FR 2850274 A1 20040730 FR 0303152 A 20030314 EXTRAIT DE BOURGEONS DE Cryptomeria japonica D. Don. L'invention concerne un extrait de bourgeons de Cryptomeria japonica. Elle a également pour objet une composition cosmétique comprenant ledit extrait. Elle se rapporte enfin à différentes utilisations dans le domaine cosmétique, par application topique, de l'extrait et donc de la composition de l'invention. Originaire de Chine et du Japon, Cryptomeria japonica D. Don est une espèce insulaire, unique représentant de son genre dans la famille des Taxodiacées. Cet arbre résineux à croissance rapide, est très rustique et prospère dans les sols frais et humides, à tendance légèrement calcaire, en Europe mais surtout au Japon, o il couvre au côté du cyprès du Japon (Chamaecyparis obtusa) et du pin rouge 15 du Japon (Pinus densiflora), près de 40 % du territoire forestier. A la connaissance du Demandeur, seuls le bois, l'écorce et les feuilles de Cryptomeriajaponica ont été valorisés. Dans une première application, le bois est utilisé pour la construction comme bois de coffrages ou pour la confection de lambris ou encore la fabrication de meubles rustiques. Un produit dérivé du bois, le charbon de bois, a déjà été décrit, dans le document JP 2001 302444, dans une application cosmétique, pour améliorer les propriétés humectantes de la peau ou des cheveux. En pratique, la 25 composition cosmétique se présente sous forme liquide et est obtenue par élution d'eau minérale sur un support constitué du charbon de bois. L'écorce de Cryptomeria japonica est utilisée comme agent antimicrobien, pour contrôler les microorganismes pathogènes des plantes. Ainsi, le document 30 JP 011292727 décrit un agent antimicrobien obtenu par extraction d'écorces de Cryptomeriajaponica, à l'aide d'un solvant organique non polaire. Les feuilles de Cryptomeria japonica ont trouvé une première application dans le domaine médical. Ainsi, le document JP 011228433 décrit un agent antibactérien, dirigé en particulier contre Escherichia Coli ou Legionella, associant 5 un extrait végétal composé de 35 types de plantes, dont Cryptomeriajaponica avec une molécule organique munie d'un noyau tropolone, en présence d'un agent émulsifiant et d'un acide organique. Ce document n'indique pas quelle partie du Cryptomeria japonica est utilisée. Le document JP 2001 000141 décrit un extrait de feuilles de Cryptomeria japonica utilisé pour la prévention des maladies 10 allergiques. Pour la même application, le document JP 01061415 décrit une composition à base d'extraits de rhizomes, de racines ou de feuilles de différentes plantes, en particulier de feuilles de Cryptomeriajaponica. Dans le domaine cosmétique, le document JP 2001 03719 décrit une 15 composition topique améliorant l'aspect de la peau, combinant extrait de citron, aloès et feuilles de Cryptomeriajaponica. En d'autres termes, aucun document ne décrit l'idée d'utiliser en lieu et place du bois, des feuilles ou de l'écorce, les bourgeons de Cryptomeria japonica. Or, le 20 Demandeur a constaté que de manière tout à fait surprenante, les extraits de bourgeons de Cryptomeria japonica présentaient des propriétés intéressantes lorsqu'ils étaient appliqués sur la peau. Autrement dit et selon un premier aspect, l'invention concerne un extrait de 25 bourgeons de Cryptomeria japonica susceptible d'être obtenu par une première étape d'extraction solide/liquide, suivie d'une seconde étape de séparation solide/liquide, puis d'une troisième étape de récupération de la phase liquide. Selon une première caractéristique, l'extraction solide/liquide peut être 30 effectuée par différentes techniques bien connues de l'homme du métier, telles que macération, re-macération, digestion, macération dynamique, extraction en lit fluide, extraction assistée par micro-ondes, extraction assistée par ultra-sons, extraction à contre courant, percolation, repercolation, lixiviation, extraction sous pression réduite, diacolation, extraction par fluide supercritique, extraction solideliquide sous reflux continu (soxhlet). Dans un mode de réalisation avantageux, l'extraction est effectuée par macération dynamique à chaud. Selon une autre caractéristique, l'extraction solide/liquide est effectuée à partir de bourgeons sous forme fraîche, sèche, fraîche traités par hyperfréquences, ou fraîche traités par hyperfréquences puis séchés, les bourgeons pouvant se présenter en outre sous forme entière, concassée, broyée, ou cryobroyée. 10 Par ailleurs, le solvant d'extraction correspondant à la phase liquide est un solvant organique utilisable dans une application cosmétique par voie topique. Le solvant d'extraction est choisi dans le groupe comprenant l'eau, les alcools (éthanol, méthanol, etc.), les glycols (tels que le propylène glycol, le butylène 15 glycol, la glycérine...), seuls ou en mélange. En pratique, le ratio bourgeon/ solvant, pendant l'étape d'extraction, est compris entre 1/99 et 80/20 (en poids). De même, L'extraction est effectuée à une température comprise entre 3 et 1000C, de préférence entre 20 et 60C, pendant 20 quelques minutes à plusieurs jours, en fonction de la méthode d'extraction utilisée. De manière à optimiser l'extraction des composés actifs tout en protégeant ces composés de l'oxydation par l'oxygène de l'air, l'étape d'extraction solide/liquide peut être réalisée sous agitation et sous atmosphère d'azote. 25 Selon l'invention, l'extraction solide/liquide est suivie d'une étape de séparation solide/liquide, l'objectif étant de récupérer la phase liquide contenant la matière active. Cette séparation peut être effectuée par toute technique connue de l'homme du métier, en particulier l'égouttage, le pressage, l'essorage, la 30 centrifugation ou la filtration. Dans un mode de réalisation avantageux, l'étape de séparation liquide/solide est suivie par au moins une étape de clarification. Cette étape de clarification peut être effectuée par filtration sur plaques, filtration membranaire, filtration tangentielle, ou encore par centrifugation. Selon un autre mode de réalisation, l'étape de séparation liquide/solide est suivie d'une étape de concentration, laquelle permet d'obtenir une forme liquide concentrée. En pratique, l'étape de concentration est effectuée par évaporation sous vide ou osmose inverse. Bien entendu, l'étape de. concentration peut être 10 effectuée directement après l'étape de séparation ou de clarification. Postérieurement à l'étape de séparation solide/liquide et dans un autre mode de réalisation, l'extrait obtenu est fractionné, enrichi ou purifié par différentes techniques telles que la filtration membranaire, l'extraction liquide/liquide ou la 15 chromatographie préparative. Enfin, en vue d'un conditionnement stérile ou non stérile, les étapes de clarification et/ou de concentration peuvent être suivies d'une étape de filtration stérilisante à 0.22tm. Comme déjà dit, à l'issue de l'étape de séparation, on récupère un extrait sous forme liquide. Pour obtenir un extrait liquide stable dans le temps en terme de contamination bactérienne, de stabilité physico- chimique et de couleur et dans le cas d'un conditionnement non stérile, on incorpore à la phase liquide, le cas 25 échéant avant l'étape de filtration stérilisante, au moins un agent conservateur (ex. PhénonipX... ) dans une concentration comprise entre 1 et 1 Og/l et un agent antioxydant (ex. acides organiques: ascorbique, citrique...) dans une concentration comprise entre 0.5 et 10 g/l par rapport au volume total de la phase liquide. Pour obtenir un extrait sous forme sèche, l'extrait obtenu à l'issue de l'étape de séparation liquide/solide, le cas échéant de clarification et/ou de concentration est séché, avec ou sans agent de conservation et avec ou sans agent texturant (tel que l'amidon, les maltodextrines, les sirops de glucose...), par lyophilisation, atomisation ou évaporation sous vide. Selon une autre caractéristique, lorsque l'extrait se présente sous forme liquide, il a une teneur en matière sèche comprise entre 1 et 100 g/kg. Lorsqu'il se présente sous forme sèche, il a une teneur en matière sèche comprise entre 10 et 10 1000 g/kg. L'extrait peut être utilisé dans le domaine cosmétique, en particulier lorsqu'il est appliqué par voie topique. Ainsi, le Demandeur a constaté que l'extrait de l'invention: - stimulait la synthèse des composants essentiels de la matrice extracellulaire par les cellules du derme; avait une activité cytoprotectrice vis-à-vis de la peau; - stimulait le métabolisme cellulaire épidermique. En d'autres termes et selon un autre aspect de l'invention, l'extrait précédemment décrit peut être utilisé dans ces applications. La stimulation du métabolisme cellulaire épidermique a été mise en évidence par le Demandeur, lequel a en effet démontré que l'extrait de l'invention avait un 25 effet sur la respiration des cellules de l'épiderme, en particulier les kératinocytes. En outre, il apparaît que cette réponse ne correspond pas à un effet poison, dont pourrait être responsable l'extrait mais à un véritable effet énergisant. Cette stimulation du métabolisme cellulaire permet donc d'atteindre l'homéostasie, c'està-dire un équilibre prolifération / différentiation des cellules au sein de l'épiderme. 30 Cette propriété de l'extrait de l'invention permet d'envisager l'utilisation de la composition de l'invention, en application topique, comme anti-âge, agent hydratant, normalisant, stimulant de l'éclat du teint et donc un procédé de traitement cosmétique consistant à appliquer ladite composition sur la peau. Dans un autre aspect, l'invention concerne une composition cosmétique comprenant un extrait de bourgeons de Cryptomeria japonica, en particulier un extrait obtenu par le procédé ci-avant décrit. 10 En pratique, l'extrait représente entre 0,1 % et 10 % en poids de la composition, préférentiellement entre 0,3 % et 3 %. L'invention et les avantages qui en découlent ressortiront bien des exemples 15 de réalisation suivants. La figure 1 représente l'effet de l'extrait de l'invention sur la respiration basale de kératinocytes humains. EXEMPLE 1: Fabrication d'un extrait de bourgeons de Cryptomeria japonica Incorporer 473.7 g de butylène glycol et 426.3 g d'eau purifiée dans un même bêcher, - Mettre le solvant à chauffer à 40'C sous agitation continue, - Peser 100 g de bourgeons de Cryptomeriajaponica congelés, Broyer les bourgeons quelques secondes à l'aide d'un broyeur à couteau, Ajouter les bourgeons broyés au mélange eau/ butylène glycol, - Laisser extraire environ 8 heures à 40C sous agitation constante, 30 - Eliminer les bourgeons par passage sur voile de nylon (lOOjm), - Clarifier l'extrait sur filtres en papier de porosité décroissante. EXEMPLE 2: Composition cosmétique Crème visage PEG-8 beeswax Emulsifiant H/E 5,00 Acide stéarique Epaississant 1,50 Cyclométhicone Emollient 10,00 Phenyl triméthicone Emollient 5,00 Phenoxyethanol et methylparaben et butylparaben et Conservateur 0,50 ethylparaben et propylparaben Acrylates / Steareth-20 methacrylate copolymère Agent gélifiant 1,00 Hydroxyde de sodium (10% sol.) Neutralisant 0,40 Diméthicone et diméthiconol Agent de texture 4,00 Extrait de bourgeons de Cryptomeriajaponica 3,00 Eau Qsp EXEMPLE 3: Effet de l'extrait sur la stimulation du métabolisme cellulaire Le but de l'étude était d'évaluer l'effet de l'extrait de l'invention sur le métabolisme cellulaire épidermique, par le biais de la respiration cellulaire. L'extrait est obtenu dans les mêmes conditions que dans l'exemple 1. Pour l'étude, l'extrait est mis en solution dans un tampon respiratoire aux concentrations de 0.01%, 0.05% et 0.1% (v/v) Cette activité sur la respiration cellulaire a été appréciée par mesure de la vitesse de consommation d'oxygène (VO2) de kératinocytes humains HaCaT placés dans les conditions expérimentales suivantes - Sur cellules normales (non perméabilisées) en suspension dans un tampon riche 20 en substrat respiratoire afin de mettre en évidence une modulation de la respiration cellulaire considérée dans son ensemble. - Après perméabilisation des cellules via une lyse partielle de la membrane cytoplasmique, condition qui élimine les problèmes de transport et de diffusion du produit jusqu'à la mitochondrie et permet ainsi, de mettre en évidence une modulation de la respiration par action directe du produit sur la mitochondrie. - Après ajout, sur cellules perméabilisées, d'un agent découplant qui induit une 5 respiration mitochondriale maximale. Cette étude est réalisée dans le seul but d'évaluer si l'effet positif d'un produit sur la respiration mitochondriale provient ou non d'un effet découplant. Dans les conditions expérimentales retenues, cette étude a montré que 10 > L'extrait est capable de stimuler la respiration basale des kératinocytes HaCaT. Une augmentation de 32% des vitesses apparentes de consommation d'O2 a été observée lors de l'incubation des cellules entières (non perméabilisées) avec l'actif à 0.05% (voir figure 1). > L'extrait ne modifie pas la respiration mitochondriale. Aucune modification significative des vitesses apparentes de consommation d'O2 n'est observée lors de l'incubation des cellules perméabilisées avec des concentrations d'actif comprises entre 0.01 % et 0.1% (v/v). > L'extrait ne modifie pas les vitesses apparentes de consommation d'O2 des cellules perméabilisées en présence d'un agent découplant (DNP). L'ensemble de ces résultats permet de conclure à un effet stimulant sur la 25 respiration cellulaire sans effet découplant de la mitochondrie. La stimulation observée sur la respiration cellulaire n'est pas due à un effet direct du produit sur la chaîne respiratoire mitochondriale. Cet actif pourrait agir, en amont de la mitochondrie, au niveau de la glycolyse, du transport, du glucose ou comme substrat respiratoire. REVENDICATIONS 1/ Extrait de bourgeons de Cryptomeria japonica D. Don susceptible d'être obtenu 5 par une première étape d'extraction solide/liquide, suivie d'une seconde étape de séparation solide/liquide et enfin d'une troisième étape de récupération de la phase liquide. 2/ Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'extraction solide/liquide 10 est effectuée par macération, re-macération, digestion, macération dynamique, extraction en lit fluide, extraction assistée par micro-ondes, extraction assistée par ultra-sons, extraction à contre courant, percolation, re-percolation, lixiviation, extraction sous pression réduite, diacolation, extraction par fluide supercritique, ou extraction solide-liquide sous reflux continu (soxhlet). 15 3/ Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce que le ratio bourgeon/ solvant, pendant l'étape d'extraction solide/liquide, est compris entre 1/99 et 80/20 (en poids). 4/ Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'extraction solide/liquide est effectuée à une température comprise entre 3 et 1000C, de préférence entre 20 et 600C. 5/ Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape de séparation 25 solide/liquide est effectuée par égouttage, pressage, essorage, centrifugation ou filtration. 6/ Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape de séparation liquide/solide est suivie par au moins une étape de clarification. 30 7/ Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape de séparation liquide/solide est suivie d'une étape de concentration. 8/ Extrait selon l'une des revendications 6 ou 7, caractérisé en ce que les étapes de clarification et/ou de concentration sont suivies d'une étape de filtration stérilisante à 0.221tm. 9/ Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est séché à l'issue de l'étape de séparation liquide/solide, par lyophilisation, atomisation ou évaporation sous vide. 10/ Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce que lorsque l'extrait se présente sous forme liquide, il a une teneur en matière sèche comprise entre 1 et g/kg. 11/ Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce que lorsqu'il se présente sous forme sèche, il a une teneur en matière sèche comprise entre 10 et 1000 g/kg. 12/ Extrait selon la revendication 1 utilisé pour stimuler la synthèse des composants essentiels de la matrice extracellulaire par les cellules du derme. 20 13/ Extrait selon la revendication 1 utilisé pour son activité cytoprotectrice vis à vis de la peau. 14/ Extrait selon la revendication 1 utilisé pour son activité stimulante du 25 métabolisme cellulaire épidermique. 15/ Composition cosmétique comprenant un extrait de bourgeons de Cryptomeria japonica selon la revendication 1. 16/ Composition selon la revendication 15, caractérisée en ce que l'extrait représente entre 0,1 % et 10 % en poids de la composition, préférentiellement entre 0,3 % et 3 %. 17/ Utilisation de la composition selon la revendication 15, en application topique, comme anti-âge, agent hydratant, normalisant, stimulant de l'éclat du teint. DEPOSANT: GATTEFOSSE SA MANDATAIRE: CABINET LAURENT ET CHARRAS