FR 2684847 A1 19930618 FR 9214989 A 19921209 COMPLEMENT NUTRITIONNEL L'invention concerne les compléments nutritionnels Plus spécifiquement, la présente in- vention concerne un complément nutritionnel contenant en abondance des ingrédients nutritifs tels que saccharides et vitamines ainsi que les sulfures d'acides aminés et d'acides gras insatu- rés qui peuvent assurer une excellente immunité. Un certain nombre de compléments nutritionnels ont été introduits et commercialisés ré- cemment avec pour objet le maintien et/ou l'amélioration du bon état de santé Un grand nombre de ces compléments nutritionnels contiennent divers éléments nutritifs tels que acides aminés, acides gras, vitamines et minéraux, assurant à ceux qui les prennent des effets tels que contrôle de la pression sanguine assurée par les acides gras tels l'acide linoléique et vasodilatation assu- rée par les acides aminés. Par une étude approfondie de la fermentation de substrats tels que son de riz, blé et soja contenant en abondance des protéines végétales et des lipides végétaux, l'inventeur a découvert que les sulfures des acides aminés et des acides gras insaturés dans un tel substrat pouvaient as- surer une excellente immunité, tous les deux étant par conséquent très utiles pour le corps hu- main. Selon la Revendication 1, l'invention est caractérisée en ce que le complément nutritionnel est préparé selon les étapes suivantes: a) préparation d'un substrat aqueux contenant des protéines végétales et des lipides végé- taux; b) adjonction à celui-ci de lipases et de protéinases et/ou d'amylase; et c) fermentation du substrat aqueux. Selon un premier mode de réalisation, le complément nutritionnel est obtenu par la fermen- tation entre 30 'C et 50 'C pendant 8 à 15 heures d'un substrat aqueux contenant des protéines végétales et des lipides végétaux et 0,01 à 0,1 % en poids d'un mélange de lipases et de protéi- nases. Selon un second mode de réalisation, le complément nutritionnel est obtenu par la fermen- tation entre 30 'C et 550 C pendant 8 à 15 heures d'un substrat aqueux contenant des protéines végétales et des lipides végétaux et 0,01 à 0,1 % en poids d'un mélange de lipases, de protéi- nases et d'amylase. Selon un trosième mode de réalisation, le complément nutritionnel est obtenu par la fer- mentation entre 40 'C et 50 'C pendant 12 à 15 heures d'un substrat aqueux contenant des pro- téines végétales et des lipides végétaux et de 1 à 3 % en poids de koji (une sorte de levure). Les substrats utilisés dans la présente invention peuvent être tout ce qui renferme une pro- téine végétale et un lipide végétal, comme par exemple le son de riz, la lie de saké (alcool de riz), les germes de blé, le son de blé, le blé noir complet, le millet de sarrasin complet, le soja, la lie de fromage de soja, le lait de soja, les pois adzuki, la farine de soja, la mouture de café, les ignames, les taros (Colocasia antiquorum), la mouture de thé, le miel, le sésame, les caca- huètes, les graines de lotus, les feuilles d'ashitaba, les "langues de boeuf' (Perillafrutescens crispa), les algues wakame et les laminaires Parmi ceux-ci, sont particulièrement préférés pour servir de substrats dans la présente invention le son de riz, la lie de saké, le son de blé, la mou- ture de café, les germes de blé, le sésame, la lie de fromage de soja, le soja et les pois adzuki car ils contiennent des protéines végétales et des lipides végétaux en quantités bien équilibrées. Un tel substrat est mis à fermenter en utilisant des enzymes capables de décomposer à la fois les protéines végérales et les lipides végétaux dans le substrat et/ou en utilisant une levure. Ces enzymes peuvent comprendre lipase et protéinase, ou lipase, protéinase et amylase La le- vure peut être du koji ou du riz malté, capable de produire dans l'organisme lipase, protéinase et/ou divers autres types d'enzymes. Les protéinases préférées à utiliser sont les protéinases alcalines (p H 9 à 13) qui peuvent être obtenues à partir par exemple de Bacillus, Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus alcalophilus, Bacillus cereus et Bacillus mycoides Une solution tampon préférée est l'urée, de préférence à raison de 0,1 à 1,0 mol/l. Lorsque cette protéinase alcaline doit être neutralisée ou acidifiée, de la papaiïne peut par exemple être mélangée à la protéinase obtenue à partir de l'Aspergillus On peut utiliser un groupe de protéinases faiblement alcalines ou neutres (meilleure fonctionnalité avec un p H entre 6 et 8) qui peuvent être raisonnablement stables à p H 9, comme par exemple la protéinase neutre obtenue à partir du Streptomyces griseus, en même temps qu'une protéinase alcaline. Cette protéinase alcaline peut être mélangée à une protéinase animale On peut par exemple utili- ser la protéinase pancréatique et une protéinase qui fonctionne à son maximum à un p H compris entre 8 et 9, ou inférieur, comme par exemple un composé de protéinase tiré de Streptomyces griseus et une enzyme tirée de Bacillus natto, Bacillus cereus ou de Bacillus mycodies, un enzy- me tiré de Asp orizae, Rhiz Chinensis ou Mucor pusillus, et une protéinase végétale comme par exemple papaïne, ficine et bromélinase Il est nécessaire d'ajuster les valeurs du p H de ladi- te protéinase pour obtenir la meilleure fonctionnalité de l'enzyme utilisée On peut ajouter de l'urée ou une solution tampon de bicarbonate de sodium ou de phosphate monopotassique par exemple pour ajuster le p H. Lesdites lipases peuvent être diverses sortes de moisissures, levures, bacilles, liquides bio- logiques ou enzymes extraits d'organes internes, comme par exemple la lipase pancréatique, la lipase du foie, la bactérie de la tuberculose, la lipase PFIB (fibrinolysine) et la lipase de hima. Les polysaccharides contenus dans les substrats, et tout spécialement les disaccharides et les tri- saccharides, possèdent un excellent pouvoir immunitaire et l'amylase peut décomposer les sac- charides. Il est également nécessaire d'ajuster le p H en fonction de ces lipases et de l'amylase de ma- nière à obtenir une bonne décomposition Une solution tampon de bicarbonate de sodium et de carbonate de sodium, de borax et d'hydroxyde de sodium, de borax et de carbonate de sodium, ou de phosphate monosodique et d'hydroxyde de sodium, etc peut être utilisée Il est pos- sible aussi d'utiliser plusieurs de ces solutions tampon. La quantité d'enzymes nécessaire dépend du type d'enzymes et de leur activité On préfere- ra habituellement une plage de 0,01 à 1 % en poids La quantité de lipases ou d'amylase est ha- bituellement la moitié de la quantité de protéinase La température de fermentation n'est pas ca- pitale dans la présente invention Elle dépend des propriétés de l'enzyme utilisée, comme la température la plus appropriée et la plage de stabilité La température est habituellement compri- se entre 30 C et 55 C La durée de la fermentation est habituellement comprise entre 8 et 15 h Il est préférable de stériliser le substrat dans un autoclave avant chaque fermentation. Du koji tel que riz malté ou malt, qui peut produire une enzyme telle que lipase, protéinase et amylase dans l'organisme, peut également être utilisé pour la fermentation Les conditions préférées pour la fermentation dans le cas du koji sont de 1 à 3 % en poids, de 40 C à 50 C, et 12 à 15 h Lorsqu'on utilise le koji pour la décomposition d'un substrat, il n'est pas nécessaire d'utiliser de solution tampon préparée spécialement. Une unité induite de la méthode d'Anson est utilisée pour mesurer l'activité enzymatique. L'unité est appelée unité protéinase (hémoglobine) U L'unité U correspond à la quantité d'en- zyme entrant en contact avec 1 micromol/min (à 40 C, 280 nm) de tyrosine provenant de l'hé- moglobine précipitée par l'acide trichloracétique. Les produits fermentés sont obtenus par adjonction d'eau à un substrat suivie de l'adjonc- tion d'enzymes (lipase, protéinase et/ou amylase) ou de koji (riz malté et/ou malt) dans le sub- strat aqueux, puis en faisant fermenter le liquide. Le filtrat du produit fermenté préparé par adjonction d'enzymes ou de koji à un substrat aqueux contenant les proteines végétales ou les lipides végétaux a été analysé par HPLC (chro- matographie liquide haute performance) L'analyse a été effectuée en utilisant un détecteur (LC- 9 A, Shimadzu Seisakusho, Co, Ltd, Japon), un système de colonnes ( 3 m de long) et l'acéto- nitrile comme éluant, la température de la colonne étant de 30 C et le débit de liquide étant de 10 ml/min Les résultats suivants ont été obtenus. Il a été confirmé que ledit filtrat fermenté contenait des acides gras tels que acide myris- tique, acide palmitique, acide stéarique, acide arachique, acide béhénique, acide lignocérique, acide dodécénique, acide tétradécénique, acide tétradécadiénique, acide pentadécénique, acide hexadécénique, acide oléique, acide linoléique, acide linolénique, acide eicosaénique, acide ei- cosadiénique, acide arachidonique, acide eicosatriénique, acide érucique et acide docosahexa- nique Ledit filtrat contenait aussi des acides aminés tels que leucine, isoleucine, lysine, méthio- nine, cystéine, phénylalanine, tyrosine, thréonine, tryptophane, valine, histidine, arginine, acide aspartique, alanine, acide glutamique, glycine, proline et sérine Des saccharides, de la cendre, du calcium, du phosphore, de la carotine, de la vitamine B 1, de la vitamine B 2, de la vi- tamine B 3, de l'acide pantothénique et des acides nucléiques étaient également contenus dans le filtrat. Comme il apparaît clairement de l'analyse, le produit fermenté selon la présente invention contient de nombreux acides aminés et acides gras différents Les sulfures d'acides aminés et d'acides gras insaturés sont considérés comme vitaux pour le maintien et la stimulation de l'im- munité Dans le cas des produits fermentés préparés à partir d'un substrat aqueux auquel sont ajoutés protéinases, lipases et/ou amylase, ou du koji tel que riz malté ou malt, il se produit une décomposition des saccharides du substrat et des polysaccharides tels que disaccharides et tri- saccharides sont formés, dont ont pense qu'ils stimulent eux aussi l'immunité. Un procédé de fabrication d'un complément nutritionnel selon la présente invention est dé- crit ci-dessous. On prépare un substrat aqueux auquel sont ajoutés protéines végétales et lipides végétaux. On rajoute alors une enzyme à l'ensemble Pour la décomposition du substrat, on utilise une protéinase, une lipase et/ou une amylase et/ou du koji qui peuvent produire diverses enzymes dans l'organisme Ladite enzyme peut être ajoutée séparément ou en même temps D'autres types d'enzyme peuvent également être utilisés La température de fermentation préférée lorsqu- 'on utilise une enzyme est comprise entre 30 'C et 550 C La durée de fermentation préférée sous agitation du substrat varie entre 8 h et 15 h Le p H doit être déterminé en fonction du type d'en- zyme utilisée Lorsqu'on utilise le koji, la température de fermentation préférée est comprise entre 400 C et 500 C La durée de fermentation préférée du substrat varie entre 12 h et 15 h sous agitation Les produits fermentés ainsi préparés sont filtrés. Le complément nutritionnel préparé par filtration des produits fermentés peut être ajouté à du jus, des sucreries, de la sauce de soja, etc Modes de Réalisation Préférés * Mode de réalisation 1 Du son de riz a été traité thermiquement pendant 30 minutes par vapeur chaude ( 1500 C à 'C) dans un autoclave Le son de riz traité thermiquement a alors été comprimé dans une presse jusqu'à obtention d'une teneur en eau de 40 % en poids De l'Aspergillus orizae et Hanzenula anorama ont entre temps été cultivés séparément sur milieu de culture MY (mélange de polypeptone, extrait de levure, extrait de malt, glucose et eau) Du Bacillus subtilis a égale- ment été cultivé sur bouillon de culture Le son de riz comprimé ( 10 kg) a été stérilisé et les trois substances cultivées susmentionnées mélangées à lui Le mélange a été agité à 300 C Après 8 heure environ, la température a été portée à 450 C et l'agitation a été reprise pour 5 h Le produit alors fermenté a été filtré et 300 g de filtrat ont été obtenus Le filtrat a été analysé Les résultats de l'analyse sont les suivants. Composants % (en poids) eau 8,5 acides aminés 55,8 acides gras 20,1 saccharides 2,5 cendres 8,3 calcium 2,3 phosphore 2,2 carotine 0,09 vitamine Bl 0,15 vitamine B 2 0,0005 vitamine B 3 0,0025 acide panthothénique 0,005840 acides nucléiques 0, 1160 * Mode de réalisation 2 On ajoute de l'eau à des germes de blé ( 40 % en poids) et l'on traite alors thermiquement le substrat aqueux dans un autoclave pendant 25 min De l'Aspergillus soya a séparément été cul- tivé sur milieu de culture MY Du Saccharomyces subtilis a également été cultivé sur bouillon de culture On ajoute au mélange des deux dites substances cultivée de la papaïne, du riz malté, de la lipase rénale et hydrocarbonate de sodium, et le mélange résultant est ajouté et mélangé au substrat aqueux ( 10 kg) L'ensemble du mélange est agité pendant 10 h à 450 C Le produit fer- menté est filtré et un filtrat est obtenu ( 310 g) Le filtrat a été analysé et les résultats suivants ont été obtenus. Composants % (en poids) saccharides 2,0 acides aminés 65,5 acides gras 25,5 cendres 12,3 carotine 0,009 vitamine Bl 0,110 vitamine B 2 0,0005 vitamine B 3 0,0015 acide panthothénique 0,0038 acides nucléiques 0,150 * Test d'immunité Les filtrats obtenus dans les Modes de réalisation 1 et 2 ont été testés sur 20 souris dont 10 étaient en bonne santé et les 10 autres souffraient de rhume Elles ont été séparées en deux groupes de 10 dont cinq étaient en bonne santé dans chaque groupe Deux des souris en bonne santé et deux des souris malades de chaque groupe n'ont reçu qu'une solution de sérum physio- logique ( 2 ml deux fois par jour) On a administré aux trois autres souris en bonne santé et aux trois autres souris malades de chaque groupe lesdits filtrats des Modes de réalisation 1 et 2 ( 2 ml deux fois par jour), respectivement Les résultats suivants ont été obtenus sur une durée d'observation de 30 jours. Souris en bonne santé: aucune anomalie n'a été détectée sur les quatre souris des deux groupes qui n'ont reçu que la solution de sérum physiologique; aucune anomalie n'a été détec- tée sur les six souris des deux groupes qui ont reçu l'un ou l'autre des filtrats.35 Souris malades: les quatre souris des deux groupes qui n'ont reçu que le sérum physio- logique sont mortes dans les cinq jours; les six souris des deux groupes auxquelles on a admi- nistré l'un ou l'autre filtrat ont survécu au-dela des 30 jours de test. Un effet d'immunité des filtrats a ainsi été confirmé. Des modes de préparation montrant des usages pratiques de ce filtrat de produits fermentés selon l'invention sont donnés ci-dessous. * Mode de préparation 3 Des tomates bien mures ( 1 kg) ont été concassées avec un mixeur La pâte concassée a été envoyée dans un réfrigérant de Liebig dans lequel coulait de l'eau à 90 'C et l'enzyme oxydante de la pâte a été détruite La pâte a alors été placée dans un broyeur Du sel ( 7 g) et le filtrat obte- nu selon le Mode de réalisation 1 ( 20 g) lui ont été ajoutés Le mélange a été broyé pendant 5 secondes La pâte broyée a été traitée au vide et stérilisée à 120 'C pendant 2 secondes Elle a alors été refroidie, donnant du jus de tomates. * Mode de préparation 4 Du sucre en poudre ( 1 kg) et du sirop de malt épais ( 500 g) ont été mélangés au filtrat du produit fermenté du Mode de réalisation 1 ( 10 g) Le mélange a été chauffé à 120 'C dans une casserole en aluminium Le sirop épaissi a été versé petit à petit dans de l'alcool qui se trouvait à une température inférieure à 00 C, formant ainsi des pastilles. * Mode de préparation 5 Une base de gomme naturelle ( 20 g) a été mise à fondre à la chaleur et le filtrat du Mode de réalisation 1 ( 2 g), du carbonate de calcium ( 2 g), du sucre en poudre ( 40 g), du sucre de raisin (glucose) ( 20 g), du sirop de malt ( 15 g) et des excipients aromatiques ( 1 g) lui ont été ajoutés. L'ensemble a été soigneusement pétri et pressé à plat On a ainsi obtenu du chewing gum. * Mode de préparation 6 De la poudre de riz ( 100 g) et du sucre ( 100 g) ont été placés dans un récipient De l'eau ( 80 ml) a été ajoutée petit à petit dans le récipient L'ensemble a été mélangé soigneusement et le filtrat du Mode de réalisation 1 ( 10 g) a été ajouté Le mélange résultant a été soigneusement pétri Le mélange pétri a été passé à la vapeur dans un cuiseur à vapeur pendant 25 min Le mé- lange passé à la vapeur a alors été placé dans un bol et un peu de sel lui a été mélangé Le mé- lange a été divisé en petites portions, chacune pesant environ 5 g, devenant des boulettes (que- nelles). Les dits modes de préparation ne représentent que quelques unes des nombreuses possibi- lités d'utilisation des produits fermentés préparés selon la présente invention En consommant ce type d'aliments, un bon état de santé sera entretenu et/ou amélioré. REVENDICATIONS 1 Complément nutritionnel préparé selon les étapes suivantes: a) préparation d'un substrat aqueux contenant des protéines végétales et des lipides végé- taux; b) adjonction à celui-ci d'un mélange d'enzymes, choisies parmi les lipases, protéinases, amylases; et c) fermentation du substrat aqueux. 2 Complément nutritionnel préparé selon la Revendication 1, caractérisé en ce que l'on ajoute 0,01 à 0,1 % en poids de lipases et de protéinases et que la fermentation du substrat aqueux est opérée entre 30 'C et 50 'C pendant 8 à 15 heures.10 3 Complément nutritionnel préparé selon la Revendication 1, caractérisé en ce que l'on ajoute 0, 01 à 0,1 % en poids de lipases, de protéinases et d'amylase et que la fermentation du substrat aqueux est opérée entre 30 'C et 550 C pendant 8 à 15 heures. 4 Complément nutritionnel préparé selon la Revendication 1, caractérisé en ce que l'on ajoute 1 à 3 % en poids de koji et que la fermentation du substrat aqueux est opérée entre 400 C et 500 C pendant 12 à 15 heures.