FR 2791262 A1 20000929 FR 9903538 A 19990322 La présente invention a pour objet des compositions à base de chondroitine et de chitosan et leur utilisation en cosmétologie, dermatologie et rhumatologie pour la protection, le traitement ou le remplacement des tissus conjonctifs. Les tissus conjonctifs des mammiferes, la peau en particulier, sont soumis notamment à des agressions de types microbien, fongique, viral, parasitaire, à des contraintes mécaniques, à des blessures ou à des carences qui les irritent, et les détériorent. De même, les articulations des mammifères sont soumises constamment à des stress et des contraintes mécaniques qui conduisent à des affections comme l'arthrose ou l'inflammation, qui sont responsables de leur blocage. Ces affections peuvent être aiguës au niveau des articulations telles que celles du cou, des épaules, du dos, des hanches, au niveau des articulations des membres antérieurs telles que les coudes ou les poignets, et au niveau des articulations des membres postérieurs comme celles des genoux ou des chevilles et au niveau des articulations des doigts des mains ou des pieds. Ces maux sont très courants et touchent aussi bien les hommes que les animaux. On connaît en rhumatologie et en dermatologie plusieurs familles de composés anti-inflammatoires, présentés sous diverses formes, utilisées par les hommes ou données aux animaux, comme les corticostéroïdes ou les A.I.N.S. (Anti- Inflammatoires Non Stéroïdiens). Ces produits, bien que soulageant la douleur et réduisant l'état inflammatoire des tissus conjonctifs lors de leur utilisation, n'ont qu'une fonction palliative de la douleur et ne permettent pas un retour à l'état normal par la reconstitution des tissus. Aussi ces traitements deviennent à la longue inefficaces, voire nocifs, car ils peuvent bloquer les processus naturels de défense du corps et conduire à une destruction des tissus conjonctifs. Lorsque les tissus conjonctifs sont soumis à des efforts, des stress et surtout lorsqu'il y a des lésions, ils produisent naturellement de fortes quantités de collagène et de protéoglycanes, composants majeurs de ces tissus, afin de se reconstituer. Ces composés, ainsi que leurs mécanismes de biosynthèse et d'action sont parfaitement connus et décrits dans la littérature. Le collagène est fabriqué à partir d'acides aminés, en particulier à partir de proline, de glycine et de lysine, et sa biosynthèse est stimulée par la présence de glucosamine. Les protéoglycanes, qui sont de larges complexes macromoléculaires, sont quant à eux constitués de longues chaînes de sucres modifiés, les glycosaminoglycanes, dont la glucosamine est un précurseur. Dans les processus de reconstitution du tissu conjonctif, les protéoglycanes et le collagène forment une 2 2791262 matrice qui confèere aux tissus leurs propriétés mécaniques. Cependant, les processus de biosynthèse in vivo du collagène et des glycosaminoglycanes à partir des molécules précurseurs sont relativement longs, ce qui constitue un frein à la réparation des tissus. Aussi, pour favoriser la reconstitution du tissu conjonctif, certains traitements consistent à amener dans l'organisme des molécules précurseurs exogènes. Cependant, ces molécules exogènes, et particulièrement la chondroïtine et ses sels, glycosaminoglycanes majeurs, sont dégradés de manière importante dans l'organisme. Cette dégradation réduit la quantité de molécules précurseurs susceptibles d'être utilisées pour la reconstruction des tissus conjonctifs et nécessite d'utiliser des compositions contenant des quantités importantes de ces composés. Les brevets américains US 5,364,845 et US 5,587,363 ainsi que la Demande de Brevet Européen n 0 693 928 décrivent une composition thérapeutique qui est une association d'aminosucre et de glycosaminoglycane avec éventuellement un sel de manganèse. L'aminosucre est choisi parmi la glucosamine, ses sels ou un mélange de ces derniers, et le glycosaminoglycane est choisi parmi la chondroïtine, ses sels ou un mélange de ceux-ci. Bien que l'association de ces composés ait montré un effet synergique, comparativement à des compositions contenant soit la glucosamine seule, soit le sulfate de chondroïtine seul, les doses utilisées restent très élevées; ainsi il est préconisé des capsules contenant des doses de glucosamine comprises entre 250 et 750 mg et des doses de sulfate de chondroïtine comprises entre et 200 mg pour l'homme ou les petits animaux (chiens), avec une à six capsules prises quotidiennement. Compte tenu du poids des animaux envisagés ainsi que celui de l'homme moyen, cela conduit à donner l'équivalent de 20 mg de sulfate de chondroitine et de 25 mg de glucosamine par kg de poids vif et par jour (calculé pour un homme de 60 kg recevant 6 capsules par jour). Le chitosan est un polysaccharide que l'on obtient par désacétylation plus ou moins totale de la chitine. L'hydrolyse de la chitine, homopolymère de N-acétyl-D-glucosamine et du chitosan conduisent à la formation de glucosamine, précurseur principal des sucres intervenant dans la synthèse des glycosaminolycanes. Le chitosan a des propriétés filmogènes, reconstituantes, antibactériennes, antifongiques, réhydratantes, cicatrisantes reconnues, qui ont conduit à son utilisation en médecine, notamment en tant que peau synthétique. Récemment, A. Denuzière et col., Electrophoresis (1997), 18, 745-750, ont montré, in vitro, que le chitosan protégeait, à un pH physiologique, les sulfates de chondroïtine de l'hydrolyse, lorsque ces sulfates étaient au préalable complexés, en milieu aqueux, avec le chitosan. Le chitosan, ses dérivés et ses sels sont définis plus en détail dans de nombreux ouvrages, en particulier dans l'ouvrage de R. A. A. Muzzarelli "The Polysaccharides" (1985) Academic-Press. La demanderesse s'est fixé pour but de pallier au défaut des compositions existantes, à savoir l'obligation de donner des quantités élevées de principes actifs, en mettant au point des compositions à base de chondroïtine et de chitosan, qui permettent l'administration de quantités efficaces et modérées de molécules exogènes participant à la protection, au traitement et à la reconstitution des tissus conjonctifs. En effet, la demanderesse a montré les effets spectaculaires inattendus des compositions selon l'invention, pour le traitement et la réparation des tissus conjonctifs, par absorption de ces compositions, quelle que soit l'affection articulaire ou dermatologique, et ce malgré de faibles quantités de principes actifs absorbées. Les compositions selon l'invention améliorent plus rapidement les signes cliniques que les compositions existantes; en particulier, les compositions selon l'invention diminuent rapidement les signes de douleurs, facilitent la mobilité et accélèrent la reconstitution du derme. Ainsi la présente invention se rapporte à des compositions, caractérisées en ce qu'elles comprennent: a) 1 à 50 % en poids de chondroïtine ou d'un de ses sels ou d'un mélange de ces derniers, par rapport au poids total de la composition, et b) 1 à 66 % en poids de chitosan, ou de ses sels ou de ses dérivés ou de leurs sels, par rapport au poids total de la composition. En effet, la Demanderesse a montré que l'association de la chondroitine avec du chitosan, ou ses sels ou ses dérivés ou leurs sels, permettait, de manière inattendue, d'obtenir des compositions contenant des quantités moins importantes de chondroitine, tout en gardant la même efficacité thérapeutique. Dans un mode préféré de réalisation, la chondroitine est utilisée sous forme de sulfate sodique. Dans un autre mode préféré de réalisation selon l'invention, le chitosan peut être choisi dans le groupe constitué par le chitosan ou les chitosans modifiés tels que les N-acyl chitosans, les N-carboxyalkyl chitosans, les N-carboxyacyl chitosans, les O-carboxyalkyl chitosans, les déoxyglycitl-yl chitosans, les hydroxyalkyl chitosans, ou les sels de ceux-ci. Ils peuvent être en outre de bas poids moléculaire. Préférentiellement le chitosan obtenu par une désacétylation presque totale de la chitine est choisi parmi ceux proposés par les sociétés japonaises Koyo, référence SK-400F80 ou SK-50SEP avec une désacétylation supérieure à 85%, 4 2791262 Katakura, référence CTA-1 ou CTA-2 avec une désacétylation supérieure à 90% pour la première et supérieure à 80% pour la seconde, Yaizu, référence LL ou LL-40 avec une désacétylation supérieure à 80%, Kyowa, référence HW avec une désacétylation supérieure à 85%. De manière avantageuse, la composition selon l'invention pourra comprendre en outre, un ou plusieurs inhibiteurs de radicaux libres qui participent aux processus de protection, de traitement et de reconstitution des tissus conjonctifs. On peut citer par exemple comme anti-radicaux libres envisageable dans les compositions selon l'invention, la vitamine E et ses dérivés, la vitamine C et ses dérivés (en particulier l'ascorbate de manganèse et/ou l'ascorbate de glucosamine), les bioflavonoïdes, la superoxyde dismutase et ses sels, et des extraits de plantes tels que l'huile essentielle de romarin. De manière avantageuse, la composition selon l'invention pourra comprendre en outre, tout élément facilitant ou participant aux biosynthèses ou aux processus de protection, de traitement et de reconstitution des tissus conjonctifs tels que les oligo-éléments, sous formes organiques ou inorganiques, (le manganèse, le cuivre, le fer, le zinc, etc), les vitamines et les nutriments. Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous forme liquide, pateuse ou solide, en utilisant les additifs usuels selon la voie d'administration envisagée (voie orale, voie topique, etc). Les compositions selon l'invention apportent de préférence pour 1 kg de poids vif et par jour: a) de 5 à 25 mg de sulfate de chondroitine sodique, et b) de 5 à 50 mg de chitosan. De manière avantageuse, les compositions selon l'invention apportent pour 1 kg de poids vif et par jour: a) 15 mg de sulfate de chondroïtine sodique, et b) 15 mg d'un chitosan ayant un degré de désacétylation supérieur à 80 %. Les compositions selon l'invention sont obtenues par mélange ou dissolution des différents constituants selon les techniques connues de l'homme de l'art. L'exemp!e qui suit est destiné à illustrer l'invention, sans pour autant en limiter la portée. EXEMPLE 1. Mode opératoire 3 groupes de 20 chiens sans restriction de race, d'âge, de sexe, et choisis dans une gamme de poids allant de 5 à 35 kg, présentant une arthrose à manifestation chronique 2791262 se traduisant par une boiterie d'un membre depuis au moins 1 mois, ont été traités et suivis par leur propriétaire et par des vétérinaires. La présence d'au moins une des lésions d'arthrose, figurant sur la fiche clinique, sur une ou plusieurs articulations du membre concerné (y compris l'articulation de l'épaule ou de la hanche) est confirmée à partir d'un cliché radiologique datant de moins de trois mois ou effectué le jour de la sélection des animaux. Tous les traitements anti- inflammatoires par voie orale ou injectable et tous les produits à visée chondroprotectrice, ont été arrêtés au moins 7 jours avant la sélection des animaux. On prépare selon des techniques connues de l'homme du métier des comprimés pour chien de formules A et C et on utilise des capsules de formule B du commerce. Les comprimés de formule A correspondent à une composition selon l'invention associée avec des excipients convenables. Les capsules de formule B correspondent aux produits commerciaux américains réalisés selon la méthode décrite dans les brevets US 5,364, 845 et ,587,363. B1 correspond aux capsules dénommées "Cosequin (Regular Strength)" et B2 correspond aux capsules "Cosequin (Double Strength)". Les comprimés de formule C correspondent à une composition équivalente à B I quant aux principes actifs et se présentant sous forme de comprimés préparés comme les comprimés A. Le contenu final des comprimés A et C et des capsules BI et B2 est illustré dans le tableau qui suit. Les quantités sont exprimées en pourcentage en poids du poids total de la composition. 6 2791262 FORMULE A B C B1 B2 _ - Sulfate de chondroïtine sodique 22,73 18, 185 - Chitosan 22,73 Appétent 10,0 - Excipient pour comprimés 44,54 55,54 - Glucosamine HCI 99+% 51,23 51,23 22,73 - Sulfate de Chondroitine sodique 95% + 40, 985 40,985 Mélange de Glycosaminoglycans 5% - Ascorbate de manganèse 7,785 7,785 3,455 - soit en ascorbate 6,76 6,76 3 - soit en manganèse 1,025 1,025 0,455 Poids d' un comprimé 660 mg 1100 mg Poids dans une capsule 488 mg 976 mg a) mode de traitement du premier groupe Chaque animal du premier groupe est traité par la composition A conforme à l'invention et présentée sous forme de comprimés, à raison de 1 prise par jour, le nombre de comprimés étant de 1 à 3 comprimés /2 par prise en fonction du poids de l'animal, pendant 6 semaines. Chaque animal reçoit environ 15 mg de sulfate de chondroitine sodique (ACS) et 15 mg de chitosan (Katakura CTA - 1) par kilogramme de poids vif et par jour. b) mode de traitement du deuxième groupe Chaque animal du deuxième groupe est traité par la composition B 1 [Cosequin (Regular Strength)] ou B2 [ Cosequin (Double Strength) 1 à raison de: * 2 capsules par jour de B1 pendant 6 semaines pour les chiens de poids corporel compris entre 4,5 et 11,35 kg * 2 capsules de B2 pendant 6 semaines pour les chiens de poids corporel compris entre 11,35 et 22,24 kg, * 3 capsules de B2 pendant 6 semaines pour les chiens de poids corporel entre 22,7 et ,4 kg. Chaque animal reçoit ainsi environ 30 mg de sulfate de chondroïtine et 37,5 mg de glucosamine/kg de poids vif/jour. c) mode de traitement du troisième groupe 7 2791262 Chaque animal du deuxième groupe est traité par la composition C à raison de: * 2 comprimés pour les chiens de poids corporel compris entre 4,5 et 11,35 kg, * 4 comprimés pour les chiens de poids corporel compris entre 11,35 et 22,24 kg, * 6 comprimés pour les chiens de poids corporel compris entre 22,7 et 45,4 kg. Chaque animal reçoit ainsi environ 30 mg de sulfate de chondroïtine et 37,5 mg de glucosamine par kg de poids vif et par jour. d) paramètres étudiés: Le propriétaire de chaque animal étudie, en faisant référence au comportement de son animal avant le traitement: - la facilité à se mouvoir de l'animal et la boiterie de l'animal lors de ses déplacements, - la souffrance de l'animal et les plaintes spontanées ou quand il est caressé. Le vétérinaire, pendant les visites à 30 et 60 jours après le début du traitement, étudie: - les difficultés à se lever ou à gravir un obstacle, - la tolérance à l'exercice, appréciée en interrogeant le propriétaire. - la boiterie, appréciée par examen clinique, - la douleur, appréciée par palpation-pression et par mobilisation de l'articulation, et - l'amplitude entre la flexion et l'extension maximales de l'articulation comparativement à une articulation saine, compte tenu de la race du chien. Les deux premiers paramètres appréciés par le vétérinaire tiennent compte de l'avis du propriétaire. Les cinq paramètres sont appréciés par le vétérinaire selon le barème suivant: -- guérison, si tous les paramètres sont revenus à la normale, amélioration importante, si 3 paramètres au moins sont revenus à la normale, - amélioration partielle, si 1 ou 2 paramètres sont revenus à la normale, - échec, si aucun des 5 paramètres n'est revenu à la normale. 2. Résultats a) 30 jours après le début du traitement: A la visite chez le vétérinaire, 30 jours après le début du traitement, on observe les résultats suivants, en fonction des compositions: 8 2791262 Echec Amélioration Amélioration Guérison partielle importante Formulation A 35% 50% 15% Formulation B 55% 40% 5% Formulation C 55% 45% I Les propriétaires des chiens du groupe A ont signalé dans 13 cas sur 20 au vétérinaire, que dès le dixième jour de traitement, était apparue une amélioration générale de l'état de santé de leur animal, se traduisant par une mobilité spontanée de l'animal et une disparition de la douleur, souvent perçue lors de caresses. On observe, après traitement par la composition A selon l'invention, une diminution significative du taux d'échecs et une augmentation significative du nombre d'animaux montrant une amélioration importante. b) 60 jours après le début du traitement: A la visite chez le vétérinaire, 60 jours après le début du traitement, on observe les résultats suivants en fonction des compositions: Echec Amélioration Amélioration Guérison partielle importante Formulation A 15% 20% 65% Formulation B 35% 25% 40% Formulation C 40% 25% 35% La formulation A selon l'invention apparaît comme étant celle conduisant aux meilleurs résultats. On observe, après traitement par la composition A selon l'invention, une diminution significative du taux d'échecs et une augmentation significative du nombre d'animaux montrant une amélioration importante. 9 2791262 REVENDICATIONS 1. Composition pour la protection, le traitement ou la réparation des tissus conjonctifs, caractérisée en ce qu'elle contient: a) 1 à 50 % en poids de chondroïtine ou de ses sels ou d'un mélange de ces derniers, par rapport au poids total de la composition, et b) 1 à 66 % en poids de chitosan, ou de ses sels, ou de dérivés de chitosan ou de leurs sels, par rapport au poids total de la composition. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le sel de chondroïtine est le sulfate de chondroitine sodique. 3. Composition selon l'une quelconque des revendications I ou 2, caractérisée en ce que le chitosan a un degré de désacétylation supérieur à 80 %. 4. Composition selon les revendications 2 et 3, caractérisée en ce qu'elle contient 5 à 25 mg de sulfate de chondroïtine sodique et 5 à 50 mg de chitosan. 5. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle contient 15 mg de sulfate de chondroïtine sodique et 15 mg de chitosan. 6. Composition selon selon l'une quelconque des revendications 1 à , caractérisée en ce qu'elle contient en outre une quantité efficace d'inhibiteurs de radicaux libres. 7. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour la préparation d'un médicament destiné à la protection, au traitement et à la réparation du tissu conjonctif 8. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, en cosmétologie. 9. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour réaliser une préparation destinée à un usage en dermatologie. 10. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications l à 6, pour réaliser une préparation destinée à un usage en rhumatologie.