FR 3045050 A1 20170616 FR 1562226 A 20151211 1 STÉRÉO-ISOMÈRE DE CONFIGURATION DE LA DIFÉTHIALONE, COMPOSITION ET APPÂT RODONTICIDE LE COMPRENANT ET PROCÉDÉ DE LUTTE CONTRE DES RONGEURS CIBLES NUISIBLES L'invention concerne un stéréo-isomère de configuration de 5 la diféthialone comme composé isolé, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles. L'invention concerne donc le domaine technique de la lutte contre des populations de rongeurs cibles nuisibles. Il est connu d'utiliser des appâts rodonticides faisant office 10 de poison pour des rongeurs cibles nuisibles. On sait de EP 2 090 164 que la diféthialone est un anticoagulant de deuxième génération agissant à simple dose. US 2005/181003 décrit un appât rodonticide sous forme de gel comprenant de la diféthialone dans une proportion massique de 25 ppm. Un tel appât est susceptible d'être consommé par des 15 animaux autres que des rongeurs cibles nuisibles lorsqu'il est mis à la disposition de rongeurs cibles nuisibles. Il peut être consommé directement (consommation primaire) par des animaux domestiques ou des animaux de compagnie. Il peut aussi être consommé accidentellement par des humains. Une telle consommation peut produire chez ces animaux domestiques, chez ces animaux de compagnie ou 20 chez des humains un empoisonnement qui peut être létal. En outre, une fraction de la diféthialone de ces appâts rodonticides peut être ingérée (consommation secondaire) par des animaux -notamment par des oiseaux- prédateurs de rongeurs nuisibles affaiblis ayant consommé un tel appât rodonticide ou par des animaux charognards de rongeurs 25 nuisibles morts d'avoir consommé un tel appât rodonticide. Cette consommation secondaire est susceptible d'entrainer à terme la mort de ces animaux prédateurs ou charognards qui peuvent être des animaux -notamment des oiseaux-appartenant à des espèces protégées. L'invention vise donc à pallier ces inconvénients en 30 proposant un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, une composition comprenant et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de 3045050 2 configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont efficaces pour contrôler des populations de rongeurs cibles. L'invention vise aussi à proposer un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dont la mise en oeuvre est en accord avec les règles de bon usage -notamment vis à vis de la protection des oiseaux, et en particulier des rapaces-. L'invention vise aussi à proposer un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui ne nécessitent pas, pour contrôler une population de rongeur cibles nuisibles, d'utiliser des doses massives d'agents rodonticides et qui sont respectueux de l'environnement, de la santé humaine et des animaux non cibles. L'invention vise donc à proposer un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui soit efficace à dose réduite d'agent rodonticide. L'invention vise aussi à proposer un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont susceptibles d'être utilisés pour lutter contre des rongeurs cibles nuisibles résistants à des appâts rodonticides connus. L'invention vise donc à proposer une alternative à des appâts rodonticides connus. Pour ce faire, l'invention concerne un énantiomère dextrogyre d'un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit hétéro- stéréo-isomère, de formule 3-(4'-bromobipheny1-4-y1)-1-(4-hydroxy thiocoumarin-3-y1)-1,2,3,4-tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène sont de configurations absolues 3045050 3 distinctes. Dans tout le texte : - le terme « diféthialone » désigne le composé 3-(4'bromobiphenyl4-y1)- 1 - (4-hydroxythiocoumarin-3 -y1)- 1,2,3 ,4-tétrahydronaphtalène ou 3- [3- [4- 5 (4-bromophényl)pheny1]-1-tétraliny11-2-hydroxy-4-thiochroménone ou 3-[3-(4'- bromo [ 1,1 '-biphényl] -4-y1)- 1,2,3 ,4-tétrahydro- 1 -naphthalény11-4-hydroxy- 2H- 1 - benzothiopyran-2-one de formule (I) ci-après : (I) ; dans laquelle sont présentés les numéros des carbones 1 et 3 du groupement 10 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène ; - le terme « stéréo-isomères » désigne des isomères de même formule semi-développée, mais dont la position relative des atomes diffère dans l'espace. L'expression « stéréo-isomères de configuration » désigne les stéréo-isomères dont la conversion de l'un en l'autre de ces stéréo-isomères de 15 configuration nécessite une rupture/reformation d'une liaison covalente interatomique. Ainsi, l'expression « stéréo-isomères de configuration » désigne les stéréo-isomères qui ne sont pas des isomères de conformation (ou « rotamères », dont la conversion de l'un en l'autre des isomères de conformation s'accompagne uniquement d'une rotation d'une partie de la molécule selon l'axe 20 d'une liaison a (sigma) formée par recouvrement axial d'orbitales) ; - le terme « hétéro-stéréo-isomère » de la diféthialone désigne le stéréo-isomère de configuration de la diféthialone de formule 3-(4'- bromobiphény1-4-y1)- 1 - (4-hydroxythiocoumarin-3 -y1)- 1,2,3 ,4- tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,425 tétrahydronaphtalène dudit hétéro-stéréo-isomère sont de configurations absolues distinctes (1R,3S et 1S,3R), lesdites configurations absolues étant déterminées 3045050 4 selon les règles séquentielles de priorité et la nomenclature de Cahn, Ingold et Prelog (CIP) ; - le terme « homo-stéréo-isomère » de la diféthialone désigne le stéréo-isomère de configuration de la diféthialone de formule 3-(4'5 bromobipheny1-4- y1)- 1 - (4-hydroxythiocoumarin-3 - y1)- 1,2 ,3 ,4- tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4- tétrahydronaphtalène dudit homo-stéréo-isomère sont de même configuration absolue (1R,3R et 1S,3S) ; - le terme « quantité » s'entend d'une quantité molaire, d'une 10 quantité massique ou d'une quantité volumique. Les proportions sont donc des proportions d'une quantité molaire rapportée à une quantité molaire, d'une quantité massique rapportée à une quantité massique, ou d'une quantité volumique rapportée à une quantité volumique ; - le terme « sensiblement » indique, de façon habituelle, qu'une 15 caractéristique structurelle ou fonctionnelle ne doit pas être prise comme marquant une discontinuité abrupte, qui n'aurait pas de sens physique, mais couvre non seulement cette structure ou cette fonction, mais également des variations légères de cette structure ou de cette fonction qui produisent, dans le contexte technique considéré, un effet de même nature, sinon de même degré ; 20 - les expressions « chromatographie liquide à haute pression » ou « chromatographie liquide à haute performance » (« CLHP ») désignent la chromatographie « HPLC » ou « High Performance Liquid Chromatography », et ; - l'expression « temps de rétention » désigne la durée, mesurée au 25 sommet du pic de chromatogramme, pendant laquelle un composé est retenu sur une colonne de chromatographie. L'invention concerne donc l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone à l'état isolé. Elle concerne cet énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone séparé de 30 l'énantiomère lévogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone et séparé des énantiomères dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone. 3045050 5 Les inventeurs ont réussi à séparer les énantiomères lévogyre et dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone et les énantiomères lévogyre et dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone par chromatographie liquide à haute pression en mode isocratique et 5 dans des conditions particulières en utilisant une colonne de chromatographie comprenant une phase stationnaire chirale spécifique et à isoler l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone. Il n'était en effet pas connu au jour de l'invention de pouvoir séparer l'énantiomère lévogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone et l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro- 10 stéréo-isomère de la diféthialone. On réalise cette séparation en utilisant une colonne HPLC LUX® Cellulose-3 (phenomenex, Le Pecq, France) de dimension 150 x 2 mm et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules poreuses de cellulose tris(4-méthylbenzoate), d'une granulométrie de 3 ium et d'une porosité 15 de 1000 À. On utilise, à titre de phase mobile, un éluant obtenu par mélange d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant de l'acide formique en proportion volumique de 0,1% dans l'eau (B) avec un rapport volumique A/B de 80/20. Le débit de la phase mobile dans la colonne est maintenu à une valeur de 0,25 mL/min et la séparation est réalisée à la température de 23,2°C. La composition à 20 analyser est à une concentration de 1 iug de diféthialone par millilitre dans l'acétonitrile et le volume de composition injecté sur la colonne est de 1 iuL. La détection peut être effectuée par spectrométrie de masse en tandem (MS/MS) en sortie de colonne séparative. La détection et la quantification peuvent être effectuées par photométrie ou par spectrophotométrie en ajustant la concentration 25 en diféthialone et le volume d'injection aux fins d'obtenir une détection optimale et en mesurant la valeur de l'aire sous le pic de chaque stéréo-isomère de configuration. Dans ces conditions analytiques, la valeur du temps de rétention (t3) de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la 30 diféthialone peut varier selon les conditions opératoires -notamment selon les conditions de température de la colonne- et être comprise entre 11,3 min et 11,8 3045050 6 min. La valeur du temps de rétention (t2) de l'énantiomère lévogyre dudit hétérostéréo-isomère de la diféthialone peut varier selon les conditions opératoires -notamment selon les conditions de température de la colonne- et être comprise entre 9,0 min et 9,5 min, de sorte que les énantiomères dextrogyre et lévogyre 5 dudit hétéro-stéréo-isomère peuvent être séparés par chromatographie liquide à haute pression sur une colonne chirale. La valeur du temps de rétention (t1) de l'énantiomère lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone peut varier selon les conditions opératoires -notamment selon les conditions de température de la 10 colonne- et être comprise entre 7,8 min et 8,2 min. La valeur du temps de rétention (t4) de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone peut varier selon les conditions opératoires -notamment selon les conditions de température de la colonne- et être comprise entre 14,0 min et 14,4 min. de sorte que les énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit homo-stéréo- 15 isomère de la diféthialone peuvent être séparés par chromatographie liquide à haute pression sur une colonne chirale. Ainsi, dans ces conditions, l'ordre d'élution des stéréo-isomères de configuration de la diféthialone est tel que t1 151,0 et m/z 537,1 -> 78,9 correspondants aux signaux de la diféthialone. La figure 1 représente les 15 chromatogrammes de la diféthialone (haut) et de l'énantiomère dextrogyre de l'hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone (bas) isolé. Dans ces conditions expérimentales, la valeur du temps de rétention (t3) de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone est de l'ordre de 11,7 min comme décrit figure 1 et la valeur du 20 temps de rétention (t2) de l'énantiomère lévogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone est de l'ordre de 9,4 min, de sorte que les énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit hétéro-stéréo-isomère peuvent être séparés par chromatographie liquide à haute pression sur une colonne chirale. Dans ces mêmes conditions expérimentales, la valeur du 25 temps de rétention (t4) dudit énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère selon l'invention est de l'ordre de 14,4 min et la valeur du temps de rétention (t1) de l'énantiomère lévogyre dudit homo-stéréo-isomère est de l'ordre de 8,1 min de sorte que les énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit homo-stéréo-isomère peuvent aussi être séparés par chromatographie liquide à haute pression sur une 30 colonne chirale et séparés des énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit hétérostéréo-isomère de la diféthialone. 3045050 27 Il est possible de réaliser dans ces conditions expérimentales (phase stationnaire, phase mobile, température) une séparation préparative des énantiomères lévogyre et dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone en utilisant une phase stationnaire similaire et de granulométrie 5 supérieure à 3 ium, et une colonne chromatographique de plus grandes dimensions, notamment d'un diamètre de 20 mm. B. Caractérisation structurelle B.1. Spectroscopie UV Le spectre UV de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro10 stéréo-isomère de la diféthialone en solution dans le chloroforme (CHC,E3) présente deux pics d'absorbance centrés à 238,2 nm et à 259.5 nm. B.2. Pouvoir rotatoire Les inventeurs ont caractérisé l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone à l'état isolé par son pouvoir 15 rotatoire (aussi appelé activité optique ou biréfringence circulaire), c'est-à-dire par sa propriété à dévier le plan de polarisation d'une lumière polarisée. Une déviation du plan de polarisation de la lumière polarisée dans le sens horaire de rotation en faisant face au faisceau de lumière polarisée caractérise une solution dextrogyre, et une déviation du plan de polarisation de la lumière polarisée dans 20 le sens antihoraire de rotation en faisant face au faisceau de lumière polarisée caractérise une solution et un composé lévogyre. On mesure le pouvoir rotatoire d'une solution d'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone dans le chloroforme (CHCt3) à une concentration de 6,3 g/L. On mesure le pouvoir 25 rotatoire de cette solution au moyen d'un polarimètre digital P 2000 (JASCO, Bouguenais, France) opérant avec une lumière excitatrice de longueur d'onde de 589 nm. Le pouvoir rotatoire a moyen obtenu sur deux séries de dix mesures est de +0,573°. Le pouvoir rotatoire spécifique à 25°C rai 25°C589mn de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone en solution dans le 30 chloroforme, mesuré sur la raie D du sodium (589 nm) est de +9,1°. 3045050 28 B.3. Dichroïsme circulaire Le spectre de dichroïsme circulaire de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone isolé traduit la différence d'absorbance (AA=AG-AD) des deux ondes de polarisation circulaire 5 gauche (PCG) d'intensité AG et de polarisation circulaire droite (PCD) d'intensité AD. Il permet de distinguer les énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit homostéréo-isomère de la diféthialone. On mesure cette différence d'absorbance des deux ondes de polarisation circulaire dans un spectromètre de dichroïsme circulaire J-815 (JASCO, Bouguenais, France). On prépare 2 mL de solution 10 d'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone dans du méthanol (CH3OH) à une concentration de 0,65 mg/mL On transfère la solution dans une cuve en quartz pour spectrophotomètre. On mesure à 25°C le spectre de dichroïsme circulaire de la solution entre 200 nm et 400 nm. Le spectre de dichroïsme circulaire de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de 15 la diféthialone mesuré dans ces conditions est représenté en figure 7. La valeur de dichroïsme circulaire est positive entre les longueurs d'onde comprises entre 215 nm et 250 nm et entre 270 nm et 300 nm. B.4. Résonnance Magnétique Nucléaire La figure 4 est un spectre RMN du proton à 500 MHz de 20 l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone en solution à une concentration de 40 mg/mL dans CDC t3 présentant un signal à un déplacement chimique (8) de l'ordre de 5,3 ppm et correspondant au proton porté par le carbone 1 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène de la diféthialone. La figure 5 est un spectre RMN du 13C de l'énantiomère 25 dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone en solution à une concentration de 40 mg/mL dans CDCt3 réalisé sur un spectromètre Bruker AVANCE III HD (500 MHz) équipé d'une cryosonde directe multi-noyaux motorisée PRODIGY. Il permet une identification des 31 atomes de carbone de la diféthialone. Le spectre 13C-RMN de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro- 30 stéréo-isomère de la diféthialone ne se distingue pas du spectre en 13C-RMN de l'énantiomère lévogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone. 3045050 29 Cependant, ledit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone présente des signaux compris entre 40 ppm et 40,5 ppm et entre 38,0 ppm et 38,5 ppm caractéristiques dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone et distinctifs dudit homo-stéréoisomère de la diféthialone. 5 La figure 6 est un spectre ('H-RMN 2D) RMN du proton en deux dimensions obtenu par spectroscopie de corrélation de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone en solution dans CDCt3 à une concentration de 40 mg/mL réalisé sur un spectromètre Bruker AVANCE III HD (500 MHz) équipé d'une cryosonde directe multi-noyaux motorisée 10 PRODIGY. Il permet une identification du couplage du proton porté par le carbone 1 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit homo-stéréoisomère de la diféthialone (5,3 ppm) avec les protons portés par le carbone 2 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène à 2,0 ppm et 2,4 ppm. C. Extraction de la diféthialone de foies de rats traités à la diféthialone en 15 vue de l'analyse des différents stéréo-isomères de configuration de la diféthialone C.1. Homogénéisation de l'échantillon de foie On pèse avec précision de l'ordre de 0,525 g (±0,025 g) de foie de rat que l'on place dans un tube en polypropylène de 50 mL On ajoute 10 20 mL d'acétone et on soumet la suspension à une homogénéisation au moyen d'un homogénéisateur/disperseur UltraTurrax® pendant une durée de l'ordre de 30 sec. On rince la tige de l'homogénéisateur/disperseur à l'eau chaude puis 2 fois avec 20 mL d'acétone dans un tube en polypropylène. On centrifuge l'homogénat pendant 5 min à une vitesse de centrifugation de 3000 rpm (rotation 25 par minute). On collecte et on transvase le surnageant dans un tube à essai. On soumet l'échantillon à une évaporation sous un flux d'azote (N2) à la température de 40°C de façon à former un extrait sec. C.2. Élimination des lipides Dans le tube contenant l'extrait sec, on ajoute 1 mL 30 d'acétonitrile de façon à solubiliser l'extrait sec. On lave la solution d'acétonitrile 2 fois successivement avec 1 mL d'hexane. L'extrait débarrassé 3045050 30 des lipides est séché sous un flux d'azote (N2) à la température de 40°C, puis repris avec 0,5 mL de méthanol et solubilisé par agitation sous vortex. On ajoute ensuite 0,5 mL d'eau ultra-pure (Milli-Q). L'échantillon est homogénéisé sous vortex. 5 C.3. Extraction de la diféthialone sur phase solide (« SPE, Solid Phase Extraction ») On fait passer 1 mL de dichlorométhane (CH2Ct2), puis 1 mL de méthanol (CH3OH), puis 1 mL d'eau ultra-pure (Milli-Q) sur une cartouche Oasis HLB 1cc (WAT094225, Waters). On dépose ensuite l'extrait de 10 foie débarrassé des lipides (1mL Me0H/H20 Milli-Q) et contenant la diféthialone en tête de la cartouche préalablement conditionnée. L'extrait de foie pénètre dans la cartouche par gravité au contact de la phase solide de la cartouche. On dépose en tête de cartouche 1 mL de solution de lavage formée de méthanol (CH3OH) et d'eau ultra-pure (H2O) en proportion volumique de 90/10. 15 On sèche la cartouche par aspiration sous vide connectée en partie basse de la cartouche. On dépose ensuite en tête de cartouche 1 mL de solution d'élution formée de dichlorométhane (CH2C 12) et de méthanol (CH3OH) en proportion volumique de 90/10 et on collecte en bas de cartouche un éluat comprenant la diféthialone. On évapore le solvant de l'éluat sous un flux d'azote (N2) à la 20 température de 40°C. C.4. Analyse On analyse la solution contenant la diféthialone par chromatographie liquide à haute pression sur une colonne chirale (150 x 2 mm, granulométrie de 3 ium) LUX® Cellulose-3 (phenomenex, Le Pecq, France) 25 comme décrit au point A2) ci-dessus. D. Appât rodonticide comprenant une proportion de 3,7 ppm de diféthialone On réalise un appât rodonticide pâteux selon l'invention par dispersion d'une quantité d'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréoisomère de la diféthialone dans un excipent comestible comprenant de la graisse 30 végétale et de la farine de céréale. La proportion mesurée de diféthialone par rapport à l'appât rodonticide est de 3,7 ppm (3,57 mg d'énantiomère dextrogyre 3045050 31 dudit hétéro-stéréo-isomère par kilogramme d'appât), et la proportion d'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère est de 96,5% par rapport à la diféthialone. À JO, on place 10 rats Sprague Dawley (SD, 5 rats mâles et 5 5 rats femelles) sensibles au coumafène dans des cages individuelles avec une alimentation de référence exempte de rodonticide. À J3, on réalise une pesée de chaque rat puis on met à disposition de chaque rat 50 g d'appât rodonticide tel que décrit ci-dessus. On renouvelle quotidiennement cette mise à disposition de 50 g d'appât rodonticide. L'appât consommé par les rats est complété à 50 g 10 d'appât à J4, J5 et J6. À compter de J7, on élimine les appâts rodonticides résiduels et on fournit une alimentation exempte de rodonticide à tous les rats. On prévoit une surveillance des rats pendant 3 semaines. Les quantités moyennes d' appât consommé quotidiennement par un rat à J4, J5, J6 et J7 exprimées en gramme par jour sont 15 données au tableau 1 ci-après. Appât consommé, g Moyenne Écart-type J4 16,6 3,8 J5 15,4 5,8 J6 14,3 6,2 J7 8,6 2,8 Tableau 1 Il est à noter qu'aucun rat n'a consommé une quantité quotidienne d'appât inférieure à 1 g/jour. Tous les rats (100%) meurent entre J9 et J13. La mortalité observée est de 100%. 20 On mesure la teneur hépatique de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone dans chacun des rats morts entre J9 et J13 par chromatographie liquide à haute pression sur une colonne chirale. Les valeurs mesurées, exprimées en microgramme d'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère (« DFN-Hétéro-dextro ») par gramme de foie sont données 25 au tableau 2 ci-après. 3045050 32 Teneur hépatique,iug/g « DFN-Hétéro-dextro » Diféthialone totale Moyenne 5,365 5,372 Écart-type 0,828 0,842 Tableau 2 L'appât dosé à 3,7 ppm d'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone procure un taux de mortalité de 100% en minimisant les risques d'intoxications primaire et secondaire. 5 E. Appât rodonticide comprenant une proportion de 10,6 ppm de diféthialone On réalise un appât rodonticide pâteux selon l'invention comme décrit pour l'appât à 3,7 ppm ci-dessus. La proportion mesurée de diféthialone dans l'appât est de 10,6 ppm (10,2 mg d'énantiomère dextrogyre 10 dudit hétéro-stéréo-isomère par kilogramme d'appât), et la proportion d'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère par rapport à la diféthialone la diféthialone est de 96,5%. On procède à une distribution d'appât comme décrit ci-dessus avec l'appât à 3,7 ppm. Les quantités moyennes d' appât consommé 15 quotidiennement par un rat à J4, J5, J6 et J7 exprimées en gramme par jour sont données au tableau 3 ci-après. Appât consommé, g Moyenne Écart-type J4 14,9 2,3 J5 15,8 2,8 J6 13,2 1,7 J7 7,4 4,6 Tableau 3 Il est à noter qu'aucun rat n'a consommé une quantité quotidienne d'appât inférieure à 1 g/jour. Tous les rats (100%) meurent entre J5 20 et J8. Le taux de mortalité obtenu avec cet appât est de 100%. On mesure la teneur hépatique de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone dans chacun des rats morts entre J5 3045050 33 et J8 par analyse en chromatographie liquide à haute pression sur une colonne chirale. Les valeurs, exprimées en microgramme d'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère (« DFN-Hétéro-dextro ») par gramme de foie sont données au tableau 4 ci-après. Teneur hépatique,iug/g « DFN-Hétéro-dextro » Diféthialone totale Moyenne 16,049 15,113 Écart-type 9,872 7,318 5 Tableau 4 L'appât dosé à 10,6 ppm de diféthialone permet l'obtention d'un taux de mortalité de 100% en minimisant les risques d'intoxication primaire et secondaire. Il va de soi que l'invention peut faire l'objet de nombreuses 10 variantes de réalisation et applications. En particulier, une composition, un appât rodonticide et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles sont sujets à des infinités de variantes tant dans la formulation de l'appât que dans les modes de mise en oeuvre du procédé. REVENDICATIONS1/ - Énantiomère dextrogyre d'un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit hétéro-stéréo-isomère, de formule 3-(4'- bromobipheny1-4-y1)- 1 - (4-hydroxythiocoumarin-3 -y1)- 1,2 ,3 ,4- tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4tétrahydronaphtalène sont de configurations absolues distinctes. 2/ - Composition comprenant de l'énantiomère dextrogyre selon la revendication 1, à l'exclusion d'un mélange racémique d'énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone. 3/ - Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que ledit hétéro-stéréo-isomère est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre. 4/ - Composition selon l'une des revendications 2 ou 3, caractérisée en ce que la diféthialone est majoritairement sous forme de 15 l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone. 5/ - Composition selon l'une des revendications 2 à 4, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de diféthialone est supérieur à 25%. 20 6/ - Composition selon l'une des revendications 2 à 5, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de diféthialone est supérieur à 95%. 7/ - Appât rodonticide comprenant une composition selon 25 l'une des revendications 2 à 6, et au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles. 8/ - Appât selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des graines de céréale, des moutures de graines de céréale, des farines de 30 graines de céréale, des flocons de graines de céréale, du son de céréales et des graines non céréalières. 3045050 35 9/ - Appât selon l'une des revendications 7 ou 8, caractérisé en ce qu'il comprend une quantité massique de diféthialone telle que le rapport de cette quantité massique de diféthialone sur la quantité massique d'appât rodonticide est inférieur à 50 ppm. 5 10/ - Procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles, dans lequel on dissémine une quantité d'appât comprenant : - au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ; - de l'énantiomère dextrogyre du stéréo-isomère de configuration de 10 la diféthialone, dit hétéro-stéréo-isomère, de formule 3-(4'-bromobipheny1-4-y1)- 1-(4-hydroxythiocoumarin-3-y1)-1,2,3,4-tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène sont de configurations absolues distinctes ; à l'exclusion d'un mélange racémique d'énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone. 11/ - Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que ledit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre. 12/ - Procédé selon l'une des revendications 10 ou 11, 20 caractérisé en ce que la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone. 13/ - Procédé selon l'une des revendications 10 à 12, caractérisé en ce qu'on choisit en combinaison : - l'excipient comestible ; 25 - une proportion d'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo- isomère de la diféthialone par rapport audit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone ; - une proportion d'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréoisomère de la diféthialone par rapport à la diféthialone ; 30 - une proportion massique de diféthialone par rapport à l'appât rodonticide, et ; 3045050 36 - une quantité d'appât disséminé ; de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité de diféthialone suffisante pour être létale pour lesdits rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât au cours d'une période unique de 24 heures 5 consécutives. 14/ - Procédé selon l'une des revendications 10 à 12, caractérisé en ce qu'on choisit en combinaison : - l'excipient comestible ; - une proportion d'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo10 isomère de la diféthialone par rapport audit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone ; - une proportion d'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréoisomère de la diféthialone par rapport à la diféthialone ; - une proportion massique de diféthialone par rapport à l'appât 15 rodonticide, et ; - une quantité d'appât disséminé ; de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité de diféthialone ; o non létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât 20 pendant une période de 24 heures consécutives, et ; o suffisante pour être létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât pendant plusieurs périodes de 24 heures, lesdites périodes étant consécutives. 15/ - Procédé chromatographique d' obtention d'un 25 énantiomère dextrogyre d'un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit hétéro-stéréo-isomère, de formule 3-(4'-bromobipheny1-4-y1)-1-(4- hydroxythio coumarin-3-y1)-1,2,3,4-tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit hétéro-stéréoisomère sont de configurations absolues distinctes, procédé dans lequel : 30 - on choisit une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale 3045050 37 constituée de particules de cellulose tris(4-méthylbenzoate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 ium et présentant une taille moyenne de pores de 1000 A; - on choisit, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé 5 d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0,1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 80/20 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ; - on réalise une séparation des stéréo-isomères de configuration de la diféthialone à température ambiante lors de laquelle ; 10 - on introduit en tête de la colonne pour chromatographie une composition liquide comprenant dudit énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone, puis ; - on collecte une fraction de la phase mobile comprenant ledit énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone avec un temps de 15 rétention t3 de valeur telle que t1