FR 2682598 A1 19930423 FR 9208675 A 19920713 c - La présente invention concerne des peptides ayant un effet hypocalcémiant (calcitonines). Comme c'est en général le cas pour les peptides, la mise au point de formulations appropriées et efficaces pour l'administration de calcitonines s'est heurtée à de nombreux problèmes Etant des peptides, les calcitonines sont aisé- ment décomposées par les sucs gastriques, lors de l'adminis- tration orale En outre, elles ne traversent qu'avec grande difficulté et inefficacité les muqueuses dans l'organisme, que ce soit dans l'estomac, les intestins, la bouche, le nez ou le rectum (voies d'administration à travers les muqueuses). La présente invention concerne des compositions phar- maceutiques comprenant une calcitonine en tant que substance pharmacologiquement active, et ayant, après administration à travers les muqueuses, un effet hypocalcémiant accru dans le sang. Sous un aspect, l'invention fournit une composition pharmaceutique comprenant de l'isocaproyl-lAla 7, Aib 10 '17, Lys(For)""'8, Lys(désoxyfructosyl)24 l -calcitonine de sau- mon-( 5-32), qui, administrée par la voie d'administration à travers les muqueuses à un singe rhésus pesant 5-7 kg, pro- duit des effets hypocalcémiants dans le sang d'au moins 9 %, par exemple -15, -21 ou -25 % L'invention est basée sur les résultats décrits dans les exemples ci-après. 2 - Les effets sont plus marqués que ceux publiés jusqu'à présent pour des compositions de calcitonine administrées par les mêmes voies, et sont donc nouveaux En tant que voies d'administration à travers les muqueuses, on préfère la voie orale, mais l'administration par la voie nasale et la voie rectale est également efficace. La découverte des effets hypocalcémiants marqués rend possible l'administration de compositions contenant de la calcitonine par des voies d'administration à travers les muqueuses En raison de la faible stabilité du composé chi- mique utilisé en tant que médicament et/ou de la faible capacité de résorption des compositions connues, cela n'était pas réalisable jusqu'à présent. L'invention fournit en particulier des compositions pharmaceutiques comprenant de l'isocaproyl-lAla 7, Aib 10 17, Lys(For) '1, Lys(désoxyfructosyl)24 l-calcitonine de sau- mon-( 5-32), qui, administrées par voie orale à un singe rhé- sus pesant 5-7 kg, en quantités de 0,1, 0,5, 1 ou 10 mg, ont des effets hypocalcémiants dans le sang d'au moins -9 %, par exemple de -15, -21 ou -25 %, respectivement. Cette substance possède la formule N-a-isocaproyl- Ser-Thr-Ala-Val-Leu-Aib-Lys(For)-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-Aib- Lys(For)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Lys( 1-désoxy-D-fructosyl)-Thr- Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH 2 (For= formyle) La formule isocaproyl-lAla 7, Aib 017, Lys (For) 1,18 Lys(désoxy- fructosyl)24 l-calcitonine de saumon-( 5-32) est la formule sous forme raccourcie, et le composé désigné ci-après par "composé A". Le composé A est décrit, ainsi que ses propriétés, dans la demande de brevet britannique GB-A-2 218 102, dont le contenu est incorporé ici par référence Sa préparation a été décrite dans l'exemple 11 de ladite demande Le com- posé A est indiqué pour une utilisation dans le traitement de la maladie de Paget, de l'hypercalcémie et de l'ostéo- porose. ?e Le composé A, tel que défini plus haut pour utilisa- tion dans l'invention, peut être sous forme libre ou sous forme de sel ou sous forme de complexe ou de produit de solvatation, pharmaceutiquement acceptable, par exemple sous forme d'un sel d'addition avec un acide pharmaceutique-ment acceptable De tels sels et complexes sont connus et ont un degré équivalent d'activité à la forme libre et sont aussi bien tolérés que celle-ci Les formes appropriées de sel d'addition avec des acides, pour utilisation selon l'inven- tion, comprennent par exemple les acétates. Le composé A diffère du point de vue de la structure et des propriétés chimiques du composé connu qui est la calcitonine de saumon Il est plus court de 4 résidus amino- acide et est dépourvu de la structure disulfure cyclique, typique des calcitonines naturelles. Le profil pharmacologique du composé A n'est pas exactement le même que celui de la calcitonine de saumon, mais les deux composés ont par exemple un effet hypo- calcémiant lorsqu'ils sont injectés Nous avons découvert à présent que le composé A est suffisamment puissant pour être utilisé dans des compositions pharmaceutiques, par exemple pour administration nasale ou en plus, lorsqu'un activateur de résorption est présent, pour administration orale (gas- trique) ou rectale. Sous un autre aspect, la présente invention fournit des compositions pharmaceutiques comprenant de l'isocaproyl- lAla 7, Aib 1,17 Lys(For) 11,8 Lys(désoxyfructosyl) 24- calcitonine de saumon-( 5-32) en association avec un acide biliaire ou un sel de celui-ci, par exemple avec un sel métallique ou d'ammonium, par exemple, d'un aminoacide basique. L'acide biliaire ou son sel a un effet d'activation de la résorption à travers les muqueuses Les acides biliaires préférés sont ceux de formule I: 4 - co-R 9 HO'"I R 4 dans laquelle R 1 est a ou E-OH, R 2 est H ou OH, R 3 est H ou a-OH, R 4 est OH ou NH-R 5, R 5 étant -CH 2-COOH ou -CH 2-CH 2-SO 3 H. Les acides biliaires sont connus dans la technique. Les acides biliaires préférés sont ceux de formule I dans lesquels R = aOH, R 2 =H, R 3 = a-OH, R 4 =NHR 5 ou OH. Lorsque R 5 est -CH 2-COOH, l'acide est l'acide glycocholique; lorsque R 5 est -CH 2-CH 2-SO 3 H, l'acide est l'acide tauro- cholique. D'autres acides biliaires préférés sont ceux dans lesquels Ri = a ou 3-OH, R 2 = H, R 3 =H, R 4 OH. Lorsque Ri = 7 a-OH, l'acide biliaire est l'acide chéno- désoxycholique; lorsque R 1 = 76-OH, l'acide biliaire est l'acide ursodésoxycholique. Lorsque Ri = a-OH, R 2 = H, R 3 = a-OH et R 4 = OH, l'acide biliaire est l'acide cholique. -5 - Les acides biliaires préférés sont l'acide chéno- désoxycholique et l'acide taurocholique Les sels métal- liques sont de préférence les sels alcalins, par exemple le sel de sodium. Les aminoacides basiques sont de préférence l'argi- nine, l'ornithine, la lysine ou la 3-oxylysine Les sels d'addition avec des acides préférés sont ceux de l'acide taurocholique ou de l'acide chénodésoxycholique avec la lysine (Tauro-Lys ou Chéno-Lys, respectivement). L'un des sels particulièrement préféré est le lysi- nate d'acide taurocholique. Nous avons découvert que, par exemple, le lysinate d'acide taurocholique est particulièrement utile en tant qu'activateur de l'effet hypocalcémiant du composé A. Sur la base des découvertes décrites dans l'exemple 2 ci-après et accompagnant le tableau I, l'invention fournit une composition pharmaceutique comprenant de l'isocaproyl- lAla?, Aibl ',7, Lys(For)"', Lys(désoxyfructosyl) 4 l- calcitonine de saumon-( 5-32), en tant que composant actif, et un acide biliaire qui, administré par voie orale, en une quantité correspondant à 3 mg de composant actif, à un singe rhésus pesant 5-7 kg, manifeste une bioactivité hypo- calcémiante relative d'au moins 200 %, par rapport à la même composition ne contenant pas d'acide biliaire et ayant par définition une bioactivité relative de 100 %, mesurée pen- dant 24 heures après l'administration. L'activité hypocalcémiante relative est calculée par comparaison de l'aire au-dessous de la courbe (AAC) indi- quant l'effet hypocalcémiant mesuré pendant 24 heures après administration orale de la composition selon l'invention et de l'AAC d'une composition de référence ne contenant pas d'activateur de résorption, dans les mêmes conditions. L'effet hypocalcémiant amélioré est da par exemple à un taux plasmatique accru du composé A On peut également calculer les AAC des taux plasmatiques Sur la base des ir I 6 - essais décrits dans l'exemple 2 et de leurs résultats figu- rant dans le tableau II ci-après, l'invention fournit égale- ment une composition pharmaceutique comprenant de l'iso- caproyl-lAla 7, Aib '17 Lys(For) l,s Lys(désoxy 2 fructosyl) 24 l-calcitonine de saumon-( 5-32), en tant que composant actif, et un acide biliaire, qui, administré par voie orale, en un quantité correspondant à 3 mg de composant actif, à un singe rhésus pesant 5-7 kg, manifeste une bio- disponibilité relative d'au moins 200 % du composant actif par rapport à la même composition ne contenant pas de sel d'addition avec un acide et ayant par définition une bio- disponibilité relative de 100 %, mesurée pendant 24 heures après l'administration. Le taux plasmatique du composé A a été également mesuré dans l'exemple 4, à partir d'une composition conte- nant en plus un activateur de résorption, administrée par voie orale et comparée à la même composition ne contenant pas d'activateur de résorption et administrée par voie intraveineuse Dans cet essai, on a pu calculer la bio- disponibilité absolue. Sur la base des résultats figurant dans le tableau III ci-après l'invention fournit une composition pharmaceutique comprenant de l'isocaproyl-lAla 7, Aibl' 17, Lys(For)ll '8, Lys(désoxyfructosyl) 24 -calcitonine de sau- mon-( 5-32) et un activateur de résorption, laquelle composi- tion, administrée par voie orale, en une quantité correspon- dant à 200 gg de composant actif, à un rat Wistar pesant 280-300 g, présente une biodisponibilité absolue d'au moins 1 500 %, en ng h/ml, par rapport à la même composition ne contenant pas d'activateur de résorption et ayant par défi- nition une biodisponibilité absolue de 100 %, mesurée pen- dant 5 heures après l'administration. Sur la base des résultats décrits dans l'exemple 3, paragraphe 1, on arrive à la conclusion que le composé A peut être résorbé par voir nasale et sans activateur de 7 - résorption, ainsi que résorbé par voie orale avec un activa- teur de résorption décrit dans l'exemple 1. Sur la base des résultats de l'exemple 3, l'invention fournit en outre une composition pharmaceutique qui, admi- nistrée par voie nasale en une quantité correspondant à gg dfisocaproyllAla', Aib 10 '17, Lys(For) 1 t 18 Lys(désoxyfructosyl) 24 l-calcitonine de saumon-( 5-32) à un singe rhésus pesant 5-7 kg, manifeste une biodisponibilité relative d'au moins 200 % par rapport à une solution de référence comprenant de la calcitonine de saumon, en tant que composant actif, et ayant par définition une bio- disponibilité relative de 100 %, mesurée pendant 8 heures après l'administration. Dans la demande de brevet britannique GB-A-2 218 098, il a été révélé que des compositions pharmaceutiques conte- nant une calcitonine de saumon et du lysinate d'acide tauro- cholique manifestent une tolérance locale améliorée, lors- qu'elles sont administrées par voie nasale Ces compositions avaient des biodisponibilité du même ordre de grandeur que celles obtenues par administration nasale de compositions contenant de la calcitonine de saumon et l'activateur de résorption taurocholate de sodium connu précédemment. Toutefois, d'après cette publication de l'état de la technique, on ne pouvait pas s'attendre à pouvoir obtenir une composition présentant une activité hypocalcémiante aussi bonne, une tolérance aussi bonne et aussi peu d'effet d'interaction avec les aliments que ceux obtenus avec une composition selon la présente invention. En outre, on ne pouvait pas s'attendre à ce qu'avec le composé A, qui est chimiquement très différent de la calcitonine de saumon, il soit possible d'obtenir d'aussi bons résultats de pénétration à travers les muqueuses et de biodisponibilité. Les compositions pharmaceutiques peuvent être pro- duites de façon classique, au moyen de substances auxi- is k -8- liaires appropriées désirées pour la voie d'administration envisagée, par exemple orale, nasale ou rectale. L'invention fournit également un procédé pour la préparation de compositions pharmaceutiques, comprenant le traitement de la calcitonine par des substances auxiliaires et, si l'on désire un effet d'amélioration de la résorption, par exemple pour emploi de la composition par voie orale, par un acide biliaire ou un sel de celui-ci, par exemple avec un métal ou un aminoacide basique. De telles compositions peuvent être convenablement préparées par des techniques classiques, pour être présen- tées sous des formes classiques, par exemple des capsules, comprimés, suppositoires, poudres dispersables, sirops, élixirs, suspensions ou solutions, par exemple pour adminis- tration par voie entérique Des diluants ou véhicules phar- maceutiques appropriés sont décrits dans les exemples ci- après Il peut s'agir par exemple d'eau, de lactose ainsi que de conservateurs, agents de mise en suspension, agents mouillants, agents de granulation et désintégrants, liants, lubrifiants appropriés, afin de fournir une composition pharmaceutique présentable et de goût agréable. Lorsqu'un véhicule liquide est présent dans la compo- sition nasale de l'invention, c'est-à-dire dans la composi- -tion liquide de l'invention, il est de préférence aqueux mais peut également être choisi parmi les solvants non aqueux physiologiquement acceptables, appropriés à l'appli- cation sur la muqueuse nasale Le véhicule liquide est de préférence l'eau, une solution salée aqueuse, par exemple le sérum physiologique, ou un tampon aqueux. Lorsqu'un véhicule solide est présent, à savoir dans les compositions nasales solides de l'invention, il peut être par exemple insoluble dans l'eau, faiblement soluble dans l'eau, absorbant de l'eau, apte à gonfler dans l'eau, gélifiant ou soluble dans l'eau Comme exemples de tels véhicules, on peut citer des polymères synthétiques ou semi- 9 - synthétiques éventuellement réticulés, tels que des poly- acrylates, par exemple le polyacrylate de sodium, de potas- sium ou d'ammonium, le poly(acide lactique), le poly(acide glycolique); des copolymères d'acides lactique et glycolique, le poly(alcool vinylique), le poly(acétate de vinyle), des copolymères d'alcool et d'acétate vinyliques,un polymère carboxyvinylique, la polyvinylpyrrolidone et le polyéthylèneglycol; des celluloses, telles que la cellulose, la cellulose microcristalline et l'a-cellulose, et des déri- vés de cellulose tels que la méthylcellulose, l'éthyl- cellulose, l'hydroxyéthylcellulose, l'hydroxypropyl- cellulose, l'hydroxypropylméthylcellulose, la carboxyméthyl- cellulose sodique et l'éthylhydroxyéthylcellulose; des dex- trines, telles que l'a-, P ou 7-cyclodextrine, la diméthyl- P-cyclodextrine, la dextrine; des amidons, tels que des amidons natifs et leurs dérivés, par exemple l'amidon hydroxyéthylé ou hydroxypropylé et l'amidon carboxyméthylé; des polysaccharides, tels que le dextrane, des dextranes réticulés, le pullulan, l'acide alginique et ses sels, l'acide hyaluronique et ses sels, l'acide pectique et ses sels, l'acide phytique et la phytine; des sucres, tels que le D-mannitol, le glucose, le lactose, le fructose, l'inosi- tol, le saccharose et l'amylose; des aminoacides, tels que la glycine et la taurine; des poly(aminoacide)s, tels que le poly(acide glutamique), le poly(acide aspartique), la poly- glycine et la polyleucine; des protéines, telles que la caséine, la gélatine, des dérivés de la gélatine tels que la succinylgélatine, la chitine et le chitosane; des gommes, telles que la gomme arabique, la gomme adragante et le glucomannane; et des phospholipides; et des mélanges de ceux-ci. Ces véhicules peuvent également être présents dans les compositions orales de l'invention. Les véhicules préférés sont ceux qui améliorent le contact de la composition nasale avec la muqueuse nasale ou - facilitent la diffusion du médicament, de la composition nasale à la muqueuse nasale, par exemple qui prolongent le temps de résidence nasale de la composition nasale et/ou réduisent la distance entre le médicament ou la composition et la muqueuse. Les véhicules solides préférés sont des des poly- acrylates, la carboxyméthylcellulose sodique, des amidons et leurs dérivés, l'acide alginique et ses sels, l'acide hyalu- ronique et ses sels, l'acide pectique et ses sels, la géla- tine et ses dérivés, des gommes, le poly(acide lactique) et ses copolymères, le poly(acétate de vinyle), les celluloses et leurs dérivés, des celluloses enrobées, des dextranes réticulés, encore mieux le poly(acide lactique) et ses copolymères, le poly(acétate de vinyle), les celluloses et leurs dérivés, des celluloses enrobées et des dextranes réticulés On préfère en particulier la cellulose micro- cristalline. Pour, par exemple, des raisons de stabilité, les compositions liquides de l'invention ont de préférence un p H légèrement acide, par exemple de 3,7 Le degré requis d'ac- tivité peut convenablement être atteint, par exemple, par addition d'un agent tampon ou d'un acide tel que H Cl ou un autre acide organique ou minéral approprié, l'acide phospho- rique par exemple. Les compositions liquides et les compositions solides de l'invention peuvent également contenir d'autres additifs, par exemple des conservateurs-antioxydants, tels que le chlorure de benzalkonium, un phydroxybenzoate d'alkyle (Paraben), tel que le p-hydroxybenzoate de méthyle et le p-hydroxybenzoate de propyle, ou le méthylmercurithio- salicylate de sodium (Thiomersal). Selon un autre mode de réalisation, l'invention four- nit une composition pharmaceutique destinée à l'administra- tion nasale et comprenant le composé A et un véhicule liquide ou solide, en l'absence d'un activateur de résorp- 11 - tion. Par "activateur"l, on entend un composé qui est pré- sent principalement pour augmenter l'absorption à travers la muqueuse nasale, par exemple par interaction avec les compo- sants de la muqueuse et/ou par augmentation de la perméa- bilité de la muqueuse. Des activateurs appropriés comprennent par exemple des esters de choline, par exemple comme décrit dans EP-A-214 898, des acylcarnitines, par exemple telles que décrites dans EP-A-215 697, des aldoses et des glucosamines, des ascorbates et salicylates, par exemple tels que décrits dans EP-A-37 943, l'a-cyclodextrine, par exemple telle que décrite dans EP-A-94 157, des esters de pyroglutamate, par exemple tels que décrits dans EP-A-173 990, des agents ché- lateurs, par exemple tels que décrits dans US-A-4 476 116, une base de gel de poly(acide acrylique), le glycyrrhétinate de sodium, le caprate de sodium, le tartrate d'ammonium, un glycyrrhizanate, par exemple le glycyrrhizanate de sodium ou d'ammonium, par exemple comme décrit dans EP-A-327 756, la glycine ou l'acide 7-aminolévulinique. La taille de particules des composants, y compris les véhicules, par exemple le véhicule cellulosique, dans la composition nasale solide de l'invention, peut aller de 5 à 500 gm, de préférence de 10 à 250 gm, encore mieux de 20 à 200 Um. Les compositions liquides de l'invention peuvent être préparées par mise en mélange intime dudit composé A dans le véhicule liquide, éventuellement conjointement avec les autres composants. La composition nasale solide de l'invention peut être préparée de façon classique On peut mélanger le composé A avec les particules de véhicule, par exemple une base poly- mère ou un produit cellulosique, de façon classique, éven- tuellement avec d'autres composants comme indiqué plus haut, par exemple un activateur d'absorption ou un agent tensio- 12 - actif, tel que décrit Le composé A peut être en solution, par exemple une solution aqueuse ou alcoolique, et être mélangé avec les particules de véhicule, et on peut évaporer le solvant, par exemple par lyophilisation ou séchage par atomisation Un tel séchage peut être effectué dans les conditions classiques Une autre possibilité consiste à tasser ou granuler le mélange et ensuite à le pulvériser et/ou le tamiser. Des compositions pour administration nasale peuvent être préparées en un état pulvérulent ou liquide, de façon classique, sous forme d'aérosols, et sont ensuite adminis- trées spécialement au moyen d'un nébuliseur ou d'un vapori- sateur Des doses unitaires peuvent être libérées par un système de valve doseuse. Les compositions pharmaceutiques de l'invention sont convenablement préparées pour administration orale ou nasale. La dose exacte de composé A, l'isocaproyl-lAla 7, Aib"'17, Lys(For) 11 18, Lys(désoxyfructosyl) 24 l-calcitonine de saumon-( 5-32) peut être déterminée dans des études cli- niques classiques ou des études classiques sur l'animal Par exemple, la dose peut être déterminée par des essais de biodisponibilité comparative, par comparaison avec d'autres formulations ayant un effet thérapeutique connu, la dose étant choisie pour produire, dans l'état stationnaire, des taux plasmatiques de médicaments comparables aux taux théra- peutiquement efficaces. En général, la dose d'un composé A avec le sel biliaire, pour absorption par voie orale ou rectale, va d'environ la moitié à environ un dixième de la dose de A dans une formulation comparable, pour le même mode d'admi- nistration, mais ne contenant pas de promoteur de résorp- tion. Des doses journalières indiquées d'isocaproyl-lAla, Aib 1017, Lys(For) "', Lys(désoxyfructosyl)24 l -calcitonine r 13 - de saumon-( 532) vont d'environ 2 gg à environ 30 mg, par exemple de 0,1 à 20 mg pour utilisation par voie orale ou rectale ou nasale. Les compositions sont convenablement sous forme de dose unitaire ou peuvent être fragmentées en doses uni- taires contenant chacune, de préférence pour utilisation orale, par exemple d'environ 0,1 à 300, de préférence de 50 à 200, en particulier jusqu'à environ 100 mg d'acide biliaire, la quantité exacte étant fonction, par exemple, du mode d'administration Le rapport pondéral de l'isocaproyl- lAla 7, Aib" ', Lys(For) 18, Lys(désoxyfructosyl) 3- calcitonine de saumon-( 5-32) au sel d'addition avec un acide de l'invention va par exemple d'environ 1:1 à environ 1:5 000, de préférence de 1:2 à 1:2 000, pour administration par voie orale ou rectale. L'activateur de résorption, par exemple l'acide biliaire, est par exemple utilisable en une quantité allant de 0,1 à 10, de préférence de 0,7 à 1,5 % en poids, en tant qu'excipient dans des compositions pharmaceutiques nasales; en particulier, en une quantité allant de 1 à 75 % en poids dans des compositions orales et rectales; et notamment en une quantité allant de 20 à 75, par exemple de 40 à 75 % en poids, dans des compositions orales. Une composition préférée contient 10 mg de composé A et 200 mg de l'acide biliaire, par exemple tel que décrit dans l'exemple 2, sous forme de sel de lysine, ou la quan- tité équivalente sous forme de sel métallique, par exemple du sel de sodium. La dose du composé A à administrer au moyen de la composition de l'invention est naturellement fonction du type d'affection à traiter, de la fréquence de doses souhai- table et du type d'effet recherché. L'invention fournit en particulier une composition pharmaceutique selon l'invention, pour utilisation dans le traitement de la maladie de Paget, de l'hypercalcémie ou de 14 - l'ostéoporose. L'invention fournit également un procédé d'adminis- tration du composé A à un sujet nécessitant un traitement par ledit composé, lequel procédé comprend l'administration audit sujet d'une quantité efficace d'une composition phar- maceutique selon l'invention. Exemple 1 * Capsules pour administration orale 1 A Composé A 0,1 à 20 mg Lysinate d'acide taurocholique 100 mg Cellulose microcristalline 50 mg Lactose 50 mg On a administré à chaque membre d'un groupe de singes rhésus, ayant un poids corporel d'environ 5-7 kg, en 6 essais séparés, des capsules selon l'exemple l A, contenant 0,1, 0,5, 1, 2 et 10 mg de composé A, et une capsule pla- cebo On a fait jeûner les animaux pendant 1 jour avant le traitement. Les concentrations du calcium ionisé dans le sang ont été mesurées après 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12 et 24 heures Le calcium a été dosé à l'aide d'un analyseur de calcium ionisé (ICA 2 Radiometer), selon la méthode décrite dans Selected Short Communications, présentées au symposium international "Calcitonin 1984 ", Milan, 2-4 octobre 1984, Current Clinical Practical Series, 42, Exerpta Medica. Les résultats ont été portés sur une courbe sur la figure 1 ci-annexée, qui montre le bon effet hypocalcémiant du composé A, utilisable par exemple dans le traitement de l'ostéoporose N représente le nombre d'animaux dans l'essai. Dans un autre essai, on a déterminé sur des singes la variation de la teneur totale en calcium du sang, après administration d'une capsule orale selon l'exemple 1 A, con- tenant 1 mg du composé A, et d'une capsule de placebo. - On a répété le même essai avec des capsules, dans lesquelles était omis le lysinate d'acide taurocholique. Il a été établi (figure 2 ci-annexée) que le com- posé A a un effet hypocalcémiant plus marqué en présence de lysinate d'acide taurocholique. Les résultats montrent que lorsqu'elles sont adminis- trées par voies orales à un singe rhésus pesant 5-7 kg, les compositions pharmaceutiques comprenant de l'isocaproyl- lAla 7, Aib 1017, Lys(For), l, Lys(désoxyfructosyl) 24 l- calcitonine de saumon-( 5-32), en quantités correspondant à 0,1, 0,5, 1 ou 10 mg du composant actif, ont des effets hypocalcémiants allant jusqu'à -9, -15, -21 et -25 %, res- pectivement. L'effet hypocalcémiant est l'effet sur les taux san- guins de calcium ionisé. Exemple 2 Capsules pour administration orale Les compositions suivantes ont été comparées comme décrit dans l'exemple 1. 2 A mg Composé A 3 Lysinate d'acide taurocholique 200 Cellulose microcristalline 50 Stéarate de magnésium 25 Lactose 25 2 B Composé A 3 Lysinate d'acide chénodésoxycholique 200 Cellulose microcristalline 50 Stéarate de magnésium 25 Lactose 25 16 - 2 C Composé A 3 Lysinate d'acide taurocholique 200 Microsphères d'amidon 50 Cellulose microcristalline 50 Stéarate de magnésium 25 Lactose 25 2 D Composé A 3 Lysinate d'acide chénodésoxycholique 200 Microsphères d'amidon 50 Cellulose microcristalline 50 Stéarate de magnésium 25 Composition placebo (capsule) Composé A 3 Cellulose microcristalline 100 Après administration orale des compositions à des singes rhésus, il est apparu que les effets hypocalcémiants de l'administration simultanée de lysinate d'acide tauro- cholique et de celle de lysinate d'acide chénodésoxycholique étaient dumême ordre Le sel cité en premier a donné un effet plus marqué Les microspheres d'amidon ont, en asso- ciation avec les deux sels, un faible effet intensifiant, comme indiqué par les valeurs numériques dans les tableaux I et II ci-annexés. Les résultats obtenus montrent que les formes orales contenant du sysinate d'acide taurocholique ou du lysinate d'acide chénodésoxycholique donnent des bioactivités hypo- calcémiantes relatives de 567 et 534 %, respectivement, et des biodisponibilités supérieures (taux plasmatiques) du composé A de 586 et 453 %, respectivement, par rapport à la composition de composé A ne contenant pas de sel d'addition avec un acide cholique (placebo), qui a été prise comme % par définition. e 17 - Dans ces essais, les taux plasmatiques du composé A ont été mesurés au moyen d'un essai radio-immunologique spé- cifique La limite de détection était de 0,025 mg/ml. Exemple 3 Compositions nasales On a mesuré comme décrit dans l'exemple 1 l'effet hypocalcémiant des compositions suivantes sur du calcium ionisé. 3 A Solution pour aérosol Composé A 440 ou 4 400 ou 8 800 gg Chlorure de sodium 7,5 mg Chlorure de benzalkonium 0,1 mg H Cl 0,1 N, jusqu'à p H 3,7 9,5 mg Eau distillée 1,0 ml N 2 gazeux quantité suffisante (environ 40, 400 ou 800 gg/activation) 3 B Poudre Composé A 40 gg Cellulose microcristalline (environ 40 gg/capsule) 30 mg Composition de référence Solution de calcitonine de saumon ICSI pour aérosol Calcitonine de saumon (CS) 440 gg (= 2 200 UI) Chlorure de sodium 7,5 mg Chlorure de benzalkonium 0,1 mg HC 1 0,1 N, jusqu'à p H 3,7 quantité suffisante Eau distillée complément à 1,0 ml N 2 gazeux quantité suffisante (environ 40 Mg = 200 UI/activation). 18 - Solution placebo pour aérosol Chlorure de sodium 7,5 mg Chlorure de benzalkonium 0,1 mg H Cl 0,1 N, jusqu'à p H 3,7 quantité suffisante Eau distillée 1,0 ml N 2 gazeux quantité suffisante (environ 90 gl/activation). 1 L'administration en quantités accrues de la solution 3 A pour aérosol a donné des résultats qui ont été portés sur la courbe de la figure 3 Ceux-ci montrent le bon effet hypocalcémiant du composé, par rapport au placebo, allant jusqu'à -21 % L'effet hypocalcémiant maximum de la CS (référence) était de -6 % ou moins, après une admi- nistration par voie nasale de 80 Mg de CS au total. 2 En dosant pendant 24 heures le calcium ionisé des compo- sitions 3 A et 3 B et de la solution pour aérosol de réfé- rence, on a trouvé par le calcul un effet de bioactivité (hypocalcémie) de 555 % de la composition 3 A et de 760 % de la composition 3 B, par rapport à 100 % de la solution (CS) de référence, solutions administrées en quantité de gg ( 40 gg dans chaque narine) à des singes rhésus pesant 5-7 kg. 3 En mesurant pendant 8 heures les taux plasmatiques du composé A à partir des compositions 3 A et 3 B et le taux de CS dans la solution pour aérosol de référence, on a trouvé par le calcul au total une biodisponibilité rela- tive de 316 % à partir de la composition 3 A et de 702 % à partir de la composition 3 B, par rapport à 100 % de CS à partir de la solution de référence, solutions adminis- trées en une quantité de 80 Mg de composé A à des singes rhésus pesant 5-7 kg. Exemple-4 On a administré par intubation orale à des rats Wistar mâles (n= 6), ayant un poids corporel de 280-300 g,, des quantités de 500 il de solution salée contenant 200 Mg y 19 - de composé A soit sans (référence), soit avec une quantité donnée d'un activateur de résorption. On a prélevé des échantillons de sang de 0,7 ml par la veine jugulaire de chaque animal conscient, 15 minutes avant et 10, 30, 60, 120, 180 et 300 minutes après l'administration de médicament On a analysé tous les échantillons en utilisant un essai radio-immunologique pour la calcitonine de saumon, après détermination de la réactivité croisée pour le composé A Dans toutes les administrations, la concentration de médicament a été contrôlée par HPLC Les biodisponibilités (BA) absolues après administration orale ont été calculées selon l'équation suivante: BA (%) = AAC 0 moyenne ( 0-5 h) (p o) x dose (i v) x 100 AAC moyenne ( 0-5 h) (i v) x dose (p o) Les paramètres pharmacocinétiques calculés, en fonc- tion de l'utilisation des activateurs de résorption spéci- fiés, sont donnés dans le tableau III. D'après le tableau III, exemple 4 A, ci-annexé, il apparait que la biodisponibilité absolue du composé A avec l'activateur de résorption va jusqu'à 3 930 % par rapport à % de la composition de référence contenant le composé A sans activateur de résorption. On fournit ainsi une composition pharmaceutique com- prenant de l'isocaproyl-lAla 7, Aib '017, Lys(For)""', Lys(désoxyfructosyl)24 l-calcitonine de saumon-( 5-32) et sans activateur de résorption, qui, administrée par voie nasale en une quantité correspondant à 80 gg de composant actif à un singe rhésus pesant de 5 à 7 kg, présente une bio- disponibilité relative allant jusqu'à 702 %, en ng h/ml, par rapport à une solution de référence comprenant de la calci- tonine de saumon en tant que composant, et dépourvu d'acti- vateur de résorption, ayant par définition une bio- disponibilité relative de 100 %, mesurée pendant 8 heures après administration. - Tandis que la biodisponibilité du composé A avec du lysinate d'acide taurocholique (exemple 4 C) est meil- leure qu'avec du lysinate d'acide chénodésoxycholique (exemple 4 B), l'activité de résorption de l'acide chéno- désoxycholique sous la forme de son sel de sodium est meil- leure en association avec de la lysine H Cl (exemple 4 A). Le mélange de 1 % en poids de sel sodique de chéno- désoxycholate avec 1 % de lysine H Cl est théoriquement équi- valent à un mélange de 2,4 moles-g de lysinate d'acide chénodésoxycholique avec 3,1 moles-g de lysine H Cl, ce qui signifie que, par comparaison avec l'exemple 4 B, la présence de lysine supplémentaire a un grand effet d'amélioration sur l'absorption. Il est donc possible d'accroître la biodisponibilité en composé A en présence d'un acide biliaire, indépendamment de la présence du sel d'addition avec un acide de l'acide biliaire avec l'aminoacide basique, ou de la présence des deux acides, en quantités d'équivalents nécessaires à la formation d'un sel d'addition avec un acide. D'après l'exemple 4 D du tableau III, il apparaît que le sel de sodium de l'acide chénodésoxycholique a lui aussi un effet favorable Après administration orale, ce sel peut être converti, dans le milieu acide de l'estomac, en l'acide chénodésoxycholique libre. Contrairement à l'acide taurocholique, l'acide chéno- désoxycholique est faiblement soluble dans le milieu acide de l'estomac Le composé A est lentement libéré dans un milieu acide, à partir d'une composition le contenant, lorsque de l'acide chénodésoxycholique ou son sel de sodium est également présent dans la composition, et plus lentement qu'avec l'acide taurocholique ou son sel de sodium. Le composé A peut donc être mieux protégé contre des attaques destructrices dans le milieu acide de l'estomac, en association avec l'acide chénodésoxycholique ou un de ses sels alcalins, qu'avec l'acide taurocholique ou un de ses 21 - sels alcalins. Du point de vue de la protection du composé A, l'acide chénodésoxycholique ou un de ses sels alcalins est donc son activateur de résorption préféré pour administra-5 tion orale. TABLEAU I Activité hypocalcémiante chez le singe rhésus après administration orale de 3 mg de composé A dans une capsule avec différentes formulations (n= 4) Principaux paramètres biocinétiques Moyenne Hypo Bioactivité d'hyrpo Moyenne calcémie T max AAC relative Forme pharmaceutique cacmie de maxMde la de la 24 T max moyenne (mo^ ^ (he moyne (h%*Ii) (h) 77 (h) avec tauro-Lys( 2 A) -178 10 -164 8 -2589 497 avec chéno-Lys( 2 B) -17,1 8,8 -1677 8 -2531 /a 86 , avec tauro-Lys-+ micro 19,6 12 -19,6 12 -295,6 567 sphères d'amidon ( 2 C) avec chéno-Lys-+ micro 19,5 10,8 -16)3 8 -278 > 3 534 sphères d'amidon ( 2 D) avec cellulose micro 7,2 3 6 t 4 -52 1 100 cristalline (réf) par définition À % K, al (n (D TABLEAU II Taux plasmatiques chez le singe rhésus après administration orale de 3 mg de composé A dans une capsule avec des formulations différentes (n= 4) Principaux paramètres pharmacocinétiques :Moyenne Moyenne O max T max de Biodisponibilit Forme pharmaceutique de C max de T max de la la moyenne A relative moyenne A 24 h (ng/ml) (h) (ng/ml) "(h) (ng*h/ml) ( 7) avec tauro-Lys, ( 2 A) O 470 0,875 0,325 1 0 > 999 377 avec chéno-Lys ( 2 B) O,278 1,375 09275 1 5 * 01798 I avec tauro-Lys + micro sphères d'amidon ( 2 C)0539 0430 1 1552 556 avec chèno-Lys + micro 0)401 '1,625 O > 339 1 ' 1 '201 453 sphères d'amidon ( 2 D) avec de la cellulose 0,l 50 1,5 0 > 090 1 5 0,265 100 microcristalline (réf) (par définition (D o,,,0 o TABLEAU III Taux plasmatiques chez le rat après administration orale de' 200 ug de compos 6 A AAC 5 h CV CMA CV T'n A CV Facteur de biodisponibilité (dose: 200 pg A/r, At dans ng h/ml X ng/î l Z Z absolu, % 09 " 1 de solution salee) 4 A + 1 % de ch 6 nodesoxy- cholate de sodium + 1 % dé lysine H Cl 10)09 101 3,27 79 0,48 157 2,36 3930 % B + 1 % de'lysinate d'acid chénod 6 soxycholique 2,32 67 2,32 60 0,48 157 0055 920 X 4 C + 1 % de lysinate d'acid taurocholique 6,20 133 2,92 126 0,36 93 1,18 1970 Z 4 D-+ 0,5 % de ch 6 nod 6 soxy- cholate de sodium " '7,08 ' 163 " 4,* 35 ** 4 > il; 1 3 ' 017 '0. 1,73 J , Référence 101 0,53 53 0 >,96 143 0 >,06 o (par d 6 finition) (n (O i I. I C\o Il - REVENDICATIONS 1 Composition pharmaceutique comprenant de l'iso- caproyl-lAla 7, Aib 10,'17 Lys(For) 11,18 Lys(désoxy- fructosyl) 24 l-calcitonine de saumon-( 5-32), qui, administrée par une voie d'administration à travers les muqueuses, à un singe rhésus pesant 5-7 kg, donne un effet hypocalcémiant dans le sang d'au moins -9 %. 2 Composition pharmaceutique comprenant de l'iso- caproyl-lAla 7, Aib 10, 17, Lys(For) 11, Lys(désoxy- fructosyl)24 l-calcitonine de saumon-( 5-32) en présence d'un acide biliaire ou d'un sel de celui-ci. 3 Composition pharmaceutique selon la revendica- tion 2, caractérisée en ce que l'acide est l'acide tauro- cholique. 4 Composition pharmaceutique selon la revendica- tion 2, caractérisée en ce que l'acide est l'acide chéno- désoxycholique. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisée en ce que le sel est un sel d'un aminoacide. 6 Composition pharmaceutique selon la revendica- tion 5, caractérisée en ce que l'aminoacide est la lysine. 7 Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisée en ce que le sel est un sel métallique. 8 Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications précédentes, destinée à l'administration orale. 9 Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications précédentes, destinée à l'administration rectale. Composition pharmaceutique selon l'une quel- conque des revendications précédentes, destinée à l'adminis- tration nasale. 26 - 11 Composition pharmaceutique destinée à l'adminis- tration orale, comprenant de l'isocaproyl-lAla 7, Aib 107 'l, Lys(For) "",18, Lys(désoxyfructosyl) 243 -calcitonine de sau- mon-( 5-32) et un véhicule liquide ou solide, d'un activateur de résorption. 12 Composition pharmaceutique selon tion 11, caractérisée en ce qu'elle est sous 13 Composition pharmaceutique selon tion 12, caractérisée en ce qu'elle comprend microcristalline. 14 Composition pharmaceutique selon tion 11, caractérisée en ce qu'elle est sous comprenant du chlorure de benzalkonium. Composition pharmaceutique selon en l'absence la revendica- forme solide. la revendica- de la cellulose la revendica- forme liquide, l'une quel- conque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend de 2 à 30 Mg de calcitonine par dose uni- taire. 16 Procédé d'administration d'isocaproyl-lAla, Aib 1 , Lys(For)> 18, Lys(désoxyfructosyl)24 l-calcitonine de saumon-( 5-32) à un sujet nécessitant un traitement par ledit composé, comprenant l'administration d'une quantité efficace d'une composition pharmaceutique selon l'une quel- conque des revendications précédentes. 17 Procédé pour la préparation d'une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant le traitement de la calcitonine par des substances auxiliaires et, si l'on désire un effet d'ac- tivation de la résorption, avec un acide biliaire ou un sel de celui-ci.