FR 3061014 A1 20180629 FR 1663109 A 20161222 1 Extrait de fraisier des bois et utilisations Domaine de l'invention La présente invention concerne notamment un extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois de l'espèce Fragatia vesce et son utilisation dans une composition cosmétique, en particulier pour application topique sur la peau, en tant qu'agent protecteur contre le stress oxydant, et/ou agent stimulant le métabolisme cellulaire de la peau. La peau est la première barrière du corps humain. Elle protège les organes des différences de température, d'humidité, et des agressions de l'environnement extérieur, comme les rayons UV ou les agents polluants. Elle joue également un rôle important dans l'homéostasie, par exemple pour réguler la température corporelle. Cependant, des stimulations chimiques et physiques excessives - exposition au soleil, à la lumière, aux UV, le stress et la pollution - détériorent les fonctions normales de la peau et induisent son vieillissement. Ce vieillissement extrinsèque (vieillissement lié à des facteurs externes) entraîne l'apparition de rides et la formation d'une peau ayant perdu sa fermeté, sa souplesse et son élasticité. De façon concomitante, le vieillissement intrinsèque, vieillissement « normal » ou chronobiologique, est la conséquence d'une sénescence programmée où interviennent des facteurs endogènes. Ce vieillissement intrinsèque provoque notamment un ralentissement du renouvellement des cellules de la peau, les kératinocytes, ce qui se traduit essentiellement par la réduction du tissu adipeux sous-cutané, l'apparition de fines rides ou ridules, une perte de fibres verticales de la membrane du tissu élastique, et la présence de grands fibroblastes irréguliers dans les cellules de ce tissu élastique. La présente invention s'intéresse en particulier au vieillissement extrinsèque lié aux agressions de l'environnement extérieur (lumière, rayonnements UV, pollution...), et cherche à en prévenir et/ou atténuer ses effets. Le stress oxydant est notamment responsable de l'accélération du vieillissement cutané humain. Des radicaux libres et des espèces réactives de l'oxygène (EORs) sont formés au cours du métabolisme cellulaire normal mais également en réponse à des stress physiques et chimiques tels que les UVs ou le peroxyde d'hydrogène (H202). Ces effets du stress 3061014 2 oxydant sont néfastes pour tous les compartiments et constituants cellulaires (ADN, protéines, lipides...). Ils peuvent également conduire à des rougeurs diffuses sur la peau. La recherche de nouvelles molécules ou ingrédients actifs utilisables en cosmétique est une 5 nécessité pour pouvoir développer des produits efficaces pour donner un aspect plus jeune à la peau, un teint homogène, sans irrégularité colonelle au niveau de la pigmentation ou de la microcirculation, un teint reflétant sa bonne santé. Les inventeurs ont justement développé un nouvel extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois de l'espèce Fragatia vesce, la Reine des Vallées, et mis en évidence des 10 performances surprenantes, comme le montrent les tests réalisés sur kératinocytes humains normaux (KHN) et illustrés dans les exemples décrits ci-après. L'extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois de l'espèce Fragaria vesce selon l'invention a notamment six actions clés : - Action sur le Nrf2 (Nuclear factor E2-related factor 2) en condition basale (sans stress) : 15 l'extrait induit le Nrf2 permettant ainsi d'anticiper les besoins des kératinocytes en termes de défenses et d'énergie ; - Action sur le Nrf2 en condition de stress (H202 ou UVB) : dans ces conditions particulières, l'extrait induit plus fortement le Nrf2 permettant ainsi d'aider la cellule à faire face en termes de défenses et d'énergie ; 20 - Action sur la production d'énergie cellulaire : l'extrait augmente de façon significative la production d'ATP par les kératinocytes ; - Action directe sur les espèces radicalaires : l'extrait piège de façon significative les radicaux libres produits par des kératinocytes stressés par H202 ; - Action sur le renforcement de la barrière cutanée : l'extrait augmente de façon significative 25 la quantité de protéines spécifiques impliquées dans la barrière cutanée ; leur présence est un gage de bonne fonction barrière ; et - Action sur les médiateurs de l'inflammation : l'extrait limite la production de médiateurs de l'inflammation induits par les UVs et contribue ainsi à limiter les rougeurs diffuses. 3061014 3 Etat de la technique On connaît de l'art antérieur l'effet antioxydant d'extraits hydroalcooliques de fruits de 5 fraisier de l'espèce Fragaria vesce, lié à leur teneur en composés phénoliques, qui diffère selon le génotype des plantes et les conditions de culture (Scalzo et al., Nutrition 21(2005) 207-213; Cheel et al. 2007, Food Chemistry 102 (2007) 36-44). Ces publications scientifiques concluent à l'intérêt de ces extraits de fruits de Fragaria vesce pour la préparation de produits alimentaires antioxydants. 10 Mais à la connaissance de la Demanderesse, il n'existe pas d'extrait de feuilles et de fruits de fraisier de l'espèce Fragaria vesce, en particulier d'extrait hydroalcoolique de feuilles et de fruits de fraisier de l'espèce de Fragaria vesce, ni leur utilisation dans la préparation d'une composition cosmétique à usage topique, pour prévenir et/ou atténuer les effets du stress sur la 15 peau, et/ou stimuler le métabolisme cellulaire de la peau. C'est également la première fois que l'on démontre autant de performances complémentaires pour un extrait de fraisier des bois de l'espèce Fragaria vesce, et en particulier un effet sur le facteur de transcription Nrf2, participant ainsi au maintien de l'énergie cellulaire, à la protection contre les stress et au maintien d'une barrière épidermique fonctionnelle. 20 En effet, Nrf2 agit sur le métabolisme et l'énergie de la cellule : impliqué dans la modulation du métabolisme intermédiaire, Nrf2 facilite le flux du glucose et augmente la régénération de NADPH (co-facteur indispensable aux activités enzymatiques nécessitant de l'énergie). Cette reprogrammation métabolique permettrait en particulier de mieux lutter contre le stress (Hayes et al., 2014, Trends in Biochemical Sciences 2014;39(4):199-218). 25 II est également directement impliqué dans la défense anti-stress. La fixation de Nrf2 sur une zone spécifique de l'ADN (région promotrice) induit la synthèse de nombreux gènes impliqués dans la réponse anti-oxydante, la détoxification des cellules. Nrf2 contribue ainsi également aux processus de réparation et la dégradation des macromolécules endommagées par les stress. 30 Nrf2 est exprimé dans toutes les couches de l'épiderme et un lien a été observé entre sa concentration et la différenciation épidermique, cette dernière conduisant à la formation de la barrière cutanée (Lee et al, 2014 Archives of Dermatological Research 2014;306:677-82). 3061014 4 Le rôle de Nrf2 est donc majeur dans l'homéostasie cellulaire et la gestion du stress. En l'activant, on participe au bon fonctionnement global de la peau pour un résultat visible à l'extérieur. 5 Résumé de l'invention Un premier objet de l'invention vise un extrait de feuilles et fruits de fraisier des bois de l'espèce Fragaria vesce, obtenu au moyen d'un solvant polaire cosmétiquement acceptable. 10 On parlera indifféremment dans la suite de la description d'extrait de fraisier ou d'extrait de fraisier des bois ou d'extrait de feuilles et de fruits de fraisier de l'espèce Fragaria vesce ou d'extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois de l'espèce Fragaria vesce. L'extrait selon l'invention pourra être sous forme de poudre (lyophilisée) ou sous forme liquide concentrée ou diluée dans un mélange de solvants polaires (solution d'extrait 15 de fraisier). Un autre objet de l'invention est une composition cosmétique notamment pour application topique comprenant à titre d'agent actif un extrait de fraisier selon l'invention et au moins un excipient cosmétiquement acceptable. 20 L'invention porte encore sur l'utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une telle composition, en particulier pour application topique, d'un extrait de fraisier de l'espèce Fragaria vesce selon l'invention, en tant qu'agent actif protecteur du stress oxydatif et/ou stimulant le métabolisme cellulaire de la peau. 25 On parlera indifféremment dans la description de stress oxydant ou de stress oxydatif. Un autre objet de l'invention est une méthode de soin cosmétique des matières kératiniques, en particulier de la peau, comprenant l'application sur lesdites matières kératiniques, en particulier la peau du visage et/ou du corps, d'une quantité efficace d'au 30 moins une composition cosmétique comprenant l'extrait de fraisier de l'espèce Fragaria vesce selon l'invention, pour protéger la peau des effets néfastes du stress oxydatif, en particulier des effets des rayonnements UV et/ou des toxines et/ou de la pollution, et/ou pour stimuler le métabolisme cellulaire de la peau, visant notamment à préparer la peau au soleil 3061014 5 et/ou prévenir et/ou limiter les effets néfastes des UV, et/ou prévenir les signes du vieillissement cutané extrinsèque, en particulier prévenir et/ou diminuer les rides et/ou ridules, et/ou améliorer l'éclat et/ou l'uniformité du teint, et/ou améliorer la radiance et/ou la transparence de la peau, et/ou améliorer la souplesse et/ou l'élasticité de la peau. 5 Description détaillée de l'invention Extrait 10 Ainsi, selon un premier objet, l'invention concerne un extrait de feuilles et fruits de fraisier des bois de l'espèce Fragaria vesce, obtenu au moyen d'un solvant polaire cosmétiquement acceptable. Préalablement à l'étape d'extraction elle-même, le matériel végétal constitué des feuilles et fruits de fraisier peut avoir été séché et/ou broyé. 15 L'extrait peut être préparé par différents procédés d'extraction connus de l'homme du métier. Selon un mode particulier, l'extrait de fraisier de l'espèce Fragaria vesce est susceptible d'être obtenu par un procédé comprenant les étapes suivantes : 20 - le broyage des feuilles et des fruits de la plante, - la dispersion de la matière végétale broyée dans l'eau ou un mélange hydroalcoolique, - éventuellement l'hydrolyse enzymatique de la dispersion obtenue, - la séparation des phases soluble et insoluble par filtration, 25 - l'ajout d'au moins un solvant polaire, de préférence un glycol et - au moins une filtration. Avantageusement, l'extraction est de préférence réalisée par mise en contact du matériel végétal sélectionné avec un solvant polaire ou un mélange de solvants polaires. Selon la 30 présente invention, l'expression « solvant polaire » signifie que le solvant a une valeur d'indice de Polarité qui est égale ou supérieure à une valeur de 4. L'indice de polarité est une grandeur calculée sur la base de grandeurs thermodynamiques (de solubilité et de 3061014 6 changement d'état) qui met en évidence le caractère plus ou moins polaire d'une molécule. On se reportera, pour les indices de polarité des solvants, à l'article de L.R. SNYDER : Classification of the solvent pro perties of common liquids ; Journal of Chromatography, 92 (1974), 223-230. 5 Les solvants polaires préférés sont ceux constitués d'un composé comprenant au moins une liaison covalente polaire de type O-H. A titre de solvant polaire particulièrement préféré, on choisit un solvant ou un mélange de solvants choisi(s) parmi l'eau, les alcools en C1-C4, tel que l'éthanol, les glycols, tels que l'éthylène glycol, le glycérol, le butylèneglycol et le propylèneglycol, et leurs mélanges. 10 Selon une mise en oeuvre préférée, on extrait le matériel végétal à l'aide d'un mélange hydroalcoolique, avantageusement un mélange d'eau et d'éthanol. En particulier, on extrait le matériel végétal à l'aide d'un solvant constitué d'eau et d'éthanol, l'éthanol représentant de 50% v/v à 99% v/v du mélange eau/éthanol. De préférence on extrait le matériel végétal à l'aide d'un mélange comprenant 30% v/v d'eau 15 et 70°/0v/v d'éthanol. Selon un mode préféré de l'invention, l'extrait de fraisier de l'espèce Fragaria vesce est obtenu par extraction hydroalcoolique des feuilles et des fruits de ladite plante. L'extraction peut être menée à chaud par reflux ou bien par macération à température ambiante. 20 On utilise avantageusement les ultrasons en cours d'extraction afin d'améliorer le rendement massique de ladite extraction. Le procédé d'extraction comprend avantageusement une étape de filtration visant à séparer la phase liquide du matériel végétal épuisé. 25 On peut reproduire le cycle d'extraction puis filtration, plusieurs fois afin d'épuiser le matériel végétal des substances ayant une affinité pour le solvant d'extraction Le procédé d'extraction peut également comprendre au moins une étape de décoloration et/ou de purification, par exemple sous la forme d'un traitement de l'extrait par une solution 3061014 7 d'au moins un solvant polaire en présence de particules de charbon actif. On élimine ainsi notamment la chlorophylle extraite par le solvant. Le procédé d'extraction peut en outre être complété par une étape d'élimination partielle ou totale des solvants d'extraction. 5 On peut avantageusement concentrer l'extrait en éliminant une partie du solvant ou du mélange du solvant d'extraction. On peut ainsi obtenir un concentré aqueux dépourvu d'une quantité significative de solvants organiques ou bien encore, en éliminant tout le solvant d'extraction, obtenir un résidu sec. 10 De manière avantageuse, on concentre l'extrait de feuilles et fruits de fraisier en éliminant l'éthanol, de façon à obtenir un extrait aqueux pouvant comprendre jusqu'à 35% en poids, en particulier de 25 à 30% en poids de matière sèche par rapport au poids total de l'extrait. En particulier, le ratio pondéral feuilles/fruits dans l'extrait sec de fraisier va de 15/1 à 5/1, de 15 préférence de 12/1 à 8/1, et est de préférence de 10/1. De façon alternative, le produit de l'étape d'extraction peut être, lyophilisé ou atomisé pour se présenter sous la forme d'une poudre. L'extrait végétal polaire tel que décrit précédemment peut être utilisé dans une composition cosmétique sous la forme d'une poudre ou bien être remis en solution ou en suspension 20 dans au moins un solvant cosmétiquement acceptable, qui peut être identique ou différent de celui ayant servi à l'extraction. Selon une variante préférée, l'extrait concentré de feuilles et fruits de fraisier est remis en solution dans un mélange d'eau et de butylène glycol. On parlera de solution d'extrait de fraisier selon l'invention. 25 Selon un mode préféré, la solution d'extrait de fraisier selon l'invention comprend une teneur de 7 à 15% en poids de matière sèche dans un mélange d'eau et de butylène glycol. Un extrait de fraisier particulier de l'invention sous forme de solution d'extrait de fraisier, comprend 12,5% en poids de matière sèche (et notamment 1,25% fruits et 11,25% de feuilles), 37,5% d'eau et 50% de butylène glycol. 30 L'extrait de fraisier selon l'invention est notamment caractérisé en ce qu'il comprend : 3061014 8 (i) Des polyphénols en une teneur allant de 15 à 20% en poids par rapport au poids de la matière sèche ; (ii) et au moins un composé choisi parmi des sucres, des minéraux et oligoéléments, des acides aminés, et leurs mélanges. 5 Selon un mode préféré, l'extrait de fraisier selon l'invention est caractérisé par une composition intrinsèque comprenant : - un taux important de polyphénols (15 à 20 % de la matière sèche), parmi lesquels des flavonoïdes glycosylés tels que la quercétine et le kaempferol ; la quantification de ces flavonoïdes serait encore en cours d'analyse ; 10 - des sucres, parmi lesquels le glucose, le fructose, le saccharose ; - des minéraux et d'oligo-éléments, parmi lesquels du calcium, du potassium, du magnésium ; - des vitamines, parmi lesquelles les vitamines B1, B2, B3, B5, B6, et C; - des acides aminés, parmi lesquels l'acide aspartique, l'acide glutamique, la proline, 15 l'alanine; - des anthocyanes. On pourra utiliser alternativement les formes poudre, liquide concentré ou liquide dilué (solution 20 d'extrait) de l'extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois dans la préparation de compositions cosmétiques. Selon un mode particulier et préféré de l'invention, on utilisera l'extrait de fraisier des bois selon l'invention sous forme de solution d'extrait de fraisier des bois dans la préparation de 25 compositions cosmétiques. Galénique L'invention porte également sur une composition cosmétique, de préférence pour application 30 topique, comprenant à titre d'agent actif un extrait de fraisier des bois selon l'invention et au moins un excipient cosmétiquement acceptable. 3061014 9 Par 'excipient cosmétiquement acceptable', on entend une substance dépourvue d'effet cosmétique en tant que telle, mais utile à l'incorporation de l'agent actif dans la composition cosmétique ou à la mise en forme de ladite composition. 5 L'excipient est avantageusement choisi parmi des pigments, des colorants, des polymères, des agents tensioactifs, des agents de rhéologie, des parfums, des électrolytes, des ajusteurs de pH, des agents anti-oxydants, des filtres UV des conservateurs, et l'un quelconque de leurs mélanges, et de façon optionnelle en outre au moins un autre agent actif cosmétique. 10 Ladite composition comprend une quantité efficace d'extrait de fraisier des bois selon la présente invention pour obtenir l'effet recherché. L'extrait de fraisier des bois selon l'invention est avantageusement présent à titre d'agent 15 actif dans la composition selon une teneur comprise entre 0,1 et 5% en poids de matière première par rapport au poids total de la composition, préférentiellement de 0,5 à 2 % en poids de matière première par rapport au poids total de la composition totale, pour une matière première préférée comprenant 12,5% d'extrait sec et 87,5% de solvant polaire comme décrit précédemment (solution d'extrait de fraisier). 20 L'extrait de fraisier des bois selon l'invention est avantageusement présent à titre d'agent actif dans la composition selon une teneur comprise entre 0,01 et 1% en poids d'extrait sec par rapport au poids total de la composition, préférentiellement de 0,05 à 0,5 %, et de préférence encore de 0,0625% à 0,25% en poids d'extrait sec par rapport au poids total de la composition totale. 25 La composition selon l'invention est avantageusement destinée à une application topique sur les matières kératiniques, en particulier sur la peau. Par 'matières kératiniques', on entend les lèvres, la peau et ses phanères (ongles, cils, cheveux), en particulier la peau. 3061014 10 La composition selon l'invention peut notamment se présenter sous la forme d'une émulsion eau-dans-huile, d'une émulsion huile-dans-eau, d'un gel aqueux, d'un sérum, d'une lotion, d'une crème d'un masque, d'un stick, ou d'un patch. En particulier, la composition selon l'invention pourra être un sérum, une crème, une lotion ou 5 un masque. La composition selon l'invention pourra être un produit de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau. Les compositions comprenant l'extrait de fraisier selon l'invention, comprennent 10 avantageusement au moins un autre agent actif cosmétiquement acceptable. Ainsi, les compositions qui comprennent l'extrait de fraisier des bois selon l'invention peuvent en outre comprendre un ou plusieurs autres agents actifs pouvant être choisis parmi les substances ayant une activité éclaircissante de la peau ; les substances ayant une activité hydratante ; les substances ayant une activité calmante, apaisante ou relaxante ; les 15 substances ayant une activité stimulant la microcirculation cutanée pour améliorer l'éclat du teint, en particulier du visage ; les substances ayant une activité sébo-régulatrice pour le soin des peaux grasses; les substances destinées à nettoyer ou purifier la peau ; les substances ayant une activité anti-radicalaire ; les vitamines ; les substances destinées à atténuer ou retarder les effets du vieillissement de la peau, en particulier la formation de rides, par une 20 activité visant à favoriser le maintien de la structure de la peau et/ou à limiter la dégradation de la matrice extracellulaire des couches superficielles du derme et de l'épiderme et/ou à obtenir un effet protecteur, correcteur ou restructurant de la peau, et leurs mélanges. Selon un mode particulier de l'invention, la composition cosmétique de l'invention comprend 25 au moins un extrait de fraisier des bois selon l'invention et au moins un actif cosmétique choisi parmi les substances ayant une activité éclaircissante de la peau, des vitamines, et leur mélange. Ainsi et pour compléter le bénéfice de l'extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois, on choisira préférentiellement l'association avec : 3061014 11 - des extraits de murier blanc (Morus alba), de concombre (Cucumis sativus) et d'hibiscus (Hibiscus sabdarifa) combinant les activités biologiques requises pour obtenir un teint plus clair et plus uniforme en agissant de concert pour diminuer la synthèse de mélanine, favoriser son transfert et accélérer son élimination ; 5 - un sel de phosphate de vitamine C et E, dérivé stable de ces 2 vitamines essentielles pour la peau, et leurs mélanges.. 10 Utilisations L'invention porte encore sur l'utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une telle composition, d'un extrait de fraisier des bois de l'espèce Fragaria 15 vesce selon l'invention, en tant qu'agent actif protecteur du stress oxydatif, en particulier des effets des rayonnements UV et/ou des toxines et/ou de la pollution, et/ou pour stimuler le métabolisme cellulaire de la peau, visant notamment à préparer la peau au soleil et/ou prévenir et/ou limiter les effets néfastes des UV, et/ou prévenir les signes du vieillissement cutané extrinsèque, en particulier prévenir et/ou diminuer les rides et/ou ridules, et/ou 20 améliorer l'éclat et/ou l'uniformité du teint ; et/ou améliorer la radiance et/ou la transparence de la peau; et/ou améliorer la souplesse et/ou l'élasticité de la peau. Selon un mode particulier, l'invention vise l'utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une telle composition, d'un extrait de fraisier des bois de l'espèce Fragaria vesce selon l'invention, en tant qu'agent actif protecteur du stress oxydatif, en 25 particulier des effets des rayonnements UV et/ou des toxines et/ou de la pollution. Selon un autre mode particulier, l'invention vise l'utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une telle composition, d'un extrait de fraisier des bois de l'espèce Fragaria vesce selon l'invention, en tant qu'agent pour stimuler le métabolisme cellulaire de la peau. 30 En particulier, l'invention vise l'utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une telle composition, d'un extrait de fraisier des bois de l'espèce Fragaria 3061014 12 vesce selon l'invention, pour préparer la peau au soleil et/ou prévenir et/ou limiter les effets néfastes des UV. En particulier, l'invention vise l'utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une telle composition, d'un extrait de fraisier des bois de l'espèce Fragaria 5 vesce selon l'invention, pour prévenir les signes du vieillissement cutané extrinsèque, en particulier prévenir et/ou diminuer les rides et/ou ridules. En particulier, l'invention vise l'utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une telle composition, d'un extrait de fraisier des bois de l'espèce Fragaria vesce selon l'invention, pour améliorer l'éclat et/ou l'uniformité du teint; et/ou améliorer la 10 radiance et/ou la transparence de la peau. En particulier, l'invention vise l'utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une telle composition, d'un extrait de fraisier des bois de l'espèce Fragaria vesce selon l'invention, pour améliorer la souplesse et/ou l'élasticité de la peau. 15 Un autre objet de l'invention est une méthode de soin cosmétique des matières kératiniques, en particulier la peau, caractérisée en ce qu'elle comprend l'application sur lesdites matières kératiniques, en particulier la peau du visage et/ou du corps, d'une quantité efficace d'au moins une composition cosmétique selon l'invention. La méthode de soin cosmétique selon l'invention vise notamment à protéger la peau contre le 20 stress oxydatif, en particulier des effets des rayonnements UV et/ou des toxines et/ou de la pollution, et/ou pour stimuler le métabolisme cellulaire de la peau, visant notamment à préparer la peau au soleil et/ou prévenir et/ou limiter les effets néfastes des UV, et/ou prévenir les signes du vieillissement cutané extrinsèque, en particulier prévenir et/ou diminuer les rides et/ou ridules, et/ou améliorer l'éclat et/ou l'uniformité du teint ; et/ou 25 améliorer la radiance et/ou la transparence de la peau ; et/ou améliorer la souplesse et/ou l'élasticité de la peau. 3061014 13 D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à la lumière des exemples, donnés simplement à titre d'illustration et qui ne sauraient donc en aucune façon limiter la portée de l'invention. Dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids, la température 5 est en degrés Celsius, sauf indication contraire. FIGURES Figure 1: Représentation graphique de l'effet de l'extrait de feuilles et fruits de Fragaria 10 vesce sur la translocation nucléaire de NRF2, en conditions de stress oxydant. Figure 2: Représentation graphique de l'effet de la production de H202 sur la production d'EORs sur les milieux testés sans actifs (témoins) Figures 3: Représentation graphique de l'effet antioxydant (diminution significative de la production d'EORs) de l'extrait de feuilles et fruits de Fragaria vesce, en condition de stress 15 oxydant. Figure 4: Représentation graphique de l'effet anti-MMP de l'extrait de feuilles et fruits de Fragaria vesce, en condition de stress UV. Figure 5: Représentation graphique de l'effet apaisant (diminution de la production d'IL-8) de l'extrait de feuilles et fruits de Fragaria vesce, en condition de stress UV. 20 Figure 6: Représentation graphique de l'effet apaisant (diminution de la production d'e TGF- a) de l'extrait de feuilles et fruits de Fragaria vesce, en condition de stress UV. Figure 7: Représentation graphique de l'effet l'extrait de feuilles et fruits de Fragaria vesce, sur la synthèse d'ATP et l'activité mitochondriale dans des Kératinocytes Humains Normaux. 25 EXEMPLES Exemple 1 : Préparation d'extraits de feuilles et de fruits de Fragaria vesce. 30 On a préparé un extrait à partir de feuilles et de fruits de fraisier des bois de l'espèce Fragaria vesce. Après récolte, cette matière végétale est séchée puis broyée. 3061014 14 On utilise pour la préparation de l'extrait, un mélange de feuilles et fruits comprenant 90% en poids de feuilles et 10% en poids de fruits, les pourcentages étant exprimés par rapport au poids de matériel végétal à extraire. On réalise une extraction solide-liquide à l'aide d'un solvant polaire. On extrait le 5 matériel végétal à reflux pendant une heure sous agitation dans un mélange éthanol/eau (70/30 v/v). L'extrait est filtré pour éliminer le résidu végétal, puis on reproduit à nouveau une deuxième fois le cycle, de façon à optimiser le rendement. Le résidu végétal épuisé est éliminé après l'étape de filtration. 10 Le rendement massique après extraction est d'environ 25% en poids par rapport au poids de matériel végétal sec mis en oeuvre. L'extrait obtenu après filtration est décoloré à l'aide de charbon actif, pour éliminer la chlorophylle, d'autres pigments ou encore des métaux. Le filtrat récupéré est limpide. On concentre l'extrait en éliminant l'éthanol pour récupérer un concentré aqueux. 15 Le concentré aqueux est filtré sur plaque 1 micromètre pour éliminer les résidus solides éventuels. Pour l'évaluation in vitro des activités de l'extrait de fraisier obtenu dans le présent exemple, on met en solution ledit extrait dans un mélange de butylène glycol et d'eau 20 jusqu'à obtenir un taux de matière sèche compris entre 10 et 15% en poids. La solution d'extrait de fraisier évaluée dans les tests décrits ci-après comprend 12,5% de matière sèche, 37,5% d'eau et 50% de butylène glycol. 25 L'extrait selon l'invention contient des sucres (glucose, saccharose et fructose). Il contient également des polyphénols, des minéraux, et en quantité plus faible des vitamines, des acides aminés. On caractérise les polyphénols par une méthode chromatographique (colonne greffée C18, Agilent Pursuit XRS C18 250*4.6mm, diamètre 5pm) avec une détection UV à 30 280nm et 365nm). Les composés détectés sont principalement des ellagitanins et des acides phénoliques, mais aussi des flavonols et des flavanolols. Les polyphénols constituent environ 15% en poids de l'extrait sec. 3061014 15 Exemple 2: Effet protecteur de l'extrait de feuilles et fruits de Fragaria vesce contre les stress extérieurs (UV, pollution, stress oxydant...) 5 2.1. Effet de l'extrait sur certaines voies métaboliques 2.1.1 Effet sur l'expression NRF2 (défense contre les effets du stress) L'étude est réalisée sur une culture monocellulaire des cellules de kératinocytes humains 10 normaux (KHN) issues de plastie abdominale d'un donneur féminin de 31 ans. Les cellules ont d'abord été ensemencées dans du milieu Epilife complet (supplémenté en HKGS) à passage 5 (P5), à une densité de 10 000 cellules par puits, dans des plaques 96 puits et incubées à 37°C 5% de CO2. A 80% de confluence, Les kératinocytes sont prétraités par l'extrait de feuilles et de fruits préparé à l'exemple 1 15 (solution d'extrait de fraisier), utilisés à des concentrations de 0.025% ou 0.05% pendant 16 heures, puis traités avec une solution oxydante (extrait de fraisier à 0.025% ou 0.05% + H202 100pM, 5minutes 4°C) ou soumises à une irradiation UVB (50mJ/cm2), et enfin traitées à nouveau par l'extrait de fraisier (0.025% ou 0.05%) pendant 1h et 2h après le stress oxydant H202, et 2h après l'irradiation UVB. Un marquage immunologique au NRF2 est 20 ensuite réalisé et analysé par criblage haut débit (mesure de l'intensité de l'expression de NRF2/ noyau). Les résultats sont présentés à la Figure 1. Le traitement des kératinocytes induit une augmentation significative de l'expression de NRF2 dans le noyau de façon dose dépendante (+4.9% et +10.5%) dans les cellules non soumises à un stress, comparativement aux cellules 25 non traitées. Cette augmentation et significativement accentuée en condition de stress (oxydant H202 et irradiation UVB). L'extrait de fraisier selon l'invention appliqué sur la peau permet donc de lutter contre les effets du stress et renforcer les défenses intrinsèques de la peau. 30 2.1.2 Effet anti-oxydant (anti- radicaux libres) L'étude des propriétés anti-oxydantes (anti- radicaux libres) de l'extrait de feuilles et de fruits de fraisier préparé à l'exemple 1, a été réalisée à l'aide d'un effectué à l'aide d'une sonde 3061014 16 H2DCF-DA fluorescente, permettant la quantification des espèces réactives de l'oxygène EORs formées en présence d'un stress oxydant à rH202. La sonde Dichlorodihydrofluorescéine Diacétate (H2DCF-DA) est une sonde perméable et stable utilisée pour la détection des EORs. Lorsqu'elle est utilisée dans une application 5 cellulaire, les groupements acétate sont clivés par les estérases membranaires. On obtient alors le produit dichlorodihydrofluorescéine (H2DCF) non fluorescent, mais dont le produit de réaction avec les EORs génèrera une entité fluorescente. La répartition de ce dérivé fluorescéine est cytoplasmique. Lorsque la sonde non fluorescente rencontre des EORs (non spécifique d'un type d'EORs) ou du NO, celle-ci est oxydée en un produit fluorescent, la 10 dichlorofluorescéine (DCF). La fluorescence est détectée aux longueurs d'ondes suivantes : Àex=504nm et Àem=529nm. Ce test permet donc de mettre en évidence le pouvoir antioxydant d'un actif, en montrant sa capacité à diminuer la production d'EORs au sein de la cellule, en situation de stress par rapport à un témoin non traité soumis à ce même stress. 15 Les kératinocytes humains normaux sont prétraités pendant 24 heures par l'extrait de feuille et fruits de fraisier à la dose de 0,05%, ainsi que par 2 réactifs utilisés comme témoins positifs (Idebenone dans DMSO, Sigma, 10pM ; et (+)-y-Tocopherol dans éthanol, Sigma, 25pM). En parallèle, les cellules sont également traitées avec le témoin excipient respectif de 20 chaque actif/réactif testé. Tous les traitements sont effectués en double ; en effet, une partie ne subira pas de stress H202 alors que l'autre subira ce stress. Après 21 heures de traitement avec les différents actifs/réactifs et leur excipient associé, 25 dans du milieu Epilife complémenté en HKGS, le milieu est éliminé, puis elles sont retraitées de la même façon dans du milieu sans HKGS pendant 3 heures (afin d'éviter la présence d'estérases qui déacétyleraient spontanément la sonde). Après deux rinçages des microplaques avec du milieu Epilife sans HKGS, 200pL de la sonde H2DCF-DA (Sigma) préparée à 50pM en milieu Epilife sans HKGS à partir d'une 30 solution mère à 50mM dans du DMSO, sont déposés dans chacun des puits. Les microplaques sont placées à 37°C sous agitation pendant 45 minutes. A la suite de cette incubation, les cellules sont rincées 2 fois avec du milieu Epilife sans HKGS avant de recevoir le système générateur d'EORs 3061014 17 - Les cellules sont traitées avec les actifs/réactifs en présence d'H202 100pM (Sigma) - L'autre moitié est traitée avec les actifs sans H202 100pM. Les cellules sont placées à 37°C 5%CO2 pendant 20 minutes. A la suite de cette incubation, une lecture de la fluorescence est effectuée à l'aide du FLUOstar BMGLabtech (Gain = 1500, 5 485-535nm). Après lecture des microplaques, elles sont rincées 2 fois au PBS pour un dosage protéique ultérieur par la méthode du BCA. Les résultats de fluorescence obtenus (RFU) sont alors normalisés par la quantité de protéines dans chaque puits (en pg). 10 Une analyse statistique est effectuée, consistant en un calcul de la moyenne, de l'écart type et de l'intervalle de confiance (a = 0,05) de la fluorescence mesurée (RFU) normalisée par la quantité de protéines par puits (pg). Les résultats sont présentés en moyenne sur n=6 avec les intervalles de confiance. Le test t 15 de Student a été utilisé pour comparer l'effet entre les cellules traitées et non traitées. Les résultats sont considérés comme significatifs pour p