FR 2882057 A1 20060818 FR 0501557 A 20050216 SYNTHESE PEPTIDIQUE SUR SUPPORTS SOLUBLES DE TYPE SELS D'ONIUM La présente invention concerne de nouveaux supports pour la synthèse peptidique. I. ART ANTERIFUR Deux techniques pour la synthèse peptidique peuvent être mises en oeuvre: la synthèse en solution non supportée et la synthèse sur supports. La première méthode consiste à assembler les peptides par couplage des différents acides aminés en solution. Cette approche est laborieuse car chaque étape nécessite une purification complexe et coûteuse. La synthèse peptidique sur support a donc été développée pour palier ces problèmes. En 1963, Merrifield a introduit la synthèse peptidique sur support solide [SPPS (R. B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 1963, 85, 2149)]. Quatre étapes sont associées à cette méthodologie: 1) Greffage d'un substrat sur la résine 2) Modification de la structure greffée 3) Décrochage de la molécule de son support 4) Analyse et purification éventuelle de la molécule (Schéma 1). F support insoluble ( F= fonction permettant le greffage) Y protection permanente de la chaîne latérale X protection temporaire de l'amine terminale A groupe carboxylique activé H2NOH + HOH bras 1 0 O R Schéma 1: Principe de la synthèse peptidique sur support solide De nombreux avantages sont associés à cette technique [a) S. R. Wilson, A. W. Czarnik, "Combinatorial Chemistry: Synthesis and Application", John Wiley and Sons New York, 1997; b) I. M. Charken, K. D. Janda, "Molecular Diversity and Combinatorial Chemistry", American Chemical Society, Washington, DC., 1996; c) R.E. Sammelson, M.J. Kurth, Chem. Rev. 2001, 101,137]: - la purification, effectuée par de simples lavages, est très aisée, ce qui rend 10 l'automatisation possible. - un excès de réactifs peut être utilisé pour rendre les réactions quantitatives (typiquement 4 à 5 équivalents). - les techniques de synthèse parallèle ou de "split and mix" sont adaptables. Cette méthodologie présente également des inconvénients: 15 - les prix des résines fonctionnalisées sont très élevés. - leur charge spécifique est très faible (souvent inférieure à 1 mmol/g de résine, atteignant rarement 2 mmol/g). - les réactions ont lieu en conditions hétérogènes. - les méthodes de suivi des réactions sont peu nombreuses et souvent 5 associées à un clivage préalable de la résine (méthode destructrice). En pratique, des méthodes colorimétriques sont utilisées pour vérifier la complétion de la réaction (test de Kaiser [E. Kaiser, R. L. Colescott, C. D. Bossinger, P.I. Cook, Anal. Biochem., 1970, 34, 595] ; test au TNBS [W. S. Hancock, J.E. Battersby, Anal. Biochem., 1976, 71, 260]) mais ces o techniques prennent du temps et sont donc rarement intégrées dans le processus d'automatisation. Les synthèses basées sur la technologie Fmoc (9-fluorényl méthoxycarbonyle) peuvent être suivies en UV (ultra violet) grâce à l'absorbance de ce groupe protecteur et de ses produits de dégradation. - La synthèse convergente de peptides n'est pas possible sans clivage préalable. - Il est impossible de séparer les molécules supportées attendues des sous produits greffés sur la résine (issus de réactions incomplètes ou de réactions secondaires) et la purification finale par HPLC (chromatographie liquide haute pression) sur phase inversée du peptide après clivage ne permet pas toujours de séparer les peptides ayant des chaînes tronquées ou comportant des suppressions (Schéma 2), ainsi que les diastéréomères formés par épimérisation lors de la synthèse. Peptide attendu: A B C D E Chaînes tronquées: A B C D A B C A B A Chaînes comportant des suppressions: A - C D E A B - D E ABC - E A B - D A B - - E A - C D É C - E É - - D E É C É -D É - - E Schéma 2: exemples de sous produits obtenus lors de la synthèse d'un pentapeptide Une autre gamrne de support a donc été développée: L'emploi de polymères solubles [a) D. J. Gravert, K. D. Janda, Chem. Rev. 1997, 97, 489; b) P. Wentworth, K. D. Janda, Chem. Comm., 1999, 1917; c) P. M. Fischer, D. I. Zheleva, J. Peptide Sci., 2002, 8, 529] permet d'effectuer les réactions en conditions homogènes tout en conservant la possibilité de purification aisée par simple précipitation du polymère par ajout d'un solvant approprié puis filtration du milieu réactionnel et lavage pour éliminer les réactifs en excès et les sous produits. Les polyéthylèneglycols (PEG 2000 et 5000 en particulier) o sont les polymères solubles les plus utilisés pour la synthèse peptidique sur polymère soluble. Les produits peuvent être caractérisés à l'aide de la RMN (résonance magnétique nucléaire du proton et du carbone, par infrarouge et en spectrométrie de masse sans clivage préalable du support. Cependant divers problèmes sont associés à cette méthodologie: -pour avoir les propriétés physico-chimiques requises, les polymères doivent avoir une masse comprise entre 2000 et 20000 daltons, ce qui implique une charge spécifique très faible (0.05 à 0.5 mmol/g pour des polymères mono branchés).. - la purification des produits est souvent laborieuse (problèmes de 20 coprécipitation...). - l'automatisation est plus délicate qu'en synthèse sur support solide (solutions très visqueuses, opérations de précipitation, recristallisation coûteuses en temps, nécessité d'effectuer plusieurs couplages successifs pour rendre les réactions quantitatives). - une mauvaise solubilisation des PEG est observée pour de grands peptides (agrégation des chaînes de peptides). - comme en synthèse sur phase solide, il est impossible de séparer les molécules supportées attendues des sous produits greffés au polymère et il n'est pas toujours possible de purifier totalement le peptide clivé par HPLC en phase inverse. En pratique, l'emploi de polymères solubles pour la synthèse peptidique reste rare. La synthèse de peptides de moins de cinq aminoacides est usuellement effectuée en solution alors que la synthèse sur support solide est utilisée pour des peptides plus longs. Celle-ci est adéquate pour produire de petites quantités de peptides, mais pour le scale-up, en particulier lorsque des kilogrammes sont nécessaires pour des productions industrielles, la synthèse traditionnelle en solution reste la plus adaptée. II existe également des techniques dites "hybrides" qui combinent la synthèse sur support solide et la synthèse en solution (K. Barlos, D. Gatos, Biopolymers, 1999, 51, 266). Une autre alternative développée récemment consiste à employer des supports fluorés pour la synthèse peptidique [a) M. Mizuno, K. Goto, T. Miura, D. Hosaka, T. Inazu, Chem. Comm., 2003, 972; b) M. Mizuno, K. Goto, T. Miura, T. Matsuura, T. Inazu, Tetrahedron Lett., 2004, 45, 3425]. Le peptide est greffé sur un support fluoré. Les réactions ont lieu en solvant organique classique puis une extraction par un solvant fluoré permet d'extraire sélectivement le peptide portant le groupement fluoré (Schéma 3). Cette technique permet de combiner les avantages de la synthèse sur support solide (purification aisée, utilisation d'un grand nombre d'équivalents de réactifs pour rendre les réactions quantitatives) et de la synthèse classique en solution (purification des intermédiaires possibles, suivi des réactions par RMN, CCM (chromatographie couche mince) , MS (spectrométrie de masse), possibilité d'effectuer des réactions à grande échelle). Cependant deux inconvénients majeurs sont associés à cette méthode: D'une part elle emploie des solvants fluorés dont la synthèse n'est pas respectueuse de l'environnement, d'autre part le peptide supporté doit contenir un important pourcentage en masse de fluor (supérieur à 40 % en masse) pour permettre une purification correcte (sinon des émulsions ou des précipitations du peptide sont observées pendant l'extraction), ce qui implique que cette technologie n'est valable que pour de petits peptides. Réaction en solvant organique Déprotection et couplage peptidique Solvant organique (sous produits et réactifs en excès) Solvant fluoré (peptide greffé sur support fluoré) Produit Clivage Peptide Schéma 3: Principe de la synthèse sur supports fluorés Les technologies actuelles présentent donc des limitations. Le développement de nouvelles technologies pour la synthèse peptidique est donc nécessaire. Les nouvelles technologies SOSLI (synthèse organique supportée sur liquide ionique) [S. Gmouh, M. Vaultier, "compositions contenant des liquides ioniques et leurs utilisations, notamment en synthèse organique", 2004, FR2845084, WO2004029004] (synthèse organique sur liquide ionique) et SOSSO (synthèse organique supportée sur sel d'onium) [F. Hassine, S. Gmouh, M. Vaultier, Use of functionalized onium salts as a soluble support for organic synthesis patent No. FR 2857360, WO 2005005345] n'ont été développées que pour la synthèse organique. Les liquides ioniques (P. Wasserscheid, T. Welton, "lonic Liquids in Synthesis", Wiley-VCH, 2003) sont des sels liquides à basse température (fusion Les sels d'onium présentent des propriétés qui permettent leur utilisation comme supports solubles pour la synthèse organique, la synthèse parallèle et la chimie combinatoire comme cela a été mis en évidence (S. Gmouh, M. Vaultier, "compositions contenant des liquides ioniques et leurs utilisations, notamment en synthèse organique", 2004, FR 2845084, WO 2004029004; F. Hassine, S. Gmouh, M. Vaultier, Use of functionalized onium salts as a soluble support for organic synthesis brevet No. FR 2857360, WO 2005005345. En effet, ce sont des entités parfaitement définies, de faible poids moléculaire et caractérisables par toutes les méthodes physico-chimiques. Ils sont solubles dans une large gamme de solvants organiques et insolubles dans d'autres, cette solubilité dépendant essentiellement de l'anion associé. Ceci permet de les purifier par simple lavage et donc d'utiliser un excès de réactifs. De plus, leur grande stabilité thermique permet d'éliminer les excès de réactifs par distillation sous vide. Enfin, leur synthèse est simple, le prix de revient est faible et leur synthèse à grande échelle est possible. II. DESCRIPTION DE L'INVENTION L'invention décrite ici est une application des techniques SOSLI et SOSSO à la synthèse peptidique. Nous proposons d'utiliser comme nouveau support pour la synthèse peptidique un sel à tâche dédiée Al+, XI" qui peut: être utilisé en solution dans un solvant moléculaire (réactions en solvants 30 organiques classiques, principe SOSSO) - être solubilisé et immobilisé dans une matrice A2+, X2 qui peut être soit un liquide ionique (principe SOSLI, dans ce cas les réactions pourront être effectuées avec ou sans ajout de solvants organiques classiques) soit un sel solide à température ambiante (dans ce cas, il sera nécessaire de travailler à la température de fusion du mélange). Les sels A+, X" peuvent être fonctionnalisés sur le cation, l'anion ou sur les deux à la fois (Schéma 4). +O O O O O XO A--F X F A X F A F I II III Schéma 4: divers cas pour la fonctionnalisation du sel d'onium Les cations A1+ et A2+ (schéma 5) peuvent être des cations imidazolium, pyridinium, substitués ou non, ammonium, phosphonium, sulfonium ou tout autre cation onium suffisamment stable et connu de l'homme de l'art. Ce cation peut être fonctionnalisé. Les anions XI" et X2 (schéma 5) peuvent être Cl-, Br, 1-, F, BF4, CF3SO3, N(SO2CF3)2 PF6, CH3CO2, CF3CO2, RCO2, RFCO2, RSO3, RFSO3,RSO4, PO42AICl4, SnCl3, ZnCl3- et des anions fonctionnels, R représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, RF représentant un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone. La fonction F est portée par un bras espaceur la reliant soit au cation, soit à l'anion. Typiquement, cette fonction est choisie parmi les grandes fonctions de la chimie organique telles que Cl, Br, I, OH, CO2H, COX (X=Cl, Br, OR, N3, NR1R2, SR), NR1R2, NHR, NH2, N=C=X(X=O,S,NR,Se), C=C, C=C=C, alcynyle, CHO, COR, CN, SO2H, SO3H, PR1R2, (X)PR1R2, (X) PR1(OR2), (X)P(OR1)(OR2) avec X=O,S,Se, P(NR1R2)2, R1 et R2 représentant un groupement alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone ou un groupement aryle et toute autre fonction connue de l'homme de l'art. Le sel Al+, XI" est: - soit solubilisé dans un solvant organique classique, de préférence le dichlorométhane, le tétrahydrofuranne, le dioxane, l'acétonitrile, le propionitrile, le diméthylformamide, le diméthylacétamide, la N-méthylpyrrolidone, l'acétone, le toluène, le chlorobenzène, le dichlorobenzène, le nitrométhane, le nitroéthane, ou un mélange de ces solvants. - soit solubilisé dans un liquide ionique tel que de préférence le [tmba] [NTf2] ou triméthylbutyl ammonium [NTf2], le [emim][NTf2] ou 1-éthyl-3 méthyl imidazolium (NTf2], le [bmim][NTf2] ou 1-butyl-3 méthyl imidazolium (NTf2] ou tout autre combinaison de cation onium et d'anion liquide à une température inférieure ou égal à 100 C, de préférence 50 C. - soit solubilisé dans un sel d'onium solide, la solution étant réalisée à la température de fusion du mélange. Pour réaliser des réactions, l'ensemble est soit solubilisé dans un solvant organique soit utilisé à la température de fusion du mélange. Les sels Al+, Xi" sont utilisés comme supports solubles. Ils peuvent être mis en présence d'un excès de réactifs, qui sera éliminé soit par lavages (extraction) avec des solvants appropriés (les sels ne sont pas solubles dans certains solvants), soit par distillation sous vide poussé (les sels ont des tensions de vapeur très faibles et peuvent être chauffés sous vide sans pertes). L'élimination d'éventuels sous-produits non supportés des réactions se fera de la même manière. Les aminoacides étant des composés bifonctionnels, deux voies peuvent être envisagées pour la synthèse peptidique: La voie directe C -N (l'aminoacide est greffé au support par sa fonction acide et sa fonction amine est engagée dans la réaction de couplage peptidique) et la voie inverse C - N (Schéma 5). Couplage peptidique (A2,X2) Al U AA. O H-CO-AA-NH2, X, X0 Synthèse peptidique supportée par voie directe Couplage peptidique e ( Z, X2} COO 11 (Z,X2) CONH-AA-COOH, XO IIN -"J'A CON11-AA-COOH A F, X1 Synthèse peptidique supportée par voie inverse O/\ e Al F, xi sel d'onium fonctionnalisé A2,X2 matrice (sel d'onium ou liquide ionique) éventuellement présent Schéma 5: Principe de la synthèse peptidique supportée sur sel d'onium, par 5 voie directe ou inverse Une première étape permet de greffer un aminoacide (naturel ou non) au sel d'onium fonctionnalisé Al F, x,- immobilisé ou non dans une matrice (sel d'onium liquide ou solide). Ensuite, n réactions de couplage peptidique (précédées si besoin est d'une étape de déprotection de la fonction terminale) permettent d'obtenir un peptide supporté à n acides aminés. Celui-ci est alors libéré lors d'une dernière étape de clivage qui permet de régénérer le support. Dans la littérature, la voie directe est utilisée préférentiellement. En effet, la voie inverse, intéressante car elle permet la synthèse directe de peptides modifiés au niveau du carbone terminal (amides, esters...) qui sont présents abondamment clans la nature et sont des molécules potentiellement utiles pour l'usage thérapeutique, présente beaucoup d'inconvénients par rapport à la voie C -* N (A. Johansson, E. Akerblom, K. Ersmark, G. Lindeberg, A. Hallberg, J. Comb. Chem., 2000, 2, 496-507) car: les rendements du couplage peptidique sont moindres. Une partie des agents acylant activés subissent une hydrolyse et des sous produits au niveau de l'acide se forment et s'accumulent sur le support. la racémisation est très importante principalement à cause de la formation d'oxazolones (Schéma 6), ce qui est très gênant car la perte partielle ou totale de l'information stéréochimique du peptide entraîne une perte de ses propriétés biologiques. R H Co-) N-NY H O R')'e ester activé Schéma 6: racémisation par formation de l'oxazolone La voie inverse est donc presque exclusivement utilisée pour la synthèse de peptides de moins de six aminoacides. II n'a pas été publié, à notre connaissance, d'utilisation des supports solubles de type PEG pour la synthèse de peptides selon cette voie. Nous avons développé la synthèse sur support sel d'onium par les deux 15 voies. Les avantages de cette séquence sont les suivants: - de très nombreux sels d'onium fonctionnels sont accessibles ou connus. Certains sont commerciaux. II en est de même pour les sels d'onium ou liquides ioniques fonctionnalisés ou non, éventuellement utilisés comme matrice. - les modifications fonctionnelles des sels d'onium sont généralement simples et facilement réalisables selon des méthodes décrites dans la littérature. Si elles n'existent pas, elles pourront être mises au point à partir des connaissances de la chimie organique. - les réactions ont lieu en phase homogène, ce qui implique que toutes les connaissances de la réactivité en synthèse peptidique classique sont applicables. De plus, toutes les techniques d'analyse, incluant les RMN 1H, 13C 19F 31P, 11B, 15N etc..., la HPLC, l'IRTF (Infrarouge à transformée de Fourier), l'UV-visible, la fluorescence, les techniques électrochimiques, l'électrophorèse, la spectrométrie de masse etc..., peuvent être utilisées dans les conditions normales sans complications particulières. La possibilité de suivi des réactions par HPLC et même de purification à toutes les étapes par HPLC préparative sans clivage préalable du support (ce qui n'est pas possible pour les synthèses supportées sur support solide ou soluble) offre de nouvelles perspectives pour obtenir des peptides ayant une grande pureté. - les réactions sont réalisées aux concentrations habituelles de 0, 1 à 1 mole par litre (voir beaucoup plus) ce qui représente un énorme avantage en terme de charge spécifique des solutions. - la synthèse convergente de peptides est possible (Schéma 7). H O OyN,AA1- N.AA! H o peptide supporté à n acides aminés synthétisé par voie inverse o o n peptide supporté à n' acides aminés synthétisé par voie directe couplage peptidique H O N. 1. L i n' 1 AA O O o + AAi, o.. o o U O n'-1 peptide supporté à (n+n') acides aminés peptide à (n+n') acides aminés Schéma 7: Principe de la synthèse convergente - la purification des intermédiaires est généralement facile. - les solutions de sels dans les solvants habituels sont facilement transférables à l'aide des techniques de seringue et (ou) de pompage. - les solutions de sels d'onium dans les solvants organiques se prêtent aisément aux techniques de partition et donc aux techniques de synthèse en parallèle ou cornbinatoire. Des bibliothèques de produits peuvent donc être facilement construites. - la montée en échelle (scale up) ne pose pas de problèmes ce qui présente un avantage majeur par rapport aux résines et aux polymères solubles. - une analogie est facilement établie entre cette technologie et les techniques de synthèse sur résines de type Merrifield ou sur polymères solubles de type PEG, PG (polyglycérol), ou le polymère de JANDA. Ces sels d'onium peuvent être fonctionnalisés comme les résines de Wang, Rink, silylalkyl, carbonate, carboxylique, formyle, hydroxy, amino, oxime etc.. . ou les polymères fonctionnalisés mais sont d'une utilisation beaucoup plus aisée et avantageuse. - ils sont beaucoup moins coûteux. Cet avantage économique nous paraît très important car de nature à ouvrir un marché de substitution de grande ampleur. III. DESCRIPTION DETAILLEE Les différents sels à tâche dédiée utilisés ont été préparés selon les procédures décrites dans la littérature. Les synthèses sont décrites en partie expérimentale. Pour illustrer la technique de synthèse peptidique supportée sur sel à tâche dédiée, nous avons choisi de greffer le premier aminoacide soit par une fonction carbamate pour la voie inverse, soit par une fonction ester pour la voie directe (Schéma 8). H2N OH R O 0 0y OH O TR R Voie C--> N "Voie directe" Voie N --> C "Voie inverse" Schéma 8: fonctions pour le greffage du premier amino-acide au support portant une fonction alcool Deux familles de sels ont principalement été étudiées: un sel de type benzylique [HMPhBTMA][X] et un de type benzhydrile [CTMPPTMA] [X] (Schéma 9), le contre-ion étant un hexafluorophosphate ou un bis(trifluorométhanesulfonyl)amidure. Ces anions confèrent au sel un caractère lipophile qui est appréciable lors des traitements des réactions (lavages aqueux possibles). O O O X, Me3N OH [4-(4-Hydroxymethyl-phenoxy)-butyl]-trimethyl-ammonium [HM PhBTMA] [X] S X = PF6 ou NTf2 O O X Me3N Cl {5-[4-(Chloro-p-tolyl-methyl)-phenoxy]pentyl}-trimethyl-ammonium 20 [CTMPPTMA][X] Schéma 9: Sels à tâche dédiée utilisés comme supports. Le support soluble considéré est: - soit un des sels à tâche dédiée cidessus utilisé en solution dans un solvant 25 moléculaire (principe SOSSO) . - soit le mélange de ce sel à tâche dédiée avec une matrice ionique qui peut être soit liquide (liquide ionique, principe SOSLI, cas de [tmba] [NTf2]) soit solide (cas de [tmba][PF6]). Ces supports ont été utilisés pour la synthèse peptidique par voie directe et inverse. La synthèse de peptides est très détaillée dans la littérature [a) J. Johnes, "the chemical synthesis of peptides", Oxford University Press, New York, 1991; b) N. Sewald, H-D. Jakubke, "Peptides: Chemistry and Biology", Wiley-VCH, 2002]. et a été très développée. 1. Synthèse peptidique supportée sur sel à tâche dédiée par voie inverse Pour cette voie, les sels [HMPhBTMA][PF6 ou NTf2] ont été utilisés, seuls ou immobilisés dans [tmba][NTf2]. 1:1:_Greffage_duu.premier_aminoacide.au sel.d'onium. 1.1.1. Cas de l'acide isonipécotique ou des 8-aminoacides Ces aminoacides sont assez lipophiles et leur fonction amine est assez nucléophile pour que le greffage puisse être effectué avec leur fonction acide carboxylique libre. Le premier aminoacide est greffé à [HMPhBTMA] [PF6 ou NTf2] en deux étapes (Schéma 10): Tout d'abord un carbonate intermédiaire est formé en une demi-heure par réaction entre le sel et le chloroformiate de p-nitrobenzyle en présence de NMM (N méthylmorpholine) dans l'acétonitrile. L'ajout d'un aminoacide (acide isonipécotique ou 8aminoacide), de NMM et de DMF permet d'obtenir le carbamate correspondant [HMPhBTMA-AA1][PF6 ou NTf2] avec un rendement d'environ 85 %. Le traitement est simple: Après évaporation des solvants, de l'acétonitrile est ajouté au résidu, le mélange est alors filtré puis, après avoir évaporé l'acétonitrile, le résidu est lavé à l'éther (solvant dans lequel les sels ne sont pas solubles). 9 % de sel [HMPhBTMA][PF6 ou NTf2] reste sous forme libre non greffée. X = PF6 ou NTf2 G O O X, Me3N [HMPhBTMA][X] NMM MeCN TA, 30min O X, Me3N' NO2 o NO2 OH o ci- o 1.1.2. Cas des cc-aminoacides Les a-aminoacides ne sont pas assez solubles dans les solvants utilisés et leur fonction arnine n'est pas assez nucléophile pour que l'attaque de la fonction carbonate intermédiaire ait lieu. C'est pourquoi ils sont greffés sous forme d'esters méthyliques. La réaction est effectuée dans les mêmes conditions que celles précédemment décrites en engageant les esters méthyliques correspondants (Schéma 11). Le traitement reste identique excepté l'ajout d'une étape d'extraction {DCM (dichlorométhane) / eau puis solution aqueuse de HPF6} qui permet d'éliminer toute trace d'aminoester restant. Pour poursuivre la synthèse, il est nécessaire de déprotéger la fonction acide carboxylique terminale (cf 1.3.) avant le couplage peptidique. X = PF6 ou NTf2 OH e O+ HN X, Me3N NMM o OH DMF TA, 18h O N o [HMPhBTMA-Aiso][X] Schéma 10: Greffage de l'acide isonipécotique. e O+ X, Me3N OH NMM MeCN TA, 30min ClO X, Me3N o e NO2 [H MPhBTMA][X] NO2 O NMM DMF TA, 18h O RI [HMPhBTMA-AA1-OMe][X] AA1 = Gly, Leu Schéma 11: Greffage d'un aaminoester 17:2,.Çouplage_pèptidigue L'étape suivante est la réaction de couplage peptidique avec un aminoacide ayant sa fonction acide protégée (Schéma 12). Des aminoesters méthyliques ont été utilisés pour la synthèse mais d'autres groupes protecteurs pourraient éventuellement être utilisés. Pour la réaction elle-même, de nombreux réactifs de couplage existent dans la littérature [a) J. Johnes, "The chemical synthesis of peptides", Oxford university press, New York, 1991; b) N. Sewald, H-D. Jakubke, "Peptides: Chemistry and Biology", Wiley-VCH, 2002; S-Y. Han, Y- A. Kim, Tetrahedron, 2004, 60, 2447]. La méthode classique utilisant le (DCC) dicyclohexylcarbodiimide, (DIC) diisopropylcarbodiimide ou (EDC.HCI) hydrochlorure de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide et l'(HOBt) 1-hydroxybenzotriazole a été employée [L. Caphase inverséeino, J. Am. Chem. Soc., 1993, 115, 4395]. 1.5 équivalents de carbodiimide, de HOBt, d'aminoester AA2-OMe (Gly-OMe, Val-OMe, Ala-OMe, Phe-OMe et Leu-OMe par exemple) et 3.0eq. de triéthylamine par rapport à [HMPhBTMAAA'][PF6 ou NTf2] sont ajoutés. La réaction est effectuée dans l'acétonitrile à température ambiante et est laissée deux heures. La matrice [tmba][NTf2] peut être utilisée comme milieu réactionnel sans variation des résultats. La conversion est totale. Si le carbodiimide utilisé est le DCC, le traitement débute par une filtration du milieu réactionnel suivie d'une évaporation de l'acétonitrile du filtrat. Si le DIC ou l'EDC.HCI, dont les urées sont solubles dans le milieu, sont engagés, le solvant est simplement évaporé. Le résidu est lavé à l'éther. Divers traitements ont été développés pour éliminer les autres réactifs: une séparation par chromatographie sur colonne d'alumine neutre avec un éluant dichlorométhane / méthanol 1 à 2 % a été employée pour X = NTf2. Les rendements avoisinent les 65 %. Il serait sans doute possible d'effectuer une séparation sur colonne de silice inverse. - une autre méthode consiste à diluer le résidu obtenu dans le dichlorométhane puis à effectuer des lavages aqueux suivis de lavages aqueux acides. La phase organique est alors séchée sur sulfate de sodium et filtrée. Les solvants sont alors évaporés. Cette technique est classiquement utilisée pour X = PF6. Les rendements sont supérieurs à 85 %. - une purification par HPLC préparative serait également envisageable. - l'emploi de résines scavengers serait sans doute possible. [HMPhBTMA-AA'][X] RAI = Aiso, [HMPhBTMA-Aiso][X] X = PF6 ou NTf2 O G CI, H3N R2 = H, Me, CHMe2, CH2CHMe2, Bn. DCC/HOBt TEA H o yN OK O RI o O e 0 X, Me3N [HMPhBTMA-AA1-AA2-OMe] [X] O R' O AA1 = Aiso et AA2 = Gly, Ala, Val, Leu, Phe. Schéma 12: Synthèse de dipeptides supportés par voie inverse 1.:3.. . ibération.de.l.fonçtion _terminale-.pour.çontinuer la-ynthèse Le clivagede l'ester méthylique est effectué avec 2.0 équivalents de triméthylsilanolate de potassium (Schéma 13). La réaction est effectuée dans l'acétonitrile à température ambiante. L'avancement de la réaction est suivi par RMN. Après deux heures, le milieu réactionnel est filtré puis le solvant et le méthoxytriméthylsilane formé sont évaporés. Le résidu est lavé à l'éther. X, Me3N 0 Me3SiOK MeCN TA, 2h e e [HMPhBTMA-AA1-AA2-OMe][X] O R' O AA1 = Aiso et AA2 = Val, Leu, Phe. 1:4 -ème.uplage.peptidiu.pour_pp.rsuivre I._ synthèse peptid!gue La synthèse peptidique peut alors être poursuivie. Les conditions des réactions de couplage et de déprotection sont les mêmes que celles précédemment décrites. Les tripeptides [HMPhBTMA-Aiso-Leu-Phe-OMe] [PF6], [HMPhE3TMA-Aiso-Leu-Val-OMe][PF6] [HMPhBTMA-Aiso-Phe-Leu-OMe][NTf2] ont ainsi été synthétisés (Schéma 14 et Figure 2). (Aiso = acide isonicopecotique). e O+ O X, Me3N [HM PhBTMA-AA1 -AA2-OK][X] AA1 = Aiso et AA2 = Val, Leu, Phe. Schéma 13: Déprotection de l'acide terminal o X = PF6 ou NTf2 O O O X, Me3 N [HMPhBTMA-AA1-AA2-OK][X] O R O AA1 = Aiso et AA2 = Leu, Phe. MeCN TA, 2h O R3 = CH2CH Me2 DCC/HOBt TEA 0K e e Cl, H3N Schéma 14: Synthèse de tripeptides supportés par voie inverse 1:5.._Ciivage du; suppo.. t libération de s.peptides_synthétisés 5 1.5.1. Clivage par TFA (acide trifluoracétique) Le clivage de la fonction carbamate servant pour le greffage est effectué par traitement par dix équivalents de TFA par rapport au sel à tâche dédiée dans l'acétonitrile (solution de 10 à 20 % en TFA) (Schéma 15). La réaction dure 10 minutes à température ambiante. Les solvants sont alors évaporés. Du dichlorométhane et de l'eau sont ajoutés au résidu: Le sel à tâche dédiée, libéré sous la forme d'un ester, ainsi que la matrice ionique si elle est présente, sont en phase organique alors que le peptide se solubilise en phase aqueuse. Les dipeptides Aiso-Leu-OMe, Aiso-Val-OMe et Aiso-Phe-OMe ont ainsi été isolés (Figure 3). Schéma 15. Clivage par TFA O O+ O X, Me3N' [HMPhBTMA-AA1-AA2-AA3-OMe][X] 0 AA1 = Aiso; AA2 = Phe; AA3 = Leu ou M1 = Aiso; AA2 = Leu; AA3 = Phe, Val [HMPhBTMA-AA1-AA2-OMe][X] 0 AA1 = Aiso et AA2 = Val, Leu, Phe. O pp O H O TFA CF3000 H3N N N I R H2 ii H O soluble en phase aqueuse O F X = PF6 ou NTf2 O e O X, Me3N O O+ X, Me3N0 ' F soluble en phase organique X = PF6 ou NTf2 X, Me3N 0 OH OH MeCN O TMSBr O TA, 30min yN 0 [HMPhBTMA-Aiso[X] HN-,.--" précipite + 1. 5.2. Clivage par TMSBr (bromure de triméthylsilyl) Une réaction de métathèse du contre-ion NTf2 - CF3COO a lieu lors du clivage par TFA. Cette réaction n'est pas totale mais conduit parfois à la contamination du peptide libéré en phase aqueuse car o F O O CF3000, Me3N0 est soluble en phase aqueuse. C'est pourquoi une deuxième méthode de clivage par TMSBr a été développée (Schéma 16). 1.5 eq. de TMSBr est ajouté au peptide supporté dissous dans l'acétonitrile. Le milieu est agité 30 minutes puis est filtré : le peptide libéré, insoluble, a précipité. Le produit de dégradation du support se trouve dans le filtrat et [HMPhBTMA][PF6] pourrait éventuellement être régénéré. O O X, Me3N0 soluble dans MeCN Schéma 16: Clivage par TMSBr 2. Synthèse peptidique supportée sur sel à tâche dédiée par voie directe Pour cette voie, deux familles de supports ont été utilisés: les sels [HMPhBTMA] [NTf2] ou [CTMPPTMA][PF6 ou NTf2], seuls ou immobilisés dans [tmba][PF6 ou NTf2] hexafluorophosphate ou bis(trifluorométhylsulfonyl) amidure de triméthylbutylammonium 2.1, Famille_ 1_:_Travaux_av_eç_le_ sl_à_tâçhe_dédiée__[HMPhBTMA][NTf2j 20 La matrice ionique [tmba][ NTf2] est éventuellement présente. 2.1.1. Greffage du premier aminoacide L'étape de greffage du premier amino-acide au support est effectuée par estérification avec 1.5 équivalents de DCC, 0.1 eq. de DMAP (diméthylamino- pyridine) et 1.1 eq. de Fmoc-aminoacide par rapport au sel d'onium [HMPhBTMA][NTf2] 1 dans l'acétonitrile (Schéma 17). La réaction est laissée une nuit à température ambiante. Le milieu réactionnel est filtré. L'acétonitrile est évaporé. Le résidu est lavé à l'éther puis est dissous dans le DCM puis des lavages aqueux acides sont effectués. La conversion est quantitative et le rendement en produit isolé avoisine les 90 %. DCC/DMAP NTf2, Mea i0 MeCN NTf2, MeO OH 18h, TA R1 O R = Me Schéma 17: Greffage du premier aminoacide au support par voie directe 2.1.2. Déprotection de la fonction amine terminale L'étape suivante est la déprotection de l'amine terminale pour pouvoir initier la synthèse peptidique (Schéma 18). Le groupement Fmoc est clivé en 15 minutes avec un mélange MeCN / Pipéridine 20 %. Le traitement consiste à évaporer les solvants puis à extraire le résidu obtenu à l'éther pour éliminer les produits de dégradation du Fmoc. Le rendement est supérieur à 90 %. [HMPhBTMA][NTf2] NHFmoc HO [Fmoc-AA1-HMPhBTMA][NTf2] O AA1 = Ala NHFmoc e s pipéridine NTf2, Me3N/0 NHFmoc MeCN min, TA [AA1-HMPhBTMA][NTf2] AA1 = Ala: [Ala-HMPhBTMA] [NTf2] O [Fmoc-AA1-HMPhBTMA][NTf2] AA1 = Ala, [Fmoc:-Ala-HMPhBTMA][NTf2] O e 0 NTf2, Me3N NH2 Schéma 18: Déprotection de la fonction amine terminale 2.1. 3. Couplage peptidique La réaction suivante est le couplage peptidique avec un deuxième aminoacide (Schéma 19). 1.5 équivalents de DCC, HOBt, triéthylamine et de Fmoc-AA2 par rapport au sel à tâche dédiée sont engagés. La réaction est effectuée dans l'acétonitrile. Après deux heures, le milieu réactionnel est filtré et les solvants du filtrat sont évaporés. Le résidu est dissous dans le DCM puis lavé par une solution aqueuse de HCI IN. Après évaporation du DCM, le résidu est lavé à l'éther. Des dipeptides sont ainsi synthétisés (Figure 4). O NTf2, Me3NO [AA1-HMPhBTMA][NTf2] o pour AA1 = Ala: [Ala-HMPhBTMA] [NTf2] 22 DCC/HOBT TEA, Fmoc-AA2 MeCN N I-12 2h, TA O @ NTf2, Me3N R = Me, R2= CH2-CHMe2 R O O\..N /NHFmoc [Fmoc-AA2-AA1-HMPhBTMA][NTf2] o H R2 pour AA1 = Ala, AA2 = Leu: [Fmoc-Leu-AIa-HMPhBTMA][NTf2] Schéma 19: Synthèse de dipeptides supportés sur sel d'onium par voie directe 2.1.4. Poursuite de la synthèse peptidique Pour poursuivre la synthèse peptidique, il faut déprotéger l'amine terminale du dipeptide. Le clivage du groupement Fmoc par la pipéridine est bien effectif mais 15 % de peptide se décroche du support par formation de dicétopipérazine (Schéma 20). (Le constat est le même que la matrice ionique [tmba][NTf2] soit ajoutée ou non). La formation de DKP (dicétopipérazine) est un problème récurrent rencontré en synthèse peptidique par voie directe avec la technologie Fmoc12. o + o NTf2, Me3N O O NTf2, Me3NO + OH o DKP Schéma 20: Formation de la dicétopipérazine au stade dipeptide 2.1. 5. Suivi des réactions par HPLC La possibilité de suivre les réactions par RP-HPLC (chromatographie liquide haute pression en phase inverse) a également été validée. Le suivi par RMN des réactions est simple mais le suivi par HPLC est plus rapide et plus adapté à l'automatisation. La séparation en régime isocratique est effectuée sur colonne Waters C18 avec comme éluant un mélange acétonitrile / eau contenant 1,1 % d'acide acétique et 20 mmol/L d'acétate d'ammonium: 60/40 avec un débit de 0, 75ml/min. La détection se fait par UV à 254 nm. L'utilisation d'un gradient d'éluant ( 60/40: MeCN/eau -*100% MeCN, en 20 minutes puis 10 minutes à 100% MeCN, débit: 1 ml/min). Le suivi est très aisé car, dans ces conditions, il y a une grande différence entre les temps de rétention selon que le sel à tâche dédiée comporte un 5 groupement Fmoc ou non (Figure 5). Figure 5: Suivi par HPLC de la synthèse peptidique supportée sur [HMPhBTMA][NTf2] 2,2_Ferri ill_2__Travaux_avec_les_sels_à_tâche_dédiée. [CTMPPTMAj[PF6 ou_ NTf2] Pour palier le problème de formation de DKP, une autre famille de support a été envisagée. Dans le cas de la synthèse peptidique sur support solide, la résine communément utilisée pour éviter les problèmes de formation de DKP 15 est la résine 2-chlorotrityle [K. Barlos and ail, Tet. Lett., 1989, 30, 3947] (Schéma 21) : ci Schéma 21: résine 2-chlorotrityle dite de Barlos Cette résine n'est pas stable en milieu aqueux acide, or ces conditions sont 20 utilisées lors des traitements mis au point: il n'est donc pas judicieux de synthétiser un analogue de ce support. Les analogues de résine pour lesquelles le greffage se fait par une liaison amide (type MBHA [a) G. Matsueda, J. Steward, Peptides, 1981, 2, 45; b) P. Thompson, H. Keah, P. Gomme, P. Stanton, M. Hearn, Int. J. Peptide o NTf2 Me3N.o OH O O NTf2,Me3N NHR O O NTf2, Me3N Protein Res., 1995, 46, 174; c) J. H. Adams, R. M. Cook, D. Hudson, V. Jammalamadaka, M. H.Lyttle, M. Songster, J. Org. Chem. , 1998, 63, 3706] ou Rink amide [a) S. Story, J. Aldrich, Int. J. Peptide Protein Res., 1992, 39, 87; b) H. Rink, Tet. Lett., 1987, 28, 33, 3787., J. Org. Chem., 1998, 63, 3706]) n'ont pas été envisagées pour l'instant car elles aboutissent à la formation de peptides amides (et non peptides acides) et les conditions de clivage sont plus dures (HF, TFMSA, HBF4, TMSBr pour la résine MBHA, TFA à 95 % pour la Rink).Le compromis trouvé est un analogue de résine de type benzhydryle [a) G. E. Atkinson, P.M. Fischer, W. C. Chan, J. Org. Chem., 2000, 65, 5048;.b) K. Barlos, D. Gatos, J. Hondrelis, J. Matsoukas, G. J. Moore, W. Schâfer, P. Sotiriou, Liebigs Ann. Chem., 1989, 951; c) K. Barlos, D. Gatos, J. Kallitsis, D. Papaioannou, W. Schâfer, P. Sotiriou, Liebigs Ann. Chem., 1987, 1031], qui a l'avantage d'être plus encombré que la résine de type benzylique, et donc de défavoriser la formation de DKP, et d'être plus stable en milieu aqueux acide que la résine de Barlos. Les travaux de Chan ont montré que l'introduction du groupe méthyle en position para du deuxième cycle aromatique facilite le clivage par le TFA (Schéma 22). [CTMPTTMA][PF6 ou NTf2] Schéma 22: Deuxième famille de sels à tâche dédiée Les travaux ont été effectués avec les contre-ions PF6 ou NTf2. Finalement, les études ont été continuées préférentiellement avec [CTMPTTMA][PF6]: Les traitements des couplages peptidiques font intervenir des lavages aqueux acides. En utilisant PF6 comme contre-ion, des lavages avec des solutions aqueuses de HPF6 peuvent être effectués sans qu'il y ait de problème de métathèse entre l'anion du sel et celui de la solution aqueuse. 2.2.1. Greffage du premier aminoacide [CTMPTTMA] est très réactif: Il est préférable de conserver ce sel avec un hydroxy en position benzhydrilique et d'effectuer sa substitution par un chlore juste avant le greffage de l'acide aminé. Celle-ci est effectuée par 1.5 équivalent de chlorure de thionyle par rapport au sel dans l'acétonitrile (Schéma 23) . Après avoir évaporé les solvants et le chlorure de thionyle en excès, de l'acétonitrile et 1.5 équivalents de Fmoc-aminoacide et de triéthylamine sont ajoutés au résidu. Les solvants sont alors évaporés et le résidu est lavé à l'éther. La réaction de greffage dure 20 minutes à température ambiante. Une réaction de métathèse du contre-ion par KPF6 est alors effectuée (Schéma 23). Cette métathèse n'est pas faite plus tôt dans la synthèse pour éviter des problèmes de métathèse involontaire lors de la chloration par SOCl2. Elle est effectuée avec KPF6 et non HPF6 pour éviter la réaction de clivage du support (sensible aux conditions acides dures). La réaction est laissée deux heures à température ambiante. Le milieu réactionnel est alors passé sur célite puis l'acétonitrile est évaporé. Du dichlorométhane est ajouté au résidu et le mélange est lavé trois fois à l'eau. L'étape suivante de déprotection de l'amine terminale (Schéma 23) a lieu dans les mêmes conditions (pipéridine) que celles explicitées auparavant. A ce stade, il est possible d'effectuer des lavages aqueux après avoir solubilisé le sel [AA1-CTMPTTMA][PF6] dans le dichlorométhane. Le groupement benzhydryle de [AA1-CTMPTTMA][PF6] est suffisamment lipophile pour que le sel reste en phase organique, même avec l'amine terminale déprotégée. Ceci n'était pas possible avec le sel [AA1-HMPhBTMA] [NTf2], moins lipophile. Ces lavages à l'eau assurent qu'il ne reste plus du tout d'aminoacide dans le milieu. (S'il reste des traces de Fmoc-aminoacide malgré les lavages à l'éther effectuées après le greffage, le groupement Fmoc a été éliminé par action de la pipéridine et l'aminoacide libéré résultant est parfaitement soluble dans l'eau). Or, il est très important qu'il ne reste pas de traces d'acide aminé sinon un mélange de peptides serait obtenu après le couplage peptidique suivant. Le rendement sur ces quatre étapes est de 85 %. Le taux de greffage est supérieur à 95 %. OH Cl e e Br, m e 3 N SOCl2 MeCN 15min 0 C à TA e Cl p Me3N O e w, Br [CTMPTTMA][CI ou Br] o Fmoc-AA1 TEA MeCN TA 30min O Cl l o e Me3NO Br J [Fmoc-AA1CTMPTTMA][CI ou Br] AA1 = Ala, Gly. Phe, Leu, lie, Val o KPF6 MeCN TA 2h E> O PF6, Me3N [Fm oc-AA1-CTMPTTMA][PF6] AA1 = Ala, Gly, Phe, Leu, IIe, Val o pipéridine MeCN TA 15m in O O PF6 Me3N-"O [AA1-CTMPTTMA][PF6] AA1 = Ala, Gly. Phe. Leu, lie. Val Schéma 23: Greffage du premier aminoacide 2.2.2. Couplage peptidique Le couplage peptidique suivant est effectué dans les mêmes conditions que celles décrites pour le support [AA1-HMPhBTMA][NTf2], à savoir 1.5 équivalents de DCC (ou DIC), de HOBt, de TEA et de fmoc-aminoacide (Fmoc-AA2) dans l'acétonitrile. Le solvant est alors évaporé. Le résidu est lavé à l'éther puis il est dissous dans le dichlorométhane La phase est lavée trois fois à l'eau et trois fois par une solution aqueuse de HPF6. La conversion est totale. Le rendement est de 85 %. Le dipeptide [Fmoc-LeuAla-CTMPTTMA][PF6] a ainsi été synthétisé (Schéma 24, Figure 6). La réaction a également été testée avec HBTU (O-(1 H-benzotriazol-1-yl)-N, N,N',N'-tétraméthyl uronium hexafluorophosphate) (1.5 équivalents) comme réactif de couplage. Le traitement reste identique. La conversion est également quantitative. Ce test montre que d'autres conditions pour le couplage peuvent être utilisées ce qui peut être intéressant pour des réactions de couplages difficiles. 2.2.3. Poursuite de la synthèse peptidique La fonction amine terminale du dipeptide supporté est alors déprotégée par la pipéridine. La formation de DKP est observée avec une proportion de 8 %. La réaction de couplage suivante, par exemple avec la Fmoc-valine, a alors été effectuée pour synthétiser le tripeptide protégé supporté [Fmoc-Val-Leu-Ala- o CTMPTTMA] [PF6] (Schéma 25, figure 7). Schéma 25: Synthèse de tripeptide supporté sur sel d'onium par voie directe R = Me R2= CH2-CHMe2 R3 = CHMe2 O +O PF6 Me3N"----r'" ^0 [FmocAA2-AA1-CTM PTTMA][PF6] AA1 = Ala, AA2 = Leu NH2 R' O pipéridine MeCN ou DCM TA 15min DCC/HOBt e PF6, Me3N-WO [AA2-AA1-CTM PTTMA][PF6] AA1 = Ala, AA2 = Leu e +O TEA PF6. Me3N - Fmoc-AA3 TA, 2h [Fmoc-AA3-AA2-AA1-CTMPTTMA] [PF6] AA1 = Ala, AA2 = Leu, AA3 = Val e O PF6, Me3N'O [AA1-CTMPTTMA][PF6] AA1 = Ala DCC/HOBt R = Me, R2 = CH2-CHMe2 e O [Fmoc-AA2-AA1-CTMPTTMA][PF6] AA1 = Ala, AA2 = Leu Schéma 24: Synthèse de dipeptides supportés sur sel d'onium par voie directe 28 2.2.4. Clivage des peptides supportés Les peptides supportés ayant leur fonction amine déprotégée peuvent être clivés par 0.01 équivalent de HPF6 dans le méthanol à reflux en une heure. Les solvants sont alors évaporés. Du DCM et de l'eau sont ajoutés au résidu. Le peptide libéré est soluble en phase aqueuse alors que le support [CTMPTTMA][PF6] (qui peut éventuellement être réutilisé pour une autre séquence) se dissout en phase organique (Schéma 26). O PF6, [V1e3N'^O [AAn-...-AA1-CTM PTT MA] [PF6] n=1,AA1=Ala Schéma 26: Clivage des peptides supportés par voie directe 10 2. Synthèse convergente Deux tripeptides supportés ayant été synthétisés l'un par voie directe, l'autre par voie inverse, ont été couplés ensemble, formant ainsi un hexapeptide sous forme d'un di-sel (Schéma 27). Ceci montre la faisabilité de la synthèse convergente avec cette nouvelle technologie et ouvre la voie à la synthèse de plus longs peptides. De plus, l'orthogonalité des groupements protecteurs fait qu'il est en principe possible de cliver sélectivement le support CTMPTTMA sans toucher HMPhBTMA, ce qui permettrait d'allonger encore la chaîne et, par exemple en couplant n fois des tripeptides, d'accéder à des peptides de longueur de chaîne 3n. MeOH A HPF6 (0.01eq. NH2 OH o O O+ [CTMPTTMA][PF6] soluble en phase organique HONH2 + R H i Rn AAn-... -AA Ala soluble en phase aqueuse o OK o [HMPhBTMA-Aiso-Leu-Val-OK][PF6] O O H2NN,'-^Ir N,)-ç + H O O O OWNMe3, [Val-Leu-AIa-CTM PTTMA][PF6] O PF6 e PF6, O+ Me3N--(CH2)4 0, O DCC/HOBt TEA MeCN e O (CH2)s ô Mea PF6 [HM PhBTMA-Aiso-Leu-Val-Val-LeuAIa-CTMPTTMA]([PF6] )2 Schéma 27: Exemple de hexapeptide issu d'une synthèse convergente IV. CONCLUSION Ces travaux montrent la faisabilité de la synthèse peptidique supportée sur sels d'onium, qui peuvent être utilisés comme supports solubles dans les solvants organiques classiques, selon le même principe que la synthèse sur support soluble mettant en jeu les PEG ou les polymères solubles. Ils offrent par conséquent, une nouvelle alternative prometteuse dans le domaine de la synthèse peptidique sur support et donc dans les domaines de la chimie combinatoire et de la synthèse parallèle avec en plus les avantages suivants présentés par les sels d'onium: - une grande facilité et flexibilité de préparation et de fonctionnalisation avec un faible coût de revient - une solubilité dans divers solvants polaires tel que l'acétonitrile, le DMF, 15 DCM...etc. - une grande stabilité thermique mais aussi chimique - une très grande diversité de sels d'onium fonctionnels Les sels d'onium sont facilement accessibles et plus particulièrement les sels de phosphonium, d'ammonium, de pyridinium et d'imidazolium. La chimie de ces sels est relativement peu développée en tant que telle. Cependant, il est intéressant de noter que la préparation des sels fonctionnels utilisés au cours de ce travail est très simple. On peut prédire sans beaucoup de risques de se tromper que de très importants développements sont à venir. Ils sont facilement isolables, purifiables et identifiables. On notera aussi que le scale up des réactions ne pose pas de problèmes particuliers autres que ceux habituellement rencontrés dans ce genre de démarche. La simplicité du suivi des réactions par les techniques d'analyse classiquement utilisées en synthèse organique ajoute à l'intérêt de ce travail. De plus, une automatisation de ces réactions est facile à envisager et ouvre un très vaste champ d'application dans le domaine de la chimie combinatoire, de la synthèse supportée et de la synthèse parallèle. V. PARTIE EXPERIMENTALE Les spectres RMN sont réalisés sur des spectromètres haut champ BRUKER AC 300P ou ARX 200. Les déplacements chimiques 8 sont exprimés en parties par million (ppm), les constantes de couplages J en Hz. Les abréviations s (singulet), d (doublet), t (triplet) , q (quadruplet), m (multiplet), dd (doublet de doublet) ont été utilisées. Les spectres de masse sont réalisés par le Centre Régional de Mesures Physiques de l'Ouest (CRMPO) sur des spectromètres de masse hautes résolutions - à double focalisation VARIAN MAT 311 pour l'impact électronique. - MS/MS ZABSpec TOF de Micromass à géométrie EBE TOF pour les spectres ESI et LSIMS. 1. Synthèse des sels à tâche dédiée 1.1. Synthèse de [HMPhBTMA1[NTf2ou PF61 É Mode opératoire:10.0 g (80.6 mmol) d'alcool 4-hydroxybenzylique sont dissous dans 125 mL d'acétone technique. 19.2 mL (2.0 eq., 161.1 mmol) de 1-4-dibromobutane et 11.1 g (1.0 eq., 80.6 mmol) de K2CO3 sont ajoutés au milieu, qui est alors mis à reflux 18 heures sous bonne agitation. Le mélange est filtré. Le produit précipitant dans le filtrat (produit de disubstitution) est éliminé par filtration. L'acétone du filtrat est alors évaporée. Du pentane est ajouté au résidu. Le produit attendu précipite, est filtré, nettoyé au pentane et séché une nuit au dessicateur. 16.9 g (80 %) de produit sont obtenus. É solide blanc cassé É RMN1H (200MHz, CDCI3) : 8(Ha) = 3.50 (t, J = 6.5, 2H); 8(Hb+c) = 1.91-2.21 (m, 2H+2H); 8(Hd) = 4.04 (t, J = 5.7, 2H); 8(Hf) = 6.92 (d, J = 8.6, 2H); 8(H9) = 7.33 (d, J = 8.9, 2H); 5(Hi) = 4. 66 (s, 2H); 8(Hi) = 1.65 (s, 1H). É RMN13C (75MHz, CDCI3) : 8(Ca) = 33.50; 8(Ch) = 27.89; 8(Cc) = 29. 47; 8(Cd) = 66.89; 8(Ce) = 158.49; 8(Cf) = 114.52; 8(Cg) = 128.68; 8(Ch) = 133.20; 8(Ci) = 65.03. É HRMS (spectroscopie de masse haute résolution) de (C11 H1502Br): [M+É] m/zthéorique = 258.0255; m/zexpérimental = 258.0266. - X = Br: [HMPhBTMA][Br] É Mode opératoire: 16.4 g (63.3 mmol) de [4-(4bromobutoxy)phényl]-méthanol sont introduits dans un tube de Schlenk. 19. 3 mL (2.0 eq., 126.6 mmol) de solution aqueuse de triméthylamine, à 45 % et 50 mL d'acétonitrile sont alors ajoutés. Le milieu est porté 18 heures à 70 C. Les solvants sont alors évaporés. De l'éther est ajouté au résidu qui cristallise. Le solide est filtré et lavé à l'éther, avant d'être placé une nuit au dessicateur. 19.7 g (98 %) de produit sont obtenus. É Solide blanc hygroscopique. É RMN'H (200MHz, D20) : 8(Ha) = 3.04 (s, 9H); 8(Hb) = 3.32 (m, 2H); 8(11c+d) = 1.74-1.99 (m, 2H+2H); 8(He) = 4.06 (t, J = 5.1, 2H); 8(Hg) = 6.95 (d, J = 8.6, 2H); 8(Hh) = 7.29 (d, J = 8.6, 2H); 8(Hi) = 4.50 (s, 2H) . É RMN13C (75MHz, D20) : 8(Ca) = 52.82 (Jc_N = 3.8); 8(Ch) = 66. 14(Jc_N = 30 3.0); 8(Cc) = 19.34; 8(Cd) = 25.17; 8(Ce) = 67.38; 8(Cf) = 157.59; 8(Cg) = 114.90; 8(Ch) = 129.34; 8(C1) = 133.09; 6(Ci) = 63.38. É HRMS de (C14H24NO2): [C+] m/zthéorique = 238.1807; mlzexpérimental = 238.1811. - X = PF6: [HMPhBTMA][PF6] É Mode opératoire: 2.0 g (6.3 mmol) de bromure de 4-[4-(hydroxyméthyl)phénoxy]-N,N,N-triméthylbutan-1-ammonium sont dissous dans un minimum d'eau. 2.3 g (2.0 eq., 12.6 mmol) de KPF6 sont alors ajoutés. Le milieu réactionnel est agité deux heures à température ambiante. L'hexafluorophosphate de 4-[4-(hydroxyméthyl) phénoxy]-N, N, Ntriméthylbutan-1-ammonium formé précipite, est filtré et lavé trois fois à l'eau et trois fois à l'éther avant d'être placé une nuit au dessicateur. 3.11 g (85 %) de solide sont obtenus. É solide blanc hygroscopique. É RMN'H (200MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3.41 (s, 9H); S(Hb) = 3.71 (m, 2H); S(Hc) = 1.93 (m, 2H); S(Hd) = 2.19 (m, 2H); S(He+k) = 4.06-4.14 (m, 2H+1 H); S(Hg) = 6.92 (d, J = 8.6, 2H); S(Hh) = 7.30 (d, J = 8.4, 2H); S(Hi) = 4.58 (d, J = 5.5, 2H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : S(Ca) = 52.66 (Jc_N = 4.2); S(Cb) = 66.26 (Jc_N = 2.9) ; S(Cc) = 19.73; S(Cd) = 25.87; S(Ce) = 66.79; S(Cf) = 158. 03; S(Cg) = 114.23; S(Ch) = 128.12; 8(Ci) = 134.67; S(Ci) = 63.48. É RMN31P (121MHz, acétone d6) : 8(PpF6) = -144.24 (sept, J = 708.3) . É RMN19F (282MHz, acétone d6) : S(FpF6) = -72.457 (d, J = 707.1). - X = NTf2: [HMPhBTMA][NTf2] É Mode opératoire: 1.0 eq. de bromure de 4[4-(hydroxyméthyl) phénoxy]-N,N,N-triméthylbutan-1-ammonium [HMPhBTMA][Br] est dissous dans un minimum d'eau. 1.1 eq. de LiNTf2 sont dissous dans un minimum d'eau puis les deux solutions sont mélangées. Le milieu est agité une heure à température ambiante. Le sel attendu se dépose sous forme d'huile au fond du ballon. Du dichlorométhane, dans lequel le liquide ionique est soluble, est ajouté au milieu réactionnel. Les phases aqueuse et organique sont séparées. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium. Le mélange est filtré. Le dichlorométhane est évaporé. Le rendement est de 95 %. É huile visqueuse légèrement jaune. É RMN1H (300MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3.40 (s, 9H); S(Hb) = 3.70 (m, 2H); S(Hc) = 1.91 (m, 2H); S(Hd) = 2.17 (m, 2H); S(He+k) = 4.03-4.11 (m, 2H+1 H); S(Hg) = 6.89 (d, J = 8.6, 2H); S(Hh) = 7.28 (d, J = 8.5, 2H); S(Hi) = 4.56 (d, J = 5.5, 2H). É RMN13C (75MHz, acétone de) : 8(Ca) = 52.60; 8(Cb) = 66.22; 6(Cc) = 19. 63; 8(Cd) = 25.69; 8(Ce) = 66.81; 8(Cf) = 158.20; 8(Cg) = 114.41; 8(Ch) = 128.61; 8(Ci) = 134.14; 8(Ci) = 63.57, 8(CNTf2) = 120.02 (q, J = 321.3). É RMN19F (282MHz, acétone de) : 8(FNTf2) = -79.88. É HRMS(ESI) de (C30H48N308F6S2) : [2C+,NTf2-] m/zthéorique = 756. 2787; 171/zexpérimentai = 756.2785. 1.2. Synthèse de FCTMPTTMA1FBr ou NTf2I É Mode opératoire: 8.9 g (73 mmol) de p-hydroxybenzaldéhyde sont dissous dans 115 mL d'acétone technique. 20 mL (2.0 eq., 146 mmol) de 1-5-dibromopentane et 10 g (1.0 eq., 73 mmol) de K2CO3 sont ajoutés au mélange qui est mis à reflux 18 heures avec une forte agitation. La solution, rouge au départ, devient jaune. Le milieu réactionnel est filtré. Le produit attendu (Teb 125 C pour P 0.05mm Hg) est isolé après distillation de l'huile résiduelle au Kügelrohr. 9.7 g (50 %) de 4-(5-bromopentyloxy)-benzaldéhyde sont obtenus. É huile jaune É RMN1H (200MHz, CDCI3) : 8(Ha) = 3.47 (t, J = 6.6, 2H); 8(Hb+d) = 1.78-2.06 (m, 2H+2H); 8(Hc) = 1.69 (m, 2H); 8(He) = 4.08 (t, J = 6.3, 2H); 8(Hg) = 7.01 (d, J = 8.8, 2H); 8(Hh) = 7.86 (d, J = 8.7, 2H); 8(Hk) = 9.90 (s, 1H). É RMN13C (75MHz, CDCI3) : 8(Ca) = 33.67; 8(Cb) = 33.30; 8(Cc) = 24. 61; 8(Cd) = 28.10; 8(Ce) = 67.90; 8(Cf) = 163.91; 8(Cg) = 114.66; 8(Ch) = 131. 80; 8(Ci) = 129.71; 8(Ci) = 190.47. É Mode opératoire: Une solution de 9.4 g (2.0 eq., 12.7 mmol) de 4bromotoluène dans l'éther anhydre est ajoutée goutte à goutte à 1.4 g (2. 1 eq., 57.8 mmol) de magnésium préalablement décapé. Le mélange est agité minutes après cette addition, puis 7.5 g (1.0 eq., 27.5 mmol) de 4-(5bromopentyloxy)-benzaldéhyde dissous dans l'éther anhydre sont ajoutés goutte à goutte à 0 C. Le milieu réactionnel est alors agité une heure à température ambiante, puis le magnésien est hydrolysé par ajout de méthanol. Les:solvants du milieu sont évaporés. De l'éther est ajouté au résidu et ce mélange est filtré sur fritté. Après évaporation, 10.0 g (99 %) de [4-(5-bromopentyloxy)-phényl]-p-tolylméthanol sont obtenus. É huile jaune É RMN'H (200MHz, CDCI3) : 8(Ha) = 3.48 (t, J = 6.7, 2H); 8(Hb+d) = 1.76-2.08 (m, 2H+2H); 8(F1) = 1.65 (m, 2H); 8(He) = 4.00 (t, J = 6.3, 2H); 6(Hg) = 6.91 (d, J = 9.5, 2H); 8(Hh+m+n) = 7.17-7.34 (m, 2H+ 2H+2H); 8(Hi) = 5.82 (d, J = 3.3, 1H); 8(Hk) = 2.25 (d, J = 3.5, 1H); 8(Hp) = 2.38 (s, 3H). É RMN93C (50MHz, CDCI3) : 8(Ca) = 34.40; 6(Cb) = 33.06; 8(Cc) = 25. 41; 8(Cd) = 29.01; 8(Ce) = 68.13; 6(Cf) = 158.79; 6(Cg) = 114.88; 8(Ch) = 128. 43; 6(Ci) = 137.04; 6(Ci) = 75.98; 6(C1) = 141.95; 6(Cm) = 127.03; 6(Cn) = 129.63; 6(Co) = 137.38; 8(Cp) = 21.78. - X = Br: [CTMPTTMA][Br] É Mode opératoire: 10.0 g (27.5 mmol) de [4-(5bromopentyloxy)-phényl]-p- tolylméthanol sont introduits dans un tube de schlenk. 8.4 mL (2.0 eq., 55.1 mmol) de solution aqueuse de triméthylamine à 45 % et 20 mL d'acétonitrile sont alors ajoutés. Le milieu est porté 18 heures à 70 C. Les solvants sont alors évaporés. Le résidu huileux est lavé à l'éther. 9.6 g (83 %) de produit sont obtenus. É huile très visqueuse jaune. É RMN'H (200MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3.42 (s, 9H); 8(Hb) = 3.72 (m, 2H); 8(Hc+e) = 1.69-1.94 (m, 2H+2H); 8(Hd) = 1.51 (m, 2H); 8(Hf) = 4. 01 (t, J = 6.2, 2H); 8(Hh) = 6.89 (d, J = 8.8, 2H); 8(H;+n+o) = 7.08-7.38 (m, 2H+ 2H+2H); 8(Hk) = 5.73 (s, 1H); 8(H,+q) = 2.03-2.34 (m, 3H+1 H). É RMN13C (75MHz, CD3CN) : 8(Ca) = 52.74; 8(Ch) = 66.04; 6(Cc) = 22. 38; 8(Cd) = 22.59; 6(Ce) = 28.46; 8(Cf) = 67.54; 8(Cg) = 157.94; 8(Ch) = 114. 25; 8(Ci) = 126.56; i5(Cj) = 136.30; 8(Ck) = 74.05; 8(Cm) = 143.04; 8(Cn)= 127.79; 8(Co) = 128.82; 8(Cp) = 138.06; 8(Cg) = 20.38. É HRMS de (C22H32NO2): [Cl m/zthéorique = 342.2433; m/zexpérimental 342. 2435. - X = NTf2: [CTMPTTMA][NTf2] É Mode opératoire: cf mode opératoire pour [HMPhBTMA][NTf2] en engageant le bromure de {5-[4-(hydroxy-p-tolyl-méthyl) -phénoxy]-pentyl}-triméthyl-ammonium [CTMPTTMA][Br]. Le rendement est de 90 %. É huile visqueuse jaune. É RMN1H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3.38 (s, 9H); 8(Hb) = 3.62 (m, 2H); 8(Ho) = 1.87 (m, 2H); 8(Hd) = 1.61 (m, 2H); 8(He) = 2.08 (m, 2H); 8(Hf) = 4.01 (t, J = 6.2, 2H); 8(Hh) = 6.84 (d, J = 8.7, 2H); 8(Hi+n+o) = 7.077.33 (m, 2H+2H+2H); 8(Hk) = 5.74 (s, 1H); 8(Hi) = 2.83 (s, 1H); 8(Hg) = 2. 29 (s, 3H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.71 (q, J = 3.8); 8(Cb) = 66.50; 8(Cd) = 22.66; 8(Cd) = 22.39; 8(Ce) = 28.49; 8(Cf) = 67.23; 8(Cg) = 158. 16; 8(Ch) = 114.12; 8(Ci) = 126.39; 8(Ci) = 136.24; 8(Ck) = 74.80; 8(Cm) = 142.83; 8(Cn) = 127.70; 8(Co) = 128.76; 8(Cp) = 137.81; 8(Cg) = 20.30; 8(CNTf2) = 120.13 (q, J = 321.3). É RMN19F (282MHz, acétone d6) : 8(FNTf2) = -79.88. 2. Synthèse peptidique Les modes opératoires suivants sont décrits dans le cas où le sel à tâche dédiée est utilisé seul comme support soluble. Les procédures sont exactement identiques lorsqu'une matrice (liquide ionique, par exemple [tmba][NTf2], ou sel d'onium, par exemple [tmba][PF6] ) est ajoutée. 2.1. Synthèse peptidique voie inverse 2.1:. Greffage u_ premier aminoacide :1.1_:1:. Greffage.de.l'açide.isonipéçotigue OaO b c _O X, Me3N O oOH OkN,,A É Mode opératoire: (commun pour X = NTf2 ou PF6 en engageant les alcools avec le contre-ion approprié) 1.0 eq. de [HMPhBTMA] [NTf2 ou PF6] sont dissous dans l'acétonitrile anhydre. 1.9 eq. de chloroformiate de p-nitrophényle et 3.0 eq. de NMM sont ajoutés au milieu qui est agité 20 minutes à température ambiante. L'acétonitrile est alors évaporé puis du DMF anhydre, 3.5 eq. d'acide isonipécotique et 3.5 eq. de NMM sont ajoutés au milieu réactionnel qui est agité 18 heures à température ambiante. L'avancement de la réaction est suivi par RMN. Après 18 heures, les solvants sont évaporés. De l'acétonitrile est ajouté au résidu qui est filtré. Les solvants du filtrat sont évaporés et le résidu est lavé trois fois à l'éther. Le rendement massique est de 85 %. Le produit est contaminé par 9 % de [HMPhBTMA][NTf2 ou PF6] (support non greffé). - X = NTf2: [HMPhBTMA-Aiso][NTf2] É huile visqueuse jaune É RMN1H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3.40 (s, 9H); 6(Hb) = 3.70 (m, 2H); 8(Ho+m) = 1.851.96 (m, 2H+2H); 8(Hd) = 2.17 (m, 2H); 8(He) = 4.11 (t, J = 6.0, 2H); 8(Hg) = 6.93 (d, J = 8.6, 2H); 8(Hh) = 7.34 (d, J = 8.6, 2H); 8(Hi) = 5. 04 (s, 2H) ; 8(Hl) = 2.95 (m, 2H); 6(Hr) = 4.01 (dt, J = 12.8, 2H); 8(Hm) = 1.52 (m, 2H); 8(Hn) = 2.50 (m, 1H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.73 (t, JN_c = 3.7); 8(Co) = 66. 25; 6(Co) = 19.77; 6(Cd) = 25.81; 8(Ce) = 66.82; 8(Cf) = 158.75; 8(Cg) = 114.24; 8(Ch) = 129.59; 6(Ci) = 129.49; 8(Ci) = 66.31; 8(Ck) = 154.96; 8(Ci) = 43.23; 8(Cm) = 29.91; 6(Cn) = 41.08; 6(Co) = 176.77; 6(CNTf2) = 120.08 (q, Jc_F = 321.3). É HRMS(ESI)de (C21H33N2O5): [C+] m/zthéorique = 393.2390; m/zexpérimental = 393.2390. - X = PF6: [HMPhBTMA-Aiso][PF6] É RMN1H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 39 (s, 9H); 8(Ho) = 3.68 (m, 2H); 8(Ho+m) = 1.80-1.98 (m, 2H+2H) ; 8(Hd) = 2.14 (m, 2H); 8(He) = 4.11 (t, J = 6.1, 2H); 8(Hg) = 6.93 (d, J = 8.6, 2H); 8(Hh) = 7.34 (d, J = 8.5, 2H); 6(Hi) = 5.04 (s, 2H) ; 8(Hi) = 2.94 (m, 2H); 6(Hr) = 4.02 (m, 2H); 8(Hm,) = 1.52 (m, 2H); 6(Hn) = 2.48 (m, 1H) . É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.68 (t, JN_c = 4.0); 8(Cb) = 67. 03; 6(Cc) = 19.73; 8(Cd) = 25.83; 6(Ce) = 66.83; 8(Cf) = 158.75; 6(C9) = 114.42; 8(Ch) = 129.61; 8(C;) = 129.56; 8(Cj) = 66.21; 8(Ck) = 154.87; 8(C1) = 43.22; 8(Cm) = 28.28; 8(Cn) = 41.04; 8(Co) = 176.26. 5.1:.1.:2.reffage_d'autres_açides_aminé Mode opératoire global 1 pour le greffage de l'aminoester méthylique: 1.0 eq. de [HMPhBTMA][PF6] est dissous dans l'acétonitrile anhydre. 2.0 eq. de chloroformiate de pnitrophényle et 3.0 eq. de NMM sont ajoutés au milieu qui est agité 10 minutes à température ambiante (étape 1). L'acétonitrile est alors évaporé puis du DMF anhydre, 3.5 eq. d'aminoester méthylique et 3.5 eq. de NMM sont ajoutés au milieu réactionnel qui est agité à température ambiante (étape 2). L'avancement de la réaction est suivi par RMN. Après 18 heures, les solvants sont évaporés. De l'acétonitrile est ajouté au résidu qui est filtré. Les solvants du filtrat sont évaporés. Le résidu est lavé trois fois à l'éther puis est dissous dans le DCM. Cette phase organique est extraite trois fois à l'eau, trois fois par une solution aqueuse de HPF6 (1 E) a O PF6, Me3N o É [HMPhBTMA-Leu-OMe][PF6] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 1 en engageant [HMPhBTMA][PF6] et Leu-OMe. É huile visqueuse jaune É RMN1H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 39 (s, 9H); 8(Hb+r) = 3.66-3.71 (m, 2H+3H); 8(H,) = 1.92 (m, 2H); 6(Hd) = 2.17 (m, 2H); 6(He) = 4.11 (t, J = 6.0, 2H); 6(Hg) = 6.93 (d, J = 8.7, 2H) ; 8(Hh) = 7.31 (d, J = 8.6, 2H); 8(Hi) = 5.01 (s, 2H) ; 8(H,) = 6.60 (m, 1H) ; 8(Hm) = 4.11 (m, 1H); 6(Hn+n') = 1.49-1.66 (m, 1 H+1 H) ; 6(Ho) = 1. 73 (m, 1H); 8(Hp) = 0.93 (d, J = 7.4, 6H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 6(Ca) = 52.70 (t, JN-c = 4.0); 8(Cb) = 66. 25 (t, JN_c = 2.9); 8(Cc) = 19.77; 8(Cd) = 25.86; 8(Ce) = 66.79; 8(Cf) = 158.76; 8(Cg) = 114.32; 6(Ch) = 129.65; 8(Cl) = 129.38; 6(Cj) = 65.68; 6(Ck) = 156.32; 6(Cm) = 52.52; 6(Cn) = 40.48; 8(Co) = 24.52; 8(Cp) = 20. 81; 8(Cp,) = 22.34; 8(Cq) = 173.28; 6(Cr) = 51.38. É HRMS(ESI)de (C22H37N205): [Cl m/zthéorique = 409.2702; m/zexpérimental = 409.2700. o ao PF6, Me3N O, N É [HMPhBTMAÉ-Gly-OMe][PF6] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 1 en engageant [HMPhBTMA][PF6] et Gly-OMe. É huile visqueuse jaune É RMN1H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 35 (s, 9H); 6(Hb+o) = 3.58-3.70 (m, 2H+3H); 8(Ho) = 1.91 (m, 2H); 8(Hd) = 2.11 (m, 2H); 8(He) = 4.10 (t, J = 6.1, 2H); 8(Hg) = 6.94 (d, J = 8.7, 2H) ; 8(Hh) = 7.33 (d, J = 8.6, 2H); 8(Hi) = 5.03 (s, 2H) ; 6(Hl) = 6.62 (m, 1H) ; 8(Hm) = 3.90 (d, J = 6.2, 2H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 53.60; 6(Cb) = 67.15; 8(Co) = 20. 67; 8(Cd) = 26.72; 8(Ce) = 67.68; 8(Cf) = 159.66; 6(Cg) = 115.22; 8(Ch) = 130.61; 6(Ci) = 130.28; 8(Ci) = 66.66; 6(Ck) = 157.55; 8(Cm) = 43. 04; 6(Cn) = 171.38; 8(Co) = 52.13. É HRMS(ESI)de (C18H29N205): [C+] m/zthéorique = 353.2076; m/zexpérimentai = 353.2066. 2.1 _2: Synthèse de. dipeptides.protégés.supportes Mode opératoire global 2 pour le couplage peptidique voie inverse: 1.0 eq. de peptide supporté est dissous dans l'acétonitrile puis 1.5 eq. de TEA, de carbodiimide (DCC, DIC ou EDC.HCI), de HOBt et d'aminoester (Gly-OMe, Ala-OMe, Val-OMe, PheOMe ou Leu-OMe) sont ajoutés. Le milieu est agité :2 heures à température ambiante. - Si le carbodiirnide utilisé est le DCC, le milieu réactionnel est filtré (DCU 30 [dicyclohexylurée] peu soluble dans l'acétonitrile) puis l'acétonitrile est évaporé. - Si le DIC ou EDC.HCI sont utilisés, l'acétonitrile est évaporé directement. Le résidu obtenu est alors lavé à l'éther. - X=NTf2: Une chromatographie sur colonne d'alumine neutre est effectuée avec 5 l'éluant DCM/ MeOH 1 %. Le rendement avoisine les 65 %. - X=PF6: Le résidu est dissous dans du dichlorométhane puis la phase est lavée trois fois à l'eau puis trois fois par une solution aqueuse de HPF6 (1 - X = PF6: [HMPhBTMA-Aiso-Ala-OMe][PF6] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 2 en engageant [HMPhBTMA-Aiso][PF6] et Ala-OMe. É huile visqueuse jaune É RMN'H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 38 (s, 9H); 8(Hb) = 3.68 (m, 2H); 8(Hd) = 1.92 (m, 2H); 8(Hd) = 2.16 (m, 2H); 8(He+i) = 4.02-4.16 (m, 2H+2H); 8(H9) = 6.94 (d, J = 8.7, 2H); 8(Hh) = 7. 34 (d, J = 8.6, 2H); 8(H1) = 5.04 (s, 2H) ; 8(H1) = 2.86 (m, 2H); 8(Hm) = 1.58 (m, 2H); 8(Hm') = 1.75 (m, 2H); 8(Hn) = 2.48 (m, 1H); 8(Hp) = 7.43 (m, 1H); 8(Hd) = 4.41 (m, 1H); 8(Hr) = 1.34 (d, J = 7.3, 3H); 8(Ht) = 3. 66 (s, 3H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.69 (t, JN_c = 3.9); 8(Ch) = 66. 17; 8(Cp) = 19.78; 8(Cd) = 25.87; S(Ce) = 66.80; 8(Cf) = 158.75; 8(C9) = 114.38; 8(Cr,) = 129.65; 8(C;) = 129.58; S(Ci) = 66.17; 8(Ck) = 154.79; 8(CI) = 43.19; 8(Cm) = 28.30; 8(C ) = 41.85; 8(C ) = 173.98; S(Cq) = 47. 80; S(Cr) = 16.81; S(Cs) = 173.12; S(Ct) = 51.38. - X = NTf2: [HMPhBTMA-Aiso-Ala-OMe][NTf2] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 2 en engageant [HMPhBTMA-Aiso][NTf2] et Ala-OMe. O a 0 b d 0 X, Me3N O É huile visqueuse jaune É RMN'H (300MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3. 41 (s, 9H); S(Hb) = 3.71 (m, 2H); S(Ho+m) = 1.72-1.97 (m, 2H+2H); S(Hd) = 2.18 (m, 2H); S(He+i) = 4.04-4.16 (m, 2H+2H); S(Hg) = 6.93 (d, J = 8.7, 2H); S(Hh+p) = 7.33-7.36 (m, 2H+1 H); S(Hi) = 5.04 (s, 2H) ; S(H1) = 2.85 (m, 2H); S(Hm.) = 1.58 (m, 2H); S(Hn) = 2.48 (m, 1H); 8(Hg) = 4.42 (m, 1H) ; S(Hr) = 1.34 (d, J = 7.3, 3H); S(Ht) = 3.67 (s, 3H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : S(Ca) = 52.78 (t, JN_c = 4.1); S(Cb) = 66. 30; S(Co) = 19.84; S(Cd) = 25.84; S(Ce) = 66.77; S(Cf) = 158.73; S(Cg) = 114.36; S(Ch+i) = 129.63; S(Ci) = 66.17; S(Ck) = 154.80; S(C1) = 43.18; S(Cm) = 28.30; S(Cn) = 41.88; ci(C0) = 174.01; 8(Cg) = 47.81; S(Cr) = 16. 81; S(Cs) = 173.07; S(Ct) = 51.37; 5(CNTf2) = 120.12 (q, Jc_F = 321. 4). É HRMS(ESI) de (C25H40N306): [C+] m/zthéorique = 478.2917; m/zexpérimentai = 478.2918. O a p r; dO NTf2, Me3N o É [HMPhBTMAÉ-Aiso-Gly-OMe][NTf2] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 2 en engageant [HMPhBTMA-Aiso][NTf2] et Gly-OMe. É huile visqueuse jaune É RMN'H (300MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3. 40 (s, 9H); S(Hb) = 3.70 (m, 2H); S(Hc+m) = 1.75-1.98 (m, 2H+2H); S(Hd) = 2.18 (m, 2H); S(He+i) = 4.04-4.20 (m, 2H+2H); S(Hg) = 6.93 (d, J = 8.7, 2H); 8(Hh) = 7.34 (d, J = 8.6, 2H); S(H,) = 5.04 (s, 2H) ; 8(H1) = 2.90 (m, 2H) ; S(Hm') = 1.60 (m, 2H); S(Hn) = 2.53 (m, 1H); S(Hp) = 7.4:3 (m, 1H); 8(Hg) = 3.94 (d, J = 5.9, 2H); S(Hs) = 3.67 (s, 3H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : S(Ca) = 52.80 (t, JN_c = 4.1); 8(Ch) = 66. 36; S(Co) = 19.87; Fi(Cd) = 25.83; S(Ce) = 66.76; S(Cf) = 158.72; S(Cg) = 114.35; S(Ch+i) = 129.64; S(Cj) = 66.13; S(Ck) = 154.76; S(C1) = 40.50; S(Cm) = 28.70; S(Cn) = 41.91; 6(Co) = 174.41; 8(Cg) = 40.50; S(Cr) = 170. 23; 6(Cs) = 51.18; 8(CNTf2) = 120.14 (q, JC-F = 321.5). É HRMS(ESI) de (C24H38N306): [Mi 171/zthéorique = 464.2761; m/Zexpérimental = 30 464.2765. e a O p x, Me3N - X = NTf2: [HMPhBTMA-Aiso-Leu-OMe][NTf2] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 2 en engageant [HMPhBTMA-Aiso][NTf2] et Leu-OMe. É huile visqueuse jaune É RMN1H (300MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3. 39 (s, 9H); S(Hb) = 3.70 (m, 2H); S(H0) = 1.92 (m, 2H); S(Hd) = 2.17 (m, 2H); S(He+l) = 4.03-4.17 (m, 2H+2H); S(Hg) = 6.93 (d, J = 8.6, 2H); S(Hh+ p) = 7.32-7.35 (m, 2H+1H); S(Hi) = 5.04 (s, 2H); S(Hr) = 2.87 (m, 2H); S(Hm+r+ r'+s) = 1.47-1.69 (m, 2H+1 H+1 H+1 H); S(Hmy) = 1.75 (m, 2H); S(Hn) = 2. 50 (m, 1H); 8(Hg) = 4.49 (m, 1H); S(Ht) = 0.90 (d, J = 6.4, 3H); S(Ht,) = 0.93 (d, J = 6.4, 3H); S(H ) = 3.66 (s, 3H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : S(Ca) = 52.76 (t, JN_c = 3.9); S(Cb) = 66. 33; S(Cp) = 19.82; S(Cd) = 25.84; S(Ce) = 66.80; S(Cf) = 158.75; S(Cg) = 114.41; S(Ch) = 129.60; S(Ci) = 129.53; S(Ci) = 66.25; S(Ck) = 154.85; S(C1) = 43.20; S(Cm) = 28.70; S(Cn) = 41.95; S(C0) = 174.39; 8(Cg) = 50. 55; S(Cr) = 40.39; S(Cs) = 24.64; S(Ct) = 20.97; S(Ct,) = 22.39; S(Cu) = 173.08; 8(C ) = 51.40; 8(CNTf2) = 120.10 (q, Je-F = 321.3). É HRMS(ESI) de (C28H46N306): [Cl m/Zthéorique = 520.3386; m/zexpériemntal = 520.3386. - X = PF6: [HMPhBTMA-Aiso-Leu-OMe][PF6] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 2 en engageant [HMPhBTMA-Aiso][PF6] et Leu-OMe. É huile visqueuse jaune É RMN1H (300MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3. 38 (s, 9H); S(Hb) = 3.68 (m, 2H); S(Hp) = 1.92 (m, 2H); S(Hd) = 2.17 (m, 2H); S(He+l) = 4.03-4.15 (m, 2H+2H); S(Hg) = 6.93 (d, J = 8.7, 2H); S(Hh+ p) = 7.29-7.36 (m, 2H+1H); S(Hi) = 5.04 (s, 2H); S(Hr) = 2.87 (m, 2H); S(Hm+r+ r'+s) = 1.45-1.69 (m, 2H+1 H+1 H+1 H); S(Hmy) = 1.75 (m, 2H); S(Hn) = 2. 48 (m, 1H); 8(Hg) = 4.49 (m, 1H); S(Ht) = 0.90 (d, J = 6.3, 3H); S(Hr) = 0.93 (d, J = 6.4, 3H); S(H ) = 3.66 (s, 3H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : S(Ca) = 52.56; S(Cd) = 66.40; S(Cd) = 19. 64; S(Cd) = 25.82; S(Ce) = 66.87; S(Cf) = 158.76; S(Cg) = 114.52; S(Ch) = 129.62; 154.98; S(CI) = 43.25; S(Cm) = 28.57; 50.67; S(Cr) = 40. 25; S(Ca) = 24.68; 5 S(CO) = 21.08; S(Cf) = 22.53; S(Cd) = 173.15; C ) = 51.64. S(Ci) = 129.41; S(Ci) = 66.12; S(Ck) = S(C0) = 41.94; 6(C0) = 174. 76; S(Cd) = NTf2, Me3N O O O N tiv0 H p O É [HMPhBTMA-Aiso-Phe-OMe][NTf2] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 2 en engageant [HMPhBTMA-Aiso][NTf2] et Phe-OMe. É huile visqueuse jaune É RMN'H (300MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3. 36 (s, 9H); S(Hb) = 3.72 (m, 2H); S(H0) = 1.91 (m, 2H); S(Hd) = 2.15 (m, 2H); S(He+l) = 3.99-4.11 (m, 2H+2H); S(Hg) = 6.96 (d, J = 8.6, 2H); S(Hh+ p+t+ u+v) = 7.04-7.37 (m, 2H+1 H+2H+2H+1 H); S(Hi) = 5.03 (s, 2H); S(HI') = 2. 81 (m, 2H); S(Hm) = 1.48 (m, 2H); Hm.) = 1.68 (m, 2H); Fin) = 2.44 (m, 1H); S(Hq) = 4.71 (m, 1H); S(Hr+r) = 2.95-3.21 (m, 1 H+1 H); S(Hx) = 3.67 (s, 3H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : S(Ca) = 52.79 (t, JN_C = 3.9); S(Cd) = 66. 33; S(C0) = 19.85; S(Cd) = 25.83; S(Ce) = 66.79; S(Cf) = 158.73; S(Cg) = 114.40; S(Ch) = 129.59; S(Ci) = 129.55; S(Ci) = 66.27; S(Ck) = 155.84; S(CI) = 43.15; S(Cm) = 29.56; S(Cn) = 41.89; S(Cd) = 174.12; S(Cd) = 53. 47; S(Cr) = 37.34; S(Cs) = 137.18; S(Ct) = 129.24; S(Cd) = 128.30; S(C ) = 126.67; S(C,,) = 171.95; S(Cx) = 51.56; S(CNTf2) = 120.10 (q, Jc_F = 321.3). É HRMS(ESI) de (C31H44N306): [Cl m/zthéorique = 554.3230; m/zexpérimental = 554.3233. s NTf2 Me3Nh T É [HMPhBTMAÉ-Aiso-Val-OMe][NTf2] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 2 en engageant [HMPhBTMA-Aiso][NTf2] et Val-OMe. É huile visqueuse jaune É RMN1H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 41 (s, 9H); 8(Hp) = 3.71 (m, 2H); 8(Hp) = 1.93 (m, 2H); 8(Hd+r) = 2.08-2. 24 (m, 2H+1 H); 8(He+i) = 4.05-4.18 (m, 2H+2H); 6(Hg) = 6.93 (d, J = 8.7, 2H); 8(Hh) = 7.34 (d, J = 8.6, 2H); 6(H0 = 5.04 (s, 2H); 8(Hr) = 2.87 (m, 2H); 8(Hm) = 1.60 (m, 2H); 8(Hm.) = 1.78 (m, 2H); 8(Hn) = 2.56 (m, 1H); 8(Hp) = 7.34 (m, 1H); 8(Hg) = 4.41 (m, 1H); 6(Hs+s,) = 0.90-0.94 (m, 3H+ 3H); 8(Hu) = 3.69 (s, 3H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.76 (t, JN-c = 4.0); 8(Cb) = 66. 31; 6(Co) = 19.82; 8(Cd) = 25.83; 8(Ce) = 66.80; 8(Cf) = 158.74; 6(Cg) = 114.41; 8(Ch) = 129.59; 8(Ci) = 129.53; 6(Ci) = 66.26; 8(Ck) = 155.87; 6(C1) = 43.24; 8(Cm) = 26.59; 6(Cn) = 41.95; 6(Co) = 174.48; 8(Cg) = 57. 41; 8(Cr) = 30.54; 8(Cs) = 17.53; 6(Cs.) = 17.60; 8(Cf) = 172.12; 8(Cu) = 51.27; 6(CNTt2) = 120.10 (q, Je-F = 321.4). É HRMS(ESI) de (C27HiN306): [Cl m/Zthéorique = 506.3230; m/zexpérimentai = 506.3226. 2:1.3, Déprotection.des.dipeptides.supportés Mode opératoire global 3 pour le clivage de l'ester méthylique terminal: 1.0 eq. de peptide supporté protégé est dissous dans l'acétonitrile anhydre. 2.0 eq. de triméthylsilanolate de potassium sont ajoutés au milieu qui est alors agité 2 heures à température ambiante. Le milieu est alors filtré. Les solvants sont évaporés et le résidu est lavé à l'éther. Les rendements avoisinent les 90 %. O O ci e O PF6,PAe3N É [HMPhBTMA-Aiso-Leu-OK][PF6] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 3 en engageant [HMPhBTMA-Aiso-Leu-OMe][PF6]. É huile visqueuse jaune É RMN'H (200MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 36 (s, 9H); 8(Hb) = 3.66 (m, 2H); 8(Hc+d+m+m'+r+r'+s) = 1.31-2.23 (m, 2H+ 2H+2H+ 2H+1 H+1 H+1 H); 8(He+1+q) = 3.99-4.29 (m, 2H+2H+1 H); 8(Hg) = 6.94 (d, J = 8.6, 2H); 8(Hh) = 7.34 (d, J = 8.5, 2H); 6(H0 = 5.04 (s, 2H); 6(H1) = 2. 84 (m, 2H); 8(Hn) = 2.59 (m, 1H); 8(Ho) = 7.89 (m, 1H); 8(H4+t') = 0.80-1. 02 (m, 3H+3H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.67; 8(Ch) = 66.20; 8(Co) = 19. 74; 6(Cf) = 21.59; 8(Cr) = 23.26; 8(Co) = 174.57. 8(Cd) = 25.83; 8(Ce) = 66.82; 8(Cf) = 158.72; 8(Cg) = 114.42; 8(Ch) = 129. 62; 8(C;) = 129.52; 6(C1) = 66.20; 8(Ck) = 154.87; 8(C1) = 43.36; 8(Cm) = 29.28; 8(Cn) = 42.10; 6(Co) = 178.24; 8(Cg) = 53.58; 8(Cr) = 41. 89; 8(Cs) = 25.13; NTf2,Me3N o 4N q OûNrn p Il O O É [HMPhBTMA-Aiso-Phe-OK][NTf2] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 3 en engageant 15 [HMPhBTMA-Aiso-Phe-OMe][NTf2]. É huile visqueuse jaune É RMN1H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 36 (s, 9H); 8(Hb) = 3.72 (m, 2H); 8(H,) = 1.91 (m, 2H); 8(Hd) = 2.15 (m, 2H); 8(He+,) = 3.99-4.11 (m, 2H+2H); 8(Hg) = 6.96 (d, J = 8.6, 2H); 8(Hh+ p+t+ u+ ) = 7.04-7.37 (m, 2H+1 H+2H+2H+1 H); 8(Hi) = 5.03 (s, 2H); 6(H1) = 2. 81 (m, 2H); 8(Hm) = 1.48 (m, 2H); 8(Hm.) = 1.68 (m, 2H); 6(Hn) = 2.44 (m, 1H); 8(Ho) = 4.71 (m, 1H); 8(Hr+r') = 2.95-3.21 (m, 1 H+1 H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.79; 8(Ch) = 66.22; 8(Co) = 19. 82; 8(Ct) = 129.62; 8(CU) = 127.81; 8(C ) = 125.72; 8(C,,) = 176.48; 6(CNTf2) = 120.11 (q, Jc_F = 321.3). 8(Cd) = 25.85; 8(Ce) = 68.41; 8(Cf) = 158.71; 8(Cg) = 114.41; 8(Ch) = 129. 62; 8(C,) = 129.53; 6(Ci) = 66.81; 8(Ck) = 154.83; 6(CI) = 43.27; 8(Cm) = 29.56; 6(Cn) = 42.00; 6(Co) = 174.01; 8(Cg) = 56.12; 8(Cr) = 38. 09; 6(Cs) = 139.78; s OK a O NTf2, Me3N OY o É [HMPhBTMAÉ-Aiso-Val-OK][NTf2] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 3 en engageant [H M Ph BTMA-Ai so-Val-OMe] [NTf2]. É huile visqueuse jaune É RMN1H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 41 (s, 9H); 8(Hb) = 3.71 (m, 2H); 8(Hc) = 1.93 (m, 2H); 8(Hd+r) = 2.08-2. 24 (m, 2H+1 H); 8(He+i) = 4.05-4.18 (m, 2H+2H); 8(Hg) = 6.93 (d, J = 8.7, 2H); 8(Hh) = 7.34 (d, J = 8.6, 2H); 8(Hi) = 5.04 (s, 2H); 8(Hr) = 2.87 (m, 2H); 8(Hm) = 1.60 (m, 2H); 8(Hm.) = 1.78 (m, 2H); 8(Hn) = 2.56 (m, 1H); 8(Hp) = 7.34 (m, 1H); 8(Hg) = 4.41 (m, 1H); 8(Hs+s,) = 0.90-0.94 (m, 3H+ 3H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.78; 8(Cb) = 66.18; 8(C,) = 19. 66; 8(Cd) = 25.86; 8(Ce) = 66.80; 8(Cf) = 158.71; 8(Cg) = 114.40; 8(Ch+i) = 129.60; 8(Ci) = 66.31; 8(Ck) = 154.84; 8(Ci) = 43.34; 8(Cm) = 26.59; 8(Cn) = 42.17; 8(C0) = 177.47; 8(Cg) = 60.03; 8(Cr) = 30.54; 8(Cs) = 12. 73; 8(Cs.) = 18.08; 8(Ct) = 174.34; 8(CNTf2) = 120.10 (q, Jc_F = 321. 4). 2:1::.Sy nthèse de tripeptides.p....és É [HMPhBTMAÉ-Aiso-Phe-Leu-OMe] [NTf2] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 2 en engageant [HMPhBTMA-Aiso-Phe-OK][NTf2] et Leu-OMe. É huile visqueuse jaune É RMN1H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 36 (s, 9H); 8(Hb) = 3.70 (m, 2H); 8(Hd) = 1.92 (m, 2H); 8(Hd) = 2.18 (m, 2H); 8(He+i) = 3.97-4.13 (m, 2H+2H); O a +0 c9 O N@O NTf2, Me3N H x 1 O N - p O z/ Il O 8(Hg) = 6.92 (d, J = 8.7, 2H); 8(Hh) = 7.33 (d, J = 8.6, 2H) ; 6(Hi) = 5.03 (s, 2H); 8(Hr) = 2.85 (ni, 2H); 8(Hm+m'+z+z'+i) = 1.28-1. 78 (m, 2H+2H+1 H+1 H+1 H); 8(Hn) = 2.43 (m, 1H); 8(Hp+t+u+v) = 7.14-7.26 (m, 1 H+2H+2H+1 H); 8(Hg) = 4.72 (m, 1H); 8(Hr+r) = 2.88-3.22 (m, 1 H+1 H) ; 8(Hx) = 7.51 (m, 1H); 8(Hy) = 4.49 (m, 1H); 8(H2) = 0.90 (d, J = 6.3, 3H); 8(H2,) = 0.91 (d, J = 6.4, 3H); 8(H4) = 3.68 (s, 3H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.80 (t, JN_c = 4.1); 8(Ch) = 66. 31; 8(Co) = 19.86; 8(Cd) = 25.86; 8(Ce) = 66.78; 8(Cf) = 158.72; 8(Cg) = 114.35; 8(Ch) = 129.64; 8(Ci) = 129.32; 8(Ci) = 66.15; 8(Ck) = 154.74; 8(Ci) = 43.09; 8(Cm) = 29.51; 8(Ch) = 41.98; 8(Co) = 174.05; 8(Cg) = 53. 84; 8(Cr) = 37.62; 8(Cs) = 137.68; 8(Ct) = 129.40; 8(Cu) = 128.13; 8(Cv) = 126.39; 8(C,,) = 172.69; 8(Cy) = 50.62; 8(Cz) = 40.64; 8(C1) = 24. 46; 8(C2) = 20.96; 8(C2.) = 21.04; 8(C3) = 171.29; 8(C4) = 51.45; 8(CNTf2) = 120.14 (q, Jc_F = 321.5). É HRMS de (C37H55N4O7) : [Cl m/Zthéorique = 667.4071; m/zexpérimental = 667.4069. É [HMPhBTMA-Aiso-Leu-Phe-OMe][PF6] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 2 en engageant [HMPhBTMA-Aiso-Leu-OK][PF6] et Phe-OMe. É huile visqueuse jaune É RMN1H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 36 (s, 9H); 8(Hb) = 3.64 (m, 2H); 8(Hc) = 1.91 (m, 2H); 8(Hd) = 2.10 (m, 2H); 8(He+i) = 4.03-4.18 (m, 2H+2H); 8(Hg) = 6.93 (d, J = 8.5, 2H); 8(Hh+ p+v+ z+aa+ab) = 7.17-7.51 (m, 2H+1 H+1 H+2H+2H+1 H); 8(Hi) = 5.04 (s, 2H); 8(Hr) = 2.83 (m, 2H); 8(Hm+m'+s+r+r') = 1.23-1.80 (m, 2H+2H+1 H+1 H+1 H); 8(Hn) = 2.43 (m, 1H); 8(Hq) = 4.45 (m, 1H); 8(Ht) = 0.86 (d, J = 6.3, 3H); 8(Ht.) = 0.90 (d, J = 6.4, 3H); 8(H,,) = 4.69 (m, 1H); 8(Hx+x.) = 2.94-3. 23 (m, 1 H+1 H); 8(Had) = 3.67 (s, 3H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.66 (t, JN_c = 3.9); 8(Ch) = 66. 27; 30 8(Co) = 19.75; 6(Cd) = 25.85; 8(Ce) = 66.82; 8(Cf) = 158.77; 8(Cg) = 114.42; t PF6, Me31Ne S(Ch) = 129.51; S(Ci) = 129.29; S(Ci) = 66. 27; S(Ck) = 154.83; S(CI) = 43.21; S(Cm) = 28.36; 6(Cn) = 42.05; S(C0) = 174. 39; S(Cd) = 53.51; S(Cr) = 40.71; S(Cs) = 24.36; S(Ct) = 21.24; S(Ct.) = 22.54; S(Cd) = 171.62; S(C,,) = 55.24; S(C),) = 37.29; S(Cy) = 136.87; S(CZ) = 128.82; S(Caa) = 128.35; S(Cab) _ 126.71; S(Cac) = 172.24; S(Cad) = 51.56. É HRMS de (C37H55N407) : [Cl m/zthéorique = 667.4071; m/zexpérimental 667. 4070. É [HMPhBTMAÉ-Aiso-Leu-Val-OMe][PF6] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 2 en engageant [HMPhBTMA-Aiso-Leu-OK][PF6] et Val-OMe. É huile visqueuse jaune É RMN1H (300MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3. 38 (s, 9H); S(Hb) = 3.68 (m, 2H); S(Hc) = 1.92 (m, 2H); S(Hd+x) = 2.08-2. 24 (m, 2H+1 H); S(He+i) = 4.07-4.18 (m, 2H+2H); S(Hg) = 6.93 (d, J = 8.6, 2H); S(Hh+p+v) = 7.23-7.45 (m, 2H+1 H+1 H); S(Hi) = 5.04 (s, 2H); S(Hr) = 2.84 (m, 2H); S(Hm+m'+s+r+r') = 1.45-1.83 (m, 2H+2H+1 H+1 H+1 H); S(Hi) = 2.52 (m, 1H); S(q) = 4.50 (m, 1H); S(Ht+t,+y+y) = 0.82-0.97 (m, 3H+3H+3H+ 3H); S(H, ) = 4.38 (m, 1H); S(Haa) = 3.69 (s, 3H). É RMN93C (75MHz, acétone d6) : S(Ca) = 52.66 (t, JN_c = 4.0); S(Cb) = 66. 25; S(Cd) = 19.77; S(Cd) = 25.84; S(Ce) = 66.80; S(Cf) = 158.76; S(Cg) = 114.39; S(Ch) = 129.65; S(Ci) = 129.50; S(Ci) = 66.25; S(Ck) = 154.82; S(CI) = 43.21; S(Cm) = 28.57; 6(Cn) = 42.14; S(C0) = 174.58; S(Cd) = 51. 44; S(Cr) = 40.50; S(Cs) = 24.55; S(Ct) = 21.21; S(Cf) = 21.25; S(Cu) = 172.44; S(C,,) = 57.25; S(C),) = 30.76; S(Cy) = 17.40; CO = 18. 53; S(CZ) = 171.80; S(Caa) = 51.34. É HRMS de (C33H55N407) : [Cl m/zthéorique = 619.4071; m/zexpérimental = 619.4070. :1:,. .livage. d.peptides. supportés. Mode opératoire global 4 pour le clivage de peptides supportés par voie inverse par le TFA: t o-'=. o N H yN/rt P I O S r O H N O x Y PF6, Me3N 1.0 eq. de peptide supporté est dissous dans une solution à 10 % de TFA dans le DCM anhydre avec un volume de solution tel qu'environ 10 eq. de TFA par rapport au sel soient ajoutés. Le mélange est agité 10 minutes à température ambiante puis les solvants sont évaporés. Du dichlorométhane et de l'eau sont ajoutés au résidu. La phase organique est lavée trois fois à l'eau. Les phases aqueuses sont réunies et l'eau est évaporée. Le rendement avoisine les 95 %. É [Aiso-Leu-OMe][CF3OOO] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 4 en engageant [H MPhBTMA-Aiso-Leu-O Me] [NTf2]. É huile incolore É RMN1H (200MHz, D2O) : S(Hc) = 2.98 (m, 2H); S(Hc.) = 3. 39 (m, 2H); S(Hd+d'+;) = 1.67-.2.04 (m, 2H+2H+1H); S(He) = 2. 61 (m, 1H); S(Hg) = 4.33 (m, 1H); S(Hh) = 1.56 (d, J = 6.4, 2H); S(Hi) = 0.80 (d, J = 8.9, 3H); S(H1) = 0.82 (d, J = 8.9, 3H); S(H1) = 3.65 (s, 3H) . É RMN13C (75MHz, D2O) : S(Ca) = 116.67 (q, Jc_F = 289.1); S(Cb) = 162.89; S(Cc) = 43.33; S(Cd) = 25.34; S(Cd.) = 25.12; S(Ce) = 39.40; S(Cf) = 176. 86; S(Cg) = 53.21; S(Ch) = 39.66; S(C1) = 24.75; S(Ci) = 20.82; S(Ci.) = 22.40; 6(Ck) =175.53; 6(C1) = 51.75. É [Aiso-Phe-OMe][CF3OOO] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 4 en engageant [HMPhBTMA-Aiso-Phe-OMe][NTf2]. É huile incolore É RMN'H (300MHz, D20) : 8(Hc+c'+h+h') = 2.79-3.42 (m, 2H+ 2H+1 H+1 H); 8(Hd+d,) = 1.41-1.93 (m, 2H+2H); 6(He) = 2.46 (m, 1H); 8(Hg) = 4.65 (dd, J1 = 5.5, J2 = 4.2, 1H); 8(Hj+k+,) = 7.14-7.30 (m, 2H+ 2H+1 H) ; 6(Hn) = 3.65 (s, 3H). É RMN13C (75MHz, D20) : 8(Ca) = 116.30 (q, Jc_F = 291.5); 8(Cb) = 162.84 (q, J = 35.7); 6(Cc) = 42.87; 8(Cd) = 24.91; 8(Cd.) = 24.55; 8(Ce) = 39. 19; 8(Cf) = 175.92; 8(Cg) = 53.77; 8(Ch) = 36.55; 8(C;) = 136.51; 6(Cj) = 129.17; 8(Ck) = 128.69; 8(C1) = 127.12; 8(Cm) = 173.58; 6(Cn) = 52.95. O c vg N O aÂ9 H F3C O, H2N O É [Aiso-Val-OMe][CF3000] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 4 en engageant [HMPhBTMA-Aiso-ValOMe][NTf2]. É huile incolore É RMN'H (200MHz, D20) : 8(Hc) = 3.01 (m, 2H); 8(Hc,) = 3. 43 (m, 2H); 8(Hd) = 1.82 (m, 2H); 8(Hd.) = 2.00 (m, 2H); 8(He) = 2.69 (m, 1H); 8(Hg) = 4.22 (d, J = 6.1, 1H); 8(Hh) = 2.12 (m, 1H); 8(H;) = 0.87 (d, J = 6.9, 6H); 8(Hk) = 3.70 (s, 3H). É RMN13C (75MHz, D20) : 8(Ca) =116.22 (q, J = 291.3); 8(Cb) = 162. 53 (q, Jc_F = 35.8); 6(Cc) = 43.01; 8(Cd) = 24.81; 8(Cd,) = 25.11; 8(Ce) = 39.26; 8(Cf) = 176.51; 8(Cg) = 58.50; 8(Ch) = 29.88; 8(C;) = 17.40; 8(C; .) = 18.20; 6(Cj) = 174.08; 8(Ck) = 52.64. Mode opératoire global 5 pour le clivage de peptides supportés par voie inverse par TMSBr: 1.0 eq. de peptide supporté [HMPhBTMA-AA1-...-AAn] [PF6] est dissous dans l'acétonitrile anhydre puis 1.5 eq. de TMSBr sont ajoutés. Le mélange est agité 30 minutes à température ambiante puis est filtré. Le filtrat (peptide) est lavé à l'acétonitrile. Pour l'instant, le clivage n'a été effectué que sur [HMPhBTMA-Aiso] [PF6]. 2.2. Synthèse peptidique voie directe 2.2._1... Greffage. . 1premier aminoacide z NTf2, Me3N O O É [Fmoc-Ala-HMPhBTMA][NTf2] É Mode opératoire: 1.00 g (1.9 mmol) de [HMPhBTMA][NTf2] sont dissous dans l'acétonitrile puis 0.60 g (1.5 eq., 2. 89 mmol) de DCC et 24 mg (0.1 eq., 0.19 mmol) de DMAP sont ajoutés. Le milieu est agité toute la nuit à température ambiante. Le mélange est filtré puis l'acétonitrile est évaporé. Le résidu est lavé à l'éther puis dissous dans du DCM. Cette phase est lavée deux fois par un dixième en volume de solution aqueuse de HCI 1 N avant d'être séchée sur sulfate de sodium et filtrée. Le DCM est alors évaporé. Le rendement avoisine les 90 %. É huile visqueuse jaune É RMN"H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 40 (s, 9H); 8(Hb) = 3.69 (m, 2H); 8(Hc) = 1.90 (m, 2H); 8(Hd) = 2.16 (m, 2H); 8(He) = 4.06 (t, J = 5.9, 2H); 8(Hg+n) = 6.80-6.91 (m, 2H+1 H); 8(Hh+ t) = 7.28-7.37 (m, 2H+2H); 8(Hi) = 5.11 (s, 2H); 8(Hi+p+q) = 4.14-4.42 (m, 1 H+2H+1 H); 8(Hm) = 1.42 (d, J = 7.3, 3H); 8(HS) = 7.71 (d, J = 7.4, 2H) ; 8(Hu) = 7.43 (m, 2H); 8(Hv) = 7.88 (d, J = 7.5, 2H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.79 (t, JN_c = 4.1); 8(Cb) = 66. 27; 8(Cc) = 19.75; 8(Cd) = 25.74; 8(Ce) = 66.77; 8(Cf) = 158.90; 8(Cg) = 114.43; 8(Ch) = 129.86; 8(Ci) = 128.33; 8(Cj) = 66.21; 8(Ck) = 172.86; 8(Cl) = 50.00; 8(Cm) = 16.97; 8(Co) = 156.12; 8(Cp) = 66.41; 8(Cq) = 47. 06; 8(Cr) = 144.17; 8(Cs) = 125.31; 8(Ct) = 126.54; 8(Cu) = 127.18; 8(C ) = 120.05; 8(C, ) = 25 141.21; 8(CNTf2) = 120.15 (q, Jc_F = 321.3). É HRMS de (C32H39N205) : [C+] m/zthéorique = 531.2859; m/zexpérimental = 531.2859. Mode opératoire global 6 pour le clivage du groupement fmoc: Le peptide supporté ayant l'amine terminale protégée par un groupement fmoc est dissous dans l'acétonitrile puis de la pipéridine (10 à 20 % en volume) est ajoutée. Le milieu est agité 15 minutes à température ambiante avant d'évaporer les solvants. Le résidu est lavé à l'éther. Pour les peptides supportés sur [CTMPTTMA][PF6] exclusivement, le résidu est dissous dans le DCM et extrait trois fois à l'eau. La phase organique est séchée sur Na2SO4 et filtrée. Les rendements sont supérieurs à 90 %. É [Ala-HMPhBTMA][NTf2] É Mode opératoire: cf mode opératoire global 6 en engageant [Fmoc-Ala-HMPhBTMA][NTf2]. É huile visqueuse jaune É RMN1H (300MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3. 40 (s, 9H); S(Hb) = 3.70 (m, 2H); S(Hc) = 1.93 (m, 2H); S(Hd) = 2.18 (m, 2H); S(He) = 4.11 (t, J = 6.0, 2H); S(Hg) = 6.93 (d, J = 8.6, 2H); S(Hh) = 7. 32 (d, J = 8.6, 2H); S(Hi) = 5.06 (s, 2H); S(HI) = 4.24 (q, J = 6.7, 1H); S(Hm) = 1.28 (d, J = 6.6, 3H); S(Hn) = 2.94 (m, 2H). É RMN13C (751MHz, acétone d6) : S(Ca) = 52.72 (t, JN_c = 3.9); 6(Cb) = 66. 29; S(Cc) = 19.74; SS(Cd) = 25.77; S(Ce) = 66.83; S(Cf) = 158. 92; S(Cg) = 114.46; S(Ch) = 129.91; 8(Ci) = 128.48; S(Ci) = 65.86; S(Ck) = 176.92; 8(Ci) = 50.42; S(Cm) = 20.97; 8(CNTf2) = 120.06 (q, Je-F = 321. 2). Mode opératoire global 7 pour le greffage du premier aminoacide à 25 [CTMPTTMA][PF6] : [AA1-CTMPTTMA][PF6] est synthétisé en quatre étapes à partir de l'hexafluorophosphate de {5-[4-(hydroxy-p-tolyl-méthyl)-phénoxy] -pentyl}-triméthyl-ammonium: - chloration de la position benzhydrilique greffage du fmoc-aminoacide - métathèse du contre-ion (Br (ou éventuellement Cl) - PF6) - clivage du groupement fmoc 1.0 eq. d'hexafluorophosphate de {5-[4-(hydroxy-p-tolyl-méthyl)-phénoxy]-pentyl}triméthyl-ammonium sont dissous dans l'acétonitrile anhydre. 1.5 eq. de chlorure de thyonyle sont ajoutés goutte à goutte à 0 C puis le milieu est agité 20 minutes à température ambiante sous argon. Les solvants sont alors évaporés. Le résidu est dissous dans l'acétonitrile anhydre puis 1. 5 eq de fmoc-aminoacide et 1.5 eq. de TEA sont ajoutés au milieu qui est agité 30 minutes à température ambiante. L'acétonitrile est alors évaporé. Le résidu est lavé à l'éther et dissous dans l'acétonitrile. 3.0 eq. de KPF6 sont ajouté au milieu qui est agité deux heures puis filtré sur célite. Les solvants du filtrat sont évaporés et le résidu est dissous dans le DCM. Cette phase est lavée par trois fois un dixième en volume d'eau puis elle est séchée sur sulfate de sodium et filtrée. Le DCM est évaporé. Un mélange d'acétonitrile et de pipéridine (10 à 20 %) est ajouté au résidu et le milieu réactionnel est agité 15 minutes à température ambiante avant d'évaporer les solvants. Le résidu est alors lavé à l'éther puis dissous dans du DCM. La phase organique obtenue est lavée trois fois à l'eau puis est séchée sur sulfate de sodium et filtrée. Le DCM est alors évaporé. 625 mg de [Ala-CTMPTTMA][PF6] sont obtenus. Le rendement moyen sur ces quatre étapes est de 85 %. Le taux de greffage est supérieur à 95 %. O aebdf PF6, Me3N O É [Ala-CTMPTTMA][PF6] É Mode opératoire: cf mode opératoire 7 en engageant Fmoc-Ala. 25 É huile visqueuse jaune É RMN'H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3.36 (s, 9H); 8(Hb+r) = 3.50-3.63 (m, 2H+1 H); 8(Hc) = 1.87 (m, 2H); 8(Hd) = 1.60 (m, 2H); 8(He) = 2.02 (m, 2H) ; 8(Hf) = 4.03 (t, J = 6.2, 2H); 8(Hh) = 6.90 (d, J = 8.5, 2H); 8(Hi+m+n) = 7.11-7.39 (m, 2H+2H+2H); 8(Hk) = 6.78 (s, 1H); 8(Hp) = 2.31 (s, 3H); 8(H5) = 1.33 (d, J = 6.6, 3H); 8(Ht) = 2.29 (m, 2H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.69; 8(Cb) = 66.42; 8(Co) = 28. 44; 8(Cf) = 67.23; 8(Cg) = 158.74; 8(Ch) = 132.99; 8(Ck) = 76.47; 8(Cl) = 137.25; 8(Cm) = 138.19; 6(Cp) = 20.13; 8(Cq) = 171.48; 8(Cr) = 5 58.47; 8(Cs) = 18.06. É HRMS de (C25H37N203) : [Cl m/Zthéorique = 413.2804; m/Zexpérimental = 413.2789. É [Gly-CTMPTTMA][PF6] É Mode opératoire: cf mode opératoire 7 en engageant Fmoc-GIy. É huile visqueuse marron É RMN'H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 33 (s, 9H); 8(Hb+r) = 3.53-3.62 (m, 2H+1 H); 8(H,) = 1.88 (m, 2H); 8(Hd) = 1.59 (m, 2H); 8(He) = 2.05 (m, 2H); 6(Hf) = 4.03 (t, J = 6.2, 2H); 8(Hh) = 6. 91 (d, J = 8.7, 2H); 6(Hi) = 7.18 (d, J = 8.0, 2H); 8(Hm+n) = 7.29-7. 38 (m, 2H+2H); 8(Hk) = 6.83 (s, 1H); 8(Hp) = 2.31 (s, 3H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.57; 8(Cb) = 66.35; 8(Co) = 22. 65; 8(Cd) = 22.32; 8(Ce) = 28.45; 6(Cf) = 67.38; 8(Cg) = 158.80; 8(Ch) = 114.51; 6(Ci) = 128.46; 8(Ci) = 132.90; 8(Ck) = 76.78; 6(Cl) = 137.41; 8(Cm) = 126.73; 8(Cn) = 129.21; 6(Co) = 138.11; 6(Cp) = 20.45; 6(Cq) = 171.21; 8(Cr) = 53.30. É HRMS de (C24H35N203) : [Cl m/Zthéorique = 399.2648; m/Zexpérimental = en attente. O q O a e b ci f PF6, Me3N O O a O+ b,+ f PF6, Me3N O 22.34; 8(Cd) = 20.25; 8(Ce) = 114.34; 8(Cl) = 128.35; 8(Ci) = 126.57; 6(Cn) = 129.03; 8(Co) = É [IIe-CTMPTTfMIA][PF6] É Mode opératoire: cf mode opératoire 7 en engageant Fmoc-IIe. É huile visqueuse marron É RMN1H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 33 (s, 9H); 8(Hb+r) = 3.48-3.60 (m, 2H+1H); 8(Ho+s) = 1.79-1.97 (m, 2H+1H) ; 8(Hd) = 1.59 (m, 2H); 8(He) = 2.05 (m, 2H); 8(Hf) = 4.03 (t, J = 6.2, 2H); 8(Hh) = 6.91 (d, J = 8.6, 2H); 8(Hi) = 7.18 (d, J = 10.3, 2H); 8(Hk) = 6. 80 (s, 1H); 8(Hm+n) = 7.19-7.32 (m, 2H+2H); 8(Hp) = 2.31 (s, 3H); 8(Ht+ ) = 0.80-0.96 (m, 3H+3H); 8(Hu) = 1.17 (m, 1H); 8(Hu,) = 1.49 (m, 1H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.58; 8(Ch) = 66.36; 6(Cc) = 22. 67; 8(Cd) = 22.34; 8(Ce) = 28.47; 8(Cf) = 67.34; 8(Cg) = 158.77; 8(Ch) = 114.39; 6(Ci) = 128.58; 8(Ci) = 132.88; 8(Ck) = 76.47; 8(Ci) = 137.33; 8(Cm) = 126.69; 8(Cn) = 129.13; 8(Co) = 138.08; 8(Cp) = 20.43; 8(Cg) = 170.65; 8(Cr) = 68.96; 8(Cs) = 38.22; 8(Cf) = 15.27; 8(Cu) = 24. 88; 8(Cv) = 10.93. É HRMS de (C28H43N203) : [Cl m/zthéorique = 455.3274; m/zexpérimental = en attente. É [Leu-CTMPTTMA][PF6] É Mode opératoire: cf mode opératoire 7 en engageant Fmoc-Leu. É huile visqueuse marron É RMN'H (300MHz, acétone d6) : 8(Ha) = 3. 36 (s, 9H); 8(Hb+r) = 3.53-3.67 (m, 2H+1H); 8(Hc+d+s+s'+t) = 1.50-1.97 (m, 2H+2H+ 1 H+1 H+1 H); 8(He) = 2.05 (m, 2H); 8(Hf) = 4.03 (t, J = 6.2, 2H); 8(Hh) = 6.91 (m, 2H); 8(Hi+m+n) = 7.09-7.34 (m, 2H+2H+2H); 8(Hk) = 6.78 (s, 1H); 8(Hp) = 2.31 (s, 3H); 8(Hu) = 0.84 (d, J = 6.5, 3H); 8(Hu,) = 0. 91 (d, J = 6.5, 1H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : 8(Ca) = 52.59; 8(Ch) = 66.36; 8(Cc) = 22. 34; 8(Cd) = 22.66; 8(Ce) = 28.47; 8(Cf) = 67.32; 8(Cg) = 158.75; 8(Ch) = 114.43; 8(Ci) = 128.37; 8(Cj) = 132.88; 8(Ck) = 76.57; 8(Ci) = 137.28; 8(Cm) = 126.70; 8(Cn) = 129.13; 8(Co) = 138.16; 6(Cp) = 20.42; 8(Cg) = 171.27; 8(Cr) = 61.98; 8(Cs) = 42.21; 8(Cf) = 24.59; 6(Cu) = 21. 69. É HRMS de (C28H43N203) : [Cl m/zthéorique = 45503274; m/zexpérimental = en attente. O a 0+ b d f PF6, Me3N O n P É [Phe-CTMPTTMA][PF6] É Mode opératoire: cf mode opératoire 7 en engageant Fmoc-Phe. É huile visqueuse marron É RMN1H (300MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3. 33 (s, 9H); S(Hb+r) = 3.50-3.61 (m, 2H+1 H); 8(I-1p) = 1.93 (m, 2H); S(Hd) = 1. 60 (m, 2H); S(He) = 2.05 (m, 2H); S(Hf) = 4.03 (t, J = 6.1, 2H); S(Hh) = 6.88 (m, 2H); S(Hi+m+n+u+v+w) = 7.09-7.33 (m, 2H+2H+2H+2H+2H+1 H); S(Hk) = 6.77 (s, 1H); S(Hp) = 2.31 (s, 3H); S(Hs+s,) = 2.87-3.06 (m, 1 H+ 1 H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : S(Ca) = 52.61; S(Cb) = 66.38; S(Cc) = 22. 69; S(Cd) = 22.35; S(Ce) = 28.49; S(Cf) = 67.35; S(Cg) = 158.75; S(Ch) = 114.44; S(Ci) = 129.13; S(q) = 132.75; S(Ck) = 76.79; S(C1) = 137. 34; S(Cm) _ 126.72; S(Cn) = 129.62; S(C0) = 138.27; S(Cp) = 20.44; 8(Cg) = 170.67; S(Cr) = 65.45; S(Cs) = 39.29; S(Cf) = 138.03; S(Cu) = 128.47; S(C ) = 128.28; S(Cw) = 126.42. É HRMS de (C31H41N203) : [Ci m/Zthéorique = 489.312; m/zexpérimental = en attente. É [Val-CTMPTTMA][PF6] É Mode opératoire: cf mode opératoire 7 en engageant Fmoc-Val. É huile visqueuse marron É RMN1H (300MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3. 34 (s, 9H); S(Hb+r) = 3.50-3.61 (m, 2H+1 H); S(Hc) = 1.87 (m, 2H); S(Hd) = 1.60 (m, 2H); S(He) = 2.05 (m, 2H); S(Hf) = 4.03 (t, J = 6.1, 2H); S(Hh) = 6. 90 (d, J = 8.7, 2H); S(Hi+m+n) = 7.12-7.36 (m, 2H+2H+2H); S(Hk) = 6. 79 (s, 1H); S(Hp+s) = 2.23-2.39 (m, 3H+1 H); S(Hf+f,) = 0.80-1.00 (m, 3H+ 3H) . o q u NH2 O a e d f PF6, Me3N e O É RMN13C (75MHz, acétone d6) : S(Ca) = 52. 59; 8(Ch) = 66.37; S(Cp) = 22.66; S(Cd) = 22.34; S(Ce) = 28.46; S(Cf) = 67.33; S(Cg) = 158.76; S(Ch) = 114.40; S(Ci) = 128.33; S(Ci) = 132.91; S(Ck) = 76.45; S(C1) = 137.34; S(Cm) _ 126.66; S(Cn) = 129.11; S(Co) = 138.10; S(Cp) = 20.41; 6(Cq) = 170.65; S(Cr) = 69.79; S(CS) = 31.70; S(Ct) = 18. 01; S(Ct,) = 18.94. É3 HRMS de (C27H41 N203) : [C+] m/Zthéorique = 441.3117; m/zexpérimental = en attente. 2,2,.Syrnthèse de. dipeptides supp9rtés O a O b O NTf2, Me3N É [Fmoc-LeuAla-HMPhBTMA][NTf2] É Mode opératoire: 63 mg (0.11 mmol) de [Ala-HMPhBTMA] [NTf2] sont dissous dans l'acétonitrile puis 33 mg (1.5 eq., 0.16 mmol) de DCC, 22 mg (1.5 eq., 0.16 mmol) de HOBT, 22 L (1.5 eq., 0. 16 mmol) de TEA et 57 mg (1.5 eq., 0.16 mmol) de fmoc-leucine sont ajoutés. Le milieu est agité 2 heures à température ambiante puis le mélange est filtré. L'acétonitrile est évaporé et le résidu obtenu est lavé à l'éther puis dissous dans du dichlorométhane. Cette phase est lavée par trois fois un dixième en volume de solution aqueuse de HCI 1 N avant d'être séchée sur sulfate de sodium et filtrée. Le DCM est évaporé. Le rendement de moyen de cette réaction est de 90 %. É huile visqueuse jaune É RMN'H (300MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3. 40 (s, 9H); S(Hb) = 3.69 (m, 2H); S(Ho) = 1.91 (m, 2H); S(Hd) = 2.16 (m, 2H); S(He) = 4.09 (t, J = 5.9, 2H); S(Hg) = 6.92 (d, J = 8.5, 2H); S(Hh+Z) = 7. 28-7.37 (m, 2H+2H); S(Hi) = 5.08 (s, 2H); S(Hi+v+w) = 4.17-4.39 (m, 1 H+ 2H+1 H); S(Hm) = 1.36 (d, J = 7.3, 3H); S(Hn) = 6.62 (m, 1H); S(Hp) = 4. 47 (m, 1H); S(Hq+q.) = 1.60 (m, 1 H+1 H); S(Hr) = 1.76 (m, 1H); S(Hs) = 0. 91 (d, J = 6.9, 3H) ; S(Hs.) = 0.93 (d, J = 7.0, 3H); S(Ht) = 7.61 (m, 1H) ; S(IHy) = 7.72 (m, 2H); S(Hl) = 7.43 (m, 2H); S(H2) = 7.88 (d, J = 7. 5, 2H). É RMN13C (100MHz, acétone d6) : S(Ca) = 54.13; S(Cb) = 67.62; S(Cc) _ 25. 93; S(Cd) = 27.14; S(Ce) = 68.06; S(Cf) = 157.39; S(Cg) = 115.64; S(Ch) _ 131.20; S(Ci) = 129.68; S(Ci) = 67.35; S(Ck) = 173.56; S(C1) = 49. 32; S(Cm) _ 18.14; S(Co) = 173.56; S(Cp) = 54.48; S(Cq) = 42.70; S(Cr) = 23. 93; S(CS) _ 21.15; CO = 22.35; S(Cu) = 160.17; S(C ) = 67.50; 6(C,,) = 48.43; S(Cx) _ 145.52; S(Cy) = 126.57; S(CZ) = 128.34; S(C1) = 128.96; S(C2) = 121.23; S(C3) = 142.49; 8(CNTf2) = 121.43 (q, Jc_F = 321.2). É HRMS de (C38HSON306) : [C+] m/Zthéorique = 644.3700; m/zexpérimentai = 644.3699. Mode opératoire global 8 pour le couplage peptidique voie directe avec les supports [CTMPTTMA][PF6] : 1.0 eq. de peptide supporté ayant l'amine déprotégée est dissous dans l'acétonitrile puis 1.5 eq. de TEA, de HOBt, de carbodiimide (DCC ou DIC) et de fmoc-aminoacide sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité 2 heures à température ambiante. - Si le carbodiimide utilisé est le DCC, le milieu réactionnel est filtré (DCU peu soluble dans l'acétonitrile) puis l'acétonitrile est évaporé. - Si le DIC ou EDC.HCI sont utilisés, l'acétonitrile est évaporé directement. Le résidu obtenu est alors lavé à l'éther puis il est dissous dans du dichlorométhane. Cette phase est lavée trois fois à l'eau puis trois fois par une solution aqueuse de HPF6 (1 Le réactif de couplage HBTU peut être utilisé à la place de 25 carbodiimide/HC)Bt en conservant les mêmes conditions de réaction et de traitement. d f PF6 O Met - O y o,, IOII Oi N O Hz a O É [Fmoc-Leu-Ala-CTMPTTMA][PF6] 2882057 58 É Mode opératoire: cf mode opératoire global 8 en engageant [Ala-CTMPTTMA][PF6] et Fmoc-Leu. É huile visqueuse jaune É RMN'H (300MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3. 32 (s, 9H); S(Hb) = 3.56 (m, 2H); S(Hc+d+,,) = 1.50-1.67 (m, 2H+2H+2H); S(He) = 1.85 (m, 2H); S(Hf) = 4.00 (m, 2H); S(Hh) = 6.89 (dd, J1 = 8.5, J2 = 3.4, 2H); S(Hi+m+n+af+ag) = 7.11-7.50 (m, 2H+2H+2H+2H+2H); 8(Hk) = 6. 78 (s, 1H); S(Hp) = 2.30 (d, J = 4.5, 3H); S(Hr+ab+ac) = 4.18-4.43 (m, 1 H+2H+1 H); S(Hs) = 1.40 (dd, J1 = 7.2, J2 = 3.2, 3H); S(Ht+ae) = 7.63-7. 74 (m, 1 H+2H); S(H") = 4.59 (m, 1H); S(Hx) = 1.74 (m, 1H); S(Hy) = 0.90 (d, J = 5.8, 3H); S(Hy.) = 0.92 (d, J = 6.1, 3H); 8(Hz) = 6.65 (m, 1H); S(Hah) = 7.86 (d, J = 8.0, 2H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : S(Ca) = 52.69 (t, Jc_N = 4.0); S(Cb) = 66. 43; S(Cc) = 22.72; S(Cd) = 22.36; S(Ce) = 28.45; S(Cf) = 67.21; S(Cg) = 158.74; S(Ch) = 114.31; S(Ci) = 128.34; S(C1) = 132.75; S(Ck) = 77.09; S(C1) = 137.24; S(Cm) = 126.69; S(Cn) = 129.03; S(C0) = 137.93; S(Cp) = 21.03; 8(Cd) = 171.31; S(Cr) = 48.23; êi(CS) = 16.83; S(Cu) = 171. 41; 6(C ) = 53.30; S(C,) = 41.46; S(Cx) = 24.47; S(Cy) = 20.24; S(Caa) = 156. 20; S(Cab) = 66.27; S(Cac) = 47.16; S(Cad) = 144.23; S(Cae) = 125.29; S(Caf) = 127.09; S(Cag) = 127.70; S(Cah) = 119.97; S(Cak) = 141.21. É HRMS de (C46H58N306) : [Cl m/zthéorique = 748.4325; m/zexpérimentai = 748.4321. 2:3 _S,ynthèse_de.tripeptids.protégés.supports O ap Y 0 VV tH rN O O H N a b N af O O Hz O É [Fmoc-Val-Leu-Ala-CTMPTTMA][PF6] É Mode opératoire: cf modes opératoires 6 en engageant [Fmoc-Leu-Ala-CTMPTTMA] [NTf2] puis 8 en engageant [Leu-Ala-CTMPTTMA][NTf2] formé et la fmoc-valine. É huile visqueuse jaune É RMN1H (300MHz, acétone d6) : S(Ha) = 3. 34 (s, 9H); S(Hb) = 3.57 (m, 2H); S(Hc+d+,,) = 1.52-1.67 (m, 2H+2H+2H); S(He) = 1.86 (m, 2H); S(Hf) = 4.00 (m, 2H); S(Hh) = 6.88 (dd, J1 = 8.8, J2 = 2.8, 2H); S(Hi+m+n+ak+ai) = 7.11-7.49 (m, 2H+2H+2H+2H+2H); S(Hk) = 6. 77 (s, 1H); S(Hp) = 2.30 (d, J = 2.9, 3H); S(Hr+ac+ag+ah) = 4.09-4.44 (m, 1 H+1 H+2H+1 H); S(HS) = 1.37 (dd, J1 = 7.1, J2 = 2.9, 3H); S(Ht+agi) = 7. 66-7. 78 (m, 1 H+2H); S(H +ab) = 4.50-4.61 (m, 1 H+1 H); S(Hx) = 1.70 (m., 1H); S(Hy) = 0.96 (d, J = 6.6, 3H); S(Hy.) = 0.99 (d, J = 5.5, 3H); S(Hz) = 7. 57 (m, 1H); S(Had) = 0.85 (d, J = 6.3, 3H); S(Had.) = 0.86 (d, J = 6. 4, 3H); S(Hae) = 6.72 (m, 1H); S(Ham) = 7.87 (d, J = 7.5, 2H). É RMN13C (75MHz, acétone d6) : S(Ca) = 52.70 (t, Jc_N = 3.7); S(Cb) = 66. 48; S(Cc) = 22.64; S(Cd) = 22.37; S(Ce) = 28.50; S(Cf) = 67.19; S(Cg) = 158.72; S(Ch) = 114.28; S(Ci) = 128.34; S(Ci) = 132.76; S(Ck) = 77.05; S(C1) = 137.23; S(Cm) = 126.69; 8(Ch) = 129.01; S(C0) = 137.93; S(Cp) = 21.17; 8(Cg) = 171.85; S(Cr) = 48.19; S(CS) = 16.85; S(Cu) = 171. 37; S(C ) = 51.23; S(C,,) = 41.11; S(Cx) = 24.39; S(Cy) = 20.23; S(Caa) = 171. 37; S(Cab) = 60.62; S(Cac) = 30.91; S(Cad) = 17.63; S(Cae) = 18.91; S(Cat) = 156.61; S(Cag) = 66.48; S(Cah) = 47.13; S(Cai) = 144.19; S(Caj) = 126. 32; S(Cak) = 126.69; S(Cai) = 128.32; S(Cam) = 119.95; S(Can) = 141. 19. É HRMS de (C51H67N407) : [Cl m/zthéorique = 847.5010; m/zexpérimental = 20 847.5024. 2.1.. Clivage peptides_supportés Mode opératoire global 9 pour le clivage des peptides supportés: 1.0 eq. de peptide supporté ayant l'amine déprotégée [AAn-...AA1-CTMPTTMA][PF6] est dissous dans le méthanol puis 1 % de solution aqueuse de HPF6 à 60 % est ajouté. Le mélange est porté une heure à reflux puis le méthanol est évaporé. Du dichlorométhane et de l'eau sont ajoutés au résidu. L'évaporation du solvant de chaque phase permet d'isoler d'une part le peptide (dissous en phase aqueuse) et [CTMPTTMA][PF6] (dissous en phase organique). La conversion est totale. Pour l'instant seul [Ala-CTMPTTMA][PF6] a été clivé. 2.1. Synthèse convergente É [HMPhBTMAÉ-Aiso-Leu-Val-Val-Leu-Ala-CTMPTTMA] ([PF6])2 É Mode opératoire: 1.0 eq. de [Val-Leu-AIa-CTMPTTMA] [PF6] et 1. 0 eq. de [HMPhBTMA-Aiso-Leu-Val][PF6] sont dissous dans l'acétonitrile puis 1.5 eq. de TEA, de HOBt et de carbodiimide sont ajoutés. Le milieu réactionnel est agité une nuit à température ambiante. L'acétonitrile est évaporé. Le résidu obtenu est alors lavé à l'éther ce qui provoque sa précipitation. Le solide obtenu est lavé trois fois à l'eau puis trois fois par une solution aqueuse de HPF6 (1 É solide crème É HRMS de (C68H108N8011) : [C++] mthéorique = 1212. 8138; m/Zexpérimental = O PF6, e O O O (CH2)6 ô Mea PF6 H Me3N-CH2)4 O/ N^ /NN N H O H O H 606.4063. REVENDICATIONS 1 Nouvelle utilisation de supports constitués d'un sel à tâche dédiée Al+, X1 qui est - utilisé en solution dans un solvant moléculaire (réactions en solvants 5 organiques classiques, principe SOSSO) solubilisé et immobilisé dans une matrice A2+, X2 qui peut être soit un liquide ionique (principe SOSLI, dans ce cas les réactions pourront être effectuées avec ou sans ajout de solvants organiques classiques) soit un sel solide à température ambiante (dans ce cas, il sera nécessaire de travailler à la température de fusion du mélange) dans lesquels les cations A1+ et A2+ sont choisis parmi les cations imidazolium, pyridinium, subst itués ou non, ammonium, phosphonium, sulfonium ou tout autre cation onium éventuellement fonctionnalisé et les anions X,' et X2' sont choisis parmi CI Br, r, F-, BF4, CF3SO3, N(SO2CF3)2, PF6, CH3CO2, CF3CO2, RCO2, RFCO2, RSO3, RFSO3,RSO4, phase inverséeO4,PO42 AIC14, SnC13, ZnCl3 et les anions fonctionnels, R représentant un groupe alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, RF représentant un groupe perfluoroalkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone, caractérisé en ce qu'ils sont utilisés pour la synthèse peptidique. 2 Nouvelle utilisation de supports selon la revendication 1 caractérisés en ce que les sels A+, X" sont fonctionnalisés sur le cation, l'anion ou sur les deux à la fois e e O e X A F X F X F A F I 3 Nouvelle utilisation de supports caractérisés en ce qu'ils sont utilisés pour la synthèse peptidique et en ce que la fonction F est choisie parmi les grandes fonctions de la chimie organique telles que CI, Br, I, OH, CO2H, COX (X=Cl, Br, OR, N3, NR1R2, SR), NR1R2, NHR, NH2, N=C=X(X=O,S,NR, Se), C=C,C=C=C, alcynyle, CHO, COR, CN, SO2H, SO3H, PR1R2, (X)PR1R2, (X) PR1(OR2), (X)P(OR1)(OR2) avec X=O,S,Se, P(NR1R2)2 RI et R2 représentant un groupement alkyle comprenant de 1 à 20 atomes de carbone ou un groupement aryle. (Q, X2) C),,.o AA Al NH-CO-AA-NHZ Xl (2,X2) 6 OAA Al NH2 o Xe 4 Nouvelle utilisation de supports selon la revendication 1 caractérisés en ce que le sel Al+, XI" est: - soit solubilisé dans un solvant organique classique tel que le dichlorométhane, le tétrahydrofuranne, le dioxane, l'acétonitrile, le propionitrile, le diméthylformamide, le diméthylacétamide, la N-méthylpyrrolidone, l'acétone, le toluène, le chlorobenzène, le dichlorobenzène, le nitrométhane, le nitroéthane, ou un mélange de ces solvants. - soit solubilisé dans un liquide ionique, de préférence le [tmba] [NTf2], le [emim][NTf2], le [bmim][NTf2] ou tout autre combinaison de cation onium et o d'anion liquide à une température inférieure ou égal à 100 C, de préférence 50 C - soit solubilisé dans un sel d'onium (liquide ou solide), l'ensemble étant alors solubilisé dans un solvant organique. Procédé de synthèse des aminoacides soit par voie directe C --* N (l'aminoacide est greffé au support par sa fonction acide et sa fonction amine est engagée dans la réaction de couplage peptidique) soit par voie inverse C > N sur les supports selon la revendication 1 (Schéma 5). Couplage peptidique 6 Nouveaux supports selon la revendication 1 caractérisés en ce qu'ils répondent à l'une des deux formules suivantes: 0 0 X, Me3NO CI X = PF6 ou NTf2 OH [4-(4-Hydroxymethyl-phenoxy)-butyl]-trimethyl-ammonium [HMPhBTMA] [X] e O X, Me3N {5-[4-(Chloro-p-tolyl-methyl)-phenoxy]-pentyl}-trimethyl-ammonium [CTMPPTMA][X]