FR 2701951 A1 19940902 FR 9302082 A 19930224 1 - La présente invention concerne des dérivés peptidiques d'acide boronique, leur procédé de préparation, les compositions pharmaceutiques qui les contiennent ainsi que leur utilisation en tant qu'inhibiteurs de trypsine- like serine proteases. L'une de ces serine proteases, la thrombine, est l'enzyme clé de la coagulation et joue un rôle central dans la pathologie des thromboses veineuses et artérielles comme l'ont montré F Toti et coll (Sang, Thrombose, Vaisseaux, 4, 483-494, 1992) et T M REILLY et coll (Blood Coagulation and Fibrinolysis, 3, 513-517, 1992). Les approches anti-thrombotiques sont plus efficaces et sans risque par rapport aux traitements actuels Des inhibiteurs directs de la thrombine, actuellement en développement clinique, présentent toute une série d'avantages sur l'héparine Mais ces substances, l'hirudine et l'hirulog- 1 ont le désavantage de ne pas être actives par voie orale. D'autre part, il est connu que des peptides contenant la séquence (D)Phe- Pro-Arg présente dans le fibrinogène sont des inhibiteurs du site catalytique de la thrombine (C KETTNER et coll, J Biol Chem, 265 ( 30), 18289-18297, 1990). Des dérivés peptidiques de l'acide boronique, présentant une activité anti-thombotique, ont déjà été décrits dans la littérature C'est le cas plus particulièrement des composés décrits dans les brevets EP 293881 et EP 471651 M A HUSSAIN et coll ont d'ailleurs démontré que l'acide Ac- (D)Phe-Pro-Arg boronique (DUP 714) est un inhibiteur de la thrombine (Peptides, 12, 1153-1154, 1991). Il était donc particulièrement intéressant de synthétiser de nouveaux inhibiteurs de serine proteases afin d'augmenter la puissance, la selectivité ainsi que l'activité par voie orale des composés déjà décrits dans la littérature. -2- Plus spécifiquement, la présente invention concerne les composés de formule (I): / OR 4 R 1 NH CH CO A CO NH CH B OR 4 R 2 R 3 OR R 2 R 3 (I) dans laquelle: R 1 représente un atome d'hydrogène ou un groupement acyle (CI-C 6) linéaire ou ramifié, benzyle, alkoxycarbonyle (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, benzyloxycarbonyle ou phénoxycarbonyle, R 2 représente un groupement: benzyle, substitué ou non sur le noyau atomes d'halogène ou groupements alkyle alkoxy (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, (substitué ou non par un groupement linéaire ou ramifié), (pyridin-2yl)méthyle, diphénylméthyle, fluorényle, naphtylméthyle, (dicyclopropylméthyl)méthyle, ou, 2-indanyle, phényle par un ou plusieurs (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, hydroxy ou bicyclooct-1-yle hydroxy ou alkoxy (Cl-C 6) R 3 représente un groupement: alkyle (C 2-C 4) linéaire ou ramifié substitué alkoxy (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, phénoxy, amino, 2-tétrahydrofuryle ou cycloalkyle (C 3-C 7), guanidinophényle, amidinophényle, aminophényle, guanidinobenzyle, amidinobenzyle, aminobenzyle, ou, cycloalkyle (C 3-C 7), par un groupement guanidino, amidino, R 4 et R 5 représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle (C 1-C 6) linéaire, /o OR 4 ou B forment un ester boronique de pinanediol, \ OR 5 L 5 -3- A représente l'un quelconque des groupements suivants: N CH dans lequel: A 1 représente avec les atomes d'azote et de carbone avec lesquels il est lié une structure polycyclique choisie parmi les structures suivantes: perhydroindole, 2-azabicyclol 2 2 2 loctane, 2-azabicyclol 3 3 0 loctane, 2-azabicyclol 2 2 1 lheptane, perhydroisoindole, indoline, isoindoline, perhydroquinoléine, perhydroisoquinoléine, 1,2,3,4-tétrahydroquinoléine, 1,2, 3,4-tétrahydroisoquinoléine, thiazolidine éventuellement substituée par un ou plusieurs groupements alkyl (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, N CH 2 dans lequel: A 2 A 2 représente un groupement cycloalkyle (C 3-C 7) ou 2-indanyle, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. L'invention concerne également le procédé de préparation des dérivés de formule (I) caractérisé en ce que l'on fait réagir un amino-acide protégé de formule (II), dont on a éventuellement séparé les isomères par une technique classique de séparation: R'I NH CH C 02 H (II) R 2 R 2 dans laquelle: R'I représente un groupement acyle (CI-C 6) linéaire ou ramifié, benzyle, alkoxycarbonyle (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, benzyloxycarbonyle ou phénoxycarbonyle, et R 2 a la même signification que dans la formule (i), que l'on fait réagir selon la technique de couplage peptidique décrite par W KONIG et R GEIGER (Ber, 103, 788, 1970), avec un deuxième amino-acide protégé de formule (III) dont on a éventuellement séparé les isomères selon une technique classique de séparation, HA C 02 CH 2 C 6 H 5 (III) dans laquelle A a la même signification que dans la formule (I), pour conduire au composé de formule (IV): R'I NH CH CO A C 02 CH 2 C 6 H 5 (IV) I R 2 dans laquelle R'I, R 2 et A ont la même signification que précédemment, dont on déprotège la fonction acide par hydrogénation catalytique pour conduire au composé de formule (V): R'I NH CH CO A CO 2 H (V) I R 2 dans laquelle R'i, R 2 et A ont la même signification que précédemment, que l'on met en réaction avec du N-hydroxysuccinimide en présence de 1,3- dicyclohexylcarbodiimide en milieu anhydre, pour conduire au composé de formule (VI): R'I NH CH CO A C 02 Suc (VI R 2 dans laquelle R'I 1, R 2 et A ont la même signification que précédemment et Suc représente un radical succinimido, que l'on met en réaction en milieu basique avec un composé de formule (VII): - O-R'4 H 2 N CH BO (VII) | \ O O R'5 R'3 dans laquelle: R'3 représente un groupement: alkyle (C 2-C 4) linéaire ou ramifié substitué par un atome d'halogène ou un groupement alkoxy (Cl-C 6) linéaire ou ramifié phénoxy, 2- tétrahydrofuryle ou cycloalkyle, cycloalkyle (C 3-C 7), phényle ou benzyle, chacun étant substitué par un atome d'halogène ou un groupement amino convenablement protégé, R'4 et R'5 représente chacun un groupement alkyle (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, j OR'4 ou, B forment un ester boronique de pinanediol, \ OR'5 pour conduire: soit au composé de formule (I/a), cas particulier des composés de formule (I): OR'4 R'1 NH CH CO A CO NH CH B (I/a) l l -OR' 5 R 2 R'3 a dans laquelle R'1, R 2, A, R'4 et R'5 ont la même signification que précédemment et R'3 a représente un groupement alkyle (C 2-C 4) linéaire ou ramifié (substitué par un groupement alkoxy (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, phénoxy, 2-tétrahydrofuryle ou cycloalkyle (C 3-C 7))ou un groupement cycloalkyle (C 3-C 7), soit au composé de formule (VIII): /(OR'4 R'I NH CH CO A CO NH CH B (VIII) I I R 2 R'3 b -6 - dans laquelle R'I, R 2, A, R'4 et R'5 ont la même signification que précédemment et R'3 b représente un groupement: alkyle (C 2-C 4) substitué par un atome d'halogène, phényle ou benzyle, chacun étant substitué par un atome d'halogène ou un groupement amino convenablement protégé, composé de formule (VIII): o qui lorsque R'3 b représente un groupement: alkyle substitué par un atome d'halogène, phényle ou benzyle, chacun étant substitué par un atome d'halogène, peut être transformé en dérivé cyano correspondant par action du cyanure de cuivre puis en dérivé amidino correspondant de formule (I/b), cas particulier des composés de formule (I), par action de l'ammoniaque: /OR'4 R'l NH CH CO A CO NH CH B (I/b) R 2 R'3 c dans laquelle R'I, R 2, A, R'4 et R'5 ont la même signification que précédemment et R'3 c représente un groupement alkyle, phényle ou benzyle, chacun étant substitué par un groupement amidino, o qui lorsque R'3 b représente: un groupement alkyle substitué par un atome d'halogène peut être transformé en dérivé azido correspondant par action de l'azoture de sodium, puis par hydrogénation catalytique en dérivé amino correspondant de formule (I/c), cas particulier des composés de formule (I), ou, un groupement phényle ou benzyle, chacun étant substitué par un groupement amino protégé, peut subir une déprotection pour conduire au composé de formule (I/c), cas particulier des composés de formule (I): -7- /OR'4 R'I NH CH CO A CO NH CH B (I/c) I j R 2 R'3 d dans laquelle R'l, R 2, A, R'4 et R'5 ont la même signification que précédemment et R'3 d représente un groupement alkyle, phényle ou benzyle, chacun étant substitué par un groupement amino, composé de formule (I/c), dont on peut transformer le radical amino du groupement R'3 d en radical guanidino par réaction avec du cyanamide, pour conduire au composé de formule (I/d), cas particulier des composés de formule (I): OR'4 R'l NH CH CO A CO NH CH B (I/d) l l \ BOR'5 R 2 R'3 e dans laquelle R'I, R 2, A, R'4 et R'5 ont la même signification que précédemment et R'3 e représente un groupement alkyle, phényle ou benzyle, chacun étant substitué par un groupement guanidino, composé de formule (I/a), (I/b), (I/c) ou (I/d) dont on déprotège, si on le souhaite, la fonction amine terminale et que l'on transforme, en milieu inerte, à l'aide de trichlorure de bore, en acide boronique de formule (I/e), cas particulier des composés de formule (I): OH R 1 NH CH CO A CO NH CH B (I/e) I I- 1 1 \ OH R 2 R 3 dans laquelle R 1, R 2, A et R 3 ont la même signification que dans la formule (I), composé de formule (I/a), (I/b), (I/c), (I/d) ou (I/e): que l'on purifie éventuellement selon une technique classique de purification, dont on sépare, si on le souhaite, les énantiomères selon une technique classique de séparation -8 - et que l'on transforme, le cas échéant, en leurs sels d'addition à un acide ou une base pharmaceutiquement acceptable. Parmi les acides pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre non limitatif les acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique, phosphonique, acétique, trifluoroacétique, lactique, pyruvique, malonique, succinique, glutarique, fumarique, tartrique, maléïque, citrique, ascorbique, méthane sulfonique, camphorique, oxalique, etc Parmi les bases pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre non limitatif, l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium le bicarbonate de sodium, etc Les composés de formule (VII) sont obtenus: soit à partir du composé de formule (IX) obtenu selon le procédé décrit par M W RATHKE et coll (J Organomet Chem, 122, 145- 149, 1976): Ci CH OR'4 CH B (IX) C 1 -/ \ OR'5 dans laquelle R'4 et R'5 sont tels que définis plus haut, que l'on fait réagir sur un organomagnésien de formule (X): R Mg Cl (X) dans laquelle R représente: un groupement alkyl (C 2-C 4) linéaire ou ramifié (substitué par un groupement alkoxy (C 1-C 6)linéaire ou ramifié, phénoxy, 2- tétrahydrofuryl ou cycloalkyl (C 5-C 7)), un groupement cycloalkyl (C 3- C 7), ou, un groupement phényl ou benzyl, chacun étant substitué par un groupement amino convenablement protégé ou par un atome d'halogène, pour conduire au composé de formule (XI): Cl B /OR'4 CH B (XI) R/ \OR'5 dans laquelle R, R'4 et R'5 sont tels que définis précédemment, que l'on met en réaction avec le 1,1,1,3,3,3-hexaméthyldisilazane (HMDS) en présence de n-butyllithium pour conduire, après traitement en milieu acide, au composé de formule (VII), soit à partir d'un ester boronique a-chloré de formule (XII), préparé selon le procédé décrit par D S MATTESON et coll (Organometallics, 3, 1284-1288, 1984) et W RATHKE et coll (J Biol Chem, 265 ( 30), 18289-18297, 1990): Cl /OR'4 CH B (XII) R' (CH 2)p OR' dans laquelle R'4 et R'5 sont tels que définis plus haut, p est un entier égal à 3 ou 4 et R' représente un atome d'halogène ou groupement alkoxy, que l'on met en réaction avec le 1,1,1,3,3,3- hexaméthyldisilazane (HMDS) en présence de n-butyllithium pour conduire, après traitement en milieu acide, au composé de formule (VII). Les composés de la présente invention, outre le fait qu'ils soient nouveaux, présentent des propriétés pharmacologiques particulièrement intéressantes. Ce sont de puissants inhibiteurs de trypsine-line serine proteases qui présentent une importante selectivité vis-à-vis de la thrombine par rapport à d'autres serine proteases de la coagulation Ils possèdent d'autre part une meilleure activité par voie orale que le composé de référence DUP 714. Ces propriétés les rendent donc utiles dans le traitement des angines stables ou non, des maladies d'origine thrombotique et/ou donnant lieu à des complications thrombotiques ainsi que dans le traitement ou la prévention de l'infarctus du myocarde et des thromboses veineuses ou artérielles. Ils peuvent également être utilisés en association thérapeutique avec un thrombolytique. - L'invention s'étend aussi aux compositions pharmaceutiques renfermant comme principe actif au moins un composé de formule (I) avec un ou plusieurs excipients inertes, non toxiques et appropriés Les compositions pharmaceutiques ainsi obtenues pourront être présentées sous diverses formes, les plus avantageuses étant les comprimés, les dragées, les gélules, suppositoires, suspensions buvables, etc La posologie utile est adaptable selon la nature et la sévérité de l'affection, la voie d'administration ainsi que selon l'âge et le poids du patient Cette posologie unitaire varie de 1 à 500 mg par jour en une ou plusieurs prises. Les exemples suivants illustrent l'invention mais ne la limitent en aucune façon. Les produits de départ utilisés sont des produits de départ connus ou préparés selon des modes opératoires connus. Les préparations A et B conduisent à des intermédiaires utiles dans la préparation des composés de l'invention. Préparation A: 1-Amino-4-bromobutylboronate de (+)a-pinanediol, chlorhydrate Ce composé a été obtenu selon le procédé décrit par C KETTNER et coll. (J Biol Chem, 265 ( 30), 18289-18297, 1990) par réaction du bromure d'allyle sur le catécholborane, suivie d'une transestérification avec du (+)a-pinanediol puis d'une réaction d'homologation en présence de dichlorométhyllithium et enfin de la réaction avec de l'hexaméthyl- disilazane. Point de fusion: 1600 C Pouvoir rotatoire:lai D 25 = + 16,5 (c = 1 %, éthanol) Microanalvse élémentaire: C % H % N% Cl% calculé 45,88 7,15 3,82 9,67 O trouvé 45,82 7,09 4,13 9,85 11 - Préparation B: ( 1-Amino-1- cyclopentyl)méthylboronate de (+)a-pinanediol, chlorhydrate Stade A: Dichlorométhylboronate de (+)a-pinanediol Ce composé a été synthétisé selon le procédé décrit par W RATHKE et coll. (J Organomet Chem, 122, 145-149, 1976) à partir de dichlorométhane et de (+)a-pinanediol et est purifié par distillation sous vide. Point d'ébullition: 125 C (p = 0,4 mm/Hg) Stade B: Cyclopentyl chlorométhylboronate de (+)a-pinanediol A une solution contenant 4,75 mmoles du composé obtenu au stade précédent dans 7 ml de tétrahydrofurane anhydre refroidie à -78 C sont ajoutées, goutte à goutte, 4,75 mmoles de chlorure de cyclopentylmagnésium. L'ensemble est maintenu une heure à O C, puis après retour à température ammbiante, le THF est évaporé Le résidu est repris par un mélange éther- eau, la phase éthérée décantée, séchée et évaporée et conduit au produit attendu qui est purifié par chromatographie sur colonne de silice en utilisant comme solvant un mélange pentane/dichlorométhane ( 90/10). Stade C: ( 1-Amino-1-cyclopentyl)méthylboronate de (+)a-pinanediol, chlorhydrate Ce composé a été obtenu selon le procédé décrit par C KETTNER et coll. (J Biol Chem, 265 ( 30), 18289-18297, 1990) en utilisant le composé décrit au stade précédent. Pouvoir rotatoire: lalD 21 = + 13,4 (c = 1 %, méthanol) Les abréviations utilisées dans les exemples sont les suivantes: Ac représente acétyl, Bz représente benzyl, (D)Phe représente (D)-phénylalanyl, Phi représente ( 2 S,3 a S,7 a S)perhydroindole-2-carbonyl, Suc représente succinimido. 12 - Exemple 1: 1-l(Ac-(D)Phe-Phi)aminol-4-aminobutylboronate de (+)apinanediol, méthane sulfonate Stade A: Ac-(D)Phe-Phi-O Bz En utilisant la technique de couplage peptidique (DCC/HOBT) décrite par W KONIG et R GEIGER (Ber, 103, 788, 1970) et le diméthylformamide anhydre comme solvant, le produit attendu est préparé à partir de 73 mmoles de Phi-O Bz et de Ac-(D)Phe-OH et est purifié par chromatographie sur colonne de silice en utilisant comme éluant un mélange dichlorométhane/éthanol ( 97/3). Rendement: 76 % Stade B: Ac-(D)Phe-Phi-OH mmoles du produit obtenu au stade précédent dans 140 ml d'éthanol sont hydrogénées sous une pression d'hydrogène de 4 kg pendant 12 heures en présence de 2 g de palladium/C à 10 % anhydre Après filtration du catalyseur, le produit attendu est obtenu après évaporation du solvant. Rendement: 97 % Stade C: Ac-(D)Phe-Phi-O Suc A 4,46 mmoles de Nhydroxysuccinimide dans 50 ml de dichlorométhane anhydre, sont ajoutées 4,46 mmoles du produit obtenu au stade précédent dans 20 ml de dichlorométhane anhydre puis 4,46 mmoles de dicyclohexylcarbodiimide dissous dans du dichlorométhane L'ensemble est agité 12 heures à température ambiante Après filtration de la dicyclohexylurée formée, le produit attendu est obtenu après évaporation. Stade D: 1-l(Ac-(D)Phe-Phi)aminol-4-bromobutylboronate de (+)a- pinanediol 1 mmole du composé obtenu dans la préparation A dans 10 ml de dichlorométhane anhydre et 1 mmole du composé obtenu au stade précédent sont placées sous atmosphère d'argon à -20 C 14 ml de triéthylamine sont 13 - alors ajoutés goutte à goutte et l'ensemble est maintenu 30 minutes à -20 C Après retour à température ambiante, le mélange est agité une nuit sous atmosphère d'argon Après reprise par de l'acétate d'éthyle, lavage à l'eau, au bicarbonate de sodium, à l'eau, à l'acide chlorhydrique 0,2 N et enfin à l'eau, la phase organique est séchée et évaporée Le produit attendu est obtenu après purification sur "sephadex". Rendement: 90 % Stade E: 1-l(Ac-(D)Phe-Phi)aminol-4-azidobutylboronare de (+)a-pinanediol 1,5 mmoles du produit obtenu au stade précédent dans 3 ml de diméthylformamide anhydre sont placées à 100 C en présence de 3 mmoles d'azoture de sodium pendant 4 heures Après 12 heures à température ambiante, l'ensemble est repris par un mélange acétate d'éthyle/eau, la phase organique est lavée plusieurs fois, séchée et évaporée et conduit au produit attendu. Rendement: 95 % Stade F: 1-l(Ac-(D)Phe-Phi)aminol-4-aminobutylboronate de (+)a-pinanediol, méthane sulfonate 1,4 mmoles du composé obtenu au stade précédent dans 25 ml de méthanol anhydre sont hydrogénées en présence de 1,4 mmoles d'acide méthane sulfonique en utilisant 50 mg de palladium/C à 10 % comme catalyseur, pendant 2 heures Après filtration du catalyseur, rinçage et évaporation, on obtient le produit attendu. Rendement: 95 % Exemple 2: 1-l(Ac-(D)Phe-Phi)aminoll-4guanidinobutylboronate de (+)a-pinanediol, méthane sulfonate 1,3 mmoles du composé obtenu dans l'exemple 1 et 10,3 mmoles de cyanamide sont portées à reflux dans 8 ml d'éthanol anhydre pendant 10 jours Après évaporation de l'éthanol, passage sur résine sephadex en reprenant le résidu par du méthanol, on obtient le produit attendu. 14 - Rendement: 91 % Exemple 3: Acide 1-l(Ac-(D)Phe-Phi)aminol-4guanidinobutyl boronique, acétate 1,2 mmoles du composé obtenu dans l'exemple 2 dans 30 ml de dichlorométhane anhydre sont refroidies à -78 C sous atmosphère d'argon. 4,8 mmoles de trichlorure de bore sont alors additionnées goutte à goutte en 30 minutes La température est amenée à O C et l'ensemble agité 30 minutes 10 ml d'eau glacée sont alors ajoutés et après 15 minutes d'agitation, le mélange est amené à température ambiante La phase organique est décantée, extraite par 10 ml d'un mélange eau/acide acétique ( 90/10) La phase aqueuse restante est lavée à l'éther et les phases aqueuses réunies sont évaporées Le résidu est purifié sur Bio-gel en utilisant comme éluant un mélange eau/acide acétique ( 90/10) et conduit au produit attendu qui est lyophilisé. Microanalvse élémentaire: C % H % N % calculé 56,45 7,54 14,63 trouvé 54,71 7,26 13,59 Exemple 4: Acide 1-l(Ac-(D)Phe-Phi)aminol-4-aminobutyl boronique, acétate Ce composé a été obtenu selon le même procédé que celui décrit pour l'exemple 3 en utilisant comme produit de départ le composé de l'exemple 1. Exemple 5: 1-l(Ac-(D)Phe-Phi)aminol-1- (cyclopentyl)méthylboronate de pinanediol Stades A à C: ces stades sont identiques aux stades A à C de l'exemple 1. Stade D: - Ce composé a été obtenu selon le procédé décrit au stade D de l'exemple 1 à partir du composé obtenu au stade C et du composé obtenu dans la préparation B. Rendement: 90 % Exemple 6: Acide 1l(Ac-(D)Phe-Phi)aminol-1-(cyclopentyl)méthyl boronique, acétate Ce composé a été obtenu selon le procédé décrit pour l'exemple 3 en utilisant comme produit de départ le composé de l'exemple 5. Etude pharmacologique des composés de l'invention Exemple 7: Activité antithrombotique Le modèle de thrombose expérimentale utilisé est celui d'une thrombose veineuse induite chez le rat Wistar mâle par ligature de la veine cave inférieure sous la veine rénale gauche. Les animaux à tester sont anesthésiés par administration intrapéritonéale de Brietal G (méthothexital sodique) à la dose de 1 mg/kg. La ligature est alors réalisée Le produit à tester est injecté 2 heures plus tard par voie sous cutanée dans la région sous clavière gauche 4 heures après cette injection, le sang est prélevé par voie intracardiaque directe, la veine est excisée et le caillot est récupéré puis pesé après passage dans une étuve à 370 C pendant 12 heures. Les composés de l'invention ont été testés aux doses de 0,1, 0,25 et 0,5 mg/kg et comparés au DUP 714 utilisé comme composé témoin. Les résultats de ce test ont montré que les composés de l'invention permettent une diminution significative du poids du caillot aussi importante que celle observée lors de l'injection du composé de référence (DUP 714) A 0,25 mg/kg, les composés de l'invention inhibent la formation du caillot d'environ 50 %. 16 - Exemple 8: Activité anticoagulante, mesure du temps de thrombine En présence d'une quantité standard de thrombine, un plasma normal coagule en un temps défini et constant, appelé temps de thrombine (TT). Tout allongement de ce temps traduit une anomalie de la fibrinoformation (coagulation). Les rats Sprague-Dawley sont anesthésiés avec du pentobarbital sodique ( 60 mg/kg, i p), l'artère carotide est cathétérisée et les prélèvements sanguins réalisés dans une solution de citrate trisodique ( 0,109 M) Un plasma pauvre en plaquettes est obtenu par centrifugation des échantillons LO sanguins ( 3000 g, 15 minutes). Le temps de thrombine est réalisé avec le réactif thrombine Prest et déterminé automatiquement en utilisant un coagulomètre. L'antagoniste ou le solvant ( 10 lil) est additionné au plasma ( 90 lil), puis incubé 2 minutes à 371 C 100 pil de thrombine sont ajoutés en déclenchant le chronomètre. Dans ces conditions, les TT obtenus dans le plasma témoin sont de l'ordre de 30 secondes L'activité d'un antagoniste est évaluée par sa capacité à prolonger ce temps de thrombine par rapport au témoin. Dans ces conditions, les composés de l'invention permettent une prolongation du temps de thrombine de 50 fois et plus L'effet des inhibiteurs est mesuré et la concentration qui multiplie par 2 le temps de thrombine (Ctt 2) est déterminée Les résultats sont reproduits dans le tableau suivant Produits Ctt 2 ("i M) ex 3 0,13 DUP 714 0,34 Cette prolongation est 3 fois supérieure à celle obtenue avec le composé de référence (DUP 714). 17 - Exemple 9: Inhibition de la thrombine et des sérines protéases de la coagulation Pour évaluer in vitro l'activité inhibitrice des produits boro Arginiques sur la thrombine humaine (Sigma, activité spécifique 3230 UNIH/mg), le fibrinogène humain (purifié ou plasmatique) (Fg) ou le substrat chromogène H-D-Phe-Pip-Arg-p Na ( 0,66 m M, 52238, Kabi) ont été ajoutés à une quantité donnée de thrombine ( 2 ou 10 pmoles/ml) préalablement incubée avec ou sans l'inhibiteur à tester ( 200 , 10 minutes). Pour évaluer in vitro la sélectivité de ces produits vis-à-vis de différentes sérines protéases de la coagulation, le même protocole a été appliqué à la plasmine humaine purifiée ( 10 pmoles/ml, Stago), au facteur X activé humain purifié ( 10 pmoles/ml, Stago) et à la protéine C activée humaine purifiée ( 10 pmoles/ml, Stago) en utilisant pour substrats différents peptides paranitroanilidés: H-D-Val-Leu-Lys-p Na ( 0,75 m M, 52251, Kabi) pour la plasmine, Bz-Ile-Glu-Gly-Arg-p Na ( 0,56 m M, 52222, Kabi) pour le facteur Xa, protéine C activée. Inhibiteurs, enzymes et substrats sont dilués dans le même tampon (tampon phosphate 0,01 m M, p H 7,4, contenant 0,12 M de chlorure de sodium et )O 0,05 % de sérum albumine bovine) puis distribués dans une microplaque en polystyrène sous un volume de 50 pl. La fibrine formée par la thrombine ou par le paranitroanilide libéré par l'action de la sérine protéase est mesurée spectrophotométriquement à 405 nm après 15 à 30 minutes de réaction à 20 C. > 5 Le tableau ci-dessous donne le pourcentage d'activité enzymatique en présence du produit de référence (DUP 714) et du composé de l'exemple 3 par rapport au contrôle sans produit Les résultats démontrent que le composé de l'exemple 3 est un inhibiteur de la thrombine humaine plus puissant que le composé de référence tout en conservant une sélectivité O équivalente vis-à-vis des autres sérine-protéases de la coagulation. 18 - Le ratio R est égal au rapport des concentrations de l'inhibiteur sur celle de l'enzyme utilisée dans les tests. Exemple 10 Mesure de l'activité anti-coagulante ex vivo. Administration des produits per os (Rat éveillé). Les rats OFA, à jeun, sont anesthésiés à l'éther L'artère caudale est dégagée et cathétérisée Le cathéter est purgé avec du sérum physiologique citraté ( 1/40) Après installation du cathéter, l'animal est placé dans une cage à contention et 1,5 cm 2 de sang artériel est prélevé sur citrate 0,109 M ( 1/9). 1 heure après le réveil de l'animal, les produits à tester sont administrés per os à une dose unique de 10 mg/kg. Des prélèvements artériels ( 1,5 ml) sont alors effectués à 30 minutes, minutes, 2 heures. L 5 A chaque prélèvement, 1,5 ml de sérum physiologique est réinjecté à l'animal. Les tubes de sang sont centrifugés 15 minutes à 3000 g pour la préparation du plasma Le temps d'apparition du phénomène de coagulation est mesuré après addition de thombine Prest. )o Les composés de l'invention augmentent de façon dose- dépendante le temps de thrombine (TT) et leur activité est supérieure à celle obtenue avec le composé de référence (DUP 714) durant les 2 premières heures. Les résultats sont reproduits dans le tableau suivant et montrent les indices d'augmentation du temps de thrombine. Thrombine Inhibiteur R Plasmine Facteur Xa Protéine Ca Fg 52238 DUP 714 1 45 % 42 % 81 % 90 % 86 % ex 3 1 27 % 13 % 72 t 92 83 % 19 - Exemple 11 Mesure de l'activité anti-coagulante ex vivo. Administration des produits par voie intraveineuse (i v) Les rats OFA, à jeun ou non, sont anesthésiés au pentobarbital ( 60 mg/kg, i p) L'artère carotide et la veine jugulaire sont dégagées et cathétérisées Les cathéters sont purgés avec du sérum physiologique citraté ( 1/40) Après installation des cathéters, un prélèvement de 1,5 cm 3 de sang artériel est effectué sur citrate 0,109 M ( 1/9). minutes après, le produit à tester est administré sous un volume de 1 ml en i v. Des prélèvements artériels ( 1,5 ml) sont alors effectués à 1 minute 30, , 15, 30 et 60 minutes. A chaque prélèvement, 1,5 ml de sérum physiologique citraté est réinjecté à l'animal via la carotide. Les tubes de sang sont centrifugés 15 minutes à 3000 g (préparation de plasma). lul de plasma sont incubés avec 100 lil de céphaline activée Le temps d'apparition du phénomène de coagulation est mesuré, après addition de 100 lil de calcium. Les composés de l'invention, testés à la dose de 0,5 mg/kg augmentent de façon dose-dépendante le temps de céphaline activée (TCA) L'effet est plus important que celui du composé de référence (DUP 714). L'augmentation du TCA notée avec les composés de l'invention est toujours significative 60 minutes après son administration Les résultats sont reproduits dans le tableau suivant et montrent les indices d'augmentation du temps de coagulation. Temps (heures) Produits 0,5 1 2 DUP 714 4,0 3,7 3,9 ex 3 7,7 7,1 5,6 - Composition pharmaceutique Exemple 12: Composition pharmaceutique Formule de préparation pour 1000 comprimés dosés à 10 mg: Composé de l'exemple 3 10 g Hydroxypropylcellulose 2 g Amidon de blé 10 g Lactose 100 g Stéarate de magnésium 3 g Talc 3 g Temps (minutes) Produits 1,5 5 15 30 60 DUP 714 7,6 3,4 2,0 1,7 1,4 ex 3 7,3 4,7 3,6 2,6 2,0 21 - REVENDICATIONS 1 Composés de formule (I): j OR 4 R 1 NH H CO A CO NH CH B (I j OR 5 R 2 R 3 dans laquelle: R 1 représente un atome d'hydrogène ou un groupement acyle (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, benzyle, alkoxycarbonyle (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, benzyloxycarbonyle ou phénoxycarbonyle, R 2 représente un groupement: benzyle, substitué ou non sur le noyau phényle par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupements alkyle (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, alkoxy (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, hydroxy ou bicyclooct-1-yle (substitué ou non par un groupement hydroxy ou alkoxy (C 1-C 6) linéaire ou ramifié), (pyridin- 2-yl)méthyle, L 5 diphénylméthyle, fluorényle, naphtylméthyle, (dicyclopropylméthyl)méthyle, ou, 2-indanyle, 0 R 3 représente un groupement: alkyle (C 2-C 4) linéaire ou ramifié substitué par un groupement alkoxy (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, phénoxy, guanidino, amidino, amino, 2-tétrahydrofuryle ou cycloalkyle (C 3-C 7), guanidinophényle, amidinophényle, aminophényle, guanidinobenzyle, amidinobenzyle, aminobenzyle, ou, cycloalkyle (C 3-C 7), R 4 et R 5 représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle (C 1-C 6) linéaire, j-OR 4 ou B forment un ester boronique de pinanediol, -OR 5 22 A représente l'un quelconque des groupements suivants: N CH dans lequel: A 1 représente avec les atomes d'azote et de carbone avec lesquels il est lié une structure polycyclique choisie parmi les structures suivantes: perhydroindole, 2-azabicyclol 2 2 2 loctane, 2-azabicyclol 3 3 0 loctane, 2-azabicyclol 2 2 1 lheptane, perhydroisoindole, indoline, isoindoline, perhydroquinoléine, perhydroisoquinoléine, 1,2,3,4-tétrahydroquinoléine, 1,2,3,4-tétrahydroisoquinoléine, thiazolidine éventuellement substituée par un ou plusieurs groupements alkyl (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, N CH 2 dans lequel: I A 2 A 2 représente un groupement cycloalkyle (C 3-C 7) ou 2-indanyle, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 2 Composés de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle Rl représente un groupement acétyl, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 3 Composés de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle R 2 représente un groupement benzyl, leurs énantiomères, diastéréoisomères 23 - et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 4 Composés de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle A représente un groupement N CH tels que défini dans la revendication 1, A 1-) leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. Composés de formule (I) selon la revendication t dans laquelle A représente un groupement N CH 2 tels que défini dans la revendication 1, A 2 leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 6 Composés de formule (I) selon la revendication 4 dans laquelle A 1 représente avec l'atome d'azote et de carbone avec lesquels il est lié un cycle perhydroindole, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 7 Composés de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle R 3 représente un groupement guanidinoalkyle (C 2-C 4) linéaire ou ramifié, leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 8 Composés de formule (I) selon la revendication 1 dans laquelle R 3 représente un groupement cycloalkyle (C 3-C 7), leurs énantiomères, diastéréoisomères et épimères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 9 Composé de formule (I) selon la revendication 1 qui est l'acide 1- l(Ac-(D)Phe-Phi)aminol-4-guanidinobutyl boronique, Ac représentant acétyl, (D)Phe représentant (D)-phénylalanyl, Phi représentant ( 2 S,3 a S,7 a S) perhydroindole-2-carbonyl, ses isomères ainsi que ses 24 - sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. Procédé de préparation des composés de formule (I) selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait réagir un amino- acide protégé de formule (II), dont on a éventuellement séparé les isomères par une technique classique de séparation: R'I NH H C 02 H (I) R 2 dans laquelle: R'I représente un groupement acyle (Cl-C 6) linéaire ou ramifié, benzyle, alkoxycarbonyle (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, benzyloxycarbonyle ou phénoxycarbonyle, et R 2 a la même signification que dans la formule (I), que l'on fait réagir selon une technique de couplage peptidique avec un deuxième amino-acide protégé de formule (III) dont on a éventuellement séparé les isomères selon une technique classique de séparation, HA C 02 CH 2 C 6 H 5 (III) dans laquelle A a la même signification que dans la formule (I), pour conduire au composé de formule (IV): R'I NH CH CO A C 02 CH 2 C 6 H 5 (IV) I R 2 dans laquelle R'I, R 2 et A ont la même signification que précédemment, dont on déprotège la fonction acide par hydrogénation catalytique pour conduire au composé de formule (V): R'I NH CH CO A C 02 H (V) R 2 dans laquelle R'l, R 2 et A ont la même signification que précédemment, - que l'on met en réaction avec du NI-hydroxysuccinimide en présence de 1,3-dicyclohexylcarbodiimide en milieu anhydre, pour conduire au composé de formule (VI): R'l NH CH CO A CO 2 Suc (VI) I R 2 dans laquelle R'1 I, R 2 et A ont la même signification que précédemment et Suc représente un radical succinimido, que l'on met en réaction en milieu basique avec un composé de formule (VII): /-O R'4 H 2 N CH B(VII) | \ O R'5 R'3 dans laquelle: R'3 représente un groupement: alkyle (C 2- C 4) linéaire ou ramifié substitué par un atome d'halogène ou un groupement alkoxy (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, phénoxy, 2- tétrahydrofuryle ou cycloalkyle, cycloalkyle (C 3-C 7), phényle ou benzyle, chacun étant substitué par un atome d'halogène ou un groupement amino convenablement protégé, R'4 et R'5 représente chacun un groupement alkyle (C 1-C 6) linéaire ou ramifié, "-OR'4 O ou, B forment un ester boronique de pinanediol, -OR'5 pour conduire: soit au composé de formule (I/a), cas particulier des composés de formule (I): 26 - OR'4 R'1 NH CH CO A CO NH CH B(I/a) l l OR' R 2 R'3 a dans laquelle R'I, R 2, A, R'4 et R'5 ont la même signification que précédemment et R'3 a représente un groupement alkyle (C 2-C 4) linéaire ou ramifié (substitué par un groupement alkoxy (CI-C 6) linéaire ou ramifié, phénoxy, 2-tétrahydrofuryle ou cycloalkyle (C 3- C 7)) ou un groupement cycloalkyle (C 3-C 7), soit au composé de formule (VIII): OR 14 R'l NH CH CO A CO NH CH B (VIII) l OR 5 R 2 R'3 b dans laquelle R'l, R 2, A, R'4 et R'5 ont la même signification que précédemment et R'3 b représente un groupement: alkyle (C 2-C 4) substitué par un atome d'halogène, phényle ou benzyle, chacun étant -substitué par un atome d'halogène ou un groupement amino convenablement protégé, composé de formule (VIII): o qui lorsque R'3 b représente un groupement: alkyle substitué par un atome d'halogène, phényle ou benzyle, chacun étant substitué par un atome d'halogène, peut être transformé en dérivé cyano correspondant par action du cyanure de cuivre puis en dérivé amidino correspondant de formule (I/b), cas particulier des composés de formule (I), par action de l'ammoniaque: OR'4 R'1 NH CH CO A CO NH CH (I/b) I I R 2 R'3 c 27 - dans laquelle R'1, R 2, A, R'4 et R'5 ont la même signification que précédemment et R'3 c représente un groupement alkyle, phényle ou benzyle, chacun étant substitué par un groupement amidino, o qui lorsque R'3 b représente: un groupement alkyle substitué par un atome d'halogène peut être transformé en dérivé azido correspondant par action de l'azoture de sodium, puis par hydrogénation catalytique en dérivé amino correspondant de formule (I/c), cas particulier des composés de formule (I), ou, un groupement phényle ou benzyle, chacun étant substitué par un groupement amino protégé, peut subir une déprotection pour conduire au composé de formule (I/c), cas particulier des composés de formule (I): j OR'4 R'1 NH CH CO -A CO NH CH B (I/c) I I R 2 R'3 d dans laquelle R'I, R 2, A, R'4 et R'5 ont la même signification que précédemment et R'3 d représente un groupement alkyle, phényle ou benzyle, chacun étant substitué par un groupement amino, composé de formule (I/c), dont on peut transformer le radical amino du groupement R'3 d en radical guanidino par réaction avec du cyanamide, pour conduire au composé de formule (I/d), cas particulier des composés de formule (I): OR'4 R'1 NH CH CO A CO NH CH B (I/d) l l ",OR 1 R 2 R'3 e dans laquelle R'I, R 2, A, R'4 et R'5 ont la même signification que précédemment et R'3 e représente un groupement alkyle, phényle ou benzyle, chacun étant substitué par un groupement guanidino, 28 - composé de formule (I/a), (I/b), (I/c) ou (I/d) dont on déprotège, si on le souhaite, la fonction amine terminale et que l'on transforme, en milieu inerte, à l'aide de trichlorure de bore, en acide boronique de formule (I/e), cas particulier des composés de formule (I): OH D 5 R 1 NH CH -CO A CO NH CH B (I/e) l l OH I I R 2 R 3 dans laquelle R 1, R 2, A et R 3 ont la même signification que dans la formule (I), composé de formule (I/a), (I/b), (I/c), (I/d) ou (I/e): que l'on purifie éventuellement selon une technique classique de purification, dont on sépare, si on le souhaite, les énantiomères selon une technique classique de séparation et que l'on transforme, le cas échéant, en leurs sels d'addition à un acide ou une base pharmaceutiquement acceptable. 11 Compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif au moins un composé selon l'une quelconques revendications 1 à 9, seul ou en combinaison avec un ou plusieurs véhicules inertes, non toxiques pharmaceutiquement acceptables. 12 Compositions pharmaceutiques selon la revendication 11 utiles en tant qu'inhibiteurs de trypsine-like serine proteases. 13 Compositions pharmaceutiques selon la revendication 12 utiles en tant qu'inhibiteurs de thrombine.