FR 2677850 A1 19921224 FR 9207488 A 19920619 1 2677850 Composition nutritive hvpoallerqénique. La présente invention concerne une composition nutritive hypoallergénique. L'allergie, en particulier l'allergie aux aliments, est une maladie allergique dont souffrent fréquemment les enfants Sa croissance a été marquée ces dernières années La seule méthode thérapeutique de base pour l'allergie aux aliments a été couramment d'éliminer les allergènes dans les aliments Au Japon, trois sources principales d'allergènes des aliments sont les laits, les oeufs et les graines de soja Du fait qu'ils constituent des aliments peu coûteux contenant des protéines abondantes et sont consommés par un grand nombre de personnes en quantités importantes, les enlever des repas de tous les jours pose de sérieux problèmes nutritionnels et économiques aux familles dont certains membres souffrent d'allergie En particulier, l'élimination des laits, des oeufs et des graines de soja des repas d'enfants à l'âge de la croissance présente un problème sérieux du point de vue de la diététique. En conséquence, il existe une forte demande pour le développement d'aliments nutritifs qui sont exempts ou ne possèdent pas d'allerginicité, en vue de les administrer à des patients allergiques. Classiquement, on a fourni à des patients allergiques, en tant qu'aliments sans allergènes, des laits de chèvre, des laits à base de viande animale, des laits de graines de soja ou des laits similaires Ils souffrent cependant des inconvénients suivants. Les laits de chèvre ne conviennent pas pour des enfants, parmi lesquels se comptent une majorité des patients allergiques, à cause de leurs compositions nutritives De plus, il est reporté que les laits de chèvre sont absolument indésirables pour des patients allergiques au lait de vache, en particulier les enfants, à cause de la réactivité réciproque entre les protéines du lait de chèvre et les protéines du lait de vache lFood Intolerance in Infancy Allergology, Immunology, and Gastroenterology, édité par Robert N Hamburger, Vol 1, 253- 265, Raven Press ( 1989)l. Cet ouvrage rapporte également l'impossibilité de fournir des laits fabriqués à partir de viandes à des patients allergiques au lait de vache à cause de la réactivité réciproque entre les protéines constituants les viandes et les protéines du lait de vache, même si de tels laits fabriqués à partir de telles viandes sont fabriqués et vendus. Les laits de graines de soja ont été recommandés comme un bon substitut du lait de vache dans de nombreux pays en Amérique et en Europe Dans les pays asiatiques, y compris le Japon, cependant, de nombreux patients allergiques aux aliments sont allergiques aux graines de soja à cause de l'alimentation avec des graines de soja usuelles dans ces régions En outre, du fait de l'allerginicité élevée des graines de soja, il est reporté que des patients allergiques aux aliments qui ne sont pas allergiques aux graines de soja deviennent allergiques aux graines de soja lYamashita et al, Pediastrial MOOK, 48, 228- 241 ( 1987)l. Pour ces raisons, des compositions nutritives comprenant des acides aminés ou des peptides, en tant que sources d'azote, sont disponibles dans le commerce Elles présentent également divers inconvénients En particulier, des formulations et des compositions nutritives utilisant uniquement des acides aminés libres en tant que source d'azote donnent des goûts et des odeurs déplaisants à cause des acides aminés libres, ce qui empêche les patients de les prendre pendant des périodes prolongées En outre, elles sont insuffisamment digérées ou absorbées à cause de leur pression osmotique élevée, bien qu'elles soient théoriquement exemptes d'allerginicité lNonomura, et al, Allergy Clinics, 9, 1035 ( 1989)l. Des formulations contenant des peptides à allerginicité réduite obtenues par hydrolyse avec des enzymes de protéines dérivées de laits de vache ou de graines de soja sont fabriquées et disponibles dans le commerce De telles formulations ont également un problème de goûts et d'odeurs déplaisants à cause des acides aminés ou des peptides produits par l'hydrolyse de protéines, ce qui empêche les patients de prendre de tels produits continuellement pendant une longue période de temps En addition, l'allerginicité n'est pas toujours complètement éliminée de telles compositions Réduire le problème des goûts et odeurs déplaisants en diminuant le taux d'hydrolyse aurait pour résultat une élimination insuffisante de l'allerginicité D'autre part, un taux d'hydrolyse plus élevé augmente encore plus les odeurs et les goûts lArita et al, Allergy Clinics, 9, 1030 ( 1989)l. Des substituants d'alimentation devant être donnés à des patients allergiques aux aliments, incluant typiquement les patients allergiques au lait, doivent être exempts d'allerginicité ou doivent posséder une allerginicité suffisamment faible, doivent avoir un bon goût et une bonne odeur, doivent être hautement nutritifs, doivent avoir une digestibilité et une absorptivité excellentes et doivent être adaptables à une consommation à long terme par les patients. Ces exigences sont cependant contradictoires les unes par rapport aux autres selon le niveau technologique actuel. Aucune composition nutritive ni aucune formulation hypoallergénique satisfaisant toutes les exigences précédentes n'ont été développées jusqu'à présent L'absence de telles compositions nutritives est un sérieux problème du fait de la tendance récente à des nombres croissants de patients allergiques aux aliments Le développement d'une composition nutritive hypoallergénique est de ce fait fortement désiré. Les présents inventeurs ont entrepris des études extensives en vue de développer une composition nutritive ayant une allerginicité faible ou nulle satisfaisant toutes les exigences précédentes et ont trouvé qu'un glycomacropeptide (en abrégé GMP) dérivé de laits de vache ne présente aucune allerginicité Les présents inventeurs ont réussi à développer une composition nutritive comprenant un GMP en tant que source d'azote. En conséquence, la présente invention a pour objet une composition nutritive hypoallergénique, caractérisée en ce qu'elle comprend un glycomacropeptide de kappa- caséine en tant que source d'azote. Selon une forme de réalisation préférée de l'invention, la composition nutritive hypoallergénique est caractérisée en ce qu'elle comprend, en plus du glycomacropeptide de kappa- caséine en tant que source d'azote, au moins un corps choisi dans le groupe constitué par les acides aminés, les peptides et les protéines en tant que sources d'azote. Selon une autre forme de réalisation préférée de la présente invention, ledit acide aminé est choisi parmi un ou plusieurs acides aminés choisis dans le groupe constitué par la L- leucine, la L-lysine, la méthionine, la L-cystéine, la L- cystine, la phénylalanine, la L-tyrosine, le L-tryptophane, la Larginine, la L-histidine, la L-valine, la L-isoleucine et la glycine. L'invention va maintenant être décrite plus en détail en référence à des exemples et au dessin annexé La figure unique de ce dessin est une courbe représentant les changements de poids de corps de souris auxquelles a été administrée une alimentation contenant un mélange GMP- acide aminé ou une alimentation classique contenant de la caséine La courbe reliant les points pleins indique le changement de poids dans le groupe de souris auxquelles a été administrée la nourriture contenant le GMP alors que la courbe reliant les carrés creux représente l'évolution du groupe auquel a été administrée l'alimentation classique contenant de la caséine (voir exemple ). Dans la présente description de l'invention, l'expression "hypoallergénique" signifie une caractéristique d'un composé ou d'une composition ayant une allerginicité faible ou pas d'allerginicité du tout. Le GMP est un peptide lié à l'acide sialique connu produit quand on fait réagir de la kappa-caséine avec de la présure ou de la pepsine Il peut être fabriqué à grande échelle à partir du lait par la méthode de Tanimoto et al (JP-A-276 542/1990) ou par la méthode de Dosako et al (JP-A-284 199/1988). Le GMP est un composé insipide et inodore, très stable à la chaleur et abondamment soluble Du fait qu'il est produit à partir de caséine en tant que matériau de départ, il ne contient pas de protéines sériques de lait, telles que la B- lactoglobuline et similaires, qui provoquent fréquemment des problèmes relatifs à l'allergie au lait de vache Le GMP a un poids moléculaire élevé d'environ 9 000 Non seulement il a une pression osmotique inférieure à celles d'acides aminés et de peptides pour une quantité équivalente d'azote, mais il présente également une action similaire à celle d'un agent tensio-actif lorsqu'on prépare, en l'utilisant comme matériau de départ, une composition nutritive contenant des lipides. Donc, l'utilisation du GMP réduit le problème de formation d'émulsion par les lipides qu'on rencontre dans la fabrication de compositions nutritives à partir de peptides ou d'acides aminés libres Les caractéristiques précédentes du GMP constituent un grand avantage dans la fabrication de compositions nutritives hypoallergéniques à partir de GMP Une autre caractéristique favorable du GMP est sa capacité supérieure contre les infections par des micro- organismes ou des virus On s'attend donc à un effet d'inhibition des infections du GMP pour une composition nutritive. Le GMP a une composition en acides aminés indiquée au tableau 1 ci-dessous. TABLEAU 1 Acides aminés Teneur (g/GMP l O Og) Asp 8,7 Thr 15,3 Sel 7,9 Glu 21,0 Pro 11,5 Gly 1,1 Ala 5,4 Cys 0,0 Val 7,5 Met 0,4 Ile 9,5 Leu 3,3 Tyr 0,3 Phe 0,7 Lys 5,9 His 0,5 Trp 0,0 Arg 1,0 Le GMP contient différents acides aminés seulement en très petite proportion Certains acides aminés essentiels ne sont pas contenus du tout dans le GMP Pour l'administration pendant une courte période de temps, il est possible de donner à des patients allergiques une composition nutritive hypoallergénique contenant des sources d'azote dérivées seulement du GMP Cependant, si la composition doit être donnée pendant une longue période de temps, elle doit contenir d'autres sources d'acides aminés choisies parmi les acides aminés libres, les peptides et les protéines, de manière à avoir une composition nutritionnellement équilibrée en acides aminés selon l'âge du patient allergique auquel elle est administrée. A côté des acides aminés, des peptides et des protéines, on incorpore éventuellement dans la composition nutritive de la présente invention d'autres composés tels que des glucides, des lipides, des émulsifiants, des vitamines, des minéraux et similaires Lors de la formulation de la composition de la présente invention, on doit prendre garde à ce que sa pression osmotique et son allerginicité n'augmentent pas indûment En particulier, des compositions nutritives devant être administrées à des bébés doivent être formulées de telle manière que leur composition en acides aminés soit équivalente ou la plus proche possible de celle du lait maternel. Spécifiquement, il est souhaitable d'incorporer avec le GMP un ou plusieurs des acides aminés suivants: la L-leucine, la L- lysine, la méthionine, la L-cystéine, la L-cystine, la phénylalanine, la L-tyrosine, le L-tryptophane, la L-arginine, la L-histidine, la L-valine, la L-isoleucine et la glycine. La composition nutritive de la présente invention ainsi préparée peut être administrée sous forme de formulations, d'aliments antéraux, d'aliments par tubage, de suppléments nutritifs et similaires. La composition nutritive ainsi préparée donne un bon goût et une odeur favorable Elle n'est pas allergénique, elle est hautement nutritive, bien absorbée et digérée En addition, elle présente un effet anti- infectieux supérieur dû à la présence du GMP Elle constitue donc une nouvelle composition nutritive hypoallergénique. D'autres caractéristiques de l'invention apparaîtront au cours de la description suivante d'exemples de réalisation qui sont donnés uniquement à titre d'illustration et ne limitent pas la portée de l'invention. EXEMPLES Exemple 1 Un kilogramme de concentré protéique de petit-lait dérivé de petit-lait de fromage a été dissous dans 50 dm 3 d'eau à 50 C. La solution a été ajustée au p H de 3,5 par addition d'acide chlorhydrique à 35 % On a fait passer la solution à travers un dispositif d'ultrafiltration (type Module 36, fabriqué par DDS) comprenant une membrane d'ultrafiltration ( 61 pp: marque déposée, fabriquée par DDS) ayant un poids moléculaire fractionnaire de 20 000 tout en faisant fonctionner le dispositif d'ultrafiltration à une température de liquide de C et à une pression de 0,4 M Pa, pour obtenir 10 dm 3 de rétentat et 40 dm 3 de perméat On a ajusté le p H du rétentat à 7 par addition de 10 cm 3 de Na OH à 25 % et on l'a soumis au traitement d'ultrafiltration dans les mêmes conditions que ci- dessus pour obtenir 5 dm 3 de rétentat Le rétentat a été soumis à un traitement de diafiltration tout en maintenant le volume de liquide à 5 dm 3 par addition d'eau soumise à un échange d'ions La conductivité électrique du rétentat est devenue constante lorsqu'on a ajouté 25 dm 3 d'eau soumise à un échange d'ions, après quoi on a arrêté l'addition d'eau soumise à un échange d'ions et on a continué la concentration pour obtenir 0,2 dm 3 du concentré voulu Le concentré de GMP ainsi préparé a été séché dans un séchoir à pulvérisation (Pulvis Minispray, marque déposée, un produit de Yamato Science Co) à une pression de pulvérisation de 1,0 kg/cm 2 et une température d'air d'évacuation de 80 C pour obtenir 18 g de poudre de GMP. On a préparé un mélange GMP-acides aminés en mélangeant 10 g de GMP ainsi préparé et 2,8 g d'un mélange d'acides aminés libres ayant la composition indiquée au tableau 2 ci-dessous. 9 2677850 TABLEAU 2 Acides Aminés Quantité (g) Leu 238,4 Lys HCI 35,6 Met 42,8 Cys HCI H 20 129,0 Phe 128,2 Tyr 135,1 Trp 56,9 Arg 81,9 His H Cl H 20 105,8 Gly 46,3 Total 1000,0 * Tous les acides aminés autres que les Gly sont du type L. On a dissous dans 700 cm 3 d'eau chaude 10 g de ce mélange GMP- acides aminés, 60,5 g d'un mélange de sucres contenant du sucre alimentaire, des polysaccharoses solubles et de l'amidon de tapioca, 3,5 g d'un mélange de minéraux et 2,2 g d'un mélange de vitamines On a ajouté à la solution 27,8 g de graisses végétales purifiées puis on a mélangé pour homogénéiser La solution ainsi obtenue a été stérilisée, concentrée par une méthode classique et séchée pour obtenir g de lait en poudre Le lait en poudre a été dissous dans de l'eau chaude pour former une solution contenant 13 % de matières solides Le lait en poudre était excellemment soluble sans séparation de graisses, et a produit un lait ayant un bon goût avec la même pression osmotique que les formulations communes pour enfants. Afin d'obtenir des données précises pour l'évaluation de la propriété allergénique due aux sources d'azote, le lait en poudre ainsi obtenu a été dissous dans de l'eau chaude pour l'amener à une concentration de 100 mg/cm 3 et centrifugé à 5.00 tours/mn pendant 30 minutes pour enlever les graisses et séparer la couche inférieure qui a été servie sous forme de lait écrémé 200 mm 3 du lait écrémé ont été soigneusement dissous dans 10 cm 3 de DTP (un vaccin mixte diphtérie-tétanos- pertussis, fourni par Chiba Serum Laboratory) et injectés intrapéritonéalement à 10 souris femelles slc/dd Y (âge: 4 semaines) à une dose de 0,5 cm 3/souris Ensuite, un mélange du lait écrémé et de solution saline physiologique a été injecté intrapéritonéalement à une dose de 5 mm 3/500 mm 3 par souris chaque semaine et 6 fois au total Trois jours après l'injection finale, du sang a été échantillonné dans le coeur pour en recueillir le sérum On a effectué une détection des anticorps spécifiques au GMP par la double immunodiffusion (la méthode d'Ouchterlony) et on n'a pas trouvé d'anticorps spécifiques dans le sérum de toutes les souris. Exemple 2 Du lait en poudre préparé de la même manière qu'à l'exemple 1 a été dégraissé de la même manière qu'à l'exemple 1 100 mm 3 du lait écrémé ont été soigneusement dissous dans 10 cm 3 de DTP et injectés intrapéritonéalement à 9 souris femelles slc/dd Y (âge: 4 semaines) à une dose de 0,5 cm 3/souris. Ensuite, un mélange du lait écrémé et de solution saline physiologique a été injecté intrapéritonéalement à une dose de 100 mm 3/500 mm 3 par souris chaque semaine et 6 fois au total. Des échantillons de sérum ont été recueillis de la même manière qu'à l'exemple 1. La détection des anticorps spécifiques au GMP par la double immunodiffusion a été effectuée de la même manière qu'à l'exemple 1, mais on n'a pas trouvé d'anticorps spécifiques dans le sérum de toutes les souris. Exemple 3 Du lait en poudre préparé de la même manière qu'à l'exemple 1 a été dégraissé de la même manière qu'à l'exemple 1 200 mm 3 du lait en poudre ont été soigneusement dissous dans 10 cm 3 de DTP et injectés intrapéritonéalement à 9 souris femelles slc/dd Y (âge: 4 semaines) à une dose de 0,5 cm 3/souris, une fois par semaine pendant 2 semaines Une semaine après, un mélange du lait écrémé et de solution saline physiologique a été injecté intrapéritonéalement à une dose de 200 mm 3/500 mm 3 par souris Trois jours plus tard, du sang a été échantillonné et des échantillons de sang ont été recueillis de la même manière qu'à l'exemple 1. La détection des anticorps spécifiques au GMP par la méthode de double immunodiffusion a été effectuée de la même manière qu'à l'exemple 1 mais aucun anticorps spécifique n'a été trouvé dans le sang de toutes les souris. Exemple 4 Du lait en poudre préparé de la même manière qu'à l'exemple 1 a été dégraissé de la même manière qu'à l'exemple 1 200 mm 3 du lait écrémé ont été soigneusement dissous dans 10 cm 3 de DTP et injectés intrapéritonéalement à 9 souris femelles slc/dd Y (âge: 4 semaines) à une dose de 0,5 cm 3/souris Ensuite, un mélange du lait écrémé et de solution saline physiologique a été injecté intrapéritonéalement à une dose de 200 mm 3/500 mm 3 par souris chaque semaine et 3 fois au total Trois jours après l'injection finale, des échantillons de sérum ont été recueillis de la même manière qu'à l'exemple 1. La détection des anticorps spécifiques au GMP par la méthode de double immunodiffusion a été effectuée de la même manière qu'à l'exemple 1 mais aucun anticorps n'a été trouvé dans le sérum de toutes les souris. Exemple 5 On a préparé des alimentations purifiées modifiées selon AIN- 76 avec les compositions indiquées au tableau 3 ci-dessous (selon la formulation de Oriental Yeast Co) en utilisant de la caséine acide ou un mélange GMP-acides aminés préparé de la même manière qu'à l'exemple 1. 12 2677850 Tableau 3 Composants Alimentation Alimentation contenant normale du GMP caséine acide 25,0 mélange GMP- acides aminés 25,0 huile de blé 6,0 6,0 amidon de blé 41,5 41,5 a-amidon 10,0 10,0 poudre de cellulose 8,0 8,0 mélange de minéraux ** 3,5 3,5 sucre granulé 5,0 5, 0 mélange de vitamines ** 1,0 1,0 ** Acheté à Oriental Yeast Co. Les alimentations ainsi préparées ont été données à des groupes de souris mâles BALB/c, âgées de 3 semaines, chaque groupe étant constitué de 10 souris, pendant 5 semaines pour mesurer l'évolution de leur poids de corps dans le temps. Les résultats sont représentés à la figure 1 dans laquelle sont indiqués les changements du poids du corps des souris de chaque groupe par rapport au temps La figure montre un accroissement plus élevé du poids du corps des souris du groupe auquel a été administré l'aliment purifié selon AIN-76 contenant le mélange GMP-acides aminés. Comme on l'a illustré ci-dessus, conformément à la présente invention, on peut fournir une composition nutritive hypoallergénique en utilisant du GMP exempt d'allergène dérivé de lait de vache en tant que source d'azote De plus, conformément à la présente invention, les inconvénients de la composition d'acides aminés inhérente au GMP ont été éliminés par l'incorporation d'acides aminés libres, de peptides, de protéines et similaires en fournissant une nouvelle composition nutritive hypoallergénique ayant un goût favorable, pas d'allergénicité, une valeur nutritive élevée, une bonne absorptivité et une bonne digestibilité, ainsi qu'un effet anti-infectieux supérieur. Bien entendu, de nombreuses modifications et variantes de la présente invention sont possibles à la lumière des enseignements précédents En conséquence, l'invention peut être mise en oeuvre autrement que spécifiquement décrit ici. REVENDICATIONS 1 Une composition nutritive hypoallergénique, caractérisée en ce qu'elle comprend un glycomacropeptide de kappa-caséine en tant que source d'azote. 2 Une composition nutritive hypoallergénique selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend, en plus du glycomacropeptide de kappa-caséine en tant que source d'azote, au moins un corps choisi dans le groupe constitué par les acides aminés, les peptides et les protéines en tant que sources d'azote. 3 Une composition nutritive hypoallergénique selon la revendication 2, dans laquelle ledit acide aminé est choisi dans le groupe constitué par la L-leucine, la L-lysine, la méthionine, la L- cystéine, la L-cystine, la phénylalanine, la L-tyrosine, le L- tryptophane, la L-arginine, la L-histidine, la L-valine, la L- isoleucine et la glycinel.