FR 2878851 A1 20060609 FR 0412782 A 20041202 où N est un nombre entier compris entre 1 et 5 et un des trois groupes R', R2, R3 est égal à : H F2C\ O HN ln L'invention concerne un procédé pour la synthèse de composés C-glycopeptides gem difluorés. Elle s'applique plus particulièrement, mais non exclusivement, à la préparation de composés utilisables notamment pour la cryochirurgie et la cryopréservation. Il est connu que l'eau pure gèle à 0 C et ce phénomène s'accompagne d'une augmentation de volume due à une croissance tridimensionnelle de la glace. Cette expansion et l'osmose qui en résulte causent de sérieux dommages dans les tissus vivants: les membranes cellulaires sont rompues, le flux de 20 sang cesse et les microstructures des cellules sont perturbées. Depuis de nombreuses années, les scientifiques étudient l'influence de glycoprotéines antigel sur ces phénomènes. Ces glycoprotéines sont extraites de poissons, d'amphibiens, de plantes et d'insectes mais ils n'ont pas encore été capables de produire des composés analogues suffisamment stables et présentant une activité au moins égale voire supérieure aux molécules naturelles pour des applications commerciales. En effet, ces composés, en raison de la présence d'une liaison osidique (liaison impliquant l'oxygène dit en position anomérique), sont fragiles vis-à-vis de plusieurs systèmes enzymatiques dont les enzymes glycosidases et les enzymes hydrolases. 2878851 -2- II est donc intéressant, pour permettre aux composés de conserver leurs propriétés biologiques, de remplacer l'oxygène de la liaison osidique afin que cette liaison ne soit plus dégradée par un processus enzymatique. Des analogues où l'oxygène est remplacé par un groupement CH2 ont été synthétisés, mais, en dépit d'un accroissement de la stabilité et d'un encombrement stérique semblable à celui de l'oxygène, le groupement CH2 ne s'est pas toujours révélé être un bon mime de l'oxygène osidique. En conséquence, on ne retrouve pas forcément les propriétés biologiques du composé initial. D'autres classes de composés où l'oxygène est remplacé par un azote ou un soufre et plus récemment par un groupe difluorométhylène sont étudiées afin de conférer aux composés glycoconjugués une stabilité accrue en milieu biologique. En effet, le groupe CF2 est particulièrement résistant aux processus de dégradations biochimiques et il permet donc la synthèse de structures non hydrolysables. Cette transposition O/CF2 semble particulièrement adaptée pour mimer l'oxygène sur le plan électronique; les deux atomes de fluor jouant le rôle des deux doublets libres de l'oxygène. De tels composés seraient utilisables en vue de nombreuses applications telles que la cryochirurgie ou encore la cryopréservation des cellules, plaquettes sanguines, tissus et organes. La cryochirurgie aussi appelée cryothérapie est l'utilisation de froid extrême 30 produit par de l'azote liquide (ou de l'argon gazeux) pour détruire des tissus anormaux. Elle est utilisée pour traiter des tumeurs externes telles que celles de la peau mais elle est aussi utilisée pour traiter des tumeurs à l'intérieur du corps et 2878851 -3- spécialement dans la prostate et le foie. Les chercheurs ont testé la cryochirurgie comme traitement pour un certain nombre de cancers incluant les cancers du sein, du colon, du rein. De surcroît, des études rapportent, qu'à une certaine concentration (5-10 mg/ml), les glycoprotéines et les protéines antigel produisent des cristaux de glace en forme de spicule qui augmentent la probabilité de rupture et de mort des cellules durant la congélation. Cette propriété des cristaux de glace modifiés par les glycoprotéines et les protéines antigels a des applications très intéressantes dans le traitement de certains cancers quand ils sont utilisés en conjonction avec la cryochirurgie. Des études initiales sur les souris suggèrent que l'utilisation de glycoprotéines et de protéines antigel augmente l'efficacité de cette procédure. Par ailleurs, il y a un grand besoin de stocker et de préserver des cellules vivantes irremplaçables, dont le sperme, les ovules et les embryons, avec beaucoup moins de dommages qu'avec les méthodes courantes autorisées. On parle plus généralement de cryopréservation. Ainsi, des composés présentant une bonne stabilité pourraient être utiles: pour maintenir des organes humains entiers tels que des reins, des coeurs et des foies à transplanter quand le besoin se présente sans contrainte de temps, - pour préserver des cornées et autres tissus délicats avec un minimum de dommages et suffisamment longtemps pour permettre une distribution internationale, - pour conserver des plaquettes sanguines, pour protéger les organismes et les plantes rares et fragiles de l'extinction. Sur cette base, l'invention a pour objet de résoudre les inconvénients précités. A cet effet, elle propose un composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule générale I: R1 O R3 H N N H H O R2 O où N est un nombre entier compris entre 1 et 5, et si RI= R2= H, CH3, alors R3= OH N R6 H F2C\ / O où n est un nombre entier compris entre 3 et 4, Y, Y' sont des groupes indépendants Où Y, Y' = H, OR, N3, NR'R", SR"' ... avec R = H, Bn, Ac, TMS, TBDMS, TBDPS,..., R', R" = H, alkyl, allyl, Bn, tosylate (Ts), C(=O)-alkyl, C(=O)-Bn,..., R"'= H,alkyl,Ac. R4 est notamment un groupement H, CH3, CH2OH, CH2-OGP où GP est un groupe protecteur tel qu'un HN groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tertbutyldiméthylsilyle (TBDMS), tertbutyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac) , R5 =OH, OGP', NH2, NHGP' où GP' est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tertbutyldiméthylsilyle (TBDMS), tert-butyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), R6 est un atome d'hydrogène H ou une fonction alcool libre ou protégée, si R'= R3= H, CH3, alors R2= où n est un nombre entier compris entre 3 et 4, Y, Y' sont des groupes indépendants Où Y, Y' = H, OR, N3, NR'R", SR"' avec R = H, Bn, Ac, TMS, TBDMS, TBDPS,..., R', R" = H, alkyl, allyl, Bn, tosylate (Ts), C(=O)-alkyl, C(=O)-Bn,..., R"' = H, alkyl, Ac. 10 n R4 est notamment un groupement H, CH3, CH2OH, CH2-OGP où GP est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tert-butyldiméthylsilyle (TBDMS), tertbutyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), R5 = OH, OGP', NH2 NHGP' où GP' est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tertbutyldiméthylsilyle (TBDMS), tert-butyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), R6 est un atome d'hydrogène H ou une fonction alcool libre ou protégée, si R2= R3= H, CH3, 15 alors R'= Y où n est un nombre entier compris entre 3 et 4, Y, Y' sont des groupes indépendants Où Y, Y' = H, OR, N3, NR'R", SR"' avec R = H, Bn, Ac, TMS, TBDMS, TBDPS,..., R', R" = H, alkyl, allyl, Bn, tosylate (Ts), C(=O) -alkyl, C(=O)-Bn,..., 10 HN 2878851 -7- R"' = H, alkyl, Ac. R4 est notamment un groupement H, CH3, CH2OH, CH2-OGP où GP est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tert-butyldiméthylsilyle (TBDMS), tertbutyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), R5 =OH, OGP', NH2, NHGP' où GP' est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tertbutyldiméthylsilyle (TBDMS), tert-butyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), R6 est un atome d'hydrogène H ou une fonction alcool libre ou protégée, Selon une variante, le composé pourra plus précisément avoir une formule générale Il: R90 10 R o N H R90 2878851 -8- où N est un nombre entier compris entre 1 et 5, n est un nombre entier compris entre 3 et 4, R5 = OH, OGP', NH2, NHGP' où GP' est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tert- butyldiméthylsilyle (TBDMS), tertbutyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), R6 est un atome d'hydrogène H ou une fonction alcool libre ou protégée, R7= H, CH3, R8 = H, CH3. R9 est un atome d'hydrogène (H) ou un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tertbutyldiméthylsilyle (TBDMS), tert-butyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), Les composés de formules générales I--II à l'état de base, de sel d'addition à un acide, d'hydrate ou de solvat pharmaceutiquement acceptable ainsi que leurs éventuels dérivés pourront être présentés sous différentes formes galéniques adaptées à leur utilisation par exemple des solutions ou suspensions éventuellement injectables. Des compositions pourront comporter au moins un composé selon l'une des revendications 1 à 2 ou un de ses dérivés ou un de ses sels obtenus par addition à un acide minéral ou organique pharmaceutiquement acceptable. Outre les excipients inertes, non toxiques et pharmaceutiquement acceptables, tels que l'eau distillée, le glucose, le lactose d'amidon, le talc, les huiles végétales, l'éthylène glycol..., les compositions ainsi obtenues pourront également contenir des agents de préservation. D'autres principes actifs pourront être ajoutés dans ces compositions. 2878851 -9- La quantité de composé selon l'invention et d'autres éventuels principes actifs dans de telles compositions pourra varier selon les applications, l'âge et le poids du malade le cas échéant. Des exemples de préparation de composés selon l'invention seront décrits ci-après, à titre d'exemples non limitatifs. Les abréviations rencontrées sont définies ainsi: éq. : équivalent g: gramme Hz: Hertz mg: milligramme MHz: mégaHertz min.: minute mL: millilitre mmol: millimole mol: micromole nmol: nanomole Les caractéristiques des appareils utilisés pour effectuer les analyses de tous les composés décrits dans la présente demande sont indiquées cidessous: Les spectres RMN 'H, 13C, 19F ont été enregistrés sur des spectromètres BRUKER DPX 300 et DPX 600. En RMN 1H et 13C, le tétraméthylsilane est utilisé comme référence interne. En RMN 19F, la référence externe est le fluorotrichlorométhane CFCI3. Les déplacements chimiques sont exprimés en partie par million (ppm), les constantes de couplage J en Hertz (Hz). Les abréviations suivantes ont été utilisées: s pour singulet, bs pour un large singulet, d pour doublet, t pour triplet, q pour quadruplet, m pour multiplet ou massif, dd pour doublet de doublet... Les spectres de masse ont été obtenus sur un spectrophotomètre de type Micromass TOF-SPEC, E 20 kV, a-cyano. pour l'ionisation Maldi et JEOL AX500, 3 kV, Canon FAB JEOL, Xe, 4 kV, courant limite 10 A, Gly-NBA 50:50 pour l'ionisation FAB. Les séparations par chromatographie sur colonne sont réalisées sous pression légère en suivant les techniques de chromatographie sur silice Kieselgel 60 (230-400 Mesh, Merck). Le suivi est assuré par chromatographie sur couches minces (CCM) avec des plaques Kieselgel 60E-254-0.25mrn. On appelle rapport frontal (Rf) le rapport de la distance de migration d'un composé sur un support donné sur la distance de migration d'un éluant. Les figures ci-après décrivent la préparation de composés glycoconjugués 15 gem-difluorés de formule générale I: R90 O N H R90 où N est un nombre entier compris entre 1 et 5, n est un nombre entier compris entre 3 et 4, 2878851 - 111 - R5 = OH, OGP', NH2, NHGP' où GP' est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tertbutyldiméthylsilyle (TBDMS), tertbutyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), R6 est un atome d'hydrogène H ou une fonction alcool libre ou protégée, R7= H, CH3, R8 = H, CH3. R9 est un atome d'hydrogène (H) ou un GP groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tertbutyldiméthylsilyle (TBDMS), tert-butyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), Et plus précisément d'un composé de formule: BnO OH BnO CF2 O NH BnO Boc 2878851 -12- Préparation de la lactone de départ 1. Dans un premier temps une lactone 1 est préparée par benzylation du méthylgalactopyrannoside 2 (Figure 1), déprotection de la position anomérique (Figure 2), puis oxydation (Figure 3) : Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant du méthyl-D-galactopyranoside 2 (5 g; 26 mmol; 1 éq.) et de l'iodure de tétrabutylammonium nBu4NI (500 mg; 1,3 mmol; 0, 05 éq.) dans le diméthylformaldéhyde DMF (250 ml) est introduit de l'hydrure de sodium NaH (3,7 g; 0,15 mol; 6 éq.) par petites portions. Puis du bromure de benzyle BnBr (18 ml; 0,15 mol; 6 éq.) est additionné et le mélange est laissé sous agitation pendant au moins 36 heures. Le milieu est hydrolysé avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium NaHCO3. Puis la phase aqueuse est extraite trois fois avec de l'éther. Les phases organiques sont ensuite rassemblées, lavées plusieurs fois à l'eau, séchées sur du sulfate de magnésium, filtrées puis évaporées. Le produit ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de neuf pour un. Après concentration des fractions recueillies, le produit 3 se présente sous la forme d'une huile incolore avec un rendement pondéral de 95%. Caractérisation du produit 3: Rf: 0,38 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2). C35 H 3806 M=554,67 g.mol-' Dans un ballon contenant le 1-O-Méthyl2,3,4,6-Tetra-O-Benzyl-D-galactopyranose 3 (5,5g; 9,92 mmol) dans 80 mL d'acide acétique 4, est additionné 11 mL d'acide sulfurique H2SO4 à une concentration molaire de 2878851 - 13- 3M. Le milieu réactionnel est chauffé à 100 C pendant une heure. La solution est ensuite diluée dans 100 mL. d'eau froide. Le mélange est extrait quatre fois avec 100 mL de toluène. Les phases organiques sont rassemblées, puis lavées avec 100 mL d'une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium NaHCO3 et enfin avec 100 mL d'eau. La phase organique est ensuite concentrée. Le produit ainsi obtenu est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de 8,5 pour 1,5. Après concentration des fractions recueillies, le produit 5 se présente sous la forme de cristaux blancs avec un rendement pondéral de 75%. Caractérisation du produit 5: Rf: 0,65 (cyclohexane/acétate d'éthyle 6/4). C34H3606 M=540,65 g.mol-1 Dans un ballon sous atmosphère inerte, contenant le 2,3,4,6-Tetra-O-Benzyl-D-Galactopyranose 5 (4 g; 7,4 mmol) sont introduits le diméthylsulphoxyde DMSO (25,6 mL) et l'anhydride acétique Ac2O (16,8 mL). Le mélange est laissé sous agitation pendant 12 heures. Une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium NaHCO3 est additionnée, puis la phase aqueuse est extraite deux fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées puis lavées cinq fois à l'eau. Cette phase organique est ensuite séchée sur du sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée. 2878851 - 14- Le produit est ensuite purifié par chrornatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Après concentration des fractions recueillies, la lactone 1 se présente sous la forme d'une huile incolore avec un rendement pondéral de 82%. Caractérisation du produit 1: Rf: 0,61 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2). C34H3406 M= 538,63 g.mol"1 RMN 1H (CDCI3, 300 MHz) 3,6 (m, 2H, H6) ; 3,8 (dd, 2,1-9,6, 1H, HI3) ; 4,1 (s, 1H, H4) ; 4,2 (m, 1H, H5) ; 4,4-5, 1 (m, 9H, H2; 4OCH2Bn) ; 7,2 (m, 20H, H ar.) RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 67, 4 (C6) ; 72,4 (C5) ; 72,6 (OCH2Bn) ; 73,5 (OCH2Bn) ; 74,5 (C4) ; 75,1 20 (OCH2Bn) ; 77,1 (C2) ; 79,9 (C3) ; 127,4 -128,3 (Car.) ; 137,2; 137,3; 137,6 (Car. quat.) ; 169,8 (CO). Préparation d'un composé am difluoroester 7 L'addition d'un bromodifluoroester sur la lactone 1 est réalisée via une réaction de Reformatsky (Figure 4). Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant du zinc Zn (1,7 g; 26 mmol; 7 éq.) préalablement activé et décapé, est additionné du tétrahydrofurane THF (30 mL). Le milieu est porté au reflux, puis un mélange constitué de la lactone 1 (2 g; 3,7 mmol; 1 éq.) et de bromodifluoroacétate d'éthyle 6 (1,42 mL; 11 mmol; 3 éq.) dans le THF (30 mL) est additionné goutte à goutte. La réaction est laissée au reflux pendant 3 heures. Après retour à la température ambiante, une solution d'acide chlorhydrique HCI 1 N (60 mL) puis du dichlorométhane (6 mL.) sont ajoutés au milieu réactionnel. Les phases aqueuses et organiques sont séparées et la phase aqueuse est extraite à nouveau deux fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées. Le produit est ensuite purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de huit pour deux. Après concentration des fractions recueillies, le produit 7 se présente sous la forme d'une huile incolore avec un rendement pondéral de 82%. Caractérisation du produit 7: Rf: 0,35 (cyclohexane/acétate d'éthyle 8/2). C38H40F208 M= 662,72 g.mol_1 RMN 19F (CDCI3; 282,5 MHz) -118,4 (d, JF_F=256Hz) ; -120,2 (d, JF_F=256Hz). RMN 1H (CDCI3, 300MHz) 1,1 (t, 7,2, 3H, CI-I3); 3,4-3,5 (m, 2H, H61) ; 3,7-3,8 (dd, 2,5-9,5, 1H, H3); 3,8 (d, 2, 1H, H4) ; 4-4,1 (m, 3H, H5; CI-I2) ; 4,25-4,85 (m, 9H, H2; 4OCH2Bn) ; 7,2 (m, 20H, !Jar). RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 14,2 (CH3) ; 63,6 (CH2) ; 68,6 (C6) ; 71, 7 (C5) ; 73,2 (OCH2Bn) ; 73,9 (OCH2Bn) ; 74,1 (C4) ; 74,9 (OCH2Bn) ; 75, 1 (C2) ;75,8 (OCH2Bn) ; 81,2 (C3) ; 96,9 (t, 27Hz, Cl) ; 113 (t, 264Hz, CF2) ; 128,0 -128,9 (par.) ; 138,2;138,3; 138,6; 139,1 (Car. quat.) ; 163, 3 (t, 31Hz, CO2Et). Première voie d'accès pour l'introduction de la chaîne peptidique: 2878851 -16- L'introduction de la chaîne peptidique peut se faire de 2 façons différentes. La première a été appliquée pour la synthèse d'un monomère Lysine-Alanine-Alanine. On introduit d'abord le premier aminoacide qui réagit sur la fonction difluoroester (Figure 5). Après obtention du premier glycoaminoacide, l'ester de la lysine est saponifié (Figure 6), puis le motif Alanine-Alanine est introduit par couplage peptidique (Figure 7). Les fonctions N puis O terminales du monomère ainsi obtenu sont ensuite déprotégées (Figures 8 et 9), puis pour finir on réalise la débenzylation de l'unité galactosidique (Figure 10) : A) Introduction du premier acide aminé (Figure 5) : Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le produit de départ 7 (50 mg; 0,075 mmol; 1 éq.) en solution et l'acétate de la Boc-lysine-OMe 8 (48 mg; 0,15 mmol; 2 éq.) dans le dichloroéthane (3 ml) est additionnée la triéthylamine Et3N (53 pl; 0,375 mmol; 5 éq.). Le mélange est chauffé au reflux pendant 48 heures puis hydrolysé à l'eau et extrait trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées. Le solvant est évaporé puis le mélange est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de sept pour trois. Après concentration des fractions recueillies, le produit 9 se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 84%. Caractérisation du produit 9: Rf: 0,58 (cyclohexane/acétate d'éthyle 7/3). C48H58F2N2011 M= 876,98 g.mol-1 RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) -117,1 (d, JF_F=260Hz) ; -121,8 (d, JF_F=260Hz). 2878851 - 17- RMN 1H (CDCI3, 300 MHz) 1,1(m, 2H, C 2) ;1,2-1,5 (m, 2H, CH2);1,3 (s, 9H, (CH3)3C);1,6 (m, 2H, CH2); 3,0-3,1 (m, 2H, CH2NH) ; 3,4-3,5 (m, 2H, H6); 3,6 (s, 3H, OCH3); 3,8 (m, 2H, H3; H4); 4,1 (m, 2H, CHNH (Lys) ; H51); 4,2-4,9 (m, 8H, 4OCi12Bn); 4,3 (d, 3,3, 1H, H2); 5 (s, 2H, 2NH) ; 6,7 (s, 1H, 1NH) ; 7,2 (m, 20H, H ar.). RMN 93C (CDCI3, 75,5 MHz) 22,9 (CH2) ; 27,3 (C-12) ; 28,7 ((CH3)3C) ; 32,4 (CH2) ; 39,4 (CH2N) ; 52,7 (OCH3) ; 53,6 (NCH Lys) ; 68,7 (C6) ; 71,1 (C5) ; 73,4 et 73,7 (2OCH2Bn) ; 74,5 (C4) ; 75,0 (OCH2Bn; C2) ; 75,8 (OCH2Bn) ; 80,3 ((CH3)3C) ; 80,9 (C3) ; 97,1 (t, 28Hz, Cl) ;112,8 (t; 260Hz) ; 128,0 -128,9 (Car.) ; 138,2; 138,3; 138,7; 139,0 (Car. quat.) ; 155,9 (CO(Boc)) ; 164,1 (t, 28Hz, CF2CONH) ; 173,6 (CO2Et). B) Saponification de l'ester de la lysine (Figure 6) : Dans un ballon contenant le produit de départ 9 (1,25 g; 1,43 mmol; 1 éq.) dans le THF (10 mL), est introduite la lithine LiOH (70 mg; 2,9 mmol; 2 éq.) en solution dans l'eau (1 mL) puis le mélange est laissé 24 heures en réaction. Le milieu réactionnel est repris dans le dichlorométhane. Une solution d'acide chlorhydrique HCI 1 N (5 mL) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, lavées à l'eau (5 mL), séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées. Le produit 10 ainsi obtenu se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral quantitatif. Caractérisation du produit 10: C47H56F2N2011 M= 862,95g.mo1-1 RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) -117,2 (d, JF_F=260Hz) ; -121,5 (d, JF_F=260Hz). 2878851 -18- RMN 1H (CDCI3,300MHz) 1,2 (m, 2H, CH2); 1,3-1,5 (m, 2H, CH2); 1,3 (s, 9H, (CH3)3C); 1,6 (m, 2H, CH2); 3,0-3,1 (m, 2H, CH2NH); 3,4-3,5 (m, 2H, H6); 3,8 (m, 2H, H3; H4) ; 4,1 (m, 2H, CHNH (Lys) ; H5); 4,2-4,9 (m, 8H, 4OCH2Bn); 4,4 (d, 3,4, 1H, H2); 5,1 (d, 7,5, 1H, NH); 6,6 (s, 1H, NH); 7,2 (m, 20H, Har.). RMN 13C (CDCI3,75,5MHz) 22,6 (CH2) ; 27,3 (CH2) ; 28,7 ((CH3)3C) ; 32,0 (CH2) ; 39,4 (CH2N) ; 53,7 (NCH Lys) ; 68,7 (C6) ; 71,1 (C5) ; 73,4 et 73,7 (2OCH2Bn) ; 74,4 (C4) ; 74,9 (C2) ; 75,0 (OCH2Bn) ; 75,8 (OCH2Bn) ; 80,5 ((CH3)3C) ; 80,9 (C3) ; 97,0 (t, 28Hz, Cl) ;112,8 (t; 260Hz) ; 127, 9 -128,9 (Car.) ; 138,1; 138,2; 138,6; 139,0 (Car. quat.) ; 156,2 (CO(Boc) ) ; 164,0 (t, 28Hz, CF2CONH) ; 176,7 (CO2H). C) Introduction d'un motif Alanine-Alanine par couplaqe peptidique (Figure 7) : Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 10 (520 mg; 0,6 mmol; 1 éq.) dans le dichlorométhane (15 mL) est introduit le carbonyldiimadozale CDI (117 mg; 0,72 mmol; 1,2 éq.). Le mélange est laissé sous agitation pendant une heure. Puis une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée du trifluoroacétate-Alanine-Alanine-OMe 11 (229 mg; 0,79 mmol; 1,3 éq.), de diisopropyléthylamine DIEA (347 L; 1, 99 mmol; 3,3 éq.) dans le dichlorométhane (15 mL) est additionnée sur ce mélange puis le mélange réactionnel est laissé sous agitation pendant 36 heures. Le mélange est ensuite hydrolysé à l'eau, puis extrait trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées. 2878851 - 19- Le solvant est évaporé puis le mélange est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de trois pour sept. Après concentration des fractions recueillies, le produit 12 se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 55%. Caractérisation du produit 12: Rf: 0,46 (acétate d'éthyle). C54H68F2N4013 M= 1019,13g.mo1-1 RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) -116,9 (d, JF_F=260Hz) ; -121,7 (d, JF_F=260Hz). RMN 1H (CDCI3, 300 MHz) 1,2-1,4 (m,1 0H, 2CH3; 2CH2); 1,3 (s,9H, (CH3)3C); 1,6 (m,2H, CH2); 3,0-3,2 (m,2H, NHCH2); 3,4-3,5 (m,2H, H6); 3,6 (s,3H, OCH3); 3,8-3,9 (m,2H, H3; H4); 4,0 (m,1 H, CHNH (Lys)); 4,1 (t, 6, 2,1 H, H5); 4,2-4,9 (m,10H, 4OCH2Bn; 2CH (Ala)); 4,3 (d, 3,3, 1H, H2); 5, 3 (d, 6,4, 2H, 2NH); 7 (m,1 H, NH); 7,2 (m,20H, Har.). RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 18,3 et 18,6 (2CH3) ; 22,8 (CH2) ; 28,7 ((CH3)3C et CH2) ; 32,1 (CH2) ; 39,3 (CH2N) ; 48,5 et 49,2 (2CH Ala) ; 52, 9 (OCH3) ; 54,8 (NCH Lys) ; 68,7 (C6) ; 71,1 (C5) ; 73,5 et 73,7 (2OCH2Bn) ; 74,5 (C4) ; 75,0 (OCH2Bn; C2) ; 75,7 (OCH2Bn) ; 80,5 ((CH3)3C) ; 80,8 (C3) ; 97,1 (t, 27Hz, Cl) ;127,9 -128,9 (Car.) ; 138,2;138,3;138, 7; 139,0 (Car. quat.) ; 156,0 (CO(Boc)) ;164,2 (t, 28Hz, CF2CONH) ; 172,3 et 172,5 (2CONH) ; 173,6 (CO2Et). D) Déprotection des fonctions N puis O terminales du monomère ainsi obtenu (Figures 8 et 9) : 2878851 - 20 - Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le produit de départ 12 (0,607 mg; 0,6 mmol; 1 éq.) dans le dichlorométhane (10 mL) est introduit de l'acide trifluoroacétique TFA (900 l- ; 12 mmol; 20 éq.). Le mélange est laissé à réagir pendant 12 heures puis le milieu réactionnel est concentré. Quatre à cinq co-évaporations au toluène sont effectuées pour éliminer les traces d'eau et obtenir le produit 13 sous la forme d'une huile incolore avec un rendement quantitatif. Caractérisation du produit 13: C51 H61 F5N4O13 M=1033,04 g.mol"1 RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) -75,9; -116,9 (d, JF_F=260Hz) ; -120,7 (d, JF_F=260Hz). RMN 1H (CDCI3, 300 MHz) 1,2-1,4 (m, 10H, 2CH3; 2CH2) ; 1,6 (ni, 2H, CH2) ; 3,0 (m, 2H, NHCH2) 3,4 (m, 2H, H6) ; 3,5 (s, 3H, OCH3) ; 3,8-3,9 (m, 3H, CHNH (Lys) ;H3; H4) 4,1 (m, 1H, H5) ; 4,2-4,9 (m, 11H, 4OCH2Bn; 2CH (Ala) ; H2) ; 7,2 (m, 20H, H ar.). RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 17,7 et 18,1 (2CH3) ; 21,9 (CH2) ; 28,5 (CH2) ; 31,0 (CH2) ; 39,1 (CH2N) ; 48,7 et 50,0 (2CH Ala) ; 52,8 (OCH3) ; 53,7 (NCH Lys) ; 68,8 (C6) ; 71,2 (C5) ; 73,3 et 73,8 (2OCH2Bn) ; 74,3 (C4) ; 75,0 (OCH2Bn) ; 75,1 (C2) ; 75,8 (OCH2Bn) ; 80,9 (C3) ; 97,1 (t, 27Hz, Cl) ;127,9 -128,9 (Car.) ; 138,1;138,3;138,6; 138,9 (Car. quat.) ; 162,0 (qdt, 34Hz, COCF3) ;164,2 (t, 28Hz, CF2CONH) ; 169,4 et 172,7 (2CONH) ; 173,6 (CO2Et). Dans un ballon contenant le produit de départ 13 (671 mg; 0,65 mmol 1 éq.) dans le THF (5 mL) est introduite la lithine LiOH (47 mg; 1,9 mmol; 3 éq.) en solution dans l'eau (1 mL). Le mélange est laissé 12 heures en réaction puis repris dans le dichlorométhane. Une solution d'acide 2878851 - 21 chlorhydrique HCI 1 N (4 mL) est ajoutée et la phase aqueuse est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, lavées à l'eau (4 mL) puis concentrées. Quatre à cinq co-évaporations au toluène sont effectuées pour éliminer les traces d'eau et obtenir le produit 14 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement quantitatif. Caractérisation du produit 14: C48H59CIF2N4011 M=941,45 g.mol-1 RMN 19F (CD3OD, 282,5 MHz) -120,4; -120,5. RMN 1H (CD3OD, 300 MHz) 1,2-1,3 (m,12H, 2CH3; 2CH2) ; 1,6 (m,2H, CH2) ; 3,0 (m, 2H, NHCH2) ; 3,1 (m,2H, H6) ; 3,5 (m, 3H, CHNH (Lys) ;H3; H4) ; 3,8-3,9 (m, 1H, H5) ; 4,2-4,9 (m,11 H, 4CH2OBn; 2CH (Ala) ; H2) ; 7, 2 (m, 20H, H ar.). RMN 13C (CD3OD, 75,5 MHz) 17,7 et 18,1 (2CH3) ; 23,5 (CH2) ; 29,9 (CH2) ; 32,7 (CH2) ; 40,5 (CH2N) ; 49,7 et 50,0 (2CH Ala) ; 53,7 (NCH Lys) ; 70,2 (C6) ; 72,4 (C5) ; 74,2 et 74,7 (2OCH2Bn) ; 76,1 et 76,6 (2OCH2Bn) 76,7 (C4 et C2) ; 82,1 (C3) ; 98,0 (t, 27Hz, Cl) 111,7 (t, 260Hz; CF2) ; 129 -130,6 (Car.) ; 139,7;140,1;140,2; 140,5 (Car. quat.) ;165,5 (t, 28Hz, CF2CONH) ; 174,0 et 174,5 (ÇO). E) Débenzylation de l'unité galactosidique (Figure 10) : Un ballon contenant le produit de départ 14 (150 mg; 0,16 mmol) dans un mélange d'acide acétique CH3CO2H (5 mL), de tétrahydrofurane THF (1,5 mL) et d'eau (1,5 mL) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur un filtre Millipore . Le 2878851 - 22 - mélange est ensuite concentré pour obtenir le produit 15 sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 70%. Caractérisation du produit 15: C20H35CIF2N4011 M=580,96 g.mol"1 RMN 19F (CD3OD, 282,5 MHz) -120,0 (d, JF_F=258Hz) ; -121,3 (d, JF_F=258Hz) ; -121,6 (d, JF_F=258Hz) ; - 123,0 (d, JF_F=258Hz). RMN 1H (CD3OD, 300 MHz) 1,4 (2d, 7,7, 6H, 2CH3);1,3-1,5 (m, 2H, CH2); 1,7 (m, 2H, CH2) ; 1,9 (m, 2H, 15 CLI2); 3,2 (m, 2H, NHCLI2); 3,7-3, 8 (m, 4H, H6; H5; H3) ; 4,2 et 4,4 (2m, 2H, H2) ;3,9 (m, 1H, CHNH (Lys)) ; 4,3 et 4,5 (2m, 2H, 2CH (Ala) . RMN 13C (CD3OD, 75,5 MHz) 18,7 et 18,9 (2CH3) ; 23,5 (CH2) ; 30,1 (CH2) ; 32,8 (CI-12) ; 40,5 (CH2N) ; 50,9 (2CH Ala) ; 54,7 (NCH Lys) ; 64,7 (C6) ; 72,7(C5), 76,2, 77,7 (C4 et C2), 82,4 (C3) ; 100,6 (Cl) ; 115,6 (t, 260Hz; CF2) ;165,5 (CF2CONH) ; 170,7 et 174, 6 (CO). Masse (FAB+) : 545 (M±CI) Deuxième voie d'accès pour la préparation de la chaîne peptidique: Elle consiste en la saponification du dérivé gem-difluoroester 7 qui sera ensuite couplé avec différents peptides. A) Saponification du dérivé qem-difluoroester 7 (Figure 11) Dans un ballon contenant l'ester 7 (0,5 g;1,75 mmol, 1 éq.) dans l'éthanol (5 mL) est additionnée une solution aqueuse de lithine LiOH (2 M; 0,75 mL, 2 éq.) ou une solution aqueuse de soude NaOH (0,07 g; 1,6 mmol). Le 2878851 - 23 mélange est laissé sous agitation pendant douze heures puis il est évaporé et repris avec du dichlorométhane. Le mélange est acidifié par une solution aqueuse d'acide chlorhydrique HCI 1M, puis extrait plusieurs fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées. Le produit 16 est obtenu sous la forme d'une huile blanche avec un rendement quantitatif. Caractérisation du produit 16: C36H36 F208 M= 634,66g.mol"1 RMN 19F (CDCI3, 282,5 MHz) -117,3 (d, JF_F=259Hz) ; -119,0 (d, JF_F=259Hz). RMN 1H (CDCI3, 300 MHz) 3,2 (dd, 4,5Hz et 9,8Hz,1H, H6) ; 3,5 (dd, 7,7Hz et 9,8Hz,1H, H6) ; 3,7 (d, 2Hz, 1H, H4) ; 3,8 (dd, 2,6Hz et 9,5Hz, 1H, H3); 4 (dd, 4,5Hz et 7,7Hz;1H, 20 H5) ; 4,3-4,9 (m, 9H, H2; 4OCH2Bn) ; 7,2 (m, 20H, Har). RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 69,4 (C6) ; 71,7 (C5) ; 73,5 (OCH2Bn) ; 74,0 (OCH2Bn) ; 74,1 (C4) ; 75,0 (OCH2Bn) ; 75,1 (C2) ;75,9 (OCH2Bn) ; 80, 8 (C3) ; 95,4 (t, 27Hz, Cl) ; 112,5 (t, 260Hz, CF2) ; 127,8 -129,0 (Car.) ; 137,6;138,0; 138,1 (Car. quat.) ; 163,1 (t, 30Hz, CO2H). B) Préparation des différents peptides à coupler avec le composé gemdifluoré 16. Chacun des peptides à coupler avec le composé gem-difluoré 16 est préparé par une série de réactions de déprotections et de couplage peptidique: Un premier couplage entre deux alanines est réalisé (Figure 12) : 2878851 -24- Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant de la Boc-Alanine-OH 17 (1 g; 5,29 mmol; léq.) dans le dichlorométhane (25 mL) est introduit du carbonyldiimadozale CDI (882 mg; 5,44 mmol; 1,03 éq.). Le mélange est laissé sous agitation pendant une heure. A ce mélange est additionné une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée de Cl-+H3N-Alanine-OMe 18 (738 mg; 5,29 mmol; 1 éq.), de diisopropyléthylamine DIEA (1,94 mL; 11,1 mmol; 2,1 éq.) dans le dichlorométhane (15 mL). Le mélange est laissé sous agitation pendant 36 heures puis le milieu est hydrolysé à l'eau et extrait trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées. Le solvant est évaporé puis le mélange est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange cyclohexane / acétate d'éthyle dans des proportions de cinq pour cinq. Après concentration des fractions recueillies, le produit 19 se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 82%. Caractérisation du produit 19: C12H22N205 M=274,31 g.mol-1 RMN 1H (CDCI3, 300 MHz) 1,3 (2d, 7,2, 6H, 2CH3) ; 1,4 (s, 9H, ((PH3)3C) ; 3,7 (s, 3H, OCH3) ; 4,2 (m, 1H, CH) ; 4,6 (m, 1H, CH) ; 4,2 (m, 1H, CH) ; 5,2 (d, 7,4, 1H, NH) ; 6,9 (s, 1H, NH). RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 18,6 et 18,8 (2CH3) ; 28,7 ((CH3)3C) ; 48,3 et 50,2 (2CH) ; 52,8 (OCH3) ; 80,4 ((CH3)3p) ; 155,8 0 (CO(Boc)) ; 172,8 et 173,6 (CONH et Ç02Et). La fonction O-terminale du dipeptide 19 ainsi obtenu est déprotégée puis le dipeptide 19 est couplé avec un acide aminé lysine N- protégé (Figure 13) : 2878851 -25- 1) Déprotection de l'unité dipeptidique Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant Boc-Alanine- Alanine-OMe 19 (1 g; 3,8 mmol; 1 éq.) dans le dichlorométhane (20 mL) est introduit de l'acide trifluoroacétique TFA (5,6 mL; 76 mmol; 20 éq.). Quatre à cinq coévaporations au toluène sont effectuées pour éliminer les traces d'eau. 2) Synthèse peptidique Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant la Boc-Lysine(Z)-OH 20 (1,32 g; 3,46 mmol; 1 éq.) dans le dichlorométhane (20 mL) est introduit du carbonyldiimadozale CDI (560 mg; 3,56 mmol; 1,03 éq.). Le mélange est laissé sous agitation pendant une heure. Puis, sur ce produit est additionné une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée de CF3CO2" +H3N-Alanine-Alanine-OMe obtenue lors de la réaction précédente (3,8 mmol; 1,1 éq.), de diisopropyléthylamine DIEA (1,26 mL; 7,27 mmol; 2,1 éq.) dans le dichlorométhane (20 mL). Le mélange est laissé sous agitation pendant 36 heures puis il est hydrolysé à l'eau et extrait trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées. Le solvant est évaporé puis le mélange est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant de l'acétate d'éthyle. Après concentration des fractions recueillies, le produit 21 se présente sous la forme d'un solide blanc avec un rendement pondéral de 66%. Caractérisation du produit 21: C26H40N408 M=536,62g.mo1-' RMN 1H (CDCI3, 300 MHz) 1,3 (d, 7,2, 6H, 2CH3) ; 1,4 (s, 9H, ((CH3)3C) 1,3-1,7(m 6H;3CH2); 3,1 (m, 2H, NHCH2) ; 3,7 (s, 3H, OCH3) ; 4,1 (m, 1H, CH Lys) ; 4,6 (m, 1H, CH) ; 4,5 (m, 2H, CH Ala) ; 5,0 (s, 2H, PhCH2); 5,6 et 5,7 (m, 2H, 2NH) ; 7,3 (m, 5H, Har.) ; 7,4 (d, 7,14, 1H, NH). 2878851 - 26 - RMN 13C (CDCI3, 75,5 MHz) 18,1 et 18,7 (2CH3) ; 22, 7 (CH2) ; 28,7 ((CH3)3C) ; 29,7 (CH2) ; 32,5 (CH2) ; 40,7 (NCH2) ; 48,4 et 49,1 (2CH) ;52,7 (OCH3) ; 54,6 (CH Lys) ;66,8 (OCH2Bn) ; 80,2 ((CH3)3C) ; 128,3 -128,8 (Car.) ; 137,1 (Car. quat.) ; 156,2 et 157,1 (CO(Boc) et CO(Z)) ; 172,4, 172,7 et 173,6 (2CONH et CO2Et). Des unités tripeptidiques sont déprotégées au niveau de leur fonction N-terminale (Figure 14a) ou O-terminale (Figure 14b) et une synthèse peptidique entre des unités tripeptidiques déprotégées au niveau de leur fonction N-terminale et des unités tripeptidiques déprotégées au niveau de leur fonction O-terminale est réalisée (Figure 14c) : N- déprotection (Figure 14a) Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant le Boc-Lysine(Z)-Alanine-Alanine-OMe 21 (2 g; 3,7 mmol; 1 éq.) dans le dichlorométhane (40 mL) est introduit de l'acide trifluoroacétique l''FA (5,5 mL; 75 mmol; 20 éq.). Le mélange est laissé à réagir pendant 12 heures puis concentré. Quatre à cinq co-évaporations au toluène sont effectuées pour éliminer les traces d'eau pour obtenir la CF3CO2-+H3NLysine(Z)-Alanine-Alanine-OMe 22. 0-déprotection (Figure 14b) Dans un ballon contenant du BocLysine(Z)-Alanine-Alanine-OMe 21 (2 g; 3,7 mmol; 1 éq.) dans l'éthanol (45 mL) est introduit la lithine LiOH (107 mg; 4,5 mmol; 1,2 éq.) en solution dans l'eau (2 mL). Le mélange est laissé 12 heures en réaction. Puis le milieu réactionnel est évaporé, puis repris dans le dichlorométhane. Une solution aqueuse d'acide chlorhydrique HCI 1 N (20 mL) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées pour obtenir la Boc-Lys(Z) -Ala-Ala-OH 23. 2878851 - 27 - Synthèse peptidique (Figure 14c) Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant du Boc-Lysine(Z)-Alanine-Alanine-OH 23 (3,7 mmol; 1 éq.) dans le dichlorométhane (50 mL) est introduit du carbonyldiimadozale CDI (665 mg; 4,10 mmol; 1,1 éq.). Le mélange est laissé sous agitation pendant une heure. Puis, sur ce produit, est additionné une solution préparée sous atmosphère inerte et constituée de CF3CO2"+H3N-Lysine(Z)-Alanine-Alanine-OMe 22 (3,7 mmol; 1 éq.), de diisopropyléthylamine DIEA (1,62 mL; 9,32 mmol; 2,5 éq.) dans le dichlorométhane (50 mL). Le mélange est laissé sous agitation pendant 48 heures. Le milieu est hydrolysé à l'eau, puis extrait deux fois au dichlorométhane et deux fois au chloroforme. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées. Le solvant est évaporé puis le mélange est purifié par chromatographie sur une colonne de silice avec comme éluant un mélange acétate d'éthyle/méthanol dans des proportions de neuf pour un. Après concentration des fractions recueillies, le produit 24 se présente sous la forme d'une poudre blanche avec un rendement pondéral de 56%. Caractérisation du produit 24: C46H68 N8013 M= 941,08g.mo1-1 RMN 1H (DMSO,300MHz) 1,3 (m, 12H, 4CH3) ; 1,4 (s, 9H, ((CH3)3C) 1,3-1,7(m 12H; 6CH2); 3,0 (m, 4H, 2NHCH2) ; 3,6 (s, 3H, OCH3) ; 4,1 (m, 1H, CH Lys) ; 4, 3 (m, 5H, 5CH Ala et Lys) ; 5,0 (s, 4H, PhCH2) ; 5,0 (s, 2H, PIhCH2); 6, 9 (m, 1H, NH) ; 7,3 (m, 5H, Har. ). RMN 13C (DMSO),75,5MHz) 17,2, 18,3, 18,4 et 18,6 (4CH3) ; 22,8 et 23,2 (2CH2) ; 28,5 ((CH3)3C) ; 29,3 et 29,5 (2CH2) ; 31,8 et 32,0 (2CH2) ; 39,5 et 39,8 (2NCH2) ; 47,8, 48,0, 48,2 et 48,5 (4CH Ala) ;52,2 (OCH3) ; 52,6 et 54,6 (2CH Lys) ;65,4 (2OCH2Bn) ; 78,4 ((CH3)3C) ; 128,0 et 128,6 (Par.) ; 137,6 (Car. quat.) ;155,7 et 156,4 - 28 - (CO(Boc) et 2 CO(Z)) ; 171,3, 172,3, 172,4, 172,5 et 173,3 (6CONH et CO2Et). La fonction amine située sur la chaîne latérale du composé 24 est déprotégée par hydrogénation (Figure 115) : Un ballon contenant le produit de départ 24 (400 mg; 0,43 mmol) dans le méthanol (10 mL) en présence d'une pointe de spatule de palladium sur charbon Pd/C est placé sous atmosphère d'hydrogène. Le mélange est laissé sous agitation pendant une nuit puis filtré sur millipore. Le milieu est ensuite concentré. Le produit 25 se présente sous la forme d'une poudre blanche avec un rendement quantitatif. Caractérisation du produit 25: C30H56 N809 M= 672,81g.mo1-1 RMN 1H (DMSO, 300 MHz) 1,2 (m, 12H, 4CH3) ; 1,4 (s, 9H, ((CH3)3C) 1,3-1,7(m 12H; 6CH2); 2,6 (m, 4H, 2NHCH2) ; 3,6 (s, 3H, OCH3) ; 3,8 (m, 1H, CH Lys) ; 4, 2 (m, 5H, 5CH AIa et Lys). Masse (ES+) : 696 (M+Na) ; 674 (M+H) C) Couplage du composé qem- difluoré 16 avec le peptide 25 (Figure 16) Dans un ballon sous atmosphère inerte contenant l'acide 16 (200 mg; 0,32 mmol; 1 éq.), le peptide 25 (105 mg; 0,16 mmol; 0,5 éq.), du 1- hydroxybenzotriazole HOBT (45 mg; 0, 33 mmol; 1,05 éq.) puis la N- méthylmorpholine NMM (32 L; 0,33 mmol; 1, 05 éq.) dans le DMF (3 mL) et introduit l'EDCI (63 mg; 0,33 mmol; 1,05 éq. ). Le milieu réactionnel est agité pendant 48 heures puis de l'eau est ajoutée et la phase aqueuse est extraite 2878851 - 29 - trois fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées. Le produit 26 est ainsi obtenu. Caractérisation du produit 26: C102H124F4N8023 M=1906,16g. mol-1 Masse (MALDI+) : 1929 (M+Na) ; 1945 (M+K) L'invention ne se limite pas aux exemples précédemment décrits. 2878851 -30- Revendications 1. Composé C-glycopeptide gem-difluoré de formule générale I: R O R3 H N N N H H O R2 où N est un nombre entier compris entre 1 et 5, et si R'= R2= H, CH3, alors R3= Y H F2C\ O nnnV'^ où n est un nombre entier compris entre 3 et 4, Y, Y' sont des groupes indépendants Où Y, Y' = H, OR, N3, NR'R", SR"' avec R = H, Bn, Ac, TMS, TBDMS, TBDPS, R', R" = H, alkyl, allyl, Bn, tosylate (Ts), C(=O)-alkyl, C(=O)-Bn, R"' = H, alkyl, Ac. R4 est notamment un groupement H, CH3, CH2OH, CH2-OGP où GP est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tert- OH O N 2878851 - 31 - butyldiméthylsilyle (TBDMS), tert- butyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), R5 = OH, OGP', NH2, NHGP' où GP' est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tert-butyldiméthylsilyle (TBDMS), tert- butyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), R6 est un atome d'hydrogène H ou une fonction alcool libre ou protégée, si R'= R3= H, CH3, alors R2= H F2CO où n est un nombre entier compris entre 3 et 4, Y, Y' sont des groupes indépendants Où Y, Y' = H, OR, N3, NR'R", SR"' avec R = H, Bn, Ac, TMS, TBDMS, TBDPS, R', R" = H, alkyl, allyl, Bn, tosylate (Ts), C(=O)- alkyl, C(=O)-Bn, R"' = H, alkyl, Ac. R4 est notamment un groupement H, CH3, CH2OH, CH2-OGP où GP est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tert- butyldiméthylsilyle (TBDMS), tert- butyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), HN 20 2878851 -32- R5 = OH, OGP', NH2, NHGP' où GP' est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tert-butyldiméthylsilyle (TBDMS), tert-butyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), R6 est un atome d'hydrogène H ou une fonction alcool libre ou protégée, si R2= R3= H, CH3, alors RI= Y F2CO O dvvv, où n est un nombre entier compris entre 3 et 4, Y, Y' sont des groupes indépendants Où Y, Y' = H, OR, N3, NR'R", SR"'... avec R = H, Bn, Ac, TMS, TBDMS, TBDPS, R', R" = H, alkyl, allyl, Bn, tosylate (Ts), C(=O)-alkyl, C(=O)-Bn, R"' = H, alkyl, Ac. R4 est notamment un groupement H, CH3, CH2OH, CH2-OGP où GP est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tertbutyldiméthylsilyle (TBDMS), tert- butyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), R5 = OH, OGP', NH2, NHGP' où GP' est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), H HN - 33 - triméthylsilyle (TMS), tert-butyldiméthylsilyle (TBDMS), tert-butyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), R6 est un atome d'hydrogène H ou une fonction alcool libre ou protégée, 2. Composé Cglycopeptide selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comprend un composé de formule générale: R90 N H R90 où N est un nombre entier compris entre 1 et 5, n est un nombre entier compris entre 3 et 4, R5 = OH, OGP', NH2, NHGP' où GP' est un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tert- butyldiméthylsilyle (TBDMS), tert-butyldiphénylsilyle (TBDPS) , acétate (Ac), R6 est un atome d'hydrogène H ou une fonction alcool libre ou protégée, R7= H, CH3, R8 = H, CH3. 2878851 -34- R9 est un atome d'hydrogène (H) ou un groupe protecteur tel qu'un groupe alkyle, benzyle (Bn), triméthylsilyle (TMS), tertbutyldiméthylsilyle (TBDMS), tert-butyldiphénylsilyle (TBDPS), acétate (Ac), 3. Composé selon l'une des revendications 1 à 2, caractérisée en ce qu'il est à l'état de base, de sel d'addition à un acide, d'hydrate ou de solvat pharmaceutiquernent acceptable 4. Composition, caractérisée en ce qu'elle comporte au moins un composé selon l'une des revendications 1 à 2 ou un de ses dérivés ou un de ses sels obtenus par addition à un acide minéral ou organique pharmaceutiquement acceptable. 5. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle comporte des excipients inertes, non toxiques et pharmaceutiquement acceptables, tels que l'eau distillée, le glucose, le lactose d'amidon, le talc, les huiles végétales, l'éthylène glycol. 6. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle comporte des agents de préservation. 7. Utilisation d'un composé selon l'une des revendications 1 à 3 pour la préparation de composés utilisables en cryochirurgie. 8. Utilisation d'un composé selon l'une des revendications 1 à 3 pour la préparation de composés utilisables en cryopréservation.