FR 3021655 A1 20151204 FR 1454935 A 20140530 1 NOUVEAUX COMPOSES DE TYPE 5-ACYLSULFANYL-HISTIDINE EN TANT QUE PRECURSEURS DES 5-SULFANYLHISTIDINES CORRESPONDANTES ET DE LEURS DISULFURES La présente invention a pour objet : -de nouveaux composés de type 5-acylsulfanyl-histidine (et leurs dérivés) ; -leurs procédés de préparation ; - leur utilisation en tant que précurseurs des 5- sulfanylhistidines correspondantes et de leurs disulfures. ETAT DE LA TECHNIQUE Cette invention concerne de nouveaux composés de type 5-acylsulfanyl-histidine et leurs dérivés, ainsi que leurs modes de préparation et leur utilisation en tant que précurseurs des 5-sulfanylhistidines correspondantes et de leurs disulfures. Plus particulièrement, cette invention relate la synthèse de nouveaux composés de type 5-acylsulfanyl-histidine et leurs dérivés, de leurs sels en tant que précurseurs directs des 5-sulfanylhistidines correspondantes et de leurs disulfures. La nomenclature récente IUPAC « sulfanyl » pour le groupement « -SH » est appliquée pour les composés décrits dans l'invention au lieu des différents termes utilisés auparavant dans la littérature tels que « thiohistidine », « thiolhistidine » ou « mercaptohistidine ». Le groupement 5-sulfanyl-imidazole est rarement retrouvé dans la Nature (Caroll A. et Avrey V.M. ; J. Nat. Prod. ; 2009 ; 72 ; 696-699). Très peu de produits naturels comportant un squelette 5-sulfanyl-histidine (méthylé ou non en position 3 du noyau imidazole) ont été mis en évidence à ce jour (Hand C.E. et Honek J.F.; 3021655 2 J. Nat. Prod.; 2005 ; 68 ; 293-308). Ils sont d'origine bactérienne ou marine pour la plupart. Un premier exemple est constitué par le groupe des adénochromines A, B et C (Ito S. et Prota G. ; JCS Chem. Comm. ; 5 1977 ; 251-252 ; Rossi F., Nardi G., Palumbo A. et Prota G. ; Comp. Biochem. Physiol. 1985, 80b, 843-845) et des séco-adénochromines A, B et C (Ito S., Nardi G. et Prota G. ; JCS Chem. Comm. ; 1976 ; 1042). L'imbricatine, produite par Dermasterias imbricate, 10 constitue un second exemple (Pathirana C. et Andersen R.J. ; J. Am. Chem. Soc. ; 1986 ; 108, 8288-8289). Les ovothiols A, B et C (Turner E., Klevit R.E. et Shapiro B.M. ; J. Biol. Chem. ; 1986 ; 261 ; 13056) constituent un troisième exemple du groupe encore plus restreint de 15 produits naturels comportant un squelette 5-sulfanyl- histidine méthyle en position 3 (A noter que la position du groupement méthyle a été, initialement, faussement localisée sur l'azote N1 de l'histidine, comme ceci a été démontré dans Holler et al. JOC 1987, 20 4421-4423 vs. Palumba et al., THL 1982, 3207-3208). Très récemment un nouvel alcaloïde indolique, contenant un squelette 5-sulfanyl-histidine, la leptoclinidamine C a été mis en évidence (Caroll A. et Avrey V.M. ; J. Nat. Prod. ; 2009 ; 72 ; 696-699). 25 La biosynthèse des ovothiols A, B et C a été décrite (Vogt R.N., Spies H.S.C. et Steenkamp D.J. ; Eur. J. Biochem. ; 2001, 268, 5229-5241). L'introduction du soufre, en position 5 du noyau 30 imidazole de la L-histidine, est réalisée en présence de l'enzyme sulfoxyde synthase (OvoA), ainsi que de fer ferreux (Fe21 et d'oxygène 02. La L-cystéine est utilisée comme donneur de soufre pour aboutir à un intermédiaire sulfoxyde (Braunshausen A. et Seebeck 35 F. ; JACS ; 2011 ; 133, 1757). Ce dernier est ensuite transformé en ovothiol A, B ou C en présence de l'enzyme sulfoxyde lyase et de phosphate de pyridoxal, 3021655 3 son cofacteur (Mashabela G. et Seebeck F. ; JCS Chem. Comm. ; 2013, 7714-7716). La préparation de la 2-sulfanylhistidine et de 5 ses dérivés par synthèse chimique a déjà été documentée par la Demanderesse (brevet US 13/121,891 et brevet US 13/500,887 Al). La préparation de la 5-sulfanylhistidine et de ses dérivés par synthèse chimique s'est avérée 10 beaucoup plus difficile que celle de leurs isomères 2- sulfanylhistidines. Plusieurs stratégies de synthèse ont été envisagées et testées sans succès. A ce jour, seules 2 voies d'accès ont permis d'aboutir uniquement à la série des 5-sulfanyl-3-méthyl-histidines. La 15 première approche a consisté en la synthèse de novo du noyau 5-sulfanyl-imidazole (Hopkins P. et al. ; JOC ; 1987, 52, 2977 et 4420) dans le cadre de la synthèse des ovothiols A et C en 10 à 12 étapes. La seconde approche a consisté en une substitution nucléophile 20 d'un noyau 5-bromo-imidazole activé par un groupement électro-attracteur carboxaldéhyde CHO (Ohba M., Nishimura Y., Kato M. et Fujii T. ; Tetrahedron ; 1999, 55, 4999-5016) dans le cadre de la synthèse de l'imbricatine. Actuellement il n'existe aucune méthode 25 chimique non-enzymatique connue d'introduction directe d'un atome de soufre sur l'histidine ou l'un de ses dérivés en position 5 du noyau imidazole. Les composés de type 5-acylsulfanyl-histidine et 30 leurs dérivés constitueraient de très bons précurseurs de 5-sulfanylhistidine et de ses dérivés. Ces composés de type 5-acylsulfanyl-histidine et leurs dérivés n'étant pas connus, il faudrait donc pouvoir disposer d'une méthode de synthèse qui permette d'introduire 35 directement un groupement acylsulfanyle en position 5 d'une histidine. Une telle méthode, à notre connaissance, n'a jamais été décrite jusqu'à ce jour. 3021655 4 Cette nouvelle méthode d'introduction directe d'un groupement acylsulfanyle en position 5 de l'histidine ou de l'un de ses dérivés serait d'autant plus intéressante qu'elle pourrait être réalisée sans 5 groupement protecteur et dans l'eau comme solvant de réaction. BUTS DE L'INVENTION L'un des buts de la présente invention est donc 10 de mettre à disposition de nouveaux composés de type 5- acylsulfanyl-histidine et leurs dérivés susceptibles d'être des précurseurs des 5-sulfanylhistidines correspondantes et de leurs disulfures. 15 Un autre but de la présente invention est un procédé de préparation de ces nouveaux composés de type 5-acylsulfanyl-histidine et leurs dérivés utilisant une nouvelle méthode d'introduction directe d'un groupement acylsulfanyle en position 5 d'une histidine ou de l'un 20 de ses dérivés sans groupement protecteur et dans l'eau comme solvant. Un autre but de la présente invention est l'utilisation de ces nouveaux composés de type 5- 25 acylsulfanyl-histidine et leurs dérivés en tant que précurseurs des 5-sulfanylhistidines correspondantes et de leurs disulfures. Ces buts sont atteints grâce à la présente 30 invention qui repose sur la conception et la préparation de nouveaux composés de type 5- acylsulfanyl-histidine et de leurs dérivés qui s'avèrent être d'excellents précurseurs des 5- sulfanylhistidines correspondantes et de leurs 35 disulfures en utilisant une nouvelle méthode d'introduction d'un groupement acylsulfanyle. Ceci a été exemplifié par la Demanderesse. 3021655 5 5 DESCRIPTION DE L'INVENTION La présente invention a donc pour but : 1) de résoudre le problème technique consistant en la fourniture de nouveaux composés de type 5- 10 acylsulfanyl-histidine et leurs dérivés, constituant ainsi des précurseurs des 5- sulfanylhistidines correspondantes et de leurs disulfures; 2) de résoudre ce problème technique selon une 15 solution qui englobe un procédé de préparation de ces nouveaux dérivés 5-acylsulfanyl-histidine en utilisant une nouvelle méthode d'introduction directe d'un groupement acylsulfanyle en position 5 du noyau imidazole d'une histidine sans 20 groupement protecteur et dans l'eau comme solvant de réaction. Les problèmes techniques énoncés ci-dessus sont résolus pour la première fois d'une manière simultanée par la présente invention, de façon très aisée et 25 économique, le procédé de préparation desdits nouveaux dérivés 5-acylsulfanyl-histidine étant très simple à mettre en oeuvre tout en fournissant de bons rendements. 30 Selon son premier aspect, la présente invention a pour objet de nouveaux composés de type 5-acylsulfanylhistidine et leurs dérivés répondant à la formule générale (I) suivante : 3021655 5 6 0 R5 4 0 N-+ R4 s R2 \R3 5 4 R1/1\11N ( I ) dans laquelle : 10 RI- = H, alkyle, en particulier CH3 ; R2 = R3 = H, alkyle, en particulier CH3 ; R4 = H, alkyle, en particulier CH3, alkyle(C=0), alkyle substitué(C=0), aryle(C=0),(3-alanyle (H2NCH2CH2(C=0); a-amino-acyle ; 15 R5 = alkyle, en particulier méthyle, phényle ; L'invention englobe tous les stéréoisomères, diastéréoisomères et énantiomères notamment au niveau de l'atome de carbone portant le groupement COOH, pris 20 isolément ou en mélange. Elle englobe également tous les sels d'acides pharmaceutiquement acceptables desdits composés de formule générale (I). Parmi les composés de formule générale (I), l'invention a 25 notamment pour objet : - ceux caractérisés en ce que R4 représente hydrogène, ou le groupe méthyle, ou le groupe acétyle, ou le groupe benzoyle, ou le groupe 13- alanyle (H2NCH2CH2(C=0); 30 - ceux préparés dans la partie expérimentale, notamment 1. la L-5-acétylsulfanyl-histidine (Composé 1) ; 2. la L-5-acétylsulfanyl-a,N,N(diméthyl)-histidine (Composé 2) ; 35 3. la L-5-acétylsulfanyl-a,N,N,N(triméthyl)-histidine (Composé 3) ; 3021655 7 4. la L-5-acétylsulfanyl-OE,N(méthyl)-histidine (Composé 4) ; 5. la L-5-acétylsulfanyl-OE,N(acéty1)-histidine (Composé 5) ; 5 6. la L-5-acétylsulfanyl-OE,N(benzoy1)-histidine (Composé 6) ; 7. la L-5-acétylsulfanyl-OE,N(R-alany1)-histidine 13 (Composé 7) ; 8. la L-1-méthyl-5-acétylsulfanyl-histidine (Composé 10 8) ; 9. la L-5-benzoylsulfanyl-histidine (Composé 9) ; 10. la L-5-benzoylsulfanyl-OE,N,N(diméthyl)-histidine (Composé 10) ; 11. la L-5-benzoylsulfanyl-a,N,N,N(triméthyl)-histi- 15 dîne (Composé 11). Parmi les acides pharmaceutiquement acceptables, on peut citer, à titre non limitatif, les acides minéraux tels que chlorhydrique, bromhydrique, iodhydrique, sulfurique, 20 tartrique, phosphorique ou avec les acides organiques tels que les propionique, formique, acétique, benzoïque, maléique, trifluoro-acétique, succinique, acides fumarique, citrique, oxalique, glyoxylique, aspartique, alcanesulfoniques tels que les acides méthane-sulfonique, 25 trifluorométhane-sulfonique, éthane-sulfonique, aryl- sulfoniques tels que les acides benzène- et paratoluènesulfonique. Dans la formule (I) ci-dessus 30 - par radical alkyle, il est entendu un groupement comportant 1 à 6 atomes de carbone linéaire ou cyclique, éventuellement ramifié, - par radical alkyle substitué, il est entendu un groupement alkyle substitué par un ou plusieurs atomes de 35 fluor, ou substitué par un groupement alkényle comportant une ou plusieurs doubles liaisons carbone-carbone, ou substitué par une ou plusieurs fonctions OH ou SH ou NH2 ou 3021655 8 COOH, ainsi que leurs énantiomères, et leurs diastéréoisomères. - par radical aryle, il est entendu un groupement phényle éventuellement fluoré ou polyfluoré, et comportant 5 éventuellement une ou plusieurs fonctions OH ou SH ou NH2 ou COOH - par radical a-amino-acyle, il est entendu le radical acyle de tout amino-acide protéogénique, c'est à dire tout amino-acide entrant dans la composition des protéines 10 retrouvées dans le monde végétal, animal, y compris l'homme. Selon un second aspect, l'invention a également pour objet un procédé A de préparation des nouveaux composés de 15 type 5-acylsulfanyl-histidine et leurs dérivés de formule générale (I), explicité sur la Figure 1 jointe, et caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : 1) La réaction de l'histidine, racémique (DL) ou l'un de ses énantiomères (D ou L), ou 20 - l'un de ses dérivés alkylé sur l'azote en position 1 du noyau imidazole, racémique (DL) ou l'un de ses énantiomères (D ou L), OU - l'un de ses dérivés alkylé ou acylé sur l'azote 25 de la fonction a-amine, racémique (DL) ou l'un de ses énantiomères(D ou L), OU - l'un de ses dérivés alkylé sur l'azote en position 1 du noyau imidazole et alkylé ou acylé sur 30 l'azote de la fonction a-amine, racémique (DL) ou l'un de ses énantiomères (D ou L), en présence de 1 à 2 équivalents d'acide minéral ou organique, avec a) un agent générateur d'ion halogénium X+ dans un 35 solvant protique polaire, à température comprise entre 0-25°, puis avec 3021655 9 b) un réactif soufré de type acide carbothioïque de formule alkyleC(=0)SH ou l'un de ses sels dans un solvant protique polaire, 2) puis éventuellement la purification par 5 chromatographie liquide sur colonne ou tout autre méthode de purification bien connue de l'Homme de l'Art. Selon un mode de réalisation particulier du procédé A selon l'invention : l'agent générateur d'ion halogénium X+ peut 10 être : a) du brome Bre (en tant que réactif commercial ou préparé in situ); ou b) du NBS ou tout dérivé N-bromo-imide et N-bromoamide 15 Selon un autre mode de réalisation particulier de ce procédé A selon l'invention, le solvant protique polaire peut être de l'eau ou une solution aqueuse. Selon encore un mode de réalisation particulier du procédé A selon l'invention, le réactif soufré de type acide 20 carbothioïque peut être par exemple l'acide thioacétique; ou l'acide thiobenzoïque, ou leurs mélanges. Selon un autre mode de réalisation particulier du procédé A selon l'invention, le réactif soufré de type sel d'acide carbothioïque peut être par exemple le thioacétate de 25 potassium, éventuellement en mélange avec un acide carbothioïque précité. Selon encore un autre mode de réalisation particulier de ce procédé A selon l'invention, la température sera comprise entre 0-5°C. 30 Le caractère innovant de ce procédé A repose sur une nouvelle réaction d'introduction directe d'un groupement acylsulfanyle RC(=O)S en position 5 du noyau imidazole de l'histidine ou de l'un de ses dérivés sans utilisation de groupement protecteur et dans l'eau comme solvant de 35 réaction. Ceci est d'autant plus surprenant que, dans les mêmes conditions opératoires, l'utilisation de la cystéine en lieu et place de l'acide carbothioïque conduit à une 3021655 10 introduction du soufre en position 2 du noyau imidazole comme montré dans le brevet US 13/121,891 et le brevet US 13/500,887 Al. 5 Selon un troisième aspect, la présente invention a pour objet l'utilisation des composés 5-acylsulfanyles précités de formule (I) ou de ses dérivés, pour la préparation de composés 5-sulfanyle-histidines correspondants et leurs disulfures décrits ci-après. 10 Selon un quatrième aspect, l'invention couvre de nouveaux composés de type 5-sulfanylhistidine et leurs dérivés répondant à la formule générale (II) suivante : 0 N± R4 R2 \R3 dans laquelle : RI- à R4 sont tels que définis pour les radicaux Ri- à R4 de la formule (I), en particulier : Ri- = H, alkyle, 25 en particulier CH3 ; R2 = R3 = H, alkyle, en particulier CH3 ; R4 = H, alkyle, en particulier CH3, alkyle(C=0), alkyle substitué(C=0), aryle(C=0), 13- alanyle (H2NCH2CH2(C=0); a-amino-acyle ; 30 étant entendu que lorsque Ri- = H alors R2, R3 et R4 ne peuvent pas être simultanément H. L'invention englobe tous les stéréoisomères, diastéréoisomères et énantiomères notamment au niveau de 35 l'atome de carbone portant le groupement COOH, ainsi que tous les disulfures correspondants, pris isolément ou en mélange. 15 20 3021655 11 Elle englobe également tous les sels d'acides pharmaceutiquement acceptables desdits composés de formule générale (II). Parmi les composés de formule générale (II), 5 l'invention a notamment pour objet : ceux caractérisés en ce que R4 représente hydrogène, ou le groupe méthyle, ou le groupe acétyle, ou le groupe benzoyle, ou le groupe 13- alanyle (H2NCH2CH2(C=0) : 10 ceux préparés dans la partie expérimentale, notamment : 1. le disulfure de la L-5-sulfanyl-aN(méthyl)-histidine (Composé 16) ; 2. la L-5-sulfanyl-aN(méthyl)-histidine (Composé 17) ; 15 3. le disulfure de la L-5-sulfanyl-OEN,N(diméthyl)- histidine (Composé 18) ; 4. la L-5-sulfanyl-cN,N(diméthyl)-histidine (Composé 19) ; 5. la L-5-sulfanyl-a,N,N,N(triméthyl)-histidine 20 (Composé 20) ; 6. le disulfure de la L-5-sulfanyl-a,N,N,-(triméthyl)- histidine (Composé 21) ; 7. le disulfure de la L-5-sulfanyl-aN(acéty1)-histidine (Composé 22) ; 25 8. la L-5-sulfanyl-aN(acéty1)-histidine (Composé 23) ; 9. la L-5-sulfanylcarnosine (Composé 24) ; 10. le disulfure de l'iso-ovothiol A (Composé 25) ; 11. l'iso-ovothiol A (Composé 26). 30 Parmi les acides pharmaceutiquement acceptables, on peut citer, à titre non limitatif, les acides minéraux tels que chlorhydrique, bromhydrique, iodhydrique, sulfurique, tartrique, phosphorique ou avec les acides organiques tels que les acides formique, acétique, trifluoro-acétique, 35 propionique, benzoïque, maléique, fumarique, succinique, citrique, oxalique, glyoxylique, aspartique, alcanesulfoniques tels que les acides méthane-sulfonique, 3021655 12 trifluorométhane-sulfonique, éthane-sulfonique, aryl- sulfoniques tels que les acides benzène- et paratoluènesulfonique. 5 Dans la formule (II) ci-dessus - par radical alkyle, il est entendu un groupement comportant 1 à 6 atomes de carbone linéaire ou cyclique, éventuellement ramifié, - par radical alkyle substitué, il est entendu un 10 groupement alkyle substitué par un ou plusieurs atomes de fluor, ou substitué par un groupement alkényle comportant une ou plusieurs doubles liaisons carbone-carbone, ou substitué par une ou plusieurs fonctions OH ou SH ou NH2 ou COOH, ainsi que leurs énantiomères, et leurs 15 diastéréoisomères. par radical aryle, il est entendu un groupement phényle éventuellement fluoré ou polyfluoré, et comportant éventuellement une ou plusieurs fonctions OH ou SH ou NH2 ou COOH 20 - par radical a-amino-acyle, il est entendu le radical acyle de tout aminoacide protéogénique, c'est à dire tout aminoacide entrant dans la composition des protéines retrouvées dans le monde végétal, animal, y compris l'homme. 25 - par disulfure, il est entendu tout composé obtenu par oxydation entre deux molécules identiques de dérivés de type 5-sulfanylhistidine décrits dans l'invention. Les nouveaux composés de type 5-sulfanylhistidine et leurs dérivés répondant à la formule générale (II), ainsi 30 que leurs disulfures, pourraient s'avérer être des principes actifs nutritionnels, cosmétiques ou médicamenteux. Selon un cinquième aspect, l'invention a encore pour 35 objet un procédé B de préparation des composés de type 5- sulfanylhistidine et de leurs dérivés de formule générale (II) obtenus à partir des composés de type 5-acylsulfanyl- 3021655 13 histidine et de leurs dérivés de formule générale (I) décrit dans le procédé A ci-dessus, et caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : 1) Soit directement (procédé B1) : 5 a) par hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanyl- histidine obtenus selon l'invention dans un solvant protique polaire par agitation à température supérieure à 20°C en présence d'un thiol, 10 b) puis éventuellement purification par chromatographie liquide sur colonne ou tout autre méthode de purification bien connue de l'Homme de l'Art. 15 2) Soit indirectement (procédé B2) : a) par hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanyl- histidine obtenus selon l'invention dans un solvant protique polaire par agitation à une température supérieure à 20°C pour obtenir le 20 disulfure correspondant, b) puis réduction du disulfure par réaction avec un thiol, c) puis éventuellement purification par chromatographie liquide sur colonne ou tout 25 autre méthode de purification bien connue de l'Homme de l'Art. Selon une mise en oeuvre particulière de ce procédé B selon l'invention, le solvant protique polaire peut être de l'eau ou une solution aqueuse. 30 Selon une autre mise en oeuvre particulière du procédé B selon l'invention, le thiol peut être par exemple l'acide mercaptopropionique ou le dithiotréitol, ou leurs mélanges. Selon encore une autre mise en oeuvre particulière de ce procédé B selon l'invention, la température pourra être 35 comprise entre 20 et 130°C. 3021655 14 Par cet aspect, la Demanderesse démontre la capacité des composés de formule générale (I) à être des précurseurs de composés de type 5-sulfanylhistidine et de leurs dérivés de formule générale (II) après hydrolyse. 5 Selon un sixième aspect, l'invention a également pour objet un procédé C de préparation de disulfures des 5- sulfanylhistidines et de leurs dérivés : 1) soit directement à partir des composés de type 510 acylsulfanyl-histidine et de leurs dérivés de formule générale (I) caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanyl-histidines de formule générale (I) obtenus selon l'invention 15 dans un solvant protique polaire par agitation à l'air et à une température supérieure à 20°C pour obtenir le disulfure correspondant, b) puis éventuellement purification par chromatographie liquide sur colonne ou tout autre 20 méthode de purification bien connue de l'Homme de l'Art ; 2) soit à partir de 5-sulfanylhistidines et de leurs dérivés de formule générale (II) caractérisé en ce qu'il 25 comprend les étapes suivantes : a) oxydation par l'oxygène ou le diméthylsulfoxyde ou toute autre méthode d'oxydation bien connue de l'Homme de l'Art, b) puis éventuellement purification par 30 chromatographie liquide sur colonne ou tout autre méthode de purification bien connue de l'Homme de l'Art. Par cet aspect, la Demanderesse démontre la capacité des 35 composés de type 5-acylsulfanyl-histidines de formule générale (I) à être des précurseurs de disulfures de 5- 3021655 15 sulfanylhistidines et de ses dérivés après hydrolyse et oxydation. Selon un septième aspect, l'invention a également pour 5 objet un procédé D en « one-pot » de préparation des dérivés 5-sulfanylhistidines et leurs disulfures correspondants à partir des dérivés histidines correspondants, en combinant les procédés A avec B ou avec C, et caractérisé en ce qu'il comprend les étapes 10 suivantes : en présence de 1 à 2 équivalents d'acide minéral ou organique, la réaction avec : halogénium X+ dans un température comprise a) un agent générateur d'ion solvant protique polaire, entre 0-25°, puis avec un réactif soufré de type acide 15 b) carbothioïque de formule alkyleC(=0)SH ou l'un de ses sels dans un solvant protique polaire, suivie de 20 1) Soit : c) l'hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanyl-histidine obtenus dans un solvant protique polaire par agitation à température comprise entre 70 et 130°C en présence d'un thiol, 25 d) puis éventuellement la purification par chromatographie liquide sur colonne ou tout autre méthode de purification bien connue de l'Homme de l'Art. 2) Soit : 30 d) par hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanyl- histidine obtenus dans un solvant protique polaire par agitation à une température comprise entre 70 et 130°C pour obtenir le disulfure correspondant, 35 e) puis éventuellement purification par chromatographie liquide sur colonne ou tout 3021655 16 autre méthode de purification bien connue de l'Homme de l'Art. DESCRIPTION DES FIGURES 5 L'invention comprend 4 Figures. Figure 1 : Schéma du procédé de synthèse des composés selon la formule générale (I) Figure 2 : Spectre représentatif (RMN-H1 , 400MHz) du 10 mélange réactionnel obtenu dans l'exemple 1, préparation de la L-5-acétylsulfanyl-histidine (Composé 1) Figure 3 : Spectre représentatif (RMN-H1, 400MHz) du mélange réactionnel obtenu dans l'exemple 3, préparation de la L-5-acétylsulfanyl-cN,N(diméthyl)-histidine (Composé 2) 15 Figure 4 : Spectre représentatif (RMN-H1, 400MHz) du mélange réactionnel obtenu dans l'exemple 5, préparation de la L-5-acétylsulfanyl-cN,N,N(triméthyl)-histidine (Composé 3) 20 DESCRIPTION DES EXEMPLES : Les exemples ci-après de même que le schéma du procédé de l'invention (voir Figure 1) sont fournis simplement à 25 titre d'illustration et ne sauraient en aucune façon limiter la portée de l'invention. Dans les exemples, décrits ci-après, la température est soit la température ambiante soit une température donnée en degré Celsius, et la pression est la pression 30 atmosphérique, sauf indication contraire. Les réactifs utilisés sont disponibles commercialement chez des fournisseurs internationaux tel que SAF (France), Alfa Aesar, Fisher Scientific, TCI Europe, Bachem (Suisse) sauf les composés suivants : N-méthyl-histidine 35 hydrochloride, N,N-diméthyl-histidine hydrochloride hydrate et L-hercynine qui ont été préparé selon les protocoles cités. 3021655 17 Toutes les expériences sont réalisées sous atmosphère ambiante sauf indication contraire. Les analyses RMN-H1 ont été enregistrées à 400 MHz dans le D20 ou un mélange D20/DC1, en utilisant le signal 5 de HOD (4.79 ppm) comme référence interne. Les déplacements chimiques sont notés en ppm, et la multiplicité des signaux indiqués par des symboles suivants : s (singlet), d (doublet), t (triplet), q (quartet), et m (multiplet). Les constantes de couplages sont notées en hertz (Hz). Les 10 analyses RMN-C13 sont enregistrées à 75 MHz dans le D20 ou D20/DC1. Les analyses de masse sont obtenues par ionisation chimique à pression atmosphérique (APCI-MS). Les points de fusion ont été mesurés avec un appareil de la société Stuart Scientific. Les analyses HPLC ont été effectuées sur 15 un appareil Acquity (Waters), en utilisant une colonne Kromasil Diol 250x4,6 (5pm). La phase mobile utilisée est un mélange du solvant A (10/90 H20/Acétonitrile + 0,05% TFA) et du solvant B (50/50 H20/Acétonitrile + 0,05% TFA), avec un gradient variant en 10 minutes de 90% A à 100% B et 20 un débit de 1,2 ml/min. La détection s'effectue avec un détecteur universel ELSD (Sedere). I- Préparation des dérivés 5-acylsulfanyl-histidines en 25 tant que précurseurs des 5-sulfanylhistidines et de leurs disulfures Dans le premier paragraphe sont donnés des exemples de préparation des dérivés 5-acylsulfanyl-histidines par 30 activation avec le dibrome ou le N-bromosuccinimide (NBS) et réaction de l'intermédiaire formé avec l'acide thioacétique. Dans le deuxième paragraphe sont donnés des exemples d'utilisation de ces dérivés 5-acylsulfanyl, préparés 35 généralement in situ, en tant que précurseur de 5- sulfanylhistidines et ses dérivés. 3021655 18 I-1. Préparation des dérivés 5-acylsulfanyl-histidines par activation avec le dibrome ou avec le N-bromosuccinimide (NBS) et réaction avec l'acide thioacétique 5 Exemple 1 : Préparation de la L-5-acétylsulfanyl-histidine (Composé 1) par activation avec le dibrome et réaction avec l'acide thioacétique 10 Composé 1 Le chlorhydrate de la L-histidine monohydratée (52,93 g ; 250 mmoles; 1 éq.) est dissous dans 1,5 1 d'eau déminéralisée, puis la solution est refroidie à 0°C en 30 15 minutes. Sous une forte agitation, le dibrome (16,7 ml ; 51,93 g; 325 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté goutte à goutte très rapidement. La solution vire au rouge. L'acide thioacétique (73,3 ml ; 78,46 g; 1 mole; 4 éq.) est additionné très rapidement : la solution se décolore immédiatement et 20 passe du rouge au jaune clair. L'agitation est maintenue vigoureuse à 0°C pendant 1h. Le composé 1 est obtenu avec un rendement réactionnel de 72% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMN- H 1 25 RMN-H1 (D20 pH -1, 400 MHz) d'un échantillon du mélange: ô (ppm) = 2,57 (s, 3H) ; 3,38 (dd, J= 15,8 Hz, J=7,3 Hz, 1H) ; 3,47 (dd, J=15,8 Hz, J=5,1 Hz, 1H) ; 4,34 (m, 1H) ; 8,94 (s, 1H). Un singulet correspondant à l'excès d'acide thio-acétique 30 est détecté à 2,48 ppm, ainsi que des signaux de faible intensité correspondants aux produits secondaires, tel que 3021655 19 l'acide acétique détecté à 2,Oppm. Un spectre représentatif est inclus dans la Figure 2. LCMS (APCI): 228,0 [M-H] 5 Exemple 2 : Préparation de la L-5-acétylsulfanyl-histidine (Composé 1) par activation avec le N-bromosuccinimide et réaction avec l'acide thioacétique H 1. HCI NI-12 2. NBS 3. CH3COSH N 10 Composé 1 Le chlorhydrate de la L-histidine monohydratée (10,48 g ; 50 mmoles; 1 éq.) est dissous dans 300 ml d'eau déminéralisée contenant une solution d'acide chlorhydrique concentré à 37% (4,17 ml ; 4,92 g; 50 mmoles; 1 éq.) puis 15 la solution est refroidie à 0°C. L'agitation est maintenue très forte. Le N-bromosuccinimide (11,56 g ; 65 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté en une seule portion: le mélange devient orange limpide après 30 secondes. La température monte à 1°C. Après 2 minutes 30 secondes, l'acide thio-acétique 20 (14,7 ml ; 15,69 g; 200 mmoles; 4 éq.) est ajouté d'un seul coup: la décoloration intervient très rapidement. La température monte à 4°C. Après refroidissement à 0°C, l'agitation est maintenue vigoureuse pendant 1h. Le composé 1 est obtenu avec un rendement réactionnel de 25 75% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMNH1 (dans le mélange réactionnel). Les spectres RMN-H1 et de masse sont identiques à ceux obtenus dans l'exemple 1. 3021655 20 Exemple 3 : Préparation de la L-5-acétylsulfanyl-a,N,Ndiméthyl-histidine (Composé 2) par activation avec le Nbromosuccinimide et réaction avec l'acide thio-acétique 1. HCI OH 2. NBS Composé 2 Le chlorhydrate de la aN,N-diméthylhistidine monohydratée (6,06 g ; 25 mmoles; 1 éq.) (voir V. N. Reinhold et al., J. Med. Chem. 1968, 11, 258-260) est dissous dans 135 ml d'eau 10 déminéralisée. Puis une solution d'acide chlorhydrique concentrée à 37%, (2,1 ml ; 2,46 g; 25 mmoles; 1 éq.) est additionnée, et la solution résultante est refroidie à 1°C. L'agitation est maintenue très forte. Le N-bromosuccinimide (2,31 g ; 13 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté rapidement. Après 15 1 minute, l'acide thioacétique (2,94 ml, 3,14 g; 40 mmoles; 4 éq.) est ajouté très rapidement. L'agitation est maintenue vigoureuse à 0°C pendant 30 minutes. Le composé 2 est obtenu avec un rendement réactionnel de 70% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMN20 Hl. RMN-H1 (D20 pH 1, 400 MHz) d'un échantillon du mélange: ô (ppm) = 2,57 (s, 3H) ; 2,79 (s, 6H) ; 3,42 (dd, J=14,9 Hz, J=10,6 Hz, 1H) ; 3,49 (dd, J=14,9 Hz, J=4,4 Hz, 1H) ; 4,20 (dd, J=10,6 Hz et J=4,4 Hz, 1H) ; 8,92 (s, 1H). 25 Un singulet correspondant à l'excès d'acide thioacétique est détecté à 2,47 ppm, ainsi que des signaux de faible intensité correspondants aux produits secondaires, tel que l'acide acétique détecté à 2,Oppm. Un spectre représentatif est inclus dans la Figure 3. 5 30 3021655 21 Le composé 2 est purifié sur une colonne de silice utilisant un gradient acétate d'éthyle/éthanol suivi par l'élution avec de l'eau. RMN-H1 (D20 pH 2-3, 300 MHz): ô (ppm) = 2,54 (s, 3H) ; 2,96 5 (s, 6H) ; 3,28 (dd, J=14,7 Hz et J=10,4 Hz, 1H) ; 3,39 (dd, J=14,7 Hz, J=4,4 Hz, 1H) ; 3,87 (dd, J=10,4 Hz et J=4,4 Hz, 1H) ; 8,81 (s, 1H). Un singulet de faible intensité correspondant au produit hydrolysé (composé 18b) est détecté à 8,33 ppm. 10 RMN-C13 (D20, 75 MHz): ô(ppm) = 22,4; 30,0; 41,7; 68,4; 117,2; 134,3; 136,8; 170,9; 195,9. LCMS (APCI): 258,9 [M+H] Exemple 4 : Préparation de la L-5-acétylsulfanyl-a,N,N15 diméthyl-histidine (Composé 2) par activation avec le dibrome et réaction avec l'acide thioacétique Composé 2 20 Le chlorhydrate de la aN,N-diméthylhistidine monohydratée (1,66 g ; 6,98 mmoles; 1 éq.) (voir V. N. Reinhold et al., J. Med. Chem. 1968, 11, 258-260) est dissous dans 57 ml d'eau déminéralisée, puis la solution est refroidit à 0°C. Sous forte agitation, le dibrome (470 pl ; 1,45 g; 9,08 25 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté goutte à goutte en 3 minutes. La solution devient rouge. Après 1 minute, l'acide thioacétique (2,56 ml ; 2,74 g; 34,91 mmoles; 5 éq.) est additionné très rapidement : la solution se décolore immédiatement et passe du rouge au jaune clair. L'agitation 30 est maintenue vigoureuse à 0°C pendant 1h. OH OH 1. HCI 2. Bre N-- I 3. CH3COSH N., NH / 3021655 22 Le composé 2 est obtenu avec un rendement réactionnel de 69% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMN- H. Les spectres RMN-H1 et masse sont identiques à ceux obtenus 5 dans l'exemple 3. Exemple 5 : Préparation du la L-5-acétylsulfanyl-a,N,N,Ntriméthyl-histidine (Composé 3) par activation avec le Nbromosuccinimide et réaction avec l'acide thioacétique 10 0 1. HCI 0- 2. NBS ; 0- 3. CH3COSH N\ NH / Composé 3 La L-hercynine (2,0 g ; 9,96 mmoles; 1 éq.) (voir V. N. Reinhold et al., J. Med. Chem. 1968, 11, 258-260) est 15 dissoute dans 55 ml d'eau déminéralisée. Puis une solution d'acide chlorhydrique concentrée à 37% (1,66 ml ; 1,96 g; 19,91 mmoles; 2 éq.) est ajoutée, et refroidie à 0°C. Sous forte agitation, le N-bromosuccinimide (2,48 g (13,94 mmoles; 1,4 éq.) est ajouté : la solution devient rouge. 20 Après 5 minutes, l'acide thioacétique (4,4 ml (4,69 g; 59,74 mmoles; 6 éq.) est additionné très rapidement. L'agitation est maintenue pendant 40 minutes. Le composé 3 est obtenu avec un rendement réactionnel de 65% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMN25 Hl. RMN-H1 (D20 pH 1, 400 MHz) d'un échantillon du mélange: ô (ppm) : 2,53 (s, 3H) ; 3,33 (s, 9H) ; 3,50 (m, 2H) ; 4,13 (m, 1H) ; 8,91 (s, 1H). Deux singulets correspondant à l'excès de l'acide thio30 acétique et au succinimide sont détectés à 2,44 ppm et 2,76 ppm, ainsi que des signaux de faible intensité correspondants aux produits secondaires tel que l'acide 3021655 23 acétique détectée à 2,Oppm. Un spectre représentatif est inclus dans la Figure 4. Le produit est purifié sur une colonne de silice (gradient 5 acétate d'éthyle/éthanol/eau). RMN-H1 (D20, pH 2-3, 400 MHz): ô (ppm) = 2,53 (s, 3H) ; 3,33 (s, 9H) ; 3,41 (m, 2H) ; 3,88 (dd, J=11,7 Hz et J=3,8 Hz, 1H) ; 8,72 (s, 1H). '3C-RMN (D20, 75 MHz): ô (ppm) = 22,9; 30,0; 52,5 ; 76,5; 10 117,9; 133,1; 137,2; 169,7; 196,0. LCMS (APCI): 272,1 [M+H]+ Exemple 6 : Préparation du la L-5-acétylsulfanyl-a,N,N,Ntriméthyl-histidine (Composé 3) par activation avec le 15 brome et réaction avec l'acide thio-acétique 1. HCI 0- 2. Bre 3. CH3COSH Composé 3 so 0 La L-hercynine (1,0 g (5 mmoles; 1 éq.) est dissoute dans 35 ml d'eau déminéralisée. Puis une solution d'acide 20 chlorhydrique concentrée à 37% (417 pl ; 5 mmoles; 1 éq.) est ajoutée et la solution est refroidie à 1°C. Sous forte agitation, le dibrome (0,33 ml ; 1,03 g, 6,5 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté : une gomme rouge se forme dans un premier temps qui se solubilise après 3 minutes. Après 4 minutes, 25 l'acide thioacétique (2,20 ml ; 2,68 g; 25 mmoles; 10 éq.) est additionné très rapidement. L'agitation est maintenue pendant 30 minutes. Le composé 3 est obtenu avec un rendement réactionnel de 68% molaire tel que calculé à partir du spectrogramme RMN30 Hl. Les spectres RMN-1-11 et masse sont identiques à ceux obtenus dans l'exemple 5. 3021655 24 Pour illustrer l'invention, les composés 4-11 sont préparés (Exemples 7-15) en analogie avec les exemples précédents. Les résultats ainsi que les caractéristiques spectrales 5 sont résumés dans le Tableau 1 ci-dessous. 3021655 25 Tableau 1 : Exemples 7-15 décrivant la préparation des Composés 4-11 selon l'invention. N°Ex. Produit En Réactif % RMN-Hl: Signaux LCMS formé analogie avec cone. caractéristiques [M+H]+ en produit désiré 8 8 a-H 8 H-2 AcS Ex.7 o 0 Ex. 2 NBS 78% 8,91 4,13 (dd, 2,55 244,1 SOH 1\1.'..NH /NI-1 J-7,7Hz, Composé 4 J-5,6Hz) Ex.8 0 Ex. 2 NBS 65% 8,83 4,73 (m) 2,51 272,1 ,-s (1 éq oil HC1) N1/4 NH NH.( Composé 5 Ex.9 o Ex. 2 NBS 58% 8,85 4,93 (dd, 2,56 334,1 \r0 OH (1 éq J-9,3Hz, S 0 HC1) J-4,7Hz) N,.,N NH - Composé 6 Ex.10 0 Ex. 2 NBS 63% 8,84 4,66 (m) 2,51 301,0 S OH \,..NH NH NH2 Composé 7 Ex.11 o Ex. 2 NBS 63% 9.00 4,31 (dd, 2,58 244,6 O OH J-7,6Hz, s J-6 9Hz) - NH2 , ,NEN ,,,,r Composé 8 Ex.12 Ex. 1 Br2 55% Ex.13 S s oll Ex. 2 NBS 31% 8,98 4,37 - 292,1 NH2 (eau/ o 0 CH3CN) Nk.,,,NH Composé 9 Ex.14 'g 0 OH Ex. 2 NBS 12% 8,95 4,28 - 320,9 0 s N.-.. (eau/ Hl'i^%N CH3CN) Composé 10 Ex.15 o Ex. 2 NBS 12% 9,06 4,32 - 334,1 o s o (eau/ , CH3CN) Nk,....,NH /N \''I Composé 11 3021655 26 II. Exemples d'application : 11.1 Transformation des dérivés 5-acylsulfanyl préparés in situ en dérivés 5-sulfanylhistidines correspondants par hydrolyse 5 Pour illustrer l'application des dérivés 5- acylsulfanyl-histidines selon l'invention, d'une manière non-limitative, sont donnés, dans ce paragraphe, des exemples d'application des nouveaux dérivés 5-acylsulfanylhistidines, préparés généralement in situ, en tant que 10 précurseur de 5-sulfanylhistidines et de leurs dérivés. Ces exemples illustrent l'utilité des nouveaux dérivés 5-acylsulfanyles décrits dans l'invention pour préparer d'une manière aisée des composés 5-sulfanylhistidines et 15 leurs dérivés tels que les disulfures, qui sont par ailleurs très difficile d'accès et nécessitent des synthèses multi-étapes. Afin d'obtenir de meilleurs rendements en dérivés 5- 20 sulfanylhistidines, les composés 5-acylsulfanyl sont préparés in situ puis hydrolysés ensuite directement, en agitant le milieu réactionnel, de préférence en chauffant le milieu réactionnel. La présence d'un thiol, tel que l'acide mercaptopropionique ou la dithiothreitol, s'avère 25 bénéfique pour l'isolation aisée des dérivés de 5sulfanylhistidines, mais elle n'est aucunement nécessaire pour l'hydrolyse même, comme démontré dans les exemples de suivi 18d , 19b et 19c. 3021655 27 Exemple 16 : Préparation « one pot » de la L-5- sulfanylhistidine via préparation in-situ de la 5- acétylsulfanylhistidine suivi par hydrolyse (Composé 12) 5 3. CH3COSH [ N./N NH2 »,» HS 0 2. NBS S 01 HSCH2CH2CO2H 1. HCI Composé 12 Le chlorhydrate de la L-histidine monohydratée (10,48 g ; 50 mmoles; 1 éq.) est dissous dans 300 ml d'eau 10 déminéralisée et l'acide chlorhydrique concentré à 37% (4,17 ml ; 4,92 g; 50 mmoles; 1 éq.), puis la solution est refroidie à 0°C. L'agitation est maintenue très forte. Le N-bromosuccinimide (11,56 g ; 65 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté en une seule portion: le mélange devient orange 15 limpide. L'acide thio-acétique (14,7 ml ; 15,69 g; 200 mmoles; 4 éq.) est ajouté d'un seul coup. L'agitation est maintenue vigoureuse à 0°C pendant 1h. L'acide 3- mercaptopropionique (26 ml ; 32,2 g; 300 mmoles; 6 éq.) est ajouté puis la solution légèrement jaune est chauffée à 20 90°C pendant 18h. La solution est extraite par trois fois 300 ml d'acétate d'éthyle. Après neutralisation et cristallisation en présence de dithiothréitol (231 mg ; 1,5 mmoles; 0,03 éq.), le composé désiré 12 cristallise. Le solide est filtré et séché sous vide pour donner 2,97 g (31 25 % ; 41 % par rapport à la quantité de l'intermédiaire SAc) de L-5-sulfanylhistidine (Composé 12) sous forme d'un solide blanc cassé. RMN-H1 (D20, 400 MHz): ô (ppm) = 3,18 (dd, J= 15,8 Hz, 30 J=7,3 Hz, 1H) ; 3,26 (dd, J=15,8 Hz et J=5,1 Hz, 1H) ; 4,33 (dd, J=7,3 Hz, J=5,1 Hz, 1H) ; 8,25 (s, 1H). 3021655 28 RMN-H1 (D20+DC1, 400 MHz): ô (ppm) = 3,11 (dd, J= 15,1 Hz, J=6,5 Hz, 1H) ; 3,19 (dd, J=15,1 Hz et J=6,6 Hz, 1H) ; 4,12 (t, J=7,0 Hz, 1H) ; 8,37 (s, 1H). RMN-C13 (D20+DC1, 75 MHz): ô (ppm) = 26,3; 55,2, 122,1; 5 130,1; 135,5; 173,6. LC-MS (AP-): 186,0 [M-H] [a] D : + 7,4° (c = 0,1 ; 1N HC1) Analyse élémentaire : C6H9N302S ; Théorique : C 38,49 % ; H 4,84 % N 22,44 ; Mesuré : C 38,0 % ; H 4,96 % ; N 22,06. 10 Exemple 17 : Préparation « one pot » de la D-5- sulfanylhistidine via préparation in-situ de la 5- acylsulfanylhistidine suivi par hydrolyse (Composé 13) 15 NN NH = I H- 2 3. CH3COSH N N -.1\1112 ] H 2 HS O 1. HCI OH \O 2. NBS OH HSCH2CH2C0 Composé 13 La D-histidine (3,92 g ; 25 mmoles; 1 éq.) est dissoute dans 150 ml d'eau déminéralisée et une solution d'acide chlorhydrique concentrée à 37% (4,17 ml ; 4,92 g; 50 20 mmoles; 2 éq.), puis la solution est refroidie à 0°C. L'agitation est maintenue très forte. Le N-bromosuccinimide (5,78 g (32,5 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté d'un coup: la solution devient orange limpide. L'acide thioacétique (7,33 ml ; 7,85 g; 200 mmoles; 4 éq.) est ajouté d'un seul coup. 25 L'agitation est maintenue vigoureuse à 0°C pendant 1h. L'acide 3-mercaptopropionique (13 ml (16,1 g; 150 mmoles; 6 éq.) est ajouté puis la solution est chauffée à 100°C pendant 18h. Après refroidissement, la solution est extraite par trois fois 150 ml d'acétate d'éthyle. Le 30 dithiothréitol (13 ml ; 16,1 g; 150 mmoles; 6 éq.) est ajouté à la phase aqueuse. Après recristallisation en 3021655 29 présence de charbon actif on obtient 1,25 g de D-5- sulfanylhistidine (Composé 13) (26 % ; 35 % par rapport la quantité de l'intermédiaire SAc) sous forme d'un solide beige. 5 Les spectres RMN-H1, RMN-C13 et masse sont identiques à ceux obtenus dans l'exemple 13 pour le composé 9. [a]D : - 7,1° (c = 0,1 ; 1N HC1) 10 Exemple 18 : Préparation « one pot » de la D,L-5- sulfanylhistidine via préparation in-situ de la 5- acylsulfanylhistidine suivi par hydrolyse (Composé 14) 1. HCI 2. NBS 3. CH3COSH OH HSCH2CH2CO2H 15 Composé 14 Le chlorhydrate de la DL-histidine monohydratée (3,21 g ; 15 mmoles; 1 éq.) est dissous dans 100 ml d'eau déminéralisée et une solution d'acide chlorhydrique 20 concentrée à 37% (1,25 ml ; 1,48 g; 15 mmoles; 1 éq.), puis la solution est refroidie à 0°C. Sous agitation très forte, le N-bromosuccinimide (3,47 g ; 19,5 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté d'un coup. Après 2 minutes, l'acide thioacétique (4,4 ml ; 4,71 g; 60 mmoles; 4 éq.) est ajouté d'un seul 25 coup. On laisse agiter à 0°C pendant 1h. L'acide 3mercaptopropionique (8,0 ml ; 9,65 g; 90 mmoles; 6 éq.) est ajouté puis la solution est chauffée à 100°C pendant 18h. Un précipité correspondant au disulfure de l'acide thioacétique et de l'acide mercaptopropionique est éliminé par 30 filtration. Le filtrat est lavé par deux fois 100 ml d'acétate d'éthyle. Après neutralisation et cristallisation 3021655 30 en présence de dithiothréitol (233 mg ; 1,5 mmoles; 0,1 éq.), 650 mg de D,L-5-sulfanylhistidine (Composé 14) (23 %, 29 % par rapport à la quantité de l'intermédiaire SAc) sont obtenus sous forme d'un solide blanc. 5 Les spectres RMN-HI, RMN-C13 et masse sont identiques à ceux obtenus dans l'exemple 16 pour le composé 12. 10 11.2 Transformation des dérivés 5-acylsulfanyles préparés in situ en dérivés 5,5'-disulfane-diyl-bishistidines (disulfures)correspondants par hydrolyse Exemple 19 : Préparation « one pot » du disulfure de la L15 5-sulfanylhistidine via préparation in-situ de la 5- acylsulfanylhistidine suivi par hydrolyse et oxydation (Composé 15) r0 \1 NH2 S NV OH1 4. HSCH2CH2CO2H HNr--------4\1 5. H2O2 1...NH2 S HO OH S, NH2 Nzr.--.NH 4 HCI 2 H2O Composé 15x4HC1x2H2O 20 Le chlorhydrate de la L-histidine monohydratée (14,82 g ; 70 mmoles; 1 éq.) est dissous dans 126 ml d'eau déminéralisée, puis la solution est refroidie à 0°C. Sous forte agitation, le dibrome (4,32 ml ; 13,42 g; 84 mmoles; 1,2 éq.) est ajouté goutte à goutte très rapidement. La 25 solution devient rouge. L'acide thioacétique (18,0 ml ; 19,2 g; 245 mmoles; 3,5 éq.) est additionné très rapidement. L'agitation est maintenue vigoureuse à 0°C pendant 20 minutes. L'acide 3-mercaptopropionique (25 ml ; 29,71 g; 280 mmoles; 4 éq.) est ajouté et la solution est 30 chauffée à 80°C pendant la nuit. La solution est refroidie puis extraite par 3 fois 150m1 d'acétate d'éthyle. Après 3021655 31 oxydation avec une solution d'eau oxygénée à 30% (3,5 ml (3,97 g; 35 mmoles; 0,5 éq.), suivie d'une purification sur la résine Dowex WX2, le disulfure de la L-5- sulfanylhistidine (Composé 15) (4,66 g ; 24 % ; 37 % par 5 rapport à la quantité de l'intermédiaire SAc) chlorhydrate hydraté est obtenu sous forme d'une poudre gris clair. RMN-1-11 (D20, 400 MHz) : 5 (ppm) = 3,27 (m, 2x1H) ; 3,32 (m, 2x1H) ; 4,17 (dd, J=8,0 Hz, J=6,6 Hz, 2x1H) ; 8,87 (s, 10 2x1H) . LCMS (APCI) : 373,0 [M+H] + [cx]D : + 23,6° (c = 0,1 ; 1N HC1) Exemple 20 : 15 a)Préparation « one pot » du disulfure de la aN-methyl- L-5-sulfanylhistidine (Composé 16) via préparation in-situ de la 5-acylsulfanylhistidine suivi par hydrolyse et oxydation (Composé 16) \4= 3. CH3COS N. [S C) 2. NBS NH OH / 1 4. HSCH2CH2CO2H 5. Oxydation e>" HN HN/------'N -- OH 20 1. HCI HO OH S i S NH -- / Nr--zzINH Composé 16 Le chlorhydrate de la OEN-methyl-L-histidine (1,05 g ; 5 mmoles; 1 éq.) (V. N. Reinhold et al., J. Med. Chem. 1968, 11, 258-260) est dissous dans 35 ml d'eau déminéralisée 25 contenant une solution d'acide chlorhydrique concentrée à 37% ; 420 pl (5 mmoles; 1 éq.), puis la solution est refroidie à 1°C. L'agitation est maintenue très forte. Le N-bromosuccinimide (1,17 g ; 6,5 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté rapidement. Puis l'acide thioacétique (2,57 ml (2,74 30 g; 35 mmoles; 7 éq.) est ajouté très rapidement. 3021655 32 L'agitation est maintenue vigoureuse à 0°C pendant 30 minutes. La solution est extraite avec 40 ml d'acétate d'éthyle puis l'acide 3-mercaptopropionique (2,2 ml ; 2,65 g; 25 mmoles; 5 éq.) est ajouté à la phase aqueuse. 5 L'hydrolyse est effectuée par chauffage à 100°C pendant 20h. Après refroidissement de la solution, le milieu réactionnel est extrait par 4 fois 35 ml d'acétate d'éthyle. Après oxydation et purification sur la résine DOWEX 50WX2-400, le disulfure de la OEN-methyl-L-5- 10 sulfanylhistidine (Composé 16) est obtenu (620 mg, 61%, 75% par rapport à la quantité de l'intermédiaire SAc) est obtenu sous forme d'une poudre marron. RMN-H1 (MeOD/D20 20/1, 400 MHz): 5 (ppm) = 2,69 (s, 2x3H) ; 15 2,94 (dd, J=14,0 Hz, J=7,0 Hz, 2x1H) ; 2,99 (dd, J=14,0 Hz, J=5,0 Hz, 2x1H) ; 3,92 (dd, J=7,0 Hz, J=5,0 Hz, 2x1H) ; 7,79 (s, 2x1H). LCMS (APCI): 401,0 [M+H] + 20 b) Préparation de la aN-methyl-L-5-sulfanylhistidine par réduction du disulfure (Composé 17) HNPee---N / -- HN S NH -- / HO N....z.vNH OH réduction OH Composé 17 25 Le disulfure de la aN-methyl-L-5-sulfanylhistidine (620 mg ; 1,52 mmoles, 1 éq.) (Composé 13) est mis en solution dans 50 ml d'eau. Le dithiothréitol (473 mg ; 3,03 mmoles; 2 éq.) et le charbon actif (300 mg) sont ajoutés. Le mélange est agité 4h à température ambiante. Après 30 filtration et cristallisation dans l'éthanol absolu la aNmethyl-L-5-sulfanylhistidine (Composé 17) (351 mg, 56%) est obtenue sous forme d'une poudre beige. 3021655 33 RMN-H1 (D20, 400 MHz): 5 (ppm) = 2,80 (s, 3H) ; 3,21 (dd, J=15,9 Hz, J=6,4 Hz, 1H) ; 3,28 (dd, J=15,9 Hz, J=5,2 Hz, 1H) ; 3,92 (m, 1H) ; 8,25 (s, 1H). 5 LCMS (APCI): 202,1 [M+H] + Exemple 21 : a) Préparation « one pot » du disulfure de la aN,Ndiméthylhistidine via préparation in-situ de la 5- 10 acylsulfanylhistidine suivi par hydrolyse et oxydation (Composé 18) -..., OH1 7---z:N 4. HSCH2CH2CO2H HN 5. Oxydation / .-- N ...-- SAS HO 0 HCI HCI H2O HCI HCI 1. HCI OH 2. NBS sro 3. CH2COSH NNNH OH N--- .--- / N-.--:._/NH H2O 15 Composé 18x4HC1x2H2O Le chlorhydrate de la aN,N-dimethylhistidine monohydratée (2,43 g ; 10 mmoles; 1 éq.) est dissous dans 54 ml d'eau déminéralisée contenant une solution d'acide chlorhydrique concentrée à 37% (835 pl ; 985 mg; 10 mmoles; 1 éq.), puis 20 la solution est refroidie à 1°C. L'agitation est maintenue très forte. Le N-bromosuccinimide (2,31 g ; 13 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté rapidement. Après 2 minutes, l'acide thioacétique (3,0 ml ; 3,14 g; 40 mmoles; 4 éq.) est ajouté très rapidement. L'agitation est maintenue vigoureuse à 0°C 25 pendant 30 minutes. La solution légèrement jaune obtenue est extraite par 2 fois 120 ml d'acétate d'éthyle. Après hydrolyse à chaud, oxydation et purification sur la résine DOWEX 50WX2-400 le chlorhydrate hydrate du disulfure de la aN,N-dimethyl-L-5-sulfanylhistidine (Composé 18, 1,2 g, 41 30 %) est obtenu sous forme d'une poudre beige. 3021655 34 RMN-H1 (D20, 400 MHz): 5 (ppm) = 3,01 (s, 2x6H) ; 3,37 (dd, J=14,6 Hz, J=11,2 Hz, 2x1H) ; 3,51 (dd, J=14,6 Hz, J=4,0 Hz, 2x1H) ; 4,09 (dd, J=11,2 Hz, J=4,0 Hz, 2x1H) ; 8,86 5 (s, 2x1H). LCMS (APCI): 429,2 [M+H] + b) Préparation du Composé 18 base libre OH N---- ---- / N.........._" NH H2O O HCI HCI H2O HCI HCI __N/ HO Neutralisation O HNr"-------N ...---". s- s 10 Composé 18 Le chlorhydrate hydrate du disulfure de la cN,N-dimethyl-L5-sulfanylhistidine (3,6 g ; 5,89 mmoles; 1 éq.) est mis en solution dans 53 ml d'eau déminéralisée. La résine Amberlite®IRA-410 (8g) sous forme hydrogénocarbonate (selon 15 K. A. Piez et al., J. Biol. Chem. 194, 669-672 (1952)) est ajoutée. La suspension est agitée sous vide pendant 30 minutes puis filtrée. Le filtrat est évaporé pour conduire au disulfure de la cN,N-dimethyl-L-5-sulfanylhistidine base libre (Composé 18) (2,47 g, 84%) sous forme d'un solide 20 jaune. RMN-H1 (D20, 400 MHz): 5 (ppm) = 2,88 (s, 2x6H) ; 2,92 (m, 2x2H) ; 3,70 (m, 2x1H) ; 8,17 (s, 2x1H). 3021655 35 c) Obtention du composé 19 par réduction du Composé 18x4HC1x2H2O) OH 1. Neutralisation N- HS ,N S t 2. Réduction H2O NNH HO 0 HCI HCI H2O HCI HCI OH Composé 19 5 Le chlorhydrate hydraté du disulfure de la aN,N-dimethyl-L5-sulfanylhistidine (1,2 g ; 2,07 mmoles; 0,5 éq.) est mis en solution dans 40 ml d'eau déminéralisée. La résine Amberlite®IRA-410 (2 g) sous forme hydrogénocarbonate est ajoutée. La suspension est agitée sous vide pendant 30 10 minutes puis filtrée. Après réduction avec du dithiothréitol (967 mg ; 6,20 mmoles; 1,5 éq.) et cristallisation avec l'éthanol absolu, sous azote, la aN,Ndimethyl-L-5-sulfanylhistidine (Composé 19) (450 mg, 58 %) est obtenue sous forme d'un solide blanc. 15 RMN-H1 (D20, 400 MHz): 5 (ppm) = 3,00 (s, 6H) ; 3,23 (dd, J=15,5 Hz, J=7,5 Hz, 1H) ; 3,31 (dd, J=15,5 Hz, J=5,8 Hz, 1H) ; 4,00 (dd, J=7,5 Hz, J=5,8 Hz, 1H) ; 8,28 (s, 1H). RMN-C13 (D20, 75 MHz): ô (ppm) = 22,7; 41,8, 67,3; 124,5; 20 129,6; 131,7; 171,0. LCMS (APCI): 216,1 [M+H]+ d) Suivi analytique de l'hydrolyse du composé 5- acylsulfanyl (composé 2) en composé 5-sulfanylhistidine 19 Composé 19 25 OH H2O N,'1JH 40°C OH 3021655 36 Le composé 2 est préparé et purifié par colonne comme décrit dans l'exemple 3, utilisant un gradient acétate d'éthyle/éthanol suivi par l'élution avec de l'eau. La 5 fraction aqueuse contenant le composé 2 pur est placée dans un bain d'eau à 40°C, et chauffé sous agitation pendant 8h. Des échantillons sont prélevés toutes les 60 minutes, et le mélange analysé par HPLC. L'hydrolyse du composé 2 est quasi-complète après 8h, et le 10 composé 19 est obtenu avec un rendement de 70%. Tableau 2 : Suivi de la formation du composé 19 par hydrolyse du composé 2 : t (h) 0 1 2 3 5 8 % composé 0% 14% 23% 34% 49% 70% 19 Exemple 22 : a) Préparation « one pot » de la aN,N,N-trimethylammoniumL-5-sulfanylhistidine via préparation in-situ de la 5- acylsulfanylhistidine suivi par hydrolyse (Composé 20) 15 20 4. HSCH2CH2CO2H HS 0 Composé 20 ' CO HS NN NH \ NvN [S 0 1. HCI \F 0 ° N 2. NBS 3. La L-hercynine (5,02 g ; 25 mmoles; 1 éq.) est dissoute dans 135 ml d'eau déminéralisée et une solution d'acide 25 chlorhydrique concentrée à 37%, (4,17 ml ; 4,93 g; 50 mmoles; 2 éq.) est additionnée ; puis la solution est refroidie à 0°C. Sous forte agitation, le Nbromosuccinimide (5,78 g ; 32,5 mmoles; 1,3 éq.) est 3021655 37 ajouté. Après 5 minutes, l'acide thio-acétique (18,33 ml ; 19,61 g; 250 mmoles; 10 éq.) est additionné très rapidement. L'agitation est maintenue pendant 40 minutes. La solution est extraite par 2 fois 135 ml d'acétate 5 d'éthyle. L'acide 3-mercaptopropionique (11,07 ml ; 13,4 g; 125 mmoles; 5 éq.) est ajouté à la phase aqueuse puis la solution est chauffée à 130°C pendant 3h. Après extraction, neutralisation et cristallisation en présence de dithiothréitol (1,95 g (12,5 mmoles; 0,5 éq.) la cN,N,N10 triméthylammonium-L-5-sulfanylhistidine (Composé 20) (2,22 g ; 38 % ; 58 % par rapport à la quantité de l'intermédiaire SAc) est obtenu sous forme d'une poudre blanche (à conserver sous atmosphère inerte). 15 RMN-1-11 (D20, 400 MHz): 5 (ppm) = 3,29 (s, 9H) ; 3,19 (m, 1H) ; 3,35 (m, 1H) ; 4,00 (dd, J=10,6 Hz, J=3,9 Hz, 1H) ; 8,22 (s, 1H). LCMS (APCI): 230,0 [M+H]+ 20 b) Suivi analytique par RMN-1-11 de l'hydrolyse du composé 5- acylsulfanyl 3 en composé aN,N,N-trimethylammonium-L-5- sulfanylhistidine (Composé 20) en présence d'un thiol 25 Composé 20 Le composé 3 est préparé et purifié par colonne comme décrit dans l'exemple 5. 100 mg (0,33 mmoles, 1 éq) du composé 3 sont solubilisés dans 2,4 mL de D20. 172 mg de 30 l'acide 3-mercaptopropionique (142 pl, 5 équivalents) sont ajoutés, et la solution est chauffée à 40°C. La conversion est suivie par RMN-H1 et par HPLC-ELSD. Le rendement HS H20/HSCH2CH2CO2H 0 N± 3021655 38 d'hydrolyse du composé 3 est de 90% après 3h (suivi par RMN-H1). Le composé 20 est formé après 3h30 avec un rendement de 97% (HPLC-ELSD). 5 c) Préparation du composé aN,N,N-trimethylammonium-L-5- sulfanylhistidine (composé 20) par hydrolyse du composé 5- acylsulfanyl 3 10 H20 air 0- Composé 3 Composé 20 Le composé 3 est préparé et purifié par colonne comme 15 décrit dans l'exemple 5. 170 mg (0,6 mmoles) du composé 3 sont solubilisé dans 10 mL d'eau, et la solution est chauffée à 90°C à l'air pendant 7h. La conversion est suivie par HPLC. L'hydrolyse du composé 3 est complète après 7h. La solution est évaporée à sec. Le résidu est 20 repris dans un mélange de 5 mL de méthanol et 93 mg (0,6 mmol) de dithiothréitol. Après agitation pendant 4h sous atmosphère inerte, 2mL d'éthanol sont ajoutés. Un précipité se forme immédiatement, qui est filtré et lavé avec de l'éthanol (2x2mL) puis de l'éther éthylique (2x2mL). Après 25 séchage, 104mg (72%) de la aN,N,N-triméthylammonium-L-5- sulfanylhistidine sont obtenus sous forme d'une poudre beige. Les spectres RMN-H1 et de masse sont identiques à ceux obtenus dans l'exemple 22a. 3021655 39 d) préparation du disulfure de la trimethylammonium-L-5- sulfanylhistidine (Composé 21) HSair HN 0- \ I + -N S' 1\1+ N..'.1\1H 5 Composé 21 La cN,N,N-triméthylammonium-L-5-sulfanylhistidine (Composé 20, 300 mg, 1,29 mmoles, 1 éq) est mis en solution dans 50 ml d'eau déminéralisée. La solution incolore est agitée à 10 température ambiante pendant 4 jours. Après filtration et lyophilisation du filtrat, le disulfure de la aN,N,Ntriméthylammonium-L-5-sulfanylhistidine (Composé 21) (263 mg ; 89%) est obtenu sous forme d'une poudre jaune. 15 RMN-H1 (D20, 400 MHz): 5 (ppm) = 2,68 (dd, J=13,5 Hz, J=11,0 Hz, 2x1H) ; 2,75 (dd, J=13,5 Hz, J=4,3 Hz, 2x1H) ; 3,19 (s, 2x9H) ; 3,68 (dd, J=11,0 Hz, J=4,3 Hz, 2x1H) ; 7,97 (s, 2x1H). LCMS (APCI) : 457,1 [M+H]+. 20 e) Suivi analytique par HPLC de l'hydrolyse du composé 5- acylsulfanyl 3 et oxydation in situ en composé 21 fleez,11 H2O H air HN S 0 \ - N- \-1\1+ S S --- 1 \ N C-- N .....z.vNH N.....1\1H / 25 Composé 21 3021655 Le composé 3 est préparé et purifié par colonne comme décrit dans l'exemple 5, utilisant un gradient acétate d'éthyle/éthanol suivi par l'élution avec de l'eau. La fraction aqueuse contenant le composé 3 pur est placée dans 5 un bain d'eau à 40°C, et chauffé sous agitation pendant deux jours. Des échantillons sont prélevés chaque heure, et le mélange analysé par HPLC. L'hydrolyse du composé 3 est quasi-complète après 2 jours, et le composé 21 est obtenu avec un rendement de 80%. 10 Tableau 3 : Suivi de l'hydrolyse du composé 3: t Oh 2h 4h 6h 8h 18h 2 j % hydrolyse 0% 7% 21% 38% 60% 85% 95% f) Suivi analytique de l'hydrolyse par RMN-1-11 du composé 515 acylsulfanyl 3 et oxydation in situ en composé 21 0 air 1 HN 0 \I1q -.+ Composé 3 Composé 21 20 Le composé 3 est préparé et purifié par colonne comme décrit dans l'exemple 5. 30 mg du composé 3 sont solubilisé dans 600pL de D20, la solution transféré dans un tube RMN, qui est gardé à température ambiante. La conversion est suivie par RMN-Hl. L'hydrolyse du composé 3 est quasi- 25 complète après 2 jours, et on obtient un mélange contenant le disulfure 21 et le thiol 20 (- 3 :1). 30 3021655 41 Tableau 4 : Suivi de l'hydrolyse du composé 3: t Oh 2h 10h 2 j % hydrolyse 0% 19% 26% 86% Exemple 23 : 5 a) Préparation « one-pot » du disulfure de la L-5- sulfanyl-a,N-acétyl-histidine (Composé 22 chlorhydrate) via préparation in-situ de la 5-acylsulfanylhistidine suivi par hydrolyse et oxydation O O 4. HSCH2CH2CO2H HO 5. oxydation (air) OH HCI N NH..0 HCI Composé 22x2HC1 S-S La cN-acétyl-L-histidine monohydratée (2,15 g, 10 mmoles; 1 éq.) est dissoute dans 63 ml d'eau déminéralisée contenant l'acide chlorhydrique concentré à 37% (1,67 ml, 1,97 g; 20 mmoles; 2 éq.) ; puis la solution est refroidie à 0°C. Le 15 dibrome (668 pl, 2,07 g; 13 mmoles; 1,3 éq.) est additionné. L'acide thioacétique (3,67 ml ; 3,92 g; 50 mmoles; 5 éq.) est ajouté d'un seul coup. L'agitation est maintenue à 0°C pendant 45 minutes. La solution est réchauffée à température ambiante. L'acide 3- 20 mercaptopropionique (5,26 ml, 6,36 g; 60 mmoles; 6 éq.) est ajouté puis la solution est chauffée à 80°C pendant la nuit. La solution est refroidie à température ambiante puis extraite par 4 fois 50 ml d'acétate d'éthyle. La phase aqueuse est purifiée sur silice pour conduire au 25 chlorhydrate du disulfure de la OEN-acétyl-L-5- sulfanylhistidine (composé 22) sous forme d'une huile orange (520 mg, 17% ; 36% par rapport à la quantité de l'intermédiaire SAc). 1. HCI O 2. Bre NH O r 3. CH3COSH 10 3021655 42 RMN-H1 (D20, 400 MHz) : 5 (ppm) = 1,86 (s, 2x3H) ; 2,92 (dd, J=15,0 Hz, J=8,0 Hz, 2x1H) ; 3,03 (dd, J=15,0 Hz, J=5,5 Hz, 2x1H) ; 4,47 (dd, J=8,0 Hz, J=5,5 Hz, 2x1H) ; 8,73 (s, 2x1H). 5 LCMS (APCI): 457,4 [M+H]+ b)Préparation de la N-acétyl-5-sulfanyl-L-histidine (Composé 23) OH N......NH H. HS 1. Neutralisation 2. Réduction O HO HCI N.....NH HCI 10 Composé 23 Le chlorhydrate du disulfure de la aN-acétyl-L-5- sulfanylhistidine (Composé 22) (520 mg ; 834 }moles, 1 éq.) est mis en solution dans 50m1 d'eau puis le pH de la 15 solution de couleur marron est ajusté à 4,5 par ajout de NH4OH. L'acide 3-mercaptopropionique (4,38 ml ; 5,31 g; 50 mmoles; 5 éq.) est ajouté. La solution est chauffée à 70°C pendant 2h. La solution est extraite par 4 fois 50 ml d'acétate d'éthyle. La phase aqueuse est évaporée à sec 20 pour donner la aN-acétyl-L-5-sulfanylhistidine (Composé 23) (390 mg ; 86 %) sous forme d'un solide beige. RMN-Hi- (D20, 400 MHz) : 5 (ppm) = 1,97 (s, 3H) ; 3,01 (dd, J=15,2 Hz, J=8,6 Hz, 1H) ; 3,16 (dd, J=15,2 Hz, J=4,8 Hz, 25 1H) ; 4,50 (dd, J=8,6 Hz, J=4,8 Hz, 1H) ; 8,22 (s, 1H) . LCMS (APCI) : 230,0 [M+H] + 3021655 43 Exemple 21 : Préparation « one pot » de la L-5- sulfanylcarnosine via préparation in-situ de la 5- acylsulfanylhistidine suivi par hydrolyse (Composé 24) 1 4. HSCH2CH2CO2H 1. HCI OH 2. NBS 0 H 3. CH3COSH N.,...NH NH2 NH2 NH2 5 Composé 24 La L-carnosine (425 mg ; 1,88 mmoles; 1 éq.) est dissoute dans 12 ml d'eau déminéralisée contenant une solution d'acide chlorhydrique concentrée à 37% (370 mg ; 3,75 mmoles; 2 éq.), puis la solution est refroidie à 0°C. Le N- 10 bromosuccinimide (440 mg ; 2,44 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté en une portion: la solution devient orange limpide. L'acide thioacétique (960 pl ; 1,03 g, 13,14 mmoles; 7 éq.) est ajouté. Le mélange est agité à 0°C pendant 1h. La solution est extraite par 4 fois 12 ml d'acétate d'éthyle. Après 15 neutralisation et purification sur silice en présence de dithiothréitol (290 mg ; 1,88 mmoles; 1 éq.), la L-5- sulfanylcarnosine (Composé 24) (70 mg ; 14 % ; 22 % par rapport à la quantité de l'intermédiaire SAc) est obtenue sous forme d'une laque incolore. 20 RMN-H1 (D20, 400 MHz): 5 (ppm) = 2,69 (t, J=6,7 Hz, 2H) ; 3,00 (m, 1H) ; 3,12 (m, 1H) ; 3,23 (t, J=6,7 Hz, 2H) ; 4,43 (dd, J=8,5 Hz, J=4,2 Hz, 1H) ; 8,20 (s, 1H). LCMS (APCI): 259,1 [M+H]+ 25 3021655 44 Exemple 25 : Préparation des composés 25 et 26 a)Préparation « one pot » du disulfure de l'iso-ovothiol A via préparation in-situ de la 5-acylsulfany1-1- méthyl-histidine suivi par hydrolyse et oxydation 5 (Composé 25) O OH1 4. HSCH2CH2CO2H 5. Oxydation HO __NEN NH2 O -NEN NH2 Composé 25 O S-S OH La 1-methyl-L-histidine (0,84 g ; 5 mmoles; 1 éq.) est 10 dissoute dans 35 ml d'eau déminéralisée et une solution d'acide chlorhydrique concentrée à 37% (835 pl (10 mmoles; 2 éq.) est ajoutée ; puis la solution est refroidie à 1°C. L'agitation est maintenue très forte. Le N-bromosuccinimide (1,17 g ; 6,5 mmoles; 1,3 éq.) est ajouté rapidement. Après 15 3 minutes, l'acide thioacétique (2,57 ml ; 2,74 g; 35 mmoles; 7 éq.) est ajouté très rapidement. L'agitation est maintenue vigoureuse à 0°C pendant 30 minutes. La solution est extraite avec 40 ml d'acétate d'éthyle puis l'acide 3- mercaptopropionique (2,2 ml ; 2,65 g; 25 mmoles; 5 éq.) est 20 ajouté à la phase aqueuse. L'hydrolyse est effectuée par chauffage à 100°C pendant 20h. Après refroidissement de la solution, le milieu réactionnel est extrait par 4 fois 35 ml d'acétate d'éthyle. Après oxydation et purification avec la résine DOWEX 50WX2-400, le disulfure de la L-1-methyl-L- 25 5-sulfanylhistidine (Composé 25) (740 mg, 65%, 90 % par rapport à la quantité de l'intermédiaire SAc) est obtenu sous forme d'une poudre marron. RMN-H1 (D20+DC1, 400 MHz): 5 (ppm) = 3,14 (m, 2x2H); 3,85 30 (s, 2x3H) ; 4,17 (m, 2x1H) ; 8,89 (s, 2x1H). LCMS (APCI): 401,1 [M+H]+ \,.....--..N O NH2 3. CH,COSI 1. HCI OH 2. NBS 3021655 b)Préparation de l'iso-ovothiol A (Composé 26) !"\N__ NH N HS -NEN NH2 OH Réduction OH -N\>,-..-N NH2 HO S-s Composé 26 Le disulfure de la L-1-methyl-L-5-sulfanylhistidine 5 (Composé 22) (427 mg ; 0,52 mmoles, 1 éq.) est mis en suspension dans 25 ml de méthanol. Le milieu est chauffé à 50°C puis le dithiothréitol (299 mg ; 1,92 mmoles; 2 éq.) est ajouté. Après agitation pendant 1h à température ambiante et précipitation avec de l'éther éthylique, la L- 10 1-methyl-5-sulfanylhistidine (Iso-ovothiol A, Composé 26) (295 mg ; 69%) est obtenue sous forme d'une poudre légèrement grisâtre. J=15,7 Hz, J=7,2 1H) ; 3,66 (s, 8,33 (s, 1H). RMN-H1 (D20, 400 MHz): 5 (ppm) = 3,19 (dd, 15 Hz, 1H) ; 3,29 (dd, J=15,7 Hz, J=5,2 Hz, 3H) ; 4,09 (dd, J=7,1 Hz, J=5,2 Hz, 1H) ; LCMS (APCI): 202,1 [M+H] + 20 Tableau 5 : Récapitulatif des exemples : Exemple Composé Structure préparé 1 1 0 0 OH S 2 1 NH2 Nr1\1 3 2 0 0 OH S 4 2 N- NN NH 3021655 46 5 3 0 0 S 0 N,..NH 1\1+ / 6 3 7 4 'C) 0 S OH %..NH /Nil 8 5 0 '---S 0 OH %..NH Fy0 9 6 0 \r0 OH S NH ° NNH - 10 7 0 0 S OH H ri'...NH NH2 11 8 0 0 OH S 12 8 - NH2 N N,,N ' 13 9 lie 0 S OH O NH2 N"NH 3021655 47 14 10 . 0 S OH 0 N- H N / 15 11 * 0 S 0- 0 N+ NNH / 16 12 0 OH HS - NH2 N NH 17 13 0 OH HS - NH2 N NH 18 14 0 HS OH N.'..NH NH2 19 15 x 0 4HC1x2H2O OH HN/-N u ,S NH2 N..2 --- N ---z---.../NH HO O 4 HCI 2 H2O 20a 16 HN/"------N 0 OH / --- HN S NH HO--- 0 N,........z/NH 3021655 48 20b 17 0 OH HS NH NN NH / 21a 18 x 0 4HC1x2H2O OH HN / -- ,S N---- --N SAS / / N.----z/NH H2O HO H2O 0 Ha HCI HCI HCI 21b 18 0 OH HNI-----.N /- S N--- ..-N S' ,-- / N.....:'_/_ NH HO 0 21c 19 0 OH HS N- N/NH / 21d 19 22a 20 0 HS 0 N.,'.NH / Ç 22b 20 22c 20 22d 21 0 0 /---z--N \\ FIN +_ -N+ SS ,- I \ N.---.-ziNH 0 0 22e 21 22f 21 3021655 49 23a 22x2HC1 0 HO HN'''N OH N y S-S 0 HCIN.....NH HCI 0 23b 23 O HS OH N......NH H.0 24 24 O HS OH 0 %..NH H NH2 25a 25 HO N.---;"\N- 0 NH2 OH NH S-S 0 -NEN 25b 26 O HS OH -NEN NH2 10 REVENDICATIONS1. Composé de type 5-acylsulfanyl-histidine et ses dérivés répondant à la formule générale (I) suivante : 0 4 N-+ R4 R2 \R3 dans laquelle : 15 RI- = H, alkyle, en particulier CH3 ; R2 = R3 = H, alkyle, en particulier CH3 ; R4 = H, alkyle, en particulier méthyle, alkyle(C=0), alkyle substitué(C=0), aryle(C=0) ; (3- alanyle (H2NCH2CH2(C=0); a-amino-acyle ; 20 R5 = alkyle, en particulier CH3; phényle ; ainsi que tous les stéréoisomères, diastéréoisomères et énantiomères notamment au niveau de l'atome de carbone portant le groupement COOH, pris isolément ou en mélange ; et tous les sels d'acides 25 pharmaceutiquement acceptables dudit composé de formule générale (I). 2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que R4 représente hydrogène, ou le groupe CH3, ou le 30 groupe acétyle, ou le groupe benzoyle, ou le groupe (3-alanyle (H2NCH2CH2(C=0); 3. Composé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi le groupe consistant 35 de : la L-5-acétylsulfanyl-histidine (Composé 1) ; 3021655 51 la L-5-acétylsulfanyl-a,N,N(diméthyl)-histidine (Composé 2) ; la L-5-acétylsulfanyl-a,N,N,N(triméthyl)-histidine (Composé 3) ; 5 la L-5-acétylsulfanyl-a,N(méthyl)-histidine (Composé 4) ; la L-5-acétylsulfanyl-a,N(acéty1)-histidine (Composé 5) ; la L-5-acétylsulfanyl-a,N(benzoy1)-histidine (Composé 6) ; la L-5-acétylsulfanyl-a,Nffl-alany1)-histidine 13 (Composé 7) ; la L-1-méthyl-5-acétylsulfanyl-histidine (Composé 8) ; la L-5-benzoylsulfanyl-histidine (Composé 9) ; la L-5-benzoylsulfanyl-a,N,N(diméthyl)-histidine (Composé 10) ; la L-5-benzoylsulfanyl-a,N,N,N(triméthyl)-histidine (Composé 11). 4. Composé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l' acide pharmaceutiquement acceptable précité est choisi parmi un acide minéral tel que chlorhydrique, bromhydrique, iodhydrique, sulfurique, tartrique, phosphorique ou parmi un acide organique tel que l' acide formique, acétique, trifluoro-acétique, propionique, benzoïque, maléique, fumarique, succinique, citrique, oxalique, glyoxylique, aspartique ; un acide alcane-sulfonique tel que un acide méthane-sulfonique, trifluorométhane-sulfonique, éthane-sulfonique, un acide aryl-sulfonique tel que l' acide benzène- et paratoluène-sulfonique. 5. Procédé (A) de préparation du nouveau composé de type 5-acylsulfanyl-histidine et ses dérivés de formule 3021655 52 générale (I), selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : 1) La réaction de l'histidine, racémique (DL) ou l'un de ses énantiomères (D ou L), ou 5 - l'un de ses dérivés alkylé sur l'azote en position 1 du noyau imidazole, racémique (DL) ou l'un de ses énantiomères (D ou L), ou l'un de ses dérivés alkylé ou acylé sur l'azote de 10 la fonction a-amine, racémique (DL) ou l'un de ses énantiomères (D ou L), ou - l'un de ses dérivés alkylé sur l'azote en position 1 du noyau imidazole et alkylé ou acylé sur l'azote de la 15 fonction a-amine, racémique (DL) ou l'un de ses énantiomères (D ou L), en présence de 1 à 2 équivalents d'acide minéral ou organique, avec un agent générateur d'ion solvant protique polaire, entre 0-25°, puis avec un réactif soufré de type b) acide carbothioïque de liquide sur colonne ou tout autre méthode de purification bien connue de l'Homme de l'Art. 30 6 Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'agent générateur d'ion halogénium X+ est choisi parmi : du brome Br2, en tant que réactif commercial ou préparé in situ; ou 35 du NBS ou tout dérivé N-bromo-imide et N-bromo- amide a) 20 halogénium X+ dans un température comprise formule alkyleC(=0)SH ou l'un de ses sels dans un solvant protique polaire, 25 puis 2) éventuellement la purification par chromatographie 3021655 53 7. Procédé selon la revendication 5 ou 6, caractérisé en ce que le solvant protique polaire est de l'eau ou une solution aqueuse. 5 8. Procédé selon l'une des revendication 5 à 7, caractérisé en ce que le réactif soufré de type acide carbothioïque est choisi parmi l'acide thioacétique, l'acide thiobenzoïque, le thioacétate de potassium, ou leurs mélanges. 10 9. Procédé selon l'une des revendications 5 à 8, caractérisé en ce que la température est comprise entre 0-5°C. 15 10. Utilisation du composé de type 5-acylsulfanyl- histidine et de ses dérivés répondant à la formule générale (I) tel que défini à l'une des revendications 1 à 4 pour la fabrication de composé de type 5-sulfanylhistidine et de ses dérivés 20 répondant à la formule générale (II) suivante : 0 o HS 5 4 N+ R4 lqNi ?N/)N1 2 3 i R R 25 dans laquelle : RI- à R4 étant tels que précédemment définis à 30 l'une des revendications 1 à 4, étant entendu que lorsque RI- = H alors R2, R3 et R4 ne peuvent pas être simultanément H. 35 3021655 54 11. Composé de type 5-sulfanylhistidine et ses dérivés répondant à la formule générale (II) suivante : 5 HS 0 5 4 N+ R4 Ri/NIN R2R3 10 dans laquelle : RI- à R4 étant tels que précédemment définis à l'une des revendications 1 à 4; étant entendu que lorsque Ri- = H alors R2, R3 et R4 ne peuvent pas être simultanément 15 H. Ainsi que tous les stéréo-isomères, diastéréoisomères et énantiomères notamment au niveau de l'atome de carbone portant le groupement COOH, ainsi que tous les disulfures correspondants, pris isolément ou en mélange ; tous les 20 sels d'acides pharmaceutiquement acceptables desdits composés de formule générale (II). 12. Composé de formule générale (II), selon la revendication 11, caractérisé en ce que R4 25 représente hydrogène, ou le groupe méthyle, ou le groupe acétyle, ou le groupe benzoyle, ou le groupe 13-alanyle (H2NCH2CH2(C=0) ; 13. Composé de formule générale (II), selon la 30 revendication 11, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi le groupe consistant de : le disulfure de la L-5-sulfanyl-aN(méthyl)-histidine (Composé 16) ; la L-5-sulfanyl-aN(méthyl)-histidine (Composé 17) ; 35 le disulfure de la L-5-sulfanyl-OEN,N(diméthyl)- histidine (Composé 18) ; 3021655 55 la L-5-sulfanyl-OEN,N(diméthyl)-histidine (Composé 19); la L-5-sulfanyl-a,N,N,N(triméthyl)-histidine (Composé 20); 5 le disulfure de la L-5-sulfanyl-a,N,N,N(triméthyl)- histidine (Composé 21) ; le disulfure de la L-5-sulfanyl-a acétyl)-histidine (Composé 22) ; la L-5-sulfanyl-aN(acéty1)-histidine (Composé 23) ; 10 la L-5-sulfanylcarnosine (Composé 24) ; le disulfure de l'iso-ovothiol A (Composé 25) l'iso-ovothiol A (Composé 26). 14. Composé de formule générale (II), selon la 15 revendication 11, 12 ou 13, caractérisé en ce que l'acide pharmaceutiquement acceptable précité est choisi parmi un acide minéral tel que chlorhydrique, bromhydrique, iodhydrique, sulfurique, tartrique, phosphorique ou parmi un acide organique tel que l' 20 acide formique, acétique, trifluoro-acétique, propionique, benzoïque, maléique, fumarique, succinique, citrique, oxalique, glyoxylique, aspartique ; un acide alcane-sulfonique tel que un acide méthane-sulfonique, trifluorométhane- 25 sulfonique, éthane-sulfonique, un acide aryl- sulfonique tel que l' acide benzène- et paratoluènesulfonique. 15. Procédé (B) de préparation des composés de type 5- 30 sulfanylhistidine et de leurs dérivés de formule générale (II) obtenus à partir des composés de type 5-acylsulfanylhistidine et de leurs dérivés de formule générale (I) décrit dans le procédé A selon l'une des revendications 5 à 9, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : 35 1) Soit directement (procédé B1) : e) par hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanyl- histidine obtenus selon l'invention dans un 3021655 56 solvant protique polaire par agitation température supérieure à 20°C en présence d'un thiol, f) puis éventuellement purification par 5 chromatographie liquide sur colonne ou tout autre méthode de purification bien connue de l'Homme de l'Art. 2) Soit indirectement (procédé B2) : f) par hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanyl- 10 histidine obtenus selon l'invention dans un solvant protique polaire par agitation à une température supérieure à 20°C pour obtenir le disulfure correspondant, g) puis réduction du disulfure par réaction avec un 15 thiol, h) puis éventuellement purification par chromatographie liquide sur colonne ou tout autre méthode de purification bien connue de l'Homme de l'Art. 20 16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que le solvant protique polaire est choisi parmi l'eau ou une solution aqueuse. 25 17. Procédé selon les revendications 15 ou 16, caractérisé en ce que le thiol est choisi parmi l'acide mercaptopropionique, le dithiotréitol ou leurs mélanges. 30 18. Procédé selon l'une des revendications 15 à 17, caractérisé en ce que la température est comprise entre 20 et 130°C. 19. Procédé (C) de préparation de disulfures des 5- 35 sulfanylhistidines et de leurs dérivés définis à l'une des revendications 15 à 18, caractérisé en ce que les dits disulfures sont préparés : 3021655 57 i) soit directement à partir des composés de type 5-acylsulfanyl-histidine et de leurs dérivés de formule générale (I) caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : 5 a) hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanyl-histidine de formule générale (I) obtenus selon l'invention dans un solvant protique polaire par agitation à l'air et à une température supérieure à 20°C pour obtenir le disulfure correspondant, 10 b) puis éventuellement purification par chromatographie liquide sur colonne ou tout autre méthode de purification bien connue de l'Homme de l'Art ; 15 ii) soit à partir de 5-sulfanylhistidines et de leurs dérivés de formule générale (II) caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : c) oxydation de la 5-sulfanylhistidine ou de ses dérivés par l'oxygène ou le diméthylsulfoxyde ou 20 toute autre méthode d'oxydation bien connue de l'Homme de l'Art, d) puis éventuellement purification par chromatographie liquide sur colonne ou tout autre méthode de purification bien connue de l'Homme de 25 l'Art. 20.Procédé (D) en « one-pot » de préparation des dérivés 5-sulfanylhistidines et leurs disulfures correspondants à partir des dérivés histidines 30 correspondants, en combinant les procédés (A) avec (B) ou avec (C) tels que précédemment définis respectivement aux revendications 5 à 9 ; 15 à 18 et 19, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : 35 en présence de 1 à 2 équivalents d'acide minéral ou organique, la réaction avec 3021655 58 c) un agent générateur d'ion halogénium X+ dans un solvant protique polaire, à température comprise entre 0-25°, puis avec d) un réactif soufré de type acide carbothioïque de 5 formule alkyleC(=0)SH ou l'un de ses sels dans un solvant protique polaire, suivie de 1) Soit : g) l'hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanyl-histidine 10 obtenus dans un solvant protique polaire par agitation à température comprise entre 70 et 130°C en présence d'un thiol, h) puis éventuellement la purification par chromatographie liquide sur colonne ou tout autre 15 méthode de purification bien connue de l'Homme de l'Art. 2) Soit : j) par hydrolyse des dérivés 5-acylsulfanyl- histidine obtenus dans un solvant protique 20 polaire par agitation à une température comprise entre 70 et 130°C pour obtenir le disulfure correspondant, k) puis éventuellement purification par chromatographie liquide sur colonne ou tout 25 autre méthode de purification bien connue de l'Homme de l'Art. 30