FR 2705971 A1 19941209 FR 9306673 A 19930603 La présente invention a pour objet un procédé de production de gamma-décalactone par bioconversion. Ce procédé comprend une étape de culture de microorganismes dans un milieu contenant au moins un précurseur de la gamma-décalactone, suivie d'une étape d'isolement du produit obtenu par extraction. Les lactones sont des composés d'arôme à l'origine de nombreuses notes aromatiques allant de la pêche au musc. Les gamma- et delta-lactones ont un carbone asymétrique et se présentent sous deux formes: les (R) lactones et les (S) lactones. Dans les fruits, la gamma- décalactone est généralement sous la forme ( R). Par biosynthèse, les microorganismes peuvent produire des proportions variables des deux énantiomères. L'acide ricinoléique qui possède un carbone asymétrique en position 12 ( carbone qui porte une fonction alcool) possède la configuration (R). Par oxydation de cet acide, on obtient l'acide (R)-4-hydroxy-décanoique qui se cyclise, soit in situ dans le milieu de culture, soit par chauffage à pH acide, en R-gamma-décalactone. La R-gamma-décalactone a une odeur agréable et suivant les concentrations, elle a des notes crémeuses ou de pêche. Cette molécule est recherchée par l'industrie des arômes. De plus, lorsque cette molécule est produite à partir de substrats végétaux transformes par un procédé biologique, elle bénéficie de l'appellation "naturelle", selon la législation française. De nombreuses équipes se sont donc attachées à la recherche de procédés d'obtention naturels de cette molécule, mais elles se sont heurtées à de multiples obstacles. L'obstacle principal réside dans la toxicité vis-à-vis des microorganismes des composés susceptibles d'être transformés en R-gamma-décalactone ainsi que de la lactone elle-même, ces composés pouvant entraîner un ralentissement, voire un arrêt du développement des microorganismes. 2 2705971 Afin de résoudre les problèmes posés par cette toxicité, diverses solutions ont été proposées. On a ainsi tenté d'éliminer ou de retenir les produits pouvant présenter une toxicité à l'aide de solvants organiques, ou d'adsorbants tels que des résines ( EP-A-O 425.001) ou à l'aide d'une phase solide ou liquide hydrophobe EP-A- O 258.993). Un autre problème réside dans la difficulté que peuvent avoir des microorganismes à dégrader des substrats naturels intéressants d'un point de vue économique, tels que des huiles végétales. Ainsi, des procédés de production de lactones à partir d'huile de ricin ( voir par exemple le brevet US 4.560.656), nécessitent-ils l'insertion d'une étape préalable de traitement de l'huile par une lipase. En outre, comme certaines souches présentent un faible rendement de bioconversion d'un substrat en lactones, on a utilisé des variantes ne catabolisant pas ces molécules. Ainsi, les demandes de brevets EP-A- 0.371.568 et EP-A- 0.409.321 concernent des procédés de production de gamma- lactones utilisant des microorganismes qui ne dégradent pas les métabolites produits; il y a donc accumulation de lactones, de sorte que les microorganismes s'intoxiquent rapidement avec ces molécules et ne peuvent en produire des quantités importantes. Les lactones produites par les procédés précédemment décrits sont isolées et purifiées par extraction à l'éther (US 3.076.750), par distillation ( EP-A- 0.371 568), par extraction par un solvant tel que le butylacétate ( EP-A- 0.409.321), par l'hexane ( WO-83/ O1 072), par séparation chromatographique et en particulier par HPLC ( WO-89 12 104). Ces procédés de séparation des lactones présentent des inconvénients notables et en particulier nécessitent, dans le cas de l'extraction, l'utilisation de solvants qui vont être en contact direct avec les microorganismes; ils ne permettent 3 2705971 pas dans le cas de la chromatographie, de traiter de grandes quantités, et de manière générale, ne peuvent être appliqués dans le cadre d'un procédé en continu. La présente invention concerne un procédé de production de gammadécalactone par des microorganismes pouvant produire cette molécule, mais également la dégrader en moindre proportion. Ce procédé comprend une étape d'extraction de la gamma-décalactone directement du milieu de culture, ce qui évite son accumulation et donc sa reconsommation par les microorganismes, de sorte que les rendements en lactone produite sont importants. On remarquera ainsi que le demandeur a été notamment à l'encontre de l'enseignement des brevets EP-A-0.371.568 et EP- A- 0.439.321 qui, comme précédemment indiqué, préconisent l'utilisation de microorganismes ne métabolisant pas les lactones. Le demandeur a en outre mis en évidence que l'on pouvait extraire la lactone d'un milieu biphasique de bioconversion et en particulier du milieu de culture des microorganismes par un procédé simple, peu coûteux et utilisable dans une production en continu, qui permet en plus le contrôle de la dégradation de la lactone par le microorganisme. Ce procédé, qui implique une extraction liquide- liquide à membrane, permet également de séparer le milieu de bioconversion, c'est-à-dire un milieu aqueux contenant un précurseur lipidique, d'un liquide extractant, évitant ainsi la formation d'émulsion, et le contact du solvant avec les microorganismes. Ainsi qu'on l'a noté précédemment, un tel contact peut être préjudiciable à la viabilité des microorganismes ( champignons). La présente invention a donc pour objet un procédé de production de Rgamma-décalactone comprenant: a) la culture de microorganismes capables de dégrader 4 2705971 modérément les molécules de lactone, choisis dans les genres Sporidiobolus ou Fusarium, dans un milieu de culture contenant au moins un précurseur de la R-gamma-décalactone choisi dans le groupe comprenant l'acide ricinoléique, l'acide lesquérolique, leurs sels, et leurs esters avec des alcools en C1 à C3, b) l'extraction, durant la culture, de la R-gamma- décalactone produite par lesdits microorganismes, par un solvant organique séparé du milieu de culture par une membrane semi-perméable, le solvant d'extraction étant substantiellement non miscible avec l'eau. Les microorganismes utilisés selon l'invention possèdent la capacité de dégrader, c'est-à-dire de transformer en un ou plusieurs autres composés, la R-gamma- décalactone intracellulaire. De tels microorganismes doivent bien entendu posséder un taux d'excrétion de la lactone très largement supérieur au taux de dégradation intracellulaire de la molécule, afin qu'il y ait excrétion d'une quantité substantielle de lactone. Les microorganismes peuvent être choisis parmi les levures du genre Sporidiobolus, en particulier de l'espèce S. ruinenii ou S. salmonicolor. Ils peuvent aussi être choisis parmi les champignons du genre Fusarium tel que l'espèce F. poae. Avantageusement, la culture des microorganismes est effectuée en continu. La lactone est extraite en cours de production à partir du milieu de culture, l'extraction pouvant se faire en continu ou à des intervalles de temps déterminés, de telle sorte que la quantité de lactone présente dans le milieu de culture ne soit pas toxique pour les microorganismes. La culture des microorganismes peut se faire aussi de manière discontinue, en particulier si le microorganisme présente un rendement élevé dans un état physiologique précis. 2705971 Ceci est notamment le cas pour Fusarium poae. Un tel état physiologique peut être lié à la densité de la population microbienne ou à son âge, par exemple. Le milieu de culture contient au moins un précurseur de la gammadécalactone choisi dans le groupe comprenant l'acide ricinoléique, l'acide lesquérolique, leurs sels et leurs esters avec des alcools en C1 à C3 Avantageusement, ce précurseur est le ricinoléate de méthyle. La seconde étape du procédé consiste en l'extraction d'arômes à partir du milieu de culture. Avantageusement le solvant d'extraction peut être tout solvant organique choisi de telle sorte que le coefficient de partage de la gamma- décalactone entre la phase organique et le milieu de culture soit supérieur à 50. Ce coefficient de partage de la gamma- décalactone peut être calculé pour divers solvants par l'homme du métier suivant les techniques connues en soi. Lorsque l'on cultive une souche de S. ruinenii, cette dernière produit de la gamma-décalactone mais également l'acide 4-hydroxydécanoique, contrairement aux souches de S. salmonicolor et Fusarum poae qui ne produisent pas ce composé intermédiaire. Ainsi, dans le cas de la culture d'un microorganisme de l'espèce S. ruinenii le solvant d'extraction peut être avantageusement hydraté avec une solution d'acide jusqu'à de faibles pH (1 à 3) afin de permettre la cyclisation de l'acide R-4 hydroxydécanoïque en lactone. Le solvant organique est un solvant hydrophobe, notamment l'hexane, le tétradécane ou l'acétate d'éthyle. De par sa nature, et contrairement aux procédés d'extraction par distillation, par extraction chimique ou par chromatographie décrits dans l'état de la technique, le procédé selon l'invention permet une extraction en continu de la gamma-décalactone et, lorsqu'il est présent dans le milieu de culture, aussi de l'acide 4-hydroxydécanoique. On 6 2705971 notera, néanmoins, que ce procédé peut aussi être appliqué à des cultures discontinues. Un tel procédé peut en particulier être mis en oeuvre à l'aide de membranes semi-perméables hydrophobes, planes, telles que des membranes de polypropylène, de polyethylène, de silicone, de PTFE ( polytétra-fluoro-éthylène) ou de fibres creuses en polypropylène ou en silicone notamment. Les caractéristiques de ces membranes sont regroupées dans le tableau 1.( Voir fin de description). Le choix d'une membrane peut varier suivant la composition du milieu de culture ( différents précurseurs utilisés) et le solvant d'extraction, compte tenu des interactions différentes pouvant exister entre un polymère et des solvants donnés. Ce choix pourra facilement être déterminé par l'homme du métier. Avantageusement, les membranes planes ou les fibres creuses ont des diamètres de pores compris entre O,O1 Mm et 1 pm ou sont de nature dense. Avantageusement, du glucose en excès est ajouté dans le milieu de culture pour contrôler la reconsommation de la R- gamma-décalactone et de l'acide 4-hydroxydécanoïque, en particulier dans le cas de l'utilisation de Sp.ruinenii. La présente invention est illustrée sans pour autant être limitée par les exemples qui suivent. Les exemples 1 à 9 ci-après illustrent la production de R-gammadécalactone par culture dans diverses conditions, selon la première étape du procédé de l'invention. Les exemples 10 à 13 illustrent la production de la R- gamma-décalactone conformément au procédé de l'invention. La figure représente l'évolution de la concentration en décalactone ( en g/l, courbe en traits pleins) et de la densité cellulaire (levure viable /ml, courbe en pointillés) en fonction du temps dans un réacteur à alimentation discontinue. 7 2705971 EXEMPLE 1: Production de R-gamma-décalactone par culture de S.ruinenii sur milieu A. On prépare une préculture de Sporidiobolus ruinenii (CBS 5001) dans une fiole Erlenmeyer de 500 ml contenant 100 ml du milieu A de composition suivante: glucose 15 g/l, KH2PO4 2 g/l, MgS04 3 g/l, CaC12 0,13 g/l, FeSO4 0,01 g/l, Tween 80 2ml/1, extrait de levure 1 g/l, extrait de malt 1 g/l, bactotryptone 0,5 g/l. Après 24 heures de culture, la densité microbienne est de 2.108 CFU/ml ( soit une densité optique à 620 nm égale à 25). 1 ml de cette préculture est ajouté à 100 ml de milieu A stérile. Après 24 heures de culture on ajoute 5 ml de ricinoléate de méthyle. Après 4 jours le contenu de la culture est acidifié avec l'acide chlorhydrique à pH = 2,0. L'extraction par la méthode de Lickens et Nickerson (Am. Soc. Brew. Chem. 1964, 5, 5-13) donne un extrait contenant 25,5 mg de ( R)-gamma-décalactone, ce qui correspond à une concentration de 0,25 g/1. EXEMPLE 2 Production de R-gamma-décalactone par S.ruinenii en présence d'une concentration croissante de précurseur. Sporidiobolus ruinenii est cultivé de la manière décrite dans l'exemple 1. Les concentrations en ricinoléate de méthyle ajouté au milieu de culture varient de 66 à 164 g/1. Après 6 jours de culture, les concentrations en R-gamma- décalactone obtenues varient de 0,8 à 1,6 g/l. Une amélioration significative du rendement de production est obtenue si la concentration de précurseur ajoutée au milieu de culture est supérieure à 100 g/l. EXEMPLE 3: Production de R-qamma-décalactone par S.ruinenii en présence de qlucose. Sporidiobolus ruinenii est cultivé de la manière décrite dans l'exemple 1 avec 164 g/l de ricinoléate de 8 2705971 méthyle. Une autre culture est conduite dans un milieu A contenant 150 g/l de glucose avec 164 g/l de ricinoléate de méthyle. L'ajout de glucose en concentration élevée limite la dégradation de R-gamma- décalactone et d'acide 4-hydroxy décanoïque, au point qu'après 30 jours de culture, on trouve plus de cinq fois plus de R-gamma- décalactone dans le milieu contenant 150 g/l de glucose que dans les cultures contenant g/l de glucose. EXEMPLE 4 Production de R-qamma-décalactone par Sporidiobolus salmonicolor avec l'acide lesquérolique comme précuseur. En ajoutant 20 g/l d'acide lesquérolique issu d'huile de Lesguerella fendleri dans le milieu A, S. salmonicolor produit 160 mg/l de gamma-décalactone après 4 jours de culture. EXEMPLE 5: Production de R-qamma-décalactone par S.ruinenii cultivé sur un milieu contenant de la farine de soia. Une culture de Sporidiobolus ruinenii est effectuée sur un milieu Ai similaire au milieu A mais ne contenant ni bactotryptone, ni extrait de malt, et contenant de la farine de soja T50. La densité de population obtenue après 24 heures correspond à une densité optique à 620 nm de 18. On ajoute ensuite 50 g/l de ricinoléate de méthyle. Six jours après cet ajout, la concentration en R-gamma-décalactone mesurée comme précédemment est de 1,2 g/1. EXEMPLE 6: Production de R-gamma-décalactone par S.ruinenii sur un milieu contenant de la qélatine. Une culture de Sporidiobolus ruinenii est effectuée sur un milieu A2 qui est du milieu Ai dans lequel la farine de soja a été remplacée par de la gélatine AT/50 (Sanofi Bio- Industrie) ( 5 g/l). La densité de population obtenue, après 9 2705971 24 heures, est de 24 unités de densité optique à 620 nm. On ajoute 50 g/1 de ricinoléate de méthyle. Six jours après cet ajout, la concentration en (R-)-gamma-décalactone mesurée comme précédemment est de 2,0 g/l. EXEMPLE 7: Production par S.ruinenii en fermenteur de 5 litres durant 5 jours. Une préculture de Sporidiobolus ruinenii est effectuée sur le milieu A. Apres 24 heures, cette préculture sert à inoculer, avec une proportion de 2%, un fermenteur contenant litres de milieu A. La température du réacteur est régulée à "C et le pH à une valeur de 6,0. Avec une agitation de 250 tours/min et un débit d'air comprimé dans le réacteur de 0,4 VVM (volume d'air par volume de liquide et par minute), le KLa du fermenteur ( coefficient de transfert de l'oxygène gazeux en oxygène dissous) est de 90 h-1. Apres 23 heures de culture sur un milieu A gélosé avec 20 g/1 d'Agar, on obtient, dans le réacteur, une population de levures vivantes estimée à 3,4.108 microorganismes formant des colonies (CFU)/ml. On ajoute au milieu 82 g/1 de ricinoléate de méthyle. Apres 19 heures de culture, la population de levures vivantes est de ,7.108 CFU/ml et la concentration en gamma-décalactone déterminée par la méthode de Lickens et Nickerson, après avoir acidifié le milieu à pH = 2,0, est de 1,25 g/1. Apres 130 heures de culture, alors que la population de Sporidiobolus ruinenii est de 4.108 CFU/ml, la concentration en R-gamma- décalactone atteinte dans le réacteur est de 1,7 g/1. La répartition de la R-gamma-décalactone et/ou de l'acide 4hydroxydécanoïque dans le milieu de culture est la suivante: 2% se trouve dans la biomasse, 38% dans l'huile, (soit 12,5 g/1 d'huile), 60% dans l'eau. Ce résultat montre que ces deux molécules sont excrétées dans le milieu de culture tout en étant métabolisées par les microorganismes. 2705971 EXEMPLE 8: Production par S.ruinenii en réacteur de 5 litres durant 14 jours. Sporidiobolus ruinenii est incubé en fermenteur dans 5 litres de milieu A à 20 C et pH = 6. La population initiale dans le réacteur est de 4.106 CFU/ml. On ajoute au milieu 82 g/l de ricinoléate de méthyle. La culture est aérée avec un débit de 360 1/heure avec une agitation de 300 tours/min. Après 209 h de culture, alors que la population viable dans le réacteur est de 5,7.108 CFU/ml, l'extraction par la méthode de Lickens et Nickerson, et acidification du milieu à pH = 2,0, permet de récupérer 3,1 g/l de R-gamma-décalactone. Apres 353 h de culture la population viable du réacteur est de 6,2.108 CFU/ml. La concentration en R-gamma- décalactone estimée par la méthode de Lickens et Nickerson, dans le milieu acidifié à pH = 2,0, est de 6,9 g/l. Ces résultats sont illustrés sur la figure. EXEMPLE 9: Production de R-gamma-décalactone par Fusarium poae. Les souches de Fusarium poae sont des souches décrites dans l'ouvrage de MARASAS W.F.O., NELSON P.E., et TOUSSOUN T.A. 1984. Toxigenic Fusarium species. Identity and Mycotoxicology. The Pennsylvania State University Press (Publ.), University Park and London, p.86, ainsi que des souches choisies dans la collection CBS ( Central Bureau Voor Schimmel Cultures, Baarn, NL) et ayant les numéros suivants: CBS 317-73, CBS 446-67, CBS 345-69. Elles sont mises en culture sur le milieu B défini comme suit: Glucose (10 g:l); NaNO3 (3 g/l); K2HPO4 (lg/1); KCl (1 g/l); Mg S04, 7H20 ( 0,5 g/l); FeSO4, 7 H20 (10 mg/1); Tween (2 g/l); Extrait de levure (0,5 g/l); Casamino acides (0,5 g/l); Ricinoléate de méthyle (41 g/l). Le pH est ajusté à 5,5 avec H2S04 (6N). Après inoculation, ce milieu contient 2.105 spores/ml. 1il 2705971 La culture est effectuée à 25 C et agitée à 180 tours/min sur une table d'agitation excentrée. Après 4 jours de culture, le milieu est filtré, amené à pH = 2 avec H2SO4 (6N). 100 pl de gamma-undécalactone à 4 ml/1 sont ajoutés à chaque culture comme étalon interne. L'ensemble est extrait par la méthode de Flath et Forrey ( J. Agric. Food Chem. 1977, 25 (1), 103-108) pendant 45 minutes, avec 30 ml de dichlorométhane. L'extrait dichlorométhanique est ensuite séché avec du sulfate de sodium anhydre. 1 pl de l'extrait ainsi obtenu est injecté dans un chromatographe en phase gazeuse. Les quantités ainsi obtenues montrent une hétérogénéité importante dans le comportement des souches. EXEMPLE 10: Comparaison de l'extraction par diverses phases organiques à l'aide d'un module plan. - Module plan: sans recirculation, agitation 600 rpm - Membrane: dense silicone composite (Gesellschaft fur Trenntechnik mbH) - Phase à épuiser: milieu avec microorganismes (Sp. ruinenii) + précurseur (ricinoléate de méthyle) à la concentration de 100 g/l. Concentration en gamma-décalactone + acide 4- hydroxydécanoïque avant extraction: 1,2 g/l. Les résultats sont rapportés dans le tableau 2 ci- apres. 12 2705971 TABLEAU 2 Phase organique Flux de gamma- Coefficient décalrctoîe de transfert (g.m.h)J de masse Kx107 (m.sec) Hexane 0,53 1,5 Hexane + HCl 0,47 1,2 Acétate d'éthyle 0,57 1,7 Acetate d'éthyle + HC1 1,4 3.5 La présence d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle augmente fortement la quantité de la gamma- décalactone extraite. EXEMPLE 11: Comparaison de l'extraction par un moduleplan avec et sans microorqanismes. - Module plan avec recirculation débit phase à épuiser = 400 ml/min débit phase organique = 200 ml/min 6P = 0,5 bar - Membrane = silicone composite GFT - phase à épuiser: milieu de culture, avec ou sans microorganisme, teneur en ricinoléate de méthyle > 25,7 g/l. Concentration initiale en gamma-décalactone = 0,7 g/l. - phase organique: hexane TABLEAU 3 Milieu sans Milieu avec microorganismes microorganismes Flux de gamma -décalactone 1,2 1 (g/h.m2 13 2705971 La présence des microorganismes ne modifie que très peu les quantités de lactone extraites. EXEMPLE 12: a) Sporidiobolus ruinenii est incubé dans les mêmes conditions que dans l'exemple 8, mais le milieu est renouvelé régulièrement. Les résultats obtenus dans ces conditions sont récapitulés sur la figure. Cette figure montre le maintien de la viabilité cellulaire et les concentrations en lactones atteintes. Ces concentrations oscillent entre 3,5 et 5 g/l après des temps de culture de l'ordre de 6 à 10 jours. Les productivités observées entre deux renouvellements de milieu sont de l'ordre de 600 mg.1 jr1. La production a pu être poursuivie pendant 48 jours; la culture a alors été arrêtée. Au cours de cette culture, plusieurs cycles d'extraction ont été effectués. b) Le système d'extraction utilisé est le suivant: débit de la phase à épuiser: 1 1/min débit phase organique: 800 ml/min 6P = 0,5 bar. Le module est à fibres creuses et sa structure est en polypropylene pour F1 ( surface d'échange de 0,4m2) ou en silicone composite pour F2 ( surface d'échange de 0,2 m2). Les fibres sont respectivement pour F1 et F2 composées de: - F1: polypropylene poreux ( diamètre interne des fibres:240 pm) - F2: silicone composite ( diamètre interne des fibres: 1,2 mm) phase à épuiser: milieu de culture avec microorganismes (Sporidiobolus ruinenii) teneur en ricinoléate de méthyle: 100 g/l phase organique: hexane. 14 2705971 TABLEAU 4 Module F1 Module F2 Concentration initiale en gamma- décalactone 3,8 1,4 + 4- hydroxydécanoïque (g/l) Flux (g/h.m2) 2 1 Au vu de la productivité moyenne des microorganismes, les modules de fibres creuses ont une capacité d'extraction en continu de gamma- décalactone ou d'acide 4-hydroxydécanoïque, supérieure aux quantités produites par le microorganisme. EXEMPLE 13: Production de R-qamma-décalactne par culture de Sporidiobolus salmonicolor avec ou sans extraction simultanée. Dans le cas o aucune extraction in situ n'est réalisée, la conversion du ricinoléate de méthyle en gamma- décalactone s'accompagne d'une mort rapide des cellules. Si une extraction est réalisée in situ par de l'hexane, grâce à un module ( Hoechst-Célanèse, XiO 240) à fibres creuses (diamètre 240pm) composées de polypropylène de 0,05 pm de diamètre de pore et d'une surface de 0,4 m2, la productivité en lactone est maintenue. La viabilité des cellules est non seulement maintenue mais la croissance se poursuit. 2705971 TABLEAU 5 Méthode Temps après Proportion Productivité ajout du de population mg.lh-1 précurseur(h) viable après ajout du précurseur sans 24 50% 15 extraction 48 7, 5% 1 avec 17 657% 4,77 extraction 48 571% 6,01 TABLEAU 1 CARACTERISTIQUES DES MEMBRANES UTILISEES POUR L'EXTRACTION DE LA GAMMA-DECALACTONE Membranes hydrophobes Nom Matériel Diamètre des Porosité Epaisseur(pm) Fournisseur commercial des pores (pm) Silicone Polydimé- - 10 O + GFT composite thyl silo- xane supporté support 160pm Polyéthylène Polyéthylè ne - 19 Atochem CD Celgard 2400 Polypropy- 0,05 0,38 25 Celanèse lène Celgard 2500 Polypropy0,075 0,45 25 Celanèse lène SM 11807 0475 Poly- tétra- 0,2 0,80 65 Sartorius fluoro-éthy- lène (-CF2)-n 17 2705971 REVENDICATIONS 1. Procédé de production de R-gamma-décalactone comprenant: a) la culture de microorganismes capables de dégrader modérément les molécules de lactone, choisis dans les genres Sporidiobolus ou Fusarium, dans un milieu de culture contenant au moins un précurseur de la R-gamma- décalactone choisi dans le groupe comprenant l'acide ricinoléique, l'acide lesquérolique, leurs sels et leurs esters avec des alcools en C1i à C3, b) l'extraction, durant la culture, de la R-gamma- décalactone produite par lesdits microorganismes, par un solvant organique séparé du milieu de culture par une membrane semi-perméable, le solvant d'extraction étant substantiellement non miscible avec l'eau. 2. Procédé de production de R-gamma-décalactone selon la revendication 1, caractérisé en ce que le microorganisme est choisi dans le groupe constitué des espèces Sporidiobolus ruinenii, Sporidiobolus salmonicolor, Fusarium poae. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le microorganisme est une souche de Sporidiobolus ruinenii et le solvant d'extraction est acidifié à un pH de 1 à 3. 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le coefficient de partage de la R-gamma- décalactone entre le solvant organique et le milieu de culture est supérieur à 50. 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que ledit précurseur est le ricinoléate de méthyle. 6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que ladite membrane semi-perméable se présente sous forme de fibres creuses. 7. Procédé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que ladite membrane est dense ou poreuse, 18 2705971 les pores ayant un diamètre compris entre 0,01 pm et 1 Mm. 8. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que le solvant d'extraction est un solvant organique hydrophobe, tel que l'hexane, le tétradécane ou l'acétate d'éthyle. 9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que Sporidiobolus ruinenii est cultivé en présence d'un excès de glucose.