FR 3044681 A1 20170609 FR 1561764 A 20151202 1 METHODE D'ISOLEMENT DE CELLULES SOUCHES CANCEREUSES La présente invention concerne le domaine de l'isolement des cellules souches cancéreuses. Le cancer colorectal (CCR) est la troisième maladie la plus fréquente dans le monde. Celle-ci comme tout cancer, peut se résumer par une prolifération cellulaire anormale dans un tissu sain (ici la muqueuse colique) provoquant l'apparition d'une masse tumorale. L'une des hypothèses émises afin d'expliquer la progression tumorale ainsi que les mécanismes de résistance et les récidives repose sur l'existence de cellules souches cancéreuses. L'échappement thérapeutique de la tumeur aux traitements radio- et chimio-thérapeutique dépend de la présence de ces cellules au sein de la tumeur. Par conséquent la détection de ces cellules dans le tissu tumoral constitue un moyen de définir le niveau d'agressivité de la tumeur. La caractérisation de biomarqueurs spécifiques des cellules souches cancéreuses est d'un grand intérêt diagnostique et pronostique dans le traitement du cancer. Cependant, il n'existe pas actuellement de marqueurs spécifiques des cellules souches cancéreuses (CSCs) qui permettent leur discrimination avec certitude des autres cellules tumorales. A cause de leur faible nombre et de l'absence de marqueurs spécifiques, les difficultés majeures pour étudier les CSCs résident dans leur isolement et leur caractérisation. La modification de protéines glycosylées est souvent associée à la progression tumorale et parait ainsi d'un intérêt majeur dans la recherche de marqueurs de surface. Il existe donc un besoin pour une méthode de détection et/ou d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales. La présente invention vient combler ce besoin. La présente invention repose sur la mise en évidence par les Inventeurs que le motif fucose 1-2 galactose exprimé à la surface des cellules souches cancéreuses colorectales permet de détecter et éventuellement d'isoler ces cellules en utilisant une lectine reconnaissant ce motif. Dans un premier aspect, la présente invention concerne l'utilisation, en tant que moyen de marquage, d'une lectine, pour la détection et éventuellement l'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales. Dans un second aspect, la présente invention concerne une méthode de détection et éventuellement d'isolement de cellules souches cancéreuses colorectales comprenant le marquage des cellules souches cancéreuses colorectales avec une lectine. Avantageusement, 3044681 2 la présente invention concerne l'utilisation d'une lectine et au moins un second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales, notamment au moins une seconde lectine reconnaissant l'antigène T, en particulier deux lectines reconnaissant l'antigène T. Dans un troisième aspect, la présente invention concerne un kit comprenant une lectine et un 5 second moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules cancéreuses colorectales. Dans un quatrième aspect, la présente invention concerne une méthode de diagnostic de l'agressivité et/ou du risque de récidive d'un cancer colorectal pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal, comprenant une étape de 10 détection et éventuellement d'isolement des cellules cancéreuses colorectales. Un premier objet de la présente invention concerne l'utilisation, en tant que premier moyen de marquage, d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement Ulex Europaeus Agglutinin 1 (UEA-1) ou Trichosanthes Japonica Agglutinin II (TJA-II), pour la mise en oeuvre d'un procédé de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches 15 cancéreuses colorectales. La présente invention concerne l'utilisation, en tant que premier moyen de marquage, d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement Ulex Europaeus Agglutinin 1 (UEA-1) ou Trichosanthes Japonica Agglutinin II (TJA-II), pour la mise en oeuvre d'un procédé in vitro de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches 20 cancéreuses colorectales, notamment dans un échantillon biologique colorectal. La présente invention concerne également l'utilisation, en tant que premier moyen de marquage, d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement Ulex Europaeus Agglutinin 1 (UEA-1) ou Trichosanthes Japonica Agglutinin II (TJA-II), pour la mise en oeuvre d'un procédé in vivo de détection et éventuellement d'isolement des cellules 25 souches cancéreuses colorectales, notamment sur des modèles animaux ou sur des modèles humains de tumeurs. Au sens de la présente invention, on entend par « moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales » une substance capable de se lier spécifiquement à un marqueur exprimé à la surface des cellules souches cancéreuses colorectales. Le moyen de marquage 30 peut en particulier être un anticorps dirigé contre un déterminant antigénique, tel qu'une glycoprotéine, une protéine ou un glycane. 3044681 3 L'échantillon biologique colorectal peut notamment être une biopsie tumorale prélevée chez un patient atteint d'un cancer colorectal ou une biopsie prélevée chez un patient suspecté d'avoir un tel cancer. L'échantillon biologique tumoral peut également être une lignée cellulaire cancéreuse 5 colorectale ou une tumeur induite chez un animal par injection de lignées cellulaires cancéreuses, par exemple chez la souris ou le rat. La lignée cellulaire est de préférence une lignée cellulaire cancéreuse colorectale. Selon ce mode de réalisation, la tumeur induite contient des cellules souches cancéreuses colorectales qui sont avantageusement isolées des autres cellules de la tumeur afin d'être étudiées. 10 Au sens de la présente invention, on entend par « détection » le fait d'identifier par des méthodes spectroscopiques la présence de cellules souches cancéreuses colorectales au sein d'un tissu colorectal. Au sens de la présente invention, on entend par « isolement » le fait d'obtenir une population de cellules enrichie en cellules souches cancéreuses colorectales à partir d'une tumeur 15 colorectale. Le terme « enrichi » désigne au sens de la présente invention une population de cellules dans laquelle le rapport nombre de cellules souches cancéreuses / nombre total de cellules est d'au moins 4, avantageusement d'au moins 6, de préférence d'au moins 8 et de manière particulièrement préférée au moins 9 tel que déterminé par le rapport cellules Epcam high + / cellules Epcam high - par cytométrie en flux. 20 Actuellement, le produit de référence pour l'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales est constitué de billes magnétiques sur lesquelles sont greffés des anticorps antiCD133 commercialisé par Miltenyi Biotec. Les Inventeurs de la présente invention ont mis en évidence qu'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose était plus efficace pour isoler les cellules souches cancéreuses colorectales que ce système. 25 Il a également été mis en évidence par les Inventeurs que les cellules pouvaient être enrichies de manière particulièrement efficace en associant une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose et un second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales. La présente invention concerne donc également l'utilisation d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose et d'un second moyen de marquage des cellules souches 30 cancéreuses colorectales pour la détection et éventuellement l'isolement des cellules souches cancéreuses dans un échantillon biologique colorectal. 3044681 4 Le second moyen de marquage est au sens de la présente invention une substance reconnaissant de manière spécifique un ou plusieurs marqueurs exprimé à la surface des cellules souches cancéreuses. Il peut notamment s'agir d'un anticorps. On peut citer, à titre d'exemple de marqueurs des cellules souches cancéreuses colorectales, 5 CD133, CD44, CD166 (ALCAM), CD24, CD26, CD29, EpCAM, Oct-4 et Sox-2. De préférence, le second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales est une lectine reconnaissant l'antigène T ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T. De manière avantageuse, ladite lectine reconnaissant l'antigène T est choisie dans le groupe 10 constitué de Agaricus Bisporus Agglutinin (ABA), Amaranthus Caudatus Agglutinin (ACA) et Jacaline. Le second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales peut également être un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, notamment choisi dans le groupe constitué de ABA et ACA ; ABA et Jacaline ; et Jacaline et ACA, avantageusement Jacaline 15 et ACA. Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne l'utilisation d'un mélange de deux lectines choisi dans le groupe constitué de UEA-1 et ABA ; TJA-II et ABA ; UEA-1 et ACA ; TJA-II et ACA ; UEA-1 et Jacaline ; et TJA-II et Jacaline. Dans un autre mode de réalisation, la présente invention concerne l'utilisation d'un mélange 20 de trois lectines choisi dans le groupe constitué de UEA-1, ABA et ACA ; TJA-II, ABA et ACA ; UEA-1, ABA et Jacaline ; TJA-II, ABA et Jacaline ; UEA-1, Jacaline et ACA ; TJAII, Jacaline et ACA, avantageusement UEA-1, ABA et Jacaline ; et UEA-1, Jacaline et ACA, de préférence UEA-1, Jacaline et ACA pour la mise en oeuvre d'un procédé de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales dans un échantillon 25 biologique colorectal. Avantageusement, le mélange de trois lectines est constitué d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose : Jacaline : ABA ou ACA, dans un rapport molaire de 625 à 12500: 16 à 320: 1 à 20, avantageusement de 5000 à 7000: 50 à 250: 5 à 15, notamment de 6250: 160: 10. 3044681 5 Dans un mode de réalisation particulier, les lectines sont UEA-1, Jacaline et ACA, avantageusement dans un rapport molaire 625 à 12500 : 16 à 320 : 1 à 20, avantageusement de 5000 à 7000: 50 à 250: 5 à 15, de préférence de 6250: 160: 10. Afin de détecter et éventuellement isoler les cellules souches cancéreuses colorectales, la ou 5 les lectines sont liées directement ou indirectement à un moyen de détection et éventuellement d'isolement desdites cellules. Par « moyen de détection et éventuellement d'isolement », on entend au sens de la présente invention une substance ou un groupe de substances permettant d'identifier les moyens de marquage liés aux cellules souches cancéreuses colorectales. Ledit moyen de détection est par 10 exemple un fluorophore, un chromophore, ou des billes magnétiques. Lorsque l'on souhaite isoler les cellules souches cancéreuses colorectales, on utilise de préférence un fluorophore ou des billes magnétiques. Ledit moyen de détection et éventuellement d'isolement peut être lié directement ou indirectement à la ou aux lectines. 15 Par « lié directement », on entend au sens de la présente invention que le moyen de détection et éventuellement d'isolement est lié de manière covalente au moyen de marquage. Par « lié indirectement », on entend au sens de la présente invention que le moyen de détection est lié à une seconde substance, la seconde substance étant capable de reconnaitre spécifiquement le moyen de marquage et de former avec lui une liaison suffisamment forte 20 pour détecter et éventuellement isoler les cellules souches cancéreuses colorectales. Le moyen de détection et éventuellement d'isolement peut être notamment un système streptavidine / biotine. Dans un mode de réalisation, le moyen de détection et éventuellement d'isolement est constitué de biotine liée de manière covalente à la ou les lectines et de billes magnétiques sur 25 lesquelles est greffée de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps anti-biotine. La présente invention concerne donc l'utilisation d'une lectine biotinylée reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, d'une première lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T, d'une deuxième lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T et de billes magnétiques sur lesquelles sont greffées de la streptavidine pour la mise en oeuvre d'un procédé de détection et 30 éventuellement d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales. Avantageusement, lesdites lectines sont avantageusement UEA-1, Jacaline et ABA ou ACA, de préférence dans 3044681 6 un rapport variant de 625 à 12500: 16 à 320: 1 à 20, avantageusement de 5000 à 7000: 50 à 250 : 5 à 15, notamment de 6250: 160: 10. Dans un autre mode de réalisation, le moyen de détection et éventuellement d'isolement est un fluorophore. Le fluorophore peut être lié de manière covalente à la ou les lectines ou 5 conjugué à de la streptavidine, à de l'avidine ou à un anticorps anti-biotine et la ou les lectines sont biotinylées. Le fluorophore peut être tout fluorophore susceptible d'être utilisé pour la cytométrie en flux. De tels fluorophores sont disponibles dans le commerce. Il s'agit par exemple d'Alexa fluor 350, 405, 430, 488, 500, 514, 532, 546, 555, 568, 594, 610, 633, 647, 660, 680, 700, 750 ou 10 790, l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC), la Rhodamine, l'allophycocyanine (APC) et la Phycoérythrine (PE). Avantageusement, le fluorophore est Alexa fluor 488, Alexa fluor 594 ou Alexa fluor 633. La présente invention concerne donc l'utilisation d'une lectine biotinylée reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, d'une première lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T, 15 d'une deuxième lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T et d'un fluorophore conjugué à de l'avidine, de la streptavidine ou un anticorps anti-biotine pour la mise en oeuvre d'un procédé de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales. Avantageusement, lesdites lectines sont UEA-1, Jacaline et ABA ou ACA, de préférence dans un rapport variant de 625 à 12500 : 16 à 320 : 1 à 20, avantageusement de 20 5000 à 7000 : 50 à 250 : 5 à 15, notamment de 6250: 160: 10. La présente invention concerne donc également l'utilisation d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, d'une première lectine reconnaissant l'antigène T, d'une deuxième lectine reconnaissant l'antigène T, lesdites lectines étant conjuguées à un fluorophore, pour la mise en oeuvre d'un procédé de détection et éventuellement d'isolement 25 des cellules souches cancéreuses colorectales. Avantageusement, lesdites lectines sont UEA- 1, Jacaline et ABA ou ACA, de préférence dans un rapport variant de 625 à 12500: 16 à 320 : 1 à 20, avantageusement de 5000 à 7000: 50 à 250: 5 à 15, notamment de 6250: 160: 10. L'étude des cellules souches cancéreuses à des fins de recherche et de diagnostique représente aujourd'hui une nécessité, en particulier pour mettre en évidence de nouvelles substances 30 capables d'agir contre ces cellules. L'étude de ces cellules est également particulièrement utile dans le cadre de la médecine personnalisée. 3044681 7 Avantageusement, la présente invention concerne donc l'utilisation telle que décrite ci-dessus, pour l'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales. La détection des cellules souches cancéreuses colorectales, en particulier leur quantification, permet d'évaluer le également d'évaluer les risques de progression d'une tumeur. La présente 5 invention concerne donc également l'utilisation d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose et éventuellement d'au moins une lectine reconnaissant l'antigène T dans les conditions décrites ci-dessus, pour le diagnostic in vitro du risque de récidive et/ou de l'agressivité d'un cancer colorectal pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal. 10 Un deuxième objet de la présente invention concerne un procédé in vitro de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales (I), comprenant l'étape de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales d'un échantillon biologique colorectal avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement UEA-1 ou TJA-II. 15 Le procédé selon la présente invention comprend, en tant qu'étape principale, le marquage des cellules souches cancéreuses colorectales avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose ou le marquage des cellules souches cancéreuses colorectales avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose et au moins une lectine reconnaissant l'antigène T. 20 La présente invention concerne également un procédé in vitro de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales (Ia), comprenant les étapes de : (a) marquage des cellules souches cancéreuses colorectales avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, pour obtenir un échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses colorectales sont 25 marquées, (b) mise en contact de l'échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses sont marquées avec un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules, (c) détection des cellules souches cancéreuses colorectales, 30 (d) éventuellement isolement des cellules souches cancéreuses colorectales. Dans un mode de réalisation, le procédé selon la présente invention est mis en oeuvre pour isoler les cellules souches cancéreuses colorectales. Cette étape d'isolement permet en 3044681 8 particulier d'étudier les cellules souches cancéreuses colorectales détectées dans un échantillon tumoral colorectal afin, par exemple, de découvrir de nouveaux traitements capables d'éliminer ces cellules souches cancéreuses fréquemment à l'origine de récidives et de métastases. 5 La présente invention concerne donc également un procédé in vitro de détection et d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales (1b), comprenant les étapes de : (a) marquage des cellules souches cancéreuses colorectales avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, pour obtenir un échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses colorectales sont 10 marquées, (b) mise en contact de l'échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses sont marquées avec un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules, (c) détection des cellules souches cancéreuses colorectales, 15 (d) isolement des cellules souches cancéreuses colorectales. L'échantillon biologique colorectal peut en particulier être une biopsie tumorale obtenue préalablement sur un patient atteint d'un cancer colorectal. L'échantillon biologique peut également être une biopsie d'un tissu colorectal chez un patient suspecté d'être atteint d'un cancer colorectal. L'échantillon biologique tumoral peut également être une lignée cellulaire 20 cancéreuse colorectale ou une tumeur induite chez un animal par injection de lignées cellulaires cancéreuses, par exemple chez la souris ou le rat, notamment une lignée cellulaire humaine. Avant le marquage des cellules souches cancéreuses colorectales à l'étape (a), les cellules sont avantageusement dissociées les unes des autres. Cette dissociation des cellules peut être 25 réalisée selon des procédures conventionnelles, par exemple en utilisant une ou plusieurs enzymes capables de séparer les cellules les unes des autres sans altérer les glycanes exprimés à la surface des cellules, en particulier le motif fucose a 1-2 galactose et l'antigène T. La dissociation des cellules peut par exemple être mise en oeuvre avec le mélange Liberase® commercialisé par la société Roche Diagnostic. 30 La présente invention concerne donc un procédé (I), (1a) ou (1b) comprenant une étape de dissociation des cellules les unes des autres avant l'étape (a) de marquage. 3044681 9 Dans un mode de réalisation, l'étape de marquage (a) est mise en oeuvre avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose en tant que premier moyen de marquage et un second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales, avantageusement une lectine reconnaissant l'antigène T ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T. 5 La ou les lectines reconnaissant l'antigène T sont avantageusement choisies dans le groupe constitué de ABA, Jacaline et ACA. Avantageusement, l'étape (a) de marquage est mise en oeuvre avec un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, notamment choisi dans le groupe constitué de ABA et ACA ; ABA et Jacaline ; et Jacaline et ACA, avantageusement Jacaline et ACA. 10 La présente invention concerne donc un procédé (I), (Ia) ou (Ib) tel que décrit ci-dessus, dans lequel l'étape de marquage (a) est mise en oeuvre avec un mélange de lectines choisi dans le groupe constitué de UEA-1, ABA et ACA ; ABA et ACA ; UEA-1, ABA et Jacaline ; ABA et Jacaline ; UEA-1, Jacaline et ACA ; Jacaline et ACA, avantageusement UEA-1, ABA et Jacaline ; et UEA-1, Jacaline et ACA, de préférence UEA- 15 1, Jacaline et ACA. De manière avantageuse, l'étape de marquage (a) est mise en oeuvre avec un mélange lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose : Jacaline : ABA ou ACA dans un rapport molaire variant de 625 à 12500: 16 à 320: 1 à 20, avantageusement de 5000 à 7000: 50 à 250 : 5 à 15, notamment de 6250 : 160 : 10. De préférence, le mélange de lectines est 20 constitué de UEA-1 : Jacaline : ABA ou ACA, dans un rapport molaire variant de 625 à 12500: 16 à 320: 1 à 20, avantageusement de 5000 à 7000: 50 à 250: 5 à 15, notamment de 6250: 160: 10, en particulier avec un mélange UEA-1, Jacaline et ACA dans un rapport molaire 6250: 160: 10. A l'étape (b), l'échantillon biologique est mis en contact avec un moyen de détection et 25 éventuellement d'isolement tel que défini ci-dessus, c'est-à-dire des billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps anti-biotine, la ou les lectines étant biotinylées, d'un fluorophore lié de manière covalente à la lectine, ou d'un fluorophore conjugué à de la streptavidine, à de l'avidine ou à un anticorps anti-biotine, la ou les lectines étant biotinylées, le fluorophore étant tel que défini ci-dessus. 30 Les étapes (c) de détection et éventuellement (d) d'isolement des cellules sont avantageusement mises en oeuvre avec des techniques conventionnelles de détection et 3044681 10 éventuellement d'isolement des cellules telles que la cytométrie en flux ou le tri cellulaire magnétique. Dans le procédé tel que décrit ci-dessus dans lequel l'étape (a) est mise en oeuvre avec un mélange de lectines, les cellules souches sont avantageusement marquées simultanément par 5 la lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose et la ou les lectines reconnaissant l'antigène T. Dans un autre mode de réalisation, le marquage des cellules souches cancéreuses colorectales dans l'échantillon biologique avec la lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose et la lectine reconnaissant l'antigène T ou le mélange de lectines reconnaissant l'antigène T est 10 mis en oeuvre de manière séquentielle. Dans ce mode de réalisation, le procédé selon la présente invention comprend donc les étapes de : (a) marquage des cellules souches cancéreuses colorectales avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, pour obtenir un échantillon dans 15 lequel les cellules souches cancéreuses colorectales sont marquées par la lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, (b) détection et isolement des cellules marquées par la lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, (c) marquage des cellules souches cancéreuses colorectales isolées avec un second 20 moyen de marquage, de préférence une lectine reconnaissant l'antigène T ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, (d) détection des cellules souches cancéreuses marquées par la lectine ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, (e) isolement des cellules souches cancéreuses colorectales. 25 Dans cet autre mode de réalisation, l'étape d'isolement des cellules souches cancéreuses marquées par la lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose (b) peut être suivie d'une étape d'amplification cellulaire. Ainsi, après l'isolement des cellules, celles-ci peuvent être mises en culture dans un milieu permettant d'augmenter la quantité de cellules souches cancéreuses colorectales avant d'être soumises à un marquage avec un second moyen de 30 marquage, avantageusement une lectine reconnaissant l'antigène T ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T. L'étape (c) peut, elle-aussi, être suivie d'une étape d'amplification 3044681 11 cellulaire avant les étapes (d) et (e) de détection et d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales. Lorsque le second moyen de marquage est un mélange de lectines, l'étape (c) peut être mise en oeuvre avec une première lectine reconnaissant l'antigène T, les cellules marquées isolées 5 peuvent être éventuellement soumises à une étape d'amplification cellulaire, puis les cellules isolées peuvent être marquées avec une seconde lectine reconnaissant l'antigène T. Les Inventeurs ont mis en évidence qu'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, notamment UEA-1, éventuellement en présence d'une lectine reconnaissant l'antigène T ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, permet de détecter de 10 manière particulièrement efficace les cellules souches cancéreuses colorectales mais aussi de les isoler. La présente invention est particulièrement adaptée pour l'étude des cellules souches cancéreuses colorectales à des fins de recherche, par exemple pour l'étude de ces cellules dans une lignée cellulaire cancéreuse colorectale ou une tumeur induite chez un animal par 15 injection de lignées cellulaires cancéreuses, notamment humaines, par exemple chez la souris ou le rat. La présente invention est également particulièrement adaptée pour une application diagnostique chez les patients atteints d'un cancer colorectal, notamment dans le suivi de la maladie et/ou du traitement. 20 Les cellules souches cancéreuses colorectales sont en effet une population de cellules particulières qui, en raison de leur résistance aux traitements de chimiothérapie, conduisent à la reformation de la tumeur et à la récidive tumorale. La présente invention permet donc, en permettant la détection des cellules souches cancéreuses colorectales, d'évaluer le risque de récidive du cancer colorectal. 25 La détection et la quantification des cellules souches cancéreuses colorectales dans un tissu tumoral permettent également de déterminer l'agressivité du cancer et sa capacité à se développer. La détection et la quantification des cellules souches cancéreuses colorectales s'inscrit également dans une démarche de médecine personnalisée. La détection des cellules souches 30 cancéreuses colorectales dans l'échantillon biologique permet notamment d'évaluer la valeur pronostique du traitement et si nécessaire, d'adapter le traitement. 3044681 12 Un quatrième objet de la présente invention concerne donc également une méthode de diagnostic in vitro du risque de récidive du cancer colorectal et/ou de l'agressivité d'un cancer colorectal pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal, comprenant l'étape de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales 5 d'un échantillon biologique colorectal avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement UEA-1 ou TJA-II, ou d'un kit comprenant une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose tel que défini précédemment. La présente invention concerne plus particulièrement une méthode de diagnostic in vitro du risque de récidive du cancer colorectal et/ou de l'agressivité d'un cancer colorectal pour 10 définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal comprenant les étapes de : 20 15 (a) (b) détection et éventuellement quantification des cellules souches (c) cancéreuses (d) marquage des cellules souches cancéreuses colorectales avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, en tant que premier moyen de marquage, pour obtenir un échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses sont marquées, mise en contact de l'échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses sont marquées avec un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules, colorectales, déduction du risque de récidive du cancer colorectal et/ou de l'agressivité du cancer colorectal pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal à partir de la présence et éventuellement de la quantité de cellules souches cancéreuses colorectales. 25 L'étape (a) peut être mise en oeuvre avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose seule ou en présence d'un second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales tel que défini ci-dessus, avantageusement une lectine reconnaissant l'antigène T, notamment choisie dans le groupe constitué de ABA, Jacaline et ACA ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, notamment choisi dans le groupe constitué de 30 ABA et ACA ; ABA et Jacaline ; et Jacaline et ACA, avantageusement Jacaline et ACA. La présente invention concerne en particulier une méthode de diagnostic in vitro du risque de récidive du cancer colorectal et/ou de l'agressivité d'un cancer colorectal pour définir une 3044681 13 valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal, dans laquelle l'étape de marquage des cellules souches cancéreuses est mise en oeuvre avec un mélange de lectines choisi dans le groupe constitué de UEA-1, ABA et ACA ; TJA-II, ABA et ACA ; UEA-1, Jacaline et ABA ; TJA-II, Jacaline et ABA ; UEA-1, Jacaline et ACA ; TJA-II, 5 Jacaline et ACA, avantageusement UEA-1, Jacaline et ABA ; et UEA-1, Jacaline et ACA, de préférence UEA-1, Jacaline et ACA. Avantageusement, le rapport molaire lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose : Jacaline : ABA ou ACA varie de 625 à 12500 : 16 à 320: 1 à 20, avantageusement 5000 à 7000: 50 à 250: 5 à 15, notamment dans un rapport molaire 6250: 160: 10. 10 De manière plus avantageuse, les lectines sont UEA-1 : Jacaline : ABA ou ACA, dans un rapport molaire de 625 à 12500: 16 à 320: 1 à 20, avantageusement 5000 à 7000: 50 à 250 : 5 à 15, notamment dans un rapport molaire 6250: 160: 10. Dans un mode de réalisation préféré, les lectines sont UEA-1, Jacaline et ACA dans un rapport molaire 6250 : 160 : 10. 15 Dans un mode de réalisation, la ou les lectines sont liées à un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales tel que défini ci-dessus. La présente invention concerne en particulier une méthode de diagnostic in vitro du risque de récidive du cancer colorectal et/ou de l'agressivité d'un cancer colorectal pour définir une 20 valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal dans laquelle le moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules est choisi dans le groupe constitué de billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps anti-biotine, la ou les lectines étant biotinylées ; un fluorophore lié de manière covalente à la ou les lectines ; ou un fluorophore conjugué à de la streptavidine, de l'avidine 25 ou un anticorps anti-biotine, la ou les lectines étant biotinylées. La présente méthode de diagnostic peut notamment être mise en oeuvre en utilisant pour l'étape de détection (c) et éventuellement d'isolement des cellules (d) la cytométrie en flux, le tri cellulaire magnétique ou l'immunohistochimie. Lorsque la méthode de détection et éventuellement d'isolement des cellules est la cytométrie en flux, le fluorophore conjugué à 30 de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps anti-biotine est avantageusement Alexa Fluor 488 ou Alexa Fluor 633. Lorsque la méthode de détection et éventuellement d'isolement des 3044681 14 cellules est l'immunohistochimie, le fluorophore conjugué à de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps anti-biotine est avantageusement Alexa Fluor 488 ou Alexa Fluor 594. Un quatrième objet de la présente invention concerne un kit, notamment destiné à la détection et éventuellement l'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales, comprenant en 5 tant que premier moyen de marquage une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement UEA-1 ou TJA-II, et un second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales. Avantageusement, le second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales est une lectine reconnaissant l'antigène T ou un mélange de lectines 10 reconnaissant l'antigène T, notamment choisie dans le groupe constitué de ABA, Jacaline et ACA. Dans un mode de réalisation, le kit selon l'invention comprend, en tant que second moyen de marquage, un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, choisi dans le groupe constitué de ABA et ACA ; ABA et Jacaline ; et Jacaline et ACA, avantageusement Jacaline et ACA. 15 La présente invention concerne donc avantageusement un kit comprenant des lectines choisi parmi UEA-1, ABA et ACA ; ABA et ACA ; UEA-1, ABA et Jacaline ; ABA et Jacaline ; UEA-1, Jacaline et ACA ; Jacaline et ACA, avantageusement UEA-1, ABA et Jacaline ; et UEA-1, Jacaline et ACA, de préférence UEA-1, Jacaline et ACA. Les lectines du kit selon l'invention peuvent être dans des récipients indépendants pour être 20 combinées au moment de leur utilisation, ou combinées dans un seul récipient prêt à l'emploi. Lorsque les lectines sont combinées dans un seul récipient prêt à l'emploi, le mélange de lectines est avantageusement constitué d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose : Jacaline : ABA ou ACA, dans un rapport molaire de 625 à 12500 : 16 à 320 : 1 à 20, avantageusement 5000 à 700: 50 à 250: 5 à 15, notamment dans un rapport 6250: 160 : 25 10. Avantageusement, le mélange de lectines combinées dans un seul récipient prêt à l'emploi est avantageusement constitué d'UEA-1 : Jacaline : ABA ou ACA, dans un rapport molaire de 625 à 12500: 16 à 320: 1 à 20, avantageusement 5000 à 700: 50 à 250: 5 à 15, notamment dans un rapport molaire 6250 : 160 : 10. 3044681 15 Dans un mode de réalisation avantageux, la présente invention concerne un kit comprenant un mélange UEA-1 : Jacaline : ABA ou ACA, combinées dans un seul récipient prêt à l'emploi, dans un rapport molaire 6250 : 160 : 10. Le kit selon la présente invention peut avantageusement contenir un moyen de détection et 5 éventuellement d'isolement des cellules tel que défini ci-dessus. Le moyen de détection est donc en particulier constitué de billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps anti-biotine, la ou les lectines étant alors biotinylées ; d'un fluorophore lié de manière covalente à la lectine ; ou d'un fluorophore conjugué à de la streptavidine, à de l'avidine ou à un anticorps anti-biotine, la ou les lectines 10 étant alors biotinylées. Avantageusement, le fluorophore est tout fluorophore susceptible d'être utilisé pour la cytométrie en flux, avantageusement Alexa Fluor 488 ou Alexa Fluor 633. La présente invention concerne donc également un kit A comprenant : - une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, 15 - une première lectine reconnaissant l'antigène T, - une deuxième lectine reconnaissant l'antigène T, - un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules. lesdites lectines étant avantageusement UEA-1, Jacaline et ABA ou ACA, dans un rapport molaire de 625 à 12500 : 16 à 320 : 1 à 20, avantageusement 5000 à 700 : 50 à 250 : 5 à 15, 20 notamment dans un rapport molaire 6250: 160: 10. La présente invention concerne dans un premier mode de réalisation particulier, un kit Al comprenant : - une lectine biotinylée reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, - une première lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T, 25 - une deuxième lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T, - un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules constitué de billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps anti-biotine, lesdites lectines étant avantageusement UEA-1, Jacaline, ABA ou ACA dans un rapport 30 molaire de 625 à 12500 : 16 à 320 : 1 à 20, avantageusement 5000 à 700 : 50 à 250 : 5 à 15, notamment dans un rapport molaire 6250 : 160 : 10. 3044681 16 Avantageusement, le kit est un kit Al-1 comprenant : - UEA-1 biotinylée, - ABA biotinylée ou ACA biotinylée, avantageusement ACA biotinylée, - Jacaline biotinylée, 5 - des billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps anti-biotine. Lesdites lectines dans le kit Al-1 peuvent être combinées dans un seul récipient prêt à l'emploi, dans un rapport molaire UEA-1 biotinylée : Jacaline biotinylée : ABA biotinylée ou ACA biotinylée de 625 à 12500: 16 à 320: 1 à 20, avantageusement 5000 à 7000: 50 à 250 : 10 5 à 15, notamment dans un rapport molaire 6250: 160: 10. La présente invention concerne également, dans un second mode de réalisation particulier, un kit A2 comprenant : - une lectine biotinylée reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, - une première lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T, 15 - une deuxième lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T, - un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules constitué d'un fluorophore conjugué à de la streptavidine, à de l'avidine ou à un anticorps antibiotine. Le fluorophore peut être tout fluorophore susceptible d'être utilisé pour la cytométrie en flux. 20 De tels fluorophores sont disponibles dans le commerce. Il s'agit par exemple d'Alexa fluor 350, 405, 430, 488, 500, 514, 532, 546, 555, 568, 594, 610, 633, 647, 660, 680, 700, 750 ou 790, l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC), la Rhodamine, l'allophycocyanine (APC) et la Phycoérythrine (PE). Avantageusement, le fluorophore est Alexa fluor 488, Alexa fluor 594 ou Alexa fluor 633. 25 Avantageusement, le kit est un kit A2-1 comprenant : - UEA-1 biotinylée, - Jacaline biotinylée, - ABA biotinylée ou ACA biotinylée, avantageusement ACA biotinylée, - un fluorophore conjugué à de la streptavidine, à de l'avidine ou à un anticorps anti- 30 biotine, 3044681 17 Lesdites lectines peuvent être combinées dans un seul récipient prêt à l'emploi, dans un rapport molaire UEA-1 biotinylée : Jacaline biotinylée : ABA biotinylée ou ACA biotinylée de 625 à 12500: 16 à 320: 1 à 20, avantageusement 5000 à 7000: 50 à 250: 5 à 15, notamment dans un rapport molaire 6250 : 160 : 10. 5 Le kit peut également être un kit A3, comprenant : - une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, conjuguée à un fluorophore, notamment tel que défini ci-dessus, - une première lectine reconnaissant l'antigène T, conjuguée à un fluorophore, notamment tel que défini ci-dessus, 10 - une deuxième lectine reconnaissant l'antigène T, conjuguée à un fluorophore, notamment tel que défini ci-dessus. Avantageusement, le kit est un kit A3-1 comprenant : - UEA-1 conjuguée à un fluorophore, notamment tel que défini ci-dessus - Jacaline conjuguée à un fluorophore, notamment tel que défini ci-dessus. 15 - ABA ou ACA conjuguée à un fluorophore, notamment tel que défini ci-dessus, Lesdites lectines peuvent être combinées dans un seul récipient prêt à l'emploi, dans un rapport molaire UEA-1 conjuguée à un fluorophore : Jacaline conjuguée à un fluorophore : ABA conjuguée à un fluorophore ou ACA conjuguée à un fluorophore de 625 à 12500: 16 à 320: 1 à 20, avantageusement 5000 à 7000: 50 à 250: 5 à 15, notamment dans un rapport 20 molaire 6250 : 160: 10. La présente invention concerne également l'utilisation d'un kit tel que défini ci-dessus, pour la mise en oeuvre d'un procédé de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales. La présente invention concerne également l'utilisation d'un kit tel que défini ci-dessus, pour 25 le diagnostic in vitro du risque de récidive et/ou de l'agressivité d'un cancer colorectal pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal. DESCRIPTION DES FIGURES : La Figure 1 montre les résultats de la séparation de cellules souches cancéreuses sur un 30 échantillon de cellules de la lignée HT29 avec des billes magnétiques sur lesquelles est greffé un anticorps anti-CD133 (T-AC133), avec le kit commercialisé par la société Miltenyi Biotec 3044681 18 (CD133 MicroBead Kit) via le marqueur CD133 (prominin-1) glycosylé, avec des billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine et UEA-1 biotinylée (Lectine UEA1), avec le mélange UEA-1 / Jacaline / ABA (Mix 1) et avec le mélange UEA-1 / Jacaline / ACA (Mix 2). 5 La Figure 2 montre le ratio Epcam High + / Epcam high - après tri cellulaire avec UEA-1 seule, deux lectines, ou un mélange de trois lectines UEA-1 : Jacaline : ACA en proportions équimolaires (Mix 2) ou un mélange UEA-1 : Jacaline : ACA, dans un rapport molaire 6250 : 160: 10. La Figure 3 montre les résultats du tri cellulaire avec des billes magnétiques sur différentes 10 lignées de cellules cancéreuses colorectales avec le mélange UEA-1 / Jacaline / ABA (Mix 1S) et avec le mélange UEA-1 / Jacaline / ACA (Mix 2S). La Figure 4 montre les résultats d'un test de clonogénicité à partir de cellules non triées (T-), triées avec le kit Miltenyi Biotec AC133 (T-AC133), avec un mélange UEA-1 / Jacaline / ABA (Mix 1) ou un mélange UEA-1 / Jacaline / ACA (Mix2). L'axe des ordonnées est 15 exprimé en pixe12. La Figure 5 montre les résultats de la croissance tumorale in vivo après greffe de cellules non triées (T-, losanges), de cellules isolées avec UEA-1 / Jacaline / ACA (carrés) et de cellules de la fraction « négative » du tri (cellules cancéreuses non-souches, triangles) dans des souris Nude . Les résultats sont exprimés en volume (axe des ordonnées) en fonction du temps (en 20 jours). EXEMPLES : Exemple 1 : Protocole d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales I. Matériels requis 25 Réactifs et matériel Mix biotinylé marquant spécifiquement les Cellules Souches Cancéreuses du Cancer Colorectal (préparé à partir des lectines individuelles Vector Laboratories Kit CELLection Biotin Binder (Invitrogen) - Aimant 30 Tampons 3044681 19 Versène (Invitrogen) Tampon 1 : PBS (Phosphate Buffer Saline sans Ca2+ et Mg2+) avec 0 .1% BSA (Bovine Serum Albumine), pH 7.4 Tampon 2 : PBS (Phosphate Buffer Saline sans Ca2+ et Mg2+) avec 0 .1% BSA (Bovine 5 Serum Albumine) et 0.6% de citrate de sodium Tampon 3 : RPMI 1640 avec 1% de FCS (Fetal Calf Serum), 1mM CaC12 et 5mM de MgC12, pH 7.0-7.4. II. Durée de l'expérimentation - 20 min pour préparer les cellules 10 - 20 min pour marquer les cellules - 20 min pour incuber les cellules marquées avec les billes - 10 min pour récupérer la suspension non enrichie en CSCs - 15 min pour casser la liaison CSCs/billes - 5 min pour récupérer la suspension enrichie en CSCs d'intérêt 15 - TOTAL : 1h30 III. Mode opératoire par tri magnétique : 1. Préparation des cellules. Les cellules sont décollées de leur support avec du Versène pendant 10 min à 37°C. 2. Les cellules sont comptées et le nombre de cellules est ajusté à 1.107. 20 3. La suspension cellulaire est centrifugée à 300g pendant 10 min puis le surnageant est éliminé. 4. Blocage des sites aspécifiques. lmL de Tampon 2 est ajouté. 5. Marquage des cellules. 841 de Mix est ajouté et le mélange incubé 10 min à 4°C. 6. 5001.it de Tampon 2 est ajouté afin de laver les cellules et la suspension est centrifugée à 25 300g pendant 10 min et le surnageant est éliminé. 7. Billes. Les cellules sont resuspendues dans lmL de Tampon 2 puis 251.11, de billes préalablement lavées sont ajoutées et resuspendues à l'aide de Tampon 1. Le mélange est incubé 20 min à 4°C sous agitation douce. 3044681 20 8. Récupération de la suspension NON enrichie en CSCs. Le tube est alors placé sur l'aimant pendant 2 min puis le surnageant retiré, en le conservant dans un falcon, ceci alors que le tube est encore en place sur l'aimant. 9. Le tube est retiré de l'aimant, lmL de Tampon 1 est ajouté, le tube est agité par vortex et 5 replacé sur l'aimant pendant 2 min avant de conserver de nouveau le surnageant dans le même falcon qu'à l'étape 8. Cette étape est répétée deux fois. 10. Les cellules encore liées aux billes sont resuspendues à l'aide de 200111 de Tampon 3 préchauffé à 37°C. 41.it de tampon de coupure de la liaison cellules/billes constitué de DNaseI sont ajoutés. Ce mélange est incubé 15 min à température ambiante sous agitation douce. 10 11. La suspension est agitée avec une pipette vigoureusement 5 à 10 fois afin de faciliter la libération des cellules. 12. Récupération de la suspension enrichie en CSCs. Le tube est placé sur l'aimant pendant 2 min et le surnageant contenant les cellules d'intérêt transféré dans un tube contenant 200pt de tampon 3 préchauffé à 37°C. Les étapes 11 et 12 peuvent être répétées une nouvelle fois 15 afin d'enrichir le rendement. Ces expériences ont été réalisées dans des conditions similaires avec UEA-1 seul, un mélange de deux lectines ou avec le kit de la société Miltenyi et sur quatre autres lignées de cellules cancéreuses colorectales. Les résultats de ces différents essais sont présentés dans les figures 1 à 3. 20 Ainsi que le montrent les résultats de ces essais, l'utilisation d'UEA-1 seule ou en mélange avec une ou deux lectines reconnaissant l'antigène T permet l'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales avec une efficacité très nettement améliorée par rapport à la méthode standard (AC133). Exemple 2: Test de clonogénicité 25 Les tests de clonogénicité ont été réalisés dans une plaque à 6 puits à une densité de 500 cellules /cm2 dans un milieu de composition MEM (Gibco) supplémenté de 50 unités/mL de pénicilline, 50 unités/mL de streptomycine (Gibco) et 2.4 g/L de bicarbonate de sodium, 1 M de tampon HEPES (Sigma Aldrich, Saint-Quentin-Fallavier, France), 1X progestérone (Sigma Aldrich), 1X putrescine (Sigma), 0.025 g/mL héparine (Sigma Aldrich), 30% (m/v) glucose 30 (Sigma Aldrich,), 1X supplément de croissance B27 (Invitrogen, Carlsbad, CA), 20 ng/mL 3044681 21 EGF (Sigma Aldrich), 20 ng/mL FGF humain basique (Sigma Aldrich), 1X supplément insuline-transferrine- sélénite de sodium (Roche diagnostics, Meylan, France). L'évolution des colonosphères a été observée après incubation à 37 °C dans une atmosphère de CO2 et quantifiée avec le logiciel ImageJ®. 5 Les résultats sont présentés dans la figure 4. Les cellules souches cancéreuses isolées selon la méthode décrite dans la présente invention conduisent à la formation de sphères de diamètre plus important que des cellules isolées avec un kit basé sur la reconnaissance du marqueur CD133. La méthode selon la présente invention permet donc d'obtenir des cellules souches capables 10 de reformer des tumeurs de manière nettement plus efficace que la méthode actuellement disponible et considérée comme le standard. Exemple 3 : Etude de l'évolution de tumeurs in vivo Des essais in vivo adaptés de la méthode décrite dans Varnat F et al. EMBO Mol Med. 2009; 1 (6-7): 338-351 ont été réalisés. 15 Pour cela, 3x106 cellules isolées avec le mélange UEA-1 / Jacaline / ACA ont été injectées en sous-cutané dans le flanc de souris Nude ou avec la fraction négative isolée avec le mélange. Des souris contrôles ont été obtenues par injection de cellules n'ayant pas été triées au préalable (cellules issues de lignées HT-29 non triées). Avant que les tumeurs n'aient atteint les limites légales, les animaux sont sacrifiés et les 20 tumeurs étudiées. Les résultats de l'évolution de la dimension des tumeurs sont donnés dans la figure 5. Comme dans l'expérience in vitro de l'exemple 4, les cellules souches cancéreuses colorectales conduisent à la formation de tumeurs de volume plus important que des cellules non-isolées. Les cellules isolées sont donc effectivement enrichies en cellules souches 25 colorectales, initiatrices de tumeurs. REVENDICATIONS1. Utilisation, en tant que premier moyen de marquage, d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement UEA-1 ou TJA-II, pour la mise en oeuvre d'un procédé de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales. 2. Utilisation selon la revendication 1, d'une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose et d'un second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales, avantageusement choisi parmi une lectine reconnaissant l'antigène T, notamment ABA, Jacaline et ACA ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, notamment choisi dans le groupe constitué de ABA et ACA ; ABA et Jacaline ; et Jacaline et ACA, avantageusement Jacaline et ACA. 3. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 2, dans laquelle la ou les lectines sont liées à un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales, avantageusement constitué de billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps anti-biotine, les lectines étant biotinylées ; d'un fluorophore lié de manière covalente à la lectine ; ou d'un fluorophore conjugué à de la streptavidine, à de l'avidine ou à un anticorps anti-biotine, les lectines étant biotinylées. 4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, dans laquelle : - la lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose est biotinylée, - une première lectine reconnaissant l'antigène T est biotinylée, - une deuxième lectine reconnaissant l'antigène T est biotinylée, - le moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules est constitué de billes magnétiques sur lesquelles sont greffées de la streptavidine. lesdites lectines étant avantageusement UEA-1, Jacaline et ABA ou ACA, dans un rapport molaire de 625 à 12500: 16 à 320: 1 à 20, avantageusement 5000 à 7000: 50 à 250 : 5 à 15, notamment dans un rapport molaire 6250: 160: 10. 3044681 23 5. Kit comprenant en tant que premier moyen de marquage une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement UEA-1 ou TJA-II, et une lectine reconnaissant l'antigène T, avantageusement choisie parmie ABA, ACA et Jacaline, ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, avantageusement choisi dans le groupe 5 constitué de ABA et ACA ; ABA et Jacaline ; et Jacaline et ACA, avantageusement Jacaline et ACA. 6. Kit selon la revendication 5 comprenant UEA-1, Jacaline et ACA dans un rapport 6250: 160: 10. 10 7. Kit selon l'une des revendications 5 ou 6, comprenant en outre un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules, avantageusement constitué de billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps antibiotine, les lectines étant biotinylées, d'un fluorophore lié de manière covalente à la lectine, ou 15 d'un fluorophore conjugué à de la streptavidine, à de l'avidine ou à un anticorps anti-biotine, les lectines étant biotinylées. 8. Kit selon l'une des revendications 5 à 7, comprenant : - une lectine biotinylée reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, 20 - une première lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T, - une deuxième lectine biotinylée reconnaissant l'antigène T, - un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules, avantageusement des billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine, 25 lesdites lectines étant avantageusement UEA-1, Jacaline, ABA ou ACA dans un rapport molaire de 625 à 12500 : 16 à 320 : 1 à 20, avantageusement 5000 à 7000 : 50 à 250 : 5 à 15, notamment dans un rapport molaire 6250: 160: 10 . 9. Procédé in vitro de détection et éventuellement d'isolement des cellules 30 souches cancéreuses colorectales, comprenant l'étape de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales d'un échantillon biologique colorectal avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement UEA-1 ou TJA-II. 3044681 24 10. Procédé selon la revendication 9, comprenant les étapes de : (a) marquage des cellules souches cancéreuses colorectales avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, pour obtenir un échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses colorectales sont 5 marquées, (b) mise en contact de l'échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses sont marquées avec un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules, (c) détection des cellules souches cancéreuses colorectales, 10 (d) éventuellement isolement des cellules souches cancéreuses colorectales. 11. Procédé selon l'une des revendications 9 ou 10, dans lequel l'étape (a) est mise en oeuvre avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose en tant que premier moyen de marquage et un second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses 15 colorectales, avantageusement choisi dans le groupe constitué de ABA, Jacaline et ACA ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, notamment choisi dans le groupe constitué de ABA et ACA ; ABA et Jacaline ; et Jacaline et ACA, avantageusement Jacaline et ACA. 12. Procédé selon la revendication 11, dans lequel les lectines sont UEA-1, 20 Jacaline et ACA dans un rapport molaire 6250: 160: 10. 13. Procédé selon la revendication 12, dans lequel la ou les lectines sont liées à un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules souches cancéreuses colorectales, avantageusement constitué de billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la 25 streptavidine, de l'avidine ou un anticorps anti-biotine, les lectines étant biotinylées, d'un fluorophore lié de manière covalente à la lectine, ou d'un fluorophore conjugué à de la streptavidine, à de l'avidine ou à un anticorps anti-biotine, les lectines étant biotinylées. 14. Méthode de diagnostic in vitro du risque de récidive du cancer colorectal et/ou 30 de l'agressivité du cancer colorectal pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal, comprenant une étape de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales d'un échantillon biologique colorectal avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, avantageusement UEA-1 ou TJA-II. 3044681 25 15. Méthode de diagnostic selon la revendication 14, comprenant les étapes de : (a) marquage des cellules souches cancéreuses colorectales avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose, pour obtenir un échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses sont marquées, 5 (b) mise en contact de l'échantillon biologique dans lequel les cellules souches cancéreuses sont marquées avec un moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules, (c) détection et éventuellement quantification des cellules souches cancéreuses colorectales, 10 (d) déduction du risque de récidive du cancer colorectal et/ou de l'agressivité du cancer colorectal pour définir une valeur pronostique pour l'adaptation thérapeutique d'un cancer colorectal à partir de la présence et éventuellement de la quantité de cellules souches cancéreuses colorectales. 15 16. Méthode de diagnostic selon la revendication 14 ou 15, dans laquelle l'étape (a) est mise en oeuvre avec une lectine reconnaissant le motif fucose a 1-2 galactose en tant que premier moyen de marquage et un second moyen de marquage des cellules souches cancéreuses colorectales, avantageusement choisi parmi une lectine reconnaissant l'antigène T notamment ABA, Jacaline ou ACA ou un mélange de lectines reconnaissant l'antigène T, 20 notamment ABA et ACA ; ABA et Jacaline ; ou Jacaline et ACA, avantageusement Jacaline et ACA. 17. Méthode de diagnostic selon la revendication 16, dans laquelle les lectines sont UEA-1, Jacaline et ACA dans un rapport molaire 6250: 160: 10. 25 18. Méthode de diagnostic selon l'une des revendications 14 à 17, dans laquelle le moyen de détection et éventuellement d'isolement des cellules est constitué de billes magnétiques sur lesquelles est greffée de la streptavidine, de l'avidine ou un anticorps antibiotine, les lectines étant biotinylées ; d'un fluorophore lié de manière covalente à la lectine ; 30 ou d'un fluorophore conjugué à de la streptavidine, à de l'avidine ou à un anticorps anti- biotine, les lectines étant biotinylées.