FR 2871464 A1 20051216 FR 0406462 A 20040615 COLLECTIONS DE COMPOSÉS TRACABLES ET LEURS UTILISATIONS La présente invention a pour objet des collections de composés traçables, ainsi que leurs utilisations, notamment dans le cadre de la détermination de ligands d'un récepteur dont on ne connaît pas de ligand ou dont on ne connaît pas de ligand utilisable pour les études de liaison d'affinité spécifique. Le gène codant pour une protéine fluorescente issue de la méduse Aequorea victoria, la protéine fluorescente verte (green fluorescent protein ou GFP) (Prasher et al. 1992, Gene 111:229-233), a été récemment déchiffré. La GFP est une protéine monomérique. Elle acquiert ses propriétés de fluorescence par un mécanisme autocatalytique de formation du fluorophore. De nombreux médicaments et substances naturelles exercent leur action en interagissant avec des protéines régulatrices appelées récepteurs, impliquées dans de nombreuses fonctions physiologiques des organismes, et les altérations de leurs fonctions sont la cause de nombreuses pathologies. L'accessibilité des récepteurs aux agents pharmacologiques endogènes ou exogènes, naturels ou synthétiques, depuis l'extérieur de la cellule conduit à les considérer comme des cibles de choix pour la recherche de molécules biologiquement actives, en particulier de molécules présentant des pouvoirs thérapeutiques potentiels. Le décryptage du génome humain donne accès à la séquence de centaines de protéines nouvelles dont on ne connaît ni le ligand endogène ni la fonction biologique. Ces protéines, dites "orphelines", constituent les sites potentiels d'action de médicaments. Les méthodes existantes à ce jour ne permettent de détecter que des molécules agonistes qui activent une fonction associée à la protéine. Ce type d'essai fonctionnel conduit à de nombreux faux positifs coûteux en temps et en argent. Par ailleurs, les molécules antagonistes qui inhiberaient la fonction associée à la protéine ne peuvent pas être détectées directement par ces méthodes. Or, les antagonistes présentent la plupart du temps le meilleur potentiel thérapeutique. La présente invention a pour but de proposer un procédé de détermination d'un ligand quelconque, qu'il soit endogène ou exogène, permettant de s'affranchir de la recherche systématique du ligand endogène ou naturel. L'un des buts de l'invention est de fournir un procédé de criblage du premier ligand d'un récepteur orphelin sans connaître son ligand endogène. La présente invention concerne l'utilisation d'une collection de composés traçables de type cationique, pour la détermination de ligands d'un récepteur dont on ne connaît pas de ligand ou dont on ne connaît pas de ligand utilisable pour les études de liaison d'affinité spécifique, lesdits composés traçables de type cationique étant caractérisés en ce qu'ils comprennent au moins un résidu d'acide aminé à caractère basique conférant le type cationique audit composé et un groupement traceur, notamment un fluorophore, un colorant ou un "quencher". L'expression "composés traçables de type cationique" désigne des molécules contenant un groupe chargé positivement dans les conditions physiologiques. L'expression "récepteur dont on ne connaît pas de ligand" désigne toute macromolécule biologique ("récepteur") pour laquelle on ne connaît pas de molécules endogène ou exogène venant s'y lier de manière réversible. L'expression "liaison d'affinité spécifique" désigne la mesure de la force d'interaction entre deux molécules, à savoir un récepteur et son ligand. L'expression "récepteur dont on ne connaît pas de ligand utilisable pour les études de liaison d'affinité spécifique" désigne toute macromolécule biologique (récepteur) pour laquelle il n'existe pas encore de molécule pouvant s'y lier (ligand) de manière suffisamment spécifique et détectable. L'expression "résidu d'acide aminé à caractère basique" désigne un résida d'acide aminé (alpha-, beta-, gamma-, delta-aminé, ou autre) contenant une entité protonable dans les conditions physiologiques. L'expression "groupe traceur" désigne une entité chimique fluorescente ou une entité chimique possédant des propriétés de colorant ou d'absorption de certaines longueurs d'onde. Une utilisation avantageuse selon l'invention est caractérisée en ce que les composés traçables de type cationique comprennent au moins un groupement "aa- cation-espaceur-fluorophore" ou "cation-aa-espaceur-fluorophore", "aa" correspondant à un résidu d'acide aminé, "cation" correspondant à un résidu d'acide aminé à caractère basique, "espaceur" correspondant à un groupe espaceur et "fluorophore" correspondant à un groupe fluorophore, ledit groupement étant caractérisé en ce que l'entité "aa" et l'entité "cation" sont reliées entre elles par une liaison peptidique ou pseudo- peptidique. L'expression "liaison peptidique" désigne une liaison amide -CO-NH- entre deux acides aminés naturels. L'expression "liaison pseudo-peptidique" désigne une liaison -CO-NH- entre deux acides aminés non naturels. L'expression "groupe espaceur" désigne une entité séparant le groupe traceur du reste de la molécule. Une utilisation avantageuse selon la présente invention est caractérisée en ce que les composés traçables de type cationique répondent à la formule (I) suivante: (I) H2N A dans laquelle: - n représente un nombre entier variant de 1 à 10, et notamment de 1 à 6, et étant 15 de préférence égal à 2 ou à 3, - i représente un nombre entier variant de 1 à n, R; représente une chaîne latérale d'acide aminé, l'un au moins des R; représentant une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, les R, pouvant tous être identiques ou différents, A représente un groupement traceur, notamment un fluorophore, un colorant ou un "quencher", ou un groupe de la forme D-G, D représentant un groupe espaceur et G représentant un groupe traceur tel que défini précédemment. La présente invention concerne également les sels des composés traçables de type cationique de formule (I) susmentionnée. La présente invention concerne également l'utilisation telle que définie ci-dessus, caractérisée en ce que les composés traçables de type cationique répondent à la formule suivante: (I-bis) dans laquelle: n représente un nombre entier variant de 2 à 10, et notamment de 2 à 6, et étant de préférence égal à 2 ou à 3, j répond à la définition donnée précédemment pour i dans les composés de formule (I), Ri et R'i représentent une chaîne latérale d'acide aminé, caractérisés en ce qu'au moins deux des groupes Ri représentent une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique et en ce que tous les R'i soient différents d'une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, les Ri pouvant tous être identiques ou différents et les R'i pouvant tous être identiques ou différents, et A est tel que défini ci-dessus, et représente de préférence un fluorophore. La présente invention concerne également un composé de formule (I) suivante: H N m A dans laquelle: n représente un nombre entier variant de 1 à 10, et notamment de 1 à 6, et étant de préférence égal à 2 ou à 3, - i représente un nombre entier variant de 1 à n, - Ri représente une chaîne latérale d'acide aminé, l'un au moins des R; représentant une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, tous les Ri 20 pouvant être identiques ou différents, A représente un groupement traceur, notamment un fluorophore, un colorant ou un "quencher", ou un groupe de la forme D-G, D représentant un groupe espaceur et G représentant un groupe traceur tel que défini précédemment. Un composé avantageux selon la présente invention est tin composé de formule (I) caractérisé en ce qu'un seul groupe Ri représente une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique. Un tel composé correspond à un composé traçable de type monocationique. Un composé avantageux selon la présente invention est caractérisé en ce qu'il répond à la formule suivante: (I-bis) H2N dans laquelle: n représente un nombre entier variant de 2 à 10, et notamment de 2 à 6, et étant de préférence égal à 2 ou à 3, j répond à la définition donnée précédemment pour i dans la revendication 5, Ri et R'i représentent une chaîne latérale d'acide aminé, caractérisés en ce qu'au moins deux des groupes Ri représentent une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique et en ce que tous les R'i soient différents d'une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, les Ri pouvant tous être identiques ou différents et les R'i pouvant tous être identiques ou différents, et A est tel que défini ci-dessus. Un composé particulièrement avantageux selon la présente invention est un composé de formule (I-bis), caractérisé en ce que seulement deux des groupes Ri représentent une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique. De tels composés correspondent à des composés traçables de type biscationique qui ont une forte probabilité de se lier à certaines classes de récepteurs ciblés. Un composé avantageux selon la présente invention est un composé de formule (I- bis) telle que définie ci-dessus, caractérisé en ce que: Ri représente une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, et de préférence la chaîne latérale de la lysine, de l'ornithine ou de l'arginine, R'i représente une chaîne latérale d'acide aminé, ledit acide aminé étant de préférence choisi dans le groupe comprenant: l'alanine, la glycine, l'acide 6-aminocaproïque, la leucine, la glutamine, l'acide glutamique, la méthionine, la proline, l'acide isonipécotique, l'acide carboxylique de tétraisoquinoline, l'acide 3-aminobenzoïque, l'acide 4- aminométhylbenzoïque, le tryptophane, l'histidine, la phénylalanine, la tyrosine, la 2-naphtylalanine, la phénylalanine de benzoyle. Selon un mode de réalisation préféré, la présente invention concerne un composé de formule (I), caractérisé en ce que n est égal à 2, et répondant à la formule (II) 0 R2 suivante: H H2N N dans laquelle: R1 O A est tel que défini ci-dessus, et représente de préférence un fluorophore, R1 représente une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, et de préférence la chaîne latérale de la lysine, de l'ornithine ou de l'arginine, et R2 représente une chaîne latérale d'acide aminé, ledit acide aminé étant de préférence choisi dans le groupe comprenant: l'alanine, la glycine, l'acide 6-aminocaproïque, la leucine, la glutamine, l'acide glutamique, la méthionine, la proline, l'acide isonipécotique, l'acide carboxylique de tétraisoquinoline, l'acide 3-aminobenzoïque, l'acide 4- aminométhylbenzoïque, le tryptophane, l'histidine, la phénylalanine, la tyrosine, la 2-naphtylalanine, la phénylalanine de benzoyle. Les composés susmentionnés de formule (II) sont des composés monocationiques. Selon un mode de réalisation préféré, la présente invention concerne un composé 10 de formule (I), caractérisé en ce que n est égal à 3, et répondant à la formule (III) R2 O H H suivante: H2N N,N NIA H R O R3 dans laquelle: A est tel que défini cidessus, et représente de préférence un fluorophore, RI et R3 représentent une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, et de préférence la chaîne latérale de la lysine, de l'ornithine ou de l'arginine, et R2 représente une chaîne latérale d'acide aminé, ledit acide aminé étant de préférence choisi dans le groupe comprenant: l'alanine, la glycine, l'acide 6-aminocaproïque, la leucine, la glutamine, l'acide glutamique, la méthionine, la proline, l'acide isonipécotique, l'acide carboxylique de tétraisoquinoline, l'acide 3-aminobenzoïque, l'acide 4aminométhylbenzoïque, le tryptophane, l'histidine, la phénylalanine, la tyrosine, la 2-naphtylàlanine, la phénylalanine de benzoyle. Les composés susmentionnés de formule (III) sont des composés biscationiques. Un composé avantageux selon la présente invention est un composé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que le groupe espaceur D est choisi parmi les groupes de formule suivante: o o H 30 H N.N,SOZ H o La présente invention concerne également un composé tel que défini cidessus, de formule (I), (I-bis), (II) ou (III), caractérisé en ce que A représente un groupe fluorophore dont les longueurs d'onde d'absorption et d'émission sont compatibles avec le processus de résonance par transfert d'énergie de fluorescence avec les divers mutants de la protéine fluorescente verte, ledit fluorophore étant notamment choisi parmi le groupe comprenant le Bodipy et la lissamine. Un composé préféré de l'invention est un composé tel que défini ci-dessus, de formule (I), (I-bis), (II) ou (III), caractérisé en ce que A représente l'un des groupes suivants: o SOZ SO3 / N dérivé de la lissamine La présente invention concerne également une collection comprenant une pluralité de composés tels que définis ci-dessus. L'expression "collection" désigne un ensemble de molécules préparées selon le même protocole. La présente invention concerne également l'utilisation d'une collection telle que définie ci-dessus, pour la détermination de ligands d'un récepteur dont on ne connaît pas de ligand ou dont on ne connaît pas de ligand utilisable pour les études de liaison d'affinité spécifique. La présente invention concerne également un procédé de criblage de ligands de récepteurs dont on ne connaît pas de ligand ou dont on ne connaît pas de ligand utilisable, ledit procédé comprenant les étapes suivantes: la mise en présence d'une collection de composés traçables selon l'invention, avec des cellules transfectées par une construction contenant la fusion de la séquence codant pour une protéine fluorescente, avec la séquence nucléotidique codant pour un récepteur dont on ne connaît pas de ligand ou dont on ne connaît pas de ligand utilisable, et le mélange desdites cellules et de ladite collection, dérivé du Bodipy la détection de la fluorescence dudit mélange, par excitation de ladite protéine fluorescente et mesure de la fluorescence d'émission de ladite protéine fluorescente, et la détermination du pourcentage d'extinction de fluorescence en comparant la fluorescence d'émission de ladite protéine fluorescente dans le mélange à la fluorescence moyenne de ladite protéine fluorescente en l'absence de ligand, la fluorescence moyenne de ladite protéine fluorescente en absence de ligand étant mesurée par des essais témoins correspondant à la mesure de la fluorescence de la protéine fluorescente en l'absence de la collection de composés, et la détermination des composés qui donnent un pourcentage d'extinction de la 10 fluorescence de la protéine fluorescente d'au moins 5% et leur identification en tant que ligand. La présente invention concerne un procédé de préparation sur support solide d'un composé tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: a) une étape de couplage de la fonction amine dudit support solide de formule 15 suivante: ÉH GP avec un premier acide aminé de chaîne latérale RI dont la fonction amine est convenablement protégée par un groupe protecteur, notamment choisi parmi: Fmoc, Boc et Cbz, et de préférence un groupe Fmoc, RI répondant à la définition donnée précédemment pour Ri, afin d'obtenir un composé de formule suivante: o É//NH-GP N H R b) une étape de déprotection du groupement GP dans dues conditions appropriées, afin d'obtenir le composé de formule suivante: NH2 H Ri c) la répétition séquentielle des étapes a) et b) jusqu'à ce que n acides aminés aient été greffés sur ledit support solide, ce qui conduit à l'obtention du composé de formule suivante: n 10 25 chaque séquence correspondant à une étape de couplage a) d'un composé de formule suivante: avec un acide aminé de chaîne latérale Rk de formule HoNH2 dont la fonction amine est convenablement protégée, Rk afin d'obtenir un composé de formule suivante: /0 1 NH 1-G R; k une étape de déprotection b) du groupement GP dans des conditions appropriées, afin d'obtenir le composé de formule suivante: k d) une étape de réaction du composé obtenu à l'issue de la répétition séquentielle susmentionnée de formule 0 1 avec un composé de formule A-W, A étant tel que défini ci-dessus et W représentant un atome d'halogène ou tout nucléofuge permettant d'activer une fonction acide et de la rendre plus réactive vis-à-vis des amines, afin d'obtenir un composé de formule suivante: H e) une étape de clivage du composé obtenu à l'étape précédente afin d'obtenir un composé de formule (I). GP k étant un nombre entier entre 1 et n, k-1 lo DESCRIPTION DES FIGURES La Figure 1 représente un spectre d'émission de cellules HEK 293 transfectées par la construction pCEP4-SP-EGFP-GPR50. L'axe des ordonnées correspond à la longueur d'onde (en mn) et l'axe des abscisses à l'intensité de fluorescence (en cps). La courbe en trait plein correspond aux cellules HEK exprimant pCEP4-SP-EGFP-GPR50 et la courbe en trait pointillé aux cellules HEK non transfectées. La Figure 2 représente la mesure en temps réel du transfert d'énergie entre des ligands peptidiques fluorescents ci-dessous (CP1 et CP2; 1 M) et le récepteur GPR50-EGFP. En abscisse est représenté le temps en seconde et en ordonnée l'intensité de fluorescence à 510 nm (coups par seconde), l'excitation ayant lieu à 470 nm (un faible transfert d'énergie de l'ordre de 5 % peut être mesuré). PARTIE EXPÉRIMENTALE Préparation de tripeptides fluorescents Schéma général O Phe NHFmoc MS = 387,1570 M+1 NHFmoc HPLC = 99% Rdt = 64 % NHFmoc 1) piperidine 20% 2) HO-Phe-NHFmoc DIC 1 HOBt H2N TFA 20%, 1h 10 3 1) pip 20% N H2 2) HO-Lys(boc)-NHFmoc DIC l HOBt (Rink)--Phe Lys(boc) NHFmoc TFA 20%, 1h 1) pip 20% 2) HO-Gly-NHFmoc DIC / HOBt TFA20%, 1h Phe Lys(boc) GIy NHFmoc - H2N MS = 515,2150 M+1 NHFmoc HPLC = 97% Rdt = 65% MS = 572.1931 M+1 NHFmoc HPLC = 99% Rdt = 63% 1) pip 20% 2) HO-Om(boc)-NHFmoc DIC I HOBt TFA 20% 1h Rink Phe Lys(boc) GIy Orn(boc) NHFmoc H2N MS = 686,2547 M+1 HPLC = 97% Rdt = 78% O 1) pip. 20% 2) Lissamine-SO2CI DIEA 3) TFA 20%, l h 1) pip. 20% 2) Bodipy-CO2H 1,5 éq. DIC / HOBt 3) TFA 20%, l h 11 PROTOCOLE EXPÉRIMENTAL I MODES OPÉRATOIRES GÉNÉRAUX 1) Mode opératoire général (A) de greffage d'un acide aminé sur une résine Rink Synthèse de la résine Rink-Phe-NHFmoc (CHPO 72A ou 116A; composé 1) Dans un ballon, la résine Rink-NHFmoc (5 g; 3 mmol; 0,6 mmol/g) est traitée avec 50 mL d'une solution de 20% de pipéridine dans le DMF et agitée pendant 20 min. Le mélange est filtré sur fritté et la résine est lavée avec deux séquences de 50 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 50 mL de DMF, DCM. (résine CHPO 24A) Une solution d'acide aminé préactivé est préparée en mélangeant dans l'ordre Na-Fmoc-L-phénylalanine (569 mg; 1,455 mmol) et HOBt (222 mg; 1,455 mmol) dans 3 mL de DMF/DCM (1:1), pendant 15 minutes à température ambiante. Le DIC (??)(230 L; 1,455 mmol) est ajouté à la solution d'acide carboxylique et de HOBt et le mélange est agité pendant 15 minutes à température ambiante. Pendant ce temps, la résine déprotégée Rink-NH2 CHPO 24A (700 mg; 0,485 mmol; 0,693 mmol/g) est expansée avec 5 mL de DMF/DCM (1:4) dans un ballon, pendant 30 minutes. La solution d'acide carboxylique préactivée (1,455 mmol; 3 éq.) est ajoutée à la résine. L'ensemble est agité pendant 14 heures à température ambiante. La résine est filtrée sur un fritté, lavée avec deux séquences de 10 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 10 mL de DMF, DCM, puis séchée sous pression réduite pendant 4 heures. 2) Mode opératoire général (B) de greffage du Bodipy sur la résine Rink Synthèse de la résine Rink-Phe-Bodipy (CHPO 78A) O H N Dans une seringue Supelco munie d'un fritté, la résine Rink-Phe-NHFmoc (677 mg; 0,374 mmol; 0,552 mmol/g) est traitée avec 7 mL d'une solution de 20% de pipéridine dans le DMF et agitée par rotation pendant 20 minutes. Le mélange est filtré et la résine est lavée avec deux séquences de 7 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 7 mL de DMF, DCM (résine CHPO 77A). Une solution d'acide carboxylique préactivée est préparée en mélangeant dans l'ordre l'acide 4,4-difluoro-5-(2-thiényl)-4-bora-3a,4a-diaza-sindacène-3-propionique CHPO65C (52 mg; 0,151 mmol) et HOBt (23 mg; 0,151 mmol) dans 1 mL de DMF/DCM (1:1), pendant 15 minutes à température ambiante. Le DIC (24 L; 0,151 mmol) est ajouté à la solution d'acide carboxylique et de HOBt et le mélange est agité pendant 15 minutes à température ambiante. Pendant ce temps, la résine déprotégée Rink-Phe-NH2 CHPO 77A (200 mg; 0,126 mmol; 0,629 mmol/g) est expansée 30 minutes avec 2 mL de DMF/DCM (1:4) dans une seringue Supelco munie d'un fritté. La solution d'acide carboxylique préactivée (0,151 mmol; 1,2 éq.) est ajoutée à la résine. L'ensemble est agité par rotation pendant 14 heures à température ambiante. La résine est filtrée sur un fritté, lavée avec deux séquences de 3 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 3 mL de DMF, DCM, puis séchée sous pression réduite pendant 4 heures. 3) Mode opératoire général (C) du clivage de molécules fluorescentes Synthèse de H2N-CO-Phe-Bodipy (CHPO 79A) o H N Dans une seringue Supelco, la résine Rink-Phe-Bodipy CHPO 78A (240 mg; 0, 126 mmol; 0,521 mmol/g) est traitée avec 2 mL de TPA/DCM/H2O (20:75:5) pendant 3 heures à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec du DCM (3 X 3 mL). Le filtrat est collecté et amené à sec sous pression réduite pour fournir 50 mg de solide violet intense. Rdt = 80%, HPLC 81% (dionex, tr = 29,59 min; 2 = 288 nm; gradient t = 0 min: 2% de CH3CN dans H2O (0,1% TFA) t = 30 min: 100% CH3CN t = 40 min: 100%; 0,5 mL/min). MS (ESI-TOF) m/z (M+H) calculé pour C25H23BF2N4O2S + H, 493; trouvé, 493. RMN 1H (CDC13) 6 8,12-8,13 (m, 1H) ; 7,50-7,52 (m, 1H) ; 7, 11-7,27 (m, 8H) ; 7,05-7,06 (m, 1H) ; 6,93-6,94 (m, 1H) ; 6,80-6,81 (m, 1H) ; 4,75-4,76 (m, 1H) ; 3,28-3,29 (m, 2H) ; 2,94-2,95 (m, 2H) ; 2,67-2, 68 (m, 2H). 4) Mode opératoire général (D) de greffage de la Lissamine sur la résine Rink Synthèse de la résine Rink-Phe-Lissamine (CHPO 112A) eN Et2 NEt2 Dans une seringue Supelco munie d'un fritté, la résine Rink-Phe-NHFmoc (630 mg; 0,350 mmol; 0,556 mmol/g) est traitée avec 7 mL d'une solution de 20% de pipéridine dans le DMF et agitée par rotation pendant 20 minutes. Le mélange est filtré et la résine est lavée avec deux séquences de 7 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 7 mL de DMF, DCM. (résine CHPO 99B). Dans une seringue Supelco munie d'un fritté, la résine Rink-Phe-NH2 (50 mg; 0,032 mmol; 0,635 mmol/g) est expansée avec 1 mL de DCM. La DIEA (11.tL; 0,064 mmol; 2 éq.) est ajoutée, puis la Lissamine rhodamine B sulfonyl chloride (37 mg; 0,064 mmol; 2 éq.) dissoute dans 2 mL de DCM. Le mélange réactionnel est agité 5 heures à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec deux séquences de 3 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 3 mL de DMF, DCM, puis séchée sous pression réduite pendant 4 heures. 5) Synthèse de H2N-CO-Phe-Lissamine (CHPO 112B) (selon le mode opératoire général (C)) NEt2 H2N N E12 Dans une seringue Supelco, la résine RinkPhe-lissamine CHPO 112A (20 mg; 0,042 mmol; 0,473 mmol/g) est traitée avec 2 mL de TFA/DCM/H20 (20:75:5) pendant 2 h 30 à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec du DCM (3 x 3 mL). Le filtrat est collecté et amené à sec sous pression réduite pour fournir un solide violet intense. HPLC 70% (dionex, tr = 27,77 min; x = 288 nm; gradient t: 0 min: 2% de CH3CN dans H2O (0,1% TFA) t = 30 min: 100% CH3CN t = 40 min: 100%; 0,5 mL/min). MS (ESI-TOF) m/z (M+H) calculé pour C36H40N407S2 + H, 705; trouvé, 705. 5 6) Synthèse de la résine Rink-Arg(pmc)-NHFmoc (CHPO 74A) (selon le mode opératoire général (A)) o Dans un ballon, la résine RinkNHFmoc (5 g; 3 mmol; 0,6 mmol/g) est traitée avec 50 mL d'une solution de 20% de pipéridine dans le DMF et agitée pendant 20 minutes. Le mélange est filtré sur fritté et la résine est lavée avec deux séquences de 50 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 50 mL de DMF, DCM (résine CHPO 24A). Une solution d'acide aminé préactivé est préparée en mélangeant dans l'ordre N-a-Fmoc-N-w-(2,2,5,7,8-pentaméthylchromane-6-sulfonyl)-LArginine (1,102 g; 1,663 mmol) et HOBt (254 mg; 1,663 mmol) dans 10 mL de DMF/DCM (1:1), pendant 15 minutes à température ambiante. Le DIC (262.il, ; 1,663 mmol) est ajouté à la solution d'acide carboxylique et de HOBt et le mélange est agité pendant 15 minutes à température ambiante. Pendant ce temps, la résine déprotégée Rink-NH2 CHPO 24A (1,2 g; 0,832 mmol; 0, 693 mmol/g) est expansée avec 10 mL de DMF/DCM (1:4) dans un ballon, pendant 30 minutes. La solution d'acide carboxlique préactivée (1,455 mmol; 3 éq.) est ajoutée à la résine. L'ensemble est agité pendant 14 heures à température ambiante. La résine est filtrée sur un fritté, lavée avec deux séquences de 20 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 20 mL de DMF, DCM, puis séchée sous pression réduite pendant 4 heures. 10 7) Synthèse de la résine Rink-Arg(pmc)-Lissamine (CHPO 113A) (selon le mode opératoire général (D)) 0NEt2 Dans une seringue Supelco munie d'un fritté, la résine Rink-Arg(pmc)-NHFmoc CHPO 74A (852 mg; 0,408 mmol; 0. 479 mmoUg) est traitée avec 7 mL d'une solution de 20% de pipéridine dans le DMF et agitée par rotation pendant 20 minutes. Le mélange est filtré et la résine est lavée avec deux séquences de 7 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 7 mL de DMF, DCM (résine CHPO 80A). Dans une seringue Supelco munie d'un fritté, la résine Rink-Arg(pmc)-NH2 CHP080A (50 mg; 0,027 mmol; 0,536 mmol/g) est expansée avec 1 mL de DCM. La DIEA (9 L; 0,054 mmol; 2 éq.) est ajoutée, puis la Lissamine rhodamine B sulfonyl chloride (31 mg; 0,054 mmol; 2 éq.) dissoute dans 2 mL de DCM. Le mélange réactionnel est agité 5 heures à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec deux séquences de 3 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 3 mL de DMF, DCM, puis séchée sous pression réduite pendant 4 heures. 8) Synthèse de H2N-CO-Arg-Lissamine (CHPO 113B) 25 (selon le mode opératoire général (C)) NEt2 NEt2 H2N o NEt2 NH H2N''LNH Dans une seringue Supelco, la résine Rink-Arg(pmc)-lissamine CHPO 113A (20 mg; 0, 048 mmol; 0,416 mmol/g) est traitée avec 2 mL de TFA/DCM/H20 (50:45:5) pendant 3 heures à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec du DCM (3 X 3 mL). Le filtrat est collecté et amené à sec sous pression réduite pour fournir un solide violet intense. HPLC 80% (dionex, tr = 24.47 min; x = 288 nm; gradient t: 0 min: 2% de CH3CN dans H20 (0.1% TFA) t = 30 min: 100% CH3CN t = 40 min: 100% ; 0,5 mL/min). MS (ESI-TOF) m/z (M+H) calculé pour C33H43N707S2 + H, 714; trouvé, 714. RMN 1H (CD30D) 8 8,64-8,66 (m, 1H) ; 8,14-8,17 (m, 1H) ; 7, 52-7,56 (m, 1H) ; 6,97-7,56 (m, 6H) ; 3,93-3,99 (m, 1H) ; 3,76-3,79 (m, 8H) ; 3,23-3,26 (m, 2H) ; 1,65-1,80 (m, 4H) ; 2,02-2,11 (m, 12H). II PRÉPARATION DE CATIONS FLUORESCENTS Synthèse de la résine Rink-PheNHFmoc (CHPO 72A ou 116A) composé 2 Dans un ballon, la résine Rink-NHFmoc (5 g; 3 mmol; 0,6 mmol/g)(composé 1) est traitée avec 50 mL d'une solution de 20% de pipéridine dans le DMF et agitée pendant 2 heures. Le mélange est filtré sur fritté et la résine est lavée avec deux séquences de 50 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 50 mL de DMF, DCM (résine CHPO 24A). Une solution d'acide aminé préactivé est préparée en mélangeant dans l'ordre N-a-Fmoc-L-phénylalanine (1,068 g; 2,76 mmol) et HOBt (422 mg; 2, 76 mmol) dans 20 mL de DMF/DCM (1:1), pendant 15 minutes à température ambiante. Le DIC (435 gL; 2,76 mmol) est ajouté à la solution d'acide carboxylique et de HOBt et le mélange est agité pendant 15 minutes à température ambiante. Pendant ce temps, la résine déprotégée Rink-NH2 CHPO 24A (2,0 g; 1,38 mmol; 0,69 mmoUg) est expansée avec 20 mL de DMFIDCM (1:4) dans un ballon, pendant 30 minutes. La solution d'acide carboxylique préactivée (2,76 mmol; 2 éq.) est ajoutée à la résine. L'ensemble est agité pendant 14 heures à température ambiante. La résine est filtrée sur un fritté, lavée avec deux séquences de 20 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 20 mL de DMF, DCM, puis séchée sous pression réduite pendant 4 heures. Synthèse de H2N-CO-Phe-NHFmoc (CHPO 116C) o composé 3 H2N Dans une seringue Supelco, la résine Rink-Phe-NHFmoc CHPO 116A (composé 2)(80 mg; 0,145 mmol; 0,55 mmol/g) est traitée avec 1 mL de TFAIDCM/H20 (20:75:5) pendant 2 heures à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec du DCM (3 x 3 mL). Le filtrat est collecté et amené à sec sous pression réduite pour fournir 11 mg de solide blanc. Rdt = 64%. HPLC 99% (dionex, tr = 30.11 min; = 288 nm; gradient t: 0 min: 2% de CH3CN dans H20 (0.1% TFA) t = 30 min: 100% CH3CN t = 40 min: 100% ; 0,5 mL/min). MS (ESI-TOF) m/z (M+H) calculé pour C24H22N203 + H, 387; trouvé, 387. RMN IH (CDC13) 8 7,78 (d; J = 7,5 Hz; 2H) ; 7,55 (dd; J = 7, 2 Hz; J = 4,9 Hz; 2H) ; 7,42 (dd; J = 7,5 Hz; J = 7,1 Hz; 2H) ; 7,24-7,35 (m, 7H) ; 5,29-5, 31 (m, 2H) ; 4,43-4,45 (m, 3H) ; 4,20 (t; J = 6,4Hz; 1H) ; 3,04-3,12 (m, 2H). Synthèse de la résine Rink-Phe-Lys(boc)-NHFmoc (CHPO 120A) NHboc composé 4 Dans un ballon, la résine Rink-Phe-NHFmoc CHPO 116A (composé 2)(1,1 g; 0,605 mmol; 0,55 mmol/g) est traitée avec 10 mL d'une solution de 20% de pipéridine dans le DMF et agitée pendant 2 heures. Le mélange est filtré sur fritté et la résine est lavée avec deux séquences de 10 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 10 mL de DMF, DCM (résine CHPO 118A). Une solution d'acide aminé préactivé est préparée en mélangeant dans l'ordre N- u-Fmoc-N-co-terbutyloxycarbonyl-L-lysine (503 mg; 1,075 mmol) et HOBt (164 mg; 1,075 mmol) dans 5 mL de DMF/DCM (1:1), pendant 15 minutes à température ambiante. Le DIC (170 L; 1,075 mmol) est ajouté à la solution d'acide carboxylique et de HOBt et le mélange est agité pendant 15 min à température ambiante. Pendant ce temps, la résine déprotégée Rink-Phe-NH2 CHPO 118A (857 mg; 0,537 mmol; 0,627 mmol/g) est expansée avec 10 mL de DMF/DCM (1:4) dans un ballon, pendant 30 min. La solution d'acide carboxylique préactivée (1,075 mmol; 2 éq.) est ajoutée à la résine. L'ensemble est agité pendant 14 h à température ambiante. La résine est filtrée sur un fritté, lavée avec deux séquences de 10 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 10 mL de DMF, DCM, puis séchée sous pression réduite pendant 4 h. Synthèse de H2N-CO-Phe-Lys-NHFmoc (CHPO 120C) N H2 composé 5 H2N Dans une seringue Supelco, la résine Rink-PheLys(boc)-NHFmoc CHPO 120A (composé 4)(80 mg; 0,163 mmol; 0,49 mmol/g) est traitée avec 1 mL de TFAIDCM/H20 (20:75:5) pendant 1 h à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec du DCM (3 x 3 mL). Le filtrat est collecté et amené à sec sous pression réduite pour fournir 13 mg de solide blanc. Rdt = 65%. HPLC 97% (dionex, tr = 25.93 min; = 288 nm; gradient t: 0 min: 2% de CH3CN dans H2O (0,1% TFA) t = 30 min: 100% CH3CN t = 40 min: 100% ; 0,5 mL/min). MS (ESI-TOF) m/z (M+H) calculé pour C30H34N404 + H, 515; trouvé, 515. RMN 1H (CD3OD) S 7,78 (d; J = 7,5 Hz; 2H) ; 7,64-7,66 (m, 2H) ; 7,41 (dd; J = 7.2 Hz; J = 7,1 Hz; 2H) ; 7,32 (dd; J = 7,2 Hz; J = 6,8 Hz; 2H) ; 7,15-7,22 (m, 5H) ; 4,63-4,65 (m, 1H) ; 4,38-4,41 (m, 2H) ; 4, 21-4,22 (m, 1H) ; 4,01-4,02 (m, 1H) ; 2,84- 3,17 (m, 4H) ; 1,55-1,65 (m, 4H) ; 1,27-1,34 (m, 2H). RMN 13C (CD3OD) S 189,03 157,63: (CO) ; 141,60; 137,18: C quat, arom,, 131,40; 129,33; 128, 41; 127,18 126,74; 125,15; 119,96: CH arom, 64,35; 55,32; 54,43: CH, 66, 98; 39,41; 37,71 31,24; 26,99; 22,47: CH2. Dans une seringue Supelco, la résine Rink-Phe-Lys(boc)-NHFmoc CHPO 120A (composé 4)(970 mg; 0,475 mmol; 0,49 mmol/g) est traitée avec 10 mL d'une solution de 20% de pipéridine dans le DMF et agitée pendant 2 h. Le mélange est filtré sur fritté et la résine est lavée avec deux séquences de 10 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 10 mL de DMF, DCM (résine CHPO 122A). Une solution d'acide aminé préactivé est préparée en mélangeant dans l'ordre la N-a-Fmoc-Glycine (261 mg; 0,88 mmol) et HOBt (134 mg; 0,88 mmol) dans 5 mL de DMF/DCM (1:1), pendant 15 min à température ambiante. Le DIC (138 L; 0,88 mmol) est ajouté à la solution d'acide carboxylique et de HOBt et le mélange est agité pendant 15 min à température ambiante. Pendant ce temps, la résine déprotégée Rink-Phe-Lys(boc)-NH2 CHPO 122A (800 mg; 0,44 mmol; 0,55 mmol/g) est expansée avec 5 mL de DMFIDCM (1:4) dans une seringue Supelco, pendant 30 min. La solution d'acide carboxylique préactivée (0,88 mmol; 2 éq.) est ajoutée à la résine. L'ensemble est agité par rotation pendant 14 h à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec deux séquences de 10 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 10 mL de DMF, DCM, puis séchée sous pression réduite pendant 4 h. Synthèse de H2N-CO-Phe-Lys-GIy-NHFmoc (CHPO 125B) NH2 Synthèse de la résine Rink-Phe-Lys(boc)-Gly-NHFmoc (CHPO 125A) NHboc NHFmoc composé 6 composé 7 H2N NHFmoc Dans une seringue Supelco, la résine Rink-Phe-Lys(boc)-Gly-NHFmoc CHPO 125A (composé 6)(100 mg; 0,210 mmol; 0,477 mmol/g) est traitée avec 1 mL de TFA/DCM/H20 (20:75:5) pendant 1 h à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec du DCM (3 x 3 mL). Le filtrat est collecté et amené à sec sous pression réduite pour fournir 17 mg de solide blanc. Rdt = 63%. HPLC 99% (dionex, tr = 25.54 min; a. = 288 nm; gradient t: 0 min: 2% de CH3CN dans H2O (0,1% TFA) t = 30 min: 100% CH3CN t = 40 min: 100% ; 0,5 mLlmin). MS (ESI-TOF) m/z (M+H) calculé pour C32H37N505 + H, 572; trouvé, 572. RMN 1H (CD3OD) 8 7,80 (d; J = 7,2 Hz; 2H) ; 7,65 (d; J = 7,2 Hz; 2H) ; 7,40 (dd; J = 7,2 Hz; J = 7,1 Hz; 2H) ; 7,15-7,34 (m, 7H) ; 4, 59-4,62 (m, 1H) ; 4,37-4,39 (m, 2H) ; 4,24-4,25 (m, 2H) ; 3,74-3,78 (m, 2H) ; 3,22-3,30 (m, 1H) ; 2,95-3,00 (m, 1H) ; 2,80-2,83 (m, 2H) ; 1,50-1, 60 (m, 4H) ; 1,27-1,31 (m, 2H). RMN 13C (CD3OD) 6 172,61; 171,99: (CO) ; 150,14; 144,13; 137,66: C quat, arom, ; 129,26; 128,45; 127,83; 127,18; 126,74; 125,18; 119,96: CH arom, 54,77; 53,75; 47, 30: CH; 67,34; 43,98; 39,40; 37,49; 34,94; 30,81; 26,89; 22,30: CH2. Synthèse de la résine Rink-Phe-Lys(boc)-Gly-Orn(boc)-NHFmoc (CHPO 15 126A) composé 8 Dans une seringue Supelco, la résine Rink-Phe-Lys(boc)-GlyNHFmoc CHPO 125A (composé 6)(740 mg; 0,353 mmol; 0,477 mmol/g) est traitée avec 5 mL d'une solution de 20% de pipéridine dans le DMF et agitée pendant 2 h. Le mélange est filtré sur fritté et la résine est lavée avec deux séquences de 5 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 5 mL de DMF, DCM (résine CHPO 125C). Une solution d'acide aminé préactivé est préparée en mélangeant dans l'ordre la N-a-Fmoc-N-co-terbutyloxycarbonyl-L-ornithine (281 mg; 0,619 mmol) et HOBt (83 mg; 0,619 mmol) dans 3 mL de DMF/DCM (1:1), pendant 15 min à TA. Le DIC (98 L; 0,619 mmol) est ajouté à la solution d'acide carboxylique et de HOBt et le mélange est agité pendant 15 min à température ambiante. Pendant ce temps, la résine déprotégée Rink-Phe-Lys(boc)-Gly-NH2 CHPO 125C (580 mg; 0,309 mmol; 0,534 mmol/g) est expansée avec 2 mL de DMF/DCM (1:4) dans une seringue Supelco, pendant 30 min. La solution d'acide carboxylique préactivée (0,88 mmol; 2 éq.) est ajoutée à la résine. L'ensemble est agité par rotation pendant 14 h à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec deux séquences de 5 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 5 mL de DMF, DCM, puis séchée sous pression réduite pendant 4 h. Synthèse de H2N-CO-Phe-Lys-Gly-Orn-NHFmoc (CHPO 126B) N H2 NH2 composé 9 H2N Dans une seringue Supelco, la résine Rink-Phe-Lys(boc)-Gly-Orn(boc)- NHFmoc CHPO 126A (composé 8)(80 mg; 0,184 mmol; 0,433 mmol/g) est traitée avec 1 mL de TFA!DCM/H20 (20:75:5) pendant 1 h à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec du DCM (3 x 3 mL). Le filtrat est collecté et amené à sec sous pression réduite pour fournir 18 mg de solide blanc. Rdt = 78%. HPLC 97% (dionex, tr = 23,37 min; X = 288 nm; gradient t: 0 min: 2% de CH3CN dans H2O (0,1% TFA) t = 30 min: 100% CH3CN t = 40 min: 100% ; 0,5 mL/min). MS (ESI-TOF) m/z (M+H) calculé pour C37H47N706 + H, 686; trouvé, 686. RMN 1H (CD3OD) 6 7,83 (d; J = 7,2 Hz; 2H) ; 7,69 (d; J = 7,2 Hz; 2H) ; 7,15-7,44 (m, 9H) ; 4,60-4,64 (m, 1H) ; 4,43-4,46 (m, 2H) ; 4,24-4,28 (m, 2H) ; 4,10-4,15 (m, 1H) ; 3,86-3,92 (m, 2H) ; 3,20-3,30 (m, 1H) ; 2, 90-3,00 (m, 2H) ; 2,80-2,85 (m, 2H) ; 1,50-1,90 (m, 8H) ; 1,27-1,40 (m, 6H). RMN 13C (CD3OD) 6 189,87; 175,06; 174,19; 172,72; 171,24; 157,71: (CO) ; 144,20; 141,63; 137,67: C quat, arom, ; 129,34; 128,43; 127,87; 127,21; 126,73; 125,17; 119,99: CH arom, 55,18; 54,78; 53,97; 48,86: CH; 67,16; 44,70; 39,37; 37,53; 30,7; 29,72; 28,95; 26,84; 24,02; 22,36: CH2. Synthèse de la résine Rink-Phe-Lys(boc)-Gly-Orn(boc)-Bodipy (CHPO 129A) Dans une seringue Supelco, la résine Rink-Phe-Lys(boc)-Gly-Orn(boc)NHFmoc CHPO 126A (composé 8)(625 mg; 0,27 mmol; 0,433 rnmol/g) est traitée avec 5 mL d'une solution de 20% de pipéridine dans le DMF et agitée pendant 2 h. Le mélange est filtré sur fritté et la résine est lavée avec deux séquences de 5 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 5 mL de DMF, DCM (résine CHPO 127A). Une solution d'acide carboxylique préactivé est préparée en mélangeant dans l'ordre l'acide 4,4-difluoro-5-(2-thiényl)-4-bora-3a,4a-diaza-sindacène-3-propionique CHPO65C (20 mg; 0,0576 mmol) et HOBt (10 mg; 0, 0768 mmol) dans 3 mL de DMFIDCM (1:1), pendant 15 min à température ambiante. Le DIC (12 L; 0,0768 mmol) est ajouté à la solution d'acide carboxylique et de HOBt et le mélange est agité pendant 15 min à température ambiante. Pendant ce temps, la résine déprotégée Rink-PheLys(boc)-Gly-Orn(boc)-NH2 CHPO 127A (80 mg; 0,0384 mmol; 0,48 mmol/g) est expansée avec 2 mL de DMF/DCM (1:4) dans une seringue Supelco, pendant 30 min. La solution d'acide carboxylique préactivée (0,0768 mmol; 2 éq.) est ajoutée à la résine. L'ensemble est agité par rotation pendant 14 h à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec deux séquences de 5 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 5 mL de DMF, DCM, puis séchée sous pression réduite pendant 4 h. Synthèse de H2N-CO-Phe-Lys-Gly-OrnBodipy (CHPO 129B) composé 11 HAN Dans une seringue Supelco, la résine Rink-Phe-Lys(boc)-Gly-Orn(boc)Bodipy CHPO 129A (92 mg; 0,0384 mmol; 0,415 mmol/g) est traitée avec 1 mL de TFA/DCM/H20 (20:75:5) pendant 1 h à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec du DCM (3 x 3 mL). Le filtrat est collecté et amené à sec sous pression réduite pour fournir 14 mg de solide violet intense. Rdt = 53%. HPLC 86% (dionex, tr = 23,58 min; 2. = 288 nm; gradient t: 0 min: 2% de CH3CN dans H20 (0,1% TFA) t = 30 min: 100% CH3CN t = 40 min: 100% ; 0,5 mL/min). MS (ESI-TOF) m/z (M+H) calculé pour C38H48BF2N905S + H, 792; trouvé, 792. RMN 1H (CD30D) 8 8,11 (d; J = 3,8 Hz; 1H) ; 7,66 (d; J = 4,9 Hz; 1H) ; 7,47 (s, 1H) ; 7,16-7,29 (m, 8H) ; 6,90 (d; J = 4,5 Hz; 1H) ; 6, 52 (d; J = 3,8 Hz; 1H) ; 4,59-4,63 (m, 1H) ; 4,29-4,21 (m, 2H) ; 3,77-4, 00 (m, 2H) ; 3,20-3,25 (m, 2H) ; 2,94- 2,99 (m, 4H) ; 2,77-2,81 (m, 4H) ; 1,30-1,90 (m, 10H). Le composé 11 ainsi obtenu est un composé de formule (I-bis). Synthèse de la résine Rink-Phe-Lys(boc)-Gly-Orn(boc)-Lissamine (CHPO 130A) NHboc NEt2 Dans une seringue Supelco, la résine Rink-Phe-Lys(boc)Gly-Orn(boc)-NHFmoc CHPO 126A (composé 8)(625 mg; 0,27 mmol; 0,433 mmol/g) est traitée avec 5 mL d'une solution de 20% de pipéridine dans le DMF et agitée pendant 2 h. Le mélange est filtré sur fritté et la résine est lavée avec deux séquences de 5 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 5 mL de DMF, DCM (résine CHPO 127A). Dans une seringue Supelco munie d'un fritté, la résine Rink-Phe-Lys(boc)Gly-Orn(boc)-NH2 CHP0127A (80 mg; 0,0384 mmol; 0,48 mmol/g) est expansée avec 1 mL de DCM/DMF (3:1). La DIEA (13 L; 0,0768 mmol; 2 éq.) est ajoutée, puis la Lissamine rhodamine B sulfonyl chloride (44 mg; 0,078 mmol; 2 éq.) dissoute dans 3 mL de DCM/DMF (1:1). Le mélange réactionnel est agité 5 h à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec deux séquences de 3 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 3 mL de DMF, DCM, puis séchée sous pression réduite pendant 4 h. Synthèse de H2N-COPhe-Lys-Gly-Orn-Lissamine (CHPO 130B) composé 10 NEt2 Dans une seringue Supelco, la résine Rink-Phe-Lys(boc)-Gly-Orn(boc)-lissamine CHPO 130A (100 mg; 0,0384 mmol; 0,38 mmol/g) est traitée avec 1 mL de TFA/DCM/H20 (20:75:5) pendant 1 h à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec du DCM (3 x 3 mL). Le filtrat est collecté et amené à sec sous pression réduite pour fournir 17 mg de solide violet intense. Rdt = 53%. HPLC 83% (dionex, tr = 23,76 min; 2 = 288 nm; gradient t: 0 min: 2% de CH3CN dans H2O (0,1% TFA) t = 30 min: 100% CH3CN t = 40 min: 100% ; 0,5 mL/min). MS (ESI-TOF) m/z (M+H) calculé pour C49H65N9010S2 + H, 1004; foüvé, 1004. RMN 1H (CD3OD) S 8,64 (s, 1H) ; 8,18 (d; J = 7,9 Hz; 1H) ; 7, 55 (d; J = 7,9 Hz; 1H) ; 6,97-7,28 (m, 11H) ; 4,61-4,65 (m, 1H) ; 4,12-4, 14 (m, 1H) ; 3,96-4,00 (m, 1H) ; 3,67-3,70 (m, 8H) ; 3,20-3,30 (m, 1H) ; 2,95-3,05 (m, 4H) ; 2,82-2,90 (m, 41-1) ; 1,21-1,86 (m, 22H). RMN 13C (CD3OD) S 174,89; 172,70; 170,40; 169, 47: (CO) ; 161,48; 158,40; 156,37; 156,28; 156,13; 145,76; 142,54; 137,76; 137,46; 134,83; 114,27: C quat, arom, ; 132,78; 131,83; 130,01; 129,47; 129,37; 128,72; 128,37; 126,78; 126,56; 96,04: CH arom, 56,69; 54,56; 52, 80: CH; 45,80; 43,21; 39,40; 37,89; 31,15; 30,76; 29,74; 28,33; 26,98; 24, 02; 22,91; 22,47: CH2; 11,84: CH3. Le composé 10 ainsi obtenu est un composé de formule (I-bis). Autre exemple: HN NH2 HN NH2 MS = 1017 M+1 HPLC = 58% produit non purifié N.SO2 H TFA 50%, 3h Arg(pmc) Phe Arg(pmc) Lissamine H2N HN Synthèse de la résine Rink-Arg(pmc)-Phe-Arg(pmc)-Lissamine (CF PO 133A) NNH(pmc) HNNH(pmc) NEt2 NEt2 Dans une seringue Supelco, la résine RinkArg(pmc)-Phe-Arg(pmc)-NHFmoc CHPO 84A (803 mg; 0,317 mmol; 0,376 mmollg) est traitée avec 5 mL d'une solution de 20% de pipéridine dans le DMF et agitée pendant 2 h. Le mélange est filtré sur fritté et la résine est lavée avec deux séquences de 5 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 5 mL de DMF, DCM (résine CHPO 84B). Dans une seringue Supelco munie d'un fritté, la résine Rink-Arg(pmc)-PheArg(pmc)-NH2 CHPO84B (100 mg; 0,041 mmol; 0,41 mmol/g) est expansée avec 1 mL de DCM/DMF (3:1). La DIEA (14 L; 0,082 mmol; 2 éq.) est ajoutée, puis la Lissamine rhodamine B sulfonyl chloride (47 mg; 0,082 mmol; 2 éq.) dissoute dans 3 mL de DCM/DMF (1:1). Le mélange réactionnel est agité 5 h à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec deux séquences de 3 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 3 mL de DMF, DCM, puis séchée sous pression réduite pendant 4 h. Synthèse de H2N-CO-Arg-PheArg-Lissamine (CHPO 133B) NNH2 HN_.NH2 H2N o NEt2 Dans une seringue Supelco, la résine Rink-Arg(pmc)-Phe-Arg(pmc)-lissamine lo CHPO 133A (122 mg; 0,041 mmol; 0,336 mmol/g) est traitée avec 1 mL de TFA/DCM/H20 (50:45:5) pendant 3 h à température ambiante. La résine est filtrée, lavée avec du DCM (3 x 3 mL). Le filtrat est collecté et amené à sec sous pression réduite pour fournir un solide violet intense. HPLC 58% (dionex, tr = 24.29 min; 2 = 288 nm; gradient t: 0 min: 2% de CH3CN dans H2O (0,1% TFA) t = 30 min: 100% CH3CN t = 40 min: 100% ; 0,5 mL/min). MS (ESI-TOF) m/z (M+H) calculé pour C48H64N1209S2 + H, 1017; trouvé, 1017. Le composé ainsi obtenu répond à la formule générale (III). III - MODES OPÉRATOIRES GÉNÉRAUX POUR LA SYNTHÈSE EN PLAQUES Mode opératoire général pour dispenser la résine dans une plaque de 96 puits 25 (CHPO 190) 0,007 mmol x 96 puits x 1,1 éq. = 0,7392 mmol de résine Rink-NH2 est placée dans un bécher et expansée avec 1 mL x 96 puits x 1,1 éq. = 105,6 mL de DCM/ DMF (1:1). La résine doit être parfaitement bien répartie dans le mélange de solvants. On distribue 1 mL de solution dans chaque puits, à l'aide d'une pipette multicanaux Mode opératoire général pour greffer un acide aminé sur la résine (CHPO 190) Une solution d'acide aminé préactivé est préparée dans un pilulier en mélangeant dans l'ordre l'acide aminé-N-Fmoc protégé (0,021 mmol) dissous dans 0,2 mL de DMF et HOBt (0,021 mmol) dissous dans 0,2 mL de DMF, pendant 15 min à température ambiante. Le DIC (0,021 mmol) dilué dans 0,3 mL de DMF est ajouté à la solution d'acide carboxylique et de HOBt et le mélange est agité pendant 15 min à température ambiante. Pendant ce temps, la résine déprotégée-NH2 (0,007 mmol) est expansée dans les puits avec 0,2 mL de DMF, qui est ensuite filtré. La solution d'acide carboxylique préactivée (0,7 mL; 0,021 mmol; 3 éq.) est ajoutée à la résine, dans chacun des puits, à l'aide d'une pipette multicanaux. On ajoute 0,3 mL de DMF pour compléter la réaction. Les plaques sont scellées grâce au système Flexchem et agitées pendant 14 h à température ambiante, sur le Robbin's. En fin de réaction, les plaques sont descellées, la résine est filtrée, lavée avec deux séquences de 0,6 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 0,6 mL de DMF, DCM. Mode opératoire général pour greffer un acide aminé sur la résine (CHPO 191) La résine N-Fmoc-protégée (0,007 mmol) est expansée dans les puits avec 0,2 mL de DMF, qui est ensuite filtré. On ajoute ensuite dans chaque puits 1 mL d'une solution de 20% de pipéridine dans le DMF à l'aide d'une pipette multicanaux. Les plaques sont scellées grâce au système Flexchem et agitées pendant 3 h à température ambiante, sur le Robbin's. En fin de réaction, les plaques sont descellées, la résine est filtrée, lavée avec deux séquences de 0,6 mL de DMF, DCM, MeOH et une séquence de 0,6 mL de DMF, DCM. Mode opératoire général pour greffer la Lissamine (CHPO 198) La résine (0, 007 mmol) est expansée dans les puits avec 0,2 mL de DCM, qui est ensuite filtré. On ajoute dans chaque puits la DIEA (0,014 mmol) diluée avec 0,2 mL de DCM, puis la Lissamine-SO2C1 (0,014 mmol) dissoute dans 0,6 mL de DCM, à l'aide d'une pipette multicanaux. Les puits sont complétés avec 0, 2 mL de DCM. Les plaques sont scellées (Joints ChemTuff, adaptés au DCM) grâce au système Flexchem et agitées pendant 5 h à température ambiante, sur le Robbin's. En fin de réaction, les plaques sont descellées, la résine est filtrée, lavée avec DCM (2 x 0,6 mL), MeOH (1 x 0,6 mL) DMF (3 x 0,6 mL pendant 20 min) une séquence de 0,6 mL de DCM, MeOH, DMF, DCM, (DCM/DIEA 5%), DCM et enfin DMF (5 X 0,6 mL). Mode opératoire général pour le clivage (CHPO 199) La résine (0,007 mmol) est expansée dans les puits avec 0,2 mL de DCM, qui est ensuite filtré. On ajoute dans chaque puits 0,6 mL d'une solution de TFAIDCMIH20 (50:45:5) , à l'aide d'une pipette multicanaux. Les plaques sont scellées grâce au système Flexchem et agitées pendant 3 h à température ambiante, sur le Robbin's. En fin de réaction, les plaques sont descellées et posées sur des plaques Deepwell pour récupérer le filtrat lors de la filtration de la résine. Celle-ci est filtrée, lavée avec du DCM (2 X 0,2 mL). Les plaques Deepwell sont amenées à sec à l'aide du Genevac DD4. La résine est à nouveau lavée avec du DMF (1 x 0,5 mL + 2 x 0,25 mL), puis les plaques sont amenées à sec à l'aide du Genevac. IV- EXEMPLE DE CRIBLAGE DES COLLECTIONS Expression du récepteur orphelin GPR 50 fusionné à son extrémité aminoterminale à la protéine EGFP et criblage de chimiothèque fluorescente. I) Fusion de la séquence codante du récepteur GPR 50 à la EGFP La séquence codante du récepteur GPR50 (Genbank accession N : U 52219) est placée dans le vecteur pCEP4-SP-EGFP. Ces extrémités 3' et 5' contiennent des séquences complémentaires aux extrémités 5' et 3' du vecteur pCEP4-SPEGFP digéré par Fsel. Ces séquences complémentaires ont été introduites dans les amorces utilisées lors de la PCR (séquences soulignées) pour amplifier la séquence codante du récepteur. Amorce sens: 5' G GCC GGG GCC GGG ACC CCC TAT GGC TGT ATT GGC Amorce antisens: 5' CTC GTT CTC GTT GGA TCA CAC AGC CAT TTC ATC AGG ATC Ce procédé d'insertion directionnelle de fragments de PCR dans un vecteur, ne fait pas intervenir d'enzyme de restriction (Aslanidis C et al; 1990, Nucleic Acids Res.18, 6069-6074, Haun R.S. et al; 1992, BioTechniques 13, 515-518) . Dans la construction pCEP4-SP-EGFP-GPR50, un bras espaceur long de 6 acides aminés sépare la EGFP du récepteur. Quant au récepteur, il possède une extrémité amino-terminale longue de 30 acides aminés, qui a été tronquée de 9 acides aminés par rapport à sa séquence sauvage. II) Expression des protéines recombinantes Des cellules HEK 293 sont transfectées, par la méthode de la précipitation au phosphate de calcium (Chen & Okayama 1987, Mol.Cell.Biol.7: 2745-2752) par la construction pCEP4-SP-EGFP-GPR50. Des lignées stables sont établies par sélection des cellules transfectées résistantes à l'hygromycine (500 g/ml, Clontech). Les cellules sont cultivées dans un milieu MEM (Gibco) supplémenté de 10% de sérum de veau foetal (Sigma), de Pénicilline (100 unités/ml), streptomycine (100 g/ml) et de glutamine (4 mM). III) Mesures de l'expression du récepteur GPR50 fusionné à la EGFP, par fluorimétrie Les expériences de fluorescence sont effectuées dans une cuvette de 1m1 pourvue d'un système d'agitation magnétique et placée dans un spectrofluorimètre Fluorolog (SPEX) équipé d'une lampe Xe 450 W (Osram) et de monochromateurs Spex 1680 0.22 m (excitation) et Spex 1681 0.22 m (émission). Les cellules sont mises en suspension dans un tampon physiologique: Hepes 10 mM, NaCl 137,5 mM, MgC12 1,25 mM, CaC12 1,25 mM, KC1 6 mM, glucose 5,6 mM, NaH2PO4 0,4 mM, BSA 0,1 % (W/v), pH 7,4. Les cellules entières sont récoltées après traitement à la trypsine-EDTA (lx Gibco) à température ambiante. Les cellules sont centrifugées 5 minutes à 100 g et sont remises en suspension à une concentration de 1 à 2.106 cellules/ml dans le tampon physiologique. Un spectre d'émission des cellules transfectées par le pCEP4-SP-EGFPGPR50 est représenté dans la figure 1. Un spectre est réalisé avant chacjue criblage. Les spectres font clairement apparaître le signal de la EGFP, indiquant que ces cellules expriment bien la EGFP en comparaison des cellules non transfectées. IV) Criblage de collections de composés fluorescents sur la lignée HEK exprimant le récepteur GPR50 fusionné à la EGFP IV.1. Procédure de criblage La distribution des ligands et des cellules est réalisée à l'aide d'un robot pipetteur distributeur (Biomek 2000) et la fluorescence est mesurée dans un spectrofluorimètre (Victor II, Perkin Elmer). Dans une plaque noire, 96 puits (Labsystem), sont distribués, chronologiquement, 98 l de tampon physiologique, 2 à 4.tl de ligand fluorescent et 100 000 cellules (100 l) d'une suspension cellulaire. Les ligands fluorescents sont criblés à une concentration finale variant de 500 nM à 1 M. Ces ligands sont dissous dans le DMSO, dont la concentration finale dans l'essai varie entre 1 et 2 %. Les cellules sont distribuées depuis un réservoir, dans lequel les cellules sont gardées en suspension par une alternance d'aspiration et refoulement effectuée par le robot avant chaque distribution. Afin de mélanger l'ensemble des composés, le robot aspire et refoule une fois, la moitié du puits. La plaque est ensuite 1 o incubée 10 min à température ambiante, puis centrifugée 5 min à 100g. Elle est ensuite placée dans le détecteur de fluorescence Victor. La EGFP est excitée à 465 7 nm et son émission est mesurée à 510 7 nm, pendant 2s, à 0.8 mm du fond de la plaque. Dans une plaque 96 puits, 16 puits servent de contrôle et 80 ligands fluorescents sont testés, soit un par puits. L'émission de la EGFP (510 nm) de chacun des puits traités est comparée à la fluorescence moyenne de la EGFP (510 nm) des 16 puits contrôle. Un pourcentage d'extinction de fluorescence est ainsi calculé et correspond au critère d'identification des touches. Trois mille ligands fluorescents ont été testés suivant ce protocole. IV.2. Confirmation et structure des touches potentielles La liaison de certaines molécules a été vérifiée au spectrofluorimère. Les mesures sont effectuées dans une cuvette de 1 ml avec une suspension de 1 à 2.106 cellules/ml de tampon physiologique. Deux des ligands préférés découverts par criblage (voir''Figure 2) possèdent les NEt2 CP1 CP2 CP 1 correspond à un composé de formule (I) susmentionnée dans laquelle n = 2, R1 représente la chaîne latérale de la lysine, R2 représente la chaîne latérale de la 2-naphtylalanine et A représente un groupe de la forme D-G, D représentant un groupe espaceur de formule -CO-(CH2)8-NH-SO2- et A représentant un dérivé de lissamine. CP2 correspond à un composé de formule (I) susmentionnée dans laquelle n = 2, R1 représente la chaîne latérale de la lysine, R2 représente la chaîne latérale de la phénylalanine de benzoyle et A représente un groupe de la forme D-G, D représentant un groupe espaceur de formule -CO-(CH2)8NH-SO2- et A représentant un dérivé de lissamine. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'une collection de composés traçables de type cationique répondant à la formule (I) suivante: H2N (I) dans laquelle: n représente un nombre entier variant de 1 à 10, et notamment de 1 à 6, et étant de préférence égal à 2 ou à 3, i représente un nombre entier variant de 1 à n, R; représente une chaîne latérale d'acide aminé, l'un au moins des Ri représentant une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, A représente un groupement traceur, notamment un fluorophore, un colorant ou un "quencher", ou un groupe de la foLme D-G, D représentant un groupe espaceur et G représentant un groupe traceur tel que défini précédemment, pour la détermination in vitro de ligands d'un récepteur dont on ne connaît pas de ligand ou dont on ne connaît pas de ligand utilisable pour les études de liaison d'affinité spécifique. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que les composés traçables de type cationique répondent à la formule suivante: (Ibis) H2N dans laquelle: n représente un nombre entier variant de 2 à 10, et notamment de 2 à 6, et étant de préférence égal à 2 ou à 3, - j répond à la définition donnée précédemment pour i dans la revendication 1, - RR et R'i représentent une chaîne latérale d'acide aminé, caractérisés en ce qu'au moins deux des groupes R.1 représentent une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique et en ce que tous les R'i soient différents d'une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, et A est tel que défini dans la revendication 1. (I) 3. Composé de formule (I) suivante: o H HZN dans laquelle: n représente un nombre entier variant de 1 à 10, et notamment de 1 à 6, et étant de préférence égal à 2 ou à 3, i représente un nombre entier variant de 1 à n, R, représente une chaîne latérale d'acide aminé, l'un au moins des R; représentant une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, A représente un groupement traceur, notamment un fluorophore, un colorant ou un "quencher", ou un groupe de la forme D-G, D représentant un groupe espaceur et G représentant un groupe traceur tel que défini précédemment. 4. Composé selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'un seul groupe R; représente une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique. 5. Composé selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il répond à la fonnule suivante: (I-bis) dans laquelle: n représente un nombre entier variant de 2 à 10, et notamment de 2 à 6, et étant de préférence égal à 2 ou à 3, j répond à la définition donnée précédemment pour i dans la revendication 3, HZN 30 Ri et R'i représentent une chaîne latérale d'acide aminé, caractérisés en ce qu'au moins deux des groupes Ri représentent une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique et en ce que tous les R'i soient différents d'une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, et A est tel que défini dans la revendication 3. 6. Composé selon la revendication 5, caractérisé en ce que seulement deux des groupes Ri représentent une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique. 7. Composé selon la revendication 5 ou 6, caractérisé en ce que: Ri représente une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, et de préférence la chaîne latérale de la lysine, de l'ornithine ou de l'arginine, - R'i représente une chaîne latérale d'acide aminé, ledit acide aminé étant de préférence choisi dans le groupe comprenant: l'alanine, la glycine, l'acide 6- aminocaproïque, la leucine, la glutamine, l'acide glutamique, la méthionine, la proline, l'acide isonipécotique, l'acide carboxylique de tétraisoquinoline, l'acide 3-aminobenzoïque, l'acide 4- aminométhylbenzoïque, le tryptophane, l'histidine, la phénylalanine, la tyrosine, la 2-naphtylalanine, la phénylalanine de benzoyle. 8. Composé selon la revendication 3, caractérisé en ce que n est égal à 2, et répondant à la formule (II) suivante: O R2 H HZN N A H R1 O dans laquelle: A est tel que défini dans la revendication 3, RI représente une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, et de préférence la chaîne latérale de la lysine, de l'ornithine ou de l'arginine, et R2 représente une chaîne latérale d'acide aminé, ledit acide aminé étant de préférence choisi dans le groupe comprenant: l'alanine, la glycine, l'acide 6-aminocaproïque, la leucine, la glutamine, l'acide glutamique, la méthionine, la proline, l'acide isonipécotique, l'acide carboxylique de tétraisoquinoline, l'acide 3-aminobenzoïque, l'acide 4-aminométhylbenzoïque, le tryptophane, l'histidine, la phénylalanine, la tyrosine, la 2-naphtylalanine, la phénylalanine de benzoyle. 9. Composé selon la revendication 3, caractérisé en ce que n est égal à 3, et répondant à la formule (III) suivante: O R2 O H H HZN N ^ \H'N Ri O R3 dans laquelle: A est tel que défini dans la revendication 3, RI et R3 représentent une chaîne latérale d'acide aminé à caractère basique, et de préférence la chaîne latérale de la lysine, de l'ornithine ou de l'arginine, et R2 représente une chaîne latérale d'acide aminé, ledit acide aminé étant de préférence choisi dans le groupe comprenant: l'alanine, la glycine, l'acide 6-aminocaproïque, la leucine, la glutamine, l'acide glutamique, la méthionine, la proline, l'acide isonipécotique, l'acide carboxylique de tétraisoquinoline, l'acide 3-aminobenzoïque, l'acide 4-aminométhylbenzoïque, le tryptophane, l'histidine, la phénylalanine, la tyrosine, la 2-naphtylalanine, la phénylalanine de benzoyle. 10. Composé selon l'une quelconque des revendications 3 à 9, caractérisé en ce que le groupe espaceur D est choisi parmi les groupes de formule suivante: o SO2 O H soî N H o 11. Composé selon l'une des revendications 3 à 10, caractérisé en ce que A représente un groupe fluorophore dont les longueurs d'onde d'absorption et d'émission sont compatibles avec le processus de résonance par transfert d'énergie de fluorescence avec les divers mutants de la protéine fluorescente verte, ledit fluorophore étant notamment choisi parmi le groupe comprenant le Bodipy et la lissamine. 12. Composé selon l'une des revendications 3 à 11, caractérisé en ce que A 5 représente l'un des groupes suivants: 13. Collection comprenant une pluralité de composés de formule (I) telle que 15 définie dans la revendication 3 ou de formule (I-bis) telle que définie dans la revendication 5. 14. Utilisation d'une collection selon la revendication 13, pour la détermination in vitro de ligands d'un récepteur dont on ne connaît pas de ligand ou dont on ne connaît 20 pas de ligand utilisable pour les études de liaison d'affinité spécifique. 15. Procédé de criblage de ligands de récepteurs dont on ne connaît pas de ligand ou dont on ne connaît pas de ligand utilisable, ledit procédé comprenant les étapes suivantes: la mise en présence d'une collection de composés traçables selon la revendication 13, avec des cellules transfectées par une construction contenant la fusion de la séquence codant pour une protéine fluorescente, avec la séquence nucléotidique codant pour un récepteur dont on ne connaît pas de ligand ou dont on ne connaît pas de ligand utilisable, et le mélange desdites cellules et de ladite collection, la détection de la fluorescence dudit mélange, par excitation de ladite protéine fluorescente et mesure de la fluorescence d'émission de ladite protéine fluorescente, et la détermination du pourcentage d'extinction de fluorescence en comparant la fluorescence d'émission de ladite protéine fluorescente dans le mélange à la fluorescence moyenne de ladite protéine fluorescente en l'absence de ligand, o dérivé du Bodipy dérivé de la lissamine la fluorescence moyenne de ladite protéine fluorescente en absence de ligand étant mesurée par des essais témoins correspondant à la mesure de la fluorescence de la protéine fluorescente en l'absence de la collection de composés, et la détermination des composés qui donnent un pourcentage d'extinction de la 5 fluorescence de la protéine fluorescente d'au moins 5% et leur identification en tant que ligand. 16. Procédé de préparation sur support solide d'un composé selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: a) une étape de couplage de la fonction amine dudit support solide de formule suivante: É'N GP avec un premier acide aminé de chaîne latérale RI dont la fonction amine est convenablement protégée par un groupe protecteur, notamment choisi parmi: Fmoc, Boc et Cbz, et de préférence un groupe Fmoc, Ri répondant à la définition donnée dans la revendication 3 pour R;, afin d'obtenir un composé de formule suivante: o afin d'obtenir le composé de formule suivante: R1 b) une étape de déprotection du groupement GP dans des conditions appropriées, É/\/NHZ N H c) la répétition séquentielle des étapes a) et b) jusqu'à ce que n acides aminés aient été greffés sur ledit support solide, ce qui conduit à l'obtention du composé de formule suivante: chaque séquence correspondant à une étape de couplage a) d'un composé de formule suivante: NH GP k étant un nombre entier entre 1 et n, O avec un acide aminé de chaîne latérale Rk de fou nule/NHZ dont la HO fonction amine est convenablement protégée, afin d'obtenir un composé de formule suivante: /0 une étape de déprotection b) du groupement GP dans des conditions appropriées, afin d'obtenir le composé de formule suivante: H1-G k d) une étape de réaction du composé obtenu à l'issue de la répétition séquentielle susmentionnée de formule tr' avec un composé de formule A-W, A étant tel que défini dans la revendication 3 et W représentant un atome d'halogène ou tout nucléofuge permettant d'activer une fonction acide et de la rendre 25 plus réactive vis-à-vis des amines, afin d'obtenir un composé de formule suivante: e) une étape de clivage du composé obtenu à l'étape précédente afin d'obtenir un composé de formule (I).