FR 3053592 A1 20180112 FR 1656479 A 20160706 1 La présente invention concerne une composition comprenant du fibrinogène stable sous forme liquide, utile en thérapie. Le fibrinogène est une protéine essentielle de la coagulation sanguine, car sa polymérisation en fibrine insoluble formée au terme de la cascade de réactions qui gouvernent la coagulation, aboutit à la formation d'un caillot obturant la brèche vasculaire, responsable du saignement. La mise en place du caillot est ainsi essentielle pour assurer l'arrêt du saignement. De plus, la fibrine formée au niveau de la plaie constitue un réseau fibrillaire qui assure la réparation tissulaire, donc la cicatrisation. De nombreuses pathologies sont actuellement traitées par voie intraveineuse en utilisant des compositions comprenant du fibrinogène. On peut citer par exemple les hypofibrinogénémies, dys-fibrinogénémies ou a-fibrinogénémies constitutionnelles chez les patients présentant une hémorragie spontanée ou post-traumatique, le traitement complémentaire dans la prise en charge d'une hémorragie sévère incontrôlée dans le cadre d'une hypofibrinogénémie acquise, etc. Pour le traitement de certaines pathologies, l'utilisation de compositions comprenant du fibrinogène stables au stockage et prêtes à l'emploi peut s'avérer particulièrement avantageuse. Cette forme d'administration offre en effet plus de flexibilité et de rapidité d'administration aux praticiens, améliorant la prise en charge urgente des patients hémorragiques. A cette fin, des compositions comprenant du fibrinogène lyophilisées, stables au stockage et adaptées à une constitution rapide ont été développées. Cependant, la reconstitution de telles compositions lyophilisées nécessite quelques minutes. De plus, la reconstitution doit être réalisée doucement pour permettre la dissolution complète du lyophilisat, garantissant la concentration du produit, et ce sans formation de mousse, de trouble ou de dépôt qui rendrait la composition difficilement ou non administrable. L'utilisation de tels produits lyophilisés n'est donc pas optimale dans un contexte de 30 médecine d'urgence intra ou péri-hospitalière ou chaque minute compte pour le traitement de l'hémorragie. 3053592 2 A ce jour, les compositions comprenant du fibrinogène sont commercialisées sous forme lyophilisée à reconstituer et ne donnent pas entière satisfaction en termes de stabilité liquide notamment. 5 Notamment, Chabbat et al (Thrombosis Research, vol.76, No.6, 525-533, 1994), décrit une composition de fibrinogène comprenant du NaC1, de l'acide aminocaproïque, de la glycine, de l'arginine et de l'aprotinine. L'aprotinine, inhibiteur compétitif des sérines protéases naturel, est néanmoins défavorable aux patients lors de l'administration intraveineuse, d'une part du point de vue de son origine animale (préparation à partir de poumon de boeuf) avec un risque 10 non négligeable de choc anaphylactique, et d'autre part vis-à-vis de son activité anti- coagulante pouvant aggraver le défaut de coagulation du patient à traiter. La demande W00021568 décrit des compositions comprenant du fibrinogène, des ions calcium, un immuno-stimulateur, et des anti-fibrinolytiques, pour leur utilisation comme colle 15 de fibrine. Néanmoins de telles compositions ne peuvent être administrées par voie intraveineuse aux patients. La demande EP1648496 de la demanderesse, décrit quant à elle des compositions comprenant du fibrinogène, stabilisé par addition d'arginine, de citrate trisodique, de leucine/isoleucine et 20 de glycine et/ou lysine, permettant la stabilisation et la solubilisation du lyophilisat. Une telle composition n'est en revanche pas totalement adaptée à une formulation liquide de fibrinogène. Dans ce contexte, les besoins en compositions liquides comprenant du fibrinogène 25 d'utilisation aisée persistent. La Demanderesse a mis au point une nouvelle composition comprenant du fibrinogène, préférentiellement du fibrinogène humain, qui est stable à l'état liquide. L'invention concerne donc une composition comprenant du fibrinogène stable sous forme liquide. 3053592 3 De manière surprenante et avantageuse, la Demanderesse a mis en évidence qu'il est possible d'obtenir des compositions comprenant du fibrinogène particulièrement stables dans le temps sous forme liquide, en utilisant un nombre limité et des quantités minimales d'excipients. 5 Le fibrinogène est une protéine constitué d'un dimère de trois chaines polypeptidiques dénommées alpha, beta et gamma. Le fibrinogène est donc un dimère et chaque monomère est composé de trois chaînes (alpha, bêta, gamma). La forme principale de fibrinogène a un poids moléculaire (PM) de 340 kDa. Le fibrinogène est formé de deux sous-unités identiques reliées par des ponts disulfures, donnant à la molécule une forme de fibre comportant 3 10 globules : un central (domaine E) et deux distaux (domaines D). La molécule entière contient 2964 acides aminés : 610 acides aminés pour la chaîne alpha (a), 461 acides aminés pour la chaîne beta 03), et 411 acides aminés pour la chaîne gamma (y).Le fibrinogène intervient dans l'hémostase primaire ainsi que dans la coagulation. 11 est le plus souvent prescrit pour le traitement des complications associées à l'afibrinogénémie constitutionnelle ou sévère et les 15 syndromes hémorragiques ou risques d'hémorragies associés à une hypofibrinogénémie. Le terme « stable » correspond à la stabilité physique et/ou chimique de la composition comprenant le fibrinogène. Le terme « stabilité physique » se réfère à la réduction ou l'absence de formation d'agrégats insolubles ou solubles des formes dimériques, 20 oligomériques ou polymériques du fibrinogène, à la réduction ou l'absence de formation de précipité, ainsi qu'à la réduction ou l'absence de toute dénaturation structurale de la molécule. Le terme « stabilité chimique » se réfère à la réduction ou l'absence de toute modification chimique de la composition comprenant le fibrinogène pendant le stockage, à l'état liquide, dans des conditions accélérées. 25 Un test de stabilité peut être effectué en différentes conditions de température, d'humidité, et de lumière. Préférentiellement, dans le cadre de la présente invention, le test de stabilité peut durer au minimum 1 semaine, préférentiellement au moins 1 mois, préférentiellement au moins 2 mois, préférentiellement au moins 3 mois, préférentiellement au moins 4 mois, 30 préférentiellement au moins 5 mois, plus préférentiellement au moins 6 mois. Typiquement, la mesure des paramètres de stabilité, tel que définis ci-après, ont lieu - avant la mise en test de stabilité d'une composition comprenant du fibrinogène ; on peut alors parler de taux initial; et - pendant ou à l'issue dudit test de stabilité, 3053592 4 étant entendu que ledit test de stabilité peut durer au minimum 1 semaine, préférentiellement au moins 1 mois, préférentiellement au moins 2 mois, préférentiellement au moins 3 mois, préférentiellement au moins 4 mois, préférentiellement au moins 5 mois, plus préférentiellement au moins 6 mois. 5 La stabilité d'une composition comprenant du fibrinogène peut s'évaluer par inspection visuelle à l'aide notamment d'une mireuse pharmacopée européenne (opalescence, formation de particules), par mesure de la turbidité au moyen d'un spectrophotomètre mesurant l'absorbance ou densité optique à 400 nm, permettant de mesurer les particules en solution de tailles comprises entre 1 nm et 1 p.m environ. 10 Dans un mode de réalisation, la stabilité de la composition comprenant du fibrinogène est définie par la mesure du taux de monomères conservés pendant le test de stabilité au moyen de la méthode High Pressure Size Exclusion Chromatography (HPSEC) ou Dynamic Light Scattering (DLS). Ces méthodes sont bien connues de l'homme du métier. 15 Une composition de fibrinogène est avantageusement considérée comme stable si la quantité de monomères de fibrinogène conservés pendant la mise en test de stabilité est supérieure à 50%, préférentiellement supérieure à 60%, préférentiellement supérieure à 70%, préférentiellement supérieure à 80%, préférentiellement supérieure à 90%, préférentiellement 20 supérieure à 95% du taux initial de monomères de fibrinogène. Plus préférentiellement, la quantité de monomères de fibrinogène conservés pendant le test de stabilité est supérieure à 70% du taux initial de monomères de fibrinogène. Par "taux initial de monomère de fibrinogène", on entend le taux de monomère observé avant 25 la mise en test de stabilité. Typiquement, la quantité de monomère de fibrinogène est mesurée avant la mise en test de stabilité et pendant ou à l'issue dudit test de stabilité. Alternativement, une composition de fibrinogène est considérée comme stable si la variation de quantité de monomères de fibrinogène durant le test de stabilité est inférieure à 20 %, 30 préférentiellement inférieure à 10%, préférentiellement inférieure à 5%, préférentiellement inférieure à 1%. Dans un autre mode de réalisation, la stabilité de la composition comprenant du fibrinogène est définie par la mesure du taux de polymères de fibrinogène formés pendant la mise en test 3053592 5 de stabilité au moyen de HPSEC. Les polymères de fibrinogènes sont des polymères comprenant au moins 2 chaines polypeptidiques alpha, 2 chaines polypeptidiques beta et 2 chaines polypeptidiques gamma du fibrinogène. Ce terme inclue également les trimères de fibrinogène. 5 Une composition de fibrinogène est avantageusement considérée comme stable si la quantité de polymères de fibrinogène formés pendant la mise en test de stabilité est inférieure à 10%, préférentiellement inférieure à 20%, préférentiellement inférieure à 30%, préférentiellement inférieure à 40%, préférentiellement inférieure à 50% par rapport au taux initial de polymères 10 de fibrinogène. Typiquement, le taux initial de polymères de fibrinogène correspond à l'ensemble des formes polymériques (trimères et plus) du fibrinogène avant la mise en test de stabilité. Plus préférentiellement, la quantité de polymères de fibrinogène formés pendant la mise en 15 test de stabilité est inférieure à 30%. Typiquement, la quantité de polymères de fibrinogène est mesurée avant la mise en test de stabilité et pendant ou à l'issue dudit test de stabilité. Alternativement, une composition de fibrinogène est considérée comme stable si la variation de quantité de polymères de fibrinogène durant le test de stabilité est inférieure à 20%, 20 préférentiellement inférieure à 10%, préférentiellement inférieure à 5%, préférentiellement inférieure à 1%. Dans un autre mode de réalisation, la stabilité de la composition comprenant du fibrinogène est évaluée par la mesure de l'activité coagulable du fibrinogène rapportée à la mesure 25 antigénique du fibrinogène (aussi appelée activité spécifique). De manière particulièrement avantageuse, la composition de fibrinogène stable présente un ratio fibrinogène coagulable / fibrinogène antigène supérieur à 0,5; préférentiellement supérieur à 0,6; supérieur à 0,7; supérieur à 0,8; supérieur à 0,9; encore plus préférentiellement environ égal à 1,0. 30 Par « fibrinogène coagulable » on entend la mesure du fibrinogène fonctionnel par une technique de coagulation, déterminée selon la méthode de von Clauss. L'activité coagulable est exprimée eu g/L de solution de fibrinogène. Cette technique est connue de l'homme du métier qui peut se référer à la publication Von Clauss, A. (1957) Gerinnungsphysiologische schnellmethode zur bestimmung des fibrinogens. Acta Haematologica, 17, 237-246. 3053592 6 Par « fibrinogène antigène » on entend la quantité de fibrinogène, qu'il soit actif ou non, mesurée par méthode néphélémétrique. La quantité de fibrinogène antigénique est exprimée en g/L. 5 La stabilité de la composition comprenant du fibrinogène est également évaluée par la mesure en SDS PAGE de la conservation des chaînes alpha, beta et gamma de fibrinogène, préférentiellement avant et après un test de stabilité comme défini dans le cadre de la présente invention. Ainsi, une composition de fibrinogène est avantageusement considérée comme 10 stable si : l'ensemble des chaînes alpha est conservée à au moins 50%, préférentiellement au moins 60%, préférentiellement au moins 70%, préférentiellement au moins 80%, préférentiellement au moins 90%; plus préférentiellement conservée à environ 100%, et/ou 15 l'ensemble des chaînes beta est conservée à au moins 50%, préférentiellement au moins 60%, préférentiellement au moins 70%, préférentiellement au moins 80%, préférentiellement au moins 90%; plus préférentiellement conservée à environ 100%, et/ou l'ensemble des chaînes gamma est conservée à au moins 50%, préférentiellement au 20 moins 60%, préférentiellement au moins 70%, préférentiellement au moins 80%, préférentiellement au moins 90%; plus préférentiellement conservée à environ 100%. La stabilité de la composition comprenant du fibrinogène est également définie par la mesure de la turbidité au moyen de la spectrophotométrie UV à 400nm. En effet, la turbidité reflète la 25 quantité en matière qui trouble la solution. Une composition de fibrinogène est avantageusement considérée comme stable si la turbidité mesurée après le test de stabilité comme défini dans la présente invention est comparable à la turbidité mesurée avant stabilité. Avantageusement, la turbidité mesurée après la mise en test de stabilité correspond à moins 30 de 130%, moins de 120%, moins de 110% ; avantageusement correspond à 100% de la turbidité mesurée avant stabilité. 3053592 7 Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, la composition comprenant du fibrinogène est stable pendant au moins 1 mois, au moins 2 mois, au moins 3 mois, au moins 4 mois, au moins 5 mois, au moins 6 mois à 4°C. 5 Par «composition selon l'invention», on entend désigner la composition comprenant du fibrinogène, ladite composition étant stable sous forme liquide. Préférentiellement, ladite composition est constituée de fibrinogène, d'arginine et de citrate. Par « composition de fibrinogène sous forme liquide » on entend une composition 10 comprenant du fibrinogène en solution, préférentiellement qui n'a pas été soumise à une étape de lyophilisation, dessiccation, déshydratation ou séchage, et qui n'a donc pas besoin d'être reconstituée avant utilisation. Un objet de l'invention est donc une composition pharmaceutique comprenant du fibrinogène 15 stable sous forme liquide non reconstituée après lyophilisation. Un autre objet de l'invention est une composition pharmaceutique comprenant du fibrinogène et un ou des excipients pharmaceutiquement acceptables, stable sous forme liquide. Le terme « excipient pharmaceutiquement acceptable » correspond à tout excipient 20 avantageusement utilisable pour la formulation de protéines humaines, notamment aux substances choisies parmi les sels, les acides aminés, les sucres, les tensioactifs ou tout autre excipient. Les excipients pharmaceutiquement acceptables de l'invention excluent notamment 25 l'isoleucine, la glycine, et le NaCl. Avantageusement, les excipients pharmaceutiquement acceptables selon l'invention incluent l'arginine et/ou le citrate. La Demanderesse a mis en évidence qu'il était possible d'obtenir des compositions particulièrement stables dans le temps sous forme liquide comprenant du 30 fibrinogène, de l'arginine et du citrate. Une telle composition est optimale, car elle limite le nombre d'excipients et donc le risque d'effets secondaires dus aux composants de la formulation tout en permettant la conservation sous forme liquide de la composition prête à l' emploi. 3053592 8 Ainsi, dans un mode de réalisation préféré, l'invention concerne une composition comprenant, préférentiellement constitué, du fibrinogène, de l'arginine, et du citrate, et qui est stable sous forme liquide. Préférentiellement, ledit fibrinogène est un fibrinogène humain. Selon l'invention, on peut utiliser plusieurs sources de matière première contenant du fibrinogène. La composition de fibrinogène peut ainsi être issue de plasma sanguin autrement dénommées fractions plasmatiques, de surnageant de culture cellulaire ou de lait d'animaux transgéniques. Dans un mode de réalisation préféré, la composition de l'invention n'a subi aucune étape préalable de lyophilisation, dessiccation, déshydratation ou séchage. Dans un mode de réalisation préféré, la composition de l'invention n'a subi aucune étape 15 préalable de reconstitution d'un lyophilisat. Dans un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention est une fraction plasmatique, de préférence une fraction plasmatique obtenue à partir de plasma sanguin prépurifié. 20 Par « fraction plasmatique obtenue à partir de plasma sanguin prépurifié», on entend toute partie ou sous-partie du plasma sanguin humain, ayant fait l'objet d'une ou plusieurs étapes de purification. Lesdites fractions plasmatiques incluent ainsi le surnageant de plasma cryoprécipité, le cryoprécipité de plasma (remis en suspension), la fraction I obtenue par 25 fractionnement éthanolique (selon la méthode de Cohn ou de Kistler & Nitschmann), les éluats de chromatographies et les fractions non adsorbées des colonnes de chromatographie, y compris des chromatographies multicolonnes, et les filtrats. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, la composition selon l'invention est issue 30 d'un éluat de chromatographie ou d'une fraction non adsorbée de colonne de chromatographie, y compris de chromatographie multicolonnes. 5 10 3053592 9 Ainsi, dans un mode de réalisation préféré de l'invention, la composition selon l'invention est issue d'une fraction plasmatique obtenue à partir de cryosurnageant ou de cryoprécipité remis en suspension. 5 Selon l'invention, le « surnageant de plasma cryoprécipité », ou « cryosurnageant », correspond à la phase liquide obtenue après décongélation de plasma congelé (cryoprécipitation). Notamment, le cryosurnageant peut être obtenu par congélation de plasma sanguin à une température comprise entre -10°C et -40°C, puis décongélation douce à une température comprise entre 0°C et +6°C, préférentiellement entre 0°C et +1°C, suivie d'une 10 centrifugation du plasma décongelé pour séparer le cryoprécipité et le cryosurnageant. Le cryoprécipité est un concentré en fibrinogène, fibronectine, facteur von Willebrand et facteur VIII, tandis que le cryosurnageant contient les facteurs du complément, les facteurs vitamine K dépendants tels que la protéine C, la protéine S, la protéine Z, le facteur II, le facteur VII, le facteur IX et le facteur X, du fibrinogène, les immunoglobulines et l'albumine. 15 Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, la composition selon l'invention est peut être obtenue selon le procédé décrit par la Demanderesse dans la demande EP1739093 ou dans la demande W02015/136217. 20 Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, la composition selon l'invention provient de lait d'animaux transgéniques, par exemple obtenu selon la méthode décrite dans W000/17234 ou dans W000/17239. Dans un mode de réalisation, la composition de l'invention est susceptible d'être obtenue par 25 le procédé comprenant les étapes suivantes : une étape de purification par chromatographie d'affinité; au moins une étape de sécurisation biologique; et une étape de formulation sous forme liquide. 30 Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, l'étape de purification par chromatographie d'affinité se fait par chromatographie d'affinité utilisant des ligands d'affinité choisis parmi les anticorps, les fragments d'anticorps, les dérivés d'anticorps ou des ligands chimiques tels que des peptides, des peptides mimétiques, des peptoïdes, des nanofitines ou encore des ligands oligonucléotidiques tels que les aptamères. 3053592 10 Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition liquide, stable et comprenant du fibrinogène est obtenue selon le procédé comprenant les étapes suivantes : obtention d'une fraction de cryosurnageant de plasma sanguin, 5 précipitation du cryo-surnageant par 8 % d'éthanol afin d'obtenir une fraction enrichie en fibrinogène, purification de la fraction de plasma sanguin enrichie en fibrinogène après remise en suspension par séparation sur gel de chromatographie d'affinité utilisant préférentiellement des ligands d'affinité choisis parmi les anticorps, les fragments 10 d'anticorps, les dérivés d'anticorps ou des ligands chimiques tels que des peptides, des peptides mimétiques, des peptoïdes, des nanofitines ou encore des ligands oligonucléotidiques tels que les aptamères, récupération de la fraction adsorbée purifiée comprenant du fibrinogène, éventuellement, ajout d'excipients pharmaceutiquement acceptables, de préférence de 15 l'arginine et/ou du citrate. Dans un mode de réalisation particulier, le procédé comprend en outre une étape de conservation pendant au moins 3 mois à 4°C. 20 Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la chromatographie d'affinité utilisée est une matrice d'affinité avec des ligands de type fragment dérivé d'anticorps de lama telle que la matrice Fibrinogen CaptureSelect (Life Technologies). De manière particulièrement avantageuse, la composition selon l'invention est dépourvue de 25 protéases et/ou d'activateurs de la fibrinolyse. Par « composition de fibrinogène dépourvue de protéases et/ou d'activateurs de la fibrinolyse», il est entendu que la composition de fibrinogène a subi une ou plusieurs étapes permettant l'élimination des protéases telles que la thrombine, la prothrombine, plasmine, 30 plasminogène de telle manière que la quantité résiduelle de protéases et/ou d'activateurs de la fibrinolyse soit : très fortement réduite en comparaison à la solution de Fibrinogène pré-purifiée avant étape de chromatographie, et/ou nulle, et/ou 3053592 11 inférieure aux seuils de détection des méthodes communément utilisées par l'homme du métier. De manière avantageuse, le taux de prothrombine résiduel est inférieur à 5 IJUI / mg de fibrinogène, le taux de plasminogène est inférieur à 15 ng / mg de fibrinogène. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition selon l'invention est donc dépourvue de protéases telles que la thrombine et/ou la plasmine ou leurs pro-enzymes correspondants prothrombine (facteur II de la coagulation) et/ou plasminogène, qui sont des zymogènes potentiellement activables. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition de fibrinogène selon l'invention est dépourvue d'inhibiteurs de protéases et/ou d'anti-fibrinolytiques. Par « inhibiteurs de protéases et/ou anti-fibrinolytiques», on entend toute molécule à activité 15 antiprotéasique, notamment toute molécule à activité inhibitrice de sérine protéase et/ou anti- fibrinolytique, en particulier toute molécule à activité inhibitrice de thrombine et/ou antiplasmine, en particulier l'hirudine, la benzamidine, l'aprotinine, le florure de phénylméthylsulfonyle (PMSF), la pepstatine, la leupeptine, l'antithrombine III associée ou non avec del'héparine, l'alpha 2 macroglobuline, l'alpha 1 antitrypsine, l'acide hexanoïque ou 20 epsilon aminocaproïque, l'acide tranéxamique, l'alpha 2 antiplasmine. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition de fibrinogène selon l'invention est dépourvue d'hirudine et/ou de benzamidine et/ou d'aprotinine et/ou de PMSF et/ou de pepstatine et/ou de leupeptine et/ou d'antithrombine III associée ou non avec de 25 l'héparine et/ou d'alpha 2 macroglobuline et/ou d'alpha 1 antitrypsine et/ou d'acide hexanoïque et/ou epsilon aminocaproïque et/ou d'acide tranéxamique et/ou d'alpha 2 antiplasmine. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition de fibrinogène selon 30 l'invention est dépourvue d'ions métalliques. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition selon l'invention est avantageusement dépourvue de calcium. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition de fibrinogène selon l'invention est dépourvue d'isoleucine, de glycine et/ou de NaCl. 5 10 3053592 12 Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition de fibrinogène selon l'invention est dépourvue d'albumine. 5 De manière avantageuse, la composition selon l'invention possède une pureté supérieure ou égale à 70%, de manière préférée supérieure ou égale à 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition selon l'invention ne 10 comprend pas d'autres protéines copurifiées, avantageusement pas de FXIII et/ou de fibronectine. Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, la composition de fibrinogène selon l'invention peut également comprendre une ou plusieurs protéines accompagnantes, 15 éventuellement copurifiées. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition selon l'invention comprend avantageusement du FXIII. La composition selon l'invention est soumise, directement après purification, aux étapes de mise en forme pharmaceutique sous forme liquide : formulation, filtration stérilisante et 20 répartition en contenant (flacon ou autre dispositif de conservation/administration). De manière particulièrement avantageuse, la composition selon l'invention n'est soumise à aucune étape de lyophilisation, dessiccation, déshydratation ou séchage. 25 De manière particulièrement avantageuse, la composition selon l'invention est donc sous forme liquide sans avoir subi d'étape de reconstitution d'un lyophilisat. De manière particulièrement avantageuse, la composition selon l'invention est sous forme liquide, et comprend donc, outre les éventuels excipients pharmaceutiquement acceptables, de 30 l'eau. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition sous forme liquide comprend du citrate et/ou de l'arginine, de préférence moins de 300mM d'arginine. 3053592 13 De manière avantageuse, la composition selon l'invention est particulièrement adaptée à une administration par voie intraveineuse. Un autre aspect de l'invention concerne la composition selon l'invention pour son utilisation 5 en thérapie. Toutes les caractéristiques techniques énoncées précédemment s'appliquent ici. L'exemple qui suit illustre un mode de réalisation de la présente invention sans toutefois en limiter la portée. 10 Exemple 1 : Composition de fibrinogène liquide stable Matériel & méthode Fraction plasmatique 15 La matière première de départ est un pool de plasma humain préalablement soumis à une étape de cryo-précipitation puis soumis à une étape de précipitation avec 8% d'éthanol. La solution de fibrinogène plasmatique pré-purifiée ainsi obtenue est diluée par 2 volumes de tampon d'équilibration du gel avant injection sur la colonne de chromatographie pré- 20 équilibrée en pH et en conductivité. Caractéristiques de la fraction plasmatique : fibrinogène antigénique ajusté par dilution à 4,74,8 g/L. 25 Solutions tampon La composition des solutions tampon utilisées lors des différentes étapes du procédé de chromatographie est résumée dans le tableau 1 ci-dessous. 30 Tableau 1 : Solutions tampon pour la chromatographie d'affinité. Phases Composition Valeurs cibles Equilibration de la colonne Citrate tri-sodique 10 mM, pH ajusté à 7,4 et retour à la ligne de base Arginine HC1 0,1 M 3053592 14 Pré-élution Citrate tri-sodique 10 mM, pH ajusté à 7,4 Chlorure de Sodium 2,0 M Arginine HC1 0,1 M Elution Citrate tri-sodique 10 mM, pH ajusté à 7,4 Propylène glycol 50 % v/v Arginine HC1 1,0 M Gels de chromatographie d'affinité Pour la chromatographie, on utilise un gel d'affinité CaptureSelect Fibrinogen (Life 5 Technologies ref. 191291050, lots 171013-01 et 171013-05). Colonnes Une colonne de 50 mm de diamètre (Référence XK 50/30 GE Healthcare), volume de gel 10 packé de 67 ml ; pour une hauteur de colonne de 3,4 cm a été utilisée Purification par affinité La solution de fibrinogène ajustée à environ 5 g/L est injectée sans autre ajustement sur la 15 colonne d'affinité CaptureSelect Fibrinogène équilibrée. Une charge d'environ 10 g/L a été appliquée. L'éluat de chromatographie a ensuite été ultrafiltré et pré-formulé sur membrane de seuil de coupure 100 kDa (référence Pall Omega 0S100C10) A la fin du procédé, le produit obtenu a une concentration en fibrinogène coagulable de 15,2 g/L et en fibrinogène antigénique de 15,2 mg/ml. Exemple 2 : stabilité d'une composition de fibrinogène liquide Composition de fibrinogène 20 25 3053592 15 La composition est formulée à minima avec de l'arginine 100mM et du citrate 8,5mM à pH 7,0. Stabilité de la composition de fibrinogène 5 La composition est mise en stabilité à 4°C sous air. Des échantillons sont prélevés à TO, T+1 mois, T+2 mois, et T+3 mois. 10 Les résultats à T+3 mois montrent que: les chaines alpha, beta et gamma restent stable dans le temps, confirmant la conservation de l'intégrité du fibrinogène liquide; le ratio fibrinogène coagulable/fibrinogène antigène est conservé et stable à 1, confirmant la conservation de l'intégrité et de la fonctionnalité du fibrinogène liquide 15 les taux de monomères et de polymères sont conservés, montrant l'absence de phénomènes d'agrégation. Résultats 20 Cet essai démontre clairement que la composition de fibrinogène est stable sous forme liquide à 4°C pendant 3 mois. REVENDICATIONS1. Composition comprenant du fibrinogène stable sous forme liquide, caractérisée en ce qu'elle présente un ratio fibrinogène coagulable / fibrinogène antigène supérieur à 0,5; préférentiellement supérieur à 0,6; supérieur à 0,7; supérieur à 0,8; supérieur à 0,9; encore plus préférentiellement environ égal à 1,0. 2. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle est stable au moins 3 mois à 4°C. 3. Composition selon la revendication 1 ou 2 caractérisée en ce qu'elle présente une quantité de monomères de fibrinogène conservés pendant la mise en test de stabilité supérieure à 50%, préférentiellement supérieure à 60%, préférentiellement supérieure à 70%, préférentiellement supérieure à 80%, préférentiellement supérieure à 90%, préférentiellement supérieure à 95% du taux initial de monomères de fibrinogène. 4. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisée en ce qu'elle présente une quantité de polymères formés pendant la mise en test de stabilité inférieure à 10%, préférentiellement inférieure à 20%, préférentiellement inférieure à 30%, préférentiellement inférieure à 40%, préférentiellement inférieure à 50% du taux initial de polymères de fibrinogène. 5. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisée en ce que : l'ensemble des chaînes alpha est conservée à au moins 50%, préférentiellement au moins 60%, préférentiellement au moins 70%, préférentiellement au moins 80%, préférentiellement au moins 90%; plus préférentiellement conservée à environ 100%, et/ou l'ensemble des chaînes beta est conservée à au moins 50%, préférentiellement au moins 60%, préférentiellement au moins 70%, préférentiellement au moins 80%, préférentiellement au moins 90%; plus préférentiellement conservée à environ 100%, et/ou l'ensemble des chaînes gamma est conservée à au moins 50%, préférentiellement au moins 60%, préférentiellement au moins 70%, préférentiellement au moins 80%, préférentiellement au moins 90%; plus préférentiellement conservée à environ 100%. 3053592 6. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la turbidité mesurée après le test de stabilité correspond à moins de 130%, moins de 120%, moins de 110% ; avantageusement correspond à 100% de la turbidité mesurée avant le test de stabilité. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que ladite composition est dépourvue de protéases et/ou d'activateurs de la fibrinolyse. 8. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que ladite composition est dépourvue d'inhibiteurs de protéases et/ou d'anti-fibrinolytiques. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que ladite composition comprend en outre des excipients pharmaceutiquement acceptables. 10. Composition selon la revendication 10, caractérisée en ce que lesdits excipients pharmaceutiquement acceptables consistent en de l'arginine et du citrate. 11. Composition constituée de fibrinogène, d'arginine et de citrate et qui est stable sous forme liquide. 12. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisée en ce qu'elle est dépourvue d'isoleucine et/ou de glycine. 13. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisée en ce qu'elle est dépourvue d'albumine. 14. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, caractérisée en ce qu'elle est dépourvue d'ions métalliques, en particulier de calcium. 15. Composition comprenant du fibrinogène, ladite composition étant liquide et stable, et n'ayant subi aucune étape préalable de lyophiliation, dessiccation, déshydratation ou séchage. 3053592 16. Composition comprenant du fibrinogène, ladite composition étant liquide et stable et n'ayant subi aucune étape préalable de reconstitution d'un lyophilisat. 17. Composition comprenant du fibrinogène, ladite composition étant liquide et stable et susceptible d'être obtenue par le procédé comprenant les étapes suivantes : une étape de purification par chromatographie d'affinité, au moins une étape de sécurisation biologique, et une étape de formulation sous forme liquide. 18. Composition selon la revendication 17 caractérisée en ce que la chromatographie d'affinité consiste en une chromatographie utilisant des ligands de type anticorps de lama ou aptamères. 19. Composition comprenant du fibrinogène liquide stable susceptible d'être obtenue selon le procédé comprenant les étapes suivantes : purification d'un plasma ou d'une fraction de cryosurnageant de plasma sanguin par séparation sur gel de chromatographie d'affinité utilisant préférentiellement des ligands de type dérivés d'anticorps ou aptamères, récupération de la fraction adsorbée purifiée comprenant du fibrinogène, éventuellement ajout d'excipients pharmaceutiquement acceptables, de préférence de l'arginine et/ou du citrate. 20. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 19 pour son utilisation en thérapie. 21. Composition pour son utilisation selon la revendication 20, caractérisée en ce que ladite composition est adaptée à une administration par voie intraveineuse.