FR 3061016 A1 20180629 FR 1670788 A 20161227 1 UTILISATION COSMETIQUE D'UN EXTRAIT DE MITRACARPUS SCABER COMME AGENT ANTI-AGE L'invention concerne l'utilisation cosmétique d'un extrait de Mitracarpus scaber comme agent anti-âge et plus particulièrement comme agent améliorant la fermeté cutanée. La peau est l'organe de revêtement du corps humain. De fine épaisseur, elle est très étendue puisqu'elle recouvre toute la surface du corps et totalise chez l'adulte une surface d'environ 1,6 m2. Elle a pour fonction de protéger les tissus profonds du milieu extérieur, tant au niveau de la pénétration physique de corps étrangers, que de l'immunité, de la régulation de la température ou de la déperdition de fluides. Enfin, les contraintes mécaniques auxquelles elle est soumise en permanence lui imposent, plus que tout autre organe, une structure solide et cohérente associée à une grande souplesse. Malgré quelques différences d'aspect suivant le site anatomique, elle présente toujours la même structure morphologique de base. Elle est constituée à sa surface de l'épiderme, en profondeur du derme, et plus profondément encore de l'hypoderme. Le derme, auquel l'épiderme est solidement amarré, est un tissu conjonctif, parcouru par de nombreux vaisseaux sanguins et lymphatiques ainsi que par des nerfs cérébro-spinaux de la vie de relation et de la vie végétative. Il constitue une zone d'implantation des annexes cutanées ainsi qu'un tissu de soutien et de nutrition pour l'épiderme qui n'est pas vascularisé. Le derme est composé de deux étages, le derme superficiel ou derme papillaire qui correspond au tissu conjonctif des papilles dermiques ; et le derme réticulaire, 3061016 2 tissu de soutien dermique, qui représente les quatre cinquièmes de l'épaisseur du derme. Le derme papillaire tient son nom de sa surface en papilles qui forment des saillies alternant avec 5 des prolongements épidermiques. Il a une structure fibreuse très fine, riche en cellules, en capillaires sanguins, en fibres nerveuses et corpuscules tactiles. Il contient entre autres: - des fibres réticuliniques qui correspondent à une variété 10 de collagène, - des fibres oxytalanes qui forment un réseau perpendiculaire qui paraît être ancré à la membrane basale ; elles jouent un rôle important dans la résistance mécanique de la peau, 15 - de la fibronectine qui conditionne le vallonnement de la jonction dermo-épidermique et semble jouer un rôle dans l'adhérence des tissus à la jonction derme-épiderme et entre les cellules endothéliales du derme, - des fibroblastes qui sont des cellules responsables de la 20 biosynthèse des macromolécules formant le tissu conjonctif du derme. Entre les cellules et les fibres se trouve la lymphe interstitielle qui contient entre autres des protéoglycanes, de l'acide hyaluronique, et des 25 mucopolysaccharides. Le derme réticulaire est plus dense (du fait de la présence de fibres de collagènes) et élastique. Il est plus pauvre en cellules. Il est anastomosé à la partie profonde du derme papillaire et contient également de la fibronectine, 30 des fibres réticuliniques, des fibroblastes, des histiocytes et du liquide intercellulaire. Le derme réticulaire contient: - des fibres d'élaunine, intermédiaire entre les fibres oxytalanes et élastiques, 3061016 3 - de fines fibres de collagène ; le collagène se compose de 19 acides aminés présents en proportion variable (principalement glycine, arginine et hydroxyproline), - des fibres élastiques minces et sinueuses, constituées 5 d'élastine, protéine fibreuse composée de divers acides aminés (surtout proline et glycine mais aussi cystine, histidine, hydroxyproline, desmosine et isodesmosine) qui leur confère leur élasticité. La synthèse de l'élastine est assurée par les fibroblastes. 10 Les fibres élastiques et les fibres de collagènes forment la charpente protidique fibreuse du derme. Les fibres communément appelées « fibres de collagène » en microscopie optique, sont toujours formées d'un assemblage de fibrilles de diamètre régulier (90 nm), 15 striation périodique (64 nm) très bien vues en microscopie électronique. Les fibres dites de réticuline en microscopie optique sont aussi constituées de fibrilles présentant une striation périodique à 64 nm mais de plus petit diamètre ( 60,0 mg 3061016 12 - Solubilités à +20°C = Eau : très soluble ; Huiles végétales et Huiles minérales : insoluble La demanderesse a démontré que l'extrait de 5 Mitracarpus scaber utilisé selon l'invention ainsi que la composition cosmétique le comprenant peuvent être utilisés par application sur la peau comme agent anti-âge et plus particulièrement comme agent améliorant la fermeté cutanée. En conséquence l'extrait de Mitracarpus 10 scaber ou la composition cosmétique le comprenant selon l'invention peuvent être utilisés pour prévenir, pour retarder, pour lutter contre, pour traiter ou réduire le vieillissement de la peau et/ou l'apparition des signes de vieillissement de la peau. 15 On entend par signes de vieillissement de la peau : le relâchement cutané, la perte de fermeté cutanée, la perte d'élasticité des fibres cutanées, une peau flétrie, et une peau amincie, et une peau terne et/ou sans éclat. L'extrait de Mitracarpus scaber peut être 20 utilisé pour réparer les manifestations cutanées du vieillissement et/ou corriger la perte de fermeté et/ou redensifier une peau flétrie ou amincie et/ou redensifier et/ou raffermir et/ou tonifier la peau du visage et/ou du corps. 25 On entend par utilisation cosmétique l'utilisation d'une composition cosmétique, c'est-à-dire une formulation convenant à une application cutanée, comprenant l'extrait de Mitracarpus scaber ainsi que des excipients cosmétiquement acceptables. 30 C'est ainsi que les compositions selon l'invention peuvent comprendre un ou plusieurs agents de formulation ou additifs d'usage connu et classique dans les compositions cosmétiques tels que, à titre d'exemples et de façon non limitative, des adoucissants, des colorants, des 3061016 13 actifs filmogènes, des tensioactifs, des parfums, des conservateurs, des émulsionnants, des huiles, des glycols, des vitamines comme la vitamine E, des filtres UV, etc. Grâce à ses connaissances en matière de cosmétique, l'homme du 5 métier saura quels agents de formulation ajouter aux compositions de l'invention et en quelles quantités en fonction des propriétés recherchées. Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier dans 10 le domaine de la cosmétologie sans autre restriction galénique que l'application sur le visage et sur le corps. De façon avantageuse, les compositions selon l'invention se présentent sous la forme d'un gel, d'une crème, d'une lotion, d'un masque, d'une huile, d'un lait, d'un spray, etc. 15 De préférence, la composition cosmétique selon l'invention comprend de 0,01 à 10% d'un extrait de Mitracarpus scaber en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition. Avantageusement, la composition comprend de 0,01 à 5% d'un extrait de Mitracarpus 20 scaber en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition. La présente invention se rapporte encore à un procédé pour améliorer la fermeté cutanée comprenant l'administration cutanée d'un extrait de Mitracarpus scaber 25 ou d'une composition cosmétique comprenant ledit extrait. Les exemples ci-après concernent, d'une part l'évaluation de l'effet d'un extrait de Mi tracarpus scaber sur le collagène I et sure l'EMILIN-1 ; d'autre part les exemples 30 ci-après concernent des compositions objets de la présente invention. Les exemples font référence aux figures suivantes dans lesquelles : - Les figures 1 et 2 représentent 3061016 14 l'expression relative du Collagène I dans des fibroblastes en culture. - Les figures 3 et 4 représentent l'expression relative de l'EMILIN-1 dans des fibroblastes en 5 culture. I.EVALUATION DE L'ACTIVITE D'UN EXTRAIT DE MITRACARPUS SCABER LA SYNTHESE DE COLLAGENE ET D'EMILIN 1. A.MATERIELS ET METHODES 10 1) culture cellulaire Les fibroblastes sont ensemencés, sur lames, dans des chambres de culture 8 puits (Millipore Millicell EZ Slide) à raison de 15.000 cellules par puits dans du milieu MEM (« Minimum Essential Medium» - Thermo Fisher) supplémenté 15 de 10% de Sérum de Veau Foetal (SVF - Dominique Dutscher), de 2 mM de L-Glutamine (Thermo Fisher) et de 100 U/ml de Pénicilline-Streptomycine (P/S - Sigma). Quatre-vingt-seize heures après, les cellules sont traitées ou non (Contrôle) par le produit à 20 l'étude ou la référence ; en milieu Minimum Essential Medium supplémenté de 2 mM de L Glutamine et 100 U/mL d'un mélange de pénicilline et streptomycine ; et incubées à l'étuve pendant 72 heures à 37°C, 5% CO2. Deux extraits sont testés en parallèle l'extrait de Mitracarpus scaberhydroalcoolique 25 (60% H20 et 40% Et0H) est testé à 0,1% ;0,01% ; 0,05% ; 0,005% et 0,001% et l'extrait de Mitracarpus scaber NaDES (bétaïne-sorbitol-eau avec le ratio massique 47:30:23) est testé à 0,1% ; 0,05% et 0,01% selon les conditions. Le témoin positif est traité par de la Vitamine C à 10 pg/mL et du TGF-13 30 à 5 ng/mL. Chaque tapis cellulaire est ensuite rincé au tampon phosphate (PBS - Sigma), fixé au méthanol (-20°C) avant de procéder à la révélation du collagène de type I ou de l'EMILIN-1 par immunofluorescence. 3061016 15 2) Immuno-localisation Les cellules sont incubées avec l'anticorps (Ac) primaire dirigé contre la protéine d'intérêt (Ac anti-Collagène I - Sigma C2456 ou Ac anti-EMILIN-1 - Santa Cruz 5 Biotechnology sc-50340) puis avec l'anticorps secondaire dirigé contre l'anticorps primaire couplé à un chromophore de type Alexa (Ac de chèvre anti-souris couplé à un Alexa 488 - Thermo Fisher ou Ac de chèvre anti-lapin couplé à un Alexa 488 - Thermo Fisher). Chaque anticorps est incubé 1 heure à 10 température ambiante. Les noyaux cellulaires sont révélés par une contre-coloration au Di Aminido Phenyl lndol (DAPI - Sigma). Les lames sont montées avec du milieu de montage (Dako) puis observées au microscope à fluorescence 15 (Zeiss AxioImager Z2). Vingt champs de la population cellulaire sont pris en photographie par condition. Les images de fluorescence indiquent les régions de localisation de la protéine d'intérêt. Les images de fluorescence DAPI indiquent les noyaux cellulaires et donc le nombre de cellules par 20 champs. Les clichés photographiques sont analysés par le logiciel d'analyse d'image Visilog (FEI). Les données sont extraites en expression relative (aire) de la protéine d'intérêt rapportée à l'aire des noyaux cellulaires (DAPI). L'étude statistique a été 25 réalisée par le Test de Tuckey, à l'aide du logiciel JMP (SAS). 3061016 16 A.RESULTATS 1)Collagène de type I Control Vitamine C (p.g/mL) Extrait de Mitracarpus sc ber Hydro- + TGF n /mL Alcooli ue 10 + 5 0,01% 0,005% 0,001% 1,26 5,40 2,15 1,64 1,60 0,08 0,62 0,19 0,05 0,15 - 330,4 71,4 30,3 27,7 - 0,016 0,857 0,998 5 Contrai Vitamine (pg/mL) EXTRAIT MITRACARPUS HADES TGEM3 (ng/mL 10 0 01% 0,005% 0,001% 1,26 5,40 5,91 6,16 2,97 0,08 0,44 0,52 0,44 0,33 0,0 330,4 371,2 390,4 136,5 _ Les résultats sont présentés en figures 1 et 2. Après traitement par 1 'extrait de 10 Mitracarpus scaber, on observe une augmentation significative de 1 'expression du collagène de type I, collagène dermique majoritaire dans les fibroblastes humains normaux en culture. Avec 1 'extrait de Mitracarpus scaber hydro alcoolique, on observe une augmentation de 71% pour une concentration 15 optimale de 0,01 % ; tandis qu'avec 1 'extrait de Mitracarpus 3061016 17 scaber NaDES on observe une augmentation de +390% pour une concentration optimale de 0,005%. 2) EMILIN -1 5 Control Vitamine Extrait de Mitracarpus scaber C (pg/mL) 1-1,m1ro-A1c-)o1ique 30 0 i0 0,050% n ou% 2,02 11,56 3,34 4,86 3,39 0,15 1,43 0,41 0,55 0,24 0,0 471,9 65,4 140,3 67,9 _ Control Vitamine MADES C (g/mL) EXTRAIT MITRACARPUS 30 0,01% 0,005% 0,001% 0,98 5,28 2,27 2,14 1,81 0,11 0,24 0,24 0,14 0,12 - 437,5 131,5 118,3 83,9 _ 0,012 Les résultats sont présentés en figures 3 et 4. 10 Après traitement par l'extrait de Mitracarpus scaber on observe une augmentation significative de l'expression de l'EMILIN-1 dans les fibroblastes humains normaux en culture. Avec l'extrait de Mi tracarpus scaberhydro alcoolique, on observe une augmentation de 140% à la 3061016 18 concentration de 0,05%, et de 68% à la concentration de 0,01% ; tandis qu'avec l'extrait de Mitracarpus scaber NaDES, on observe une augmentation de 118% à la concentration de 0,005%, et de 132% à la concentration de 0,01%. 5 L'extrait de Mitracarpus scaber renforce la structure particulière du derme papillaire, première cible du vieillissement cutané intrinsèque, et restaure ses propriétés biomécaniques. 10 II.EXEMPLES DE COMPOSITIONS COSMETIQUES CREME VISAGE ANTI AGE TOUTES PEAUX 96 15 CARBOMER 0,40 PHENOXYETHANOL 0,40 GLYCERIN 2,00 DISODIUM EDTA 0,10 ETHYLHEXYL GLYCERINE 0,20 20 GLYCERYL STEARATE & PEG-100 STEARATE 2,50 DICAPRYLYL CARBONATE 4,00 CETEARYL ALCOHOL & CETEARYL GLUCOSIDE 3,50 DIMETHICONE 3,00 I SONONYL I SONONANOATE 8,00 25 TOCOPHEROL 0,06 CAPRYLYL GLYCOL 0,30 BUTYROSPERMUM PARKII (SHEA) BUTTER 1,00 SODIUM HYDROXIDE 0,08 TAPIOCA STARCH 2,00 30 SODIUM HYALURONATE 0,10 TOCOPHERYL ACETATE 0,20 PARFUM 0,40 EXTRAIT DE MITRACARPUS SCABER 0,10 EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 3061016 19 5 SERUM VISAGE ANTI-AGE o o 0,40 0,50 3,00 CARBOMER CELLULOSE PENTYLENE GLYCOL DISODIUM EDTA 0,05 GLYCERIN 2,00 10 PHENOXYETHANOL 0,60 ETHYLHEXYLGLYCERIN 0,20 SODIUM HYDROXIDE 0,09 PPG-5-CETETH-20 1,20 TOCOPHERYL ACETATE 0,20 15 METHYL TRIMETHICONE 1,00 SODIUM HYALURONATE 0,10 EXTRAIT DE MITRACARPUS SCABER 0,10 ALCOHOL 4,00 PARFUM 0,20 20 EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 BAUME CONTOUR YEUX ANTI-AGE 25 CARBOMER o DISODIUM EDTA o 0,30 0,10 BUTYLENE GLYCOL 2,00 GLYCERIN 3,00 PHENOXYETHANOL 0,36 30 ETHYLHEXYLGLYCERIN 0,20 SODIUM HYDROXIDE 0,06 CETEARYL ALCOHOL & CETEARYL GLUCOSIDE 3,50 GLYCERYL STEARATE & PEG-100 STEARATE 2,00 STEARETH-21 0,50 3061016 20 HYDROGENATED COCO-GLYCERIDES 2,00 CAPRYLIC/CAPRIC TRIGLYCERIDE 3,00 BUTYROSPERMUM PARKII (SHEA) BUTTER 1,00 TOCOPHEROL & HELIANTHUS ANNUUS (SUNFLOWER) 5 SEED CIL 0,05 DIMETHICONE & DIMETHICONOL 0,50 SILICA 3,00 TOCOPHERYL ACETATE 0,20 SODIUM DEXTRAN SULFATE 0,10 10 EXTRAIT DE MITRACARPUS SCABER 0,10 PARFUM 0,10 EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 REVENDICATIONS1) Utilisation cosmétique d'un extrait de Mitracarpus scaber comme agent anti-âge. 2) Utilisation cosmétique d'un extrait de Mitracarpus scaber comme agent améliorant la fermeté cutanée. 3) Utilisation cosmétique d'un extrait de de Mitracarpus scaber pour prévenir, pour retarder, pour lutter contre, pour traiter ou réduire le vieillissement de la peau et/ou l'apparition des signes de vieillissement de la peau. 4) Utilisation cosmétique selon la revendication 3, dans laquelle les signes de vieillissement de la peau sont sélectionnés parmi le relâchement cutané, la perte de fermeté cutanée, la perte d'élasticité des fibres cutanées, une peau flétrie, et une peau amincie, et une peau terne et/ou sans éclat. 5) Utilisation cosmétique selon les revendications 3 ou 4 pour réparer les manifestations cutanées du vieillissement et/ou corriger la perte de fermeté et/ou redensifier une peau flétrie ou amincie et/ou redensifier et/ou raffermir et/ou tonifier la peau du visage et/ou du corps. 6) Utilisation cosmétique d'un extrait de Mitracarpus scaber dans une composition cosmétique anti-âge. 7) Utilisation cosmétique d'un extrait de Mitracarpus scaber dans une composition cosmétique raffermissante. 3061016 8) Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle l'extrait de MUtracarpus scaber est un extrait des parties aériennes. 9) Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle l'extrait de MUtracarpus scaber est un extrait hydro alcoolique. 10) Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans laquelle l'extrait de MUtracarpus scaber est un extrait NaDES. 11) Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ledit extrait est formulé dans une composition cosmétique qui comprend de 0,01 à 10% dudit extrait en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition, de préférence de 0,01 à 5% dudit extrait en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition. 12) Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite composition cosmétique comprend en outre un ou plusieurs agents de formulation ou additifs tels que des adoucissants, des colorants, des agents filmogènes, des tensio-actifs, des parfums, des conservateurs, des émulsionnants, des huiles, des glycols, filtres UV, et des vitamines.