récupération de l'extrait cellulaire consistant en la phase liquide de milieu de culture présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g de matière 25 sèche. Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire de broyage de l'extrait et de récupération d'un broyat de cellules présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g de matière sèche. 30 Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que le broyat obtenu est soumis à une séparation liquide/solide suivie de la récupération de la phase liquide comme extrait cellulaire présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g de matière sèche. 4 3052668 Dans un autre mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que le broyat obtenu est soumis à une séparation liquide/solide suivie de la récupération de la phase solide de débris cellulaires comme extrait cellulaire présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g 5 de matière sèche. Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que le milieu de culture de l'étape c) et/ou de l'étape d) comprend un substrat de la phényl-ammonia-lyase. Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est 10 caractérisé en ce que le substrat de la phényl-ammonia-lyase est choisi dans le groupe constitué par la phénylalanine, en particulier la L-phénylalanine, l'acide cinnamique, l'acide aspartique, l'acide glutamique ainsi que leurs mélanges. Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que l'extrait obtenu contient au moins un acide aminé N- 15 phenylpropenoyl. Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que l'acide aminé N-phénylpropenoyl est choisi dans le groupe constitué par : P1 : 1-0-(4-coumaroy1)13-D-glucose 20 C151-11808 P2 : N-p-Coumaroylaspartic acid ou Aspartic acid; (S)-form, N-(4- Hydroxycinnamoyl) 25 C131-113N06 5 3052668 P3 : N-cis-(p-Coumaroyl)glutamic acid ou Glutamic acid; (S)-form, N-(4- Hydroxy-Z-cinnamoyl) 5 C141-115N06 OH P5 : 4-hydroxycinnamide C9H9NO2 P6 : Glutamic acid; (S)-form, N-cinnamoyl C141-114N05 10 6 3052668 ainsi que leurs mélanges. C'est aussi un objet de la présente invention que de fournir un extrait de culture in vitro de cellules de Mimosa pudica susceptible d'être obtenu par un procédé selon la présente invention et présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 5 ng/g de matière sèche. L'invention a aussi pour objet une extrait de culture in vitro de cellules de Mimosa pudica, caractérisé en ce que sa teneur en mimosine est inférieure à 5 ng/g de matière sèche. Dans un mode de réalisation particulier, l'extrait de culture in vitro de cellules de 10 Mimosa pudica selon l'invention est caractérisé en ce qu'il contient au moins un acide aminé N-phenylpropenoyl. Dans un mode de réalisation particulier, l'extrait selon l'invention est aussi caractérisé en ce que le au moins un acide aminé N-phenylpropenoyl est choisi dans le groupe constitué par : 15 P1 : 1-0-(4-coumaroy1)13-D-glucose C15H1808 P2 : N-p-Coumaroylaspartic acid ou Aspartic acid; (S)-form, N-(4- 20 Hydroxycinnamoyl) C13I-I13N06 7 3052668 P3 : N-cis-(p-Coumaroyl)glutamic acid ou Glutamic acid; (S)-form, N-(4- Hydroxy-Z-cinnamoyl) 5 C141-115N06 OH P5 : 4-hydroxycinnamide C9H9NO2 P6 : Glutamic acid; (S)-form, N-cinnamoyl C141-114N05 10 8 3052668 ainsi que leurs mélanges. Selon un mode particulier de réalisation, l'extrait selon l'invention est caractérisé en ce que la teneur totale de l'extrait en au moins un acide aminé 5 N-phenylpropenoyl est comprise entre 1 et 50 pg/g de biomasse sèche, et plus préférentiellement entre 10 et 40 pg/g de biomasse sèche. Selon un mode particulier de réalisation, l'extrait selon l'invention est caractérisé en ce que les cellules sont des cellules indifférenciées. C'est aussi un objet de l'invention que de viser un extrait tel que décrit ici pour 10 son utilisation dans le traitement de troubles inflammatoires de la peau. C'est aussi un objet de l'invention que de viser un extrait tel que décrit ici pour son utilisation comme inhibiteur de la Thymic Stromal lymphopoietine. Dans un mode de réalisation particulier, les troubles inflammatoires de la peau sont choisis parmi la dermatite atopique, le prurit, le psoriasis. 15 Une composition pour son utilisation comme inhibiteur de la Thymic Stromal lymphopoietine comprenant un extrait selon l'invention est aussi un objet de l'invention. Une Composition dermatologique pour le traitement d'un trouble inflammatoire de la peau choisi parmi la dermatite atopique, le prurit, le psoriasis, comprenant 20 un extrait selon l'invention en quantité efficace et au moins un excipient dermatologique est aussi un objet de la présente invention. La présente invention vise encore l'utilisation d'un extrait selon l'invention et tel que décrit ici pour le traitement cosmétique du vieillissement cutané et des troubles cutanés associés à un stress oxydatif de la peau dont le stress oxydatif 25 dû à la pollution environnementale. La présente invention concerne aussi une composition cosmétique comprenant un extrait selon l'invention associé à un excipient cosmétiquement acceptable. L'invention vise aussi une composition dermatologique comprenant un extrait selon l'invention tel que décrit, associé à un excipient dermatologiquement acceptable. 9 3052668 Enfin, la présente invention concerne encore l'utilisation d'une composition selon l'invention pour le traitement cosmétique du vieillissement cutané et des troubles cutanés associés à un stress oxydatif de la peau, tel que le stress oxydatif dû à la pollution environnementales. 5 Définitions L'expression « dédifférentiation » s'entend d'un retour des cellules à un état méristématique, c'est-à-dire à l'état de cellules indifférenciées, c'est-à-dire des cellules qui ont perdu leurs caractéristiques morphologiques et qui sont physiologiquement 10 différentes des cellules du tissu originel dont elles faisaient partie. Dans un mode de réalisation de l'invention, l'extrait présente une teneur en mimosine inférieure à 5ng/g de matière sèche, plus particulièrement inférieure à 4 ng/g de matière sèche, plus particulièrement encore inférieure à 3 ng/g de matière sèche, encore plus particulièrement encore inférieure à 2 ng/g de matière sèche, voire plus 15 particulièrement encore inférieure à 1 ng/g de matière sèche. Il est ainsi particulièrement remarquable et étonnant que la mise en culture selon l'invention de cellules de Mimosa pudica à l'état indifférencié permet d'obtenir un extrait quasiment dénué de mimosine et c'est là tout l'intéret de la présente invention du fait 20 de la toxicité de ce composé. Dans le cadre de la présente invention, l'expression « extrait » vise tout autant le milieu de culture, après avoir cessé la propagation de la culture, principalement constitué des cellules de Mimosa pudica indifférenciées baignant dans le milieu de culture liquide. Un 25 tel extrait contient entre 100 et 500 g de matière sèche par litre, particulièrement entre 150 et 350 g/I. La matière étant principalement constituée de la biomasse de cellules indifférenciées. L'extrait selon l'invention vise aussi la fraction solide dudit milieu de culture, c'est-à-dire la biomasse constituée des cellules indifférenciées de Mimosa pudica séparées du 30 milieu de culture. 10 3052668 L'extrait selon l'invention vise aussi la fraction liquide dudit milieu de culture, c'est-à-dire le milieu de culture débarrassé des cellules de Mimosa pudica indifférenciées. Ces fractions solides et liquides peuvent être aisément obtenues par une technique de séparation liquide/solide bien connue de l'homme du métier qui peut être choisie parmi 5 la centrifugation, la décantation, la filtration par exemple. L'extrait selon l'invention peut aussi est constitué d'un broyat de cellules de Mimosa pudica indifférenciées. Un tel broyat peut être obtenu directement par broyage du milieu de culture après avoir cessé la propagation. Un tel broyat contient donc les débris de membrane et de parois cellulaires, le contenu intracellulaire ainsi que le 10 milieu de culture ainsi que les composés et molécule entrainés. Un tel broyat constitutif de l'extrait selon un mode particulier de réalisation, peut être obtenu en broyant la fraction solide du milieu de culture, constituée des cellules indifférenciées de Mimosa pudica, telle qu'obtenue ci-avant ainsi que des composés et 15 molécules entrainés. Un extrait selon l'invention peut encore être constitué par la fraction solide du broyat tel que défini ci-avant. Un tel extrait comprend les fragments de parois et membranes cellulaires ainsi que certains composés et molécules entrainés. 20 Un extrait selon l'invention peut enfin être représenté par la fraction liquide du broyat après resuspension et broyage de la fraction solide du milieu culture contenant les cellules de Mimosa pudica indifférenciées. Le broyage peut être effectué par tout moyen connu de l'homme du métier, par mixeur 25 de type Utraturax par exemple, par agitation avec des billes de verres assistée ou non d'ultrasons, par exemple. Il apparait ainsi que l'extrait selon l'invention peut prendre plusieurs formes. 11 3052668 De manière préférée, l'extrait selon l'invention contient des cellules indifférenciées de Mimosa pudica entières ou des cellules indifférenciées de Mimosa pudica broyées. Cet extrait est caractérisé par son contenu en mimosine inférieur à 5, préférentiellement inférieur à 4, préférentiellement inférieur à 3, plus particulièrement inférieur à 2, plus 5 particulièrement encore inférieur à 1 ng/g de matière sèche. Dans le cadre d'un extrait selon l'invention constitué de fraction liquide dénuée de fraction solide (cellules entière ou fragments de cellules), la quantité de mimosine est 10 inférieure à 5, préférentiellement inférieur à 4, préférentiellement inférieure à 3, plus particulièrement inférieure à 2, plus particulièrement encore inférieure à 1 ng/ml d'extrait. 15 D'une manière plus générale, les cultures in vitro de tissus végétaux en suspension permettent de produire des composés organiques actifs directement issus du métabolisme primaire ou secondaire des cellules. Les cellules végétales en suspension sont maintenues totipotentes dans un état indifférencié similaire à celui des cellules souches pour les cultures de cellules 20 animales. Ces cellules végétales sont donc théoriquement capables de produire tous les métabolites observés dans la plante entière. La dédifférenciation entraîne une perturbation des voies de biosynthèse d'ordre génétique ou épigénétique si bien que les profils chimiques sont différents quantitativement et qualitativement entre la plante entière et les souches cellulaires qui en découlent. Ainsi théoriquement des 25 intermédiaires réactionnels non observés dans la plante entière peuvent apparaître en suspension cellulaire et inversement. Ceci offre une nouvelle richesse et permet d'accéder à une biodiversité phytochimique latente. Un des objets de la présente invention concerne la préparation issue d'une culture in vitro de cellules indifférenciées de Mimosa pudica. 30 Par cellules végétales « indifférenciées », ou « dédifférentiées » on entend toute cellule végétale ne présentant aucun caractère d'une spécialisation particulière c'est-à-dire 12 3052668 dans un état physiologique proche des tissus méristematiques de la plante à l'état naturel. Ces cellules sont capables de vivre par elles-mêmes et non en dépendance avec d'autres cellules. La dédifférenciation initiale des cellules de Mimosa pudica est obtenue à partir de 5 matériel végétal vivant prélevé sur la plante ou la jeune pousse, que ce soit la feuille, les pétioles, la tige, la racine, la graine, la fleur et ses organes ou le bourgeon, plus particulièrement à partir de graines ou de feuilles. Le procédé de culture de cellules dédifférenciées est obtenu in vitro par toute méthode connue par l'homme de l'art, on se réfèrera par exemple à : Murashige, T., Skoog, F. 10 1962. A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant 15: 473-496. / Plant Culture Media, Vol-1 Formulations and Uses E. F. George, D. J. M. Puttock, and H. J. George (1987) Exegetics Ltd. Edington, Westbury, Wlts, BA134QG England. Un extrait selon la présente invention peut être obtenu en réalisant les étapes 15 successives suivantes : a) mise en dédifférentiation des cellules, b) mise en suspension cellulaire avec un milieu de culture maintenant les cellules dans un état physiologique indifférencié, c) culture de propagation et production de biomasse avec un milieu de culture 20 d) dans un mode de réalisation particulier, enrichissement du compartiment intracellulaire de la culture en métabolites d'intérêts par bioconversion e) obtention de l'extrait. La préparation peut s'effectuer en erlenmeyer s'il s'agit de produire de faibles quantités de biomasse ou en bioréacteur pour des quantités plus importantes. Par exemple, en 25 erlenmeyer avec 500 ml de suspension cellulaire, on récolte 175 g de biomasse essorée en moyenne (soit 350 g de biomasse /L de suspension cellulaire) alors qu'en bioréacteur de 10 L on récolte 3000 g de biomasse essorée en moyenne (300 g/L de biomasse). Selon les espèces cultivées et leurs sensibilités aux stress de culture, différents types 30 de bioréacteurs peuvent être utilisés pour améliorer la croissance des tissus et la production de métabolites secondaires. Trois modes principaux sont rencontrés pour la culture de cellules végétales en bioréacteur : 13 3052668 1. la culture discontinue ou batch, 2. la culture recharge/récolte ou fed-batch et 3. la culture continue. Etape de stérilisation du matériel végétal : 5 Des explants de plantes de Mimosa pudica et plus particulièrement des graines sont prélevées et décontaminées avec des solutions éthanoliques à 70% puis des solutions d'hypochlorite de sodium ou de calcium ou bien des solutions de chlorure de mercure à température ambiante durant plusieurs minutes. Les tissus sont rincés à l'eau distillée stérile puis subissent au moins un lavage à l'eau distillée stérile en fin de 10 décontamination. Etape de dédifférentiation des cellules Dans le cas d'utilisation de graines, celles-ci sont décontaminées et sont mises à germer avec un milieu gélosé nutritif de Murashige & Skoog, complémenté de saccharose et de facteurs de croissance. Ces derniers vont conditionner la machinerie 15 cellulaire des explants de manière à stimuler les divisions cellulaires et aboutir à des amas cellulaires ou cals dédifférenciés (callogénèse). Les cals obtenus vont être transférés sur un milieu nutritif de dédifférentiation neuf toutes les 3 à 4 semaines. En effet certain constituants de ce milieu géloses peuvent se trouver métabolisés par les cals ou bien dégradés par l'action de l'air. 20 Un homme du métier peut aussi utiliser des tissus différentiés tels que des explants issus de feuilles par exemple pour obtenir des cellules indifférentiées. De façon générale, afin d'obtenir une dédifférenciation rapide et une multiplication cellulaire intense sous la forme de cals friables (callogénèse) qui favorisera un passage en milieu liquide, une composition hormonale à base de facteurs de 25 croissance tels que des auxines (Picloram ou acide 4-Amino-3,5,6-trichloro-2- pyridinecarboxylique) et des cytokinines (kinétine) a été testée avec succès. Les graines stérilisées peuvent être déposées en contact avec le milieu gélosé composé d'un milieu de 30 g/L de saccharose, 8 g/L d'agar, complémenté avec 1,5 mg/L de kinétine et 2 mg/L d'acide 4-Amino-3,5,6-trichloro-2-pyridinecarboxylique (Picloram) et 30 ajusté à pH 6 avant un autoclavage de 20 min à 121°C (1 bar). Les boîtes de pétri contenant les graines sont laissées à incuber à l'obscurité à 28°C. Les premiers cals apparaissent au bout de quelques jours, en particulier 2 semaines. Les cals obtenus 14 3052668 sont transférés sur un nouveau milieu toutes les 3 - 4 semaines environ en divisant les cals au scalpel de manière à maintenir une taille d'environ2 à 3 cm. Ces transferts se succèdent pendant environ plusieurs semaines, voire plusieurs mois, par exemple 6 à 8 mois, de manière à obtenir des cals friables. 5 Etape de mise en suspension cellulaire dans un milieu de culture La dédifférentiation cellulaire au gré des transferts successifs des cals sur milieu gélosé abouti à la formation de cals friables. Cette baisse de la cohésion entre les cellules est une conséquence de la dédifférentiation qui peut survenir entre deux et six 10 mois selon la plante. Cet état est propice au passage en milieu liquide car il garantit un délitement des cals en suspension cellulaire tout en minimisant les stress mécaniques induits. Ainsi une collection de cals friables est introduit (10-20% du volume) dans le milieu nutritif liquide préparé suivant la même formulation que le milieu gélosé de dédifférentiation mais sans agent gélifiant. 15 Les cals friables sont délités ainsi en milieu liquide par l'action d'une table d'agitation pendant quelques jours et la suspension cellulaire obtenue est débarrassée des parties de cals non délitées formant ainsi une suspension cellulaire homogène. Cette suspension est maintenue en culture de manière à obtenir une population cellulaire suffisamment dense. A ce stade la suspension est (repiquée ou) diluée dans du milieu 20 nutritif neuf et mise en culture de la même manière. La mise en suspension cellulaire initiale peut être réalisée en déposant environ 20 à 40 g de cals friables dans un erlenmeyer de 500 ml contenant 200 ml de milieu. Les cals friables sont délités ainsi en milieu liquide par l'action d'une table d'agitation pendant 2 à 3 jours à 115 RPM à l'obscurité à 29°C. Ensuite la suspension cellulaire est récoltée 25 à la pipette laissant de côté les amas de cals résiduels non délités. La suspension cellulaire forme ainsi une suspension homogène de micro-amas cellulaires. Cette suspension est maintenue en culture de manière à obtenir une population cellulaire « suffisamment » dense. La suspension cellulaire obtenue est cultivée pendant 14 jours puis propagée par dilution au 1/5ème dans du nouveau milieu sur la même durée. Des 30 ajustements de la composition du milieu de culture (nutriments, facteurs de croissance etc.) ont été réalisés afin de maximiser la productivité en biomasse. Il en résulte le milieu de propagation de la biomasse SENSMS (Cf tableau 1) optimisé pour la suspension cellulaire liquide. Ce milieu est une version modifiée du milieu de 15 3052668 Murashige & Skoog pour la callogénèse. Ce milieu est ajusté à pH 6 par l'ajout de KOH suivi d'un autoclavage de 20 min à 121°C (p = 1 bar) ou d'une filtration stérilisante à 0,2pm. Tableau 1 : Milieu SENSMS qui est une version modifiée du milieu de Murashige & 5 Skoog (MS) servant pour la culture en conditions optimales des cellules de sensitive en suspension en erlenmeyer ou en bioréacteur Milieu SENSMS - optimisé pour la croissance cellulaire NH4NO3 1,65 g/L Macro éléments KNO3 1,9 g/L CaCl2.2H20 0,44 g/L MgSO4.7H20 0,37 g/L KH2PO4 0,17 g/L KI 0,83 mg/L Micro éléments H3B03 6,2 mg/L MnSO4.4H20 22,3 mg/L ZnSO4.1H20 6,61 mg/L Na2Mo04.21-120 0,25 mg/L CuSO4.5H20 0,025 mg/L CoC12.6H20 0,025 mg/L FeSO4.7H20 41,7 mg/L Na2EDTA.2H20 55,95 mg/L myo-lnositol 150 mg/L Vitamines Acide nicotinique 0,75 mg/L Pyridoxine-HCI 0,75 mg/L Thiamine-HCI 0,75 mg/L 16 3052668 Glycine 2 mg/L Picloram 2 mg/L Facteurs (hormones de croissance) Kinétine 1,5 mg/L Saccharose 30 g/L Source carbonée Culture de propagation et production de biomasse avec un milieu de culture Après plusieurs repiquages de la sorte, la suspension cellulaire est stabilisée lorsque la densité de cellules obtenue sur la période est constante. Des ajustements de la 5 composition du milieu de culture (nutriments, facteurs de croissance...) est alors possible afin de maximiser la productivité en biomasse. Ce milieu optimisé est employé comme moyen de production de biomasse afin d'en extraire les principes actifs. La culture cellulaire en condition « optimale » ainsi établie est stabilisée et entretenue en erlenmeyer (culture de propagation) à raison d'une dilution de la suspension 10 cellulaire au 1/5e tous les 14 jours. Ceci équivaut à une culture cellulaire inoculée à 60 g/L env. de biomasse fraîche qui produit une suspension cellulaire de 350 g/L env. au bout de 14 jours de culture; ou inoculée en bioréacteur selon les besoins. La biomasse fraîche représente 100 à 500g par litre de suspension, et de façon plus préférentielle entre 200 et 350 g par litre de suspension. 15 Etape optionnelle : Enrichissement du compartiment intracellulaire de la culture en métabolites d'intérêts par bioconversion Il est parfois indispensable de fournir aux cellules des « précurseurs » dont la structure est suffisamment proche du produit final dans l'espoir de les voir incorporer, modifier ou transformer à l'aide des équipements enzymatiques présents dans la cellule. 20 Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que le milieu de culture de l'étape c) et/ou de l'étape d) comprend un substrat de la phényl-ammonia-lyase. Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que le substrat de la phényl-ammonia-lyase est choisi dans le 25 groupe constitué par la phénylalanine, en particulier la L-phénylalanine, l'acide cinnamique, l'acide aspartique, l'acide glutamique ainsi que leurs mélanges. 17 3052668 Dans un mode particulier de réalisation, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que l'extrait obtenu contient au moins un acide aminé Nphenylpropenoyl. Ce procédé de modification d'un précurseur par la cellule porte le nom de 5 bioconversion. L'ajout de précurseurs dans le milieu de culture pourrait être une approche intéressante pour augmenter la production des métabolites secondaires d'intérêts. Ce concept se base sur le principe que n'importe quel composé, qui est un intermédiaire réactionnel dans la voie de biosynthèse du métabolite d'intérêt, peut probablement améliorer le rendement du produit final. 10 Ainsi, d'après la structure des NPA (voir Figure ci-dessous), certaines molécules (acide-aminé) semblent être des précurseurs de ces intermédiaires réactionnels. Par exemple, l'acide aminé L-phénylalanine représente un précurseur intéressant pour moduler positivement l'activité d'une l'enzyme Phényl-Ammonia-Lyase (PAL). De la même manière, l'acide cinnamique pourrait être à l'origine de ce même phénomène. 15 On peut également envisager multiples combinaisons, notamment avec l'acide aspartique ou l'acide glutamique. Nous avons effectué des nombreuses expériences, utilisant ces différents précurseurs (seuls ou en combinaison), et de manière surprenante avec la L-Phénylalanine, nous obtenons des NPAs intéressants qui n'ont jamais été décrits dans les cellules de Mimosa pudica tels que : 20 P1 : 1-0-(4-coumaroy1)13-D-glucose Ci5H1808 P2 : N-p-Coumaroylaspartic acid ou Aspartic acid; (S)-form, N-(4- Hydroxycinnamoyl) 25 C131-113N06 18 3052668 P3 : N-cis-(p-Coumaroyl)glutamic acid ou Glutamic acid; (S)-form, N-(4- Hydroxy-Z-cinnamoyl) 5 C141-115N06 OH P5 : 4-hydroxycinnamide C9H9NO2 P6 : Glutamic acid; (S)-form, N-cinnamoyl C141-114N05 10 19 3052668 ainsi que leurs mélanges. 5 Obtention de l'extrait Après arrêt de la propagation, la suspension cellulaire obtenue peut être filtrée ou centrifugée afin de la séparer du milieu de culture et obtenir d'une part le milieu extracellulaire (ou surnageant de culture) et d'autre part la biomasse récoltée. La 10 biomasse peut alors être traitée de différentes manières selon l'utilisation. Soit elle est séchée par lyophilisation, soit elle est remise en suspension, par exemple à 30% dans de la Glycérine 68.2% avec 0.8 % de carraghénane et 1% d'acide citrique. On peut aussi réaliser une extraction par solvant sur la suspension cellulaire en faisant au préalable un broyage cellulaire par sonication ou par French press par exemple. 15 Formulation Un autre objet de l'invention concerne une composition cosmétique ou dermatologique comprenant une extrait de culture in vitro de cellules de Mimosa pudica susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention et un ou plusieurs excipients cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptables, et de préférence destinés à 20 une application topique. Les excipients cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptables peuvent être tout excipient parmi ceux connus de l'homme de l'art. La composition selon l'invention sera notamment une composition topique notamment sous forme de crème, d'une lotion, d'un gel, d'une pommade, d'une émulsion, d'une microémulsion, d'un spray, etc. 25 La composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention peut en particulier contenir des additifs et aides à la formulation, tels que des émulsionnants, des 20 3052668 épaississants, des gélifiants, des fixateurs d'eau, des agents d'étalement, des stabilisants, des colorants, des parfums et des conservateurs. Un autre objet selon l'invention est l'utilisation d'une extrait selon l'invention dans le traitement des traitements des troubles inflammatoires cutanés, comme agent anti- 5 oxydant dont le traitement des stress oxydatifs dus à la pollution environnementale, et comme agent anti-âge. Par « trouble inflammatoire cutané », on entend la dermatite atopique, prurit, et démangeaisons dues au prurit (inhibition TSLP), l'eczéma et le psoriasis. De manière préférée, lesdits troubles inflammatoires dermatologiques consistent en la 10 dermatite atopique, le prurit, l'eczéma ou le psoriasis. Selon un autre mode de réalisation, l'invention objet de la présente demande de brevet vise une composition comprenant au moins, à titre de principe actif, un extrait selon l'invention. L'invention concerne donc, de manière préférée, une composition cosmétique ou dermatologique. La composition selon l'invention vise le traitement de troubles 15 inflammatoires dermatologiques. De manière préférée, lesdits troubles inflammatoires dermatologiques consistent en la dermatite atopique, le prurit, les démangeaisons dues au prurit, l'eczéma ou le 20 psoriasis. La composition selon l'invention peut être préparée sous la forme d'une émulsion eau dans huile (E/H) ou huile dans eau (H/E), d'une émulsion multiple comme 2 0 par exemple, une émulsion eau dans huile dans eau (E/H/E) ou une émulsion huile dans eau dans huile (H/E/H), d'une micro-émulsion ou encore sous la forme d'une 25 hydrodispersion ou une lipodispersion, un gel ou un aérosol. Les excipients dermatologiquement ou cosmétiquement compatibles peuvent être tout excipient parmi ceux connus de l'homme de l'art en vue d'obtenir une composition pour l'application topique sous forme d'un lait, d'une crème, d'un baume, d'une huile, d'une lotion, d'un gel, d'un gel moussant, d'une pommade, d'un spray, etc. 30 Outre des compositions dermatologiques et cosmétiques, l'invention vise également des compositions pharmaceutiques pour une utilisation à titre de médicament. 21 3052668 L'invention vise donc une composition pharmaceutique comprenant, en outre, un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Dans la présente description, on entend désigner par véhicule pharmaceutiquement acceptable, un composé ou une combinaison de composés entrant dans une composition pharmaceutique ne 5 provoquant pas de réactions secondaires et qui permet par exemple la facilitation de l'administration du ou des composés actifs, l'augmentation de sa durée de vie et/ou de son efficacité dans l'organisme, l'augmentation de sa solubilité en solution ou encore l'amélioration de sa conservation. Ces véhicules pharmaceutiquement acceptables sont bien connus et seront adaptés par l'homme de l'art en fonction de la nature et du 10 mode d'administration. EXEMPLE : Culture de cellules végétales en bioréacteur WAVE (5 L) Matériels et méthodes : Le réacteur WAVE (Sartorius) de volume utile 5 L contenant 4 L de milieu MS SENS (composition voir tableau plus haut) a été inoculé par 1 L de 15 suspension de culture de cellules de M pudica (densité cellulaire entre 300 et 400 g/L en Fresh weight FVV) Paramètres : - Température : 27°C - Volume d'air : 0.5 L/mn (Ipm) 20 - Pression : 5 mPa à 10 mPa - Angle d'agitation: 7° - p02 maintenue à 75% par augmentation des rpm entre JO (19 rpm) et J9 (27 rpm) - p02 maintenue à 75% par enrichissement de l'air en 02 entre J9 (5% 02) et 25 J15 (20% 02) à 25 rpm En suivant la cinétique de croissance on observe l'augmentation de la biomasse évaluée par « fresh weight » ou « dry weight » (FW ou DVV) corrélée avec la consommation en sucre (décroissance de la courbe) jusqu'au 13ème jour de culture, J13, où le milieu de bioconversion est ajouté. 30 Bioconversion et récolte 22 3052668 Après 13 jours (J13) de culture en batch d'une culture de 4 L, la concentration cellulaire se trouve entre 300 et 350 g/L (FVV) équivalent à 12 à 14 g/L (DW). Lorsque cette concentration cellulaire est atteinte, on procéde à la bioconversion en injectant les précurseurs par filtration stérilisante, nous avons sélectionné les différents acides 5 aminés (acide aspartique, acide cinnamique, acide glutamique ou L-Phénylalanine), et dans nos conditions de culture, la L-Phénylalanine a donné les meilleurs résultats en terme de rendement en bioconversion en NPAs. Ci-contre un exemple de concentrations en précurseurs suivantes : Préparation extemporanée Concentration(SM) Concentration (Suspension) Volume final de SM (ml) NH4H2PO4 50 g/L 0,1 g/L 10 L-Phénylalanine 300 mM 6 mM 100 Saccharose 500 g/L 10 g/L 100 10 Milieu de Bioconversion favorisant les acides hydroxycinnamiques dont leurs dérivés, les N-Phénylpropenoyl Aminoacids (NPA) Diluer les composés dans H2O et ajouter par filtration stérilisante le mix dans le bioréacteur. Après 48h, c'est-à-dire entre J15 et J16, procéder à la récolte de la 15 biomasse par filtration directe à l'aide d'une « poche en Nylon 20 pm » par exemple. La biomasse est lavée 1 fois avec un volume d'eau déminéralisée stérile équivalent au volume de biomasse récoltée. La concentration cellulaire évaluée à J13 doit être équivalente (+1-10%) à J15. Tout au long de la culture, la baisse du volume de suspension est principallement due aux prélèvements effectués. 20 On prélève un volume de la culture à J13, J14, J15 et J16, on extrait ensuite avec un solvant puis les différents extraits ont été dissous dans avant d'être analysé par HPLC couplé avec la spectrométrie de masse. On voit dans les 2 graphes ci-dessous que par rapport à J13 (le jour de l'ajout du précurseur L-Phénylalanine), l'apparition progressive des nouveaux pics J14, J15 jusqu'à atteindre le maximum d'intensité au jour J16. 25 Les pics Pl, P2, P3, P4, P5 et P6 ont été isolés à J16, analysés par sp de masse et par RMN afin de déterminer la structure de la molécules. Le Pic P4 étant en très faible 23 3052668 quantité celui ci ne nous a pas permis de déterminer sa structure. Pour la le fois et de manière surprenante, nous découvrons que le précurseur L-Phénylalanine était le meilleur acide-aminé pour la bioconversion. 5 Les produits NPAs Pl, P2, P3, P5 et P6 ont été identifiés par spectroscopie de masse et RMN. Liste des noms des NPAs : 10 PI : 1-0-(4-coumaroy1)13-D-glucose C15H1808 P2 : N-p-Coumaroylaspartic acid ou Aspartic acid; (S)-form, N-(4-Hydroxycinnamoyl) C13I-I13N06 P3 : N-cis-(p-Coumaroyl)glutamic acid ou Glutamic acid; (S)-form, N-(4-Hydroxy-Z-cinnamoyl) P5 : 4-hydroxycinnamide C9H9NO2 P6 : 25 Glutamic acid; (S)-form, N-cinnamoyl Cl4H14N05 30 EXEMPLE 2: DOSAGES DE MIMOSINE DE CELLULES VEGETALES VERSUS FEUILLES DE MIMOSA PUDICA 15 20 24 3052668 L'objectif est de mettre au point les conditions analytiques qui permettent d'identifier et de quantifier la mimosine dans les extraits. La biomasse issue de culture en suspension de cellules de M pudica (avec bioconversion) a été extraite avec ET0H80 ou avec ET0H60. Les feuilles séchées de M pudica ont été séchées, broyées et 5 extraites avec les mêmes solvants. On se sert de référence la L-Mimosine de Sigma pour l'identification et quantification. Les échantillons ont été analysés par HPLC/spectrométrie de masse. Matériels et méthodes : Conditions Analytiques Spectromètre de masse TripleTOF 4600 ABSciex 10 Méthode (ES+): TOF (100ms) / MRM (50ms) Colonne: Acquity HSS C18, 1.8pm, 2.1x100mm, fritté 0.5pm Eluants : A (H20-0.1 cY0HCO2H) / B (CH3CN-0.1cY0HCO2H) Débit : 500 pl/min Injections : 10 pl 15 Gradient : Time (mn) %A %B 0.0 100 0 1.0 100 0 4.0 10 90 4.01 0 100 5.0 0 100 20 Les dosages quantitatifs ont permis de déterminer la limite basse de quantification (LLOQ lower limit of quantification) atteinte dans la solution témoin est de 5 ng/mL. Cette LLOQ et le mode de préparation de nos échantillons hydro-éthanolique permettent de confirmer l'absence de Mimosine dans nos échantillons de culture cellulaire à la limite de détection (1 ng de Mimosine par g de biomasse) : 25 - Extraits Et0H80 et Et0H60 de cellules (20% w/w) REVENDICATIONS1. Procédé de préparation in vitro d'un extrait cellulaire de Mimosa pudica présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g de matière sèche comprenant les étapes suivantes : a. Fourniture de matériel végétal stérile de Mimosa pudica, b. Dédifférenciation des cellules du matériel végétal, c. Mise en culture en suspension des cellules indifférenciées dans un milieu liquide permettant leur maintien dans l'état indifférencié, d. Culture de propagation d'une biomasse de cellules indifférenciées dans le milieu de culture, e. arrêt de la propagation et obtention d'un extrait cellulaire présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g de matière sèche. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le matériel végétal de Mimosa pudica est choisi dans le groupe constitué par feuille, tige, pétiole, racine, graine, fleur et bourgeon. 3. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que l'étape b) de dédifférenciation est réalisée sur un milieu solide comprenant un ou plusieurs facteurs de croissance. 4. Procédé selon la revendication 3, caractérisée en ce que le un ou plusieurs facteurs de croissance comprend une hormone choisie dans le groupe constituée par les auxines, les cytokines, les gibbérellines et leurs mélanges. 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'étape b) de dédifférenciation est répétée permettant l'obtention de cals de cellules dédifférenciés. 6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l'étape c) est réalisée dans un milieu liquide comprenant un ou plusieurs facteurs de croissance 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le ou les facteurs de croissance sont les mêmes que celui ou ceux du milieu de dédifférenciation. 8. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que l'étape d) de culture de propagation est réalisée par des repiquages ou dilutions successifs dans le milieu de culture liquide jusqu'à obtention d'une densité de cellules constante. 9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes supplémentaires suivantes : - f. séparation liquide/solide, g. récupération d'un extrait cellulaire consistant en la biomasse séparée du milieu de culture présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g de matière sèche. 3052668 38 10. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes supplémentaires suivantes : f. séparation liquide/solide, g. récupération de l'extrait cellulaire consistant en la phase liquide de milieu de culture 5 présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g de matière sèche. 11. Procédé selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire de broyage de l'extrait et de récupération d'un broyat de cellules présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g de matière sèche. 12. Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que le broyat obtenu est soumis à une 10 séparation liquide/solide suivie de la récupération de la phase liquide comme extrait cellulaire présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g de matière sèche. 13. Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que le broyat obtenu est soumis à une séparation liquide/solide suivie de la récupération de la phase solide de débris cellulaires comme extrait cellulaire présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g de matière 15 sèche. 14. Procédé selon l'une des revendications 1 à 13 caractérisé en ce que le milieu de culture de l'étape c) et/ou de l'étape d) comprend un substrat de la phényl-ammonia-lyase. 15. Procédé selon la revendication 14, caractérisé en ce que le substrat de la phényl-ammonialyase est choisi dans le groupe constitué par la phénylalanine, en particulier la L- 20 phénylalanine, l'acide cinnamique, l'acide aspartique, l'acide glutamique ainsi que leurs mélanges. 16. Procédé selon l'une des revendications 14 ou 15, caractérisé en ce que l'extrait obtenu contient au moins un acide aminé N-phenylpropenoyl. 17. Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce l'acide aminé N-phénylpropenoyl est 25 choisi dans le groupe constitué par : PI. :1-0-(4-coumaroyi)-I3-D-glucose Cl5H1808 3052668 39 P2 : N-p-Coumaroylaspartic acid ou Aspartic acid; (S)-form, N-(4-Hydroxycinnamoyl) C131113N 06 OH 5 P3 : N-cis-(p-Coumaroyl)glutamic acid ou Glutamic acid; (S)-form, N-(4-Hydroxy-Z-cinnamoyl) CIAH isN 06 OH P5 : 4-hydroxycinnamide 10 C9119N 02 N112 OH P6 : Glutamic acid; (S)-form, N-cinnamoyl C141114N 05 3052668 0 HO (S ainsi que leurs mélanges. 40 18. Extrait de culture in vitro de cellules de Mimosa pudica susceptible d'être obtenu par un procédé selon l'une des revendications précédentes présentant une teneur en mimosine inférieure à 5 ng/g de matière sèche. 5 19. Extrait de culture in vitro de cellules de Mimosa pudica, caractérisé en ce que sa teneur en mimosine est inférieure à 5 ng/g de matière sèche. 20. Extrait selon l'une des revendications 18 ou 19 caractérisé en ce qu'il contient au moins un acide aminé N-phenylpropenoyl. 21. Extrait selon la revendication 20, caractérisé en ce que le au moins un acide aminé N- 10 phenylpropenoyl est choisi dans le groupe constitué par : Pl. : 1-0-(4-coumaroy1)-11-D-glucose 015111808 15 P2 : N-p-Coumaroylaspartic acid ou Aspartic acid; (S)-form, N-(4-Hydroxycinnamoyl) C13H13N06 3052668 41 OH P3 : N-cis-(p-Coumaroyl)glutamic acid ou Glutamic acid; (S)-form, N-(4-Hydroxy-Z-cinnamoyl) CJAH 15N 06 P5 : 4-hydroxycinnamide C9H9NO2 NH2 OH 10 P6 : Glutamic acid; (S)-form, N-cinnamoyl C14 H i4N 05 3052668 ainsi que leurs mélanges. 42 22. Extrait selon l'une des revendications 20 ou 21 caractérisé en ce que la teneur totale de l'extrait en au moins un acide aminé N-phenylpropenoyl est comprise entre 1 et 50 gg/g de 5 biomasse sèche. 23. Extrait selon l'une des revendications 18 à 22, caractérisé en ce que les cellules sont des cellules indifférenciées. 24. Extrait selon l'une des revendications 18 à 23 pour son utilisation dans le traitement de troubles inflammatoires de la peau. 10 25. Extrait selon l'une des revendications 18 à 23 pour son utilisation comme inhibiteur de la Thymic Stromal lymphopoietine. 26. Extrait pour son utilisation selon la revendication 24, caractérisé en ce que les troubles inflammatoires de la peau sont choisis parmi la dermatite atopique, le prurit et démangeaisons dû au prurit, l'eczéma et le psoriasis. 15 27. Composition pour son utilisation comme inhibiteur de la Thymic Stromal lymphopoietine comprenant un extrait selon l'une des revendications 18 à 23. 28. Composition dermatologique pour le traitement d'un trouble inflammatoire de la peau choisi parmi la dermatite atopique, le prurit et démangeaisons dues au prurit, l'eczéma et le psoriasis, comprenant un extrait selon l'une des revendications 18 à 23 en quantité efficace 20 et au moins un excipient dermatologique. 29. Utilisation d'un extrait selon l'une des revendications 18 à 23 pour le traitement cosmétique du vieillissement cutané. 30. Composition cosmétique comprenant un extrait selon l'une des revendications 18 à 23 associé à un excipient cosmétiquement acceptable. 25 31. Composition dermatologique comprenant un extrait selon l'une des revendications 18 à 23 associé à un excipient dermatologiquement acceptable 32. Utilisation d'une composition selon la revendication 30 pour le traitement cosmétique du vieillissement cutané.