FR 2850397 A1 20040730 FR 0301015 A 20030129 METHODE POUR IDENTIFIER DES COMPOSES BIOLOGIQUEMENT ACTIFS DANS LE TRAITEMENT DE LA DEPRESSION La présente invention concerne le domaine du 5 traitement de la dépression et, plus particulièrement, la mise en oeuvre de nouvelles méthodes pour identifier des composés biologiquement actifs dans le traitement de ladite pathologie. La dépression est l'un des troubles psychologiques 10 les plus fréquents. Le risque de présenter une dépression au cours de la vie varie entre 5 et 25 %, selon les études et selon les sujets testés (hommes ou femmes). Malgré cette grande fréquence, cette pathologie reste méconnue et semble impliquer des facteurs biologiques, 15 psychologiques et/ou sociaux. La dépression est diagnostiquée lorsque différents symptômes sont présents chez les patients. Parmi les critères retenus dans le diagnostic de la dépression, se trouvent notamment l'humeur dépressive, la perte d'intérêt ou de plaisir, la perte (ou le gain) de poids inexpliqué, 20 l'insomnie (ou l'hypersomnie), la baisse d'énergie ou la fatigue, la faible estime de soi, etc.... Les molécules antidépressives les plus récentes et actuellement les plus prescrites sont les inhibiteurs sélectifs de la recapture des monoamines et surtout de la sérotonine. Les 25 antidépresseurs sont généralement efficaces sur toute la gamme des épisodes dépressifs. Cependant le taux de réponse n'est que de 70 % dans le cas de dépressions légères, et ce taux diminue avec la sévérité des épisodes (La santé mentale: nouvelles conceptions, nouveaux espoirs. Rapport sur la santé dans le 30 monde. OMS 2001, Genève). Par ailleurs, les antidépresseurs disponibles sur le marché ont des effets secondaires. Ces effets indésirables courants des antidépresseurs sont: l'hypotension orthostatique, la somnolence, les insomnies, les vertiges, les nausées, la perte ou le gain de poids, la perte de la libido.... Il existe donc un réel besoin d'identifier de nouveaux antidépresseurs qui puissent éventuellement être prescrits aux patients résistants aux traitements disponibles et aux autres, et qui présentent moins d'effets secondaires que ceux décrits ci-dessus. Les sous-unités des canaux potassium (environ 80 gènes chez les mammifères) peuvent être regroupées en 3 grandes familles structurales selon qu'elles possèdent 2, 4 ou 6 10 segments transmembranaires (STM) suivant la topologie prédite par l'analyse de la séquence génétique. La caractéristique commune à toutes les sous-unités des canaux potassium est la présence d'un motif très conservé, le domaine " P ", ainsi appelé car il entre dans la constitution du pore que forme le 15 canal à travers la membrane plasmique. Les sous-unités des canaux K+ appartenant aux familles à 2 et 6 STM ne possèdent qu'un seul domaine P et s'assemblent en tétramère pour former un canal fonctionnel. Les sous-unités à 4 STM possèdent 2 domaines P et fonctionnent en dimères (Lesage et al. 1996 EMBO 20 J. 15, 6400-7). C'est à cette famille structurale qu'appartiennent les canaux concernés par la présente invention. La famille des canaux potassium à 2 domaines P comprend 14 membres dont les gènes correspondants sont désignés 25 KCNK1 à KCNK17 (Lesage & Lazdunski, 2000, Am J Physiol. 279: 793-801) : - les canaux présentant des propriétés de rectification entrante peu marquées, les canaux TWIK-1 et TWIK-2 appartiennent à ce groupe; - les canaux activés par les acides gras insaturés et par les étirements, les canaux TREK-1, TREK-2 (pour " TWIKRelated K+ channel " et TRAAK (pour " TWIK-Related Arachidonic Acid-stimulated K+ channel ") appartiennent à ce groupe; - les canaux dépendant du pH et activés par l'alcalose, les canaux TALK1 et TALK2 (pour " TWIK-related ALkalinactivated K+ channel ") appartiennent à ce groupe; les canaux dépendant du pH et inhibés par l'acidose, 5 les canaux TASK1, TASK2 et TASK3 (pour " TWIK-Acid-sensitive background K+ channel ") appartiennent à ce groupe. Des canaux potassium à 2 domaines P ont été détectés dans tous les tissus examinés, que se soit chez 10 l'homme, la souris ou le rat. Chaque canal a un profil d'expression qui lui est propre conférant à chaque tissu une combinaison unique de canaux potassium à 2 domaines P. Toutefois, les études d'expression des canaux à 2 domaines P menées chez l'homme et l'animal, révèlent des différences 15 d'expression tissulaire selon les espèces. A titre d'exemple, nous pouvons citer l'expression du canal TREKi dans les coeurs de souris et humains (Lesage & Lazdunski, 2000, Am J Physiol. 279: 793-801). Certains canaux potassium à 2 domaines P tels que 20 les canaux TREK-1, TREK-2 et TASK-1, sont activés par les anesthésiques volatiles et constituent en cela des cibles potentielles pour l'identification et le développement de nouvelles molécules anesthésiantes (Patel et al., 1999, Nature Neuroscience, vol. 2, pages 422-6). Cette utilisation fait 25 l'objet de la demande de brevet internationale publiée le 17 aot 2000 sous le numéro WO 00/47738. Les inventeurs ont créé une lignée de souris génétiquement modifiées dépourvues de canaux potassium de type 30 TREK-1. Ils ont montré que lorsque ces souris sont soumises à des tests comportementaux destinés à mesurer l'efficacité de molécules antidépressives, elles présentent un comportement comparable à celui de souris sauvages traitées par des antidépresseurs existants. Ces observations suggèrent fortement que les canaux potassium à 2 domaines P, et plus particulièrement les canaux K+ à 2 domaines P choisis parmi les canaux TREK-1, TREK-2 et TRAAK constituent de nouvelles cibles potentielles pour le développement de molécules antidépressives. Par conséquent, la présente invention concerne la description de cibles moléculaires telles que les canaux potassium à deux domaines P et, plus particulièrement les canaux TREK-1, TREK-2 et TRAAK susceptibles d'être utilisées 10 pour identifier de nouveaux composés biologiquement actifs dans le traitement de la dépression. L'invention concerne également les méthodes à employer utilisant ces cibles pour la découverte de nouveaux médicaments. Par " composé biologiquement actif ", dans le 15 cadre de la présente invention, on entend toute molécule chimique naturelle ou synthétique comme à titre d'exemple et de façon non exhaustive des protéines, des peptides, des lipoprotéines, des polysaccharides, des composés chimiques simples différents de macromolécules, etc.... La validation de 20 l'effet biologique antidépresseur dudit composé peut être réalisée en utilisant un modèle animal (y compris les souris génétiquement modifiées décrites dans la présente invention), comme des souris ou des rats que l'on soumet à des tests reconnus tels que le test de la nage forcée et celui de " la 25 suspension par la queue ". Ces tests sont expliqués plus en détails dans la partie expérimentale ci-après. La présente invention concerne une méthode pour identifier un composé biologiquement actif dans le traitement 30 de la dépression comprenant les étapes suivantes: a) mettre en contact, avantageusement in vitro, ledit composé biologiquement actif avec un canal potassium à 2 domaines P ou un canal fonctionnellement équivalent; b) mesurer la modulation éventuelle de l'activité basale du canal potassium à 2 domaines P ou du canal fonctionnellement équivalent par ledit composé biologiquement actif. Dans une forme de mise en oeuvre préférée, l'étape (a) de la méthode objet de la présente invention comprend les étapes suivantes: i) mettre en culture des cellules qui expriment un 10 canal potassium à 2 domaines P ou un canal fonctionnellement équivalent; ii) incuber lesdites cellules avec ledit composé biologiquement actif. De façon avantageuse, les cellules cultivées à l'étape (i) de la méthode objet de la présente invention sont des cellules qui surexpriment un canal potassium à 2 domaines P ou un canal fonctionnellement équivalent. Toute cellule qui peut surexprimer à sa surface, de façon transitoire ou de façon 20 constitutive, un canal potassium à 2 domaines P dans une conformation adéquate pour le transport du potassium est utilisable dans le cadre de la présente invention. De telles cellules comprennent des cellules eucaryotes comme des levures, des cellules d'invertébrés et des 25 cellules de vertébrés, notamment mammifères. Des cellules de mammifères utilisables dans le cadre de l'invention sont, à titre d'exemple mais de façon non exhaustive, des cellules issues de cultures primaires, des cellules neuronales, des fibroblastes, des cellules cardiaques, des cellules COS, des 30 cellules CHO (pour " Chinese Hamster Ovary "), des cellules embryonnaires, des cellules HELA. Des cellules de vertébrés autres que de mammifères utilisables dans le cadre de l'invention sont, à titre d'exemple mais de façon non exhaustive, des oocytes d'amphibiens comme des oocytes de Xenopus laevis. Des cellules d'invertébrés utilisables dans le cadre de l'invention sont, à titre d'exemple mais de façon non exhaustive, des cellules d'insectes comme les cellules Sf9 de Spodoptera frugiperda. Des cellules de levures utilisables dans 5 le cadre de l'invention sont, à titre d'exemple mais de façon non exhaustive, les cellules de Saccharomyces cerevisiae. Une molécule d'acide nucléique codant un canal potassium à 2 domaines P ou un canal fonctionnellement 10 équivalent ou un vecteur tel que décrit ci-dessous peuvent être utilisés pour transfecter les cellules qui surexpriment, de façon transitoire ou constitutive, un canal potassium à 2 domaines P. L'introduction d'un acide nucléique dans des cellules de façon à obtenir l'expression de la protéine codée 15 par ledit acide nucléique peut être réalisée par toute méthode connue de l'homme du métier telles que des méthodes de transfection dans des cellules de constructions d'acide nucléique appropriées ou des méthodes de microinjection d'ARN codant ladite protéine dans des cellules. Les méthodes de 20 transfection utilisables dans le cadre de l'invention sont, à titre d'exemple et de façon non exhaustive, l'électroporation, la précipitation au phosphate de calcium, la lipofection, l'infection virale, etc.... A titre d'exemples, une méthode utilisable dans le 25 cadre de la présente invention est brièvement décrite ci-après. L'homme du métier pourra apporter toute modification au protocole décrit sans toutefois sortir du cadre de la présente invention. La séquence codant un canal potassium à deux domaines P est insérée entre les séquences non-codantes 5' et 30 3' d'une protéine de Xenopus laevis (telle que la globine) dans un vecteur approprié tel que le vecteur pEXO (Lingueglia et al., 1994, J. Biol. Chem., vol. 269, pages 13726-39). La construction est introduite dans un type cellulaire approprié en vue de la réplication dudit vecteur et/ou de la transcription de l'ARN. De façon alternative, le vecteur peut être utilisé comme matrice pour la transcription in vitro. L'ARN complémentaire est transcrit et injecté dans une cellule appropriée, telle qu'un oocyte de Xenopus laevis. Comme indiqué ci-dessus, tout canal potassium à 2 domaines P peut être utilisé dans le cadre de la présente invention. De façon avantageuse, le canal potassium à 2 domaines P utilisable est choisi dans le groupe comprenant le canal TREK-1, le canal TREK-2 et le canal TRAAK. Par conséquent, la molécule d'acide nucléique codant un canal potassium à 2 domaines P ou un canal fonctionnellement équivalent est, tout particulièrement, choisie parmi une molécule codant un canal TREK-1, une molécule codant un canal 15 TREK-2 et une molécule codant un canal TRAAK. Cette molécule d'acide nucléique peut être, à titre d'exemple et de façon non exhaustive, une molécule d'acide nucléique de mammifères comme une molécule d'origine humaine, de souris, de rat.... L'homme du métier est capable d'identifier dans 20 les bases de données telles que Genbank des molécules d'acide nucléique utilisables dans le cadre de la présente invention. Dans le tableau 1 ci-dessous, sont présentées les références, dans Genbank, de canaux potassium à deux domaines P utilisables dans le cadre de l'invention et d'origine humaine. 25 Tableau 1. I Références Canal TWIK-1 NM 002245 Canal TWIK-2 NM 004823 Canal TWIK-3 NM_033456 NM_033455 NM_033347 NM_033348 NM 005717 Canal TREK-1 NM 014217 Canal TREK-2 NM_138318 NM_138317 NM 021161 Canal TASK-1 NM 002246 Canal TASK-2 NM 003740 Canal TRAAK NM_016611 NM_033311 NM 033310 Canal TALK-1 NM 032115 L'homme du métier est à même d'identifier à partir des séquences des canaux potassium à deux domaines P connues dans l'état de la technique des séquences d'homologues de ces 5 canaux non encore décrites. Dans cette identification, l'homme du métier pourra utiliser des amorces spécifiques de chacun des canaux pour identifier par PCR la séquence codant ce canal dans une autre espèce. En raison de la redondance du code génétique, 10 d'autres séquences que les séquences décrites ci-dessus et codant des séquences en acides aminés identiques sont utilisables dans le cadre de l'invention. Ces séquences incluent, mais ne sont pas limitées à des séquences comprenant toute ou portion d'une séquence codant un canal potassium à 2 15 domaines P qui a été modifiée par substitution de différents codons qui codent des acides aminés équivalents, produisant ainsi une mutation silencieuse. Par " acide aminé équivalent ", il faut comprendre, par exemple, un acide aminé qui appartient à la même classe d'acides aminés que l'acide aminé sauvage. 20 L'homme du métier connaît les classes d'acides aminés qui comprennent: les acides aminés polaires (hydropobes), - les acides aminés polaires neutres, - les acides aminés chargés positivement (basiques), - les acides aminés chargés négativement (acides). Par " canal fonctionnellement équivalent à un canal potassium à 2 domaines P >, dans le cadre de la présente invention, on entend un canal qui présente une séquence en acides aminés proche de celle d'un canal potassium à 2 domaines P choisi. Cette séquence en acides aminés présente au moins 90% 10 d'identité, de préférence, au moins 95% d'identité et, tout particulièrement, au moins 99% d'identité avec la séquence en acides aminés du canal potassium à 2 domaines P choisi. De plus, les propriétés structurelles et fonctionnelles entre les deux canaux sont identiques. L'homme du métier est capable sur 15 la base des articles relatifs à chacun des canaux potassium à 2 domaines P utilisables dans le cadre de la présente invention de définir des protocoles afin de confirmer l'identité des propriétés entre ces deux types de canaux. Le vecteur qui peut être utilisé dans le cadre de la présente invention pour transformer des cellules surexprimant un canal potassium à deux domaines P ou un canal fonctionnellement équivalent comprend au moins une molécule d'acide nucléique codant un canal potassium à deux domaines P 25 ou un canal fonctionnellement équivalent telle que décrit cidessus, avantageusement associée à des séquences contrôle adaptées au procédé d'expression ou de production desdits canaux dans un hôte cellulaire. Le vecteur utilisé est choisi en fonction de l'hôte (cellules cultivées) dans lequel il doit 30 être transféré ; il peut s'agir de tout vecteur tel qu'un plasmide. L'exemple de protocole donné ci-dessus décrit le vecteur pEXO utilisable pour la transfection d'oocytes de Xenopus laevis. La préparation de ces vecteurs tout comme la production ou l'expression d'un canal potassium à deux domaines P dans un hôte cellulaire peuvent être réalisées par toutes les techniques de la biologie moléculaire et de l'ingénierie génétique bien connues de l'homme du métier. La surexpression effective à la surface d'une 5 cellule transfectée par une molécule d'acide nucléique codant un canal potassium à deux domaines P ou un équivalent fonctionnellement équivalent peut être facilement vérifiée en utilisant des anticorps spécifiques dudit canal potassium. Cette vérification peut mettre en oeuvre des techniques 10 d'hybridation in situ courantes. Un composé capable de moduler l'activité basale d'un canal ionique et, plus particulièrement, d'un canal potassium à 2 domaines P est un composé qui " ouvre " ou 15 " ferme " lesdits canaux et module donc les courants ioniques passant à travers ces canaux. Un composé capable d'ouvrir un canal ionique est également appelé activateur ou agoniste. Un composé qui, quant à lui, ferme un canal ionique est appelé un inhibiteur ou antagoniste. Afin d'étudier la modulation de 20 l'activité basale d'un canal potassium à deux domaines P, il convient d'étudier la modulation des courants ioniques passant à travers ces canaux. Dans le cadre de canaux potassium à deux domaines P, les courants ioniques étudiés sont les courants potassium. Par conséquent, le but de l'étape (b) de la méthode 25 objet de la présente invention est de mesurer, par tous les moyens appropriés, la modulation des courants ioniques. Les résultats obtenus par les inventeurs sur les souris dans lesquelles le gène codant la protéine TREK-1 a été inactivé présentés ci-après suggèrent que des composés capables 30 de " fermer " les canaux potassium à 2 domaines P, et, plus particulièrement, de " fermer " les canaux potassium à 2 domaines P choisis parmi les canaux TREK-1, TREK-2 et TRAAK sont susceptibles d'être d'utilisés dans le traitement de la dépression. Ainsi, de façon avantageuse, la modulation de 1l l'activité des canaux potassium à deux domaines P ou de canaux fonctionnellement équivalents mesurée à l'étape (b) de la méthode objet de la présente invention est une inhibition de l'activité de ces canaux. Cette inhibition peut être partielle ou complète en fonction du composé biologiquement actif testé. L'homme du métier connaît différentes techniques capables de mesurer les courants ioniques traversant des canaux ioniques comme, par exemple, la technique de voltage imposé, la 10 technique de double microélectrodes ou la technique de patchclamp utilisée dans la configuration cellule attachée, cellule entière, patch excisé ou patch perforé. Ces techniques sont connues de l'homme du métier qui sera tout à fait à même de les mettre en oeuvre dans le cadre de la présente invention en 15 utilisant des cellules capables de surexprimer à leur surface un canal potassium à deux domaines P ou un canal fonctionnellement équivalent (Maingret et al., 2000, J. Biol. Chem., vol. 275, pages 10128-33; " Principes et techniques en électrophysiologie ", Extrait de la thèse de Fabrice Duprat, 20 www.ipmc. cnrs.fr/-duprat/cyberfac/documents/electrophy.pdf). Toutes techniques permettant de détecter l'activité d'un canal ionique in vivo ou in vitro, par visualisation directe ou indirecte grâce a des composés 25 fluorescents (imagerie) radioactifs (techniques de flux) ou autres (biosensor, mort cellulaire) sont également utilisables dans le cadre de la présente invention. Il est évident que la mesure de la modulation de 30 l'activité basale de canaux potassium à deux domaines P utilisables dans le cadre de la présente invention nécessite de mesurer, tout d'abord, l'activité desdits canaux en absence du composé biologiquement actif. Cette mesure effectuée, une mesure dans les mêmes conditions expérimentales mais en présence du composé biologiquement actif à tester devra être effectuée afin de mesurer la modulation de l'activité basale. La présente invention concerne également un kit 5 pour la mise en oeuvre d'une méthode pour identifier un composé biologiquement actif dans le traitement de la dépression. Ce kit comprend de façon avantageuse des cellules capables de surexprimer à leur surface un canal potassium à deux domaines P et plus particulièrement un canal potassium à deux domaines P 10 choisi parmi les canaux TREK-1, TREK-2 et TRAAK. Ce kit peut également contenir tout tampon nécessaire à la mesure de l'activité basale des canaux potassium. La présente invention concerne également des 15 méthodes pour traiter ou prévenir la dépression mettant en òuvre des composés identifiés dans les méthodes décrites cidessus. La présente invention concerne donc l'utilisation d'inhibiteurs de canaux potassium à deux domaines P pour la 20 préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention de la dépression. De façon avantageuse, la présente invention concerne l'utilisation d'inhibiteurs de canaux potassium à deux domaines P choisis parmi les canaux TREK-1, les canaux TREK-2 et les canaux TRAAK. A titre d'exemples et de 25 façon non-exhaustive, nous pouvons envisager d'utiliser comme inhibiteurs d'un canal potassium un anticorps dirigé contre ledit canal et, de façon préférée, un anticorps monoclonal. D'autres avantages et caractéristiques de 30 l'invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent concernant l'étude de la dépression chez des souris dont le gène kcnk2 codant la protéine TREK-1 a été inactivé. Ces exemples sont donnés à titre illustratif et ne sauraient être interprétés comme limitant la portée de l'invention. Ils font référence aux figures jointes dans lesquelles: - la figure 1 présente la durée d'immobilité de souris contrôle sauvages TREK1 +/+ et de souris Knock Out (KO TREK1 -/-) dans le test de " suspension par la queue" ; - la figure 2 présente la durée d'immobilité de souris contrôle sauvages TREK1 +/+ et de souris Knock Out (KO TREK1 -/-) dans le test de la nage forcée; - la figure 3 compare la durée d'immobilité, dans 10 le cadre du test de la nage forcée, obtenue pour des souris sauvages non traitées ou traitées par de l'imipramine à 15 mg/kg ou par de la fluoxetine à 16 mg/kg. I. Souris KO TREK-1 -/-. Afin d'étudier le rôle physiologique des canaux potassium à deux domaines P, les inventeurs ont réalisé l'inactivation (Knock Out, KO) du gène kcnk2 codant la protéine TREK-1 chez la souris. Les souris KO (TREK1 -/-) ont été soumises à différents tests permettant d'évaluer leur 20 comportement. Les souris génétiquement modifiées, dépourvues de canal TREK-1 (TREK-1 KO) ont été fabriquées par recombinaison homologue dans des cellules ES (Embryonic Stem cells) de souris 129, selon des techniques de biologie moléculaire et cellulaire 25 et d'embryologie, bien connues de l'homme du métier (Hogan et al. 1994. Manipulating the Mouse Embryo 2d ed., Cold spring Harb. Press). Le vecteur de ciblage est construit à partir d'un fragment de restriction Bgl2/EcoRl d'ADN génomique de souris 30 129 contenant les exons 1 à 3 du gène KCNK2. L'inactivation du gène est réalisée par délétion de l'exon 3 qui code notamment pour le premier segment transmembranaire de la sousunité TREK1. L'introduction dans le vecteur de ciblage du gène de résistance à la néomycine sous contrôle d'un promoteur indépendant (Promoteur PGK de la Phospho Glycétrate Kinase) permet la sélection des événements de recombinaison dans les clones de cellules ES. Le vecteur ainsi construit est introduit dans les cellules ES par électroporation. Les cellules ES sont 5 ensuite cultivées en milieu sélectif (antibiotique: G-418) pendant 8 jours. Les événements de recombinaison homologue sont identifiés par analyse (PCR pour Polymérase Chain Reaction et technique de Southern blot) de l'ADN des clones de cellules ES résistants. Des souris chimériques mâles sont générées par 10 injection de cellules ES positives dans des blastocystes de souris C57Bl/6. Ces souris sont ensuite accouplées avec des femelles C57Bl/6 pour s'assurer de la transmission germinale de la mutation et fonder la lignée de souris TREK-1 KO. L'ensemble des études comportementales, et en 15 particulier celles présentées ci-après ont été menées sur des souris TREK-1 KO mâles, âgées de 8 à 10 semaines, issues de la 8ème génération de croisements successifs sur fond génétique C57Bl/6. Chaque animal n'a été soumis qu'à un seul test et pour un seul essai. II. Procédure d'évaluation de la dépression. Chez la souris, les tests permettant d'évaluer l'état de dépression sont basés sur le comportement de résignation. Ils mesurent l'incapacité de l'animal à rechercher 25 une échappatoire à une situation adversative. Cette absence de volonté, cette résignation, traduit une désespérance de l'animal assimilable à un état dépressif. Les deux tests actuellement reconnus et utilisés pour prédire l'efficacité de substances antidépressives chez l'homme ou l'animal sont: - le test de la nage forcée ou test de Porsolt (Porsolt et al., 1977, Arch. Int. Pharmacodyn., vol. 229, pages 327-336) - le test de " suspension par la queue " (Crawley, 1999, Brain Research, vol. 935, pages 18-26; Crawley & Paylor, 1997, Hormone and Behavior, vol. 31, pages 197-211; Cryan et al., 2002, TIPS, vol. 23, pages 1238-45; Nestler et al., 2002, Neuron, vol. 34, pages 13-25). Les souris Knock Out TREK1 -/ont été soumises à ces deux tests. 1. Le test de la nage forcée. La souris est placée dans un cylindre de plexiglas de 30 cm de haut et de 15 cm de diamètre, rempli aux 2/3 d'eau à 28WC, et le comportement natatoire de l'animal est observé 10 sur une durée de 6 minutes. Après un cours moment de panique, l'animal se met à nager. Pendant toute la durée du test, la souris va ainsi alterner des périodes de nage active avec des périodes pendant lesquelles elle se laisse flotter. La mesure cumulée de ces périodes de flottaison au cours des 4 dernières 15 minutes du test reflète l'état dépressif de l'animal, dans le sens o elles correspondent à un renoncement à chercher une échappatoire à cette situation. Sur des souris sauvages, les antidépresseurs classiques comme l'imipramine (Tofranil ) ou la fluoxetine 20 (Prozac ) réduisent le temps de flottaison et augmentent donc le temps de nage. 2. Le test de " suspension par la queue ". La souris est suspendue par l'extrémité de la 25 queue. Dans cette situation, l'animal alterne les périodes d'activité o il se débat en cherchant à se redresser et les périodes d'inactivité o il se laisse pendre sans mouvement. Selon le même principe que dans le précédent test, le temps cumulé d'inactivité sur une durée de 6 minutes est mesuré. Dans ce test également, les antidépresseurs utilisés en thérapeutique réduisent le temps d'inactivité au profit du temps d'activité. III. Résultats. Les résultats obtenus à ces différents tests sont présentés aux figures 1 à 3. Ces résultats mettent en évidence une différence significative entre les souris KO TREK1 -/- et les souris contrôles sauvages (TREKI +/+). Cette différence 5 s'exprime en faveur d'une différence du temps d'immobilité dans chacun des tests (Figures 1 et 2). Dans le test de la nage forcée, la différence de comportement entre les souris KO TREK1 -/- et les souris contrôles est très comparable à celle que l'on peut observer au 10 cours du même tests entre des souris sauvages, traitées avec des antidépresseurs et des souris sauvages non traitées. Les souris KO TREK1 -/- présentent, en fait, un comportement identique à celui de souris sauvages traitées avec des antidépresseurs (Figure 3). Ces résultats indiquent donc le rôle physiologique important que le canal TREK-1 joue dans les processus neuronaux qui engendrent des comportements dépressifs et font apparaître ce canal comme une cible pour le développement de futures molécules antidépressives. REVENDICATIONS 1) Méthode pour identifier un composé biologiquement actif dans le traitement de la dépression comprenant les étapes suivantes: a) mettre en contact in vitro ledit composé biologiquement actif avec un canal potassium à 2 domaines P ou un canal fonctionnellement équivalent; b) mesurer la modulation éventuelle de l'activité 10 basale du canal potassium à 2 domaines P ou du canal fonctionnellement équivalent par ledit composé biologiquement actif. 2) Méthode selon la revendication 1, caractérisée 15 en ce que ladite étape (a) comprend les étapes suivantes: i) mettre en culture des cellules qui expriment un canal potassium à 2 domaines P ou un canal fonctionnellement équivalent; ii) incuber lesdites cellules avec ledit composé 20 biologiquement actif. 3) Méthode selon la revendication 2, caractérisée en ce que les cellules cultivées à l'étape (i) sont des cellules qui surexpriment un canal potassium à 2 domaines P ou 25 un canal fonctionnellement équivalent. 4) Méthode selon l'une quelconque des revendications 2 ou 3, caractérisée en ce que lesdites cellules comprennent des cellules eucaryotes comme des levures, des 30 cellules d'invertébrés et des cellules de vertébrés, notamment mammifères. 5) Méthode selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisée en ce que lesdites cellules sont transfectées avec une molécule d'acide nucléique codant un canal potassium à 2 domaines P ou un canal fonctionnellement équivalent. 6) Méthode selon l'une quelconque des revendications 2 à 5, caractérisée en ce que lesdites cellules sont transfectées avec un vecteur. 7) Méthode selon la revendication 6, caractérisée 10 en ce que ledit vecteur comprend au moins une molécule d'acide nucléique codant un canal potassium à deux domaines P ou un canal fonctionnellement équivalent, avantageusement associée à des séquences contrôle adaptées. 8) Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le canal potassium à 2 domaines P utilisable est choisi dans le groupe comprenant le canal TREK-1, le canal TREK-2 et le canal TRAAK. 9) Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ladite étape (b) consiste à mesurer la modulation des courants ioniques. 10) Méthode selon l'une quelconque des 25 revendications précédentes, caractérisée en ce que ladite étape (b) consiste à mesurer l'inhibition de l'activité des canaux potassium à deux domaines P ou des canaux fonctionnellement équivalents. 11) Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ladite étape (b) consiste à mesurer la fermeture des canaux potassium à deux domaines P ou des canaux fonctionnellement équivalents. 12) Kit pour la mise en oeuvre d'une méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend des cellules capables de surexprimer à leur surface un canal potassium à deux domaines P et tout tampon 5 nécessaire à la mesure de l'activité basale des canaux potassium. 13) Utilisation d'un anticorps dirigé contre un canal potassium à deux domaines P pour la préparation d'un 10 médicament destiné au traitement et/ou à la prévention de la dépression. 14) Utilisation selon la revendication 13, caractérisée en ce que ledit anticorps est un anticorps dirigé 15 contre un canal potassium à deux domaines P choisis parmi les canaux TREK-1, les canaux TREK-2 et les canaux TRAAK.