FR 3003762 A1 20141003 FR 1352791 A 20130328 PREPARATION A BASE D'UNE BIOMASSE ALGALE, SON PROCEDE D'OBTENTION ET SES APPLICATIONS TOPIQUES DANS LES DOMAINES DU THERMALISME ET DE LA COSMETOLOGIE La présente invention concerne une préparation à base d'au moins une algue, son procédé d'obtention et ses applications topiques dans les domaines du thermalisme et de la cosmétologie, applications liées aux propriétés biologiques et/ou pharmacologiques de cette préparation. De nombreux travaux montrent l'intérêt des algues cyanophycées ou cyanobactéries naturellement présentes dans les sources et émergences d'eaux minérales naturelles. Elles sont utilisées sous des formes très diverses d'extraits, de fractions purifiées, seules ou associées à d'autres composés. Elles constituent un élément actif des boues thermales utilisées à des fins thérapeutiques dans la station d'origine de l'eau minérale. Ces boues sont à base d'un substrat argileux ou limoneux, imbibé d'eau minérale et comportent une biocénose algale et bactérienne. A titre d'exemples de boues thermales, on citera la boue thermale « TERDAX, le péloïde de Dax » qui a établi la réputation des établissements thermaux de la station de Dax qui l'exploitent pour des soins de rhumatologie dans le cadre d'une cure thermale. Le brevet français n°2 710 921 décrit le procédé de préparation des boues thermales, les boues obtenues et leurs applications, mis en oeuvre à Dax. Les algues entrant dans la composition de cette préparation correspondent à la flore algale et bactérienne qui se développe naturellement dans les eaux thermales de Dax, riches en ions thérapeutiquement actifs, dès lors que les eaux arrivent l'émergence en présence de lumière. Cette flore spécifique est adaptée à la température élevée de l'eau, à sa minéralisation caractéristique et aux conditions locales d'éclairement naturel. Le brevet français n°2 710 921 décrit les espèces entrant dans la composition des boues thermales associant cyanophycées (ou cyanobactéries), chlorophycées et diatomées. Ce brevet décrit aussi très précisément le procédé de culture utilisé pour l'obtention de ces algues à grande échelle, leur récolte et leur mode de conservation. Ainsi, ce procédé comporte le ruissellement en continu sous lumière naturelle et/ou artificielle de l'eau minérale de Dax, constituant un milieu nutritif de culture des algues, à une température appropriée pour le développement de celles-ci, sur un support de culture en plan incliné. Les souches d'algues sont ensemencées sur ce support ou sont apportées par l'eau utilisée qui est avantageusement l'eau hyperthermale dont la température est supérieure à 45°C. Les algues sont récoltées par raclage de la surface de la culture, égouttées puis essorées par centrifugation. A des fins de conservation, ces algues sont congelées à basse température, pour être ensuite utilisées pour l'élaboration de la boue thermale « TERDAX, le péloïde de Dax ». Ce péloïde, utilisé dans les établissements thermaux de l'agglomération dacquoise, est obtenu au terme d'une maturation particulière réalisée, de préférence, en anaérobiose, en présence de bactéries sélectionnées. Cette opération vise en particulier à induire la formation de composés réduits du soufre, qui confèrent au péloïde une couleur noirâtre et une odeur caractéristique. La Demanderesse a recherché un nouvel actif destiné à diverses applications topiques, présentant des caractéristiques organoleptiques agréables, notamment sur le plan olfactif, sans perdre l'efficacité liée l'utilisation de la flore thermale totale. L'objectif était donc d'utiliser, non pas un extrait d'algue, mais le totum de l'algue ou biomasse algale totale comprenant l'ensemble de la flore sans éliminer par fractionnement ou séparation des membranes ou des organites cellulaires insolubles et présentant l'ensemble des propriétés de la flore algale dont les effets sont reconnus. Les recherches de la Demanderesse l'ont conduite à découvrir des propriétés inattendues de l'association du totum d'au moins une algue avec au moins un sel soluble de cuivre, avantageusement à une concentration choisie afin d'accroître l'activité de chacun des deux constituants, les propriétés de cette association de la biomasse algale totale avec un sel soluble de cuivre pouvant alors être mises à profit dans les applications classiques, à savoir dans le domaine pharmaceutique, en particulier en thermalisme pour des soins en rhumatologie, et dans les domaines para-médical et dermo-cosmétologique. Les essais réalisés par la Demanderesse ont montré, d'une part, une parfaite acceptabilité du produit et une très nette amélioration de l'agrément de l'utilisateur, et, d'autre part, une efficacité très avantageuse de la nouvelle association dans l'ensemble des applications citées ci-dessus. Par la demande de brevet français n°2 849 596, on connaît une composition renfermant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un u-hydroxyacide, au moins un sel de cuivre, au moins un sel de zinc, au moins un extrait d'algue et au moins un halogénoalkynyl carbamate. Cette association obligatoire de quatre actifs aux effets complémentaires est destinée au traitement des peaux grasses et de l'acné par des actions kératolytique et antiseptique. L'extrait d'algue utilisé est un extrait cytosolique. La préparation selon l'invention diffère entre autres de cette composition connue par la combinaison de deux constituants actifs seulement et par l'utilisation d'une biomasse algale totale et non d'un extrait. La présente invention a donc pour objet une préparation à base d'au moins une algue caractérisée par le fait qu'elle comporte, dans un milieu à base aqueuse, un 10 mélange de : (a) au moins une biomasse algale totale ; et (b) au moins un sel de cuivre soluble dans ledit milieu. La ou les algues de la ou des biomasses algales totales (a) sont avantageusement des algues thermophiles 15 choisies parmi les algues marines, les algues d'eau douce ou les algues sélectionnées par la température spécifique des eaux minérales. En particulier, la ou les algues de la ou des biomasses algales totales (a) appartiennent aux familles 20 suivantes: les Cyanophycées ou Cyanobactéries, notamment de l'ordre Chroococcales, telles que Chroococcus minutus et Synechococcus elongatus, ou de l'ordre Oscillatoriales, telles qu'Oscillatoria formosa, Oscillatoria germinata, 25 Oscillatoria granulata, Phormidium ambigum, Phormidium autumnale, Phormidium corium, Phormidium luridum, Phormidium tenue, Phormidium uncinatum, Phormidium valderianum, Anabaena sp., Anabaena constricta, Anabaena variabilis, Nostoc sp., Cylindrospermum stagnale, 30 Mastigocladus laminosus, Mastigocladus laminosus forma anabaenoides, Stigonema sp., Calothrix thermalis ; les Chlorophycées, notamment de l'ordre Volvocales, de l'ordre Ulothricales, telles qu'Hormidium crassum, ou de l'ordre Chloroccales, telles que Scenedesmus quadricauda, Scenedesmus acutiformis, Scenedesmus obliquus, Ankistrodesmus falcatus ou Micractinium pusillum ; - les Diatomées, notamment de l'ordre Centrales, telles que Cyclotella sp. ou Nalosira varians ou de l'ordre Pennales, telles que Nitzschia palea, Nitzschia thermalis, Pinnularia interrupta forma minutissima, Hantzchia amphioxys, Amphora hosatica. De façon tout particulièrement préférée, la ou les algues de la ou des biomasses algales totales (a) peuvent être choisies parmi les algues de la flore algale qui se développe naturellement dans les eaux thermales de Dax dès lors que les eaux arrivent à l'émergence en présence de lumière, et notamment les algues de l'eau minérale de Dax, obtenues par ruissellement en continu sous lumière naturelle et/ou artificielle de l'eau minérale de Dax, à la température de développement desdites algues, sur un support de culture en plan incliné ; culture des souches desdites algues apportées par ladite eau minérale de Dax et/ou ensemencées sur ledit support ; récolte desdites algues par raclage de la surface de la culture, égouttage et essorage par centrifugation. Dans la préparation selon l'invention, la ou les biomasses algales totales (a) peuvent se présenter sous une forme qui est débarrassée d'une flore bactérienne naturelle interférente et qui est microbroyée notamment à une taille moyenne de particule ne dépassant pas 50 pm, en particulier ne dépassant pas 5 pm, étant notamment de 1 à 5 pm. La ou les biomasses algales totales (a) peuvent se présenter sous la forme d'une suspension dans un véhicule stabilisant la ou les biomasses, entrant dans la constitution dudit milieu à base aqueuse, et avantageusement solubilisant au moins en partie le ou les sels de cuivre (b), ledit véhicule étant notamment le glycérol. Le ou les sels de cuivre (b) peuvent être choisis 5 parmi les sels non toxiques de cuivre et d'acides organiques, tels que l'acétate de cuivre, le butyrate de cuivre, le citrate de cuivre, le tartrate de cuivre, le salicylate de cuivre, le glycinate de cuivre, le lactate de cuivre ou le gluconate de cuivre, en particulier l'acétate 10 de cuivre et le gluconate de cuivre, et d'acides minéraux, tels que le chlorure de cuivre, le bromure de cuivre, le nitrate de cuivre ou le sulfate de cuivre. Parmi les sels de cuivre, on peut mentionner en particulier l'acétate de cuivre et le gluconate de cuivre 15 en raison de leur tolérance locale et de l'absence d'action irritante topique. Le ou les sels de cuivre (b) peuvent par ailleurs être associés à au moins un acide, tel que l'acide lactique, dans une quantité permettant d'ajuster le pH de 20 la composition à une valeur inférieure à 7 et d'empêcher la formation de dérivés du cuivre insolubles en milieu alcalin. Egalement, la ou les biomasses algales totales (a) peuvent être en suspension dans le milieu à base 25 aqueuse, à raison de 5 à 50 % en poids par rapport au mélange (a) + (b) + milieu à base aqueuse, et le ou les sels de cuivre (b) peuvent être présents à raison de 0,05 à 10 g pour 100 g du mélange (a) + (b) + milieu à base aqueuse. La concentration maximale du ou des sels de cuivre 30 est conditionnée par la solubilité limite de ce sel ou de ces sels dans le milieu à base aqueuse. On précise ici que, par milieu à base aqueuse, on entend le milieu dans lequel la ou les masses algales totales sont en suspension et qui est constitué par de l'eau ou qui comprend de l'eau, ledit ou lesdits sels de cuivre étant dissous dans ledit milieu, en particulier dans l'eau constituant ou comprise dans ledit milieu. Conformément à un mode de réalisation particulier de la préparation selon l'invention, le milieu à base aqueuse contient de l'eau et du glycérol, et le glycérol représente 30 à 85 % en poids, en particulier 60 à 80 % en poids, dudit milieu à base aqueuse. La préparation selon l'invention peut notamment se présenter sous la forme d'une suspension stable, de couleur vert soutenu, d'une densité de 1,08 à 1,23, en particulier de 1,16 à 1,22, et d'un pH de 4,5 à 6,5, en particulier de 5 à 6. La présente invention porte également sur un procédé d'obtention de la préparation telle que définie ci-après, caractérisé par le fait que l'on ajoute au moins un sel de cuivre soluble dans un milieu à base aqueuse à au moins une masse algale totale en suspension dans ledit milieu à base aqueuse. On peut préparer la ou les biomasses algales totales en conduisant les étapes suivantes : (1) ruissellement en continu sous lumière naturelle et/ou artificielle de l'eau minérale de Dax, à la température de développement desdites algues, sur un support de culture en plan incliné ; (2) culture des souches desdites algues apportées par ladite eau minérale de Dax et/ou ensemencées sur ledit support ; (3) récolte desdites algues par raclage de la surface de culture, égouttage et essorage par centrifugation ; (4) décontamination et désodorisation desdites algues dans des conditions maintenant l'activité de la biomasse totale ; (5) microbroyage et micronisation de la ou des biomasses algales totales ainsi obtenues jusqu'à une taille de particule ne dépassant pas 5 pm. On peut conduire les décontaminations et désodorisation (point 4 ci-dessus) par mise en contact des algues récoltées, égouttées et essorées avec un agent de 10 décontamination consistant en peroxyde d'hydrogène. On peut effectuer le microbroyage (point 5 ci-dessus) de la ou des biomasses algales totales en présence d'un véhicule stabilisant la ou lesdites biomasses algales totales et utilisé dans des proportions comprises entre 30 15 et 85% en poids de ladite ou desdites biomasses algales totales, ledit véhicule entrant dans la composition dudit milieu à base aqueuse, et consistant notamment en glycérol. On peut ajouter le ou les sels de cuivre (b) dans la ou les biomasses algales totales (a) avant ou après la 20 micronisation, à raison de 0,05 à 10 g de sel(s) de cuivre (b) pour 100 grammes du mélange (a) + (b) + milieu à base aqueuse, de façon préférée avec ajustement du pH à une valeur inférieure à 7 par addition d'un acide tel que l'acide lactique. 25 La présente invention concerne aussi les applications topiques de la préparation telle que définie ci-dessus ou préparée par le procédé tel que défini ci-dessus en thermalisme et en cosmétologie. La présente invention porte également sur une 30 composition à usage topique comprenant la préparation telle que définie ci-dessus ou préparée par le procédé tel que défini ci-dessus. Conformément à un premier mode de réalisation, la composition à usage topique selon l'invention consiste en un bain de boue ou un soin de boue/enveloppement, comprenant, en dehors de ladite préparation, un véhicule facilitant l'application de cette dernière sur la peau, par exemple composé d'au moins un substrat argileux tel que le kaolin et le péloïde de Dax et/ou d'au moins l'un des composés parmi la paraffine, la lanovaseline, la méthylcellulose, l'hydroxyméthylcellulose, la carbométhylcellulose et/ou d'amidon de blé ou d'amidon de maïs et/ou d'eau, notamment d'eau thermale de Dax. Conformément à un second mode de réalisation, la composition topique selon l'invention consiste en une composition cosmétologique, telle que masque pour le visage, base pour masque pour le visage, crème de soin, en particulier crème de soin revitalisante, lait corporel, comprenant, en dehors de ladite préparation, un véhicule approprié pour les applications en cosmétologie. Un masque peut comporter, comme véhicule, au 20 moins un substrat argileux tel que le kaolin et le péloïde de Dax ; et, le cas échéant du sorbitol et/ou de l'amidon de blé et/ou de l'amidon de maïs. Une crème de soin, en particulier une crème de soin revitalisante, ou un lait corporel peut se présenter 25 sous la forme d'une émulsion qui comprend une phase huileuse et une phase aqueuse, par exemple 22 à 30 parties en poids de phase huileuse et 78 à 70 parties en poids de phase aqueuse pour 100 parties en poids de phase huileuse + phase aqueuse, et dans laquelle ladite préparation a été 30 incorporée, après formation de l'émulsion, une concentration comprise entre 0,05 et 5% en poids, de préférence entre 0,1 et 2% en poids de ladite émulsion. L'invention concerne également les applications de la préparation selon l'invention obtenue par le procédé selon l'invention comme principe actif dans des préparations pharmaceutiques pour l'homme et l'animal, notamment contre le vieillissement cutané et/ou articulaire, pour soigner ou prévenir les rhumatismes, ou des préparations para-médicales ou dermo-cosmétologiques, comme agent anti-vieillissement cutané. La préparation selon l'invention est un produit 10 naturel obtenu par un procédé de préparation recourant des traitements mécaniques et respectant l'environnement ; elle ne contient pas d'antiseptique de synthèse. Elle rassemble la totalité des éléments constitutifs de la biomasse algale sous la forme native 15 dans les proportions définies par la nature et présentant la synergie qui existe entre les propriétés pharmacologiques reconnues, en particulier : - polysaccharides membranaires et mucilages (alginates, carraghénanes par exemple) ainsi que d'autres substances 20 apparentées utilisées pour leur action antiinflammatoire, anti-thrombine ou anti-cancéreuse : - fraction hydrosoluble riche en constituants actifs : antiradicalaires, cytostimulants. A noter la présence des phycocyanines spécifiques des cyanobactéries qui 25 sont présentes en totalité ; - fraction liposoluble, constituée principalement des pigments chlorophylliens, des phaeophytines, des caroténoïdes, des tocotriénols dont les propriétés antioxydantes, anti-inflammatoires et antiradicalaires sont 30 bien connues. L'ensemble de ces propriétés justifie donc l'utilisation de cet actif particulièrement dans le domaine de la rhumatologie et de la dermo-cosmétologie, comme H traitement des modifications liées à l'âge et dans la lutte contre les effets du vieillissement. Rappelons aussi que le cuivre et ses sels ont des propriétés antiseptiques, algicides, fongicides et spermicides. Ce sont des constituants actifs des dispositifs intra-utérins. Les sels de cuivre présentent une action astringente sur les muqueuses. Le sulfate de cuivre est traditionnellement utilisé, associé avec le sulfate de zinc, dans les « eaux de Dalibour » comme protecteur cutané dans le traitement des irritations. Par voie orale, le cuivre est utilisé en oligothérapie. Le gluconate de cuivre Oligosol est prescrit en ampoules buvables (voire sublinguales) comme modificateur de terrain, en particulier au cours d'états infectieux et viraux, d'états grippaux et au cours d'affections rhumatismales inflammatoires (Vidal). Les Exemples suivants illustrent la présente invention sans toutefois en limiter la portée. Exemple 1 : Mode opératoire général d'obtention d'une biomasse algale totale Cet exemple décrit les conditions générales de l'obtention d'une biomasse algale totale à base d'algues thermales de Dax sous la forme d'une suspension dans le glycérol, également appelée « glycéré total d'algues thermales de Dax ». (1) Ruissellement de l'eau minérale de Dax On fait ruisseler en continu, sur un support de culture en plan incliné, sous lumière naturelle et/ou artificielle, de l'eau minérale naturelle de Dax constituant le milieu nutritif de culture à une température supérieure à 42°C, comprise entre 42 et 53°C. (2) Culture des souches On cultive les souches des algues apportées par ladite eau minérale de Dax (développement spontané). (3) Récolte des souches On récolte les algues par raclage de la surface de la culture, on les égoutte et on les essore par centrifugation. A des fins de stockage, ces algues sont congelées et conservées à basse température. (4) Décontamination et désodorisation ménagées des algues L'utilisation d'un tel système de culture en milieu ouvert, tel qu'il vient d'être décrit, présente un inconvénient : la présence d'une flore interférente accompagnant la biomasse attendue. Cette flore bactérienne naturelle est le plus souvent éliminée lors des phases successives des traitements connus des algues aboutissant un extrait purifié. Ces traitements connus, consistant habituellement en une filtration stérilisante ou en une ultrafiltration, permettent de supprimer les germes de contamination et 30 d'obtenir une fraction stérile. En contrepartie, ces extraits divers et variés, qui sont décrits dans la littérature ou exploités, ne peuvent revendiquer l'activité de la biomasse totale, puisqu'ils ne contiennent pas toutes les fractions insolubles de l'algue totale, notamment les organites cellulaires, les membranes auxquelles sont liés les composés biologiques actifs : chlorophylle, phaeophytines, phycocyanines, phycoérythrines et mucilages, en combinaison naturelle entre eux. Selon l'invention, il était nécessaire de conserver le totum de la biomasse algale, mais pour réduire ou supprimer la flore accompagnatrice indésirable des algues obtenues, il était cependant nécessaire de procéder à une phase de décontamination, laquelle devait être une décontamination ménagée. A cet effet, divers agents de décontamination par contact peuvent être ajoutés : alcool éthylique et/ou 15 alcool isopropylique, chlore actif, antiseptiques, sulfites. Le choix préféré s'est cependant porté sur un agent permettant d'obtenir efficacement, après traitement, une biomasse algale totale quasiment stérile et inodore, 20 sans altération des membranes, ni décoloration des pigments (chlorophylle notamment), et sans résidu d'antiseptique susceptible de réduire le caractère « naturel, sans conservateur chimique » du nouvel actif selon l'invention. Cet agent est le peroxyde d'hydrogène, qui a été 25 utilisé à une concentration choisie et pendant une durée choisie afin d'obtenir une efficacité optimale sans altération ou dégradation de la biomasse. La solution de décontamination est une dilution de peroxyde d'hydrogène telle que son activité exprimée en volumes d'oxygène est 30 comprise entre 1,5 et 6 volumes. La durée de contact est généralement comprise entre 1 et 24 heures. Les éventuelles traces résiduelles d'oxygène actif sont éliminées par simple rinçage à l'eau minérale de Dax, stérilisée par filtration sur une membrane de 0,2 pm de dimension de pore. (5) Microbroyage et micronisation La biomasse décontaminée est diluée dans un véhicule choisi pour sa bonne tolérance en usage topique et pour son effet solvant et stabilisant vis-à-vis des constituants de la biomasse algale. Ce diluant est le glycérol, substance naturelle d'origine végétale, utilisé dans les proportions comprises entre 30 et 85 % du poids de la biomasse. Il est ajouté à la biomasse décontaminée de façon à obtenir une masse fluide, homogène et stable. La suspension d'algues totales est broyée l'aide d'un mixer puis micronisée. Parmi les divers procédés de micronisation classiquement utilisés, a été retenu le traitement par ultrasons qui permet à la fois de rompre les membranes des parois cellulaires et d'homogénéiser la suspension sans provoquer de dénaturation ou de dégradation des constituants biologiques. Ce procédé impose toutefois d'opérer en circuit réfrigéré afin d'éviter les effets délétères possibles d'une élévation excessive de la température, au-delà de 40-45°C. Ainsi, la suspension obtenue est constituée de particules dont le diamètre n'excède pas 3 à 5 pm. L'ajout de sel de cuivre est réalisé au terme de cette opération de micronisation. Exemple 2 : Obtention de 10 kg de glycéré total d'algues thermales de Dax On a produit 10 kg d'un glycéré total d'algues thermales de Dax en procédant de la façon suivante : On a fait ruisseler en continu sous lumière naturelle et/ou artificielle de l'eau minérale naturelle de 5 Dax à une température comprise entre 42 et 53°C sur un support de culture en plan incliné. L'eau minérale de Dax constituait le milieu nutritif des souches d'algues ensemencées sur ce support ou apportées par l'eau utilisée. 10 On a récolté les algues par raclage de la surface de culture. 2,2 kg de biomasse d'algues thermales de Dax ont été récupérés et placés dans un tamis de 0,5 mm d'ouverture de maille et lavés abondamment avec de l'eau minérale 15 naturelle de Dax (20 à 25 litres environ). La biomasse a été égouttée et essorée par légère pression. Cette biomasse lavée a été placée dans une cuve munie d'un couvercle et d'un agitateur. On a ajouté dans la cuve une solution de 20 décontamination consistant en une solution de peroxyde d'hydrogène titrant entre 3 et 6 volumes et on a maintenu le contact à température ambiante, avec une légère agitation, pendant une durée suffisante pour obtenir des décontaminations - désodorisations ménagées, en évitant 25 toute altération, notamment, une décoloration, de la biomasse algale totale. Cette durée était comprise entre 1 et 24 heures. La présence d'une mousse à la surface de la masse algale a témoigné de la libération d'oxygène actif sous la forme de bulles gazeuses et a manifesté l'activité 30 de ce traitement. A la fin de cette opération, la biomasse d'algues totales a été recueillie sur un tamis préalablement stérilisé, de 0,2 mm d'ouverture de maille, rincé rapidement par de l'eau minérale de Dax filtrée sur une membrane stérilisante (environ 4 à 5 litres d'eau minérale) puis égouttée et essorée. A ce stade, la biomasse algale a pu être stockée 5 après congélation à basse température ou soumise au microbroyage. L'ensemble de ces opérations ainsi que le microbroyage final ont été réalisés dans le respect des règles d'hygiène et d'asepsie d'usage courant pour l'homme 10 du métier. On a réalisé le microbroyage de la façon suivante : 2kg de biomasse d'algues totales obtenus au terme de cette opération de décontamination-désodorisation 15 ménagées et donc quasiment stériles, ont été dilués dans 8 kg de glycérol d'origine végétale. Cette suspension a été broyée à froid à l'aide d'un mixer, puis soumise à l'action des ultrasons dans des conditions permettant d'obtenir au final des particules 20 dont le diamètre n'excédait pas 3 à 5 pm, en évitant tout échauffement de la masse, à savoir en maintenant la température inférieure à 40-45°C. On notera que ces résultats peuvent être obtenus au niveau du laboratoire avec un appareil de type Helscher 25 UP 400S qui permet de préparer des lots de 100 g de produit, et au niveau pilote et industriel, avec un appareil combinant l'action des ultrasons et de la pression. L'équipement de type UP 1000, de même marque, permet de traiter en recirculation des quantités de l'ordre 30 de 2 à 4 kg de produit. La réfrigération du circuit permet de limiter l'échauffement de la masse. Exemple 3 : Association de gluconate de cuivre au glycéré total d'algues thermales de Dax pour former une préparation de l'invention Après la micronisation, on a associé du gluconate de cuivre au glycéré total d'algues obtenu à l'Exemple 2. On peut noter que cette association aurait pu tout aussi bien être réalisée pendant la micronisation. Le gluconate de cuivre a été privilégié parmi les divers sels de cuivre envisageables, en raison des bons résultats des tests d'activité biologique décrits plus loin, et a été utilisé à la concentration de 2 grammes de gluconate de cuivre dans 100 grammes de glycéré. A titre de précaution, le sel de cuivre a été associé à de l'acide lactique afin d'ajuster le pH de l'association à une valeur inférieure à 7 de façon stabiliser la suspension et à éviter la formation de dérivés du cuivre insolubles en milieu alcalin. La préparation de l'invention ainsi obtenue 20 présentait les caractéristiques suivantes : - aspect : suspension stable de couleur vert soutenu - taille des particules : leur diamètre n'excède pas 5 pm - densité : voisine de 1,2 - pH : en dilution au 'A dans l'eau distillée, voisin de 25 4,5-5,5. Exemple 4 : Action de la préparation selon l'invention dans la prévention et le traitement des modifications tissulaires et biologiques. 30 Le présent exemple apporte la démonstration de l'action de la préparation selon l'invention dans la prévention et le traitement des modifications tissulaires et biologiques, notamment au niveau de la matrice tissulaire que constitue le tissu conjonctif. Le vieillissement de l'organisme entraîne des modifications inévitables, affectant notamment le tissu 5 conjonctif, structure ubiquitaire de soutien des tissus. Il affecte en particulier les articulations et la peau. Ce vieillissement se manifeste par des douleurs, une baisse de la motricité, et, au niveau de la peau, par une diminution de la tonicité du derme, une perte d'élasticité cutanée, la 10 formation de rides et l'empâtement du visage. A : La préparation selon l'invention présente un effet inhibiteur de l'activité de la métalloprotéase MMP-9 15 Il apparaît que l'un des paramètres communs déterminant l'ensemble de ces manifestations est la diminution de la synthèse du collagène et la réduction d'activité biologique des chondrocytes, situés dans les cartilages, et des fibroblastes, situés dans le derme. 20 La Demanderesse a pu démontrer que la préparation selon l'invention permet de renforcer la protection de la matrice tissulaire que constitue le collagène, en inhibant l'activité collagénase. Le test biochimique utilisé a consisté à analyser 25 l'activité MMP-9, métalloprotéase d'origine humaine, suivant le protocole ci-après. Al - Analyse biochimique de l'activité MMP-9 30 Les composés et leurs mélanges ainsi que la référence 0-phénantroline ont été pré-incubés en présence de MMP-9 pendant 10 minutes sur glace, puis un substrat fluorescent (Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2) a été ajouté. Les plaques ont ensuite été incubées pendant 2 heures à 37°C. Un contrôle du composé en présence du milieu réactionnel sans enzyme (mesure de l'autofluorescence) ainsi qu'un contrôle de l'absorption éventuelle de la 5 fluorescence par le composé (« quenching ») ont été réalisés en parallèle. Toutes les conditions ont été réalisées en n=3 hormis pour les contrôles qui ont été réalisés en n=2. A la fin de l'incubation, la fluorescence émise, à la suite de la dégradation du substrat, a été 10 mesurée par fluorimétrie à 328 nm et 393 nm sur SpectroMax Gemini, Molecular Devices. Les valeurs de fluorescence présentées dans le Tableau 1 ci-après correspondent à la valeur mesurée et corrigée de la fluorescence du composé seul. 15 Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition. On notera qu'en cas de « quenching », cet effet est pris en compte dans l'interprétation des résultats. 20 A2 - Traitement des données Les données brutes ont été transférées et traitées par le logiciel Excel de Microsoft. Les comparaisons intergroupes ont été réalisées à l'aide du 25 test T de Student bilatéral, non apparié. Les analyses statistiques peuvent être interprétées si n est supérieur ou égal à 5. Cependant, pour n inférieur à 5, les données calculées ne sont fournies qu'à titre indicatif. Les formules utilisées sont les suivantes : (Moyenne témoin +UV - Valeur) x 100 Pourcentage de protection - Moyenne témoin +UV - Moyenne témoin -UV 100 - (Valeur x 100) pourcentage d'inhibition - moyenne du témoin erreur standard de la moyenne : esm = écart-type (Sd) / n 1/2 L'erreur standard de la moyenne (esm) représente l'écart de la moyenne de l'échantillon par rapport à la moyenne de la vraie population. L'esm est calculé en divisant le Sd par la racine carrée de la taille de l'échantillon. Pourcentage de viabilité : viabilité % = (DO 10 composé / DO témoin) x 100 A3 - Résultats de l'effet sur l'activité enzymatique de la MMP -9 15 La référence O-phénanthroline, testée à 0,1 et 1 mM, a significativement inhibé l'activité enzymatique de la MMP-9. Ce résultat était attendu et valide l'essai. Les composés - biomasse algale totale et gluconate de cuivre - testés à 0,4 et 2 % (p/p) inhibent 20 significativement l'activité de la MMP-9. Une inhibition nette de l'activité de l'enzyme MMP-9 est aussi observée avec l'association des composés - biomasse algale totale + gluconate de cuivre. Dans ce cas, l'effet inhibiteur est supérieur à celui observé avec les 25 composés testés seuls, suggérant un effet additif potentiel entre ces deux composés. Les résultats figurent dans le Tableau 1 ci-après. 21 Tableau 1 : EFFETS DE LA BIOMASSE ALGALE TOTALE ET D'UN SEL DE CUIVRE ET DE LEUR ASSOCIATION SUR L'ACTIVITE DE LA MMP-9 Traitement Données de base Données normalisées Quenching Bruit de Composé testé Concentration MMP-9 fond MMP- Moyenne esm % esm Pn) Inhibition esm pn) Equzvalent MMP-9 # % (Equzvalent 9# _9 Témoin Témoin MMP-9) (UA) (UA) (UA) (UA) (UA) (%) (%) (%) (UA) Contrôle négatif 705 02 (Enzyme 731 752 02 1 1 0 0 *** 100 0 *** Inactivée) 756 4 12867 12115 Témoin 12552 752 11800 12052 131 100 1 - 0 1 12052 0 12992 12240 8645 7805 0,1 mM 7801 840 6961 7473 259 62 2 *** 38 2 *** 12734 0 0-phénan- 8492 7652 throline 1399 12 1 mM 1373 1387 02 15 10 0 0 *** 100 0 *** 9889 18 1420 34 22 Tableau 1 : EFFETS DE LA BIOMASSE ALGALE TOTALE ET D'UN SEL DE CUIVRE ET DE LEUR ASSOCIATION SUR L'ACTIVITE DE LA MMP-9 (suite 1) Traitement Données de base Données normalisées Quenching Bruit de Composé testé Concentration MMP-9 fond MMP- Moyenne m4p_9 esm % esm len) Inhibition esm pn) Equivalent MMP-9 # % (Equivalent 9# Témoin Témoin MMP-9) (UA) (UA) (UA) (UA) (UA) (%) (%) (%) (UA) 13236 12000 0,08% 13080 1236 11844 11931 46 99 0 ns 1 0 ns 12469 0 13185 11949 12744 10559 BIOMASSE ALGALE 0,4% 12484 2185 10299 10432 75 87 1 *** 13 1 *** 11652 3 TOTALE 12625 10439 10911 6732 2% 10813 4179 6634 6726 52 56 0 *** 44 0 *** 8717 28 10992 6813 23 Tableau 1 : EFFETS DE LA BIOMASSE ALGALE TOTALE ET D'UN SEL DE CUIVRE ET DE LEUR ASSOCIATION SUR L'ACTIVITE DE LA MMP-9 (suite 2) Traitement Données de base Données normalisées Quenching Bruit de Composé testé Concentration MMP-9 fond MMP- Moyenne esm % esm len) Inhibition esm pn) Equivalent MMP-9 # % (Equivalent 9# _9 Témoin Témoin MMP-9) (UA) (UA) (UA) (UA) (UA) (%) (%) (%) (UA) 13290 12408 0,08% 12687 882 11805 12016 196 100 2 ns 0 2 ns 12863 0 12719 11837 10690 9827 GLUCONATE *** *** DE CUIVRE 0,4% 10507 863 9644 9782 70 81 1 19 1 13218 0 10737 9874 6278 5414 2% 5824 864 4960 5074 173 42 1 *** 58 1 *** 12606 0 5710 4846 24 Tableau 1 : EFFETS DE LA BIOMASSE ALGALE TOTALE ET D'UN SEL DE CUIVRE ET DE LEUR ASSOCIATION SUR L'ACTIVITE DE LA MMP-9 (suite 3) Traitement Données de base Données normalisées Quenching Composé testé Concentration MMP-9 Bruit de MMP- Moyenne esm % esm le n) Inhibition esm pn) Equivalent MMP-9 # % (UA) fond 9 # _9 (UA) Témoin (%) (%) (%) (UA) Témoin (Equivalent (UA) (UA) MMP-9) (UA) MELANGE DES DEUX CONSTITUANTS (50/50) 0,08% / 0,08% 12729 1216 11513 11168 176 93 1 7 1 12204 0 12151 10934 12273 11057 0'4% / 0,4% 10660 2001 8659 8424 140 70 1 *** 30 1 *** 11327 6 10176 8175 10440 8439 2% / 2% 6064 2553 3510 3299 106 27 1 *** 73 1 *** 9847 18 5726 3173 5769 3215 # le bruit de fond des produits seuls (contrôle d'interférence) a été retranché aux valeurs brutes (1) : Seuil de significativité statistique ns : > 0,05, Non significatif * : 0,01 à 0,05, Significatif ** : 0,001 à 0,01, Très significatif *** : B2 - Traitement des données Les données brutes ont été transférées sous logiciel Excel de Microsoft et traitées selon la méthode 5 décrite dans l'étude A ci-dessus de l'activité de la MMP-9. B3 - Résultats de l'effet sur la production drH202 L'irradiation des cellules Jurkat par des UV A+B 10 induit une augmentation nette de l'intensité de fluorescence de la sonde DHR, traduisant une augmentation de la production drH202. Dans ces conditions, la référence, BHA testée à 100M, protège nettement et significativement les cellules de Jurkat de l'irradiation : 83% de 15 protection. L'induction d'un stress radicalaire par les ultra-violets et l'effet protecteur de la BHA étaient attendus et valident l'essai. Le composé gluconate de cuivre, testé à 0,5%, inhibe significativement la production de peroxyde 20 d'hydrogène par les cellules de Jurkat irradiées : 27 % de protection. Le composé biomasse algale totale testé entre 0,0001 et 0,05% n'a pas eu d'effet significatif sur la production de peroxyde d'hydrogène par les cellules de 25 Jurkat. Les résultats de l'essai figurent dans le Tableau 2. 27 Tableau 2 : EFFETS DE LA BIOMASSE ALGALE TOTALE ET DU SEL DE CUIVRE ET DE LEUR ASSOCIATION SUR LA PRODUCTION DE PEROXYDE D'HYDROGENE DANS LES CELLULES DE JURKAT IRRADIEES PAR DES UVA ET UVB Traitement Données de base Données normalisées Composés testés Concentration Intensité de fluorescence Moyenne esm % Témoin . esm pu) % esm pu) WPO WPO WPO irradié (%) Protection (%) Condition non Contrôle sans sonde 92 88 4 - irradiée 81 106 82 83 83 Témoin 1053 1184 1425 1332 1394 1342 1288 58 6 0 *** 100 0 * * * 28 Tableau 2 : EFFETS DE LA BIOMASSE ALGALE TOTALE ET DU SEL DE CUIVRE ET DE LEUR ASSOCIATION SUR LA PRODUCTION DE PEROXYDE D'HYDROGENE DANS LES CELLULES DE JURKAT IRRADIEES PAR DES UVA ET UVB (suite 1) Traitement Données de base Données normalisées Composés testés Concentration Intensité de fluorescence Moyenne (UA) esm % esm p(1) % esm p(1) (UA) (UA) Témoin (%) Protection (%) irradié Conditions irradiées Témoin - 24153 22521 816 100 4 - 0 4 UVA (2.6 J/cm2) + UVB (180 mJ/cm2) 21657 21754 BHA 100 1_1M 4931 4859 4784 22334 22787 14257 15298 4858 42 22 0 *** 83 0 *** 29 Tableau 2 : EFFETS DE LA BIOMASSE ALGALE TOTALE ET DU SEL DE CUIVRE ET DE LEUR ASSOCIATION SUR LA PRODUCTION DE PEROXYDE D'HYDROGENE DANS LES CELLULES DE JURKAT IRRADIEES PAR DES UVA ET UVB (suite 2) Traitement Données de base Données normalisées Composés testés Concentration Intensité de fluorescence Moyenne esm % esm pn) % esm P(I) (UA) (UA) (UA) Témoin (%) Protection (%) irradié Conditions irradiées BIOMASSE ALGALE TOTALE 0,0001% 22301 23880 899 106 4 ns -6 4 /1 S UVA (2.6 23924 J/cm2) + 25415 UVB (180 mJ/cm2) 0,0005% 13430 (2) 27314 3783 121 17 ns -23 18 /15 31096 23531 0,001% 21860 22284 252 99 1 ns 1 1 liS 22260 22731 0,05% 19627 21583 987 96 4 ns 4 5 ns 22334 22787 30 Tableau 2 : EFFETS DE LA BIOMASSE ALGALE TOTALE ET DU SEL DE CUIVRE ET DE LEUR ASSOCIATION SUR LA PRODUCTION DE PEROXYDE D'HYDROGENE DANS LES CELLULES DE JURKAT IRRADIEES PAR DES UVA ET UVB (suite 3) Traitement Données de base Données normalisées Composés testés Concentration Intensité defluorescence Moyenne esm % esm pn) % esm P(I) (UA) (UA) (UA) Témoin (%) Protection (%) irradié Conditions irradiées GLUCONATE DE CUIVRE 0,01% 21917 22046 82 98 0 ns 2 0 ns UVA (2.6 22197 J/cm2) + 22025 UVB (180 mJ/cm2 0,5% 16707 16828 349 75 2 ** 27 2 ** 16293 17484 31 Tableau 2 : EFFETS DE LA BIOMASSE ALGALE TOTALE ET DU SEL DE CUIVRE ET DE LEUR ASSOCIATION SUR LA PRODUCTION DE PEROXYDE D'HYDROGENE DANS LES CELLULES DE JURKAT IRRADIEES PAR DES UVA ET UVB Traitement Données de base Données normalisées % Composés testés Concentration Intensité de fluorescence Moyenne esm Témoin esm pn) % esm pn) irradié Protection (UA) (UA) (UA) (%) (%) 20259 0,01% / 0,1% 21808 21104 453 94 2 ns 7 2 ns MELANGE 21246 DES DEUX CONSTITUANTS 13591 0,05% / 0,5% 15586 14342 626 64 3 ** 39 3 ** Conditions irradiées 13849 UVA (2.6 J/cm2) + UVB (180 21881 mJ/cm2 0,0001% / 0,1% 20879 21850 552 97 2 ns 3 3 ns MELANGE 22791 DES DEUX CONSTITUANTS 13694 0,0005% / 0,5% 14257 14416 470 64 2 ** 38 2 ** 15298 (1) : Seuil de significativité statistique *** : 0,05, Non significatif (2) : Donnée invalidée : 0,01 à 0,05, Significatif nc : non calculable ** : 0, 001 à 0, 01, Très significatif xx : Ecart type L'association des deux composés : biomasse algale totale et gluconate de cuivre inhibe significativement la production de peroxyde d'hydrogène aux plus fortes concentrations testées (environ 39% de protection). Dans ces conditions, l'effet protecteur observé est supérieur à celui de composé gluconate de cuivre testé seul, suggérant ainsi un possible effet synergique entre les deux composés. Les deux études expérimentales A et B réalisées permettent d'établir l'intérêt exceptionnel de la préparation selon l'invention (association de biomasse algale totale et de sel de cuivre) dans la prévention et le traitement des modifications tissulaires et biologiques notamment au niveau de la matrice tissulaire qui constitue le tissu conjonctif. Les composés individuels : biomasse algale totale et sel de cuivre présentent un effet inhibiteur de l'activité de la MMP-9. Un effet anti-radicalaire est également mis en évidence pour le composé sel de cuivre, via une inhibition de la production d'H202 par des cellules Jurkat irradiées par des UV. L'association de ces deux composés permet également d'inhiber efficacement l'activité enzymatique de la MMP-9 et la production d'H202 par des cellules Jurkat irradiées. Il faut aussi noter que dans ces deux cas, l'effet de l'association est supérieur à celui des composés testés individuellement. Les effets de cette association sur l'inhibition d'une protéase (MMP-9) couplé à un effet anti-radicalaire 30 sont en faveur d'une activité anti-âge. Exemples 5 et 6 : Bains de boue employant la préparation selon l'invention On a préparé les bains de boue ayant la 5 composition suivante : Constituants Exemple 5 Exemple 6 Hydroxyéthylcellulose 0,3 g 0,3 g Amidon de blé 2 g 2 g Kaolin 2 g - Terdax, le péloïde de - 2,5 g Dax Préparation selon 0,5 g 0,5 g l'Exemple 3 (actif) Eau thermale de Dax qsp 100g qsp 100 g On a mélangé l'hydroxyéthylcellulose, l'amidon de blé, le kaolin ou le Terdax et la préparation de l'Exemple 10 3 ci-dessus dans l'eau thermale de Dax à température d'émergence (>50°C) pour former une suspension laiteuse fluide, constituant le bain de boue. Ces bains de boue ont été utilisés à une température adaptée à la peau, soit de 37 à 45°C dans les 15 conditions bien connues en thermalisme. Exemples 7 et 8 : Soins de boue/ enveloppements employant la préparation de l'invention 20 On a préparé les soins de boue/enveloppements ayant la composition suivante : Constituant Exemple 7 Exemple 8 Carboxyméthylcellulose 1,8 g 1,8 g Amidon de maïs 3 g 3 g Kaolin 2,5 g - Terdax, le péloïde de - 3 g Dax Préparation selon 1 g 1 g l'Exemple 3 (actif) Eau thermale 30 g 30 g d'empâtage Eau thermale de Dax qsp 100 g qsp 100 g On a mélangé la carboxyméthylcellulose, l'amidon de maïs, le kaolin ou le Terdax et la préparation de l'Exemple 3 ci-dessus dans de l'eau thermale de Dax 5 température d'émergence (>50°C) pour former une pâte. Cette dernière a été diluée dans cette eau pour former après gonflement une pâte lisse, onctueuse qui a pu être appliquée sur la partie du corps à traiter. L'opérateur a réalisé l'application des 10 préparations à une température adaptée à la peau (de 37 à 45°C) dans les conditions bien connues en thermalisme. Exemples 9 et 10 : Masques pour le visage employant la préparation selon l'invention 15 On a préparé les masques pour le visage ayant la composition suivante : 20 Constituants Exemple 9 Exemple 10 Sorbitol 1,7 g 1,7 g Amidon de maïs 1,7 g 1,7 g Kaolin 6,5 g - Terdax, le péloïde - 8 g de Dax Préparation selon 0,1 g 0,1 g l'Exemple 3 (actif) Eau thermale de qsp 20 g qsp 20 g Dax On a mélangé le sorbitol, l'amidon de maïs, le kaolin ou le Terdax et la préparation de l'Exemple 3, puis de façon extemporanée, on a dilué cette préparation avec son poids d'eau minérale de Dax pour former un gel pâteux onctueux, que l'on a appliqué sur le visage. Ces masques ont pu être maintenus en place 10 -15 minutes, puis ont été éliminés par rinçage à l'aide d'une lingette imprégnée d'eau minérale. Exemple 11 : Lait corporel On a préparé une phase huileuse et une phase aqueuse ayant les formulations suivantes : 15 Phase huileuse : - huile végétale - squalane - stéarate de glycérol - alcool cétostéarylique 20 Phase aqueuse : - gomme xanthane - eau purifiée - conservateurs, parfums On a chauffé séparément les deux formulations ci-dessus à 65-70°C, la phase huileuse représentant 22 parties 5 en poids et la phase aqueuse, 78 parties en poids pour 100 parties en poids de la phase huileuse + phase aqueuse. Sous agitation, on a ajouté la phase huileuse à la phase aqueuse pour former une émulsion. On a refroidi sous agitation jusqu'à 30°C. On a ajouté la préparation de l'Exemple 3 10 (actif) à raison de 1 g pour 100 g de l'émulsion et on a homogénéisé. Exemple 12 : Crème de soin revitalisante 15 On a préparé une phase huileuse et une phase aqueuse ayant les formulations suivantes : Phase huileuse : - Monostéarate de PEG 1500 - Monostéarate de PEG 300 20 - Huile de paraffine Phase aqueuse : - Eau purifiée - Conservateurs, parfums On a procédé comme à l'Exemple 11 excepté que les 25 phases huileuse et aqueuse représentaient respectivement 30 et 70 parties en poids pour 100 parties en poids de la phase huileuse + la phase aqueuse et que la préparation de l'Exemple 3 (actif) a été incorporée, à raison de 2 g pour 100 g de l'émulsion. 30 REVENDICATIONS1 - Préparation à base d'au moins une algue caractérisée par le fait qu'elle comporte, dans un milieu à base aqueuse, un mélange de : (a) au moins une biomasse algale totale ; et (b) au moins un sel de cuivre soluble dans ledit milieu. 2 - Préparation selon la revendication 1, caractérisée par le fait que la ou les algues de la ou des biomasses algales totales (a) sont choisies parmi les algues de la flore algale qui se développe naturellement dans les eaux thermales de Dax dès lors que les eaux arrivent à l'émergence en présence de lumière. 3 - Préparation selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisée par le fait que la ou les algues de la ou des biomasses algales totales (a) sont les algues de l'eau minérale de Dax, obtenues par ruissellement en continu sous lumière naturelle et/ou artificielle de l'eau minérale de Dax, à la température de développement desdites algues, sur un support de culture en plan incliné ; culture des souches desdites algues apportées par ladite eau minérale de Dax et/ou ensemencées sur ledit support ; récolte desdites algues par raclage de la surface de la culture, égouttage et essorage par centrifugation. 4 - Préparation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée par le fait que la ou les biomasses algales totales (a) se présentent sous une forme qui est débarrassée d'une flore bactérienne naturelle interférente et qui est microbroyée notamment à une taille moyenne departicule ne dépassant pas 50 pm, en particulier ne dépassant pas 5 pm, étant notamment de 1 à 5 pm. - Préparation selon l'une des revendications 1 5 à 4, caractérisée par le fait que la ou les biomasses algales totales (a) se présentent sous la forme d'une suspension dans un véhicule stabilisant la ou les biomasses, entrant dans la constitution dudit milieu à base aqueuse, et avantageusement solubilisant au moins en partie 10 le ou sels de cuivre (b), ledit véhicule étant notamment le glycérol. 6 - Préparation selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée par le fait que le ou les sels de cuivre 15 (b) sont choisis parmi les sels non toxiques de cuivre et d'acides organiques, tels que l'acétate de cuivre, le butyrate de cuivre, le citrate de cuivre, le tartrate de cuivre, le salicylate de cuivre, le glycinate de cuivre, le lactate de cuivre ou le gluconate de cuivre, en particulier 20 l'acétate de cuivre et le gluconate de cuivre, et d'acides minéraux, tels que le chlorure de cuivre, le bromure de cuivre, le nitrate de cuivre ou le sulfate de cuivre. 7 - Préparation selon l'une des revendications 1 25 à 6, caractérisée par le fait que le ou les sels de cuivre (b) sont associés à au moins un acide, tel que l'acide lactique, dans une quantité permettant d'ajuster le pH de la composition à une valeur inférieure à 7 et d'empêcher la formation de dérivés du cuivre insolubles en milieu 30 alcalin. 8 - Préparation selon l'une des revendications 1 7, caractérisée par le fait que la ou les biomassesalgales totales (a) sont en suspension dans le milieu à base aqueuse, à raison de 5 à 50 % en poids de la ou des biomasses algales totales par rapport au mélange (a) + (b) + milieu à base aqueuse, et que le ou les sels de cuivre (b) sont présents à raison de 0,05 à 10 g pour 100 g de mélange (a) + (b)+ milieu à base aqueuse. 9 - Préparation selon la revendication 8, caractérisée par le fait que le milieu à base aqueuse contient de l'eau et du glycérol, et que le glycérol représente 30 à 85 % en poids, en particulier 60 à 80% en poids, dudit milieu à base aqueuse. 10 - Préparation selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisée par le fait qu'elle se présente sous la forme d'une suspension stable, de couleur vert soutenu, d'une densité de 1,08 à 1,23, en particulier de 1,16 à 1,22, et d'un pH de 4,5 à 6,5, en particulier de 5 à 6. 11 - Procédé de fabrication de la préparation telle que définie à l'une des revendications 1 à 10, caractérisé par le fait que l'on ajoute au moins un sel de cuivre soluble dans un milieu à base aqueuse à au moins une masse algale totale en suspension dans ledit milieu à base aqueuse. 12 Procédé selon la revendication 11, caractérisé par le fait que l'on prépare la ou les biomasses algales totales en conduisant les étapes 30 suivantes : (1) ruissellement en continu sous lumière naturelle et/ou artificielle de l'eau minérale de Dax, à la températurede développement desdites algues, sur un support de culture en plan incliné ; (2) culture des souches desdites algues apportées par ladite eau minérale de Dax et/ou ensemencées sur ledit support ; récolte desdites algues par raclage de la surface de culture, égouttage et essorage par centrifugation ; décontamination et désodorisation desdites algues dans des conditions maintenant l'activité de la biomasse totale ; microbroyage et micronisation de la ou des biomasses algales totales ainsi obtenues jusqu'à une taille de particule ne dépassant pas 5 pm. (5) 13 Procédé selon la revendication 12, caractérisé par le fait que l'on conduit les décontamination et désodorisation par mise en contact des algues récoltées, égouttées et essorées avec un agent de décontamination consistant en peroxyde d'hydrogène. 14 - Procédé selon l'une des revendications 12 et 13, caractérisé par le fait que l'on effectue le microbroyage de la ou des biomasses algales totales en présence d'un véhicule stabilisant la ou lesdites biomasses algales totales et utilisé dans des proportions comprises entre 30 et 85% en poids de ladite ou desdites biomasses algales totales, ledit véhicule entrant dans la composition dudit milieu à base aqueuse, et consistant notamment en glycérol. 15 - Procédé selon l'une des revendications 12 à 14, caractérisé par le fait que l'on ajoute le ou les sels de cuivre (b) dans la ou les biomasses algales totales (a)avant ou après la micronisation, à raison de 0,05 à 10 g de sel(s) de cuivre (b) pour 100 grammes du mélange (a) +(b) + milieu à base aqueuse, de façon préférée avec ajustement du pH à une valeur inférieure à 7 par addition d'un acide tel que l'acide lactique. 16 - Applications topiques de la préparation telle que définie à l'une des revendications 1 à 10 ou obtenue par le procédé tel que défini à l'une des 10 revendications 11 à 15 en thermalisme et en cosmétologie. 17 - Composition à usage topique comprenant la préparation telle que définie à l'une des revendications 1 à 10 ou préparée par le procédé tel que défini à l'une des 15 revendications 11 à 15. 18 - Composition à usage topique selon la revendication 17, caractérisée par le fait qu'elle consiste en un bain de boue ou un soin de boue/enveloppement, 20 comprenant, en dehors de ladite préparation, un véhicule facilitant l'application de cette dernière sur la peau. 19 - Composition à usage topique selon la revendication 17, caractérisée par le fait qu'elle consiste 25 en une composition cosmétologique, telle que masque pour le visage, base pour masque pour le visage, crème de soin, en particulier crème de soin revitalisante, lait corporel, comprenant, en dehors de ladite préparation, un véhicule approprié pour les applications en cosmétologie.