FR 3051371 A1 20171124 FR 1654470 A 20160519 5 1 3 7 1 La présente i n:ention er un produ mposant dédié à la L, ration cu formif dont I on concerne la régé du tissu osseux après i cti(..i.:,n da' cisme 77-nt, les domaines d'applic envisagés it le icUtSt-...7i7iCeS osseuses en ort opédie ou en -dontologie. Le7 VeUeS bioactifs, égaleme, r: nommés bio es, sc n que mi, céramiques ou de type verres, qui nt aptes PPPy à en présence d'un m'''eu aqueux, ou à ur interface avec :orporel, une couche yapatite phosL,_)calciaue 1.0 cristallisée, produisant utile biologiquemen - :ouche d'hydroxyapatite est, :ion, similaire à la phase minérale de l'os. La notion de verres bioactifs inclut à la fois les verres au sen, terme et les matériaux vitrocerar4ues, partiellement cristallisés, c e 15 contenant à la fois au moins une phase amorphe formée de verre bioactif et. au moins une phase cristalline, la phase arncri....:,he n'étant pas nécessairement majoritaire. Pour plus de détails les verres bidactifs, on pourra se réf à l'ouvrage « BIOMATERIALS SCIENCE, An Introduction to Materials in Medicine, 2d Fgion by Buddy D. Ratner, Allen S. Hoffman, Frederick 3, 20 Schoen, Jack E. Lemons, Elsevier Academic Press, chapter 2. Cerar Glasses, and Glass-Ceramics 153 Larry L. ENCH and Serena SES-r » (2004), ainsi qu'à l'ouvrage « Bioactive glasses, properties and applications, Edited by Heimo O. Ylanen, Woodhead Publishing ';>1011). Les verres bioactifs peuvent être préparés de diffeLentes façons, 25 T amment o:Drnme décrit dans les tech ti.).Jes de l'Ingénieur (n4955 « Verres actifs », pAbliées le 10 avril 2014). pouvoir bioactif peut être testé 7 la norme 150 23317. Dans l'art antérieur, des tentatives d'associer les verres chitcznne polysaccharide cr e pour être biocompatible, biorésorbable, 30 bactériostati (Jebahi S Keskes H. Effect of fongista -,nt été proposées. Oudadesse et al. , Farhat L, '.)udadesse H, Rebai T, Kabir A, El Feki A, novel curcurnin-en,7psulated chitosan-bioglass drug on 305 1 3 7 1 2 bone and ski after gamma radiation: experimental study ï"star rat model, Ccq ni-hem Funct, 150459) ont t sur l'élaboration de ma..iiéria;.,'-a/chitosane pour des applications en recL: .,oss&,,J5e pour ficraUl,73.:ion des plaies dermiques. Les autedid pîdposent de mélanger une r de chitosane prép en milieu acide et UI de bioverrE,.. rniLeu ho et e,Jauornenter le pH duchenu par lyophi de soude inc Ut ification du mélange qui Fe7;:t ensuite D'au 3rt --euir proposent' (l'utiliser un chitosane,00verre contenant du --hosphate, oui, :37°C, forme avec la solution de chitosane con bioverre. OnIt notamment c. D. S. Couto, Z. Hong, J. Developmem of bloactive biodegradable chitosan-based bjactiv( nanoparticles. Acta Biomaterialia 5 (2009) 3.1::::e.123. Ces différentes techni le donnent pas satisfaction, car, conduisent pas à des solutions injectables, soit elles utilisent des agents de réticulation posant des problèmes de toxicité. Dans ce contexte, H présente invention vise à provy répondant à ces problèmes et concerne un produit desene d'une composition injectable. ' - produit s on se doit de permettre une préparation sim rapide d ur, cciircl 'sition injectable adaptée le régénération des tissus LLP,./..'-)tion concerne un prodi.. leeftne la préparation d'une injectable, contenant de rreière'L--parée l'une de l'autre, au moins une prer..e.t une deux i,:iTri iinpositions, ' s lequel : - la premi )mposition dite t une solutich Jeuse de chitosane de pH apparter,, la garnie ?"-Int de 3 à 7, et. - la deuxi' :ompojtkon 31 correspond à des particules d'un ou plusieurs verre(d) biOaCtifc, voduit de glycérophosphate, Le oroduit sebri Yourra également conl-iJr-jr une cci..r.,h,i):-3ition C correspondant à de Veau ou à une solution aqueuse .nparticuliei, du type 3051371 constitué des composition De manière pré solution tampon ca.. n"W. 5,5 à 8, de préférenc7.7 composition C sera, de composition B1, pour correspondant à une si.er, bioactif, le pH de cette si unar avantag de pH appartenant à la gamme ai allant de 5/8 à 7,2. Dans ce cas,.. prérérence, destinée à être mélogée avec la former une composition irt édiaire B2 ise de particules J'au moins un verre sio ans la gamme allant de 5,5 à 8. euse. le .1,ion l'inve est exclusivement et Fg des compositions A, B1 et. C. duit selon l'invention ne cont ie- pas de c rr io génépine, i glutà :yri", rmuényc'e. Plus généralement, le produit selon l'invention ne cortie Lorsque l'on dit que le ''agent de réticulation. l'invention ne contient pas un composant, cela signifie que lecir n'est présent ni dans la composition A, ni dans composit- 1, r me autre composition C 15 que le produit pourrait contenir. Dans le cadre .invention, le mélange des compositions B1, ou compositions A et B2, voire ri, compositions A, 81 et C, donne une iposition injectable, qui va en te conduire à la formation d'un gel physique de chitosane. Aucun ag. : de réticulation conduisant à un gel 20 utilisé. 1.,s1 solution selon l'invention est donc moins toxique que les solutions ant es ut le tels agents de réticula puisqu'aucun agent de i'esterait ensuite dans l'u'gani,nie n'est présent. Dans le cadre ri Vinvention. l'approche est totalement différente des 25 solutions antérieures utilisar ..isphate, puisque ce sont les particules de verre bioactif qui sont. u s pour obtenir, à court terme, la gélification ri.. 'tosane. Le produit Invention conduit, après mélange des compo ; A et Bi, ou de compositions A et B2, voire des. composition_ 31 et C, à une composition injectable pouvant être utilisée 30 pour réc des tssus ,:Sseux, et donc, enortti)pédie et en cidonto lectable corre. suspension de pa- d'au moins ur va-Fe bioactif dans une solution aqueuse de 3051371 4 chitosane. Le les compositions A et Bi, ou des compositions A et B2, voire des C5FT1DCH:' composidon irj tions A, Bi et C, conduit, tout d'abord, à une qui va é',./"0.7:1' u C7.'7-7 du temps pour conduire à une gélification dt. cdrc osane' u hn échange de cations particules de verre(s)oactif(s) et l chitosane. Dans le cadre de l'inverlti,(':q.' il est donc - rible d'obtenir une géftfication qui ircnnt( situ, en:, Jonc vivo, après on de la compas Jans qL maintien des parb(:u terre ur le site d'implantation. La compo:un àb /erre(s) bioactif(s) obtenue présente une 10 tolérance -méliorf.:2:e par rapport ire siif1de. suspension e(s) bioactif(s) u fait de la prcnr cc osane. En effet, les vei ctifs cassique..,, lorsqu'ils soni. L;i-j entraînent une augmentation importiuicn lu pH au niveau c nuitation, et s'accompagnent d'une certaine toxicité, 'e d'une ise tisS . La présence de la solution 15. aqueuse de chitosane, au pH sélection, le, va permet de contrôler l'augmentation de pH obtenu, en partU:uner, au sein de iorganisme. De même, la solution de chitosane, utili, seule, présent- une certaine toxicité, vis-à-vis de l'organisme, du fait de son caractère acide. L'utilisation combinée des deux permet d'atteindre dans l'organisme des pH dan gamme allant de 6,5 à 7,5, notamment de 6, 7,4, en fonction du pH cnJ la solution de chitosane notamment, ce ccJ e;t bien adapté aux implants L'état in al (c'est - peu du emps après mélange des coi A et B1, ou ic cornpcmjtiiis A et voire riFi.H , -i,rdpositions A, El. 6_L cl 25 la compositan (table, cciu )sane et les verres bloal permet son injection et la formatic-- in sit e l'hydroge. (('.()d,posite qi résulte après injection, permet le maintien du matériau coripnctu ni r le d'implantation.. La présence des particules de verre(s) bioactif(s) dans la composition 30 injectable obtenue après mélanç en. compositions A et Bi ou des compositions A et B2, un corn ',sitions A, Bi et C, permet une immobilisation au niveau du tissu osseux. La présence du chitosane apporte 305 1 3 7 1 des propriétés angiogéniques, st la r :onstruction tissulaire et permet de C de plus grands déf, s oss iu'avec lisation de verres bioactifs seuls. L'association des deux compositions Bi ou des compositions A et B2, voire des compositions A, B1 et C, e pouvoir exploiter à la fois les propriétés rhéologiques et biologiques ch.tosa.ne et les propriétés bioactives des particules du ou des bioverre(F !ctionné(s). De par le choix de certains ;_ ses, que sont en particulier le pH de la composition A, la quantité de vc tail' s part-Hcr., bloverre, il est possible de e temps ,F.);.1rant le menDf-lt du lo mélange C.:t fj.--:zir3j de la gélification. L'invention a également pour objet les compositions exerr.,Aes de glycérophosphate et contenant des particules d'un j eurs verre(s) bioactif(s) en suspension dar )Iution aqueuse de chii obtenues par mélange des com DOS 15 B2, voire de- compositions A, description. De telles compositioi dans un état antérieur à l'étape situ, en particulier, après inject sujet à traiter. En particulier, d Bi, ou des compositior du procluft défini dans ICI pi qualifiées d'Injectables, car elles sont .,.lification qui a vocation à intervenir in de la composition dans l'organisme du compositions injectables présentent 20 une viscosité pour une vitesse de cisaillement de 104 s dans la gamme allant de 0,005 à 200 Pa.s. Cette viscosité pourra être mesurée par rhéométrie capillaire, notamment à 22°C, t e tics Uc lon la méthode décrite dans la publicationsan solutions as injectable systems for dermal filler applications: rheoloaical characterization and biological 25 evidence » par C. Halimi, A. Monte Guerry, T. Delair, E. Viguier, R. Fulchiron, L. David. Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society. IEEE Engineering in Medicirm? and Biology iety. 2015; 2596-9. Les compositions injectables selon l'invern. ,fsentent avantageusement un pH dans la gamme allant de 3,1 à 7,4, 30 gamme allai 7. Les caractéristiques de visc...y.,À té pour Ucn injectable correspondent, de pr&erence, à celles s uni le mélange des 3051371 6 différents constituants utilisés p paration, et en compo5 s A et Bi, ou des corrod , . et B2, voire des con,,.:' Bi et C, en fonction du mode de mélange sélectionné, et notammeni, moins de 5 secondes après ledit mélange. De manière a,-artageuse, les compositions injectables sont obtenues e. vement " compositions A et BI, ou bien des compositions A et E, ou bien C.C:Ir positions A, Bi et C. En particulier, il n'est pas nécessaire fajouter une base, que la soude pour obtenir une Wicaion, ,,-,-Jelification du chitosane présent dans la compositon A est 10 oBLenue giace a un verre bioact t dans la composition P. ne telle composition inject e est donc, (.1'.:'ns, .préférence, obtenue pEr- -u-,...ange des seules composition_ A et Bi ou bien des seules compositions f. L2, ou bien des seules compositions A, Bi et composition Bi correspond à des particules d'un verre bioactif ou à un mélange de particules de 15 verres bioactifs et se trouve donc sous la forme d'une poudre. Il esi possible de mettre préalablement au mélange avec la compof.;hon A, cette poudre en suspension dans une solution aqueuse, et en paitculier, dans de l'eau c 'espondant à la composition C. Dans ce cas, ce' ,evient à former rmédiairement une suspension aqueuse B2 de part d'au 20 verre bioactif, le pH de cette suspension étant, de préférence, dans la gamme allant de 5,5 à 8, de préférence dan rnme allant de 6,8 à 7,2. L'invention a également pour obje, ies produits destir s à la préparation d'une composition injectable et lesdites compositions injectai décrits dans le cadre de Vi , pour leur utilisation dans la régénération 25 d'un tissu osseux, après injection de la composition injectable à un sujet, notamment dans le domaine orthopédique ou orthodontique. Le sujet sera un êtr.:, nyn ou un animal. En particulier, dans une telle utilisation après injectiul sujet, il y a formation. d'un hydrogel de chitosane in vivo. La gélH: du chitosane présent r.riLnalement dans la composition A est 30 obtenue grâce à un verre bioactif présent initialement dans la composîbDn Bi. 3051371 7 L'invention concerne nt une méthode d r1 énE. l'un iseux chez un sujet c.,:.Jrnrq-erlint le mélange des c.' A et Bi, ç compuftions A et B2, ou bien des compositions A, BI. et C, nduislnt à -H-nation s d'une composition injectable, exempte de glycérophosphatu des particules verre(s) bioactif(s) en suspension dans une solution E,-,-,.ueuse de chitosane, en particulier .F,',7:!,`,T07 Î3 nrOcédé de préparat -jection audit sujet de C:omposition inj . ,:abtenue 10 la zone f.''! !a ré trAn du tissu osseuA souhaitée, oePficz.M(Dn 'h situ de la composition injectée. L'invention concerne également une méthode de réc f d'un tissu osseux chez un sujet comprenant : e mélange d'uE.-r solution aqueuse de chitosane de pF.: 5enant à 15 la gamme allaHL de 3 à 7, dite composition A et d'une poudre de particules d'un ou plusieurs verre(s) bioactif(s), dite composition BI, en l'absen2:e de glycérophosphate, conduisant à la formation d'une composition injectable, exempte de glycérophosphate, contenant des particules d'un ou sieurs verre(s) bioactif(s) suspen is une solution aqueuse de chitosane, en par tic hr selon le .e préparation décrit ci-après, l'injectioi, ourlit sujet de la composition injectable obtenue au niveau de la zone cw, régénération du tissu osseux est souhaitée, - la gélificatic,i situ de la composition injectée. 25 L'invention concerne également une méthode de régénération d'un tissu osseux chez un sujet comprenant : i) la prE."..T7r1.tion d'une composition injectable, exempte de glycérophosphate, contenant des particules d'un ou plusieurs verre(s) ' Jactif(s) en suspension dans une tion aqueuse de 30 chitosane, caractérisé en ce qu'il COMp,"7...?''n, consiste exclusivement en les étapes successives sui : 3051371 - disposer d'une ( aqueuse c' t)s- ne de pH appartenant à la gamme allant 7, dite com - A, - d'une poudre de particules d'un ou plusieurs verre(s) bioactif(s), dite composition Bi, mettre la compositior Bi en suspension aqueuse, et préférentiellement, en sus ision dans de l'eau, mélanger la composition A la suspension aqueuse de particules d'au mo verre bi idement - la r,r-Lse: suspen.:1,7-7 de la composiUon préfère :e, rroins 0 10 sec:des après, e nréférentieller-nent, rdoins cl^ n secondes apres, 1e7 c.lfférentes compotions et solutions utilisée exemptes de :Jphosphate, ii) I jection audit sujet de la composition injectable obtenue au niveau de la zone où la régénération du tissu osseux est 15 souhaitée, iii) la gélificatio r situ de la composition injectée. L'in' - concerne également un dispositif de conditi.. comprenant de..H, c:mpositions A et BI. formant un produit selon voire trois compol.ii,:pns A, B1 et C. Ledit dispositif peut être composé ci un 20 unique ensemble de conditionnement comprenant les compositions A et Bi conditionnées séparément l'une de l'autre dans deux compartiments dudit ensemble de conditionnement, et en partlruller, dans un système d'injection tel qu'une seringue à deux compartimert7 Selon un mode de réalisation particulier, le dispositif de 25 conditionnement selon l'invention comprendra également ta composb.:::n. C, ledit disposV pourra alors être composé d'un unique ensemble de con ornement comprenant au moins trois compartiments indépendants contenant respectivement chacune des trois compositions A, B1 et C. Le dispositif comprc,:li,-::---a,. de préférence, des moyens permettre la mise en 30 contact et le rrie.-::uige des deux compositions A et Bi, voire des trois compositions A, El et C. ti gens permettant la mise en contact des deux compositions, voire des trois compositions, sont tels que le 305 1 3 7 1 mélange iç. compos: conditionnerr juste avar,L ensemble de de 1,:_= composition irc;ctable obtenue. E7C eff au Ces moyens pourront permetre uer un séquentiel, lorsque le dispositif contient le i.075 5 mélange des composkions B1 intermédiaire mise en cont.Fii- Un tel dispose i' est, par trois compartiments. Il est égaiement possible que dans le disposi r de conditionnement, 10 compositions A et B1 scft7nt condltlo '-iéparément l'une de l'autre, dans deux unités de conditionnement H Dans le cas où une composition C est présente, la composition C pourra également être conditionnée dans une unité de conditionnement distinC La description détaillée c i rdes compositions C permet de 15 r COMpren-.,-,:fre Composition A La composition A contient du c,, 7:iwne. Le chitosane, est un dérivé partiellement, voire totalement désa:_.:tylé de la chitine. Ses différen- 20 3 sont notarrn.7-1t caractérisées par leur degré d'acétylation (DA) et Ir masse mc ,culaire moyenne en masse Mw. De manière préférée, le chitosane de la composition A présente une masse moléc.i kn/rnol, de moyenn,_ appartenant à la gamme allant de 80 à 1000 ..rente, à u y mme allant de 100 à 700 kg/mal et/ou le 25 ii::osane présente un degré d'acétylation appartenant à la gamme allant de 60%, de préférence, à la gamme allant de 0 à 20°k. Un degré A, B1 el C : mise en contact et C, pour former une composition .7.ompositic.,-is B2 e. compartim. -e sane mme d'acétylation inférieur ou égal à 20% est preinflammatoire du chitosane. On préférera présentant une masse moléculaire moyenne Mw appartenant à 7.ur éviter le .itiliser un 30 allant de 100 à 700 kg/, L4-1 degré d'acétylation appartenant à la gamme allant de 0 à 20%. 305 1 3 7 1 10 Dans le de l'inve . /enfles en masse Mw du chitosane sc ,romatograph :`exclusion stérique, dont les corËU'rr's experin.---.i.-zdes sont décrites ciarr. Dublica «Physico-chemical r of th of chitosan in a hydroalcot c medium » A. IviONIT:r-,.'3AULT, C. V1TON, A. DOMARD Biomaterials' 26'. 933-9413 l'acétylation (DA) es.. .nine en utilisant la tecl-1- RMN en suivant la r odoloçire r73i (Asako H7.- -asni Odani, Akio Nakajima, Polyme letin (19,71', Volume: 2E T. 1, lo Publisher: 3pringer, Pages: 87-94). De manière avantageuse, r de le .;,::.,,niposition A appartient à la gamme allant de 4 à 6,5. Un nrr, ue la suspension injectée, obtE I après mélange d comp t de celle comprenant les part,: de verre(s) bioa et stabilise n'ait pas un pH inférieur à 15 6,5, voire même de pré. ente inférieur à 6,0, pKa de l'amine des rés Ur glucosam j chitose étant de 6,2. Un pH plus bas de la solution A proche de peut "nnr - ?nvisagé, si le temps entre le mélange ,1 la composition les particules de verre(s) bioact et l'injection de a ...:omposition injectable alors obtenue est suffisant pour 20 permettre au pH de remonter --dessus de 6,5. En particulier, la corr sition A comprend une quantité d'acide nécessaire pour protoner lesi ctions amine présentes sur le chitosane, ledit. acide étant, de préférence, racide acétique ou chlorhydrique. Notamment, la comp, A comprerck-a une quantité d'acide juste 25 nécessaire pour pro br- ; tonctior.F.;.: amine des résidus glucosamine du chitosane. L'acide de préférence, présent en quantité équimolaire par rapport aux résidus ylocosamine du chitosane. Dans la composition A, (jiitosane r:)nc sous une forrre protonée, a de ses fon amine, qiiseront donc sous lu .'orrne 30 -NH3+. Ces groupements -NH3 créent des ;.3ions sur les chaînes de chitosane, qui vont alors se trouver sous forme :.,!'ployée. Le polymère est donc dissout en solution aqueuse.. 3051371 11 L'ajustemen' du de la solution aqueuse de chitcs..7. pourra é par incorp,...yrailon d'acide .,que dans la soit ior aquet. clIILosdne ou in::.urporation sukde. Un autre acide, tel que I acide chlorhydrique rrait égalerr tre utilisé. 5 De manière préférée, l,i-:nn-4.-)osition A comprend une concentration en chitosane de 0,5 à 6 % '.,férence de 1 à 4% (rr concentration est exprimé(.... à savoir le % que représera masse de chitosane sur 17 masse de lz Tf.)1'.npositio Avec les concentrations en chitosane l( plus faibles, la solution est m,:m ',,fisqueuse, io ce c permet de Mie!..!Y COntrô!er "homogénéité du gel final, ap mé ange avec les particules de -) ' Le gel obtenu in situ avec les les concentrations is facilement colonisable par De ri>articulièrement préférée, le pH de la comr n A 15 appartient a ri-mile allant de 4 à 6,5 et elle contient une concept chitosane de -(m/m). Compositions Bi et B2 De manière avantageuse, la cois com 1 B1 comprend des 20 d'un verre bioactif qui compr u moins du Si02, du Na20, du Ca0 et du P205. n d'autres types de verres pourront être utilisés. Le ou les verres seront sélectionnés de manière à obtenir, après mélange des compositor de chitosane et de verre( sélectionnées, une remontée de :171 25 pour le mélange, dans un temps donné. En particulier, il est cherché à obtenir pour la composition injectable, à un temps t qui appartient à la gamme allant de 5 à 20 minutes, un .1 appartenant à la gamme allant de 6,8 à 7,4. En particulie., /erre umprend 30% à 70% en poids de 30 5102, 10 à 50% en poids de CaO, 5 40% en poids de Na20 et de 2 à 20% en poids de P205. 305 1 3 7 1 12 Notarnrn un verre bioactif A composition est la suivante r 3 être utilisé 50 % en poids clE 10 à 30 % en poids de CaC, *J.0 à poids de Na20 et 2 à 8 % en poids de P205. Un tel verre bioactif est le 4555 (commercialisé notamment par Biometic ou Mo-Sci s Corpo, ation, ou sous forme de riispositifs médicaux par les sociétés Noraker, Novabone, etc.). Ce verre bic:, ne reste que modérément utilisé par les praticiens, principa._ nent en forme reste très limitée. La n à base de chitosane décrite aans la prés te invent, r, après kation, de constituer un support mu. ,ciel pour les particu'-i- verre 10 uloactif, ce qui répond aux problèmes - Bien d'autres compositions verres pourront être uti l'important est que le verre bioactif comporte une quantité suffisante ';',/de susceptible de relarguer des cations qui vont être capables de s Eger avec les protons du milieu. Un tel échange doit pouvoir intervenir lorsque le 15 ;.e bioactif est en suspension aqueuse, et en particulier, lorsqu'il est en mélange avec la sok.: c )sane. De tels cations peuvent être des cations d'un métal al c. ou a di-Io-terreux, par exemple, des ions 2 Na+, K+, Mg2+ Ba ou Sr2+. La composit, Ait verre bioactif comprendra donc au moins un des composants suivants : CaO, Na20, K20, MgO, ou SrO. 20 La présence de strontium qui est ur c:,n posant radio-opaque, permettra une localisation de la composition in vivo, après injection et gélification. Le verre comprendra également génér7'ement du Si02. Cette part de Si02 sera, de préférence, sélectionnée de - à ne pas empêcher la mobilité des cations au sein du verre hic); ont pour vc e venir s'échanger 25 avec les protons du chiton . ainsi autoriser leur reiargage. En particulier, la composition B1 comprenc a des particules d'un verre bioactif comprenant de 40 à 60% en poids de Si02 et 2 ) 8% en poids -h P20 1. au moins un composant, voire 2, 3 ou 4, ,'arrni Cal ' , Sr2+, B3+ avec la totalité de ces coninn représente dc. 55% en poids. De 30 manière classique, la )sition d'un verre bioactif donnée dans le présent texte en % er. , par rapport au poids tH lud verre et la somme des % de chacun ues constituants donn& soit 100- , ou pour 305 1 3 7 1 13 le moins au moins 95 %, ce qui n'exclut donc pas forcément la présence d'autres composants. Le verre br,a::.tif entraîne une Jentation du pH, lorsqu'il est mélangé à la aqueL de chtosane ( omposition A). Cette s augmentation ce fait que nctions -NH3+ -lent présentes sur les chaînes de chitosane vont plus se trouver soti. cme protonée, mais sous forme -NI-12, perme ";fl--1 ainsi formation de c.,ns hydrogène et de liaisons hydrophobes entre les chaînes -plymères, voire au sein d'une même , conduisant au final à une gélif', -ion. 10 Il est égalemenl: r)ossible d'utiliser une combinaison de pluFle.!_. , verres bioacti- par exemple, un premier verre bioactif principalement pour l'obten lu pouvoir gélifiant et un deuxième verre bioactif princH sé pour son pouvoir ostéoinducteur, ou qui va conduire au HJage l'ions, avec effet retard. La présence de Sr0 pour favoriser la localisa 15 i'implant pou- prévue dans l'une ou l'autre des corrnIsitions de verre bioactif. De .--,anière préférée, le premier verre bioactif pourra être un de tix précédurnent décrits, notamment un verre bioactif comprenant 40 à 60 % en poids de Si02, 10 à 30 % en poids de CaO, 10 à 35 % en poids de Na20 et. 2 à 8 °AD en poids de P205. Le deuxième verre bioactif pourra 20 comprendre, quant à lui, 60% à 75% en po de P205, 6 à 35% en poids de .CaO, 5 à 12% en poids de Na2L.), à 18°A n poids de K20 et 0 à 8% en poids de A1203. De manière avantageuse, les particules de verre bioactif ont un qui apparw, .1. à une gamme allant de 3 à 500 pm, et notamment 7,ui 25 appartient à une gamme allant de 6n à 250 pm. Bien entendu, la compositior du verre bioactif ou du mélange de verre(s) bioactif( s) sélectionné(s) et la taille des particules dueii: verre bioactif a une influence sur la bioactivité du produit et sur la gélification de la composition. Les particules de verres bioactifs pourront être obtenues par 30 broyage de lingot de verres bioactifs et la taille souhaitée rr obtenue, par passage des particules obtenues sur des tamis, selon des Led-iniques bien connues de l'homme du métier. La taille mentionnée dans le cadre de 3051371 14 l'invention, à moins qu'V r plus grande dimension .cifié autrement, corn. pond donc à la e choix d'une grenu Pmétrie plus fine entraîn gélification plus rapide. Aussi, si la r- 0,osition d'un verre bioactit -nt moins de cations relargables, l'homr métier pourra, en 5 diminua n' ;a 'Lüille des particules dudit verre bioartif;.. ugmenter la quantité de cations relargués et donc obtenir'effet souhait iç à-vis du chitosane. La composition B1 se int sous la forme d'une poudre de particules d'un ou plusieurs verre(s) bioactif(s) pourra _ dires nt mélangée à la composition A, pour former la formulation est 10 égalerrn possible er.prmer intermédiairemedt une SUSpei)Siüri àqueuae de particules d'un ou s verre(s) bioactif(s) (composition B2). Lorsqu'une composition B2 st.- t sous la forme d'une suspension use de particules un ou plusieurs verre(s) bioactif(s) est formée intermédiain ent, celle-ci sera, de préférence formée, peu de temps avant 15 le mélange des compositions A et B2. En 7-rticulier, la suspension correspondant à la composition B2 sera formée, 20 secondes, de préférence moins de 10 seconriPç avant le mélange de aade dernière avec la composition A. En effet, le e suspension aqueuse de bioverres évolue en fonction du temps. Dai le cadre de l'inve on, le pH d'une suspension 20 B2 augmente avec le temps, du fait. ,..change de cations intervenant avec l'eau. Aussi, le pF-, la compo! B2 donné dans le cadre de l'inveri qui nnpartient à la gamme allant uc 3,5 à 8, préférentiellement à la e allant de 6,8 à 7,2 correspond, de préférence, au pH de la sus! mesuré immédiatement anrès sa formation, notamment mol. 25 secondes, après sa constit De manière avantageuse, la composition B2 compre :' .1 moins (m/m), de préférence de 30 à 60°, de particules 7e(s) bioactif(s). Ces % exprimés en correspondent ;ente la masse du ou des verres bioa :présents sur la 30 B2. Lorsqu'une composition B2 correspondant à une suspension d'un ou plusieurs verre- kifs sei.c1 iu iiiée intermédiairement, elle sera 3051371 15 obtenue, p7, -tion des panic bioactifs ou d'un mélange de particules (rfi:! verre bioactifs Bi dans la compositior De manière pràférée, la comp,./s . est dc! l'eau, mais il n'est pas exclu qu'elle comprenne également des phosphates de C'ECHJITI, sous réserve s qu'elle respc.te les cond. --- de pH qui doit appartenir gamme allant de 5,5 à 8, de préf.r:,-,..7.e à la gamme allant de 6,8 à 7,2. àutres caractéristiques tn.. produit sena reinvention et dispositif de conditionnement io Les s ou suspensions aql. 3e. id:USe, s dans la préscu.::.-7. invention pou.- les compositions A, C iL 2, ront physiologiquement _?.ptables. De préférence, de telles solutions ou suspemEJ,..'.) isées dans de l'eau, et notamment de l'eau déionisée ou ultrapure. Les proportions de composition A et de composition Bi, voire de 15 mposition C quand celle-ci est présente, seront s par l'homme du métier, 7-ciFIlment pour avoir la viscosité soui-iaitée. De avantageuse, la masse de la composition B1 ou des compo.:.::bons B par rapport à la masse totale des compositions A et B1 ou des compt...b:):- A, B1 et C, respectivement, appartiendra à la gamme allant de 20% a 90ü/o, 20 de préférence à la gamme allant de 40% à 80%. La quantité des corr-nsitions B1 et C pourra être ajustée, par !hor ij métier, en fonct...,..)n de la part massique que les particules de représentent dans .a composition B2 obtenues après leur mélar., et ce, de manière à obtenir rinjectabilité souhaitée pour la composition finale. La quantité de 25 verre b.:,actifs sera ajustée pour contrôler le temps nécessaire à l'obtention d'un ç L'augmentation de la quantité de verre bioactif permet d'obtenir plus r iement un pH plus élevé, et (Jonc une gélification plus r lotis les paramètres précéderwrint listés seront ajustés pa, "homme t métier, de manière à rendre compatible le temps néc-.:27,3i-e à la 30 t. ification avec le temps nécessaire pour l'injection. De préférence, la gélification intervierc. 5 et . minutes après le mélange des compositions A et Bi, ou A et B2, ou des compositions A, 3051371 16 B1 et C, en foncticn (lu p 1 inventior node de sélectionné. 77,e.lon un mot réalisc- " ticulier du selon l'invention, cDcitions A r sont cc ées sépek, de l'autrr 5 deux compartir d'un uni î smble de cc ment, e particulier, système tel qu'une à compartimen. fsque le rwo uiL 'vention cor,prenci ,aleme,L. une compositien C de lère , les compcitions A, 131 et C sont conditions nes autres dans compar7 lents d'un 10 urique ensemble de condi., 73,rticulier, dans en système jection tel qu'une seringue H ompartin its. Selon un autre mode dr lisation particulier du produit selon l'invention, les compositions A et ont conditionnées séparémer de l'autre, dans deux unités de condii: lnement distinctes. Lorsque :duit 15 selon l'invention comprend également une composition C, de manière avantageuse, les compositions A, B1 et C sont conditionnées séparément les unes des autres dans trois ui yes je conditionnement distinctes. Toutes les combinaisons sont possibles, la première étant néanmoins préférée 20 composition C et B1 .an unique ensemble de conditionnement comprenant les compositions C et B1 conditionnées séparément l'u de l'autre ns deux rr,, arts dudit ensemble de conditionne , et compos innée séparément dans une autre unité de ...znditionnement 25 Rcomposition A et B1 de,' unique ensemble de conditionnement comprenant les compost et 131 conditionnées séparément l'une de l'autre dans deux lents dudit ensemble de conditionnement, et composH:: C litionnée séparément dans une autre û lité de conditionnemc, 30 composition A et C c., unique ensemble de conditionnement comprenant les comp A et C conditic séparément l'une de - dans peux compartiments dudit ensemble de 3051371 17 nc:.7,i-nent, et composition B1 conditionnée séparément dans une a unité de conditionnement. Dans ces différents cas, la cor: ion se présente sous U-17 forme sèche, c'est-à-dire sous la forme udre de particules d'un c-..1 .urs verr7: bctfs. Avec une telle ciiiposition B1, et en paruLc com 31 constituée exclusivement de particules d'un ou verr ikc, produit selon l'imer.tion est par -rement Pour le reste, les caractéristiques préférées des comper Pn .5 A et B1 précédemment listées s'appliquent, également de manière prférée, au 10 :,ositif de candit finement selon l'invention. En particulk le dispositif de -r-iditionnement selot Lier combinera : une composition A présentant un pH qui appartient à la gamme aL,. de 4 à 6,5 et qui contient une concentration en chitosane de 1 à 4% 15 une composition B1 corresponcL:It à des particules d'un eurs verre(s) biabcL notamment SOUS la forme d'une poudre. Les quantités de composition A et B1 seront sélectionnées, de manière à ce que, la masse de la composition Bl, par rapport à la masse totale de la zo composition injectable obtenue, rtienne à la gamme allant de 20% à 90%, de préférence à la gamme dE )% à 80%. Bien entendu, le chitcsa7 s bioverres correspondront, de manière avantageuse, à ceux présentés cornme. préférés dans les parties précédentes relatives aux compositions A et R1.. Lorsque le dispositif de conditionnement 25 comprend une composit sera, de préférence de l'eau. Procédé de oréoan Dn de ra nvention a pour ot .4: un ,Dpn injectable exempte 30 plusieurs verre(s) chitosane, ledit. mélange : glycérophosphate conta iant particules c1411 ou '13) en suspension dans une solution aqueuse de comprenant, voire con.sistarït e.xclusue:r.nt dans le 3051371 18 - d'une .aqueu,.-;,7 17.4 ,-)sane de pH appartenant à la gamme allant de 3 à C - d'une poudre de panicules d'un ou plusieurs verre(s) bioactif(s), dite composition B1, 5 en l'absence de g ycérophosphate. L'invention a également objet un procée: de préparation d'une compo5làpn injectable, exel de glycérophosphate, - tih-Plant des particules d'un ou piusieurs -vtrre(S) bioactif(s) uspension dar.7 une s aqueuse de chitosane, ce qu'il cornu, 10 conue exclusivement en le.F succ, puivantes disposer d'une solut -use -' sane de pH appartenant à la gamme allant de 3 à corh A, d'une poudre de particules d'un o verre(s) bioact composition B1, 15 mettre la --)osition B1 en suspension aqueuse, et préférentiellement, en susper.--,,i dans de l'eau, mélanger la compoSU,L.)n t.et la suspension aqueuse de particules d'au moins un verre bioactif obtenue, rapidement après la mise en suspension de la composition Bi, e préférence, moins de 20 20 secondes après, et préfénrtiellement, moins de 10 secondes après, les différentes compositions e solutions utilisées étant exemptes de glycérophosphate. manière préférée, épE :ion de la composition injectable se des compose A r 31, des compositions A et B2, voire 25 corr.:,,P,Ellons A, Bl. et C, contenues dans un produit selon l'invention tel que pré: .,--irnent défini. De manière préférée, la co ltion injectable selon l'invention ne contient pas de génépine, ni d 3Idéhyde, ni de formaldéhyde. généralement, la composition selon l'invention ne contil 3s 30 d'agent de réticulation. Aussi, ce °duits ne seront pas présents dans les différentes compositio di'.1-bc.ins utilisées dans les procédés selon 3051371 19 Le mélange des compostions A et Bi, des compositions A et B2, des compositions A, B1 et C, pour obtenir la composition injectable, --sc,u1T3 se faire par toute méthode appropriée d'addition ou d'injni;:)ri notamment. La composition A peut être directement mélangée Î.:; composiUm s c---r3tituée d'une poudre d7 de verre(s) bioactif(s), par exempie, en rredant directement it es de -.=\1-re sous la forme d'une poudre d:7,ns la solution de Il est également possible de mettre les icules de bioverre ,_;..ispension aqueuse avant de procéder au ange avec la soluton ,::Htosane composition A). Cette mise en 10 SUS f courra se faire avec une composition C, préser" dans le procluit .se o ;ln) tion ou avec une solution aqueuse, lier de l'eau. externe produit selon l'invention. Dans les c.tte mise en suspension sera réalisée juste avant de procéder au mélange avec la compoon A, par exemple, moins de 20 secondes avant, et 15 préférentiellement, moins de 10 secondes avant. Dans ce cas, le produit selon l'invention pourra comprendre trois compartiments, disposé dans un ensemble unique de conditionnement ou dans de .')nditionnement : l'un contenant la composition A, l'autre position B1 'verre(s) bioactif(s) et le troisième de l'eau (compositinn n. 20 Selon une première variante de mise en cet, . le proci.;;;V: je préparation d'une composition injectable selon l'invention comprend, rite exclusivement en les t.apes successives sui) - disposer d'une compu-;:.ion A, telle que définie dans le cadre de l'invention, 25 disposer d'une composition Bl., mélanger les compositions A et Bi. En particulier, selon une deuxième variante de mise en oeuvre, le procédé de préparation d'une composition injectaL:de: elon l'invention comme d, voire consiste exclusivement en les étrec .;.iceessives suivantes : 30 3po - d'une composition A, telle que lie dans le cadre de ulvent;c:;, disposer d'une composition Bi, 3051371 mettre composition B1 en susper aqueuse, et préféra ent, en suspension dans de l'eau, mélanger les compositi,,,.,),, A et la suspension obt nue, rapidement après la mise en sr :ie la composition B1 préférence, s moins r'?.. 20 secondes après, et préférentiellem moins de 10 secon( )rès. La susp.....sion de verres comprendra ente, au moins 15% (m/m), de préU7- de 60% cules un ou plusieurs ) bioactif(s). unière mise en suspension de la 10 composition B1 corre,, un pH qu Dpartient à gamme allant de 6,8 a formation d'une composition B2, présentant allant de 5,5 à 8, préférentiellement à lue ce pH est mesuré immédiatemed apr sa formation, notamment moir de 5 s )ndes après sa constitue De manière préférée, la usp rDrmée est obtenue par mise en 15 )ension de la composition A, dans une composition C telle que définie cadre de l'invention. Dans de tels procédés, le méta = veut être rendu plus hnmo ne grâce à une agitation mécanique ou , ace à un mélange dynarm dynamique d'une composition dans l'autre. notamment de la compoe.. A Jans la composition Bl, ou inverserr Du de la suspension B2 dans la composition A notamment). Là encore, les caractér4 igues préférées des compositions A et B1 précédemment listées s'app t, également de manière préférée, au procédé c, paration selon ivention. 25 En iculier, seront util = dans le procédé selon l'invention : composition A présentant un pH qui appartient à la gamm de 4 à 6,5 et qui contient une concentration en chitosane de 1 à+.30 ( une:ornposit±on B1 correspondant àparticules d'un ou plusieurs 30 verre.-(s) ,,$), notamment sous la forme d'une poudre. Les composition A et B1, voire les quantités de sol aqueuse et: er d'eau pour réaliser une suspensior, médiaire, 305 1 3 7 1 21 seront, sélectionnées, de m,1 . que a masse de 1E) ,Dy-l.posibon Bi, p,F,,7 rapport à la masse Dmposition inject. obtenue, ar. 'renne à la gamme allant Je 20% à 90%, de préférence à la gamme . e 40% à 80%. Bien entendu, là encore, le cl-H,,ü..ne et 'L.s hioverres correspondront, avantageus à ceux pré., 'rés dans le,E: p relatives au compositicrus A 31. L'invention alement po ..7 7bjet l compositic77 rijectables susceptibles d'être itenues par les Ï,Dr. :dés d- prér dans le 10 cadre de l'invention. composition obtenue est destinée à être injectée à L De , le mélange des compositions A et Bi, voire des compositions B1 et C formant :le compositk-,T, 62, puis des compositions A et 62, ou encore des composOjLi)ns A, B1 et C, aura lieu juste avant l'injection de la 15 COMpO ^Rjectable obte-le à i. _ notamment moins de 1 minute avant, référence rnoin avant. Bien entend ',jection devra intervenir avant la ge Les exemples ci-après, en référence aux Figures annexées, permeUnt, l'illustrer l'invention mais n'ont aucun caractère limitatif. 20 La Figure 1 présertç,,_ nvolution des mules G' et G" en n 7uence pour une sob chitosane de a :rat 'ormation imposée La Figure ,7, rr,,)ntre l'évolution de G' en G" en for: de la fréquu,ce ire, 2 11,-'n,.) 30 secondes après la réalisation du MélEn2,?., 25 . nation imposée : 0,5 L- ure 3 présente rtogramme aux rayons X obtenu après immerp.,' J'un hydrogel forrn, partir d'une suspension contenant des ' terres et du chitosane, nt 4 jours dans du SBF à 37°C. 30 Méti de déteur, n du r.fri mélange des rcr'n -,,,bo"-is est avantaç nent L( du contrôlée âce à un pH-mètre cle contact (Mettler-Toledo AG, Suisse). 305 1 3 7 1 22 Méthode de détermination de La mesure de la viscosité est à haute vitesse de cisaillement ent 104 s-1) et est obtenue par rhéométrie capillaire selon la méthode décrite dans la publicatbn « Chitosan solutions as injectable 5 srtems for dermal filer applicai is: rheological characterization and evidence » par C. A. Montembault, A. Guerry, T. Delair, E. R. Fulchiron, L. Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine Biology Society. IEEE Engineering in Medi, and Biology Society. 201; 10 Méthode d'ajustement de la granulométrie (taille des particules) des erres Les verres obtenus sont broyés à l'aide d'un mortier/pl Agathe ou à l'aide d'un broyeur à billes en carbure de tungstène. 15 Les poudres obtenues sont ensuite tamisées à sec à traver- colonne de tamis vibrants de diamètres de maille variables (63pm, 125pm, 1501. lm, 250pm, 315pm et/ou 500pm). Afin er les fines particules agglomérées qui ne correspondent pas aux granL métries recherchées, les différents lots obtenus après 20 séparation par tamisage sont plongés chacun dans un bêcher contenant 203m1 d'acétone et placé dans un bac à ultrasons. Les grosses partiu tombent au fond du bêcher, alors que les fines sont éliminé- e, ne. Cette procédure est répétée jusqu'à ce que l'acétone soit c' fines particules). Les lots de de granulométrie définie son 25 séchés dans une étuve à 92°C 70 à 30 minutes. Méth'.ie d'obtention du ,. L.ïesure ci ,iiffractogramme7 est réalisée l'aide d'un diffractiare à ayons rle leboratoire, utilisant une source de rayons X Cu 30 Ka et des angh: etre 3 et 60 degrés 29 modules du vert(, 7tre 0,2 et 4), et en géLL Bragg-Brentano. 305 1 3 7 1 23 1. Mise en évidence de la formation d'un Une solution aqueuse de chitosane 0,75c)f masse est préparée. Pour cela, le chitosane est dispersé dans un volu l'acide acétique est ajouté, de façon à une 5 stoechic f:.- fictions amine du c sane. Le chitosane utilise le cas de possède les caraC.éri tiques structu hs L ri d % masse molaire w de 550 000 gilliu, un ;i ice d polydis té Iode 1,z'' Pare rnent, une p udr ést disl--:::rsée dans d 1.0 d nisée, T le volume c volume de la solution de chiton P` exactement, il s'agit d dont la composition en masse suivante : 45°":' de Si02, 24,S 24,5% de Na20 et 5% de - masse de ven.-E:'. incorporée est à la moitié de la à la solution de chitosane. 15 Ainsi, les quantités utilisées dans cet exemple sont les suivantes : - 750 mg de solution de chitosane à 0,75% (m/m), - 375 mg de particules de verre 45S5 dispersées dans 750 mg d'eau déionisée. Les es utilisés et présentée dans le cadre de cette ont été préparés au Laboratoire Charles CouJmb de l'Université de Montpellier. Les bioverres ont été élaborés à partit- ::d'un mélange des matières premières suivantes Al(OH)3, H2NaPO4, CaCO3, -.1)4PO4, Si02 et K2CO3 en portions adéqt an fonction de la co osition souhaitée. Dans le cas ' ' "^r Lion d. eiie 4555, les matières premières utilisées sont Na2CO3 25 aPo), CaCO3 OlerckKGaA), 1-12(NH)4PO4 (Prolabo), et Si02 (Prolabo). Chah mélange ,té fondu dans un creuset en r:latine. La fonte obtenue a - e dans un moule en acier et le verre obtc.T,LI après refroidissement à h à une ure un peu s:J,..>"?.rieure à sa e transition vitreuse, puis r à une vitesse très jusqu'à 30 températ: nbiante. Chaque .ingot de verre formé a ensuite été broyé et tamisé, afin d'obtenir des poudres de granulométries différentes. La granulométrie de la 305 1 3 7 1 24 poudre de verre utilisée dans le cadre de cet exercui-A-e tw co.npr se entn: et 315 micron e ..e.17 sélectionnée grâce aux tamis "ansés. La associant la dispersion de bioverre et la chitosane a été mise sous agitation, de façon à obtenir un _ homogène. Au final, la--ï-ation de chitosarr dan-, le mélange est de 0,375 % (m/v). Lors de la réalisation du 1 e sous agitation, un mécan.' :e de gélification spontanée se prod sant à la formation d'un 'ogel physigue contenant une ,ruse. 10 Qu e minutes après le e, le pH du matériau composite se stab 7,4. 2. Caractéristiques rh^ oqiques Cette partie présente ' r7r-dérisations rhéologiques qui ont été s, afin de mettre en _ pouvoir gélifiant des bioverr rs de leu;. avec "ne solutio de chitosane. lution de chitosane à 0,75% en masse a été ér rée, comme -édemment. ement, -ferres bioactifs sous la forme poudre sont dispersés dans de l'eau déionisée dont le volume est égal au volume de la solution de chitosane. Plus exactement, il s'agit d'un mélange de verres composé de 2/3 de 45S5 et d'1/3 de verre Na16Ca30P50A14 (en proportions massiques). Le verre Na16Ca30Ps0Al4 (appelé ici « verres au phosphate ») est composé de 9,8% de Na20, 16,5% 69,7% de P205 et de 4% d'A1203 25 m/m). Ce verre a été élaboré -.,rivant la même procédure que ceHe décrite précédemment dans le pal 09i aphe 1.. Mise en évidence de la formation d'un gel, c'est-à-dire à partir d'un mélange de premières qui sont ici : Al(OH)3 (FlukaBioChemika), H2NaPO4 (FlukaC.._.... CaCO3 (MerckKGaA), H2(NH)4PO4 (Prolabo) en propC' adéquates, 30 (r.-Adues dans un creuset platine. Le verre obtenu par coulage de la fonte suivi d'une recuisson et d'u, tamisé, comme cela a été ement lent rsuite été broyé et A au paragraphe compo 305 1 3 7 1 25 Méthode d'ajustemer granul (taille des part,c7t es bioverres. La granulo es poudr verres 4555 et utilisées dans le cadre de cet exemple est comprise ertre. 00 et 1!- :roi ,s. La masse des verres incorporée est égale à la de la de chitosane. Ainsi, les quantités utilisées dans cet exerrr ' suiva ' - 750 mg de solution de chitosane à 0,75 - 375 mg dispersés dans :'eau Dans ces 375 sont pr de verre et 125 m lo verre au phosphate. granulomét: es verres utilisés dans le cadre de cet exemre con 50 microns et est sélectionnée grâce aux ta- La formulation associant dispersion a bioverres et la salut- 1 15 chitosane est mise sous agitatiur s.'efaçon à obte,- ,,- un système homogène. la concE:ration en Dsane dans le mélange est de 0,.... Afin de faciliter l'homogénéisation de la formulation, un système de deux seringues connectées est utilisé. Un connecteur relie les deux 20 seringues, l'une COI ienant la solution de chitosane, l'autre 2 .srension de bioverres. Le mélange est ainsi réalisé en effectuant plusi retours .,es deux seringues. Lors de la réalisation du mélange homogène, un nisme de fication spontanée se produit conduisant à la formation hydrogel 25 que contenant une partie minérale vitreuse. La transition sol-gel correspondante a été étudiée par 'éométi Ces essais ont été réalisés sur un rhéomètre AR 2000 C.A Inst, a, &Ifs) e isant une géométrie plan avec de 25 mm de di système de confiner de lécha iettant de mainte - e 30 atmosphère saturée en ,c7u et ainsi de limiter l'évapc ente dans l'échantillon. L'erse des essais a été réalisé mpérature ambiante (25°C). 3051371 26 Une caractérisation rhéologique a été d'abord réalisée sur une sclutiol de chitosane concentrée à 0,375% (m/v) ne contenant pas de verre. courbes obtenues pour une fDrrrUation sans verre sont présentées sur la Figure 1 et montrent un com,,.1Dment rhédoI,T,.. correspondant à l'état de solution. L'allure des courbes est caractéristique des viscoélastiques avec G' G" au h. fréquence, r7' G" étant respectiverr léfinis comme étant les modus élastique Cr vquux de l'échantillon. Une sa ti o n rhéologique a ensuite été réalisée sur une même cL n mais dans laquelle a été incorporée une suspensier parUoules de bioverres dispersées dans l'eau c.iEcnisée (suspension de 'Ï(...?rre 45Icïe au phosphate et introduite dans la propor 7 précédemment décrite). La Figure 2 montre les ccurbes rhéok.Iques obtenues 2 minutes 30 secondes après la réalisation du méla%,. Ces courbes montrent un 15 comportement rhéologique correspondant à at de gel des valeurs de modules G' et G" telles que G' 10 G", 'Jelle que 7bit la fréquence ang ire. propriété de gélification est tout à fait compati ivec le déveioppewient de systèmes injectables. 20 La présence des bioverres au n de la solution provoque une augmentation du pH dans le milieu et 1 déprotonation des sil:cc mine oi olane, ce qui pe..rm -Sification de la solution de s gels obtenus au cor 25 T. . ution ale Une étude bioverres aril de vérifier qt.p.7 Ion 7,r-bcu es de l'hydrogel, les cc u 1CCIVité. 30 Afin d'évau,:r cette bioct une solution _SBF (« SilTiUlüZ0U concentratiel proche de celle u!,7:73 -és dans je une 305 1 3 7 1 27 maintenus dans des concli.ftis de température et de pH physil_._ gigues (37°C et 7,5) [T. Kokubo, LK., S. Sakka, T. Kitsugi and T. Yamamuro. Solutions able to reproduu surface-structure changes in bioactive glass-ceramic A-W. J. BicTd. 13ter. Res. 1990, vol. 24, 721-734]. 5 Les composites étudiés ici avaient i .Dpmposition suivante : - 750 mg de soluJ,..7, chitos7.u-, à 0,75 % (m/m) dans de l'eau déionisée, - 375 mg de verres dispersés dans 750 mg d'eaL dHnLée, ce cemp.renant 250 mg de verre 45S5 et 125 mg de ver; é nosphate io dans la partie précédente 2. La granulométrie des verres utilisés dans le cadre de cet exemple était entre 90 et 150 micron ,. Ainsi, après immersion des matériaux composites dans une solution SBF pendant deux jours, l'eau de l'échantillon obtenu a été el e par 15 lyophilisation, et analysée par diffraction des rayons X. Le diffractogrammf:,J aux rayons X, présenté sur la Figure 3 montre la formation d'une phase cristalline, la calcite. Les flèches pointent les pics de diffraction caractéristiques de la calcite. Dans le cas des bioverres seuls, il est généra!ernent observé que la calcite qui pr dans un premier temps, se transforme ensuite en hydroxyapatite : cette phase peut être ainsi considérée dans ces conditions comme un précurseur de l'hydroxyapatite ')onatée [Lefebvre, L, Développement de bioverres poreux pour application à l'orthopédie et à l'ingénierie tissulaire, 2007 , INSA de Lyon]. Dans le cas des bioverres incorporés dans l'hydroge" phériom.T 25 d'échanges ioniques avec le milieu sont donc compara '3 ce qui est observé dans le cas de bioverres seuls. Ces expérience_ .no.ntrent que le comportement des bioverres n'a pas été modifié dans le cas de leur incorporation dans un hydrogel de chitosane et que ces bioverres ont conservé leurs propriétés de bioactivité. 30 REVENDICATIONS1. Produit destiné à la préparation d'une co: , injert.hle contenant de manière séparée l'une de 3U moins un uemière et urtE,-: compositions, et dans lequel - :première composition (Dite A est une solution aqueuse de chitosane de pl :::îppartenant à la gamme allant de 3 à 7, et - la deuxième composition dite B1 correspond à des particules d'un ou :Lieurs verre(s) bioactif(s), ledit c.,:.7.:::21ant pas de glycérophosphate. 1.0 2. Produit selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il ne con pas de génépine, ni de glutaraldéhyde, ni de formaldéhyde. 3. Produit selon la revendication 1 ou 2, caractér ce que le pH de la composition A appartient à la gamme allant de 4 à 4. Produit selon l'une quelconque des revendic....._ 1 à 3, caractérisé 1.5 en ce que la composition A comprend une quantité d'acide nécessaire pour protoner les fonctions amine présentes sur le chitosane, ledit acide étant, de préférence, de l'acide acétique ou chlorhydrique. 5. Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que la )osition A comprend une concentration en chitosane de 0,5 20 à 6 % (m/m), de préférenc: rie 1 à 4% (m/m). 6. Produit selon l'une qi..u..iconpue des revendications 1 à 5, caractérisé en CI que la composîn'J7, Bi compr.E,n,.:1 les particulE ei verre bioactif qui con End au moins OuETIj2, du Na20, du CaO et _ ?ro' 't selon la revendication 6 caractérisé en ce que ledit verre. 25 m nd 30% à 70% en poids c. ,,,d.)2 10 à 50% en poids de CaO, à 40% en poids de Na20 et 2 à 20% er P205. 8. Produit selorî les revendications en ce que la compositc7 1 c7Tnprend des particules d'un bioactif comprenant 40 à 60 % en poids de Si02, 10 à 30 % en poids de 30 CaO,. 10 à 35 % en poids de Na20 et 2 à 8 % en poids de P205 et des particules d'un deuxième verre bioactif comprenant (500/ à 75% en poids de "7 305 1 3 7 1 29 P205, 6 à 35% en poids de CaO, 5 à 12% en poids de Na20, 0 à 18% en poids de K20 et 0 à 8% en poids de A1203. 9. Produit selon l'une nuemnque des revendication. 1à 8; t(risé en ce que les particu rre bioactif ont une taille il appartient à une 5 gamme allant de 3 à ..n) pm, et notamment qui appartient à une gamme allant de 60 à 250 pm. 10. Produit selon l'un- - conque des revendications 1 à 9, carctérisé en ce pull comprend également une composition C correspondant OJ L...sie solution aqueuse de pH appartennt à la garn,-ns: allant io de préférence à la gamme allant de 6,8 à 7,2. 11. Produit selon la revendication 10, caractérisé en cc q» la composition C est présente en quantité telle que la codi.- B1 représente au moins 15% (m/ m', de préf,à-ence de 30 à 60cr:::, de la masse totale des compositions B1 et C. 15. 12. Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, car:n(.:L-n ce que la masse de la composition B1 ou des compositions BI et C, pdr i-apport à la masse totale des compositions A et BI, ou des compositions A, B1 C, respectivement, appartient à la gamme allant de. 20% à 90%, de préfe._dce à la gamme allant de 40% à 60%. 20 13. Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que le chitosane présente une masse moléculaire moyenne Mw aprrl7nnant à la gamme allant de 80 à 1 000 kg/mol, de r7r,r..,rrr à la gamme ,1Valt de 100 à 700 kg/mol. 14. Produit selon l'urL quelconque des revendiceons 1 à 13 25 caractérisé en ce que le chitosane présente un degré d'E n appartenant à la gamme allant de 0 à 60%, de préférence à la gan - liant de 0 à 20%. 1 . roduit selo tun quelconque des revendications 1 à 14, cari . en ce qu, ienc ffions A t B1 sont conditidi-ines 30 séparément l'une de . ans ,:::omparti.1.---tents d'un unique ensemble ,..,nditionnement' et c particulier, dans un système d'injection tel qu'une ue à deux compartiments. 3051371 30 16. Produit selon rune quelconque des revendications 1 à 14, caractérisé en ce que les compositions A et B1 sont conditionnées séparément l'une de l'autre, dans deux unités de conditionnement distinctes. 17. Procédé de préparation d'une composition injectable, exempte de s glycérophosphate, contenant des particules d'un ou plusieurs verre(s) bioactif(s) en suspension dans une solution aqueuse de chitosane, ledit procédé comprenant, voire consistant exclusivement dans le mélange : - d'une solution aqueuse de chitosane de pH appartenant à la gamme allant de 3 à 7, dite composition A, et - d'une poudre de particules d'un ou plusieurs verre(s) bioactif(s), dite composition Bi, en l'absence de glycérophosphate. 18. Procédé de préparation d'une composition injectable, exempte de glycérophosphate, contenant des particules d'un ou plusieurs verre(s) bioactif(s) en suspension dans une solution aqueuse de chitosane, caractérisé en ce qu'il comprend, voire consiste exclusivement en les étapes successives suivantes : disposer d'une solution aqueuse de chitosane de pH appartenant à la gamme allant de 3 à 7, dite composition A, d'une poudre de particules d'un ou plusieurs verre(s) bioactif(s), dite composition Bi, mettre la composition B1 en suspension aqueuse, et préférentiellement en suspension dans de l'eau, mélanger la composition A et la suspension aqueuse de particules d'au moins un verre bioactif obtenue, rapidement après la mise en suspension de la composition Bi, de préférence, moins de 20 secondes après, et préférentiellement, moins de 10 secondes après, les différentes compositions et solutions utilisées étant exemptes de glycérophosphate. 19. Procédé de préparation selon la revendication 18, caractérisé en ce que la suspension aqueuse de particules d'au moins un verre bioactif 305 1 3 7 1 31 obtenue, un pH dans la gamme allant de 5,5 à 8, de préférence dans la g,::; allant de 6,8 à 7,2. 2ü. Procédé de préparation selon la revendication 18 ou 19, cara-1, en ce que la suspension aqueuse de particules d'au moins un verre bl(,)i,r1:.-.J s oht.enue comprend au moins 15% (m/m), E2e de 30 à0% de particules d'un ou p jeurs verre :.)(Dactif(s). 2 :cédé lon la re 18 à 20, caractérisé en ce que le pH de la comt_ rtior 22. Procédé de pn :ion sEftrr l revendication 18 à 21 ce que la c.ompositio en.d ne quantité d'acide rf, (:),:oner les fonctions an- ,.,Ites sur le chitosane, ledit -.::,.?Jrtient à la gamme aflr cr4 à ""),5. risé pour de nce, de l'acide ac ,i=..:111orhydrique. 23. Procédé de préparation selon la revendicatlar, ;' 3 à 22, caractérisé en ce que la composition A comprend une concentration en chitosane de 0,5 15 à 6 % (m/m), de préférence de 1 à 4% (m/m). 24. Procédé de préparation selon la revend:c.1.. -.1n 18 à 23, caractérisé en ce que la composition B1 comprend des r incs d'un verre bioactif qui comprend au moins du S102, du Na20, du CaO et du P205. 25. Procédé de préparation selon la revendication 24, caractérisé en ce 20 que ledit verre bioactif comprend 30% à 70% en poids de 902, 10 à 50% en poids de CaO, 5 à 40% en poids de Na20 et 2 à 20% en poids de 26. Procédé de préparation selon la revendicat 18 à 25, caractérisé en ce que la composition B1 comprend des partie,:l: d'un premier verre bioactif comprenant 40 à 60 % en pcie.3 le Si02, 1C L 30 % en poids de 25 CaO, 10 à 35 % en poids de Na20 et 2 à 8 % en poids de P205 des parLules d'un deuxième verre bioactif comprenant 60% à 75% en 7 le P205, 6 à 35% en poids de CaO, 5 à 12% en poids de Na20, 0 à 1i.)-16 en poids de 0 à 8% en poids de A1203. 7. c.cédé selon l'une quelconque des revendicnd 18 à 26, 30 en ce que les particules de vF,r-e bioactif nrt. une qui ...tient à une gamme allant de 3 à 5C et notamment qui appartient une gamme allant de 60 à 250 p 305 1 3 7 1 32 28. Procédé selon l'une quelconque des revendiutbns 18 à 27, caractérisé en ce que le chitosane présente une masse molculaire moyenne Mw appartenant à la gamme allant de 80 1 kg/mol, de préférence à la gamme allant de 100 à 700 kg/mol. 79. Procédé selon l'une quelconque des revertions à 28, caractérSe en ce que le. chitosane présente un degré appartenant à la gamme allant de 0 à ,v, de . à la gam; allant de 0 à 20%. e correspondant à une suspension d'un ou plusieus verre(s) bioactirs dans une solution aqueuse de chitosane, obtenue par mélange des et Bi, par mélange compositions A, Bi et C, ou FéSfl des compositions B1 et C pour fi:nier une composition didiire B1 puis B2 et C, du produit tel que sd ni à l'une auelconque des - undications 1 à 14. 15 31. ,-position injectable in-espondant à une suspension d'un ou plusieurs verre(s) bioactif(s) cL., ss une solution aqueuse de chitosane, susceptible d'être obtenu par un procédé défini à l'une quelconqi'.des revendications 18 à 29. 32. Composition injectable selon la revendication 30 ou 31 caractérisée elle présente une viD..7.ci)sité à une vitesse de cisaillement de 104 s4 dans la gamme allant de 0,005 à 200 Pa.s. 33. Composition injectable selon l'une quelconque des revendications 30 à 32, pour son utilisation dans la régénénd::s duntissu osseux, après injection à un sujet. 25 34 nnenposition injectable pour son utilisation -)n la revendication 33, das se le après injection à uri HeL, il y a for._ J'un hydrogel de chitosane in VIVO. 35. Dispositif de ce snssment d'un produit selon l'une quelconque des revendication': 1 à dispositif comprenant au moins deux 30 compartiments ir pendants respectivement chacune desdites compositions A et 3051371 33 36. Di conditionnernent n revendication 35 caractérisé en ce qu'ilend des moyer pumettre la mise en contact et e mélange des deux compositions. 37. DispositV Ser.H.:)ri la revendication 36 c é r ce que les moyens permettant la mise er 77-'tact des deux compositions sont te lz que le mélange desdites compositi,:x effectué au sEr--. dudit dispositit: este avant l'injection de la composition !rIlect?b e oktenue. 38. Dispositif selon l'une qu vendications 35 caractérisé en ce qu'il se présente :77)U5 la forme d'une seringue 10 compartiments.