FR 2682008 A1 19930409 FR 9112368 A 19911008 Nouvelles compositions dérivées d'algues marines; leurs procédés de préparation et applications dans le domaine agricole. La présente invention a pour objet de nouvelles composi- tions dérivées d'algues marines, leur procédé de préparation ainsi que leurs applications dans le domaine agricole. On sait que de nombreuses compositions dérivées d'algues marines ont été proposées dans le domaine agricole, notamment comme stimulant de croissance, correcteur de carence et anti-stress par voie foliaire. La présente invention résulte de la découverte de nou- velles compositions dérivées d'algues marines présentant une acti- vité de type systémique originale sur les grandes fonctions physiologiques des végétaux, photosynthèse et respiration, en augmentant leur potentiel énergétique, et particulièrement intéressante notamment, en ce qui concerne l'accélération de la croissance des plantes, l'élongation cellulaire et la germination des graines. Les compositions conformes à l'invention trouveront donc application dans le domaine agricole pour augmenter la qualité et le rendement des productions en intervenant spécifiquement sur certaines fonctions physiologiques des végétaux, par exemple en améliorant les métabolismes photosynthétiques et respiratoires. Ces compositions pourront ainsi être utilisées pour la préparation de solutions d'enrobage pour semence, d'engrais liquides ou encore de solutions à appliquer sur les feuilles d'une plante. Ces nouvelles compositions sont susceptibles d'être obte- nues par la mise en oeuvre d'un procédé comprenant l'hydrolyse basique d'au moins une algue brune, de préférence choisie parmi les fucales ou les laminariales, en présence d'un réducteur comme par exemple un borohydrure de métal alcalin, à une température comprise entre environ 50 C et 100 C, et de préférence d'environ 80 C, pen- dant une durée comprise entre 4 et 8 h, de préférence d'environ 6 h; ladite hydrolyse étant suivie d'une neutralisation, de préfé- rence par l'addition d'un acide fort jusqu'à l'obtention d'un p H compris entre environ 6 et 8, puis d'une filtration de préférence sur une membrane minérale dont le diamètre de pore est d'environ 0,45 Mm, éventuellement d'une diafiltration ou d'une électrodialyse du perméat ainsi obtenu, et éventuellement une réduction à sa poudre du perméat obtenu après ultrafiltration ou du rétentat obtenu après diafiltration. Ce procédé permet de conduire à des compositions tout à fait originales et nouvelles présentant une activité de type sys- témique remarquable sur la croissance des plantes, sur l'élongation cellulaire, sur la germination des graines, et la physiologie des plantes, en augmentant leur potentiel énergétique. Il semble que les propriétés particulières de ces compo- sitions soient essentiellement dues à leur structure chimique ori- ginale directement liée à leur procédé d'obtention, et en particulier aux conditions tout à fait originales de l'hydrolyse basique (présence d'un réducteur, température et durée très pré- cises). On a en effet constaté que, si les conditions de l'hydro- lyse spécifiées ci-dessus ne sont pas rigoureusement respectées, les compositions obtenues après neutralisation et filtration ne présentent plus les activités remarquables des compositions reven- diquées. Le procédé conforme à la présente invention s'applique généralement aux algues brunes (phéophycées), et en particulier aux fucales ou aux laminariales, de préférence du type Ascophyllum nodosum. Ces algues peuvent être utilisées sous des formes variées Le procédé conforme à l'invention s'applique en particu- lier aux algues fraîches, aux algues sèches, ou encore à des crèmes d'algues comme par exemple celles obtenues par cryobroyage suivant le procédé décrit dans le brevet français n 74 35 162 Dans le cas des crèmes d'algues, on procédera préalablement à l'hydrolyse à un traitement acide, par exemple en ajoutant à la crème un acide fort comme par exemple l'acide chlorhydrique. Le réducteur utilisé dans le procédé conforme à l'inven- tion est notamment un borohydrure de métal alcalin, en particulier le borohydrure de sodium. D'autres réducteurs peuvent être utilisés On citera en particulier les alumino-hydrures de métal alcalin comme par exemple L'alumino-hydrure de lithium. Les conditions de température et de durée de l'étape d'hydrolyse constituent des paramètres critiques du procédé con- forme à l'invention. On a constaté expérimentalement que, pour parvenir aux résultats recherchés, la température doit être comprise entre 50 C et 100 C et la durée entre 4 et 8 h Les conditions optimales d'hy- drolyse semblent être d'environ 80 C pour la température et 6 h pour la durée. L'étape de neutralisation qui suit l'étape d'hydrolyse est généralement réalisée par l'addition à l'hydrolysat d'un acide fort, comme par exemple L'acide chlorhydrique jusqu'à l'obtention d'un p H compris entre environ 6 et 8, de préférence d'environ 6,5. L'hydrolysat neutralisé ainsi obtenu est clarifié par filtration sur une membrane présentant un diamètre de pore d'envi- ron 0,45 pm. Cette filtration sera de préférence une filtration tan- gentielle sur une membrane tubulaire carbone-céramique par exemple de type Carbosep. Le perméat obtenu à l'issue de cette étape présente l'en- semble des caractéristiques des compositions conformes à l'inven- tion. Cependant, on peut prévoir des étapes complémentaires facultatives, et notamment la réduction à sa poudre du perméat obtenu à l'issue de la filtration ou bien encore une diafiltration ou une éLectrodialyse de ce perméat suivie éventuellement d'une réduction à sa poudre du rétentat ainsi obtenu. Selon une caractéristique particulière, l'étape de dia- filtration est réalisée sur une membrane de porosité nominale égale à 1 000 daltons, de préférence pendant une durée telle que le ré- tentat obtenu présente une résistivité d'au moins 100 ohms x cm, de préférence de 200 ohms x cm. Se Lon une variante de réalisation, l'étape de diafiltra- tion est remplacée par une étape d'éLectrodialyse réalisée sur une membrane non spécifique pendant une durée telle que le rétentat obtenu présente une résistivité d'au moins 100 ohms x cm, de préfé- rence 200 ohms x cm. Selon une caractéristique particulière du procédé con- forme à l'invention, l'hydrolysat obtenu après hydrolyse ou éven- tuellement neutralisation, le perméat obtenu à l'issu de l'étape de filtration, ou encore le rétentat obtenu à l'issu de l'étape de diafiltration ou d'électrodialyse sera traité par de la polyvinyl pyrrolidone. On a constaté d'une façon tout à fait surprenante et inattendue, qu'un tel traitement permet encore de potentialiser l'activité biologique des compositions conformes à l'invention. Ce traitement consistera à faire réagir en solution de la polyvinyl pyrrolidone sur l'hydrolysat, le perméat ou le rétentat précité et à filtrer le mélange réactionnel ainsi obtenu. Avantageusement, la polyvinyl pyrrolidone est mise en réaction à une concentration comprise entre 0,1 et 50 g/L de solu- tion, de préférence à une concentration comprise entre 0,5 et g/L et encore de préférence à une concentration de 5 g/L. La réaction sera réalisée pendant une durée comprise entre 1 et 90 min et la filtration peut être réalisée soit par ultrafiltration ou microfiltration, soit sur un filtre à plaque horizontale. Les compositions dérivées d'algues marines, susceptibles d'être obtenues par la mise en oeuvre du procédé décrit précédem- ment pourront être utilisées pour la préparation de compositions à usage agricole, en particulier pour la préparation de produits d'enrobage de semence ou d'engrais accélérant la croissance des plantes, en augmentant leur potentiel énergétique. Dans ces utilisations, les compositions conformes à l'in- vention seront employées à des doses comprises entre 50 et 500 ml/quintal dans le cadre du traitement des semences, de 0,1 à ml/L dans le cadre du traitement foliaire. L'invention sera mieux comprise et d'autres buts, carac- téristiques et avantages de celle-ci apparaîtront plus clairement à la lecture de la description explicative qui va suivre, faite en référence aux exemples illustratifs suivants. Exempte 1: Préparation d'une composition conforme à L'invention dérivée d'une crème d'algues Etape a On soumet des algues fraîches de type Ascophyllum nodosum (Linné Lamouroux) à un cryobroyage (-40 C) suivant le procédé décrit dans le brevet français n 74 35 162. On obtient ainsi une crème dont le diamètre moyen des particules est inférieur à 20 pm. A 800 ml de la crème ainsi obtenue, on ajoute progressi- vement sous agitation 1,2 l d'acide chlorhydrique ( 4 M) La durée totale d'agitation est de 15 min. Après une phase de décantation d'environ 1 h, on sépare la phase liquide de la phase solide par centrifugation. Le culot de centrifugation ainsi obtenu est rincé plu- sieurs fois par de l'eau déminéralisée jusqu'à ce que le p H du sur- nageant soit supérieur à 5. Etape b On recueille le culot de centrifugation obtenu à l'issue de l'étape a Dans cet exemple, ce culot est constitué de 500 g de masse solide présentant une teneur en matière sèche supérieure à 10 %. Le culot de centrifugation est hydrolysé par addition d'environ 2,5 I d'une base forte (KOH, 4 M) et par addition de 2,5 g de borohydrure de sodium (Na 2 BH 4). L'hydrolyse est réalisée au bain-marie à une température d'environ 800 C pendant 6 h sous agitation. Etape c L'hydrolysat obtenu à l'issue de l'étape b est neutralisé par l'addition d'un acide fort (H Cl, 37 %) jusqu'à l'obtention d'un p H d'environ 6,5. Dans cet exemple, on a ajouté environ 750 m L d'acide chlorhydrique à l'hydrolysat. Etape d Le liquide neutre obtenu à l'issue de l'étape c est soumis à une clarification par filtration tangentielle sur une mem- brane tubulaire carbone-céramique de type Carbosep de porosité 0,45. L'opération est réalisée en maintenant une pression de 1 bar sur la colonne de filtration. On obtient ainsi un perméat présentant un volume d'en- viron 3 375 ml et un p H d'environ 6,5 La résistivité mesurée est de 10 ohms x cm. Etape e Le perméat obtenu à l'issue de l'étape d est soumis à une diafiltration de façon à en éliminer les sels minéraux. A cet effet, on a utilisé un système Pellicon commercia- lisé par la société Millipore équipé d'une cassette de porosité 1 000 daltons associée à une pompe Procon également commercialisée par la société Millipore. On suit la diminution de la teneur ionique du filtrat en mesurant régulièrement la résistivité. La diafiltration est poursuivie jusqu'à ce que la résis- tivité du rétentat soit d'environ 200 ohms x cm. On obtient ainsi 3 375 ml de rétentat présentant un p H égal à 6,5. Etape f Le rétentat obtenu à l'issue de l'étape e est soumis à une lyophilisation et l'on récupère ainsi environ 10,5 g de poudre sèche. Le spectre RMN 13 C de la composition est donné à la figure unique. Exempte'2: Traitement à La polyvinyl pyrrolidone On traite un échantillon d'hydrolysat neutralisé obtenu en suivant le processus indiqué aux étapes a à c de l'exemple 1 par de la polyvinyl pyrrolidone à la dose d'environ 1 % en poids. A cet effet, 9,5 g de polyvinyl pyrrolidone (produit com- mercialisé sous la dénomination Polyclar ) sont introduits dans un volume de 350 ml d'hydrolysat. On laisse la polyvinyl pyrrolidone s'épaissir pendant environ 2 h. La solution ainsi obtenue est additionnée à environ 3 l d'hydrolysat neutralisé, le mélange étant maintenu sous agitation pendant 30 min, puis filtré sous vide sur un filtre Whatman GF/A. Le liquide ainsi obtenu est soumis aux opérations de cla- rification, dessalement et mise en poudre respectivement décrites aux étapes d à f de l'exemple 1. Exempte 3: Dessalement par étectrodia Lyse On prépare 3 375 ml de perméat en suivant le expérimental décrit aux étapes a à d de l'exemple 1. L'élimination des sels minéraux est obtenue ici protocole par élec- trodialyse. A cet effet, on utilise un pilote de laboratoire à deux compartiments de type TS 2 10 P présentant une surface totale de cellule de 2 000 cm, et équipé d'une série de membranes standard. Le mode de fonctionnement utilisé est le mode discontinu par recirculation sur une cuve. Cet appareil est équipé de 3 réservoirs: 2 pour les pro- duits et 1 pour les électrodes Le volume unitaire utile est de 1,9 l Il comprend en outre 3 pompes à entraînement magnétique de débit égal à 180 l/h. On suit la diminution de la teneur ionique en mesurant la résistivité. Au départ, le perméat présente une résistivité de ohms x cm. L'électrodialyse est réalisée pendant une durée suffi- sante pour obtenir une résistivité finale de 200 ohms x cm. On récupère ainsi 3 375 ml d'un filtrat présentant un p H de 6,5 et une résistivité de 200 ohms x cm. Ce filtrat peut être réduit à sa poudre par lyophilisa- tion comme indiqué à l'étape f de l'exemple 1. Exempte 4: Composition se Lon L'invention dérivée d'algues fraîches On soumet 500 g d'algues fraîches de type Ascophyllum nodosum (Linné Lamouroux) à une hydrolyse basique contrôlée en pré- sence d'un réducteur. Contrairement à la crème d'algues traitée à l'exemple 1, les algues fraîches peuvent être hydrolysées sans traitement préa- lable à l'acide. L'hydrolyse est réalisée ici par addition de 2,5 L d'une base forte (KOH, 4 M) et de 2,5 g d'un réducteur (borohydrure de sodium) dans un bain-marie, à une température de 80 O C pendant 6 h sous agitation. L'hydrolysat ainsi obtenu est soumis au protocole expéri- mental décrit aux étapes b à e de l'exemple 1. Exemple 5: Composition conforme à L'invention dérivée d'algues sèches On soumet 500 g d'algues fraîches de type Ascophy L Lum nodosum (Linné Lamouroux) à un séchage à 50 C dans une étuve pen- dant une durée de 24 h. On récupère ainsi 116 g d'algues fraîches qui sont en- suite broyés manuellement dans un mortier. La poudre ainsi obtenue est ensuite soumise à une hydro- lyse basique contrôlée en présence d'un réducteur. L'hydrolyse est réalisée par addition de 2,5 I d'une base forte (KOH; 4 M) et de 2,5 g d'un réducteur (borohydrure de sodium dans un bain-marie à une température de 80 C pendant 6 h sous agi- tation. L'hydrolysat ainsi obtenu est traité en suivant le proto- cole expérimental décrit aux étapes b à e de l'exemple 1. ETUDE DES PROPRIETES DES COMPOSITIONS SELON L'INVENTION Les propriétés des compositions dérivées d'algues marines conformes à la présente invention ont été mises en évidence en effectuant les expériences décrites ci-après. Expérience 1: Essai de pelliculage d'une composition conforme à l'invention sur une semence de pois protéagineux On prépare 4 lots de 500 g de graines de pois (Ascoona) pelliculés à l'aide de solutions aqueuses comprenant un dispersant (produit commercialisé sous la dénomination Pellistac par la société La Quinoléine) et le produit obtenu à l'issue de l'étape e de l'exemple 1. Les quantités respectives des constituants de la solution de pelliculage pour chaque lot sont mentionnées dans le tableau I ci-après. Tab Leau I Lot Produit de Dispersant Eau l'exemple déminéralisée (ml) (ml) (ml) D O O 1 3 D 1 0,5 1 2,5 D 21 1 2 D 3 2 1 1 a) Mesure de germination Les graines pelliculées comme indiqué précédemment ont été semées dans des pots remplis de sable de carrière, lavées, séchées et humidifiées à 9 pour 1 000 conformément à la norme ISTA. Les semis ainsi réalisés sont recouverts d'un film de polypropylène pour créer un effet de serre et placés en chambre de culture à une température de 19 C. Dans ces conditions, La Levée s'effectue en 4 jours et L'expérience est arrêtée Le 8 ème jour après Le semis. On procède, pour chaque pot, aux trois observations sui- vantes: L'objet pesée. nombre de p Lantu Les Levées; poids frais du système racinaire; poids frais de La jeune tige. Le système racinaire, après arrachage des p Lantu Les fait d'un Lavage et d'un essorage sur papier buvard avant La Les résultats obtenus ont été reportés dans Le tab Leau II ci-après. Tableau II Ces résultats font apparaître que Les compositions dérivées d'a Lgues conformes à La présente invention augmentent de façon significative Les poids frais des tiges et des racines par rapport au témoin. b) Essai de croissance Cinq graines de chaque Lot Dot D 1, D 2 et D 3 sont semées dans un conteneur de 2 l contenant du terreau "spécia L semis" enri- chi en engrais. Ce processus est répété 4 fois. Pour effectuer ces semis, on a choisi des graines de même calibre, sans cassure ni tégument. Les conteneurs sont disposés en chambre de culture à une température de 19 C, une hygrométrie supérieure ou égale à 60 % et OS avec une photopériode de 14 h le jour et 10 h la nuit. L'arrosage des pots est calibré pendant tout le cycle végétatif en fonction du développement. Six jours après le semis, on procède à une notation de précocité et à un comptage du nombre de plantes ayant levé. Trente-trois jours après le semis, on procède à une nou- velle notation réalisée sur le stade de chaque plante, suivant la méthode suivante: la notation du nombre de noeuds auquel s'ajoute un système décimal pour la notation du dernier étage: 0,1 à 0,5: vrille plus ou moins sortie 0,6: stipule fermée, vrille sortie non étalée 0,7: stipule fermée, vrille étalée 0,8 à 0,9: stipule plus ou moins étalée. Après cette notation, toutes les plantes d'un même con- tainer font l'objet d'une mesure du poids frais des parties aérien- nes et du poids sec après étuvage ( 48 h à 100 C). Les résultats de toutes ces observations sont donnés dans le tableau III ci-dessous. Dans ce tableau la lettre A indique qu'il n'y a aucune différence sur le critère mesuré entre les différents lots. Tableau III Code Nombre de Précocité Nombre de plan Stade à la Poids frais des Poids sec en plante plantes le à la levée tes récoltées récolte parties aériennes des parties aé- vées en % * en % par plante riennes (en g) en % (en g) en % D O 100 A 100 12,18 20,50 100 1,25 100 D 1 100 A 100 12,14 18,09 88,2 1,18 94,4 D 2 99 A 99 12,32 18,35 89,5 1,13 90,4 D 3 100 A 100 12,37 20,80 101,5 1,28 102,4 K, o, al K 3 Ces résultats montrent que, pour les lots D 1 et D 2, la taille des tiges et feuilles est réduite par rapport au témoin et ceci de façon significative, alors qu'à la concentration D 3 ce phénomène est inversé. Expérience 2 Essai de pulvérisation foliaire d'une composition obtenue à l'étape e selon l'exemple 1 sur des plants de tomates cultivés en chambre de culture Des plants de tomates Rondello (hybride F 1) sont disposés en chambre de culture dans les conditions suivantes: substrat spécial tomate photopériode: 16 h le jour; 8 h la nuit temperature: constante à 18 C; hygrométrie: 75 % et plus jusqu'à l'apparition des pre- *mières fleurs puis 40 à 45 %; ventilation et recyclage d'air permanent. Le produit obtenu à l'étape e de l'exemple 1 est testé à trois concentrations: D 1: 1 pour 1 000; D 2: 5 pour 1 000; D 3: 10 pour 1 000. L'eau déminéralisée est utilisée comme témoin (Do) Les produits testés sont pulvérisés sur les plants de tomates suivant le calendrier et les volumes de pulvérisation indi- qués au tableau IV. Chaque essai est répété quatre fois. Tab Leau IV Jour Volume pulvérisé par plant en ml JO 4 JO + 8 j 6 JO + 18 j 10 JO + 30 j 15 JO + 39 j 20 JO + 49 j 26 Afin de limiter le développement végétatif et de vérifier l'incidence des traitements sur la fructification du premier bou- quet, on procède à l'ablation des deuxième et troisième bouquets (deux feuilles au-dessus du premier bouquet) lorsqu'apparaissent les premières nouaisons des fruits sur le premier bouquet. Concernant l'arrosage, chaque pot reçoit une quantité d'eau de 150 ml pour les deux jours jusqu'au sixième jour et, à partir du huitième jour, chaque pot est alimenté avec une solution fertilisante diluée dans de l'eau déminéralisée. L'essai est arrêté le soixantième jour. Trois observations ont été réalisées en cours de végéta- tion: a) avant la suppression des deuxième et troisième bou- quets (JO + 39 jours) on relève le nombre de boutons et leur état de floraison. Les résultats de cette observation sont regroupés au tableau V ci-après. b) Au jour JO + 49 jours, on compte le nombre de boutons floraux sur le premier bouquet. Les résultats de cette observation sont reportés au tableau VI ci-dessous. c) Le jour de l'arrêt de l'essai (JO + 60 jours) on compte pour chaque bouquet le nombre de fleurs, le nombre de fruits et le poids de chaque fruit. Les résultats de cette observation sont regroupés au ta- bleau VII ci-après. Tab Leau V Dose Nombre de Nombre de boutons Nombre de boutons boutons sur sur le 2 ème bouquet sur le 1 er bouquet le 3 ème bou Fermés Epanouis Fermés Epanouis quet (fermés) DO 14 17 O 11 il 6 D 12 17 O 14 9 Tab Leau V (suite) Dose Nombre de Nombre de boutons Nombre de boutons boutons sur sur le 2 ème bouquet sur le 1 er bouquet le 3 ème bou Fermés Epanouis Fermés Epanouis quet (fermés) D 2 17 17 1 10 13 D 3 22 21 1 8 12 + 1 T = 1 tomate formée Tableau VI Doses Nombre total de boutons floraux sur le 1 er bouquet D O 20 D 1 22 D 1 Z D 2 20 D 3 24 Tabteau VII Doses Nombre de Taux de Poids frais to-Nombre de fruits par classe de poid fruits nouaison % tal de fruits Moins de de 10,1 à plus de récoltés (g) 10 g 20 g 20 g DO 14 70 113,5 9 4 1 D 1 18 86 157,7 9 8 1 D 2 18 90 207,2 9 4 5 D 22 92 222,7 12 8 2 3. On constate à la lecture des tableaux V à VII que la composition conforme à l'invention augmente considérablement le taux de nouaison (de 15 à 20 % par rapport au témoin). En outre cette composition a une action très nette sur la précocité de la floraison, le nombre de fleurs épanouies étant particulièrement plus important aux doses D 2 et D 3. A la récolte, cette précocité de floraison est très bien reliée à la répartition des fruits par tranche de poids La com- position D 2 possède le plus de fruits de poids éLevé, tandis que les compositions D 1 et D 3 ont le plus de fruits à calibre intermé- diaire. Dans tous les cas, le nombre de fruits est beaucoup plus important que pour le témoin. Expérience 3: Test de germination de graines La germination est une des phases essentielles de la vie d'une plante Une bonne germination assure un bon départ pour sa croissance ultérieure et un bon développement racinaire lui confère à la fois une bonne nutrition minérale et une bonne adhérence au sol ou au substrat de culture. La découverte d'une substance susceptible de stimuler la germination des semences et un bon développement de l'appareil ra- cinaire apporte une contribution importante à l'agriculture. On a évalué l'influence des compositions conformes à l'invention sur la germination des semences de la façon suivante: Sans trempage préalable, des semences de melon et de tomate sont mises à germer par lot de 10 dans des boîtes de Petri de 5 cm de diamètre: dans une solution aqueuse (lot témoin); dans une solution contenant des substances de crois- sance (kinetine ou acide indolacétique (AIA)) à des concentrations de 0, 1 p M ou 1 p M; dans une solution contenant une composition selon l'exemple 4, à différentes concentrations, ces dernières étant exprimées en pg d'équivalent en hexoses. Les boites de Petri sont mises dans une enceinte à 250 C à l'obscurité. On a regroupé obtenus après 10 jours. au tableau VIII ci-après les résultats Tab Leau VIII Produit testé Eau Kin 1 p M Kin 0,1 p M AIA I p M AIA 0,1 p M Produit de 8 pg/ml Produit de 8 pg/ml Produit de 8 pg/ml l'exemple 1 l'exemple 2 l'exemple 4 % de germination Melon O Tomate Ces résultats démontrent sitions conformes à l'invention sur l'influence marquée des compo- la germination des graines. Expérience 4: Elongation des coléoptiles de blé Des graines de blé sont mises à germer à 25 C à l'obscu- rité. Au bout de 3 jours, les coléoptiles atteignent 2,5 à 3 cm de longueur Après l'excision des co Léoptiles, des segments de 8 mm de Longeur sont découpés. Afin de déterminer si la zone apicale, siège de produc- tion endogène d'auxine va interférer en synergie ou en antagonisme avec les compositions conformes à l'invention, 2 lots ont été tes- tés l'un comportant la zone apicale, l'autre n'en comportant pas. Pour chaque expérience et pour chaque dose de composition à tester, 2 lots de 10 fragments de co Léoptiles sont mis en pré- sence de 5 ml d'une solution aqueuse de composition à tester, dans des boîtes de Petri de 5 cm de diamètre. L'éLongation est mesurée après 20 h d'incubation à l'obs- curité à 25 C. Les résultats obtenus montrent que les compositions con- formes à l'invention ont une activité très favorable sur l'élonga- tion des coléoptiles Ces compositions agissent donc comme des ré- gulateurs de croissance. Expérience 5: Activité biostimulante du produit de l'exemple 1 sur les plants de tomates en croissance. Dans ce qui suit on désignera par "produit 1 " le produit obtenu sous forme de poudre à l'issue de l'exemple 1. Méthodologie: L'action du produit 1 a été étudiée sur des plants de tomate possédant une dizaine de feuilles, traités par pulvérisation de ce produit avec une solution à 0,1 %. On a effectué des observations ultrastructurales au niveau du limbe foliaire des cellules de l'épiderme supérieur et du parenchyme photosynthétique et de leurs organites. Ces observations ont été réalisées sur des microphoto- graphies. Les valeurs moyennes du nombre, de la taille, de la sur- face des organites et/ou de leurs sous-structures ont été calculées avec un coefficient de sécurité de 95 % Elles sont exprimées avec leur déviation standard (m + X S Les observations ultrastructurales ont toujours été réa- lisées sur les folioles de la quatrième feuille comptée à partir de la base des plants et ont porté sur les cinq lots suivants: T 1: ultrastructure foliaire de plants témoins non traités; T 2: ultrastructure foliaire 4 h après le traitement de toute la plante; E 1: ultrastructure après le traitement des trois E 2: ultrastructure après le traitement des trois E 3: ultrastructure 1 h après le traitement des 4 de la 4 ème feuille, non traitée, 1 h feuilles qui lui sont inférieures; de la 4 ème feuille, non traitée, 4 h feuilles qui lui sont inférieures; de la foliole terminale non traitée, autres folioles de la 4 ème feuille. Résultats: Les résultats des observations réalisées ont été résumés dans le tableau suivant: Tableau A Caractéristique observée T 1 T 2 E 1 E 2 E 3 Surface d'un plaste 12,5 + 7,7 pm 2 11,10 + 4,82 pu 2 12,03 + 4,72 pn 2 11,82 + 4,06 pm 2 11,11 + 3,51 pm 2 Nombre de grana par plaste 19,3 + 5,1 16,3 + 5,6 18 + 4,2 17,3 + 5,1 17,3 + 4,6 Surface d'un granum 0,16 + 0,04 p 2 0, 22 + 006 >m 2 0,32 + 0,07 m 2 0,31 + 0,06 pm 2 0,33 + 0,08 pm 2 Nombre de plastoglobules par plaste 6 + 4,4 9,4 + 2,9 10,3 + 3,3 10,4 + 3,6 8, 5 + 4,2 Diamètre d'un plastoglobule 0,11 + 0,02 pu 0,13 + 0,04 pm 0,12 + 0,01 pm 0,13 + 0,07 jm 0,13 + 0,08 pm Surface d'untmitochondrie 0,28 + 0,07 pm 2 0,66 + 0,21 pm 2 0,67 + 0,14 pm 2 0,60 + 0,16 pm 2 0,59 + 0,15 p 12 Nombre de peroxysomes par cellule O O 0,1 O 0,1 r O C) K, o, Interprétation: La comparaison visuelle des planches relatives aux plants non traités (T 1) et à ceux soumis à une pulvérisation atteignant la plante entière (T 2) révèle d'emblée des mitochondries plus volumi- neuses et des grana sensiblement plus grands chez les plantes trai- tées Il convient également de noter l'aspect dilaté des thyla- coîdes chez les plants soumis à l'action du produit 1. La comparaison des valeurs numériques des ultrastructures des lots T 1 et T 2 confirme ces observations: le produit 1 a une action hautement significative sur la surface moyenne d'une mitochondrie qui passe de 0,28 + 0,07 pm à 0,66 + 0,21 pm 2; le produit provoque donc un taux d'accroissement de 135,7 % de la surface mitochondriale. Il induit en outre une augmentation significative de la 2 2 surface d'un ganum qui passe de 0,16 + 0,04 pm 2 à 0,22 + 0,06 pm, le taux d'accroissement est de 37,5 %. Par ailleurs une analyse comparée des surfaces moyennes des mitochondries et des grana des 5 lots des plants (cf tableau ci- dessous), montre les différences très hautement significatives entre les essais El, E 2, E 3 et le témoin (T 1) (non traité). mitochondrie granum T 1 0,28 + 0,07 0,16 + 0,04 T 2 0,66 + 0,21 0,22 + 0,06 E 1 0,67 + 0,14 0,32 + 0,07 E 2 0,60 + 0,16 0,31 + 0,06 E 3 0,59 + 0,15 0,33 + 0,08 (surfaces en pm 2) Ces différences traduisent une augmentation de la surface des organites chez les plants soumis à des traitements partiels. On note même un accroissement plus important des grana par rapport à celui observé chez les plants traités entièrement. Ces observations traduisent sans équivoque que les Limbes foliaires non traités ont modifié leurs u Ltrastructures de La même manière que ceux directement soumis au contact du produit Ces mo- difications ultrastructurales des zones non traitées plaident en faveur d'un transport à longue distance du produit 1 et donc d'une activité systémique de ce produit. Le produit Pl appliqué par pulvérisation à la dose de 0,1 % sur des plants de tomate en croissance pénètre rapidement (moins de 1 h), en partie ou totalité, dans les cellules des limbes foliaires On note donc une bonne perméabilité cellulaire de ce produit. Les cibles qu'il atteint sont, au moins, les plastes et les mitochondries. L'accroissement de la surface des grana, lieux privilé- giés de l'accumulation des pigments photosynthétiques, conduit à une augmentation du taux de chlorophylle a et à une élévation de l'activité photosynthétique. L'augmentation spectaculaire de la surface mitochondriale conduit à une élévation du quotient respiratoire. L'action conjuguée de l'améLioration des métabolismes photosynthétique et respiratoire se traduit par une meilleure assi- milation du gaz carbonique et une élévation du bilan énergétique des cellules par la synthèse d'adénosine-tri-phosphate (ATP). REVENDICATIONS 1 Procédé de préparation de compositions dérivées d'al- gues marines, caractérisé en ce qu'il comprend: a) l'hydrolyse basique d'au moins une algue brune, de préférence choisie parmi les fucales ou les laminariales, en pré- sence d'un réducteur comme par exemple un borohydrure de métal al- calin, à une température comprise entre 50 et 100 C, et de préfé- rence d'environ 80 C, pendant une durée comprise entre 4 et 8 h, de préférence d'environ 6 h; b) la neutralisation de l'hydrolysat ainsi obtenu, de préférence par l'addition d'un acide fort jusqu'à l'obtention d'un p H compris entre environ 6 et 8; c) une filtration, de préférence sur une membrane miné- rale dont le diamètre de pore est d'environ 0,45 pm; d) éventuellement une diafiltration ou une éLectrodialyse du perméat obtenu à l'issue de l'étape c); et e) éventuellement une réduction à sa poudre du perméat obtenu à l'issue de l'étape c), ou du rétentat obtenu à l'issue de l'étape d). 2 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend en outre un traitement à la polyvinyl pyrrolidone: soit de l'hydrolysat obtenu à l'issue de l'étape a); soit de l'hydrolysat neutralisé obtenu à l'issue de l'étape b); soit du perméat obtenu à l'issue de l'étape de filtra- tion c); soit du rétentat obtenu à l'issue de l'étape de diafil- tration ou d'électrodialyse d). 3 Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'étape de diafiltration précitée est réalisée sur une mem- brane de porosité nominale égale à 1 000 daltons, de préférence pendant une durée telle que le rétentat obtenu présente une résis- tivité d'au moins 100 ohms x cm, de préférence de 200 ohms x cm. 4 Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'étape d'éLectrodialyse précitée est réalisée sur une mem- brane non spécifique pendant une durée telle que le rétentat obtenu présente une résistivité d'au moins 100 ohms x cm, de préférence ohms x cm. Compositions dérivées d'algues marines, susceptibles d'être obtenues par la mise en oeuvre du procédé selon l'une quel- conque des revendications 1 à 4. 6 Utilisation des compositions dérivées d'algues selon la revendication 5, pour la préparation de compositions à usage agricole. 7 Utilisation selon la revendication 6, pour la prépara- tion d'un produit d'enrobage de semence et d'élément de composition de cet enrobage. 8 Utilisation selon la revendication 6, pour la prépa- ration d'un engrais accélérant la croissance de la plante, en augmentant le potentiel énergétique des semances et des plantes.