FR 3029113 A1 20160603 FR 1461817 A 20141202 COMPOSES POUR LE TRAITEMENT DES MALADIES MITOCHONDRIALES L'invention a pour objet des composés pour leur utilisation dans le traitement et la prévention des maladies mitochondriales. Les maladies mitochondriales regroupent un ensemble très large et hétérogène de maladies orphelines, qui comprend notamment les troubles liés à l'instabilité de l'ADN mitochondrial (ADNmt). Parmi eux, l'ophtalmoplégie externe progressive (Progressive External Ophthalmoplegia, PEO), l'insuffisance hépatique néonatale et la maladie d'Alpers (Alpers-Huttenlocher Syndrome, AHS) sont causées par des mutations dans le gène codant la polymérase gamma de l'ADN mitochondrial : le gène POLG (Spinazzola A, Zeviani M. Disorders of nuclear-mitochondrial intergenornic communication. Blasa Rep 2007;27(1-3):39- 5 I). Les mutations dans le gène POLG peuvent conduire à une accumulation de substitutions de bases, à des délétions de l'ADNmt ainsi qu'à des déplétions de l'ADNmt résultant en une production altérée de l'énergie via la phosphorylation oxydative. Jusqu'à présent, plus de 200 mutations pathogéniques dans le gène POLG ont été reportées. Ces mutations sont associées à un très large spectre de maladies mitochondriales incluant entre autres la PEO, la myopathie, le parkinsonisme, la ménopause prématurée, les troubles psychologiques, l'ataxie, l'encéphalopathie et la maladie d'Alpers (Hudson G, Chinnery PF. Mitochondrial DNA polymerase-gamma and human disease. Hum Mol Genet. 2006;15:R244-52). Les mutations de POLG dominantes donnent lieu à une ophtalmoplégie externe progressive associée à des délétions multiples de l'ADNmt tandis que les mutations récessives provoquent une déplétion de l'ADNmt (240% de la quantité normale en ADNmt) et une insuffisance hépatique néonatale ou une maladie d'Alpers. Il n'existe aujourd'hui aucun traitement curatif des maladies liées à l'instabilité de l'ADNmt. Les traitements sont actuellement limités à la gestion des symptômes et à des soins de soutien. Une grande variété de vitamines et cofacteurs a été utilisée chez des individus atteints de troubles mitochondriaux, bien qu'une revue systématique récente ait mis en évidence le manque de preuves justifiant leur utilisation (Chinnery P, Majamaa K, Tumbull D, Thorbum D. Treatment for mitochondrial disorders. Cochrane Database Syst Rev. 2006 Jan 25;(I):CD004426. Review. Update in: Cochrane Database Syst Rev. 2012;4:CD004426). La lévocamitine, la créatine monohydrate, le coenzyme Qio, les vitamines B et des antioxydants, tels que l'acide lipoïque alpha, la vitamine E et la vitamine C, ont été utilisés comme compléments mitochondriaux. Ainsi, des thérapies à base de vitamines et cofacteurs peuvent être proposées dans le but de fortifier les fonctions mitochondriales. Cependant, il n'y a pas eu d'études formelles sur l'utilisation de ces vitamines et cofacteurs pour la maladie d'Alpers ou d'autres maladies liées au gène POLO (Parldh S, Saneto R, Falk MI, Anslem 1, Cohen BH, Haas R. A modem approach to the treament of mitochondrial diseases. Current Treatment Options in Neurology. 2009;11:414-430). Il a également été rapporté que l'emploi de la lévo-arginine aide à réduire la fréquence et la sévérité des accidents vasculaires cérébraux associés au syndrome MELAS et pourrait être considéré chez les patients atteints de maladies liées à POLG, en particulier si une carence dans le plasma ou une concentration d'arginine dans le liquide céphalorachidien est confirmé. Le recours à des traitements de l'épilepsie réfractaire tels que la corticotropine ou la prednisone, le régime cétogène et les immunoglobulines G intraveineuses n'a pas été démontré être efficace pour le traitement de l'AHS. Une transplantation du foie chez les adultes souffrant de l'AHS et possédant une qualité de vie acceptable peut être bénéfique. Toutefois, la transplantation du foie n'est pas conseillée pour les enfants, celle-ci n'ayant pas d'effet sur la progression rapide de l'atteinte neurologique (Kelly DA. Liver transplantation: to do or not to do? Pediatr Transplant. 2000;4:170-2). Le clofilium tosylate est un agent antiarythmique de classe III dont le mécanisme d'action repose sur le blocage des canaux potassium, augmentant ainsi la durée des potentiels d'action cardiaque (US 4 289 787). L'Ibutilide est un agent antiarythmique de classe III commercialisé sous le nom de Corvert (sous forme de fumarate d'ibutilide) par Pfizer. Ce médicament est utilisé pour la réduction rapide de la fibrillation ou du flutter auriculaire en rythme sinusal. Il agit en retardant la repolaiisation par activation d'un courant lent entrant essentiellement sodique (EP 0 164 865). Le Dofétilide est un antiarythmique de classe III commercialisé par Pfizer sous le nom Tikosyn. Il est prescrit pour la prise en charge des fibrillations et flutters auriculaires. Il agit en bloquant les canaux potassium (EP 0 245 997). Le brétylium tosylate est un agent antiarythmique de classe III empêchant la libération de noradrénaline par les terminaisons sympathiques. Il est indiqué pour la prophylaxie et le traitement de la fibrillation ventriculaire, ainsi que pour le traitement de l'arythmie ventriculaire (US 3 441 649). L'un des buts de l'invention est de fournir des composés efficaces dans le traitement des maladies mitochondriales. Un autre aspect de l'invention est de fournir des composés efficaces dans le traitement de pathologies résultant de mutations dans le gène POLG. L'un des avantages de l'invention est de fournir des composés efficaces chez l'adulte et chez l'enfant. Un autre avantage de l'invention est de fournir des composés per flottant un traitement curatif des maladies mitochondriales et ne se limitant pas à la gestion des symptômes des maladies mitochondriales. La présente invention concerne un composé ayant la formule I R2 R4 RI (Y)rn (1) Rit dans laquelle Ri et Ry représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, notamment Cl ou Br, un groupe alcoxy en C1-C4, un groupe alkyle en Cl-C3 ou NEISO2R6, sous réserve qu'au moins l'un des deux éléments Ri ou soit différent de H; R2 représente OH ou H; R3 et R4 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de R7 0 carbone ou où R7 représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alcoxy en C1-C4, un groupe alkyle en C1-C3 ou NHSO2R8 ; R6 et R8 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en Cl-C4; -X = -R5 ou le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison, sous réserve que + lorsque -X =- R5; R5 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl-C4; m = 0 ou 1, sous réserve que in = 1 lorsque -X - R5 et m 0 lorsque -X - le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison ; 0, 1, 2 ou 3 ; Y est un anion acceptable sur le plan thérapeutique; pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitoehondrial. 0 représente l'ensemble vide. Les inventeurs ont trouvé de façon inattendue que l'application des composés de l'invention à des organismes atteints d'une maladie mitochondriale permettait une amélioration de leur état. Cette invention s'appuie notamment sur des résultats obtenus en appliquant les composés définis ci-dessus à des organismes mimant une maladie mitochondriale ou à des cultures cellulaires de fibroblastes cutanés d'un patient atteint d'une maladie mitochondriale. Par « instabilité de l'ADN mitochondrial », on entend la présence de toutes mutations, délétions et/ou déplétions de l'ADN mitochondrial par rapport à l'ADN mitochondrial d'un individu sain. Au sens de la présente invention, on entend par « maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial » les maladies liées à l'aspect quantitatif de l'instabilité de l'ADN mitochondrial et les.maladies liées à l'aspect qualitatif de l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Par « maladies liées à l'aspect quantitatif de l'instabilité de l'ADN mitochondrial », on entend les maladies liées à une déplétion de l'ADN mitochondrial. Cette déplétion peut notamment être due à une ou des mutations présentes dans le gène POLG, un gène nucléaire codant pour la polymérase POLG spécifique à l'ADN mitochondrial. Par « déplétion de l'ADN mitochondrial », on entend une réduction du nombre de molécules d'ADN mitochondrial dans les mitochondries d'un organisme par rapport à un organisme sain. Les déplétions sont tissu spécifiques. Par « maladies liées à l'aspect qualitatif de l'instabilité de l'ADN mitochondrial », on entend les maladies dont la cause réside en la présence de délétions et/ou de mutations dans l'ADN mitochondrial. L'expression « délétion de l'ADN mitochondrial» signifie une perte de matériel génétique dans l'ADN mitochondrial par rapport à un ADN mitochondrial sauvage. Une délétion peut concerner un ou plusieurs nucléotides, notamment plusieurs centaines de nucléotides, de l'ADN mitochondrial. L'expression « mutation de l'ADN mitochondrial » signifie une modification de l'ADN mitochondrial par rapport à un ADN mitochondrial sauvage. Les mutations regroupent les mutations par substitution, les mutations par insertion et les mutations par délétion de petite taille (de 1 à 10 nucléotides). Le tenue « mutation par substitution » signifie le remplacement d'un ou plusieurs nucléotides par un nucléotide différent dans la molécule d'ADN mitochondrial. Le terme « mutation par insertion » signifie l'addition d'un ou de plusieurs nucléotides dans la molécule d'ADN mitochondrial. Les maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial comprennent notamment, sans y être limitées, le syndrome d'Alpers-Huttenlocher les (ABS), le spectre des myo-cérébrohépatopathies de l'enfant (MCHS), les épilepsies myocloniques avec myopathie et ataxie sensitive MEMSA (Myoclonic epilepsy myopathy sensory ataxia), l'ataxie spin.océrébelleuse avec épilepsie (SCAE), les ataxies avec neuropathies incluant les syndromes MIRAS et SANDO, l'ophtalmoplégie externe progressive autosomique récessive (arPEO), 1' ophtalmoplégie externe progressive autosomique dominante (adPEO), l'encéphalomyopathie mitochondriale neurogastrointestinale (MNGIE), la myopathie infantile et amyotrophie spinale liées aux mutations de TK2, les insuffisances hépatiques avec déplétion de l'ADNmt, les pathologies associées aux mutations des gènes SUCLA2 et SUCLAG1, RRM2B,AIF1, MPV17, la neuropathie optique héréditaire de Leber, le syndrome MELAS, le syndrome MERR_F, ainsi que certaines formes du syndrome de Leigh, d'ophtalmoplégie externe progressive chronique, de myopathie, de cardiomyopathie, de diabète-surdité, d'encéphalomyopathie, et de surdité. Le terme « groupe alcoxy en Cx-Cy » signifie un groupe alkyle, possédant de x à y atomes de carbone, lié à un atome d'oxygène. Le teinte « groupe alkyle en Cx-Cy » signifie une chaine hydrocarbonée saturée, linéaire ou branchée, comprenant de x à y atomes de carbone. Par « X -R5 », on entend que l'amine à laquelle est liée le groupe R5 est une amine quaternaire et que dans ce cas i + et m - 1, le composé étant alors sous forme de sel. Par « X - le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison », on entend que l'amine correspondante est une amine tertiaire et que dans ce cas i 0, m 0 et (Y"). - 0. Par « amine quaternaire », on entend que l'atome d'azote est chargé positivement, c'est-à-dire qu'il est sous forme de cation, et qu'il est substitué par 4 substituants. Au sens de la présente invention, l'un des substituants peut être l'atome d'hydrogène. Par « amine tertiaire », on entend que l'atome d'azote est substitué par 3 substituants. Par « anion acceptable sur le plan thérapeutique », on entend tout anion non toxique et n'induisant pas une perte de l'effet thérapeutique ou prophylactique du cation auquel il est associé. L'invention concerne en particulier un composé de formule (Y-)rn (I) dans laquelle R1 et Ri, représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, notamment Cl ou Br, un groupe alcoxy en C1-C4, un groupe alkyle en C1-C3 ou NHSO2R6, sous réserve qu'au moins l'un des deux éléments Ri ou Ri, soit différent de H; R2 représente 011 ou H; R3 et R4 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de R7 carbone ou où R7 représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alcoxy en C1-C4, un groupe alkyle en Cl-C3 ou NIISO2R8 ; R6 et Rs représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en C1-C4 ; -X --Rs ou le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison, sous réserve que I = lorsque-X - Rs ; R5 représente un groupe alkyle en C1-C4; m 0 ou 1, sous réserve que m 1 lorsque -x =- R5 et m = 0 lorsque -X = le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison ; n= 0, 1, 2 ou 3 ; Y" est un anion acceptable sur le plan thérapeutique; pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le composé de formule I tel que défini ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial, comporte un élément y- choisi parmi l'ion tosylate, carbonate, l'ion phosphate et l'ion chlorure. Avantageusement, l'invention concerne un composé de formule I tel que défini ci- dessus ( )m ) formule dans laquelle : Ri et Ri, représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, Cl, Br, ou NHSO2R6, sous réserve qu'au moins l'un des deux éléments Ri ou Ri' soit différent de H; R2 représente OH ou ; R3 et R4 représentent indépendannnent l'un de l'autre un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de R7 - carbone ou où R7 représente un atome - d'halogène ou NHSO2R8, sous réserve que R3 et R4 ne peuvent pas être simultanément o R7 - R6 et R8 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en Cl-C4 ; -X -R5 ou le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison, sous réserve que i + lorsque -X -- -R5 ; R5 représente un groupe alkyle en Cl C4; m 0 ou 1, sous réserve que m = 1 lorsque -X = - R5 et m 0 lorsque -X = le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison ; n = 0, 1, 2 ou 3 ; Y - est choisi parmi l'ion tosylate, l'ion carbonate, l'ion phosphate et l'ion chlorure ; pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule Ta 1:0 (la) dans laquelle Ri représente un atome d'halogène, notamment Cl ou Br, un groupe alcoxy en Cl-C4, un groupe alkyle en CI-C3 ou NHSO2R6j R2 représente OH ou H; R3 et R4 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone OU RI Où R7 représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alcoxy en Cl-C4, un groupe alkyle en C1-C3 ou NHSO2Rs ; R6 et R8 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en Cl-C4; -X =-R5 ou le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison, sous réserve que = + lorsque -X = - R5 ; R5 représente un atome'd'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl -C4; m = 0 ou 1, sous réserve que m = 1 lorsque X = - R5 et m = 0 lorsque -X = le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison ; ri- 0, 1, 2 ou 3 ; Y" est un anion acceptable sur le plan thérapeutique; pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule lb RI R2 R3 (1b) dans laquelle Ri représente un atome d'halogène, notamment Cl ou Br, un groupe alcoxy en C1-C4, un groupe alkyle en Cl-C3 ou NHSO2R6; R2 représente OH ou H; R3 et R4 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de R7 - carbone ou où Rry représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alcoxy en C1-C4, un groupe alkyle en C1-C3 ou NI-ISO2R8 ; R6 et R8 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en Cl-C4 ; -X -R5 ou le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison, sous réserve que + lorsque -X R5; R5 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4; m = 0 ou 1, sous réserve que m - 1 lorsque -X = - R5 et m - 0 lorsque -X = le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison ; n 0, 1,2 ou 3 ; Y est un anion acceptable sur le plan thérapeutique; pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule Je R1' dans laquelle Ri et Ri, représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, notamment Cl ou Br, un groupe alcoxy en C1-C4, un groupe alkyle en Cl-C3 ou NIISO2R6, sous réserve qu'au moins l'un des deux éléments Ri ou Ri, soit différent de H; R2 représente OH ou H; R3 et R4 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de R7 - carbone ou où R7 représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alcoxy en C1-C4, un groupe alkyle en Cl-C3 ou NHSO2R8 ; R6 et R8 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en Cl-C4 ; n = 0, 1, 2 ou 3 ; pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Le groupement amine supportant les groupes R3 et R4 du composé de formule 1c est une amine tertiaire. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule Id (Id) RI' dans laquelle Ri et Ri, représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, notamment Cl ou Br, un groupe alcoxy en C1-C4, un groupe alkyle en Cl-C3 ou NHSO2R6, sous réserve qu'au moins l'un des deux éléments Ri ou Ri, soit différent de H; R2 représente OH ou H; R3 et R4 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de R7 0 carbone ou où R7 représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alcoxy en Cl-C4, un groupe alkyle en C1-C3 ou NHSO2Rs ; R6 et R8 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en C1-C4 ; R5 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Ci-C4; n = 0, 1, 2 ou 3 ; Y- est un anion acceptable sur le plan thérapeutique; pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Le groupement amine supportant les groupes R3, RI et R5 du composé de formule Id est une amine quaternaire. Dans un mode de réalisation avantageux, le composé de l'invention tel que défini ci-dessus a pour formule (a) : CI (a) Le composé de formule (a) est le clofilium tosylate, le composé de formule : 14 CI étant le clofilium, et le composé de formule : o Ii étant l'ion tosylate. Dans un autre mode de réalisation avantageux, le composé de l'invention tel que défini ci-dessus a pour formule (b) : Le composé de formule (b) est le Dofétilide. Dans un autre mode de réalisation avantageux, le composé de l'invention tel que défini ci-dessus a pour formule (c): OH (c) Le composé de formule (c) est l'Ibutilide. Dans un autre mode de réalisation avantageux, le composé de l'invention tel que défini ci-dessus a pour formule (d) : (d) Le composé de formule (d) est le brétylium tosylate, le composé de formule : étant le brétylium, et le composé de faunule : étant l'ion tosylate. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (a), (b), (c) ou (d), pour une administration à une dose de 1 itg/kg à 50 mg/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitoehondrial. Plus particulièrement l'invention concerne un composé de formule (a), (b), (c) ou (d), pour une administration à une dose de 1 à 50 [tg/kg, de 50 à 500 [tg/kg, de 500 tg à 5 mg/kg, ou de 5 à 50 mgfkg, encore plus particulièrement à une dose de 1 à 12 [tg/kg, de 12 à 20 ig/kg, de 20 à 50 ilg/kg, de 20 à300 [tg/kg, de 50 à300 [ig/kg, de 300 à 5001.1g/kg , de 500 [tg/kg à 1 mg/kg, de 1 à 5 mg/kg, de 5 à 30 mg/kg , ou de 30 à 50 mg/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (a), (b), (c) ou (d), se présentant sous forme de dose unitaire de 30 [tg à 6000 mg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrie Au sens de la présente invention, on entend par « dose unitaire » la dose correspondant à la dose totale du composé prise en une seule fois, quel que soit le mode d'administration du composé. Plus particulièrement l'invention concerne un composé de formule (a), (b), (e) ou (d), se présentant sous forme de dose unitaire de 30 à 500 pe, de 500 [tg à 2,5 mg, de 2,5 à 60 mg, de 60 à 150 mg, ou de 150 à 6000 mg, encore plus particulièrement se présentant sous forme de dose unitaire de 30 à 150 [tg, de 150 à 300 [tg, de 300 à 500 ltg, de 500 1.1g à 1 mg, de 1 à 2,5 mg, de 2,5 à30 mg, de 30 mg à60 mg, de 150 à2500 mg, de 2500 à 4500 mg ou de 4500 à 6000 mg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (a), (b), (c) ou (d), pour une administration par voie orale à une dose de 1 [tg/kg à 50 mg/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitoehondrial. Plus particulièrement, l'invention concerne un composé de formule (a), (b), (e) ou (cl), pour une administration par voie orale à une dose de 1 à 50 [tg/kg, de 50 à 500 g/kg, de 500 [tg/kg à 5 mg/kg, ou de 5 à 50 mg/kg, encore plus particulièrement à une dose de 1 à 20 [tg/kg, de 20 à 50 g/kg, de 50 à 300 [tg/kg, de 300 à 500 [tg/kg, de 500 [tg/kg à 1 mg/kg, de 1 à 5 mg/kg, de 5 à 30 mg/kg, ou de 30 à 50 mg/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de fou-male (a), (b), (e) ou (d), se présentant sous forme de dose unitaire de 30 lig à 6000 mg, pour une administration par voie orale, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Plus particulièrement, l'invention concerne un composé de formule (a), (b), (e), ou (d), se présentant sous forme de dose unitaire de 30 à 500 g, de 500 }tg à 60 mg, ou de 60 mg à 6000 mg, encore plus particulièrement se présentant sous forme de dose unitaire de 30 à 125 lig, de 125 à 300 i.tg, de 300 à 500 de 500 iag à 1,5 mg, de 1,5 à 25 mg, de 25 à 60 mg, de 60 à 500 mg, de 500 à 2000 mg, ou de 2000 à 6000 mg, pour une administration par voie orale, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (a), (b), (e) ou (d), pour une administration par voie intraveineuse à une dose de 1 pg/kg à 50 mg/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Plus particulièrement, l'invention concerne un composé de formule (a), (b), (c) ou (d), pour une administration par voie intraveineuse à une dose de 1 à 20 g/kg, de 20 à 500 itg/kg, de 5001.1g/kg à 5 mg/kg, ou de 5 à 50 mg/kg, encore plus particulièrement à une dose de 1 à 12 pe/kg, de 12 à 20 g/kg, de 20 à 50 lag/kg, de 20 à 150 p.g/kg, de 50 à 300 g/kg, de 300 à 500 lagikg, de 500 j.tg/kg à 1 mg/kg, de 1 à 5 mg/kg, de 5 à 30 mg/kg, ou de 30 à 50 mg/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (a), (b), (c) ou (d), se présentant sous forme de dose unitaire de 30 [tg à 6000 mg, pour une 'administration par voie intraveineuse, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Plus particulièrement, l'invention concerne un composé de formule (a), (b), (c) ou (d), se présentant sous faune de dose unitaire de 30 à 500 lig, de 500 p, g à 30 mg, de 30 à 150 mg, ou de 150 à 6000 mg, encore plus particulièrement se présentant sous forme de dose unitaire de 30 à 1501.1g, de 150 à 500 itg, de 500 lag à 1,5 mg, de 1,5 à 30 mg, de 30 à 60 mg,- de 60 à 150 mg, de 150 à 1000 mg, de 1000 à 2500 mg, ou de 2500 à 6000 mg, pour une administration par voie intraveineuse, pour son Utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN rnitochondrial. Dans un mode de réalisation encore plus particulier, l'invention concerne un composé de formule (a) : cl (a) . pour une administration par voie orale à une dose de 50 à 500 pg/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Plus particulièrement, l'invention concerne un composé de formule (a), pour une administration par voie orale à une dose de 50 à 300 tg/kg, ou de 300 à 500 ig/kg, encore plus particulièrement à une dose de 50 à 100 !.tg/kg, de 100 à200 !.a.g/kg, de 200 à 300 itg/kg, de 300 à 400 ug/kg ou de 400 à 500 p.g/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (a) : ci (a) se présentant sous forme de dose unitaire de 1,5 mg à 60 mg, pour une administration par voie orale, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Plus particulièrement, l'invention concerne un composé de formule (a), se présentant sous farine de dose unitaire de 1,5 à 25 mg ou de 25 à 60 mg, encore plus particulièrement de 1,5 à 8 mg, de 8 à 15 mg, de 15 à 25 mg, de 25 à 35 mg, de 35 à 60 mg, de 35 à 45 mg, ou de 45 à 60 mg, pour une administration par voie orale, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (a) : CI (a) pour une administration par voie intraveineuse à une dose de 20 à 250 [tg/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrie, Plus particulièrement, l'invention concerne un composé de formule (a), pour une administration par voie intraveineuse à une dose de 20 à 150 [tg/kg ou de 150 à 250 .tg/kg, encore plus particulièrement à une dose de 20 à 50 ag/kg, de 50 à 100 tg/kg, de 100 à 150 [tg/kg, de 150 à 200 ltg/kg, ou de 200 à 250 mg/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrie. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (a) : a (a) se présentant sous forme de dose unitaire de 0,5 mg à 30 mg, pour une administration par voie intraveineuse, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Plus particulièrement, l'invention concerne un composé de foimule (a), se présentant sous forme de dose unitaire de 0,5 mg à 12 mg ou de 12 à 30 mg, encore plus particulièrement se présentant sous forme de dose unitaire de 0,5 à 4 mg, de 4 à 8 mg, de 8 à 12 mg, de 12 à 16 mg, de 16 à 30 mg, de 16 à 20 mg ou de 20 à 30 mg, pour une administration par voie intraveineuse, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mite chondrial. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (b) : se présentant sous forme de dose unitaire de 125 à 500 mg deux fois par jour, pour une administration par voie orale, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Plus particulièrement, l'invention concerne un composé de formule (b), se présentant sous forme de dose unitaire de 125 à 300 [tg ou de 300 à 500 m,g deux fois par jour, encore plus particulièrement se présentant sous forme de dose unitaire de 125 à 200 'tg, de 200 à 300 itg, de 300 à 400 p.g, ou de 400 à 5001..tg deux fois par jour, pour une administration par voie orale, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (c) : (b) 21 S (c) N pour une administration par voie intraveineuse à une dose de 5 itg/kg à 20 lig/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Plus particulièrement, l'invention concerne un composé de formule (c), pour une administration par voie intraveineuse à une dose de 5 à 12 .tg,/l(g ou de 12 à 20 peikg, encore plus particulièrement à une dose de 5 à 8 itg/kg, de 8 à 12 Fig/lcg, de 12 à 16 [tg/kg, ou de 16 à 20 ug/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrie Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (e) : 0 (c) N se présentant sous forme de dose unitaire de 150 lig à 2500 [tg, pour une administration par voie intraveineuse, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Plus particulièrement, l'invention concerne un composé de formule (c), se présentant sous forme de dose unitaire de 150 à 1000 p,g ou de 1000 à 2500 ug, encore plus particulièrement se présentant sous forme de dose unitaire de 150 à 650 ug, de 650 à 1000 [tg, de 1000 à 1500 [tg, de 1500 à 2500 [tg, de 1500 à 2000 ug, ou de 2000 à 2500 ug, pour une administration par voie intraveineuse, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (d) : (d) pour une administration par voie intraveineuse à une dose de 5 mg/kg à 50 mg/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Plus particulièrement, l'invention concerne un composé de formule (d), pour une administration par voie intraveineuse à une dose de 5 à 30 mg/kg ou de 30 à 50 mg/kg, encore plus particulièrement à une dose de 5 à 10 mg/kg, de 10 à 20 mg/kg, de 20 à 30 mg/kg, de 30 à 40 mg/kg, ou de 40 à 50 mg/kg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitoehondrial. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (d) : (d) se présentant sous forme de dose unitaire de 150 mg à 6000 mg, pour une administration par voie intraveineuse, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Plus particulièrement, l'invention concerne un composé de formule (d), se présentant sous forme de dose unitaire de 150 à 2500 mg ou de 2500 à 6000 mg, encore plus particulièrement se présentant sous forme de dose unitaire de 150 à 800 mg, de 800 à 1500 mg, de 1500 à 2500 mg, de 2500 à 3500 mg, de 3500 à 6000 mg, de 3500 à4500 ou de 4500 à6000 mg, pour une administration par voie intraveineuse, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Avantageusement, l'invention concerne un composé de formule (a), (b), (c) ou (d), se présentant sous forme de solution injectable, sirop, suspension, poudre, gélule, comprimé, pastille, granule, pilule ou suppositoire, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé de formule (a), (b), (c), ou (d), pour une administration par voie orale, se présentant sous forme de sirop, suspension, poudre, gélule, comprimé, pastille, granule ou pilule, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. Avantageusement, l'invention concerne un composé tel que défini ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à au moins une mutation, ou à au moins une délétion ou à au moins une insertion, ou à une combinaison de ces éléments, dans le gène POLG. , Dans un autre mode de réalisation, l'invention concerne un composé tel que défini ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial non liées aux mutations du gène POLG. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé tel que défini ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à une déplétion ou une délétion de l'ADN mitochondrie. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé tel que défini ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à une mutation ponctuelle de l'ADN mitochondrie. Dans un mode de réalisation encore plus particulier, l'invention concerne un composé tel que défini ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention - de maladies associées à des anomalies quantitatives ou qualitatives de l'ADN mitochondrial telles que la maladie d'Alpers (AHS), le spectre des myo-cérébro-hépatopathies de l'enfant (MCHS), les épilepsies myocloniques avec myopathie et ataxie sensitive MEMSA (Myoclonic epilepsy myopathy sensory ataxia), l'ataxie spinocérébelleuse avec épilepsie (SCAE), les ataxies avec neuropathies incluant les syndromes MIRAS et SANDO, Pophtalmoplégie externe progressive autosomique récessive (arPEO), Pophtalmoplégie externe progressive autosomique dominante (adPEO), encéphalomyopathie mitochondfiale neurogastrointestinale (MNGIE), le syndrome de Pearson, le syndrome de Kearns-Sayre, la myopathie infantile et l'amyotrophie spinale liées au mutations de TK2, les insuffisances hépatiques avec déplétion de PADNmt, les pathologies associées aux mutations des gènes SUCLA2 et SUCLAG 1 , KR11/12B, AIF1 MPY I 7, ou - des maladies associées à des mutations ponctuelles de l'ADN mitochondrial telles que la neuropathie optique héréditaire de Leber, du syndrome MELAS, du syndrome MERRF, et certaines faunes de syndrome de Leigh, d'ophtalmoplégie externe progressive chronique, de myopathie, de cardiomyopathie, de diabète-surdité, d'encéphalomyopathie et de surdité. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé tel que défini ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à au moins une mutation, ou à au moins une délétion ou à au moins une insertion, ou à une combinaison de ces éléments, dans le gène POLG, lesdites maladies comprenant la maladie d'Alpers (AHS), le spectre des myo-cérébro-hépatopathies de l'enfant (MCHS), les épilepsies myocloniques avec myopathie et ataxie sensitive MEMSA (Myoclonic epilepsy myopathy sensoryataxia), les ataxies spinocérébelleuses avec épilepsie (SCAE), les ataxies avec neuropathies incluant les syndromes MIRAS et SANDO, Pophtalmoplégie externe progressive autosomique récessive (arPEO) et l'ophtalmoplégie externe progressive autosomique dominante (adPEO). Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé tel que défini ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à une déplétion ou une délétion de l'ADN mitochondrial, lesdites maladies comprenant Pophtahnoplégie externe progressive autosomique récessive, I' encéphalomyopathie mitoehondriale neurogastrointestinale, le syndrome de Pearson, le syndrome de Keams-Sayre, la myopathie infantile et l'amyotrophie spinale liées aux mutations de TK2 , les insuffisances hépatiques avec déplétion de l'ADNmt, les pathologies associées aux mutations des gènes SUCLA2 et SUCLAG 1 , RRA/I2B, AlF1 , MPVI 7 et l' ophtalmoplégie externe progressive autosomique dominante. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un composé tel que défini ci-dessus, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à une mutation ponctuelle de l'ADN mitochondrial, lesdites maladies comprenant la neuropathie optique de Leber, le syndrome de MELAS, le syndrome de MERRF, et certaines formes de syndrome de Leigh, d'ophtalmoplégie externe progressive chronique, de myopathie, de cardiomyopathie, de diabète-surdité, d'eneéphalomyopathie et de surdité. DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1: La figure l représente la densité optique (D0600) d'une culture cellulaire de levure Saccharornyces cerevisiae mutante dans le gène MIP 1 (mip1G69 après 24 heures de culture en fonction de la concentration de elofilium tosylate ajoutée au milieu de culture. Figure 2 : La figure 2 représente la fréquence, en pourcentage, de production de colonies petite de la souche de levure mip1G6515 en présence (CLOF) et absence (DMSO) de clofilium tosylate 32 dans le milieu de culture. Figure 3 : La partie A représente la fréquence, en pourcentage, de production de colonies petite des mutants mipl récessifs. La partie B représente la réduction du nombre de colonies petite en présence de clofilium tosylate 32 1.IM comparé au nombre de cellules non traitées (cellules en présence de DMSO) chez les mutants mipl récessifs. La partie C représente la fréquence, en pourcentage, de production de colonies petite des mutants mipl dominants. La partie D représente la réduction du nombre de colonies petite en présence de clofilium tosylate 32 p.fvf comparé au nombre de cellules non traitées (cellules en présence de DMSO) chez les mutants mipl dominants. Figure 4 : La figure 4 représente le nombre de colonies résistantes àPérythromycine (EryR) sur le nombre total de colonies (fréquence des cellules résistantes à l'érythromycine) des mutants mipl récessifs en absence (DMSO) et en présence (CLOF) de clofillum tosylate. Figure 5 : La figure 5 représente la fréquence, en pourcentage, de production de coloniespetite, chez les souches de levures miplGe 0651 Aisne/ mipiA4592T et mipp1692T Ami], en présence de clofilium tosylate 32 1.LM (gris foncé) ou en absence de clofilium tosylate (présence de DMSO, gris clair). Figure 6 : La figure 6 représente la vitesse de consommation de dioxygène (V02) en mno1/2x106 cellules/min chez des levures exprimant le gène sauvage MIP1 ou le gène muté mip/G65Ls', en présence (CLOF) ou en absence (DMSO) de clofillum tosylate 32 itM. Figure 7 : La figure 7 représente l'analyse par électrophorèse sur gel SDS/PAGE des fractions protéiques mitochondriales des cellules cultivées en présence (CLOF, +) ou en absence (DMSO, -) de clofilium tosylate 32 i,t114. Les protéines étudiées sont la protéine Mipl-HA, la protéine Mip1G651S-HA (analyse sur gel SDS/PAGE 6%), la protéine mitochondriale Cox2 et la porine (analyse sur gel SDS/PAGE 10%). Les protéines après séparation sont transférées sur membrane de nitrocellulose puis révélées par détection de l'activité peroxydase ECLP1" à l'aide d'anticorps primaires et secondaires couplés à la horseradish peroxydase (HRP). La bande marquée d'une * est une cross-reaction de l'anticorps anti-HA. Figure 8: La figure 8 représente le pourcentage de nématode Caenorhabditis elegans aux stades Li à L3 et au stade L4-Adulte par rapport au nombre total de nématodes chez une lignée sauvage (N2) et chez une lignée mutée TB2143 (polg-1(ok15484/+), délétion hétérozygote de 2149 bp dans la séquence codante du gène polg-1) en fonction de la concentration en clofilium tosylate contenue dans les boîtes NOM des nématodes. Figure 9 : La figure 9 représente le pourcentage de larves de nématode TB2143 (polg1(ok1548A/+)) haploinsuffisants élevées sur des boîtes NGM contenant 30 i.tg/mL de bromure d'éthidium dont le développement s'est arrêté au stade L3 selon l'absence (DMSO) ou la présence (CLOF) de clofilium tosylate 50 i.t,M dans les boites. Figure 10 : La figure 10 représente la courbe dose-réponse du clofilium tosylate sur la résistance des nématodes TB2143 haploinsuffisants (polg-1(ok1548A/+)) au bromure d' éthidium : le pourcentage de larves L3 (arrêt du développement) est représenté en fonction de la concentration de clofilium tosylate contenue dans les boîtes NGM des nématodes comprenant 30 pg/mL de bromure d'éthidium. Figure 11 : La figure 11 représente la courbe dose-réponse de la quinidine sur la résistance des nématodes TB2143 haploinsuffisants (polg-1 (ok1548A/+)) au bromure d'éthidium : le pourcentage de larves L3 (arrêt du développement) est représenté en fonction de la concentration de quinidine contenue dans les boîtes NGM des nématodes comprenant 30 p.g/mL de bromure d'éthidium. Figure 12: La partie A représente le nombre d'oeufs pondus par des nématodes homozygotes TB2143 (polg-1(A/A)) en absence (DMSO) ou en présence (CLOF) de clofilium tosylate 50 iM dans les boîtes NGM des nématodes. La partie B représente le nombre de larves, donc d'éclosions des oeufs pondus, par 5 nématodes homozygotes TB2143 (polg-1(A/A)) en absence (DMSO) ou en présence (CLOF) de clofilium tosylate 50 1.iM dans les boîtes NGM des nématodes. Figure 13 : La figure 13 représente le pourcentage de nématodes TB2143 homozygotes (polg1(ok1548AJA)) morts et présentant une extrusion de l'intestin et/ou des gonades au 7ème jour de l'adulte en absence (DMS0) et en présence (CLOF) de clofilium tosylate 50 M. Figure 14 : La figure 14 représente le pourcentage d'ADNmt des nématodes TB2143 homozygotes (polg-1(ok1548A/A)) par rapport à la souche de référence N2 en présence de DMSO et en présence de clofilium tosylate 50 pM. Figure 15 : La figure 15 représente l'index cellulaire, représentatif de la viabilité des cellules, de fibroblastes humains cultivés avec différentes concentrations de clofilium tosylate en fonction du temps. La partie A représente l'index cellulaire des fibroblastes contrôles. La partie B représente l'index cellulaire de fibroblastes de patient ayant une mutation sur chaque allèle du gène POLO. Figure 16 : La figure 16 représente le ratio de la quantité .d'ADNmt sur la quantité d'ADN nucléaire (ADNnu) chez les fibroblastes contrôles et les fibroblastes d'un patient présentant une mutation sur chaque allèle du gène POLO cultivés en absence (DMSO) et en présence (CLOF) de clofilium tosylate 2,5 JIM. Figure 17: La figure 17 représente-le pourcentage de déplétion de l'ADNint de fibroblastes cutanés d'un patient présentant une mutation sur chaque allèle du gène POLO comparé à la quantité d'ADNmt de fibroblastes cutanés contrôles, cultivés en milieu quiescent en absence de tout traitement (NT) ou en présence de DMSO (DMSO) ou présence de clofilium tosylate 1 (CLOF) en fonction du temps. Figure 18 : La figure 18 représente le pourcentage de nématodes haploinsuffisants TB2143 (polg-1(ok1548A/+)) au stade adulte et au stade de développement L4 après 4 jours d'élevage sur des boîtes NGM supplémentées avec 30 itg/mL de bromure d'éthidium et différentes concentrations de clofilium tosylate ou du DMSO. Figure 19 : La figure 19 représente le pourcentage de nématodes haploinsuffisants TB2143 (po1g-1(ok1548A/+)) au stade adulte et au stade de développement L4 après 4 jours d'élevage sur des boîtes NOM supplémentées avec 30 fog/mL de bromure d'éthidiurn et différentes concentrations d'Ibutilide hemifirramate ou du DMSO. Figure 20 : La figure 20 représente le pourcentage de nématodes haploinsuffisants TB2143 (polg-1(ok15484/+)) au stade adulte et au stade de développement L4 après 4 jours d'élevage sur des boîtes NGM supplémentées avec 30 mg/mL de bromure d'éthidium et du clofilium tosylate 50 !.1,M, ou différentes concentrations de Dofétilide ou du DMSO. Figure 21 : La partie A représente la réduction du nombre de colonies petite en présence de clofilium tosylate 32 pLIVI (gris foncé) comparé au nombre de cellules non traitées (cellules en présence de DMSO, gris clair) chez le mutant Afis.l. La partie B représente la réduction du nombre de colonies petite en présence de clofilium tosylate 32 uM (gris foncé) comparé au nombre de cellules non traitées (cellules en présence de DMSO, gris clair) chez le mutant mip1G"' ainsi que la réduction calculée (attendu) et celle observée chez le double mutant rnip1G8G7R4fis1. La partie C représente la réduction du nombre de colonies petite en présence de clofilium tosylate 32 1.1.M (gris foncé) comparé au nombre de cellules non traitées (cellules en présence de DMSO, gris clair) chez le mutant mip1G651s ainsi que la réduction calculée (attendu) et celle observée chez le double mutant n'apiG65IS Afisi. EXEMPLES Les exemples 1 à 14 et 17 à 20 concernent le clofilium tosylate: les exemples 1 à 6 et 17 concernent la levure Saccharomyces cerevisiae, les exemples 7 à 11 et 20 concernent le nématode Caenorhabditis elegans et les exemples 12 à 14, 18 et 19 concernent les fibroblastes humains. L'exemple 15 concerne l'Ibutilide et le nématode et l'exemple 16 concerne le Dofétilide et le nématode. L'exemple 21 concerne la combinaison du clofilium tosylate avec le resvératrol et les fibroblastes humains. Matériel et méthodes Les levures S. cerevisiae utilisées dans les exemples 1 à 6 et 17 sont des levures de fond génétique DWM-5A : Mat a ade2-1 leu2-3, 112 ura3-1 tipi-1 his3-11, 15 can1-100 Amip1::KanR transformées par un plasmide mono-copie (ARS-CEN) pFL39 (TRP1) permettant l'expression des différents allèles de MIP1 (Baruffini, E., Lodi, T., Dallabona, C., Puglisi, A., Zeviani, M. and Ferrero, I. (2006) Genetic and Chemical rescue of the Saccharomyces cerevisiae phenotype induced by mitochondrial DNA polymerase mutations associated with progressive extemal ophtalmoplegia in humans. Hum. Mol. Genet., 15, 2846 - 2855). Les nématodes C. elegans utilisés dans les exemples 7 à 11 et 15, 16 et 20 sont la lignée BRISTOL N2 sauvage, la lignée VC1224 (polg-1(olc1548)/mT1 II; +/mTl[dpy-10(e128)1 II) du consortium Caenorhabditis Genetics Center (CGC), la lignée TB2143 (polg-1(ok1548)1+ II; +1 min [dpy-10(e128) mi s14] II) (A. Trifunovic, Allemagne) et la lignée DA631 (eat-3(ad426) II; him-8(e1489) IV) (CGC). Exemple 1 : Détermination de la concentration maximale de clofilium tosylate tolérée par la souche de levure Saccharomyces cerevisiae mip1G651's' L'inhibition de croissance (MIC, Minimum Inhibitory Concentration) du clofilium tosylate sur la souche mip/G651s est testée pour des concentrations de clofilium tosylate de 512 1.tM, 256 [LM, 1281.1M, 64 M, 32 ptM, 16 i,t114, 8 p,M, 41..LM, 2 1.1M, et 1 M. A partir d'une préculture ofn en milieu selectif (SC-URA, 2% éthanol (v/v)), 50 mL de milieu riche YPD (1% Yeast Extract, 0,5% Bacto Peptone, 2% Glucose) sont ensemencés à une D0600 de 0,05/mL. Ces 50 mL de culture sont répartis dans une série de dix tubes, à raison de 2 mL de culture / tube, et 4 mL de culture sont déposés dans un dernier tube. Dans ce dernier tube (tube 1) est ajouté le clofilium tosylate à la concentration maximale : 512 jaM (solubilité maximale). De ce tube 1, 2 mL de culture sont mis dans le tube 2. Le tube 2 contient 4 mL de culture et le clofilium tosylate à une concentration de 256 p.M. 2 mL du tube 2 sont ajoutés au tube 3 et ainsi de suite. Chaque tube contient la drogue à une concentration égale à la moitié de celle du tube précédent. Deux contrôles sont effectués, sans clofilium tosylate et avec du DMSO (le volume étant le même que celui qui a servi à diluer le clofilium tosylate). Les cultures sont incubées à 28°C avec agitation pendant 24 heures et la densité optique (D0600) est mésurée. Les résultats sont présentés en Figure I. La concentration choisie de clofilium tosylate pour l'étude de son effet chez la levure S. cerevisiae est de 32 Exemple 2: Effet du clofilium tosylate sur la production de colonies petite chez des souches mipl mutées de levure Le taux de cellules petite dans mie population représente les cellules ne respirant pas du fait de remaniements de l'ADNInt etiou ayant perdu leur ADNmt. 2.1. iltode opératoire A partir d'une préculture en milieu selectif (SC-TRP, 2% éthanol (v/v)) de la souche mip.1 mutée, 2.105 cellules/mL sont ensemencées dans 2 mL de milieu riche YPD (1% Yeast Extract, 0,5% Bacto Peptone, 2% Glucose) en présence de clofilium tosylate 32 1,tM ou de DMSO. Puis les cellules sont incubées à 28°C pendant deux cycles de 24 heures. Les cellules sont ensuite diluées pour avoir environ 200 à 250 cellules par boîte et étalées sur milieu synthétique différentiel (SC-TRP, 0,3% glucose, 2% éthanol). Le nombre de colonies petite est calculé après 6 jours d'incubation à 28°C (Baruffini, E., Lodi, T., Dallabona, C., Puglisi, A., Zeviani, M. and Ferrero, I. (2006) Genetic and Chemical rescue of the Saccharomyces cerevisiae phenotype induced by mitochondrial DNA polymerase mutations associated with progressive external ophtalmoplegia in humus. Hum. Mol. Genet., 15, 2846 - 2855). 2.2. Effet du clofilium tosylate sur la production de colonies petite de la souche de levure mutante miplG6518 L'effet du clofilium tosylate sur la production de colonies petite est mesuré chez la levure mutante inip1G651,S. Les résultats sont présentés en Figure 2. Le clofilium tosylate réduit la production de colonies petite de la souche de levure mutante mi/A 0651S 2.3. Effet de clofilium tosylate sur la production de colonies petite sur différents mutants récessifs et dominants de mipl chez la levure L'effet du clofilium tosylate sur la production de colonies petite est mesuré chez 8 mutants récessifs mipl : - A692T (domaine muté: polymérase) - 11734Y (domaine muté: polymérase) G651S (domaine muté: polymérase) R467W (domaine muté: linker) G259R (domaine muté: exonuclease) - G807R (domaine muté: polymérase) C261R (domaine muté: exonuclease) - P829L (domaine muté: polymérase) et chez 3 mutants dominants mipl : Y757C (domaine muté: polymérase) K749R (domaine muté: polymérase) - E698G (domaine muté: polymérase) Les résultats sont présentés en Figure 3. Le clofilium tosylate réduit la production de cellules ne respirant pas quel que soit le domaine de MIR] muté (exonucléase, polymérase ou linker) à l'exception des mutations produisant plus de 90% de colonies petite. Exemple 3 Effet du clofilium tosylate sur la fidélité des différents mutants de MIP1 chez la levure Une perturbation de la fidélité de la polymérase mitochondriale Mipl peut être évaluée en mesurant la fréquence des cellules résistantes à l'érythromycine (EryR). Les mutations Erye sont causées par des mutations dans l'ARN ribosomique mitochondrial 21S codé par l'ADNrnt qui peuvent se produire après incorporation d'un mauvais nucléotide (Bandai, E., Lodi, T., Dallabona, C., Puglisi, A., Zeviani, M. and Ferrero, I. (2006) Genetic and Chemical rescue of the Saccharomyces cerevisiae phenotype induced by mitoehondrial DNA polymerase mutations associated with progressive external ophtalmoplegia in humans. Hum. Mol. Genet., 15, 2846 - 2855). Une mesure de la résistance à l'érythromycine est un moyen de mesurer directement les mutations ponctuelles de l'ADNmt. Des colonies indépendantes sont ensemencées dans 10 mL de milieu minimum (SC-TRP, 2% glucose) en présence de clofiliurn tosylate 32 p.M ou de DMSO jusqu'à la phase stationnaire. Pour déterminer le nombre total de cellules capables de respirer, un aliquot de chaque culture est étalé sur milieu riche YPE (1% Yeast Extract, 0,5% Bacto Peptone, 2% Ethanol). Le reste des cultures est étalé sur milieu Ni contenant 2,5 mg/mL d'erythromycine (2% peptone, 1% yeast extract, 40 mg/L adenine, 3% éthanol, 3 % glycerol dans 25 mM de tampon phosphate pH 6,5 et supplémenté avec 2,5 g/L d'erythromycine (SIGMA)) et incubé à 28°C pendant 8 jours. L'expérience est réalisée en duplicat. La fréquence des mutations est calculée comme le nombre de colonies Eryg sur le nombre total de colonies (Baruffini, E., Lodi, T., Dallabona, C., Puglisi, A., Zeviani, M. and Ferrero, I. (2006) Genetic and Chemical rescue of the Saccharomyces cerevisiae phenotype induced by mitochondrial DNA polymerase mutations associated with progressive external ophtalmoplegia in humans. Hum. Mol. Genet., 15, 2846 - 2855). Les résultats sont présentés en Figure 4. Le clofilium tosylate n'a aucun effet sur la fidélité des différents mutants de levure de Mei. Exemple 4 : Effet du clofilium tosylate et de la disponibilité des dNTP sur la stabilité de l'ADNmt des mutants de levure MielGOIS et mipp1692T La délétion du gène MW/ codant l'inhibiteur de RNR1 (ribonueleotide-diphosphate reductase, enzyme limitante de la voie de synthèse des dNTP) est connue pour être un suppresseur génétique de l'instabilité de l'ADNmt due à des mutations dans le gène MIP1 (Wang PJ, Chabes A, Casagrande R, Tian XC, Thelander L and Huffaker TC. (1997) Rnr4p a novel ribonucleotide reductase small-subunit protein. Mol Ce!! Biol, 17, 6114-6121). G651 et inipp46927' La fréquence de colonies petite est déterminée pour les souches mi:pi délétées ou non du gène UNI/ et en présence de clofilium tosylate 32 1.tM ou de DMSO. A partir de précultures en milieu selectif (SC-TRP, 2% éthanol (v/v)) des souches mipl mutées, 2.105 cellules/mL sont ensemencées dans 2 mL de milieu riche YPD en présence de clofilium tosylate 32 FIM ou de DMS 0 puis incubées à 28°C pendant 24 heures. Les cellules sont ensuite diluées pour avoir environ 200 à 250 cellules par boite et étalées sur milieu synthétique différentiel (SC-TRP, 0,3% glucose, 2% éthanol). Le nombre de coloniespetite est calculé après jours d'incubation à 28°C. Les résultats sont présentés en Figure 5. Le clofilium tosylate et la disponibilité des dNTP (due à la délétion du gène SLM1) ont un effet additif sur la stabilité de l'ADNint des mutants de levure mip/G65.19 et mip 14692T Exemple 5 : Effet du clofilium tosylate sur la respiration des cellules de levure L'intensité respiratoire est la quantité d'oxygène consommée par unité de temps et de matière biologique. Elle reflète l'activité du métabolisme oxydatif des cellules. La consommation d'oxygène sur cellules entières est mesurée à l'aide d'une électrode HANSATECH. Les cellules de levure exprimant le gène sauvage ild/P/ ou le gène muté MiP1G651S sont cultivées pendant 7-8 générations dans un milieu YPE (1% Yeast Extract, 0,5% Bacto Peptone, 2% Ethanol) supplétnenté avec du DMSO ou du clofilium tosylate 32 11M à 28°C avec agitation. Un volume correspondant à un total de 60 unités de D0600 de chaque culture est centrifugé pendant 5 min à 3000 g. Le culot est resuspend-u en YPE afin d'avoir 6.105 cellules/g. 50 g, soit 3.107 cellules, sont introduits dans la chambre de mesure de l'électrode HANSATECH qui est maintenue à 28°C. La consommation d'02 est observée et enregistrée en temps réel. La vitesse de consommation d'02 est calculée à partir de la partie linéaire de la courbe de consommation d'02. Les résultats sont présentés en Figure 6. Les cellules de levure traitées par le eloflium tosylate respirent mieux. Exemple 6 : Effet du elofilium tosylate sur la quantité de protéines Mip1 sauvages ou Mip1G651S mutées de levure L'analyse de l'effet du clofilium tosylate sur la quantité de protéines Mipl sauvages ou mutées est réalisée sur des extraits cellulaires enrichis en rnitochondries. Afin de visualiser l'expression des protéines Mipl et Mip1G651S, la séquence codant trois épitopes HA a été clonée en 3' et en phase avec la séquence codante de Mipl et Mip1G651S. Les cellules de levure sont mises en culture en milieu sélectif (SC-TRP, 2% Ethanol) pendant une nuit. Puis les cellules sont ensemencées à une densité optique (D0600) initiale de 0,05 dans 100 mL de YPE (1% Yeast Extract, 0,5% Bacto Peptone, 2% Ethanol) supplémenté soit par du DMSO ou par du elofilium tosylate 32 l_tM à 28°C avec agitation jusqu'à une D0600 comprise entre 3 et 4. Les cellules sont centrifugées à 3000 g pendant 5 min et lavées à l'eau. L'isolation de la fraction enrichie en mitochondries et l'extraction protéique de cette fraction sont réalisées selon le protocole décrit par Hoffinan et al., 2009 (Hofmarm, L., Saunier, R., Cossard, R., Esposito, M., Rinaldi, T. and Delahodde, A. (2009) A non-proteolytic proteasome activity controls organelle fission in yeast. J Ceil. Sei., 122, 3673 - 3682). Les extraits protéiques des fractions enrichies en mitochondries sont analysés par électrophorèse sur gel SDS/PAGE 6% pour l'analyse des protéines Mipl-HA et Mip10651SHA et 10% pour l'analyse des protéines mitochondriales Cox2 (codée par l'ADNmt) et de la porine. Après séparation sur gel de polyacrylamide les protéines sont transférées sur une membrane de nitrocellulose. Après saturation des membranes par la solution de lait écrémé à 5 % (p/v), les membranes sont incubées pendant une heure sous agitation en présence des anticorps primaires correspondants (la protéine Mipl : anti-HA dilués au 1/5000èr", la protéine Cox2 : anti-Cox2 dilués au 1/500b', laponne : anti-porine dilués au 1/25000ème). Après lavage en tampon TBS, les membranes sont incubées pendant une heure en présence des anticorps secondaires couplés à la horseradish peroxydase (HRP) dilués au 1/5000ème. Puis les membranes sont relavées en tampon TBS. Les protéines sont ensuite révélées à l'aide du Kit de détection de l'activité peroxydase ECLEI" de GE Healthcare. Les résultats sont présentés en Figure 7. La quantité de protéine Mipl sauvage ou Mip10651S mutée de levure est augmentée en présence de clofilium tosylate. Exemple 7: Détermination de la concentration non-toxique de clofilium tosylate (MIC, Minimum Inhibitory Concentration) chez le nématode Caenorhabditis elegans Une série de boîtes NGM contenant du clofilium tosylate aux concentrations de 1 jiM, 5 [tM, 10 [.IM, 50 uM, 100 p.M ou 20011M est préparée (trois boîtes pour chaque concentration). Entre 30 et 40 larves Li synchronisées des lignées sauvage N2 BRISTOL ou mutée VC1224 (po1g1(ok1548A/+)/mT1 II; +/mTl[dpy-10(e128)] II), nématodes portant une délétion hétérozygote de 2149 bp dans la séquence codante du gène polg-1, sont déposées sur chacune de ces boîtes. Leur développement est observé pendant 4 jours. Les résultats sont présentés en Figure 8. Pour la lignée sauvage, un arrêt de développement au stade L3 ou un ralentissement de développement est observé à 100 uNI de clofiliurn tosylate indiquant que la concentration maximale à utiliser est de 501.tM. Pour la souche polg-1(ok1548A1+), les larves se développent de manière similaire pour des concentrations allant de 1 ia.M à 50 faM de clofilium tosylate. La concentration en clofilium tosylate choisie pour les futures expériences chez le nématode est de 50 Ii.M. Exemple 8 : Effet du clofilium tosylate sur la résistance des nématodes polg-1 haploinsuffisant polg-1(ok1548A/+) au bromure d'éthidium Le bromure d'éthidium est un agent intercalant de l'ADN, et plus spécialement de l'ADNmt, riche en adénine et thymidine. A forte concentration il induit un arrêt de développement au stade L3 des vers (Addo, M. G., Cossard, R., Pichard, D., Obiri-Danso, K., Reitig, A. and Delahodde, A. (2010) Caenorhabditis elegans, a pluricellular model organism to screen new genes involved in mitochondrial genome maintenance. BBA-Mol. Basis Dis., 1802, 765 - 773). Les nématodes TB2143 polg-1(okl 5481V+) haploinsuffisants sont fortement sensibles à de faibles doses de bromure d'éthidium (30 p.g/mL) avec 90% des larves arrêtées au stade L3. 8.1. Test de résistance au bromure d'éthidium Une trentaine de larves synchronisées au stade Li sauvages ou mutées dans polg-1 (lignée TB2143 polg-1(ok1548A/+)) est déposée sur des boîtes NOM contenant 301.tg/mL de bromure d'éthidium et soit du DMS0 soit du clofilium tosylate 50 uM (expérience faite en triplicat). Le développement larvaire est examiné après 4 jours de traitement. Les résultats sont présentés en Figure 9. Le elofilium tosylate entraîne une résistance accrue des nématodes haploinsuffisants polg1(ok1548A/+) au bromure d' éthidium. 8.2. Dose réponse du clofilium tosylate sur la résistance des nématodes haploinsuffisants polg-1(ok1548A/+) au bromure d'éthidium Une trentaine de larves synchronisées au stade Li mutées dans polg-1, lignée TB2143 polg1(ok1548A/+), est déposée sur des boîtes NOM contenant 30 p.g/mL de bromure d'éthidium et soit du DMSO soit différentes concentrations de clofilium tosylate : 1 pM, 5 p,M, 10 el et 50 i..tM (expérience faite en triplicat). Le développement larvaire est examiné après 4 jours de traitement. La courbe dose-réponse est donnée en Figure 10. La dose-réponse du clofilium tosylate est déterminée une nouvelle fois selon le même mode opératoire, avec des concentrations de clofilium tosylate de 0,1 p.M, 0,5 iuM, 1 LM, 5 pM, 10 p.M et 50 p.M. Les résultats sont présentés en Figure 18. 8.3. Dose réponse de la quinidine (contrôle négatif), sur la résistance des nématodes haploinsuffisants polg-1(ok1548A/+) au bromure d'éthidium Une trentaine de larves synchronisées au stade Ll mutées dans polg-1, lignée TB2143 polg1(ok1548A1+), est déposée sur des boîtes NGM contenant 30 lig/mL de bromure d'éthidium et soit du DMSO soit différentes concentrations de quinidine, un antiarythmique de classe I : 10 pM, 30 ,L11/1, 100 p.11/1 et 300 pM (expérience faite en triplicat). Le développement larvaire est examiné après 4 jours de traitement. La courbe dose-réponse est donnée en Figure 11. Exemple 9 : Effet du clofilium tosylate sur le nombre d'ceufs pondus et éclos des nématodes homozygotes T132143 polg-1(A/A) Quatre larves au stade L4 TB2143 polg-1(ok1548A/A) homozygotes sont déposées sur chaque boîte NOM contenant soit du DMSO soit du clofilium tosylate 50 p.11/1 (trois boîtes pour chaque groupe de traitement). Elles sont incubées à 20°C jusqu'au stade adulte. Toutes les 9 à 12 heures et ce pendant 6 à 7 jours, jusqu'à absence d'oeuf dans l'utérus, les adultes sont déplacés sur de nouvelles boîtes contenant du DM80 ou du clofilium tosylate 50 iLiM, et le nombre d'oeufs pondus est compté. Chaque ponte est suivie jusqu'. au lendemain pour le dénombrement de l'éclosion. Les résultats sont présentés en Figure 12. Le clofilium tosylate augmente le nombre d'oeufs pondus et l'éclosion des embryons des nématodes homozygotes TB2143 polg4(A/M. Exemple 10 : Effet du clofilium tosylate sur l'extrusion des gonades et/ou de l'intestin des nématodes homozygotes Dix larves au stade L4 TB2143 polg-1(ok1548A/A) homozygotes sont déposées sur chaque boîte NOM contenant soit du DMSO soit du clofilium tosylate 501,1M (trois boîtes pour chaque groupe de traitement) et sont incubées à 20°C. Leur- survie est suivie jusqu'au 7ème jour de l'adulte. Le nombre d'animaux morts, ne répondant à aucune stimulation, et présentant une extrusion de l'intestin et/ou des gonades est compté. Les rares animaux morts de déshydratation surie bord des boîtes de pétri sontexclus de l'analyse. Les résultats sont présentés en Figure 13. Le clofilium tosylate réduit la mort prématurée des nématodes homozygotes par extrusion des gonades et/ou de l'intestin. Exemple 11 : Effet du clofilium tosylate sur la quantité d'ADNmt des nématodes homozygotes TB2143 polg-1(ok1548A/A) déplétés en ADNmt Dix larves au stade L4 TB2143 polg-1(ok1548A/A) homozygotes ou sauvages sont déposées sur chaque boîte NGM contenant soit du DMSO soit du clofilium tosylate 50 pM (trois boîtes pour chaque groupe de traitement). Elles sont incubées à 20°C jusqu'au 6èm° jour de l'adulte. L'extraction des ADN totaux des nématodes est réalisée avec le kit Nucleospin Kit Tissue (Macherey Nagel). Les quantifications de PADNmt et de l'ADN nucléaire sont réalisées comme décrit dans Addo et al., 2010 (Addo, M. G., Cossard, R., Pichard, D., Obiri-Danso, K., Reitig, A. and Delahodde, A. (2010) Caenorhabditis elegans, a pluricellular model organism to screen new genes involved in mitochondrial genome maintenance. BBA-Mol. Basis Dis., 1802, 765 - 773). Les résultats sont présentés en Figure 14 et en Table 1. Table 1 : Rapport de la quantité d' ADNmt à la quantité d'ADN nucléaire par nématode sauvage N2 BRISTOL traité au DMSO et par nématode homozygote TB2143 polg-1(ok1548A/A) traité soit au DMSO soit avec du clofilium tosylate 50 j_tM (CLOF). génotype traitement ADNrnt/ADNnu wild-type (N2) DMSO 488,9 polg-1(ol Les résultats sont présentés en Figure 16. En condition de prolifération cellulaire, le clofilium tosylate augmente légèrement la quantité d'ADNmt chez les fibroblastes du patient avec une mutation sur chaque allèle du gène POLG. L'effet du clofilium tosylate sur la quantité d'ADNmt chez les fibroblastes d'un patient avec une mutation sur chaque allèle du gène POLO en condition de prolifération cellulaire cultivés dans un milieu DMEM glucose complet ou galactose complet est mesuré une seconde fois. Des fibroblastes cutanés du contrôle et du patient sont cultivés jusqu'à 100% de confluence dans un milieu DMEM glucose complet ou galactose complet (4,5 g/L de D-glucose ou 4,5 g/L de D-galactose, 110 mg/L de sodium pyruvate, IO% de sérum de veau foetal, 1% de pénicilline/streptomycine à partir de la solution mère pénicilline 10000 Ili et streptomycine 10000 Rg/mL) à 37°C sous CO2 5%. A confluence, les cultures sont traitées à la trypsine et remises en culture à 30% de confluence dans un milieu DMEM glucose complet ou galactose complet supplémenté soit avec du DMSO 0,1% soit avec du clofilium tosylate 2,5 uM. Elles sont incubées à 37°C sous CO25% et sont récoltées à 100% de confluence. Les ADN totaux des fibroblastes sont extraits par la méthode de phénol-chlorofoime et la quantification des ADNmt et ADN nucléaire est réalisée par qPCR comme décrite dans Sarzi et al., 2007 (Sarzi, E., Bourdon, A., Chrétien, D., Zarhrate, M., Corcos, 3., Slama, A., Cormier-Daire, V., De Lonlay, P., Munnich, A. and Rôtig, A. (2007) Mitochondrial DNA Depletion is a Prevalent Cause of Multiple Respiratory Chain Deficieney in Childhood. J Pediatr, 105, 531 - 534). Exemple 14 : Effet du clofilium tosylate sur la quantité d'ADNmt des fibroblastes d'un patient avec une mutation sur chaque allèle du gène POLG en condition de quiescence Des fibroblastes cutanés du contrôle et du patient sont cultivés jusqu'à 100% de confluence dans du DMEM à 37°C sous CO2 5%. A 100% de confluence, les fibroblastes sont lavés au PBS et le milieu quiescent est ajouté (4,5 g/L de D-glucose, 110 mg/L de sodium pyruvate, 0,1% de sérum de veau foetal, 1% de pénicilline/streptomycine à partir de la solution mère pénicilline 10000 1U et streptomycine 10000 ug/mL) Après quatre jours en milieu quiescent, le clofilium tosylate 1 [1114 ou le DMS 0 (0,1%) sont ajoutés au milieu de culture. Le traitement est réalisé pendant 18 jours en changeant le milieu de culture avec ou sans clofilium tosylate tous les trois jours. Les fibroblastes sont récoltés tous les 6 jours et l'ADN total est extrait au phénol-chloroforme. L'ADNmt et l'ADN nucléaire sont quantifiés par qPCR (Sarzi, E., Bourdon, A., Chrétien, D., Zarhrate, M., Corcos,J., Slama, A., Cormier-Daire, V., De Lonlay, P., Murmich, A. and Reitig, A. (2007) Mitochondrial DNA Depletion is a Prevalent Cause of Multiple Respiratory Chain Deficiency in Childhood. J Pediatr, 105, 531 - 534). Les résultats sont présentés en Figure 17. Le clofilium tosylate augmente la quantité d'ADNtnt des fibroblastes du patient avec une mutation sur chaque allèle du gène POLG en condition de quiescence. L'effet du °lofai= tosylate sur la quantité d'ADNmt de fibroblastes d'un patient avec une mutation sur chaque allèle du gène POLO en condition de quiescence est mesuré une deuxième fois selon le même mode opératoire. Exemple 15 : Dose-réponse de I'Ibutilide sur la résistance des nématodes haploinsuffisants polg-1(ok1548A/+) au bromure d' éthidium Des boîtes NGM supplémentées avec 30ug/mL de bromure d' éthidiurn et du DMSO ou 1 p,M, 5 JIM, 10 p.M ou 50 uM d'Ibutilide Hemifirmarate sont préparées (trois boîtes pour chaque groupe de traitement). Entre 30 et 40 larves de la souche TB2143 polg-1(ok1548A/+) synchronisées au stade Li sont déposées sur chacune de ces boîtes. Leur développement est observé pendant 4 jours. Les résultats sont présentés en Figure 19. Exemple 16 : Dose-réponse du Dofétilide sur la résistance des nématodes haploinsuffisants polg4(ok1548A/+) au bromure d'éthidium Des boîtes NGM supplémentées avec 30 u.g/naL de bromure d'éthidiurn et du DMSO ou 1 uM, 5 1.1M, 10 i.tM, 50 uM, 100 p'M ou 200 iM de Dofétilide ou 50 uM de clofiliurn tosylate sont préparées (trois boîtes pour chaque groupe de traitement). Entre 30 et 40 larves de la souche TB2143 polg-1(ok1548A1+) synchronisées au stade Li sont déposées sur chacune de ces boîtes. Leur développement est observé pendant 4 jours. Les résultats sont présentés en Figure 20. Exemple 17 : Effet du clofilium tosylate sur la production de colonies petite de la souche de levure mutante Afis/ L'effet du clofilium est évalué selon le même mode opératoire que pour l'Exemple 2 avec des levures mutantes Afisl Les résultats sont présentés en Figure 21. Le produit du gène FIS] , impliqué dans le processus de fission des mitochondries, intervient dans le mécanisme d'action du clofilium tosylate. Exemple 18 : Elargissement de la dose-réponse du clofilium tosylate sur la quantité d'ADN-int de fibroblastes d'un patient avec une mutation sur chaque allèle du gène POLG en condition de quiescence Des fibroblastes cutanés du contrôle et du patient sont cultivés jusqu'à 100% de confluence dans du DMEM à 37°C sous CO2 5%. A 100% de confluence, les fibroblastes sont lavés au PBS et le milieu quiescent est ajouté (4,5 g/L de D-glucose, 110 mg/L de sodium pytuvate, 0,1% de sérum de veau foetal, 1% de pénicilline/streptomycine à partir de la solution mère pénicilline 10000 IU et streptomycine 10000 1.1g/mL). Après quatre jours en milieu quiescent, le clofilium tosylate 30 nM, 100 nM, 300 nM ou 1 !.11'4 ou le DMSO (0,1%) sont ajoutés au milieu de culture. Le traitement est réalisé pendant 18 jours en changeant le milieu de culture avec ou sans clofilium tosylate tous les trois jours. Les fibroblastes sont récoltés tous les 6 jours et l'ADN total est extrait au phénol-chloroforme. L'ADNmt et l'ADN nucléaire sont quantifiés par qPCR (Sarzi, E., Bourdon, A., Chrétien, D., Zarhrate, M., Corcos, J., Slama, A., ColliderDaire, V., De Lonlay, P., Munnich, A. and Râtig, A. (2007) Mitochondrial DNA Depletion is a Prevalent Cause of Multiple Respiratory Chain Deficiency in Childhood. J Pediatr, 105, 531 - 534). Exemple 19 : Effet du clofilium tosylate sur la quantité d'ADNint de fibroblastes d'un autre patient avec mutations différentes sur chaque allèle du gène POLG en condition de quiescence Des fibroblastes cutanés du contrôle et du patient sont cultivés jusqu'à 100% de confluence dans du DMEM à 37°C sous CO2 5%. A 100% de confluence, les fibroblastes sont lavés au PIM et le milieu quiescent est ajouté (4,5 WL de D-glucose, 110 mg/L de sodium pyruvate, 0,1% de sérum de veau foetal, 1% de pénicilline/streptomycine à partir de la solution mère pénicilline 10000 1U et streptomycine 10000 p,g/mL). Après quatre jours en milieu quiescent, le clofiliurn tosylate 1 j.iM ou le DMSO (0,1%) sont ajoutés au milieu de culture. Le traitement est réalisé pendant 18 jours en changeant le milieu de culture avec ou sans clofilium tosylate tous les trois jours. Les fibroblastes sont récoltés tous les 6 jours et l'ADN total est extrait au phénol-chloroforme. L'ADNmt et l'ADN nucléaire sont quantifiés par qPCR (Sarzi, E., Bourdon, A., Chrétien, D., Zarhrate, M., Corcos, J., Slama, A., Cormier-Daire, V., De Lonlay, P., Munnich, A. and Reitig, A. (2007) Mitochondrial DNA Depletion is a Prevalent Cause of Multiple Respiratory Chain Deficiency in Childhood. J Pediatr, 105, 531 - 534). Exemple 20 : Effet du elofilium tosylate sur un modèle de déplétion de l'ADNmt (non due à une mutation dans le gène POLG) avec mutation dans le gène orthologue d'OPA1 (eat-3) chez Caenorhabditis elegans. 20.1. Effet du clofilium tosylate sur les phénotypes du ver homozygote muté dans le gène eat-3 (eat-3(ad426) II ; him-8(e1489) IV) : Test de résistance au bromure d'ethidium Une trentaine de larves synchronisées au stade Li sauvages ou mutées dans eat-3 (lignée DA631 eat-3(ad426)) est déposée sur des boîtes NOM contenant différentes concentrations de bromure d'éthidium (10, 20, 30, 40, 50 ii.g/mL) et soit du DMSO soit du clofilium tosylate 50 F.EM (expérience en triplicat). Le développement larvaire est examiné après 4 jours de traitement. 20.2. Effet du clofilium tosylate sur le nombre d'oeufs pondus et éclos des nématodes DA631 et sur leur développement Quatre larves au stade L4 DA631 (eat-3(ad426)) sont déposées sur chaque boîte NOM contenant soit du DMSO soit du clofilium tosylate 50 pM (trois boîtes pour chaque groupe de traitement). Elles sont incubées à 20°C jusqu'au stade adulte. Toutes les 9 à 12 heures et ce pendant 6 à 7 jours jusqu'à absence d'ceuf dans l'utérus, les adultes sont déplacés sur de nouvelles boîtes contenant du DMSO ou du clofilium tosylate 50 1.1,M, et le nombre d'oeufs pondus est compté. Chaque ponte est suivie pour le dénombrement de l'éclosion et le développement larvaire. 20.3. Effet du clofilium tosylate sur la quantité d'ADNmt des nématodes DA631 (eat3(ad426)) Dix larves DA631 (eat-3(ad426)) au stade L4 ou sauvages sont déposées sur chaque boîte NOM contenant soit du DMSO soit du clofilium tosylate 50 p14 (trois boîtes pour chaque groupe de traitement). Elles sont incubées à 20°C jusqu'au ele jour de l'adulte. L'extraction des ADN totaux des nématodes est réalisée avec le kit Nucleospin Kit Tissue (Macherey NageD. Les quantifications de l'ADNmt et de l'ADN nucléaire sont réalisées connue décrit dans Addo et al., 2010 (Addo, M. G., Cossard, R., Pichard, D., Obiri-Danso, K., Riitig, A. and Delahodde, A. (2010) Caenorhabditis elegans, a pluricellular model organism to screen new genes involved in mitochondrial genome maintenance. BBA-Mol. Basis Dis., 1802, 765 - 773). 20.4. Effet du clofilium tosylate sur la morphologie mitochondriale des nématodes DA631 Dix larves DA631 au stade L4 ou sauvages, exprimant la GFP adressée aux mitochondries dans les muscles locomoteurs, sont déposées sur boîte NOM contenant soit du DMSO soit du clofilium tosylate 50 uM. Elles sont incubées à 20°C jusqu'au 3'ne jour de l'adulte. Les adultes sont alors anesthésiés et mis entre lame et lamelle pour examen de la morphologie mitochondriale en microscopie à fluorescence. Exemple 21 : Effet de la combinaison d'administration de resveratrol (antioxydant) et de clofilium tosylate sur les fibroblastes d'un patient avec une mutation sur chaque allèle du gène POLG 21.1 : Effet sur la prolifération cellulaire Les fibroblastes cutanés du contrôle et du patient sont cultivés en milieu DMEM Galactose (DMEM dépourvu de glucose (Life Technologies) complémenté avec 10 mM de galactose, 10% de sérum de veau foetal, 200 U/mL de pénicilline, 200 U/mL de streptomycine). De l'uridine (50 pg/mL) et du pyruvate de sodium (2,5 mM) sont ajoutés au milieu de culture afin de maintenir les cellules exprimant un déficit de la chaîne respiratoire. Les cellules sont incubées en atmosphère contrôlée à 37°C et 5% de CO2. La prolifération cellulaire des fibroblastes du patient et du contrôle est mesurée en continu pendant 140 h par utilisation d'un automate xCELLigence (ACEA Bioseiences) dans des plaques 96 puits. Le signal du bruit de fond est mesuré avec 50 FIL de milieu de culture par puits. 50 pl de milieu contenant 1350 fibroblastes sont ensuite ajoutés dans chaque puits. La mesure d'impédance est réalisée toutes les minutes pendant 9 h puis toutes les 15 minutes jusqu'à la fin de l'analyse. Dès l'ensemencement des cellules, du clofilium tosylate ( REVENDICATIONS1. Composé de formule I:cYjrn (I)R1'dans laquelle Ri et Ri> représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, notamment Cl ou Br, un groupe alcoxy en C1-C4, un groupe alkyle en C1-C3 ou NHSO2R6, sous réserve qu'au moins l'un des deux éléments R1 ou R1' soit différent de H; R2 représente OH ou H; R3 et R4 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de R7 - carbone ou où R7 représente un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe alcoxy en C1-C4, un groupe alkyle en Cl-C3 ou NHSO2R8 ; R6 et R8 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en Ci-C4; X = -R5 ou le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison, sous réserve que i = + lorsque -X = -R5 ; R5 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4; m = 0 ou 1, sous réserve que m = 1 lorsque -X = -R5 et m = 0 lorsque -X = le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison ; n= 0, 1, 2 ou 3 ;Y est un anion acceptable sur le plan thérapeutique, en particulier r est choisi parmi l'ion tosylate, l'ion carbonate, l'ion phosphate et l'ion chlorure ; pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. 2- Composé selon la revendication 1, de formule I: R2 R4 R3 RI Ri? Min (I) dans laquelle Ri et Ri, représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, Cl, Br, ou NHSO2R6, sous réserve qu'au moins l'un des deux éléments Ri ou Ri> soit différent de H; R2 représente OH ou H; R3 et R4 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de R7 - carbone ou où R7 représente un atome d'halogène ou NHSO2R8, sous réserve que R3 et R4 ne peuvent pas être simultanément 0 R7 - R6 et R8 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe alkyle en C1-C4 ; -X = - R5 ou le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison, sous réserve que i = + lorsque -X = - R5 ; R5 représente un groupe alkyle en Cl-C4;m = 0 ou 1, sous réserve que m = 1 lorsque -X = -R5 et m = 0 lorsque -X = le doublet électronique de l'azote non engagé dans une liaison ; n = 0, 1, 2 ou 3; Y est choisi parmi l'ion tosylate, l'ion carbonate, l'ion phosphate et l'ion chlorure ; pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. 3- Composé selon la revendication 1, de formule Ta: RI (Y)rn (la) ou de formule lb: (Y)n-1 (lb)ou de formule Je: R1' ou de formule Id: R1' dans lesquelles Ri, Ri', R2, R3, R5, W , Y, m et n, ont les significations indiquées dans la revendication 1; pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. 4- Composé selon la revendication 1, de formule (a): CI o (a) ou de formule (b) : 0 N ou de formule (c) : (c)ou de formule (d) : pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. 5- Composé selon la revendication 4, se présentant sous forme de dose unitaire de 30 tg à 6000 mg, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. 6- Composé selon la revendication 4 ou 5, se présentant sous forme de dose unitaire de 30 tg à 6000 mg, pour une administration par voie orale, ou se présentant sous forme de dose unitaire de 30 p.g à 6000 mg, pour une administration par voie intraveineuse, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. 7- Composé selon la revendication 4, de formule (a): CI (a)se présentant sous forme de dose unitaire de 1,5 mg à 60 mg pour une administration par voie orale, ou se présentant sous forme de dose unitaire de 0,5 mg à 30 mg, pour une administration par voie intraveineuse, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. 8- Composé selon la revendication 4, de formule (b) : se présentant sous forme de dose unitaire de 125 à 500 ltg, pour une administration par voie orale, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. 9- Composé selon la revendication 4, de formule (c) : o (b) (c) se présentant sous forme de dose unitaire de 150 lig à 2500 ltg, pour une administration par voie intraveineuse, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. 10- Composé selon la revendication 4, de formule (d) : (d) se présentant sous forme de dose unitaire de 150 mg à 6000 mg, pour une administration par voie intraveineuse, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial. 11- Composé selon l'une des revendications 1 à 10, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des maladies liées à au moins une mutation, ou au moins une délétion ou au moins une insertion, ou une combinaison de ces éléments, dans le gène POLG, ou des maladies liées à l'instabilité de l'ADN mitochondrial non liées aux mutations du gène POLG, ou des maladies liées à une déplétion ou une délétion de l'ADN mitochondrial, ou des maladies liées à une mutation ponctuelle de l'ADN mitochondrial. 12- Composé selon l'une des revendications 1 à 10, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention - de maladies associées à des anomalies quantitatives ou qualitatives de l'ADN mitochondrial telles que la maladie d'Alpers (AHS), le spectre des myo-cérébro-hépatopathies de l'enfant (MCHS), les épilepsies myocloniques avec myopathie et ataxie sensitive MEMSA (Myoclonic epilepsy myopathy sensory ataxia), l'ataxie spinocérébelleuse avec épilepsie (SCAE), les ataxies avec neuropathies incluant les syndromes MIRAS et SANDO, l'ophtalmoplégie externe progressive autosomique récessive (arPEO), l'ophtalmoplégie externe progressive autosomique dominante (adPEO), l'encéphalomyopathie mitochondriale neurogastrointestinale (MNGIE), le syndrome de Pearson, le syndrome de Kearns-Sayre, la myopathie infantile et l'amyotrophie spinale liées au mutations de TK2, les insuffisances hépatiques avec déplétion de l'ADNmt, les pathologies associées aux mutations des gènes SUCLA2 et SUCLAG1, RRM2B, AIF1, MPV17, ou - des maladies associées à des mutations ponctuelles de l'ADN mitochondrial telles que la neuropathie optique héréditaire de Leber, le syndrome MELAS, le syndrome MERRF, et certaines formes de syndrome de Leigh, d'ophtalmoplégie externe progressive chronique, de myopathie, de cardiomyopathie, de diabète-surdité, d'encéphalomyopathie et de surdité.