FR 2843589 A1 20040220 FR 0210272 A 20020813 La présente invention a trait à un procédé de préparation de la 6-hydroxy- 4-sphingénine, qui est un précurseur de céramides. La présente invention a également pour objet la 6hydroxy-4-sphingénine obtenue dans un degré de pureté supérieur ou égal à 90%, les compositions la contenant, et son utilisation dans des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques, notamment dermatologiques. Les céramides du stratum corneum humain, indispensables à sa fonction barrière, sont composés d'une base sphingode condensée à un acide gras. Ces céramides peuvent être divisés en quatre classes selon le type de leur base sphingode, qui sont la sphinga10 nine, la sphingénine, la phytosphingosine et la 6-hydroxy-4- sphingénine. Contrairement aux trois autres bases de la classification, il n'existe à ce jour aucun procédé de préparation de la 6-hydroxy-4-sphingénine dans un degré de pureté satisfaisant. La présente invention a pour objet un procédé original et novateur de préparation de 15 cette base, notamment par extraction à partir de cellules animales ou végétales, en particulier à partir de stratum humain. La demanderesse a découvert que le choix et l'optimisation des solvants d'extraction employés permet de mettre au point un procédé de préparation de cette base avec un rendement satisfaisant et une pureté supérieure à 90%, ce qui n'a jamais été réalisé dans l'art antérieur. On sait seulement que la base 620 hydroxy-4-sphingénine est présente dans certaines structures céramidiques extraites de stratum corneum humain, comme décrit dans "Journal of Lipid Research, 35, 2060-2068, 1994". La présent invention a pour objet un procédé de préparation d'un composé de formule (I): 25 CH3-(CH2) -CHOH CH--CH-CHOH-CH-CH2R (I) NH2 dans laquelle: - n est un entier compris entre 3 et 17 inclus, et - R représente un atome d'hydrogène, un radical sulfate -O-SO3 ou un radical phosphate 30 -O-P03, ainsi que ses sels, de degré de pureté supérieur ou égal à 90% de préférence 95%, de préférence encore 98% en poids, qui comporte au moins une étape d'extraction par une phase liquide comprenant un mélange d'un solvant organique et d'une solution aqueuse basique miscitle dans ledit solvant organique. On entend par solution aqueuse basique, une solution aqueuse dont le pH, mesuré à C, est supérieur ou égal à 7. Le pH de la solution aqueuse basique ?st de préférence strictement supérieur à 7. La solution aqueuse basique a un pH compris entre 8 et 12, de préférence entre 9 et 11, de préférence entre 10 et 10,5. Le rapport volumique du solvant organique et de la solution aqueuse basique est de préférence compris entre 150/1 et 300/1, de préférence encore entre 170/1 et 280/1, préférentiellement entre 195/1 et 270/1. Selon un mode de mise en oeuvre, la solution aqueuse basique est l'amloniaque (2N). 15 Le solvant organique comprend avantageusement un premier solvant d' ndice de polarité compris entre 2,5 et 5,5, de préférence entre 3 et 5, de préférence encore entre 3,5 et 4,5. Le solvant organique comprend avantageusement un deuxième solvant, miscible dans le premier, d'indice de polarité compris entre 3,5 et 6,5, compris de préférence entre 20 4 et 6, de préférence encore entre 4,5 et 5,5. Dans ce mode de mise en oeuvre, la polarité du deuxième solvant est supérieure à celle du premier. L'indice de polarité est mesuré selon la méthode de Snyder. Le rapport volumique du deuxième solvant et de la solution aqueuse bac ique est avanta25 geusement compris entre 1/1 et 100/1, de préférence entre 5/1 et 80/1. Le deuxième solvant est de préférence un solvant protique, comme le me thanol. Le premier solvant est de préférence un solvant aprotique, comme le chlqroforme ou le n30 propanol. Selon un mode de mise en oeuvre, le procédé comprend une série de) lusieurs étapes d'extraction. Le rapport volumique du premier solvant et du deuxième sIolvant est avantageusement diminué d'une étape à l'autre. Au cours de la première étae, le rapport vo35 lumique est inférieur à 100/1, de préférence 50/1. Au cour de la dernière.tape, le rapport volumique est supérieur à 1/1, de préférence 2/1. - - 2O 25 30 35 L'étape d'extraction ou la série de plusieurs étapes peut être renouvelée nécessaire, en particulier deux fois. Selon un mode de mise en oeuvre préféré, la phase liquide d'extraction lange chloroforme/méthanol/ammoniaque. De façon avantageuse, le 1 chloroforme/méthanol/ammoniaque est compris entre 190/5/1 et 190/80/ 1 L'extraction peut être réalisée par chromatographie sur couche mince, P phie liquide haute performance ou par chromatographie sur colonne remp Selon un mode de mise en oeuvre, l'extraction est réalisée par chromat x che mince, de préférence en plusieurs étapes, avantageusement en q diminue avantageusement d'une étape à l'autre le rapport vc1l forme/méthanol/ammoniaque d'une valeur inférieure à 190/5/1 à une vaIl 190/80/1. Dans ce mode de mise en oeuvre, on augmente avantageuse r de migration d'une étape sur l'autre. Selon un autre mode de mise en oeuvre, I'extraction est réalisée par c liquide haute performance. On applique avantageusement à la phase m de concentration du mélange premier solvant/deuxième solvant compr. 1/1, de préférence entre 50/1 et 2/1. Le procédé de l'invention peut comporter une première étape consistant chimique du composé de formule (I) ou en une extraction à partir de cell végétales, en particulier à partir d'épiderme ou de stratum humain. Une extraction à partir de cellules animales ou végétales conduit à un que sous la forme d'une phase organique. Différents modes d'extra l'homme du métier peuvent être utilisés. En particulier, les lipides de l'épiderme humain peuvent être extraits à provenant de chirurgie plastique, de strippings vernis, ou directemen grâce à des turbines, de même que par toute autre méthode permettar totalité ou une partie des lipides épidermiques. Ces procédés peuvent qués aux épidermes d'animaux. plusieurs fois si omprend un mépport volumique ar chromatograplie. graphie sur coujatre étapes; on umique chloroeur supérieure à ment la distance chromatographie)bile un gradient s entre 100/1 et en une synthèse iles animales ou chantillon lipidi'tion connus de )artir de stratum de volontaires t de prélever la 3ussi être appli- Une extraction par turbines consiste en le passage de solvants au travers du stratum corneum pour entraîner les lipides. L'échantillon lipidique obtenu se trouve directement sous forme solvatée en milieu organique. On utilise le plus souvent un mélange d'hexane/éthanol dans les proportions 2/3. Une extraction à partir de strippings vernis consiste en l'application d'une bande adhésive sur la peau de volontaires, puis en l'arrachage de l'ensemble entraînant par la même une partie du stratum, ou à partir de stratum provenant de chirurgie plastique. Les échantil10 Ions sont mis en présence d'un mélange de chloroforme et de méthanol, par exemple dans les proportions 2/1, de préférence sous agitation. Cette opération peut être renouvelée une fois ou plus si nécessaire. Selon un premier mode de réalisation de l'invention, lorsque le procédé de l'invention 15 comporte une première étape consistant la préparation d'un échantillon lipidique extrait de cellules animales ou végétales, l'échantillon lipidique est avantageusement hydrolysé. L'hydrolyse est de préférence réalisée en milieu basique. Ce premier mode de réalisation est préféré. Selon un deuxième mode de réalisation de l'invention, lorsque le procédé de l'invention comporte une première étape consistant en la préparation d'un échantillon lipidique extrait de cellules animales ou végétales, on extrait de l'échantillon lipidique les céramides contenant la base 6hydroxy-4-sphingénine, et plus particulièrement le céramide 7. Les céramides contenant la base 6-hydroxy-4-sphingénine peuvent être isolées par la mé25 thode de chromatographie sur couche mince, à partir de l'échantillon brut. Dans ce cas, la chromatographie est avantageusement réalisée en deux migrations successives. La première élution est réalisée par exemple avec un mélange de chloroforme, méthanol et acide acétique dans les proportions volumiques 190/5/1, et la deuxième élution est réalisée par exemple avec un mélange de chloroforme, méthanol et acide acétique dans les 30 proportions volumiques 190/9/1. Les céramides contenant la base 6-hydroxy4sphingénine ainsi obtenues sont ensuite hydrolysées. La présente invention a également pour objet la 6-hydroxy-4-sphingénine obtenue par le procédé décrit précédemment, de formule (I): 35 CH3-(CH2) -CHOH-CH-CH-CHOH -CH-CH20R (I) ENI '2 NH2 dans laquelle: - n est un entier compris entre 3 et 17 inclus, et - R représente un atome d'hydrogène, un radical sulfate -O-SO3 ou un radical phosphate -O-P03, ainsi que ses sels, la 6-hydroxy-4-sphingénine de formule (I) présentant un degré de pureté supérieur ou égal à 90%, de préférence 95%, de préférence encore 98% en poids. La 6-hydroxy-4-sphingénine de formule (I) est de préférence telle que n est compris entre 8 et 14, notamment entre 10 et 12, et préférentiellement telle que n = 11. R représente avantageusement un atome d'hydrogène. Les sels des composés de formule (I) sont de préférence organiques, notamment des sels d'acides carboxyliques en C2-30, ou d'hydroxy-acides en C3-30, notamment d'achydroxy-acides en C3-30. Les sels des composés de formule (I) peuvent être minéraux, par exemple sous forme de sulfates ou d'halogénures. Bien entendu, les composés de formule (I) peuvent se présenter sous forme d'un mélange d'isomères ou sous forme d'un isomère pur. On peut utiliser un mélange de différents composés de formule (I). La présente invention a également pour objet une composition, cosmétique ou pharmaceutique, contenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, une 6-hydroxy-4sphingénine de formule (I) décrit précédemment en une quantité de 0,005 % à 20 % en poids, de préférence de 0,01 à 10 % en poids, notamment 0,05 à 5%, voire 0,1 à 1% en poids, par rapport au poids total de la composition. 30 La composition selon l'invention comprend en outre un milieu physiologiquement acceptable, c'est-à-dire, lorsqu'une application est envisagée pour les domaines cosmétique ou pharmaceutique, un milieu cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable, donc compatible avec une application sur les matières kératiniques telles que la peau, les ongles, les cheveux, les cils et sourcils, les muqueuses et les semi-muqueuses, et toute autre zone cutanée du corps et du visage. Le milieu physiologiquement acceptable dans lequel les composés selon l'invention peuvent être employés, ainsi que ses constituants, leur quantité, la forme galénique de la composition et son mode de préparation, peuvent être choisis par l'homme du métier sur la base de ses connaissances générales en fonction du type de composition recherchée. D'une manière générale, ce milieu peut être anhydre ou aqueux. Il peut ainsi comprendre 10 une phase aqueuse et/ou une phase grasse. La composition peut donc comprendre une phase aqueuse qui peut comprendre de l'eau, une eau florale telle que l'eau de bleuet, une eau minérale telle que l'eau de VITTEL, l'eau de LUCAS ou l'eau de LA ROCHE POSAY et/ou une eau thermale. Ladite phase aqueuse peut comprendre en outre des alcools tels que des monoalcools en Cl-C6, parmi lesquels on peu citer l'éthanol, le propanol, le butanol, I'isopropanol, I'isobutanol; et/ou des polyols tels que le glycérol, le butylèneglycol, I'isoprène glycol, le propylèneglycol, le polyéthylèneglycol. La composition selon l'invention peut également comprendre une phase grasse, notamment constituée de corps gras liquides à 25 C, tels que des huiles d'origine animale, végétale, minérale ou synthétique, volatiles ou non; de corps gras solides à 25 C tels que des cires d'origine animale, végétale, minérale ou synthétique; de corps gras pâteux; de gommes; de leurs mélanges. Les huiles volatiles sont généralement des huiles ayant, à 25 C, une tension de vapeur saturante au moins égale à 0,5 millibar (soit 50 Pa). Parmi les constituants de la phase grasse, on peut citer: - les silicones volatiles cycliques ayant de 3 à 8 atomes de silicium et de préférence de 4 à 6. Il s'agit par exemple de la cyclotétradiméthylsiloxane, de la cyclopentadiméthylsi30 loxane ou de la cyclohexadiméthylsiloxane, - les cyclocopolymères du type diméthylsiloxane/méthylalkylsiloxane, - les silicones volatiles linéaires ayant de 2 à 9 atomes de silicium. Il s'agit par exemple de l'hexaméthyldisiloxane ou un PDMS de faible viscosité (1 cSt). On peut encore citer l'hexaméthyldisiloxane et les alkyltrisiloxanes tels que l'hexylheptaméthyltrisiloxane ou 35 I'octylheptaméthyltrisiloxane. - les huiles volatiles hydrocarbonées, telles que les isoparaffines et notamment l'isododécane; - les polyalkyl(C1-C20) siloxanes et notamment ceux à groupements terminaux triméthylsilyle, parmi lesquels on peut citer les polydiméthylsiloxanes linéaires et les alkylméthylpo5 lysiloxanes tels que la cétyldiméthicone (nom CTFA), - les silicones modifiées par des groupements aliphatiques et/ou aromatiques, éventuellement fluorés, ou par des groupements fonctionnels tels que des groupements hydroxyles, thiols et/ou amines. - les huiles de silicone phénylées, - les huiles d'origine animale, végétale ou minérale, et notamment les huiles animales ou végétales formées par des esters d'acide gras et de polyols, en particulier les triglycérides liquides, par exemple les huiles de tournesol, de mas, de soja, de courge, de pépins de raisin, de sésame, de noisette, d'abricot, d'amandes ou d'avocat; les huiles de poisson, le tricaprocaprylate de glycérol, ou les huiles végétales ou animales de formule 15 R1COOR2 dans laquelle R1 représente le reste d'un acide gras supérieur comportant de 7 à 19 atomes de carbone et R2 représente une chaîne hydrocarbonée ramifiée contenant de 3 à 20 atomes de carbone, par exemple, I'huile de Purcellin; I'huile de paraffine, de vaseline, le perhydrosqualène, I'huile de germes de blé, de calophyllum, de sésame, de macadamia, de pépins de raisin, de colza, de coprah, d'arachide, de palme, de ricin, 20 de jojoba, d'olive ou de germes de céréales; des esters d'acides gras; des alcools; des acétylglycérides; des octanoates, décanoates ou ricinoléates d'alcools ou de polyalcools; des triglycérides d'acides gras; des glycérides; - les huiles fluorées et perfluorées. - les gommes de silicones; - les cires d'origine animale, végétale, minérale ou synthétique telles que les cires microcristallines, la paraffine, le pétrolatum, la vaseline, I'ozokérite, la cire de montan; la cire d'abeilles, la lanoline et ses dérivés; les cires de Candellila, d'Ouricury, de Carnauba, du Japon, le beurre de cacao, les cires de fibres de lièges ou de canne à sucre; les huiles hydrogénées concrètes à 25 C, les ozokérites, les esters gras et les glycérides concrets 30 à 25 C; les cires de polyéthylène et les cires obtenues par synthèse de Fischer-Tropsch; des huiles hydrogénées concrètes à 25 C; des lanolines; des esters gras concrets à C; les cires de silicone; les cires fluorées. Lorsque la composition selon l'invention se présente sous la forme d'une émulsion, elle 35 peut éventuellement comprendre en outre un tensioactif, de préférence en une quantité de 0,01 à 30% en poids par rapport au poids total de la composition. La composition seIon l'invention peut également comprendre au moins un coémulsionnant qui peut être choisi parmi le monostéarate de sorbitan oxyéthyléné, des alcools gras tels que l'alcool stéarylique ou l'alcool cétylique, ou des esters d'acides gras et de polyols tels que le stéa5 rate de glycéryle. La composition selon l'invention peut comprendre en outre une phase particulaire qui peut comprendre des pigments et/ou des nacres et/ou des charges habituellement utilisés dans les compositions cosmétiques. Les pigments peuvent être présents à raison de 0-20 % en poids, par rapport au poids total de la composition, et de préférence à raison de 215 %. Ils peuvent être blancs ou colorés, minéraux et/ou organiques, de taille usuelle ou nanométrique. On peut citer, parmi les pigments et les nanopigments minéraux, les dioxydes de titane, de zirconium ou de cérium, ainsi que les oxydes de zinc, de fer ou de chrome, les nanotitanes, le bleu 15 ferrique. Parmi les pigments organiques, on peut citer le noir de carbone, et les laques couramment employées pour conférer aux lèvres et à la peau un effet de maquillage, qui sont des sels de calcium, de baryum, d'aluminium ou de zirconium, de colorants acides tels que les colorants halogéno-acides, azoques ou anthraquinoniques. Les nacres peuvent être présentes dans la composition à raison de 0-20% en poids, de 20 préférence à un taux élevé de l'ordre de 2-15% en poids. Parmi les nacres envisageables, on peut citer la nacre naturelle, le mica recouvert d'oxyde de titane, d'oxyde de fer, de pigment naturel ou d'oxychlorure de bismuth ainsi que le mica titane coloré. Les charges, qui peuvent être présentes dans la composition à raison de 020 % en poids, par rapport au poids total de la composition, de préférence 2-10%, peuvent être 25 minérales ou de synthèse, lamellaires ou non lamellaires. On peut citer le talc, le mica, la silice, le kaolin, les poudres de Nylon et de polyéthylène, le Téflon, l'amidon, le nitrure de bore, les microsphères telles que l'Expancel (Nobel Industrie), le polytrap (Dow Corning) et les microbilles de résine de silicone (Tospearls de Toshiba, par exemple). La composition peut également comprendre des colorants hydrosolubles choisis parmi 30 les colorants usuels du domaine considéré tels que le sel disodique de ponceau, le sel disodique du vert d'alizarine, le jaune de quinoléine, le sel trisodique d'amarante, le sel disodique de tartrazine, le sel monosodique de rhodamine, le sel disodique de fuchsine, la xanthophylle. De façon connue, la composition selon l'invention peut comprendre les adjuvants habi- tuels dans le domaine considéré, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les additifs hydrophiles ou lipophiles, les actifs notamment cosmétiques ou pharmaceutiques hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les pigments, les nacres, les filtres UV, les absorbeurs d'odeur et les colo5 rants. La nature et la quantité de ces adjuvants peuvent être choisies par l'homme du métier, sur la base de ses connaissances générales, de manière à obtenir la forme de présentation désirée pour la composition. En tout état de cause, l'homme du métier veillera à choisir tous les éventuels composés complémentaires et/ou leur quantité, de manière telle que les propriétés avantageuses de la composition selon l'invention ne soient pas, 10 ou substantiellement pas, altérées par l'adjonction envisagée. Dans une forme de réalisation préférée de l'invention, les compositions comprenant lesdits composés de formule (I) peuvent en outre comprendre des composés usuellement employés dans le domaine d'application considéré, tels que des actifs pouvant aider à 15 prévenir ou à améliorer les matières kératiniques, notamment la peau, et encore mieux les peaux sèches, rugueuses et/ou abîmées. On peut notamment citer les autres bases de céramides, telles que la sphingénine, la sphinganine ou la 4-OH-sphinganine; les céramides; les glycocéramides; les acides gras en C14-30; les triglycérides; les stérols comme le cholestérol; les corps gras habituelle20 ment utilisés en cosmétique. Les composés selon l'invention trouvent une application particulière dans les compositions destinées au renforcement de la barrière lipidique de la peau, notamment dans les compositions destinées au soin de la peau, en particulier de la peau sèche et/ou ru25 gueuse et/ou abîmée. Pour une application sur la peau, la composition peut avoir la forme notamment de solution aqueuse ou huileuse; de dispersion du type lotion ou sérum; d'émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait obtenues par dispersion d'une phase grasse 30 dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H); de suspensions ou émulsions de consistance molle du type crème ou gel aqueux ou anhydres; de microcapsules ou microparticules; de dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique. Pour une application sur les cheveux, la composition peut être sous forme de solutions aqueuses, alcooliques ou hydroalcooliques; sous forme de crèmes, de gels, d'émulsions, 35 de mousses; sous forme de compositions pour aérosol comprenant également un agent propulseur sous pression. Les compositions selon l'invention peuvent notamment se présenter sous la forme: - d'un produit de soin, de traitement ou de protection, des matières kératiniques, et notamment de la peau du visage ou du corps y compris le cuir chevelu, tel qu'une composi5 tion de soin (de jour, de nuit, hydratante) du visage ou du corps; une composition antirides ou anti-age pour le visage; une composition matifiante pour le visage; une composition pour les peaux irritées; une composition démaquillante; un lait pour le corps, notamment hydratant éventuellement après-soleil; d'une composition de protection solaire, de bronzage artificiel (autobronzant) ou de soin 10 après-soleil; - d'une composition capillaire, et notamment une crème ou un gel protecteu solaire; une composition de soin du cuir chevelu, notamment anti-chute ou repousse des cheveux; un shampooing antiparasitaire; - d'un produit de maquillage des matières kératiniques tel qu'un fond de teint, une crème 15 teintée, un fard à joues ou à paupières, une poudre libre ou compacte, un stick anticernes, un stick camouflant, un rouge à lèvres, un soin des lèvres; un vernis à ongles, un soin des ongles, un mascara, un mascara traitant, un eye-liner. La présente invention a également comme objet l'utilisation d'au moins un composé de 20 formule (I): tel que décrit précédemment ou d'une composition le comprenant, pour: - renforcer la barrière lipidique de l'épiderme, notamment de la peau sèche et/ou rugueuse et/ou abîmée, et/ou - rétablir ou maintenir l'intégrité du stratum corneum et/ou - améliorer l'aspect de surface et/ou l'hydratation de la peau, et/ou - pour protége la peau, notamment les peaux sèches et rugueuses, et/ou - comme agent de nutrition essentiel pour les matières kératiniques (peau, cheveu, cil, ongle) et/ou - pour renforcer la barrière lipidique de la peau reconstruite, ou équivalent de peau et/ou 30 - pour améliorer et/ou maintenir le contenu lipidique de l'épiderme humain, in vivo et in vitro, et/ou - pour améliorer la qualité et les propriétés telles que contenu en lipides et/ou propriété barrière, des épidermes reconstruits et/ou des cultures de cellules épidermniques. Les compositions selon l'invention trouvent une application préférée comme composition de soin de la peau du visage, de type hydratante, et comme composition de protection solaire ou après-soleil. Les compositions selon l'invention trouvent une application toute particulière pour le soin 40 des matières kératiniques, notamment de la peau, des ongles, des cils, des cheveux, et en particulier de la peau sèche et/ou rugueuse et/ou abîmée. Les composés selon l'invention trouvent également une application particulière pour renforcer la barrière lipidique de la peau reconstruite, aussi appelée équivalent de peau. En effet, on a constaté que la supplémentation en composés selon l'invention, desdites peaux reconstruites, permet d'améliorer l'aspect et les propriétés barrière de ces peaux, et de les rendre plus proches structurellement des peaux normales. On peut ainsi obtenir un nouveau équivalent de peau, ou nouvelle peau reconstruite, supplémenté en au moins un composé de formule (I), notamment en 6-OH-sphingénine. 50 On sait que des modèles plus ou moins proches de la peau humaine ont pu être mis au point. On peut citer par exemple les modèles décrits dans les demandes de brevets EP- A-285471, EP-A-285474, EP-A-789074, EP-A-502172, EP-A-418035, WO-A9116010, EP-A-197090, EP-A-20753, FR-A-2665175, FR-A-2689904, ainsi que dans la demande 99FR-04970 au nom de la demanderesse et non encore publiée. De manière très générale, les modèles de peau reconstruite décrits dans ces documents 5 comprennent des kératinocytes humains associés ou non à d'autres cellules de la peau comme les mélanocytes et/ou les cellules de Langerhans, déposés sur un support, souvent un équivalent de derme, et cultivés dans des conditions telles qu'ils entrent dans un programme de différenciation aboutissant à la formation d'un équivalent d'épiderme. Les équivalents de derme décrits à ce jour sont soit des membranes artificielles comme par 10 exemple les filtres de marque Millipore, des substituts sous-cutanés à base de collagène, du plastique ou tout autre support compatible avec la viabilité cellulaire, soit des supports plus élaborés pour les rendre plus proches du derme naturel, comme le derme préalablement désépidermisé ou des lattices mixtes collagène/fibroblastes. Dans les lattices mixtes collagène/fibroblastes l'association de collagène natif et de fibroblastes humains 15 isolés conduit à l'obtention d'un équivalent de derme mimant un derme qui n'a pas subi l'action du temps. Toutefois, on a constaté qu'aucun des équivalents de peau ci-dessus cités ne comprenant de composés de formule (I), et en particulier de 6-OH sphingénine. L'utilisation des composés de formule (I) tels que définis plus haut présente donc le grand avantage de mettre à la disposition des chercheurs, un équivalent de peau nouveau, supplémenté en au moins un composé de formule (I) et plus particulièrement en 6-OH sphingénine. Notamment, on peut traiter ledit équivalent de peau avec une composition comprenant, dans un milieu aqueux, une quantité de 107 à 1% en poids de composé de formule (I), notamment de 5.10-5 à 5.10-2 % en poids, et en particulier de 5.10-3 à 10-2% en poids, par rapport au poids total de la composition. On obtient ainsi une composition se présentant sous la forme d'une composition pour le traitement des peaux reconstruites ou équivalents de peau, ainsi que des cultures de cellules épidermiques. L'invention est illustrée plus en détail dans les exemples suivants. 35 Exemple 1: Préparation à partir d'un échantillon lipidique de stratum humain On prépare un échantillon brut lipidique à partir de stratum humain par application d'une bande adhésive de vernis+nylon sur la peau de volontaires, puis par arrachage de 5 I'ensemble entraînant par la même une partie du stratum. Les échantillons sont mis en présence d'un mélange chloroforme/méthanol (2/1) sous agitation, cette opération étant renouvelée une fois ou plus si nécessaire afin d'optimiser l'extraction. L'échantillon brut lipidique est séché puis hydrolysé par mise en présence de potasse 10 méthanolique 2M 10% dans H2O pendant 16 H à 60 C. On réalise une précipitation avec du KCI aqueux à 10 %. La phase chloroformique est ensuite évaporée pour être reprise dans un mélange de chloroforme/méthanol (2/1). L'échantillon obtenu précédemment est déposé sur toute la longueur d'une plaque CCM 15 (de type silice non greffée par exemple), après préparation des plaques et des cuves. Quatre migrations successives sont alors réalisées: la première migration est effectuée avec un mélange de chloroforme/méthanol/ammoniaque aqueuse 2N (190/5/1) en arrêtant le front de migration à I cm de la zone de dépôt, la seconde avec les mêmes solvants aux proportions (190/10/1) en arrêtant le front de migration à 2 cm de la zone de 20 dépôt, la troisième avec les mêmes solvants aux proportions (190/40/1) en arrêtant le front de migration à 4 cm de la zone de dépôt, et enfin la dernière avec les mêmes solvants aux proportions (190/80/1) en arrêtant le front de migration à 5 cm de la zone de dépôt. Après révélation non destructive, par exemple à la primuline, et lecture de la plaque sous rayonnement UV, la silice est alors détachée de son support afin d'en extraire les bases par élution dans un solvant de type chloroforme/méthanol (2/1) sous agitation, cette opération étant renouvelée une fois ou plus si nécessaire afin d'optimiser l'extraction. La purification de l'échantillon est obtenue par un nouveau dépôt sur une plaque CCM. Cette plaque est alors éluée avec un choix de solvants et un mode de migration identiques à ceux présentés précédemment. On obtient des bases 6-hydroxy-4-sphingénines de longueurs de chaîne carbonées 35 comprises entre C16 et C26, avec un rendement massique de 3, 25 % par rapport au contenu céramidique de l'échantillon brut et une pureté de 98%. Par ce procédé, le ren- dement d'extraction global à partir de stratum provenant de chirurgie plastique est de 0.8 pg de base / cm2 de stratum. Exemple 2 comparatif: Le document "Journal of Lipid Research, 35, 2060-2068, 1994" décrit des conditions opératoires permettant d'extraire une céramide contenant la base 6-hydroxy-4-sphingénine. L'exemple 2 vise à montrer que les conditions d'extraction de la céramide ne peuvent être appliquées à l'extraction de la base 6-hydroxy-4sphingénine. 10 On réalise une première élution de l'échantillon lipidique préparé comme dans l'exemple 1, avec le mélange chloroforme / méthanol / acide acétique (190/5/1) jusqu'en haut d'une plaque de chromatographie. Cette première élution est suivie du grattage et du dépôt des bandes de migration, puis d'une seconde élution avec le mélange chloroforme / méthanol 15 / acide acétique (190/9/1), jusqu'en haut de la plaque. L'observation de la plaque de chromatographie montre que cette méthode (prévue pour l'extraction de la céramide contenant la base 6-hydroxy-4sphingénine) ne permet pas de séparer la base 6-hydroxy-4-sphingénine des autres bases, en particulier de la sphinga20 nine et la 4-sphingénine. REVENDICATIONS 1. Composé de formule (I): CH3-(CH2)n-CHOH -CH CH-CHOH CH-CHzOR (I) NH2 dans laquelle: - n est un entier compris entre 3 et 17 inclus, et - R représente un atome d'hydrogène, un radical sulfate -O-SO3 ou un radical phosphate 10 -O-PO3, ainsi que ses sels. de degré de pureté supérieur ou égal à 90%, de préférence 95%, de préférence encore 98% en poids. 2. Composé de formule (I) selon la revendication 1, dans laquelle n est compris entre 8 et 14, notamment entre 10 et 12, et préférentiellement, n = 11. 3. Composé de formule (1) selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle R 20 représente un atome d'hydrogène. 4. Composé de formule (I) selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle les sels des composés de formule (I) sont organiques, par exemple des sels d'acides carboxyliques en C2-30, ou d'hydroxyacides en C3-30, notamment d'(c-hydroxy-acides en 25 C3-30, ou sont minéraux, par exemple sous forme de sulfates ou d'halogénures. 5. Composition contenant un composé de formule (I): CH-(CH2) -CHOH-CH--CH-CHOH-CH-CH20R (I) NH2 dans laquelle: - n est un entier compris entre 3 et 17 inclus, et - R représente un atome d'hydrogène, un radical sulfate -O-SO3 ou un radical phosphate -O-P03, ainsi que ses sels, de degré de pureté supérieur à 90% de préférence 95%, de préférence encore 98% en poids, en une quantité de 0,005 % à 20 % en poids, de préférence de 0,01 à 10 % en poids, notamment 0,05 à 5%, voire 0,1 à 1% en poids, par rapport au poids total de la composition, dans un milieu physiologiquement acceptable. 10 6. Composition selon la revendication 5, comprenant par ailleurs des actifs pouvant aider à prévenir ou à améliorer les matières kératiniques, notamment la peau, et encore mieux les peaux sèches, rugueuses et/ou abîmées, tels que la sphingénine, la sphinganine ou la 4-OH-sphinganine; les céramides; les glycocéramides; les acides gras en C14-30; les 15 triglycérides; les stérols comme le cholestérol; les corps gras habituellement utilisés en cosmétique. 7. Composition selon la revendication 5 ou 6, se présentant sous la forme: - d'un produit de soin, de traitement ou de protection, des matières kératiniques, et no20 tamment de la peau du visage ou du corps y compris le cuir chevelu, tel qu'une composition de soin (de jour, de nuit, hydratante) du visage ou du corps; une composition antirides ou anti-age pour le visage; une composition matifiante pour le visage; une composition pour les peaux irritées; une composition démaquillante; un lait pour le corps, notamment hydratant éventuellement après-soleil; - d'une composition de protection solaire, de bronzage artificiel (autobronzant) ou de soin après-soleil; - d'une composition capillaire, et notamment une crème ou un gel protecteur solaire; une composition de soin du cuir chevelu, notamment anti-chute ou repousse des cheveux; un shampooing antiparasitaire; - d'un produit de maquillage des matières kératiniques tel qu'un fond de teint, une crème teintée, un fard à joues ou à paupières, une poudre libre ou compacte, un stick anticernes, un stick camouflant, un rouge à lèvres, un soin des lèvres; un vernis à ongles, un soin des ongles, un mascara, un mascara traitant, un eye-liner. 8. Composition selon l'une des revendications 5 à 7, se présentant sous la forme d'une composition pour le soin des matières kératiniques, notamment de la peau, des ongles, des cils, des cheveux, et en particulier de la peau sèche et/ou rugueuse et/ou abîmée. 9. Composition selon l'une des revendications 5 à 8, comprenant, dans un milieu aqueux, 5 une quantité de 10-7 à 1% en poids de composé de formule (I), notamment de 5.10-5 à 5.10-2 % en poids, et en particulier de 5.10-3 à 10-2% en poids, par rapport au poids total de la composition. 10. Composition selon l'une des revendications 5 à 9, se présentant sous la forme d'une 10 composition pour le traitement des peaux reconstruites ou équivalents de peau, ainsi que des cultures de cellules épidermiques. 11. Utilisation d'au moins un composé de formule (I): CH3-(CH2)-CHOH CH CH-CHOH CH-CH2OR (I) NH2 dans laquelle: - n est un entier compris entre 3 et 17 inclus, et - R représente un atome d'hydrogène, un radical sulfate -O-SO3 ou un radical phosphate -O-P03, ainsi que ses sels, de degré de pureté supérieur à 90% de préférence 95%, de préférence encore 98% en poids, ou d'une composition le comprenant, pour: - renforcer la barrière lipidique de l'épiderme, notamment de la peau sèche et/ou ru25 gueuse et/ou abîmée, et/ou - rétablir ou maintenir l'intégrité du stratum corneum et/ou - améliorer l'aspect de surface et/ou l'hydratation de la peau, et/ou - pour protège la peau, notamment les peaux sèches et rugueuses, et/ou - comme agent de nutrition essentiel pour les matières kératiniques (peau, cheveu, cil, 30 ongle) et/ou - pour renforcer la barrière lipidique de la peau reconstruite, ou équivalent de peau et/ou - pour améliorer et/ou maintenir le contenu lipidique de l'épiderme humain, in vivo et in vitro, et/ou t - pour améliorer la qualité et les propriétés telles que contenu en lipides et/ou propriété barrière, des épidermes reconstruits et/ou des cultures de cellules épidermiques. 12. Procédé de préparation d'un composé de formule (1): CH-(CH2)-n CHOHCH CH-CHOH-CHCH (I) NH2 dans laquelle: - n est un entier compris entre 3 et 17 inclus, et - R représente un atome d'hydrogène, un radical sulfate O-SO3 ou un radical phosphate 10 -O-PO3, ainsi que ses sels, de degré de pureté supérieur à 90% de préférence 95%, de préférence encore 98% en poids, qui comporte au moins une étape d'extraction par une phase liquide comprenant un mélange d'un solvant organique et d'une solution aqueuse basique, miscible dans ledit solvant organique. 13. Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que le rapport volumique du sol20 vant organique et de la solution aqueuse basique est compris entre 150/1 et 300/1. 14. Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que le rapport volumique du solvant organique et de la solution aqueuse basique est compris entre 170/1 et 280/1, de préférence entre 195/1 et 270/1. 25 15. Procédé selon l'une des revendications 12 à 14, caractérisé en ce que solution aqueuse basique a un pH compris entre 8 et 12, de préférence entre 9 et 11, de préférence entre 10 et 10,5. 16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que solution aqueuse basique est l'ammoniaque (2N). 17. Procédé selon l'une des revendications 12 à 16, caractérisé en ce que le solvant or- _ 8 2843589 ganique comprend un premier solvant d'indice de polarité compris entre 2, 5 et 5,5 et un deuxième solvant, miscible dans le premier, d'indice de polarité compris entre 3,5 et 6,5, la polarité du deuxième solvant étant supérieure à celle du premier. 18. Procédé selon la revendication 17, caractérisé en ce que la polarité du premier solvant est comprise entre 3 et 5, de préférence entre 3,5 et 4,5, et la polarité du deuxième solvant est comprise entre 4 et 6, de préférence entre 4,5 et 5,5. 19. Procédé selon l'une des revendications 17 à 18, caractérisé en ce que le rapport vo10 lumique du deuxième solvant et de la solution aqueuse basique est compris entre 1/1 et /1, de préférence entre 5/1 et 80/1. 20. Procédé selon l'une des revendications 17 à 19, caractérisé en ce que le deuxième solvant est un solvant protique. 21. Procédé selon l'une des revendications 17 à 20, caractérisé en ce que le premier solvant est un solvant aprotique. 22. Procédé selon l'une des revendications 17 à 21, caractérisé en ce que le rapport vo20 lumique du premier solvant et du deuxième solvant est compris entre 100/1 et 1/1, de préférence entre 50/1 et 2/1. 23. Procédé selon l'une des revendications 17 à 22, caractérisé en ce qu'il comprend plusieurs étapes d'extraction, et en ce que l'on diminue d'une étape à l'autre le rapport volu25 mique du premier solvant et du deuxième solvant, d'une valeur inférieure à 100/1, de préférence 50/1, à une valeur supérieure à 1/1, de préférence 2/1. 24. Procédé selon l'une des revendications 17 à 23, caractérisé en ce que le premier solvant est le chloroforme ou le n-propanol. 25. Procédé selon l'une des revendications 17 à 24, caractérisé en ce que le deuxième solvant est le méthanol. 26. Procédé selon la revendication 25, caractérisé en ce que la phase liquide d'extraction 35 comprend un mélange chloroforme/méthanol/ammoniaque (2N). 27. Procédé selon la revendication 26, caractérisé en ce qu'il comprend plusieurs étapes d'extraction, et en ce que l'on diminue d'une étape à l'autre le rapport volumique chloroforme/méthanol/ammoniaque (2N) de la valeur 190/5/1 à la valeur 190/80/1. 28. Procédé selon l'une des revendications 12 à 27, caractérisé en ce que l'extraction est réalisée par chromatographie sur couche mince ou par chromatographie liquide haute performance. 29. Procédé selon la revendication 28, caractérisé en ce que l'extraction est réalisée par chromatographie sur couche mince en plusieurs étapes, de préférence quatre, en augmentant la distance de migration d'une étape sur l'autre.