FR 2719477 A1 19951110 FR 9405617 A 19940506 UTILISATION DE PRINCIPES ACTIFS PROTEGES VIS-A-VIS DE LA DEGRADATION DANS LE RUMEN COMME HEPATOPROTECTEURS La présente invention concerne l'utilisation de principes actifs protégés vis-à- vis de la dégradation dans le rumen chez le ruminant et surtout leur effet sur son état hépatique en début de lactation. Il est connu d'après l'article de Remond et al (Ann. Zootech., 1989, 38, 129- 137) qu'une méthionine protégée donnée à des vaches en début de lactation permet d'obtenir une augmentation de la quantité de lait produite au cours des deux premières semaines après la mise bas de 2,6 et 1,2 kg/jr et une augmentation moyenne des protéines d'environ 27 g par jour ce qui se traduit par une augmentation du taux protéique moyen du lait de 1 à 2%. Il est aussi connu selon l'article de Chilliard et al. (Reprod. Nutr. Develop., 1987, 27 (2A), 327-398) qu'en début de lactation, la capacité d'ingestion des vaches laitières est affaiblie; la vache laitière se trouve en déficit énergétique et pour le combler, elle mobilise ses réserves corporelles. Les triglycérides stockés dans les tissus adipeux sont hydrolysés en acide gras et transportés jusqu'au foie, dans lequel ils sont transformés en triglycérides et en corps cétoniques. La capacité de recyclage et d'exportation de ces acides gras non estérifiés par le foie sous forme de triglycérides est faible car ils doivent être transportés par l'intermédiaire de lipoprotéines telles que les VLDL (lipoprotéines de très faible densité). Or, il est connu selon l'article de Rayssiguier et al (Res. Vet. Sci., 1988, 45, 389-393) qu'en début de lactation les VLDL sont synthétisées en très faible quantité ce qui entraine un surstockage de graisse au niveau hépatique et par la même se traduit parfois par une stéatose hépatique. Cette faible synthèse de VLDL serait due à une disponibilité insuffisante d'un des constituants lipidiques (cholestérol, phospholipides) ou protéique (apoprotéine B). Il est apparu de façon tout à fait surprenante que chez les ruminants l'ingestion de principes actifs protégés vis-a-vis de la dégradation dans le rumen et libérant lesdits principes actifs dans la caillette et/ou l'intestin permettait de réduire ou de prévenir la stéatose hépatique. Cette réduction de la stéatose hépatique est due d'une part à une augmentation de la libération des lipoprotéines hépatiques qui se traduit par l'augmentation de l'expression du gène hépatique de l'apoprotéine B (augmentation de l'ARNm de l'apoB) et de la teneur intrahépatique de l'apo B; en effet, l'apoprotéine, en tant qu'élément structural indispensable à la synthèse de VLDL, est l'un des facteurs majeurs limitants de la production de particules riches en triglycérides. Les principes actifs protégés utilisés pour traiter ces animaux sont choisis notamment parmi les acides aminés, les aminoalcools, les polyols, les vitamines ou les mélanges de ces composés entre eux. Parmi les acides aminés on peut citer, à titre non limitatif, la méthionine et la lysine; parmi les aminoalcools la choline; parmi les polyols le sorbitol et parmi les vitamines, la niacine. On préfère néanmoins utiliser la méthionine protégée. Parmi les composés permettant une protection efficace dans le milieu du rumen et une libération dans la caillette ou l'intestin grêle on peut citer deux grands types de composés. Certains de ces composés permettent une protection et une libération qui est provoquée uniquement par un phénomène chimique, due à la différence de la valeur du pH entre le rumen (5-6) et la caillette (2-3); on peut citer dans cette catégorie d'abord les polymères pH sensibles tels que les copolymères du styrène et de la vinylpyridine en mélange avec des corps gras tels que les acides gras, les huiles végétales ou animales hydrogénées. De nombreux brevets tels que les brevets US 4 877 621 ou US 4 832 967 décrivent des compositions contenant de tels composés. Ces compositions permettent une excellente protection in vivo et in vitro des substances nutritives ou médicamenteuses et une bonne libération des principes actifs. Elles présentent le seul inconvénient de contenir un produit chimique de synthèse qui d'un point de vue alimentaire et écologique n'est pas toujours très apprécié tant du point de vue des autorités administratives d'autorisation de mise sur le marché que de celui des consommateurs. Dans cette première catégorie de compositions o la libération du principe actif est provoquée uniquement par un phénomène chimique, on peut citer, aussi les compositions à base de chitosane et d'acides carboxyliques. Ces compositions sont par exemple décrites dans le brevet français publié sous le numéro 2 524 269. Ces compositions contiennent une quantité de principes actifs toujours inférieure à 60%o en poids et plus préférentiellement de l'ordre de 30% pour permettre une protection au niveau du rumen de l'ordre de 80 à 90% sur 24 heures et contiennent, en outre, une ou plusieurs charges minérales pH sensibles, en quantité notable (10 à 20%o en poids). Une deuxième catégorie de brevets décrit des compositions utilisant les propriétés d'hydrolyse enzymatique de certains composés naturels tels que la zéine. Parmi ces brevets on peut citer le brevet US 4 983 403 ou la demande de brevet européen EP 0 406 041. La présente invention décrit l'effet des principes actifs, décrits précédemment (acides aminés, aminoalcools, polyols et vitamines), protégés vis à vis de la dégradation dans le rumen et libérables dans la caillette ou l'intestin grêle, sur la libération des lipoprotéines hépatiques riches en triglycérides ainsi que l'effet sur la synthèse de l'ARN m de l'apoprotéine B et sur la libération d'apoprotéine B au niveau hépatique. La présente invention sera plus complètement décrite à l'aide des exemples suivants qui ne doivent pas être considérés comme limitatifs de l'invention. EXEMPLES L'objectif du présent essai est d'évaluer dans quelle mesure une supplémentation en méthionine protégée contre les fermentations du rumen préparée notamment selon le brevet US 4 877 621 peut limiter la stéatose hépatique et la cétose chez des vaches grasses en début de lactation recevant une ration présentant une faible concentration énergétique. Matériel et méthodes 1- Animaux Quinze vaches sont réparties en 2 lots équilibrés sur la date de vêlage, la note d'état corporel, le poids vif 3 mois avant vêlage et la production laitière maximum de la lactation précédente. Les deux lots sont les suivants: témoin sans méthionine (T, 8 vaches), lot recevant de la méthionine protégée (M, 7 vaches), une ayant dû être sortie de l'expérience au début de la partie post expérience (42 jours après le vêlage). 2- Alimentation a) Fin de gestation Les animaux reçoivent de l'ensilage de mais à volonté, avec du concentré selon la protocole suivant, S(-4) à S(-1) indiquant les semaines avant le vêlage: kg S(-4) et S(-3) S(-2) S(-1) Concentré 0,5 1,5 2,5 Tourteaux soja tanné 1 1,0 1,0 Tourtaux soja non tanné 0,5 0,5 0,5 L'apport de calcium est limité (100 g/j puis suppression 3 semaines avant vêlage) et on distribue un supplément d'environ 1 kg de foin par jour. b) Début de la lactation Les animaux reçoivent, en un repas par jour, une ration complète de composition constante pendant les 3 premiers mois de lactation, contenant 75 % d'ensilage de maïs, 20 % de tourteau de soja tanné et 5 % de tourteau de soja non tanné. On rajoute du concentré minéral vitaminé (200 g/j), et du foin (1 kg/j). Méthionine protégée (22 g/) Distribuée le matin à jeun dans un seau avec 200 g de tourteau non tanné, pendant 5 jours à toutes les vaches (15) trois à quatre semaines avant mise-bas, puis tous les jours aux vaches du lot M à partir du 3 ou 5ème jour après la mise-bas (au jour 3 à 5 de lactation), jusqu'en 6ème semaine de lactation incluse (42 jours). Dosage des lipoprotéines - Séparation des classes majeures de lipoprotéines Les VLDL (lipoprotéines de très basse densité) ont été séparées à partir de ml de plasma par ultracentrifugation de flottaison: 40 000 tr/min pendant 16 heures et à 15 C. Les IDL, LDL, HDLI et HDLh (lipoprotéines de densité intermédiaire, basse, haute densité légère et haute densité lourde) ont été séparées par gradient de densité à 39 000 tr/min pendant 46 heures et à 15 C, selon la technique décrite par Chapman, Golstein Lagrange et Laplaud, J. Lip. Res., 22, 339-358 (1981) et adaptée par Bauchard et al. (1989, J. Lip. Res., 30, 1499-1514). Nous avons obtenu ainsi 5 classes de lipoprotéines: - VLDL: d pendant 7 heures avec un système de microdialyse afin d'éliminer le KBr. - Séparation des LDL vraies et des HDL very light (HDLvl) dans la zone de densité 1,040-1,090 g/ml Nous avons dans un premier temps vérifié l'hétérogénéité de taille des particules dans la zone de densité 1,040-1,090 g/ml par électrophorèse sur gel en gradient d'acrylamide (gel PAA: 2,5 - 16 %) de tous nos animaux à chacun des différents stades étudiés. Après s'être assuré de l'homogénéité de nos animaux, nous avons regroupé les plasmas par stade et par traitement puis isolé les particules lipoprotéiques par ultracentrifugation de flottaison selon le protocole décrit par Laplaud et al. (J. Lip. Res., 1991, 32, 1429- 1439), dans la zone de densité à 1,040-1,090 g/ml. Ces lipoprotéines de type HDL et LDL ont été ensuite séparées par chromatographie d'affinité sur colonne d'héparine-Sépharose ce qui nous a permnnis de séparer et quantifier les particules LDL (sans contamination par des HDL) appelées "LDL vraies" d'une part et des HDL non contaminées par des LDL d'autre part. Ces particules ont ensuite été analysées, comme les autres classes lipoprotéiques séparées sur gradient, notamment la composition chimique. - Détermination de la composition chimique Sur chacune des fractions lipoprotéiques plasmatiques comme sur les plasmas totaux, nous avons dosé les apoprotéines A-I et B par immunodiffusion radiale selon la méthode de Mancini adaptée par Auboiron et al., Reprod. Nutr. Develop., 2, 2275 (1989). Les protéines totales des fractions lipoprotéiques ont été dosées par colorimétrie par la méthode colorimétrique utilisant le réactif à base d'acide bicinchoninic (BCA, Pierce, IL, USA). - Dosage de l'ARNm de l'apo B hépatique Les ARN totaux sont isolés à partir des biopsies de foie (environ 200 mg) par le thiocyanate de guanidine/phénol-chloroforme d'après la méthode décrite par Chomczynski et Sacchi, Ann. Biochem., 162,156-159 (1987). La quantification de l'ARNm d'apo B est réalisée selon la méthode suivante: 70 g de chaque extrait d'ARN totaux sont dénaturés en présence de formaldéhyde et déposés par dilutions successives de 1/2 en 1/2 sur une membrane de nitrocellulose en utilisant un appareil de Dot- Blot (Schleicher & Schuell, SRC 26 D Minifold 1) soit 4 dépôts de 30, 15, 7,5 et 3,75 Fg environ pour chaque extrait d'ARN. L'hydridation est réalisée avec une sonde synthétisée à partir d'un fragment d'ADNc de r'apo B humaine putifiée en laboratoire et marquée au (a32p) dCTP (desoxycytidyltriphosphate) par marquage aléatoire (random priming). L'abondance de l'ARNm d'apo B est calculée par analyse densitométrique d'autoradiographies obtenues après exposition des membranes pendant 16 heures à -80 C. La comparaison entre les différentes autoradiographies étant impossible, nous avons choisi de déposer sur une même membrane les ARN totaux correspondant aux différents stades de prélèvement (S1, S2, S4 et S12) de 5 vaches (2 témoins et 3 méthionines ou vice-versa). Ceci nous a permis de déterminer l'évolution des teneurs en ARNm d'apo B au cours du début de lactation et de comparer cette évolution entre les vaches des lots témoin et expérimentaux. -Dosage de l'apoprotéine B intrahépatique Les protéines totales intrahépatiques ont été extraites par homogénéisation de fragments de foie prélevés par biopsie (50 mg) dans une solution de lyse hautement concentrée en détergents (désoxycholate de sodium, Triton X100) et en inhibiteurs de protéases (benzamidine, PMSF, leupeptine, pepstatine). Les protéines intrahépatiques totales extraites ont été quantifiées par dosage colorimétrique selon la méthode de Bradford (1976). Des quantités comparables (1 00!tg) de protéines totales ont été déposées sur gradient de gel de polyacrylamide (3-7,5%) en conditions dénaturantes. Après migration électrophorétique, les protéines sont transférées sur membrane de nitrocellulose par électrotransfert. Ces membranes sont incubées en présence d'anticorps polyclonal de lapin anti- apo B bovine. La fixation de l'anticorps sur la bande correspondant à l'apo B est révélée en incubant la membrane en présence de protéine A marquée à l'iode 125. Les teneurs en apo B intrahépatiques sont calculées par analyse densitométrique à partir des autoradiographies obtenues après exposition des membranes pendant 16h à 80 C. 3 - Lipides et apoprotéines plasmatiques (Tableau 1) Dès la première semaine de lactation, la concentration en acides gras non estérifiés circulants est très élevée et elle le reste au stade S2; ces taux vont ensuite diminuer de près de 50 % (P l'ensemble des fractions lipidiques étudiées. Le taux d'apoprotéine B totale plasmatique n'évolue pas entre S1 et S2 et reste proche de 4 mg/dl, puis augmente jusqu'à une valeur de 11 mg/dl au stade S12. Cette évolution est comparable pour les 2 lots (témoin et méthionine). Le taux d'apoprotéine A-I totale plasmatique augmente, comme dans le cas de l'apo B, principalement entre les stades S2 et S12 atteignant en moyenne 100 mg/dl en S12. Par contre, une légère différence est observée dans la forme d'évolution entre nos 2 lots. En effet, l'augmentation du taux d'apo A-I est essentiellement observée entre les stades S2 et S4 pour le lot "méthionine" alors que cette augmentation est beaucoup plus progressive dans le lot "témoin". Malgré cette différence de forme d'évolution, aucune différence significative de leur teneur plamatique est observée entre les 2 lots, quel que soit le stade de lactation étudié. TABLEAU 1 Semaines après vêlage Composés S1 S2 S4 S12 plasmatiques T 28.6 + 3.8a 26.7 + 5.1a 13.2 + 2.2b 2.8 0.8C AGNE M 26.1 + 4.4a 22.8 + 2.8a 16.2 + 2.6b 2.3 0. 6C T 3.3 0.5a 5.0 + 1.1a 9.7 + 2.1b 16.5 + 2.1c CL M 4.3 + 0.8a 5.2 + 1.2a 10.7 + 2.7b 16.8 + 2.1c T 75.9 5.1a 105.7 + 9.4b 156.8 + 13.3C 205.2 i 11.9d EC M 72.8 + 6.7a 97.6 + 6.0b 160.7 + 9. 1c 213.7 + 7.6d T 86.8 4.1a 120.5+ 13.1b 143.5 + 12.1b 154.1 12.5b PL M 85.3 i 5.5a 121.3 + 23.8a 132.6 + 15.5a 187.9 + 13.5b T 17.8 + 1.9 17.8 + 1.2 16.6 + 0.8 17.5 + 1.0 TG M 16.4 + 1.2 16.5 + 1.0 19.8 + 3.0 17.3 + 0.6 T 3.8 + 1.oa 4.7 + 1.0a 6.8 + 1.9b 10.7 + 2.4C apo B M 3.7 1.5a 3.7 + 1.3a 4.8 + 1.7a 11.2 3.1b T 50.4 + 7.1 a 63.1 8.3b 80.1 + 15.3C 100.7 16.8d Apo A-I M 70.6 + 10.9a 69. 1 + 5.1a 100.8 + 14.5b 106.9 + 5.9b Tableau: Evolution des teneurs en lipides (AGNE, Acides Gras Non Estérifiés; CL, Cholestérol Libre; EC, Esters de Cholestérol; PL, Phospholipides; TG Triglycérides) et en apoprotéines A-I et B (Apo A-I, Apo B) plasmatiques (mg/dl; moyenne + ES) chez la vache laitière au cours du début de lactation recevant un régime à base d'ensilage de mais (régime témoin T, n=8) ou le même régime supplémenté en méthionine protégée de 4 à 6 jours jusqu'à 42 jours après le vêlage (régime méthionine M, n=7); S1=3-5 j; S2=10-12 j; S4=24-26 j; S12=71-89 j après le vêlage. Les concentrations plasmatiques des lipides ont été comparées à l'intérieur d'un même lot par test "t" dans le cas de séries appariées; les valeurs affectées de 2 lettres différentes sont significativement différentes au seuil de 5%. 4 - Lipoprotéines plasmatiques L'évolution globale des différentes familles lipoprotéiques montre que les concentrations plasmatiques en VLDL, IDL et HDL lourdes (HDLh) sont peu modifiées au cours des 12 premières semaines de lactation. Par contre, les taux plasmatiques en LDL et de HDL légères (HDLI) augmentent très fortement entre S1 et S1 2 (tableau 2). La composition lipidique de ces deux familles de lipoprotéines n'est que peu modifiée. TABLEAU 2 Semaines après vêlage Si S2 S4 S12 LDL "vraies" T 21.4 + 3.4a 22.8 + 3.la 34.9 + 5.5b 63.0 + 5. 8c M 14.6 + 2.9a 18.2 + 4.0a 24.0 + 5.9b 59.3 + 6.4c HDLvl T 6.8 + 5.5ab 0.3 + 2.7a 17.4 + 8.2b 71.0 + 19.0C M 3.5 + 4.1a 5.4 + 2.7ab 27.4 + 10.3b 98.0 + 38.4C Evolution de la concentration en lipoprotéine de type LDL "vraies" et HDL très légères (HDLvl) (mg/dl; moyenne+ ES) isolées par ultracentrifugation en gradient de densité puis par chromatographie d'affinité sur héparine- sépharose, chez la vache laitière au cours du début de lactation recevant un régime à base d'ensilage de maïs (régime témoin T, n=8) ou le même régime supplémenté en méthionine protégée (régime méthionine M, n=7) de 4 à 6 jours jusqu'à 42 jours après le vëlage. Les concentrations plasmatiques des lipides ont été comparées à l'intérieur d'un même lot par test "t" dans le cas de séries appariées; les valeurs affectées de 2 lettres différentes sont significativement différentes au seuil de 5%. En revanche, les teneurs respectives en apoprotéines A-I et B des LDL isolées (tableau 3) entre les densités 1,020-1,060 g/ml varient fortement avec le stade de lactation étudié. Ainsi, la concentration en apo B augmente de 3 à 9 mg/dl entre S1 il et S12 et celle de l'apo A-I de 2 à 16 mg/dl. La contribution de l'apoprotéine A-I au contenu total des particules dans cette zone s'élevant de 7 à 10 % et est plus rapide dans le temps pour le groupe recevant de la méthionine. TABLEAU 3 LDL (SI) LDL (S2) LDL (S4) LDL (S12) T M T M T M T M Lipoprotéines mg/ml 28.2 7.7 18.1 4.6 23.1 2.7 23.6 + 2.9 52.3 + 9.1 51.4 14 134.0+ 15.8 157.3 + 34 Apo B mg/dl 3.2 i 0.5 2.2 i 0.4 3.4 0.5 2.7 i 0.6 5.2 + 0.8 3.6 i 0.9 9.5 + 0.9 8.9 + 1.0 % lipo. tot. 13.9 2.4 14.9 3.9 15.4+ 1.6 11.4 1.8 10.8 1.3 8.1 i 1.5 7.9 1.4 7.0 1.5 Apo A- mng/dl 1.7 +0.4 1.6 i 0.5 1.3 0.3 2.2 +0.2 5.1 +1.6 5. 1 1.7 14.2 +2.8 19.5 8.0 % lipo. tot. 6.9 t 1.2 8.7 i 0.8 5. 3 i 0.8 10 + 1..5 8.7 + 1.4 10.6 1.9 10.1 i 0.8 10.4 + 2.0 Concentration en lipoprotéines (mng/dl; moyenne + ES) et teneur en apoprotéine s A-I (Apo A-I) et B (Apo-B) (en mg/dl de plasma et en % du poids de la lipoprotéine totale) des principales classes lipoprotéiques chez la vache laitière au cours de la 1ère (3-5 j après vêlage) et 2ème (10-12 j après vêlage) semaines de lactation recevant un régime à base d'ensilage de maïs (régime témoin T, n=8) ou le même régime supplémenté en méthionine protégée (régime méthionine M, n=7) de 4 à 6 jours jusqu'à 42 jours après le vëlage. - Niveaux hépatiques en ARNm d'apo B (Tableaux 4 et 5) Les résultats présentés concernent les 8 vaches du lot témoin, et les 6 ou 7 vaches du lot méthionine (7 en période de traitement avec la méthionine protégée et 6 sur la totalité de l'essai). La quantification de l'ARNm d'apo B hépatique a été réalisée par analyse en Dot- Blot. Les évolutions des niveaux d'ARNm de l'apo B (unités arbitraires/lpg d'ARN) entre 2 stades consécutifs de prélèvement (S2-SI1; S4-S2; S12-S4) ont été calculées pour les 2 lots de vaches (tableau 4). Les importantes variations de niveaux d'ARNm d'apo B entre animaux et les différences d'intensité de signal existant entre autoradiographies induisent l'apparition d'écarts-types importants lors de ce calcul. Nous pouvons toutefois noter une augmentation significative des niveaux d'ARNm d'apo B intrahépatiques entre les stades SI et S2 pour le lot méthionine (6 vaches sur 7, P témoin (7 vaches sur 8, P TABLEAU 4 Evolution des teneurs hépatiques en ARNm d'apo B Lots S2- SI S4-S2 S12-S4 Témoin (n = 8) 910 + 607 1359 +698* 658 974 Méthionine (n = 7) 3505 + 920** 183 + 1407 Méthionine (n = 6) 4109 + 778*** 263 + 1454 1428 + 1358 Evolution des teneurs intrahépatiques de l'ARNm d'apo B (unités arbitraires/g d'ARN totaux, + SE) entre 2 stades consécutifs de prélèvement chez la vache laitière en début de lactation recevant un régime à base d'ensilage de maïs (régime témoin T, n=8) ou le même régime supplémenté en méthionine protégée (régime méthionine M, n=7 ou n=6) de 3 à 5 jours jusqu'à 42 jours après le vêlage (S1=3-5 j; S2= 10-12 j; S4=24-26 j; S12=71-89 j). Les valeurs sont significativement différentes de 0 au seuil de 6 % (*), 3,5 % (*) ou 2 % (***) (Test du signe). Dans le but d'éliminer les écarts induits par les différences d'intensité de signal existant entre les autoradiographies, le rapport des niveaux hépatiques d'ARNm d'apo B mesurés entre 2 semaines consécutives de prélèvement (S2/S1; S4/S2; S12/S4) a été calculé (tableau 5). Ce rapport permet de mettre en évidence une augmentation significative (P pour cette même période. TABLEAU 5 Rapport des niveaux hépatiques d'ARNm d'apo B Lots S2/SI1 S4/S2 S12/S4 Témoin (n = 8) 1.08 + 0.07a 1.20 + 0.10 1.10 + 0.09 Méthionine (n = 7) 1.50 + 0. O10b 0.96 + 0.12 Méthionine (n = 6) 1.58 + 0.05b 0.98 + 0.13 1.27 + 0.17 Rapport des teneurs intrahépatiques de l'ARNm d'apo B (unités arbitraires/pg d'ARN totaux, + SE) entre 2 stades consécutifs de prélèvement chez la vache laitière en début de lactation recevant un régime à base d'ensilage de mais (régime témoin T, n=8) ou le même régime supplémenté en méthionine protégée (régime méthionine M, n=7 ou n=6) de 3 à 5 jours jusqu'à 42 jours après le vêlage (S1=3-5 j; S2= 10-12 j; S4=24-26 j; S12=71-89 j). Les valeurs affectées de deux lettres différentes sont significativement différentes au seuil de 1% 6 - Variation des teneurs hépatiquties d'apo B (Tableaux 6 et 7) La quantification de l'apo B intrahépatique a été réalisée par analyse en Western- Blot. Les évolutions des niveaux de l'apo B (unités arbitraires / 109 cellules) entre 2 stades consécutifs de prélèvement (S2-S1; S4-S2; S12-S4) ont été calculées pour les 2 lots de vaches (tableau 6). Les importantes variations de niveaux d'apo B entre les animaux et les différences d'intensité de signal existant entre autoradiographies induisent l'apparition d'écarts-types importants lors de ce calcul. Nous pouvons toutefois noter une augmentation significative des niveaux d'apo B intrahépatiques (d'après le test du signe) entre les stades S2 et S1 pour le lot méthionine (p entre les stades S4 et S2 pour le lot témoin (p TABLEAU 6 Evolution des teneurs hépatiques en apo B Lots S2-S1 S4-S2 S12-S4 Témoin (n = 8) -0,56 + 6,9 19,10 + 5,4* 89,2 + 21** Méthionine (n = 7) 18,20 + 2,9** 7,67 + 7,2 Méthionine (n = 6) 14,00 + 3,6** 3,92 + 7,1 76,5 + 23** Evolution des teneurs intrahépatiques d'apo B (unités arbitraires/109 cellules, +SE) entre 2 stades consécutifs de prélèvement chez la vache laitière au cours du début de lactation recevant un régime à base d'ensilage de mais (régime témoin T, n=8) ou le même régime supplémenté en méthionine protégée (régime méthionine M, n=7 ou n=6) de 3 à 5 jours jusqu'à 42 jours après le vêlage (S1=3-5 j; S2=10-12 j; S4=24-26 j; S12=71-89 j). Les différences sont significativement différentes de 0 au seuil de 3,5 % (*) ou au seuil de 1 % (**) (test U). Dans le but d'éliminer les différences d'intensité de signal existant entre autoradiographies, le rapport des niveaux hépatiques d'apo B entre 2 semaines consécutives de prélèvement (S2/S1; S4/S2; S12/S4) a été calculé (tableau 7). Ce rapport permet de mettre en évidence une augmentation significative (p TABLEAU 7 Rapport des niveaux hépatiques d'apo B Lots S2/S1 S4/S2 S12/S4 Témoin (n = 8) 1.07 + 0.12a 1.52 + 0.20 2.49 + 0.40 Méthionine (n = 7) 1.68 + 0.09b 1.22 + 0.16 Méthionine (n = 6) 1.66 0.10Ob 1.14 0.16 2.70 +0.54 Rapport des teneurs intrahépatiques d'apo B (unités arbitraires/ltg d'ARN totaux, +SE) entre 2 stades consécutifs de prélèvement chez la vache laitière au cours du début de lactation recevant un régime à base d'ensilage de maïs (régime témoin T, n=8) ou le même régime supplémenté en méthionine protégée (régime méthionine M. n=7 ou n=6) de 3 à 5 jours jusqu'à 42 jours après le vêlage (SI =3-5 j; S2=10-12 j; S4=24-26 j; S1 2=71-89 j). Les valeurs affectées de deux lettres différentes sont significativement différentes au seuil de 1%. REVENDICATIONS 1 - Utilisation de principes actifs pour produire une composition protégée vis-à-vis du rumen destinée à être administrée aux ruminants en vue de prévenir ou traiter la stéatose hépatique. 2 - Utilisation de la composition selon la revendication 1 en vue de diminuer la teneur en triglycérides au niveau hépatique. 3 - Utilisation de la composition selon la revendication 1 en vue de diminuer la teneur en corps cétoniques au niveau sanguin. 4 - Utilisation de la composition selon la revendication 1 pour augmenter la la synthèse de l'apoprotéine B hépatique. - Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que le principe actif est choisi parmi les acides aminés, les polyols, les aminoalcools et/ou les vitamines. 6 - Utilisation selon la revendication 4 caractérisée en ce que l'acide aminé utilisé est la méthionine. 7 - Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que le principe actif est protégé par un mélange à base d'un polymère pH sensible et d'un corps gras. 8 - Utilisation selon la revendication 5 caractérisée en ce que le principe actif est protégé par un mélange à base d'un copolymère vinylpyridine styrène et d'un acide gras. 9 - Utilisation selon la revendication 5 caractérisé en ce que le principe actif est protégé par un polymère naturel à base de chitosane. - Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que le principe actif est protégé par un polymère naturel dont la libération est provoquée par une hydrolyse enzymatique. 11 - Utilisation selon la revendication 8 caractérisée en ce que le principe actif est protégé par un polymère à base de zéine.