FR 2760454 A1 19980911 FR 9702714 A 19970305 (R) N-(l-cyclopropvlméthyl-pyrrolidine-2ylméthyl)-benzamide et son utilité comme antidiarrhéique - domaine de l'invention L'invention se rapporte au (R) N-(I-cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2 ylméthyl)-benzamide et le racémique (R,S) lui correspondant, leurs sels, et leur utilité comme médicaments antidiarrhéiques chez l'homme. - état de la technique Les anomalies sécrétoires du tractus gastrointestinal sont, avec les troubles de la motricité, responsables de la majorité des diarrhées chroniques ou aigues qui, en 1990, ont été estimées être la seconde cause de mortalité mondiale, notamment auprès des populations infantiles des pays en cours de développement. Les diarrhées chroniques sont définies par leur durée persistante généralement au delà de deux semaines. Leurs mécanismes connus et la stratégie diagnostique à tenir devant ces cas a été documentée par M. CERF - Gastroenterol. Clin. Biol, 1992, 16, T 12-T 21. et plus récemment par M.J.G.FARTHING - Eur. J. of Gastroenterol. & Hepatol. 1996, 8:157-167. Les diarrhées aiguës, qui sont en grande majorité d'origine infectieuse, ont été également documentées par M.CERF et M.HAGIAGE: Diarrhées aiguës d'origine infectieuse. - Editions Techniques - Encycl. Méd. Chir. (Paris-France), Gastroentérologie, 9061 A' , 1992, 20p., et H.L.DuPONT - Review article: infectious diarrhoea - Aliment. Pharmacol. Ther. 1994; 8: p.3-13. Entre autres causes il est développé le rôle important de la toxinogénèse lors de l'infection bactérienne, et, notamment, l'expression du pouvoir pathogène par la synthèse de cytotoxines et d'entérotoxines, thermolabiles ou thermostables, qui sont responsables de diarrhées sécrétoires à composante hydroélectrolytique dont le modèle physiopathologique représentatif est celle du choléra. D'autres agents infectieux sont connus provoquer de telles diarrhées, comme des souches de Salmonella, d'Escherichia coli (E.coli) et de Clostridium difficile (C.difficile). Ces derniers agents, et plus particulièrement C. difficile sont responsables de diarrhées sécrétoires chroniques et abondantes, souvent d'origine nosocomiale, chez des sujets soumis 3 0 à une antibiothérapie intensive comme les patients VIH+. Chez ces derniers, les diarrhées particulièrement invalidantes, sont souvent associées à une malabsorption, et contribuent à établir rapidement un état de dénutrition alarmant. Pour le traitement des diarrhées sécrétoires, une réhydratation des patients est conseillée et s'avère parfois indispensable. Les traitements symptomatiques habituels font appel à des - 2 - composés adsorbants (smectite), des modulateurs de la flore intestinale et, très largement, à des composés dits "ralentisseurs", qui sont des antidiarrhéiques morphinomimétiques: lopéramide (DCI) et diphénoxylate (DCI), inhibiteurs reconnus de la motilité du tractus et, de ce fait, d'utilité controversée sinon déconseillée pour certaines affections, entre autres raisons par le retard qu'ils apportent à l'évacuation naturelle des germes pathogènes. Plus récemment il est proposé de traiter ces diarrhées par l'acétorphan (DCI), dipeptide de synthèse inhibiteur d'enképhalinase d'effet antisécrétoire, qui maintient l'effet des enképhalines, neuropeptides endogènes antisécrétoires de la paroi intestinale, qui sont normalement rapidement hydrolysés "in vivo" par les enképhalinases ce qui rend leur effet fugace. Depuis peu, pour les cas réfractaires aux thérapies conventionnelles, on propose des peptides inhibiteurs de la motilité et de la sécrétion gastro intestinale apparentés à la somatostatine (M.CAMILLERI - Digestion 1996;57(suppl 1):90-92 & M.J.G.FARTHING - Digestion 1996; 57(suppl 1): 107-113). Des composés de synthèse substitutifs de ce médiateur endogène sont l'octréotide (DCI) et le valtréotide (DCI), tous deux octapeptides proposés avec certains succès pour le traitement des diarrhées sécrétoires du SIDA. Ces composés coûteux ne sont actifs que par administrations réitérées par voie parentérale qui conduit à des coûts de traitements prohibitifs qui sont accrus de par leur mode d'administration difficilement réalisable en milieu extrahospitalier. Par ailleurs certains composés, définis comme ligands spécifiques aux récepteurs sigma ont montré des propriétés antisécrétoires suggérant leur utilité au traitement des diarrhées. Ainsi, la demande WO 95/15948 publiée le 15 juin 1995 revendique des dérivés de 2-arylalkényl- azacycloalkanes ligands aux récepteurs sigma, leur procédé de préparation et leur application en thérapeutique. Les composés, leurs isomères et leurs sels d'addition sont proposés pour la préparation de médicaments antipsychotiques et utiles en gastro-entérologie. Notamment il est mentionné que les composés de la demande sont actifs sur les diarrhées sécrétoires induites chez la souris par le lipopolysaccharide (LPS) de salmonelle, ce qui suggère leur utilité au traitement des diarrhées sécrétoires d'étiologies diverses. L'exposé des traitements pratiqués et la poursuite des recherches pour de nouvelles thérapies aux diarrhées sécrétoires sont significatifs d'un besoin imparfaitement satisfait en ce qui concerne les médicaments proposés. Dans le domaine des structures apparentées aux composés de l'invention, l'état de la technique révèle deux familles de composés qui diffèrent essentiellement par le nombre et/ou la nature des substituants de leurs séquences "benzamide". -3 - En ce qui concerne les composés non substitués, la publication du brevet JP 53025560 (Chem. abstracts, 89, 109068, 1978) décrit, sans mention d'activité pharmacologique, la préparation de la 2-(aminométhyl)-1-éthylpyrrolidine racémique par saponification de N-( 1- éthylpyrrolidine-2-ylméthyl)-benzamide intermédiaire de formule H N C2H5 Dans un travail d'analyse conformationnelle de benzamides dopaminergiques, I. Petterson et coll. (J. Med. Chem. 1992, 35, 2355- 2363) montrent dans la publication, à titre de formule générale et sans 1' exemplifier, le (S) N-(1 -méthylpyrrolidine-2-ylméthyl)-benzamide de formule o N YHH CH3 Par ailleurs, en ce qui concerne les composés dont la séquence benzamide est substituée, au brevet FR 5.916 M, il est revendiqué des médicaments à base de benzamides hétérocycliques dont le sulpiride (DCI) de formule SO2NH2 H Ha N N o OCH3 C2H5 qui a été développé puis mis à disposition pour le traitement des psychoses. Les effets indésirables, notamment neurologiques, de ce produit ont provoqué des efforts de recherche considérables pour les maîtriser. Entre autres il a été réalisé la résolution du - 4 - sulpiride racémique en ses énantiomères R(+) et S(-), ce dernier nommé lévosulpiride (DCI), étant reconnu comme inhibiteur sélectif des récepteurs dopaminergiques D2 aux niveaux du système nerveux central et du tractus gastro- intestinal dont il augmente la motricité alors que son antipode R(+) est sans effet (E. Zuccato et coll. - Pharmacological Research, Vol. 26, No. 2, 1992, p. 179-185; M. Guslandi - Curr. Therap. Researc, Vol. 53, No. 5, Mai 1993, p. 484-501). Plus particulièrement, en considérant les benzamides substitués apparentés qui comprennent la séquence N-(I-cyclopropylméthyl- pyrrolidinyl 2-ylméthyl): * Le brevet FR 2 294 698 décrit des dérivés du méthoxy-2 benzamide utiles au traitement 0 des affections nerveuses et psychosomatiques et de formule R2 (CH2)n N ( CHN OCH3 O R.1 dans laquelle plus particulièrement - n représente un entier égal à 1, - R, représente un reste cycloalkyle alkyle (CH2)m=CH-A- dans lequel m est au moins égal à 2 et A est alkylène linéaire renfermant 1 à 4 atomes de carbone. * Le certificat d'addition FR 2 327 771 vise les énantiomères correspondant aux composés du brevet principal FR 2 294 698. * Un second certificat d'addition FR 2 394 529 vise des composés, sous leur forme racémique et d'énantiomères, utilisables dans le traitement des affections du domaine du système nerveux central et de formule R2 3 0 I' N N OCH3 R. -5- dans laquelle plus particulièrement: - R' est cycloalkylalkyle de formule (CH2)m=CH-A- o m représente le nombre 2, 3, 4 ou et A est un radical alkylène de 1 à 4 atomes de carbone * Le brevet FR 2 418 226 vise des méthoxy-2alkylthio-5 benzamides, racémiques ou énantiomères, actifs dans le domaine du système nerveux central et de formule R CN>\N - 0CH3 (CH2) n dans laquelle plus particulièrement n est égal à 1, 2, 3 ou 4. * La demande de certificat d'addition FR 2 447 910 vise des méthoxy-2 alkylthio-5 benzamides, racémiques ou énantiomères, apparentés aux composés du brevet principal FR 2 418 226 et de formule S N OCH3 (CH2)m , (CH2)n dans laquelle plus particulièrement: m est égal à 2, 3 ou 4, nest égal à 1,2,3 ou4 également l'invention vise spécifiquement l'énantiomère (S)(-) du N[(cyclopropylméthyl- l pyrrolidinyl-2)-méthyl]méthoxy-2 méthylthio-5 benzamide composé pour lequel m = n = I et R = méthyl. * La demande FR 2 447 911 publiée le 29/08/90 vise des benzamides, racémiques ou - 6 - énantiomères, actifs sur le système nerveux central et de formule CF3 H * N N OCH3 ^ (CH2)m (CH2) n dans laquelle plus particulièrement m = n = 1. * La demande EP 207 913 vise des catechols benzamides racémiques ou isomères optiques de formule N O A2 3 dans laquelle plus particulièrement R3 est un groupe cycloalkyle, composés utiles au traitement de l'émésis, des états anxieux, des maladies psychosomatiques comme la schizophrénie et la dépression, les maladies relatives à l'alcoolisme, les états de confusions et les troubles du sommeil chez les personnes âgées. La demanderesse indique préférer pour les énantiomères, les composés de configuration (S) lorsque R3 est alkyl ou alkényl et ceux de configuration (R) lorsque R3 est phényl ou phényl substitué. * Le brevet FR 2 593 504 vise des dérivés de dihydrobenzofurane et de chromane carboxamides, racémiques ou énantiomères, d'activité neuroleptique et de formule -7- - 7 - Y Z N ( CH2)n (CH2)m \ O+ dans laquelle plus particulièrement Z est un groupe N X-. R3 dans lequel R3 est cycloalkylalkyle. * La demande FR 2 678 266 vise des dérivés de 2-hydroxy 4-amino 5éthylsulfonyl benzamides, racémiques et isomères optiques, utiles comme anxiolytiques et de formule S02C2H5 X HNH2 -NH ( CH2) n H \"È /O N (CH2)n \ OH dans laquelle notamment m = n = 1; R est cyclopropyméthyle, le carbone du cycle pyrrolidine substitué étant en position 2. Tel qu'il vient d'être présenté, l'état de la technique proche du produit de l'invention enseigne essentiellement que les N-(pyrrolidine2ylméthyl)-benzamides substituées en position 1 du radical pyrrolidine par des groupes alkyle ou cycloalkylalkyl inférieurs et comportant sur le radical benzamide un radical oxygéné en ortho de la fonction carboxamide sont des médicaments. Ce radical oxygéné s'avère être essentiel à une activité sur le système nerveux central, activité qui, pour les énantiomères, est préférentielle de la configuration (S) lorsque le substituant en 1 de la pyrrolidine est alkyle ou cycloalkylalkyle inférieur, et est préférentielle pour la configuration (R) lorsque ce substituant comprend un aromatique tel que phényle ou phényle substitué. La présente invention diffère radicalement de cet état de la technique en proposant comme médicament utile au traitement des diarrhées sécrétoires un benzamide nouveau, non substitué en position ortho par un atome d'oxygène, et pour lequel contrairement à ce qui est enseigné, l'activité est préférentielle pour l'énantiomère de configuration (R) bien que le radical substituant en position 1 de la pyrrolidine soit cyclopropylméthyle. -sommaire de l'invention L'invention a pour objet au titre de composes nouveaux le (R) N-(1cyclopropylméthyl- pyrrolidine-2 ylméthyl)-benzamide de formule (I), N le composé racémique (R,S) (I') qui lui correspond, leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables, leur procédé de préparation. Elle concerne également, à titre de médicaments, le (R) N-( I cyclopropylméthyl-pyrrolidine- 2 ylméthyl)-benzamide de formule (I), le composé racémique (R,S) (I') qui lui correspond, et leurs sels d'addition ainsi que leur utilisation à la préparation de compositions pharmaceutiques destinées au traitement des diarrhées sécrétoires chez l'homme. Elle comprend aussi les compositions médicamenteuses comprenant à titre de principe actif le (R) N-(l-cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2 ylméthyl)-benzamide de formule (I), le composé racémique (RS) (I') qui lui correspond, et leurs sels d'addition en quantité thérapeutiquement efficace. - description détaillée de l'invention En premier lieu l'invention vise à titre de produits nouveaux le (R) N-(l- cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2 ylméthyl)-benzamide de formule (I), le composé racémique (R,S) (I') qui lui correspond, et leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement -9 - acceptables. Au titre de principe actif pharmaceutique et selon les normes en vigueur de cette industrie on préfère pour l'eutomère (R) une qualité optiquement pure, c'est à dire que le produit soit pratiquement exempt de son antipode (S) et soit au minimum d'une pureté optique de 95% et de préférence égale ou supérieure à 98% en eutomère (R) et ce déterminé par les moyens analytiques appropriés. Par racémique on entend conventionnellement le composé comprenant à parties égales les énantiomères (R) et (S). Toutefois les composés comprenant un mélange dans lequel l'eutomère (R) est en quantité supérieure à 50% sont considérés partie intégrante de l'invention. Par sels d'addition pharmaceutiquement acceptables, on entend ceux, minéraux ou organiques, y compris leurs éventuels isomères, démontrés atoxiques aux doses thérapeutiques courantes dont, pour exemple, une liste est présentée dans J. Pharm. Sci., 1977, vol. 66, p. 1-19. A titre d'exemples non limitatifs on utilise les acides acétique, benzènesulfonique, camphosulfonique, citrique, éthanesulfonique, bromhydrique, lactique, maléique, malique, méthanesulfonique, mucique, nitrique, pamoïique, phosphorique, salicylique,stéarique, succinique, sulfurique, tartrique et l' acide chlorhydrique qui est préféré. Par un autre aspect, l'invention concerne un procédé de préparation du (R) N-(l- cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2 ylméthyl)-benzamide de formule (I) et de son racémique (R,S) (I') qui consiste - à réaliser une N-substitution du radical pyrrolidine de l'eutomère (R) ou du racémique (R,S) du Npyrrolidine-2-ylméthyl-benzamide (II), soit par alkylation avec un halogénométhylcyclopropane, de préférence le bromométhylcyclopropane, soit par alkylation réductrice avec le cyclopropanecarboxaldéhyde en présence d'un agent de réduction, soit encore à réaliser une acylation par le chlorure, un anhydride ou un ester d'acide cyclopropanecarboxylique puis à réduire l'intermédiaire cyclopropanecarboxamide par un agent de réduction approprié ou, 3 0 - à réaliser la benzoylation de l'eutomère (R) ou du racémique (RS) de la 2- aminométhyl l-cyclopropylméthyl pyrrolidine (III) par réaction avec l'acide benzoïque ou l'un de ses dérivés tel qu'un halogénure comme de préférence le chlorure ou un anhydride éventuellement mixte ou encore un ester d'alkyle inférieur comme méthyle, éthyle. Toutefois, les procédés préférés mis en oeuvre consistent à réaliser la N-substitution du - 10 - radical pyrrolidine de l'eutomère (R) ou du racémique (R,S) du Npyrrolidine-2-ylméthyl- benzamide (II) par alkylation avec le bromométhylcyclopropane et, de façon particulièrement préférée à réaliser la benzoylation de l'eutomère (R) ou du racémique (R,S) de la 2-aminométhyl 1-cyclopropylméthyl pyrrolidine (III) par le chlorure de benzoyle comme décrit au schéma 1. N H N, N H (It I) Ol (II) ++ Br Cl (l) La réaction de N-substitution des intermédiaires (II) par alkylation avec le bromométhylcyclopropane consiste à traiter les réactifs en rapport équimoléculaire à une température comprise de 20 C à la température de reflux du solvant réactionnel qui est choisi parmi l'acétone, les alcools de faible masse moléculaire, le diméthylformamide (DMF), le diméthylsulfoxyde (DSMO) ou l'acétonitrile qui est préféré, éventuellement en présence d'une base minérale, comme un carbonate alcalin, ou bien organique comme la triéthylamine. La benzoylation d'un intermédiaire (III) consiste à le faire réagir avec de 1,0 à 1,25 mole 3 0 de chlorure de benzoyle à une température comprise entre 20 C et la température de reflux du solvant réactionnel qui est choisi parmi l'éther diéthylique, le tétrahydrofuranne (TiF), le dichlorométhane, le chloroforme, le toluène et, de préférence, en présence d'une base organique comme le triéthylamine en quantité équimoléculaire au chlorure de benzoyle. Les intermédiaire (II) et (III) du schéma 1 sont accessibles par des voies de synthèse 11- documentées dans la littérature notamment par une adaptation du procédé décrit dans J. Med. Chem. 1982, 25, p. 1286-92 en ce qui concerne (II) et des brevets FR 2 294 698, FR 2 394 529 et FR 2 395 261 pour les formes (RS) et (R) de (III). Précisément, le procédé mis en oeuvre pour la préparation de (II) adapté de la littérature est décrit au schéma 2 et consiste: - à préparer le (R) 1-trityl-pyrrolidine-2-carboxamide (VI) à partir de L-prolinamide, puis, à reduire le dérivé trityle par LAH obtenir la (R)(1-tritylpyrrolidine-2-ylméthyl)-amine (V), puis, - à benzoyler l'amine par le chlorure de benzoyle pour obtenir le (R) N(1-trityl- pyrrolidine-2-ylméthyl)-benzamide (IV), - puis à hydrolyser le groupement proctecteur trityl par l'acide chlorhydrique pour obtenir le (R) N-pyrrolidine-2-ylméthyl-benzamide (II). N5 - CONH2 N- CONH2 NS CH2NH2 I I t H Trp - Trp (VI) (V) N CH2NH2 N CH2NHCO- Trp > Trp (V) ( IV) (Il) et, pour la préparation de l'intermédiaire (III) tel que montré au schéma 3 et réalisé pour la préparation de l'eutomère de l'invention (I) de configuration (R): - à préparer la (R)cyclopropyl-(2-hydroxyméthyl- pyrrolidine-l-yl)-méthanone (IX) par acylation de R-(-)-2- (hydroxyméthyl)-pyrrolidine avec le chlorure d'acide cyclopropane carboxylique, puis, - à réduire 1' intermédiaire par LAH pour obtenir le (R) (1cyclopropylméthyl-pyrrolidine- 2-yl)-méthanol (VIII), puis, - à faire réagir l'intermédiaire (VIII) avec le chlorure de thionyle pour obtenir la (R) 2- chlorométhyl-1- cyclopropylméthyl -pyrrolidine (VII), puis, - 12 - - à faire réagir l'intermédiaire (VII) avec l'ammoniac pour obtenir la (R) (1- cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2-ylméthyl)-amine (III) N 1CH2OH N CH2OH CH20H Ho N'CH2OH N CH2C I qui est considéré représentatif des diarrhées sécrétoires toxigéniques dans cette étude. D'emblée, les premiers produits synthétisés et testés, à savoir l'eutomère (I) de configuration (R) et son antipode distomère (S) ont montré des résultats surprenants. Ainsi, alors que dans l'essai "in vitro" pratiqué, les deux composés ne montrent qu'une affinité médiocre aux récepteurs sigma, il se révèle "in vivo" que l'eutomère (I) de configuration (R) possède, de façon stéréosélective, une très puissante activité antidiarrhéique. - 13 - Ainsi, l'eutomère (I) se montre au moins trois fois plus actif que son antipode de configuration (S) par voie per os chez la souris, sur le modèle de diarrhées sécrétoire provoquée par le lipopolysaccharide de salmonelle (LPS), modèle dans lequel l'antipode (S) présente un effet inhibiteur maximum limité, quelque soit la dose, à environ 30%. Chez la souris, par voie per os, dans les modèles de diarrhées sécrétoires toxigéniques provoquées par le lipopolysaccharide de salmonelle (LPS) la toxine thermostable d'E. coli et les toxines A et B de C. difficile, lorsqu'il est comparé aux composés annoncés ou potentiellement capables de traiter les diarrhées sécrétoires, l'eutomère (I) objet de l'invention s'avère, sans pour autant agir sur le transit: - d'environ 12 à plus de 250 fois plus actif que le lopéramide,et - sur la diarrhée provoquée par le LPS, plus de 1000 fois plus actif que l'acétorphan, Egalement le composé (I) montre une activité inhibitrice remarquable de la sécrétion intestinale induite chez le rat par la toxine cholérique. Ces études, développées dans la partie expérimentale, sont probantes de l'activité antidiarrhéique particulièrement intéressante du (R) N-(1cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2 ylméthyl)-benzamide (I), de son correspondant racémique (R,S) (I'), de leurs sels et leur utilité à la préparation de formes pharmaceutiques administrables par les voies appropriées à la pathologie et à l'état du patient. Ainsi les médicaments pourront être administrés par voie parentérale, transdermale ou transmucosale sous des formes classiquement connues. Toutefois les formes pharmaceutiques adaptées aux traitements ambulatoires sont préférées et notamment celles destinées à l'administration par voie orale. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention qui contiennent une quantité thérapeutiquement efficace de l'eutomère (I), du racémique (I') ou de l'un de leurs sels, sont appropriées aux traitements de diarrhées pouvant être banales, comme celles du nourrisson ou du voyageur, et qu'elles soient aigues ou/et persistantes et d'étiologies diverses dans lesquelles la composante sécrétoire peut aussi bien résulter d'une diminution d'absorption que d'une hypersécrétion intestinale. Ainsi, les compositions selon l'invention sont indiquées au traitement des diarrhées dont l'origine est inflammatoire (maladie de Crohn, entérites post-radiothérapiques), d'obstructions par hyperplasie lymphoïide ou encore de chimiothérapie anti-cancéreuse. Egalement ces compositions sont appropriées aux traitements symptomatiques des diarrhées hypersécrétoires comme celles consécutives aux affections tumorales neuroendocriniennes - 14 - (syndrome de Zolliger-Ellison, VIPome, somatostatinome, syndrome carcinoide), des infections HIV, virales, bactériennes, ou bien des dysfonctionnements congénitaux ou provoqués par des drogues cathartiques, et lors des hypersécrétions des syndromes inflammatoires intestinaux. La bonne tolérance au produit montrée dans les essais préliminaires autorise pour des traitements sur deux à trois semaines une posologie journalière de 5 à 250 mg et, exceptionnellement, pour des traitements d'attaque de courte durée jusqu'à 500 mg. Toutefois la majorité des états diarrhéiques traités sont améliorés par des posologies journalières de 10 à 100 mg, le produit étant administré par voie orale réparties en deux à 0 quatre prises par 24 heures. Le produit est administré sous des formes pharmaceutiques diverses contenant unitairement de 2,5 à 50mg de l'eutomère (I) ou se son racémique (I') ou de l'un de leurs sels, notamment du chlorhydrate, ce dernier pouvant se présenter sous forme cristallisée ou amorphe ou encore être préparé extemporanément lors de la fabrication des formes pharmaceutiques, qui peuvent être, pour exemples non limitatifs, des comprimés, dragées, capsules, gélules, poudres, solutions, suspensions, gels. Pour les formes dites "solides" le composé (I) ou un congénère, salifiés ou non peut représenter de 1 à 90% en poids du total de la forme terminée, les excipients pharmaceutiquement acceptables représentant de 99 à 10%. Pour les formes liquides ou considérées comme tel les le principe actif peut représenter de 0,1 à 10% en poids de la forme terminée pour une phase liquide représentant de 99,9 à 90% en poids. - partie expérimentale Exemples 1: Synthèses chimiques Exemple 1L.A produit de comparaison (S)N-( l-cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2-ylméthyl)-benzamide. a) Préparation du (Si N-pyrrolidine-2-ylméthyl-benzamide (II: - stade I: (S) (1-trityl-pyrrolidine-2-carboxamide(VI). Dans un réacteur de 250 ml protégé de l'humidité, on dissout dans 75,0 ml de dichlorométhane anhydre 2,00 g (17,5 mmole) de L-prolamine et 2,7 ml soit 1,95 g (19,3 mmole) de triéthylamine. A une température inférieure à 10 C, on ajoute 5,40 g de chlorure de triphénylméthane puis laisse agiter à 20 C le mélange durant 16 heures. - 15 - La solution est extraite à 2 reprises par 100 ml d'eau puis déshydratée. Le solvant est éliminé par distillation sous vide et sur bain-marie. le résidu blanc amorphe (6,10 g) est recristallisé au reflux dans 30 ml d'acétate d'éthyle. Après refroidissement, le précipité est filtré et séché. Poids = 4,70 g Rdt = 75% CCM: Rf 0,80 (CH2C12-MeOH/NH4OH 10 % 95-5 v/v) - stade 2: (S) (1-trityl-pyrrolidine-2-ylméthyl)-amine(V). Dans un réacteur protégé de l'humidité, et sous atmosphère d'azote, on introduit 1,00 g (26,4 mmole) de LAH dans 20,0 ml de TI-IF anhydre. La suspension est refroidie à environ 10 C puis on ajoute 4,70 g (13,2 mmole) de l'amide (VI) en solution dans 25,0 ml de THF. Le mélange qui devient rouge est porté au reflux 1 heure puis refroidi par un bain de glace. On ajoute alors goutte à goutte 2,5 ml d'eau à t d'une huile jaune. Poids = 4,5 g Rdt = 100 % CCM: Rf 0,45 (CH2CI2-MeOH/NH4OH 10 % 95-5 v/v) - stade 3: (S) (1-trityl-pyrrolidine-2-ylméthyl)-benzamide(IV). Dans un réacteur protégé de l'humidité, on dissout dans 4,70 g (13,7 mmole) de l'amine intermédiaire (V) dans 60 ml de dichlorométhane anhydre, on ajoute à la solution 2,10 ml soit 1,53 g (15,1 mmole) de triéthylamine. Le mélange est refroidi par un bain d'eau glacée et on ajoute 1,8 ml soit 2,12 g (15,1 mmole) de chlorure de benzoyle à t Le mélange est agité à 20-25 C durant une heure puis extrait successivement par 100 ml d'ammoniaque à 10 %, 100 ml d'eau, 100 ml d'HCI 10 %, 100 ml d'eau, 100 ml de solution saturée en bicarbonate de sodium et finalement 100 ml d'eau. Après déshydratation la phase organique est concentrée. On obtient un résidu meringué jaune. Poids=5,00 g Rdt=82% CCM Rf 0,65 (CH2CI2- acétone 95-5 v/v) - stade 4: (S)N-pyrrolidine-2-ylméthyl)-benzamide(II). Dans un réacteur on ajoute, sans dépasser 15-20 C, 80 ml d'éthanol chlorhydrique 0,6 N à 5,0 g d'intermédiaire (IV). Le mélange est agité 1 heure à 20-25 C puis concentré sous vide et sur bain-marie. le résidu est repris par l'éther et l'eau. La phase aqueuse acide est alcalinisée puis extraite à l'éther. Après élimination de l'éther on obtient le produit brut pur - 16 - sous forme d'huile jaune. Poids = 1,50 g Rdt = 66 % CCM: Rf 0,20 ( CH2CI2-MeOH/NHIOH 10 % 95-5 v/v) b) préparation du (S)N-(l -cvclopropylméthvl-pyrrolidin-2vlméthvl benzamide (produit de comparaison - antipode de (I)) Dans un réacteur protégé de l'humidité on dissout 1,50 g (7,3 mmole) d'intermédiaire (S)N- -pyrrolidine-2-ylméthyl-benzamide (II) dans 20,0 ml d'acétonitrile puis on ajoute 0,75 ml soit 1,0 g (7,3 mmole) de bromométhylcyclopropane. La solution est portée 5 heures au reflux puis le solvant éliminé par distillation sous vide. Le résidu est dissout dans 100 ml 0 de dichlorométhane et extrait par 100 ml d'une solution NaOH 2N puis par 100 ml d'eau. Après déshydratation le dichlorométhane est éliminé par distillation sous vide. On obtient 1,55 g d'huile résiduelle orangée qui est purifiée par chromatographie rapide sur colonne de silice. L'élution par un mélange dichlorométhane - méthanol ammoniacal à 10 % permet d'obtenir 1,40 g de produit purifié qui sont recristallisés dans 70 ml d'hexane. Poids = 0,9 g Rdt = 47,7% F = 86 C CCM: Rf 0,65 ( CH2Cl2-MeOH/NH4OH 10 % 90-10 v/v) Analyse élémentaire conforme pour C16 H22 N2 0 IR(KBr): 3300, 2750, 1640, 1540, 1310, 1290, 1180, 1140, 1020, 920, 830, 700, 680, 540 cm-I 'H - RMN (CDC13 TMS): ô (ppm) 0,05 - 0,30 (m, 2H); 0,40 - 0, 55 (m, 1H); 1,60 - 1,85 (m, 3H); 1,85 - 2,00 (m, 1H); 2,00 - 2,15 (m, 1H); 2,20 2,40 (m, 1H); 3,25 - 3,45 (m, 2H); 3,65 - 3,80 (m, 1H); 6,90 - 7,10 (m, 1H); 7,40 - 7,60 (m, 3H); 7,75 - 7,90 (d, 2H) [OC]D2 =- 110 (CH2C12, c = 1) Exemple 1.B - produit (I) de l'invention (R) N-(lcyclopropylméthyl-pyrrolidine-2-ylméthyl)-benzamide (I) a) Préparation de la (R) (1-cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2-vlméthvl)-amine (II): - stade 1: (R) cyclopropyl-(2-hydroxyméthyl-pyrrolidine-1-yl)-méthanone (IX). Dans un réacteur protégé de l'humidité, on dissout 50,0 g (494 mmole) de (R) (-)-2- (hydroxymethyl)-pyrrolidine dans 500 ml de dichlorométhane déshydraté, puis ajoute 116,5 ml soit 85,0 g (840 mmole) de triéthylamine. La solution est refroidie par un bain d'eau glacée puis on ajoute en 1 heure à t pour obtenir le produit brut à l'état de pureté. Poids = 60,47 g Rdt = 72,4 % CCM: Rf 0,80 (CH2CI2-MeOH/NH4OH 10 % 90-10 v/v) - stade 2: (R) (1-cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2-yl)-méthanol (VIII) Dans l'éther diéthylique, selon le mode opératoire décrit au stade 2 de l'exemple l.A et à partir de 59,0 g (350 mmole) de méthanone (IX) et de 33,1 g (873 mmole) de LAH, on obtient 38,8 g de produit (VIII) brut à l'état de pureté. Rdt = 71,4 % CCM: Rf 0,55 (CH2CI2-MeOH/NH4OH 10 % 90-10 v/v) - stade 3: chlorhydrate de (R) 2-chlorométhyl-1-cyclopropylméthyl-pyrrolidine (VII) Dans un réacteur protégé de l'humidité, on dissout 38,0 g (245 mmole) de l'intermédiaire (VIII) dans 200,0 ml de chloroforme déshydraté. La solution est refroidie à t dépasser 5 C. La solution est agitée 30 minutes à 20-25 puis chauffée et maintenue au reflux 40 minutes. Le mélange est concentré sous vide. Le résidu est dissout dans 200 ml de chloroforme. L'addition de 350 ml d'éther provoque la précipitation du chlorhydrate qui est filtré est séché. Poids = 48,45 g Rdt= 94,9% CCM trainée de O,0 à 1,0 (CH2CI2-MeOH/NH4OH 10 % 90-10 v/v) - stade 4 (R) (1cyclopropylméthyl-pyrrolidin-2-ylméthyl)-amine (III) Dans un autoclave d'un litre, on introduit préalablement refroidis à -25 C 645 ml d'éthanol et 70 ml d'eau, puis on ajoute 48,0 g d'ammoniac liquide. L'autoclave est hermétiquement fermé et agité 48 heures à 20-25 C. Après ouverture, la solution est concentrée par distillation sous vide, le résidu repris par 500 ml d'éthanol et l'insoluble filtré. Le filtrat est évaporé, repris par 500 ml de dichlorométhane, et après déshydratation évaporée sous vide. L'huile brune résiduelle (51,7 g) est purifiée par chromatographie rapide sur colonne de silice. L'élution par un gradient de dichlorométhane progressivement enrichi en méthanol ammoniacal à 10 % permet d'obtenir le produit à l'état pur sous forme d'une huile jaune. Poids = 28,9 g Rdt= 80 % CCM: Rf 0,35 (CH2CI2-MeOH/NH4OH 10 % 90-10 v/v) [c]ID - 39 (MeOH, c = 2) - 18 - b) Exemple de 1' invention: (R) N-( I -cyclopropylméthvl-pvrrolidine-2vlméthyl)-benzamide (eutomère (I1) Dans un réacteur protégé de l'humidité, on dissout 27,0 g (175 mmole) de (R) (1- cyclopropylméthyl-pyrrolidin-2-ylméthyl)-amine intermédiaire (III) dans 500 ml de dichlorométhane anhydre puis ajoute 26,85 ml soit 19,5 g (192, 5 mmole) de triéthylamine. La solution est refroidie par un bain d'eau glacé et on ajoute à t d'ammoniac 10 %, d'eau, d'HCI 10 %, puis d'eau. La phase chlorhydrique et la dernière phase aqueuse sont réunies alcalinisées par NaOH et extraites à l'éther. Les phases éthérées réunies sont déshydratées et l'éther éliminé par distillation. Le résidu (31,0 g) est purifié par chromatographie rapide sur colonne de silice. L'élution par le dichlorométhane progressivement enrichi en méthanol permet d'obtenir 14,0 g de produit purifié qui sont recristallisés dans 400 ml d'hexane à ébullition. Après refroidissement l'insoluble cristallin est filtré et séché. Poids= 10, SgRdt = 24% F = 87 C CCM: Rf 0,70 (CH2CI2-MeOH/NH4OH 10 % 90-10 v/v) IR(KBr): 3300, 2750, 1640, 1540, 1310, 1290, 1180, 1140, 1020, 920, 830, 700, 680, 540 cm-! H - RMN (CDC13 TMS): ô (ppm) 0,05 - 0, 30 (m, 2H); 0,40 - 0,55 (m, 1H); 1,60 - 1,85 (m, 3H); 1,85 - 2,00 (m, 1H); 2,00 2,15 (m, 1H); 2,20 - 2,40 (m, 1H); 3,25 - 3,45 (m, 2H); 3,65 - 3,80 (m, 1H); 6,90 - 7,10 (m, 1H); 7,40 - 7,60 (m, 3H); 7,75 - 7,90 (d, 2H) [c]D20 = + 115 (CH2CI2, c = 0,5) Exemple 2: Etude de toxicité Chez l'animal l'étude de toxicité a été réalisée chez le souris par voie orale. Aucune mortalité n'est constatée jusqu'à la plus forte dose étudiée à savoir 300 mg/kg. Il n'apparait aucun symptôme toxique aux doses inférieures à 100 mg/kg. A partir de cette dose il est observé des symptômes tels que dépression respiratoire, tremblements, convulsions, état de prostration ou de léthargie qui sont réversibles dans un laps de temps de 24 heures après le traitement. - 19 - Exemple 3: Etudes pharmacologiques "in vitro" i) - affinité aux récepteurs sigma L'étude de la capacité d'interaction avec les récepteurs sigma de l'eutomère objet de l'invention de son antipode a été réalisée par la détermination de leur fixation, ou binding, sur préparation membranaire de cerveau de rat, préalablement chargée par le ligand marqué spécifique des récepteurs sigma, en l'occurrence le (+ )[3H]-SKF 10,047. La technique utilisée est celle décrite par Largent, B. L. et al. dans J. Pharmacol. Exp. Ther., 1986, vol. 238, p. 739- 748 Les résultats, exprimés en CI5, du produit à l'essai, qui est la concentration permettant de déplacer le ligand tritié de 50 % de ses sites de liaison, sont respectivement de 784 nM pour l'eutomère (I) et de 365 nM pour son antipode distomère, valeurs qui, pour les deux composés, ne correspondent en valeurs absolues qu'à des affinités médiocres. ii) - affinité aux récepteurs de la dopamine L'étude d'affminité aux récepteurs dopaminnergiques D1, D2, D3 est effectuée - sur des membranes de striatum de rat selon Trampus M. et al., Eur. J. Pharmacol., 194, 17, 1991, en ce qui concerne les récepteurs D1, le [3H]-SCH 23390(0,3ng) étant utilisé comme ligand et le SCH 23390 (10 AM) étant utilisé pour déterminer l'affinité non spécifique, - sur des membranes de striatum de rat selon Terai M. et al., Eur. J. Pharmacol., 173, 177, 1989, pour les récepteurs D2, le [3H YM091512 (0,lnM) étant utilisé comme ligand et le (+) butaclamol (10 4M) pour déterminer l'affinité non spécifique, - et, pour les récepteurs D3, sur des récepteurs humaines recombinants D2 exprimés dans des cellules CHO, la [3H]-spiperone (0,2 gM) étant utilisée comme ligand et le (+) butaclamol étant utilisé pour déterminer l'affinité non spécifique selon Mac Kenzie R. G. et al., Eur. J. Pharmacol., 266, 79, 1994. Dans ces essais l'eutomère (I) de l'invention ne manifeste aucune affinité, la CI5odans chaque essai étant supérieure à 10000 nM. Exemple 4: Etudes pharmacologiques "in vivo" 4-1) - inhibition des diarrhées toxigéniques expérimentales - protocoles a) diarrhée induite par les lipolysaccharides (LPS) de salmonelle: le test est pratiqué sur la souris selon un mode opératoire inspiré de M.J.CANCIO et coll. Gastroenterology Nov. - 20 - 1992, 103 (5), 1437-43 qui chez le rat induisent par une endotoxine des altérations de transport d'eau et d'électrolytes au niveau du côlon. - mode opératoire: des souris mâles dBA2 (Iffa-credo, les Oncins, France) d'un poids compris entre 20 et 25 g sont placées dans des cages individuelles. Après adaptation des animaux à leur environnement on administre le produit à l'essai par voie orale en solution ou en suspension aqueuse puis une heure après (to de l'essai) on pratique dans la veine de la queue une injection de lipopolysaccharides (LPS) de salmonelle enteriditis (produit Sigma - réf. L6761) à raison de 15 mg/kg. On place alors un papier filtre prépesé sous chaque cage et détermine le poids de fèces éliminé par les animaux en deux heures (tl20). L'effet du produit à l'essai est déterminé et est exprimé en pourcentage d'inhibition du poids des fèces à la dose considérée par rapport au poids des fèces d'un lot d'animaux témoins n'ayant reçu dans les mêmes conditions que LPS. Ces résultats permettent de calculer la DE5,, des composés qui est la dose efficace permettant d'inhiber 50% du poids des fèces provoqués par l'administration de l'agent diarrhéique. b) - diarrhée induite par la toxine thermostable d'E.Coli: des souris mâles NMRI (30-35 g) nourries sont pesées et placées dans des cages individuelles préalablement tapissées de papier blanc permettant la visualisation des matières fécales émises. Les fèces sont récupérées aussitôt émises et regroupées par périodes de 30 min, pendant 120 min. Les fèces ainsi regroupées sont pesées avant (poids frais) et après (poids sec) séchage à 120 C pendant 24 h. La quantité d'eau présente dans les fèces est calculée comme la différence (poids frais - poids sec). La toxine thermostable d'Escherichia Coli (Sigma, E5763) est administrée par voie orale au temps zéro à la dose de 600 U/souris. Les animaux du lot contrôle reçoivent, au temps zéro, une administration orale de sérum physiologique. L'administration des produits à l'essai est effectuée par voie orale une heure avant l'administration des toxines. Les résultats sont exprimés en quantité d'eau fécale cumulée au temps 120 min. et permettent de calculer la DE50 des composés qui est la dose efficace permettant d'inhiber % de poids d'eau des fèces sous l'action du produit à l'essai. * c) - diarrhée induite par les toxines A et B de Clostridium difficile: le protocole expérimental, le calcul et l'expression des résultats sont identiques à ceux décrits précédemment. Les toxines A et B de Clostridium difficile sont administrées par voie orale au temps zéro à la dose de 6 ng/souris. - 21 - - résultats i) - stéréospécificité de l'effet inhibiteur de (I) dans les diarrhées induites par le LPS de salmonelle. Dans ce test l'activité de l'eutomère (I) de configuration (R) est comparée à celle de son antipode (S), les composés étant respectivement décrits aux exemples 1-B et 1-A. dose mg/kg activité inhibitrice % voie p.o (I) pdt ex. 1-B (R) pdt ex. 1-a (S) 0,01 9,4% 0,03 50 % (DE50) - 0,10 35,5 % 1,00 33,9 % ii) - activité inhibitrice comparée de l'eutomère (I) avec lopéramide (DCI) et acétorphan (DCI) chez la souris, administration p.o, DE50 mg/kg ou % d'inhibition à la dose considérée. diarrh. tox. eutomère (I) lopéramide acétorphan LPS salmon. 0,030 0,37 34 E.Coli 0,015 3,92 N.T C.difficile 95% à 0,05mg 4,27 N.T N.T non testé 4-2) - inhibition de la sécrétion intestinale induite par la choléra toxine: technique dite "d' enteropoolin.". Des rats femelles Wistar (160-180 g) sont mis à jeun de nourriture solide 24h avant le test. Au temps zéro, les animaux reçoivent, par voie orale, 0.1 mg/kg de choléra toxine (Sigma, C3012). Trois heures après les animaux sont sacrifiés par dislocation cervicale. Après laparotomie médiane, l'intestin est ligaturé au niveau du pylore et de la jonction iléo- caecale. Il est ensuite prélevé (du duodénum jusqu'au caecum), pesé plein puis vide. L'administration des produits à l'essai est effectuée par voie orale une heure avant - 22 - l'administration de la choléra toxine. Les résultats sont exprimés en poids de contenu intestinal et permettent de calculer la DE50 des composés qui est la dose efficace permettant d'inhiber de 50% le poids du contenu intestinal sous l'action du produit à l'essai. Dans cette étude l'eutomère (I) montre une DE50 de 0,017 mg/kg. Exemple 5: Formes pharmaceutiques A titre illustratif il est présenté la formulation et la préparation de l'eutomère (I) de l'invention sous forme de gélules et de comprimés contenant 25mg de principe actif par unité. 5 I - formulation unitaire des gélules et préparation: chlorhydrate de l'eutomère (I) 25,0 mg lactose 74,3 mg silice colloïdale 0,2 mg stéarate de magnésium 0,5 mg total: 100 mg Les poudres sont intimement mélangées puis réparties à raison de 100 mg par unité dans des gélules de taille appropriée. -2 - formulation unitaire de comprimés et préparation: eutomère (I) 25,0 mg 20. lactose 87,0 mg hydroxypropylméthylcellulose (HPMC) 3,6 mg carboxyméthylcellulose réticulée (CMC) 3,6 mg silice colloïdale 0,24 mg stéarate de magnésium 0,6 mg total: 120 mg Le principe actif est mélangé au lactose puis granulé avec l'HPMC en solution. Les grains sont séchés et tamisés sur une grille d'ouverture de 1 mm. La CMC et la silice sont mélangées puis ajoutées aux granulés. On mélange ensuite intimement avec le stéarate de magnésium puis comprime à raison de 120 mg par comprimé sécable. - 23 - Revendications 1) le (R) N-(l-cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2 ylméthyl)-benzamide de formule (I), N%'- NH 7 '0 son mélange racémique (R,S) (I') et leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables, 2) Procédé de préparation du (R) N-(l-cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2 ylméthyl)- benzamide de formule (I) qui consiste: - soit à N-substituer le radical pyrrolidine du (R) N-pyrrolidine-2-ylméthyl-benzamide (II) par alkylation avec le bromométhylcyclopropane, - soit à benzoyler la (R) 2- aminométhyl 1-cyclopropylméthyl pyrrolidine (III) par le chlorure de benzoyle, 3) A titre de médicament, le (R) N-(l-cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2 ylméthyl)- benzamide de formule (I), son mélange racémique (R,S) (I') et leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables, 4) Composition thérapeutique contenant à titre de principe actif, le (R) N-(l- cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2 ylméthyl)-benzamide de formule (I), son mélange racémique (R,S) (I') et leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables, ) Utilisation du (R) N-(1cyclopropylméthyl-pyrrolidine-2 ylméthyl)-benzamide de formule (I), son mélange racémique (R,S) (I') et leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables, pour la préparation de médicaments antidiarrhéique,