FR 2852842 A1 20041001 FR 0303931 A 20030331 PROCEbE DE PREPARATION D'UN PRINCIPE ACTIF A PARTIR D'EXSUDAT DE RESINE DES FRUITS DE Daemonorops draco ou Croton lechieri, COMPOSITIONS L'INCLUANT ET UTILISATIONS La présente invention concerne un procédé de préparation d'un principe actif permettant notamment de lutter contre le vieillissement de la peau et couvre aussi les compositions qui l'incluent. On connaît le composé naturel dit sang de dragon qui est issu des fruits d'un 5 arbre de la famille des Daemonorops ou des Crotons, plus spécifiquement Daemonorops draco ou Croton lechieri. Ce composé rouge d'o son nom, sous forme de résines, est connu depuis très longtemps pour ses vertus de cicatrisation en faisant migrer les fibroblastes vers les zones affectées d'une plaie par exemple. Ce composé naturel présente aussi des propriétés antibactériennes, antiseptiques et anti-inflammatoires. On a isolé principalement dans ces extraits naturels une forte richesse en alcaloïdes, notamment la taspine. On peut citer comme art antérieur le brevet US 3 694 557 qui décrit une 15 composition à vocation anti-inflammatoire. De même, le brevet US 5 156 847 présente une composition pharmaceutique mais dont la dissolution est réalisée dans un solvant du type non aqueux, plus particulièrement le DMSO, diméthylsulfoxyde. Il existe aussi des produits dans le commerce auxquels on prête les vertus 20 connues sans qu'elles aient été constatés comme étant supérieures aux produits de la pharmacopée moderne. Par contre, on a constaté qu'il était très difficile de disposer d'extraits en milieu aqueux qui sont instables. La présente invention consiste en un procédé de préparation d'un principe actif à partir de sang de dragon qui est stable en milieu aqueux. be plus, ces compositions stabilisées trouvent des applications cosmétiques certaines dont les résultats sont vérifiés dans la présente invention. A cet effet, le procédé est maintenant décrit en détail selon un mode de réalisation particulier, non limitatif, les résultats étant intégrés dans la présente description. 1/ PROCEDE bE PREPARATION b'UNE COMPOSITION A BASE DE SANG DE bRAGON solubilisation de sang de dragon, c'est-à-dire d'un exsudat de résine de 10 fruits de Daemnonoropsou des Crotons, plus particulièrement de la variété Daemonorops draco ou Croton lechieri, à raison d'au moins 20 9/I en poids, dans une solution hydroglycolique, contenant entre 0 et 100 % de glycol, - filtration, décantation ou centrifugation afin de séparer la phase solubilisée des produits insolubles, - concentration successives de la phase active par filtration, ultrafiltration, osmose et/ou nanofil Itration. On peut aussi ajouter entre 0 et 1%o de sel, sous forme de bisulfite de sodium et de 0 à 1% d' EDTA, éthylène diamine tétra acétique. be même, en tant que glycol, on préférera le butylène glycol. On note que suivant la forme du sang de dragon utilisée, on peut modifier le rapport eau/glycol et que c'est ce composé qui apporte la stabilité de la composition comme cela sera confirmé ci-après. Le sel a pour avantage de conserver stable la couleur. 2/ CARACTERISATION DU PRINCIPE ACTIF AINSI OBTENU 2-1/ Matière sèche: le taux de matière sèche est obtenu par passage à l'étuve à 105 C de 109 de produit, jusqu'à obtention d'un poids constant. Le taux de matière sèche est compris entre 1 et 100 g/I, plus particulièrement entre 20 et 60g/l. 2-2/pH: Le pH final est compris entre 4,0 et 7,0, constant. 2-3/ Taux de polypénols: Le taux de polyphénols donne une teneur comprise entre 0,4 et 40 9/I. 2-4/ Caractérisation de la taspine: La taspine contenue dans la préparation selon la présente invention est identifiée suivant le protocole décrit dans la publication Persinos-Perdue G, et ai, (1979)" 10 South american plants II, taspine isolation and anti inflammatory activity" Journal of Pharmaceutical Sciences 68 (1), pp 124-126. bans les essais menés, le rapport de taspine par rapport aux polyphénols est de 2,5% lorsque l'on ajoute sel et EbTA et de 20% lorsque l'on utilise le seul mélange eau/glycol. Le rapport de taspine par rapport aux polyphénols est donc toujours supérieurs à 1. 2-5/ Caractérisation physique: La couleur du principe actif est rouge, son aspect est limpide et la composition aqueuse ou avec glycol est stable. 20 3/ EFFETS DU PRINCIPE ACTIF SELON L' INVENTION: 3-1/ Activité anti-radicalaire: 3-1-1/ DPPH Le diphényl picrylhydrazyl hydrate est un radical libre, absorbant dans le violet à 25 517 nm. bans le cas d'une activité anti-radicalaire, il y a disparition de la coloration violette, c'est ce que l'on constate dans le tableau suivant: Activité anti-radicalaire en % Témoin 0 Principe actif à 0,0050% 71 Principe actif à 0,0025 % 64 3-1-2/ Cultures de cellules: Le protocole consiste à cultiver des fibroblastes humains ou des kératinocytes en présence et en absence du principe actif selon la présente invention à différentes concentrations, le principe actif étant dilué directement da,s le milieu de culture. On agresse chimiquement ces cultures par une solution d'hypoxanthinexantine 10 oxydase. Les effets délétère de cette agression chimique sont évalués sur les cultures prétraitées et non prétraitées. L'étude consiste à mesurer la viabilité cellulaire au moyen de la méthode dite MTT à 540 nm pour déterminer les effets protecteurs vis-à-vis des radicaux 15 libres chimio-induits du principe actif selon l'invention. Les résultats sont indiqués dans le tableau ci-dessous Fibroblastes humains: Activité anti-radicalaire en % Témoin 0 Principe actif à 0,25 % 10 Principe actif à 1,00 % 100 Principe actif à 2,00 % 100 On constate une forte activité anti-radicalaire du principe actif selon laprésente invention. Kératinocytes HaCaT:. Activité anti-radicalaire en % Témoin 0 Principe actif à 0,5 % 58 Principe actif à 1,0 % 70 Principe actif à 2,0 % 88 On constate une protection anti-radicalaire de 88% des kératinocytes HaCaT. 3-2/ Activité détoxifiante: On soumet des cultures de kératinocytes humain, en présence ou non du principe actif selon la présente invention, à une agression radicalaire par le réactif de 10 Fenton (mélange de FeCI2 avec de l'eau oxygénée). La viabilité est de nouveau évaluée par la méthode MTT. On obtient les résultats suivants: Fibroblastes humains: Activité chélatrice en % Témoin 0 Principe actif 0,25% 51 Principe actif 0,50% 67 Kératinocytes humains | Activité chélatrice en % Témoin 0 Principe actif 0,25% 26 Principe actif 0,50% 50 On note que le principe actif limite les dégâts radicalaires induits par le réactif de Fenton tant sur les fibroblastes que sur les kératinocytes. 3-3/ Effet sur la libération des PGE2: Dans cette évaluation, on soumet des kératinocytes humains cultivés en présence ou non du principe actif, à une inflammation chimique (acide arachidonique). On dose dans le surnageant, au moyen d'un kit Elisa spécifique, le taux de PGE2. Les résultats sont les suivants Variation du taux de PGE2 / témoin Témoin 0 Principe actif 0,50 -31 On constate une diminution de l'expression des PGE2, ce qui procure un effet apaisant. Le principe actif est introduit dans tout support cosmétique adapté, crème, onguent, émulsion, lotion ou dispersion. Le principe actif est introduit à raison de 1 à 10% dans ces formes galéniques. REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation d'un principe actif, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: - solubilisation de sang de dragon, notamment sous la forme d'un exsudat de résine de fruits de Daetnonorops ou des Crotons, notamment la variété 5 Daemonorops draco ou Croton lechieri, dans une solution hydroglycolique contenant entre 0 et 100% de glycol, - filtration, décantation ou centrifugation afin de séparer la phase solubilisée des produits insolubles, - concentration successives de la phase active par filtration, ultrafiltration, 10 osmose et/ou nanofiltration. 2. Procédé de préparation d'un principe actif selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on ajoute entre 0 et 1% de sel, notamment sous forme de bisulfite de sodium. 3. Procédé de préparation d'un principe actif selon la revendication 1 ou 2, 15 caractérisé en ce que l'on ajoute entre 0 et 1% d'EbTA, éthylène diamine tétra acétique. 4. Procédé de préparation d'un principe actif selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le glycol est du butylène glycol. 5. Principe actif obtenu à partir du procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il comprend - 1 à 100 g/I de matière sèche, notamment entre 20 et 60 g/I - le pH est compris entre 4,0 et 7,0 - taux de polyphénols compris entre 0,4 et 40 g/I 25 - taux de taspine supérieur à 1%. 6. Utilisation du principe actif selon la revendication 5 obtenu à partir du procPédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'elle consiste à introduire de 1 à 10% de ce principe actif dans un support cosmétique adapté afin de pouvoir l'appliquer sur la peau pour obtenir un effet antiradicalaire et apaisant.