FR 2875678 A1 20060331 FR 0410118 A 20040924 Modèle animal d'ostéosarcome mimant la pathologie humaine, son procédé de production et son utilisation pour déterminer l'effet d'une substance La présente invention concerne un procédé de production d'un modèle animal d'ostéosarcome mimant la pathologie humaine par administration en site intra- io osseux de cellules tumorales issues d'une tumeur d'ostéosarcome d'un donneur, un modèle animal de l'ostéosarcome humain obtenu notamment par ce procédé et l'utilisation dudit modèle pour déterminer l'effet d'une substance sur la tumeur et/ou les métastases développées par ledit modèle et/ou pour mieux comprendre les mécanismes cellulaires et/ou moléculaires impliqués au sein de la tumeur et/ou des métastases. L'ostéosarcome est la plus fréquente des tumeurs malignes primitives de l'os, touchant principalement l'enfant et l'adolescent (moyenne d'âge de survenue 18 ans). Il est principalement primitif mais il existe aussi des formes secondaires radio-induites ou faisant suite à une pathologie locale. Le genou et l'épaule sont le plus souvent touchés, au niveau de leur zone métaphysaire. La dissémination métastatique se fait par voie sanguine avec atteinte préférentielle des poumons dans 75-80% des cas. Actuellement, les protocoles thérapeutiques basés sur une polychimiothérapie associée à une résection chirurgicale en zone saine avec reconstruction et conservation du membre permettent un taux de survie variant, selon les séries, de 50 à 70 %, à 5 ans. Malgré l'absence de registre national, les tumeurs osseuses primitives touchent 300 nouveaux patients par an en France. L'ostéosarcome est caractérisé par une formation directe de tissu osseux par les cellules tumorales et parallèlement par l'activation des ostéoclastes conduisant à une ostéolyse. Les deux phénomènes sont indissociables. Il existe toutefois trois formes d'ostéosarcome: ostéolytique, ostéocondensant ou mixte. De ce fait deux types de lignées d'ostéosarcome peuvent exister, à savoir, d'une part, des cellules ostéosarcomateuses à caractère plutôt ostéocondensant, d'autre part, des cellules ostéosarcomateuses à caractère plutôt ostéolytique. Le brevet US 2003 005470 décrit, à titre d'arrière plan technologique, un modèle animal de métastases osseuses induit par administration par voie parentérale de cellules tumorales de cancer du poumon ou du sein. Il est également décrit, (Mii Y et al, Jpn) Cancer Res (1988) 79:589-92) la réalisation d'un modèle d'ostéosarcome par implantation sous cutanée de fragments tumoraux. Cette technique ne permet pas l'obtention d'un modèle reproductible car il est très difficile de quantifier le nombre de cellules tumorales présentes dans un fragment de tumeur. Cette non reproductibilité empêche toute utilisation du modèle dans le cadre d'études pré-cliniques. Par ailleurs, il doit être noté que l'injection de cellules sarcomateuses induisant un ostéosarcome de type ostéolytique sans développement métastatique au niveau pulmonaire ne présente aucun intérêt pour l'étude de l'ostéosarcome humain de type ostéocondensant. En effet, le décès des patients humains atteints d'un ostéosarcome est étroitement lié à la dissémination métastatique au niveau pulmonaire. En conséquence, un modèle animal d'ostéosarcome n'induisant pas de développement métastatique pulmonaire est dénué d'intérêt pour nous. Une autre publication de (Oison HM and Capen CC, Am J Pathol (1977) 86:437-458) décrit l'injection de virus (Moloney sarcoma) pour le développement d'un modèle animal d'étude de l'ostéosarcome. Les modèles issus de la manipulation de virus sont à proscrire car les virus sont d'une utilisation très délicate. Un des buts de la présente invention est de proposer un modèle animal d'ostéosarcome apte à induire à la fois un développement métastatique pulmonaire et une formation osseuse au niveau de la tumeur primitive pour obtenir un modèle de développement de l'ostéosarcome comparable à celui observé chez l'être humain tant au niveau temporel que physiologique, ledit modèle animal constituant un mime fidèle de la pathologie humaine. Un autre but de la présente invention est de proposer un procédé de production 5 d'un modèle animal dont la mise en oeuvre permet l'obtention de modèles parfaitement reproductibles. A cet effet, l'invention a pour objet un procédé de production d'un modèle animal d'ostéosarcome mimant la pathologie humaine par administration, à un io animal hôte, de cellules tumorales issues d'une tumeur d'ostéosarcome d'un donneur, caractérisé en ce qu'on choisit des cellules tumorales d'ostéosarcome ostéocondensant, c'est-à-dire à fort pouvoir ostéogène, et en ce qu'on introduit lesdites cellules tumorales dans l'animal hôte à une quantité bien définie et maîtrisée par voie intra-osseuse en vue de l'obtention d'un modèle is reproductible présentant des métastases pulmonaires et une tumeur osseuse primitive, ledit modèle étant un modèle superposable au niveau physiologique et temporel à l'ostéosarcome humain. Selon un mode de mise en oeuvre préféré du procédé de l'invention, on introduit lesdites cellules à une concentration comprise dans la plage [5x106 20x106 cell/200 microL], de préférence voisine de 10.106 cellules/200microL, pour observer un développement intra-osseux puis paraosseux de la tumeur avec dissémination métastasique au niveau pulmonaire dans des proportions comparables à la pathologie humaine, avec un développement temporel superposable au développement humain. De préférence, on choisit des cellules tumorales d'ostéosarcome ostéocondensant avec un phénotype tel que suit: Phosphatase alcaline (PA) ++ Ostéopontine +/- Ostéoprotégérine (OPG) + Ostéocalcine (OC) Sialoprotéine Osseuse (BSP) Recepteur Activateur de NF-kB Ligand (RANKL) Bien que le procédé puisse s'appliquer à tous les mammifères, généralement, l'animal hôte est un rongeur, de préférence un rat. Lesdites cellules tumorales peuvent quanti elles être obtenues à partir d'une tumeur d'ostéosarcome d'un humain ou d'un animal. De préférence, ces cellules tumorales sont issues d'une tumeur d'ostéosarcome d'un rat donneur. Ces cellules sont introduites dans les os longs de l'animal. Préalablement à leur administration dans la cavité intra-médullaire ou fût diaphysaire du fémur de l'hôte, les cellules sont mises en suspension dans un milieu liquide visqueux présentant un indice de viscosité au moins égal à 15 mpas. (milli pascals seconde). i0 Ces cellules, en suspension dans une solution vectrice, par exemple d'alginate, sont introduites à l'aide d'une seringue dans le fût diaphysaire après que l'animal hôte a subi une arthrotomie suivie d'une trépanation osseuse. Après injection, le point d'injection est refermé par exemple par un point de tissu-colle afin d'éviter une fuite des cellules à l'extérieur de la diaphyse. Après injection, on procède régulièrement à la mesure des deux axes de la tumeur et on euthanasie l'animal lorsqu'au moins l'un des axes de la tumeur atteint une dimension au moins égale à 40 mm. Après euthanasie, on prélève la tumeur, l'os et éventuellement les organes, tels que le foie, le poumon et la rate en vue d'études histologiques et/ou radiologiques. L'invention a encore pour objet un modèle animal d'ostéosarcome mimant la pathologie humaine, caractérisé en ce que ledit modèle animal présente des métastases pulmonaires et une tumeur osseuse primitive induites par administration de cellules tumorales d'ostéosarcome de type ostéocondensant. Enfin, l'invention a pour objet l'utilisation du modèle animal précité pour déterminer l'effet de substance(s) sur la tumeur et/ou les métastases développées par ledit modèle. Cette utilisation du modèle peut comprendre les étapes suivantes: a) administrer de la substance test à l'animal hôte, b) comparer la taille et/ou l'évolution des métastases et/ou de la tumeur et/ou des symptômes résultant des métastases et/ou de la tumeur avec un animal témoin. Grâce à la sélection et au comptage possible des cellules ostéosarcomateuses à caractère ostéocondensant administrées par voie osseuse, on obtient un modèle animal parfaitement reproductible au comportement similaire à celui observé chez l'être humain. L'invention a encore pour objet l'utilisation du modèle animal précité pour l'étude des mécanismes cellulaires et/ou moléculaires impliqués au sein de la 10 tumeur et/ou des métastases. L'invention sera bien comprise à la lecture de la description suivante d'exemples de réalisation, en référence aux dessins annexés dans lesquels: la figure 1 représente l'étude par RT-PCR (réaction de polymérisation en chaînes par transcription inverse) du phénotype des cellules OSR (issues d'une tumeur d'ostéosarcome chez le rat) en culture dans un milieu RPMI additionné de 10% de sérum de veau foetal (SVF) ; la figure 2 illustre l'étude par RT-PCR du phénotype d'une tumeur développée en site extra-osseux (8 semaines), après injection de 10 x 106 cellules OSR en site intra-fémoral; la figure 3 représente sous forme de tableau la fréquence d'apparition 25 des tumeurs et métastases pulmonaires, obtenue dans le cadre d'essais pré cliniques sur 6 séries indépendantes; la figure 4 illustre, à l'aide d'un cliché macroscopique d'un poumon métastatique de rat au moment de l'euthanasie, le développement de 30 métastases pulmonaires; les figures 5a à 5d illustrent les caractéristiques histologiques de la tumeur démontrant le pouvoir ostéogène des cellules injectées; les figures 6a et 6b montrent les coupes médiane et sagittale obtenues par analyse par microscanner d'un fémur de rat témoin (témoin) et d'un fémur au sein duquel 10.106 cellules OSR ont été injectées 8 semaines auparavant (tumeur); la figure 7 illustre sous forme de tableau les caractéristiques de la microstructure osseuse et io la figure 8 illustre, sous forme de courbe, l'évolution du volume tumoral chez 6 rats Sprague-Dawley issus d'une même série. Comme mentionné ci-dessus, l'invention a pour objet la mise au point d'un modèle animal in vivo d'ostéosarcome conforme sur le plan physiologique, histologique et temporel au développement d'un ostéosarcome humain, permettant la validation d'outils pour la compréhension des mécanismes physiopathologiques des tumeurs osseuses primitives et la mise en place de protocoles thérapeutiques. Ce modèle consiste en l'injection de cellules tumorales OSR (issues d'une tumeur d'ostéosarcome chez le rat) à fort pouvoir ostéogène dans la cavité intra-médullaire du fémur de jeunes rats Sprague-Dawley. Le développement des tumeurs est tout d'abord intraosseux, puis para-osseux par envahissement des tissus musculaires environnants. Ce modèle entraîne également une dissémination métastatique au niveau pulmonaire, dans des proportions comparables à la pathologie humaine. Les données cliniques, radiologiques et histologiques telles que fournies ci-dessous montrent que ce modèle est superposable aux formes d'ostéosarcomes ostéocondensantes chez l'homme. Pour permettre l'obtention de modèles animaux in vivo tels que décrits cidessus, le procédé de l'invention est appliqué à des rats mâles SpragueDawley âgés de 4 semaines. Pour tout acte chirurgical, les animaux sont endormis et maintenus sous anesthésie générale le temps de l'intervention: système d'anesthésie gazeuse par l'isoflurane à 3,5 % dans de l'air (débit 2 litres/heure), associée à un antalgique (Imalgene, 100 mg/kg). Les animaux subissent une arthrotomie, mettant à nu les condyles du fémur distal. Les cellules d'ostéosarcome OSR sont maintenues en culture dans du milieu RPMI additionné de 10% en volume de sérum de veau foetal (SVF). A confluence, elles sont décollées par l'action de la trypsine 0,05%, comptées et reprises dans une solution d'alginate à 1,2% en poids dans de l'HEPES. L'épiphyse inférieure du fémur est abordée par l'articulation du genou. La trépanation osseuse est réalisée avec un trocard de 14, qui sert également à préparer la cavité médullaire. Les cellules OSR (5-10 x 106 cellules/animal) sont injectées lo dans un volume maximal de 200 pI. Un point de Tissucol (marque déposée) (colle de fibrine) est appliqué à la fin de l'injection afin d'éviter une fuite des cellules à l'extérieur de la diaphyse, puis un ou deux points de suture sont réalisés pour refermer le plan cutané. Le point de Tissucol peut être remplacé par du tissu osseux ou un phosphate de calcium. Après induction du modèle, les animaux sont pesés 2 fois par semaine et le volume de la tumeur est calculé deux fois par semaine par la mesure à l'aide d'un pied à coulisse du plus grand (D) et du plus petit (d) axes, selon la formule: V = (D/2) x d2. Une radiographie de l'animal entier est prise chaque semaine afin de suivre l'évolution du remodelage osseux. Pour la prise des radiographies, les animaux sont endormis au Nesdonal (50 mg/kg). Des prélèvements sanguins sont effectués une fois par semaine au niveau du sinus rétro-orbital. Lorsque la mesure d'un des deux axes atteint 40 mm, les animaux sont euthanasiés, ainsi que lorsque ceux-ci présentent des détresses respiratoires ou des signes de souffrance. L'euthanasie est réalisée par endormissement des animaux à l'isoflurane, puis dislocation occipito- cervicale. A l'euthanasie, la tumeur primitive (le fémur à l'intérieur duquel ont été injectées les cellules tumorales), ainsi que plusieurs organes sont prélevés pour des études histologiques: foie, poumons, rate. Des colorations hématoxyline- éosine-safran et von Kossa sont réalisées sur tous les échantillons. Après fixation dans le formol et dissection des tissus mous, la morphologie osseuse du fémur est analysée par micro-scanner (SkyScan 1072, Belgique). s L'étude par RT-PCR du phénotype des cellules OSR en culture fournit des résultats conformes à ceux de la figure 1. Les gènes desdites cellules s'expriment comme suit: Phosphatase alcaline (PA) ++ Ostéopontine +/- Ostéoprotégérine (OPG) + Ostéocalcine (OC) Sialoprotéine Osseuse (BSP) Recepteur Activateur de NF-kB Ligand (RANKL) i0 Conformément au protocole décrit ci-dessus, 9 séries indépendantes sont réalisées, permettant d'affiner les conditions optimales d'expérimentation: (i) variation du nombre de cellules OSR injectées, (ii) utilisation d'une solution d'alginate pour l'injection des cellules afin d'obtenir une viscosité appropriée pour éviter la fuite des cellules, (iii) utilisation de tissu osseux, de phosphate de calcium ou de colle de fibrine pour reboucher l'orifice créé dans l'os par la trépanation, (iv) animaux traités ou non par la cyclosporine A. Une fois ces conditions définies (à partir de la cinquième série), on obtient des résultats relatifs au développement tumoral et métastatique conformes à ceux réprésentés dans le tableau de la figure 3: 78% des rats développent une (des) tumeur(s) en site osseux et des métastases pulmonaires sont observées à l'euthanasie chez 96% des rats, même dans des cas où aucune tumeur n'est observée en site osseux. Ces résultats confirment l'utilisation du modèle pour l'étude du développement des métastases pulmonaires. Ce modèle peut en outre être utilisé pour l'étude des tumeurs osseuses. Les tumeurs sont décelables en moyenne 3 semaines après l'injection des cellules. Leur développement est variable et peut atteindre plus de 15000 mm3, 60 jours après l'injection des cellules. Sur le plan phénotypique, la tumeur apparaît très calcifiée à l'observation macroscopique, lors de l'autopsie. Une partie du tissu tumoral est prélevée puis les ARN totaux en sont extraits par un mélange phénol-chloroforme. Les résultats, représentés à la figure 2, montrent une expression phénotypique des marqueurs ostéogènes suivants: Phosphatase alcaline (PA) ++ Ostéopontine ++ Ostéocalcine (OC) + Sialoprotéine osseuse (BSP) ++ Ostéoprotégérine (OPG) Récepteur Activateur de NF-kB Ligand (RANKL) - io Sur le plan histologique, la tumeur en site osseux se caractérise comme suit. La masse tumorale issue des cellules OSR injectées se développe en site intraosseux au détriment de la moelle osseuse (Figure 5a). La masse tumorale est constituée par de larges cellules mésenchymateuses présentant de nombreuses condensations nucléaires. Le développement tumoral se poursuit en site para-osseux au sein des tissus mous (Figures 5b, 5c, 5d). De larges foyers tumoraux se développent et de larges plages de nécroses sont observées au centre des masses tumorales en prolifération (présence de nombreuses mitoses) (Figure 5b). Les cellules OSR présentent une activité de synthèse importante au vu de la matrice extracellulaire observée entre les cellules tumorales. Les cellules OSR possèdent également un pouvoir ostéogène important mis en évidence par un grand nombre de travées de tissu minéralisé au sein de la masse tumorale (Figures 5 c et d) et qui sont conformes aux clichés radiologiques réalisés. Cette observation révèle une différenciation marquée in vivo des cellules OSR capables d'induire des néoformations osseuses. Par ailleurs, 96% des rats ayant reçu une injection d'OSR développent des métastases pulmonaires comme l'illustre la figure 4. Aucune métastase hépatique et splénique n'est mise en évidence. Le tissu pulmonaire est envahi par de nombreux foyers tumoraux caractérisés, pour les plus volumineux, par une nécrose centrale. De nombreux emboles veineux sont observables. Les foyers tumoraux sont associés à la présence d'infiltrats lymphoïdes majeurs constituant localement des points lymphoïdes. Tout comme la tumeur primitive, i0 les foyers tumoraux métastatiques sont constitués de cellules à haute capacité prolifératrice, synthétisant une matrice extracellulaire abondante. Les radiographies montrent, quant à elles, tous les signes d'une tumeur s osseuse maligne ostéogène: remaniements de la trame associant plages d'ostéolyse et ostéocondensation, effractions corticales, appositions périostées et calcifications hétérogènes des parties molles. Toutes ces modifications sont hétérogènes et mal délimitées. ro En ce qui concerne la micro-architecture osseuse, les paramètres architecturaux (BV/TV: volume relatif de l'objet et BS/BV: surface spécifique de l'objet), comparés au niveau de l'os total et de l'os trabéculaire montrent une importante augmentation du volume osseux trabéculaire dans l'échantillon tumoral, signe révélateur d'une forte induction ostéogène suite à l'injection de is cellules OSR. Parallèlement, la surface spécifique osseuse est diminuée comme l'illustre la figure 7. Cette observation traduit un envahissement de l'espace trabéculaire par du tissu osseux synthétisé par les cellules tumorales. La corticale présente des signes d'envahissement et d'épaississement avec apposition périostée comme l'illustrent les figures 6a et 6b. L'ensemble des données architecturales témoigne d'un remodelage osseux intense, superposable aux formes d'ostéosarcome ostéocondensantes chez l'homme. Les résultats obtenus montrent l'obtention d'un modèle animal de tumeur osseuse primitive, l'ostéosarcome (représentant plus de 50% des tumeurs osseuses primitives chez l'homme), dont l'évolution sur le plan physiologique et temporel est superposable à l'ostéosarcome humain. En effet, ce modèle permet le développement d'une tumeur primitive en site osseux, siège d'un important remodelage osseux. De plus, ce modèle induit une dissémination métastatique au niveau pulmonaire dans des proportions comparables à celles observées chez les patients atteints d'ostéosarcome comme l'illustrent les figures 3 et 4. Or l'ostéosarcome est une maladie toujours mortelle par dissémination métastatique, la première localisation étant pulmonaire comme dans le modèle objet de l'invention. 2875678 Il Ce modèle offre de nombreux avantages: il est reproductible car le nombre de cellules injectées est connu et maîtrisable, à l'inverse des modèles induits par implantation de fragments tumoraux dont l'hétérogénéité cellulaire peut entraîner des variations de tumorigénicité d'une implantation à l'autre. Cette maîtrise est notamment due au fait que les cellules sont introduites dans les os de l'animal sous forme d'une suspension dans un milieu visqueux présentant une indice de viscosité au moins égal à 15 mpas. io La caractérisation histologique des tumeurs montre une parfaite superposition avec l'ostéosarcome humain, tant sur le plan ostéogène, que de la fréquence de la dissémination métastatique au niveau pulmonaire. Dans ce modèle, le développement temporel de la tumeur est superposable à celui observé chez les patients atteints d'ostéosarcome. Il en est de même sur le plan histologique. Le modèle animal obtenu est le seul modèle animal de tumeur osseuse primitive induit par injection de cellules tumorales en site intra-osseux avec dissémination métastatique au niveau pulmonaire, superposable au niveau physiologique et temporel à la pathologie humaine. Par rapport aux modèles induits par implantation sous-cutanée ou en site para-osseux, l'origine de la tumeur est intra-osseuse, phénomène comparable à l'ostéosarcome humain. Ce modèle est reproductible grâce à l'injection d'un nombre connu de cellules reprises dans une solution d'alginate à 1,2 % en poids, afin d'obtenir une plus grande viscosité et ainsi prévenir la fuite des cellules hors du fût diaphysaire. Du fait que ce modèle est superposable à la pathologie humaine au niveau temporel et physiologique, ce modèle présente tous les avantages pour fournir un outil utilisable dans des essais thérapeutiques pré-cliniques. Un tel modèle peut être utilisé dans le domaine de la recherche pour mieux comprendre les mécanismes cellulaires et moléculaires du développement tumoral en site osseux, à des fins thérapeutiques dans le cadre d'études pré- cliniques pour tester de nouvelles approches thérapeutiques des tumeurs osseuses primitives, à des fins de diagnostic notamment dans le cadre de l'étude du transcriptome de ces tumeurs pour déterminer les gènes impliqués dans le développement de la pathologie, à des stades précoces ou tardifs. L'utilisation de tels modèles devrait permettre de valider de nouvelles 5 approches thérapeutiques des tumeurs osseuses primitives: par association d'agents anti-tumoraux avec des agents affectant le remodelage osseux par immuno-thérapie (lymphocytes T, cellules dendritiques) par transfert de gènes (utilisation de vecteurs synthétiques ou viraux) L'utilisation de tels modèles devrait également permettre de valider l'effet thérapeutique de peptido-mimétiques des molécules de la superfamille du TNF (facteur de nécrose tumorale) et de ses récepteurs. Par peptido-mimétique, on entend des peptides capables de mimer l'action et/ou l'activité biologique de cytokines, facteurs de croissance, sans les inconvénients liés à l'utilisation de telles molécules: effets pléïotropes, effets secondaires, de façon à permettre de mieux cibler et maîtriser une activité biologique donnée. REVENDICATIONS 1. Procédé de production d'un modèle animal d'ostéosarcome mimant la pathologie humaine par administration à un animal hôte, destiné à être euthanasié, de cellules tumorales issues d'une tumeur d'ostéosarcome d'un donneur, caractérisé en ce qu'on choisit des cellules tumorales d'ostéosarcome ostéocondensant, c'est-à-dire à fort pouvoir ostéogène, et en ce qu'on introduit lesdites cellules tumorales dans l'animal hôte par voie intra-osseuse en vue de l'obtention d'un modèle reproductible présentant des métastases pulmonaires et une tumeur osseuse primitive, ledit modèle étant un modèle superposable au niveau physiologique et temporel à l'ostéosarcome humain. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on introduit lesdites cellules à une concentration comprise dans la plage [5x106 20x106] cell./200microL, de préférence voisine de 10.106 cellules/200 microL, pour observer un développement intra-osseux puis para-osseux de la tumeur avec dissémination métastasique au niveau pulmonaire dans des proportions comparables à la pathologie humaine, et avec un développement temporel superposable. que suit: ++ Phosphatase alcaline (PA) Ostéopontine +/- Ostéoprotégérine (OPG) + Ostéocalcine (OC) - Sialoprotéine osseuse (BSP) Recepteur Activateur de NF-kB Ligand (RANKL) 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'animal hôte est un rongeur, de préférence un rat, lesdites cellules tumorales, issues d'une tumeur d'ostéosarcome d'un rat 3. Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'on choisit des cellules tumorales d'ostéosarcome ostéocondensant avec un phénotype tel 30 donneur, étant introduites dans les os longs de l'animal. 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que, préalablement à leur administration dans la cavité intra- s médullaire ou fût diaphysaire du fémur de l'hôte, les cellules sont mises en suspension dans un milieu liquide visqueux présentant un indice de viscosité au moins égal à 15 mpas. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que les cellules, en suspension dans une solution vectrice, de préférence une solution d'alginate, sont introduites à l'aide d'une seringue dans le fût diaphysaire après que l'animal hôte a subi une arthrotomie suivie d'une trépanation osseuse. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le point d'injection est refermé après injection, de préférence par tissu-colle, afin d'éviter une fuite des cellules à l'extérieur de la diaphyse. 8. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'on procède régulièrement à la mesure des deux axes de la tumeur et en ce qu'on euthanasie l'animal lorsqu'au moins l'un des axes de la tumeur atteint une dimension au moins égale à 40 mm. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que, après euthanasie, on prélève la tumeur, l'os et éventuellement les organes, tels que le foie, le poumon et la rate en vue d'études histologiques et/ou radiologiques. 10. Modèle animal d'ostéosarcome mimant la pathologie humaine, caractérisé en ce que ledit modèle animal présente des métastases pulmonaires et une tumeur osseuse primitive induites par administration de cellules tumorales d'ostéosarcome de type ostéocondensant. 11. Modèle selon la revendication 10, caractérisé en-ce que les cellules sont introduites dans les os de l'animal sous forme d'une suspension dans un milieu visqueux présentant une indice de s viscosité au moins égal à 15 mpas. 12. Utilisation d'un modèle animal conforme à l'une des revendications 10 et 11 pour déterminer l'effet de substance(s) sur la tumeur et/ou les métastases développées par ledit modèle. 13. Utilisation d'un modèle animal conforme à l'une des revendications 10 et 11 pour l'étude des mécanismes cellulaires et/ou moléculaires impliqués au sein de la tumeur et/ou des métastases. 14. Utilisation d'un modèle animal conforme à l'une des revendications 10 et 11 pour l'étude du transcriptome des cellules tumorales issues d'une tumeur d'ostéosarcome chez le rat en comparaison avec des ostéoblastes de rats.