FR 3034018 A1 20160930 FR 1552483 A 20150325 1 COMPOSITION OPHTALMIQUE NUTRACEUTIQUE POUR LA SANTE OCULAIRE DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention propose une composition ophtalmique nutraceutique, notamment pour l'amélioration de la santé oculaire et la prévention des maladies oculaires. Une telle composition comprend des vitamines, des oligoéléments, des caroténoides, des acides gras oméga 3 et du resvératrol. De manière surprenante, la présente demande démontre une meilleure efficacité et un effet synergique du resvératrol dans une telle association, tant dans le traitement des cellules rétiniennes pathologiques que dans le maintien et l'amélioration de la santé des cellules saines. ETAT ANTERIEUR DE LA TECHNIQUE La dégénérescence maculaire liée à l'âge (DMLA) est la première cause de handicap visuel chez les personnes de plus de 50 ans. Toutes formes confondues, cette maladie 20 concerne environ 8 % de la population française, mais sa fréquence augmente largement avec l'âge : elle touche 1 % des personnes de 50 à 55 ans, environ 10 % des 65-75 ans et de 25 à 30 % des plus de 75 ans. Si l'on tient compte uniquement des formes tardives de la maladie, associées à une perte de la vision centrale, ces chiffres sont à diviser environ par deux. Mais dans les années à venir, compte tenu de 25 l'allongement de l'espérance de vie, l'incidence de la DMLA ne va cesser de croitre. Cette pathologie touche sélectivement la région maculaire, c'est à dire la zone centrale de la rétine, entraînant une perte progressive de la vision centrale à savoir le champ de vision utile pour lire, reconnaître des visages ou conduire. Elle est la première cause de 30 malvoyance chez les sujets âgés. La maladie débute par une phase précoce, sans dégénérescence, appelée maculopathie liée à l'âge (MLA ou "sèche précoce"). Cette phase se caractérise par l'accumulation de petits dépôts blanchâtres (ou "drusen mous") à l'intérieur et autour de la macula. 35 Ces dépôts sont visibles lors d'un simple examen de fond d'oeil. Cette phase est le plus souvent asymptomatique, mais le patient peut éventuellement percevoir des déformations des lignes droites ("métamorphopsies") et des taches floues. 10 15 3034018 2 En effet, à l'examen du fond d'oeil, l'ophtalmologiste observe des taches blanches (drusen) ou des irrégularités de la couche profonde de la rétine, signes caractéristiques de DMLA chez une personne de plus de 50 ans. Lorsque l'examen du fond d'oeil est réalisé à un stade plus avancé, il met en évidence des lésions plus évoluées, telles que 5 des altérations de l'épithélium pigmentaire, des hémorragies ou des dépôts de liquides, aussi appelés exsudats. Aux stades plus avancés, des symptômes apparaissent, variant en fonction de la gravité de la maladie: - Diminution de l'acuité visuelle, avec nécessité d'avoir un meilleur éclairage pour la lecture ou pour tout travail de précision ; - Vision centrale de plus en plus floue, altération de la perception des couleurs, distorsion des lignes droites, qui apparaissent déformées et gondolées ; - Apparition d'une tache sombre au centre du champ visuel appelée scotome, difficultés à reconnaître les visages, hallucinations visuelles ou baisse brutale de l'acuité visuelle ; - L'atteinte sévère du deuxième oeil est très variable d'un sujet à l'autre : elle peut survenir rapidement, dans un an, dans 10 ans, ou jamais. Si une DMLA exsudative est présente à un oeil, il y a un risque de la développer au deuxième. 20 Une MLA peut rester stable tout au long de la vie. Néanmoins, dans environ la moitié des cas et sous l'influence de plusieurs facteurs, la MLA évolue en formes dégénératives tardives : - Forme atrophique qui est une forme sèche, aussi appelée forme atrophique, 25 dans laquelle la macula s'atrophie en vieillissant et est progressivement remplacée par du tissu cicatriciel ; ou - Forme humide qui est une forme exsudative dans laquelle de petits vaisseaux gorgés de sang se développent sous la macula. Saignant facilement, ces néovaisseaux sont responsables d'exsudats et d'hémorragies du fond d'oeil. 30 Ces deux formes tardives ont une incidence à peu près équivalente. Elles conduisent à une dégradation irréversible de la macula et à une perte de la vision centrale affectant un seul oeil ou les deux. Des formes mixtes peuvent être observées. 3034018 3 La forme humide de la DMLA, dite néovasculaire ou exsudative, tout comme la rétinopathie diabétique, l'oedème maculaire, l'occlusion veineuse rétinienne ou encore la forte myopie, se traduit par une prolifération de nouveaux vaisseaux anormaux sous la rétine. Ces vaisseaux fragiles laissent diffuser du sérum, responsable d'un 5 soulèvement de la rétine, et/ou du sang entrainant l'apparition d'hémorragies rétiniennes. Cette forme évolue rapidement si elle n'est pas prise en charge, avec une perte de la vision en quelques semaines ou même quelques jours. Ce processus peut être ralenti par des médicaments de type anti-VEGF. 10 Ainsi, depuis 2006, la forme humide de la DMLA est traitée à l'aide d'inhibiteurs du VEGF. Progressivement, les autres pathologies néovasculaires (oedème maculaire, occlusion veineuse rétinienne ou forte myopie) sont également traitées à l'aide de ces traitements. Le VEGF est un facteur de croissance qui permet la formation des néovaisseaux. Son blocage par des injections répétées d'anti-VEGF, directement dans 15 l'oeil par voie intra vitréenne à raison de sept injections par an en moyenne, permet de stopper la progression de la maladie. Il existe actuellement trois inhibiteurs de VEGF : - le pegaptanib depuis 2006, considéré comme peu efficace ; - le ranibizumab depuis 2007, avec environ 30% de non-répondeurs ou d'échappement au traitement ; et - l'aflibercept depuis 2012. Ces anti-VEGF ont largement supplanté les anciennes techniques destinées à détruire les néo-vaisseaux, notamment la photocoagulation (destruction thermique des vaisseaux anormaux) et la photodynamique. Cette dernière technique, datant des années 2000, consiste à injecter par voie intraveineuse un produit photosensible (vertéporfine) qui devient toxique sous l'effet de lumière rouge appliquée localement à l'aide d'un laser. En amont de ces traitements pharmaceutiques lourds, mis en oeuvre à des stades avancés de la pathologie, des études ont été menées pour tenter de trouver des prises en charges plus précoces et plus « légères », ayant pour but de prévenir l'avancée de la maladie. Ainsi, des études appelées AREDS 1 & 2 (acronyme anglais de "Age-Related Eye 35 Disease Study") ont été menées dans le but de démontrer l'effet bénéfique de compléments alimentaires sur les maladies oculaires. 3034018 4 Ces études ont révélé que des suppléments alimentaires à base d'antioxydants étaient potentiellement capables de prévenir le développement de maladies oculaires, notamment celles liées à l'âge, en particulier la DMLA. 5 En pratique, l'étude AREDS 1 préconise la prise quotidienne d'antioxydants de type oligoéléments et vitamines, comme suit : Zinc 80 mg Vitamine C 500 mg Vitamine E 267 mg Cuivre 2 mg Béta-carotène (= Vitamine A) 15 mg L'étude AREDS 2 a par ailleurs préconisé la suppression de la vitamine A et rapporté 10 le bénéfice de la prise quotidienne supplémentaire de caroténoïdes (pigments maculaires) et d'acides gras oméga 3, comme suit : Lutéine 10 mg Zéaxanthine 2 mg acide docosahexaénoïque (DHA) 350 mg acide eicosapentaénoïque (EPA) 650 mg Sur la base des résultats des études AREDS, il est donc préconisé la prise quotidienne 15 de tels compléments alimentaires chez les personnes présentant un risque élevé de développer une DMLA, en particulier chez les malades présentant une MLA à l'un ou aux deux yeux, ainsi que chez les patients atteints d'une DMLA avancé ne touchant encore qu'un oeil. 20 Il existe toutefois un besoin évident de développer des solutions permettant une meilleure prise en charge notamment de la DMLA, tant au niveau de sa prévention que de son traitement. 3034018 5 EXPOSE DE L'INVENTION Selon un premier aspect, la présente invention vise une composition ophtalmique nutraceutique comprenant : 5 - des vitamines ; - des oligoéléments ; - des caroténoïdes ; - des acides gras oméga 3 ; et - du resvératrol. 10 Dans le cadre de l'invention, on appelle « composition nutraceutique », une composition dont le but est de compléter le régime alimentaire normal et constituant une source concentrée de nutriments ou d'autres substances ayant un effet nutritionnel ou physiologique, seuls ou combinés. Il s'agit avantageusement d'un complément ou 15 supplément alimentaire. Dans le cadre de l'invention, on appelle « composition ophtalmique », une composition présentant des propriétés bénéfiques pour la santé oculaire. Ceci n'exclut toutefois pas la possibilité qu'une telle composition ait un effet bénéfique au niveau 20 d'autres organes de l'homme ou de l'animal. Dans la présente demande, il est montré que la combinaison des différents composés listés a une action bénéfique dans le cadre de la modulation, à la fois au niveau de l'expression (modification quantitative) et de la phosphorylation/activité (modification 25 qualitative), des récepteurs aux facteurs de croissance de l'endothélium vasculaire (VEGF pour « Vascular endothelial growth factor ») notés VEGFR dans la suite de l'exposé. Selon une première variante, la composition selon l'invention est constituée des 30 ingrédients listés ci-dessus. De manière avantageuse, les ingrédients vitamines, oligoéléments, acides gras oméga 3 et caroténoïdes, connus pour leurs propriétés antioxydantes, sont choisis comme préconisés par les études AREDS. 3034018 6 Selon un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention comprend au moins une vitamine, avantageusement une combinaison de vitamines. Il s'agit avantageusement de la vitamine C et/ou de la vitamine E. 5 Il peut également s'agir des vitamines suivantes : - nicotinamide ou niacinamide ou vitamine B3 ou PP ; - pyridoxine, par exemple sous forme de pyridoxine HC1, ou vitamine B6 ; - riboflavine ou vitamine B2 ; - thiamine, par exemple sous forme de thiamine nitrate, ou vitamine B1 ; 10 - cyanocobalamine ou vitamine B12 ; - acide folique ou vitamine B9 ; - Vitamine B5 ; - Vitamine B8 ; - Vitamine D. 15 La vitamine C, disponible sous forme d'acide ascorbique ou d'ascorbate de calcium, est avantageusement présente en quantité (dose journalière) comprise entre 50 et 500 mg, par exemple égale à 240 mg. 20 La vitamine E ou alpha-tocophérol, par exemple disponible sous forme d'huile à 67%, est avantageusement présente en quantité (dose journalière) comprise entre 10 et 500 mg, par exemple égale à 30 mg. Selon un autre mode de réalisation, des quantités quotidiennes suivantes, exprimées en 25 mg, peuvent être envisagées pour les vitamines suivantes : vitamine B3 ou PP : 1 à 100, par exemple 18 ; vitamine B6 : 1 à 10, par exemple 2 ; vitamine B2 : 1 à 10, par exemple 1,6 ; vitamine B1 : 1 à 10, par exemple 1,4 ; 30 vitamine B12 : 0,0005 à 0,01, par exemple 0,001 ; vitamine B9 : 0,1 à 1, par exemple 0,2. Selon un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention ne comprend pas de vitamine A ou bêta-carotène. 35 3034018 7 Selon un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention comprend au moins un oligoélément, avantageusement une combinaison d'oligoéléments. Il s'agit avantageusement du zinc (Zn) et/ou du cuivre (Cu). Il peut également s'agir des oligoéléments suivants : 5 - du manganèse, par exemple du sulfate de manganèse anhydre ; - du sélénium, par exemple du sélénite de sodium ; - du magnésium, par exemple de l'oxyde de magnésium. Le zinc (Zn), disponible sous forme d'oxyde de zinc ou de sulfate de zinc 10 (monohydrate), est avantageusement présent en quantité (dose journalière) comprise entre 5 et 100 mg, par exemple égale à 12,5 mg. Le cuivre (Cu), disponible sous forme de sulfate de cuivre, monohydrate ou anhydre, est avantageusement présent en quantité (dose journalière) comprise entre 0,2 et 10 15 mg, par exemple égale à 1 mg. Selon un autre mode de réalisation, des quantités quotidiennes suivantes, exprimées en mg, peuvent être envisagées pour les oligoéléments suivants : - du manganèse : entre 1 et 10 mg, par exemple 1 mg ; 20 - du sélénium : entre 0,01 et 0,1 mg, par exemple 0,025 mg ; - du magnésium : entre 1 et 50 mg, par exemple 10 mg. Selon un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention comprend au moins un caroténoïde, avantageusement une combinaison de caroténoïdes. Il s'agit 25 avantageusement de la lutéine et/ou de la zéaxanthine. Il peut également s'agir des caroténoïdes suivantes : - de la méso-zéaxanthine ; - du lycopène ; - de l'astaxanthine. 30 La lutéine, disponible sous forme de lutéine à 20% en poids, est avantageusement présente en quantité (dose journalière) comprise entre 2 et 50 mg, par exemple égale à 10 mg. 35 La zéaxanthine, disponible sous forme de zéaxanthine à 5 ou 14% en poids, est avantageusement présente en quantité (dose journalière) comprise entre 0,5 et 10 mg, par exemple égale à 2 mg. 3034018 8 Selon un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention comprend au moins un acide gras polyinsaturé de type oméga 3, avantageusement une combinaison d'acides gras oméga 3. Il s'agit avantageusement de l'acide eicosapentaénoïque (EPA) et/ou de l'acide docosahexaénoïque (DHA). Il peut également s'agir des acides gras 5 oméga 3 suivants : - de l'acide alpha-linolénique (ALA) ; - de l'acide docosapentaénoïque (DPA). Les acides gras oméga 3 mis en oeuvre dans le cadre de la composition selon 10 l'invention peuvent être issus de l'huile de poisson, par exemple de l'huile de poisson à 70% en masse d'acides gras oméga 3, ou d'huile végétale, par exemple de lin. Ces acides gras sont avantageusement présents en quantité (dose journalière) comprise entre 500 et 1000 mg, par exemple égale à 665 mg ce qui représente un apport en huile de poisson de 950 mg. Plus généralement, l'huile de poisson peut être présente en 15 quantité journalière comprise entre 500 et 1000 mg. Dans ce contexte, l'EPA est avantageusement présent en quantité (dose journalière) comprise entre 100 et 1000 mg, par exemple égale à 380 mg. 20 Dans ce contexte, le DHA est avantageusement présent en quantité (dose journalière) comprise entre 100 et 1000 mg, par exemple égale à 190 mg. Dans ce contexte, le DPA est avantageusement présent en quantité (dose journalière) inférieure à 100 mg, voire à 50 mg. 25 De manière caractéristique, une composition selon l'invention comprend en outre du resvératrol. Le resvératrol est un composé polyphénolique, dérivé du stilbène, de formule : 30 OH HO OH 3034018 9 Il existe deux isomères mais la forme trans est majoritairement active. Dans la suite de la description, le terme « resvératrol » pourra donc être utilisé en lieu et place de transresvératrol. 5 Le resvératrol est un polyphénol retrouvé en quantités abondantes dans certains fruits, notamment dans le raisin et les oléagineux, et dans le vin. Il existe aujourd'hui plusieurs sources commerciales de resvératrol qui peuvent être utilisées pour la préparation d'une composition selon l'invention : - Vitis vinifera : 10 o Peau de raisin o Pépin de raisin - Polygonum Cuspidatum - Produit par fermentation 15 Des sources privilégiées sont notamment : - Resveratrol 5% source Vitis vinifera, peau de raisin (PHARMANAGER INGREDIENT) ; - Resveratrol 98% source Vitis vinifera, peau de ra i sin (CAMBRIDGE COMMODITIES ; CAS Number : 501-36-0). 20 Le resvératrol est avantageusement présente en quantité (dose journalière) supérieure ou égale à 1 mg, voire 2 mg, 5 mg, 10 mg, 20 mg, 30 mg, 50 mg, voire même 100 mg ou 200 mg. Selon un mode de réalisation particulier, sa quantité journalière est supérieure ou égale à 30 mg, voire supérieure ou égale à 50 mg, voire même supérieure 25 ou égale à 100 mg. Avantageusement, elle ne dépasse pas 200 mg. A la connaissance du Déposant, il a déjà été préconisé d'utiliser du resvératrol dans des compositions, y compris à visée ophtalmique, en raison de ses propriétés précédemment décrites : antioxydant, anti-apoptotique, anti-tumorigène, anti- 30 inflammatoire, anti-angiogénique et vaso-relaxant. Toutefois, la présente demande met en évidence les nouveaux effets suivants : - Un effet bénéfique sur des cellules saines ; - Une activité anti-VEGF, au niveau quantitatif et qualitatif, dans les cellules malades, boostée en présence des autres ingrédients d'une composition 35 selon l'invention, en particulier dans le contexte d'une formulation ARED S . 3034018 10 Selon un autre mode de réalisation, la composition selon l'invention peut contenir d'autres actifs tels que : - un ou d'autres polyphénol(s), tels que l'épigallocatechine-3-gallate (EGCG) ; 5 - du glutathion, par exemple à hauteur de 1 à 10 mg par jour, voire 2 mg par jour ; - un ou des anthocyanoside(s) ; - de l'hydroxythyrosol. La teneur en chacun de ces ingrédients est aisément déterminée et ajustée par l'homme 10 du métier. Ainsi et selon une variante, la composition comprend ou est constituée des ingrédients suivants : - vitamine C ; 15 - vitamine E ; - zinc ; - cuivre ; - lutéine ; - zéaxanthine ; 20 - acides gras oméga 3 issus de l'huile de poisson, notamment EPA et DHA ; - resvératrol. Selon une autre variante, la composition comprend ou est constituée des ingrédients suivants, sur la base d'une dose quotidienne: 25 - de 50 mg à 500 mg de vitamine C, avantageusement 240 mg ; - de 10 mg à 500 mg de vitamine E, avantageusement 30 mg ; - de 5 mg à 100 mg de zinc, avantageusement 12,5 mg ; - de 0,2 mg à 10 mg de cuivre, avantageusement 1 mg ; - de 2 mg à 50 mg de lutéine, avantageusement 10 mg ; 30 - de 0,5 mg à 10 mg de zéaxanthine, avantageusement 2 mg ; - de 100 mg à 1000 mg de EPA, avantageusement 380 mg ; - de 100 mg à 1000 mg de DHA, avantageusement 190 mg ; - du resvératrol, avantageusement en quantité supérieure à 30 mg. 3034018 11 Selon une première alternative, tous ces ingrédients sont mélangés et administrés dans une composition unique. Alternativement, ces ingrédients peuvent être combinés de différentes manières pour être formulés et/ou administrés de manière simultanée ou décalée dans le temps. 5 Selon un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention est dépourvue d'au moins un des ingrédients de la liste suivante : - le safran ; - un agent chélateur des métaux, tels que l'EDTA ou l'acide phytique ; 10 - un nucléotide. Selon ce mode de réalisation, la composition mise en oeuvre ne combine pas du resvératrol avec du safran, ou du resvératrol avec un agent chélateur des métaux et un ou plusieurs nucléotides. 15 Une composition selon l'invention est avantageusement destinée à une administration orale. Elle peut se présenter sous forme liquide, de solution, de suspension, de pâte ou de gel. 20 Avantageusement, elle se présente sous forme solide, telle que poudre, tablettes y compris tablettes effervescentes, capsules, gélules, comprimés ou pastilles, préparés de manière conventionnelle à l'aide d'additifs acceptables tels que des agents liants, des agents de comblement, des lubrifiants, des agents de désintégration ou des agents mouillants. Les tablettes peuvent optionnellement être « coatées » de manière connue 25 de l'homme du métier à l'aide de sucres, de films ou de revêtements entériques. De manière alternative, d'autres systèmes de délivrance peuvent être mis en oeuvre, tels que des préparations dans de la gélatine molle ou des capsules à base de gélatine ou des formulations préparées à l'aide des nanotechnologies, telles que des nano- 30 dispersions, nano-émulsions ou nano-encapsulations. La composition selon l'invention peut en outre contenir un ou plusieurs additifs tels que colorants, pigments, arômes, ... 3034018 12 Selon un mode de réalisation particulier, la composition se présente sous forme de capsules, définissant un volume donné dans lequel est contenue la composition. La capsule se décompose dans l'appareil digestif afin de libérer les principes actifs et permettre son assimilation par l'organisme. 5 De manière connue de l'homme du métier, la répartition dans ce type de conditionnement relève d'un compromis entre : - un nombre limité de prises, pour assurer une bonne observance du traitement ; 10 - un volume adapté des prises, permettant la formulation de l'ensemble des ingrédients et une ingestion aisée. Dans le cas présent, une composition selon l'invention se présente sous la forme d'une ou plusieurs capsules, avantageusement 2 capsules. Ainsi, ces capsules peuvent être 15 prises avec un peu d'eau en début ou au milieu du repas principal. De manière préférentielle, une composition selon l'invention est administrée une fois par jour. Dans ce contexte, des additifs classiques sont : - du glycérol, par exemple du glycérol monostéarate ; et/ou 20 - de l'huile de soja ; et/ou - de la cire d'abeille ; et/ou - de la lécithine de soja. De manière adaptée, ces additifs sont ajoutés à une composition selon l'invention en raison de leur capacité à améliorer par exemple les propriétés d'écoulement ou 25 l'homogénéisation de celle-ci. En outre et de manière connue de l'homme du métier, la tunique des capsules peut être élaborée à partir des ingrédients suivants : - gélatine ; et/ou 30 - oxyde de fer rouge ; et/ou - oxyde de fer noir ; et/ou - sorbitol ; et/ou - glycérol. 35 3034018 13 Dans le cadre de la présente invention, il a été constaté que l'activité anti-VEGF, du resvératrol pouvait être améliorée, aussi bien au niveau de l'inhibition de l'expression des récepteurs que de leur phosphorylation, par la présence d'autres ingrédients, en l'occurrence vitamines, oligoéléments, caroténoïdes et acides gras oméga 3, non 5 connus pour cette propriété. De manière remarquable, cet effet est dose-dépendant. Ainsi, la composition selon l'invention présente un intérêt évident pour son utilisation dans le traitement des pathologies oculaires associées à une surproduction de VEGF / VEGFR (récepteurs au VEGF), telles que la DMLA, en particulier exsudative, 10 l'occlusion veineuse rétinienne, l'oedème maculaire, l'oedème maculaire diabétique, la myopie, la rétinopathie diabétique, le glaucome néovasculaire ou la néovascularisation cornéenne. Plus généralement, la présente invention concerne une composition nutraceutique 15 comprenant du resvératrol pour son utilisation dans: - le maintien ou l'amélioration de la santé oculaire ; et/ou - la prévention des maladies oculaires ; et/ou - la modulation de l'expression et/ou de l'activité des récepteurs VEGF (VEGFR) des cellules oculaires, telles que rétiniennes ou du segment antérieur 20 (cornéennes). Selon un premier aspect, la présente invention concerne un procédé pour le maintien et/ou l'amélioration de la santé oculaire chez un sujet, consistant à administrer, par voie orale, une composition nutraceutique comprenant du resvératrol. 25 Dans le cadre de l'invention, les termes « sujet » et « patient » peuvent être utilisés indifféremment. Avantageusement, le sujet est un sujet sain, dont l'examen ophtalmologique ne révèle 30 aucun des signes caractéristiques des pathologies oculaires, en particulier MLA ou DMLA. Encore plus avantageusement, il s'agit d'un sujet dit « jeune », c'est-à-dire âgé de moins de 50 ans, voire de moins de 45 ans. Selon un mode de réalisation particulier, il s'agit d'un sujet jeune dit « à risque », c'est-à-dire présentant des caractéristiques ou des antécédents associés à un risque accru de développer une 35 pathologie oculaire, en particulier une MLA ou une DMLA. Les facteurs à risque aujourd'hui identifiés sont en particulier : 3034018 14 - fumeur ; - risque génétique héréditaire - hypertension artérielle ; - obésité ; 5 - opération de la cataracte ; - myopie ; - diabète. Selon un second aspect, la présente invention concerne un procédé pour prévenir les 10 maladies oculaires chez un sujet, consistant à administrer, par voie orale, une composition nutraceutique comprenant du resvératrol. Avantageusement, les maladies oculaires visées sont les maladies liées à l'âge, en particulier les atteintes rétiniennes, et encore plus précisément les pathologies 15 rétiniennes néovasculaires telles que la DMLA exsudative. Préférentiellement, le sujet est un sujet sain comme défini ci-dessus, ou un sujet atteint de certains de ces signes uniquement au niveau d'un oeil. 20 Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé pour moduler l'expression et/ou l'activité des récepteurs VEGF des cellules oculaires chez un sujet, consistant à administrer, par voie orale, une composition nutraceutique comprenant du resvératrol. Comme démontré dans la présente demande, la modulation correspond à une inhibition en présence de cellules malades, notamment dans le cadre d'atteintes 25 rétiniennes, alors qu'elle correspond à une stimulation ou activation en présence de cellules saines. Selon un mode de réalisation particulier, le sujet est un sujet atteint d'une pathologie ophtalmique, en particulier néovasculaire, par exemple la DMLA (avantageusement exsudative), l'occlusion veineuse rétinienne, l'oedème maculaire, l'oedème maculaire diabétique, la myopie, la rétinopathie diabétique, le glaucome 30 néovasculaire ou la néovascularisation cornéenne. Selon un mode de réalisation privilégié, la composition comprenant du resvératrol est une formulation de type AREDS associant d'autres actifs, comme décrit ci-dessus. 35 Comme déjà dit, selon des études menées par le Déposant, une composition à base de resvératrol peut favoriser le maintien en bonne santé des cellules rétiniennes saines, tandis qu'elle contribue à éliminer les cellules rétiniennes pathologiques. 3034018 15 Ainsi, une telle composition peut être préconisée dans le cas de patients atteints d'une pathologie ophtalmique, en particulier néovasculaire, telle que listée ci-dessus, ou atteints d'une telle pathologie à un seul oeil. 5 Outre cet effet bénéfique dans le cas d'une pathologie détectable ou déclarée, une composition comprenant du resvératrol peut être utilisée pour stimuler l'expression et/ou l'activité (la phosphorylation) des récepteurs VEGF (VEGFR) des cellules oculaires, notamment rétiniennes, saines. Cela a pour conséquence une bonne néovascularisation, et donc une bonne irrigation sanguine avec un apport accru 10 d'éléments nutritifs essentiels pour ces cellules, de manière à les maintenir en bonne santé et à prévenir les maladies, notamment celles liées à l'âge. Une population cible est donc constituée par des sujets dont l'examen ophtalmologique ne révèle aucun des signes caractéristiques d'une pathologie oculaire néovasculaire. 15 Comme déjà dit, il peut s'agir d'individus dits « jeunes », c'est-à-dire âgés de moins de 50 ans, voire de moins de 45 ans. En particulier, il peut s'agir d'individus dits « à risque », présentant au moins l'une des caractéristiques suivantes : - fumeur ; - risque génétique héréditaire ; 20 - hypertension artérielle ; - obésité ; - opération de la cataracte ; - myopie ; - diabète. 25 EXEMPLES DE REALISATION DE L'INVENTION L'invention et les avantages qui en découlent ressortiront mieux des figures et 30 exemples suivants donnés, afin d'illustrer l'invention et non de manière limitative. 3034018 16 DESCRIPTION DES FIGURES La figure 1 compare, dans des cellules rétiniennes indifférenciées (pathologiques) incubées (A) en présence d'une composition selon l'invention (formule A) ou (B) en 5 présence d'une composition similaire à celle de l'invention mais dépourvue de resvératrol (formule B), l'expression des récepteurs VEGFR (VEGFR1 et VEGFR2) et leur état de phosphorylation (p-VEGF2 Y1054 et Y951), ainsi que du VEGF, par western blot (image) et normalisation à l'aide de la f3-actine (diagramme). 10 La figure 2 compare, dans des cellules rétiniennes différenciées (saines) incubées (A) en présence d'une composition selon l'invention (formule A) ou (B) en présence d'une composition similaire à celle de l'invention mais dépourvue de resvératrol (formule B), l'expression des récepteurs VEGFR (VEGFR1 et VEGFR2) et leur état de phosphorylation (p-VEGF2 Y1054 et Y951), ainsi que du VEGF, par western blot 15 (image) et normalisation à l'aide de la f3-actine (diagramme). I/ Composition selon l'invention 1-1/ Formule de la composition (A) 20 Ingrédient Quantité (mg) /jour Vitamine C 240 Vitamine E 30 Zinc 12,5 Cuivre 1 Lutéine 10 Zéaxanthine 2 Huile de poisson* 950 dont DHA 190 dont EPA 380 Resvératrol 30 *Huile de poisson comprenant 70% en poids d'acide gras oméga 3 dont EPA et DHA. Tableau 1 : formule d'une composition selon l'invention (A) 3034018 17 1-2/ Conditionnement de la composition sous forme de capsules Les quantités présentées dans le tableau 1 correspondent à la dose journalière. En pratique, la composition selon l'invention est conditionnée sous forme de 2 capsules. Pour chaque capsule, il est ajouté au mélange-maître : - glycérol monostérate ; - cire d'abeilles ; - lécithine de soja. La tunique d'une capsule présente la composition suivante : - Gélatine bovine - oxyde de fer rouge - oxyde de fer noir. Les capsules sont ensuite recouvertes d'une coque en PVC/PVDC et d'un film d'aluminium. De manière alternative, elles peuvent être conditionnées en pilulier. De manière recommandée, ces deux capsules sont prises avec un peu d'eau en début 20 ou au milieu du repas principal. II/ Etude de la composition selon l'invention (Formule A) : II-1/Préparation de solutions à différentes concentrations en resvératrol 25 La solution mère est préparée dans du DMSO (DiMéthyl SulfOxyde), à raison de 0,115g de la formule A dans 1 ml de DMSO, ce qui correspond à 10 mM en resvératrol. 30 Des solutions à 1, 5, 10 et 201.1M en équivalent resvératrol, notées Al, A5, A10 et A20 respectivement, sont préparées à partir de cette solution mère. Les dilutions sont réalisées dans un milieu de culture composé de DMEM/F12 + 1% de SVF (Sérum de veau foetal sans phénol rouge). 5 10 15 35 3034018 18 II-2/Effet de la composition selon l'invention sur des cellules pathologiques A/ Protocole : 5 - Cellules étudiées : culture de cellules ARPE-19 (ATCC® CRL-2302TM) (« human retinal pigment epithelium ») indifférenciées. Ces cellules peuvent être assimilées à des cellules rétiniennes atteintes ou pathologiques. 10 - Protocole expérimental : a) Culture cellulaire : Les cellules ont été maintenues à 37°C, et en présence de CO2 5% dans du milieu DMEM/F12 (GIBCO; 31331), complété avec 10% FBS (Lonza) et 15 mM d'HEPES 15 (pH 7.4; GIBCO). b) Incubation entre les compositions (de formule A ou B) et les cellules : 1, 5, 10 ou 201.1M. Le 10 1.1M de resvératrol correspondant à 0,115 mg/ml de la formule A dans du DMEM/F12 + 1% FBS w/o rouge phénol 20 L'équivalent 101.1M de la formule B correspondant également à 0,115 mg/ml de formule B dans du DMEM/F12 + 1% FBS w/o rouge phénol Le jour précédent le traitement, le milieu a été éliminé et remplacé par du DMEM/F12 sans rouge phénol (GIBCO; 21041), complété avec 1% FBS (Lonza) et 15 mM d'HEPES (pH 7.4; GIBCO). Après 24h, les cellules ont été traitées pendant 24h avec 25 les différentes formules (Formule A, Formule B et resvératrol) dans du milieu DMEM/F12 sans rouge phénol (GIBCO; 21041), complété avec 1% FBS (Lonza) et 15 mM de HEPES (pH 7.4; GIBCO). c) Western blot : 30 Après 24h de stimulation, les milieux ont été éliminés, les cellules ont été lavées avec du PBS 1X puis grattées dans du PBS lx. Les cellules ont été centrifugées et le culot a été resuspendu dans du tampon RIPA complété avec un cocktail d'inhibiteurs de protéases (Roche) et des inhibiteurs de phosphatases. Les cellules ont été lysées dans la glace pendant 30 min puis centrifugées. La concentration protéique a été déterminée 35 par un kit de quantification des protéines (Lowry kit, biorad). 45 !..tg de protéines ont été mélangées avec un volume égal de tampon Laemmli 5x concentré, dénaturées puis chargées sur un gel d'acrylamide. Après électrophorèse, les protéines ont été 3034018 19 transférées sur une membrane de nitrocellulose (Amersham). Les blots ont ensuite été bloqués avec du lait à 5% + PBS-T 0.1% pendant 1 heure à température ambiante. Après blocage, les membranes ont été incubées avec des anticorps primaires de Cell Signaling (VEGFR-1, VEGFR-2 (55B11) ou Phospho-VEGF Receptor 2 (Tyr951) 5 (15D2)) ou Abcam (Anti-VEGF antibody [VG-1]). Les membranes ont été lavées 3 fois avec du PBS-T 0.1% puis incubées avec des anticorps conjugués HRP correspondants pendant 1 heure à température ambiante. Les membranes ont à nouveau été lavées 3 fois dans du PBS-T 0.1% et le signal a été détecté à l'aide d'ECL (Tebu bio). Les images ont été enregistrées avec le système d'imagerie ChemiDoc et 10 analysées avec le logiciel Quantity One Software (Biorad). d) Quantification du niveau d'expression et d'activité des récepteurs : La (3-actine a également été quantifiée afin de relativiser les niveaux d'expression. 15 e) Contrôles : - Co = échantillon contrôle correspondant au DMSO (servant à la solubilisation des formules) dans le milieu de culture. - R20 = resvératrol seul à 201.1M dilué dans le milieu de culture (= DMEM/F12 + 1% de SVF (Sérum de veau foetal sans phénol rouge). 20 B/ Résultats : 1) Mise en évidence de l'effet du resvératrol Pour mettre en évidence l'effet du resvératrol sur l'expression des récepteurs VEGFR, 25 la composition selon l'invention (formule A) est comparée à une composition caractérisée par l'absence de resvératrol, de formule B donnée dans le tableau 2 ci-dessous : Ingrédient Quantité (mg) Vitamine B1 1,4 Vitamine B2 1,6 Vitamine B3 18 Vitamine B6 2 Vitamine B9 0,2 Vitamine B12 0,001 Vitamine C 60 Vitamine E 10 Zinc 7,5 Manganèse 1 3034018 20 Sélénium 0,025 Cuivre 1 Lutéine 10 Zéaxanthine 2 Huile de poisson 400 dont EPA 160 Glutathion 1 Tableau 2 : composition de la formule B dépourvue de resvératrol Des dilutions de cette composition, notées B 1, B5, B10 et B20, ont été réalisées dans des conditions similaires à celles décrites au point II-1 : 0,115g de la formule B dans 1 5 ml de DMSO puis des dilutions équivalentes dans le milieu de culture. La figure 1 illustre les résultats obtenus sur des cellules pathologiques, traitées à l'aide de la composition selon l'invention (A) ou de son équivalent sans resvératrol (B). 10 Il ressort de cette figure que sur ce type de cellules, la présence de resvératrol entraine une diminution de l'expression des récepteurs (VEGFR1 et VEGFR2), ainsi que de leur phosphorylation : - la composition selon l'invention (A) permet de réprimer l'expression du VEGF et des récepteurs aux VEGF, et ce de manière dose-dépendante ; 15 - la phosphorylation des récepteurs présents diminue également, et ce de manière dose dépendante, ce qui indique une réduction de l'activation de ces récepteurs. La composition selon l'invention entraine donc une réduction quantitative, mais aussi qualitative de l'activation des récepteurs aux VEGF dans les cellules pathologiques et 20 par conséquent, de la néovascularisation. Dans la mesure où la composition dépourvue de resvératrol (formule B) ne permet pas de réduire l'expression des récepteurs aux VEGF, ni leur phosphorylation (Figure 1B), cet effet serait donc lié à la présence du resvératrol. 25 2) Mise en évidence d'une synergie dans la composition selon l'invention L'effet dose-dépendant de la composition selon l'invention sur des cellules pathologiques a été comparé à celui de la solution R20, contenant uniquement du 30 resvératrol à 20 p.M. 3034018 21 La figure 1 A révèle que le resvératrol seul permet de diminuer l'expression des récepteurs aux VEGF. Cependant, cet effet est amplifié en présence des autres ingrédients de la composition selon l'invention (comparer A20 et R20). 5 II-3/Effet de la composition selon l'invention sur des cellules saines A/ Protocole : 10 Le protocole mis en oeuvre est le même que celui décrit à l'exemple II-2, à l'exception des cellules étudiées: - Cellules étudiées : culture de cellules ARPE-19 (human retinal pigment epithelium) différenciées. - Protocole d'obtention des cellules différenciées : 15 Les cellules indifférenciées sont ensemencées dans des flacons T75. Les cellules sont maintenues à 37°C, en présence de CO2 5% dans du milieu DMEM/F12 (GIBCO; 31331), complété avec 10% FBS (Lonza) et 15 mM de HEPES (pH 7.4; GIBCO). Lorsque les cellules arrivent à confluence, le milieu est remplacé par du DMEM/F12 (GIBCO; 31331), complété avec 1% FBS (Lonza) et de 1'HEPES (15 mM pH 7.4; 20 GIBCO). Les milieux ont été changés 2 fois par semaine pendant 8 semaines. Ces cellules peuvent être assimilées à des cellules rétiniennes non atteintes ou saines. B/ Résultats : 25 1) Mise en évidence de l'activité du resvératrol La figure 2 illustre l'effet de la composition selon l'invention (A) ou de son équivalent sans resvératrol (B) sur des cellules saines. 30 Au contraire de ce qui a été observé sur des cellules pathologiques, la composition selon l'invention (A) augmente l'expression des récepteurs aux VEGF de manière dose-dépendante. De plus, la phosphorylation des récepteurs présents augmente également. Il y a donc une augmentation quantitative mais également qualitative de l'activation, et par conséquent de la néovascularisation des cellules saines. 35 En revanche, aucun effet n'est observé avec la formulation sans resvératrol (voir Figure 2: comparer Fig. 2Aet 2B). 3034018 22 Il ressort de la figure 2 que cette augmentation est dose-dépendante et significative pour les plus hautes concentrations en resvératrol. 2) Mise en évidence d'une synergie dans la composition selon l'invention L'effet dose-dépendant de la composition selon l'invention sur des cellules saines a été comparé à celui d'une solution contenant uniquement du resvératrol à 20 uM (Fig. 2, R20) : celle-ci révèle que le resvératrol seul, à la concentration testée n'a pas d'effet sur les cellules saines, tout comme la formule dépourvue de resvératrol (Fig. 2B). CONCLUSIONS : De manière surprenante et pour la première fois dans le domaine de l'ophtalmologie, 15 en rapport avec des cellules rétiniennes, il a été montré qu'une composition selon l'invention, contenant du resvératrol, a une action différentielle au niveau des récepteurs VEGF nécessaires à la néovascularisation, en fonction du type de cellules : répression dans les cellules pathologiques et effet inverse dans les cellules saines. Ainsi, le resvératrol permettrait de rétablir un équilibre dans les cellules « déficientes » 20 mais ne modifierait en rien, et permettrait même de « maintenir en forme » les cellules saines par apport supplémentaire en éléments essentiels apportés par la circulation sanguine. 5 10 REVENDICATIONS1. Composition ophtalmique nutraceutique comprenant : - des vitamines ; des oligoéléments ; - des caroténoïdes ; des acides gras oméga 3 ; et - du resvératrol. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est dépourvue de safran. 3. Composition selon les revendications 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité supérieure ou égale à 30 mg de resvératrol, avantageusement supérieure à 30 mg, encore plus avantageusement comprise entre 100 et 200 mg. 4. Composition selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que: - les vitamines, seules ou en combinaison, sont choisies dans le groupe comprenant la vitamine C et la vitamine E ; les oligoéléments, seuls ou en combinaison, sont choisis dans le groupe comprenant le zinc et le cuivre ; les caroténoïdes, seuls ou en combinaison, sont choisis dans le groupe comprenant la zéaxanthine et la lutéine ; - les acides gras oméga 3, seuls ou en combinaison, proviennent de l'huile de poisson et sont avantageusement choisis dans le groupe comprenant l'acide eicosapentaénoïque (EPA) et l'acide docosahexaénoïque (DHA). 5. Composition selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend : - vitamine C ; vitamine E ; zinc ; cuivre ; - lutéine ; - zéaxanthine ; - acides gras oméga 3 issus de l'huile de poisson, notamment EPA et DHA. 6. Composition selon la revendication 5, caractérisée en ce qu'elle comprend: 3034018 24 de 50 mg à 500 mg de vitamine C, avantageusement 240 mg ; de 10 mg à 500 mg de vitamine E, avantageusement 30 mg ; de 5 mg à 100 mg de zinc, avantageusement 12,5 mg ; - de 0,2 mg à 10 mg de cuivre, avantageusement 1 mg ; - de 2 mg à 50 mg de lutéine, avantageusement 10 mg ; de 0,5 mg à 10 mg de zéaxanthine, avantageusement 2 mg ; de 100 mg à 1000 mg de EPA, avantageusement 380 mg ; de 100 mg à 1000 mg de DHA, avantageusement 190 mg 7. Composition selon l'une des revendications 1 à 6 pour son utilisation en tant que complément alimentaire en ophtalmologie. 8. Composition pour son utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que la composition est administrée par voie orale de manière journalière. 9. Composition nutraceutique comprenant du resvératrol, sous la forme d'une ou plusieurs capsules, avantageusement 2 capsules, pour son utilisation dans: - le maintien ou l'amélioration de la santé oculaire ; et/ou - la prévention des maladies oculaires ; et/ou - la modulation de l'expression et/ou de l'activité des récepteurs VEGF des cellules oculaires. 10. Composition pour son utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que la composition est telle que définie dans les revendications 1 à 6. 11. Composition pour son utilisation selon la revendication 9 ou 10, caractérisée en ce qu'elle est utilisée dans la stimulation de l'expression et/ou de l'activité des récepteurs VEGF des cellules rétiniennes saines. 12. Composition pour son utilisation selon l'une des revendications 9 à 11, caractérisée en ce qu'elle est utilisée chez un sujet sain, avantageusement chez un sujet jeune à risque.