FR 2884715 A1 20061027 FR 0503932 A 20050420 ASSOCIATION ENTRE LA FERROQUINE ET UN DERIVE D'ARTEMISININE POUR LE TRAITEMENT DU PALUDISME La présente invention se rapporte à une nouvelle association de principes actifs antipaludiques, à savoir la ferroquine et un dérivé d'artémisinine, ainsi qu'à une composition pharmaceutique comprenant une telle association, utile pour le traitement et/ou la prévention du paludisme. Le paludisme est l'une des premières causes infectieuses de mortalité au monde et touche annuellement plus de 500 millions de personnes, parmi lesquelles 3 millions décèdent chaque année. Ce fléau touche principalement l'Afrique sub-saharienne, l'Asie du Sud-Est et l'Amérique Latine. Quatre types de parasites du genre Plasmodium (P. falciparum, P. malariae, P. vivax et P. ovale), véhiculés par les moustiques Anophèles, propagent le paludisme. Le Plasmodium falciparum, largement répandu en Afrique, est le parasite le plus virulent et est responsable des formes mortelles de la maladie. La forte recrudescence de la maladie observée depuis quelques années est due à plusieurs facteurs, parmi lesquels la résistance de nombreuses souches de Plasmodium falciparum aux médicaments classiquement utilisés, tels que la chloroquine, la méfloquine, l'amodiaquine ou encore la pyriméthamine. Isolée en 1972 de la plante Artemisia annua (qinghaosu), utilisée depuis des siècles en Chine, l'artémisinine présente une puissante activité antipaludique. Des dérivés aux propriétés pharmacologiques améliorées, tels que l'artéméther, l'artééther et l'artésunate sont aussi commercialisés. L'artémisinine et ses dérivés font aujourd'hui partie des principes actifs les plus efficaces contre le Plasmodium falciparum. Cependant, l'utilisation d'artésimine ou de ses dérivés en monothérapie pourrait être un facteur causal de sélection de souches parasitaires résistantes. La communauté scientifique préconise maintenant l'utilisation d'associations de principes actifs, et en particulier d'associations de l'artémisine ou de ses dérivés avec d'autres principes actifs antipaludiques. Ces polythérapies, nommées ACT (Artemisininbased Combination Therapies), sont recommandées depuis 2002 par l'Organisation Mondiale de la Santé (OMS). Elles offrent de multiples avantages: amélioration de l'efficacité thérapeutique sur les souches résistantes, protection des deux principes actifs contre l'apparition de résistance, réduction de la transmission de la maladie et de la propagation des résistances. L'association entre l'artéméther et la luméfantrine, commercialisée sous la dénomination Coartem , a par exemple été proposée, ainsi que l'association entre l'artésunate et l'amodiaquine (Arsucam ). En accord avec la stratégie appuyée par l'OMS, la recherche de nouvelles associations de principes actifs antipaludiques doit être poursuivie. Parmi les différents principes actifs antipaludiques décrits dans la littérature, la ferroquine est une molécule active contre les souches de Plasmodium falciparum résistantes à la chloroquine. La ferroquine, aussi dénommée ferrocène-chloroquine ou ferrochloroquine, correspond à la 7chloro-4[({2-[(N,N-diméthylamino)méthyl]ferrocényl}méthyl)amino] quinoléine. II s'agit d'un dérivé de 4-aminoquinoléine couplé à un noyau ferrocène. Cette molécule est décrite notamment dans le brevet EP 0 824 536 et dans J. Med. Chem., 1997, 40, 3715-3718, Antimicrob. Agents Chemother., 1998, 42, 540-544, J. Org. Chem., 1999, 589, 59-65 et J. Organometallic Chem., 2004, 689, 4678-4682. Alors que l'association entre la chloroquine et l'artésunate n'atteint pas des niveaux d'efficacité satisfaisants (Am. J. Trop. Med. Hyg., 2003, 69(1), 19-25 et Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene, 2003, 97, 429-433) et peut induire l'apparition de souches résistantes, notamment à la chloroquine, on a maintenant trouvé, de manière surprenante, qu'une association entre la ferroquine et un dérivé d'artémisinine, en particulier l'artésunate, l'arthéméther ou l'artééther, était efficace pour le traitement et/ou la prévention du paludisme et notamment pour anticiper et réduire, voire éviter le développement de souches parasitaires résistantes aux deux principes actifs, lorsque ces derniers sont administrés en monothérapie. La présente invention a donc pour objet une nouvelle association entre la ferroquine (molécule (I) représentée ci-dessous sous forme de base libre et où Fe 30 représente un noyau ferrocène) et un dérivé d'artémisinine. / N (I) Cl Dans les associations selon l'invention, la ferroquine peut se présenter sous forme de base libre, mais également sous forme de sel, d'hydrate ou de solvat (ces derniers étant définis comme des associations ou des combinaisons de la ferroquine avec, respectivement, une ou plusieurs molécules d'eau ou de solvant). On utilise avantageusement la ferroquine sous forme de base libre. Le dérivé d'artémisinine présent dans les associations selon l'invention consiste avantageusement en l'artésunate (II) ou l'artéméther (III) : O O O ONa O CH3 (III) O- L'invention a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant, en tant que principes actifs, une association entre la ferroquine (I) et un dérivé d'artémisinine, avantageusement l'artésunate (II) ou l'artéméther (III). Une telle composition pharmaceutique contient des doses thérapeutiquement efficaces de ferroquine, ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable, d'un hydrate ou d'un solvat de la ferroquine, et d'au moins un dérivé d'artémisinine, ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Lesdits excipients sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaité, parmi les excipients habituels qui sont connus de l'Homme du métier. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules molles ou dures, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale, buccale, intratrachéale, intraoculaire, intranasale, par inhalation, les formes d'administration topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, les formes d'administration rectale et les implants. Pour l'application topique, on peut utiliser les composés selon l'invention dans des crèmes, gels, pommades ou lotions. Des voies d'administration préférées sont les voies orale, rectale et injectable. Par exemple, lorsqu'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange les ingrédients actifs avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiques, tels que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la silice, la gomme arabique, le mannitol, le cellulose microcristalline, l'hydroxypropyl-méthylcellulose, le croscarmellose ou analogues. On peut enrober les comprimés de saccharose, d'un dérivé cellulosique ou d'autres matières adaptées à l'enrobage. Les comprimés peuvent être réalisés par différentes techniques, telles que la compression directe, la granulation sèche, la granulation humide ou la fusion à chaud. On peut également obtenir une préparation sous forme de gélules en mélangeant les ingrédients actifs avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans des gélules molles ou dures. Pour une administration parentérale, on utilise des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion et/ou des mouillants pharmacologiquement compatibles, par exemple le propylèneglycol ou le butylèneglycol. Par voie orale, les doses journalières en chacun des deux principes actifs de l'association selon l'invention sont les suivantes: - ferroquine: entre 50 et 1600 mg, de préférence entre 200 et 1200 mg, de façon encore préférée entre 400 et 800 mg par personne et par jour; - dérivé d'artémisinine: entre 1 et 10 mg/kg/jour, de préférence entre 2 et 6 mg/kg/jour, de façon encore préférée environ 4 mg/kg/jour. II peut y avoir des cas particuliers où des dosages plus élevés ou plus faibles sont appropriés; de tels dosages ne sortent pas du cadre de l'invention. Selon la pratique habituelle, le dosage approprié à chaque patient est déterminé par le médecin selon le mode d'administration, le poids et la réponse dudit patient. L'association selon l'invention est destinée à être administrée pendant 3 jours consécutifs, en une ou plusieurs prises quotidiennes de chacun des deux principes actifs, de préférence une seule prise par jour. Ce temps de traitement limité à 3 jours est particulièrement avantageux, en comparaison des 7 jours préconisés pour une monothérapie par les dérivés d'artémisinine, en ce qu'il permet une meilleure observation du traitement par les patients, évitant ainsi les arrêts prématurés du traitement qui induisent à long terme une résistance du parasite. L'administration de chacun des deux principes actifs peut être effectuée de façon simultanée, ou bien séparée ou étalée dans le temps (administration séquentielle). Lorsque l'administration est effectuée de façon simultanée, les deux principes actifs peuvent être réunis au sein d'une forme pharmaceutique unique (combinaison fixe), tel que dans un comprimé ou une gélule adaptés à l'administration orale. Les deux principes actifs de l'association selon l'invention peuvent également, que leur administration soit simultanée ou non, être présents dans des formes pharmaceutiques distinctes. A cet effet, les associations selon l'invention peuvent se présenter sous forme de kit comprenant, d'une part, la ferroquine ou un sel, hydrate ou solvat de la ferroquine, et, d'autre part, au moins un dérivé d'artémisinine tel que l'artésunate ou l'artéméther, ladite ferroquine et ledit dérivé d'artémisinine étant dans des compartiments distincts et étant destinés à être administrés de façon simultanée, séparée ou étalée dans le temps (administration séquentielle). A titre d'exemple, une forme unitaire d'administration de la ferroquine sous forme 20 de comprimé peut comprendre les composants suivants: Ferroquine 50 mg Mannitol 224 mg Croscaramellose sodique 6 mg Amidon de maïs 15 mg Hydroxypropyl-méthylcellulose 2 mg Stéarate de magnésium 3 mg Egalement à titre d'exemple, une forme unitaire d'administration d'artésunate sous forme de comprimé peut comprendre 50 ou 100 mg d'artésunate et des excipients usuels, par exemple du lactose, du croscarmellose, de la silice colloïdale anhydre, de la cellulose microcristalline et du stéarate de magnesium. La présente invention a également pour objet une méthode de traitement et/ou de prévention du paludisme qui comprend l'administration, à un patient, d'une dose thérapeutiquement efficace de ferroquine, ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable, d'un hydrate ou d'un solvat de la ferroquine, et d'une dose thérapeutiquement efficace d'au moins un dérivé d'artémisinine, lesdites doses étant administrées de façon simultanée ou bien séquentielle audit patient, comme cela est décrit précédemment. L'association selon l'invention a fait l'objet de tests biochimiques in vivo chez la 5 souris infectée par un plasmodium de type Plasmodium falciparum (souche Plasmodium vinckei vinckei), permettant de mettre en évidence son efficacité pour le traitement du paludisme. Les tests ci-dessous, réalisés avec de l'artésunate, sont donnés à titre d'exemple. Les dérivés d'artémisinine ayant tous en commun le même métabolite (la dihydroartémisinine) et une demie-vie courte, les résultats de ces tests, obtenus pour l'artésunate, sont généralisables aux autres dérivés d'artémisinine tels que l'artéméther ou l'artééther. Mesure de l'activité in vivo chez la souris infectée par Plasmodium Vinckei de la 15 ferroquine, de l'artésunate et de l'association des deux composés 1. Description du test in vivo utilisé On inocule à des souris femelles de type Swiss , âgées de huit semaines et un 20 jour des parasites de type Plasmodium vinckei vinckei (Rodhain, 1952). Les souris sont au préalable, acclimatées pendant deux semaines. Les souris sont nourries et boivent ad libitum. La souche Plasmodium vinckei vinckei est maintenue par infection hebdomadaire chez la souris par 10' érythrocytes parasités suspendus dans un tampon phosphate salin 25 (0,9%). Au premier jour de traitement (JO), une heure après l'infection (10' érythrocytes parasités suspendus dans un tampon phosphate salin (0, 9%)), on administre à l'animal, par voie orale, selon le cas, de la ferroquine, de l'artésunate ou un mélange des deux principes actifs. Cette administration est répétée les trois jours suivants (J1 à J3) (Peter, 1987). Lors de l'administration combinée des deux produits l'artésunate est administrée en premier, la ferroquine est administrée en second, 45 minutes après. Au quatrième jour, on effectue un frottis du sang prélevé au niveau de la queue de la souris. On fixe l'échantillon sur une plaque. On compte au microscope le nombre de cellules sanguines parasitées. La parasitémie est exprimée en pourcentage d'érythrocytes infectés présents dans le prélèvement sur un échantillon de 1000 cellules. six ou sept souris sont utilisées par dose. Les souris pour lesquelles le frottis à J4 ne révèle aucune trace de parasites seront contrôlées à nouveau au 10ième 17ième 24ième 31 ième 38ième 45ième 52ième et 59ième jour afin de détecter une possible recrudescence des parasites. Préparation des suspensions de dilutions et d'administration des composés - Préparation de la suspension de ferroquine (ferroquine issue de SanofiSynthélabo, lot MY18.0088) On mélange de la ferroquine avec de la méthylcellulose (0/5 (w/w)) et du Polysorbate 80 (0/5 (w/w)). La préparation est stable au moins 7 jours, dans l'obscurité, au froid (4 C) et 4 heures à température ambiante. La suspension finale de ferroquine a une concentration variant entre 0,1 et 100 mg/mL. - Préparation de la suspension d'artésunate (artésunate issue de SanofiSynthelabo, lot 1.04) On mélange de l'artésunate avec de la méthylcellulose (0/5 (w/w)) et du Polysorbate 80 (0/5 (w/w)). La préparation est stable pendant 4 heures, dans l'obscurité et à température ambiante. La suspension finale d'artésunate a une concentration variant entre 0,8 et 20 mg/mL. 2. Détermination des C150 et des doses curatives de l'artésunate et de la ferroquine administrés séparément Méthode de détermination des CI50 La CI50 est définie comme la concentration en mg/kg/jour qui inhibe la parasitémie sanguine de 50% au quatrième jour (J4) après infection (JO) et quatre jours de traitement (J0,J1,J2,J3). Le 0% d'inhibition correspond à la moyenne des parasitémies observées chez les souris infectées non traitées. Le 100% d'inhibition correspond à une parasitémie très faible ou nulle, inférieure à 0,1%. Les CI50 sont déterminés par interpolation linéaire de la courbe dose réponse représentée en logarithme des concentrations. La CI50 de la ferroquine est déterminée après administration de concentrations comprises entre 1 et 10 mg/kg/jour. Les concentration utilisées sont 0; 1; 1,47; 2,1; 3,2; 4,6; 6,8 et 10 mg/kg/jour pendant 4 jours. La CI50 de l'artésunate est déterminée après administration de concentrations comprises entre 1 et 15 mg/kg/jour. Les concentrations utilisées sont 0; 1; 1,6; 2,5; 3,9; 6,1; 9,5 8 et 15 mg/kg/jour pendant 4 jours. Les CI50 obtenues sont présentées dans le tableau I qui suit: 5 Tableau I CI50 (mg/kg/jour) ferroquine 3,32 artésunate 2,79 Pour la ferroquine la dose curative est de 10 mg/kg/jour. Pour l'artésunate la dose curative n'a pas été atteinte dans cette étude et est donc 10 supérieure à 15 mg/kg/jour. II est important d'effectuer l'étude d'interaction avec des doses non curatives (sub-optimales) en artésunate et ferroquine, donc proches des CI50 obtenues avec les deux composés étudiés séparément. La ferroquine a une dose curative (survie totale des souris traitées) proche de la CI50É Pour l'artésunate, l'écart entre la dose curative et la CI50 est plus élevé et on peut donc utiliser une dose supérieure à la CI50. Des administrations conjointes et séparées de 3mg/kg/jour pour la ferroquine et 6 mg/kg/jour pour l'artésunate, pendant 4 jours ont donc été considérées lors de l'étude d'association. 3. Mesure de l'activité antimalariale de l'association ferroquine/artesunate sur une souche de parasite Plasmodium vinckei vinckei in vivo 3.1. Détermination du pourcentaqe de parasitémie Des administrations associées et séparées de 3 mg/kg/jour pour la ferroquine et 6 mg/kg/jour pour l'artésunate, pendant 4 jours ont été réalisées sur des souris infectées, en comparaison avec un lot n'ayant pas reçu de traitement. Le tableau II indique les parasitémies moyennes (pourcentage d'érythrocytes infectés) observées au quatrième jour après l'infection. 9 Tableau II Parasitémie ( en %) Artésunate (mg/kg/jour) 0 6 ferroquine moyenne moyenne (mg/kg/jour) 0 31,4 7,1 3 8,8 0,16 Comme indiqué dans le tableau II, l'administration associée de la ferroquine à la dose de 3 mg/kg/jour et de l'artesunate à la dose de 6 mg/kg/jour pendant 4 jours permet de réduire significativement la parasitémie des animaux infectés par rapport à l'administration séparée des deux produits. 3.2. Détermination de la mortalité des souris Chaque jour à partir du jour 5 après l'infection le nombre de souris mortes est compté pour déterminer le pourcentage de mortalité (nombre de souris mortes rapporté au nombre de souris du lot considéré). La dose curative est la première dose où toutes les souris du lot survivent. La FIGURE 1 présente le pourcentage de survie des animaux à partir du cinquième jour après l'infection. Comme le montre la FIGURE 1, le délai de survie des animaux est amélioré par l'administration associée de doses sub-optimales en composés (ferroquine à la dose de 3 mg/kg/jour et artésunate à la dose de 6 mg/kg/jour pendant 4 jours) par rapport aux administrations séparées (ferroquine à la dose de 3 mg/kg/jour ou artésunate à la dose de 6 mg/kg/jour pendant 4 jours). Les résultats obtenus in vivo chez la souris infectée par P. vinckei vinckei démontrent clairement l'absence d'antagonisme entre les deux principes actifs, et prouvent que l'association selon l'invention, de l'artésunate (ou d'un dérivé d'artémisinine en général) et de la ferroquine est avantageuse pour le traitement du paludisme. REVENDICATIONS 1. Association, qui comprend en tant que principes actifs la ferroquine, sous forme de base libre, de sel, d'hydrate ou de solvat, et un dérivé d'artémisinine. 2. Association selon la revendication 1, caractérisée en ce que le dérivé d'artémisinine consiste en l'artésunate, l'artééther ou l'artéméther. 3. Association selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisée en 10 ce que le dérivé d'artémisinine consiste en l'artésunate ou l'artéméther. 4. Association selon la revendication 1, caractérisée en ce que la dose journalière de ferroquine est comprise entre 50 et 1600 mg, de préférence entre 200 et 1200 mg et de préférence entre 400 et 800 mg, par personne et par jour. 5. Association selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la dose journalière de dérivé d'artémisinine est comprise entre 1 et 10 mg/kg/jour, de préférence entre 2 et 6 mg/kg/jour et de préférence environ 4 mg/kg/jour. 6. Association selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce qu'elle est destinée à être administrée pendant une période de 2 à 4 jours consécutifs. 7. Association selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en 25 ce que chacun des principes actifs est destiné à être administré de façon simultanée ou séquentielle. 8. Composition pharmaceutique comprenant des doses thérapeutiquement efficaces de ferroquine, ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable, d'un hydrate ou d'un solvat de la ferroquine, et d'au moins un dérivé d'artémisinine, ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. 9. Composition pharmaceutique selon la revendication 8, caractérisée en ce que le dérivé d'artémisinine consiste en l'artésunate, l'artééther ou l'artéméther. 10. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 8 ou 9, caractérisée en ce que le dérivé d'artémisinine consiste en l'artésunate ou l'artéméther. 11. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 8 à 10, caractérisée en ce qu'elle est adaptée à l'administration orale, rectale ou injectable. 12. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, caractérisée en ce qu'elle est utile pour le traitement et/ou la prévention du 10 paludisme. 13. Utilisation d'une association selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 pour la préparation d'un médicament destiné au traitement ou à la prévention du paludisme. 14. Kit pour le traitement ou la prévention du paludisme comprenant, d'une part, la ferroquine ou un sel, hydrate ou solvat de la ferroquine, et, d'autre part, au moins un dérivé d'artémisinine, ladite ferroquine et ledit dérivé d'artémisinine étant dans des compartiments distincts et étant destinés à être administrés de façon simultanée ou séquentielle.