FR 2843965 A1 20040305 FR 0210691 A 20020828 PARTICULES SOUS FORME DE POUDRE ET DISPERSIONS A BASE D'ALGINATE MODIFIE, ET LEURS PROCEDES DE PREPARATION. La présente invention a pour objet des particules sous forme de poudre, ainsi que des dispersions à base d'alginate modifié et leurs procédés de préparations correspondants. L'alginate est un polysaccharide extrait d'algue brune notamment Phaophyceae, Laminaria hyperborea, Ascophyllum nodosum et Macrocystis pyrifera. Il est composé d'acide P-D-manuronnique et d'acide cE-L-guluronique. L'alginate est capable de former des hydrogels en présence d'ions di- ou 10 trivalents. L'utilisation de ces hydrogels d'alginate sous forme de particules pour l'encapsulation de protéines ou de cellules est largement répandue, notamment dans le domaine pharmaceutique. Toutefois les procédés actuels de préparation de ces particules d'alginate ne permettent d'obtenir que des particules d'alginate dont la taille est de l'ordre du 15 millimètre et peut quelquefois atteindre quelques centaines de micromètres. Lorsqu'on souhaite obtenir des particules de tailles plus petites, il faut recourir à l'émulsification, qui est un procédé qui implique l'utilisation d'un solvant organique. Or, I'utilisation d'un solvant organique n'est pas compatible avec certaines molécules à encapsuler qui sont solubles dans une phase aqueuse. Afin de répondre aux exigences des industriels, notamment dans le domaine de la formulation pharmaceutique, il est devenu nécessaire de réaliser des particules d'alginates de taille contrôlée, en milieux aqueux et sans utiliser de solvant organique. Aussi le problème que se propose de résoudre l'invention est de fournir des particules d'alginate dont la taille est contrôlée, plus particulièrement dont la taille est 25 d'au plus 100 gm, et qui sont préparées en milieux aqueux et sans utiliser de solvant organique. Dans ce but l'invention propose des particules sous forme de poudre à base d'un polysaccharide amphiphile, associatif, dont la taille moyenne est inférieure ou égale à AIm. L'invention propose également une suspension obtenue par remise en suspension des particules mentionnées ci-dessus. L'invention a également pour objet une dispersion aqueuse qui comprend dans une phase continue des particules à base d'un polysaccharide amphiphile, associatif, et dont les particules ont une taille moyenne inférieure ou égale à 100 pm. L'invention a également pour autre objet le procédé de préparation de la dispersion aqueuse selon l'invention, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes; a) on ajoute le polysaccharide amphiphile, associatif, dans une phase aqueuse b) on agite le milieu obtenu à l'étape a); c) on ajoute, au milieu obtenu à l'étape b) et en maintenant l'agitation, un sel monovalent; L'invention concerne enfin l'utilisation des particules sous forme de poudre selon 5 I'invention pour l'encapsulation de peptides ou de macromolécules solubles en milieu aqueux, telles que les protéines ou les polypeptides. L'avantage des particules et des dispersions selon l'invention est qu'elles sont réalisées sans solvant organique. Ainsi les particules et les dispersions selon l'invention sont compatibles avec les molécules à encapsuler qui sont solubles dans une phase 10 aqueuse. Un autre avantage de la présente invention est qu'elle permet une encapsulation de principes actifs ou de molécules actives de façon durable. De plus les particules selon l'invention ont l'avantage de posséder une taille moyenne contrôlable. En outre, dans certains cas, les produits de l'invention peuvent présenter une meilleure stabilité en présence d'ions chélatant du type phosphate ou citrate. Par stable, on entend qu'aucune modification de taille des particules n'est observée après 7 jours. D'autres avantages et caractéristiques de la présente invention apparaîtront 20 clairement à la lecture de la description et des exemples donnés à titre purement illustratif et non limitatif, qui vont suivre. Pour une meilleure compréhension de l'invention, on va tout d'abord décrire les dispersions aqueuses selon l'invention. L'invention concerne tout d'abord une dispersion aqueuse qui comprend dans une 25 phase continue des particules à base d'un polysaccharide amphiphile, associatif et dont les particules ont une taille moyenne inférieure ou égale à 100 lm. Par dispersion aqueuse, on entend que la phase continue de la dispersion est une phase aqueuse sans solvant organique. De préférence cette phase aqueuse est de l'eau. Les particules de la phase continue de la dispersion aqueuse selon l'invention ont plus particulièrement une taille moyenne inférieure ou égale à 60 pm et de préférence une taille moyenne inférieure ou égale à 15 ltm. La taille des particules a été mesurée aussi bien à l'aide d'un granulomètre à diffraction laser qu'avec un compteur à variation de résistance. Lesdites particules sont à base d'un polysaccharide amphiphile, associatif. Par polysaccharide amphiphile, associatif on entend un polysaccharide qui est capable de former des gels en milieux aqueux par des associations hydrophobes intermoléculaires qui permettent un pontage physique dès la mise en solution du polysaccharide amphiphile dans l'eau. De préférence le polysaccharide amphiphile associatif est rhéofluidifiant et thixotrope. Le polysaccharide amphiphile associatif peut être ionique ou non-ionique. Parmi les polysaccharides ioniques, le polysaccharide est plus particulièrement anionique. A titre d'exemple de polysaccharides anioniques, on peut citer notamment l'alginate, la pectine, la gomme xanthane, les carraghénanes du type kappa, lambda, 10 iota, ou l'acide hyaluronique. A titre d'exemple de polysaccharides cationiques, on peut citer notamment le chitosane. Le polysaccharide associatif peut être obtenu par modification chimique de polysaccharides neutres naturels. On peut citer notamment le dextrane, le pullulane, 15 I'amidon, la cellulose. Le polysaccharide utilisé de préférence selon l'invention est un alginate. Par alginate, on entend la forme ionisée en milieu aqueux de l'acide alginique. Avantageusement le polysaccharide est un polysaccharide modifié chimiquement. Le polysaccharide utilisé est de préférence un polysaccharide modifié ayant de 1 à 20 30 % de groupes hydrophobes fixés sur son squelette polysaccharidique, pourcentage exprimé en mole de groupe hydrophobe pour 100 moles de motifs saccharidiques. Parmi les groupes hydrophobes on peut utiliser des chaînes alkyles saturées ou insaturées comportant de 10 à 20 atomes de carbone. On peut également utiliser des groupes comportant des noyaux aromatiques. Par ailleurs le polysaccharide associatif peut être ponté par des ions diou trivalents. Dans le cas des polysaccharides polyanioniques, I'ion diou trivalent est avantageusement du calcium, du baryum, du strontium ou de l'aluminium. La dispersion aqueuse selon l'invention peut comprendre en outre des peptides ou 30 des macromolécules solubles en milieu aqueux, telles que les protéines ou les polypeptides, au moins en partie encapsulés. Ces macromolécules solubles en milieu aqueux, telles que les protéines ou les polypeptides, ou ces peptides peuvent également être présents dans la phase continue de la dispersion. Ils peuvent être également totalement encapsulées au sein de la 35 particule. A titre de protéines susceptibles d'être encapsulées dans les particules, on peut citer toutes les protéines hydrosolubles, quelle que soit leur masse moléculaire, pour peu qu'elles possèdent des résidus acides aminés à chaînes latérales hydrophobes. La protéine peut avoir une charge nette positive, neutre ou négative au pH de travail et de conservation des particules. On peut également citer les protéines qui ne possèdent pas de chaînes latérales hydrophobes mais qui ont entre autres des chaînes latérales chargées positivement. La dispersion aqueuse selon l'invention peut être filtrée, centrifugée ou lyophilisée. Dans ce cas on pourra recueillir les particules présentes dans la phase continue. L'invention a également pour objet les particules qui sont obtenues par centrifugation de la dispersion aqueuse décrite ci-dessus. Ces particules selon l'invention sont obtenues selon les techniques classiques de 10 centrifugation. Ces particules, obtenues après centrifugation, comprennent en outre des peptides ou des macromolécules solubles en milieu aqueux, telles que les protéines ou les polypeptides. L'invention concerne ensuite des particules sous forme de poudre à base d'un 15 polysaccharide amphiphile, associatif, dont la taille moyenne est inférieure ou égale à p1m. Ces particules sous forme de poudre selon l'invention sont redispersibles dans une phase aqueuse. En effet, à partir des particules sous forme de poudre selon l'invention, il est 20 possible de réaliser des suspensions aqueuses ayant avantageusement les caractéristiques des dispersions précédemment décrites. Ces particules sous forme de poudre sont à base d'un polysaccharide ayant les mêmes caractéristiques que celles des polysaccharides définis précédemment, dans le cas des dispersions. Tout ce qui a été dit précédemment sur les polysaccharides s'applique ici. Lorsque le polysaccharide est l'alginate de sodium, il peut être ponté par des ions calcium après la mise en forme des particules selon le procédé de l'invention. Ces particules sous forme de poudre selon l'invention comprennent en outre des peptides ou des macromolécules solubles en milieu aqueux, telles que les protéines ou 30 les polypeptides. Les protéines ont les mêmes caractéristiques que celles des protéines définis précédemment, dans le cas des dispersions. Tout ce qui a été dit' précédemment sur les peptides ou les macromolécules solubles en milieu aqueux, telles que les protéines ou les polypeptides, s'applique ici. Ces particules sous forme de poudre selon l'invention peuvent être obtenues 35 selon des techniques classiques de séchage de la dispersion aqueuse obtenue précédemment. On peut citer notamment la lyophilisation ou l'atomisation. Ces particules sous forme de poudre selon l'invention peuvent également être obtenues par séchage des particules obtenues par centrifugation de la dispersion aqueuse précédemment décrite. Enfin l'invention concerne également la suspension obtenue par remise en suspension des particules sous forme de poudre selon l'invention. Avantageusement cette suspension est stable en milieux aqueux. L'invention se rapporte également à un procédé de préparation de la dispersion aqueuse précédemment citée, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes; a) on ajoute le polysaccharide amphiphile, associatif, dans une phase aqueuse 10 b) on agite le milieu obtenu à l'étape a); c) on ajoute, au milieu obtenu à l'étape b) et en maintenant l'agitation, un sel monovalent; L'étape a) du procédé consiste à ajouter le polysaccharide pré-cité dans une phase aqueuse, de manière à obtenir un gel. Le gel obtenu est de préférence un gel 15 faible. Avantageusement le polysaccharide pré-cité est dissout dans la phase aqueuse. L'étape a) du procédé est avantageusement réalisée de manière à obtenir une concentration en polysaccharide comprise entre 0,5 et 20 g/I. De préférence le polysaccharide ajouté à l'étape a) est rhéofluidifiant et thixotrope. 20 Avantageusement le polysaccharide ajouté à l'étape a) est un polysaccharide modifié ayant de 1 à 30 % de groupes hydrophobes fixés sur son squelette polysaccharidique, pourcentage exprimé en mole de groupe hydrophobe pour 100 moles de motifs saccharidiques. Parmi les groupes hydrophobes on peut utiliser des chaînes alkyles saturées ou insaturées comportant de 10 à 20 atomes de carbone. On 25 peut également utiliser des groupes comportant des noyaux aromatiques. Plus particulièrement le polysaccharide possède les mêmes caractéristiques que celles des polysaccharides définis précédemment, dans le cas des dispersions. L'étape b) du procédé selon l'invention consiste à agiter le milieu obtenu à l'étape a). Cette agitation peut avantageusement fluidifier le milieu milieu obtenu à l'étape a). 30 Cette étape d'agitation peut se faire dans des conditions cisaillantes. De préférence, on cisaillera le milieu à l'aide d'un agitateur mécanique à ruban hélicodal, d'un ultra- turrax, d'ultra-sons ou de tout autre équipement susceptible de produire des forces de cisaillement. Avantageusement l'étape b) est conduite en agitant à des vitesses de déformation 35 supérieure à la vitesse de déformation critique de la solution obtenue à l'étape a). Plus particulièrement l'étape b) est réalisée de façon à diminuer fortement la viscosité jusqu'à obtenir une valeur proche de celle d'une solution aqueuse du polysaccharide précursseur non modifié chimiquement, toutes choses égales par ailleurs. L'étape c) du procédé selon l'invention consiste à ajouter, au milieu obtenu à l'étape b) et en maintenant l'agitation, un sel monovalent. De préférence l'étape b) et c) sont réalisées à une vitesse de déformation supérieure à la vitesse de déformation critique de la solution obtenue à l'étape a). Avantageusement l'étape c) est réalisée avec un rapport Ra = masse d'alginate / masse de solution de sels monovalents compris entre 1/1 et 1/100. On préférera réaliser l'étape c) en ajoutant une solution de sels monovalents à une concentration comprise entre 0,05 et 1 M. Plus particulièrement l'étape c) est réalisée jusqu'à obtenir une viscosité d'au plus 10 0,2 Pax sec. De préférence le sel monovalent est un sel alcalin et plus particulièrement il s'agit d'un chlorure, de préférence NaCI ou KCl. A l'issue de l'étape c) on obtient une dispersion de particules de gel renforcées par la présence de sel monovalent. Selon une variante du procédé selon l'invention, une étape d) peut être réalisée après l'étape c). Cette étape d) de la variante du procédé selon l'invention consiste à ajouter un sel d'ions di- ou trivalents au milieu obtenu à l'étape c). Préférentiellement, cette étape d) est réalisée lorsqu'un polysaccharide ionique est 20 utilisé. De préférence le sel d'ions di- ou trivalents ajouté à l'étape d) est un sel de calcium ou de baryum, ou de strontium ou d'aluminium. Dans le cas particulier de l'alginate, on préfère utilisé à l'étape d) du CaCI2. Enfin l'invention a pour objet l'utilisation des particules sous forme de poudre ou 25 des particules pour l'encapsulation de peptides ou de macromolécules solubles en milieu aqueux, telles que les protéines ou les polypeptides. L'encapsulation peut être réalisée selon 2 protocoles différents - la macromolécule hydrosoluble est dissoute dans le prégel lors de l'étape a) du procédé sleon l'invention - la macromolécule est mise en contact avec les particules dans la dispersion aqueuse après l'étape c) ou d).du même procédé. L'encapsulation de telles molécules peut être utille dans le domaine de la détergence pour l'encapsulation d'enzymes incorporées dans les lessives, mais aussi dans le domaine pharmaceutique pour l'encapsulation de macromolécules vaccinales, 35 et encore dans le domaine alimentaire, cosmétique ou tinctoriale. La libération des molécules encapsulées peut être déclenchée par des variations d'environnement des particules dans la suspension (pH, température, présence de tensio-actifs,....). Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée. EXEMPLES 1/ Synthèse de I'alginate modifié de sodium Les étapes du protocole de synthèse de l'alginate modifié de sodium: Première étape: 10g d'alginate de sodium sont mis en suspension dans un mélange contenant 190 ml EtOH 70% et 10ml d'acide chlorhydrique commercial à 37% (12N) pendant 2 heure à 4 C sous agitation. Le mélange est filtré (filtre borosilicate n 4) puis lavé avec de l'éthanol 70% afin 15 d'éliminer le chlorure de sodium formé au cours de la réaction. Un test au nitrate d'argent (AgNO3 0,1 N) permet de s'assurer de l'élimination complète des chlorures. Le produit filtré est lavé à l'acétone. Il est ensuite placé pendant 2 heures dans une étuve sous vide à 25 C pour évaporer l'acétone résiduelle. L'alginate sous forme acide est mis en suspension dans 500 ml de H20 sous agitation. 20 Une solution de TBAOH 0,15M est ajoutée jusqu'à neutralisation du mélange à pH 7.0. Le mélange est ensuite lyophilisé. Deuxième étape: 20g d'alginate TBA lyophilisé sont solubilisés dans 1 litre de DMSO (2% en poids) pendant 24 heures, sous courant d'azote pour contrôler le taux d'humidité. Le dérivé bromé est ajouté à l'aide d'une micropipette pour obtenir le taux de greffage désiré. Le mélange est laissé sous agitation à 370 tr/min pendant 24 heures. Troisième étape: 128 ml d'une solution de NaCI 2,5N sont ajoutés au mélange. Celui-ci est soumis à l'action d'un ultra-turrax (5000 tr/min, 5 min) puis laissé sous agitation pendant 1 heure pour réaliser l'échange des ions TBA+ par les ions Na+. Le mélange est versé dans 900ml d'éthanol 70% puis l'ensemble est soumis à l'action d'un ultra-turrax (5000 tr/min) pendant 15 minutes afin de précipiter l'alginate modifié. Le mélange est filtré (filtre borosilicate n 4) puis lavé à l'éthanol 70% jusqu'à élimination des chlorures (test au nitrate d'argent). L'alginate modifié précipité est ensuite lavé à l'acétone et placé dans une étuve sous 35 vide à 25 C pendant 3 jours pour éliminer l'acétone résiduelle. 2/ Préparation des microparticules à partir des dérivés amphiphiles de l'alginate Les formulations sont préparées dans les conditions opératoires suivantes: Rapport massique solution de polymère/solution de NaCI 0,2M = 1/1 (environ 38 g de chaque). Etape a: Une solution d'alginate de sodium ayant une concentration de 7 g/I est préparée dans de l'eau à 20 C. Un prégel se forme. Etape b: Le prégel préparé à l'étape a/ est introduit dans la cuve du rhéomètre à déformation imposée. Il est rhéofluidifié en imposant des vitesses de déformation successives de 0.005; 1; 10 et 100 s-1 pendant des créneaux de 200s. La vitesse de déformation de 100 s-' est maintenue pendant 90s supplémentaires. Etape c: La solution de NaCI 0.2M est ajoutée, en maintenant la vitesse de déformation 15 à 100 s-1. En même temps, l'ultra-turrax est mis en marche à une vitesse de 16 000 tr/min. La dispersion du gel fluidifé dans la solution saline se fait avec l'ultra-turrax à 16 000 tr/min pendant 30s. Le temps de dispersion du gel fluidifié sous agitation dans la solution saline est de 30 secondes. Etape d: La suspension de particules est transvasée dans un erlen. Une solution de 20 NaCI 0,1 M/CaCI2 20mM est ajoutée en proportion massique 1/1. L'ensemble est laissé sous agitation magnétique pendant 2 heures. La suspension de particules est ensuite centrifugée à 8000g pendant 15 minutes, à C. Le surnageant est éliminé et les particules sont lyophilisées. 25 3/ Encapsulation de la savinase: Protocole d'encapsulation: La savinase utilisée est fournie par la firme Novozyme sous forme de poudre. Lot N 1530 1195. Elle a une activité déclarée de 4,26 KNPU(S)/g. Les essais d'encapsulation ont été réalisés de la manière suivante: préparation d'un prégel d'alginate modifié AA 14C12 (14% de chaînes alkyle à 12 carbone greffées sur le squelette alginique) à 7g/l dans l'eau milliQ. Agitation 1 nuit. - ajout de la savinase (sous forme de poudre) à la concentration voulue. Agitation 3 heures puis centrifugation à 3000 g pendant 15 minutes pour éliminer les bulles d'air. - fluidification du prégel contenant la savinase par cisaillement à l'aide du rhéomètre à déformation imposée comme dans l'étape b) du paragraphe 2/ des exemples. - ajout de la solution saline NaCI 0,2M sous cisaillement à l'ultraturrax à 16 000tr/min. - ajout de CaCI2 pour renforcer les particules formées comme dans l'étape d) du pragraphe 2/ des exemples. - centrifugation des particules à 8000g pendant 15 minutes et dosage du surnageant pour déterminer la quantité d'enzyme non encapsulée. Résultats de l'encapsulation: La savinase a été encapsulée à partir de différentes concentrations: 0,1, 0,5,1, 2 et 4g/l 10 dans l'eau. L'activité de la savinase non encapsulée restant dans le surnageant a été mesurée en suivant le protocole fourni par Novozyme. L'activité est déterminée en mesurant la densité optique des solutions à 425 nm. Les résultats obtenus sont rassemblés dans le tableau 1. 15 Concentration Masse de Rendement Masse de savinase initiale en savinase savinase initiale d'encapsulation encapsulée (mg) / g de standard (g/l) (mg) (%) microparticules 0,1 5,06 100 1,1 0,5 21,1 100 6,6 I 42,77 65 9,4 2 82,05 69 18,2 4 160,65 66 36,2 Tableau 1: Résultats de l'encapsulation de la savinase standard Quelle que soit la concentration de savinase initiale, les microparticules obtenues ont des tailles moyennes de 10 à 15 pm. Charge des particules en savinase après yIvophilisation en présence ou non de tréhalose: Après centrifugation, les microparticules récupérées sont divisées en deux lots et sont lyophilisées avec ou sans tréhalose à 10%. Le volume de tréhalose à 10% utilisé pour la lyophilisation est tel que la masse de tréhalose est égale à 10 fois la masse de savinase encapsulée. Les résultats sont donnés dans le tableau 2 ci-après: Masse approximative de savinase Masse approximative de savinase Echantillon dans les particules (mg) dans les particules (mg) Lyophilisation sans tréhalose Lyophilisation avec tréhalose 0,1 g/I 1,7 1,7 0,5g/I 11 3,8 lg/l 15 15 2g/l 30 28 4g/l 58 61 Tableau 2: Récapitulatif des masses approximatives de savinase contenues dans les microparticules après lyophilisation en présence ou non de tréhalose à 10%. Savinase seule lyophilisée: 500 mg de savinase ont été lyophilisés en présence de tréhalose à 10% (50ml). Puis la savinase lyophilisée a été remise en solution dans l'eau pour vérifier son activité par rapport à l'activité de la savinase standard non lyophilisée. 10 Savinase Concentration (g/Il) Absorbance à 425nm Non lyophilisée 1,004 0,7559 Lyophilisée avec 1,0414 0,7881 tréhalose Tableau 3: Absorbances des solutions de savinase lyophilisée ou non. D'après les résultats du tableau 3, on peut en déduire que l'activité de l'enzyme reste identique avant et après lyophilisation en présence de tréhalose à 10%. 4/ Utilisation de savinase encapsulée dans différents traitement de salissures sur coton: Tergotomètre: Le tergotomètre est un appareil de laboratoire fabriqué par US Testing qui permet de procéder à 6 tests de lavage simultanément dans des conditions reproductibles et similaires de température, d'agitation et de durée. On effectue un lavage à 40 C avec 1 litre d'eau dont la dureté est dé 30 TH (dilution dans de l'eau minérale de marque Contrex) et en utilisant 5 g lessive modèle (avec l'enzyme encapsulée ou non). il Différentes salissures standards qui sont sensibles à l'activité protéalytique de l'enzyme sont testées: 2 tissus par type de salissure. Après le lavage, on effectue 3 X 1 rinçage avec 1 litre d'eau du robinet. Le rinçage est fait manuellement. Les enzymes ont été testées à 0,06% d'enzyme, pourcentage exprimé en poids par rapport à la masse de lessive. La lessive d'origine est la Savinase, nom commercial d'une protéase vendu par la firme Novo, non encapsulée. Lessive modèle: PRODUITS LABS / NI = 0,5 Wessalithe 4A 25 Powder of silicate R2A 5 Carbonate Na leger 15 Sokalan CP5 5 Sulfate de Na To 100% CMC Blanose 7MXF 1 Perborate monohydrate 15 TAED granule 5 LABS Nansa 80 6 Synperonic A3 3 Synperonic A9 9 Lessive Seule Lessive avec Savinase 4g/1 encapsulée avec Tréhalose Lessive avec Savinase Lyophilisée (non encapsulée) avec tréhalose AS3 - 007 1,7 3,1 2,7 AS10 - 064 5,7 7,9 7,1 CS1 -- 027 25,2 25,3 24,9 CS2 -014 5,4 9,1 8,7 CS8 - 012 11,1 12,3 11,7 Détergence 49,2 57,8 55,1 cu m u lée _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ Tableau 4 Nature des salissures standards (sensibles aux actions de protéase) utilisées: AS3: lait chocolaté/suie AS1 0: huile d'arachide, pigments at lait en poudre écrémé CS1: sang CS2: cacao CS8: extrait d'herbe Le tableau 4 ci dessus donne les pourcentages d'enlèvement pour chaque type de salissure: plus le chifffre est élevé, plus la performance est bonne L'essai correspondant à la colonne 2 est un essai selon l'invention. Les essais sont 10 réalisés en présence d'un sucre, la tréhalose, largement utilisé pour améliorer la redissolution des principes actifs encapsulés. On note que la savinase encapsulée selon l'invention permet dans chaque cas, d'obtenir une performance de nettoyage supérieure à la référence sans enzyme (colonne 1), mais aussi supérieur à celle obtenue avec l'enzyme lyophilisée et non encapsulée (colonne 3). 15 REVENDICATIONS 1 Particule sous forme de poudre à base d'un polysaccharide amphiphile, associatif, dont la taille moyenne est inférieure ou égale à 100 j.m. 2 Particule selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle est redispersible dans une phase aqueuse. 3 Particule selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que le 10 polysaccharide est l'alginate de sodium et est ponté par des ions calcium. 4 Particule selon l'une des revendications précedentes caractérisée en ce qu'elle comprend en outre des peptides ou des macromolécules solubles en milieu aqueux, telles que les protéines ou les polypeptides. 15 Suspension obtenue par remise en suspension des particules selon l'une des revendications 1 à 4. 6 Dispersion aqueuse qui comprend dans une phase continue des particules à base 20 d'un polysaccharide amphiphile, associatif, et dont les particules ont une taille moyenne inférieure ou égale à 100 rm. 7 Dispersion aqueuse selon la revendication 6 caractérisée en ce que les particules ont une taille moyenne inférieure ou égale à 60 g.m. 25 8 Dispersion aqueuse selon l'une des revendications 6 ou 7 caractérisée en ce que les particules ont une taille moyenne inférieure ou égale à 15 tm. 9 Dispersion aqueuse selon l'une des revendications 6 à 8 caractérisée en ce que le 30 polysaccharide est rhéofluidifiant et thixotrope. Dispersion aqueuse selon l'une des revendications 6 à 9 caractérisée en ce que le polysaccharide est un polysaccharide modifié ayant de 1 à 30 % de groupes hydrophobes fixés sur son squelette polysaccharidique, pourcentage exprimé en 35 mole de groupe hydrophobe pour 100 moles de motifs saccharidiques. 11 Dispersion aqueuse selon l'une des revendications 6 à 10 caractérisée en ce que le polysaccharide est un alginate. 12 Dispersion aqueuse selon l'une des revendications 6 à 11 caractérisée en ce que le polysaccharide est ponté par des ions di- ou trivalents. 13 Dispersion aqueuse selon la revendication 12 caractérisée en ce que les ions diou trivalents sont choisis parmi le calcium, le baryum, le strontium ou l'aluminium. 14 Dispersion aqueuse selon l'une des revendications 6 à 13 caractérisée en ce qu'elle comprend en outre des peptides ou des macromolécules solubles en milieu 10 aqueux, telles que des protéines ou des polypeptides, au moins en partie encapsulés. Particule caractérisée en ce qu'elle est obtenue par centrifugation de la dispersion aqueuse selon les revendications 6 à 14. 16 Particule selon la revendication 15 caractérisées en ce qu'elle comprend en outre des peptides ou des macromolécules solubles en milieu aqueux, telles que des protéines ou des polypeptides. 17 Procédé de préparation d'une dispersion aqueuse selon l'une des revendications 6 à 14, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes; a) on ajoute le polysaccharide amphiphile, associatif, dans une phase aqueuse b) on agite le milieu obtenu à l'étape a); c) on ajoute, au milieu obtenu à l'étape b) et en maintenant l'agitation, un sel 25 monovalent. 18 Procédé selon la revendication 17 caractérisé en ce que l'étape a) est réalisée de manière à obtenir une concentration en polysaccharide comprise entre 0,5 et 20 g/I. 19 Procédé selon l'une des revendications 17 ou 18 caractérisé en ce que le polysaccharide ajouté à l'étape a) est rhéofluidifiant et thixotrope. Procédé selon l'une des revendications 17 à 19 caractérisé en ce que le 35 polysaccharide ajouté à l'étape a) est un polysaccharide modifié ayant de 1 à 30 % de groupes hydrophobes fixés sur son squelette polysaccharidique, pourcentage exprimé en mole de groupe hydrophobe pour 100 moles de motifs saccharidiques. 21 Procédé selon l'une des revendications 17 à 20 caractérisé en ce que l'étape b) est réalisée en cisaillant le milieu issu de l'étape a) à l'aide d'un agitateur mécanique à ruban hélicodal, d'un ultra-turrax, d'ultra-sons ou de tout autre équipement susceptible de produire des forces de cisaillement. 22 Procédé selon l'une des revendications 17 à 21 caractérisé en ce que l'étape b) est conduite en agitant à des vitesses de déformation supérieure à la vitesse de déformation critique de la solution obtenue à l'étape a). 10 23 Procédé selon l'une des revendications 17 à 22 précédentes caractérisé en ce que l'étape b) et c) sont réalisées à une vitesse de déformation supérieure à la vitesse de déformation critique de la solution obtenue à l'étape a). 24 Procédé selon l'une des revendications 17 à 23 caractérisée en ce que l'étape c) est réalisée avec un rapport Ra = masse d'alginate / masse de solutions de sels monovalents compris entre 1/1 et 1/100. Procédé selon l'une des revendications 17 à 24 caractérisé en ce que l'étape c) 20 est réalisée en ajoutant une solution de sels monovalents à une concentration comprise entre 0,05 et 1 M. 26 Procédé selon l'une des revendications 17 à 25 caractérisé en ce que l'étape c) est réalisée jusqu'à obtenir une viscosité d'au plus 0,2 Pa x sec. 25 27 Procédé selon l'une des revendications 17 à 26 caractérisé en ce que l'étape c) est réalisée en ajoutant du NaCl ou KCI. 28 Procédé selon l'une des revendications 17 à 27 caractérisé en ce qu'il comprend 30 une étape d) qui consiste à ajouter un sel d'ions di- ou trivalents au milieu obtenu à l'étape c). 29 Procédé selon la revendication 28 caractérisé en ce que l'étape d) est réalisée en ajoutant un sel de calcium ou de baryum, ou de strontium ou d'aluminium. 35 Procédé selon l'une des revendications 28 ou 29 caractérisée en ce que l'étape d) est réalisée en ajoutant du CaCI2. 31 Utilisation des particules selon les revendications 1 à 4, ou les revendications 15 ou 16 pour l'encapsulation de peptides ou de macromolécules solubles en milieux aqueux, telles que les protéines ou les polypeptides.