FR 2984151 A1 20130621 FR 1161853 A 20111216 COMPOSITION COSMETIQUE COMPRENANT DU MIEL DE THYM ET POUVANT COMPRENDRE DE L'EAU THERMALE DE NEYRAC DESCRIPTION Domaine technique La présente invention se rapporte à une composition cosmétique, à son procédé de fabrication et à ses utilisations pour le traitement cosmétique de la peau. Cette composition permet avantageusement, notamment de traiter cosmétiquement les peaux sensibles ou réactives et/ou atopiques. La présente invention se rapporte également, notamment à une composition cosmétique qui est une composition permettant de restaurer la barrière cutanée et/ou de lutter contre les inflammations et allergies cutanées et/ou de réparer et cicatriser efficacement, et à un procédé de traitement cosmétique. La composition de l'invention permet avantageusement, par exemple, une réparation de la peau et/ou une amélioration de l'aspect cosmétique d'une cicatrice. La présente invention trouve notamment une application dans le domaine cosmétique. Dans la description ci-dessous, les références entre crochets ([ ]) renvoient à la liste des références présentée à la fin du texte. Etat de la technique La peau est l'organe le plus lourd du corps humain et possède une architecture très complexe. Barrière entre les milieux extérieur et intérieur de notre corps, son fonctionnement a deux finalités : assurer la communication entre l'organisme et l'environnement extérieur et le protéger des agressions. Les fonctions de la peau sont multiples, mais quatre principaux rôles sont reconnus : protection car la peau constitue une barrière physique, immunologique et biologique, thermorégulation à travers son rôle dans le maintien de la température corporelle, métabolisme à travers l'hypoderme, lieu de stockage principal des triglycérides produits lors la lipogenèse et qui pourront être mobilisés pour la lipolyse et sensation à l'origine de l'un des cinq sens : le toucher. Ainsi, elle est le siège de la perception d'une grande quantité d'informations provenant de l'environnement extérieur et nous permet d'appréhender contact, vibration, pression, variations de températures, douleur etc. (DRENO B. Anatomie et physiologie de la peau et de ses annexes. Annales de dermatologie 2009 ; 136 (6) : S247-S251 [1], GAUBERT-DAHAN Marie-Line. L'effet du vieillissement sur la microcirculation cutanée. Th : Physiologie : Université Claude Bernard Lyon 1 : n° 278-2008, 105p. [2]) Le système nerveux, la peau et l'immunité ont longtemps été appréhendés comme trois systèmes artificiellement séparés. En réalité, les intrications anatomiques et fonctionnelles étroites entre eux conduisent à envisager un système intégré et unique, défini comme système neuro-immuno-cutané. (MISERY L. La peau neuronale. Paris : Ellipses Editions, 2000, 94p. (Vivre et Comprendre) [3], MISERY L., et al. Sensitive skin is not limited to the face. British Journal of Dermatology 2008; 158: 130-133. [4] ). Ces communications sont médiées par les neuromédiateurs qui sont non seulement synthétisés par les fibres nerveuses mais aussi par les cellules épidermiques (cellules de Merkel, cellules de Langerhans, kératinocytes et mélanocytes) et par toutes les cellules immunitaires (polynucléaires, lymphocytes, monocytes, macrophages et mastocytes). Les fibres nerveuses se situant au contact des cellules cutanées et immunitaires, des connexions très étroites se mettent en place et tout déséquilibre entraine une sensibilité cutanée.30 A/ Les peaux sensibles Environ la moitié des femmes et 1/3 des hommes déclarent avoir la peau sensible. Dans le langage des consommateurs, peaux sensibles et peaux réactives sont synonymes. On peut ainsi parler indifféremment de peaux sensibles ou peaux réactives. Cela se manifeste par des sensations d'inconfort momentané au niveau du visage et du corps: picotements, fourmillements, échauffements parfois associés à des rougeurs fugaces. Dermatologiquement, la peau sensible se définit comme une peau hyperréactive à différents facteurs agissant par des mécanismes non immunologiques (contrairement aux peaux atopiques). L'hyperréactivité se traduit par un abaissement du seuil de tolérance à des stimuli habituellement bien tolérés (FARAGE MA. « How do perceptions of sensitive skin differ at different anatomical sites? An epidemiological study'. Clin Exp Dermatol 2009; 38:521- 30. [6] , FARAGE M.A., KATSAROU A., MAIBACH H. Sensory, clinical and physiological factors in sensitive skin: a review. Contact Dermatitis 2006; 55: 1-14. [5] , QUERLEUX B., DAUCHOT K., JOURDAIN R., BASTIEN P., BITTOUN J., ANTON JL., et al. Neural basis of sensitive skin: an fMRI study. Skin Research and Technology 2008; 14: 454-46 [7]). Ces stimuli ou facteurs de réactivité sont d'origine interne et externe essentiellement de nature physique ou chimique (MISERY L., et al. [4]) : Environnementaux : variations de températures, chaleur, froid, vent, pollution atmosphérique, soleil - Cosmétiques - Facteurs internes : alimentation, cycles menstruels, facteurs émotionnels, type de peau, âge, groupes ethniques, etc. Les peaux sensibles se caractérisent par une hyperréactivité sensitive cutanée en réponse à une perturbation des deux principales fonctions de la barrière cutanée : défense antimicrobienne, perméabilité, déshydratation, et à l'installation d'un état inflammatoire particulier appelé inflammation neurogène, comme décrit dans le document PONS-GUIRAUD A. La peau sensible. Progrès en dermatoallergologie.Grenoble : John Libbey Eurotext, 2005, 338p. [8], SEIDENARI S., FRANCOMANO M., MANTOVANI L. Baseline biophysical parameters in subjects with sensitive skin. Contact Dermatitis 1998; 38: 311-315. [9]). La peau sensible, dont la fonction barrière est altérée, serait capable de produire des neuropeptides et cytokines inflammatoires suite à une stimulation et établirait des connections neuronales étroites avec le système nerveux (GUILLET G. Sensitive Skin. Revue française d'allergologie et d'immunologie clinique 2004 ; 44 : 557-558. [10]). Chez les peaux neurosensibles, une hyperstimulation des fibres nerveuses génère un influx nerveux relayé jusqu'au système nerveux central et induit ainsi les symptômes subjectifs caractéristiques des peaux réactives tels que picotements, échauffements et inconfort cutané. Même si aujourd'hui les termes « peau sensible », «réactive», « intolérante » sont des synonymes, de nombreuses confusions persistent notamment concernant l'atopie et l'allergie. Bi Les peaux atopiques L'atopie concernant un quart des Européens est une prédisposition génétique aux allergies caractérisée par un taux élevé d'immunoglobuline E dans le sérum. La peau atopique entraine une sécheresse cutanée persistante car la fuite de l'eau est facilitée par l'absence du film protecteur hydrolipidique et par une mauvaise cohésion des cornéocytes, c'est-à-dire des cellules de la couche la plus extérieure de l'épiderme. De plus, de par ces deux caractéristiques, elle est plus vulnérable face aux allergènes, agents infectieux et la pénétration de ceux-ci dans la peau est favorisée. Les peaux atopiques ou intolérantes se caractérisent par un inconfort quotidien et une très forte irritabilité, se traduisant par des rougeurs, picotements, brûlures, etc. et un état inflammatoire chronique. Les peaux intolérantes sont, par conséquent, particulièrement sensibles aux composants des soins cosmétiques, les allergènes les plus fréquents provenant des parfums et des conservateurs. CI Les peaux allergiques Les peaux allergiques développent une sensibilité à un allergène ou plus. Il s'agit d'un mécanisme immunologique en réponse à un antigène de contact. Lors du premier contact avec l'allergène, les cellules dendritiques migrent de la peau vers les ganglions lymphatiques où elles le présentent aux lymphocytes T. Ces cellules reconnaissent l'antigène lors du second contact et induisent une réaction immunitaire dont l'expression clinique apparaît environ 48 heures après et se traduit généralement par un eczéma de contact avec érythème, prurit et vésicules. Il s'agit d'une susceptibilité individuelle, indépendante du type et de la quantité d'allergène impliqué. Il peut aussi s'agir d'allergies à des aliments, à certains ingrédients cosmétiques, parfums, ou produits professionnels (MISERY L. How the skin reacts to environmental factors. JEADV 2007;21: 5-8. [11]). Cependant, la réelle allergie aux cosmétiques reste rare. Il s'agit le plus souvent d'allergies au parfum, aux huiles essentielles, aux filtres chimiques ou à certains conservateurs chimiques. De nombreuses compositions pour le traitement de la peau sensible ou réactive et/ou atopique sont connues dans l'état de la technique. Toutefois, ces compositions ne permettent pas de traiter efficacement les causes de la peau sensible ou atopique ni de restaurer la fonction barrière et de lutter contre l'inflammation de la peau liée à cet état. Le miel est connu par nos ancêtres depuis des siècles, comme un aliment aux vertus bienfaisantes, adoucissantes et régénératrices ayant un réel effet bénéfique sur l'organisme. Le miel est élaboré en plusieurs étapes et chacune influence sa composition chimique. Chaque miel présente donc une composition spécifique liée à la flore butinée. Le miel de thym est un antiseptique et un anti-infectieux. En effet, la présence de polyphénols (thymol, carvacrol), initialement présents dans l'huile essentielle de thym et retrouvés en petite quantité dans ce miel, explique en grande partie que ce miel présente l'une des activités antibactériennes les plus marquées de tous les miels (Wahdan H.A. "Causes of the antimicrobial activity of honey." Infection, 1998, 26(1), 26-31. [12]). Une étude réalisée par le Pr Descottes au CHU de Limoges a démontré les propriétés anti-infectieuses et cicatrisantes remarquables du miel de thym (B. Descottes. Cicatrisation par le miel, l'expérience de 25 années : Phytothérapie (2009) 7 :112-116. [13]). Il est également conseillé en cas de bronchites, de rhumes, de toux et soulage l'asthme. Il stimule les fonctions digestives, facilite le tonus musculaire et la récupération physique. Malgré le grand nombre de compositions cosmétiques disponibles pour traiter des problèmes de peau, ces compositions ne permettent pas de traiter efficacement les causes de la peau sensible ou atopique ni de restaurer la fonction barrière ni de lutter contre l'inflammation de la peau liée à cet état. Il existe donc un réel besoin de trouver une nouvelle composition et/ou un moyen de traitement cosmétique ou pharmaceutique efficace, notamment pour traiter une peau sensible et/ou atopique et/ou les causes à l'origine de cet état palliant l'ensemble des défauts, inconvénients et obstacles de l'art antérieur. Description de l'invention La présente invention a précisément pour but de répondre à 5 ce besoin en fournissant une composition cosmétique ou pharmaceutique à visée dermatologique comprenant du miel de thym. Dans la présente par « miel de thym » on entend un miel monofloral issu de thyms de l'espèce Thymus qui se présente sous la forme d'un miel liquide, ambré moyen, odeur puissante et saveur 10 complexe, fruitée, acidulée et assez persistante avec un spectre pollinique assez complexe, comprenant des pollens d'accompagnement de brassicacée et de thym et des pollens minoritaires de sainfoin, de lamiacée, de trèfle, de bleuet et de type genista, et une teneur en glucose et fructose de plus de 60%. Il peut s'agir par exemple du miel 15 de thym commercialisé par la société Miels Villeneuve, 81 rue de la Baraudière ZA Villemandeur 45203 Montargis, par exemple de miel issu de l'agriculture biologique. La présente invention a également pour objet une composition cosmétique ou pharmaceutique à visée dermatologique 20 comprenant du miel de thym et comprenant en outre eau thermale de Neyrac. Les inventeurs de la présente sont en effet les tous premiers à avoir associé du miel de thym et de l'eau thermale de Neyrac et à constater que cette association permet notamment de traiter les peaux 25 sensibles et/ou atopiques. NEYRAC-LES-BAINS se trouve dans le département de l'Ardèche et possède des eaux bicarbonatées carbogazeuses mixtes hypothermales ainsi que des boues contenant des éléments des terres rares. Ces eaux et ces boues ont été employées depuis des siècles, 30 empiriquement, pour traiter les affections dermatologiques (Eczémas, Psoriasis, Prurits, Acnés), rhumatologiques et les maladies stomatologiques. L'eau de Neyrac-les-bains, captée dans le sol volcanique à 42 mètres de profondeur, sort à une température de 30°C. Elle est riche en oligo-éléments et notamment en manganèse et silice. Les propriétés thérapeutiques des eaux et boues de Neyrac ont fait l'objet de travaux intéressants par le Dr UZAN en 1940 [UZAN M. Etude sur les eaux de Neyrac. Ed . Maloine. Paris (14)]. En particulier, par rapport aux dermatoses, l'eau thermale de Neyrac est antiseptique et bactéricide. Tous les minéraux, sédiments et autres confèrent les propriétés thérapeutiques particulières à cette eau thermale. Dans la présente par composition cosmétique on entend toute composition à visée cosmétique par exemple une composition pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain, par exemple l'épiderme, les systèmes pileux et capillaires, les organes externes, les dents et les muqueuses. Il peut s'agir, par exemple d'une composition non thérapeutique. Dans la présente par composition pharmaceutique on entend toute composition pharmaceutique à visée dermatologique, par exemple une composition pouvant être mise en contact avec les parties du corps humain, par exemple l'épiderme, les systèmes pileux et capillaires, les organes externes, les dents et les muqueuses. Selon l'invention, la concentration en miel de thym peut être comprise de 0,05 à 100%, de 0,05 à 99,95%, de 0,05 à 99,5%, de 0,1 à 75%, de 0,1 à 50%, de 0,1 à 15%, de 0,1 à 5%, par exemple de 0,1 à 1,5% en poids par rapport au poids total de la composition. Selon l'invention, la concentration en eau thermale de Neyrac peut être comprise de 0,05 à 100%, de 0,05 à 99,95%, de 0,1 à 75%, de 0,1 à 50%, de 0,1 à 40%, par exemple de 0,1 à 35%, de 2 à 35% en poids par rapport au poids total de la composition. Selon l'invention, la concentration totale du miel de thym et de l'eau thermale de Neyrac peut être 0,05 à 100%, par exemple de 0,1 à 80%, de 0,1 à 40%, par exemple de 0,1 à 10%, en poids par rapport au poids total de la composition. Selon l'invention par « poids total de la composition » on entend le poids de la composition comprenant l'ensemble de ses constituants. Selon l'invention, la composition cosmétique de la présente invention peut comprendre en outre au moins un agent actif additionnel choisi, par exemple parmi un agent anti-âge, un agent hydratant, un agent apaisant ou un mélange de ces agents. Ces agents peuvent être ceux couramment utilisés dans les produits cosmétiques et/ou pharmaceutiques à visée dermatologique. Des exemples d'agents anti- âges utilisables sont par exemple le silicium ou la vitamine C. Des exemples d'agents hydratants utilisables sont par exemple la glycérine ou l'acide hyaluronique. Des exemples d'agents apaisants utilisables sont par exemple le bisabolol ou l'allantoïne ou les extraits de boswellia serrata ou de camomille maritime. Ce ou ces agent(s) peuvent être utilisé(s) dans la composition de la présente invention par exemple aux concentrations usuellement utilisées et connues de l'homme du métier dans les compositions cosmétiques et/ou pharmaceutiques à visée dermatologique. La composition cosmétique selon l'invention peut comprendre un ou plusieurs adjuvants connus de l'homme du métier. Il peut s'agir par exemple d'un ou plusieurs adjuvant(s) choisi(s) parmi des agents de type esters, des agents hydratants, des agents émollients, des agents épaississants minéraux, des agents épaississants organiques, associatifs ou non, des filtres solaires minéraux, et pseudo-céramides, des vitamines et des provitamines, des protéines, des agents séquestrants, des agents alcanisants, des agents acidifiants, des agents réducteurs, des agents anti-oxydants, des charges minérales, ou tout autre adjuvant pouvant être cité dans le dictionnaire INCI (International Nomenclature Cosmetic Ingredients) publié par le CTFA (Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association). Selon l'invention, la composition cosmétique peut, par exemple, se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier. Il peut s'agir, par exemple d'une forme choisie parmi une émulsion huile-dansl'eau, eau-dans-l'huile, une émulsion multiple, une microémulsion, d'une émulsion solide, un gel aqueux ou hydro-alcoolique, une crème, un lait, une pommade, une huile, un baume, un onguent, un gel, d'un masque, une poudre, un support imbibé, par exemple un patch transdermique, une solution, une lotion aqueuse ou hydroalcoolique, un spray, une suspension et/ou une cire. Selon l'invention, la composition peut être sous toute forme connue de l'homme du métier dans les domaines de la cosmétique et de la dermatologie, sans aucune restriction galénique particulière. La composition selon la présente invention peut être, par exemple une composition pour le soin du visage, du corps, par exemple des compositions pour le visage et/ou le corps. La composition de l'invention peut être obtenue par tout procédé approprié connu de l'homme du métier pour la fabrication d'une composition cosmétique et/ou dermatologique. Il peut s'agir, par exemple d'un simple mélange. Il peut s'agir également, par exemple, d'un procédé comprenant une étape d'incorporation d'une phase interne dans une phase externe au moyen d'un émulseur, par exemple d'une turbine de type rotor-stator. Il peut s'agir également par exemple d'un procédé utilisant la Température d'Inversion de Phase (TIP), procédé classiquement utilisé par l'homme de l'art pour obtenir des émulsions huile dans eau dont les gouttelettes dispersées sont particulièrement fines. Selon l'invention, la composition cosmétique ou pharmaceutique à visée dermatologique peut être une composition cosmétique pour le traitement de la peau sensible ou atopique, pour inhiber l'inflammation cutanée neurogène, pour la réparation de la peau et/ou pour l'amélioration de l'aspect cosmétique d'une cicatrice. 2 9 8 4 1 5 1 11 Dans la présente par « peau sensible » on entend les peaux telles que définies précédemment. Dans la présente par « peau atopique » on entend on entend les peaux atopiques telles que définies précédemment. 5 Dans la présente par « inflammation cutanée neurogène » on entend par exemple une neuroinflammation dans la peau, par exemple des inflammations déclenchées par l'activation des nerfs sensoriels de la peau. Il peut s'agit par exemple d'inflammation cutanée neurogène telle que décrite dans Richardson JD, Vasko MR mécanismes 10 cellulaires de l'inflammation neurogène J Pharmacol Exp Ther 2002 Sep; 302 (3) :839-45 [31]. Dans la présente par « réparation de la peau » on entend, par exemple la restauration/amélioration de la fonction barrière de l'épiderme, cicatrisation de la peau, la stimulation de la réparation de 15 lésion cutanée superficielle, par exemple au niveau de l'épiderme. Avantageusement, la restauration/amélioration de la fonction barrière permet, par exemple, la protection de la peau d'agressions extérieures. Dans la présente par « l'amélioration de l'aspect cosmétique 20 d'une cicatrice » on entend, par exemple la diminution de la taille de la cicatrice, la diminution de rougeurs/marques au niveau de la cicatrice. La composition de l'invention permet avantageusement, notamment de traiter cosmétiquement les peaux sensibles ou réactives et/ou atopiques. 25 Selon l'invention, la composition cosmétique comprenant de l'eau thermale de Neyrac et du miel de thym peut être utilisée afin de restaurer la barrière cutanée et/ou de lutter contre les inflammations et allergies cutanées, de favoriser la réparation de la peau et/ou d'améliorer l'aspect cosmétique d'une cicatrice. 30 Avantageusement, la composition de l'invention comprenant du miel de thym et de l'eau thermale de Neyrac permet de renforcer la fonction barrière épidermique. En outre, la composition de l'invention permet notamment et avantageusement de lutter contre l'inflammation cutanée neurogène, de renforcer l'immunité et de réparer la peau et/ou cicatriser efficacement afin de traiter les peaux sensibles ou atopiques. Avantageusement, les inventeurs ont démontré que le miel de thym et l'eau thermale de Neyrac ont un effet synergique, notamment sur la restauration de la fonction barrière. La présente invention à donc également pour objet l'utilisation cosmétique d'une composition de l'invention, pour la restauration de la fonction barrière de la peau. La composition de l'invention peut également être utilisée pour inhiber l'inflammation cutanée neurogène. La composition de l'invention peut également être utilisée pour stimuler la ré-épithélisation et/ou la cicatrisation et/ou la réparation cutanée, en particulier la réparation de la peau et/ou améliorer l'aspect cosmétique d'une cicatrice. La présente invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique, notamment des peaux sensibles ou réactives et/ou atopiques, comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique comprenant du miel de thym. La présente invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique, notamment des peaux sensibles ou réactives et/ou atopiques, comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique comprenant du miel de thym et de l'eau thermale de Neyrac. Le miel de thym et l'eau thermale de Neyrac sont tels que définis ci-dessus. La composition cosmétique est telle que définie ci-dessus. Toutes les variantes et mode de réalisation décrits ci-dessus pour la composition cosmétique s'appliquent mutatis mutandis au procédé de traitement cosmétique selon l'invention. Pour cette application, on peut, par exemple, utiliser les formes galéniques décrites ci-dessus. L'application sur la peau peut donc être réalisée en fonction de la forme galénique utilisée. Il peut s'agir, par exemple d'une simple application sur la peau ou d'une application accompagnée d'un massage de la peau avec la composition de la présente invention. L'application est de préférence réalisée avec une quantité suffisante de la composition afin que toute la surface de la peau à traiter soit traitée. Il peut s'agir par exemple d'une application classique, comme une crème sur la peau. Il peut s'agir par exemple aussi d'une application pour former un masque traitant. L'application peut être, par exemple une application quotidienne, hebdomadaire et bi-mensuelle. Il peut s'agir par exemple d'une application une fois par jour, deux fois par jour ou plus. Avantageusement, la composition comprenant du miel de thym et de l'eau thermale de Neyrac permet notamment de restaurer la fonction barrière, possède en outre une action anti-inflammatoire, est antiallergique, anti-infectieuse, et une action réparatrice et/ou cicatrisante sur la peau. D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, illustrés par les figures annexées, données à titre illustratif. EXEMPLES Exemple 1 : Exemple d'un soin du visage ou pour le corps réalisé à partir de la composition de la présente invention Une composition de base a été préparée par mélange des différents composants, décrits dans le tableau 1 ci-dessous :30 Tableau 1 INGREDIENTS Quantité en % par rapport au poids total de la composition (%) Alkylglucoside 0,1 à 10% Glycérine 0,1 à 10% Triglycéride caprylique/ caprique 1 à 20% Gomme xanthane 0,05 à 1% Eau QS 100 Dans cette composition de base du miel de thym a été ajouté et une partie de l'eau utilisée était l'eau thermale de Neyrac. Les pourcentages en poids du miel de thym et de l'eau de Neyrac sont indiqués dans le tableau 2 suivant : Tableau 2: pourcentage en poids de miel de thym et/ou d'eau de Neyrac par rapport au poids de la composition Compositions % en poids de miel de thym par rapport au poids total de la composition (%) % en poids d'eau de Neyrac par rapport au poids total de la composition (%) 1 5 34,97 2 3 34,97 3 2 34,97 4 5 35,299 5 3 37,299 6 2 38,299 7 5 32,6489 8 3 32,6489 9 2 32,6489 5 30,40 11 3 30,40 12 2 30,40 13 5 2 14 2 2 0,5 79,5 16 0,1 79,9 17 5 0 18 10 0 19 99,5 0 Exemple 2 : Caractérisation biochimique et analytique du miel de thym La composition globale du miel de thym associé à l'eau thermale de Neyrac entrant dans la composition cosmétique est détaillée dans le tableau 3 ci-dessous. Tableau 3: Composition moyenne du miel de thym exprimée en % en poids par rapport au poids total du miel Composition Miel de thym % en poids par rapport au poids total du miel Eau 18% Glucides 80,3% Acides Aminés libres 0,082% Substances diverses 1,6% (vitamines, sels minéraux, enzymes, polyphénols) Conformément à la présente invention, la teneur en eau est un des critères de choix de qualité des miels. Concernant le miel de thym, la teneur en eau ne dépasse pas, de préférence, 21°A en poids du miel, permettant avantageusement d'éviter la prolifération de microorganismes. Selon, l'invention, de préférence, la teneur moyenne en eau est de 18% en poids du miel. 2.1 Les glucides Les glucides représentent les composés majoritaires du miel (80.3%). Les sucres analysés dans le miel de thym sélectionné pour cet exemple sont présentés dans le tableau 4. Tableau 4 : Composition du miel de thym en sucres exprimée en % en poids Composition Miel de thym % en poids par rapport au poids total du miel Fructose 38,8 Glucose 29,1 Saccharose 2,9 Isomaltose 3 Maltose 1,5 Raffinose 0,7 Erlose nd Turanose 1,7 Sucres Totaux 80,3 Glucose + Fructose 67,9 Dans le tableau le symbole « nd » correspond à non déterminé. Les sucres majoritaires dans le miel sélectionné pour cet exemple sont des monosaccharides : fructose (38.8%) et glucose (29.1%). De nombreux autres sucres sont également présents, en plus faible quantité, tels des disaccharides (saccharose, maltose, isomaltose, turanose) ou encore des trisaccharides (raffinose et erlose). La richesse en sucre facilite la fixation des molécules d'eau protégeant ainsi la peau de la déshydratation tout en conservant souplesse et douceur. 2.2 Les Acides aminés Les acides aminés contenus dans les miels permettent avantageusement de tonifier et de nourrir la peau. Les acides aminés libres présents dans les miels peuvent avoir plusieurs origines : le nectar des fleurs butinées, le pollen présents dans les miels, l'abeille elle-même (cas de la proline). Le profil des acides aminés présents dans le miel de thym sélectionné pour cet exemple est présenté dans le tableau 5. Tableau 5: Composition du miel de thym en acides aminés libres exprimée en mg par Kg. Composition Miel de En mg par kg thym Acide aspartique 12,7 Acide glutamique 15,3 Asparagine 14,9 Serine 7,9 Glutamine 20 Histidine 7,2 Glycine 4,2 Thréonine 4,7 Alanine 14,9 Arginine 12 Tyrosine 47,3 Cystéine 7,9 Cystine 13,8 Valine 6,7 Méthionine 1,7 Tryptophane 5 Phénylalanine 236,3 Isoleucine 7,1 Leucine 3,6 Lysine 21,8 Proline 350,8 TENEUR TOTALE 815,8 Le miel de thym sélectionné pour cet exemple contient une grande diversité d'acides aminés qui permettent de nourrir et tonifier la peau. L'acide aminé majoritaire est la proline (350,8 mg/Kg). Il présente également une teneur élevée en phénylalanine (236,3 mg/Kg) ainsi qu'en tyrosine (47,3 mg/Kg). 2.3 Les Polyphénols Les polyphénols constituent l'une des plus importantes familles de molécules présentes dans le règne végétal. Ils sont présents dans toutes les parties des plantes (fleur, fruit, graine, appareil végétatif...). Leur répartition est très inégale d'une espèce végétale à une autre et, pour une même espèce, selon la variété, le stade d'évolution physiologique de la plante et enfin selon les conditions climatiques et géographiques auxquelles les plantes auront été soumises. Chez les plantes ces composés interviennent par exemple dans différents processus physiologiques : croissance cellulaire, floraison... Ils protègent la plante contre les différents agents pathogènes (virus, bactéries, moisissures, rayonnement UV...). Ils sont également responsables de la coloration des fleurs, des fruits et des feuilles qui attirent les insectes pollinisateurs. Les polyphénols sont divisés en tanins, lignines, flavonoïdes et anthocyanes qui dérivent tous de l'assemblage d'unité phénoliques. L'intérêt cosmétique des polyphénols est multiple et directement corrélé aux différentes propriétés de ces molécules : propriétés antioxydantes, capacité à chélater les métaux, pouvoir anti-inflammatoire, effet antimicrobien et intervention sur l'activité de nombreuses enzymes. Ils participent à la lutte contre le vieillissement cutané en tant que molécules antiradicalaires ou en tant que protecteurs de la dégradation des protéines de structure de la peau comme l'élastine et le collagène. La teneur en polyphénols totaux du miel de thym sélectionné pour cet exemple est de 530 équivalent mg acide gallique / Kg. Des analyses chromatographiques complémentaires sur la composition en polyphénols du miel ont permis d'identifier par exemple l'acide syringique (par exemple 1,2 mg/Kg) et l'acide cinnamique (par exemple 4,7 mg/Kg). L'acide cinnamique est notamment connu pour son pouvoir antibactérien et antifongique très puissant (Schmidt E, Bail S, Friedl SM, Jirovetz L, Buchbauer G, Wanner J, Denkova Z, Slavchev A, Stoyanova A, Geissler M. Antimicrobial activities of single aroma compounds. Nat Prod Commun. 2010 Sep;5(9):1365-8. [15]). L'acide syringique, pour sa part, possède des propriétés cytoprotectrices, anti-inflammatoires en inhibant la peroxydation lipidique et anti-oxydantes (Ramachandran V, Raja B. Protective effects of syringic acid against acetaminopheninduced hepatic damage in albino rats. J Basic Clin Physiol Pharmacol. 2010;21(4):369-85 [16]).30 2.4 Matériel et méthodes 2.4.1 Teneur en eau La teneur en eau a été mesurée par dosage au réfractomètre sans préparation préalable des échantillons réalisé à partir du protocole expérimental décrit plus bas dans l'exemple 3. 2.4.2 Dosage des glucides Le protocole expérimental réalisé est décrit dans la publication Determination of honey sugars by HPLC with pulsed amperometric detection publiée dans Harmonised methods of the international honey commission. [17]. 2.4.3 Dosage des acides aminés Les acides aminés ont été identifiés et quantifiés par chromatographie liquide selon le protocole analytique décrit dans « Développement de méthodes analytiques et de banque de données appliquées au contrôle de la naturalité des miels monofloraux », Jean- François Cotte, thèse de l'université Claude Bernard-Lyon 1, école doctorale de chimie, 2003 [32]. 2.4.4 Dosage des polyphénols totaux Le dosage par spectrophotométrie UV-VIS a été selon la méthode de Folin-Ciocalteu décrit dans « Colorimetry of total phenolics with phosphomolybdicphosphotungstic acid and reagents », Singleton YL., Rossi JA, (1965), Am J Enol Vitic 16:144-158 [18]. 2.4.5 Analyse chromatographique des polyphénols L'analyse qualitative et quantitative des polyphénols a été 25 réalisée par chromatographie liquide haute performance (HPLC) utilisant la méthode d'extraction en phase solide (SPE) décrite ci-dessous. 2.4.6 Réactifs et Matériels Les standards phénoliques acide cinnamique (99%) et acide 30 syringique (>95%) ont été fournis par Sigma-Aldrich. 2 9 84 1 5 1 20 Le méthanol (grade HPLC), l'acétonitrile (grade HPLC) et l'acide chlorhydrique 1M ont été fournis par Panreac. L'acide trifluoroacétique (pureté 99%) a été obtenu chez Acros organics. Les cartouches d'extraction strata C18-E, 500mg/3m1 (55pm, 70A) 5 ont été fournis par Phenomenex et les filtres seringues PVDF 0,45 pm par Millipore. L'appareillage chromatographique utilisé était une chaîne Perkin Elmer Flexar équipée d'une détecteur à barrettes d'iodes, pilotée par le logiciel Chromera. La colonne utilisée est une colonne Luna C18 10 (250*4mm, 5pm) fournie par Phenomenex. 2.4.7 Préparation de l'échantillon 10 g de miel ont été dilués dans 10 mL d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique (pH = 2). La solution a été agitée pendant 15 minutes sous agitation magnétique. La solution a été ensuite filtrée sur 15 coton avant l'extraction sur support solide (SPE). Le protocole utilisé pour l'extraction SPE était : 1/ Conditionnement de la cartouche par 5 mL de méthanol puis 2 mL d'eau déminéralisée, 2/ Chargement de la solution acide de miel (10 g de miel ont été 20 dilués dans 10 mL d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique (pH = 2), 3/ Rinçage par 10 mL d'eau acidifiée par de l'acide chlorhydrique (pH = 2), 4/ Elution des composés phénoliques par 2,5 mL de méthanol et filtration des solutions sur filtres seringues 0,45pm avant injection en Chromatographie liquide haute performance (HPLC). 2.4.8 Analyse HPLC La séparation a été réalisée avec le gradient de phase mobile présenté dans le tableau 6 ci-dessous Tableau 6 : description du gradient de solvant Temps (min) Solvant A Solvant B (pourcentage (pourcentage de la solution) de la solution) 0 95 5 50 min 20 80 15 min 95 5 Le solvant A correspond à de l'eau acidifiée avec 0,1% d'acide trifluoroacétique et le solvant B correspond à de l'acétonitrile acidifiée avec 0,1% d'acide trifluoroacétique. Le débit est de 1 mL/min. Le volume d'injection est de 10 pL. Les analyses sont réalisées à 280 et 330 nm. Exemple 3 : Caractérisation physico-chimique de l'eau de Neyrac. L'eau de Neyrac utilisée a été analysée afin de déterminer ses caractéristiques physicochim igues. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 6 ci-dessous. Tableau 7 : composition de l'eau de Neyrac Seuils de Eau de Neyrac quantification filtrée (filtration 5pm x 0,2pm) pH 7,55 Conductivité à 25°C 1 pS/cm 1951 Conductivité à 20°C 1 pS/cm 1748 Turbidité 0,1-2 NFU Tableau 8 : méthodes d'analyse Méthodes pH NF T 90 008 Conductivité NF EN 27888 Turbidité NF EN ISO 7027 Carbone organique total NF EN 1484 TAC NF EN ISO 9963-1 Carbonates (CO3) NF EN ISO 9963-1 Bicarbonates (HCO3) NF EN ISO 9963-1 Calcium total NF EN ISO 14911 Magnésium NF EN ISO 14911 Sodium NF EN ISO 14911 Potassium NF EN ISO 14911 Chlorures NF EN ISO 10304-1 Nitrates (NO3) NF EN ISO 10304-1 Sulfates (SO4) NF EN ISO 10304-1 Orthophosphates en P / PO4 NF EN ISO 6878 Fer total NF EN ISO 11885 Manganèse NF EN ISO 11885 Silicium, silicates, silice NF EN ISO 11885 Exemple 4 : Effet d'un extrait de miel de thym ou de l'eau thermale de Neyrac et/ou du mélange des deux sur des peaux sensibles et/ou atopiques. Etant donné la variété de symptômes observés et les sensations décrites chez les sujets à la peau sensible ou atopique, la perte de la fonction barrière et l'état déshydraté entrainent pour conséquence trois phénomènes étroitement impliqués : un seuil de tolérance de la peau abaissé, l'activation du système nerveux avec une réponse accélérée et une inflammation neurogène. La peau devient alors plus sensible aux irritants et aux stimuli extérieurs. En effet, la fonction barrière de la peau étant moins efficace, le contact et la pénétration des agresseurs est facilitée. Il en résulte une stimulation directe des récepteurs nerveux cutanés avec libération accrue de neuromédiateurs modulant les fonctions de toutes les cellules immunitaires, en particulier celles des lymphocytes et des cellules dendritiques, les deux cellules-clés de la présentation antigénique et une réponse de type inflammatoire : l'irritation, même minime et insoupçonnée entraîne la libération de cytokines pro-inflammatoires (IL-1 et TNF-a) et le relargage de métabolites de l'acide arachidonique (PgE2, PgF2 et leucotriènes). Ce mécanisme inflammatoire explique les signes cliniques tels que les rougeurs, les sensations de chaleur et parfois même de rcedème. Les expériences ont été réalisées avec un miel de thym biologique, de l'eau thermale de Neyrac et le mélange des deux. Le miel de thym biologique provenait de Montargis par la société Miels Villeneuve (81 rue de la Baraudière ZA Villemandeur 45203 Montargis). Le transcriptome est l'ensemble des ARN messager (molécules servant de matrice pour la synthèse des protéines) issus de l'expression d'une partie du génome d'un tissu cellulaire ou d'un type de cellule. La caractérisation et la quantification du transcriptome dans un tissu donné et dans des conditions données permettent d'identifier les gènes actifs, de déterminer les mécanismes de régulation d'expression des gènes et de définir les réseaux d'expression des gènes. Une des techniques utilisées pour mesurer simultanément le niveau d'expression d'un grand nombre de types différents d'ARN messager est celle de la puce à ADN. Les puces à ADN permettent de mesurer et de visualiser très rapidement les différences d'expression entre les gènes et ceci à l'échelle d'un génome complet. 1. Matériel et méthode 1.1 Préparation des échantillons : Des extraits de miel de thym, de l'eau thermale de Neyrac et la combinaison de deux aux différentes concentrations présentées dans le tableau 9 ci-dessous ont été réalisés en vue des analyses transcriptom igues. Après avoir réalisé un test de viabilité cellulaire tel que décrit dans la publication de Khalegi S et al. (Khaleghi S, Aziz AA, Razali N, Junit SM. Microarray analysis revealed different gene expression patterns in HepG2 cells treated with low and high concentrations of the 3 0 extracts of Anacardium occidentale shoots. Genes Nutr. 2011 Mar 29.09D, 5 explants de peau provenant de lifting du visage d'une patiente âgée de 55 ans ont été incubés indépendamment en présence de ces compositions pendant 24h dans du DMEM (Dulbecco/Vogt modified Eagle's minimal essential medium) sans sérum à 37°C en atmosphère humide à 5% de CO2. Un expiant de peau non traité a été incubé dans les mêmes conditions. Le tableau 9 récapitule les concentrations appliquées pour chaque composition ; Tableau 9 : concentrations appliquées pour chaque composition Pourcentage en poids par rapport au poids total de la composition miel de thym 5 Eau thermale de Neyrac 30 Mélange des deux 30+5 1.2 Extraction des ARN totaux et amplification linéaire Après incubation, les expiants de peau ont été broyés puis les ARN totaux issus de chaque expiant ont été extraits en utilisant le RNeasy Kit (Qiagen, Hilden, Germany). Les ARN totaux ont été ensuite quantifiés puis la qualité a été vérifiée en utilisant le BlOanalyzer 2100 avec le RNA 6000 Nano LabChip Kit (Agitent Technologies, Boblingen, Germany). Un RIN entre 7,5 et 10 atteste de la bonne qualité des ARN totaux issus de chaque expiant préalablement incubé ou non avec l'extrait de miel biologique de thym, ainsi que le mélange avec l'eau thermale de Neyrac. 1.3 Mesure de l'expression génique sur puce oligonucléotide et acquisition des data : Les puces oligonucléotides Affymetrix Human Gene 1.0 ST Whole Genome ont été utilisées pour chaque analyse d'expression génique (GeneChip HU Gene 1.0, Affymetrix, Santa Clara, USA). Une documentation complète ainsi que le protocole expérimental décrit dans Seitz G, Bonin M, Fuchs J et al. Inhibition of glutathione-S- transferase as a treatment strategy for multidrug resistance in childhood rhabdomyosarcoma. International Journal of Oncology 2010 36:491- 500.[20] est disponible sur le site : http://m edia. affymetrix. com/support/techn ical/datasheets/gene_1_0_st_ 10 datasheet.pdf. Les cycles de rétrotranscription et d'amplification des ARN totaux en ARNc puis en ADNc ont été réalisés à l'aide des kits Ambion WT Expression (Ambion, Applied Biosystem, USA) et du kit GeneChip WT terminal Labelling and Hybridization User (Affymetrix). L'hybridation des 15 puces et les mesures ont été réalisées par les Microarray Facility Tubingen. Les Puces ont ensuite été scannées en utilisant le scanner GCS3000 Gene Chip (Affymetrix) et le software GCOS 1.4. Les images scannées ont été ensuite analysées en utilisant la console Expression 1.0 (Affymetrix) afin de convertir des mesures d'intensité lumineuse en 2 0 données numériques et de normaliser ces données. L'analyse complète des données et une analyse statistique ont été réalisées grâce au logiciel Genespring GX 11 (Agilent Technologies) sur la base, en particulier, d'algorithmes de classification. Des différences d'expression de gènes ainsi obtenues suite à l'application de l'eau de Neyrac seule, 25 du miel de thym seul ou du mélange des deux sur des explants de peau par rapport à un expiant non traité sont rassemblées dans le tableau 10. La valeur des gènes différentiellement exprimés entre la peau non traitée et la peau traitée avec de l'eau de Neyrac seule, du miel de thym seul ou du mélange des deux présente une p-value Tableau 10 : différence d'expression génique et signification biologique des gènes suite à l'application du miel de thym et de l'eau thermale de Neyrac et du mélange des 2 sur explants de peau par rapport à un même expiant non traité. GENES db EST FONCTIONS STATUT dans étude: stimulation par rapport à la peau non traitée ALOX 5 NM membre de la famille des Inhibition: -2X arachidonate 000698.2 lipooxygénase, formation des avec miel de 5- leucotrienes impliqués dans thym seul et lipoxygenase l'inflammation et allergies également avec le mélange miel de thym et eau thermale de Neyrac ALOX15 B NM membre de la famille des Inhibition: -20X arachidonate 001141.2 lipooxygénase, formation des avec miel de 15- leucotrienes impliqués dans l'inflammation et allergies thym seul et également avec le mélange miel de thym et eau lipoxygenase thermale de Neyrac CXCL12 NM membre de la famille des Inhibition: -8X chemokine (C- 199268.2 intercrines, joue un rôle en avec miel de X-C motif) activant les lymphocytes, thym seul et ligand 12 inhibant l'apoptose entrainant également avec prolifération incontrôlée et le mélange miel inflammation de thym et eau thermale de Neyrac DEFB4A NM peptide cytotoxique et X4 avec miel de defensin, beta 004942.2 bactéricide synthétisé par les thym seul et également avec le mélange miel de thym et eau 4A leucocytes thermale de Neyrac DEFB103A NM peptide cytotoxique et X2 avec miel de defensin, beta 018661.3 bactéricide synthétisé par les thym seul et également avec le mélange miel de thym et eau 103A leucocytes thermale de Neyrac TLR2 toll-like NM membre de la famille des Toll X2 avec miel de thym seul et . receptor 2 003264.3 like récepteurs impliqués dans la également avec e reconnaissance des pathogènes le mélange miel de thym et eau thermale de activant l'immunité innée Neyrac ITGA5 NM impliquée dans l'adhésion X2 avec le integrin, alpha 002205.5 cellulaire et la signalisation mélange miel de thym et eau thermale de Neyrac. Non stimulé par le miel seul. ITGB3 NM impliquée dans l'adhésion X2 avec le integrin, beta 00212.2 cellulaire et la signalisation mélange miel de 3 thym et eau thermale de Neyrac. Non stimulé par le miel seul. ICAM5 AF impliquée dans l'adhésion X2 avec le mélange miel de thym et eau thermale de Neyrac. Non stimulé par le intercellular 082802.1 intercellulaire miel seul. adhesion molecule 5 ICAM 3 NM impliquée dans l'adhésion X2 avec le mélange miel de thym et eau thermale de Neyrac. Non stimulé par le intercellular 002162.3 intercellulaire miel seul. adhesion molecule 3 ITGB6 NM impliquée dans la réparation X2 avec le integrin, beta 000888.3 tissulaire, la cicatrisation et la ré- mélange miel de 6 épithélisation thym et eau thermale de Neyrac. Non stimulé par le miel seul. CCL20 BCO2069 chémokine impliquée dans le X 6,5 dans l'eau chemokine (C- 8.1 recrutement des cellules de thermale de C motif) ligand Langerhans et leur maturation Neyrac 20 CCR7 NM 001 Récepteur de chémokine X 2,5 dans l'eau chemokine (C- 838.3 impliqué dans la maturation des thermale de C motif) cellules de Langerhans ainsi que Neyrac receptor 7 dans la migration des lymphocytes Dans le tableau précité, Xn représente le facteur de stimulation et/ou d'inhibition par rapport à la peau non traitée, et db EST est une base de données regroupant la référence du gène ainsi que la séquence correspondant au gène spotté sur la puce oligonucléotides Affymetrix Human Gene 1.0 ST Whole Genome. 1.4 Validation des données d'expression génique par PCR en temps réel Afin de valider au niveau génique, par une autre méthode, ces données, une expérience de QPCR a été réalisée sur plusieurs gènes cibles impliqués respectivement dans le renouvellement épidermique et la microcirculation cutanée. Pour cela, des amorces en position 3' et 5 `de chaque gène ont été sélectionnées puis synthétisées afin d'amplifier chaque gène pris séparément. Le tableau 11 regroupe les séquences et les caractéristiques de ces amorces. Tableau 11 : séquence et caractéristique des amorces permettant d'amplifier ALOX15B, ITGB6, CXCL12, DEFB4 et ICAM5. Amorces Séquences TM %GC SEQ ID ALOX 15B L ctgccaccctctcttcaagt 59 55 1 ALOX15B R caggagagaatagttcagctgctt 60 46 2 ITGB6 L gaaggaatgatcacgtacaaggt 59 43 3 ITGB6 R agcaggcagtcttcacaggt 60 55 4 2 9 8 4 1 5 1 30 CXCL12 L ccaaactgtgcccttcagat 60 50 5 CXCL12 R ctctgcgccccttgttta 59 56 6 DEFB4 L tcagccatgagggtcttgta 59 50 7 DEFB4 R g gatcgcctataccaccaaa 59 50 8 ICAM5 L cactgtgggcgtggaatac 59 48 9 ICAM 5 R tcaacgtgaagtttcctcctg 60 58 10 GAPDH L agccacatcgctcagacac 60 58 11 GAPDH R g cccaatacgaccaaatcc 60 53 12 Une étape de rétrotranscription a été réalisée en utilisant le système Superscript First-Srand Synthesis System for RT-PCR (Invitrogen Corp, Carlsbad, CA) des ARN issus des explants de peau 5 précédant (Devilard E, Bladou F, Ramuz O, Karsenty G, Dalès JP, Gravis G, Nguyen C, Bertucci F, Xerri L, Birnbaum D. FGFR1 and WT1 are markers of human prostate cancer progression. BMC Cancer. 2006 Nov 30; 6:272. [21 ] ). Les expériences de PCR en temps réel ont été réalisées en 10 utilisant le LightCycler 2.0 Detection (Roche Diagnostic, Suisse) en triplicate avec la GAPDH comme gène de référence et contrôle interne. Le kit d'amplification utilisé dans cette expérience est le FastStart DNA Master plus SYBR Green I Master Mix (Roche Diagnostics, Suisse) (Archambaud C, Sansoni A, Mingueneau M, Devilard E, Delsol G, 15 Malissen B, Malissen M. STAT6 deletion converts the Th2 inflammatory pathology afflicting Lat(Y136F) mice into a lymphoproliferative disorder involving Th1 and CD8 effector T cells. J Immunol. 2009 Mar 1; 182(5):2680-9. [22] ).20 2. RESULTATS 2.1 Profil d'expression génique 2.1.1. Impact sur l'immunité et sur la restauration de la fonction barrière du miel de thym, de l'eau thermale de Neyrac et du mélange composé de miel de thym et de l'eau thermale de Neyrac. Les résultats des analyses d'expression de gènes regroupés dans le tableau 10 ont permis de montrer que l'expression de deux gènes DEFB4A et DEFB103A codant pour des défensines sont multipliées respectivement par 4 (X4) et par 2 (X2) en présence du miel de thym et du mélange de thym et de l'eau thermale de Neyrac par rapport à la peau non traitée. Aucune surexpression de ces gènes ne fut détectée dans la peau non traitée. De plus, ce mélange de miel de thym et eau thermale de Neyrac ainsi que le miel de thym a stimulé par 2 (x2) l'expression du gène codant pour le récepteur 2 de la famille Toll (TLR2) impliqué dans l'immunité innée alors qu'aucune surexpression de ce gène n'a été observé dans la peau non traitée. Par ailleurs, les résultats des analyses d'expression de gènes regroupés dans le tableau 10 ont permis de montrer que l'expression de deux gènes CCL20 et CCR7 codant pour une chémokine et un récepteur de chémokine sont multipliés respectivement par 6.5 (X6.5) et par 2.5 (X2.5) en présence de l'eau thermale de Neyrac seule par rapport à la peau non traitée. Aucune surexpression de ces gènes ne fut détectée dans la peau non traitée ou dans le miel de thym ainsi que le mélange eau thermale de Neyrac + miel de thym. Les gènes DEFB4A et DAFB103A codent pour des beta- défensines présentes sur l'ensemble des épithéliums et au sein de nombreux organes, famille de peptides antimicrobiens naturels largement impliqués dans l'immunité non spécifique, ou innée. Les défensines jouent un rôle prépondérant dans les pathologies infectieuses, mais également modulent la réponse inflammatoire. (Ganz T (2005) Defensins and other antimicrobial peptides: a historical perspective and an update. Comb. Chem. High Throughput Screen. 8: 209-217[23]). Leur sécrétion est médiée par l'interaction du récepteur Toll 2 avec les produits microbiens, dont l'expression est retrouvée stimulée comme précédemment démontré (Kumar Ashok, Jing Zhang (2005) Toll-like receptor 2 mediated expression of 11-defensin-2 in human corneal epithelial cells Microbes and infection [24]). Les gènes CCL20 et CCR7 codent pour la chémokine CCL20 et un récepteur de chémokine CCR7 impliqués tous les deux lors dans le recrutement des cellules de Langerhans, sentinelles de l'épiderme, ainsi que leur maturation lors d'une infections ou l'entrée d'allergènes (Kennedy-Crispin M, Billick E, (2011) Human Keratinocytes Response to Injury Upregulates CCL20 and Other Genes Linking Innate and Adaptive Immunity. [25] ; Stutte S, Quast T, Gerbitzki N, Savinko T (2011) Requirement of CCL17 for CCR7- and CXCR4-dependent migration of cutaneous dendritic cells. [26]). Le récepteur de chémokine CCR7 participe également à la migration des lymphocytes depuis le sang jusqu'à l'épiderme lors d'infections. Tel que démontré ici, l'eau thermale stimule l'immunité via le recrutement et la maturation des cellules dendritiques et la migration des lymphocytes. Le miel de thym et le mélange miel de thym associé à l'eau thermale de Neyrac stimule l'immunité innée à travers une activité antibactérienne et anti-infectieuse. En particulier, ils permettent de restaurer efficacement la fonction barrière des peaux sensibles ou atopiques. En outre et avantageusement, les polyphénols, en particulier l'acide cinnamique ( [15]) et le thymol ( [12]), contenus dans le miel de thym confèrent au mélange des propriétés anti microbiennes que ce soit sur les bactéries Gram positives ou Gram négatives ainsi qu'une activité fongique sur Candida albicans. 2.1.2. Impact sur l'inflammation neurogène, l'irritation et l'effet apaisant du miel de thym et du mélange composé de miel de thym et de l'eau thermale de Neyrac. Les résultats des analyses d'expression génique (tableau 10) permettent de démontrer que plusieurs gènes d'une même famille impliqués dans l'inflammation neurogène ont été inhibés en présence du miel de thym et du mélange de miel de thym et d'eau thermale de Neyrac par rapport à la peau non traitée. En effet, l'expression des gènes ALOX5 et ALOX158 codant pour des lipo-oxygénases a été inhibée respectivement par 2 (-x2) et par 20 (-x20) en présence du miel de thym et du mélange de miel de thym et d'eau thermale de Neyrac. Ces deux gènes, en oxydant l'acide arachidonique, sont responsables de la formation des leucotriènes, cysteinyl- leucotriènes et lipoxines médiateurs de l'inflammation neurogène cutanée. (Serhan CN, Jain A, Marleau S, Clish C, Kantarci A, Behbehani B, Colgan SP, Stahl GL, Merched A, Petasis NA, Chan L, Van Dyke TE. Reduced inflammation and tissue damage in transgenic rabbits overexpressing 15- lipoxygenase and endogenous anti-inflammatory lipid mediators. J Biol Chem. 2002 May 3; 277(18):16189-201 [27] ). De plus, le miel de thym et le mélange de miel de thym et eau thermale de Neyrac inhibe par 8 (-x8) l'expression du gène codant pour la chemokine CXCL12 impliquée dans les phénomènes inflammatoires et allergiques cutanés (Narbutt J, Lesiak A, Sysa-Jedrzeiowska A, Zakrzewski M, Bogaczewicz J, Stelmach I, Kuna P. The imbalance in 2 5 serum concentration of Th-1- and Th-2-derived chemokines as one of the factors involved in pathogenesis of atopic dermatitis. Mediators Inflamm. 2009;2009:269541 [28] ) avec aucune inhibition de ce gène dans la peau non traitée. Ainsi, le miel de thym et la composition comprenant du miel de 30 thym et l'eau thermale de Neyrac permettent avantageusement d'apaiser les peaux sensibles ou atopiques en luttant contre l'inflammation neurogène cutanée et l'irritation de la peau. Tel que démontré ici, le miel de thym et la composition comprenant le miel de thym et l'eau thermale de Neyrac inhibent l'inflammation neurogène cutanée et apaise les peaux sensibles ou atopiques. 2.1.3. Impact sur la perméabilité cutanée du mélange composé de miel de thym et de l'eau thermale de Neyrac. Les résultats des analyses d'expression génique (tableau 10) permettent de démontrer que plusieurs gènes de deux familles différentes impliqués dans l'adhésion intra et intercellulaire sont surexprimés en présence du mélange de miel de thym et d'eau thermale de Neyrac par rapport au miel de thym ou l'eau thermale de Neyrac pris séparément et par rapport à la peau non traitée. Ainsi, il existe un réel effet synergique lié au mélange du miel de thym et eau thermale de Neyrac. En effet, l'expression des gènes ITGA5 et ITGB3 codant pour des récepteurs protéiques appartenant à la famille des Intégrines (Margadant C, Charafeddine RA, Sonnenberg A. Unique and redundant functions of integrins in the epidermis. FASEB J. 2010 Nov;24(11):4133-5 [29] ) impliquées dans les jonctions intercellulaires et l'adhérence a été multipliée respectivement par 2 (x2) en présence de miel de thym et eau thermale de Neyrac. De plus, l'expression des gènes ICAM5 et ICAM3 codant pour des protéines permettant une adhésion intercellulaire en se fixant sur la protéine LFA- 1 a été également multipliée par (x2) en présence du mélange. L'effet synergique du mélange comprenant le miel de thym et l'eau thermale de Neyrac permet notamment et avantageusement de restaurer la perméabilité de la peau en assurant une meilleure cohésion entre cellules de par la stimulation de l'expression de quatre gènes (INTGs et ICAMs) limitant ainsi la perte en eau de la peau. Tel que démontré ici, le mélange comprenant le miel de thym et l'eau thermale de Neyrac permet de restaurer la perméabilité de la peau et de ce fait sa fonction, la richesse en sucre du miel de thym facilitant la fixation des molécules d'eau qui protègent la peau de la déshydratation (propriétés humectantes). 2.1.4. Impact sur la réparation et cicatrisation cutanées du miel de thym et du mélange composé de miel de thym et de l'eau thermale de Neyrac. Les résultats des analyses d'expression génique (tableau 10) permettent de montrer qu'un gène ITGB6 appartenant à la famille des Intégrines, est surexprimés en présence du miel de thym et du mélange de miel de thym et d'eau thermale de Neyrac par rapport à la peau non traitée et à l'eau thermale de Neyrac . En effet, l'expression du gène ITGB6 a été multipliée respectivement par 2 (x2) en présence du miel de thym et du mélange de miel de thym et d'eau thermale de Neyrac. Ce gène code pour une intégrine impliquée dans la cicatrisation cutanée et les phénomènes de ré-épithélisation durant la réparation tissulaire. (Jacobsen JN, Steffensen B, Hâkkinen L, Krogfelt KA, Larjava HS. Skin wound healing in diabetic [36 integrin-deficient mice. APMIS. 2010 Oct;118(10):753-64. [30] ) De ce fait, le miel de thym et le mélange comprenant le miel de thym et l'eau thermale de Neyrac a notamment une action cicatrisante, réparatrice, par exemple par la stimulation de l'expression de gènes impliqués dans la réparation tissulaire. Tel que démontré ici, le miel de thym et le mélange comprenant le miel de thym et l'eau thermale de Neyrac permettent de mieux réparer et cicatriser les peaux sensibles, irritées ou atopiques lors de phases inflammatoires.30 2.2 PCR en temps réel Les résultats de PCR en temps réel permettant de valider sur les gènes ALOX15B, CXCL12, DEFB4, ICAM5 et ITGB6 les données de micro-array sont regroupées dans le tableau 12. Tableau 12: expression génique de ALOX15B, CXCL12, DEFB4, ICAM5 et ITGB6 par RT-QPCR suite à l'application d'une composition comprenant du miel de thym, ou d'une composition comprenant un mélange de miel de thym et d'eau thermale de Neyrac sur explants de peau par rapport à un même expiant non traité. GENES Miel de thym Mélange du miel de thym +eau thermale de Neyrac DEFB4A X 4,5 X 5 ITGB6 X 2,5 X 2,5 ALOX15 Inhibition: - 22 X Inhibition: - 22 X CXCL12 Inhibition: - 7 X Inhibition: - 7X ICAM 5 X2 Dans le tableau 12 ci-dessus, * signifie qu'aucune augmentation génique n'a été observé, Xn correspond au facteur d'augmentation ou d'inhibition de l'expression. L'expression des gènes DEFB4, ICAM5 et ITGB6 a été multipliée par 5 (x5) ,2 (x2) et 2,5 (x2,5) en présence du mélange miel de thym+eau thermale de Neyrac. Par ailleurs, l'expression des gènes DEFB4 et ITGB6 n'a été multipliée que par 4,5 (x4,5) en présence uniquement de miel de thym. L'expression des gènes ALOX15B et CXCL12 a été inhibée respectivement par 22 (-22X) et par 7 (-7x) en présence du miel de thym et du mélange miel de thym et eau thermale de Neyrac par rapport à la peau non traitée. Aucune surexpression ou inhibition ne fut retrouvée pour ICAM5 en présence du miel de thym ou l'eau thermale de Neyrac pris séparément ainsi que dans la peau non traitée. Les résultats obtenus lors de cette expérience sont identiques à l'expérience sur puces à ADN ce qui confirme et valide les données de micro-arrays. De ce fait, tel que démontré dans cet exemple, la composition comprenant du miel de thym et de l'eau thermale de Neyrac peut être utilisée pour le traitement de peau sensible et/ou atopique. En particulier, la composition de l'invention permet avantageusement de restaurer la fonction barrière de la peau et/ou d'inhiber l'inflammation neurogène cutanée. En outre la composition de l'invention permet avantageusement de réparer et cicatriser la peau. Il en résulte que la stimulation directe des récepteurs nerveux cutanés est inhibée limitant ainsi la libération de neuromédiateurs responsables des signes cliniques des peaux sensibles et atopiques (Richardson JD et al. [31]). Cet exemple démontre clairement par une analyse transcriptomique ex-vivo par Puces à ADN que la composition de l'invention permet de restaurer la fonction barrière, permet de lutter contre l'inflammation neurogène, les infections, la déshydratation, caractéristiques des peaux sensibles et/ou atopiques. Ainsi, la composition cosmétique ou pharmaceutique de l'invention peut être avantageusement utilisée, notamment, dans le traitement cosmétique de la peau sensible ou atopique, pour inhiber l'inflammation neurogène. En outre la composition cosmétique ou pharmaceutique selon l'invention peut donc être avantageusement utilisée pour restaurer la fonction barrière de la peau et/ou pour améliorer l'aspect d'une cicatrice. Ainsi la composition cosmétique ou pharmaceutique selon l'invention peut être avantageusement utilisée pour réparer et cicatriser la peau. Listes des références 1. DRENO B. Anatomie et physiologie de la peau et de ses annexes. 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Composition selon la revendication 3, dans laquelle la concentration en miel de thym est de 0,05 à 99,95% en poids par rapport au poids total de la composition et la concentration en eau thermale de Neyrac est de 0,05 à 99,95% en poids par rapport au poids total de la composition. 5. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ladite composition étant sous l'une des formes choisies parmi une crème, un lait, une lotion, une huile, un baume, un onguent un gel, un masque. 6. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 pour le traitement d'une peau sensible ou atopique. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 pour inhiber l'inflammation cutanée neurogène. 8. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 pour la réparation de la peau. 9. Composition selon la revendication 3, ou 4 ou 5 lorsqu'elles dépendent de la revendication 3, pour la restauration de la fonction barrière de la peau. 10. Procédé de fabrication d'une composition selon la revendication 1 ou 2, ledit procédé comprenant une étape de mélange de miel de thym à une composition cosmétique ou pharmaceutique à visée dermatologique. 11. Procédé de fabrication selon la revendication 10, comprenant en outre une étape de mélange d'eau thermale de Neyrac précédente, simultanée ou successive à l'étape de mélange de miel de thym avec ladite composition cosmétique ou pharmaceutique à visée dermatologique. 12. Utilisation cosmétique d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, pour la réparation de la peau. 13. Utilisation cosmétique d'une composition selon la revendication 3, ou 4 ou 5 lorsqu'elles dépendent de la revendication 3, pour la restauration de la fonction barrière de la peau. 14. Procédé cosmétique comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5.