FR 3041345 A1 20170324 FR 1558806 A 20150918 1 Composés polysaccharides multi-fonctionnalisés et leur utilisation pour cibler le récepteur du mannose 6-phosphate cation-indépendant La présente invention concerne de nouveaux composés polysaccharides multifonctionnalisés, et plus particulièrement des composés di-, tri- ou tétra- mannosidiques multi-fonctionnalisés. L'invention concerne également le procédé de préparation desdits composés, et leur utilisation pour cibler le récepteur du mannose 6-phosphate cation-indépendant (RM6P-CI). Le récepteur du mannose 6-phosphate cation-indépendant (RM6P-CI) est un récepteur ubiquitaire qui est présent à la fois dans le cytoplasme et à la membrane des cellules. Son rôle principal est d'assurer le transport des enzymes lysosomales nouvellement synthétisées depuis le réseau trans-golgien jusqu'aux lysosomes où elles sont actives. Il participe également à l'endocytose des enzymes lysosomales secrétées par les cellules. Cette endocytose par le RM6P-CI permet l'internalisation de composés portant des résidus mannose 6-phosphate (M6P) au sein de la cellule et leur adressage vers les lysosomes. Le RM6P-CI joue donc un rôle crucial dans le traitement des maladies de surcharge lysosomale (maladie rare), et plus particulièrement pour l'enzymothérapie substitutive. L'enzymothérapie substitutive est une thérapie utilisée avec succès pour traiter ces maladies rares qui se caractérisent par une déficience d'une enzyme lysosomale spécifique. Elle consiste en l'administration d'enzymes lysosomales recombinantes qui vont être dirigées vers les lysosomes via le RM6P-CI grâce aux résidus M6P présents à l'extrémité de leurs chaînes glycosylées. De plus, le RM6P-CI est surexprimé dans certains cancers', ce qui en fait une cible intéressante pour l'élaboration de traitements ciblés, limitant ainsi la toxicité sur les cellules saines. De telles thérapies peuvent être obtenues par la fonctionnalisation, par exemple, de nanoparticules encapsulant un principe actif et greffées en surface par des résidus de mannose 6-phosphate (M6P). Cependant, l'inconvénient majeur du mannose 6-phosphate (M6P) est la sensibilité de sa fonction phosphate à l'hydrolyse par les phosphatases présentes dans tous les organes et dans le sérum. Le M6P est alors déphosphorylé et n'est plus 3041345 2 reconnu par le RM6P-CI. La stabilité de ce marqueur de reconnaissance est donc un élément déterminant pour son utilisation dans le transport de molécules bioactives. Les analogues isostères du M6P ne présentent pas l'inconvénient de la dégradation par des phosphatases2'3'4 . La ligation de ces analogues isostères du M6P 5 à la partie oligosaccharidique des enzymes lysosomales permet d'améliorer l'efficacité de ces enzymes pour des applications en thérapie enzymatique substitutives. L'utilisation de ces analogues isostères permet également un ciblage très efficace des cellules cancéreuses des tumeurs de la prostate surexprimant le RM6P-CI ainsi que leur traitement'. 10 Afin d'améliorer l'affinité pour le RM6P-CI, ces mêmes analogues ont été synthétisés en série dimannosidique avec une liaison glycosidique de type a(1,2). Le disaccharide 6-P-Man-a(1,2)-Man possède une affinité pour le RM6P-CI supérieure à celle du monosaccharide M6P6. Le lien alpha 1,2 entre les deux résidus mannose est très important pour obtenir une bonne affinité vis-à-vis du RM6P-CI. Les liens 15 alpha 1,3 ou alpha 1,4 ou alpha 1,6 conduisent à une affinité inférieure. Le disaccharide 6-P-Man-a(1,2)-Man présente cependant l'inconvénient de ne pas être stable dans le sang. En effet, la fonction phosphate du disaccharide 6-P-Mana(1,2)-Man subit l'hydrolyse par les phosphatases présentes dans le sérum. Après déphosphorylation par les hydrolases du sérum, le disaccharide formé Man-a(1,2)- 20 Man n'est pas reconnu par le RM6P-CI qui est la cible biologique. Il subsiste à ce jour la nécessité de trouver de nouveaux analogues isostères du M6P présentant une affinité améliorée pour le RM6P-CI, et qui en outre sont stables dans les liquides physiologiques. L'un des buts de la présente invention est donc de proposer de nouveaux 25 analogues isostères du M6P présentant une très grande affinité pour le RM6P-CI. On entend par analogue isostère du M6P, un composé chimique synthétique présentant la même activité biologique que le M6P, mais une stabilité améliorée. Un autre but de l'invention est de proposer de nouveaux analogues isostères du M6P qui soient stables dans les liquides physiologiques. 30 Un autre but de l'invention est de proposer de nouveaux analogues isostères du M6P présentant une affinité améliorée pour le RM6P-CI par rapport aux analogues isostères du M6P décrits dans la demande PCT/EP2010/059505. 3041345 3 Les Inventeurs ont ainsi imaginé de nouveaux composés di-, tri- ou tétramannosidiques multi-fonctionnalisés, c'est-à-dire portant différents groupes fonctionnels, lesdits groupes fonctionnels étant aptes à former respectivement une (ou des) liaison(s) avec le RM6P-CI et une (ou des) liaison(s) avec un composé 5 d'intérêt Y. La difficulté rencontrée avec les composés proposés dans l'invention est de trouver une façon avantageuse de les synthétiser, à savoir notamment une façon qui soit simple à mettre en oeuvre, efficace (bon rendement) et non coûteuse. Un autre but de l'invention est donc de trouver un procédé de préparation des 10 composés di-, tri- ou tétra-mannosidiques multi-fonctionnalisés qui soit avantageux, à savoir notamment qui soit simple à mettre en oeuvre, efficace et non coûteux. En effet, la synthèse de composés di-, tri- ou tétra-saccharidiques est plus complexe à mettre en oeuvre que celle de composés mono-saccharidiques. 15 La présente invention a pour objet un composé caractérisé en ce qu'il présente la formule générale (I) : (I) dans laquelle : - n est un entier allant de 1 à 3, 20 o représente une liaison simple ou une liaison double, . chacun des Pl représente indépendamment l'un de l'autre H, un groupe protecteur acidolabile, basolabile, hydrogénolabile, photolabile, halogénolabile, notamment choisi parmi le triméthylsilyle (TMS : (CH3)3Si-), le tertbutyldiméthylsilyle (TBDMS : tBuMe2Si-), le benzyle (Bn : C6H5CH2-), le para- 25 méthoxybenzyle (PMB : 4-CH30C6H5CH2-), l'ortho-nitrobenzyle (o-NO2C6H5CH2-), l'acétyle (Ac :CH3C0-), le benzoyle (Bz : C6H5C0-) ou CF3C0- (trifluoroacétyle), . X représente : 00 lorsque est une liaison simple : 3041345 4 000 le groupement phosphonate : zo- eo ZOO P\ ?Hz 000 le groupement fluoro phosphonate : zo-eo zo'P\ CHF 000 le groupement bi-fluoro phosphonate : e0 ZOO CF2 000 le groupement carboxylate : zo-ceo CH2 000 le groupement malonate : o ZO ZO CH 00 lorsque est une liaison double : 000 le groupement phosphonate : zo- eo zoP\ CH 000 le groupement carboxylate : o \CH 15 avec Z représentant indépendamment l'un de l'autre H; un alkyle en Ci-05, notamment choisi parmi méthyle (Me : CH3-), éthyle (Et : C2H5) ou isopropyle (iPr : (CE13)3C-) ; le 2,2,2-trifluoroéthyle (CF3CH2-) ; C6H5CH2- ; le phényle (Ph : C6H5-) ; (CE13)3Si- ; un métal alcalin choisi parmi Na, Li ou K ; un ammonium NI-14 ; 20 0 A représente un radical divalent choisi parmi -0-, -S-, -NH-, -CH2-, 5 10 3041345 5 L représente : o. -H ; -NH2 ; -(CH2).1-CH=CH2 ou -(CH2).1-CCH avec n1 représentant un entier allant de 0 à 4, alors dans chacun de ces cas L1 est absent, oo un radical hydrocarboné divalent saturé, linéaire ou ramifié, substitué ou non 5 substitué, ayant de 1 à 30 atomes de carbone, un radical hydrocarboné divalent insaturé, linéaire ou ramifié, substitué ou non substitué, ayant de 2 à 30 atomes de carbone, oo un radical hydrocarboné divalent saturé ou insaturé tel que défini ci-dessus dont un ou plusieurs groupements -CH2-, -CH=CH- et/ou -CC- du radical 10 hydrocarboné saturé ou insaturé est (sont) remplacé(s) indépendamment l'un de l'autre par un groupement éther (-0-) ; amine (-NH-) ; alkylamine (-NR1-) avec R1 représentant un alkyle en C1-05 ; thioéther (-S-) ; amide (-CO-NH-) ; carbamate (NH-CO-O-) ; oxime -0-N=CH- ; acylhydrazone -CO-NH-N=CH- ; un système cyclique ou hétérocyclique, saturé ou insaturé, substitué ou non ; 15 ° L1 représente : -(CH2).1-CH=CH2 ; -(CH2).1-CCH ; -(CH2).1-N3 ; -(CH2).1-SH ; -(CH2).1-NH2 ; -(CH2).1-N=C=0 ; -(CH2).1-N=C=S ; -(CH2).1-NHR1 ; -(CH2).1-NR1R2 ; -(CH2).1-A1-NH2 ; -(CH2).1-A1-NHR1 ; -(CH2).1-A1-NR1R2 ; -(CH2).1-NHCO-CH2Ha1 ; -(CH2).1-COZi ; -(CH2).1-A1C0Z1 ; 20 -(CH2).1-0-N=CH2 ; -(CH2).1-CO-NH-N=CH2 ; -(CH2).1-H ; un système cyclique ou hétérocyclique, saturé ou insaturé, substitué ou non ; un halogène choisi parmi F, Cl, Br ou I ; avec n1 tel que défini ci-dessus, R1 et R2 représentant indépendamment l'un de l'autre un alkyle en C1-05, 25 Al représentant -0-, -N1-1-, Hal représentant Cl, Br ou I ; Z1 représentant -OH, -NHRZ, -NH-NFI2, -NH-NHRi, -NH-NR1R2 avec R1 et R2 tels que définis ci-dessus, un halogène choisi parmi F, Cl, Br ou I. A titre d'exemples d'un radical hydrocarboné divalent saturé, linéaire ou ramifié, 30 ayant de 1 à 30 atomes de carbone, on pourra notamment citer : -CH2- ; - CH2 - CH2 - ; - CH2 - (CH2)m- ; -(CH2)m- CH(C 1 - C7)- (CH2)m- ; - (CH2)m- CH(C - C7)-(CH2)m- CH(C 1 - C7)-(CH2)m- ; (CH2)m- C (C 1 C7)2 -(CH2)m ; - (CH2)m- C (C 1 - C7)2- (CH2)m- CH(C 1 - C7)- (CH2)m- ; 3041345 6 -(CH2),-n-C(C1-C7)2-(CH2)m-C(C1-C7)2-(CH2)m- ; avec m représentant indépendamment l'un de l'autre un entier allant de 0 à 30 avec la condition que la longueur de la chaîne hydrocarbonée principale ne dépasse pas 30 atomes de carbone, et C1-C7 représentant un alkyle ayant de 1 à 7 atomes de 5 carbone. A titre d'exemple d'alkyle en Ci-C7, on pourra notamment citer le méthyle, l'éthyle, le propyle, l'isopropyle, le butyle, l'isobutyle, le pentyle, l'hexyle, l'heptyle. Un radical hydrocarboné divalent insaturé, linéaire ou ramifié, ayant de 2 à 30 atomes de carbone, désigne un radical hydrocarboné comportant une ou plusieurs doubles liaisons carbone-carbone et/ou une ou plusieurs triples liaisons carbone- 10 carbone. A titre d'exemples d'un radical hydrocarboné divalent insaturé on pourra notamment citer : -CH=CH- ; -(CH2).,-CH=CH-(CH2)m- ; -(CH2)',-CH=CH-(CH2).,-CH=CH-(CH2)m- ; -(CH2),-n-CH=CH-CH(C1-C7)-(CH2)m- ; 15 -(CH2)',-CH(C1-C7)-(CH2)m-CH=CH-CH(C1-C7)-(CH2)m- -(CH2)',-CH(C1-C7)-CH=CH-(CH2)m- ; -(CH2)',-CH(C1-C7)-CH=CH-(CH2).,-CH=CH-(CH2)m- -(CH2),-n-CH=CH-C(C1-C7)2-(CH2)m- ; -(CH2),-n-CH=CH-C(Ci-C7)2-(CH2)m-C(Ci-C7)2-(CH2)m-CH=CH ; 20 -(CH2),-n-CH=CH-C(Ci-C7)2-(CH2)m-CH(Ci-C7)-(CH2),-n-CH=CH ; - ; -(CH2)m-CC-(CH2)',- ; -(CH2)m-CC-(CH2)',-C=C-(CE12)m- -(CH2)',-CH=CH-CH(Ci-C7)-(CH2)m-CC-(CH2)',-CH(Ci-C7)- ; -(CH2),n-CH-CH-C(C1-C7)2-(CH2)m-C=C-(CH2),',-C(C1-C7)2-(CH2)m-; -(CH2)',-CC-CH(C1-C7)-(CH2)m-CC-(CH2)',-CH(C1-C7)-(CH2)m ; 25 -(CH2)',-CC-C(C1-C7)2-(CH2).,-CH=CH-(CH2).,-CH(C1-C7)-; -(CH2),-n-CH=CH-C(C1-C7)2-(CH2)m-CH(C1-C7)-(CH2).-CC-CH=CH-(CH2)m-; avec m tel que défini précédemment. Selon l'invention, le terme « système » cyclique ou hétérocyclique désigne, selon le cas, le radical monovalent ou divalent provenant d'un composé cyclique ou 30 hétérocyclique, saturé ou insaturé, en tant que tel. Ainsi lorsque L1 représente un système cyclique ou hétérocyclique, il s'agira plus précisément d'un radical monovalent provenant d'un composé cyclique ou hétérocyclique, saturé ou insaturé. 3041345 7 Lorsque L représente un radical hydrocarboné saturé ou insaturé dont un ou plusieurs groupements -CH2-, -CH=CH- et/ou -CC- est (sont) remplacé(s) indépendamment l'un de l'autre par un système cyclique ou hétérocyclique, saturé ou insaturé, alors ledit système cyclique ou hétérocyclique est un radical divalent 5 provenant d'un composé cyclique ou hétérocyclique, saturé ou insaturé. A titre d'exemple d'un composé cyclique ou hétérocyclique, saturé ou insaturé, on pourra notamment citer l'azétidine, l'oxétane, le thiétane, le pyrrole, le pyranose, le furanose, le furane, la pyrroline, le tétrahydrofurane, le thiophène, le tétrahydrothiophène, le pyrazole, l'imidazole, l'oxazole, l'isoxazole, la pyrazoline, 10 l'imidazoline, la pyrazolidine, l'imidazolidine, le dioxolane, le thiazole, l'isothiazole, la thiazolidine, l'isoxazolidine, le triazole, l'oxadiazole, le thiadiazole, le thiosuccinimide, le tétrazole, la pyridine, le naphthyridine, le phtalimide, le pyrane, le dihydro-pyrane, la pipéridine, la pyridazine, le pyridinium, la pyrimidine, la purine, la pyrazine, la ptéridine, l'oxazine, la dioxine, la pipérazine, le maléimide, la 15 morpholine, le dioxane, la thiazine, la thiomorpholine, l'oxathiane, le dithiane, la triazine, le trioxane, la thiadiazine, la dithiazine, le trithiane, le 3-cyclobutène-1,2- dione, le cyclobutane, le cyclobutène, le cyclopentane, le cyclopentène, le cyclohexane, le cyclohexène, le cycloheptane, le cycloheptène, le benzène, le toluène, le naphtalène, l'indène, l'indane, l'indolizine, l'indole, le benzofurane, 20 l'indoline, le benzothiophène, l'indazole, le benzimidazole, le benzthiazole, la tétraline, la quinoline, le chromène, le chromane, la cinnoline, la quinazoline, la quinoxaline, la phthalazine. Selon l'invention, et comme indiqué précédemment, ledit radical hydrocarboné divalent saturé ou insaturé, linéaire ou ramifié, et ledit système cyclique ou 25 hétérocyclique, saturé ou insaturé, pourront en outre être substitués par un ou plusieurs substituants choisis parmi alkyle en Ci-C7, alcényle en C2-C7, alcynyle en C2-C7, aryle, ou par des groupes fonctionnels. A titre d'exemple de groupes fonctionnels on pourra notamment citer des fonctions alcool, amine, amide, cétone, ester, éther, thioéther ou acide carboxylique. 30 Le terme alcényle en C2-C7 désigne un radical hydrocarboné, linéaire ou ramifié, ayant 2 à 7 atomes de carbone, et comportant une ou plusieurs doubles liaisons carbone-carbone. 3041345 8 Le terme alcényle en C2-C7 désigne un radical hydrocarboné, linéaire ou ramifié, ayant 2 à 7 atomes de carbone, et comportant une ou plusieurs triples liaisons carbone-carbone. Le terme aryle désigne un système hydrocarboné aromatique mono-, bi- ou 5 tricyclique, ayant de 6 à 18 atomes de carbone. A titre d'exemple on peut citer le phényle (C6H5), le benzyle (C6H5CH2), le phénéthyle (C6H5CH2CH2), le tolyl (C6H4CH3), le xylyle (C6E13(CH3)2), le benzylidène (C6H5CH=CH), le benzoyle (C6H5C0), le biphényle (ou diphényle) (Ci2H9), le naphtyle (Ci0H7). Selon un mode de réalisation de l'invention, dans le composé de formule (I) tel 10 que défini ci-dessus : L représente : o -NH2, -(CH2).1-CH=CH2 ou -(CH2).1-CCH, avec n1 tel que défini ci-dessus (entier allant de 0 à 4), alors dans chacun de ces cas L1 est absent, O un radical hydrocarboné divalent saturé, linéaire ou ramifié, substitué ou non 15 substitué, ayant de 1 à 10 atomes de carbone, un radical hydrocarboné divalent insaturé, linéaire ou ramifié, substitué ou non substitué, ayant de 2 à 10 atomes de carbone, O un radical hydrocarboné divalent saturé ou insaturé tel que défini ci-dessus, dont un ou plusieurs groupements -CH2-, -CH=CH- et/ou -CC- du radical hydrocarboné 20 saturé ou insaturé est(sont) remplacé(s) indépendamment l'un de l'autre par : 00 un groupement -0- ; -NH- ; -S- ; -CO-NH- ; -NH-00-0- ; et/ou 00 un système cyclique ou hétérocyclique choisi parmi : N = N '222, (S55N- N 25 s H 3041345 9 )1 2ZL(0)., Ir(s)555 N NN CSçç oN)L rS: 3%eS- YS)L OU 0 L1 représente : 5 -(CH2).1-CH=CH2 ; -(CH2).1-CCH ; -(CH2)n1-N3 ; -(CH2).1-SH ; -(CH2)rv1-NH2 ; -(CH2).1-N=C=0 ; -(CH2).1-N=C=S ; -(CH2).i-0-NH2 ; -(CH2).1-NHCO-CH2Hal ; -(CH2).1-COOH ; -(CH2).1-COORi ; -(CH2).1-CO-NH-NH2 ; -(CH2)n1-H ; un halogène choisi parmi F, Cl, Br ou I ; - un système cyclique ou hétérocyclique choisi parmi : 10 o ---, )\----I '...--.., N C-CH2 \o/ Y ou 0 , avec n1, R1 et Hal tels que définis ci-dessus. A titre d'exemples de composés de formule (I) tels que définis ci-dessus, on pourra citer ceux pour lesquels : . le substituant L est choisi parmi : 15 o. -CH=CH2, -CCH ou -NH2 alors dans chacun de ces cas L1 est absent, o. -CH2- ; CH CH ; (CH - (CH - (CH ; CH CH 0 CH CH - , - -2- - -2- , - -2,3 - , - -2,4- , - -2,5- , - -2- - -2- - -2- - -2- , -(CH2-CH2-0)2-CH2-CH2- ; -CH2-CH2-S-CH2-CH2- ; -CH2-CH2-S-CH2-CH2-0-CH2-CH2-; CH2- -H2C CH2- 20 NON CH2c,, C)N, CH2_ CH2 > CH2- OU N 2 0 CH2 , et o le substituant L1 est choisi parmi : o. _CH=CH2 ; -CCH ; -N3 ; -SH ; ; -N=C=0 ; -N=C=S ;-O-NH2 ; 3041345 10 -NFICO-CH2C1 ; -COOH ; -COORi ; -CO-NH-NE12, un halogène choisi parmi F, Cl, Br ou I, oo un système cyclique ou hétérocyclique choisi parmi : o N 2C-CH Fi °R Y o ou o , 5 avec R1 tel que défini ci-dessus. Un composé de formule (I) dans lequel n est égal à 1 est un disaccharide, et plus particulièrement un di-mannoside multi-fonctionnalisé répondant à la formule : A -L--L1 (I) Un composé de formule (I) dans lequel n est égal à 2 est un trisaccharide, et plus 10 particulièrement un tri-mannoside mufti-fonctionnalisé répondant à la formule : opi A -L (I) Un composé de formule (I) dans lequel n est égal à 3 est un composé tétrasaccharide, et plus particulièrement un tétra-mannoside multi-fonctionnalisé répondant à la formule : A -L 15 (I) 3041345 11 L'invention concerne également un procédé de préparation d'un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que le composé de départ utilisé est un composé répondant à la formule (II) : plo OI PÔ PRO 5 dans laquelle Pl, n, A, L et Li sont tels que définis ci-dessus. Ces composés sont très avantageux car ils permettent notamment de préparer des composés de formule (I) en un nombre limité d'étapes, et avec un bon rendement. L'invention a donc également pour objet un composé répondant à la formule générale (II) : A-L-L1 (II) dans laquelle Pl, n, A, L et Li sont tels que définis ci-dessus. La préparation du composé de formule (II) s'effectue par réaction entre un accepteur de glycoside (IV) ou (IVbis) avec un donneur de glycoside (V), selon l'un des schémas réactionnels ci-dessous : OU P10 01=11 pio 01=11 pi,q p 0 P 0 io P10 O`/NH CC13 réactif permettant la fixation de Lt IV A-L-L1 A-L 10 15 Plo yNH CC13 Plo V P 0 A-L-L1 IV bis 3041345 12 Les composés de l'invention de formule (I) sont particulièrement avantageux car ils permettent d'une part de cibler le RM6P-CI avec une très grande affinité et d'autre part car ils sont capables de former des liaisons covalentes au niveau de leur groupement LLi avec un grand nombre de composés d'intérêt 0. 5 La présente invention se rapporte également à un conjugué formé entre un composé d'intérêt 0 et le composé de formule (I). L'invention a ainsi encore pour objet un conjugué caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (III) : 10 dans laquelle X, Pl, n, A et L sont tels que définis ci-dessus, L1' représente le substituant Li tel que défini ci-dessus impliqué dans une liaison covalente avec un groupement fonctionnel porté par un composé d'intérêt 0, ledit composé d'intérêt 0 étant choisi parmi des enzymes, des nanoparticules, des protéines, des anticorps ou des agents cytotoxiques. 15 Selon un mode de réalisation de l'invention, le conjugué de formule (III) tel que défini ci-dessus présente une valeur IC50 pour le récepteur du mannose 6-phosphate cation-indépendant (RM6P-CI) d'au moins 10-5 M, et de préférence allant de 10-6 à 10-9 M. On entend par valeur IC50 la concentration de composés capables d'inhiber la 20 liaison du RM6P-CI à son ligand, le pentamannose 6-phosphate (PMP), préalablement adsorbé. A titre d'exemples plus spécifiques du composé d'intérêt 0, on pourra citer une enzyme lysosomale ou une nanoparticule, notamment une nanoparticule de silice. Selon un mode de réalisation de l'invention, la nanoparticule pourra incorporer un 25 photosensibilisateur de type porphyrine neutre. A titre d'exemples d'enzymes lysosomales, on pourra citer celles choisies parmi alpha glucosidase acide, béta-galactosidase-1 acide, sphingomyélinase acide, alphaD-mannosidase, alpha-fucosidase, alpha-galactosidase A, alpha-glucosaminide 3041345 13 acétyltransférase, alpha-glucosidase, alpha-L-iduronidase, alpha-N- acétylgalactosaminidase, alpha-acétylglucosaminidase, alpha-D-neuraminidase, arylsulfatase A, arylsulfatase B, bêta-galactosidase, bêta-glucuronidase, bêtamannosidase, cathepsine D, cathepsine K, céramidase, cystinosine, facteur 5 d'activation du ganglioside GM2, galactocérébrosidase, glucocérébrosidase, héparane sulfatase, hexosaminidase A, hexosaminidase B, hyaluronidase, iduronate2-sulfatase, LAMP2, lipase acide lysosomale, N-acétylglucosamine-1- phosphotransférase, N-acétylgalactosamine 6-sulfatase, N-acétylglucosamine-1- phosphotransférase, N-acétylglucosamine-6-sulfate sulfatase, N-aspartyl-bêta- 10 glucosaminidase, palmitoyl-thioestérase-1, phosphatase acide, protéine protectrice/cathepsine A (PPCA), sialine, tripeptidyl-peptidase 1. Lesdites enzymes sont obtenues par génie génétique dans des systèmes de production permettant l'obtention de protéines recombinantes biologiquement actives et fonctionnelles. Par exemple, pour la production de glycoprotéines lysosomales, le 15 système baculovirus/cellules d'insecte sf9 est utilisé. L'invention concerne encore l'utilisation d'au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, pour former au moins une liaison covalente avec au moins un groupement fonctionnel porté par un composé d'intérêt 0, ledit composé d'intérêt 0 étant choisi parmi des enzymes, des nanoparticules, des protéines, des 20 anticorps ou des agents cytotoxiques. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, n' composés de formule (I) peuvent réagir avec n' groupement(s) fonctionnel(s) porté(s) par ledit composé d'intérêt Y, avec n' étant un entier allant de 1 à 1000, et de préférence de 1 à 100, de façon à former n' liaisons covalentes. 25 L'invention concerne ainsi également l'utilisation de n' composé(s) de formule (I) pour former n' liaison(s) covalente(s) avec n' groupement(s) fonctionnel(s) du composé d'intérêt 0, avec n' tel que défini ci-dessus. L'invention a encore pour objet l'utilisation de n' composé(s) de formule (I) telle que définie ci-dessus pour former le conjugué de formule générale (IIIbis) : 3041345 14 cp (IIIbis) dans laquelle Pl, X, n, n', A, L, L'l et 0 sont tels que définis ci-dessus. Lorsque n' est un entier égal à 1, alors le conjugué de formule générale (III) et le conjugué de formule générale (IIIbis) sont identiques. 5 Le terme conjugué de formule générale (III) se réfère à un polysaccharide de formule (I) lié de manière covalente au niveau de son groupement Li avec un groupement fonctionnel du composé d'intérêt 0. Le terme « conjugué de formule générale (IIIbis) » se réfère, lorsque n' n'est pas égal à 1, à au moins deux polysaccharide(s) de formule (I) liés de manière covalente 10 avec au moins deux groupements fonctionnels du composé d'intérêt 0. Par exemple, lorsque le composé d'intérêt 0 est une nanoparticule, le conjugué (Mb i s) pourra comprendre 100 polysaccharides de formule (I) formant respectivement 100 liaisons covalentes avec 100 groupements fonctionnels portés par la nanoparticule. 15 Le groupement LLi des composés (I) de l'invention est tel que défini précédemment et est capable de se lier par une liaison covalente, directement ou après activation, à au moins l'une des fonctions naturellement présentes ou artificiellement introduites sur le composé d'intérêt 0. Ainsi que mentionné précédemment par la définition des substituants L et L1, le 20 substituant LLi des composés (I) de l'invention pourra notamment comprendre un groupement réactif choisi parmi acide carboxylique et ses sels, chlorure d'acide, ester (ester d'alkyle, ester de p-nitrophényle, ester de succinimidyle, ester de sulfosuccinimidyl etc.), azido (acyl azide, azidonitrophenyl etc.), hydrazide, 3-acyl1,3-thiazolidine-2-thione, amine substituée ou non, O-alkyloxyamine, ammonium 25 quaternaire, isocyanate, isothiocyanate, hydrazine, phtalimido, maléimide, halogénoacétamide, monochlorotriazine, dichlorotriazine, pyridine mono- ou di-halogénée, thiol, chlorure de sulfonyle, vinylsulfone, disulfure, hydroxyle, époxyde, ou imidazolyle. 3041345 15 Dans un mode de réalisation particulier, le substituant LLi comprend un groupement carbonyle réactif choisi parmi acylhydrazide, hydrazine ou 0- alkyloxyamine. La réaction entre ledit acylhydrazide, hydrazine ou O-alkyloxyamine avec un groupement carbonyle du composé d'intérêt 0 conduit respectivement à 5 une liaison acylhydrazone, hydrazone ou une liaison oxime. Ce type de groupements chimiques est généralement utile pour lier des glycoprotéines (composé d'intérêt 0): les groupes carbonyle (soit naturellement présents ou induits par l'oxydation de fonctions hydroxyles des chaînes glycosyles de la glycoprotéine) disponibles sur les fragments d'oligosaccharide de la glycoprotéine sont mis à réagir avec les 10 groupements carbonyles réactifs des composés (I) de l'invention. A titre d'exemples plus particuliers : - des fonctions carbonyles du composé d'intérêt 0 peuvent réagir avec des fonctions O-alkylamine ou acylhydrazide du composé (I) (à savoir Li= -0-NH2 ou - CO-NH-NH2) afin de conduire à la formation de liens oxime ou acylhydrazone ; 15 - des fonctions amine du composé d'intérêt 0 peuvent réagir avec des fonctions squarate d'éthyle ou ester activé du composé (I) (à savoir par exemple Li= ou -COOH activé avec N-hydroxysuccinimide (NETS) ou avec hydroxybenzotriazole (HOBt)) afin de conduire à la formation de liens squarate ou de liens amide ; - des fonctions thiol du composé d'intérêt 0 peuvent réagir avec des fonctions 20 thiol, disulfure, maléimide du composé (I) (à savoir Li= -SH, -S-S-R1 avec Ri alkyle o en Ci-05, ) afin de conduire à la formation de liens disulfures ou thiolènes ; - des fonctions alcynes ou azotures du composé d'intérêt 0 peuvent réagir respectivement avec une fonction azoture du composé (I) (à savoir Li= N3) ou alcyne (à savoir Li= -CCH) afin de conduire à la formation d'un triazole (ce qui implique 25 une réaction de cycloaddition entre l'azoture et l'alcyne). Selon l'invention, le choix du substituant LLI du composé (I) va dépendre de la nature du composé d'intérêt 0 et des groupements fonctionnels portés par ce dernier. 3041345 16 En effet, l'homme du métier comprend aisément que la longueur du substituant LL1 augmentera avec l'encombrement stérique associé au composé d'intérêt 0 qui doit être lié. Par exemple, si le composé d'intérêt 0 est une protéine ou glycoprotéine, alors 5 un substituant LL1 ne comportant pas plus de 2 ou 3 atomes consécutifs sera suffisant pour assurer une affinité satisfaisante entre le composé (I) et le RM6P-CI. En revanche, si le composé d'intérêt 0 est une protéine ou une nanoparticule qui provoque un encombrement stérique important à proximité des sites de liaison M6P du RM6P-CI, alors un substituant LL1 comportant plus de 2 ou 3 atomes consécutifs 10 sera nécessaire pour assurer une affinité satisfaisante entre le composé (I) et le RM6P-CI. La présente invention concerne encore un procédé de préparation d'un conjugué de formule (III) tel que défini ci-dessus ou d'un conjugué de formule ([)Ibis) tel que défini ci-dessus, caractérisé en que l'on fait réagir : 15 - au moins un groupement fonctionnel porté par un composé d'intérêt 0, ledit composé d'intérêt étant tel que défini ci-dessus, avec - au moins un composé répondant à la formule (I) : (I) dans laquelle Pl, X, n, A, L et Ll sont tels que définis ci-dessus. 20 Selon un mode de réalisation de l'invention, on fera par exemple réagir un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, dans lequel Pl représente un hydrogène, et X, n, A, L, Ll sont tels que définis ci-dessus, avec au moins un groupement fonctionnel porté par le composé d'intérêt 0 tel que défini ci-dessus. Un autre objet de l'invention porte sur un conjugué de formule (III) tel que défini 25 ci-dessus ou un conjugué de formule (IIIbis) tel que défini ci-dessus : - pour son utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique du corps humain ou animal, notamment choisie parmi l'enzymothérapie substitutive, la thérapie photodynamique ou le traitement du cancer, et/ou 3041345 17 - pour son utilisation dans une méthode de diagnostic, notamment de diagnostic de maladies ou d'affections associées à une augmentation ou diminution de l'expression du RM6P-CI. En effet, de par leur affinité élevée pour le RM6P-CI, les conjugués (III) et (IIIbis) 5 de l'invention sont particulièrement utiles pour avec le diagnostic de maladies liées à l'expression du RM6P-CI. Lorsque le composé d'intérêt 0 est une nanoparticule incorporant un photosensibilisateur de type porphyrine, alors le conjugué de l'invention de formule (III) ou (IIIbis) sera particulièrement adapté pour la thérapie photodynamique. 10 A titre d'exemples de maladies pouvant être traitées à l'aide du conjugué (III) ou (IIIbis) de l'invention, on pourra citer les maladies causées par une déficience du composé d'intérêt 0 dans le lysosome. Cette déficience pourra être compensée par l'administration du conjugué de l'invention, qui est capable de délivrer spécifiquement au lysosome le composé d'intérêt 0 déficient. 15 L'invention sera mieux comprise à la lumière des exemples non limitatifs et purement illustratifs suivants, et des figures 1 et 2 suivantes. La figure 1 est une comparaison de la cytotoxicité des disaccharides phosphonates 18, 19 (i.e. M6Pn-a(1,2)-Man-Ethyl-NH2 et M6Pn-a(1,2)-ManEthylSq) et carboxylates 24 et 25 (i.e. M6C-a(1,2)-Man-Ethyl-NH2 et M6C-a(1,2)- 20 Man-EthylSq) de formule (I) de l'invention sur des cellules LNCaP et de leurs homologues respectifs monosaccharides. La figure 2 représente les effets phototoxiques, sur des cellules LNCaP, de nanoparticules de silice seules (MSN) et de nanoparticules de silice (MSN) greffées sur des analogues carboxylates monosaccharidique (M6C-EthylSq) et 25 disaccharidique 25 (M6C-a(1,2)-Man-EthylSq) à différents temps d'incubation. Les nanoparticules greffées sur l'analogue carboxylate monosaccharidique et sur l'analogue carboxylate disaccharidique sont représentées respectivement par « MSNM6C-Ethyl Sq » et « MSN-M6C-a(1,2)-Man-Ethyl Sq ». 30 EXEMPLE 1 : Synthèse de composés de formule (I) 3041345 18 Cet exemple décrit la préparation de disaccharides multi-fonctionnalisés répondant à la formule (I) dans laquelle n est un entier égal à 1 ; Pl représente indépendamment l'un de l'autre H, (CH3)3Si- ou C6H5CH2- ; représente une liaison simple ou double ; X représente le groupement phosphonate ou le groupement 5 carboxylate avec Z représentant indépendamment l'un de l'autre H, éthyle, Na ; A représente l'oxygène ; L représente -CH2-CH2- ; Li représente -Br, -NH2, -N3, OU H 1) Préparation de disaccharides 9, 10, 11 et 12 répondant à la formule (II) 10 a) Préparation d'un accepteur de saccharide 6: le 3,4,6-tri-O-benzyl-a-D- mannopyranoside de 2-bromoéthyle Le procédé de préparation d'un composé accepteur de saccharide 6 répondant à la formule générale (IVbis), dans laquelle Pl représente Bn, A représente O, L représente CH2-CH2 et Li représente Br, est illustré ci-dessous : 15 4 5 HO HO 3 82% HO iv OAc ii AcO 63% sur Ac0 2 étapes Ac0 Bn0 OAc O Bn0 82% 2 6 AcO Ac0 AcO OAc BnO BnO BnO 56% V Bn0 O 75% Bn0 Bn0 Br vi Le composé de départ est le a-D-mannose pentaacétylé sur lequel est introduit un brome en position anomère à l'aide d'acide bromhydrique à 33% dans l'acide acétique pour former le composé 1. L'intermédiaire 1 est ensuite mis en réaction avec du 2-bromoéthanol et de la 2,6-lutidine pour former l'orthoester 2 avec un 20 rendement de 63% sur deux étapes. Les acétates présents sur les positions 3, 4 et 6 de l'orthoester 2 sont ensuite saponifiés pour conduire à l'intermédiaire 3 avec un rendement de 82%. Cette étape de déprotection est totale et ne nécessite pas de purification. Ces mêmes positions 3, 4 et 6 sont ensuite benzylées par l'action du bromure de benzyle pour former le composé 4 avec un rendement de 56%. 25 L'orthoester 4 est ensuite ouvert en présence de BF3.Et20 et de 2-bromoéthanol pour former l'intermédiaire clé 5 avec un rendement de 75%. Le composé 5 est ainsi fonctionnalisé en position anomère et porte un groupement protecteur en position 2 3041345 19 orthogonal aux groupements des positions 3, 4 et 6. On peut ainsi déprotéger sélectivement cette position 2 à l'aide d'une solution de soude pour obtenir l'intermédiaire 6 avec un rendement de 82%. L'accepteur de saccharide 6 est fonctionnalisé en position anomère : le synthon 6 5 sera donc commun quel que soit le disaccharide de formule (II) souhaité. Conditions et réactifs : (i) HBr 33%, AcOH, TA, 1h ; (ii) 2-bromoéthanol, 2-6- lutidine, DCM, 40°C, 3h ; (iii) NaOH 1N, THF, TA, 16h ; (iv) BnBr, NaH, DMF, TA, 21h ; (y) 2-bromoéthanol, BF3.Et20, TA, 1h30 ; (vi) NaOH 1N, THF, TA 21h. Partie expérimentale 10 Préparation du 1-bromo-2,3,4,6-tétra-0-acétyl-a-D-mannopyranose 1: 1 10g d'a-D-mannose pentaacétate sont dissous dans 20 mL d'une solution d'acide bromhydrique à 33% dans l'acide acétique. La solution jaune est agitée 1 h à température ambiante. Le mélange réactionnel est refroidi à 0°C, dilué par 30 mL de 15 CH2C12 et neutralisé à l'aide d'une solution saturée de NaHCO3. La phase aqueuse est extraite avec de CH2C12 (5x100 mL). Les phases organiques sont combinées, séchées sur MgSO4 et concentrées pour conduire au composé 1 (11,9 g) qui est utilisé pour l'étape suivante sans purification. Formule chimique 1 : C14H19BrO9 20 Masse exacte : 410,02 g.mo1-1 Rf : 0,76 [AcOEt/Cyclo (1:1)] Préparation du 1,2-0-(1-(2-bromoéthoxy)éthylidène)-3, 4, 6-tri-O-acétyl-a-Dmannopyranose 2 : 2 25 11,08 g (1 éq ; 26,9 mmol) du composé 1 sont dissous dans 9,5 mL de CH2C12 et 9,4 mL (3 éq ; 80,7 mmol) de 2,6-lutidine. 4,8 mL (2,5 éq ; 67,25 mmol) de 2- bromoéthanol sont ajoutés. Le milieu réactionnel de couleur orange est chauffé à 40°C et agité pendant 4 h. Un précipité blanc est formé. La solution est refroidie à température ambiante et 12 mL d'Et20 sont ajoutés. Le précipité est filtré. Le filtrat 30 est dilué avec 30 mL de CH2C12 et lavé successivement avec 30 mL d'eau, 30 mL 3041345 20 d'une solution saturée de NaHCO3 et 30 mL de saumure. Les phases aqueuses combinées sont extraites avec 50 mL de CH2C12. Les phases organiques sont combinées puis séchées sur MgSO4 et concentrées. Le résidu obtenu est dissous dans 20 mL de CH2C12 et 25 mL d'éthanol sont ajoutés. La solution est refroidie à -30°C 5 pour conduire au composé 2 sous la forme de cristaux blancs avec un rendement de 51% (6,268 g ; 13,8 mmol) sur deux étapes. Formule chimique 2 : Ci6H23BrOio Masse exacte : 454,05 g.mo1-1 Rf : 0,49 [Cyclo/AcOEt (1:1)] 10 SM, ESI+ m/z : 477 [M+Na]+ Préparation du 1,2-0-(1-(2-bromoéthoxy)éthylidène-a-D-mannopyranose 3: 3 4,79 g (1 éq ; 10,6 mmol) du composé 2 sont dissous dans 22 mL de THF. 43 mL d'une solution aqueuse de NaOH 1N sont ajoutés. La solution devient trouble. 2 mL 15 de méthanol sont ajoutés et la solution devient limpide. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 16 h. 250 mL d'acétate d'éthyle sont ajoutés et la phase aqueuse est extraite avec 3x200 mL d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont combinées puis séchées sur MgSO4 et concentrées. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie flash automatisée sur gel de silice (CH2C12/MeOH : 20 de 0 à 5% en 15 min ; 5% pendant 10 min ; de 5 à 10% en 15 min) pour conduire au composé 3 sous forme d'une huile incolore avec un rendement de 82% (2,86 g ; 8,69 mmol). Formule chimique 3 : CioHi7BrO7 Masse exacte : 328,02 g.mo1-1 25 Rf : 0,36 [CH2C12/MeOH (9:1)] SM, ESI- : 373 [M-H+HCOOHT Préparation du 1,2-0-(1-(2-bromoéthoxy)éthylidène-3,4,6-tri-O-benzyl-a-Dmannopyranose 4 3041345 21 2,86 g (1 éq ; 8,69 mmol) du composé 3 sont dissous dans 40 mL de DMF. 4,2 mL (4 éq ; 34,76 mmol) de bromure de benzyle sont ajoutés. Le mélange réactionnel est refroidi à 0°C et 874 mg (3 éq ; 26 mmol) de NaH 60% dispersion dans l'huile sont ajoutés. Après 17h30 d'agitation à température ambiante, il reste du produit 5 partiellement benzyle. L'ajout d'un équivalent de bromure de benzyle et de NaH ne fait pas évoluer la réaction. 50 mL d'Et20 et 40 mL d'eau sont ajoutés. La phase aqueuse est extraite avec 2x100 mL d'Et20. Les phases organiques sont combinées, lavées avec 5x80 mL d'eau puis séchées sur MgSO4 et concentrées. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie flash automatisée sur gel de silice 10 (Cyclohexane/Et20 : de 0 à 10% en 15 min ; 10% pendant 10 min ; de 10 à 20% en 15 min ; 20% pendant 50 min ; de 20 à 40% en 30 min) pour conduire au composé 4 sous forme de solide blanc avec un rendement de 56% (2,92 g ; 4,87 mmol). Formule chimique 4 : C31H35BrO7 Masse exacte : 598,16 g.mo1-1 15 Rf : 0,43 [Cyclo/Et20 (1:1)] SM, ESI+ m/z : 621 [M+Na]+ Préparation du 2-0-acéty1-3,4,6-tri-O-benzyl-a-D-mannopyranoside de 2- bromoéthyle 5 5 20 1g (1 éq ; 1,67 mmol) du composé 4 est dissous dans 20mL de CH2C12. 236 !IL (2 éq ; 3,34 mmol) de 2-bromoéthanol sont ajoutés et le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 10 min. 211pt (1 éq ; 1,67 mmol) de BF3.Et20. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 16 h. La solution est devenue jaune pâle. La réaction est diluée avec 50 mL de solution saturée de 25 NaHCO3. La phase aqueuse est extraite avec 3x50 mL de CH2C12. Les phases organiques sont combinées, lavées avec 100 mL de saumure puis séchées sur MgSO4 et concentrées. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie flash automatisée sur gel de silice (Cyclohexane/Et20 : 0 à 30% en 30 min ; 30% pendant 20 min) pour conduire au composé 5 sous forme d'une huile incolore avec un rendement de 75% 30 (750 mg ; 1,25 mmol). Formule chimique 5 : C31H35BrO7 3041345 22 Masse exacte : 598,16 g.mo1-1 Rf : 0,45 [Cyclo/Et20 (1:1)] SM, ESI+ m/z : 621 [M+Na]+ Préparation du 3,4,6-tri-O-benzyl-a-D-mannopyranoside de 2-bromoéthyle 6 : 5 6 750 mg (1 éq ; 1,25 mmol) du composé 5 sont dissous dans 1,6 mL de THF. 2,5 mL (2 éq ; 2,5 mmol) d'une solution de NaOH 1N sont ajoutés. La solution devient trouble. La solution est agitée à température ambiante pendant 21 h. La solution est neutralisée avec une solution d'HCl 1N. 40 mL de CH2C12 sont ajoutés. La phase 10 aqueuse est extraite avec 3x40 mL de CH2C12. Les phases organiques sont combinées puis séchées sur MgSO4 et concentrées. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie flash automatisée sur gel de silice (Cyclohexane/Et20 : de 0 à 20% en 15 min ; 20% pendant 10 min ; de 20 à 30% en 15 min ; 30% pendant 15 min) pour conduire au composé 6 sous forme d'une huile incolore avec un rendement de 15 82% (575 mg ; 1,03 mmol). Formule chimique 6 : C29H33BrO6 Masse exacte : 556,16 g.mo1-1 Rf : 0,29 [Cyclo/Et20 (7:3)] SM, ESI+ m/z : 579 [M+Na]+ 20 b) Préparation d'un donneur de saccharide 8 : le trichloroacétimidate de 2,3,4,6- tétra-O-acétyl-a-D-mannopyranose Le procédé de préparation d'un composé donneur de saccharide 8 répondant à la formule générale (V), dans laquelle Pl représente Bn, est illustré ci-dessous : AcO. OAc AcO OAc AcO OAc -0 AcO 45% sur 2 étapes AcO 0 AcO AcO OAc 7 OH 8 NH 25 Le composé de départ est le a-D-mannose pentaacétylé qui est déprotégé en position anomère à l'aide de morpholine pour conduire au composé 7 sans purification. Le trichloroacétimidate 8 est ensuite formé par réaction du composé 7 avec du trichloroacétonitrile en présence de DBU. 3041345 23 Conditions et réactifs : (i) morpholine, DCM, reflux, 3h30 ; (ii) C13CCN, DBU, DCM, TA, 4 h. Partie expérimentale Préparation du 2,3,4,6-tétra-0-acétyl-D-mannose 7: 5 7 3 g (1 éq ; 7,69 mmol) d'a-D-mannose pentaacétate sont dissous dans 18 ml de CH2C12. 2,7 mL (4 éq ; 30,76 mmol) de morpholine sont ajoutés. Le mélange réactionnel est chauffé à reflux pendant 3h30 puis refroidi à température ambiante. La solution est neutralisée avec une solution d' HC1 1N. La phase organique est lavée 10 avec 3x10 mL d'eau, séchée sur MgSO4 et concentrée pour conduire au produit 7 sous forme d'une huile jaune directement utilisée pour l'étape suivante. Formule chimique 7 : Ci4H200io Masse exacte : 348,30 g.mo1-1 Rf : 0,38 [Cyclo/AcOEt (1:1)] 15 SM, EST m/z : 393 [M-H+HCOOHT Préparation du trichloroacétimidate de 2,3,4,6-tétra-0-acétyl-a-D-mannopyranose 8: 8 1,34g (1 éq ; 3,85 mmol) du composé 7 sont dissous dans 8,6 mL de CH2C12. La solution de couleur jaune est refroidie à 0°C. 2,7 mL (7 éq ; 26,95 mmol) de 20 trichloroacétonitrile et 575 !IL de DBU (1,8-diazabicyclo[5.5.0]undec-7-ène) sont ajoutés. La solution devient marron. Le milieu réactionnel est agité 4 h à température ambiante puis concentré. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie flash automatisée sur gel de silice (Cyclohexane/Et20 : 50% pendant 25 min) pour conduire au produit 8 sous forme d'huile jaune pâle avec un rendement de 45% (860 25 mg ; 1,75 mmol). Le produit relativement instable est utilisé rapidement. Formule chimique 8 : Ci6H20C13NOio Masse exacte : 492,69 g.mo1-1 Rf : 0,4 [Cyclo/Et20 (3:7)] 3041345 24 c) Préparation des disaccharides 9, 10, 11 et 12 Le procédé de préparation de disaccharides 9, 10, 11 et 12 répondant à la formule (II) est illustré ci-dessous : 5 La réaction de glycosylation entre l'accepteur de formule IV ou IVbis, en particulier le saccharide 6, et le donneur de formule V, en particulier le saccharide 8, permet l'obtention du composé de formule (II), en particulier le disaccharide 12, qui occupe une position centrale dans la stratégie de synthèse de l'invention. En effet, le composé de formule (II) permet de diverger vers l'ensemble des composés de 10 formule (I) de l'invention. Les analogues isostères du M6P de l'invention (I) sont en effet accessibles à partir du composé de formule (II). Le procédé de synthèse de l'invention confère de la souplesse dans la production des analogues disaccharidiques de formule (I) de l'invention mais également aux analogues tri- ou tétra-saccharidiques de formule (I) de l'invention. 15 Les composés respectifs « accepteur de saccharide » 6 et « donneur de saccharide » 8 tels que préparés ci-dessus sont mis en réaction en présence de triflate de triméthylsilyle pour former le disaccharide 9 avec un rendement de 60%. Les groupements acétates sont ensuite saponifiés pour conduire au composé 10 avec un rendement de 74%. Les alcools ainsi déprotégés sont ensuite triméthylsilylés par 20 action du chlorure de triméthylsilyle pour former l'intermédiaire 11. La position 6 est ensuite désilylée sélectivement en présence de carbonate de potassium dans le méthanol pour conduire au disaccharide 12 avec un rendement de 81% sur deux étapes. Conditions et réactifs : (i) TMSOTf, DCM, -30°C, 30min ; (ii) NaOH 1N, THF, 25 TA, 18h ; (iii) TMSC1, NEt3, DCM, TA, 18h ; (iv) K2CO3, Me0H, TA, 1h45. Partie expérimentale 6 8 9 r iii 12 11 r 10 B r C C 74% 3041345 25 Préparation du 2,3,4,6-tétra-0-acétyl-a-D-mannopyranosyl-(1 2)-3,4,6-tri-Obenzyl-a-D-mannopyranoside de bromoéthyle 9 : 9 430 mg (1 éq ; 0,77 mmol) du composé 6 et 860 mg (2,27 éq ; 1,75 mmol) du 5 composé 8 sont dissous dans 15 mL de CH2C12 en présence de 7 g de tamis moléculaire LIA précédemment activé. Le milieu réactionnel est agité 30 min à température ambiante puis refroidi à -30°C. 167 !IL (1,2 éq ; 0,924 mmol) de TMSOTf sont ajoutés goutte à goutte. Le mélange réactionnel est agité à -30°C pendant 1h15. Le milieu réactionnel est ensuite neutralisé avec 3,5 mL de pyridine. 10 Après filtration sur célite, le filtrat est concentré puis co-évaporé avec du toluène. Le résidu (solide jaune pâle) obtenu est purifié par chromatographie flash automatisée sur gel de silice (Cyclohexane/Et20 : 30% pendant 110 min) pour conduire au produit 9 sous la forme d'une huile incolore avec un rendement de 64% (441mg ; 0,497 mmol). 15 Formule chimique 9 : C43H5iBrOis Masse exacte : 886,24 g.mo1-1 Rf : 0,56 [Cyclo/Et20 (2:8)] SM, ESI+ m/z : 909 [M+Na]+ Préparation du a-D-mannopyranosyl-(1 20 mannopyranoside de bromoéthyle 10 : 10 5,84 g (1 éq, 6,58 mmol) du composé 9 sont dissous dans 16 mL de THF. 33 mL (5 éq, 32,9 mmol) d'une solution de soude 1 M sont ajoutés. La solution devient trouble. 1,5 mL de méthanol sont ajoutés. La solution est agitée à température 25 ambiante pendant 18h puis neutralisée avec une solution de HC1 1M et concentrée. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie flash sur gel de silice (DCM/Me0H : 0% (500 mL) ; 5% (500 mL) ; 7% (500 mL) ; 10% (1 L)) pour Ac0 Ac0 Ac0 Bn0 Bn0 3041345 26 conduire au composé 10 sous la forme d'une mousse blanche avec un rendement de 74% (3,5 g, 4,86 mmol). Formule chimique 10 : C35H43BrOli Masse molaire : 718,2 g.mo1-1 5 Rf : 0,41 [DCM/MeOH (9:1)] Préparation du 2,3,4,6-tétra-0-triméthylsilyl-a-D-mannopyranosyl-(1 2)-3,4,6- tri-O-benzyl-a-D-mannopyranoside de bromoéthyle 11 : 11 3,4 g (1 éq, 4,72 mmol) du composé 10 sont dissous dans 24 mL de DCM 10 fraîchement distillé et 19 mL (30éq ; 141,6 mmol) de triéthylamine. La solution est refroidie à 0°C et 4,8 mL (8 éq ; 37,8 mmol) de chlorure de triméthylsilyle sont ajoutés goutte à goutte. Après 18 h d'agitation à température ambiante, il reste un peu de produit de départ. 1,2 mL (2 éq ; 9,44 mmol) de chlorure de triméthylsilyle sont ajoutés goutte à goutte. Après 1h30 d'agitation à température ambiante, il n'y a 15 pas d'évolution. La solution est concentrée. Le résidu rose est dissous dans du cyclohexane et filtré sur célite. Le filtrat est concentré pour obtenir le composé 11 sous la forme d'une huile marron clair directement utilisée pour l'étape suivante. Formule chimique 11 : C47H75BrOnSi4 Masse molaire : 1008,34 g.mo1-1 20 Rf : 0,78 [Cyclo/Et20 (7:3)] Préparation du 2,3 ,4-tri-O-triméthyl silyl- a-D-mannopyranosyl-(1 2)-3 ,4,6-tri-0- benzyl-a-D-mannopyranoside de bromoéthyle 12 : 12 4,58 g (4,72 mmol ; 1 éq) du composé 11 sont dissous dans 65 mL de méthanol 25 fraîchement distillé. Une solution de 6,5 mg (0,01 éq ; 0,0472 mmol) de K2CO3 (concentration finale = 0,63 mM) dans 10 mL de méthanol est ajoutée goutte à goutte. Le milieu réactionnel est agité 1h45 à température ambiante puis dilué avec 3041345 27 200 mL de CH2C12 et lavé avec 125 mL de saumure. La phase aqueuse est extraite avec 260 mL de CH2C12. Les phases organiques sont combinées, séchées sur MgSO4 et concentrées. Le résidu obtenu (huile marron clair) est purifié par chromatographie sur gel de silice (Cyclohexane/Et20 : 30% (700 mL) ; 40% (500 mL) ; 50% (500 5 mL) ; 70% (500 mL)) pour conduire au composé 12 (3,58 g ; 3,82 mmol) sous la forme d'un liquide incolore avec un rendement de 81% sur 2 étapes. Formule chimique 12 : C44H67BrOiiSi3 Masse molaire : 936,16g.mal Rf : 0,45 [Cyclo/Et20 (1:1)] 10 SM, ESI+ m/z : 959 [M+Na]+ 2) Préparation de disaccharides 14, 15, 16, 17, 18 et 19 répondant à la formule (I) dans laquelle X représente le groupement phosphonate Le procédé de préparation de disaccharides 14, 15, 16, 17, 18 et 19 répondant à la formule (I) dans laquelle X représente le groupement phosphonate est illustré ci- 15 dessous : OTMS L'alcool 12 obtenu tel que décrit précédemment est oxydé en aldéhyde à l'aide du périodinane de Dess-Martin pour former le composé 13. Cet intermédiaire clé va permettre l'accès aux différents disaccharides de formule (I). 20 Pour synthétiser les disaccharides « phosphonate » de formule (I), l'aldéhyde 13 est mis en réaction avec le méthylènediphosphonate de tétraéthyle, préalablement 18 19 H OEt HO OTMS -0 TMSO TMSO Bn0 Bn0 Bn0 12 o Et° // ElO TMSO TMSO TMSO TMSO TMSO O OTMS TMSO TMSO -0 Bn0 Bn0 Bn0 O C>Br 13 O 15 Br 17 88% 11 75% sur 2 étapes 3041345 28 déprotoné par de l'hydrure de sodium, pour former le composé 14 avec un rendement de 75% sur deux étapes. Lors d'une étape d'hydrogénation catalytique, en présence de palladium sur charbon et pour laquelle l'hydrogène est généré in situ par ajout progressif de triéthylsilane, la double liaison ainsi que les trois benzyles sont réduits 5 et les groupements triméthylsilyles sont hydrolysés. On obtient ainsi le composé 15, sans purification, avec un rendement quantitatif. L'atome de brome est ensuite substitué par du phtalimide de potassium pour former l'intermédiaire 16 avec un rendement de 75%. Les fonctions alcools sont ensuite protégées par du chlorure de triméthylsilyle pour conduire au composé 17 avec un rendement de 88%. 10 L'intermédiaire 17 ainsi obtenu, sans purification est ensuite mis en réaction avec du chlorure de triméthylsilyle et de l'iodure de sodium pour former le phosphonate bis(triméthylsilylé) par une réaction de type Rabinowitz. Cet intermédiaire est ensuite converti en acide phosphonique par action de l'hydrazine monohydratée dans le méthanol qui va aussi déplacer les groupements triméthylsilyles présents sur les 15 alcools secondaires du sucre et réagir avec le phtalimide afin de démasquer la fonction amine. On obtient ainsi, en une seule étape, le composé 18 déprotégé sur la partie phosphonate, sur les alcools des deux sucres et portant la fonction amine en position anomère avec un rendement de 76% sur deux étapes. Le composé 18 est ensuite mis en réaction avec le squarate de diéthyle pour former le produit 19 avec un 20 rendement de 59%. Conditions et réactifs : (i) Dess-Martin periodinane, DCM, TA, 4h (ii) méthylènediphosphonate de tétraéthyle, NaH, THF, TA, 45min ; (iii) Pd/C, Et3SiH, Me0H ; (iv) Phtalimide de potassium, DMF, 60°C, 40h ; (v) TMSC1, NEt3, DCM, DMF, TA, 24h ; (vi)-a TMSC1, Nat ACN, 35°C, lh ; (vi)-b N2H4.H20, Me0H, TA, 25 1h30 ; (vii) squarate de diéthyle, Et0H/H20, NEt3. Partie expérimentale Préparation du 2,3,4-tri-O-triméthylsilyl-a-D-manno-hexodialdopyranosyl-(1 2)- 3,4,6-tri-O-benzyl-a-D-mannopyranoside de bromoéthyle 13: 13 3041345 29 1 g (1 éq ; 1,07 mmol) du composé 12 est dissous dans 24 mL de DCM sur tamis moléculaire. 5,4 mL (1,5 éq ; 1,6 mmol) d'une solution de périodinane de DessMartin à 0,3 M dans le dichlorométhane sont ajoutés goutte à goutte. Le milieu réactionnel est agité à température ambiante pendant 4 h puis dilué avec 120 mL 5 d'Et20. 25 mL d'une solution saturée de NaHCO3 et 3,9 g de Na2S2O3 sont ajoutés. La solution est agitée à température ambiante pendant 5 min. La phase aqueuse est extraite avec 3x125 mL d'Et20. Les phases organiques sont combinées, séchées sur MgSO4 et concentrées pour conduire au composé 13 utilisé directement pour l'étape suivante. 10 Formule chimique 13 : C44H65BrOiiSi3 Masse molaire : 934,14g.moL' Rf : 0,77 [DCM/Et20 (95:5)] Préparation du 2,3,4-tri-O-triméthylsily1-6,7-didésoxy- 7-diéthoxyphosphinyl-aD- manno-hept-6-énopyranosyl-(12)-3,4,6-tri-O-benzyl-a-D-mannopyranoside de 15 bromoéthyle 14 : 14 90 mg (2,5 éq ; 2,67 mmol) de NaH 60% dispersion dans l'huile sont dissous dans 16 mL de THF. 5301.it (2 éq ; 2,14 mmol) de méthylènediphosphonate de tétraéthyle sont ajoutés goutte à goutte. Le mélange réactionnel est agité 45 min à température 20 ambiante puis ajouté à 998 mg (1 éq ; 1,07 mmol) du composé 13 dissous dans 8 mL de THF. La solution se colore en jaune puis devient marron. Le milieu réactionnel est agité à température ambiante pendant 45min puis dilué avec 200mL de CH2C12 et lavé avec 2x40 mL de saumure. La phase aqueuse est extraite avec 3x130 mL de CH2C12. Les phases organiques sont combinées, séchées sur MgSO4 et concentrées. 25 Le résidu obtenu (huile marron) est purifié par chromatographie flash automatisée sur gel de silice (DCM/Et20 : 0% à 5% en 15 min ; 5% pendant 10 min ; de 5% à 10% en 15 min ; 10% pendant 10 min ; de 10 à 13% en 15 min) pour conduire au composé 14 sous la forme d'une huile jaune clair avec un rendement de 76% (864 mg ; 0,81 mmol) sur deux étapes. 3041345 30 Formule chimique 14 : C49H76BrO13Si3 Masse molaire : 1068,25 g.mo1-1 Rf : 0,26 [DCM/Et20 (95:5)] Préparation du 6-désoxy-6-diéthoxyphosphinylméthylène-a-D-mannopyranosyl- 5 (1 2)-a-D-mannopyranoside de bromoéthyle 15 : 15 864 mg (0,81 mmol) du composé 14 sont dissous dans 8,2 mL de méthanol. 130 mg (15% massique) de palladium sur charbon sont ajoutés. 1,3 mL (8,1 mmol ; 10 éq) de triéthylsilane sont ajoutés goutte à goutte pendant 1h20. La suspension est 10 agitée à température ambiante pendant 30 min puis filtrée sur célite. Le filtrat est évaporé pour conduire au composé 15 avec un rendement de 99% (468 mg ; 8,0 mmol). Formule chimique 15 : C19H36BrO13P Masse exacte : 582,2 g.mo1-1 15 Rf : 0,23 [DCM/Me0H (85:15)] SM, ESI+ m/z : 583,1 [M+H]+ Préparation du 6-désoxy-6-diéthoxyphosphinylméthylène-a-D-mannopyranosyl(1 2)-a-D-mannopyranoside de phtalimidoéthyle 16: 16 20 220 mg (0,38 mmol) du composé 15 sont dissous dans 1,8 mL de DIVII sur tamis moléculaire. 119 mg (0,64 mmol ; 1,7 éq) de phtalimide de potassium sont ajoutés. La suspension est agitée pendant 40 h à 60°C puis refroidie à température ambiante et concentrée. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice 3041345 31 (AcOEt/Me0H : 75/25) pour conduire au composé 16 sous la forme d'un solide incolore avec un rendement de 75% (184 mg ; 0,28 mmol). Formule chimique 16 : C27H40N015P Masse molaire : 649,58 g.mo1-1 5 Rf : 0,31 [AcOEt/MeOH (75:25)] SM, ESI+ m/z : 650,3 [M+H]+ Préparation du 2,3, 4-tri-O-triméthylsily1-6-désoxy-6-diéthoxyphosphinylméthylènea-D-mannopyra nosyl-(12)-3,4,6-tri-O-triméthylsilyl-a-D-mannopyranoside de phtalimidoéthyle 17: 10 e 17 184 mg (0,28 mmol) du composé 16 sont dissous dans 817 !IL de DCM fraîchement distillé et 1,15 mL (8,5 mmol ; 30 éq) de triéthylamine. Le produit de départ n'est pas complètement soluble. 431 !IL (3,4 mmol ; 12 éq) de chlorure de triméthylsilyle sont ajoutés goutte à goutte. La solution est agitée à température 15 ambiante pendant 15 h. Le produit de départ n'est toujours pas complètement solubilisé et la solution est de couleur blanche. 0,5 mL de DMF sur tamis moléculaire sont ajoutés, le produit de départ est alors soluble. La solution est agitée à température ambiante pendant 24 h puis évaporée. Au cours de la réaction, la solution devient marron. Le résidu marron est dissous dans du cyclohexane puis filtré 20 sur célite. Le filtrat est concentré pour conduire au composé 17 avec un rendement de 88% (268 mg ; 0,25 mmol) directement utilisé pour l'étape suivante. Formule chimique 17 : C45H88N015PSi6 Masse molaire : 1082,66g.ma1 Rf : 0,49 [DCM/Et20 (9:1)] 25 Préparation du 6-désoxy-6-dihydroxyphosphinylméthylène-a-D-mannopyranosyl- (1 2)-D-mannopyranoside d' aminoéthyle (M6Pn-a(1,2)-Man-Ethyl-NH2) 18: 3041345 32 18 269 mg (0,25 mmol) du composé 17 et 260 mg (1,73 mmol ; 7 éq) d'iodure de sodium sont dissous dans 7,3 mL d'acétonitrile fraîchement distillé. 219 !IL (1,73 mmol ; 7 éq) de chlorure de triméthylsilyle sont ajoutés goutte à goutte. La solution 5 est agitée à 35°C pendant 1h15. Pendant la réaction un précipité se forme. Le surnageant est canulé dans un ballon et évaporé à sec. 132 !IL (2,72 mmol ; 11 éq) d'hydrazine monohydratée sont dilués dans 3,4 mL de méthanol sur tamis moléculaire et ajoutés au résidu obtenu précédemment. Un précipité blanc est formé. La suspension est agitée à température ambiante pendant 1h30. Le précipité est 10 dissous dans l'eau et évaporé. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (isopropanol/ammoniaque/eau : 5/3/2) pour conduire au composé 18 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 76% (67 mg ; 0,14 mmol). Formule chimique 18 : Ci5H30N013P Masse molaire : 463,37 g.mo1-1 15 Rf : 0,49 [DCM/Et20 (9:1)] SMHR : masse calculée : 464,1533 ; masse trouvée : 464,1530 Préparation du 6,7-didésoxy-7-dihydroxyphosphinyl-a-D-manno-heptopyranosyl(1 2)-a-D-mannopyranoside de (4-éthoxy-2,3-dioxocyclobut-1-ényl)aminoéthyle (M6Pn-a(1,2)-Man-Ethyl Sq) 19: 20 19 Le composé 18 (32mg ; 1 éq ; 0,07mmol) est dissous dans un mélange éthanol/eau (1:1) (62011E). Le squarate de diéthyle (10,3pt ; 1 éq ; 0,07 mmol) et la triéthylamine (9,7pt ; 1 éq ; 0,07mmol) sont ajoutés. La réaction est agitée à 15 3041345 33 température ambiante pendant 20h puis le solvant est évaporé. Le résidu est précipité dans un mélange AcOEt/MeOH (7:3). Après centrifugation, le précipité est rincé 5 fois avec de l'acétate d'éthyle pour conduire au composé 19 avec un rendement de 59% (24mg ; 0,041 mmol). 5 Formule chimique : C21F134N016P Masse molaire : 587,47g.mo1-1 Rf : 0,67 [Me0H/H20 (9:1)] SM, ESf m/z : 586 [M-H] 10 3) Préparation de disaccharides 20, 21, 22, 23, 24, et 25 répondant à la formule (I) dans laquelle X représente le groupement carboxylate Le procédé de préparation de disaccharides 20, 21, 22, 23, 24 et 25 répondant à la formule (I) dans laquelle X représente le groupement carboxylate est illustré ci-dessous : Le début de la synthèse des disaccharides « carboxylate » de formule (I) est identique à celle des disaccharides « phosphonate », à savoir l'aldéhyde 13 est obtenu à partir de l'alcool 12 de la même manière que décrit ci-dessus. HO EtO 12 13 HO OTMS O OTMS -O -0 TMSO TMSO BnO BnO BnO 75 0st....7.5,,Br étap es \./Br 95% O OH 23 22 \./Br HO 24 iv 99% Vii 73% 3041345 34 L'aldéhyde 13 est ensuite mis en réaction avec du phosphonoacétate de triéthyle préalablement déprotoné à l'aide d'hydrure de sodium pour former le composé 20 avec un rendement de 75% sur deux étapes. En une seule étape d'hydrogénation, la double liaison ainsi que les 3 groupements benzyles sont réduits. Lors de cette 5 réaction, les groupements triméthylsilyles sont aussi hydrolysés. Cette réaction est effectuée à l'aide de palladium sur charbon à 10% et l'hydrogène est généré in situ par ajout progressif de triéthylsilane pour former le composé 21 avec un rendement de 95%. Cette étape d'hydrogénation est totale et ne nécessite pas de purification pour obtenir le composé 21 pur. L'atome de brome est ensuite substitué par de 10 l'azoture de sodium pour conduire au composé 22 avec un rendement de 99%. La fonction ester est alors saponifiée pour former le composé 23 avec un rendement de 86%. Enfin la fonction azide est réduite lors d'une réaction d'hydrogénation catalytique à l'aide de palladium sur charbon et de triéthylsilane pour former le composé 24 avec un rendement de 97%. Enfin, le composé 24 est mis en réaction 15 avec du squarate de diéthyle pour conduire au composé 25 avec un rendement de 73%. Conditions et réactifs : (i) Dess-Martin periodinane, DCM, TA, 4h ; (ii) phosphonoacetate de triéthyle, NaH, THF, TA, 14h ; (iii) Pd/C, Et3 SiH, Me0H, TA ; (iv) NaN3, DMF, TA, 5j ; ( v)NaOH 1N, TA, 20h ; (vi) Pd/C, Et3SiH, Me0H/H20 ; 20 (vii) squarate de diéthyle, Et0H/H20, NEt3, TA, 2h30. Partie expérimentale Préparation du 2,3 ,4-tri-O-triméthyl sily1-6, 7-didé s oxy-7-éthoxy carb onyl-a-D-manno- hept-6-énopyranosyl-(1 2)-3,4,6-tri-O-benzyl-a-D-mannopyrannoside de bromoéthyle 20 : 25 v 20 144 mg (4 éq ; 4,28 mmol) de NaH 60% dispersion dans l'huile sont dissous dans 10mL de THF. 637 !IL (3 éq ; 3,21 mmol) de phosphonoacétate de triéthyle sont ajoutés goutte à goutte. Le mélange réactionnel est agité 45 min à température ambiante puis ajouté à 1,065 g (1 éq ; 1,07 mmol) du composé 13 dissous dans 20 3041345 mL de THF. La solution se colore en orange. Le milieu réactionnel est agité à température ambiante pendant 14h30 puis dilué avec 175 mL de CH2C12 et lavé avec 4x50 mL de saumure. La phase aqueuse est extraite avec 125 mL de CH2C12. Les phases organiques sont combinées, séchées sur MgSO4 et concentrées. Le résidu 5 obtenu (huile orange) est purifié par chromatographie flash automatisée sur gel de silice (Cyclohexane/Et20 : 20% (900 mL)) pour conduire au composé 20 sous la forme d'une huile incolore avec un rendement de 75% (802 mg ; 0,80 mmol) sur deux étapes. Formule chimique 20 : C48E171BrOuSi3 10 Masse molaire : 1004,23 g.mo1-1 Rf : 0,39 [Cyclo/Et20 (8:2)] Préparation du 6,7-didésoxy-7-éthoxycarb onyl-a-D-manno-heptopyranosyl- (1 2)-ct-D-mannopyranoside de bromoéthyle 21 : 21 15 795 mg (1 éq ; 0,79 mmol) du composé 20 sont dissous dans 8 mL de méthanol. 160 mg (20% massique) de palladium sur charbon à 10% sont ajoutés. 1,3 mL (10 éq ; 7,9 mmol) de triéthylsilane sont ajoutés goutte à goutte pendant 1 h. Le milieu réactionnel est agité à température ambiante pendant 20 min puis filtré sur célite (rincée avec du méthanol chaud). Le filtrat est concentré pour conduire au composé 20 21 sous la forme d'une huile incolore avec un rendement de 95% (390 mg ; 0,75 mmol). Formule chimique 21 : C181-131BrOi2 Masse molaire : 519,34g.mal Rf : 0,40 [DCM/MeOH (85:15)] 25 Préparation du 6,7-didésoxy- 7-éthoxycarb onyl-a-D-manno-heptopyranosyl- (1 2)-ct-D-mannopyranoside d'azidoéthyle 22 : 3041345 36 22 440 mg (1 éq ; 0,85 mmol) du composé 21 sont dissous dans 3,5 mL de DMF fraîchement distillé. 66 mg (1,2 éq ; 1,02 mmol) d'azoture de sodium sont ajoutés. La solution est agitée à température ambiante pendant 5 jours puis évaporée. Le résidu 5 obtenu est purifié par chromatographie flash sur gel de silice (AcOEt/Me0H : 10% (210 mL) ; 20%) pour conduire au composé 22 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 99% (407 mg ; 0,85 mmol). Formule chimique 22 : C18H31N3012 Masse molaire : 481,45 g.mo1-1 10 Rf : 0,43 [AcOEt/MeOH (8:2)] SM, ESI+ m/z : 482 [M+H]+ Préparation du 6,7-didésoxy- 7-hydroxycarbonyl-a-D-manno-heptopyranosyl(1 2)-ct-D-mannopyranoside d'azidoéthyle 23: 23 15 377 mg (1 éq ; 0,78 mmol) du composé 22 sont dissous dans 932 !IL (1,2 éq ; 0,932 mmol) d'une solution de soude 1 N. La solution est agitée à température ambiante pendant 20 h puis concentrée. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie flash sur gel de silice (isopropanol/ammoniaque 35%/eau : 6/3/1) pour conduire au composé 23 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 20 86% (316 mg ; 0,67 mmol). Formule chimique 23 : C16H27N3012 Masse molaire : 453,40 g.mo1-1 3041345 37 Rf : 0,38 [isopropanol/NH4OH/eau (6:3:1)] SM, ESI+ m/z : 454 [M+H]+ Préparation du 6,7-didésoxy- 7-hydroxycarbonyl-a-D-manno-heptopyranosyl(1 2)-a-D-mannopyranoside d' aminoéthyle (M6C-a(1,2)-Man-Ethyl-NH2) 24: 5 24 316 mg (1 éq ; 0,67 mmol) du composé 23 sont dissous dans 15 mL d'un mélange méthanol/eau 2 :1. 32 mg (10% massique) de palladium sur charbon à 10% sont ajoutés. 536 !IL (5 éq ; 3,36 mmol) de triéthylsilane sont ajoutés goutte à goutte pendant 40 min. Après 45 min d'agitation à température ambiante, il reste du produit 10 de départ. 536 !IL (5 éq ; 3,36 mmol) de triéthylsilane sont ajoutés goutte à goutte pendant 30 min. Le milieu réactionnel est agité à température ambiante pendant 10 min (pas d'évolution) puis filtré sur célite (rincée avec du méthanol chaud). Le filtrat est concentré puis dissous dans 3 mL d'un mélange méthanol/eau 2 :1. 60 mg (20% massique) de palladium sur charbon à 10% sont ajoutés. 1,07 mL (10 éq ; 6,72 15 mmol) de triéthylsilane sont ajoutés goutte à goutte pendant 20 min. La suspension est agitée à température ambiante pendant 30 min puis filtrée sur célite (rincée avec du méthanol chaud). Le filtrat est concentré pour conduire au composé 24 sous la forme d'une huile incolore avec un rendement de 97 % (280 mg ; 0,66 mmol). Formule chimique 24 : C16H29N012 20 Masse molaire : 427,40 g.mo1-1 Rf : 0,51 [isopropanol/NH4OH/eau (5:4:1)] SM, ESI+ m/z : 428 [M+H]+ Préparation du 6,7-didésoxy- 7-hydroxycarbonyl-a-D-manno-heptopyranosyl- (1 2)-a-D-mannopyranoside de (4-éthoxy-2,3-dioxocyclobut-1-ényl)aminoéthyle 25 (M6C-a(1,2)-Man-EthylSq) 25: 3041345 38 25 45 !IL (1 éq ; 0,307 mmol) de squarate de diéthyle sont dilués dans 300 !IL d'un mélange éthanol/eau 2 :1. Le pH de la solution est de 5. 20 !IL (0,5 éq ; 0,154 mmol) de triéthylamine sont ajoutés pour arriver à pH=8-9. 131 mg (1 éq ; 0,307 mmol) du 5 composé 24 dissous dans 1,7 mL d'un mélange éthanol/eau 2 :1 sont ajoutés goutte à goutte. La solution est agitée à température ambiante pendant 2h30, en maintenant le pH à 8-9 par ajout de triéthylamine, puis concentrée. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie flash sur gel de silice (AcOEt/Me0H : dépôt 3 :7 ; élution : 30% (20 mL) ; 40% (10 mL) ; 50% (20 mL) ; 70% (30 mL) pour conduire au composé 25 10 sous la forme d'un solide incolore avec un rendement de 73% (123 mg ; 0,223 mmol). Formule chimique 25 : C22H33N015 Masse molaire : 551,50 g.mo1-1 Rf : 0,36 [AcOEt/MeOH (1:1)] 15 SM, ESI+ m/z : 552 [M+H]+ EXEMPLE 2 : Caractérisation des composés (I) de l'invention 1) Liaison des analogues M6P de l'invention avec le RM6P-CI 20 Les plaques de 96 puits (Maxisorp Nunc) sont incubées une nuit à 4°C avec 200 !IL de PMP (penta mannose 6-phosphate) à la concentration de 200 lag.mL-1, dans le tampon carbonate (NaHCO3/Na2CO3 à 0,1M, pH 9,6). Le lendemain, la solution contenant le PMP résiduel est écartée et les puits sont saturés, pendant 1 h à température ambiante, avec 360 !IL de la gélatine 1% (Type A from Porcine Skin) 25 diluée dans le PBS (1,9 mM NaH2PO4, 8,1 mM Na2PO4 et 154 mM NaC1, pH 7,4). Les puits sont ensuite rincés 5 fois par le PBS additionné de 0,2% de gélatine. Tous les lavages ainsi que les dilutions sont réalisés dans la solution de PBS additionné de 0,2% de gélatine. Les analogues M6P à tester aux différentes concentrations (de 10-2 à 10-7 M) sont pré-incubés en présence du RM6P-CI préalablement biotinylé 3041345 39 (RM6Pb) (2,5 µg.mL-1) pendant 20 min, puis 200 !IL du mélange sont incubés dans les puits pendant 2 h, à température ambiante. Après 3 lavages, les puits sont incubés pendant 1 h avec une solution de streptavidine-peroxydase (250 !IL par puits ; 3.10-8 M). Après 3 autres lavages, 200 !IL d'une solution d'OPD (o-phenylènediamine 1 5 mg.mL-1 dans le tampon citrate pH 5,0 et 1 !IL 30% H202.mL-1 ; Sigma Aldrich) est ajoutée. Après 20 min d'incubation au noir et à température ambiante, les densités optiques sont mesurées à la longueur d'onde de 450 nm. Les affinités des disaccharides phosphonate 18 et carboxylate 24 de formule (I) de l'invention ont été mesurées et comparées avec celles de leurs homologues respectifs 10 monosaccharidiques. L'affinité désigne la capacité de fixation (en l'occurrence par l'intermédiaire d'une liaison covalente) des analogues du M6P pour le RM6P-CI. L'affinité relative permet de comparer l'affinité des molécules avec le M6CEthyl-NH2 pris comme référence et pour lequel une valeur égale à 1 lui est attribuée. 15 Les résultats obtenus sont résumés dans le tableau 1 ci-dessous. L'affinité du disaccharide phosphonate 18 (ligne 1 du tab. 1), le 6-désoxy-6- dihydroxyphosphinylméthylène-a-D-mannopyranose-a-(1,2)-D-mannopyrannose d'aminoéthyl, représenté par M6Pn-a(1,2)-Man-Ethyl-NH2, est donc comparée à celle du monosaccharide phosphonate (ligne 2), représenté M6Pn-Ethyl-NH2. 20 L'affinité du disaccharide carboxylate 24 (ligne 3), le 6,7-didésoxy-7- hydroxycarbonyl-a-D-manno-hept-6-anopyranose-a-(1,2)-a-D-mannopyrannose d'aminoéthyle, représenté par M6C-a(1,2)-Man-Ethyl-NH2, est donc comparée à celle du monosaccharide carboxylate (ligne 4), représenté M6C-Ethyl-NH2. Tableau 1 25 3041345 Analogues M6P Structure chimique IC50 en M Affinité relative Composé 18 de l'invention M6Pn-a(1,2)-Man-Ethyl-NH2 HOP OH 0 ONE,2 0,5 x 10-5 M 19,8 ° °--0 HO HO HO HO H M6Pn-Ethyl-NH2 O 0 0 C)NH2 2,9 x 10-5 M 3,4 HO HO - / P HO HO Composé 24 de l'invention HO 0 OH ,-0 NH: 1,7 x 10-5 M 5,8 M6C-a(1,2)-Man-Ethyl-NH2 HO , HO HO HO M6C-Ethyl-NH2 HO 0 ,1 NH2 9,9 x 10-5 M 1 HO 01-0 HO Conclusion : Une meilleure affinité des analogues disaccharidiques 18 et 24 de l'invention est observée pour le RM6P-CI que celle des mêmes analogues monosaccharidiques. De 5 plus, un gain d'affinité de l'analogue phosphonate 18 est observé par rapport à l'analogue carboxylate 24, aussi bien en série disaccharidique qu'en série monosaccharidique. 2) Evaluation de la cytotoxicité des analogues M6P de l'invention avec RM6P-CI La cytotoxicité des analogues disaccharidiques phosphonates 18, 19 et 10 carboxylates 24, 25 de l'invention a été évaluée sur des cellules de cancers de la prostate LNCaP, et a été comparée à celle de leurs homologues monosaccharidiques respectifs. 3041345 41 Les analogues disaccharidiques 18, 19, 24 et 25 de formule (I) de l'invention ainsi que les analogues monosaccharidiques des analogues disaccharidiques 19, 24 et 25 sont testés :: M6Pn-a(1,2)-Man-Ethyl-NH2 (compo 18) ; 5 M6Pn-a(1,2)-Man-EthylSq (compo 19) ; M6Pn-EthylSq (décrit ci-dessous) ; M6C-a(1,2)-Man-Ethyl-NH2 (compo 24) ; M6C-Ethyl-NH2 (décrit dans le tableau 1) ; M6C-a(1,2)-Man-EthylSq (compo 25) ; 10 M6C-EthylSq (décrit ci-dessous). M6C-EthylSq M6Pn-EthylSq Protocole expérimental Les cellules humaines de cancer de la prostate LNCaP sont incubées avec des solutions des analogues tels que décrits ci-dessus présentant des concentrations allant 15 de 10-3 M à 10-7M. La survie cellulaire est mesurée après 4 jours d'incubation à l'aide d'un test MTS (3 -(4,5-dim éthylthiazol-2-y1)-5-(3 -carb oxym éthoxyphény1)-2-(4-sulfophény1)-2Htétrazolium). Ce dernier est réduit par une enzyme mitochondriale et va former un composé de couleur jaune orangée qui est soluble en milieu aqueux. La mesure des 20 densités optiques indique ainsi la quantité de cellules vivantes. Les résultats de la croissance cellulaire ont été déterminés par rapport à un contrôle traité avec uniquement le véhicule (solution dans laquelle sont dilués les analogues). Les résultats obtenus sont représentés à la figure 1. Conclusion : 25 Aucun des composés testés ne présente de cytotoxicité significative sur les cellules humaines LNCaP même à des concentrations très élevées (jusqu'à 10-3 M). Ainsi les analogues M6P testés ne présentent pas de toxicité intrinsèque pour des cellules exprimant le RM6P-CI telles que les cellules LNCaP. 3) Fonctionnalisation de nanoparticules pour la thérapie photodynamique 30 monophotonique 3041345 42 Un composé d'intérêt 0, à savoir des nanoparticules de silice mésoporeuse incorporant un photosensibilisateur de type porphyrine neutre, est ensuite fonctionnalisé en surface avec les analogues : - disaccharidiques phosphonates M6Pn-a(1,2)-Man-EthylSq (19) et carboxylates 5 M6C-a(1,2)-Man-EthylSq (25) ; - monosaccharidiques phosphonate M6Pn-EthylSq et carboxylate M6C-EthylSq. La structure de la porphyrine neutre utilisée pour la thérapie photodynamique est représentée ci-dessous : 10 Préparation des nanoparticules de silice incorporant la porphyrine La porphyrine doit porter un groupement trialkoxysilane qui permettra son incorporation dans le réseau silicique lors du procédé sol-gel décrit ci-après. Pour cela, la porphyrine est mise en réaction avec le 3-mercaptopropyltriméthoxysilane dans le méthanol à température ambiante pendant 12h. 15 Le CTAB (bromure de cétyltriméthylammonium) est dissous dans une solution de soude à 0,2 M. Des micelles vont ainsi se former dans la solution. La porphyrine silylée puis le TEOS (orthosilicate de tétraéthyle) sont ajoutés. Rapidement, le milieu réactionnel est dilué avec un grand volume d'eau afin d'abaisser le pH à 8-8,5 et d'initier la condensation. Après 6 min, le milieu réactionnel est neutralisé à l'aide 20 d'une solution d'HCl à 0,2 M. Les nanoparticules sont obtenues après des étapes de lavages avec du nitrate d'ammonium pour enlever le CTAB contenu dans les pores. Lors de la synthèse des nanoparticules, les temps de réaction ainsi que le pH doivent être contrôlés minutieusement afin de maîtriser la taille des nanoparticules formées. Les nanoparticules ainsi obtenues présentent un diamètre hydrodynamique 25 d'environ 200 nm et contiennent 111.1g de porphyrine par gramme de nanoparticule. Fonctionnalisation de la surface des nanoparticules Ces nanoparticules sont ensuite fonctionnalisées en surface avec les analogues monosaccharidiques carboxylate M6CEthylSq et phosphonate M6PnEthylSq et les 3041345 43 analogues disaccharidiques carboxylate M6C-a(1,2)-Man-EthylSq (25) et phosphonate M6Pn-a(1,2)-Man-EthylSq (19). La fonctionnalisation se déroule en deux temps : la première étape consiste à introduire des fonctions amines sur la surface des nanoparticules qui, dans la seconde 5 étape, viendront substituer le groupement éthoxy présent sur le squarate du bras de l'analogue. Les nanoparticules sont mises en réaction avec de l'aminopropyltriéthoxysilane (APTS) dans un mélange eau/éthanol (2:1). Le pH du milieu réactionnel est ajusté à 6 par ajout d'une solution d'HCl à 0,2 M puis agitée à température ambiante pendant 20 h. Les nanoparticules sont obtenues après plusieurs 10 étapes de lavages à l'éthanol suivis de centrifugations. Pour le couplage des analogues carboxylates (M6CEthylSq et M6C-a(1,2)-ManEthylSq (25)), l'analogue a été dissout dans un mélange éthanol/eau (1:1) en présence des nanoparticules puis la suspension a été chauffée à 50°C pendant 12 h. Il est à noter que de la triéthylamine peut être ajoutée pour maintenir le pH à 8-9 15 et favoriser le couplage des analogues aux nanoparticules. Après des étapes de lavages à l'eau et à l'éthanol, les nanoparticules fonctionnalisées avec les analogues carboxylates sont obtenues. Le couplage (greffage) de l'analogue disaccharidique carboxylate M6C-cc(1,2)- Man-EthylSq (25) avec les nanoparticules de silice incorporant la porphyrine 20 (représentée par une étoile) est représenté ci-dessous : On obtient ainsi un conjugué de formule (III). Le groupement squarate étant observable en UV, le dosage de la quantité de monosaccharides et disaccharides a été réalisé par spectroscopie UV/visible. 25 Le tableau 2 ci-dessous représente la quantité de porphyrine incorporée (en [tg/g) et la quantité de monosaccharide ou disaccharide (en lamol/g) greffé sur les nanoparticules. L'abréviation « MSN » représente les nanoparticules de silice mésoporeuse seules, sans greffage avec le monosaccharide ou le disaccharide. 3041345 44 Les analogues M6CEthylSq, M6C-a(1,2)-Man-EthylSq (25) et M6Pn-a(1,2)- Man-EthylSq (19) greffés avec les nanoparticules de silice mésoporeuse sont représentés par MSN-M6C-EthylSq ; MSN-M6C-a(1,2)-Man-EthylSq et MSNM6Pn-a(1,2)-Man-EthylSq. Ces composés sont des conjugués répondant à la 5 formule générale (III). Tableau 2 Nanoparticules Quantité Quantité de de porphyrine mono- ou di-saccharide (µmol/g) (µmol/g) MSN 11 [tmolig - MSN-M6C-EthylSq 11 [tmolig 351 [tmolig MSN-M6C-a(1,2)-Man-EthylSq 11 [tmolig 329 [tmolig MSN-M6Pn-a(1,2)-Man-EthylSq. 11 [tmolig 167 [tmolig Evaluation in vitro en thérapie photodynamique Les conjugués carboxylates MSN-M6C-EthylSq et MSN-M6C-a(1,2)-Man- 10 EthylSq de formule (III) ont été utilisés dans des expériences de PDT in vitro sur des cellules de cancer de la prostate LNCaP qui surexpriment le RM6P-CI. Les cellules LNCaP ont été incubées avec 80 lag.mL-1 de nanoparticules seules (MSN) ou avec 80 lag.mL-1 de nanoparticules fonctionnalisées avec le mono- ou disaccharide (i.e. avec 80 lag.mL-1 de conjugués MSN-M6C-EthylSq et MSN-M6C- 15 a(1,2)-Man-EthylSq) pendant 3, 6, 9 ou 18 h puis irradiées pendant 20 min avec un laser à 650 nm (3 mW, 11,25 J.cm-2). Le test de survie cellulaire MTS a été effectué 48 h après l'irradiation. Après 3 heures d'incubation, une très légère augmentation de l'effet phototoxique des nanoparticules fonctionnalisées avec les mono- ou di-saccharides est observée. 20 Lorsque le temps d'incubation est augmenté à 6 h on note que la fonctionnalisation par un disaccharide carboxylate apporte une forte amélioration de l'effet phototoxique, avec 73% de mort cellulaire contre 35% pour le monosaccharide carboxylate. Ceci est lié à l'amélioration de la reconnaissance des RM6P-CI conduisant à une internalisation plus rapide des nanoparticules 25 (fonctionnalisées avec un disaccharide) dans les cellules. 3041345 Ces résultats mettent en évidence l'avantage de la fonctionnalisation des nanoparticules avec des analogues disaccharidiques, permettant à la fois de réduire le temps d'incubation et d'augmenter considérablement l'effet phototoxique des nanooutils. 5 En augmentant le temps d'incubation à 9 h la mort cellulaire obtenue pour les cellules traitées avec les nanoparticules fonctionnalisées avec le disaccharide atteint 81% contre 55% avec les nanoparticules fonctionnalisées avec le monosaccharide. Dans le cas d'une incubation pendant 18h une amélioration de l'effet phototoxique est observée pour les nanoparticules fonctionnalisées avec les 10 analogues carboxylates monosaccharidiques par rapport à l'effet de ces mêmes nanoparticules après une incubation de 9h. En revanche l'effet des nanoparticules disaccharidiques n'est pas augmenté à 18h car cet effet est déjà maximal après 9h d'incubation. Les effets phototoxiques des nanoparticules seules (MSN) et fonctionnalisées 15 avec le monosaccharide carboxylate (MSN-M6C-EthylSq) et disaccharide carboxylate (MSN-M6C-a(1,2)-Man-EthylSq) aux différents temps d'incubation sont récapitulés dans la figure 2. Conclusion La fonctionnalisation de nanoparticules avec des dimannosides analogues du M6P 20 permet donc d'augmenter très significativement l'efficacité phototoxique par rapport aux nanoparticules greffées avec les analogues monosaccharidiques tout en réduisant le temps d'incubation. Cette augmentation d'efficacité associée à l'affinité pour le RM6P-CI peut être déterminante pour l'application diagnostique ou thérapeutique des composés d'intérêt 0 (nanoparticules, glycoprotéines, petites molécules, ...) 25 dont la clairance métabolique chez l'homme peut être rapide. 3041345 46 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1. Demande de brevet FR No. 14 50588 déposée le 23/01/14 ; 2. Vidal S et al., Bioorg Med Chem. 10, 4051, (2002); 5 3. Jeanjean A et al., Bioorg Med Chem. 14, 2575, (2006) ; 4. Jeanjean A et al., Bioorg Med Chem Lett. 18, 6240, (2008) ; 5. Demande internationale PCT/EP2010/059507 ; 6. Distler JJ et al., J. Biol Chem, 32, 21687, (1991) ; REVENDICATIONS1. Composé caractérisé en ce qu'il présente la formule générale (I) : -o Pl 0 pl 0 A-L -L1 (I) dans laquelle : - n est un entier allant de 1 à 3, - représente une liaison simple ou une liaison double, - chacun des Pl représente indépendamment l'un de l'autre H, un groupe protecteur acidolabile, basolabile, hydrogénolabile, photolabile, halogénolabile, notamment choisi parmi (CH3)3Si- ; tBuMe2Si- ; C6H5CH2- ; 4-CH30C6H5CH2- ; o- NO2C6H5CH2- ; CH3C0- ; C6H5C0- ou CF3C0- ; O X représente : 00 lorsque est une liaison simple : 000 le groupement phosphonate : zo- P ZO\ CH2 000 le groupement fluoro phosphonate : ZO--peo ZO' CHF 000 le groupement bi-fluoro phosphonate : o zo_pe zo- c2 -4, 000 le groupement carboxylate : zo-ceo cH2 Pl 0 o-o pl() pl 0 3041345 48 000 le groupement malonate : o ZO ZO~C~CH 00 lorsque est une liaison double : 000 le groupement phosphonate : ZO--Deo zoo CH 5 000 le groupement carboxylate : o \CH avec Z représentant indépendamment l'un de l'autre H ; un alkyle en Ci-05 ; 10 CF3CH2- ; C6H5CH2- ; C6H5- ; (CH3)3Si- ; un métal alcalin choisi parmi Na, Li ou K ; un ammonium NH4, 0 A représente un radical divalent choisi parmi -0-, -S-, -NH-, -CH2-, L représente : 00 -H ; -NH2 ; -(CH2).1-CH=CH2 ou -(CH2).1-CCH avec n1 représentant un 15 entier allant de 0 à 4, alors dans chacun de ces cas L1 est absent, 00 un radical hydrocarboné divalent saturé, linéaire ou ramifié, substitué ou non substitué, ayant de 1 à 30 atomes de carbone, un radical hydrocarboné divalent insaturé, linéaire ou ramifié, substitué ou non substitué, ayant de 2 à 30 atomes de carbone, 20 00 un radical hydrocarboné divalent saturé ou insaturé tel que défini ci-dessus dont un ou plusieurs groupements -CH2-, -CH=CH- et/ou -CC- du radical hydrocarboné saturé ou insaturé est (sont) remplacé(s) indépendamment l'un de l'autre par un groupement -O- ; -NH- ; -NRi- avec R1 représentant un alkyle en Ci-C5 ; -S- ; -CO-NH- ; -NH-00-0- ; -0-N=CH- ; -CO-NH-N=CH- ; un système cyclique ou hétérocyclique, saturé ou insaturé, substitué ou non ; 0 L1 représente : -(CH2).1-CH=CH2 ; -(CH2).1-CCH ; -(CH2).1-N3 ; -(CH2).1-SH ; -(CH2).1-NH2 ; -(CH2).1-N=C=0 ; -(CH2).1-N=C=S ; -(CH2).1-NHRi ; -(CH2).1-NR1R2 ; 3041345 49 -(CH2).1-A1-NH2 ; -(CH2).1-A1-NHRi -(CH2).1-A1-NR1R2 -(CH2).1-NHCO-CH2Ha1 ; -(CH2).1-COZi ; -(CH2),1 -AiC OZ' ; -(CH2).1-0-N=CH2 ; -(CH2).1-CO-NH-N=CH2 ; -(CH2).1-H ; un système cyclique ou hétérocyclique, saturé ou insaturé, substitué ou non ; un halogène choisi parmi F, 5 Cl, Br ou I; avec n1 tel que défini ci-dessus, R1 et R2 représentant indépendamment l'un de l'autre un alkyle en C1-05, Al représentant -0-, -NH-, Hal représentant Cl, Br ou I ; 10 Z1 représentant -OH, -NHRi, -NH-NF12, -NH-NHRi, -NH-NR1R2 avec R1 et R2 tels que définis ci-dessus, un halogène choisi parmi F, Cl, Br ou I. 2. Composé selon la revendication 1 caractérisé en ce que : L représente : 15 ° -NH2, -(CH2).1-CH=CH2 ou -(CH2).1-CCH, avec n1 tel que défini à la revendication 1, alors dans chacun de ces cas L1 est absent, 0 un radical hydrocarboné divalent saturé, linéaire ou ramifié, substitué ou non substitué, ayant de 1 à 10 atomes de carbone, un radical hydrocarboné divalent insaturé, linéaire ou ramifié, substitué ou non substitué, ayant de 2 à 10 atomes de 20 carbone, 0 un radical hydrocarboné divalent saturé ou insaturé tel que défini ci-dessus, dont un ou plusieurs groupements -CH2-, -CH=CH- et/ou -CC- du radical hydrocarboné saturé ou insaturé est(sont) remplacé(s) indépendamment l'un de l'autre par : 00 un groupement -0- ; -NH- ; -S- ; -CO-NH- ; -NH-00-0- ; et/ou 25 00 un système cyclique ou hétérocyclique choisi parmi : "--^- 0 2 H 'N> 3041345 50 )1 2ZL(0)., Ir(s)Ç555 N NN cSçç oN)L rsjsses- Ys)L OU o L1 représente : 5 -(CH2).1-CH=CH2 ; -(CH2).1-CCH ; -(CH2).1-N3 ; -(CH2).1-SH ; -(CH2).1-NH2 ; -(CH2).1-N=C=0 ; -(CH2).1-N=C=S ; -(CH2).1-0-NH2 ; -(CH2).1-NHCO-CH2Hal ; -(CH2).1-COOH ; -(CH2).1-COORi ; -(CH2).1-CO-NH-NH2 ; -(CH2).1-H ; un halogène choisi parmi F, Cl, Br ou I ; - un système cyclique ou hétérocyclique choisi parmi : 10 o N I 2C-CH \o/ Y ou , avec n1, R1 et Hal tels que définis à la revendication 1. 3. Composé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que : . le substituant L est choisi parmi : 15 o. -CH=CH2, -CCH ou -NH2 alors dans chacun de ces cas L1 est absent, -CH2- ; CH CH ; (CH 1 - (CH 1 - (CH 1 ; CH CH 0 CH CH - , ___2- , -,___2,3- , -,___2,4- , -,___2,5- , - ___2- ___2- - ___2- ___2- , -(CH2-CH2-0)2-CH2-CH2- ; -CH2-CH2-S-CH2-CH2- ; -CH2-CH2-S-CH2-CH2-0-CH2-CH2-; CHZ CH2 20 CH2- -H2C N-N CHZ CH2- N-N - ...''c1-12 o , cH2 N CH2_ - CH2 H i> o CH2- OU cH2 , et o le substituant L1 est choisi parmi : o. _CH=CH2 ; -CCH ; -N3 ; -SH ; -N1-12 ; -N=C=0 ; -N=C=S ;-O-NH2 ; 3041345 51 -NHCO-CH2C1 ; -COOH ; -COORi ; -CO-NH-1\1E12, un halogène choisi parmi F, Cl, Br ou I, oo un système cyclique ou hétérocyclique choisi parmi : 0 N I 2C-CH \/ Y o OU o , 5 avec R1 tel que défini à la revendication 1 ou 2. 4. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce que le composé de départ utilisé est un composé répondant à la formule (II) : n 10 A -I- -1-1 (II) dans laquelle Pl, A, L, Li et n sont tels que définis à l'une quelconque des revendications 1 à 3. 5. Composé répondant à la formule générale (II) : n 15 A -I- -1-1 (II) dans laquelle Pl, A, L, Li et n sont tels que définis à l'une quelconque des revendications 1 à 3. 6. Conjugué caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (III) : 3041345 52 (III') dans laquelle Pl, X, n, A et L sont tels que définis à l'une quelconque des revendications 1 à 3, L1' représente le substituant Li tel que défini à l'une quelconque des 5 revendications 1 à 3 impliqué dans une liaison covalente avec un groupement fonctionnel porté par un composé d'intérêt 0, ledit composé d'intérêt 0 étant choisi parmi des enzymes, des nanoparticules, des protéines, des anticorps ou des agents cytotoxiques. 10 7. Conjugué selon la revendication 6, caractérisé en ce que ledit conjugué présente une affinité IC50 pour le récepteur du mannose 6-phosphate cation indépendant (RM6P-CI) d'au moins 10-5 M, et de préférence allant de 10-6 à 10-9 M. 8. Conjugué selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce que le composé 15 d'intérêt 0 est une enzyme lysosomale ou une nanoparticule. 9. Conjugué selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, pour son utilisation dans une méthode de traitement thérapeutique du corps humain ou animal, notamment choisie parmi l'enzymothérapie substitutive, la thérapie photodynamique 20 ou le traitement du cancer. 10. Conjugué selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, pour son utilisation dans une méthode de diagnostic, notamment de maladies ou d'affections associées à une augmentation ou une diminution de l'expression du RM6P-CI. 25 11. Utilisation d'au moins un composé de formule (I) tel que défini à l'une quelconque des revendications 2 à 3, pour former au moins une liaison covalente 3041345 53 avec au moins un groupement fonctionnel porté par un composé d'intérêt 0, ledit composé d'intérêt 0 étant choisi parmi des enzymes, des nanoparticules, des protéines, des anticorps ou des agents cytotoxiques. 5 12. Utilisation selon la revendication 11 de n' composé(s) de formule (I) pour former n' liaison(s) covalente(s) avec n' groupement(s) fonctionnel(s) du composé d'intérêt 0, avec n' étant un entier allant de 1 à 1000, et de préférence de 1 à 100. 13. Utilisation selon la revendication 11 ou 12 pour former le conjugué de formule 10 générale (IIIbis) : (IIIbis) dans laquelle Pl, X, n, A, L, L'l et 0 sont tels que définis à la revendication 6, n' est tel que défini à la revendication 12. 15 14. Procédé de préparation d'un conjugué de formule (III) tel que défini à la revendication 6 ou d'un conjugué de formule (IIIbis) tel que défini à la revendication 13, caractérisé en ce que l'on fait réagir : - au moins un groupement fonctionnel porté par un composé d'intérêt 0, ledit composé d'intérêt étant choisi parmi des enzymes, des nanoparticules, des protéines, 20 des anticorps ou des agents cytotoxiques, avec - au moins un composé répondant à la formule (I) : 3041345 54 dans laquelle Pl, X, A et n sont tels que définis à la revendication 1, L et Li sont tels que définis à la revendication 2 ou 3.