FR 3007291 A1 20141226 FR 1355810 A 20130620 COMPOSITION CICATRISANTE ET UTILISATION La présente invention concerne une composition particulière constituée de miel et d'acide hyaluronique, et son utilisation sur la peau ou les muqueuses pour une activité cicatrisante et antibactérienne. Une plaie est une rupture de la barrière cutanée, qui, outre la lésion d'organes sous-jacents, peut entraîner la pénétration d'agents infectieux dans l'organisme. Les tissus humains et animaux sont capables de réparer une plaie par des processus de réparation qui leurs sont propres, et la cicatrisation est un phénomène biologique naturel. Cette capacité reste cependant soumise à de nombreuses variations, la rapidité et la qualité de la cicatrisation d'une plaie dépendant de l'état général de l'organisme atteint, de l'état et de la localisation de la plaie, et de la survenue ou de l'absence d'une infection. Aussi, en cas de lésion cutanée, il est nécessaire de recourir à l'application de produits favorisant la cicatrisation. Il existe actuellement plusieurs produits cicatrisants. Certains de ces produits cicatrisants agissent en maintenant un environnement humide pour favoriser la cicatrisation, comme par exemple des hydrocollaides constitués de matrice de cellules et d'autres gélifiants, des alginates, constitués de sels de calcium et de sodium de l'acide alginique, des hydrogels ou des pansements absorbants. Ces produits, même s'ils favorisent la cicatrisation en générant un environnement humide, ne présentent pas de propriétés antibactériennes. Les autres produits cicatrisant existants sont des produits agissant en favorisant le contrôle infectieux, en particulier des pansements à base d'argent ou à base d'iode. Bien que très antibactériens les pansements à l'argent présentent l'inconvénient d'être cytotoxiques. Ils induisent la mort cellulaire des cellules impliquées dans la cicatrisation des plaies. Il est par conséquent, déconseillé d'utiliser les pansements à base d'argent sur de longues périodes en raison de leur cytotoxicité. Quant aux produits à base d'iode ils sont également cytotoxiques et leur activité antimicrobienne diminue fortement en présence de matière organique (pus, fibrine ou nécrose). be plus il existe des risques de sensibilisation avec eczéma de contact et allergie à ces produits. C'est pourquoi, la présente invention a pour objectif de proposer une composition à base de miel palliant les inconvénients de l'art antérieur, simple de fabrication, économique, facile d'application et générant à la fois un environnement humide et antibactérien afin de réunir les conditions favorables à une cicatrisation rapide et efficace sans générer la toxicité des produits précités. A cet effet, l'invention vise une composition comprenant un mélange de miel et d'acide hyaluronique, en particulier pour son utilisation comme produit de santé à application topique cicatrisant et/ou antibactérien. L'utilisation de pansements et de soins au miel pour le traitement de certaines infections au niveau des plaies est connue. On sait en particulier que le miel présente des propriétés antibactériennes et antifongiques et qu'il permet de réduire le temps de cicatrisation, sans infection ni effets secondaires. Toutefois, le mélange de miel et d'acide hyaluronique selon l'invention présente un effet synergique important et surprenant, qui permet de proposer une composition cicatrisante, réparatrice et antibactérienne, avec une bonne tolérance et sans effets secondaires notoires, et avec des propriétés qui dépassent celles des produits existants actuellement. D'autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description en détails de l'invention qui va suivre. L'invention vise donc une composition pour son utilisation comme produit de santé cicatrisant et/ou antibactérien à application topique sur la peau ou les 5 muqueuses, comprenant du miel et de l'acide hyaluronique. Par miel au sens de l'invention, on entend un miel naturel ou un miel artificiel, ou encore un mélange de plusieurs miels naturel(s) et/ou artificiel(s). Par miel artificiel on entend une combinaison d'au moins deux sucres. Préférentiellement, le miel est un miel naturel choisi parmi les miels de thym, de 10 miellat, de sarrasin, de manuka et leurs mélanges. Il peut s'agir par exemple d'un miel tel que décrit dans la demande FR1258722. Si le miel utilisé dans la composition est un miel artificiel, il s'agit préférentiellement d'un mélange saccharidique comprenant majoritairement du glucose, du fructose et du saccharose. 15 L'acide hyaluronique présent dans la composition est préférentiellement un sel d'acide hyaluronique ou un dérivé d'acide hyaluronique, encore plus préférentiellement un sel sodique d'acide hyaluronique de poids moléculaire supérieur à 20 kba. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, la composition comprend 20 entre 5% et 99,8% de miel en poids de matière sèche de la composition, et entre 0,1 et 1% d'acide hyaluronique en poids de matière sèche de la composition, encore plus préférentiellement entre 0,2% et 0,5%. La composition peut être composée exclusivement de miel et d'acide hyaluronique. Elle peut également contenir de la lactoferrine de la glucose- 25 oxydase, de l'oxyde de zinc, de la lactoperoxydase, des thiocyanates, du chitosan, du lysozyme, du xylitol, de la vanilline, des sucres tels que glucose, fructose, galactose, dextrose, rhamnose, mannose, téflose®, des oligosaccharides, de l'acide lactobionique, du bisabolol, des bêta-glucanes, de l'allantene, de l'aloe vera, du squalane, de la vitamine E, de la vitamine C, du panthénol, des céramides, du collagène, du bentonite et/ou du kaolin. Elle peut aussi contenir des excipients choisis parmi les excipients dermatologiquement compatibles et/ou applicables sur les muqueuses afin d'obtenir une composition liquide telle qu'une lotion, ou semi-solide tels qu'une crème, une pommade, un gel, une pâte, un suppositoire, un ovule. Il peut s'agir par exemple d'excipients tels que des sucres et dérivés de sucres, des polysaccharides (pectines, amidon et dérivés, alginates et dérivés, chitosan et dérivés, dérivés de cellulose, des gommes), des polymères de synthèse, des cires, des huiles naturelles ou non, des beurres, des produits minéraux (silice, talc, argiles, oxyde de titane), des glycérides et autres esters gras, des tensio-actifs, l'eau, l'éthanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le glycérol, le sorbitol, des hydrocarbures et silicones, des protéines et peptides et autres excipients connus de l'homme de métier. La composition peut aussi contenir des additifs auxiliaires de formulation tels que des tensioactifs, des agents gélifiants, des agent absorbants, des agents humectants, des solvants, des agents d'étalement, des stabilisants, des complexants, des modificateurs rhéologiques, des conservateurs, des antioxydants et antimicrobiens, des colorants et des parfums. La composition selon l'invention peut être stérile, c'est-à-dire qu'elle a subit un procédé de stérilisation. La stérilisation est préférentiellement réalisée par rayonnement gamma. La composition selon l'invention peut être obtenue par simple mélange des constituants. Préférentiellement, elle est obtenue par la dispersion d'une poudre fine d'acide hyaluronique ou d'une solution d'acide hyaluronique dans une composition de miel. Si le procédé est un procédé à chaud, la température de chauffe du miel ou du mélange contenant du miel doit être inférieure à 40°C. La composition selon l'invention peut se présenter sous différentes formes liquides ou semi-liquides, notamment lotion, crème, émulsion, gel, pommade, ovule vaginal, suppositoires. La composition est utilisée comme produit cicatrisant et/ou antibactérien. En effet, le mélange de miel et d'acide hyaluronique agit en synergie pour à la fois : - augmenter la prolifération des cellules de la peau, en particulier des fibroblastes. - diminuer la charge bactérienne, et ainsi favoriser indirectement la cicatrisation. Les effets obtenus sont bien meilleurs que ceux obtenus avec le miel seul ou l'acide hyaluronique seul. Il existe un effet synergique surprenant. Au niveau cellulaire, le miel seul ou l'acide hyaluronique seul permettent d'augmenter la prolifération des fibroblastes, mais lorsqu'ils sont utilisés ensemble, l'augmentation de la prolifération des fibroblastes est plus importante que la somme des proliférations induites par les constituants seuls. be plus, au niveau bactérien, ni l'acide hyaluronique, ni le miel lorsqu'ils sont dilués, ne présentent une activité antibactérienne. Cependant, l'association de l'acide hyaluronique avec le miel à la même concentration montre une inhibition importante de la prolifération bactérienne. Selon l'invention, la composition comprenant du miel et de l'acide hyaluronique peut donc être avantageusement utilisée comme produit de santé à application topique sur la peau ou les muqueuses chez l'homme ou l'animal, très préférentiellement comme: - dispositif médical destiné à être appliqué sur des lésions cutanées 25 notamment pour : - le traitement des brûlures de premier et second degré, - le traitement et/ou la prévention des désunions post opératoires de cicatrice, - le traitement et/ou la prévention post-opératoire des cavités résiduelles des sinus pi lonidaux, - le traitement des cicatrices chirurgicales infectées après mise à plat, - le traitement des ulcères et escarres en phase de bourgeonnement, - le traitement des plaies traumatiques et/ou chirurgicales, - le traitement des plaies aigües et chroniques - le traitement des plaies cancérologiques - le traitement des emplacements de stomies - le traitement des érythèmes fessiers - gel buccal, notamment destiné à traiter les aphtes et les mucites, - stick ou baume à lèvre destiné à traiter les gerçures, - crème pour les mains et les pieds destinée notamment au traitement des 15 crevasses et des engelures, - baume destiné à la prévention, au soin et/ou au traitement des crevasses du mamelon, - gel vaginal. Par dispositif médical on entend un produit destiné à être utilisé chez l'homme ou 20 l'animal à des fins notamment de prévention, de contrôle, de traitement et/ou d'atténuation d'une maladie ou d'une blessure. S'il s'agit d'un dispositif médical pour la cicatrisation de lésions cutanées se présentant sous forme de gel, crème ou pommade, la composition selon l'invention peut en particulier s'appliquer selon le protocole d'utilisation suivant : 25 - rincer la plaie et sécher doucement - recouvrir l'intégralité de la plaie ou le pansement secondaire d'une pellicule de la composition selon l'invention - recouvrir de compresses et d'un pansement occlusif durant les premières applications pour les plaies très exsudatives. En phase de détersion, et en fonction de l'état de la plaie, il est conseillé de refaire le pansement une à deux fois par 24 heures. En phase de bourgeonnement, il est conseillé de refaire le pansement toutes les 48 à 72 heures. En phase d'épithélialisation, il est conseillé de refaire le pansement tous les 3 ou 4 jours. L'invention est à présent illustrée par des exemples de composition et des résultats d'essais démontrant son efficacité. A. Exemples de composition selon l'invention 1. Exemple 1 La composition de l'exemple 1 est un gel hyperosmotique. Elle est constituée de : - 99,8% d'un mélange de miels de thym, miellat, sarrasin et manuka - 0,2% de hyaluronate de sodium les pourcentages étant donnés en poids par rapport au poids total de matière sèche de la composition. La composition est obtenue par mélange des deux composés. 2. Exemple 2 La composition de l'exemple 2 est un pommade constituée de : qsp 100% de miel de thym 25% de triglycérides (caprique et caprylique) - 11% de cire d'abeille blanche 7,5% de beurre de karité 1,83% de tocophérol acétate 5% de glyceri I mono stearate 0,2% de hyaluronate de sodium - 0,07% de tocophérol. les pourcentages étant des pourcentages en poids par rapport au poids total de la matière sèche de la composition. La composition est obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - disperser finement le hyaluronate de sodium dans le miel - chauffer le mélange à moins de 40°C - chauffer la phase lipophile (cire, beurre et glyécride) à environ 70°C pour faire fondre les solides - quand la phase lipophile a atteint la température de 40°C, ajouter le 10 tocophérol acétate et le tocophérol et le mélange de miel et de hyaluronate de sodium. - mélanger la pommade jusqu'à refroidissement. 3. Exemple 3 La composition de l'exemple 3 est une crème constituée de : 15 qsp 100% de miel artificiel 30% de glycérol - 10,3% de beurre de karité 5% de cetearyl alcohol et cetearyl glucoside - 2% de cire d'abeille blanche 20 - 1,82% de tocophérol acétate - 0,8% d'acide stéarique 0,2% de hyaluronate de sodium 0,07% de tocophérol 0,01% de palmitate d'ascorbyle 25 les pourcentages étant des pourcentages en poids par rapport au poids total de la matière sèche de la composition. La composition est obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - disperser finement le hyaluronate de sodium dans le miel, - chauffer le mélange à moins de 40°C - chauffer la phase lipophile (cire, beurre) et le glycérol séparément à environ 70°C, - ajouter la phase lipophile au glycérol et quand ce mélange atteint environ 40°C, ajouter le tocophérol acétate, le tocophérol, le palmitate d'ascorbyle, puis le mélange de miel et de hyaluronate de sodium - mélanger la crème jusqu'à refroidissement. 4. Exemple 4 La composition de l'exemple 4 est un gel hyperosmotique. Elle est constituée de : - 90% de miel de sarrasin - 9,8% de glycérol - 0,2% de hyaluronate de sodium La composition est obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - une solution de hyaluronate de sodium à 2% dans un mélange eau/glycérol/éthanol (dans un ratio 10/10/3) est préparée puis déshydratée par distillation sous vide ; - cette solution de hyaluronate de sodium glycérolée est ensuite mélangée dans le miel à température ambiante. B. Evaluation de l'efficacité de la composition selon l'invention bes essais ont été réalisés pour démontrer l'efficacité cicatrisante et antibactérienne de la composition selon l'invention d'une part et comparer cette efficacité à celle du miel seul et à celle de l'acide hyaluronique seule. 1. Evaluation de l'activité antibactérienne de la composition selon l'invention et comparaison par rapport aux ingrédients seuls L'objectif de cette étude est d'évaluer l'activité antibactérienne de la composition selon l'invention (exemple 1), en comparaison à celle du miel seul. Les échantillons ont été testés à 1,5, 3 et 4,5% v/v. Le protocole opératoire est le suivant. La prolifération bactérienne en présence des produits à tester est déterminée par une méthode en microplaque 96 puits. Chaque puits est inoculé avec 100 pl... de suspension bactérienne à tester réalisée dans un bouillon Muller-Hinton (MH) + 100 pL de solution de produit à tester dilué. La concentration bactérienne dans le puits est fixée à 106 CFU/mL. Le témoin positif (150 pL de suspension bactérienne + 50 pL de milieu MH) correspond au 100% de prolifération bactérienne. Le témoin négatif (200 pL de milieu de culture) correspond au 0% de prolifération bactérienne. Chaque échantillon est testé en triplica. Les densités optiques (DO) sont lues une première fois au temps 0 (TO) à 450 nm. Les plaques sont ensuite incubées 24h à 37°C sous agitation. Au terme de l'incubation la DO est remesurée à 450 nm (T24). Le pourcentage de prolifération est calculé ainsi : Prolifération = (D01-24 -1)01-0) / (1)0T24 Témoin + - bOTO Témoin +) Les résultats obtenus en pourcentage de prolifération bactérienne sont présentés dans le tableau 1 suivant. Tableau 1: Evaluation de l'activité antibactérienne Concentration testées (en % v/v) Pourcentage de prolifération bactérienne (Staphylococcus aureus) Miel seul 1,5 147% 3 146% 4,5 122% Composition exemple 1 1,5 104% 2 70% 4,5 76% On constate que la composition selon l'invention présente une amélioration de l'activité antibactérienne. En outre, cette activité est bien plus importante que celle du miel seul. 2. Evaluation de l'activité cicatrisante - prolifération cellulaire L'objectif de cette étude est d'évaluer l'activité cicatrisante de la composition selon l'invention, en comparaison à celle du miel seul et à celle de l'acide hyaluronique seul, et de vérifier la stabilité de la composition après stérilisation par rayonnement gamma. Les échantillons testés sont les suivants : - miel brut : mélange de miel de thym, miellat, sarrasin et manuka, - acide hyaluro nique testé seul à 0,5% - composition constituée de miel brut (mélange de thym, miellat, sarrasin et manuka) dans lequel on a ajouté 0,2 ou 0,5% d'acide hyaluro nique - composition constituée de miel brut (mélange de thym, miellat, sarrasin et manuka) dans lequel on a ajouté 0,2 d'acide hyaluronique, et traitée par irradiation gamma (30kGy). Les produits sont dilués pour obtenir une concentration de 5,12% v/v de l'échantillon, et filtrés pour éliminer les germes. Le protocole opératoire est le suivant : Les cultures primaires de fibroblastes humains PAF 08052 sont ensemencées dans des microplaques 48 puits à raison de 10 000 cellules par puits avec un volume de milieu de culture complet de 500 IL.. Les cellules vont ensuite adhérer au fond des puits durant 24 heures. Le milieu sera ensuite remplacé par la composition selon l'invention diluée dans du milieu de culture privé de sérum. La concentration testée est 1,3% v/v à raison de 500 pl... par puits et incubé pendant 48 heures à 37°C + 5% CO2. Les cellules sont ensuite décollées avec de la trypsine puis comptées sur lame de Malassez avec un colorant d'exclusion (bleu Trypan). Le pourcentage de prolifération fibroblastique est déterminé par rapport à un témoin non traité avec la composition. Les résultats obtenus, sont présentés dans le tableau 2 suivant. Tableau 2 : Evaluation de l'activité cicatrisante Nombre de cellules par puits Miel seul 13 333,3 Acide hyaluronique 0,5% 15 833,3 Miel + Acide hyaluronique 0,2% 20 833,3 Miel + Acide hyaluronique 0,5% 20 000 Miel + Acide hyaluronique 0,2% + 20 000 irradiation gamma On constate que la composition selon l'invention favorise la prolifération des fibroblastes et donc la cicatrisation et que cet effet est nettement amélioré en comparaison à celui du miel seul ou à celui de l'acide hyaluronique seul. En outre, cette activité est maintenue même après stérilisation par rayonnement 5 gamma. REVENDICATIONS1. Composition comprenant du miel et de l'acide hyaluronique pour son utilisation comme produit de santé à application topique, cicatrisant et/ou antibactérien. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend 5 entre 5% et 99,8% de miel et entre 0,1 et 1% d'acide hyaluronique. 3. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le miel est du miel d'origine naturelle. 4. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que le miel est du miel de thym et/ou de miellat et/ou de sarrasin et/ou de manuka et/ou leurs 10 mélanges. 5. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le miel est du miel artificiel. 6. Composition selon la revendication 5, caractérisée en ce que le miel artificiel est constitué majoritairement de glucose, fructose et saccharose. 15 7. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu'elle a été traitée par irradiation gamma. 8. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme liquide ou semi-liquide. 9. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en 20 ce qu'elle se présente sous forme de gel, pommade, crème, émulsion ou ovule. 10. Composition selon l'une des précédentes revendications pour son utilisation comme dispositif médical destiné au traitement des plaies. 11. Composition selon la précédente revendication pour son application comme dispositif médical destiné au traitement des brûlures de premier et 25 second degré, au traitement et/ou à la prévention des désunions postopératoires de cicatrice, au traitement et/ou à la prévention post-opératoire des cavités résiduelles des sinus pilonidaux, au traitement des cicatrices chirurgicales infectées après mise à plat, au traitement des ulcères et escarres en phase de bourgeonnement et/ou au traitement des plaies traumatiques. 12. Composition selon l'une des précédentes revendications pour son utilisation comme gel buccal destiné à traiter les aphtes et les mucites, stick à lèvre destiné à traiter les gerçures, crème pour les mains et les pieds destinée notamment à la réparation ou au traitement des crevasses et des engelures, baume destiné à la prévention et/ou au traitement des crevasses du mamelon, ou gel vaginal.