FR 3002775 A1 20140905 FR 1300467 A 20130301 POLYPEPTIDES CODANT POUR DES MANNANASES MUTEES AYANT UNE EFFICACITE CATALYTIQUE AMELIOREE DOMAINE DE L'INVENTION L'invention concerne des polypeptides codant pour des mutants de mannanases ayant une efficacité enzymatique améliorée. L'invention fournit aussi des polynucléotides codant pour de tels polypeptides, des vecteurs et cellules hôtes comprenant de tels polynucléotides, ainsi que des compositions comprenant de tels polypeptide(s), polynucléotide(s), vecteur(s) ou cellule(s) hôte(s). L'invention couvre enfin les diverses utilisations de tels polypeptides, polynucléotides, vecteurs, cellules hôtes ou compositions. ART ANTERIEUR La conversion de la biomasse, notamment la biomasse lignocellulosique, en sucres simples est largement étudiée, car préalable à la fermentation des produits de dégradation de celle-ci pour la production de bioéthanol ou de produits industriels variés. La saccharification, c'est-à-dire l'hydrolyse enzymatique des composants de la biomasse lignocellulosique, constitue aujourd'hui un des principaux points de blocage du processus de raffinerie biologique : la résistance des parois cellulaires végétales entraine la nécessité d'utilisation d'une grande quantité d'enzymes pour hydrolyser la biomasse lignocellulosique en sucres fermentables. La conversion de la biomasse lignocellulosique représente donc aujourd'hui une réaction à coût élevé. Le champignon ascomycète Trichoderma reesei est aujourd'hui l'un des champignons industriels les plus utilisés à travers le monde. Il est en effet capable de produire un cocktail enzymatique riche en cellulases, utilisé pour la dégradation de la biomasse lignocellulosique. Cependant, les coûts considérables engendrés par l'utilisation de tels cocktails enzymatiques pour la dégradation de la biomasse lignocellulosique constituent une barrière à l'utilisation de cette ressource renouvelable. Il est donc nécessaire d'améliorer les cocktails enzymatiques existants pour augmenter leur efficacité et leur rendement, afin de diminuer le coût de revient de conversion de la biomasse. La lignocellulose est le composant le plus abondant de la biomasse, comprenant environ cinquante pourcents de matière végétale produite par photosynthèse et représentant la ressource biologique renouvelable la plus importante dans le sol. Elle contient principalement trois types de polymères : la cellulose, l'hémicellulose et la lignine. La cellulose représente environ 45% de la masse sèche de lignocellulose. C'est un polymère linéaire composé de D-glucoses liés par des liaison f31,4-glycosidiques, formant de longue chaines liées entre elles par des liaisons non covalentes. L'hémicellulose est formée d'hétéropolymères représentant 15 à 35% de la biomasse, et contenant des pentoses, tels que le P-D-xylose ou l'a-L-arabinose, des hexoses, tels que le P-D-mannose, le 13-D-glucose ou l'a-D-galactose, ou encore des acides uroniques. La lignine est composée d'unités de phénylpropane liées entre elles par différents types de liaisons. Elle se lie à la cellulose et à l'hémicellulose et forme une barrière physique protégeant les végétaux, plus spécifiquement les cellules végétales. L'hémicellulose désigne un ensemble divers de polymères de carbohydrates non-cristallins, parmi lesquels les mannanes constituent un composant majeur, notamment dans le bois tendre. Les mannanes constituent une famille de sucres complexes comprenant une structure de résidus de D-mannose, appelée mannane, ou une combinaison de résidus de f31,4-D-mannose et de f31,4-D-glucose, appelée glucomannane. Chacune des deux structures peut être complémentée de chaines latérales de galactose, et forme alors un polymère d'oses appelé galactomannane et galactoglucomannane, respectivement. Les mannanes, au sens large du terme, sont hydrolysés par une action coordonnée de différents types de glycoside hydrolases comprenant notamment les mannanases. Les mannanases sont donc des enzymes nécessaires pour la conversion de la biomasse lignocellulosique. Deux mannanases issues du champignon coprophile Podospora anserina ont récemment été étudiées et identifiées comme facteurs renforçant l'efficacité du cocktail enzymatique de Trichoderma reesei pour la dégradation de la biomasse lignocellulosique (Couturier et al, Applied and Environmental Microbiology, January 2011, 77(1) :23, pages 237-246). Cette étude constitue une voie d'amélioration des cocktails enzymatiques 5 existants pour la dégradation de la biomasse lignocellulosique. Des études supplémentaires pourraient permettre l'émergence de nouvelles enzymes ou de nouveaux outils pour améliorer encore leur efficacité. SOMMAIRE DE L'INVENTION Cherchant à améliorer les moyens actuels de dégradation de la biomasse 10 lignocellulosique, les inventeurs ont au préalable montré que l'efficacité des cocktails enzymatiques actuellement disponibles pour la dégradation lignocellulosique, tels que ceux issus du sécrétome de Trichoderma reesei, peut être accrue par la supplémentation de ceux-ci avec des enzymes supplémentaires, parmi lesquelles les mannanases Man5A et Man26A issues du champignon ascomycète Podospora anserina (Couturier et al., 15 2011). Suite à ces résultats, les inventeurs ont cherché à augmenter encore l'efficacité d'un cocktail enzymatique de Trichoderma reesei supplémenté. Ils ont ainsi cherché à développer des variants des mannanases Man5A et Man26A ayant des activités enzymatiques améliorées par rapport aux enzymes natives. 20 L'invention concerne ainsi un polypeptide consistant en une mannanase mutée, ayant une séquence dérivée d'une mannanase native du champignon filamenteux ascomycète coprophile Podospora anserina, et étant caractérisée par une efficacité catalytique augmentée d'au moins 25% par rapport à l'efficacité catalytique de cette mannanase native. 25 Plus particulièrement, ledit polypeptide est dérivé de la mannanase Man5A ou Man26A de Podospora anserina et est défini par l'une des séquences SEQ ID NO :3 à 14, et diffère d'au moins un acide aminé de la séquence SEQ ID NO :1 ou 11. L'invention concerne aussi un polynucléotide codant pour un tel peptide, un vecteur comprenant un tel polynucléotide et une cellule hôte comprenant un tel polynucléotide ou un tel vecteur. L'invention concerne de plus une composition comprenant un polypeptide, un polynucléotide, un vecteur ou une cellule hôte de l'invention. L'invention concerne enfin l'utilisation d'un polypeptide, un polynucléotide, un 5 vecteur, une cellule hôte ou une composition de l'invention pour la dégradation des composés comprenant des mannanes, plus particulièrement, pour la dégradation de la biomasse lignocellulosique. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Cherchant à améliorer l'efficacité des cocktails enzymatiques utilisés pour la 10 dégradation de la biomasse lignocellulosique, les inventeurs ont développé des mutants de mannanases issus du champignon filamenteux ascomycète coprophile Podospora anserina, lesdits mutants montrant une efficacité catalytique améliorée d'au moins 25% par rapport aux enzymes natives. La présente invention a ainsi pour objet un polypeptide consistant en une 15 mannanase mutée, ayant une séquence dérivée d'une mannanase native du champignon filamenteux ascomycète coprophile Podospora anserina, et étant caractérisée par une efficacité catalytique augmentée d'au moins 25% par rapport à l'efficacité catalytique de cette mannanase native. Le terme « mannanase » fait référence à une famille d'enzymes capable 20 d'hydrolyser des chaines polyoses composées de mannoses (appelées mannanes, mannopolymères ou polymannoses). Par « mannanase mutée », on entend une mannanase définie par une séquence dérivée d'une mannanase native et dont la séquence comprend au moins une mutation par rapport à la séquence de cette mannanase native. 25 Le terme « mutation » fait référence à la substitution, au remplacement, à l'insertion ou à la délétion d'un ou plusieurs acides aminés dans une séquence protéique de référence. Une mannanase mutée de l'invention est caractérisée par une efficacité catalytique augmentée d'au moins 25% par rapport à l'efficacité catalytique de la mannanase native. L'efficacité catalytique d'une réaction enzymatique, laquelle est associée à une enzyme donnée, est bien connue de l'homme du métier et est définie communément par la mesure du rapport kcat/KM, OÙ kcat est la constante catalytique, correspondant au nombre de moles de produit formées par seconde et par mole d'enzyme, et où KM est la constante de Michaelis, caractéristique de l'enzyme testée. De préférence, l'efficacité catalytique des polypeptides de l'invention est mesurée sur la réaction d'hydrolyse du galactomannane et comparée à celle de la mannanase native. Les réactions d'hydrolyse de mannooligosaccharides tels que le mannopentaose et le mannohexaose peuvent aussi être utilisées. De telles réactions et mesures sont décrites dans Berrin et al, 2007 (Appl Microbiol Biotechnol., 74(5):1001). Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le polypeptide est dérivé de la mannanase Man5A de Podospora anserina. Par « Man5A », on entend la mannanase Man5A de Podospora anserina, définie 15 par la séquence protéique SEQ ID NO :1. Cette mannanase est codée par la séquence nucléique SEQ ID NO :2. SEQ ID NO :1 LPQAQGGGAA ASAKVSGTRF VIDGKTGYFA GTNSYWIGFL TNNRDVDTTL DHIASSGLKI LRVWGFNDVN NQP SGNTVWF QRLASSGSQI NTGPNGLQRL DYLVRSAETR GIKLIIALVN YWDDFGGMKA YVNAFGGTKE SWYTNARAQE QYKRYIQAVV SRYVNSPAIF AWELANEPRC KGCNTNVIFN WATQISDYIR SLDKDHLITL GDEGFGLPGQ TTYPYQYGEG TDFVKNLQIK NLDFGTFHMY PGHWGVPTSF GPGWIKDHAA ACRAAGKPCL LEEYGYESDR CNVQKGWQQA SRELSRDGMS GDLFWQWGDQ LSTGQTIINDG FTIYYGSSLA TCLVTDHVRA INALPA SEQ ID NO :2 TCCCCCAAGCACAAGGTGGAGGAGCAGCCGCCTCAGCCAAAGTC AGCGGCACCCGCTTCGTGATCGACGGCAAAACCGGCTACTTTGCA GGAACAAACTCCTACTGGATTGGCTTCCTGACCAACAACAGAGAT GTCGACACAACCTTGGACCACATCGCCTCCTCGGGCCTCAAAATC CTCCGCGTCTGGGGCTTCAACGACGTGAACAACCAACCATCCGGT AACACCGTCTGGTTCCAACGCCTCGCCTCCTCAGGCTCCCAAATC AACACCGGCCCCAACGGCC TCCAACGCCTCGACTACCTCGTCAGA TCAGCCGAAACCCGCGGCATCAAGCTCATCATCGCGCTGGTCAAC TACTGGGATGACTTTGGCGGCATGAAAGCCTACGTCAACGCCTTT GGAGGCACAAAAGAATCCTGGTACACCAACGCCCGCGCTCAGGA GCAGTACAAGCGTTACATCCAGGCTGTCGTCTCGCGATATGTCAA CAGCCCCGCAATCTTTGCGTGGGAACTTGCCAACGAGCCCAGGTG CAAGGGGTGCAACACGAATGTTATTTTCAACTGGGCGACGCAGAT TTCAGATTATATCCGGAGCTTGGATAAGGATCATTTGATCACCCTT GGGGATGAGGGGTTTGGGTTGCCGGGGCAGACGACGTATCCGTAT CAGTATGGGGAGGGGACCGACTTCGTCAAGAATCTGCAGATTAAG AATCTGGACTTTGGGACGTTTCATATGTATCCTGGTCATTGGGGGG TGCCGACGAGTTTTGGTCCAGGGTGGATTAAGGATCATGCGGCGG CTTGCAGGGCGGCGGGGAAGCCGTGTTTGTTGGAGGAGTATGGGT ATGAGAGTGATAGGTGTAATGTGCAGAAGGGCTGGCAGCAGGCG TCGAGGGAGCTGAGCAGGGATGGGATGAGTGGTGATTTGTTTTGG CAATGGGGCGATCAGTTGAGTACTGGGCAGACACATAATGATGG GTTCACGATTTATTATGGTTCTTCGTTGGCTACTTGCTTGGTTACTG ACCATGTGAGGGCTATCAATGCTCTCCCGGCGTAG Selon l'invention, le polypeptide de l'invention est défini par la séquence SEQ ID NO :3. LPQAQGGGAA ASAKVSGTRF TNNRDVDTTL DHIASSGLKI LRVWGFNDVN NQPSGNTVWF QRLASSGSQI NTGPNGLQRL DYLVRSAETR GIKLIIALVN YWDDFGGMKA YVNAFGGTX139E SWYTNARAQE QYKRYIQAVV SRYVNSPAIF AWELANEPRC KGCNTNVIFN WATQX195SDYIR SLDKDHLITL GDEGFGLPGQ TTX223PYQYGEG TDFVKNLQIK NLDFGTFHMY PGHWGX256PTSF GPGWIKDHAA ACRAAX276KPCL LEEYGYESDR CNVQKGWQQA SRELSRDGMS X311DLFWX316WGDQ LSTGQTHNDG FTIYYGSSLA TCLVTDHVRA INALPA Où: le résidu en position 36 est un tryptophane ou une arginine (X36 = W ou R), le résidu en position 139 est une lysine ou une arginine (X139 = K ou R), VIDGKTGYFA GTNSYX36IGFL SEQ ID NO :3 - le résidu en position 195 est une isoleucine ou une thréonine (X195= I ou T), - le résidu en position 223 est une tyrosine ou une histidine (X223= Y ou H), - le résidu en position 256 est une valine, une leucine ou une alanine (X256= V, L ou A), - le résidu en position 276 est une glycine ou une valine (X276= G ou V), - le résidu en position 311 est une glycine ou une sérine (X311= G ou S), et le résidu en position 316 est une glutamine ou une histidine (X316= Q ou H). La séquence SEQ ID NO :3 diffère d'au moins un acide aminé de la séquence SEQ ID NO :1. Dans un mode de réalisation préféré, le polypeptide de l'invention est défini par la séquence SEQ ID NO :4. L'efficacité catalytique du polypeptide défini par la séquence SEQ ID NO :4 (mutant G311S) est augmentée d'un facteur 8 (augmentation de 800%) par rapport à celle de la mannanase Man5A native (SEQ ID NO :1) sur la réaction d'hydrolyse du galactomannane. Dans un mode de réalisation préféré, le polypeptide de l'invention est défini par la 10 séquence SEQ ID NO :5. SEQ ID NO :4 LPQAQGGGAA ASAKVSGTRF VIDGKTGYFA GTNSYWIGFL TNNRDVDTTL DRUS SGLKI LRVWGFNDVN NQPSGNTVWF QRLASSGSQI NTGPNGLQRL DYLVRSAETR GIKLIIALVN YWDDFGGMKA YVNAFGGTKE SWYTNARAQE QYKRYIQAVV SRYVNSPAIF AWELANEPRC KGCNTNVIFN WATQISDYIR SLDKDHLITL GDEGFGLPGQ TTYPYQYGEG TDFVKNLQIK NLDFGTFHMY PGHWGVPTSF GPGWIKDHAA ACRAAGKPCL LEEYGYESDR CNVQKGWQQA SRELSRDGMS SDLFWQWGDQ LSTGQTHNDG FTIYYGSSLA TCLVTDHVRA INALPA SEQ ID NO :5 LPQAQGGGAA ASAKVSGTRF VIDGKTGYFA GTNSYWIGFL TNNRDVDTTL DHIASSGLKI LRVWGFNDVN NQPSGNTVWF QRLASSGSQI NTGPNGLQRL DYLVRSAETR GIKLIIALVN YWDDFGGMKA YVNAFGGTX139E SWYTNARAQE QYKRYIQAVV SRYVNSPAIF AWELANEPRC KGCNTNVIFN WATQISDYIR SLDKDHLITL GDEGFGLPGQ TTX223PYQYGEG TDFVKNLQIK NLDFGTFHMY PGHWGVPTSF GPGWIKDHAA ACRAAGKPCL LEEYGYESDR CNVQKGWQQA SRELSRDGMS GDLFWQWGDQ LSTGQTHNDG FTIYYGSSLA TCLVTDHVRA INALPA Où: - le résidu en position 139 est une lysine ou une arginine (X139 = K ou R), et - le résidu en position 223 est une tyrosine ou une histidine (X223= Y ou H). La séquence SEQ ID NO :5 diffère d'au moins un acide aminé de la séquence SEQ ID NO :1. Plus préférentiellement, le polypeptide de l'invention est défini par la séquence SEQ ID NO :6. L'efficacité catalytique du polypeptide défini par la séquence SEQ ID NO :6 (mutant K139R/Y223H) est augmentée d'un facteur 1,7 (augmentation de 70%) par rapport à celle de la mannanase Man5A native (SEQ ID NO :1) sur la réaction d'hydrolyse du galactomannane. Dans un autre mode de réalisation préféré, le polypeptide de l'invention est défini 10 par la séquence SEQ ID NO :7. SEQ ID NO :6 LPQAQGGGAA ASAKVSGTRF VIDGKTGYFA GTNSYWIGFL TNNRDVDTTL DHIASSGLKI LRVWGFNDVN NQPSGNTVWF QRLASSGSQI NTGPNGLQRL DYLVRSAETR GIKLIIALVN YWDDFGGMKA YVNAFGGTRE SWYTNARAQE QYKRYIQAVV SRYVNSPAIF AWELANEPRC KGCNTNVIFN WATQISDYIR SLDKDHLITL GDEGFGLPGQ TTHPYQYGEG TDFVKNLQIK NLDFGTFHMY PGHWGVPTSF GPGWIKDHAA ACRAAGKPCL LEEYGYESDR CNVQKGWQQA SRELSRDGMS GDLFWQWGDQ LSTGQTHNDG FTIYYGSSLA TCLVTDHVRA INALPA La séquence SEQ ID NO :7 diffère d'au moins un acide aminé de la séquence SEQ ID NO :1. Plus préférentiellement, le polypeptide de l'invention est défini par la séquence SEQ ID NO :8. L'efficacité catalytique du polypeptide défini par la séquence SEQ ID NO :8 (mutant V256L/G276V/Q316H) est augmentée d'un facteur 1,3 (augmentation de 30%) par rapport à celle de la mannanase Man5A native (SEQ ID NO :1) sur la réaction d'hydrolyse du galactomannane. SEQ ID NO :7 LPQAQGGGAA ASAKVSGTRF VIDGKTGYFA GTNSYWIGFL TNNRDVDTTL DHIASSGLKI LRVWGFNDVN NQPSGNTVWF QRLASSGSQI NTGPNGLQRL DYLVRSAETR GIKLIIALVN YWDDFGGMKA YVNAFGGTKE SWYTNARAQE QYKRYIQAVV SRYVNSPAIF AWELANEPRC KGCNTNVIFN WATQISDYIR SLDKDHLITL GDEGFGLPGQ TTYPYQYGEG TDFVKNLQIK NLDFGTFHMY PGHWGX256PTSF GPGWIKDHAA ACRAAX276KPCL LEEYGYESDR CNVQKGWQQA SRELSRDGMS GDLFWX316WGDQ LSTGQTHNDG FTIYYGSSLA TCLVTDHVRA INALPA Où: - le résidu en position 256 est une valine, une leucine ou une alanine (X256= V, L ou A), - le résidu en position 276 est une glycine ou une valine (X276= G ou V), - le résidu en position 316 est une glutamine ou une histidine (X316= Q ou H). SEQ ID NO :8 LPQAQGGGAA ASAKVSGTRF VIDGKTGYFA GTNSYWIGFL TNNRDVDTTL DHIASSGLKI LRVWGFNDVN NQPSGNTVWF QRLASSGSQI NTGPNGLQRL DYLVRSAETR GIKLIIALVN YWDDFGGMKA YVNAFGGTKE SWYTNARAQE QYKRYIQAVV SRYVNSPAIF AWELANEPRC KGCNTNVIFN WATQISDYIR SLDKDHLITL GDEGFGLPGQ TTYPYQYGEG TDFVKNLQIK NLDFGTFHMY PGHWGLPTSF GPGWIKDHAA ACRAAVKPCL LEEYGYESDR CNVQKGWQQA SRELSRDGMS GDLFWHWGDQ LSTGQTHNDG FTIYYGSSLA TCLVTDHVRA INALPA Dans un autre mode de réalisation préféré, le polypeptide de l'invention est défini par la séquence SEQ ID NO :9. SEQ ID NO :9 LPQAQGGGAA ASAKVSGTRF VIDGKTGYFA GTNSYX36IGFL TNNRDVDTTL DHIASSGLKI LRVWGFNDVN NQPSGNTVWF QRLASSGSQI NTGPNGLQRL DYLVRSAETR GIKLIIALVN YWDDFGGMKA YVNAFGGTKE SWYTNARAQE QYKRYIQAVV SRYVNSPAIF AWELANEPRC KGCNTNVIFN WATQX195SDYIR SLDKDHLITL GDEGFGLPGQ TTYPYQYGEG TDFVKNLQIK NLDFGTFHMY PGHWGX256PTSF GPGWIKDHAA ACRAAGKPCL LEEYGYESDR CNVQKGWQQA SRELSRDGMS GDLFWQWGDQ LSTGQTHNDG FTIYYGSSLA TCLVTDHVRA INALPA Où: - le résidu en position 36 est un tryptophane ou une arginine (X36 = W ou R), - le résidu en position 195 est une isoleucine ou une thréonine (X195= I ou T), - le résidu en position 256 est une valine, une leucine ou une alanine (X256= V, L ou A), La séquence SEQ ID NO :9 diffère d'au moins un acide aminé de la séquence SEQ ID NO :1. Plus préférentiellement, le polypeptide de l'invention est défini par la séquence SEQ ID NO :10. SEQ ID NO :10 LPQAQGGGAA ASAKVSGTRF VIDGKTGYFA GTNSYRIGFL TNNRDVDTTL DHIASSGLKI LRVWGFNDVN NQPSGNTVWF QRLASSGSQI NTGPNGLQRL DYLVRSAETR GIKLIIALVN YWDDFGGMKA YVNAFGGTKE SWYTNARAQE QYKRYIQAVV SRYVNSPAIF AWELANEPRC KGCNTNVIFN WATQTSDYIR SLDKDHLITL GDEGFGLPGQ TTYPYQYGEG TDFVKNLQIK NLDFGTFHMY PGHWGAPTSF GPGWIKDHAA ACRAAGKPCL LEEYGYESDR CNVQKGWQQA SRELSRDGMS GDLFWQWGDQ LSTGQTHNDG FTIYYGSSLA TCLVTDHVRA INALPA L'efficacité catalytique du polypeptide défini par la séquence SEQ ID NO :10 (mutant W36R/1195T/V256A) est augmentée d'un facteur 1,78 (augmentation de 78%) par rapport à celle de la mannanase Man5A native (SEQ ID NO :1) sur la réaction d'hydrolyse du galactomannane. Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, la mannanase mutée de l'invention est dérivée de la mannanase Man26A de Podospora anserina. Par « Man26A », on entend la mannanase Man26A de Podospora anserina, définie par la séquence protéique SEQ ID NO :11 et la séquence nucléique SEQ ID NO :12. SEQ ID NO :11 KPCKPRDGPV TYEAEDAILT GTTVDTAQVG YTGRGYVTGF DEGSDKITFQ ISSATTKLYD LSIRYAAIYG DKRTNVVLNN GAVSEVFFPA GDSFTSVAAG QVLLNAGQNT IDIVNNWGWY LIDSITLTPS APRPPHDINP NLNNPNADTN AKKLYSYLRS VYGNKIISGQ QELHHAEWIR QQTGKTPALV AVDLMDYSPS RVERGTTSHA VEDAIAHHNA GGIVSVLWHW NAPVGLYDTE ENKWWSGFYT RATDFDIAAT LANPQGANYT LLIRDIDAIA VQLKRLEAAG VPVLWRPLHE AEGGWFWWGA KGPEPAKQLW DILYERLTVH HGLDNLIWVW NSILEDWYPG DDTVDILSAD VYAQGNGPMS TQYNELIALG RDKKMIAAAE VGAAPLPGLL QAYQANWLWF AVWGDDFINN PSWNTVAVLN EIYNSDYVLT LDEIQGWRS SEQ ID NO :12 AAGCCTTGTAAGCCTCGTGATGGCCCCGTGACCTACGAGGCCGA AGATGCCATCCTCACCGGCACCACCGTCGACACTGCTCAGGTAG GCTATACCGGCCGTGGCTACGTCACCGGCTTCGACGAGGGCTCC GACAAGATCACCTTCCAGATCAGCTCCGCCACCACCAAGCTCTA CGACCTCTCCATCCGGTACGCCGCCATCTACGGTGACAAGCGAA CCAACGTCGTCCTCAACAACGGTGCCGTCAGCGAGGTCTTCTTC CCCGCCGGTGACTCTTTTACTTCTGTCGCCGCCGGCCAGGTCCTC CTCAACGCTGGACAAAACACCATCGACATCGTCAACAACTGGGG ATGGTACCTCATCGACTCCATCACCCTCACCCCCTCCGCCCCTCG CCCCCCCCACGACATCAACCCCAACCTCAACAACCCCAACGCCG ACACCAACGCCAAGAAGCTCTACTCCTACCTCCGCTCTGTCTAC GGCAACAAGATCATCTCTGGCCAGCAGGAGCTCCACCACGCCGA GTGGATCAGACAGCAAACCGGCAAGACTCCCGCGCTGGTGGCTG TCGATCTGATGGATTACTCCCCCTCCCGCGTCGAGCGTGGCACC ACCAGCCATGCCGTCGAGGACGCCATCGCCCACCACAACGCAGG CGGTATCGTTTCTGTCCTCTGGCACTGGAACGCTCCCGTCGGTCT GTATGACACCGAAGAGAACAAGTGGTGGTCCGGCTTCTACACTC GGGCTACCGACTTTGACATTGCCGCCACGTTGGCCAACCCCCAG GGTGCGAACTACACTCTTCTCATCAGGGACATTGACGCGATTGC TGTCCAGCTCAAGAGGCTGGAGGCTGCTGGTGTTCCGGTCTTGT GGAGACCTCTTCACGAGGCGGAGGGTGGTTGGTTCTGGTGGGGA GCCAAGGGGCCAGAGCCGGCGAAGCAGCTTTGGGATATCTTGTA TGAGCGTCTGACGGTGCACCATGGTTTGGATAATTTGATTTGGGT GTGGAATTCGATTTTGGAGGATTGGTATCCGGGTGATGATACGG TTGATATCTTGTCGGCCGATGTGTATGCGCAGGGTAATGGGCCC ATGTCGACTCAGTACAATGAGTTGATCGCCCTCGGCAGGGACAA GAAGATGATTGCTGCTGCAGAGGTTGGCGCTGCCCCTTTGCCCG GCTTGTTGCAGGCTTACCAGGCCAACTGGCTGTGGTTTGCTGTCT GGGGTGATGACTTTATCAACAACCCCAGCTGGAACACGGTTGCT GTTCTCAACGAGATCTACAACAGCGACTATGTGTTGACGCTGGA TGAGATTCAGGGGTGGAGGAGTTAG Dans un mode de réalisation plus particulier, la mannanase mutée de l'invention dérivée de Man26A est définie par la séquence SEQ ID NO :13. SEQ ID NO :13 KPCKPRDGPV TYEAEDAILT DEGSDKITFQ ISSATTKLYD GAVSEVFFPA GDSFTSVAAG LIDSITLTPS APRPPHDINX14° VYGNKIISGQ QELHHAEWIR RVERGTTSHA VEDAIAHHNA GTTVDTAQVG LSIRYAAIYG QVLLNAGQNT NLNNPNADTN QQTGKTPALV GGIVSVLWHW YTGRGYVTGF DKRTNVVLNN IDIVNNWGWY AKKLYSYLRS AVDLMDYSPS NAPVGLYDTE ENKWWSGFYT RATDFDIAAT LANPQGANYT LLIRDIDAIA VQLKRLEAAG VPVLWRPLHE AEGGWFWWGA KGPEPAKQLW DILYERLTVH HGLDNLIWVW NSILEDWYPG DDTVDILSAD VYAQGNGPMS TQYNELIALG RDKKMIAAAE VGAAPLPGLL QAYQANWLWF AVWGDX416FINN PSWNTVAVLN EIYNSDYVLT LDEIQGWRS Où: - le résidu en position 140 est une proline ou une leucine (X140= P ou L), et - le résidu en position 416 est un aspartate ou une glycine (X416= D ou G). La séquence SEQ ID NO :13 diffère, d'au moins un acide aminé, de la séquence SEQ ID NO :11. Dans un mode de réalisation préféré, la mannanase mutée de l'invention est définie par la séquence SEQ ID NO :14. SEQ ID NO :14 KPCKPRDGPV TYEAEDAILT GTTVDTAQVG YTGRGYVTGF DEGSDKITFQ IS SATTKLYD LSIRYAAIYG DKRTNVVLNN GAVSEVFFPA GDSFTSVAAG QVLLNAGQNT IDIVNNWGWY LIDSITLTPS APRPPHDINL NLNNPNADTN AKKLYSYLRS VYGNKIISGQ QELHHAEWIR QQTGKTPALV AVDLMDYSPS RVERGTTSHA VEDAIAHHNA GGIVSVLWHW NAPVGLYDTE ENKWWSGFYT RATDFDIAAT LANPQGANYT LLIRDIDAIA VQLKRLEAAG VPVLWRPLHE AEGGWFWWGA KGPEPAKQLW DILYERLTVH HGLDNLIWVW NSILEDWYPG DDTVDILSAD VYAQGNGPMS TQYNELIALG RDKKMIAAAE VGAAPLPGLL QAYQANWLWF AVWGDGFINN PSWNTVAVLN EIYNSDYVLT LDEIQGWRS Les inventeurs ont montré que l'efficacité catalytique d'un polypeptide défini par la séquence SEQ ID NO :14 (mutant P140L/D416G) est augmentée d'un facteur 1.3 (augmentation de 30%) par rapport à celle de la mannanase Man5A native (SEQ ID NO :11) sur la réaction d'hydrolyse du galactomannane. Un autre objet de l'invention concerne un polynucléotide codant pour un polypeptide de l'invention. Selon l'invention, ledit polynucléotide est une molécule d'ADN ou d'ARN. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, ledit polynucléotide code pour une mannanase mutée de l'invention définie par une séquence choisie parmi les séquences SEQ ID NO :3-10 et 13-14. Dans un mode de réalisation préféré, ledit polynucléotide est défini par une séquence choisie parmi les séquences SEQ ID NO :15-19. SEQ ID NO :15 CTCCCCCAAGCACAAGGTGGAGGAGCAGCCGCCTCAGCCAAAGTCAGCG GCACCCGCTTCGTGATCGACGGCAAAACCGGCTAC TTTGCAGGAACAAA CTCCTACTGGATTGGCTTCCTGACCAACAACAGAGATGTCGACACAACCT TGGACCACATCGCCTCCTCGGGCCTCAAAATCCTCCGCGTCTGGGGCTTC AACGACGTGAACAACCAACCATCCGGTAACACCGTCTGGTTCCAACGCC TCGCCTCCTCAGGCTCCCAAATCAACACCGGCCCCAACGGCCTCCAACGC CTCGACTACCTCGTCAGATCAGCCGAAACCCGCGGCATCAAGCTCATCAT CGCGCTGGTCAACTACTGGGATGACTTTGGCGGCATGAAAGCCTACGTCA ACGCCTTTGGAGGCACAAAAGAATCCTGGTACACCAACGCCCGCGCTCA GGAGCAGTACAAGCGTTACATCCAGGCTGTCGTCTCGCGATATGTCAACA GCCCCGCAATCTTTGCGTGGGAACTTGCCAACGAGCCCAGGTGCAAGGG GTGCAACACGAATGTTATTTTCAACTGGGCGACGCAGATTTCAGATTATA TCCGGAGCTTGGATAAGGATCATTTGATCACCCTTGGGGATGAGGGGTTT GGGTTGCCGGGGCAGACGACGTATCCGTATCAGTATGGGGAGGGGACCG ACTTCGTCAAGAATCTGCAGATTAAGAATCTGGAC TTTGGGACGTTTCAT ATGTATCCTGGTCATTGGGGGGTGCCGACGAGTTTTGGTCCAGGGTGGAT TAAGGATCATGCGGCGGCTTGCAGGGCGGCGGGGAAGCCGTGTTTGTTG GAGGAGTATGGGTATGAGAGTGATAGGTGTAATGTGCAGAAGGGCTGGC AGCAGGCGTCGAGGGAGCTGAGCAGGGATGGGATGAGTAGTGATTTGTT TTGGCAATGGGGCGATCAGTTGAGTACTGGGCAGACACATAATGATGGG TTCACGATTTATTATGGTTCTTCGTTGGCTACTTGCTTGGTTACTGACCAT GTGAGGGCTATCAATGCTCTCCCGGCG SEQ ID NO :16 CTCCCCCAAGCACAAGGTGGAGGAGCAGCCGCCTCAGCCAAAGT CAGCGGCACCCGCTTCGTGATCGACGGCAAAACCGGCTACTTTGC AGGAACAAACTCCTACTGGATTGGCTTCCTGACCAACAACAGAGA TGTCGACACAACCTTGGACCACATCGCCTCCTCGGGCCTCAAAAT CCTCCGCGTCTGGGGCTTCAACGACGTGAACAACCAACCATCCGG TAACACCGTCTGGTTCCAACGCCTCGCCTCCTCAGGCTCCCAAATC AACACCGGCCCCAACGGCCTCCAACGCCTCGACTACCTCGTCAGA TCAGCCGAAACCCGCGGCATCAAGCTCATCATCGCGCTGGTCAAC TACTGGGATGACTTTGGCGGCATGAAAGCCTACGTCAACGCCTTT GGAGGCACAAGAGAATCCTGGTACACCAACGCCCGCGCTCAGGA GCAGTACAAGCGTTACATCCAGGCTGTCGTCTCGCGACATGTCAA CAGCCCCGCAATCTTTGCGTGGGAACTTGCCAACGAGCCCAGGTG CAAGGGGTGCAACACGAATGTTATTTTCAACTGGGCGACGCAGAT TTCAGATTATATCCGGAGCTTGGATAAGGATCATTTGATCACCCTT GGGGATGAGGGGTTTGGGTTGCCGGGGCAGACGACGTATCCGTAT CAGTATGGGGAGGGGACCGACTTCGTCAAGAATCTGCAGATTAAG AATCTGGACTTTGGGACGTTTCATATGTATCCTGGTCATTGGGGGG TGCCGACGAGTTTTGGTCCAGGGTGGATTAAGGATCATGCGGCGG CTTGCAGGGCGGCGGGGAAGCCGTGTTTGTTGGAGGAGTATGGGT ATGAGAGTGATAGGTGTAATGTGCAGAAGGGCTGGCAGCAGGCG TCGAGGGAGCTGAGCAGGGATGGGATGAGTGGTGATTTGTTTTGG CAATGGGGCGATCAGTTGAGTACTGGGCAGACACATAATGATGG GTTCACGATTTATTATGGTTCTTCGTTGGCTACTTGCTTGGTTACTG ACCATGTGAGGGCTATCAATGCTCTCCCGGCG SEQ ID NO :17 CTCCCCCAAGCACAAGGTGGAGGAGCAGCCGCCTCAGCCAAAGT CAGCGGCACCCGCTTCGTGATCGACGGCAAAACCGGCTACTTTGC AGGAACAAACTCCTACTGGATTGGCTTCCTGACCAACAACAGAGA TGTCGACACAACCTTGGACCACATCGCCTCCTCGGGCCTCAAAAT CCTCCGCGTCTGGGGCTTCAACGACGTGAACAACCAACCATCCGG TAACACCGTCTGGTTCCAACGCCTCGCCTCCTCAGGCTCCCAAATC AACACCGGCCCCAACGGCCTCCAACGCCTCGACTACCTCGTCAGA TCAGCCGAAACCCGCGGCATCAAGCTCATCATCGCGCTGGTCAAC TACTGGGATGACTTTGGCGGCATGAAAGCCTACGTCAACGCCTTT GGAGGCACAAAAGAATCCTGGTACACCAACGCCCGCGCTCAGGA GCAGTACAAGCGTTACATCCAGGCTGTCGTCTCGCGATATGTCAA CAGCCCCGCAATCTTTGCGTGGGAACTTGCCAACGAGCCCAGGTG CAAGGGGTGCAACACGAATGTTATTTTCAACTGGGCGACGCAGAT TTCAGATTATATCCGGAGCTTGGATAAGGATCATTTGATCACCCTT GGGGATGAGGGGTTTGGGTTGCCGGGGCAGACGACGTATCCGTAT CAGTATGGGGAGGGGACCGACTTCGTCAAGAATCTGCAGATTAAG AATCTGGACTTTGGGACGTTTCATATGTATCCTGGTCATTGGGGGT TGCCGACGAGTTTTGGTCCAGGGTGGATTAAGGATCATGCGGCGG CTTGCAGGGCGGCGGTGAAGCCGTGTTTGTTGGAGGAGTATGGGT ATGAGAGTGATAGGTGTAATGTGCAGAAGGGCTGGCAGCAGGCG TCGAGGGAGCTGAGCAGGGATGGGATGAGTGGTGATTTGTTTTGG CACTGGGGCGATCAGTTGAGTACTGGGCAGACACATAATGATGGG TTCACGATTTATTATGGTTCTTCGTTGGCTACTTGCTTGGTTACTGA CCATGTGAGGGCTATCAATGCTCTCCCGGCG SEQ ID NO :18 CTCCCCCAAGCACAAGGTGGAGGAGCAGCCGCCTCAGCCAAAGT CAGCGGCACCCGCTTCGTGATCGACGGCAAAACCGGCTACTTTGC AGGAACAAACTCCTACAGGATTGGCTTCCTGACCAACAACAGAGA TGTCGACACAACCTTGGACCACATCGCCTCCTCGGGCCTCAAAAT CCTCCGCGTCTGGGGCTTCAACGACGTGAACAACCAACCATCCGG TAACACCGTCTGGTTCCAACGCCTCGCCTCCTCAGGCTCCCAAATC AACACCGGCCCCAACGGCCTCCAACGCCTCGACTACCTCGTCAGA TCAGCCGAAACCCGCGGCATCAAGCTCATCATCGCGCTGGTCAAC TACTGGGATGACTTTGGCGGCATGAAAGCCTACGTCAACGCCTTT GGAGGCACAAAAGAATCCTGGTACACCAACGCCCGCGCTCAGGA GCAGTACAAGCGTTACATCCAGGCTGTCGTCTCGCGATATGTCAA CAGCCCCGCAATCTTTGCGTGGGAACTTGCCAACGAGCCCAGGTG CAAGGGGTGCAACACGAATGTTATTTTCAACTGGGCGACGCAGAT CTCAGATTATATCCGGAGCTTGGATAAGGATCATTTGATCACCCTT GGGGATGAGGGGTTTGGGTTGCCGGGGCAGACGACGTATCCGTAT CAGTATGGGGAGGGGACCGACTTCGTCAAGAATCTGCAGATTAAG AATCTGGACTTTGGGACGTTTCATATGTATCCTGGTCATTGGGGGG CGCCGACGAGTTTTGGTCCAGGGTGGATTAAGGATCATGCGGCGG CTTGCAGGGCGGCGGGGAAGCCGTGTTTGTTGGAGGAGTATGGGT ATGAGAGTGATAGGTGTAATGTGCAGAAGGGCTGGCAGCAGGCG TCGAGGGAGCTGAGCAGGGATGGGATGAGTGGTGATTTGTTTTGG CAATGGGGCGATCAGTTGAGTACTGGGCAGACACATAATGATGG GTTCACGATTTATTATGGTTCTTCGTTGGCTACTTGCTTGGTTACTG ACCATGTGAGGGCTATCAATGCTCTCCCGGCG SEQ ID NO :19 AAGCCTTGCAAGCCTCGTGATGGCCCCGTGACCTACGAGGCCGAA GATGCCATCCTCACCGGCACCACCGTCGACACTGCTCAGGTAGGC TATACCGGCCGTGGCTACGTCACCGGCTTCGACGAGGGCTCCGAC AAGATCACCTTCCAGATCAGCTCCGCCACCACCAAGCTCTACGAC CTCTCCATCCGGTACGCCGCCATCTACGGTGACAAGCGAACCAAC GTCGTCCTCAACAACGGTGCCGTCAGCGAGGTCTTCTTCCCCGCC GGTGACTCTTTTACTTCTGTCGCCGCCGGCCAGGTCCTCCTCAACG CTGGACAAAACACCATCGACATCGTCAACAACTGGGGATGGTACC TCATCGACTCCATCACCCTCACCCCCTCCGCCCCTCGCCCCCCCCA CGACATCAACCCCAACCTCAATAACCCCAACGCCGACACCAACGC CAAGAAGCTCTACTCCTACCTCCGCTCTGTCTACGGCAACAAGAT CATCTCTGGCCAGCAGGAGCTCCACCACGCCGAGTGGATCAGACA GCAAACCGGCAAGACTCCCGCGCTGGTGGCTGTCGATCTGATGGA TTACTCCCCCTCCCGCGTCGAGCGTGGCACCACCAGCCATGCCGT CGAGGACGCCATCGCCCACCACAACGCAGGCGGTATCGTTTCTGT CCTCTGGCACTGGAACGCTCCCGTCGGTCTGTATGACACCGAAGA GAACAAGTGGTGGTCCGGCTTCTACACTCGGGCTACCGACTTTGA CATTGCCGCCACGTTGGCCAACCCCCAGGGTGCGAACTACACTCT TCTCATCAGGGACATTGACGCGATTGCTGTCCAGCTCAAGAGGCT GGAGGCTGCTGGTGTTCCGGTCTTGTGGAGACCTCTTCACGAGGC GGAGGGTGGTTGGTTCTGGTGGGGAGCCAAGGGGCCAGAGCCGG CGAAGCAGCTTTGGGATATCTTGTATGAGCGTCTGACGGTGCACC ATGGTTTGGATAATTTGATTTGGGTGTGGAATTCGATTTTGGAGGA TTGGTATCCGGGTGATGATACGGTTGATATCTTGTCGGCCGATGTG TATGCGCAGGGTAATGGGCCCATGTCGACTCAGTACAATGAGTTG ATCGCCCTCGGCAGGGACAAGAAGATGATTGCTGCTGCAGAGGTT GGCGCTGCCCCTTTGCCCGGCTTGTTGCAGGCTTACCAGGCCAACT GGCTGTGGTTTGCTGTCTGGGGTGATGACTTTATCAGCAACCCCA GCTGGAACACGGTTGCTGTTCTCAACGAGATCTACAACAGCGACT ATGTGTTGACGCTGGATGAGATTCAGGGGTGGAGGAGT Un polynucléotide de l'invention est de préférence une séquence isolée et/ou purifiée. L'invention a encore pour objet un vecteur comprenant un polynucléotide de l'invention. Le terme « vecteur » (ou encore « plasmide » ou « vecteur d'expression ») fait référence à une molécule d'acide nucléique dans laquelle il est possible d'insérer des fragments d'acide nucléique étrangers, pour ensuite les introduire, les maintenir voire les exprimer dans une cellule hôte. Un polynucléotide de l'invention peut être introduit dans n'importe quel vecteur 10 approprié pour son expression, tel qu'un plasmide, un cosmide, un épisome, un chromosome artificiel, un phage ou un vecteur viral. Le choix des vecteurs utilisables dans le cadre de la présente invention est vaste. Il peut s'agir de vecteurs de clonage et/ou d'expression. D'une manière générale, ils sont connus de l'homme de l'art et nombre d'entre eux sont disponibles commercialement 15 mais il est également possible de les construire ou les modifier par les techniques de manipulation génétique. On peut citer à titre d'exemples les plasmides tels que JMP61, pPICZaA, pPICZaB, pPICZaC... De préférence, un vecteur mis en oeuvre dans le cadre de la présente invention contient une origine de réplication assurant l'initiation de la réplication dans une cellule productrice et/ou une cellule hôte. Il comprend également les éléments nécessaires à l'expression d'un polynucléotide de l'invention, tels qu'un promoteur et un terminateur. Des exemples de promoteur utilisables selon l'invention comprennent, mais ne sont pas limités aux promoteurs PDX2, AOX (alcohol oxidase). Il peut en outre comprendre un ou plusieurs gène(s) de sélection permettant de sélectionner ou identifier les cellules transfectées par ledit vecteur (complémentation d'une mutation d'auxotrophie, gène codant pour la résistance à un antibiotique...). Il peut aussi comprendre des éléments supplémentaires améliorant son maintien et/ou sa stabilité dans une cellule donnée (séquence cer qui favorise le maintien monomérique d'un plasmide, séquences d'intégration dans le génome cellulaire). Le vecteur de l'invention peut éventuellement être associé à une ou plusieurs substances améliorant l'efficacité transfectionnelle et/ou la stabilité du vecteur. Ces substances sont largement documentées dans la littérature accessible à l'homme de l'art. A titre illustratif mais non limitatif, il peut s'agir de polymères, de lipides notamment cationiques, de liposomes, de protéines nucléaires ou encore de lipides neutres. Ces substances peuvent être utilisées seules ou en combinaison. Une combinaison envisageable est un vecteur recombinant plasmidique associé à des lipides cationiques (DOGS, DC-CHOL, spermine-chol, spermidine-chol etc.) et des lipides neutres (DOPE). La présente invention concerne également une cellule hôte comprenant un vecteur ou un polynucléotide de l'invention. Aux fins de la présente invention, une telle cellule est constituée par toute cellule transfectable par un polynucléotide ou un vecteur de l'invention tels que décrits ci-avant. Les systèmes d'expression bactériens peuvent être utilisés dans le cadre de la 30 présente invention. Des exemples de cellules hôtes bactériennes comprennent notamment des bactéries des genres Escherichia (par exemple Escherichia coli), Pseudomonas (par exemple Pseudomonas fluorescens ou Pseudomonas stutzerei), Proteus (par exemple Proteus mirabilis), Ralstonia (par exemple Ralstonia eutropha), Streptomyces, Staphylococcus (par exemple Streptomyces carnosus), Lactococcus (par exemple Lactoccocus lactis), ou Bacillus (par exemple Bacillus subtilis, Bacillus megaterium ou Bacillus licheniformis), etc. Les cellules de levures sont aussi des cellules hôtes pouvant convenir dans le cadre de l'invention. Des exemples de cellules hôtes de levure pouvant utilisées comprennent, mais ne sont pas limités à, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe, Klyveromyces lactis, Yarrowia lipolytica, Hansenula polymorpha ou Pichia pastoris. Les systèmes d'expression fongiques sont aussi envisageables dans le cadre de la présente invention, tels que Aspergillus piger, Chrysosporium lucknowense, Aspergillus (par exemple Aspergillus oryzae, Aspergillus piger, Aspergillus nidulans, etc.), Podospora anserina ou Trichoderma reesei. D'autres systèmes d'expression tels que les systèmes d'expression mammifères peuvent encore être utilisés dans le cadre de l'invention, par exemple les lignées cellulaires NSO, CHO, BHK, les systèmes transgéniques d'origine mammifère, mais aussi les cellules d'insectes ou les systèmes d'expression viraux tels que les bactériophages M13, T7 ou X ou encore les systèmes d'expression Baculovirus. De préférence, la cellule hôte de l'invention est choisie parmi Yarrowia lipolytica et Pichia pastoris. Le polynucléotide compris dans le vecteur et/ou la cellule hôte de l'invention peut de manière optionnelle être associé à une séquence codant pour un peptide signal (aussi appelée séquence signal), permettant la sécrétion des marmanases mutées de l'invention dans l'espace extracellulaire et ainsi une détection et une purification simplifiées de celles-ci dans le surnageant de culture des cellules hôtes. Les séquences promotrices et signal utilisées dans le cadre de la présente invention peuvent être modifiées et améliorées par des techniques d'optimisation des séquences bien connues de l'homme du métier. Un autre objet de l'invention concerne un procédé de production d'un polypeptide de l'invention, ledit procédé comprenant les étapes de : (i) production et amplification d'un fragment d'acide nucléique comprenant un polynucléotide de l'invention, (ii) insertion dudit fragment d'acide nucléique obtenu à l'étape (i) dans un vecteur d'expression comprenant un promoteur, de manière à permettre l'expression dudit fragment d'acide nucléique sous le contrôle dudit promoteur, (iii) introduction du vecteur d'expression obtenu à l'étape (ii) dans une cellule hôte, (iv) mise en culture de la cellule hôte obtenue à l'étape (iii), (v) récupération du polypeptide de l'invention. Il est aisé pour un homme du métier de produire un fragment d'acide nucléique comprenant un polynucléotide de l'invention. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, le fragment d'acide nucléique 15 de l'étape (i) comprend un polynucléotide associé à une séquence signal. De préférence, la séquence signal est fusionnée au polynucléotide de l'invention en amont de celle-ci. Des exemples de séquences signal comprennent, mais ne sont pas limités à la séquence du peptide de sécrétion preprolip2 (Bordes et al., 2007, J Microbiol Meth., 70, 493), la séquence de sécrétion du pré-pro-facteur a de S. cerevisiae (Kjeldsen, 2000, 20 Appl Microbiol Biotechnol. 54(3):277-86) ou encore la séquence signal des protéines natives. Les méthodes d'amplification d'un fragment d'acide nucléique sont bien connues de l'homme du métier, et comprennent notamment la réaction en chaine par polymérase ou PCR (Polymerase Chain Reaction). 25 Un exemple de paires d'amorces utilisable pour l'amplification d'un polypeptide de l'invention dérivé de la mannanase Man5A est fourni par les séquences SEQ ID NO :20-21 ; un exemple de paires d'amorces utilisable pour l'amplification d'un polypeptide de l'invention dérivé de la mannanase Man26A est fourni par les séquences SEQ ID NO :22-23. SEQ ID NO :20 TTTGAATTCCTCCCCCAAGCACAAGGTG SEQ ID NO :21 TTTTCTAGACCCGCCGGGAGAGCATTGATAG SEQ ID NO :22 TTTATCGATAAAGCCTTGTAAGCCTCGTG SEQ ID NO :23 TTTTCTAGACCACTCCTCCACCCCTGAATCTC Les techniques d'insertion d'un fragment d'acide nucléique dans un vecteur d'expression sont bien connues de l'homme du métier. Ladite séquence est insérée dans le vecteur de manière à être liée de manière opérationnelle au promoteur présent dans le vecteur, cela permettant l'expression de ladite séquence nucléique sous le contrôle dudit promoteur. Généralement, l'expression « lié de manière opérationnelle » signifie que le promoteur est positionné par rapport au fragment d'acide nucléique inséré de manière à ce que la transcription puisse commencer. Cela signifie que le promoteur est positionné en amont dudit fragment d'acide nucléique, à une distance permettant l'expression de ce dernier. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, le vecteur d'expression comprend un gène de sélection. Des exemples de gènes de sélection comprennent, mais ne sont pas limités au gène de résistance de la zéocine et au gène d'auxotrophie à l'histidine De préférence, le vecteur d'expression utilisé à l'étape (ii) est JMP61, pPICZaA, ou pPICZaC. L'étape (iii) d'introduction du vecteur dans la cellule hôte est réalisée par des techniques de transformation bien connues de l'homme du métier, telles que l'électrolocation, la transfection, la lipofection, la transfection chimique, la transformation par l'acétate de lithium, la transformation par biolistique, la transformation par PEG, la fusion de protoplaste, la transformation par liposome, la transformation par Agrobacterium tumefaciens, les transformations virales ou adénovirales ou encore la transduction. De préférence, la cellule hôte de l'étape (iii) est Pichia pastoris ou Yarrowia 25 lipolytica. Dans le cas où la cellule hôte est Pichia pastoris, le vecteur de l'étape (ii) est de préférence pPICZaA, ou pPICZaC. Dans le cas où la cellule hôte est Yarrowia lipolytica, le vecteur de l'étape (ii) est de préférence JMP61. Dans le cas où le vecteur comprend un gène de sélection, le procédé de production de l'invention peut comprendre une étape supplémentaire (iv') de sélection des cellules ayant intégré le vecteur d'expression à l'étape (iii), pour augmenter le rendement de production d'un polypeptide de l'invention. Ce type de sélection est réalisé par des techniques bien connues de l'homme du métier. La récupération du polypeptide de l'invention est faite à partir du milieu de culture de l'étape (iv) et réalisée par des techniques bien connues de l'homme du métier. Si le fragment d'acide nucléique de l'étape (i) comprend le polynucléotide de l'invention associé à une séquence signal, la récupération pourra se faire directement dans le sécrétome des cellules hôtes présent dans le milieu de culture obtenu à l'étape (iv). Si le fragment d'acide nucléique de l'étape (i) ne comprend pas de séquence signal, il sera nécessaire de lyser les cellules et de récupérer le polypeptide de l'invention par exemple dans le surnageant du milieu de culture après centrifugation de celui-ci. L'invention concerne une composition comprenant au moins un polypeptide, un polynucléotide, un vecteur ou une cellule hôte de l'invention. Selon l'invention, ladite composition peut comprendre un ou plusieurs polypeptide(s) de l'invention (ou un polynucléotide, un vecteur ou une cellule hôte de 1' invention). Ladite composition peut aussi comprendre, de manière optionnelle, une ou plusieurs mannanase(s) native(s) (ou au moins un ou plusieurs polynucléotide(s), vecteur(s) ou une cellule(s) hôte(s) associé(s)) de Podospora anserina, telle que, par exemple, les mannanases natives Man5A et Man26A. Ladite composition peut encore comprendre, de manière optionnelle, une ou plusieurs mannanase(s) (ou au moins un ou plusieurs polynucléotide(s), vecteur(s) ou une cellule(s) hôte(s) associé(s)), natives ou mutées, de n'importe quelle espèce. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, ladite composition comprend éventuellement une ou plusieurs autre(s) hydrolase(s) (ou polynucléotides, vecteurs ou une cellules hôtes associés), la ou lesdites autre(s) hydrolase(s) étant utile(s) à la dégradation de la biomasse lignocellulosique, telles que des endoglucanases, des exoglucanases, des polysaccharides mono-oxygénases, des P-glucosidases, des cellobiose déshydrogénases, des xylanases, des arabinofuranosidases, des galactosidases, des arabinanases, des carbohydrates estérases, des glucuronidases, des méthyl glucuronoyl estérases, des acétyl estérases, des pectinases. Dans un mode de réalisation plus particulier de l'invention, ladite composition comprend un cocktail enzymatique de cellulases de Trichoderma reesei. Dans un mode de réalisation préféré, le cocktail enzymatique de cellulases de Trichoderma reesei correspond au sécrétome dudit champignon Trichoderma reesei. Le terme « sécrétome » fait référence à la totalité des protéines libérées par une cellule, un tissu ou un organisme. Les méthodes pour récupérer le sécrétome d'une cellule, et notamment les méthodes d'obtention d'un cocktail de cellulases de Trichoderma reesei sont bien connues de l'homme du métier. De tels cocktails de cellulases de Trichoderma reesei sont par ailleurs disponibles commercialement, tels que les cocktails enzymatiques suivants : GC220 (GENENCOR), MULTIFECT GC (GENENCOR), Accellerase (Danisco), Cellic C-Tec (NOVOZYME), ou encore CELLUCLAST 1.5L (NOVOZYME). Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, ladite composition comprend en outre un cocktail enzymatique de cellulases de Trichoderma reesei, et un cocktail enzymatique de Pycnoporus cinnabarinus, comprenant une cellobiose deshydrogénase (CDH) ou une cellobiose deshydrogénase de Pycnoporus cinnabarinus (ou un polynucléotide, vecteur ou une cellule hôte associé). Dans un mode de réalisation préféré, ladite composition comprend un cocktail enzymatique de cellulases de Trichoderma reesei et au moins un polypeptide de l'invention, à une concentration d'au plus 10 mg de polypeptide par gramme de matériel à hydrolyser, préférentiellement 10 f.tg de polypeptide par gramme de matériel à hydrolyser. La présente demande de brevet vise aussi à couvrir les diverses utilisations possibles d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou 30 d'une composition de l'invention. Les mannanases sont des enzymes aujourd'hui utilisées dans des domaines industriels très variés tels que l'industrie du papier et de la cellulose, l'industrie agricole et alimentaire, l'extraction du café, le forage pétrolier ou encore l'industrie du détergent. Ainsi, un objet de l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention pour la dégradation des composés comprenant des mannanes. Un mannane est un polyoside composé de monomères de mannose. Le terme « mannane » est ici utilisé au sens large, et englobe les sucres complexes et dérivés comprenant des polymères de mannose. Notamment, le terme englobe les mannanes simples (polymères uniquement constitués de mannose), galactomannanes, les glucomannanes et les galactoglucomannanes. Les mannanes sont présents dans de nombreux composés végétaux, tels que les fruits et certaines algues. Ils sont également abondant dans certains graines et noix (« ivory nut », gomme de caroube, gomme tara, gomme guar, gomme de fenurec). Ils constituent notamment un composant important de la biomasse, notamment la biomasse lignocellulosique tel que les bois tendres (gymnospermes), les bois de résineux (pin, épicéa) et en quantité non négligeables dans les bois durs. Dans le domaine de l'énergie, et plus particulièrement des bioénergies, le terme de biomasse désigne l'ensemble des matières organiques d'origine végétale (algues incluses), animale ou fongique pouvant devenir source d'énergie, par exemple par combustion, après méthanisation (biogaz) ou après de nouvelles transformations chimiques (agrocarburant). Un de ses constituants principaux est la biomasse lignocellulosique. Le terme « biomasse lignocellulosique » fait référence à un matériau dérivé de plantes ou d'autres organismes dans lequel le contenu en carbohydrate est substantiellement de la lignocellulose constitué de cellulose, d'hémicellulose et de la lignine (à hauteur d'au moins 5%). Elle est constituée par exemple de bois et résidus verts, de paille, briquettes de paille, de bagasse de canne à sucre, ou encore de fourrage. La biomasse lignocellulosique inclut notamment des matériaux traités, comme le papier ayant plus de 5% de lignine, mais aussi les matières premières naturelles, comme les déchets agricoles. Un mélange d'eau et/ou d'autres agents et solvants comprenant de la biomasse lignocellulosique comme principal composant solide peut aussi être considéré comme de la biomasse lignocellulosique en tant que telle. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, la biomasse lignocellulosique est sélectionnée parmi le groupe comprenant des résidus agricoles herbacés, des résidus de sylviculture, des déchets solides municipaux, les déchets de type papier, la pulpe et des résidus de papeterie, ou une combinaison quelconque de cela. Dans un autre mode de réalisation préféré, la biomasse lignocellulosique selon l'invention est choisie dans un groupe comprenant les tiges et rafles de maïs, la paille par exemple de riz, blé, seigle, avoine, orge, lavandin, la bagasse, le miscanthus, les herbes, le bambou, la jacinthe d'eau, le bois consistant de bois dur par exemple l'eucalyptus, le peuplier en taillis, le bois consistant de bois tendre par exemple l'acacia, la pulpe de bois tendre... Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention pour la dégradation de la biomasse lignocellulosique. Dans un mode de réalisation plus particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention pour le prétraitement de la biomasse lignocellulosique à dégrader. Par « prétraitement », on entend une manipulation de la biomasse lignocellulosique qui rend ses composants cellulosiques plus accessibles aux enzymes convertissant les polymères de carbohydrates en sucres fermentables. Dans un mode de réalisation préféré, l'invention concerne l'utilisation d'une composition comprenant un polypeptide de l'invention (ou un polynucléotide, un vecteur ou une cellule hôte de l'invention) et un cocktail enzymatique de cellulases Trichoderma reesei pour la dégradation de la biomasse lignocellulosique et/ou pour le prétraitement de la biomasse lignocellulosique à dégrader. Dans un mode de réalisation encore plus préféré, ladite composition peut en outre comprendre d'autres mannanases natives ou mutées, de Podospora anserina ou d'autres espèces, et d'autres enzymes utiles à la dégradation de la biomasse lignocellulosique. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention pour la production de biocarburants. En effet, les composants de la biomasse lignocellulosique constituent des substrats convenables pour la production de biocarburants. Les polypeptides de l'invention sont utilisés pour convertir la biomasse lignocellulosique, les produits ainsi obtenus pouvant être utilisés comme biocarburants (par exemple du bioéthanol, biobutanol) ou comme composants moléculaires de tels carburants (par exemple l'acide 3-hydroxy propionique, l'acide aspartique, le xylitol et l'acide gluconique). Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention pour la stimulation de puits de pétrole et de gaz par fracturation hydraulique. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention pour la production de mannose ou de mannooligosaccharides à partir de composés végétaux contenant des mannanes. Des exemples de tels composés comprennent, mais ne sont pas limités à, le noyau de palmier à huile, les noix de coco, le coprah, le konjac, la gomme de caroube, la gomme de guar, le soja... Le mannose est en effet une ressource relativement rare dotée de propriétés bénéfiques et utilisé dans la nourriture, les produits pharmaceutiques, les cosmétiques, les textiles et dans la manufacture de polymères. Il peut notamment être utilisé comme matière première pour la production de mannitol. Dans un mode de réalisation plus particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention pour la production de mannitol. De nombreuses utilisations sont envisageables dans l'industrie alimentaire et agricole. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention comme complément alimentaire. En effet, les mannanases promeuvent la dégradation des composants alimentaires contenant des mannanes, libérant ainsi des oligomannoses connus comme ayant des propriétés bénéfiques pour la santé humaine et animale, et aident à la digestion en dégradant des polymères difficilement dégradés par les organismes ; ils sont notamment utiles à l'organisme en tant que prébiotiques. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une 10 composition de l'invention dans le traitement de composés alimentaires. En effet, l'application de mannanases aux ananas, citrons, oranges, pamplemousses avant de les presser permet une amélioration de la récupération des jus de ces fruits. Par ailleurs, les mannanases peuvent aussi être utilisées dans le cadre de 15 l'extraction de l'huile de palme : leur application sur des tourteaux de noyaux de palmier à huile, après une première extraction par pression, permet une amélioration du rendement, mais aussi l'obtention de tourteaux de noyaux de palmier à huile de meilleure qualité (car ils contiennent moins de fibres de galactomannanes, composants anti-nutritifs dans l'alimentation animale). 20 Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention pour l'extraction de l'huile de palme. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une 25 composition de l'invention pour l'extraction du café. L'utilisation de mannanases dans l'extraction de café permet l'hydrolyse des galactomannanes présents dans les extraits liquides de café, permettant ainsi de diminuer la viscosité de ces extraits liquides et de diminuer la consommation d'enzymes et d'énergie au cours de l'extraction. 30 Par ailleurs, dans le cadre de l'extraction du café, les déchets peuvent être utilisés pour la production de mannose tels de décrit ci-avant. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention comme ingrédient de cuisson. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention pour le blanchiment de la pâte à papier. Un polypeptide, un polynucléotide, un vecteur, une cellule hôte et/ou une composition de l'invention peut être utilisée seul(e), ou en association avec une ou plusieurs autres mannanase(s) (polypeptide(s), polynucléotide(s), vecteur(s), cellule hôte(s) et/ou composition(s) associé(s)), natives ou mutées, avec des xylanases, des endoglucanases, des a-galactosidases, des cellobiohydrolases... Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention pour le désencollage et le blanchissement des fibres textiles. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention dans des compositions détergentes. Selon l'invention, un polypeptide, un polynucléotide, un vecteur, une cellule hôte et/ou une composition de l'invention peut être utilisée seul(e), ou en association avec d'autres mannanases, natives ou mutées, des amylases, cellulases, lipases, pectinases, protéases et endoglucanases. Les mannanases montrent aussi des propriétés d'intérêt pour l'industrie pharmaceutique. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention pour l'élimination de biofilms. Pour l'élimination de biofilms, un polypeptide (un polynucléotide, un vecteur, une cellule hôte ou une composition) de l'invention peut être utilisée seul(e), ou en association avec des détergents, d'autres mannanases, natives ou mutées, d'a- galactosidases, pectinases, xylanases, arabinoxylanases, protéases, bêta-glucanases, cellulases, galactanases, endoglucanases, xylosidases, cutinases et lipases. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention dans des systèmes de distribution ciblée ou à libération contrôlée dans le temps. De tels systèmes sont très utilisés dans l'industrie du médicament pour l'administration de principes actifs jusqu'à un organe donné et/ou pendant une durée définie. Ils sont réalisés à l'aide des systèmes basés sur les gels de mannopolymères qui contiennent et transportent la matière. La fonction d'une mannanase dans un tel système est la sortie contrôlée de la matière par la dégradation partielle ou complète du gel, en raison d'un changement spécifique de l'environnement du gel, par exemple le pH et/ou la température, qui active les mannanases. Les mannanases montrent aussi des applications dans les procédés de fermentation alcoolique et/ou de production d'alcool. Ainsi, un autre objet de l'invention est relatif à une méthode de production d'un produit de fermentation à partir de la biomasse lignocellulosique, ladite méthode comprenant les étapes de : Liquéfaction de la biomasse lignocellulosique par utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention, dans le but d'obtenir un produit liquéfié ayant une masse sèche d'au moins 20%, (ii) Saccharification dudit produit liquéfié obtenu à l'étape (i) avec un cocktail enzymatique, (iii) Fermentation du produit de saccharification obtenu à l'étape (ii) par utilisation d'un microorganisme fermentant. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le cocktail enzymatique utilisé à l'étape (ii) est une composition de l'invention, comprenant notamment (a) un 30 polypeptide, un polynucléotide, un vecteur et/ou une cellule hôte et (b), de manière optionnelle, un cocktail de cellulases de Trichoderma reesei. Un autre objet de l'invention est relatif à une méthode de production d'acide gluconique, d'acide xylonique et/ou d'acide xylobionique, ou d'accroissement de la d'acide gluconique, d'acide xylonique et/ou d'acide xylobionique, à partir de la 5 biomasse lignocellulosique, ladite méthode comprenant les étapes de : Liquéfaction de la biomasse lignocellulosique par utilisation d'un polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention, dans le but d'obtenir un produit liquéfié ayant une masse sèche d'au moins 20%, 10 (ii) Saccharification dudit produit liquéfié obtenu à l'étape (i) avec un cocktail enzymatique. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le cocktail enzymatique utilisé à l'étape (ii) est une composition de l'invention, comprenant notamment (a) un polypeptide, un polynucléotide, un vecteur et/ou une cellule hôte et (b), de manière 15 optionnelle, un cocktail de cellulases de Trichoderma reesei. Un autre objet de l'invention est relatif à une méthode d'accroissement de la production de sucres à partir de la biomasse lignocellulosique, ladite méthode comprenant les étapes de : (i) Liquéfaction de la biomasse lignocellulosique par utilisation d'un 20 polypeptide, d'un polynucléotide, d'un vecteur, d'une cellule hôte et/ou d'une composition de l'invention, dans le but d'obtenir un produit liquéfié ayant une masse sèche d'au moins 20%, (ii) Saccharification dudit produit liquéfié obtenu à l'étape (i) avec un cocktail enzymatique. 25 Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le cocktail enzymatique utilisé à l'étape (ii) est une composition de l'invention, comprenant notamment (a) un polypeptide, un polynucléotide, un vecteur et/ou une cellule hôte et (b), de manière optionnelle, un cocktail de cellulases de Trichoderma reesei. EXEMPLES D'autres caractéristiques de l'invention apparaîtront dans les exemples qui suivent, sans pour autant que ceux-ci ne constituent une quelconque limitation de l'invention. Les inventeurs ont développé des mutants des protéines Man5A et Man26A de Podospora anserina, et ont étudié leur activité, cherchant à accroître l'efficacité de ces 5 enzymes, notamment pour augmenter l'efficacité des cocktails enzymatiques utilisés pour la dégradation de la biomasse lignocellulosique. Production des enzymes natives Ainsi, les deux gènes codant pour les protéines Man5A (séquence nucléique définie par SEQ ID NO :2) et Man26A (séquence nucléique définie par SEQ ID 10 NO :12) de Podospora anserina ont chacun été amplifiés avec les amorces définies par les séquence SEQ ID NO :20-21 et 22-23 respectivement, insérés dans le vecteur d'expression JMP61, associés à un peptide de sécrétion de preprolip2 (Bordes et al., 2007, J Microbiol Meth., 70, 493) et placés sous le contrôle du promoteur inductible par acide oléique PDX2. Les cellules de levure de Yarrowia lipolytica ont été transformées 15 avec les vecteurs obtenus (JMP61-Man5A et JMP61-Man26A). Les transformants positifs ont été sélectionnés sur des plaques comprenant du galactomannane. Ils étaient capables de produire des enzymes Man5A et Man26A fonctionnelles, à un niveau de 10.4 +/- 0.2 et 11.2 +/- 0.6 U.mL-1 in vitro. Les activités moyennes obtenues après répétition des expérimentations étaient de 20 1.78 +/- 0.138 et 1.24 +/- 0.152 U.mU1 de culture pour Man5A et Man26A respectivement. Production de mutants Les chercheurs ont alors développé des mutants, puis étudié leur activité. Quatre mutants ont été développés pour Man5A : 25 - le mutant G311S, défini par la séquence protéique SEQ ID NO :4, et codé par la séquence SEQ ID NO :15, - le mutant K139R/Y223H, défini par la séquence protéique SEQ ID NO :6, et codé par la séquence SEQ ID NO :16, - le mutant V256L/G276V/Q316H, défini par la séquence SEQ ID NO :8, et codé par la séquence nucléique SEQ ID NO :17, et - le mutant W36R/I195T/V256A, défini par la séquence SEQ ID NO :10, et codé par la séquence nucléique SEQ ID NO :18. Un unique mutant a été développé à partir de Man26A : - le mutant P140L/D416G, défini par la séquence SEQ ID NO :14, et codé par la séquence nucléique SEQ ID NO :19. Etude de l'activité des souches de Yarrowia lipolytica exprimant ces mutants La souche exprimant le mutant P140L/D416G de Man26A a montré une 10 augmentation de l'activité sur la réaction d'hydrolyse du galactomannane de 147% comparé à une souche exprimant la Man26 de Podospora anserina native. Sur la même réaction, les souches exprimant les mutants de Man5A ont montré une augmentation de l'activité de 46, 9, 20 et 11% respectivement pour les mutants V256L/G276V/Q31614, W36R/I195TN256A, K139R/Y223H, G311 S comparé à une souche 15 de Yarrowia lipolytica exprimant la protéine Man5A de Podospora anserina native. Les inventeurs ont alors voulu évaluer plus précisément l'intérêt de ces mutants d'un point de vue enzymatique, notamment pour la dégradation de la biomasse lignocellulosique. Ils ont donc étudié le profil d'hydrolyse du galactomannane pour chacun d'eux. 20 Production des mutants dans le système d'expression Pichia pastoris Les mutants ont été produits dans le système d'expression Pichia pastoris, pour l'obtention de niveaux d'expression supérieurs à ceux obtenus dans le système d'expression Yarrowia Les gènes codant pour les protéines natives Man5A et Man26A de Podospora 25 anserina et les mutants développés ont chacun été amplifiés avec les amorces définies par les séquences SEQ ID NO :20-23 (amorces définies par les séquences SEQ ID NO :20-21 pour Man5A et ses mutants, amorces définies par les séquences SEQ ID NO :22-23 pour Man26A et son mutant), insérés dans le vecteur d'expression pPICZaA, associés à la séquence de sécrétion du pré-pro-facteur a de Saccharomyces cerevisiae (Kjeldsen, 2000, Appl Microbiol Biotechnol. 54(3):277-86) et à la séquence C-terminale (His)6tag, placés sous le contrôle du promoteur AOX (alcohol oxidase). Le vecteur d'expression utilisé comprenait un gène de résistance à la zéocine. Les cellules de Pichia pastoris ont été transformées avec les vecteurs obtenus (pPICZaA-Man5A, pPICZaA-Man26A, pPICZaA-Man5A-G311S, pPICZaA-Man5AK139R/Y223H, pPICZaA-Man5A-V256L/G276V/Q316H, pPICZaA--Man5A W36R/I195TN256A, pPICZaA-Man26A-P140L/D416G). Les transformants positifs ont été sélectionnés de par leur résistance à la zéocine. Tous les mutants ont été produits avec succès dans le système d'expression Pichia pastoris à environ lg/L de milieu de culture et purifiés grâce à la séquence C-terminale (His)6tag. Caractérisation cinétique des mutants Pour chaque mutant, la capacité d'hydrolyse du galactomannane a été évaluée. La détermination des paramètres cinétiques de chaque enzyme, native ou mutée, sur la réaction d'hydrolyse du galactomannane a été réalisée grâce au test d'activité DNS : 1 tag de chaque enzyme, native ou mutée, a été mélangée à 190 1.1g de galactomannane et incubée à 40°C pendant 5 minutes. La réaction a été stoppée par addition de 300 'JI de DNS et les échantillons ont été placés pendant 10 minutes à 95°C. La densité optique D0540 a été mesurée relativement au standard du mannose de 0 à 20 mM. Une unité d'activité mannanase (endo-131,4-mannanase) a été définie comme étant la quantité de protéine nécessaire à la libération d'l 1.tmol de monomère de sucre par minute. Les paramètres cinétiques ont été estimés par analyse de régression non-linéaire 25 pondérée, à l'aide du programme GRAFIT. Les constantes Kcat, KM, et l'efficacité catalytique ont été mesurées pour chaque enzyme, native ou mutée. Les résultats sont résumés dans le Tableau 1 : Enzyme testée Efficacité catalytique Augmentation de l'efficacité catalytique Kcat/KM (ng-i.mri.min-i) Man26A native 1398 - P140L/D416G 1838 +31% Man5A native 145 - V25611G276V/Q316H 191 + 31% W36R/1195T/V256A 259 + 78% K139R/Y223H 247 + 70% G311S 1187 Multipliée par un facteur 8 Tableau 1 : Augmentation de l'efficacité catalytique de chaque mutant par rapport à son enzyme native. Au vu des valeurs apparentes de KM, tous les mutants ont montré une affinité apparente améliorée pour le galactomannane. Tous les mutants affichent une efficacité catalytique améliorée d'au moins 30% par rapport à l'enzyme native. Le mutant G311S de Man5A montre lui une activité étonnante, augmentée d'un facteur 8 par rapport à l'enzyme native. REVENDICATIONS1. Un polypeptide caractérisé en ce qu'il est dérivé de la mannanase native Man5A ou Man26A du champignon filamenteux ascomycète coprophile Podospora anserina définies respectivement par les séquences protéiques SEQ ID NO :1 et SEQ ID NO :11 et en ce qu'il bénéficie d' une efficacité catalytique augmentée d'au moins 25% par rapport à l'efficacité catalytique de cette mannanase native. 2. Un polypeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est défini par une séquence choisie parmi les séquences SEQ ID NO :3-10 ou 13-14 ou les séquences SEQ ID NO :3-10 et 13-14 diffèrent d'au moins un acide aminé des séquences SEQ ID NO :1 et 11. 3. Un polynucléotide codant pour un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2. 4. Un polynucléotide selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il est défini par une séquence choisie parmi les séquences SEQ ID NO :15-19. 5. Un vecteur comprenant un polynucléotide selon l'une quelconque des revendications 3 et 4. 6. Une cellule hôte comprenant un vecteur selon la revendication 5 ou un polynucléotide selon l'une quelconque des revendications 3 et 4. 7. Une composition comprenant un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 2, un polynucléotide selon l'une quelconque des revendications 3 et 4, un vecteur selon la revendication 5 ou une cellule hôte selon la revendication 6. 8. Une composition selon la revendication 7, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre d'autres hydrolases, telles que des mannanases, des endoglucanases, des exoglucanases, des P-glucosidases ou des xylanases. 9. Une composition selon l'une quelconque des revendications 7 et 8, caractérisée en ce qu'elle comprend un cocktail enzymatique de cellulases de Trichoderma reesei. 10. Utilisation d'un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, d'un polynucléotide selon l'une quelconque des revendications 3 et 4, d'un vecteur selon la revendication 5, d'une cellule hôte selon la revendication 6 ou d'une compositionselon l'une quelconque des revendications 7 à 9 pour la dégradation des composés comprenant des mannanes. 11. Utilisation selon la revendication 10, pour la dégradation de la biomasse lignocellulosique.