FR 2807445 A1 20011012 FR 0004579 A 20000410 i La présente invention concerne un procédé pour stabiliser une enzyme, notamment en vue d'une application cosmétique. On sait que les enzymes ont une stabilité limitée dans le temps lorsque l'on cherche à les incorporer dans des compositions cosmétiques. On a donc déjà proposé différents procédés pour stabiliser des enzymes. L'une de ces méthodes consiste à conditionner l'enzyme dans une phase o l'enzyme est stable et à mélanger lors de l'utilisation cette phase avec une deuxième phase conditionnée séparément pour former une émulsion. Une telle méthode est décrite dans FR-A-2 163 348 (Richand), WO 96/10 990 (Knoll), WO 97/27 841 (GIST BROCADES), et WO 97/26 861 (NORD-MARK ARZNEIMITTEL). Une autre méthode, décrite dans FR 2 737 115 (L'OREAL), consiste à diminuer l'activité de l'eau par utilisation de polyols. Une autre méthode, décrite dans FR 2 732 593 (BIOEUROPE), consiste à immobiliser l'enzyme sur des particules telles que des particules de silice. A l'aide de tests de stabilité, les inventeurs ont maintenant mis en évidence le fait que les enzymes peuvent être stabilisées par certaines huiles végétales. La présente invention a ainsi pour objet un procédé de stabilisation d'une enzyme, notamment en vue d'une application cosmétique, qui consiste à mélanger l'enzyme avec un véhicule contenant une quantité efficace d'une huile ou cire végétale choisie parmi: a) - les huiles triglycéridiques dont au moins 5% en poids des acides gras sont constitués d'acide palmitoléique; b) - les huiles triglycéridiques dont au moins 10% en poids des acides gras sont constitués par des acides gras hydroxylés; c) - les huiles triglycéridiques dont au moins 40% en poids des acides gras sont constitués par des acides gras en C20 à C24 mono- ou di-insaturés, d) - les huiles ou cires contenant au moins 50% en poids de monoesters d'acides gras ayant au total 36 à 46 atomes de carbone et dérivant d'un acide gras insaturé et d'un alcool gras insaturé. L'huile ou cire végétale spécifique est avantageusement présente en une proportion en poids par rapport à l'enzyme d'au moins 4/1 et, de préférence, de /1 à 60/1. Les huiles ou cires végétales spécifiques qui sont utilisées dans la présente invention appartiennent à 4 classes spécifiques: a- les huiles triglycéridiques dont au moins 5% en poids des acides gras sont constitués d'acide palmitoléique. Comme exemples on peut citer les huiles suivantes: * macadamia (contenant de 20 à 25% d'acide palmitoléique), 10. aveline (contenant de 22 à 29% d'acide palmitoléique), * argousier (contenant de 20 à 30% d'acide palmitoléique), À avocat (contenant de 5 à 10% d'acide palmitoléique). b- Les huiles triglycéridiques dont au moins 10% en poids des acides gras sont constitués par des acides gras hydroxylés. Les acides gras hydroxylés sont essentiellement l'acide ricinoléique (OH C18:1), I'acide dimorphécolique (OH C18:2) et l'acide lesquerolique (OH C20:1). Comme exemples on peut citer les huiles des espèces suivantes: Ricin (Ricinus communis) 85 à 90% de OH C18:1 Ricinus zanzibarinus 90% de OH C18:1 Hiptage madablota 70% de OH C18:1 Hiptage benghalensis 85% de OH C18:1 Dimorphoteca pluvialis 62% de OH C18:2 Osteopermum ecklonis 72% de OH C18:2 Lesquerella fendleri, et autres espèces du même genre 57% de OH C20:1. c- Les huiles triglycéridiques dont au moins 40% en poids des acides gras sont constitués par des acides gras en C20-C24 mono- ou di-insaturés. Ces acides gras sont essentiellement l'acide eicosanoïque (C20:1 A13), I'acide eicosénoïque (C22:1 A5), I'acide docosénoïque ou acide érucique (C22:1 A13), l'acide docosanediénoïque (C22:2 A5, A13), l'acide tétracosénoïque (C24:1). Comme exemples, on peut citer les huiles des espèces suivantes: Limnanthe (Limnanthes alba) contenant 62,5% de C20:1 A13 L. douglasii contenant 62, 5% de C20:1 A13 Brassica napus contenant 45% de C22:1 A13 Crambe abyssinica contenant 55% de C22:1 A13 Eruca sativa contenant 45% de C22:1 A13 Lunaria annua contenant 43% de C22:1 A13. d- Les huiles ou cires contenant au moins 50% en poids de monoesters d'acides gras ayant au total 36 à 46 atomes de carbone et dérivant d'un acide gras insaturé et d'un alcool gras insaturé. Comme exemple, on peut citer l'huile de jojoba dont les deux principaux acides gras sont les suivants: C20:1 70 à 75% C22:1 0 à 15%, et les deux principaux alcanols sont les suivants C20:1 50% C22:1 40%. Les enzymes qui peuvent être stabilisées selon la présente invention peuvent être de différents types (protéases, lipases, phospholipases, phosphatases), de toute origine (biotechnologique, bactérienne, fongique, végétale) et sous toute forme (poudre, liquide, immobilisée, vectorisée). Le véhicule utilisé dans la présente invention peut en outre contenir une huile minérale qui peut être présente en une proportion en poids par rapport à l'enzyme d'au moins 10/1. Comme exemples d'huiles minérales, on peut citer les huiles de paraffine et les huiles de vaseline. Le véhicule utilisé dans la présente invention peut en outre contenir une silicone, notamment des huiles de type polydiméthylsiloxanes (telles que diméthicones, diméthiconols), des huiles polydiméthylsiloxanes modifiées (telles que diméthicone copolyols), ou des silicones volatiles (telles que que cyclométhicones). Le véhicule utilisé dans la présente invention peut en outre contenir un ester choisi parmi les esters d'alcools gras (en C4-C36), les esters d'acides gras (en C4-C36), les esters polyoxyéthyléniques d'acides gras et d'alcools gras tels que Steareth 21, Isoceteth 20, les esters de polyalcools tels que myreth3- myristate, polypropylène glycol - 2 myristyl éther propionate, les esters de sucroses tels que stéarate de glucose, sesquistéarate de méthyl glucose. Le véhicule utilisé dans la présente invention peut en outre contenir un agent gélifiant. Comme exemple, on peut citer l'hydroxypropylméthylcellulose et l'hydroxyéthylcellulose, les gommes xanthane, les alginates, les carbomeres (par exemple Carbopol 1382), les Polyquaterniums tels que Polyquaternium 32, Polyquaternium 39. Des compositions d'enzymes stabilisées selon la présente invention 1o peuvent contenir notamment: 0,1 à 5 % en poids d'enzyme, 2 à 50% en poids d'huile végétale spécifique, à 50% en poids d'huile minérale, 1 à 20% en poids de silicone, 1 à 30% en poids d'agent gélifiant, 1 à 30% d'ester. On donnera ci-après des résultats d'essais in vitro montrant l'effet de stabilisation des huiles végétales spécifiques dans des compositions de type cosmétique et l'effet des constituants complémentaires. On mesure l'activité protéolytique d'une protéase (Kératoline de la société Sederma), enzyme de type subtilisine, par hydrolyse in vitro de la caséine. Après hydrolyse, les protéines restantes sont précipitées par l'acide. Le dosage des peptides libérés se fait d'après la méthode de Lowery modifiée: en milieu alcalin, les ions Cu2+ du réactif de Folin forment avec les liaisons amides des peptides un complexe coloré en bleu, que l'on mesure à 660 nm. L'intensité de l'hydrolyse est proportionnelle à la valeur de la densité optique. Les compositions testées étaient les suivantes Enzyme (Keratoline) 0,5 % Huile végétale 30,0 % Huile minérale (isohexadécane) 38,9 % Gélifiant (galactomannane) 3,0 % Silice 2,0 % Silicone (cyclomethicone) 10,0 % Antioxydant (acétate de tocophérol) 0,1 % Ester (benzoate d'alkyle (C12 C15)) 15,0 % Parfum 0,5 % Résultats Des mesures ont été effectuées au bout de 15 jours et de 1 mois afin d'observer l'évolution de l'activité enzymatique dans le temps. On obtient les résultats suivants: Huiles selon macadamia Limnanthes jojoba ricin l'invention DO (TO) 0,68 0,83 1,29 0,45 DO (15 jours) 0,50 0,77 0,97 0,42 DO (1 mois) 0,46 0,54 0,70 0,39 Autres huiles palme raisin amande douce DO (T10O) 0,03 0,18 0,30 DO (15 jours) 0,00 0,14 0,23 DO (1 mois) 0,00 0,00 Il apparaît donc que des huiles végétales spécifiques selon l'invention sont l0 tout-à-fait adaptées pour préserver l'activité d'une enzyme dans le temps dans un produit fini. En revanche, les autres huiles (palme, raisin, amande douce) , soit détruisent dès le début les enzymes, soit ne permettent pas de conserver l'activité enzymatique. D'autres essais ont été effectués avec des constituants complémentaires. Les compositions testées étaient les suivantes: 1 2 3 4 Enzyme (keratoline) 0,5 % 0,5 % 0,5 % 0,5 % Huile de macadamia 30,0 % 0,00 0,00 0,00 Huile minérale (isohexadécane) 38,9% 68,9 % 38,9 % 38,9 % Gélifiant (galactomannane) 3,0 % 3,0 % 3,0 % 3,0 % Silice 2,0 % 2,0 % 2,0 % 2,0% Silicone (cyclométhicone) 10,0 % 10,0 % 40 % 10,0 % Antioxydant (acétate de tocothérol) 0,1 % 0,1 % 0,1 % 0,1 % 6 Ester (Benzoate d'alkyle (C12 C15) 15,0 % 15,0 % 15,0 % 45 % Parfum 0,5 % 0,5 % 0,5 % 0,5 % Les résultats étaient les suivants: Composition Référence DO (TO) DO (15 jours) %/T0 1 macadamia 0,68 0,50 73,5 2 huile minérale 0,92 NA * - 3 huile de silicone 0,55 NA * 4 ester 0,32 0,12 * NA: non accessible car séparation de phase. Il apparaît clairement que le remplacement de l'huile de macadémia par une huile minérale, une huile de silicone ou un ester, ne permet pas de stabiliser la composition à base d'enzyme. On donnera ci-après d'autres exemples concrets de compositions stabilisées selon le procédé de l'invention. Exemple I: Lait VISAGE Une formule lait visage a été conditionné dans un packaging bi-pack, les deux compartiments ne se mélangeant qu'au moment de l'emploi, de façon à former une émulsion sur la peau. La composition d'une première phase de type gel anhydre est la suivante: Enzyme (Keratoline) 0,5 % Huile végétale 30,0 % Huile minérale (isohexadécane) 38,9 % Gélifiant (galactomannane) 3,0 % Silice 2,0 % Silicone (cyclomethicone) 10,0 % Antioxydant (acétate de tocophérol) 0,1 % Ester (benzoate d'alkyle (C12 -C15) 15,0 % La composition de la deuxième phase (de type émulsion) est la suivante: Eau déminéralisée 54, 450 Sequestrant (Na4 EDTA) 0,025 Adoucissant (Allantoïne) 0,200 Gélifiant (Gomme xanthane) 4,075 Ester (Cocoate) 8,000 Conservaeurs (POBM) 1,650 Huile végétale (macadamia) 4,000 Antioxydant (acétate de tocophérol) 0, 200 Emulsion (Stéareth...) 4,100 Silice 1,000 Eau déminéralisée 8,000 Hydratant (Glycérine) 10,000 Sorbaïne 0,600 Complexe au Pro-Rétinol végétal 0,200 Vitamines (Palmitate de vit.A, Vit.E) 0,200 Parfum 0,300 Ethanol 3,000 Exemple 2: Cake (Poudre coulée) Ester (Cocoate) 20,400 Paraffine 65 5,000 Filtres solaires 1,000 Triglycéride 8,000 Huile végétale (macadamia) 9,500 Emulsifiants (Lécithine de soja) 1,500 Antioxydant (acétate de tocophérol) 0,100 Silicone 7,000 Enzyme (protéase) 0,600 Hydratant (glycérine) 6,000 Silice 5,000 Parfum 0,200 Charges (TiO2) 27,500 Gélifiant (Bentone) 1,200 Nacre 7,000 Exemple 3: Emulsion VISAGE et CORPS Eau déminéralisée 60,575 Humectant (Propylène glycol) 2, 000 Hydratant (Glycérine) 2,000 Séquestrant (Na 4 EDTA) 0,025 Gélifiants (Alginate) 0,100 Conservateur (POBM) 0,200 Antioxydant (acétate de tocophérol) 0,100 Huile végétale (macadamia) 12,000 Silicone (Cyclométhicone) 3,000 Tryglicéride 2,000 Adoucissants (Bisabolol) 0,100 Epaissisant (Acide gras) 1,500 Emulsifiants (Alcool gras) 4,000 Ester (Cocoate) 7,000 Enzymes (protéases) 1,100 Parfum 0,300 Ethanol 3,000 Silice 1,000 REVENDICATIONS 1. Procédé de stabilisation d'une enzyme, notamment en vue d'une application cosmétique, qui consiste à mélanger l'enzyme avec un véhicule contenant une quantité efficace d'une huile ou cire végétale choisie parmi a) - les huiles triglycéridiques dont au moins 5% en poids des acides gras sont constitués d'acide palmitoléique; b) - les huiles triglycéridiques dont au moins 10% en poids des acides gras sont constitués par des acides gras hydroxylés; c) - les huiles triglycéridiques dont au moins 40% en poids des acides gras io sont constitués par des acides gras en C20 à 024 mono- ou diinsaturés, d) - les huiles ou cires contenant au moins 50% en poids de monoesters d'acides gras ayant au total 36 à 46 atomes de carbone et dérivant d'un acide gras insaturé et d'un alcool gras insaturé. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel ladite huile végétale est présente en une proportion en poids par rapport à l'enzyme d'au moins 4/1. 3. Procédé selon la revendication 1 ou la revendication 2, dans lequel le véhicule contient en outre une huile minérale. 4. Procédé selon la revendication 3, dans lequel l'huile minérale est présente en une proportion en poids par rapport à l'enzyme d'au moins 10/1. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel le véhicule contient en outre une silicone. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel le véhicule contient en outre un ester choisi parmi les esters d'alcools gras (en C4-C36), les esters d'acides gras (en C4-C36), les esters polyoxyéthyléniques d'acides gras et d'alcools gras, les esters de polyalcools, les esters de sucroses. 7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel le véhicule contient en outre un agent gélifiant.