FR 2867076 A1 20050909 FR 0500257 A 20050111 2867076 1 COMPLEMENTS ALIMENTAIRES ET PRODUITS PHARMACEUTIQUES La présente invention concerne des compléments alimentaires et des produits pharmaceutiques composés d'un extrait de courge mélangé avec un extrait d'oignon. Il est classiquement connu que l'extrait d'oignon a un effet antidiabétique (voir la demande japonaise ouverte à l'inspection publique no. 10-77 232) ; Yoshimi Saitou, Effects of Onion Concentrated Dried Tablets (OCDT) on Postprandial Hyperglycemia in Diabetic Cases, Rinsho Iyaku (Clinical Medicines), vol. 17, no. 7, 1089 à 1095 (2001) ; Yoshimi Saitou Effects of Onion Concentrated Dried Tablets (OCDT) on Hyperlipidemia in Diabetic Cases, Rinsho Iyaku (Clinical Medicines), vol. 17, no. 8, 1216 à 1221 (2001) ; Kazuhiko Yoshizawa, Yoshitaka Aiso, Clinical Effect of Tamaekisu on type II Diabetics, Japan Diabetic Society Kanto-Koshinetsu District 41st Lecture Abstract, p. 36 (2004)). Il est également connu que l'extrait d'oignon a un effet hypotenseur (voir, par exemple, Yoshimi Saitou, Effects of Onion Concentrated Dried Tablets (OCDT) on Postprandial Hyperglycemia in Diabetic Cases, Rinsho Iyaku (Clinical Medicines), Vol. 17 No. 7, 1089 à 1095 (2001)). L'effet hypotenseur de l'extrait de courge, basé sur l'effet inhibiteur de l'enzyme de conversion de l'angiotensine (effet inhibiteur de l'ACE) a été découvert par Abe et Kosaka parmi d'autres inventeurs, et une demande a été déposée par les demandeurs (demande de brevet japonais No. 2002-312 459). Les effets rapportés pour les agents hypotenseurs basés sur ladite inhibition de l'ACE (par exemple les antagonistes du calcium) englobent la suppression de l'apparition d'un nouveau diabète et la suppression d'un début de complication chez des patients diabétiques (voir, par exemple, Hansson L et al.: Effect of angiotensin-converting-enzyme inhibition compared with conventional therapy on cardiovascular morbidity and mortality in hypertension: the Captoril Prevention Project (CAPPP) randomized trial, Lancet 353: 611, 1999; Yusuf S et al. ; Effect of angiotensin-converting-enzyme inhibitor, ramipuril, on cardiovascular events in high-risk patients: The Heart Outcome Prevention Evaluation Study Investigators, N. Engl J Med 342: 145, 2000). Pour ce mécanisme, une augmentation de sensibilité à l'insuline, à savoir une moindre résistance à l'insuline a été suggérée (voir, par 2867076 2 exemple, Tetsuya Shinai, Masatsugu Horiuchi, Angiotensin and Diabetic Complications, Gendai Iyaku (Modern Medicines), vol. 35, no. 9, (2003)). On estime généralement qu'il y a approximativement 14 millions de patients diabétiques, parmi lesquels des patients potentiels, et on pense qu'environ 40 % parmi eux reçoivent une thérapie médicale à base de médicaments. Toutefois, dans le cas d'une thérapie médicale à base de médicaments, des effets indésirables se font sentir. Le coût énorme d'une telle thérapie est également un problème en vue d'une économie médicale. Il est donc souhaitable pour des patients présentant des diabètes légers ou des patients potentiels qui sont sur le point de développer des diabètes, d'utiliser un complément alimentaire efficace (aliment modifié) etc., s'il est disponible, sans recevoir aucune thérapie médicale à base de médicaments. Toutefois, les aliments modifiés à base d'extrait d'oignon actuellement disponibles sur le marché tels que ceux divulgués dans la demande japonaise ouverte à l'inspection publique no. 10-77 232, n'ont pas été satisfaisants du point de vue de leur efficacité. Les présents inventeurs ont découvert que l'extrait de courge mélangé avec l'extrait d'oignon a une excellente activité inhibitrice de l'ACE (décrite plus tard dans les exemples 1 à 3), et ont donc protégé son utilisation comme compléments alimentaires efficaces dans la réduction de la pression sanguine par le dépôt d'une demande de brevet (demande de brevet japonais no. 2002-312 459). Comme mentionné ci-dessus, puisque l'effet hypotenseur basé sur une activité inhibitrice de l'ACE supprime également l'apparition d'un nouveau diabète, on s'attend à ce que des compléments alimentaires contenant de l'extrait de courge mélangé avec de l'extrait d'oignon aient un effet antidiabétique de même qu'un effet hypotenseur. Lorsque ces compléments alimentaires ont été administrés à des patients diabétiques avec des complications d'hypertension, une performance extrêmement bonne, qui sera décrite ci- après, a été obtenue. Il serait encore plus avantageux si des compléments alimentaires contenant de l'extrait de courge mélangé à de l'extrait d'oignon pouvaient être utilisés non seulement comme compléments alimentaires (aliments traités) mais également comme produits pharmaceutiques. 2867076 3 Le but de la présente invention est donc de proposer des compléments alimentaires et des produits pharmaceutiques sains plus efficaces sans effet indésirable un effet hypotenseur et un effet antidiabétique. Ce but a été atteint selon l'invention grâce à un complément alimentaire comprenant de l'extrait de courge mélangé avec de l'extrait d'oignon. Un autre objet de l'invention est un produit pharmaceutique comprenant de l'extrait de courge mélangé à de l'extrait d'oignon. Tant la courge que l'oignon sont consommés par les êtres humains depuis des milliers d'années en tant qu'aliments. Leur innocuité peut être bien déduite de cette expérience abondante de consommation et ils sont disponibles en tant que matière première de faible coût. De plus, comme ils ont été consommés pendant longtemps et que leur innocuité est empiriquement prouvée, le mélange d'une poudre d'extrait de courge et d'une poudre d'extrait d'oignon, puis l'addition d'additifs pharmaceutiquement acceptables appropriés (par exemple des excipients, des agents tensioactifs, etc.), permet de préparer des produits pharmaceutiques sains ne présentant pas d'effets indésirables. En mélangeant de l'extrait de courge à de l'extrait d'oignon, un effet synergique des deux extraits est attendu, formant ainsi, par exemple, des compléments alimentaires et des produits pharmaceutiques combinant un effet hypotenseur et un effet antidiabétique, qui sont sains et plus efficaces que l'extrait d'oignon seul, et n'ont aucun effet indésirable. L'invention est décrite ci-après en référence aux figures parmi lesquelles la figure 1 montre les changements de la pression sanguine systolique et diastolique après l'ingestion des produits obtenus par mélange d'extrait de courge et d'extrait d'oignon; la figure 2 montre les changements de substances liées à l'élévation de la pression sanguine et les minéraux hypotenseurs après ingestion des produits obtenus par mélange d'extrait de courge et d'extrait d'oignon; 2867076 4 la figure 3 montre la corrélation entre la pression sanguine systolique et les substances liées à l'élévation de la pression sanguine; et la figure 4 montre les changements de glycémie postprandiale à 2 heures et de HbAI, après l'ingestion des produits obtenus par mélange d'extrait de courge et d'extrait d'oignon. Des exemples de préparation et des exemples seront à présent décrits. Exemple de préparation 1 Procédé de préparation d'extrait de courge (Préprocédé) Tout d'abord, on lave 78 kg de courge (cultivar Ebisu) avec un Jet Washer (Arimitsu Industry Co., Ltd., SKY-13011) pour éliminer les salissures de surface, puis on les pèle et on enlève les graines à la main pour obtenir la chair. On broie la chair en une taille de quelques millimètres avec un broyeur Feather Mill (Hosokawa Micron Corporation, FM-65042) pour obtenir 56 kg de produit broyé. (Préparation d'un liquide sous pression) On a préparé une quantité équivalente d'eau à ébullition dans un pot à double fond, puis on a ajouté le produit broyé dans le pot et on a laissé le mélange à 90 C pendant 10 minutes. On a placé le mélange dans un sac de tissu filtrant et on l'a exprimé avec une presse hydraulique à l'huile (Komagata Kikai Seisakusho, KS-3) pour obtenir 90 kg de liquide exprimé. La teneur en matière solide soluble de ce liquide était de 5,4 %. (Préparation d'un liquide concentré) Pour réduire la viscosité, on a ajouté 0,01 % en poids d'enzyme (Sankyo Co., Ltd., Sucrase N) au liquide exprimé, et on a laissé le mélange à 45 C pendant 1 heure, puis on l'a chauffé à 90 C pour inactiver complètement l'enzyme. On a concentré ce liquide sous vide dans les conditions de température de chauffage suivantes:120 C, 160 mm Hg, en utilisant un récipient de concentration (Yashima Chemical Engineering Co., Ltd., type AS) pour obtenir 13 kg de liquide concentré. La teneur en matière solide soluble de ce liquide était de 36 %. 2867076 5 (Préparation d'une poudre) On a dissous 14 kg de dextrine de qualité alimentaire (Nissi Co., Ltd., NSD 500) dans 28 kg d'eau chaude, puis on a chauffée à 95 C pendant 20 minutes. On a ajouté 13 kg du liquide concentré obtenu et on a agité le mélange pour l'homogénéiser à 70 C jusqu'à ce qu'il soit uniforme. Ensuite, on l'a converti en une poudre en utilisant un sécheur à pulvérisation (Ohkawara Kakohki Co., Ltd., type L12) travaillant à une température d'entrée de 150 C et une température d'échappement de 70 C, on a tamisé la poudre avec un tamis de 30 mesh pour obtenir 17,5 kg de poudre d'extrait de courge. Exemple de préparation 2 Procédé de préparation de l'extrait d'oignon On a lavé deux fois dix kg d'oignons de chez Hokkaido avec de l'eau, puis on les a immédiatement placés dans un pot et chauffé à ébullition à 100 C. On a broyé les oignons portés à ébullition obtenus dans un broyeur Feather Mill et on les a exprimés au moyen d'une presse pour obtenir 9,5 kg de liquide exprimé. On a réalisé une concentration sous vide en utilisant une température de chauffage de 92 C, une température d'évaporation de 42 C, et une pression de 15 mm Hg dans un concentrateur sous vide à film centrifuge pour obtenir 0,9 kg d'extrait concentré. On a fait passer les constituants éliminés par distillation pendant la concentration sous vide à travers une couche de charbon actif pour les y adsorber. On a élué la matière adsorbée avec de l'éthanol, puis on a éliminé l'éthanol de la solution par évaporation pour obtenir 1,5 g de composant résiduel. On l'a ajouté uniformément à l'extrait concentré obtenu précédemment pour obtenir 0,9 kg d'extrait d'oignon. Exemple 1 Résultats de l'étude de l'activité inhibitrice de l'ACE et de l'interaction entre les extraits de courge et d'oignon On a réalisé des mesures selon la méthode de Cushman & Cheung partiellement modifiée suivante [Seikagaku Jikkenhou 38: Shokuhinchu no Seitaikinou Chosetsubusshitsu Kenkyuhou (Experimental Methods in Biochemistry 38: Methods of Researching Substances Regulating Vital Functions in Food Materials), Shunro Kawagishi ed., Gakkai Shuppan Center (1996)]. 2867076 6 [Echantillons] 1) Extrait de courge (Nippon Shinyaku Co. Ltd., Chitose Foodstuffs Plant) 2) Extrait d'oignon (Nippon Shinyaku Co. Ltd., Chitose Foodstuffs Plant) 3) Produit alimentaire commercial A (aliment diététique spécifié contenant du lactotripeptide) 4) Produit alimentaire commercial B (aliment diététique spécifié contenant un peptide de sardine) [Procédé] 1. Réactifs (1) Tampon: on mélange 450 ml de Na2B4O7 à 50 mM et 550 ml de H3BO3 à 200 mM et on ajuste le pH du mélange à une valeur de 8,3. (2) Solution de substrat: on dissout du Hip-His-Leu à 7,6 mM et du NaCl à 608 mM dans cette solution tampon. (3) Solution d'ACE: on dissout de l'ACE dans le tampon ci-dessus (60 mU/ml d'activité). 2. Procédé de mesure (1) On place 30 l d'une solution d'échantillon et 250 l d'une solution de substrat dans un tube à essai, puis on les incube dans un thermobain à 37 C pendant 5 minutes. (2) On ajoute 100 i de solution d'ACE (6 mU), on agite immédiatement, puis on fait réagir à 37 C pendant 30 minutes. (3) On ajoute 250 l d'acide chlorhydrique à 1 N et on agite pour arrêter la réaction. On ajoute 1,5 ml d'acétate d'éthyle, on agite bien, puis on extrait l'hippurate libéré. (4) Après une centrifugation à 3000 tr/min pendant 10 minutes, on récupère 0,5 ml de la phase supérieure d'acétate d'éthyle et on la place dans un tube à essai. (5) On aspire l'acétate d'éthyle et on l'élimine dans un dessiccateur. Après confirmation de l'élimination complète de l'acétate d'éthyle, on ajoute 4 ml d'eau distillée et on agite bien pour dissoudre l'hippurate et on mesure l'absorbance à 228 nm. (6) Le taux d'inhibition est représenté par: Inhibition (%) = Ec-Esx100 Ec -EB 2867076 7 où Es est l'absorbance lorsque la solution d'échantillon est ajoutée, Ec est l'absorbance lorsque de l'eau distillée au lieu d'une solution d'échantillon est ajoutée, et EB est l'absorbance après réaction et addition d'acide chlorhydrique à 1 N. 3. Calcul de l'activité inhibitrice La concentration de l'échantillon dans la solution réactionnelle lorsque le taux d'inhibition est de 50 % est définie comme la valeur Cl50. On ajuste la teneur en glucose de tous les échantillons à 2,0 Bx avant la mesure. [Résultats] (1) Matières seules Extrait de Extrait Produit Produit Echantillon courge d'oignon alimentaire alimentaire (2,0 Bx) (2,0 Bx) commercial A commercial B 2) Mélange de quantités égales Produit Produit Extrait de courge + alimentaire alimentaire extrait d'oignon Echantillon commercial A commercial B (chacun 2,0 Bx) + extrait + extrait d'oignon d'oignon Activité inhibitrice de 10,5 40,2 25,0 l'ACE Cl50 ( l/ml) [Discussion] 1) On a observé une activité inhibitrice de l'ACE considérablement élevée tant avec l'extrait de courge seul qu'avec l'extrait d'oignon seul. 2) Les activités des meilleurs produits connus comme étant des aliments diététiques spécifiés (produit alimentaire commercial A et Activité inhibitrice de l'ACE Cl50 ( l/ ml) 23,7 21,1 79,0 28,9 2867076 8 produit alimentaire commercial B) sont celles indiquées ci-dessus; ces produits présentent des activités inférieures à celle de l'extrait de courge seul et à celle de l'extrait d'oignon seul. 3) Dans le cas de l'association extrait de courge + extrait d'oignon, on observe clairement un effet synergique; l'activité inhibitrice de l'ACE est augmenté d'un facteur 2. 4) Dans le cas du produit alimentaire commercial A associé à l'extrait d'oignon et du produit alimentaire commercial B associé à l'extrait d'oignon, aucun effet synergique n'a été observé (effet additif). 5) Il apparaît à partir de la comparaison avec les produits alimentaires commerciaux A et B, que la quantité d'extrait de courge à ingérer par jour est d'environ 3à 10 g sous forme de poudre contenant 30 % de matière solide d'extrait. Exemple 2 Etude clinique d'évalutation des effets hypotenseur et hypoglycémique des produits contenant de l'extrait de courge mélangé à de l'extrait d'oignon chez des patients diabétiques présentant des complications d'hypertension (Yoshimi Saitou, Head Surgeon, Bunkyo Daiichi Iin) But Les présents inventeurs ont déjà confirmé l'effet hypotenseur des produits contenant de l'extrait de courge mélangé à de l'extrait d'oignon, mais son effet hypoglycémique chez les patients diabétique n'a pas été encore étudié. L'effet hypoglycémique de l'extrait d'oignon seul a déjà été confirmé, mais l'effet hypoglycémique, lorsque l'extrait d'oignon est mélangé avec de l'extrait de courge, n'a pas encore été étudié. Le but du présent essai consiste à examiner l'effet hypoglycémique des produits contenant de l'extrait de courge mélangé à de l'extrait d'oignon, comparé à de l'extrait d'oignon seul. Méthode Les sujets étaient 8 patients diabétiques avec des complications hypertensives (3 hommes, âgés de 51, 59 et 70 ans; 5 femmes, âgées de 51, 61, 65, 68 et 70 ans). Trois patients reçurent des agents hypotenseurs (antagonistes du calcium) de manière concomitante et cinq patients ne prirent aucun médicament concomitant. Sept patients reçurent des médicaments antidiabétiques concomitants et 1 patient ne 2867076 9 reçut aucun médicament concomitant. Les 20 pilules de produits contenant de l'extrait de courge mélangé à de l'extrait d'oignon ont été ingérées divisées en 2 portions, de 10 pilules chacune, respectivement chaque matin et chaque soir. La période d'observation a été fixée à 16 semaines et les patients ont été suivis avant la prise du produit et toutes les quatre semaines après celle-ci. Les paramètres examinés étaient: la mesure de la pression sanguine, toutes les 4 semaines (le temps de mesure a été unifié soit, le matin, soit l'après-midi) ; le dosage des substances liées à l'élévation de la pression sanguine (aldostérone, ACE, angiontensine II), avant la prise du produit et 8 et 16 semaines après la prise, ce qui fait un total de 3 mesures; le dosage des minéraux hypotenseurs (K, Ca, Mg), avant la prise du produit et 8 et 16 semaines après la prise, ce qui fait un total de 3 mesures; et la mesure de la glycémie et de l'HbAic, toutes les quatre semaines. Résultats Les changements de pression sanguine systolique et diastolique sont montrés sur la figure 1. La pression sanguine systolique et diastolique diminuait significativement à 4 semaines après le commencement de l'administration des produits contenant l'extrait de courge mélangé avec l'extrait d'oignon, et diminuait progressivement ultérieurement. Lorsqu'on l'observait cas par cas, l'effet hypotenseur était d'autant plus significatif que la pression avant commencement de l'administration était élevée. L'utilisation concomitante d'agents hypotenseurs ne semblait pas être corrélée à l'effet du présent produit. Parmi les substances liées à l'élévation de la pression sanguine, l'angiotensine II et l'ACE ont diminué avec le temps et l'aldostérone ne présentait pratiquement aucun changement (figure 2). Les minéraux hypotenseurs Ca, K et Mg ne présentaient pratiquement aucun changement (figure 2). L'examen de la corrélation entre la pression sanguine systolique et les substances liées à l'élévation de la pression sanguine a montré qu'il y avait une corrélation positive entre la pression sanguine systolique et l'ACE. Autrement dit, l'ACE diminuait avec la pression sanguine (figure 3). On a observé une tendance similaire en ce qui concerne la pression sanguine diastolique et l'ACE. Les changements de glycémie postprandiale sont montrés sur la figure 4. Il y avait clairement une diminution de la glycémie postprandiale après le début de l'administration, et on a observé une diminution 2867076 10 statistiquement significative après 8 semaines. L'HbAlc tendait à diminuer. Discussion On suppose que les produits mixtes contenant de l'extrait de courge et de l'extrait d'oignon suppriment l'ACE, et par suite suppriment la production de l'angiotensine II, améliorant ainsi l'effet hypotenseur. Il devrait être noté en particulier qu'un meilleur effet hypoglycémique postprandial était observé, comparé à l'extrait d'oignon seul comme précédemment rapporté par les présents inventeurs. A partir de ce fait, on peut supposer que l'extrait de courge abaisse également les glycémies. Récemment, des agents hypotenseurs (inhibiteurs de l'ACE) tels que Captoril ont été décrits comme supprimant l'apparition d'un nouveau diabète et les complications diabétiques. La relation entre l'effet inhibiteur de l'ACE et l'effet de diminution de la résistance à l'insuline a été considérée, et le mécanisme d'action de l'extrait de courge en termes d'effet hypoglycémique est supposé être dû à l'effet de réduction de la résistance à l'insuline basé sur l'effet inhibiteur de l'ACE de l'extrait de courge. Conclusion Les produits contenant de l'extrait de courge mélangé à de l'extrait d'oignon se sont révélés avoir un effet hypotenseur, de même qu'un effet hypoglycémique plus fort que celui observé avec de l'extrait d'oignon seul. On suppose que le mécanisme d'action est la réduction de la résistance à l'insuline basée sur l'effet inhibiteur de l'ACE de la courge. 2867076 11 REVENDICATIONS 1. Complément alimentaire comprenant de l'extrait de courge mélangé à de l'extrait d'oignon ayant un effet hypotenseur et un effet antidiabétique. 2. Produit pharmaceutique comprenant dé l'extrait de courge mélangé à de l'extrait d'oignon ayant un effet hypotenseur et un effet antidiabétique.