FR 2865825 A1 20050805 FR 0450200 A 20040203 Dispositif destiné à contrôler la fraîcheur d'un produit La présente invention concerne un dispositif destiné à contrôler la fraîcheur d'un produit. Le dispositif est caractérisé en ce qu'il met en oeuvre une étiquette comprenant des bactéries destinées à provoquer une opacification de l'étiquette en cas de franchissement d'un seuil déterminé de température de conservation du produit. L'étiquette est notamment destinée à être apposée sur un code barres associé au produit. Le dispositif est en outre caractérisé en ce que: - l'étiquette est paramétrée en fonction d'une date limite de consommation du produit sur lequel elle est apposée, - l'étiquette subit une opacification lors de la survenance de la date limite de consommation et/ou antérieurement à la date limite de consommation dans le cas où la température du produit a excédé un seuil déterminé pendant une durée déterminée. Ainsi, l'opacification de l'étiquette rend illisible le code barres du produit. STABILITE DE LA SOUCHE 503M10 A 20 C DANS DES MILIEUX DE CULTURE AVEC DIFFERENTS HUMECTANTS (NON HYDROLYSES) DATE: 12 août 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: La croissance de la souche 503M10 est testée à 20 C dans différents milieux de culture contenant différents humectants. Les milieux de culture utilisés: Tryptone- NaCI Caséine Glycérol Aga rose Saccharose Sorbito pH sel (%) (g/1) (%) (%) (%) (%) 1 X 0,85 50 0,5 6,2 2.. X 0,1 50 0,5 6,2 3 X 0,85 50 4 0,5 6,2 4 X 0,85 50 15 0,5 6,2 X 0,85 50 0,5 4 6,2 6 X 0,85 50 0,5 15 6,2 Page 1 sur 83 7 X 0,85 50 0,5 25 6,2 8 X 0,85 50 0,5 4 6,2 9 X 0,85 0,5 7,5 6,2 X 0,85 0,5 10 6,2 11 X 0,85 0,5 6,2 OBJECTIFS: Déterminer un milieu de stabilité pour la souche 503 M10 à 20 C. Page 2 sur 83 RÉSULTATS: Evolution de la croissance de la souche 503M10 à 20 C dans les milieux 1 et2 Croissance de la souche 503M10 sur le milieu 8 9.00 9.00 8.00 m 7.00 e 6.00 8.00 7.00 6.00 t Milieu 1 5.00 c 5.00 - --a-Milieu 2 i o -1 4.00 -- J 4.00 3.00 3.00 2.00 2.00 0 2 4 6 Temps(jours) Temps(jours) 1-.- Milieu 81 Milieu 3 --a- Milieu 4 Croissance de la souche 503M10 dans le milieu 3 et 4 à 20 C 9.00 8.00 a, 7.00 6.00 - âà 5.00 - 0 4.00 r 3.00 2.00 1 Croissance de la souche 503M10 dans les milieux 5, 6 et 7 à 20 CCroissance de la souche 503M10 sur le milieu 11 à 20 C Croissance de la souche 503M10 dans le milieu 9 et 10 à 20 C Milieu 9 -a- Milieu 10 0 2 4 6 Temps(jours) 9.00 8.00 7.00 6.00 5.00 4.00 3.00 2.00 2 4 6 Temps(jours) 9.00 9.00 8.00 8.00 7.00 m 7.00 -± Milieu 6 6.00 -a- Milieu 6 6.00 o 5.00 Milieu 7 âe" ô 5.00 J -1 4.00 4.00 v. 3.00 3.00 2.00 2.00 -,- - Milieu 1 1 0 2 4 6 0 2 4 Temps(jours) Temps(jours) NOMBRE D'ESSAIS: boites par condition ont été réalisées, soit 110 essais. CONCLUSION: La souche 503M10 croît dans les différents milieux expérimentés. La présence des différents humectants ne permet pas de réduire sa croissance. Ces milieux ne nous permettent pas d'atteindre notre objectif. Page 3 sur 83 ETALONNAGE AW TRYPTONE + GLYCEROL DATE: 12 août 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Mesure de l'Aw de différentes solutions de TS (0.85 % nacl) OBJECTIFS: Obtenir une courbe d'étalonnage d'Aw en milieu liquide RESULTATS: Milieux AW TS 0.85% NaCl Aw Traceo + glycerol AwSupérieure, Température IAWlnférieure iTempérature Awfinale, Température' 0_.990 23.7 0.996 _ ___3 6 0.987 __ 0.990 0.989 23.4 0.994 23.8 0.990 _ ____ 0.991 23.3 0.993 23.9 0.990 0.990 23.3 0.99 23.8 0.990 i 0.987 23.6 0.991 0.990 23 2 0.99 __ _ 23.8 1 0.990 0.984 23.3 0,987 0.990 0.975 _.._23.3__ 0.986 23 6 0.990 [ 0.972 23.3 0. 9 8 5;2 3. 7 0.990 0.963 23.4 0.981 23.7 _j 0.990._0.949 23.8 0 978 23 7 0.990 1 _0.934 _ _23.8 0.969 Il 23.7 0.990_ 23.7 0.966..239 Page 4 sur 83 NOMBRE D'ESSAIS: 13 CONCLUSION: Obtention de la courbe d'étalonnage de I'Aw en milieu liquide. Evolution de l'AW finale en fonction de l'Aw supérieure et inférieure 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Essais 1.020 1.000 0.980 0.960 Q 0.940 - 0.920 0.900 - 0.880 - .-AwSupérieure e-- AWlnférieure Awfinale Page 5 sur 83 DETERMINATION DE LA DLC DE LA SOUCHE 503M10 SUR LE MILIEU TRACEO DOUBLE COUCHE DATE: 14 août 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Quatre scénarios de croissance sont envisagés: Le milieu supérieur est le tryptone sel ( 0. 85% de Nacl) + 50 g/I de caséine Le milieu inférieur est le milieu TRACEO double concentration avec ou sans glycérol. Scénarios; Glycérol (%) I Température 0 113 4 C et 2/3 8 C 3 15 jours 15 et 20 1/3 4 C et 2/3 8 C 4 21 jours 25et20 1134 Cet2/38 C OBJECTIFS: Déterminer la DLC de la souche 503M10 dans le milieu TRACEO RESULTATS: / Croissance de la souche 503M10 lors du scénario à 8 C - SCENARIO 1 Milieu double couche Milieu TRACEO DC sans glycérol+ caséine 50g/I Milieu inférieur Milieu TS 0.85% Nacl + caséine 50g/l Milieu supérieur 14-août 19h00 0 1 0.0 6.5 + 1 18 août I 10h00 I 87 I 3.6 6.38 I 19-août 9h00 120 5.0 1 5.69 i I + 20-août 9h30 I 144 1 5.63 + 21-août 9h00 167.5 7.0 4.87 + 22-août 17h00 I 199.5 8.3 4.91 Date Heure I Temps pH Précipitation Lecture (heures) (jours) code-barre Page 6 sur 83 Croissance de la souche 503MI0 lors du scénario à 8 C - SCENARIO 2 Milieu double couche Milieu TRACEO DC sans glycérol+ caséine 50g/l Milieu inférieur Milieu TS 0.85% Nacl sans caséine DLC attendue: 7 jours 0% glycérol Milieu supérieur 1 Date Heure Temps Dénombrement _ II (heures) (jours) (ufc/boite) 21-août 16h15 0 0.0 1.0E+04 4.0 16.38 1 22 août 17hOO 24.75 1 1.0 2.2E+04 ^ 25-août r 9h00 88.75 3.7 2.4E+05 5.4 6 34 26-août 11hOO 114.75 4.8 5E+07 7.2 6.15 27-août 9hOO 136.75 5.7 2.8E+08 8.45 5.9 _ [ + 7-août 15h00 142.75 44-6.12 - + 28-août 9ti 00 [160.75 6.7 9.30E+07 7.97 5.6 r - 1 + 28-août 13h30 165.25 6.9 + 5.62 1 + 28-août 116h3O 168.25 7.0 5.58 _ + 28-août 18hOO 169.75 7.1 5.49 _ + 29-août 9hOO 184.75 7.7 3.1E+09 9.49 5.12 - + 01-sept 9h00 256.75 r 10.7 4.71 1 + - (ufc/boite) L g pH Précipitation code-barre Lecture + 4.3 6.27 Il _ + Milieu TRACEO DC avec glycérol(2%)+ caséine 50g/l Milieu inférieur Milieu TS 0.85% Nacl sans caséine 2 % glycérol DLC attendue: 7 jours Milieu supérieur Data Heure Temp s Dénombrement (ufc/boite) pH Précipitation Lecture (ufc/boite) Log code barre 1 (heures) 1(jours) 21-août 16h15 24.75 0.0 1.2E+04 4.1- 1 6.4 + 0 1.0 22-août 17hOO 2.5E+04 4.4 6.25 + T 1 25-août 1 9h00 88.75 3.7 3.5E+05 5.5 - + 6 29 1 26 août 1 1 hOO 114.75 4.8 8.3E+06 6.9 6 16 1 - + 27-août 9hOO 136.75 5.7 1.8E+08 8.26 6.04 + 28 août, 9h00 160.75 6.7 7.1E+08 8.85 1 5.67 - + 13h30, 165.25 6.9 1.0E+09 9.00 5.63 i - + 28août 28-août 16h30 168.25 7.0 1 5.45 _ + 28août 18h00 169.75 7.1 15.29-1 _ + 29-août 9h00 184.75 7.7 2.6E+09 9.41 5 1 + 9hOO 256.75 10.7 [47 1 + 01-sept 24-août: passage à 8 C soit 66,5 heures (2.8 jours) à 4 C Page 7 sur 83 V Croissance de la souche 503M10 lors du scénario à 8 C - SCENARIO 3 Milieu double couche Milieu TRACEO DC avec glycérol(15%)+ caséine 50gl1 Milieu inférieur Milieu TS 0.85% Nacl + caséine 50gll Milieu supérieur DLC attendue: 15 jours Milieu TRACEO DC avec glycérol(20%)+ caséine 50gl1 Milieu inférieur Milieu TS 0.85% Nacl + caséine 50gl1 Milieu supérieur DLC attendue: 15 jours Temps Dénombrement Lecture Date Heure heures pH Précipitation (ufc/boîte) code-barre () i _(jours 14-août, 19h00 0 0.0 i' 9.6E+03 6.5 _ + , 18-août 10hOO, 87 1 3 6 9.20E+03 6.471 _ + 19-août 15h00 116 4.8 6.4 _ + 1 19-août, 19h00 i 120 5.0 Passage a 8 C 20-ao9t 9h3O 1 134.5 5.6 6A7-1 + 21-a00t 9h00 158 1 6.6 1 1 6.321 _ + 22-août117h00 190 1 7.9 1 6.41 1 - + 25-août 9h00 254 10.6 1 6.37 _ i + 26-août 11 hOO, 280 11.7 1 27 août 9hOO i 302 1 12.6 6.041 _ + I 28-août 9h00 326 13.6 6.26, + Petites colonies 29-aoûtl 9h00 350 14.6 1. 6.36 _ 01-sept 9hOO 422 17.6 6.251 _ 1 + 02 set 9hO0 446 18.6 5.851 _ + 02-sept 19h00 456 19.0 1 5.61 _ + j _ ] 03-sept 19hOO 480 20.0 5.23 19-août: passage a 8 C soit 120 heures (5 jours) à 4 C. Lecture 1 code- barre 1 19 août 15h00 19-août 19h00 1 120 20-août 9h30] 134.5 21-août l 9h00 158 6.6 6.39 _ 1 + ] if l 7.9 I 6.37 _ + l + 1 Heure Temps Dénombrement 1 pH Précipitation (Heure 1 (heures) (jours) 1 14 août 19hOO 0 0.0 1 1 0E+04 6 54 18-août 1 10h001 87 3.6 1.20E+04 1 6.42 Date 116 4.8 1 6.45 5.0.1 5.6:16.46 - ^^^^ 2ô il 17h00 25-août 9h00 l 254 10.6 5.53 _ [ 26-août 11 hOO l 280 11.7 1 l 5.34 27 -août 9h00 0 12.6 28-août] 9h00 326 13.6 il Passage à 8 C + + A Page 8 sur 83 Croissance de la souche 503M10 lors du scénario à 8 C SCENARIO 4 Milieu double couche Milieu TRACEO DC avec glycérol(20%)+ caséine 50g/I Milieu inférieur Milieu TS 0.85% Nacl + caséine 50g11 Milieu supérieur DLC attendue: 21 jours - + 8 C + + + - I + Milieu TRACEO DC avec glycérol(25%)+ caséine 50g/I Milieu inférieur Milieu TS 0. 85% Nacl + caséine 50g/l Milieu supérieur DLC attendue: 21 jours Temps Dénombrement Lecture Heure -- ufc/boîte pH Précipitation 1(heures) 1(jours) ( ) code-barre 14-août 119h00 0 0.0 8.5E+03 16.51 1 - + 4 C_ 18 août 10h00; 87 1 3.6 1 8.9E+03 6 44 19 août 15h00 1 116 4.8 20-août 10h00 135 5.6 16.48 1- + I 21-août 1 9h00 1 158 6.6 6.41 1 1 + 1968h changement de T 122-août 1 + 1 7h0â 190 7.9 16.44 25-août 1 9h00 254 10.6 + 26-août 11 h00 1 280 11.7 ( 6.32 1 + 27-août; 9h00 I 302 ' 12.6 28 août h00 F 326 13.6 29-août 19h00 1 350 1- 14.6 101-sept ' 9h00 [ 422 1 17.6 02-sept '' 9h00 446 1 18.6 03-sept 19h00; 480 1 20.0 05-sept 91145 1 518.75 121.6 08-sept 9H15 1590. 25 124.6 15-sept'', 114.00 1 764 1 31.8 I 21-août: passage à 8 C soit 168 heures (7 jours) à 4 C 114-août 19h00 118 août 10h00 119-août 15h00 20-août 10h00 I 135 I 5.6 f21 août, 9h00 158 6.6 + 22-août 17h00 190 7.9 ^ 6 36_; - + [2-août 9h00 I 254 1 10.6 1 16.36! 126-août ' 11 h00 1 280 11.7 6.231 127-août; 9h00 1 302 1 12.6 16.21 1 128-août 9h00 326 11 13.6 6.28 L 29-août 9h00 1 350 1 14.6 '1 16.33 1,101-sept 9h00 422 17.6 _I_ 15.97 102-sept 9h00 I.446 1 18.6 1 6.02 102-sept 19h00 456 [ 19.0 1 15.31 I _ + Date Heure 1 Temps I (heures) 1 (jours) 1 0 1.0.0 1 9.3E+03 16.47.1 _. 87 3.6 ( ..9.6E+03_. 6.47 + .. 1 116 4.8 6.32 - 1 + I 6.48 1 _ + 11 Dénombrement (ufc/boîte) pH Précipitation Lecture code-barre' 4 C Date 16.32;1 6.3 1 16.32 r-- - [626', 1 626 ( I- + 6261 + + 6.251 + Page 9 sur 83 NOMBRE D'ESSAIS: boites ont été réalisées pour chaque scénario, soit au total 80 essais. CONCLUSION: Le milieu TRACEO précipite à 8 C en 7 jours. Le glycérol permet d'augmenter la DLC de notre système. Pour 15 % de glycérol, la DLC est comprise en 11,7 et 12,6 jours. Pour 20 % de glycérol, la DLC est comprise en 19 et 20 jours. Pour 25 % de glycérol, nous n'obtenons pas de précipitation du milieu TRACEO . Page 10 sur 83 DETERMINATION DE LA DLC DE LA SOUCHE 503M10 REPETITION DATE: 17 octobre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: La croissance de la souche 503M10 est testée sur le milieu TRACEO avec différentes conditions. Le protocole est le suivant: Scénarios DLC attendue (jours) 1 7 jours (0 et 2% glycérol) 2 15jours(15et16.5%et18% glycérol) 3 répétitions sont réalisées pour ces 2 scénarios OBJECTIF: Valider les résultats de DLC réalisés précédemment (cryo49). RESULTATS: Page 11 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche 58 lors du scénariol 7jours Milieu double couche Milieu TRACEO DC sans glycérol+ caseine 50g/l Milieu TS 0.85% Nacl Température moyenne RM14 (4 C) : 3.57 C Température moyenne RE420 (8 C) : 8.03 C TO:denombrement: 8,9.10 3 ufc/boite Date Heure Temps pH moyen Précipitation Lecture code Opacificatior (heures) (jrs) barre 30-sept 18h00 0 0,0 6,27 - + - 01-oct 17h30 23,5 1,0 - + - 02-oct 18h00 48 2,0 - + - 03-sept 9h00 63 2,6 - + 03-oct 12h30 66,5 2,8 6,24 + - 06-oct 9h00 130 5,4 6,27 -1-1- +/+/+ -1-I_ 07-oct 9h00 154 6,4 6,12 -1-I- +/+/+ -1-/- 11h00 156 6,5 6,13 -I-I- +/+I+ -/-/- 14h00 159 6,6 6,08 -I-I- +1+/+ -/-/- 17h00 161 6,7 6,10 -/-/- +/+/+ -/-/- 18h00 164 6,8 6,08 -/-/- +/+/+ -/-/- 08-oct 9h00 178 7,4 5,86 -1-1+/+/+ -I-/- 11 h30 180,5 7,5 5,83 -/-/- +/+/+ -/-/- 15h00 184 7,7 5,73 -/-1- +/+/+ -I-I- 18h00 187 7,8 5,63 -1-1- +/+/+ -/-1- 09-oct 9h00 202 8,4 5,21 +1- bord +/+/+ Début 10h30 203,5 8,5 5,17 +/- bord +/+/+ 14h15 207,25 8,6 5,13 +1- bord +/+/+ 17h00 210 8,8 5,03 +± +1+1+ 18h00 212 8,8 5,03 +I+1+ -I-/- Fin Milieu TRACEO DC avec glycérol(2%)+ caseine 50g/l Milieu TS 0.85% Nacl TO:denombrement: 8,9.10 3 ufc/boite Date Heure Temps pH moyen Précipitation Lecture code Opacificatior (heures) (jrs) barre 30-sept 18h00 0 0,0 6,28 - + - 01-oct 17h30 23,5 1,0 - + - 02-oct 18h00 48 2,0 - + - 03-sept 9h00 63 2,6 - + - 03oct 12h30 66,E 2,8 6;24 - +.. _. 06-oct 9h00 130 5,4 6,26 -/-/- +/+/+ -/-/- 07-oct 9h00 154 6,4 6,12 -/-/+/+/+ -/-/- 11 h00 156 6,5 6,13 -I-1- +/+/+ -/-/- 14h00 159 6,6 6,19 -1-I+/+I+ -1-1- 17h00 162 6,8 6,13 -I-1- +/+/+ -I-/- 18h00 163 6,8 6,12 -/-/+/+/+ -1-1- 08-oct 9h00 178 7,4 5,96 -/-/- +/+/+ -/-/- 11 h30 180,5 7,5 5,90 -I-l- +I+/+ -I-I- 15h00 184 7,7 5,86 -/-/- +/+/+ -/-/- 18h00 187 7,8 5,78 -/-/- +/+/+ -/-/- 09-oct 9h00 202 8,4 5,39 -/-/- +/+/+ -/-/- 10h30 203,5 8,5 5,39 -1-1- +/+I+ -I-/- 14h15 207,25 8,6 5,28 -I-1- +/+/+ -I-117h00 210 8,8 5,21 +/-bord +/+/+ Début 18h00 212 8,8 5,36 +/-bord +/+/+ 10-oct 9h00 226 9,4 5,00 +/-bord +/+/+ Léger 16h00 233 9,7 4,98 +/-bord +/+/+ Léger 17h00 234 9,8 4,93 +/+I+ -I-1- _ Fin Passage à 8 C te 3110103 à 12h30 iôit 66,5 h à4 C(2,8 jours) Milieu inférieur Milieu supérieur Milieu inférieur Milieu supérieur (Milieu double couche Milieu TRACEO DC sans glycérol+ caseine 50g/l Milieu TS 0.85% Nacl TO:denombrement: 9,0.103 ufc/boite Date Heure Temps pH moyen Précipitation Lecture code Opacificatio (heures) (jrs) barre 02-oct 12h00 0 0,0 6,26 - + - 03-oct 12h00 24 1,0 - + - 04-oct 12h00 48 2,0 - + - 0 - et 9h00 69. 2,9 + - 1 06-oct 9h00 93 3,9 6,31 -I-I- +/+/+ -1-1- 07-oct 9h00 117 4,9 6,31 -I-I+/+/+ -1-1- 08-oct 9h00 141 5,9 6,24 -I-I- +/+/+ -1-1- 09-oct 10h30 166,5 6,9 5,90 -/-/- +/+/+ -/-/- 17h00 173 7,2 5,75 -/-/- +/+/+ -/-/- 10-oct 9h00 189 7,9 5,43 -I-/- +/+/+ -/-/- 16h00 196 8,2 5,35 -I-I- +1+1+ -/-/11-oct 12h00 216 9,0 4,92 ±/±/± -1-1- ±1±/± 12-oct 9h00 213 8,9 4,79 +1+1+ -I-I- +/+/+ 13-oct 9h00 237 9,9 4,75 +1+1+ -1-1- +/+/+ Milieu inférieur Milieu supérieur Milieu TRACEO DC avec glycérol(2%)+ caseine 50g/1 Milieu TS 0. 85% Nacl Milieu inférieur Milieu supérieur TO:denombrement: 9.0.10 3 ufc/boite Date Heure Temps pH moyen Précipitation Lecture code Opacificatio (heures) (jrs) barre 02-oct 12h00 0 0,0 6,26 - + - 03-oct 12h00 24 1,0 - + - 04-oct 12h00 48 2,0 - + 05-oct 9h00 69 2,9 06-oct 9h00 93 3,9 6,31 -1-1- +/+/+ -/-/- 07-oct 9h00 117 4,9 6,29 -I-I- +/+/+ -/-/- 08-oct 9h00 141 5,9 6,26 -/-/- +/+/+ -N08-cet 17h00 150 6,3 5,77 -I-I- +/+/+ -/-/- 09-oct 10h30 165 6,9 10-oct 9h00 187,5 7,8 5,40 -/-/- +/+/+ -/-/- 16h00 194,5 8,1 5,36 -1-I- +/+/+ -1-1- 18h00 196,5 8,2 5,21 -/-/- +/+/+ -/-/- 11-oct 12h00 214,5 8,9 4,91 ±1+/+ -I-/- ±/+/+ 12-oct 9h00 235,5 9,8 4,70 +1+1+ -/-I- +/+/+ 13-oct 9h00 259,5 10,8 4,70 +1+1+ -/-/- +1+1+ 105110103 passage à 8 C à 9H soit 29j à 4 C Page 13 sur 83 Milieu TS 0. 85% Nacl Milieu supérieur TO:denombrement: 8,8.10 3 ufc/boite Date Heure Temps pH moyen Précipitation Lecture code Opacification (heures) (jrs) barre 07-oct 18h00 0 0,0 6,28 - + _ 08-oct 9h00 15 0,6 09-oct 9h00 39 1,6 10-oct 9h00 63 2,6 10-oct 12h30 66,5 2,8 6,35 13-oct 16h30 142,5 5,9 6,28 -/-/- +/+/+ _1-/_ 14-oct 9h00 159 6,6 6,04 -1-1- +/+/+ 15-oct 14h00 188 7,8 5,31 +1+1+ _/+1+ +1+1+ 16h00 190 7,9 5,43 +/+/+ -/-/- +/+/+ 17h00 191 8,0 5,27 +1+1+ -/-/- +1+1+ Milieu TRACEO DC avec glycérol(2%)+ caseine 50g/l Milieu TS 0.85% Nacl TO:denombrement: 9,0.10 3 ufc/boite Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification (heures) (jrs) barre 07-oct 18h00 0 0,0 6,25 - + _ 08-oct 9h00 15 0,6 09-oct 9h00 39 1,6 10-oct 9h00 63 2,6 10-oct 12h30 66,5 2,8 6;43 13-oct 16h30 142,5 5,9 6,27 -I-/- +/+/+ 14-oct 9h00 159 6,6 6,05 -I-I- +/+/+ 15-oct 14h00 188 7,8 5,38 +1+1+ +/+/+ 16h00 190 7,9 5,43 +1+1+ -1-/+ +1+1+ 17h00 191 8,0 5,30 +1+1+ -/-/- +/+/+ (Passage à 8 C le 10110/03 à 12h30 soit 66,5 h à 4 C(2,8 jours Milieu inférieur Milieu supérieur Page 14 sur 83 scénario 2 Milieu TRACEO DC 15% glycérol+ caseine 50g/I Milieu TS 0.85% Nacl Milieu inférieur Milieu supérieur Tableau de résultats de croissance de la souche 58 lors du scénario2 15jours Milieu double couche To: Denombrment 8,7.10 3 ufc/boite Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification (heures) (jrs) barre 08-oct 12h00 0 0,0 6,23 - + - 13-oct 12h00 120 5,0 6,39 16-oct 17h00 197 8,2 6,34 - + 17-oct 11 h30 215,5 9,0 5,92 - + - 18h00 223 9,3 6,03 20-oct 9h00 285 11,9 5,02 +I+1+ -/-I- +1+/+ Passage etites cola Milieu TRACEO DC avec glycérol(16.5%)+ caseine 50g/I Milieu TS 0.85% NacI Milieu inférieur Milieu supérieur To: Denombrment 8,7.10 3 ufc/boite Date Heure Temps pH moyen Précipitation Lecture code Opacification (heures) (jrs) barre 08-oct 12h00 0 0,0 6,23 - + - 13-oct 12h0â 120 5 0 6,34 + _ - 16-oct 17h00 197 8,2 6,33 - + - 17-oct 11h30 215,5 9,0 6,1 - + - 18h00 223 9,3 6,34 - + 20-oct 9h00 285 11,9 5,04 ±I+/+ +1-1- ±1+/+ *** 11h00 287 12,0 5,09 +/+/+ -/-/_ +/+/+ ***Le 20 octobre à 9h00 une seule boite sur 9 restante: Précipitation +/- Opacification +/- Lecture code barre + La lecture dà 11 h est réalisée sur cette seule boite. scénario 2 Page 15 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche 58 lors du scénario2 15jours Milieu double couche Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification (heures) (jrs) barre 17-oct 18h00 0 0,0 6,15 -I-I- +/+/+ -/-/- 23-oct 18h00 144 6,0 -/-/- +/+/+ -/-/- 24-oct 16h30 166,5 6,9 6,13 -I-I- +/+/+ -I-I- 27-oct 16h00 238 9,9 5,66 -I-I+/+/+ -I-I- 28-oct 17h00 263 11,0 5,26 Début +/+/+ -I-I- 29-oct 14h00 284 11,8 5,03 +/+/+ -/-/- +/+/+ Milieu TRACEO DC 15% glycérol+ caseine 50g/l Milieu TS 0.85% Nacl sans caséine scénario 1 Milieu inférieur Milieu supérieur Milieu TRACEO DC avec glycérol(16.5%)+ caseine 50g11 Milieu TS 0.85% Nacl sans caséine Milieu inférieur Milieu supérieur scénario 1 Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification (heures) Ors) barre 17-oct 18h00 0 0,0 6,15 -I-I- +/+/+ -I-I- 23-oct 18h00 144 6,0 -I-I+/+/+ -I-I- 24-oct 16h30 166,5 6,9 6,20 -I-l- +I+/+ -I-I- 27-oct 16h00 238 9,9 5,99 -l-I- +/+/+ -I-I- 28-oct 17h00 263 11,0 5,70 -I-I- +/+/+ -I-/29-oct 14h00 284 11,8 5,29 Début +/+/+ Début 18h00 288 12,0 5,35 +/+/+ 30-oct 9h00 303 12,6 5,06 +++ --- +++ Page 16 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche 58 lors du scénario 2 15 jours Milieu TRACEO DC avec glycérol 18% + caséine 50g/l Milieu TS 0,85% NACL sans caséine Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification Heures Jours 22-nov 18h00 0 0,00 6,33 - + - 27-oct 18f00 120 500 633 + - 29-oct 14h00 164 6,83 6,39 - + - 03-nov 17h00 287 11,96 5,17 Début + Début 04-nov 9h00 303 12,63 5,04 + - + NOMBRE D'ESSAIS: boites sont réalisées pour chaque essais soit 120 essais sont effectués. CONCLUSION: Les résultats obtenus sont cohérents par rapport à ceux obtenus précedemment. II reste à affiner nos lectures par d'autres répétitions. Page 17 sur 83 DETERMINATION DU TAUX DE CROISSANCE OPTIMAL DE LA SOUCHE 503M10 DATE: 1 septembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Le taux de croissance optimal est déterminé en gélose sur le milieu TRACEO. Le protocole est le suivant: Aw opt PH opt T( C) T( C) T( C) 0.992 6.4 4 C 8 C 30 C La souche est inoculée à 10 ufclml. OBJECTIF: Cette expérience permet de déterminer le taux de croissance optimale de la souche 503M10; Page 18 sur 83 RESULTATS: Calcul du popt de la souche 58 sur le milieu tracéo aux conditions optimales Aw=0.992 et pH=6.4 T 4 C Temps ufc/boite Log(ufc/boite) 0 1.10E+04 4.04 24.75 1.00E+04 4.00 88.75 8.70E+05 5.94 114.75 3.30E+06 6.52 121.25 5.50E+06 6.74 136.75 9.30E+07 7.97 160.75 1.00E+08 8.00 184.75 5.40E+09 9.73 0.0889(h"-"1)[ 0.0540; 0.1238] leg= 44.84]h)[ 0.86; 88.81] ( 1.870) log_1_0(X_m_a_x)= 27.59[-85448608.43;85448663.62] 1 2 3 log_1_0(X_o)= 4.02[ 3.23; 4.81] Page 19 sur 83 Calcul du pop' de la souche 58 sur le milieu tracéo aux conditions optimales Aw=0.992 et pH=6. 4 T 8 C Temps ufc/boite Log(ufc/boite) 0 1.10E+04 4.04 24.75 1.00E+04 4.00 88.75 1.50E+06 6.18 114.75 9.20E+07 7.96 120.75 1.80E+07 7.26 136.75 5.30E+08 8.72 160.75 7.70E+08 8.89 0 1 2 log_7_0(X_o)- 4.02( 3.05; 4.99] N m_e_xÉ 01198(h"-'l)[ 0.0066; 0.2329] lag- 46.91(h)[ -17.23; 11105]( 1.95()) log_1 0(X_m_a x)= 8.99[ 7.41; 10.56] R'-0.97829 3 4 tmmnm Page 20 sur 83 Calcul du popt de la souche 58 sur le milieu tracéo aux conditions optimales Aw=0.992 et pH=6.4 T 30 C Temps(heures) ufc/boite(a) Loq(ufc/boite)(a) 0 1.00E+03 3 2.5 1.00E+03 3 4.5 6.10E+03 3.79 5.5 9.10E+03 3.96 7 5.10E+04 4.71 9.30E+08 8.97 17.5 1.20E+09 9.08 21.5 9.80E+08 8.99 22 1.20E+09 9.08 3Q L 0 01 0.2 03 0.4 0.5 016 0.7 0.8 0.9 log_7 OV,o)É 3.04[ 2.82: 1271 'wmnslR 11..8_exÉ 11B760) - l)[ 19934: 1.3818) IegÉ 29005[ 2.15: 1651( 0.120) log_1 07 CONCLUSION: Les taux de croissance de la souche 503M10 sont: 0.088 h-1 à 4 C 0.1198 h-1 à 8 C 1.1876 h-1 à 30 C Page 21 sur 83 STABILITE DE LA SOUCHE 503M10 à 20 C DATE: 22 septembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: La croissance de la souche est testée dans 4 milieux différents. La composition est la suivante: Milieux Tryptone(%) Nacl (g/I) 1 0.2 8.5 2 0.5 8.5 3 0.0 8.5 4 0.1 8.5 OBJECTIF: Ces essais permettent de déterminer un milieu stable à 20 C pour la souche 503M 10. Page 22 sur 83 RESULTATS: 0.2g/l tryptone 0.5g/1 tryptone Date Heure Temps ufc/g log(ufc/g) ufc/g log(ufc/g) 09/09/03 17h00 1 7.50E+03 3.88 8.50E+03 3.93 11/09/03 9h00 41 5.70E+05 5.76 3.20E+05 5.51 15/09/0310h00 138 4.40E+05 5.64 4.40E+05 5.64 22/09/0318h00 314 1.90E+05 5.28 1.70E+05 5.23 24/09/0316h00 360 2.00E+03 3.30 2.60E+05 5.41 26/09/0310h00 402 3.20E+04 4.51 2.30E+04 4.36 Milieu 1 et 2 Page 23 sur 83 Milieu 3 et 4 sans tryptone 0,l g tryptone Date Heure Temps ufc/g log(ufc/g) ufclg log(ufc/g) 22/09/0218h00 0 1.60E+03 3.20 2.40E+03 3.38 24/09/0316h00 46 3.20E+04 4.51 6.90E+03 3.84 26/09/0310h00 88 5.20E+04 4.72 1.70E+04 4.23 30/09/0310H00 184 4.70E+04 4.67 2.90E+04 4.46 03/10/039h30 279.5 1.00E+05 5 3.40E+04 4.53 10/10/0317h00 375 7.60E+04 4.88 4.20E+04 4.62 NOMBRE D'ESSAIS: 4 essais ont été nécessaires pour l'obtention de ces résultats. CONCLUSION: Le milieu TS avec 0.1 g/l de tryptone semble être le milieu le plus approprié. En effet il est le plus table à 20 C. Page 24 sur 83 DETERMINATION DU TAUX DE CROISSANCE DE LA SOUCHE 503M10 EN PRESENCE DE DIFFERENTS SUCRES: glucose, lactose, galactose et saccharose. DATE: 17 septembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Des taux de croissance de la souche 503M10 vont être déterminés au Bioscreen en fonction des différents sucres présents dans le milieu TRACEO. Les concentrations testées sont 10 et 20g/I. OBJECTIF: Augmenter ou ralentir la croissance de la souche 503M10 RESULTATS: Les taux de croissance sont consignés dans le tableau cidessous: 10g/I 20g1l Dextrose 0,61 0,517 0,597 0,493 Lactose 0,572 0,607 0,607 0,546 Galactose 0,56 0,522 0,572 0,588 Fructose 0,638 0,763 0,661 0,485 Saccharose 0,605 Taux de croissance en fonction des concentrations de sucres 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 1 0,4 0.3 0,2 0.1 0 D10g/1 ^ 10g/l ^ 20gn ^ 20g/1 oya ya Q4 aF sucres Page 25 sur 83 NOMBRE D'ESSAIS: 18 essais sont effectués. CONCLUSION: Le taux de croissance de la souche 503M10 en présence de différents sucres varie peu. Le taux de croissance est peu sensible à la concentration en sucre du milieu. Page 26 sur 83 ETUDE DE L'ACTION INHIBITRICE DE 2 TYPES DE COLLES FOURNIS PAR LA SOCIETE CRYOLOG DATE: 18 septembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Les 2 colles fournies par la société CRYOLOG sont: Resinated permanent PSA Non résinated permanent PSA La croissance de la souche est testée à 15 C dans le milieu TRACEO contenant 10% et 50% des 2 colles fournis. Cette croissance est comparée à un témoin contenant 10% et 50% d'eau distillée. OBJECTIF: Ces colles peuvent être utilisées dans le processus industriel. Il est important de tester leur inhibition sur la souche 503M10. Page 27 sur 83 RESULTATS: T10% Log T50% 0110% C150% 0210% C250% Date heure Temps(heures) ufc/g ufc/g ufc/g ufc/g ufc/g ufc/g 16/10/2003 10h00 0 1,10E+04 4,04 7,90E+03 3,90 1,20E+04 4,08 1,00E+04 4, 00 9,60E+03 3,98 1,10E+04 4,04 12h15 2,25 2,10E+04 4,32 1,80E+04 4,26 1,50E+04 4,18 1,20E+04 4,08 1,70E+ 04 4,23 1,00E+04 4,00 13h45 3,75 3,30E+04 4,52 2,70E+04 4,43 2,20E+04 4,34 1,80E+04 4,26 2,30E+ 04 4,36 1,20E+04 4,08 15h45 5,75 6,60E+04 4,82 4,80E+04 4,68 1,90E+04 4,28 2,00E+04 4,30 3,60E+ 04 4,56 1,30E+04 4,11 17h30 7,5 1,10E+05 5,04 1,20E+05 5,08 4,70E+04 4,67 3,50E+04 4,54 5,00E+ 04 4,70 2,00E+04 4,30 17/10/2003 9h00 23 1,30E+07 7,11 1,30E+07 7,11 1,50E+06 6,18 9,60E+05 5, 98 7,70E+06 6,89 4,40E+05 5,64 12h00 26 3,60E+07 7,56 2,20E+07 7,34 3,00E+06 6,48 1,60E+06 6,20 7,00E+ 06 6,85 5,00E+05 5,70 14h00 28 5,10E+07 7,71 3,70E+07 7,57 4,70E+06 6,67 2,90E+06 6,46 2,00E+ 07 7,30 1,00E+06 6,00 Ni CO 0) CO Ni Page 28 sur 83 Témoin 10% Témoin 50% l.m 103.1_041251. 404 3%: .111 ti n 030116n'-}1 02560 071771 105.000 63.t_0x_.r.y.F 203140159485125331 5073719 1 pmax=0,3071 [0,2960 0,3183] Colle 1 10% b3.1_00{2o1. 334 312: 2481 0.45 r 022211 "-11 61215: 021351 b9rtW b4.1_0)G3_5345 X9W191A 61211.12000003a0:19180%62121111uwA(O 34 pmax=0,2227 [0,1719 0,2735] Colle 2 10% 104.1_0752* 397 361: 4225 0413311C11 02355: 031,71 43.5 _00!_, e.M 2234e 6613310153>77]600]0]p 9323 t33t01532336COXOe W1 pmax=0,2758 [0,2359 0,3157] Cl: Colle Résinated permanent PSA C2: Colle Non Résinated permanent PSA 341_1352* 394 319: 1131 0]qn".-11 02163. 070n 0030. b3.1_04C0.V35 3ne.23112578)E0731512771 pmax=0,3032[0,2760 0,3305] Colle 1 50% 64.1_045231. 194 374: 434 0.,.0_.É 03024,- 11 018,: 0211031 64.1_0X77 e a). S0[4.22907345505131420OOMC0100:2D0734551W21420p0000m0.001 pmax=0,2070 [0,1877 0,2263] 1.313.0 414.4_[35257 3331 450: 3.081 Y_^_9 4_ 0.17290,'t37 21351: 021011 0. W 1>Q1 001_, e.). 203.71.21111 98622111199,5.54] pmax=0,1728 [0,1354 0,2101] Page 29 sur 83 NOMBRE D'ESSAIS: 6 essais ont été nécessaires pour l'obtention de ces résultats. CONCLUSION: Le taux de croissance est plus faible dans les cas ou le milieu contient la colle à 10 et 50%. Cependant la différence n'est pas significative avec les témoins. Page 30 sur 83 DETERMINATION DU PH CARDINAL DE LA SOUCHE 58. DONNEES SUPPLEMENTAIRES DATE: 18 septembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Des points supplémentaires de pH sont expérimentés pour augmenter la précision du pH cardinale de la souche 503M10. OBJECTIF: Augmenter la précision des valeurs cardinales en pH de la souche 503M10. RESULTATS: Ces résultats reprennent les résultats obtenus dans le dossier CRYO50 et ces dernières. pH Nmax 5.72 0.685 6.6 0.764 7.3 0.821 7.85 0.744 5.56 0.297 6.4 0.635 6. 85 0.727 7.75 0.71 mu opt=0.78937 [0.62058 0.95815] pHmin=4.8572 [3.9902 5.7242] pHopt=7.1603 [6.3282 7.9923] R2=0.6672 Page 31 sur 83 NOMBRE D'ESSAIS: 8 essais ont été nécessaires à cette expérimentation. CONCLUSION: Le pH de la souche est déterminé à nouveau. Le pH minimum obtenu est 4.95 [3.99-5.72] et le pH optimal est de 7.1 [6.32-7.99]. Page 32 sur 83 TRAITEMENT THERMIQUE DE LA SOUCHE 503M10 DATE: 30 septembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: La croissance de la souche 503M10 est testée à 30 C après traitement thermique à 60 C pendant 1, 3 et 5 minutes. OBJECTIF: Pour les essais industriels, il est important de déterminer la température maximale que peut supporter la souche. Page 33 sur 83 RESULTATS: Dénombrement avant traitement thermique Echantillon Témoin non traité Traitement 1 minute Traitement 3 minutes Traitement 5 minutes ufc/g log(ufc/g) ufc/g log(ufc/g) ufc/g log(ufc/g) ufc/g log(ufc/g) A 1,70E+04 4,23 1,30E+04 4,11 2,00E+ 01 1,30 B C Page 34 sur 83 CROISSANCE DE LA SOUCHE 503M10 DANS LE MILIEU CTSI ( CRESOL RED THALLIUM ACETATE SUCROSE INULIN AGAR) DATE: 16 octobre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: La croissance de la souche 503M10 dans le milieu TRACEO est comparée à celle dans le milieu CTSI pH=9.1 et pH=6.2. La croissance est déterminée par dénombrements de la souche sur le milieu TRACEO Agar. OBJECTIFS: Cette expérience permet de déterminer la croissance de la souche 503M10 sur le milieu CTSI, milieu sélectif des Carnobacterium spp. * RESULTATS: Date Heure Temps(heures) TRACEO +glu CTSI 9.1 CTSI 6.2 ufc/ml log(ufc/mI) ufc/mI log(ufc/ml) ufc/mI log(ufc/ml) 16-oct 12h15 1.25 8.80E+03 3.94 1.00E+04 4.00 7.90E+03 3.90 13h45 2.75 3.00E+04 4.48 1.50E+04 4.18 1.00E+04 4.00 15h45 4.75 1.80E+05 5.26 2.40E+04 4.38 1.00E+04 4.00 17h30 6.5 2.30E+05 5.36 1.20E+04 4.08 4.90E+04 4.69 17-oct 9h00 22 2.50E+08 8.40 8.70E+06 6.94 9.00E+06 6.95 NOMBRE D'ESSAIS: 3 essais ont été réalisés pour cette expérience CONCLUSION: Le milieu TRACEO permet une meilleure croissance de la souche 503M10. De plus le milieu CTSI de part sa composition est trouble, alors que nous recherchons un milieu transparent. Page 35 sur 83 CROISSANCE DE LA SOUCHE 503M10 DANS LE MILIEU TRACEO CONTENANT DES SUCRES DIFFERENTS: MALTOSE, MANNITOL, TREHALOSE. DATE: 21 octobre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Le taux de croissance de la souche 503M10 dans le milieu TRACEO + glucose 2% est comparé à celui du milieu TRACEO + maltose, mannitol et tréhalose de même concentration à 25 C. Le pH final de croissance est déterminé. OBJECTIFS: L'objectif est de trouver des sucres permettant une acidification ralentie de notre système. RESULTATS: Date heure temps Glucose Maltose Trehalose ufc/ml Log(ufc/ml) ufc/ml Log(ufc/ml) ufc/ml Log(ufcml) 21-oct 9h45 0 1.50E+04 4.18 1.70E+04 4.23 2.50E+04 4.40 11 h00 1.25 1.40E+04 4.15 1.90E+04 4.28 1.20E+04 4.08 13h30 2.75 4.50E+04 4.65 1.00E+05 5.00 8.00E+04 4.90 14h45 4 1.30E+05 5.11 4.40E+04 4.64 1.20E+05 5.08 16h00 6.25 2.20E+05 5.34 2.70E+05 5.43 1.80E+05 5.26 17h30 7.75 5.90E+05 5.77 5.50E+05 5.74 4.60E+05 5.66 22-oct 8h45 23 2.60E+08 8.41 2.00E+08 8.30 3.30E+08 8.52 pH final 4.23 4. 41 4.27 Date heure temps Mannitol ufc/ml Log(ufc/ml) 21-oct 10h00 0 1.60E+04 4.20 13h30 2.5 3.90E+04 4.59 14h45 3.75 1.40E+05 5.15 16h00 6 2.00E+05 5.30 17h30 7.5 4.60E+05 5.66 22-oct 8h45 22.75 2.40E+08 8.38 pH final 4.4 Page 36 sur 83 I Taux de croissance à 25 C Sucres Taux de croissance (h-1) Glucose 0.4312 Maltose 0.412 Mannitol 0.419 tréhalose 0.429 NOMBRE D'ESSAIS: 4 essais ont été réalisés pour cette expérience. CONCLUSION: Le taux de croissance varie peu en fonction du sucre utilisé. Le pH final varie également peu. Page 37 sur 83 CROISSANCE DE LA SOUCHE 503M10 SUR LE MILIEU TRACEO POUR UNE DLC DE 7 JOURS. MODIFICATION DU PH ET DE L'INOCULUM. DATE: 22 octobre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Milieu TRACEO: pH Inoculum de départ (ufc pour 5ml de la couche supérieure) 6.0 104 5.8 105 OBJECTIFS: Le but est de déterminer la DLC pour un pH plus faible et un inoculum plus fort. Page 38 sur 83 RESULTATS: Tableau de résultats de croissance de la souche 58 lors du scénario 7jours I Milieu double couche Milieu TRACEO DC 0% glycérol+ caseine 50g/I Milieu inférieur Milieu TS 0.85% Nacl Milieu supérieur pH= 5,8 inoculum=10e4 t Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification (heures) (jrs) barre 22-oct 18h00 0 0,0 5,9 - + - 25-oct 11 h00 65 2,7 - + - 27-oct 16h00 118 4,9 5,99 - + - 28-oct 17h00 143 6,0 5,98 - + - 29-oct 14h00 164 6,8 6 - + - 29-oct 18h00 168 7,0 5,93 - + - 30-oct 9h00 183 7,6 5,84 - + - 30-oct 18h00 192 8,0 5,73 - + 31-oct 9h00 207 8,6 5,54 - + - 31-oct 16h00 214 8,9 5,5 - + - 01-nov 14h00 236 9,8 + + - 03-nov 8h45 278,25 11,6 + - - l 1 1 Milieu TRACEO DC 0% glycérol+ caseine 50g/I L Milieu inférieur Milieu TS 0.85% Nacl Milieu supérieur pH= 5,8 inoculum=10e5 Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification (heures) (jrs) barre 22-oct 18h00 0 0,0 5,9 - + 25-oct 11 h00 65 2,7 - + - 27-oct 16h00 118 4,9 5,98 - + - 28-oct 17h00 143 6,0 5,99 - + - 29-oct 14h00 164 6,8 5,82 - + - 29-oct 18h00 168 7,0 5,7 - + - 30-oct 9h00 183 7,6 5,48 - + - 30-oct 18h00 192 8,0 5,25 - + 31-oct 9h00 207 8,6 5,2 Début + Début 31-oct 16h00 214 8,9 5,15 + 01-nov 14h00 236 9,8 + 03-nov 8h45 278,25 11,6 +++ - +++ Page 39 sur 83 Milieu double couche t 1 Milieu TRACEO DC 0% glycérol+ caseine 50g11 Milieu inférieur Milieu TS 0. 85% Nacl { (Milieu supérieur pH= 6,0 I inoculum=10e4 Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification (heures) (jrs) barre 22-oct 18h00 0 0,0 6 - + - 25-oct 11 h00 65 2,7 - + 27-oct 16h00 118 4,9 6,07 - + 28-oct 17h00 143 6,0 6,09 - + - 29-oct 14h00 164 6,8 5,88 - + - 29-oct 18h00 168 7,0 5,83 - + - 30-oct 9h00 183 7,6 5,56 - + - 30-oct 18h00 192 8,0 5,34 Début + Début 31-oct 9h00 207 8,6 5,19 Début + Début 31-oct 16h00 214 8,9 5,12 + - + 01-nov 14h00 236 9,8 + - + Milieu double couche I J Milieu TRACEO DC 0% glycérol+ caseine 50g/l Milieu inférieur Milieu TS 0.85% Nacl 1 Milieu supérieur pH= 6,0 inoculum=10e5 L Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification (heures) (jrs) barre 22-oct 18h00 0 0,0 6 - + - 25-oct 11 h00 65 2,7 - + - 27-oct 16h00 118 4,9 6,09 - + - 28-oct 17h00 143 6,0 5,89 - + - 29-oct 14h00 164 6,8 5,48 - + - 29-oct 18h00 168 7,0 5,4 - + 30-oct 9h00 183 7,6 5,14 - + - 30-oct 18h00 192 8,0 5,04 Début + (Limi) Début 31-oct 9h00 207 8,6 4,985 Début +(Lirai) Début 31-oct 16h00 214 8,9 5,01 + - + 01-déc 14h00 236 9,8 + - + I I 4 Page 40 sur 83 NOMBRE D'ESSAIS: 4 essais ont été réalisés pour cet étude. CONCLUSION: Pour un inoculum de 104 ufc/5m1 (de la couche supérieure), le temps de précipitation est plus long lorsque le pH de départ et 5.8 ([9.811.6]) que lorsque le pH de départ est 6.2 ( [7.8-9]). L'augmentation de I'inoculum de 104 à 105 ufcl5 ml (de la couche supérieure) ne permet pas d'augmenter considérablement le temps de précipitation. D'autres inoculum plus élevés devront être testés. Page 41 sur 83 UTILISATION DU CHLORURE DE CALCIUM POUR AUGMENTER LA VITESSE DE PRECIPITATION DE LA CASEINE DATE: 5 novembre 2004 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Des essais de précipitation en milieu liquide sont réalisés dans le milieu TRACEO en présence de chlorure de calcium à 4 concentrations différentes (0.01,0. 02M, 0.04M et 0.05M) comparativement au milieu TRACEO sans chlorure de calcium. De l'acide lactique est ajouté aux différentes solutions pour obtenir la précipitation. OBJECTIFS: L'objectif est de déterminer le rôle du chlorure de calcium dans la réaction de précipitation. RESULTATS: La réaction de précipitation pour les concentrations 0.04M et 0.05 M se produit instantanément lors du contact avec le milieu. Pour les concentrations 0.01 M et 0.02M les résultats sont consignés dans le tableau ci-dessous. Page 42 sur 83 Volume [acide Tracéo précipitation pH Tracéo précipitation pH Tracéo précipitation acide lactique] (g!1) pH=6. 2 CaCl2 0,01 M CaCl2 0,02M lactique (pl) 0 0 6,2 - 6,19 - 6,21 - 0,06 6,17 - 6,17 - 6,18 - 0,12 6,15 - 6,14 - 6,16 - 0,18 6,13 - 6,11 - 6,14 - 0,24 6,11 - 6,09 - 6,1 0,3 6,09 - 6,05 - 6,08 - 0,36 6,07 - 6,03 - 6,05 - 0,42 6,04 - 6 - 6,03 0,48 6,02 - 5,97 - 6 - 0,54 6 - 5,94 - 5,95 - 0,6 5,99 - 5,91 - 5,92 0,66 5,97 Petits flocons 5,88 - 5,89 - 0,72 5,94 - 5,86 Flocons 5,86 0,78 5,92 - 5,83 - 5,82 - 0,84 5,86 Gros flocons 5,8 - 5,8 - 0,9 5,81 5,78 - 5,75 - 0,96 5,78 - 5,75 - 5,72 - 1,02 5,76 - 5,72 - 5,68 - 1,08 5,73 - 5,69 - 5,64 - 1,14 5,66 - 5,66 - 5,6 - 1,2 5,64 - 5,63 - 5,56 - 210 1,26 5,62 - 5,6 - 5,53 - 220 1,32 5,57 - 5,57 - 5,47 - 230 1,38 5,56 5,54 - 5,43 - 240 1,44 5,54 - 5,51 - 5,39 - 250 1,5 5,51 - 5,49 - 5,34 260 1,56 5,49 - 5,47 - 5,32 - 270 1,62 5,46 - 5,44 - 5,3 - 280 1,68 5,43 5,41 Blanc 5,27 Petits flocons 290 1,74 5,4 - 5,37 5,23 300 1,8 5,38 5,35 5,21 Blanc 310 1,86 5,36 - 5,32 + gros flocons 5,17 320 1,92 5,34 5,3 5,15 Gros flocons 330 1,98 5,33 - 5,27 5,09 +++ 340 2,04 5,31 - 5,25 350 2,1 5,25 +++ 5,23 5,11 +++ Page 43 sur 83 NOMBRE D'ESSAIS: Pour cette expérimentation 5 essais ont été nécessaires. CONCLUSION: Pour une concentration de 0.02M en chlorure de Calcium, ces résultats nous montrent un léger écart d'acidification du milieu selon la présence ou non du chlorure de calcium D'autres essais devront être réalisés. pH du milieu tracéo avec ou sans chlorure de calcium o 2 Concentration en acide lactique gll 0 M chlorure de Calcium --- 0.020M chlorure de calcium Page 44 sur 83 TRACABILITE DU MILIEU EN INDUSTRIE-UTILISATION DE LA METHODE DEFT (FILTRATION SUR MEMBRANE) DATE: 5 novembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: La méthode DEFT est testée sur la souche 503M10 Trois échantillons de solution bactérienne sont filtrés par cette méthode comparativement à la méthode de dénombrement sur gélose TRACEO. Le protocole est le suivant:* Protocole méthode DEFT Filtration sur membrane 1. MILIEUX o Tampon pour méthyle orange ml d'acide citrique 0,1 M (1,05 g / 50 ml H2O) ml NaOH 0,1 M (0,6 g 1150 ml H2O) jusqu'à pH = 6,6 Stériliser le tampon par filtration o Solution stock méthyle orange 0,25 g / 10 ml de tampon à conserver au froid et à l'obscurité Solution fraîche Acridine (pour une semaine maxi) 0,025 % (0,5 ml solution stock dans 50 ml tampon) o Triton 0,1 % (filtré) o Isopropanol (filtré) Page 45 sur 83 2. PROTOCOLES - Installation de l'appareil de filtration - Stériliser avec de l'alcool, flamber Rincer le bol avec de l'eau stérile Déposer la membrane Nucléopore 0,6 pm 0,25 mm 0 face brillante vers le haut Filtrer 5 ml de Triton 0,1 % Filtrer l'échantillon (dilutions à voir) - Filtrer avec Triton 0,1 %, ôter le vide - Mettre 1 - 2 ml ?? et laisser 2 min - Filtrer Ajouter du Titron 0,1 % sans arrêter la pompe 1 ml isopropanol Laisser la pompe en marche et ôter la tour Déposer la membrane sur du sopalin pour la sécher - Montage membrane: huile membrane - huile - lamelle huile (bien écraser la lamelle) Observer au microscope à'épifluorescence 3. INTERPRETATION: MICROSCOPIE PAR EPIFLUORESCENCE Nombre de champs comptés sur membrane-filtre et nombre de bactéries par champs Nombre de Nombre moyen de champs colonies par comptés champs 0 - 10 11 - 25 6 26- 50 3 51 -75 2 76 - 100 Répétition* > 100 * Echantillon dilué et procédure répétée R = nombre moyen de colonie par champ x Fm (facteur microscopique) x dilution Fm (pour 1 ml filtré)= 15 625,1 Page 46 sur 83 OBJECTIFS: Cette technique de dénombrement par filtration et lecture par microscopie épifluorescence doit permettre le dénombrement de la solution bactérienne utilisée pour les essais. RESULTATS: Echantillons Méthode de Méthode DEFT dénombrement Log(UFC/ML) Log(UFC/ML) 1 8.26 8.40 2 8.20 8.36 3 8.34 8.30 NOMBRE D'ESSAIS: 3 essais ont été réalisés pour cette expérimentation. CONCLUSION: Les résultats montrent que la méthode DEFT est adaptée pour la traçabilité du TRACEO en milieu indistriel. Cependant, les réactifs toxiques utilisés dans cette méthode demandent de nombreuses précautions d'utilisation. Page 47 sur 83 PRECIPITATION DU SYSTEME TRACEO POUR UNE DLC DE 7 JOURS AVEC UN SUCRE DIFFERENT LE MANNITOL DATE: 16 novembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Le temps de précipitation de notre système TRACEO est déterminé à pH=6.2 avec un milieu contenant du glucose à 2% et I autre du mannitol à la même concentration. OBJECTIFS: L'objectif est d'obtenir un temps de précipitation plus court de notre milieu en y ajoutant un sucre différent entraînant une acidification plus lente. Page 48 sur 83 RESULTATS: Glucose Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification (heures) (jrs) barre 17-nov 18h00 0 0,0 6,15 + - 20-nov 9h00 63 2,6 6,15 - + 21-nov 12h00 90 3,8 6,26 - + 24-nov 9h00 159 6,6 5,57 - + 11h45 161,75 6,7 5,45 - + 13h30 163,5 6,8 5,34 - + 17h15 167,25 7,0 5,16 - + 25-nov 9h30 183,5 7,6 4,99 - + 11 h15 185,25 7,7 4,95 Début + Début 13h45 187,75 7,8 4,91 + +/- + 15h00 189 7,9 4,89 +++ - +++ _17h00 191 8,0 4,92 +++ - +++ I Mannitol I Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification (heures) (jrs) barre 17-nov 18h00 0 0,0 6,18 - + - 20-nov 9h00 63 2,6 6,20 - + - 21-nov 12h00 90 3,8 6,26 - + - 24-nov 9h00 159 6,6 5,89 - + - 11 h45 161,75 6,7 5,82 - + - 13h30 163,5 6,8 5,72 - + - 17h15 167,25 7,0 5,68 - + - 25-nov 9h30 183,5 7,6 5,49 - + - 11h15 185,25 7,7 5,48 - + - 13h45 187,75 7,8 5,39 Début + Début 15h00 189 7,9 5,38 - + - 17h00 191, 8,0 5,33 + 17h45 191,75 8,0 5,37 + 26-nov 10h30 209 8,7 5,27 + 17h30 216 9,0 5,24 + 27-nov 9h00 231,5 9,6 5,12 + 15h00 237,5 9,9 5,13 + 17h00 239,5 10,0 5,1 + 28-nov 9h00 255,5 10,6 4,99 + 01-déc 9h00 327,5 13,6 4,9 +++ - +++ Page 49 sur 83 NOMBRE D'ESSAIS: 2 essais ont été réalisés. CONCLUSION: L'acidification dans le temps de notre système est plus lente avec le mannitol qu'avec le glucose. Le temps de précipitation est également augmenté dans le cas de l'utilisation du mannitol. En effet, le temps de précipitation avec le milieu glucosé est de 7.8-7.9 jours alors qu'il est de 13.6 jours avec le milieu mannitol. Comparaison du pH en fonction du sucre utilisé lors d'une DLC 7 jours glucose Mannitol 5.0 10.0 15.0 Temps(jours) Page 50 sur 83 PRECIPITATION DE LA SOUCHE 503M10 DANS UN MILIEU DE PH PLUS ELEVE: DATE: 16 novembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: La précipitation de notre système est déterminé en présence d'un milieu de pH plus élevé : 7.75 comparativement au milieu TRACEO de pH 6.2. OBJECTIFS: L'objectif de cette étude est d'augmenter ou diminuer le temps de précipitation de notre système. Page 51 sur 83 RESULTATS: pH=6,2 Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification (heures) (jrs) barre 17-nov 18h00 0 0,0 6,15 - + 20-nov 9h00 63 2,6 6,15 - + 21-nov 12h00 90 3,8 6,26 - + 24-nov 9h00 159 6,6 5,57 - + 11h45 161,75 6,7 5,45 - + 13h30 163,5 6,8 5,34 - + 17h15 167,25 7,0 5,16 - + 25-nov 9h30 183,5 7,6 4,99 - + 11 h15 185,25 7,7 4,95 Début + Début 13h45 187,75 7,8 4,91 + +/- + 15h00 189 7,9 4,89 +++ - +++ 17h00 191 8,0 4,92 +++ - +++ _.__ pH=7,75 Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification (heures) (jrs) barre 17-nov 18h00 0 0,0 7,75 - + - 20-nov 9h00 63 2,6 7,76 - + - 21-nov 12h00 90 3,8 7,78 + - 24-nov 9h00 159 6,6 5,14 - + - 11 h45 161,75 6,7 5,12 Début + Début 13h30 163,5 6,8 5,12 Blanc + 17h15 167,25 7,0 5,07 Blanc + 18h30 168,5 7,0 5,04 Blanc + 25-nov 9h30 183,5 7,6 5,00 - + 11 h15 185,25 7,7 4,96 - + 13h45 187,75 7,8 5,00 - +/- + 15h00 189 7,9 4,98 ++ - ++ 17h00 191 8,0 4,96 ++ - ++ Page 52 sur 83 NOMBRE D'ESSAIS: 2 essais ont été réalisés. CONCLUSION: Pour le milieu à pH 7.75, l'acidification est ralentie dans la première partie de la courbe. Le temps final de précipitation est identique à celui du pH 6.2. Page 53 sur 83 UTILISATION DU TAMPON IMIDAZOLE DATE: 16 novembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Le tampon imidazole O. 1 M est utilisé à la place de l'eau distillée dans le milieu TRACEO. Des essais sont réalisés dans le milieu tamponné imidazole dans lequel sont rajoutées différentes concentrations en chlorure de calcium. La réaction de précipitation est obtenue en milieu liquide en ajoutant différentes quantités d'acide lactique. OBJECTIFS: L'objectif est de déterminer l'effet du tampon imidazole couplé avec le chlorure de calcium sur la précipitation du milieu TRACEO. Page 54 sur 83 RESULTATS: V acide [acide pH6,2 précipitation pH6, 2 précipitation lactique (pl) lactique] (g/l) Tracéo + Tracéo + Eau + CacI2 Imidazole + 10mM CacI2 10mM 0 0 6,21 - 6,19 - 0,12 6,14 - 6,13 - 0,24 6,1 - 6,11 0,36 6,05 Flocons 6,09 Flocons 0,48 6,01 5,99 0,6 5,98 5,95 0,72 5,91 5,88 0,84 5,86 5,85 Gros flocons 0,96 5,78 Gros flocons 5,80 1,08 5,73 5,78 1,2 5,69 5,69 1,32 5,66 5,66 1,44 5,57 5,58 1,56 5,54 5,57 1,68 5,49 5,54 1,8 5,39 +++ 5,49 1,92 5,45 2,04 5,41 +++ 2,16 5,36 NOMBRE D'ESSAIS: 2 essais ont été réalisés. CONCLUSION: Ces résultats nous montrent que le tampon imidazole n'a pas d'effet sur le pH de précipitation du TRACEO. Page 55 sur 83 TAMPON PHOSPHATE DATE: 16 novembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: La DLC du TRACEO est testée pour différents temps avec ou sans tampon phosphate. OBJECTIFS: L'objectif de cette étude est de déterminer l'effet du phosphate sur le temps de précipitation de notre système. Le phosphate a une action tampon qui peut être nécessaire pour retarder la précipitation de notre milieu. RESULTATS: Tableau 7 - Précipitation du milieu TRACEO en fonction de la présence ou de l'absence du tampon phosphate 0,1 M Sucre % glycérol DLC Milieu Jours précipitation Moyenne jours Tamponné Glucose 0 7 8,6-9,63 9,12 Glucose 0 7 X 10,7 10,70 Glucose 0 9 8,6-9,6 9, 10 Glucose 0 9 X 9,6-9,7 9,65 Glucose 15 12 9,6-10,6 10,10 Glucose 15 12 X 12,02 12,02 Glucose 15 15 10,7 10,70 Glucose 15 15 X 13,6- 13,7 13,65 NOMBRE D'ESSAIS: 8 essais ont été réalisés. CONCLUSION: Le tampon phosphate 0.1M augmente le temps de précipitation. En effet, pour une DLC attendue de 7 jours, nous obtenons un temps moyen de précipitation de 9.12 jours avec le milieu tamponné alors qu'il est de 10.7 jours avec le milieu tamponné. II en est de même pour les DLC attendue de 9 jours, 12 jours et 15 jours. Page 56 sur 83 LE CITRATE DATE: 20 NOVEMBRE 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Des essais sont réalisés en milieu liquide. Le pH de précipitation est mis en évidence par ajout d'acide lactique dans différents milieux contenant 0, 20 et 40 mM de trinatriumcitrate. OBJECTIFS: L'objectif est de déterminer l'effet du citrate sur notre milieu TRACEO et sa précipitation. Page 57 sur 83 RESULTATS: Tableau 8 - pH de précipitation de différents milieux contenant du trinatriumcitrate V acide [acide pH Tracéo Précipitation [acide pHCitrate précipitation V acide [acide pH Citrate précipitation lactique (pl) lactique] (g/I) Citrate OmM lactique] (g/1) 20mM lactique (pl) lactique] (g/I) 40mM 0 0 6,2 - 0 6,25 - 0 0 6,25 - 0,06 6,17 - 0,06 6,24 Gros flocons 10 0,06 6,23 - 0,12 6,15 - 0,12 6,23 +gros 20 0,12 6,22 - 0,18 6,13 - 0,18 6,21 - 30 0,18 6,21 Flocons 0,24 6,11 0,24 6,19 - 40 0,24 6,2 - 0,3 6,09 - 0,3 6,15 - 50 0,3 6,19 - 0,36 6,07 0,36 6,14 - 60 0,36 6,15 Gros flocons 0,42 6,04 - 0,42 6,12 - 70 0,42 6,14 - 0,48 6,02 - 0,48 6,1 - 80 0,48 6,13 - 0,54 6 - 0,54 5;92 - 90 0,54 6,12 - 0,6 5,99 - 0,6 5,9 - 100 0,6 6,11 - 0,66 5,97 Petits flocons 0,66 5,9 110 0,66 6,1 - 0,72 5,94 0,72 5,89 - 120 0,72 6,09 - 0,78 5,92 0,78 5,89 130 0,78 6,09 - 0,84 5,86 Gros flocons 0,84 5,89 ? 140 0,84 6,08 - 0,9 5,81 0,9 5,94 - 150 0,9 6,07 - 0,96 5,78 0,96 5,93 - 160 0,96 6,06 - 1,02 5,76 1,02 5,93 - 170 1,02 6,05 - 1,08 5,73 1,08 5,93 - 180 1,08 6,03 1,14 5,66 1,14 5,92 - 190 1,14 6,02 - 1,2 5,64 1,2 5,91 - 200 1,2 6,01 210 1,26 5,62 1,26 5,9 - 210 1,26 5,96 Gros flocons 220 1,32 5,57 1,32 5,89 - 310 1,86 5,84 - 230 1,38 5,56 1,38 5,88 - 410 2,46 5,77 - 240 1,44 5,54 1,44 5,86 - 510 3,06 5,72 - 250 1,5 5,51 1,5 5,82 - 610 3,66 5,64 260 1,56 5,49 1,56 5,81 - 710 4,26 5,52 - 270 1,62 5,46 1,62 5,79 - 810 4,86 5,47 - 280 1,68 5,43 1,68 5,78 - 910 5,46 5,38 +++ 290 1,74 5,4 1,74 5,77 - 300 1,8 5,38 1,8 5,76 - 310 1,86 5,36 1,86 5,75 - 320 1,92 5,34 1,92 5,74 - 330 1,98 5,33 1,98 5,7 - 340 2,04 5,31 2,04 5,69 - 440 2,1 5,25 +++ 2,64 5,61 +++ 540 3,24 5,5 640 _ 3,84 5,41 Page 58 sur 83 NOMBRE D'ESSAIS: 3 essais ont été réalisés. CONCLUSION: Ces résultats nous indique que le trinatrium citrate a un effet tampon dans le milieu TRACEO. En effet, pour une concentration de 0.6g/1 à 1.32g/I d'acide lactique, le pH du milieu contenant 20mM de citrate varie très peu. II en est de même pour la concentration 40mM. Une concentration en acide lactique plus importante est nécessaire dans le milieu TRACEO + citrate pour obtenir une précipitation. La présence de trinatrium citrate dans le milieu TRACEO peut permettre de rallonger la DLC de notre témoin de rupture de chaîne du froid. D'autres essais doivent être réalisés pour valider ces résultats. pH du milieu Tracéo en fonction de la concentration en Citrate après ajout d'acide lactique ---OmM citrate ---20 mM citrate 40 Mm citrate 0 2 4 6 Concentration en acide lactique (g/1) Page 59 sur 83 VALIDATION DE DLC (6, 15 ET 21 JOURS) DATE: 28 novembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Les conditions sont présentées dans le tableau suivant: DLC % glycérol Glucose Mannitol Tampon phosphate 0.1 M 6 jours 0 X X X jours 15 X X X 21 jours 20 X X X OBJECTIFS: L'objectif est de valider les résultats obtenus précédemment en associant au milieu TRACEO les éléments suivants: Glycérol, sucres et tampon phosphate 0.1 M. Page 60 sur 83 RESULTATS: Croissance de la souche 58 DLC 6J 6J=-2J 4 C et 4J à 8 C Milieu TRACEO DC (+glucose) avec glycérol 0% + caséine 50g/l GO Milieu TS 0,1g/I tryptonel 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 28-nov 18h00 0 0,00 6,2 - + - 01-déc 9h00 63 2,63 6,2 - + - 04-déc 9h15 135,25 5,64 6,08 - + - 05-déc 9h15 159,25 6,64 5,49 - + - 06-déc 9h15 183,25 7,64 5,56 - + - 07-déc 9h15 207,25 8,64 08-déc 9h00 231 9,63 4,77 + - + Milieu TRACEO DC (+ mannitol) avec glycérol 0% + caséine 50g/l MO Milieu TS 0,1 g/1 tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 28-nov 18h00 0 0,00 6,21 - + - 01-déc 9h00 63 2,63 6,21 - + - 04-déc 9h15 135,25 5,64 6,09 - + - 05-déc 10h00 160 6,67 5,94 - + - 06-déc 9h15 183,25 7,64 5,92 - + - 07-déc 9h15 207,25 8,64 - 08-déc 9h00 231,25 9,64 5,14 + - 12h00 234,25 9,76 5,11 - + - 16h00 238,25 9,93 5,11 - + - 17h30 239,75 9,99 5,08 - + - 09-déc 9h15 255,5 10,65 5,06 Blanc + 12h00 258,25 10,76 5,09 18h00 264,25 11,01 5,08 10-déc 16h00 286,25 11,93 5,03 Début + 11-déc 9h15 303,5 12,65 4,92 ++ - +/- 8 C colo+ 8 C colo+ Page 61 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche 58 DLC 6J 6J=2J 4 C et 4J à 8 C Milieu TRACEO DC Tamponné phosphate 0,1 M (+glucose) avec glycérol 0% + caséine 50g/I GOT Milieu TS 0,lg/l tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification barre Heures Jours 28-nov 18h00 0 0,00 6,28 - + - 01-déc 9h00 63 2,63 6,29 - + _ 04-déc 9h15 135,25 5,64 6,29 - + - 05-déc 10h00 160 6,67 6,18 - + - 07-déc 9h15 207,25 8,64 08-déc 9h00 231 9,63 4,83 ++/- + + 09-déc 9h00 255 10,63 4,89 ++/+(limite) +/- 09-déc 12h00 258 10,75 4,83 ++ - + Milieu TRACEO DC Tamponné phosphate (+ mannitol) avec glycérol 0% + caséine 50g/I IMOT Milieu TS 0,lg/I tryptone/ 0,85% NACL 8 C colo+ Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code Opacification barre Heures Jours 28-nov 18h00 0 0,00 6,2 - + - 01-déc 9h00 63 2,63 6,21 - + _ 04-déc 9h15 135,25 5,64 6,17 - + _ 05-déc 10h00 160 6,67 5,94 - + - 05-déc 17h00 167 6,96 5,92 - + _ 07-déc 9h15 207,25 8,64 - + _ 08-déc 9h00 231 9,63 5,27 - + - 12h00 234 9,75 5,09 - + _ 16h00 238 9,92 5,06 - + _ 17h30 239,5 9,98 5,06 - + _ 09-déc 9h15 255,25 10,64 4,99 Blanc ++ + +/- 12h00 Arrêt Exsudat +i Eau dans I boite 8 C colo+ TO Milieu mou ( Mannitol + tampon phosphate) Page 62 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche 58 DLC 9J 9J=3J 4 C et 6J à 8 C Milieu TRACEO DC (+glucose) avec glycérol 0% + caséine 50g/l GO Milieu TS 0,1g/l tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 28-nov 18h00 0 0,00 6,2 - + - 01-déc 9h00 63 2,63 6,2 - + _ 04-déc 9h15 135,25 5,64 6 - + - 05-déc 10h00 160 6,67 5,94 - + - 06-déc 9h30 183,5 7,65 - 07-déc 9h45 207,75 8,66 +/- 1 + et 1 08-déc 9h00 231 9,63 4,74 + - + Milieu TRACEO DC (+ mannitol) avec glycérol 0% + caséine 50g/l MO Milieu TS 0,1g/l tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 28-nov 18h00 0 0,00 6,21 - + - 01-déc 9h00 63 2,63 6,21 - + _ 04-déc 9h15 135,25 5,64 6,15 - + - 05-déc 10h00 160 6,67 5,98 - + - 06-déc 9h30 183,5 7,65 - + _ 07-déc 9h45 207,75 8,66 - + _ 08-déc 9h00 231 9,63 5,22 - + _ 12h00 234 9,75 5,24 - + _ 16h00 238 9,92 5,22 - + _ 17h30 239,5 9,98 5,21 - + _ 09-déc 9h15 255,25 10,64 5,12 Blanc+ + _ 12h00 258 10,75 5,08 18h00 264 11,00 5,03 10-déc 16h00 286 11,92 4,94 Début 11-déc 9h15 303,25 12,64 4,91 +/- + +/- 12h00 306 12,75 4,86 +++ - +++ 8 C Page 63 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche 58 DLC 9J 9J=3J 4 C et 6J à 8 C Milieu TRACEO DC Tamponné phosphate 0,IM (+glucose) avec glycérol 0% + caséine 50g/l Milieu TS 0,lg/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 28-nov 18h00 0 0,00 6,28 - + _ 01-déc 9h00 63 2,63 6,29 - + _ 04-déc 9h15 135,25 5,64 6,29 - + _ 05-déc 10h00 160 6,67 6,23 06-déc 9h30 183,5 7,65 - 07-déc 9h45 207,75 8,66 - 08-déc 9h00 231 9,63 4,99 +1- + +1- 12h00 234 9,75 4,89 ++ - ++ Milieu TRACEO DC Tamponné phosphate (+ mannitol) avec glycérol 0% + caséine 50g/l MOT Milieu TS 0,lg/I tryptone10,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 28-nov 18h00 0 0,00 6,2 - + _ 01-déc 9h00 63 2,63 6,21 - + _ 04-déc 9h15 135,25 5,64 6,16 - + _ 05-déc 10h00 160 6,67 6,08 - + _ 06-déc 9h30 183,5 7,65 - 07-déc 9h45 207,75 8,66 - 08-déc 9h00 231 9,63 5,15 Exsudat 12h00 234 9,75 5,1 16h00 238 9,92 5,13 Milieu blanc mais pas précipitation 17h30 239,5 9,98 5,15 09-déc 9h15 255,25 10,64 5,03 Blanc ++ + +/- 12h00 258 10,75 5,07 18h00 264 11,00 5,08 10-déc 16h00 286 11,92 4,96 +/- + +/11-déc 9h15 303,25 12,64 4,91 +/- + +/_ 12h00 306 12,75 4,89 +++ - +++ IGOT Exsuc Page 64 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche 58 DLC 12J 12J=4J 4 C et 8J à 8 C Milieu TRACEO DC (+glucose) avec glycérol 15% + caséine 50g/l G15GIy Milieu TS 0,lg/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,09 - + _ 02-déc 9h00 111,5 4,65 6,13 - + _ 05-déc 10h00 183,5 7,65 5,85 - + _ 06-déc 9h30 207,5 8,65 - 07-déc 9h45 231,5 9,65 + 08-déc 9h00 255,5 10,65 4,75 + - + Milieu TRACEO DC (+ mannitol) avec glycérol 15% + caséine 50g/I M15Gly Milieu TS 0,1 g/l tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,12 - + 02-déc 9h00 111,5 4,65 6,19 - + - 05-déc 10h00 184,5 7,69 6,09 - + - 06-déc 10h00 208,5 8,69 - 07-déc 10h00 232,5 9,69 - 08-déc 9h00 255,5 10,65 5,25 - + - 12h00 258,5 10,77 5,3 - + _ 16h00 262,5 10,94 5,29 - + _ 17h30 264 11,00 5,23 - + - 09-déc 9h15 279,75 11,66 5,12 Blanc+ 12h00 282,5 11,77 5,1 18h00 288,5 12,02 5,1 10-déc 16h00 310,5 12,94 4,95 +++ - +++ 8 C 8 C Page 65 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche 58 DLC 12J 12J=4J 4 C et 8J à 8 C Milieu TRACEO DC Tamponné phosphate 0,IM (+glucose) avec glycérol 15% + caséine 50g/l G15GIy T Milieu TS 0,lg/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,25 - + _ 02-déc 9h00 111,5 4,65 6,28 - + _ 05-déc 10h00 184,5 7,69 6,21 - + _ 06-déc 10h00 208,5 8,69 - 07-déc 10h00 232,5 9,69 - 08-déc 9h00 255,5 10,65 5,22 - + _ 12h00 258,5 10,77 5,08 - + _ 16h00 262,5 10,94 5,06 - + _ 17h30 264 11,00 5,01 - + _ 09-déc 9h15 279,75 11,66 4,97 Blanc ++ + _ 12h00 282,5 11,77 4,98 18h00 288,5 12,02 4,96 +++ _ +++ Milieu TRACEO DC Tamponné phosphate (+ mannitol) avec glycérol 15% + caséine 50g/I M15GIyT Milieu TS 0,lg/l tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,25 - + _ 02-déc 9h00 111,5 4,65 6,27 - + - 05-déc10h00 184,5 7,69 6,33 - + _ 06-déc 10h00 208,5 8,69 - 07-déc 10h00 232,5 9,69 - 08-déc 9h00 255,5 10,65 5,91 - + _ 12h00 258,5 10,77 5,85 - + _ 16h00 262,5 10,94 5,76 - + _ 17h30 264 11,00 5,71 - + _ 09-déc 9h15 279,75 11,66 5,56 - + _ 12h00 282,5 11,77 5,58 - + - 18h00 288,5 12,02 5,47 - + _ 10-déc 16h00 310,5 12,94 5,31 - + _ 11-déc 9h15 327,75 13,66 5,21 - + _ 12h00 330,5 13,77 5,15 - + _ 12-déc 9h15 351,75 14,66 5,1 +/ _ + _ 14h30 357 14,88 5,15 +/ - + _ 13-déc 16h30 383 15,96 +/ - + - 14-déc 16h30 407 16,96 + - + Page 66 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche 58 DLC 15j 15J=5J 4 C et 10J à 8 C Milieu TRACEO DC (+glucose) avec glycérol 15% + caséine 50g/l G15GIy Milieu TS 0,lg/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,09 - + 03-déc 9h00 135,5 5,65 6,11 - + _ 05-déc 10h00 184,5 7,69 6,03 08-déc 9h00 255,5 10,65 4,9 +/- +/- + 12h00 258,5 10,77 4,91 +++ _ + Milieu TRACEO DC (+ mannitol) avec glycérol 15% + caséine 50g/I M15GIy Milieu TS 0,1 g/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,12 - + _ 03-déc 9h00 135,5 5,65 6,18 - + _ 05-déc 10h00 184,5 7,69 6,15 - + _ 08-déc 9h00 255,5 10,65 5,79 - + _ 12h00 258,5 10,77 5,4 - + _ 16h00 262,5 10,94 5,34 - + _ 17h30 264 11,00 5,39 - + _ 09-déc 9h15 279,75 11,66 5,21 - + _ 12h00 282,5 11,77 5,15 - + _ 18h00 288,5 12,02 5,11 - + _ 10-déc 16h00 310,5 12,94 5 +++ _ +++ 8 1 8 1 Page 67 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche 58 DLC 15j 15J=5J 4 C et 10J à 8 C Milieu TRACEO DC Tamponné phosphate 0,1M (+ glucose) avec glycérol 15%+ caséine 50g/I G15GIy T Milieu TS 0,1g/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,25 - + - 03-déc 9h00 135,5 5,65 6,25 - + - 05-déc 10h00 184,5 7,69 6,27 - + - 08-déc 9h00 255,5 10,65 6,11 - + - 12h00 258,5 10,77 6,06 - + - 16h00 262,5 10,94 5,98 - + 17h30 264 11,00 5,97 - + - 09-déc 9h15 279,75 11,66 5,6 - + - 10-déc 16h00 286,5 11,94 5,13 - + - 11-déc 9h15 327,75 13,66 5 +/- + +/- 12h00 330,5 13,77 4,96 +++ - +++ Milieu TRACEO DC Tamponné phosphate (+ mannitol) avec glycérol 15% + caséine 50g/I M15GIy T Milieu TS 0,lg/I tryptonel 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,25 - + - 03-déc 9h00 135,5 5,65 6,25 + - 05-déc 10h00 184,5 7,69 6,35 - + - 08-déc 9h00 255,5 10,65 6,19 - + 12h00 258,5 10,77 6,14 - + - 16h00 262,5 10,94 6,07 - + - 17h30 264 11,00 6,04 - + - 09-déc 9h15 279,75 11,66 6,05 - + - 18h00 288,5 12,02 6,02 - + - 10-déc 10h00 304,5 12,69 5,94 - + - 11-déc 9h15 327,75 13,66 5,83 - + 12h00 330,5 13,77 5,75 - + - 12-déc 9h15 351,75 14,66 5,71 - + - 14h30 357 14,88 5,12 - + - 13-déc 16h30 383 15,96 - + - 14-déc 16h30 407 16,96 + - + 8 C 8 C Page 68 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche 58 DLC 18J 18J=6J 4 C et 12J à 8 C Milieu TRACEO DC (+glucose) avec glycérol 20% + caséine 50g/I G20GIy Milieu TS 0,1g/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,09 - + - 04-déc 9h00 159,5 6,65 6,1 - + - 08-déc 9h00 255,5 10,65 5,85 - + - 12h00 258,5 10,77 - + - 17h30 264 11,00 5,81 + - 09-déc 9h30 279 11,63 5,61 - + - 10-déc 16h00 310,5 12,94 4,97 +++ +++ Milieu TRACEO DC (+ mannitol) avec glycérol 20% + caséine 50g/l M20GIy Milieu TS 0,lg/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,15 - + - 04-déc 9h00 159,5 6,65 6,17 - + - 08-déc 9h00 255,5 10,65 5,92 - + 17h30 264 11,00 6,00 - + - 09-déc 9h30 280 11,67 5,71 - + - 10-déc 16h00 289,5 12,06 5,49 - + - 11-déc 9h15 327,75 13,66 5,36 - + - 12h00 330,5 13,77 5,33 - + - 12-déc 14h30 357 14,88 5,12 +/- + - 18h35 361 15,04 5,05 +1- + - 13-déc 17h00 383 15,96 + - + 8 8 Page 69 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche 58 DLC 18J 6J 4 C et 12J à 8 C Milieu TRACEO DC Tamponné phosphate 0,IM (+glucose) avec glycérol 20% + caséine 50g/I G20GIy T Milieu TS 0,1g/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,22 - + - 04-déc 9h00 159,5 6,65 6,26 - + - 08-déc 9h00 255,5 10,65 5,95 - + - 17h30 264 11,00 5,67 - + - 09-déc 9h30 280 11,67 5,33 - + - 10-déc 16h00 310,5 12,94 5,06 - + - 11-déc 9h15 327,75 13,66 4,98 ++ - +++ Milieu TRACEO DC Tamponné phosphate (+ mannitol) avec glycérol 20% + caséine 50g/l M20GIy T Milieu TS 0,1 g/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,25 - + - 04-déc 9h00 159,5 6,65 6,25 + - 08-déc 9h00 255,5 10,65 6,21 - + - 17h30 264 11,00 6,14 - + - 09-déc 9h30 280 11,67 5,83 - + - 10-déc 16h00 286,5 11,94 5,71 - + - 11-déc 9h15 327,75 13,66 5,63 - + - 12h00 330,5 13,77 5,54 - + - 12-déc 9h15 351,75 14,66 5,45 - + - 14h30 357 14,88 5,45 - + - 18h35 361 15,04 5,41 - + 15-déc 9h 423,5 17,65 +/- + - 16-déc 9h30 448 18,67 5,14 +/- + +/- 17-déc 9h15 471,75 19,66 5,1 +/- - +/- 8 C 8 C Page 70 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche DLC 21 j 21J=7J 4 C et 14J à 8 C Milieu TRACEO DC (+glucose) avec glycérol 20% + caséine 50g/l I G20GIy Milieu TS 0,1g/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,09 + - 05-déc 9h00 183,5 7,65 6,09 - + - 08-déc 9h00 255,5 10,65 5,88 - + 17h30 264 11,00 5,84 - + - 09-déc 9h30 280 11,67 5,66 - + - 17h30 288 12,00 5,53 - + - 10-déc 16h00 310,5 12,94 4,94 +++ - +++ Milieu TRACEO DC (+ mannitol) avec glycérol 20% + caséine 50g/I M20GIy Milieu TS 0,1 g/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,15 - + - 05-déc 9h00 183,5 7,65 6,15 - + - 08-déc 9h00 255,5 10,65 6,09 - + - 09-déc 9h30 280 11,67 5,95 - + - 10-déc 16h00 310,5 12,94 5,43 - + - 11-déc 9h15 327,75 13,66 5,37 - + - 12h00 330,5 13,77 5,27 - + - 12-déc 9h15 351,75 14,66 5,13 +/- + - 14h30 357 14,88 5,14 +/- + 18h35 361 15,04 5,06 +/- + 13-déc 16h30 383 15,96 +/- + +/- 14-déc 16h30 407 16,96 +/- +/- +/- 15-déc 9h 423,5 17,65 +++ - +++ Page 71 sur 83 Tableau de résultats de croissance de la souche DLC 21 j 21 J=-.7J 4 C et 14J à 8 C Milieu TRACEO DC Tamponné phosphate 0,1 M (+ glucose) avec glycérol 20% + caséine 50g/l G20GIyT Milieu TS 0,1g/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,22 - + _ 05-déc 9h00 183,5 7,65 6,25 - + _ 08-déc 9h00 255,5 10,65 6,18 - + _ 09-déc 9h30 280 11,67 5,77 - + _ 10-déc 16h00 310,5 12,94 5,2 - + - 11-déc 9h15 327,75 13,66 5,04 +1- - +++ Milieu TRACEO DC Tamponné phosphate (+ mannitol) avec glycérol 20% + caséine 50g/I M20GIyT Milieu TS 0,1g/I tryptone/ 0,85% NACL Date Heure Temps pH Précipitation Lecture code barre Opacification Heures Jours 27-nov 17h30 0 0,00 6,25 - + _ 05-déc 9h00 183,5 7,65 6,25 - + _ 08-déc 9h00 255,5 10,65 6,29 - + _ 09-déc 9h30 280 11,67 6,22 - + _ 10-déc 16h00 310,5 12,94 5,8 - + _ 11-déc 9h15 327,75 13,66 5,65 - + _ 12H00 330,5 13,77 5,53 - + _ 12-déc 9h15 351,75 14,66 5,48 - + _ 14h30 357 14,88 5,43 - + _ 18h35 361 15,04 5,36 - + _ 13-déc 16h55 383 15,96 - + _ 15-déc 9h 423,5 17,65 - + _ 16-déc 9h30 448 18,67 5,04 +/- + +/_ 17-déc 9h15 471,75 19,66 5,03 ++ _ ++ Page 72 sur 83 NOMBRE D'ESSAIS: 24 essais sont réalisés. CONCLUSION: Ces différents résultats permettent de valider les résultats obtenus précédemment. Les temps de précipitation sont enregistrés dans le tableau ci dessous pour tous les essais réalisés. Certains essais de DLC 21 jours sont à valider. En effet, certaines DLC ne sont pas répétables entre le mois d'août et le mois de novembre. Page 73 sur 83 RECAPITULATIF DE TOUS LES ESSAIS DLC REALISES Date Sucre % glycérol DLC attendue Milieu Inoculum pHi pHf Jours précipitation Moyenne analyse jours Tamponné départ 21-août Glucose 0 7 1,00E+04 6,38 4,71 7,7-10,7 9,20 30-sept Glucose 0 7 1,00E+04 6,27 5,03 8,8 8,80 02-oct Glucose 0 7 1,00E+04 6,26 4,92 8,2-9,0 8,60 07-oct Glucose 0 7 1,00E+04 6,28 5,43 7,8-7,9 7,85 22-oct Glucose 0 7 1,00E+04 6 5,12 8,6-8,9 8,75 22-oct Glucose 0 7 1,00E+05 6 5,01 8,6-8,9 8,75 22-oct Glucose 0 7 1,00E+04 5,8 9,8-11,6 10,70 04-nov Glucose 0 7 1,00E+04 6,33 4,79 9,0-9,6 9,30 04-nov Glucose 0 7 1,00E+05 6,33 4,8 8,6-8,7 8,65 04-nov Glucose 0 7 1,00E+07 6,33 4,87 5,6-6,0 5,80 17-nov Glucose 0 7 1,00E+04 6,15 4,89 7,8-7,9 7,85 17-nov Glucose 0 7 1,00E+04 7,75 4,98 7,8-7,9 7,85 22-nov Glucose 0 7 1,00E+05 5,9 9,8-11,6 8,57 28-nov Glucose 0 6 1,00E+04 6,2 4,77 8,6-9,63 9,12 28-nov Glucose 0 6 X 1,00E+04 6,2 4,83 10,7 10,70 17-nov Imidazole 0 7 1,00E+04 6,59 4,89 7,9-8 7,95 17-nov Mannitol 0 7 1,00E+04 6,18 4,9 10,6-13,6 12,10 28-nov Mannitol 0 6 1,00E+04 6,2 4,92 11,9-12,65 12,28 28-nov Mannitol 0 6 X 1,00E+04 6,2 4,99 pb milieu 28-nov Glucose 0 9 1,00E+04 6,2 4,74 8,6-9,6 9,10 28-nov Glucose 0 9 X 1,00E+04 6,28 4,89 9,6-9,7 9,65 28-nov Mannitol 0 9 1,00E+04 6,21 4,86 12,75 12,75 28-nov Mannitol 0 9 X 1,00E+04 6,2 4,89 12,6-12,7 12,65 21-août Glucose 2 7 1,00E+04 6,4 4,7 7,7-10,7 9,20 30-sept Glucose 2 7 1,00E+04 6,28 4,93 9,8 9,80 02-oct Glucose 2 7 1,00E+04 6,26 4,91 8,2-8,9 8,55 07-oct Glucose 2 7 1,00E+04 6,25 5,3 7,9-8,0 7,95 Page 74 sur 83 RECAPITULATIF DE TOUS LES ESSAIS DLC REALISES - SUITE Date Sucre % glycérol DLC attendue Milieu Inoculum pHi pHf Jours précipitation Moyenne analyse jours Tamponné départ 14-août Glucose 15 12 1,00E+04 6,54 5,21 11,7-12,6 12,15 08-oct Glucose 15 12 1,00E+04 6,23 5,02 9,3-11,9 10,60 17-oct Glucose 15 12 1,00E+04 6,15 5,03 11,0-11,8 11,40 28-nov Glucose 15 12 1,00E+04 6,09 4,75 9,6-10,6 10,10 28-nov Glucose 15 12 X 1,00E+04 6,25 4,96 12,02 12,02 28-nov Mannitol 15 12 1,00E+04 6,12 4,95 12,0-12,9 12,45 28-nov Mannitol 15 12 X 1,00E+04 6,25 Attente 28-nov Glucose 15 15 1,00E+04 6,09 4,91 10,7 10,70 28-nov Glucose 15 15 X 1,00E+04 6,25 4,96 13,6-13,7 13,65 28-nov Mannitol 15 15 1,00E+04 6,12 5 12,0-12,9 12,45 28-nov Mannitol 15 15 X 1,00E+04 6,25 16,96 16,90 08-oct Glucose 16,5 12 1,00E+04 6,23 5,09 11,9-12,0 11,95 17-nov Glucose 16,5 12 1,00E+04 6,15 5,06 12,0-12,6 12,30 22-nov Glucose 18 15 1,00E+04 6,33 5,04 11,9-12,6 12,25 28-nov Glucose 20 18 1,00E+04 6,09 4,97 11,6-12,9 12,25 28-nov Glucose 20 18 X 1,00E+04 6,22 4,98 12,9-13,66 13,28 28-nov Mannitol 20 18 1,00E+04 6,15 15,96 15,96 28-nov Mannitol 20 18 X 1,00E+04 6,25 5,1 18.67-19.66 19,17 14-août Glucose 20 21 1,00E+04 6,5 5,23 19-20 19,50 14-août Glucose 20 21 1,00E+04 6,47 5,31 18,6-19,0 18,80 28-nov Glucose 20 21 1,00E+04 6,09 4,94 12-12,9 12,45 28-nov Glucose 20 21 X 1,00E+04 6,22 5,04 12,9-13,66 13,28 28-nov Mannitol 20 21 1,00E+04 6,15 16.96-17.65 17,31 28-nov Mannitol 20 21 X 1,00E+04 6,25 5,03 18.67-19.66 19,17 14-août Glucose 25 25 1,00E+04 6,51 Pas de précipitation Page 75 sur 83 CROISSANCE DE LA SOUCHE 503M10 A 4 C AVEC DIFFERENTS SUCRES DATE: 17 novembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Le temps de précipitation du milieu TRACEO est étudié à 4 C avec le milieu TRACEO + glucose 2% et le mannitol 2% La croissance en milieu solide de la souche dans le milieu contenant le mannitol pour une DLC de 7 jours (1/3 à 4 C et 2/3 à 8 C) est déterminée comparativement au glucose. OBJECTIFS: L'objectif est de connaître l'effet du mannitol à cette température sur la durée de la précipitation. RESULTATS: Glucose Date Heure Temps(Heures) Temps(Jours) pH Précipitation lecture Code Opacification 17-nov 18h00 0 0,00 6,21 - + - 28-nov 10h00 257 10,71 5,46 - + - 01-déc 9h00 328 13,67 4,96 - + - 01-déc 17h30 336,5 14,02 4,96 Début + Début 02-déc 8h30 351,5 14,65 4,9 +++ _ +++ Mannitol Date Heure Temps(Heures) Temps(Jours) pH Précipitation lecture Code Opacification 17-nov 18h00 0 0,00 6,2 - + - 28-nov 10h00 257 10,71 5,82 + - 01-déc 9h00 328 13,67 5,29 - + - 01-déc 17h30 336,5 14,02 5,23 - + 02-déc 8h30 351,5 14,65 5,21 Début + Début 14h15 357,25 14,89 5,2 + 03-déc 9h00 376 15,67 5,19 + NOMBRE D'ESSAIS: Page 76 sur 83 2 essais sont réalisés. CONCLUSION: Ce tableau nous montre que la DLC est augmentée lorsque le sucre fermentescible est du mannitol. En effet, dans le premier cas pour un milieu contenant 0% de glycérol et pour une DLC de 7 jours le temps de précipitation est de 7.85 jours en présence de glucose et de 13.6 en présence de mannitol soit une différence de 5.75 jours. Page 77 sur 83 DETERMINATION D'UN TEMPS DE DETECTION-TRAÇABILITE INDUSTRIELLE DATE: 24 novembre 2003 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: L'expérience consiste à déterminer un temps de détection sur une solution bactérienne définie. 7 milieux sont testés dans cette expérience: N milieu Milieu Base Sucre 2% Glycérol (%) Tampon Tampon 0.1 M 0.2M lA1 TRACEO Glucose 0 1A2 TRACEO Mannitol 1A3 TRACEO Mannitol 15 1A4 TRACEO Mannitol 20 X 1A5 TRACEO Mannitol 25 X 1A6 TRACEO Mannitol 30 X 1A7 TRACEO Mannitol 20 X OBJECTIFS: Cette expérience permet de déterminer une technique qui permette de tracer une solution bactérienne prédéfinie. Cette technique peut être utilisée facilement dans le milieu industriel de fabrication du milieu. RESULTATS: NOMBRE D'ESSAIS: 7 essais ont été nécessaires pour cette étude. CONCLUSION: Le graphe nous montre que cette technique permet de donner un temps de détection qui est de 14.6 jours pour la condition lA1. Page 78 sur 83 Pour les autres conditions, nous n'obtenons pas de temps de détection. Mais cette technique peut être améliorée de façon à être calibrée pour une autre condition de culture. II reste donc d'autres essais à réaliser ultérieurement. Page 79 sur 83 DETERMINATION DE TEMPS DE PRECIPITATION EN PRESENCE DE DIFFERENTS TAMPONS PHOSPHATE DATE: 9 janvier 2004 CONDITIONS DE L'EXPERIENCE: Milieu de Sucres Glycérol % Tampon Tampon Tampon base 2% phosphate phosphate phosphate 0.1M 0.15M 0.20 M TRACEO Glucose 15 X X TRACEO Glucose 17.5 X X TRACEO Glucose 20 X X TRACEO Glucose 22.5 X X TRACEO Mannitol 15 X X TRACEO Mannitol 17.5 X X TRACEO Mannitol 20 X X TRACEO Mannitol 22.5 X X TRACEO Glucose 15 X TRACEO Glucose 17.5 X TRACEO Glucose 20 X TRACEO Glucose 22.5 X TRACEO Mannitol 15 X TRACEO Mannitol 17.5 X TRACEO Mannitol 20 X TRACEO Mannitol 22.5 X Ces expériences ont été réalisées à deux températures: 4 C constant 8 C constant OBJECTIFS: Cette expérience permet de valider les résultats obtenus avec le tampon phosphate. La microbiologie prévisionnelle confirmera le choix de ces températures comparativement à 1/3 4 C et 2/3 à 8 C. Page 80 sur 83 RESULTATS: Ces essais sont actuellement en cours de réalisation. NOMBRE D'ESSAIS: 96 essais sont réalisés dans cette expérience. Page 81 sur 83 2865825 Revendication 1. Dispositif destiné à contrôler la fraîcheur d'un produit; ledit dispositif étant caractérisé en ce qu'il met en oeuvre une étiquette comprenant des bactéries destinées à provoquer une opacification de ladite étiquette en cas de franchissement d'un seuil déterminé de température de conservation dudit produit; ladite étiquette étant notamment destinée à être apposée sur un code barres associé audit produit; ledit dispositif étant en outre caractérisé en ce que: - ladite étiquette est paramétrée en fonction d'une date limite de consommation dudit produit sur lequel elle est apposée, - ladite étiquette subit une opacification lors de la survenance de ladite date limite de consommation et/ou antérieurement à ladite date limite de consommation dans le cas où ladite température dudit produit a excédé un seuil déterminé pendant une durée déterminée; de sorte que l'opacification de l'étiquette rend illisible le code barres du produit. Page 82 sur 83