FR 2714263 A1 19950630 FR 9315628 A 19931224 1 2714263 L'invention concerne une nouvelle utilisation de compo- sitions renfermant du pyrazophos et leur inhibiteur de la biosynthèse des stérols. L'invention a pour objet l'utilisation de compositions renfermant du pyrazophos et un inhibiteur de la biosynthèse des stérols (IBS) en agriculture pour lutter contre les résistances aux traitements fongicides et prévenir l'appari- tion des résistances. L'objet de l'invention peut être utilisé pour le trai- tement de la vigne, des céréales comme l'orge ou le blé, des betteraves ou encore en arboriculture. L'invention a plus particulièrement pour objet l'utili- sation décrite ci-dessus pour le traitement fongicide de la vigne.15 L'invention a pour objet l'utilisation de compositions renfermant du pyrazophos et un inhibiteur de la biosynthèse des stérols (IBS) pour le traitement fongicide de la vigne. Le pyrazophos ou 2-diéthoxyphosphinothioyloxy 5-méthyl- pyrazolo[1, 5a]pyrimidine 6-carboxylate d'éthyle est un pro- duit fongicide connu (cf The Pesticide Manual 9ème édition. Working et Hance, 10350), son mode d'action multisites lui confère une activité anti-résistance intéressante. Toutefois le produit n'est pas assez actif pour être utilisé seul en tant que fongicide pour le traitement de la vigne. Comme inhibiteurs de la biosynthèse des stérols, on peut citer par exemple, le myclobutanil, le triadiménol et d'une façon générale tous les triazoles. Les inhibiteurs de la biosynthèse des stérols (IBS) et en particulier ceux agissant spécifiquement sur la C14 démé- thylase (DMI) ont une activité fongicide exceptionnelle. Toutefois leur utilisation dans le traitement de la vigne fait apparaitre des résistances. Ces résistances ont entralné une difficulté à lutter contre les attaques d'oïdium dans de nombreuses régions viticoles. L'intérêt de l'invention est double: diminuer la pression de sélection de souches résistantes et permettre de conserver une bonne protection du feuillage dans les secteurs o ces souches s'expriment déjà par l'abaissement d'effica- cité des triazols. Les résultats expérimentaux exposés ci-après mettent clairement en évidence les bons résultats fongicides obtenus avec une faible quantité de pyrazophos. 5 L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation caractérisée en ce que l'inhibiteur de la biosynthèse des stérols est le myclobutanil. La partie expérimentale exposée ci-après met en évidence les bons résultats obtenus lorsque l'on utilise le myclo- butanil. L'invention a plus particulièrement pour objet, l'utili- sation caractérisée en ce que la quantité pondérale de pyra- zophos est comprise entre 1 fois et 15 fois la quantité d'inhibiteur de la biosynthèse des stérols, et tout spéciale-15 ment l'utilisation caractérisée en ce que la quantité pondé- rale de pyrazophos est 3 à 5 fois ou environ 3 à 5 fois la quantité pondérale de myclobutanil. L'invention a plus spécialement pour objet, l'utilisa- tion décrite cidessus pour le traitement de l'oïdium de la vigne, pour lutter notamment contre Uncinula necator. L'oïdium de la vigne est un problème très important que l'invention permet de résoudre. L'invention a notamment pour objet l'utilisation carac- térisée en ce que l'on traite 1 hectare de vigne avec une composition renfermant de 20 à 40 g de myclobutanil pour une quantité comprise entre 100 g ou environ 100 g de pyrazophos et 150 g ou environ 150 g de pyrazophos. L'invention a également pour objet les compositions ren- fermant une quantité pondérale de pyrazophos égale à 1 à 15 fois la quantité pondérale d'inhibiteur de la biosynthèse des stérols. L'invention a plus particulièrement pour objet les compositions renfermant de 20 à 40 g de myclobutanil pour une quantité comprise entre 100 g ou environ 100 g de pyrazophos35 et 150 g ou environ 150 g de pyrazophos. L'invention a tout spécialement pour objet les composi- tions renfermant 30 g ou environ 30 g de myclobutanil pour une quantité comprise en 100 g ou environ 100 g de pyrazophos et 150 g ou environ 150 g de pyrazophos. L'invention a notamment pour objet l'utilisation des compositions définies précédemment pour traiter 1 hectare de vigne (par exemple de 30 à 50 g de myclobutanil et 100 à 5 150 g de pyrazophos par hectare). L'invention a en outre pour objet des compositions antifongiques renfermant comme principe actif au moins une composition définie cidessus ainsi que des agents de formu- lation appropriés.10 Les formulations de l'invention renferment en général de 1 à 95 % en poids de principe actif. Les formulations possibles varient en fonction de para- mètres biologiques et physicochimiques. Il peut s'agir par exemple de poudres mouillables, de concentrés émulsifiables,15 de gels, de comprimés effervescents, de solutions aqueuses, d'émulsions, de solutions à vaporiser, de dispersions dans l'huile ou dans l'eau, de suspoémulsions, de poudres, de granulés par exemple de microgranulés, de granulés à pulvé- riser, de granulés enduits, de granulés d'absorption, de20 granulés dispersibles dans l'eau, de formulation ULV, de microcapsules, de cires ou d'appâts. Ces types de formulations sont connus et sont décrites par exemple par Winnacker-K chler, "Chemische Technologie (Chemical Technology)", Volume 7, C-Hauser Verlag, Munich, 4ème Ed., 1986; van Falkenburg, "Pesticides Formulations", par Marcel Dekker N.Y., 2ème Ed. 1972-73 ou par K. Martens, "Spray Drying Handbook", 3ème Ed. 1979, G. Goodwin Ltd. London. Les différents agents de formulations appropriés, comme des matériaux inertes, des surfactants, des solvants et autres additifs sont connus et décrits par exemple par Watkins, "Handbook of Insecticide Dust Diluents and Carriers", 2ème Ed. Darland Book, Caldwell N.J., par H.v. Olphen, "Introduction to Clay Colloid Chemistry, 2ème Ed.,35 J. Wiley & Sons, N.Y.; par Marschen, "Solvents Guide", 2ème Ed., Interscience, N.Y. 1950; McCutcheon's "Detergents and Emulsifiers Annual", MC Publ. Corp., Ridgewood N.J.; par Sisley and Wood, "Encyclopedia of Surface Active Agents", Chem. Publ. Co. Inc., N.Y. 1964, par Schônfeldt, "Grenzflâchenaktive Athylenoxidaddukte (Surfaceactive Ethylene Oxide Adducts)", Wiss. Verlagsgesell., Stuttgart 1976; ou par WinnackerKUchler, "Chemische Technologie (Chemical Technology)", Volume 7, C. Hauser Verlag Munich, 4ème Ed. 1986. Les poudres mouillables sont des préparations que l'on peut disperser uniformément dans l'eau et renferment outre la substance active d'autres agents mouillants, comme les alkyl-10 phénols polyoxyéthylés, les alcools gras polyoxyéthylés, les alkylsulfonates ou alkylphénosulfonates et des agents disper- sants comme le ligninesulfonate de sodium, le 2,2'-dinaphtyl- méthane, 6,6'-disulfonate de sodium, le dibutylnaphtalène sulfonate de sodium, ou l'oleïlméthyltaurinate de sodium,15 avec en outre un agent diluant ou inerte. Pour préparer des concentrés émulsifiables, on dissout la matière active avec un solvant organique comme le méthanol, le butanol, la cyclohexanone, le diméthylformamide, le xylène, ou d'autres compo- sés aromatiques ou d'autres hydrocarbures à point d'ébulli-20 tion plus élevé avec en outre un ou plusieurs agents émulsi- fiants. Comme exemples d'agents émulsifiants, on peut citer, les sels de calcium d'acide arylalkylsulfonique, comme le dodécylbenzènesulfonate de calcium, ou des agents émulsi- fiants non ioniques comme les esters de polyglycol d'acide25 gras, les éthers d'alkylarylpolyglycol, les éthers de polyglycols, les esters d'acide gras d'oxyde de propylène et d'oxyde d'éthylène, les esters d'acide gras de polyoxy- éthylène, ou les esters de polyoxyéthylène. Pour obtenir des poudres, on peut moudre la matière active avec des substances finement divisées comme le talc ou les argiles naturelles, comme le kaolin, la bentonite, la pyrophylite ou la terre d'infusoire. Pour obtenir des granu- lés, on peut pulvériser la matière active sur des granulés de matière inerte absorbante ou appliquer des concentrés de35 matière active sur la surface de véhicules comme le sable, les kaolin ou des granulés de matière active au moyen de ligands comme les alcools polyvinylique, les polyacrylates de sodium, ou les huiles minérales. On peut ainsi faire des granulés de matière active d'une manière classique pour les engrais, en mélangeant si on le souhaite, la substance active à des engrais. Dans le cas de poudres mouillables, la concentration en principe actif est par exemple de 10 à 90 % en poids, le restant étant constitué par des ingrédients classiques de formulation. Dans le cas de concentrés émulsifiables, la concentration en principe actif est d'environ 5 à 80 % en poids. Les formulations sous forme de poudre contiennent10 habituellement de 5 à 20 % en poids de principe actif, les solutions pour spray de 2 à 20 % en poids environ. Dans le cas de granulés, la concentration en principe actif varie selon que le principe actif est liquide ou solide et selon les substances auxiliaires de formulation utilisées.15 En outre, les compositions renferment éventuellement des adhésifs, des agents mouillants, dispersant, des émulsi- fiants, des agents de pénétration, des solvants, des charges et des véhicules. Pour l'emploi, les concentrés sont dilués d'une manière habituelle avec de l'eau dans le cas de poudres mouillables, de concentrés émulsifiables, de dispersants et parfois de microgranulés. Les préparations sous forme de poudres ou granulés et les solutions pour sprays ne sont en général pas diluées avec d'autres substances avant utilisation.25 I - EXEMPLES DE COMPOSITIONS SELON L'INVENTION a) On a préparé des compositions renfermant: pyrazophos 100 g myclobutanil 30 g b) On a préparé des compositions renfermant: pyrazophos 150 g myclobutanil 30 g II - EXEMPLES DE FORMULATIONS En utilisant comme matière active les compositions a et b, on a préparé les formulations suivantes: a) On prépare une poudre en mélangeant 10 parties en poids de matière active à 90 parties en poids de talc et en mélangeant le tout dans un mortier. b) On prépare une poudre mouillable facilement dispersable dans l'eau en mélangeant 25 parties en poids de matière active, 65 parties en poids de quartz contenant du koalin comme matière inerte, 10 parties en poids de ligninesulfonate de potassium et 1 partie en poids d'oléoylméthyl taurinate de 5 sodium comme agent mouillant et dispersant et en moulant le mélange dans un broyeur à disque d'aiguilles. c) On prépare un concentré de dispersion facilement dispersa- ble dans l'eau en mélangeant 40 parties en poids de substance active, 7 parties en poids de monoestersulfosuccinique, 210 parties en poids de sel de sodium d'acide ligninesulfonique, 51 parties en poids d'eau et en moulant le mélange à une forme inférieure à 5 microns dans un broyeur à disque. d) On prépare un concentré émulsifiable en mélangeant 15 parties en poids de matière active, 75 parties en poids de15 cyclohexanone comme solvant et 10 parties en poids de nonyl- phénol comme émulsifiant. e) On prépare des granulés à partir de 2 à 15 parties en poids de matière active et d'un véhicule inerte pour granulés comme l'attapulgite, la pierre ponce en granulés et/ou du20 sable quartzeux. On utilise de façon avantageuse une suspen- sion de poudre mouillable de l'exemple b, avec une teneur en solide de 30 % qui est vaporisée sur la surface des granulés. On sèche et mélange intimement. La proportion en poids de poudre mouillable est d'environ 6 % et celle du véhicule25 inerte d'environ 95 % en poids des granulés finis. III - Activité fongicide des compositions de l'invention 1) Préparation du matériel végétal On a utilisé des feuilles de vigne de cépage Cinsaut de 3ème et 4ème étage foliaire, lavées, séchées et découpées sous la forme de disques de 18 mm de diamètre. Les disques ainsi préparés sont répartis dans des boites de Pétri à raison de 10 disques par boite. 2) Préparation du matériel fongique Le matériel fongique est constitué de conidies, issues de souches monoconidiennes d'U. necator obtenues par deux isolements monospores successifs à partir d'échantillons récoltés au vignoble. Les souches ont été conservées à 15'C sur des vitro- plants de vigne, cv. "Cinsaut" par des repiquages successifs tous les 3 mois. Les vitro-plants ont été produits en tubes sur le milieu nitritif de SKOOG. Ils ont été élevés dans une chambre climatique à 22 20C éclairée 16 heures par jour avec une intensité lumineuse de 45 ME.m-2.s- 1. Apres deux mois de croissance environ, ils ont été contaminés par dépôt de quelques conidies à l'aide d'une aiguille stérile. Quatre souches monoconidiennes ont été retenues. Leurs caractéristiques sont présentées dans le tableau 1. Année CI50 (en mg/1) Facteur de résistance CI50 Souche Pays d'isole (en mg/l) ment Triadiménol Myclobutanil Triadiménol Myclobutanil Pyrazophos CH02 France 1988 0,230 0,119 2,943 MA05 France 1989 3,585 3,305 20,5 31,7 3,515 PE17 France 1992 6,181 0,646 35,3 6,2 2,957 ER12 Portugal 1990 0,570 9,158 3,3 87,8 2,017 La souche CH02 isolée dans le vignoble bordelais en 1988 sert de référence sensible aux fongicides DMI. La souche MA05, isolée à Madiran en 1989, est résistante au triadiménol (FR = 20,5) et au myclobutanil (FR = 31,7). Par contre, les souches PE17 et ER12 ont des profils de résistance très différents: PE17 est résistante au triadiménol (FR = 35,3) et ER12 au myclobutanil (FR = 87,8). La production en masse de l'inoculum a été réalisée par contamination de feuilles entières désinfectées dans une solution d'hypochlorite de calcium (50 g/l) par immersion pendant une durée de 10 minutes. Chaque feuille a été séchée puis placée dans une boîte de Petri face inférieure contre un milieu gélosé (20 g/l) additionné de benzimidazole (30 mg/l). Les colonies qui se développent à la surface de ces feuilles15 produisent un inoculum qu'il convient de choisir avec atten- tion: lorsque les sporulations ont un aspect blanchâtre, bien visible à l'oeil nu, il n'existe que majoritairement des conidies âgées, déformés, voire lysées, incapables de germer. Par contre, les jeunes taches fructifères, à peine visibles,20 sont contituées uniquement de chaînettes de conidies translu- cides, ovales et au contour régulier, qui possèdent une parfaite viabilité et constituent un inoculum d'excellente qualité. Dans des conditions de température de 20 à 25'C, le meilleur compromis entre la viabilité et la quantité totale25 d'inoculum se situait 10 à 12 jours après la contamination. Nous avons confirmé ces observations et utilisé un inoculum âgé de 12 jours dans toutes les expérimentations en condi- tions contrôlées. 3) Application du fonqicide Les fongicides sont appliqués par contact direct avec les disques de feuille. On dépose les disques de feuille dans des boîtes de Pétri sur un papier filtre imbibé de 3 ml d'une suspension de fongicide. Les boîtes sont maintenues pendant 24 heures à 20 C dans ces conditions. 4) Inoculation et incubation La contamination de la face adaxiale des disques de feuille a été réalisée par dépôt de conidies à sec. Les boîtes ont été ouvertes et placées à la base d'une tour d'inoculation en Plexiglas (0,09 m2 de surface et 0,6 m de hauteur). Un souffle d'air détache des conidiophores les conidies provenant de feuilles infectées placées au sommet de la tour. Elles se déposent alors par gravité sur le support 5 végétal. On vérifie par observation microscopique, la quan- tité de conidies apportée. Après avoir été refermées, les boites ont été placées en incubation à 21 C et éclairées 16 heures par jour avec une intensité lumineuse de 25 ^E.m-2.s-1. L'humidité nécessaire à10 l'infection est assurée à l'intérieur des boîtes par le milieu gélosé. ) Notation du développement de la maladie Au bout de 12 jours d'incubation, chaque disque de feuille a été crédité d'une note visuelle après observation de toute la surface du disque à l'aide d'une loupe binocu- laire. Les notes varient de 0 à 10 et prennent en compte la surface colonisée par le parasite mais aussi l'intensité de la sporulation. 6) Calcul de l'efficacité des différents produits La note moyenne d'attaque a été calculée pour chaque concentration de fongicide appliquée sur 10 disques. L'effi- cacité (E) de chaque concentration de fongicide peut être calculée selon la formule: (1) E = 100 x ((T-d)/T) o T est la note moyenne d'attaque sur les disques témoins et d celle sur les disques traités avec la concentration d de fongicide.30 L'interaction entre le pyrazophos et le myclobutanil a été appréciée en utilisant la méthode de GOWING modifiée par COLBY. Celle-ci consiste à comparer l'efficacité de l'asso- ciation (A + B) obtenue expérimentalement (Eobs) à celle de l'efficacité théorique du mélange qu'il est possible de35 calculer (Ethé) à partir de l'efficacité pratique de chacun des produits A et B pris isolément. Cette efficacité (Ethé) est calculée par la formule: (2) Ethé = EA + EB ((EAXEB)/100) o EA et EB sont les efficacités respectives des produits A et B étudiés séparément aux mêmes concentrations que celles 5 retenues dans le mélange. La valeur de la différence entre Eobs et Ethé permet de conclure sur l'interaction entre les deux molécules. 7 - Résultats Les mélanges de l'invention montrent une bonne activité et une synergie sur l'ensemble des souches résistantes. IV - Essais au vignoble Une stratégie anti-résistance doit correspondre A deux exigences: un très bon niveau de protection dans toutes les situations y compris sur les populations résitantes et le plus faible effet sélectif possible sur les populations d'agents pathogènes. C'est dans ce but que l'on a procédé à la surveillance des populations d'Uncinula necator traitées par les compositions de l'invention. Il a été procédé en20 cours et en fin de saison A la comparaison de la sensibilité des populations isolées des différentes parcelles de vigne traitées avec les mélanges de l'invention. Les éléments observés justifient l'utilisation des compositions de l'invention dans la lutte anti-résistance pour le traitement25 de l'oïdium de la vigne. ESSAI N 1: On traite des parcelles de 200 pieds de vigne A l'aide de suspensions renfermant soit le pyrazophos seul (300 g/ha) soit le myclobutanil seul (30 g/ha), soit les associatios30 (20 g de myclobutanil et 150 g de pyrazophos, et 30 g de myclobutanil et 150 g de pyrazophos). Au bout de 2 ans de traitement, on étudie la structure de la population d'oXdium vis-à-vis de sa sensibilité par rapport au myclobutanil, on constate que par rapport A la situation de départ, dans les parcelles traitées pendant 2 ans avec le myclobutanil seul, la fréquence de souches résistantes s'accroit, alors que dans les parcelles traitées avec les mélanges de l'invention la structure de la population est stable. ESSAI N 2 On traite des parcelles de vigne comme précédemment, selon la cadence du traitement pratiqué par les viticulteurs pour empêcher le développement de la maladie. On observe l'efficacité de fin de saison. On observe que dans les sites o l'oXdium est résistant au myclobutanil ou au triadiménol, les mélanges de l'inven- tion gardent leur totale efficacité. REVENDICATIONS 1) Utilisation de compositions renfermant du pyrazophos et un inhibiteur de la biosynthèse des stérols (IBS), en agricul- ture pour lutter contre les résistances aux traitements 5 fongicides et prévenir l'apparition des résistances. 2) Utilisation selon la revendication 1 pour le traitement fongicide de la vigne. 3) Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que l'inhibiteur de la biosynthèse des stérols est le myclobutanil. 4) Utilisation selon la revendication 1, 2 ou 3, caractérisée en ce que la quantité pondérale de pyrazophos est comprise entre 1 fois et 15 fois la quantité d'inhibiteur de la bio- synthèse des stérols.15 5) Utilisation selon la revendication 4, caractérisée en ce que la quantité pondérale de pyrazophos est 3 à 5 fois ou environ 3 à 5 fois la quantité pondérale de myclobutanil. 6) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à pour le traitement de l'oïdium. 7) Utilisation selon la revendication 6 pour lutter contre Uncinula necator. 8) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 2 à 7, caractérisée en ce que l'on traite 1 hectare de vigne avec une composition renfermant de 20 a 40 g de myclobutanil pour une quantité comprise entre 100 g ou environ 100 g de pyrazo- phos et 150 g ou environ 150 g de pyrazophos. 9) Les compositions renfermant une quantité pondérale de pyrazophos égale à 1 a 15 fois la quantité pondérale d'inhi- biteur de la biosynthèse des stérols. 10) Les compositions selon la revendication 9, renfermant une quantité pondérale de pyrazophos comprise entre 3 et 5 fois la quantité d'inhibiteur de la biosynthèse des stérols. 11) Les compositions selon l'une quelconque des revendica- tions 8 à 10 caractérisées en ce que l'inhibiteur de la bio- synthèse des stérols est le myclobutanil. 12) Les compositions selon la revendication 11, renfermant de à 80 g de myclobutanil/l pour environ 200 à 300 g/l de pyrazophos. 13) Les compositions selon la revendication 12, renfermant g de myclobutanil ou environ 30 g de myclobutanil pour une quantité comprise entre 100 g ou environ 100 g et 150 g ou environ 150 g de pyrazophos. 14) Les formulations antifongiques renfermant comme principe actif au moins une composition définie à l'une quelconque des revendications 9 à 13, ainsi que des agents de formulation appropriés.