FR 2997857 A1 20140516 FR 1260855 A 20121114 Formulation à action rapide d'insuline comprenant un composé anionique substitué [0001] La présente invention concerne une formulation à action rapide d'insuline. [0002] Depuis la production d'insuline par génie génétique, au début des années 80, les patients diabétiques bénéficient d'insuline humaine pour se traiter. Ce produit a grandement amélioré cette thérapie puisque les risques immunologiques liés à l'utilisation d'insuline non humaine en particulier de porc se trouvent éliminés. Cependant, l'insuline humaine injectée par voie sous-cutanée a un effet hypoglycémiant seulement après 60 minutes, ce qui implique que les patients diabétiques traités avec l'insuline humaine doivent procéder à l'injection 30 minutes avant le repas. [0003] Un des problèmes à résoudre pour améliorer la santé et le confort des patients diabétiques est de mettre à leur disposition des formulations d'insuline qui permettent d'apporter une réponse hypoglycémiante plus rapide que celle de l'insuline humaine et si possible s'approchant de la réponse physiologique de la personne saine. La sécrétion d'insuline endogène chez l'individu sain est immédiatement déclenchée par l'augmentation de la glycémie. L'objectif est de réduire le plus possible le délai entre l'injection d'insuline et le début du repas. [0004] Aujourd'hui, il est admis que la mise à disposition de telles formulations est utile pour que la prise en charge de la maladie soit la meilleure possible. [0005] Le génie génétique a permis d'apporter une réponse avec le développement d'insulines analogues rapides. Ces insulines sont modifiées sur un ou deux acides aminés pour être plus rapidement absorbées dans le compartiment sanguin après une injection sous-cutanée. Ces insulines lispro (1-lumalog®, Lilly), aspart (Novolog®,Novo) et glulisine (Apidra®, SanofiAventis) sont des solutions stables d'insuline avec une réponse hypoglycémiante plus rapide que celle de l'insuline humaine. Dès lors, les patients traités avec ces insulines analogues rapides peuvent procéder à l'injection d'insuline seulement 15 minutes avant le repas. [0006] Le principe des insulines analogues rapides est de former des hexamères à la concentration de 100 UI/mL pour assurer la stabilité de l'insuline dans le produit commercial tout en favorisant la dissociation très rapide de ces hexamères en monomères après injection sous-cutanée afin d'obtenir une action rapide. [0007] L'insuline humaine telle que formulée sous sa forme commerciale, ne permet pas d'obtenir une réponse hypoglycémiante proche en terme de cinétique de la réponse physiologique générée par le début d'un repas (hausse de la glycémie), car à la concentration d'usage (100 UI/mL), en présence de zinc et d'autres excipients tels que le phénol ou le m-crésol, elle s'assemble sous forme d'hexamère alors qu'elle est active sous forme de monomère et de dimère. L'insuline humaine est préparée sous forme d'hexamères pour être stable près de 2 ans à 4°C car sous forme de monomères, elle a une très forte propension à s'agréger puis à fibriller ce qui lui fait perdre son activité. De plus sous cette forme agrégée, elle présente un risque immunologique pour le patient. [0008] Les dissociations des hexamères en dimères et des dimères en monomères retardent son action de près de 20 minutes comparativement à une insuline analogue rapide (Brange 3., et al, Advanced Drug Delivery Review, 35,1999, 307-335). [0009] En outre, la cinétique de passage des insulines analogues dans le sang, ainsi que leur cinétique de réduction de la glycémie, ne sont pas optimales et il existe un réel besoin d'une formulation ayant un temps d'action encore plus court afin de s'approcher des cinétiques de sécrétion d'insuline endogène chez les personnes saines. [00010] La société Biodel a proposé une solution à ce problème avec une formulation d'insuline humaine comprenant de l'EDTA et de l'acide citrique telle que décrite dans la demande de brevet US200839365. L'EDTA par sa capacité à complexer les atomes de zinc et l'acide citrique par ses interactions avec les zones cationiques présentes à la surface de l'insuline sont décrits comme déstabilisant la forme hexamèrique de l'insuline et réduisant ainsi son temps d'action. [00011] Cependant, une telle formulation présente notamment comme inconvénient de dissocier la forme hexamèrique de l'insuline qui est la seule forme stable 20 susceptible de répondre aux exigences de stabilité de la réglementation pharmaceutique. [00012] On connait également au nom de la demanderesse, la demande PCT W02010/122385 qui décrit des formulations d'insuline humaine ou analogue et qui permet de résoudre les différents problèmes évoqués ci-dessus par l'addition d'un 25 polysaccharide substitué comprenant des groupes carboxyles. [00013] Cependant, les exigences entraînées par l'usage chronique et intensif voire l'usage pédiatrique de telles formulations conduisent l'homme de l'art à rechercher à utiliser des excipients dont la masse molaire et la taille soient les plus réduites possibles pour en faciliter l'élimination. 30 [00014] Les polysaccharides décrits dans les demandes WO 2010/122385A1 et US 2012/094902A1 comme excipients sont des composés constitués de chaînes dont les longueurs sont statistiquement variables et qui présentent une grande richesse de sites d'interaction possibles avec des principes actifs protéiques. Cette richesse pourrait induire un manque de spécificité en terme d'interaction et une molécule plus 35 petite et mieux définie pourrait permettre d'être davantage spécifique à ce sujet. [00015] En outre, une molécule avec un squelette bien défini est en général plus facilement traçable (MS/MS par exemple) dans les milieux biologiques lors d'expériences de pharmacocinétique ou d'ADME (administration, distribution, métabolisme, élimination) par rapport à un polymère qui donne généralement un signal très diffus et bruité en spectrométrie de masse. [00016] A contrario, il n'est pas exclu qu'une molécule bien définie et plus courte puisse présenter un déficit de sites d'interaction possibles avec des principes actifs protéiques. En effet, en raison de leur taille réduite ils ne présentent pas les mêmes propriétés que les polymères de type polysaccharide car il y a perte de l'effet polymère comme cela est démontré dans les exemples comparatifs de la partie expérimentale, voir notamment les essais de solubilisation de l'insuline au point isoélectrique et les essais d'interaction avec une protéine modèle telle que l'albumine. [00017] En dépit de ces résultats décourageants, la demanderesse a réussi à mettre au point des formulations susceptibles d'accélérer l'insuline en utilisant un composé anionique substitué en combinaison avec un composé polyanionique. [00018] De plus comme dans le cas de l'utilisation de polysaccharides, la nature hexamèrique de l'insuline n'est pas affectée, donc la stabilité des formulations n'est pas affectée, comme cela est d'ailleurs confirmé par les exemples d'état d'association d'insuline humaine et analogue en dichroïsme circulaire en présence de composé anionique substitué selon l'invention. [00019] La présente invention permet de résoudre les différents problèmes ci- dessus exposés puisqu'elfe permet notamment de réaliser une formulation d'insuline, humaine ou analogue, capable après administration, d'accélérer le passage de l'insuline humaine ou de ses analogues dans le sang et de réduire plus rapidement la glycémie en comparaison des produits commerciaux d'insuline correspondants. [00020] L'invention consiste en une composition, en solution aqueuse, comprenant de l'insuline et au moins un composé anionique substitué. On entend par « composé anionique substitué » des composés constitués d'un squelette saccharidique formé d'un nombre discret u compris entre 1 et 8 (1 u 8) d'unités saccharidiques identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes, lesdites unités saccharidiques étant choisies dans le groupe constitué par les hexoses, sous forme cyclique ou sous forme réduite ouverte, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels carboxyles non substitués étant salifiables. [00021] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention comprend en outre un composé polyanionique. [00022] Dans un mode de réalisation, l'insuline est sous forme hexamèrique. [00023] Dans un mode de réalisation, l'insuline est l'insuline humaine. [00024] On entend par insuline humaine une insuline obtenue par synthèse ou recombinaison dont la séquence peptidique est la séquence de l'insuline humaine, incluant les variations alléliques et les homologues. [00025] Dans un mode de réalisation, l'insuline est une insuline humaine recombinante telle que décrite dans la Pharmacopée Européenne et la Pharmacopée Américaine. [00026] Dans un mode de réalisation, l'insuline est une insuline analogue. [00027] On entend par insuline analogue une insuline recombinante dont la séquence primaire contient au moins une modification par rapport à la séquence primaire de l'insuline humaine. [00028] Dans un mode de réalisation l'insuline analogue est choisie dans le groupe constitué par l'insuline lispro (Hurnalog ), aspart (Novolog®, Novorapid®) et l'insuline glulisine (Apidra ). [00029] Dans un mode de réalisation, l'insuline analogue est l'insuline lispro (1-lumalog®). [00030] Dans un mode de réalisation, l'insuline analogue est l'insuline aspart (Novologc), Novorapid®). [00031] Dans un mode de réalisation, l'insuline analogue est l'insuline glulisine (Apidra®). [00032] Dans un mode de réalisation, le composé anionique substitué, est choisi parmi les composés anioniques substitués constitués d'un squelette saccharidique formé d'un nombre discret u compris entre 1 et 8 (1 u 8) d'unités saccharidiques identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes, lesdites unités saccharidiques étant choisies parmi les hexoses, sous forme cyclique ou sous forme réduite ouverte, caractérisés : a) en ce qu'ils sont substitués de façon statistique par : au moins un substituant de formule générale I : -[Rih-[AA]rn Formule I tes substituants étant identiques ou différents lorsqu'il y a au moins deux substituants, dans lequel : le radical -[AA]- désigne un résidu d'acide aminé, ledit acide aminé étant choisi dans le groupe constitué de la phénylalanine, l'alpha-méthyl- phénylalanine, la 3,4 dihydroxyphénylalanine la tyrosine, l'alpha-méthyl- tyrosine, la 0-méthyl-tyrosine, l'alpha-phénylglycine, Fa 4-hydroxyphényiglycine, la 3,5-dihydroxyphénylglycine et leurs sels de cations alcalins, lesdits dérivés étant de configuration absolue L ou D, -[AA]- est fixé sur le squelette de fa molécule par l'intermédiaire d'un bras de liaison -R1- ou directement lié au squelette par une fonction G, - -R1- étant : - soit une liaison G, et alors a = 0, - soit une chaîne carbonée, et alors a = 1, en Cl à C15 éventuellement substituée et/ou comportant au moins un hétéroatome choisi parmi 0, N et S et portant au moins une fonction acide avant la réaction avec l'acide aminé, ladite chaîne formant avec le résidu d'acide aminé -[AA]- une liaison amide, et est fixée sur le squelette saccharidique à l'aide d'une fonction F résultant d'une réaction entre une fonction hydroxyle portée par le squelette et une fonction portée par le précurseur de R1, F est une fonction éther, ester ou carbamate, - G est une fonction ester ou carba mate, - m est égal à 1 ou 2, - le degré de substitution, j, en -[Ri],-[AA], étant strictement supérieur à 0 et inférieur ou égal à 6, 0 Dans un mode de réalisation, l'utilisation est caractérisée en ce que le composé polyanionique est choisi dans le groupe constitué des molécules anioniques, des polymères anioniques et des composés constitués d'un squelette formé d'un nombre discret u compris entre 1 et 3 (1 .É u É 3) d'unités saoeharidiques identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes naturellement porteurs de groupes carboxyles ou substitués par des groupes carboxyles. [000268] Il est connu de l'homme de l'art que le délai d'action des insulines est dépendant de la concentration en insuline. Seules les valeurs de délai d'action des formulations à 100 Ul/mL sont documentées. [000269] Les formulations d'insuline humaine « regular » sur le marché à une concentration de 600 pM (100 LJI/mL) ont un délai d'action compris entre 50 et 90 minutes et une fin d'action d'environ 360 à 420 minutes chez l'humain. Le temps pour atteindre la concentration maximale en insuline dans le sang est compris entre 90 et 180 minutes chez l'humain. [000270] Les formulations d'insulines analogues rapides sur le marché à une concentration de 600 pM (100 UI/mL) ont un délai d'action compris entre 30 et 60 minutes et une fin d'action d'environ 240-300 minutes chez l'humain. Le temps pour atteindre la concentration maximale en insuline dans le sang est compris entre 50 et 90 minutes chez l'humain. [000271] L'invention concerne également une méthode de préparation d'une formulation d'insuline humaine ayant une concentration en insuline comprise entre 240 et 3000 pM (40 et 500 Ul/mL), dont le délai d'action chez l'humain est inférieur à celui de la formulation de référence à la même concentration en insuline en l'absence de composé anionique substitué caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'addition à ladite brmulation d'au moins un composé anionique substitué, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels carboxyfes non substitués étant salifiables [000272] Dans un mode de réalisation, la méthode comprend en outre une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé polyanionique. [000273] L'invention concerne égaiement une méthode de préparation d'une formulation d'insuline humaine ayant une concentration en insuline comprise entre 600 et 1200 pM (100 et 200E11/nt), dont le délai d'action chez l'humain est inférieur à celui de la formulation de référence à la même concentration en insuline en l'absence de composé anionique substitué caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique substitué, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels carboxyles non substitués étant salifiables. [000274] Dans un mode de réalisation, la méthode comprend en outre une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé polyanionique. [000275] L'invention concerne également une méthode de préparation d'une formulation d'insuline humaine ayant une concentration en insuline de 600 pM (100 UI/mL), dont le délai d'action chez l'humain est inférieur à 60 minutes caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique substitué, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels carboxyles non substitués étant salifiables. [000276] Dans un mode de réalisation, la méthode comprend en outre une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé polyanionique. [000277] Dans un mode de réalisation, l'insuline est sous forme hexarnèrique. [000278] L'invention concerne également une méthode de préparation d'une formulation d'insuline humaine ayant une concentration en insuline de 1200 pM (200 UI/mL), dont le délai d'action chez l'humain est inférieur d'au moins 10% à celui de la formulation de l'insuline humaine à la même concentration (200 UI/mL) et en l'absence de composé anionique substitué caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique substitué, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels carboxyles non substitués étant salifiables. [000279] Dans un mode de réalisation, la méthode comprend en outre une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé polyanionique. 95 [000280] L'invention consiste en la préparation d'une formulation d'insuline humaine dite rapide caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique substitué, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels 30 carboxyles non substitués étant salifiables. [000281] Dans un mode de réalisation, la méthode comprend en outre une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé polyanionique. [000282] Dans un mode de réalisation, l'insuline est sous forme hexamèrique. 35 [000283] L'invention concerne également une méthode de préparation d'une formulation d'insuline humaine à une concentration de 600 pM (100 UI/mL) dont le délai d'action chez l'humain est inférieur à 60 minutes, de préférence inférieur à 45 minutes, et encore de préférence inférieur à 30 minutes caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique substitué, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels carboxyles non substitués étant salifiables. [000284] Dans un mode de réalisation, la méthode comprend en outreune étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé polyanionique. [000285] Dans un mode de réalisation, l'insuline est sous forme hexamerique. [000286] L'invention concerne également une méthode de préparation d'une formulation d'insuline analogue ayant une concentration en insuline comprise entre 240 et 3000 pM (40 et 500 UI/mL), dont le délai d'action chez l'humain est inférieur à celui de la formulation de référence à la même concentration en insuline en l'absence de composé anionique substitué caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique substitué, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels carboxyles non substitués étant salifiables. [000287] Dans un mode de réalisation, la méthode comprend en outre une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé polyanionique. [000288] L'invention concerne également une méthode de préparation d'une formulation d'insuline analogue ayant une concentration en insuline comprise entre 600 et 1200 pM (100 et 200 UI/mL), dont le délai d'action chez l'humain est inférieur à celui de la formulation de référence à la même concentration en insuline analogue en l'absence de composé anionique substitué composé anionique substitué, caractérisée en ce qu'elfe comprend une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique substitué, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels carboxyles non substitués étant salifiables [000289] Dans un mode de réalisation, la méthode comprend en outre une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé polyanionique. [000290] L'invention concerne également une méthode de préparation d'une formulation d'insuline analogue ayant une concentration en insuline de 600 pmol/L (100 UI/mL), dont le délai d'action chez l'humain est inférieur à 30 minutes, caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique substitué, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels carboxyles non substitués étant salifiables. [000291] Dans un mode de réalisation, la méthode comprend en outre une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé polyanionique. [000292] Dans un mode de réalisation, l'insuline est sous forme hexamèrique. [000293] L'invention concerne également une méthode de préparation d'une formulation d'insuline analogue ayant une concentration en insuline de 1200 pM (200 UI/mL), dont le délai d'action chez l'humain est inférieur d'au moins 10% à celui de la formulation de l'insuline analogue en l'absence de composé anionique substitué caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique substitué, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels carboxyles non substitués étant salifiables. [000294] Dans un mode de réalisation, la méthode comprend en outre une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé polyanionique. [000295] L'invention consiste en la préparation d'une formulation d'insuline analogue dite très rapide caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique substitué, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels carboxyles non substitués étant salifiables [000296] Dans un mode de réalisation, la préparation comprend en outre une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé polyanionique. [000297] Dans un mode de réalisation, l'insuline est sous forme hexamèrique. [000298] Dans un mode de réalisation l'insuline analogue est choisie dans le groupe constitué par l'insuline lispro (HumalogC)), l'insuline aspart (Novologe, Novorapid()) et l'insuline glulisine (Apidra0). [000299] Dans un mode de réalisation, l'insuline analogue est l'insuline lispro (HumalogC)). [000300] Dans un mode de réalisation, l'insuline analogue est l'insuline aspart (Novolog®, Novorapid®). [000301] Dans un mode de réalisation, l'insuline analogue est l'insuline glulisine (Apidra®). [000302] Dans un mode de réalisation, l'insuline est une insuline humaine recombinante telle que décrite dans la Pharmacopée Européenne et la Pharmacopée américaine. [000303] Dans un mode de réalisation, l'insuline est une insuline analogue choisie dans le groupe constitué par l'insuline lispro (HumalogQ), l'insuline aspart (Novolog0 Novorapid()) et l'insuline glulisine (Apidra()). [000304] La composition peut de plus être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse d'insuline humaine ou analogue et d'une solution aqueuse de composé anionique substitué en mélange avec un composé polyanionique. [000305] Dans un mode de réalisation, la composition peut être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse d'insuline humaine ou analogue, d'une solution aqueuse de composé anionique substitué et de composé polyanionique en solution ou sous forme de lyophilisat. [000306] Dans un mode de réalisation, la composition peut être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse d'insuline humaine ou analogue, de composé anionique substitué sous forme de lyophilisat et de composé polyanionique en solution ou sous forme de lyophilisat. [000307] De préférence cette composition est sous forme d'une solution injectable. [000308] Dans un mode de réalisation, la concentration en insuline humaine ou analogue est comprise entre 240 et 3000 pM (40 à 500 UI/mL). [000309] Dans un mode de réalisation, la concentration en insuline humaine ou analogue est comprise entre 600 et 1200 pM (100 à 200 UI/mL). [000310] Dans un mode de réalisation, la concentration en insuline humaine ou analogue est 600 pM (100 UI/mL). [000311] Dans un mode de réalisation, la concentration en insuline humaine ou analogue est 1200 pM (200 UI/mL). [000312] Dans un mode de réalisation, la concentration en insuline humaine ou analogue de 600 uM (100 UI/mL) peut être réduite par simple dilution, en particulier pour les applications pédiatriques. [000313] L'invention concerne également une formulation pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce qu'elle est obtenue par séchage et/ou lyophilisation. [000314] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre l'addition de sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 500 pM. [000315] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre l'addition de sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 300 pM. [000316] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre l'addition de sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 200 pM. [000317] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent des tampons à des concentrations comprises entre 0 et 100 mM, de préférence entre 0 et 50 mM ou entre 15 et 50 mM. [000318] Dans un mode de réalaistion le tampon est le Tris. [000319] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des conservateurs. [000320] Dans un mode de réalisation, les conservateurs sont choisis dans le groupe constitué par le m-crésol et le phénol seuls ou en mélange. [000321] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateurs est comprise entre 10 et 50 mM. [000322] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateurs est comprise entre 10 et 40 mM. [000323] Les compositions selon l'invention peuvent en outre comprendre des additifs tels que des agents de tonicité comme la glycérine, le chlorure de sodium (NaCI), le mannitol et la glycine. [000324] Les compositions selon l'invention peuvent en outre comprendre des 90 additifs conformes aux pharmacopées comme des tensioactifs par exemple du polysorbate. [000325] Les compositions selon l'invention peuvent comprendre en outre tous les excipients conformes aux pharmacopées et compatibles avec les insulines utilisées aux concentrations d'usage. 25 [000326] Dans le cas des libérations locale et systémique, les modes d'administration envisagés sont par voie intraveineuse, sous-cutanée, intradermique ou intramusculaire. [000327] Les voies d'administration trarrsdermique, orale, nasale, vaginale, oculaire, buccale, pulmonaire sont également envisagées. 30 [000328] L'invention concerne également l'utilisation d'une composition selon l'invention pour la formulation d'une solution d'insuline humaine ou analogue de concentration de 100 UI/mL destinée aux pompes à insuline implantables ou transportables. [000329] L'invention concerne également l'utilisation d'une composition selon 35 l'invention pour la formulation d'une solution d'insuline humaine ou analogue de concentration de 200 UI/mL destinée aux pompes à insuline implantables ou transportables. [000330] L'invention est illustrée par les exemples suivants. 32 Exemptes AA Composés anioniques sub Composé i j Enchaînement saccharidique Substituant Substituant -R'1 -[Ri]e-[AAlm 1 0,65 1,0 ,--../,' r ' ..,...., 0P,Ja o L>7.,_*---\ o H N 0 Na 0 111 2 1,0 0,65 ,',:.-\ ---''';'' ONa le0 Fi 0 \ >:_:^- f'7"--5-(_ .,-- , o C)1\13 o H 0 L,,,-----, -.,/"--,, .', N ONa .111 4 0,35 0,65 k..,/,' ,,,_- V, o ON a o H N o ONa 0 AM- Composé 1 Maltotrioseméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium [000331] A 8 g (143 mmol de fonctions hydroxyles) de maltotriose (CarboSynth) dissouts dans de l'eau à 65°C est ajouté 0,6 g (16 mmol) de borohydrure de sodium Après 30 min d'agitation, 28 g (238 mmol) de chloroacétate de sodium sont ajoutés. A cette solution sont ensuite ajoutés goutte à goutte 24 mL de NaOH 10 N (24 mmol) puis le mélange est chauffé à 65°C pendant 90 minutes. 16,6 g (143 mmol) de chloroacétate de sodium sont ensuite ajoutés au milieu réactionnel ainsi que 14 mL de NaOH lON (14 mmol) au goutte à goutte. Après 1h de chauffage, le mélange est dilué avec de l'eau, neutralisé avec de l'acide acétique puis purifié par ultrafiltration sur membrane PES de 1 kDa contre de l'eau. La concentration en molécule de la solution finale est déterminée par extrait sec, puis un dosage acide/base dans un mélange eau/acétone 50/50 (V/V) est effectué pour déterminer le degré de substitution en méthylcarboxylate. [000332] D'après l'extrait sec : [composé] = 32,9 mg/g [000333] D'après le dosage acide/base, le degré de substitution en méthylcarboxylate est de 1,65 par unité saccharidique. [000334] La solution de maltotrioseméthylcarboxylate de sodium est acidifiée sur une résine Purolite (anionique) pour obtenir l'acide maltotrioseméthylcarboxylique qui est ensuite lyophilisé pendant 18 heures. [000335] 10 g d'acide maltotrioseméthylcarboxylique (63 mmol de fonctions acide méthylcarboxylique) sont solubilisés dans le DMF puis refroidis à 0°C. Un mélange de phénylalaninate d'éthyle, sel d'hydrochlorure (8,7 g, 38 mmol) dans du DMF est préparé. 3,8 g de triéthylamine (38 mmol) sont ajoutés à ce mélange. Une solution de NMM (6,3 g, 63 mmol) et de EtOCOCI (6,8 g, 63 mmol) est ensuite ajoutée au mélange à 0°C. La solution de phénylalaninate d'éthyle est ensuite ajoutée et le mélange agité à 10°C. Une solution aqueuse d'imidazole est ajoutée puis le mélange chauffé à 30°C. Le milieu est dilué avec de l'eau puis la solution obtenue est purifiée par ultrafiltration sur membrane PES de 1 kDa contre NaOH 0,1 N, NaCI 0,9% et de l'eau. La concentration en molécule de la solution finale est déterminée par extrait sec. Un échantillon de solution est lyophilisé et analysé par RMN 1H dans D20 pour déterminer le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par le L-phénylalaninate de sodium. [000336] D'après l'extrait sec : [composé 1] = 29,4 mg/g [000337] D'après le dosage acide/base, le degré de substitution en méthylcarboxylate par unité saccharidique est de 0,65. [000338] D'après la RMN 11-I : le degré de substitution en méthyicarboxylates fonctionnalisés par le L-phénylalaninate de sodium par unité saccharidique est de 1,0. AA2. Composé 2: Maltotrioseméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium [000339] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du composé 1, un maltotriosecarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium est obtenu. D'après le dosage acide/base, le degré de substitution en méthylcarboxylates de sodium par unité saccharidique est de 1,0. [000340] D'après l'extrait sec : [composé 2] = 20,2 mg/g [000341] D'après la RMN : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par le L-phénylalaninate de sodium par unité saccharidique est de 0,65. AA3. Composé 3: Maltotrioseméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium [000342] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du composé 1, un maltotriosecarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium est obtenu. D'après le dosage acide/base, le degré de substitution en méthylcarboxylates de sodium par unité saccharidique est de 0,46. [000343] D'après l'extrait sec : [composé 3] = 7,2 mg/g [000344] D'après la RMN 11-1 : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par le L-phényialaninate de sodium par unité saccharidique est de 1,2. AA4. Composé 4: Maltotrioseméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium [000345] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du composé 1, un maltotriosecarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium est obtenu. D'après le dosage acide/base, le degré de substitution en méthylcarboxylates de sodium par unité saccharidique est de 0,35. [000346] D'après l'extrait sec [composé 4] = 3,1 mg/g [000347] D'après la RMN 1-1-1 : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par le L-phénylalaninate de sodium par unité saccharidique est de 0,65. AB Polysaccharides contre-exemples ABL Polysaccharide 1. Dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phényialaninate de sodium. [000348] Le polysaccharide 1 est un dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium obtenu à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids 10 kg/mol (DP = 39, Pharmacosmos) selon le procédé décrit dans fa demande de brevet FR 07/02316. D'après le dosage acide/base, le degré de substitution en méthylcarboxylates de sodium par unité saccharidique est de 0,6. [000349] D'après la RMN 'I-1 : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalises par le L-phénylalaninate de sodium par unité saccharidique est de 0,46. [000350] Ce polysaccharide correspond au polysaccharide 1 de la demande FR0901478. AB2. Polysaccharide 2: Dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium. [000351] Le polysaccharide 2 est un dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium obtenu à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids 5 kg/mol (DP = 19, Pharmacosmos) selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR 07/02316. D'après le dosage acide/base, le degré de substitution en méthylcarboxylates de sodium par unité saccharidique est de 1,01. [000352] D'après la RMN 1.1-1 le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par le L-phénylalaninate de sodium par unité saccharidique est de 0,64. AB3. Polysaccharide 3: Dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium. [000353] Le polysaccharide 3 est un dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium obtenu à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids 5 kg/mol (DP = 19, Pharmacosmos) selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR 07/02316. D'après le dosage acide/base, le degré de substitution en méthylcarboxylates de sodium par unité saccharidique est de 0,65. [000354] D'après la RMN : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par le L-phénylalaninate de sodium par unité saccharidique est de 0,45. AB4. Polysaccharide 4: Dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium. [000355] Le polysaccharide 4 est un dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium obtenu à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids 10 kg/mol (DP = 39, Pharmacosmos) selon le procédé décrit dans fa demande de brevet FR 07/02316. D'après le dosage acide/base, le degré de substitution en méthylcarboxylates de sodium par unité saccharidique est de 1,01. [000356] D'après la RMN 11-1 : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par le L-phényialaninate de sodium par unité saccharidique est de 0,64. ABS. Polysaccharide 5 : Dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium. [000357] Le polysaccharide 5 est un dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le L-phénylalaninate de sodium obtenu à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids 5 kg/mol (DP = 19, Pharmacosmos) selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR 07/02316. D'après le dosage acide/base, le degré de substitution en méthylcarboxylates de sodium par unité saccharidique est de 0,45. [000358] D'après la RMN '1-1 : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par le L-phénylalaninate de sodium par unité saccharidique est de 0,65. AC Composé polyanioniques Composé polyanionique 1 : Maltotrioseméthylcarboxylate de sodium [000359] A 8 g (143 mmol de fonctions hydroxyles) de maltotriose (CarboSynth) dissouts dans de l'eau à 65°C est ajouté 0,6 g (16 mmol) de borohydrure de sodium. Après 30 min d'agitation, 28 g (238 mmol) de chloroacétate de sodium sont ajoutés. A cette solution sont ensuite ajoutés goutte à goutte 24 mL de NaOH 10 N (24 mmol) puis le mélange est chauffé à 65°C pendant 90 minutes. 16,6 g (143 mmol) de chloroacétate de sodium sont ensuite ajoutés au milieu réactionnel ainsi que 14 mL de NaOH 10 N (14 mmol) au goutte à goutte. Après 1h de chauffage, le mélange est dilué avec de l'eau, neutralisé avec de l'acide acétique puis purifié par ultrafiltration sur membrane PES de 1 kDa contre de l'eau. La concentration en molécule de la solution finale est déterminée par extrait sec, puis un dosage acide/base dans un mélange eau/acétone 50/50 (V/V) est effectué pour déterminer le degré de substitution en méthylcarboxylate. [000360] D'après l'extrait sec : [Composé polyanionique 1] = 32,9 mg/g [000361] D'après le dosage acide/base : le degré de substitution en méthylcarboxylates de sodium par unité saccharidique est de 1,65. AC2. Composé polyanionique 2 : Dextraneméthylcarboxylate de sodium. [000362] 40 g (0,74 mol de fonctions hydroxyles) de dextrane de masse molaire moyenne en poids 1 kg/mol (DP = 4, Pharmacosmos) et 144 g (1,23 mol) de chloroacétate de sodium sont dissouts dans l'eau à 60°C. A cette solution sont ajoutés goutte à goutte 123 mL de NaOH 10 N (1,23 mol) puis le mélange est chauffé à 60°C pendant 90 minutes. 86,3 g (0,74 mol) de chloroacétate de sodium sont ensuite ajoutés au milieu réactionnel ainsi que 74,1 mL de NaOH 10 N (0,74 mol) au goutte à goutte. Après 1h de chauffage, le mélange est dilué avec de l'eau, neutralisé avec del'acide acétique puis purifié par ultrafiltration sur membrane PES de 1 kDa contre de l'eau. La concentration en oligosaccharide de la solution finale est déterminée par extrait sec, puis un dosage acide/base dans un mélange eau/acétone 50/50 (V/V) est effectué pour déterminer le degré de substitution en méthylcarboxylate. [000363] D'après l'extrait sec : [Composé polyanionique 2] = 34,4 mg/g [000364] D'après le dosage acide/base, le degré de substitution en méthylcarboxylates de sodium par unité saccharidique est de 1,65. B Préparation des solutions Bi. Solution d'insuline analogue rapide Novolog® à 100 UI/mL. [000365] Cette solution est une solution commerciale d'insuline aspart de Novo Nordisk vendue sous le nom de NovoiogC). Ce produit est une insuline aspart analogue rapide. B2. Solution d'insuline analogue rapide Humaloge à 100 UI/mL. [000366] Cette solution est une solution commerciale d'insuline lispro d'El Lilly vendue sous le nom de HumalogC). Ce produit est une insuline analogue rapide. B3. Solution d'insuline humaine régulière Actrapid à 100 UI/mL. [000367] Cette solution est une solution commerciale d'insuline humaine de Novo Nordisk vendue sous le nom d'ActrapidC). Ce produit est une insuline humaine régulière. B4. Solution d'insuline humaine régulière Humulin Re à 100 UI/mL. [000368] Cette solution est une solution commerciale d'insuline humaine d'Eli Lilly vendue sous le nom de Humulin RCD. Ce produit est une insuline humaine régulière. B5. Préparation des solutions d'excipients [000369] Préparation d'une solution de citrate de sodium à 1,188 M. [000370] Une solution de citrate de sodium est obtenue en solubilisant 9,0811 g de citrate de sodium (30,9 mmol) dans 25 mL d'eau dans une fiole jaugée. Le pH est ajusté exactement à 7,4 par ajout de 1 mL d'HO 1 M. La solution est filtrée sur 0,22 [m. Préparation d'une solution de m-crésol 130 mM. [000371] Une solution de m-crésol est obtenue en solubilisant 14,114 g de m-crésol (130 mmol) dans 986,4 mL d'eau dans une fiole jaugée de 1 L.35 Préparation d'une solution de m-crésol et glycérine (96,6 mM m-crésol et 566 mM glycérine). [000372] 73,3 g de la solution de m-crésol à 130 mM sont ajoutés à 5,26 g de glycérine et ensuite dilués par ajout de 22,25 g d'eau. La solution obtenue de m-crésol et glycérine est homogénéisée pendant 30 minutes puis filtrée sur une membrane 0,22 pm. Préparation d'une solution de Tween 20 à 32,7 mM. [000373] Une solution de Tween 20 est obtenue en solubilisant 2,0079 g de Tween 20 (1,636 mmop dans 50 mL d'eau dans une fiole jaugée. La solution est filtrée sur une membrane 0,22 pm, B6. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 500 UI/mL. [000374] 15 g d'eau sont ajoutés à 563,6 mg d'insuline humaine, puis le pH est abaissé à pH acide par ajout de 5,98 g d'HCI 0,1 N. Après solubilisation complète de l'insuline à pH acide, la solution est neutralisée à pH 7,2 par ajout de 8,3 mL de NaOH 0,1 N. La concentration est ensuite ajustée à 500 UI/mL par ajout de 0,76 g d'eau. La solution est enfin filtrée sur une membrane 0,22 pm. 87. Préparation d'une solution d'insuline iispro à 100 UI/ml en présence du composé 1 [000375] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[lispro] de 2,0, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous et dans l'ordre suivant : Composé 1 lyophilisée 730 mg Solution commerciale Flumalog 100 UI/ml 100 mL [000376] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000377] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B8. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/ml en présence du composé 1 et de citrate [000378] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[lispro] de 2,0 et une concentration de 9,3 mM de citrate, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous et dans l'ordre suivant : Composé 1 lyophilisé 730 mg Solution commerciale Flumalogc) 100 UI/ml 100 mL Solution de citrate de sodium à 1,188 M 783 pL [000379] Pour le citrate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000380] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000381] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B9. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/ml en présence du composé 1 et du composé polyanionique 1 [000382] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[composé polyanionique 1]/[lispro] de 2,0/2,0/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous et dans l'ordre suivant : Composé 1 lyophilisé 730 mg Composé polyanionique 1 lyophilisé 730 mg Solution commerciale Humalog®100 UT/mi 100 mL [000383] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000384] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B10. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/ml en présence du composé 1 et du composé polyanionique 1 [000385] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[composé polyanionique 1]/[lispro] de 2,0/5,5/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous et dans l'ordre suivant Composé 1 lyophilisé 730 mg Composé polyanionique 1 lyophilisé 2000 mg Solution commerciale Humaloge 100 UI/ml 100 mL [000386] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000387] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B11. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/ml en présence du composé 2 et de citrate [000388] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[lispro] de 2,0 et une concentration de 9,3 rnM de citrate, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous et dans l'ordre suivant : Composé 2 lyophilisé 730 mg Solution commerciale Humalog 100 UI/ml 100 mL Solution de citrate de sodium à 1,188 M 783 pL [000389] Pour le citrate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000390] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000391] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B12. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/ml en présence du composé 2 et du composé polyanionique 1 [000392] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[composé polyanionique 1]/[lispro] de 2,0/2,0/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous et dans l'ordre suivant : Composé 2 lyophilisé 730 mg Composé polyanionique 1 lyophilisé 730 mg Solution commerciale Humaloge100 Ut/mi 100 mL [000393] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000394] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B13. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UT/ml en présence du composé 2 et du composé polyanionique 1 [000395] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[composé polyanionique 1]/[lispro] de 2,0/5,5/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous et dans l'ordre suivant : Composé 2 lyophilisé 730 mg Composé polyanionique 1 lyophilisé 2000 mg Solution commerciale Humalog® 100 UI/ml 100 mL [000396] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000397] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B14. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/ml en présence du composé 1 et du composé polyanionique 2 [000398] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[composé polyanionique 2]/[lispro] de 2,0/5,5/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous et dans l'ordre suivant : Composé 1 lyophilisé 730 mg Composé polyanionique 2 lyophilisé 2000 mg Solution commerciale Humalog® 100 UI/ml 100 mL [000399] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000400] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C, B15. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/ml en présence du composé 2 et du composé polyanionique 2 [000401] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[composé polyanionique 2]/[lispro] de 2,0/5,5/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous et dans l'ordre suivant : Composé 2 lyophilisé 730 mg Composé polyanionique 2 lyophilisé 2000 mg Solution commerciale Humalog® 100 UI/ml 100 mL [000402] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000403] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B16. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 1 à 14,6 mg/mL. [000404] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[insuline lispro] de 4, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées : Composé 1 sous forme lyophilisée 1460 mg Solution commerciale Humaiog® 100 UI/ml 100 mL [000405] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B17. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 à 14,6 mg/mL. [000406] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[insuline lispro] de 4, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées : Composé 2 sous forme lyophilisée 1460 mg Solution commerciale Humaloge 100 UI/ml 100 mL [000407] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B18. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 80 mM de tartrate de sodium. [000408] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 80 mM de tartrate de sodium, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog 100 U1/ml 100 mL Tartrate de sodium 1,552 g [000409] Pour le tartrate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000410] Le pH final est ajusté à 7,4 E 0,4. [000411] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B19. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 tii/mL en présence du composé 1 et de 60 mM de phosphate. [000412] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 60 mM de phosphate, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog 100 UI/ml 100 mL Na2HPO4,12H-20 2,148 g [000413] Pour le phosphate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000414] Le pH final est ajusté à 7,4 0,4. [000415] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B20. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UT/mL en présence du composé 1 et de 80 mM d'aspartate de sodium. [000416] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 80 mM d'aspartate de sodium, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog® 100 UI/m1 100 mL Aspartate de sodium 1,416 g [000417] Pour l'aspartate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000418] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000419] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B21. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 100 mM de glutamate de sodium. [000420] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[insuline lispro} de 2,0 et une concentration de 100 mM de glutamate de sodium, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog 100 UI/ml 100 mL Glutamate de sodium 1,691 g [000421] Pour le glutamate, on peut utiliser, la forme acide ou fa forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000422] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000423] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B22. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 60 mM d'acide malique. [000424] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 60 mM d'acide malique, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog 100 UT/mi 100 mL Acide malique 0,805 g [000425] Pour l'acide malique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000426] Le pH final est ajusté à 7,4 ± [000427] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B23. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UT/mL en présence du composé 1 et de 80 mM de succinate de sodium. [000428] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 80 mM de succinate de sodium, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog® 100 UT/mi 100 mL Succinate de sodium 1,296 g [000429] Pour le succinate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000430] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000431] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 [1M et stockée à 4°C. B24. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 50 mM d'adipate de sodium. [000432] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 50mM d'adipate de sodium, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humaloge 100 UI/ml 100 mL Adipate de sodium 0,951g [000433] Pour l'adipate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000434] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000435] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B25. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 10 mM d'oxalate de sodium. [000436] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 10 mM d'oxalate de sodium, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog® 100 UT/mi 100 mL Oxalate de sodium 134 mg [000437] Pour l'oxalate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000438] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. [000439] La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C.35 B26. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 14,6 mg/mL d'acide polyglutamique. [000440] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [Composé 1]/[acide polyglutamique]/[insuline lispro] de 2/4/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Acide polyglutamique sous forme lyophilisée 1460 mg Solution commerciale Humalog° 100 UI/ml 100 mL [000441] Pour l'acide polyglutamique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000442] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B27. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 14,6 mg/mL d'acide polyaspartique. [000443] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [Composé 1]/[acide polyaspartique]/[insuline lispro] de 2/4/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Acide poiyaspartique sous forme lyophilisée 1460 mg Solution commerciale Humalog° 100 UI/ml 100 mL [000444] Pour l'acide poryaspartique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000445] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B28. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 14,6 mg/mL de composé polyanionique 1. [000446] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[composé polyanionique 1]/[insuline lispro] de 2/4/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Composé polyanionique 1 sous forme lyophilisée 1460 mg Solution commerciale Humalog° 100 UT/mi 100 mL [000447] Le composé polyanionique 1 peut être utilisé sous la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000448] Le pH final est ajusté à 7,4 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B29. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 7,3 mg/mL de triphosphate de sodium. [000449] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[triphosphate]/[insuline lispro] de 2/2/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Triphosphate ou polyphosphatede sodium 730 mg Solution commerciale Humalog® 100 UI/m1 100 mL [000450] Pour le triphosphate ou polyphosphate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000451] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4, La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B30. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 14,6 mg/mL de pory(acide acrylique). [000452] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[poly(acide acrylique)]/[insuline lispro] de 2/4/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Poly(acide acrylique) sous forme lyophilisée 1460 mg Solution commerciale Humalog® 100 U1/ml 100 mL [000453] Pour le poly(acide acrylique), on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000454] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B31. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé let de 14,6 mg/mL d'alginate de sodium (bas poids moléculaire). [000455] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[alginate de sodium]/rinsuline lispro] de 2/4/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Alginate de sodium 1460 mg Solution commerciale Humalog® 100 UI/m1 100 mL [000456] Pour l'alginate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000457] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 prn et stockée à 4°C. B32. Préparation d'une solution d'insuline iispro à 100 UT/mL en présence du composé 1 et de 21,9 mg/mL de polymère à base d'acide glucuronique. [000458] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[polymère à base d'acide glucuronique]/[insuline lispro] de 2/6/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Polymère à base d'acide glucuronique 2190 mg Solution commerciale Humalog® 100 UI/ml 100 mL [000459] Pour les polymères à base d'acide glucuronique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000460] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B33. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 U1/mL en présence du composé 1 et de 21,9 mg/mL de polymère à base d'acide galacturonique. [000461] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[polymère à base d'acide galacturonique]/[insuline lispro] de 2/6/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Polymère à base d'acide galacturonique 2190 mg Solution commerciale Humalog 100 UI/mi 100 mL [000462] Pour les polymères à base d'acide galacturonique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000463] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B34. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 Ul/mL en présence du composé 1 et de 21,9 mg/mL polymère à base d'acide hyaluronique. [000464] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 1]/[polymère à base d'acide hyaluronique]/[insuline lispro] de 2/6/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 1 sous forme lyophilisée 730 mg Polymère à base d'acide hyaluronique 2190 mg Solution commerciale Humaloge 100 UI/m1 100 mL [000465] Pour les polymères à base d'acide hyaluronique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000466] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B35. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UT/mL en présence de composé 2 et de 80 mM de tartrate de sodium. [000467] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 80 mM de tartrate de sodium, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog® 100 UT/m1 100 mL Tartrate de sodium 1,552 g [000468] Pour le tartrate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000469] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B36. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 U1/mL en présence du composé 2 et de 60 mM de phosphate. [000470] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 60 mM de phosphate, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humaloe 100 UT/mi 100 mL Na,1-1PO4,12H20 2,148 g [000471] Pour le phosphate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000472] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B37. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 80 mM d'aspartate de sodium. [000473] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 80 mM d'aspartate de sodium, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog® 100 Ur/mi 100 mL Aspartate de sodium 1,416 g [000474] Pour l'aspartate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000475] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B38. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 100 mM de glutamate de sodium. [000476] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 100 mM de glutamate de sodium, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog 100 Ul/m1 100 mL Glutamate de sodium 1,691 g [000477] Pour le glutamate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000478] Le pH final est ajusté à 7,4 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B39. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 60 mM d'acide malique. [000479] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 60 mM d'acide malique, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog 100 UT/mi 100 mL Acide malique 0,805 g [000480] Pour l'acide malique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000481] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B40. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 80 mM de succinate de sodium. [000482] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 80 mM de succinate de sodium, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog® 100 UI/ml 100 mL Succinate de sodium 1,296 g [000483] Pour le succinate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000484] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B41. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 50 mM d'adipate de sodium. [000485] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 50 mM d'adipate de sodium, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog 100 UI/ml 100 mL Adipate de sodium 0,951 g [000486] Pour l'adipate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000487] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C.35 B42. Préparation d'une solution d'insuline analogue lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 10 mM d'oxalate de sodium. [000488] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[insuline lispro] de 2,0 et une concentration de 10 mM d'oxalate de sodium, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Solution commerciale Humalog® 100 LJI/m1 100 mL Oxalate de sodium 134 mg [000489] Pour l'oxalate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000490] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 urn et stockée à 4°C. B43. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 14,6 mg/mL d'acide polyglutamique. [000491] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[acide polyglutamique]/[insuline lispro] de 2/4/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous ; Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Acide polyglutamique sous forme lyophilisée 1460 mg Solution commerciale Humalog® 100 Ul/m1 100 mL [000492] Pour l'acide polyglutamique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000493] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 um et stockée à 4°C. B44. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 14,6 mg/mL d'acide polyaspartique. [000494] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[acide polyaspartique]/[insuline lispro] de 2/4/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Acide polyaspartique sous forme lyophilisée 1460 mg Solution commerciale Humalog® 100 UI/m1 100 mL [000495] Pour l'acide polyaspartique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000496] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B45. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 14,6 mg/mL de composé polyanionique 1. [000497] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[composé polyanionique 1]/[insuline lispro] de 2/4/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Composé polyanionique 1 sous forme lyophilisée 1460 mg Solution commerciale Humaloge 100 LII/m1 100 mL [000498] Le composé polyanionique 1 peut être utilisé sous la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000499] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4 La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B46. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 7,3 mg/mL de triphosphate de sodium. [000500] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[triphosphate]/[insuline lispro] de 2/2/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Triphosphate ou polyphosphate de sodium 730 mg Solution commerciale Humaloge 100 in/mi 100 mL [000501] Pour le triphosphate ou polyphosphate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000502] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 [IM et stockée à 4°C. B47. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 14,6 mg/mL de poly(acide acrylique). [000503] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[poly(acide acrylique)]/[insuline lispro] de 2/4/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Poly(acide acrylique) sous forme lyophilisée 1460 mg Solution commerciale Humaloge 100 UI/ml 100 mL [000504] Pour le poly(acide acrylique), on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000505] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B48. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 Ur/mL en présence du composé 2 et de 14,6 mg/mL d'alginate de sodium (bas poids moléculaire). [000506] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[alginate de sodium]/[insuline lispro] de 2/4/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Alginate de sodium 1460 mg Solution commerciale Humalog° 100 Ur/mi 100 mL [000507] Pour l'alginate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000508] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B49. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 21,9 mg/mL de polymère à base d'acide glucuronique. [000509] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[polymère à base d'acide glucuronique]/[insuline lispro] de 2/6/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Polymère à base d'acide glucuronique 2190 mg Solution commerciale Hurnalog 100 UT/m1 100 mL [000510] Pour les polymères à base d'acide glucuronique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000511] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B50. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 Ur/mL en présence du composé 2 et de 21,9 mg/mL de polymère à base d'acide galacturonique. [000512] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[polymère à base d'acide galacturonique]/[insuline lispro] de 2/6/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous : Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Polymère à base d'acide galacturonique 2190 mg Solution commerciale Humaloge 100 UI/mi 100 mL [000513] Pour les polymères à base d'acide galacturonique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000514] Le pH final est ajusté à 7,4 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B51. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 21,9 mg/mL polymère à base d'acide hyaluronique. [000515] Pour un volume final de 100 mL de formulation, avec un ratio massique [composé 2]/[polymère à base d'acide hyaluronique]/[insuline lispro] de 2/6/1, les différents réactifs sont additionnés dans les quantités spécifiées ci-dessous Composé 2 sous forme lyophilisée 730 mg Polymère à base d'acide hyaluronique 2190 mg Solution commerciale Humalog® 100 LlI/m1 100 mL [000516] Pour les polymères à base d'acide hyaluronique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000517] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B52, Préparation d'une solution d'insuline analogue (insuline lispro) à 200 UI/mL. [000518] La formulation commerciale d'insuline lispro (Humalog(D) a été concentrée en utilisant des tubes de centrifugation AMICON Ultra-15 avec une coupure à 3 kDa. Les tubes amicon ont tout d'abord été rincés avec 12 mL d'eau déionisée. 12 mL de la formulation commerciale ont été centrifugés pendant 35 minutes à 4000 g à 20°C. Le volume du rétentat a été mesuré et la concentration estimée par le volume de rétentat. Tous les rétentats ont été mis en commun et la concentration globale a été estimée (> 200 UI/mL). [000519] La concentration de cette solution de lispro concentrée a été ajustée à 200 UI/mL par addition de la formulation commerciale d'insuline lispro (Humalog()). La formulation concentrée d'insuline lispro concentrée présente les mêmes concentrations en excipients (m-crésol, glycérine, phosphate) que la formulation commerciale à 100 UI/mL. [000520] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B53. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 200 UI/mL en présence du composé 1 à 14,6 mg/mL et de 18,6 mM de citrate. [000521] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[Lispro] de 2, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline lispro à 200 UI/mL 100 mL Lyophilisat de composé 1 1460 mg Solution de citrate de sodium à 1,188 M 1570 pL [000522] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4.La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B54. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 200 UI/mL en présence du composé 1 à 14,6 mg/mL et de composé polyanionique 1 à 14,6 mg/mL. [000523] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[composé polyanionique 1]/[lispro] de 2/2/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline lispro à 200 UI/mL 100 mL Lyophilisat de composé 1 1460 mg Lyophilisat de composé polyanionique 1 1460 mg [000524] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B55. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 200 UI/mL en présence du composé 1 à 14,6 mg/mL et du composé polyanionique 1 à 29,2 mg/mL. [000525] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[composé polyanionique 1]/[lispro1 de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous. Insuline lispro à 200 UI/mL 100 mL Lyophilisat de composé 1 1460 mg Lyophilisat de composé polyanionique 1 2920 mg [000526] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 um et stockée à 4°C. B56. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 200 UI/mL en présence du composé 1 à 14,6 mg/mL et du composé polyanionique 2 à 29,2 mg/mL. [000527] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[composé polyanionique 2]/[lispro] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous. Insuline lispro à 200 UI/mL 100 mL Lyophilisat de composé 1 1460 mg Lyophilisat de composé polyanionique 2 2920 mg [000528] Le pH final est ajusté à 7,4 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B57. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 200 UI/mL en présence du composé 2 à 14,6 mg/mL et du composé polyanionique 1 à 29,2 mg/mL. [000529] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[composé polyanionique 1]/[lispro] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous. Insuline lispro à 200 UI/mL 100 mL Lyophilisat de composé 2 1460 mg Lyophilisat de composé polyanionique 1 2920 mg [000530] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B58. Préparation d'une solution d'insuline lispro à 200 UI/mL en présence du composé 2 à 14,6 mg/mL et du composé polyanionique 2 à 29,2 mg/mL. [000531] Pour un volume final de 100 mi_ de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[composé polyanionique 2]/[lispro] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous. Insuline lispro à 200 UI/mL 100 mL Lyophilisat de composé 2 1460 mg Lyophilisat de composé polyanionique 2 2920 mg [000532] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B59. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 80 mM de tartrate. [000533] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[insuline humaine] de 2 et 80 mM de tartrate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Tartrate de sodium 1,552 g [000534] Pour le tartrate, on peut utiliser, fa forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000535] Le pH final est de 7,4 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B60. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 80 mM de phosphate. [000536] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[insuline humaine] de 2 et 80 mM de phosphate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Na,HPO4,121-f20 2,864 g [000537] Pour le phosphate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000538] Le pH final est de 7,4 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B61. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 80 mM d'aspartate [000539] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[insuline humaine] de 2 et 80 mM d'aspartate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Aspartate de sodium 1,416 g [000540] Pour l'aspartate, on peut utiliser, fa forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000541] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B62. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 100 mM de glutamate. [000542] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[insuline humaine] de 2 et 100 mM de glutamate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Glutamate de sodium 1,691 g [000543] Pour le glutamate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000544] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B63. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 60 mM d'acide malique. [000545] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[insuline humaine] de 2 et 60 mM d'acide malique, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Acide malique 0,805 g [000546] Pour l'acide malique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000547] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B64. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 80 mM de succinate. [000548] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[insuline humaine] de 2 et 80 mM de succinate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Succinate de sodium 1,296 g [000549] Pour le succinate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000550] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B65. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 50 mM d'adipate. [000551] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[insuline humaine] de 2 et 50 mM d'adipate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Adipate de sodium 0,951 g [000552] Pour Vadipate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000553] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B66. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 10 mM d'oxalate. [000554] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[insuline humaine] de 2 et 10 mM d'oxalate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Oxalate de sodium 134 mg [000555] Pour l'oxalate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000556] Le pH final est de 7,4 d 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B67. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 14,6 mg/mL d'acide polyglutamique. [000557] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[acide polyglutamique]ninsuline humaine] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Acide polyglutamique 1460 mg [000558] Pour l'acide polyglutarnique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000559] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B68. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UT/mL en présence du composé 1 et de 14,6 mg/mL d'acide polyaspartique. [000560] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[acide polyaspartique]/[insuline humaine] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-crésol/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Acide polyaspartique 1460 mg [000561] Pour l'acide polyaspartique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000562] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B69. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 14,6 mg/mL du composé polyanionique 2. [000563] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[composé polyanionique 2]/[insuline humaine] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Composé polyanionique 2 1460 mg [000564] Le composé polyanionique 2 peut être utilisé sous la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000565] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B70, Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 7,3 mg/mL de triphosphate, [000566] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[triphosphate]/[insuline humaine] de 2/2/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Triphosphate ou polyphosphate de sodium 730 mg [000567] Pour le triphosphate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000568] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B71. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 14,6 mg/mL de poly(acide acrylique). [000569] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[poly(acide acrylique)]/[insuline] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Poly(acide acrylique) 1460 mg [000570] Pour le poly(acide acrylique), on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000571] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 um puis est placée à +4°C. B72. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 14,6 mg/mL d'alginate de sodium (bas poids moléculaire). [000572] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[alginate]/[insuline humaine] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-crésoi/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Alginate 1460 mg [000573] Pour l'alginate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000574] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B73. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 21,9 mg/mL de polymère à base d'acide glucuronique. [000575] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[polymère à base d'acide glucuronique]/[insuline humaine] de 2/6/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Polymère à base d'acide glucuronique 2190 mg [000576] Pour le polymère à base d'acide glucuronique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000577] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B74. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 21,9 mg/mL de polymère à base d'acide galacturonique. [000578] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[polymère à base d'acide galacturonique]/[insuline humaine] de 2/6/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-crésol/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Polymère à base d'acide galacturonique 2190 mg [000579] Pour de polymère à base d'acide galacturonique, on peut utiliser, la forme acide ou fa forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000580] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 uni puis est placée à +4°C. B75. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 21,9 mg/mL de polymère à base d'acide hyaluronique. [000581] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[polymère à base d'acide hyaluronique]/[insuline humaine] de 2/6/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Polymère à base d'acide hyaluronique 2190 mg [000582] Pour de polymère à base d'acide hyaluronique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000583] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B76. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 80 mM de tartrate. [000584] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[insuline humaine] de 2 et 80 mM de tartrate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Tartrate de sodium 1,552 g [000585] Pour le tartrate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000586] Le pH final est de 7,4 0,4. [000587] Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 urn puis est placée à +4°C. B77. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 80 mM de phosphate. [000588] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[insuline humaine] de 2 et 80 mM de phosphate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Na,HPO4,121-170 2,864 g [000589] Pour le phosphate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000590] Le pH final est de 7,4 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 um puis est placée à +4°C. B78. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 80 mM d'aspartate. [000591] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[insuline humaine] de 2 et 80 mM d'aspartate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Aspartate de sodium 1,416 g [000592] Pour l'aspartate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000593] Le pH final est de 7,4 E 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B79, Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 100 mM de glutamate. [000594] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[insuline humaine] de 2 et 100 mM de glutamate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 IJI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-crésol/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Glutamate de sodium 1,691 g [000595] Pour le glutamate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000596] Le pH final est de 7,4 J 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 jm puis est placée à +4°C. B80. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 60 mM d'acide malique. [000597] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[insuline humaine] de 2 et 60 mM d'acide malique, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Acide malique 0,805 g [000598] Pour l'acide malique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000599] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B81. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 80 mM de succinate. [000600] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[insuline humaine] de 2 et 80 mM de succinate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-crésol/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Succinate de sodium 1,296 g [000601] Pour le succinate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000602] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B82. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 50 mM d'adipate. [000603] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[insuline humaine] de 2 et 50 mM d'adipate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Adipate de sodium 0,951 g [000604] Pour l'adipate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000605] Le pH final est de 7,4 ± 0,4, Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. 883. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 10 mM d'oxalate. [000606] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[insuline humaine] de 2 et 10 mM d'oxalate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL IO Oxalate de sodium 134 mg [000607] Pour l'oxalate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000608] Le pH final est de 7,4 ± 0,4, Cette solution limpide est filtrée sur une 15 membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B84. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 14,6 mg/mL d'acide polyglutamique. [000609] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique 20 [composé 2]/[acide polyglutamique]/[insuline humaine] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL 25 Eau 28,95 mL Acide polyglutamique 1460 mg [000610] Pour l'acide polyglutamique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. 30 [000611] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 prn puis est placée à +4°C. B85. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 14,6 mg/mL d'acide polyaspartique. 35 [000612] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[acide polyaspartiquejninsuline humaine] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Acide polyaspartique 1460 mg [000613] Pour l'acide polyaspartique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000614] Le pH final est de 7,4 E 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B86. : Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 14,6 mg/mL de composé polyanionique 2. [000615] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2J/[composé polyanionique 2]/[insuline humaine] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Composé polyanionique 2 1460 mg [000616] Le composé polyanionique 2 peut être utilisé sous la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000617] Le pH final est de 7,4 0,4. [000618] Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à 25 +4°C. B87. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 7,3 mg/mL de triphosphate. [000619] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique 30 [composé 2]/[triphosphate]/[insuline humaine] de 2/2/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL 35 Eau 28,95 mL Triphosphate ou polyphosphate de sodium 730 mg [000620] Pour le triophosphate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000621] Le pH final est de 7,4 + 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. 688. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 14,6 mg/mL de poly(acide acrylique). [000622] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[poly(acide acrylique)]/[insuline humaine] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mi_ Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-crésol/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Poly(acide acrylique) 1460 mg [000623] Pour le poly(acide acrylique), on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000624] Le pH final est de 7,4 + 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 [..IM puis est placée à +4°C. 889. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 14,6 mg/mL d'alginate de sodium (bas poids moléculaire). [000625] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[alginate]/[insuline humaine] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-crésol/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Alginate 1460 mg [000626] Pour l'alginate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000627] Le pH final est de 7,4 + 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 um puis est placée à +4°C. B90. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 21,9 mg/mL de polymère à base d'acide glucuronique. [000628] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[polymère à base d'acide glucuronique]/[insuline humaine] de 2/6/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Polymère à base d'acide glucuronique 2190 mg [000629] Pour le polymère à base d'acide glucuronique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000630] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 um puis est placée à +4°C. B91. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 21,9 mg/mL de polymère à base d'acide galacturonique. [000631] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[polymère à base d'acide galacturonique]/[insuline humaine] de 2/6/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Polymère à base d'acide galacturonique 2190 mg [000632] Pour le polymère à base d'acide galacturonique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000633] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 um puis est placée à +4°C. B92. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 2 et de 21,9 mg/mL de polymère à base d'acide hyaluronique. [000634] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[polymère à base d'acide hyaluronique]/[insuline humaine] de 2/6/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution du composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-crésoI/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Polymère à base d'acide hyaluronique 2190 mg [000635] Pour le polymère à base d'acide hyaluronique, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000636] Le pH final est de 7,4 E 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B93. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 200 UI/mL. [000637] La formulation commerciale d'insuline humaine (Humulin R(D) a été concentrée en utilisant des tubes de centrifugation AMICON Ultra-15 avec une coupure à 3 kDa. Les tubes amicon ont tout d'abord été rincés avec 12 mL d'eau déionisée. 12 mL de la formulation commerciale ont été centrifugés pendant 35 minutes à 4000 g à 20°C. Le volume du rétentat a été mesuré et la concentration estimée par le volume de rétentat. Tous les rétentats ont été mis en commun et la concentration globale a été estimée (> 200 UI/mL). [000638] La concentration de cette solution d'insuline humaine concentrée a été ajustée à 200 UI/mL par addition de la formulation commerciale d'insuline humaine (Humulin Re). La formulation concentrée d'insuline humaine concentrée présente les mêmes concentrations en excipients (m-crésol, glycérine) que la formulation commerciale à 100 UI/mL. [000639] Le pH final est ajusté à 7,4 i 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 !Jrn et stockée à 4°C. B94. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 200 UI/mL en présence du composé 1 à 14,6 mg/mL et de 18,6 mM de citrate. [000640] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[insuline humaine] de 2, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 200 UI/mL 100 mL Lyophilisat du composé 1 1460 mg Solution de citrate de sodium à 1.188 M 1570 pL [000641] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B95. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 200 UI/mL en présence du composé 1 à 14,6 mg/mL et du composé polyanionique 1 à 14,6 mg/mL. [000642] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[composé polyanionique 1]/[insuline humaine] de 2/2/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline humaine à 200 UT/mL 100 mL Lyophilisat du composé 1 1460 mg Lyophilisat du composé polyanionique 1 1460 mg [000643] Le pH final est ajusté à 7,4 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 [en et stockée à 4°C. B96. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 200 UI/mL en présence du composé 1 à 14,6 mg/mL et du composé polyanionique 1 à 29,2 mg/mL. [000644] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[composé polyanionique 1]/[insuline humaine] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline humaine à 200 UI/mL 100 mL Lyophilisat du composé 1 1460 mg Lyophilisat du composé polyanionique 1 2920 mg [000645] Le pH final est ajusté à 7,4 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B97. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 200 UI/mL en présence du composé 1 à 14,6 mg/mL et du composé polyanionique 2 à 14,6 mg/mL. Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[composé polyanionique 2]/[insuline humaine] de 2/2/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline humaine à 200 UI/mL 100 mL Lyophilisat du composé 1 1460 mg Lyophilisat du composé polyanionique 2 1460 mg [000646] Le pH final est ajusté à 7,4 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B98. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 200 UI/mL en présence du composé 2 à 14,6 mg/mL et de 18,6 mM de citrate. [000647] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[insuline humaine] de 2, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline humaine à 200 UI/mL 100 mL Lyophilisat du composé 2 1460 mg Solution de citrate de sodium à 1.188 M 1570 pL [000648] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B99. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 200 UI/mL en présence du composé 2 à 14,6 mg/mL et du composé polyanionique 1 à 14,6 mg/mL. [000649] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[composé polyanionique 1]/[insuline humaine] de 2/2/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline humaine à 200 UI/mL 100 mL Lyophilisat du composé 2 1460 mg Lyophilisat du composé polyanionique 1 1460 mg [000650] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B100. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 200 UI/mL en présence du composé 2 à 14,6 mg/mL et du composé polyanionique 1 à 29,2 mg/mL. [000651] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[composé polyanionique 1]/[insuline humaine] de 2/4/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline humaine à 200 UI/mL 100 mL Lyophilise du composé 2 1460 mg Lyophilisat du composé polyanionique 1 2920 mg [000652] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B101. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 200 UI/mL en présence du composé 2 à 14,6 mg/mL et du composé polyanionique 2 à 14,6 mg/mL. [000653] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[composé polyanionique 2]/[insuline humaine] de 2/2/1, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous Insuline humaine à 200 UI/mL 100 mL Lyophilisat du composé 2 1460 mg Lyophilisat du composé polyanionique 2 1460 mg [000654] Le pH final est ajusté à 7,4 ± 0,4. La solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm et stockée à 4°C. B102. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence de composé 2 et de 9,3 mM de citrate. [000655] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 2]/[insuline humaine] de 2 et 9,3 mM de citrate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution du composé 2 à 36,01 mg/mL 20,27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Solution de citrate de sodium à 1,188 M 783 pl_ [000656] Pour le citrate, on peut utiliser, la forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000657] Le pH final est de 7,4 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C. B103. Préparation d'une solution d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence du composé 1 et de 9,3 mM de citrate. [000658] Pour un volume final de 100 mL de formulation avec un ratio massique [composé 1]/[insuline humaine] de 2 et 9,3 mM de citrate, les différents réactifs sont mélangés en quantités précisées ci-dessous : Insuline humaine à 500 UI/mL 20 mL Solution de composé 1 à 36,01 mg/mL 27 mL Solution 96,6 mM m-créso1/566 mM glycérine 30 mL Eau 28,95 mL Solution de citrate de sodium à 1,188 M 783 pL [000659] Pour le citrate, on peut utiliser, fa forme acide ou la forme basique sous forme de sel de sodium, de sel de potassium ou d'un autre sel compatible avec une formulation injectable. [000660] Le pH final est de 7,4 ± 0,4. Cette solution limpide est filtrée sur une membrane 0,22 pm puis est placée à +4°C.35 C Pharmacodynamie et pharmacocinétique Cl : Protocole de mesure de la Pharmacodynamie des solutions d'insuline [000661] 12 porcs domestiques d'environ 50 kg, préalablement cathétérisés au niveau de la jugulaire, sont mis à jeun 2,5 heures avant le début de l'expérience, Dans l'heure précédant l'injection d'insuline, 3 prélèvements sanguins sont réalisés afin de déterminer le niveau basal de glucose. [000662] L'injection d'insuline à la dose de 0,09 UI/kg pour l'insuline lispro et à la dose de 0,125 UI/kg pour l'insuline humaine est réalisée en sous-cutané au niveau du cou, sous l'oreille de l'animal à l'aide du stylo à insuline Novopen équipé d'une aiguille 31 G. [000663] Des prélèvements sanguins sont ensuite réalisés toutes les 4 minutes pendant 20 minutes puis toutes les 10 minutes jusqu'à 3 heures. Après chaque prélèvement, le cathéter est rincé avec une solution diluée d'héparine. [000664] Une goutte de sang est prélevée pour déterminer la glycémie au moyen d'un 15 glucomètre, [000665] Les courbes de pharmacodynamie du glucose sont ensuite tracées et le temps nécessaire pour atteindre le taux minimum de glucose dans le sang pour chaque porc est déterminé et reporté comme Tmin glucose. La moyenne des Tmin glucose est ensuite calculée. 20 [000666] Le sang restant est collecté dans un tube sec et est centrifugé pour isoler le sérum. Les taux d'insuline dans les échantillons de sérum sont mesurés par la méthode immuno-enzymatique ELISA en sandwich pour chaque porc. [000667] Les coubes de pharmacocinétique sont ensuite tracées. Le temps nécessaire pour atteindre la concentration maximale d'insuline dans le sérum pour chaque porc est 25 déterminé et reporté comme Tmax insuline. La moyenne des Tmax insuline est ensuite calculée. C2 : Résultats de Pharmacodynamie et de Pharmacocinétique des solutions d'insulines des exemples 52 et 58 Exemple Insuline Composé Excipient Nombre de cochons B2 Lispro - - 11 58 Lispro 1 Citrate 9,3 mM 10 30 [000668] Les résultats de pharmacodynamie obtenus avec les formulations décrites dans les exemples B2 et B8 sont présentés sur la figure 1. Selon l'invention, l'analyse de ces courbes montrent que la formulation de l'exemple B8 comprenant le composé 1 et le citrate à 9,3 mM comme excipient (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple B8, Tmin glucose = 30 ± 11 min) permet d'obtenir une action plus rapide que celle de la formulation commerciale Humalog® de l'exemple 132 (courbe tracée avec les triangles correspondant à l'exemple B2, Tmin glucose = 44 ± 14 min). [000669] Les résultats de pharmacocinétique obtenus avec les formulations décrites dans les exemples B2 et B8 sont présentés sur la figure 2. Selon l'invention, l'analyse de ces courbes montrent que la formulation de l'exemple B8 comprenant le composé 1 et le citrate à 9,3 mM comme excipient (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple B8, Tmax insuline = 11 ± 6 min) induit une absorption plus rapide de l'insuline lispro que la formulation commerciale Humalog® de l'exemple 62 (courbe tracée avec les triangles correspondant à l'exemple 62 , Tmax insuline = 18 ± 8 min). C3 Résultats de Pharmacodynamie et de Pharmacocinétique des solutions d'insulines des exemples 62 et B10 Exemple Insuline Composé Excipient Nombre de porcs 52 Lispro - - 11 510 Lispro 1 Composé 11 polyanionique 1 [000670] Les résultats de pharmacodynamie obtenus avec les formulations décrites dans les exemples B2 et 610 sont présentés sur la figure 3. Selon l'invention, l'analyse de ces courbes montrent que la formulation de l'exemple B10 comprenant le composé 1 et le composé polyanionique 1 comme excipient à 20 mg/mL (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple B10, Tmin glucose = 33 ± 13 min) permet d'obtenir une action plus rapide que celle de la formulation commerciale Flumalog®de l'exemple 52 (courbe tracée avec les triangles correspondant à l'exemple 62, Tmin glucose = 44 I 14 min). [000671] Les résultats de pharmacocinétique obtenus avec les formulations décrites dans les exemples 62 et B10 sont présentés sur la figure 4. Selon l'invention, l'analyse de ces courbes montrent que la formulation de l'exemple B10 comprenant le composé 1 et le composé polyanionique 1 comme excipient à 20 mg/mL (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple B10, Tmax insuline = 15 ± 9 min) induit une absorption plus rapide de l'insuline fispro que la formulation commerciale Humaloge de l'exemple 82 (courbe tracée avec les triangles correspondant à l'exemple 62, Tmax insuline = 18 ± 8 min). C4 : Résultats de Pharmacodynamie et de Pharmacocinétique des solutions d'insulines des exemples B2 et B7 Exemple Insuline Composé Excipient Nombre de cochons 62 Lispro - - 12 B7 Lispro 1 12 [000672] Les résultats de pharmacodynamie obtenus avec les formulations décrites dans les exemples B2 et B7 sont présentés figure 5. Selon l'invention, l'analyse de ces courbes montrent que la formulation de l'exemple B7 comprenant le composé 1 comme excipient (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple B7, Tmin glucose = 41 ± 16 min) induit un début d'action plus rapide que celle de la formulation commerciale Humalog® de l'exemple B2 (courbe tracée avec les triangles correspondant à l'exemple B2, Tmin glucose = 50 14 min). [000673] Les résultats de pharmacocinétique obtenus avec les formulations décrites dans les exemples 62 et B7 sont présentés figure 6. L'analyse de ces courbes montrent que la formulation comprenant le composé 1 comme excipient (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple B2, Tmax insuline = 21 ± 10 min) n'induit pas une absorption plus rapide de l'insuline lispro que la formulation commerciale Humalog® de l'exemple 62 (courbe tracée avec les triangles correspondant à l'exemple 62 (Tmax insuline = 20 ± 9 min). Le composé 1 seul n'est donc pas suffisant pour induire une accélération significative de la pharmacocinétique de l'insuline lispro. C5 : Résultats de Pharmacodynamie et de Pharmacocinétique des solutions d'insulines des exemples B1 et B3 Exemple Insuline Composé Excipient Nombre de cochons 61 Aspart _ _ 11 B3 Humaine - 11 [000674] Les résultats de pharmacodynamie obtenus avec les formulations décrites dans les exemples B1 et B3 sont présentés sur la figure 7. L'analyse de ces courbes montre que la formulation d'insuline humaine de l'exemple 63 (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple 63, Tmin glucose = 61 ± 31 min) a bien une action plus lente que celle de la formulation commerciale d'insuline aspart de l'exemple 131 (courbe tracée avec les triangles correspondant à l'exemple 131, Tmin glucose = 44 ± 13 min). [000675] Les résultats de pharmacocinétique obtenus avec les formulations décrites dans les exemples B1 et 133 sont présentés sur la figure 8. L'analyse de ces courbes montre que la formulation d'insuline humaine seule de l'exemple 83 (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple 83, Tmax insuline = 36 33 min) induit bien une absorption plus lente que la formulation commerciale d'insuline aspart (Novologe) de l'exemple B1 (courbe tracée avec les triangles correspondant à l'exemple Bl, Tmax insuline -= 28 ± 13 min). [000676] Ces résultats sont conformes à ceux de la littérature avec une accélération de la baisse de la glycémie et de l'absorption de l'insuline pour un analogue rapide d'insuline par rapport à une insuline humaine. C6 : Résultats de Pharmacodynamie et de Pharmacocinétique des solutions d'insulines des exemples B1 et B103 Exemple Insuline Composé Excipient Nombre de cochons B1 Aspart - 14 13103 Humaine 1 Citrate 9,3 mM 5 [000677] Les résultats de pharmacodynamie obtenus avec les formulations décrites dans les exemples 131 et B103 sont présentés sur la figure 9. L'analyse de ces courbes montre que la formulation à base d'insuline humaine de l'exemple B103 comprenant le composé 1 et le citrate à 9,3 mM comme excipient (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple 8103, Tmin glucose = 46 ± 9 min) permet d'obtenir une action similaire à celle de la formulation commerciale d'insuline aspart (Novologe) de l'exemple B1 (courbe tracée avec les triangles correspondant à l'exemple B1, Tmin glucose = 53 24 min). [000678] Les résultats de pharmacocinétique obtenus avec les formulations décrites dans les exemples B1 et B103 sont présentés sur la figure 10. L'analyse de ces courbes montre que la formulation de l'exemple B103 comprenant le composé 1 et le citrate à 9,3 mM comme excipient (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple 13103, Tmax insuline = 20 ± 7 min) induit une absorption de l'insuline humaine similaire à celle de la formulation commerciale d'insuline aspart (Novologn de l'exemple 131 (courbe tracée avec les triangles correspondant à l'exemple B1, Tmax insuline = 22 10 min). [000679] Les paramètres de temps de l'insuline aspart (Novolog®) entre les exemples C5 et C6 étant similaires, on peut en déduire par extrapolation que la formulation de l'exemple B103 induit une accélération de la baisse de la glycémie et de l'absorption de l'insuline humaine par rapport à la formulation commerciale d'insuline humaine (exemple B3). D Dichroïsme circulaire Dl : Etat d'association de l'insuline lispro en dichroïsme circulaire en présence du composé 1 [000680] Le dichroïsme circulaire permet d'étudier la structure secondaire et quaternaire de l'insuline. Les monomères d'insuline s'organisent en dimères et en hexamères. L'hexamère est la forme de l'insuline la plus stable physiquement et chimiquement. Il existe deux formes hexamèriques, la forme R6 et la forme T6. L'insuline lispro présente un signal CD fort à 251 nm caractéristique de la forme hexamèrique R6 (forme la plus stable). La perte du signal CD à 251 nm est reliée à une déstabilisation de l'hexamère (et donc le premier signe de transformation de l'hexamère en dimère). [000681] L'EDTA et le mélange EDTA/citrate déstructurent complètement la forme R6 de l'insuline lispro (figure 11). L'EDTA a donc un effet marqué sur l'hexamère. [000682] Au contraire, le citrate seul, le composé 1 seul ainsi que le mélange composé 1/citrate et composé 1/composé polyanionique 1 n'ont quasiment pas d'impact sur le signal CD à 251 nm. Ces composés n'ont donc quasiment aucun impact sur la structure R6 de l'hexamère et a fortiori sur la structure hexamèrique. D2 : Etat d'association de l'insuline humaine en dichroïsme circulaire en présence du composé 1 [000683] Le dichroïsme circulaire permet d'étudier la structure secondaire et quaternaire de l'insuline. Les monomères d'insuline s'organisent en dimères et en hexamères. L'hexamère est la forme de l'insuline la plus stable physiquement et chimiquement. Le signal CD à 275 nm est caractéristique de la forme hexamèrique de (signal hexamère aux alentours de -300, signal du dimère entre -200 et -250 et signal du monomère en-dessous de -200). La perte du signal CD à 275 nm est donc caractéristique d'une déstabilisation de l'hexamère en dimères ou monomères. [000684] L'EDTA et la combinaison EDTA/citrate ont un impact très marqué sur la structure hexamèrique de l'insuline humaine (dissociation complète de l'hexamère en dimères, figure 12). Au contraire, le citrate seul, le composé 1 seul, le composé polyanionique 1 seul ainsi que les combinaisons composé 1/citrate et composé 1/composé polyanionique 1 n'ont pas d'impact sur fa structure hexamèrique de l'insuline humaine. Contrairement à l'EDTA, tes formulations d'insuline humaine comprenant le composé 1 et le citrate ou le composé polyanionique 1 ne présentent pas de dissociation de l'hexamère de l'insuline humaine. E Solubilisation d'insulines humaine et analogue au point isoélectrique El. Solubilisation de l'insuline humaine à son point isoélectrique [000685] L'insuline humaine a un point isoélectrique à 5,3. A ce pH l'insuline humaine précipite. Un test démontrant la formation d'un complexe de l'insuline humaine avec les différents composés est exécuté au point isoélectrique. Si une interaction existe, il est possible de solubiliser l'insuline à son point isoélectrique. [000686] Une solution d'insuline humaine à 200 UI/mL est préparée. Des solutions de composés à différentes concentrations (8, 30 ou 100 mg/mL) dans l'eau sont préparées. Un mélange équivolume (50/50) entre la solution d'insuline humaine et la solution de composé est effectué pour mener à une solution contenant 100 UI/mL d'insuline humaine et la concentration désirée en composé (4, 15 ou 50 mg/mL). Le pH des différentes solutions est ajusté à pH 5,3 par ajout d'acide acétique 200 mM. [000687] L'aspect de la solution est documenté. Si la solution est turbide, le composé à la concentration testée ne permet pas la solubilisation de l'insuline humaine. Si la solution est translucide, le composé permet la solubilisation de l'insuline humaine à la concentration testée. De cette façon, la concentration en composé nécessaire pour solubiliser l'insuline humaine à son point isoélectrique peut être déterminée. Plus cette concentration est basse plus l'affinité du composé pour l'insuline humaine est importante. Composé Solubilisation de Solubilisation de Solubilisation de l'insuline humaine l'insuline humaine l'insuline humaine à 100 UI/mL par le à 100 UI/mL par le à 100 UI/mL par le composé à 4 composé à 15 composé à 50 mg/mL mg/mL mg/mL Contre exemples Polysaccharide 1 Oui Oui Oui Polysaccharide 4 Oui Oui Oui Polysaccharide 3 Oui Oui Oui Polysaccharide 2 Oui Oui Oui Polysaccharide 5 Oui Oui Oui Exemples Composé 1 Non Non Oui Composé 2 Non Non Oui Composé 3 Non Non Oui E2.Solubilisation de l'insuline lispro à son point isoélectrique [000688] L'insuline lispro a un point isoélectrique à 5,3. A ce pH l'insuline lispro précipite. Un test démontrant la formation d'un complexe de l'insuline lispro avec les différents composés est exécuté au point isoélectrique. Si une interaction existe, il est possible de solubiliser l'insuline lispro à son point isoélectrique. [000689] La formulation commerciale de l'insuline lispro (Humaiog ) est dialysée contre du tampon PO4 1mM (pH 7). Après dialyse, la concentration en insuline lispro est d'environ 90 UI/mL. Le lyophilisat de composé est pesé et solubilisé dans la solution d'insuline lispro pour mener à des formulations contenant l'insuline lispro à 90 UI/mL et le composé aux concentrations désirées (4, 15 ou 50 mg/mL). Le pH des différentes solutions est ajusté à pH 5,3 par ajout d'acide acétique 200 mM. [000690] L'aspect de la solution est documenté. Si la solution est turbide, le composé à la concentration testée ne permet pas la solubilisation de l'insuline lispro. Si la solution est translucide, le composé permet la solubilisation de l'insuline lispro à la concentration testée. De cette façon, la concentration en composé nécessaire pour solubiliser l'insuline lispro à son point isoélectrique peut être déterminée. Plus cette concentration est basse plus l'affinité de composé pour l'insuline lispro est importante. Polysacharide ou Solubilisation de Solubilisation de Solubilisation de Composé l'insuline lispro à l'insuline lispro à l'insuline lispro à 90 UI/ml« par le 90 UI/mt. par le 90 UI/mt. par le composé à 4 composé à 15 composé à 50 mg/mL mg/m1., rrtgirn Contre exemples Polysaccharide 1 Oui Oui Oui Polysaccharide 3 Oui Oui Oui Polysaccharide 2 Oui Oui Oui Exemples Composé 1 Non Non Oui Composé 2 Non Non Oui Composé 3 Non Non Oui F Interaction avec l'albumine F1 Afin de déterminer les interactions entre les différents polysaccharides ou composés et une protéine modèle telle que l'albumine, un essai en Centricon (membrane de CutOff 50 kDa) a été effectué. Une solution de polysaccharide ou de composé à 7,3 mg/mL a été diluée au tiers dans une solution de BSA (albumine du sérum bovin) à 20 mg/mL dans le PBS (concentration dans le mélange : 2,43 mg/mL de polysaccharide ou de coposé, 13,3 mg/mL d'albumine et environ 100 mM de sels). [000691] Ce mélange a été centrifugé sur Centricon pour faire passer environ la moitié du volume à travers la membrane. L'albumine est retenue de façon quantitative sur la membrane du Centricon. Les polysaccharides et composés analysés seuls passent en grande partie à travers la membrane (pour les polysaccharides ayant des masses molaires les plus importantes, environ 20% du polysaccharide est retenu). [000692] Après centrifugation le polysaccharide ou composé est dosé par LN dans le filtrat. Le pourcentage de polysaccaride ou composé lié à l'albumine est calculé par l'équation suivante : [000693] (1-[polysaccharide ou composé dans le filtrat en présence d'albumine]/[polysaccharide ou composé dans le filtrat en absence d'albumine])*100 [000694] On observe très clairement que les polysaccharides de masse molaire 5-15 kDa sont fortement retenus par l'albumine dans cet essai. Au contraire, les composés de l'invention de plus faible masse molaire sont nettement moins retenus par l'albumine dans cet essai. Polysaccharide ou Composé % Polysaccharide ou % Composé lié à la BSA Contre exemples Polysaccharide 4 97 0/0 Polysaccharide 1 95 % Polysaccharide 3 77 % Polysaccharide 5 86 % Polysaccharide 2 82 % Exemples Composé 2 21 % Composé 1 20 % Composé 3 27 %20 REVENDICATIONS1. Composition en solution aqueuse, comprenant de l'insuline et au moins un composé anionique substitué choisi parmi les composés anioniques substitués constitués d'un squelette formé d'un nombre discret u compris entre 1 et 8 (1 É u É 8) d'unités saccharidiques identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes, lesdites unités saccharicliques étant choisies dans le groupe constitué par, les hexoses, sous forme cyclique ou sous forme réduite ouverte, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels carboxyles non substitués étant salifiables. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un composé polyanionique. 3. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'insuline est une insuline humaine. 4. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que l'insuline est une insuline analogue. 5. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que l'insuline analogue est choisie dans le groupe constitué par l'insuline lispro, l'insuline aspart et l'insuline glulisine. 6. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que l'insuline analogue est l'insuline lispro. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le ratio massique composé anionique substitué/insuline est compris entre 0,5 et 10. 8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la concentration en composé anionique substitué est comprise entre 1,8 et 36 mg/mL. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que le composé anionique substitué, est choisi parmi les composés anioniques substitués constitués d'un squelette saccharidique formé d'un nombre discret u compris entre 1 et 8 (1 _É u 8) d'unités saccharidiques identiques ou différentes, liéespar des liaisons glycosidiques identiques ou différentes, lesdites unités saccharidiques étant choisies parmi les hexoses, sous forme cyclique ou sous forme réduite ouverte, caractérisés a) en ce qu'ils sont substitués de façon statistique par : au moins un substituant de formule générale I : Formule I - les substituants étant identiques ou différents lorsqu'il y a au moins deux substituants, dans lequel - le radical -[AA]- désigne un résidu d'acide aminé, ledit acide aminé étant choisi dans le groupe constitué de la phénylalanine, l'alpha-méthyl-phénylalanine, la 3,4 dihydroxyphényfalanine la tyrosine, l'alpha-méthyl-tyrosine, la 0-méthyl- tyrosine, l'alpha-phénylglycine, la 4-hydroxyphénylglycine, la 3,5- dihydroxyphénylglycine et leurs sels de cations alcalins, lesdits dérivés étant de configuration absolue L ou D, -[AA]- est fixé sur le squelette de la molécule par l'intermédiaire d'un bras de liaison -R1- ou directement lié au squelette par une fonction G, ^ -R1- étant : - soit une liaison G, et alors a = 0, - soit une chaîne carbonée, et alors a = 1, en Cl à C15 éventuellement substituée et/ou comportant au moins un hétéroatome choisi parmi 0, N et S et portant au moins une fonction acide avant la réaction avec l'acide aminé, ladite chaîne formant avec le résidu d'acide aminé -[AAJ- une liaison amide, et est fixée sur le squelette saccharidique à l'aide d'une fonction F résultant d'une réaction entre une fonction hydroxyle portée par le squelette et une fonction portée par le précurseur de R1, F est une fonction éther, ester ou carbamate, - G est une fonction ester ou carbamate, - m est égal à 1 ou 2, - le degré de substitution, j, en -[Rda-[AA], étant strictement supérieur à 0 et inférieur ou égal à 6, 0 un ou plusieurs substituants -R'1 - -R'1 étant une chaîne carbonée en Cl à C15, éventuellement substituée et/ou comportant au moins un hétéroatome (tels que 0, N et S) et portantau moins une fonction acide sous forme de sel de cations alcalins ladite chaine étant fixée sur lesquelette saccharidique par une fonction F' résultant d'une réaction entre une fonction hydroxyle portée par le squelette et une fonction portée par le précurseur de -R'1, - F' est une fonction éther, ester ou carba mate, - le degré de substitution i, en -R'1, étant compris entre 0 et 6-j, i 5 6-j, et, - identique ou différent de -R1, - F et F' identiques ou différentes, - F' et G identiques ou différentes - Les fonctions acides salifiables libres sont sous forme de sels de cations alcalins, b) lesdites liaisons glycosidiques identiques ou différentes étant choisies dans le groupe constitué par les liaisons glycosidiques de type (1,1), (1,2), (1,3), (1,4) ou (1,6), dans une géométrie alpha ou béta, c) +j 5 6 10. Composition selon l'une quelconque des revendications 2 à 8, caractérisée en ce que le composé polyanionique est choisi dans le groupe constitué des molécules anioniques, des polymères anioniques et des composés constitués d'un squelette formé d'un nombre discret u compris entre 1 et 3 (1 5 u 5 3) d'unités saccharidiques identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes naturellement porteurs de groupes carboxyles ou substitués par des groupes carboxyles. 11. Formulation pharmaceutique comprenant une composition selon l'une quelconque des revendications précédentes. 12. Formulation pharmaceutique selon la revendication 11, caractérisée en ce que la concentration en insuline est comprise entre 240 et 3000 pM (40 à 500 UI/mL). 13. Formulation pharmaceutique selon la revendication 12, caractérisée en ce que la concentration en insuline est comprise entre 600 et 1200 pM (100 et 200 UI/mL). 30 14. Utilisation d'au moins un composé anionique fonctionnalisé constitués d'un squelette formé d'un nombre discret u compris entre 1 et 8 (1 5 u5 8) d'unités saccharidiques identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes, lesdites unités saccharidiques étant choisies dans le groupe constitué par, 35 les hexoses, sous forme cyclique ou sous forme réduite ouverte, ledit composé comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués, les groupes fonctionnels carboxyles non substitués étant salifiables pour préparer une formulation pharmaceutique d'insuline permettant, après administration, d'accélérer le passage del'insuline dans le sang et de réduire plus rapidement la glycémie par rapport à une formulation exempte de composé anionique substitué. 15. Utilisation selon la revendication 14, caractérisé en ce que le composé anionique fonctionnalisé est en mélange avec un composé polyanionique. 16. Utilisation selon l'une des revendications 14 ou 15, caractérisée en ce que le composé anionique substitué, est choisi parmi les composés anioniques substitués constitués d'un squelette saccharidique formé d'un nombre discret u compris entre 1 et 8 (1 u 8) d'unités saccharidiques identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes, lesdites unités saccharidiques étant choisies parmi les hexoses, sous forme cyclique ou sous forme réduite ouverte, caractérisés : a) en ce qu'ils sont substitués de façon statistique par : au moins un substituant de formule générale I: Formule - les substituants étant identiques ou différents lorsqu'il y a au moins deux substituants, dans lequel : - le radical -[AA]- désigne un résidu d'acide aminé, ledit acide aminé étant choisi dans le groupe constitué de la phénylalanine, l'alpha-méthyl-phénylalanine, la 3,4 dihydroxyphényialanine la tyrosine, l'alpha-méthyl-tyrosine, la 0-méthyl- tyrosine, l'alpha-phénylglycine, la 4-hydroxyphénylglycine, la 3,5- dihydroxyphénylglycine et leurs sels de cations alcalins, lesdits dérivés étant de configuration absolue L ou D, -[AA]- est fixé sur le squelette de la molécule par l'intermédiaire d'un bras de liaison -R1- ou directement lié au squelette par une fonction G, - -R1- étant : - soit une liaison G, et alors a = 0, - soit une chaîne carbonée, et alors a = 1, en Cl à C15 éventuellement substituée et/ou comportant au moins un hétéroatome choisi parmi Ci, N et S et portant au moins une fonction acide avant la réaction avec l'acide aminé, ladite chaîne formant avec le résidu d'acide aminé -[AA]- une liaison amide, et est fixée sur le squelette saccharidique à l'aide d'une fonction F résultant d'une réaction entre une fonction hydroxyle portée par le squelette et une fonction portée par le précurseur de R1, - F est une fonction éther, ester ou carbamate, - G est une fonction ester ou carba mate, - m est égal à 1 ou 2,- le degré de substitution, j, en-[Ri],-(AA]r, étant strictement supérieur à 0 et inférieur ou égal à 6, 0 17. Utilisation selon l'une des revendications 15 à 16, caractérisée en ce que le composé polyanionique est choisi dans le groupe constitué des molécules anioniques, des polymères anioniques et des composés constitués d'un squelette formé d'un nombre discret u compris entre 1 et 3 (1 u 5 3) d'unités saccharidiques identiques ou différentes, liées par des liaisons glycosidiques identiques ou différentes naturellement porteurs de groupes carboxyles ou substitués par des groupes carboxyles. 18. Méthode de préparation d'une formulation d'insuline humaine ayant une concentration en insuline comprise entre 240 et 3000 pM (40 et 500 UI/mL), dont le délai d'action chez l'humain est inférieur à celui de la formulation de référence à la même concentration en insuline en l'absence de composé anionique substitué, caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués.35 19. Méthode de préparation d'une formulation d'insuline analogue ayant une concentration en insuline comprise entre 240 et 3000 uM (40 et 500 UI/mL), dont le délai d'action chez l'humain est inférieur à celui de la formulation de référence à la même concentration en insuline en l'absence de composé anionique substitué, caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'addition à ladite formulation d'au moins un composé anionique comportant des groupes fonctionnels carboxyles partiellement substitués.