FR 3061033 A1 20180629 FR 1663248 A 20161222 1 PROCEDE DE PREPARATION DE NANOCAPSULES DE SOLUTE ET LEUR UTILISATION DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne un procédé de préparation de nanocapsules de type coeur/écorce, le coeur et l'écorce étant respectivement un soluté et un polymère. Ces nanocapsules de soluté peuvent être notamment utilisées dans la cosmétique, dans des applications de vectorisation, par exemple la pharmaceutique et la thérapeutique. ETAT ANTERIEUR DE LA TECHNIQUE L'encapsulation de composés chimiques présente un intérêt particulier dans les applications nécessitant un relargage contrôlé. A titre d'exemple, l'encapsulation d'un catalyseur ou d'un médicament peut permettre son relargage au moment opportun. De manière générale, l'encapsulation consiste à piéger un composé chimique, le soluté, au sein d'une écorce telle qu'une matrice polymère. Le soluté est libéré après décomposition ou rupture de, ou par diffusion à travers, la matrice polymère. Ainsi, en adaptant la nature de cette dernière, il est possible de contrôler les conditions de libération du soluté. Il peut s'agir d'une matrice poreuse ou d'une matrice étanche, respectivement. Le procédé de nanoprécipitation permet d'encapsuler un soluté par effet Ouzo (Yan et al., Angew. Chem. Int. Ed., 2014, 53, 6910-6913). Ce procédé combine les phénomènes suivants : 30 la formation d'une émulsion de soluté lorsqu'un solvant est ajouté à une solution de soluté dans un co-solvant ; la précipitation d'un polymère en fonction de la fraction massique de solvant et de co-solvant. 25 3061033 2 Pour obtenir l'effet Ouzo, le solvant et le co-solvant sont miscibles alors que le soluté est insoluble dans le solvant. En outre, pour parvenir à l'encapsulation des gouttelettes de soluté ainsi formées, le polymère est soluble dans le solvant et insoluble dans le cosolvant. 5 Ainsi, lorsque les conditions sont réunies, le soluté peut être encapsulé par le polymère. Cependant, le procédé Ouzo ne permet pas d'obtenir des capsules de tailles facilement 10 contrôlables. De plus, la gamme de tailles disponible est limitée, et majoritairement supérieur à 100 nm. Il existe donc le besoin de pallier, au moins partiellement, aux inconvénients précités. 15 EXPOSE DE L'INVENTION Les Demandeurs ont mis au point un procédé permettant non seulement de préparer des capsules de taille nanométrique mais aussi de prédéfinir la taille de ces capsules. En outre, le procédé selon l'invention s'avère relativement fiable et facile à mettre en 20 oeuvre à l'échelle industrielle. La présente invention permet de préparer des nanocapsules de soluté. Il s'agit d'un procédé particulièrement intéressant eu égard à sa facilité de mise en oeuvre et à sa polyvalence. Ce procédé permet notamment de prédéfinir la taille des capsules en fonction de la nature du soluté et des solvants utilisés. Le procédé selon l'invention permet également de travailler dans une zone plus 30 importante que la zone Ouzo et donc, avec une gamme plus large de polymères hydrophiles. Plus précisément, la présente invention concerne un procédé de préparation de nanocapsules de soluté S à partir d'un premier solvant Si, d'un deuxième solvant S2, 35 et d'un polymère réticulable Pa', le solvant Si étant l'eau, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : 3061033 3 a/ on établit un diagramme de phase Pl du soluté S dans le mélange de solvants [S1+S2], le soluté S étant miscible dans le solvant S2 et immiscible dans le solvant Si, - le diagramme Pl étant établi pour la fraction massique S2/[S1+S2] en fonction 5 de la fraction massique Si[S1+S2], - le diagramme Pl comprenant deux courbes définissant trois domaines Dl à D3 : * un domaine homogène Dl, * un domaine hétérogène D2 dans lequel le soluté S est immiscible dans le 10 mélange [S1+S2], * un domaine hétérogène D3 dans lequel le soluté S est sous forme d'une émulsion huile dans eau dans le mélange [S1+S2], les deux courbes du diagramme Pl étant respectivement une courbe binodale séparant le domaine homogène Dl des domaines hétérogènes D2 et D3 ; et une 15 courbe séparant le domaine D2 du domaine D3 ; ces deux courbes ayant un point d'intersection N correspondant à l'intersection des domaines Dl, D2 et D3, b/ on établit un diagramme de phase P2 du polymère réticulable Pa' dans le mélange de solvants [S1+S2], Pa' étant soluble dans Si et insoluble dans S2, 20 - le diagramme P2 étant établi pour la fraction massique S2/[S1+S2] en fonction de la fraction massique Pal[51+52], - le diagramme P2 comprenant une courbe de point de trouble définissant deux domaines D4 et D5 : * un domaine D4 dans lequel Pa' est soluble dans le mélange [S1+S2], et 25 * un domaine D5 dans lequel Pa' précipite dans le mélange [S1+S2], c/ on définit un domaine correspondant au chevauchement des domaines Dl et D5, d/ on prépare séparément : - une phase E comprenant un polymère réticulable Pa' et un solvant Si, et - une phase H comprenant : * un solvant S2, * un agent réticulant, et * un soluté S, e/ on forme un mélange M en combinant la phase E et la phase H, - le mélange M étant dans le chevauchement des domaines Dl et D5, - la fraction massique Pal[Sl+S2] du mélange M étant dans le domaine D5, - la fraction massique Si[Sl+S2] du mélange M étant dans le domaine Dl, 3061033 4 - la fraction massique S2/[S1+S2] du mélange M étant dans les domaines Dl et D5, f/ on forme des nanocapsules de soluté S dans le polymère réticulable Pa', par précipitation et réticulation de Pa'. 5 Le point N correspond à une fraction massique 1\1' de soluté Si[S1+S2] et à une fraction massique Ny de solvant S2/[S1+S2]. Le mélange M se situe dans le chevauchement des domaines Dl et D5. Il est donc hors 10 du domaine D6. En l'absence de polymère réticulable Pa' et d'agent réticulant, le mélange M correspond à une microémulsion thermodynamiquement stable, ce qui n'est pas le cas des émulsions du domaine Ouzo, D3. 15 Selon un mode de réalisation particulier, la fraction massique Si[S1+S2] du mélange M est dans le domaine Dl et inférieure àl\l' alors que la fraction massique 52/[S1+52] du mélange M est dans les domaines Dl et D5 et inférieure à N. Ce mode de réalisation permet d'obtenir des nanocapsules dont la taille moyenne est inférieure à 20 100 nanomètres. De plus, la taille des nanocapsules est facilement contrôlée en variant le rapport 52/[S1+52] de sorte à atteindre des diamètres qui, avantageusement, s'échelonnent de 40 à 200 nm. Cette taille correspond à la taille mesurée par TEM (microscopie 25 électronique à transmission), c'est-à-dire sur des nanocapsules séchées. Sauf indication contraire, il en est de même pour le reste de la description. Le domaine D3 du diagramme de phase Pl correspond au domaine Ouzo dans lequel les gouttelettes de soluté formées présentent une taille difficilement contrôlable. 30 L'émulsion formée dans ce domaine n'est pas thermodynamiquement stable si aucun tensioactif n'est utilisé. Le soluté S est avantageusement un principe actif. Il peut notamment être choisi dans le groupe comprenant : les triglycérides, par exemple le Miglyole ; les médicaments 35 tels que la doxorubicine ; les huiles essentielles ; les protéines ; les marqueurs photoluminescents ; les colorants ; les parfums ; les engrais ; les pesticides ; les compléments alimentaires ; les arômes ; et les produits cosmétiques. 3061033 5 Le solvant Si est l'eau. Selon un mode de réalisation particulier, il peut également s'agir de toute solution aqueuse, ainsi que des mélanges eau/solvant dans lesquels le polymère hydrophile est soluble. 5 Les solvants Si et S2 sont miscibles. Le solvant S2 est avantageusement choisi dans le groupe comprenant : les cétones, par exemple l'acétone ; les éthers, par exemple le tétrahydrofurane ; le diméthylsulfoxyde 10 (DM50) ; les alcools, par exemple l'éthanol, le méthanol, l'isopropanol ; la N-méthy1- 2-pyrrolidone (NMP) ; et le N,N-diméthylformamide (DMF). De manière générale, tous solvants parfaitement miscibles à l'eau, dans certaines conditions de température et de pression (conditions de mise en oeuvre du procédé), peuvent être utilisés. 15 Selon un mode de réalisation préféré, le solvant 51 est l'eau alors que le solvant S2 est l'acétone. Le polymère réticulable Pa' n'est pas miscible dans le solvant S2. En d'autres termes, il précipite lorsqu'une solution de polymère dans le solvant 51 est mise en présence 20 d'une certaine quantité de solvant S2. Le diagramme P2 permet de déterminer cette quantité en fonction de la concentration en polymère réticulable pCL Le polymère réticulable Pa' est soluble dans le solvant 51. Ainsi, il est hydrosoluble (51 = eau) dans les conditions normales d'utilisation selon l'invention. 25 Le polymère réticulable Pa' est avantageusement un polymère synthétique hydrosoluble, un polysaccharide ou un polypeptide hydrophile. A titre d'exemple non limitatif, il peut notamment être choisi dans le groupe 30 comprenant : poly(N42-(a-D-mannopyranosyloxy)éthyl] méthacrylamide) (PEMM) ; poly (N-[2-(2-ethoxy)éthyl (a-D-glucopyranoside)] méthacrylamide) (PEEGM) ; dextrane (polymère ramifié de dextrose) ; poly(N-(2-hydroxypropyl)méthacrylamide) (PHPMA) ; alcool polyvinylique (PVA) ; acide hyaluronique ; glycogène ; pullulane (polysaccharide) ; et les dérivés du dextrane, par exemple le dextrane sulfate. 35 De manière générale, le polymère réticulable Pa' comprend des groupements OH qui permettent la réticulation en présence d'un agent réticulant adéquat. 3061033 6 En outre, selon un mode de réalisation particulier, le polymère réticulable Pa' peut comprendre au moins un groupement fonctionnalisant. Ce groupement peut notamment être choisi dans le groupe comprenant : biotine ; luminophores par exemple un fluorophore ; métaux ; nanotraceur ; biomarqueur ; nanoparticules magnétiques ; et 5 leurs mélanges. La formation de nanocapsules est assurée par la précipitation de Pa' sur le soluté, et la réticulation de Pa' en présence d'un agent réticulant. 10 L'agent réticulant comprend au moins deux fonctions aptes à réagir avec le polymère Pa'. Il peut notamment être un composé comprenant au moins deux fonctions isocyanate -N=C=0. Il peut être aussi un diépoxide, un dialdéhyde ou tous agents capables de réagir avec des fonctions alcools. 15 A titre d'exemple non limitatif, cet agent réticulant peut être avantageusement choisi dans le groupe comprenant : les diisocyanates, par exemple l'isophorone diisocyanate (IPDI) ; les diépoxydes, par exemple le Bisphenol A diglycidyl éther ; les dialdéhydes, par exemple le glutaraldéhyde ; et leurs mélanges. 20 Afin d'éviter la réticulation de Pa' préalablement à sa mise en contact avec le soluté S et à sa précipitation, l'agent réticulant est présent dans la phase E. Il est donc avantageusement soluble dans le solvant S2. Il peut aussi être soluble dans le solvant Si. La phase H est donc avantageusement dépourvue d'agent réticulant du polymère pCL. 25 Comme déjà indiqué, le procédé selon l'invention met en oeuvre les étapes suivantes : a/ on établit le diagramme de phase Pi; b/ on établit le diagramme de phase P2; c/ on définit le domaine correspondant au chevauchement du domaine de 30 précipitation de Pa' (D5) et du domaine homogène de S (D1) dans [Sl+S2] ; d/ on prépare séparément une phase E et une phase H; e/ on forme un mélange M en combinant la phase E et la phase H; f/ on forme des nanocapsules de soluté S dans le polymère réticulable pCL 35 Le diagramme de phase P1 du soluté S dans le mélange de solvants [Sl+S2] est établi de manière conventionnelle. Plus précisément, ce type de diagramme peut être obtenu selon les deux étapes suivantes : 3061033 7 1/ on fait varier la fraction massique S2/[S1+S2] en ajoutant du solvant Si dans une solution de soluté S dans le solvant S2, à concentration en S constante ; on note la présence d'une phase homogène (Dl), d'une émulsion (D3) ou d'une phase hétérogène (D2) ; 5 2/ on réitère l'étape 1/ à une concentration en soluté S différente. Ainsi, on obtient le diagramme Pl qui comprend deux courbes définissant les trois domaines Dl, D2 et D3 comme illustré par la figure 1. 10 Le domaine Dl correspond à une solution de soluté S dans [S1+S2]. Il s'agit d'un domaine présentant une phase homogène correspondant à une microémulsion de soluté S dans le mélange [S1+S2]. Le domaine Dl est dit « transparent » car la microémulsion formée est invisible à l'oeil nu. C'est la raison pour laquelle ce domaine a généralement été considéré comme correspondant à un domaine monophase dans 15 lequel le soluté S était totalement solubilisé. Or, les Demandeurs ont montré pour des systèmes soluté huileux/solvant S2/solvant Si (eau) que ce domaine spécifique correspond à une microémulsion, le soluté S n'étant pas miscible (solubilisé) dans le mélange [S1+S2] du domaine Dl. Contrairement à l'émulsion du domaine D3, cette microémulsion est thermodynamiquement stable même en l'absence de tensioactif 20 Cette microémulsion est stable dans le temps et présente une taille monodisperse. Les Demandeurs ont par ailleurs découvert que, dans le domaine Dl, la microémulsion formée présente une taille de gouttelette identique pour un ratio Sl/S2 donné, et ce quel que soit la concentration en soluté S. 25 Le domaine D2 correspond à un mélange hétérogène de soluté S dans les solvants [S1+S2]. Ce domaine est dit « opaque » ou « trouble » car le soluté S n'est ni soluble ni émulsionnable dans ce domaine. Le domaine hétérogène D3 correspond à une émulsion huile dans l'eau de soluté S 30 dans le mélange de solvants [Sl+S2]. Comme déjà indiqué, il s'agit du domaine Ouzo. Dans ce domaine, la taille des gouttelettes de soluté S formant l'émulsion varie fortement en fonction d'une variation faible de la concentration en soluté S dans le mélange [Sl+S2]. L'émulsion formée ne correspond pas à la microémulsion du domaine Dl. L'homme du métier a toujours clairement distingué ces deux domaines 35 notamment en raison de la transparence du domaine Dl. 3061033 8 L'étape b/ du procédé objet de l'invention consiste à établir le diagramme de phase P2 du polymère réticulable Pa' dans le mélange de solvants [S1+S2], Pa' étant soluble dans Si et insoluble dans S2. Pour cela, il est possible de suivre les étapes suivantes : 1/ on fait varier la fraction massique S2/[S1+S2] en ajoutant du solvant S2 dans une 5 solution de polymère réticulable Pa' dans le solvant Si, à concentration en Pa' constante ; on note la fraction massique S2/[S1+S2] correspondant à la précipitation du polymère réticulable ; 2/ on réitère l'étape 1/ à une concentration en polymère réticulable Pa' différente. 10 Ainsi, on obtient le diagramme P2 qui comprend une courbe de point de trouble du polymère réticulable Pa' définissant les deux domaines D4 et D5 comme illustré par la figure 2. La courbe de point de trouble séparant les domaines D4 et D5 correspond à 15 l'apparition d'un trouble lorsque le solvant S2 est ajouté dans une solution de polymère P CL dans l'eau. Cette courbe représente la limite solubilité/précipitation du polymère P CL dans [S1+S2]. Le domaine D4 correspond à une solution de Pa' dans [S1+S2]. 20 Le domaine D5 correspond à une suspension de Pa' dans [S1+S2]. La superposition des diagrammes de phase P1 et P2 permet de définir le domaine D6 correspondant au chevauchement des domaines de précipitation de Pa' (D5) et 25 d'émulsion de S (D3) dans [S1+S2] comme illustré par la figure 3. Le domaine D6 permet d'obtenir des capsules qui présentent une taille généralement supérieure à 100 nm et difficilement contrôlable. 30 Plus précisément, la superposition des diagrammes de phase P1 et P2 permet de définir le domaine d'intérêt correspondant à la superposition des domaines D1 et D5. Le domaine d'intérêt (D1+D5) présente également l'avantage d'être plus important que le domaine D6 (D3+D5) de l'art antérieur. Il offre donc une zone de travail plus 35 conséquente. 3061033 9 Une fois les conditions d'obtention du domaine d'intérêt définies (D1+D5), les phases E (51+p C) L' et H (52+5+réticulant) sont préparées indépendamment l'une de l'autre. Ces deux phases sont ensuite mélangées par introduction de la phase E dans la phase H 5 ou par introduction de la phase H dans la phase E pour former le mélange M. Le mélange M comprend des gouttelettes de soluté S recouvertes de PcL. Selon un mode de réalisation particulier, la phase H peut également comprendre une 10 part de solvant 51. Dans ce cas particulier, les quantités des solvants 51 et S2 sont ajustées ultérieurement par addition du polymère P CL et/ou de l'agent réticulant. 15 Le mélange M résultant de l'addition des phases E et H est avantageusement réalisé en l'absence d'agent tensioactif Ainsi, le procédé selon l'invention est préférentiellement réalisé en l'absence d'agent tensioactif Dans la phase E, la concentration de Pa' est avantageusement comprise entre 10-5 et 20 101 g/g, plus avantageusement entre 10-4 et 5x10-4 g/g, cette concentration étant exprimée en grammes de Pa' par gramme de phase E. Dans la phase H, la concentration de soluté S est avantageusement comprise entre 10-8 et 10-2 g/g, plus avantageusement entre 10-6 et 101 g/g, cette concentration étant 25 exprimée en grammes de soluté S par gramme de phase H. La quantité d'agent réticulant utilisée est avantageusement comprise entre 1 et 128 eq/mol polymère P CL, plus avantageusement entre 24 et 48 eq/mol polymère P CL, cette quantité étant exprimée en équivalent molaire d'agent réticulant par mole de polymère 30 pCL. Le mélange M présente une fraction massique 52451+52] avantageusement comprise entre 0,2 et 0,8, plus avantageusement entre 0,4 et 0,6, en fonction de la taille des objets visés. 35 3061033 10 Toujours dans le mélange M, le rapport massique 13n/soluté S est avantageusement compris entre 0,2/1 et 100/1, plus avantageusement entre 1/1 et 10/1, selon l'épaisseur de membrane visée c'est-à-dire en fonction de l'épaisseur de polymère réticulé entourant le soluté. 5 Comme déjà indiqué, les nanocapsules de soluté S dans le polymère réticulable pCL sont formées par précipitation et par réticulation de Pa'. La réticulation de Pa' peut être réalisée dans un délai avantageusement compris entre 10 10 minutes et 24 heures, plus avantageusement entre 2 heures et 12 heures. La réticulation de Pa' est avantageusement réalisée entre 10°C et 50°C, plus avantageusement à la température ambiante. 15 De manière avantageuse, tout le procédé (étapes a/ à f/) est réalisé à la température ambiante. La présente invention concerne également les nanocapsules obtenues par ce procédé. 20 La taille de ces nanocapsules peut notamment être comprise entre 10 nanomètres et 300 nanomètres, plus avantageusement entre 40 nanomètres et 200 nanomètres. Les nanocapsules étant avantageusement sphériques, la taille correspond avantageusement à leur diamètre. Comme déjà indiqué, il s'agit de nanocapsules de nanocapsules de type coeur/écorce (ou coeur/coquille), le coeur et l'écorce étant respectivement un soluté et un polymère. L'épaisseur de l'écorce est avantageusement comprise entre 5 et 30 nanomètres, plus avantageusement entre 10 et 20 nanomètres. Le procédé selon l'invention permet de prédéfinir la taille des nanocapsules en fonction du ratio S2/S1 et de la quantité de soluté S. Il permet en outre d'obtenir une dispersion de taille relativement étroite. 35 Pour prédéterminer la taille des nanocapsules, la taille des gouttelettes de soluté S dans le mélange [S1+S2] est mesurée en fonction de la fraction massique S2/[S1+S2] et de la concentration en soluté S, et ce dans le domaine Dl du diagramme Pl. 25 30 3061033 11 Comme déjà indiqué, il est possible d'obtenir des nanocapsules dont la taille est inférieure à 100 nanomètres lorsque la fraction massique Si[S1+S2] du mélange M est dans le domaine Dl et inférieure à N' et lorsque la fraction massique S2/[S1+S2] du 5 mélange M est dans les domaines Dl et D5 et inférieure à N. D'autre part, le procédé selon l'invention est particulièrement polyvalent étant donné qu'il permet d'encapsuler toute sorte de soluté. En adaptant la nature de Pa', il est possible d'obtenir des nanocapsules dont l'écorce est poreuse ou non. La présence 10 d'une écorce poreuse peut permettre, le cas échéant, d'éliminer toute trace de solvant Si ou S2 en séchant les nanocapsules à une température ne permettant pas d'évaporer le soluté. Le domaine d'utilisation de ces nanocapsules dépend du soluté encapsulé. Ainsi, elles 15 peuvent notamment être utilisées dans le traitement du cancer. D'autres domaines d'application envisageables de ces nanocapsules incluent notamment la cosmétique, les applications de vectorisation, par exemple la pharmaceutique et la thérapeutique. Ils incluent également l'agroalimentaire, le 20 marquage d'objets, l'agriculture et la diffusion d'arômes ou de parfums. Grâce à la présente invention, l'homme du métier pourra préparer des nanocapsules de taille prédéfinie. Ainsi, il pourra adapter la taille au domaine d'utilisation envisagé. 25 La présente invention et les avantages qui en découlent ressortiront mieux des figures et exemples suivants donnés afin d'illustrer l'invention et non de manière limitative. DESCRIPTION DES FIGURES 30 La figure 1 illustre le diagramme de phase Pl d'un système constitué d'un soluté S dans un mélange de deux solvants [S1+S2] miscibles entre eux. La figure 2 illustre le diagramme de phase P2 d'un système constitué d'un polymère réticulable Pa' dans un mélange de deux solvants [S1+S2] miscibles entre eux. La figure 3 correspond à la superposition du diagramme de phase Pl d'un système 35 constitué d'un soluté S dans un mélange de deux solvants [Sl+S2] miscibles entre eux et du diagramme de phase P2 d'un système constitué d'un polymère réticulable pCL dans le même mélange de deux solvants [Sl+S2] miscibles entre eux. 3061033 12 EXEMPLES DE REALISATION DE L'INVENTION Le diagramme de phase de la figure 3 est obtenu par superposition du diagramme de 5 phase Si[S1+S2] (figure 1) et du diagramme de phase Pc1-1[51+52] (figure 2). Les solutés S ont été encapsulés avec les polymères PcL dans les conditions décrites dans le tableau 1 ci-après. 10 L'encapsulation a été réalisée à partir d'une solution aqueuse de polymère réticulable PcL et d'une solution de soluté S et de réticulant dans l'acétone. Les conditions d' encapsulation sont définies par le diagramme de phase S/PcL/S1/S2 avec : 15 - S = miglyol, hexadécane ; - pCL = PEMM (poly(N-[2-(a-D-mannopyranosyloxy)éthyl] méthacrylamide), PHPMA (poly(N-(2-hydroxypropyl)méthacrylamide), PEEGM (poly(N-[2-(2- éthoxy)éthyl (a-D-glucopyranoside)] méthacrylamide), glycogène, acide hyaluronique, pullulan ou dextrane ; 20 - S1 = eau ; - S2 = acétone. Ce diagramme de phase (figure 3) est obtenu par superposition du diagramme de phase Si[S1+S2] (figure 1) et du diagramme de phase Pal[51+52] (figure 2). 25 1/ Détermination de la taille des gouttelettes de soluté S dans le mélange acétone/eau Préalablement à la préparation de capsules de soluté S, la taille des gouttelettes de soluté S (miglyol 812, numéro CAS 37332-31-3) dans le mélange acétone/eau a été 30 déterminée en fonction de la fraction massique acétone/eau (52/[S1+52] = 0,2 à 0,8) et de la concentration en soluté S (S/[S1+52] = 1041 à 101). La taille des gouttelettes est déterminée par diffusion dynamique de la lumière (DLS « dynamic light scattering ») ou par TEM (microscopie électronique à transmission). 35 3061033 13 Particulièrement, des gouttelettes de taille inférieures à 100 nm sont obtenues lorsque la fraction massique acétone/eau (S2/[S1+S2]) est comprise entre 0,4 et 0,6 : - avec une fraction massique acétone/eau (S2/[S1+S2]) de 0,6, les gouttelettes ont une distribution de taille monodisperse de 75-90 nm (dv/dN REVENDICATIONS1. Procédé de préparation de nanocapsules de soluté S à partir d'un premier solvant Si, d'un deuxième solvant S2, et d'un polymère réticulable Pa', le solvant Si étant l'eau, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a/ on établit un diagramme de phase Pl du soluté S dans le mélange de solvants [S1+S2], le soluté S étant miscible dans le solvant S2 et immiscible dans le solvant Si, - le diagramme Pl étant établi pour la fraction massique S2/[S1+S2] en fonction de la fraction massique Si[S1+S2], - le diagramme Pl comprenant deux courbes définissant trois domaines Dl à D3 : * un domaine homogène Dl, * un domaine hétérogène D2 dans lequel le soluté S est immiscible dans le mélange [S1+S2], * un domaine hétérogène D3 dans lequel le soluté S est sous forme d'une émulsion huile dans eau dans le mélange [S1+S2], les deux courbes du diagramme Pl étant respectivement une courbe binodale séparant le domaine homogène Dl des domaines hétérogènes D2 et D3 ; et une courbe séparant le domaine D2 du domaine D3 ; ces deux courbes ayant un point d'intersection N correspondant à l'intersection des domaines Dl, D2 et D3, b/ on établit un diagramme de phase P2 du polymère réticulable Pa' dans le mélange de solvants [S1+S2], Pa' étant soluble dans Si et insoluble dans S2, - le diagramme P2 étant établi pour la fraction massique S2/[S1+S2] en fonction de la fraction massique Pal[Sl+S2], - le diagramme P2 comprenant une courbe de point de trouble définissant deux domaines D4 et D5 : * un domaine D4 dans lequel Pa' est soluble dans le mélange [S1+S2], et * un domaine D5 dans lequel Pa' précipite dans le mélange [S1+S2], c/ on définit un domaine correspondant au chevauchement des domaines Dl et D5, d/ on prépare séparément : - une phase E comprenant un polymère réticulable Pa' et un solvant Si; et - une phase H comprenant : * un solvant S2, * un agent réticulant, et * un soluté S, 5 f/ 102. 3. 15 4. 20 5. 25 6. 30 7. 35 8. 3061033 17 e/ on forme un mélange M en combinant la phase E et la phase H, - le mélange M étant dans le chevauchement des domaines Dl et D5, - la fraction massique Pal[Sl+S2] du mélange M étant dans le domaine D5, - la fraction massique Si[S1+S2] du mélange M étant dans le domaine Dl, - la fraction massique S2/[S1+S2] du mélange M étant dans les domaines Dl et D5, on forme des nanocapsules de soluté S dans le polymère réticulable Pa', par précipitation et réticulation de Pa'. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le procédé est réalisé en l'absence d'agent tensioactif Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le solvant S2 est choisi dans le groupe comprenant : l'acétone ; le tétrahydrofurane ; le diméthylsulfoxyde ; l'éthanol ; le méthanol ; l'isopropanol ; la N-méthy1-2- pyrrolidone ; et le N,N-diméthylformamide. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le polymère réticulable Pa' est un un polymère synthétique hydrosoluble, un polysaccharide ou un polypeptide hydrophile. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le polymère réticulable Pa' comprend au moins un groupement fonctionnalisant choisi dans le groupe comprenant : biotine ; luminophores ; métaux ; nanotraceur ; biomarqueur ; nanoparticules magnétiques ; et leurs mélanges. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l'agent réticulant est choisi dans le groupe comprenant les diisocyanates ; les diépoxides ; les dialdéhydes ; et leurs mélanges. Procédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la concentration en soluté S dans la phase H est comprise entre 10-8 et 10-2g/g, cette concentration étant exprimée en grammes de soluté S par gramme de phase H. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que le mélange M présente un rapport massique 13n/soluté S compris entre 0,2/1 et 100/1. 3061033 18 9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que le mélange M présente une fraction massique S2/[S1+S2] comprise entre 0,2 et 0,8. 5 10. Nanocapsules obtenues par le procédé selon l'une des revendications 1 à 9.