FR 2877011 A1 20060428 FR 0411454 A 20041027 SOUCHE DE LEVURE GENETIQUEMENT MODIFIEE PRESENTANT UNE PRODUCTION ET UNE EXCRETION ACCRUE DE S-ADENOSYLMETHIONINE (SAM) La présente invention concerne une souche de levure génétiquement modifiée présentant une production et une excrétion accrue de S- adénosylméthionine (SAM), son utilisation pour la production de SAM, et des compositions pharmaceutiques la comprenant. NH2 CH \j\N HOOC.\, N 0 N S-adénosylméthionine (SAM) La S-adénosylméthionine (SAM) (voir la formule ci-dessus) est un composé essentiel du métabolisme intermédiaire chez l'ensemble des organismes vivants. Ce métabolite est synthétisé à partir de méthionine et d'adénosine triphosphate (ATP). Cette synthèse, catalysée par les SAM synthétases (ATP: L-méthionine S- adénosyltransférase, EC 2.5.1.6), peut être considérée comme l'étape terminale du métabolisme des acides aminés soufrés. Cette réaction est assez exceptionnelle car elle implique la déphosphorylation totale de la molécule d'ATP employée (Méthionine + ATP -' SAM + PPi + Pi) et représente donc une dépense énergétique particulièrement élevée. La SAM est certainement la molécule, qui après l'ATP, participe au plus grand nombre de réactions cellulaires. La SAM joue en effet le rôle de donneur quasi-universel de groupement méthyle dans les réactions de transméthylations des protéines, des acides nucléiques, des lipides etc... La SAM sert également de donneur de groupement carboxyaminopropyle dans des réactions de modifications de bases d'ARN ribosomaux ou de transferts, ou également lors de la synthèse de la diphtamide, une modification posttraductionnelle d'un résidu histidine trouvé dans le facteur d'élongation EF2 chez les organismes eucaryotes. La SAM sert également de donneur de groupement amine lors de la biosynthèse de la biotine chez les microorganismes. La SAM est également employée comme NH2 2877011 2 précurseur de la synthèses des polyamines, spermine et spermidine, où après une étape initiale de décarboxylation, elle remplit le rôle de donneur de groupement aminopropyle (Cantoni, 1982, The biochemistry of S-adenosylmethionine , Columbia University Press, NY). Cette description non exhaustive des différentes fonctions métaboliques de la SAM démontre le rôle central joué par cette molécule dans le métabolisme intermédiaire. En médecine humaine la S-adénosylméthionine est indiquée dans le traitement de la dépression (SAMYR ). Elle a également été impliquée dans le traitement de la stérilité masculine (Piacentino et al. (1991) Minerva Gynecol. 43:191-193), de l'ostéoarthrite (Najm et al. (2004) BMC Muscoskeletal Disord. 5:6-21) et des fibromyalgies (Tavoni et al. (1998) Clin. Exp. Rheumatol. 16:106-107). A ce jour, il n'existe pas de possibilité de synthétiser chimiquement de la SAM avec des rendements suffisants pour obtenir de la SAM de qualité pharmaceutique à un coût compatible avec une commercialisation. Les procédés industriels de production de SAM mettent en jeu une production microbiologique qui est réalisée chez la levure Saccharomyces cerevisiae. Plusieurs documents de l'art antérieurs décrivent des souches de levure génétiquement modifiées présentant une production accrue de SAM. Ainsi, la demande de brevet US 2002/0192784 concerne des souches de levure Saccharomyces cerevisiae présentant une production accrue de SAM qui ont été génétiquement modifiées par l'introduction d'un gène chimérique codant pour une méthylène tétrahydrofolate réductase (MTHFR) composée pour partie de l'enzyme d'Arabidopsis thaliana et pour partie de l'enzyme de levure. Cependant, la SAM n'apparaît pas être excrétée par ces souches de levure, ce qui rend le procédé d'obtention de la SAM à partir de ces souches peu intéressant dans une perspective de production industrielle, dans la mesure où l'extraction de la SAM à partir des cellules de levure est un processus relativement long et coûteux; a contrario, la purification de la SAM à partir du milieu de culture des souches de levure est particulièrement aisée. De plus, les souches de levure décrites dans ce document sont génétiquement modifiées par l'introduction de séquences nucléiques hétérologues, ce qui pose un problème de sécurité biologique, car les effets, notamment sur la santé humaine, de ces nouvelles séquences nucléiques et des protéines qu'elles codent ne sont pas connus. Le document Shiomi et al. (1995) Appl. Microbiol. Biotechnol. 42:730-733 décrit une souche de levure Saccharomyces cerevisiae présentant une production accrue de SAM, 2877011 3 génétiquement modifiée par l'introduction de copies supplémentaires d'un gène de résistance à l'éthionine. Le document Yu et al. (2003) Sheng Wu Hua Xue Yu Sheng Wu Wu Li Xue Bao 35:127- 132 décrit une souche de levure Pichia pastoris présentant une production accrue de SAM, génétiquement modifiée par l'introduction de copies supplémentaires du gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 2 (SAM2). La SAM n'apparaît pas être excrétée par les souches de levures décrites dans ces deux documents, de plus la production de SAM par ces souches apparaît être trop faible pour une application industrielle. Un objet de la présente invention est donc de fournir des souches de levure génétiquement modifiées présentant une production et/ou une excrétion de SAM supérieure aux souches de levure de l'art antérieur. Un autre objet de l'invention est de fournir des souches de levure génétiquement modifiée ne comprenant pas de séquences nucléiques hétérologues, c'est-à-dire ne provenant pas d'organisme d'une espèce différente de celle de la levure considérée. Encore un autre objet de l'invention est d'utiliser les souches de levures génétiquement modifiées de l'invention pour la production industrielle de SAM. Enfin, un autre objet de l'invention est de fournir des compositions pharmaceutiques comprenant les souches de levure génétiquement modifiées de l'invention. La présente invention découle, notamment, de la mise en évidence par les Inventeurs qu'une souche de levure pour laquelle le gène ADO1, codant l'adénosine kinase de levure, a été inactivé présentait une production et une excrétion accrue de S-adénosylméthionine par rapport à la souche sauvage correspondante. La présente invention concerne l'utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée, dans laquelle le gène codant pour l'adénosine kinase a été inactivé par modification génétique, pour la production de Sadénosylméthionine (SAM). On désigne par levure tout champignon de type unicellulaire. Les levures comprennent notamment les genres Saccharomyces, Candida, Pichia, Schizosaccharomyces, et Kluyveromyces. L'adénosine kinase est également appelée adénosine 5 phosphotransférase. Dans la levure Saccaromyces cerevisiae, le gène codant pour l'adénosine kinase est le gène ADOI correspondant à la phase de lecture ouverte YJR105w (Lecoq et al. (2001) Yeast 18:335-342) et est notamment représenté par SEQ ID NO: 1. Par ailleurs, à titre d'exemple, 2877011 4 pour Kluyveromyces lactis, il est représenté par la référence EMBL CR382124 et pour Schizosaccharomyces pombe il est représenté par la référence EMBL SPCC338. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne donc l'utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée, dans laquelle le gène ADO] codant pour l'adénosine kinase a été inactivé par modification génétique, pour la production de S- adénosylméthionine (SAM). Un gène de levure est dit inactivé lorsque le produit pour lequel il code n'est pas exprimé dans ladite levure. Dans le cas du gène codant pour l'adénosine kinase, ce gène est dit inactivé si l'adénosine kinase n'est pas exprimée. De nombreuses méthodes d'inactivation d'un gène donné sont connues de l'homme de l'art, parmi lesquelles on peut citer: É l'introduction de mutations ponctuelles dans la séquence codante du gène en question, telle que: des substitutions de nucléotides conduisant à des mutations faux-sens (changement d'acide aminé dans la protéine codée par le gène à inactiver) ou non-sens (codon stop) ; des insertions ou des délétions de nucléotides conduisant à une interruption de la phase ouverte de lecture dudit gène; É l'insertion de séquences nucléotidiques codant par exemple pour des gènes de sélection à l'intérieur de la séquence codante du gène à inactiver; É le remplacement d'une partie substantielle de la séquence codante du gène à inactiver par des séquences nucléotidiques codant par exemple pour des gènes de sélection; É la modification de la séquence promotrice du gène à inactiver, notamment au niveau de séquences consensus, telle que la boite TATA; É l'introduction dans le génome de la levure de séquences codant pour un antisens de l'ARNm messager du gène à inactiver. Un gène de sélection est habituellement un gène de résistance à un antibiotique (par exemple un gène de résistance à la généticine) ou la copie sauvage d'un gène codant pour une étape du métabolisme de la levure (par exemple URA3, TRPI, LEU2, ou HIS3), lequel gène est muté et inactif dans la levure que l'on souhaite modifier. Toutes ces méthodes sont particulièrement aisées à mettre en oeuvre par l'homme de l'art, notamment lorsque la séquence du gène à inactiver est connue. 2877011 5 Avantageusement, l'inactivation du gène codant pour l'adénosine kinase dans une souche de levure conduit à la production et à l'excrétion accrue de S-adénosylméthionine par ladite souche. La détermination de la séquence du gène codant pour l'adénosine kinase des levures pour lesquelles il n'a pas été identifié est aisée pour l'homme de l'art. Dans le cas où le génome de la levure pour laquelle on souhaite identifier le gène codant pour l'adénosine kinase est partiellement ou intégralement séquencé il est possible de lancer une recherche dans les bases de données de séquences adéquates, soit sur la base du nom de l'enzyme codée par le gène recherché, c'est-à-dire adénosine kinase, soit par homologie avec une séquence connue du gène, par exemple ADO], à l'aide d'un logiciel tel que le logiciel BLAST (Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402). Alternativement, il est également possible de cribler une banque d'ADNc ou d'ADN génomique de la levure en question à l'aide d'une sonde dérivée d'une séquence connue du gène, par exemple ADOI, comme cela est bien connu de l'homme de l'art; on pourra, par exemple, se reporter à cet effet à l'ouvrage Sambrook et Russel (2000) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la séquence du gène codant pour l'adénosine kinase a été génétiquement modifiée par mutation. On désigne par mutation d'une séquence nucléotidique donnée, l'insertion, la substitution et/ou la suppression d'un ou plusieurs nucléotides dans ladite séquence nucléotidique. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, la séquence du gène codant pour l'adénosine kinase de la souche génétiquement modifiée définie ci-dessus a été disruptée. On désigne par disruption de la séquence d'un gène, l'interruption de la séquence codante dudit gène par l'introduction d'une séquence nucléotidique à l'intérieur de cette séquence codante. En général, cette introduction s'accompagne de la substitution d'une partie substantielle de la séquence codante, voir de toute la séquence codante, par la séquence introduite. Cette séquence introduite est habituellement un gène de sélection. De nombreuses méthodes de disruption sont à la disposition de l'homme de l'art telles que, par exemple, celles décrites par Rothstein (1991) Methods Enzymol. 194:281-301; Wach et al. (1994) Yeast 10:1793-1808 ou encore Güldener et al. (1996) Nucleic Acids Res. 24:2519-254. 2877011 6 Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la souche génétiquement modifiée définie ci-dessus présente au moins une autre modification génétique choisie parmi le groupe comprenant: l'inactivation d'un gène choisi parmi le groupe comprenant le gène codant pour le transporteur à haute affinité de la S-adénosylméthionine, le gène codant pour la S-adénosylméthionine-homocystéine méthyle transférase, le gène codant pour la S-méthylméthionine-homocystéine méthyle transférase, et le gène codant pour la sous-unité réceptrice Met3O du complexe ubiquitine ligase SCFMet30 - l'introduction d'une copie supplémentaire de la séquence d'un gène choisi parmi le groupe comprenant le gène codant pour la S- adénosylméthionine synthétase 1, le gène codant pour la Sadénosylméthionine synthétase 2, le gène codant pour la méthionine perméase à faible affinité, le gène codant pour la méthionine perméase à haute affinité, le gène codant pour la méthionine perméase à très faible affinité, un gène codant pour une perméase à large spectre pouvant transporter la méthionine, dans le génome de ladite souche, et - la mutation de la séquence d'un promoteur d'un gène choisi parmi le groupe comprenant le gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 1, le gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 2, le gène codant pour la méthionine perméase à faible affinité, le gène codant pour la méthionine perméase à haute affinité, le gène codant pour la méthionine perméase à très faible affinité, un gène codant pour une perméase à large spectre pouvant transporter la méthionine. Le gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 1 de levure est notamment représenté par le gène SAM1 de Saccharomyces cerevisiae (Thomas and Surdin-Kerjan (1987) J. Biol. Chem, 262: 16704-16709). Le gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 2 de levure est notamment représenté par le gène SAM2 de Saccharomyces cerevisiae (Thomas et al. (1998) Mol. Cell. Biol. 8: 5132-5139). Le gène codant pour le transporteur à haute affinité de la Sadénosylméthionine est 30 notamment représenté par le gène SAM3 de Saccharomyces cerevisiae (Rouillon et al., J. Biol. Chem. 274: 2809628105). Le gène codant pour la S-adénosylméthionine-homocystéine méthyle transférase est notamment représenté par le gène SAM4 de Saccharomyces cerevisiae (Thomas et al. (2000) J. Biol. Chem. 275: 40718-40724). 2877011 7 Le gène codant pour la S-méthylméthionine-homocystéine méthyle transférase est notamment représenté par le gène MHT1 de Saccharomyces cerevisiae (Thomas et al. (2000) J. Biol. Chem. 275: 40718-40724). Le gène codant pour la sous-unité réceptrice Met30 du complexe ubiquitine ligase 5 SCFMet3 est notamment représenté par le gène MET30 de Saccharomyces cerevisiae (Patton et al. (1998) Genes Dev. 12: 692-705). Le gène codant pour la méthionine perméase à faible affinité est notamment représenté par le gène AGP1 de Saccharomyces cerevisiae (Iraqui et al. (1999) Mol. Cell. Biol. 19: 989-1001). Le gène codant pour la méthionine perméase à haute affinité est notamment représenté par le gène MUP1 de Saccharomyces cerevisiae (Isnard et al. (1996) J. Mol. Biol. 262: 473-484). Le gène codant pour la méthionine perméase à très faible affinité est notamment représenté par le gène MUP3 de Saccharomyces cerevisiae (Isnard et al. (1996) J Mol. Biol. 15 262: 473-484). Un gène codant pour une perméase à large spectre capable de transporter la méthionine est notamment représenté par le gène BAP2 ou par le gène BAP3 de Saccharomyces cerevisiae (Regenberg et al. (1999) Curr. Genet. 36: 317-328). Selon un mode de réalisation plus particulier de l'invention, la souche génétiquement modifiée définie ci-dessus présente au moins une autre modification génétique choisie parmi le groupe comprenant: l'inactivation d'un gène choisi parmi le groupe comprenant SAM3, SAM4, MHT1, et MET30, - l'introduction d'une copie supplémentaire de la séquence d'un gène choisi parmi 25 le groupe comprenant SAMI, SAM2, AGP1, MUP1, MUP3, BAP2, et BAP3, dans le génome de ladite souche, et - la mutation de la séquence d'un promoteur d'un gène choisi parmi le groupe comprenant SAM], SAM2, AGP1, MUP1, MUP3, BAP2, et BAP3. La séquence du gène SAM1 de la levure Saccharomyces cerevisiae (SEQ ID NO: 3) et de son produit de traduction, la protéine Samlp (SEQ ID NO: 4), est celle déposée à la banque de données EMBL, identificateur SCSAM1 , numéro d'accès J03477. La séquence du gène SAM2 de la levure Saccharomyces cerevisiae (SEQ ID NO: 5) et de son produit de traduction, la protéine Sam2p (SEQ ID NO: 6), est celle déposée à la banque de données EMBL, identificateur SCSAM2SA , numéro d'accès M23368. 2877011 8 La séquence du gène SAM3 de la levure Saccharomyces cerevisiae (SEQ ID NO: 7) et de son produit de traduction, la protéine Sam3p (SEQ ID NO: 8), est celle déposée à la banque de données EMBL, identificateur SCYPL274W , numéro d'accès Z73630. La séquence du gène SAM4 de la levure Saccharomyces cerevisiae (SEQ ID NO: 9) et de son produit de traduction, la protéine Sam4p (SEQ ID NO: 10), est celle déposée à la banque de données EMBL, identificateur SCYPL273W , numéro d'accès Z73629. La séquence du gène MHTI de la levure Saccharomyces cerevisiae (SEQ ID NO: Il) et de son produit de traduction, la protéine Mhtlp (SEQ ID NO: 12) , est celle déposée à la banque de données EMBL, identificateur SCYLL062C , numéro d'accès Z73167. La séquence du gène AGPJ de la levure Saccharomyces cerevisiae (SEQ ID NO: 13) et de son produit de traduction, la protéine Agplp (SEQ ID NO: 14) , correspond à la séquence de l'ORF YCL025C et est comprise dans la sequence déposée à la banque de données EMBL, identificateur SCCHRIII , numéro d'accès X59720. La séquence du gène BAP2 de la levure Saccharomyces cerevisiae (SEQ ID NO: 15) et de son produit de traduction, la protéine Bap2p (SEQ ID NO: 16) , est celle déposée à la banque de données EMBL, identificateur SCYBR068C , numéro d'accès Z35937. La séquence du gène BAP3 de la levure Saccharomyces cerevisiae (SEQ ID NO: 17) et de son produit de traduction, la protéine Bap3p (SEQ ID NO: 18) , correspond à la sequence de l'ORF YDR046C et est comprise dans la sequence déposée à la banque de données EMBL, identificateur SC9609X , numéro d'accès Z49209. La détermination de la séquence des gènes décrits ci-dessus pour d'autres espèces de levure, est aisée pour l'homme de métier, qui pourra par exemple procéder comme cela est décrit précédemment pour le gène codant pour l'adénosine kinase. Avantageusement, l'inactivation des gènes codant pour le transporteur à haute affinité de la S-adénosylméthionine, pour la S-adénosylméthioninehomocystéine méthyle transférase, la S-méthylméthionine-homocystéine méthyle transférase, et la sous-unité réceptrice Met30 du complexe ubiquitine ligase SCFMet3o dans une souche de levure permet d'augmenter la production et/ou l'excrétion de SAM par ladite souche. Par ailleurs l'augmentation de la transcription des gènes codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 1, la S-adénosylméthionine synthétase 2, la méthionine perméase à faible affinité, la méthionine perméase à haute affinité, la méthionine perméase à très faible affinité, une perméase à large spectre pouvant transporter la méthionine, soit par modification de leurs séquences promotrices, soit en augmentant leur nombre de copies dans une souche de levure, permet également d'augmenter la production et/ou l'excrétion de SAM par ladite souche. 2877011 9 Lorsque une copie supplémentaire de la séquence d'un gène est introduite dans le génome de la souche génétiquement modifiée définie cidessus, cette copie peut être soit portée par un vecteur à réplication autonome tel qu'un plasmide ou un chromosome artificiel, soit être insérée dans un ou plusieurs chromosome de ladite souche génétiquement modifiée. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la souche génétiquement modifiée définie ci-dessus porte une copie modifiée du gène codant pour la méthylène tétrathydrofolate réductase (MET13 pour Saccharomyces cerevisiae, Raymond et al. (1999) Arch. Biochem. Biophys. 372: 300-308), l'enzyme correspondante n'étant plus inhibée par la SAM. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention, la séquence d'au moins un des gènes de la souche génétiquement modifiée définie ci-dessus est choisi parmi le groupe comprenant le gène codant pour le transporteur à haute affinité de la S-adénosylméthionine, le gène codant pour la S-adénosylméthionine-homocystéine méthyle transférase, le gène codant pour la S-méthylméthionine-homocystéine méthyle transférase, et le gène codant pour la sous-unité réceptrice Met30 du complexe ubiquitine ligase SCFMet30, a été disruptée. Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, au moins une séquence d'un promoteur d'un des gènes de la souche génétiquement modifiée définie ci-dessus choisi parmi le groupe comprenant le gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 1, le gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 2, le gène codant pour la méthionine perméase à faible affinité, le gène codant pour la méthionine perméase à haute affinité, le gène codant pour la méthionine perméase à très faible affinité, un gène codant pour une perméase à large spectre pouvant transporter la méthionine, a été substituée par une séquence d'un promoteur fort de levure. L'expression promoteur fort désigne un promoteur conférant au gène placé sous son contrôle, c'est-à-dire en général directement en aval de la séquence promotrice, un niveau de transcription plus élevé que le niveau de transcription moyen des gènes dans la levure. Les promoteurs forts de levures sont notamment décrits dans Velculescu et al. (1997) Cell 88: 243-251. Il s'agit, en particulier des promoteurs naturels des gènes PGK1, ADH1, TDH3, TEE], 30 PHO5, LEU2, et GAL1. La séquence du promoteur du gène GAL] de la levure Saccharomyces cerevisiae utilisé dans les descriptions qui suivent correspond notamment à la séquence décrite par Johnston et Davis (1984) Mol. Cell. Biol. 4: 1440-1448. 2877011 10 La séquence du promoteur du gène TEFI de la levure Saccharomyces cerevisiae utilisé dans les descriptions qui suivent correspond notamment à la séquence décrite par Schaaff-Gerstenschlager et al. (1993) Eur. J. Biochem. 217: 487-492). La séquence du promoteur du gène PGKI de la levure Saccharomyces cerevisiae utilisé dans les descriptions qui suivent correspond notamment à la séquence décrite par Bonneau et al. (1991) Yeast 87: 609- 615). La séquence du promoteur du gène PHO5 de la levure Saccharomyces cerevisiae utilisé dans les descriptions qui suivent correspond notamment à la séquence décrite par Feldmann et al. (1994) EMBO J. 13: 5795-5809). Avantageusement, l'utilisation d'un promoteur fort permet d'augmenter le niveau de transcription des gènes placés sous son contrôle et donc le niveau de traduction des protéines correspondante, ce qui induit une augmentation de la synthèse de SAM. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, les gènes codant pour la sous-unité réceptrice Met30 du complexe ubiquitine ligase SCFMet30, la S-méthylméthionine- homocystéine méthyle transférase, l'adénosine kinase, et la S- adénosylméthioninehomocystéine méthyle transférase de la souche génétiquement modifiée définie ci-dessus sont inactivés, notamment par disruption des séquences desdits gènes. Dans un autre mode de réalisation préféré de l'invention, une copie supplémentaire de la séquence du gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 2, couplée à un promoteur fort, a été introduite dans le génome de la souche génétiquement modifiée définie ci-dessus. Dans un autre mode de réalisation préféré de l'invention, la séquence du promoteur du gène codant pour la méthionine perméase à faible affinité de la souche génétiquement modifiée définie ci-dessus a été substituée par la séquence d'un promoteur fort. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré de l'invention, le gène codant pour le transporteur à haute affinité de la Sadénosylméthionine et le gène codant pour la S-adénosylméthioninehomocystéine méthyle transférase de ladite souche ont été inactivés par substitution de la séquence desdits gènes par une copie de la séquence du gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 2, couplée à un promoteur fort. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, le promoteur fort défini ci-dessus est choisi parmi le groupe comprenant les promoteurs naturels des gènes PGKI, ADH1, TDH3, TEFI, PHO5, LEU2, GAL1 de la souche génétiquement modifiée définie ci-dessus. 2877011 11 Dans un autre mode de réalisation particulièrement préféré, la souche génétiquement modifiée définie ci-dessus est prototrophe pour l'adénine. L'expression prototrophe pour l'adénine signifie que la souche définie ci-dessus ne nécessite pas un apport exogène d'adénine pour sa croissance et qu'elle est capable d'assurer seule la production d'adénine nécessaire à sa survie et/ou à sa croissance. Ceci signifie que les gènes impliqués dans la voie de synthèse de l'adénine sont fonctionnels. En particulier, les souches définie ci-dessus portent un allèle sauvage, c'est-à-dire non muté, du gène qui code pour la phosphoribosylaminoimidazole carboxylase (ADE2 dans Saccharomyces cerevisiae). Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, la souche de levure génétiquement définie ci-dessus est haploïde. Dans un mode de réalisation alternatif de l'invention, la souche de levure génétiquement modifiée définie ci-dessus est diploïde. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la souche de levure génétiquement modifiée selon l'invention est caractérisée en ce que lorsque les modifications génétiques sont chromosomiques, lesdites modifications génétiques sont portées par chacun des deux chromosomes homologues. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, la souche de levure génétiquement modifiée selon l'invention ne comprend pas de séquences nucléotidiques hétérologues. Le terme hétérologue désigne des séquences nucléotidiques que l'on ne trouve pas présentes à l'état naturel dans les cellules de levure appartenant à la même espèce de levure que celle de la souche considérée. Dans un autre mode de réalisation préféré de l'invention, la souche de levure génétiquement modifiée selon la présente invention est choisie parmi le groupe comprenant les levures du genre Saccharomyces, Candida, Pichia, Schizosaccharomyces, et Kluyveromyces, et que ladite souche est notamment une levure de l'espèce Saccharomyces cerevisiae. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la souche appartient à l'espèce Saccharomyces cerevisiae et lorsque le gène codant pour la sous-unité réceptrice Met3O du complexe ubiquitine ligase SCFMet3 (MET30) de ladite souche est inactivé, notamment par disruption de la séquence du gène MET30, alors le gène MET4 et/ou le gène MET32 de ladite souche est également inactivé, notamment par disruption des séquences géniques correspondantes. 2877011 12 Le gène MET4 code pour l'activateur transcriptionnel principal du métabolisme des acides aminés soufrés dans la levure Saccharomyces cerevisiae (Thomas et al. (1992) Mol. Cell. Biol. 12: 1719-1727). Le gène MET32 code pour un facteur transcriptionnel impliqué dans la régulation du métabolisme des acides aminés soufrés de la levure Saccharomyces cerevisiae (Blaiseau et al. (1997) Mol. Cell. Biol. 17: 3640-3648). Dans une souche de levure de type sauvage l'inactivation du gène MET30 est létale pour la souche chez laquelle elle a été pratiquée. Avantageusement l'inactivation préalable de MET4 et/ou de MET32 permet d'abolir l'effet létal de l'inactivation de MET30 (Patton et al. (2000) EMBO J. 19: 1613-1624). La séquence du gène MET4 de la levure Saccharomyces cerevisiae (SEQ ID NO: 19) et de son produit de traduction, la protéine Met4p (SEQ ID NO: 20) , est celle déposée à la banque de données EMBL, identificateur SCMETBLZP , numéro d'accès M84455. La séquence du gène MET32 de la levure Saccharomyces cerevisiae (SEQ ID NO: 21) et de son produit de traduction, la protéine Met32p (SEQ ID NO: 22), est celle déposée à la banque de données EMBL, identificateur AY557729 , numéro d'accès AY557729. La présente invention concerne également une souche de levure génétiquement modifiée présentant une production et une excrétion accrue de S-adénosylméthionine par rapport à la souche de levure non modifiée correspondante, ladite souche génétiquement modifiée étant telle que définie ci-dessus. La présente invention concerne également un procédé de production de Sadénosylméthiomne, caractérisée en ce qu'il comprend les étapes de: culture d'une souche de levure génétiquement modifiée telle que définie ci-dessus dans un milieu de culture, - purification de la S-adénosylméthionine à partir du surnageant du milieu de culture et/ou des cellules de levure génétiquement modifiées. Avantageusement, les souches de levure génétiquement modifiées de l'invention excrètent de grande quantité de SAM dans leur milieu de culture, ce qui permet une récupération aisée de ce produit, sans qu'il ne soit nécessaire de l'extraire à partir des levures, dont la paroi cellulaire est particulièrement résistante. Selon un mode de réalisation particulier du procédé défini ci-dessus, la culture est réalisée en chémostat. Avantageusement, un chémostat permet une culture en continu des levures. En effet, on désigne notamment par chémostat un bioréacteur dans lequel l'apport de milieu nutritif et 2877011 13 l'évacuation du milieu de culture contenant les levures sont réalisés en continu, de façon à maintenir essentiellement constants les paramètres physico-chimiques de la culture tout en récupérant le milieu de culture. La présente invention concerne également une composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de substance active au moins une souche de levure telle que définie ci-dessus, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Les levures sont connues pour pouvoir prendre place aisément dans l'intestin humain, l'ingestion de cellules des souches de levure selon l'invention, éventuellement lyophilisées, pourrait ainsi permettre d'augmenter les apports en SAM chez les individus en ayant besoin sur une période relativement longue, correspondant environ à la durée de la colonisation de l'intestin par les levures. La présente invention concerne également l'utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée telle que définie ci-dessus, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des maladies nécessitant un apport accru en S-adénosylméthionine, telle que la dépression, l'arthrite, les fibromyalgies, ou la stérilité masculine. La présente invention concerne également l'utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée telle que définie ci-dessus, pour la préparation d'aliments ou de boissons enrichis en S-adénosylméthionine. L'utilisation des souches de levure génétiquement modifiée de l'invention pour la 20 préparation de certains aliments ou boissons (tel que du pain ou de la bière dans le cas de Saccharomyces cerevisiae permet leur enrichissement spontané en SAM. La présente invention concerne également une préparation alimentaire ou une boisson, destinée à l'alimentation humaine ou animale, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une souche de levure génétiquement modifiée telle que définie ci-dessus. DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1 La figure 1 schématise les étapes du clonage du gène MHTI de Saccharomyces cerevisiae. Figure 2A et Figure 2B La figure 2A schématise le clonage du gène SAM2 de Saccharomyces cerevisiae sous le contrôle du promoteur fort du gène PGKJ. 2877011 14 La figure 2B schématise les étapes de disruption des gènes SAM3 et SAM4 de Saccharomyces cerevisiae par la substitution d'une copie du gène SAM2 sous le contrôle du promoteur du gène PGK1. Figure 3 La Figure 3 schématise le clonage du gène AGP1 de Saccharomyces cerevisiae sous le contrôle du promoteur fort du gène PGK1. EXEMPLES MATERIELS ET METHODES Nomenclature utilisée La nomenclature utilisée dans ce travail pour désigner les gènes de Saccharomyces cerevisiae est la nomenclature classique et connue de l'homme du métier: chaque gène est désigné par trois lettres italiques suivies par un nombre, par exemple ADO1. Les allèles dominants (dans le cas présent, l'allèle de type sauvage) sont notés avec des lettres capitales italiques, tandis que les lettres minuscules sont utilisées pour désigner l'allèle récessif (dans le cas présent, l'allèle muté). Le symbole adol:: URA3 désigne l'insertion du gène URA3 au locus ADOI, dans lequel URA3 est fonctionnel et adol est défectif. La protéine codée par un gène donné est désignée par le nom du gène où la première lettre est en majuscules et les deux autres en minuscules, suivie de la lettre p , par exemple Adolp pour le produit du gène ADO1. Souches utilisées Le travail décrit ci-après a été réalisé avec des souches haploïdes et auxotrophes de Saccharomyces cerevisiae pour plusieurs acides aminés ou bases. Ces souches sont 20 isogéniques avec les souches: - CC788-2B (MATa, his3, leu2, ura3, trpl), décrite dans Chérest et al. (2000) J. Biol. Chem. 275: 14056-14063, et - CC788-2D (MATa, his3, leu2, ura3, trpl) décrite dans Chérest et al. (2000) J. Biol. Chem. 275: 14056-14063. Ces deux souches sont elles-mêmes des dérivés ADE2+ (prototrophes pour l'adénine) de la souche de référence W303 de la levure Saccharomyces cerevisiae décrite par Bailis A. M. et al., 1990, Genetics 126, 535-547). La souche W303 est déposée à l'ATCC sous le numéro ATCC 201239. Méthodes génétiques utilisées Les méthodes employées pour croiser des souches et pour disséquer les asques sont celles décrites par Sherman et al., 1979, Methods in Yeast Genetics: a Laboratory Manual , Cold Spring Harbor, N.Y. 2877011 16 Les protocoles classiques de manipulation de gènes dans Saccharomyces cerevisiae ont été employés et les transformations de levure ont été effectuées selon la méthode de Gietz et al., 1992, Nucleic Acids Res. 20, 1425. Les remplacements de gènes ont été effectués selon la méthode décrite par Rothstein (Rothstein, 1991, Methods Enzymol. 194, 281-301). L'intégration correcte est vérifiée à chaque fois soit par Southern blotting , soit par amplification en chaîne par polymérase (PCR). Les stratégies utilisées lors des manipulations de gènes ont été conçues pour qu'aucun fragment d'ADN de E. coli ne reste dans le génome de la levure. Les souches obtenues ne contiennent donc que des séquences d'ADN de Saccharomyces cerevisiae. Mesure de l'accumulation et de l'excrétion de la SAMpar chromatographie à haute pression Les mesures de concentration de SAM dans les surnageants de culture ou sur des extraits des cellules par chromatographie liquide à haute pression ont réalisés selon la méthode de Wise et al., 1997, J. Chromatogr. B. Biomed. Sci. Appl., 696,145-152) sur une résine Waters Spherisob ODS2, en employant des standards de SAM de concentrations connues. Mesure de l'excrétion de la SAM par méthode microbiologique. Pour ce travail, une méthode rapide de mesure de SAM par alimentation croisée a été développée. Cette méthode emploie une souche test, qui est une souche particulière de Saccharomyces cerevisiae de génotype MATa, his3, leu2, ura3, ade2, trp, saml::LEU2, sam2:: HIS3 qui présente une disruption les deux gènes SAM] et SAM2 codant les SAM synthétases et dont la croissance requiert absolument un apport de SAM exogène. Pour mesurer l'excrétion de SAM, cette souche est cultivée dans du milieu contenant des concentrations croissantes de surnageant des cultures des souches testées. Le rendement des cultures ainsi réalisées est proportionnel à la quantité de SAM présente dans le surnageant. Une courbe de calibration est réalisée à chaque expérience en employant de la SAM. La souche à tester est cultivée pendant 24 heures dans 5 ml de milieu complet YPD (Kuras et al. 2002, 2002, Mol. Cell 10, 69-80). Après centrifugation, la totalité des cellules est transférée dans 5 ml de milieu de production et incubée sous agitation pendant 24 heures à 30 C. Les surnageants de culture sont ensuite récupérés par élimination des cellules par centrifugation suivie d'une filtration sur filtres 0.45 microns et des aliquotes de ces surnageants sont ajoutés à des cultures de la souche test. 2877011 17 EXEMPLE 1 Identification de gènes dont l'inactivation permet l'obtention souches de levure produisant et excrétant des quantités accrues de Sadénosylméthionine (SAM) : disruption du gène ADOI Afin de caractériser de nouvelles souches capables de produire de large concentrations de composés soufrés organiques et notamment de SAM, les Inventeurs ont recherché des souches de levure dont la croissance serait fortement altérée par la présence dans la milieu de culture de grandes quantités de SAM ou de l'un de ses précurseurs, la méthionine ou la cystéine. Une souche haploïde de Saccharomyces cerevisiae de type sauvage (W303-1A) a été mutagénéisée à l'aide d'éthyle méthane sulfonate et des colonies présentant des défauts de croissance sur de fortes concentrations de composés soufrés organiques, mais toujours aptes à croître sur de faibles concentrations de ces mêmes composés, ont été recherchées. Ce travail a permis de caractériser en particulier deux mutations ponctuelles, génétiquement indépendantes, temporairement dénommées cys5-1 et cys6-1. La présence de chacune de ces mutations induit un phénomène d'arrêt de croissance lorsque ces cellules sont cultivées en milieu minimum contenant 5 mM de L-cystéine. Par contre les souches mutées cys51 et cys6-1 sont capables de croître en présence de 0,2 mM L-cystéine employée comme source de soufre. Ce dernier phénotype démontre donc que les mutations cys5-1 et cys6-1 sont différentes des mutations strl et str4 (également dénommée cysl et cys4 respectivement) qui sont les deux seules mutations connues à ce jour qui entraînent un phénotype de non croissance sur cystéine (Chérest et Surdin-Kerjan, 1992, Genetics 130, 51- 58). Pour comprendre la nature moléculaire de ces mutations, les gènes correspondants à ces mutations ont été clonés par complémentation fonctionnelle. Une libraire génomique constituée de fragments d'ADN obtenus par digestion partielle HindIII de l'ADN d'une souche sauvage X2180-1A, clonés dans le vecteur navette pEMBLYe23 (Baldari et Cesarini, 1985, Gene 35, 27-32) a été employée et utilisée pour rechercher des plasmides capables de restaurer la croissance sur cystéine 5 mM des souches mutantes cys5-1 et cys6-1. Ces expériences ont permis d'isoler des plasmides comportant respectivement, un fragment d'ADN comprenant la phase ouverte de lecture YER043w, située sur le bras droit du chromosome V de la levure et complémentant le défaut de croissance de la souche cys5- 1, et un fragment d'ADN comprenant la phase ouverte YJR105w, située sur la bras droit du chromosome X et complémentant le défaut de croissance de la souche cys6-1. Pour confirmer l'identité des gènes CYS5 et CYS6 avec respectivement, les phases ouvertes YER043w et 2877011 18 YJR105w, une technique d'intégration dirigée au locus a été employée et a confirmé ces assignations. L'analyse des séquences peptidiques déduites de ces deux phases ouvertes a montré que: i) le gène CYS5 (YER043w) correspond au gène spécifiant la S-adénosylhomocystéine (SAH) hydrolase et dénommé SAH1. L'inactivation de ce gène dans une souche diploïde W303 et l'analyse des spores issues de la sporulation du diploïde (sahl:: URA3 / SAH1) résultant a démontré que seules deux spores par tétrades étaient viables et que toutes les spores viables étaient auxotrophes pour l'uracile, ce qui signifie que l'inactivation du gène SAH1 est létale dans un contexte génique W303 haploïde. ii) le gène CYS6 (YJR105w) est équivalent au gène ADOI et code pour l'adénosine kinase (Lecoq et al., 2001, Yeast 18, 335-342). Le gène ADOI a été inactivé dans un diploïde W303 et l'analyse des spores issues de la sporulation du diploïde (adol:: URA3 / ADOI) résultant a montré que la moitié des 40 spores étudiées étaient incapables de croître sur milieu minimum contenant 5 mM L-cystéine. L'ensemble des spores incapables de croître sur cystéine 5 mM sont protrophes pourl'uracile et correspondent donc à des spores comprenant un allèle inactivé du gène ADO1. Ces expériences démontrent que la disruption du gène ADOI résulte bien dans le même phénotype que les cellules portant la mutation cys6-1 originalement isolée. Le gène ADO1 a été cloné par complémentation fonctionnelle d'une souche portant une mutation dans le gène ADO1. La banque utilisée a été construite en insérant le produit de la digestion partielle par l'enzyme de restriction HindIII de l'ADN chromosomique isolé de la souche X2180-1A dans le site HindIII du plasmide pEMBLYe23 (1) Baldari et Cesarini, 1985, Gene 35, 27-32). Le plasmide ainsi isolé par complémentation fonctionnelle portait un fragment de 1690 pb contenant le gène ADO1 délété des 176 premières paires de base de la phase ouverte de lecture. Le plasmide portant la région ADO1 a été digéré par l'enzyme de restriction EcoRI et auto-ligaturé, conduisant ainsi à l'élimination du fragment 2 microns du plasmide pEMBLYe23 (Baldari et Cesarini (1985) Gene 35:27-32) et donc à un plasmide incapable de se répliquer chez la levure. Le fragment Asp718-Asp718 (460 pb) interne à la phase ouverte de lecture a été ensuite remplacé par le gène de sélection URA3. Ceci conduit à l'élimination d'un fragment d'Adolp borné par les codons 118 et 271. La transformation de la souche diploïde CC572 (issue du croisement W303-1A x W303-1B) par le fragment Hindlll-HindIII du plasmide ainsi obtenu et sélection des transformants prototrophes pour l'uracile, conduit au remplacement d'une des copies chromosomiques du gène ADOI par la méthode de 2877011 19 disruption en une étape (Rothstein, 1991, Methods in Enzymology, 194, 281-301). L'analyse de la descendance de la souche diploïde ainsi obtenue (CD215) hétérozygote pour la mutation adol:: URA3 montre que cette disruption n'est pas létale. La disruption a été vérifiée par PCR. Le clonage des gènes correspondant aux mutations cys5-1 et cys6-1 démontrent donc que ces deux mutations affectent deux enzymes impliquées dans le catabolisme de la SAM et plus particulièrement impliquées dans le catabolisme de la SAH, produit libéré lors des réactions de méthylation employant la SAM. Les mutations qui affectent les gènes SAH1 ou ADO1 compromettent donc le cycle du méthyle en conduisant à une accumulation de SAH, molécule qui est connue pour inhiber les méthyltransférases qui sont les utilisatrices principales de SAM. Ces mutations sont par conséquent susceptibles de modifier le rendement des réactions qui permettent la synthèse de cystéine à partir de méthionine ou de cystéine (Thomas et Surdin-Kerjan, 1997, Microbiol. Mol. Biol. Rev. 61, 503-532). La capacité de souches portant une mutation inactivant le gène ADOI à excréter de la SAM a ensuite été analysée. Le gène ADO1 a donc été disrupté dans les souches CC788-2B et CC788-2D, comme cela est décrit ci-dessus, pour donner les souches CY78-3B et CY788B de génotype MATa, his3, leu2, ura3, trpl, adol:: URA3 et MATa, his3, leu2, ura3, trpl, adol:: URA3. respectivement. Ces souches pour lesquelles le gène ADO1 a été disrupté produisent environ 10 fois plus, et excrètent environ 40 fois plus de SAM, que leurs souches parentales respectives (voir le Tableau 1). EXEMPLE 2 Obtention de souches présentant une diminution du catabolisme de la SAM: disruption des gènes SAM4 et MHT1 Une diminution du catabolisme de la SAM a donc été obtenue en inactivant le gène ADO1, ce qui modifie le fonctionnement du cycle du méthyle, cette diminution du catabolisme de la SAM s'accompagnant d'une surproduction et d'une excrétion accrue de SAM. Il est cependant important de noter que le cycle du méthyle n'est pas la voie unique de recyclage de la SAM. En effet il a été récemment démontré le recyclage de la SAM peut également avoir lieu par l'intermédiaire d'une réaction de méthylation de l'homocystéine en 2877011 20 employant la SAM comme donneur de groupe méthyle. L'existence de ce second cycle a été démontrée lors de la caractérisation fonctionnelle de deux nouveaux gènes, SAM4 et MHT1 qui codent respectivement la SAM-homocystéine méthyltransférase et la S- méthylméthionine-homocystéine méthyltransferase (Thomas et al., 2000, J. Biol.Chem. 275, 40718-40724). Alors que l'enzyme Sam4p est très spécifique et ne semble employer que la SAM comme substrat donneur de méthyle, l'enzyme Mhtlp utilise la S-méthylméthionine et la SAM comme substrat donneur de méthyle, mais son affinité pour ce second substrat est 10 fois plus faible que pour la S-méthylméthionine (Thomas et al., 2000, J. Biol.Chem. 275, 40718- 40724). Pour augmenter la production de SAM par les souches de levures, des mutations inactivant les gènes SAM4 et MHT1 ont été introduites dans les souches CY78-3B et CY78-8B de génotype MATala, his3, leu2, ura3, trpl, adol:: URA3 de l'Exemple 1. Clonage et disruption du gène MHT1 Le gène MHT1 a été cloné par la méthode du GAP repair (Rothstein (1991) Methods Enzymol. 194: 281-301; Mallet et Jacquet (1996) Yeast 12: 1351-1357; voir la Figure 1) Les fragments d'ADN compris dans les régions 5' (A) et en 3' (B) du gène MHT1 ont été amplifiés par PCR en utilisant des oligonucléotides portant des sites Clal et EcoRl (A) ou EcoRI et BamHI (B). Olil: CCATCGATGGCACAGAGCATAGATGCGCCGACC (SEQ ID NO: 23) (site Clal en gras) Oli 2: GGAATTCCGAAGGTTTGCTGTATTCGGAGC (SEQ ID NO: 24) (site EcoRl en gras) Oli3: GGAATTCCCCCCTTGCTGTGGCATGCTAG (SEQ ID NO: 25) (site EcoRl en gras) Oli4: CGGGATCCCGGTATAGCGAAGGTTGTTGTCCC (SEQ ID NO: 26) (site BamHI en gras) L'amplification conduit à l'obtention de fragments de 232 pb (A) et 344 pb (B), qui ont été digérés par EcoRl et soit par Clal (A), soit par BamHI (B). Les fragments ainsi digérés sont ligaturés avec le plasmide pRS314 digéré par Clal et BamHl, comme le montre la figure ci- dessus. Le plasmide ainsi obtenu, ouvert par EcoRl a ensuite été utilisé pour une expérience de GAP repair avec le gène chromosomique dans la souche W303-1A. Afin de disrupter le gène MHT1, le fragment Ncol- Hpal du plasmide pRS314MHT1 a été remplacé par un fragment BamHI-BamHI portant le gène de sélection HIS3 de Saccharomyces cerevisiae (pRS314: Sikorski et Hieter (1989) Genetics 122:19-27; La séquence du plasmide pRS314 est celle déposée à la banque de données EMBL, identificateur PRS314 , numéro d'accès UO3440). Ceci conduit à l'élimination du codon 128 au codon 236 de Mhtlp. Puis le plasmide a été digéré par Clal et BamHI et le fragment obtenu a été 2877011 21 utilisé pour une disruption en une étape en transformant la souche CY251-17D (Mat-a, his3, leu2, ura3, trpl, met32::TRP1, adol::URA3, sam4:.proSAM4-SAM2, et en sélectionnant les transformants prototrophes pour l'histidine. La disruption a été vérifiée par PCR en utilisant des amorces complémentaires à des séquences adjacentes à l'ORF MET32. Le gène SAM4 a été cloné et inactivé comme décrit dans Thomas et al. (2000) J. Biol. Chem. 275: 40718-40724. Les souches triples mutantes MATa/a, his3, leu2, ura3, trpl, adol::URA3, mht1::HIS3, sam4::URA3 obtenues, sont donc totalement déficientes pour le catabolisme de la SAM associé à son emploi en tant que donneur de groupement méthyle. Comme on le voit dans le Tableau 1, la présence simultanée de ces trois mutations augmente de façon significative la quantité de SAM produite et excrétée par les cellules de levure. Les souches CY168-14A et CY168-1C ont été obtenues en croisant les souches CY78-3B (Mata, his3, leu2, ura3, trpl, adol::URA3) et CY55-5A (Mata, his3, leu3, ura3, ade2, trpl, sam4:: URA3, mhtl:: HIS3) et en faisant sporuler les diploïdes obtenus, puis en analysant les tétrades obtenues afin de sélectionner les spores présentant les recombinaisons géniques souhaitées. Dans un tel croisement, on obtient les spores portant la double disruption adol::URA3, sam4::URA3 en selectionnant spécifiquement les spores URA+ dans les tétrades qui présentent 2 spores URA+ et 2 spores URA(c'est-à-dire le ditype recombinant, à opposer aux tétrades tétratype, 3 URA+, 1 URA"). EXEMPLE 3 Obtention de souches chez lesquelles la régulation transcriptionnelle négative agissant 25 sur la synthèse de la SAM a été inactivée: disruption du gène MET30 La synthèse des composés soufrés organiques, méthionine, cystéine et SAM est soumise à une régulation négative spécifique, qui agit au niveau transcriptionnel et qui se déclenche suite à une augmentation de la concentration intracellulaire de composés soufrés organiques. Pour augmenter de manière significative la synthèse de SAM en augmentant le flux de soufre réduit nécessaire à la synthèse de ce composé, cette régulation négative a été supprimée et les modifications génétiques nécessaires à cette suppression ont été combinées dans une même souche aux mutations inactivant le catabolisme de la SAM et le transport de la SAM décrites ci-dessus. 2877011 22 La modification de la régulation négative de la biosynthèse de la SAM a pu être obtenue en inactivant le gène MET30 qui code pour la sous unité réceptrice Met3O du complexe ubiquitine ligase SCFMet3o (Patton et al., 1998, Genes Dev., 12, 692-705). Pour réaliser cette inactivation, il a été nécessaire d'employer des souches possédant préalablement un gène MET4 inactivé ou un gène MET32 inactivé. En effet, la protéine Met30p est une enzyme essentielle au maintien de la viabilité des cellules de levures et l'inactivation du gène MET30 est létale. Cependant, il a été montré que la protéine Met30p n'est pas indispensable aux cellules de levures si celles-ci n'expriment pas en même temps, soit la protéine Met4p, soit la protéine Met32p (Patton et al., 2000, The Embo J. 19, 1613-1624). Disruption du gène MET30 Un fragment d'ADN BamHI - BamHI portant le gène MET30 a été cloné dans le plasmide pUC19 comme décrit dans Thomas et al. (1995) Mol. Cell. Biol. 15: 6526-6534. Le plasmide résultant a été digéré par EcoRV et déphoshorylé. Un fragment BglII-Bglll portant le gène URA3 dont les extrémités ont été rendues franches est ligaturé avec le plasmide pUC19 digéré par EcoRV-déphosphorylé, donnant un plasmide portant le gène MET30 disrupté par le gène URA3. Ceci résulte en l'élimination des codons 264 à 448 de Met30p. La souche diploïde W303 été alors transformée par le fragment BamHI-Sali et les transformants prototrophes pour l'uracile ont été sélectionnés (disruption en une étape, Rothstein, 1991, Methods in Enzymology, 194, 281-301). La recombinaison homologue a conduit ainsi à l'interruption d'une des copies chromosomiques du gène MET30 par le gène URA3. Ceci a été vérifié par Southern Blotting en employant une sonde radiomarquée correspondant au gène URA3. L'analyse de la descendance du diploïde ainsi obtenu (CD126) hétérozygote pour la mutation met30:: URA3 a montré que les tétrades ne contenaient que deux spores viables comme cela avait montré précédemment (Thomas et al., 1995, Mol. Cell. Biol., 15, 6526-6534). Il a été démontré par la suite que les souches portant les deux mutations met304, met44 ou met304, met32zl sont viables (Patton et al., 2000, The Embo J. 19, 1613- 1624). Disruption du gène MET32. Un fragment d'ADN Hindlll-EcoRI portant le gène MET32 a été cloné dans le plasmide pUC9. Le gène TRP1 de Saccharomyces cerevisiae a ensuite été inséré dans le site unique Swa1 présent dans la phase ouverte de lecture du gène MET32 (Blaiseau et al., (1997) Mol. Cell. Biol. 17: 3640-3648). Le plasmide ainsi modifié a été digéré par Hindlll et EcoR1 et le fragment obtenu (3680 pb) a été utilisé pour une disruption en une étape (Rothstein, 1991, 2877011 23 Methods in Enzymology, 194, 281-301) en transformant la souche W303-1A et en sélectionnant les transformants prototrophes pour le tryptophane. La disruption a été vérifiée par amplification en chaîne par polymérase (PCR). Les analyses réalisées avec les souches CY82-7C (génotype d'intérêt; met32d, adold), CY117-3A (génotype d'intérêt; met30A, met4zl, adold) et CY154-17A (génotype d'intérêt; met30d, met324 adold) démontrent que des souches portant une double inactivation des gènes MET4 et MET30 combinée à l'inactivation du gène ADOI surproduisent de la SAM en comparaison à une souche de type sauvage. De plus, la même analyse montre que les cellules portant une double inactivation des gènes MET30 et MET32 combinée à l'inactivation du gène ADOI produisent plus de SAM que les cellules possédant une simple inactivation du gène ADOI (voir le Tableau I). La souche CY82-7C a été obtenue en croisant les souches CC867-1D (Mata his3, leu2, ura3, ade2, trpl, met32:: TRP1, met30:: URA3) et CY78-3B (Mata, his3, leu2, ura3, trpl, adol:: URA3) et en faisant sporuler les diploïdes obtenus, puis en analysant les tétrades obtenues afin de sélectionner les spores présentant les recombinaisons géniques souhaitées. La souche CY154-17A a été obtenue en croisant les souches CC867-1D (Mata, his3, leu2, ura3, ade2, trpl,met32::TRP1, met30:: URA3) et CY82-7C (Mata, his3, leu2, ura3, trpl, adol:: URA3, met32:: TRP1). Cette double inactivation des gènes MET30 et MET32 permet donc d'inactiver la régulation transcriptionnelle négative du métabolisme du soufre inorganique sans que les souches qui possèdent cette double mutation présentent de phénotype d'auxotrophie spécifique. Cela est à comparer à la présence d'une double mutation met4zl, met30d qui, si elle permet le maintien de la viabilité cellulaire, résulte, elle, en un phénotype d'auxotrophie pour la méthionine. L'inactivation simultanée des gènes MET30 et MET32 est donc compatible avec la croissance des souches sur des milieux de culture économiquement avantageux. EXEMPLE 4 Obtention de souches montrant une augmentation de l'activité SAM synthétase: surexpression du gène SAM2 2877011 24 Comme indiqué dans l'introduction, une des étapes limitantes de la biosynthèse de la SAM est la réaction qui permet la synthèse de ce composé à partir de méthionine et d'ATP. En effet cette réaction est particulière car elle requiert la déphosphorylation totale d'une molécule d'ATP. Chez la levure, deux isoenzymes codées par les gènes SAM] et SAM2 catalysent cette réaction. Le mécanisme enzymatique de la réaction catalysée par les SAM synthétases est un mécanisme en deux étapes: la molécule d'ATP et de méthionineréagissent pour former de la SAM et du triphosphate, puis dans une seconde étape, le triphosphate est clivé en Pi et PPi. Afin d'augmenter la synthèse de SAM, les Inventeurs ont cherché à sur-exprimer les gènes SAM] et SAM2 à partir de différents promoteurs forts de levure, tels que les promoteurs des gènes PGK1 et TEF1. Des souches ont été construites dans lesquelles les copies endogènes des gènes SAM1 et SAM2 ont été remplacées par les fusions proPGKl -SAMI et proPGKl-SAM2 respectivement ou proTEF1-SAMI et proTEF1-SAM2. L'analyse de la production de SAM des souches correspondantes a permis de montrer que ces remplacements géniques conduisaient à une légère augmentation de la production de SAM. Une stratégie alternative a donc été employée et a conduit à l'ajout d'une copie supplémentaire du gène SAM2, qui a été insérée dans le chromosome XVI de la levure, en lieu et place des deux gènes adjacents SAM3 et SAM4. L'analyse de la production de SAM dans de telles souches a révélé que la présence d'une telle copie supplémentaire du gène SAM2 à ce locus génique induisait une augmentation significative de la production de SAM par les cellules de levure. Construction du gène fusion proPGKl -SAM2 Le gène SAM2 a été placé sous le contrôle du promoteur du gène PGK1 par une expérience de GAP repair . Pour cela, le promoteur du gène PGK1 porté par le plasmide pFL61 (Bonneau et al. (1991) Yeast 87: 609- 615) a été amplifié en utilisant deux oligonucléotides bi fonctionnels. Oli-5'-SAM2-PGK comprend 42 nucléotides homologues à la séquence-cible située en 5' du gène SAM2 (- 222 à -181, en gras ci-dessous), suivis de 24 nucléotides homologues au promoteur du gène PGK1 (-771 à -747). Le deuxième oligonucléotide (Oli-3'- SAM2-PGK) est formé de 45 nucléotides homologues au gène SAM2 comprenant l'ATG débutant le traduction (44 à 1, en gras ci-dessous) suivis de 30 nucléotides homologues du promoteur du gène PGK1 (-2 à -31). Les nucléotides sont comptée à partir de l'A de l'ATG débutant le traduction de chaque gène. 2877011 25 Oli-5'SAM2-PGK: GCTCTTGTAAACGACGTCAAATCTTCATATGCAAGGAGATCTGATTCCTGACT TCAACTCAAGACG (SEQ ID NO: 27) Oli-3'-SAM2-PGK: CCGACGGATTCAGAGGTAAATAAGAAAGTTTTGCTCTTGGACATTGTTTTATA TTTGTTGTAAAAAGTAGATAAT (SEQ ID NO: 28) Le fragment obtenu par amplification est utilisé dans une expérience de GAP repair avec le plasmide pSAM2-3 (Thomas et al., 1988, Mol. Cell. Biol., 8, 5132-5139) dans la souche W303-1A. Le plasmide résultant de cette expérience porte le gène SAM2 sous le contrôle du promoteur du gène PGK1 (voir Figure 2A). Le plasmide obtenu a été digéré par Hindlll, et le fragment généré a été utilisé dans une expérience de disruption en une étape (Rothstein, 1991, Methods in Enzymology, 194, 281- 301) en transformant la souche W744-1A et en sélectionnant des transformants prototrophes pour la SAM. La disruption a été vérifiée par PCR. Remplacement des gènes SAM3 et SAM4 par le gène fusion proPGK1-SAM2 Dans un mode de mise en oeuvre avantageux des procédés selon l'invention, le gène SAM4 a été inactivé de façon simultanée avec le gène SAM3 adjacent qui code pour le transporteur à haute affinité de la SAM, de façon à diminuer significativement la possibilité que les cellules de levure ne re-prélèvent la SAM qu'elles auraient excrétée. Dans un autre mode de mise en oeuvre avantageux des procédés selon l'invention, cette double inactivation des gènes SAM3 et SAM4 a été réalisée en insérant à leur locus une fusion surexprimant l'enzyme Sam2p (SAM synthétase 2) sous le contrôle du promoteur fort constitutif PGK1. Les cellules de levure ainsi construites présentent l'avantage d'avoir, grâce à cette modification spécifique apportée à leur génome, un catabolisme de la SAM diminué, un système de transport à haute affinité de la SAM inactivé et une expression accrue de l'activité SAM synthétase grâce à la présence d'un gène SAM2 supplémentaire, de surcroît exprimé à partir d'un promoteur fort constitutif (alors que les promoteurs des gènes natifs SAM1 et SAM2 sont régulés de manière négative par l'augmentation des concentrations endogènes de composés soufrés organiques, Thomas et Surdin-Kerjan, 1997, Microbiol. Mol. Biol. Rev. 61, 503-532). Les souches portant au niveau du bras gauche du chromosome XVI l'insertion de la fusion proPGK1-SAM2 en lieu et place des gènes SAM3 et SAM4 2877011 26 (construction indiquée dans le génotype des souches comme sam3sam4::proPGKl-SAM2) démontrent effectivement un synthèse accrue de SAM par rapport à leur souche parentale. Le plasmide portant le gène SAM2 placé sous le contrôle du promoteur du gène PGK1, obtenu comme décrit ci-dessus, a été utilisé pour amplifier le fragment portant le gène proPGK-SAM2 avec des oligonucléotides bi fonctionnels. L'oligonucléotide SAM3-PGK comprend 77 nucléotides homologue à la séquence cible en 5' du gène SAM3 (-80 à -3, apparaissant en gras ci-dessous) suivis de 24 nucléotides homologues à la région promoteur du gène PGK1 (-771 à -748). L'oligonucléotide SAM4-SAM2 comprend 70 nucléotides homologues à la séquence cible en 3' du gène SAM4 (1043 à 974, apparaissant en gras ci-dessous) suivis par 21 nucléotides homologues à la fin du gène SAM2 (1155 à 1134). Les nucléotides sont numérotés à partir de l'ATG débutant la traduction pour chaque gène. Oli-SAM3-proPGK: TGATGTTATGTCGAGAGCTCTGAAAACCAATTATTTTGAAAGCTAACATTTCA AAAGGCTATTTCTTCTGAAATATCGATTCCTGACTTCAACTCAAGACG (SEQ ID NO: 29) Oli-SAM4SAM2: GTGTAACATGCTGCTTTTAGCATATATATAATGTTAAGAATTATTTAACTTCT TTAAAAACGCATTTACGTTAAAATTCCAATTTCTTTGG (SEQ ID NO: 30) Le fragment obtenu par amplification a été utilisé dans une expérience de disruption en une étape (Rothstein, 1991, Methods in Enzymology, 194, 281-301) en transformant la souche W744-1A et en sélectionnant les transformants prototrophes pour la SAM (voir la Figure 2B. Le remplacement simultané des gènes SAM3 et SAM4 par le gène proPGK-SAM2 a été vérifié par PCR. Les souches CY273 ont été obtenues en croisant les souches CY270-7D (Mata, his3, leu2, ura3, trpl, met32::TRP1,adol:: URA3, sam3-sam4:.proPGKl-SAM2) et CY258-10D (Mata, his3, leu2, ura3, trpl, met32:: TRP1, met30:: URA3, ado1.: URA3, sam3-sam4:.proSAM4-SAM2, mhtl) et en faisant sporuler les diploïdes obtenus, puis en analysant les tétrades obtenues afin de sélectionner les spores présentant les recombinaisons géniques souhaitées. 2877011 27 EXEMPLE 5 Obtention de souches présentant des capacités de transport de la méthionine accrues: surexpression du gène AGP1 Un des procédés mis en oeuvre par la présente invention concerne la culture de cellules de levure génétiquement modifiées afin de produire de large quantité de SAM. Dans un mode avantageux des procédés mis en oeuvre, le milieu de culture des cellules de levure contient de forte concentration de méthionine, produit peu onéreux, qui est le précurseur immédiat de la SAM. Afin d'augmenter dans de telles conditions de culture la production de SAM, la capacité de transport de la méthionine des cellules du milieu de culture vers leurs cytoplasme a été améliorée. Pour prélever la méthionine du milieu extérieur, la levure possède au moins trois systèmes de transport dont les caractéristiques enzymatiques sont différentes. Ces systèmes de transport diffèrent notamment par leur affinité pour la méthionine et leur capacité de transport de cet acide aminé soufré. Ces systèmes sont appelés méthionine perméase à haute affinité, codée par le gène MUP1, méthionine perméase à faible affinité, codée par le gène AGP1 (et peut être d'autres gènes) et méthionine perméase à très faible affinité, codée par le gène MUP3 (Isnard et al., 1996, 1 Mol. Biol. 262, 473-484) L'expression de ces différents gènes est soumise à des régulations complexes et les capacités de transport de la méthionine varient donc largement selon les conditions de croissance. Pour augmenter le prélèvement de la méthionine du milieu extérieur et le rendre moins dépendant des variations environnementales, des souches de levures ont été construites chez lesquelles le gène AGP1 codant pour la méthionine perméase à faible affinité, a été placé sous le contrôle du promoteur fort constitutifs PGK1. La fusion proPGK1-AGP1 a été employée pour remplacer la copie endogène du gène AGP1. La mutation agpl:.proPGKl-AGP1 a été introduite dans des souches présentant des mutations met30A, met32A, sam4A, mhtlA, adolA et l'analyse de la souche correspondante CY208-7B démontre une augmentation de la quantité de SAM produite suite à l'introduction au locus AGP1 de la fusion proPGK1-AGP1. Remplacement du gène AGP1 par le gène fusion proPGKI -AGP1 Le gène AGP1 a été placé sous le contrôle du promoteur du gène PGK1 par une expérience de GAP repair . Pour cela, le promoteur du gène PGK1 porté par le plasmide pFL61 a été amplifié en utilisant deux oligonucléotides bi fonctionnels. Oli-5'-AGP1-PGK comprend 45 nucléotides homologues à la séquence cible située en 5' du gène AGP1 (-387 à - 2877011 28 342, en gras ci-dessous), suivis de 24 nucléotides homologues au promoteur du gène PGK1 (-771 à -747). Le deuxième oligonucléotide (Oli-3'- AGP1-PGK) est formé de 45 nucléotides homologues au gène AGP1 comprenant l'ATG débutant le traduction (45 à 1, en gras ci-dessous) suivis de 30 nucléotides homologues du promoteur du gène PGK1 (-1 à -30). Les nucléotides sont comptée à partir de l'A de l'ATG débutant le traduction de chaque gène. Oli-5'-AGP1-PGK: CACGTCCAGCGGATTGCTGCTCCTTAGTAGTCCACAGTTCTTAAGGATTCCTG ACTTCAACTCAAGACG (SEQ ID NO: 31) Oli-3'-AGP 1-PGK: ATTTTTCAAGTCTTTCAGTTCGTATAGAGACTTCGACGACGACATTGTTTTAT ATTTGTTGTAAAAAGTAGATAAT (SEQ ID NO: 32) Le fragment obtenu par amplification a été ensuite utilisé dans une expérience de GAP repair avec le plasmide pI1406 (le vecteur pFL38 portant un fragment de 3 kb comprenant le gène AGP1, Iraqui et al., 1999, Mol. Cell. Biol., 19, 9891001) dans la souche W303-1A. Le plasmide résultant de cette expérience porte le gène AGP1 sous le contrôle du promoteur du gène PGK1 (voir Figure 3). Ce plasmide a été digéré par BssHII et BamHI, et le fragment généré a été utilisé dans une expérience de disruption en une étape (Rothstein, 1991, Methods in Enzymology, 194, 281-301), en transformant la souche EK011 (Iraqui et al. (1999) Mol. Cell. Biol. 19: 989-1001) et en sélectionnant les transformants capables de croître sur un milieu contenant 1 mM d'isoleucine (la souche EK011 qui porte simultanément une délétion dans le gène GAP1 et une disruption du gène AGP1 a une croissance très ralentie sur une forte concentration d'isoleucine (1 mM). De plus, dans cette souche la disruption du gène AGP1 a été effectuée par le gène KanMX, la souche est donc résistante à la généticine (Iraqui et al., 1999, Mol. Cell. Biol, 19, 989-1001). Un transformant, CD225 capable de croître sur 1 mM isoleucine et devenu parallèlement sensible à la généticine a été conservé. Le remplacement du gène AGP1 par le gène proPGK-AGP1 a été vérifié par PCR. Les souches CY131 ont été obtenues en croisant les souches CC867-1D (Mata his3, leu2, ura3, ade2, trpl, met32::TRP1, met30:: URA3) et CY121-3D (Mata, his3, ura3, trpl, met32::TRP1, adol::URA3, agpl:. proPGKI -AGPI) et en faisant sporuler les diploïdes 2877011 29 obtenus, puis en analysant les tétrades obtenues afin de sélectionner les spores présentnat les recombinaisons géniques souhaitées. Les souches CY208 ont été obtenues en croisant les souches CY188-9A (Mata, his3, trpl, ura3, met32::TRP1, adol:: URA3, met30::: URA3, sam4::URA3, mht1::HIS3) et CY121-1C (Mata his3, ura3, trpl, met32:: TRP1, adol:: URA3, agpl:.proPGK1-AGP1) et en faisant sporuler les diploïdes obtenus, puis en analysant les tétrades obtenues afin de sélectionner les spores présentant les recombinaisons géniques souhaitées Les souches CY284 ont été obtenues en croisant les souches CY273-2B (Mata, his3, leu2, ura3, trpl,met32::TRP1, met30:: URA3, adol:: URA3, sam3-sam4:.proPGK1-SAM2) et CY121-1C (Mata, his3, leu2, ura3, trpl, met32:: TRP1, agpl::proPGK1-AGPI) et en faisant sporuler les diploïdes obtenus, puis en analysant les tétrades obtenues afin de sélectionner les spores présentant les recombinaisons géniques souhaitées. EXEMPLE 6 Analyse de l'effet de la mutation ADE2 sur la production de SAM L'analyse de la production et d'excrétion de SAM dans les différentes souches qui ont été construites pour cette invention ont permis d'observer que la production et l'excrétion de SAM était systématiquement plus faible dans des souches portant une mutation inactivant le gène ADE2 (gène situé sur le chromosome XV, codant pour la phosphoribosylaminoimidazole carboxylase) que dans des souches comprenant un génome exactement équivalent mais portant un allèle sauvage du gène ADE2. Cette mutation affecte la biosynthèse des purines mais son influence sur la capacité des cellules de levure à surproduire de la SAM reste difficile à expliquer. Néanmoins, au vu des résultats obtenus, les souches construites pour la présente invention porteront toutes un allèle sauvage non muté du gène ADE2. EXEMPLE 7 Culture des souches de levures génétiquement modifiées de l'invention dans un milieu de culture économiquement avantageux La cultures des souches haploïdes de génotype CY208-7B et CY208-11B, CY273-9D et CY273-2B, CY284-9B et CY284-2B et des souches diploïdes CY303-1 et CY303-4, et CY304-1 et CY304-2 (voir le Tableau 1), dans un milieu de culture économiquement avantageux (contenant entre 3 et 10 % de phosphate d'ammonium, entre 0,5 et 5 % de sulfate d'ammonium, entre 0,1 % et 1 % de sulfate de magnésium, entre 0,5 et 4 % de citrate de 2877011 30 sodium, entre 5 et 10 % de glucose et entre 0,1 et 2 % de DL-méthionine) ont permis d'obtenir en moyenne environ 8 g par litre en 24 heures de SAM (voir le Tableau 1). Environ 40 % de cette SAM produite est excrétée dans le milieu de culture et peut donc être purifiée sans cassage des cellules. Les souches CY208 ont été obtenues en croisant les souches (Mata, his3, trpl, ura3, met32::TRP1, adol:: URA3, met30:: URA3, sam4::URA3, mhtl::HIS3) et CY121-1C CY121-1C (Mata his3, leu2, ura3, trpl, met32:: TRP1, agpl:.proPGK1-AGP1) et en faisant sporuler les diploïdes obtenus, puis en analysant les tétrades obtenues afin de sélectionner les spores présentant les recombinaisons géniques souhaitées. Les souches CY273 ont été obtenues en croisant les souches CY270-7D (Mata, his3, leu2, ura3, trpl,met32::TRP1,ado1:: URA3, sam3-sam4:.proPGKI-SAM2) et CY258-1OD (Mata, his3, leu2, ura3, trpl, met32::TRP1,met30:: URA3, adol:: URA3, sam3-sam4:.proSAM4- SAM2, mhtl) et en faisant sporuler les diploïdes obtenus, puis en analysant les tétrades afin de sélectionner les spores présentant les recombinaisons géniques souhaitées. Les souches CY284 ont été obtenues en croisant les souches CY273-2B (Mata, his3, leu2, ura3, trpl,met32::TRP1, met30:: URA3, adol:: URA3, sam3sam4:.proPGKI-SAM2) et CY121-1C (Mata, his3, leu2, ura3, trpl, met32::TRP1, agpl:.proPGK1-AGP1) et en faisant sporuler les diploïdes obtenus, puis en analysant les tétrades obtenues afin de sélectionner les spores présentant les recombinaisons géniques souhaitées. 2877011 31 Tableau 1: génotype des souches obtenues et profil de production et d'excrétion de la SAM associé Souche Génotype SAM totale SAM Excrétion (g /1 / 24h) excrétée (g /1/24h) CC788-2B MATa, his3, leu2, ura3, ade2, trpl 0.229 0,016 7 (souche de référence) CY78-3B MA Ta, his3, leu2, ura3, ade2, trp1, 2,85 0, 60 21 adold adol:: URA3 CY168-1C MATo his3, leu2, ura3, trpl, sam4.. URA3, 2,41 1,13 47 adold sam44 mhtld mht1::HIS3, ado1:: URA3 CY154-17A MATa his3, leu2, ura3, trpl, met32:: TRPI, 3,01 1,96 59 met32A met30d ado1A met30:: URA3, adol:: URA3 CY131-14A MATa, his3, ura3, trpl, met32::TRPI, 4,88 1,95 40 met32d met304 ado1A met30:: URA3, adol:: URA3, agp 1: .proPGK1 -AGPI agpl:. proPGK1-AGPI CY188-9A MATa, his3, leu2, ura3, trpl, sam4::URA3, 6,32 3,69 58 ado1A sam4A mhtld mht1::HIS3, met32:: TRPI, met30:: URA3, met32A met304 adol:: URA3 CY208-7B MATa, his3, ura3, trpl, sam4::URA3, 7,16 2,4 33 ado14 sam4A mhtld mht1::HIS3, met32::TRP1, met30:: URA3, met32d met304 ado1:: URA3, agpl:.proPGK1-AGPI agp 1: . proPGK1 -AGPI CY208-11D MAT his3, ura3, trpl, sam4::URA3, 7,74 3,21 41 ado1A sam44 mhtld mht1::HIS3, met32::TRP1, met30:: URA3, met324 met3OA adol:: URA3, agpl:.proPGK1-AGPI agpl: .proPGK1 -AGPI CY273-9D MATa, his3, leu2, ura3, trpl, sam4:: URA3, 8,32 4,90 59 adol4 sam44 mhtld mht1::HIS3, met32:: TRPI, met30:: URA3, met32A met30d adol:: URA3, sam3-sam4:.proPGK-SAM2 sam3-sam4:. proPGK-SAM2 CY273-2B MAT his3, leu2, ura3, trpl, sam4:: URA3, 8,29 4,56 55 ado1A sam44 mht14 mht1::HIS3, met32:: TRPI, met30:: URA3, met324 met3OA ado1:: URA3, sam3-sam4: .proPGK- SAM2 sam3-sam4:. proPGK-SAM2 CY284-9B MATa, his3, ura3, trpl, sam4::URA3, 8,54 4,54 53 ado14 sam4A mhtlA mht1::HIS3, met32:: TRPI, met30:: URA3, met32d met30A ado1:: URA3, sam3-sam4:.proPGK-SAM2, sam3-sam4:. proPGK- SAM2 agp1:: proPGK-AGPI. agpl:. proPGK1-AGPI CY284-2B MATa, his3, ura3, trpl, sam4:: URA3, 8,29 4, 56 55 ado14 sam44 mhtld mht1:: HIS3, met32:: TRPI, met30:: URA3, met324 met3OA ado1:: URA3, sam3-sam4:. proPGK-SAM2 sam3-sam4:. proPGK-SAM2, agpl:.proPGK1-AGP1 agp1:.proPGK-AGPI. MA Ta/MATcy his3/his3, leu2/leu2, 6,12 3,88 63 ura3/ura3, trp 1 /trp 1, sam4.. URA3/sam4:: URA3, mht1:: HIS3/mhtlHIS3, m et32.. TRP1 /met32:: TRP1, met3O.. URA3/met30:: URA3, adol:. URA3/adol:: URA3, sam3sam4:.proPGK-SAM2/sam3- sam4::proPGK-SAM2. CY303-4 (CY273-9D x CY273-9D) CY304-2 (CY284-2B x CY284-9B) MATa/MATo his3/his3, leu2/leu2, ura3/ura3, trpl/trpl, sam4:: URA3/sam4:: URA3, mht1:: HIS3/mhtl:: HIS3, met32: TRP1 /met32:: TRP1, met30:: URA3/met30:: URA3, ado1:: URA3/ado1:: URA3, sam3- sam 4: .proP GK-SAM2/sam 3-sam4:.proPGK-SAM2, agpl:. proPGKAGP1 /agp 1: . proPGK-A GP1. 33 REVENDICATIONS 1. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée, dans laquelle le gène codant pour l'adénosine kinase a été inactivé par modification génétique, pour la production de S-5 adénosylméthionine (SAM) . 2. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon la revendication 1, caractérisée en ce que la séquence du gène codant pour l'adénosine kinase de ladite souche a été disruptée. 3. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle ladite souche présente au moins une autre modification génétique choisie parmi le groupe comprenant: l'inactivation d'un gène choisi parmi le groupe comprenant le gène codant pour le transporteur à haute affinité de la S-adénosylméthionine, le gène codant pour la S-adénosylméthionine-homocystéine méthyle transférase, le gène codant pour la S-méthylméthionine-homocystéine méthyle transférase, et le gène codant pour la sous-unité réceptrice Met30 du complexe ubiquitine ligase SCFMet3 , - l'introduction d'une copie supplémentaire de la séquence d'un gène choisi parmi le groupe comprenant le gène codant pour la S- adénosylméthionine synthétase 1, le gène codant pour la Sadénosylméthionine synthétase 2, le gène codant pour la méthionine perméase à faible affinité, le gène codant pour la méthionine perméase à haute affinité, le gène codant pour la méthionine perméase à très faible affinité, un gène codant pour une perméase à large spectre pouvant transporter la méthionine, dans le génome de ladite souche, et - la mutation de la séquence d'un promoteur d'un gène choisi parmi le groupe comprenant le gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 1, le gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 2, le gène codant pour la méthionine perméase à faible affinité, le gène codant pour la méthionine perméase à haute affinité, le gène codant pour la méthionine perméase à très faible affinité, un gène codant pour une perméase à large spectre pouvant transporter la méthionine. 2877011 34 si 4. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon la revendication 3, caractérisée en ce que la séquence d'au moins un des gènes choisi parmi le groupe comprenant le gène codant pour le transporteur à haute affinité de la S-adénosylméthionine, le gène codant pour la S-adénosylméthionine-homocystéine méthyle transférase,, le gène codant pour la S-méthylméthionine-homocystéine méthyle transférase, et le gène codant pour la sous-unité réceptrice Met3O du complexe ubiquitine ligase SCFMet30 de la dite souche a été disruptée. 5. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon la revendication 3 ou 4, caractérisée en ce qu'au moins une séquence d'un promoteur d'un des gènes de ladite souche choisi parmi le groupe comprenant le gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 1, le gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 2, le gène codant pour la méthionine perméase à faible affinité, le gène codant pour la méthionine perméase à haute affinité, le gène codant pour la méthionine perméase à très faible affinité, un gène codant pour une perméase à large spectre pouvant transporter la méthionine, a été substituée par une séquence d'un promoteur fort de levure. 6. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon l'une des revendications 3 à 5, caractérisée en ce que les gènes codant pour la sous-unité réceptrice Met3O du complexe ubiquitine ligase SCFMet3o, la Sméthylméthionine-homocystéine méthyle transférase, l'adénosine kinase, et la S-adénosylméthionine-homocystéine méthyle transférase de la dite souche sont inactivés, notamment par disruption des séquences desdits gènes. 7. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon l'une des revendications 3 à 6, caractérisée en ce qu'une copie supplémentaire de la séquence du gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 2, couplée à un promoteur fort, a été introduite dans le génome de ladite souche. 8. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon l'une des revendications 3 30 à 7, caractérisée en ce la séquence du promoteur du gène codant pour la méthionine perméase à faible affinité de ladite souche a été substituée par la séquence d'un promoteur fort. 9. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon l'une des revendications 3 à 8, caractérisée en ce que le gène codant pour le transporteur à haute affinité de la S- adénosylméthionine et le gène codant pour la S-adénosylméthionine- homocystéine méthyle transférase de ladite souche ont été inactivés par substitution de la séquence desdits gènes par une copie de la séquence du gène codant pour la S-adénosylméthionine synthétase 2, couplée à un promoteur fort. 10. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon l'une des revendications 5 à 9, caractérisée en ce que le promoteur fort est choisi parmi le groupe comprenant les promoteurs naturels des gènes PGK1, ADH1, TDH3, TEF1, PHO5, LEU2, et GAL1 de ladite souche. 11. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisée en ce qu'elle est prototrophe pour l'adénine. 12. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon l'une des revendications 15 1 à 11, caractérisée en ce qu'elle est haploïde. 13. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisée en ce qu'elle est diploïde. 14. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon la revendication 13, caractérisée en ce que lorsque les modifications génétiques sont chromosomiques, lesdites modifications génétiques sont portées par chacun des deux chromosomes homologues. 15. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon l'une des revendications 25 1 à 14, caractérisée en ce que ladite souche ne comprend pas de séquences nucléotidiques hétérologues. 16. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon l'une des revendications 1 à 15, caractérisée en ce que ladite souche est choisie parmi le groupe comprenant les levures du genre Saccharomyces, Candida, Pichia, Schizosaccharomyces, et Kluyveromyces, et que ladite souche est notamment une levure de l'espèce Saccharomyces cerevisiae. 17. Utilisation d'une souche de levure génétiquement modifiée selon l'une des revendications 3 à 10, caractérisée en ce que la souche appartient à l'espèce Saccharomyces cerevisiae et en 2877011 36 ce que lorsque le gène codant pour la sous-unité réceptrice Met3O du complexe ubiquitine ligase SCFMet3o (MET30) de ladite souche est inactivé, notamment par disruption de la séquence du gène MET30, alors le gène MET4 et/ou le gène MET32 de ladite souche est également inactivé, notamment par disruption des séquences géniques correspondantes. 18. Souche de levure génétiquement modifiée présentant une production et une excrétion accrue de S-adénosylméthionine par rapport à la souche de levure non modifiée correspondante, ladite souche génétiquement modifiée étant telle que définie dans l'une des revendications 3 à 17. 19. Procédé de production de S-adénosylméthionine, caractérisée en ce qu'il comprend les étapes de: - culture d'une souche de levure génétiquement modifiée telle que définie dans l'une des revendications 1 à 17 dans un milieu de culture, - purification de la S-adénosylméthionine à partir du surnageant du milieu de culture et/ou des cellules de levure génétiquement modifiées. 20. Procédé selon la revendication 19, caractérisé en ce que la culture est réalisée en chémostat. 21. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de substance active au moins une souche de levure telle que définie dans l'une des revendications 1 à 17, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 22. Utilisation d'une souche de levure telle que définie dans l'une des revendications 1 à 17, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des maladies nécessitant un apport accru en Sadénosylméthionine, telle que la dépression, l'arthrite, les fibromyalgies, ou la stérilité masculine. 23. Utilisation d'une souche de levure telle que définie dans l'une des revendications 1 à 17, pour la préparation d'aliments ou de boissons enrichis en S-adénosylméthionine. 24. Préparation alimentaire ou boisson, destinée à l'alimentation humaine ou animale, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une souche de levure telle que définie dans l'une des revendications 1 à 17.