FR 2845284 A1 20040409 FR 0212420 A 20021007 PROCEDE D'OBTENTION D'UN PRINCIPE ACTIF PRESENTANT UNE ACTIVITE PIGMENTANTE DE LA PEAU, PRINCIPE ACTIF OBTENU ET COMPOSITION COSMETIQUE L'INCLUANT La présente invention concerne un principe actif présentant une activité pigmentante de la peau obtenu par un procédé donné. L'invention couvre aussi une composition qui inclut un tel principe actif. Une peau bronzée est un signe de bonne santé dans le référentiel actuel. Même 5 si l'on sait que bronzage et bonne santé ne sont aucunement liés, il n'en demeure pas moins qu'il s'agit d'un signe social fort. Ainsi de nombreuses personnes s'exposent aux rayons du soleil en sorte de provoquer une réaction de protection qui génère de la mélanine et offre à la peau un teint hâlé voire fortement coloré. Les conséquences d'une telle exposition sont, elles, préjudiciables à la santé car l'exposition aux rayonnements ultraviolets à forte dose comme c'est le cas pour certaines personnes peuvent engendrer des cancers. Il conviendrait de trouver un moyen de provoquer une réaction de la peau pour augmenter la production de mélanine. Ce pigment est synthétisé par des cellules 15 spécifiques les mélanocytes au cours d'une réaction, la mélanogenèse. Plus cette réaction est mise en oeuvre, plus la mélanine est synthétisée et plus la peau devient colorée. Il existe aussi les autobronzants qui résistent maintenant à l'eau mais il ne s'agit que de produits qui provoquent une coloration superficielle de la peau et dont la 20 durabilité éphémère ne convient pas à la plupart des consommateurs. De plus, la coloration obtenue dépend aussi de la nature de la peau et les résultats obtenus ne sont pas nécessairement ceux qui sont recherchés. L'effet est artificiel et n'est pas une réaction de la peau qui seule peut conduire à un résultat adéquat. Un des moyens efficace est de provoquer une réaction naturelle de la peau et de provoquer la production de mélanine. bans ce type d'action, on sait que la synthèse de la mélanine, sous ses différentes formes, résulte d'une succession de réactions enzymatiques qui transforment un amino-acide, la tyrosine, en pigments mélaniques. Une des étapes essentielles comprennent une hydroxylation de la tyrosine par la tyrosinase. Cette même enzyme, par des réactions successives, conduit à la synthèse de ces pigments mélaniques, phaeomélanine et de d'eumélanine. La présente invention consiste à provoquer une augmentation de l'activité tyrosinase. Un principe actif qui permet une telle action est celui de la présente invention, à savoir un extrait de bugrane, choisie parmi les variétés Ononis spinosa, Ononis procurrens, Ononis campestris ou Ononis antiquorum. La présente invention est maintenant décrite à travers un procédé d'obtention d'un principe actif à effet pigmentant, couvre le principe actif obtenu et 20 propose quelques compositions adaptées incluant ce principe actif. 1/ PROCEDE b' OBTENTION Le procédé prévoit la succession d'étapes suivantes: - solubilisation de poudre de racines de bugrane choisie parmi les variétés Ononis spinosa, Ononis procurrens, Ononis campestris ou Ononis antiquorum dans 25 une solution hydroglycolique à raison d'au moins 200 g/l, - séparation des phases soluble et insoluble par décantation, filtration ou centrifugation, et - concentration de la phase polyphénolique. 2/ CARACTERISTIQUES DU PRINCIPE ACTIF AINSI OBTENU 2-1/ Taux de matière sèche: La mesure consiste à partir d'un volume donné de liquide, à placer ce liquide à 5 I'étuve à 105 C jusqu'à obtention d'un poids constant et à mesurer la matière sèche résiduelle après dessiccation. Le taux de matière sèche obtenu est compris entre 5 et 100 g/I, plus particulièrement entre 20 et 40 9/I. 2-2/ pH: Le pH est mesuré par la méthode potentiométrique, à température ambiante. Le pH est compris entre 4,0 et 7,0 et plus particulièrement entre 5,0 et 6,0. 2-3/ Polyphénols totaux: On sait que les composés phénoliques forment en présence de ferricyanure de potassium des complexes colorés détectables. Comme l'intensité de la coloration est proportionnelle à la quantité de composés phénoliques, il suffit de comparer avec une gamme étalon adaptée à la plage de mesures envisagées à savoir 0,5 à 5,0 g/I. La teneur en composés phénoliques varie de 0,15 à 3,6 g/l, plus particulièrement de 0,6 à 1,4 g/I. 2-4/ Caractérisation de cette fraction polyphénolique La caractérisation des composés phénoliques est réalisée par CLHP, Chromatographie Liquide Haute Performance. On utilise à cet effet une colonne de type C18, notamment celle commercialisée sous la dénomination Alltech Altima C18., avec pré-colonne ayant les mêmes 25 caractéristiques. On utilise comme solvants une solution d'acide formique et de l'acétonitrile. Un gradient entre ces deux solvants permet de séparer les différents composés phénoliques. Un détecteur à 280 nm permet l'analyse et de fournir les résultats suivants: - composés hydroxybenzodiques dont l'acide para-hydrobenzd'que, I'ensemble de ces composés hydrobenzodiques représentant de l'ordre de 2 % des polyphénols totaux, - composés hydroxycinnamiques représentant de l'ordre de 5 % des polyphénols totaux, et - isoflavones représentant de l'ordre de 11% des polyphénols totaux. 3/ EVALUATION IN VITRO bE L' ACTIVITE PIGMENTANTE Le principe consiste à étudier l'activité pigmentante du principe actif selon la présente invention sur des cultures de mélanocytes par mesure de l'activité tyrosinase et du taux de mélanine synthétisée. Le protocole opératoire consiste à ensemencer de mélanocytes B16F1 dans un milieu complet en présence de 0,25 % et 0,5 % (volume /volume) du principe actif 15 et on laisse incuber dans des conditions adaptées. On réalise parallèlement un témoin positif en présence de a-MSH (Melanocyte Stimuling Hormone), hormone de stimulation de la mélanogenèse. Les cellules sont trypsinées et comptées. Les cellules sont lysées et après centrifugation, on dose la tyrosinase à partir du 20 surnageant et le taux de mélanine à partir du culot. 3-1 Dosage de l'activité tyrosinase On ajoute à ce surnageant de la LbOPA. Après incubation, la densité optique DO à 490nm permet de déterminer l'activité de la tyrosinase. Les résultats sont les suivants: % d'activité tyrosinase / témoin Témoin positif x-MSH + 79 Principe actif dosé à 0,25 % + 18 Principe actif dosé à 0,5 % + 27 On constate à travers les résultats une forte activité tyrosinase ayant des valeurs tout à fait comparables avec celles obtenues avec l'hormone ca-MSH, I'effet étant dose-dépendant. 2-2 Dosage du taux de mélanine: Ce taux de mélanine est déterminé par rapport à une gamme étalon de mélanine synthétique allant de 0 à 500 pj/l. Les taux de mélanine synthétisée par des mélanocytes sont récapitulés dans le tableau suivant: Taux de mélanine synthétisée en% / témoin Témoin positif a-MSH + 210 Principe actif dosé à 0,25% + 41 Principe actif dosé à 0,5 % + 133 On constate une très forte augmentation dose-dépendante du taux de mélanine 15 sous l'action du principe actif. Une des formules cosmétiques utilisée et donc susceptible d'être réalisée industriellement comprend: - Alcool d'arachidyle / Alcool de béhényle / Glucoside d'arachidyl (Montanov 20 2002): 3% - Isononanoate d'isononyle (Lanol 99): 2% - Octanoate de cétéaryle (Lanol 1688): 10% - Polyacrylamide / Isoparaffine C13-14 / Laureth-7 (Sepigel 305): 2% - Principe actif: 5% Eau: 77,5% - Conservateur: 0,5%. Le principe actif peut être introduit dans tout support cosmétique adapté tel qu'une émulsion, une crème, une lotion, un onguent ou une dispersion. Ainsi, un procédé de bronzage de la peau consiste à appliquer une composition 10 contenant de 0,5 et 10 % de principe actif pour provoquer une forte augmentation de la mélanine. REVENDICATIONS 1. Procédé d'obtention d'un principe actif pour la stimulation de l'activité de la tyrosinase en sorte d'augmenter la synthèse de la mélanine, caractérisé en ce qu'il consiste à réaliser successivement les étapes suivantes - solubilisation de poudre de racines de bugrane choisie parmi les variétés Ononis spinosa, Ononis procurrens, Ononis campestris ou Ononis antiquorum dans une solution hydroglycolique à raison d'au moins 200 g/I, - séparation des phases soluble et insoluble par décantation, filtration ou centrifugation, et - concentration de la phase polyphénolique. 2. Principe actif obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il présente: - un taux de matière sèche compris entre 5 et 100 g/I, plus particulièrement entre 20 et 40 g/I. - un taux de composés phénoliques compris entre 0,15 à 3,6 g/l, plus particulièrement de 0,6 à 1,4 g/I. - un pH compris entre 4,0 et 7,0, plus particulièrement entre 5,0 et 6,0. 3. Procédé de bronzage de la peau par application du principe actif selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il provoque une forte augmentation de 20 la mélanine lorsque ledit principe actif est dosé entre 0,5 et 10 %. 4. Composition cosmétique destinée à favoriser le bronzage de la peau, caractérisée en ce qu'elle comprend entre 0,5 et 10 % de principe actif selon la revendication 2 sous une forme galénique telle qu'une crème, un onguent, une émulsion ou encore une dispersion. 5. Composition cosmétique selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle est intègre les composés suivants: - Alcool d'arachidyle / Alcool de béhényle / Glucoside d'arachidyl (Montanov 2002): 3% - Isononanoate d'isononyle (Lanol 99): 2% - Octanoate de cétéaryle (Lanol 1688): 10% - Polyacrylamide / Isoparaffine C13-14 / Laureth-7 (Sepigel 305): 2% - Principe actif: 5% 10 - Eau: 77,5% - Conservateur: 0,5%. J