FR 2851576 A1 20040827 FR 0302090 A 20030220 PROCEDE D'OBTENTION D'UN PRINCIPE ACTIF A PARTIR DE LEVURES PERMETTANT DE LUTTER CONTRE L'ALTERATION DU CONTOUR DES YEUX La présente invention couvre un procédé d'obtention d'un principe actif à partir de levures plus particulièrement Saccharomyces Cerevisiae permettant de lutter contre les altérations du contour des yeux, c'est-àdire essentiellement contre les cernes et la pigmentation marquée dans cette zone particulière. L'invention couvre aussi les produits cosmétiques qui incorporent un tel actif sous forme de crèmes, onguent, lotions ou tout autre forme galénique, y compris en association avec d'autres actifs ayant un effet de synergie ou simplement une action complémentaire. Le contour de l'oeil est une zone particulièrement sensible et complexe dont le 10 rôle esthétique est très important puisqu'elle affecte le regard et transmet de nombreuses informations concernant la personne. Cette zone, pourtant de faible surface est néanmoins le reflet immédiat de la fatigue, de l'humeur et bien sr de l'âge. C'est donc une zone à laquelle les femmes sont très attentives. Cette zone du contour de l'oeil présente une épaisseur de peau très mince puisqu'elle est de l'ordre d'un demi millimètre. Le tissu conjonctif est composé essentiellement de collagène, d'élastine et de glycosaminoglycanes Cette zone est très vascularisée pour alimenter un réseau important de plus de trente muscles dont la moitié est dédiée à l'ouverture / fermeture des yeux. De ce fait, lorsque le tissu de cette zone très vascularisée se trouve être en défaut de certains composés favorisant ses propriétés élastiques, il se produit un relâchement de la peau. Des défauts de circulation au niveau des vaisseaux capillaires de cette zone 5 provoquent une modification de la couleur par la stagnation du sang, par une plus forte concentration de mélanine, par une concentration en pigments ferriques, ce qui renforce les défauts apparus parallèlement par les jeux de lumière induits. La peau est souvent plus terne, ce sont des cernes. De plus, lorsque certains muscles se relâchent, en particulier le muscle dénommé 10 Orbital septum, il se forme une poche. Il existe bien sr des produits de maquillage qui permettent d'hydrater la peau et/ou de masquer certains défauts ou encore de compenser un manque d'éclat par des produits réfléchissant la lumière ou des pigments blancs éclaircissants ou encore des produits ayant une activité dépigmentante. Mais il n'est pas prévu de traitement plus en profondeur agissant sur les causes de ces altérations. On sait aussi que d'autres facteurs sont impliqués dans l'apparition de cernes ou dans la formation de poches notamment la fatigue, le manque de sommeil, le stress et ainsi qu'indiqué précédemment l'âge. La pollution et la consommation de 20 tabac favorisent aussi de telles altérations. Il y a donc une attente pour des produits permettant de lutter efficacement contre les effets induits par ces facteurs. La présente invention concerne un procédé permettant l'obtention d'un actif issu de levures qui permet d'améliorer l'apparence du contour de l'oeil. Un tel actif permet de remodeler le réseau capillaire et d'agir sur l'hyperpigmentation de la zone suborbitale en ayant simultanément une action d'uniformisation de la couleur de cette zone. Les dessins annexés montrent sur les différents résultats obtenus Les figures 1A à 1E montrent ainsi des vues des différentes évolutions du réseau capillaire. A cet effet, le procédé prévoit de recourir à des extraits de levures, plus particulièrement Saccharomyces Cerevisiae. 1/ Procédé d'obtention du principe actif selon l'invention Le procédé consiste en la succession des étapes suivantes - solubilisation de levures, plus particulièrement Saccharomyces Cerevisiae, dans un milieu aqueux basique à raison d'au moins 200 g/I, 10 - hydrolyse(s) enzymatique(s), - séparation des parties solides / liquides par filtration, décantation ou centrifugation, et - filtration stérilisante. 2/ Composition chimique de l'actif obtenu par le procédé 2-1/ Taux de matière sèche Le taux de matière sèche est réalisé en pesant 10 g de produit placés à l'étuve à 105 C jusqu'à obtention d'un poids constant. bans le cas présent, la quantité de matière sèche est de 20 à 200 g/I, plus 20 particulièrement 38 à 52 g/I. 2-2 Mesure du pH Le pH est mesuré par la méthode potentiométrique, à température ambiante. bans le cas présent, le pH est compris entre 4,0 et 9,0 plus particulièrement 25 dans la plage de 6,0 à 7,0. 2-3 Détermination de la teneur en protéines La mesure de la teneur en protéines est déterminée par la méthode de Lowry. bans le cas présent, la teneur en protéines est comprise entre 7,0 et 85 9/I, plus particulièrement entre 14 et 22g/l. 2-4 Détermination de la teneur en sucres totaux On dose les sucres réducteurs par la méthode de bubois. bans le cas présent, la teneur en sucres réducteurs est comprise entre 9,0 et 96 9/l, plus particulièrement entre 17 et 25g/l. 2-5 Détermination de la quantité de vitamine PP La vitamine PP est dosée selon la méthode de SNELL (Snell E. et ai, 1941, Biol, Chem, 139,675). bans le cas présent, la teneur en vitamine PP du principe actif selon la présente invention est comprise entre 500 et 4 000 ng/ml, plus particulièrement 1000 ng/ml et 2 000 ng/ml 3/ Effets obtenus par la mise en oeuvre du principe actif 3-1 Effets sur la néovascularisation La néovascularisation consiste à déterminer la formation de nouveaux vaisseaux à partir du réseau pré existant. En culture in vitro, cela se traduit sur des cellules endothéliales par la formation de tubules continus à partir de ces cellules, grâce à des migrations sous l'influence de différents facteurs angiogéniques. Ces cellules peuvent ainsi former des vaisseaux sanguins pour constituer une structure capillaire avec des ramifications. Le protocole d'essai consiste à visualiser ces cellules endothéliales ainsi que les ramifications et les structures tubulaires formées. A cette fin, on réalise un immunomarquage en utilisant un anticorps anti-PECAM-1 (plate/et endothelial cel/ adhesion molecule) qui est un marqueur spécifique de ces cellules endothéliales. On cultive ces cellules endothéliales en présence du principe actif selon I' invention dosé à 0,1%; 0,5% et 1,0%. La comparaison est réalisée avec un même milieu de culture de cellules endothéliales en présence de vitamine PP. La visualisation est réalisée au microscope couplé à un système d'images. On mesure le nombre de structures tubulaires et le nombre de ramifications Structures tubulaires Nbr de ramifications Longueur (pm) Variation (%) Témoin 1172 _ 99 1,5 + 0,75 Vitamine PP 2068 244 + 76 8,75 + 1,84 Principe actif 0,1% 1225 + 97 + 5 1,75 0,29 Principe actif 0,5% 1859 220 + 58 7,25 + 1,85 Principe actif 1,0% 2026 35 + 73 10,25 0,55 On constate dans les résultats mesurés à partir de vues au microscope telles que 10 celles des figures 1A à 1E que le principe actif provoque la formation de nouveaux vaisseaux et favorise la restructuration du réseau capillaire. La figure 1A montre une vue d'un témoin, la figure lB montre la néovascularisation obtenue après traitement avec de la vitamine PP. Les figures 1C à 1E montrent des néovascularisations avec respectivement 0,1 %, 15 0,5 % et 1,0 % de principe actif selon la présente invention. 3-2 Effets sur le VEGF (Facteur de croissance de l'endothélium vasculaire) L'objectif est de déterminer la propension du principe actif à stimuler le facteur de croissance vasculaire dit aussi VEGF. Ce facteur est un des facteurs 20 régulant la néovascularisation. Pour y procéder, on traite des kératinocytes ensemencés dans un milieu de culture avec le principe actif selon la présente invention dosé à 0,5%/ ; 1,0%/ et 2,0%, dilué dans ce milieu de culture. Après incubation, on récupère le surnageant cellulaire et le dosage de VEGF est réalisé au moyen d'un kit de dosage ELISA spécifique On constate les résultats suivants: VEGF (pg/g) | Synthèse de VEGF (/%) Témoin 2,73 Principe actif 0,5% 3,30 +21 + 14 Principe actif 1,0% 4,07 +49 9 Principe actif 2,0%0 4,37 +60 + 19 La synthèse de VEGF est stimulée dans une proportion de 60% par rapport au 10 témoin avec 2,0% de principe actif, ce qui est particulièrement attractif. 3-3 Effets sur l'éclaircissement des cernes L'étude est réalisée in vivo contre placebo. L'effet anti-cernes est évalué en comparant la couleur des cernes avant et après 15 traitement avec le principe actif pendant un mois. La formulation est à 4% de principe actif dans un gel carbopol ou en émulsion. Les zones concernées sont choisies sur les volontaires, un cerne traité par la formulation avec principe actif et l'autre traité par le placebo. On mesure préalablement la couleur de la peau à l'aide d'un appareil 20 commercialisé sous la dénomination Chromamètre, modèle CR300. On analyse ensuite les résultats de coloration, 28 jours après traitement biquotidien. Le paramètre mesuré est L: la zone du sombre au pâle, (clarté) ci/ Variation de L avec le principe actif avec gel carbopol: LPr est obtenu avec la formule (J28 - JO) / JO API est aussi obtenu avec la formule (J28 - JO) / JO On obtient la valeur de LA = L\Pr - ,PI soit 3,2%. b/ Variation de L avec le principe actif en émulsion: On calcule ces valeurs de la même façon que précédemment. On constate qu'il y a éclaircissement de la zone des cernes par l'application du principe actif, quelle que soit la formulation galénique. 3-4 Effets sur l'uniformisation du teint L'étude consiste à comparer la couleur de la zone d'un cerne et la couleur de la peau sur le reste du visage, plus particulièrement sur la zone de la patte d'oie. Le principe actif est formulé dans un gel de carbopol et dosé à 4%. Le test est réalisé sur des volontaires pendant 28 jours par application biquotidienne de cette formulation sur des zones déterminées, contre placebo. On mesure ensuite la clarté L. Les résultats sont donnés dans le tableau suivant: JO J28 Zone visage Cerne traité |O/ Zone visage | Cerne traité Principe actif 61,14 57,83 5,4 61,50 58,06 5,6 Placebo 61,14 58,21 4,8 61, 70 56,57 8,3 Différence - - 0,6 - - -2,7 Après 28 jours de traitement, on constate que la différence entre les deux zones reste constante 5,4 pour 5,6% lorsque la zone est traitée par le principe actif tandis qu'elle se dégrade 4,8 à 8,3% lorsque la zone est traitée avec le 10 placebo. Le cerne apparaît plus sombre. Le principe actif selon la présente invention diminue la couleur des cernes. Il y a une uniformisation des différences de couleur, les cernes apparaissent moins marqués. Pour l'ensemble des tests précédents, on peut utiliser comme formulation galénique toute formulation comme un gel, une émulsion, une crème, un onguent ou une lotion. Ce choix sera fonction de la praticité, de la destination et du meilleur accueil commercial. Un tel choix relève des compétences du formulateur final. Le principe actif selon la présente invention pourra être associé à tout autre actif pour obtenir des efficacités synergiques. REVENDICATIONS 1. Procédé d'obtention d'un principe actif permettant de lutter contre les altérations du contour des yeux, notamment les cernes et la pigmentation marquée dans cette zone, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: - solubilisation de levures, plus particulièrement Saccharomyces Cerevisiae dans un milieu aqueux basique à raison d'au moins 200 g/t, - hydrolyse(s) enzymatique(s), - séparation des parties solides / liquides, par filtration, décantation ou centrifugation, et - filtration stérilisante. 2. Principe actif à partir de levures, plus particulièrement Saccharomyces Cerevisiae permettant de lutter contre les altérations du contour des yeux, obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend: - taux de matière sèche compris entre 20 à 200 g/l, 15 - le pH est compris entre 4,0 et 9,0 - la teneur en protéines est comprise entre 7,0 et 85 g/I - la teneur en vitamine PP du principe actif est comprise entre 500 ng/l et 4 000 ng/l. 3. Principe actif à partir de levures selon la revendication 1, caractérisé en 20 ce que qu'il comprend: - taux de matière sèche compris entre 38 à 52 g/I - le pH est compris entre 6,0 et 7,0 - la teneur en protéines est comprise entre 14 et 22 g/I - la teneur en vitamine PP du principe actif est comprise entre 1 000 ng/l et 25 2000 g/l. 4. Composition cosmétique contenant un principe actif selon l'une des revendications 2 ou 3, obtenu à partir de levures notamment Saccharomyces Cerevisiae, selon le procédé de la revendication 1, caractérisée en que le principe actif, associé à une forme galénique adaptée telle qu'un gel, une émulsion, une 5 crème, un onguent ou une lotion, favorise la néovascularisation en conduisant à la formation de nouveaux vaisseaux et à la restructuration du réseau capillaire. 5. Composition cosmétique contenant un principe actif selon l'une des revendications 2 ou 3, obtenu à partir de levures notamment Saccharomyces Cerevisiae, selon le procédé de la revendication 1, caractérisée en que le principe 10 actif, associé à une forme galénique adaptée telle qu'un gel, une émulsion, une crème, un onguent ou une lotion, stimule le facteur de croissance vasculaire dit aussi VEGF et régule la néovascularisation. 6. Composition cosmétique contenant un principe actif selon l'une des revendications 2 ou 3, obtenu à partir de levures notamment Saccharomyces 15 Cerevisiae, selon le procédé de la revendication 1, caractérisée en que le principe actif, associé à une forme galénique adaptée telle qu'un gel, une émulsion, une crème, un onguent ou une lotion, stimule le facteur de croissance vasculaire dit aussi VEGF et régule la néovascularisation. 7. Composition cosmétique contenant un principe actif selon l'une des 20 revendications 2 ou 3, obtenu à partir de levures notamment Saccharomyces Cerevisiae, selon le procédé de la revendication 1, caractérisée en que le principe actif, associé à une forme galénique adaptée telle qu'un gel, une émulsion, une crème, un onguent ou une lotion, conduit à l'éclaircissement des cernes. 8. Composition cosmétique contenant un principe actif selon l'une des 25 revendications 2 ou 3, obtenu à partir de levures notamment Saccharomyces Cerevisiae, selon le procédé de la revendication 1, caractérisée en que le principe actif, associé à une forme galénique adaptée telle qu'un gel, une émulsion, une -r 2851576 il crème, un onguent ou une lotion, conduit à l'uniformisation du teint de la zone des cernes avec le reste du visage.