FR 3004353 A1 20141017 FR 1353231 A 20130410 ASSOCIATION SYNERGIQUE DE L'ALANINE-GLUTAMINE, L'ACIDE HYALURONIQUE ET UN EXTRAIT D'AVOINE ET SON UTILISATION DANS UNE COMPOSITION DESTINEE A LA CICATRISATION ET LA REPARATION DES LESIONS CUTANEES La présente invention concerne une association synergique comprenant le dipeptide alanine-glutamine, l'acide hyaluronique ou un de ses sels et un extrait d'avoine, avantageusement destinée à la cicatrisation et la réparation des lésions cutanées. La cicatrisation est un ensemble de phénomènes locaux de défense, survenant après une agression : blessure, brûlure, acte dermatologique, intervention chirurgicale. De nombreux produits actifs en provenance du sang et du tissu sont libérés au cours de ces phénomènes : enzymes, protéines diverses, histamine, etc. La cicatrisation comprend plusieurs étapes, dont la première est la coagulation du sang, arrêtant le saignement. Les globules blancs venant du sang éliminent les cellules mortes. Puis des cellules survivantes prolifèrent et donnent naissance à un nouveau tissu, dont l'aspect dépend de la localisation de la lésion. La cicatrisation dépend de plusieurs facteurs, notamment nutritionnels, métaboliques, endocriniens ou médicamenteux ; on observe des retards de cicatrisation chez les sujets dénutris ou âgés, ou en cas de prise prolongée de corticoïdes. Avec l'âge, le processus d'amélioration de la cicatrisation et de récupération des lésions cutanées devient en effet moins performant, le processus est plus lent. Il existe toujours un besoin de proposer de nouvelles compositions pour une réparation rapide et esthétique des lésions 30 cutanées. Les propriétés pharmacologiques du dipeptide L-alanyl-Lglutamine administré par voie orale décrites dans la littérature sont nombreuses. Entre autres, le dipeptide L-alanyl-L-glutamine est utilisé per os comme supplément chez les sportifs pour faciliter la récupération après l'effort et après une intervention chirurgicale pour diminuer la durée de l'hospitalisation. Ce dipeptide est également indiqué en nutrition parentérale en complément à une solution standard d'acides aminés ou à d'autres mélanges utilisés en nutrition parentérale chez des patients de réanimation nécessitant un apport en glutamine. Dans la présente invention, les inventeurs ont montré de manière surprenante que le dipeptide L-alanyl-L-glutamine utilisé par voie topique possède une activité biologique sur la peau, basée sur ses propriétés régénérantes : action sur la migration des kératinocytes. De plus, les inventeurs ont également montré que cette 15 activité est fortement amplifiée lorsque ce dipeptide est associé à un extrait d'avoine et à de l'acide hyaluronique. En particulier, les inventeurs ont mis en évidence l'existence d'une synergie entre les trois composants que sont l'extrait d'avoine et plus spécifiquement l'extrait de plantules 20 d'avoine, l'acide hyaluronique ou un des sels et le L-alanyl-Lglutamine sur la migration des kératinocytes. Cette activité est particulièrement intéressante dans la régénération tissulaire et la cicatrisation des lésions cutanées. En effet, la migration des cellules épithéliales est une 25 étape importante du développement et du processus de réparation tissulaire, tels que l'embryogénèse et la cicatrisation. Les mécanismes d'initiation, de coordination et d'arrêt des mouvements des cellules, ne sont pas complètement élucidés, cependant, le rôle primordial de la migration cellulaire est bien 30 établi. Plusieurs agents susceptibles de stimuler ce processus cellulaire ont été caractérisés, telles que certaines protéines matricielles ou cytoplasmiques (SANTORO MM., GAUDINO G., Cellular and molecular facets of keratinocyte reepithelization during wound healing. EXP. CELL. RES. 304(1) : 274-286, 2005) (WERNER S., GROSE R. Regulation of wound healing by growth factors and cytokines. PHYSIOL. REV. 83(3) : 835-870, 2003) (STEFFENSEN B., AKKINEN L., LARIAVA H. Proteolytic events of wound healingcoordinated interactions among matrix metallopteinases (MMPs), integrins, and extracellular matrix molecules. CRIT. REV. ORAL BIOL. MED. 12(5) : 373-398, 2001). Lors de la cicatrisation cutanée et dans les affections inflammatoires chroniques dermatologiques, les kératinocytes sont « activés » pour entreprendre le processus de migration. Les 10 cellules voient alors leur phénotype influencé par les interactions avec la matrice extracellulaire d'une part et par les interactions cellules-cellules, d'autre part (MCMILLAN J.R., AKIYAMA M., SHIMIZU H. Epidermal basement membrane zone component : ultrastructural distribution and molecular 15 interactions. J DERM SC. 31 :169-177, 2003). Les kératinocytes de l'assise basale des berges d'une plaie, migrent sur la plaie et la recouvrent. En effet, les kératinocytes sont activés au contact de la fibronectine, du collagène dermique interstitiel (type 1), du collagène IV et de la laminine 5 de la lame basale. 20 Ils sont aussi régulés par certains facteurs de croissance polypeptidiques comme le TGFP, TGFa et l'EGF. De plus des cytokines (IL1, TNFa) et chémokines (RANTES et IL8) contribuent aussi à augmenter la vitesse de ré-épithélisation d'une plaie, suite à l'activation kératinocytaire (SZABO I., WETZEL M.A., 25 ROGERS TJ. Cell-Density-Regulated Chemotactic Responsiveness of Keratinocytes In Vitro. J INVEST DERMATOL 117 :1083-1090, 2001. LEGENDE DE LA FIGURE EN ANNEXE La Figure unique annexée illustre l'effet de l'extrait de plantules d'avoine / d'acide hyaluronique et de L-alanyl-L30 glutamine et de leurs associations sur la migration des kératinocytes. La présente invention a pour objet une association comprenant de la L-alanyl-L-glutamine, de l'acide hyaluronique ou un de ses sels et un extrait d'avoine. Le terme « L-alanine » se réfère à l'acide (S)-2- aminopropanoïque, également appelé acide a-aminopropionique. La L-alanine est un acide aminé neutre aux propriétés légèrement apolaires et hydrophobes. Le terme « L-glutamine » se réfère à l'acide 2- aminoglutaramique. La L-glutamine est un acide aminé semiessentiel, polaire non chargé et hydrophile. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, l'association comprend un acide hyaluronique ou un de ses sels, de haut poids moléculaire. De préférence, le poids moléculaire sera compris entre 50 000 et 750 000 Da, et de préférence entre 250 000 et 450 000 Da. Le sel de l'acide hyaluronique sera préférentiellement le hyaluronate de sodium. Selon un mode d'exécution de l'invention, le sel hyaluronate aura un poids moléculaire compris entre 50 000 et 750 000 Da, et de préférence entre 250 000 et 450 000 Da. Dans un mode de réalisation de l'invention, l'extrait d'avoine est obtenu à partir de plantules d'avoine, et 20 préférentiellement tel que décrit dans WO 2010/054879. Par « plantules d'avoine », on entend au sens de la présente invention l'avoine avant épiaison, c'est-à-dire au stade après germination (environ 2 semaines à 2 mois après germination) durant le stade de la montaison jusqu'à l'épiaison non comprise. 25 On appelle «montaison» la phase de croissance qui correspond à l'élongation de la tige et à la montée de l'épi en formation, avant floraison. Des métabolites secondaires sont décrits dans la demande W02010/054879 comme composants d'un extrait de plantule d'avoine : les flavonoïdes et les saponines de type avenacoside. 30 Ledit extrait est caractérisé par la présence de 2 à 15% de flavonoïdes et 0,2 à 2% d'avenacosides A et B. Le procédé de préparation de l'extrait d'avoine peut être comme suit : - séchage et broyage des parties d'avoine, de préférence les plantules d'avoine, - extraction en solvant organique choisi dans le groupe constitué des cétones, des esters, des alcools en Cl à C4 et des mélanges en toute proportion miscibles de ces solvants, et - centrifugation ou filtration. Avantageusement, le solvant organique du procédé selon l'invention est choisi dans le groupe constitué de l'acétone, la méthyl éthyl cétone, la méthylisobutyl cétone, l'acétate d'éthyle, un alcool en Cl à C4 et un mélange en toute proportion miscible de ces solvants. Le marc obtenu par l'étape d'extraction est ensuite séparé 15 de l'extrait par centrifugation ou filtration et la solution peut être plus ou moins concentrée jusqu'à l'obtention d'un extrait sec. Selon un mode d'exécution de l'invention, un support peut être rajouté lors de l'étape de séchage dans des proportions 20 massiques par rapport à la matière sèche extraite pouvant varier de 1 à 75%. Le support peut être un sucre comme la maltodextrine, le lactose, de la silice ou tout autre support cosmétologiquement acceptable. Dans un autre mode de réalisation de l'invention, la 25 solution est concentrée de façon à obtenir un mout comprenant de 60 à 80% de matière sèche, et de préférence 70% de matière sèche. Dans un mode de réalisation particulier, l'association selon l'invention est caractérisée en ce que le ratio massique acide hyaluronique / extrait d'avoine / L-alanyl-L-glutamine est 30 respectivement compris entre 2/1/3 et 2/1/5. Dans un autre mode d'exécution, le ratio d'acide hyaluronique, de l'extrait de plantules d'avoine et de L-alanylL-glutamine est un rapport en poids respectivement de 2/1/4. Dans un autre mode de réalisation préféré, la composition selon l'invention comprend un ratio acide hyaluronique / extrait de plantules d'avoine / L-alanyl-L-glutamine respectivement de 2/1/4. Avantageusement, les compositions selon l'invention contiennent de la L-alanyl-L-glutamine à une teneur comprise entre 0,1 % et 1% en poids. Un autre objet de la présente invention concerne une nouvelle composition dermatologique ou cosmétique destinée à 10 accélérer la réparation cutanée afin de rétablir l'intégrité et la qualité de la peau. La composition selon l'invention comprend en tant que principe actif dermatologique ou cosmétique l'association d'acide hyaluronique, d'extrait d'avoine et de L-alanyl-L-glutamine ci- 15 dessus mentionnée et comprend en outre au moins un excipient dermatologiquement ou cosmétiquement acceptable. Dans un mode de réalisation préférée de l'invention, la composition est destinée à une application topique. Les excipients dermatologiquement (pharmaceutiquement) ou 20 cosmétiquement compatibles peuvent être tout excipient parmi ceux connus de l'homme de l'art en vue d'obtenir une composition pour l'application topique sous forme d'un lait, d'une crème, d'un baume, d'une huile, d'une lotion, d'un gel, d'un gel moussant, d'une pommade, d'un spray, etc. 25 Dans un mode de réalisation préféré, la composition sera sous forme d'une crème, d'une pommade. Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention comprend au moins un autre principe actif. Par « principe actif » selon l'invention, on entend toute 30 substance ayant des propriétés dermatologiques ou cosmétiques. Cet autre principe actif pourra notamment être sélectionné dans le groupe comprenant des agents cicatrisants, apaisants, antiprurit, anti-âge, antirides, anti-radicalaires, anti-UV, des agents stimulants la synthèse de macromolécules dermiques ou le métabolisme énergétique, des agents hydratants, antibactériens, antifongiques, anti-inflammatoires, anesthésiques. Préférentiellement, on utilisera des agents cicatrisants et/ou apaisants. Enfin, un autre objet de la présente invention vise l'utilisation des compositions à base de l'association d'acide hyaluronique, d'extrait d'avoine et de L-alanyl-L-glutamine pour le traitement et la cicatrisation des lésions cutanées. La présente invention porte, en outre, sur une association 10 d'acide hyaluronique, d'extrait de plantules d'avoine et de Lalanyl-L-glutamine selon l'invention pour la préparation d'une composition destinée à favoriser la migration kératinocytaire. La composition selon l'invention est destinée aux soins des peaux lésées: 15 - suite à des actes / traitements invasifs : actes chirurgicaux (exérèses, shavings) avec ou sans suture, cryothérapie, laser ablatif, peelings moyens ou forts, mésothérapie, curetage. - en post traumatique lors de coupures ou brulures superficielles - suite à des actes superficiels (non invasifs) nécessitant un 20 produit cicatrisant qui accélère la récupération cutanée, utilisable au long cours (jusqu'à réparation complète de la peau). suite à une altération extérieure légère: écorchures superficielles, coup de soleil. 25 Le traitement des lésions de la peau et des muqueuses selon l'invention pourra notamment comprendre le traitement des coupures, des sutures, des écorchures, des éraflures, des égratignures, des cicatrices post-chirurgie ou post-acte de dermatologie esthétique, des brûlures superficielles, des coups 30 de soleil. La présente invention porte, en outre, sur l'utilisation d'une composition cosmétique selon l'invention destinée à l'amélioration de la cicatrisation et de la réparation cutanée. Ne sont pas concernées par la présente invention les cicatrices pathologiques telles que les cicatrices chéloïdiennes (post lésionnelles ou spontanées) et les cicatrices hypertrophiques. En effet, la formation de chéloïdes résulte d'un processus de cicatrisation anormal avec une phase proliférative prolongée et une phase de remodelage retardée. Les cicatrices chéloïdes sont des anomalies d'une production excessive de collagène par les fibroblastes et témoignent d'une atteinte au niveau du derme. Les chéloïdes croissent et s'étendent progressivement au- delà de la région de la plaie, ce qui cliniquement les distingue des cicatrices hypertrophiques qui, après une phase de croissance limitée à la zone de la plaie, se stabilisent. L'invention sera mieux comprise à la lecture des résultats ci-dessous qui l'illustrent sans en limiter la portée. EVALUATION PHARMACOLOGIQUE sur la migration des kératinocytes Ce test avait pour objectif d'évaluer l'effet de l'acide hyaluronique, de l'extrait de plantules d'avoine, de la L-alanylL-glutamine et de leurs associations sur la migration des 20 kératinocytes à l'aide du kit de migration cellulaire Oris Cell Migration Assay (Platypus Technologies). Matériel biologique La lignée de kératinocytes humains HaCaT, spontanément immortalisés, fréquemment citée comme modèle de référence dans la 25 littérature a été utilisée. Protocole de migration cellulaire Le protocole utilisé pour l'étude de la migration cellulaire repose sur l'utilisation d'un kit 96 puits, Oris Cell Migration Assay (Platypus technologies TEBU), permettant la 30 miniaturisation et la quantification de ce processus cellulaire. Le principe de ce test consiste à étudier la migration cellulaire vers le centre du puits de la plaque de 96 puits. Il consiste à placer un stoppeur dans des puits, afin de créer une zone de détection de 2 mm de diamètre. Puis de retirer les stoppeurs une fois que les cellules ont bien adhéré à la surface autour de ceux-ci, et ainsi, de permettre aux cellules de migrer vers la zone de détection. Les plaques sans les stoppeurs et avec les actifs sont mises à incuber à 37°C pendant 24 heures dans du 5 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) 0% SVF (sérum de veau foetal). La quantité de cellules situées dans la zone où il y avait le stoppeur est analysée afin d'évaluer la migration des cellules. Un cache permet de visualiser et de comptabiliser uniquement les cellules situées dans cette zone. Pour chaque 10 condition, la moyenne est réalisée sur 6 à 8 puits. Les cellules ont été incubées dans du milieu sans SVF. Les produits testés - EGF : 33 ng/ml, - extrait de plantules d'avoine : 10 ou 30 pg/ml, 15 Préparation de l'extrait : Extraire 10 g de plantules broyées avec 100 ml de solvant d'extraction acétone / eau (80/20) (v/v). Filtrer et rincer le marc avec le solvant d'extraction. Evaporer l'acétone et reprendre la phase aqueuse. 20 Filtrer. Concentration par séchage jusqu'à l'obtention d'un extrait sec. - hyaluronate de sodium (poids moléculaire 250-450 kDa): 20 ou 60 pg/ml, - L alanyl L glutamine : 40 ou 90 pg/ml. 25 Analyse des résultats Les résultats ont été analysés avec BioAssay et sont exprimés : - En intensité de fluorescence (IF), proportionnelle à la quantité des cellules ayant migré. 30 - En pourcentage d'activité par rapport au témoin 0% SVF IF traité X 100 IF témoin 0% SVF Analyses statistiques Des analyses statistiques par le test de Dunnett ont été réalisées sur les valeurs brutes de migration. Ce test donne alors des valeurs de « p value » caractérisant la significativité des résultats obtenus pour les différentes conditions. Le degré de significativité a été fixé à p 0,05 (non significatif). Résultats Les résultats à différentes concentrations de l'effet de l'extrait de plantule d'avoine, de l'acide hyaluronique et de la L-alanyl-L-glutamine, seuls ou en association sur la migration des kératinocytes sont indexés dans les tableaux 1 et 2 puis représentés sur la figure unique. Les valeurs de l'intensité de fluorescence représentées sur cette courbe correspondent à une moyenne de 3 mesures effectuées lors de 3 expériences indépendantes. En présence de DMEM et 0% SVF, le contrôle positif des expériences EGF induit bien la migration des kératinocytes. Dans ces conditions expérimentales, l'extrait de plantules d'avoine (10 ou 30 pg/ml) seul et le hyaluronate (20 ou 60 pg/ml) seul n'ont pas d'effet significatif sur la migration des kératinocytes. Leur association semble en revanche montrer une tendance à l'augmentation de la migration : +45% ou +27% par rapport au témoin en fonction des concentrations testées (tableaux 1 et 2). La L-alanyl-L-glutamine seule induit la migration des kératinocytes de façon concentration-dépendante. Ces inductions sont mêmes plus importantes qu'avec le contrôle positif EGF. Les associations des 3 actifs - extrait de plantules d'avoine, acide hyaluronique et L-alanyl-L-glutamine - induisent de façon très importante et statistiquement significative la migration des kératinocytes. Les tableaux 1 et 2 et la figure en annexe montrent que ces inductions sont statistiquement significatives par rapport au témoin, mais elles le sont aussi par rapport à l'extrait de plantules d'avoine et à l'acide hyaluronique seuls ou par rapport à leur association. La Figure unique annexée illustre l'effet de l'extrait sec de plantules d'avoine (ES), de l'acide hyaluronique (AH) de la Lalanyl L-glutamine (A-G) et leurs associations sur la migration des kératinocytes. Les pourcentages correspondent aux pourcentages d'activité supplémentaires par rapport au témoin. Tableau 1 : Effets de l'extrait sec de plantules d'avoine (ES), de l'acide hyaluronique (AH), de la L-alanyl-L-glutamine (A-G) et leurs associations sur la migration des kératinocytes. DS : Déviation standard, **p Groupes Concentration Moyenne ± DS o Migration Témoin 1729 ± 384 100 EGF 33 ng/ml 3553 ± 1556 301 * ES 30 pg/ml 1386 ± 226 62 AH 60 pg/ml 1735 ± 488 101 A-G 90 pg/ml 2586 ± 1092 194 ES + AH 30 + 60 pg/ml 1152 ± 541 127 ES + AH + A-G 30 + 60 + 90 pg/ml 2877 ± 1024 317 ** Par conséquent une association d'extrait de plantules d'avoine, d'acide hyaluronique ou un de sels et de L-alanyl-L- glutamine augmente de façon synergique la migration des kératinocytes. Ces résultats confirment l'intérêt d'utiliser une telle association dans une composition dermatologique ou cosmétique cicatrisante. 20 EXEMPLE DE COMPOSITION : émulsion huile dans eau Pourcentage Fonction Phase aqueuse Eau QSP100% Extrait d'avoine obtenu suite à une extraction 0.1 - 3% Actif acétonique, filtration, et concentration jusqu'à obtention d'un mout à 70% de matière sèche hyaluronate de sodium de poids moléculaire 250- 400kDa 0.05 - 1% Actif L-Alanyl-L-glutamine 0.1 - 1% Actif Glycérine 1 - 30% Humectant Hexylène glycol 0.1 - 7% Glycol Phase Cétéaryl glucoside 0.1 - 1% Emulsionnant lipophile Cétéaryl alcool 0.9 - 4% Emulsionnant Stearic acid 0.5 - 4% Facteur de consistance Glycéryl stéarate 0.1 - 4% Facteur de consistance Huile végétale 0.1 - 10% Emollient Butyrospermum ParkII 0.1 - 10% Emollient (Shea) Butter Silicone 0.1 - 5% Emollient5 REVENDICATIONS1. Association comprenant de la L-alanyl-L-glutamine, de l'acide hyaluronique ou un de ses sels et un extrait d'avoine. 2. Association selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'acide hyaluronique se présente sous la forme de fragments de hyaluronate de sodium. 3. Association selon la revendication 2, caractérisée en ce que le poids moléculaire des fragments de hyaluronate est compris entre 50 000 et 750 000 Da. 4. Association selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l'extrait d'avoine est obtenu à partir de plantules d'avoine. 5. Association selon la revendication 4, caractérisée en ce que le ratio massique acide hyaluronique / extrait de plantules d'avoine / L-alanyl-L-glutamine est respectivement compris entre 2/1/3 et 2/1/5. 6. Association selon la revendication 5, caractérisée en ce que le ratio acide hyaluronique /extrait de plantules d'avoine / L-alanyl-L-glutamine est un rapport en poids respectivement de 2/1/4. 7. Association selon l'une des revendications 1 à 6, pour son utilisation topique destinée à favoriser la migration kératinocytaire. 8. Association selon l'une des revendications 1 à 6, pour son utilisation topique destinée à traiter les lésions cutanées. 9. Association selon la revendication 8, caractérisée en ce que les lésions cutanées sont des lésions cutanées normales non pathologiques. 10. Association selon l'une des revendications 1 à 6, pour son utilisation topique destinée à améliorer la cicatrisation et la récupération cutanées. 11. Composition dermatologique ou cosmétique comprenant à titre de principe actif une association selon l'une desrevendications 1 à 6, avec au moins un excipient dermatologiquement ou cosmétiquement acceptable. 12. Composition selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle contient de la L-alanyl-L-glutamine à une teneur comprise entre 0,1 % et 1% en poids. 13. Composition selon l'une des revendications 11 et 12, pour son utilisation dans le traitement des coupures, des sutures, des écorchures, des éraflures, des égratignures, des cicatrices post-chirurgie ou post-acte de dermatologie esthétique, des brûlures superficielles, des coups de soleil.