FR 2894966 A1 20070622 FR 0512942 A 20051220 La presente invention concerne une nouvelle forme cristalline de la vinflunine, son procede d'obtention, ainsi que ses utilisations dans le domaine therapeutique. La vinflunine est un derive indolique de la famille de la vinblastine et de la Vincristine. HO Vinblastine R=CH3 Vincristine R=CHO Ces composes font partie des alcaloides antimitotiques, extraits de Catharanthus roseus, et sont utilises depuis de nombreuses annees en chimiotherapie anticancereuse. Les difficultes d'obtention de ces derives par extraction a partir des plantes ont conduit plusieurs groupes de recherche a identifier de nouvelles substances voisines et ayant les memes proprietes et a mettre au point leur procede d'obtention par hemisynthese. Ainsi la vindesine et la vinorelbine (Navelbine) ont pu etre obtenues et commercialisees pour le traitement de cancers. La structure chimique des ces composes presente comme caractere principal 1'association de deux monomeres alcaloides, la catharanthine et la vindoline. N OCOCH3 H R COOCH3 HO Vinorelbine Vindesine 0 N 0 OCOCH, H CH, COOCH3 Dans le cadre de la mise au point de nouvelles voies synthetiques pour obtenir la vinorelbine, la reactivite de ce compose en milieu superacide a conduit a identifier une nouvelle molecule, la 20',20'-difluoro-3',4'-dihydrovinorelbine, ou vinflunine (WO95/03312). L'interet therapeutique de ce compose a egalement pu titre verifie au cours des memes travaux. La conformation exacte de la vinflunine a ete etudiee par differentes methodes de spectroscopie RMN 'H et RMN 13C (Magn. Reson. Chem., 2001, 39, p. 43-48). Cette etude a ete menee sur le ditartrate de vinflunine en solution. Toutefois, ce sel possede des proprietes hygroscopiques qui en limite la stabilite a 1'etat solide, et constituent un handicap lors de la fabrication industrielle. A ce jour, it n'a ete isole que sous forme de solide poudreux amorphe qui doit titre conserve a une temperature negative, inferieure a -15 C, et sous une atmosphere de gaz inerte, par exemple sous azote, ou argon. La manipulation et la conservation de ce compose sont donc delicates, et toute forme permettant d'ameliorer la stabilite physique a 1'etat solide permettrait de simplifier les processus de fabrication, conservation, et conditionnement. Classiquement, la cristallisation d'un compose amorphe peut presenter de tres grosses difficultes, et l'obtention des premiers cristaux est toujours problematique. Toutefois, ce type de forme solide permet de palier bon nombre d'inconvenients de la forme amorphe. En effet elle retient moins d'eau, et sa stabilite amelioree dans le temps facilite sa manipulation lors des processus industriels de fabrication grace notamment a une tendance a moins s'agglomerer en motte, et a une meilleure coulabilite. Elie permet egalement d'envisager des formes galeniques plus variees, et d'en faciliter la fabrication et la manipulation. La Demanderesse a mis en evidence qu'il etait possible de cristalliser le ditartrate de vinflunine, par utilisation d'un systeme solvant approprie.30 Ainsi, la presente invention a pour objet le ditartrate de vinflunine cristallise de formule (I) : 12' 13' HOB O H HO OH H 10 15 HOBO De preference, l'invention concerne le ditartrate de vinflunine cristallise sous forme hydratee. Le nombre de molecules d'eau est compris entre 2 et 6, preferentiellement entre 3 et 6, par exemple it peut etre de 2, 3, 4, 5 ou 6. Le ditartrate de vinflunine selon l'invention possede avantageusement un spectre infra-rouge dans du KBr qui presente un pic d'absorption a environ 1730 cm-1, plusieurs bandes d'absorption entre 1330 et 1420 cm-1, une bande d'absorption entre 1275 et 1185 cm 1, et deux bandes d'absorption entre 1160 et 1030 cm -1 Dans un aspect avantageux, le spectre de diffraction des rayons X du ditartrate de vinflunine objet de l'invention presente des pics caracteristiques, exprimes en degres 20, a environ 5,641 ; 6,529 ; 7,991 ; 8,673 ; 9,245 ; 9,831 ; 11,369 ; 11,844 ; 12,273 ; 2 13,931 ; 14,334 ; 15,105 ; 15,805 ; 16,132 ; 16,833 ; 17,127 ; 17,461 ; 18,073 ; 18,711 ; 18,960 ; 19,835 ; 20,087 ; 20,629 ; 21,226 ; 21,414 ; 22,940 ; 23,662 ; 24,329 ; 25,064 ; 25,323 ; 25,959 ; 26,339 ; 27,600 ; 28,272 ; 29,006 ; 29,792 ; 30,525. Le ditartrate de vinflunine de structure amorphe a pu etre cristallise sous une forme hydrate dans un solvant contenant des proportions variables d'eau. Le solvant utilise est choisi parmi les solvants courants miscibles a 1eau, principalement les alcools. On &vitera au cours de la cristallisation les temperatures &levees du fait de la fragilite de la molecule. L'invention concerne donc &galement le procede de preparation du ditartrate de vinflunine cristallise caracterise en ce qu'il comprend les &tapes suivantes : ^ dissolution du ditartrate de Vinflunine dans un melange alcool / eau, ^ evaporation lente du melange solvant a temperature ambiante, a fair libre, ou sous vide, ^ filtration et recuperation des cristaux formes, ^ rincage, et sechage sous vide des cristaux. Le ditartrate de vinflunine utilisee pour la mise en ouvre de la presente invention est 20 obtenu selon le procede decrit dans la demande de brevet WO95/03312. De preference, l'alcool utilise est choisi parmi 1'&thanol, et les propanol-1 et propanol-2. Comme indique ci-dessus, la temperature de dissolution doit etre controlee afin d'&viter 25 toutes degradations de la molecule. Ainsi on choisira avantageusement une temperature inf&rieure a 70 C, et plus particulierement une temperature de 50 C. Le solvant utilise pour dissoudre la poudre amorphe de ditartrate de vinflunine est miscible a 1eau et choisi parmi les alcools. De maniere avantageuse, le rapport 30 alcool/eau vane entre 75/25 et 100/0, et est pr&f&rentiellement de 80/20, en volume. La quantite de solvant devra etre ajustee par 1'homme du metier, et sera de preference comprise entre 1 et 20 parties en volume (ml) rapporte a la masse (g) de ditartrate de vinflunine. Le rincage des cristaux obtenus s'effectue avec un solvant permettant de ne pas entrainer une re-dissolution du produit, et se fera par exemple a 1'aide de certains solvants etheres, par exemple 1'ether ethylique, 1'ether isopropylique, ou 1'ether de methyle et de tertbutyle et plus particulierement Tether isopropylique. L'etat cristallin de la vinflunine ditartrate est mis en evidence au moyen de techniques connues de 1'homme du metier, telles que par exemple la diffraction des rayons X de poudre, la spectrometrie infra-rouge, et peut etre verifiee par simple microscopie. Du fait de 1'interet therapeutique deja demontre de la vinflunine et de ses derives, en particulier des sels, la presente invention a egalement pour objet un medicament comprenant le ditartrate de vinflunine selon l'invention. Dans un aspect particulier, l'invention concerne l'utilisation du ditartrate de vinflunine cristallise pour la preparation d'un medicament destine a etre utilise pour le traitement de la pathologic cancereuse. On peut citer notamment, et de fawn non limitative, les cancers du sein, de la vessie, du poumon non a petites cellules, et de la prostate. L'invention a aussi pour objet une composition pharmaceutique caracterisee en ce qu'elle contient une quantite efficace de ditartrate de vinflunine selon l'invention, dans un milieu physiologiquement acceptable. Parmi les compositions pharmaceutiques, on pourra citer plus particulierement celles qui conviennent a une administration orale, parenterale, intraveineuse ou sous-cutannee, et plus particulierement convenant a une administration orale, sous forme de comprime, capsules, ou gelules. 30 La posologie vane selon le sexe, l'age le poids du patient, et la voie d'administration. Les exemples suivants illustrent l'invention, sans en limiter la portee. Legendes des figures : FIGURE 1 : Observation en microscopie optique, lumiere visible, du ditartrate de vinflunine cristallise, et de la poudre de ditartrate de vinflunine amorphe. FIGURE 2 : Spectres InfraRouges du ditartrate de vinflunine cristallise et du produit amorphe correspondant. Pourcentage de Transmission en fonction du nombre d'onde. FIGURE 3 : Comparaison des spectres InfraRouges du ditartrate de vinflunine cristallise et du produit amorphe correspondant dans la zone 2000 cm-1 û 800 cm-1. Pourcentage de Transmission en fonction du nombre d'onde. FIGURE 4 : Spectre RMN 'H du ditartrate de vinflunine cristallise et du produit amorphe correspondant. Deplacements en ppm. FIGURE 5 : Diffractogramme de rayons X du ditartrate de vinflunine cristallise (en 20 pointilles) et du produit amorphe correspondant (trait plein). FIGURE 6 : Releve des raies de diffraction aux rayons X du ditartrate de vinflunine cristallise. 25 A. Cristallisation du ditartrate de vinflunine. Exemple 1 : Une prise d'essai de 7.5g de ditartrate de vinflunine est mice en solution a 50 C dans 60 ml de propanol-2 contenant 20% d'eau. La solution est coulee dans un cristallisoir qui 30 est abandonne, ouvert a fair, a temperature ambiante pendant plusieurs jours. Les cristaux formes sont alors recueillis par filtration si 1'evaporation du solvant est 15 incomplete ou par simple grattage des parois si tout le solvant est evapore. Les cristaux obtenus sont rinces avec de 1'ether isopropylique puis seches sous vide. Analyse elementaire : C53H66N4F2020 : 1117.12 Theorie % : C 56.98, H 5.95, N 5.02 Trouve % : C 52.51, H 5.78, N 4.69 Corrige (H20 6.59%) : C 56.21, H 5.40, N 5.03 Exemple 2 : Une prise d'essai de 7.5g de ditartrate de vinflunine est mise en solution a 50 C dans 60 ml de propanol-2 contenant 20% d'eau. La solution est coulee dans un cristallisoir qui est place dans une enceinte a vide a 25 C pendant plusieurs jours. Les cristaux formes sont alors recueillis par filtration si 1'evaporation du solvant est incomplete ou par simple grattage des parois si tout le solvant est evapore. Les cristaux obtenus sont rinces avec de 1'ether isopropylique puis seches sous vide. Analyse elementaire : C53H66N4F2020 : 1117.12 Theorie % : C 56.98, H 5.95, N 5.02 Trouve % : C 52.47, H 5.91, N 4.61 Corrige (H20 6.6%) : C 56.17, H 5.53, N 4.94 Exemple 3 : Une prise d'essai de 200 mg de ditartrate de vinflunine est mise en solution a 50 C dans 10 ml de propanol-1 contenant 20% d'eau. La solution est coulee dans un cristallisoir qui est abandonne, ouvert a fair, a temperature ambiante pendant plusieurs jours. Les cristaux formes sont alors recueillis par simple grattage des parois lorsque tout le solvant est evapore. Les cristaux obtenus sont rinces avec de 1'ether isopropylique puis seches sous vide. Analyse elementaire : C53H66N4F20201117.12 Theorie % : C 56.98, H 5.95, N 5.02 Trouve % : C 53.64, H 6.36, N 4.75 Corrige (H20 6.46%) : C 57.34, H 6.03, N 5.08 B. Caracterisation du ditartrate de vinflunine cristallise selon 1'invention. - Microscopie optique en lumiere visible : La poudre de ditartrate de vinflunine est examinee en lumiere visible a 1'aide du microscope Continuum equipe des accessoires suivants : Trinoculaire avec oculaires 10X. Camera couleur haute resolution STI version NTSC. Carte de capture video 4 Mo GXT. Logiciel mView version 2.6a. Polarisateur/Analyseur visible. Les resultats des observations sont reportes en figure 1 : on observe un systeme cristallin organise pour chacun des echantillons obtenus dans les exemples 1, 2, et 3, et pas dans le cas de 1'echantillon du produit amorphe. - Spectroscopie infrarouge : Le spectre infrarouge est enregistre sur un spectrometre Nexus modele 670 FT - IR couple a un microscope Continu m (ThermoElectron). Une prise d'essai d'environ 1 mg d'echantillon de ditartrate de vinflunine est placee sur une lamelle de bromure de potassium. Le spectre infrarouge est enregistre sur un cristal de cette poudre en utilisant les parametres instrumentaux suivants : Microscope Continuum : Mode transmission Detecteur MCT-A Objectif et condenseur Reflachromat 32X infinity corrected avec compensation 30 variable Banc optique : Spectrometre Nexus 670 FT ù IR accreditation COFRAC (N 1-1009) Interferometre Vectra Source Ever Glo, resolution 0.5 cm-' Separatrice KBr (7400-350 cm') Logiciel Omnic version 6.2 Nombre de balayages : 256 Resolution 8 Fonction d'apodisation Happ-Genzel Correction de phase : Mertz Resultats : Les spectres resultants obtenus pour le produit amorphe, et pour be produit cristallise selon l'exemple 1 sont donnes dans la figure 2. Une analyse comparative entre ces deux spectres pour les zones compnses entre 2000 cm' et 800 cm-' est reportee dans la figure 3. La bande d'absorption de forte intensite observee pour les deux produits a environ 1730 cm' est caracteristique de la vibration d'elongation des groupes carbonyles C=0. La large bande d'absorption situee entre 1275 et 1185 cm' a pour origine les vibrations d'elongation asymetriques des groupes esters C-0-C. Les bandes d'absorption comprises entre 1160 et 1030 cm' sont dues aux vibrations d'elongation symetriques des groupes esters C-0-C. Ces bandes relativement intenses sont representatives des differents esters aliphatiques presents dans la molecule de vinflunine. Les vibrations de deformation dans le plan de la fonction alcool tertiaire 0-H donnent lieu a des bandes d'absorption comprises entre 1420 et 1330 cm-'. La forme et la frequence de vibration de ces bandes d'absorption sont significativement differentes entre les deux especes polymorphes. - Resonance magnetique nucleaire : Le spectre RMN 'H est enregistre a la frequence nominale de 400 MHz sur un spectrometre Bruker Avance DPX 400 equipe d'une sonde inverse large bande et d'un 930 accessoire gradient z. Avant 1'enregistrement du spectre RMN le produit est prealablement solubilise dans le methanol deuterie (Eurisotop, reference D 324-B, Lot A-3561) a la concentration voisine de 0.4 % (ply). Les deplacements chimiques sont exprimes en p.p.m. par rapport au T.M.S. (tetramethylsilane) utilise comme standard interne. Les constantes de couplage sont exprimees en Herzt. La figure 4 regroupe les spectres obtenus pour le produit amorphe et pour le produit de 1'exemple 2, en comparaison : Les deux spectres sont comparables et en accord avec la structure chimique du ditartrate de vinflunine. Les differences observees entre les deux spectres RMN sont dues principalement aux differences de concentration entre les deux echantillons ; le lot cristallise contient egalement des solvants de cristallisation. La resonance magnetique nucleaire est utilisee d'une part pour confirmer 1'integrite structurale de la molecule de ditartrate de vinflunine apres 1'essai de cristallisation et d'autre part pour determiner le rapport molaire acide tartrique û vinflunine. Ce rapport est de 2 - 1 pour les deux especes polymorphes (amorphe et cristallisee); ce resultat etant confirme par analyse elementaire. - Diffraction des rayons X de poudre Les echantillons ont ete analyses sur un diffractometre D8 Advance Bruker AXS equipe d'une anticathode de cuivre (k =1.54060A) fonctionnant avec une tension de 40kV et une intensite de 40mA, d'un bloc de fente primaire variable et du detecteur Vantec. Les analyses ont ete realisees entre 3 et 35 20 avec un pas de 0,030 20 et un temps, de comptage de 40s. Compte tenu du caractere cytotoxique de la molecule, les echantillons ont ete maintenus dans un environnement confine a 1'aide de porte echantillon de 25 mm supporte d'un dome hermetique transparent (A100B33 Brucker AXS). Les echantillons ont ete ensuite analyses par CLHP pour s'assurer que les rayons X n'ont pas degrade les echantillons. Les diffractogrammes de la figure 5 montrent que le produit exemple 2 est cristallise alors que le produit d'origine est amorphe. L'etat cristallise est caracterise par le releve des raies de diffraction presente dans le tableau de la figure 6. L'analyse CLHP ne montre pas de degradation significative des produits apres exposition aux rayons X.5 REVENDICATIONS 1. Ditartrate de vinflunine cristallise. 2. Ditartrate de vinflunine selon la revendication 1, caracterise en ce qu'il est sous forme hydratee. 3. Ditartrate de vinflunine selon la revendication 2, caracterise en ce que le nombre de 10 molecules d'eau est compris entre 2 et 6. 4. Ditartrate de vinflunine selon la revendication 1, dont le spectre infra-rouge dans du KBr presente un pic d'absorption a environ 1730 cm-1, plusieurs bandes d'absorption entre 1330 et 1420 cm-1, une bande d'absorption entre 1275 et 1185 cm-1, et deux 15 bandes d'absorption entre 1160 et 1030 cm-1 . 5. Forme cristalline de ditartrate de vinflunine selon la revendication 1, ayant un spectre de diffraction des rayons X presentant des pics caracteristiques, exprimes en degres 20, a environ 5,641 ; 6,529 ; 7,991 ; 8,673 ; 9,245 ; 9,831 ; 11,369 ; 11,844 ; 20 12,273 ; 13,931 ; 14,334 ; 15,105 ; 15,805 ; 16,132 ; 16,833 ; 17,127 ; 17,461 ; 18,073 ; 18,711 ; 18,960 ; 19,835 ; 20,087 ; 20,629 ; 21,226 ; 21,414 ; 22,940 ; 23,662 ; 24,329 ; 25,064 ; 25,323 ; 25,959 ; 26,339 ; 27,600 ; 28,272 ; 29,006 ; 29,792 ; 30,525. 6. Procede de preparation du ditartrate de vinflunine cristallise selon rune des 25 revendications 1 a 5, comprenant les etapes de : ^ dissolution du ditartrate de vinflunine dans un melange alcool / eau, ^ evaporation lente du melange solvant a temperature ambiante, a fair libre, ou sous vide, ^ filtration et recuperation des cristaux formes, 30 rincage, et sechage sous vide des cristaux.5 7. Procede de preparation selon la revendication 6, caracterise en ce que 1'alcool utilise est choisi parmi l'ethanol et les propanol-1 et propanol-2. 8. Procede de preparation selon la revendication 6, caracterise en ce que la dissolution 5 est effectuee en chauffant a une temperature inferieure a 70 C, et preferentiellement a 50 C. 9. Procede de preparation selon la revendication 6, caracterise en ce que le rapport alcool / eau vane entre 75/25 et 100/0 en volumes. 10. Procede de preparation selon la revendication 6, caracterise en ce que la proportion de solvant est comprise entre 1 et 20 parties en volumes exprimees en millilitres rapportees a la masse en grammes de ditartrate de vinflunine. 15 11. Procede de preparation selon la revendication 6, caracterise en ce que le rincage s'effectue a 1'aide d'un ether choisi parmi les ethers ethylique, isopropylique, et 1'ether de methyle et de tertbutyle. 12. Ditartrate de vinflunine selon 1'une des revendications 1 a 5 en tant que medicament. 13. Composition pharmaceutique caracterisee en ce qu'elle comprend une quantite efficace de ditartrate de vinflunine selon rune des revendications 1 a 5 dans un milieu physiologiquement acceptable. 25 14. Utilisation de ditartrate de vinflunine selon rune des revendications 1 a 5 pour la preparation d'un medicament destine a etre utilise pour le traitement de la pathologie cancereuse. 10 20 30