FR 3022784 A1 20160101 FR 1456014 A 20140626 L'invention concerne des s. moécn' lctivables utiles dans le d, iu diagnostic, incorporant un Drm --.E Ir, qui en réponse à un si rulus qui peut notamment!a PICJUHLC u une enzyr--, d'un composé cylique ou une caractéristnuci.. n pHlysicochimique dans se i ?. la sundcii va s'auto-efforcirer r une entité ctable du type fiLviiycciphore c. cre. bblogique ou chimique, la détec d'une activité enzymatique peut etre très utile. Les organismes er11{72.77'. ce..iles ou les extraits cellulaires, les liquides biologiques ou les 10 de exemples d'échantillons biologiques ou chimiq es clans lesq enzymatique n être détectée. Leensymes constitucini.: ne: enix biomarqueus diverses pathologiec riquées aussi dans de nombreux processus cellulaires et font donc l'objet d'études innombrables de la part des biologistes cellulaires. Ainsi, leur 15 détecti( n donner des informations con,i:ernanc un état métabolique ou morbide particulier, par exemple. De ce fait, des sondes capables de détecter une activité enzymatique ' très utileu et ont fait l'objet trav in peut notammE ter les travaux de l'un des invente,: la -;854 présent' qui conc. subs, 77ide de brev :orrespondant ni .x demandes WO 201 cies substrats. eptidases et WO 2014/020285 qui co ç'. arne 3 de ,as qui utlisent un eien.ceur .!'Ito-efforidi'able un substrat de l'enzyme d'intér à un gro. ryle ,iiintiainant, après 3ge du substrat, la cyc.._ation de l'espacc..... 1 Le LLération d'un 25 rophore 'T (fluorophore conduisant à un transfert de proton ir moléculaire dans un nit excité, nom rné ESIPT pour « Excited State Intramolecular Proton Ti Or, une bonne solu en une activité enzymatiqu.. sast 30 fiabilité des résultats qu'elles orgi pour dissoudre une r ule er:dns moléculaires répondant à untiels pour s'assurer de la Ffet, l'aiM.Et. de co-solvant obe diminue généralement uulc l'activite des enzymes d .7,7.mtante. De plus, alors que lfL 3022 784 2 de solution7 'faiblement cc et: r- tains tests vitro, le passacl des ici.lxWür-is iires _ des inc.systémiq in vivo requiert l'utilisation solutiults à des ccr Plua élevées c. elles vont être dUL le manière lnipoit:nte Do olu n d'Uri CO-5,-;-ant i vivo est exc. Lofinne molécu:e hydrc L, de s'accum s tissus adpe X, non pas les ti7s,u_. Juis rmps scduricns ont Cette questk', ayàrt un ,LiLdère sPr, telle que rencontréEs Anal. Biochem. 1991, préoccupation pour 10 La première a É1 , ipoi-er des tant qt. substrats ,::.:rizymatique5 ries s pour ph)sphatase caspasc (Liu et al. J. Am. (Jem. Soc. 2012, 134, 1';'' exemple, foncti ,,,ie très bien mais elle limite le choix des enzymes h'3ées 15 puisque celle cellc i reconnaissen trats apolaires ne peuvent être ciblées. De plus, les I nargées négativement t, sent difficilement la membrane c. du Ckir application Lu c:blage d'enzymes extracellulaires. Une seconde solution est le greffage de groupements hvdrosolubilisants sur le signalophore utilisé, souvent des 20 grot ments suironates i ung e -etrahedron 2006, 62, 578 ; ShabEtt al. Am. Chem. Soc, 2011, 133, 10960). Encore une l'hydrosoliik"k.ltion apportée r res motifs est excellente, mais u-.L.Le mese( peu attractive c isque d'abaisser les performances du signalc relâché la sorte. Witiale suite à l'activité 25 enzymatique. De ine telle solution est tout simplement lorsque l'on veut employer de ophores à l'état solide. possibilits ne sont don, -as généralisapies au plus grand rornbi'e de spi lues molécu ponoEu., ne activité enzymatique. A il r que très peu de systèmes qui permettent 30 l'associatL:,r Yersatile d'une esr hydrosolubilisa à un substrat enzymatique dans le but de rela - une molécule ,7.quement active. Ceux-ci sont généralement basés sur un espa7,7ur éiiminant 3022 784 (Sha t I. I am. Chem, 372-7. 1 ,DU sur une combinaison d'un paceur cyclisant et min :.habat et al. Bioorg. Med. Che, ), 2e 15, 7318). Le problème est yue les espaceur s "h'rr s subsbb, sont unnus pour produire des intermédiaires hauterbent toxiques (Rokita, Quinone Methides, lère éd. 2009, uhn Wiley and Sons Inc. ; Bolton et al. Chem. Res. Toxicol. 1995, 8, 323 ; Thatcher et a. J. Org. Chem. 7, 62, 1820). D'autre part, la naison cyclisation/élimination loin car elle irtmdui_ complexib :essité iser cieuxesi.-).7-'n.---2LP en série) en . 10 des cinétiti qui sont ialb a'être satisfaism VVu al. Bioorg. Mec :hem. 2012, 20, 3465), ou bien une flstad-iilité face à l'hydrolyse s née non négligeable (Romieu et al Ora. Lett 200$1 in, 1517). Cerl.:.iines constructions livrent leur ro:-Aécule dizaines d'heures (Shabat et al. Bioconjugate Chem. 201.. :7, 1432), qui 15 les rend difficilement utilisables pour détecter rapidement I- -sence ou l'absence de certains analytes dans un échantillon donné. Il est box souhait Avelbpper une nouvelle génération d'espaceurs cyclisant perrr :ant ncorporation versatile de n'importe tip substrat enzymatique, qu'il s Iaire ou apolaire, et qui répondent aux 20 exigences de solubilité. Néanrions. cet espaceur devra garder Lflc,LIÉJque d'effondrement ra efficace. Dans le génération t devn.: p.7,:-mettre unc. reconnaissance c.._ de l'invention, les inventeurs proposent t _brides oui, d'une part, offre une solubilité ouvelle 'eall 25 satil isante et, d'autre part, sont facilement synthétisables et motu du I de la présence d'un groupe pipérazin, l'un des atomes ,orter divers groupes hydrosolubilisants. Les I ont choisi de proposer une solub.::in qui incorpore une partie hydrosolubilisante s t -e comoosanteibe la sonde, à savoir dans un espaceur rel:e 30 et substrat ce qui permet choibr importe quel -nzym et n'importe quelle molée....le Les sondes selon l'invention répondent à la formule (I) : A Xl (I) R iaquelle : X1 = NH, 0 ou , X2 =O ou S, SE est un groupe labile, et en particule-- 7r: su nat A est un groupe aromatique, qui après cirage uuon aqueuse de la liaison C(X2)-0 conduit à la ération d'un chromophore ou d'un fluorophore, 10 R représente un atome d'hydrogène ou -(L)n-GP, avec n qui est égal à 0 ou 1, L est un bras de liaison, GP est un groupe hydrosolubilisant, ainsi que leurs sels, solvats ou hydrate_, physioloç_,__.lent acceptables. 15 La présente invention permet de détecter un analyte chimique ou enzymatique capable de cliver la liaison X1-SE, par la détection du chromoph-- fluorophore qui va être lib r suite à la cyclisation de l'espaceur r., type pipérazinyle de formule : R 20 Le substrat selon l'invention agit ccq le une sonde molécul capable e révéler la présence d'un stimuluu L I qu'une enzyme, mposé inique - ne ca téristique physicochimique du milieu dans lequel se trouve la ment un changement de pH). Quand la soi st mer' c:himiquement par ledit ie se fragmente via une 'taction en C77.:,7'-je pour libérer un chrompphore ou fluorophore est possible que le groupement. A se comporte également chromophore ou un fluorophore, lorsqu'il est lié au les sondes de f ce cas de sondes propriétés spectrales, et er . culter --ropr d'absorbance fou de fluorescenc.E seront différente: '" )érée sous l'action d'un te' i enzyrT-7, un -7-1posé chimique ou une caractéristique physicochimique du milieu - 3 lequel se trouve la sonde. De manière lo avantageuse mais -ion obligawne, le r.,,,iinement A pourra être choisi, de .E--Y-iière à ce que la sonde de forr (I) ne soit pas détectable par mbon ou émission de lumière, avant de rencontrer le stimulus, a forme notarni-nent d'une enzyme compose chimique ou caracté physicochimique du . (Jans lequel se trouve la sonde, 15 (c'est-à-dire que la est dite « iurtive »). Le groupe labile SE est tel que son élimination, par exemple par voie enzym ,, ou consécutivement à une action purement chimique (telle qu'une variation de pH ou la présence d'un agent réducteur), asE'.1re, par réerar ment ir i-moléculaire de spaceur auto-effondra bi une 20 libération du fluoroonore ou chrr-ophore, notamment sous la forme A-OH ou A-0-, ou A'=0 (A'=0 étant t forme obtenue après réarrangeme de .4-0H, une forr tautomérinue ou polymérisée de A-OH J. Le clivage de la liaison SE-X1 nche ération du fi ou chromophore, notamment sou A-DH ou A-0-, ou A1=0 (A'=0 ét 'it une forme obtenue 25 après réarrangEriert de A-OH t A-0-, une forme tautomérique ou polymérisée de A-C'1) par cyclisa le l'espaceur comme illustré sur le Schéma 1 ci-dessous : Schéma 1 A-OH S -H SE réaction chimique / enzymatique cyclisation R . - t composée d. catr cc, ,.,.,,.)sa un e.,,..._.... intelligent qui porte, à une extr- , ur .....,upe ' t à l'autre, iii) un gdpupe organique A-0 r ar un groupement carbamate ou thiocarbamate cl..,.:: r(dspaceur qui, quand il est libéré par fragmentation. du ugué espaceur-A-O, pour donner at. correspondant, conduit à la formation d'un chromophor ou fluorophore détethle, iv) un groupement hydrosolubilisant de l'invention, la présence l'atome d'azote porteur d groupement R permet de moduler les proprd de la sonde et d'introdui-e une troisième fonctionnalisation, à côté du groupe labile SE et du groupe A conduisant, après élimination du groupe SE et à la cyclisation de l'espace ,' à la libération d'un ch, dd-1(,)phore ou fluorophore détectable. En effet, les sondes de forrnd (I) selon l'invention comportent n espaceur de type pipérazine multifonc_lnalisable gui permet Vina d'un large choix de substrats enzymatiques, et CL' ,:lroupe annexe R cu perncdcc,,;.?n fonction de sa nature, de rendre (nolécu e encore pi.'(s de l'atome d'azote, permet à partir d'un 'ême z, r..(1-:,(d-r-dédiaire de synthèse de conduire à différentes fonctionnalisat s R hydrosolubilisantes. 'Je plus, les sondes selon l'invention présentent une , par rapport à leurs homclogues comprenant un espaceur type pipéridinyle, exemplifiés dans cs dem nc 'NC) 2013/045854 et WO 25 2014/020285 et par rapport aux réactifs ccrdrïu.,((ciaux ne con7:in-e, 3nt pas du 3022 784 7 tout d'espacE.J7 tels qu,:::! 17 l'acétate de 4r. iylumL H N - 7-(phe. 'do)coumarine ou - Impie 4-méthy1-7-(phenylacetamido)wumirine 4-n lumbelliferyl acetate Par ailleurs, comme d n:7 cas -; Ç7.77nandes WO 2013,15854 et WO 5 2014/020285, la sonci.E: comporte t spaceur pré-organisé pour sa cyclisation après clivage Ue ,'son SL-Xj, qui accélère le procer-- effondrement de l'espaceur, tout en assurant une bonne recon ssance enzymatique. Or, il- t nullement évident qu'avec la r on de l'espaceur or ' e dans le cadre de l'invention dans laquelle des groupemen 10 : introduits pour augmenter l'hydrosolubilité, il n'y ait pas d'impact r rappor, des sondes. Or, dans le de a été cilE.:rriontré que l'introduction d'une c1 u mentation 1%ombrement stérlque au niveau du groupe R, et donc ...ur une p,:-Uor-; proche du site d'action du stimulus (ie. une enzyme un composé ch ique 15 ou une variation d'une caractéristique physicochr- du millet. 3ns se trouve !a 7,0ide, en f7:7y7uor le 17 nature du groupe SE), ne modifiait pdS la réactior nue sous l'action du Umulus correspondant. La p1ite invention concerne donc lec composés de formule (I), quelle que soit leur variante de mise en oeuvre décrite dans la présente 20 demande de brevet, pour la détection in vivo, chez l'homme ou l'animal, in vitri 7ulo ou ex vive n stimulus tel qu'une enzyme, un composé - ne caractéristique physicochimique du milieu dans e sonde, dont la présence 'ntraîne le clivage de la liaison SE-X1. un autre as. .Jention concerne un procédé in vib 25 déte',- moyen (Sm- -2 fouule (I) selon l'inventiorn la pr_ d'un stimulus tel qu'une enzyme, un compo 7 ou une caractéristique physicochimique du milieu dans CQ t rouve la sonde,. dont la présence entraîne le clivage de la liaison SE-X1. Plus précisément, re procédi détecter la présence la présence d'un un cor nosé chimique ou une caractéristique se trouve la sorrlo.. dont la présence l'inver :im physieuel du milieu dans entraîne le clivage de la liaison SE-X1, comprenant les de - mise en contact d'un échantillon suspect de cc.';'Lenir ledit composé ligue ou ladite enzyme ou de p indite ctéristique physicochimique avec une sonde s ale (I) selon invention ; - l'applicab , de conditions app'r clivage covalente entre X1 et SE, qui e5 10 d'un Mye de la liai! C(X.2) ie 'roupe OA suite à une cyclisation de l'espaceur prése - -onde de formule (I), et - analyse quantitative o..: chromopho.'e .4.) ore L'échan, lion pourra être tout échanU biologique approprié. Il pourra 15 notam; 3ielt d'un --élèvement oJide biologique, notamm échantillon de sang tc I, de sérum! :.q,asma, urine, d'un prélèvement ou de cellules isolées, Pt en narticulier d'un m, èvement peut être utilisé te u bien être sour w- avant rr 3ence de la sonde, à une préparation de type enrichis, lent o, 20 bien connue de l'homme de l'art. De manière avantageuse, les composés de formule (I) se comportent comme des sondes fonctionnant selon un mode 'teint/a c'est filre qu'avant clivage par le stimu 0e. L - enzyme, pur composé chi _u une va d'une caractéris phi, ,i:ochimique dEu milieu dans se 25 trouve ia sonde, en fonction de la nature du grc SE), I sonde est sible ». 1 est également possible de choisir (- A, de maniere obtenir des pi ^tes sper- ' différentes le groupeme libéré aprèsais° . C(X2) et le gr-,:::'J OA et ii) la scrde de formule (I). 30 En particulier, le procédé de détection sel(Dr. être en oeuvre dans des conditions physiologiques, aqueux t.:1-eip,enné à un pH appartenant à 1,--rune allant de 4 à 9, et notamm,:.; ,11 pH de l'ordre de 7,4. Dans un mode le réalisation l'invention, un fluorophore est libéré et son analyse compr s étapes s - exposition du ,crophore à uiie scy.Irce lumineuse capable de produire une lumièr à Li longu,eur d'onde iondu fluor'. lore ; et ion. dEIL.Jorescence Dans utrn'Iode a I e linvention, est libéré et son analyse conqy DÀ,,,,antes : 10 du !Irie source lumir de produire u à une ride d'absorption du chromophore ; et - détection de la lumière absor ar cas où un chromophore est lib , on détectera un changement 15 de couleur suite à ia timulu i.lne enzyme, un composé chimique ou une variatior.-, une caractéri5tique physicochimique du m dans lequel se trouve la soucie, en fonctiori de la nature du groupe SE). De manière préférée, mais non nécessaire, le fluorophore i le chromop- bér' en particulier sous la forme A-OH ou A-0-, ou - D 20 (A'=0 eta: une forme obtenue ap, ' rearrangement de A-Ori ou A-( e tiy...ib.-.11-1-ique ou polym A-OH), forme un précipité en s aqueuse. L'invention va maintenant être d de manière plus détaillée. s groupes labiles SE 25 SE est un groupe labile, 'lirable e. Aition aqueuse sous l'action d'un stimulus oui 1 ''sence d'une enzyme, d'un composé chimi u d'une carTr physicoc".iln' milieu lequel se tr(-)uvea sonde. L'élir SE peut notarnmen::: Se faire en mili"r-v A titre d'exemple propriété pl-iysicbcriiiiiique, on peut 30 cite tion de pH, ou 17 _ J potentiel redox, lerrh,:n clivant ïes n Bisulfures nrés(i,':ntsot it dans les cas où Xi = S. manière p notamment ,r-17:.]ers, les cas ou X1 = NH ou 0, le , abile SE est susceptible à un composé chimique (un ru_ f cible) ou une eryz, Une enzyme est définie comme une protéine: le qui catalyse rÉ~_ le groupe 3E assure la reconr d'une cible ompos' chimique ou enzy , parcmètre physico-chiei 'igue di et notamment d'y enzyme, _ ?.ctivernelt localisée dans un tissu ....-1 dans un type de cellules Les groupernenlis SE caractéris" de pouv - e e la molécir sous l'action d'un Jlus qui peu r 7Sei présence d'une enzyme, d'ur -posé ou ri physicochimique du milieu dans lequel se trouve la sonde. Dans le cas où SE est substrat enzymatique, l'enzyme joue alors le rôle de catalyseur de la entre SE et l'atome X1 auquel il est lié. Une telle coupure est la conséquence d'une hydrolyse en milieu aqueux pour laquel lzyme va 15 jouer le rôle de catalyseur. Bien que dans ce cas égalemer coupure mette en jeu une hydrolyse, on parlera de clivage sous l'actior qui est catalytiquement active pour la réactior, olyse. Le choix de X1 sera adapté en fonction ioupe SE, et notamnrv substrat d'enzyme sélectionné, de manière à o,..,Lenir le clivage souhaité. En 20 particulier, Xi sera un oxygène dans cas où SE sera un substrat d'estérase, glycosidase, de phosphatase, de sulfatase, ou de :uronidase, era NH dans le cas où SE sera un substrat de protéase, notamment d'arriclase, ou de transférase et X1 sera un soufre dans le cas où X1-SE sera un pont disulfure nui sera clivé par un agent réducteur. 25 En particulier, l'homrh,, ,étier, en fonction de l'a pour les sondes selon l'invention, pourra choisir un substrat pour H . s une enzyme choisie paroe' les estérases telles que les carboxylestérases ou les lipases ; les alkalinE iosphatases ; les glucuronidases telles que la 13- gluc monidase ; les y,rcosidases ; protéases telles que les 30 r ,)protéases; les peptidases et les e groupement SE sera, de préf c de manière à être spécifique d'une enzyme d'intérêt. En revanche, CE enzymes ont la capacité de cliver un ensemble de grotipemertits 5. parmi on peut citer la hexosaminich.377, et les esterases. De tels substrats d'enzyme F:ont notarrn.-77nt choisis parmi les ypes 'ecosyle liés par leur carbone anom&Hque eu reste de la molécu des af es gras liés par leur forrtinn uu este de la molécule, les ,ours :idyle liés au reste de l t.n écule par une fonction acyle c.rminal ou par un chaînon lat, ou un groupe un SUltc i7mh-l'E. avec X1 qui représente alors NH. SE peut êtrT _in substrat de gly( _ rictarrn-,e1 10 de galactosidase et corresponOie à grouperro...:tt ..icosyle îié par son oone anomérique au reste de la molécule. Par « glycosidase », on entend une enzyme glycoside hydrolase °Ili a la capacité de catalyser l'hydrolyse de liaisons gly 'ques, de mar à. libérer au moins un composé osidique. 15 g:-Oupe « glycosyle », on entend tout sucre, mono ou p s lié au reste de la molécule par un lien glycosyl ,t.-:!st-à-dire via SV I I anomérietKt,' Le carbone anomérique adopter a configuration alpha ou beta. A titre d'exemple de groupe SE, on peu, les groupements mono-glycosyl 'est-à-dire formé d'une 20 saccha que et poly-glycosyle c'est-à-dire formé de plusieurs unités saccha ques ides ou dif antes. Les unités saccharidiques peuvent être Tirr nt. citt ,,type hexose ou pentose, et choisies par- --tose, rn,:tmose, le gulose, l'allose, l'altrose, Vidas( talose, le fucc., ose, le lyxose, le ribose et: le xylose, ru exemple. 25 Les unités saccharidit.y..v. peuvent re de st iimie L ou les groupements qlycosyle possi. nstituant des substrats de glyccidase vent être ut t; en tant que SE. Ler .es 7syle peuvent être f: alis non, notamment avec y ..,roupertt(:Y.t acétyl ou ami.r.-10, LL".3 uétylhexosarrnes sont de exernphas de gre'..t:t:,e glycosue Le plus 30 souvent, upe SE comprerid-p de Dans le cas d'un ,;glyosyle, il-,L.rra _. ou d'un copolymère avec une structure alea bloc. DE exemples de tels grc y SE se comporIDS Tomme des substrats de glyciidase _ nt donnés : les nts mono-glycosylés choisis parmi le ;.osyle, le glucosyle, le mannosyie, le gulosyle, l'allosyle, osyle, lido ,e talosy e le fucosyle, le fructos l'arabinosyle, le lyxosyle, ie Idsyle, le .glucuronyle. et -hexosaminyle et les groupes- ts '3ylés constitués ,s3ieurs = notamment 2 à 20, de prAférEni. 3 et nlus particulièrement de 4 à 6) de ces grou ments monoglycosylés ide lues ou c`'` Di Pi pc-_ pt-',.k.....jre à une tori-re. tautomèri ce Lus ip er rl Millé A'=0. Par gmoui.)e aromatio un on entenu uT comprenant un ou nbczipurç Pad clibstitu s ou non sL'IbU cycles e un ou p' leurs reul!-(Diltorne:;:;., chnTss ou de sou .v, et/ou uj r. es d(- e Q, A c.:on or(,?r e.X-77-n ple, de prdtdnence de 4 à 4.0 a tO rr de c-. _ a 10 tiCrreS choisis parmi les atomes d'o de soufre. En pe t ruiler, un groupe arorna.'. eut Pte un carbocycle moreun ruocce DU un carbc7/cle poly avec plus de deux cycou, et pou U'a sous la forme d'un carbon comportant de préf&-rà de à 40 cnarînonn, et pdfémc -bellement de 6 à 15 chai- et comprenant au moins un cycle aromatiu edit carb- )mpre. éventuellement J:1,J '1,7'jns un hétéroatome oisi pari ai - - d'oxygène, a" - au sein du carbocycle et/ou -1 plusieurs atomes de clrbone e carbocycle sous la formE carbonyle C=0, un tel carbocycle pouvant être non s1!h.5.11° f"J porteui un ou plusieurs substituants. Les oupes arorne omprennent norarrrnent les groupes ary. hétérc__ /le, non substit n substril. xemple de tels carbocycles, sous leur ronre non-subshtuée, groupes phényle, naphtyle, 2-, 3- ou 4-pednyle, 2- ou .:3--furoy,, 10 ou 3-ïhiophényle, pyrrolyle, imidazoiyle, pyrazolyic, U-ÏiazoV)iie, oxazolyle, isoxazolyle, pyridinyle, pyrazinyle, pyrimidinyle, tétrazolyle, thiadiazolyle, oxadiazolyle,triazo yridazinyle, indolyle, pyronyle. Ut )mophor st une molécule capable d'absorber une partie spectre de la lum visible. On -,riqt citer, comme (.-xEr.mp de 15 chromophore, le paranitrophénol et s ivés, les colorants du type indigokles obtenus après dimérisation rivé énol correspondant (et correspondant unc à A'=0) qui forment un précipité en milieu aqueux p)bique, ou encore les composés tels que la cyclohexenoesculetine (CHE), l'alizarine ou encore l'hydroxyflavone qui forment un précipité coloré en 20 présence de certains métaux : x3 H 3-hydroxyindcly O -1- hydroxyflavone NO2 paranitrophenol indigoïdes 0 0 OH OH Alizarin CHE 3022 784 18 iivent: être substitués pllLI7's: X3 iden its chles atomes lorer brome, iode ou fluor el. positionné(s) sur n'importe c position du cycle benzénique. Un fluorophore est une e de gen f uorescen.ce, lorsowelle est soumise à une excita,,,,,.. -lumineuse c ongueur d'onde. adar - - L'a luorescence est la pm..rîété par laque e moiect est excE-: par la lumie-e d'une !.ongueu d'onde donnée erre la à une grande k cfnrcle. La op.i-cence est un iomène qui Ite de l'int( fludroph( a-.,./ec un photon incident. Ce procêssus est L'absorptioii photon amène un électron dans le fluoro passer de son état fondarr1 un nive J'ê.nergie supérieur, ctron revient à son niveau orig--1.-'JI en émettant un photon. ,e appelé -:rescer Uti-,..urophor ,:n-'-,et ensuite clE: Une plus grandk. ipngue d'o que celle du photon absorbé. Ceci est cii-a simplement au fait que l'énero photon est inférieure à celle du photon absorbé, du fait de la dissi'-) d'éner., pendant la durée de vie& , tut excité. Cet. (.1à9nition est burinée dans la demande de brevet WO 2.0C,4/058787. Des exemples de gr)upements i:.-Pwrnettant de libérer de tels fluorophores zr..et donnés ci-dessous: ferone fLu ?sc o resorufin DAO A U-re. d'exemple de groupe OA ,,,,rmettant la libéLAon fluor après réarrangement de la rrrs")k-cule libérée A-OH 0 peut citer les fluorophores suivants (le deuxieule est décrit par : Shabat et al. J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 20412) : o fluorescent HO non fluorescent fluorescent fluorescent non fluorescent des modes de sation partLiier, le groupe OA est séle.; nné de manière obtei )H qui correspond à un fluorophore ESIPT, qui peut ou non ,cipite. _ ..'tion aqueuse. Des exemples de tels 10 groupements OA répondent à la for AA). X4 X5 dan 'Inn soit x, est t. me,'ioxygène et X4 est un groupe -NH2, -0H, -SH, alkyle, aryle, -0-alk , -0-phànyle, -NH-a - .--',.;H-phényle, -S-alkyle ou -S-ary e, lesdits groupes alkyle et phényle pouvétu-1 tire substitués ou non substitués, soit X5 représente un atome d'azote et est lié à X4 qui alors CH, O, S, N ou Ni"ipour former un hétéroaryle subst»:, ou r.o.- sLd.)::titué, 3022 784 C 20 et représente tin aryle ou tin hétérnArv par exemple chol non o lesdits groupes i-)ouvant être substitués ou non substitués, avec X6 qui représente n" NR", et R" qui représente un atome d'hydrogène ou un groupe Ci Les fluorophores ESIPT montrent un dél »rient de StokE,....> qui dépasse les 100 nm et atteint souvent 200 nm. Tous ies fluorophores E3IPT perdent cette émission de fluorescence correspondant à un déplacement de 10 Stokes supérieur à 100 nm, si le- groupement OH du type phénolique est alkyle, acylé ou autrement fc Inalisé, ce qui empêche de transférer un atome d'hydrol'ne ...Méroatome X5 sur l'illustratior (1(:)nnée avec la formule (AA), lors de l'excitation par irradiation, et ainsi E )èC -nission de fluorescence caractéristi,. u processus de tr t de prot7.,. 15 Le plus souvnn 7lans 7.11 tel C7 groupe A correspond à un groupe phényle est nu-- b.s-th é et/ou qui est fusionné avec un ou pli urbocycies ,:,,i-np-enant éventuellement u téroatome l'azote. Ce dérivé oxy OA, lorsqu'il n'est pas substrat, corn por us sa forme pr( née à v-'- - ,.'.rivé phénol HO-A Ji appartient à !, "i se des fluorophores ESIPT. Des OA du type phénoxy, correspondent, par exemple, aux structures pi- rées (BB) ou (CC) suivantes : Rb (BB) dans laquelle - T est -NH-C 0 -S-, -0-, -NH, N-alkyle ou N 5- Ra est l'hydrogène ou un substituant carbon( d'électrc comme -CN ou -COORd, avec Rd n;.: représente un g.:J);, -C4)a kyle bien Ra est -CONReRf, avec Re et Rf, identiques ou différents, qui représentent l'hydrogène ou un groupe (C1-C4)alkyle, ou bien Ra est -CF3 ou un groupe 2-oxazolyle, 5H 5H zolyle, 2-imidazolyle, 2-bel )im nzolyle, 10 4-pyrimidinon-2-yle ou quinazolinon-2-yle, - b est l'hydrogènP un de chlore, brome, e ou fluor, -OH, -NH2, -NRgRh, - Rg et Rh qui 1.c-5crtent chacun indépendamment u - ou bien Ra et Rb hés Ert..rh..'! eux pour former 15 hydrocarbonée comprenant ou h chaînons, saturée ou insaturée, substituée ou non substituée, éventuellement interrompue par uu ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, S et 0, - Rc est l'hydrogène, Br, Cl, I ou F, R'a R'b 20 (CC) dans laquelle : 3022 784 22 - T' est NH2, OH.,, .- aryle -in gro (C1-C4)alkyle, SH, NHR'c, OR'c, NR'cR'd ou - tiques ou différents, qui représentent un grooi_. ryle, - R'a est l'hydrociT ou ur _ Jar: racteu, 'f-tr. comme -CN, ou -COOR'e, avec ._ _ .eprésente ,;roupe ( ou'c -CONR'fRig, avec R'f et R'g, identiqus ou différents, qui reprénten.', l'hydrogène ou un g- (C1-C4)alkyle, Lian R' -CF3 ou un 2- axazolyie, i-ben2oh171-7zolyle, 4-pyrim dnon-2-yle ou quin )1inon-2 Rb est l'hydrooè:...2, un ato:-ne de ch brome, iode ou -OH, -NH2, -NR'N. R'h et RI, identiques ou différents, représentent un groupe - ou bien R'7, et R'hccnt iés entre eux pour former une carbonée cocorenar 4 ou 5 chaînons, sat»ure ou insaturée, 15 '.iobstituée ou non substituée, éventuellement interrompue par un ou ieurs hétéroatomes choisis prcL On pourra notamment E _ demandes WO 2013/045854 et WO 2014/020285A qui donnent des exemples de tels fluorop:)res ESIPT pour plus de détails. 20 A titre d'exemple de groupe 0A, corresrr à un fluorophore de type ESIPT, on peut ciio, particulièrement oupements suivants : 0 CI Le très grand ement de Stokes de &s fluorophnres (approximativer cL 70 nm pour la HPQ présentée circ' u c7 25 ana de tz contribuera à l'ex sensit Jea sonde renara libéré aisément distinguable de la nuores pouvaru.:. de l itillon biologique cr lequel l'a- ,Lre menée. 3022 784 23 Défirutior es gn _ R peut représenter I atorr ou -(L) , avec égal à 0 ou 1. Bien souvent, pour des raisons c nthk n = est un lo liaiçon, et LL.,t-nrnment un bras 2 'ans le cn - > poupe GP' ,--lentiqt j, qui sont choisis 3rmi -0-, -NH- -N(Ci..6 aikyl)-, -N(phé -C(0)-, -C(0 0) -0C(0)-0- ,- NHC(0)-0-, -0C(0)-' -S-, -NHC(0)- 10 et -C: 'lents suivants : C1-20 aIlL. C1-20 alcéu , -20 alcyny -24 arc. ;Jryle, C7-44 alcénylaryle, Cr44 alcynyiaryle, C7- Lc4cyclo yL, r alcénylcycloalkyle, C7- alcynylcycloalkyle, C7-H,Pvylhété alcénylhétérocycloalkyle, C7-44 alcynylhétérocyeivalkyle ; H drcii. uv P Pire intertdmr'' se terminer par un groupe triaz(Jle , pouvant être non substitt substitués, notammerc oar un ou piu§c.p'....P.- , substituants choisis parmi , 10 alcoxy, C110 alkyle, C6.1.0 n arnido, imido, phosphido, nitrido, alcényle, C1_10 ann OH ml., t tiques ou -"ch7ents, qui sont égaux à O ou 1. Le bras L, est préseni oisi pour éloigner le gnou - . de ln op4rcu ou pour des que- de 5%/rItilACP '1';PInn un mode réal' éré L présente '1 avec Li. .= - C(0, , rra. = m2 = 1 Oet que précédemment, et ,-,fsente -C(0)-(CH2)p-Là- avec p qui est égal à 1, 2, 3 ou 4 et L' triazole eL nor:imment un groupe 111-1,2,3-triazole. GP est un groupe hydrosolubilisant. Par « groupe hydrosolubilis,drit on entend ur hvrin-Inhile qui )ermet d'améliorer la solubilité de la une sonde qui n'en diffère nue par le rer- de nne u r de 111:, par un CH2, pour obtenir une 1ipéridine tee que décrite d715ins 3022 784 24 demandes WO 2013 045854 ,n.10 2014/020285. titre d'exemrn groupe hydrosolubilisant,ocltef.: groupes ca ables de formE espen? c U d 0 aqueuse. A titre qexern.pe de g ron GP, on fonctions F1 choisies parmi les 5 (prima re seconoaire ou fonctions F2C8 tiCr es sulfonate ou phosphate ces fonctions polysaccharides 10 peptidicues d'exemp )nctions ar imines dans lesquelle - arnidine, ou tétrazole ; .35 ou du t ioniunc-nrboxy ate, ts comprenant eurs de T yéthyl ,Juycnis ies soues - lactose --annose ; les grou;i-,',n7 ,es TAT-peFandes... A Ude eut citer -NH2, -NHC1-4alkyle, et In)esalk-1.»:°) nt identiques ou différents et comprennent de 1 à 4 atomes de ca ne D nition des utilisés 15 Par fonction acyle, ,iteriu une IûtLLIUI: Par groupe « alkyle qu'il n'es spécifié trL.-:!ment, on entend une chaîne hydrocarbonée, e, linéaire ou ramifiée. Les yrc,:i...JP:S alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone , érés. d'exem a de groupe alkyle comprenant de 1 à atcyne', de carbone, nommés Ikyle ou (C1-C6) alkyle, on peut citer, notamment r iroupes méthyle, ,7-propyle, iso-propyle, n-butyle, nnbutyle, sec,-;', yle, n- pentyle, n-hexyle. Par nni:jpe on entend un caub( mono-, bi- ou 25 polycyclique, compre, ' au moins un groupe aryn, ',)ar exemple, un groupe phényle, c . Les grou comprenant 6 à 12 atomes de r, Le dst le group_ par:' fl«Jiqué qu'un grouif7.)E.,: substitué, ce !,7 :.rnifie qu'il est 30 substitué --- un ou pruse.:.:77 substituanLs .a,rrrrent choisis .parrni ;es atomes de chlore, brome, iode ou les groupes cyanc, ftuoroalky e, trifluorométh-, alcényle, acynyle, Jalkyle, hétérockyle, amino, akylamino, aiakyamino, hydroxy, a coxy'. -CC r Vs groupes acy groupes aromatiques (notarvit et lesdits groupes ,.,ényle, alcynyle, c'Yoalk^,ile, groupes acyle e groupes aromatiques peuvent ion substit_ Les termes utilis defhition cie ces 77,..bstituart5 sont ceui ent reconnus par l'homme du r 10 De manière Ci2FFK.-.Ue, le terme design._ une chaîne. ...oarbonée, linéaire cq.i ramifiée corn.:Tenant au moins une (131 Hemn, ,,cs(ntant de ,.férence de 2 à 20 atomes de cari préférentiellement de 2 à 6 Ï:itomes de carbone ; IE arme « aicy désigne une chaîne hydrocarlAnée, 1néaire ou rami con au 15 mnlr- une triple liaishn, et présent ni: e préférence de 2 à1 de cad, - e, et préférentiellement de 2 à 6 atomes de carbone ; terme _ Da I une chaîne hydrocarbonée, saturée' ramifiée dans laquc'h moins un atome d'hydrogène a été rempac'Je par un atome de fluor, n présentant de préférence de 2 à 12 atn entend un grour,:. . ;y:arboné saturé d'ai -, :le, ponté, groupes alkyle cornipr:::Tkar0.:: et adamantyle. Par « hétérocycloal4le », on en Land un groupe cycloa :el que défirP ,-..::"dessus, dans lequel au moins un abome de carbone est :na:é par préfér;nUehemen dn à 6 atomes le carbone « alcoxy t « ar,',dxy » déHpnït respectivemerli,' aryle. 25 de 3 à IL atomes de coJrt:Drio --.ont préférés, A Utre d'exemple, on les groupes Jtyle, cyclopentyle, cyclohexyle, cyck unl-p-,,érdatome cr'-:,îsî ç.,arn.--1 0, S ou N. A titre d'hétérocyck on citer 17:1'0upes DÉ:!razinyle, morpho, 74..)yranyle _ 302 2 784 26 Par groupe « argile », on entend un carbc7.; cle mono-, bi- ou C07-- -7-UY-, de préférence de 6 à 12 . -r-7!s de carbone, et c( ... nt au ITIOiriS un groupe an:nal-igue. A titr exempte de groupe -)n peut citer les groupes phény cinnarwle et naphtyle. Le plvtn groupe aryle particulièrement prél'éré. Pz - groupe « hétéorryle », on entend ;un carbocycle mono-, ou poly cc , :ant ne préférence dn 5 à 12 çock-37nons, et ,Trenant au moins1 cwcune aromatique et nu mctnn7.tome a tu mer rJ du , azote ou soufre n u usein du cart 10 d'exemple roupe hétéroaryle, on r: citer e/:; , ou ou 3-fun pyrrolyle, irnî( thiazolyle, OXE -hfridirryle, pyraziny FriÏC^ tétrazolyle, thiadiazolyie, oxadiazoiyle, triazol pyridazinyle, inaolyle. Les hétéroi.o.un comprennent également de tels groupes dans lesquels u n ou 15 nlusieurs atome(s) de k..arbou'le Liu cycle est(sont) sous la forme d'une - arbonyle C=0. E! acyle », on unund un groupe lié par le carbone d'une fonction acyle. C=0 et notamment un 4:17.001-1, -C., le, -(1.0C1.4alkyle, :vt\IHR"aCÙN R' r fl ntiques ou différents, qui représentent un alkyle ou aryle. ar « C7- alkylaryle « (77-- « C7-4.4 al( "n entend respectivement une rhum nid île, ou alcynyles interrompue ou se terrrirkr n: an/le, On préféra-a oL, 25 alky Aryle et aicyr .ary iprenant de 7 à 22 et ci .:érence de lé atome: de carbone. on des tecg Ils 30 procédés analogues à eaux utilisés dans les exempu. Les COM POSéS :72.1on l'inventon e 2 ci-aprèr ' ct S sonhies que )nt préparés selon .c.:.us selon des )1,.T1er'..30flueS de formule (I) et P1 et P2 sont des groupes protecteurs temporaires des fonctions amine en :mrticulier dans les conditions de réaction mises en oeuvre, Y est un groupe partant du type Cl, ;-.7re-nitrophénol, imidazole ou N-méthylimidazolium, ou N-hydroxysuccinimide, et Rp représente R ou un groupe protecteur temporaires des fonctions amine en particulier dans les conditions de réaction mise en oeuvre ou Rp est un groupe précurseur du groupe R. Schéma 2 10 OU: P2 P2 ,SE ,SE (V) (VI) A 6,,x2 ,SE 3022 784 28 Par groupe protecteur no:-aire des amines, on _ les grc s protecteurs tels que ceux _ "3 dans Protective Gr:! 2s in Orgfd . -3is, Greene T.W. et Wuts rJM,, cd John V`,/ley et Sons 5 -t dans Proteciing Groups, Koc. L 1994, Georg Thieme \ titre creY,emple de tek nrouinPrrents, o peut citer les Brome hEn-.- - les groupe a /le »Joe 123R"i avec j qui C groupes _yloxy g- 1 à 12 ':21.0nees de carbone o re tzente un groupe aryle: Cy fi 0 71ye au 3, et en particin ycarbanyl (Boc) et Dxycarbonyle (Alloc). Les compo;nàs (V) pour notarn commerciE» r suivant une prcK..a.' d :elle décrite dans t. 2010, rénylméthyluAy,..orbonyi Jbln.n--,us à narb I1/41 III 15 (V) à part- .7:" la pipérazine bis-protégée, :ut Ueb grOUr---4- groupement, Butyloxycarbonyl (Bac), grâce à une réaction d'or su ive. réaction avc. uu pa;uforrrnr1. yde nnl le composé où X1 = Le dérivé amine NH être ensuite obtenu par exemp :e à synthèse de nabrieUe, tandis que le composé (V) 20 = S peur + par substirt n nuclea. Il est également possible, de manière -nreée, d'uthnr illustrés dans les Schémas 3 et 4 qui nécL...tent mo c c où X1 = ou NH p01 a préparation s compo! enr .mas 3 et 4, A, X1, X2 et SE sont tels j ' pour les 25 sondes de f.nrrru (I) et R2 e St un grnnpeHede1à F atomes de carbone, R groupa t.(n.ur es for. _r en particulier c.f;:',Ins ncYl;:ons Ue réactions ifiiSe en oeuvre, et Y est un groupe partan ou para ou itrophénol, imidazole ou N- nftrindazolium ci N-hydrovvstic t Fip représente R ou un protecteur tinaoraire pa rticulier de n3 les ons de réaction mises E uvre OU lf,qe est: un gn.:n.:Ina préc.,..n.,,.7.urlu gro Schéma 29 Schéma R3-NH FIN-R3 0 R3 Cr R2 (X) fV ©' R (XIV) 2 R3 N 0 R3 (XIII) Dans la procédure décrite dans Schéma 3, cy: pérazine est obtenu par une double substil lucléophile d'ur iposé dt éthylène diamine (X) sur des d: rés du produit de départ commerl 10 type (XI). Dans la procédure le Schéma 4, de pipéraf réduction du cycle pipérazinone (XIII), même ntl- partir d'un bromure de malo-- ',.XIV) et d'un compc: pe étily diamine (X). 15 Les groupements R différents de H, qui correspc ent à un groupe 1.- GP, peuvent être introduits grâce '..actions du r Eohile, amination réductrice le liaison arr La lia_77n entre les .'Jpements par -brables voies de synthèse Ion les fc 20 On peut par exemple ci«t s sur le de liaison. L. Lions cire iigation telles que des Jtions nucléop es, des c, peptidiques, des cycle a cycl+ lâtion de Hu ou de Diels-Alder, des c 3lysés telsque le o ue Sc'-4;Dshra ou de Heck. est possible d.;.1 iltermédiairem,nt un composé intermédiaire de formule (I') dans t iF1p est n groupe précurseur d'un groupe R ou Rp groupe prot nporee s En parUculier, font inte de Vinverritir ain7sr mule: ,Fm1-1 2 2-(LI)mil.-2 et A Xç (I"p) 10 llJ R'p 15 ainsi nue leurs se ou : ' ECH, N3, une roncoon un groupe p;rotectepr de, ^nt tels que défr pour (I), - et m-Io-bons - préférence uSioai-ini les groupos ber es groupes-C. )o'in qui , rarp:.:sente un groupe alkyle ou nyle de là 12 atomes de c:71-bor ou un CH2 rn3R"i avec R111 .rite un groupe aryle, cycloalkyle ou nuorenyie et m3 ui est ép 3. A titre d'exern:De c':,,à groupe R'p 20 préféré, on r.),7J..;17 citer le carbc nzy ter-butyloxycarbonyl, 9- ...PP;rénylméthyloxycarbony!, et allyloxycarbonyie. certa'Jis cas,. arnelt, un fblrnb, servir d'intrT :'aire dans la pr,, reon d'un fa,_..4dn, (.:oriposé de formule (I). C'est notamment le cas cie.s composéJ quels = -e-*^OH ou - qui pourront être utilisé: notamment pov sJs compc sian- lesquels 1,1 = -CONH- ou -NHCC- tr'CI = 1. Les réactifs de départ sont dans le commerce ou fe.:::7e' acce:7sLbes. Les molécules de forrnue J) sont clo-nc d'accès ch que me simples, et peuve 7.;d:Yi-2':-:n'es à un n-,-.,e±.,/:ment faible coût -ation, pour le domaine U - - que considéré, 10 L Js des composés selo,--: l'invention sont préparés selon des niqt)ien connuer de l'hunrne , 'art. Les sels des compdsés de formule n la présente inventjo 1-(innent ceux avec des acides ou des bases, en fonction :,,uUJtuantsr, Dresents. Ces acides , ,J bases peuvent être choisis ' ,-Icides et bases minéraux et organktues qui 15 porrne's---it une sépa oj une cristallisation LOilVe:1:d:Le rles srnposés f's e (I), ainsi que des sels pfrd,:iologiquement acceph,,bles, c'est-à- Ipatib,es avec applicatiuns vii,A1 et in vitra Erl tant qu'as aopropr. on peut d !' aci ou un acide cptiquement exempe Ln acide tartrique, ut acide cld:::,emifioyltartrique, un acide manciéL 20 ou ceux qui former': des sels physid emeni - l'hydrogénosulfaL, le chlorhydrate, br,',:,,rr.,Hydrate, le (Snonhosphate, m iléate, le 'esn-erlte, le 2-naphtalènesulfonate, le pard-VA iesulfonz mésyia bésylate, l'isotionate. Er ciLle base appropriée, on peut citer la 25 l'arginine, la r r1(-7: !a benéltanu.ne, la benzathW,e ,Fn: celles forrint des sels physiolo^:, tels que ':,;ek'; de de potassium, de calcium. Comme composés sous hydratée, on citer, à t:ftte d'exemple, les serni-hyclrat. )hydrates et polyhydrates 30 Par solvat.. .1-Ie nt; use :orme du composé associé à une ou plusieurs molécules de ,t, notamment utilisé lors de sa synthèse ou lors de sa purification, sans pour autant être en solution dans ce dernier. ,,.,!rits composés de trouver s..Dus t u,tes les formes o en rnebnge selon toutes proprbons Selo: mode c._ l'inve rnmr cu.. racémique es R et 5 se égal H_Tut're mode de -- l'invention vent se sauver sous gent qu'ii n'en .';A, particulier, les zf--,:posés te se trouver - une for._ en proportions se7-s,;.rolment composés de formuHF., une forme un ou diastéréoisomère e, avec un excès 10 énantiomériqo Jr à J %, voire même supéri,:, 95%, vowe I S u forme isomérique pure c'est-à-dire avec un ex«:di éréolsor '1..érique supérieur à 99 %. LEU }posés (I) pourront e isolés sous une formc enrichieen un stéréoisor= ou énantiorr par les techniques classiques de 15 iration c pourra uti!;r' pp. exemple des recristallisations fractionnées racémique avec un acide o base optiquement active dont le principe L'2_ bien connu ou, les technique! Jes de chromatographies sur plase c chir Dans le cadre de l'inverti toutes k.'s (..-liEfinitions et moü 20 réa .1 préférés pour A, R, X1, X.7 pourront être combinées. En particulier, les sonde! :ion présenteronu ou l'a des caractéristiques uivantes, :es .éristiques = 0, soit X1 = 0 et SE est un de glycosidase ou gH. -idase et 25 correspond up Eci7 carbone 77 igue au reE l a,ouSEestw su '.'este et7.,pond à -.4u )Ri avec Ri qui .repreente, par exemple, un groupe préférence de 1 à 20 atorn carbone, cep à 20 atomes de carbone, soit X1 30 = NH et SE est un s ' '-at de protéase =eptidase rrespot I à Jpe peptid par une fonction 7 p:ortË r -.-wn Cr7 j par un ci;;latéral, 3022 784 33 aprésent 2.0 : o L qu eito, a préférence, - , Ll = -C(0)- . = rin2 = 1 ni 1 = 1 ou 0 que défins z mn enmmmtion 14, et notar sente - p qui est égal à 1, et. L3 qui est un çroupe triazole et notamment un groupe 13-triazole, lui est. sic Jréfr , arr moniunT, carnoxy -aeff7-,te et p a te et 10 les pc A est un ,npkifiquement décrits dans la prc demande de brevet., as sondes selon l'invenUo- sont attractives p r plusier - a sensibilité tiens Scjenc-,es vka, et r- imment 15 à rendemei.it d'urie activité, en paiiiculier d enr, exprimée par des colonies bactériennes sur une pLique (a colonies) ; (2) la détectjon la.:' vitro d'une act cher. ivité ,2J-rp - 3tique, dans des liquides biologiques atoL. en: a détection d'une activité, en particulier d'une activité uizymatic 20 d'une cellule unic)L;.,,ar cytornétrie de Me.; suàiisatiori urune Kbvité, en particulier d'un,-:,: activité., Pruymatique, intrace'l-ai---es dans ctss -(1 ules CUltiVéeS frricroscopie .est (5) la d'ury. P chelle tissulaire et également (6) l'h- 'r7 vivo. 25 Ainsi, les ET:)ncles selon la préSU17s invention ont u grand nombre ,:sications potentielles, Les exempes le te:les applic ons incluent !a cca, ntion d'analyses sur mn en bas.t, ,alnes. Celles-ci actuellement _ansées sur ene (lboîtr: de Pétri) où jusqu'à 3 00C (.71.7)OrlieS. peuver .t dis sans avoir les séparer activement c'iariL 30 compa ltS corr ner plaqt à puits multip1:-. Il est, par exempdi, unse _ le concevoir des ,dis sur un fonction ois M? les échantillons clini penV)-Cirt,: :crMentifier pann,1 bactériennes un a t. Les SOrtri?.S .peuvent se 'imagerie par fluorescence rn innoscopique, c'est-à-dire au d'un orqanisme entier. Dans ce (L,BS a sonde pénètrera dans la r cellulaire pour atteindre érêt (un stimulus une en 77, y - un composé chimique ou une '-'7..t.istique physicocKn du mWeu -:-_15 :luel se troue sonde). Les exemples suivants illustrent l'inven - 71 S nt aucun car:. 10 limitatif. Abrévietir 3cide tilfluoroacét méthyl DCV : - --loromét1 HOBt : 1-hydru.,nybenzotria; Boc : te,;.-butyloxycarboxy Ac : acétyl HATU hexaluon...i.,phospnate de 1- sBu sec-butyl Bis(diméthylarninc)rnethylèrk.71-n" t 1,2,3-triazolo{4,5-Ujyridiniun yde TA : Tem nature Ambiante DIAD : izodicarboxylate de : nno,,-néthylcoumarine diisopropy THF : Tétrahydrofurane DCC : Dicyclohexy carbodiimide DMF : 'N-diméthylformamide iPr : .opyl Ô: Chimique (pp. RFU : ,,,iité fluorescences rbi UA : L o' 'nsorbance arbitrEire Àex : Lonç d'on( exc (nm) Àem : Longueur d'orP----e magr L que (nm) re LC : C liquide : Spectroscopie de masse ESI : lectrospray _7: Cor plage H-H (Hz) d : t : trip . 3022 784 35 dd : doublet de doublet td oot de dc br : signal élargi :L me Appareillage utilisé pour les cara Les spectres RMN ont e ius à 297K grâce à un specitni: --- AVANCE 300 (300 MHz & 75 MHz pour 'Flet 13C, respectives un Bruker AVANCE 500 (500 MHz & 125 MHz pour 1H et 13C, respectivement). Les de Masse ¶i basse résolution: ont été o'lltenues grâce à un spectromÈtidr --nasse coié à la chromatognohie oHde AGILENT 1100 Les analyses par Chromatograpre r Couche Mince C-1°,1) été 10 réalisées sur des plaques de gel do : :75:ee 60Â déposé (Aldrich). Les mesures de ,71 haute rcI.tion ont été obten râce à un spectromètre de masse '',fici-.C.;-1-0FQ II, Les mesures de d'absorbance ont été obtenues 15 un fluorimètre à pL':gLLe L A - Synthèses : Al_ 4-benzylpiperazin-2-yl)méthyl)-2- - ide trifluoacétique :ine I - Préparation de l'intermédiaire 8 phénylacétamide, sou5 four e 20 a) Prépa :ion du compLL Boc.20 D t MI, TA H 1 A uHe solution de p4:)5rnzine 1 ( 10Ornmol, 2,0eq.) dans du DCM (30Cr est ajoutée goutte à goutt. s-..idutior, de Boc2O (8,07g,_ 50mmol, 25 1 dans du (150mL) u: neprock de 3h à r :::7ure 3022 784 36 7.rnbiante pc r clan ). A la f l'addition 'e mélange réactionnel est Le T ,ng?. est u-lsuite concentré par évapore,i-' d'obtenir L. volumefir-J approximatif de 100m1'.. Cette solution est ensuite lavée avec une solution aqueuse saitl 7e de NJEd-1( '2x100mL) et une. . Dve.:: la saumure (100mL). hase ..st séchée avec N 504, firo'ée e .i7,--.Drée pour obtenir le 4.: -"me d'une Lulle lore qt :ristallise avec le temps (7,571 rendement: 81%). (: ' MHz, CDC11): à = 3.33 (t, , 2.75 (t, .1=5Hz, 4 17 (s, 11 1.41 (s, 9H) ppm. 13C RMN (75 MHz, CDCk': 5= 154.9, 79,5, 56.3. 46.0, 44.8, 30.4, 28.5 ppm. MS: ESI: [M+H]4 m z ée 187.3 c J'éolt " Drim rmrfise.trt '"posé 3: N-Boc-W-benzyl-p Bac benze:Idéh' N Tamis moléci 4A H DCM, 0°C à T 3h 2 86% A uno solution. osé 2 (10,0g, 5,7rrmol, 1,0eq.), de benzalci^h., mol, de tamis moléi")..laire 4Â dam:, du DCM (200 - .) - DidiP 9°C plusieurs portions du NaBii(uAc)3 (17 8U,6mr ,5eq.). Le. eu réaction est agité à 0°C pendant 1h s à TA pendar A la fin de la réaction, le mélange est filtré et le filtrat est lavé trois fois avec une solution aqueuse saturée NaHCO3 .x150mL). La phase organique est séchée avec du Na2SO4, filtrée et évaporée. Le brut nnel est purifié par colunne de chi iatographie sur gel de silice ant : bord pur DCM puis DCM : Me( H / 95:5 / v:v) pour obten e cc _ 3 sous for_ ?. d'une huile incolore cristallise avec le ,r5g, '+6mmol, rencrlent: 86%). MN (300 MHz, = 7.29 (m, 2 (s, 2H), 3.45 (t, J=51-1z, L40 (t, J=5Hz), 1.48 (s, 41-1) ppm. 3022 784 37 13C NMR " CDCI3) ô = 1F -TT, 137.98, 129.25, 128.38, 127. 79.63, 63.18, 43.61, 28.54 MS: ESI: F L11+ -'uvée 277.3, cF,7ulée.. 77.3 Rf = d'éthyle / 8:2 I v:v) Prépai ion du (hydroxyny _ osé 4 tert-butyl 4-benzy1-2- loxy _ cori , -30°C, 6rniii OH 2,paraformaldéhyde -30°C à TA, 2.n 57% Dans un ball(n séché et piacé sous atmosphère inerte d' 10 e dissout le nposé .3 (1,0g, 3,6rrimo , 1,0eq.) dans du THF a.nhyu e ,)-riL). Cet - L:bon est refroidie à -30"C le sBuLi (1,3M dans du C exarie, ,5eq.) est ajouté à goutte. mélange réac t agité à -30°C pendant 6 minutes ave bareïon1,3ldéhyde (350mg, 11,6mmol, 3,2eq.) ne soit introduit rapic 15 E e seule portion. Cette suspension est agitée à -30°C 30minutes, et 1h30 à TA avant d'être quenchée grâce ition aqueuse saturée de NH4CI (20mL). La phase organique est t la phase aqueuse est lavée deux fois avec Et20 (2x20mL). Les phases c iniques sont combinées, séchées avec du Na2SO4, filtrées et évaporées. 20 L brut réactionnel est purifié par colonne de chromatographi!, r gel de e (éluant éther de pétrole : ite d'éthyle / 7:3 / v:v) PC ir le cuiriposé 4 sous forme d'une huile jaune (t325mg, 2,0mmol ierijement: 57%). 'H-RMN (500 MI-I CDCI3): 5= 7.2 (m, 5H), 4.12 (br s, 1H), 3.92 (m, 3H), 3.54 (s, 2H), 3.40 r s, 1H), (d, J=11.6Hz, 1H), 2.86 (d, J=8 2.33 (dd, J=11.61-t 3.9Hz, 2.13 (td, 1=11.6Hz, 3.9Hz, 1H), 1 ppm. 3022 784 38 13C-RMN (127 NLz, CDCI3): 6 = 155.3, 137.3, 129.0, 128.6, 127.5, 80 66.5, 63.1, 57. 72.6, 51.4, 41.7, 28.5 ppm. MS: EST: [M+H] trouv_-: 307.2, ceP-. d 30/.2 Rf = 0.28 (éther 5 ation n-2- trole : acétate )ipérazine- r c y1-2-((1,3- phthalirr. PPh3. DIAD, àTA 18h A refroidie à 0°C d omposé 4 10 triph, ùv.,)pitine (1,07g, nul, 1,2e-, ec (ouumy, 4,03mmol, 1,2eq.) dans dt: anhydre « L) est ajout à goutte le DIA!) (845pL, 13L-Tnol, 1 t. mélange réactionn..-.. agité à 0°C p- it 30min pu à TA pen .es volatiles sont évaporés et l'huile résultante est pur Le par 1_ chromatographie sur gel de silice 15 ant : éther de pétrole acétate d'éthyle / 8:2 / v:v) pour obt-,'; ° composé 5 sous forme de solide blanc (1, 1H-RMN (500 MHz, CDCI3): ô = 7.79 ( 4.45 (m, 0,5H), 3.98 ./ .'1=13Hz, 4H), 2. >'1 2.05 2,76mmol, rendement: 82%). i), 7.30 (m, 51-0, 4.55(m, 1.5H), ,75 (d, J=12Hz, 0.4H), 3.48 ( ), 1.08 + 1.03 (2xs, 9H) ppm. 20 13C-RMN (125 MHz, = 168.5, 168.2, 167.9, 155.1, 154.4, 138.2, 134.5, 134.1, 133.7, 132.8, 1: 2.4, 129.0, 128.7, 128.5, 127.4, 123.7, 123.4, 123.3, 79.7, 62.9, 54.5, 53.3, 50.3, 48.8, , 38.6, 37.8, 28.4, 27.9 ppm. MS: E5 _ +H] iz trouvée 436.3, c: Rf Rf = 0.32 (,..ther de pétrole : 2r4tate d'étti, 8:2 / v:v) 25 e) ation du composé 6: tert-butyl 2-(aminométhyl)-4- benzylpioé - -carboxylate 302 2 784 39 ( NI-12 EION 5 6 A ut-1,71 con7osé 5 (1 7 2,76mi, dans l'EtOr zine nonohydrH:: h20mg, 12.mrrioL, 4.0eq.) et le mhn -tionnel est porté reflux int 18h. A hi de la réi-Jc-jon, suspension est refror-.:t à TA et est filtrée. .ifitrat est évapoh. pression réduite pour donnes un solide qui est re-suspsmi-ju dans du (50mL), filtré une fois de plus le filtrat est lavé deux fois avec une softition aquelizP saturée de NaHCO3 (2x50mL) et une fois avec de la sa (50r -a phase organique est séchée avec du Na2S0 et évapc' 10 pour obtenir le cc .iiposé 6 (610mq) sous forme d'huile. uit est ut tape suivante sans autre purific )n. 11.1 q\l (500 MHz, CECI ô = 7. 3.97 (br u, 2H), 3.57 (d, J = 13.2 11-1), 3.43 (d, J = 13.1 H::, (dd, J = 13.1, 7.0 Hz, 1 2.94 J = 13.1, 7.0 Hz, H, (m, 2H), 2.10 (m, 2H), 1.50 15 ppm. 13C-RMN (125 MHz, CDC.13): à = 155.33, 138.36, 128.76, 12r3 28.35 128.13, 127.19, 79.74, 62.82, 53.55, 53.30, 53.13, 48.55, E4, 28.48, 21.99 ppm. MS: ESI: [M- 306.3, calculée 305.2 20 P Primar nn rnmnn 7 hrthutv4- :étan th ne-l-ca chlorure de phénylé-5cétyle, iPrEt2N Ph DCM, 0°C à TA, 2h 43% sur 2 étapes Bn 7 à 0°C du composé 6 (600mg, 1,96mmol, ?t 25 (DIPEA) (530pL, 3,0mmol, 1,5eq.) dans d_ DCM 3022 784 40 est. Ae goutte à h ite solution chlorure de 318; L. 2, mmol, 1,2eq.) 1.111K11.1v1 1.,5mL). Le ,ctnnc st agité à n°C pendant 3fl1 1.h30. A la fin de la réactil le rr -inge est ._ trc avec une aqueuse saturée dr "..33 (3x20mL). La phase cru.nque est séc du Na2SO4, filtrée et évar-T,f,7. Le brut r, 1-ion'es urif11 chromatoç -qphie sur gel de silice (éluant : éthei Dle : acél / 55:45 -our obtenir le composé 7 sous fo, i-bie solide visquew, 1.16mn em .6% sur 2 étapes). 10 I, 500 MHz, _ .3): 5= . 7.06 (m, 10H), 6.12 (s, 1H), 4.08 (s, I.H), 3.43 - 3.3 3H), 3.21 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 2.61 _ = 11.6 Hz, 1H), 2.57 (d, 1, 1i Hz, 1H), 1.99 (dd, 1= 11.6, 3.8 Hz, 1H.J 11.6, 3.8 Hz, 1H), 'DG )1-1) ppm. '3C-RMN (125 MH: 471,0,137.8, 135.1, 129.4, 128.9, 128.9, 15 128.8, 128.4, 127. .2 32.8, 54.2, 53.0, 49.7, 43.9, 41,0, 40.1, 2-_.`1 ppm. I: [M+Hr m/z , alculée 424.3 Rf = 0,23 (éther d I v:v) g) Préparation du composé 8: ((4-b )érazin-2-y )métte 20 2-1. ,..,.étarnide, sous la forme de sE.. c rh-J .TFA H Ph TFA DCM, TA, 3h n 8 Ph A une solution du composé 7 (OOmg, 1.18mmol, 1.0eq.) dans du D M (4m est ité de l'acide trifluoroacétique "FA) (4mL) et le méta 25 réac.1.10,nnel est agité à TA pendant la réaction, le rr react»iinnel est ,..'n.faporé sous p C,,e,'-:iissout dons Dal et évaporé une rou,':72:le fois. Cet tE: deuxs fois. L'huile résultant est dissoute dans Ou i'4e0Vi et le prod ite est p. 4 Jans 3022 784 41 de l'Et20. La suspension nt séchée à l'ai'. nour obtenir le composé sous forme d'une poud e (401mg, 31, rendement: 78%). 1H-RMN (500 MHz, CD-Or»: 5 = 7.42 - 7.22 (m, 9H), 3.70 - 3.59 (m, 2H), 3.57 (s, 2H), 3.53 - (m, 1H), 3.41 - ,36 (m, 3H), 3.15 (td, 1 = 11.3, 3.5 Hz, 1H;, 8 (d, , = 11.3 Hz, 2H), 2.z, t, J = 11.3 Hz, 1H), 2.24 (t, J = 11.3 I- 1H) ppm. (125 MHz, CD3OD): ».40,, 136 130.39, 130.26, 129.70, 129.x;2, 128.85, 128.13, 63.15, 56 u 5 49.54, 44.80, 43.69, 40.74 pprr 10 MS: ESL: L ] z trouvée 324.3, calculée 324.3 Il - Préparation de l'intc iaire 10, le : 4-méthyl-2-oxo-2H-c -7-y1 carbonochloridate H triphosgène, NaOH(1M aq.) CH à TA 9 10 A une solution refroidie à 0°C de triphosgène (420 mg, 1,4 mmo , 0,7 eq) M (10 mL) est :,utée la 4-méthylumbelliférone 9 (360 g, !n un( :ion. A cette suspension est additionnée go 3olutio.. -use de NaOH (2M, 1,1 mL, 2,2 mmo , 1,1 ec,, ange réactionnel est agité à 0 °C pendant 1h puis à TA pendant 18h, La 20 s pension est ensuite filtrée et le solide résultant est lavé deux fois avec d[ DCM et séché à pour donner environ la moitié de la masse de composé 10 attendue (202 mg, 0,85 mmc ;:'st alors lavé eux fois avec de l'eau et la phase organique est séchée du Na2SO -ée Pt °"Pnorée pour donner une au H,Drtion de com,D 10 (240 mg, 1,0 SOUS 25 forme d'une poudre che. Le rendem_ Je cette est de %. .RMN (300 MHz, CD: - ), 7.33-7.19 (m, 1H), 2.46 (s, Rf = 0.47 (cyclohe , d'éthyle / 6:4 CI dans 2,0 EL 3022 784 42 III Préparation du composé 12, l'hydroC -oxo-21-1- 2-((2-phér. 17étamido) -,75rboxylate iposé - h( iiai ) é pipén p-xylate iP7Et2N DC , 0°C to TA, 4h30 33% 10 A une soli r.efroidie à 0°C di' (7».7) 10 (237- mmol, 1,05eq.) 10 c1 3 C anhydre (10mL) sous le atnips inerte d'argon est addiij goutte "ne sdittion du comp;),J (400mg, 0,91mmol, et c, '1,2EA (48( , 3,0eq.) dans du DCM .:!rihydre n e réactior t .,gité à 0°C r - . . 30n n à idant 4h. A la fin de la réaction, mélange réac.,-.Ler-lp :rois 15 fi avec une solution aqueuse saturée aHCO3 (3x2Orr la phase organic iée av Na2SO4,filt,c';-. féac4-'^nnel est purifié par colonne d )matogra, He sur gel de silice nt : gi lent de DCM Me01-1 I 9q:1, q7:1 ,V) pour obtenir le composé I ;ous forme d'une huH 16 U,3lmmol, rendement: 33%). 20 11-1-RMN (500 lv 7. '6 (2xd, 5 Hz, 1H), 7.26 - 7.06 (m, 10H), , = 9./ 1H), 6.97 (t, J= 7,4 Hz, 1H), 6.25 , 0.5H), 6.13 (br s, 1H 4 (s, 0.5H), 4.33 (s, 0.5H), 4.16 (s, 0.5H), 4 3.99 (m, 0.5H), 3.9à. ;t, J= 13.2 Hz, 1H), 3.70 - 3.61 (m, 0.5H), 3.50 - (m, 41-1), 3.28 (t, J = 12.6 .4 1H), 3.20 - 3.05 (m, 1H), 2.72 (d, J = 11.9 H 25 2.65 (d, J = 2.31 (d, 3= 7.7 Hz, 3H), 2.13 (dd, 3= 11.9, Hz, 11-1:. 2.06 (t, 3= 11.8 Hz, 1H) - 160.68, 154.08, 13C-RIvb 7, CDCI3): 5 = 11.23, 152.76, i52. 2, 137.53, 134.76, 129.38, 129.31, 128.90, 127.40, 127.1 125.22, 118.11, 117.96, 117.37, 117.24, 153.82, 153.40, 128.88, 128.44, 114.20, 114.12, 302 2 784 43 MS: EST: Rf = 110.07, 62.63, 54.00, 53.85, 53.51, 52.74, 51.14, 43.79, 40.97, 37, 4 7 72 ppm. 5 b) 1/z trouvée 526.3, calculée 526.3 10H / 97:3 rv) cétamiu azi cart (10%w) MeC1.-' 1Bh, 78% H HCI f2 10 Un ballon contenant une solution du composé 11 (120mg, 0,23m 1,0eq.) et du 1,1,2-trcloroéthane (25pL, 0,25mmol, 1,1eq.) dans du ME (5mL) est purgée pervint 5min avec du H2. Le Pd/C (10%, 24mg) )uté et le ballon est de nouveau purgé avec du H2 pendant 5min. Le meiange 15 réactionnel est ensuite agité à TA pendant 18h sous une atmosphère de H2- A la fin de la réactiryl, le mélange est filtré sur Celite® et le filtrat est évaporé sous pression rijite jusqu'à un volume approximatif de 2mL. Et20 est alors ajouté pour précipiter le produit. La suspension résultante est e et séchée à l'air pour donner le composé 12 sus forme d'une poudra 20 blanche (85mg, 0.18mmol, rendement: 78%). 11-1-RMN (500 MHz, CD30D): ô = 7.80 (d, J 8.1 z' 7.35 - 7.07 (m, 7H), 6.33 (s, 1H), 4.63 (2xs, 1H), 4.33 (2xs, 3H), 3.45 - 3.32 (m, 3H), 3.21 (s, 1H), 2.49 ( 3,78 - 3.66 (m, 1H), 3.53 3H) ppm. 'C-RMN (125 MHz, CD30D): ô = 175.07, 162. 155.25, 155.00, 136.46, 130.19, 129.71, 128.O), 127.15, 119.38, 119.02, 114.83, 111.09, 50.92, 50.42, 44.39, 44.04, 43.75, 38.6-' 38.32, 37.44, 37.39, 18.72 ppm. HRMS: C24H26N305 [M+H] m/z t Née 436.1858 calculée 436.1867 25 3022 784 44 IV - Préparation de l'intermédiaire 14, le yl-N-( ylméthyl)a TIide NH2 acide p-LVi3tiCLe DCC, DCM 0 C à TA 13 14 A une suspension d'acide phér"acétique ( 1g, 11,2mmoL 1'Oeq. d'HOBt (1,66g, 12,3 mmoi, une solution de dicyclohex'. a DCM (10 mL). Le mélange la 2-(aminométhyl)péridine dans du DIF 30 mL:, c'.ditionnÉe r (.:ijmide (2,56g, 12,3 mmoi, 1,1 eq) , ns du ;Itant est agité à TA pendant 30min avaa,: que 3 J.4rL, 11,2 mmol, 1,0 eq) ne soit a outée. Le mélange réactionnel es ensuite agité à TA penc1'n2h L s17pension 10 résultante est filtrée et le filtrat est lavé deux fois avec une solution a ue saturée de NaHCO3 (e:x50 mL). 'hase organklue es! plusieurs fois avec une a 10% de KH2PO4 ce que le pH de la phase aque__-boit Du 0 mL) est ensuite ajouté aux phases aqueu recomoinees et une :,-aâ,..tion aqueuse de 15 NaOH M) est additionnée que a phase aqueuse aqueuse basique )rganiques sont poi tr le mol, rendement: bu H), 3.57 (s, 2H), .56 (m, 2H), 1..5 .H 12. La deux e orgue est soutirée D .x100 mL), combinées, séchées SVac composé 14 sous forme de sel 34, filtrées c (2,0 20 H ddO MHz, CDCI3): 6= (m, 5H) (m, 1H), 3.U4 ( 2.59 (ni, 2H), 1.75 (m 4H), 1.03 (m, 1H) MS: ESI: [M+Hr lz trouvée 233 3, calculée 233.3 25 3022 784 45 V - Préparation du composé e 4-méthy1-2-oxo-2/- -chromen- 2-((2- phénylacétamido)méthyl)pipéridine-1-carboxylate (comparatif 11 15 A une suspension refroidie à 0P5C du composé 10 (39r-,: r l6mmol, 1,05eq.) dans du DCM anhydre (5mL) sous une atmosphère inerte d'argon, est additionné le :,-..--nposé 14 (25mg, 0_1F m, 1,0eq.) suivi par la DIPFe (55pL, 0,30mmol, 2,0eq.). Le mélanrs -actionnel est agité à 0°C pendr 30min et à TA pendant 4h. A la fin c :éaction, le mélange réactionnel ot 10 lavé trois fois avec une solution aqueuse saturée de NaHLO3 (3x20mL) et la phase organique est séchée avec du Na2SO4, filtrée et évaporée. Le brut réactionnel est purifié par colonne de chromatographie sur gel de (éluant : gradient de DCM : Me0H / 99:1, 98:2, 97:3 / v:v) pour obt composé 15 sous forme d'une huile incolore (3grnn n.31mmol, , .....ent: 15 54%). 11-I-RMN (500 MHz, CDC11): ô = 7.49 (s, 1H), 7.30 - 7.04 (m, 5H), 7.04 - 6.88 (m, 2!-1), 6.16 L,.90 (s, 1H), 4.48 - 4.23 (m, 1H), 4.03 (d, J 13.5 Hz, 1H), 3.82 (s' ,64 - 3.27 (m, 3H), 3.12 (s, 1H), 2.35 (s, 3H), 1.77 - 1.36 (m, 6H) ppm. 20 13C-RMN (125 MHz, CDCI3): 6 = 171.42, 160.73, 154.14, 153.99, 153.83, 152.12, 134.62, 129.75, 129.36, 129.00, 128.38, 127.35, 126.76, 125.19, 118.10, 117.32, 114.20, 110.34, 53.51, 51.09, 50.93, 46,72, 43.69, 41.28, 40.83, 40.64, 39.53, 38.94, 31.69, 26.53, 25.28, 24.39, 23.04, 19.09, 18.76 ppm. 25 HRMS: C2 2Na05 [M+Na] m/z trouvée 457.1734 calculée 457.1734 Rf = 0.27 DCM : Me0H / 98:2 / v:v) o 10 14 0 o DOM, 0°C â TA, 4h30 33% 3022 784 46 le(4-benzyl zin-2-yl)méthyl VI - Préparation de l'intermédiaire _ :étic noate sous la de sel avec eimai_jor c ipc O chlorure thionyle HO 2h C O 17 16 e l'acide octanoiqu.-:: 16 10,0g, 69mmol, 1,0eq est additionné tte du chlorure de t:L, nyle (30mL, 410m mol, 6,0e - dionne suite porté pendant 2i, puis re volatiles,±-.:vaporés sous rssion réduite. L'huile résuliantes est reprise 10 dam - DC4 t la solution est à nouveau évaporée. Cette procédure est jeux fois supplémentaires no!'r- r-d-enir le composé 17 SOus forme d'un Hquide jaune très odorant (11,C 66, mol, rendement (300 MHz, CDC1-2; 2.87 ,:. J 7.3 Hz, 2H), 1.70 i= 7.3 Hz, 2H), 1.42 - 1.22 (m, 8H), 0.88 (t, J= H) ppm. 15 1:1'(-2,-P..NM (75 MHz, CL 22.65, 14.11 ppm. b) Préparatior ((octanoyloxy) ...h 5 = 173.89, ..,, 31.64, 28.85, .20, 4, e _zirtz e 28.51, 25.20, 4- Jenzy1-2- Bac Bac RI OH 17, Et3N DCM, 0°C à TA, 3h 44% 20 Bn 4 A une cr,lution refroidi de th- lamine (78C' additio §_e goutte à 1 I aans 25 obi (RnOmg, 3'72mmol, - Oeq.) et -u DCM anhydre ftr," --t utte une solution du __imposé 17 (667m; (5mL). Le mélange ractionnel est .7 ité à OC pendi5rt. l est ensuite dilué avec du DCM mL) vé une fois avec une solution aqueuse saturée ce NaHC0.3 3022 784 47 (50mL), une e- de l'eau (50m1), une fois avec une solution aqueuse et une fois avec de la saumure (50mL) L- phase d'HCI (1M - organicue est séchée avec du Na2SC. 'r:.r'ée et évpc Le brut r i':donne de, ,:::',-:.rornatc sur gel ce silice (DCM pur d'éthyle tenir 18 sous fo d'une c4mmol, tendemerri. 4%). CD30D): 5 = 7.34 - 7.16 0 4.18 (rn, (d, J 13.1 Hz, 1H), 3.37 (d, Hz, 1H), 3.0'2; = 1:i Hz, 1H), 2.77 (d, = 11.5 Hz, 2H), 2.20 7.6 Hz, 2H), 2.14 - 10 1.95 2H), 1.60 - . , 2H), 1.44 (s, 9H), 1.25 (s, 8H), 0.87 (t, = 6.4 Hz, 3H) ppm. 13C-RM (.25 MHz, CD30D): S = 173.72, 154.91, 138.16, 128.93, 128.42, 127.19, 79.97, 62.83, 61.56, 53.10, 52.82, 34.36, 31.80, 29.25, 29.04, 2 24.95, 22.73, 14.20 ppm. 15 Hi miz trouvée 433.3. calculée 433.3 J COI é (4. orme :ide trifluoroz .TFA est, CCM jaune 1-11-RMN (500 3.88 (s, 1H,, DCM, TA, 2h quantitatif FJ 13n 20 La vr-cédure utilisée est la même que celte décrite pour la syr:Rr. du 8, mais en utilisant le composé C7Cb mmol, .) dans du (5mL) et du TFA pour composé forme mudre blanche (775mg, rE ement: qua IN (500 MHz, CD30D): 5= 11 - 7.27 (n-, 51-i), 4.30 (dd, J= 12.5, 3.9 25 " ,), 4.22 (dd, J= mz, 1H), 3.70 - 3.63 (m, 1H), 3.46 1= 13.2 Hz, 1H), 3.28 - 3.12 I), 2.71 (td, 3= 12.2, 12.2, 2.6 Hz, 1H), 2.61 (t, J= 11.8 Hz, 1H), 2.38 (t, 3= 7.5 Hz, 2H), 1.66 - 1.52 (m, 2H), 1.30 (s, 8H), 0.89 (t, 3= 6.7 Hz, 3H) ppm. 3022 784 48 13C-RMN (125 MHz, CD30D): à = 174.57, 162.06, 161.77, 135.40, 13095 129.86, 129.62, 118.70, 116.40, 62.75, 62.55, 54.98, 52.20, 49.8(- 34.47, 32.84, 30.13, 30.07, 25.72, 23.65 14.38 ppm. MS: ESI: [M+H] m/z trouvée 333.3, C TJ 333.2 V I- )ari du composé hydrochlorure de 4-méLily1-2-oxo-2H- c-irome 7yl érazine- -carboxvlate (EXEMPLE u con 11_ - - m( , .az 4-- utoxylate o 10 19 4h30 b - me que celle JLcriL pour 1ihLsi du 15 compose 11, avec te co ,pos LI) L-Lcmg, 1,.,.:.,. imol, le composé 19 (750mg, 1,67mmd,,--.::: L EA (8LL, 5,02mmol, 3,0eq. d DCM anhydre ("^ .nrr-17-,!le .E-- 'ei de silice (éti1=- Lie role : acétate c rnposé 20 sous forme di solide incolore. (3mg, er.t: 22%). 20 'H-RMN (500 MHz, CD30D): à , , J = 8.6 Hz, 1H), 7.24 , 1H), 7.11 - 7.00 (m, 2H), 6.18 11), 4.57 - 4.3 m, 2H 4.27 1H), 4.09 - 3.95 54 (d, J = 13.1 Hz, 1H', (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.23 (t, J = 1iL Hz, 0.5H), 2.82 (d, J = .) I'L, LH), 2.36 (s, , 2.21 - 2.10 (m, 3H), 1.55 1.43 (m, 2H), 1.26 - 1.12 y.LH, .87 - m 3H) 25 ppm. 13C-RMN (125 MHz, CD30D): 5 173.46, 160.56, 154.1 3.82, 152.88, 152.00, 137.65, 11.76, 128.35, 127.29, 125.17, 118.11, 117.90, 117.29, 114.14, 110.25, L05, 62.57, 61.57, 61.28, 52.75, 52.62, 51.16, 50.57, 41.02, 40.21, 34.13, 31.58 28.86, 24.76, 22.54, 18.65, 14.03 3022 784 49 MS: ESI: [M+H] m/z trouvée 535.3, calculée 535.3 Rf = 0.26 (éther de pétrole : acétate d'éthyle / ':3 I v:v) ç'réparation du composé 21: hydroc Drure de 4-méthy1-2-oxo- chromen-7 12-((octanoyloxy)méth )pipérazine-1-carboxylate 20 HCI H2 (1311-1.). Pd/C (le 1. 1,2-tr .:ticirc:éthane Me0H,TA, 15h 51% La procédure utilisée est la même ,ue celle dé pour la synthèse du crr-posé 12, avec le composé 20 (180mg, 0,3:J1.1h iul, 1,Oeq.), du 1,1,2- , °éthane (37pL, 0,39mmol, 1,1eq.), du Pd/C (38mg, 20%w) d du 10 Me0H (5mL) pour di-11-Pnir le composé 21 sous forme d'une pot (95mg, 0,20mmol, - ,ant: 61%). 1H-RMN (500 MHz, CD30D): ô = 7, = 8.6 Hz, 1H), 7.32 - 7.13 (m, 1H), 4.67 (s, 1H), 4.4..) (m, 2H), 3.53 (d, J = 13.4 Hz, 2H), 3.45 = 11.7 Hz, 3H), 3.26 1H), 2.49 ( 3H), 2.35 (t, J = 7.5 15 Hz, 2H), 1.57 .), 1.26 (dd, J = 28.7, 21.9 H .., 0.84 (t, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. 13C-RMN (125 MHz, CD30D): à = 174.84, 162.51, 155.27, 154.96, 154.90, 154.05, 127.20, 119.25, 119.06, 114.87, 111.01, C.14, 43.94, 43.50, 34.83, 32.80, 30.17, 30.07, 25.89, 23.63, 18.67, 14.36 prq 20 HRMS: C24H33N206 [M+Hr m/z trouvée 445.2318 calculée 445.2333 3022 784 50 VTIT - Préparation du composé , l'acide 4-(4-(((4-methyl-2-or-,-2H- cbron ;y)carl ,yloxy)méthyl)pipérazin-1-y1)buta sulfonic__ MPLE31 A u(ie suspension du composé .. ,052mmol, 1,0eq.) iyle (10mL) est ajouuee _ se de NaHCO (1M, 10rr phase organique est soutiréert aqueuse est lavée trois . s avce de 10 l'acétate d'éthyle (3x10mL)r organiques combinées s ?.chées avec du Na2SO4, filtrées et évapi "ur donner une huile inc- )re. Cette huile est dissoute dans du THF anh)/ (2,5mL), et de la butane s.,...t:one est ajoutée (2 gouttes t :?.t le mélange r cijonnel est chauffé à refk,r ethoxy)éthoxyjethyl)-1H-1:2,3-triazi .iyij- -(.(2- 25 lacétamido)i -thyppipérazine-1-carboxylate (E- - :L4) Préparation du composé 29, azido-2 2- méthoxyéthoxy)éthoxy)éthane NaN3 N3 28 DMF, H20, 70°C, 18h 29 69% 3022 784 54 A -ne solution r' L 5mL) en ...ne portir o'2 1Qrimol, 1,0eat'i dn un mélange. CL r laN3 (2,04g, : réactionnel esti . C penciant ythtiles sont ensulte evapor, L L ésultant est re,tAL,.. l'acétate d 50mL). La susp,ansion c et le filtrat et: fois avec une sdutîon aqueuse saturée e NaKCO3 2x50mL), puH.:;, une 'us avec de la umure (50mL). La phase organique est séchée avec clu 2S0 4 r filtrée et évapc, pour donner le c mposé 29 sous forme d'end colore (820mg, 4,33mmol, rendernE2' 69%). 10 1H-R. 300 MHz. CDCI3) = 3.6l3 337 (m, 8H), 3.55 - 3.48 (m, 2H), 3.38 1,)J3 0.71, 70.68, 70.63, 70.05, 50.6; ppïu. Rf = 0.56 (éther de pl : acétate tyle, 1t f v:v) 15 b) Pré :ion du g OSE (pent- ynoyI)-2-((z- 3o)m^ )piperazgne-i- carboxy acide pentynoïque, HATU, DIPEA DCM, TA, 2h30, 30 quantitatif 20 A une si rsion ,11.1 composé 12 (50mg' 0,106mmol, 1,0eq.): noïc .2mg, 0,ll7mmol, 1,leq.) et de HATU , g, 0,117mrtioD, 1 aq.) dans du DCM anhydre (5m1...) sous atmospher -te additic- la DIPEA (4? 2,2eq.) et le mélange rr'el est ag FA pends b fin de la ré ion, le mélange réac nnel 25 est . ec du DC.. (20mL)lavé deux fc._ avec une solu NaHCO3 (2x20mL) et fois avec - saura . La phase L H est séchée ,L E . Le brut réactionnel purifié par colonne de chromatog. plile sur alumine neutre 3022 784 55 (Ether de pétrcTe : 21"oe.e fle / 1:9 / v:v) pour obt7c.,,-.°- le composé 30 sous forme d'une h i0mg, rendeme .1 lar» '500 MHz, CDCI3) 5= 7.59 (dd, 3= 14.8, 8.6 Hz, 1:1), 7.36 - 7.27 (m, 2H), 7.27 - 7.21 (m, 2H), 7.21 - 7,02 (m, 2H), 6.73 - 6.45 (ri, 1H), 5 6.32 - 6.04 (m, -I), 4.67 - 4.25 (mi -.17 - 3.69 (m, 3H), .47 (m, 3H), 3.45 - 3..9 -I), 3.18 - 2.89 on, 2H), 2.81 (s, 3H), L4 - 2.63 (m, 1H), 2.60 - 2.47 3H), 2.44 (s, TH), 2.20 (s, 3 - 1.96 (m, 1H) ppm. 13C-1e (125 MHz, CDCI3) â = 171.52, 171.36, 170.69, 170.37, 10 165.73, _L60.62, 154.03, 153.52, 153.23, 152.78, 152,16, 134.78, 134.65, 129.23, 128.97, 128.88, 127,33, 127.21, 125.35, 117.9/, 117.58, 117.45, 114.33, 114.22, 110.28, 110.16, 83.32, 83.05, 69.34, 69.03, 53.52, 51.33, 45.59, 45.20, 45.03, 43.62, 42.37, 42.19, 41.21, 40.48, 40.19, 39.98, 38.62, 38.05, 37.50, 31.77, 18.74, 14.66, 14.36 ppm. 15 MS: ESI: [M+H] m/z trouvée 515.3, calculée 515.2 Rf = 0.20 (éther de pétrole : acétate d'éthyle/ 1:9 / v:v) c) Préparatiot :omposé 31, 4-méth -oxo-2H-chromen-7-y1 4- (3-(1-(2-(2-(2-méthoxyéthoxy)éthoxy)éthy1)-11-1- 1,2,3 triazol-4- yl)propanoy1)-2-((2-phenylacétamido)méthy érî -1- 20 carboxylate 28. CuSO4.5 ascorbate de A une scftition du composé btrnmol, 1,0eq.) et du composé 28 2.1 0,128mmol, 2,2eq.) dans un mélange. DCM (1.mL) et eau (1mL) 25 sont aciditionnés le CuSO4.5H2O (9mg, 6 O4mmor, ,) et l'ascorbate de sodium (10mg, 0,08mmol, 1,2eq.) en Uri2 portion. Ce mélnne réactionnel est ensuite VA prrirn 2T, A la fin de la onnel est avec du DC71 ,L) et de l'eau CiOr 3022 784 56 orna ue est soutirée et la phas2 -'i.se est lavée trois fois avec du DM ..!s phases organique-, rs sont séchées avec du Nt-i 7.; et évaporées. Le Krlit r4,,jinel est purifié par colonne tographie sur gel de tuant gradient de DCM : Me0H / 100 : 5 0, 1, 98:2, 97:3, 96 : 4, 93 : _ / v:v) pour dcï le composé 31 sous four, pou,j7?..r mol -endement-. 11-V 500 MHz, ) 5 = 1-1,), 7.47 (m 1. 32 - 6.94 (m, , I), 3.61 (s, 0.2H), 6.21 (m, 0.2H), 4.73 3.25H), 4.55 - 4.17 H), 4.01 - 3.69 (ri, 3.6! - 7; (m, 1.5H), 3.59 - 3.50 10 (m, ,1=.0 - 3.38 (m, 3H), 3.31 2.5H), 3.26 - 2.55 ( 6.51-1), 2.36 ( ' ppm. '3C-RMN (125 MHz, CDCI 172.66, 54, 170.71, 60.77, 154.23, 153.64, 152.93, 152.10, 134.96, -r.70, 129.42, 129.03, 128.85, 12 '.35, 127.14, 125.36, ..96, 118.17, 117.60, 114.42, 110.45, 72.04, 15 7 69.56, 67.21, 59.18, 5:.. , 50.21, 45.48, 45.21 44.77, 14,02, 43.86, 42.43, 42.22, 41.15, 40.55, 40.24, 40.00, 39.36, 38.12, 37.72, 37.42, 32.04, 31.66, 29.81, 28.81, 213,'.0.57, 18.86 ppm. MS: ES, I+ m/z tr( p 704.5, calculée 704.3 Rf = 0.30 (DCM : Me0Hi 27:7 / v:v) 20 XI - Préparation de '"aire ient-4-vnoyl)pip, yllméthyl)-2-phénvlacétamide 9.'us forme de sel avec l'acide trifluoroacettl Prépare late utyl (À- :étarr o méth ^éri sel 25 d :hlortne 1-12 atrn,), (10%w 1, 2,i ci roéthane Me0H. 18h, 76% La procédure utilisée est la même que celle décrite pour la synthèse du composé 12, avec le composé 7 (605mg, 1,53mmol, 1,0eq.), du 1,1,2- 3022 784 57 trichloroéthane (161pL, 1,70mmol, 1,1eq.), du Pd/C (12 r. 2 hue) dans du Me0H (30mL) pour obtenir le composé : .1 sr 3 r )rH e d'un blanche (41flmg, 1,16mmol, rendement: 76%). - MHz, CDCI3) C = 7.43 - 7.15 (-1 5I-1), 6.25 (s, 1H), 4.47 - 4.15 (m, 2H' - 3.57 (n. 2. H) 3.52 (d, J = 2.9 'z, 2H), 3.33 (m, 0.7H), 3.28 (rn, 2.8H), 2.68 - 2.29 (m, 4.5H), 2.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 1.47 ni. (7s MHz, CDC13) à = 171.53, 171.33, 170.51, 170.26, 165.70, 15 34.84, 1';12,11 128.78, 127.26, 127.09, 83.36, 83.06, 10 80.81 , 68.90' :7, 45.37, 43.60, 42.10, 41.32, 31.77, 31.69, 28.29, 14.55 pprr e 333.2 MS: ESI: [M4 trouvée 3312, cac 17` 'Préparation du composé 33, tert-butyl 4-(pel -ynoyl)-2-((2- nylacétamido)r rI)pipérazine-1-carboxy :e H HCI 32 A une suspension r,..:froidie à 0°C ch, composé 32 (410mg, 1 , 1,0eq.), d'acide pentyndique ) et de '=-IgA1r1',J 15 1,22mmoly 1,1eq.) dans du DCIA ailil d'argon, t additiord-,:,, la DIPEA ïmmol 2 ;2eq.' et le 20 reartkn .el est rIll74? à 0°C pendu puis à TA pendant 7h15. A la fin de la réaction, le rudange réactionnel est dilué avec du DC L) et lavé s avec une .g:D.iution aqueu,7e ,,Dturée de NaHCO3 (2x5C et une de saumure (7.(7 La phase orc ique e sÉlce avec ou -2 évaporée. I_ , réactk purit lonne de 25 chrunai. ,'n e sur alumine ne-fre (éther de pétrole : ac 15:85 / v:v) pour obtenir le c- sé 33 sous fen-ne d'un jaune (552mg, rendement: 302 2 784 58 1-1-RMN (300 MHz, CDCI3) ô= 7.43 - 7.15 (m, 5H), 6.25 (s, 1H), 4.47 - 415 (m, (m, 2H), 9 - 3.57 (m, 2. 52 (d, J = 2.9 Hz, 3.28 - 2.8 2.8H), 2.68 - 2.29 (m, 4.5H), 2.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 1_7 (s, 9H) ppm. 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) = 171.53, 171.33, .,.. 170.26, 165.70, 154.91, 1M. 0, 129.22, 128.92, 128.78, 127.26, 12709, 83.36, 83.06, 80.81, 69.0, 0I0O, 53.49, 49.97, 45.37, 43.60, 42. 28.29, 14.3, 1.29 ppm. MS: ESI: [1v1-1-- m z ilée 413.2 Rf = 0.29 ,-iey pétrce . yle/ 2:8 / v:v) c) Préparation du compose 34, il-((4-(pent-4-, lpipére- yl)méthyl)-2-phénylacétamide sous fora avec 'acide trifluoroacétici.. TFA DCM, TA, 3h 88% 15 La procédure utilisée est la rn'é..-Î-K7. Gue celle décrite pot synthèse du composé 8, mï:js en utilis :1"Ii posé 33 (550n-11, 1,33mmol, dans du DCM (Ern. ?.t du 1 TL)pour donner h7:: composé 34 sous , anche (500rr. 1»mmo1 .rnerq::: 88%). (5ü0 MHz, Me0D) = 7.33 - 7.22 (m, 4H), 7.22 - 7.15 (m, 1H), 20 4.4E , J = 13.4 Hz, 1.H 3.97 (t, J = 13.4 Hz, 1H), 3.45 - 3.11 (m, 6.5H), 3.06 (t, J = 10.6 Hz, 0.5H), 3.01 - 2.81 (m 2 67 - 2.46 (m, 2H), 2.42 (m, 2H), 2.24 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 1.34 - 1.26 (m 1'1) ppm. 13C-RMN (125 MHz, Me0D) 5 = 175.33, 172.22, 172.09, 163.50, 1023, 162.96, 162.68, 1 " - .30, 130.27, 130.17, 129.70, 25 128.09, 128.03, 83.85, 70,32, 70.: , 56.37, 56.22, 55.75, 54.81, 46.53, 44.58, 44.48, 43.72, 43.66, 43.55, 43.26, 42.64, 40.34, 40.19, 40.08, 39.63, 39.42, 32.73, 32.59, 18.65, 15.11, 13.09 pp 302 2 784 59 MS: ESI: [M+H] z trouvée 313.2, calculée 313.2 XII - Préparation du composé 4-(3-(1- 2-(2-(2- méthoxyéthoxy)éthox 1H-1,2,3-un 1-4-yl)propanoyI)-2- 5 phénylacétamido)méthe ,ylate (EXEMPLE 5) ~.a arion du co -hényl 4-(pent-4 yl)-2- ( 2-phénylacétamido)rn( ine-1-carboxylate paranitrophenylchloroformate, 02N iPr2EtN IrT,'C à TA, 2h30, Aantitatif 10 A une d ° efroidie à 0°C et sous atrr nerte on du compos, 34 0,117mmol, 1,0eq.) et u, (npL' Jrnmol, 2,5e dans du DCM anhydre (2mL) est té le para- nitrcr..énolchlorofomiate (28mg, 0,130mmol, 1,1eq.) une fois. Le mélange réactionnel est agité à 0°C pendant 30min puis TA pend A la fin de la réactkm le mélange réactionnel est dilué avec Ëu DCM (20mL) et lavé deux fois avec une solution aqueuse saturée de NaHCO3 (2x25mL' 't une fois avec de la saumure (25mL). La phase organique est séchée avec Na2SO4, filtrée et évaporée. Le brut réactionneI (: purifié chromatographie sur gel de silice (éther de péti-ol : acétate 2:8 / 20 v:v) nir le composé 35 sous forme solide il rene?.-, a: quantitatif). 11-I-RMN (500 MHz, CDCI3) b = = 9.8 Hz, 2H), 7.33 - , 7H), 6.23 fc n 41-1), 6.08 - 5.82 (m, - 4.36 (m, 1.5H), 4.3 - 17 (m, - 3.88 (m, 1.4H) 3.77 - 3.62 (m, 0.8 3.'32 - 4.5H), 3.12 (t, J = 12. 2.96 - 2.65 (m. 1.8I-1 2.65 - 2.26 (r 4.2H), 2 08 - 1.86 ( ,1.29- 1.13 (m, 0.5 1) 13C-R 1 CDCI3) 6 = 171.59, 171.35,170.80, 1 170.28, _.40, 155.85, 152.84, 152.40, 145.05, 144.94, 134619, 134.48, 129.35, 129.25, 3022 784 60 129.08, 128.96, 127.50, 127.33, 125.17, 122.27, 122.13, 121.85, 83.28, 83.03, 69.37, 69.10, 53.54, 51.50, 51.25, 45.58, 45.23, 45.03, 43.68, 42.43, 42.09, 41.20, 40.59, 40.18, 38.70, 38.10, 37.48, 31.86, 31.75, 14.71, 14.40 ppm. MS: ESI: [M+H]+ m/z. trouvée 478.3, calculée 478.3 Rf = 0.32 (éther de : acétate d'éthyle/ 2-° b) Préparation du composé 36, trc 2-(2-(2- méthoxyéthoxy)éthoxy)éthy1)-1H-1,2,3-tria2 Dyl -2- ((2-phénylacétamido)méthyl)pipérazine-1-carbox 10 La procédure utilisée est la même que celle décrite pour la synthèse du composé 31, avec le composé 35 (30mg, 0,063mmol, 1,0ec composé 28 (26mg, 0,138mmol, 2,2eq.), CuSO4.5H20 (9mg, 0,04mr ),6( t l'ascorbate de sodium (16mg, 0,08mmc' 1.eq.) dans un mélange C. 15 (1mL) et eau (1mL). Après purificati \ le composé 35 sous forme d'une huile légèrer aune (39mc 058mmol, rendement : 93%). 1-1-RMN (500 MHz ) cî = 8.29 - 8.01 (m, 2H), 7.54 - 7.01 (m, 7H), 4.56 - 4.24 (m, 5H), - 3.66 (m, 5H), 3.66 - 3.37 (m, 12H), 3.31 (d, 3 = 4.7 Hz, L.55 (m, 7H), 2.18 - 1.84 (m, 1H) ppm. 20 13C-RM MHz, CDCI3) b= 172: '_71.62, 156.11, 155.95, 152.46, 145.10, 144.97, 135.45, 134.92, 1 29..1, 128.97, 128 80, 127.31, 127.10, 125.18, 122.21, 72.00, 70.64, 70.60, 69.43, 59.14, 51. 1.26, 50.69, 50.44, 50.18, 45.45, 45.20, 44.63, 44.03, 43.80, 42.40, 4; 11.06, 40 40.25, 40,10, 39.39, 38.05, 37.72, 37.48, 31.85, 31.39, 30.40, 29.77, 29.51, 25 28.59, 26.99, 21.36, 20.53 ppm. MS: ESI: [M+H]+ m/z trouvée 667.3, calculée 667.3 Rf = 0.31 (DCM : JH/ 95:5 1 35 3022 784 61 XIP Préparation du rIrs REVENDICATIONS1. s Je formule (I) : dans laquelle : = NH, 0 ou S X2 = O ou S, SE est aqueuse sous l'action :UiTiULUS De 1"-::.tre la pie.ence d'un d'un compos JuimiqhJe ou d'une carac.aque 10 nh iu milieu dans .cci trouve la sonde,. A est un groupe aromatique, qui après clivage i. ion aqueuse de La liaison C(X2)-0, conduit. à c' )phore ou d'un fi uorop R représ in atome d'hydroç-jr n Qui st égal 15 à 0 ou 1, L est un br.2s GP ei.-1 g ydrosolubilisar -ue leu ou hydrates, prlysLo .iquement acc 2. Sondes la UJon I carck -'-.sées en ce quo groupe 20 labil' ubstrat 3. Sondes selon la revenc- ri 1 ca acterisees en - e - soit Xi est un oxygène o ..;E est un substrat d'e__jrase. g o qu, 25 so représe, et S - soit X1 est ur agent réducteur. cuiJaa ai, acic t un substrat foi ne liaison ou transférase, .t un p( cuJu o qui est c par un 4. Sondes selon l'une quelconque (.1k7.=; revendications 1 à 3 ries en cer L pe lare est cri sulutre: pour au moins une L chopr s estérases =lles que =es carboxylestérases c.= les les =,=liine-phosphat..1s=7:s ; les glucuronidases telles que la .roniudse ; cosidases ; ks protéases telles que les méta c téases; les pept;Joses et les arnidaFes. 5. Sondes s =cl= je===7:=7nque des veve7clication 4 cari risées en ce que SI les groupes one anc=rr=l-rique éc-. ; groupes peptc,=/- es:72 10 la rrdécule par Ln n ,Dr7 rbOr- r c Dar un dna, tate-at Scetles selon-7--)=.1=qu'- -ndicatiorr 1 5 carï,==7> 3ées en ce que gE eçt n par iple de la N-acétyl-p- ctosamin=d,E, =icosa idase ; la a-amylase la a- 15 ,,'..'J.r-l)inofurarrsiclase ..arabinc=sidase ; la p-cellobiosidase la p- chit( =='.=7'-,==ida ; galactosidase rilucosi; la p-glt. ase tosidase ; ---=annos -se ; I mannos;d:Y::: p-xylOSivac ; la p-D-l'ucosida-^ ; la 0.-L-fucosidase ; -L-fucosidase la L-iduronidase ou de la cellL ; et correspond à 20 g;-oupement nlvcr=:; le lié par son carbone flornérlque n,i recta rie la molécule, et tamment, SE est un groupemer:. mur le galactosvl le gluco!. .e mannc le gui )3syle, le r';yle, le frucupsyle, l'araoinos, ribosyle, le xylosyle, yle et lccétyl-hexosam====-==y 25 groupement --k:^lycosylé Cuu d° -"rieurs, par eyernpl,n d- 2 à 20, de préfére-ice 3 à et lus -nt de 4 t ='.,'_. ce_ pements monog= une quCconque de evenclicalic.===-1,.. 1. à 7, acierisées en ce SE su'Lstriit: de de r' tOSidESe exeml _ e la a )sidase, de l'hc de la N-acétyl-D- cosatnoce, de r-rni=-Tb':3.7! de la rnannosidase, de 3 02 2 7 84 70 la fucosidase ou de la glucircrnidase.. notamment de la 0 -glu cwo ; et cc Lià ,....upernent gyc. bora are au reste de I tolécule, otarnment.. len u mono-gHico7ylé choisi par, D-glucuron le nyle, a cton'y'r-anosyle, J-glucosa !e. D-rran nfe, le LeiUcopyranosyle ou un g,e7., ment ...1Ssurs, par exerrpei à 20, de ft:» p,1H de 4 à 0 oa's groupements monoglycosylés identiqui- 10 8 - Sondes selon revendications 1 à 5 caractel Ls en ce que SE est : idase, nOe3rnrnent un soit un substrat cru 7,137:.M A te.,J7;eE substrat (:',e rater >rostate Spe nbran- gen) ; et SE corrsoond ' 15 aptidyle eu reste de la moléc_ acyle ern- -31 oe.i pa-' un chaînon lat sul..rat an! - .-ase, not [-'..e!nt un st.- ghltatilione transterae,: gamma- Q-i wyr dansférase, et SE PeP- de ou aminoacide lié au reA-e de la à un 20 -----nok:!cule par une fon-te-a-1 dortée par son carbone ou par ur ,-;:haînon latéral sporu à un groupe sulfon) -m . une ,eJnamide avec , représente alors NH. Sondes selon liurp uek:oncpJe Ci CS revendications 1 à 8 en tel iue A - n compo comprenant un ou s cycles 25 aromatiques s ou non subP1: lesdits CyCis ne-%! -1/4-,rn prendre un ê"'',L; les atom( (l'o>,-:-:;-éne. ou de et/ou ou plusieurs _as de carbone D i for-ne d'un carbonyle C=O. 10 - Sondes selon l'une que. :-,yrno.::,,.te des r- vs 1 à 9 30 caractérisées en ce que A est un composé arorn-e,rJ,:: conduisant à la libérati 0 ri h c choisi r rn--ii le paranitr et ses dérivés, les indigoïdes, la c L H.'oxyflavone. Une11 - Sondes selon l'une des revendications 1 à 9 caractérisées en ce que A est un composé aromat;i7ii. avec -0A choisi parmi : fluorescéine resorufin DAO 12 - Sondes selon l'une ( Iconque des revendications caractérisées en ce que A est un -.imposé aromatique avec -OA q à la formule (AA): dans laquelle : soit X5 est un atome d'oxygène et un groupe - aryle, -0-alkyle, 2hényle, y e, lesdits groupes Phényle pouvant.. être substitués ou n- soit X5 représente ur d'azote et est lié à X4 représente alors CH, 0, S, N ou NH pour forrr hétéroaryle substitué ou non substitué,et: Erente t _i un hét&niye, substitué ou non par exen, ,e choisi pan,. groupes ph&e, aphthyle, et : o lesdits groupes pouvant être substitués ou non substitués, avec X6 qui représente 5, NR", et R" qui représente un atome d'hydrogène ou un roupe (Cr kyle ; de préférence, DA est du type phénoxy, et correspond, aux structt préférées (BB) ou (CC) suivantes : 10 Rb (BB) dans laquelle - T est -N?--i-C(0)-, -5-, -0-, - 4, N-a kyle ou N-aryle, - Ra est l'hydrogène ou ! ,...,_itituant carboné attracteur d'électrons, comme CN ou --COOP,J, avec ui ;ente un groupe (C1-C4)alkyle, ou 15 bien Ra est: avz: identiq _ Du différents, qui représenI: Ihydrogène ou u groupe (C1-C4)alkyle, ou bien Ra est -CF3 ou un gr 2-oxazolyie, 2-imidazolyle, 2-benzoimidazolyle, 4-pyrimidin -2-yie ou qui 1 -yle,un atome de chlore, brome, iode ou - Rb est l'hy-o fluor, -OH, -NH2, -NRgRh, chacun indépendamment un (Cr avec Rg et Rh qui représentent bien Ra et Rb sont lié.; entre eux poiir former une c.bîne e comprenant 4 ou - 'le oui e, ou non substituée, éventuellement in i rompue par Li ou étéroatomes choisis parmi N, S et 0, ydrogène, Br, CI, I ou F, R'a 10 (CC) dans - T' est OH, L ru NHR'c, 01«, NR'cR'd no SR'c - et R'd c.fférents, qui représentent un gr.)up, nu 15 R'a est l'hyt)gène OUfl LLstituant cari carPcnr uttracteur d -CN, ou -COOR'e, avec OU P: e.St -CONR177.tg, avec reprentent l'hydrogène ou L un 2-oxazoly, 20 rolmidinon-2 ttn ou quinaz :u r47.1réSeH.,.z:.'un groupe (C1- ,ck.,ntiques ou di' .ents, qui ou bien R'a est --CF3 ou imidan, 2-benzoirnidu7.: n. -2- in de unu, brome, 'de ou vec R'h et Pt, cntiques ( - 'érei qui représentent un groupe (C Je, rote eux pour former une _ R'h 2, -NP2hR"i ou- fluor, -0 r7: 25 rocarb.1,r coniprnrn non , ions, nu insaturée,SubStitiAe Du non substituée, éventuellement interrompue par un ou plusieurs hété!- atomes c""-:-nrm N. Set O. 1,3 - Sondes selc lueio::::incp des 1 à 9 ..Orisées en ce oi CC7:0 aromatiquo -OA qui répond à l'une des formu suivantes : CI re ---idîciJons 1 à 13 14 - ondes selon caractées en ce que R de.r. n est u de liaison, et notamment un brE 1-(L2)m2-(L11) can7 10 le sens pipér ->. gru'.1.7e GP av( Li L'l, identiques ou différents, qui sont moisis parmi -0-, -NH, .1 alk} -N(phényl)-, -N(ar: C(0)-, -C(0)0, -C1..,0)-, -0C(0'; -NHC(0)-0-, -0C(0)-Nh» NHC(0)-NH -S02-, -I\® 15 12 qui est choisi parmi C1-20 alcényle, C1-20 alcyny C7- .nylaryle, C7- C7-44 ait.énylcy-: ^,^°- cd- C un substrat e glycosidase ou gl t corr groupe glycos,' carbone ,_... Hque au reste e ia molécule ou SE eist 25 d'estérase et correspond à u Ri qu. par exemple, un groupe alk érence de 1 à 20 E c c)ne, un grou nce de 1 à 2C r3 de -1:»Dne, un grau - réçent..' ubstrat de protéase ou p-ptidase 30 et correspc)nd lyle lié au reste de la molécule, parune fonction acyle portE -air son car-bai-le arra aiia ou par ur l& -L-GP avec : représente -(L1)m1-(L2)m2-(L'1)m'l avec L1 = - C(0)-, 1' = m_ = 1, m'l = 1 oui ti et L2 et L'l tels que défini à a ravii cation. 14, et mment L représente - C(0)-(CH2)p-Li- , p aat égal à 1, 2, 3 est i. upe tamment un grca h'iazole, et 10 o ' qui est tel que déf -evendicatio 17 et qui _préser_ de préférerai: -ie fonction F1 choisie paraiii fonctions amrnium, carbta sulfon, phosphate et les polyéthylè lycols. ' - Sondes selon la reieri choisies parmi : 15 H-aloriiire de 4- e ai-2airichrorriaa.J 2-((2- phériiilacétamido)n . :hyl)pipérazine-l-aiiiraicaialaii.ia (Composé I : 12 N H 21 HCI hydrochlorure 20 ((octanoyloxy)méthyl o o o 0 N ne-l-carbox-, )-2H-Crirornen-7-y1 CGïHOsé 21) acide 4-(4-(((4-rnethyl-2-oxo-21-1-chromen-7-yl)ww)carbonyl)-3- ((octanoyloxy)méthyl)pipérazia- a')butane-1-sulfonique (Composé 22)SO3H 22 o 22 77 4-méthy1-2-oxo-2H-chromen-7-y1 4-(3-(1- 2-(2-(2- méthoxyéthoxy)éthoxy)éthyl)-1H-1,2,3-triazol-4-y1)propanoy1)-2-((2- phenylacétamido)méthyDpipérazine-l-carboxylate (Composé 31) 00 31 4-nitrophényl 4-(3-(1-(2-(2-(2-méthtméthoxy)éthoxy)éthyl)-1H-1,2,3-triazol- 4-y1)propanoy1)-2-((2-phénylacétam4-1^\ othyDpipérazine-1-carboxylate 10 (Composé 36) oo 364-chloro-2-(6-: (2-méthox :