FR 2694019 A1 19940128 FR 9209053 A 19920722 i PROCEDE DE FABRICATION DE MANNITOL La présente invention concerne un procédé d'obten- tion de mannitol. L'hydrogénation catalytique du mannose s'effectue avec un rendement stoechiométrique et fournit le mannitol. L'hydrogénation catalytique du fructose permet aussi d'obtenir le mannitol, mais le rendement n'est pas stoechio- métrique puisque l'hydrogénation du fructose n'est pas stéréospécifique et fournit du sorbitol en quantité égale. Le mannitol est utilisé largement dans la fabrica- tion du chewing-gum, des bonbons ou des excipients pharma- ceutiques sans sucre Cependant, l'obtention de mannose de pureté élevée est extrêmement difficile à réaliser et elle est onéreuse et la fabrication du mannitol n'est générale- ment réalisée industriellement qu'à partir de sirops de fructose, ce qui génère une quantité considérable de sorbitol. Un procédé ancien consistait à hydrogéner un sirop de saccharose inverti, constitué à parts égales de glucose et de fructose et ne permettait d'obtenir qu'un sirop d'une teneur de 25 * de mannitol environ. Un procédé plus récent décrit dans le brevet américain US-4 029 878, déposé en 1975, a consisté à procéder à l'épimérisation par voie chimique du glucose en mannose, l'hydrogénation de ce sirop épimérisé fournissant des sirops d'une teneur de 30 % de mannitol environ. Une amélioration de ce procédé décrite dans le brevet américain US-4 173 514 déposé en 1977, a consisté à isomériser ces sirops épimérisés pour transformer une partie du glucose non épimérisé en fructose Les équilibres thermodynamiques de ces réactions et les conditions indus- trielles de leur mise en oeuvre conduisent à l'obtention de mélanges ternaires glucose/mannose/fructose dans des proportions respectives d'environ 44/28/28 permettant d'obtenir par hydrogénation des sirops d'une teneur en mannitol d'environ 42 %. L'hydrogénation des sirops à haute teneur en fructose conduit quant à elle à des sirops d'une teneur d'environ 48 % en mannitol, et l'hydrogénation de fructose pur conduirait à des sirops d'une teneur en mannitol d'envi- ron 50 %. Cependant, ces matières premières sont relativement onéreuses et ne permettent pas de fabriquer le mannitol dans les meilleures conditions économiques. Tous ces procédés ont en outre pour inconvénient de générer une quantité considérable d'un sous-produit conte- nant essentiellement du sorbitol, mais contenant aussi du mannitol qu'on ne peut arriver à cristalliser et dont la perte amenuise encore les rendements C'est ainsi que dans l'ordre o ils ont été cités précédemment, les procédés décrits ci-dessus ne permettent d'obtenir respectivement que environ 12 %, 17,5 %, 32 %, 39 % et 40 % de mannitol cristallisé pur par rapport aux sucres mis en oeuvre à l'étape d'hydrogénation catalytique. Cela signifie aussi que même le procédé offrant le rendement le plus élevé, c'est-à-dire celui consistant à hydrogéner du fructose, génère cependant 1,58 kg d'un sous- produit difficilement valorisable contenant 85 % de sorbitol et 15 % de mannitol pour chaque kilogramme de mannitol cristallisé chimiquement pur produit par ce procédé. Ce dernier procédé souffre également de l'inconvé- nient de nécessiter la mise en oeuvre d'une matière relati- vement chère: les sirops à très haute teneur en fructose. Quoique le plus performant en termes de rendement, il demandait donc à être amélioré. Il y a de nombreuses années, PALLERONI et DOUDOROFF ont isolé d'un Pseudomonas saccharophila une enzyme qu'ils nommèrent mannose isomérase, capable d'interconvertir le fructose et le mannose dans les proportions respectives de 71/29 (J Biol Chem, 218, pages 535 à 548; 1956). Une enzyme semblable a aussi été isolée par TAKASAKI d'un Streptomyces aerocolorigenes (Agr Biol Chem, Vol. 31, n 4, pages 435 à 440; 1967) et par ANDERSON et ALLISON (J Biol Chem 240, pages 2367 à 2372; 1965) d'un Aerobac- ter aerogenes sous le nom de D-Lyxose isomérase Beaucoup plus tard, ALLENZA (US Patent n 5 049 494 déposé en 1989) utilisa une mannose isomérase de Pseudomonas cepacia, extraite après rupture des parois cellulaires puis immobili- sée sur un support d'alumine imprégné de polyéthylène imine et réticulée au glutaraldéhyde, ceci afin d'isomériser de façon continue une matière première contenant du mannose tele que les lessives résiduaires de papeterie, dans le but de fabriquer économiquement du fructose Il émit alors l'hypothèse que le fructose formé pourrait être séparé du mannose par une technique chromatographique ou par sépara- tion à l'aide de membranes Toutefois, pour ce qui concerne l'obtention de mannose pur, matière première préférable pour la réalisation de son invention, il préconisait d'isoler celui-ci des autres sucres par précipitation de son dérivé bisulfitique ou du méthylmannoside, aveu manifeste du peu d'efficacité de ces techniques chromatographiques ou membranaires. En 1982, HORWATH (brevet américain US-4 492 755) avait isomérisé le L-fructose en L-mannose à l'aide d'une L- mannose isomérase produite par un mutant de Klebsiella aerogenes et séparait le mannose formé et le fructose résiduel par cristallisation sélective des dérivés d'addi- tion de ces sucres avec la phénylhydrazine et régénération du mannose à partir de sa phénylhydrazone. En 1981 KRUSE et al (demande de brevet européen n 74 713) préconisaient quant à eux d'enrichir le mannose contenu dans un sirop de glucose par précipitation sous forme d'un complexe mannose/chlorure de sodium. Tous ces procédés de purification du mannose font intervenir des dérivés chimiques et sont difficilement industrialisables puisqu'il faut ensuite régénérer le mannose. La séparation chromatographique de mélanges de glucose et de fructose a été décrite depuis longtemps et de nombreuses fois, aussi bien sur résines cationiques que sur zéolithes Elle permet de préparer les sirops à très haute teneur en fructose La fraction de glucose enrichi est toujours éluée un peu avant la fraction de fructose enrichi. On consultera ainsi avec intérêt le brevet américain no 3 044 904 déposé en 1960 par CENTRAL AGUIRE SUGAR COMPANY, pour ce qui concerne la chromatographie des mélanges de glucose et de fructose sur des résines cationiques, et le brevet américain US 4 226 977 déposé en 1976 par UNION OIL PRODUCTS, pour ce qui concerne la chromatographie de ces mélanges sur des zéolithes. La séparation chromatographique de mélanges de glucose et de mannose a également été décrite depuis longtemps et de nombreuses fois, sur résines cationiques comme sur zéolithes, dans le but essentiellement de produire des sirops à haute teneur en mannose, aptes à fournir par hydrogénation le mannitol avec un rendement élevé Toute- fois, la séparation chromatographique de ces deux sucres s'avère très peu efficace Dans ce cas aussi, la fraction de glucose enrichi est toujours éluée un peu avant la fraction de mannose enrichi On consultera avec intérêt le brevet anglais N O 1 540 556 déposé en 1977 par IMPERIAL CHEMICAL INDUSTRIES, pour ce qui concerne la chromatographie des mélanges de glucose et de mannose sur des résines cationi- ques, et la demande de brevet européen no 115 631 déposée en 1983 par UNION CARBIDE, pour ce qui concerne la chromatogra- phie de ces mélanges sur des zéolithes. La demande de brevet européen n 302 970 déposée en 1987 par UNION OIL PRODUCTS, relative à la séparation de différents aldohexoses et cétohexoses montre d'ailleurs clairement que si le glucose se sépare un peu du mannose et davantage du fructose sur des zéolithes, mannose et fructose ne se séparent pratiquement pas La sélectivité fructose/mannose de l'adsorbant n'est en effet que de 1,68 alors qu'elle est de 4,84 pour fructose/glucose et de 2,88 pour mannose/glucose ( 4,84: 1,68). Si une sélectivité des adsorbants de l'ordre de 5 a permis une véritable explosion de la fabrication des sirops de fructose par chromatographie des mélanges glucose/fructo- se, une sélectivité de l'ordre de 3 s'est cependant avérée insuffisante pour permettre le développement de l'obtention de sirops à haute teneur en mannose à partir de mélanges glucose/mannose, ces sirops à haute teneur en mannose devant cependant constituer la matière première idéale permettant d'obtenir le mannitol avec un rendement quasi- stoechiométrique. Or, la Société demanderesse a eu le mérite de trouver qu'une sélectivité aussi basse que 1,68 pouvait cependant être exploitée dans un procédé de fabrication de sirops à haute teneur en mannose, destinés tout particuliè- rement à la fabrication de mannitol par hydrogénation catalytique, dès lors que les sirops soumis à la séparation chromatographique présentent à la fois une teneur en fructose d'au moins 65 %, une teneur en mannose d'au moins % et une teneur en glucose inférieure à 15 % Ces teneurs, ainsi que les teneurs apparaissant dans la suite de la description de la présente demande de brevet sont, sauf indications contraires, exprimées en poids par rapport à la matière sèche. Le procédé de fabrication du mannitol conforme à 1 'invention comprend les étapes suivantes reprises schémati- quement en figure 1: dans une première étape Ml, un sirop de fructose contenant moins de 15 % de glucose est soumis à une isoméri- sation enzymatique conduisant à l'obtention d'un mélange de fructose et de mannose contenant au moins 15 % de mannose. dans une deuxième étape M 2, le susdit mélange est soumis à un traitement de séparation chromatographique conduisant à au moins deux fractions dont l'une est forte- ment enrichie en mannose (fraction X 1) et dont l'autre est fortement enrichie en fructose (fraction X 2). dans une troisième étape M 3, la fraction X 2 est, au moins partiellement, recyclée à l'étape d'isomérisation. dans une quatrième étape M 4, la fraction Xl fortement enrichie en mannose est soumise à une hydrogéna- tion catalytique. Le sirop de fructose peut être obtenu de manière connue en soi par chromatographie de mélanges de glu- cose/fructose provenant de saccharose inverti ou d'hydroly- sats d'amidon isomérisés Il peut aussi être obtenu par hydrolyse de l'inuline Dans les deux cas, il convient que ce sirop ne contienne pas plus de 15 % de glucose qui, se séparant mal du mannose, viendrait polluer de façon néfaste la fraction fortement enrichie en mannose issue de l'étape chromatographique. Ce sirop contient plus de 80 %, de préférence plus de 85 % et plus préférentiellement encore plus de 90 % de fructose. Selon une variante avantageuse du procédé selon l'invention, le sirop de fructose servant de matière première est un sirop obtenu par chromatographie d'hydroly- sats d'amidons isomérisés et il contient plus de 95 % de fructose. L'isomérisation enzymatique du fructose en mannose est effectuée de manière continue ou discontinue selon des procédés connus en eux- mêmes et décrits par exemple par PALLERONI et DOUDOROFF (J Biol Chem, 218, pages 535 à 548; 1956), pour ce qui concerne l'isomérisation discontinue et par ALLENZA (brevet américain no 5 049 494), pour ce qui concerne l'isomérisation continue par enzyme immobilisée. Un moyen commode est de laisser agir une boue bactérienne obtenue par centrifugation ou filtration d'un moût de culture de Pseudomonas saccharophila sur un sirop de fructose d'une matière sèche de 40 % environ à un p H de 7,5 environ et à une température de 30 à 500 C, et de préférence de 400 C environ Il faut veiller dans ce cas à introduire les bactéries en quantité suffisante pour que la réaction d'isomérisation se déroule à une vitesse telle qu'on atteigne un pourcentage d'au moins 15 % de mannose en 24 à 30 heures au maximum, faute de quoi on se verrait contraint d'introduire un agent antiseptique dans le réacteur d'isomé- risation La découverte de mannose isomérase plus thermosta- ble permettrait d'éviter cette contrainte. Avantageusement, on procède à l'isomérisation du fructose en mannose de manière continue Dans ce cas l'enzyme peut être extraite des bactéries par sonication de celles-ci et l'extrait brut peut être adsorbé ou fixé par liaison covalente sur un support inorganique activé comme cela est décrit dans le brevet américain US 5 049 494. Un autre procédé d'immobilisation de l'enzyme, et qui est préférentiellement utilisé dans le procédé conforme à l'invention, consiste à immobiliser les cellules complètes au sein d'un réseau protéique constitué par exemple par de la gélatine réticulée à l'aide d'un agent pontant bifonc- tionnel comme le glutaraldéhyde On trouve une description d'un tel mode d'immobilisation des cellules bactériennes dans le brevet américain US 4 163 691 dont la Société demanderesse est titulaire Un tel procédé immobilise l'ensemble du potentiel enzymatique inclus à l'intérieur des cellules mais dans ce cas, l'absence de production de composés indésirables est due à la pureté du substrat qui ne contient essentiellement que du fructose. Il faut toutefois veiller à ce que la masse micro- bienne immobilisée ne contienne pas de glucose isomérase en quantité sensible, faute de quoi une partie du fructose serait isomérisée en glucose, ce qui nuirait grandement à l'efficacité du procédé Si tel est toutefois le cas, on ajoute un peu de calcium au sirop de fructose, ce qui inhibe la glucose isomérase sans affecter la mannose isomérase. On évite également de procéder à l'isomérisation à un p H trop supérieur à 7,5 car dans ce cas une partie du fructose serait isomérisée en glucose par catalyse chimique alcaline. De façon préférée, l'enzyme immobilisée est utilisée dans un réacteur en forme de colonne, calorifugée ou thermostatée et munie d'un fond poreux On percole le sirop de fructose au travers des particules de cette enzyme à une température de 30 à 500 C à un débit tel que l'on obtienne en sortie une proportion de mannose comprise entre 15 et 29 A. L'activité enzymatique emprisonnée dans le réacteur d'isomérisation est telle que sa concentration permette d'obtenir le pourcentage de mannose susmentionné avec un temps de séjour du sirop dans le réacteur de préférence compris entre 2 et 20 heures. Le sirop de fructose enrichi en mannose après l'étape d'isomérisation est alors soumis au fractionnement chromatographique Ce fractionnement chromatographique est effectué de manière connue en soi, de façon discontinue ou continue (lit mobile simulé), sur des adsorbants du type résines cationiques fortement acides, chargées préférentiel- lement à l'aide d'ions alcalins ou alcalinoterreux ou sur des zéolithes cationiques chargées avec les mêmes ions. Des exemples de tels procédés sont décrits notamment dans les brevets US 3 044 904, 3 416 961, 3 692 582, FR 2 391 754, 2 099 336, US 2 985 589, 4 024 331, 4 226 977, 4 293 346, 4 157 267, 4 182 623, 4 332 623, 4 405 455, 4 412 866 et 4 422 881. Selon un mode de réalisation préféré, le fractionne- ment chromatographique est réalisé en employant le procédé et appareillage décrits dans le brevet américain US 4 422 881 dont la Société demanderesse est titulaire. Quel que soit le procédé chromatographique retenu, on a recours de préférence en ce qui concerne l'adsorbant, à une résine cationique forte employée sous forme calcium et réticulée avec environ 4 à 10 * de divinylbenzène Les résines sont avantageusement de granulométrie homogène et comprises entre 100 et 800 microns. Le choix des paramètres du fractionnement chromato- graphique, parmi lesquels on note plus particulièrement le débit d'élution, le débit d'alimentation en sirop de fruc- tose isomérisé, le débit d'extraction de la fraction enrichie en mannose, le débit de la fraction enrichie en fructose et la composition des zones de désorption, d'ad- sorption et d'enrichissement est expliqué et illustré dans les exemples. Le choix de ces paramètres est effectué de telle manière que la fraction Xl ait une richesse en mannose, les pourcentages étant exprimés en poids par rapport à la matière sèche, comprise entre 30 et 80 %, de préférence entre 35 % et 70 % et plus préférentiellement encore entre % et 60 %, ainsi qu'une richesse en glucose inférieure à 15 % et de préférence inférieure à 10 %. Pour parvenir à ce résultat, ces paramètres sont choisis comme suit quand le fractionnement chromatographique est réalisé en utilisant les procédé et appareillage décrits dans le brevet US 4 422 881 et quand l'adsorbant utilisé est une résine cationique de faible granulométrie réticulée à 6 % de divynylbenzène et qu'elle est utilisée sous forme calcium: débit d'élution de 70 à 700 l/h/m 3 d'adsorbant, débit d'alimentation en sirop isomérisé de 10 à 100 l/h/m 3 d'adsorbant, débit d'extraction de la fraction enrichie en mannose: de 80 à 800 l/h/m 3 d'adsorbant, débit d'extraction de la fraction enrichie en fructose: 20 à 200 l/h/m 3 d'adsorbant. L'étape de fractionnement chromatographique amène la production conjointe de la fraction X 2, fortement enrichie en fructose, et éventuellement d'une fraction X 3 contenant du glucose existant comme impureté dans les sirops de fructose et dont il convient d'effectuer la purge périodique afin que le glucose ne s'accumule pas et que sa teneur ne dépasse pas, après recyclage de la fraction X 2 dans le sirop de fructose utilisé comme matière première, une valeur de % dans le sirop soumis au fractionnement chromatographi- que. La fraction X 2, fortement enrichie en fructose, présente de préférence la composition suivante, les pourcen- tages étant exprimés en poids par rapport à la matière sèche: de 76 à 97 % de fructose, de 2 à 24 % de mannose, de O à 15 %de glucose. Conformément à l'invention, cette fraction X 2 forte- ment enrichie en fructose est recyclée vers l'étape d'isomé- risation. Grâce au procédé conforme à l'invention qui tire profit des bénéfices combinés de l'isomérisation du fructo- se, de la séparation chromatographique du sirop isomérisé et du recyclage du fructose séparé non isomérisé, il devient possible de convertir avec un très fort rendement le fructose en mannose. La richesse en mannose de la fraction Xl, insuffi- sante en elle-même pour donner par hydrogénation du mannitol avec un bon rendement, s'avère cependant suffisante dans la mesure o l'impureté accompagnatrice, le fructose, génère elle aussi du mannitol par hydrogénation, compensant ainsi la faible sélectivité fructose/mannose de l'adsorbant. Qui plus est, les richesses en mannitol atteintes après l'étape d'hydrogénation permettent de cristalliser celui-ci à l'état pur en une seule opération de cristallisa- tion Il est même possible en séchant complètement cette fraction Xl d'obtenir avec un rendement total un mannitol technique de pureté très élevée Les procédés connus jusqu'alors, y compris le procédé d'hydrogénation directe des sirops de fructose isomérisés, ne permettaient pas d'obenir une richesse en mannitol suffisante et obligeaient à procéder à plusieurs recristallisations successives du mannitol. il C'est ainsi qu'un sirop à 25 % de mannitol obtenu à partir de saccharose par exemple obligeait à pratiquer trois cristallisations successives et qu'un sirop d'une richesse inférieure à 65 % de mannitol obligeait à pratiquer deux cristallisations successives. L'un des avantages essentiels du procédé selon l'invention réside donc dans le fait qu'il permet d'obtenir le mannitol cristallisé chimiquement pur dès lors que la richesse en mannose de la fraction X 1 est supérieure à 30 %, ce qui se traduit par une richesse en mannitol après hydrogénation supérieure à 65 %. Grâce au procédé selon l'invention, et en pratiquant plusieurs cristallisations successives sur les eaux mères, ce qui est rendu possible par la haute richesse des sirops obtenus après hydrogénation, le rendement en mannitol cristallisé par rapport au sucre (fructose) mis en oeuvre peut atteindre 70 % et davantage, la production de 1 kg de mannitol ne générant plus que la production de 0, 430 kg d'un sous-produit contenant 85 % de sorbitol, ce qui équivaut à une diminution d'un facteur de 3 3 de la production de sous- produit par rapport au meilleur procédé de l'art antérieur, utilisant le fructose comme matière première mais avec un rendement de 40 %. E X E M P L E S ISOMERISATION Une souche de pseudomonas saccharophila ATCC 15946 adaptée à la culture sur milieu au fructose a été cultivée dans les conditions décrites par PALLERONI et DOUDOROFF. Les cellules ont été centrifugées et la boue bactérienne obtenue a été additionnée d'une solution de gélatine à 50 % de matières sèches dans des proportions de kgs de solution de gélatine pour 200 kgs de boue. Le produit résultant a été injecté dans une filière perforée de 400 trous de 500 microns de diamètre immergée dans l'eau froide, conformément au procédé décrit dans le brevet français 2 353 562. La réticulation de la gélatine a été effectuée par contact de 15 heures des boues bactériennes ainsi filées dans une solution de glutaraldéhyde à 1 % maintenue à une température de 20 C Les fils formés ont été découpés en morceaux d'une longueur moyenne de 2 mm et ont été immédia- tement chargés dans des colonnes thermostatées à 350 C, d'une hauteur de 200 cm et d'un diamètre de 25 cm. On a percolé sur ces colonnes un sirop de fructose obtenu par refonte de fructose cristallisé, présentant une matière sèche égale à 40 % et un p H de 7,0 Les colonnes ont été alimentées à un débit de 30 litres/heure de sirop de fructose et on a recueilli au bas de ces colonnes un sirop de fructose isomérisé contenant 25 % de mannose et 75 % de fructose. Le sirop obtenu a été déminéralisé puis concentré à une matière sèche de 53 %. SEPARATION CHROMATOGRAPHIQUE Le fractionnement du sirop isomérisé riche en mannose a été effectué dans l'installation de séparation chromatographique continue dont les détails de construction et de fonctionnement sont décrits dans le brevet américain US 4 422 881, ces détails n'étant repris ici que pour ce qui est nécessaire à la compréhension du procédé Cette instal- lation comprend, comme montré à la figure 2 du brevet américain (reprise ici en tant que figure 2 et pour l'expli- cation détaillée de laquelle on se référera audit brevet américain), huit colonnes ou étages C 1 à C 8 de 200 litres chacun, remplis de résine cationique forte permutée sous forme calcium et d'une granulométrie comprise entre 200 et 400 microns du type DUOLITE C 204-2078. De par le calage des électrovannes, on établit dans cette installation une zone I de désorption de deux étages, une zone II d'adsorption de deux étages et une zone III d'enrichissement et de séparation du mannose relativement moins adsorbé et du fructose relativement plus adsorbé de quatre étages comme montré sur la figure 3, qui est une représentation schématique de l'installation selon la figure 2 et sur laquelle on n'a fait figurer que les colonnes C 1 à C 8, le dispositif de fermeture, en l'occurrence I'électrovanne 106, les canalisations d'alimentation en eau et en sirop isomérisé à fractionner riche en mannose montrées respectivement en 14 et 128, et la canalisation 148 d'extraction de sirop enrichi en fructose (fraction X 2) d'une part, et la canalisation 146 d'extraction du mannose (fraction Xl). Le dispositif de fermeture 106 maintient dans la configuration adoptée une étanchéité totale entre, d'une part, la zone III, qui est une zone d'enrichissement à l'extrémité de laquelle est récupérée la fraction enrichie en mannose et d'autre part la zone I de désorption du fructose, zone en tête de laquelle est introduite l'eau de désorption. Ce dispositif de fermeture assure le sens du passage de la phase liquide sur l'adsorbant sélectif. Une minuterie ajustée à 1500 secondes assure pour les débits indiqués dans le tableau I une alimentation en eau sur la première colonne de la zone I de désorption de la totalité du fructose, et une alimentation en un volume de sirop isomérisé riche en mannose sur le premier étage de la zone III compatible avec le volume d'adsorbant et sa capacité d'adsorption, de façon à obtenir un rendement d'extraction du mannose au moins égal à 7,5 % du mannose présent dans le sirop isomérisé et cela à une richesse au moins égale à 40 % en mannose Au terme des 1500 secondes, toutes les entrées et sorties, de même que le dispositif de fermeture 106 sont décalés d'un étage vers la droite. Les susdits taux d'extraction et pureté sont main- tenus constants en ajustant le débit de la pompe d'extrac- tion, non montrée, du fructose adsorbé La sortie de la fraction XI, éventuellement précédée d'une fraction X 3 contenant un peu de glucose, s'effectue à pression atmosphé- rique et son débit constant résulte de la différence entre les débits d'alimentation et le débit d'extraction. Le sirop isomérisé riche en mannose qui est intro- duit dans l'installation en tête de la zone d'enrichissement et de séparation III, présente une matière sèche de 53 % La température à l'intérieur des colonnes de séparation est maintenue à environ 70 C. La fraction X 1 enrichie en mannose, ainsi qu'éven- tuellement la fraction X 3, sont précédées d'une fraction d'eau pure ayant servi au désucrage de la colonne lors du cycle précédent Cette fraction d'eau pure est avantageuse- ment éliminée durant les dix-huit premières minutes de chaque cycle, ce qui permet d'accroître fortement la concentration des fractions de mannose enrichi. Le tableau I ci-après montre pour différentes conditions de conduite de l'installation les richesses et concentrations obtenues pour les deux fractions X 1 et X 2. Les conditions préférées pour la conduite du fractionnement chromatographique sont celles pour lesquelles la teneur en mannose de la fraction X 1 est comprise entre 40 et 60 % Une telle richesse en mannose est suffisante pour fournir après hydrogénation des sirops d'une teneur supé- rieure à 70 % de mannitol, richesse qu'il n'est pas indis- pensable de dépasser pour obtenir le mannitol cristallisé pur sans avoir à effectuer une recristallisation. En outre, dans ces conditions, le rendement d'ex- traction du mannose, que l'on peut exprimer comme étant le rapport du poids de mannose pur extrait dans la fraction Xl sur le poids de mannose pur contenu dans le sirop d'alimen- tation, est beaucoup plus élevé. TABLEAU I Débit d'alimentation du sirop & 60 60 60 60 53 % M S. Débit d'alimentation 372 372 372 372 eau ( 1/h) Débit de la fraction enrichie en 332 362 371 380 mannose ( 1/h) Débit de la fraction enrichieen 100 70 61 52 fructose (l/h) Matière sèche alimentée 40 40 40 40 en kg/h Matière sèche en % 1 % 10,6 % 15,2 % 20 % après élimination de l'excédent d'eau ( 18 mn) FRACTION Poids sec 0,925 kg 11,2 kg 16,8 kg 23,2 kg RICHE RICHE Richesse en mannose 81 60 51 40 EN (X) MANNOSE richesse en fructose 19 40 49 60 (X) Rdt d'extraction du 7,5 % 67,2 % 85,7 % 92,8 % mannose Matière sèche 34 % 35,8 % 33,5 % 28, 5 % FRACTION FRACTION Poids sec 39,075 kg 28,8 kg 23,2 kg 16,8 kg RICHE Richesse en mannose 23,6 11,4 6,2 4,2 EN (R) FRUCTOSE Richesse en fructose 76, 4 88,6 93,8 95,8 (R) Richesse en mannitol après hydrogénation 90, 5 80 75,5 70 w M (O (O 1 La fraction de fructose enrichie peut être isoméri- sée, dans les conditions déjà décrites précédemment, de façon séparée du sirop de fructose servant de matière première, mais elle peut aussi être mélangée à cette matière première et ce mélange peut être isomérisé comme un tout. La fraction Xl riche en mannose est hydrogénée de façon connue en soi Elle est d'abord concentrée à une matière sèche de 40 % puis hydrogénée à une température de 'C sous une pression d'hydrogène de 50 bars en présence de catalyseur au NICKEL de RANEY. On a obtenu dans tous les cas des sirops dont la richesse en mannitol est supérieure à 70 %, comme cela figure également dans le tableau I. REVENDICATIONS 1 Procédé de fabrication de mannitol, caractérisé par le fait: que dans une première étape on soumet un sirop de fructose contenant moins de 15 % de glucose à une isomérisa- tion enzymatique à l'aide d'au moins une enzyme capable d'interconvertir le fructose et le mannose, ladite isoméri- sation enzymatique conduisant à l'obtention d'un mélange de fructose et de mannose contenant au moins 15 % de mannose, que dans une seconde étape on soumet ledit mélange à un traitement de séparation chromatographique de façon à obtenir au moins deux fractions dont l'une (fraction Xl) est fortement enrichie en mannose et dont l'autre (fraction X 2) est fortement enrichie en fructose, que dans une troisième étape on recycle au moins partiellement la fraction X 2 en tête de l'étape d'isomérisa- tion enzymatique, que dans une quatrième étape on hydrogène la fraction Xl fortement enrichie en mannose de façon à obtenir un sirop riche en mannitol. 2 Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le sirop de fructose contient plus de 80 %, de préférence plus de 85 %, et plus préférentiellement encore plus de 90 % de fructose. 3 Procédé selon l'une ou l'autre des revendications 1 et 2, caractérisé par le fait que le mélange soumis au traitement de séparation chromatographique présente une teneur en fructose d'au moins 65 %, une teneur en glucose inférieure à 15 %, et une teneur en mannose supérieure à 15 %, de préférence comprise entre 15 et 29 %. 4 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que l'isomérisation enzymati- que du sirop de fructose est effectuée de manière disconti- nue ou continue à un p H d'environ 7 5 et à une température de 30 à 50 C, et de préférence en présence d'ions calcium. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait que l'on effectue le traite- ment chromatographique dans des conditions telles que la fraction Xl présente une richesse en mannose comprise entre et 80 %, de préférence entre 35 et 70 % et plus préféren- tiellement encore entre 40 et 60 %, ainsi qu'une richesse en glucose inférieure à 15 % et de préférence inférieure à 10 %. 6 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé par le fait que l'on effectue le traite- ment chromatographique dans des conditions telles que la fraction X 2 présente une teneur en fructose comprise entre 76 et 97 %, une teneur en mannose comprise entre 2 et 24 % et une teneur en glucose comprise entre O et 15 %. 7 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé par le fait que le sirop riche en mannitol obtenu présente une richesse en mannitol supérieure à 65 %. 8 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé par le fait que l'on soumet ultérieure- ment le sirop riche en mannitol à une seule étape de cristallisation de façon à obtenir du mannitol cristallisé.