FR 2982772 A1 20130524 FR 1160634 A 20111122 UTILISATION DE PEPTIDES OBTENUS A PARTIR D'ALISMA COMME AGENT COSMETIQUE POUR RENFORCER LA FONCTION BARRIERE GLOBALE DE LA PEAU La présente invention se rapporte à l'utilisation de molécules spécifiques obtenues à partir de rhizomes d'Alisma, ainsi qu'à un principe actif particulier contenant de telles molécules, pour une action sur la fonction barrière cutanée. L'invention concerne également les compositions cosmétiques incluant de telles molécules, et un procédé de traitement cosmétique destiné à renforcer et/ou réparer la fonction barrière globale de la peau. La fonction première de la peau est de former une barrière efficace contre les agressions extérieures, qu'elles soient physiques, chimiques ou microbiologiques. Deux barrières agissent de façon simultanée et coordonnée et conditionnent la première ligne de défense de la peau : la barrière mécanique perméable et la barrière biologique immune. La barrière mécanique, issue du processus de différenciation des kératinocytes, résulte de la structure particulière du stratum corneum et de la cohésion des couches supérieures de l'épiderme assurée par les jonctions serrées. Son rôle premier est de maintenir l'hydratation de la peau. La barrière immunologique, quant à elle, via des récepteurs membranaires spécifiques des kératinocytes, les récepteurs TLR, contrôle l'intrusion et la prolifération des microorganismes étrangers transitoires et déclenche, lorsque nécessaire, une réponse immunitaire innée locale et rapide. Ces récepteurs TLR ont la capacité de discriminer la présence de microorganismes transitoires de microorganismes commensaux essentiels à la fonction barrière cutanée. En effet, la microflore commensale, qui réside à la surface de la peau, composée essentiellement de corynébactéries et de microcoques tels que Staphylococcus epidermes, joue un rôle protecteur non négligeable en assurant : - une compétition directe avec les microorganismes exogènes pour l'occupation des niches et pour la disponibilité limitée des nutriments, et - la production de métabolites permettant de maintenir le pH acide de la peau ainsi que la production de substances bactéricides pour limiter la production de la flore non désirée. L'utilisation de nettoyants trop drastiques ou d'antibiotiques bouleverse la microflore naturelle de la peau, altère ses défenses antimicrobiennes et peut conduire à l'apparition d'imperfections et d'inconforts cutanées ou de dermatoses inflammatoires. Des recherches récentes ont montré que la microflore commensale pouvait être régulée et maintenue par l'utilisation de substances prébiotiques ou probiotiques, microorganismes ayant la capacité d'activer les défenses bactériennes de la peau sans présence de réaction pro-inflammatoire. L'utilisation de ces microorganismes en application topique permet en effet d'améliorer ou réparer la fonction barrière de la peau et réduire sa sensibilité cutanée. L'objectif de la présente invention est de proposer un principe actif cosmétique d'origine végétale qui améliore la fonction barrière globale de la peau en agissant à la fois sur la fonction barrière mécanique et sur la fonction barrière biologique et qui présente un mécanisme similaire à celui d'un probiotique. A cet effet, l'invention vise l'utilisation de molécules particulières obtenues à partir de rhizomes d' Allsma plantago-aquatica. Li A Agma ou le plantain d'eau est une plante aquatique utilisée en médecine traditionnelle chinoise notamment pour ses propriétés diurétiques, ses effets contre les bouffées de chaleur et les infections. Ses racines sont également utilisées pour la préparation de remèdes homéopathiques. Des extraits d'A/istna ont par ailleurs été utilisés dans des produits destinés à la perte de poids et à un effet amincissant ou encore en mélange avec d'autres plantes dans des produits cosmétiques anti-âge. La présente invention vise spécifiquement l'utilisation cosmétique de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d'Alisma plantago-aquatica ou d'un hydrolysat de rhizomes d'Alisma plantago-aquatica comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba, en tant qu'agent actif cosmétique dans une composition cosmétique ledit agent actif et/ou ladite composition étant destiné(s) à renforcer et/ou réparer la fonction barrière globale de la peau. En effet, de façon surprenante l'utilisation cosmétique de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d'Alisma plantagoaquatica renforce la fonction barrière globale de l'épiderme, en particulier elle permet : - d'augmenter la cohésion des couches supérieures de l'épiderme en restaurant le réseau membranaire des jonctions serrées altérées par une agression chimique ou microbienne, et ainsi restructurer la barrière mécanique de la peau, - de stimuler des récepteurs de l'immunité innée de façon adaptée pour favoriser la production de molécules antimicrobiennes tout en limitant la réponse inflammatoire. Avantageusement, l'invention agit par un mécanisme similaire à celui d'un probiotique, et permet d'activer et d'optimiser les défenses naturelles de la peau sans provoquer d'inflammation. L'utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d'Alisma plantago-aquatica ou d'un hydrolysat de rhizomes d'Alisma plantago-aquatica comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba permet de renforcer la fonction barrière globale de la peau en stimulant à la fois la barrière mécanique et la barrière biologique de l'épiderme. De façon spécifique, l'invention vise également un principe actif cosmétique particulier à savoir un hydrolysat de rhizomes d' Allsma plantago-aquatica 5 comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba. Par « hydrolysat » on entend tout extrait obtenu à partir de rhizomes d' Allsma plantago-aquatica, comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique. Enfin, l'invention a également pour objet une composition cosmétique contenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de 10 rhizomes d'Allsma plantago-aquatica, ainsi qu'un procédé de traitement cosmétique destiné à améliorer la fonction barrière globale de la peau comprenant l'application topique d'une telle composition. La présente invention est maintenant décrite en détail. 15 UTILISATION Selon un premier aspect, l'invention vise l'utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d'Allsma plantagoaquatica ou d'un hydrolysat de rhizomes d'Allsma plantago-aquatica en contenant, en tant qu'agent actif cosmétique dans une composition cosmétique ledit agent 20 actif et/ou ladite composition étant destiné(s) à renforcer et/ou réparer la fonction barrière globale de la peau. En effet, par un mécanisme similaire à celui d'un probiotique, les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d'Allsma plantago-aquatica agissent à la fois sur les fonctions mécanique et biologique 25 immune de l'épiderme qui sont co-régulées et interdépendantes. Le maintien de la barrière mécanique de la peau dépend notamment de la cohésion des couches supérieures de l'épiderme assurée par les jonctions serrées. Les jonctions serrées sont constituées de trois catégories de protéines : - des protéines transmembranaires qui jouent un rôle structural en connectant les membranes des cellules adjacentes (occludines, claudines et molécules d'adhésion jonctionnelle), - des protéines plaques qui stabilisent, d'une part, la structure des jonctions serrées en liant les protéines transmembranaires au cytosquelette de la cellule et qui recrutent d'autre part les protéines de signalisation (zonula occludens : ZO-1, ZO-2 et ZO-3), - des protéines de signalisation impliquées dans la régulation de différents processus cellulaires comme la polarité, la prolifération et la différenciation cellulaires. En scellant les membranes plasmiques de deux cellules adjacentes, elles assurent l'adhésion entre les kératinocytes du stratum granulosum pour former une barrière semi-perméable sélective. En outre, les jonctions serrées fonctionnement également comme une plateforme de signalisation contrôlant différents processus cellulaires. On sait que les agressions de l'épiderme, en particulier les agressions chimiques ou microbiennes endommagent fortement les jonctions serrées qui induisent une perméabilité accrue de celles-ci et donc une augmentation du flux d'eau vers la surface cutanée. Ces dysfonctionnements entraînent une altération du gradient ionique de l'épiderme qui influence les différents processus de la différenciation épidermique impliqués dans le maintien de la fonction barrière. Selon l'invention, l'utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 25 2000ba obtenus à partir de rhizomes d'Allsma plantago-aquatica permet de restaurer le réseau membranaire des jonctions serrées, notamment de stimuler la synthèse de ZO-1, et ainsi renforcer la barrière mécanique de la peau. Par ailleurs, les kératinocytes sont capables de détecter la présence d'agents étrangers de façon très précoce via la reconnaissance intelligente et sélective de motifs microbiens par l'intermédiaire de récepteurs membranaires spécifiques de l'immunité innée (PRR « Pattern Recognition Receptors ») comme les récepteurs TLR (« Toll-Like Recpetors »). Les récepteurs TLR ont pour fonctions principales de détecter la présence et le type de micro-organismes exogènes, de déclencher une réponse innée locale et de stimuler la réponse adaptative. Ils sont capables de reconnaître des structures localisées au niveau de la membrane des microorganismes et ainsi de distinguer la présence de pathogènes (virus, bactéries, champignons) de la flore commensale ou de probiotiques et d'induire une réponse adaptée. Par exemple, les récepteurs TLR2 présents à la surface des kératinocytes, capables de détecter essentiellement les motifs bactériens peptidoglycanes et acide lipoteichoique, sont activés à la fois par Staphylococcus aureus et Staphylococcus epidermes, mais déclenche des réponses distinctes au niveau des kératinocytes. En outre, TLR-2 régule l'effet anti-inflammatoire bénéfique exercé par les probiotiques. Selon l'invention, l'utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d'Allsma plantago-aquatica permet de stimuler l'expression des récepteurs TLR des kératinocytes, notamment de stimuler l'expression des récepteurs TLR-2, et ainsi renforcer la barrière biologique de la peau. L'engagement des récepteurs TLR des kératinocytes active plusieurs cascades de signalisation - la production de peptides antimicrobiens, et - la production de cytokines pro-inflammatoires et de chimiokines, dont l'interleukine-8 qui induit une réponse inflammatoire nécessaire au recrutement des cellules immunitaires au niveau du site d'infection. Les peptides microbiens, dont les majoritaires dans la peau sont les P-défensines (hBb) et les cathélicidines, sont dotés d'une activité antimicrobienne directe et indirecte, capables de tuer ou d'inactiver un large spectre de microorganismes en perméabilisant notamment les membranes microbiennes. Ils sont nécessaires également à l'élaboration de la barrière mécanique. Selon l'invention, l'utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d' Allsma plantago-aquatica permet de stimuler l'expression de peptides antimicrobiens, notamment de stimuler l'expression des P-défensines, en particulier de la P-défensine 2, et ainsi renforcer la barrière antimicrobienne et indirectement la barrière mécanique de la peau. Par ailleurs, l'utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d' Allsma plantago-aquatica permet de limiter l'inflammation induite par une agression microbienne, en réduisant la synthèse de cytokines pro-inflammatoires, en particulier d'interleukine-8. L'invention vise donc l'utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d'Allsma plantago-aquatica ou d'un principe actif en contenant comme agent actif cosmétique dans une composition cosmétique, ledit agent actif et/ou ladite composition étant destiné(s) à : - renforcer la barrière mécanique, en particulier en stimulant la barrière mécanique, - renforcer la barrière biologique, en particulier o en stimulant les récepteurs de l'immunité innée TLR o en stimulant les peptides antimicrobiens - limiter l'inflammation de l'épiderme induite par une agression microbienne, en particulier en réduisant la production de cytokines pro-inflammatoires. L'invention permet ainsi d'améliorer la qualité de la peau, notamment : -de diminuer la perte insensible en eau, -de lisser le microrelief cutané, -d'affiner le grain de la peau. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, l'invention vise l'utilisation d'un principe actif obtenu à partir de peptides de poids moléculaire inférieur à 5 2000ba obtenus à partir de rhizomes d'Alisma plantago-aquatica, tel que décrit en suivant. PRINCIPE ACTIF L'invention concerne également un principe actif cosmétique particulier, à savoir un hydrolysat de rhizomes d'Alisma plantago-aquatica comprenant des peptides 10 de poids moléculaire inférieur à 2000ba. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba représentent au moins 90% en poids des protéines totales du principe actif. De façon préférée les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba 15 représentent au moins 8% en poids de matière sèche du principe actif. Le principe actif selon l'invention est préférentiellement un hydrolysat enzymatique. Le principe actif présente préférentiellement une couleur jaune clair. Il peut se présenter sous forme liquide et être défini par au moins une des 20 caractéristiques exposées ci-après, préférentiellement toutes. Matières sèches : Le taux de matières sèches d'un principe actif selon l'invention (mesuré par passage à l'étuve à 105°C en présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant) peut être compris 25 entre 20 et 70 g/I, préférentiellement entre 28 et 44 g/I. Mesure du pH : Le pH (mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante) peut être compris entre 3 et 5, préférentiellement entre 3 et 4. Protéines Détermination de la teneur en protéines : Le dosage de la teneur en protéines est réalisé selon la méthode de LOWRY (Lowry et al. Protein measurement with the folin reagent, J. Biol. Chem, 193, 265-275, 1951). Le réactif de Folin donne une coloration bleue avec certains acides aminés. La coloration obtenue est comparée avec celle d'une courbe établie avec un sérum étalon. La teneur en protéines peut aussi être exprimée en pourcentage par rapport à la matière sèche. Elle est donc préférentiellement comprise entre 3 et 11g/I, préférentiellement entre 4 et 7g/I. Caractérisation de la fraction protéique : La caractérisation de la fraction protéique du principe actif selon l'invention est réalisée par exclusion stérique F.P.L.0 (Fast Protein Liquid Chromatography). L'étalonnage de la colonne est réalisé par le passage de marqueurs de masse moléculaire définie (Cytochrome C, Aprotinine, Vitamine B12 et Cytidine). Les protéines du principe actif selon l'invention sont composées de peptides de masses molaires inférieures à 2000Da pour au moins 90% en poids des protéines totales du principe actif. Les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da représentent préférentiellement au moins 8% en poids de matière sèche du principe actif, notamment entre 8 et 25%. Carbohydrates : Détermination de la teneur en sucres totaux Le dosage de la teneur en sucres totaux peut être réalisé par la méthode de DUBOIS (DUBOIS M. et al., (1956), Analytical chemistry, 28, n°3 p. 350-356). En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon. La teneur en sucres totaux peut être comprise entre 57 et 71% en poids de matière sèche. Caractérisation de la fraction carbohydrate : La détermination de la taille des carbohydrates d'un principe actif issu d'Alisma selon l'invention est réalisée par chromatographie liquide haute performance. Le chromatogramme obtenu montre la présence d'environ 54% de monosaccharides de masse moléculaire inférieure à 180ba et d'environ 46% d'oligosaccharides de masse molaire comprise entre 180 et 4250ba (degré de polymérisation maximum de 24). La fraction glucidique du principe actif issu d'Alisma selon l'invention est donc composée essentiellement de monosaccharides et d'oligosaccharides de degré de polymérisation inférieur ou égal à 24. Les sucres présents sont majoritairement du glucose et du fructose. Teneur en cendres brutes : La teneur en cendres brutes est déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération à 550°C dans un four à moufle électrique (VULCANTM) Le poids du résidu est calculé en déduisant la tare. La teneur en minéraux est exprimée en pourcentage par rapport au poids total de la matière sèche du principe actif. La teneur en cendres brutes d'un principe actif selon l'invention est préférentiellement comprise entre 10 et 13%. Teneur en composés phénoliques : Les composés phénoliques forment en présence de ferricyanure de potassium des composés colorés, détectables à 715nm. L'intensité de coloration est proportionnelle à la quantité de composés phénoliques. Les lectures sont réalisées à partir d'une gamme étalon d'acide gallique allant de 40 à 120 mg/I. Les résultats obtenus pour les étalons permettent de tracer une droite densité optique en fonction de la concentration et le taux de polyphénols des échantillons est lu directement sur cette droite. La teneur en composés phénoliques d'un principe actif selon l'invention est inférieure à 1% en pourcentage par rapport à la matière sèche. Identification de la fraction active Afin de démontrer que la fraction majoritairement active du principe actif selon l'invention est bien la fraction constituée par les peptides de masses molaires inférieures à 2000ba, une étude a été réalisée. Cette étude consiste à fractionner les espèces moléculaires du principe actif selon l'invention : - une fraction A constituée de cendres, obtenue par ressolubilisation des résidus issus de l'incinération à 550°C dans un four à moufle électronique, reprise dans de l'eau distillée et filtrée, - une fraction B contenant des carbohydrates neutres purifiés par adsorption des composés cationiques et anioniques du principe actif. La fraction B contient 95% des sucres et 5% des protéines du principe actif, - une fraction C contenant des peptides purifiés par adsorption/élution sur résine échangeuse de cations. La fraction C contient 72% des peptides et 1% des sucres du principe actif. L'étude consiste à comparer l'effet de ces différentes fractions sur l'expression de P-défensine 2 par PCR quantitative sur kératinocytes humains normaux, au résultat obtenu pour le principe actif selon l'invention à 1%. Le protocole de l'essai est celui décrit au point II.b. .Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau ci-après Taux de hBb2 / Témoin (%) Principe actif à 1% +28 Fraction A 1% +8% Fraction B 1% 0 Fraction C 1% +42% Les fractions A et B ne sont pas efficaces. C'est la fraction C qui confère au principe actif son activité. L'analyse de la fraction C par HPLC (Chromatographie Liquide Haute Performance), montre qu'elle est constituée de 97% de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba. Ce sont donc bien les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba qui confèrent au principe actif son efficacité. PROCEDE D'OBTENTION Le principe actif selon l'invention tel que décrit précédemment peut être obtenu préférentiellement par un procédé comprenant une hydrolyse enzymatique. Un procédé particulièrement adapté comprend au moins la succession des étapes suivantes : - solubilisation de poudre de rhizome d'Alisma plantago aquatica dans l'eau, - hydrolyse enzymatique, - séparation des phases soluble et insoluble par décantation, filtration ou centrifugation, - inactivation de l'activité enzymatique par traitement thermique, - filtrations et récupération du filtrat, - concentration de la fraction active, - filtration stérilisante. Les étapes de désodorisation et de décoloration peuvent être ajoutées. Les paramètres des différentes étapes doivent être ajustés afin d'obtenir des principes actifs comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba, en particulier un principe actif dans lequel les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba représentent au moins 90% en poids des protéines totales du principe actif. COMPOSITIONS COSMETIQUES ET PROCEDE COSMETIQUE DE SOIN DE LA PEAU La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d' Alisma plantago-aquatica ou un hydrolysat de rhizomes d' A lisma plantagoaquatica comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba, dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huiledans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Il peut s'agir de compositions comprenant entre 0,01 et 3% de principe(s) actif(s) issu(s) de rhizomes d' Alisma plantago-aquatica selon la présente invention. Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement 5 acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur tels que des rougeurs, tiraillements ou picotements. Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi 10 - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; - les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba ; - les élastomères de silicone, 15 - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères ; - les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires ; - les épaississants et/ou gélifiants, - les humectants, tels que les polyols comme la glycérine ; 20 - les filtres organiques, - les filtres inorganiques, - les colorants, les conservateurs, les charges, - les tenseurs, - les séquestrants, 25 - les parfums, -et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative. Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook publié par le Personal Care Product Council). Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'ad jonction envisagée. Ces compositions sont notamment destinées à renforcer la fonction barrière cutanée. L'invention vise à cet effet un procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à renforcer la fonction barrière globale de la peau, comprenant l'application topique d'une composition renfermant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da obtenus à partir de rhizomes d'Alisma plantagoaquatica ou un hydrolysat de rhizomes d'Alisma plantago-aquatica comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da selon la présente invention. EXEMPLES Un exemple non limitatif de procédé d'obtention, de principe actif contenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da obtenus à partir de 20 rhizomes d'Alisma plantago-aquatica, est présenté en suivant, ainsi que des exemples de composition incluant un tel principe actif. Exemple 1 : procédé d'obtention du principe actif selon l'invention Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes : 25 - solubilisation de poudre de rhizome d'Alisma plantago aquatica dans l'eau à raison de 50g/I, - hydrolyse enzymatique à l'aide d'une protéase, - séparation des phases soluble et insoluble par décantation, - inactivation de l'activité enzymatique par traitement thermique, - filtrations et récupération du filtrat, - concentration de la fraction active, - filtration stérilisante. Le principe actif obtenu présente les caractéristiques suivantes - aspect : liquide limpide - couleur : jaune - teneur en matières sèches : 36.2g/I - pH : 3.6 - teneur en protéines totaux : 24% en poids par rapport à la matière sèche, dont 97% sous forme de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da, - teneur en sucres totaux : 64.4% en poids par rapport à la matière sèche, - teneur en cendres : 11.5% en poids par rapport à la matière sèche, - teneur en polyphénols : 0.1% en poids par rapport à la matière sèche. Exemple 2 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème légère Phase A . Eau QSP 100% Glycérol 6,5% Blanose 7M31CF (Hercules) 0,8% Phase B. Beeswax 10% PHYTOWAX OLIVE 18L57 (Sophim) 4% DUB OK18 (Stéarinerie DUBOIS) 1% DUB AMIS (Stéarinerie DUBOIS) 3,5% Patlac MGLP (Rita) 1% Phase C. Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Conservateur 0,7% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Ce gel émulsionné fondant écru présente un pH de 6,6. En application topique, il présente une pénétration rapide avec un fini doux et sec. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, bien disperser le gel à température ambiante, sous agitateur 5 mécanique, - chauffer au bain marie à 80°C sous agitation magnétique, - mélanger B, chauffer au bain marie à 80°C sous agitation magnétique, - émulsionner B dans A sous rotor stator à 1700 tours/minute, - à 40°C, ajouter C, dans l'ordre indiqué sous rotor stator à 2000 10 tours/minute, et - laisser refroidir jusqu'à complète homogénéisation de l'émulsion. Exemple 3 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une émulsion fluide Phase A. Eau QSP 100 % 15 Satiaxane CX930 (Degussa) 0,2% Butylène glycol 4% EUCAROL AGEC (Cesalpinia) 1% Phase B. Montanox 60 (Seppic) 0,8% Patlac IL (Rita) 0,7% 20 DUB GNS AE (Stéarinerie DUBOIS) 1,5% Alcool stéarilique 0,8% Montanov 202 (Seppic) 1% Sophiderm (Sophim) 5% Phytowax Olive 14L48 (Sophim) 2% 25 Phytowax Olive 6L25 (Sophim) 4% Phase C. Conservateur 0,7 % Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion blanche onctueuse présente un pH de 6. En application topique, elle présente une pénétration rapide avec un fini doux et sec. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes - mélanger A, chauffer au bain marie à 80°C sous agitation mécanique en veillant à bien disperser le gel, - mélanger B, chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - émulsionner B dans A sous émulseur rotor stator à 2600 tours/minute, - à 40°C, additionner C dans l'ordre sous rotor sator à 2600 tours/minute, - laisser sous agitation jusqu'à complète homogénéisation. Exemple 4 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un savon equi libre Phase A. Eau Q5P 100 % Montanov 5 (Seppic) 3% Ritafactan 138 AN 3,5% Satiagel CT52 (begussa) 1,5% Glycérol 6% Conservateur 0,7% Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Ce gel blanc épais à application topique présente un pH de 5,5. Il s'émulsionne 20 facilement à l'eau, sous forme de mousse abondante, avec une application effet frais et fini doux. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, - chauffer A à 60°C sous agitation mécanique à 1000 tours/minute, 25 - laisser sous agitation jusqu'à complet refroidissement. Exemple 5 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une émulsion Phase A. Sepigel 305 (Seppic) 0,3% Conservateur (Nippa) 0,7% Phase B. Montanox 202 (Seppic) 3% Montanov 68 (Seppic) 2% Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Phase C. Lanol 99 (Seppic) 5 % Phase D. Eau Q5P 100% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion blanche onctueuse présente un pH de 5,5. En application topique, elle présente une pénétration rapide avec un fini doux et sec. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes - mélanger A, chauffer au bain marie à 80°C, - mélanger B, chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique, - émulsionner A dans B sous émulseur rotor-stator entre 2000 et 5000 tours/minute, - à 50°C, additionner C, puis D dans l'ordre sous rotor sator, - laisser sous agitation jusqu'à complète homogénéisation. Exemple 6 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un gel Phase A . Eau Q5P 100% DUB GC7 (Dubois) 1,2% DUB MCT 5545 (Dubois) 0,8% Carbopol ETD2020 (Noveon) 0,2% Conservateur (Nippa) 0,7% Phase B. Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Phase C. NaOH qsp pH 6,3 Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Ce gel fondant écru présente un pH de 6,3. En application topique, il présente une pénétration rapide avec un fini doux et sec. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A dans une marmite et chauffer au bain marie à 45°C, - homogénéiser A sous agitation mécanique, jusqu'à complète dispersion du gel, - ajouter B avec une pipette graduée , - ajuster le pH lentement avec C avec une pastette en adaptant l'agitation à la viscosité du produit. EVALUATION DE L'EFFICACITE COSMETIQUE D'UN PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION A. Tests in vitro I. Etude de l'effet sur la barrière mécanique de la peau - Etude de la synthèse des jonctions serrées Le but de l'étude est de visualiser l'effet d'un principe actif comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d'Allsma plantago-aquatica, sur le réseau membranaire formé par ZO-1, un des constituants majeurs des jonctions serrées. L'étude a été réalisée par immunocytologie sur des kératinocytes humains 15 normaux après agression chimique avec du Sodium Lauryl Sulfate (SLS) ou agression microbienne avec le peptidoglycane (PGN) de Staphylococcus aureus, selon le protocole opératoire décrit en suivant. A JO les kératinocytes humains sont ensemencés dans du milieu complet. Les cellules sont ensuite incubées à 37°C. 20 A J4, les kératinocytes humains sont traités avec une solution de CaCl2 à 1,5mM pendant 48 heures afin de permettre la formation du réseau de jonctions serrées. A J6, les kératinocytes sont traités - soit pour réaliser une agression chimique avec une solution de SLS, et à la 25 fin de l'incubation, la solution de SLS ou de PGN est éliminée et remplacée par du milieu contenant le principe actif de l'exemple 1 à 0,25% et 0,50%(V/V),. - soit pour réaliser une agression microbienne avec une solution de PGN de Staphylococcus aureus, et à la fin de l'incubation, la solution de SLS ou de PGN est éliminée et remplacée par du milieu contenant le principe actif de l'exemple 1 à 0,25% et 0,50% (V/V), ou Staphylococcus epidermidis à 106 CFU/ml. Les cellules sont ensuite incubées pendant 48 heures dans une étuve à 37°C. A J8 on réalise un marquage immunocytologique. La visualisation des résultats 5 est réalisée sur un microscope couplé à un système d'analyse d'images. Les résultats obtenus après agression au SLS sont présentés en suivant Moyenne Efficacité synthèse d'intensité de de ZO-1 / Témoin fluorescence agressé (%) (103x UA) Témoin - kératinocytes non agressés SLS 2516 / Témoin - kératinocytes agressés SLS 1412 / kératinocytes agressés SLS + 2593 +84 traitement principe actif selon l'invention 0,25% kératinocytes agressés SLS + 3379 +139 traitement principe actif selon l'invention 0,50% Les résultats obtenus après agression microbienne sont présentés en suivant, le 10 taux de synthèse correspondant à l'intensité du marquage ayant été défini selon 3 niveaux : - faible détection d'immunoréactivité (synthèse faible) + - moyenne détection d'immunoréactivité (synthèse moyenne) ++ - forte détection d'immunoréactivité (synthèse intense) +++ 15 Synthèse de ZO-1 Témoin - kératinocytes non agressés PGN +++ Témoin Staphylococcus epidermidis +++ Témoin - kératinocytes agressés PGN + kératinocytes agressés PGN + traitement ++ principe actif selon l'invention 0,25% kératinocytes agressés PGN + traitement +++ principe actif selon l'invention 0,50% Ces résultats confirment tout d'abord qu'une agression chimique ou microbienne conduit à l'altération du réseau membranaire des jonctions serrées développé par les kératinocytes humains. On constate qu'un principe actif comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d'Allsma plantago-aquatica, testé à 0,5% stimule la synthèse de Z0-1 et restaure la formation du réseau membranaire de jonctions serrées préalablement altéré par l'agression chimique ou microbienne. II. Etude de l'effet sur la barrière biologique de la peau a. Effet sur la réponse immune : étude de l'expression de TLR-2 Cette étude a pour objectif d'évaluer l'effet d'un principe actif comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d' Allsma plantago-aquatica (exemple 1) sur sa capacité à augmenter l'expression de l'ARNm (acide ribonucléique messager) codant pour le récepteur TLR-2, récepteur de l'immunité innée. Elle a été réalisée sur kératinocytes humains normaux selon le protocole opératoire décrit en suivant. A JO les kératinocytes humains sont ensemencés dans du milieu complet et les cellules sont incubées à 37°C. A J4, les cellules sont traitées. Le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu contenant : - le principe actif de l'exemple 1 à 0,5%, 1% et 2% (V/V), - Staphylococcus epidermidis à 106 CFU/ml utilisé comme témoin positif, - le peptidoglycane (PGN) de Staphylococcus aureus à 5pg/ml. Les cellules sont ensuite incubées pendant 24 heures à 37°C. A J5 les cellules sont récupérées et les ARN totaux extraits. Les ARN sont reverse-transcripts et les ADN complémentaires obtenus analysés par PCR quantitative (Réaction en Chaîne par Polymérase quantitative). La quantification de l'incorporation de fluorescence est mesurée en continu à l'aide d'un thermocycleur et la quantification relative est réalisée à l'aide d'un logiciel. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau ci-après : Expression de Efficacité / TLR2 (%) Témoin (%) Témoin 100 Staphylococcus Epidermidis 106 CFU/ml 116 +16 PGN 5pg/m1 158 +58 Principe actif selon l'invention 0,5% 138 +38 Principe actif selon l'invention 1% 148 +48 Principe actif selon l'invention 2% 151 +51 On constate que l'utilisation d'un principe actif selon l'invention permet de stimuler l'expression des récepteurs TLR des cellules de l'épiderme. En particulier, testé à 1% sur kératinocytes humains normaux, le principe actif selon l'invention stimule de 48% l'expression de TLR2, récepteur pivot de l'immunité innée. b. Effet sur la réponse antimicrobienne : étude de l'expression de 33-défensine 2 L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet d'un principe actif comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da obtenus à partir de rhizomes 5 d' Alisma plantago-aquatica sur sa capacité à augmenter l'expression de l'ARNm codant pour la P-défensine 2 (hBD2), peptide antimicrobien de la peau. L'étude a été réalisée sur kératinocytes humains normaux selon le protocole opératoire décrit en suivant. A JO les kératinocytes humains sont ensemencés dans du milieu complet puis 10 incubés à 37°C. A J4 le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu contenant : - le principe actif de l'exemple 1 à 0,5%, 1% et 2% (V/V), - Staphylococcus epidermidis à 106 CFU/ml utilisé comme témoin positif, - le peptidoglycane (PGN) de Staphylococcus aureus à 5pg/ml. 15 Les cellules sont ensuite incubées pendant 72 heures à 37°C. A J7 les cellules sont récupérées et les ARN totaux extraits. Les ARN sont reverse-transcripts et les ADN complémentaires obtenus analysés par PCR quantitative (Réaction en Chaîne par Polymérase quantitative). La quantification de l'incorporation de fluorescence est mesurée en continu à 20 l'aide d'un thermocycleur et la quantification relative est réalisée à l'aide d'un logiciel. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau ci-après : Expression de Efficacité / hBb2 (%) Témoin (%) Témoin 100 Staphylococcus epidermidis 106 CFU/ml 206 +106 PGN 5pg/m1 419 +319 Principe actif selon l'invention 0,5% 116 +16 Principe actif selon l'invention 1% 128 +28 Principe actif selon l'invention 2% 130 +30 On constate que l'utilisation d'un principe actif comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d' Alisma plantagoaquatica permet de stimuler l'expression des peptides antimicrobiens hBb de la 5 peau. En particulier, testé à 1% sur kératinocytes humains normaux, le principe actif selon l'invention stimule de 28% l'expression de hBb2. III. Etude de l'effet sur l'inflammation induite par une agression 10 microbienne Le but de cette étude est de déterminer la capacité d'un principe actif comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d' Alisma plantago-aquatica (exemple 1) à diminuer l'inflammation induite par une agression microbienne en mesurant le taux 15 d'interleukines 8 (IL-8) libérées. L'inflammation est induite par un traitement avec le peptidoglycane (PGN) de Staphylococcus aureus. L'étude est réalisée sur kératinocytes humains normaux selon le protocole opératoire décrit en suivant. A JO, les kératinocytes humains sont ensemencés dans un milieu complet. Les 20 cellules sont ensuite incubées à 37°C. A J4 les cellules sont prétraitées ou non avec le PGN de Staphylococcus aureus à en présence ou non du principe actif de l'exemple 1 à 0,5%, 1% et 2%. A J7, les surnageants cellulaires sont récupérés. Le dosage des IL-8 est réalisé à l'aide d'un kit de dosage ELISA. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau ci-après Taux d'IL8 Efficacité / (fg/pg de Témoin agressé protéines) (%) Kératinocytes non agressés Témoin 53 / Principe actif selon l'invention 2% 50 / Kératinocytes agressés Témoin 108 / Principe actif selon l'invention 0,5% 85 -21 Principe actif selon l'invention 1% 73 -33 Principe actif selon l'invention 2% 70 -35 On constate que l'utilisation d'un principe actif comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d' Allsma plantagoaquatica permet de limiter l'inflammation induite à la suite d'une agression microbienne de la peau. En particulier, testé à 1% sur kératinocytes humains normaux, le principe actif selon l'invention limite de 33% la production d'IL-8 induite à la suite d'une agression à Staphylococcus aureus. B. Tests in vivo I. Etude de l'effet sur la fonction barrière de la peau Cette étude a pour objectif de quantifier in vivo sur volontaires l'effet du principe actif comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir de rhizomes d'Alisma plantago-aquatica (exemple 1) formulé à 3% en gel-émulsionné (exemple 6) sur la perte insensible en eau (PIE) de la peau. La barrière cutanée mécanique joue un rôle régulateur dans l'équilibre en eau de la peau. Lorsque celle-ci est lésée, l'eau migre alors plus facilement vers le milieu extérieur ce qui augmente la perte insensible en eau. En revanche, si l'état de la barrière cutanée s'améliore, les valeurs de la perte en eau diminuent car la régulation des échanges en eau sera assurée de façon correcte. L'étude de l'effet sur la perte insensible en eau a été réalisée sur 21 volontaires sains de sexe féminin présentant une peau normale au niveau des bras, et l'effet rémanent après traitement a également été étudié sur 15 des volontaires de la première étude. Les mesures de la perte insensible en eau ont été réalisées à l'aide d'un 15 Tewamètre®, dispositif muni d'une sonde qui mesure le gradient de vapeur d'eau se mettant en place entre la surface cutanée et l'air ambiant. Le protocole opératoire de l'étude est le suivant. Entre J-14 et JO, les volontaires n'appliquent aucune crème au niveau du haut des bras. 20 A JO, on détermine trois zones de mesure au niveau du haut des bras : - Zone non traitée - Zone placebo - Zone traitée avec le principe actif de l'exemple 1 formulé selon l'exemple... Des mesures de la PIE sont réalisées sur chaque zone à l'aide d'un Tewamètre®. 25 Entre JO et J6 : - les zones étudiées sont lavées avec un savon irritant (SLS) qui permet d'augmenter les pertes en eau, - les produits sont appliqués biquotidiennement sur les zones dédiées. A J7, des mesures de la PIE sont réalisées sur chaque zone au Tewamètre®. Entre J7 et J13 : - les zones étudiées sont lavées avec un savon irritant (SLS) qui permet d'augmenter les pertes en eau, - les produits sont appliqués biquotidiennement sur les zones dédiées. A J14, des mesures de la PIE sont réalisées sur chaque zone au Tewamètre®. A J21, des mesures de la PIE sont à nouveau réalisées sur chaque zone au Tewamètre® pour 15 des volontaires. Les résultats obtenus pour le principe actif selon l'invention en pourcentage par 10 rapport aux résultats obtenus avec le placebo sont présentés dans le tableau suivant : Variation / Placebo (%) J7 -12,3% J14 -14,4% J21 (effet rémanent) -9,9% Ces résultats montrent que dans les conditions de cette étude, dès 7 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, le principe actif selon 15 l'invention formulé à 3% en gel-émulsionné diminue de 12,3% la perte insensible en eau après agression répétée au SLS. Cet effet est également mesuré après 14 jours d'étude avec une diminution significative de la PIE de 14,4%. De plus, l'effet du principe actif selon l'invention se poursuit au moins 7 jours après l'arrêt du traitement. 20 L'utilisation d'un principe actif comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir d'Alisma, permet de limiter l'altération de la fonction barrière et présente un effet longue durée qui persiste après l'arrêt du traitement. II. Etude de l'effet sur la qualité de la peau L'objectif de l'étude est d'évaluer in vivo l'effet lissant d'un principe actif comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 20001)a obtenus à partir d'Alisma, en particulier du principe actif selon l'invention (exemple 1), formulé en émulsion (exemple 5) contre placebo au niveau des joues par projection de franges. L'étude a été réalisée sur 18 volontaires sains de sexe féminin. Les mesures ont été réalisées à l'aide d'empreintes en polymère siliconé. Des acquisitions en volume de ces empreintes ont été réalisées avec un appareil de projection de franges dédié à la mesure 3b du relief des empreintes. Ce système comprend un capteur de mesure (associant un projecteur et une caméra CCb haute résolution) relié à un logiciel d'acquisition. Les paramètres retenus pour l'étude sont deux paramètres de rugosité en 3b - Sq : moyenne quadratique de rugosité de surface - Sa : moyenne arithmétique de rugosité de surface Une diminution de ces deux paramètres est caractéristique d'un lissage du mi crorel ief cutané. Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant. Entre J-14 et JO, une crème placebo est appliqué sur l'ensemble du visage par tous les volontaires. A JO, des prises d'empreintes sont réalisées au niveau des joues. Entre JO et J27, les produits sont appliqués biquotidiennement en hémi-visage (un côté placebo, un côté principe actif). A J28, des prises d'empreintes sont réalisées au niveau des joues. Les résultats obtenus entre JO et J28 pour le principe actif selon l'invention en pourcentage par rapport aux résultats obtenus avec le placebo sont présentés dans le tableau suivant : Variation / Placebo (%) Paramètre Sq -7,1% Paramètre Sa -6,5% Ces résultats montrent que dans les conditions de cette étude, après 28 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, le principe actif selon l'invention formulé à 3% en émulsion lisse le micro-relief cutané au niveau des joues. Le principe actif selon l'invention diminue en effet les paramètres de rugosité de façon significative. L'utilisation d'un principe actif comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba obtenus à partir d'Alisma, en particulier du principe actif selon l'invention, en limitant l'altération de la fonction barrière, permet d'améliorer la qualité de la peau en particulier de lisser le microrelief cutané. REVENDICATIONS1. Principe actif cosmétique obtenu à partir de rhizomes d' Alisma plantagoaquatica, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat de rhizomes d' Alisma plantago-aquatica comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da. 2. Principe actif cosmétique selon la revendication 1, caractérisé en que les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da représentent au moins 90% des protéines totales présentent dans le principe actif. 3. Principe actif selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il comprend au moins 8% de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da, en 10 poids total de matière sèche. 4. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé par au moins une des caractéristiques suivantes : - un taux de matières sèches compris entre 28 et 44g/I, - une teneur en protéines comprise entre 4 et 79/1. 15 5. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat enzymatique de rhizomes d' Alisma plantago-aquatica. 6. Utilisation cosmétique de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da obtenus à partir de rhizomes d' Alisma plantago-aquatica, ou d'un principe 20 actif selon l'une des revendications 1 à 5, en tant qu'agent actif cosmétique dans une composition cosmétique ledit agent actif et/ou ladite composition étant destiné(s) à renforcer et/ou réparer la fonction barrière globale de la peau. 7. Utilisation cosmétique selon la revendication 6, caractérisée en ce que ledit agent actif et/ou ladite composition cosmétique sont destiné(s) à limiter la 25 perte insensible en eau et/ou à lisser le microrelief de la peau. 8. Utilisation cosmétique selon la revendication 6 ou 7, caractérisée en ce que ledit agent actif et/ou ladite composition cosmétique sont destiné(s) à renforcer et/ou réparer la barrière mécanique de la peau. 9. Utilisation cosmétique selon l'une des revendications 6 à 8, caractérisée en 5 ce que ledit agent actif et/ou ladite composition cosmétique sont destiné(s) à restaurer la formation du réseau membranaire des jonctions serrées. 10. Utilisation cosmétique selon l'une des revendications 6 à 9, caractérisée en ce que ledit agent actif et/ou ladite composition cosmétique sont destiné(s) à renforcer et/ou réparer la barrière biologique de la peau. 10 11.Composition cosmétique pour application topique, caractérisée en ce qu'elle comprend un principe actif selon l'une des revendications 1 à 5 présent entre 0,01 et 3% en poids total de la composition. 12. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à renforcer et/ou réparer la fonction barrière de la peau, comprenant l'application topique 15 d'une composition selon la revendication 11. 13. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à limiter la perte insensible en eau et/ou lisser le microrelief de la peau, comprenant l'application topique d'une composition selon la revendication 11.