FR 2868421 A1 20051007 FR 0403421 A 20040401 2868421 1 NOUVEAUX BENZOTHIAZOLES ET LEUR UTILISATION COMME MEDICAMENTS La présente invention concerne notamment de nouveaux composés chimiques, particulièrement de nouveaux dérivés des benzothiazoles, les compositions les contenant, et leur utilisation comme médicaments. Plus particulièrement, l'invention concerne de nouveaux esters sulfoniques des benzothiazoles présentant une activité anticancéreuse, via la modulation de l'activité de protéines, en particulier des kinases. A ce jour, la plupart des composés commerciaux utilisés en chimiothérapie sont des cytotoxiques qui posent des problèmes importants d'effets secondaires et de tolérance par les patients. Ces effets pourraient être limités dans la mesure où les médicaments utilisés agissent sélectivement sur les cellules cancéreuses, à l'exclusion des cellules saines. Une des solutions pour limiter les effets indésirables d'une chimiothérapie peut donc consister en l'utilisation de médicaments agissant sur des voies métaboliques ou des éléments constitutifs de ces voies, exprimés majoritairement dans les cellules cancéreuses, et qui ne seraient pas ou peu exprimés dans les cellules saines. Les protéines kinase sont une famille d'enzyme qui catalysent la phosphorylation de groupes hydroxy de résidus spécifiques de protéines tels que des résidus tyrosine, sérine ou thréonine. De telles phosphorylations peuvent largement modifier la fonction des protéines; ainsi, les protéines kinases jouent un rôle important dans la régulation d'une grande variété de processus cellulaires, incluant notamment le métabolisme, la prolifération cellulaire, la différentiation cellulaire, la migration cellulaire ou la survie cellulaire. Parmi les différentes fonctions cellulaires dans lesquelles l'activité d'une protéine kinase est impliquée, certains processus représentent des cibles attractives pour traiter les maladies cancéreuses ainsi que d'autres maladies. Ainsi, un des objets de la présente invention est de proposer des compositions ayant une activité anticancéreuse, en agissant en particulier vis-à-vis de kinases. Parmi les kinases pour lesquelles une modulation de l'activité est recherchée, les kinases cycline dépendantes ainsi que Aurora-2 sont préférées. La progression du cycle cellulaire est souvent gérée par des kinases cycline dépendantes (CDK) qui sont activées par une interaction avec des proteines appartenat à la famille des cyclines, activation qui se termine par la phosphorylation de substrats et finalement par la division cellulaire. En plus les inhibiteurs endogènes des CDK qui sont activés (famille des INK4 et des KIP/CIP) régulent de façon negative l'activité des CDK. La croissance des cellules normales est due à une balance entre les activateurs des CDK (les cyclines) et les inhibiteurs endogènes des CDK. Dans plusieurs types de cancers, l'expression ou l'activité abérante de plusieurs de ces régulateurs du cycle cellulaire a été décrite. La cycline E active la kinase Cdk2 qui agit ensuite pour phosphoryler la protéine pRb (protéine du rétinoblastome) résultant en un engagement dans la division cellulaire irréversible et une transition vers la phase S (PL Toogood, Medicinal Research Reviews (2001), 21(6) ; 487-498. La kinase CDK2 et peut être CDK3 sont nécessaires pour la progression dans la phase G1 et l'entrée en phase S. Lors de la formation de complexe avec la cycline E, elles maintiennent l'hyperphosphorylation de pRb pour aider la progression de la phase G1 en phase S. Dans les complexes avec la Cycline A, CDK2 joue un rôle dans l'inactivation de E2F et est nécessaire pour la réalisation de la phase S (TD. Davies et al. (2001) Structure 9, 389-3). Le complexe CDKI/cycline B régule la progression du cycle cellulaire entre la phase G2 et la phase M. La régulation négative du complexe CDK/Cycline B empêche les cellules normale d'entrer en phase S avant que la phase G2 ait été correctement et complètement réalisée. (K.K. Roy and E.A. Sausville Current Pharmaceutical Design, 2001, 7, 1669-1687. Un niveau de régulation de l'activité des CDK existe. Les activateurs de cycline dépendantes kinases (CAK) ont une action positive de régulation des CDK. CAK phosphoryle les CDK sur le résidu thréonine pour rendre l'enzyme cible totalement active. La présence de défauts dans les molécules intervenant sur le cycle cellulaire entraîne l'activation des CDK et la progression du cycle, il est normal de 2868421 3 vouloir inhiber l'activité des enzymes CDK pour bloquer la croissance cellulaire des cellules cancéreuses. De nombreuses protéines impliquées dans la ségrégation des chromosomes et l'assemblage du fuseau ont été identifiées dans la levure et la drosophile. La désorganisation de ces protéines conduit à la non-ségrégation des chromosomes et à des fuseaux monopolaires ou désorganisés. Parmi ces protéines, certaines kinases, dont Aurora et!pli, provenant respectivement de drosophile et de S. cerevisiae, sont nécessaires pour la ségrégation des chromosomes et la séparation du centrosome. Un analogue humain de Ip11 de levure a été récemment cloné et caractérisé par différents laboratoires. Cette kinase, nommée aurora2, STK15 ou BTAK appartient à la famille des kinases à sérine/thréonine. Bischoff et al. ont montré que Aurora2 est oncogène, et est amplifié dans les cancers colorectaux humains (EMBO J, 1998, 17, 3052-3065). Cela a également été exemplifié dans des cancers impliquant des tumeurs épithéliales telles que le cancer du sein. La présente invention concerne de nouveaux dérivés des benzothiazoles. Elle concerne ainsi l'utilisation des dérivés des benzothiazoles comme agents d'inhibition des kinases et plus particulièrement comme agent anticancéreux. Parmi ceux ci elle concerne préférentiellement les esters sulfoniques des benzothiazoles. Elle concerne également l'utilisation desdits dérivés pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de l'homme. Parmi l'art antérieur connu à ce jour décrivant les esters sulfoniques des benzothiazoles on peut citer la demande de brevet publiée JP 0539036 qui décrit un procédé de préparation de dérivés de formule générale suivante: où Y1 peut représenter un atome de soufre, n peut être égal à zéro, Z peut être un groupe acylamino les groupes X1, X2, X3, X4, sont égaux à H ou peuvent représenter un groupe alkylsulfonyoxy. Parmi l'immense majorité des composés inclus dans la formule générale du brevet ci-dessus référencé aucun des exemples ne décrit de composés correspondant aux composés actifs selon l'invention ni même ne décrit la synthèse de benzothiazoles. Les composés selon l'invention répondent à la formule générale (I) suivante: O X Ar R il N / ôO (I) O dans laquelle É X représente un groupe choisi parmi une liaison covalente, (CH2)n, avec n égal à 1 ou 2 É Ar représente un groupe aryle ou hétéroaryle; ce groupe est éventuellement substitué par un groupe choisi parmi les groupes alkyles, halogènes, NR1R2 (RI et R2 étant choisis parmi les groupes hydrogène, alkyles, cycloalkyles ou ensemble peuvent former un radical hétérocyclique ou hétéroaryle, ces groupes étant eux même éventuellement substitués), SO2alk, Salkyl, alkoxy, hétéroaryles, ou aryles É R représente un groupe choisi parmi l'hydrogène, un groupe alkyle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aryle, heteroaryle, alkoxy, cycloalkoxy, hétérocycloalkoxy, amino; R peut être éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes choisis parmi les mêmes radicaux que ceux définis pour R. Les éventuels substituants du groupes RI et R2 sont choisis notamment parmi 25 les groupes hydroxy, hétéroaryles, cycloalkyle, aminoalkyles. On entend au sens de la présente invention par groupe alkyle des chaînes droites ou ramifiées contenant 1 à 10 atomes de carbone. On entend au sens de la présente invention par groupe cycloalkyle des chaînes alkyles cycliques contenant 3 à 10 atomes de carbone. On entend au sens de la présente invention par groupe hétérocycloalkyle des chaînes alkyles cycliques contenant 3 à 10 atomes de carbone et contenant au moins un hétéroatome choisis parmi O, N ou S. On entend au sens de la présente invention par groupe NR1R2 des groupes 5 amino de préférence secondaire c'est à dire des groupes pour lesquels au moins un des substituants est l'hydrogène. Tous ces groupes sont éventuellement substitués par un groupe alkyle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, hétéroaryle, aryle, amino, hydroxy, alkoxy ou halogène. On entend au sens de la présente invention par radicaux aryle et hétéroaryle les radicaux monocycliques comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi O, N et S ou les radicaux fusionnés à un autre cycle comportant 5 ou 6 chaînons et éventuellement un à trois hétéroatomes choisis parmi O, N et S. De préférence parmi les radicaux aryles ou hétéroaryles on peut citer les groupes phényle, pyridyle, pyrimidine, triazine, pyrrolyle, imidazolyle, thiazolyle, furyle, thiényle, indolyle, azaindazolyle, isobenzofuranyle, isobenzothiényle, benzoxazolyle, benzothiazolyle, arylvinylène, arylamido, arylcarboxamide, aralkylamine, quinoléyle, isoquinoléyle, cinnolyle, quinazolyle, naphtyridyle, triazolyle ou tétrazolyle. On préfère choisir parmi les groupes aryle et hétéroaryle les groupes phényle, thiényle, pyrazolyle, imidazolyle éventuellement substitué. Parmi les substituants du groupe phényle on préfère les groupes amino et les halogènes en particulier le chlore et le fluor, ainsi parmi les groupes aryles on préfère tout particulièrement les di et trifluorophényles et les monoalkylamino phényles, la chaîne alkyle étant éventuellement substituée par un groupe hydroxy, dialkylamino. On préfère encore choisir parmi les composés de formule (I) ceux pour lesquels X représente une liaison covalente et ceux pour lesquels R représente un radical cycloalkyle. On peut citer parmi les composés répondant à la formule (I) les composés suivants: 4-(2-hydroxy-2-methyl-propylamino)-benzenesulfonic acid 2-[(piperidine-4- carbonyl)-amino]-benzothiazol-6-yl ester 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-(cyclopropanecarbonyl-amino)-benzothiazol6-yl ester 4-cyclopentylamino-benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)- benzothiazol-6-yl ester 4-(3-imidazol-1-yl-propylamino)-benzenesulfonic 2(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester 4-methylaminobenzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)- 10 benzothiazol-6-yl ester 4-(2-hydroxy-2-methyl-propylamino)-benzenesulfonic 2(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester 4-(2-diisopropylamino-ethylamino)- benzenesulfonic 2(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester 4-[4-(4-pyridin-3-yl-imidazol-1-yl)-butylamino]- benzenesulfonic 2(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester 4-(2-Isopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(2-piperidin-4ylacetylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate 4-(3-Imidazol-1-yl-propylamino)-benzenesulfonic acid 2-(2-piperidin-4-yl20 acetylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate 4-(2-Ethylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(2-piperidin-4ylacetylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate 4-[2-(2-Hydroxy-ethylamino)-ethylamino]-benzenesulfonic acid 2-(2piperidin-4-yl-acetylamino)-benzothiazoI-6-yI ester ch Ioryd rate 4-(2-Hydroxy-2-methyl-propylamino)-benzenesulfonic acid 2-(2-piperidin-4ylacetylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate 4-(2-isopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(8aminooctanoyiamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate 4-(3-imidazol-1-yl-propylamino)-benzenesulfonic acid 2-(8-amino-30 octanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate 4-(2-ethylamino-ethylamino)-benzene sulfonic acid 2-(8-aminooctanoylamino) -benzothiazol-6-yl ester 4-[2-(2-hydroxy-ethylamino)-ethylamino]-benzenesulfonic acid 2-(8aminooctanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate 4-(2-Hydroxy-2-methyl-propylamino)-benzenesulfonic acid 2-(8aminooctanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate 4-(2-I sopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(3-piperidin-4ylpropionylamino)-benzothiazol-6-yi ester chlorhydrate 4-(3-Imidazol-1-yl-propylamino)-benzenesulfonic acid 2-(3-piperidin-4-ylpropionylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate 4-(2-Ethylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(3-piperidin-4ylpropionylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate 4-[2-(2-Hydroxy-ethylamino)-ethylamino]-benzenesulfonic acid 2-(3piperidin-4-yl-propionylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate 4-Isobutylamino-benzenesulfonic acid 2-(2-piperidin-4-yl-acetylamino)benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate 4-Isobutylamino-benzenesulfonic acid 2-(3-piperidin-4-yl-propionylamino)- benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate 4-Isobutylamino-benzenesulfonic acid 2-(8-amino-octanoylamino)benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate Thiophene-2-sulfonic acid 2[(piperidine-4-carbonyl)-amino]-benzothiazol-6-yl ester; compound with trifluoro-acetic acid Thiophene-2-sulfonic acid 2-(3-piperidin-4-ylpropionylamino)-benzothiazol-6-yI ester; compound with trifluoro-acetic acid Thiophene-2-sulfonic acid 2-(2-amino-acetylamino)-benzothiazol-6-yl ester Thiophene-2-sulfonic acid 2-(2-methylamino-acetylamino)benzothiazol-6-yl ester; compound with trifluoro-acetic acid Thiophene-2sulfonic acid 2-(3-amino-propionylamino)-benzothiazol-6-yl ester; compound with trifluoro-acetic acid Thiophene-2-sulfonic acid 2-(2-amino2-methyl-propionylamino)-benzothiazol-6-yl ester; compound with trifluoroacetic acid Thiophene-2-sulfonic acid 2-(8-amino-octanoylamino)benzothiazol-6-yl ester; compound with trifluoro-acetic acid Thiophene-2sulfonic acid 2-(3-diethylamino-propionylamino)-benzothiazol-6-yl ester; compound with trifluoro-acetic acid Thiophene-2-sulfonic acid 2(cyclopropanecarbonyl-amino)-benzothiazol-6-yl ester 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-[(azetidine-3carbonyl)-amino]-benzothiazol-6-yl ester 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(8aminooctanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-[(1aminocyclopentanecarbonyl)-amino]-benzothiazol-6-yl ester 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(2-piperidin-4ylacetylamino)-benzothiazol-6-yl ester 4(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2acetylaminobenzothiazol-6-yl ester 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(2-methoxyacetylamino)-benzothiazol-6-yl ester 4(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2(cyclopentanecarbonyl-amino)-enzothiazol-6-yl ester Un des procédés de préparation des composés selon l'invention peut être schématisé de la façon suivante: 1. Les composés de formule (I) pour lesquels R = alkyle, cycloalkyle, aryle, hétéroaryle peuvent être préparés selon le schéma de synthèse 1. SCHEMA 1 H \ N i H H N i H (2) (5) O\SX-Ar \ â O (6) if XAr = R1R2NH (8) Les composés de la présente invention peuvent être préparés facilement à partir de 5-méthoxybenzothiazol-2-ylamine (composé commercial). Dans une première étape, le produit de départ est déméthoxylé en milieu acide, préférentiellement dans un mélange acide acétiquelacide bromhydrique aqueux. (7) O R O.S N \ / \ H O O Dans une deuxième étape, les 5-hydroxy-benzothiazol-2-ylamides (4) sont obtenues par réaction entre la 5-hydroxy-benzothiazol-2-ylamine (2) et un acide de formule (3) (R tel que défini dans la formule générale (I)) en présence d'un agent de couplage tel que HATU ou HBTU et d'une base telle que la diisopropyléthylamine ou la triéthylamine dans un solvant appropié. Parmi les solvants pouvant être utilisés, nous pouvons citer la diméthylformamide, le dichlorométhane. La température de choix pour effectuer cette réaction est comprise entre température ambiante et reflux. Dans une troisième étape, les sulfono-esters de formule (6) sont obtenus par réaction entre les 5-hydroxy-benzothiazol-2-ylamides (4) et un chlorure de sulfonyle de formule (5) (X et Ar tels que définis dans la formule générale (I)) dans un solvent inerte (acétone, THF, dichlorométhane, toluène) en présence d'une base telle que la triéthylamine ou la pyridine. Dans le cas où XAr correspond au 4-fluorophényl, la substitution nucléophile du F par des amines de formule (7) (R1 R2 tels que définis dans la formule générale (I)) pour conduire aux dérivés de formule (8) est effectuée dans un solvant aprotique tel que la N-methylpyrrolidone ou la diméthylformamide à une température variant de 90 à 130 C en tube scellé ou au micro-ondes. 2. Les composés de la présente invention pour lesquels R = alkoxy, 20 cycloalkoxy, hétérocycloalkoxy peuvent être préparés selon le schéma de synthèse 2. SCHEMA 2, H \ N H H \ N i H (2) Cz SxAr (3) O O, /X-Ar S â O (4) O R3, (5) C1 O O., (7) R30^CI (5) R3 N H O,S /X-Ar â O H2N (8) Les composés de la présente invention peuvent être préparés facilement à partir de 5-méthoxybenzothiazol-2-ylamine (composé commercial). Dans une première étape, le produit de départ est déméthoxylé en milieu acide, préférentiellement dans un mélange acide acétique/acide bromhydrique aqueux. Dans une deuxième étape, les sulfono-esters de formule (4) sont obtenus par réaction entre la 5-hydroxy-benzothiazol-2-ylamine (2) et un chlorure de sulfonyle de formule (3) (X et Ar tels que définis dans la formule générale (I)) dans un solvent inerte (acétone, THF, dichlorométhane, toluène) en présence d'une base telle que la triéthylamine ou la pyridine. Dans le cas où XAr correspond au 4-fluorophényl, la substitution nucléophile du F par des amines de formule (6) (R1 R2 tels que définis dans la formule générale (I)) pour conduire aux dérivés de formule (7) est effectuée dans un solvant aprotique tel que la N-methylpyrrolidone ou la diméthylformamide à une température variant de 90 à 130 C en tube scellé ou au micro-ondes. Les carbamates (8) sont obtenus par réaction entre les amines de formules (4 et 7) et un chioroformate de formule (5) (R3 tel que défini dans la formule générale (I)) en présence d'une base organique telle que la pyridine, la triéthylamine, la diisopropylethylamine ou inorganique telle que le carbonate de potassium dans un solvant appropié. Parmi les solvants pouvant être utilisés, nous pouvons citer le tétrahydrofurane, le dichlorométhane et le dioxane. La température de choix pour effectuer cette réaction est comprise entre 0 C et reflux. 3. Les composés de la présente invention pour lesquels R = alkylamino, cycloalkylamino, heterocycloamino peuvent être préparés selon le schéma de synthèse 3. SCHEMA 3 O, ,X Ar S â \O (8) H N R4R5 (9) R4 O \ N R5 H Les urées de formule (10) peuvent être obtenues par réaction entre les carbamates de formule (8) (R3 = Me de préférence) et une amine de formule (9) (R4 et R5 tels que définis dans la formule générale (I)) dans un solvant aprotique tel que la N-méthylpyrrolidone ou la diméthylformamide à une température variant de 90 C à 130 C en tube scellé ou au micro- ondes. Les composés selon l'invention sont utilisables en thérapie humaine et plus particulièrement dans le traitement du cancer, plus particulièrement des cancers sensibles aux inhibiteurs d'Aurora-2 et à ceux de Cdk2. La présente invention sera plus complètement décrite à l'aide des exemples 20 suivants qui ne doivent pas être considérés comme limitatifs de l'invention. X Ar . OSO (10) Les spectres DCI ont été réalisés en désorbtion-ionisation chimique (gaz réactant: ammoniac, appareil Finnigan SSQ7000). Les spectres en électrospray (ES+) ont été réalisés sur un appareil Platform II (Micromass). Analyses LCIMS Méthode d'analyse par LCIMS (méthode Al) Les analyses LC/MS ont été réalisées sur un appareil Micromass modèle LCT relié à un appareil HP 1100. L'abondance des produits a été mesurée à l'aide d'un détecteur à barrette de diodes HP G1315A sur une gamme d'onde de 200-600 nm et un détecteur à dispersion de lumière Sedex 65. L'acquisition des spectres de masses Mass spectra a été réalisée sur une gamme de 180 à 800. Les données ont été analysées en utilisant le logiciel Micromass MassLynx. La séparation a été effectuée sur une colonne Hypersil BDS C18, 3 pm (50 x 4.6 mm), en éluant par un gradient linéaire de 5 à 90 0/0 d'acétonitrile contenant 0,05 % (v/v) d'acide trifluoroacétique (TFA) dans l'eau contenant 0,05 % (v/v) TFA en 3,5 mn à un débit de 1 mLlmn. Le temps total d'analyse, incluant la période de rééquilibration de la colonne, est de 7 mn. Méthode d'analyse par LC/MS (méthode A2) Les analyses LC/MS ont été réalisées sur un appareil Micromass modèle Platfom. L'abondance des produits a été mesurée à l'aide d'un détecteur à barrette de diodes HP G1315A sur une gamme d'onde de 200-400 nm et un détecteur à dispersion de lumière Sedex 65. L'acquisition des spectres de masses Mass spectra a été réalisée sur une gamme de 50 à 1500. Les données ont été analysées en utilisant le logiciel Micromass MassLynx. La séparation a été effectuée sur une colonne XTerral 3,5 pm (50 x 2.1 mm), en éluant par un gradient linéaire de 5 à 95 d'acétonitrile dans l'eau contenant 0,1 % (v/v) d'acide formique en 9 mn à un débit de 0.7 mL/mn. Le temps total d'analyse, incluant la période de rééquilibration de la colonne, est de 9 mn. Purification par LC/MS préparative (Méthode B): Les produits ont été purifiés par LC/MS en utilisant un système Waters FractionsLynx composé d'une pompe à gradient Waters modèle 600, d'une pompe de régénération Waters modèle 515, d'une pompe de dilution Waters Reagent Manager, d'un auto-injecteur Waters modèle 2700, de deux vannes Rheodyne modèle LabPro, d'un détecteur à barrette de diodes Waters modèle 996, d'un spectromètre de masse Waters modèle ZMD et d'un collecteur de fractions Gilson modèle 204. Le système est contrôlé par du logiciel Waters FractionLynx. La séparation a été effectuée alternativement sur deux colonnes Waters Symmetry (C18, 5 pM, 19x50 mm, référence catalogue 186000210), une colonne étant en cours de régénération par un mélange eau/acétonitrile 95/5 (v/v) contenant 0,07 % (v/v) d'acide trifluoroacétique, pendant que l'autre colonne était en cours de séparation. L'élution des colonnes a été effectuée en utilisant un gradient linéaire de 5 à 95 % d'acétonitrile contenant 0,07 % (v/v) d'acide trifluoroacétique dans l'eau contenant 0,07 % (v/v) d'acide trifluoroacétique, à un débit de 10 mL/mn. A la sortie de la colonne de séparation, un millième de l'effluent est séparé par un LC Packing Accurate, dilué à l'alcool méthylique à un débit de 0,5 mL/mn et envoyé vers les détecteurs, à raison de 75 % vers le détecteur à barrette de diodes, et les 25 % restants vers le spectromètre de masse. Le reste de l'effluent (999/1000) est envoyé vers le collecteur de fractions où le flux est éliminé tant que la masse du produit attendu n'est pas détectée par le logiciel FractionLynx. Les formules moléculaires des produits attendus sont fournies au logiciel FractionLynx qui déclenche la collecte du produit quand le signal de masse détecté correspond à l'ion [M+H]+ et/ou au [M+Na]+. Dans certains cas, dépendant des résultats de LC/MS analytique, quand un ion intense correspondant à [M+2H]++ a été détecté, la valeur correspondant à la moitié de la masse moléculaire calculée (MW/2) est aussi fournie au logiciel FractionLynx. Dans ces conditions, la collecte est aussi déclenchée quand le signal de masse de l'ion [M+2H]++ et/ou [M+Na+H]++ sont détectés. Les produits ont été collectés en tube de verre tarés. Après collecte, les solvants ont été évaporés, dans un évaporateur centrifuge Savant AES 2000 ou Genevac HT8 et les masses de produits ont été déterminées par pesée des tubes après évaporation des solvants. Purification par chromatographie flash: les produits bruts sont purifiés par 35 chromatographie flash sur silice de granulométrie 15-35 pm sous une pression d'argon de 0.5 bar. Les fractions correspondant au produit attendu sont rassemblées et concentrées sous pression réduite à l'évaporateur rotatif. La présente invention sera plus complètement décrite à l'aide des exemple suivants qui ne doivent pas être considérés comme limitatifs de l'invention: Intermédiaire 1: Préparation du 2-amino-benzothiazol-6-ol S OH H2N N Une solution de 2-amino-6-ethoxybenzothiazole (5 g, 25.74 mmol) et d'acide hydrobromique à 48 % dans l'eau (130 ml, 1.141 mol) dans 65 ml d'acide acétique est répartie dans 10 tubes de 20 ml pour micro-ondes, puis chauffée à 150 C au micro-ondes pendant 200 secondes. Le milieu réactionnel est concentré. Le résidu est repris par 200 ml d'eau, basifié à pH 8 par addition de 75 ml d'une solution saturée de NaHCO3 et extrait à l'acétate d'éthyle, lavé par une solution saturée de chlorure de sodium, séché sur sulfate de magnésium et concentré à sec pour conduire à 3.4 g de 2-Amino- benzothiazol-6-ol (poudre grise). LC/MS (méthode Al) : [M+H]+=167.00, temps de retention: 1.07 min. Intermédiaire 2: Préparation du 4-(6- hydroxy-benzothiazol-2-ylcarbamoyl)-piperidine-1-carboxylic acid tert- butyl ester Une solution de pipéridine-1,4-dicarboxylic acid mono-tert- butyl ester (276 mg, 1.203 mmol), d'HATU (549 mg, 1.444 mmol) et de diisopropyléthylamine (187 mg, 1.44 mmol) dans 3 ml de DMF est agitée à température ambiante pendant 15 minutes. Le 2-amino-benzothiazol-6-ol (intermédiaire 1) (200 mg, 1.203 mmol) en solution dans 3 ml de DMF est additionné en une fois. Le milieu réactionnel est agité à température ambiante pendant 2 heures, versé sur une solution de 10 % Na2CO3 dans l'eau (20 ml) et extrait à l'acétate d'éthyle. Le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur colonne (éluant: EtOAc/ heptane (1/1)) pour conduire à 401 mg de 4-(6-hydroxy-benzothiazol-2-ylcarbamoyl)- pipéridine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (solide blanc). LCIMS (méthode A2) : [M+H]+ = 378.0, temps de rétention: 3.9 minutes. Intermédaire 3: Préparation du 4-[6-(4-fluoro-benzènesulfonyloxy)benzothiazol-2-ylcarbamoyl]-piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester F o )(3,-N\ Une solution de 4-(6-hydroxy-benzothiazol-2-ylcarbamoyl)pipéridine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (intermédiaire 2) (454 mg, 1.20 mmol), de 4-fluoro-benzènesulfonyl chloride (234 mg, 1.20 mmol) et de triéthylamine (320 pl) dans 10 ml d'acétone est agitée à température ambiante pendant 1 heure. Le chlorhydrate de triéthylamine est filtré et le filtrat évaporé. Le brut réactionnel est purifié par chromatographie sur colonne (éluant: EtOAc/ Heptane (7/3) pour conduire à 400 mg de 4-fluoro- benzènesulfonic 2-[(pipéridine-4-carbonyl)-amino] benzothiazol-6-yl ester (solide blanc). LC/MS (méthode A2) : [M+H]+ = 535.9, temps de rétention: 4.9 minutes. Intermédaire 4: Préparation du 4-fluoro-benzènesulfonic 2-[(pipéridine-4carbonyl)-amino] benzothiazol-6-yl ester Une solution de 4-[6-(4-fluorobenzènesulfonyloxy)-benzothiazol-2-yl carbamoyl]-pipéridine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (intermédiaire 3) (100 mg, 0.187 mmol), de TFA (0.5 ml) dans du dichlorométhane (4.5 ml) est agitée à température ambiante pendant 1 heure. Le milieu réactionnel est ramené à sec. Le résidu repris dans le minimum d'eau, neutralisé par addition d'une solution aqueuse 10 % de Na2CO3 et extrait à l'acétate d'éthyle pour conduire à 55 mg de 4-fluoro-benzenesulfonic 2-[(piperidine- 4-carbonyl)- amino] benzothiazol-6-yl ester (solide blanc). LC/MS (méthode A2) : [M+H]+ = 435.9, temps de rétention: 3.0 minutes. N Exemple 5: Préparation du 4-(2-hydroxy-2-methyl-propylamino)benzenesulfonic acid 2-[(piperidine-4-carbonyl)-amino]-benzothiazol-6-ylester Une solution de 4-fluoro-benzenesulfonic 2-[(piperidine-4-carbonyl)amino] benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 4) (50 mg, 0.114 mmol) et de 4-(4-pyridin-3-yl-imidazol-1-yl)-butylamine (40.93 mg, 0.459 mmol) dans 0.5 ml de NMP est chauffée à 130 C au micro-ondes pendant 5 minutes. Le brut réactionnel est purifié par LC/MS préparative (milieu basique (pH 9)) pour conduire après lyophilisation à 21 mg de 4-(2-hydroxy-2-methylpropylamino)- benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester (solide jaune pâle). LC/MS (méthode A2) : [M+H]+ = 505.2, temps de rétention: 2.70 minutes. Intermédaire 6: Préparation du Cyclopropanecarboxylic acid (6-hydroxybenzothiazol-2-yl)-amide OH Dans un ballon de 100 ml, muni d'un barreau aimanté, une solution de 2-amino-benzothiazol-6-ol (intermédiaire 1) (850 mg, 4.6 mmol), d'acide cyclopropane-carboxylique (1.564 g, 18.1 mmol), de N,N-diisopropylethylamine (3.6 ml, 24.4 mmol), d'HBTU (4.1 g, 5.53 mmol) dans 40 ml de dimethylformamide est agitée à température ambiante pendant 16 heures. 150 ml d'eau sont ajoutés au milieu réactionnel, extrait à l'acétate d'éthyle, lavé par une solution saturée de chlorure de sodium, séché sur sulfate de magnésium et concentré à sec. Le résidu obtenu est lavé par de l'acétate d'éthyle conduisant à 893 mg de Cyclopropanecarboxylic acid 2(cyclopropanecarbonyl-amino)-benzothiazol-6-yl ester. LC/MS: [M+H]+=303. 18, TR=3.53 min. A ce produit est ajoutée une solution de lithium hydroxide monohydrate (200 mg, 4.768 mmol) dans 50 ml de méthanol et 5 ml d'eau. Le milieu réactionnel est mis au reflux sous agitation pendant une heure. Le milieu réactionnel est concentré, acidifié à pH 1 par une solution d'acide chlorhydrique 2N, dilué avec 100 ml d'eau et extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée par de l'eau, puis par une solution saturée de chlorure de sodium, ramenée à sec conduisant à 500 mg de Cyclopropanecarboxylic acid (6-hydroxy-benzothiazol-2-yl)-amide avec un rendement de 72 % (poudre beige). RMN: Spectre RMN 1H (400MHz) ö en ppm - dans le DMSO-d6: de 0,90 à 1,00 (mf, 4H) ; 1,98 (mf, 1H) ; 6,88 (dd, J = 8,5 et 3,0 Hz, 1H) ; 7,27 (d, J = 3,0 Hz, 1 H) ; 7,54 (d, J = 8,5 Hz, 1H) ; 9,51 (s large, 1 H) ; 12,4 (s large, 1 H) . Exemple 7: Préparation du 4-Fluoro- benzenesulfonic acid 2-(cyclopropanecarbonyl-amino)-benzothiazol-6-yl ester Dans un ballon de 100 ml, muni d'un barreau aimanté, une solution de cyclopropanecarboxylic acid (6-hydroxy-benzothiazol-2-yl)-amide (intermédiaire 6) (1.81 g, 7.72 mmol), de 4-fluorobenzenesulfonylchloride (1.5 g, 7.72 mmol), de triéthylamine (2.14 ml, 15.45 mmol) dans 43 ml d'acétone est mise sous agitation pendant une heure à température ambiante. Le précipité obtenu est filtré et le filtrat est évaporé. Le résidu est lavé par de l'acétone et de l'éther éthylique, conduisant à 1. 92 g de 4-fluorobenzenesulfonic acid 2-(cyclopropane-carbonyl-amino)- benzothiazol-6-yl ester (poudre blanc cassé) avec un rendement de 66 %. Masse: IE: m/z 392 [M+'], mlz 324: [M+']-COC3H5, m/z 233: [M+']-SO2PhF, 25 m/z 165: 324-SO2PhF, m/z 69 (pic de base) : [COC3H5]+ Spectre RMN 1H (300MHz) ö en ppm - dans le DMSO-d6: de 0,92 à 1,03 (mf, 4H) ; 2,02 (mf, 1 H) ; 7,04 (dd, J = 8,5 et 2,5 Hz, 1H) ; 7,54 (mf, 2H) ; 7,70 (d, J = 8, 5 Hz, 1 H) ; 7,80 (d, J = 2,5 Hz, 1 H) ; 7,97 (mf, 2H) ; 12,75 (s large, 1H) . Exemple 8: Préparation du 4-cyclopentylamino-benzenesulfonic 2(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester: Une solution de 4-fluoro-benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)- benzothiazol-6-yl ester (exemple 7) (50 mg, 127.4 pmol) et de cyclopentylamine (51 pI, 0.51 mmol) dans 0.5 ml de NMP est chauffée à 150 C au micro-ondes pendant 5 minutes. Le brut réactionnel est purifié par LC/MS préparative (milieu basique (pH 9)) pour conduire après lyophilisation à 38 mg de 4-cyclopentylamino-benzenesulfonic 2- (cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester (solide blanc). LCIMS (méthode A2) : [M+H]+ = 458.0, temps de rétention: 4.39 minutes. Exemple 9: Préparation du 4-(3-imidazol-1-yl-propylamino)-benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester Une solution de 4fluoro-benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester (exemple 7) (100 mg, 0.255 mmol) et de 3-imidazol-1-yl-propylamine (123 pI, 1.019 mmol) dans 2 ml de NMP est chauffée à 150 C au micro-ondes pendant 5 minutes. Le brut réactionnel est purifié par LC/MS préparative (milieu basique (pH 9)) pour conduire après lyophilisation à 63 mg de4-(3imidazol-1-yl-propylamino)-benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)benzothiazol-6-yl ester (solide blanc). LC/MS (méthode A2) : [M+H]+ = 498. 0, temps de rétention: 2.90 minutes. Exemple 10: Préparation du 4-methylamino-benzenesulfonic 2(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester: Une solution de 4fluoro-benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester (exemple 7) (25 mg, 63.71 pmol) et de methylamine (2N dans MeOH, 200 pl) dans 300 pl de NMP est chauffée à 150 C au micro-ondes pendant 3 minutes. Le brut réactionnel est purifié par LC/MS préparative (milieu basique (pH 9)) pour conduire après lyophilisation à 6.7 mg de 4méthylamino-benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)-benzo-thiazol-6yl ester (solide beige). LC/MS (méthode A2) : [M+H]+ = 404.1, temps de rétention: 3.83 minutes. Exemple 11: Préparation du 4-(2-hydroxy-2-methyl-propylamino)-benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester: Une solution de 4-fluoro-benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)benzothiazol-6-yl ester (exemple 7) (100 mg, 255 pmol) et de 1-amino-2methyl-propan-2-ol (91 mg, 1.02 mmol) dans 2 ml de NMP est chauffée à 150 C au micro-ondes pendant 5 minutes. Le brut réactionnel est purifié par LC/MS préparative (milieu basique (pH 9)) pour conduire après lyophilisation à 61 mg de 4-(2-hydroxy-2-methyl-propylamino)benzenesulfonic 2-(cyclopropane-carbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester (solide beige). LC/MS (méthode A2) : [M+H]+ = 462.1, temps de rétention: 3.83 minutes. Exemple 12: Préparation du 4-(2-d iisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester Une solution de 4-fluoro-benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)benzothiazol-6-yl ester (exemple 7) (100 mg, 255 pmol) et de N,Ndiisopropyl-ethane-1, 2-diamine (147 mg, 1.02 mmol) dans 2 ml de NMP est chauffée à 110 C au micro-ondes pendant 10 minutes. Le brut réactionnel est purifié par LC/MS préparative (milieu basique (pH 9)) pour conduire après lyophilisation à 66 mg de 4-(2-hydroxy-2-methyl-propylamino)benzenesulfonic 2-(cyclopropane-carbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester (solide beige). LC/MS (méthode A2) : [M+H]+ = 517.1, temps de rétention: 2.93 minutes. Exemple 13: Préparation du 4-[4-(4-pyridin-3-yl-imidazol-1-yl)-butylamino] -benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester o o Une solution de 4-fluoro-benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)benzothiazol-6-yl ester (exemple 7) (50 mg, 127.4 pmol) et de 4-(4pyridin-3- yl-imidazol-1-yl)-butylamine (110.2 mg, 0.51 mmol) dans 0.5 ml de NMP est chauffée à 150 C au micro-ondes pendant 8 minutes. Le brut réactionnel est purifié par LC/MS préparative (milieu basique (pH 9)) pour conduire après lyophilisation à 36 mg de 4-(2-hydroxy-2-methyl-propylamino)- benzenesulfonic 2-(cyclo-propanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester (solide beige). LC/MS (méthode A2) : [M+H]+ = 589.0, temps de rétention: 3.14 minutes. Intermédiaire 14: Préparation du (6-Hydroxy-benzothiazol-2-yl)-carbamic acid tert-butyl ester OH Dans un ballon de 100 ml, muni d'un barreau aimanté, une solution de 2amino-benzothiazol-6-oI (intermédiaire 1) (1.91 g, 11.49 mmol), de ditertbutyl dicarbonate (7.52 g, 34.47 mmol), de triethylamine (4.9 ml, 34. 47 mmol), de 4-diméthylaminopyridine (168 mg, 1.38 mmol) dans 50 ml de dichlorométhane est agitée une nuit à température ambiante. Le milieu réactionnel est ramené à sec et le résidu obtenu est lavé par du dichlorométhane et de l'éther éthylique conduisant à 4.2 g de Carbonic acid 2-tert-butoxycarbonylamino-benzothiazol-6-yl ester tert-butyl ester avec un rendement quantitatif. LC/MS: [M+H]+ :311.16, temps de rétention: 5.27 min. A ce produit est ajoutée une solution de soude (920 mg, 22.8 mmol) dans 110 ml de méthanol. Le milieu réactionnel est agité 2 heures à température ambiante sous ultra-sons, puis acidifié à pH4 avec une solution d'acide chlorhydrique 2N. Le milieu réactionnel est ramené à sec et le résidu obtenu est lavé par du dichlorométhane et de l'éther éthylique conduisant à 2.35 g de (6Hydroxybenzothiazol-2-yl)-carbamic acid tert-butyl ester (poudre beige) avec un rendement de 77 %. Masse: IE: mlz 266 [M+'], mlz 166 (pic de base) : [M+]-CO2tBu IR: KBr 3422; 3263; 3091; 2981; 1725; 1608; 1562; 1468; 1278; 1245; 1154; 1049; 862 et 852 cm-1 Spectre RMN 1H (300MHz) ö en ppm - dans le DMSO-d6: 1,52 (s, 9H) ; 6,85 (dd, J = 9,0 et 3,0 Hz, 1 H) ; 7,24 (d, J = 3,0 Hz, 1 H) ; 7,49 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 9,44 (mf étalé, 1 H) ; 1 1, 5 (mf, étalé, 1 H) . Intermédiaire 15: Préparation du 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2tertbutoxycarbonylamino-benzothiazol-6-yl ester Dans un ballon de 100 ml, muni d'un barreau aimanté, une solution de (6-Hydroxy-benzothiazol-2-yl)carbamic acid tert-butyl ester (intermédaire 14) (3.61 g, 13.08 mmol), de 4-fluorobenzenesulfonylchloride (2.56 g, 13.08 mmol), de triéthylamine (3. 63 ml, 26.16 mmol) dans 65 ml d'acétone est mise sous agitation à température ambiante pendant une nuit. Filtration du précipité obtenu et le filtrat est ramené à sec. Le résidu sec est lavé par de l'acétate d'éthyle conduisant à 5.02 g de 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2tertbutoxycarbonylamino-benzothiazol-6-yl ester (poudre blanche) avec un rendement de 62 %. Spectre RMN 1H ( 400MHz) ö en ppm - dans le DMSO-d6: 1,53 (s, 9H) ; 7,02 (dd, J = 9,0 et 2,5 Hz, 1H) ; 7,55 (t, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,65 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,78 (d, J = 2,5 Hz, 1 H) ; 7,98 (dd, J = 5,0 et 9,0 Hz, 2H) ; 1 1, 9 (s large, 1 H) . Intermédiaire 16: Préparation du 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-amino-5 benzothiazol-6-yl ester S H2N-4 N Dans un ballon de 100 ml, muni d'un barreau aimanté, une solution de 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-tert-butoxycarbonylamino-benzothiazol6-yl ester (intermédiaire 15) (1.7 g, 3.60 mmol), de 10 ml d'acide trifluoroacétique (130 mmol) dans 10 ml de dichlorométhane, et 1 ml d'eau est mise sous agitation pendant 2 heures à température ambiante. Le milieu réactionnel est ramené à sec et le résidu obtenu est lavé par de l'éther éthylique conduisant à 1.31 g de 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol- 6-yl ester sous forme de sel d'acide trifluoroacétique (poudre blanche) avec un rendement de 83 %. LC/MS (méthode Al): [M+H]+ :325.13, temps de rétention: 3.12 min. Intermédiaire 17: Préparation du 4-{[6-(4-Fluorobenzenesulfonyloxy)-benzothiazol-2-ylcarbamoyl]-methyl}-piperidine-1carboxylic acid tert-butyl ester Dans un tube à essai, muni d'un barreau aimanté, une solution de 4-Fluoro- benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 16) (580 mg, 1.32 mmol), de 4-carboxymethyl-piperidine-1-carboxylic acid tert- butyl ester (640 mg, 2.63 mmol), d'HBTU (1.1 g, 2.9 mmol), de N,N- diisopropylamine (1.2 ml, 6.89 mmol) dans 12 ml de diméthylformamide est agitée 3 jours à température ambiante. 200 ml d'eau sont ajoutés au milieu réactionnel extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est ensuite lavée à l'eau et par une solution saturée de chlorure de sodium, puis séchée sur sulfate de magnésium et évaporée. Le résidu obtenu est repris par de l'acétate d'éthyle et purifié sur cartouche flash Varian contenant 50 g de silice de porosité 15-35 p par un gradient de 5 à 30 % d'acétate d'éthyle dans le cyclohexane en 100 minutes. Après évaporation du solvant, 700 mg de 4-{[6-(4-Fluoro-benzenesulfonyloxy)-benzothiazol-2ylcarbamoyl]-methyl}-piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester sont obtenus (huile jaune) avec un rendement de 96 %. LC/MS (méthode Al): [M+H] + :550.11, temps de rétention: 4.14 min. Exemple 18: Préparation du 4-(2Isopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(2-piperidin-4-ylacetylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate CIH 1 ère étape: Dans un tube à essai, muni d'un barreau aimanté, une solution de 4-{[6-(4-Fluoro-benzenesulfonyloxy)-benzothiazol-2-ylcarbamoyl]-methyl}piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (intermédiaire 17) (174 mg, 0.318 mmol), de N-isopropylethylenediamine (97 mg, 0.954 mmol), de carbonate de cesium (103 mg, 0.318 mmol) dans 3 ml de dimethylsulfoxyde est agitée pendant une nuit à 90 C. 100 ml d'eau sont ajoutés au milieu réactionnel extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est ensuite lavée à l'eau et par une solution saturée de chlorure de sodium, puis séchée sur sulfate de magnésium et évaporée conduisant à 103 mg de 4-({6-[4-(3Imidazol-1-ylpropylamino)-benzenesulfonyloxy]-benzothiazol-2-ylcarbamoyl}methyl)- piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (poudre blanche) avec un rendement de 50 %. 2ème étape: Une solution 103 mg de 4-({6-[4-(3-Imidazol-1-yl-propylamino)benzenesulfonyloxy]-benzothiazol-2-ylcarbamoyl}-methyl)-piperidine-1carboxylic acid tert-butyl ester, de 2 ml de dioxanne, de 2 ml d'acide chlorhydrique 4N dans le dioxanne est agitée pendant 3 heures à température ambiante. Le précipité obtenu est filtré et lavé par du dioxanne et de l'éther éthylique conduisant à 110 mg de 4-(2Isopropylamino-ethylamino)- benzenesulfonic acid 2-(2-piperidin-4-yl-acetylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate (poudre blanche) avec un rendement de 88 %. Masse: LCMS: mlz 532 [M+H]+ , mlz 407 (pic de base) : [M+H]+ - C5H10NCH2CO IR: KBr 3432; 2960; 2793; 2464; 2598; 1560; 1470; 1364; 1162; 1120; 1093; 915; 853 et 753 cm-' Spectre RMN 1H ( 400MHz) â en ppm - dans le DMSO-d6: 1,28 (d, J = 7,0 Hz, 6H) ; 1,48 (m, 2H) ; 1,83 (d large, J = 12,5 Hz, 2H) ; 2,12 (mf, 1H) ; 2,52 (masqué, 2H) ; 2,92 (m, 2H) ; 3,10 (mf, 2H) ; 3,28 (d large, J = 12,5 Hz, 2H) ; 3,36 (mt, J = 7,0 Hz, 1H) ; 3,50 (t, J = 6,0 Hz, 2H) ; 6, 78 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,03 (dd, J = 8,5 et 2,5 Hz, 1H) ; 7,30 (mf, étalé, 1 H) ; 7,56 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,71 (d, J = 8,5 Hz, 1H) ; 7,78 (d, J = 2,5 Hz, 1 H) ; 8,58 (mf étalé, 1H) ; 8,81 (mf étalé, 1 H) ; 9,00 (mf étalé, 2H) ; 12,5 (s large, 1 H) . Exemple 19: En utilisant la même méthode que l'exemple 18, les exemples suivants sont réalisés en utilisant le 4-{[6-(4-Fluoro-benzenesulfonyloxy)-benzothiazol-2ylcarbamoyl]-methyl}-piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester comme précurseur (intermédiaire 17) combiné avec différentes amines. Dans les exemples suivants, le composé obtenu après la première étape est purifié sur cartouche flash de 5 g de silice Interchim (15-35p) p) par un gradient de 5 à 10 % de méthanol dans le dichlorométhane avec un débit de 10 ml/min. Ces exemples sont présentés dans le tableau suivant: N amine composé caractérisation exemple IR: KBr 3426; 2957; 2717; 2462; 1597; 1545; 1451; 1364; 1199; 1161; 1092; 872; 750 et 586 cm-1 Masse: LCMS: mlz 555 [M+H]+, m/z 430 (pic de base) : [M+H]+ - C5H10NCH2C0 Spectre RMN 1 H ( 400MHz) - ö en ppm - dans le DMSO-d6: N 4- (3-Imidazol-1-yl- 1,48 (m, 2H) ; 1,84 (d large, J = 12,5 propylamino)- Hz, 2H) ; 2,12 (mf, 3H) ; 2,52 (masqué, N benzenesulfonic acid 2H) ; 2,91 (m, 2H) ; 3,13 (t, J = 6,5 Hz, 19 a 2-(2-piperidin-4-yl2H) ; 2,28 (d large, J = 12,5 Hz, 2H) ; Ni acetylamino)- 4,33 (t, J = 6,5 Hz, 2H) ; 6,70 (d large, benzothiazol-6- yl ester J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,02 (dd, J = 9,0 et chlorhydrate; 3,0 Hz, 1 H) ; 7,20 (mf très étalé, I H) ; 7,51 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,71 (d, J = 9,0 Hz, 1H); 7,73 (s large, 1H); 7,78 (d, J = 3,0 Hz, 1 H) ; 7,87 (s large, I H) ; 8,70 (mf étalé, I H) ; 8,91 (mf étalé, 1 H) ; 9,24 (s large, I H) ; 12,5 (s large, 1 H) ; 14, 55 (mf très étalé, 1 H) . IR: KBr 3425; 2956; 2717; 2462; 1597; 1558; 1469; 1364; 1162; 1119; 1094; 872; 744 et 584 cm-1 Masse: LCMS: m/z 518 [M+H]+, m/z 393 (pic de base) : [M+H]+ - C5H10NCH2C0 Spectre RMN 1 H ( 400MHz) - ö en ppm - dans le DMSO-d6: 4-(2-Ethylamino- 1,25 (t, J = 7,0 Hz, 3H) ; 1,47 (m, 2H) ; ethylamino)- 1, 85 (d large, J = 12,5 Hz, 2H) ; 2,12 19 b N benzenesulfonic acid (mf, 1H) ; 2,52 (masqué, 2H) ; 2,91 (m, 2-(2-piperidin-4-yl- 2H) ; 3,02 (q, J = 7,0 Hz, 2H) ; 3,10 acetylamino)(mf, 2H) ; 3,28 (d, J = 12,5 Hz, 2H) ; N benzothiazol-6-yl ester 3,48 (t, J = 6,0 Hz, 2H) ; 6,78 (d large, chlorhydrate J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,02 (dd, J = 8,5 et 2,5 Hz, 1 H) ; 7,30 (mf très étalé, 1 H) ; 7,45 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,71 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,78 (d, J = 2,5 Hz, I H) ; 8,62 (mf étalé, I H) ; 8,86 (mf étalé, 1 H) ; 9,04 (mf, 2H) ; 12,45 (s large, 1 H) . IR: KBr 3435; 2949; 2790; 2462; 1598; 1561; 1470; 1363; 1161; 1093; 854; 751 et 590 cm-1 Masse: LCMS: m/z 534 [M+H]+, m/z 4-[2-(2-Hydroxy- 409 (pic de base) : [M+H]+ - ethylamino)- C5H1oNCH2CO ethylamino]- Spectre RMN I H (400MHz) - ö en ppm - dans le DMSO d6 1,46 (m, 2H) ; 1,85 (d large, J = 12,5 N benzenesulfonic acid Hz, 2H) ; 2, 12 (mf, 1H) ; 2,52 (masqué, 19 c 2-(2-piperidin-4-yl- 2H) ; 2,92 (m, 2H) ; 3,08 (mf, 2H) ; acetylamino)3,13 (mf, 2H) ; 3,28 (d large, J = 12,5 benzothiazol-6-yl ester Hz, 2H) ; 3,45 (masqué, 2H) ; 3,71 (t, J chlorydrate = 5,5 Hz, 2H) ; 6,77 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,03 (dd, J = 8,5 et 2,5 Hz, I H) ; 7, 18 (mf, étalé, 1H); 7,55 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,72 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,79 (d, J = 2,5 Hz, I H) ; 8,51 (mf étalé, 1H); 8,75 (mf étalé, 1 H) ; 8,87 (mf étalé, 2H) ; 12,5 (s large, 1 H) . LCMS: [M+H]+ = 519.08, temps retention: 2,66 min IR: KBr 3415; 2971; 1597; 1563; 1470; 1365; 1161; 1094; 915; 854; 746 et 586 cm-1 4-(2-Hydroxy-2- Spectre RMN 1 H (400MHz) - ö en methyl-propylamino)- ppm - dans le DMSO-d6: 1,18 (s, 6H) ; 1,45 (m, 2H) ; 1,85 (d 19 d o benzenesulfonic acid large, J = 12,5 Hz, 2H) ; 2,13 (mf, 1 H) ; 2-(2-piperidin-4-yl- 2,52 (masqué, 2H) ; 2,92 (m, 2H) ; acetylamino)3, 06 (s, 2H) ; 3,28 (d large, J = 12,5 N benzothiazol-6-yl ester Hz, 2H) ; 6,78 (d large, J = 9,0 Hz, chlorhydrate 2H) ; de 6,50 à 7,00 (mf étalé, 1H); 7,02 (dd, J = 9,0 et 2,5 Hz, I H) ; 7,45 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,70 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,75 (d, J = 2,5 Hz, 1 H) ; 8,51 (mf étalé, 1H); 8,78 (mf étalé, I H) ; 12,5 (s large, 1 H) . Intermédiaire 20: Préparation du 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-(8tertbutoxycarbonylamino-octanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester Selon la méthode de l'intermédiaire 17, le 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-(8-tertbutoxycarbonylamino-octanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester est préparé en combinant le 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 16) avec du Boc-8-aminocaprylic acid. LC/MS (méthode Al): [M+H]+:566.01, temps de retention: 4.21 min. Exemple 21: Préparation du 4-(2-isopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2(8-amino-octanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate Selon la méthode de l'exemple 18, le 4-(2-isopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-(8-amino-octanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate est préparé en combinant le 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2(8- tert-butoxycarbonylamino-octanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 20) avec la N-isopropylethylenediamine. Le composé issu de la première étape (4-(2-isopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2(8-tert-butoxycarbonylamino-octanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester est purifié sur silice par un gradient de 4 à 15 % de méthanol dans le dichlorométhane. Masse: El: mlz 406: [M+] - C$H160, mlz 335: [M+] C4H10N, mlz 72 C4H10N (pic de base). Cl: mlz 548 [M+H]+ (pic de base) , mlz 407: [M+H]+ - C$H16N0 IR KBr 3426; 2923; 2448;1717; 1597; 1563; 1472; 1371; 1165; 1092; 911; 857; 755; 574 et 548 cm-1 Spectre RMN 1H (400MHz) ö en ppm - dans le DMSO-d6: 1,30 (t, J = 7,0 Hz, 6H) ; 1,33 (mf, 6H) ; 1,58 (mf, 2H) ; 1,67 (mf, 2H) ; 2,52 (masqué, 2H) ; 2,79 (mf, 2H) ; 3,01 (mf, 2H) ; 3,36 (mt, J = 7,0 Hz, 1 H) ; 3,48 (mf, 2H) ; 6,78 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,02 (dd, J = 8, 5 et 2,5 Hz, 1 H) ; 7,30 (mf, 1 H) ; 7,56 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7, 70 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,77 (d, J = 2,5 Hz, 1 H) ; 7,82 (mf étalé, 3H) ; 9,00 (mf étalé, 2H) ; 12,45 (s large, 1H) Exemple 22: En utilisant la même méthode que l'exemple 21, les exemples suivants sont réalisés en utilisant le 4-Fluoro- benzenesulfonic acid 2-(8-tertbutoxycarbonylamino-octanoylamino)- benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 20) comme précruseur combiné avec différentes amines. Ces exemples sont présentés dans le tableau suivant: N amine composé caractérisation exemple 22 a N 4-(3-imidazol-1- Spectre RMN 1H ( 300MHz) - S en ppm - dans le DMSO-d6 N yl-propylamino)- : benzenesulfonic 1,31 (mf, 6H) ; de 1, 49 à 1,68 (mf, 4H) ; 2,11 J acid 2-(8-amino- (mt, J = 7,0 Hz, 2H) ; 2,52 (masqué, 2H) É 2,75 octanoylamino)- (mf, 2H) ; 3,11 (t, J = 7,0 Hz, 2H) ; 4,32 (t, J = Ni benzothiazol-6-yl 7,0 Hz, 2H) ; 6,68 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; ester 6,97 (dd, J = 9,0 et 2,5 Hz, 1 H) ; 7,20 (mf très chlorhydrate étalé, 1 H) ; 7,50 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) É 7,67 (d, J = 9,0 Hz, 1H) ; 7,72 (t, J = 2 Hz, 1H) 7,74 (d, J = 2,5 Hz, 1H) ; 7,85 (t, J = 2 Hz, 1 H) ; 7,89 (mf étalé, 3H) ; 9,24 (t, J = 2 Hz, 1 H) ; 12,45 (s large, 1 H) ; 14,6 (mf étalé, 1 H) . 22b N---- 4-(2-ethylamino- IR: KBr 3421; 2931; 2457; 1717; 1596; 1563; 1472; ethylamino)- 1370; 1357; 1199; 1163; 1093; 911; 857; 756; N benzene sulfonic 677; 611; 574 et 547 cm' acid 2-(8-amino- Masse: CI: mlz 534 [M+H]+ (pic de base). octanoylamino)- Spectre RMN 1H ( 400MHz) - ö en ppm - benzothiazol-6-yl dans le DMSO-d6: ester 1,22 (t, J = 7,0 Hz, 3H) ; 1,32 (mf, 6H) ; 1,56 (mf, 2H) ; 1,64 (mf, 2H) ; 2,52 (masqué, 2H) ; 2,79 (mf, 2H) ; 3,01 (mf, 2H) ; 3,10 (mf, 2H) ; 3,45 (mf, 2H) ; 6,73 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,02 (dd, J = 8,5 et 3,0 Hz, 1H) ; 7,22 (mf étalé, 1H); 7,55 (d large, J = 9,0 He, 2H) ; 7,67 (d, J = 8,5 Hz, 1H) ; 7,78 (d, J = 3,0 Hz, 1H) ; 7,82 (mf étalé, 3H) ; 8,92 (mf étalé, 2H) ; 12,4 (s large, 1 H) . 22 c N 4-[2-(2-hydroxy- IR: KBr ethylamino)- 3444; 2926; 2627; 2416; 1715; 1597; ethylamino]- 1563; 1473; 1370; 1196; 1165; 1148; benzenesulfonic 1092; 911; 858; 849; 757; 612; 574 et 549 acid 2-(8-amino- cm"I octanoylamino)Masse: Cl: m/z 550 [M+H]+, mlz 409: [M - benzothiazol-6-yl CO(CH2)7NH2 + H]H+ (pic de base). ester Spectre RMN 1H ( 300MHz) - S en ppm - chlorhydrate dans le DMSO-d6: 1,28 (mf, 6H) ; de 1,43 à 1,67 (mf, 4H) ; 2,52 (masqué, 2H) ; 2,73 (mf, 2H) ; de 3,00 à 3,15 (mf, 4H) ; 3,45 (mf, 2H) ; 3,67 (mf, 2H) ; 6,72 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 6,98 (d large, J = 9,0 Hz, 1H); 7,20 (mf étalé, 1H) ; 7,52 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,65 (d, J = 9,0 Hz, 1H) ; 7,72 (s large, 1H) ; 7,82 (mf étalé, 3H) ; 8,92 (mf étalé, 2H) ; 12,4 (s large, 1 H) . 0 4-(2-Hydroxy-2- Masse: LCMS: m/z 535 [M+H]+ (pic de base), 22 d methyl- mlz 463: [M+H]+ - C4Hg0 N prethyl ino)- Cl: mlz 535 [M+H]+ (pic de base). benzenesulfonic Spectre RMN 1H (300MHz) - S en ppm - acid 2-(8(8-a minodans le DMSO-d6: octanoylamino)- 1,14 (s, 6H) ; 1,29 (mf, 6H) ; 1,53 (mf, 2H) ; benzothiazol-6-yl 1,63 (mf, 2H) ; 2,52 (masqué, 2H) ;2,75 (mf, ester 2H) ; 3,03 (s, 2H) ; 6,75 (d large, J = 9,0 Hz, chlorhydrate 2H) ; 6,97 (dd, J = 9,0 et 2,5 Hz, 1 H) ; 7,42 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,65 (d, J = 9,0 Hz, 1H) ; 7,70 (d, J = 2,5 Hz, 1 H) ; 7,78 (mf étalé, 3H) ; 12,4 (s large, 1 H) . Intermédiaire 23: Préparation du 4-{2-[6-(4Fluoro-benzenesulfonyloxy)-benzo-thiazol-2-ylcarbamoyl]-ethyl}-piperidine1-carboxylic acid tert-butyl ester Selon la méthode de l'intermédiaire 17, le 4-{2-[6-(4-Fluorobenzenesulfonyloxy)-benzothiazol-2-ylcarbamoyl]ethyl}-piperidine-1carboxylic acid tert-butyl ester est préparé en combinant le 4-Fluorobenzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 16) avec du N-Boc-4-piperidinepropionic acid. LC/MS (méthode Al): [M+H]+ :564.16, temps de rétention: 4.24 min. Exemple 24: 4(2-Isopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(3-piperidin-4-ylpropionylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate H HN O S C9 N-vSI-I H-'N O CIH Selon la méthode de l'exemple 18, le 4-(2-Isopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-(3-piperidin-4-yl-propionylamino)-benzothiazol-6yl ester chlorhydrate est préparé en combinant le 4-{2-[6-(4Fluorobenzenesulfonyloxy)-benzothiazol-2-ylcarbamoyl]-ethyl}-piperidine-1carboxylic acid tert-butyl ester (intermédiaire 23) avec la N,Ndiisopropylamine. Le composé issu de la première étape (le 4-(2-{6-[4-(2Isopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonyloxy]-benzothiazol-2-ylcarbamoyl} -ethyl)-piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester) est purifié sur cartouche flash de 5 g de silice de porosité 15-35 p par un gradient de 1 % à 10 % de méthanol dans le dichlorométhane. Masse: LCMS: m/z 546 [M+H]+, m/z 407: [M+H]+ - C5H1oNC2H4CO, mlz 274: [M+ 2H]2+ mlz 294 (pic de base). Spectre RMN 1H ( 300MHz) öen ppm - dans le DMSO-d6: 1,25 (d, J = 7,0 Hz, 6H) ; 1,32 (m, 2H) ; de 1,45 à 1,65 (mf, 3H) ; 1,81 (d large, J = 12,5 Hz, 2H) ; 2,52 (masqué, 2H) ; 2,82 (m, 2H) ; 3,07 (mf, 2H) ; 3,25 (d large, J = 12,5 Hz, 2H) ; 3,35 (masqué, 1H) ; 3,45 (mf, 2H) ; 6,73 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 6,99 (dd, J = 8,5 et 2,5 Hz, 1 H) ; 7, 20 (mf, étalé, 1H) ; 7,52 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,67 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,73 (d, J = 2,5 Hz, 1H) ; 8,40 (mf étalé, 1 H) ; 8,65 (mf étalé, 1H) ; 8,87 (mf étalé, 2H) ; 12,4 (s large, 1H) . Exemple 25: En utilisant la même méthode que l'exemple 24, les exemples suivants sont réalisés en utilisant le 4-{2-[6-(4-Fluoro-benzenesulfonyloxy)-benzothiazol-2ylcarbamoyl]-ethyl}-piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester comme précurseur (intermédiaire 23) combiné avec différentes amines. Ces exemples sont présentés dans le tableau suivant: N exemple a amine composé 4-(3-I m idazol-1-yl-propylamino)-benzenesulfonic acid 2-(3-piperidin-4- yl-propionylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate Caractérisation LCMS: mlz 569 [M+H]+, m/z 430: [M+H]+ - C5H1oNC2H4CO mlz 306 (pic de base) Spectre RMN 1 H ( 300MHz) b en ppm - dans le DMSO-d6: 1,32 (m, 2H) ; de 1,45 à 1,65 (mf, 3H) ; 1,81 (d large, J = 12,5 Hz, 2H) ; 2,10 (mf, 2H) ; 2,52 (masqué, 2H) ; 2,82 (m, 2H) ; 3,10 (mf, 2H) ; 3,23 (d large, J = 12,5 Hz, 2H) ; 4,29 (t, J = 7,0 Hz, 2H) ; 6,65 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 6,98 (dd, J = 8,5 et 2,5 Hz, I H) ; 7,10 (mf étalé, I H) ; 7,48 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,67 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,70 (s large, I H) ; 7,72 (d, J = 2,5 Hz, I H) ; 7,81 (s large, 1H); 8,45 (mf étalé, 1H); 8,72 (mf étalé, 1 H) ; 9,17 (s large, 1H) ; 12,4 (s large, 1H); 14, 4 (mf étalé, 1 H) . LCMS: m/z 532 [M+H]+, m/z 393: [M+H]+C5H10N(CH2)2CO3 mlz 267: [M+ 2H]2+, m/z 287 (pic de base). Spectre RMN 1 H ( 300MHz) 6 en ppm - dans le DMSO-d6: 1,21 (t, J = 6,5 Hz, 3H) ; 1,30 (m, 2H) ; de 1,45 à 1,65 (mf, 3H) ; 1,80 (d large, J = 12,5 Hz, 2H) ; 2,52 (masqué, 2H) ; 2,83 (m, 2H) ; 2,97 (q, J = 6,5 Hz, 2H) ; 3,07 (mf, 2H) ; 3,25 (d large, J = 12,5 Hz, 2H) ; 3,44 (mf, 2H) ; 6,73 (d, large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 6,99 (dd, J = 9,0 et 3,0 Hz, I H) ; 7,15 (mf étalé, 1 H) ; 7,52 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,67 (d, J = 9,0 Hz, 1H); 7,73 (d, J = 3,0 Hz, 1H); 8,35 (mf étalé, I H) ; 8,63 (mf étalé, 1H); 8,81 (mf étalé, 2H) ; 12,4 (s large, I H) . 4-(2-Ethylam ino-ethylam ino)-benzenesulfonic acid 2-(3-piperidin-4-yl- propionylam ino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate /N,,,-- NJr 25b i( 4-[2-(2-Hydroxy-ethylamino)- LCMS: mlz 548 [M+H]+, m/z 409: ethylam ino]-benzenesulfon ic [M+H]+ - C5H1oNC2H4CO,m/z acid 2-(3- piperidin-4-yl275: [M+2H]2+ mlz 295 (pic de propionylamino)- benzothiazol- base). 6-yl ester chlorhydrate Spectre RMN 1H ( 300MHz) 6 en ppm - dans le DMSO-d6: 1,32 (m, 2H) ; de 1,45 à 1,65 (mf, N 3H) ; 1,80 (d large, J = 12,5 Hz, 2H) ; 2,52 (masqué, 2H) ; 2,82 c (m, 2H) ; 3,03 (mf, 2H) ; 3,10 (mf, 2H) ; 3,25 (d large, J = 12,5 Hz, 2H) ; 3,45 (masqué, 2H) ; 3,69 (t,J = 5,5 Hz, 2H) ; 6,72 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 6,99 (dd, J = 8,5 et 2,5 Hz, 1H) ; 7,18 (mf étalé, 1H) ; 7,52 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,67 (d, J = 8,5 Hz, 1H) ; 7,73 (d, J = 2,5 Hz, 1 H) ; 8,50 (mf étalé, 1H) ; 8,75 (mf étalé, 1H) ; 8,91 (mf étalé, 2H) ; 12,4 (s large, 1H) . Intermédiaire 26: Préparation du 4- Isobutylamino-benzenesulfonic acid 2-tert-butoxycarbonylamino- benzothiazol-6-yl ester or( s o o Une solution de 4-Fluoro- benzenesulfonic acid 2-tert-butoxycarbonylaminobenzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 15) (1 g, 2.32 mmol), d'isobutylamine (517 mg, 7.07 mmol), de carbonate de cesium (845 mg, 2.59 mmol)dans 12 ml de DMSO est agitée à 80 C pendant une nuit. Au milieu réactionnel, 60 ml d'eau sont ajoutés. Il est extrait par de l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée par de l'eau et par une solution saturée de chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium puis évaporée à sec. Le résidu est lavé par de l'éther éthylique conduisant à 880 mg de 4-Isobutylaminobenzenesulfonic acid 2-tert-butoxycarbonylamino-benzothiazol-6-yl ester (solide beige) avec un rendement de 80 %. LC/MS (méthode Al): [M+H]+ :478.01, temps de rétention: 4.31 min. intermédiaire 27: Préparation du 4-Isobutylamino-benzenesulfonic acid 2amino-benzothiazol-6-yl ester o I o Une solution de 4-Isobutylamino-benzenesulfonic acid 2-tert- butoxycarbonylamino-benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 26) (880 mg, 1.93 mmol), d'acide trifluoroacétique (5.7 ml, 74 mmol) dans 6 ml de dichlorométhane et 600 pl d'eau est mise sous agitation pendant une nuit à température ambiante. Le milieu réactionnel est concentré à sec et le résidu est lavé par de I'ether éthylique conduisant à 700 mg de 4-Isobutylamino-benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester sous forme de sel d'acide trifluoroacétique (solide blanc) avec un rendement de 52 %. LC/MS (méthode Al): [M+H]+ :378.05, temps de retention: 3.60 min. Exemple 28: Préparation du 4-Isobutylamino-benzenesulfonic acid 2-(2-piperid in-4yl-acetylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate CIH 1 ère étape: Une solution de 4-Isobutylamino-benzenesulfonic acid 2aminobenzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 27) (300 mg, 0.495 mmol) de 4carboxymethyl-piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (361 mg, 1. 485 mmol), d'HBTU (563 mg, 1.485 mmol), de N-N-diisopropylethylamine (432 pl, 2.475 mmol) dans 4 ml de dimethylformamide est agitée à température ambiante pendant une nuit. De l'eau est ajoutée au milieu réactionnel qui est extrait par de l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée par de l'eau, puis par une solution saturée de chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium et concentrée à sec. Le résidu obtenu est purifié par CLHP sur colonne Dynamax C18, 60À, 21 x 300 mm par un oS H N mélange d'eaulacétonitrile 95/5 pendant 5 minutes, par un gradient de 5 à 40 % dans l'eau pendant 5 minutes, par un gradient de 40 à 80 % d'acétonitrile dans l'eau pendant 30 minutes, par un gradient de 80 à 95 % d'acétonitrile dans l'eau pendant 5 minutes, puis par un mélange d'eau/acétonitrile 5/95 pendant 5 minutes avec un débit de 20 ml / min. Les solvants contiennent chacun 0.07 % (v/v) d'acide trifluoroacétique. Les fractions sont collectées toutes les 30 secondes et sont contrôlées par CLHP analytique sur colonne Hypersil C18, 4,6 x 50 mm. Par un gradient de 0 à 100 % d'acétonitrile dans l'eau en 10 minutes à un débit de 1 ml/min. Les solvants contiennent chacun 0.07 % (v/v) d'acide trifluoroacétique. Les fractions contenant l'attendu sont concentrés à sec conduisant au 4-{[6-(4-Isobutylamino-benzenesulfonyloxy)-benzothiazol2-ylcarbamoyl]-methyl} piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester. 2eme étape: Une solution de 4-{[6-(4-Isobutylamino-benzenesulfonyloxy)benzothiazol-2-ylcarbamoyl]-methyl}piperidine-1-carboxylic acid tertbutyl ester (110 mg, 182 pmol), de dioxanne (2 ml) et d'acide chlorhydrique 4N dans le dioxanne est mise sous agitation pendant 2 heures à température ambiante. Le milieu réactionnel est concentré à sec et le résidu obtenu est lavé par de l'éther éthylique conduisant à 183 mg de 4-Isobutylamino- benzenesulfonic acid 2-(2-piperidin-4-yl-acetylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate (poudre blanche) avec un rendement de 64 %. Masse: IE: mlz 502 [M+'], mlz 377: [M+'] - C7H12NO, mlz 212: [SO2PhNHiBu]+. m/z 165: [377 212] +., m/z 126: [C7H12NO]+. (pic de base) . Spectre RMN 1H (300MHz) b en ppm - dans le DMSO-d6: 0,94 (d, J = 6,5 Hz, 6H) ; 1,45 (m, 2H) ; de 1,77 à 1,88 (mf, 3H) ; 2,10 (mf étalé, 1 H) ; 2,52 (masqué, 2H) ; 2,83 (m, 2H) ; 2,91 (d, J = 6,5 Hz, 2H) ; 3,25 (d large, J = 12,5 Hz, 2H) ; 6,67 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,00 (dl, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,15 (mf très étalé, 1 H) ; 7,45 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,67 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,73 (d, J = 2,5 Hz, 1 H) ; 8, 62 (mf étalé, 1H) ; 8,85 (mf étalé, 1 H) ; 12,5 (s large, 1H) Exemple 29: En utilisant la même méthode que l'exemple 28, les exemples suivants sont réalisés en utilisant le 4-Isobutylamino- benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester comme précurseur (intermédiaire 27) combiné avec différents acides. Ces exemples sont présentés dans le tableau suivant: N acide composé Caractérisation exemple 29 a o o 4-Isobutylamino- Masse: LCMS: m/z 517 [M+H]+ (pic benzenesulfonic acid 2-(3- de base) piperidin-4-yl-propionylamino)- IE: m/z 516 [M+'], benzothiazol-6-yl ester m/z 377: [M+.]- C$H14N0, chlorhydrate m/z 212: [SO2PhNHiBu]+. m/z 165: [377 - 212] +. Spectre RMN 1H ( 400MHz) - ö en ppm - dans le DMSO-d6: 0,94 (d, J = 7,0 Hz, 6H) ; 1,32 (m, 2H) ; de 1,50 à 1,65 (mf, 3H) ; de 1,78 à 1,88 (mf, 3H) ; 2,52 (masqué, 2H) ; 2,83 (m, 2H) ; 2,92 (d, J = 7,0 Hz, 2H) ; 3,25 (d, J = 12,5 Hz, 2H) ; 6,67 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,00 (dd, J = 8,5 et 2,5 Hz, 1H) ; de 6,90 à 7,10 (mf très étalé, 1H) ; 7,45 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,68 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,72 (d, J = 2,5 Hz, 1H) ; 8,40 (mf étalé, 1H) ; 8,70 (mf étalé, 1H) ; 12,45 (s large, 1H) . H2N 4-Isobutylamino- Masse: LCMS: m/z 519 [M+H]+ (pic o benzenesulfonic acid 2-(8- de base) amino-octanoylamino)- IE: m/z 518 [M+'], benzothiazol-6-yl ester m1z 377: [M+]- CO(CH2)7NH2, chlorhydrate m/z 212: [SO2PhNHiBu]+. m/z 165: [377 - 212] +. (pic de base). OH Spectre RMN 1H (400MHz) - ö en ppm - dans le DMSO-d6: 0,95 (d, J = 6,5 Hz, 6H) ; 1,32 (mf, 29b 6H) ; 1,55 (mf, 2H) ; 1,64 (mf, 2H) ; 1,83 (mt, J = 6,5 Hz, 1H); 2,52 (masqué, 2H) ; 2,78 (mf, 2H) ; 2,91 (d, J = 6,5 Hz, 2H) ; 6,67 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 6,98 (d large, J = 9,0 Hz, 1H) 7,45 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,68 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,72 (s large, 1H) 7,89 (mf étalé, 3H) ; 12,4 (s large, 1H) . Intermédiaire 30: Préparation de Thiophene-2-sulfonic acid 2-tert-5 butoxycarbonyl-amino-benzothiazol-6yl ester S> n \\ // Une solution de (6-Hydroxy-benzothiazol-2-yl)carbamic acid tert-butyl ester (intermédiaire 14) (527 mg, 1.979 mmol), de 2-thiophènesulfonylchloride (433 mg, 2.37 mmol), de triethylamine (677 pI, 4.75 mmol) dans 10 ml d'acétone est mise sous agitation pendant une nuit à temperature ambiante. Le milieu réactionnel est concentré à sec. Le résidu obtenu est lavé à l'eau, à l'acétone puis à l'éther éthylique conduisant à 621 mg de Thiophene-2-sulfonic acid 2-tertbutoxycarbonylamino-benzothiazol-6-yl ester (poudre gris clair) avec un rendement de 76 %. LCIMS: [M+H]+=412.98, temps de rétention: 3.99 min. lintermédiaire 31: Préparation du Thiophene-2-sulfonic acid 2-aminobenzothiazol-6-yl ester S v,S 0 8 H2NN Une solution de Thiophene-2-sulfonic acid 2-tert-butoxycarbonylamino- benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 30) (1.5 g, 3.63 mmol), d'acide trifluoroacétique (15 ml, 196 mmol) dans 15 ml de dichloromethane et 600 pl d'eau est mise sous agitation pendant 2 heures à temperature ambiante. Le milieu réactionnel est concentré à sec conduisant à 900 mg de Thiophene-2-sulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester sous forme de sel d'acide trifluoroacétique (huile) avec un rendement de 76 %. LC/MS (méthode Al): [M+H]+ :313, temps de rétention: 3.11 min. Exemple 32: Préparation du Thiophene-2-sulfonic acid 2-[(piperidine-4-carbonyl)amino]-benzothiazol-6-yl ester; compound with trifluoro-acetic acid O I ère étape: Une solution de Thiophene-2-sulfonic acid 2-aminobenzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 31) (80 mg, 0.256 mmol), de Bocisonipecotic acid OH HN H S N O (176 mg, 0.768 mmol) d'HBTU (291 mg, 0.768 mmol), de N,Ndiisopropylethylamine (223 pl, 1.28 mmol) dans 4 ml de dimethylformamide est mise sous agitation pendant 3 jours à température ambiante. 30 ml d'eau sont ajoutés au milieu réactionnel qui est extrait par de l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée par de l'eau et par une solution saturée de chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium et concentrée à sec conduisant au 4-[6-Thiophene-2-sulfonyloxy)benzothiazol2-ylcarbamoyl]-piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester. LC/MS:[M+H]+ :523.96, temps de rétention: 4.00 min. 2ème étape: Une solution de 4-[6-Thiophene-2-sulfonyloxy)benzothiazol-2- yl carbamoyl]-piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester, d'acide trifluoroactéique (1.5 ml) dans 1.5 ml de dichlorométhane et 100 pI d'eau est mise sous agitation pendant une nuit à température ambiante. Le milieu réactionnel est concentré à sec, repris dans 500 pI de DMSO et un échantillon est purifié par LC/MS préparative (méthode B), conduisant à 3 mg de Thiophene-2-sulfonic acid 2-[(piperidine-4-carbonyl)-amino]benzothiazol-6-yI ester; compound with trifluoro-acetic acid. LC/MS: [M+H]+ :423.97, temps de rétention: 2.74 min. Exemple 33: En utilisant la même méthode que l'exemple 32, les exemples suivants sont réalisés en utilisant le Thiophene-2-sulfonic acid 2-aminobenzothiazol-6yl ester comme précurseur (intermédiaire 31) combiné avec différents acides. Ces exemples sont présentés dans le tableau suivant, les LCMS sont réalisés selon la méthode Al: N acide composé [M+H]+ Temps exemple de rétention (min) 33a H Thiophene-2-sulfonic acid 2-(3- 452.01 2.77 o'Co piperidin-4-yl-propionylamino)- aenzothiazol-6-yl ester; compound with trifluoro-acetic acid 33b NI Thiophene-2-sulfonic acid 2-(2-amino- 369.98 2.62 o) acetylamino)- benzothiazol-6-yl ester; o 3ompound with trifluoro-acetic acid 33c Ni Thiophene-2-sulfonic acid 2-(2- 384.00 2.67 O1) methylamino-acetylamino)- O benzothiazol-6-yl ester; compound /vith trifluoro-acetic acid 33d O Thiophene-2-sulfonic acid 2-(3-amino- 383.99 2.65 O Dropionylamino)- benzothiazol-6-yl aster; compound with trifluoro-acetic acid 33e N Thiophene-2-sulfonic acid 2-(2-amino- 397.96 2.68 o 2-methyl-propionylamino)- aenzothiazol-6-yi ester; compound Nith trifluoro-acetic acid 33f H2N Thiophene-2-sulfonic acid 2-(8-amino- 453.98 2.91 b Dctanoylamino) -benzothiazol-6-yl OH aster; compound with trifluoro-acetic acid 33g OO Thiophene-2-sulfonic acid 2-(3- 440.03 2.81 N I diethylamino-propionylamino)- J benzothiazol-6-yl ester compose avec acide trifluoroacétique 33h O Thiophene-2-sulfonic acid 2- 380.99 3.63 O;cyclopropanecarbonyl-amino)- benzothiazol-6-yl ester Intermédiaire 34: Préparation du 4-(2-d iisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6- yl ester H2N Une solution de 4-fluoro-benzenesulfonic acid 2-amino- benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 16) (100 mg, 0.225 mmol. et de N,Ndiisopropylethylenediamine (395 pI, 2.25 mmol.) dans 5 ml de NMP est chauffée à 150 C par micro-ondes "Emrys TM Optimizer" pendant 20 minutes. Le brut réactionnel est repris par 50 ml d'acétate d'éthyle, la solution résultante est lavée par 5 fois 50 ml d'eau. Après décantation la phase organique est séchée sur sulfate de sodium, filtrée et évaporée sous pression réduite pour donner 100 mg de 4-(2-diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester. LC/MS (méthode A1) : [M+H]+ = 449.22, temps de retention: 2.36 min. Intermédiaire 35: Préparation du 3-{6-[4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonyloxy]-benzothiazol-2-ylcarbamoyl}-azetidine-l-carboxylic acid tert-butyl ester O o 0 0 /\ 5 Sur une solution de 4-(2diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6yl ester (intermédiaire 34) (100 mg, 0.225 mmol.) dans 5 ml de dimethylformamide sont ajoutés 68 mg de Azetidine-I,3-dicarboxylic acid mono-tert-butyl ester, 256 mg de HBTU, 235 pl de DIEA. La solution obtenue est agitée 20 heures à température ambiante. Après avoir ajouté 50 ml d'eau, le mélange réactionnel est extrait par 3 fois 25 ml d'acétate d'éthyle. Les extraits séchés sur sulfate de magnésium, filtrés et évaporés sous pression réduite, conduisent à 700 mg d'huile brute. Cette huile est purifiée par élution dans un mélange dichloromethane / methanol 95:5 débit de 10 mllmn.sur 20 g de silice pour donner 39 mg de 3-{6-[4-(2Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonyloxy]-benzothiazol-2ylcarbamoyl}-azetidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester. LC/MS: [M+H]+ : 632.11 Temps de rétention: 3.00 min. Méthode Al Intermédiare 36: Préparation du 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-(8-tert-butoxycarbonylamino-octanoylamino)benzothiazol-6-yl ester o ö Sur une solution de 4-(2-diisopropylaminoethylamino)-benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 34) (100 mg, 0.225 mmol.) dans 5 ml de dimethylformamide sont ajoutés 175 mg de 8-tert-Butoxycarbonylamino-octanoic acid, 256 mg de HBTU, 235 pI de DIEA. La solution obtenue est agitée 20 heures à température ambiante. Après avoir ajouté 50 ml d'eau, le mélange réactionnel est extrait par 3 fois 25 ml d'acétate d'éthyle. Les extraits sont séchés sur sulfate de magnésium, filtrés et évaporés sous pression réduite, et conduisent à 338 mg d'huile brute. Cette huile est purifiée par élution dans un mélange dichloromethane/ methanol 95:5 débit de 10 mllmn. sur 10 g de silice pour donner 153 mg de 4-(2-Diisopropylaminoethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(8-tert-butoxycarbonylaminooctanoylamino)-benzo-thiazol-6-yl ester. LC/MS: [M+H]+ : 690.33 Temps de rétention: 3.25 min. Méthode Al Intermédiaire 37: Préparation du 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzene-sulfonic acid 2-[(1-tert-butoxycarbonylamino-cyclopentanecarbonyl) -amino]-benzothiazol-6-yl ester. N O I I O Sur une solution de 4-(2-diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 34) (100 mg, 0.225 mmol.) dans 5 ml de diméthylformamide sont ajoutés 155 mg de 1-tertButoxycarbonylamino-cyclopentanecarboxylic acid, 256 mg de HBTU, 235 pI de DIEA. La solution obtenue est agitée 20 heures à température ambiante. Après avoir ajouté 50 ml d'eau, le mélange réactionnel est extrait par 3 fois 25 ml d'acétate d'éthyle. Les extraits sont séchés sur sulfate de magnésium, filtrés et évaporés sous pression réduite, et conduisent à 720 mg d'huile brute. Cette huile est purifiée par élution dans un mélange dichloromethane / methanol 95:5 débit de 10 ml/mn.sur 10 g de silice pour donner 120 mg de 4- (2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-[(1-tert- butoxycarbonyl amino-cyclopentanecarbonyl)-amino]-benzothiazol-6-yl ester. LC/MS: [M+H]+ : 660.56 Temps de rétention: 3.11 min. Méthode Al Iintermédiaire 38: Préparation du 4-({6-[4-(2-Diisopropylamino-ethylamino) -benzenesulfonyloxy]-benzothiazol-2-carbamoyl}-methyl)-piperidine-1carboxylic acid tert-butyl ester o ' 5 Sur une solution de 4-(2diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6yl ester (intermédiaire 34) (100 mg, 0.225 mmol.) dans 5 ml de dimethylformamide sont ajoutés 164 mg de 4-Carboxymethylpiperidine-1carboxylic acid tert-butyl ester, 256 mg de HBTU, 235 pl de DIEA. La solution obtenue est agitée 20 heures à température ambiante. Après avoir ajouté 50 ml d'eau, le mélange réactionnel est extrait par 3 fois 25 ml d'acétate d'éthyle. Les extraits sont séchés sur sulfate de magnésium, filtrés et évaporés sous pression réduite, et conduisent à 380 mg d'huile brute. Cette huile est purifiée par élution dans un mélange dichloromethanel methanol 95:5 débit de 10 mllmn.sur 10 g de silice pour donner 90 mg de 4-({6-[4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonyloxy]-benzothiazol2-carbamoyl}-methyl)-piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester. LC/MS: [M+H]+ : 674.57 Temps de rétention: 3.11 mim. Méthode Al Exemple 39: Préparation du 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-[(azetidine-3-carbonyl)-amino]-benzothiazol-6-yl ester. o s N-- N A une solution de 39 mg de 3-{6-[4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonyloxy]-benzothiazol-2-ylcarbamoyl}-azetidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (intermédiaire 35) dans 1.5 ml de dioxanne est ajoutée 1.5 ml de dioxanne chlorhydrique. La solution résultante est agitée pendant 5 heures à température ambiante puis évaporée sous pression réduite pour conduire à 49 mg d'huile, purifiée par LC/MS donne 9.7 mg de 4-(2- Diisopropylaminoethylamino)-benzenesulfonic acid 2-[(azetidine-3-carbonyl) -amino]-benzothiazol-6-yl ester. MS: DCI: m/z=532 [M+H]+ ES+ : mlz=532 [M+H]+ ; m/z=266,8 [M+2H]++ A une solution de 153 mg de 3-{6-[4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonyloxy]-benzothiazol-2-ylcarbamoyl}-azetidine-1 -carboxylic acid tert-butyl ester (intermédiaire 36) dans 3 ml de dioxanne est ajoutée 3 ml de dioxanne chlorhydrique. La solution résultante est agitée pendant 5 heures à température ambiante puis évaporée sous pression réduite pour conduire à 152 mg de 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)- benzenesulfonic acid 2-(8- amino-octanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester. MS: DCI: m/z=590 [M+H]+ ES+ : m/z=590 [MH]+ ; m/z=295.95 [M+2H]++ Spectre RMN 1H ( 300MHz) 8 en ppm - dans le DMSO-d6: De 1,20 à 1,38 (mf, 16H) ; de 1,42 à 1,68 (mf, 6H) ; 2,29 (t, J = 7,0 Hz, 2H) ; 2,74 (mf, 4H) ; 3,16 (mf, 2H) ; de 3,50 à 3,80 (mf, 2H) ; 6,71 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 6,96 (d large, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,33 (t large, J = 6, 0 Hz, 1 H) ; 7,51 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,64 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,68 (s large, 1 H) ; 7,85 (mf étalé, 3H) ; 9,98 (mf, 1H) ; 12,4 (s large, 1 H) . Exemple 41: Préparation du 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)- benzene-25 sulfonic acid 2-[(1-amino-cyclopentanecarbonyl)-amino]- benzothiazol-6-yl ester Exemple 40: Préparation du 4-(2-Diisopropylamino- ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(8-amino-octanoylamino)-benzothiazol-6- yl ester. 1-12N\ O Ö N A une solution de 120 mg de 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-[(1-tert-butoxycarbonylamino-cyclopentanecarbonyl)amino]-benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 37) dans 3 ml de dioxanne est ajoutée 3 ml de dioxanne chlorhydrique. La solution résultante est agitée pendant 5 heures à température ambiante puis évaporée sous pression réduite pour conduire à 90 mg d'huile, purifiée par LC/MS donne 32 mg de 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-[(1aminocyclopentanecarbonyl)-amino]-benzothiazol-6-yl ester. Spectre RMN 1H ( 300MHz) b en ppm - dans le DMSO-d6 + 1 goutte AcCOD: 1,26 (d, J = 6,5 Hz, 12H) ; de 1,85 à 2,02 (mf, 6H) ; 2,35 (mf, 2H) ; 3, 19 (t, J = 7,0 Hz, 2H) ; 3,50 (t, J = 7,0 Hz, 2H) ; 3,68 (mt, J = 6,5 Hz, 2H) ; 6,72 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 6,98 (dd, J = 8,5 et 2,5 Hz, 1 H) ; 7,55 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,76 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,85 (d, J =2,5 Hz, 1 H) . Exemple 42: Préparation du 4-(2-Diisopropylaminoethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(2-piperidin-4-yl-acetylamino)benzothiazol-6-yl ester N A une solution de 90 mg de 4-({6-[4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonyloxy]-benzothiazol-2-carbamoyl}-methyl)-piperidine-1carboxylic acid tert-butyl ester (intermédiaire 38) dans 3 ml de dioxanne est ajoutée 3 ml de dioxanne chlorhydrique. La solution résultante est agitée pendant 5 heures à température ambiante puis évaporée sous pression réduite pour conduire à 90 mg d'huile, purifiée par LC/MS donne 101 mg de 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(2-piperidin-4ylacetylamino)-benzo-thiazol-6-yl ester. LC/MS: [M+H]+ : 574.23 Temps de rétention: 2.24 min. Méthode Al MS: DCI: m/z=574 [MH+] ES+ : mlz=574 [MH+] ; m/z=287,9 [(M+2H)/2]+ Spectre RMN 1H ( 400MHz) 8 en ppm - dans le DMSO-d6 + 1 goutte AcCOD à 383 K (110 C) : 1,33 (d, J = 7,0 Hz, 12H) ; de 1,42 à 1,58 (mf, 2H) ; de 1,85 à 1,95 (mf, 2H) ; 2,15 (mf, 1H) ; 2,31 (d, J = 7,0 Hz, 2H) ; de 2,87 à 2,97 (mf, 2H) ; 3,22 (t, J = 6,5 Hz, 2H) ; de 3,24 à 3,32 (mf, 2H) ; 3,58 (t, J = 6,5 Hz, 2H) ; de 3,65 à 3,75 (mf, 2H) ; 6,75 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,08 (dd, J = 8,5 et 2,5 Hz, 1H) ; 7,58 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,62 (d, J = 2,5 Hz, 1 H) ; 7,65 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . Exemple 43: 4 (2Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-acetylaminobenzothiazol-6-yl ester N N Sur une solution de 4-(2-diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester(intermédiaire 34) (70 mg, 0.156 mmol.) dans 4 ml de dimethylformamide sont ajoutés 28 mg d'acide acétique, 177.5 mg de HBTU, 163 pl de DIEA. La solution obtenue est agitée 20 heures à température ambiante. Après avoir ajouté 50 ml d'eau, le mélange réactionnel est extrait par 3 fois 25 ml d'acétate d'éthyle. Les extraits séchés sur sulfate de magnésium, filtrés et évaporés sous pression réduite, conduisent à 130 mg d'huile brute. Cette huile est purifiée par LC/MS donner 15 mg de 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-acetylaminobenzo-thiazol-6-yl ester. IR: 3420; 2989; 2680; 1674; 1599; 1542; 1452; 1367; 1268; 1202; 1176; 25 1161; 1134; 1094; 914; 851; 831; 753; 720 et 579 cm-1 Spectre RMN 1H ( 300MHz) 8 en ppm - dans le DMSO-d6: 1,30 (d, J = 6,5 Hz, 12H) ; 2,22 (s, 3H) ; 3,23 (mf, 2H) ; 3,51 (mf, 2H) ; 3,72 (mf, 2H) ; 6,74 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 6,90 (mf étalé, 1 H) ; 7,03 (d large, J = 9,0 Hz, 1H) ; 7,56 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,68 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,70 (d, J = 3,0 Hz, 1H) ; 8,46 (mf, 1H) ; 12,4 (s large, 1 H) . Exemple 44: 4(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(2-methoxyacetylamino)-benzothiazol-6-yl ester o o o,o s Sur une solution de 4-(2diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 34) (70 mg, 0.156 mmol.) dans 4 ml de dimethylformamide sont ajoutés 42.1 mg d'acide méthoxyacétique, 177.5 mg de HBTU, 163 pl de DIEA. La solution obtenue est agitée 20 heures à température ambiante. Après avoir ajouté 50 ml d'eau, le mélange réactionnel est extrait par 3 fois 25 ml d'acétate d'éthyle. Les extraits séchés sur sulfate de magnésium, filtrés et évaporés sous pression réduite, conduisent à 98 mg d'huile brute. Cette huile est purifiée par LC/MS donner 47.8 mg de 4-(2-Diisopropylaminoethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(2-methoxy-acetyl-amino)-benzothiazol6-yl ester. I R: 3390; 2993; 2666; 1674; 1599; 1541; 1452; 1365; 1269; 1202; 1175; 1161; 1125; 1094; 914; 852; 830; 757; 720 et 570 cm-1 Spectre RMN 1H (300MHz) 8 en ppm - dans le DMSO-d6: 1,29 (d, J = 6,5 Hz, 12H) ; 3,23 (mf, 2H) ; 3,40 (s, 3H) ; 3,52 (mf, 2H) ; 3,72 (mf étalé, 2H) ; 4,22 (s, 2H) ; 6,75 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 6, 90 (t large, J = 6,0 Hz, 1H) ; 7,05 (dd, J = 9,0 et 2,5 Hz, 1H) ; 7,55 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,70 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,72 (d, J = 2,5 Hz, 1H) ; 8,48 (mf, 1 H) ; 12,35 (s, 1H ) Exemple 45: 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)- benzenesulfonic acid 2-(cyclopentanecarbonyl-amino)-enzothiazol-6-yl ester. o o,, s o Sur une solution de 4-(2-diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 34) (70 mg, 0.156 mmol.) dans 4 ml de dimethylformamide sont ajoutés 42.1 mg d'acide méthoxyacétique, 177.5 mg de HBTU, 163 pl de DIEA. La solution obtenue est agitée 20 heures à température ambiante. Après avoir ajouté 50 ml d'eau, le mélange réactionnel est extrait par 3 fois 25 ml d'acétate d'éthyle. Les extraits séchés sur sulfate de magnésium, filtrés et évaporés sous pression réduite, conduisent à 135 mg d'huile brute. Cette huile est purifiée par LC/MS donner 55.2 mg de 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(cyclopentane-carbonyl-amino)-benzothiazol-6-yl ester. IR: 3423; 2968; 2672; 1673; 1599; 1541; 1451; 1365; 1261; 1202; 1175; 1161; 1137; 1094; 916; 852; 829; 752; 720 et 568 cm-1 Spectre RMN 1H ( 300MHz) S en ppm - dans le DMSO-d6 + 1 goutte AcOD: 1,27 (d, J = 6,5 Hz, 12H) ; de 1,52 à 1,80 (mf, 7H) ; 1,90 (mf, 1 H) ; 2, 97 (mt, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 3,20 (t, J = 6,5 Hz, 2H) ; 3,50 (t, J = 6,5 Hz, 2H) ; 3, 69 (mt, J = 6,5Hz, 2H) ; 6,71 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,04 (dd, J = 9,0 et 2,5 Hz, 1H) ;7,53 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,58 (d, J = 2,5 Hz, 1 H) ; 7,64 (d, J = 9,0 Hz, 1H) . Intermédiaire 46 - Préparation du 4-Fluorobenzenesulfonic acid 2-(6-tertbutoxycarbonylamino-hexanoylamino)benzothiazol-6-yl ester \ \ \NHBOC Dans un ballon de 20 ml muni d'un barreau aimanté, une solution de 4-fluorobenzenesulfonic acid 2-aminobenzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 16, brevetbenzothiazole_V2) (0.15 g 0.46 mmole), de BOC-6-Aminohexanoic acid (0.128 g 0.555 mmole), d'HATU (0.211 g 0.555 mmole), de N,N-diisopropylethylamine (95 pl 0.555 mmole) dans 2ml de DMF est chauffé vers 60 C (ext.) durant 5 heures. Le milieu réactionnel est extrait à l'acétate d'éthyle, lavé avec une solution d'acide chlorhydrique N puis à l'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée à sec. Le résidu est purifié par chromatographie à l'aide du Quad 12/25 sur une cartouche de type Biotage (40 g de silice) en éluant avec un mélange chlorure de méthylène- Isopropanol 97: 3. Après évaporation du solvant, 0.199 g de 4-Fluoro- benzenesulfonic acid 2-(6-tert-butoxycarbonylamino-hexanoylamino)- benzothiazol-6-yl ester sont récupérés avec un rendement de 80 %. Intermédiaire 47 - Préparation du 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-(6-tert-butoxycarbonylamino-hexanoylamino)- 5 benzothiazol-6-yl ester o \ \ \ NHBOC o I ro Une solution de 0.194 g de 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-(6tertbutoxycarbonylamino-hexanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester (0.194 g 0. 36 mmole) et de N,N-diisopropylethylenediamine (0.33 ml 1.8 mmole) dans 4 ml de NMP est chauffée 10 minutes à 150 C au micro-ondes. Le brut réactionnel est extrait à l'AcOEt, lavé à l'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée: on obtient 1.8 g (liquide jaune). On chromatographie sur silice 60 (40-63 pm) en éluant avec un mélange CH2Cl2-MeOH 93: 7. Après évaporation du solvant on obtient une gomme (0.215 g) que l'on triture à l'eau. On élimine l'eau, puis reprend la gomme avec du toluène et évapore à sec ce qui conduit à 0.13 g de 4-(2- Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(6-tertbutoxycarbonylamino-hexanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester soit un rendement de 54 %. Exemple 49 - Préparation du 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-(6-amino-hexanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate. \ CIH CIH J o N \ O Ig \ N H \ \ H IIo s \ O NH2 Dans un ballon de 10 ml muni d'un barreau aimanté, on introduit 0.12 g de 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-(6-tert-butoxycarbonylamino-hexanoylamino)benzothiazol-6-yl ester dans 2 ml d'AcOEt, puis on ajoute goutte à goutte 0.5 ml d'acide chlorhydrique en solution dans I'AcOEt. IL se forme une gomme que l'on agite 1 heure à température ambiante. Le milieu réactionnel est repris à l'eau puis amener à pH 8 avec de l'ammoniaque à 28 %. On extrait à I'AcOEt, lave à l'eau puis séche la phase organique sur sulfate de sodium. Après filtration, le filtrat est évaporé à sec, conduisant à 0.1 g de poudre blanche qui est mise en solution dans 5 ml de méthanol puis amenée à pH 2 avec de l'acide chlorhydrique en solution dans l'AcOEt. La suspension est évaporée à secet reprise avec de 5 ml d'eau avant d'être lyophilisée conduisant à 91 mg de 4-(2- Diisopropylaminoethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(6-amino-hexanoylamino) -benzothiazol- 6-yI ester chlorhydrate soit 80 % de rendement. Intermédiaire 50 - Préparation du 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-(6tertbutoxycarbonylamino-heptanoylamino)-benzothiazol-6-yl 0 %H Selon la méthode de l'intermédiaire 46, le 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-(6-tert-butoxycarbonylamino-heptanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester est préparé par action du 4-fluoro-benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol6-yl ester (intermédiaire 16, brevetbenzothiazole_V2) avec du BOC7-aminoheptanoic acid conduisant à 0.164 g de produit. Intermédiaire 51 - Préparation du 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-(6-tert-butoxycarbonylamino-heptanoylamino)benzothiazol-6-yl ester Selon la méthode l'intermédiaire 47, le 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)- benzenesulfonic acid 2-(6-tert-butoxycarbonylamino-heptanoylamino)- benzothiazol-6-yl ester est préparé par action du 4-Fluoro- benzenesulfonic acid 2-(6-tert-butoxycarbonylamino-heptanoylamino)- benzothiazol-6-yl ester avec la N,N-diisopropylethylenediamine. Le produit est purifié par chromatographie sur colonne de type Biotage (8 g de silice) en éluant avec un mélange CH2Cl2-MeOH 95: 5, conduisant à 86 mg de produit soit 44 % de rendement. Exemple 52 - Préparation du 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-(6-amino-heptanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester 20 chlorhydrate. N H Selon la méthode de l'exemple 49, le 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-(6-amino-heptanoylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate est préparé par hydrolyse du 4-(2-Diisopropylaminoethylamino)-benzenesulfonic acid 2-(6-tert-butoxycarbonylaminoheptanoylamino)- benzothiazol-6-yl en présence d'acide chlorhydrique en solution dans l'AcOEt, conduisant à 47 mg de chlorhydrate soit 77% de rendement. Exemple 53 - Préparation du 4-(2-isopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate Une solution de 4-fluoro-benzenesulfonic 2(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester (exemple 53, brevetbenzothiazole V2) (145 mg, 0.37 mmol) et de Nisopropylethylenediamine (233 pl, 1.85 mmol) dans 4.5 ml de NMP est chauffée à 150 C au micro-ondes pendant 5 minutes. Le brut réactionnel est dilué à l'AcOEt, on lave 3 fois à l'eau et extrait deux fois à I'AcOEt. Les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de sodium, filtrées puis amenées à sec. Les 165 mg de produit brut sont purifiés par chromatographie sur silice: colonne AIT 8 g. Eluant: CH2Cl2 / MeOH/NH4OH: 90/10/1. Le solide obtenu (96 mg) est mis en solution dans I'AcOEt puis amené à pH 2 avec de l'acide chlorhydrique en solution dans l'AcOEt. La suspension est évaporée à sec et reprise avec 5 ml d'eau avant d'être lyophilisée pour conduire à 76 mg de 4-(2-isopropylaminoethylamino)-benzenesulfonic 2-(cyclopropanecarbonylamino)-benzothiazol-6yl ester chlorhydrate. Intermédiaire 54 - Préparation du 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2isobutyrylamino-benzothiazol-6-yl ester C1H C1H NH F Selon la méthode de l'intermédiaire 46, le 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-isobutyrylamino-benzothiazol-6-yl ester est préparé par action du 4fluorobenzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 16, brevetbenzothiazole_V2) avec l'isobutyric acid. Le brut réactionnel est cristallisé avec de l'éther éthylique, après essorage on isole 0.17 g de solide incolore soit 86 % de rendement. Exemple 55 - Préparation du 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-isobutyrylamino-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate CIH HN CIH Selon la méthode de l'exemple 53, le 2, 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-isobutyrylamino-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate est préparé par action du 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2isobutyrylaminobenzothiazol-6-yl ester avec la N,N-d iisopropyléthylenediamine. Le brut réactionnel est extrait à dAcOEt, lavé à l'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée: on obtient 0.327 g de produit brut qui est chromatographié sur colonne de silice biotage (40 g) en Muant avec un mélange CH2Cl2-MeOH 90: 10. L'huile obtenue cristallise dans l'heptane. Le produit est redissous dans 5 ml d'AcOEt puis on ajoute une solution d'acide chlorhydrique dans l'AcOEt goutte à goutte jusqu'à pH 2. Le chlorhydrate est essoré, lavé à IAcOEt puis séché sous vide à 40 C. On isole 0.112 g de 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)-benzenesulfonic acid 2isobutyrylamino-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate soit 42 % de rendement. Intermédiaire 56 - Préparation du 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2propionylamino-benzothiazol-6-yl ester Selon la méthode de l'intermédiaire 46, le 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-propionylamino- benzothiazol-6-yl ester est préparé par action du 4-fluorobenzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester (intermédiaire 16, brevetbenzothiazole V2) avec du propionic acid. Le produit, 0.397 g, est obtenu avec un rendement de 93 %. CIH Selon la méthode de l'exemple 53, le 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-propionylamino-benzothiazol-6-yl ester est préparé par action du 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-propionylamino-benzothiazol6-yl ester avec la N,N-diisopropyléthylenediamine en chauffant 10 minutes au micro-ondes à 150 C. Le produit, 0.09 g, est obtenu après purification avec un rendement de 45 % sous forme de chlorhydrate. Exemple 58 - Préparation du 4-(2-Hydroxy-2-methyl-propylamino)benzenesulfonic acid 2-propionylamino-benzothiazol-6-yl ester N H Exemple 57 - Préparation du 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-propionylamino-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate. N H * Selon la méthode de l'exemple 53, le 4-(2-Hydroxy-2-methyl-propylamino)benzenesulfonic acid 2-propionylamino-benzothiazol-6-yl ester est préparé par action du 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-propionylamino-benzothiazol6-yl ester avec la 1-amino-2-methyl-propan-2-ol en chauffant 20 minutes au micro-ondes à 150 C. Le produit, 0.096 g, est obtenu après purification avec un rendement de 50 % sous forme de chlorhydrate. Intermédiaire 59 - 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2(cyclobutanecarbonylamino)-benzothiazol-6-yl ester o '1s o Selon la méthode de l'intermédiaire 46, le 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2(cyclobutanecarbonyl-amino)-benzothiazol-6-yl ester est préparé par action du 4-fluoro-benzenesulfonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester avec le cyclobutanecarboxylic acid. Exemple 60 - Préparation du 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-(cyclobutanecarbonyl-amino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate CIH Selon la méthode de l'exemple 53, le 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-(cyclobutanecarbonyl-amino)-benzothiazol-6-yl ester est préparé par action du 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2propionylaminobenzothiazol-6-yl ester avec la N,Ndiisopropyléthylenediamine en chauffant 10 minutes au micro-ondes à 150 C. Le produit, 0.054 g, est obtenu après purification avec un rendement de 18 % sous forme de chlorhydrate. Exemple 61 - Préparation du 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-(3-pyridin-3yl-25 propionylamino)-benzothiazol-6-yl ester. Selon la méthode de l'intermédiaire 46, le 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-(3-pyrid in-3-yl-propionylamino)-benzothiazol-6-yl ester est préparé par action du 4-fuoro-benzenesuifonic acid 2-amino-benzothiazol-6-yl ester avec le 3-(3- pyridyl)-propionic acid. Le produit est obtenu avec un rendement quantitatif. Exemple 62 - Préparation du 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-(3-pyridin-3-yl-propionylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate. Selon la méthode de l'exemple 7, le 4-(2-Diisopropylamino-ethylamino)benzenesulfonic acid 2-(3-pyridin-3-yl-propionylamino)-benzothiazol-6-yl ester est préparé par action du 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-(3pyridin-3-ylpropionylamino)-benzothiazol-6-yl ester avec la N,N-d iisopropyléthylenediamine en chauffant 10 minutes au micro-ondes à 150 C. Le produit, 0.045 g, est obtenu après purification avec un rendement de 23 % sous forme de chlorhydrate. Exemple 63 - Préparation du 4-(2-Hydroxy-2-methyl-propylamino)benzenesulfonic acid 2-(3-pyridin-3-yl-propionylamino)-benzothiazol-6-yl ester chlorhydrate. N OH H Selon la méthode de l'exemple 53, le 4-(2-Hydroxy-2-methyl-propylamino)benzenesulfonic acid 2-(3-pyridin-3-yl-propionylamino)-benzothiazol-6-yl ester est préparé par action du 4-Fluoro-benzenesulfonic acid 2-(3pyridin-3-yl- propionylamino)-benzothiazol-6-yl ester avec la 1-amino-2-methyl-propan-2- ol en chauffant 20 minutes au micro-ondes à 150 C. Le produit, 0.104 g, est obtenu après purification avec un rendement de 52 % sous forme de chlorhydrate. Protocoles expérimentaux sur les tests biochimiques 1 Protocole CDK2/cycline E: Purification du complexe CDK2/CyclineE-(His)6 par IMAC (Immobilized Metal Affinity Chromatography) : Deux baculovirus recombinants portant les séquences humaines codant respectivement pour CDK2 et la CyclineE (cette dernière comportant un tag hexa-histidine en C terminal) sont utilisés pour co-infecter des cellules d'insecte Sf21. Deux à trois jours après le début de la co-infection, les cellules sont récoltées par centrifugation, puis conservées à -40 C jusqu'à leur utilisation. Après décongélation et lyse mécanique des cellules, le complexe présent dans le surnageant de lyse est purifié par chromatographie d'affinité sur Nickel (IMAC), et conservé à -80 C. Essai Flashplate CDK2/CyclinE en format 96 puits. Un format en plaques 96 puits coatés à la streptavidine est utilisé pour tester l'activité des composés sur l'activité kinase de CDK2/Cycline E. Pour réaliser cet essai, le substrat peptidique biotynilé, fragment de la protéine pRb, (biotinyl-SACPLNLPLQNNHTAADMYLSPVRSPKKKGSTTR- OH) est solubilisé à la concentration de 1 mM dans du tampon kinase (HEPES/ NaOH 50 mM, NaCI 1 mM, MgCl2 5 mM, pH 7.5) afin de constituer une solution-stock conservée à -20 C sous forme d'aliquots de 110 pl. Le jour de l'expérience, un aliquot de cette solution est décongelé et dilué dans du tampon kinase contenant 1 mM de Dithiothréitol, ajouté au tampon extemporanément, afin d'obtenir une concentration de 14.3 pM. 70 pI de cette solution sont ajoutés dans chaque puits de la Flashplate afin d'obtenir une concentration finale en substrat de 10 pM lors de la réaction enzymatique conduite dans un volume final du milieu réactionnel de 100 pI (cf. ci-après). Des dilutions intermédiaires d'inhibiteurs (produits de l'invention) à différentes concentrations sont préparées dans le DMSO à partir de solutions stock à 10 mM dans des tubes séparés. On réalise ainsi des dilutions à 1000 pM, 333.3 pM, 111.1 pM, 37.03 pM, 12.35 pM, 4.11 pM et 1.37 pM. Un pl de chacune de ces solutions (ou 1 pl de DMSO pour les contrôles) est transferré dans les puits de la plaque de test. Dans chaque puits, sont ensuite ajoutés 19 pI d'une solution d'un mélange d'adénosinetriphosphate (ATP) et d'ATPy33P dans le tampon kinase à la concentration de 5,26 pM d'ATP total et de 52,6 pCi/ml de 33P. La réaction enzymatique est déclenchée par addition de 10 pl par puits d 'une solution de CDK2/Cycline E à 200 nM dans le tampon kinase contenant 1 mM de dithiothréitol (ou 10pI de tampon kinase contenant 1 mM de dithiothréitol pour les blancs réactionnels). Après addition de chacun des réactifs, le volume final de chaque puits est de 100pI, la concentration finale de substrat est de 10 pM, les concentrations finales en inhibiteurs sont delO pM, 3,33 pM, 1,11 pM, 0, 37 pM, 0,123 pM, 0,041 pM et 0,014 pM (selon la concentration de la dilution intermédiaire), la concentration finale en ATP est de 1 pM, la quantité finale de 33P est de 1 pCi/puits, la concentration finale de complexe CDK2/Cycline E est de 20 nM. Après l'addition de tous les réactifs, la plaque de test incubée à 30 C sous agitation orbitale à 650 rpm. Lorsque l'incubation est terminée, la plaque est lavée trois fois par 300 pI par puits de PBS (Phosphate Bûffered Saline, pH=7,4 sans calcium ni magnésium, référence 10010-015, Gibco BRL). L'incorporation de 33P au peptide est quantifiée par comptage par scintillation avec un appareil Packard Topcount.NXT. L'activité inhibitrice des produits de l'invention est évaluée par mesure de la concentration d'inhibiteur permettant une diminution de l'activité enzymatique de 50 % (CI50). 2 Protocole CDK4/cycline Dl: Purification du complexe CDK4-HA/Cycline D1(His)6 par IMAC (Immobilized Meta! Affinity Chromatography) : Deux baculovirus recombinants portant les séquences humaines codant respectivement pour CDK4-HA (fusion C terminale avec le tag Hémaglutinine) et pour la Cycline D1-(His) 6 sont utilisés pour co-infecter des cellules d'insecte Sf9. Soixante heures après le début de la co-infection, les cellules sont récoltées par centrifugation, puis congelées à -20 C jusqu'à leur utilisation. Après décongélation dans le tampon A (HEPES 200 mM pH 7.0, NaCl 50 mM, MgCl2 2 mM, imidazole 25 mM, TCEP 1 mM, glycérol 10 % (p/v), NaF 1 mM, Na3VO4 1 mM), agitation 1 h à 4 C, et centrifugation, le complexe présent dans le surnageant de lyse est purifié par chromatographie d'affinité sur Nickel (IMAC) et conservé à -80 C. Essai Flashplate CDK4/CyclinD1 en format 96 puits. Un essai en plaque "Flashplate" de 96 puits recouverts de streptavidine est utilisé pour évaluer l'inhibition du complexe kinase CDK4/cycline Dl par les produits de l'invention. Pour réaliser cet essai, le substrat peptidique biotinylé, fragment de la protéine pRb, (BiotinylRPPTLSPIPHIPRSPYKFPSSPLR-amide) est solubilisé à la concentration de 2 mM dans du tampon kinase (HEPES/NaOH 50 mM, NaCl 1 mM, MgCl2 5 mM, PH=7,5) afin de constituer une solution stock conservée à -20 C sous forme d'aliquots de 110 pl. Le jour de l'expérience, un aliquot de cette solution est décongelé et dilué dans du tampon kinase contenant 1 mM de dithiothréitol, ajouté extemporanément, de manière à obtenir une concentration finale de peptide de 2.571 pM. Soixante-dix pl de cette solution sont déposés dans chaque puits de la plaque Flashplate afin d'obtenir une concentration finale en substrat de 1.8 pM lors de la réaction enzymatique conduite dans un volume final de 100 pl (cf. ciaprès). Des dilutions intermédiaires d'inhibiteurs (produits de l'invention) à différentes concentrations sont préparées dans le DMSO à partir de solutions stock à 10 mM dans des tubes séparés. On réalise ainsi des dilutions à 1000 pM, 333,3 pM, 111,1 pM, 37,03 pM, 12,35 pM, 4, 11 pM et 1,37 pM. Un pl de chacune de ces solutions (ou 1 pl de DMSO pour les contrôles) est ensuite transféré dans les puits de la plaque de test. Dans chaque puits, sont ensuite ajoutés 19 pl d'une solution d'un mélange d'adénosinetriphosphate (ATP) et d'ATPy33P dans le tampon kinase à la concentration de 5,26 pM d'ATP total et de 78.9 pCilml de 33P. La réaction enzymatique est déclenchée par l'addition de 10 pI par puits d'une solution de complexe CDK4/Cycline Dl à 250 nM dans le tampon kinase contenant 1 mM de dithiothréitol (ou 10 pl de tampon kinase contenant 1 mM de dithiothréitol pour les blancs réactionnels). A l'issue des différentes additions le volume final dans chaque puits est de 100 pI, la concentration finale de substrat est de 1.8 pM, les concentrations finales en inhibiteurs sont de 10 pM, 3,33 pM, 1,11 pM, 0, 37 pM, 0,123 pM, 0,041 pM et 0,014 pM (selon la concentration de la dilution intermédiaire), la concentration finale en ATP est de 1 pM, la quantité finale de 33P est de 1.5pCi/puits, la concentration finale de complexe CDK4/Cycline Dl est de 25 nM. Après l'additions de tous les réactifs, la plaque de test incubée à 30 C sous agitation orbitale à 650 rpm. Après l'incubation, la plaque est lavée trois fois par 300 pl par puits de tampon PBS (Phosphate Buffered Saline, pH=7.4 sans calcium ni magnésium, référence 10010-015, Gibco BRL). L'incorporation de 33P au peptide substrat est mesurée par comptage par scintillation avec un appareil Packard Topcount.NXT. L'activité inhibitrice des produits de l'invention est évaluée par détermination de la concentration d'inhibiteur provoquant une diminution de 50 % de l'activité enzymatique (IC50). 3. Aurora2 L'effet inhibiteur de composés vis-à-vis de la kinase Aurora2 est déterminé par un test de scintillation par radioactivité. Une enzyme Aurora2 recombinante complète, dont l'extrémité N-terminale a 25 été marquée à l'histidine, a été exprimée dans E. col/ et purifiée jusqu'à une qualité proche de l'homogénéité. Le fragment C-terminal (Q1687-H2101) d'une NuMA (protéine Nucléaire qui s'associe avec l'Appareil Mitotique) exprimé dans E. col/, et dont l'extrémité N-terminale a été marquée à l'histidine, a été purifié par chromatographie au nickel chélate et utilisé comme substrat dans le test de la kinase Aurora2. L'activité kinase d'Aurora2 est mesurée par scintillation en microplaque saturée avec du nickel chélate (New England Nuclear, modèle SMP107). Chaque puits contient 100 pl de la solution suivante: 0.02 pM d'Aurora2; 0.5 pM de substrat NuMA; 1 pM d'ATP additionné de 0.5 pCi d'ATP-[33P]. Les solutions sont incubées pendant 45 minutes à 37 C. Le tampon du test est ensuite éliminé et les puits sont rincés deux fois avec 300 pl de tampon kinase. La radioactivité est mesurée dans chaque puits à l'aide d'un appareil Packard Model Top Count NXT. Le bruit de fond est mesuré double exemplaire dans des puits contenant de I'ATP radioactif seul contenant de la kinase tamponnée traitée de la même manière que les autres échantillons. L'activité du contrôle est effectuée en mesurant en double exemplaire la 10 radioactivité dans le mélange complet du test (ATP, Aurora2 et le substrat NuMA), en l'absence de composé test. L'inhibition de l'activité de Aurora2 avec un composé de l'invention est exprimée en pourcentage d'inhibition de l'activité de contrôle en l'absence de composé test. De la staurosporine est ajoutée dans chaque plaque comme contrôle d'inhibition. Exemple Structure Aurora CDK4 CDK2 HeLa 21050 IC50 IC50 proliferation nM nM nm EC50 (nM) DG N-OH HN s * 3974 995 \ \ N p S 7 F 10000 123 1577 D i s o,s H\ 0 O N 8 D N D i s O,s H\ O O N 11 H 105 924 19 80 N OH o s o H\ ogo N H,N 12 D-C s 172 205 25 16 HN ôS.O 13 H / N^N 6863 678 841 I\ 0 OS 1N/ / N H- S N O O 18 HN 480 2683 CIH NH .S'o HN â 19a CI 471 2720 N CIH NH 0 S H\N 19b HN 732 5470 CIH NH H / \ O S O\SO H 19c sOH 1223 5782 HN> CIH >" O S O S O HN 21 H 539 227 o \H CIH N N), s ô Sà N H2N 22a NN 609 634 . C1H Ns H H2N 22 b N,--N--. N * Cl N N 22 C H 1570 1099 NN^OH CIH o s N H2N 22 d O 69 O-S, N N o o N CI 24 N) \ O 864 /// N g O I CI a N-{ 365 N CI b N2--\_e0 S N f 5871 N -es Ci 25c O 2644 ä C 32 Ci N\S O S o O 33a CI N Ns Oâ' 1 N 33 b N 0 0 N O Cl 33c O C N S 0'S" I O N Cl 33d N O O N O CI 33e N CI O N S o----s s l N s \ s o, 33f ci N 33 9 s p N N o. o N o CI 33 h N --\s o O o H 39 H" 5 2326 3064 O OH F HzN 253 209 CIH H N S os H â N 41 NH2 0 N i 1000010000 HS N OH F H 42 " CIH H 202 1143 N s o H \\ O 43 / s o N \\ N O 44 ",/ o o N--- O o N N O 52 g O.SO 189 112 N NH HZN CIH " O 221 73 II _S N S O HIVN C O OH2 CIH 49 H 328 183 OO "\ H2" * \N CIH H 265 105 CIH N/ H N â REVENDICATIONS 1 Composés répondent à la formule générale (I) suivante: O X-Ar \. O O (I) dans laquelle É X représente un groupe choisi parmi une liaison covalente, (CH2)n, avec n égal à 1 ou 2 É Ar représente un groupe aryle ou hétéroaryle; ce groupe est éventuellement substitué par un groupe choisi parmi les groupes alkyles, halogènes, NR1R2 (RI et R2 étant choisis parmi les groupes hydrogène, alkyles, cycloâlkyles ou ensemble peuvent former un radical hétérocyclique ou hétéroaryle, ces groupes étant eux même éventuellement substitués), SO2alk, Salkyl, alkoxy, hétéroaryles, ou aryles É R représente un groupe choisi parmi l'hydrogène, un groupe alkyle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, aryle, heteroaryle, alkoxy, cycloalkoxy, hétérocycloalkoxy, amino; R peut être éventuellement substitué par un ou plusieurs groupes choisis parmi les mêmes radicaux que ceux définis pour R. 2 Composés selon la revendication 1 caractérisés en ce que les 20 éventuels substituants des groupes RI et R2 sont choisis parmi les groupes hydroxy, hétéroaryles, cycloalkyle, aminoalkyles. 3 - Composés selon la revendication 1 caractérisés en ce que les groupes alkyles sont des chaînes droites ou ramifiées contenant 1 à 10 atomes de carbone. 4 - Composés selon la revendication 1 caractérisés en ce que les groupes cycloalkyle sont des chaînes alkyles cycliques contenant 3 à 10 atomes de carbone. - Composés selon la revendication 1 caractérisés en ce que les groupes hétérocycloalkyles sont des chaînes alkyles cycliques contenant 3 à 10 atomes de carbone et contenant au moins un hétéroatome choisis parmi O, N ou S. 6 - Composés selon la revendication 1 caractérisés en ce que dans les groupes NR1 R2 l'un des groupes RI ou R2 est un atome d'hydrogène. 7 - Composés selon les revendications 1 à 6 caractérisés en ce que tous les groupes R, RI et R2 sont éventuellement substitués par un groupe alkyle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, hétéroaryle, aryle, amino, hydroxy, alkoxy ou halogène. 8 - Composés selon la revendication 1 caractérisés en ce que les radicaux aryle et hétéroaryle sont choisis parmi les radicaux monocycliques comportant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi O, N et S ou les radicaux fusionnés à un autre cycle comportant 5 ou 6 chaînons et éventuellement un à trois hétéroatomes choisis parmi O, N et S. 9 Composés selon la revendication 1 caractérisés en ce que les radicaux aryles ou hétéroaryles sont choisis parmi les groupes phényle, pyridyle, pyrimidine, triazine, pyrrolyle, imidazolyle, thiazolyle, furyle, thiényle, indolyle, azaindazolyle, isobenzofuranyle, isobenzothiényle benzoxazolyle, benzothiazolyle, arylvinylène, arylamido, arylcarboxamide, aralkylamine, quinoléyle, isoquinoléyle, cinnolyle, quinazolyle, naphtyridyle, triazolyle ou tétrazolyle. - Composés selon la revendication 9 caractérisés en ce que les groupes aryle et hétéroaryle sont choisis pami les groupes phényle, thiényle, pyrazolyle, imidazolyle éventuellement substitué. 11 - Composés selon la revendication 10 caractérisés en ce que le groupe phényl est substitué par un groupe choisi pami les groupes amino et les halogènes en particulier le chlore et le fluor. 12 - Composés selon la revendication 11 caractérisés en ce que les groupes aryles sont choisis parmi les di et trifluorophényles et les monoalkylamino phényles. 13 Composés selon la revendication 1 caractérisé en ce X représente une liaison covalente. 14 - Composés selon la revendication 1 caractérisés en ce que R représente un radical cycloalkyle.