FR 2715304 A1 19950728 FR 9400846 A 19940126 Vaccin anti-allergique La présente invention a pour objet des compositions pharmaceutiques principalement destinées au traitement ou à la prévention des réactions allergiques notamment médiées par les immunoglobulines E (IgE), ainsi que des maladies immunitaires, notamment inflammatoires, qui en découlent. Dans certains cas, ces compositions pourraient être aussi utilisées pour moduler la production d'IgE par l'organisme, en particulier pour lutter contre les pathologies liées à la production anormale des IgE. D'une manière générale, on sait que les anticorps produits par un organisme sont des immunoglobulines. Une molécule d'immunoglobuline est formée de deux chaines polypeptidiques légères (chaine L) et de deux chaines lourdes (chaine H) dans une configuration "Y". Il existe différentes classes d'immunoglobulines, G, M, A, D et E, chacune caractérisée par une chaine lourde particulière. L'IgE possède une chaîne lourde de type epsilon (O). Toute immunoglobuline clivée à la papaine génère un fragment constant Fc et deux fragments Fab. Dans la suite du texte le terme fragment "Fc" sera utilisé pour désigner un dimère composé pour l'essentiel de tout ou partie de la région d'une IgE allant du domaine CH2 au domaine CH4. Les IgE possèdent des récepteurs à la surface des cellules du système immunitaire: un récepteur de haute affinité (FceRI) est présent sur les mastocytes, les basophiles et les cellules de Langherans tandis qu'un récepteur de basse affinité (FceRII) est présent sur les lymphocytes B, les eosinophiles, les plaquettes et les monocytes. Les IgE se fixent sur leur récepteurs par l'intermédiaire de leur région Fce. Lors d'une deuxième exposition à un antigène certains individus développent une raction allergique qui peut prendre des formes variées; elle peut être notamment aussi bien aiguë que chronique. Les IgE jouent un rôle central dans le phénomène allergique, en particulier elles sont un des facteurs déclenchants de la réaction allergique aiguë, aussi appelée réaction d'hypersensibilité de type I. En bref, des cellules présentatrices d'antigène transportent l'allergène et le présentent aux cellules T qui à leur tour, aident les lymphocytes B à produire des IgE spécifiques de l'allergène. Ces IgE se lient par leur région Fc aux récepteurs FcERI des mastocytes. Quand ces IgE liées aux mastocytes interagissent ultérieurement avec le même allergène, un pontage s'établit entre les récepteurs FceRI. Ce pontage déclenche une réaction de dégranulation qui libère des médiateurs responsables des symptômes cliniques d'une réaction allergique aiguë; il y a notamment relargage d'histamine. Les symtômes d'allergie locale incluent, par exemple, la rhinite et l'asthme allergiques, l'urticaire, l'eczéma atopique, la stimulation des extrémités des nerfs suivie de prurit et de douleurs. Lors d'une administration systémique d'antigène, certains Individus réagissent par une chute de la tension, un collapsus, des bronchospasmes, voire un choc anaphylactique mortel. Dans le cas d'une allergie alimentaire des symptômes apparaissent, tels que le prurit et le gonflement des lèvres, de la bouche et de la langue, des nausées et des vomissements, et des douleurs abdominales. Les traitements actuels de l'allergie consistent, soit à traiter les symptômes par des inhibiteurs des médiateurs libérés, soit à augmenter la tolérance à un antigène spécifique par désensibilisation. Des développements plus récents permettent d'envisager une intervention plus en amont dans le but de traiter les causes de l'allergie au lieu des symptômes. A cette fin, on a déjà proposé d'intervenir au niveau de l'interaction entre les IgE spécifiques et leurs récepteurs, (i) en utilisant un fragment Fcú non-immunogène à titre de compétiteur pour la fixation sur les récepteurs des IgE, (>i) en utilisant des anticorps monoclonaux anti-IgE ou anti-FceRI ou II, empêchant l'interaction des IgE avec leurs récepteurs, ou (iii) en utilisant des anticorps monoclonaux réduisant la synthèse des IgE par les lymphocytes B. La première approche (i) a été étudiée notamment par R. S. Geha et al. (Nature Vol. 315, 1985, n 6020, 577-578) qui décrivent le blocage de la réaction de Prausnitz-Kustner provoquée par l'injection cutanée chez l'homme d'un sérum contenant les anticorps IgE aux graminés, en présence d'un excès d'un polypeptide non glycosylé résultant d'une expression bactérienne du fragment de gène humain codant pour l'essentiel du fragment FcE, à savoir pour la séquence d'acides aminés 218-547 selon la définition de Bennich (Progress In Immunol. II Vol. I, 1974, 49-58 et Int. Arch. Allergy App. Immunol. 53, 459), en présence de l'allergène. Les auteurs préconisent cette approche du fait que ces fragments peptidiques ne seraient pas immunogènes chez l'homme. D'autres fragments dérivés du fragment Fce ont été proposés dans WO 88/00204. D'autre part, WO 90/15878 (Stanworth) décrit un oligopeptide de 10 acides aminés de formule Lys-Thr-Lys-Gly- Ser-Gly-Phe-Phe-Val-Phe; séquence identique à celle du domaine CH4 de la chaîne E. Cet oligopeptide se comporte comme un haptène et, par conséquent, il doit être nécessairement conjugué à un élément porteur pour être utilisé comme agent vaccinal antiallergique. WO 93/5810 (Hellman) décrit un peptide dont la séquence d'acides aminés est identique à celle de la région CH2-CH3 de la chaîne ú. A des fins vaccinales, ce peptide est utilisé sous forme fusionnée avec la glutathion- transférase de Schistosoma japonicum en présence d'adjuvant de Freund complet ou incomplet. En modifiant le profil de glycosylation d'un fragment Fce humain, on a maintenant trouvé un moyen pour rendre immunogène ce fragment FcE chez l'homme, vraisemblablement en démasquant des épitopes néoantigéniques. De plus, il a été trouvé que, ce fragment Fcú rendu immunogène induit des anticorps qui reconnaissent les IgE natives mais qui ne forment pas, avec ces IgE natives, des complexes immuns susceptibles d'induire des réactions indésirables telles que le relargage d'histamine. Un fragment Fce rendu immunogène pour l'organisme dont il est issu pourrait donc être utilisé: (i) soit en tant qu'agent vaccinal, (ii) soit pour générer in vitro des anticorps qui alors seraient utiles dans des traitements d'immunisation passive. D'une manière générale, la présente invention concerne des compositions pharmaceutiques destinées à modifier favorablement l'intensité de la réponse immunitaire à l'encontre d'un allergène ou le taux de synthèse des IgE. Elles se prêtent de manière toute particulière au traitement ou à la prévention des réactions allergiques alguë et des maladie inflammatoires qui peuvent en découler. En premier lieu l'invention a pour objet une composition pharmaceutique qui comprend, en quantité efficace, et à titre d'agent thérapeutique ou prophylactique pour induire un effet vaccinal antiallergique, un polypeptide dont une partie au moins de la séquence d'acides aminés est dérivée de celle du monomère du fragment Fce de l'IgE de primates, notamment humain, et présentant, par rapport à l'IgE native naturellement présente dans l'organisme humain ou de primates, un ou des sites ou épitopes néoantigéniques. Il est supposé que le ou les épitopes néoantignéiques que le polypeptide non glycosylé selon l'invention présente, par rapport au fragment Fcú des IgE natives, pourraient être des épitopes immunologiquement dissimulés dans l'IgE native naturellement présente dans l'organisme du primate et/ou des néoépitopes résultant de modifications conformationnelles de la séquence polypeptidique, même dans le cas o la structure primaire impliquée dans cet épitope se retrouve dans les IgE natives. En d'autres termes, un épitope néoantigénique pourrait être mis en évidence en montrant qu'un anticorps monoclonal réagissant avec un polypeptide selon l'invention (ayant une séquence d'acides aminés identique à celle d'une région de la chaine ú) ne réagit pas avec une IgE native. Par quantité vaccinante efficace on entend, dans le sens de la présente invention, la quantité permettant d'assurer, en une ou plusieurs injections, l'effet protecteur recherché après stimulation du système immunitaire. Par "séquence dérivée" de la séquence de référence du monomère dudit fragment Fce de l'IgE on entend: (i) la séquence de référence dans son intégralité, (ii) une séquence partielle, incluse dans la séquence de référence; ou (iii) une séquence présentant un degré d'homologie d'au moins 98 % avec la séquence de référence ou des séquences partielles de cette dernière. A titre d'exemple des fragments Fcr de primates sont considérés comme homologues des séquences humaines. On comprend donc que le polypeptide de la composition selon l'invention présente une séquence dont une partie importante, au moins, peut provenir du fragment Fce d'une IgE naturelle ou monoclonale de primate, ou bien peut- être obtenue par expression, dans un vecteur recombinant, d'une séquence d'acide nucléique codant pour la séquence dérivée, ou synthétisés de toute autre manière. De préférence sensiblement la totalité de la séquence d'acides aminés du polypeptide est dérivée de la séquence de référence. Préférentiellement la séquence du polypeptide contient, ou est constituée par, les séquences intégrales ou partielles d'un domaine, ou plusieurs ou tous les domaines CH2, CH3 et CH4 de la chaîne lourde c de l'IgE (humaine ou de primate). De préférence l'un au moins des domaines CH2 et CH3 est présent. Des exemples de polypeptides utilisés dans la préparation de compositions vaccinales selon l'invention contiennent la séquence du fragment Fcú intégral de l'IgE humaine dénommée Fcú CH2-CH4(218- 547); ou la séquence partielle du fragment Fcú CH2-CH4 (Val 224 - Lys 547); Fct CH2-CH4 (Ser 225 - Lys 547); Fce CH2-CH4 (Val 234 - Lys 547); Fcc CH2-CH4 (Ser 226 Lys 547) également désigné par la référence interne rE.2.4(7). Selon la nomenclature adoptée dans la présente demande de brevet un polypeptide recombinant appelé Fcú CH2-CH4 indique qu'il contient une séquence correspondant au fragment de la chaine lourde c de l'IgE humaine qui contient les trois domaines CH2 à CH4 complets. Fcú CH2'-CH4 (Ser 226-Lys 547) ou Fcú CH2'-CH4 (226-547) indique que le fragment contient la séquence d'IgE humaine à partir de la sérine en position 226 et jusqu'à la lysine en position 547. Les acides aminés sont énumérés conformément à l'identificateur de séquence SEQ ID n' 1 que l'on peut rapprocher du repérage de Bennich et al., Prog. Immunol. vol 1, Ed. North Holland, Amsterdam, (1974), p 49. De préférence la séquence d'acides aminés du polypeptide du vaccin selon l'invention est dérivée de la séquence telle que montrée dans l'ID SEQ n 1, de l'acide aminé en position 215 à l'acide aminé en position 547. A titre d'exemple la séquence d'acides aminés de ce polypeptide peut être constituée par ou comporter l'une des séquences suivantes, ou en être dérivée: - de l'acide aminé en position 218 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 224 à l'acide aminé en position 547, de l'acide aminé en position 226 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 234 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 330 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 358 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 418 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 438 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 215 à l'acide aminé en position 330, - de l'acide aminé en position 218 à l'acide aminé en position 330, - de l'acide aminé en position 226 à l'acide aminé en position 330, ou - de l'acide aminé en position 234 à l'acide aminé en position 330, - de l'acide aminé en position 300 à l'acide aminé en position 500. De préférence le polypeptide a une séquence comprenant au moins 15, de préférence 60 acides aminés. On préfère que la séquence des polypeptides soit relativement longue. Par exemple le polypeptide peut avoir une séquence comprenant au moins 100 acides aminés, et notamment au moins 220 acides aminés. Dans la composition selon l'invention ledit polypeptide est préférentiellement sous forme dimérique. L'identité d'acides aminés des différents polypeptides selon l'invention peut varier notamment à cause de substitutions conservatrices qui permettent de conserver la conformation squelettique du polypeptide. Ainsi, de façon préférée, dans les agents immunogènes selon l'invention une substitution en position homologue, comparée à la séquence de Bennich (1974, voir supra) se fait avec un acide aminé ayant une fonctionnalité équivalente en ce qui concerne ses propriétés hydrophobiques, de charge ou d'espacement. On choisit par exemple parmi le groupe des acides aminés hydrophobes entre alanine, Isoleucine, leucine, méthionine, phénylalanine, proline, tryptophane et valine; parmi le groupe des acides aminés polaires non chargés entre asparagine, cystéine, glutamine, glycine, sérine, thréonine et tyrosine; parmi les acides aminés chargés positivement entre arginine, histidine et lysine; parmi les acides aminés chargés négativement entre acide aspartique et acide glutamique et parmi le groupe des acides aminés d'espacement équivalent entre alanine, glycine et sérine. Des modifications telles que des délétions ou des insertions peuvent également intervenir. Afin que le polypeptide utile aux fins de la présente invention puisse présenter par rapport à une IgE humaine native, au moins un épitope néoantigénique, il convient notamment que ce polypeptide soit nonglycosylé ou qu'il possède un profil de glycosylation différent d'une IgE humaine native. De préférence, le polypeptide sera non glycosylé. Un polypeptide non glycosylé signifie qu'il est dépourvu des chaînes polysaccharidiques attachées aux asparagines (Asn) présentes dans la séquence d'acides aminés de l'IgE humaine naturelle. Contrairement à ce que l'on pouvait supposer, le polypeptide dérivé de l'IgE utilisé dans la préparation des compositions vaccinales de la présente invention est capable d'être immunogène par lui-même, et ne nécessite pas l'utilisation de protéine porteuse. Il peut donc être sous forme libre (non couplé, non-fusionné ou non-conjugué). De même la présence d'adjuvant n'est pas indispensable et notamment pas celle des adjuvants, puissants tels que l'adjuvant de Freund, complet ou incomplet. La présence d'un adjuvant léger tel que l'alun est cependant compatible avec l'invention. Les anticorps induits par l'agent Immunogène selon l'invention sont capables de modifier favorablement l'intensité de la réponse immunitaire médiée par les IgE lors de l'introduction d'un allergène dans l'organisme humain. Les anticorps induits par les compositions vaccinales selon l'invention sont vraisemblablement spécifiques d'épitopes immunologiquement dissimulés dans l'IgE naturelle présente dans l'organisme concerné, et/ou spécifiques de la conformation du polypeptide utilisé. De ce fait, les anticorps induits ne reconnaissent pas l'IgE naturelle de la même façon que les anti-IgE naturellement présents et ont l'avantage de ne pas former des complexes immuns IgE/anti-IgE avec les IgE naturelles. Ces anticorps ne risquent pas d'induire les effets secondaires présumés des auto-anticorps anti-IgE induits par les vaccins de l'art antérieur. Ces anticorps ne provoquent pas de libération de médiateurs et peuvent être utilisés dans des compositions pharmaceutiques destinées à une immunisation protectrice passive d'un organisme. Une autre application serait de les utiliser dans des immunopurifications par chromatographie d'agents immunogènes conformes à la présente invention. Les anticorps utilisables dans une composition pharmaceutique selon l'invention peuvent être des anticorps humains obtenus par immunisation de donneurs dont les anticorps peuvent être utilisés ensuite pour une sérothérapie ou, de préférence, pour la préparation d'une composition d'immunoglobulines obtenue par purification du sérum des donneurs, par exemple par chromatographie d'immuno-affinité utilisant des IgE immobilisées sur colonnes. Les anticorps peuvent cependant également être des anticorps hétérologues, par exemple des anticorps murins ou autres, obtenus par immunisation à partir des polypeptides selon l'invention. Ces anticorps hétérologues peuvent être monoclonaux ou polyclonaux. Ils peuvent être humanisés selon les procédures classiques. Enfin des sélections d'anticorps humains peuvent être effectuées par prélèvement de lymphocytes circulants d'un donneur humain immunisé par les polypeptides selon l'invention, obtention des séquences codant pour les chaînes VL et HL et sélection multicombinatoire selon les techniques décrites, par exemple, par P. Waterhouse et al., Nucleic Acids Research, 1993, Vol. 21 N 9, 2265-2266. L'obtention des dérivés polypeptidiques de l'IgE, selon l'invention, s'effectue, de préférence, par la voie de synthèse de polypeptides recombinants. A partir d'un gène cloné codant pour la chaine lourde E d'IgE humaine ou de primate, un fragment de ce gène ou le gène entier sont transférés dans une cellule hôte choisie. De préférence on choisit une cellule hôte qui permet d'obtenir des polypeptides non glycosylés. Préférentiellement l'hôte transformé est un procaryote tel que E. coli et plus particulièrement les souches E. col! CAG 1139 et BL 21 qui permettent d'obtenir des taux de production intéressants. Des cellules hôtes sont transformées par un vecteur d'expression assurant l'expression d'un fragment d'ADN isolé codant pour l'agent immunogène. Par fragment d'ADN isolé on entend un fragment d'ADN qui n'est plus associé à l'ensemble des régions naturelles qui contrôlent son expression dans l'organisme dont il est issu, c'est-à-dire dans le cas des exemples repris ci-dessous, l'être humain. Parmi les fragments d'ADN isolés qui comprennent une séquence codant pour un agent immunogène il faut citer en particulier l'ADN qui est repris dans la liste d'identification des séquences sous le numéro SEQ ID n 1. Comme vecteur d'expression il convient d'utiliser des vecteurs déjà bien connus de l'homme de métier qui sont adaptés pour être utilisés dans l'hôte choisi et qui conviennent pour exprimer des gènes eucaryotes. Pour un hôte de type procaryote il convient particulièrement bien de choisir un vecteur d'expression bicistronique qui permet de garantir un taux d'expression élevé et la production de polypeptldes eucaryotes dépourvus d'acides aminés d'origine hétérologue. Les composants de base d'un tel système de vecteur d'expression bicistronique sont un plasmide multicopie contenant un promoteur fort et un site de liaison des ribosomes, une séquence synthétique (premier cistron) et la séquence codante du polypeptide à exprimer (second cistron). Le rôle du premier cistron est de produire une séquence optimisée pour l'initiation de la traduction. L'accessibilité du ribosome à l'ARNm peut être augmentée si la séquence Shine-Dalgarno et le codon AUG sont localisés dans le contexte d'une région riche en AU libre de structure secondaire locale. Le premier cistron sert à séparer la région 5' non traduite, de la séquence codante du gène d'intérêt. Ainsi, la possibilité de formation d'une structure secondaire entre ces régions est réduite. Les ribosomes se fixent au site de liaison des ribosomes du premier cistron, initient la traduction du codon AUG et traduisent le premier cistron. A l'extrémité de celui-ci, les ribosomes ne sont pas dissociés et réinitient aussitôt la traduction du second cistron. Le niveau d'expression du second cistron serait très sensible à des changements altérants tels que: - la longueur de la phase de lecture ouverte dans le premier cistron (il faut 8 à 18 codons); - la position du codon stop qui termine la traduction du premier cistron; - la longueur de la région intercistronique (elle doit être courte); - la phase du codon stop du premier cistron par rapport au codon d'initiation du second cistron (elle doit être la même); - la séquence SD nécessaire pour l'expression du second cistron et l'espace entre cette séquence et le codon de réinitiation. Un vecteur d'expression bicistronique particulièrement préféré pour être utilisé dans E. coli est le pWT211 Ncol Bis. Les cellules hôtes transformées sont cultivées sur un milieu approprié et on récupère le polypeptide recombinant. La renaturation des polypeptldes recombinants dérivés d'IgE après synthèse par des cellules hôtes transformées ne concerne que les formations des ponts disulfure pour obtenir des dimères et exclut la N-glycosylation des asparagines dans la séquence d'acides aminés. Pour la formation des ponts disulfure la concentration relative au couple oxydo-réducteur utilisé est de 2/1 de préférence. Comme couple oxydo-réducteur qui convient particulièrement bien pour les polypeptides recombinants d'IqE synthétisée en E. coli, on citera le couple glutathion oxydé/DDT. On peut également envisager de synthétiser chimiquement les polypeptides utilisés comme agents immunogènes selon l'invention, par des méthodes de synthèse connues de l'homme de métier. A titre de référence on citera les polypeptides synthétiques de Stanworth (Eur. Immunol. 1987, 17-437). Les polypeptides dérivés de l'IgE sous forme non- glycosylés utilisés selon l'invention peuvent également être obtenus par déglycosytion enzymatique de la séquence d'acides aminés de l'IgE native. Ce procédé de préparation convient particulièrement bien si on envisage d'utiliser comme agent immunogène non-glycosylé la chaine lourde c de l'IgE ou son fragment Fcc CH2-CH4 qui est obtenu après clivage enzymatique de l'IgE par la papaïne. L'invention concerne également une méthode pour traiter ou prévenir les réactions d'hypersensibilité de type 1, une maladie immunitaire inflammatoire ou une affection liée à une production anormale des IgE, qui comprend l'acte d'administrer, en quantité efficace, une composition vaccinale ou une composition d'anticorps selon l'invention à un sujet ayant besoin d'un tel traitement. La méthode de traitement ou de prévention des réactions d'hypersensibilité de type 1, selon l'invention, est tout à fait différente d'un traitement d'inhibition par compétition avec l'IgE par action sur le récepteur FcúRI, qui nécessite l'administration de doses élevées, le cas échéant dans des zones localisées de l'organisme, d'un polypeptide dérivé du fragment Fce de l'IgE. Comme exemple d'affection liée à une production anormale des IgE on peut citer le cas des patients infectés par le virus HIV, qui présentent très fréquemment des taux anormalement élevés d'IgE. Ces affections comprennent, de façon non-limitative, des sinusites sévères, des bronchopneunomies, ainsi que toutes les manifestations allergiques et des maladies immunitaires inflammatoires fréquemment rencontrées chez ces patients. La présente invention recommande également de traiter les sujets infectés par HIV et présentant un taux anormalement élevé d'IgE, y compris en l'absence apparente d'affection liée à ces immunoglobulines, du fait que des auteurs ont constaté une diminution de la survie à 24 mois chez les sujets ayant un taux d'IgE supérieur à 150 KIU/l comparés aux sujets ayant un taux inférieur à cette valeur. La composition vaccinale selon l'invention peut être fabriquée de manière conventionnelle. En particulier on peut associer l'agent immunogène utilisé avec un diluant ou un support pharmaceutiquement acceptable tel que par exemple une solution saline physiologique apyrogène. En outre, une composition vaccinale selon l'invention peut contenir des composants usuels tels qu'un tampon, un agent conservateur ou stabilisant, le cas échéant, un excipient de lyophilisation. L'agent immunogène peut être conservé en présence d'un diluant, d'un support ou d'un composant tel que précédemment évoqué. De manière alternative, un diluant, un support ou un composant peut être ajouté juste avant l'emploi. C'est pourquoi l'invention concerne de manière alternative un kit contenant: a) une composition essentiellement constituée d'un agent immunogène sous forme dudit polypeptide non- glycosylé; b) une composition comprenant au moins un composant sélectionné parmi un diluant ou un support pharmaceutiquement acceptable, un composant ayant un pouvoir tampon, un agent conservateur ou stabilisant; c) des instructions pour l'administration concomitante par exemple sous forme de mélange des compositions décrites sous a) et b). Enfin, une composition vaccinale selon l'invention peut contenir un agent immunogène autre que l'agent immunoqène sous forme d'un polypeptide non-glycosylé dérivé d'IgE, comme par exemple dans le cas d'un vaccin polyvalent. Une composition vaccinale selon l'invention peut également contenir plusieurs agents immunogènes différents tous étant des polypeptides non-glycosylés dérivés de l'IqE. Une composition vaccinale selon l'invention peut être administrée par n'importe quelle voie conventionnelle en usage dans le domaine des vaccins. De façon préférée, une composition vaccinale selon l'invention est administrée par voie générale ou éventuellement locale, sous-cutanée, intra- musculaire ou intra-veineuse sous forme de suspension injectable par exemple. L'administration peut avoir lieu en dose unique ou répétée une ou plusieurs fois après un certain délai d'intervalle. Le dosage approprié varie en fonction de divers paramètres, comme par exemple l'individu à traiter ou le mode d'administration. On peut toutefois indiquer que de bons résultats peuvent être obtenus avec une dose unitaire de 0,5 à 5 ou 10 ig/kg d'agent immunogène sous un volume compatible avec l'injection. La dose unitaire peut, par exemple comporter, sous un volume d'un véhicule liquide injectable, une quantité comprise entre 10 et 500 gg du polypeptide, de préférence de à 250 ug, et notamment de 50 à 125 ug. L'invention a également pour objet l'utilisation, comme décrite cidessus, du polypeptide défini ci-dessus, pour la préparation d'une composition vaccinale selon l'invention. L'objet de la présente invention est illustré par les exemples qui suivent, qui sont donnés à titre d'illustration uniquement. Ils font référence aux figures 1 à 5 o la figure 1 représente la carte de restriction du vecteur d'expression pWT211 NcoI; la figure 2 comprend la carte de restriction du vecteur d'expression bicistronique pWT211 NcoI Bis et la séquence du promoteur; la figure 3 résume les différents polypeptides non-glycosylés dérivés de l'IgE humaine exprimés dans les exemples; la figure 4 représente le chromatogramme obtenu par chromatographie en phase inverse de l'extrait renaturé de Fce CH2'-CH4(226-547) élué à 70 mM de NaCI sur colonne de Q-Sépharose contenant 220 pg de protéines totales; la figure 5 reprend le chromatogramme obtenu par chromatographie en phase inverse du FceCH2'-CH4(226-547) purifié après élimination du contaminant de 14 000 daltons par chromatographie sur Superdex 75. Toutes les techniques employées dans les exemples ci-dessous pour le clonage, la digestion de l'ADN, l'analyse de fragments de restriction en gel d'agarose sont celles décrites dans le manuel de laboratoire Maniatis, Molecular Cloning, Sec. Ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press, (1989) bien connu de l'homme de métier. Exemple 1: Expression du fragment FcECH2-CH4 L'ARN total a été isolé à partir d'un myélome humain 266BL qui synthétise une IgE de type ND tel que décrit dans J.H. Kenten, Proc. Natl. Acad. Sci. US 79, (1982), p 6661. L'ARN messager (ARNm) est purifié par chromatographie sur colonne d'oligo dT. Après séparation des ARNm sur gradient de saccharose, une fraction enrichie en ARNm codant pour la chaine lourde c est copiée en ADN complémentaire (ADNc). Cet ADNc est cloné dans un plasmide et transformé dans E. coli. Une sonde synthétique (oligonucléotide) déduite de la séquence protéique N-terminale de l'IgE qui est décrite dans Bennich, Progress in Immunology II, Vol I, (1974), p 49, est utilisée pour cribler la banque d'ADNc. Parmi les cinq clones positifs détectés, un seul possède un ADNc de 2 Kb codant pour la chaine lourde ú complète. En d'autres termes, codant pour les régions 5' et 3' non traduites du ARNm, pour la chaîne mature et pour le peptide de sécrétion N-terminal de vingt acides aminés. Seule la portion du gène codant pour le fragment Fce CH2-CH4 (Asp 218-Lys 547) est sous-clonée dans le plasmide d'expression pWT211 sous le contrôle du promoteur-opérateur tryptophane selon la méthode décrite dans J. Kenten, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, (1984), p 2955. Ce vecteur d'expression est analogue au pWTlll décrit dans W. Tacon, Molec. Gen. Genet. 177, (1980). Ce plasmide est obtenu à partir du plasmide PWT111 de 4 823 pb par délétion du gène rop (767 pb) situé entre l'origine de réplication et le gène de la tétracycline. Ce vecteur permet de réprimer la synthèse du polypeptide recombinant en présence de tryptophane et d'induire un haut niveau de synthèse grâce à l'acide 3-l- indoleacrylique (IAA). Le plasmide exprimant le fragment fcú CH2-CH4 (218-547) est sélectionné et appelé pSC213. Le fragment Fce analysé par électrophorèse après coloration au bleu de Coomassie a un poids moléculaire de 40 KD (Keuton J. PNAS 1984 - 81 p 2955). En position 225 le fragment Fce CH2-CH4 (218-547) a maintenu une cystéine qui dans l'IgE naturelle forme un pont disulfure avec une cystéine du domaine CH1, absent dans Fce CH2-CH4. Cette cystéine 225 est remplacée par une sérine 225. Le site de restriction HindIII et le site de restriction BglII qui possède le gène du FceCH2-CH4 (218-547) cloné sont utilisés pour remplacer la cystéine par la sérine. A cet effet on effectue une délétion du fragment HindIII- BglII de 59 pb qui contient le triplet codant pour la cystéine 225. On remplace le fragment délété par un "linker" synthétique de 35 pb possédant une mutation d'une base G en C au niveau du codon d'intérêt. On obtient ainsi le fragment Fce CH2'-CH4 (Ser 225-Lys 547) représenté dans la figure 5. L'expression dans pSC213 aboutit à un polypeptide de fusion qui contient sept acides aminés du gène trpE plus deux acides aminés qui résultent de la création du site de restriction Hind III. Pour éliminer les acides aminés d'E. coli afin d'avoir un polypeptide recombinant qui ne contient que des parties du Fce d'IgE humaine, on crée un site de clonage NcoI par mutagénèse dirigée au niveau du codon ATG. Ce site peut être utilisé pour le clonage des polypeptides dérivés de l'IgE selon l'invention à la place du site HindIII. La création du site NcoI est réalisée à partir du vecteur de départ pWT211. Le plasmide pWT211 possède deux sites de restriction uniques (PstI et BamHI) situés de part et d'autre du codon d'initiation, sites qui sont présents également dans le polylinker du phage M13. Un fragment de 1 500 pb PstI-BamHI est donc cloné dans M13mpl8 (J. Messing, Methods Enzymol. 101, (1983), p 20). La figure 1 montre les bons clones obtenus (9 sur 18) après préparation d'ADN simple-brin. L'insertion du fragment à muter est aussi contrôlée par séquence avec l'amorce universelle M13. L'oligonucléotide muteur tel qu'identifié sous le SEQ ID n 2 permettant la création du site NcoI diffère de deux bases autour du codon d'initiation par rapport à la séquence d'origine. La mutagénèse est réalisée suivant le protocole T.A. Kunkel, Methods Enzymol. 154, (1987), p 367. C G Vecteur pWT211 5' TTAGAGAATAACAATGCAAACACAAAAAC 3' Oligonucléotide 3' AATCTCTTATTGGTACCTTTGTGTTTTTC 5' SEQ ID n" 2 * * NcoI Cette méthode utilise un ADN matrice simple-brin (phage M13) o une partie des résidus thymines sont remplacés par des uraciles. Ce bactériophage recombinant est produit dans la souche d'E. coli CJ 236 (T.A. Kunkel et al., Methods Enzymol. 154, (1987), p 367) portant les mutations dut- et ung. Cette souche est déficiente en uracyl-N-glycosylase, enzyme remplaçant les uraciles par des thymines en temps normal. L'ADN simple-brin uracilé contenant le fragment à muter est utilisé comme matrice dans un procédé de mutagénèse standard pour générer un hétéroduplex formé d'un brin uracylé et d'un brin synthétisé in vitro contenant des thymines. La transformation de cet ADN dans une souche JM101 dans Maniatis ung+ provoque la destruction du brin matrice ce qui entraine une diminution conséquente de la production de phages sauvages; la plupart des phages formés dérivent du brin non uracylé. Comme la synthèse de ce brin a été amorcée avec l'oligonucléotide muteur phosphorylé, ces phages recombinants portent les mutations désirées. Après la réaction de mutagénèse, le séquençage est une des méthodes permettant de vérifier la présence de mutations. A titre d'exemple, sur 13 simples-brins isolés après mutagénèse, 7 clones sur 13 possèdent les mutations, vues sur deux pistes C et G. Le fragment muté de 1 500 pb est réinséré dans le vecteur pWT211 entre les sites PstI et BamHI après PCR (polymer chain reaction) sur l'ADN simple-brin M13. Les 1i 500 pb sont amplifiées grâce aux amorces M13 universelles et inverses et digérées par les deux enzymes ayant servi au clonage. Les bons clones sont contrôlés sur gel d'agarose après digestion par PstI et NcoI (bandes de 1 200 et 2 800 pb) et séquences au niveau du site NcoI. Le plasmide correctement muté est sélectionné et nommé pWT211 NcoI et sa carte de restriction est reprise figure 1. Pour cloner Fce CH2'-CH4 (Val 224 - Lys 547) dans le plasmide pWT211 NcoI, le vecteur est coupé par NcoI et Bam H1, sites choisis pour leur facilité de digestion après amplification par PCR. Une portion de plasmide de 371 pb situé dans le gène de résistance à la tétracycline est ainsi éliminée. FcE CH2'-CH4 (Val 224 - Lys 547) est amplifié par PCR pour créer les sites NcoI et BamHI. La séquence de l'oligonucléotide sis au niveau de NcoI est choisie de telle façon que la phase de lecture ouverte et l'intégrité du site de clonage soient conservées. Fcc CH2'-CH4 (Val 224 - Lys 547) est exprimé dans les couches d'E. coli CAG 1139 (A.D. Grossman et al., Cell 32, (1983), p 151) ou BL 21 (F.W. Studier, J. Mol. Biol. 189, (1986), p 113); la protéine est exempte d'acides aminés d'origine d'E. coli. Exemple 2: Construction d'un vecteur d'expression bicistronique Un vecteur bicistronique qui permet d'exprimer le polypeptide non- glycosylé dérivé d'IgE dans E. col! est le pWT211 NcoI Bis. Pour le préparer on effectue la digestion du plasmide pWT211NcoI par l'enzyme de restriction NcoI au site créé par mutagénèse dirigé selon l'exemple 1. On fait suivre par une insertion d'un 'linker" synthétique double-brin de 42 pb contenant les sept acides aminés de trpE, une seconde séquence de Shine-Dalgarno et des codons de terminaison TAA dans les trois phases. L'insertion est facilement contrôlée sur gel d'agarose après digestion par DraI (site présent dans l'adaptateur synthétique). Les diverses contraintes permettant une bonne efficacité de traduction et par conséquent une expression du gène d'intérêt à un niveau élevé ont été respectées. La figure 2 donne la carte de restriction du plasmide pWT2llNcoIBis et la séquence SEQ ID No. 3 au niveau du promoteur bicistronique. Exemple 3: Préparation d'un vecteur bicistronique codant pour les polypeptides dérivés d'Ige. Comme vecteur bicistronique on utilise pWT211 NcoI Bis dans lequel les codons des polypeptides respectifs sont insérés entre les sites NcoI et BamHI. FcE CH2'-CH4 (Ser 226 - Lys 547) est également exprimé. Le plasmide ainsi exprimé s'appelle pE2-4(7). Dans ce cas, il y a suppression du site NcoI car la séquence nucléotidique à l'extrémité 5' commence par le codon TCC de la sérine 226. Fcú CH2'-CH4 (226-547) correspond à la séquence de l'IgE native humaine respective et est exprimé à 20 % sous forme de corps d'inclusion. Le microséquençage de l'extrémité 5' des polypeptides recombinants montre que la méthionine N-terminale est clivée de façon quantitative in vivo dans la bactérie. La séquence complète du Fce CH2'-CH4 (226-547) est donnée dans la SEQ ID n 1. La figure 3 résume les constructions réalisées comme illustration de la présente invention. Exemple 4: Déglycosylation d'IgE native Des polypeptides dérivés d'IgE sous forme non- glycosylée sont obtenus par déglycosylation enzymatique. A cet effet, 200 pg/ml d'IgE dans 0,55 M phosphate de sodium pH 8,6 sont incubés avec 15 U/ml N-qlycosydase F (N-Glycanase, Genzyme Corp.) pendant une nuit à 37 C. L'IgE déglycosylée est alors absorbée avec un excès de Lentil Lectin Sépharose 4B (Sigma Chemical Comp.) à 4 C sur rotateur. L'analyse de la préparation ainsi obtenue par SDS- PAGE et marquage du gel au PAS (acide périodique-Schiff) démontre clairement que l'IgE est complètement déglycosylée. La concentration d'IgE déglycosylé est déterminée par radio- immunoessai en utilisant les anticorps spécifiques obtenus selon l'invention. L'IgE peut être fragmentée à la papaine en fragments Fab et Fc (Ishizaka et al. 1970, Immunochem., Vol. 7: p 687). Exemple 5: préparation de polypeptides recombinants non- glycosylés dérivés d'IgE humaine. La souche E. coli BL21 ou CAG 1139 est transformée avec le vecteur d'expression bicistronique WT211NcoIBls préparé dans l'exemple 2 selon les méthodes de transformation bien connues de l'homme de métier. 100 pl d'une préculture cultivée à 37 C dans du milieu LB plus ampicilline pendant 18 à 24 heures sont ensemencés dans 10 ml de milieu M9 (Miller J.H. (1972) Experiments in Molecular Genetics (Cold Springer NY) contenant 50 pl/ml d'ampicilline ou de carbenicilline 50 pg/ml. Deux tubes de 10 ml de préculture servent à ensemencer 1 litre de culture qui est incubé à 37"C sous agitation jusqu'à ce que la D.O. (600 nM) atteigne 0,2 - 0,3. L'expression est alors induite par addition d'acide 3-P- indolacrylique à 15 pg/ml en concentration finale. Les cultures sont à nouveau incubées à 37'C sous agitation dans un incubateur pendant 5 à 6 heures jusqu'à une densité optique mesurée à 600 nm égale à 2,0. Les dérivés d'IgE recombinants exprimés sont agrégés sous forme de corps d'inclusion dans la bactérie et présentent 20 % des protéines totales. Les dérivés recombinants d'IgE ainsi synthétisés sont récupérés par extraction selon D. Bohmann et al (1988), Transcriptional regulation by the AP-1 family of enhancer bindings proteins: a nuclear targer for signal transduction. Cold Spring Harbor Symp Quant. Bio 53, 695-700. Les bactéries sont recueillies par centrifugation à 4 200 t/min pendant 15 min. Les culots sont resuspendus dans 7,2 % du volume initial de culture à l'aide du tampon A (Tris HCl 10 mM; pH 7,9; 25 % saccharose, KCl 100 mM, PMSF (phenyl methyl sulfonyl fluorure) 2 mM) puis, après dissolution complète, on rajoute la solution B (Tris HCl 300 mM; pH 7,9; EDTA 100 mM, lysozyme 4 mg/ml). On laisse en contact pendant 10 min à 0 C avant d'ajouter la solution C (LiCI 1M; EDTA 20mM, 0,5 % NP40 (Nonidet nonylphenyl polyethylene glycol). La suspension bactérienne est soniquée pendant 3 mn dans la glace. Les corps d'inclusion contenant les protéines recombinantes rE2-4(7) sont recueillis par centrifugation à 000 t/min pendant 10 min à 4*C. Les culots sont lavés deux fois dans un tampon D (Tris HCl 10 mM; pH 7,9; EDTA 0,1 mM; LiCl 0,5 M; 0,5 % NP40, DTT 1 mM, PMSF 1 mM). Après resuspension, la solution est soniquée comme précédemment, puis lavée deux fois dans un tampon E (10 mM Tris HCl, (pH 7,9) 0,1 M EDTA, 0, 5 % NP40,1 mM DTT, 1 mM PMSF. Après resuspension le culot obtenu est congelé et stocké à -80C. Pour renaturer les dérivés d'IgE recombinants, le culot congelé est décongelé dans la glace pilée puis solubilisé à 30-C avec le tampon PEB (Pellet Extraction Buffer, Tris HCl 50 mM; pH 7,9; urée 8M; EDTA 1 mM; NaCl 0,5 M (fig 3) PMSF 25 pg/ml) à raison de 20 ml de tampon par litre de culture. Après dissolution, on ajoute du DTT à la concentration finale de 10 mM et on laisse en contact pendant 1 heure à température ambiante. La renaturation est effectuée par dilution jusqu'à une concentration protéique de 30 pg/ml dans un tampon dont la concentration finale est: Tris HCl 50 mM; pH 8,5; EDTA 1 mM; NaCl, 0,1M; PMSF 25 pg/ml; urée 0,8 M; glutathion oxydé 0,5 mM; DTT 0,25 mM. Après agitation, la solution est laissée au repos pendant 24 heures à 4 C. La solution obtenue est alors concentrée sur membrane d'ultrafiltration, dialysée contre un tampon PBS. Exemple 6: Purification des polypeptides recombinants non-glycosylés dérivés d'IgE. Pour séparer les monomères des dimères renaturés, on soumet les polypeptides obtenus selon l'exemple 5 à une chromatographie sur échangeur d'anions Q Sépharose Fast Flow (Pharmacia) avec un tampon d'application F (Tris 20 mM; pH 8,5; NaCl 30 mM) ce qui permet aux dimères de s'accrocher sur la colonne tout en lui conservant une stabilité correcte. Pour l'élution on utilise comme gradient le même tampon F avec une concentration en NaCl croissante linéaire. L'élution de la fraction enrichie en dimère se fait quand la concentration en NaCl atteint 70 mM. La colonne est lavée avec du tampon Tris 20 mM (pH 8,5) NaCl 1 M. D'autres produits coéluent avec les dimères dont un de 14 000 daltons de masse molaire en quantité importante. L'éluat obtenu est concentré à 0,5 mg/ml en dimère mesurée par ELISA. Les coéluents et les dérivés recombinants d'IgE sont séparés par chromatographie en gel filtration sur Superdex 75. (fig 5) Dans le cas du polypeptide recombinant FcE CH2-CH4 (226-547) on obtient environ 2 à 3 mg de dimère/litre de culture. Exemple 7: Immunogénicité du polypeptide recombinant Fcú CH2'CH4 (226-547) chez le singe Vervet. 1. Protocole d'immunisation. singes Vervet C1-C2-C5-C7-C10 sont immunisés avec les polypeptides recombinants purifiés selon l'exemple 6; le protocole suivi est le suivant tel que illustré avec FcECH'2-CH4 (226-547): Jour 0: injection en s.c. en 2 points de 2 x 25 Pg de Fcc CH2'-CH4 (226-547) sous 100 pl Jour 15: injection en s.c. en 2 points de 2 x 50 pg de Fcc CH2'-CH4 (226-547) sous 200 pl Jour 30: injection en s.c. en 2 points de 2 x 50 pg de Fcú CH2'-CH4 (226-547) sous 200 pl jours après la première injection, on prélève un échantillon de sérums sur chacun des singes. Les échantillons de sérums sont testés en ELISA pour leur réactivité vis à vis de l'IgE humaine et du Fce CH2'-CH4 (226-547). Les résultats obtenus indiquent une faible réactivité croisée et d'autre part un taux d'anticorps anti Fce CH2'-CH4 (226-547) supérieur à celui des anticorps anti-IgE. 2. Effet neutralisant sur les réactions d'hypersensibilité de type I Le polypeptide recombinant (référence interne r E 2-4(7), préparé selon l'exemple 5, l'IgE de myélome ou les sérums des singes immunisés avec le FcE CH2'-CH4 (226-547) selon l'exemple 7.1 ont été testés pour leur capacité d'inhiber la réaction d'anaphylaxie cutanée passive (ACP) chez le singe (Ishizaka K. et al., J. Allergy, 1967, 39, 254). Le test a été réalisé chez le singe Vervet, la réaction d'anaphylaxie cutanée passive a été induite par injection par voie intradermique de sérum de patients atopiques suivi 24 h plus tard de l'allergène spécifique Dptero, au même point d'inoculation, également par voie intradermique. La visualisation de l'érythème est réalisée par injection par voie intraveineuse d'une solution de bleu d'Evans. La lecture se fait par mesure des diamètre des papules bleutées aux points d'injection intradermique, et calcul des surfaces correspondantes. Pour les contrôles négatifs, les réactifs sont remplacés par une solution de NaCl à 9 %. L'inhibition de l'ACP est mesurée par injection au même point d'inoculation, par voie intradermique, du polypeptide recombinant rE2-4 (7), ou des sérums des singes immunisés à différentes dilutions, ou de l'IgE d'un myélome humain (Guill) 1 heure avant sensibilisation par le sérum de patients atopiques et de l'allergène selon le protocole décrit pour l'induction de l'ACP. Les résultats montrent que le polypeptide recombinant Fce CH2'- CH4 (226-547) est capable d'inhiber la réaction d'ACP, et qu'il n'a pas perdu ses qualités fonctionnelles puisqu'il est capable de se fixer sur le récepteur FccRI de l'IgE. Chez le singe Vervet, le test d'ACP est inhibé significativement à partir de 140 nM. pour l'IgE de myélome et 14 nM. pour le peptide recombinant, indiquant qu'il faut une dose de rE2-4(7) environ 100 000 fois supérieure à celle de l'IgE spécifique, pour inhiber la réaction d'ACP chez le singe Vervet. Chez ces mêmes singes, l'inhibition totale de l'ACP est obtenue pour une concentration de 540 nM pour l'IgE de myélome, alors qu'avec le polypeptide recombinant, l'inhibition est progressive (50 % à 540 nM et 100 % à 2700 nM). Le transfert d'immunsérum de singes immunisés avec le polypeptide recombinant Fce CH2'-CH4 (226-547) à des singes non immunisés, entraine une négativation de la réaction d'ACP. La réaction est totalement inhibée lorsque l'on utilise le sérum pur de singe Immun (par exemple singe ne Cl 117 jours après son immunisation avec le polypeptide Fce CH2'-CH4 (226-547). Il existe un effet dose, Illustré par une diminution de l'inhibition lors d'une injection de l'immunsérum dilué au 1/50ème (73 % d'inhibition). Si les mêmes tests d'ACP sont réalisés sur des singes immunisés avec le peptide recombinant, on n'observe aucune réaction positive, même pas avec le témoin positif: sérum d'atopique et allergène correspondant, même à forte concentration. En Conclusion. 1) L'efficacité vaccinale des polypeptides recombinants a été testée sur le modèle animal le plus proche de l'être humain puisque les IgE de singe ont, avec celles de l'homme une homologie supérieure à 95 %. 2) Le polypeptide recombinant Fce CH2'-CH4 (226-547) porte des épitopes capables d'induire des anticorps neutralisant la réaction d'hypersensibilité de type 1. 3) Les anticorps induits chez le singe sont bien dus à l'existence d'épitopes portés par cette molécule et non pas simplement dus à des différences structurales entre les IgE du singe et l'être humain, si cela avait été le cas, les anticorps provenant des singes immunisés reconnaitraient les IgE humaines, ce qui n'est pas le cas (Mesure en Western Blot). LISTE DE SEQUENCES INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:1 (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: LONGUEUR: 321 acides aminés TYPE: nucléotides et acides aminés CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine (vi) ORIGINE: ORGANISME: Homo sapiens gagcgggcttttttttgaacaaaattagagaataaccatgcaaacacaaaaaccgactttaaataaggaggaat aatcc 226 230 240 * Met Ser Arg Asp Phe Thr Pro Pro Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser Ser Cys Aso Gly Gly ATG TCC AGG GAC TT ACC CCG CCC ACC GTG AAG ATC TTA CAG TCG TCC TGC GAC GGC GGC 250 253 253 _ 260 Gly His Phe Pro Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly Thr GGG CAC TTC CCC CCG ACC ATC CAG CTC CTG TGC CTC GTC TCT GGG TAC ACC CCA GGG ACT 270 280 Ile Asn Ile Thr Trp Leu Glu Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp Leu Ser Thr Ala Ser ATC AAC ATC ACC TGG CTT GAA GAC GGG CAG GTC ATG GAC GTG GAC TTG TCC ACC GCC TCT 290 300 Thr Thr Gln Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His ACC ACG CAG GAG GGT GAG CTG GCC TCC ACA CAA AGC GAG CTC ACC CTC AGC CAG AAG CAC 310 320 Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp TGG CTG TCA GAC CGC ACC TAC ACC TGC CAG GTC ACC TAT CAA GGT CAC ACC TTT= GAG GAC 330 340 Ser Thr Lys Lys Cys Ala Asc Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro AGC ACC AAG AAG TGT GCA GAT TCC AAC CCG AGA GGG GTG AGC GCC TAC CTA AGC CGG CCC 350 360 Ser Pro Phe Aso Leu Phe ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu AGC CCG TTC GAC CTG TTC ATC CGC AAG TCG CCC ACG ATC ACC TGT CTG GTG GTG GAC CTG 370 380 Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn GCA CCC AGC AAG GGG ACC GTG AAC CTG ACC TGG TCC CGG GCC AGT GGG AAG CCT GTG AAC 390 400 His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu CAC TCC ACC AGA AAG GAG GAG AAG CAG CGC AAT GGC ACG TTA ACC GTC ACG TCC ACC CTG 410 420 Pro Val Gly Thr Arg As; Trp le Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro CCG GTG GGC ACC CGA GAC TGG ATC GAG GGG GAG ACC TAC CAG TGC AGG GTG ACC CAC CCC 430 440 His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly Pro Arg Ala Ala Pro CAC CTG CCC AGG GCC CTC ATG CGG TCC ACG ACC AAG ACC AGC GGC CCG CGT GCT GCC CCG 450 4560 Glu Val V'r Ala zhe Aia Thr Pro Glu Trp Pro G'y Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu Ala GAA GTC TAT GCG -. GCG ACG CCG GAG TGG CCG GGG AGC CGG GAC AAG CGC ACC CTC CC 4 I0 480 Cys Leu:le Gin. Asn Phe Me: Pro Glu Asp -le Ser Vai Gln Trp Leu His Asn Glu Vai TGC CTG ATC CAG.AC TC ATG CCT GAG GAC ATC CG GTG CAG TGG CTG CAC AAC GAG GTG 490 500 Gin Leu Pro AsD Ala Arg His Ser Thr Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe CAG CTC CCG GAC GCC _GG CAC AGC ACG ACG CAG CCC CGC AAG ACC AAG GGC TCC GGC TTC 510 520 Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asp Glu Phe Ile TTC GTC TTC AGC CGC CTG GAG GTG ACC AGG GCC GAA TGG GAG CAG AAA GAT GAG TTC ATC 530 540 Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val TGC CGT GCA GTC CAT GAG GCA GCG AGC CCC TCA CAG ACC GTC CAG CGA GCG GTG TCT GTA Asn Pro Gly Lys XXX A.AT CCC GGT AAA TGA ggatcctctacgccggacgcatcgtggccgatcacccgggccacaggtgcggttgctggc INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:2 C G Vecteur pWT211 5' TTAGAGAATAACAATGCAACACAAAAAC 3' Oligonucléotide 3' AATCTCTTATTGGTACCTTTGTGTT=C 5' * i NcoI INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:3 Vecteur pWT211NcoIBis ' GCCTR:TGAGCGGCTTTT'TT G:RCR:AFTTRGIGATR: CCATGCRPCaOE RCCGFC CGGaTTRCTCGCCCGRAFA RRFaLCTlTGTTTTRRTTCTTRTT GGTRCGT GT 'iT i ' 1- 1 àG 3' RTR-6GR6I:IIR T-T..C UAGCTTICARGCTTTA:ATGCG6TG RAAT7"Tecs eC WTTREG;Tr T.TGTTTT TGGCTGR. GTrCGARATTRCGCCRTC REVENDICATIONS 1. Composition pharmaceutique comprenant, en quantité efficace, et à titre d'agent thérapeutique ou prophylactique pour induire un effet vaccinal antiallergique, un polypeptide dont une partie, au moins, de la séquence d'acides aminés est dérivée de celle du monomère du fragment Fce de l'IgE de primate, notamment humain, et présentant par rapport à l'IgE native naturellement présente dans l'organisme humain, ou des primates, un ou des sites ou épitopes néoantigéniques. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comporte, dans un véhicule approprié à l'administration parentérale, une dose unitaire de 0,5 à 5 pg/kg dudit polypeptide. 3. Composition pharmaceutique, selon l'une des revendications 1 et 2, comprenant un polypeptide dont la séquence d'acides aminés est dérivée de la séquence telle que montrée dans l'ID SEQ N 1, de l'acide aminé en position 215 à l'acide aminé en position 547; ledit polypeptide présentant par rapport à une IgE humaine native, au moins un épitope néoantigénique. 4. Composition selon la revendication 3, dans laquelle ledit polypeptide a une séquence d'acides aminés dérivée de la séquence telle que montrée dans l'ID SEQ N 1, - de l'acide aminé en position 218 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 224 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 226 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 234 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 330 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 358 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 418 à l'acide aminé en position 547, ou - de l'acide aminé en position 438 à l'acide aminé en position 547. 5. Composition selon la revendication 3, dans laquelle ledit polypeptide a une séquence en acides aminés qui inclut la séquence substantiellement telle que montrée dans l'ID SEQ N 1, de l'acide aminé en position 438 à l'acide aminé en position 547. 6. Composition selon la revendication 3, dans laquelle ledit polypeptide a une séquence en acide aminés dérivée de la séquence telle que montré dans le ID SEQ N 1, de l'acide aminé en position 226 à l'acide aminé en position 547. 7. Composition selon la revendication 3, dans lequelle ledit polypeptide a une séquence en acides aminés dérivée de la séquence telle que montrée dans l'ID SEQ N 1, - de l'acide aminé en position 215 à l'acide aminé en position 330, - de l'acide aminé en position 218 à l'acide aminé en position 330, - de l'acide aminé en position 226 à l'acide aminé en position 330, ou - de l'acide aminé en position 234 à l'acide aminé en position 330. 8. Composition selon la revendication 3, dans laquelle ledit polypeptide a une séquence en acides aminés dérivée de la séquence telle que montrée dans l'ID SEQ N 1 de l'acide aminé en position 300 à l'acide aminé en position 500. 9. Composition selon la revendication 4, dans laquelle ledit polypeptide a une séquence d'acides aminés telle que montrée dans l'ID SEQ N 1, - de l'acide aminé en position 218 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 224 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 226 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 234 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 330 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 358 à l'acide aminé en position 547, - de l'acide aminé en position 418 à l'acide aminé en position 547, ou - de l'acide aminé en position 438 à l'acide aminé en position 547. 10. Composition selon la revendication 8, dans laquelle ledit polypeptide a une séquence en acides aminés qui inclut la séquence telle que montrée dans le ID SEQ N 1, de l'acide aminé en position 438 à l'acide aminé en position 547. 11. Composition selon la revendication 6, dans laquelle ledit polypeptide a une séquence en acides aminés telle que montrée dans l'IDE SEQ N 1, de l'acide aminé en position 226 à l'acide aminé en position 547. 12. Composition selon la revendication 7, dans laquelle ledit polypeptide a une séquence en acides aminés telle que montrée dans l'ID SEQ N 1. - de l'acide aminé en position 215 à l'acide aminé en position 330, - de l'acide aminé en position 218 à l'acide aminé en position 330, - de l'acide aminé en position 226 à l'acide aminé en position 330, ou - de l'acide aminé en position 234 à l'acide aminé en position 330. 13. Composition selon l'une des revendications 1 à 8, dans laquelle le polypeptide a une séquence comprenant au moins 15, de préférence 60 acides aminés. 14. Composition selon la revendication 13, dans laquelle le polypeptide a une séquence comprenant au moins acides aminés. 15. Composition selon la revendication 14, dans laquelle le polypeptide a une séquence comprenant au moins 220 acides aminés. 16. Composition selon l'une des revendications 1 à , dans laquelle le polypeptide est non-glycosylé. 17. Composition selon l'une des revendications 1 à 16, dans laquelle ledit polypeptide est sous forme dimérique. 18 Composition selon l'une des revendications 1 à 17, dans laquelle ledit polypeptide est sous forme libre (non-couplé, non-fusionné et non-conjugué). 19. Composition selon l'une des revendications 1 à 18, qui ne contient pas d'adjuvant. 20. Composition selon l'une des revendications l à 18, qui contient en outre un adjuvant faible, à l'exclusion de l'adjuvant de Freund complet ou incomplet. 21. Composition selon la revendication 20, qui contient de l'alun, à titre d'adjuvant. 22. Une composition selon l'une des revendications 1 à 21, qui comprend de 10 à 500 pg, de préférence de 25 à 250 pg dudit polypeptide par dose unitaire de vaccin. 23. Composition selon la revendication 22, qui comprend de 50 à 125 pg dudit polypeptide par dose unitaire de vaccin. 24. Utilisation d'un polypeptide dont une partie au moins de la séquence d'acides aminés est dérivée du fragment Fcc de l'IgE de primates, notamment humain, et présentant par rapport à l'IgE naturellement présente dans l'organisme humain, ou de primate, un ou des sites ou épitopes néoantigénique, tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1, et 3 à 18 pour la préparation d'une composition vaccinale destinée à modifier favorablement l'intensité de la réponse immunitaire médiée par les IgE. 25. Utilisation selon la revendication 24 caractérisée en ce que, pour la préparation d'un vaccin à administration parentérale, on introduit dans un véhicule ayant un volume et une composition adaptée à l'administration parentérale, une quantité de 0,5 à 5 pg/kg dudit polypeptide. 26. Composition contenant des anticorps induits par une composition vaccinale selon l'une des revendications 1 à 23. 27. Composition destinée à l'immunisation passive, contenant une quantité efficace d'anticorps selon la revendication 26. 28. Procédé d'immunopurification par chromatographie d'agents immunogènes dans lequel on utilise des anticorps selon la revendication 26. 29. Procédé de préparation d'un polypeptide immunogène selon l'une des revendications 1 et 3 à 18, caractérisé en ce que l'on cultive, sur un milieu approprié, une cellule hôte transformée avec un vecteur d'expression assurant l'expression d'un fragment d'ADN isolé codant pour ledit polypeptide, et que l'on récupère le polypeptide recombinant.