FR 2989973 A1 20131101 FR 1253933 A 20120427 Matériaux nanostructurés biodégradables, leur procédé de préparation et leur utilisation pour le transport et le relargage de substances d'intérêt La présente invention concerne des matériaux nanostructurés biodégradables, leur procédé de préparation et leur utilisation pour le transport et le relargage de substances d'intérêt. Le développement de biomatériaux biodégradables et implantables pour le transport de médicaments suscite un intérêt considérable car ces matériaux permettent des utilisations peu invasives et de durée finie. De façon idéale, le relargage des molécules constituant le principe actif contenu dans les médicaments vectorisés, doit être contrôlé de façon à délivrer localement une dose continue. Or, ce n'est pas le cas dans la plupart des matériaux conçus pour le transport de médicaments, la diffusion des molécules étant gouvernée par une loi fickienne, donc dépendant de la concentration en molécules. En effet, jusqu'ici, le relargage est essentiellement induit par l'érosion du contenant et non par la diffusion dans des pores. Par conséquent, dans la plupart des vecteurs élaborés jusqu'à présent, l'effet rafale est souvent incontournable et s'oppose à une diffusion contrôlée et continue des molécules actives. Il est donc nécessaire de mener des études sur la conception de biomatériaux appropriés pour le contrôle de la diffusion. Idéalement, la nanostructuration devrait permettre de concevoir des pores dont la taille est du même ordre de grandeur que la taille des molécules actives, permettant ainsi une diffusion contrôlée par file unique des molécules encapsulées. II est par ailleurs souhaitable de pouvoir élaborer ces biomatériaux sans avoir recours à des méthodes agressives de traitement, physiques ou chimiques, habituellement utilisés dans des processus de nanostructuration inorganique. En effet, les gabarits ou agents structurants couramment utilisés sont généralement éliminés par calcination, ce qui consomme beaucoup d'énergie, ou/et ils sont éliminés par extraction dans des solvants organiques souvent toxiques. Gérardin et al (US2011/0028576 et W02009/081000) décrivent des matériaux inorganiques nanostructurés destinés notamment à la préparation de catalyseurs. Ces matériaux sont à base de silicium et sont obtenus grâce à des agents de nanostructuration constitués à partir de micelles de copolymères diblocs . Mais, si la silice nanostructurée n'est pas toxique, elle n'est ni biodégradable, ni deformable, ni structurée en couches épaisses comme peuvent l'être des polymères nanostructurés. La silice ne possède donc pas les propriétés qui en ferait un candidat idéal pour le transport de molécules actives ou pour l'implantation dans le corps. Berg et al (Berg M.C., Zhei L., Cohen R.E., Rubner M.F., Biomacromolecules, 2006, 7, 357- 364), Yang et al (Yang S.Y., Yang J.A., Kim E.S., Jeon G, Oh E.J., Choi K.Y., Hahn S.K., Kim J.K., acsnano, 2010, 4, 3817-3822), Desai et al (Bernards D.A., Desai T.A., Adv. Mat., 2010, 22, 23582362 ; Bernards D.A., Desai TA., Soft matter, 2010, 6, 1621-1631) et Martin et al (Martin F., Walczak R., Boiarski A., Cohen M., West T., Cosentino C., Ferrari M., I of Controlled released, 2004, 102, 123-133) décrivent la nanostructuration de polymères pour former des matériaux poreux ultraminces sous forme de membranes, leur épaisseur n'excédant pas la centaine de nanomètres. Mackay et al (Mackay M.E., Tutej a A., Duxbury P.M., Hawker C.J., Van Horn B., Guan Z., Chen G, Krishnan R.S., Science, 2006, 311, 1740-1743) décrivent les conditions nécessaires à la stabilité ou à la ségrégation de mélanges de polymères tel que du polystyrène et de nanoparticules telles que des fullerènes. Leurs matériaux ne présentent pas de porosité et sont notamment destinés à des dispositifs photovoltaïques (Mackay et al, US2007/0212528). Ye et al (Ye M., Kim S., Park K., I of controlled released, 2010, 146, 241-260) présentent des biopolymères, sous forme de microsphères, destinés à vectoriser des protéines à des fins thérapeutiques. Mais le profil de relargage n'est ni contrôlé, ni continu. Johnson et al (Johnson S.A., Brigham E.S., 011ivier P.J., Mallouk T.E., Chem. Mater , 1997, 9, 2448-2458) utilisent des zéolites comme agents de structuration de matériaux organiques tels que la bakélite. Mais les méthodes de traitement sont agressives puisqu'elles nécessitent une pyrolyse et l'utilisation d'acide fluorhydrique pour libérer la porosité. Wang et al (Wang X.D., Tan B., Teng Q., Yao X., Su C., Wang W., Chem. comm., 2010, 46, 970-972) décrivent des polymères nanoporeux organiques constitués de base de Trôger destinés à des applications de catalyse hétérogène. Canelas et al (Canelas D.A., Herlihy K.P., DeSimone J.M., advanced review, 2009, 1, 391- 404) décrivent des études portant sur l'utilisation de nanoparticules formées de polymères et obtenues par un procédé "PRINT" = Particle Replication In Non-wetting Templates) et destinées à la vectorisation de médicaments et à leur libération par dégradation enzymatique du contenant. L'un des buts de l'invention est de fournir des matériaux nanostructurés biodégradables sous forme de films épais, contenant des micelles possédant des propriétés thérapeutiques, pour des applications médicales. L'un des autres buts de l'invention est de fournir un procédé de préparation de matériaux nanostructurés biodégradables sous forme de films épais, contenant des pores libres, par méthodes douces, sans chauffage, sans utilisation de traitements agressifs. L'un des autres buts de l'invention est de fournir des matériaux nanostructurés biodégradables sous forme de films épais, contenant des molécules actives et permettant leur relargage par effet de file unique, à des fins thérapeutiques. L'invention concerne un procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres comprenant les étapes suivantes : - une étape de mélange d'un polymère organique dans un solvant, et de micelles pour obtenir un mélange stable de polymère organique et de micelles, - une étape de séchage du mélange stable de polymère organique et de micelles pour éliminer le solvant et obtenir un matériau nanostructuré contenant des micelles sous forme de film sec contenant des pores occupés par des micelles, - une étape de désassemblage des micelles à partir du susdit film, notamment par lavage en milieu aqueux, pour obtenir un matériau nanostructuré sous forme de film contenant des pores libres, - une étape de séchage du matériau nanostructuré pour éliminer l'eau et obtenir un matériau nanostructuré contenant des pores libres, ledit matériau nanostructuré obtenu étant sous forme de film sec ayant une épaisseur comprise de 1 !am à 500 !am, en particulier comprise de 10 !am à 200 !am, notamment de 50 !am à 150 !am. Par "matériau nanostructuré", on désigne un matériau contenant des nano-objets dont la taille est comprise de 1 nm à 100 nm. Par "matériau nanostructuré contenant des pores libres", on désigne un matériau nanoporeux, caractérisé par la présence d'interstices, qualifiées de "pores libres" si ces interstices sont vides. Parmi les matériaux nanostructurés, on trouve donc les matériaux nanoporeux, dans lesquels il existe des pores de taille nanométrique. La structure nanométrique du matériau de l'invention lui confère des propriétés physiques et chimiques avantageuses, utilisables en particulier pour l'encapsulation de substances d'intérêt puis leur relargage à des fins notamment thérapeutiques. Les pores peuvant constituer des cages ou des tubes, ces matériaux sont exploitables, entre autre, comme structure hôte pour des molécules. Les matériaux selon l'invention font appel à des "polymères organiques" définis comme des macromolécules formées par répétition d'un ou de plusieurs motif(s) ou monomère(s). Ces matériaux présentent alors l'avantage, devant les matériaux inorganiques tels que la silice ou les zéolites, d'être déformables et biodégradables, ce qui en fait de bons candidats pour des applications biomédicales, contrairement aux matériaux inorganiques. Par "micelle", on désigne un assemblage constitué de molécules qui ont tendance à s'associer en solution. Dans l'invention, les micelles constituent des "gabarits"; elles permettent la nanostructuration en donnant une taille nanométrique et une forme aux pores dudit matériau. Par "mélange stable", on désigne un mélange formé à partir du polymère organique et de micelles n'évoluant pas dans le temps, le mélange étant stable au moins un mois. Par "désassemblage", on désigne l'action de dissociation des parties structurantes des micelles. Il permet de libérer des espaces vides, les pores libres. Par "séchage", on désigne l'étape permettant d'éliminer toute trace de solvant ou d'eau contenue dans le film. Par "film sec", on désigne alors la forme sous laquelle est obtenu le matériau, son épaisseur étant avantageusement de l'ordre de la centaine de micromètres, ce qui est environ 1000 fois plus important que celle des matériaux décrits dans l'art antérieur. L'épaisseur des films obtenus constitue un des avantages de la présente invention. Un autre avantage de l'invention est la préparation de matériaux nanostructurés par des méthodes douces, sans avoir recours à des méthodes agressives telles que la calcination ou l'utilisation de solvants organiques. Un autre avantage est la simplicité de mise en oeuvre du procédé de préparation permettant de nanostructurer le matériau en partant de l'échelle la plus petite vers le matériau, processus "bottom- up", rendant le coût de production des matériaux inférieur aux coûts engendrés par des procédés tels que la lithographie, le bombardement ionique ou l'assemblage couche par couche. De façon avantageuse, les micelles sont un complexe de deux parties structurantes reliées entre elles par un ou plusieurs types de liaisons réversibles non-covalentes. Les liaisons permettant aux deux parties structurantes constituant les micelles de l'invention, de s'associer, sont notamment des liaisons de type électrostatique, pouvant se former et se défaire. De façon particulièrement avantageuse, les deux parties structurantes formant les micelles, sont constituées d'un polymère à bloc double-hydrophile (CBDH) contenant une séquence polyélectrolyte et un polyélectrolyte de charge opposée, ou étant deux copolymères à blocs double- hydrophiles contenant des séquences polyélectrolytes de charges opposées. Par "polyélectrolyte", on désigne un polymère ionique. Les liaisons de type électrostatique entre les deux parties structurantes sont donc permises par interaction électrique entre parties anioniques et cationiques desdits polyélectrolytes. Selon un mode avantageux du procédé de préparation d'un matériau nanostructuré, les micelles sont lyophilisées. Par "micelles lyophilisées", on désigne des micelles isolées, séchées, et conservant leurs propriétés. Elles peuvent être ainsi stockées afin d'être utilisées dans le procédé de préparation des matériaux nanostructurés. De façon avantageuse, la densité des pores libres est comprise de 1,0x1016 à 1,0x1018 pores/cm', en particulier comprise de 2,0x10'6 à 8,0x. -lu16 pores/cm'. La structure interne des films a été observée par microscopie électronique à transmission (MET) sur des échantillons de films cryofracturés. La structure à l'échelle nanométrique a été sondée par microscopie à force atomique (AFM). Les pores étant en particulier destinés à l'encapsulation de substances d'intérêt à des fins thérapeutiques, le réglage de la densité des pores peut permettre le contrôle de la quantité de substance libérée à des fins thérapeutiques. De façon avantageuse, dans ce procédé de l'invention de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres, lesdits pores ont une taille comprise de 1 nm à 200 nm, en particulier de 2 nm à 100 nm, notamment de 5 nm à 20 nm. L'écart-type de la distribution log-normale est égale à environ 0.3 pour un diamètre de pores égal à environ 9 nm. Un objectif de l'invention est de pouvoir régler la taille des pores et de l'adapter à celle des molécules susceptibles d'y être encapsulées. Si les pores sont occupés par des composés à propriétés thérapeutiques afin de les vectoriser dans le corps notamment, l'effet rafale doit être évité et l'effet file unique doit être privilégié : la diffusion par les pores doit prévaloir devant la dégradation du polymère. Or, la taille des pores selon l'invention, est adaptable à celle des composés à vectoriser et relarguer. Pour cela, la taille des pores n'excèdera pas deux fois la taille du composé diffusant. Ce point est particulièrement avantageux car le relargage du principe actif est alors indépendant de la concentration du composé à relarguer. Dans un mode de réalisation avantageux du procédé de préparation de l'invention d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres, celui-ci comprend une étape de mélange d'un polymère organique, notamment biodégradable, constitué d'un homopolymère, d'un copolymère à blocs ou d'un copolymère statistique, et de micelles. Les matériaux selon l'invention sont de nature organique, biocompatibles et biodégradables; ils correspondent ainsi à la définition de "biomatéraux". "Homopolymère" désigne un polymère issu d'une seule espèce chimique, tous ses motifs étant donc de nature identique. Par opposition à homopolymère, un "copolymère à blocs" désigne un polymère contenant plusieurs motifs de répétition, au moins deux, donc contient deux types de monomères différents. Au sein du polymère, chacun des types de monomère forme un bloc. Par "copolymère statistique", on désigne un polymère contenant plusieurs motifs de répétition, au moins deux, donc contenant deux types de monomères différents, la répartition des différents motifs étant aléatoire. Dans un mode de réalisation avantageux du procédé de préparation de l'invention, celui-ci comprend une étape de mélange d'un polymère organique, notamment biodégradable, constitué d'un homopolymère, et de micelles, ledit homopolymère étant un polyester choisi parmi un poly-L-lactide, un poly-D-lactide ou un 20 poly-D,L-lactide. Les polyesters tels que le polylactide (PLA), présentent l'avantage d'être biocompatibles et biodégradables grâce à l'action d'estérases. Le PLA présente d'autre part l'avantage de pouvoir être préparé avec des masses molaires et des formes très variables. Le PLA a pour formule : o 0 25 P PLA dans laquelle n représente le nombre de motifs. Le PLA est obtenu par ouverture de cycle et polymérisation en présence d'un catalyseur, du lactide (dimère d'acide lactique). Cela est représenté dans le schéma suivant : O 7 0 lactide Un autre avantage est de pouvoir utiliser le PLA sous forme optiquement pure ou sous forme de mélange racémique. En effet, l'acide lactique présente deux carbones asymétriques. Il peut donc être utilisé sous forme chirale (poly-L-lactide et poly-D-lactide), ou sous forme racémique (poly-D,L- lactide). Dans un autre mode de réalisation avantageux du procédé de l'invention, celui-ci comprend une étape de mélange d'un polymère organique, notamment biodégradable, constitué d'un copolymère constitué de deux blocs, et de micelles, lesdits blocs constituant le copolymère à blocs étant - un bloc de polylactide (PLA) sous forme racémique (poly-D,L-lactide, PDLLA) ou sous forme optiquement active dextrogyre (poly-D-lactide, PDLA) ou lévogyre (poly-L-lactide, PLLA), et - l'autre bloc étant choisi parmi le polyoxyde d'éthylène (PEO) ou le polyglycolide. Les copolymères de l'invention sont constitués de deux blocs, l'un étant nécessairement un bloc de PLA, chiral ou racémique, l'autre bloc étant un bloc de polyoxyde d'éthylène (PEO) ou un bloc de polyglycolide (PGA). L'intérêt de travailler avec des copolymères à blocs est de pouvoir régler la durée de dégradation dudit copolymère. Dans un autre mode de réalisation avantageux du procédé de l'invention, celui-ci comprend une étape de mélange d'un polymère organique, notamment biodégradable, constitué d'un copolymère statistique, et de micelles, ledit copolymère statistique étant constitué - de polylactide (PLA) sous forme racémique (poly-D,L-lactide, PDLLA) ou sous forme optiquement active dextrogyre (poly-D-lactide, PDLA) ou lévogyre (poly-L-lactide, PLLA), OH HO PLA et - et de polyglycolide. Les copolymères statistiques de l'invention peuvent être constitués de PLA, chiral ou racémique, et de polyglycolide (PGA). L'intérêt de travailler avec des copolymères statistiques est de pouvoir régler la durée de dégradation dudit copolymère. Selon un mode particulier du procédé de préparation de l'invention, celui-ci comprend une étape de mélange d'un polymère organique, notamment biodégradable, et de micelles, ledit polymère organique étant un homopolymère organique de masse molaire comprise de 3 000 à 1 000 000 g/mol, notamment égale à 60 000 g/mol pour l'homopolymère du poly-L-lactide, et notamment égale à 75 000 g/mol ou 1 000 000 g/mol pour l'homopolymère du poly-DL-lactide. La dispersion de nano-objets dans le matériau nécessite un choix judicieux entre la taille desdits nano-objets et le rayon de giration du polymère, le "rayon de giration" étant lié à l'étendue spatiale occupée par le polymère. Ainsi, la miscibilité entre les micelles et le polymère dépend de la masse molaire de ce dernier. Quand le rayon de giration est plus grand que la taille des micelles, le mélange de polymère et de micelles est homogène, la gamme des rayons de giration dépendant des dimensions des pores souhaitées. A titre d'illustration de cette propriété, il a été calculé que la masse molaire critique au-dessous de laquelle les mélanges de nano-objets de 10 nm et le polymère ne sont pas miscibles, est de 20 000 g/mol. Selon un mode particulier du procédé de préparation de l'invention, celui-ci comprend une étape de mélange d'un copolymère organique, notamment biodégradable, constitué de deux blocs, et de micelles, ledit copolymère ayant notamment pour formule PEO-PDLLA, PEO-PDLA ou PEO-PLLA, les blocs ayant pour masse molaire : - 1 000 à 3 000 g/mol pour le bloc PEO, notamment 1 880 g/mol, - 5 000 à 500 000 g/mol pour le bloc PDLLA, PDLA ou PLLA, en particulier 10 000 à 456 000 g/mol, et notamment 10 000, 77 332, 113 000 ou 455 300 g/mol, - 6 000 à 503 000 g/mol de masse molaire totale pour le copolymère de formule PEO- PDLLA, PEO-PDLA ou PEO-PLLA, notamment 11 880, 79212, 114 880 ou 457 180 g/mol. La méthode de polymérisation par ouverture de cycle de dimères cycliques de lactide est utilisée pour synthétiser les copolymères PEO-PLA, la réaction étant catalysée par l'octoate 5 stanneux. Dans cette méthode, le bloc PEO est terminé par un groupe -OCH3 (MePEO-PLA). Les copolymères obtenus sont caractérisés par RMN 1H. - Le rapport d'intégration du groupe -OCH3 comparé au pic du groupe CH2-CH2-0 permet de déterminer la masse molaire du bloc PEO. - Les pics de résonance correspondant aux groupements -CH3 et -CH- permettent de 10 déterminer l'indice de polymérisation et la masse moléculaire du bloc de PLA. Dans l'invention, les copolymères dans lesquels le bloc PEO a une masse molaire de 1880 g/mol sont avantageux car le PEO de masse molaire de 1880 g/mol est commercial. Selon un mode particulier du procédé de préparation de l'invention, celui-ci comprend une 15 étape de mélange d'un copolymère organique statistique, notamment biodégradable, et de micelles, ledit copolymère étant notamment le poly-DL-lactide-polyglycolide, de masse molaire comprise de 20 000 à 2 000 000 g/mol, notamment égale à 1 000 000 g/mol, la fraction de poly-DLlactide/polyglycolide étant notamment égale à 50/50. La masse molaire du poly-DL-lactide-polyglycolide (PDLLA-PGA) doit au moins être égale à 20 20 000 g/mol, car pour une masse molaire inférieure, le mélange n'est pas homogène. Pour cette masse molaire en particulier, la taille des nano-objets formés est de l'ordre de 10 nm. Selon un mode de réalisation du procédé de préparation d'un matériau nanostructuré de l'invention, contenant des pores libres, celui-ci comprend une étape de mélange d'un polymère 25 organique, notamment biodégradable, et de micelles, lesquelles résultent de la complexation de deux parties structurantes par un ou plusieurs types de liaisons réversibles non-covalentes, dans un solvant aqueux, ladite complexation étant éventuellement suivie d'une élimination du solvant aqueux, pour donner les micelles. Par "complexation", on désigne le mode d'association des deux parties structurantes. 30 L'expression "liaisons réversibles non-covalentes" s'applique à des interactions électrostatiques existant entre les deux parties structurantes des micelles et expliquant la formation de ces derniers. Ces liaisons sont réversibles car elles peuvent se former et se défaire en réponse à un stimulus exercé par un paramètre du milieu, par exemple le pH. Selon un mode de réalisation particulier du procédé de préparation d'un matériau nanostructuré de l'invention, contenant des pores libres, la complexation est suivie de l'élimination du solvant aqueux, et d'une étape de lyophilisation des micelles, pour obtenir des micelles lyophilisées. Dans un mode de réalisation avantageux du procédé de préparation de l'invention, les deux parties structurantes dans un solvant aqueux sont un copolymère à bloc double-hydrophile (CBDH) contenant une séquence polyélectrolyte et un polyélectrolyte de charge opposée, ou sont deux copolymères à blocs double-hydrophiles contenant des séquences polyélectrolytes de charges opposées, la complexation ayant eu lieu dans un milieu aqueux à un pH compris de 5.0 à 7.0, en particulier compris de 5.8 à 6.2, et notamment égal à 5.5 ou 6.0. La charge des polyélectrolytes de l'invention, dépend de la valeur du pH de la solution qui les contient. C'est pourquoi le mélange des deux parties structurantes doit être réalisé en contrôlant la valeur du pH et en la choisissant dans l'intervalle de 5.0 à 7.0. Cette valeur sera notamment fixée à 5.5 ou 6.0. La force électrostatique exercée entre les groupes de charges opposées portées par les deux parties structurantes est le moteur de la formation des micelles, particulièrement sensibles au pH. Selon un mode de réalisation avantageux du procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres, celui-ci comprend une étape de mélange d'un polymère organique, notamment biodégradable, dans un solvant organique, et de micelles lesquelles résultent d'un mélange de deux parties structurantes, - une partie structurante étant un copolymère à blocs double hydrophile (CBDH) constitué à partir de polyoxyde d'éthylène PEO et à partir de poly(acide méthacrylique) PMAA et étant représenté par la formule E0.-b-MAA., dans laquelle - n désigne le nombre de motifs oxyde d'éthylène, n variant notamment de 50 à 800, - m désigne le nombre de motifs acide méthacrylique, m variant notamment de 10 à 100, - le rapport n/m étant notamment compris de 3 à 10, - l'autre partie structurante étant une polyamine organique choisie parmi la polyéthylèneimine PET, le chitosan, la polyvinylpyridine ou la polyallylamine, notamment la PET ou le chitosan, ladite polyamine possédant éventuellement des propriétés thérapeutiques, et étant notamment du chitosan, de la lidocaïne, de la tétracaïne, de la procaïne, de la cimétidine, de la gentamicine, de la kanamycine, de la doxorubicine, de la gencitabine, ou une catécholamine, lesdites micelles ayant pour formule CBDH/polyamine, en particulier E0.-b-MAA./polyamine dans laquelle n et m ont les valeurs désignées ci-dessus, et notamment ayant pour formules E017710 b-MAA23/PEI ou E0182-b-MAA35/PEI. L'expression «copolymère à blocs double hydrophile (CBDH)» désigne un copolymère dibloc, dont les deux blocs, PEO et PMAA, sont hydrophiles. Le CBDH selon l'invention est désigné par «E0.-b-MAA.», la lettre « b» signifiant « bloc », n et m désignant le nombre de motifs, respectivement d'oxyde d'éthylène et d'acide méthacrylique. Au 15 moment de la formation des micelles, le pH du milieu est compris de 5.0 à 7.0, en particulier compris de 5.8 à 6.2, et notamment égal à 5.5 ou 6.0. La formation des micelles a lieu à température ambiante, en milieu aqueux. Après dissolution du CBDH, une solution de polyamine est additionnée, dans un milieu de pH défini précédemment. Après formation, elles sont éventuellement dialysées pour éliminer l'excès de sels (si la polyamine 20 est le chitosan), isolées puis, soit lyophilisées pour être éventuellement stockées, soit transférées après élimination du solvant aqueux dans un milieu organique compatible avec le polymère organique avant mélange du susdit polymère organique et des susdites micelles. - Si les micelles sont utilisées sous forme de lyophilisat pour réaliser le mélange avec le polymère organique en solution dans un solvant organique, alors le lyophilisat est préalablement 25 introduit dans un solvant organique, identique à celui du polymère ou différent de celui-ci, sous réserve qu' il soit compatible avec celui du polymère. - Si les micelles ont été préparées, débarrassées de l'eau qu'elles contiennent sans être cependant lyophilisées, alors elles peuvent être introduites dans un solvant organique, identique à celui du polymère ou différent de celui-ci, sous réserve qu'il soit compatible avec celui du 30 polymère. Lorsque la polyamine est la polyéthylèneimine (PET), la valeur du pH du milieu est maintenue avantageusement à environ 6.0. Lorsque la polyamine est le chitosan, la valeur du pH du milieu est maintenue avantageusement à environ 5.5. Dans ces conditions de pH, le CBDH de l'invention est polyanionique en raison de ces groupes acrylates, tandis que l'autre partie structurante des micelles constituée de la polyamine, est polycationique. Les micelles se forment donc par interaction électrostatique. La micellisation est optimale dans cette zone de pH. Les micelles sont représentées par la formule générale « E0.-b-1VIAA./polyamine ». La polyamine peut être une molécule potentiellement thérapeutique. Ainsi, le chitosan encore nommé "oligochitosane", peut être utilisé pour ses propriétés antibactériennes et antimicrobiennes, la lidocaine, la tétracaine, la procaine, pour leurs propriétés anesthésiantes, la cimétidine pour ses propriétés anti-histaminiques, la gentamicine et la kanamycine pour leurs propriétés antibiotiques, la doxorubicine et la gencitabine pour leurs propriétés anti-cancéreuses, les catécholamines en tant que neurotransmetteurs, contre la détresse cardio-circulatoire, contre les problèmes vasculaires, cardiaques ou liés au système nerveux. Dans le procédé de l'invention, on mélange une solution ou une suspension des susdites micelles avec le copolymère à bloc ou le copolymère statistique contenant du polylactide, précédemment désigné. Le mélange se fait en milieu organique. Le rapport n/m est important pour régler la taille des micelles. Selon un mode de réalisation particulier du procédé de préparation de l'invention, celui-ci comprend une étape de mélange d'un polymère organique, notamment biodégradable, et de micelles 20 de formule E0.-b-1VIAA./ polyamine, le rapport S=MAA/N représentant le rapport entre le nombre de fonctions carboxylates ou carboxyliques le long des chaînes poly(acide méthacrylique) PMAA et le nombre de fonctions amine, S étant compris de 0.1 à 2, et étant notamment égal à 1. La micellisation est optimale quand S, nombre de moles de sites anioniques (C00-) sur nombre de 25 moles de sites cationiques (NH+), est proche de 1.0. Selon un mode de réalisation particulier du procédé de préparation de l'invention, celui-ci comprend une étape de mélange d'un polymère organique, notamment biodégradable, et de micelles de type coeur/couronne, de diamètre à sec compris de 1 nm à 200 nm, en particulier de 2 30 nm à 100 nm, notamment de 5 nm à 20 nm. Pour tenir compte de l'effet de la polydispersité des tailles des micelles sur l'intensité diffusée, une distribution log-normale a été utilisée. L'écart-type de la distribution log-normale pour des micelles de diamètre à sec environ égal à 9 nm est environ égal à 0.01. A partir de mesures par diffusion dynamique de la lumière (DDL), le diamètre hydrodynamique des micelles a été mesuré. Mais pour connaître les tailles réelles et spécifiques des micelles, rayon de coeur, épaisseur de la couronne, la diffusion de neutrons aux petits angles (DNPA) a été utilisée. Il a été établi que la taille des micelles dépend fortement des longueurs de blocs hydrophiles et polyélectrolytes des CBDH formant les micelles. Le coeur des micelles est sphérique, dense et compact. A titre d'illustration, les micelles de formule E0177-b-MAA23/PEI sont constituées de chaînes de PMAA, chargées négativement et rendues insolubles par la complexation avec l'amine, notamment avec la PET, chargée positivement. Ce coeur est entouré d'une couronne hydrophile de chaînes de PEO, gonflées par le solvant. Le changement de longueur du bloc hydrophile de PEO engendre donc un changement de l'épaisseur de la couronne des micelles. D'autre part, l'étirement des chaînes de PEO dépend de la nature du solvant; elles sont plus étirées dans le chloroforme notamment, que dans l'eau. Aussi, le diamètre à sec a été déterminé, notamment par MET, car il est directement relié au diamètre du pore. A titre d'illustration, pour les micelles de formule E0177-b-MAA23/PEL l'histogramme de distribution en taille effectué sur 50 "objets", montre une taille moyenne de 9.2 nm avec une distribution étroite. Selon un mode de réalisation particulier du procédé de préparation de l'invention, celui-ci comprend une étape de mélange d'un polymère organique, notamment biodégradable, et de micelles en suspension dans un solvant organique choisi parmi le chloroforme, le chlorobenzène, le diméthylsulfoxyde ou le toluène, notamment à la concentration de 0.05 à 0.2 g de polymère organique et de micelles dans 1 mL de 25 solvant, pour obtenir un mélange stable de polymère organique et de micelles. Par «concentration», on désigne la somme de la masse de polymère organique et de la masse des micelles par mL de solvant. Par exemple, le mélange de polymère organique et de micelles est agité magnétiquement, dans un 30 solvant commun, en particulier le chloroforme anhydre, à la vitesse de 300 tours par minute, à une température comprise de 20 à 35° C, et notamment à température ambiante. Il est stable au moins pendant une durée de 1 mois. Selon un mode de réalisation avantageux du procédé de préparation de l'invention, les micelles sont mises en solution dans le chloroforme anhydre, ladite solution étant alors mélangée avec le polymère organique, lui-même en solution dans le chloroforme anhydre. Selon un mode de réalisation avantageux du procédé de préparation de l'invention, celui-ci comprend une étape de séchage du mélange de polymère organique et de micelles, ladite étape de séchage étant réalisée par évaporation du solvant organique pour obtenir un film sec contenant des pores occupés par des micelles, d'épaisseur comprise de 1 [lm à 500 [lm, en particulier comprise de 10 um à 200 um, notamment de 50 um à 150 um. Le film obtenu contient des molécules de solvant organique. Le film peut être laissé à température ambiante, à pression atmosphérique, pendant une durée comprise de 1 jour à 7 jours, notamment 2 jours. Les films sont ensuite, par exemple, placés sous vide pendant 24 heures pour assurer l'évaporation complète du solvant organique. Le film sec obtenu contient des micelles, servant de gabarits pour les pores. Selon un mode de réalisation particulier du procédé de préparation de l'invention d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres, celui-ci comprend une étape de désassemblage des micelles à partir du film sec, ledit désassemblage des micelles étant réalisé notamment par immersion du susdit film sec dans une solution aqueuse de pH > 8, pour obtenir un matériau nanostructuré sous forme de film contenant des pores libres. Comme vu précédemment, les micelles utilisées comme agents structurants sont formées via un assemblage réversible induit par l'application d'un stimulus constitué du pH. Ainsi, une variation inverse de ce stimulus conduit à la dissociation des micelles et à la solubilisation des copolymères. Elles peuvent être alors éliminées du biopolymère par lavage doux. Elles servent ainsi de gabarits. Les films séchés peuvent être plongés dans un bain aqueux à pH > 8, pendant quelques jours, pour assurer l'élimination totale des micelles de la matrice de PLA. Les traces d'eau sont ensuite éliminées. Pour suivre l'état de sortie des micelles de la matrice de copolymère contenant le PLA, on effectue par exemple le dosage d'amines primaires par la ninhydrine. La solution de ninhydrine libre, jaune, vire au violet lorsqu'elle réagit avec les amines primaires, notamment la PET. Grâce à une courbe d'étalonnage faite au préalable, la densité optique de la solution contenant les amines permet d'en déterminer le taux. Cette solution a donc été étudiée par spectroscopie UV-visible. Ainsi, le dosage colorimétrique par absorbance a permis de suivre le taux de dissociation des complexes micellaires et la cinétique de sortie des parties provenant de ces derniers. D'autre part, la dissociation des micelles a été vérifiée par une étude en fluorescence : par exemple, la PET a été complexée avec de la fluorescéine disodique, la dissociation des complexes micellaires a alors été suivie par mesure de la fluorescence de la solution aqueuse de lavage, à intervalles de temps définis. Le désassemblage peut donc se faire dans des conditions particulièrement douces, sans consommer beaucoup d'énergie. De plus, les agents structurants peuvent être récupérés et recyclés, d'où un avantage supplémentaire en terme de coût pour la production des matériaux nanostructurés. 10 Selon un mode de réalisation particulier du procédé de préparation de l'invention d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres, celui-ci comprend une étape de séchage, notamment sous vide, d'un matériau nanostructuré sous forme de film contenant des pores libres après désassemblage des micelles, 15 pour éliminer les molécules d'eau et obtenir un matériau nanostructuré contenant des pores libres sous forme de film sec. Le film est placé sous vide à une température inférieure ou égale à 30°C pendant 24 heures, pour obtenir un film sec. 20 Selon un autre mode avantageux, le procédé de préparation de l'invention d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres, celui-ci comprend les étapes suivantes : - une étape de mélange, notamment dans le chloroforme, d'un polymère organique étant : ^ un homopolymère de polyester, notamment un poly-L-lactide, un poly-D- 25 lactide ou un poly-D,L-lactide, ledit homopolymère ayant une masse molaire comprise de 3 000 à 1 000 000 g/mol, notamment égale à 60 000 g/mol pour l'homopolymère du poly-L-lactide, et notamment égale à 75 000 g/mol ou 1 000 000 g/mol pour l'homopolymère du poly-DL-lactide, ^ ou un copolymère à blocs constitué d'un bloc de polylactide sous forme 30 racémique (poly-D,L-lactide, PDLLA) ou sous forme optiquement active dextrogyre (poly-Dlactide, PDLA) ou lévogyre (poly-L-lactide, PLLA), et d'un bloc choisi parmi le polyoxyde d'éthylène PEO ou le polyglycolide (PGA), ledit copolymère à blocs ayant notamment pour formule PEO-PDLLA, PEO-PDLA ou PEO-PLLA, les blocs ayant pour masse molaire : - 1 000 à 3 000 g/mol pour le bloc PEO, notamment 1880 g/mol, - 5 000 à 500 000 g/mol pour le bloc PDLLA, PDLA ou PLLA, en particulier 10 000 à 456 000 g/mol, et notamment 10 000, 77 332, 113 000 ou 455 300 g/mol, - 6 000 à 503 000 g/mol de masse molaire totale pour le copolymère de formule PEOPDLLA, PEO-PDLA ou PEO-PLLA, notamment 11 880, 79 212, 114 880 ou 457 180 g/mol, . ou un copolymère statistique constitué de polylactide sous forme racémique (poly-D,L-lactide, PDLLA) ou sous forme optiquement active dextrogyre (poly-D-lactide, PDLA) 10 ou lévogyre (poly-L-lactide, PLLA), et de polyglycolide, notamment le poly-DL-lactidepolyglycolide (PDLLA-PGA), ledit copolymère statistique étant notamment le poly-DL-lactide-polyglycolide de masse molaire comprise de 20 000 à 2 000 000 g/mol, notamment égale à 1 000 000 g/mol, la fraction de poly-DL-lactide/polyglycolide étant notamment égale à 50/50, 15 ^ et de micelles de formules E0177-b-MAA23/PEI avec un rapport S=1, le rapport massique polymère organique/micelles étant compris de 1 à 100, et notamment compris de 1 à 9, pour obtenir un mélange stable de polymère organique et de micelles E0177-b-1VIAA23/PEI, a une étape de séchage du mélange stable de polymère organique et de E0177-b- 20 1VIAA23/PEI, notamment par évaporation du chloroforme à température ambiante et à pression atmosphérique, puis sous vide, et obtenir un film sec contenant des pores occupés par des micelles, a une étape de désassemblage des micelles à partir du susdit film sec par immersion du film sec dans une solution aqueuse de pH>8 pour obtenir un matériau nanostructuré sous forme de film contenant des pores libres, 25 a une étape de séchage du susdit matériau nanostructuré pour éliminer l'eau et obtenir un matériau nanostructuré contenant des pores libres, ledit matériau obtenu étant sous forme de film sec ayant une épaisseur comprise de 1 !am à 500 !am, en particulier comprise de 10 lm à 200 iam, notamment de 50 iam à 150 p.m. 30 Le rapport massique polymère organique / micelles est notamment compris de 1 à 9. En effet, il correspond à des fractions polymère organique/ micelles. Les fractions notamment étudiées sont: 90 %-10 % (rapport égal à 9), 85 %-15 % (rapport égal à environ 5.7), 80 %-20 % (rapport égal à 4), 70 %-30 % (rapport égal à 2.3) , 60 %-40 % (rapport égal à 1.5) et 50 %-50% (rapport égal à 1), où les pourcentages sont des pourcentages massiques. Un mélange constitué d'un rapport massique polymère organique/micelles environ égal à 50 %-50 % peut perdre de son homogénéité et présenter une séparation de phase. C'est pourquoi, il est préférable de travailler avec un rapport massique polymère organique / micelles au moins égal à 1. L'invention concerne également un procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des micelles, comprend les étapes suivantes : - une étape de mélange dans un solvant d'un polymère organique, notamment biodégradable, et de micelles pour obtenir un mélange stable de polymère organique et de micelles, - une étape de séchage du mélange stable de polymère organique, notamment biodégradable, et de micelles, pour éliminer le solvant et obtenir un matériau nanostructuré contenant des micelles sous forme de film sec contenant des pores occupés par des micelles, ledit matériaux étant obtenu sous forme de film sec contenant des micelles d'épaisseur comprise de 1 !am à 500 [lm, en particulier comprise de 10 ùm à 200 ùm, notamment de 50 ùm à 150 ùm. Ces micelles peuvent être en particulier thérapeutiquement intéressantes. Selon un mode avantageux, le procédé de préparation de l'invention d'un matériau nanostructuré contenant des micelles, comprend une étape de mélange dans un solvant organique d'un polymère organique, notamment biodégradable, avec des micelles, - ledit polymère organique étant ^ un homopolymère de polyester, notamment un poly-L-lactide, un poly-D- lactide ou un poly-D,L-lactide, ledit homopolymère ayant une masse molaire comprise de 3 000 à 1 000 000 g/mol, notamment égale à 60 000 g/mol pour l'homopolymère du poly-L-lactide, et notamment égale à 75 000 g/mol ou 1 000 000 g/mol pour l'homopolymère du poly-DL-lactide, ^ ou un copolymère à blocs constitué d'un bloc de polylactide sous forme racémique (poly-D,L-lactide, PDLLA) ou sous forme optiquement active dextrogyre (poly-Dlactide, PDLA) ou lévogyre (poly-L-lactide, PLLA), et d'un bloc choisi parmi le polyoxyde d'éthylène PEO ou le polyglycolide (PGA), ledit copolymère à blocs ayant notamment pour formule PEO-PDLLA, PEO-PDLA ou PEO-PLLA, les blocs ayant pour masse molaire : - 1 000 à 3 000 g/mol pour le bloc PEO, notamment 1 880 g/mol, - 5 000 à 500 000 g/mol pour le bloc PDLLA, PDLA ou PLLA, en particulier 10 000 à 456 000 g/mol, et notamment 10 000, 77 332, 113 000 ou 455 300 g/mol, - 6 000 à 503 000 g/mol de masse molaire totale pour le copolymère de formule PEO5 PDLLA, PEO-PDLA ou PEO-PLLA, notamment 11 880, 79 212, 114 880 ou 457 180 g/mol, ^ ou un copolymère statistique, notamment biodégradable, constitué de polylactide sous forme racémique (poly-D,L-lactide, PDLLA) ou sous forme optiquement active dextrogyre (poly-D-lactide, PDLA) ou lévogyre (poly-L-lactide, PLLA), et de polyglycolide (PGA), ledit copolymère statistique étant notamment le poly-DL-lactide-polyglycolide de masse molaire 10 comprise de 20 000 à 2 000 000 g/mol, notamment égale à 1 000 000 g/mol, la fraction de poly-DL-lactide-polyglycolide étant notamment égale à 50/50, - lesdites micelles étant obtenues par mélange de deux parties structurantes dans un solvant aqueux, les deux parties structurantes étant un copolymère à bloc double-hydrophile contenant une séquence polyélectrolyte et un polyélectrolyte de charge opposée, 15 ou étant deux copolymères à blocs double-hydrophiles contenant des séquences polyélectrolytes de charges opposées, ledit solvant aqueux ayant un pH compris de 5.0 à 7.0, en particulier compris de 5.8 à 6.2, et notamment égal à 5.5 ou 6.0, ^ une partie structurante étant un copolymère à blocs double hydrophile 20 (CBDH) constitué à partir de polyoxyde d'éthylène (PEO) et à partir de poly(acide méthacrylique) PMAA et étant représenté par la formule E0.-b-MAA., dans laquelle - n désigne le nombre de motifs oxyde d'éthylène, n variant notamment de 50 à 800, - m désigne le nombre de motifs acide méthacrylique, m variant notamment de 10 à 100, 25 - le rapport n/m étant notamment compris de 3 à 10, ^ l'autre partie structurante étant une polyamine organique choisie parmi la polyéthylèneimine PET, le chitosan, la polyvinylpyridine ou la polyallylamine, notamment la PET ou l'oligochitosane, ladite polyamine possédant éventuellement des propriétés thérapeutiques, et étant notamment du 30 chitosan, de la lidocaïne, de la tétracaïne, de la procaïne, de la cimétidine, de la gentamicine, de la kanamycine, de la doxorubicine, de la gencitabine, ou une catécholamine, lesdites micelles ayant pour formule CBDH/polyamine, en particulier E0.-b-MAA./polyamine dans laquelle n et m ont les valeurs désignées ci-dessus, et notamment ayant pour formules E0177- b-MAA23/PEI ou E0182-b-MAA35/PEI, le rapport polymère/micelles étant compris de 1 à 100, et notamment compris de 1 à 9, pour obtenir un mélange stable de polymère et de micelles dans un solvant organique. Selon un mode avantageux du procédé de préparation de l'invention d'un matériau nanostructuré contenant des micelles, le solvant organique utilisé est choisi parmi le chloroforme, le chlorobenzène, le diméthylsulfoxyde ou le toluène, à la concentration de 0.05 à 0.2 g de polymère organique et micelles dans 1 mL de solvant. Dans un autre mode avantageux du procédé de préparation de l'invention d'un matériau nanostructuré contenant des micelles, celui-ci comprend une étape de séchage d'un mélange stable de polymère organique, notamment biodégradable, et de micelles, ladite étape de séchage étant réalisée notamment par évaporation du solvant organique pour obtenir un film sec contenant des pores occupés par des micelles, et d'épaisseur comprise de 1 !am à 500 !am, en particulier comprise de 10 i.tm à 200 i.tm, notamment de 50 i.tm à 150 i.tm. Les mesures indiquent qu'il n'existe pas sensiblement de différence entre l'épaisseur des films avec et sans micelles. Selon un autre mode avantageux du procédé de préparation de l'invention d'un matériau nanostructuré contenant des micelles, les micelles sont constituées d'un CBDH, en particulier contenant une séquence polyélectrolyte, notamment une séquence polyanionique, et d'un principe actif contenant un groupe ionisé, en particulier cationique, notamment une polyamine organique possédant des propriétés thérapeutiques, ladite polyamine constituant le principe actif étant choisie parmi le chitosan, la lidocaïne, la tétracaïne, la procaïne, la cimétidine, la gentamicine, la kanamycine, la doxorubicine, la gencitabine ou une catécholamine. L'invention concerne également un procédé d'encapsulation d'un ou plusieurs principe(s) actif(s) dans un matériau nanostructuré contenant des pores libres définis ci-dessus, comprenant une étape de solubilisation du ou des principe(s) actif(s) dans un solvant sélectif, en particulier un solvant aqueux, et une étape de filtration sous pression réduite de la solution concentrée sur le matériau nanostructuré contenant des pores libres, le(s)dit(s) principe(s) actif(s) encapsulé(s), utilisé(s) pour ses (leurs) propriétés dans les domaines pharmaceutique ou cosmétique, est (sont) inorganique(s), notamment choisi(s) parmi le cisplatine, le carboplatine, les sels de ruthénium et de rhodium, les sels de gadolinium, les oxydes de fer, les complexes d'or, d'argent ou de cuivre, ou est (sont) organique(s), synthétique(s) ou naturel(s). L'encapsulation est réalisée par passage de la solution contenant le composé à encapsuler, sur le matériau, qui agit comme un filtre. L'épaisseur des polymères nanostructurés selon l'invention est de l'ordre de la centaine de micromètres, ce qui est environ 1000 fois plus épais que ceux décrits dans l'art antérieur. Ainsi, les polymères nanostructurés de l'invention, qui permettent un taux de relargage constant, comme mentionné précédemment, permettent aussi d'encapsuler une quantité plus importante de composés d'intérêt thérapeutique et donc de les relarguer de façon plus longue dans le temps. Ceci constitue une propriété particulièrement avantageuse lorsqu'on envisage l'implantation desdits matériaux dans le corps humain. Parmi les composés encapsulables, certains, organiques, ont été précédemment cités, ainsi que leurs propriétés. Mais on peut aussi encapsuler des composés inorganiques tels que le cisplatine et le carboplatine (anticancéreux), des sels de ruthénium et de rhodium (potentiels anti-cancéreux), des sels de gadolinium (utiles dans l'imagerie par IRM), des oxydes de fer (utiles dans le traitement anticancéreux par hyperthermie et imagerie IRM), des complexes d'or, d'argent ou de cuivre. L'invention concerne un matériau nanostructuré sous forme de film sec contenant des pores libres occupés par des micelles tel qu'obtenu par la mise en oeuvre du procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des micelles et définies ci-dessus. L'invention concerne aussi un matériau nanostructuré contenant des pores libres sous forme de film sec tel qu'obtenu par la mise en oeuvre du procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres et définis ci-dessus. Le matériau nanostructuré de l'invention, contenant des pores libres sous forme de film sec peut être utilisé pour l'intégration d'un principe actif à usage pharmaceutique dans lesdits pores choisi parmi les substances - vitaminiques, - anti-tumorales, notamment le paclitaxel, l'alendronate, l'amonafide, l'acétate de leuprolide, la doxorubicine, la gencitabine, - anti-inflammatoires, notamment le diclofénac, l'ibuprofène, le kétoprofène, - antibiotiques, notamment le chitosan, la gentamicine, la kanamycine, - antifongiques, notamment le kétoconazole, - hormonales, notamment la testostérone, - anxiolytiques, notamment les benzodiazépines, - antidiabétiques, notamment le glicazide, - anti-hypertenseurs, notamment la nifédipine; - anti-histaminiques, notamment la cimétidine, - anesthésiques, notamment la lidocaïne, la tétracaïne, la procaïne, - neurotransmetteurs, notamment les catécholamines. De façon avantageuse, les principes actifs pouvant être encapsulés dans les matériaux nanostructurés selon l'invention, sont destinés à l'usage médical et à l'usage vétérinaire. Le matériau nanostructuré selon l'invention, contenant des pores libres sous forme de film sec, peut aussi être utilisé pour l'intégration d'une substance d'intérêt à usage cosmétique dans lesdits pores, choisie parmi les substances - anti-âge, - anti-UV, - dépigmentantes, - cicatrisantes, - hydratantes, - parfumantes. 30 Le matériau nanostructuré selon l'invention, contenant des pores libres sous forme de film sec, peut aussi être utilisé pour l'intégration d'un principe actif dans lesdits pores, dans un but de protection vis à vis de la dégradation physique, chimique ou enzymatique, ledit principe actif étant en particulier une protéine. L'invention concerne également un mélange stable contenant un polymère organique et des micelles dans un solvant organique, a ledit polymère organique étant . un homopolymère de polyester, notamment un poly-L-lactide, un poly-D- lactide ou un poly-D,L-lactide, ledit homopolymère ayant une masse molaire comprise de 3 000 à 1 000 000 g/mol, notamment égale à 60 000 g/mol pour l'homopolymère du poly-L-lactide, et notamment égale à 75 000 g/mol ou 1 000 000 g/mol pour l'homopolymère du poly-DL-lactide, . ou un copolymère à blocs constitué d'un bloc de polylactide sous forme racémique (poly-D,L-lactide, PDLLA) ou sous forme optiquement active dextrogyre (poly-Dlactide, PDLA) ou lévogyre (poly-L-lactide, PLLA), et d'un bloc choisi parmi le polyoxyde d'éthylène PEO ou le polyglycolide (PGA), ledit copolymère à blocs ayant notamment pour formule PEO-PDLLA, PEO-PDLA ou PEO-PLLA, les blocs ayant pour masse molaire : - 1 000 à 3 000 g/mol pour le bloc PEO, notamment 1 880 g/mol, - 5 000 à 500 000 g/mol pour le bloc PDLLA, PDLA ou PLLA, en particulier 10 000 à 456 000 g/mol, et notamment 10 000, 77 332, 113 000 ou 455 300 g/mol, - 6 000 à 503 000 g/mol de masse molaire totale pour le copolymère de formule PEOPDLLA, PEO-PDLA ou PEO-PLLA, notamment 11 880, 79 212, 114 880 ou 457 180 g/mol, . ou un copolymère statistique constitué de polylactide sous forme racémique (poly-D,L-lactide, PDLLA) ou sous forme optiquement active dextrogyre (poly-D-lactide, PDLA) ou lévogyre (poly-L-lactide, PLLA), et de polyglycolide (PGA), ledit copolymère statistique étant notamment le poly-DL-lactide-polyglycolide de masse molaire comprise de 20 000 à 2 000 000 g/mol, notamment égale à 1 000 000 g/mol, la fraction de poly-DL-lactide-polyglycolide étant notamment égale à 50/50, a lesdites micelles résultant d'une association de deux parties structurantes par un ou plusieurs types de liaisons réversibles non-covalentes, dans un solvant aqueux ayant un pH compris de 5.0 à 7.0, en particulier compris de 5.8 à 6.2, et notamment égal à 5.5 ou 6.0, . une partie structurante étant un copolymère à bloc double-hydrophile contenant une séquence polyélectrolyte et un polyélectrolyte de charge opposée, ou étant deux copolymères à blocs double-hydrophiles contenant des séquences polyélectrolytes de charges opposées, notamment un copolymère à blocs double hydrophile (CBDH) constitué à partir de polyoxyde d'éthylène (PEO) et à partir de poly(acide méthacrylique) PMAA et étant représenté par la formule E0.-b-1VIAA., dans laquelle - n désigne le nombre de motifs oxyde d'éthylène, n variant notamment de 50 à 800, - m désigne le nombre de motifs acide méthacrylique, m variant notamment de 10 à 100, - le rapport n/m étant notamment compris de 3 à 10, l'autre partie structurante étant une polyamine organique choisie parmi la polyéthylèneimine PET, le chitosan, la polyvinylpyridine ou la polyallylamine, notamment la PET ou le chitosan, ladite polyamine possédant éventuellement des propriétés thérapeutiques, et étant notamment du chitosan, de la lidocaïne, de la tétracaïne, de la procaïne, de la cimétidine, de la gentamicine, de la kanamycine, de la doxorubicine, de la gencitabine, ou une catécholamine, lesdites micelles ayant pour formule CBDH/polyamine, en particulier E0.-b-MAA./polyamine dans laquelle n et m ont les valeurs désignées ci-dessus, et notamment ayant pour formules E0177- b-MAA23/PEI ou E0182-b-MAA35/PEI, le rapport polymère / micelles étant compris de 1 à 100, et notamment de 1 à 9. FIGURES La figure 1 représente les domaines d'ionisation des blocs PMAA et des blocs polyamine selon le pH, ainsi que le domaine de micellisation des micelles de formule CBDH/polyamine, notamment des micelles de formules E0177-b-MAA23/PEI et E0182-b-1VIAA35/PEI. Les figures 2a et 2b représentent la variation du diamètre hydrodynamique (0) et de l'intensité diffusée (M) de micelles à base de PEO-PMAA et de PET, et à base de PEO-PMAA et d'oligochitosane (a et b respectivement) en fonction du pH avec S = 1. La figure 3 représente la variation du diamètre hydrodynamique (0) et de l'intensité diffusée (M) de micelles de PE0177-PMAA23/PEI en fonction du rapport molaire S à pH = 6. La figure 4a représente l'intensité diffusée en fonction du vecteur d'onde par des micelles complexes E0177-MAA23/PEI dans D20 à la concentration de 0.03 g/mL ; (0) : courbe expérimentale, (-) : modèle coeur-couronne. La figure 4b représente l'intensité diffusée par des micelles complexes E0177-MAA23/PEI dans CDC13 à la concentration de 0.005 g/mL ; (0) : courbe expérimentale, (-) : modèle coeur-couronne. La figure 4c représente l'intensité diffusée par un mélange de MePEO-PLA (114 880 g/mol) et micelles complexes E0177-MAA23/PEI (70% et 30% respectivement) dans CDC13 à la concentration de 0.16 g/mL. L'apparition du pic de structure démontre que le milieu est nanostructué. (o) courbe expérimentale (-) : modèle incluant le facteur de structure. La figure 5 représente l'image de microscopie électronique en transmission (MET) de micelles E0177-MAA23/PEI. Barre d'échelle = 50 nm. L'histogramme de distribution en taille est effectué sur 50 objets. La taille moyenne est de 9.2 nm. La figure 6 est un cliché de microscopie électronique en transmission (MET) de réplique d'un film cryofracturé préparé avec MePEO-PLA (114 880 g/mol) et micelles complexes E0177-MAA23/PEI (70% et 30% respectivement) puis lavés à pH > 8; barre d'échelle = 100 nm. La flèche montre une frontière entre deux zones d'orientation différente de la surface de fracture par rapport à la direction de métallisation. Histogramme de distribution de taille indiquant une taille moyenne de 8 ± 2 nm. La figure 7, à gauche, est le cliché d'AFM (11.1mx11.1m) montrant les nanostructures dans une matrice de biopolymère MePEO-PLA (114 880 g/mol) et micelles complexes E0177-MAA23/PEI (70% et 30% respectivement). A droite est représenté le cliché d'AFM (1 iamx 11.1m) montrant la structure nanoporeuse dans la même matrice après extraction des micelles complexes par lavage à pH = 8. EXEMPLES Signification des abréviations utilisées : CHC13 : chloroforme CDC13 : chloroforme deutéré RMN 1F1 : Résonance Magnétique Nucléaire du proton : déplacement du proton, exprimé en ppm DMSO: diméthylsulfoxyde Mn : masse nominale MET : Microscopie Electronique en Transmission 5 NaOH: hydroxyde de sodium DDL : Diffusion Dynamique de la Lumière DNPA : Diffusion de Neutrons aux Petits Angles AFM : Microscopie à Force Atomique 10 Caractéristiques/types des appareils d'analyse utilisés : RMN 'H: spectromètre RMN Brucker, 600 MHz. Ces mesures ont été réalisées à l'Institut de Topologie et de Dynamique des Systèmes (ITODYS), CNRS-Université Paris Diderot. DDL : digital Brookhaven BI9000AT 15 DNPA : spectromètre PAXY au laboratoire Léon Brillouin au CEA de Saclay. cryofracture : institut de Physique et Chimie des Matériaux de Strasbourg (CNRS-Université de Strasbourg). MET : microscope Tecnai 12 Spirit FEI sous une tension accélératrice de 120 kV; micrographies collectées à l'aide d'une caméra ORIUS 832 GATAN au Laboratoire de Chimie de la Matière 20 Condensée (CNRS-Université Pierre et Marie Curie/Collège de France). AFM : Ces mesures ont été réalisées au Centre de Recherche sur la Matière Divisée, CNRS- Université d'Orléans, au moyen d'un Nanoscope III (Digital Instruments Corp.) Spectrophotomètre UV-Visible Varian, Cary ® 50 spectrophotomètre de fluorescence : Cary Eclipse, Varian 25 pHmètre : Mettler Toledo SevenMulti, équipé d'une microélectrode. Réactifs et solvants utilisés Les dimères et homopolymères L et D,L-lactide (Mn = 60 000 et 75 000 g/mol), le monoéthyléther 30 polyoxyde d'éthylène (MePEO, Mn 2 000 g/mol), l'octoate stanneux, la polyéthylèneimine (PET, Mn 600 g/mol), l'oligochitosane (ou chitosan) (Mn 5000 g/mol), la solution de ninhydrine (2% dans le DMSO), la fluorescéine sodique (C20HioNa205), le dichlorométhane (CH2C12), le chloroforme (CHC13), le toluène, le diéthyle éther, le d-chloroforme (CDC13, Cambridge Isotope) et D20 ont été achetés chez Sigma-Aldrich (France) et utilisés tels quels sauf spécification ultérieure. Les copolymères à blocs double hydrophiles (CBDH) polyoxyde d'éthylène - poly(acide méthacrylate) (PEO - PMAA), de masses moléculaires différentes, ont été achetés chez Polymer Source (Canada). Exemple 1: Synthèse des copolymères lactides MePEO-PLA Après dissolution du lactide (L ou D,L) dans un volume minimal d'acétate d'éthyle anhydre à chaud (pour assurer une solubilisation complète), la solution a été agitée magnétiquement pendant 24 heures. Le réactif a été recristallisé par filtration de la solution sur des filtres en nylon de porosité 0.45 pm (Whatman). Les cristaux ont ensuite été placés dans l'étuve à 40°C sous vide pour évaporer les résidus du solvant. L'octoate stanneux a été préalablement dilué dans une solution de toluène anhydre à une concentration d'environ 0.15 g/mL. La méthode de polymérisation par ouverture de cycle de dimères cycliques de lactide a été utilisée pour synthétiser les copolymères MePEO-PDLLA (M. Al Helou, N. Anjum, M.A. GuedeauBoudeville, M. Rosticher, A. Mourchid. Polymer, 2010, 51, 5440-5447; S.K. Agrawal, N. SanabriaDeLong, GN.Tew, S.R.Bhatia, Langmuir, 2008, 24, 13148-13154). Le MePEO a été utilisé afin d'initier la polymérisation par l'ouverture du cycle des dimères par le seul groupe hydroxyle libre de la chaîne de MePEO. Pour cela, le MePEO a été dissous dans du toluène anhydre dans un ballon tricol, placé dans un bain d'huile à 130°C sous flux d'azote et sous agitation continue. Pour sécher le PEO, le ballon a été surmonté d'un montage Dean-Stark. L'azéotrope eau-toluène (point d'ébullition 84°C) s'est condensé en premier grâce au réfrigérant. Les traces d'eau ont ainsi été éliminées de la solution de toluène. Les dimères recristallisés de lactide ont ensuite été introduits dans le ballon et agités jusqu'à entière dissolution. Un second volume de toluène a été éliminé du Dean-Stark et le système a été laissé à reflux sous azote jusqu'à la condensation d'un nouveau volume de toluène dans le décanteur. L'octoate stanneux a ensuite été ajouté à l'aide d'une seringue pour catalyser la réaction. Le mélange a été laissé sous agitation mécanique à 130°C pendant 24 heures sous pression positive d'azote. La réaction a été arrêtée par refroidissement de la solution jusqu'à température ambiante. Le produit obtenu a été dissous dans un volume minimal de CHC13 sous agitation. Le polymère a ensuite été précipité en versant goutte à goutte la solution chloroformique dans une solution de diéthyle éther sous agitation. Le produit précipité a alors été filtré sur un filtre de nylon de porosité 0.45 pm. Cette dernière étape de précipitation et de filtration a été répétée plusieurs fois pour assurer la précipitation et la récupération complète du polymère. Enfin, le produit récupéré a été mis sous vide à température ambiante pendant 2 jours pour une évaporation complète des solvants. Le rendement des synthèses a varié de 60 à 90% en fonction des masses molaires moléculaires du polymère final. Exemple 2: Caractérisation des copolymères MePEO-PLA par R1VIN 11I Les analyses des résultats des expériences sur les produits ont été menées en déterminant exactement la masse molaire moléculaire moyenne du MePEO (masse nominale Mn = 2 000 g/mol) grâce au pic de résonance du groupement OCH3 localisé à 3.4 ppm. En comparant le rapport d'intégration de ce pic spécifique à la valeur intégrée du pic CH2-CH2-0 (Ô = 3.7 ppm; 4 x n protons), la masse moléculaire réelle du MePEO utilisé a été calculée, Mn = 1 880 g/mol. L'indice de polymérisation et la masse moléculaire des blocs de PLA ont été déterminés à partir des pics de résonance correspondant aux groupements CH3 (3 x y protons) et CH (1 x y protons). Le tableau 1 montre les résultats des expériences de RMN faites sur les polymères que nous avons utilisés. Echantillon Mn PEO Mn PLA Mn Totale Rendement MePEO-PDLLA 1880 113000 114880 88% 1880 77332 79212 66% 1880 10000 11880 69% 1880 455300 457180 57% tableau 1 Masses moléculaires moyennes et caractéristiques des polymères synthétisés. Exemple 3 : Préparation de suspensions de micelles composées du CBDH PEO - PlVIAA et d'une polyamine Différentes solutions ont été préparées dans l'eau déionisée (MilliQ, Millipore, 18 MS.2.cm-1, France). Pour préparer des suspensions de micelles complexes PEO-PMAA/polyamine, une solution du copolymère PEO-P1VIAA et une solution mère de la polyamine sont mélangées sous certaines conditions. Le rapport S, défini comme le nombre de fonctions carboxylates et carboxyliques le long des chaînes PMAA par fonction amine, S = MAA/N, est très important et influence les caractéristiques des suspensions. Typiquement, la préparation d'une suspension de micelles complexes à partir d'un CBDH E0177-IVIAA23 (177 et 23 indiquant le degré de polymérisation des chaines PEO et PMAA respectivement) et de polyamine pour un rapport S = 1, a été réalisée de la manière suivante : 50 mg de copolymère E0177-MAA23 ont été directement pesés dans un tube en verre, soigneusement nettoyé et séché, et 5 mL d'eau déionisée ont été ajoutés pour obtenir la dissolution complète du copolymère. 1.2 mL d'une solution mère de PET à 0.1 M en fonctions amines a alors été additionné et le mélange a été agité magnétiquement pendant 2 heures, la valeur du pH du mélange étant environ égale à 6. Avec la PET, le pH final n'a pas besoin d'être ajusté. Par contre, la préparation des suspensions de micelles contenant l'oligochitosane a nécessité l'ajustement du pH à la valeur de 5.5, par ajout d'une solution de NaOH 0.1 M, dans les deux solutions mères, ainsi que l'ajustement de la valeur du pH de la suspension finale. La suspension résultante a ensuite été dialysée contre une solution aqueuse à pH = 5.5 pendant une semaine et la sortie des sels en excès a été suivie en mesurant la conductivité de l'eau de dialyse après chaque changement d'eau. L'opération de dialyse a été nécessaire dans le cas de l'oligochitosane car il contient du sel, ce qui n'est pas le cas de la PET. A la fin de la procédure de complexation, les suspensions ont été lyophilisées et les produits récupérés ont été stockés à 4°C pour être utilisées ultérieurement. Par ailleurs, la formation de complexes polyioniques en fonction du pH de la solution a été étudiée et décrite dans l'exemple suivant. Exemple 4 : étude d'un système PEO-PMAA/polyamine en fonction du pH La gamme de pH sur laquelle les micelles ont été formées et définies, a été déterminée par diffusion dynamique de lumière (DDL). La figure 1 correspond au schéma des domaines d'ionisation des blocs PMAA et polyamine ainsi que du domaine de micellisation. Les interactions électrostatiques se produisant entre les blocs PMAA et les blocs polyamines induisent la formation des complexes micellaires. Les valeurs des pKa des différents polyélectrolytes étudiés permettent de prévoir l'existence d'une gamme de pH pour laquelle à la fois les blocs PMAA et les blocs polyamines sont ionisés. Cette gamme correspond aux valeurs de pH entre 4.5 et 8 environ. Pour mieux souligner les effets du pH sur la structure et la formation des micelles, les mélanges ont été étudiés par DDL. Pour cela, une solution mère de E0177- 1VIAA23/polyamine avec un rapport S = 1 a été préparée puis divisée en 11 solutions de volumes égaux. Ensuite, la valeur du pH de chacune des solutions filles a été ajustée à une valeur différente (la solution mère a été divisée en plusieurs solutions pour éviter l'ajout non nécessaire de sels) et l'évolution du diamètre hydrodynamique, Dh, a été étudiée par DDL. On remarque sur les figures 2a et 2b que les courbes représentant le diamètre hydrodynamique Dh et l'intensité diffusée marquent une brusque variation lorsque le pH s'approche de la valeur de 5. L'échelle de pH peut être divisée en deux parties: pH 7: Les valeurs d'intensité mesurées sont faibles et de même ordre de grandeur pour la PET et l'oligochitosane. Les rayons hydrodynamiques mesurés sont faibles avec une grande polydispersité. Les objets présents dans la solution sont peu diffusants. Ils sont formés par les chaînes de polymères non agrégés et très peu denses ; 5 Les courbes de la figure 2 permettent d'affirmer que les conditions optimales pour la formation de micelles bien agrégées et monodisperses correspondent à des valeurs de pH telles que 5 Le diamètre hydrodynamique moyen ainsi que l'intensité de lumière diffusée augmentent en fonction de la valeur du rapport S. Ce résultat montre, que même pour un rapport molaire de 0.2, le bloc anionique de PMAA réagit encore avec le bloc cationique de PET pour former des micelles ayant des diamètres hydrodynamiques plus petits et contrôlés par la couronne de PEO qui entoure et stabilise le coeur formé par les polyélectrolytes. Une confirmation supplémentaire a été apportée par l'étude de la morphologie des micelles par la diffusion de neutrons aux petits angles (DNPA). La figure 4a montre l'intensité diffusée par une solution micellaire dans l'eau deutérée. L'allure de la courbe est caractéristique de la diffusion par des objets nanométriques. L'utilisation du modèle coeur-couronne permet de rendre compte des mesures expérimentales et de déduire le rayon du coeur, qui est de 4.4 nm, l'extension de la couronne (environ 4 nm dans l'eau) et le nombre d'agrégation = 28. Ces mesures sont en bon accord avec l'observation directe des micelles séchées, faite par microscopie électronique en transmission, qui fournit une taille moyenne de 9.2 nm avec une distribution étroite comme cela est visible sur la figure 5. Dans la suite, les micelles utilisées ont été préparées à un pH = 6 et pour un rapport molaire S= 1 . Exemple 5: Préparation des films de copolymère MePEO-PLA nanostructurés La méthode décrite ici a été employée pour la préparation de tous les échantillons nanostructurés, dans le chloroforme anhydre choisi comme solvant commun aux micelles et aux copolymères MePEO-PLA. Typiquement, pour préparer un film de copolymères et de complexes micellaires contenus dans le film, avec des rapports en masses de 70% et 30% pour le copolymère et les micelles respectivement, il a été procédé comme suit : - mélange micelles et copolymère : 30 mg de micelles lyophilisées ont été dissous dans 1 mL de chloroforme, la solution étant turbide au début. La solution organique a alors été vortexée, puis placée dans un bain d'ultrasons pendant quelques minutes, provoquant la disparition de la turbidité. 70 mg de copolymère à base de PLA ont été ajoutés, la dispersion des micelles étant à nouveau assurée grâce à un bain d'ultrasons. La solution organique a ensuite été déposée sur des lamelles de verre à l'aide d'une pipette. Après évaporation du chloroforme à température ambiante, pendant 48 heures, puis sous vide pendant 24 heures, les films secs ont été obtenus. Pendant cette étape, la DNPA a été utilisée afin de vérifier que la permutation de solvant n'induit pas de changement dans les propriétés morphologiques des micelles. La figure 4b montre que l'intensité diffusée par les micelles est bien ajustée par le modèle coeur-couronne. L'étude du mélange copolymère à base de PLA et micelles complexes dans le chloroforme deutéré fait apparaître un pic de corrélation localisé à q = 0.019 /3£1 comme cela est visible sur la figure 4c. Ceci démontre que le mélange est structuré à l'échelle nanométrique. - désassemblage : Les films obtenus ont ensuite été immergés dans une solution aqueuse à pH > 8 pour initier la décomplexation des micelles et promouvoir leur élimination. Les films ont ainsi été laissés dans le bain aqueux pendant quelques jours, pour assurer l'élimination totale des micelles de la matrice de copolymère à base de PLA, puis remis sous vide pendant 24 heures pour évaporer les traces d'eau. L'état de sortie des micelles de la matrice de copolymère, a été suivi par dosage d'amines primaires par la ninhydrine (S. Prochazkova, K.M. Varum, K. Ostgaard. Carbohydrate Polymers, 1999, 38, 115-122). La méthode utilisée est décrite ci-après. A un prélèvement de 1 mL d'une solution aqueuse contenant des fonctions amines, 1 mL d'une solution de ninhydrine (diluée à 2% dans le DMSO) a été ajouté. Le mélange a alors été agité à la main brièvement puis placé dans un bain d'eau bouillante pendant 30 minutes pour initier la réaction entre la ninhydrine et les groupements amines. Après refroidissement de la solution, 5 mL d'une solution eau/éthanol (50/50 v/v) ont été ajoutés et le mélange a été vortexé pendant 15 secondes, pour oxyder l'excès de ninhydrine. L'absorbance de la solution a ensuite été mesurée, en lumière visible, l'absorbance zéro étant effectuée à l'aide d'un échantillon d'eau pure traité de la même façon que ci-dessus. Comme preuve supplémentaire de la cinétique de sortie de la PET observée par la méthode de dosage à la ninhydrine, la PET a été marquée avec une molécule fluorescente, la fluorescéine sodique. Pour cela, une solution de PET à une concentration de 0.1 M en fonction amine a été préparée. La fluorescéine sodique a été ajoutée à la solution de PET, agitée au noir pendant 24 heures pour assurer la complexation électrostatique entre la fluorescéine chargée négativement en solution aqueuse et les polycations PET, chargés positivement au pH de travail (pH neutre). Un rapport de 0.03 % en nombre de moles de fluorescéine par rapport à la PET a été utilisé pour éviter le phénomène de "quenching". Enfin, la solution de PET marquée a été utilisée pour la fabrication de micelles selon exactement la même procédure que celle décrite précédemment. L'ajout de charges électrostatiques négatives apportées par la fluorescéine dans les complexes et le calcul du rapport molaire S est négligeable puisque celles-ci ne représentent qu'une fraction de 0.0003. Un exemple typique de film lavé à l'eau, étudié par microscopie électronique en transmission, est représenté sur la figure 6. Il faut rappeler que la fracture n'est pas nécessairement plane. Des zones de différents niveaux et orientations sont visibles par rapport à la direction de déposition. Ceci est clairement mis en évidence par une flèche sur la figure 6 où une large zone continue sombre est suivie d'une zone plus claire caractéristique d'une marche. Une statistique sur la taille de 180 objets identifiables sur le cliché et qui possèdent un ombrage caractéristique de trous nanométriques dans la surface de fracture, a été faite afin de déterminer la taille moyenne des pores. La taille moyenne obtenue concernant ce cliché est de 8 nm, avec une incertitude de ± 2 nm due à l'épaisseur de la couche de métal déposée. Des mesures obtenues à partir d'autres clichés de microscopie ont permis de déduire des tailles de nanopores entre 8 et 12 nm ± 2 nm, soit en bon accord avec le diamètre des micelles E0177-MAA23/PEI utilisées pour induire la nanoporosité. La nanostructuration des films de polylactide à l'aide de micelles et la création de porosité par lavage à l'eau à pH > 8 ont également été étudiées par microscopie à champ proche. Un exemple typique obtenu pour la nanostructuration du MePEO-PLA (114 880 g/mol) à la fraction de 70%, par des micelles E0177-MAA23/PEI à la fraction de 30%, est représenté sur la figure 7, gauche. Dans ce cas, une meilleure distribution est constatée pour les particules émergentes réparties sur toute la surface du film. Les films ont été lavés à l'aide d'une solution aqueuse à pH = 8 pour vérifier la nature des objets observés. Les observations discutées ci-dessus sont clairement mises en évidence sur le cliché de droite de la figure 7. La surface du film est homogène après le lavage et les pores sont bien répartis. Il est à noter que les tailles mesurées avec l'AFM sont généralement exagérées à cause des convolutions entre la pointe de la sonde et l'objet observé. Exemple 6 : Préparation des films de polymère PLA nanostructurés, avec ou sans polyglycolide La méthode décrite ici a été employée pour la préparation de tous les échantillons nanostructurés, dans le chloroforme anhydre choisi comme solvant commun aux micelles et aux polymères PLA, copolymérisé ou non avec le polyglycolide. Typiquement, pour préparer un film de polymères et de complexes micellaires contenus dans le film, avec des rapports en masses de 70% et 30% pour le polymère et les micelles respectivement, il a été procédé comme suit : - mélange micelles et polymère : 30 mg de micelles lyophilisées ont été dissous dans 1 mL de chloroforme, la solution étant turbide au début. La solution organique a alors été vortexée, puis placée dans un bain d'ultrasons pendant quelques minutes, provoquant la disparition de la turbidité. 70 mg de polymère à base de PLA ont été ajoutés, la dispersion des micelles étant à nouveau assurée grâce à un bain d'ultrasons. La solution organique a ensuite été déposée sur des lamelles de verre à l'aide d'une pipette. Après évaporation du chloroforme à température ambiante, pendant 48 heures, puis sous vide pendant 24 heures, les films secs ont été obtenus. - désassemblage : Les films obtenus ont ensuite été immergés dans une solution aqueuse à pH > 8 pour initier la décomplexation des micelles et promouvoir leur élimination. Les films ont ainsi été laissés dans le bain aqueux pendant quelques jours, pour assurer l'élimination totale des micelles de la matrice de polymère à base de PLA, puis remis sous vide pendant 24 heures pour évaporer les traces d'eau. L'état de sortie des micelles de la matrice de polymère, a été suivi par dosage d'amines primaires par la ninhydrine (S. Prochazkova, K.M. Varum, K. Ostgaard. Carbohydrate Polymers, 1999, 38, 115-122) et par suivi de la sortie de molécule fluorescente, la fluorescéine sodique, préalablement attachée à l'amine. Exemple 7 : Analyse des échantillons de copolymères 1VIePEO-PLA par Résonance Magnétique Nucléaire du proton (R1VIN111) La RMN 'El a été utilisée dans cette étude pour déterminer la structure des produits de synthèses des copolymères contenant le polylactide. Les polymères à analyser ont été dissous dans le chloroforme deutéré à température ambiante à une concentration d'environ 15 mg/g. Le déplacement chimique a été calibré par rapport à celui du pic du solvant. Exemple 8: Analyse par Diffusion Dynamique de la Lumière (DDL) Pour effectuer ces mesures, un montage de diffusion de lumière équipé d'un laser Hélium-Néon émettant à une longueur d'onde de 632 nm et équipé d'un goniomètre, a été utilisé. La fonction de corrélation a été obtenue à l'aide d'un auto-corrélateur digital Brookhaven BI9000AT. Les échantillons ont été filtrés sur des filtres à seringue, aqueux ou organiques, de porosité de 0.45 lm puis 0.2 iam afin d'éliminer toute trace de pollution. La fonction de corrélation obtenue a permis de déterminer la taille hydrodynamique dans le régime de forte dilution. Exemple 9: Analyse par Diffusion de Neutrons aux Petits Angles (DNPA) Les expériences de DNPA ont été réalisées sur le spectromètre PAXY au laboratoire Léon Brillouin au CEA de Saclay, ce montage de diffusion étant équipé d'un détecteur bidimensionnel. Différentes configurations du spectromètre ont été utilisées pour couvrir un domaine de vecteur d'onde q compris de 0.003 à 0.4 kl. Les solutions de polymères ont été préparées dans des solvants deutérés, eau et chloroforme, pour renforcer le contraste entre les polymères et le solvant et en même temps diminuer le signal incohérent causé par les atomes d'hydrogène de l'échantillon. Les films secs ont été étudiés entre deux fenêtres de quartz. Exemple 10: Analyse par Microscopie Electronique en Transmission (MET) Les films séchés ont été étudiés par Cryofracture. Pour cela, les films ont été fixés entre deux supports spécifiques en cuivre humidifié à l'aide d'une goutte de chloroforme pour assurer une bonne adhésion entre l'échantillon et son support puis l'ensemble a été plongé dans un bain d'azote liquide pour assurer la congélation rapide de l'échantillon. Les supports ont ensuite été brusquement séparés par un signal mécanique entrainant ainsi la fracture longitudinale du film. Une couche mince de platine a été évaporée obliquement sur les deux faces du film fracturé pour former la réplique, puis une couche de carbone a été évaporée perpendiculairement aux échantillons pour fixer la réplique de platine. A la fin de cette étape, les échantillons, avec les répliques, ont été récupérés et plongés dans un bain de chloroforme afin d'éliminer les résidus de l'échantillon et ainsi laver les répliques de platine. Les répliques ont ensuite été récupérées sur des grilles de microscopie et observées par le MET. Les répliques des échantillons ont été examinées à l'aide d'un microscope Tecnai 12 Spirit FEI sous une tension accélératrice de 120 kV, et les micrographies collectées à l'aide d'une caméra. Exemple 11 : Analyse par Microscopie à Force Atomique (AF1VI) L'AFM en mode dynamique a été utilisée car ce mode ne provoque pas de dégradation de la surface des échantillons et est ainsi adapté à l'étude d'échantillons souples, notamment les films de polymères organiques. Les films organiques de copolymères à base de polylactide, nanostructurés ou non, avant et après lavage à pH > 8, ont été étudiés. Exemple 12 : Dosage d'amines primaires par la ninhydrine suivi par Spectroscopie ultraviolet-visible et spectroscopie de fluorescence L'absorbance des échantillons est mesurée avec un spectrophotomètre UV-Visible Varian, le Cary ® 50. Les échantillons ont été étudiés dans des cuves de quartz ayant un chemin optique de 2 mm d'épaisseur, 10 mm de largeur et 30 mm de hauteur. Les mesures de spectroscopie de fluorescence ont été faites sur un spectrophotomètre de 30 fluorescence Cary Eclipse, Varian, dans des cuves de quartz ayant un chemin optique de 2 mm d'épaisseur, 10 mm de largeur et 30 mm de hauteur. Exemple 13 : Mesures par pH-métrie La pHmétrie a été mise en oeuvre pour suivre le dosage des fonctions acides carboxyliques présentes sur les blocs PMAA des copolymères PEO-PMAA. Le degré de polymérisation et le pKa ont ainsi été déterminés. Des solutions aqueuses de copolymères PEO-PMAA à 4 mg/mL ont été dosées par l'ajout régulier de volumes mesurés d'une solution de soude à 0.1 M. Le titrage de l'oligochitosane sous sa forme sel de lactate a été réalisé par l'ajout d'une solution de soude 0.5M dans la solution d'oligochitosane. Le titrage de la PET a été réalisé par ajout d'une solution d'acide chlorhydrique 0.5M dans la solution de PET. Exemple 14: Dialyse Les solutions aqueuses à dialyser ont été introduites dans des membranes de dialyse plongées dans un réservoir d'eau déionisée dont le pH a été ajusté à 6, le pH de l'eau de dialyse étant fixé au même pH que celui des solutions des complexes. La sortie du sel a été surveillée en mesurant la conductivité de l'eau du réservoir et ainsi cette eau a été changée plusieurs fois par jour jusqu'à ce que la conductivité mesurée reste à une valeur constante. Les membranes, à base de cellulose régénérée (SpectraPor), forment des réseaux enchevêtrés générant ainsi un seuil de coupure. Ce seuil (exprimé en Daltons) a été choisi en fonction de la masse moléculaire (en g/mol) des échantillons à purifier: pour les copolymères diblocs de masse moléculaire de 9 800 g/mol, un seuil de coupure de 2000 Daltons a été choisi et pour les copolymères diblocs de masse molaire de 17 000 g/mol, ce seuil a été choisi à 6 000-8 000 Daltons. REVENDICATIONS1. Procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres comprenant les étapes suivantes : a une étape de mélange d'un polymère organique dans un solvant, et de micelles pour obtenir un mélange stable de polymère organique et de micelles, a une étape de séchage du mélange stable de polymère organique et de micelles pour éliminer le solvant et obtenir un matériau nanostructuré contenant des micelles sous forme de film sec contenant des pores occupés par des micelles, a une étape de désassemblage des micelles à partir du susdit film, notamment par lavage en milieu aqueux, pour obtenir un matériau nanostructuré sous forme de film contenant des pores libres, a une étape de séchage du matériau nanostructuré pour éliminer l'eau et obtenir un matériau nanostructuré contenant des pores libres, ledit matériau nanostructuré obtenu étant sous forme de film sec ayant une épaisseur comprise de 1 !am à 500 !am, en particulier comprise de 10 !am à 200 !am, notamment de 50 !am à 150 [lm. 2. Procédé de préparation d'un matériau nanostructuré selon la revendication 1, dans lequel les micelles sont un complexe de deux parties structurantes reliées entre elles par un ou plusieurs types de liaisons réversibles non-covalentes, en particulier les micelles étant constituées d'un polymère à bloc double-hydrophile (CBDH) contenant une séquence polyélectrolyte et un polyélectrolyte de charge opposée, ou étant deux copolymères à blocs double-hydrophiles contenant des séquences polyélectrolytes de charges opposées, les micelles étant notamment lyophilisées. 3. Procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres selon l'une des revendications 1 ou 2, dans lequel la densité des pores est comprise de 1,0x1016 à 1,0x. -lu18 pores/cm', en particulier comprise de 2,0x 1016 à 8,0x. -16 lu pores/cm' et notamment dans lequel les pores libres ont une taille comprise de 1 nm à 200 nm, en particulier de 2 nm à 100 nm, notamment de 5 nm à 20 nm. 4. Procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres selon l'une des revendications 1 à 3, comprenant une étape de mélange d'un polymère organique, notamment biodégradable, constitué d'un homopolymère, d'un copolymère à blocs ou d'un copolymère statistique, et de micelles, ledit homopolymère étant notamment un polyester choisi parmi un poly-L-lactide, un poly-Dlactide ou un poly-D,L-lactide, ledit copolymère étant notamment constitué de deux blocs, - un bloc de polylactide (PLA) sous forme racémique (poly-D,L-lactide, 10 PDLLA) ou sous forme optiquement active dextrogyre (poly-D-lactide, PDLA) ou lévogyre (poly-L-lactide, PLLA), et - l'autre bloc étant choisi parmi le polyoxyde d'éthylène (PEO) ou le polyglycolide, ledit copolymère étant notamment un copolymère statistique constitué 15 - de polylactide (PLA) sous forme racémique (poly-D,L-lactide, PDLLA) ou sous forme optiquement active dextrogyre (poly-D-lactide, PDLA) ou lévogyre (poly-Llactide, PLLA), et - et de polyglycolide, la masse molaire dudit homopolymère étant notamment comprise de 3 000 à 1 000 000 g/mol, 20 notamment égale à 60 000 g/mol pour l'homopolymère du poly-L-lactide, et notamment égale à 75 000 g/mol ou 1 000 000 g/mol pour l'homopolymère du poly-DLlactide, ledit copolymère ayant notamment pour formule PEO-PDLLA, PEO-PDLA ou PEO-PLLA, les blocs ayant notamment pour masse molaire : 25 - 1 000 à 3 000 g/mol pour le bloc PEO, notamment 1 880 g/mol, - 5 000 à 500 000 g/mol pour le bloc PDLLA, PDLA ou PLLA, en particulier 10 000 à 456 000 g/mol, et notamment 10 000, 77 332, 113 000 ou 455 300 g/mol, - 6 000 à 503 000 g/mol de masse molaire totale pour le copolymère de formule PEOPDLLA, PEO-PDLA ou PEO-PLLA, notamment 11 880, 79 212, 114 880 ou 457 180 g/mol, 30 ledit copolymère étant notamment le poly-DL-lactide-polyglycolide, de masse molaire comprise de 20 000 à 2 000 000 g/mol, notamment égale à 1 000 000 g/mol, la fraction de poly-DL-lactide/polyglycolide étant notamment égale à 50/50. 5. Procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres selonl'une des revendications 1 à 4, comprenant une étape de mélange d'un polymère organique, notamment biodégradable, et de micelles, lesquelles résultent de la complexation de deux parties structurantes par un ou plusieurs types de liaisons réversibles non-covalentes, dans un solvant aqueux, ladite complexation étant éventuellement suivie d'une élimination du solvant aqueux, pour donner les micelles, et éventuellement comprenant d'une étape de lyophilisation des micelles, pour obtenir des micelles lyophilisées, les deux parties structurantes dans un solvant aqueux étant avantageusement un copolymère à bloc double-hydrophile contenant une séquence polyélectrolyte et un polyélectrolyte de charge opposée, ou étant deux copolymères à blocs double-hydrophiles contenant des séquences polyélectrolytes de charges opposées, la complexation ayant eu lieu avantageusement dans un milieu aqueux à un pH compris de 5.0 à 7.0, en particulier compris de 5.8 à 6.2, et notamment égal à 5.5 ou 6.0. 6. Procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres selon la revendication 5, comprenant une étape de mélange d'un polymère organique, notamment biodégradable, dans un solvant organique, et de micelles, lesquelles résultent d'un mélange de deux parties structurantes, une partie structurante étant un copolymère à blocs double hydrophile (CBDH) constitué à partir de polyoxyde d'éthylène PEO et à partir de poly(acide méthacrylique) PMAA et étant représenté par la formule E0.-b-MAA., dans laquelle - n désigne le nombre de motifs oxyde d'éthylène, n variant notamment de 50 à 800, - m désigne le nombre de motifs acide méthacrylique, m variant notamment de 10 à 100, - le rapport n/m étant notamment compris de 3 à 10, - l'autre partie structurante étant une polyamine organique choisie parmi la polyéthylèneimine PET, le chitosan, la polyvinylpyridine ou la polyallylamine, notamment la PET ou le chitosan, ladite polyamine possédant éventuellement des propriétés thérapeutiques, et étant notamment du chitosan, de la lidocaïne, de la tétracaïne, de la procaïne, de la cimétidine, de la gentamicine, de la kanamycine, de la doxorubicine, de la gencitabine, ou une catécholamine,lesdites micelles ayant pour formule CBDH/polyamine, en particulier E0n-bMAA./polyamine dans laquelle n et m ont les valeurs désignées ci-dessus, et notamment ayant pour formules E0177-b-MAA23/PEI ou E0182-b-MAA35/PEI. 7. Procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres selon l'une des revendications 1 à 6, comprenant une étape de séchage du mélange de polymère organique et de micelles, ladite étape de séchage étant réalisée par évaporation du solvant organique pour obtenir un film sec contenant des pores occupées par des micelles, d'épaisseur comprise de 1 um à 500 10 ium, en particulier comprise de 10 iun à 200 pm, notamment de 50 iam à 150 um. 8. Procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres selon la revendication 7, comprenant une étape de désassemblage des micelles à partir du film sec, ledit désassemblage des micelles étant réalisé notamment par immersion du susdit film sec 15 dans une solution aqueuse de pH? 8, pour obtenir un matériau nanostructuré sous forme de film contenant des pores libres. 9. Procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres selon la revendication 8, comprenant une étape de séchage, notamment sous vide, d'un matériau 20 nanostructuré sous forme de film contenant des pores libres après désassemblage des micelles, pour éliminer les molécules d'eau et obtenir un matériau nanostructuré contenant des pores libres sous forme de film sec. 25 10. Procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des micelles, pour la mise en oeuvre d'un procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des pores libres selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, comprenant les étapes suivantes : - une étape de mélange d'un polymère organique, notamment biodégradable, dans un solvant, et de micelles pour obtenir un mélange stable de polymère organique et de micelles, 30 - une étape de séchage du mélange stable de polymère organique, notamment biodégradable, et de micelles, pour éliminer le solvant et obtenir un matériau nanostructuré contenant des micelles sous forme de film sec contenant des pores occupés par des micelles, ledit matériaux étant obtenu sous forme de film sec contenant des micelles d'épaisseur comprise de 1 um à 500 um, en particulier comprise de 10 pnl à 200 um, notamment de 50jimà 150 gin, - ledit polymère organique étant notamment - un homopolymère de polyester, notamment un poly-L-lactide, un poly-D-lactide ou un poly-D,L-lactide, o ou un copolymère à blocs constitué d'un bloc de polylactide sous forme racémique (poly-D,L-lactide, PDLLA) ou sous forme optiquement active dextrogyre (poly-D-lactide, PDLA) ou lévogyre (poly-L-lactide, PLLA), et d'un bloc choisi parmi le polyoxyde d'éthylène PEO ou le polyglycolide, ledit copolymère à blocs ayant notamment pour formule PEO-PDLLA, PEO-PDLA ou PEO10 PLLA, o ou un copolymère statistique, notamment biodégradable, constitué de polylactide sous forme racémique (poly-D,L-lactide, PDLLA) ou sous forme optiquement active dextrogyre (poly-D-lactide, PDLA) ou lévogyre (poly-L-lactide, PLLA), et de polyglycolide, 15 ledit copolymère statistique étant notamment le poly-DL-lactide-polyglycolide, 1. lesdites micelles étant obtenues par mélange de deux parties structurantes dans un solvant aqueux, les deux parties structurantes étant un copolymère à bloc double-hydrophile contenant une séquence polyélectrolyte et un polyélectrolyte de charge opposée, ou étant deux copolymères à blocs double-hydrophiles contenant des séquences 20 polyélectrolytes de charges opposées, ledit solvant aqueux ayant un pH compris de 5.0 à 7.0, en particulier compris de 5.8 à 6.2, et notamment égal à 5.5 ou 6.0, - une partie structurante étant un copolymère à blocs double hydrophile (CBDH) constitué à partir de polyoxyde d'éthylène (PEO) et à partir de poly(acide 25 méthacrylique) PMAA et étant représenté par la formule E0n-b-MAAm, dans laquelle - n désigne le nombre de motifs oxyde d'éthylène, n variant notamment de 50 à 800, - m désigne le nombre de motifs acide méthacrylique, m variant notamment de 30 10 à 100, - le rapport n/rn étant notamment compris de 3 à 10, o l'autre partie structurante étant une polyamine organique choisie parmi la polyéthylèneimine PEI, le chitosan, la polyvinylpyridine ou la polyallylamine, notamment la PET ou le chitosan,ladite polyamine possédant éventuellement des propriétés thérapeutiques, et étant notamment du chitosan, de la lidocaïne, de la tétracaïne, de la procaïne, de la cimétidine, de la gentamicine, de la kanamycine, de la doxorubicine, de la gencitabine, ou une catécholamine, lesdites micelles ayant pour formule CBDH/polyamine, en particulier E0-b- 1VIAAidpolyamine dans laquelle n et m ont les valeurs désignées ci-dessus, et notamment ayant pour formules E0177-b-M_AA23/PEI ou E0182-b-MAA35/PEI, le rapport polymère/micelles étant notamment compris de 1 à 100 , et notamment compris de 1 à9, pour obtenir un mélange stable de polymère et de micelles dans un solvant organique, le solvant organique utilisé étant notamment choisi parmi le chloroforme, le chlorobenzène, le diméthylsulfoxyde ou le toluène. 11. Procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des micelles selon la revendication 10, comprenant une étape de séchage d'un mélange stable de polymère 15 organique, notamment biodégradable, et de micelles, ladite étape de séchage étant réalisée notamment par évaporation du solvant organique pour obtenir un film sec contenant des pores occupés par des micelles, et d'épaisseur comprise de 1 !lm à 500 pm, en particulier comprise de 10 kim à 200 pm, notamment de 50 gni à 150 p,m. 20 12. Procédé de préparation d'un matériau nanostructuré contenant des micelles selon l'une des revendications 10 ou 11, dans lequel les micelles sont constituées d'un CBDH, en particulier contenant une séquence polyélectrolyte, notamment une séquence polyanionique, et d'un principe actif contenant un groupe ionisé, en particulier cationique, notamment une 25 polyamine organique possédant des propriétés thérapeutiques, ladite polyamine constituant le principe actif étant choisie parmi le chitosan, la lidocaïne, la tétracaïne, la procaïne, la cimétidine, la gentamicine, la kanamycine, la doxorubicine, la gencitabine ou une catécholamine. 30 13. Matériau nanostructuré sous forme de film sec contenant des pores libres occupés par des micelles tel qu'obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 10 à 12. 14. Matériau nanostructuré contenant des pores libres sous forme de film sec tel qu'obtenupar la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 1 à 9.