FR 3056989 A1 20180406 FR 1759214 A 20171003 56 9 89 1 DESCRIPTION PROCÉDÉ DE PRODUCTI ON D'ACI DES L-AMI NÉS Domaine technique [0001] La présente invention concerne un procédé de production d'un acide Laminé, tel que l'acide L-glutamique, par une fermentation en utilisant une bactérie. Les acides Laminés sont utiles sur le plan industriel en tant que matières premières des assaisonnements et ainsi de suite. Art antérieur [0002] Les acides L-aminés sont produits de manière industrielle, par exemple, par une fermentation en utilisant des micro-organismes tels que des bactéries possédant une capacité de production d'acides L-aminés (Document non-brevet 1). En tant que tels micro-organismes, par exemple, des souches isolées dans la nature et des souches mutantes de celles-ci ont été utilisées. De plus, une capacité de production d'acides L- aminés de micro-organismes peut être améliorée en utilisant des techniques de l'ADN recombinant. Par exemple, en tant que moyen pour améliorer une capacité de production d'acide L-glutamique de bactéries, on sait qu'il est possible d'améliorer l'activité phosphocétolase (Document de brevet 1) et d'utiliser un gène yggBmutant (Document de brevet 2). [0003] Divers transporteurs d'acide dicarboxylique C4 ont été observés chez les bactéries. Les bactéries peuvent incorporer et métaboliser des acides dicarboxyliques C4 via ces transporteurs d'acide dicarboxylique C4. Par exemple, on sait que les protéines codées par le gène dctA, le gène dcuA, et le gène dcuB possèdent toutes une capacité d'incorporation d'un acide dicarboxylique C4 tel que l'acide aspartique (Documents non-brevet 2 à 3). On sait également qu'une protéine codée par un gène dctA possède également une capacité d'incorporation d'acide L-glutamique (Document non-brevet 4). [0004] En outre, un procédé de production d'un acide Laminé utilisant une bactérie corynéforme présentant une expression améliorée du gène dctA a été rapporté (Document de brevet 3). Ce document décrit un exemple dans lequel de la L-lysine a été produite en utilisant la même bactérie. Par opposition, même si des acides L-aminés autres que la L-lysine, tel que l'acide L-glutamique, sont également exemplifiés en tant qu'acide Laminé dans ce document, le fait que des acides Laminés autres que la L-lysine, 3056989 2 tel que l'acide L-glutamique, puissent être produits en utilisant la même bactérie n'a pas été démontré. [0005] De plus, on sait qu'une protéine codée par le gène yggB possède 5 une capacité d'excrétion d'acide L-glutamique (Document de brevet 2 et Document non-brevet 5). Références de l'art antérieur Documents de brevet 10 [0006] Document de brevet 1 : W02006/016705 Document de brevet 2 : W02006/070944 Document de brevet 3 : US2002-0106759 Documents non-brevet 15 [0007] Document non-brevet 1 : Akashi, K. et al., Amino Acid Fermentation. Japan Scientific Societies Press, p.195 à 215, 1986. Document non-brevet 2 : Karinou E. et al., The Escherichia coli SLC26 homologue YchM (DauA) is a C4-dicarboxylic acid transporter. Mol 20 Microbiol. Février 2013 ; 87(3):623-40. Document non-brevet 3 : Janausch IG. et al., C4-dicarboxylate carriers and sensors in bacteria. Biochim Biophys Acta. 17 janvier 2002 ; 1553(1- 2):39-56. Document non-brevet 4: Youn et al., Characterization of the 25 Dicarboxylate Transporter DctA in Corynebacterium glutamicum. Journal Of Bacteriology. Septembre 2009. 5480-5488. Document non-brevet 5: Nakamura et al., Mutations of the Corynebacterium glutamicum NCg11221 Gene, Encoding a Mechanosensitive Channel Homolog, Induce I-Glutamic Acid Production. 30 Applied And Environmental Microbiology. Juillet 2007 4491-4498. Résumé de l'invention Objet devant être atteint par l'invention [0008] 35 Un objet de la présente invention consiste à développer une nouvelle technique pour améliorer une capacité de production d'acide Laminé d'une bactérie, et ainsi de mettre à disposition un procédé pour efficacement produire un acide Laminé. 40 Moyens pour atteindre l'objet [0009] Afin d'atteindre l'objet susmentionné, les inventeurs de la présente invention ont mené diverses recherches. En conséquence, ils ont 3056 9 89 3 découvert qu'une capacité de production d'acide Laminé d'une bactérie pouvait être améliorée en modifiant la bactérie de sorte que l'expression du gène dctA, gène dcuA, ou gène dcuB, codant pour un transporteur d'acide dicarboxylique C4, soit augmentée, et sont parvenus à la présente 5 invention. [0010] Des modes de réalisation de la présente invention peuvent ainsi, par exemple, être les suivants. [1] Un procédé de production d'un acide Laminé, le procédé 10 comprenant : la mise en culture d'une bactérie possédant une capacité de production d'acide Laminé dans un milieu afin d'accumuler un acide Laminé dans le milieu et/ou les cellules de la bactérie ; et la collecte de l'acide Laminé à partir du milieu et/ou des cellules, 15 où la bactérie a été modifiée de sorte que l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 soit augmentée par comparaison à une souche non modifiée, où le transporteur d'acide dicarboxylique C4 consiste en un ou plusieurs types de protéines sélectionnés parmi des protéines codées par 20 un gène dctA, un gène dcuA, et un gène dcuB, et où l'acide Laminé est un acide L-aminé autre que l'acide L-aspartique, à condition que l'acide Laminé soit l'acide L-glutamique lorsque le transporteur d'acide dicarboxylique C4 est une protéine codée par un gène 25 dctA. [2] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel le gène dctA est un gène codant pour une protéine définie en (a), (b), ou (c) mentionné ci-dessous : 30 (a) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 16 ou 18 ; (b) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 16 ou 18, mais qui comprend une substitution, une délétion, une insertion, et/ou une addition de 1 à 10 résidus d'acides aminés, et qui 35 possède une activité d'incorporation d'acide L-aspartique ; (c) une protéine comprenant une séquence d'acides aminés montrant une identité de 90 % ou plus avec la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 16 ou 18, et qui possède une activité d'incorporation d'acide aspartique. 40 [3] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel le gène dcuA est un gène codant pour une protéine définie en (a), (b), ou (c) mentionné ci-dessous : 3056989 4 (a) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 20 ; (b) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 20, mais qui comprend une substitution, une délétion, une insertion, 5 et/ou une addition de 1 à 10 résidus d'acides aminés, et qui possède une activité d'incorporation d'acide aspartique ; (c) une protéine comprenant une séquence d'acides aminés montrant une identité de 90 % ou plus avec la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 20, et qui possède une activité d'incorporation d'acide aspartique. 10 [4] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel le gène dcuB est un gène codant pour une protéine définie en (a), (b), ou (c) mentionné ci-dessous : (a) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID 15 NO: 22 ; (b) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 22, mais qui comprend une substitution, une délétion, une insertion, et/ou une addition de 1 à 10 résidus d'acides aminés, et qui possède une activité d'incorporation d'acide aspartique ; 20 (c) une protéine comprenant une séquence d'acides aminés montrant une identité de 90 % ou plus avec la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 22, et qui possède une activité d'incorporation d'acide aspartique. [5] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel l'activité du 25 transporteur d'acide dicarboxylique C4 est augmentée en augmentant l'expression d'un gène codant pour le transporteur d'acide dicarboxylique C4. [6] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel l'expression du gène 30 est augmentée en augmentant le nombre de copies du gène et/ou en modifiant une séquence de contrôle de l'expression du gène. [7] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel la bactérie a en outre été modifiée de sorte que l'activité de la phosphocétolase soit augmentée 35 par comparaison à une souche non modifiée. [8] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel la phosphocétolase consiste en la D-xylulose-5-phosphate phosphocétolase et/ou la fructose6-phosphate phosphocétolase. 40 [9] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel l'activité de la phosphocétolase est augmentée en augmentant l'expression d'un gène codant pour la phosphocétolase. 3056 9 89 5 [10] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel la bactérie est une bactérie corynéforme ou une bactérie appartenant à la famille Enterobacteriaceae. 5 [11] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel la bactérie est une bactérie appartenant au genre Corynebacterium. [12] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel la bactérie est 10 Corynebacterium glutamicum. [13] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel la bactérie est une bactérie appartenant au genre Pantoea ou Escherichia. 15 [14] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel la bactérie est Pantoea ananatis ou Escherichia colt. [15] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel l'acide Laminé consiste en un acide Laminé de la famille glutamate et/ou un acide L- 20 aminé de la famille aspartate. [16] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel l'acide Laminé de la famille glutamate consiste en un ou plusieurs acides Laminés sélectionnés parmi l'acide L-glutamique, la L-glutamine, la L-proline, la L-arginine, la L- 25 citrulline, et la L-ornithine. [17] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel l'acide Laminé de la famille glutamate est l'acide L-glutamique. 30 [18] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel l'acide L-glutamique est le L-glutamate monoammonique ou le L-glutamate monosodique. [19] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel l'acide Laminé de la famille aspartate consiste en un ou plusieurs acides Laminés sélectionnés 35 parmi la L-lysine, la L-thréonine, la L-isoleucine, et la L-méthionine. [20] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel l'acide Laminé est un acide Laminé de la famille glutamate, et 40 dans lequel la bactérie a en outre été modifiée de sorte que l'activité de l'- -cétoglutarate déshydrogénase et/ou la succinate déshydrogénase soit réduite par comparaison à une souche non modifiée. 3056 9 89 6 [21] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel la bactérie est une bactérie corynéforme, et dans lequel la bactérie a en outre été modifiée de sorte à abriter un gène yggB mutant. 5 [22] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel le gène yggB mutant est un gène yggB comportant une mutation qui améliore la capacité de production d'acide L-glutamique de la bactérie corynéforme. 10 [23] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel le gène yggB mutant est un gène yggB comportant une mutation définie en (1), (2), ou (3) mentionné ci-dessous : (1) une mutation dans la région codant pour les résidus d'acides aminés aux positions 419 à 533 d'une protéine YggB de type sauvage, 15 (2) une mutation dans la région codant pour une région transmembranaire d'une protéine YggB de type sauvage, et (3) une combinaison de celles-ci. [24] Le procédé mentionné ci-dessus, dans lequel la protéine YggB de 20 type sauvage est une protéine définie en (a), (b), ou (c) mentionné ci- dessous : (a) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 10 ; (b) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID 25 NO: 10, mais qui comprend une substitution, une délétion, une insertion, et/ou une addition de 1 à 10 résidus d'acides aminés, et qui possède une propriété selon laquelle une expression augmentée de celle-ci dans la bactérie corynéforme permet d'obtenir une capacité de production d'acide L-glutamique améliorée de la bactérie corynéforme ; 30 (c) une protéine comprenant une séquence d'acides aminés montrant une identité de 90 % ou plus avec la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 10, et qui possède une propriété selon laquelle une expression augmentée de celle-ci dans la bactérie corynéforme permet d'obtenir une capacité de production d'acide L-glutamique améliorée de la bactérie 35 corynéforme. [0011] Selon la présente invention, une capacité de production d'acide Laminé d'une bactérie peut être améliorée, et un acide L-aminé peut être 40 efficacement produit. Brève description des dessins [0012] 3056989 7 [FIG. 1] Schéma montrant les résultats d'une culture de production d'acide glutamique en utilisant une souche de C glutamicum présentant une expression améliorée d'un gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 (Cg-dctA, Ec-dctA, Ec-dcuA, ou Ec-dcuB). (A) Quantité d'accumulation 5 d'acide glutamique (Glu), (B) Quantité d'accumulation d'acide aspartique (Asp). Modes de réalisation de l'invention [0013] 10 0-après, la présente invention va être expliquée en détail. [0014] Le procédé de la présente invention est un procédé de production d'un acide Laminé comprenant la mise en culture d'une bactérie possédant une capacité de production d'acide Laminé dans un milieu afin 15 d'accumuler un acide Laminé dans le milieu et/ou les cellules de la bactérie, et la collecte de l'acide Laminé à partir du milieu et/ou des cellules de la bactérie, où la bactérie a été modifiée de sorte que l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 soit augmentée. La bactérie utilisée pour ce procédé est également désignée « bactérie de la présente 20 invention ». [0015] Bactérie de la présente invention La bactérie de la présente invention est une bactérie possédant une capacité de production d'acide Laminé, qui a été modifiée de sorte que 25 l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 soit augmentée. [0016] Bactérie possédant une capacité de production d'acide Laminé Dans la présente invention, le terme « bactérie possédant une capacité de production d'acide Laminé » fait référence à une bactérie qui 30 possède une capacité à générer et à accumuler un acide Laminé cible dans un milieu et/ou les cellules de la bactérie dans un degré tel que l'acide Laminé peut être collecté, lorsque la bactérie est mise en culture dans le milieu. La bactérie possédant une capacité de production d'acide Laminé peut être une bactérie qui est capable d'accumuler un acide L- 35 aminé cible dans milieu et/ou les cellules de la bactérie en une quantité plus importante que celle pouvant être obtenue avec une souche non modifiée. Le terme « souche non modifiée » fait référence à une souche de contrôle qui n'a pas été modifiée de sorte que l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 soit augmentée. C'est-à-dire que 40 des exemples de la souche non modifiée comprennent une souche de type sauvage et une souche parentale. La bactérie possédant une capacité de production d'acide Laminé peut être une bactérie qui est capable d'accumuler un acide Laminé cible dans un milieu en une quantité de 3056989 8 préférence de 0,5 g/I ou plus, de manière davantage préférée de 1,0 g/I ou plus. [0017] L'acide Laminé produit dans la présente invention est un acide L- 5 aminé autre que l'acide L-aspartique. Des exemples de l'acide Laminé autre que l'acide L-aspartique comprennent des acides aminés basiques tels que la L-lysine, la L-ornithine, la L-arginine, la L-histidine, et la Lcitrulline ; des acides aminés aliphatiques tels que la L-isoleucine, la L-alanine, la L-valine, la L-leucine, et la glycine ; des acides aminés qui sont 10 des acides hydroxy-monoaminocarboxyliques tels que la L-thréonine et la L-sérine ; des acides aminés cycliques tels que la L-proline ; des acides aminés aromatiques tels que la L-phénylalanine, la L-tyrosine, et le Ltryptophane ; des acides aminés contenant du soufre tels que la Lcystéine, la L-cystine, et la L-méthionine ; des acides aminés acides tels 15 que l'acide L-glutamique ; et des acides aminés possédant un groupe amide dans la chaîne latérale tels que la L-glutamine et la L-asparagine. Des exemples particuliers de l'acide Laminé autre que l'acide L-aspartique comprennent un acide L-aminé de la famille glutamate et un acide Laminé de la famille aspartate. Le terme « acide Laminé de la famille 20 glutamate » fait collectivement référence à l'acide L-glutamique et à des acides Laminés qui sont biosynthétisés via l'acide L-glutamique en tant qu'intermédiaire. Des exemples des acides Laminés qui sont biosynthétisés via l'acide L-glutamique en tant qu'intermédiaire comprennent la L-glutamine, la L-proline, la L-arginine, la L-citrulline, et la 25 L-ornithine. Le terme « acide Laminé de la famille aspartate » fait collectivement référence à des acides Laminés qui sont biosynthétisés via l'acide L-aspartique en tant qu'intermédiaire, et ne comprennent pas l'acide L-aspartique per se. Des exemples des acides Laminés qui sont biosynthétisés via l'acide L-aspartique en tant qu'intermédiaire 30 comprennent la L-lysine, la L-thréonine, la L-isoleucine, et la L-méthionine. Des exemples plus particuliers de l'acide Laminé autre que l'acide L-aspartique comprennent l'acide L-glutamique. Par exemple, au moins lorsque le transporteur d'acide dicarboxylique C4 est une protéine codée par le gène dctA, l'acide Laminé peut être l'acide L-glutamique. La 35 bactérie de la présente invention peut posséder une capacité de production d'un seul type d'acide Laminé, ou deux types d'acides Laminés ou plus. [0018] Dans la présente invention, le terme « acide aminé » fait référence 40 à un acide Laminé, sauf indication contraire. Dans la présente invention, le terme « acide Laminé » fait référence à un acide Laminé sous une forme libre, à un sel de celui-ci, ou à un mélange de celui-ci, sauf indication contraire. Des exemples de sel seront décrits plus loin. 3056 9 89 9 [0019] Des exemples de la bactérie comprennent des bactéries appartenant à la famille Enterobacteriaceae et des bactéries corynéf ormes. 5 [0020] Des exemples de bactéries appartenant à la famille Enterobacteriaceae comprennent des bactéries appartenant au genre Escherichia, Enterobacter, Pantoea, ffiebsiella, Serratia, Erwinia, Photorhabdus, Prowdencia, Salmonella, Morganella, ou analogue. 10 Spécifiquement, des bactéries classées dans la famille des Enterobacteriaceae selon la taxonomie utilisée dans la base de données du NCBI (National Center for Biotechnology Information) (http://www.ncbi.nlm. ni h .gov/Taxonomy/ Browser/wwwtax.cgi ?id= 91347) peuvent être utilisées. 15 [0021] Les bactéries Escherichia ne sont pas particulièrement limitées, et des exemples de celles-ci comprennent celles classées dans le genre Escherichia selon la taxonomie connue de l'homme du métier dans le domaine de la microbiologie. Des exemples des bactéries Escherichia 20 comprennent, par exemple, celles décrites dans les travaux de Neidhardt et al. (Backmann B.J., 1996, Derivations and Genotypes of some mutant derivatives of Escherichia colt' K-12, pp.2460-2488, Tableau 1, dans F.D. Neidhardt (ed.), Escherichia colt' and Salmonella Cellular and Molecular Biology/Seconde Édition, American Society for Microbiology Press, 25 Washington, D.C.). Des exemples des bactéries Escherichia comprennent, par exemple, Escherichia colt. Des exemples spécifiques d' Escherichia colt' comprennent, par exemple, les souches d'Escherichla colt' K-12 telles que la souche W3110 (ATCC 27325) et la souche MG1655 (ATCC 47076) ; la souche Escherichia colt' K5 (ATCC 23506) ; les souches B d'Escherichia colt' 30 telles que la souche BL21 (DE3) ; et des souches dérivées de celles-ci. [0022] Les bactéries Enterobacter ne sont pas particulièrement limitées, et des exemples comprennent celles classées dans le genre Enterobacter selon la taxonomie connue de l'homme du métier dans le domaine de la 35 microbiologie. Des exemples de la bactérie Enterobacter comprennent, par exemple, Enterobacter agglomerans et Enterobacter aerogenes. Des exemples spécifiques d'Enterobacter agglomerans comprennent, par exemple, la souche Enterobacter agglomerans ATCC 12287. Des exemples spécifiques d'Enterobacter aerogenes comprennent, par exemple, la 40 souche Enterobacter aerogenes ATCC 13048, la souche NBRC 12010 (Biotechnol. Bioeng., 27 mars 2007 ; 98(2):340-348), et la souche AJ110637 (FERM BP-10955). Des exemples des bactéries Enterobacter comprennent également, par exemple, les souches décrites dans la 3056 9 89 10 demande de brevet européen mise à l'inspection publique (EP-A) n° 0952221. De plus, Enterobacter agglomerans comprend également certaines souches classées en tant que Pantoea agglomerans. [0023] 5 Les bactéries Pantoea ne sont pas particulièrement limitées, et des exemples comprennent celles classées dans le genre Pantoea selon la taxonomie connue de l'homme du métier dans le domaine de la microbiologie. Des exemples des bactéries Pantoea comprennent, par exemple, Pantoea ananatis, Pantoea stewae Pantoea agglomerans, et 10 Pantoea citrea. Des exemples spécifiques de Pantoea ananatis comprennent, par exemple, la souche Pantoea ananatis LMG20103, la souche AJ13355 (FERM BP-6614), la souche AJ13356 (FERM BP-6615), la souche AJ13601 (FERM BP-7207), la souche SC17 (FERM BP-11091), la souche SC17(0) (VKPM B-9246), et la souche SC17sucA (FERM BP-8646). 15 Certaines des bactéries Enterobacter et des bactéries Erwinia ont été reclassées dans le genre Pantoae (Int. J. Syst. Bacteriol., 39, 337-345 (1989) ; Int. J. Syst. Bacteriol., 43, 162-173 (1993)). Par exemple, certaines souches d'Enterobacter agglomerans ont été récemment reclassées en Pantoea agglomerans, Pantoea ananatis, Pantoea stewarffi, 20 ou analogue, d'après une analyse de la séquence de nucléotides de l'ARNr 16S, etc. (Int. J. Syst. Bacteriol., 39, 337-345 (1989)). Dans la présente invention, les bactéries Pantoea comprennent celles reclassées dans le genre Pantoea tel que décrit ci-dessus. [0024] 25 Des exemples des bactéries Erwinia comprennent Erwinia amylovora et Erwinia carotovora. Des exemples des bactéries ffiebsiella comprennent ffiebsiella planticola. [0025] Des exemples des bactéries corynéformes comprennent des 30 bactéries appartenant au genre Corynebacterium, Brevibacterium, Microbacterium, ou analogue. [0026] Des exemples spécifiques des bactéries corynéformes comprennent les espèces suivantes. 35 Corynebacterium acetoacidophilum Corynebacterium acetoglutamicum Corynebacterium alkanolyticum Corynebacterium callunae Corynebacterium crenatum 40 Corynebacterium glutamicum Corynebacterium Oum Corynebacterium melassecola Corynebacterium thermoaminogenes (Corynebacterium efficiens) 3056989 11 Corynebacterium hercultS Brevibacterium divaricatum (Corynebacterium glutamicum) Brevibacterium flavum (Corynebacterium glutamicum) Brevibacterium immariophilum 5 Brevibacterium lactofermentum (Corynebacterium glutamicum) Brevibacterium roseum Brevibacterium saccharolyticum Brevibacterium thlogenitalis Corynebacterium ammoniagenes (Corynebacterium stations) 10 Brevibacterium album Brevibacterium cerinum Microbacterium ammonlaplillum [0027] Des exemples spécifiques des bactéries corynéf ormes comprennent 15 les souches suivantes. Corynebacterium acetoacidophilum ATCC 13870 Corynebacterium acetoglutamicum ATCC 15806 Corynebacterium alkanolyticum ATCC 21511 Corynebacterium callunae ATCC 15991 20 Corynebacterium crenatum AS1.542 Corynebacterium glutamicum ATCC 13020, ATCC 13032, ATCC 13060, ATCC 13869, FERM BP-734 Corynebacterium Oum ATCC 15990 Corynebacterium melassecola ATCC 17965 25 Corynebacterium efficiens (Corynebacterium thermoaminogenes) AJ12340 (FERM BP-1539) Corynebacterium herculis ATCC 13868 Brevibacterium divaricatum (Corynebacterium glutamicum) ATCC 14020 30 Brevibacterium flavum (Corynebacterium glutamicum) ATCC 13826, ATCC 14067, AJ12418 (FERM BP-2205) Brevibacterium immariophilum ATCC 14068 Brevibacterium lactofermentum (Corynebacterium glutamicum) ATCC 13869 35 Brevibacterium roseum ATCC 13825 Brevibacterium saccharolyticum ATCC 14066 Brevibacterium thlogenitalisATCC 19240 Corynebacterium ammoniagenes (Corynebacterium stations) ATCC 6871, ATCC 6872 40 Brevibacterium album ATCC 15111 Brevibacterium cerinum ATCC 15112 Microbacterium ammonlaplillum ATCC 15354 [0028] 3056989 12 Les bactéries Corynebacterium comprennent des bactéries qui avaient été précédemment classées dans le genre Brewbacterium, mais sont actuellement réunies dans le genre Corynebacterium (Int. J. Syst. Bacteriol., 41, 255 (1991)). De plus, Corynebacterium stations comprend 5 des bactéries qui avaient été précédemment classées en tant que Corynebacterium ammoniagenes, mais sont actuellement reclassées en Corynebacterium stations d'après une analyse de la séquence de nucléotides de l'ARNr 16S, etc. (Int. J. Syst. Evol. Microbiol., 60, 874-879 (2010)). 10 [ 0029] Ces souches sont disponibles auprès de, par exemple, l'American Type Culture Collection (Adresse : 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, P.O. Box 1549, Manassas, VA 20108, États-Unis d'Amérique). C'est-à-dire que les numéros d'enregistrement sont indiqués 15 par rapport aux souches respectives, et que les souches peuvent être commandées en utilisant ces numéros d'enregistrement (se reporter à http://www.atcc.org/). Les numéros d'enregistrement des souches sont listés dans le catalogue de l'American Type Culture Collection. Ces souches peuvent également être obtenues, par exemple, à partir des institutions 20 de dépôt dans lesquels les souches ont été déposées. [0030] La bactérie de la présente invention peut être une bactérie possédant une capacité de production d'acide Laminé de manière inhérente, ou peut être une bactérie modifiée de sorte à posséder une 25 capacité de production d'acide Laminé. La bactérie possédant une capacité de production d'acide Laminé peut être obtenue en conférant une capacité de production d'acide L-aminé à une telle bactérie telle que mentionnée ci-dessus, ou en améliorant une capacité de production d'acide Laminé d'une telle bactérie telle que mentionnée ci-dessus. 30 [0031] Afin de conférer ou d'améliorer une capacité de production d'acide Laminé, des procédés conventionnellement employés dans la culture de souches productrices d'acides aminés de bactéries corynéformes, de bactéries Escherichia, et ainsi de suite (se reporter à « Amino Acid 35 Fermentation », Gakkai Shuppan Center (Ltd.), 1 ère Édition, publié le 30 mai 1986, pp.77-100), peuvent être utilisés. Des exemples de tels procédés comprennent, par exemple, l'obtention d'une souche mutante auxotrophe, l'obtention d'une souche résistante à un analogue d'acide aminé, l'obtention d'une souche mutante pour une régulation métabolique, 40 et la construction d'une souche recombinante dans laquelle l'activité d'une enzyme de biosynthèse d'un acide L-aminé est améliorée. Lors de la culture de bactéries productrices d'acide Laminé, une seule des propriétés décrites ci-dessus telles que l'auxotrophie, la résistance à un analogue, et 3056989 13 une mutation de régulation métabolique, peut être conférée, ou deux ou trois telles propriétés ou plus peuvent être conférées en combinaison. De plus, lors de la culture de bactéries productrices d'acide Laminé, l'activité d'une seule des enzymes de biosynthèse d'un acide Laminé peut être 5 améliorée, ou les activités de deux ou trois telles enzymes ou plus peuvent être améliorée en combinaison. En outre, le fait de conférer une/des propriété(s) telle(s) qu'une auxotrophie, une résistance à un analogue, et une mutation de régulation métabolique peut être combiné à une amélioration de l'activité/des activités d'une/de plusieurs enzyme(s) de 10 biosynthèse. [0032] Une souche mutante auxotrophe, une souche résistante à un analogue, ou une souche mutante pour une régulation métabolique possédant une capacité de production d'acide Laminé peut être obtenue 15 en soumettant une souche parentale ou une souche de type sauvage à un traitement de mutagenèse classique, puis en sélectionnant une souche exhibant une auxotrophie, une résistance à un analogue, ou une mutation de régulation métabolique, et possédant une capacité de production d'acide Laminé à partir des souches mutantes obtenues. Des exemples du 20 traitement de mutagenèse classique comprennent une irradiation de rayons X ou ultraviolets et un traitement avec un agent mutagène tel que la N-méthyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG), le méthanesulfonate d'éthyle (EMS), et le méthanesulfonate de méthyle (MMS). [0033] 25 Une capacité de production d'acide Laminé peut également être conférée ou améliorée en améliorant l'activité d'une enzyme impliquée dans la biosynthèse d'un acide Laminé cible. Une activité enzymatique peut être améliorée, par exemple, en modifiant une bactérie de sorte que l'expression d'un gène codant pour l'enzyme soit améliorée. Des procédés 30 pour améliorer l'expression d'un gène sont décrits dans W000/18935, EP1010755A, et ainsi de suite. Les procédures détaillées pour améliorer l'activité enzymatique seront décrites plus loin. [0034] En outre, une capacité de production d'acide L-aminé peut 35 également être conférée ou améliorée en réduisant l'activité d'une enzyme qui catalyse une réaction qui s'éloigne de la voie de biosynthèse d'un acide Laminé cible pour générer un composé autre que l'acide Laminé cible. L' « enzyme qui catalyse une réaction qui s'éloigne de la voie de biosynthèse d'un acide Laminé cible pour générer un composé autre que 40 l'acide Laminé cible » à laquelle on fait référence dans la présente comprend une enzyme impliquée dans la décomposition de l'acide aminé cible. Le procédé de réduction d'une activité enzymatique sera décrit plus loin. 3056989 14 [0035] 0-après, des bactéries productrices d'acide Laminé et des procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production d'acide Laminé vont être spécifiquement exemplifiés. Toutes les propriétés des 5 bactéries productrices d'acide Laminé et les modifications pour conférer ou améliorer une capacité de production d'acide Laminé peuvent être utilisées indépendamment ou en une quelconque combinaison appropriée. [0036] 10 Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production d'acide L-glutamique comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités augmentée(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes de biosynthèse d'acide L- 15 glutamique. Des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, la glutamate déshydrogénase (gdhA), la glutamine synthétase (gInA), la glutamate synthase (g/tBp, l'isocitrate déshydrogénase (icdA), l'aconitate hydratase (acnA, acnB), la citrate synthase (g/tA), la méthylcitrate synthase (prpp, la pyruvate carboxylase 20 (pyc), la pyruvate déshydrogénase (aceEF, IpdA), la pyruvate kinase (pykA, pykFj, la phosphoénolpyruvate synthase (ppsA), l'énolase (eno), la phosphoglycéromutase (pgmA, pgml), la phosphoglycérate kinase (pgk), la glycéraldéhyde-3-phophate déshydrogénase (gapA), la triose phosphate isomérase (tplA), la fructose bisphosphate aldolase (fbp), la glucose 25 phosphate isomérase (pgi), la 6-phosphogluconate déshydratase (edo), la 2-céto-3-désoxy-6-phosphogluconate aldolase (eda), et la transhydrogénase. Des exemples de gènes codant pour les enzymes sont montrés entre parenthèses après les noms des enzymes (ceci s'appliquera dans les mêmes circonstances ci-après). Il est préférable d'améliorer 30 l'activité ou les activités d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi, par exemple, la glutamate déshydrogénase, la citrate synthase, la phosphoénolpyruvate carboxylase, et la méthylcitrate synthase, parmi ces enzymes. [0037] 35 Des exemples de souches appartenant à la famille Enterobacteriaceae et modifiées de sorte que l'expression du gène de la citrate synthase, gène de la phosphoénolpyruvate carboxylase, et/ou gène de la glutamate déshydrogénase soit augmentée comprennent celles décrites dans EP1078989A, EP955368A, et EP952221A. En outre, des 40 exemples de souches appartenant à la famille Enterobacteriaceae et modifiées de sorte que l'expression d'un gène de la voie d'EntnerDoudoroff (edd, eda) soit augmentée comprennent celles décrites dans EP1352966B. Des exemples de bactéries corynéformes modifiées de sorte 3056989 15 que l'expression du gène de la glutamate synthétase (g/tB/ soit augmentée comprennent celles décrites dans W099/07853. [0038] Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité 5 de production d'acide L-glutamique comprennent également, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités réduite(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes qui catalysent une réaction qui s'éloigne de la voie de biosynthèse de l'acide L-glutamique pour 10 générer un composé autre que l'acide L-glutamique. Des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, l'isocitrate lyase (aceA), l'- -cétoglutarate déshydrogénase (sucA, odhA), l'acétolactate synthase (i/v/), la formate acétyltransférase (pfi), la lactate déshydrogenase (/c//7), l'alcool déshydrogénase (adh), la glutamate 15 décarboxylase (gadAB), et la succinate déshydrogénase (sc/I7ABCp. Il est préférable de réduire ou de supprimer, par exemple, l'activité - - cétoglutarate déshydrogénase, parmi ces enzymes. [0039] Des bactéries Escherichia possédant une activité - -cétoglutarate 20 déshydrogénase réduite, ou déficientes en activité - -cétoglutarate déshydrogénase, et des procédés pour les obtenir sont décrits dans les brevets U.S. n° 5 378 616 et 5 573 945. En outre, des procédés pour réduire ou supprimer l'activité - -cétoglutarate déshydrogénase de bactéries Enterobacteriaceae telles que des bactéries Pantoea, des 25 bactéries Enterobacter, des bactéries ffiebsiella, et des bactéries Erwinia sont décrits dans les brevets U.S. n° 6 197 559, 6 682 912, 6 331 419, et 8 129 151, et W02008/075483. Des exemples spécifiques de bactéries Escherichia possédant une activité - -cétoglutarate déshydrogénase réduite ou déficientes en activité - -cétoglutarate déshydrogénase comprennent 30 les souches suivantes. E colt W3110sucA: : Km r E collAJ12624 (FERM BP-3853) E collAJ12628 (FERM BP-3854) E colt AJ12949 (FERM BP-4881) 35 [0040] E colt W3110sucA::Kmr est une souche obtenue par une perturbation du gène sucA codant pour l'- -cétoglutarate déshydrogénase d'E coi/ W3110. Cette souche est complètement déficiente en activité - - cétoglutarate déshydrogénase. 40 [0041] Des bactéries corynéformes dans lesquelles l'activité - - cétoglutarate déshydrogénase est réduite ou éliminée, et des procédés pour obtenir celles-ci, sont décrits dans W02008/075483. Des exemples 3056989 16 spécifiques de bactéries corynéformes dans lesquelles l'activité - - cétoglutarate déshydrogénase est réduite ou éliminée comprennent, par exemple, les souches suivantes. Souche Corynebacterium glutamicum (Brevibacterium 5 lactofermentum) L30-2 (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2006-340603) Souche Corynebacterium glutamicum (Brevibacterium lactofermentum) - S (W095/34672) Corynebacterium glutamicum (Brevibacterium lactofermentum) 10 AJ12821 (FERM BP-4172, brevet français n° 9401748) Corynebacterium glutamicum (Brevibacterium flavum) AJ12822 (FERM BP-4173, brevet français n° 9401748) Corynebacterium glutamicum AJ12823 (FERM BP-4174, brevet français n° 9401748) 15 [0042] Des exemples de bactéries productrices d'acide L-glutamique et de souches parentales pour les dériver comprennent également des bactéries Pantoea, telles que la souche Pantoea ananatis AJ13355 (FERM BP-6614), la souche Pantoea ananatis SC17 (FERM BP-11091), et la souche Pantoea 20 ananatis SC17(0) (VKPM B-9246). La souche AJ13355 est une souche isolée à partir du sol à Iwata-shi, Shizuoka-ken, Japon, en tant que souche qui peut proliférer dans un milieu à faible pH contenant de l'acide L-glutamique et une source de carbone. La souche SC17 est une souche sélectionnée en tant que souche mutante faiblement productrice de 25 phlegme issue de la souche AJ13355 (brevet U.S. n° 6 596 517). La souche SC17 a été déposée auprès de l'agence administrative indépendante, le National lnstitute of Advanced Industrial Science and Technology, International Patent Organism Depository (actuellement, agence administrative indépendante, National I nstitute of Technology and 30 Evaluation, International Patent Organism Depositary, n° 120, 2-5-8 Kazusakamatari, Ksarazu-shi, Chiba-ken, 292-0818, Japon) le 4 février 2009, et a reçu le numéro d'accès FERM BP-11091. La souche AJ13355 a été déposée auprès du National lnstitute of Bioscience and Human Technology, Agency of Industrial Science and Technology (actuellement, 35 agence administrative indépendante, National I nstitute of Technology and Evaluation, International Patent Organism Depositary, n° 120, 2-5-8 Kazusakamatari, Ksarazu-shi, Chiba-ken, 292-0818, Japon) le 19 février 1998 et a reçu le numéro d'accès FERM P-16644. Ensuite, le dépôt a été converti en dépôt international conformément aux dispositions du Traité 40 de Budapest le 11 janvier 1999, et a reçu le numéro d'accès FERM BP6614. [0043] 3056989 17 En outre, des exemples de bactéries productrices d'acide L-glutamique et de souches parentales pour les dériver comprennent également des bactéries Pantoea possédant une activité - -cétoglutarate déshydrogénase réduite ou déficientes en activité - -cétoglutarate 5 déshydrogénase. Des exemples de telles souches comprennent la souche AJ13356 (brevet U.S. n° 6 331 419), qui est une souche déficiente en gène de la sous-unité El de l'- -cétoglutarate déshydrogénase (sucA) de la souche AJ13355, et la souche SC17sucA (brevet U.S. n° 6 596 517), qui est une souche déficiente en gène sucA de la souche SC17. La souche 10 AJ13356 a été déposée auprès du National lnstitute of Bioscience and Human Technology, Agency of Industrial Science and Technology (actuellement, agence administrative indépendante, National lnstitute of Technology and Evaluation, International Patent Organism Depositary, n° 120, 2-5-8 Kazusakamatari, Kisarazu-shi, Chiba-ken, 292-0818, Japon) 15 le 19 février 1998, et a reçu le numéro d'accès FERM P-16645. Ensuite, le dépôt a été converti en dépôt international conformément aux dispositions du Traité de Budapest le 11 janvier 1999, et a reçu le numéro d'accès FERM BP-6616. La souche SC17sucA a reçu le numéro privé AJ417, et a été déposée auprès de l'agence administrative indépendante, le National 20 lnstitute of Advanced Industrial Science and Technology, International Patent Organism Depository (actuellement, agence administrative indépendante, National I nstitute of Technology and Evaluation, International Patent Organism Depositary, n° 120, 2-5-8 Kazusakamatari, Ksarazu-shi, Chiba-ken, 292-0818, Japon) le 26 février 2004, sous le 25 numéro d'accès FERM BP-8646. [0044] La souche AJ13355 a été identifiée en tant qu'Enterobacter agglomerans lorsqu'elle a été isolée, mais elle a été récemment reclassée en tant que Pantoea ananatis d'après une analyse de la séquence de 30 nucléotides de l'ARNr 16S et ainsi de suite. Par conséquent, même si les souches AJ13355 et AJ13356 sont déposées auprès de l'institution de dépôt susmentionnée en tant qu'Enterobacter agglomerans, elles sont désignée Pantoea ananatis dans ce mémoire. [0045] 35 En outre, des exemples de bactéries productrices d'acide L- glutamique et de souches parentales pour les dériver comprennent également des bactéries Pantoea telles que la souche Pantoea ananatis SC17sucA/ RSFCPG+ pSTVCB, la souche Pantoea ananatis AJ13601, la souche Pantoea ananatis NP106, et la souche Pantoea ananatis NA1. La 40 souche SC17sucA/RSFCPG+pSTVCB a été obtenue en introduisant le plasmide RSFCPG contenant le gène de la citrate synthase (gItA), le gène de la phosphoénolpyruvate carboxylase (ppc), et le gène de la glutamate déshydrogénase (gdhA) dérivés d'Escherichia colt, et le plasmide pSTVCB 3056989 18 contenant le gène de la citrate synthase (gItA) dérivé de Brewbacterium lactofermentum, dans la souche SC17sucA. La souche AJ13601 est une souche sélectionnée à partir de la souche SC17sucA/RSFCPG+pSTVCB en tant que souche résistante à une forte concentration d'acide L-glutamique 5 à un faible pH. La souche NP106 a été obtenue à partir de la souche AJ13601 par une réticulation des plasmides RSFCPG et pSTVCB. La souche NA1 a été obtenue à partir de la souche NP106 en introduisant le plasmide RSFPPG dans celle-ci (W02010/027045). Le plasmide RSFPPG possède une structure correspondant au plasmide RSFCPG sauf que le gène gltA de 10 celui-ci a été remplacé par un gène de la méthylcitrate synthase (prpq et, par conséquent, il contient le gène prpC, le gène ppc, et le gène gdhA (W02008/020654). La souche AJ13601 a été déposée auprès du National lnstitute of Bioscience and Human Technology, Agency of Industrial Science and Technology (actuellement, agence administrative 15 indépendante, National I nstitute of Technology and Evaluation, International Patent Organism Depositary, n° 120, 2-5-8 Kazusakamatari, Ksarazu-shi, Chiba-ken, 292-0818, Japon) le 18 août 1999, et a reçu le numéro d'accès FERM P-17516. Ensuite, le dépôt a été converti en dépôt international conformément aux dispositions du Traité de Budapest le 6 20 juillet 2000, et a reçu le numéro d'accès FERM BP-7207. [0046] Des exemples de bactéries productrices d'acide L-glutamique et de souches parentales pour les driver comprennent également des souches dans lesquelles à la fois l'activité - -cétoglutarate déshydrogénase (sucA) 25 et l'activité succinate déshydrogénase (sdh) sont réduites ou supprimées (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2010-041920). Des exemples spécifiques de telles souches comprennent, par exemple, une souche doublement déficiente sucAsdhA de la souche Pantoea ananatIS NA1 et une souche doublement déficiente oc/hAsc/hA de la souche 30 Corynebacterium glutamicum ATCC 14067, c'est-à-dire la souche Corynebacterium glutamicum 8L3G- SDH (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2010-041920). [0047] Des exemples de bactéries productrices d'acide L-glutamique et de 35 souches parentales pour les dériver comprennent également des souches mutantes auxotrophes. Des exemples spécifiques de souches mutantes auxotrophes comprennent, par exemple, E colt' VL334thrC+ (VKPM B8961, EP1172433). E colt' VL334 (VKPM B-1641) est une souche auxotrophe pour la L-isoleucine et la L-thréonine comportant des 40 mutations dans les gènes thrC et i/vA (brevet U.S. n° 4 278 765). E colt' VL334thrC+ est une bactérie productrice d'acide L-glutamique auxotrophe pour la L-isoleucine obtenue en introduisant un allèle de type sauvage du gène thrCdans la souche VL334. L'allèle de type sauvage du gène thrCa 3056989 19 été introduit par le procédé de transduction générale en utilisant un bactériophage P1 mis en culture sur les cellules de la souche E colt' K-12 de type sauvage (VKPM B-7). [0048] 5 Des exemples de bactéries productrices d'acide L-glutamique et de souches parentales pour les dériver comprennent également des souches présentant une résistance à un analogue de l'acide aspartique. De telles souches peuvent également être déficientes en activité - -cétoglutarate déshydrogénase. Des exemples spécifiques de souches présentant une 10 résistance à un analogue de l'acide aspartique et déficientes en activité - - cétoglutarate déshydrogénase comprennent, par exemple, E collAJ13199 (FERM BP-5807, brevet U.S. n° 5 908 768), E colt' FFRM P-12379, qui possède en outre une capacité de décomposition de l'acide L-glutamique diminuée (brevet U.S. n° 5 393 671), et E colt' AJ13138 (FERM BP-5565, 15 brevet U.S. n° 6 110 714). [0049] Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production d'acide L-glutamique comprennent également, par exemple, un procédé pour améliorer l'expression d'un gène de sécrétion d'acide L- 20 glutamique, tel qu'un gène yhfK (W02005/085419) ou un gène ybjL (W02008/133161). [0050] En outre, des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production d'acide L-glutamique pour ou dans des 25 bactéries corynéformes comprennent également des procédés pour conférer une résistance à un analogue d'acide organique, un inhibiteur respiratoire, ou analogue, et des procédés pour conférer une sensibilité à un inhibiteur de la synthèse de la paroi cellulaire. Des exemples spécifiques de tels procédés comprennent, par exemple, le procédé pour 30 conférer une résistance à l'acide monofluoroacétique (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 50-113209), le procédé pour conférer une résistance à l'adénine ou une résistance à la thymine ((brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 57-065198), le procédé d'atténuation de l'uréase (brevet japonais mis à l'inspection publique 35 (Kokai) n° 52-038088), le procédé pour conférer une résistance à l'acide malonique (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 52038088), le procédé pour conférer une résistance aux benzopyrones ou aux naphtoquinones (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 56-1889), le procédé pour conférer une résistance à l'HOQNO (brevet 40 japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 56-140895), le procédé pour conférer une résistance à l'acide - -cétomalonique (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 57-2689), le procédé pour conférer une résistance à la guanidine (brevet japonais mis à l'inspection publique 3056989 20 (Kokai) n° 56-35981), le procédé pour conférer une sensibilité à la pénicilline (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 488994), et ainsi de suite. [0051] 5 Des exemples spécifiques de telles bactéries résistantes ou sensibles comprennent les souches suivantes. Corynebacterium glutamicum (Brewbacterium flavum) AJ3949 (FERM BP-2632, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 50113209) 10 Corynebacterium glutamicum AJ11628 (FERM P-5736, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 57-065198) Corynebacterium glutamicum (Brewbacterium flavum) AJ11355 (FERM P-5007, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 561889) 15 Corynebacterium glutamicum AJ11368 (FERM P-5020, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 56-1889) Corynebacterium glutamicum (Brewbacterium flavum) AJ11217 (FERM P-4318, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 572869) 20 Corynebacterium glutamicum AJ11218 (FERM P-4319, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 57-2869) Corynebacterium glutamicum (Brewbacterium flavum) AJ11564 (FERM BP-5472, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 56140895) 25 Corynebacterium glutamicum (Brewbacterium flavum) AJ11439 (FERM BP-5136, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 5635981) Corynebacterium glutamicum H7684 (FERM BP-3004, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 04-88994) 30 Corynebacterium glutamicum (Brewbacterium lactofermentum) AJ11426 (FERM P-5123, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 56-048890) Corynebacterium glutamicum AJ11440 (FERM P-5137, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 56-048890) 35 Corynebacterium glutamicum (Brewbacterium lactofermentum) AJ11796 (FERM P-6402, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 58-158192) [0052] En outre, des exemples de procédés pour conférer ou améliorer 40 une capacité de production d'acide L-glutamique pour ou dans des bactéries corynéformes comprennent également un procédé d'amélioration de l'expression du gène yggB et un procédé d'introduction d'un gène yggB mutant comportant une mutation dans la région codante 3056989 21 (W02006/070944). C'est-à-dire que la bactérie de la présente invention peut avoir été modifiée de sorte que l'expression du gène yggB soit augmentée, ou peut avoir été modifiée de sorte à abriter (posséder) un gène yggBmutant. 5 [0053] Le gène yggB est un gène codant pour un canal mécano-sensible. Des exemples du gène yggB comprennent des gènes yggB de bactéries corynéformes. Des exemples spécifiques des gènes yggB de bactéries corynéformes comprennent, par exemple, les gènes yggB de 10 Corynebacterium glutamicum ATCC13869, Corynebacterium glutamicum ATCC13032, Corynebacterium glutamicum ATCC14967, et Corynebacterium melassecola ATCC17965 (W02006/070944). Le gène yggB de Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 correspond à la séquence complémentaire à la séquence des numéros de nucléotides 15 1 336 091 à 1 337 692 dans la séquence génomique enregistrée en tant que numéro d'accès GenBank NC 003450 dans la base de données du NCBI, et est également appelé NCg/1221. La protéine YggB codée par le gène yggB de Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 est enregistrée en tant que numéro d'accès GenBank NP 600492. De plus, la séquence de 20 nucléotides du gène yggB de Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869) et la séquence d'acides aminés de la protéine YggB codée par le gène sont montrées dans SEQ ID NO: 9 et 10, respectivement. [0054] Dans la présente invention, un gène yggBcomportant la « mutation 25 spécifique » décrite plus loin est également désigné « gène yggB mutant », et une protéine codée par celui-ci est également désignée « protéine YggB mutante ». En outre, dans la présente invention, un gène yggB ne comportant pas la « mutation spécifique » décrite plus loin est également désigné « gène yggBde type sauvage », et une protéine codée 30 par celui-ci est également désignée « protéine YggB de type sauvage ». En conséquence, comme pour la protéine YggB, une modification de la séquence d'acides aminés provoquée par la « mutation spécifique » dans le gène yggB est également désignée « mutation spécifique ». Le terme « type sauvage » auquel on fait référence dans la présente est utilisé à 35 des fins de commodité pour différencier le gène yggBou la protéine YggB « de type sauvage » du gène yggBou la protéine YggB « mutant(e) », et le gène yggBou la protéine YggB « de type sauvage » n'est pas limité(e) à ceux/celles obtenu(e)s en tant que substances naturelles, tant qu'il/elle ne possède pas la « mutation spécifique ». Des exemples de la protéine 40 YggB de type sauvage comprennent les protéines YggB exemplifiées ci-dessus, telles qu'une protéine YggB possédant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 10. Des exemples de la protéine YggB de type sauvage comprennent également des variants conservateurs (variants 3056989 22 dans lesquels la fonction d'origine de ceux-ci est maintenue) des protéines YggB exemplifiées ci-dessus, à condition que les variants conservateurs ne possèdent pas la « mutation spécifique ». La « fonction d'origine » concernant la protéine YggB peut être, par exemple, une fonction comme 5 un canal mécano-sensible ou une propriété selon laquelle une expression augmentée de celle-ci dans une bactérie corynéforme permet d'obtenir une capacité de production d'acide L-glutamique améliorée de la bactérie corynéforme. [0055] 10 La « mutation spécifique » n'est pas particulièrement limitée, tant qu'elle modifie la séquence d'acides aminés de la protéine YggB telle que celles décrites ci-dessus pour ainsi améliorer une capacité de production d'acide L-glutamique d'une bactérie corynéforme. Des exemples de la « mutation spécifique » comprennent une mutation sur le côté C-terminal 15 et une mutation dans une région transmembranaire. La « mutation spécifique » peut également être une combinaison de celles-ci. [0056] (1) Mutation sur le côté C-terminal La mutation sur le côté C-terminal est une mutation introduite dans 20 la région du gène yggB de type sauvage codant pour les résidus d'acides aminés des positions 419 à 533 de la protéine YggB de type sauvage. La mutation sur le côté C-terminal peut être introduite au niveau d'un ou plusieurs sites dans la région. Le type de modification de la séquence d'acides aminés induite par la mutation sur le côté C-terminal n'est pas 25 particulièrement limité. La mutation sur le côté C-terminal peut être une mutation qui provoque une substitution d'acide aminé (mutation faux-sens), l'insertion d'un résidu d'acide aminé, la délétion d'un résidu d'acide aminé, l'introduction d'un codon stop (mutation non-sens), une mutation de décalage du cadre de lecture, ou une combinaison de celles-ci. La 30 mutation sur le côté C-terminal est de préférence, par exemple, une mutation pour insérer une séquence de nucléotides comme une séquence d'insertion (désormais également désignée « IS ») ou un transposon. [0057] (1-1) Insertion d'une séquence de nucléotides 35 Des exemples de la mutation sur le côté C-terminal comprennent, par exemple, une mutation qui insère une séquence de nucléotides au niveau du site codant pour le résidu valine à la position 419 de la protéine YggB de type sauvage (mutation de type 2A-1). La mutation de type 2A-1 peut être, par exemple, une mutation qui provoque une délétion ou une 40 substitution d'une partie ou de l'intégralité des résidus d'acides aminés des positions 419 à 533 de la protéine YggB de type sauvage. Des exemples spécifiques du gène yggB mutant comportant la mutation de type 2A-1 comprennent, par exemple, le gène yggB incluant l'IS insérée suivant le 3056989 23 « G » à la position 1255 dans SEQ ID NO: 9, et codant ainsi pour une protéine YggB mutante ayant une pleine longueur de 423 résidus d'acides aminés, qui est plus courte que celle de la protéine YggB de type sauvage d'origine (SEQ ID NO: 10). La séquence de nucléotides de ce gène yggB 5 mutant (V419::IS) et la séquence d'acides aminés de la protéine YggB mutante codée par le gène sont montrées dans SEQ ID NO: 11 et 12, respectivement. Dans la SEQ ID NO: 11, les positions 1 à 1269 correspondent à la CDS pour cette protéine YggB mutante (V419::IS). Des exemples spécifiques de la bactérie productrice d'acide L-glutamique 10 comportant le gène yggSmutant (V419::IS) comprennent, par exemple, la souche C glutarnicum 2256- sucA- IdhA yggB* (W02014/185430). [0058] (1-2) Substitution de résidus proline Des exemples de la mutation sur le côté C-terminal comprennent 15 également, par exemple, une mutation qui remplace un résidu proline présent aux positions 419 à 533 de la protéine YggB de type sauvage par un autre résidu d'acide aminé. Des exemples d'un tel résidu proline comprennent les résidus proline aux positions 424, 437, 453, 457, 462, 469, 484, 489, 497, 515, 529, et 533 de la protéine YggB de type 20 sauvage. Il est particulièrement préférable de remplacer le(s) résidu(s) proline de la/des position(s) 424 et/ou 437 par un autre/d'autres résidu(s) d'acide(s) aminé(s). L'« autre acide aminé » n'est pas particulièrement limité tant que c'est un acide aminé survenant à l'état naturel autre que la proline. Des exemples de l'« autre acide aminé » comprennent Lys, Glu, 25 Thr, Val, Leu, Ile, Ser, Asp, Asn, Gln, Arg, Cys, Met, Plie, Trp, Tyr, Gly, Ala, et His. Par exemple, le résidu proline à la position 424 peut être remplacé, de préférence, par un résidu d'acide aminé hydrophobe (Ala, Gly, Val, Leu, ou Ile), de manière davantage préférée un résidu d'acide aminé à chaîne ramifiée (Leu, Val, ou Ile). En outre, par exemple, le 30 résidu proline à la position 437 peut être remplacé, de préférence, par un résidu d'un acide aminé possédant un groupe hydroxyle dans la chaîne latérale (Thr, Ser, ou Tyr), de manière davantage préférée par un résidu Ser. [0059] 35 (2) Mutation dans une région transmembranaire On estime que la protéine YggB possède cinq régions transmembranaires. Les régions transmembranaires correspondent aux résidus d'acides aminés des positions 1 à 23 (première région transmembranaire), des positions 25 à 47 (deuxième région 40 transmembranaire), des positions 62 à 84 (troisième région transmembranaire), des positions 86 à 108 (quatrième région transmembranaire), et des positions 110 à 132 (cinquième région transmembranaire) de la protéine YggB de type sauvage. La mutation 3056989 24 dans une région transmembranaire est une mutation dans les régions codant pour ces régions transmembranaires du gène yggB de type sauvage. La mutation dans une région transmembranaire peut être introduite dans un ou plusieurs sites dans les régions. La mutation dans 5 une région transmembranaire est de préférence une mutation qui induit une substitution, une délétion, une addition, une insertion ou une inversion d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés, mais ne comprend pas de quelconque mutation de décalage du cadre de lecture ou de mutation non-sens. Le nombre désigné par le terme « un ou plusieurs » est de 10 préférence 1 à 20, de manière davantage préférée 1 à 10, de manière encore davantage préférée 1 à 5, particulièrement de préférence 1 à 3. Des exemples de la mutation dans une région transmembranaire comprennent une mutation qui insère un ou plusieurs résidus d'acides aminés, tel que Cys-Ser-Leu, entre le résidu leucine à la position 14 et le 15 résidu tryptophane à la position 15 ; une mutation qui remplace le résidu alanine à la position 100 par un autre résidu d'acide aminé, comme un résidu d'un acide aminé possédant un groupe hydroxyle dans la chaîne latérale (c'est-à-dire, Thr, Ser, ou Tyr), de préférence un résidu Thr ; une mutation qui remplace le résidu alanine à la position 111 par un autre 20 résidu d'acide aminé comme un résidu d'un acide aminé possédant un groupe hydroxyle dans la chaîne latérale (c'est-à-dire, Thr, Ser, ou Tyr), de préférence un résidu Thr ; dans la protéine YggB de type sauvage. [0060] Dans la présente invention, un « résidu d'acide aminé à la position 25 X de la protéine YggB de type sauvage » désigne le résidu d'acide aminé correspondant à celui de la position X dans SEQ ID NO: 10, sauf indication contraire. La « position X » dans une séquence d'acides aminés est la Xe position en comptant à partir de l'extrémité N-terminale de la séquence d'acides aminés, et le résidu d'acide aminé de l'extrémité N-terminale est 30 le résidu d'acide aminé de la position 1. C'est-à-dire que les positions susmentionnées des résidus d'acides aminés indiquent des positions relatives, et que les positions absolues de ceux-ci peuvent être décalées en raison d'une délétion, insertion, addition, ou analogue, d'un résidu ou de résidus d'acide(s) aminé(s). Par exemple, le « résidu d'acide aminé à la 35 position 419 de la protéine YggB de type sauvage » désigne le résidu d'acide aminé correspondant à celui de la position 419 dans SEQ ID NO: 10 et, lorsqu'un seul résidu d'acide aminé est supprimé à une position sur le côté N-terminal de la position 419, le 418e résidu d'acide aminé de l'extrémité N-terminale est le « résidu d'acide aminé à la position 419 de la 40 protéine YggB de type sauvage ». En outre, lorsqu'un seul résidu d'acide aminé est inséré à une position sur le côté N-terminal de la position 419, le 420e résidu d'acide aminé de l'extrémité N-terminale est « le résidu d'acide aminé à la position 419 de la protéine YggB de type sauvage ». 3056989 25 Spécifiquement, par exemple, les résidus d'acides aminés des positions 419 à 529 de la protéine YggB de Corynebacterium glutamicum ATCC14967 correspondent aux résidus d'acides aminés des positions 419 à 533 de la protéine YggB de type sauvage. 5 [0061] Le résidu d'acide aminé qui est « le résidu d'acide aminé correspondant à celui de la position X dans SEQ ID NO: 10 » dans la séquence d'acides aminés d'une protéine YggB arbitraire peut être déterminé par un alignement entre la séquence d'acides aminés de la 10 protéine YggB arbitraire et la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 10. L'alignement peut être réalisé, par exemple, en utilisant un logiciel d'analyse de gène connu. Des exemples spécifiques d'un tel logiciel comprennent DNASIS produit par Hitachi Solutions, GENETYX produit par Genetyx, et ainsi de suite (Elizabeth C. Tyler et al., Computers and 15 Biomedical Research, 24 (1) 72-96, 1991 ; Barton GJ et al., Journal of Molecular Biology, 198 (2), 327-37, 1987). [0062] Un gène yggB mutant peut être obtenu en modifiant un gène yggB de type sauvage de sorte qu'il comporte la « mutation spécifique » 20 susmentionnée. La modification de l'ADN peut être réalisée par un procédé connu. Par exemple, une mutation cible peut être introduite dans un site cible d'un ADN par le procédé de mutagenèse dirigée. Des exemples spécifiques du procédé de mutagenèse dirigée comprennent, par exemple, un procédé utilisant une PCR (Higuchi, R., 61, dans PCR 25 Technology, Erlich, H.A. Eds., Stockton Press, 1989 ; Carter P., Meth. dans Enzymol., 154, 382, 1987), et un procédé utilisant un phage (Kramer, W. and Frits, H.J., Meth. dans Enzymol., 154, 350, 1987 ; Kunkel, T.A. et al., Meth. in Enzymol., 154, 367, 1987). En outre, un gène yggB mutant peut également être obtenu par synthèse chimique. 30 [0063] Une telle modification d'une bactérie de sorte que la bactérie comporte un gène yggB mutant peut être obtenue en introduisant le gène yggB mutant dans la bactérie. Une telle modification d'une bactérie de sorte que la bactérie comporte un gène yggB mutant peut également être 35 obtenue en introduisant une mutation dans le gène yggB de la bactérie par une mutation naturelle ou un traitement avec un mutagène. [0064] Les procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production d'acide L-glutamique peuvent également être efficaces pour 40 conférer ou améliorer une capacité à produire des acides Laminés qui sont biosynthétisés via l'acide L-glutamique en tant qu'intermédiaire, tels que la L-glutamine, la L-proline, la L-arginine, la L-citrulline, et la Lornithine. Par conséquent, une bactérie possédant une capacité à produire 3056989 26 l'un quelconque de ces acides Laminés qui sont biosynthétisés via l'acide L-glutamique peut posséder, tel que requis, une telle propriété possédée par une bactérie productrice d'acide L-glutamique telle que mentionnée ci-dessus. Par exemple, une bactérie possédant une capacité à produire l'un 5 quelconque de ces acides L-aminés qui sont biosynthétisés via l'acide L- glutamique peut avoir été modifiée de sorte que l'activité de l'- cétoglutarate déshydrogénase et/ou la succinate déshydrogénase soit réduite. [0065] 10 Des exemples du procédé pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-glutamine comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que l'activité ou les activités d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes de 15 biosynthèse de la L-glutamine soit/soient améliorée(s). Des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, la glutamate déshydrogénase (gdhA) et la glutamine synthétase (gInA). L'activité glutamine synthétase peut également être améliorée par la perturbation du gène de la glutamine adénylyltransférase (gInE) ou la 20 perturbation du gène de la protéine de contrôle PI I (g/nB) (EP1229121). [0066] Des exemples du procédé pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-glutamine comprennent également, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que l'activité ou les 25 activités d'un ou de plusieurs types d'enzymes qui catalysent une réaction qui s'éloigne de la voie de biosynthèse de la L-glutamine pour générer un composé autre que la L-glutamine soit/soient réduite(s). Des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, la glutaminase. 30 [0067] Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-glutamine et de souches parentales pour les dériver comprennent, par exemple, des bactéries corynéformes dans lesquelles l'activité ou les activités de la glutamate déshydrogénase (gdhA) et/ou la glutamine synthétase (gInA) 35 (EP1229121, EP1424398) sont améliorées, et des bactéries corynéformes dans lesquelles l'activité glutaminase (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2004-187684) est réduite. Des exemples de bactéries productrices de L-glutamine et de souches parentales pour les dériver comprennent une souche appartenant au genre Escherichia et comportant 40 une glutamine synthétase mutante dans laquelle le résidu tyrosine de la position 397 de la glutamine synthétase a été remplacé par un autre résidu d'acide aminé (US2003/0148474A). [0068] 3056989 27 Des exemples des procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-glutamine pour ou dans des bactéries corynéformes comprennent également le procédé pour conférer une résistance à la 6-diazo-5-oxo-norleucine (brevet japonais mis à l'inspection 5 publique (Kokai) n° 3-232497), le procédé pour conférer une résistance à un analogue de la purine et une résistance au sulfoxyde de méthionine (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 61-202694), et le procédé pour conférer une résistance à l'acide - -cétomalonique (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 56-151495). Des exemples 10 spécifiques de bactéries corynéformes possédant une capacité de production de L-glutamine comprennent, par exemple, les souches suivantes. Corynebacterium glutamicum (Brewbacterlum flavum) AJ11573 (FERM P-5492, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 56- 15 151495) Corynebacterium glutamicum (Brewbacterlum flavum) AJ11576 (FERM BP-10381, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 56-151495) Corynebacterium glutamicum (Brewbacterlum flavum) AJ12212 20 (FERM P-8123, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 61- 202694) [0069] Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité 25 de production de L-proline comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités augmentée(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes de biosynthèse de la L-proline. Des exemples de telles enzymes comprennent la glutamate-5-kinase (proB), la 30 - -glutamylphosphate réductase, et la pyroline-5-carboxylate réductase (putA). Afin d'améliorer l'activité d'une telle enzyme, par exemple, le gène proB codant pour une glutamate kinase désensibilisée à la rétro-inhibition par la L-proline (brevet allemand n° 3127361) peut être de préférence utilisé. 35 [0070] Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-proline comprennent également, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité réduite d'une enzyme impliquée dans la décomposition de la 40 L-proline. Des exemples d'une telle enzyme comprennent la proline déshydrogénase et l'ornithine aminotransférase. [0071] 3056989 28 Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-proline et de souches parentales pour les dériver comprennent, par exemple, E colt' NRRL B-12403 et NRRL B-12404 (brevet britannique n° 2075056), E colt' VKPM B-8012 (demande de brevet russe n° 2000124295), les souches 5 mutantes plasmidiques d'E coi/ décrites dans le brevet allemand n° 3127361, les souches mutantes plasmidiques d'E colt' décrites par Bloom F.R. et al. (The 15th Miami winter symposium, 1983, p. 34), la souche E colt' 702 (VKPM B-8011), qui est une souche résistante à la 3,4- déhydroxyproline et à l'azétidine-2-carboxylate, et la souche E co/i702ilvA 10 (VKPM B-8012), qui est une souche déficiente en gène i/vA de la souche 702 (EP1172433). [0072] Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité 15 de production de L-thréonine comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités augmentée(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes de biosynthèse de la L-thréonine. Des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y 20 limiter, l'aspartokinase III (/ysp, l'aspartate semialdéhyde déshydrogénase (aso), l'aspartokinase I (thrA), l'homosérine kinase (thrB), la thréonine synthase (thrÇ, et l'aspartate aminotransférase (aspartate transaminase) (aspp. Parmi ces enzymes, il est préférable d'améliorer l'activité ou les activités d'un ou de plusieurs types d'enzymes 25 sélectionnées parmi l'aspartokinase III, l'aspartate semialdéhyde déshydrogénase, l'aspartokinase I, l'homosérine kinase, l'aspartate aminotransférase, et la thréonine synthase. L'un quelconque des gènes codant pour les enzymes de biosynthèse de la L-thréonine peut être introduit dans une bactérie possédant une capacité réduite à décomposer 30 la thréonine. Des exemples d'une telle souche dans laquelle la décomposition de la thréonine est supprimée comprennent, par exemple, la souche E colt' TDH6, qui est déficiente en activité thréonine déshydrogénase (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n ° 2001-346578). 35 [0073] Les activités des enzymes de biosynthèse de la L-thréonine sont inhibées par le produit final, la L-thréonine. Par conséquent, afin de construire des souches productrices de L-thréonine, il est préférable que les gènes des enzymes de biosynthèse de la L-thréonine soient modifiés 40 de sorte que les enzymes soient désensibilisées à la rétro-inhibition par la L-thréonine. Les gènes thrA, thrB, et thrC susmentionnés constituent l'opéron de la thréonine, qui forme une structure d'atténuation. L'expression de l'opéron de la thréonine est inhibée par l'isoleucine et la 3056989 29 thréonine dans le bouillon de culture et est également supprimée par atténuation. Par conséquent, l'expression de l'opéron de la thréonine peut être améliorée en éliminant la séquence leader ou l'atténuateur dans la région d'atténuation (Lynn, S.P., Burton, W.S., Donohue, T.J., Gould, 5 R.M., Gumport, R.L, et Gardner, J.F., J. Mol. Biol. 194:59-69 (1987) ; W002/26993 ; W02005/049808 ; et W02003/097839). [0074] Le promoteur natif de l'opéron de la thréonine est présent en amont de l'opéron de la thréonine, et peut être remplacé par un 10 promoteur non natif (W098/04715). Également, l'opéron de la thréonine peut être construit de sorte que les gènes de biosynthèse de la thréonine soient exprimés sous le contrôle du répresseur et du promoteur du phage - (EP0593792B). En outre, une bactérie modifiée de sorte qu'elle soit désensibilisée à la rétro-inhibition par la L-thréonine peut également être 15 obtenue en sélectionnant une souche résistante à l'acide - -amino-- - hydroxyisovalérique (AHV), qui est un analogue de la L-thréonine. [0075] Il est préférable que la quantité d'expression de l'opéron de la thréonine qui est modifié de sorte à être désensibilisé à la rétro-inhibition 20 par la L-thréonine tel que décrit ci-dessus soit augmentée chez un hôte en augmentant le nombre de copies de celui-ci ou en le ligaturant à un puissant promoteur. Le nombre de copies peut être augmenté en introduisant un plasmide contenant l'opéron de la thréonine dans un hôte. Le nombre de copies peut également être augmenté en transférant 25 l'opéron de la thréonine dans le génome d'un hôte en utilisant un transposon, le phage Mu, ou analogue. [0076] Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-thréonine comprennent également, par exemple, un 30 procédé pour conférer une résistance à la L-thréonine chez un hôte, et un procédé pour conférer une résistance à la L-homosérine chez un hôte. Une telle résistance peut être conférée, par exemple, en améliorant l'expression d'un gène qui confère une résistance à la L-thréonine ou d'un gène qui confère une résistance à la L-homosérine. Des exemples des 35 gènes qui confèrent la résistance susmentionée comprennent le gène rhtA (Res. Microbiol. 154:123-135 (2003)), le gène rhtB(EP0994190A), le gène rhtC(EP1013765A), le gène yfiK, et le gène yeaS(EP1016710A). En ce qui concerne les procédés pour conférer une résistance à la L-thréonine chez un hôte, il est possible de se référer à ceux décrits dans EP0994190A et 40 W090/04636. [0077] Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-thréonine et de souches parentales pour les dériver comprennent, par exemple, E 3056989 30 colt' TDH-6/pVIC40 (VKPM B-3996, brevets U.S. n° 5 175 107 et 5 705 371), E colt' 472T23/pYN7 (ATCC 98081, brevet U.S. n° 5 631 157), E colt' NRRL-21593 (brevet U.S. n° 5 939 307), E colt' FERM BP-3756 (brevet U.S. n° 5 474 918), E colt' FERM BP-3519 et FERM BP- 5 3520 (brevet U.S. n° 5 376 538), E colt' MG442 (Gusyatiner et al., Genetika (en russe), 14, 947-956 (1978)), E colt' VL643 et VL2055 (EP1149911A), et E col/VKPM B-5318 (EP0593792B). [0078] La souche VKPM B-3996 est une souche obtenue en introduisant le 10 plasmide pVIC40 dans la souche TDH-6. La souche TDH-6 possède une capacité d'assimilation du saccharose et est déficiente en gène thrC, et le gène i/vA de celle-ci comporte une mutation fuyante. La souche TDH-6 comporte également une mutation dans le gène rhtA, qui confère une résistance à une forte concentration de thréonine ou homosérine. Le 15 plasmide pVIC40 est un plasmide obtenu en insérant l'opéron thrA*BC contenant un gène thrA mutant codant pour une aspartokinasehomosérine déshydrogénase I résistante à la rétro-inhibition par la thréonine et les gènes thrBCde type sauvage dans un vecteur dérivé de RSF1010 (brevet U.S. n° 5 705 371). Ce gène thrA mutant code pour une 20 aspartokinase-homosérine déshydrogénase I qui est essentiellement désensibilisée à la rétro-inhibition par la thréonine. La souche B-3996 a été déposée le 19 novembre 1987 auprès du All-Union Scientific Center of Antibiotics (Nagatinskaya Street 3-A, 117105 Moscou, Russie) sous le numéro d'accès RIA 1867. Cette souche a également été déposée auprès 25 de la Russian National Collection of Industrial Microorganisms (VKPM, FGUP GosNl I Genetika, 1 Dorozhny proezd., 1 Moscou 117545, Russie) le 7 avril 1987 sous le numéro d'accès VKPM B-3996. [0079] La souche VKPM B-5318 est prototrophe par rapport à l'isoleucine, 30 et abrite le plasmide pPRT614, qui correspond au plasmide pVIC40 dont la région régulatrice de l'opéron de la thréonine est remplacée par le répresseur Cl et le promoteur PR du phage - sensibles à la température. La souche VKPM B-5318 a été déposée auprès de la Russian National Collection of Industrial Microorganisms (VKPM, FGUP GosNI I Genetika, 1 35 Dorozhny proezd., 1 Moscou 117545, Russie) le 3 mai 1990 sous le numéro d'accès VKPM B-5318. [0080] Le gène thrA qui code pour l'aspartokinase-homosérine déshydrogénase I d'E cou a été élucidé (numéros de nucléotides 337 à 40 2799, accès GenBank NC 000913.2, gi : 49175990). Le gène thrA est localisé entre les gènes thrL et thrB sur le chromosome d'E coi/ K-12. Le gène thrB qui code pour l'homosérine kinase d'Escherichla colt' a été élucidé (numéros de nucléotides 2801 à 3733, accès GenBank 3056989 31 NC_000913.2, gi : 49175990). Le gène thrB est localisé entre les gènes thrA et thrCsur le chromosome d'E colt' K-12. Le gène thrCqui code pour la thréonine synthase d'E colla été élucidé (numéros de nucléotides 3734 à 5020, accès GenBank NC_000913.2, gi : 49175990). Le gène thrC est 5 localisé entre le gène thrB et le cadre de lecture ouvert de yaaX sur le chromosome d'E colt' K-12. L'opéron thrA*BC contenant un gène thrA mutant qui code pour une aspartokinase-homosérine déshydrogénase I résistante à la rétro-inhibition par la thréonine et les gènes thrBCde type sauvage peuvent être obtenus à partir du plasmide bien connu pVIC40, 10 qui est présent dans la souche d'E colt' productrice de thréonine VKPM B- 3996 (brevet U.S. n° 5 705 371). [0081] Le gène rhtA d'E colt' est localisé à 18 min sur le chromosome d'E colt' à proximité de l'opéron gInHPQ, qui code pour des composants du 15 système de transport de la glutamine. Le gène rhtA est identique à l'ORF1 (gène ybIF numéros de nucléotides 764 à 1651, numéro d'accès GenBank AAA218541, gi : 440181) et est localisé entre les gènes pexB et ompX. L'unité exprimant une protéine codée par l'ORF1 a été désignée gène rhtA (rht : résistance à l'homosérine et à la thréonine). Il a également été 20 révélé que la mutation rhtA23 qui confère une résistance à une forte concentration de thréonine ou d'homosérine est une substitution de A à G à la position -1 par rapport au codon d'initiation ATG (ABSTRACTS of the 17th International Congress of Biochemistry and Molecular Biology conjointement au Annual Meeting of the American Society for Biochemistry 25 and Molecular Biology, San Francisco, Californie 24-29 août 1997, abrégé n ° 457 ; EP1013765A). [0082] Le gène asd d'E colt' a déjà été élucidé (numéros de nucléotides 3572511 à 3571408, accès GenBank NC_000913.1, gi : 16131307), et 30 peut être obtenu par PCR (White, T.J., et al., Trends Genet, 5:185-189, 1989) en utilisant des amorces préparées en se basant sur la séquence de nucléotides du gène. Les gènes asd d'autres micro-organismes peuvent également être obtenus de manière similaire. [0083] 35 Le gène aspCd'E colt' a également déjà été élucidé (numéros de nucléotides 983742 à 984932, accès GenBank NC_000913.1, gi : 16128895), et peut être obtenu par PCR en utilisant des amorces préparées en se basant sur la séquence de nucléotides du gène. Les gènes aspC d'autres micro-organismes peuvent également être obtenus 40 de manière similaire. [0084] En outre, des exemples de bactéries corynéformes possédant une capacité de production de L-thréonine comprennent, par exemple, 3056989 32 Corynebacterium acetoacidophilum AJ12318 (FERM BP-1172, brevet U.S. n° 5 188 949). [0085] 5 Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-lysine comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités augmentée(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes de biosynthèse de la L-lysine. Des 10 exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, la dihydrodipicolinate synthase (dapA), l'aspartokinase III (/ysq, la dihydrodipicolinate réductase (dap,5), la diaminopimélate décarboxylase (lysA), la diaminopimélate déshydrogénase (ddh) (brevet U.S. n° 6 040 160), la phosphoénolpyruvate carboxylase (ppc), l'aspartate 15 semialdéhyde déshydrogénase (aso), l'aspartate aminotransférase (aspartate transaminase) (aspq, la diaminopimélate épimérase (dapFj, la tétrahydrodipicolinate succinylase (dapp, la succinyl diaminopimélate désacylase (dapE), et l'aspartase (aspA) (EP1253195A). Il est préférable d'améliorer l'activité ou les activités d'un ou de plusieurs types d'enzymes 20 sélectionnées parmi, par exemple, la dihydrodipicolinate réductase, la diaminopimélate décarboxylase, la diaminopimélate déshydrogénase, la phosphoénolpyruvate carboxylase, l'aspartate aminotransférase, la diaminopimélate épimérase, l'aspartate semialdéhyde déshydrogénase, la tétrahydrodipicolinate succinylase, et la succinyl diaminopimélate 25 désacylase, parmi ces enzymes. En outre, des bactéries productrices de L- lysine et des souches parentales pour les dériver peuvent exprimer un taux augmenté du gène impliqué dans l'efficacité énergétique (cyo) (EP1170376A), du gène codant pour la nicotinamide nucléotide transhydrogénase (pntAB) (brevet U.S. n° 5 830 716), du gène ybjE 30 (W02005/073390), ou de combinaisons de ceux-ci. Étant donné que l'aspartokinase III (lysq est sensible à la rétro-inhibition par la L-lysine, un gène /ysCmutant codant pour une aspartokinase III désensibilisée à la rétro-inhibition par la L-lysine (brevet U.S. n° 5 932 453) peut être utilisé pour améliorer l'activité de cette enzyme. Des exemples de l'aspartokinase 35 III désensibilisée à la rétro-inhibition par la L-lysine comprennent l'aspartokinase III dérivée d'Escherichia colt' et comportant une ou plusieurs mutations sélectionnées parmi une mutation pour remplacer le résidu méthionine à la position 318 par un résidu isoleucine ; une mutation pour remplacer le résidu glycine à la position 323 par un résidu 40 acide aspartique ; et une mutation pour remplacer le résidu thréonine à la position 352 par un résidu isoleucine (brevets U.S. n° 5 661 012 et 6 040 160). En outre, étant donné que la dihydrodipicolinate synthase (dapA) est sensible à la rétro-inhibition par la L-lysine, un gène dapA 3056989 33 mutant codant pour dihydrodipicolinate synthase désensibilisée à la rétro-inhibition par la L-lysine peut être utilisé pour améliorer l'activité de cette enzyme. Des exemples de la dihydrodipicolinate synthase désensibilisée à la rétro-inhibition par la L-lysine comprennent la dihydrodipicolinate 5 synthase dérivée d'Escherichia colt' et comportant une mutation pour remplacer le résidu histidine à la position 118 par un résidu tyrosine (brevet U.S. n° 6 040 160). [0086] Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité 10 de production de L-lysine comprennent également, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités réduite(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes qui catalysent une réaction qui s'éloigne de la voie de biosynthèse de la L-lysine pour générer un 15 composé autre que la L-lysine. Des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, l'homosérine déshydrogénase, la lysine décarboxylase (brevet U.S. n° 5 827 698), et l'enzyme malique (W02005/010175). [0087] 20 En outre, des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-lysine pour ou dans des bactéries corynéformes comprennent également un procédé de modification des bactéries de sorte que l'activité d'un système d'excrétion de la lysine (lysE) soit augmentée (W097/23597). Le gène lysE de Corynebacterium 25 glutamicum ATCC 13032 correspond à la séquence complémentaire à la séquence des numéros de nucléotides 1 329 712 à 1 330 413 dans la séquence génomique enregistrée en tant que n° d'accès GenBank NC 006958 (VERSION NC 006958.1 GI : 62388892) dans la base de données du NCBI. La protéine LysE de Corynebacterium glutamicum ATCC 30 13032 est enregistrée en tant que n° d'accès GenBank YP 225551 (YP 225551.1 GI : 62390149). [0088] Des exemples de bactéries productrices de L-lysine et de souches parentales pour les dériver comprennent également des souches mutantes 35 présentant une résistance à un analogue de L-lysine. Les analogues de L- lysine inhibent la croissance de bactéries telles que les bactéries de la famille Enterobacteriaceae et les bactéries corynéformes, mais cette inhibition est complètement ou partiellement libérée lorsque de la L-lysine est présente dans le milieu. Des exemples de ces analogues de L-lysine 40 comprennent, sans particulièrement s'y limiter, l'oxalysine, la lysine hydroxamate, la S-(2-aminoéthyl)-L-cystéine (AEC), la --méthyllysine, et l'- -chlorocaprolactame. Des souches mutantes présentant une résistance à 3056989 34 ces analogues de la lysine peuvent être obtenues en soumettant une bactérie à un traitement de mutagenèse artificielle conventionnel. [0089] Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-lysine et 5 de souches parentales pour les dériver comprennent E colt' AJ11442 (FERM BP-1543, NRRL B-12185, brevet U.S n° 4 346 170) et E coliVL611. Dans ces souches, l'aspartokinase est désensibilisée à la rétro-inhibition par la L-lysine. [0090] 10 Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-lysine et de souches parentales pour les dériver comprennent également la souche E colt' WC196. La souche WC196 a été obtenue en conférant une résistance à l'AEC à la souche W3110, qui a été dérivée d'E colt' K-12 (brevet U.S. n° 5 827 698). La souche WC196 a été désignée E colt' 15 AJ13069 et a été déposée auprès du National lnstitute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology (actuellement, agence administrative indépendante, National (nstitute of Technology and Evaluation, International Patent Organism Depositary, n° 120, 2-5-8 Kazusakamatari, Kisarazu-shi, Chiba-ken, 292-0818, Japon) 20 le 6 décembre 1994, et a reçu le numéro d'accès FERM P-14690. Ensuite, le dépôt a été converti en dépôt international conformément aux dispositions du Traité de Budapest le 29 septembre 1995, et a reçu le numéro d'accès FERM BP-5252 (brevet U.S. n° 5 827 698). [0091] 25 Des exemples préférés de bactéries productrices de L-lysine comprennent E coliWC196. cadA- Idc et E coliWC196. cadA- Idc/pCABD2 (W02010/061890). E colt' WC196- cadA- Idc est une souche construite à partir de la souche WC196 par une perturbation des gènes cadA et ldcC codant pour la lysine décarboxylase. La souche WC196- cadA- Idc/pCABD2 30 a été construite en introduisant le plasmide pCABD2 contenant les gènes de l'enzyme de biosynthèse de la lysine (brevet U.S. n° 6 040 160) dans la souche WC196- cadA- Idc. La souche WC196- cadA- Idc, désignée AJ110692, a été déposée auprès de l'agence administrative indépendante, le National lnstitute of Advanced Industrial Science and Technology, 35 International Patent Organism Depositary (actuellement, agence administrative indépendante, National I nstitute of Technology and Evaluation, International Patent Organism Depositary, n° 120, 2-5-8 Kazusakamatari, Kisarazu-shi, Chiba-ken, 292-0818, Japon) le 7 octobre 2008 en tant que dépôt international, et a reçu le numéro d'accès FERM 40 BP-11027. Le plasmide pCABD2 contient un gène dapA mutant dérivé d'Escherlchla coll et codant pour une dihydrodipicolonate synthase (DDPS) comportant une mutation pour une désensibilisation à la rétro-inhibition par la L-lysine (H118Y), un gène lysC mutant dérivé d'Escherlchla col l et 3056989 35 codant pour l'aspartokinase III comportant une mutation pour une désensibilisation à la rétro-inhibition par la L-lysine (T352I), le gène dapB dérivé d'Escherichia colt' et codant pour la dihydrodipicolonate réductase, et le gène de dérivé de Brewbacterlum lactofermentum et codant pour la 5 diaminopimélate déshydrogénase. [0092] Des exemples préférés de bactéries productrices de L-lysine comprennent également E colt' AJIK01 (NITE BP-01520). La souche AJI K01 a été désignée E colt' AJ111046, et a été déposée auprès de 10 l'agence administrative indépendante, le National Institute of Technology and Evaluation, International Patent Organism Depositary (n° 122, 2-5-8 Kazusakamatari, Ksarazu-shi, Chiba-ken, 292-0818, Japon) le 29 janvier 2013. Ensuite, elle a été convertie en dépôt international conformément aux dispositions du Traité de Budapest le 15 mai 2014, et a reçu le 15 numéro d'accès NITE BP-01520. [0093] Des exemples de bactéries corynéformes possédant une capacité de production de L-lysine comprennent, par exemple, les souches mutantes résistantes à l'AEC (la souche Corynebacterium glutamicum 20 (Brewbacterium lactofermentum AJ11082) ( NRRL B-11470) , etc., publications de brevet japonais (Kokoku) n° 56-1914, 56-1915, 57-14157, 57-14158, 57-30474, 58-10075, 59-4993, 61-35840, 62-24074, 62-36673, 5-11958, 7-112437, et 7-112438) ; des souches mutantes nécessitant un acide aminé tel que la L-homosérine pour leur croissance (publications de 25 brevet japonais n° 48-28078 et 56-6499) ; des souches mutantes montrant une résistance à l'AEC et nécessitant en outre un acide aminé tel que la L-leucine, la L-homosérine, la L-proline, la L-sérine, la L-arginine, la L-alanine, et la L-valine (brevets U.S. n° 3 708 395 et 3 825 472) ; des souches mutantes montrant une résistance au DL-- -amino-- 30 caprolactame, à l'-amino-lauryllactame, à un analogue de l'acide aspartique, un médicament sulfa, un quinoïde, et la N-lauroylleucine ; des souches mutantes montrant une résistance à un inhibiteur de l'oxaloacétate décarboxylase ou un inhibiteur d'une enzyme de la chaîne respiratoire (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 50- 35 53588, 50-31093, 52-102498, 53-9394, 53-86089, 55-9783, 55-9759, 56- 32995, 56-39778, publications de brevet japonais n° 53-43591 et 531833) ; des souches mutantes nécessitant de l'inositol ou de l'acide acétique (brevets japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 55-9784 et 56-8692) ; des souches mutantes qui sont sensibles à l'acide 40 fluoropyruvique ou à une température de 34 °C ou plus (brevets japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 55-9783 et 53-86090) ; et des souches mutantes montrant une résistance à l'éthylène glycol (brevet U.S. n° 4 411 997). 3056 9 89 36 [0094] Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-arginine comprennent, par exemple, un procédé de 5 modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités augmentée(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes de biosynthèse de la L-arginine. Des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, la N-acétylglutamate synthase (argA), la N-acétylglutamate kinase, 10 (are), la N-acétylglutamyl phosphate réductase (argq, l'acétylornithine transaminase (argD), l'acétylornithine désacétylase (argE), l'ornithine carbamoyltransférase (are, argl), l'argininosuccinate synthétase (argG, l'argininosuccinate lyase (argH), l'ornithine acétyltransférase (argJ), et la carbamoyl-phosphate synthétase (carAB). En tant que gène de la N- 15 acétylglutamate synthase, par exemple, un gène codant pour une Nacétylglutamate synthase mutante désensibilisée à la rétro-inhibition par la L-arginine par une substitution des résidus d'acides aminés correspondant aux positions 15 à 19 de l'enzyme de type sauvage (EP1170361A) peut être de préférence utilisé. 20 [0095] Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-arginine et de souches parentales pour les dériver comprennent, par exemple, la souche E colt' 237 (VKPM B-7925, US2002/058315A1), des souches dérivées de celle-ci dans lesquelles le gène argA codant pour une N-acétyl 25 glutamate synthase mutante a été introduit (demande de brevet russe n° 2001112869, EP1170361A1), la souche E colt' 382 dérivée de la souche 237 et possédant une capacité d'assimilation d'acide acétique améliorée (VKPM B-7926, EP1170358A1), et la souche E colt' 382ilvA+ , qui est une souche obtenue à partir de la souche 382 en introduisant le gène i/vA de 30 type sauvage de la souche E coliK-12 dans celle-ci. La souche E colt' 237 a été déposée auprès de la Russian National Collection of Industrial Microorganisms (VKPM, FGUP GosNll Genetika, 1 Dorozhny proezd., 1 Moscou 117545, Russie) le 10 avril 2000 sous le numéro d'accès VKPM B7925, et le dépôt a été converti en dépôt international conformément aux 35 dispositions du Traité de Budapest le 18 mai 2001. La souche E co/i382 a été déposée auprès de la Russian National Collection of Industrial Microorganisms (VKPM, FGUP GosNll Genetika, 1 Dorozhny proezd., 1 Moscou 117545, Russie) le 10 avril 2000 sous le numéro d'accès VKPM B7926. 40 [0096] Des exemples de bactéries productrices de L-arginine et de souches parentales pour les dériver comprennent également des souches présentant une résistance à des analogues d'acides aminés, et ainsi de 3056989 37 suite. Des exemples de telles souches comprennent des souches mutantes d'E colt présentant une résistance à l'- -méthylméthionine, la pfluorophénylalanine, la D-arginine, l'arginine hydroxamate, la S-(2- aminoéthyl)-cystéine, l'- -méthylsérine, la - -2-thiénylalanine, ou la 5 sulfaguanidine (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 56- 106598). [0097] Des exemples de bactéries productrices de L-arginine et de souches parentales pour les dériver comprennent également de telles bactéries 10 corynéformes en tant que souche déficiente en ArgR, qui est un répresseur de l'arginine (US2002-0045223A), et une souche dans laquelle l'activité glutamine synthétase est augmentée (US2005-0014236A). [0098] Des exemples de bactéries productrices de L-arginine et de souches 15 parentales pour les dériver comprennent également des souches mutantes de bactéries corynéformes, les souches mutantes présentant une résistance à un analogue d'acide aminé ou similaire. Des exemples de telles souches comprennent, par exemple, des souches présentant une résistance à la 2-thiazoléalanine et exhibant en outre une auxotrophie 20 pour la L-histidine, la L-proline, la L-thréonine, la L-isoleucine, la L- méthionine, ou le L-tryptophane (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 54-44096) ; des souches résistantes à l'acide cétomalonique, l'acide fluoromalonique, ou l'acide monofluoroacétique (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 57-18989) ; des 25 souches résistantes à l'argininol (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 62-24075) ; des souches résistantes à la X-guanidine (X représente une chaîne aliphatique ou un dérivé de celle-ci, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2-186995) ; et des souches résistantes à l'arginine hydroxamate et à la 6-azauracile (brevet 30 japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 57-150381). Des exemples spécifiques de bactéries corynéformes possédant une capacité de production de L-arginine comprennent les souches suivantes. Corynebacterium glutarnicum (Brewbacterium fla vum) AJ11169 (FERM BP-6892) 35 Corynebacterium glutarnicum (Brewbacterium lactofermentum) AJ12092 (FERM BP-6906) Corynebacterium glutarnicum (Brevibacterium flavum) AJ11336 (FERM BP-6893) Corynebacterium glutarnicum (Brevibacterium fla vum) AJ11345 40 (FERM BP-6894) Corynebacterium glutarnicum (Brevibacterium lactofermentum) AJ12430 (FERM BP-2228) [0099] 3056989 38 La L-citrulline et la L-ornithine sont des intermédiaires de la voie de biosynthèse de la L-arginine. Par conséquent, des exemples de procédés 5 pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-citrulline et/ou L-ornithine comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités augmentée(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes de biosynthèse de la L-arginine. Des exemples de telles 10 enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, la Nacétylglutamate synthase (argA), la N-acétylglutamate kinase, (argB), la N-acétylglutamyl phosphate réductase (argq, l'acétylornithine transaminase (argD), l'acétylornithine désacétylase (argE), l'ornithine carbamoyltransférase (are, argl), l'ornithine acétyltransférase (argJ), et 15 la carbamoyl-phosphate synthétase (carAB), pour la L-citrulline. En outre, des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, la N-acétylglutamate synthase (argA), la N-acétylglutamate kinase, (argB), la N-acétylglutamyl phosphate réductase (argq, l'acétylornithine transaminase (argp, l'acétylornithine désacétylase (argE), et l'ornithine 20 acétyltransférase (argJ), pour la L-ornithine. [0100] Une bactérie productrice de L-citrulline peut être facilement obtenue, par exemple, à partir d'une bactérie productrice de L-arginine telle que la souche E colt' 382 (VKPM B-7926) en réduisant l'activité de 25 l'argininosuccinate synthétase codée par le gène argG De plus, une bactérie productrice de L-ornithine peut être facilement obtenue, par exemple, à partir d'une bactérie productrice de L-arginine telle que la souche E colt' 382 (VKPM B-7926) en réduisant l'activité de l'ornithine carbamoyltransférase codée par les gènes argFet argl. 30 [0101] Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-citrulline et de souches parentales pour les dériver comprennent, par exemple, des souches appartenant au genre Eschericina, telles que les souches d'E coi/ 237/pMADS11, 237/pMADS12, et 237/pMADS13, qui possèdent une N- 35 acétylglutamate synthase mutante (brevet russe n° 2 215 783, brevet U.S. n° 6 790 647, et EP1170361B1), les souches d'E coi/ 333 (VKPM B-8084) et 374 (VKPM B-8086), qui possèdent une carbamoyl-phosphate synthétase résistante à la rétro-inhibition (brevet russe n° 2 264 459), des souches d'E coi/ possédant une activité augmentée de l'- -cétoglutarate 40 synthase et possédant une activité modifiée de la ferrédoxine NADP± réductase, la pyruvate synthase, et/ou l'- -cétoglutarate déshydrogénase (EP2133417A) ; et la souche F? ananatt:s NA1sucAsdhA, qui possède une 3056989 39 activité réduite de la succinate déshydrogénase et l'- -cétoglutarate déshydrogénase (US2009-286290A1). [0102] 5 Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-histidine comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités augmentée(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes de biosynthèse de la L-histidine. Des 10 exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, l'ATP phosphoribosyltransférase (hi,s, la phosphoribosyl-AMP cyclohydrolase (his/), la phosphoribosyl-ATP pyrophosphohydrolase (his/), la phosphoribosylformimino-5-aminoimidazole carboxamide ribotide isomérase (in:sA), l'amidotransférase (in:sH), l'histidinol phosphate 15 aminotransférase (insp, l'histidinol phosphatase (his,5), et l'histidinol déshydrogénase (hisp. [0103] Parmi ces enzymes, les enzymes de biosynthèse de la L-histidine codées par hisG et hIsBHAF/ sont connues pour être inhibées par la L- 20 histidine. Par conséquent, la capacité de production de L-histidine peut être conférée ou améliorée, par exemple, en introduisant une mutation conférant une résistance à la rétro-inhibition dans le gène codant pour l'ATP phosphoribosyltransférase (hisG (brevets russes n° 2 003 677 et 2 119 536). 25 [0104] Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-histidine et de souches parentales pour les dériver comprennent, par exemple, des souches appartenant au genre Escherichia, telles que la souche E colt' 24 (VKPM B-5945, RU2003677), E colt' NRRL B-12116 à B-12121 (brevet U.S. 30 n° 4 388 405), E colt' H-9342 (FERM BP-6675) et H-9343 (FERM BP-6676, brevet U.S. n° 6 344 347), E col/ H-9341 (FERM BP-6674, EP1085087), E colt' A180/pFM201 (brevet U.S. n° 6 258 554), E colt' FERM P-5038 et FERM P-5048, dans lesquelles un vecteur portant un ADN codant pour une enzyme de biosynthèse de la L-histidine a été introduit (brevet japonais 35 mis à l'inspection publique (Kokai) n° 56-005099), des souches d'E colt' dans lesquelles un gène de transport d'acides aminés a été introduit (EP1016710A), et la souche E colt' 80, pour laquelle une résistance à la sulfaguanidine, la DL-1,2,4-triazole-3-alanine, et la streptomycine (VKPM B-7270, brevet russe n° 2119536) a été conférée. 40 [0105] Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-cystéine comprennent, par exemple, un procédé de 3056989 40 modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités augmentée(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes de biosynthèse de la L-cystéine. Des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y 5 limiter, la sérine acétyltransférase (cysE) et la 3-phosphoglycérate déshydrogénase (serA). L'activité sérine acétyltransférase peut être améliorée, par exemple, en introduisant un gène cysEmutant codant pour une sérine acétyltransférase mutante résistante à la rétro-inhibition par la cystéine dans une bactérie. Une telle sérine acétyltransférase mutante est 10 décrite, par exemple, dans le brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 1 1-1 55571 et US2005-0112731A. En outre, l'activité 3- phosphoglycérate déshydrogénase peut être améliorée, par exemple, en introduisant un gène serA mutant codant pour une 3-phosphoglycérate déshydrogénase mutante résistante à la rétro-inhibition par la sérine dans 15 une bactérie. Une telle 3-phosphoglycérate déshydrogénase mutante est décrite, par exemple, dans le brevet U.S. n° 6 180 373. [0106] En outre, des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-cystéine comprennent également, par 20 exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités réduite(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes qui catalysent une réaction qui s'éloigne de la voie de biosynthèse de la L-cystéine pour générer un composé autre que la L-cystéine. Des exemples de telles 25 enzymes comprennent, par exemple, des enzymes impliquées dans la décomposition de la L-cystéine. Des exemples des enzymes impliquées dans la décomposition de la L-cystéine comprennent, sans particulièrement s'y limiter, la cystathionine-- -lyase (metC, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 1 1-1 55571 ; Chandra et 30 al., Biochemistry, 21 (1982) 3064-3069), la tryptophanase (tnaA, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2003-169668 ; Austin Newton et al., J. Biol. Chem., 240 (1965) 1211-1218), l'O-acétylsérine sulfhydrylase B (cysM, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2005-245311), le produit du gène malt (brevet japonais mis à 35 l'inspection publique (Kokai) n° 2005-245311), le produit du gène d0191 de Pantoea ananatis (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2009-232844), et la cystéine désulfhydrase (aecD, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2002-233384. [0107] 40 En outre, des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-cystéine comprennent également, par exemple, un procédé d'amélioration du système d'excrétion de L-cystéine, et un procédé d'amélioration du système de transport du 3056989 41 sulfate/thiosulfate. Des exemples de protéines du système d'excrétion de L-cystéine comprennent la protéine codée par le gène ydeD (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2002-233384), la protéine codée par le gène yfiK (brevet japonais mis à l'inspection publique 5 (Kokai) n° 2004-49237), les protéines codées par les gènes emrAB, emrKY, yojIH, acrEF, bcr, et cusA (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2005-287333), et la protéine codée par le gène yeaS (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2010-187552). Des exemples des protéines du système de transport du 10 sulfate/thiosulfate comprennent les protéines codées par le cluster de gènes cysPTWAM. [0108] Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-cystéine et de souches parentales pour les dériver comprennent, par exemple, E 15 coi/ JM15 transformée avec différents allèles cysEcodant pour des sérine acétyltransférases résistantes à la rétro-inhibition (brevet U.S. n° 6 218 168, demande de brevet russe 2003121601), E colt' W3110 comportant un gène surexprimé codant pour une protéine appropriée pour la sécrétion d'une substance cytotoxique (brevet U.S. 20 n° 5 972 663), des souches d'E colt' possédant une activité cystéine désulfohydrase réduite (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 11-155571), et E colt' W3110 possédant une activité augmentée d'un régulateur positif de la transcription pour le régulon de la cystéine codé par le gène cysB (W001/ 27307A1). 25 [0109] En outre, des exemples de bactéries corynéformes possédant une capacité de production de L-cystéine comprennent des bactéries corynéformes comportant une sérine acétyltransférase désensibilisée à la rétro-inhibition par la L-cystéine, pour ainsi montrer une activité sérine 30 acétyltransférase intracellulaire améliorée (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2002-233384). [0110] Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une 35 capacité de production de L-sérine comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités augmentée(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes de biosynthèse de la L-sérine. Des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y 40 limiter, la 3-phosphoglycérate déshydrogénase (serA), la phosphosérine transaminase (serp, et la phosphosérine phosphatase (sera) (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 11-253187). L'activité 3- phosphoglycérate déshydrogénase peut être augmentée, par exemple, en 3056989 42 introduisant un gène serA mutant codant pour une 3-phosphoglycérate déshydrogénase mutante résistante à la rétro-inhibition par la L-sérine dans une bactérie. La 3-phosphoglycérate déshydrogénase mutante est décrite, par exemple, dans le brevet U.S. n° 6 180 373. 5 [0111] Des exemples de bactéries productrices de L-sérine et de souches parentales pour les dériver comprennent, par exemple, des bactéries corynéformes résistantes à l'azasérine ou la - -(2-thiényl)-DL-alanine et déficientes en capacité de décomposition de la L-sérine (brevet japonais 10 mis à l'inspection publique (Kokai) n° 10-248588). Des exemples spécifiques de telles bactéries corynéformes comprennent, par exemple, Corynebacterium glutamicum (Brewbacterlum flavum) AJ13324 (FERM P16128), qui est résistante à l'azasérine et déficiente en capacité de décomposition de la L-sérine, et Corynebacterium glutamicum 15 (Brewbacterlum flavum) AJ13325 (FERM P-16129), qui est résistante à la la - -(2-thiényl)-DL-alanine et déficience en capacité de décomposition de la L-sérine (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 10- 248588). [0112] 20 Des exemples de bactéries productrices de L-méthionine et de souches parentales pour les dériver comprennent des souches auxotrophes pour la L-thréonine et des souches mutantes résistantes à la norleucine (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2000- 25 139471). Des exemples de bactéries productrices de L-méthionine et de souches parentales pour les dériver comprennent également une souche contenant une homosérine transsuccinylase mutante résistante à la rétro-inhibition par la L-méthionine (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2000-139471, US2009-0029424A). Étant donné que 30 la L-méthionine est biosynthétisée via la L-cystéine en tant qu'intermédiaire, la capacité de production de L-méthionine peut également être améliorée en améliorant la capacité de production de la L-cystéine (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2000139471, US2008-0311632A). 35 [0113] Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-méthionine et de souches parentales pour les dériver comprennent, par exemple, E colt' AJ11539 (NRRL B-12399), E colt' AJ11540 (NRRL B12400), E collAJ11541 (NRRL B-12401), E collAJ11542 (NRRL B-12402, 40 brevet britannique n° 2075055), la souche d'E colt' 218 (VKPM B-8125, brevet russe n° 2209248) et la souche 73 (VKPM B-8126, brevet russe n° 2215782), qui sont résistantes à la norleucine, qui est un analogue de la L-méthionine, et E co/iAJ13425 (FERMP-16808, brevet japonais mis à 3056989 43 l'inspection publique (Kokai) n° 2000-139471). La souche AJ13425 est une souche auxotrophe pour la L-thréonine dérivée d'E coi/ W3110, dans laquelle le répresseur de la méthionine est supprimé, l'activité Sadénosylméthionine synthétase intracellulaire est atténuée, et l'activité 5 homosérine transsuccinylase intracellulaire, l'activité cystathionine -- synthase, et l'activité aspartokinase-homosérine déshydrogénase Il sont améliorées. [0114] 10 Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-leucine comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités augmentée(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes de biosynthèse de la L- 15 leucine. Des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, les enzymes codées par les gènes de l'opéron /euABCD. En outre, afin d'améliorer l'activité d'une telle enzyme, par exemple, le gène leuA mutant codant pour une isopropyl-maléate synthase désensibilisée à la rétro-inhibition par la L-leucine (brevet U.S. 20 n° 6 403 342) peut être de préférence utilisé. [0115] Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-leucine et de souches parentales pour les dériver comprennent, par exemple, des souches appartenant au genre Escherichia, tel que des souches d'E coi/ 25 résistantes à la leucine (par exemple, la souche 57 (VKPM B-7386, brevet U.S. n° 6 124 121)), des souches d'E coi/ résistantes à un analogue de la leucine tel que la - -2-thiénylalanine, la 3-hydroxyleucine, la 4-azaleucine, and la 5,5,5-trifluoroleucine (publication de brevet japonais (Kokoku) n° 62-34397 et brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 8- 30 70879), des souches d'E coi/ obtenues par une technique de génie génétique décrite dans W096/06926, et E colt' H-9068 (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 8-70879). [0116] Des exemples de bactéries corynéformes possédant une capacité 35 de production de L-leucine comprennent, par exemple, Corynebacterium glutamicum (Brewbacterlum lactofermentum) AJ3718 (FERM P-2516), qui est résistante à la 2-thiazolalanine et à la - -hydroxyleucine et auxotrophe pour l'isoleucine et la méthionine. [0117] 40 Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-isoleucine comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède 3056989 44 une activité ou des activités augmentée(s) d'une ou de plusieurs enzymes sélectionnées parmi les enzymes de biosynthèse de la L-isoleucine. Des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, la thréonine désaminase et l'acétohydroxy acide synthase (brevet 5 japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2-458, EP0356739A, brevet U.S. n° 5 998 178). [0118] Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-isoleucine et de souches parentales pour les dériver comprennent, par exemple, 10 des bactéries Escherichia telles que des souches mutantes présentant une résistance à la 6-diméthylaminopurine (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 5-304969), des souches mutantes présentant une résistance à un analogue d'isoleucine tel que la thiaisoleucine et l'isoleucine hydroxamate, et des souches mutantes 15 présentant une résistance à un tel analogue d'isoleucine et présentant en outre une résistance à la DL-éthionine et/ou l'arginine hydroxamate (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 5-130882). Des exemples de bactéries corynéformes possédant une capacité de production de L-isoleucine comprennent, par exemple, la bactérie 20 corynéforme dans laquelle le gène brnE codant pour une protéine d'excrétion d'acide aminé à chaîne ramifiée est amplifié (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2001-169788), la bactérie corynéforme pour laquelle une capacité de production de L-isoleucine est conférée par une fusion de protoplastes avec une bactérie productrice de 25 L-lysine (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 62- 74293), la bactérie corynéforme dans laquelle l'homosérine déshydrogénase est améliorée (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 62-91193), la souche résistante à la thréonine hydroxamate (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 62- 30 195293, la souche résistante à l'acide - -cétomalonique (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 61-15695), la souche résistante à la méthyllysine (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 61-15696), et Corynebacterium glutamicum (Brewbacterlum flavum) AJ12149 (FERM BP-759, brevet U.S. n° 4 656 135). 35 [0120] Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-valine comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède 40 une activité ou des activités augmentée(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes de biosynthèse de la L-valine. Des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, les enzymes codées par les gènes de l'opéron i/vGMEDA et les 3056989 enzymes codées par l'opéron i/vBNC Le gène i/vBN code pour l'acétohydroxy acide synthase, et le gène i/vC code pour une isoméroréductase (W000/506214). Les expressions de l'opéron i/vGMEDA et de l'opéron i/vBNC sont supprimées (atténuées) par la L-valine, la L- 5 isoleucine, et/ou la L-leucine. Par conséquent, afin d'améliorer l'activité d'une telle enzyme, il est préférable que la suppression de l'expression par la L-valine produite soit libérée en éliminant ou en modifiant une région requise pour l'atténuation. En outre, la thréonine désaminase codée par le gène i/vA est une enzyme qui catalyse la réaction de désamination de la L- 10 thréonine pour générer de l'acide 2-cétobutyrique, qui est l'étape limitante du système de biosynthèse de la L-isoleucine. Par conséquent, pour la production de L-valine, il est préférable que le gène i/vA soit, par exemple, perturbé, et ainsi l'activité thréonine désaminase est réduite. [0121] 15 Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-valine comprennent également, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités réduite(s) d'un ou de plusieurs types d'enzymes sélectionnées parmi les enzymes qui catalysent 20 une réaction qui s'éloigne de la voie de biosynthèse de la L-valine pour générer un composé autre que la L-valine. Des exemples de telles enzymes comprennent, sans particulièrement s'y limiter, la thréonine déshydratase impliquée dans la synthèse de la L-leucine, et les enzymes impliquées dans la synthèse de l'acide D-pantothénique (W000/50624). 25 [0122] Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-valine et de souches parentales pour les dériver comprennent, par exemple, des souches d'E coi/ modifiées de sorte à surexprimer l'opéron i/vGMEDA (brevet U.S. n° 5 998 178). 30 [0123] Des exemples de bactéries productrices de L-valine et de souches parentales pour les dériver comprennent également des souches mutantes comportant une mutation dans l'aminoacyl-ARNt synthétase (brevet U.S. n° 5 658 766). Des exemples de telles souches comprennent, par 35 exemple, E cou VL19, qui comporte une mutation dans le gène ileS codant pour l'isoleucine ARNt synthétase. E colt' VL1970 a été déposée auprès de la Russian National Collection of Industrial Microorganisms (VKPM, FGUP GosNI I Genetika, 1 Dorozhny proezd., 1 Moscou 117545, Russie) le 24 juin 1988 sous le numéro d'accès VKPM B-4411. Des 40 exemples de bactéries productrices de L-valine et de souches parentales pour les dériver comprennent également des souches mutantes nécessitant de l'acide lipoïque pour leur croissance et/ou dépourvues de W-ATPase (W096/06926). 3056989 46 [0124] Des exemples de bactéries productrices de L-valine et de souches parentales pour les dériver comprennent également des souches résistantes à un analogue d'acide aminé ou similaire. Des exemples de 5 telles souches comprennent, par exemple, les souches de bactéries corynéformes qui sont auxotrophes pour la L-isoleucine et la L-méthionine, et résistantes au D-ribose, au ribonucléoside purine, ou au ribonucléoside pyrimidine, et possèdent une capacité de production de L-valine (FERM P1841, FERM P-29) (publication de brevet japonais n° 53-025034), des 10 souches de bactéries corynéformes résistantes à des polycétides (FERM P1763, FERM P-1764) (publication de brevet japonais n° 06-065314), et des souches de bactéries corynéformes résistantes à la L-valine dans un milieu contenant de l'acide acétique en tant qu'unique source de carbone et sensibles aux analogues de l'acide pyruvique (acide fluoropyruvique, 15 etc.) dans un milieu contenant du glucose en tant qu'unique source de carbone (FERM BP-3006, BP-3007) (brevet japonais n° 3006929). [0125] Des exemples de bactéries productrices de L-alanine et de souches 20 parentales pour les dériver comprennent les bactéries corynéformes déficientes en W-ATPase (Appt. Microbiol. Biotechnol., novembre 2001, 57(4):534-40) et des bactéries corynéformes dans lesquelles l'activité aspartate - -décarboxylase est améliorée (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 07-163383). 25 [0126] Des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production de L-tryptophane, une capacité de production de 30 L-phénylalanine, et/ou une capacité de production de L-tyrosine comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités augmentée(s) d'une ou de plusieurs enzymes sélectionnées parmi les enzymes de biosynthèse du L-tryptophane, de la L-phénylalanine et/ou de la L- 35 tyrosine. [0127] Des exemples d'enzymes communes aux systèmes de biosynthèse de ces acides aminés aromatiques comprennent, sans particulièrement s'y limiter, la 3-désoxy-D-arabinoheptulosonate-7-phosphate synthase (aroG, 40 la 3-déshydroquinate synthase (aroB), la shikimate déshydrogénase (aroE), la shikimate kinase (aroL), la 5-énolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (aroA), et la chorismate synthase (arop (EP763127B). Les expressions des gènes codant pour ces enzymes sont contrôlées par le 3056989 47 répresseur de la tyrosine (tyrR), et les activités de ces enzymes peuvent être améliorées en supprimant le gène tyrR(EP763127B). [0128] Des exemples des enzymes de biosynthèse du L-tryptophane 5 comprennent, sans particulièrement s'y limiter, l'anthranilate synthase (trpE), la tryptophane synthase (trpAB), et la phosphoglycérate déshydrogénase (serA). Par exemple, en introduisant un ADN contenant l'opéron du tryptophane, une capacité de production de L-tryptophane peut être conférée ou améliorée. La tryptophane synthase consiste en des 10 sous-unités - et - codées par les gènes trpA et trpB, respectivement. Étant donné que l'anthranilate synthase est sensible à la rétro-inhibition par le L-tryptophane, un gène codant pour cette enzyme dans lequel une mutation de désensibilisation à la rétro-inhibition a été introduite peut être utilisé pour améliorer l'activité de cette enzyme. Étant donné que la 15 phosphoglycérate déshydrogénase est sensible à la rétro-inhibition par la L-sérine, un gène codant pour cette enzyme dans lequel une mutation de désensibilisation à la rétro-inhibition a été introduite peut être utilisé pour améliorer l'activité de cette enzyme. En outre, en augmentant l'expression de l'opéron (opéron ace) consistant en le gène de la maléate synthase 20 (aceB), le gène de l'isocitrate lyase (aceA), et le gène de l'isocitrate déshydrogénase kinase/phosphatase (ace/ (FERM BP3566) , E colt K-12 ( FERM BP-12659), E colt K-12 (FERM BP-12662), et E colt K-12 AJ12604 (FERM BP-3579), qui contient un gène codant pour une chorismate mutase-préphénate déshydratase 20 désensibilisée à la rétro-inhibition (EP488424B1). Des exemples spécifiques de bactéries productrices de L-phénylalanine et de souches parentales pour les dériver comprennent en outre, par exemple, des souches appartenant au genre Escherichla possédant une activité augmentée de la protéine codée par le gène yedA ou le gène yddG 25 (US2003-0148473A, US2003-0157667A, W003/044192). [0135] Des exemples de bactéries corynéformes possédant une capacité de production de L-phénylalanine comprennent, par exemple, les souches Corynebacterium glutarnicum BPS-13 (FERM BP-1777), K77 (FERM BP30 2062), and K78 (FERM BP-2063) (EP331145A, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 02-303495), dont l'activité phosphoénolpyruvate carboxylase ou pyruvate kinase est réduite, et la souche auxotrophe pour la tyrosine (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 05-049489). 35 [0136] Des exemples de bactéries corynéformes possédant une capacité de production de L-tyrosine comprennent, par exemple, Corynebacterium glutarnicum AJ11655 (FERM P-5836, publication de brevet japonais n° 26517), et Corynebacterium glutarnicum (Brewbacterium lactofermentum) 40 AJ12081 (FERM P-7249, brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 60-70093). [0137] 3056989 En outre, des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité de production d'acide Laminé comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité augmentée pour sécréter un acide L-aminé à partir 5 d'une cellule bactérienne. Une telle activité pour sécréter un acide L-aminé peut être augmentée, par exemple, en augmentant l'expression d'un gène codant pour une protéine responsable de la sécrétion de l'acide Laminé. Des exemples de gènes codant pour les protéines responsables de la sécrétion de divers acides aminés comprennent, par exemple, le gène 10 b2682 (yga2), le gène b2683 (ygaH), le gène b1242 (ycl7E), et le gène b3434 (yhgA (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2002-300874). [0138] En outre, des exemples de procédés pour conférer ou améliorer 15 une capacité de production d'acide Laminé comprennent également, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que la bactérie possède une activité ou des activités augmentée(s) d'une ou de plusieurs protéines sélectionnées parmi des protéines impliquées dans le glycométabolisme et des protéines impliquées dans le métabolisme 20 énergétique. [0139] Des exemples des protéines impliquées dans le glycométabolisme comprennent des protéines impliquées dans l'incorporation de saccharides et les enzymes du système de glycolyse. Des exemples de gènes codant 25 pour une protéine impliquée dans le glycométabolisme comprennent le gène de la glucose-6-phosphate isomérase (pgi, W001/02542), le gène de la pyruvate carboxylase (pyc, W099/18228, EP1092776A), le gène de la phosphoglucomutase (pgm, W003/04598), le gène de la fructose bisphosphate aldolase (pfkB, fbp, W003/04664), le gène de la 30 transaldolase (talB, W003/008611), le gène de la fumarase (fum, W001/02545), le gène d'incorporation du saccharose non-PTS (csc, EP1149911A), et le gène d'assimilation du saccharose (opéron scrAB, brevet U.S. n° 7 179 623). [0140] 35 Des exemples de gènes codant pour les protéines impliquées dans le métabolisme énergétique comprennent le gène de la transhydrogénase (pntAB, brevet U.S. n° 5 830 716) et le gène de la cytochrome bo oxydase (cyoB, EP1070376A). [0141] 40 En outre, des exemples de procédés pour conférer ou améliorer une capacité à produire des substances utiles telles que des acides Laminés comprennent, par exemple, un procédé de modification d'une bactérie de sorte que l'activité de la phosphocétolase soit augmentée 3056 9 89 51 (W02006/016705). Par conséquent, la bactérie de la présente invention peut avoir été modifiée de sorte que l'activité de la phosphocétolase soit augmentée. Ce procédé peut être particulièrement efficace pour conférer ou améliorer une capacité de production d'un acide Laminé de la famille 5 glutamate tel que l'acide L-glutamique. Des exemples de phosphocétolase comprennent la D-xylulose-5-phosphate phosphocétolase et la fructose-6-phosphate phosphocétolase. L'une quelconque de l'activité D-xylulose-5-phosphate phosphocétolase et l'activité fructose-6-phosphate phosphocétolase peut être améliorée, ou 10 les deux peuvent être améliorées. [0142] Le terme « activité D-xylulose-5-phosphate phosphocétolase » fait référence à une activité pour convertir le xylulose-5-phosphate en glycélaldéhyde-3-phosphate et phosphate d'acétyle en consommant de 15 l'acide phosphorique afin de libérer une molécule d'H20. Cette activité peut être mesurée par le procédé décrit par Goldberg, M. et al. (Methods Enzymol., 9, 515-520, 1996) ou le procédé décrit par L. Meile (J. Bacteriol., 183:2929-2936, 2001). Des exemples de D-xylulose-5- phosphate phosphocétolase comprennent celles de bactéries appartenant 20 aux genres Acetobacter, Bifidobacterium, Lactobacillus, Thiobacillus, Streptococcus, Methylococcus, Butyriwbrio, et Fibrobacter, et d'une levure appartenant aux genres Candida, R170dotorula, R170dosporieum, FÏC171a, Yarrowia, Hansenula, Iluyveromyces, Saccharomyces, Trichosporon, et vengea. Des exemples spécifiques de D-xylulose-5-phosphate 25 phosphocétolase et de gènes les codant sont décrits dans W02006/016705. [0143] Le terme « activité fructose-6-phosphate phosphocétolase » fait référence à une activité pour convertir le fructose-6-phosphate en 30 érythrose-4-phosphate et phosphate d'acétyle en consommant de l'acide phosphorique afin de libérer une molécule d'H20. Cette activité peut être mesurée par le procédé décrit par Racker, E. (Methods Enzymol., 5, 276280, 1962) ou le procédé décrit par L. Meile (J. Bacteriol., 183:2929-2936, 2001). Des exemples de fructose-6-phosphate phosphocétolase 35 comprennent celles de bactéries appartenant aux genres Acetobacter, Bifidobacterium, Chlorobium, Brucella, Methylococcus, et Gardnerella, et d'une levure appartenant aux genres Rhodotorula, Candida, et Saccharomyces. Des exemples spécifiques de fructose-6-phosphate phosphocétolase et de gènes les codant sont décrits dans 40 W02006/016705. [0144] À la fois l'activité D-xylulose-5-phosphate phosphocétolase et l'activité fructose-6-phosphate phosphocétolase peuvent également être 3056989 52 conservées par une seule enzyme (c'est-à-dire la D-xylulose-5-phosphate phosphocétolase/fructose-6-phosphate phosphocétolase). [0145] La séquence de nucléotides du gène de la phosphocétolase (gène 5 xfp) de Bifidobacterium longum JCM1217 et la séquence d'acides aminés de la phosphocétolase codée par le gène (protéine Xfp) sont montrées dans SEQ ID NO: 13 et 14, respectivement. [0146] Les gènes et les protéines utilisés pour la culture de bactéries 10 productrices d'acide Laminé peuvent posséder, par exemple, les séquences de nucléotides et les séquences d'acides aminés de gènes et de protéines connus, tels que ceux/celles exemplifié(e)s ci-dessus, respectivement. De plus, les gènes et les protéines utilisés pour la culture de bactéries productrices d'acide Laminé peuvent être des variants 15 conservateurs de gènes et de protéines connus, tels que ceux/celles exemplifié(e)s ci-dessus, respectivement. Spécifiquement, par exemple, les gènes utilisés pour la culture de bactéries productrices d'acides Laminés peuvent être chacun un gène codant pour une protéine possédant une séquence d'acides aminés d'une protéine connue, mais comprenant 20 une substitution, une délétion, une insertion, ou une addition d'un ou de plusieurs résidus d'acides aminés au niveau d'une ou de plusieurs positions, tant que la fonction d'origine de celle-ci est maintenue. Pour les variants conservateurs des gènes et des protéines, les descriptions concernant des variants conservateurs du gène de transporteur d'acide 25 dicarboxylique C4 et le transporteur d'acide dicarboxylique C4 mentionné plus loin peuvent être appliquées, mutatis mutandis. [0147] Amélioration de l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 30 La bactérie de la présente invention a été modifiée de sorte que l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 soit augmentée. La bactérie de la présente invention a été modifiée spécifiquement de sorte que l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 soit augmentée par comparaison à une souche non modifiée. La bactérie de la présente 35 invention peut être obtenue en modifiant une bactérie possédant une capacité de production d'acide Laminé de sorte que l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 soit augmentée. La bactérie de la présente invention peut également être obtenue en modifiant une bactérie de sorte que l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 soit 40 augmentée, puis en conférant ou en améliorant une capacité de production d'acide Laminé. La bactérie de la présente invention peut également être une bactérie qui a acquis une capacité de production d'acide Laminé en étant modifiée de sorte que l'activité d'un transporteur 3056 9 89 53 d'acide dicarboxylique C4 soit augmentée. La bactérie de la présente invention peut posséder, tel que requis, une telle propriété possédée par une bactérie productrice d'acide Laminé telle que susmentionnée, ainsi qu'être modifiée de sorte que l'activité d'un transporteur d'acide 5 dicarboxylique C4 soit augmentée. Par exemple, la bactérie de la présente invention peut avoir été modifiée de sorte que l'activité de la phosphocétolase soit augmentée. Les modifications pour construire la bactérie de la présente invention peuvent être réalisées dans un ordre arbitraire. 10 [0148] En modifiant une bactérie de sorte que l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 soit augmentée, une capacité de production d'acide Laminé de la bactérie peut être améliorée, et c'est-à-dire que la production d'un acide Laminé en utilisant la bactérie peut être 15 augmentée. Particulièrement, en modifiant une bactérie de sorte que l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 soit augmentée, on s'attend à ce qu'une capacité de production d'acide Laminé de la bactérie, dans des conditions dans lesquelles de l'acide L-aspartique est produit en tant que produit secondaire, puisse être améliorée, et c'est-à-dire que la 20 production d'un acide Laminé en utilisant la bactérie peut être augmentée. Des exemples de l'« augmentation de la production d'un acide Laminé » comprennent une amélioration (augmentation) de la quantité d'accumulation de l'acide Laminé dans un milieu. C'est-à-dire qu'en raison d'une augmentation de l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique 25 C4 tel qu'une protéine DctA, plus spécifiquement, en raison d'une augmentation de l'expression d'un gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 tel qu'un gène dctA, par exemple, la quantité d'accumulation d'un acide Laminé tel que l'acide L-glutamique dans un milieu peut être améliorée (augmentée). En outre, particulièrement, en 30 modifiant une bactérie de sorte que l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 soit augmentée, on s'attend à ce qu'une production secondaire d'acide L-aspartique puisse être réduite. [0149] 0-après, les transporteurs d'acide dicarboxylique C4 et les gènes 35 les codant vont être expliqués. [0150] Le terme « transporteur d'acide dicarboxylique C4 » fait référence à une protéine possédant une activité d'incorporation d'acide dicarboxylique C4. Le terme « activité d'incorporation d'acide dicarboxylique C4 » fait 40 référence à une activité d'incorporation d'un acide dicarboxylique C4 (acide carboxylique possédant 4 carbones) depuis l'extérieur d'une cellule vers l'intérieur de la cellule. Des exemples de l'acide dicarboxylique C4 comprennent l'acide aspartique. Un gène codant pour un transporteur 3056989 54 d'acide dicarboxylique C4 est également désigné « gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 ». [0151] Des exemples du gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 5 comprennent le gène dctA, le gène dcuA, et le gène dcuB. Les protéines codées par le gène dctA, le gène dcuA, et le gène dcuB sont également désignées « protéine DctA », « protéine DcuA », et « protéine DcuB », respectivement. Toutes ces protéines possèdent une activité d'incorporation d'acide aspartique. Dans la présente invention, l'activité 10 d'un seul type de transporteur d'acide dicarboxylique C4 peut être augmentée, ou les activités de deux types de transporteurs d'acide dicarboxylique C4 ou plus peuvent être augmentées. C'est-à-dire que le transporteur d'acide dicarboxylique C4 dont l'activité est augmentée peut spécifiquement consister en un ou plusieurs types de protéines 15 sélectionnées parmi une protéine DctA, une protéine DcuA, et une protéine DcuB. L'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 peut être augmentée, par exemple, en augmentant l'expression d'un gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4. C'est-à-dire que l'expression « l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 est augmentée » 20 peut signifier, par exemple, que l'expression d'un gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 est augmentée. L'expression « l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 est augmentée » peut également signifier, spécifiquement, par exemple, que l'expression d'un ou de plusieurs types de gènes sélectionnés parmi un gène dctA, un gène dctB, 25 et un gène dcuBest augmentée. [0152] Des exemples du gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 comprennent des gènes de divers organismes tels que des bactéries appartenant à la famille Enterobacgeriaceae et des bactéries 30 corynéformes. Les séquences de nucléotides des gènes de transporteur d'acide dicarboxylique C4 dérivés de divers organismes et les séquences d'acides aminés des transporteurs d'acide dicarboxylique C4 codées par celles-ci peuvent être obtenues, par exemple, à partir de bases de données publiques telles que le NCBI. Des exemples spécifiques de gène 35 dctA comprennent, par exemple, le gène dctA (NCg12506) de C glutarnicum et le gène dctA d'E colt: Des exemples spécifiques de gène dcuA comprennent, par exemple, le gène dcuA d'E colt: Des exemples spécifiques de gène dcuB comprennent, par exemple, le gène dcuB d'E colt: La séquence de nucléotides du gène dctA (NCg12506) de C 40 glutarnicum 2256 (ATCC 13869) et la séquence d'acides aminés de la protéine codée par le gène sont montrées dans SEQ ID NO: 15 et 16, respectivement. La séquence de nucléotides du gène dctA (NCBI Genel D : 948039) d'E coi/ K-12 MG1655 et la séquence d'acides aminés de la 3056 9 89 protéine codée par le gène sont montrées dans SEQ ID NO: 17 et 18, respectivement. La séquence de nucléotides du gène dcuA (NCBI Genel D : 948659) d'E cou K-12 MG1655 et la séquence d'acides aminés de la protéine codée par le gène sont montrées dans SEQ ID NO: 19 et 5 20, respectivement. La séquence de nucléotides du gène dcuB (NCBI Genel D : 948641) d'E cou K-12 MG1655 et la séquence d'acides aminés de la protéine codée par le gène sont montrées dans SEQ ID NO: 21 et 22, respectivement. C'est-à-dire que le gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 peut être, par exemple, un gène possédant la séquence 10 de nucléotides de l'un quelconque des gènes de transporteur d'acide dicarboxylique C4, tel que la séquence de nucléotides montrée en tant que SEQ ID NO: 15, 17, 19, ou 21. De plus, le transporteur d'acide dicarboxylique C4 peut être, par exemple, une protéine possédant la séquence d'acides aminés de l'un quelconque des transporteurs d'acide 15 dicarboxylique C4 exemplifiés ci-dessus, telle que la séquence d'acides aminés montrée en tant que SEQ ID NO: 16, 18, 20, ou 22. L'expression « un gène ou une protéine possède une séquence de nucléotides ou d'acides aminés » signifie qu'un gène ou une protéine comprend la séquence de nucléotides ou d'acides aminés, sauf indication contraire, et 20 comprend également les cas où un gène ou une protéine consiste en la séquence de nucléotides ou d'acides aminés. [0153] Le gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 peut être un variant de l'un quelconque des gènes de transporteur d'acide 25 dicarboxylique C4 exemplifiés ci-dessus (par exemple, un gène possédant la séquence de nucléotides montrée en tant que SEQ ID NO: 15, 17, 19, ou 21), tant que sa fonction d'origine est maintenue. De manière similaire, le transporteur d'acide dicarboxylique C4 peut être un variant de l'un quelconque des transporteurs d'acide dicarboxylique C4 exemplifiés ci- 30 dessus (par exemple, une protéine possédant la séquence d'acides aminés montrée en tant que SEQ ID NO: 16, 18, 20, ou 22), tant que sa fonction d'origine est maintenue. Un tel variant qui maintient sa fonction d'origine est également désigné « variant conservateur ». Les termes « gène dctA », « gène dcuA », et « gène dcuB» comprennent non seulement le 35 gène dctA, le gène dcuA, et le gène dcuB exemplifiés ci-dessus, respectivement, mais comprend également des variants conservateurs de ceux-ci. De manière similaire, les termes « protéine DctA », « protéine DcuA », et « protéine DcuB » comprennent non seulement la protéine DctA, la protéine DcuA, et la protéine DcuB exemplifiées ci-dessus, 40 respectivement, mais comprennent également des variants conservateurs de celles-ci. Des exemples des variants conservateurs comprennent, par exemple, des homologues et des versions artificiellement modifiées des 3056989 56 gènes de transporteur d'acide dicarboxylique C4 et des transporteurs d'acide dicarboxylique C4 exemplifiés ci-dessus. [0154] L'expression « la fonction d'origine est maintenue » signifie qu'un 5 variant d'un gène ou d'une protéine possède une fonction (comme une activité ou une propriété) correspondant à la fonction (comme une activité ou une propriété) du gène ou de la protéine d'origine. L'expression « la fonction d'origine est maintenue » utilisée pour un gène signifie qu'un variant du gène code pour une protéine qui maintient la fonction d'origine. 10 C'est-à-dire que l'expression « la fonction d'origine est maintenue » utilisée pour le gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 signifie qu'un variant du gène code pour une protéine possédant une activité d'incorporation d'acide dicarboxylique C4, comme une activité d'incorporation d'acide aspartique. En outre, l'expression « la fonction 15 d'origine est maintenue » utilisée pour le transporteur d'acide dicarboxylique C4 signifie qu'un variant de la protéine possède une activité d'incorporation d'acide dicarboxylique C4, comme une activité d'incorporation d'acide aspartique. [0155] 20 L'activité d'incorporation d'acide dicarboxylique C4 d'une protéine peut être mesurée, par exemple, en incubant des cellules bactériennes exprimant la protéine avec un acide dicarboxylique C4, et en mesurant l'incorporation protéine-dépendante de l'acide dicarboxylique C4 dans les cellules. 25 [0156] 0-après, des exemples les variants conservateurs vont être expliqués. [0157] Des homologues des gènes de transporteur d'acide dicarboxylique 30 C4 ou des homologues des transporteurs d'acide dicarboxylique C4 peuvent être facilement obtenus à partir de bases de données publiques, par exemple, par une recherche BLAST ou une recherche FASTA en utilisant l'une quelconque des séquences de nucléotides des gènes de transporteur d'acide dicarboxylique C4 exemplifiées ci-dessus ou l'une 35 quelconque des séquences d'acides aminés des transporteurs d'acide dicarboxylique C4 exemplifiés ci-dessus en tant que séquence de requête. En outre, des homologues des gènes de transporteur d'acide dicarboxylique C4 peuvent être obtenus, par exemple, par une PCR en utilisant un chromosome de divers organismes en tant que matrice, et des 40 oligonucléotides préparés en se basant sur l'une quelconque des séquences de nucléotides de ces gènes de transporteur d'acide dicarboxylique C4 connus en tant qu'amorces. [0158] 3056989 57 Le transporteur d'acide dicarboxylique C4 peut être un gène codant pour une protéine possédant l'une quelconque des séquences d'acides aminés susmentionnées (par exemple, la séquence d'acides aminés montrée en tant que SEQ ID NO: 16, 18, 20, ou 22), mais qui comprend 5 une substitution, une délétion, une insertion, et/ou une addition d'un ou de plusieurs résidus d'acides aminés au niveau d'une ou plusieurs positions, tant que la fonction d'origine est maintenue. Par exemple, l'extrémité N-terminale et/ou l'extrémité C-terminale de la protéine codée peut être rallongée ou raccourcie. Bien que le nombre désigné par le 10 terme « une ou plusieurs » mentionné ci-dessus puisse différer en fonction des positions des résidus d'acides aminés dans la structure tridimensionnelle de la protéine ou des types de résidus d'acides aminés, spécifiquement, il est, par exemple, de 1 à 50, 1 à 40, ou 1 à 30, de préférence de 1 à 20, de manière davantage préférée de 1 à 10, encore 15 de manière davantage préférée de 1 à 5, particulièrement de préférence de 1 à 3. [0159] La substitution, délétion, insertion, et/ou addition d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés susmentionnée(s) sont/est une mutation 20 conservatrice qui maintient la fonction normale de la protéine. Des exemples typiques de la mutation conservatrice sont des substitutions conservatrices. La substitution conservatrice est une mutation dans laquelle la substitution se produit mutuellement parmi Plie, Trp, et Tyr, si le site de substitution est un acide aminé aromatique ; parmi Leu, Ile, et 25 Val, si c'est un acide aminé hydrophobe ; entre Gln et Asn, si c'est un acide aminé polaire ; parmi Lys, Arg, et His, si c'est un acide aminé basique ; entre Asp et Glu, si c'est un acide aminé acide ; et entre Ser et Thr, si c'est un acide aminé possédant un groupe hydroxyle. Des exemples de substitutions considérées comme des substitutions conservatrices 30 comprennent, spécifiquement, une substitution de Ser ou Thr à Ala, une substitution de Gln, His, ou Lys à Arg, une substitution de Glu, Gln, Lys, His, ou Asp à Asn, une substitution de Asn, Glu, ou Gln à Asp, une substitution de Ser ou Ala à Cys, une substitution de Asn, Glu, Lys, His, Asp, ou Arg à Gln, une substitution de Gly, Asn, Gln, Lys, ou Asp à Glu, 35 une substitution de Gly, Asn, Gln, Lys, ou Asp à Glu, une substitution de Pro à Gly, une substitution de Asn, Lys, Gln, Arg, ou Tyr à His, une substitution de Leu, Met, Val, ou Plie à Ile, une substitution de Ile, Met, Val, ou Plie à Leu, une substitution de Asn, Glu, Gln, His, ou Arg à Lys, une substitution de Ile, Leu, Val, ou Plie à Met, une substitution de Trp, 40 Tyr, Met, Ile, ou Leu à Pte, une substitution de Thr ou Ala à Ser, une substitution de Ser ou Ala à Thr, une substitution de Plie ou Tyr à Trp, une substitution de His, Pte, ou Trp à Tyr, et une substitution de Met, Ile, ou Leu à Val. En outre, une telle substitution, délétion, insertion, ou 3056 9 89 58 addition de résidus d'acides aminés telle que mentionnée ci-dessus comprend une mutation survenant à l'état naturel en raison d'une différence individuelle, ou d'une différence d'espèce de l'organisme à partir duquel le gène est dérivé (mutant ou variant). 5 [0160] Le gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 peut être un gène codant pour une protéine possédant une séquence d'acides aminés montrant une homologie de, par exemple, 50 % ou plus, 65 % ou plus, ou 80 % ou plus, de préférence 90 % ou plus, de manière davantage 10 préférée 95 % ou plus, de manière encore davantage préférée 97 % ou plus, particulièrement de préférence de 99 % ou plus, avec la séquence d'acides aminés totale de l'une quelconque des séquences d'acides aminés susmentionnées, tant que la fonction d'origine est maintenue. Dans cette description, « homologie » signifie « identité ». 15 [0161] Le gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 peut également être un ADN qui est capable de s'hybrider dans des conditions stringentes avec une sonde qui peut être préparée à partir de l'une quelconque des séquences de nucléotides susmentionnées (par exemple, la séquence de 20 nucléotides montrée en tant que SEQ ID NO: 15, 17, 19, ou 21), comme une séquence complémentaire à une séquence partielle ou entière de l'une quelconque des séquences de nucléotides susmentionnées, tant que la fonction d'origine est maintenue. Le terme « conditions stringentes » fait référence à des conditions dans lesquelles ce qu'on appelle un hydride 25 spécifique est formé, et un hybride non spécifique n'est pas formé. Des exemples des conditions stringentes comprennent celles dans lesquelles des ADN fortement homologues s'hybrident l'un à l'autre, par exemple, des ADN au minimum 50 %, 65 %, ou 80 % homologues, de préférence au minimum 90 % homologues, de manière davantage préférée au 30 minimum 95 % homologues, de manière encore davantage préférée au minimum 97 % homologues, particulièrement de préférence au minimum 99 % homologues, s'hybrident l'un à l'autre, et des ADN moins homologues que ceux-ci-dessus ne s'hybrident pas l'un à l'autre, ou des conditions de lavage d'une hybridation de Southern typique, c'est-à-dire 35 des conditions de lavage à raison d'une seule fois, de préférence 2 ou 3 fois, à une concentration en sel et à une température correspondant à du SSC lx, SDS à 0,1 % à 60 °C, de préférence SSC 0,1x, SDS à 0,1 % à 60 °C, de manière davantage préférée SSC 0,1x, SDS à 0,1 % à 68 °C. [0162] 40 La sonde utilisée pour l'hybridation susmentionnée peut faire partie d'une séquence qui est complémentaire au gène tel que décrit ci-dessus. Une telle sonde peut être préparée par PCR en utilisant des oligonucléotides préparés en se basant sur une séquence de gène connue 3056989 59 en tant qu'amorces et un fragment d'ADN contenant l'un quelconque des gènes susmentionnés en tant que matrice. En tant que sonde, par exemple, un fragment d'ADN possédant une longueur d'environ 300 pb peut être utilisé. Lorsqu'un fragment d'ADN possédant une longueur 5 d'environ 300 pb est utilisé en tant que sonde, les conditions de lavage de l'hybridation peuvent être, par exemple, 50 °C, SSC 2x et SDS à 0,1 %. [0163] En outre, étant donné que la dégénérescence des codons diffère en fonction de l'hôte, des codons arbitraires dans le gène de transporteur 10 d'acide dicarboxylique C4 peuvent être remplacés par des codons équivalents respectifs. C'est-à-dire que le gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 peut être un variant de l'un quelconque des gènes de transporteur d'acide dicarboxylique C4 exemplifiés ci-dessus en raison de la dégénérescence du code génétique. Par exemple, le gène de 15 transporteur d'acide dicarboxylique C4 peut être un gène modifié de sorte qu'il possède des codons optimaux en fonction des fréquences des codons chez un hôte devant être utilisé. [0164] Le pourcentage de l'identité de séquence entre deux séquences 20 peut être déterminé, par exemple, en utilisant un algorithme mathématique. Des exemples non limitatifs d'un tel algorithme mathématique comprennent l'algorithme de Myers et Miller 1988) CABIOS 4:11-17, l'algorithme d'homologie locale de Smith et al (1981) Adv. Appl. Math. 2:482, l'algorithme d'alignement d'homologie de Needleman et 25 Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443-453, le procédé de recherche d'homologie de Pearson et Lipman (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. 85:24442448, et une version modifiée de l'algorithme de Karlin et Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264, tel que celui décrit dans Karlin et Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877. 30 [0165] En utilisant un programme basé sur un tel algorithme mathématique, une comparaison de séquences (c'est-à-dire un alignement) pour déterminer l'identité de séquence peut être réalisée. Le programme peut être exécuté de manière appropriée par un ordinateur. 35 Des exemples d'un tel programme comprennent, sans s'y limiter, le programme CLUSTAL de PC/Gene (disponible auprès de Intelligenetics, Mountain View, Calif.), le programme ALIGN (Version 2.0), et GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA, et TFASTA du progiciel de Wisconsin Genetics, Version 8 (disponible auprès de Genetics Computer Group (GCG), 575 40 Science Drive, Madison, Wis., États-Unis). Un alignement en utilisant ces programmes peut être réalisé en utilisant, par exemple, les paramètres initiaux. Le programma CLUSTAL est bien décrit dans Higgins et al. (1988) Gene 73:237-244 (1988), Higgins et al. (1989) CABIOS 5:151-153, Corpet 3056989 et al. (1988) Nucleic Acids Res. 16:10881-90, Huang et al. (1992) CABIOS 8:155-65, et Pearson et al. (1994) Meth. Mol. Biol. 24:307-331. [0166] Afin d'obtenir une séquence de nucléotides homologue à une 5 séquence de nucléotides cible, en particulier, par exemple, une recherche de nucléotides par BLAST peut être réalisée en utilisant le programme BLASTN avec un score de 100 et une longueur de mot de 12. Afin d'obtenir une séquence d'acides aminés homologue à une protéine cible, en particulier, par exemple, une recherche de protéines par BLAST peut 10 être réalisée en utilisant le programme BLASTX avec un score de 50 et une longueur de mot de 3. Voir http://www.ncbi.nlm.nih.gov pour une recherche de nucléotides par BLAST et une recherche de protéines par BLAST. De plus, Gapped BLAST (BLAST 2.0) peut être utilisé afin d'obtenir un alignement comprenant une/des brèche(s) à des fins de comparaison. 15 De plus, PSI-BLAST peut être utilisé afin de réaliser une recherche répétitive pour détecter des relations distantes entre des séquences. Voir Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389 pour Gapped BLAST et PSI-BLAST. Lors de l'utilisation de BLAST, Gapped BLAST, ou PSI-BLAST, les paramètres initiaux de chaque programme (par exemple, BLASTN pour 20 les séquences de nucléotides, et BLASTX pour les séquences d'acides aminés) peuvent être utilisés. Un alignement peut également être réalisé manuellement. [0167] L'identité de séquence entre deux séquences est calculée en tant 25 que rapport des résidus correspondants dans les deux séquences lors d'un alignement des deux séquences de sorte qu'elles montrent une correspondance maximale l'une avec l'autre. [0168] Les descriptions susmentionnées concernant des variants 30 conservateurs des gènes et des protéines peuvent être appliquées mutatis mutandis aux variants de protéines arbitraires telles que les enzymes d'un système de biosynthèse d'acide Laminé et les gènes les codant. [0169] Procédés pour augmenter l'activité d'une protéine 35 0-après, les procédés pour augmenter l'activité d'une protéine telle que le transporteur d'acide dicarboxylique C4 vont être expliqués. [0170] L'expression « l'activité d'une protéine est augmentée » signifie que l'activité de la protéine est augmentée par comparaison à une souche non 40 modifiée. Spécifiquement, l'expression « l'activité d'une protéine est augmentée » signifie que l'activité de la protéine par cellule est augmentée par comparaison à celle d'une souche non modifiée. Le terme « souche non modifiée » utilisé dans la présente fait référence à une 3056 9 89 61 souche de contrôle qui n'a pas été modifiée de sorte que l'activité d'une protéine cible soit augmentée. Des exemples de la souche non modifiée comprennent une souche de type sauvage et une souche parentale. Des exemples spécifiques de la souche non modifiée comprennent les souches 5 de type respectif des espèces de bactéries. Des exemples spécifiques de la souche non modifiée comprennent également des souches exemplifiées ci-dessus par rapport à la description des bactéries. C'est-à-dire que, dans un mode de réalisation, l'activité d'une protéine peut être augmentée par comparaison à une souche de type, c'est-à-dire la souche de type de 10 l'espèce à laquelle la bactérie de la présente invention appartient. Dans un autre mode de réalisation, l'activité d'une protéine peut également être augmentée par comparaison à la souche C glutamicum ATCC 13032. Dans un autre mode de réalisation, l'activité d'une protéine peut également être augmentée par comparaison à la souche C glutamicum 15 2256 (ATCC 13869). Dans un autre mode de réalisation, l'activité d'une protéine peut également être augmentée par comparaison à la souche E colt' K-12 MG1655. Dans un autre mode de réalisation, l'activité d'une protéine peut également être augmentée par comparaison à la souche F? ananatis AJ13355. L'état selon lequel « l'activité d'une protéine est 20 augmentée » peut également être exprimé par « l'activité d'une protéine est améliorée ». Plus spécifiquement, l'expression « l'activité d'une protéine est augmentée » peut signifier que le nombre de molécules de la protéine par cellule est augmenté, et/ou que la fonction de chaque molécule de la protéine est augmentée par comparaison à celles d'une 25 souche non modifiée. C'est-à-dire que le terme « activité » dans l'expression « l'activité d'une protéine est augmentée » n'est pas limité à l'activité catalytique de la protéine, mais peut également désigner la quantité de transcription d'un gène (c'est-à-dire la quantité d'ARNm) codant pour la protéine, ou la quantité de traduction de la protéine (c'est- 30 à-dire la quantité de la protéine). En outre, l'état selon lequel « l'activité d'une protéine est augmentée » comprend non seulement un état selon lequel l'activité d'une protéine cible est augmentée dans une souche possédant l'activité de la protéine cible de manière inhérente, mais également un état selon lequel l'activité d'une protéine cible est conférée à 35 une souche ne possédant pas l'activité de la protéine cible de manière inhérente. En outre, tant que l'activité de la protéine est en fin de compte augmentée, l'activité d'une protéine cible contenue de manière inhérente dans un hôte peut être atténuée et/ou éliminée, puis un type approprié de la protéine cible peut être conféré à l'hôte. 40 [0171] Le degré d'augmentation de l'activité d'une protéine n'est pas particulièrement limité, tant que l'activité de la protéine est augmentée par comparaison à une souche non modifiée. L'activité de la protéine peut être 3056989 62 augmentée, par exemple, de 1,5 fois ou plus, 2 fois ou plus, ou 3 fois ou plus par rapport à celle d'une souche non modifiée. En outre, lorsque la souche non modifiée ne possède pas l'activité de la protéine cible, il est suffisant que la protéine soit produite en conséquence de l'introduction du 5 gène codant pour la protéine et, par exemple, la protéine peut être produite dans une mesure telle que son activité peut être mesurée. [0172] La modification pour augmenter l'activité d'une protéine peut être obtenue, par exemple, en augmentant l'expression d'un gène codant pour 10 la protéine. L'expression « l'expression d'un gène est augmentée » signifie que l'expression du gène est augmentée par comparaison à une souche non modifiée comme une souche de type sauvage et une souche parentale. Spécifiquement, l'expression « l'expression d'un gène est augmentée » signifie que la quantité d'expression du gène par cellule est 15 augmentée par comparaison à celle d'une souche non modifiée. Plus spécifiquement, l'expression « l'expression d'un gène est augmentée » peut signifier que la quantité de transcription du gène (c'est-à-dire la quantité d'ARNm) est augmentée, et/ou que la quantité de traduction du gène (c'est-à-dire la quantité de la protéine exprimée à partir du gène) est 20 augmentée. L'état selon lequel « l'expression d'un gène est augmentée » peut également être désigné « l'expression d'un gène est améliorée ». L'expression d'un gène peut être augmentée, par exemple, de 1,5 fois ou plus, 2 fois ou plus, ou 3 fois ou plus par rapport à celle d'une souche non modifiée. En outre, l'état selon lequel « l'expression d'un gène est 25 augmentée » comprend non seulement un état selon lequel la quantité d'expression d'un gène cible est augmentée dans une souche qui exprime le gène cible de manière inhérente, mais également un état selon lequel le gène est introduit dans une souche qui n'exprime pas le gène cible de manière inhérente, et qu'il est exprimé dans celle-ci. C'est-à-dire que la 30 phrase « l'expression d'un gène est augmentée » peut également signifier, par exemple, qu'un gène cible est introduit dans une souche qui ne possède pas le gène, et qu'il est exprimé dans celle-ci. [0173] L'expression d'un gène peut être augmentée, par exemple, en 35 augmentant le nombre de copies du gène. [0174] Le nombre de copies d'un gène peut être augmenté en introduisant le gène dans le chromosome d'un hôte. Un gène peut être introduit dans un chromosome, par exemple, en utilisant une recombinaison homologue 40 (Miller, J.H., Experiments in Molecular Genetics, 1972, Cold Spring Harbor Laboratory). Des exemples du procédé de transfert de gène utilisant une recombinaison homologue comprennent, par exemple, un procédé d'utilisation d'un ADN linéaire tel qu'une intégration dirigée par Red 3056989 63 (Datsenko, K.A., et Wanner, B.L., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97:66406645 (2000)), un procédé utilisant un plasmide contenant une origine de réplication sensible à la température, un procédé utilisant un plasmide capable de transfert par conjugaison, un procédé utilisant un vecteur 5 suicide ne possédant pas d'origine de réplication qui fonctionne chez un hôte, et un procédé de transduction en utilisant un phage. Une seule copie, ou deux copies ou plus d'un gène peuvent être introduites. Par exemple, en réalisant une recombinaison homologue en utilisant une séquence qui est présente en de multiples copies sur un chromosome en 10 tant que cible, de multiples copies d'un gène peuvent être introduites dans le chromosome. Des exemples d'une telle séquence qui est présente en de multiples copies sur un chromosome comprennent des ADN répétitifs, et des répétitions inversées localisées aux deux extrémités d'un transposon. En variante, une recombinaison homologue peut être réalisée en utilisant 15 une séquence appropriée sur un chromosome comme un gène non nécessaire à la production d'une substance cible en tant que cible. En outre, un gène peut également être introduit de manière aléatoire dans un chromosome en utilisant un transposon ou un Mini-Mu (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2-109985, brevet U.S. n° 5 882 888, 20 EP805867B1). [0175] L'introduction d'un gène cible dans un chromosome peut être confirmée par une hybridation de Southern en utilisant une sonde possédant une séquence complémentaire au gène entier ou à une partie 25 de celui-ci, une PCR en utilisant des amorces préparées en se basant sur la séquence du gène, ou analogue. [0176] En outre, le nombre de copies d'un gène peut également être augmenté en introduisant un vecteur contenant le gène dans un hôte. Par 30 exemple, le nombre de copies d'un gène cible peut être augmenté en ligaturant un fragment d'ADN contenant le gène cible avec un vecteur qui fonctionne chez un hôte afin de construire un vecteur d'expression du gène, et en transformant l'hôte avec le vecteur d'expression. Le fragment d'ADN contenant le gène cible peut être obtenu, par exemple, par PCR en 35 utilisant l'ADN génomique d'un micro-organisme possédant le gène cible en tant que matrice. En tant que vecteur, un vecteur capable de réplication autonome dans la cellule de l'hôte peut être utilisé. Le vecteur est de préférence un vecteur à copies multiples. En outre, le vecteur possède de préférence un marqueur comme un gène de résistance aux 40 antibiotiques pour la sélection du transformant. En outre, le vecteur peut comporter un promoteur et/ou un terminateur pour exprimer le gène introduit. Le vecteur peut être, par exemple, un vecteur dérivé d'un plasmide bactérien, un vecteur dérivé d'un plasmide de levure, un vecteur 3056989 64 dérivé d'un bactériophage, un cosmide, un phagémide, ou analogue. Des exemples spécifiques de vecteur capable de réplication autonome dans des bactéries Enterobacteriaceae telles qu'Escherichia colt' comprennent, par exemple, pUC19, pUC18, pHSG299, pHSG399, pHSG398, pBR322, 5 pSTV29 (tous étant disponibles auprès de Takara Bio), pACYC184, pMW219 (NIPPON GENE), pTrc99A (Pharmacia), les vecteurs de la série pPROK (Clontech), pKK233-2 (Clontech), les vecteurs de la série pET (Novagen), les vecteurs de la série pQE (QIAGEN), pCold TF DNA (Takara Bio), les vecteurs de la série pACYC, et le vecteur à vaste spectre d'hôtes 10 RSF1010. Des exemples spécifiques de vecteurs capables de réplication autonome dans des bactéries corynéformes comprennent, par exemple, pHM1519 (Agric. Biol. Chem., 48, 2901-2903 (1984)) ; pAM330 (Agric. Biol. Chem., 48, 2901-2903 (1984)) ; des plasmides obtenus en améliorant ceux-ci et possédant un gène de résistance à un médicament ; 15 le plasmide pCRY30 (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 3-210184 ; les plasmides pCRY21, pCRY2KE, pCRY2KX, pCRY31, pCRY3KE, et pCRY3KX (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2-72876 et brevet U.S. n° 5 185 262) ; les plasmides pCRY2 et pCRY3 (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 1-191686) ; 20 pAJ655, pAJ611, et pAJ1844 (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 58-192900) ; pCG1 (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 57-134500) ; pCG2 (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 58-35197) ; pCG4 et pCG11 (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 57-183799) ; pVK7 (brevet japonais mis à l'inspection 25 publique (Kokai) n° 10-215883) ; pVK9 (US2006-0141588) ; pVC7 (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 9-070291) ; pVS7 (W02013/069634). [0177] Lorsqu'un gène est introduit, il est suffisant que le gène soit abrité 30 de manière exprimable par un hôte. Spécifiquement, il est suffisant que le gène soit abrité par un hôte de sorte qu'il soit exprimé sous le contrôle d'un promoteur qui fonctionne chez l'hôte. Le promoteur n'est pas particulièrement limité tant qu'il fonctionne chez l'hôte. Le terme « promoteur qui fonctionne chez un hôte » fait référence à un 35 promoteur qui montre une activité promotrice chez l'hôte. Le promoteur peut être un promoteur dérivé de l'hôte, ou un promoteur hétérogène. Le promoteur peut être le promoteur natif du gène devant être introduit, ou un promoteur d'un autre gène. En tant que promoteur, par exemple, un tel promoteur plus puissant tel que mentionné plus loin peut également 40 être utilisé. [0178] Un terminateur pour la terminaison de la transcription d'un gène peut être localisé en aval du gène. Le terminateur n'est pas 3056989 particulièrement limité tant qu'il fonctionne chez l'hôte. Le terminateur peut être un terminateur dérivé de l'hôte, ou un terminateur hétérogène. Le terminateur peut être le terminateur natif du gène devant être introduit, ou un terminateur d'un autre gène. Des exemples spécifiques du 5 terminateur comprennent, par exemple, le terminateur T7, le terminateur T4, le terminateur du phage fd, le terminateur tet, et le terminateur trpA. [0179] Des vecteurs, promoteurs, et terminateurs disponibles dans divers micro-organismes sont décrits en détail dans « Fundamental Microbiology 10 Vol. 8, Genetic Engineering, KYORITSU SHUPPAN CO., LTD, 1987 », et ceux-ci peuvent être utilisés. [0180] En outre, lorsque deux des gènes ou plus sont introduits, il est suffisant que les gènes soient chacun abrités de manière exprimable par 15 l'hôte. Par exemple, tous les gènes peuvent être portés par un seul vecteur d'expression ou un chromosome. En outre, les gènes peuvent être séparément portés par deux vecteurs d'expression ou plus, ou être séparément portés par un seul ou deux vecteurs d'expression ou plus et un chromosome. Un opéron constitué de deux gènes ou plus peut 20 également être introduit. Le cas d'une « introduction de deux gènes ou plus » comprend, par exemple, des cas d'introduction de gènes respectifs codant pour deux types de protéines ou plus (telles que des enzymes), l'introduction de gènes respectifs codant pour deux sous-unités ou plus constituant un seul complexe protéique (comme un complexe 25 enzymatique), et une combinaison des susdits cas. [0181] Le gène devant être introduit n'est pas particulièrement limité tant qu'il code pour une protéine qui fonctionne chez l'hôte. Le gène devant être introduit peut être un gène dérivé de l'hôte, ou peut être un gène 30 hétérogène. Le gène devant être introduit peut être obtenu, par exemple, par PCR en utilisant des amorces conçues en se basant sur la séquence de nucléotides du gène, et en utilisant l'ADN génomique d'un organisme possédant le gène, d'un plasmide portant le gène, ou analogue, en tant que matrice. Le gène devant être introduit peut également être totalement 35 synthétisé, par exemple, en se basant sur la séquence de nucléotides du gène (Gene, 60(1), 115-127 (1987)). Le gène obtenu peut être utilisé tel quel, ou après avoir été modifié tel que requis. Un gène peut être modifié par une technique connue. Par exemple, une mutation cible peut être introduite dans un site cible d'un ADN par le procédé de mutagenèse 40 dirigée. C'est-à-dire que la région codante d'un gène peut être modifiée par le procédé de mutagenèse dirigée de sorte qu'un site spécifique de la protéine codée comprenne une substitution, une délétion, une insertion, et/ou une addition de résidus d'acides aminés. Des exemples du procédé 3056 9 89 66 de mutagenèse dirigée comprennent le procédé utilisant une PCR (Higuchi, R., 61, in PCR Technology, Erlich, H.A. Eds., Stockton Press (1989) ; Carter, P., Meth. in Enzymol., 154, 382 (1987)), et le procédé utilisant un phage (Kramer, W. and Frits, H.J., Meth. in Enzymol., 154, 350 5 (1987) ; Kunkel, T.A. et al., Meth. in Enzymol., 154, 367 (1987)). [0182] En conséquence, lorsqu'une protéine fonctionne comme un complexe consistant en une pluralité de sous-unités, une partie ou l'intégralité de la pluralité de sous-unités peut être modifiée, tant que 10 l'activité de la protéine est en fin de compte augmentée. C'est-à-dire, par exemple, que lorsque l'activité d'une protéine est augmentée en augmentant l'expression d'un gène, l'expression d'une partie ou de l'intégralité de la pluralité de gènes qui codent pour les sous-unités peut être améliorée. Il est généralement préférable d'améliorer l'expression de 15 l'intégralité de la pluralité des gènes codant pour les sous-unités. En outre, les sous-unités constituant le complexe peuvent être dérivées d'un seul type d'organisme ou de deux types d'organismes ou plus, tant que le complexe possède une fonction de la protéine cible. C'est-à-dire, par exemple, que des gènes du même organisme codant pour une pluralité de 20 sous-unités peuvent être introduits chez un hôte, ou que des gènes de différents organismes codant pour une pluralité de sous-unités peuvent être introduits chez un hôte. [0183] En outre, l'expression d'un gène peut être augmentée en 25 améliorant l'efficacité de la transcription du gène. De plus, l'expression d'un gène peut également être augmentée en améliorant l'efficacité de la traduction du gène. L'efficacité de la transcription du gène et l'efficacité de la traduction du gène peuvent être améliorées, par exemple, en modifiant une séquence de contrôle de l'expression du gène. Le terme « séquence 30 de contrôle de l'expression » fait collectivement référence à des sites qui affectent l'expression d'un gène. Des exemples de la séquence de contrôle de l'expression comprennent, par exemple, un promoteur, une séquence Shine-Dalgarno (SD) (également désignée site de fixation du ribosome (RBS)), et une région espaceur entre le RBS et le codon d'initiation. Des 35 séquences de contrôle de l'expression peuvent être identifiées en utilisant un vecteur de recherche de promoteur ou un logiciel d'analyse de gène tel que GENETYX. Ces séquences de contrôle de l'expression peuvent être modifiées, par exemple, par un procédé utilisant un vecteur sensible à la température, ou le procédé d'intégration dirigé par Red 40 (W02005/010175). [0184] L'efficacité de la transcription d'un gène peut être améliorée, par exemple, en remplaçant le promoteur du gène sur un chromosome par un 3056989 67 promoteur plus puissant. Le terme « promoteur plus puissant » fait référence à un promoteur qui permet d'obtenir une transcription améliorée d'un gène par comparaison à un promoteur de type sauvage du gène existant de manière inhérente. Des exemples de promoteurs plus 5 puissants comprennent, par exemple, les promoteurs d'expression élevée connus tels que le promoteur T7, le promoteur trp, le promoteur lac, le promoteur thr, le promoteur tac, le promoteur trc, le promoteur tet, le promoteur araBAD, le promoteur rpoH, le promoteur msrA, le promoteur Pm1 (dérivé du genre Sifidobacterium), le promoteur PR, et le promoteur 10 PL. Des exemples de promoteurs plus puissants pouvant être utilisés dans des bactéries corynéformes comprennent, par exemple, le promoteur P546 modifié de manière artificielle (Appt. Microbiol. Biotechnol., 53, 674-679 (2000)), les promoteurs pta, aceA, aceB, adh, et amyEinductibles dans les bactéries corynéformes avec de l'acide acétique, de l'éthanol, de l'acide 15 pyruvique, ou analogues, les promoteurs cspB, SOD, et tuf (EF-Tu), qui sont de puissants promoteurs capables d'entraîner une quantité d'expression importante dans des bactéries corynéformes (Journal of Biotechnology, 104 (2003) 311-323; Appl. Environ. Microbiol., décembre 2005 ; 71 (12):8587-96), ainsi que le promoteur lac, le promoteur tac, et 20 le promoteur trc. En outre, en tant que promoteur plus puissant, un type hautement actif de promoteur existant peut également être obtenu en utilisant divers gènes rapporteurs. Par exemple, en faisant en sorte que les régions -35 et -10 d'une région de promoteur soient plus proches de la séquence consensus, l'activité du promoteur peut être améliorée 25 (W000/18935). Des exemples de promoteur de type hautement actif comprennent divers promoteurs de type tac (Katashkina JI et al., demande de brevet de la Fédération de Russie n° 2006134574) et le promoteur pnlp8 (W02010/027045). Des procédés pour évaluer la puissance de promoteurs et des exemples de puissants promoteurs sont 30 décrits dans l'article de Goldstein et al. (Prokaryotic Promoters in Biotechnology, Biotechnol. Annu. Rev., 1, 105-128 (1995)), et ainsi de suite. [0185] L'efficacité de la traduction d'un gène peut être améliorée, par 35 exemple, en remplaçant la séquence Shine-Dalgarno (SD) (également désignée site de fixation du ribosome (RBS)) du gène sur un chromosome par une séquence SD plus puissante. La « séquence SD plus puissante » désigne une séquence SD qui permet d'obtenir une traduction améliorée d'un ARNm par comparaison à la séquence SD de type sauvage du gène 40 existant de manière inhérente. Des exemples de séquences SD plus puissantes comprennent, par exemple, le RBS du gène 10 dérivé du phage T7 (Olins P.O. et al, Gene, 1988, 73, 227-235). En outre, on sait qu'une substitution, insertion, ou délétion de plusieurs nucléotides dans une 3056 9 89 68 région espaceur entre un RBS et le codon d'initiation, particulièrement dans une séquence immédiatement en amont du codon d'initiation (UTR5'), affecte significativement la stabilité et l'efficacité de la traduction d'un ARNm et, par conséquent, l'efficacité de la traduction d'un gène peut 5 également être améliorée en les modifiant. [0186] L'efficacité de la traduction d'un gène peut également être améliorée, par exemple, en modifiant des codons. Par exemple, l'efficacité de la traduction du gène peut être améliorée en remplaçant un codon rare 10 présent dans le gène par un codon synonyme utilisé plus fréquemment. C'est-à-dire que le gène devant être introduit peut être modifié, par exemple, de sorte à contenir des codons optimaux en fonction des fréquences des codons observées chez un hôte devant être utilisé. Des codons peuvent être remplacés, par exemple, par le procédé de 15 mutagenèse dirigée. En variante, un fragment de gène dans lequel des codons cibles sont remplacés peut être totalement synthétisé. Les fréquences des codons dans divers organismes sont décrites dans la « Codon Usage Database » (http://www.kazusa.or.jp/codon; Nakamura, Y. et al, Nucl. Acids Res., 28, 292 (2000)). 20 [0187] En outre, l'expression d'un gène peut également être augmentée en amplifiant un régulateur qui augmente l'expression du gène, ou en supprimant ou en atténuant un régulateur qui réduit l'expression du gène. [0188] 25 De tels procédés pour augmenter l'expression d'un gène tel que susmentionné peuvent être utilisés indépendamment ou en une combinaison arbitraire. [0189] En outre, la modification qui augmente l'activité d'une protéine peut 30 également être obtenue, par exemple, en améliorant l'activité spécifique de l'enzyme. Une amélioration de l'activité spécifique comprend également une désensibilisation à la rétro-inhibition. C'est-à-dire que lorsqu'une protéine est sensible à une rétro-inhibition par un métabolite, l'activité de la protéine peut être augmentée en faisant en sorte que la bactérie abrite 35 un gène codant pour une protéine mutante qui a été désensibilisée à la rétro-inhibition. Dans la présente invention, le terme « désensibilisation à la rétro-inhibition » comprend une élimination complète de la rétro-inhibition, et une atténuation de la rétro-inhibition, sauf indication contraire. De plus, un état de « désensibilisation à la rétro-inhibition », 40 c'est-à-dire un état selon lequel la rétro-inhibition est éliminée ou atténuée, peut également être désigné « tolérance à la rétro-inhibition ». Une protéine montrant une activité spécifique améliorée peut être obtenue, par exemple, par une recherche de divers organismes. En outre, 3056 9 89 69 un type hautement actif d'une protéine existante peut également être obtenu en introduisant une mutation dans la protéine existante. La mutation devant être introduite peut être, par exemple, une substitution, une délétion, une insertion, ou une addition d'un ou de plusieurs résidus 5 d'acides aminés au niveau d'une ou de plusieurs positions de la protéine. La mutation peut être introduite, par exemple, par un tel procédé de mutagenèse dirigée tel que mentionné ci-dessus. La mutation peut également être introduite, par exemple, par un traitement de mutagenèse. Des exemples du traitement de mutagenèse comprennent une irradiation 10 de rayons X, une irradiation d'ultraviolets, et un traitement avec un agent mutagène tel que la N-méthyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG), le méthanesulfonate d'éthyle (EMS), et le méthanesulfonate de méthyle (MMS). En outre, une mutation aléatoire peut être induite en traitant directement un ADN in vitro avec de l'hydroxylamine. Une amélioration de 15 l'activité spécifique peut être indépendamment utilisée, ou peut être utilisée en une combinaison arbitraire avec de tels procédés d'amélioration de l'expression d'un gène tels que mentionnés ci-dessus. [0190] Le procédé de transformation n'est pas particulièrement limité, et 20 des procédés conventionnellement connus peuvent être utilisés. On peut utiliser, par exemple, un procédé de traitement de cellules receveuses avec du chlorure de calcium afin d'augmenter leur perméabilité pour l'ADN, qui a été rapporté pour la souche Escherichia col K-12 ((Mandel, M. and Higa, A., J. Mol. Biol., 1970, 53, 159-162), et un procédé de 25 préparation de cellules compétentes à partir de cellules qui sont en phase de croissance, suivi d'une transformation avec un ADN, qui a été rapporté pour Bacilus subtils (Duncan, C.H., Wilson, G.A. et Young, F.E., Gene, 1977, 1:153-167). En variante, on peut également utiliser un procédé de fabrication de cellules receveuses d'ADN dans des protoplastes ou des 30 sphéroplastes, qui peuvent facilement incorporer un ADN recombinant, suivi de l'introduction d'un ADN recombinant dans les cellules receveuses d'ADN, qui est connu pour être applicable à Bacilus subtils, aux actinomycètes, et aux levures (Chang, S. et Choen, S.N., 1979, Mol. Gen. Genet., 168:111-115 ; Bibb, M.J., Ward, J.M. et Hopwood, 0.A., 1978, 35 Nature, 274:398-400 ; Hinnen, A., Hicks, J.B. et Fink, G.R., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75:1929-1933). En outre, le procédé utilisant des impulsions électriques rapporté pour des bactéries corynéformes (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 2-207791) peut également être utilisé. 40 [0191] Une augmentation de l'activité d'une protéine peut être confirmée en mesurant l'activité de la protéine. [0192] 3056989 Une augmentation de l'activité d'une protéine peut également être confirmée en confirmant une augmentation de l'expression d'un gène codant pour la protéine. Une augmentation de l'expression d'un gène peut être confirmée en confirmant une augmentation de la quantité de 5 transcription du gène, ou en confirmant une augmentation de la quantité d'une protéine exprimée à partir du gène. [0193] Une augmentation de la quantité de transcription d'un gène peut être confirmée en comparant la quantité d'ARNm transcrit à partir du gène 10 avec celle d'une souche non modifiée telle qu'une souche de type sauvage ou une souche parentale. Des exemples du procédé pour évaluer la quantité d'ARNm comprennent une hybridation de Northern, une RT-PCR, et ainsi de suite (Sambrook, J., et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual/Troisième édition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold 15 Spring Harbor (États-Unis), 2001). La quantité d'ARNm peut augmenter, par exemple, de 1,5 fois ou plus, 2 fois ou plus, ou 3 fois ou plus par rapport à celle d'une souche non modifiée. [0194] Une augmentation de la quantité d'une protéine peut être 20 confirmée par un transfert de Western en utilisant des anticorps (Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor (États-Unis), 2001). La quantité de la protéine (comme le nombre de molécules de la protéine par cellule) peut augmenter, par exemple, de 1,5 fois ou plus, 2 fois ou plus, ou 3 fois ou plus par rapport à celle d'une 25 souche non modifiée. [0195] Les procédés susmentionnés pour augmenter l'activité d'une protéine peuvent être utilisés pour l'amélioration des activités de protéines arbitraires telles que des enzymes de biosynthèse d'acide Laminé, et 30 l'amélioration de l'expression de gènes arbitraires tels que des gènes codant pour ces protéines arbitraires, en plus de l'amélioration de l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4. [0196] Procédé pour réduire l'activité d'une protéine 35 0-après, les procédés pour réduire l'activité d'une protéine vont être expliqués. [0197] L'expression « l'activité d'une protéine est réduite » signifie que l'activité de la protéine est réduite par comparaison à une souche non 40 modifiée. Spécifiquement, l'expression « l'activité d'une protéine est réduite » signifie que l'activité de la protéine par cellule est réduite par comparaison à celle d'une souche non modifiée. Le terme « souche non modifiée » utilisé dans la présente fait référence à une souche de contrôle 3056989 71 qui n'a pas été modifiée de sorte que l'activité d'une protéine cible soit réduite. Des exemples de la souche non modifiée comprennent une souche de type sauvage et une souche parentale. Des exemples spécifiques de la souche non modifiée comprennent les souches de type 5 respectif des espèces de bactéries. Des exemples spécifiques de la souche non modifiée comprennent également des souches exemplifiées ci-dessus par rapport à la description des bactéries. C'est-à-dire que, dans un mode de réalisation, l'activité d'une protéine peut être réduite par comparaison à une souche de type, c'est-à-dire la souche de type de l'espèce à laquelle la 10 bactérie de la présente invention appartient. Dans un autre mode de réalisation, l'activité d'une protéine peut également être réduite par comparaison à la souche C glutamicum ATCC 13032. Dans un autre mode de réalisation, l'activité d'une protéine peut également être réduite par comparaison à la souche C glutamicum 2256 (ATCC 13869). Dans un 15 autre mode de réalisation, l'activité d'une protéine peut également être réduite par comparaison à la souche E colt' K-12 MG1655. Dans un autre mode de réalisation, l'activité d'une protéine peut également être réduite par comparaison à la souche F? ananatt:s AJ13355. L'état selon lequel « l'activité d'une protéine est réduite » comprend également un état selon 20 lequel l'activité de la protéine a complètement disparu. Plus spécifiquement, l'expression « l'activité d'une protéine est réduite » peut signifier que le nombre de molécules de la protéine par cellule est réduit, et/ou que la fonction de chaque molécule de la protéine est réduite par comparaison à celles d'une souche non modifiée. C'est-à-dire que le terme 25 « activité » dans l'expression « l'activité d'une protéine est réduite » n'est pas limité à l'activité catalytique de la protéine, mais peut également désigner la quantité de transcription d'un gène (c'est-à-dire la quantité d'ARNm) codant pour la protéine ou la quantité de traduction de la protéine (c'est-à-dire la quantité de la protéine). L'état selon lequel « le 30 nombre de molécules de la protéine par cellule est réduit » comprend également un état selon lequel la protéine n'existe pas du tout. L'état selon lequel « la fonction de chaque molécule de la protéine est réduite » comprend également un état selon lequel la fonction de chaque molécule de protéine a complètement disparu. Le degré de réduction de l'activité 35 d'une protéine n'est pas particulièrement limité, tant que l'activité est réduite par comparaison à celle d'une souche non modifiée. L'activité d'une protéine peut être réduite, par exemple, à 50 % ou moins, 20 % ou moins, 10 % ou moins, 5 % ou moins, ou 0 % de celle d'une souche non modifiée. 40 [0198] La modification pour réduire l'activité d'une protéine peut être obtenue, par exemple, en réduisant l'expression d'un gène codant pour la protéine. L'expression « l'expression d'un gène est réduite » signifie que 3056989 72 l'expression du gène est réduite par comparaison à une souche non modifiée telle qu'une souche de type sauvage et une souche parentale. Spécifiquement, l'expression « l'expression d'un gène est réduite » signifie que l'expression du gène par cellule est réduite par comparaison à celle 5 d'une souche non modifiée. Plus spécifiquement, l'expression « l'expression d'un gène est réduite » peut signifier que la quantité de transcription du gène (c'est-à-dire la quantité d'ARNm) est réduite, et/ou que la quantité de traduction du gène (c'est-à-dire la quantité de la protéine exprimée à partir du gène) est réduite. L'état selon lequel 10 « l'expression d'un gène est réduite » comprend également un état selon lequel le gène n'est pas exprimé du tout. L'état selon lequel « l'expression d'un gène est réduite » est également désigné « l'expression d'un gène est atténuée ». L'expression d'un gène peut être réduite, par exemple, à 50 % ou moins, 20 % ou moins, 10 % ou moins, 5 % ou moins, ou 0 % 15 de celle d'une souche non modifiée. [0199] La réduction de l'expression d'un gène peut être due, par exemple, à une réduction de l'efficacité de la transcription, une réduction de l'efficacité de la traduction, ou une combinaison de celles-ci. L'expression 20 d'un gène peut être réduite en modifiant une séquence de contrôle de l'expression du gène comme un promoteur, une séquence Shine-Dalgarno (SD) (également désignée site de fixation du ribosome (RBS)), et une région espaceur entre le RBS et le codon d'initiation du gène. Lorsqu'une séquence de contrôle de l'expression est modifiée, de préférence un ou 25 plusieurs nucléotides, de manière davantage préférée deux nucléotides ou plus, particulièrement de préférence trois nucléotides ou plus, de la séquence de contrôle de l'expression sont modifiés. Par exemple, l'efficacité de la transcription d'un gène peut être réduite, par exemple, en remplaçant le promoteur du gène sur un chromosome par un promoteur 30 plus faible. Le terme « promoteur plus faible » désigne un promoteur entraînant une transcription atténuée d'un gène par comparaison à un promoteur de type sauvage du gène existant de manière inhérente. Des exemples de promoteurs plus faibles comprennent, par exemple, des promoteurs inductibles. C'est-à-dire qu'un promoteur inductible peut 35 fonctionner comme un promoteur plus faible dans une condition non induite, tel qu'en l'absence de l'inducteur correspondant. En outre, une partie ou l'intégralité d'une séquence de contrôle de l'expression peut être supprimée. L'expression d'un gène peut également être réduite, par exemple, en manipulant un facteur responsable du contrôle de 40 l'expression. Des exemples du facteur responsable du contrôle de l'expression comprennent des petites molécules responsables du contrôle de la transcription ou de la traduction (inducteurs, inhibiteurs, etc.), des protéines responsables du contrôle de la transcription ou de la traduction 3056989 73 (facteur de transcription, etc.), des acides nucléiques responsables du contrôle de la transcription ou de la traduction (ARNsi, etc.), et ainsi de suite. En outre, l'expression d'un gène peut également être réduite, par exemple, en introduisant une mutation qui réduit l'expression du gène 5 dans la région codante du gène. Par exemple, l'expression d'un gène peut être réduite en remplaçant un codon dans la région codante du gène par un codon synonyme utilisé moins fréquemment dans un hôte. En outre, par exemple, l'expression d'un gène peut être réduite en raison d'une perturbation d'un gène tel que décrit plus loin. 10 [0200] La modification pour réduire l'activité d'une protéine peut également être obtenue, par exemple, en perturbant un gène codant pour la protéine. L'expression « un gène est perturbé » signifie qu'un gène est modifié de sorte qu'une protéine qui peut normalement fonctionner n'est 15 pas produite. L'état selon lequel « une protéine qui normalement fonctionne n'est pas produite » comprend un état selon lequel la protéine n'est pas produite du tout à partir du gène, et un état selon lequel la protéine dont la fonction (comme une activité ou une propriété) par molécule est réduite ou éliminée est produite à partir du gène. 20 [0201] La perturbation d'un gène peut être obtenue, par exemple, par une délétion du gène sur un chromosome. Le terme « délétion d'un gène » fait référence à la délétion d'une région partielle ou entière de la région codante du gène. En outre, l'intégralité d'un gène comprenant des 25 séquences en amont et en aval de la région codante du gène sur un chromosome peut être supprimée. La région devant être supprimée peut être une région quelconque, comme une région N-terminale (région codant pour une région N-terminale d'une protéine), une région interne, ou une région C-terminale (région codant pour une région C-terminale 30 d'une protéine), tant que l'activité de la protéine peut être réduite. La délétion d'une région plus longue peut généralement plus certainement inactiver le gène. La région devant être supprimée peut être, par exemple, une région possédant une longueur de 10 % ou plus, 20 % ou plus, 30 % ou plus, 40 % ou plus, 50 % ou plus, 60 % ou plus, 70 % ou plus, 80 % 35 ou plus, 90 % ou plus, ou 95 % ou plus de la longueur totale de la région codante du gène. En outre, il est préférable que les cadres de lecture des séquences en amont et en aval de la région devant être supprimée ne soient pas les mêmes. Une non-correspondance des cadres de lecture peut provoquer un décalage du cadre de lecture en aval de la région 40 devant être supprimée. [0202] La perturbation d'un gène peut également être obtenue, par exemple, en introduisant une mutation pour une substitution d'acide 3056989 74 aminé (mutation faux-sens), un codon stop (mutation non-sens), une addition ou la délétion d'un ou de deux résidus de nucléotides (mutation de décalage du cadre de lecture), ou analogue dans la région codante du gène sur un chromosome (Journal of Biological Chemistry, 272:8611-8617 5 (1997) ; Proceedings of the National Academy of Sciences, USA, 95 5511- 5515 (1998) ; Journal of Biological Chemistry, 26 116, 20833-20839 (1991)). [0203] La perturbation d'un gène peut également être obtenue, par 10 exemple, en insérant une autre séquence de nucléotides dans une région codante du gène sur un chromosome. Le site de l'insertion peut être dans une quelconque région du gène, et l'insertion d'une séquence de nucléotides plus longue peut généralement plus certainement inactiver le gène. Il est préférable que les cadres de lecture des séquences en amont 15 et en aval du site d'insertion ne soient pas les mêmes. Une non- correspondance des cadres de lecture peut provoquer un décalage du cadre de lecture en aval de la région devant être supprimée. L'autre séquence de nucléotides n'est pas particulièrement limitée tant qu'une séquence qui réduit ou élimine l'activité de la protéine codée est choisie, 20 et des exemples de celle-ci comprennent, par exemple, un gène marqueur tel que des gènes de résistance aux antibiotiques, et un gène utile pour la production d'une substance cible. [0204] Particulièrement, la perturbation d'un gène peut être réalisée de 25 sorte que la séquence d'acides aminés de la protéine codée soit supprimée. En d'autres termes, la modification pour réduire l'activité d'une protéine peut être obtenue, par exemple, en supprimant la séquence d'acides aminés de la protéine, spécifiquement en modifiant un gène de sorte à coder pour une protéine dont la séquence d'acides aminés est 30 supprimée. Le terme « délétion de la séquence d'acides aminés d'une protéine » fait référence à la délétion d'une région partielle ou entière de la séquence d'acides aminés de la protéine. De plus, le terme « délétion de la séquence d'acides aminés d'une protéine » signifie que la séquence d'acides aminés originale disparaît dans la protéine, et comprend 35 également les cas dans lesquels la séquence d'acides aminés originale est modifiée en une autre séquence d'acides aminés. C'est-à-dire, par exemple, qu'une région qui a été modifiée en une autre séquence d'acides aminés par un décalage du cadre de lecture peut être considérée comme une région supprimée. Lorsque la séquence d'acides aminés d'une 40 protéine est supprimée, la longueur totale de la protéine est typiquement raccourcie, mais il peut également exister des cas dans lesquels la longueur totale de la protéine n'est pas modifiée ou est allongée. Par exemple, par la délétion d'une région partielle ou entière de la région 3056989 codante d'un gène, une région codée par la région supprimée peut être supprimée dans la protéine codée. De plus, par exemple, par l'introduction d'un codon stop dans la région codante d'un gène, une région codée par la région en aval du site d'introduction peut être supprimée dans la 5 protéine codée. De plus, par exemple, par un décalage du cadre de lecture dans la région codante d'un gène, une région codée par la région de décalage du cadre de lecture peut être supprimée dans la protéine codée. Les descriptions susmentionnées concernant la position et la longueur de la région devant être supprimée dans la délétion d'un gène peuvent être 10 appliquées mutatis mutandis à la position et à la longueur de la région devant être supprimée dans la délétion de la séquence d'acides aminés d'une protéine. [0205] Une telle modification d'un gène sur un chromosome tel que décrit 15 ci-dessus peut être obtenue, par exemple, en préparant un gène de type perturbation modifié de sorte qu'il soit incapable de produire une protéine qui normalement fonctionne, et en transformant un hôte avec un ADN recombinant contenant le gène de type perturbation afin de provoquer une recombinaison homologue entre le gène de type perturbation et le 20 gène de type sauvage sur un chromosome et d'ainsi substituer le gène de type perturbation au gène de type sauvage sur le chromosome. Dans cette procédure, si un gène marqueur sélectionné en fonction des caractéristiques de l'hôte, comme une auxotrophie, est inclus dans l'ADN recombinant, l'opération devient plus simple. Des exemples du gène de 25 type perturbation comprennent un gène dont une région partielle ou entière de la région codante est supprimée, un gène comprenant une mutation faux-sens, un gène comprenant une mutation non-sens, un gène comprenant une mutation de décalage du cadre de lecture, et un gène dans lequel une séquence d'insertion comme un transposon ou un gène 30 marqueur a été introduite. La protéine codée par le gène de type perturbation possède une conformation différente de celle de la protéine de type sauvage, même si elle est produite et, ainsi, sa fonction est réduite ou éliminée. Une telle perturbation de gène basée sur la substitution d'un gène en utilisant une recombinaison homologue a déjà 35 été établie, et il existe des procédés utilisant ADN linéaire tel qu'un procédé appelé « Intégration dirigée par Red » Datsenko, K.A, et Wanner, B.L., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97:6640-6645 (2000)), et un procédé utilisant l'intégration dirigée par Red en combinaison avec un système d'excision dérivé du phage - (Cho, E.H., Gumport, R.I., Gardner, J.F., J. 40 Bacteriol., 184:5200-5203 (2002)) (se reporter à W02005/010175), un procédé utilisant un plasmide comportant une origine de réplication sensible à la température, un procédé utilisant un plasmide capable de transfert par conjugaison, un procédé utilisant un vecteur suicide ne 3056989 76 comportant pas d'origine de réplication qui fonctionne dans un hôte (brevet U.S. n° 6 303 383), brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 05-007491), et ainsi de suite. [0206] 5 Une modification pour réduire l'activité d'une protéine peut également être obtenue, par exemple, par un traitement de mutagenèse. Des exemples du traitement de mutagenèse comprennent une irradiation de rayons X ou d'ultraviolets et un traitement avec un agent mutagène tel que la N-méthyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG), le méthanesulfonate 10 d'éthyle (EMS), et le méthanesulfonate de méthyle (MMS). [0207] De tels procédés pour réduire l'activité d'une protéine tels que mentionnés ci-dessus peuvent être utilisés indépendamment ou en une combinaison arbitraire. 15 [0208] Lorsqu'une protéine fonctionne comme un complexe consistant en une pluralité de sous-unités, une partie ou l'intégralité de la pluralité de sous-unités peut être modifiée, tant que l'activité de la protéine est en fin de compte réduite. C'est-à-dire, par exemple, qu"une partie ou l'intégralité 20 d'une pluralité de gènes qui codent pour les sous-unités respectives peut être perturbée ou analogue. En outre, lorsqu'il existe une pluralité d'isozymes d'une protéine, une partie ou l'intégralité des activités de la pluralité d'isozymes peut être réduite, tant que l'activité de la protéine est en fin de compte réduite. C'est-à-dire, par exemple, qu'une partie ou 25 l'intégralité d'une pluralité de gènes qui codent pour les isozymes respectives peut être perturbée ou analogue. [0209] Une réduction de l'activité d'une protéine peut être confirmée en mesurant l'activité de la protéine. 30 [0210] Une réduction de l'activité d'une protéine peut également être confirmée en confirmant une réduction de l'expression d'un gène codant pour la protéine. Une réduction de l'expression d'un gène peut être confirmée en confirmant une réduction de la quantité de transcription du 35 gène ou une réduction de la quantité de la protéine exprimée à partir du gène. [0211] Une réduction de la quantité de transcription d'un gène peut être confirmée en comparant la quantité d'ARNm transcrit à partir du gène 40 avec celle d'une souche non modifiée. Des exemples du procédé pour évaluer la quantité d'ARNm comprennent une hybridation de Northern, une RT-PCR, et ainsi de suite (Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor (États-Unis), 2001). La quantité 3056 9 89 77 d'ARNm est de préférence réduite, par exemple, à 50 % ou moins, 20 % ou moins, 10 % ou moins, 5 % ou moins, ou 0 % de celle d'une souche non modifiée. [0212] 5 Une réduction de la quantité d'une protéine peut être confirmée par un transfert de Western en utilisant des anticorps (Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor (États-Unis), 2001). La quantité de la protéine (comme le nombre de molécules de la protéine par cellule) est de préférence réduite, par exemple, à 50 % ou moins, 10 20 % ou moins, 10 % ou moins, 5 % ou moins, ou 0 % de celle d'une souche non modifiée. [0213] La perturbation d'un gène peut être confirmée en déterminant la séquence de nucléotides d'une partie ou de l'intégralité du gène, une 15 cartographie d'enzymes de restriction, la pleine longueur, ou analogue, du gène en fonction du moyen utilisé pour la perturbation. [0214] Les procédés susmentionnés pour réduire l'activité d'une protéine peuvent tels que mentionnés ci-dessus peuvent être appliqués à la 20 réduction des activités de protéines arbitraires comme une enzyme qui catalyse une réaction qui s'éloigne de la voie de biosynthèse d'un acide Laminé cible pour générer un composé autre que l'acide Laminé cible, et la réduction de l'expression de gènes arbitraires tels que des gènes codant pour ces protéines arbitraires. 25 [0215] Procédé de production d'acide Laminé de la présente invention Le procédé de la présente invention est un procédé de production d'un acide Laminé comprenant la mise en culture de la bactérie de la présente invention dans un milieu pour accumuler un acide Laminé dans 30 le milieu et/ou les cellules de la bactérie, et la collecte de l'acide Laminé à partir du milieu et/ou des cellules de la bactérie. L'acide L-aminé produit dans la présente invention est un acide Laminé autre que l'acide L-aspartique. Dans la présente invention, un type d'acide Laminé peut être produit, ou deux types d'acides Laminés ou plus peuvent être produits. 35 [0216] Le milieu devant être utilisé n'est pas particulièrement limité, tant que la bactérie de la présente invention peut proliférer dans celui-ci, et qu'un acide Laminé cible peut être produit. En tant que milieu, par exemple, un milieu classique utilisé pour la culture de bactéries telles que 40 des bactéries corynéformes et des bactéries Enterobacteriaceae peut être utilisé. En tant que milieu, par exemple, un milieu contenant une source de carbone, une source d'azote, une source de phosphore, et une source de soufre, ainsi que des composants sélectionnés parmi divers autres 3056989 78 composants organiques et composants inorganiques, tel que requis, peuvent être utilisés. Les types et les concentrations des composants du milieu peuvent être déterminés de manière appropriée en fonction de diverses conditions telles que le type de bactérie devant être utilisée. 5 [0217] Des exemples spécifiques de la source de carbone comprennent, par exemple, des saccharides tels que le glucose, le fructose, le saccharose, le lactose, le galactose, le xylose, l'arabinose, des mélasses de cuisine, des hydrolysats d'amidons, et des hydrolysats de biomasse, des 10 acides organiques tels que l'acide acétique, l'acide fumarique, l'acide citrique, et l'acide succinique, des alcools tels que le glycérol, le glycérol brut, et l'éthanol, et des acides aliphatiques. En tant que source de carbone, un matériel dérivé d'une plante peut être de préférence utilisé. Des exemples de la plante comprennent, par exemple, le maïs, le riz, le 15 blé, le soja, la canne à sucre, la betterave, et le coton. Des exemples du matériel dérivé d'une plante comprennent, par exemple, des organes tels qu'une racine, une tige, un tronc, une branche, une feuille, une fleur, et une graine, les corps végétaux les comprenant, et des produits de décomposition de ces organes de plante. Les formes du matériel dérivé 20 d'une plante au moment de son utilisation ne sont pas particulièrement limitées, et il peut être utilisé sous une forme quelconque, comme un produit non traité, un jus, un produit broyé, et un produit purifié. Des pentoses tels que le xylose, des hexoses tels que le glucose, ou des mélanges de ceux-ci, peuvent être obtenus à partir, par exemple, d'une 25 biomasse végétale, et être utilisés. Spécifiquement, ces saccharides peuvent être obtenus en soumettant une biomasse végétale à un tel traitement comme un traitement à la vapeur, une hydrolyse avec un acide concentré, une hydrolyse avec un acide dilué, une hydrolyse avec une enzyme telle que la cellulase, et un traitement alcalin. Étant donné que 30 l'hémicellulose est généralement plus facilement hydrolysée par comparaison à la cellulose, l'hémicellulose dans une biomasse végétale peut être hydrolysée à l'avance afin de libérer des pentoses, puis la cellulose peut être hydrolysée afin de générer des hexoses. En outre, du xylose peut être obtenu par une conversion à partir d'hexoses, par 35 exemple, en conférant une voie pour convertir un hexose, tel que le glucose, en xylose pour la bactérie de la présente invention. En tant que source de carbone, un seul type de source de carbone peut être utilisé, ou deux types de sources de carbone ou plus peuvent être utilisés en combinaison. 40 [0218] Des exemples spécifiques de la source d'azote comprennent, par exemple, des sels d'ammonium tels que le sulfate d'ammonium, le chlorure d'ammonium, et le phosphate d'ammonium, des sources d'azote 3056989 79 organiques telles que la peptone, un extrait de levure, un extrait de viande, et des produits de décompositions de protéine de soja, l'ammoniac, et l'urée. De l'ammoniac gazeux ou de l'ammoniac aqueux utilisé pour ajuster le pH peut également être utilisé en tant que source 5 d'azote. En tant que source d'azote, un seul type de source d'azote peut être utilisé, ou deux types de sources d'azote ou plus peuvent être utilisés en combinaison. [0219] Des exemples spécifiques de la source de phosphate comprennent, 10 par exemple, des sels d'acide phosphorique comme le dihydrogénophosphate de potassium et l'hydrogénophosphate de dipotassium, et des polymères d'acide phosphorique comme l'acide pyrophosphorique. En tant que source de phosphate, un seul type de source de phosphate peut être utilisé, ou deux types de sources de 15 phosphate ou plus peuvent être utilisés en combinaison. [0220] Des exemples spécifiques de la source de soufre comprennent, par exemple, des composés de soufre inorganiques tels que des sulfates, des thiosulfates, et des sulfites, et des acides aminés contenant du soufre tels 20 que la cystéine, la cystine, et le glutathion. En tant que source de soufre, un seul type de source de soufre peut être utilisé, ou deux types de sources de soufre ou plus peuvent être utilisés en combinaison. [0221] Des exemples spécifiques de divers autres composants organiques 25 et composants inorganiques comprennent, par exemple, des sels inorganiques tels que le chlorure de sodium et le chlorure de potassium ; des métaux traces tels que le fer, le manganèse, la magnésium, et le calcium ; des vitamines telles que la vitamine B1, la vitamine B2, la vitamine B6, l'acide nicotinique, le nicotinamide, et la vitamine B12 ; des 30 acides aminés ; des acides nucléiques ; et des composants organiques contenant ceux-ci tels que la peptone, un acide casaminé, un extrait de levure, et un produit de décomposition de protéine de soja. En tant que divers autres composants organiques et composants inorganiques, un seul type de composant peut être utilisé, ou deux types de composants ou plus 35 peuvent être utilisés en combinaison. [0222] En outre, lorsqu'un mutant auxotrophe qui nécessite un acide aminé ou analogue pour sa croissance est utilisé, il est préférable de fournir un nutriment requis au milieu. 40 [0223] En outre, il est également préférable, par exemple, de restreindre la quantité de biotine dans le milieu, ou d'ajouter un tensioactif ou de la pénicilline au milieu. 3056989 [0224] Les conditions de culture ne sont pas particulièrement limitées tant que la bactérie de la présente invention peut proliférer, et qu'un acide Laminé cible peut être produit. La culture peut être réalisée, par exemple, 5 dans des conditions classiques utilisées pour la culture de bactéries telles que des bactéries corynéformes et des bactéries Enterobacteriaceae. Les conditions de culture peuvent être définies de manière appropriée en fonction de diverses conditions telles que le type de bactérie devant être utilisée. 10 [0225] La culture peut être réalisée en utilisant un milieu liquide. Au moment de la culture, la bactérie de la présente invention mise en culture sur un milieu solide tel qu'un milieu de gélose peut être directement inoculée dans un milieu liquide, ou la bactérie de la présente invention 15 mise en culture dans un milieu liquide en tant que culture d'ensemencement peut être inoculée dans un milieu liquide pour la culture principale. C'est-à-dire que la culture peut être réalisée séparément en tant que culture d'ensemencement et culture principale. Dans un tel cas, les conditions de culture de la culture d'ensemencement et la culture 20 principale peuvent être les mêmes ou non. La quantité de la bactérie de la présente invention contenue dans le milieu au moment du début de la culture n'est pas particulièrement limitée. La culture principale peut être réalisée, par exemple, en inoculant un bouillon de culture d'ensemencement dans un milieu pour la culture principale en une 25 quantité de 1 à 50 % (v/v). [0226] La culture peut être réalisée sous forme de culture discontinue, culture discontinue alimentée, culture continue, ou une combinaison de celles-ci. Le milieu utilisé au moment du début de la culture est également 30 désigne « milieu de départ ». Le milieu fourni à un système de culture (cuve de fermentation) dans une culture discontinue alimentée ou une culture continue est également désigné « milieu d'alimentation ». En outre, le fait de fournir un milieu d'alimentation à un système de culture dans une culture discontinue alimentée ou une culture continue est 35 également désigné « alimentation ». En outre, lorsque la culture est réalisée séparément en tant que culture d'ensemencement et culture principale, par exemple, à la fois la culture d'ensemencement et la culture principale peuvent être réalisées sous forme de culture discontinue. En variante, par exemple, la culture d'ensemencement peut être réalisée sous 40 forme de culture discontinue, et la culture principale peut être réalisée sous forme de culture discontinue alimentée ou de culture continue. [0227] 3056989 81 Dans la présente invention, les composants du milieu peuvent être chacun contenus dans le milieu de départ, le milieu d'alimentation, ou les deux. Les types des composants contenus dans le milieu de départ peuvent être les mêmes, ou non, que les types des composants contenus 5 dans le milieu d'alimentation. La concentration de chaque composant contenu dans le milieu de départ peut être la même, ou non, que la concentration du composant contenu dans le milieu d'alimentation. En outre, deux types de milieux d'alimentation ou plus contenant différents types et/ou différentes concentrations de composants peuvent être 10 utilisés. Par exemple, lorsque le milieu est alimenté par intermittence une pluralité de fois, les types et/ou concentrations des composants contenus dans le milieu d'alimentation peuvent être les mêmes, ou non, pour chaque alimentation. [0228] 15 La concentration de la source de carbone dans le milieu n'est pas particulièrement limitée, tant que la bactérie de la présente invention peut proliférer et produire un acide L-aminé. La concentration de la source de carbone dans le milieu peut être aussi élevée que possible dans une plage telle que la production de l'acide Laminé ne soit pas inhibée. La 20 concentration de la source de carbone dans le milieu peut être, en tant que concentration initiale (la concentration dans le milieu de départ), par exemple, de 1 à 30 % (p/v), de préférence 3 à 10 % (p/v). En outre, la source de carbone peut être en outre fournie au milieu tel que requis. Par exemple, la source de carbone peut être en outre fournie au milieu 25 proportionnellement à la consommation de la source de carbone accompagnant la progression de la fermentation. [0229] La culture peut être réalisée, par exemple, dans une condition aérobie. Le terme « condition aérobie » fait référence à une condition 30 dans laquelle la concentration en oxygène dissous dans le milieu liquide n'est pas moins de 0,33 ppm, qui est la limite de détection pour la détection avec une électrode à membrane pour l'oxygène, ou peut de préférence faire référence à une condition dans laquelle la concentration en oxygène dissous dans le milieu liquide n'est pas moins de 1,5 ppm. La 35 concentration en oxygène peut être contrôlée, par exemple, à 5 à 50 %, de préférence environ 10 %, de la concentration d'oxygène saturé. Spécifiquement, la culture dans une condition aérobie peut être réalisée par une culture sous aération, une culture sous mélange-agitation, une culture sous agitation, ou une combinaison de celles-ci. Le pH du milieu 40 peut être, par exemple, de 3 à 10, de préférence 4,0 à 9,5. Pendant la culture, le pH du milieu peut être ajusté tel que requis. Le pH du milieu peut être ajusté en utilisant diverses substances alcalines et acides telles que l'ammoniac gazeux, l'ammoniac aqueux, le carbonate de sodium, le 3056989 82 bicarbonate de sodium, le carbonate de potassium, le bicarbonate de potassium, le carbonate de magnésium, l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de calcium, et l'hydroxyde de magnésium. La température de la culture peut être, par exemple, de 20 à 45 °C, de préférence 25 à 5 37 °C. La période de culture peut être, par exemple, de 10 à 120 heures. La culture peut être poursuivie, par exemple, jusqu'à ce que la source de carbone contenue dans le milieu soit consommée, ou jusqu'à ce que la bactérie de la présente invention perde l'activité. Par une mise en culture de la bactérie de la présente invention dans ces conditions telles que 10 décrites ci-dessus, un acide Laminé est accumulé dans le milieu et/ou les cellules de la bactérie. [0230] De plus, lorsque de l'acide L-glutamique est produit, la culture peut être réalisée en utilisant un milieu liquide ajusté pour satisfaire à une 15 condition dans laquelle l'acide L-glutamique est précipité, tout en précipitant l'acide L-glutamique dans le milieu. Des exemples de la condition dans laquelle l'acide L-glutamique est précipité comprennent, par exemple, un pH de 5,0 à 4,0, de préférence un pH de 4,5 à 4,0, de manière davantage préférée un pH de 4,3 à 4,0, particulièrement de 20 préférence environ un pH 4,0 (EP1078989A). [0231] La production d'un acide Laminé peut être confirmée par des procédés connus utilisés pour la détection ou l'identification de composés. Des exemples de tels procédés comprennent, par exemple, la HPLC, 25 LC/MS, GC/MS, et RMN. Ces procédés peuvent être indépendamment utilisés, ou peuvent être utilisés en une combinaison appropriée. [0232] L'acide Laminé produit peut être collecté à partir du bouillon de fermentation par des procédés connus utilisés pour la séparation et la 30 purification de composés. Des exemples de tels procédés comprennent, par exemple, un procédé utilisant une résine échangeuse d'ions (Nagai, H. et al., Séparation Science and Technology, 39(16), 3691-3710), une précipitation, une séparation sur membrane (brevet japonais mis à l'inspection publique (Kokai) n° 9-164323 et brevet japonais mis à 35 l'inspection publique (Kokai) n° 9-173792), et une cristallisation (W02008/078448 et W02008/078646). Ces procédés peuvent être indépendamment utilisés, ou peuvent être utilisés en une combinaison appropriée. Lorsque l'acide L-aminé est accumulé dans les cellules de la bactérie, par exemple, les cellules peuvent être lysées avec des ondes 40 ultrasonores ou analogue, un surnageant peut être obtenu en éliminant les cellules de la suspension contenant des cellules lysées par centrifugation, et l'acide Laminé peut être collecté à partir du surnageant par le procédé utilisant une résine échangeuse d'ions ou analogue. L'acide 3056 9 89 83 Laminé devant être collecté peut être un composé libre, un sel de celui-ci, ou un mélange de ceux-ci. Des exemples du sel comprennent, par exemple, un sulfate, un hydrochlorure, un carbonate, un sel d'ammonium, un sel de sodium, et un sel de potassium. Lorsque de l'acide L-glutamique 5 est produit, l'acide L-glutamique devant être collecté peut être spécifiquement, par exemple, de l'acide L-glutamique libre, du L-glutamate de sodium (L-glutamate monosodique, MSG), du L-glutamate d'ammonium, (L-glutamate monoammonique), ou un mélange de ceux-ci. Par exemple, du L-glutamate monosodique (MSG) peut être obtenu en 10 ajoutant un acide au bouillon de fermentation afin de cristalliser le L- glutamate d'ammonium contenu dans celui-ci, puis en ajoutant une quantité équimolaire d'hydroxyde de sodium aux cristaux. De plus, une décoloration peut être réalisée en utilisant du charbon actif avant et/ou après la cristallisation (voir, Tetsuya KAWAKITA, « Industrial 15 Crystallization for Monosodium L-Glutamate. », Bulletin of the Society of Sea Water Science, Japon, Vol.56:5). Le cristal de L-glutamate monosodique peut être utilisé, par exemple, en tant qu'assaisonnement umami. Le cristal de L-glutamate monosodique peut également être utilisé en tant qu'assaisonnement en combinaison avec un acide nucléique tel 20 que la guanylate de sodium et l'inosinate de sodium, qui possèdent également un goût umami. [0233] Lorsque l'acide Laminé est précipité dans le milieu, il peut être collecté par centrifugation, filtration, ou analogue. L'acide Laminé 25 précipité dans le milieu peut également être isolé avec l'acide Laminé qui se dissout dans le milieu, après que l'acide Laminé qui se dissout dans le milieu soit cristallisé. [0234] L'acide Laminé collecté peut contenir des composants tels que des 30 cellules bactériennes, des composants du milieu, de l'humidité, et des métabolites de produit secondaire de la bactérie en plus de l'acide Laminé. L'acide Laminé collecté peut également être purifié à un degré souhaité. La pureté de l'acide L-aminé collecté peut être, par exemple, de 50 % (p/p) ou plus, de préférence 85 % (p/p) ou plus, particulièrement 35 de préférence de 95 % (p/p) ou plus (JP1214636B, USP5,431,933, USP4,956,471, USP4,777,051, USP4,946,654, USP5,840,358, USP6,238,714, et US2005/0025878). Exemples 40 [0235] 0-après, la présente invention va être expliquée de manière plus spécifique en se référant aux exemples. En revanche, la présente invention n'est pas limitée par ces exemples. 3056989 84 [0236] Exemple : Culture de production d'acide glutamique en utilisant une souche de Corynebacterium glutamicum présentant une expression améliorée d'un gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 5 Dans cet exemple, la production d'acide glutamique a été réalisée en utilisant une souche de C glutamicum productrice d'acide glutamique dans laquelle un gène codant pour un transporteur d'acide dicarboxylique C4 possédant une capacité d'incorporation d'acide aspartique (Cg-dctA, Ec-dctA, Ec-dcuA, ou Ec-dcuB) a été introduit, et l'effet d'une expression 10 améliorée du gène de transporteur d'acide dicarboxylique C4 sur la production d'acide glutamique a été évalué. [0237] (1) Matériel Le matériel utilisé dans cet exemple est le suivant. 15 3056 9 89 [0238] Tableau 1 Amorce SEQ ID NO Séquence de nucléotides (5'. 3') 1 1 CCAAGCTTGCATGCCAGGAGGATTATAATGGATTCAAACACAGAATCTTC 2 2 CGGTACCCGGGGATCCTAGTGGTCTTCTTCTAACTCCAC 3 3 CCAAGCTTGCATGCCAGGAGGATTATAATGAAAACCTCTCTGTTTAAAAGO 4 4 CGGTACCCGGGGATCTTAAGAGGATAATTCGTGCG 5 5 CCAAGCTTGCATGCCAGGAGGATTATAATGCTAGTTGTAGAACTCATCATA^ 6 6 CGGTACCCGGGGATCTTACAGCATGAAGCTACCCAGCACG 7 7 CCAAGCTTGCATGCCAGGAGGATTATAATGTTATTTACTATCCAACTTATC 8 8 CGGTACCCGGGGATCTTATAAGAACCCGTACATCGCGGCG [0239] 5 pVK9 (KmR ; US2006-0141588) pVK9-Cg-dctA (KmR ; présente demande) pVK9-Ec-dctA (KmR ; présente demande) pVK9-Ec-dcuA (KmR ; présente demande) 10 pVK9-Ec-dcuB (KmR ; présente demande) [0240] C glutamicum 2256- sucA- IdhA yggB* (W02014/185430) C glutamicum 2256- sucA- IdhA yggB*/pVK9 (présente demande) 15 C glutamicum 2256- sucA- IdhA yggB*/pVK9-Cg-dctA (présente demande) C glutamicum 2256- sucA- IdhA yggB*/pVK9-Ec-dctA (présente demande) C glutamicum 2256- sucA- IdhA yggB*/pVK9-Ec-dcuA (présente 20 demande) C glutamicum 2256. sucA- IdhA yggB*/pVK9-Ec-dcuB (présente demande) [0241] (2) Construction de plasmides et de souches 25 Une PCR a été réalisée en utilisant l'ADN génomique de la souche C glutamicum 2256 (ATCC 13869) en tant que matrice, et les amorces 1 et 2, afin d'amplifier un fragment d'ADN contenant le gène dctA de C glutamicum (Cg-dctA). Le fragment d'ADN obtenu et pVK9 (US2006- 0141588) digéré avec Barnhl et Pstl ont été mutuellement ligaturés en 30 utilisant le kit de clonage In-fusion HD de Clontech (TaKaRa Inc.), afin de construire pVK9-Cg-dctA, qui est un plasmide d'expression de Cg-dctA. [0242] 3056989 86 De la même manière, une PCR a été réalisée en utilisant l'ADN génomique de la souche E colt K-12 MG1655 (ATCC 47076) en tant que matrice, en combinaison avec les amorces 3 et 4 afin d'amplifier un fragment d'ADN contenant le gène dctA d'E colt (Ec-dctA), les amorces 5 5 et 6 afin d'amplifier un fragment d'ADN contenant le gène dcuA d'E colt (Ec-dcuA), et les amorces 7 et 8 afin d'amplifier un fragment d'ADN contenant le gène dcuB d'E colt (Ec-dcuB), et les fragments d'ADN obtenus ont chacun été ligaturés avec pVK9, afin de construire pVK9-EcdctA, pVK9-Ec-dcuA, et pVK9-Ec-dcuB, qui sont les plasmides d'expression 10 de ces gènes. [0243] Les plasmides construits ont chacun été introduits dans la souche C glutarnicum 2256- sucA- IdhA yggB* (W02014/185430), afin de construire des souches présentant une expression améliorer des gènes de 15 transporteur d'acide dicarboxylique C4 respectifs. La souche 2256- sucA- IdhA yggB* est une souche productrice d'acide glutamique dérivée de la souche C glutarnicum 2256 (ATCC 13869). La souche 256- sucA- IdhA yggB* est déficiente en gènes /dhA et sucA, et comporte une mutation IS (V419::IS) dans le gène yggB. La séquence de 20 nucléotides de ce gène yggB mutant (V419::IS) et la séquence d'acides aminés de la protéine YggB mutante (V419::IS) codée par le gène sont montrées dans SEQ ID NO: 11 et 12, respectivement. [0244] (3) Culture de production d'acide glutamique 25 La culture de production d'acide glutamique a été réalisée en utilisant chaque souche. La composition du milieu utilisé est montrée dans le Tableau 2. [0245] Tableau 2 : Composition du milieu Glucose 80 g/I (NH4) 2504 30 g/I KH2PO4 1 g/I Mg SO4. 7H20 0,4 g/I FeSO4.7H20 0,01 g/I Mn SO4. 5 H20 0,01 g/I V131 200 .g/I Biotine 300 .g/I Mameno 0,48 g/I CaCO3 50 g/I Acide succinique 1 g/I 30 Le milieu de la composition susmentionnée ajusté à un pH 8,0 avec du KOH a été préparé, et a été stérilisé par autoclave (115 °C, 10 min). Du CaCO3 stérilisé par chaleur sèche (180 °C, 6 heures) a été ajouté au 3056989 87 milieu stérilisé à une concentration finale de 50 g/I, et a été utilisé pour la culture. [0246] Chaque souche a été inoculée dans 5 ml du milieu contenant 50 g/I 5 de Ca003 contenu dans un grand tube à essai, et a été mis en culture à 31,5 °C sous agitation à 120 tr/min en utilisant un agitateur (ABLE ML-190). À 18 heures après le début de la culture, le bouillon de culture a été échantillonné. Les concentrations d'acide glutamique et d'acide aspartique dans le bouillon de culture ont été quantifiées en utilisant un analyseur 10 AS-310 de Biotech (SAKURA SI), et un analyseur d'acide aminé L-8800A (Hl TACHI ), respectivement. [0247] Les résultats sont montrés sur la Fig. 1. L'accumulation d'acide glutamique (Glu) a été améliorée par une expression améliorée de Cg- 15 dctA, Ec-dctA, Ec-dcuA, ou Ec-dcuB. De plus, une production secondaire d'acide aspartique a été réduite par une expression améliorée de Cg-dctA, Ec-dctA, Ec-dcuA, ou Ec-dcuB. [0248] Tel que décrit ci-dessus, même si un procédé de production d'un 20 d'acide Laminé utilisant une bactérie corynéforme présentant une expression améliorée du gène dctA a déjà été rapporté et que l'acide L-glutamique soit exemplifié en tant qu'acide Laminé, le fait que de l'acide L-glutamique puisse être produit en utilisant la même bactérie n'a pas été démontré (document de brevet 3). À l'inverse, en considérant le fait 25 qu'une protéine codée par un gène dctA possède une capacité d'incorporation d'acide L-glutamique (document non-brevet 4), l'homme du métier devrait prédire qu'une expression améliorée du gène dctA favorise l'incorporation d'acide L-glutamique dans des cellules, et ainsi la quantité d'accumulation d'acide L-glutamique dans un milieu est réduite. 30 C'est-à-dire que l'homme du métier ne peut pas prédire que la production d'acide L-glutamique soit améliorée par une expression améliorée du gène dctA et, par conséquent, le document de brevet 3 ne décrit pas essentiellement un procédé de production d'acide L-glutamique utilisant une bactérie corynéforme présentant une expression améliorée du gène 35 dctA. De plus, pour la même raison, il était difficile d'améliorer l'expression du gène dctA pour la production d'acide L-glutamique. [0249] En outre, bien qu'une protéine codée par le gène dctA possède une capacité d'incorporation d'acide L-glutamique (document non-brevet 4), 40 une protéine codée par le gène yggB possède une capacité d'excrétion d'acide L-glutamique (document non-brevet 5). L'homme du métier ne peut pas prédire que l'utilisation du gène dctA et du gène yggB en combinaison, qui possèdent de telles fonctions contraires, soit utile pour la 3056989 88 production d'acide L-glutamique et, par conséquent, il était également difficile d'utiliser le gène dctA et un gène yggB mutant en combinaison pour la production d'acide L-glutamique. [0250] 5 Explication de la liste des séquences SEQ I D NO: 1-8 : Amorces 9: Séquence de nucléotides du gène yggB de Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869) 10 10 : Séquence d'acides aminés de la protéine YggB de Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869) 11 : Séquence de nucléotides du gène yggB mutant (V419::IS) de Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869) 12 : Séquence d'acides aminés de la protéine codée par le gène yggB 15 mutant (V419:: I S) de Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869) 13 : Séquence de nucléotides du gène xfp de Bifidobacterium longum JCM1217 14 : Séquence d'acides aminés de la protéine Xfp de Bifidobacterium longum JCM1217 20 15: Séquence de nucléotides du gène dctA de Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869) 16: Séquence d'acides aminés de la protéine DctA de Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869) 17: Séquence de nucléotides du gène dctA d'Escherichia colt K-12 MG1655 25 18: Séquence d'acides aminés de la protéine DctA d'Escherichia colt K-12 MG1655 19: Séquence de nucléotides du gène dcuA d'Escherichla colt K-12 MG1655 20: Séquence d'acides aminés de la protéine DcuA d'Escherichla colt K-12 30 MG1655 21: Séquence de nucléotides du gène dcuB d'Escherichla colt K-12 MG1655 22: Séquence d'acides aminés de la protéine DcuB d' Escherichla colt K-12 MG1655 35 40 REVENDICATIONS1. Procédé de production d'un acide Laminé, le procédé comprenant : la mise en culture d'une bactérie possédant une capacité de production d'acide Laminé dans un milieu afin d'accumuler un acide L- aminé dans le milieu et/ou les cellules de la bactérie ; et la collecte de l'acide Laminé à partir du milieu et/ou des cellules, où la bactérie a été modifiée de sorte que l'activité d'un transporteur d'acide dicarboxylique C4 soit augmentée par comparaison à une souche non modifiée, où le transporteur d'acide dicarboxylique C4 consiste en un ou plusieurs types de protéines sélectionnés parmi des protéines codées par un gène dctA, un gène dcuA, et un gène dcuB, et où l'acide Laminé est un acide L-aminé autre que l'acide L15 aspartique, à condition que l'acide Laminé soit l'acide L-glutamique lorsque le transporteur d'acide dicarboxylique C4 est une protéine codée par un gène dctA. 20 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel le gène dctA est un gène codant pour une protéine définie en (a), (b), ou (c) mentionné ci-dessous : (a) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 16 ou 18 ; 25 (b) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 16 ou 18, mais qui comprend une substitution, une délétion, une insertion, et/ou une addition de 1 à 10 résidus d'acides aminés, et qui possède une activité d'incorporation d'acide L-aspartique ; (c) une protéine comprenant une séquence d'acides aminés montrant 30 une identité de 90 % ou plus avec la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 16 ou 18, et qui possède une activité d'incorporation d'acide aspartique. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel le gène dcuA est 35 un gène codant pour une protéine définie en (a), (b), ou (c) mentionné ci- dessous : (a) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 20 ; (b) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID 40 NO: 20, mais qui comprend une substitution, une délétion, une insertion, et/ou une addition de 1 à 10 résidus d'acides aminés, et qui possède une activité d'incorporation d'acide L-aspartique ; 3056989 90 (c) une protéine comprenant une séquence d'acides aminés montrant une identité de 90 % ou plus avec la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 20, et qui possède une activité d'incorporation d'acide aspartique. 5 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel le gène dcuB est un gène codant pour une protéine définie en (a), (b), ou (c) mentionné ci-dessous : (a) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 22 ; 10 (b) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 22, mais qui comprend une substitution, une délétion, une insertion, et/ou une addition de 1 à 10 résidus d'acides aminés, et qui possède une activité d'incorporation d'acide aspartique ; (c) une protéine comprenant une séquence d'acides aminés montrant une identité de 90 % ou plus avec la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 22, et qui possède une activité d'incorporation d'acide aspartique. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel l'activité du transporteur d'acide dicarboxylique C4 est augmentée en augmentant l'expression d'un gène codant pour le transporteur d'acide dicarboxylique C4. 6. Procédé selon la revendication 5, dans lequel l'expression du gène est augmentée en augmentant le nombre de copies du gène et/ou en modifiant une séquence de contrôle de l'expression du gène. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel la bactérie a en outre été modifiée de sorte que l'activité de la phosphocétolase soit augmentée par comparaison à une souche non 30 modifiée. 8. Procédé selon la revendication 7, dans lequel la phosphocétolase consiste en la D-xylulose-5-phosphate phosphocétolase et/ou la fructose6-phosphate phosphocétolase. 35 9. Procédé selon la revendication 7 ou 8, dans lequel l'activité de la phosphocétolase est augmentée en augmentant l'expression d'un gène codant pour la phosphocétolase. 40 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans lequel la bactérie est une bactérie corynéforme ou une bactérie appartenant à la famille Enterobacteriaceae. 3056 9 89 91 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, dans lequel la bactérie est une bactérie appartenant au genre Corynebacterium. 12. Procédé selon la revendication 11, dans lequel la bactérie est 5 Corynebacterium glutamicum. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, dans lequel la bactérie est une bactérie appartenant au genre Pantoea ou Escherichia. 10 14. Procédé selon la revendication 13, dans lequel la bactérie est Pantoea ananatis ou Escherichia colt. 15. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, dans 15 lequel l'acide Laminé consiste en un acide Laminé de la famille glutamate et/ou un acide Laminé de la famille aspartate. 16. Procédé selon la revendication 15, dans lequel l'acide Laminé de la famille glutamate consiste en un ou plusieurs acides Laminés sélectionnés 20 parmi l'acide L-glutamique, la L-glutamine, la L-proline, la L-arginine, la L- citrulline, et la L-ornithine. 17. Procédé selon la revendication 15 ou 16, dans lequel l'acide Laminé de la famille glutamate est l'acide L-glutamique. 25 18. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, dans lequel l'acide L-glutamique est le L-glutamate monoammonique ou le L-glutamate monosodique. 19. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 18, dans lequel l'acide Laminé de la famille aspartate consiste en un ou plusieurs acides Laminés sélectionnés parmi la L-lysine, la L-thréonine, la Lisoleucine, et la L-méthionine. 20. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 19, dans lequel l'acide Laminé est un acide Laminé de la famille glutamate, et dans lequel la bactérie a en outre été modifiée de sorte que l'activité de l'- -cétoglutarate déshydrogénase et/ou la succinate 40 déshydrogénase soit réduite par comparaison à une souche non modifiée. 21. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 et 15 à 20, 3056989 92 dans lequel la bactérie est une bactérie corynéforme, et dans lequel la bactérie a en outre été modifiée de sorte à abriter un gène yggB mutant. 5 22. Procédé selon la revendication 21, dans lequel le gène yggB mutant est un gène yggB comportant une mutation qui améliore la capacité de production d'acide L-glutamique de la bactérie corynéforme. 23. Procédé selon la revendication 21 ou 22, dans lequel le gène yggB 10 mutant est un gène yggBcomportant une mutation définie en (1), (2), ou (3) mentionné ci-dessous : (1) une mutation dans la région codant pour les résidus d'acides aminés aux positions 419 à 533 d'une protéine YggB de type sauvage, (2) une mutation dans la région codant pour une région 15 transmembranaire d'une protéine YggB de type sauvage, et (3) une combinaison de celles-ci. 24. Procédé selon la revendication 23, dans lequel la protéine YggB de type sauvage est une protéine définie en (a), (b), ou (c) mentionné ci-20 dessous : (a) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 10 ; (b) une protéine comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 10, mais qui comprend une substitution, une délétion, une insertion, 25 et/ou une addition de 1 à 10 résidus d'acides aminés, et qui possède une propriété selon laquelle une expression augmentée de celle-ci dans la bactérie corynéforme permet d'obtenir une capacité de production d'acide L-glutamique améliorée de la bactérie corynéforme ; (c) une protéine comprenant une séquence d'acides aminés montrant 30 une identité de 90 % ou plus avec la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO: 10, et qui possède une propriété selon laquelle une expression augmentée de celle-ci dans la bactérie corynéforme permet d'obtenir une capacité de production d'acide L-glutamique améliorée de la bactérie corynéforme.