FR 2742162 A1 19970613 FR 9514373 A 19951206 1 2742162 PROCEDE DE PREPARATION DE COMPOSES INDOLIQUES La présente invention concerne un nouveau procédé de préparation de composés indoliques par voie enzymatique. L'indole et ses dérivés sont des matières premières largement utilisées dans l'industrie des colorants, des cosmétiques, des produits pharmaceutiques ou alimentaires. L'indole est, en particulier, une des matières premières utilisables pour la synthèse du tryptophane qui est un acide aminé essentiel sur le plan nutritionnel. La synthèse des indoles se fait en général en plusieurs étapes, de façon longue et coûteuse. De plus, cette synthèse nécessite des étapes d'oxydation poussées, à des températures de réaction élevées, souvent supérieures à 140 C, entraînant des risques de manipulation. C'est ainsi qu'ont été proposés différents procédés de préparation de composés indoliques tel que décrit par exemple dans la demande de brevet FR-A-2 606 405, opérant soit par hydrogénation catalytique sous pression, soit par transfert d'hydrogène ou encore par cyclisation réductrice catalytique tel que décrit par exemple dans le brevet US 4 595 765. Ces méthodes nécessitent l'utilisation de précurseurs d'indole portant des groupements compatibles avec une réaction d'hydrogénation, ce qui entraîne une complication du procédé en amont. De plus ces procédés conduisent généralement à l'obtention de produits secondaires affectant la pureté de la réaction. Il a également été proposé de préparer des composés indoliques par déshydrogénation de dérivés d'indolines tel que décrit par exemple dans la demande de brevet DE-A-4 204 089 ou bien encore par hydrolyse basique à partir 2 2742162 de 5,6-diacétate d'indole tel que décrit par exemple par R. J. S. BEER et autres dans "Journal of Chemical Society", 2223-2226, 1948. L'inconvénient de ces deux dernières méthodes est que la réaction se déroule préférentiellement dans l'eau en présence d'un agent alcalin, ce qui entraîne généralement une dégradation rapide du composé indolique obtenu. C'est en cherchant à remédier à ces problèmes que la demanderesse a découvert le procédé objet de l'invention. La présente invention a donc pour objet un nouveau procédé de préparation de composés indoliques en une seule étape, qui est caractérisé par le fait qu'il consiste à mettre en contact, en milieu solvant, au moins une hydrolase avec au moins un composé indolique portant un ou deux radicaux reliés par une fonction ester au cycle benzénique, ce par quoi l'on obtient un mono- ou un dihydroxyindole. Selon ce procédé, il ne se forme pas de produit secondaire, ce qui présente un intérêt tant du point de vue de la pureté du produit final obtenu que du rendement de la réaction en ce produit. De plus, ce procédé de synthèse simple ne nécessite pas l'emploi d'agent alcalin dans le milieu réactionnel, ce qui permet d'éviter la dégradation rapide du composé indolique obtenu. Selon le procédé conforme à l'invention, les composés indoliques de départ portant un ou deux radicaux reliés par une fonction ester au cycle benzénique sont de préférence choisis parmi les composés de formule (I) suivante R4 R3 [Rs5-COO]r () N R2 R6 R1 3 2742162 dans laquelle: - n est un nombre entier égal à 1 ou 2 - R1 représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4; - R2, R3, R4 et R6, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un radical alkyle en Cl-C8, alcoxy(C1-C4)alkyle en Cl-C4, alcoxy en C1-C8, alcoxy(ClC4)alcoxy en Cl-C4, aryle en C5-C10, aryloxy en C5-C10, aryle en C5-Co10 comportant de 1 à 3 hétéroatomes tel qu'un atome d'oxygène ou d'azote, aryloxy en C5-C10 comportant de 1 à 3 hétéroatomes tel qu'un atome d'oxygène ou d'azote, acyle en CI-C8, ou bien un radical pris dans le groupe constitué par les radicaux suivants: O O O o o oo II II II -NH-C-NHR7; -NH-C-OR7 OU -O-C--NHR7 dans lesquels le radical R7 représente un radical alkyle en C-C8; - R5 représente un radical alkyle en C1-C8, un radical aryle en C5-Cl0, aryl(C5- C10)alkyle en Cl-C8, alkyl(C1-C8)aryle en C5-Cl0 ou acyl(C2-C8)aryle en C5-Cm. Dans la formule (I) ci-dessus, les radicaux alkyle et alcoxy peuvent être linéaires ou ramifiés, saturés ou insaturés. Le radical acyle désigne de préférence un radical alcanoyle dérivé d'un acide carboxylique aliphatique ayant de 5 à 10 atomes de carbone tels que par exemple les groupes formyle, acétyle, etc; ou un groupe aroyle dérivé d'un acide carboxylique aromatique tel que le groupe benzoyle. Les mono- et dihydroxyindoles pouvant être obtenus par le procédé conforme à I'invention lorsqu'appliqué aux composés de départ de formule (I) ci-dessus répondent donc à la formule (Il) suivante: 4 2742162 R4 R3 [OH] (1Il) R2 R6 RR dans laquelle: - n est un nombre entier égal à 1 ou 2; - et R., R2, R3, R4 et R6 ont les mêmes significations que dans la formule (I). Parmi les composés indoliques que l'on peut obtenir en mettant en oeuvre le procédé de l'invention, on peut citer: - le 5,6dihydroxyindole, - le 6-hydroxyindole, - le 4-hydroxy indole, - le 5hydroxyindole, - le 7-hydroxyindole, - le 5,7-dihydroxyindole. Des composés particulièrement préférés sont: - le 5,6-dihydroxyindole, le 6-hydroxyindole, - le 4-hydroxy indole, - le 7-hydroxyindole. Selon le procédé de l'invention, la nature de l'hydrolase n'est pas critique. Par hydrolase, on entend toute substance enzymatique qui sous l'action de l'eau entraîne la coupure d'une liaison ester. Ces hydrolases sont par exemple décrites par H.G. Davis, R.H. Green, D.R. Kelly et S.M. Roberts dans "Biotransformations in preparative organic chemistry", Academic Press, 1989. 2742162 Parmi les hydrolases utilisables selon l'invention, on peut en particulier citer les lipases, les estérases et les protéases. Ces hydrolases peuvent éventuellement être fixées (supportées) sur des supports inertes tels que des billes de verre, de la célite, de l'argile ou de la résine. A titre de lipase, on peut tout particulièrement citer la lipase de Pseudomonas Fluorescens ainsi que la lipase de Candida Antartica fixée sur résine et commercialisée sous la dénomination Novozym 435 par la société NovoNordisk. Selon le procédé de l'invention, la ou les hydrolases représentent de préférence de 5 % à 500 % en poids environ par rapport au poids du composé indolique de départ à faire réagir et encore plus préférentiellement de 10 % à 100 % en poids environ de ce poids. Selon un mode de réalisation préféré du procédé selon l'invention, le pH du milieu solvant est compris entre 5 et 9 environ et encore plus préférentiellement est compris entre 6,5 et 7,5 environ. Afin d'éviter les variations de pH en cours de réaction, on ajoute de préférence au milieu réactionnel, une solution tampon classique telle que par exemple le tampon phosphate. D'une manière avantageuse, le solvant utilisé est un solvant inerte comme par exemple un alcool inférieur en Cl-C4 tel que le méthanol, 'éthanol ou l'isopropanol ; I'acétonitrile; le tetrahydrofurane; le toluène; I'hexane; I'heptane, le chloroforme ou le dichlorométhane, en présence ou non d'un agent de transfert de phase tel que par exemple un ammonium quaternaire ou un sel d'acide sulfosuccinique. De façon préférentielle, le solvant utilisé est un alcool en Cl-C4 tel que l'éthanol. 6 2742162 Selon l'invention, la température de la réaction n'est pas critique mais il faut que cette température soit compatible avec un bon fonctionnement de l'enzyme utilisée. Selon un forme de réalisation avantageuse du procédé de l'invention, la température de la réaction est comprise entre 20 et 80 C environ et de préférence entre 25 et 50 C environ. Une température tout particulièrement préférée se situe aux environs de 37 C. Lorsque la réaction est terminée, les produits attendus, tels que par exemple le ,6-dihydroxyindole, peuvent, le cas échéant, être récupérés par des méthodes bien connues de l'état de la technique telles que la filtration ou cristallisation. Les composés indoliques obtenus selon le procédé conforme a l'invention peuvent également être ensuite purifiés selon les méthodes classiques et bien connues de l'homme du métier, telles que par exemple la chromatographie sur gel de silice. Les produits indoliques obtenus selon le procédé conforme à l'invention peuvent être utilisés à de nombreuses fins, par exemple comme composés intermédiaires dans la préparation d'acides aminés, d'alcaloïdes de tryptamines, etc..., ou encore comme produits finis dans tout type d'industrie, chimique, cosmétique, alimentaire, pharmaceutique, ou autre. Les exemples de préparation qui suivent sont destinés à illustrer l'invention sans pour autant en limiter la portée. 7 2742162 EXEMPLES EXEMPLE 1: Synthèse du 5,6-dihydroxyindole CH-CO-O OH 3I I hydrolase CH3-CO-O NH OH NH Dans un Erlenmeyer de 500 ml, on a mélangé 6 g de 5,6-diacétoxy indole, 4 g de Novozym 435 commercialisé par la société Novo-Nordisk (hydrolase), 100 ml d'éthanol à 95 et 100 ml de tampon phosphate 0,1M à pH 7. Au bout de 2 heures et 30 minutes d'agitation à une température d'environ 37 C, le milieu réactionnel a été filtré, évaporé à sec puis repris par 50 ml d'acétate d'éthyle. La solution obtenue a ensuite été chromatographiée sur gel de silice, sous pression d'azote en prenant comme éluant un mélange acétate d'éthyle heptane (20/80). Après élimination du 5,6-diacetoxy indole n'ayant pas réagi, on a récupéré le produit attendu dont l'analyse élémentaire pour C8H7NO2 était la suivante: % C H N O Calculée 64,43 4,70 9,39 21,47 Trouvée 64,18 4,89 9,22 21,46 8 2742162 REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation de composés indoliques en une seule étape, caractérisé par le fait qu'il consiste à mettre en contact, en milieu solvant, au moins une hydrolase avec au moins un composé indolique portant un ou deux radicaux reliés par une fonction ester au cycle benzénique, ce par quoi l'on obtient un mono- ou un dihydroxyindole. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que les composés indoliques de départ portant un ou deux radicaux reliés par une fonction ester au cycle benzénique sont choisis parmi les composés de formule (I) suivante R 4 R3 [R5-COO]X 3 I (I) N R2 R6 Ri dans laquelle: - n est un nombre entier égal à 1 ou 2; - R. représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle en Cl-C4; - R2, R3, R4 et R6, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un radical alkyle en C1-C8, alcoxy(C1-C4)alkyle en C1-C4, alcoxy en C1-C8, alcoxy(C1- C4)alcoxy en C1-C4, aryle en C5-C10, aryloxy en C5-C10, aryle en C5-C10 comportant de 1 à 3 hétéroatomes tel qu'un atome d'oxygène ou d'azote, aryloxy en C5-C10 comportant de 1 à 3 hétéroatomes tel qu'un atome d'oxygène ou d'azote, acyle en Cl-C8, ou bien un radical pris dans le groupe constitué par les radicaux suivants: 0 0 0 o o o Il Il Il -NH-C-NHR7 -NH-C-OR7 ou -O-C--NHR7 dans lesquels le radical R7 représente un radical alkyle en C1-C8; - R5 représente un radical alkyle en C1-C8, un radical aryle en C5-C10, aryl(C5- C10)alkyle en C1-C8, alkyl(Cl-C8)aryle en C5-C10 ou acyl(C2-C8)aryle en C5-C10. 9 2742162 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé par le fait que dans la formule (I), les radicaux alkyle et alcoxy sont linéaires ou ramifiés, saturés ou insaturés; le radical acyle désigne un radical alcanoyle dérivé d'un acide carboxylique aliphatique ayant de 5 à 10 atomes de carbone ou un groupe aroyle dérivé d'un acide carboxylique aromatique. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, pour la préparation de mono- ou de dihydroxyindoles de formule (Il) suivante: R4 R3 [OH] nX v ' I N R2 R6 R1 dans laquelle: - n est un nombre entier égal à 1 ou 2; - R1 représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle en C1-C4; - R2, R3, R4 et R6, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un radical alkyle en C1-C8, alcoxy(C1-C4)alkyle en Cl-C4, alcoxy en C1-C8, alcoxy(C- C4)alcoxy en C1-C4, aryle en C5-Co10, aryloxy en C5-Co10, aryle en C5Co10 comportant de 1 à 3 hétéroatomes tel qu'un atome d'oxygène ou d'azote, aryloxy en C5-C1o comportant de 1 à 3 hétéroatomes tel qu'un atome d'oxygène ou d'azote, acyle en Cl-C8, ou bien un radical pris dans le groupe constitué par les radicaux suivants: 0 0 0 o o o Il il il -NH-C-NHR7; -NH-C-OR7 ou -O-C- NHR7 dans lesquels le radical R7 représente un radical alkyle en C1-C8. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour la préparation du 5,6-dihydroxyindole, du 6-hydroxyindole, du 4hydroxyindole, du -hydroxyindole, du 7-hydroxyindole ou du 5,7dihydroxyindole. 2742162 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que l'hydrolase est choisie parmi les lipases, les estérases et les protéases. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé par le fait que l'hydrolase est fixée sur un support inerte tel que des billes de verre, de la célite, de l'argile ou de la résine. 8. Procédé selon la revendication 6 ou 7, caractérisé par le fait que l'hydrolase est choisie parmi la lipase de Pseudomonas Fluorescens et la lipase de Candida Antartica fixée sur résine. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que la ou les hydrolases représentent de 5 % à 500 % en poids par rapport au poids du composé indolique de départ à faire réagir. 10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé par le fait que la ou les hydrolases représentent de 10 % à 100 % en poids par rapport au poids du composé indolique de départ à faire réagir. 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que le pH du milieu solvant est compris entre 5 et 9. 12. Procédé selon la revendication 11, caractérisé par le fait que le pH du milieu solvant est compris entre 6,5 et 7,5. 13. Procédé selon la revendication 11 ou 12, caractérisé par le fait que le milieu réactionnel renferme une solution tampon. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé par le fait que le solvant utilisé est un solvant inerte choisi parmi les alcools en C1-C4, 1 1 2742162 I'acétonitrile, le tetrahydrofurane, le toluène, I'hexane, I'heptane, le chloroforme et le dichlorométhane. 15. Procédé selon la revendication 14, caractérisé par le fait que le solvant est un alcool en Cl-C4. 16. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé par le fait que la température de la réaction est comprise entre 20 et 80 C. 17. Procédé selon la revendication 16, caractérisé par le fait que la température de la réaction est comprise entre 25 et 50 C.