FR 3046539 A1 20170714 FR 1650193 A 20160111 1 PRINCIPE ACTIF DE PICHIA HEEDII ET UTILISATION COSMETIQUE EN PARTICULIER POUR LUTTER CONTRE LES EFFETS DE LA POLLUTION SUR LA PEAU La présente invention concerne l'utilisation en cosmétique de Pichia Heedii ou d'un principe actif de Pichia Heedii pour son effet anti-pollution. L'invention se rapporte également à des principes actifs de Pichia Heedii, à des compositions cosmétiques incluant Pichia Heedii ou un principe actif de Pichia Heedii, et à un procédé de traitement cosmétique pour lutter contre les effets de la pollution sur la peau. Alors que le nombre de citadins ne cesse d'augmenter, beaucoup d'entre eux cherchent des solutions visant à se protéger de l'impact de la pollution. En effet, au-delà des effets délétères sur la santé en général, il est aujourd'hui établi qu'elle est également néfaste pour la peau. La pollution est associée au vieillissement cutané, à l'apparition de désordres pigmentaires et à l'émergence de pathologies telles que la dermatite atopique ou les allergies (Krutmann J., Liu W., Li L., Pan X., Crawford M., Sore G., Seite S. Pollution and skin: From epidemiological and mechanistic studies to clinical implications. Journal of Dermatological Science, 76, 163 - 168 (2014) , Vierkiitter A., Schikowski T., Ranft U., Sugiri D., Matsui M., Kràmer U., Krutmann J. Airborne Particle Exposure and Extrinsic Skin Aging. Journal of Investigative Dermatology, 130, 2719 - 2726 (2010)). Bien que ce problème soit universel, les populations de la région Asie-Pacifique y sont particulièrement exposées. Les polluants sont des substances organiques et non-organiques. On peut citer l'ozone, les PM (« particulate matter » ou particules fines), les PAH (« polycyclic aromatic hydrocarbons » ou hydrocarbure aromatique polycyclique), les métaux lourds ou encore la fumée de cigarettes. De nature lipophile, certains polluants sont capables de pénétrer à l'intérieur des cellules où ils vont se localiser au niveau de la mitochondrie. Leur mécanisme d'action sur la peau n'est pas encore clairement élucidé. Toutefois, plusieurs voies potentielles sont suspectées : - L'altération de la flore bactérienne cutanée : l'exposition à des fortes concentrations en ozone entraine une réduction de 50% de la flore résidente suggérant qu'il exerce un effet bactéricide. De plus, des études ont montré que les bactéries présentes à la surface de la peau peuvent métaboliser partiellement les 3046539 2 polluants. De cette dégradation incomplète naissent des métabolites toxiques pour la peau : - L'induction de la cascade inflammatoire : divers polluants ont été décrits comme associés à la production de médiateurs inflammatoires. Parmi ces médiateurs, on 5 peut citer les interleukines 1(3, 8 et 6, et le GM-CSF (« granulocyte macrophage colony-stimulating factor » ou facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages). Cette production incontrôlée cause en retour une altération de la différenciation épidermique. - L'activation de la voie du récepteur Aryl-hydrocarbone « Aryl-hydrocarbon 10 Receptor » (AhR) : Le récepteur Aryl-hydrocarbone est un facteur de transcription présent au niveau cytoplasmique qui est capable de détecter la présence de polluants. Ce récepteur régule plusieurs fonctions physiologiques parmi lesquelles la prolifération cellulaire, l'inflammation et la mélanogénèse. - La perturbation de la voie des mitokines (prohibitines) : Cet axe de recherche 15 encore inexploré en cosmétique est dédié à la fonction de sentinelle assurée par la mitochondrie qui permet à la peau de rester connectée à son environnement. La mitochondrie capte le signal de danger associé à un épisode de pollution puis le transmet à ses organistes partenaires grâce à des médiateurs protéiques : les mitokines. Par ce mécanisme de communication intracellulaire inédit, les 20 mitokines, notamment la prohibitine, permettent au tissu de déclencher une réponse antistress optimale. L'objectif de l'invention est de prévenir et lutter contre les effets délétères de la pollution sur la peau, en agissant sur plusieurs de ces voies, en particulier sur la voie du récepteur Aryl-hydrocarcone et la voie des mitokines, qui constitue un axe d'action inédit encore 25 inexploré en cosmétique. Pour répondre à cet objectif, l'invention propose d'utiliser une levure particulière Pichia Heedii ou un principe actif de cette levure. La levure Pichia Heedii fait partie de la famille des Saccharomycetaceae. Elle a été découverte dans les branches et troncs en nécrose de cactus Carnegiea gigantea du genre des Pachycereus, de la famille des Cactaceaes, dans le désert de Sonoran dans le sud- ouest des Etats-Unis en 1978. 3046539 3 La levure Pichia Heedii est identifiée dans les collections sous les numéros ATCC 34940, MUCL31256, CBS 6934; CCRC 21370; IFO 10019; UCD 76-503A. Les colonies sont de couleurs blanches à crèmes, butyreuses. Elles sont convexes, brillantes à semi-brillantes, et ont généralement une surface texturée ou irrégulière. 5 Après 3 jours de culture, les cellules sont ovoïdes de 1.8-3.5 iim sur 3.0-7.011m. Les ascospores sont formés après 2-3 semaines de croissance dans le milieu malt-agar. Pichia Heedii vit en aérobie stricte. De façon surprenante, Pichia Heedii présente une action « absolue » contre les effets délétères de la pollution sur la peau. L'utilisation de cette levure ou d'un principe actif 10 issu de cette levure sur la peau permet avantageusement de réguler au moins deux voies anti-pollution : l'inactivation du récepteur Aryl-hydrocarbone face aux polluants - la restauration de la synthèse de mitokines, en particulier de prohibitine, et le rétablissement de la communication entre les différents éléments cellulaires. 15 L'invention vise ainsi l'utilisation de Pichia Heedii ou d'un principe actif de Pichia Heedii comme principe actif cosmétique destiné à être appliqué sur la peau en topique au sein d'une composition cosmétique, en particulier pour lutter contre les effets de la pollution sur la peau. Avantageusement cette utilisation permet d'améliorer la fonction barrière ainsi que la couleur et l'éclat de la peau. 20 L'invention a également pour objet un principe actif cosmétique caractérisé en ce qu'il s'agit d'un principe actif de Pichia Heedii, en particulier un principe actif comprenant des glucomannanes de masses molaires comprises entre 360 et 4000 Da. Enfin l'invention vise aussi une composition cosmétique incluant Pichia Heedii ou un principe actif de Pichia Heedii ainsi qu'un procédé de traitement cosmétique. 25 D'autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description en détail de l'invention qui va suivre, en regard des figures annexées sur lesquelles : - La Figure 1 schématise l'activation ou l'inactivation du récepteur Arylhydrocarbone (AhR) par un ligand et translocation nucléaire entrainant la régulation de gènes cibles, 30 - La Figure 2 schématise les localisations subcellulaires des prohibitines en absence de stress ou en présence d'un stress modéré, 3046539 4 - La Figure 3 représente le profil chromatographique HPLC du principe actif de l'exemple 1, - La Figure 4 représente l'effet d'un principe actif selon l'invention sur l'épaisseur des épidermes reconstruits transfectés avec siRNA PHB (correspondant au 5 Tableau 9), DEFINITIONS Par « actif cosmétique » ou « principe actif cosmétique » au sens de l'invention, on entend au moins une molécule, préférentiellement un ensemble de molécules présentant 10 un effet sur les cellules de la peau. Par « principe actif de Pichia Heedii » au sens de l'invention, on entend toute molécule ou ensemble de molécules issue(s) de la structure du ferment Pichia Heedii. Il peut s'agir de molécules natives du ferment ou de molécules du ferment obtenues par tout type de transformation des molécules natives du ferment par exemple par hydrolyse. 15 Préférentiellement, il s'agit d'un hydrolysat de Pichia Heedii. Le terme principe actif au sens de l'invention exclut les molécules produites par fermentation de Pichia Heedii. Par « hydrolysat » on entend tout principe actif issu de Pichia Heedii, obtenu par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique ou chimique de Pichia Heedii. Par « effets de la pollution sur la peau » au sens de l'invention, on entend les effets 20 délétères de la pollution sur la peau d'un point de vue cosmétique, à savoir notamment une déshydratation de la peau, un trouble de la desquamation, le développement de l'acné, un teint terne et gris, un vieillissement prématuré et une irritation de la peau. Par « pollution » on entend « pollution environnementale » c'est-à-dire l'ensemble des polluants primaires, directement issus des sources fixes, type industrie, chauffage, et des 25 sources mobiles comme voitures et avions, et des polluants secondaires comme l'ozone obtenus suite à la transformation des polluants primaires sous l'action des rayons solaires et de la chaleur. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION 30 L'invention vise donc l'utilisation de Pichia Heedii ou d'un principe actif de Pichia Heedii comme principe actif cosmétique destiné à être appliqué sur la peau en application topique au sein d'une composition cosmétique, c'est-à-dire l'utilisation cosmétique de Pichia Heedii sur la peau. 3046539 5 En particulier, l'invention a pour objet l'utilisation de Pichia Heedii ou d'un principe actif de Pichia Heedii pour prévenir et/ou lutter contre les effets de la pollution sur la peau. Pour lutter contre les effets délétères de la pollution sur la peau, Pichia Heedii ou un principe actif de Pichia Heedii agit principalement sur deux voies : 5 - la voie Aryl-hydrocarbone, et - la voie des mitokines. Concernant la voie Aryl-hydrocarbone, le récepteur Aryl-hydrocarbone (AhR) est capable de détecter la présence de polluants et de traduire leurs effets biochimiques et toxiques. Il est activé par des molécules ou des particules toxiques émanant de la fumée de 10 cigarettes, de l'incinération incomplète des déchets ou du trafic routier tels que les hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP), les dioxines et ses dérivés. Une fois activé, l'AhR est transloqué du cytoplasme vers le noyau où il régule l'expression de gènes cibles dont CYP1A1 (ou Aryl-hydrocarbon hydroxylase). C'est l'induction prolongée de la voie AhR - CYP1A1 par une exposition quotidienne aux polluants environnementaux qui 15 entraîne les effets délétères liés à la pollution. Ces effets résultent de la production continue et inappropriée de médiateurs pro-inflammatoires incluant cytokines, protéases et ROS, facteurs bien connus pour engendrer l'altération des différents composants cellulaires: dommages à l'ADN, peroxydation lipidique et carbonylation des protéines (Kitamura M., Kasai A. Cigarette smoke as a trigger for the dioxin receptor-mediated 20 signaling pathway. Cancer Letters, 252, 184 - 194 (2007)). Le schéma de l'activation du récepteur Aryl-hydrocarbone (AhR) par un ligand et translocation nucléaire entrainant la régulation de gènes cibles est représenté sur la Figure 1. L'utilisation de Pichia Heedii ou d'un principe actif de Pichia Heedii sur la peau selon l'invention permet de désactiver le récepteur Aryl-hydrocarbone et par conséquent de limiter et lutter 25 contre les effets délétères de la pollution qui découlent de l'activation de ce récepteur. Concernant la voie des mitokines, l'invention agit en particulier sur les prohibitines. Les prohibitines forment une famille de protéines constituées de deux homologues : la prohibitine (prohibitine 1 ou PHB1) et la prohibitone (prohibitine 2 ou PHB2). Leurs destins sont étroitement liés : l'absence de l'une entrainant la dégradation de l'autre. 30 Chez l'homme, bien que détectables dans la circulation sanguine, les prohibitines sont majoritairement localisées à l'intérieur des cellules en particulier dans la membrane interne de la mitochondrie où elles forment un large complexe moléculaire. Elles y jouent 3046539 6 un rôle clé pour le développement des mitochondries et leur pérennité au sein de la cellule. Elles maintiennent la structure de la mitochondrie, régule sa fonction, protègent les protéines de la chaine respiratoire fraichement synthétisées d'une dégradation incontrôlée, et maintiennent l'organisation de l'ADN mitochondrial (ADN mt). 5 En réponse à un stress, les prohibitines sont mobilisées vers les autres organites de la cellule afin de moduler divers aspects de la physiologie cellulaire. On les retrouve ainsi au niveau du noyau ou de la membrane plasmique. Dans le noyau, en interagissant avec divers facteurs de transcription tels que NRF2 ou PGC1a, elles vont activer respectivement la réponse anti-oxydante et la biogénèse mitochondriale afin de protéger 10 la cellule et renforcer l'activité de la mitochondrie. Localisées au niveau de la membrane cellulaire, elles vont maintenir la structure du double-feuillet lipidique. De plus, en interagissant avec les protéines de signalisation cellulaire (MAPK, Raf/ERK, PI3K/Akt, etc.), elles régulent les voies biologiques impliquées dans le métabolisme, la migration, l'adhésion, la prolifération et la différenciation cellulaire (Mishra S., Ande S.R., Nyomba 15 B.L.G. The role of prohibitin in cell signaling. FEBS Journal, 277, 3937 - 3946 (2010) ; Zhou T.B., Qin Y.H. Signaling pathways of prohibitin and its role in diseases. Journal of Receptors and Signal Transduction, 33, 28 - 36 (2013) ; Rajalingam K., Rudel T. Ras-Raf Signaling Needs Prohibitin. Cell Cycle, 4, 1503 - 1505 (2005)). Les prohibitines jouent donc le rôle de messager en transmettant aux différents éléments 20 de la cellule les informations relatives à un danger potentiel. De par leur mobilité, elles sont capables de moduler l'activité des différents organites et à plus grande échelle l'activité cellulaire afin qu'elle soit la mieux armée pour répondre au stress. La Figure 2 schématise les localisations subcellulaires des prohibitines en absence de stress ou en présence d'un stress modéré. 25 Grâce à la communication intracellulaire qu'elles initient en réponse à un stress, les prohibitines participent activement aux mécanismes d'adaptation vis-à-vis de conditions défavorables : leur rôle cytoprotecteur est indéniable. Selon la présente invention, l'exposition de kératinocytes humains normaux à un environnement pollué (abaissement de la teneur en oxygène, exposition au 30 benzo[a]pyrène ou aux « particules matter ») entraine une réduction significative de la synthèse de prohibitine-1. 3046539 7 L'utilisation de Pichia Heedii ou d'un principe actif de Pichia Heedii sur la peau selon l'invention permet d'augmenter ou de restaurer le taux de prohibitines, en particulier de prohibitine-1, dans les cellules de la peau, et permet ainsi de récréer un environnement favorable à la communication entre les organites : élément indispensable à l'initiation de 5 la machinerie pour lutter contre le stress créé sur les cellules de la peau par la pollution. L'invention permet donc de limiter et lutter contre les effets délétères de la pollution qui découlent de la diminution du taux de mitokines en particulier de prohibitine dans les cellules cutanées. Ainsi, en renormalisant la synthèse de la prohibitine et en inactivant le récepteur Aryl- 10 hydrocarboné , Pichia Heedii ou un principe actif de Pichia Heedii présente un effet anti- pollution. Par la régulation de ces deux voies, l'invention permet en particulier : - d'améliorer la couleur et l'éclat de la peau (augmentation du rayonnement de la peau, réduction de l'état de fatigue des yeux, réduction de la synthèse de mélanine des cellules de la peau notamment), 15 - d'améliorer la fonction barrière de la peau et de préserver les peaux fragiles de la pollution, notamment en améliorant la différenciation épidermique et réduisant la perte insensible en eau de la peau. Pichia Heedii ou un principe actif de Pichia Heedii agit comme un bouclier contre les effets délétères de la pollution environnementale. L'invention permet d'obtenir une peau 20 plus résistante, purifiée et un teint frais et dégrisé. Préférentiellement, l'invention vise l'utilisation d'un principe actif de Pichia Heedii, en particulier d'un principe actif tel que décrit en suivant. En effet, selon un deuxième aspect, l'invention a pour objet un principe actif cosmétique caractérisé en ce qu'il s'agit d'un principe actif de Pichia Heedii. 25 Le principe actif cosmétique selon l'invention comprend des carbohydrates. Ces carbohydrates représentent préférentiellement au moins 30% en poids par rapport au poids total de matière sèche du principe actif. Les carbohydrates du principe actif de Pichia Heedii selon l'invention ont de façon préférée une masse molaire moyenne entre 360 et 4000 Da, plus précisément entre 500 30 et 1000Da, préférentiellement 550 Da. De façon particulièrement adaptée, le principe actif est un principe actif comprenant en particulier des glucomannanes de masses molaires comprises entre 360 et 4000 Da. Les 3046539 8 glucomannanes sont des sucres particuliers, constitués de glucose et de mannose. Ces sucres, avec cette taille particulière (masses molaires comprises entre 360 et 4000 Da), ne sont pas tous présents naturellement chez Pichia Heedii et leur obtention peut nécessiter une hydrolyse de Pichia Heedii. 5 Préférentiellement, les glucomannanes de masses molaires comprises entre 360 et 4000 Da représentent plus de 50% en poids des carbohydrates totaux du principe actif, encore plus préférentiellement plus de 60%. La détermination des masses molaires est préférentiellement réalisée par chromatographie d'exclusion stérique. Cette méthode de chromatographie liquide, avec 10 détection indice de réfraction (IR), permet de séparer les macromolécules en fonction de leur volume hydrodynamique. La masse molaire moyenne correspond à la moyenne des masses molaires pondérée par l'intensité des signaux obtenus pour chaque masse molaire. Le principe actif peut contenir d'autres molécules, notamment des protéines et des cendres. 15 Selon une variante particulièrement adaptée, le principe actif selon l'invention est un hydrolysat de Pichia Heedii, préférentiellement un hydrolysat enzymatique. Selon un mode de réalisation adapté, le principe actif utile selon l'invention se présente sous forme liquide et présente au moins une des caractéristiques suivantes, préférentiellement toutes : 20 - Un taux de matières sèches compris entre 13 et 57 g/I, préférentiellement entre 26 et 38 g/I, - Une teneur en carbohydrates comprise entre 6 et 27 g/I, préférentiellement entre 12 et 18 g/I, soit entre 30% et 70% en poids de matières sèches, Les carbohydrates sont constitués de glucose et de mannose sous forme simple et 25 sous forme de glucomannanes, Ces carbohydrates sont au moins 50% en poids sous forme glucomannanes de masses molaires comprises entre 360 et 4000 Da, - La présence de peptides inférieure à 15% en poids par rapport au poids de matières sèches, 30 - Une teneur en cendres comprise entre 10 et 35% en poids par rapport au poids de matières sèches. 3046539 9 Le taux de matières sèches peut être mesuré par passage à l'étuve à 105°C d'un échantillon jusqu'à obtention d'un poids constant. La teneur globale en carbohydrates peut être déterminée par la méthode de DUBOIS (Dubois M. et al., Analytical chemistry, 28, 3, 350-356, 1956). La caractérisation de la masse molaire 5 des carbohydrates présents dans le principe actif de la présente invention est réalisée par méthode HPLC. Les conditions opératoires sont préférentiellement les suivantes : Colonne : Polymer Laboratories (Varian) PL aquagel-OH 60, aquagel-OH 40 et aquagel-OH 30 de dimension 300 x 7,5 mm (en séries) avec pré-colonne de mêmes caractéristiques Solvant : tampon NaNO3 0,3 M et NaH2PO4-2H20 0,01 M, pH7 en mode isocratique 10 Détecteur : RI (Indice de Réfraction) Les masses molaires des carbohydrates sont évaluées par comparaison des temps de rétention des pics détectés dans les échantillons du principe actif avec les temps de rétention de standards injectés au préalable. Le dosage des sucres simples est réalisé par chromatographie liquide ionique. 15 La teneur en composés peptidiques est déterminée par la méthode de LOWRY (Lowry et al., Protein measurement with the folin reagent, J. Biol. Chem., 193, 265, 1951). La teneur en cendres brutes peut être déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération des échantillons du principe actif à 550°C dans un four à moufle électrique. Au lieu d'une forme liquide, le principe actif peut également se présenter sous forme de 20 poudre atomisée par exemple. Le principe actif selon l'invention peut être obtenu par tout procédé adapté à la transformation de molécules de Pichia Heedii. Préférentiellement, il est obtenu par un procédé comprenant une étape d'hydrolyse, en particulier d'hydrolyse enzymatique. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, le principe actif est obtenu par la 25 mise en oeuvre des étapes suivantes : Solubilisation de poudre de Pichia Heedii dans l'eau, préférentiellement à raison de 20 g/I, Hydrolyse chimique et/ou enzymatique, afin d'hydrolyser les carbohydrates, Inactivation enzymatique par traitement thermique, 30 Séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble, Purification afin d'éliminer les molécules ayant une masse molaire très élevée, Concentration, 3046539 10 Les paramètres des différentes étapes doivent être ajustés afin d'obtenir des principes actifs présentant les caractéristiques de l'invention, en particulier la présence de glucomannanes présentant un poids moléculaire compris entre 360 et 4000 Da. Certaines étapes peuvent être ajoutées afin d'obtenir un actif particulier, comme une étape de : 5 - Clarification ayant pour but de retirer les composés rendus insolubles lors du traitement thermique, cette clarification peut, par exemple, être réalisée par filtration sur tamis, - Filtration finale et filtration stérilisante ayant pour but d'éliminer les microorganismes qui pourraient être présents dans le produit. 10 Ces étapes prises individuellement sont usuelles dans le domaine des extractions d'actifs à partir de plantes ou de levures et l'homme du métier est à même d'en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales. Le principe actif selon l'invention ou Pichia Heedii est préférentiellement utilisé dans une composition, cette composition comprenant un milieu cosmétiquement acceptable. Il 15 s'agit de compositions dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huile-danseau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous 20 forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Il peut s'agir de compositions comprenant au moins 0,25% de Pichia Heedii ou d'un principe actif de Pichia Heedii selon la présente invention, préférentiellement entre 0,25 et 10%. 25 Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur telles que des rougeurs, tiraillements ou picotements. Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un 30 composé choisi parmi : - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; 3046539 11 - les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba, - les élastomères de silicone, - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, 5 anioniques, cationiques ou amphotères, - les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires, - les épaississants et/ou gélifiants, - les humectants, tels que les polyols comme la glycérine, - les filtres organiques, 10 - les filtres inorganiques, - les colorants, les conservateurs, les charges, - les tenseurs, - les séquestrants, - les parfums, 15 - et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative. Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook publié par le Personal Care Product Council). Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, 20 actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. Ces compositions sont notamment destinées à être utilisées pour lutter contre les effets délétères de la pollution sur la peau. L'invention vise aussi spécifiquement un procédé cosmétique de soin de la peau pour 25 lutter contre les effets délétères de la pollution sur la peau, en particulier pour augmenter l'efficacité de la fonction barrière de la peau et/ou améliorer la couleur et l'éclat des peaux polluées, qui consiste à appliquer au moins une fois par jour sur la peau du visage une composition comprenant au moins 0,10% en poids de matières sèches de Pichia Heedii ou d'un principe actif cosmétique de Pichia Heedii. 30 Afin d'illustrer ces effets cosmétiques sur la peau, les exemples suivants avec leurs résultats d'essais sont présentés. 3046539 12 EXEMPLES Exemple 1 : Principe actif selon l'invention Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes : 5 - Solubilisation de poudre de Pichia Heedii dans l'eau à raison de 20 g/I, - Hydrolyse enzymatique, afin d'hydrolyser les carbohydrates, - Inactivation enzymatique par traitement thermique pendant 15 mn, - Séparation des phases soluble et insoluble par décantation et récupération la phase soluble, 10 - Purification afin d'éliminer les substances ayant une masse molaire supérieure à 10 kDa, - Filtration stérilisante sur 0.22 um. Le principe actif obtenu est un liquide limpide jaune pâle présentant une matière sèche de 32 g/I, un pH de 5 et une teneur en carbohydrates (méthode de Dubois) de 15 g/I, soit 15 47% de la matière sèche. Il contient aussi des protéines. 68% des carbohydrates du principe actif sont des glucomannanes de masses molaires comprises entre 360 et 4000 Da. La détermination des masses molaires est réalisée par HPLC avec détection RI. Le profil chromatographique HPLC/RI de la fraction glucidique de ce principe actif est présenté sur la Figure 3. 20 Les carbohydrates sont composés à 77% de glucose, 23% de mannose. Exemple 2 : Principe actif selon l'invention Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes : 25 - Solubilisation de poudre de Pichia Heedii dans l'eau à raison de 20 g/I, - Hydrolyse chimique, afin d'hydrolyser les carbohydrates, - Séparation des phases soluble et insoluble et récupération la phase soluble, - Purification afin d'éliminer les substances ayant une masse molaire supérieure à 10 kDa, 30 - Filtration stérilisante sur 0.22 um Le principe actif obtenu est un liquide limpide jaune pâle présentant une matière sèche de 31 g/I, un pH de 5 et une teneur en sucres (méthode de Dubois) de 17 g/I, soit 55% de la matière sèche. 3046539 13 60% des carbohydrates du principe actif sont des glucomannanes de masses molaires comprises entre 360 et 4000 Da. Exemple 3 : Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème 5 La composition a la formulation suivante : Isononyl isononanoate (Lanol 99, Seppic) 5,0% Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3,0% Behenyl alcohol / arachidyl glucoside / arachidyl alcohol (Montanov 202, Seppic)) 3,0% Cetearyl alcohol / cetearyl glucoside (Montanov 68, Seppic) 2,0% Conservateurs 0,7% Polyacrylamide / C13-14 isoparaffin / laureth 7 (Sepigel 305, Seppic) 0,3% Eau qsp 100% Cette émulsion est blanche, souple brillante à l'odeur légère. Elle présente une application aisée, une pénétration rapide et un fini sec. EVALUATION DE L'EFFICACITE COSMETIQUE SELON L'INVENTION 10 TESTS IN VITRO o Effet d'un principe actif de Pichia Heedii sur les voies anti-pollution - Etude de la voie des mitokines - Modèle 2D L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un principe actif de Pichia Heedii à restaurer la voie des mitokines dans un modèle 2D soumis à des conditions mimant un 15 environnement pollué. Pour cela, l'action d'un principe actif de Pichia Heedii (exemple 1) sur la synthèse de la prohibitine a été étudiée sur des kératinocytes humains normaux exposés : - aux causes de la pollution, en appliquant deux composants de la pollution atmosphérique : le benzo[a]pyrène (BaP) et les particules fines (PM 2,5) ; 20 - aux conséquences de la pollution sur la teneur en oxygène de l'air, en mimant un appauvrissement avec un traitement au chlorure de cobalt. La synthèse des prohibitines a été mesurée par Western blot. Le protocole opératoire est décrit en suivant. 3046539 14 Les kératinocytes humains normaux sont ensemencés dans un milieu adapté. La pollution au BaP est réalisée par remplacement du milieu de culture par une solution de benzo[a]pyrène (BaP). Pour mimer la pollution aux particules fines, le milieu de culture est éliminé et les cellules 5 sont agressées soit par une solution de particules fines PM 2,5, soit par une solution de cobalt. Après plusieurs jours, les cellules sont rincées puis traitées avec le principe actif de Pichia Heedii (exemple 1) à 0,25%, 0,50% ou 1,00%. Ensuite, les extraits cellulaires sont récupérés, puis stockés à -80°. L'électrophorèse de Western blot est réalisée sur gel précoulé TGX (Biorad). 10 Les protéines sont ensuite transférées sur membrane PVDF (Biorad). L'immunomarquage est réalisé avec les anticorps primaires (anticorps anti-prohibitine et anticorps anti-actine), l'anticorps secondaire et le système de révélation. Les bandes sont visualisées, semi-quantifiées par densitomètrie puis analysées à l'aide du logiciel. 15 Les résultats obtenus sont présentés dans les Tableaux 1 à 3. La capacité à restaurer les prohibitines est calculée comme suit : Capacité à restaurer les Ratio essai traité composé chimique - ratio témoin avec composé chimique x 100 prohibitines = 20 Ratio témoin non traité - ratio témoin avec composé chimique Causes de la pollution : agression avec le benzo[a]pyrène : Taux des prohibitines (UA) Capacité à restaurer les prohibitines (%) Environnement non pollué Témoin 1,075 Exemple 1 à 1,00% 1,113 Environnement pollué (benzo[a]pyrène) Témoin 0,944* Exemple 1 à 0,25% 0,977 25% Exemple 1 à 0,50% 1,022' 59% Exemple 1 à 1,00% 1,031' 67% * : résultat significatif selon le test t de Student /témoin non pollué (p REVENDICATIONS1. Principe actif cosmétique caractérisé en ce qu'il s'agit d'un principe actif de Pichia Heedii. 2. Principe actif cosmétique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend au moins 30% de carbohydrates en poids par rapport au poids total de matière sèche du principe actif. 3. Principe actif cosmétique selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il comprend des glucomannanes de masses molaires comprises entre 360 et 4000 Da. 4. Principe actif cosmétique selon la précédente revendication, caractérisé en ce que les glucomannanes de masses molaires comprises entre 360 et 4000 Da représentent au moins 50% en poids des carbohydrates du principe actif. 5. Principe actif selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il présente un taux de matières sèches compris entre 13 et 57g/I. 6. Principe actif selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il présente un taux de matières sèches compris entre 26 et 38g/I. 7. Principe actif selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat de Pichia Heedii. 8. Principe actif selon l'une des revendications 1 à 7 pour une utilisation pour lutter contre les effets délétères de la pollution sur la peau en renormalisant la synthèse de la prohibitine-1. 9. Principe actif selon l'une des revendications 1 à 7 pour une utilisation pour lutter contre les effets délétères de la pollution sur la peau en inactivant le récepteur Arylhydrocarbone (Ah R). 10. Utilisation de Pichia Heedii ou d'un principe actif de Pichia Heedii comme principe actif cosmétique destiné à être appliqué sur la peau en application topique au sein d'une composition cosmétique. 11. Utilisation selon la revendication 10, pour un effet cosmétique anti-pollution sur la peau. 12. Utilisation selon l'une des revendications 10 ou 11, pour lutter contre les effets délétères de la pollution sur la peau. 3046539 37 13. Utilisation selon l'une des revendications 10 à 12, pour améliorer la couleur et l'éclat de la peau. 14. Utilisation selon la précédente revendication, pour améliorer la couleur de la peau en réduisant la synthèse de mélanine des cellules de la peau. 5 15. Utilisation selon l'une des revendications 10 à 14, pour améliorer la fonction barrière de la peau. 16. Utilisation selon la précédente revendication, pour améliorer la fonction barrière de la peau en améliorant la différenciation épidermique. 17. Utilisation selon la précédente revendication, pour améliorer la fonction 10 barrière de la peau en réduisant la perte insensible en eau de la peau. 18. Utilisation selon l'une des revendications 10 à 17, caractérisée en ce que le principe actif de Pichia Heedii est un principe actif selon l'une des revendications 2 à 7. 19. Composition cosmétique, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins 0,25% en poids de matières sèches de Pichia Heedii ou d'un principe actif de Pichia Heedii. 15 20. Composition cosmétique selon la revendication 19, caractérisé en ce que le principe actif de Pichia Heedii est un principe actif cosmétique selon l'une des revendications 2 à 7. 21. Procédé cosmétique de soin de la peau pour lutter contre les effets délétères de la pollution sur la peau, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer au moins une fois 20 par jour sur la peau du visage une composition selon l'une des revendications 19 à 20. 22. Procédé cosmétique de soin de la peau selon la revendication 21, pour augmenter l'efficacité de la fonction barrière de la peau et/ou améliorer la couleur et l'éclat des peaux polluées.