FR 3032342 A1 20160812 FR 1550982 A 20150206 1 Procédé de caractérisation d'un échantillon par mesure d'un signal optique rétrodiffusé Domaine technique L'invention se situe dans le domaine de la caractérisation des échantillons, et notamment des échantillons biologiques, et plus particulièrement la peau. Description de l'art antérieur Les mesures optiques permettant de caractériser des échantillons sont répandues. Il s'agit en particulier de caractériser les propriétés optiques, ou la nature des matériaux qui composent un échantillon. On peut notamment citer les mesures basées sur la détection d'un signal rétrodiffusé par un échantillon illuminé par un faisceau lumineux. Il s'agit en particulier de la spectrométrie Raman, l'imagerie de fluorescence ou la spectrométrie de réflectance diffuse. La spectrométrie de réflectance diffuse, souvent désignée par l'acronyme anglais DRS (Diffuse Reflectance Spectroscopy), consiste à exploiter la lumière rétrodiffusée par un objet diffusant soumis à un éclairement, généralement ponctuel. Cette technique s'avère performante pour caractériser des propriétés optiques d'objets, en particulier les propriétés de diffusion ou d'absorption. Mise en oeuvre sur la peau, cette technique permet par exemple de caractériser le derme, comme décrit dans le document EP 2762064. Les auteurs de ce document décrivent une sonde de mesure destinée à être appliquée contre la peau. Cette sonde comporte une fibre optique centrale, dite fibre d'excitation, destinée à diriger un faisceau lumineux vers un échantillon de peau. Des fibres optiques, disposées autour de la fibre centrale, dites fibres de détection, recueillent un signal optique rétrodiffusé par le derme. Des moyens d'analyse spectrale du signal optique ainsi collecté, couplés à des algorithmes de calcul, permettent d'estimer des paramètres du derme, en particulier la concentration de certains chromophores, par exemple l'oxyhémoglobine ou la déoxyhémoglobine, mais aussi des paramètres gouvernant le parcours des photons dans le derme, notamment le coefficient de diffusion réduit ils' ainsi que le coefficient d'absorption p.a. 3032342 2 Selon les principes de la diffusion de la lumière dans un milieu diffusant, plus l'écartement entre la fibre d'excitation et une fibre de détection est important, plus la lumière recueillie par la fibre de détection est fonction des propriétés optiques dans les couches profondes du derme, c'est-à-dire au-delà d'une plage de profondeur comprise entre 300 um et quelques mm. Autrement 5 dit, plus la distance entre la fibre d'excitation et la fibre de détection augmente, plus le résultat est représentatif des propriétés optiques des couches profondes du milieu examiné. A l'inverse, plus cette distance diminue, plus le résultat est représentatif des couches superficielles du milieu diffusant. Or, afin d'effectuer une mesure suffisamment sensible, chaque fibre a un diamètre égal à 10 quelques centaines de microns, typiquement 500 um pour la fibre d'excitation et 300 um pour chaque fibre de détection. Par ailleurs, du fait de contraintes de fabrication, il est difficilement envisageable de réduire significativement la distance entre ces fibres. Il en résulte que l'écartement minimal entre chaque fibre ne peut pas être inférieur à une valeur seuil, supérieure à 400 um, et le plus souvent millimétrique. 15 De ce fait, alors que le procédé et le dispositif décrits dans cette publication sont adaptés à la caractérisation du derme, ils ne sont pas aptes à caractériser l'épiderme, ce dernier s'étendant, selon les individus et les zones corporelles, sur les premières dizaines micromètres de la peau. L'invention vise à résoudre ce problème, en proposant un procédé et un dispositif de mesure aptes à déterminer les propriétés optiques l'épiderme et, de façon plus générale, les propriétés 20 optiques de la couche superficielle d'un milieu diffusant. Description de l'invention Ainsi, un objet de l'invention est un procédé de détermination d'une propriété optique d'un échantillon, comportant les étapes suivantes : illumination d'une surface de l'échantillon à l'aide d'un faisceau lumineux, de façon à 25 former, à la surface dudit échantillon, une zone élémentaire d'illumination, correspondant à la partie de ladite surface éclairée par ledit échantillon, détection de N signaux optiques, rétrodiffusés par l'échantillon, chaque signal optique émanant de la surface de l'échantillon à une distance, dite distance de rétrodiffusion, de ladite zone élémentaire d'illumination, de manière à former autant de signaux détectés, N étant un entier supérieur ou égal à 1, 3032342 3 - détermination d'au moins une propriété optique de l'échantillon, par comparaison entre : ^ une fonction de chaque signal ainsi détecté, ^ et une pluralité d'estimations de ladite fonction chaque estimation étant réalisée 5 en considérant une valeur prédéterminée de ladite propriété optique (p), le procédé étant caractérisé en ce que - lors de ladite étape de détection, au moins une distance de rétrodiffusion est inférieure à 200 um. De préférence, au moins une distance (D1, D2,) peut être inférieure à 150 um. 10 De préférence, au moins deux distances (Di, D2) sont inférieures à 200 um. Ladite propriété optique peut être choisie parmi ^ un facteur d'anisotropie, représentant un angle moyen de diffusion, ^ un coefficient d'absorption, ^ un coefficient de diffusion, 15 ^ un coefficient de diffusion réduit. Le procédé peut comprendre également : - la détection d'au moins deux signaux optiques rétrodiffusés émanant de la surface de l'échantillon : ^ un signal rétrodiffusé proche, émis à une distance de rétrodiffusion dite proche, 20 inférieure à 200 um, ^ un signal rétrodiffusé éloigné, émis à une distance de rétrodiffusion dite éloignée, supérieure à ladite distance proche, - la détermination d'une première propriété optique à partir dudit signal proche, - la détermination d'une deuxième propriété optique, différente de la première propriété 25 optique, à partir dudit signal rétrodiffusé éloigné. Il peut également comprendre : 3032342 4 - la détection d'au moins deux signaux optiques rétrodiffusés proches, émanant de la surface de l'échantillon à deux distances de rétrodiffusion différentes, ces deux distances étant inférieures à 200 lm, - la détermination du coefficient de diffusion réduit à partir dudit signal optique éloigné, 5 - puis la détermination du coefficient de diffusion et du coefficient d'anisotropie de diffusion à partir desdits deux signaux optiques rétrodiffusés proches, ainsi que du coefficient de diffusion réduit préalablement déterminé. Il peut comprendre : - la détection d'au moins deux signaux optiques rétrodiffusés éloignés, émanant de la 10 surface de l'échantillon à deux distances de rétrodiffusion différentes, les deux distances étant supérieures à 200 lm, - la détermination du coefficient d'absorption à partir desdits signaux optiques rétrodiffusés éloignés. L'échantillon examiné peut être la peau d'un humain ou d'un animal. 15 Le signal optique rétrodiffusé peut être mesuré à une pluralité de longueurs d'ondes. Selon un mode de réalisation, la dite fonction du signal est la réflectance, représentant l'intensité du signal mesuré, correspondant à ladite distance de rétrodiffusion, relativement à l'intensité dudit faisceau lumineux. Description des figures. 20 Les figures 1 et 2 représentent un premier mode de réalisation d'un dispositif selon l'invention. Les figures 3A et 3B représentent respectivement un schéma du dispositif selon l'art antérieur et selon l'invention. La figure 4 est un schéma représentant le parcours de la lumière dans un échantillon diffusant en fonction de la distance de rétrodiffusion. 25 Les figures 5A à 5C représentent des logigrammes de 3 procédés permettant la détermination d'au moins une propriété optique d'un échantillon. 3032342 5 La figure 6 représente une modélisation de la réflectance, à une distance de rétrodiffusion donnée, pour différentes valeurs du coefficient d'absorption lia et du coefficient de diffusion réduit us. Les figures 7A, 7B, 7C et 7D une modélisation de la réflectance, pour quatre distances de 5 rétrodiffusion respectives, la réflectance étant estimée pour différents couples de valeurs du coefficient de d'absorption lia, du coefficient de diffusion réduit us et du coefficient d'anisotropie de diffusion g. Description détaillée La figure 1 représente un premier mode de réalisation d'un dispositif selon l'invention. Il 10 comporte une source de lumière 10, qui comprend dans ce premier exemple une source de lumière blanche 10'. La source de lumière 10 comprend, dans ce premier mode de réalisation, une fibre optique d'illumination 12, s'étendant entre une extrémité proximale 14 et une extrémité distale 16. La fibre optique d'illumination 12 est apte à collecter la lumière, par une extrémité proximale 14 15 et à émettre un faisceau lumineux 20 vers l'échantillon par une extrémité distale 16, ledit faisceau lumineux étant alors dirigé vers la surface d'un échantillon 50. Dans une telle configuration, la source de lumière 10 est dite fibrée. Le diamètre de la fibre optique d'émission 12 est compris entre 100 um et 1 mm, et est par exemple égal à 400 um. 20 Par source ponctuelle, on entend une source dont l'aire est inférieure à 1 cm2, et de préférence inférieure à 5 mm2, et encore de préférence inférieure à 1 mm2. Le dispositif comporte également une pluralité de fibres optiques de détection 221, 222, 223...22n, l'indice n étant compris entre 1 et N, N désignant le nombre de fibres optiques de détection dans le dispositif. N est un entier naturel compris généralement compris entre 1 et 25 100, et préférentiellement compris entre 5 et 50. Chaque fibre de détection 221, 222, 223...22n s'étend entre une extrémité proximale 241, 242, 243...24n et une extrémité distale 261, 262, 263...26n. 3032342 6 Sur la figure 1, les références 22, 24 et 26 désignent respectivement l'ensemble des fibres de détection, l'ensemble des extrémités proximales des fibres de détection et l'ensemble des extrémités distales des fibres de détection. Le diamètre de chaque fibre optique de détection 22 est compris entre 50 um et 1 mm, et est 5 par exemple égal à 300 um. L'extrémité proximale 24 de chaque fibre optique de détection 22 est apte à être optiquement couplée à un photodétecteur 40. L'extrémité distale 261, 262, 263...26,, de chaque fibre optique de détection 22 est apte à collecter respectivement un signal optique Si, S2, S3, S4, ...Sn rétrodiffusé par l'échantillon 50, lorsque ce 10 dernier est exposé au faisceau lumineux 20. Le photodétecteur 40 est apte à détecter chaque signal optique 521, 522, 523...52,, de façon à former un signal (S1,S2, S3, ...S,,) respectivement représentatif de chaque signal optique détecté. Il peut s'agir d'un spectrophotomètre, apte à établir le spectre en longueur d'onde du signal optique collecté par la fibre optique de détection 22 auquel il est couplé. 15 Le photodétecteur est apte à être connecté à un microprocesseur 48, ce dernier étant configuré pour mettre en oeuvre les procédés décrits ci-après. Les fibres optiques de détection 22 s'étendent parallèlement les unes aux autres, parallèlement à un axe longitudinal autour de la fibre optique d'émission 12. Elles sont maintenues fixes les unes par rapport aux autres par un élément de maintien 42. Leurs extrémités distales 26 sont 20 coplanaires, et définissent un plan de détection 44. Une fibre optique 13, dite fibre de retour d'excitation, relie la source de lumière 10 au photodétecteur 4. Cette fibre optique est utile pour réaliser une mesure de calibration détaillée ultérieurement. Cette fibre optique de retour d'excitation n'est pas représentée sur les figures suivantes, mais peut être présente sur l'ensemble des modes de réalisation. 25 La figure 2 représente une vue en coupe du dispositif, dans le plan de détection, formé par l'ensemble des extrémités distales 26 des N fibres de détection. Dans cet exemple, N est égal à 36. Comme on peut le voir, les fibres optiques de détection sont réparties selon : 3032342 7 un premier groupe G1 de six fibres optiques de détection 221...226, disposées régulièrement le long d'un cercle centré sur la fibre optique d'émission 12, de telle sorte que l'extrémité distale 261...266 de chaque fibre de ce groupe soit distante de l'extrémité distale 16 de la fibre optique d'émission 12 d'une première distance d1 égale 5 à 300 um. un deuxième groupe G2 de six fibres optiques de détection 222...2212, disposées régulièrement le long d'un cercle centré sur la fibre optique d'émission 12, de telle sorte que l'extrémité distale 262...2612 de chaque fibre de ce groupe soit distante de l'extrémité distale 16 de la fibre optique d'émission 12 d'une deuxième distance d2 10 égale à 700 um. un troisième groupe G3 de six fibres optiques de détection 2213...2218, disposées régulièrement le long d'un cercle centré sur la fibre optique d'émission 12, de telle sorte que l'extrémité distale 2613...2618 de chaque fibre de ce groupe soit distante de l'extrémité distale 16 de la fibre optique d'émission 12 d'une troisième distance d3 15 égale à 1,1 mm. un quatrième groupe G4 de six fibres optiques de détection 2219...2224, disposées régulièrement le long d'un cercle centré sur la fibre optique d'émission 12, de telle sorte que l'extrémité distale 2619...2624 de chaque fibre de ce groupe soit distante de l'extrémité distale 16 de la fibre optique d'émission 12 d'une quatrième distance d4 20 égale à 1,5 mm. un cinquième groupe G5 de six fibres optiques de détection 2225...2230, disposées régulièrement le long d'un cercle centré sur la fibre optique d'émission 12, de telle sorte que l'extrémité distale 2625...2630 de chaque fibre de ce groupe soit distante de l'extrémité distale 16 de la fibre optique d'émission 12 d'une cinquième distance cls 25 égale à 2 mm. un sixième groupe G6 de six fibres optiques de détection 2231...2236, disposées régulièrement le long d'un cercle centré sur la fibre optique d'émission 12, de telle sorte que l'extrémité distale 2631...2636 de chaque fibre de ce groupe soit distante de l'extrémité distale 16 de la fibre optique d'émission 12 d'une sixième distance d6 égale 30 à 2,5 um. 3032342 8 Lorsqu'on évoque une distance entre deux fibres, ou entre une fibre ou un faisceau lumineux, on entend une distance centre à centre. Ainsi, chaque extrémité distale 26n d'une fibre optique de détection 22n est placée, dans un plan perpendiculaire à l'axe longitudinal Z selon lequel s'étendent ces fibres, à une distance dr, 5 de la source de lumière 10 (c'est-à-dire de l'extrémité distale 16 de la fibre d'émission 12), et, par conséquent, à une distance dr, du faisceau lumineux 20 dirigé vers l'échantillon 50. Le dispositif peut comporter un photodétecteur 40, apte à être couplé à l'extrémité proximale 24n de chaque fibre optique de détection 22n. Dans cet exemple, le photodétecteur est un spectrophotomètre, apte à déterminer le spectre d'un signal optique 521...52,-, rétrodiffusé par 10 l'échantillon lorsque ce dernier est exposé au faisceau lumineux 20. Pour cela, les extrémités proximales 24 de chaque groupe de fibres optiques de détection, décrits ci-dessus, sont regroupées et sont, groupe par groupe, successivement couplées au photodétecteur 40 au moyen d'un commutateur optique 41. Ainsi, le photodétecteur permet de mesurer le spectre du rayonnement rétrodiffusé S par l'échantillon, sous l'effet d'une illumination par le faisceau 15 lumineux 20. Le dispositif peut comporter une fibre optique 13, dite de retour d'excitation, dont une extrémité proximale est couplée à la source de lumière 10 et dont une extrémité distale est apte à être couplée au photodétecteur 40. L'utilisation de cette fibre optique est détaillée à la fin de la description. 20 Le dispositif comporte également un système optique 30, présentant un facteur de grandissement G et un axe optique Z'. Dans cet exemple, l'axe optique Z' est confondu avec l'axe longitudinal Z selon lequel s'étendent les fibres optiques de détection, ce qui constitue une configuration préférée. Dans cet exemple, le système optique 30 comporte: un objectif de microscope 31, placé en configuration foyer infini, apte à produire une 25 image à l'infini de la surface de l'échantillon observé, lorsque ce dernier est placé au foyer de cet objectif. Dans cet exemple, il s'agit d'un objectif de marque Zeiss, de référence Plan Aprochromat 20X, d'ouverture numérique 0.8, et de distance focale f1= 8,25 mm, 3032342 9 un doublet achromat 32, de distance focale f2 = 50 mm, accolé à l'objectif 31, apte à projeter l'image fournie par ce dernier dans le plan de détection 44, ce plan étant placé à la distance focale du doublet. Le système optique 30 décrit ci-dessus présente un facteur de grandissement G égal au rapport 5 des distances focales, soit G ,,k,' 6. De préférence, le système optique 30 est amovible et interchangeable, ce qui permet, en utilisant le même dispositif, l'utilisation de systèmes optiques présentant des facteurs de grandissements différents. D'une façon générale, le système optique 30 permet de former une image de la surface de 10 l'échantillon 50 sur le plan de détection 44 formé par les extrémités distales 26 de chaque fibre optique de détection 22, avec un facteur de grandissement G donné. Ainsi, chaque extrémité distale 261, 262...26,, est respectivement conjuguée à une zone élémentaire de détection 281, 282...28,, de la surface de l'échantillon. De cette façon, chaque fibre optique de détection 221, 222,...22,, est apte à collecter respectivement un signal optique élémentaire 521, 522,...52,, 15 rétrodiffusé par l'échantillon, chaque signal optique élémentaire 521, 522,...52,, émanant de la zone élémentaire de détection 281, 282...28n. Ainsi, chacune desdites extrémités distales 261, 262...26,, peut être située dans un plan focal image du système optique 30, et conjuguée à une zone élémentaire de détection 281, 282...28,, située dans le plan focal objet dudit système optique, à la surface de l'échantillon. 20 De même, l'extrémité distale 16 de la fibre d'émission 12 est conjuguée à une zone élémentaire d'illumination 18 à la surface de l'échantillon, cette zone élémentaire d'illumination constituant le point d'impact du faisceau lumineux 20 à la surface de l'échantillon 50. D'une façon générale, et quelle que soit le mode de réalisation, le terme zone élémentaire désigne une partie de la surface de l'échantillon dont les dimensions sont suffisamment faibles 25 pour considérer qu'elle est traversée par un rayonnement lumineux homogène. Autrement dit, une zone élémentaire est une zone de forme délimitée, de préférence ponctuelle, c'est-à-dire dont le diamètre ou la diagonale est inférieure à 5 mm, et de préférence inférieure à 1 mm, voire inférieure à 500 um. Une zone élémentaire d'illumination 18 est traversée par le faisceau lumineux 20, se 30 propageant en direction de l'échantillon 50, tandis qu'une zone élémentaire de détection 28n 3032342 10 est traversée par un rayonnement rétrodiffusé (ou signal optique) 52n, ce rayonnement étant produit par la rétrodiffusion, dans l'échantillon, du faisceau lumineux 20. Le couplage optique, réalisé par le système optique 30, permet à chaque fibre de détection 22n de collecter le rayonnement rétrodiffusé élémentaire 52n, ce dernier correspondant au rayonnement 5 rétrodiffusé traversant la zone élémentaire 28n. L'élément de maintien 42 peut assurer une liaison rigide entre les fibres optiques de détection 22 et le système optique 30, de façon à maintenir le plan de détection 44, formé par les extrémités distales 26 des fibres optiques de détection à une distance fixe du système optique 30. 10 En lien avec la figure 3A, et cela constitue un des points essentiels de l'invention, si dn est la distance entre l'extrémité distale 26n d'une fibre de détection 22n et l'extrémité distale 16 de la fibre d'émission 12, distance calculée dans un plan perpendiculaire à l'axe optique Z', la distance Dn entre la zone élémentaire de détection 28n, conjuguée de ladite extrémité distale 26n, et la zone élémentaire d'illumination 18, conjuguée de ladite extrémité distale 16, est telle 15 que : dn Dn = 7 La distance Dr, est appelée distance de rétrodiffusion, car elle correspond à la distance, à partir de la zone élémentaire d'illumination 18, à laquelle on collecte les photons rétrodiffusés. Cela correspond à la distance entre la zone élémentaire d'illumination 18 et une zone élémentaire 20 de détection 28n. Lorsque son facteur de grandissement est supérieur à 1, le système optique 30 tend à rapprocher significativement les zones élémentaires de détection 28n de la zone élémentaire d'illumination 18 par rapport à la configuration de l'art antérieur, dépourvue de système optique, et représentée sur la figure 3B dans laquelle les extrémités distales de chaque fibre 25 optique (fibres optiques de détection et fibre optique d'illumination) sont placées au contact de la surface de l'échantillon. Dans cette dernière configuration, la distance de rétrodiffusion Dn est égale à la distance dn entre les extrémités distales respectives d'une fibre optique de détection 22n et de la fibre optique d'illumination 12. 3032342 11 En résumé, dans la configuration de l'art antérieur, Dn = dn, tandis qu'en mettant en oeuvre le système optique 30, Dn = dGn. Si la distance entre le faisceau lumineux et l'extrémité distale d'une fibre optique de détection est, en amont du système optique, égale à une première distance, la distance de rétrodiffusion 5 est à la surface de l'échantillon, égale à ladite première distance pondérée par l'inverse duditledit facteur de grandissement. Le terme « en amont » se comprend en considérant la direction de propagation de la lumière. Ainsi, les zones élémentaires de détection 28n sont éloignées les unes des autres, et éloignées de la zone élémentaire d'illumination, leur surface étant augmentée du carré du facteur de 10 grandissement, par rapport à la surface de l'extrémité distale à laquelle elles sont respectivement associées. Cela permet d'effectuer une caractérisation de l'échantillon avec une résolution spatiale plus faible, mais sur une profondeur plus élevée que selon l'art antérieur. La figure 4 résume cet effet technique, chaque flèche Fi, F2, F3 et F4 représentant le trajet, dans l'échantillon 50, des photons contribuant aux signaux rétrodiffusés respectifs 521, 522, 523, 524 15 respectivement associés aux zones élémentaires de détection 281, 282, 283, 284. Plus l'écartement entre les zones élémentaires de détection 281, 282, 283, 284 et la zone élémentaire d'illumination 18 est élevée, plus la profondeur examinée zi, z2, z3, z4 de l'échantillon est importante. Inversement, plus l'écartement entre les zones élémentaires de détection et la zone élémentaire d'illumination est faible plus la profondeur examinée de l'échantillon est faible. 20 Plus particulièrement, lorsque l'échantillon est de la peau, le fait de rapprocher les zones élémentaires de détection de la zone élémentaire d'illumination permet la caractérisation de l'épiderme, qui constitue la couche superficielle de la peau, s'étendant jusqu'à une profondeur comprise entre 100 et 300 p.m, ce qui n'est pas envisageable avec les dispositifs de l'art antérieur, dont l'espacement entre chaque fibre est de l'ordre de quelques centaines de 25 micromètres de quelques millimètres. Autrement dit, le dispositif selon l'invention permet de détecter des signaux de rétrodiffusion émis par l'échantillon à des distances de rétrodiffusion significativement plus faibles que selon l'art antérieur, et cela permet une caractérisation des propriétés optiques de la couche superficielle de l'échantillon observé. 3032342 12 Lorsque le photodétecteur est un spectromètre, le dispositif permet d'effectuer des mesures du spectre rétrodiffusé selon des distances de rétrodiffusion de quelques dizaines à environ 200 um. On parle de spectroscopie de microréflectance diffuse, par opposition à la spectroscopie de réflectance diffuse, connue de l'art antérieur. 5 On décrit à présent un procédé susceptible d'être mis en oeuvre par le dispositif précédemment décrit, afin d'estimer une ou plusieurs propriétés optiques de l'échantillon examiné, et plus particulièrement d'une couche superficielle de cet échantillon, cette couche s'étendant en particulier entre la surface et une profondeur inférieure à 1/us'. Dans la plupart des tissus biologiques, et pour les longueurs d'onde du spectre visible ou proche 10 infra-rouge, le coefficient de diffusion réduit est compris entre 10 cm-1 et 70 cm-1. Aussi, le procédé décrit ci-dessous est apte à caractériser une couche superficielle, s'étendant entre la surface de l'échantillon et une profondeur inférieure à 1 mm, et plus particulièrement inférieure à 500 um, voire 200 um ou 100 um. Une des applications visées est la caractérisation de la peau, laquelle comporte trois couches. 15 La couche superficielle est l'épiderme, dont l'épaisseur varie selon les individus et la partie du corps, et est généralement comprise entre quelques dizaines de um et 100 um. Le coefficient de diffusion réduit de l'épiderme est compris entre 50 et 70 cm-1, selon la longueur d'onde. Il est par exemple cité, dans la littérature, une valeur de 66 cm-1 à la longueur d'onde de 500 nm. Les deux autres couches de la peau, plus profondes que l'épiderme, et plus épaisses que ce 20 dernier sont respectivement le derme, dont l'épaisseur varie entre 1 et 2 mm, puis l'hypoderme, dont l'épaisseur peut dépasser plusieurs mm. Le terme propriété optique désigne notamment un facteur gouvernant l'absorption et la diffusion des photons dans le milieu diffusant, en particulier un coefficient d'absorption, un coefficient de diffusion, un coefficient de diffusion réduit, un coefficient d'anisotropie de la 25 diffusion. En lien avec la figure 5A, on décrit les principales étapes d'un procédé permettant l'estimation des propriétés optiques de diffusion, en particulier le coefficient d'absorption lia et le coefficient de diffusion réduit u's. Dans cet exemple, le facteur de grandissement G s'élève à 6. Comme représenté sur la figure 2, le dispositif comporte 36 fibres de détection, divisées en 6 groupes 30 de 6 fibres, en fonction de la distance dr, séparant chaque fibre de détection 22n du faisceau 3032342 13 d'illumination 50. Ces distances dr, s'élèvent respectivement à 300 um ; 700 um ; 1.1 mm ; 1.5 mm ; 2 mm ; 2.5 mm Grâce au système optique 30, chaque fibre de détection 22n est conjuguée à une zone élémentaire de détection 28n. Les zones élémentaires de détection sont alors elles-mêmes 5 divisées en 7 groupes, en fonction de la distance de rétrodiffusion Dr, séparant chaque zone élémentaire de détection 28n à la zone élémentaire d'illumination 18. Compte tenu du facteur de grandissement, les distances Dr, s'élèvent respectivement à environ 50 um ; 120 um ; 185 ; 250 um ; 333 um ; 415 um. On procède alors selon les étapes suivantes : 10 1ère étape 110: application du dispositif préalablement décrit, en regard de l'échantillon 50, de telle sorte que la surface examinée soit placée au foyer du système optique 30. 2ième étape 120 : illumination de l'échantillon en dirigeant un faisceau lumineux 20 contre la surface de l'échantillon, la partie de la surface illuminée constituant la zone élémentaire illuminée 18. 15 3ierne étape 130 : collection d'un signal optique 521, 522, 523, 524... 52', respectivement rétrodiffusé par l'échantillon, au niveau de chaque zone élémentaire de détection 281, 282, 283, 284... 28',, par la fibre optique 221, 222, 223, 224... 22,, de détection dont l'extrémité distale 261, 262, 263, 264... 26', est respectivement conjuguée à ladite zone élémentaire 281, 282, 283, 284... 28',. 20 4ierne étape 140 : mesure, à l'aide d'un photodétecteur 40, du signal Sr, représentatif du signal optique rétrodiffusé sr, à chaque distance Dr, de la zone élémentaire d'illumination. Le signal Sr, peut être notamment établi en cumulant les signaux optiques collectés par les fibres optiques de détection d'un même groupe. Lorsque le détecteur est un détecteur spectrométrique, ce qui constitue le mode de réalisation préféré, il génère le spectre du signal Sr, 25 Sierne étape 150 : A l'aide de chaque signal Sr, correspondant à une distance de rétrodiffusion D,,, détermination d'une fonction 8,, appelée réflectance du signal, cette réflectance étant fonction du signal Sr, et de paramètres de calibration. Ainsi, 8,, = fcalib(Sn), ou tan désigne une fonction de calibration, dépendant de l'instrumentation mise en oeuvre, par exemple l'efficacité de collection par les fibres, la fonction de réponse du détecteur et l'intensité du faisceau lumineux 3032342 14 incident. La fonction de calibration f - calib peut être obtenue au cours d'une phase de calibration, préalablement ou postérieurement à la mesure sur l'échantillon. Par exemple, la réflectance Rr, peut être obtenue, à partir de S,,, selon l'expression : 5 ou selon l'expression Rn - fcalib(Sn) Sn Sref Ssource Sn Sref Rstd_n Rn - fcalib(Sn)X Ssource Sstd-n où : - Sr, est le signal détecté correspondant à la distance Dr, de la zone élémentaire d'illumination, 10 Sref est un signal de calibration, traduisant les réflexions parasites du système optique, obtenu en activant la source de lumière, mais sans présence de l'échantillon, ce dernier étant par exemple remplacé par un écran absorbant de type écran noir. , Ssource est le signal produit par la source de lumière. Ssource peut notamment être établi en couplant la source de lumière au photodétecteur, par exemple au moyen d'une fibre 15 optique dite de retour d'excitation 13, représentée sur la figure 1. Sstd-n est un signal de rétrodiffusion mesuré, en considérant une distance de rétrodiffusion Dr,, sur un fantôme, dont les propriétés optiques (absorption, diffusion) sont connues, en utilisant le même dispositif que celui mis en oeuvre pour acquérir le signal Sn. 20 Rstd-n est une estimation de la réflectance produite, par ledit fantôme, à la distance de rétrodiffusion D. D'autres fonctions f',,b établissant un lien entre le signal Sn mesuré par le photodétecteur et la réflectance Rn, notamment en prenant en compte les paramètres de l'instrumentation mise en oeuvre, sont utilisables. 25 D'une façon générale, la réflectance représente l'intensité du signal rétrodiffusé. Elle est généralement normalisée par l'intensité du faisceau incident au détecteur, auquel cas elle représente une fraction du faisceau incident rétrodiffusée. 3032342 15 6ierne étape 160 : pour au moins une longueur d'onde X, et en considérant au moins deux distances Dr, de rétrodiffusion, détermination du couple (p.a(X), p.'s(X)) présentant le moindre écart entre la réflectance mesurée Rr,(X), à la longueur d'onde X, et une réflectance modélisée RnA ja,p.s,model(X) pour différentes valeurs de p.a(X) et de p.'s(X), à une distance de rétrodiffusion D. 5 Cette détermination peut être réalisée par la minimisation d'un écart quadratique, et par exemple selon l'expression : N m (Rn, ta Rn (À)) 2 (P a (XI !ifs (À)) = argmin(ia(nwsm) (Rn n=1 où : N désigne le nombre de distances prises en compte 10 Rnmeoades, est une fonction de réflectance modélisée, établie pour la distance de rétrodiffusion Dr,, et pour un couple de valeurs lia et us'. Les différentes valeurs de réflectance modélisée Rnmec'atis, sont obtenues, pour une pluralité de couples de valeurs lia, us' au cours d'une phase de calibration, par simulation numérique, ou expérimentalement, sur des échantillons étalons dont les propriétés optiques sont connues. 15 Pour une distance de rétrodiffusion Dr, donnée, on peut représenter une pluralité de réflectances Rnm4'ades, modélisées en fonction de p.a et de ps'. La figure 6 donne un exemple de représentation de telles réflectances modélisées, en considérant une distance de rétrodiffusion égale à 400 p.m et en prenant en compte des valeurs du coefficient d'absorption comprises entre 0 et 10 cm-1, et des valeurs du coefficient de diffusion réduit comprises entre 0 et 100 cm-1 20 D'une façon générale, la notation Rnmeel, désigne une réflectance modélisée à la distance de rétrodiffusion Dr,, en prenant en compte des valeurs prédéterminées d'au moins un paramètre optique p. Le paramètre p peut correspondre à une propriété optique, ou un ensemble de propriétés optiques. Les étapes 150 et 160 sont mises en oeuvre par le microprocesseur 48, préalablement 25 programmé à cet effet, et dont les données d'entrée sont les mesures réalisées par le photodétecteur 40. Les inventeurs ont constaté que lorsque la distance de rétrodiffusion, séparant une la zone d'illumination élémentaire d'une zone de détection élémentaire, est inférieure à 200 p.m, ou, 3032342 16 plus généralement, inférieure à un ratio 1/us', le procédé décrit ci-dessus permet de caractériser les propriétés optiques de la couche superficielle de l'échantillon examiné, cette couche superficielle s'étendant entre la surface de l'échantillon et une profondeur inférieure à 1/us'. Les figures 7A à 7D, réalisées par les inventeurs, représentent la valeur de la réflectance 5 modélisée RZ'atis, en fonction des coefficients lia, us', en considérant un milieu semi-infini, et en considérant également un autre paramètre optique : le paramètre d'anisotropie de diffusion, noté g. Ces simulations ont été réalisées avec un code de calcul modélisant le transport des photons de type Monte Carlo. La distance de rétrodiffusion est respectivement égale à 65 um pour la figure 10 7A, 120 um pour la figure 7B, 185 um pour la figure 7C et 415 um pour la figure 7D. Sur chaque figure, on a considéré quatre valeurs de g : 0,6 ; 0,7 ; 0,8 ; 0, 9. Le facteur d'anisotropie de la diffusion, noté g, représente le cosinus moyen de l'angle de diffusion au cours d'une diffusion. Ce facteur, sans dimension, est défini dans la littérature par l'expression : 1 g = 1f(cos(0))cos(0)d(cos(0)) -1 - 6' représente l'angle de diffusion, - f(cos(6)) est la probabilité associée à chaque valeur du cosinus de l'angle de diffusion. Une diffusion parfaitement anisotrope, dans laquelle tous les angles de diffusion seraient 20 équiprobables, se traduit par un coefficient d'anisotropie égal à 0. A l'inverse, en l'absence de diffusion, les photons ne sont pas déviés et le coefficient d'anisotropie est égal à 1. La propagation de la lumière dans le milieu est alors uniquement gouvernée par le coefficient d'absorption. Dans les milieux biologiques, il est admis que la diffusion est anisotrope, privilégiant les faibles 25 angles de diffusion. On parle de diffusion vers l'avant. Le facteur d'anisotropie est choisi de façon arbitraire, et généralement entre 0,8 et 0,95. Ce facteur est alors utilisé en tant que facteur de correction appliqué au coefficient de diffusion ps, afin d'établir un coefficient de diffusion dit réduit, ps', tel que : 15 où 3032342 17 ps' = ps (1-g) us est un coefficient de diffusion réduit, prenant en compte la nature anisotrope de la diffusion dans le milieu diffusant. Sur la figure 7A, on peut observer plusieurs nappes sensiblement parallèles les unes aux autres, 5 chaque nappe correspondant à une valeur du coefficient d'anisotropie de diffusion g. Les différences entre les différentes nappes s'estompent peu à peu sur les figures 7B et 7C, et deviennent négligeables sur la figure 7D, sur laquelle on n'observe qu'une seule nappe, qui correspond à la superposition de quatre nappes respectivement affectées aux différentes valeurs de g. 10 Sur la base de la figure 7D, qui correspond à une distance de rétrodiffusion supérieure à quelques centaines de um, l'influence de la valeur du coefficient d'anisotropie g sur la réflectance est faible : quelle que soit sa valeur, la valeur de la réflectance, pour un couple (lia, us') donné, n'évolue pas de façon significative. La diffusion de la lumière est correctement décrite par les coefficients lia et us' moyennant une détermination arbitraire du coefficient 15 d'anisotropie. Lorsque la distance de rétrodiffusion est faible, par exemple inférieure à 100 um ou 200 um, comme c'est le cas sur la figure 7A, et, dans une moindre mesure, sur les figures 7B et 7C, la réflectance évolue de façon non négligeable en fonction du coefficient d'anisotropie. Sur la figure 7A, qui correspond à une distance de rétrodiffusion de 65 um, les différentes nappes, 20 correspondant à différentes valeurs de g, se séparent distinctement. Aussi, une même valeur de réflectance peut correspondre à plusieurs couples (lia, us'), selon la valeur du coefficient d'anisotropie g. Ainsi, la prise en compte d'un coefficient d'anisotropie défini de façon arbitraire n'est plus adaptée. Il devient alors utile de le déterminer expérimentalement. Autrement dit, au voisinage de la surface de l'échantillon, la diffusion des photons ne peut plus 25 être modélisée, de façon satisfaisante, en considérant le uniquement coefficient d'absorption lia et le coefficient de diffusion réduit us, mais en considérant également le coefficient d'anisotropie de la diffusion. Selon un deuxième exemple, représenté sur la figure 5B, et sous réserve de disposer d'un nombre suffisant de mesures à des distances de rétrodiffusion Dr, différentes et inférieures à 30 200 um, on peut déterminer conjointement lia, us et g, (ou lia, us et g) en appliquant les étapes 3032342 18 110 à 150 préalablement décrites, l'étape 160 étant remplacée par une étape 161 dans laquelle, pour au moins une longueur d'onde X, et pour une pluralité de distances de rétrodiffusion Dri, inférieures à 200 um, on détermine le triplet (p.a(X), p.',(X) ,g) présentant le moindre écart entre la réflectance Rn(X) mesurée, à la longueur d'onde X, et une réflectance modélisée Rnme° ad ,etisi 5 pour différentes valeurs du triplet (p.a, us', g). Cette détermination peut être réalisée en minimisant un écart quadratique, selon l'expression : N (RInnto ad epls1 ,g(À,) Rn (À))2 (lict(X), MI g (À)) = ,g n=1 où : N désigne le nombre de distances prises en compte. Dans le cas présent, N doit être au 10 moins supérieur à 3 car trois grandeurs sont à estimer, à savoir lia, p.,' et g. Rnmec'adepsfg est une fonction de réflectance modélisée, établie pour une distance de rétrodiffusion Dri, et pour différents triplets de valeurs p.a , ps' et g, au cours d'une phase de calibration, comme précédemment décrit. 15 Cette étape 161 peut être avantageusement mise en oeuvre itérativement, en fixant, par exemple alternativement, deux paramètres, sur les trois recherchés, soit à une valeur initiale arbitraire soit à une valeur déterminée lors d'une itération précédente. L'algorithme itératif peut alors converger vers un triplet de valeurs (p.a,p.s',g) Les inventeurs ont par ailleurs réalisé différents modèles, montrant que lorsque la distance de 20 rétrodiffusion est faible, typiquement inférieure à 1 / p.s', l'influence du coefficient d'absorption lia sur la réflectance est faible. Tirant profit de ces constatations, il est proposé un troisième exemple de procédé, qui constitue un procédé préférentiel de détermination des propriétés optiques, plus robuste que le procédé précédent, et représenté sur la figure 5C. 25 II comprend les étapes 110 à 150 telles que précédemment décrites, l'étape 120 comprenant l'acquisition : 3032342 19 de deux signaux optiques de rétrodiffusion (521, 522), dits signaux proches, émanant respectivement de la surface de l'échantillon à deux distances de rétrodiffusion D1 et D2 dites « proches », inférieures à 200 um, ou, de façon plus générale, inférieures à 1/us'. de deux signaux optiques de rétrodiffusion, dits signaux éloignés (523, 524), émanant 5 respectivement de la surface de l'échantillon à deux distances de rétrodiffusion D3 et D4 dites « éloignées », supérieures auxdites distances proches (Di, D2) et de préférence supérieures à 200 um, ou, de façon plus générale, supérieures à 1/us', et encore de préférence supérieures à 500 um. L'étape 160 est remplacée par une étape 162, comprenant : 10 Sous-Etape 162.1 : la détermination, pour au moins une longueur d'onde X, ou pour au moins une bande spectrale, du coefficient de diffusion réduit us'(X) et du coefficient d'absorption u.a(X) par comparaison des réflectances R3 et R4, mesurées aux distances de rétrodiffusion éloignées D3 et D4, avec des valeurs de réflectances modélisées RIZ ad ' R4 µa,µ5, de façon analogue à l'étape 160 précédemment décrite. Cette 15 comparaison peut prendre la forme d'une minimisation d'un écart quadratique, selon l'expression : n=4 (X), s (À)) = argmin4,(up, sw)(1(Rge,e4, (À) - Rn (À)) n=3 où Rnrne°atis, désigne une réflectance modélisée à la distance de rétrodiffusion Dri, pour un couple de valeurs (u.a,us'). 20 Sous-étape 162.2: la détermination, pour la même longueur d'onde, ou la même bande spectrale que lors de la sous-étape précédente, du coefficient de diffusion u.s(X) et du coefficient d'anisotropie g, par comparaison des réflectances Ri et R2, mesurées aux distances courtes D1 et D2, avec des valeurs de réflectances Ri7sde et Rmsdgei 25 modélisées en considérant respectivement les distances de rétrodiffusion D1 et D2, ainsi que différentes valeurs de us et de g, de façon analogue à l'étape 160 précédemment décrite. Cette comparaison peut prendre la forme d'une minimisation d'un écart quadratique, selon l'expression : (n=2 (Ps (XI g) = argmin(wug) l(R,rezi (À) _ Rn (À)) 2 n=1 3032342 20 où R,27,°,d,gel désigne une réflectance modélisée à la distance de rétrodiffusion Dn, et un couple de valeurs (u.'g). Cet algorithme est mis en oeuvre en considérant la contrainte suivante : 5 ps'(2) = ps(2) (1-9(2)) us'(X) étant déterminé lors de l'étape précédente 162.1. Par ailleurs, le fait de déterminer lia, lors de la première étape, permet, lors de la deuxième étape de sélectionner des valeurs de la réflectance modélisée Rri7e,gettenant compte de la valeur lia ainsi établie. On voit tout l'intérêt de combiner des mesures à grandes et à faibles distance 10 de rétrodiffusion. Lorsque la valeur du coefficient d'absorption est connue, ou fixée arbitrairement, l'étape 162.1 vise uniquement à déterminer us'(X) en prenant en compte la valeur dudit coefficient d'absorption. Dans ce cas, il n'est pas nécessaire de disposer de deux mesures D3, D4 à des distances éloignées. Une mesure à une seule distance (D3 ou D4) peut suffire. 15 Par ailleurs, un même signal rétrodiffusé peut être utilisé à la fois lors de la première étape 162.1 et lors de la deuxième étape 162.2. On améliore alors la précision de la mesure, en particulier lorsque le coefficient us n'est pas homogène selon la profondeur de l'échantillon. Les procédés précédents ont été décrits en considérant un signal de réflectance Rn établi, en appliquant une fonction de calibration foelib à l'intensité d'un signal de rétrodiffusion Sn. D'une 20 manière générale la fonction de calibration effectue un ajustement du signal de rétrodiffusion Sn en prenant en compte des paramètres d'instruments, en particulier le bruit, l'efficacité, et éventuellement une normalisation par l'intensité du faisceau incident. Lorsque le détecteur est pourvu d'une fonction spectrométrique, les procédés précédemment décrits peuvent être mises en oeuvre pour une pluralité de longueurs d'onde ou de bandes 25 spectrales différentes. Dans ce cas, on obtient les différentes propriétés optiques en fonction de la longueur d'onde ou de la bande spectrale considérée. REVENDICATIONS1. Procédé de détermination d'une propriété optique (lia, u' us', g) d'un échantillon (50), comportant les étapes suivantes : illumination d'une surface de l'échantillon à l'aide d'un faisceau lumineux (20), de façon à former, à la surface dudit échantillon, une zone élémentaire d'illumination (18), correspondant à la partie de ladite surface éclairée par ledit échantillon, détection de N signaux optiques (521, 522, 523, 524, 52,,), rétrodiffusés par l'échantillon, chaque signal optique émanant de la surface de l'échantillon à une distance, (D1, D2, D3, D4, Dr,), dite distance de rétrodiffusion, de ladite zone élémentaire d'illumination, N étant un entier supérieur ou égal à 1, de manière à former autant de signaux détectés (Si, S2, S3, S4, Sn), détermination d'au moins une propriété optique (p) de l'échantillon, par comparaison entre : a une fonction (Ri, R2, R3, R4, Rn) de chaque signal ainsi détecté (Si, S2, S3, S4, Sn), - et une pluralité d'estimations de ladite fonction (Ri, pmodel, R2,pmodel, R3,pmodel, R4,pmodel , Rn,pmode) ) chaque estimation étant réalisée en considérant une valeur prédéterminée de ladite propriété optique (p), le procédé étant caractérisé en ce que - lors de ladite étape de détection, au moins une distance de rétrodiffusion (D1, D2) est inférieure à 200 um. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel au moins une distance (Di, D2,) est inférieure à 150 um. 3. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, dans lequel au moins deux distances (D1, D2) sont inférieures à 200 um. 4. Procédé selon l'une des revendications précédentes, dans lequel ladite propriété optique comprend : 3032342 22 ^ un facteur d'anisotropie, représentant un angle moyen de diffusion, ^ un coefficient d'absorption, ^ un coefficient de diffusion, ^ un coefficient de diffusion réduit. 5 5. Procédé selon l'une des revendications précédentes, comprenant : - la détection d'au moins deux signaux optiques rétrodiffusés émanant de la surface de l'échantillon : ^ un signal rétrodiffusé proche (521, 522), émis à une distance de rétrodiffusion dite proche (Di, D2), inférieure à 200 p.m, 10 ^ un signal rétrodiffusé éloigné (523, 524), émis à une distance de rétrodiffusion dite éloignée (D3, D4), supérieure à ladite distance proche, - la détermination d'une première propriété optique (p.' g) à partir dudit signal proche, - la détermination d'une deuxième propriété optique (lis', lia), différente de la première propriété optique, à partir dudit signal rétrodiffusé éloigné. 15 6. Procédé selon la revendication 5, comprenant : - la détection d'au moins deux signaux optiques rétrodiffusés (521, 522) proches, émanant de la surface de l'échantillon à deux distances de rétrodiffusion différentes (D1, D2), ces deux distances étant inférieures à 200 p.m, - la détermination du coefficient de diffusion réduit (p.,') à partir dudit signal optique 20 éloigné (S3, S4), - puis la détermination du coefficient de diffusion (p.$) et du coefficient d'anisotropie de diffusion (g) à partir desdits deux signaux optiques rétrodiffusés proches (521, 522), ainsi que du coefficient de diffusion réduit (p.,') préalablement déterminé. 7. Procédé selon la revendication 6, comprenant : 25 - la détection d'au moins deux signaux optiques rétrodiffusés éloignés (523, 524), émanant de la surface de l'échantillon à deux distances de rétrodiffusion différentes (D3, D4), les deux distances étant supérieures à 200 p.m, 3032342 23 - la détermination du coefficient d'absorption (lia) à partir desdits signaux optiques rétrodiffusés éloignés. 8. Procédé selon l'une des revendications précédentes, dans lequel l'échantillon examiné est la peau d'un humain ou d'un animal. 5 9. Procédé selon l'une des revendications précédentes, dans lequel le signal optique rétrodiffusé est mesurée à une pluralité de longueurs d'ondes. 10. Procédé selon l'une des revendications précédentes, dans lequel la dite fonction du signal est la réflectance (R,,), représentant l'intensité du signal mesuré (Sr,), correspondant à ladite distance de rétrodiffusion (Dr,), relativement à l'intensité dudit faisceau lumineux (20). 10