FR 2764508 A1 19981218 FR 9707255 A 19970611 La présente invention est relative à des vecteurs liposomaux stables, sous forme pulvérulente, de principes actifs, et plus particulièrement de principes actifs sensibles à la dégradation digestive et/ou plasmatique, telles que les protéines, ainsi qu'à leur application en tant que médicament. Pour protéger de tels principes actifs fragiles, de nombreux vecteurs ont été proposés; parmi ceux-ci, il y a lieu de citer les liposomes, qui ont été considé- rés comme un vecteur de choix. Les premières études d'administration de liposomes par voie orale n'ont pas été concluantes (DESMUKH DS. et al., Life Sciences, 1981, 28, 239-242). Les résultats obtenus ont montré que les liposomes de formulation: diéther-phosphati- dylcholine (analogues non digestibles de PC)/cholestérol-7:1 permettaient une protec- tion gastro-intestinale du peptide encapsulé, mais ne permettaient pas son passage au travers de la barrière intestinale. Plusieurs raisons peuvent être avancées pour expliquer ce non-pas- sage: taille des liposomes trop grande et non calibrée, faible stabilité de la structure ou fuite du composé encapsulé vers le milieu extra-liposomal. Récemment, l'équipe de Robert Greenwood (Drug Dev. and Ind. Pharm., 1993, 19, 11, 1303-1315), de la Campbell University aux USA, a réussi à montrer que l'intubation duodénale de liposomes vectorisant l'insuline provoquait un effet hypoglycémiant supérieur à celui obtenu à l'issue d'une intubation duodénale d'une solution d'insuline libre. De nombreux essais ont été réalisés pour obtenir des liposomes pré- sentant de bonnes capacités de transport des principes actifs, notamment en ce qui con- cerne l'action su le pourcentage de capture du principe actif, la stabilité des liposomes et la biodisponibilité du principe actif On peut citer, par exemple, à titre indicatif: - S.B. Kulkarni et al. (J. Microencapsulation, 1995, 12, 3, 229-246) qui font le point sur les facteurs intervenant dans la microencapsulation des médica- ments dans les liposomes: taille du liposome, type de liposome, charge à la surface du liposome, rigidité de la bicouche, addition d'adjuvants d'encapsulation. Il ressort de cette évaluation que les MLV (multilamellar vesicles) contenant plusieurs bicouches et d'un diamètre compris entre 100 nm et 20 gm sont souhaitables pour l'encapsulation de médicaments hydrophobes interagissant avec les bicouches, alors que les LUV (large unilamellar vesicles) contenant une seule bicouche et d'une taille comprise entre et 1.000 nm sont considérées comme les plus appropriées à l'encapsulation des médicaments hydrophiles. - I. De Miguel et ai., (Biochimica et Biophysica Acta, 1995, 1237, 4948), qui proposent des nanoparticules composées d'un noyau interne formé de polysaccharides réticulés, greffés à leur partie externe par des acides gras et entourés d'une couche de phospholipides; - P.S. Uster et al., (FEBS Letters, 1996, 386, 243-246) qui propo- sent d'insérer des phospholipides modifiés par du poly(éthylène glycol) dans des lipo- somes préformés pour améliorer la biodisponibilité. Des séries d'expérimentations ayant trait à l'administration de pepti- des par voie orale ont été conduites et utilisent soit différentes méthodes d'encapsu- lation liposomales, soit la modification du principe actif lipidique par greffage de fonc- tion lipophiles. Dans tous les cas, le but est de transformer le principe actif lipidique en "prodrogue"; cette prodrogue présente la propriété de résister au transit gastro-intesti- nal, à savoir résistance au pH gastrique, aux détergents physiologiques (sels biliaires), aux protéases (exo- et endo-peptidases intestinales) et à la métabolisation par la flore intestinale. Par exemple, le pontage en position 2 d'un 1,3-diglycéride sur un penta- peptide a permis de conférer ces qualités à la drogue ainsi modifiée. Toutefois, ces différents liposomes de l'art antérieur ne permettent pas d'avoir à la fois une bonne stabilité, un rendement d'encapsulation du principe actif acceptable et une biodisponibilité per os significativement améliorée dudit principe actif, sans modifier le principe actif, qui conserve ainsi l'ensemble de ses fonctions et propriétés. J.C. Hauton, a décrit des liposomes à noyau interne gélifié (lipogélosomes ) en suspension en milieu aqueux contenant des substances gélifiantes. Il a, en particulier, mis au point un procédé permettant de fabriquer de tels liposomes (Brevet européen 0 393 049), se différenciant des liposomes classiques par le fait que la phase aqueuse encapsulée se présente sous forme semi-solide de gel et non sous forme liquide, ce qui empêche les fusions des liposomes lors des collisions. De tels lipogélosomes sont produits uniquement à partir de substances naturelles, ce qui minimise les risques d'intolérances. En particulier, dans le Brevet Européen 0 393 049, ces lipogélosomes sont constitués par une phase interfaciale en bicouche dans le cas des lipogélosomes unilamellaires ou d'une pluralité de phases interfaciales en bicouche superposées concentriquement, dans le cas des lipogélosomes multilamellaires et par une phase polaire aqueuse interne encapsulée gélifiée, dans laquelle la substance géli- fiée polymérisable ou non est sélectionnée parmi les polysaccharides, les polypeptides ou les polyacrylamides; par exemple la substance gélifiable non polymérisable est sélectionnée parmi la gélatine, l'agarose, ou les carraghénanes et la substance gélifiable polymérisable est sélectionnée parmi les gels de polyacrylamide. Ces lipogélosomes ont une stabilité significativement augmentée, par rapport aux liposomes de l'art anté- rieur, notamment en raison de l'absence de fusion interparticulaire pendant les colli- sions. Toutefois, ils ont l'inconvénient de se présenter sous la forme d'une dispersion de liposomes en phase liquide, non adaptée à la préparation de formulations solides, de stockage et d'administration aisés. En conséquence, la Demanderesse s'est donné pour but de pourvoir à un nouveau vecteur, qui permette effectivement d'obtenir à la fois un rendement d'encapsulation suffisant et une biodisponibilité per os significativement améliorée dudit principe actif, par rapport aux liposomes de l'Art antérieur, tout en présentant une grande stabilité tant au stockage qu'in vivo. Lesdits vecteurs, aptes à une administration par voie orale, sont caractérisés en ce qu'ils consistent en - une composition pulvérulente qui est essentiellement constituée de liposomes unilamellaires comprenant une phase lipidique externe constituée de lipi- des de classe 4 (phospholipides), éventuellement associés à des substances de classe 2 (triglycérides à longues chaînes, esters de cholestérol), des substances de classe 3 (cholestérol, acides gras à longue chaîne non ionisés) et/ou des substances de classe 5 (sels biliaires, dérivés de l'acide fusidique) et un noyau aqueux interne formant un gel aqueux thermoréversible irradiant jusqu'à la phase lipidique externe, lequel noyau aqueux interne est constitué essentiellement d'un mélange M d'au moins deux agents gélifiants non- polymérisables G1 et G2, différents et dont le point de transition de phase gel-sol est supérieur ou égal à 37 C, GI étant un agent gélifiant sélectionné parmi les gélatines et les carraghénanes, tels que les kappa- carraghénanes et G2 étant sélectionné parmi des carraghénanes ayant des propriétés différentes des carraghénanes sélectionnés pour G1, tels que les iota-carraghénanes et les celluloses, telles que l'hydroxypropylméthylcellulose, lesquels liposomes ont un diamètre compris entre 20 nm et 1 gm, de préférence compris entre 20 nm et 500 nm et qui se présente sous la forme d'unités particulaires ayant un diamètre moyen compris entre 10 gm et 1 000 gm, formées d'un ou plusieurs desdits liposomes, entourés d'une gangue sélectionnée dans le groupe constitué par un gel aqueux thermoréversible déshydraté identique au gel aqueux dudit noyau interne, des dextrines ou un mélange de ceux- ci, de telle sorte qu'elle comprend, en moyenne, 1016 à 1018 liposomes/g de poudre et - au moins un principe actif inclus, selon les cas, soit dans le noyau interne gélifié, soit dans la phase lipidique externe de ladite composition. De manière surprenante, de tels vecteurs permettent de surmonter les inconvénients liés aux liposomes classiques. En effet, ils permettent: d'augmenter la stabilité des liposomes, en raison de l'absence de fusion interparticulaire pendant les collisions, - d'augmenter la biodisponibilité du principe actif (protection dans le tractus gastrointestinal et passage à travers la barrière intestinale); en particulier, chez le rat, le temps de passage des vecteurs selon l'invention (LGS) à travers la barrière intestinale à partir de leur administration par la voie orale peut être compris entre 2 et 4 heures: soit 1 heure de vidange gastrique et I à 3 heures de passage de la lumière in- testinale vers la circulation systémique; ainsi un principe actif dont la capacité d'intemrnalisation cellulaire est faible ou nulle peut de façon effective être incorporé dans une cellule épithéliale intestinale différenciée, lorsqu'il est encapsulé dans un vecteur (LGS) selon l'invention, sans modification de l'activité ou de la composition du principe actif. - de diminuer la toxicité des principes actifs encapsulés et - d'entraîner moins de fuites des produits encapsulés, en raison de la plus faible mobilité moléculaire dans la phase aqueuse encapsulée gélifiée. De manière inattendue, en sélectionnant les gélifiants, il est possible d'obtenir des liposomes (SUV ou small unilamellar vesicles), aptes à être utilisés sous une forme sèche (poudre) et présentant des propriétés particulièrement intéressantes en tant que vecteur de principes actifs; en effet, de manière surprenante, la biodispo- nibilité par os desdits principes actifs, -de préférence des principes actifs, sensibles à la dégradation digestive, mal absorbés ou très toxiques- est augmentée de manière signi- ficative, lorsqu'ils sont encapsulés ou associés au vecteur selon la présente invention. En outre de tels vecteurs sous forme pulvérulente conservent toute l'intégrité des liposomes qu'ils contiennent et qui restent stables dans le temps, aussi bien sous forme pulvérulente que lorsqu'ils sont remis en suspension, du fait du main- tien de l'intégrité des lipides constitutifs (pas de produit de dégradation) et du maintien de l'intégrité des caractéristiques des agents gélifiants, notamment le mélange G1 et G2 (viscosité, force en gel et à la rupture, masses moléculaires). L'intérêt de l'utilisation des lipogélosomes (LGS) dans ce contexte est de bénéficier d'une forme liposomale stabilisée (JC Hauton et al, Eur. J. Surg., 1994, suppl. 574, 117-119) en vue de l'administration de principes actifs par voie orale. Le mode de fabrication des LGS permet d'obtenir en moyenne des taux d'encapsulation des phases hydrophiles gélifiées proches de 10 %. Ce pourcentage varie, notamment en fonction du poids moléculaire du principe actif, et se calcule selon le rapport quantité de principe actif encapsulé/quantité de principe actif mis en oeuvre. Par exemple on observe au moins 5 % d'encapsulation pour une molécule de 500 Da et au moins 50 % d'encapsulation pour une molécule d'au moins 20 kDa. Pour ce qui concerne les peptides par exemple, on observe 10 à 50 % d'encapsulation, alors que de manière générale pour l'ensemble des principes actifs, le pourcentage d'encapsulation varie de 5 à 80 %, selon les cas. Les agents gélifiants G1 et G2 diffèrent notamment en ce qui concerne les paramètres suivants: viscosité, force en gel et à la rupture, masses molé- culaires. Selon un autre mode de réalisation avantageux de ladite composition, ledit noyau aqueux interne des liposomes comprend, en outre, au moins un agent stabilisant de nature osidique, et/ou au moins un agent de régulation de l'osmolarité du milieu et/ou au moins un agent tensioactif, tel qu'un sel biliaire et/ou un agent tensio- actif non-ionique. De manière avantageuse, lesdits vecteurs comprennent en % (m/m) à 75 % de lipides de classe 4, 5 à 45 % d'agents gélifiants, 0 à 70 % d'agent stabili- sant de nature osidique, 0 à 15 % d'agent de régulation de l'osmolarité du milieu, 0 à % d'agents tensio-actifs et 0 à 15 % de dextrines, de préférence 8 à 12 %; cette formulation n'inclut pas les principes actifs. Selon un autre mode de réalisation avantageux de ladite composition pulvérulente selon l'invention, ledit noyau interne aqueux comprend 70 à 95 % d'agent gélifiant Gi et 5 à 30 % d'agent gélifiant G2. Selon un autre mode de réalisation avantageux de ladite composition pulvérulente selon l'invention, l'agent stabilisant de nature osidique est du saccharose, du tréhalose ou tout autre agent de protection. La présente invention a également pour objet un procédé de prépara- tion des vecteurs pulvérulents selon l'invention, dans lesquels la gangue externe des unités particulaires comprend une fraction de gel aqueux thermoréversible, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: (1) préparation d'une dispersion de liposomes à noyau interne gélifié (lipogélosomes ) en phase aqueuse par (a) préparation d'une solution d'au moins un agent gélifiant convenable, notamment un mélange M d'agents gélifiants GI et G2, par dissolution desdits agents gélifiants, sous agitation lente, à une température supérieure à la température de transition de phase gel-sol desdits agents gélifiants dans une solu- tion aqueuse à pH compatible avec le principe actif à encapsuler, (b) incorporation du principe actif dans la solution obtenue en (a), (c) incorporation des lipides dans la solution obtenue en (b), sous agitation lente du mélange, pendant une période infé- rieure à 5 heures, de préférence sous vide et formation d'une émulsion et (d) obtention de ladite dispersion de liposomes à noyau interne gélifié (lipogélosomes ) dans une phase aqueuse contenant lesdits agents gélifiants, par agitation rapide de l'émulsion obtenue en (c), de préférence sous vide et (2) obtention du produit pulvérulent par séchage convenable de la dispersion obtenue. Selon un mode de mise en oeuvre avantageux dudit procédé, le sé- chage est réalisé par atomisation, coacervation, couche mince ou granulation. La présente invention a également pour objet un procédé de prépara- tion des vecteurs pulvérulents selon l'invention, dans lesquels la gangue externe des unités particulaires comprend une fraction de gel aqueux thermoréversible et/ou une dextrine, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: (1) préparation d'une dispersion de liposomes à noyau interne gélifié (lipogélosomes ) en phase aqueuse par (a) préparation d'une solution d'au moins un agent gélifiant convenable, notamment un mélange M d'agents gélifiants GI et 02, par dissolution desdits agents gélifiants, sous agitation lente, à une température supérieure à la température de transition de phase gel-sol desdits agents gélifiants dans une solu- tion aqueuse à pH compatible avec le principe actif à encapsuler, (b) incorporation du principe actif dans la solution obtenue en (a), (c) incorporation des lipides dans la solution obtenue en (b), sous agitation lente du mélange, pendant une période infé- rieure à 5 heures, de préférence sous vide et formation d'une émulsion et (d) obtention de ladite dispersion de liposomes à noyau interne gélifié (lipogélosomes') dans une phase externe aqueuse contenant lesdits agents gélifiants, par agitation rapide de l'émulsion obtenue en (c), de préférence sous vide, (2) élimination d'au moins une partie de la phase liquide aqueuse contenant lesdits agents gélifiants, dans laquelle les liposomes sont dispersés, (3) ajout d'au moins une dextrine convenable et (4) obtention du produit pulvérulent par séchage par atomisation de produit obtenu en (3). Selon un mode de mise en ceuvre avantageux dudit procédé, l'étape (2) d'élimination d'au moins une partie de la phase liquide aqueuse contenant lesdits agents gélifiants est réalisée par dilution et/ou par filtration. Conformément aux procédés de préparation selon l'invention, la solution aqueuse de l'étape (a) comprend en outre un agent de régulation de l'osmolarité du milieu (NaCI à 0,9 %, par exemple) et/ou un agent stabilisant de nature osidique et/ ou un agent tensioactif, de préférence des substances de classe 5 (sels biliaires). En variante, le principe actif est ajouté dans la phase lipidique ex- terne, avant son incorporation dans le mélange obtenu en (a). Par exemple, la calcitonine est incorporée à pH 5, l'AZT, à pH 7,5 et la doxorubicine, à pH 3. De manière surprenante, de tels procédés permettent d'obtenir un vecteur sous forme pulvérulente à base de liposomes à noyau interne gélifié stables (lipogélosomes ) au cours d'une seule étape comportant une phase de maturation des constituants en phase aqueuse, à vitesse lente, puis une phase de dispersion (formation des lipogélosomes ) à vitesse rapide, comprennent une étape au cours de laquelle on obtient une dispersion stable de lipogélosomes en phase liquide, de morphologie homogène, qui est apte à être soumise à l'étape de séchage; une telle dispersion de liposomes à noyau interne gélifié présente, en effet, la morphologie est la suivante: structure vésiculaire de diamètre compris entre 20 nm et 500 nm, de préférence entre 20 et 80 nm, observations microscopiques en coloration négative, cryofracture, cryotransmission et force atomique: vésicules ou assemblages de vésicules d'aspect caractéristiques de bicouches phospholipidiques; la coloration négative permet d'observer la présence plus ou moins marquée de mélange M d'agents gélifiants enro- bant la couche phospholipidique externe, et polydispersité des liposomes à phase interne gélifiée comprise entre et 55 %, de préférence entre 10 et 30 %. Un tel procédé a l'avantage d'être reproductible et parfaitement adaptable à l'échelle industrielle. Il présente en outre l'avantage d'être moins lourd à mettre en oeuvre que les procédés de l'Art antérieur dans lesquels une étape de sonication, d'extrusion ou d'élimination de détergents est nécessaire, comme décrites dans le Brevet 0 393 049. Selon un mode de mise en oeuvre avantageux desdits procédés, l'étape (c) est effectuée, de préférence, à une vitesse de cisaillement inférieure à s'; de manière générale, la vitesse de cisaillement est donnée par le rapport suivant: vitesse du module d'agitation/écartement entre la paroi interne du réacteur et l'extrémité distale de la pale d'agitation (également appelé " entrefer "). La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend un vecteur liposomal pulvérulent de principe actif tel que défini ci-dessus et au moins un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Selon un mode de réalisation avantageux de ladite composition, elle se présente sous forme solide (gélule, comprimé, poudre à dissoudre dans l'eau). Selon un autre mode de réalisation de ladite composition, elle comprend en outre un activateur de l'AMPc. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en oeuvre du procédé objet de la présente invention ainsi qu'aux dessins annexés, dans lesquels: - la figure 1 représente les variations de la calcémie en fonction du temps (-A- = calcitonine libre; -1- = vecteur LGS-calcitonine selon l'invention); - la figure 2 représente la différence d'AUC entre la calcémie obtenue avec la calcitonine libre et celle obtenue après administration, par voie orale, des vec- teurs LGS-calcitonine selon l'invention; - la figure 3 représente les variations de calciurie en fonction du temps (-I- = vecteur LGS calcitonine 500 kDa, -El- = calcitonine libre, -I1- = vecteur LGS calcitonine 300 kDa); - la figure 4 représente l'évaluation de la phosphatémie en fonction du temps (-A- = calcitonine libre; --- = vecteur LGS-calcitonine selon l'invention); - la figure 5 représente la différence d'AUC entre la phosphatémie obtenue avec la calcitonine libre et celle obtenue après administration, par voie orale, des vecteurs LGS-calcitonine selon l'invention; - la figure 6 représente les variations de phosphaturie en fonction du temps (-E- = vecteur LGS calcitonine (construction (PA-vecteur) de poids moléculaire au moins supérieure à 500 kDa, ce qui équivaut à des lipogélosomes encapsulant la calcitonine de diamètre au moins supérieur à 40 nm), -El- = calcitonine libre, -t- = vecteur LGS calcitonine (construction (PA-vecteur) de poids moléculaire au moins supérieure à 300 kDa, ce qui équivaut à des lipogélosomes ' encapsulant la calcitonine de diamètre au moins supérieur à 20 nm); - la figure 7 représente les variations de la SGOT (UI/1) en fonction du temps (-E- = calcitonine libre; -*- = vecteur LGS-calcitonine selon l'invention); - la figure 8 représente les variations de la SGPT (UI/I) en fonction du temps (-E- = calcitonine libre; -*- = vecteur LGS-calcitonine selon l'invention); - la figure 9 représente les différences d'AUC des taux de SGPT en- tre les groupes traités à la calcitonine libre et ceux traités par un vecteur LGS-calcito- nine selon l'invention. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en au- cune manière une limitation. EXEMPLE 1: Procédé de préparation d'un vecteur pulvérulent selon l'invention contenant de la calcitonine 1) Préparation d'une dispersion de liposomes à phase interne gélifiée (lipogélosomes ): - Constituants: Lécithines de soja 11,915 kg (7,943 %) Gélatine B150 7,149 kg (4,766%) Iota carraghénanes 1,565 kg (1,043 %) Kappa carraghénanes 0,222 kg (0,148 %) Saccharose 8,936 kg (5,957 %) Chlorure de sodium 1,073 kg (0,715 %) Eau purifiée 119,15 kg (79,43 %) TOTAL MATIERE 150,01 kg (100 %). a) Préparation d'une dispersion de liposomes un mélange de: -gélatine B 150 7,149 kg - iota carraghénanes 1,565 kg - kappa carraghénanes 0, 222 kg - saccharose 8,936 kg - NaCI 1,073 kg - Na*- chénodéoxycholate 1,131 kg eau purifiée 118,00 kg, (qsp 150 kg) est prémélangé dans un mélangeur à vitesse de 10 tours/minutes, dont le planétaire tourne à la vitesse de 1500 tours/minute pendant 1,5 heures, sous vide. Il b) Incorporation de la calcitonine: A l'aide d'acide acétique concentré (6N), on procède à une baisse du pH du mélange par additions successives, jusqu'à atteindre un pH stable de 4,5. On procède ensuite à l'ajout de 4,075 g de calcitonine de saumon (Bachem California), dont l'activité spécifique est de 7017 UI/mg. c) Incorporation des phospholipides dans la solution obtenue en a): Les lécithines de soja (11,915 kg) sont ajoutées au prémélange, dans un mélangeur à la vitesse de 10 tours/minute, dans lequel le planétaire tourne à la vitesse de 1500 tours/minute, pendant 5 heures, sous vide (--> formation d'une émul- sion). Dispersion finale par augmentation des vitesses d'agitation du plané- taire (25 tours/minute) et de la turbine (2 500 tours/minute) un temps suffisant pour obtenir une polydispersité inférieure à 40 %. On obtient une dispersion de lipogélosomes en phase aqueuse. Observations microscopiques en coloration négative, cryofracture, cryotransmission et microscopie de force atomique: vésicules ou assemblages de vési- cules d'aspect caractéristiques de bicouches phospholipidiques; la coloration négative permet d'observer la présence plus ou moins marquée de gélifiant extérieur selon le procédé de fabrication et/ou de séparation choisi. d) filtration tangentielle Un volume de la dispersion de lipogélosomes , obtenue au cours des étapes précédentes est dilué dans 20 volumes de NaCI à 0,9 %, à chaud, sous agitation. Le diluant (NaCI 0,9 %) sera additionné de 8,25.10'4 % de chénodéoxycholate, selon la présence de ce tensioactif, dans la dispersion précédente. La phase non encapsulée est éliminée par ultrafiltration tangentielle continue à chaud. L'ultrafiltration est effectuée sur une membrane de porosité sélective de 300 ou 500 kDa, suivant la granulométrie voulue, des lipogélosomes . Le produit obtenu est une suspension de lipogélosomes , encapsulant au moins 17 % de calcitonine de saumon, dans laquelle les diamètres des liposomes varient de 20 nm à 500 nm, quand la suspension est ultrafiltrée sur 300 kDA et de 40 nm à 500 nm, lorsque la suspension est ultrafiltrée sur 500 kDA. 2) Séchage de la dispersion obtenue: La dispersion des lipogélosomes en phase aqueuse obtenue est transvasée dans un sécheur sous vide (50-100 mbars) pendant environ 4 heures. On obtient une poudre assez homogène, de couleur jaune paille, très claire, contenant des grains de diamètre compris entre 0,1.tm et 1 mm. Au niveau des observations de microscopie électronique, on a cons- taté une rétraction des vésicules lipidiques sur elles-mêmes, en raison de la déshydrata- tion. De plus, on remarque que, alors que, à l'état liquide, les LGS sont souvent agré- gés à l'intérieur d'une gangue gélifiée homogène dans un environnement de nombreu- ses structures vésiculaires isolées, l'étape de séchage transforme cette gangue gélati- neuse en filaments de gélifiant secs à la surface des agrégats, mais aussi à la surface des structures vésiculaires isolées. En variante, le séchage est effectué comme suit: la dispersion de lipogélosomes en phase aqueuse est répartie directement sur un sécheur à cylindres tournants (température des cylindres: 120-150 C, vitesse de rotation 3-6 tours/min.). Les " copeaux " obtenus sont ensuite broyés et calibrés sur une grille adéquate. On obtient alors une poudre de lipogélosomes (également dénommés ci-après LGS), ayant les caractéristiques définies ci-dessus. Le séchage peut être optimisé par l'ajout d'un excipient de charge, par exemple la maltodextrine ou les j3-cyclodextrines EXEMPLE 2: Effets comparés de la calcitonine libre ou encapsulée dans des vecteurs obtenus selon l'exemple 1, après administration orale chez le rat. Les effets d'une préparation selon l'exemple 1, sur la calcémie, la calciurie, la phosphatémie et la phosphaturie, sont analysés comparativement à l'admi- nistration orale de calcitonine sous forme libre. Les pharmacocinétiques obtenues pour les deux formes de calcitonine administrées sont également comparées. D'autres paramètres sont également analysés: transaminases (SGOT et SGPT) et glycémie. I1 est important de noter que l'effet de la calcitonine chez le rat ou chez l'homme normocalcémique est difficile à mettre en évidence, et que les réponses à cette hormone sont beaucoup plus nettes lorsque sont traités des sujets pathologiques (hypercalcémiques). Protocole expérimental- Préparation des LGS-Calcitonine. Voir exemple 1 Animaux et traitement pharmacologique. Animaux groupes de 10 rats Wistar Ico (IOPS AF/Han, IFFA CREDO) soit rats au total, âgés de 6 semaines et pesant entre 160 et 180 g, ont été constitués. Le poids des animaux est mesure en début d'expérience afin d'assurer, au niveau de ce paramètre, une répartition homogène des rats dans chacun des grou- pes. Les 6 groupes expérimentaux sont préalablement nourris pendant 7 jours par un régime de base type " AO4 " stérile (UAR = Usine d'Alimentation Ra- tionnelle (Fournisseur des régimes)). Les rats sont mis à jeun et sous glucose ad libitum 24 heures avant l'administration des doses expérimentales. Le poids des animaux est contrôlé avant l'administration des doses expérimentales. Schéma expérimental Les groupes A, B, C, D, E, F, G, H, I, J sont réalisés comme suit: * groupe A: 10 rats contrôles dont le plasma et l'urine sont prélevés au temps 0. * groupe B: 10 rats sont intubés et 1,8 ml de suspension de LGS- Cal-500 kDa (concentration approximative en calcitonine: 54 UI/rat soit 330 UI/kg) sont administrés à chaque individu. Le plasma et l'urine sont prélevés au temps 45 min. * groupe C: 10 rats sont intubés et 1,8 ml de suspension de LGS- Ca/500 kDa (concentration approximative en calcitonine: 54 UI/rat soit 330 UI/Kg) sont administrés à chaque individu. Le plasma et l'urine sont prélevés au temps 90 min. * groupe D: 10 rats sont intubés et 1,8 ml de suspension de LGS- Cal-500 kDa (concentration approximative en calcitonine: 54 UI/rat soit 330 UI/Kg) sont administrés à chaque individu. Le plasma et l'urine sont prélevés au temps 180 min. * groupe E: 10 rats sont intubés et 1,8 ml de suspension de LGS- Cal-500 kDa (concentration approximative en calcitonine: 54 UI/rat soit 330 UI/Kg) sont administrés à chaque individu. Le plasma et l'urine sont prélevés au temps 300 min. * groupe F: 10 rats sont intubés et 1,8 ml de suspension de calcito- nine libre (concentration: 54 UI/rat soit 330 UI/Kg) sont administrés à chaque indi- vidu. Le plasma et l'urine sont prélevés au temps 45 min. * groupe G: 10 rats sont intubés et 1,8 ml de suspension de calcito- nine libre (concentration: 54 UI/rat soit 330 UI/Kg) sont administrés à chaque indi- vidu. Le plasma et l'urine sont prélevés au temps 90 min. * groupe H: 10 rats sont intubés et 1,8 ml de suspension de calcito- nine libre (concentration: 54 UI/rat soit 330 UI/Kg) sont administrés à chaque indi- vidu. Le plasma et l'urine sont prélevés au temps 180 min. * groupe I: 10 rats sont intubés et 1,8 ml de suspension de calcito- nine libre (concentration: 54 UI/rat soit 330 UI/Kg) sont administrés à chaque indi- vidu. Le plasma et l'urine sont prélevés au temps 300 min. * groupe J: 10 rats sont intubés et 1,8 ml de suspension de LGS-Cal- 300 kDa (concentration approximative en calcitonine: 36 UI/rat soit 228 UI/Kg) sont administré à chaque individu. Le plasma et l'urine sont prélevés au temps 90 min. Anesthésies: les anesthésies sont réalisées à l'aide de Rompun (Xylazine 2 %;10 mg/kg)/ImalgèneJ (Kétamine 10 %; 60 mg/Kg) par injection intra- péritonéale selon la chronologie indiquée dans le schéma expérimental. Prélèvements Les prélèvements de sang au niveau de l'aorte abdominale par cathé- terisation sous anesthésie, sont effectués aux temps 0 pour le groupe A; temps 45 min. pour les groupes B et F; temps 90 min. pour les groupes C, G et J; temps 180 min. pour les groupes D et H; temps 300 min. pour les groupes E et I. La vessie est égale- ment canulée et l'urine récoltée selon le même timing que celui utilisé pour les prélève- ments sanguins. Le plasma total sera obtenu après séparation des échantillons de sang par centrifugation à 3000 TPM, 15 minutes, dans des tubes contenant 3,8 % d'EDTA (anticoagulant non protéique). Analyses Sur chaque échantillon de plasma, la calcémie, la phosphatémie, les transaminases seront dosés par colorimétrie. Traitement statistique des données Les résultats des mesures sont exprimés en moyenne + SEM des dix rats de chaque groupe. Les données seront comparées au moyen des tests statistiques appropriés à ce type de protocole expérimental (études des paramètres et pharmaco- cinétique). Le test statistique choisi est le test ANOVA ou analyse de variance, les si- gnifications des différences sont déterminées par le test de Fisher et par le test de Scheffe qui est plus discriminant. Deux méthodes d'expression des résultats ont été employées: la re- présentation graphique des moyennes de 10 valeurs relatives au paramètre considéré ainsi que l'analyse comparée des AUC (areas under the curve ou aires sous la courbe). Ce mode d'expression permet d'apprécier les différences d'amplitudes des réponses obtenues. Les résultats obtenus sont représentés selon la technique de pharma- cocinétique: variation du taux du paramètre considéré en fonction du temps. Il ne s'agit pas, en l'occurrence, de la recherche d'un effet dose. Résultats 20. Pharmacocinétique de l'effet de la calcitonine libre ou encapsu- lée sous forme de LGS-Calc, sur la calcémie. La figure 1 représente les variations de la calcémie en fonction du temps. Les dosages utilisés pour déterminer les concentrations en calcium ont été réali- sés par la méthode colorimétrique consignée dans la Pharmacopée. Les valeurs basales des calcémies (au temps 0) sont très bien corrélées aux données antérieures. Chaque point représente la moyenne de 10 valeurs, soit 9 groupes de 10 rats indépendants. Les moyennes sont exprimées + SEM. Les résultats sont comparés par analyse de variance (ANOVA), pour valeurs non appariées. Les différences significatives sont symbolisées par **. Ce symbole correspond à une significativité au test très discriminant de Scheffe. On constate une diminution transitoire de la calcémie après adminis- tration par voie orale de la calcitonine libre. Il est expliqué par le fait que lors d'une administration massive de peptide type calcitonine, un faible pourcentage franchit la barrière intestinale (1 %), sans être dénaturé. Ici 330 UI ont été administré ce qui cor- respond à un passage lymphatique de 3,3 UI (passage de la lumière intestinale vers le plasma, via la voie des canaux lymphatiques). Or, l'effet par voie IV de la calcitonine débute à 0,9 LUI. Il est donc normal d'observer cet effet de la calcitonine libre. L'hypocalcémie observée après administration orale de la calcitonine diminue au cours du temps pour rejoindre la normale après 90 min. En ce qui concerne les LGS-Calc, le même effet à 45 min est ob- servé, mais cet effet hypocalcémique est deux fois plus important à 180 min. Ce fait indique que la formulation LGS, à concentration équivalente en calcitonine, est plus efficace en terme d'effet pharmacologique que la calcitonine libre. On peut attribuer ce phénomène bi-phasique à l'activité de la calcitonine liée à la couche externe des LGS (première action), le second effet pourrait être dû à la calcitonine contenue à l'intérieur des LGS. On constate donc un effet retard doublé d'une augmentation de l'activité du *PA d'un facteur 2. La figure 2 représente la différence d'AUC entre la calcémie obtenue avec la calcitonine libre et celle obtenue après administration par voie orale des LGS- Calc. La différence observée est hautement significative au test de Scheffe. L'AUC correspond à un cumul de toutes les valeurs obtenues au cours de l'expérimentation; ces valeurs sont intégrées, puis comparées. L'AUC correspond à l'aire sous la courbe des variations de la calcémie en fonction du temps. Plus cette AUC est faible, plus l'effet hypocalcémiant est important (puisque la courbe se rapproche alors, de l'axe des abscisses). Pharmacocinétique de l'effet de la calcitonine libre ou encapsu- lée sous forme de LGS-Calc, sur la calciurie. Les restrictions évoquées au sujet des résultats plasmatiques obtenus par absorption atomique sont confirmées par l'analyse des valeurs obtenues sur l'urine des rats traités à la calcitonine libre ou encapsulée. En effet, la figure 3 corrobore les valeurs de la figure 1, puisqu'une hypocalcémie est toujours suivie d'une augmentation de la calciurie. Pharmacocinétique de l'effet de la calcitonine libre ou encap- sulée sous forme de LGS-Calc, sur la phosphatémie. (figure 4) Les LGSCalc et la calcitonine libre induisent une hypophosphatémie (dosage colorimétrique) qui se poursuit uniquement dans le cas des groupes traités au LGS-Calc. Les résultats sont significatifs au test de Fisher. La comparaison représentée dans la figure 5, des AUC respectives confirme très nettement les données de la pharmacocinétique. La différence entre les deux AUC est significative au test de Scheffe. Pharmacocinétique de l'effet de la calcitonine libre ou encap- sulée sous forme de LGS-Calc, sur la phosphaturie. (figure 6) Les dosages sur les échantillons d'urine ont été effectués par absorp- tion atomique comme dans le cas de la calciurie (voir précédemment). Ces résultats sont moins significatifs que dans le cas de la calciurie. Il est donc difficile de conclure. Néanmoins, il semble qu'au temps 180 min., l'effet des LGS-Calc ait une tendance à être supérieur à celui de la drogue non encapsulée. Aspect toxicologique de l'étude. Grâce aux prélèvements effectuées, il a été possible d'effectuer les dosages des transaminases au cours de l'administration des deux principes actifs. L'analyse des taux de SGOT au cours du temps montre une tendance à l'hypotoxicité (figure 7) de la forme encapsulée de la calcitonine par rapport à la forme libre. Cette différence est très significative au test de Fisher au temps 300 min. Néanmoins, les comparaisons des AUC ne montrent pas de différences significatives en ce qui con- cerne les variations des taux de SGOT au cours du temps. Cette tendance à une modération de l'augmentation des transaminases (" hypotoxicité ") est confirmée par l'analyse des taux de SGPT au cours du temps (figure 8). Ces données montrent une forte hypotoxicité de la forme encapsulée de la calcitonine comparativement à la forme libre. La figure 9 montre les différences d'AUC des taux de SGPT entre les groupes traités à la calcitonine libre et ceux traités par la calcitonine encapsulée. La différence entre les deux aires est significative au test de Scheffe. Cet effet peut notamment être utilisé dans le cadre d'administration de principes actifs hautement toxiques, afin de réduire l'impact hépatotoxique de telles substances. Conclusion - L'encapsulation de calcitonine dans la forme LGS potentialise le franchissement de la barrière intestinale. - L'effet comparé de l'administration par la voie orale montre un réel potentiel de la forme LGS, d'autant plus qu'il est désormais possible de stabiliser cette structure sous forme de poudre. - L'effet hypocalcémiant biphasique des LGS-Calc est explicable par la répartition de la calcitonine à la surface et au coeur des LGS. - Cette expérimentation permet de mettre en valeur l'hypotoxicité de la forme LGS-Calc par rapport à la forme libre, qui semble plus toxique. - Les données démontrant la supériorité de la forme LGS-Calc vs Calcitonine libre ont été acquises en utilisant la méthode de dosage recommandée dans la pharmacopée. - Les deux pics d'hypocalcémie provoquée après administration par la voie orale des deux formes de PA ont été précisés: 45 et 180 min après administration. - L'effet "retard" des LGS-Calc pourrait être dû à une libération progressive au niveau intestinal de microsphères issues d'une matrice mère: les con- centrats de LGS-Calc, qui pénètrent petit à petit la barrière intestinale. EXEMPLE 3: Augmentation de la biodisponibilité des principes encapsulés dans les formes lipogélosomes et dérivées; comparaison entre les liposomes et les lipo- gélosomes. 1. Comparaison de résistance ou de stabilité des formes lipogélo- some (LGS) et liposome (LS) classiques. Les LGS permettent de réaliser des formes galéniques (poudre) im- possibles à réaliser avec les formes liposomales classiques; seuls, les LGS sont résis- tants aux conditions physiologiques: pH, température, motilité intestinale, enzymes, ce qui leur confère la capacité d'être administrés par voie orale ou pulmonaire, alors que les LS sont déstructurés, lorsqu'ils sont administrés par de telles voies. a) Résistance au pH et aux sels biliaires intestinaux: Des séries d'incubations de LGS et de LS, 1 heure à 37 C en pré- sence de sel biliaire (taurodéoxycholate) au pouvoir détergent, et donc déstructurant vis-à-vis des vésicules lipidiques, sont réalisées. Les résultats montrent que pour une concentration de 0,25 mM en sel biliaire, les LGS sont 3 fois plus résistants que les LS. La résistance des structures est analysée par granulométrie laser (variation du taux de comptage des particules, indiqué par la variation de la diffraction d'un laser, en Khz). La comparaison de la structure (observée en granulométrie laser) des LGS et des LS après 1 heure d'incubation à des pH variables, montre que les LGS sont stables de pH = 2,5 à 9 alors que les LS sont majoritairement intacts, uniquement à pH = 6,3. Les LGS sont plus résistants que les LS aux pH et aux concentra- tions en détergent, rencontrés dans l'estomac; ceci permet de déduire que les LS sont dégradés dans l'estomac, alors que les LGS résistent plus longtemps. b) Résistance au milieu sérique, à la température et à l 'agitation: Des séries d'incubations de LGS et de LS ont été effectuées pendant 24 heures à 37 C sous agitation. Les phases lipidiques des LGS et LS, rigoureusement identiques en composition, ont été marquées de la même manière par un isotope (14-C). Les produits issus de la dégradation des deux types de structures: LS ou LGS ont été analysés au cours du temps. Il apparaît au vu des résultats que les constituants lipidi- ques des LS sont libérés plus facilement que les constituants lipidiques des LGS. Ces résultats montrent que la forme LGS est plus stable que la forme LS. c) Comparaison de la fuite des principes actifs encapsulés à partir des LGS et des LS: Un principe actif (PA) de petite taille (500 Da) a été encapsulé dans des LGS et dans des LS, en même quantité. Par la suite les deux préparations ont été mises sous agitation à 37 C dans un milieu sérique, et la libération du PA encapsulé a été mesurée. La quantité de PA libérée à partir des LS est 60 % supérieure à la quantité de PA libérée à partir des LGS (1,6 unité PA pour le LS; 1,01 unité PA pour le LGS). Grâce à cette stabilité significativement supérieure des LGS, des for- mes galéniques solides sont réalisables et une administration par voie orale est possible, alors qu'elles n'étaient pas envisageables avec des liposomes de formulation classique. 2. Comparaison de la biodisponibilité des formes lipogélosome et li- posome classiques. en modèle cellulaire. On a analysé les différences d'internalisation cellulaire d'un marqueur ou d'un PA lorsque ces molécules sont encapsulées dans des formes LGS (lipogélosome ) ou dans des formes LS (liposome). a) Comparaison des internalisations cellulaires des liposomes et des lipogélosomes : Les LS et les LGS ont été marqués à l'aide de sondes radioactives ou de sondes fluorescentes, et, après une période d'incubation dans un milieu en présence de macrophages humains (souche THPI) en culture à 37 C, l'internalisation comparee des deux types de structures (LS et LGS) a été analysée en fin d'incubation, la durée des incubations étant identique. L'analyse des internalisations a été effectuée par diver- ses méthodes analytiques. A. microscopie à fluorescence Les clichés montrent une internalisation des LS et des LGS, mais dans le cas des LS la répartition du signal est homogène alors que la répartition du si- gnal des LGS est localisée dans des structures intracellulaires ponctiformes. Ce résultat montre que les LGS sont moins vite dégradés au niveau intracellulaire que les structures LS (o le signal diffuse plus rapidement dans la cel- lule). Ainsi, un effet de diffusion lente des principes actifs encapsulés dans les LGS apparaît, alors qu'il n'existe pas pour les LS. B. radiomarquage Le comptage au niveau intracellulaire des LGS radiomarqués et des LS radiomarqués montre que les LGS sont 2,5 fois plus internalisés que les LS dans les mêmes conditions expérimentales. Les LGS sont internalisés en plus grande quantité que les LS: ce fait montre que la biodisponibilité cellulaire des LGS est plus grande que celles des LS, ce fait est du à la différence entre les deux structures liposomales: la présence d'un gel thermoréversible particulier, dans la phase interne du LGS, irradiant jusqu'à la surface de la particule, confère aux LGS une propriété de captation cellulaire préférentielle. C. cytométrie de flux Ces expérimentations reposent sur l'endocytose cellulaire comparée de LGS et de LS marqués par une sonde fluorescente. Après l'incubation, les cellules sont récoltées puis passées au cytomètre de flux, qui quantifie le signal fluorescent dans chaque cellule. Les spectres obtenus montrent que les cellules incubées avec les LGS émettent 2,5 fois plus de signal fluorescent que les cellules incubées avec les LS. Les LGS sont internalisés 2,5 fois plus que les LS: ce fait montre que la biodisponibilité cellulaire des LGS est plus grande que celle des LS. b) Pharmacologie cellulaire comparée des lipogélosomes -PA/PA libre A. AZT et 3TC, effets sur les macrophages en culture: Dans ces expérimentations, des LGS encapsulant l'AZT ou le 3TC ont été incubés avec des cellules macrophagiques humaines. Les cytotoxicités des pro- duits libres ou encapsulés dans les LGS ont été analysées. Les résultats montrent que les PA encapsulés sont 150 fois plus efficaces que l'AZT ou le 3TC libres, en terme de cytotoxicité vis-à-vis des macrophages en culture. Ces expérimentations montrent qu'à doses égales le PA encapsulé est 150 fois plus actif vis-à-vis des macrophages que le PA libre, vraisemblablement du fait de sa meilleure intemrnalisation cellulaire. B. Doxorubicine et PEG 4000, effets sur les hépatocytes et les cellu- les épithéliales intestinales différenciées, en culture: On a comparé l'internalisation cellulaire de deux molécules: la doxorubicine et le PEG 4000, suivant que leur forme est libre ou encapsulée sous forme de LGS. Dans les mêmes conditions expérimentales en temps et en concentra- tion, le fait que la molécule soit encapsulée provoque une augmentation de son incor- poration cellulaire ou de son activité pharmacologique vis-à-vis des cellules d'origine hépatique ou intestinale, d'un facteur variant de 1,5 à 3. Ces expérimentations montrent que la biodisponibilité des molécules encapsulées sous forme de LGS est augmentée par rapport à leur forme libre sur des cellules épithéliales intestinales ou sur des cellules parenchymateuses hépatiques. c) Explication de la biodisponibilité modifiée des molécules lorsqu 'elles sont sousforme de LGS: Les liposomes (LS) sont habituellement internalisés au niveau cellu- laire par un processus de fusion membranaire, dit de diffusion passive, c'est-à-dire ne mettant pas en cause de messagers secondaires responsables de l'expression d'un ré- cepteur membranaire. Or, les LGS différent des LS, par la présence d'un gel thermoréver- sible particulier dans la phase interne du LGS, irradiant jusqu'à la surface de la parti- cule ainsi que par la présence d'une pellicule de gel sur sa surface externe Ce gel est de nature protéo-saccharique (mélange de gélatine, carraghénanes K et t). Les différences d'internalisations cellulaires et donc de biodisponibi- lité entre les LS et les LGS selon l'invention, résident essentiellement dans la présence et la composition de ce gel. Des cellules intestinales différenciées ou non différenciées (souches HT29, HT29gal, T84) ont été cultivées sur filtre semi-poreux (chambre de diffusion). Des LGS ont été incubés avec ces cellules en présence ou en l'absence de cpt-AMPc. En présence de cpt-AMPc, l'internalisation des LGS est augmentée d'un facteur 2. Cette expérimentation montre que l'internalisation des LGS est un phénomène AMPc-dépendant. Par ailleurs la courbe d'internalisation des LGS en fonc- tion de la dose montre que le phénomène d'internalisation des LGS est saturable. Ces deux faits essentiels montrent que l'internalisation des LGS est médiée par un récep- teur. Ce procédé d'internalisation diffère donc des processus d'endocytose par fusion des liposomes classiques, non-dépendant d'un récepteur. Ainsi la biodisponibilité op- timisée des drogues encapsulées dans les LGS est expliquée par la mise en jeu d'un récepteur propre aux LGS. d) Biodisponibilité des formes lipogélosomes in vivo chez le rat: voir exemple 3 e) Biodisponibilité des formes lipogélosomes sur modèle chambre de diffusion: Des cellules épithéliales intestinales ont été cultivées à confluence sur filtre semi-poreux permettant d'obtenir un système bicompartimenté, séparant un mi- lieu " plasmatique " d'un milieu " lumière intestinale ". Des LGS ont été disposés côté " lumière intestinale ", puis après une période d'incubation, le milieu " plasmatique " a été analysé. Dans ce compartiment, on retrouve par granulométrie laser, des structures présentant les mêmes caractéristiques que les LGS déposés au départ de l'expérimentation dans le compartiment " lumière intestinale ". L'ajout d'une propor- tion de CDCA (chénodéoxycholate) dans la formulation des LGS, augmente le nombre de particules retrouvées dans le compartiment " plasmatique ". Ces expérimentations montrent qu'une proportion de LGS franchit l'épithélium intestinal vraisemblablement par un processus de passage paracellulaire ou de transcytose. Ce passage est augmenté lorsque la formulation LGS est modifiée par l'ajout de CDCA. Ainsi, il est possible d'optimiser le passage transépithélial intestinal (après administration par voie orale par exemple) de molécules encapsulées dans les LGS; la forme LGS permet d'augmenter la biodisponibilité intestinale des molécules encapsulées, cette propriété est exacerbée lorsque le chénodéoxycholate est inclus dans la formulation LGS. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nul- lement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui vien- nent d'être décrits de façon plus explicite; elle en embrasse au contraire toutes les va- riantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. REVENDICATIONS 1 ) vecteurs liposomaux de principes actifs, caractérisés en ce qu'ils consistent en: - une composition pulvérulente qui est essentiellement constituée de liposomes unilamellaires comprenant une phase lipidique externe constituée de lipi- des de classe 4 (phospholipides), éventuellement associés à des substances de classe 2 (triglycérides à longues chaînes, esters de cholestérol), des substances de classe 3 (cholestérol, acides gras à longue chaîne non ionisés) et/ou des substances de classe 5 (sels biliaires, dérivés de l'acide fusidique) et un noyau aqueux interne formant un gel aqueux thermoréversible irradiant jusqu'à la phase lipidique externe, lequel noyau aqueux interne est constitué essentiellement d'un mélange M d'au moins deux agents gélifiants non-polymérisables G1 et G2, différents et dont le point de transition de phase gel-sol est supérieur ou égal à 37 C, G1 étant un agent gélifiant sélectionné parmi les gélatines et les carraghénanes et G2 étant sélectionné parmi des carraghé- nanes ayant des propriétés différentes des carraghénanes sélectionnés pour G1, et les celluloses, lesquels liposomes ont un diamètre compris entre 20 nm et 1 tm, de préfé- rence compris entre 20 nm et 500 nm et qui se présente sous la forme d'unités particu- laires ayant un diamètre moyen compris entre 10 lm et 1 000.m, formées d'un ou plusieurs desdits liposomes, entourés d'une gangue sélectionnée dans le groupe consti- tué par un gel aqueux thermoréversible déshydraté identique au gel aqueux dudit noyau interne, des dextrines ou un mélange de ceux-ci, de telle sorte qu'elle comprend, en moyenne, 10t6 à 1018 liposomes/g de poudre et au moins un principe actif inclus, selon les cas, soit dans le noyau interne gélifié, soit dans la phase lipidique externe. 2 ) Vecteurs liposomaux de principes actifs selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils comprennent, en outre, dans leur noyau aqueux interne, au moins un agent stabilisant de nature osidique, et/ou au moins un agent de régulation de l'osmolarité du milieu et/ou au moins un agent tensioactif, tel qu'un sel biliaire et/ou un agent tensioactif non-ionique. 3 ) Vecteurs liposomaux de principes actifs selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisés en ce qu'ils comprennent en % (m/m): 25 à 75 % de lipides de classe 4, 5 à 45 % d'agents gélifiants, 0 à 70 % d'agent stabilisant de nature osidique, 0 à 15 % d'agent de régulation de l'osmolarité du milieu, 0 à 20 % d'agents tensio-actifs et 0 à 15 % de dextrines. 4 ) Vecteurs liposomaux de principes actifs selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisés en ce que ledit noyau interne aqueux comprend 70 à 95 % d'agent gélifiant Gi et 5 à 30 % d'agent gélifiant G2 ) Vecteurs liposomaux de principes actifs selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisés en ce que l'agent stabilisant de nature osidique est du saccharose, du tréhalose ou tout autre agent de protection. 6 ) Procédé de préparation des vecteurs pulvérulents selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lesquels la gangue externe des unités particulaires comprend une fraction de gel aqueux thermoréversible déshydraté, carac- térisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: (1) préparation d'une dispersion de liposomes à noyau interne gélifié (lipogélosomes ) en phase aqueuse par (a) préparation d'une solution d'au moins un agent gélifiant convenable, notamment un mélange M d'agents gélifiants G1 et G2, par dissolution desdits agents gélifiants, sous agitation lente, à une température supérieure à la température de transition de phase gel-sol desdits agents gélifiants dans une solu- tion aqueuse à pH compatible avec le principe actif à encapsuler, (b) incorporation du principe actif dans la solution obtenue en (a), (c) incorporation des lipides dans la solution obtenue en (b), sous agitation lente du mélange, pendant une période infé- rieure à 5 heures, de préférence sous vide et formation d'une émulsion et (d) obtention de ladite dispersion de liposomes à noyau interne gélifié (lipogélosomes) dans une phase aqueuse contenant lesdits agents gélifiants, par agitation rapide de l'émulsion obtenue en (c), de préférence sous vide et (2) obtention du produit pulvérulent par séchage convenable de la dispersion obtenue. 7 ) Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le séchage est réalisé par atomisation, coacervation, couche mince ou granulation. 8 ) Procédé de préparation des vecteurs pulvérulents selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lesquels la gangue externe des unités particulaires comprend une fraction de gel aqueux thermoréversible et/ou une dextrine, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: (1) préparation d'une dispersion de liposomes à noyau interne gélifié (lipogélosomes ) en phase aqueuse par (a) préparation d'une solution d'au moins un agent gélifiant convenable, notamment un mélange M d'agents gélifiants GI et G2, par dissolution desdits agents gélifiants, sous agitation lente, à une température supérieure à la température de transition de phase gel-sol desdits agents gélifiants dans une solu- tion aqueuse à pH compatible avec le principe actif à encapsuler, (b) incorporation du principe actif dans la solution obtenue en (a), (c) incorporation des lipides dans la solution obtenue en (b), sous agitation lente du mélange, pendant une période infé- rieure à 5 heures, de préférence sous vide et formation d'une émulsion et (d) obtention de ladite dispersion de liposomes à noyau interne gélifié (lipogélosomes ) dans une phase externe aqueuse contenant lesdits agents gélifiants, par agitation rapide de l'émulsion obtenue en (c), de préférence sous vide, (2) élimination d'au moins une partie de la phase liquide aqueuse contenant lesdits agents gélifiants, dans laquelle les liposomes sont dispersés, (3) ajout d'au moins une dextrine convenable et (4) obtention du produit pulvérulent par séchage par atomisation de produit obtenu en (3). 9 ) Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'étape (2) d'élimination d'au moins une partie de la phase liquide aqueuse contenant lesdits agents gélifiants est réalisée par dilution et/ou par filtration. ) Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 9, carac- térisé en ce que la solution aqueuse de l'étape (a) comprend en outre un agent de régu- lation de l'osmolarité du milieu (NaCI à 0,9 %, par exemple) et/ou un agent stabilisant de nature osidique et/ ou un agent tensioactif, de préférence des substances de classe 5 (sels biliaires). 11 ) Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendica- tions 6 à 10, caractérisé en ce que l'étape (b) d'incorporation du principe actif est effectuée dans la phase lipidique externe, avant l'incorporation de cette dernière dans le mélange obtenu en (a). 12 ) Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 11, caractérisé en ce que l'étape (c), est effectuée, de préférence, à une vitesse de cisaille- ment inférieure à 200 s1'. 13 ) Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle com- prend un vecteur liposomal de principe actif selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 et au moins un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 14 ) Composition selon la revendication 13, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un activateur de l'AMPc ) Composition selon la revendication 13 ou la revendication 14, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme solide (gélule, comprimé, poudre à dissoudre dans l'eau). 16 ) Dispersion de liposomes à noyaux internes gélifiés dans une solution aqueuse contenant le mélange d'agents gélifiants tels que définis à la revendi- cation 1, dans laquelle lesdits liposomes présentent la morphologie suivante: structure vésiculaire de diamètre compris entre 20 nm et 500 nm, de préférence entre 20 et 80 nm, et polydispersité des liposomes à phase interne gélifiée comprise entre 10 et 55 %, de préférence entre 10 et 30 %.