FR 2839450 A1 20031114 FR 0205819 A 20020507 energetique des cellules; et leurs melanges. 1 2839450 - 5 L'invention concerne une preparation medicamenteuse injectable visqueuse contenant notamment de ['ethanol et un compose opaque aux rayons X. Wile s'applique plus particulierement, mais non exclusivement, au traitement des hernies discales mais egalement aux procedures interventionnelles ayant demontre l'efficacite de ['ethanol pur: traitement des tumeurs hepato cellulaires ou encore des osteomes osteoldes, des kystes des reins et des angiomes arterioveineux... Les hernies discales vent les principales causes des douleurs lombaires et des sciatiques. Wiles vent le plus souvent relatives a de multiples facteurs ergonomiques et anatomiques: mauvaises positions, faiblesse des muscles abdominaux et paraspinaux,.... Les therapies conservatrices et chirurgicales vent les traitements choisis dans la plupart des cast Cependant, chez certains patients selectionnes avec des criteres cliniques et radiologiques bien definis, un traitement percutane peut etre propose. L'efficacite du traitement percutane des hernies discales lombaires par injection d'une enzyme, la chymopapame, (nucle-olyse: modification enzymatique d'un disque intervertebral) a ete bien demontree. Cependant, des 2 2839450 patients avec des antecedents allergiques ou deja traites par nucleolyse, ne peuvent pas profiler de cette procedure. Au regard des actions necrosantes de l' ethanol sur les tissue biologiques, l'alcool absolu (ethanol anLydre) a ete utilise comme un agent therapeutique efficace dans de nombreuses procedures d'intervention: sclerose de ganglions et de nerfs, ablation de tumeurs hepatiques, de tumeurs renales, traitement - preoperatoire de tumeurs vertebrales, malformations arterioveineuses peripheriques, viscerales et du cerveau Une equipe a recemment pense que ces proprietes therapeutiques pouvaient etre utilisees dans des pathologies lombaires. Wile a traite des hernies discales lombaires avec des injections intradiscales d'alcool absolu avec des resultats tres encourageants. Cette procedure percutanee presente certains avantages: - pas de complication a!lergique, - pas de complications septiques locales, - pas de douleur importante apres traitement, - pas de retrecissement de l'espace interdiscal, - pas de complications inflammatoires, - un temps tres court de recuperation clinique. Cependant, ['ethanol, de par ses proprietes, peut diffuser loin de sa cible et necroser des cellules seines. C'est la raison pour laquelle, l'equipe utilisant l' ethanol pur a contre-indique son usage dans les hernies discales avec fuite - epidurale visualisee a la discographie et dans les cas de hernies discales cervicales. De surcro^t, dans le traitement de tumeurs hepato-cellulaires, l'alcool peut provoquer des thromboses de la veine porte par diffusion du produit dans le systeme veineux. 3 2839450 La demanderesse a, entre autres, pour objectif d'eviter les effete secondaires de ['ethanol dans cette pathologic, a savoir la necrose des tissue sains en raison d'une diffusion loin de la cible tout en renforcant son effcacite. S A cet effet, elle a teste plusieurs substances epaississantes et elle propose une preparation medicamenteuse injectable comprenant au moins un compose pour donner une preparation visqueuse, de lt ethanol et au moins un compose rendant ladite preparation opaque aux rayons X de maniere a controler son administration et son action. Avantageusement, la viscosite permet de limiter la diffusion de la preparation a une zone definie et de renforcer son effet therapeutique. Ainsi, cette preparation presente le double avantage de proposer un principe 1S actif dont la diffusion est limitee et un marqueur qui permet de mieux suivre ['injection durant ['intervention du therapeute et surtout de controler apres le traitement la situation exacte du produit injecte a ['aide d'un scanner. Les composes utilises pour rendre la preparation opaque aux rayons X pourront etre des composes inertes tels qu'un oxyde de tungstene ou un oxyde de tamale. Ces composes pourront etre incorpores, par exemple sous forme de poudre, soit a la fin de la fabrication de la preparation, soit juste avant ['intervention. L'ethylcellulose a ete choisi comme compose (excipient) pour obtenir la viscosite souhaitee. Ce choix repose sur plusieurs criteres: - son hydrophilic, en raison du caractere injectable de la preparation, - son pouvoir epaississant qui devait etre suffisamment important pour augmenter, meme present en falble quantite, la viscosite du melange, 4 2839450 - les derives de la cellulose vent hydrolysables in vitro et dispensent ainsi d'une resection chirurgicale de la zone soignee, - une presentation sous forme de poudre et non de liquide afin de ne pas diluer ['ethanol, une certaine solubilite dans ['ethanol de maniere a obtenir une preparation homogene, - des effete toxiques locaux et/ou systemiques reduits au minimum voire inexistants pour ne pas compromettre la tolerance de la preparation. Par consequent, la preparation selon ['invention repond aux criteres essentials requis qui vent la surete d'emploi dans toutes les phases du processus, l' aptitude a creer une sclerose stable et selective. Un mode d' execution de ['invention sera decrit ci-apres, a titre d' exemple non limitatif: La figure 1 represente la mesure de la viscosite exprimee en unite pharmaceutique en fonction de la concentration exprimee en pourcentage du poids d'ethylcellulose par rapport au poids total; La figure 2 represente la mesure de la viscosite exprimee en unite pharmaceutique en fonction de la temperature exprimee en degre Celsius. Choix des excipients entrant dans la preparation Six produits inscrits a la Pharmacopee europeenne 3eme edition (1999) et repondants aux criteres mentionnes ci-dessus ont done ete choisis pour etre evalues comme excipient (Tableau I). Pour chacun d'entre eux, la solubilite a chaud etlou a froid dans ltethanol a ete etudiee de meme que la compatibilite 2839450 physico-chimique des substances mises en contact (par appreciation visuelle) et enfin la viscosite approximative du melange. Tableau I: Produits testes pour la fabrication du gel Produits References commerciales Fournisseurs Hydroxycellulose Klucel HF EP Aldrich EthYlcellulose Aaualon 100 NF Hercules . Polysorbate Montanox 80 Seppic Silice collodale Aerosil R972 Degussa France Carbopol 940 Carboxypolymethylene Carbopol 934 Gattefosse Polyethyleneglycol Lutrol E4000 BASF France Les resultats des differents essais vent resumes dans le tableau II. Tous les produits testes etaient solubles a chaud dans ['ethanol. Seule l'ethylcellulose ltetait plus ou moins egalement a froid. De plus, la compatibilite physicochimique du melange (absence de precipitation) eta t bonne et la lo viscosite sahsfaisante. C'est pour ces raisons que l'ethylcellulose a paw le produit le plus adapte. Tableau II: Caracteristiques des produits testes Produits Solubilite d ens ['ethanol Examen visuel A froid A chaud + Apres refroidissement, Hydroxypropylcellulose + non homogene Ethylcellulose + Gel limpide Polysorbate + Viscosite hres falble + La viscosite n'appara^t. Slice collodale, + qu apres quelquesJ ours + Precipite apres Carboxypolymethylene - + neuhralsahon Polyethyleneglycol + Precipite a froid 6 2839450 , Fabrication de la preparation Plusieurs preparations a differentes concentrations en ethylcellulose ont ete effectuees par dissolution respectivement de 0,15; 0,45 et 0,75 g dans 15 mL d'ethanol d'une purete de 70 a 99 % en volume et de preference de 95 % (d = 0,8) soit 1,22; 3,61 et 5,88 % en poids du poids total de la preparation. La preparation dont la concentration en ethylcellulose est la plus elevee a ete choisie. Une perte de 2,5 % au moment de la repartition en flacons a ete considere soit pour quarante flacons, des proportions de 205 mL d'alcool a 95 (% volume) et 10,25 g d'ethylcellulose. Plus generalement, l'ethylcellulose est present en une concentration variant de 0,5 a 15 %, de preference 5,88 % en poids du poids total de la preparation. Conformement aux Bonnes Pratiques de Fabrication (1998), la preparation a ete realisee en trots etapes: preparation du gel,- repartition aseptique et sterilisation du produit dans le conditionnement final. Dans un premier temps, l'excipient (ethylcellulose) a ete melange a ['ethanol dans un ballon a col rode sterile, a chaud, par agitation magnetique et a reflux jusqu'a dissolution complete. Le tout a ete laisse sous agitation et avec le reflux pendant quinze minutes, puis sous agitation jusqu'a refroidissement afin de permettre la recondensation de l'alcool dans le ballon. Le reconditionnement s'est fait ensuite sous hotte a flux laminaire horizontal dans des flacons sertis steriles de mL (bioblock 42065). Enfin, comme le preconise la Pharmacopee europeenne, les flacons ont ete sterilises a ['autoclave par vapeur saturee, a 121 C pendant vingt minutes. La derriere etape de fabrication de la preparation, l'ajout d'une poudre de compose opacifiant tel que l'oxyde de tamale ou l'oxyde de tungstene, se fait en proportion variable pour obtenir une bonne opacite. Cet aj out peut avoir lieu soit a la fin de la fabrication avant le reconditionnement, soit juste avant de pratiquer ['intervention. 7 2839450 Par ailleurs, ces composes etant inertes et utilises en tres faible quantite, ils ne modifient pas significativement les resultats des controles presentes ci-dessous et effectues sur la preparation avant leur ajout. Controles effectues La conformite de la preparation a ete verifiee par un essai de sterilite, des controles chimiques et physicochimiques. Selon les recommendations de la Pharmacopee europeenne, la presence eventuelle de contaminants a ete recherchee par ensemencement de 4 mL de la preparation dans 250 mL de bouillon tryticase-soja pour les gerrnes aerobics, au thioglycolate pour les germes anaerobies et Sabouraud pour les levures. Les resultats de l'essai de sterilite ont confirme ['absence de contaminants dansla preparation. La teneur en alcool a ete determinee apres dilution de l'echantillon et incorporation de l'etalon interne, le propanol-l, par chromatographie gazeuse avec detection par ionisation de flamme. La separation est obtenue sur une colonne Porapak Q (80-100 > (maille), longueur 3 m) avec l'azote comme gaz vecteur (1,2 bar) sur un appareil Delsi DN200. Le dosage de l'alcool a donne une valeur de 802 g.L-. Le dosage specifique de l'adjuvant de viscosite n'a pas ete realise, mais la concentration a ete estimee par la methode des residue sees, operation qui consiste a evaporer l' ethanol dans une cuve thermostatee a 110 C jusqu'a poids constant de l'echantillon. La methode des residue sees a permis de correler la concentration theorique en ethylcellulose a celle mesuree experimentalement soit 5,88 % en poids du poids total de l'echantillon. 8 2839450 La viscosite de la preparation a ete mesuree a l' aide d'un viscosimetre a capillaire dit de Baume (Prolabo). Plusieurs series de mesure ont ete effectuees a differentes temperatures et a differentes concentrations en epaississant la preparation. Les mesures de viscosite ont montre que, a temperature constante, la viscosite de la preparation augmentait de maniere exponentielle avec Ia teneur en ethylcellulose (Figure 1). En revanche, elle diminuait, touj ours de facon exponentielle, lorsque la temperature augmentait (Figure 2). Enfin lt etude de la stabilite physicochimique a ete realisee par une analyse dans le temps de ['evolution des parametres qui definissent la preparation c'est-a-dire la viscosite, la teneur en ethanol et en agent de viscosite. Les mesures ont ete repetees a un j our (J1), huit j ours (J8), quinze j ours (J15), trente j ours (J30). Les resultats vent consignee dans le tableau III. Les coefficients de variation inferieurs a 3% prouvent la stabilite du melange jusqu'a J30, ce qui permettra de determiner une date de peremption pour la preparation. Tableau III: Parametres physicochimiques en fonction du temps Residu Rapport. ., Date (Cge.anO) (rV4h) Pech (g) dech sec RS /0 - Vi(sccp )slte (g) () J1 784 2 1,650 0,825 0,101 6,10 320 J8 821 2 1,720 0,850 0,103 5,97 339,5 J15 783 2 1,610 0,800 0,097 6,00 J30 820 - 2 1,670 0,830 0,099 5,92 332 Moyenne 802 1,663 0,826 0,100 5,998 330,5 Ecart-type 21,370 0,046 - 0, 021 0,002 0,076 9,836 Coefficient. de 2,665 2,751 2,489 2,458 1,265 2,976 variation * cp: unite pharmaceutique Lors de son injection dans un disque lombaire, la preparation a permis de diminuer la pression intra-discale et ainsi de diminuer les douleurs lombaires dues aux hernies discales. 9 2839450 Revendications 1. Preparation medicamenteuse injectable, caracterisee en ce qu'elle comprend au moins un compose pour donner une preparation visqueuse, de ['ethanol et au moins un compose rendant ladite preparation opaque aux rayons X. 2. Preparation selon la revendication 1, caracterisee en ce que ledit compose pour donner une preparation visqueuse est l'ethylcellulose. 3. Preparation selon la revendication 2, caracterisee en ce que l'ethylcellulose est present en une concentration variant de 0,5 a 15 %, de preference 5,88 % en poids du poids total de la preparation. 4. Preparation selon la revendication 1, caracterisee en ce que ledit compose rendant ladite preparation opaque aux rayons X est un compose inerte. 5. Preparation selon la revendication 4, caracterisee en ce que ledit compose rendant ladite preparation opaque aux rayons X est un oxyde de tamale. 6. Preparation selon la revendication 4, caracterisee en ce que ledit compose rendant ladite preparation opaque aux rayons X est un oxyde de tungstene. 7. Preparation selon la revendication 1, caracterisee en ce que ledit ethanol a une purete qui varie de 70 a 99 % en