FR 3060561 A1 20180622 FR 1662763 A 20161219 1 NANOPARTICULES ORGANIQUES CONTENANT UN COMPLEXE MÉTALBIS(DITHIOLÈNE) ET LEURS UTILISATIONS La présente invention a pour objet de nouvelles nanoparticules organiques contenant un complexe métal-bis(dithiolène), ainsi que leurs utilisations, notamment pour la libération photothermique contrôlée de principes actifs. Au cours des deux dernières décades, grâce au développement rapide des nanotechnologies, de nombreuses nanoparticules encapsulant des principes actifs, io encore appelés nanovecteurs, ont été développées dans le but d'accroître l'efficacité thérapeutique et réduire les effets secondaires indésirables. L'encapsulation de principes actifs dans les nanovecteurs permet de diminuer la concentration de médicament sous forme libre au sein de l'organisme, de limiter les problèmes de solubilité et de stabilité des principes actifs, de diminuer leur clairance 15 rapide, et, en particulier, leur manque de sélectivité, qui est responsable de la cytotoxicité et des effets secondaires indésirables lors du traitement. Les nanovecteurs qui permettent de transporter directement des principes actifs dans les zones à traiter offrent la possibilité de réduire les effets secondaires généralement observés chez les patients et d'accroitre l'efficacité des traitements 20 médicamenteux. Cependant, le développement des nanovecteurs biocompatibles capables de délivrer à la demande des principes actifs de façon spécifique dans les zones à traiter reste un challenge. Les nanovecteurs utilisés pour la libération contrôlée sont habituellement formulés, de façon à libérer le médicament/principe actif en réponse à des stimuli 25 internes ou externes. Aujourd'hui, différents stimuli, tels que l'hydrophobicité, le pH, la température, des réactions enzymatiques, les champs magnétiques et la lumière ont été exploités pour faire de la délivrance contrôlée de principes actifs à partir de nanoparticules. Parmi ces stimuli, la lumière est un moyen simple, efficace et facile à mettre 30 en oeuvre pour libérer à la demande des principes actifs encapsulés au sein de nanoparticules. De plus, avec un rayonnement lumineux, il est plus aisé de contrôler spatialement et temporellement l'intensité du stimulus. Des lasers qui permettent d'obtenir des faisceaux fins et d'intensité variable sont couramment utilisés pour contrôler la perméabilité de nanovecteurs photosensibles. 35 3060561 2 Les rayonnements proche-infrarouge (NIR) offrent de nombreux avantages en raison de leur nature non invasive, une haute résolution spatiale et une pénétration des tissus en profondeur avec un minimum de dommages. Les rayonnements NIR sont donc de plus en plus utilisés dans les nouvelles photothérapies ainsi que pour 5 la délivrance contrôlée de principes actifs. Les rayonnements NIR entre 800 nm et 1 400 nm correspondent à la fenêtre biologique, là où la peau, les organes, le sang et l'eau absorbent le moins. Dans cette zone d'énergie, les tissus sont moins endommagés et la pénétration laser augmentée. Les agents photothermiques capables de convertir les rayonnements proche- io infrarouge en chaleur apparaissent de plus en plus comme une alternative intéressante pour faire de la délivrance contrôlée de principes actifs de façon contrôlée et non-invasive. En effet, sous irradiation NIR, l'agent photothermique libère de la chaleur, ce qui permet de moduler la perméabilité des nanoparticules organiques, dans lesquelles ils sont encapsulés, et donc de contrôler la libération 15 des principes actifs. A ce jour, la plupart de ces biotechnologies fondées sur les effets photothermiques reposent sur l'utilisation de nanoparticules d'or et de dérivés de porphyrine et de cyanine. Les cyanines et les porphyrines souffrent d'une 20 photoinstabilité marquée sous irradiation et les nanoparticules d'or, en plus d'un manque de biodégradabilité et de clairance par le corps, sont aussi connues pour subir des changements de morphologie sous irradiation laser conduisant à la diminution de leur efficacité photothermique. En plus, les nanostructures d'or et les dérivés de porphyrine et de cyanine produisent de l'oxygène singulet sous 25 irradiation NIR, ce qui provoque une dénaturation des principes actifs co- encapsulés. Par conséquent, il existe actuellement un besoin pour de nouveaux agents photothermiques sensibles à la lumière permettant de développer des nanovecteurs 30 photoactivables efficaces pour la délivrance contrôlée de principes actifs. La présente invention a pour but de fournir de nouveaux systèmes, thermiquement, chimiquement et photochimiquement stables, efficaces pour la délivrance contrôlée de principes actifs. 3060561 3 Un autre but de la présente invention consiste à disposer de systèmes ne produisant pas d'oxygène singulet, ce qui permet de conserver l'intégrité chimique et l'efficacité des principes actifs lors de la libération. 5 Ainsi, la présente invention concerne l'utilisation d'un complexe métal- bis(dithiolène) de formule (I) suivante : Z R Z 1 \S\ /S M \ pe, VS SNp 1 .3 1 .4 (I) dans laquelle : - M représente un métal choisi dans le groupe constitué du nickel, du palladium, du platine, de l'or, du fer, du cobalt, du rhodium et de l'iridium, - R1, R2, R3 et R4, identiques ou différents, représentent un groupe hydrophile ou un groupe hydrophobe, et - z est égal à 0, -1 ou -2, pour la libération photothermique contrôlée de principes actifs. Selon l'invention, le terme "libération photothermique contrôlée" (ou PTCR pour "PhotoThermal Control Release", en anglais) désigne la libération contrôlée de médicaments ou principes actifs par un stimulus photothermique, c'est-à-dire suite à la conversion d'une irradiation laser en chaleur par un agent photothermique. La présente invention est basée sur les propriétés des complexes de formule (I) susmentionnée, en les utilisant comme agent photoactif. Complexes de formule (I) Ces complexes sont de forts absorbeurs NIR chimiquement et photothermiquement stables. Ils présentent des coefficients d'absorption élevés (environ 30 000 M-'.cm-1) avec des maxima d'absorption dans le proche infrarouge de 600 nm à 1 600 nm en fonction de la nature de M et des groupements R1, R2, R3 et R4. Ces complexes sont non luminescents, ce qui signifie que l'énergie absorbée est libérée dans l'environnement sous forme de chaleur. 3060561 4 A ce jour, les complexes métal-bis(dithiolène) n'ont jamais été utilisés pour faire de la délivrance contrôlée de principes actifs à partir de nanovecteurs organiques. La présente invention est basée sur les propriétés des complexes métal-bis(dithiolène) qui peuvent être efficacement co-encapsulés avec des 5 principes actifs au sein de nanoparticules organiques telles que des liposomes, des nanoparticules de polymères, des nanocapsules lipidiques ou encore des virus (capside vide). Sous irradiation proche infrarouge, ces complexes sont capables de convertir efficacement les rayonnements NIR en chaleur ce qui permet de moduler la perméabilité des nanovecteurs organiques et donc de contrôler, de façon io temporelle et spatiale, la libération des principes actifs. Les propriétés photothermiques des complexes métal-bis(dithiolène) qui sont stables chimiquement et thermiquement n'ont pas été encore exploitées pour faire de la délivrance contrôlée de principes actifs à partir de nanoparticules organiques. Ces complexes apparaissent comme une alternative intéressante aux systèmes 15 déjà décrits, reposant sur l'utilisation, soit de nanoobjets inorganiques difficilement éliminables par l'organisme ou encore de molécules organiques difficilement fonctionnalisables et instables sous irradiation laser. D'autre part, ces complexes ne produisent pas d'oxygène singulet, contrairement aux autres systèmes décrits, ce qui permet de conserver l'intégrité chimique et l'efficacité des principes actifs lors de 20 la libération. L'utilisation de rayonnements proche-infrarouge (autour de 700-1 000 nm) permet également d'envisager une meilleure pénétration au sein des milieux biologiques, ce qui permettra de traiter des zones plus profondes dans les organismes. Il est également possible d'adapter de façon simple la longueur d'onde NIR en fonction de la nature du métal et des ligands dithiolène utilisés. 25 Selon un mode de réalisation, dans la formule (I), R2 et R4 peuvent former ensemble, avec les atomes de carbone qui les portent, un (hétéro)cycle comprenant de 5 à 8 atomes de carbone, et éventuellement au moins un hétéroatome, notamment N ou S. 30 Selon un mode de réalisation, dans la formule (I), M est Au, Pt, Ni, Fe, Co, Rh ou Ir. De préférence, M est Pt ou Ni, et préférentiellement, M est Ni. Dans la formule (I), selon la nature de M, z est 0, -1 ou -2. 3060561 5 Selon un mode de réalisation, les complexes utilisés selon l'invention répondent à la formule (1-1) suivante : 5 2 Ni " \ R4 3 dans laquelle les groupes R1, R2, R3 et R4 sont tels que définis ci-dessus dans la formule (I). io Comme indiqué ci-dessus, les groupes R1, R2, R3 et R4, identiques ou différents, sont des groupes hydrophiles ou des groupes hydrophobes. Lorsque les groupes R1, R2, R3 et R4 sont des groupes hydrophiles, identiques ou différents, ceux-ci peuvent être choisis dans le groupe constitué des sucres, des 15 peptides hydrophiles, des polyéthylène glycols, des acides, des ammoniums, des zwitterions et des groupes hydroxyles. Selon un autre mode de réalisation, les groupes R1, R2, R3 et R4, identiques ou différents, peuvent être des groupes comprenant au moins un substituant choisi dans le groupe constitué des sucres, des peptides hydrophiles, des polyéthylène glycols, des acides, des ammoniums 20 quaternaires, des zwitterions et des groupes hydroxyles. Parmi les sucres, on peut citer par exemple le glucose, le fructose, le saccharose, le lactose et leurs dérivés acétates. Parmi les peptides hydrophiles, on peut citer par exemple l'aspartame, l'acide pyro-glutamique, les polypeptides de lysine, hystidine, asparagine, glutamine, 25 arginine, sérine, thréonine et a-sulfo-p-alanine. Parmi les polyéthylène glycols, on peut citer par exemple le diéthylène glycol, le triéthylène glycol, le dodécaéthylène glycol, l'hexadécaethylène glycol ou le PEG 2000. Parmi les acides, on peut citer par exemple les acides carboxyliques, les 30 acides sulfoniques et les acides carboxyliques activés N-hydroxysuccinimide. Parmi les ammoniums quaternaires, on peut citer par exemple NH4+ ou bien des ammoniums quaternaires de structure générale NR4+, avec des groupes alkyles courts tels que des groupes méthyle, butyle ou benzyle. Parmi les zwitterions, on peut citer par exemple des dérivés bétaïne ou sulfobétaïne obtenus par alkylation 35 par la 1,3-propanesultone de fragments amine. 3060561 6 Lorsque les groupes R1, R2, R3 et R4 sont des groupes hydrophobes, identiques ou différents, ceux-ci peuvent être choisis dans le groupe constitué des peptides hydrophobes, des cholestérols, des groupes alkyles, linéaires ou ramifiés, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, et des groupes alcoxyles, linéaires ou 5 ramifiés, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone. Selon un autre mode de réalisation, les groupes R1, R2, R3 et R4, identiques ou différents, peuvent être des groupes comprenant au moins un substituant choisi dans le groupe constitué des peptides hydrophobes, des cholestérols, des groupes alkyles, linéaires ou ramifiés, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, et des groupes alcoxyles, linéaires ou 10 ramifiés, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone. Selon un mode de réalisation, les complexes utilisés selon l'invention répondent à la formule (1-2) suivante : 15 S S z (1-2) 20 \NA/ / \ s s dans laquelle : Ra Ra - z et M sont tels que définis ci-dessus dans la formule (I), - Ra est H ou un groupe Rb tel que défini ci-dessous, et - Rb est choisi parmi l'un des groupes suivants : 25 . un groupe alkyle ou alcoxyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone ; . OH, . un groupe de formule -((CH2-CH2)2-0),-CH3, n représentant un nombre entier compris entre 1 et 50 ; 30 . un groupe de formule (11) suivante : 35 dans laquelle R' est un groupe alkyle ou un groupe alkaryle comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, et est de préférence un groupe méthyle ou 3060561 5 7 un groupe benzyle ; ou R' est un groupe alkylamine comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, un groupe alkylammmonium comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, un groupe imidazole, un groupe carboxamide comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, une guanidine comprenant de 1 à 10 atomes de carbone, ou encore un groupe hydroxyle ; . un groupe de formule (III) suivante : 10 . un groupe de formule (IV) suivante : 15 (IV) 20 Parmi les composés de formule (1-2), on peut citer les composés spécifiques suivants : 0 OH HO décrit dans la demande FR 2 682 678. Parmi les composés de formule (1-2), on peut citer les composés de formule (1-2-1) suivante : z 25 30 35 CH 0 n 3 O 1,0H, O n EI,C4 O (1-2-1) 3060561 8 dans laquelle : - M et z sont tels que définis ci-dessus dans la formule (I), - n est un nombre entier compris entre 1 et 50, de préférence compris entre 1 et 6, et préférentiellement égal à 3, et 5 - Ra est H ou un groupe de formule -0-[(CH2-CH2)2-0],-CH3, n étant tel que défini ci-dessus. Parmi les composés de formule (1-2-1), on peut citer les composés spécifiques 10 suivants : 15 20 décrits dans l'article : Water-soluble nickel-bis(dithiolene) complexes as photothermal agents, K. MEBROUK, F. CHOTARD, C. LE GOFF-GAILLARD, Y. ARLOT-BONNEMAINS, M. FOURMIGUE, F. CAMEREL, Chem. Commun. 2015, 25 51, 5268-5270. ou encore le composé suivant : 30 35 3060561 9 Selon un mode de réalisation, les complexes utilisés selon l'invention répondent à la formule (1-3) suivante : 5 z (1-3) dans laquelle : - z et M sont tels que définis ci-dessus dans la formule (I), - R, est un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, et - Rd est H ou un groupe ORS, R, étant tel que défini ci-dessus. De préférence, dans la formule (1-3), M est Ni, Pt ou Au, et z=0. Parmi les composés de formule (1-3), on peut citer les composés spécifiques suivants : 0C12H25 0C12H25 0C12H25 0C12H25 0C12H25 ces deux composés étant décrits dans l'article : Discotic liquid crystals of transition metal complexes 25: influence of the central metal on columnar mesomorphism and rr-acceptor properties of the octa-alkoxy-substituted 25 bis(diphenyldithiolene)metal complexes, K. OTHA, K., Y. INAGAKI-OKA, H. HASEBE, I. YAMAMOTO, Polyhedron 2000, 19, 267-274; 10 15 C12H250 S'S C12H250 Ni S"S 20 0C12H25 C12H250 S'S Pt C12H250 s' 's 0C12H25 3060561 5 10 ou encore le composé suivant : Cl2H2 0 ; 1S Au Cl2H250 S 's 0C12H25 décrit dans l'article : Probing magnetic interactions in columnar phases of a paramagnetic gold dithiolene complex, R. PEROCHON, P. DAVIDSON, S. ROUZIERE, F. CAMEREL, L. PIEKARA-SADY, T. GUIZOUARN, M. FOURMIGUE, J. Mater. Chem. 2011, 21, 1416-1422; ou encore les composés suivants : Fi2n+1CnO Fi2n+1CnO n= 1, 4, 8, 12 C4H90 S% /S Au 0C4H9 C4H90 S *s 0C4H9 10 ces composés étant décrits dans les articles : (1) Amphiphilic paramagnetic neutral gold dithiolene complexes. R. PEROCHON, L. PIEKARA-SADY, W. JURGA, R. CLERAC, M. FOURMIGUE, Dalton Trans. 2009, 3052-3061; et (2) Molecular Alloys of Neutral Gold/Nickel Dithiolene Complexes in Single-Component 15 Semiconductors, K. MEBROUK, W. KADDOUR, P. AUBAN-SENZIER, C. PASQUIER, O. JEANNIN, F. CAMEREL, M. FOURMIGUE, Inorg. Chem. 2015, 54, 7454-7460. Selon un mode de réalisation, les complexes utilisés selon l'invention 20 répondent à la formule (1-4) suivante : z Ar-C(0)-X (1-4) 25 Ar-C(0)-X X-C(0)-A7 X-C(0)-Ar 3060561 11 dans laquelle : - z et M sont tels que définis ci-dessus dans la formule (I), et M est de préférence Ni, et z est de préférence égal à 0, - X est -NH- ou -0-, et 5 - Ar est un groupe phényle, éventuellement substitué par au moins un substituant notamment choisi parmi les groupes alcoxyles comprenant de 1 à 20 atomes de carbone. Parmi les composés de formule (1-4), on peut citer les composés spécifiques io suivants : tels que décrits dans l'article : Room-temperature columnar mesophases of nickel-bis(dithiolene) metallomesogens, S. DEBNATH, H. F. SROUR, B. DONNIO, 15 Marc FOURMIGUE, F. CAMEREL, RSC Adv. 2012, 2, 4453-4462. 3060561 12 Parmi les complexes utilisés selon l'invention, on peut également citer les composés spécifiques suivants : 5 décrits dans l'article : Near-infrared chiro-optical effects in metallogels, S. DEBNATH, J.-F. BERGAMINI, F. ARTZNER, C. MERIADEC, F. CAMEREL, M. FOURMIGUE, Chem. Commun. 2012, 48, 2283-2285. io ou encore les composés suivants : R R Ni8C3, n = 3 Ni8C4, n = 4 Ni8C6, n = 6 Ni8C11, n = 11 R = 1^.01 .0.1(0 n S'S N i Se 'S décrits dans l'article : Photothermal Control of the Gelation Properties of Nickel Bis(dithiolene) Metallogelators under Near-Infrared Irradiation, K. MEBROUK, S. DEBNATH, M. FOURMIGUE, F. CAMEREL, Langmuir 2014, 30, 8592-8597. Selon un mode de réalisation, les complexes utilisés selon l'invention répondent à la formule (1-5) suivante : Re , --....,/ -, N J '....-S 7,,. R 11, e 7'-'-..S/ S"'-'-'-NR dans laquelle : e - z et M sont tels que définis ci-dessus dans la formule (I), et - Re est un groupe -S-Ri ou un groupe Rf, 15 20 Z (1-5) 3060561 13 Rf étant choisi parmi l'un des groupes suivants : . un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone ; . un groupe de formule -((CH2-CH2)2-0),-CH3, n représentant un nombre 5 entier compris entre 1 et 50 ; . un groupe de formule (11) suivante : 10 dans laquelle R' est tel que défini ci-dessus ; . un groupe de formule (III) suivante : 15 . un groupe de formule (IV) suivante : 20 (IV) Parmi les composés de formule (1-5), on peut citer le composé spécifique suivant : 25 3 décrit dans l'article : Water-soluble nickel-bis(dithiolene) complexes as photothermal agents, K. MEBROUK, F. CHOTARD, C. LE GOFF-GAILLARD, Y. ARLOT-BONNEMAINS, M. FOURMIGUE, F. CAMEREL, Chem. Commun. 2015, 30 51, 5268-5270. S S S s"s co), 3060561 14 Selon un mode de réalisation, les complexes utilisés selon l'invention répondent à la formule (1-6) ou (I-6-bis) suivante : Rg Rg' \ / N S S N s S V X > -------- 5 -S*-------------- N / \ Rg' Rg (1-6) 5 s \9 R -1 z (I-6-bis) / g N....,,,'...-S\ /S-...,_,-N M > S / \ N"-----'-'S S"----'"N / \ R R g g io dans laquelle : - z et M sont tels que définis ci-dessus dans la formule (I), et - Rg et Rg', identiques ou différents, sont choisis parmi l'un des groupes suivants : . un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 20 atomes de 15 carbone ; . un groupe de formule -((CH2-CH2)2-0),-CH3, n représentant un nombre entier compris entre 1 et 50 ; . un groupe de formule (11) suivante : 20 dans laquelle R' est tel que défini ci-dessus, et est de préférence un groupe alkyle ou un groupe alkaryle comprenant de 1 à 10 atomes de 25 carbone, et préférentiellement un groupe méthyle ou un groupe benzyle ; . un groupe de formule (III) suivante : 30 3060561 15 . un groupe de formule (IV) suivante : 5 0 c: o (IV) De préférence, dans la formule (1-6), z=0 et M est Ni. Parmi les composés de formule (1-6), on peut citer les composés de formule 10 (1-6-1) suivante : R g / g \ / / \ Ni (1-6-1) g g dans laquelle Rg est un groupe alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 15 20 atomes de carbone. Parmi les composés de formule (1-6-1), on peut citer les composés spécifiques suivants : 20 25 C ei N Cl2H25 C H9 C4H9 C C8111, 1 ' N $ N ;1117 17 CH 81' ' 30 35 C 4H9 C 1 2H29 S S sb1 ( 3060561 16 N SS S« 1 Ni. r »s N S'S N tels que décrits dans l'article : High photothermal activity within neutral nickeldithiolene complexes derived from imidazolium-based ionic liquids, K. MEBROUK, 5 F. CAMEREL, O. JEANNIN, B. HEINRICH, B. DONNIO, M. FOURMIGUÉ, Inorg. Chem. 2016, 55,1296-1303. Nanoparticules organiques Selon un mode de réalisation, le complexe métal-bis(dithiolène) tel que défini io ci-dessus est encapsulé dans une nanoparticule organique, notamment choisie dans le groupe constitué des liposomes, des nanoparticules de polymères, des nanoparticules lipidiques et des capsides virales. De préférence, la nanoparticule organique est un liposome, une nanoparticule lipidique, une capside virale ou une nanoparticule de polymères. 15 Selon l'invention, le terme « encapsulé » signifie que le complexe de formule (I) susmentionné est contenu dans une nanoparticule. Le complexe est encapsulé au sein des nanoparticules organiques par des interactions primaires hydrophiles et hydrophobes. 20 3060561 17 Selon l'invention, le terme « nanoparticule organique » désigne un objet d'une taille finie, de préférence comprise entre 5 nm et 1 000 nm, formé par l'agrégation de molécules organiques ou de polymères organiques. Selon un mode de réalisation préféré, les nanoparticules organiques selon 5 l'invention ont une taille comprise entre 5 nm et 1 000 nm, c'est-à-dire un diamètre compris entre 5 nm et 1 000 nm. Selon l'invention, le terme « liposomes » désigne des vésicules phospholipides renfermant un coeur hydrophile. Les phospholipides sont des unités amphiphiles constituées d'une tête hydrophile (sel de phosphate d'ammonium io quaternaire) et d'une queue hydrophobe (chaînes alcanes). En solution dans l'eau, les parties hydrophobes interagissent entre elles de façon à orienter les parties hydrophiles vers le milieu aqueux. Parmi les formulations liposomales pouvant être utilisées selon l'invention, on 15 peut citer par exemple les formulations suivantes : - HSPC (L-a-phosphatidylcholine hydrogénée (soja) - "L-a-phosphatidylcholine, hydrogenated (Soy)"), DSPG (sel sodique de 1,2-distéaroyl-sn-glycéro-3- phosphoglycérol) et cholestérol, - EPC (Egg PC - lécithine - phosphatidylcholine d'ceuf) et cholestérol, 20 - HSPC, cholestérol et DSPE-PEG2000 (1,2-distéaroyl-sn-glycéro-3- phosphoéthanolamine-N-[amino(polyéthylène glycol)-2000] (sel d'ammonium)), - DSPC, cholestérol et DSPE-PEG2000, - DSPC et cholestérol, - EPG (phosphatidylglycérol d'ceuf) et DMPC (1,2-dimyristoyl-sn-glycéro-3- 25 phosphatidylcholine), - DOPC (1,2-dioleoyl-sn-glycéro-3-phosphocholine), DPPG (sel sodique de 1,2-dipalmitoyl-sn-glycéro-3-phosphoglycérol), cholestérol et trioléine, - DOPC, DPPG, cholestérol et trioléine, - Egg Sphingomyéline et cholestérol, 30 - archaeolipides (PEG2000-tetraether et FA-PEG5000-tetraether) Selon l'invention, le terme « nanoparticule de polymères » désigne des nanoparticules à base de polymères hydrophobes ou de co-polymères à blocs amphiphiles pouvant appartenir, par exemple, à la famille des poly(esters), 35 polyacrylates, polystyrènes, polyéthylène glycols ou polycarbonates. 3060561 18 De préférence, ces nanoparticules de polymères sont : - biocompatibles et non toxiques, - biodégradables (les molécules résultantes de sa décomposition, après la libération du médicament encapsulé, sont tenues d'être non toxiques), 5 - furtives pour ne pas être reconnues dès le départ par le système réticulo- endothélial (RES) et donc éliminées par les cellules de RES responsables de la destruction des corps considérés comme étrangers, - adaptées pour transporter une grande quantité de principe actif, qui doit être libéré de manière contrôlée sur son site d'action. io Pour répondre à ces besoins, les nanoparticules sont souvent formulées à partir d'un co-polymère à blocs amphiphile tel que le poly(éthylène glycol)-blocpoly(lactique-co-glycolique) (PEG-b-PLGA) ou le poly(éthylène glycol)-blocpoly(malate de benzyle) (PEG-b-PMLABe). Selon un mode de réalisation, la partie hydrophobe (PLGA ou PMLABe) forme 15 le coeur de la nanoparticule, tandis que la partie hydrophile (PEG) forme une couronne hydrophile permettant d'assurer la solubilité et d'augmenter sa furtivité vis-à-vis du RES. Parmi les nanoparticules polymériques pouvant être utilisées selon l'invention, 20 on peut citer par exemple les nanoparticules à base des polymères suivants : - poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) - poly(c-caprolactone) (PCL) - poly(méthyl méthacrylate) (PMMA) - PEG-b-PLGA 25 - PEG-b-PLA (acide polylactique) - Biotine-PEG-b-PMLABe (polyéthylèneglycol-b-poly(benzyl malate)) - FolicAcid- PEG-b-PMLABe Selon l'invention, le terme « nanoparticule lipidique » désigne des 30 nanoparticules colloïdales sphériques d'un diamètre variant de préférence de 5 nm à 1 000 nm formées par l'agrégation de lipides. De préférence, les lipides sont choisis parmi les acides gras, les acylglycérols, les phosphoglycérides, les sphingolipides, les glycolipides, les polycétides, les stérols et les prénols. 35 3060561 19 Selon l'invention, le terme « capside virale » désigne une structure compacte de nature protéique qui entoure un génome viral, l'acide nucléique (ADN ou ARN). De préférence, ces capsides virales sont choisies parmi les virus CCMV (cowpea chlorotic mottle virus), CPMV (cowpea mosaic virus), RCNMV (red clover 5 necrotic mosaic virus), TMV (tobacco mosaic virus) et les bactériophages MS2, Ce ou M13. La présente invention concerne également une nanoparticule organique, notamment choisie dans le groupe constitué des liposomes, des nanoparticules de 10 polymères, des nanoparticules lipidiques et des capsides virales, encapsulant au moins un complexe métal-bis(dithiolène) de formule (I) telle que définie ci-dessus. De préférence, les nanoparticules organiques sont choisies parmi les liposomes et les nanoparticules de polymères. 15 Selon un mode de réalisation, les nanoparticules organiques selon l'invention contiennent en outre au moins un principe actif. Parmi les principes actifs utilisés selon l'invention, on peut citer les principes actifs anti-inflammatoires, anticoagulants, anesthésiques, anticancéreux, 20 antalgiques, antipyrétiques ou psychotropes. En particulier, le principe actif (ou médicament) peut être choisi parmi les molécules suivantes : cisplatine, doxorubicine, paclitaxel, amphotéricine B, daunorubicine, vertéporfine, cytarabine, morphine, vincristine, mitoxantrone, topotécan, vinorelbine, lurtotécan, amikacine ou insuline. 25 Le choix du principe actif pouvant être encapsulé peut être fait selon l'invention en fonction de la nature de la nanoparticule organique. Par exemple, dans le cas d'une nanoparticule de polymères, si le coeur de la nanoparticule de polymères est hydrophobe, des médicaments solubles dans les 30 solvants organiques mais également dans l'eau devront être utilisés avec ce type de système. En effet lors de la formulation, le complexe de formule (I) et le médicament seront encapsulés dans le coeur par interaction hydrophobe avec le polymère. Lors de l'irradiation laser, la montée en température, due à l'effet photothermique des agents photoactifs (complexes), va augmenter la perméabilité ou créer des 35 « brèches » dans les nanoparticules, provoquant ainsi un échange entre le coeur et le milieu extérieur hydrophile. Les principes actifs, étant aussi solubles dans l'eau, 3060561 20 vont pouvoir se libérer du coeur de la nanoparticule et exercer leur action au niveau des cellules cancéreuses. Les agents photoactifs hydrophobes restent quant à eux piégés dans la nanoparticule car ils ne possèdent aucune interaction favorable avec l'environnement extérieur hydrophile. 5 Tous les liposomes sont plus ou moins thermosensibles, selon leur température de transition de phase (Tm) solide-liquide. Au-dessous de leur Tm, les liposomes sont dans leur état solide, la membrane lipidique est ordonnée et condensée, empêchant le médicament encapsulé d'être libéré dans 10 l'environnement. Sous irradiation, lorsque la montée en température, due à l'effet photothermique, dépasse la Tm, l'enveloppe lipidique subit une transition de phase solide (ordonnée)-liquide (désordonnée). Ce changement de propriété conduit à l'augmentation de la perméabilité de la paroi, facilitant ainsi la libération des principes actifs. Lorsque l'irradiation laser est stoppée et que la température 15 repasse au-dessous de la Tm, la membrane retourne dans son état solide et la libération du médicament est freinée. Cette technique permet de maîtriser la délivrance du médicament en fonction du temps d'irradiation. Le principe de libération sera le même pour le capsules lipidiques et les capsides virales. Un autre facteur qui gouverne la vitesse de libération des principes actifs est 20 la composition de la paroi lipidique. La présente invention concerne également l'utilisation de la nanoparticule organique telle que définie ci-dessus, pour la libération photothermique contrôlée du principe actif. 25 La présente invention concerne également un procédé de libération photothermique contrôlée d'un principe actif, comprenant une étape d'irradiation à une longueur d'onde comprise entre 600 nm et 1 600 nm, d'une nanoparticule organique telle que définie ci-dessus. 30 L'étape d'irradiation est effectuée à une longueur d'onde qui est dans la bande d'absorption du complexe. 3060561 21 EXEMPLES Exemple 1 : Préparation de nanoparticules à base de PEG42 b-PMLABe73 5 Le poly(éthylène glycol)-b-poly(benzyle malate) (PEG42-b-PMLABe73) est un copolymère à bloc amphiphile, permettant de préparer des nanoparticules stables, pouvant encapsuler des principes actifs ou des agents fluorescents. De plus, comme la plupart des polymères dérivés du poly(acide malique) (PMLA), il possède lo l'avantage d'être biocompatible, non-toxique et (bio)dégradable. La préparation de ces nanoparticules à base de PEG42-b-PMLABe73 se fait en 2 étapes. La première consiste à synthétiser le PEG42-b-PMLABe73 et la seconde est l'auto-assemblage du copolymère à bloc pour donner les nanoparticules de polymères désirées. Le PEG42-b-PMLABe73 a été obtenu en 4 étapes selon le procédé décrit ci- 15 dessous en suivant les protocoles décrits par Cammas et al. (S. Cammas, I. Renard, V. Langlois, Ph. Guérin, Polymer, 37(18), 4215-4220, 1996 ; Z.W. Huang, V. Laurent, G. Chetouani, J.Y. Ljubimova, E. Holler, T. Benvegnu, P. Loyer, S. Cammas-Marion, International Journal of Pharmaceutics, 423, 84-92, 2012) : 15 1120/CH2C12 (1:1) pH = 7.2, 45°C H2C-C=0 THF, N2 17 18 0= OH I 0=C Br ^,.,C H CH2 -H20 COOH THF, TFAA 13 0°C OH 45°C 14 16 COOH H2N-CH CH2 COOH 11 Acide aspartique COOH O N2-CH Br CH2 COOH 12 I BrWCH CH2 I I CH2 + Br ..,CH COOH CO2CH2C6H5 CO2CH2C6H5 COOH NaNO2, 5°C 20 25 CO2CH2C6H5 I CH2 COO 30 (2:1) OMe PEG42 0K O0C-PE042-0Me 0=C 6-crown-12 O CO2CH2C6H5 0 C6H5H2CO2C,,CH CH2 o H Me0-PEG42-0-C-(1-02 II o-L CO2CH2C6H5 34e0-PEG42-PIVILABe 19 17 Jr 4 0=t,CH2 CO2CH2C6H5 35 3060561 22 Le produit de départ, l'acide aspartique 11 (Sigma-Aldrich), est mis en présence de bromure de sodium (Sigma-Aldrich), d'acide sulfurique 2N (Sigma-Aldrich) et de nitrite de sodium (Sigma-Aldrich). Cette réaction permet de 5 transformer dans un premier temps, la fonction amine de 11 en sel de diazonium 12, qui est ensuite substitué par un atome de brome, pour donner après recristallisation dans l'acétonitrile, l'acide (RS)-bromosuccinique 13. Dans la seconde étape, le dérivé bromé 13 réagit avec de l'anhydride trifluoroacétique (TFAA, Sigma-Aldrich)) dans le THF anhydre (Sigma-Aldrich) à 0°C pour forrrer, après déshydratation et 10 cyclisation, l'intermédiaire réactionnel anhydride 14, sur lequel est ajouté de l'alcool benzylique (Sigma-Aldrich) après évaporation sous vide du THF et de l'acide trifluoroacétique formé. Dans cette troisième étape, l'alcool benzylique attaque par substitution nucléophile, soit en position 2, soit en position 5 du composé anhydride 14. L'attaque nucléophile est privilégiée en position 2 car c'est la plus électrophile, 15 du fait de la proximité avec l'atome de brome. Par conséquent, l'acide (RS)-3- benzyloxycarbony1-3-bromopropancique 15 est obtenu en majorité par rapport à l'acide (RS)-2-bromo-3-benzyloxycarbonylpropanoïque 16 avec un ratio de (2:1). Le produit brut contenant 15 et 16 est ensuite solubilisé dans un mélange eau/dichlorométhane (1/1, pH = 7,2) et chauffé à 45°C pour obtenir, après 20 cyclisation intramoléculaire, le (RS)-4-benzyloxycarbonyl-2-oxetanone (MLABe) 17. Lors de cette étape, la fonction carboxylate (-000- à pH = 7,4) fait une substitution intramoléculaire du brome, formant ainsi le produit désiré 17 avec un rendement de 20%, après purification par chromatographie sur silice et distillation sous vide. La dernière étape consiste à utiliser le bloc PEG comme amorceur de polymérisation 25 du MLABe. Pour cela, le monomère MLABe 17, solubilisé dans du THF, est transféré sur une solution d'a-méthyl-w-carboxylate-PEG42 de potassium (Me0- PEG42-000- K±) (Iris Biotech) en présence d'éther couronne (6-crown-12, Sigma-Aldrich) dans du THF. La fonction carboxylate de la chaîne PEG attaque en position 4 du MLABe 17, amorçant la polymérisation anionique par ouverture de cycle. La 30 nouvelle fonction carboxylate formée 18 peut attaquer une autre molécule de MLABe et le procédé continue ainsi de suite. La réaction de polymérisation est complète, lorsque la bande vc.0 (- 1850 cm-1) caractéristique du dérivé lactone 17 a disparu du spectre Infra-Rouge (IR). Par cette méthode, le copolymère à bloc PEG42-b-PMLABe73 19 a été obtenu avec une masse molaire de 17 880 g/mol, 35 déterminée par RMN 1H. 3060561 23 Une fois le polymère 19 synthétisé, les nanoparticules sont préparées par nanoprécipitation. Cette méthode décrite par Fessi et ses collaborateurs (Thioune, O., Fessi, H., Devissaguet, J.P., Puisieux, F., Int. J. Pharm. 1997, 146, 233-238) repose sur l'auto-assemblage du co-polymère dans un mélange eau/solvant 5 organique. Pour cela, le PEG42-b-PMLABe73 (5 mg) est dissous dans 1 mL de THF puis rapidement additionné dans 2 mL d'eau distillée sous forte agitation. Le mélange est ensuite agité à température ambiante pendant 10 min. Lors de ce procédé, les parties hydrophobes du polymère (PMLABe) vont s'agréger, en laissant les parties io hydrophiles (PEG42) en contact avec l'eau. Cette agglomération permet de former des nanoparticules de PEG42-b-PMLABe73. Le THF est ensuite évaporé sous vide (évaporateur rotatif) et le volume final est ajusté à 2 mL par ajout d'eau, si nécessaire. La solution contenant les nanoparticules est analysée par diffusion dynamique de la lumière (DLS) et zétamétrie. 15 Les mesures réalisées par DLS révèlent que les nanoparticules de PEG42-b- PMLABe73 possèdent un diamètre hydrodynamique moyen de 93 nm avec un indice de polydispersité (Ip) de 0,14. Un Ip inférieur à 0,25 indique que les nanoparticules en suspension ont une répartition en taille homogène. De plus, ces résultats montrent que les nanoparticules de polymères de PEG42-b-PMLABe73 ont un 20 diamètre favorable à une accumulation par l'effet « Enhanced Permeation and Retention » (EPR) ( 0 I [4 + 21 0 Ph Ph 1,3-diphénylisobenzofurane (DPBF) Ph Ph 0 o-dibenzoylbenzène law 20 Dans le but de déterminer la formation ou non d'oxygène singulet par les complexes Ni-bis(dithiolène), l'expérience suivante a été réalisée : 1 mL d'une solution à 1.6x10-4 M de Ni8C12 dans le toluène a été ajouté dans une cuve de fluorescence contenant 1 mL d'une solution à 2x10-5 M de DPBF dans le toluène. Le mélange est agité et une mesure avant irradiation est effectuée. La cuve est 25 ensuite irradiée (940 nm, 5 W/cm2) pendant 15 min puis une nouvelle mesure est faite. Aucune perte significative de la fluorescence n'a été observée, signe de la stabilité du DPBF. Par conséquent, les complexes Ni-bis(dithiolène) ne produisent pas d'oxygène singulet lors de leur irradiation. 30 3060561 37 Ceci a permis de s'assurer que des études d'encapsulation pouvaient être menées, sans risquer de détériorer le principe actif lors d'applications en PTCR. 5 Exemple 8 : Étude de la cytotoxicité des nanoparticules encapsulant des complexes nickel-bis(dithiolène) La cytotoxicité des NPs-Ni4C12, des Lp-Ni8C12 et des Lp-Ni8PEG a été déterminée in vitro à l'aide de tests MTT, sur deux types de lignées cellulaires 10 (HeLa et MDA). Pour cela, des cellules HeLa et MDA ont été incubées pendant 24h avec les nanoparticules. Les résultats montrent que la présence de complexes hydrophobes au sein des liposomes ou des nanoparticules de polymères (NPsNi4C12 et Lp-Ni8C12) n'augmente pas leur cytotoxicité. Les liposomes et les nanoparticules de polymère, avec ou sans complexe, sont cytotoxiques à une 15 concentration supérieure à 50 pg/mL. Par contre, les Lp-Ni8PEG sont plus toxiques que les liposomes seuls. L'hypothèse est que le complexe Ni8PEG est libéré du liposome et passe dans le milieu de culture, du fait de ses propriétés hydrophiles, induisant ainsi une cytotoxicité supplémentaire. 20 Exemple 9 : Libération photothermique contrôlée de carboxyfluorescéine ou de doxorubicine Préparation et étude de la libération des NPs-PEG42-b-PMLABe73-Ni4C12-Dox 25 Le principe actif ou le fluorophore devant être encapsulé dans les nanoparticules de polymères de l'exemple 1 doit être à la fois hydrophobe pour permettre l'encapsulation dans le polymère lipophile et qu'il présent un certain caractère hydrophile pour permettre sa libération dans l'eau. Si une de ces règles 30 n'est pas respectée, alors soit la molécule a un taux d'encapsulation faible, soit elle ne sera que peu libérée. Afin d'obtenir les NPs-PEG42-b-PMLABe73-Ni4C12-Dox (NPs-Ni4C12-Dox) désirées, une solution mère de Dox,HCI est tout d'abord préparée dans un mélange THF/NEt3 (6 mL THF + 23 pL NEt3) : Dox : 10 mg + 4 mL de THF/NEt3. [Dox]solution 35 mère = 2,5 mg/mL. Ensuite, 5 mg de MeOPEG42-b-PMLABe73 sont solubilisés dans 744 1.1L de THF, 56 !IL de la solution mère ([Ni4C12]solution mère = 9 mg/mL) de 3060561 38 complexe dans le THF (10 % / polymère, soit 0,5 mg de Ni4C12) et 200 1..1L de la solution de Dox (10 % / polymère, soit 0,5 mg, [Dox]initialement introduite = 0,25 mg/mL) sont ensuite additionnés. Cette solution (polymère + Complexe + Dox dans le THF) est ensuite 5 additionnée rapidement dans 2 mL d'eau ultra-pure sous forte agitation. Le mélange est agité à température ambiante pendant 10 min puis le THF est évaporé sous vide (évaporateur rotatif). Le volume final est ajusté à 2 mL par ajout d'eau ultra-pure, si nécessaire. La solution est orange/verte. La solution est centrifugée dans un MicroCon pour éliminer la Dox libre : 15 000 g pendant 5 min puis 1 000 g pendant 10 1 min. Le surnageant est éliminé et le concentré est dilué avec de l'eau ultra-pure pour obtenir 2 mL de solution finale. Le taux d'encapsulation de ces NPs-Ni4C12-Dox est déterminé en mesurant l'absorbance de la Dox à 485 nm par spectroscopie UV-Vis. En premier lieu, une courbe d'étalonnage de la Dox libre dans un mélange eau/DMF (20/80) est réalisée 15 comme suit : 5001..1L de la solution mère de Dox dans le THF/NEt3 est évaporée sous vide. Puis 1mL de la préparation eau/DMF (20/80) y est ajouté. A partir de cette solution concentrée ([Dox] = 1,25 mg/mL), plusieurs dilutions sont préparées par ajout du mélange eau/DMF (20/80) et l'absorbance à 485 nm des différents échantillons de Dox libre (V = 400 1..1L) est ensuite mesurée par spectroscopie UV- 20 Vis à 485 nm à l'aide d'une plaque multi-puits. Une fois la courbe d'étalonnage réalisée, 80 !IL de la suspension de NPs-Ni4C12-Dox sont dilués avec 320 !IL de DMF afin de détruire les nanoparticules, libérant ainsi la totalité de la Dox encapsulée. L'absorbance mesurée est de 0,22. En extrapolant sur la courbe d'étalonnage, la concentration déterminée en Dox encapsulée est donc de 73,4 25 pg/mL soit 29% de la Dox initialement introduite a été encapsulé, c'est-à-dire 3% par rapport à la masse de polymère. De plus, les résultats DLS montrent que l'encapsulation de la Dox a peu d'influence sur la taille finale des nanoparticules (Tableau 1). 3060561 39 NPs-Ni4C12 NPs-Ni4C12-Dox Diamètre (nm) 110 100 Ip 0,20 0,22 Aspect Sol. Verte Orange/Verte (3/0 massique de Dox encapsulé 29 Tableau 1 : Comparaison des résultats obtenus par DLS à partir des NPsNi4C12 et des NPs-Ni4C12-Dox. 5 La libération de la Dox a ensuite été étudiée à l'aide d'un boudin de dialyse de seuil de coupure de 3500 Daltons, c'est à dire laissant passer les molécules ayant une masse molaire inférieure à 3500 g/mol et retenant les autres. Pour cela, un tube de dialyse est plongé dans un bécher d'eau pendant 30 min puis rincé avec de l'eau propre. Il est ensuite découpé à la taille désiré puis mis en place sur un cône 10 Eppendorf de 100 !IL qui a été découpé à 2,9 cm de la base. La membrane de dialyse est maintenue sur le cône à l'aide de Parafilm. Le système est ensuite introduit dans une cuve UV ou de fluorescence possédant une ouverture circulaire et contenant 2,7 mL d'eau. 15 En amont, des NPs-PEG42-b-PMLABe73-Ni4C12-Dox sont préparées mais ne sont pas centrifugées de suite. En effet, 500 !IL de la solution sont prélevés puis centrifugés tandis que le reste de la suspension, en présence de Dox libre, est congelé afin d'éviter la possible libération à température ambiante. Cette manipulation permet de pouvoir réutiliser plusieurs fois la suspension, en la 20 décongelant, puis en prélevant la quantité souhaitée de nos NPs-PEG42-b- PMLABe73-Ni4C12-Dox, qui est ensuite centrifugée. Après filtration des 500 pL, le concentré est réhydraté avec 150 !IL d'eau ultra-pure, puis additionné dans le système de dialyse. Dès l'ajout, une mesure correspondant au tc, est réalisée. Il y a un échange qui se fait entre l'eau de la cuve UV et le système de dialyse. Ainsi la 25 Dox libérée passe à travers la membrane, puisqu'elle a une masse molaire inférieure à 3500 g/mol, tandis que les nanoparticules sont retenues. Du fait de sa bande d'absorption caractéristique à 485 nm, le pourcentage de Dox libérée est mesuré par spectroscopie UV-Vis-NIR. 30 3060561 Le pourcentage de Dox libérée est mesuré selon cette équation : 100 5 Afinal est obtenue par ajout d'une goutte de DMF dans le système de dialyse, permettant de détruire les nanoparticules et de libérer la Dox restante. En utilisant cette technique, la libération de la Dox au cours du temps a été étudiée de différentes façons. La première a été de mesurer la libération de Dox sans irradiation, la seconde a fait appel à une irradiation prolongée de 15 min à tc, et io la dernière a consisté à exposer notre échantillon à des paliers d'irradiation de 2 min toutes les 30 min (Figure 1). La Figure 1 a représente le pourcentage de Dox libérée par une suspension de NPs-PEG42-b-PMLABe-Ni4C12-Dox (NPs-Ni4C12-Dox), sans et avec irradiation initiale de 15 min (940 nm, 5 W/cm2). Dans la Figure 1 a, la courbe en trait plein 15 correspond aux nanoparticules sans irradiation et la courbe en trait pointillé correspond aux nanoparticules avec irradiation. La Figure 1 b représente le pourcentage de Dox libérée par une suspension de NPs-PEG42-b-PMLABe-Ni4C12-Dox (NPs-Ni4C12-Dox), sous exposition laser par intermittence (940 nm, 5 W/cm2, 2 min ON, 30 min OFF). Dans la Figure 1 b, la 20 courbe en trait plein correspond aux nanoparticules avec irradiation initiale pendant 15 minutes et la courbe en trait pointillé correspond aux nanoparticules avec irradiation par paliers de 2 minutes. Au bout de 18 heures, sans irradiation, la quantité de Dox libérée est inférieure à 5%. Les NPs-PEG42-b-PMLABe73-Ni4C12-Dox libèrent donc peu 25 d'anticancéreux sans stimulus externe. A l'inverse, l'irradiation d'une suspension de NPs-Ni4C12-Dox pendant 15 min, entraîne la libération de plus de 30% de la Dox encapsulée (Figure 1 a). Il faut noter qu'après 18h, la quantité de Dox libérée n'augmente pas. Cela confirme la plus grande affinité de la DOX pour les milieux hydrophobes. Cela peut aussi venir du fait que le volume d'eau extérieur n'est pas 30 suffisant pour être largement supérieur à la solubilité de la Dox en milieu aqueux. Ce type de système est intéressant dans le cas où le principe actif doit être libéré rapidement et dans une région précise. Un troisième test a été réalisé. Cette fois-ci la suspension est irradiée par intermittence pendant 2 min toutes les 30 min (Figure 1 b). De cette façon, les 30% 35 d'anticancéreux libérés sont atteints au bout de 3 h au lieu de 30 min. Par 3060561 41 conséquent, ce système permet une libération de la Dox plus lente. Il faut noter tout de même que la moitié du produit (15%) est libérée dès les deux premières minutes d'irradiation, puis ensuite la quantité relâchée est moindre. L'exposition laser augmente, probablement de façon irréversible, la perméabilité des nanoparticules 5 de polymères. En effet, lors des périodes de non-irradiation, la libération de la Dox continue à se faire avec une cinétique plus rapide que le lot de NPs-Ni4C12-Dox n'ayant pas été irradié. Préparation et étude du des Lp Ni8C12 CF io Le complexe Ni8C12 est hydrophobe et ne risque pas de passer en solution avec la molécule libérée, permettant ainsi de concentrer l'effet photothermique sur le liposome. Deuxièmement, il est situé dans les parois, laissant ainsi le coeur hydrophile du liposome libre pour les molécules à encapsuler. Le dernier point avantageux est leur plus grande efficacité photothermique. Dans le cas des Lp- 15 Ni8C12, la molécule à encapsuler est la 6-carboxyfluorescéine (CF). Cette molécule est un agent fluorescent hydrophile qui sera encapsulé dans le coeur du liposome afin d'obtenir les Lp-Ni8C12-CF. Pour cela, une solution saturée de carboxyfluorescéine (50 mM) dans l'eau est tout d'abord préparée puis filtrée sur célite. Le filtrat est récupéré et stocké. En 20 parallèle, un film lipidique-Ni8C12 est préparé de la même manière que pour les Lp- Ni8C12 puis une fois bien sec, il est hydraté avec la solution saturée de carboxyfluorescéine récupérée. Après 48h d'hydratation, la suspension est passée cinq fois aux ultrasons puis congelée. La libération a été suivie par émission de fluorescence, en utilisant 25 exactement le même système de dialyse pour l'étude de la libération de la DOX à partir des nanoparticules de polymères. Ainsi, notre suspension de Lp-Ni8C12-CF est décongelée et 100 !IL sont prélevés pour être centrifugée dans des MicroCon. Cette étape permet d'éliminer la 6-carboxyfluorescéine non-encapsulée et de récupérer notre concentré de Lp-Ni8C12-CF. Ce dernier est repris avec 150 !IL d'eau 30 puis ajouté dans le cône de dialyse. Le pourcentage de CF libéré est calculé à l'aide de l'équation suivante : - ?nbre ???.;;-;- - Lip % CF libéré = 100 CG p 3060561 42 Le nombre de coups est représentatif de la fluorescence émise par la solution. Plus il est élevé plus le milieu est émissif. Le nombre de coupstotal est lui obtenu en ajoutant, lors de la dernière mesure, du Triton-X. C'est un détergent permettant de détruire les liposomes et de libérer le reste de CF encapsulée. 5 Trois expériences de délivrance de carboxyfluorescéine ont été menées sur nos suspensions de Lp-N8C12-CF. La première est réalisée sans irradiation laser, la seconde avec une irradiation initiale de 15 min à tc, et la dernière est mise en oeuvre par exposition laser pendant 1, 3 ou 5 min toute les 10 min. Les résultats mettent en évidence que sans irradiation 80% de la 6-carboxyfluorescéine est libérée au bout io de 16 h tandis qu'après exposition laser pendant 15 min la même quantité de CF est libérée en 1 h. Le stimulus laser permet donc de libérer rapidement et en bonne quantité la molécule désirée. En s'appuyant sur ces premiers résultats, une expérience de libération 15 fractionnée a été réalisée (Figure 2). La Figure 2 représente le pourcentage de CF libérée par une suspension de Lp-Ni8C12-CF sous exposition laser (940 nm, 5 W/cm2) pendant différents intervalles de temps. La courbe avec les ronds représente la libération de CF pour des nanoparticules non irradiées, la courbe avec les carrés correspond à la libération de 20 CF pour des nanoparticules irradiées initialement pendant 15 min et la courbe avec les triangles représente la libération de CF pour des nanoparticules irradiées à différents intervalles de temps donnés. Lors des 30 premières minutes de non-irradiation, la cinétique de libération est en adéquation avec celle des Lp-Ni8C12-CF non-irradiés. Ensuite, la suspension est 25 irradiée pendant différents intervalles de temps. Les résultats indiquent que la libération de CF est proportionnelle au temps d'irradiation. Effectivement, plus le temps d'irradiation est long, plus le pourcentage libéré est important. De plus, contrairement au système NPs-Ni4C12, les Lp-Ni8C12 ont une perméabilité réversible. En effet, lors de l'irradiation, la porosité du liposome augmente, 30 entraînant la libération de CF qui se traduit par une montée subite de la fluorescence. Puis dès que le laser est éteint, la température du milieu diminue et le liposome retrouve sa perméabilité de départ et donc sa cinétique de libération d'origine. En conclusion, les Lp-Ni8C12 peuvent être utilisés pour libérer de façon 35 contrôlée les molécules désirées. Ce relargage peut se faire selon deux cinétiques bien différentes, qui sont dépendantes de la durée d'irradiation. Le principal 3060561 43 avantage des Lp-Ni8C12 est leur perméabilité réversible. De tels systèmes sont très intéressants pour des thérapies contre le cancer. En effet, une haute dose d'anticancéreux, encapsulés dans nos Lp-Ni8C12, peut être injectée tout en évitant les effets secondaires indésirables. Puis sous irradiation par intermittence, 5 l'anticancéreux peut être libéré, dans une zone précise et en plusieurs petites fractions dans le temps, évitant ainsi au patient de multiples injections à faible dose. L'ensemble de ces résultats démontrent que les Lp-Ni8C12 comme les NPs-Ni4C12 sont de bons candidats pour la libération photothermique contrôlée de médicament. 10 REVENDICATIONS1. Utilisation d'un complexe métal-bis(dithiolène) de formule (I) suivante : Z Z Ri Xs ,S V De' VS/ SNp 1.3 -4 (I) dans laquelle : - M représente un métal choisi dans le groupe constitué du nickel, du palladium, du platine, de l'or, du fer, du cobalt, du rhodium et de l'iridium, - R1, R2, R3 et R4, identiques ou différents, représentent un groupe hydrophile ou un groupe hydrophobe, et - z est égal à 0, -1 ou -2, pour la libération photothermique contrôlée de principes actifs. 2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle, dans la formule (I), M est Ni. 20 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle, dans la formule (I), les groupes R1, R2, R3 et R4, identiques ou différents, sont des groupes hydrophiles choisis dans le groupe constitué des sucres, des peptides hydrophiles, des polyéthylène glycols, des acides, des ammoniums, des zwitterions et des groupes hydroxyles, ou les groupes R1, R2, R3 et R4, identiques ou différents, sont 25 des groupes comprenant au moins un substituant choisi dans le groupe constitué des sucres, des peptides hydrophiles, des polyéthylène glycols, des acides, des ammoniums quaternaires, des zwitterions et des groupes hydroxyles. 4. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle, dans la formule 30 (I), les groupes R1, R2, R3 et R4, identiques ou différents, sont des groupes hydrophobes choisis dans le groupe constitué des peptides hydrophobes, des cholestérols, des groupes alkyles, linéaires ou ramifiés, comprenant de 1 à 20 10 15 3060561 45 atomes de carbone, et des groupes alcoxyles, linéaires ou ramifiés, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, ou les groupes R1, R2, R3 et R4, identiques ou différents, sont des groupes comprenant au moins un substituant choisi dans le groupe constitué des peptides hydrophobes, des cholestérols, des groupes alkyles, 5 linéaires ou ramifiés, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, et des groupes alcoxyles, linéaires ou ramifiés, comprenant de 1 à 20 atomes de carbone. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle le complexe métal-bis(dithiolène) est encapsulé dans une nanoparticule organique, notamment choisie dans le groupe constitué des liposomes, des nanoparticules de polymères, des nanoparticules lipidiques et des capsides virales. 6. Utilisation selon la revendication 5, dans laquelle la nanoparticule organique est un liposome, une nanoparticule lipidique, une capside virale ou une nanoparticule de polymères. 7. Nanoparticule organique, notamment choisie dans le groupe constitué des liposomes, des nanoparticules de polymères, des nanoparticules lipidiques et des capsides virales, encapsulant au moins un complexe métal-bis(dithiolène) de formule (I) suivante : R 17 IVI iNs S 2 /\/ F2 VS SNp ,3 ,4 dans laquelle : - M représente un métal choisi dans le groupe constitué du nickel, du palladium, du platine, de l'or, du fer, du cobalt, du rhodium et de l'iridium, - R1, R2, R3 et R4, identiques ou différents, représentent un groupe hydrophile ou un groupe hydrophobe, et - z est égal à 0, -1 ou -2. 8. Nanoparticule organique selon la revendication 7, contenant en outre au moins un principe actif. Z (I) 3060561 46 9. Utilisation de la nanoparticule organique selon la revendication 8, pour la libération photothermique contrôlée du principe actif. 5 10. Procédé de libération photothermique contrôlée d'un principe actif, comprenant une étape d'irradiation à une longueur d'onde comprise entre 600 nm et 1 600 nm, d'une nanoparticule organique selon la revendication 8. 10