FR 3003165 A1 20140919 FR 1352222 A 20130313 COMPOSITION CONTENANT DE LA SUPEROXYDE DISMUTASE ISSUE D' OLEA EUROPEAE La présente invention se rapporte à l'utilisation de superoxyde dismutase issue d'Olea europeae dans des compositions cosmétiques, alimentaires ou compléments alimentaires. L'invention concerne également l'utilisation de ces compositions en particulier pour lutter contre le stress oxydatif. Le corps humain est régi par un équilibre oxydant/antioxydant : dans les conditions physiologiques, l'organisme produit en permanence des molécules oxydantes, appelées radicaux libres, tels que les Espèces Réactives à l'Oxygène (ER0s). Ces molécules sont formées par une chaîne oxydative qui transforme les molécules d'Oz en anion superoxyde (02'). L'02" est la molécule oxydante la plus active sur les cellules. Il est ensuite transformé en radical hydroxyle (01-1'), un oxydant efficace capable de synthétiser de nombreux radicaux libres secondaires (R00'). Ceci induit un stress oxydatif sur l'organisme, avec des dommages non réversibles sur les cellules de l'organisme tels que peroxydation des lipides membranaires, dégradations mitochondriales, oxydations protéiques et altérations de l'ADN. Le stress oxydatif est impliqué dans de nombreux désordres de l'organisme, tels que les maladies pro-inflammatoires et cardiovasculaires, les désordres neurologiques, les fibroses, le diabète ou encore le vieillissement cellulaire. Pour combattre le stress oxydatif et ses effets délétères, les cellules disposent de plusieurs systèmes biologiques de défense et de réparation, mais ces systèmes ont des capacités limitées et ne peuvent pas faire face à une surproduction de molécules antioxydantes. Pour restaurer l'homéostasie de l'organisme, il faut alors faire appel à des mécanismes complémentaires de défenses antioxydantes. On connaît à cet effet deux types d'antioxydants : - les antioxydants primaires, qui agissent directement contre la formation d'Oz' avec actions complémentaires, comme la superoxyde dismutase (SOI)), la Gluthatione Peroxidase ou encore la Catalase ; - les antioxydants secondaires, qui agissent au milieu de la chaîne oxydative, en inhibant la formation des R00', comme par exemple les po lyphéno Is. Plusieurs principes actifs et compositions aux propriétés antioxydantes ont été développés ces dernières années. Parmi ces produits, on connaît notamment des extraits polyphénoliques, en particulier des extraits polyphénoliques issus de produits de l'olivier, notamment de la feuille d'olivier, développés et utilisés pour lutter contre le stress oxydatif pour diverses applications, en particulier pour des applications dans les domaines cosmétique, alimentaire et des compléments alimentaires. bans le domaine de la cosmétique en particulier, ces produits sont utilisés pour lutter contre le vieillissement cutané. Le vieillissement cutané est un phénomène inévitable résultant de deux procédés complémentaires : - le vieillissement intrinsèque ou vieillissement naturel, génétiquement programmé ; il est dû à l'âge, et se traduit par : o une diminution du contenu et de l'activité des constituants de la peau o une diminution des enzymes antioxydantes comme la Superoxyde dismutase, o une augmentation de la dégradation enzymatique des composants de la peau, o une perte de l'intégrité des parois vasculaires et une hyperperméabilité dermique, conduisant à une réduction de la nutrition et de l'oxygénation de la peau ; - le vieillissement extrinsèque, dépendant de facteurs environnementaux aléatoires, y compris le rayonnement solaire (UV), les substances addictives (l'alcool, le tabac), l'alimentation (déséquilibres, carences, suralimentation), les polluants chimiques, le contexte social (mode de vie stressant), etc. Tous ces facteurs engendrent une production d'EROs dans la peau. Les extraits polyphénoliques issus de l'olivier, lorsqu'ils sont appliqués sur la peau, jouent leur rôle d'antioxydants secondaires : ils inhibent la formation des R00', et participent ainsi à la prévention et à la lutte contre le vieillissement 15 cutané. Les extraits polyphénoliques sont utilisés dans le domaine alimentaire et des compléments alimentaires notamment pour leur action anti-oxydante directe ou indirecte, dans des applications pour prévenir et/ou lutter contre le stress oxydatif, le vieillissement cellulaire, ou les maladies métaboliques et 20 neurodégénératives. Toutefois, si ces produits naturels issus de l'olivier présentent certains avantages, ils ne sont pas entièrement satisfaisants en termes d'efficacité en particulier parce qu'ils n'agissent qu'au milieu de la chaîne oxydative et n'ont pas d'effet direct sur la lutte contre la formation d'Oz'. 25 Pour pallier ces inconvénients, la présente invention propose d'utiliser de la superoxyde dismutase issue d'Olea europeae. La superoxyde dismutase (SOD) est une enzyme antioxydante primaire, présente naturellement chez l'être humain. Il existe plus formes de SOD. Chez l'homme 3 isoformes ont été identifiées : la SOD1 localisée dans le cytosol, la SOD2, localisée dans la mitochondrie et la SOD3 localisée dans l'espace extracellulaire. La SOD est responsable d'une réaction de dismutation spontanée du radical superoxyde 02' en peroxyde d'hydrogène (H202) selon la réaction suivante : SOD 02* + 02* + 2H+ -> H202+ 02 Le peroxyde d'hydrogène ainsi formé est ensuite transformé en eau par l'action complémentaire de la Catalase et de la Gluthationperoxydase. Ainsi, l'action de la SOD permet de réduire la quantité d'Oz' présente dans l'organisme et donc d'inhiber à la base les dommages oxydatifs pouvant être induits par des molécules oxydantes dérivées d'Oz', tels le radical hydroxyle 10 OH' ou le peroxynitrite ON00-. On sait que plusieurs formes de SOD ont été identifiées dans différents compartiments cellulaires de divers végétaux, comme par exemple la pulpe de Citrus lemon, les feuilles de Plgum sativum, les aiguilles de Pinus sylvestris, les racines de Curcuma comosa, etc. En fonction de son origine et de son type, la 15 SOD présente des propriétés et une activité différente. De façon surprenante, la demanderesse a démontré que la SOD issue d'olivier présentait de très bonnes propriétés antioxydantes et des caractéristiques adaptées à une application cosmétique, alimentaire ou comme complément alimentaire. 20 Les extraits d'olivier en général et de feuilles d'olivier en particulier, utilisés actuellement en cosmétique et dans le domaine alimentaire ou des compléments alimentaires ne contiennent pas de SOD contrairement aux compositions visées dans la présente invention. Avantageusement, les compositions selon l'invention lorsqu'elles sont appliquées 25 sur la peau apportent une supplémentation en SOD suffisamment efficace pour permettre de contrer le déficit naturel en enzymes antioxydantes du vieillissement intrinsèque de l'organisme en général et de la peau en particulier, mais aussi de neutraliser la surproduction d'ER0s, notamment due au vieillissement extrinsèque. De même, les compositions selon l'invention lorsqu'elles sont ingérées apportent une supplémentation en SOD suffisamment efficace pour permettre de lutter contre de nombreux désordres de l'organisme, en particulier des maladies pro-inflammatoires et cardiovasculaires, les désordres neurologiques, les fibroses, le diabète et le vieillissement cellulaire. Selon un autre avantage, l'efficacité antioxydante des compositions selon l'invention est beaucoup plus importante que celle des compositions cosmétiques, alimentaires ou de compléments alimentaires, contenant des extraits d'olivier connus jusqu'alors, y compris des extraits polyphénoliques issus d'olivier. L'invention vise donc également l'utilisation des compositions contenant de la SOD issue d'Olea europeae comme compositions cosmétiques antioxydantes 15 destinées à âtre appliquées sur la peau ou comme compositions antioxydantes destinées à être ingérées. L'invention a aussi pour objet un procédé de traitement cosmétique de traitement de la peau, destiné à prévenir et/ou lutter contre le vieillissement cutané. Elle concerne également des compositions contenant de la SOD issue 20 d'Olea europeae pour leur application comme composition alimentaire antioxydante ou complément alimentaire antioxydant pour prévenir et/ou lutter contre de nombreux désordres de l'organisme en particulier pour prévenir et/ou lutter contre les maladies pro-inflammatoires et cardiovasculaires, les désordres neurologiques, les fibroses, le diabète et/ou le vieillissement cellulaire. 25 L'invention est à présent décrite en détails. Selon un premier aspect, l'invention a donc pour objet une composition cosmétique, alimentaire ou complément alimentaire contenant de la superoxyde dismutase issue d'Olea europeae. Préférentiellement, il s'agit d'une composition comprenant un extrait d'Olea europeae contenant de la SOD à raison d'au moins 100 UI/g de matière sèche de l'extrait, encore plus préférentiellement à raison d'au moins 500 UI/g de matière sèche de l'extrait. Par compositions alimentaires et/ou compléments alimentaires selon l'invention on entend les produits alimentaires courants tels que les boissons, les huiles, les yaourts, les biscuits, y compris les produits nutritionnels et les produits diététiques, ainsi que les compléments alimentaires avec une galénique répondant aux caractéristiques réglementaires en vigueur. Par extrait d'Olea europeae selon l'invention on entend toute molécule ou mélange de molécules obtenu à partir d' Olea europeae. Selon l'invention, la composition comprend au moins un extrait d'Olea europeae contenant de la SOD. Ledit extrait est de façon préférée présent dans la composition à au moins 0,05% en poids de matière sèche de la composition. La SOD utilisée dans les compositions selon l'invention est préférentiellement issue de feuilles de feuilles d'Olea europeae. De façon particulièrement adaptée, la SOD ou l'extrait contenant de la SOD est obtenue à partir d'Olea europeae par un procédé comprenant une étape de séchage à une température inférieure à 100°C, encore plus préférentiellement inférieure à 60°C. Le séchage peut par exemple être réalisé par lyophilisation, sous vide, par atomisation ou par séchage à air chaud. De même, on préfèrera un procédé d'obtention par extraction aqueuse, sans solvant organique. La SOD est en effet une molécule particulièrement fragile qui nécessite des conditions d'extraction douces. La SOD (ou l'extrait contenant la SOD) peut être obtenue par la mise en oeuvre d'un procédé comprenant au moins les étapes suivantes : - solubilisation dans l'eau de feuilles d'Olea europeae, - centrifugation pour récupérer le surnageant, - éventuellement purification, et - séchage à une température inférieure à 100°C. Les feuilles d'Olea europeae sont préférentiellement préalablement broyées avant solubilisation. Pour faciliter le broyage, les feuilles d'Olea europeae 5 peuvent être congelés. La solubilisation peut être idéalement réalisée à raison d'au moins 100 g de matière fraîche par litre d'eau. La centrifugation est préférentiellement réalisée entre 2 et 20 minutes à une vitesse comprise entre 4000 et 15000 tours par minute. 10 Le surnageant récupéré après centrifugation peut être séché directement. Le séchage doit être réalisé à une température inférieure à 100°C, préférentiellement par lyophilisation. La SOD (ou l'extrait contenant de la SOD) utilisé selon l'invention est préférentiellement associée à un véhicule approprié pour un l'usage visé : usage 15 externe pour une composition cosmétique, ingestion et assimilation par l'organisme pour une composition alimentaire ou un complément alimentaire. En particulier la SOD est préalablement microencapsulée au sein de microparticules biodégradables polymériques ou de substances lipidiques. Selon une variante, les compositions selon l'invention comprennent également un 20 ou plusieurs composés polyphénoliques ou au moins un extrait polyphénolique. Ces polyphénols sont préférentiellement issus d' Olea europeae, plus particulièrement de feuilles d'Olea europeae ou issus d'huiles obtenues à partir d'Olea europeae. L'extrait contenant de la SOD et l'extrait polyphénolique peuvent être identiques, c'est-à-dire que la SOD et les polyphénols sont obtenus selon un 25 même procédé d'extraction à partir d' Olea europeae. Cependant les procédés d'extraction de polyphénols sont souvent trop agressifs pour la SOD qui est généralement détruite ou inactivée. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté l'extrait contenant la SOD issu d' Olea europeae et l'extrait polyphénolique issu d' Olea europeae sont donc différents et obtenus séparément. La composition selon l'invention peut comprendre un extrait d'Olea europeae 5 contenant des polyphénols à raison d'au moins 0,2g pour 100 g de matière sèche de l'extrait ou 1mg pour 20g d'huile si l'extrait est sous forme huileuse (la quantité de polyphénols étant mesurée par spectrophotométrie à 280nm). Préférentiellement les composés polyphénoliques présents dans la composition selon l'invention sont choisis parmi l'hydroxytyrosol et ses dérivés comme le 10 complexe oleuropéine et le tyrosol. Avantageusement l'association de SOD antioxydant primaire, et de polyphénols, antioxydants secondaires, assure une action antioxydante optimale, efficace notamment contre le vieillissement cellulaire, en particulier le vieillissement cutané. Selon un autre avantage, les polyphénols ont également d'autres effets 15 bénéfiques, tels que le maintien de la vitalité et de l'intégrité de la peau. Les compositions selon l'invention doivent être adaptées pour une utilisation cosmétique. Les compositions cosmétiques selon l'invention se présentent sous une forme appropriée pour une administration par voie topique telle que notamment crème, 20 pommade, émulsion, gel ou lotion. Les compositions alimentaires et compléments alimentaires selon l'invention se présentent sous une forme appropriée pour une administration par voie orale telle que notamment poudre, huile, liquide. Selon un autre aspect, l'invention vise spécifiquement l'utilisation des 25 compositions contenant de la SOD issue d'Olea europeae pour prévenir le stress oxydatif pour une application cosmétique. En particulier, l'invention a pour objet l'utilisation d'une composition contenant de la SOD issue d'Olea europeae comme composition cosmétique antioxydante destinée à âtre appliquée sur la peau, notamment comme composition cosmétique destinée à prévenir et/ou lutter contre le vieillissement de la peau. A cet effet l'invention vise également un procédé cosmétique de traitement de la peau, destiné à prévenir et/ou lutter contre le vieillissement cutané, qui consiste 5 à appliquer sur la peau une composition contenant de la SOD issue d' Olea europeae. Selon un autre aspect l'invention a aussi pour objet l'utilisation des compositions contenant de la SOD issue d' Olea europeae pour prévenir le stress oxydatif par voie orale pour une application comme composition alimentaire ou complément 10 alimentaire. En particulier, l'invention vise une composition contenant de la SOD issue d' Olea europeae pour son application comme composition alimentaire antioxydante ou complément alimentaire antioxydant, en particulier pour prévenir et/ou traiter le vieillissement cellulaire, les maladies pro-inflammatoires et cardiovasculaires, les désordres neurologiques, les fibroses et 15 le diabète. L'invention est à présent illustrée par des exemples d'extraits et de compositions. I. Exemple d'extraits d'Olea europeae standardisés en SOD Les extraits sont obtenus par la mise en oeuvre des étapes suivantes : 20 - broyage de 5g de feuilles fraîches congelées d'Olea europeae pendant 60s - homogénéisation dans 50mL d'eau distillée - Ajustement du pH - Agitation pendant t minutes à T°C 25 - Centrifugation pendant 20 minutes à 4000tour.min-1 - Récupération du surnageant - Séchage par lyophilisation à 35°C 3003 165 10 Quatre extraits différents ont été obtenus : Extrait de feuille d'olivier Extrait Temps d'agitation (t) Température (T) pH Masse de matière sèche totale (g) Mg de protéines / g de matière sèche Activité 50D extrait UI/gM5 Extrait 30 min 4°C 4,5 1,27 6,14 2135 1 Extrait 1h15 min 14°C 7,8 1,07 60,35 3627 2 Extrait 2h 24°C 11,1 2,08 56,43 3971 3 Extrait 30 min 24°C 11,1 1,91 58,92 8883 4 Les extraits obtenus peuvent être notamment standardisés avec un support tel que la maltodextrine, de la feuille d'olivier séchée broyée, de la poudre d'olive, des grigons ou du marc issus du pressage des olives. L'extrait standardisé pourra alors avoir une concentration moins importante en SOD que l'extrait pur obtenu lors de l'extraction spécifique mais contiendra au moins 100 UI/g de matière sèche. II. Exemple d'extraits d'Olea europeae standardisés en polyphénols Les extraits sont obtenus par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - traitement par pressurage à froid d'olives mures (380kg) - acidification - clarification - filtration - margines d'olives - purification des polyphénols - distillation et concentration sous vide - standardisation - séchage par atomisation - récupération d'1kg d'extrait sec d' Olea europeae L'extrait obtenu contient plus de 5% de polyphénols. Il comprend notamment (mesures HPLC) : - plus de 6% d'hydroxytyrosol - du tyrosol (environ 1%). III. Exemples de compositions Exemple 1: composition cosmétique - crème de nuit : - extrait du point I 0,8% - extrait du point II 0,3% - conservateur et biosaccharide 0,7% - parfums 1,5% - phase grasse + phase aqueuse 96,7% La phase grasse est constituée d'un émulsionnant et d'un émollient. La phase aqueuse est constituée d'eau associée à un pidolate. La composition est obtenue par mélange des constituants dans les conditions classiques connues de l'homme du métier. Exemple 2 : composition cosmétique ou alimentaire : - extrait du point I 0,8% - huile d'olives riche en polyphénols 99,2% La composition est obtenue par mélange des constituants dans les conditions classiques connues de l'homme du métier. Exemple 3 : complément alimentaire : bans une gélule de 400 mg : - extrait du point I 25mg - extrait du point II 175mg - maltodextrine 200mg La composition est obtenue par mélange des constituants dans les conditions classiques connues de l'homme du métier. REVENDICATIONS1. Composition cosmétique alimentaire ou complément alimentaire contenant de la superoxyde dismutase issue d'Olea europeae. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait d'Olea europeae contenant de la superoxyde dismutase à raison d'au 5 moins 100 UI/g de matière sèche de l'extrait. 3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que l'extrait est présent à au moins 0,05% dans la composition. 4. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu'elle comprend également des composés polyphénoliques issus d'Olea 10 europeae. 5. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait d'Olea europeae contenant des composés polyphénoliques. 6. Composition selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce qu'elle 15 comprend un extrait d'Olea europeae contenant des composés polyphénoliques et en ce que cet extrait est différent de l'extrait contenant la superoxyde dismutase. 7. Composition selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce que l'extrait d'Olea europeae contenant de la superoxyde dismutase contient également des 20 composés polyphénoliques. 8. Composition selon l'une des revendications 4 à 7, caractérisée en ce que les composés polyphénoliques sont choisis parmi l'hydroxytyrosol et ses dérivés. 9. Composition selon l'une des revendications 4 à 8, caractérisée en ce que les composés polyphénoliques sont choisis parmi le complexe oleuropéine et le 25 tyroso I. 10. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la superoxyde dismutase est issue de feuilles d'Olea europeae. 11. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la superoxyde dismutase est obtenue à partir d'Olea europeae par un 5 procédé comprenant une étape de séchage à une température inférieure à 100°C. 12. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la superoxyde dismutase est obtenue par extraction aqueuse à partir d'Olea europeae. 13. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en 10 ce que la superoxyde dismutase est obtenue par la mise en oeuvre d'un procédé comprenant au moins les étapes suivantes : - solubilisation dans l'eau de feuilles d'Olea europeae éventuellement préalablement broyés, - centrifugation pour récupérer le surnageant, 15 - éventuellement purification, et - séchage à une température inférieure à 100°C. 14. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la superoxyde dismutase est microencapsulée. 15. Utilisation d'une composition selon l'une des précédentes revendications, 20 comme composition cosmétique antioxydante destinée à âtre appliquée sur la peau. 16. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 14 comme composition cosmétique destinée à prévenir et/ou lutter contre le vieillissement de la peau. 25 17. Procédé cosmétique de traitement de la peau, destiné à prévenir et/ou lutter contre le vieillissement cutané, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer sur la peau une composition selon l'une des revendications 1 à 14. 18. Composition selon l'une des revendications 1 à 14 pour son application comme composition alimentaire antioxydante ou complément alimentaire antioxydant. 19. Composition selon l'une des revendications 1 à 14 pour son application 5 comme composition alimentaire ou complément alimentaire pour prévenir et/ou traiter le vieillissement cellulaire, les maladies pro-inflammatoires et cardiovasculaires, les désordres neurologiques, les fibroses et le diabète.