FR 2876903 A1 20060428 FR 0452429 A 20041025 UTILISATIONS D'UN PRINCIPE ACTIF POUR LUTTER CONTRE L'ALOPECIE, ET COMPOSITIONS ASSOCIEES La présente invention concerne des utilisations à visée cosmétique anti-chute de cheveux d'un principe actif issu de Lupinus albus et les compositions cosmétiques associées. Depuis de nombreuses années l'industrie cosmétique cherche à supprimer les troubles capillaires et particulièrement l'alopécie qui touchent 70% des hommes et 40% des femmes à des degrés divers. La croissance des cheveux et leur renouvellement sont principalement déterminés par l'activité cyclique des follicules pileux qui comporte essentiellement trois phases, à savoir la phase anagène, la phase catagène et la phase télogène. La phase anagène est la phase la plus longue. Elle correspond à la croissance du cheveu qui elle-même se décompose en plusieurs stades. Elle dure sensiblement de 3 à 5 ans et constitue l'état de la majorité des follicules pileux. Cette phase correspond à une activité métabolique intense au niveau du bulbe. Les étapes suivantes se succèdent: - régénération du follicule pileux, amplification de la prolifération, - enveloppement de la papille dermique pour former un bulbe et sa matrice, 20 - augmentation de taille du bulbe, - différenciation du poil et des gaines épithéliales, - activité des mélanocytes, et - kératinisation du cheveu. Cette phase est terminée lorsque le cheveu émerge du cuir chevelu de façon visible. La phase catagène correspond à la régression du follicule du cheveu. Les cellules 5 se kératinisent, l'activité mitotique cesse et le follicule ne fabrique plus de cheveux. La dernière phase du cycle est la phase télogène pendant laquelle, le cheveu, qui est ancré dans le follicule, continu de croître jusqu'à sa chute. A la fin de cette période, un nouveau follicule est généré et un autre cycle recommence. La perte naturelle des cheveux est donc un phénomène physiologique qui se produit en permanence. Cependant, le cycle de renouvellement physique du cheveu peut être perturbé ou accéléré par différentes causes, qui entraînent une perte importante, temporaire ou définitive, des cheveux. Il existe trois grandes catégories d'alopécie: l'alopécie traumatique provoquée par une agression physique l'alopécie due à une maladie du follicule pileux l'alopécie endocrinienne ou androgénétique liée à des facteurs de prédispositions génétiques. bans tous les cas, la chute des cheveux est en relation directe avec le cycle pilaire, le follicule n'entrant plus dans la phase anagène et ne fabriquant ainsi plus de cheveux. Pour lutter contre l'alopécie, il est donc nécessaire de relancer le cycle pilaire en activant la phase anagène. C'est ce que propose le principe actif selon la présente invention en agissant simultanément sur trois des principaux facteurs de contrôle du cycle pilaire à savoir l'équilibre hormonal, le métabolisme cellulaire et le système vasculaire. 2876903 3 Le système hormonal, et plus particulièrement les androgènes, sont impliqués dans les problèmes de chute de cheveux. Présents en trop grande quantité, ils sont responsables de la miniaturisation des follicules pileux constatée en cas d'alopécie. C'est le cas notamment de la 5a-dihydrotestostérone (5a-DHT), androgène issue de l'hydroxylation de la testostérone par l'enzyme 5aréductase, qui régule le métabolisme de la glande sébacée. Le principe actif selon la présente invention se propose donc de limiter le processus de transformation de la testostérone en 5a-DIT qui conduit à l'alopécie androgénétique, en inhibant l'activité de l'enzyme 5aréductase. Pour relancer le cycle pilaire et stimuler la repousse des cheveux il convient également de favoriser l'activité cellulaire. En outre, la multiplication cellulaire, qui permet la croissance du cheveu, dépend essentiellement d'une activité mitotique importante. De fait, le principe actif selon la présente invention agit comme un stimulateur de l'activité mitotique et prolifératrice des cellules du bulbe pileux, en apportant des peptides glutaminés et des oligo-éléments, tels que du Zinc ou encore du Fer. Le bon développement et la croissance du cheveu sont également dépendants de la vascularisation du follicule pileux qui permet de faciliter le transport en nutriments essentiels à l'activité cellulaire intense en phase anagène. Parmi les facteurs de croissance impliqués dans la formation du réseau vasculaire existant autour du follicule pileux, on peut citer un facteur essentiel, le VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor) ou facteur de vascularisation qui est connu pour stimuler l'angiogenèse et la perméabilité vasculaire. Or, en cas d'alopécie, la quantité de VEGF est faible, et cette diminution conduit à une vascularisation inadéquate qui participe à l'atrophie des follicules pileux. Pour pallier ce problème, le principe actif selon la présente invention vise à augmenter la synthèse de VEGF pour densifier le réseau vasculaire qui entoure le follicule pileux et faciliter l'apport en nutriments indispensables à l'activité intense des cellules en phase anagène. Le principe actif selon la présente invention agit donc sur la phase anagène du cycle pilaire pour lutter contre la chute du cheveu, favoriser sa pousse et 5 normaliser la densité capillaire, à la fois: - en restaurant l'équilibre hormonal, par inhibition de l'activité de la 5aréductase, - en favorisant la pousse du cheveu par stimulation du métabolisme cellulaire des cellules du follicule pileux, - et en améliorant la vascularisation du follicule pileux facilitant l'apport en nutriments nécessaires au bon développement du cheveu, par stimulation de la synthèse de VEGF. La présente invention concerne ainsi l'utilisation à visée cosmétique, dans un rôle de lutte contre l'alopécie, d'un principe actif issu de Lupinus albus qui présente de telles propriétés, et les produits cosmétiques susceptibles de l'intégrer. La présente invention est maintenant décrite en détail pour permettre de mieux appréhender les résultats obtenus illustrés par des tableaux et les figures suivantes: Figure 1: cellules endothéliales non traitées. Figure 2: cellules endothéliales cultivées en présence de VEGF. Figure 3: cellules endothéliales cultivées en présence du principe actif selon l'invention dosé à 1%. 1/ PROCEDE D'OBTENTION DU PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION: Le procédé d'obtention consiste en la succession des étapes suivantes: solubilisation de poudre de Lupinus Albus dans l'eau, - hydrolyse(s) enzymatique(s) simultanée(s) ou successive(s), - inactivation enzymatique par traitement thermique, - séparation des phases solubles et insolubles par décantation, filtration ou centrifugation, - ultracentrifugation, concentration, et - filtration stérilisante. 2/ CARACTERISATION DU PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION: 2-1/ Matière sèche: On mesure le taux de matières sèches par passage à l'étuve à 105 C d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant. 10 Le taux de matières sèches est compris entre 100 et 400 g/I, plus particulièrement entre 180 et 250 g/I. 2-2/ Mesure du pH: Le pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante conduit à des valeurs comprises entre 6 et 9, plus 15 particulièrement entre 7,5 et 8,5. 2-3/ Détermination de la teneur en protéines: Le taux de protéines est obtenu par la méthode de Biuret à 540nm. Les résultats donnent une teneur en protéines de 50 à 240 g/I, plus particulièrement 90 à 150 g/I. 2-4/ Caractérisation de la fraction protéique La répartition des masses moléculaires des différentes molécules présentes dans le principe actif obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'invention est déterminée par FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography). Des marqueurs permettent de servir d'étalons et on constate que la fraction peptidique est de masse moléculaire supérieure ou égale à 29 KDaltons. 2-5/ Caractérisation des carbohydrates 2-5-1/ Dosage de sucres simples: Le taux de sucres simples est réparti en 36% de glucose, en 46,9% de 5 galactose et en 17,1% de fructose. 2-5-2/ Degré de polymérisation Le tableau ci-dessous montre que la fraction glucidique du principe actif selon la présente invention comprend du glucose, du galactose et du fructose sous forme de disaccharides, d'oligosaccharides et de polysaccharides de degré de polymérisation supérieur à 7. Degré de Taux de polymérisation carbohydrates Monosaccharides 1 1,2% Disaccharides 2 35,6% Oligosaccharides 5 1,6 Oligosaccharides et polysaccharides > 7 61,6% 3/EVALUATION DE L'EFFET DU PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION POUR LA LUTTE CONTRE LA CHUTE DES CHEVEUX 3-1/ Evaluation de l'effet sur la vascularisation du follicule pileux 3-1-1/ Etude de l'effet sur la synthèse de VEGF Cette étude a pour but d'évaluer la capacité du principe actif selon l'invention à stimuler la synthèse du facteur de croissance vasculaire VEGF. En effet, la vascularisation du follicule pileux est essentielle au bon développement et à la croissance du cheveu, plus particulièrement au moment de la phase anagène. Elle participe aux processus impliqués dans 2876903 7 la régulation du cycle du cheveu. L'un des facteurs essentiels est le VEGF connu pour stimuler l'angiogenèse et la perméabilité vasculaire dont la croissance du cheveu est particulièrement dépendante. Le VEGF agit directement sur les papilles dermiques et stimule la formation du réseau vasculaire situé à proximité du follicule pileux ce qui permet de répondre aux besoins nutritionnels du follicule particulièrement au cours de la phase anagène. L'étude est réalisée sur des kératinocytes humains normaux synthétisant le VEGF, selon le protocole opératoire suivant: A J1, les cellules sont ensemencées. A J2, les kératinocytes sont traités avec le principe actif selon l'invention à 0,25% et à 0,5% dilué dans le milieu de culture. Ils sont ensuite incubés pendant 72 heures à l'étuve. A J5, à la fin de l'incubation, les surnageants cellulaires sont récupérés. 15 On peut alors doser le VEGF présent dans ces surnageants par dosage ELISA spécifique. Les résultats sont présentés dans le tableau suivant en fonction du témoin non traité : Synthèse VEGF / Témoin (%) Principe actif 0,25% 17 5 Principe actif 0,50% 30 9 On note que la synthèse de VEGF est augmenté de 17% dans le cas de cellules traitées avec le principe actif selon l'invention dosé à 0,25% et de 30% dans le cas de cellules traitées avec le principe actif selon l'invention dosé à 0,5% Ainsi, le principe actif selon l'invention permet d'améliorer la vascularisation du follicule pileux, essentielle au bon développement du cheveu. 3-1-2/ Evaluation de l'effet sur l'angiogenèse Ce test permet de mesurer la capacité du principe actif selon l'invention à stimuler l'angiogenèse, c'est à dire la formation de nouveaux vaisseaux à partir de vaisseaux préexistants, et donc à améliorer la vascularisation du système pileux. L'étude est réalisée in vitro sur des cellules endothéliales. Il est possible d'obtenir une structure capillaire avec des ramifications et des structures tubulaires, à partir de cellules endothéliales qui sont capables de former des vaisseaux sous l'influence de différents facteurs angiogéniques. Pour ce test, les cellules endothéliales, les ramifications et les structures tubulaires sont visualisées par immunomarquage en utilisant un anticorps anti-PECAM-1 (Platelet Endothelial Cell Adhesion Molecule). L'étude consiste à cultiver des cellules endothéliales en présence du principe actif dosé à 0,25%, 0,5% et 1%, ou d'un témoin positif VEGF. L'incubation se fait à 27 C avec 5% de CO2, et le milieu de culture est remplacé tous les deux jours. Après douze jours d'incubation, on réalise un immunomarquage avec un anticorps primaire anti-PECAM-1, un anticorps secondaire anti-IgG marqué HRP, et un système de révélation sous forme de substrat chromogène. Les résultats, visualisés et quantifiés sur microscope couplé à un système d'analyse d'images, sont présentés sur les figures 1, 2 et 3 et sur le tableau suivant: Structures tubulaires Nombre de ramifications Longueur (pm) Variation par rapport au témoin (%) Témoin 1290 1 Témoin positif VEGF 2251 + 75 12 Principe actif 0,25% 1395 + 8 4 Principe actif 0,50% 2231 + 73 8 Principe actif 1,00% 2530 + 96 9 Ces résultats montrent que le principe actif selon l'invention, utilisé à 0,25%, à 0,50% ou à 1% participe à la formation de nouveaux vaisseaux à partir du réseau existant. Les figures permettent également de visualiser l'augmentation du réseau vasculaire en présence du principe actif selon l'invention. Le principe actif selon l'invention favorise donc l'angiogenèse et facilite ainsi l'apport en oxygène et nutriments essentiels aux cellules pilaires au cours de la phase anagène. 3-2/ Evaluation de l'effet sur l'activité de la 5a-réductase L'objectif de ce test est de mesurer l'effet anti-5a-réductase du principe actif selon l'invention. Pour réaliser cette étude on utilise des fibroblastes. Les cellules sont préincubées pendant 2 heures avec le principe actif selon 15 l'invention dosé à 0,25% et 2,5% ou une molécule de référence, le finastéride. Après la période de préincubation, on ajoute de la testostérone à la concentration totale de 10-6 M dont 4.10-8M est radiomarquée. Les cellules sont ensuite incubées pendant 25,5 heures à 37 C dans une 20 atmosphère contenant 5% de CO2. Après incubation, les cellules et les surnageants sont récupérés. Les fibroblastes sont soumis à l'action d'ultrasons dans le milieu d'incubation pour obtenir des homogénats qui sont ensuite extraits par du dichlorométhane. Les résidus secs sont finalement repris par du méthanol puis déposés sur des plaques de silice. Parallèlement, des standards non radiomarqués, à savoir de la testostérone, de la 5a-DHT et de l'androsténedione, sont également déposés sur chacune des plaques. On fait ensuite migrer les extraits déposés et les standards non radiomarqués grâce à un mélange dichlorométhane/éther. Les résultats sont obtenus par lecture des plaques à l'aide d'un analyseur de radioactivité Berthold, et les standards sont mis en évidence par pulvérisation avec une solution d'acide sulfurique puis chauffage. A partir de ces données, on peut calculer les pourcentages de métabolisation de la testostérone en 5a-DHT qui reflètent l'activité de la 5a-réductase. Les résultats sont exprimés dans le tableau suivant: Activité 5a-réductase Inhibition de l'activité 5a- (pmol de 5a-DHT formée/h/mg réductase (%) de protéines) Témoin 11,3 Finastéride (3ng/ml) 9,1 -21 Principe actif 0,25% 9,3 -18 Principe actif 2,5% 7,7 -31 On constate que le principe actif selon l'invention dosé à 0, 25% présente un effet inhibiteur significatif vis-à-vis de l'activité 5a- réductase, comparable à celui de la molécule de référence. Utilisé à 2,5% le principe actif permet de réduire l'activité de la 5a-réductase de plus de 30%, et limite ainsi la transformation de testostérone en 5a-DHT qui est responsable de la miniaturisation des follicules caractéristique de l'alopécie. 3-3/ Evaluation de l'effet sur le métabolisme cellulaire L'objectif de cette étude est de déterminer l'effet du principe actif selon l'invention sur l'activité métabolique de kératinocytes en suivant l'expression des ARN messagers (ARNm) de la Transglutaminase, marqueur de la différentiation cellulaire, cette activité étant en corrélation directe avec la croissance du cheveu. L'étude est réalisée sur des kératinocytes humains. Les kératinocytes sont incubés en présence du principe actif selon l'invention à 0,50% et à 1%. Après incubation, les cellules sont récupérées pour en extraire les ARN totaux. Les ARN extraits sont reversés-transcripts pour obtenir des ADN complémentaires qui sont ensuite analysés par la technique PCR. Parallèlement, les ARNm de la (3-actine, témoin de référence, sont également analysés dans chaque condition expérimentale. Les résultats, présentés dans le tableau suivant, sont exprimés en pourcentage de taux d'ARN par rapport au témoin: Taux d' ARNm/témoin (%) Principe actif 0,50% +21 Principe actif 1% +44 Ces résultats montrent que le principe actif, utilisé à 1%, favorise l'expression des ARMm de la transglutaminase de 44%. En stimulant l'activité métabolique des kératinocytes, processus important pendant la phase anagène, le principe actif selon l'invention favorise la pousse du cheveu. 3-4/ Evaluation de l'effet anti-chute capillaire Le but de cette étude est de déterminer l'action du principe actif selon la présente invention sur le ralentissement de la chute excessive des cheveux et d'évaluer sa tolérance cutanée sur le cuir chevelu. Pour réaliser cette étude on utilise la méthode du phototrichogramme qui 10 est une méthode d'étude macrophotographique standardisée. L'étude consiste à appliquer une lotion contenant 10% du principe actif sur 16 volontaires sains, de sexe masculin, âgés de 18 à 65 ans, atteints d'une calvitie légère à modérée, et n'ayant jamais entrepris de traitement antichute de cheveux. Pour chaque volontaire, un site d'une surface de 1cm2 est délimité dans la région temporale droite. L'étude se déroule selon le protocole suivant - à J1, on effectue: - une inclusion, - un repérage du site temporal, - une section des cheveux à l'émergence du cuir chevelu, et - une macrophotographie de la zone. Entre J1 et J3 il n'y a pas d'application du produit capillaire, ni de shampoing à J3, on fait une seconde photographie de la zone et on commence le traitement avec le produit capillaire. De J3 à J42, le produit est appliqué une fois par jour. - à J42, on effectue: - un repérage du site temporal, - une macrophotographie de la zone, - une section des cheveux à l'émergence du cuir chevelu, - une évaluation de la tolérance capillaire et cutanée, et une vérification de l'observance du traitement. Entre J42 et J44 il n'y a pas d'application du produit capillaire, ni de shampoing. - à J44, on réalise: - une macrophotographie de la zone, 10 - une évaluation de la tolérance capillaire et cutanée, - une vérification de l'observance, et - on recommence le traitement avec le produit capillaire. Entre J44 et J84, le produit est appliqué une fois par jour. A J84, on réalise: - un repérage du site temporal, - une macrophotographie de la zone, - une section des cheveux à l'émergence du cuir chevelu, É une évaluation de la tolérance capillaire et cutanée, et - une vérification de l'observance du traitement. Entre J84 et J86 il n'y a pas d'application du produit capillaire, ni de shampoing. à J86, on réalise: - une macrophotographie de la zone, - une évaluation de la tolérance capillaire et cutanée, - une vérification de l'observance du traitement, et - une évaluation de l'acceptabilité cosmétique. 3-4-1/ Evaluation de l'effet sur le ralentissement de la chute excessive de cheveux Les macrophotographies permettent d'évaluer: la densité capillaire, le nombre de cheveux au stade anagène, c'est-à-dire le nombre de cheveux qui ont continué à croître entre les 2 prises photographiques à deux jours d'intervalles, et - le nombre de cheveux au stade télogène, c'est-à-dire le nombre de cheveux qui ont cessés de croître ou qui sont tombés. Ainsi, on obtient des résultats sur la densité capillaire totale, la densité des cheveux en phase anagène et le rapport anagène/télogène. a/ densité capillaire totale La densité capillaire obtenue chez un sujet indemne d'alopécie est de l'ordre de 200 à 400 cheveux par cm2. Chez les sujets atteints de calvitie, cette densité diminue notablement et peut atteindre 80 cheveux par cm2. Les résultats de l'étude sont exprimés en nombre de cheveux par cm2 dans le tableau suivant: JO J44 J86 Moyenne 110,43 106,24 123,57 Variation (%) -3,79 +11,9 On constate qu'après 86 jours d'application quotidienne du principe actif selon l'invention formulé à 10%, la densité capillaire totale augmente de 11,9%. b/ densité des cheveux en phase anagène Les résultats, exprimés en nombre de cheveux par cm2 sont présentés dans le tableau suivant: JO J44 J86 Moyenne 103,44 103,40 121,11 Variation (%) -0,04 +17,12 On constate qu'après 86 jours d'application quotidienne du principe actif selon l'invention formulé à 10%, la densité des cheveux en phase anagène augmente de 17,12%. c/ rapport anagène/télogène A partir du nombre de cheveux en phase anagène et télogène, il est possible d'établir le rapport anagène/télogène (A/T). Quand il y a chute de cheveux, le nombre de cheveux télogènes augmente et le rapport A/T diminue. Les résultats sont exprimés en nombre de cheveux par cm2 dans le tableau 15 suivant: JO J44 J86 Moyenne 25,71 47,76 55,96 Variation (%) +85,78 + 117,70 On constate qu'après 44 jours d'application quotidienne du principe actif selon l'invention formulé à 10%, le ratio anagène/télogène augmente de 20 85,78%. Après 86 jours d'application quotidienne du principe actif selon l'invention formulé à 10%, le ratio anagène/télogène augmente encore plus nettement de 117,7%. Ces résultats permettent de conclure qu'après 12 semaines de traitement, le principe actif selon l'invention présente une action sur la densité capillaire qui se traduit par une augmentation significative du nombre de cheveux, accompagnée d'une augmentation du rapport anagène/télogène se traduisant par une action significative sur le ralentissement de la chute excessive des cheveux. 3-4-2/ Evaluation de la tolérance cutanée sur le cuir chevelu L'évaluation de la tolérance cutanée consiste à rechercher par un examen dermatologique les signes suivants prurit, séborrhée du cuir chevelu, - érythème, pellicules, et suintement. Cette évaluation a été conduite lors de l'étude précédente. Aucun volontaire n'a décrit de manifestation d'intolérance et/ou d'incofort. 4/ COMPOSITION COSMETIQUE INCLUANT LE PRINCIPE ACTIF SELON L' INVENTION: La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant le principe actif selon la présente invention dans différentes formes galéniques, notamment gel, solution, shampoing, après-shampoing, soin, baume, crème.... Il convient alors d'analyser la stabilité des formes galéniques incluant le principe actif selon l'invention, ceci dans des proportions comprises entre 1 et 10 %. On peut citer des formulations ayant montré une stabilité physique incluant 1% de principe actif selon l'invention. Gel limpide Carbopol 0,57. avec Triethanolamine qsp pH=6,5 Glycerol 10,0% Propylene glycol 10,0% Imidazolydinylurée 0,5% Principe actif 78,0% Eau Gel brillance: Sépigel 305 1,5% Propylene glycol 40,0% Imidazolydinylurée 0,5% Cyclomethicone 14,0% Principe actif 1,0% Eau 43, 0% Shampooing: SDS 25% 25,0% NaCI 3,0% Imidazolydinylurée 0,5% Acide citrique 0,1% Principe actif 1,0% Eau 70,4% Après shampooing: 5,0% Montanov 68 Amonyl DM 2,0% Dimethicone 3,0% Imidazolydinylurée 0,5% 15 Principe actif 1,0% Eau 88,5% Baume démêlant: Viscolam AT 64 3,0% Amonyl DM 1,0% Huile amande douce 1,0% Dimethicone 2,0% Imidazolydinylurée 0,5% Principe actif 1,0% Eau 91,5% Soin capillaire restructurant: Montanov 68 Dimethicone Imidazolydinylurée Principe actif Eau De plus, des tests ont montré la premières utilisées en cosmétique. 5,0% 2,0% 0,5% 1,0% 91,5% compatibilité du principe actif avec les matières REVENDICATIONS 1. Utilisation d'un principe actif obtenu par la succession des étapes suivantes: - solubilisation de poudre de Lupinus Albus dans l'eau, hydrolyse(s) enzymatique(s) simultanée(s) ou successive(s), - inactivation enzymatique par traitement thermique, - séparation des phases solubles et insolubles par décantation, filtration ou centrifugation, ultracentrifugation, - concentration, et - filtration stérilisante, pour incorporation à une composition cosmétique, caractérisée en ce qu'il permet de lutter contre l'alopécie en restaurant l'équilibre hormonal des fibres capillaires par inhibition de l'activité de la 5a-réductase. 2. Utilisation d'un principe actif obtenu par la succession des étapes 15 suivantes: - solubilisation de poudre de Lupinus Albus dans l'eau, hydrolyse(s) enzymatique(s) simultanée(s) ou successive(s), - inactivation enzymatique par traitement thermique, - séparation des phases solubles et insolubles par décantation, filtration 20 ou centrifugation, ultracentrifugation, - concentration, et - filtration stérilisante, pour incorporation à une composition cosmétique, caractérisée en ce qu'il permet de lutter contre l'alopécie en favorisant la pousse du cheveu par stimulation du métabolisme cellulaire des cellules du follicule pileux. 3. Utilisation d'un principe actif obtenu par la succession des étapes 5 suivantes: - solubilisation de poudre de Lupinus Albus dans l'eau, hydrolyse(s) enzymatique(s) simultanée(s) ou successive(s), - inactivation enzymatique par traitement thermique, - séparation des phases solubles et insolubles par décantation, filtration 10 ou centrifugation, ultracentrifugation, - concentration, et - filtration stérilisante, pour incorporation à une composition cosmétique, caractérisée en ce qu'il permet 15 de lutter contre l'alopécie en améliorant la vascularisation du follicule pileux par stimulation de la synthèse de VEGF. 4. Composition cosmétique pour une utilisation selon l'une des revendications 1, 2 ou 3, caractérisée en ce qu'elle est constituée d'un gel limpide, d'un gel brillance, d'un shampoing, d'un après shampoing, d'un soin 20 capillaire restructurant ou d'un baume démêlant.