FR 2881649 A1 20060811 FR 0550402 A 20050210 PROCEDE D'EXTRACTION DE POLLEN FRAIS, EXTRAIT LIPIDIQUE OBTENU ET APPLICATIONS ASSOCIEES La présente invention concerne un procédé d'extraction de substances actives issues de grains de pollen frais ou congelé à l'état frais. L'invention couvre également l'extrait obtenu et les compositions susceptibles de l'inclure. Depuis toujours, le pollen est connu pour ses vertus bienfaisantes. Cette caractéristique découle directement de la composition des grains de pollen qui contiennent à la fois des protéines, des fibres, des sucres, des vitamines, des minéraux, des oligo-éléments, des composés phénoliques et des lipides. Il existe de nombreuses variétés de pollen, chacune d'entre elles possédant une composition qui lui est propre avec un apport privilégié en certaines classes. Chaque variété développe donc des qualités nutritionnelles, cosmétiques et thérapeutiques différentes. Toutefois, bien que les vertus du pollen soient très intéressantes, elles sont difficilement exploitables car les grains possèdent une enveloppe de cellulose extrêmement stable qui ne peut pas être dissoute et qui empêche l'extraction des substances actives se trouvant à l'intérieur de cette enveloppe. Aussi, il existe donc un besoin pour un procédé d'extraction qui permettrait d'améliorer la biodisponibilité des principes actifs contenus dans le pollen en vue de leur utilisation dans les domaines pharmaceutique, cosmétique et nutritionnel. De ce fait, la présente invention vise à répondre à ce besoin en proposant un procédé d'extraction des substances actives issues du pollen, basé sur un système ternaire de solvants. Plusieurs tentatives pour améliorer la biodisponibilité des principes contenus dans le pollen ont déjà été réalisées. On peut citer à cet effet le brevet FR 1 575 114 qui propose de récupérer les constituants recherchés du pollen par une extraction à l'acétone et à l'éther de pétrole. On connaît également la demande de brevet FR 2 777 205 qui recourt à un procédé d'extraction par gaz carbonique supercritique. Toutefois, ces méthodes d'extraction ne permettent pas d'obtenir des teneurs suffisantes en substances actives. En outre, elles sont réalisées à partir de pollens secs passés à l'étuve dont les constituants vitaminiques, aromatiques et protéiques ont été en partie détruits par la chaleur et/ou la conservation en présence d'air et/ou la conservation à température positive. Pour pallier ces inconvénients, la présente invention vise donc un procédé d'extraction basé sur un système ternaire de solvants eau, alcool, alcane, qui permet de récupérer la partie lipidique du pollen, à savoir la partie lipidique interne ou intine et la pellicule grasse ou exine, ainsi que les éléments essentiels qu'elle renferme. Plus particulièrement, la présente invention propose un procédé d'extraction à partir de pollen frais basé sur un système ternaire de solvant eau, isopropanol, hexane. Par pollen on entend toutes les variétés de pollens apicoles. On peut citer comme particulièrement efficace pour la présente invention le pollen de ciste. Par pollen frais on entend du pollen fraîchement récolté, et par pollen congelé à l'état frais on entend du pollen décongelé après conservation par congélation directement après récolte. Avantageusement, le procédé d'extraction selon la présente invention permet un fractionnement du pollen en trois produits: - un tourteau de pollen délipidé, - une phase hydro-alcoolique, et 2881649 3 -un extrait lipidique qui renferme les substances actives. L'extrait lipidique obtenu selon la présente invention contient différents composés intéressants soit pour leur rôle dans la prévention des maladies cardiovasculaires soit pour leurs propriétés anti- radicalaires ou anti-oxydantes. La présente invention concerne ainsi à la fois: - un procédé d'extraction de substances actives à partir de pollen frais ou congelé à l'état frais, - l'extrait contenant les substances actives obtenu, et -les compositions pharmaceutiques, cosmétiques et nutritionnelles susceptibles d'inclure cet extrait. L'invention est maintenant décrite en détail. 1/ PROCEDE D'EXTRACTION Le procédé d'extraction selon la présente invention consiste en la succession des 15 étapes suivantes réalisées à température ambiante: - décongélation du pollen dans le cas de pollen congelé à l'état frais, - réhydratation dans les proportions iL d'eau pour 1Kg de pollen, - dispersion de l'isopropanol dans les proportions iL d'isopropanol pour 1Kg de pollen, - dispersion de l'hexane dans les proportions 2L d'hexane pour 1Kg de pollen, - filtration, - décantation pour récupérer le miscella et éliminer la phase lourde hydroalcoolique et le tourteau résiduel, - désolvatation sous vide de l'extrait lipidique, et - stockage de l'extrait lipidique sous azote. Le procédé selon l'invention comporte donc une seule étape d'extraction qui permet de garantir la sélectivité et de limiter la durée du procédé et le volume du solvant. La réhydratation du pollen avant l'extraction par l'isopropanol et l'hexane permet d'améliorer la dispersion des grains de pollen dans l'alcool isopropylique, la libération des éléments contenus dans le cytoplasme et la standardisation de la polarité du système solvant. 2/CARACTERISATION DE L'EXTRAIT L'extrait obtenu selon la présente invention contient: 15% d'acides gras, et ma joritairement des acides gras polyinsaturés essentiels dont l'acide linoléique et l'acide alphalinolénique, - environ 40% de composants insaponifiables, à savoir: É des cires, É des stérols libres et estérifiés, É des hydrocarbures, É des alcools gras et terpéniques, É des tocophérols, É des caroténo des, É des xanthophylles, notamment de la lutéine et de la zeaxantine, É des phytostérols, et É du sélénium, - des corps microbiens issus de ferments lactiques, - 5% de polyphénol, - 7% d'eau et de composés volatils, et moins de 1% de sucres et de protéines. 2881649 5 3/EFFETS DE L'EXTRAIT OBTENU SELON L'INVENTION L'extrait obtenu selon l'invention contient différentes substances actives qui présentent des propriétés diverses. 3-1/ Effets liés à la présence d'acide linolénique L'acide linolénique est un acide gras essentiel, précurseur de la série métabolique des acides gras poly-insaturés oméga 3 qui ont un effet hypotriglycémiant. L'acide linolénique est notamment responsable de la synthèse de l'acide éicosapentaénoique (EPA), et de l'acide docosahex:aénoique (DHA). De façon générale les acides gras poly-insaturés oméga 3 permettraient de réduire le développement de certaines tumeurs. Ils seraient également susceptibles de prévenir les risques cardiovasculaires primaire et secondaire. Si on s'intéresse plus particulièrement à l'EPA, on sait qu'il entre en compétition avec l'acide arachidonique au niveau de la cyclogénase qui initie leur transformation en éicosano des. L'EPA est transformé en thromboxane qui est beaucoup moins pro-agrégant et hypertensif que l'éicosanoide issu de l'acide arachidonique. La présence d'EPA a donc un effet favorable sur les maladies cardiovasculaires. En ce qui concerne le DHA, c'est un constituant majeur des phospholipides membranaires. Il joue donc un rôle structural au niveau des cellules nerveuses telles que les neurones du cerveau, ou d'origine nerveuse telles que les cellules de la rétine. Il intervient également dans les fonctions associées à ces cellules c'est-à-dire les fonctions cognitives telles que l'apprentissage ou la vision. 3-2/ Effets liés à la présence de Carotènes Il existe plusieurs types de caroténoides dont les carotènes. Les carotènes sont des piégeurs d'oxygène singulet ce qui leur confère des propriétés anti-oxydantes et anti-radicalaires. Ils sont connus comme ayant une activité anti-tumorale et anti-athérome. Les carotènes sont des précurseurs de la vitamine A dite rétinole qui joue un rôle dans la fonction visuelle. La vitamine A agit également sur l'intégrité des tissus et des muqueuses à savoir sur la croissance, la détoxification et la résistance aux infections. 3-3/ Effets liés à la présence de Xanthophylles Les xanthophylles ont un effet antioxydant. Parmi les xanthophylles présents dans l'extrait de pollen obtenu selon la présente invention, on retrouve notamment la lutéine et la zéaxantine, en particulier dans le pollen de saule, qui sont des antioxydants spécifiques de la rétine et du cristallin. Ces deux antioxydants sont particulièrement efficaces pour protéger de la cataracte et pour lutter contre la dégénérescence maculaire liée à l'âge. La lutéine présente également de bonnes propriétés protectrices et régénératrices des effets des rayons ultraviolets sur la peau. 3-4/ Effets liés à la présence de Phytostérols Les phytostérols sont des constituants terpéniques majoritaires des insaponifiables végétaux. Ils ont une structure moléculaire proche du cholestérol et présentent également des analogies de structure avec d'autres composés biologiquement actifs, tels que les flavonoides. Les phytostérols ont une action hypocholestérolémiante. Ils provoqueraient une diminution de l'absorption du cholestérol par compétition avec ce dernier au niveau de la formation des micelles dans l'intestin. Ils agiraient également sur certains enzymes du métabolisme lipidique. Les phytostérols sont capables à la fois de prévenir et de contrôler une légère hypercholestérolémie. Les phytostérols agissent également sur l'excrétion des sels biliaires et peuvent donc être utilisés pour prévenir des cancers colorectaux. Enfin, les phytostérols sont connus pour leur activité anti-virale et pour leur effet inhibiteur de la prolifération cellulaire. 3-5/ Effets liés à la présence de Tocophérols Le tocophérol est un précurseur de la vitamine E. La vitamine E est un anti-oxydant biologique des acides gras poly-insaturés qui agit principalement au niveau des membranes et des lipoprotéines, par piégeage des radicaux libres, et qui permet donc de prévenir le vieillissement cutané. La vitamine E intervient également dans la prévention des maladies cardiovasculaires, notamment en agissant en synergie avec d'autres nutriments. Il semble que la vitamine E puisse aussi jouer un rôle dans la prévention de certains cancers. La vitamine E permettrait également de stimuler la réponse immunitaire chez les personnes âgées, de réduire le risque de cataracte et de retarder la progression des maladies neurovégétatives. 3-6/ Effets liés à la présence de Sélénium Le sélénium est un oligoélément essentiel qui agit en synergie avec la vitamine E. C'est le coenzyme de la glutathion peroxydase qui protège contre l'agression des radicaux libres capables d'endommager les membranes cellulaires et le noyau, favorisant la cancérisation et le vieillissement. Le sélénium est donc un agent préventif du cancer. Le Sélénium est également indispensable à la croissance cellulaire. Il possède aussi une activité anti-nécrose hépatocytaire. Finalement, le sélénium constitue un anti-oxydant intracellulaire efficace. 4/COMPOSITIONS SUSCEPTIBLES D'INCLURE L'EXTRAIT OBTENU SELON L'INVENTION La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques, les produits pharmaceutiques et les compléments alimentaires incluant l'extrait obtenu selon la présente invention. 2881649 8 4-1/Compositions cosmétiques L'extrait obtenu selon la présente invention possède des propriétés physicochimiques, une texture et des propriétés de dispersion qui permettent de l'inclure dans des formulations cosmétiques se présentant sous différentes formes galéniques, notamment solution aqueuse, éventuellement gélifiée, dispersion huile dans l'eau ou inversement, émulsion, crème, pommade, lait, lotion, sérum, pâte ou mousse, baume, soin. Parmi les compositions cométiques susceptibles de l'inclure, on peut citer notamment les baumes cicatrisant et régénérant, ainsi que les crèmes et soins anti-rides. 4-2/Produits pharmaceutiques Les propriétés de l'extrait obtenu selon la présente invention permettent de l'inclure dans des compositions pharmaceutiques destinées en particulier à l'administration: - par voie orale, notamment sous forme de capsule, granulé, poudre, support pulvérulent, émulsion buvable, etc., et - par voie locale, notamment sous forme d'émulsion, crème, pommade, lotion, patch, etc. 4-3/Compléments alimentaires L'extrait obtenu selon la présente invention répond aux critères de l'alimentarité. Il peut donc être incorporé dans des compléments alimentaires ou des produits nutraceutiques. 9 REVENDICATION: 1. Procédé d'extraction de substances actives issues de grains de pollen frais ou congelé à l'état frais, caractérisé en ce qu'il consiste à extraire la partie lipidique des grains par un système ternaire de solvants eau, alcool, alcane. 2. Procédé d'extraction selon la revendication 1, caractérisé en ce que les solvants dudit système ternaire de solvants sont l'eau, 1' isopropanol et l'hexane. 3. Procédé d'extraction selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il consiste en la succession des étapes suivantes: -réhydratation du pollen, - dispersion de l'alcool, - dispersion de l'alcane, - filtration, - décantation pour éliminer la phase lourde hydro-alcoolique et le tourteau résiduel, et récupérer l'extrait lipidique, désolvatation sous vide de l'extrait lipidique, et - stockage de l'extrait sous azote. 4. Procédé d'extraction selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il consiste en la succession des étapes suivantes: réhydratation du pollen, - dispersion de l'isopropanol, dispersion de l'hexane, - filtration, - décantation pour éliminer la phase lourde hydroalcoolique et le tourteau résiduel, et récupérer l'extrait lipidique, désolvatation sous vide de l'extrait lipidique, et -stockage de l'extrait sous azote. 15 20 5. Procédé d'extraction selon l'une quelconque des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'on réhydrate le pollen dans les proportions IL d'eau pour 1Kg de pollen, et en ce qu'on disperse l'alcool et l'alcane dans les proportions iL d'alcool et 2L d'alcane pour 1Kg de pollen. 6. Procédé d'extraction selon l'une quelconque des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'on réhydrate le pollen dans les proportions 1L d'eau pour 1Kg de pollen, et en ce qu'on disperse l'isopropanol et l'hexane dans les proportions iL d'isopropanol et 2L d'hexane pour 1Kg de pollen. 7. Extrait de pollen obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une 10 quelconque des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il contient: - 15% d'acides gras, - 40% de composants insaponifiables, - des ferments lactiques, - 5% de polyphénol, - 7% d'eau et de composés volatils, et - moins de 1% de sucres et de protéines. 8. Composition cosmétique incluant l'extrait selon la revendication 7, caractérisée en ce qu'elle est constituée d'une solution aqueuse, d'une solution aqueuse gélifiée, d'une dispersion huile dans l'eau, d'une dispersion eau dans l'huile, d"une émulsion, d'une crème, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse, d'un baume ou d'un soin. 9. Composition pharmaceutique incluant l'extrait selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'elle est se présente sous forme de capsule, granulé, poudre, support pulvérulent, émulsion buvable, crème, pommade, lotion ou patch.