FR 2718752 A1 19951020 FR 9409031 A 19940721 La présente Invention est relative à des pré- parations à base de lactosérum fermenté, utilisables pour améliorer l'état de la peau. Des produits issus de la fermentation du lait, en particulier par des bactéries lactiques (produits du type yaourt), ou par des levures (produits du type kefir), sont connus depuis très longtemps et sont réputés avoir une action favorable sur la santé, qui est attri- buée à leur effet sur l'équilibre de la flore intes- tinale. Les Inventeurs ont maintenant mis au point un produit issu de la fermentation de lactosérum par un mélange de souches spécifiques de bactéries lactiques et de levures, et ont constaté que ce produit possédait une15 activité particulièrement bénéfique pour le tissu cutané, aussi bien par administration systémique (voie orale), que par administration locale (usage externe). La présente Invention a pour objet un procédé d'obtention d'une préparation à base de lactosérum, lequel procédé est caractérisé en ce qu'il comprend une étape au cours de laquelle on procède à la fermentation de lactosérum par un mélange de microorganismes compre- nant au moins un lactobacille choisi dans le groupe constitué par Lactobacillus hilgardii, Lactobacillus casei, Lactobacillus cellobiosus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus kefir, Lacto- bacillus delbrueckii; au moins un streptocoque choisi dans le groupe constitué par: Streptococcus lactis, Streptococcus cremoris, Streptococcus diacetylactis, au moins un Leuconostoc choisi dans le groupe constitué par : Leuconostoc mesenteroides, et Leuconostoc kefir; au moins une levure choisie dans le groupe constitué par: Saccharomyces delbrueckii, Saccharomyces cerevisiae, Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces bulgaricus, Saccha- romyces unisporus, Torula holmii, Saccharomyces globosus, Saccharomyces carlbergensis, Kluyveromyces lactis, Candida tenuis, Candida kefir. Selon un mode de mise en oeuvre préféré du procédé conforme à l'Invention, ledit mélange de micro- organismes comprend au moins: Lactobacillus acidophilus, Streptococcus lactis, Streptococcus cremoris, Streptococ- cus diacetylactis, Leuconostoc mesenteroides, Kluyvero- myces lactis. Le procédé conforme à l'Invention peut être mis en oeuvre à partir de lactosérum frais, directement issu de la fabrication fromagère, ou d'un lactosérum reconstitué à partir de poudre de lactosérum. On peut ajouter au lactosérum des substrats facilitant la crois- sance du mélange de microorganismes, tels que par exemple, des extraits de levure, de mélasses, ou n'importe quelle autre substance connue en elle-même pour faciliter le démarrage de la fermentation par les souches considérées. On effectue l'ensemencement du lactosérum par un inoculat du mélange d'un microorganisme tel que défini ci-dessus. Avantageusement, cet inoculat a préalablement subi une préculture pendant une durée comprise entre 12 et 20 heures, par exemple 16 heures, dans un milieu convenant à la croissance de l'ensemble desdits micro- organismes, tel que par exemple, le milieu M17. On procède de préférence à la fermentation, sous agitation, à une température comprise entre 25 et C, pendant une durée comprise entre 18 et 30 heures, par exemple 24 heures. Selon un autre mode de mise en oeuvre préféré du procédé conforme à l'Invention, il comprend en outre une étape au cours de laquelle l'on procède à la cen- trifugation du lactosérum fermenté, à une force centri- fuge comprise entre 4000 et 8000 g, de préférence 4500 g environ, et l'on recueille le surnageant. Selon une disposition préférée de ce mode de mise en oeuvre, le lactosérum est chauffé après la fer- mentation et préalablement à la centrifugation, à une température comprise entre 80 et 95'C pendant 15 à 30 mi- 5 nutes, de préférence à 85 C pendant 30 minutes. Selon encore une autre disposition préférée de ce mode de mise en oeuvre, le procédé comprend en outre une étape au cours de laquelle on procède à l'ultrafiltration du surnageant de centrifugation sur une membrane, organique ou minérale, possédant un seuil de coupure compris entre 50 000 et 300 000 daltons, de pré- férence de 100 000 daltons, et l'on recueille le filtrat obtenu. La présente Invention a également pour objet des préparations fermentées à base de lactosérum, suscep- tibles d'être obtenues par un procédé conforme à l'Invention, tel que défini ci-dessus. Ces préparations possèdent un effet particu- lièrement bénéfique sur l'état et l'aspect du tissu cutané, et peuvent donc en particulier constituer le principe actif de base de compositions cosmétiques buvables, ou destinées à un usage externe, qui font éga- lement partie de l'objet de la présente Invention. De manière inattendue, les préparations fermentées à base de lactosérum possèdent également un effet immunostimulant. Pour l'obtention de ces compositions, et en particulier des compositions cosmétiques, les prépara- tions fermentées conformes à l'Invention peuvent être diluées par addition d'eau, et/ou additionnées de sub- stances diverses, en particulier d'autres principes actifs tels que oligoéléments, vitamines, extraits d'algue ou des véhicules adaptés à la formulation. Tout particulièrement, les Inventeurs ont constaté que lorsqu'une préparation fermentée conforme à l'Invention était combinée à au moins un principe actif choisi dans le groupe constitué par les vitamines A, E, C, B1, le sélénium, le P-carotène et la superoxyde dis- mustase (SOD), les effets favorables sur la peau étaient très notablement augmentés, aussi bien lors d'une administration systémique que lors de l'usage externe et l'effet antiradicalaire était significativement supérieur à celui obtenu avec les antiradicalaires tels que les vitamines C et E ou le sélénium utilisés seuls. Des compositions conformes à l'Invention ont en particulier une action sur le taux de sébum, et sur l'hydratation et la fermeté de la peau, qui lui confère un aspect plus doux et plus lisse. Les vitamines sont ajoutées de préférence en une quantité calculée pour qu'une prise journalière d'une composition conforme à l'Invention assure entre 20 et 40% des apports nutritionnels quotidiens recommandés pour chacune des vitamines considérées. De préférence, le 1-carotène est ajouté à un taux compris entre 10 et 30 mg pour 100 g de composition prête à l'emploi, le sélénium est ajouté à un taux com- pris entre 10 et 40 gg pour 100 g de composition prête à l'emploi, et la superoxyde dismutase est ajoutée à un taux compris entre 2000 et 10000 unités internationales pour 100 g de composition prête à l'emploi. Les principes actifs hydrosolubles peuvent être dissous directement dans le lactosérum. Les principes actifs liposolubles peuvent être ajoutés sous forme hydrodispersible; avantageusement il sont incorporés sous forme de microparticules telles que celles obtenues par exemple par le procédé décrit dans la Demande EP 501 094, déposée au nom de WORLD TRUST INVESTMENT S.A.. Les compositions buvables conformes à l'Invention peuvent être aromatisées par addition d'arômes alimentaires, et/ou sucrées, avant d'être condi- tionnées dans des contenants du volume souhaité. Les compositions buvables conformes à l'Invention sont administrées de préférence à une dose correspondant à l'absorption d'une quantité comprise entre 30 et 100 ml par jour d'une composition contenant 40% en volume d'une préparation fermentée conforme à l'Invention. Les compositions à usage externe conformes à l'invention comprennent de préférence 10 % en volume d'une préparation fermentée conforme à l'invention. La présente Invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples d'obtention de compositions conformes à l'Invention, et montrant leur activité sur la peau. Il va de soi toutefois que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'Invention dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE 1: Préparation du lactosérum multifermenté. On utilise du lactosérum en poudre reconstitué avec de l'eau à raison de 60 grammes de lactosérum pour 1 litre d'eau. Le lactosérum est additionné de 1,5 pour cent d'extrait de levure afin de permettre une meilleure croissance des bactéries. Le lactosérum enrichi est stérilisé, refroidi à 28 C et ensemencé avec le mélange de bactéries et levures suivant: Lactobacillus hilgardii, Lactobacillus casei, Lactobacillus cellobiosus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus kefir, Lactobacillus delbrueckii, Streptocoque lactis, Streptocoque cremoris, Streptocoque diacetylactis, Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc kefir, Saccharomyces delbrueckii, Saccharomyces cerevisiae, Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces bulgaricus, Saccharomyces unisporus, Torula holmii, Saccharomyces globosus Saccharomyces carlbergensis, Kluyveromyces lactis, Candida tenuis, Candida kefir. L'ensemencement est réalisé à l'aide de pré- cultures de 16 heures de chacune des souches de bactéries et de levures dans du milieu M 17 lactosé (milieu de marque DIFCO). Le lactosérum ensemencé est maintenu à 28 C pendant 24 heures avec une agitation permanente à l'aide d'un mélangeur équipé d'une pale large en rotation lente (70 tours par minute). Pendant les 18 premières heures, le lactosérum est maintenu à un pH de 5,5 par adjonction de soude concentrée à l'aide d'une pompe doseuse. Pendant les 6 dernières heures, la régulation de pH est arrêtée. Le produit ainsi obtenu est ultra-filtré tan- gentiellement sur membrane organique spirale en PVDF (MILLIPORE), de seuil de coupure 100 000 D. L'appareil est réglé de telle façon que l'on ait une pression transmembranaire de 0,5 bar. En variante, avant de procéder à l'ultrafiltration, et après 24 heures de fermentation, le lactosérum multi-fermenté est porté à une température de 'C et maintenu à cette température pendant 30 minutes. Les phospholipides du sérum qui ont précipité lors de l'étape précédente sont séparés par centrifuga- tion continue (à 4500 g), puis l'on procède à l'ultrafiltration sur le surnageant ainsi obtenu. EXEMPLE 2: Préparation d'une composition cosmétique buvable conforme à l'invention: Composition I. L'ultra-filtrat obtenu à l'exemple 1 est dilué avec de l'eau potable de façon à obtenir une solution contenant 40 % de lactosérum clarifié et filtré. Cette solution est additionnée de (pour 100 g): - 100 UI de vitamine A - 0,2 mg de vitamine B1 - 30 mg de vitamine C 2 UI de vitamine E En variante, 25 microgrammes de sélénium (levure séléniée), peuvent, en outre, être ajoutés. Ces vitamines et éventuellement le sélénium possèdent des effets bénéfiques pour la peau. Les vitamines C et E et le sélénium possèdent des propriétés anti-radicaux libres. Les vitamines A et Bl possèdent un effet béné- fique sur la régénération des membranes des cellules. Le lactosérum dilué et vitaminé est aromatisé et sucré pour des raisons organoleptiques: On ajoute au produit (pour 100 g): 2,80 g de saccharose 0,40 g d'arôme naturel de vanille 30. 0,05 g d'arôme naturel d'abricot. On obtient ainsi une composition I qui, pour une meilleure conservation, peut notamment être pasteuri- see. EXEMPLE 3: Préparation d'une composition cosmétique buvable conforme à l'invention: Composition II. Au produit obtenu dans l'exemple 2, sont ajou- tés: 5. 15 mg de béta carotène qui possède des pro- priétés photoprotectrices. EXEMPLE 4: Préparation d'une composition cosmétique buvable conforme à l'invention: Composition III. Au produit obtenu dans l'exemple 2, sont ajou- tés: 5000 UI de S.O.D. (super oxyde dismutase) qui possède des effets anti-radicaux libres ainsi que des propriétés régénératrices du tissu cutané. EXEMPLE 5: Préparation d'une composition cosmétique buvable conforme à l'invention: Composition IV. L'ultra-filtrat obtenu à l'exemple 1 est dilué avec de l'eau potable de façon à obtenir une solution contenant 40 % de lactosérum clarifié et filtré. Cette solution est additionnée de (pour 100 g): - 30 mg de zinc, 30 mg de vitamine C. Le lactosérum dilué et vitaminé est aromatisé et sucré pour des raisons organoleptiques, comme précisé à l'exemple 2. EXEMPLE 6: Effets sur le tissu cutané de la composition I selon l'exemple 2: action sur le taux de sébum (indice lipidique mesuré par sébumétrie). Les essais ont été effectués en double aveugle contre placebo. La composition I obtenue comme décrit dans l'exemple 2, est administrée oralement à un groupe de 10 sujets, pendant 28 jours (1 flacon de 45 ml/j). En parallèle, un groupe de 25 sujets a reçu des compositions (produit de référence) obtenues par fer- mentation du lactosérum avec le mélange de microorga- nismes suivant: Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus caucasicus, Lactobacillus buchnieri, Lactobacillus cellobiosus, Lactobacillus kefir, Lactobacillus brevis, Streptococcus lactis, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces delbrueckii, Saccharomyces exiguus, Saccharomyces unisporus, Saccharomyces uvarum, Saccharomyces carlbergensis, Candida tenuis, Candida kefir, Candida pseudotropicalis, Kluyveromyces fragilis. Un troisième groupe témoin (25 sujets) a reçu un placebo constitué par de l'eau distillée, aromatisée et sucrée. Les résultats sont indiqués dans le Tableau I ci-dessous et à la figure 1. Les effets ont été évalués en déterminant l'indice de sébumétrie (qui est proportionnel au taux lipidique de la surface de l'épiderme), au 14ème jour (Tableau I), au 28ème jour et 12 jours après l'arrêt du traitement (40ème jour) (figure 1). Le taux de stimulation de l'indice lipidique obtenu avec la composition I représente plus de 25 % de l'indice lipidique initial (placebo) (figure 1). En outre, ce taux de stimulation est également significativement supérieur à celui obtenu avec du lacto- sérum multifermenté seul (produit de référence, Tableau I), pour lequel on observe un taux de stimulation de 8,5 %. w w bO LI) I. -à U3n O Ul 0 L-I 0 ' TABLEAU I Placébo Produit de référence Produit selon l'invention _____J-1 J-14 J-1 J-14 J-1 J-14 103. 48 ' 25 I 89 ' 104 2 92 87 2 89 98 2 116 142 3 47 27 3 108 61 3 ' 83 1 4 _ 45 64 4 47 77 4 107 132 97 73 5 92 113 5 50 61 6 66 137 6 84 85 6 ' 83 78 7 105 57 7 87 77 7 93 133 8 142 109 8 94 136 8 _84 105 9 80 147 9 65 64 g_ 164 121 79 72 10 94 140 10 37 106 84,8 87,6 80,8 87.6 90.6 111.8 rbnne......o 90.6 111.8( EXEMPLE 7: Effets sur le tissu cutané de la composition I selon l'exemple 2: action sur l'hydratation de la peau. Les essais ont été effectués en double aveugle contre placebo. Des compositions conformes à l'invention (Composition I), obtenues comme décrit dans l'exemple 2, sont administrées oralement à un groupe de 5 sujets (groupe 4). En parallèle: - un groupe de 5 sujets (groupe 1) a reçu un placebo constitué par de l'eau distillée, aromatisée et sucrée; - un groupe de 5 sujets (groupe 2) a reçu la Composition I pendant 17 jours, puis un placebo pendant 8 jours; - un groupe de 5 sujet (groupe 3) a reçu un placebo pendant 17 jours, puis la Composition I pendant 8 jours. Les résultats sont illustrés au Tableau II suivant et à la figure 2 et montrent un taux de stimula- tion d'hydratation de 41,90 %, significativement plus élevé que la stimulation obtenue avec le placebo, qui est de -0,1 %: ul O CD o ul o ul TABLEAU II J0 J10 Jll J12 J13 J14 J17 J25 G R Bras droit 73,50 63,35 70,48 65,75 75,05 68,45 69,20 66,20 O Bras gauche 78,50 60,50 73,55 65,75 70,60 62,75 71,90 67,80 U Pommette droite 80,30 74,48 91,37 85,77 94,60 94,60 96,30 93,08 P Pommette gauche 80,40 79,70 93,40 90,80 101,90 97,45 95,60 95,77 E Front 92,64 86,95 91,95 94,85 89,30 89,70 90,40 92,51 Menton 105,55 94,10 99,00 98,42 102, 15 101,85 96,35 101,10 G R Bras droit 78,30 67,90 68,80 72,08 74,60 71,30 79,60 68,50 0 Bras gauche 78,55 69,85 68,90 71,88 74,55 67,80 76,75 65,19 U Pommette droite 84,64 81,45 92,75 94,80 94,90 97,65 101,40 84,29 P Pommette gauche 85,70 85,83 86,25 92,53 92,10 98,05 100,25 86,81 E Front 85,65 86,21 85,12 91,95 92,25 99,00 101,00 87,20 Menton 98, 70 95,00 99,75 105,48 98,30 100,35 105,15 98,50 WI W M -t -t u1 uLl O U1 0 UI TABLEAU II (suite) J0 J10 Jll J12 J13 J14 J17 J25 - G R Bras droit 73,00 77,80 81,70 79,40 78,20 73, 10 78,70 100,94 O Bras gauche 75,68 75,85 77,15 79, 05 75,45 72,60 76,70 102,53 U Pommette droite 91,05 92, 70 92,75 94,00 92,80 87,11 93,30 123,69 P Pommette gauche 85,83 90,42 94,15 92,80 88,10 88,25 89,60 126, 31 E Front 85,85 81,02 88,50 89,55 82,85 77, 14 86,20 119,99 Menton 94,18 95,75 96,00 101,40 95,25 92,55 99,55 121,19 G R Bras droit 71,43 79,00 74,90 73,15 69,50 66,31 75,65 63,95 O Bras gauche 71,95 80,35 71,20 70,70 72,65 66,90 73,70 101,31 U Pommette droite 85,28 91,85 95,55 99,25 95,40 84,97 84, 78 121,35 P Pommette gauche 80,75 94,25 95,50 98,15 90, 70 89,70 86,18 122,50 E Front 85,38 94,50 96, 45 88,47 83,40 87,13 92,55 121,15 Menton 95,52 103,80 105,60 106,85 99,20 95,82 105,50 129,00 EXEMPLE 8: Effet antiradicalaire de la composition I selon l'exemple 2. A partir d'un prélèvement de sang humain, on isole les globules rouges. Après centrifugation et lavage, on prépare une solution d'hématies à 22 %. Les différents lots à tester sont préparés comme suit: - Lot témoin: 1 ml d'hématies à 22 % + 500 gl de 2,2'- azobis(2-amidinopropane) chlorhydrate (générateur de radicaux libres) + 500 gl de NaCl. - Lots composition I (pur et à différentes dilutions): 1 ml d'hématies à 22 % + 500 g1 de 2,2'- azobis(2-amidinopropane) chlorhydrate + 500 Bl de composition I. 3 lots ont été réalisés avec 500 Rl de diffé- rentes dilutions de composition I (respectivement 1 - 1/10 - 1/100). Les différents mélanges sont placés à une tem- pérature de 37 C. Il y a à cette température une libéra- tion de radicaux libres hydroperoxy ROO- par le généra- teur. Les radicaux libres attaquent les membranes de glo- bules rouges qui sont détruites. A ce moment là, l'hémoglobine est libérée dans le milieu extérieur qui se colore. On évalue l'hémolyse grâce à l'absorbance rela- tive à la coloration. Le dosage colorimétrique est réa- lisé à 405 nm. Dans le lot témoin, l'hémolyse se produit à partir de la 50ème minute (figure 3, courbe (1)). Dans le lot Composition I non diluée (figure 3, courbe (2)), l'hémolyse se produit à partir de la 260ème minute. Les cellules sont donc protégées 5 fois plus longtemps. On observe un effet protecteur de la composi- tion dose-dépendant: - 100 minutes de protection obtenues avec la composition diluée au 1/10ème (figure 3, courbe (3)), - 50 minutes de protection obtenues avec la composition diluée au 1/100ème (figure 3, courbe (4)). EXEMPLE 9: Effet antiradicalaire et immunopharmacolo- gique des différentes compositions selon l'invention. A. Effet inhibiteur sur la production d'espèces réactives de l'oxvygène de la comDosition I selon l'exemple 2:10 L'effet de la Composition I sur la production d'espèces réactives de l'oxygène est mesurée par le test de chimiluminescence sur la lignée murine J 744 (astrocytome), après activation des cellules par un phor- bol-ester (PMA) ou par le zymosan (Zym) non opsonisé. L'effet de la Composition I a été évalué sur les cellules J 744 soit directement, soit après un prétraitement de 24 heures à 37 C, en présence ou en l'absence d'interféron-y (IFN-y) (10 U/ml) et/ou de lipopolysaccha- ride (LPS) (100 ng/ml). La chimiluminescence est mesurée dans un lumi- nomètre LKB 1251. Les résultats sont illustrés ci-après aux Tableaux III à VII: 1) Effet de la Composition I (Comno I) par action directe, sur la chimiluminescence des cellules J 744: / W W t' -U1Lji LJi 0 Li Do Ln O TABLEAU III 1a 2 3 4 5 m sem p Témoin PMA 8470b 49400 82900 107000 100000 Zymosan 34600 26200 ndC nd nd Compo I 1/20 PMA -74,97d -73,68 -79,25 -85,89 -88,6 -80,5 2,9 0,5 % Zymosan -66,18 -74,01 nd nd nd -70,1 4 Compo I 1/40 PMA -45,93 -38,87 -46,80 -64,21 -61,10 -51, 4 4,8 0,5 % Zymosan -50,87 -58,78 nd nd nd -54, 8 4 Compo I 1/100 PMA nd -20,24 -17,73 -36,36 -30,40 -26,2 4,4 1 % Zymosan -36,13 -47,71 nd nd nd -41,9 5,8 a, nombre d'experiences ind pendantes b, valeur de l'aire sur la courbe (intégrale) c, non déterminé d, pourcentage de changement dans la production d'espèces réactives de 1'02 w w r'. -t - U1 0 oi 0 C oL o TABLEAU IV o o 1a 2 3 4 5 m sem p o Témoin o PMA 12700b 4970 9900 6600 6110 H Zymosan 19300 14300 9600 10000 ndc Compo I 1/20 i- PMA -24,41d -61,77 -43,64 -60,45 -56,96 -49, 4 7 0,5 % Zymosan -71,61 -31,05 -47,08 -52,3 nd -50,5 8,4 1 % Compo I 1/40 m, PMA -21,57 -53,72 -41,52 -33,33 -29,62 -36, 0 5,5 0,5 % Zymosan -63,26 -9,10 -39,79 -41,90 nd -38, 5 11,1 1 % Compo I 1/100 ( PMA -28,82 -43,46 - 32,53 -13,79 nd -29,7 6,1 1 % Zymosan -62,54 -14,69 -41,77 -40,6 nd -32,6 16,5 1% O a, nombre d'experiences inde pendantes b, valeur de l'aire sur la courbe (intégrale) c, non déterminé ( d, pourcentage de changement dans la production d'espèces réactives de 1'02 a (Dh F (D (D i- w w r1j w -à -à ui 0 Ln CO oC LnU TABLEAU V PMA -47,28c -59,08 -53,54 ndd -53,3 3,4 1,7% o - Zymosan -30,86 -11,78 -62,99 nd -14,6 27,1 2,5 % D Compo I 1/40 n PMA -23,48 -8,03 -40,42 -42,92 -28,7 8,1 1 % Zymosan -26,72 -0,35 -52,70 1,74 -19,6 12,8 1 % ( n TABLEAU VI o la 2 3 4 5 m sem p (t tn O Témoin m H PMA 60400b 36800 107000 36400 45700 M Zymosan 123000 366000 183000 183000 ndc DC Compo I 1/20 ' fD P PMA -36,26d 43,48 -33,18 -43, 41 -14,22 -16,7+ 15,8 0,5 % f 0,5 % ID, Zymosan 30,89 -34,15 -42,62 -21,86 nd -16, 9 16,5 0,1 % ' '(D k Compo I 1/40 PMA -56,29 14,13 -19,16 -26,10 -4,38 -18, 4 11,7 0,5 % (D' Zymosan 15,45 -33,06 -31,15 14,21 nd -8, 6+13,6 0,1 % Co (D oD C n Dj Compo I 1/100 c' PMA -55,30 -3,53 -16,64 -34,34 14,66 - 19 12,1 0,5 % Zymosan -0,81 -34,70 -44,26 -26,23 nd -26, 5+9,3 1 % a, nombre d'expériences indépendantes - b, valeur de l'aire sur la courbe (intégrale) ( c, non déterminé i "I d, pourcentage de changement dans la production d'espèces réactives de 1'02 D _U ID P MI I-j LI) w -1 - t U-1 0 uLn o ui o ui o TABLEAU VII n 1a 2 3 4 5 m sem p Témoin PMA 53300b 70100 294000 72200 201000 o: ct Zymosan 454000 988000 448000 ndC nd - Compo I 1/20 - t (D) PMA -84,69d -46,22 -53,40 -44,32 -42,29 -54, 2 7,9 0,7 %. Zymosan -50,66 -39,37 -18,75 nd nd -23,8+ 21,5 2,5 % ' ' Compo I 1/40; II PMA -67,54 -28,25 -58,16 23,96 -45,77 -35, 2 16,2 0,7 % Zymosan -38,55 -32,09 13,39 nd nd -19, 1 16,3 2,5 % c aCt C: (D Compo I 1/100 PMA -65, 10 nd -22,79 3,32 -54,83 34,9 15,6 1 % _ Zymosan nd -34,72 -1,12 nd nd -17, 9 16,8 au 1/100. * B. Effet inhibiteur sur la production d'espèces réactives de l'azote: L'effet de la Composition I sur la production d'espèces réactives de l'azote est mesurée par une méthode calorimétrique, en utilisant le réactif de Griess, sur la lignée murine J 744 (astrocytome). Les cellules sont activées en présence d'interféron-y seul (10 U/ml) (IFN-y) ou associé au lipopolysaccharide (100 ng/ml) (LPS); les oxydes nitriques sont dosés dans le surnageant après 24 ou 48 heures de culture à 37 C. La Composition I est ajoutée aux cultures en même temps que l'interféron-y et/ou le lipopolysaccharide. 1) Effet de la Composition I sur la production des NO par les cellules J 744 activées par l'interféron-y seul (10 U/ml) ou l'interféron-y (IFN) et le lipopolysac- charide (LPS) (100 na/ml), au bout de 24 heures de cul- ture: 3O u1 0 CD o C 0,C n TABLEAU VIII la 2 3 m sem p Témoin IFN 6,70b 10,32 4,34 IFN + LPS 18,72 22,28 11,47 Compo I 1/20 IFN -10,75C -16,23 -9,91 -12,3 2 2,5 % IFN + LPS -23,18 -37,21 -24,5 -28,3 4,5 2,5 % Compo I 1/40 IFN -17,91 -20,54 -3,69 -14 5,2 2,5 % IFN + LPS -28,69 -30,05 -28,68 -29,1 0,5 2,5 % Compo I 1/100 IFN -20,0 -27,71 -11,98 -19,9 4,5 2,5 % IFN + LPS -25,05 -30,70 -22,32 -26,0 2,5 2,5 % a, nombre d'experlences independantes b, concentration en nitrites dans le surnageant de culture en nmoles/ml c, pourcentage de changement dans la production des NO w w N - v U1 0oin O U0 OI -(D (D TABLEAU IX 3 0 C ô z _ r o 2 3 m sem p ( P Témoin n HN) IFN 23,53b 34,23 26,28 C fi g-1 IFN + LPS 58,32 69,92 52 26 Q a ___________ (D( - ,, , Compo I 1/20 Ct (D cD IFN -21,80C -15,32 -1,10 -12,7 6,1 2, 5 % in IFN + LPS -44,70 -30,01 -19,66 -31,5 7,3 2,5 % P4 Compo I 1/40 - cD IFN -19,51 -15,83 -1,41 -12,3 5,5 2,5 % o H > D IFN + LPS -37,26 -24,61 -20,98 -27,6 4,9 2,5 % oD - o O Compo I 1/100: IFN -17,59 -13,92 -8,41 -13,3 2,7 2,5 % H IFN + LPS -26,83 -21,12 -22,22 -23,4 1,7 2,5 % _ n a, nombre d'experiences indépendantes H h b, concentration en nitrites dans le surnageant de culture en nmoles/ml i c, pourcentage de changement dans la production des NO _' O (D D _ 1- ( D fi Ct P-(I hiO (D(D J Ces expériences (Tableaux VIII et IX) montrent un effet inhibiteur de la composition I sur la production des NO par les cellules J 744 activées (IFN-7 et/ou LPS). C. Effet immunostimulant du lactosérum fer- menté conforme à l'invention et comparaison avec la com- Dosition I: 1) Lactosérum: L 1/20 53,5 % de stimulation (1)b L 1/40 264,1 % de stimulation (1) L 1/100 218,0 % de stimulation (1) b:nombre d'expériences indépendantes. 2) Eau + substances de la comDosition I autres aue le lactosérum multifermenté (E): E 1/20 98,0 % d'inhibition (1)b E 1/40 95,2 % d'inhibition (1) E 1/100 88,2 % d'inhibition (1) b:nombre d'expériences indépendantes. L'ensemble des essais ci-dessus montrent: 1. une amplification de stimulation de la production d'espèces réactives de l'oxygène par le lactosérum multifermenté seul. Cette amplification de stimulation s'explique par une activation de la PKC (protéine kinase C) et correspond à une action immunostimulante sur les cellules. 2. un effet inhibiteur très important des vitamines sur la production d'espèces réactives de l'oxygène. 3. les essais réalisés avec la composition I montrent que, de manière inattendue, les effets opposes du lactosérum multifermenté et des vitamines sur l'immunostimulation ne s'annulent pas, mais que la compo- sition I présente à la fois une action antiradicalaire et une action immunostimulante. EXEMPLE 10: Préparation de compositions cosmétiques à usage externe. On prépare le lactosérum multifermenté comme précisé à l'exemple 1 a). L'ultrat-filtrat obtenu est dilué avec de l'eau déminéralisée, de façon à obtenir une solution contenant 10 % de lactosérum clarifié et filtré. Cette solution est associée à des excipients convenables et éventuellement à d'autres substances actives, conformément aux formulations ci-après: * Emulsion régénératrice: Lactosérum multifermenté 10,00 Propylène glycol 5,00 Carbopol 0,60 Alcool cétylique 1,00 Lanoline 10,00 Huiles végétales 7,00 Myristate d'isopropyle 10,00 Triéthanolamine 0,60 Alpha tocophérol 0,05 Conservateurs 0,15 Parfum 0,20 Eau déminéralisée qsp 100 * Lotion tonique pour le corps: Lactosérum multifermenté 10,00 Extrait hydroglycolique de Centella asiatica 10,00 Glycérine 5,00 EDTA 0,05 Acide lactique 0,50 Lactate de sodium (sol. à 70 %) 0,50 Urée 0,25 Pyrrolidone carboxylate de sodium (sol. à 50 %) 0,75 Conservateurs 0,25 Parfum 0,20 Eau déminéralisée qsp 100 * Masque stimulant: Lactosérum multifermenté 10,00 Kaolin 5,00 Lait en poudre 2,00 Talc 12,00 Stéaralkonium bentonite 8,00 Glycérine 10, 00 Propylène glycol 10,00 Alcool polyvinylique 0,50 Dioctyl succinate de sodium 0,50 Conservateurs 0,15 Parfum 0,35 Eau déminéralisée qsp 100 * Fond de teint traitant: Lactosérum multifermenté 10,00 Cérésine 5,00 Cire de carnauba 5,00 Ozokérite 3,00 Alcool de lanoline 21,00 PPG 45 dodécyl glycol copolymère 20,00 Lactate de myristyle 20,00 Complexe cire d'abeille-PEG-sorbitol 5,00 Huiles végétales 4,00 Bentone 0,50 Glycérine 5,00 Conservateurs 0,30 Eau déminéralisée qsp 100 * Lotion après-rasage: Lactosérum multifermenté 10,00 Acide lactique 0,2-0,5 Lactate de sodium 0,2-0,4 Glycérine 2,00 Allantoine 0,15-0,35 EDTA (sel disodique) 0,05 Carboxyméthyl cellulose 0,10 Conservateurs 0,25 Parfum 0,25 Eau déminéralisée qsp 100 * Lotion tonique pour les cheveux: Lactosérum multifermenté 10, 00 Cyclométhicone 30,00 Isononaoate d'octyle 4,00 Alcool cétylique éthoxyle 20 propoxyle 5 2,00 Extrait de lotus 0,50 Extrait d'orchidées 0,75 Parfum 0,15 Alcool éthylique 96 % qsp 100 Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui vien- nent d'être décrits de façon plus explicite; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée de la présente inven- tion. REVENDICATIONS 1) Procédé d'obtention d'une préparation à base de lactosérum, lequel procédé est caractérisé en ce qu'il comprend une étape au cours de laquelle on procède 5 à la fermentation de lactosérum par un mélange de microorganismes comprenant au moins un lactobacille choisi dans le groupe constitué par Lactobacillus hilgardii, Lactobacillus casei, Lactobacillus cellobio- sus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus acidophilus,10 Lactobacillus kefir, Lactobacillus delbrueckii; au moins un streptocoque choisi dans le groupe constitué par: Streptococcus lactis, Streptococcus cremoris, Strepto- coccus diacetylactis, au moins un Leuconostoc choisi dans le groupe constitué par: Leuconostoc mesenteroides, et15 Leuconostoc kefir; au moins une levure choisie dans le groupe constitué par: Saccharomyces delbrueckii, Saccha- romyces cerevisiae, Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces bulgaricus, Saccharomyces unisporus, Torula holmii, Saccharomyces globosus, Saccharomyces carlbergensis, Kluyveromyces lactis, Candida tenuis, Candida kefir. 2 ) Procédé selon la revendication 1, caracté- risé en ce que ledit mélange de microorganismes comprend au moins: Lactobacillus acidophilus, Streptococcus lactis, Streptococcus cremoris, Streptococcus diacetylac- tis, Leuconostoc mesenteroides, Kluyveromyces lactis. 3 ) Procédé selon l'une quelconque des reven- dications 1 ou 2, caractérisé en ce que la fermentation est effectuée à une température comprise entre 25 et C, pendant une durée comprise entre 18 et 30 heures, par exemple 24 heures. 4 ) Procédé selon l'une quelconque des reven- dications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il comprend en outre une étape au cours de laquelle l'on procède à la centrifugation du lactosérum fermenté, à une force cen- trifuge comprise entre 4000 et 8000 g. ') Procédé selon l'une quelconque des reven- dications 1 à 4, caractérisé en ce que le lactosérum est chauffé après la fermentation et préalablement à la cen- trifugation, à une température comprise entre 80 et 95'C,5 pendant 15 à 30 minutes. 6') Procédé selon l'une quelconque des reven- dications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il comprend en outre une étape au cours de laquelle on procède à l'ultrafiltration du surnageant de centrifugation sur une10 membrane, organique ou minérale, possédant un seuil de coupure compris entre 50 000 et 300 000 daltons, de pré- férence de 100 000 daltons, et l'on recueille le filtrat obtenu. 7 ) Préparation fermentée à base de lacto- sérum, caractérisée en ce qu'elle est susceptible d'être obtenue par un procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 8 ) Composition cosmétique buvable, caractéri- sée en ce qu'elle comprend une préparation fermentée selon la revendication 7. 9') Composition cosmétique selon la revendica- tion 8, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un principe actif choisi dans le groupe constitué par les vitamines A, E, C, B1, le sélénium, le 5-carotène et la superoxyde dismustase (SOD). ) Composition cosmétique à usage externe, caractérisée en ce qu'elle comprend une préparation fer- mentée selon la revendication 7. 11') Utilisation d'une préparation fermentée selon la revendication 7, ou d'une composition selon l'une quelconque des revendications 8 à 10, pour amélio- rer l'aspect de la peau. 12') Utilisation d'une préparation fermentée selon la revendication 7, pour la préparation d'un médi- cament immunostimulant.