FR 2987262 A1 20130830 FR 1251840 A 20120229 UTILISATION D'UN EXTRAIT DE MICROALGUE DANS UNE COMPOSITION COSMETIQUE AMINCISSANTE La présente invention a pour objet un extrait issu d'une microalgue 5 du genre Dysmorphococcus globosus, son utilisation dans le domaine cosmétique et pharmaceutique et son procédé de préparation. Les tissus adipeux sont formés d'une matrice conjonctive essentiellement constituée de cellules graisseuses, ou adipocytes, qui sont des cellules dont le cytoplasme renferme une volumineuse vacuole lipidique unique sous forme de triglycérides. Les adipocytes assurent la synthèse, le stockage et la libération des lipides. Les triglycérides sont composés d'une molécule de glycérol couplée à trois chaînes d'acides gras. Leur synthèse a lieu à l'intérieur des adipocytes. Deux voies de synthèse sont possibles : 15 - Les triglycérides provenant de l'alimentation sont dégradés dans la lumière de l'intestin, puis après une re-synthèse dans les entérocytes intestinaux, ils rejoignent la circulation générale par voie lymphatique. La lipoprotéine-lipase qui est une enzyme libérée dans le plasma les dégrade à nouveau en glycérol et acides gras libres dans la circulation sanguine. Ils 20 peuvent ainsi passer à travers la membrane des adipocytes à l'intérieur desquels ils vont être resynthétisés en triglycérides. - Les triglycérides peuvent également être synthétisés à partir du glucose issu des glucides alimentaires. Cette voie de synthèse permet de réguler la glycémie. L'hormone pancréatique appelée insuline favorise l'entrée du 25 glucose dans l'adipocyte où il va être transformé en glycérol phosphate. Les acides gras libres se fixent ensuite sur la molécule de glycérol phosphate pour former les triglycérides. Le stockage des lipides se fait sous forme de triglycérides. Le tissu adipeux renferme la quasi-totalité des triglycérides stockés dans 30 l'organisme ; il représente, de ce fait, une des plus importantes réserves énergétiques de l'organisme. C'est à cette réserve que l'organisme fait appel lorsque les réserves de glucides sont épuisées (jeûne, efforts physiques, lutte contre le froid, etc.), ou inutilisables (diabète grave). L'hydrolyse des triglycérides (ou lipolyse), stimulée par les 35 catécholamines, libère dans le sang des acides gras non estérifiés. La lipolyse est due à l'action de deux lipases présentes dans le cytoplasme des adipocytes. De même que la dégradation du glucose permet une production d'énergie dans la cellule, sous forme d'ATP, la dégradation des acides gras permet aux cellules d'obtenir l'énergie nécessaire à leur survie. Cette dégradation se réalise dans la mitochondrie, selon un ensemble de réactions regroupées sous le terme d'hélice de Lynen. En l'absence de glucose, les triglycérides stockés par les adipocytes sont dégradés de manière à fournir des molécules d'ATP nécessaires au fonctionnement du corps. En général, cette synthèse d'ATP par dégradation des triglycérides stockés s'effectue à une vitesse qui ne permet pas de dégrader un nombre suffisant de triglycérides pour permettre de lutter contre leur stockage dans les adipocytes. La masse des adipocytes, en masse grasse, représente de 10 à 15% 15 du poids corporel chez un homme et un peu plus chez la femme, entre 20 et 25%. Ces cellules sont localisées en de nombreux points de l'organisme (tissu sous-cutané, replis du péritoine, etc.). Une alimentation trop riche favorise le stockage des lipides dans les adipocytes. L'augmentation de la taille de ces adipocytes ou l'infiltration 20 excessive d'eau dans les tissus sont les causes d'une augmentation de l'épaisseur de l'hypoderme (situé sous l'épiderme, dans la partie profonde du derme) illustrée par un changement du système adipeux appelé plus communément cellulite. Plus le surplus de lipides stocké sous forme de triglycérides est important, plus on observe un gonflement des adipocytes 25 qui se remplissent de graisses (ils peuvent grossir jusqu'à 50 fois par rapport à leur volume initial). Cela entraîne une compression de la circulation sanguine et lymphatique et un drainage inefficace de l'eau et des toxines contenues dans l'organisme. Cette accumulation de déchets provoque la formation d'amas graisseux transformant l'aspect de l'épiderme 30 qui devient bosselé, d'où son appellation « peau d'orange ». L'augmentation du nombre et du volume des adipocytes, appelée adipose, est associée à un dysfonctionnement chronique de leur métabolisme : altérations de la lipogenèse et de la lipolyse. Un déséquilibre entre lipogenèse et lipolyse est à l'origine du surstockage des graisses. Pour limiter une expansion des tissus adipeux, un certain nombre de substances connues peuvent agir sur les adipocytes, soit en stimulant la lipolyse des triglycérides intra-cellulaires et le re-largage extra-cellulaire des acides gras et du glycérol, soit au contraire en inhibant la lipogenèse Les produits amincissants couramment utilisés comprennent des principes actifs présentant une activité lipolytique par laquelle ils stimulent la dégradation des graisses stockées dans les adipocytes humains, et favorisent l'élimination des produits de cette dégradation, notamment les acides gras et les glycérols. On peut citer à titre d'exemples les bases xanthiques telles que la caféine et la théophylline, qui sont utilisées depuis de nombreuses années. Ces substances agissent en bloquant l'action de la phosphodiestérase, enzyme responsable de la destruction de l'adénosine3',5'-monophosphate cyclique (AMPc) impliquée dans la dégradation des triglycérides. D'autres substances, notamment des extraits de plantes ayant une activité lipolytique, peuvent également être utilisées dans la composition de produits cosmétiques et/ou pharmaceutiques destinés à affiner la silhouette. A titre d'exemple, on peut citer la demande internationale W02007116579 qui décrit un promoteur de lipolyse comprenant, en tant que principe actif, une plante Huang Hua Cai appartenant au genre Hemerocallis, ou un extrait de cette plante et un dérivé de xanthine. On peut également citer le brevet FR 2844449 qui décrit l'utilisation d'un extrait d'une algue brune du genre Haloptéris dans une composition cosmétique ou pharmaceutique destinée à limiter l'expansion des tissus adipeux par son effet sur la différenciation pré-adipocytaire. Le brevet FR 2879098 décrit l'utilisation d'un extrait d'algue brune Laminaria digitata pour stimuler la consommation d'oxygène par les cellules de la peau, ladite consommation d'oxygène étant à l'origine de la production par ces cellules de molécules d'ATP ayant un effet lipolytique sur les graisses de la peau. La demande FR 2795959 décrit un produit cosmétique ou pharmaceutique destiné à lutter contre l'adiposité, dont le principe actif est constitué d'au moins un acide gras issu d'un extrait lipidique de plantes ou d'algues, de préférence d'une microalgue, appartenant notamment à la famille des Eurodiscaceaes, à l'ordre des Bidulphiales et à la classe des Bacilariophycées. La demande FR 2784295 décrit un procédé de préparation d'un extrait algal enrichi en iode, ainsi que l'utilisation de cet extrait pour fabriquer des timbres cutanés destinés à libérer graduellement de l'iode apte à stimuler la biosynthèse de l'hormone thyroxine qui permet une meilleure combustion des réserves énergétiques contenus dans les tissus adipeux. Ces molécules, bien qu'efficaces, sont fabriquées par synthèse chimique ou par extraction à partir de produits naturels. Dans les deux cas, la préparation des principes actifs fait intervenir de nombreux réactifs chimiques. Le but de l'invention est de proposer un nouveau produit à activité lipolytique extrait à partir de produits naturels de manière simple et peu coûteuse. Un objet de l'invention est un extrait issu d'une microalgue du genre Dysmorphococcus globosus pour son utilisation comme médicament à activité lipolytique. La microalgue Dysmorphococcus globosus utilisée dans la présente invention est un organisme unicellulaire eucaryote qui appartient à la classe des Chlorophycées, et à l'ordre des Chlamydomonadales. L'extrait de microalgue peut se présenter sous forme sèche ou sous forme liquide. Conformément à la présente invention, il est utilisé de préférence sous forme liquide. Un autre objet de l'invention est l'utilisation d'au moins un extrait de microalgue du genre Dysmorphococcus globosus en tant que principe actif dans une composition cosmétique ou pharmaceutique à activité lipolytique. L'invention a également pour objet une composition cosmétique ou pharmaceutique à activité lipolytique caractérisée en ce qu'elle comprend au 30 moins un extrait de microalgue du genre Dysmorphococcus globosus en tant que principe actif lipolytique. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, l'extrait de microalgue représente 0,5 à 5 % en poids de la composition, avantageusement 1 à 5 'Vo. Selon un autre mode de réalisation, la composition comprend en outre au moins un autre agent actif à activité lipolytique ou apte à limiter l'expansion du tissu adipeux. Les agents actifs intéressants peuvent notamment être choisis parmi ceux ayant un effet amincissant par une action au niveau de la lipogenèse, de la lipolyse ou du stockage des lipides, par exemple en agissant sur le taux intracellulaire d'AMPc. On peut citer à titre d'exemples la caféine, les extraits de café vert, les extraits de thé vert, les extraits de guarana, les extraits de maté titré en caféine, les extraits de cacao titrés en théobromine, et la théophylline. Conformément à l'invention, cette composition peut également contenir au moins un principe actif choisi parmi les agents structurants comme l'acide hyaluronique ou le rétinol qui restructurent les tissus cutané et conjonctif, les fibres, et les vaisseaux, et les agents drainants pour lutter contre la rétention d'eau. La composition selon la présente invention peut contenir en outre un ou plusieurs autres composants connus de l'homme du métier, comme des agents de formulation ou des additifs d'usage connu dans les compositions cosmétiques. A titre d'exemples et de façon non limitative, de tels agents de formulation et additifs peuvent être des pigments, des colorants, des polymères, des agents solubilisants, des agents de texture, des parfums, des conservateurs, des agents tensio-actifs, des émollients, des émulsifiants. Grâce à ses connaissances en matière de cosmétiques, l'homme du métier saura quels agents de formulation ajouter aux compositions cosmétiques selon l'invention et en quelles quantités en fonction des propriétés recherchées. Les compositions cosmétique et pharmaceutique selon la présente invention peuvent se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier dans les domaines cosmétique et pharmaceutique sans aucune autre restriction particulière que celle pour l'application sur la peau. Ainsi, les compositions selon l'invention peuvent avoir la forme d'un sérum, d'une lotion, d'une émulsion, par exemple une crème, ou bien encore d'un hydrogel, ou se présenter sous la forme d'un stick ou d'un timbre cutané (patch). Un autre objet de l'invention est l'utilisation non thérapeutique de ladite composition cosmétique comme crème amincissante. Enfin, l'invention a pour objet un procédé de préparation d'un extrait issu de la microalgue Dysmorphococcus globosus comprenant les étapes suivantes : a) Hydrolyse thermique et acide de la biomasse de Dysmorphococcus globosus ; b) Refroidissement et neutralisation ; c) Séparation de la biomasse par centrifugation ou filtration ; d) Décoloration sur support charbon ; e) Dilution dans l'eau. L'homme du métier est capable par ses connaissances de déterminer l'ensemble des conditions de mise oeuvre du procédé. Ainsi, l'étape a), l'hydrolyse peut être réalisée à une température comprise entre 70 et 90 °C, à un pH compris entre 1 et 3, pendant une durée variant de 30 minutes à 2 heures. Le taux de matière sèche de l'extrait de Dysmorphococcus globosus déterminé à la fin de l'étape e) par la mesure de la perte en masse de l'échantillon en présence de sable de Fontainebleau après passage à l'étuve à 105°C pendant 12 heures est compris entre 0,1 % et 10 %, plus particulièrement entre 1 et 3 Wo. A la fin de l'étape e), le pH de l'extrait mesuré par méthode potentiométrique à température ambiante est avantageusement compris entre 3 et 8, plus particulièrement entre 4 et 7. L'invention est illustrée par les exemples 1 et 2 qui suivent. Exemple 1 : Effet in vitro d'un extrait de Dysmorphococcus globosus sur des adipocytes humains Le but de cette étude est d'évaluer l'effet de l'extrait de microalgue 30 Dysmorphococcus globosus sur un modèle d'adipocytes humains normaux en suspension. 1.1. Préparation de l'extrait : Le principe actif est obtenu selon le procédé suivant : - Hydrolyse acide de la biomasse de Dysmorphococcus globosus pendant 1 heure à 80°C à pH 2 par ajout d'HCI. - Neutralisation à pH = 7 par de la soude et refroidissement à 20°C. - Centrifugation à 4080 g pendant une durée comprise entre 5 et 30 minutes pour séparer la biomasse microalgale de l'extrait. - Filtration du surnageant de centrifugation sur une plaque cellulosique de porosité 0,3-1,0 dam. - Décoloration du produit par passage sur plaques de charbon actif. - Dilution du produit à environ 2% de matière sèche. L'extrait obtenu présente un pH égal à 5,10 et un taux de matière sèche égal à 2,3 % après mise à l'étuve à 105°C pendant 12 heures. 1.2. Mesure de l'effet in vitro Des adipocytes humains normaux ont été dissociés à partir du tissu adipeux obtenu suite à une plastie abdominale réalisée chez une femme de 39 ans. Ces adipocytes ont été incubés pendant 2 heures à 37°C, sous agitation, en absence ou en présence de caféine 10-3 M qui est considérée comme un activateur de référence, ou de concentrations croissantes du produit à l'essai. A la fin de la période d'incubation, le glycérol qui est un produit de dégradation des triglycérides a été quantifié dans les milieux d'incubation à l'aide d'une technique spectrophotométrique sensible et spécifique. Les résultats sont donnés sous la forme de concentrations moyennes (en pg/mL) de glycérol présent dans les milieux d'incubation des adipocytes. Les moyennes ont été obtenues sur des mesures réalisées en triplicata. La significativité statistique des différences observées entre les conditions « Milieu seul » et « Produits » a été évaluée par un test de Student. Les différences sont significatives avec une valeur p Milieu Caféine Extrait de Dysmorphococcus seul 10-3M globosus 1% 2,5% 5% Concentration en 4,3 9* 10,5* 14,8* 45,7* glycérol (pg/mL) Déviation 2,7 0,1 0,5 9,8 12,3 standard % par rapport à 100 208,2 243,4 343,2 1061,8 "Milieu seul" cyo d'augmentation 0 108,2 143,4* 243,2* 961,8* par rapport à "Milieu seul" * : (p Exemple 2 : Effet in vivo d'un extrait de Dysmorphococcus globosus chez l'homme 2.1. Conditions de réalisation du test L'étude a été réalisée sur 50 sujets : 20 sujets pour le groupe traité par la crème comprenant le principe actif et 30 personnes pour le groupe placebo. Les sujets retenus pour l'étude sont des femmes de 25 à 45 ans, présentant un indice de masse corporelle compris entre 23 à 27. Les essais sont conduits par application d'une crème contenant 3% d'extrait de Dysmorphococcus globosus obtenu à l'exemple 1 ou d'une crème placebo sur une cuisse. Les applications ont été effectuées deux fois par jour (matin et soir) pendant 56 jours. Deux mesures centimétriques des tours de cuisses ont été effectuées à J28 et J56 par un médecin, JO étant situé dans les dix premiers jours du cycle. Le tableau 2 est un tableau présentant les compositions d'une crème placebo et d'une crème contenant l'extrait de microalgue utilisées dans le cadre de tests in vivo. Crème Crème avec "placebo" extrait Emulsifiant 4% 4% Emollient 12% 12% Conservateur 0,50% 0,50% Glycérine 1% 1% Extrait de Dysmorphococcus 0% 3% globosus à 2,3 % obtenu à l'exemple 1 Eau qsp 100 % qsp 100 % Tableau 2 : Compositions des crèmes utilisées pour les tests in vivo 2.2. Résultats La significativité statistique des différentes observées entre les conditions « Traité» et « Placebo » a été évaluée par un test de Student. Les résultats sont donnés dans le tableau 3. La valeur p correspond à la probabilité que la différence observée soit due au hasard en l'absence d'effet du traitement. Mesure centimétrique du Mesure centimétrique du tour de cuisse (cm) après tour de cuisse (cm) après 28 jours d'application 56 jours d'application Crème -0,47 -0,74 "placebo" Crème avec -0,95 -1,59 extrait Valeur p (traité vs placebo) 0,078 0,016 Tableau 3 : Résultats des tests in vivo Au bout de 56 jours, la crème contenant 3 % d'extrait de Dysmorphococcus globosus diminue significativement le tour de cuisse des volontaires en comparaison de la crème "placebo".10 REVENDICATIONS1. Extrait issu d'une microalgue du genre Dysmorphococcus globosus pour son utilisation comme médicament à activité lipolytique. 2. Utilisation d'au moins un extrait de microalgue du genre Dysmorphococcus globosus en tant que principe actif dans une composition cosmétique à activité lipolytique. 10 3. Composition cosmétique ou pharmaceutique à activité lipolytique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un extrait de microalgue du genre Dysmorphococcus globosus en tant que principe actif lipolytique. 15 4. Composition cosmétique ou pharmaceutique à activité lipolytique selon la revendication 3 caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un principe actif choisi parmi les agents structurants et les agents drainants. 20 5. Composition selon l'une quelconque des revendications 3 et 4 caractérisée en ce que l'extrait représente 0,5 à 5 °h en poids de la composition, avantageusement 1 à 5 °h en poids de la composition. 6. Composition selon l'une quelconque des revendications 3 à 5 25 caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un autre agent actif à activité lipolytique ou apte à limiter l'expansion du tissu adipeux. 7. Utilisation non thérapeutique d'une composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 3 à 6 comme crème 30 amincissante. 8. Procédé de préparation d'un extrait issu de la microalgue Dysmorphococcus globosus comprenant les étapes suivantes : a) Hydrolyse thermique et acide de la biomasse de Dysmorphococcus 35 globosus ;