FR 2777205 A1 19991015 FR 9804911 A 19980410 1 2777205 La présente invention a pour objet un procédé d'extraction du pollen, et les applications cosmétiques, dermo-cosmétiques ou pharmaceutiques de l'extrait obtenu par ce procédé. L'utilisation de pollen en cosmétique est connue depuis longtemps, et un procédé d'extraction du pollen à partir des aggrégats de pollen collectés par les abeilles est décrit notamment dans le brevet japonais J52-090635. Ce procédé est un procédé classique d'extraction alcoolique, simplement appliqué au pollen. Ce procédé traditionnel consiste à distiller le mélange constitué par le pollen et l'alcool, et nécessite donc une étape de chauffage et d'évaporation. Ces étapes modifient inévitablement la composition du pollen. Par ailleurs, le grain de pollen est constitué d'une enveloppe en lignine, qui forme une coquille comportant un trou microscopique. Les substances actives, et notamment les stérols, se trouvent à l'intérieur de la coquille. Les solvants habituellement utilisés dans l'art antérieur pour l'extraction du pollen pénètrent très difficilement dans le grain de pollen par le trou microscopique, et ne permettent par conséquent qu'une extraction incomplète de la 2 0 partie lipidique, et donc des stérols, se trouvant à l'intérieur de la coquille. Pour notamment remédier à ces inconvénients, un but de la présente invention est de proposer un procédé d'extraction du pollen caractérisé en ce que, dans une première phase de l'extraction, on met le pollen en contact avec un solvant ou un mélange de solvant, ledit solvant ou mélange de solvant étant du dioxyde de carbone sous pression et/ou un solvant polaire ou apolaire, puis dans une deuxième phase, on met en oeuvre un 3 0 moyen de séparer l'extrait de pollen, du mélange obtenu à l'issue de la première phase d'extraction. Suivant un mode de réalisation préféré de l'invention, le dioxyde de carbone est à une température comprise entre 31 C et 70 C et à une pression comprise entre 73.10-5 Pa et 300.10-5 Pa. 2 2777205 Avantageusement, le mélange de solvant utilisé dans la première phase d'extraction est un mélange de dioxyde de carbone et d'un solvant polaire. De préférence, ce solvant polaire est l'éthanol. Suivant un mode de réalisation particulier de l'invention, l'on effectue, préalablement à l'extraction, un traitement de la matière première. De préférence, ce traitement préalable de la matière première consiste à broyer les amas ou pelotes de grains de pollen. 1 0 Suivant un mode de réalisation préféré de l'invention, le moyen de séparation est d'abaisser la pression du dioxyde de carbone. Avantageusement, l'on abaisse la pression du CO2 en effectuant plusieurs paliers, de préférence, deux paliers. Suivant un autre mode de réalisation préféré du procédé selon l'invention, à l'issue de ladite seconde phase, on recycle le CO2 en abaissant sa température entre 0 et 10 C et sa pression à 50.10-5 Pa, puis en remontant la pression à 300.10-5 Pa au moyen d'une pompe et enfin en le réchauffant jusqu'à la température souhaitée pour l'extraction. L'invention a aussi pour objet de proposer un agent antifongique, caractérisé en ce qu'il comprend un extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'invention. L'invention a également pour objet de proposer une composition cosmétique ou dermocosmétique, caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'invention, en association avec tout excipient approprié. Un autre objet de l'invention est de proposer une composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'invention, en association avec tout excipient pharmaceutiquement acceptable. Avantageusement, la composition cosmétique ou dermo-cosmétique ou pharmaceutique selon l'invention se présente sous forme de gel, 3 2777205 crème, lotion, stick ou tout autre vecteur destiné à une application topique, ou sous forme de comprimés ou de gélules ou toute autre forme destinée à une administration orale. L'invention concerne également les applications d'un extrait de pollen obtenu par le procédé ci-dessus décrit pour l'obtention de compositions cosmétiques destinées à lutter contre le vieillissement cutané, à prévenir les effets néfastes des agressions solaires, à apaiser les inflammations dues aux agressions solaires et à 1 0 régénérer les tissus cutanés ayant subi de telles agressions et à restructurer ou raffermir les tissus cutanés. Encore un autre objet de l'invention est l'application de la composition pharmaceutique selon l'invention pour obtenir un médicament destiné au traitement de l'acné, du psoriasis, des brûlures, des ulcères variqueux, des cicatrices, des rhumatismes, de l'asthénie et notamment l'asthénie sexuelle masculine, de l'hypertrophie prostatique, ou de l'hyperlipidémie. Enfin, l'invention a également pour objet de fournir un médicament caractérisé en ce qu'il comprend une composition pharmaceutique selon l'invention. L'invention se comprendra mieux à la lecture de la description détaillée qui suit, qui illustre non limitativement l'invention. Le procédé selon l'invention est un procédé d'extraction du pollen caractérisé en ce que, dans une première phase de l'extraction, on met le pollen en contact avec un solvant ou un mélange de solvant. 3 0 Bien entendu, ce procédé ne fait intervenir aucune étape de distillation: les composants actifs des extraits de pollen obtenus par le procédé selon l'invention présentent donc des structures et une composition strictement identiques à celles des grains de pollen de départ. L'extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'invention comprend 20 à 60% en poids de matières insaponifiables. Ces 4 2777205 matières insaponifiables comprennent notamment des cires (environ 14% en poids.), des hydrocarbures (environ 10 à 15% en poids), des stérols, probablement majoritaires sous forme d'esters (entre 5 et 20% en poids) et des alcools aliphatiques et terpéniques. Le solvant ou mélange de solvant utilisé dans le procédé selon l'invention est de préférence du dioxyde de carbone sous pression et/ou un solvant polaire ou apolaire. Le dioxyde de carbone peut être utilisé comme solvant unique. Le dioxyde de carbone est un gaz inerte, présent dans l'air, et d'une innocuité totale. Le procédé selon l'invention peut donc être réalisé de manière à éviter toute contamination de la matière première, ainsi que de l'extrait, par des solvants plus ou moins toxiques. En outre, le procédé selon l'invention n'apporte aucune contamination au niveau de l'environnement et est parfaitement naturel. Dans une deuxième phase, on met en oeuvre un moyen de séparer l'extrait de pollen, du mélange obtenu à l'issue de la première phase d'extraction. Le dioxyde de carbone en état supercritique ou subcritique, c'est à dire lorsqu'il se trouve porté à une température voisine de sa température critique, à savoir 31 C et à une pression supérieure à sa pression critique, à savoir 73.10-5 Pa, se comporte comme un solvant apolaire, sélectif pour extraire les matières premières les moins polaires du pollen, les lipides. Sous l'effet de la pression, le 3 0 dioxyde de carbone supercritique pénètre facilement dans le grain de pollen, et même il dilate le grain de pollen. Ce phénomène de dilatation est observé à chaque extraction, et son importance est telle qu'il conditionne le remplissage de l'extracteur: on considère que le volume des grains de pollen, sous l'action du dioxyde de carbone supercritique, augmente d'environ 20 %. 2777205 Ainsi, l'introduction du dioxyde de carbone dans le grain de pollen s'effectuant sans difficulté et dans des quantités importantes, tous les lipides intéressants sont susceptibles d'être extraits des produits naturels alors que les protéines et les glucides ne sont pas solubles dans le dioxyde de carbone. Par ailleurs, en modifiant les paramètres de température et de pression, l'extraction des lipides est effectuée sélectivement. De préférence, le dioxyde de carbone est amené à une température 1 0 comprise entre 31 C et 70 C et à une pression comprise entre 73.10- Pa et 300.10-5 Pa. Avantageusement la température est comprise entre 40 C et 70 C et la pression de dioxyde de carbone est comprise entre 200 et 300.10-5 Pa. De manière générale, on observe que le rendement d'extraction augmente avec la température et la pression. Suivant un mode de réalisation préféré de l'invention, on peut moduler la polarité du dioxyde de carbone d'une part de façon modérée en jouant sur les paramètres pression-température, d'autre part de façon importante en additionnant un co-solvant polaire. De préférence, le co-solvant polaire est ajouté dans des proportions comprises de préférence entre 1 et 10% en poids. Avantageusement, le co-solvant polaire est un alcool, de préférence l'éthanol. Suivant un mode de réalisation particulier de l'invention, le co- solvant polaire est introduit dans l'extracteur par une pompe annexe qui envoie ce co-solvant entre la pompe du dioxyde de carbone et l'échangeur de réchauffage. Le co-solvant peut être 3 0 récupéré en quasi-totalité avec les extraits et recyclé. Bon solvant à haute pression, le dioxyde de carbone perd toute sa capacité de dissoudre les molécules organiques lorsqu'il est porté à l'état gazeux à une température voisine de sa température critique mais à une pression sensiblement inférieure à sa pression critique. 6 2777205 Ainsi, l'invention permet de séparer les produits dissous dans le dioxyde de carbone à haute pression en abaissant la pression sans changer notablement la température. On peut abaisser la pression de dioxyde de carbone brutalement, ou en respectant plusieurs paliers. De préférence, on effectue autant de paliers qu'il y a de groupes de molécules à séparer: de préférence, on effectue deux ou trois paliers. Le fait de ménager des paliers de pression permet de fractionner les extraits en classant les molécules les composant en fonction de leur solubilité dans le dioxyde de carbone à des pressions différentes. La récupération des extraits obtenus dans les deux ou trois paliers de séparation est réalisée par un système de sas automatisé. Suivant un mode de réalisation particulier de l'invention, on effectue, préalablement à l'extraction, un traitement de la matière première, qui consiste de préférence à broyer les pelotes de grains de pollen, par tout moyen de broyage connu. Cette étape préalable permet, avec certains solvants, d'obtenir de meilleurs rendements d'extraction. Suivant un mode de réalisation préféré de l'invention, on effectue un recyclage du dioxyde de carbone utilisé pour l'extraction. Le recyclage s'effectue par liquéfaction du dioxyde de carbone qui a servi à l'extraction en en abaissant la température, de manière à liquéfier ce dioxyde de carbone passé à l'état gazeux après les paliers de séparation. Suivant un mode de réalisation particulier de l'invention, la température est abaissée entre 0 et 10 C et la pression est diminuée à 50.10-5 Pa. Ensuite, pour réutiliser ce 3 0 dioxyde de carbone, on remonte sa pression à une pression supérieure à 73.10-5 Pa., de préférence à 200 à 300.10-5 Pa. Le dioxyde de carbone est ensuite réchauffé dans un échangeur jusqu'à une température comprise de préférence entre 40 et 70 C, avant d'être introduit dans les extracteurs. Le dioxyde de carbone est ainsi presque totalement recyclé. 7 2777205 Le pollen a une composition très riche; il apporte des protéines, de nombreux acides aminés, des vitamines, des minéraux, des enzymes et de la provitamine A. Les actions traditionnelles reconnues du pollen généralement consommé en pelotes séchées, sont les suivantes: - action régulatrice des fonctions intestinales, aussi bien en cas de diarrhée que de constipation, - augmentation du taux d'hémoglobine chez les anémiés, regain d'appétit et de poids chez les individus amaigris et récupération rapide des forces après grippe, dépression et autres maladies, - action bénéfique sur la fatigue intellectuelle, probablement grâce à sa teneur élevée en acides aminés, - action fortifiante sur le système circulatoire et notamment capillaire, par la présence de rutine, glucoside préventif des hémorragies et fortifiant les contractions du coeur, - action positive sur la croissance des jeunes enfants, - action rajeunissante par recouvrement de la puissance masculine, - action bienfaisante sur les fonctions du foie et récupération rapide de la santé après ictères, 3 0 action curative très efficace de la prostatite, - action diurétique, - action favorable sur le métabolisme lipidique. Or, les inventeurs ont mis en évidence des propriétés inconnues et totalement nouvelles pour les extraits obtenus par le procédé selon 8 2777205 l'invention. Ainsi, il apparaît que l'extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'invention possède des propriétés pharmacologiques particulièrement intéressantes Les inventeurs ont notamment démontré que l'extrait de pollen augmente sensiblement, à des concentrations de 8.10-4 %, 4.10-3 % et 2.10-2 % en poids, la néosynthèse des collagènes totaux (collagènes sécrétés + collagènes intracellulaires) et la multiplication des fibroblastes. Ces propriétés pharmacologiques conduisent à des applications dermocosmétiques variées, principalement dans le domaine de la cosmétique ou de la dermo-cosmétique. La multiplication des fibroblastes montre que l'extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'invention est un composé restructurant, raffermissant et cytostimulant et peut donc être utilisé notamment dans des 1 5 compositions cosmétiques destinées à lutter contre le vieillissement cutané, par exemple des compositions anti-rides, anti-vergetures, ou visant à obtenir un effet lissant et adoucissant de la peau, par exemple un effet anti-capitons. 2 0 Par ailleurs, les inventeurs ont également démontré que les extraits de pollen selon l'invention, à des concentrations choisies, permettaient la reprise de la multiplication de fibroblastes préalablement fragilisés par un rayonnement UVA. Ces propriétés pharmacologiques conduisent à des applications dermo- cosmétiques 2 5 ou pharmaceutiques en tant que réparateur et cicatrisant. Parmi les applications cosmétiques, les plus importantes sont celles relatives à la protection de la peau, à titre préventif, contre les effets du soleil, et à l'apaisement et la régénération d'une peau préalablement soumise à une agression solaire. Il est bien entendu que les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous toute forme galénique appropriée, et en association avec tout excipient cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable, pour une administration orale ou topique. 9 2777205 Les inventeurs ont également mis en évidence que l'extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'invention présente une activité antifongique et peut être utilisé comme agent anti-fongique, tant dans des compositions cosmétiques que dans des compositions dermo- cosmétiques, pharmaceutiques ou parapharmaceutiques, notamment dans le domaine de la podologie ou dans des compositions à visées anti-pelliculaires. Exemple 1: On introduit dans deux autoclaves de 400 litres montés en série, kg de pollen par autoclave, on ferme l'autoclave et on introduit le CO2 à une pression de 280.10-5 Pa. Le débit du C02 introduit est compris entre 600 et 1800 kg/h. Pendant toute la phase d'extraction, le CO2 est maintenu à une température comprise entre 50 et 60 C. La phase d'extration dure 4-5 heures, mais peut varier en fonction de la capacité de la pompe. On effectue la séparation dans un séparateur cyclonique à deux étages, qui permet d'effectuer la séparation gravitaire en deux étapes suivantes: dans un premier étage du séparateur, on abaisse la pression de 280 à 60.10-5 Pa, et la température est ramenée entre 30 et 50 C. La séparation totale de l'extrait de pollen est effectuée dans le 2ème étage de séparation, à une pression comprise entre 40 et 50.10-5 Pa et une température comprise entre 40 et 50 C. Le rendement est d'environ 2, 5 %. On obtient une pâte huileuse de couleur marron orangée présentant une forte odeur aromatique sucrée et une teneur en lipides élevée (60 à 80 % en poids). Exemple 2: 2 mg d'extrait de pollen sont déposés sur un milieu gélosé coulé en 3 0 boîte de Pétri et ensemencé en surface à l'aide d'une culture en milieu liquide d'une moisissure Aspergellus niger CIP 183183. Après incubation, la lecture des résultats se fait par la mesure des zones d'inhibition en millimètres, soit pour l'Aspergellus niger: 10 mm. L'extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'invention 3 5 révèle donc une activité antifongique. l o 2777205 REVENDICATIONS 1. Procédé d'extraction du pollen caractérisé en ce que, dans une première phase de l'extraction, on met le pollen en contact avec un solvant ou un mélange de solvant, ledit solvant ou mélange de solvant étant du dioxyde de carbone sous pression et/ou un solvant polaire ou apolaire, puis dans une deuxième phase, on met en oeuvre un moyen de séparer l'extrait de pollen, du mélange obtenu à l'issue de la première phase d'extraction. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit dioxyde de carbone est à une température comprise entre 31 C et 70 C et à une pression comprise entre 73.10-5 Pa et 300.10-5 Pa. 3. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que ledit mélange de solvant utilisé dans la première phase d'extraction est un mélange de dioxyde de carbone et d'un solvant polaire. 4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que ledit solvant polaire est l'éthanol. 5. Procédé d'extraction du pollen selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'on effectue, préalablement à l'extraction, un traitement de la matière première. 6. Procédé d'extraction du pollen selon la revendication 5, 3 0 caractérisé en ce que ledit traitement préalable de la matière première consiste à broyer les pelotes de grains de pollen. 7. Procédé d'extraction du pollen selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que ledit moyen de séparation est d'abaisser la pression du C02. i 1 2777205 8. Procédé d'extraction du pollen selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que l'on abaisse la pression du CO2 en effectuant plusieurs paliers. 9. Procédé d'extraction selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'on abaisse la pression du CO2 en effectuant deux paliers. 10. Procédé d'extraction du pollen selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que, à l'issue de ladite seconde phase, on recycle le CO2 en abaissant sa température entre 0 et 10 C et sa pression à 50.10-5 Pa, puis en remontant la pression à 300.105 Pa au moyen d'une pompe et enfin en le réchauffant jusqu'à la température souhaitée pour l'extraction. 11. Agent antifongique caractérisé en ce qu'il comprend un extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10. 12. Composition cosmétique ou dermocosmétique, caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, en association avec tout excipient approprié. 13. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, en association avec tout excipient pharmaceutiquement acceptable. 14. Composition cosmétique ou dermo-cosmétique ou pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 12 ou 13, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de gel, crème, lotion ou tout autre vecteur destiné à une application topique, ou sous forme de comprimés ou de gélules ou toute autre forme destinée à une administration orale. 15. Application d'un extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 pour l'obtention 1 2 2777205 d'une composition cosmétique destinée à lutter contre le vieillissement cutané. 16. Application d'un extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 pour l'obtention d'une composition cosmétique destinée à prévenir les effets néfastes pour la peau des agressions solaires. 17. Application d'un extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 pour l'obtention d'une composition cosmétique destinée à apaiser les inflammations dues aux agressions solaires et à régénérer les tissus cutanés ayant subi de telles agressions. 1 5 18. Application d'un extrait de pollen obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 pour l'obtention d'une composition cosmétique destinée à restructurer ou raffermir les tissus cutanés. 19. Application de la composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 13 ou 14 pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement de l'acné, du psoriasis, des brûlures, des ulcères variqueux, des cicatrices, des rhumatismes, de l'asthénie (et notamment l'asthénie sexuelle masculine), de l'hypertrophie prostatique, ou de l'hyperlipidémie. 20. Médicament caractérisé en ce qu'il comprend une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 13 ou 14.