FR 2689764 A1 19931015 FR 9204429 A 19920410 i Uti Lisation de dérivés de peptides pour La fabrica- tion de médicaments inhibiteurs des endopeptidases 24.15 et 24 16. La présente invention a pour objet l'utilisation de dérivés de peptides du type phosphonamide pour la fabrication de médicaments inhibiteurs des endopeptidases 24 15 et/ou 24 16. Les endopeptidases sont des enzymes appartenant à la famille des métallopeptidases contenant du zinc qui présentent la propriété d'inactiver certains neuromodulateurs agissant au niveau du cerveau tels que la neurotensine, et de détruire ainsi leurs effets pharmacologiques. Aussi, des inhibiteurs de ces endopeptida- ses seraient d'un grand intérêt pour pouvoir potentialiser les effets pharmacologiques associés à la neurotensine. On sait que certains dipeptides tels que Pro-Ile sont capables d'inhiber l'endopeptidase 24.16, comme il est décrit par Dauch et a L dans Eur J Biochem, vol 202, p 269-276, 1991 b Cepen- dant, cet inhibiteur de l'endopeptidase 24 16 a une constante d'inhibition Ki de 9 Op M, qui est beaucoup trop élevée, compte tenu de la solubilité de ce dipeptide, pour permettre son utilisation "in vivo" Par ailleurs, il n'a aucun effet inhibi- teur sur l'endopeptidase 24 15 à une concentration aussi élevée que 5 m M. Pour l'endopeptidase 24 15, on connaît toutefois un composé inhibiteur de cette enzyme qui est un peptide de formule: CPP-Ala-Ala-Tyr-p AB avec CPP représentant le radical carboxy-3-phénylpropy L et p AB représentant le p- aminobenzoate, présentant une constante d'inhibition de 16 n M, comme il est décrit par Orlowski et a L, Biochemistry, vol 27, p 597-602, 1988 Cet inhibiteur est donc beaucoup plus efficace que l'inhibiteur Pro-Ile de l'endopeptidase 24 16 mais il ne concerne pas l'endopeptidase 24 16 Il a toutefois un effet inhibiteur sur l'endopeptidase 24 16 qui correspond à une constante d'inhibition de 1 p M beaucoup trop élevée, comme il est décrit par Dauch et al dans Biochem J, 280, 1991, p. 421-426. Aussi, des recherches ont été entreprises pour trouver d'autres inhibiteurs plus efficaces vis-à-vis des endopeptidases 24 16 et 24 15 qui hydrolysent toutes deux la neurotensine. A la suite de ces recherches, on a trouvé que certains dérivés de peptides décrits dans FR-A- 2 654 430, connus pour avoir un effet inhibiteur sur des collagénases bactériennes telles que la collagénase de Clostridium Histolyticum présentaient un effet inhibiteur encore plus marqué et très spécifique sur les endopeptidases 24 16 et 24 15. Cet effet est tout-à-fait inattendu car les endopeptidases possèdent une spécificité différente de celle des collagénases bactériennes et elles n'ont aucune similitude reconnue avec les col Lagénases bactériennes. Aussi, la présente invention a pour objet L'utilisation d'un dérivé de peptide de formule: O R 4 Il I R 1-P-NH-CH 2-CO-R 2-N-CH-Coo R 5 (I) OR 6 R 3 dans Laque L Le R 1 représente un groupe choisi parmi les groupes aryle et aralkyle non substitués ou substitués sur leur partie aryle par au moins un substituant choisi parmi les groupes halo, trifluoro- méthyl, a Lcoxy en C 1 à C 4, alkyle en C 1 à C 4, alcanoyloxy en C 1 à C 4, carbonyloxyalkyle en C 2 à C 5, nitro, carboxy ou cyano; R 2est un radical bivalent dérivé d'un aminoacide choisi parmi la proline, l'hydroxyproline, la thiazolidine et la déshydroproline, de formule: CH 2 CH S CH 2 CH 2 CH N CH CO - N N CH CO- OH 2 oê CH 2 I H H 2 C CH 2 H 2 C H 2 CHC 2 I I N -CH CO N CH CO relié par sa partie NH à CO; -R 3 est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C 1 à C 4, R 4 est un groupe alkyle en C 1 à C 5 ou la chaîne latérale d'un OE-aminoacide; R 5 représente un atome d'hydrogène, NH 4 +, un atome de métal pharmaceutiquement accepta- ble, un groupe alkyle en C 1 à C 5 ou un groupe benzy- le; et atome d'hydrogène, R 6 représente un NH 4 +,ou un atome de métal pharmaceutiquement acceptable, pour la fabrication d'un médicament inhibiteur des endopeptidases 24-15 et/ou 24-16. Le médicament inhibiteur des endopeptidases 24.15 et/ou 24 16 est un médicament potentialisant les effets pharmacologiques associés à la neurotensi- ne. Ce médicament peut donc être un analgési- que, un agent antihypertenseur ou un agent pour traiter l'hypothermie. Dans les dérivés de peptides décrits ci-dessus, les termes "aryle", "ara Lkyle", et "a amino-acide" ont les significations suivantes. Le terme "aryle" désigne des systèmes à noyau aromatique carbocyclique et hétérocyclique contenant par exemple un ou plusieurs hétéroatomes tels que 0, S et N Ces groupes aryle ont générale- ment de 3 à 10 atomes de carbone. A titre d'exemples de groupes aryle, on peut citer les groupes phényle, naphtyle, furyle, thiényle, pyrolyle, imidazolyle, pyridyle, pyrimi- dinyle, indolyle, quinolyle, oxazolyle et isooxazoly- le. Le terme "aralkyle" désigne des groupements formés par l'association d'un groupe aryle et d'un groupe alkyle Les groupes aryle peuvent être du type de ceux décrits ci-dessus Les groupes alkyle peuvent être linéaires ou ramifiés et ont de préférence de I à 4 atomes de carbone. Le groupe aralkyle peut être substitué sur sa partie aryle par au moins un substituant choisi parmi les groupes halo, par exemple le fluor, le chlore, le brome ou l'iode, trifluorométhyle, alcoxy en C 1 à C 4, alkyle en C 1 à C 4, alkanoyloxy en C 1 en C 4, carbonyloxyalkyle avec un groupe alkyle en C 1 à C 4, nitro, carboxy, et cyano. De même, lorsque R 1 représente un groupe aryle, il peut être également substitué par les groupements décrits ci-dessus. Le terme "C-aminoacide" utilisé ici se rapporte aux vingt O-aminoacides communément trouvés dans Les protéines qui sont également connus sous le nom d'aminoacides standard et à leurs analogues. Les chaÂnes latérales de ces aminoacides comprennent des groupes alkyle linéaires et ramifiés, hydroxy- alkyle, carboxyalkyle, aralkyle, aminoalkyle, carboxamide alkyle, mercapto alkyle, phénylalkyle, hydroxyphénylalkyle, guanidinoalkyle, imidazoylalkyle, indolylalkyle, et pyrrolidinyle. A titre d'exemple d'acides aminés utilisa- bles, on peut citer l'alanine, l'arginine, l'aspara- gine, l'acide aspartique, la cystéine, la glutamine, l'acide glutamique, la glycine, l'histidine, l'isoleucine, la leucine, la norleucine, la lysine, la méthionine, la phénylalanine, la proline, l'hydroxyproline, la sérine, la thréonine, le tryptophane, la tyrosine, la valine, la nitrophényl alanine, l'homo arginine, la thiazolidine et la déshydroproline. Dans les dérivés de peptides, les métaux utilisables pour R 5 et R 6 sont des métaux pharmaceu- tiquement acceptables tels que les métaux alcalins, en particulier le sodium et le Lithium. Les dérivés de peptides utilisés dans l'invention peuvent être préparés par des procédés classiques, en particulier par le procédé décrit dans FR-A 2 654 430. Selon l'invention, pour la fabrication du médicament inhibiteur des endopeptidases 24 15 et/ou 24 16, on inclut une quantité pharmaceutique- ment efficace du dérivé de peptide de formule (I) donnée ci- dessus, à l'état pur ou sous la forme de sel pharmaceutiquement acceptable, dans un véhicu- le ou un support physiologiquement acceptable appro- prié Ce support peut être une solution ou une suspension pour injections. On peut aussi utiliser des supports et des excipients appropriés pour obtenir un médicament destiné à l'administration orale sous la forme de comprimés ou de capsules, incorporant de plus, si nécessaire, des additifs classiques tels que le carbonate de magnésium, le stéarate de magnésium, le talc, le sucre, le lactose, la pectine, la dextri- ne, l'amidon, la gélatine, le tragacanthe, la méthyl- cellulose, la carboxyméthylcellulose de sodium, le beurre de cacao etc Pour cette fabrication, on peut aussi ajouter des diluants, des agents de saveurs, des solubilisants, des lubrifiants, des agents de mise en suspension, des liants et des agents de désintégration. Généralement, le médicament est administré à des doses se situant dans la gamme allant de 0,1 mg/kg/jour à environ 5 mg/kg/jour du dérivé de peptide de formule (I). Il peut être utilisé en tant qu'agent analgésique ou hypothermiant, ou pour le traitement de certaines hypertensions artérielles. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples suivants donnés bien entendu à titre illustratif et non limitatif, en référence au dessin annexé, sur Lequel la figure 1 est une courbe illustrant l'effet inhibiteur (en %) du dérivé de peptide sur l'endopeptidase 24 16 en fonction de la concen- tration en inhibiteur, les figures 2 à 7 sont les chromato- grammes obtenus lors d'essais d'inhibition de l'endo- peptidase 24 16, La figure 8 illustre des courbes représentant l'effet inhibiteur (en %) d'un dérivé de l'invention sur l'endopeptidase 24 16 (courbe 1) et sur l'endopeptidase 24 15 (courbe 2) en fonction de la concentration en inhibiteur, et La figure 9 est une courbe illustrant l'effet inhibiteur (en %) du dérivé de l'invention sur l'endopeptidase 24 15 en fonction de la concentration en inhibiteur. Exempte I:Préparation du dérivé de peptide de formu- le: CH 3 2 C 6 H 5-CH 2-CH 2-P-NH-CH 2-CO-N -CH-CO-NH-CH-COOH OH Ce dérivé que l'on désignera ci-après sous le terme de "phosphodiépryl 03 ", est un dérivé répondant à la formule (I) dans laquelle R 1 est le groupe phény Léthyle, R 2 est dérivé de la proline, R 3 est un atome d'hydrogène, R 4 est le groupe n-buty- le et R 5 est un atome d'hydrogène. a) Préparation du phosphonate du dibenzyl- phény Léthyle: C 6 H 5-CH 2-CH 2-P-(OCH 2 C 6 H 5)2 On méLange délicatement dans du B 11258 3 MDT diméthylformamide lmmol d'hydrure de sodium, sous atmosphère d'azote à 15 C, et on y ajoute peu à peu lmmol de phosphite de dibenzyle dissoute dans du diméthylformamide On laisse la réaction se poursuivre jusqu'à l'arrêt complet du dégagement d'hydrogène. On ajoute alors sous agitation lmmol de bromure de phényléthyle dans du diméthylformamide, toujours sous atmosphère d'azote, et on réalise cette addition suffisamment lentement pour que la température varie de -10 C à O C Quand toute la solution de bromure de phényléthyle est ajoutée, on laisse le mélange réactionnel revenir à 25 C. On enlève l'azote et on maintient sous agitation pendant 3 h. On évapore alors de ce méLange le diméthyl- formamide (DMF) sous vide poussé, à une température de 35 à 40 C, puis on reprend dans de l'éther, on lave ensuite deux fois à l'eau la phase organique, puis on la sèche sur sulfate de sodium Après évaporation du solvant, on obtient le dibenzylphényléthyl phosphonate voulu avec un rendement de 80 %. On purifie ensuite ce produit par chromato- graphie flash sur silice en utilisant comme éluant un mélange d'éther et d'acétate d'éthyle dans un rapport 2/3 en volume On obtient ainsi le phosphona- te purifié avec un rendement de 40 %. b) Préparation du chlorure de monobenzylphényléthyl phosphonate. On ajoute lmmol de pentachlorure de phosphore dans du benzène à une solution dans du benzène de lmmol du dibenzylphény Léthyl phosphonate obtenu précédemment On chauffe le mélange à 70 C sous reflux et sous atmosphère anhydre, pendant 3 à 4 h, jusqu'à l'obtention complète du chlorure. On évapore ensuite le benzène de ce mélange et on le reprend dans du dichlorométhane sec On utilise immédiatement cette solution pour réaliser le coupla- ge avec le peptide. c) Couplage avec le peptide. A la solution de lmmol de chlorure de monobenzylphényléthyl phosphonate dans du dichloromé- thane obtenue précédemment, on ajoute à O C, 0,9 mmol du peptide H Cl, Gly-Pro-Nle-OCH 2-C 6 H 5 dans du dichlo- rométhane et deux équivalents de triéthylamine. On laisse réagir sous agitation pendant une demi- heure toujours à O C, puis pendant une demi-heure supplémentaire à 25 C On évapore alors le dichloro- méthane et on reprend l'huile dans de l'acétate d'éthyle, puis on lave à l'eau avec de l'acide chlorhydrique 0,1 N, du Na HCO 3 à 5 %, puis avec de l'eau jusqu'à neutralité On sèche la phase organique puis on l'évapore On obtient ainsi le dérivé de peptide protégé avec un rendement de 90 % On purifie ce dérivé par chromatographie flash en utilisant comme solvant d'éLution le méLange dichlorométhane- méthanol ( 9/1 en volume). d) Déprotection. On réalise la déprotection du dérivé par hydrogénation catalytique en utilisant le palla- dium comme catalyseur On obtient ainsi le phospho- diépryl 03. Exemple 2: Utilisation du phosphodiépryl 03 comme inhibiteur de l'endopeptidase 24 16. On incube pendant 1 h à 37 C, 5 nmol ( 50 pm/l) de Mcc-Pro-Leu-Gly-Pro- D Lys-Dnp, qui est un substrat connu de l'endopeptidase 24 16, Mcc représentant le radical 7-méthoxycoumarine-3-carboxyle et Dnp représentant le radical 2,4-dinitrophényle, avec 1 d'endopeptidase 24 16 purifié dans un volume final de 100 P 1 l du tampon Tris-H Cl, 50 m M, p H 7,5, en l'absence d'inhibiteur (témoin) ou en présence de phosphodiépryl 03 à des concentrations allant de 10-11 à 10-7 mol/l Après 1 h d'incubation, on analyse les solutions par fluorimétrie comme il est décrit par Dauch et a I, Biochem J 280, p. 421-426, 1991 a. Les résultats obtenus sont donnés sur la figure 1 qui représente la fluorescence (en % de la fluorescence du témoin en fonction de la concentration (en mol/L) en phosphodiépryl 03 (expri- mée en cordonnée logarithmique). Au vu de cette figure, on constate que l'endopeptidase 24 16 est inhibée par le phospho- diépryl 03 et que le taux d'inhibition croît avec la concentration en inhibiteur. La concentration d'inhibiteur qui inhibe % de l'endopeptidase, IC 50, est de 1 n M et la constante d'inhibition Ki est de 0,3 n M. Ainsi, les propriétés inhibitrices du phosphodiépryl 03 sont très supérieures à celles de l'inhibiteur connu Pro-Ile (Ki= 90 PM). Exemp Le 3: Inhibition de l'endopeptidase 24 16. Dans cet exemple, on étudie comme dans l'exemple 1, l'effet inhibiteur du phosphodiépryl 03 sur l'endopeptidase 24 16 mais on utilise dans ce cas la neurotensine comme substrat d'enzyme. Dans ce but, on incube 2 nmol ( 20 p M) de neurotensine à 37 C avec 10 ju L de l'endopeptidase 24.16 dans un volume final de 100 tul de tampon Tris- H Cl 50 m M, p H 7,5 en l'absence d'inhibiteur (témoin) ou en présence de concentrations en phosphodiépryl 03 allant de 10-10 à 10- 6 mol/L Après min d'incubation, on interrompt celle-ci par acidification et on analyse La solution par chromatographie liquide à haute performance (HPLC) en utilisant un système d'élution constitué par un gradient linéaire de 42 min d'acide trifluoroacétique à 0,1 % et de triéthylamine à 0,05 % dans l'acétonitrile,allant de 9/1 à 3/1 comme il a été décrit par Checler et a L dans Biochimie , p 75-82, 1988. Les résultats obtenus sont donnés sur les figures 2 à 6 qui représentent les chromatogram- mes obtenus par mesure de la densité optique à 230 nm en fonction du temps (min). Sur la figure 2, on a représenté le chroma- togramme obtenu en l'absence d'inhibiteur Sur cette figure, on voit 3 pics qui correspondent respectivement à la neurotensine 1- 10 (NT 1-10), à la neurotensine 11-13 (NT 11-13)et à la neurotensine (NT) La neurotensine 1-10 et la neurotensine 11- 13 sont Les produits de dégradation de la neurotensi- ne de départ. Sur les figures 3 à 7, on remarque que les pics correspondant à la neurotensine dégradée (neurotensine 1-10 et neurotensine 11- 13) diminuent avec la concentration en inhibiteur. Sur la figure 8, (courbe 1), on a représen- té le taux d'inhibition (en % par rapport au témoin) en fonction de la concentration C (en mol/1) en inhibiteur (en coordonnée logarithmique). A partir de cette courbe, on obtient les valeurs suivantes d'inhibition: IC 50 = 10 n M Ki = 0,9 n M. Si l'on compare cette valeur au Ki obtenu avec l'inhibiteur connu Pro-Ile ( 90 jp M), on constate que l'inhibiteur de l'invention est 100 000 fois plus efficace. Exemp Le 4: Inhibition de l'endopeptidase 24 15. Dans cet exemple, on étudie l'inhibition de l'endopeptidase 24 15 par le phosphodiépryl 03 en utilisant comme substrat de cette enzyme Bz-Gly-Ala-Ala-Phe-p AB avec Bz représentant le radical benzoyle et p AB le paraaminobenzoate. Dans ce but, on incube 5 n M de ce substrat à 37 C avec 10 ul des fractions post-hydroxylapatite de l'endopeptidase 24 15 en l'absence (témoin) ou en présence de concentrations croissantes de phosphodiépryl 03 Après incubation pendant min, on acidifie et on analyse par chromatographie HPLC sur phase inversée en utilisant un système d'élution à gradient linéaire de 63 min d'acide trifluoroacétique à 0,1 % et de triéthylamine à 0,05 % dans l'acétonitrile allant de 9/1 (v/v) à ,5 / 4,5 (v/v) comme il a été décrit par Checler et al dans Biochimie 70, p 75-82, 1988. Les résultats obtenus sont donnés sur la figure 9. Sur cette figure qui représente le taux d'inhibition (en % par rapport au témoin), en fonc- tion de la concentration C (en mol/l) en inhibiteur en coordonnée logarithmique, on remarque que l'inhibition augmente régulièrement avec la concentration en inhibiteur Les valeurs d'inhibition sont les suivantes: IC 50 = 5 n M Ki = 5 n M. Exemple S: Inhibition de l'endopeptidase 24 15. Dans cet exemple, on utilise le même mode opératoire que dans l'exemple précédent, mais en utilisant la neurotensine comme substrat de l'endopeptidase 24 15. Dans ce but, on incube 2 nmol de neuroten- sine à 37 C avec 10 l L de fractions post hydroxylapa- tite d'endopeptidase 24 15 en l'absence (témoin) ou en présence de concentrations croissantes de phosphodiépryl 03 Après 42 min d'incubation, on acidifie et on analyse la phase liquide par chromato- graphie HPLC en phase inverse en utilisant des gradients linéaires du système acide trifluoroacéti- que,triéthylamine et acétonitrile comme dans l'exem- pie 3. La courbe 2 de la figure 8 illustre les résultats obtenus. A partir de cette courbe, on peut détermi- ner IC 50 et la constante d'inhibition Ki On trouve ainsi que IC 50 = 100 n M Ki = 7,5 ri M. Ainsi, le phosphodiépryl 03 est également un inhibiteur très efficace de l'endopeptidase 24 15. Dans le tableau joint, on a regroupé les valeurs de Ki et de IC 50 obtenues dans les exemples 2 à 5. Exemple 6: Effets du phosphodiépryl sur la carboxy- Peotidase A. Dans cet exemple, on incube pendant 15 min à 37 C un substrat de carboxypeptidase A constitué par 5 nmol de Hippuryl-Phe avec 0,2 pjg de carboxypepti- dase A traitée par D P dans un volume final de Pl de Tris-HCL 50 m M, p H 7,5, en l'absence ou en présence de lpmol/l de phosphodiépryl 03 Après min d'incubation, on analyse la solution par HPLC. Les résultats obtenus montrent que la présence de lpmol/l de phosphodiépryl 03 ne donne lieu à aucune inhibition de la carboxypeptidase A. Exemp Le 7: Effets du phosphodiépryl 03 sur la leucine aminopeptidase. Dans cet exemple, on met à incuber 5 n M d'un substrat de la leucine aminopeptidase constituée par Leu-7 AMC pendant 15 min, à 37 C, avec 0, 02 pg de leucine aminopeptidase dans un volume final de 100 Pl de Tris-H Cl 50 m M à p H 7,5, en l'absence ou en présence de lpmol/l de phosphodiépryl 03. Après les 15 min d'incubation, on analyse le milieu réactionnel par HPLC. Les résultats obtenus montrent qu'il n'y a eu aucune inhibition par le phosphodiépryl 03. Exemple 8: Effets du phosphodiépryl 03 sur l'enzyme de conversion de l'angiotensine. On met à incuber pendant 15 min à 37 C, 5 nmol d'Hippuryl-His-Leu avec 0,6 pg d'enzyme de conversion de l'angiotensine dans un volume final de 100 l de Tris-H Cl 50 m M, p H 7,5 contenant 0,3 mol/l de Na Cl en l'absence ou en présence de I 1 mol/l de phosphodiépryl 03. On analyse la solution par HPLC et on constate qu'il n'y a eu aucune inhibition de l'enzyme de conversion de l'angiotensine par le phosphodiépryl 03. Exemp Le 9: Effet du phosphodiépryl 03 sur l'endopep- tidase 24 11. On suit l'hydrolyse de 2 n M de neurotensine par 9 pg de l'endopeptidase 24 11 dans les conditions décrites dans L'exemple 3. Les résu Ltats obtenus montrent qu'il n'y a pas eu d'inhibition de l'endopeptidase 24 11 par le phosphodiépryl 03. Ainsi, le dérivé de peptide de l'invention est très intéressant car il présente un effet puis- sant d'inhibition vis-à-vis des endoprotéases 24 16 et 24 15 alors qu'il est sans effet sur d'autres protéases telles que la carboxypeptidase A, la leucine aminopeptidase, l'enzyme de conversion de l'angiotensine et l'endopeptidase 24 11. Ce dérive de peptide est donc spécifique et sélectif des endopeptidases 24 15 et 24 16. TABLEAU K, (O Ex Enzyme Substrat IC 50 (n M) Ki (n M) 2 endopeptidase Mcc-Pro-Leu-Gly-Pro 1 0,3 24.16 D Lys-Dnp 3 l neurotensine 10 0,9 4 endopeptidase Bz-Gly-Ala-Ala-Phe 5 5 24.15 p AB " neurotensine 100 7,5 REVENDICATIONS 1 Utilisation d'un dérivé de peptide de formule: 0 R 4 il I R 1 -P-NH-CH 2-CO-R 2-N-CH-COOR 5 OR 6 R 3 ( I) dans Laquelle R 1 représente un groupe choisi parmi les groupes aryle et aralkyle non substitués ou substitués sur leur partie aryle par au moins un substituant choisi parmi les groupes halo, trifluoro- méthyl, alcoxy en C 1 à C 4, alkyle en C 1 à C 4, a Lcanoyloxy en C 1 à C 4, carbonyloxyalkyle en C 2 à C 5, nitro, carboxy ou cyano; R 2 est un radical bivalent dérivé d'un aminoacide choisi parmi La proline, l'hydroxyproline, la thiazolidine et la déshydroproline, de formule: CH 2 S CH 2 I I N CH CO - f CH 2 H 2 C CH 2 I I N CH CO - /CH\\ CH 2 CH I i N CH CO - OH t H / \ H 2 C CH 2 I I N CH CO - relié par sa partie NH à CO; -R 3 est un atome d'hydrogène ou un groupe a Lkyle en C 1 à C 4, R 4 est un groupe alkyle en C 1 à C 5 ou La cha Tne latérale d'un Oz-aminoacide; R 5 représente un atome d'hydrogène, NH 4 +, un atome de métal pharmaceutiquement accepta- ble, un groupe alkyle en C 1 à C 5 ou un groupe benzy- le; et R 6 représente un atome d'hydrogène, NH 4 +,ou un atome de métal pharmaceutiquement acceptable, pour la fabrication d'un médicament inhibiteur des endopeptidases 24-15 et/ou 24-16. 2 Utilisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que le médicament est un analgé- sique, un agent antihypertenseur ou un agent de traitement de l'hypothermie. 3 Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que R 2 est le radical dérivé de la proline de formule: -Nt, CO 4 Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que R 1 est un groupe phénylméthyle, phényléthyle, p- nitrophény Léthyle ou p-trifluorométhylphényléthyle. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que R 3 est un atome d'hydrogène et R 4 est le groupe n-butyle. 6 Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que R 5 et R 6 sont H. 7 Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que le dérivé de peptide répond à la formule: CH 3 o 0 a (CH 2)3 C 6 H 5-C 2 H 4-P-NH-CH 2-CO-N CO-NH-AH-COOH 6 H