FR 3014902 A1 20150619 FR 1362715 A 20131216 Extrait enzymatique d'Helix aspersa pour le confort digestif. 1. Domaine de l'invention Le domaine de l'invention est celui des additifs alimentaires. Plus précisément, l'invention concerne un extrait enzymatique d'Helix aspersa pour améliorer le confort digestif des mammifères monogastriques. L'invention concerne également un procédé d'obtention d'un tel extrait enzymatique. 2. Art antérieur Les individus monogastriques, comme l'homme, le chat ou le chien, peuvent connaître des troubles digestifs douloureux tels que les ballonnements, les flatulences, une augmentation significative du volume des selles, des diarrhées... Ces troubles sont souvent causés par la consommation d'aliments difficiles à digérer par l'organisme. En particulier, les mammifères monogastriques tels que l'homme, le chat, le chien...ne possèdent pas les enzymes digestives nécessaires pour dégrader les fibres contenues dans les aliments. Par exemple, l'homme et autres espèces monogastriques sont incapables de digérer le squelette cellulosique des végétaux et les polysaccharides non amylacés présents dans les céréales. On peut trouver des bactéries méthanogènes dans le colon de l'homme qui permettent de dégrader partiellement les fibres alimentaires, dont fait partie le squelette en cellulose des végétaux, en produisant du méthane. Or, l'accumulation de méthane dans le tube digestif conduit à des ballonnements et aux flatulences. La présence de gaz dans l'intestin distend la paroi intestinale ainsi que le péritoine, ce qui peut être extrêmement douloureux. De plus, les fibres alimentaires permettent de transporter l'eau le long du tube digestif afin qu'elle puisse être réabsorbée par l'intestin. Elles permettent également de stimuler le péristaltisme digestif. On comprend aisément qu'une surconsommation de fibres alimentaires ou une susceptibilité individuelle aux fibres entrainent des spasmes et des ballonnements douloureux, ainsi que des flatulences gênantes. L'industrie alimentaire produit des aliments riches en fibres, soit parce qu'ils contiennent naturellement des aliments riches en fibres, soit parce que de telles fibres sont introduites dans les aliments afin de pouvoir provoquer la sensation de satiété. En particulier, les aliments destinés aux animaux de compagnie contiennent un pourcentage pondéral de fibres compris entre 5% et 15%. Les chiens et les chats notamment n'ont pas l'appareil enzymatique nécessaire au niveau de leur tube digestif pour dégrader les fibres contenues dans les aliments qui leurs sont destinés. Ils développent donc les troubles digestifs évoqués ci-dessus. Or, les fibres alimentaires présentent un réel intérêt pour la bonne santé de l'homme et des mammifères monogastriques et, en particulier, un rôle protecteur dans certaines pathologies comme le cancer. Il est connu de prescrire des comprimés à base de charbon ou de montmorillonite pour absorber les gaz intestinaux, que ce soit à titre préventif ou curatif. Toutefois, les comprimés de charbon ont tendance à colorer les tissus et les selles, et ne font que pallier les conséquences liées à une mauvaise digestion des fibres sans en améliorer la dégradabilité. En d'autres termes, il n'existe pas, à la connaissance du Déposant, de moyens naturels d'améliorer la dégradabilité intestinale des fibres et polysaccharides non amylacés, afin d'améliorer le confort digestif. 3. Objectifs de l'invention L'invention a notamment pour objectif, dans au moins un mode de réalisation, un composé permettant de faciliter la digestion chez les individus monogastriques. Un autre objectif de l'invention est de mettre en oeuvre, dans au moins un mode de réalisation, un procédé de fabrication d'un tel extrait. L'invention a encore pour objectif de fournir, dans au moins un mode de réalisation, l'utilisation d'un tel extrait pour la formulation de compositions alimentaires ou de compléments alimentaires destinés à l'homme ou l'animal. 4. Exposé de l'invention Ces objectifs, ainsi que d'autres qui apparaîtront par la suite, sont atteints à l'aide d'un extrait enzymatique obtenu à partir d'une espèce choisie parmi Helix aspersa, Helix pomelo, Helix lucorum ou leur combinaison présentant une activité cellulase et une activité p 1-3 glucanase. Ainsi, l'invention repose sur une approche tout à fait nouvelle et originale de proposer un extrait naturel permettant de dégrader les fibres insolubles et les polysaccharides non amylacés contenus dans l'alimentation afin de faciliter la digestion. Plus exactement, l'extrait selon l'invention présentant une activité cellulase et une activité p 1-3 glucanase permet d'une part de limiter voire éliminer les inconvénients liés à la consommation des fibres contenues dans l'alimentation, et notamment celles issues des végétaux, mais également d'améliorer l'absorption des nutriments. En d'autres termes, en dégradant de manière enzymatique les fibres alimentaires, les phénomènes de flatulences et de gonflement du volume des selles sont éliminés, ou à tout le moins, considérablement réduits. Les douleurs associées à la production de gaz sont donc éliminées. De plus, une alimentation trop riche en fibres peut avoir des impacts négatifs sur l'absorption des aliments : en effet, de nombreux nutriments se retrouvent piégés dans les selles, en particulier les protéines. Les fibres accélérant le transit intestinal, ces nutriments ne peuvent être efficacement absorbés par le colon et l'absorption d'énergie s'en trouve donc diminuée. L'extrait selon l'invention, en dégradant les fibres alimentaires et les polysaccharides non amylacés, permet au colon d'avoir le temps et d'avoir accès aux nutriments pour les absorber. On entend par « nutriment » des fragments alimentaires obtenus après digestion partielle par les enzymes digestives. De préférence, l'extrait enzymatique est obtenu à partir d'Helix aspersa. Dans un mode de réalisation intéressant, l'extrait selon l'invention se présente sous la forme d'une poudre. Une telle présentation permet de faciliter le stockage, la conservation et l'utilisation de l'extrait dans le cadre d'un procédé industriel ou privé. Par exemple, il est possible de produire l'extrait selon l'invention sous forme de poudre qui pourra être utilisé sous forme réhydratée par un industriel afin d'être incluse dans une composition alimentaire, humaine ou animale. L'extrait sous forme de poudre peut également être utilisé directement par les propriétaires d'animaux, par exemple en étant saupoudrée sur la nourriture de leur animal. L'extrait selon l'invention peut enfin être encapsulée dans des gélules pour être administré à un humain souffrant d'inconfort digestif. De préférence, l'extrait selon l'invention présente une activité enzymatique de la cellulase comprise entre 630 u/g.sec et 750 u/g.sec, et une activité enzymatique de la p 1-3 glucanase comprise entre 240 u/g.sec et 350 u/g.sec. L'activité enzymatique de la cellulase et de la p 1-3 glucanase sont déterminées par la mesure de l'augmentation, en fonction du temps, du pouvoir réducteur de l'extrait selon l'invention testé sur une solution contenant soit de la carbaméthylcellulose, soit de la lamarinine, à pH 5,5 à 40°C. Le dosage se base sur l'accroissement de l'activité réductrice lors de l'hydrolyse. Les sucres réducteurs sont dosés par spectrophotométrie après réaction avec le réactif spécifique DNS (dinitrosalicylique). Une unité d'activité u correspond à 1 micromol/minute de glucose. L'activité spécifique u/g est obtenue en rapportant l'activité u à la quantité d'extrait sec dans l'échantillon dosé, et l'activité u/g.sec est calculée en rapportant l'activité spécifique au temps de mesure exprimé en seconde. Avantageusement, l'extrait enzymatique aqueux selon l'invention est obtenu à partir d'hépatopancréas d'escargots de l'espèce Helix aspersa. L'hépatopancréas est un sous-produit de l'industrie alimentaire riche en enzymes. Un autre objet de la demande concerne une composition comprenant l'extrait enzymatique selon l'invention pour l'amélioration de la digestion et/ou la réduction des flatulences et du volume des selles. Dans un mode de réalisation avantageux, la composition comprend l'extrait enzymatique selon l'invention pour l'amélioration de la digestion et/ou la réduction des flatulences chez l'homme, ladite composition comprenant entre 50% et 75% en poids dudit extrait enzymatique par rapport au poids total de la composition. Un dosage adapté pour un humain adulte est d'environ 150 mg/jour. Une telle composition peut être par exemple sous forme de capsules ou de comprimés, comme alicament, afin de faciliter la digestion de manière chronique ou ponctuelle. Une telle composition peut également être une composition alimentaire industrielle comprenant l'extrait selon l'invention afin de rendre ladite composition alimentaire plus digeste. Dans un autre mode de réalisation avantageux, la composition comprend l'extrait enzymatique selon l'invention pour l'amélioration de la digestion et/ou la réduction des flatulences chez le chien et/ou le chat, ladite composition comprenant entre 0,05% et 0,1% en poids dudit extrait enzymatique par rapport au poids total de la composition. Ainsi, il est intéressant d'intégrer l'extrait selon l'invention dans les compositions alimentaires pour animaux de compagnie afin de faciliter leur confort digestif et améliorer l'absorption des nutriments contenus dans leurs aliments. A titre d'exemple, les compositions selon l'invention peuvent être des croquettes pour chien ou chat comprenant l'extrait selon l'invention à une concentration pondérale comprise entre 0,05% et 0,1%. L'extrait selon l'invention est en effet suffisamment efficace pour se contenter d'une faible quantité. L'invention a également pour objet un procédé de fabrication d'un extrait enzymatique selon l'invention à partir d'escargots congelés choisis parmi les espèces Helix aspersa, Helix pomelo, Helix lucorum ou leur combinaison, ledit procédé comprenant les étapes de : a. préparation d'un mélange comprenant de l'eau purifiée et lesdits escargots congelés ; b. broyage desdits escargots dans ledit mélange ; c. extraction enzymatique en phase aqueuse à température ambiante ; d. séparation liquide-solide ; e. séchage par atomisation, lyophilisation ou flux d'air chaud. De préférence, l'étape de mélange se fait dans les proportions suivantes massiques suivantes : 1/4 d'escargots congelés, avec leurs coquilles, pour 3/4 d'eau purifiée, par rapport au poids total du mélange. On calcule la proportion massique selon la formule suivante : Proportion massique de X = masse de X/ masse totale du mélange. Avantageusement, l'étape de séchage est mise en oeuvre par flux d'air chaud dont la température comprise entre 30-45°C. Ce procédé permet de conserver l'efficacité des enzymes tout en optimisant l'étape de séchage et en étant une méthode peu couteuse en comparaison de la lyophilisation. De préférence, le procédé selon l'invention comprend en outre une étape de concassage desdits escargots de l'espèce avant l'étape de préparation du mélange ou avant l'étape de broyage. Ainsi, le broyage s'en trouve facilité et l'extraction enzymatique est plus efficace. Dans un mode de réalisation intéressant, le procédé selon l'invention comprend en outre une étape de concentration par évaporation sous vide, après l'étape de séparation liquide - solide et avant l'étape de séchage. Cette étape optionnelle permet d'améliorer considérablement l'efficacité du procédé et d'augmenter significativement le taux de matière sèche. Dans un autre mode de réalisation intéressant, le procédé selon l'invention comprend en outre une étape de filtration après l'étape de séparation liquide-solide. Avantageusement, l'étape d'extraction enzymatique en phase aqueuse est réalisée par agitation pendant 1 heure. De préférence, l'étape de séparation liquide-solide est réalisée par centrifugation à une vitesse d'environ 4000 tours par minute. L'extrait selon l'invention peut également être obtenu par d'autres méthodes bien connues de l'homme du métier. Un autre objet de l'invention est l'utilisation d'un extrait enzymatique obtenu à partir d'escargots choisi parmi les espèces Helix aspersa, Helix lucorum, Helix pomatia ou leur combinaison pour la fabrication d'une composition permettant de réduire le volume de gaz et/ou le volume des selles. 5. Description d'un mode de réalisation de l'invention Le principe général de l'invention repose sur l'utilisation d'un extrait enzymatique d'escargots de l'espèce Helix aspersa, Helix pomatia et/ou Helix lucorum pour la formulation de compositions alimentaires, destinées à l'homme ou l'animal, et/ou de composition pharmaceutiques. L'extrait selon l'invention permet d'une part de dégrader les fibres contenues dans les aliments ce qui permet de réduire le volume des selles, des flatulences et du niveau de douleur associé à ces désagréments, et d'autre part d'améliorer l'absorption des nutriments par le colon. 5.1 Préparation d'un extrait d'Hélix aspersa selon l'invention On prépare un extrait d'Helix aspersa à l'aide du procédé d'extraction aqueuse selon l'invention. Pour ce faire, 50 kg d'escargots congelés appartenant à l'espèce Helix aspersa sont mélangés à 150 L d'eau purifiée dans une cuve stérile, à température ambiante, afin de procéder à la décongélation douce des escargots. Le mélange subit ensuite une étape de broyage pour casser la structure des escargots. En fonction des équipements, il pourra éventuellement être envisagé de procéder à une étape préalable de concassage hors de l'eau pour faciliter le broyage. Le mélange est ensuite agité pendant 1 heure à température ambiante. Cette étape correspond à une extraction aqueuse des tissus de l'escargot : les enzymes contenues dans les tissus de l'escargot, et notamment son hépatopancréas, sont libérées dans le mélange. Le mélange subit ensuite une étape de séparation liquide-solide soit par filtration avec une toile de Nylon, soit par centrifugation. De préférence, cette étape de séparation liquide-solide se fait par centrifugation à 4000 rpm pendant 5 minutes. Cette étape permet de séparer les déchets du surnageant contenant les enzymes. Eventuellement, il est possible de procéder à une étape de filtration supplémentaire si de petits déchets subsistent dans le surnageant. A ce stade, on obtient un surnageant clair. De préférence, le surnageant est soumis à une évaporation sous vide afin d'éliminer l'eau superflue et de concentrer les enzymes dans le surnageant. Plus précisément, le surnageant est injecté soit dans un évaporateur rotatif sous vide, soit dans un évaporateur sous vide à colonne. L'évaporation se fait ainsi pendant une durée comprise entre 4 et 6 heures, à une température finement contrôlée comprise entre 40°C et 45°C. Ainsi, l'étape de séchage est facilitée. Cette plage de température permet de sécher le surnageant sans endommager les enzymes et altérer leur activité. Enfin, le surnageant, éventuellement concentré, est soumis à une étape de séchage. De préférence, on procède à un séchage par flux d'air dont la température ne dépasse pas 45°C. Ainsi, la qualité et l'activité des enzymes sont préservées. L'étape de séchage peut être faite sur un support inerte tel que la maltodextrine. On peut également prévoir des étapes ultérieures de pressage ou 30 d'encapsulation de l'extrait d'Helix aspersa en poudre pour fabriquer des compléments alimentaires pour l'homme. Les activités des enzymes cellulases et (3 1-3 glucanase sont évaluées par toute méthode bien connue de l'homme de l'art. L'extrait d'Helix aspersa selon l'invention comprend environ 75% de protéines, 12% de glucides, 3% de lipides et 8% de cendres. Le pH mesuré est à 7,1. Les analyses de solubilité ont montré que la poudre était totalement soluble dans l'eau. L'activité enzymatique de l'extrait selon l'invention n'est pas altérée par un passage à l'étuve à 70°C pendant 20 minutes. L'extrait produit par le procédé selon l'invention se présente sous forme d'une poudre fine de couleur blanc-crème. Cette poudre se caractérise par une odeur et une saveur neutres. Ainsi, l'extrait d'Helix aspersa selon l'invention se présente sous la forme d'une poudre : les poudres sont plus faciles à stocker à température ambiante, plus stable et plus facile à utiliser dans le cadre d'un procédé industriel. Par exemple, il suffit de diluer la poudre dans de l'eau purifiée pour obtenir une solution à pulvériser, par exemple à la surface de croquettes pour animaux. On peut donc concevoir des compositions alimentaires pour animaux comprenant entre 0,05 et 0,1% en poids d'extrait selon l'invention, par rapport au poids total de la composition alimentaire. Les propriétaires de chiens et de chats peuvent également utiliser la poudre pour saupoudrer directement la nourriture de leur animal et améliorer ainsi sa digestibilité. Il est à noter que le même procédé peut être appliqué pour la synthèse d'un extrait à partir d'escargots appartenant aux espèces Helix pomelo ou Helix lucorum, ou en mélangeant des escargots appartenant à n'importe laquelle de ces trois espèces pour fabriquer un extrait enzymatique selon l'invention. 5.2 Protocole de mesure des activités enzymatiques L'activité des enzymes cellulase et (3-1-3-glucanase est mesurée grâce au protocole suivant. L'extrait sec préparé conformément au paragraphe 5.1 est dilué au 1/5ème dans un tampon acétate à 100 mmol/L, pH 5.5. On prépare en parallèle une solution de carbaméthyl-cellulose à 10 g/L et une solution de lamiranine à 10 g/L, dans du tampon acétate 100 mmol/L, pH5.5. La laminarine a pour formule générale (C6H1205)n avec n compris entre 25 et 30. La solution de laminarine permet de doser l'activité de la (3 1-3 glucanase tandis que la solution de carbaméthyl-cellulose permet de doser l'activité de la cellulase. Brièvement, à 0,4 ml de solution de laminarine ou de carbaméthyl-cellulose, on ajoute 0,1 ml de l'extrait selon l'invention dilué. Les mélanges obtenus sont ensuite homogénéisés. On prépare ainsi plusieurs échantillons afin de réaliser une cinétique d'activité. La cinétique est faite sur 20 minutes, en incubant toutes les 5 minutes un échantillon à 40°C. Une fois la cinétique terminée, on ajoute 0,5 ml de DNS à chaque échantillon. Les tubes sont ensuite incubés pendant 5 min à 100°C puis brutalement refroidis dans un bain-marie d'eau froide. 2 mL d'eau déminéralisée sont ajoutés à chaque échantillon avant de lire l'absorbance au spectrophotomètre à 250 nm. En parallèle, une courbe d'étalonnage au glucose est réalisée en suivant le même protocole.15 REVENDICATIONS1. Extrait enzymatique obtenu à partir d'une espèce choisie parmi Helix aspersa, Helix pomatia, Helix lucorum ou leurs combinaisons présentant une activité cellulase et une activité (3 1-3 glucanase. 2. Extrait selon la revendication 1 présentant une activité enzymatique pour la cellulase comprise entre 630 et 750 u/g.sec et une activité enzymatique pour la (3 1-3 glucanase comprise entre 240 et 350 u/g.sec. 3. Extrait selon l'une des revendications 1 ou 2 se présentant sous la forme d'une poudre. 4. Composition comprenant l'extrait enzymatique selon l'une des revendications 1 à 3 pour l'amélioration de la digestion et/ou la réduction des flatulences chez le chien et/ou le chat, ladite composition comprenant entre 0,05% et 0,1% en poids dudit extrait enzymatique par rapport au poids total de la composition. 5. Composition comprenant l'extrait enzymatique selon l'une des revendications 1 à 3 pour l'amélioration de la digestion et/ou la réduction des flatulences chez l'homme, ladite composition comprenant entre 50% et 75% en poids dudit extrait enzymatique par rapport au poids total de la composition. 6. Procédé de fabrication d'un extrait enzymatique à partir d' escargots congelés choisis parmi les espèces Helix aspersa, Helix pomatia, Helix lucorum ou leurs combinaisons, ledit procédé comprenant les étapes de : a. préparation d'un mélange comprenant de l'eau purifiée et lesdits escargots congelés; b. broyage desdits escargots congelés dans ledit mélange ; c. extraction enzymatique en phase aqueuse à température ambiante ;d. séparation liquide-solide ; e. séchage par atomisation, lyophilisation ou flux d'air chaud. 7. Procédé selon la revendication 6 dans lequel l'étape de séchage est mise en oeuvre par flux d'air chaud dont la température est comprise entre 30-45°C. 8. Procédé selon la revendication 6 ou 7 comprenant en outre une étape de concassage desdits escargots avant l'étape de préparation du mélange ou avant l'étape de broyage. 9. Procédé selon l'une des revendications 6 à 8 comprenant en outre une étape de concentration par évaporation sous vide, après l'étape de séparation liquide-solide et avant l'étape de séchage. 10. Procédé selon l'une des revendications 6 à 9 comprenant en outre une étape de filtration après l'étape de séparation liquide-solide. 11. Procédé selon l'une des revendications 5 à 9 dans lequel l'étape d'extraction enzymatique en phase aqueuse est réalisée par agitation pendant 1 heure. 12. Procédé selon l'une des revendications 5 à 10 dans lequel l'étape de séparation liquide-solide est réalisée par centrifugation à une vitesse d'environ 4000 rpm. 13. Utilisation d'un extrait enzymatique obtenu à partir d'escargots choisi parmi les espèces Helix aspersa, Helix lucorum, Helix pomelo ou leur combinaison pour la fabrication d'une composition permettant de réduire le volume de gaz et/ou le volume des selles.30