FR 2864082 A1 20050624 FR 0315160 A 20031222 La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de la morphine 6- glucuronide, leur procédé de préparation ainsi que leurs utilisations en thérapie, notamment en tant qu'analgésiques. La morphine est actuellement l'analgésique le plus utilisé dans le traitement des douleurs de moyenne et de grande intensité. On distingue au niveau du système nerveux central trois classes principales de récepteurs opioïdes: p (mu), x (kappa) et b (delta). La morphine, de même que d'autres opioïdes, produisent leurs principaux effets sur le système nerveux central et le système digestif par l'intermédiaire des récepteurs p-opioïdes. Il existe deux sous-types de récepteurs p: le type p1 de très haute affinité et faible capacité, et le type p2 de basse affinité et forte capacité (Pasternak & Wood, 1986. Life Sci 38:1889-1898). La liaison aux récepteurs p1 entraîne une réaction analgésique de type supraspinal et la diminution du turnover de l'acétylcholine, tandis que la liaison aux récepteurs p2 entraîne une réaction analgésique de type spinal et est responsable de la dépression respiratoire et de l'inhibition du transit intestinal. Les mécanismes par lesquels la morphine exerce son action analgésique ne sont pas encore complètement élucidés. On sait qu'elle subit un important métabolisme, qui conduit à des métabolites dont certains contribuent à son action analgésique. Le foie apparaît comme le site principal de sa biotransformation. La morphine subit principalement une glucuronidation énantio-sélective catalysée par l' UDP-glucuronyltransférase (UGT) qui conduit à la formation de deux métabolites: la morphine-3-glucuronide (ciaprès également désignée M3G ) et la morphine-6-glucuronide (ci-après également désignée M6G ). Il a été démontré que la modification de la position 3-hydroxy de la morphine diminuait l'activité analgésique, alors que des modifications de la position 6-hydroxy peuvent, au contraire, augmenter l'activité analgésique (Aderjan & Skopp, 1998, Therapeutic Drug Monitoring 20:561-569). Ainsi, la M3G n'a pas d'affinité pour les récepteurs opioïdes et ne participe pas à l'activité analgésique de la morphine. En revanche, la morphine-6-glucuronide a une forte affinité pour les récepteurs opioïdes et il a été démontré qu'elle a un effet analgésique aussi bien chez les rongeurs que chez l'homme. La M6G a été décrite comme étant un analgésique plus puissant que la morphine elle-même après une administration centrale (Paul et al, 1989. J Pharmacol. Exp. Ther. 49; 6280-6284; Frances et al, 1992. J Pharmacol. Exp. Ther. 262; 25-31) et ayant la même activité par voie systémique. Des études de liaison ligand-récepteur aux opiacés réalisées in vitro ont montré que la M6G se liait aux récepteurs opioïdes et qu'elle était 3 à 5 fois moins affine pour les récepteurs p que la morphine (Christensen & Jorgensen 1987. Pharmacol Toxicol.60:75-76; Frances et al, 1992 J Pharmacol. Exp. Ther. 262; 25-31). D'autres métabolites de la morphine, en particulier la normorphine, ont montré une certaine activité analgésique. Cependant, ces autres métabolites sont présents en de faibles concentrations et ne sont pas susceptibles de contribuer de manière significative à l'effet global de la morphine. Toutefois, malgré sa grande efficacité, le traitement de la douleur par la morphine s'accompagne d'effets secondaires indésirables tels que: dépression respiratoire, inhibition du transit intestinal, nausées, vomissements, et surtout syndrome de dépendance et induction de tolérance. On a donc cherché à mettre au point d'autres substances actives, présentant une efficacité analgésique comparable à la morphine, mais n'ayant pas tout ou partie de ses effets secondaires indésirables. Bien entendu, en raison de son activité analgésique exposée plus haut, on a proposé d'utiliser la M6G en tant que substitut de la morphine. On peut, à cet égard, faire référence à la demande internationale WO 95/05831 visant l'utilisation d'une composition pharmaceutique pour administration orale, contenant de la M6G, pour le traitement de la douleur. La demande internationale WO 99/64430 décrit une méthode pour la synthèse de la M6G et de ses intermédiaires. Le brevet US 5,621,087 décrit un nouveau procédé pour la préparation de la M6G ou de certains de ses dérivés. La M6G, qui, on l'a vu, présente des propriétés analgésiques comparable à la morphine, a pour avantage de diminuer nausées et vomissements. Toutefois, la M6G ne contribue pas à la suppression d'autres effets indésirables de la morphine, à savoir la dépression respiratoire et le syndrome de dépendance (Osborne et al, 1992. Br. J. Clin. Pharmac 34:130138). Le brevet US 6,150,524 décrit des procédés pour la synthèse d'autres dérivés de la morphine, qui sont dits présentés des propriétés analgésiques fortes et qui peuvent être administrés par voie orale. Il est également connu que l'association d'un composé se liant aux récepteurs p et d'un composé se liant aux récepteurs K, présente un effet analgésique puissant sans les effets secondaires de dépendance physique et de dépression respiratoire (Rothman et al 2000; J Subst Abuse Treat 19:277-281; Shook et al, 1990 Am Rev Respir Dis 142:895-909). Cependant, à la connaissance des inventeurs, il n'existe pas d'analgésique d'une efficacité comparable à celle de la morphine ou de la M6G, mais qui ne présente pas, ou moins, d'effets secondaires, notamment en ce qui concerne la dépendance physique et la dépression respiratoire. La présente invention a alors pour principal objet de nouveaux composés, dérivés de la M6G, qui permettent de résoudre ce problème. Plus particulièrement, les composés de l'invention présentent l'avantage de posséder une affinité pour les récepteurs K plus grande que la M6G sans pour autant présenter une affinité réduite pour les récepteurs p afin d'obtenir un composé ayant une activité analgésique puissante mais moins d'effets 25 secondaires, Dans le cadre de leurs travaux de recherche, les inventeurs ont ainsi pu déterminer que la modification de la M6G par substitution à l'aide d'un groupement porteur d'une fonction thiol permet d'augmenter de façon significative l'affinité pour les récepteurs K sans pour autant diminuer celle pour 30 les récepteus p. L'invention concerne ainsi un composé de formule (I) HO (I) dans laquelle: - RI représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1-C1o, non substitué ou substitué par au moins un substituant, la chaîne alkyle étant éventuellement interrompue par un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi O, S et NH, - R2 représente l'hydrogène, un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1- 05 ou un groupe aryle ou hétéroaryle monocyclique ou (C1-05)alkylaryle, non substitué ou substitué par un alkyle en C1-C4. Lorsque RI représente un groupe alkyle substitué par un ou plusieurs substituants, le (ou les) substituant(s) est (sont) par exemple choisi(s) parmi:un groupe alkyle en C1-05; amino; carboxyle, carboxylamino; -COOR3 où R3 représente l'hydrogène, ou un groupe alkyle en C1-05; une cétone en CIC10; un aldéhyde en CI-Clo. Lorsque R2 représente un groupe aryle ou hétéroaryle monocyclique, celuici peut par exemple être choisi parmi les groupes phényle, thiophényle, pyridyle, pyrrolyle, pyrazolyle, furanyle, ou indolyle. Lorsque R2 représente un groupe alkylaryle, celui-ci peut par exemple être le benzyle. Un composé préféré selon l'invention est un composé de formule (I) 20 cidessus dans laquelle RI représente (CH2)2 et R2 est l'hydrogène. Un tel composé est appelé M6G-cystéamide. D'autres composés avantageux de formule (I) sont, par exemple, ceux dans lesquels: - RI représente un groupe CH2-CH(COOR4) dans lequel R4 25 représente hydrogène, méthyle ou éthyle, et R2 représente l'hydrogène; RI représente un groupe -CH(COOH)-CH(CH3)2-, et R2 représente l'hydrogène; - RI représente un groupe -CH(NH2)-(CH2)2-C(0)-NH-CH(R5)-CH2-, dans lequel R5 représente -C(0)-NH-CH2-COOH, et R2 représente 5 l'hydrogène. L'invention concerne également, selon un aspect ultérieur, un procédé pour la préparation des composés de formule (I). Ledit procédé comprend les étapes consistant à faire réagir la morphine-6glucuronide avec un composé de formule (Il) NHR2-R1-S-S-R1- NHR2, dans laquelle RI et R2 sont tels que définis ci-dessus, en présence d'un agent de couplage et à réduire le pont disulfure à l'aide d'un agent réducteur. De préférence, la réaction de la morphine-6-glucuronide avec le composé de formule (II) a lieu en milieu basique. On utilisera par exemple un composé de formule (Il) dans laquelle R2 est l'hydrogène et RI représente un groupe -(CH2)2-, dénommé cystamine. A titre d'agent de couplage, on peut citer les agents de couplages habituellement utilisés en synthèse peptidique, tels que le benzotriazol1-yl-oxytris-pyrrolidino-phosphonium hexafluorophosphate (PyBOP), la dicyclohexylcarbodiimide (DCC), la DCC associée à l'hydroxybenzotriazole (DCC/HOBT) ou la diisopropylcarbodiimide associée à l'HOBT (DIPCDI/ HOBT). On utilisera de préférence l'agent de couplage en excès molaire d'environ 2,2 à 4 équivalents molaires pour 1 équivalent molaire de composé de formule (II). Le couplage est de préférence réalisé à température ambiante, dans un solvant polaire tel que par exemple le diméthylformamide (DMF), la Nméthylpyrrolidone (NMP), le dichlorométhane ou l'acétonitrile. A titre d'agent réducteur, on peut citer par exemple la tris(2carboxyéthyl)phosphine, la triphénylphosphine, la tris(hydroxyméthyl)phosphine ou le dithiothréitol. On utilisera de préférence l'agent réducteur en excès molaire d'environ 1, 1 à 5 équivalents. La réduction a lieu de préférence à température ambiante et à un pH inférieur à 7. Selon un autre aspect de l'invention, le composé de formule (I) peut être obtenu par un procédé comprenant les étapes consistant à faire réagir la morphine-6-glucuronide avec un composé de formule (III) NHR2-RI-SH, dans laquelle RI et R2 sont tels que définis ci-dessus, en présence d'un agent de couplage et à réduire in situ les sous-produits d'oxydation à l'aide d'un agent réducteur. De préférence, la réaction de la morphine-6-glucuronide avec le 10 composé de formule (III) a lieu en milieu basique. On peut notamment utiliser un composé de formule (III) dans laquelle R2 est l'hydrogène et RI représente un groupe -(CH2)2-, dénommé cystéamine. A titre d'exemples de composés de formule (III), on peut également citer la pénicillamine ou la glutathione. A titre d'agent de couplage, on peut utiliser les agents de couplages habituellement utilisés en synthèse peptidique, tels que ceux cités cidessus. On utilisera de préférence l'agent de couplage en excès molaire d'environ 1,1 à 2 équivalents molaires pour 1 équivalent molaire de morphine-6glucuronide. Le couplage est de préférence réalisé à température ambiante, dans un solvant polaire tel que par exemple le diméthylformamide (DMF), la Nméthylpyrrolidone (NMP), le dichlorométhane ou l'acétonitrile. L'agent réducteur peut être choisi parmi les agents réducteurs habituellement utilisés en chimie peptidique tels que ceux cités cidessus. On utilisera de préférence l'agent réducteur en excès molaire d'environ 1, 1 à 5 équivalents. La réduction a lieu de préférence à température ambiante et à un pH inférieur à 7. L'invention concerne également une composition pharmaceutique 30 contenant à titre de principe actif un composé de formule (I) tel que décrite cidessus ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, et un au moins un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Par " sel pharmaceutiquement acceptable", on entend par exemple et de manière non limitative un acétate, un sulfate ou un chlorhydrate. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention se présentera sous une forme appropriée pour une administration: - par voie parentérale, comme par exemple, sous forme de préparations injectables par voie sous-cutanée, intraveineuse ou intramusculaire; - par voie orale, comme par exemple, sous forme de comprimés enrobés ou non, de gélules, de poudres, de granulés, de suspensions ou de solutions orales. Une telle forme pour l'administration par voie orale peut être soit à libération immédiate, soit à libération prolongée ou retardée. De telles formes à libération prolongée ou retardée sont décrites, par exemple, dans les demandes EP 253 104 ou EP 576 643; - par voie rectale, comme par exemple, sous forme de 15 suppositoires; - par voie topique, notamment transdermique, comme par exemple, sous la forme de " patch ", de pommade ou de gel. - par voie intranasale, comme par exemple sous forme d'aérosols et " sprays ", - par voie perlinguale, - par voie intraoculaire. Le véhicule pharmaceutiquement acceptable peut être choisi parmi les véhicules utilisés de manière classique selon chacun des modes d'administration. L'invention concerne également l'utilisation d'un composé de formule (I) ou d'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables pour la fabrication d'un médicament utile pour le traitement de la douleur, en particulier pour le traitement de douleurs aiguës ou des douleurs chroniques, de douleurs neuropathiques, musculaires, osseuses, post-opératoires, de la migraine, les douleurs du cancer, les lombalgies, les douleurs arthrosiques, les douleurs associées au diabète ou les douleurs associées au SIDA. L'invention est illustrée de manière non limitative par les exemples cidessous. Exemple 1: synthèse de la M6G-cystéamide La synthèse a été réalisée selon le schéma ci-dessous. H2N,SNH2 Cystamine PyBOP, DIEA DMF OH O O O \ OH 1HO M6G OH,OH HO Tris(2-carboxyethyl)phosphine Eau - acetonitrile HO O O I NS'' H H OH M6G-cystéamide Dans un réacteur (tube falcon) on a solubilisé 1 équivalent molaire de cystamine sous sa forme chlorhydrate dans du diméthylformamide (DMF) à g/l, puis on a ajouté 4 équivalents molaires de diisopropyléthylamine (DIEA). On a vérifié que le pH était basique (>_ 9). On a additionné 2 équivalents molaires de M6G en poudre, 2,4 15 équivalents molaires de benzotriazol-1-yl-oxy-tris-pyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (PyBOP) préalablement solubilisé dans du DMF à 100 g/I, puis on a vérifié que le pH était toujours basique. On a laissé réagir pendant 2h sous agitation à température ambiante. La réaction a été suivie par HPLC et Spectrométrie de Masse (MS). On a alors réduit le pont disulfure par la Tris(2-carboxyéthyl)phosphine (3 équivalents molaires) à 30 mg/ml dans un mélange acétonitrile/H20 (50/50), acide trifluoroacétique 0,1%). La réaction est suivie par HPLC et MS. Après 12h de réaction sous agitation, le produit brut est alors purifié par HPLC préparative. On obtient après lyophilisation le produit M6G-cystéamide avec un rendement global de l'ordre de 70%. Exemple 2: synthèse de la M6G-cystéamide La synthèse a été réalisée selon le schéma ci-dessous. 1) Cysteamine PyBOP, DIEA p 2) Tris(2-carboxyethyl)phosphine HO O"p O OH OH M6G OH M6G-cystéamide Dans un réacteur (tube falcon) on a solubilisé 4 équivalents molaires de cystéamine sous sa forme chlorhydrate dans du DMF à 15 g/l, puis on a ajouté 4 équivalents molaires de DIEA. On a vérifié que le pH était basique (>_ 9). Après 2h de réaction, on a additionné 1 équivalent molaire de M6G en poudre, 1,2 équivalent molaire de PyBOP préalablement solubilisé dans du DMF à 100 g/I, puis on a vérifié que le pH était toujours basique. On a laissé réagir pendant 2h sous agitation. La réaction a été 25 suivie par HPLC et Spectrométrie de Masse (MS). On a alors réduit le pont disulfure des sous-produits d'oxydation, générés lors du couplage en milieu basique, au moyen de Tris(2carboxyéthyl)phosphine (3 équivalents molaires) à 30 mg/ml dans un mélange acétonitrile/H2O (50/50), acide trifluoroacétique 0,1%). La réaction a été suivie par HPLC et MS. Après 12h de réaction sous agitation, le produit brut est purifié par HPLC. On a obtenu, après lyophilisation, le produit M6G-cystéamide avec un rendement global de l'ordre de 70%. Exemple 3: étude de l'effet analgésique Pour cette étude, on a utilisé le test dit de " tait flick ". Ce test consiste à placer la queue d'une souris devant une source d'infrarouge à un temps donné après l'administration du produit testé, pris comme temps O. La lumière est focalisée sur la surface ventrale de la queue de façon à produire une température de surface de 55 C. On mesure alors le temps de latence entre l'administration du produit testé et le moment où la souris bouge la queue. Les composés étudiés, à savoir la M6G et la M6G-cystéamide ont été administrés par voie sous-cutanée à une dose de 2 mg/kg (10 souris par groupe). Trois mesures ont été faites avant administration du produit testé pour avoir un temps de base. Le temps de latence pour une même souris a été mesuré à différents temps allant de 15 min à 240 min après l'injection du produit. Un temps maximum de 10 s a été choisi comme temps maximum de réaction. Les résultats obtenus sont représentés sur la figure 1. Ces résultats montrent que la M6G et la M6G-cystéamide ont une activité analgésique similaire. Ainsi, le groupe cystéamide n'altère pas l'activité analgésique du produit. Exemple 4: étude de l'affinité aux récepteurs opioïdes 4.1/ Mode opératoire On a comparé l'affinité de la M6G à celle de la M6G-cystéamide pour les récepteurs opioïdes p (mu) et x (kappa). Pour déterminer l'affinité aux récepteurs p, des homogénats de membrane du cortex cérébral du rat (200pg de protéine) ont été incubés avec soit la M6G, soit la M6G-cystéamide et 1 nM de [3H][D-Ala2, MePhe4, Gly(ol)5] enkephalin (DAMGO) pendant 60 min à 22 C dans un tampon contenant 50 mM Tris-HCI [pH 7,7]. Pour déterminer l'affinité aux récepteurs K, des homogénats de membrane de cervelet du cobaye (250 dag de protéine) ont été incubés avec soit la M6G, soit la M6G-cystéamide et 0,7 nM [3H]U 69593 (80 min à 22 C) dans un tampon contenant 50 mM Tris-HCI [pH 7,4], 10 mM MgCl2, 1 mM EDTA. On a utilisé des concentrations en M6G et M6G-cystéamide de 10-10 à 106 M. La liaison non spécifique a été déterminée grâce à l'addition aux ligands marqués de 10 pM naloxone. Après incubation, les échantillons ont été filtrés sur des fibres de verre (GF/B, Packard) préalablement incubées avec 0,3% de polyéthylèneimine et rincées plusieurs fois avec 50 mM de Tris-HCI froid en utilisant un " 96sample cell harvester " (Unifilter, Packard). Les filtres ont été ensuite séchés et la radioactivité comptée. 4.2/ Résultats Les résultats sont rapportés dans le tableau 1 ci-dessous. Tableau 1: Affinité aux récepteurs u et K (Ki exprimé en nM). composé récepteurs p récepteurs K M6G 3,8 1860 M6G-cystéamide 0,32 2,7 Les résultats montrent que: - la M6G se lie aux récepteurs p avec un Ki= de 3,8 nM indiquant une affinité pour ces récepteurs. En revanche, la valeurs de Ki pour les récepteurs K, de l'ordre de 1860 nM indiquent qu'aucune affinité n'est observée pour ces récepteurs. - l'affinité de la M6G-cystéamide pour les récepteurs K (Ki = 2,7) est augmentée de façon spectaculaire par rapport à celle de la M6G (environ 600 fois), du fait de l'adjonction du groupement cystéamide, sans que l'affinité pour les récepteurs p ne diminue. On observe même une augmentation de cette affinité d'un facteur 10 environ. REVENDICATIONS 1. Composé de formule (I) H N O HO O O U O '- N\_R 1 Ho R2 SH OH OH dans laquelle: - R1 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1-C10, substitué ou non par au moins un substituant, la chaîne alkyle étant éventuellement interrompue par un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi O, S et NH, - R2 représente l'hydrogène, un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C1- 05 ou un groupe aryle ou hétéroaryle monocyclique ou (C1-05)alkylaryle, non substitué ou substitué par un alkyle en C1-C4. ainsi qu'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables 2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que R1 15 représente (CH2)2 et R2 est l'hydrogène. 3. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les composés de formule (I) dans laquelle: - R1 représente un groupe CH2-CH(COOR4) dans lequel R4 représente hydrogène, méthyle ou éthyle, et R2 représente l'hydrogène; ou - R1 représente un groupe CH(COOH)-CH(CH3)2 , et R2 représente l'hydrogène;ou - R1 représente un groupe CH(NH2)-(CH2)2-C(0)-NH-CH(R5)-CH2 , dans lequel R5 représente -C(0)-NH-CH2-COOH, et R2 représente l'hydrogène. (I) 4. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à faire réagir la morphine-6-glucuronide avec un composé de formule (II) NHR2-R1-S-S-R1-NHR2, dans laquelle RI et R2 sont tels que définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 3, en présence d'un agent de couplage, et à réduire le pont disulfure à l'aide d'un agent réducteur. 5. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à faire réagir la morphine-6-glucuronide avec un composé de formule (III) NHR2-RI-SH, dans laquelle RI et R2 sont tels que définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 3, en présence d'un agent de couplage et à réduire in situ les sous-produits d'oxydation à l'aide d'un agent réducteur. 6. Procédé selon l'une des revendications 4 ou 5, caractérisé en ce que l'agent de couplage est choisi parmi que le benzotriazol-1-yl-oxytrispyrrolidino-phosphonium hexafluorophosphate (PyBOP), la dicyclohexylcarbodiimide (DCC), la DCC associée à l'hydroxybenzotriazole (DCC/HOBT) et la diisopropylcarbodiimide associée à l'HOBT (DIPCDI/ HOBT). 7. Procédé selon l'une des revendications 4 à 6, caractérisé en ce que l'agent réducteur est choisi parmi la tris(2-carboxyéthyl)phosphine, la triphénylphosphine, la tris(hydroxyméthyl)-phosphine et le dithiothréitol. 8. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 9. Composition pharmaceutique selon la revendication 8, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme administrable par voie parentérale. 10. Composition pharmaceutique selon la revendication 8, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de préparation injectable par 30 voie sous-cutanée, intraveineuse ou intramusculaire. 11. Composition pharmaceutique selon la revendication 8, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme administrable par voie orale. 12. Composition pharmaceutique selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle présente une activité prolongée ou retardée. 13. Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 ou d'une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement de la douleur.