FR 3044873 A1 20170616 FR 1562180 A 20151211 1 APPÂT RODONTICIDE COMPRENANT DU BRODIFACOUM ET PROCÉDÉ DE LUTTE CONTRE DES RONGEURS CIBLES NUISIBLES L'invention concerne un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles. 5 L'invention concerne aussi un procédé de séparation des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum. L'invention concerne donc le domaine technique de la lutte contre le développement de populations de rongeurs cibles nuisibles. On sait de EP 0 147 052 que le stéréo-isomère « trans » du brodifacoum est métabolisé plus rapidement que le stéréo-isomère « cis » dans 10 les tissus d'espèces non-cible et non-rongeurs et que ce stéréo-isomère « trans » du brodifacoum permet de diminuer les risques d'empoisonnement de ces espèces non-cible. En particulier EP 0 147 052 décrit un appât rodonticide comprenant du brodifacoum sous forme de stéréo-isomère « trans » dans une proportion de 50 ppm. 15 Un tel appât est susceptible d'être consommé par des animaux autres que des rongeurs cibles nuisibles lorsqu'il est mis à la disposition de rongeurs cibles nuisibles. Il peut être consommé directement (consommation primaire) par des animaux domestiques ou des animaux de compagnie. Il peut aussi être consommé accidentellement par des humains. Une telle consommation 20 peut produire chez ces animaux domestiques, chez ces animaux de compagnie ou chez des humains un empoisonnement qui peut être létal. En outre, une fraction du brodifacoum de ces appâts rodonticides peut être ingérée (consommation secondaire) par des animaux -notamment par des oiseaux- prédateurs ou charognards de rongeurs nuisibles et 25 notamment de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé un tel appât rodonticide. Cette consommation secondaire est susceptible d' entrainer à terme la mort de ces animaux prédateurs ou charognards qui peuvent être des animaux -notamment des oiseaux- appartenant à des espèces protégées. L'invention vise donc à pallier ces inconvénients en 30 proposant un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour 3044873 2 contrôler des populations de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d'empoisonnement d'animaux non-cibles -notamment des animaux domestiques ou d'élevage, des animaux de compagnie ou des humains-consommant accidentellement un tel appât rodonticide. L'invention vise donc à pallier ces inconvénients en proposant un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour contrôler les populations de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d'empoisonnement secondaire d'animaux -par exemple de renards ou d'oiseaux- sauvages prédateurs de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé de l'appât rodonticide ou d'animaux sauvages charognards de cadavres de rongeurs cibles nuisibles empoisonnés. L'invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles 15 nuisibles dont la mise en oeuvre est en accord avec les règles de bon usage -notamment vis à vis de la protection des oiseaux, et en particulier des rapaces-. L'invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont respectueux de l'environnement, de la santé humaine et des 20 animaux non cibles -notamment des oiseaux, et en particulier des rapaces-. L'invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui ne nécessitent pas, pour contrôler une population de rongeur cibles nuisibles, d'utiliser un agent rodonticide à forte dose et qui sont respectueux de 25 l'environnement, de la santé humaine et des animaux non cibles -notamment des oiseaux-. L'invention vise aussi à proposer un appât rodonticide comprenant du brodifacoum et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont susceptibles d'être utilisés pour lutter contre des rongeurs 30 cibles nuisibles résistants à des appâts connus de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles. 3044873 3 L'invention vise donc aussi à proposer une alternative à des appâts rodonticides connus. Pour ce faire, l'invention concerne un appât rodonticide comprenant : 5 - au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ; - un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E3, du brodifacoum, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et d'un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E2, du brodifacoum 10 distinct dudit énantiomère E3 ; o ledit énantiomère E3 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans des conditions décrites ci-après et à la température de 21,5°C, un temps de rétention t3 ; o ledit énantiomère E2 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t2 ; les temps de rétention t2 et t3 étant de valeurs telles que t1 78,9 et m/z 521,1 -> 135,1 correspondants aux signaux du brodifacoum. Le chromatogramme obtenu est représenté en figure 1 à titre d'exemple. Les valeurs des temps de rétention de chacun des 10 énantiomères du brodifacoum sont, dans les conditions décrites, de : - t1 = 15,4 min pour l'énantiomère El dudit diastéréoisomère D1,4 ; - t2 = 17,2 min pour ledit énantiomère E2 ; - t3 = 19,9 min pour ledit énantiomère E3 selon l'invention, et ; - t4 = 26,3 min pour l'énantiomère E4 dudit diastéréoisomère D1,4. 15 Les valeurs des temps de rétention t1, t2, t3 et t4 sont susceptibles de varier selon les conditions chromatographiques et avec la température de la colonne de chromatographie. Cependant, dans ces conditions chromatographiques, l'ordre d'élution des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum reste inchangé. À titre indicatif, pour une variation de température 20 de quelques degrés Celsius, la valeur du temps de rétention (t1) de l'énantiomère El dudit diastéréoisomère D1,4 peut varier entre 15,0 min et 15,7 min, la valeur du temps de rétention (t2) dudit énantiomère E2 peut varier entre 16,9 min et 17,5 min, la valeur du temps de rétention (t3) dudit énantiomère E3 peut varier entre 18,8 min et 20,0 min et la valeur du temps de rétention (t4) de l'énantiomère 25 E4 dudit diastéréoisomère D1,4 peut varier entre 26,0 min et 27,5 min. Rémanence hépatique des stéréo-isomères de configuration du brodifacoum chez le rat On administre par voie orale (« peros ») à des rats de laboratoire (rats Sprague Dawley, Charles River, Saint germain sur l'Arbresle, 30 France) mâles et femelles, âgés de 8 semaines et pesant entre 180 et 200 g, une solution comprenant du brodifacoum dans un mélange d'huile végétale et de 3044873 25 DMSO à 5 % de façon que la quantité de brodifacoum ingérée par chaque rat soit de l'ordre de 3,4 mg de brodifacoum par kilogramme de rat. Les rats gavés sont traités quotidiennement par administration par voie sous cutanée d'une dose de vitamine K1 à raison de 1U par rat. 5 Le rapport de la quantité dudit diastéréoisomère D2,3 sur la quantité de brodifacoum dans la solution de gavage comprenant du brodifacoum est de 70% et le rapport de la quantité dudit diastéréoisomère D1,4 sur la quantité de brodifacoum dans la solution de gavage comprenant du brodifacoum est de 30%. À 1 jour (J+1), 2 jours (J+2), 5 jours (J+5), 7 jours (J+7) et 9 jours (J+9) 10 après le gavage, on euthanasie 6 rats préalablement anesthésiés à l'isoflurane, on prélève le foie des rats euthanasiés puis on extrait du foie et on dose les quantités de chacun des énantiomères du brodifacoum présents dans le foie des rats gavés. Les résultats obtenus sur les rats (mâles et femelles) sont donnés au tableau 1 ci-après dans lequel les valeurs de la concentration de chacun des énantiomères du 15 brodifacoum dans le foie sont la moyenne des valeurs mesurées sur 6 rats et exprimées en nanogramme (ng) par gramme de foie. Concentration J+1 J+2 J+5 J+7 J+9 hépatique, ng/g Énantiomère El 2956,5 2025,5 1487 892 442 Énantiomère E2 7425 4980 3400 1869,5 1054 Énantiomère E3 13563,5 8700 8911,5 7762,5 5862,5 Énantiomère E4 2484,5 1921 1533 1311 860 Tableau 1 La figure 2 représente l'évolution du pourcentage de la quantité massique de chaque énantiomère (E1 et E4) dudit diastéréoisomère D1,4 20 et de chaque énantiomère (E2 et E3) dudit diastéréoisomère D2,3 par rapport à la quantité de brodifacoum retenue dans le foie des rats gavés et sacrifiés à J+1, J+2, J+5, J+7 et J+9. Le pourcentage de l'énantiomère El est représenté par des colonnes à hachures obliques, le pourcentage de l'énantiomère E4 est représenté par des colonnes blanches, le pourcentage dudit énantiomère E2 est représenté par 25 des colonnes à hachures horizontales et le pourcentage dudit énantiomère E3 est représenté par des colonnes noires. Les proportions respectives de chacun des 3044873 26 énantiomères (E1 et E4) dudit diastéréoisomère D14 et desdits énantiomères (E2 et E3) dudit diastéréoisomère D2,3 dans le brodifacoum de la composition de gavage sont représentées en colonne « X » figure 2 et sont de 15% pour les énantiomères El et E4 dudit diastéréoisomère D14 et de 35% pour les énantiomères E2 et E3 5 dudit diastéréoisomère D2,3. Ledit énantiomère E3 est plus rémanent dans le foie des rats que ne le sont lesdits énantiomères E1, E2 et E4. L'énantiomère E3 du brodifacoum est plus rémanent dans le foie de rongeurs cibles nuisibles, est plus efficace à titre de substance anticoagulante et peut donc être utilisé à moindre 10 dose dans des appâts rodonticides. Un appât rodonticide et un procédé de lutte contre une population de rongeurs cibles nuisibles selon l'invention permettent de réduire la quantité de brodifacoum dans les appâts pour une efficacité rodonticide maintenue. Il va de soi que l'invention peut faire l'objet de nombreuses 15 variantes de réalisation et d'applications. En particulier, un appât rodonticide et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles sont sujets à des infinités de variantes tant dans la formulation de l'appât rodonticide que dans les modes de mise en oeuvre du procédé. REVENDICATIONS1/ - Appât rodonticide comprenant : - au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ; - un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E3, du brodifacoum, à l'exclusion d'un mélange racémique dudit énantiomère E3 et d'un stéréo-isomère de configuration, dit énantiomère E2, du brodifacoum distinct dudit énantiomère E3 ; o ledit énantiomère E3 présentant, par analyse chromatographique 10 d'une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de configuration du brodifacoum effectuée dans des conditions décrites ci-après et à la température de 21,5°C, un temps de rétention t3 ; o ledit énantiomère E2 présentant, par analyse chromatographique d'une composition de brodifacoum comprenant quatre stéréo-isomères de 15 configuration du brodifacoum effectuée dans ces mêmes conditions, un temps de rétention t2 ; les temps de rétention t2 et t3 étant de valeurs telles que t1