FR 2666589 A1 19920313 FR 9011146 A 19900907 Nouveaux virus herpès recombinants, vaccin à base de ces recombinants, leur procédé de préparation, gènes, vecteurs et plasmides utilisés dans ce procédé. La présente invention concerne des virus herpès recombinants, notamment pour la réalisation de vaccins, leur procédé de préparation et les plasmides réalisés au cours de ce procédé Elle concerne encore une partie du génome du10 virus de la maladie de Marek (MDV) qui est susceptible d'être utilisée pour la préparation de tels vaccins. Différents types de virus ont été utilisés comme vecteurs d'expression de gènes étrangers, en particulier de gènes codant pour des protéines antigéniques, et ont15 démontré leur potentiel pour l'immunisation des animaux Le virus de la vaccine a été largement utilisé pour la construction de virus recombinants Les virus herpès ont été également employés: le virus herpès simplex (HSV) (M Shih et al, Proc Natl Acad Sci, USA, 1984, 81, 5867-5870), le virus de la varicelle (VZV) (R Lowe et al, Proc Natl. Acad Sci, USA, 1987, 84, 3896-3900) Le gène étranger est inséré dans un fragment d'ADN génomique du virus herpès, correspondant à une région non essentielle pour la réplication virale, cloné dans un plasmide Ce gène est transféré dans le génome viral par recombinaison homologue. Cette dernière étape est effectuée par cotransfection de 1 'ADN génomique herpès et du plasmide puisque cet ADN génomique est naturellement infectieux. Différents gènes de virus herpès ont été identifiés comme non essentiels à la croissance virale, certains de ces gènes étant associés à la virulence. Le gène de la thymidine kinase du virus herpès simplex (D Dubbs et al, Virology, 1965, 22, 493-502), du virus d'Aujeszky (G Tatarov, Zentralbl. Vet Med, 1968, 15 B, 848853), du virus de la rhinotrachéite infectieuse bovine (S Kit et al, Virology, 1983, 130, 381-389). Le gène g III du virus d'Aujeszky (A Robins et al, J Virol, 1986, 59, 635-645). Le gène g X du virus d'Aujeszky (D Thomsen et al, J Virol, 1987, 61, 229-232). Le gène g I du virus d'Aujeszky (C Mettenleiter et al, J Virol, 1987, 61, 4030-4032). Ces virus délétés gardent la capacité de produire une infection latente chez la souris. Des travaux similaires ont été entrepris sur le virus de la maladie de Marek qui appartient à la sous-famille des gamma herpès virus C'est un virus enveloppé possédant un ADN génomique linéaire double brin d'environ 175 kilobases. Son génome est composé d'un segment long (UL) et d'un segment court (Us) entourés par des séquences terminales inversées répétées. Le virus de la maladie de Marek cause des paralysies et une maladie lymphoproliférative chez le poulet, généralement à l'âge de 2 à 5 mois Cette maladie entraîne des pertes économiques très importantes (L Payne, Biology of Marek's disease virus and the herpesvirus of turkeys, dans The Herpesvirus, vol 1, p 347-431, édité par B. Roizman, Plenum Press). Les souches du virus de la maladie de Marek ont été classées en trois sérotypes: le sérotype 1 comprend les souches pathogènes et les souches atténuées qui en dérivent, le sérotype 2 comprend les souches naturellement atténuées, le sérotype 3 comprend le virus de l'herpès du dindon (HVT) et ses variants. Par la suite, le terme virus de la maladie de Marek atténué désignera à la fois les sérotypes 1, 2 et 3. Les virus de la maladie de Marek (MDV) et de l'herpès du dindon (HVT) possèdent des organisations génomiques analogues (A Buckmaster et al, J Gen Virol 1988, 69, 2033-2042) et de nombreuses homologies de séquence tout au long de leur génome (C Gibbs et al, Proc Acad Natl Sci. USA 1984, 81, 3365-3369). Les poussins sont vaccinés à I'âge d'un jour et sont protégés ensuite contre la maladie de Marek pendant leur vie entière Pendant de nombreuses années, la vaccination à l'aide du virus herpès du dindon vivant (HVT) a été très efficace pour contrôler la maladie. Néanmoins, l'émergence de nouvelles souches virales hautement virulentes a amené l'utilisation de souches de virus de la maladie de Marek atténuées d'un autre sérotype, pour vacciner et augmenter ainsi le niveau de protection, soit par exemple la souche CVI 988, MDV sérotype 1 atténué par passages sur cellules (B Rispens et al, Avian Dis. 1972, 16, 1108-125), soit par exemple l'association des souches HVT MDV sérotype 3 et SB 1, MDV sérotype 2 (K Schat et al, J Natl Cancer Inst, 1987, 60, 1075-1082). Des études portant sur la région courte unique du génome du virus herpès simplex HSV-1 ont été conduites (B. Megnier et al, Virology, 1988, 162, 251-254) et ont montré que des virus HSV-1 délétés dans la région courte ont subi une atténuation. Le génome du virus de Marek possède certaines similarités avec le génome des alphavirus, herpès simplex (HSV) et varicelle (VZV) La plupart des gènes localisés dans la longue région UL du génome sont approximativement colinéaires entre les virus herpès simplex, varicelle (D Mc Geoch, J Gen Virol, 1988, 69, 1531-1574) et virus de la maladie de Marek (A Buckmaster, 1988). Par contre, la localisation des gènes dans le segment Us montre une plus grande divergence entre virus herpès. Aussi parmi les douze phases de lecture identifiées pour le virus herpès simplex, seulement quatre présentent une homologie avec le virus de la varicelle (Mc Geoch, 1988, déjà cité). De fait, l'art antérieur ne suggère pas qu'il y ait un intérêt à procéder à une étude d'homologie des cadres de lecture ouverts de la région courte unique du génome du virus de la maladie de Marek avec des gènes de HSV-1. La présente invention divulgue pour la première fois la séquence codant pour la protéine kinase du génome du virus de la maladie de Marek (MDV) et a permis d'établir, de façon surprenante, que ce gène pouvait être délété sans bloquer la réplication virale et permettre l'insertion de séquences hétérologues ouvrant la voie au développement d'une série de vecteurs d'expression viraux. Un tel virus de la maladie de Marek recombinant et atténué constitue un candidat de choix pour le développement d'un vecteur viral exprimant des gènes étrangers destinés à la vaccination polyvalente des volailles puisqu'il présente l'avantage de pouvoir être utilisé pour ses propriétés vaccinales propres et comme vaccin contre d'autres maladies virales, bactériennes ou parasitaires, comme par exemple la bronchite infectieuse aviaire, la maladie de Newcastle, la peste aviaire, le syndrome chute de ponte, la maladie de Gumboro, l'anémie aviaire, la coccidiose, la variole aviaire, la laryngotrachéite infectieuse, la colibacillose, la pasteurellose, l'hémophilose. RESUME DE L'INVENTION L'invention a pour objet de fournir des virus herpès recombinants, y compris un virus de la maladie de Marek atténué (sérotypes 1, 2 ou 3) recombinant utilisable comme vaccin, la méthode pour construire un tel virus recombinant ainsi qu'un virus vecteur permettant la vaccination multivalente contre des maladies aviaires virales, bactériennes ou parasitaires. L'invention a pour objet la séquence nucléotidique et ses variantes correspondant au gène U 53 homologue du gène de la protéine kinase du virus herpès simplex et aux régions environnantes. L'invention a pour objet un virus recombinant choisi parmi les virus herpès, y compris les virus de la maladie d'Aujesky, de la rhinotrachéite infectieuse des bovins, de la rhinopneumonie équine, de la rhinotrachéite féline, de l'herpès canin. L'invention a également pour objet un virus de la maladie de Marek recombinant comprenant un ou plusieurs gènes hétérologues insérés dans la région de son génome correspondant au gène U 53 de manière à pouvoir être exprimés. Par "gène hétérologue", on entend notamment un gène codant pour une protéine ou une glycoprotéine immunogène d'un agent pathogène viral, bactérien ou parasitaire, notamment une agent associé à une pathologie aviaire Cela concerne également la construction de virus hybrides, par exemple en introduisant, dans le génome d'un virus herpès du dindon, des gènes codant pour des immunogènes d'un virus de la maladie de Marek du sérotype 1 et/ou du sérotype 2. On entend également par "gène hétérologue" un gène codant pour un peptide ou une protéine, par exemple hormone, facteur de croissance, immunomodulateur. Le gène hétérologue est exprimé de préférence sous le contrôle des séquences régulatrices de la transcription du gène U 53 On peut cependant faire en sorte que cette expression soit contrôlée par une séquence promotrice provenant d'un autre gène du virus considéré, par exemple le promoteur du gène TK, du gène g A, du gène g B, ou d'un autre virus herpès, par exemple le promoteur du gène g I du virus de la rhinotrachéite infectieuse bovine ou du gène Il ou du gène III du virus d'Aujeszky. De préférence, on substitue les codons d'initiation et de terminaison du gène U 53 par ceux du gène à exprimer. DESCRIPTION DES FIGURES. La figure 1 représente la construction du plasmide p MDV 53 L qui contient le gène Lac Z inséré à la place du gène U 53. La figure 2 représente la construction du plasmide p MDV 53 CL qui contient le gène Lac Z sans le contrôle du promoteur i E du cytomégalovirus humain à la place du gène U 53. La figure 3 représente la plasmide p MDV 53 F qui contient le gène de la protéine fusion du virus de la maladie de Newcastle à la place du gène U 53. DESCRIPTION DE L'INVENTION: MATERIELS ET METHODES. Souche virale. La souche sérotype 1 RB 1 B du virus de la maladie de Marek (MDV) a été utilisée (Schat K A et al, 1982, Avian Pathol 11, 593-605). Les méthodes de culture du virus et d'extraction d'ADN viral de haut poids moléculaire ont été décrites (C Lee et al, 1980 J Gen Virol 51, 235-253; N Ross et al 1989, 70, 1789-1804). Culture cellulaire. Les fibroblastes d'embryon de poulet (CEP) ont été cultivés en milieu 199 F 10, supplémenté en pénicilline, streptomycine, fungizone et sérum de veau foetal, comme décrit (N Ross 1975, J Gen Virol 28, 37-47). Clonaqe de l'ADN viral De manière générale, les techniques utilisées pour la construction des plasmides recombinants sont celles décrites par T Maniatis et al (T Maniatis et al, 1982, Molecular cloning: a laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY). Pour toutes les étapes de clonage ou de sous-clonage, le vecteur linéarisé par les enzymes de restriction appropriées est déphosphorylé avant ligation La purification des fragments d'ADN à partir d'un gel d'agarose est faite selon la technique décrite par le fabricant: "Geneclean" (Bio 101, San Diego, Californie, USA). Séquenqaqe. Les fragments clones sont séquences selon la technique classique décrite par Sanger (G Sanger, S.Nicklen, A Coulson, 1977, Proc Natl Acad, USA 74, 5463-5467) Les séquences après traduction ont été comparées aux séquence publiées de virus herpès simplex et varicelle (Mc Geogh, 1985, J Mol Biol 181, 1, 13; K Davison et al 1986, J Gen Virol 67, 1759-1816). Mutagénèse dirigée. Les fragments d'ADN, sous-clonés dans le vecteur Blue Script (Stratagene, La Jolla, Californie, USA) sont mutagénéisés après séparation des AD Ns simple brin à l'aide du phage helper R 408 (Stratagene, La Jolla, Californie, USA)20 (M Russel, S Kidd, M Kelley, 1986, Gene 45, 333-338). La procédure de mutagénèse et de sélection des mutants en utilisant la souche CJ 236 dut-, ung d'E Coli (In Vitrogen, San Diego, Californie, USA) est décrite par T Kunkel, (T Kunkel 1985, Proc Natl Acad Sci, 82, 488-492 et T Kunkel et al, 1987, Methods of enzymology 154, 367-382, Acad Press). Recombinaison in vivo. Les virus recombinants sont obtenus selon les techniques classiques de transfection des cellules sensibles, telles que la méthode au phosphate de calcium ou celle utilisant le réactif Lipofectine décrite par le fabricant BRL (P L Felgner et al, 1987, Proc Natl Acad. Sci, USA, 84, 7413) Pour cela, les fibroblastes d'embryons de poulet, cultivés jusqu'à confluence, sont cotransfectés avec de l'ADN génomique et le plasmide porteur du fragment d'ADN à insérer, flanqué en 5 ' et 3 ' des séquences du génome qui permettent la recombinaison. Les virus recombinants peuvent ensuite être criblés par hybridation avec une sonde appropriée ou par la coloration des plages Lorsqu'un gène marqueur, le gène lac Z de la 1-galactosidase, est inséré dans le génome du virus de10 la maladie de Marek, l'expression de ce gène peut être suivie en additionnant, à la couche cellulaire, une surcouche d'agarose renfermant le substrat chromogène pour la 9- galactosidase, e g Xgal ( 5-bromo-4-chloro-3-indolyl, B.D galactopyranoside).15 Exemple 1: Isolement d'un fragment Eco RI de 5,25 kilobases. L'ADN génomique viral a été digéré par l'enzyme de restriction Eco RI et les fragments clones dans le vecteur p UC 13 (Pharmacia) (Yannisch, Perron et al, 1985, Gene 33, 103-119). Parmi les fragments clones, un fragment de 5,25 kilobases, localisé au niveau du petit fragment Us, a été plus particulièrement analysé par séquençage (p MDV 05; séquence ID n 1). La séquence renferme six cadres de lecture ouverte (ORF) Les séquences traduites de 4 de ces ORF présentent une homologie avec des protéines de virus HSV de type I, localisées dans le fragment Us En particulier le gène U 5330 du virus de la maladie de Marek présente une homologie avec le gène de la protéine kinase du virus herpès simplex. De manière surprenante, l'étude de cette région a montré que le gène U 53 pouvait être délété sans bloquer la réplication virale. Exemple 2: Construction d'un plasmide p MDV 53 L pour lequel le gène U 53 a été remplacé par le gène lac Z (figure 1). Le fragment Eco RI de 5, 25 kilobases issu du clone p MDV 05 a été digéré par l'enzyme Nco I et les extrémités ainsi générées réparées par l'ADN polymérase fragment Klenow Il a ensuite été digéré par l'enzyme Kpn I, et le fragment de 1989 paires de bases ainsi libéré a été cloné dans le vecteur Blue Script linéarisé par les enzymes Eco RV et Kpn I pour donner le plasmide p MDV 52 de 4947 paires de bases. Les sites Nco I et Sal I ont été introduits respectivement aux extrémités 5 ' et 3 ' du fragment cloné par mutagénèse dirigée en utilisant les oligonucléotides désignés par Seq ID n 2 et 3, dans la liste des séquences annexées, ce qui génère le plasmide p MDV 53 Le gène lac Z a été purifié à partir du plasmide p MC 1871 (Pharmacia LKB, Uppsala, Suède) (S K Shamira et al 1983, Gene 25, 71- 82) par digestion par les enzymes Sma I et Sal I. Il a ensuite été inséré dans le plasmide p MDV 53, digéré partiellement par 1 ' enzyme Nco I, traité par 1 ' ADN polymérase fragment Klenow, et digéré ensuite par l'enzyme Sal I, ce qui génère le plasmide p MDV 53 L d'environ 6687 paires de bases. Exemple 3: Préparation d'un virus de la maladie de Marek renfermant le gène lac Z. Les fibroblastes d'embryon de poulet ont été 1 l cotransfectés avec l'ADN génomique total du virus et l'ADN du plasmide p MDV 53 L linéarisé ( 10 à 50 pg) Les cultures ont été suivies pendant 4 à 6 jours jusqu'à l'apparition de foyers infectieux Alternativement les cellules sont 5 trypsinées après 72 h, puis réinoculées ( 1:1 ou 1:2) en un passage secondaire, et cela jusqu'à l'obtention de plages de lyse. Le milieu est alors remplacé par du milieu neuf renfermant 1 % d'agarose et 0,5 % d'Xgal. Les foyers dus aux virus recombinants se distinguent par leur coloration bleue. Les virus peuvent alors être purifiés par plaque- purification et, après inoculation à des cellules saines, donnent des figures d'effet cytopathogène colorées15 en bleu en présence d'Xgal. Exemple 4: Construction du plasmide p MDV 53 CL qui renferme le gène lac Z sous contrôle du promoteur immédiat précoce du cytomégalovirus humain (CMV) (figure 2).20 Le gène lac Z de la 1-galactosidase a été placé sous le contrôle du promoteur immédiat précoce du cytomégalovirus humain (IECMV) dans le vecteur p CMV-Lac Z. Le fragment d'environ 4500 paires de bases renfermant l'ensemble, le promoteur IE du cytomégalovirus et le gène lac Z, a été digéré par l'enzyme Eco RI, et les extrémités remplies par l'ADN polymérase fragment Klenow Il a ensuite été digéré par l'enzyme Sal I. Le fragment ainsi libéré a été cloné dans le vecteur p MDV 53 digéré partiellement, par 1 ' enzyme Nco I, traité par l'ADN polymérase fragment Klenow, et digéré ensuite par l'enzyme Sal I Ce plasmide d'environ 8200 paires de bases construit est dénommé p MDV 53 CL. Exemple 5: Construction d'un virus Marek recombinant pour lequel le gène lac Z a été introduit sous le contrôle du promoteur immédiat précoce du cytomégalovirus, à la place du gène U 53. Les CEP ont été cotransfectées avec de l'ADN génomique du virus et de 10 à 50 mg d'ADN du plasmide p MDV 53 CL linéarisé. On peut ainsi obtenir des virus recombinants qui se distinguent par l'apparition de foyers infectieux colorés en bleu en présence du substrat chromogène Xgal Ces virus ont été purifiés selon la technique de purification de plages et ont permis d'infecter des fibroblastes d'embryon de poulet secondaires. Des foyers infectieux colorés en bleu peuvent être obtenus en présence d'Xgal, ce qui montre que le gène lac Z est inséré à la place du gène U 53. Exemple 6: Construction du plasmide p MDV 53 F qui renferme le gène de la protéine fusion du virus de la maladie de Newcastle à la place du gène U 53 (figure 3). Le gène fusion (J Taylor at al, 1990, J Virol. 64, 1441-1450) a été introduit sous forme d'un fragment à extrémités franches dans le vecteur Blue Script au site Sma I pour donner le plasmide p NF 1 de 5300 paires de bases. Des sites Nco I et Sal I ont été introduits par mutagénèse dirigée au niveau des codons ATG, et Stop, du gène fusion, grâce aux oligonucléotides répertoriés SEQ ID n 4 et SEQ ID n 5 respectivement dans la liste des séquences annexées. Le fragment de 1682 paires de bases Nco I/Sal I provenant de plasmide p NF 2, a été inséré dans le vecteur p MDV 53 digéré partiellement par l'enzyme Nco I et digéré par l'enzyme Sal I pour donner le plasmide p MDV 53 F de 5369 paires de bases. Exemple 7: Construction d'un virus de la maladie de Marek renfermant le gène de la protéine fusion du virus de la maladie de Newcastle. Les fibroblastes d'embryon de poulet ont été cotransfectés avec l'ADN génomique total du virus et de 10 à 50 mg d'ADN linéarisé du plasmide p MDV 53 F Les cultures ont été suivies jusqu'à apparition de foyers infectieux. Les virus recombinants ont ensuite été criblés par hybridation avec une sonde renfermant le gène fusion. Des procédures similaires sont utilisées pour la construction de virus herpès recombinants non aviaires, par insertion d'un gène hétérologue dans la région Us et en particulier dans le gène homologue au gène U 53 du virus de Marek. L'invention concerne également les vaccins, vivants ou non, constitués par ou contenant les virus recombinants construits selon l'invention, ou contenant des immunogènes exprimés par ces virus. ANNEXE 1 LISTE DES SEQUENCES SEO ID N 1 Longueur de la séquence: 5 255 paires de bases Type de molécule séquencée: ADN génomique Origine de la molécule: virus de la maladie de Marek, souche RB 1 B Source expérimentale: plasmide p MDV 05 Caractérisques: de 1 à 324 paires de bases: région non codante de 325 à 1 135 paires de bases: gène U 51 Le gène est codé par le brin d'ADN complémentaire à la séquence indiquée et est transcrit de droite à gauche (SEQ ID N 1 B) 623 à 1 214 paires de bases 1 215 à 1 245 paires de bases 1 246 à 2 451 paires de bases 2 452 à 2 563 paires de bases 2 564 à 3 004 paires de bases 3 005 à 3 190 paires de bases 3 191 à 4 384 paires de bases 4 385 à 4 494 paires de bases 4 495 à 5 253 paires de bases : gène U 52 : région non codante : gène U 53 : région non codante : gène U 54 : région non codante : gène U 55 : région non codante : gène U 56 de de de de de de de de de CAAAAATTTACATTAGTAATCTTTCTCGGTGGCTTACCAAATCGTCCTCTTGGTATATCCATATCATCGAAC ATTGTAGCATTGACTCTGCTCATCGTTGTCTTTCAAATGCGCTCOGATTGTTGAATCTCTCCTGATGTTAGAA GTATATGGAAGATAGCCTGGATACATAAGTGATCTAGAAGGGTTTGTTATTGCAGTAATATACAAATTATAC GTGACACTATAGCGACGGTTGTAGCGATGCACCTAATCGTAATGTGTATACGCCCCATCATGTAATTATATC TAATTGGTAGCAAGTAGGTCTGTCGAATAACAGCTAATGACTACCGGCTCTACATTTTTTCTGTATTCGTGA CTTTCCTGTCGCAGTGTAACGAACCGGAATTGCAATCGCATCTCTATCTTCTTTCTTGCAACATTTTCCACA ACAGAATAATCTGCCGGGTGTACTACTCATTTGAGGTGGTTCGATTTCCGGAGGTTTTAGAGGATTGGGTGG GGACCCGAGGATTTTGTATACACATACCATATCACTGTCGCAAAAATGCGCTCTATCTTCTGGGGTGTCGAA CTTCGGTTCCCATGTAGATGTCAAGAGAGTTTGAATATTGTCGGGA ATG GCC CAC GGC ATA CCG Met Ala His Gly Ile Pro CAG Gln AGC Ser TTA Leu TCT Ser GTT Val ACT Thr AGG Arg ATA 1 e CCT Pro CCC Pro ATC Ile GTC Val GCA Ala CCA Pro GTG Val CCG Pro ATC Ile TCT Ser CAT His GGC Gly ATC Ile TCC Ser CCA GAC ACT Pro Asp Thr ATG CGA CAT Met Arg His GAA ACT TCA Glu Thr Ser GAA CAT CCT Glu His Pro GCC AAT CCG Ala Asn Pro GGT CGA TGT Gly Arg Cys GCA GCT CTG Ala Ala Leu TGC TTT ATA Cys Phe Ile AAT CGA TCG Asn Arg Ser TTC ACT CCA Phe Thr Pro AAA TCT TAT Lys Ser Tyr TTG Leu ATA Ile GAT Asp GCA Ala GTA Val TGC Cys ACG Thr AGG Arg CAT His CCA Pro ACC Thr ATT Ile TCT Ser TCC Ser ACA Thr CCA Pro CGA Arg ATT Ile AAT Asn TCA Ser ATA Ile TCT Ser GCA Ala GCC Ala AAC Asn TCT Ser CGA Arg GGA Gly ATG Net ATC Ile TCT Ser ATC Ile GGT 1 Gly AGT Ser GCC Ala ATC Ile TCA Ser ACT Thr AGA Arg GGC Gly CAT His AGA Arg TTT Phe AGA Arg AAC Asn CCA Pro AAA Lys AAT Asn CCA Pro ATT Ile ACA Thr AAA Lys AGT Ser TTT Phe ATA Ile CTT Leu ACT Thr TAT Tyr AGC Ser GTT Val AAC Asn CCC Pro GTA Val GTG Val ATT Ile TTT Phe ATC Ile CCA Pro CGC Arg CCA Pro ATG Net ACA Thr GAT Asp ACT Thr GTT Val GGC Gly CAC His GAT Asp ACT Thr TCT Ser GGT Gly TCA Ser GCA Ala ATA Ile AAT Asn AAA GGA Lys Gly AAG CTA Lys Leu AGA ACA Arg Thr ATA AAC Ile Asn GGT GGC Gly Gly TTG GCA Leu Ala TCC TGT Ser Cys GCA TC T Ala Ser GTT ATC Val Ile AAC TGG Asn Trp ATA CAT Ile His TGT GGA Cys Gly TCC TGC Ser Cys GAA TCC Glu Ser TTT GTC Phe Val AAA CGG Lys Arg ATT TGT Ile Cys CTA GAT Leu Asp ATG GAC Met Asp GCC GGT Ala Gly TGAAACAGGGTTAAAACTAGGTAATAG ACTGGATG TCT TCG AGT CCG GAG GCA GAA ACG ATG GAA TGC GGC ATT TCT TCG TCG Met Ser Ser Ser Pro Glu Ala Glu Thr Met Glu Cys Gly Ile Ser Ser Ser AAA GTA CAC GAC TCT AAA ACT AAT A AC ACC TAC GGA ATT ATA CAT AAC AGC ATC Lys Val His Asp Ser Lys Thr Asn Thr Thr Tyr Gly Ile Ile His Asn Ser Ile AAT GGT ACG GAT ACG ACGG TT TTT GAT ACT TTT CCC GAC AGT ACC GAT AAC GCG Asn Gly Thr Asp Thr Thr Leu Phe Asp Thr Phe Pro Asp Ser Thr Asp Asn Ala GAA GTG ACG GGG GAT GTG GAC GAT GTG AAG ACT GAG AGC TCT CCC GAG TCC CAA Glu Val Thr Gly Asp Val Asp Asp Val Lys Thr Glu Ser Ser Pro Glu Ser Gln 14 z; 69 GAC Asp TCG Ser GCA Ala CAT His CTA Leu CTT Leu AAT Asn TCC Ser CTT Leu ACA Thr CTG Leu GAT TTG TCA Asp Leu Ser ATT GAT GCA Ile Asp Ala CCC GGA TCT Pro Gly Ser AGA AAA GTC Arg Lys Val GAT ATA TTA Asp Ile Leu AGA TGG AAA Arg Trp Lys ACG TAC ATA Thr Tyr tle CGG GGT TTG Arg Gly Leu GAT STA AAA Asp Val Lys GAC TTT GGG Asp Phe Gly *GSA TGG AGT Gly Trp Ser TAC TGT ACA Tyr Cys Thr GTA AAA AAT Val Lys Asn AGA TCC ATA Arg Ser Ile TCT ACA AAC Ser Thr Asn TAT SCA ATC Tyr Ala Ile GCT ATT SCA Ala Ile Ala ATT TTA ATG Ile Leu Met ACT GCC SCT Thr Ala Ala CCT Pro GTT Val GAA Glu ATT Ile AAA Lys TCG Ser GAT Asp CTT Leu ACT Thr GCA Ala GGA Gly AAA Lys ATA île ATT Ile TTA Leu CCT Pro AAA Lys TTG Leu CAT His TTT Phe TCA Ser GGG G 1 y GTG Val AAA Lys ACA Thr ATC île SGA C 1 y GAA Glu GCA Ala ACT Thr ACT Thr ACC Thr AGA Arg TGC Cys CAG Gln ATI Met CCT Pro ATI Met CG 5 AAC GAT Gly Asn Asp GCT Ala TAT Tyr AAA Lys ATS Met GTT Val ATG Met SCA Ala AAT Asn TST Cys CTS Leu GAT Asp TTT Phe TGC Cys AAA Lys ATT île CTC Leu CTT Leu GTG Val ATC Ile GCT Ala TCT Ser TGT Cys GGA Gly TTG Leu ATA Ile AAA Lys GAA Glu ATA Ile TTT Phe CTG Leu CAC His ATA île ACA Thr TTT Phe CGA Arg TAT Tyr GTG Val CAC His ATS Met CCA Pro GCA Ala TTT Phe TTA Leu ACC Thr TGG Trp GGC Gly CAA Gln TTC Phe CGA Arg TTC Phe ACT Thr GSA AAT Gly Asn ATG CAG Met Gln GTT TGT Val Cys ACT GST Thr Gly CGC TCC Arg Ser GTA ATG Val Met TTG CCA Leu Pro TAT ATC Tyr île TTG GAC Leu Asp GAT GAA Asp Glu AAT TCG Asn Ser AGT GCA Ser Ala AAA CAA Lys Gln STC CAT Val His AAG CAG Lys Gln AAG AGT Lys Ser GAT CAS Asp Gln AAA GAA Lys Glu GAA Glu TAT Tyr ACA Thr GAC Asp ATA île CCT Pro CTA Leu CAC His AAA Lys CAT His CCT Pro GGA Gly GTA Val CCG Pro TAC Tyr GGT Gly GAG Glu CCC Pro TCC CCC GAA Ser Pro Glu AAC AAT GTT Asn Asn Val AAG CGT GGG Lys Arg Gly AAA ACC CTT Lys Thr Leu ATT AGA TTA Ile Arg Leu AAA TAC AAA Lys Tyr Lys AAT CAA ATA Asn Gln Ile GAA AAG GGT Glu Lys Gly CCT GAA AAT Pro Glu Asn ACA GAT AAA Thr Asp Lys GAA CTG CTT Glu Leu Leu TTA GTT CTS Leu Val Leu AAC GGC TCA Asn Gly Ser TTG GAA TTT Leu Glu Phe GCG ATT CAG Ala Ile Gln ATG ACG ATG Met Thr Met TTT AGA CCA Phe Arg Pro GCT GAC SCA Ala Asp Ala TAAACACCCGTCAAAAATAACTTCAATGATTCATTTTATAATA TATACTACGCGTTACCTGCAATAATGACAACATTCGAAGTCTTTGAAGATTCGCAGACCTTTTTTGCGAATG 2566 Met 600 GCA Ala ACA Thr CCT Pro TTT Phe TCG Ser TTG Leu GGA Gl y GAT Asp CCT Pro TGC Cys ACG Thr ATG Met CCA Pro AGA Arg TAT Tyr TAT Tyr TCC Ser ACT Thr CAC His CTA Leu AGA Arg AAC Asn CCG Pro GAT Asp CAA Gln GAG Glu ATA Ile AGT Ser AAG Lys AAG Lys CAT His GTA Val TAT Tyr GAT Asp GGA Gly GAT Asp TCT GAA Ser Glu ACG GAC Thr Asp TTA TCG Leu Ser ACC AAG Thr Lys GAA ATT Glu Ile GCT TAT Ala Tyr TTG TTT Leu Phe ATA GAA Ile Glu CAT CGT His Arg TTG GGG Leu Gly TST TAT Cys Tyr GAT CCA Asp Pro ATG TCA Met Ser CAG CTG G 1 N Leu AAC AAT Asn Asn CAT CCA His Pro GAA TAT Glu Tyr CAA GAT G 1 N Asp ACG ATA Thr île ACG Thr TCA Ser GAT Asp GGG Gly GTT Val TGC Cys ATT Ile ATA île GTA Val CCC Pro GCA Ala TTT Phe GGT Gly CCA Pro TTA Leu GAT Asp TCT Ser TTA Leu GTG Val TCG Ser AAT Asn AGT Ser CAT His GAC Asp ACG Thr ATA Il e STA Val AAA Lys CTT Leu GAG Glu TCT Ser CAG Gln CGA Arg CTT Leu GCC Ala TAC Tyr 1620 > TCA Ser ATG Met GAC Asp TCA Ser ATA l e AAA Lys GAC Asp AAC Asn CCT Pro TGG Trp CGT Arg TGT Cys ATA lle GAT Asp AAA Lys CAA Gln TCC Ser GAA GluCAT Mis TCG Ser AGT Ser AAT Asn TCT Ser TCA Ser AAC Asn GAA Glu GTT Val CTG Leu AAG Lys ATT l e TCC Ser GAA Glu TTT Phe AAC Asn AGG Arg GGC Gly TTA GCA Leu Ala TAT CCA Tyr Pro TAT AAA Tyr Lys TCC CAT Ser His CGA TGG Arg Trp GCT GGT Ala Gly CAA TCC Gln Ser TTA ATA Leu Ile GTT CGT Val Arg GGC AAT Gly Asn AAG AAT Lys Asn AAC GGA Asn Gly AAT Asn AAT Asn AAG Lys AST Ser CCC Pro ATA GTT Val GGA Gly CCT Pro GGT Gly GAG Glu AAA ACT Thr CCT Pro GAC Asp CTA Leu ATA île ATT l 1 e Lys l Ie TCA Ser TCS Ser CGA Arg CGT Arg TTT Phe TCA Ser ASC Ser ATI Met AGT Ser CGT Arg AAG Lys TTC Phe ATG Met CAG Gln CGT Arg SAA Glu GTA Val TCA Ser 69 O TTT TTC TAACATTATAATATATCAGATCGTTTCTTATATACTTATTTTCATCGTCGGGATATGACTAAC 3067 Phe Phe 74 d GTATACTAAGTTACAAGAAACAACTGCTTAACGTCGAACATAACGGAAATAAAAATATATATAGCGTCTCCT 3139 ATAANTGTTATATTGGCACCTTTTAGAGCTTCGGTATGAATAGATACAGATATG AAA GTA TTT TTT 3205 Met Lys Val Phe Phe 751 TAT ATC Tyr lle GAC ATG Asp Met CAT CCG His Pro TCT CCA Ser Pro ACG GAT Thr Asp CTT CTC Leu Leu TTT GTC Phe Val TGC TCT Cys Ser GAT AGA Asp Arg ATT GCA Ile Ala AAT GGA Asn Gly TTT TCG Phe Ser GTC AAT Val Asn TCA Ser TCC Ser AAA Lys CTG Leu AAT Asn AGT Ser TTG Leu ACT Thr AGA Arg GCA Ala GAA GS u AGA Arg GGT Gly TCC Ser GCA Ala GGT Gly TTT Phe TGC Cys TTA Leu GGC Gly AAT Asn TAT Tyr CCC Pro CCC Pro CGG Arg ACA Thr ACG Thr ATG Met AAT Asn GAT Asp AGT Ser CTG Leu AGA Arg GAA Glu GCA Ala AGT Ser ATT Ile GGG Gly ACA Thr AGA Arg GGA Gly GAA Glu ACA Thr TTT Phe TTG Leu GCA Ala CCA Pro ATS Met CGT Arg TCG Ser ATA lie CGC Arg ATI Met CTT Leu AAC Asn CTT Leu GCT Ala ATG Met TGT Cys TTT Phe ACG Thr GAG Glu AST Ser AAG Lys CTG Leu ATT CTT lie Leu AAS AAA Lys Lys CTC CGG Leu Arg SAC AAT Asp Asn GTT TTG Val Leu GGA CGA Gly Arg GGG AGA Gly Arg GGA ACT Gly Thr AGT TAT Ser Tyr CTA AGT Leu Ser SAC ATA Asp Ile GAT AAC Asp Asn TTA GAC Leu Asp ATA l 1 e GAC Asp GCT Ala TCA Ser AAT Asn CGC Arg CCA Pro TGT Cys ATC Ile GGA Gly TTA Leu AAA Lys ATG Met ATC Ile AAT Asn ACT Thr TAT Tyr CCA Pro AAA Lys ATT lie AAA Lys GAT Asp TTA Leu CTG Leu CTA Leu GTS Val TGT Cys TCT Ser CTC Leu GAG Glu TTT Phe TAT Tyr TAT Tyr TTA Leu CGA Arg TAT Tyr ACT Thr TGC Cys GGA G Sy CTA Leu CCG Pro AAT Asn ACA Thr GGC Gi y GAT Asp TTA Leu AAG Lys GAT Asp ACG Thr GTT Val AAA Lys ACA Thr CTT Leu ATC Ile GAA Glu AAA Lys GAT Asp GCT Ala CGT Arg TCC Ser SAA Glu CGT Arg AAA Lys CCG Pro GGA Gly TTC Leu ATT Tle TAC Tyr CAC His CCS Pro CTA Leu GAA Glu CTA Leu TTG Leu TTA Leu GAA Glu TTC Phe ACC Thr GGA Gly CCC Pro AAA Lys STA Val AAA Lys GTC Val TAT Tyr GGA Gly AAA Lys ATA î le ACA Thr AGT Ser CCG Pro AGA GCT CAT GAA GAA AAT GTG AAG CAG TGG CTT GAA CGA ATT GST GGT AAA CAT AGA * Arg TCT * Ser GCA Ala GAT Asp AAA Lys TCT Ser TGT Cys GTA Val GAG Gl u TTT Phe TAT Tyr TTI Leu TTT Phe ATT Ile ACA Thr ATC Il e ATA lie TAT Tyr GCA Ala GCC Ala TGG Trp TTG Leu ATA lie TGT Cys TTT Phe AGA Arg GGG Si y TTA Leu CCG Pro TAT Tyr ACG Thr TGG Trp AAC Asn TGG Trp ATT Il e ATT il e AGT Ser TTT Phe 18 2666589 Arg Ala His Glu Glu Asn Val Lys Gln Trp Leu Glu Arg Ile Gly Gly Lys His 1003 CTA CCA ATC GTC GTC GAA ACA TCT ATG CAA CAA GTC TCA AAT TTG CCG AGA AGT 4015 Leu Pro Ile Val Val Glu Thr Ser Met Gin Gln Val Ser Asn Leu Pro Arg Ser 1021 TTT AGA GAT TCA TAT TTC AAA TCA CCT SAC GAC GAT AAA TAT GAT SAC GTC AAA 406 ? Phe Arg Asp Ser Tyr Phe Lys Ser Pro Asp Asp Asp Lys Tyr Asp Asp Val Lys 1039 ATG ACA TCG GCC ACT ACT AAT AAC ATT ACC ACC TCC GTG GAT GGT TAC ACT GGA 4123 Met Thr Ser Ala Thr Thr Asn Asn Ile Thr Thr Ser Val Asp Gly Tyr Thr Gly 1057 CTC ACT AAT CGG CCC GAG SAC TTT GAG AAA GCA CCA TAC ATA ACT AAA CGA CCG 4177 Leu Thr Asn Arg Pro Glu Asp Phe Glu Lys Ala Pro Tyr Ile Thr Lys Arg Pro 1075 ATA ATC TCT GTC GAG GAG GCA TCC AGT CAA TCA CCT AAA ATA TCA ACA GAA AAA 4231 Ile Ile Ser Val Glu Glu Ala Ser Ser Gln Ser Pro Lys Ile Ser Thr Glu Lys 1093 AAA TCC CGA ACG CAA ATA ATA ATT TCA CTA GTT GTT CTA TGC GTC ATG TTT TGT 4285 Lys Ser Arg Thr Gln Ile Ile Ile Ser Leu Val Val Leu Cys Val Met Phe Cys 1111 TTC ATT GTA ATC GGG TCT GGT ATA TGG ATC CTT CGC AAA CAC CGC AAA ACG GTG 4339 Phe Ile Val Ile G ly Ser Sly Ile Trp Ile Leu Arg Lys His Arg Lys Thr Val 1129 ATG TAT GAT AGA CGT CGT CCA TCA AGA CGG GCA TAT TCC CGC CTA TAACACGTGTT 4395 Met Tyr Asp Arg Arg Arg Pro Ser Arg Arg Ala Tyr Ser Arg Leu 1144 TGGTATGGGCGTGTCGCTATAGTGCATAAGAAGTTGACTACATTGCATCAATGACATTATATAGCTTCTTTG 4467 GTCAGATAGACGGCGTGTGTGATTGCGATG TAT CTA CTA CAA TTA TTA TTT TGG ATC CGC 4527 Met Tyr Leu Leu Gin Leu Leu Phe Trp Ile Arg 1155 CTC TTT CGA GGC ATC TGG TCT ATA GTT TAT ACT GGA ACA TCT GTT ACG TTA TCA 4581 Leu Phe Arg Gly Ile Trp Ser Ile Val Tyr Thr Gly Thr Ser Val Thr Leu Ser 1173 ACG SAC CAA TCT GCT CTT GTT GCG TTC TGC GGA TTA GAT AAA ATG GTG AAT GTA 4635 Thr Asp Gln Ser Ala Leu Val Ala Phe Cys Gly Leu Asp Lys Met Val Asn Val 1191 CGC GGC CAA CTT TTA TTC CTG GGC GAC CAG ACT CGG ACC AGT TCT TAT ACA GGA 4689 Arg Gly Gin Leu Leu Phe Leu Gly Asp Gln Thr Arg Thr Ser Ser Tyr Thr Sly 1209 ACG ACG GAA ATC TTG AAA TGG GAT GAA GAA TAT AAA TGC TAT TCC GTT CTA CAT 4743 * Thr Thr Glu Ile Leu Lys Trp Asp Glu Glu Tyr Lys Cys Tyr Ser Val Leu His 1227 GCG ACA TCA TAT ATG GAT TGT CCT GCT ATA SAC GCC ACG GTA TTC AGA GGC TGT 4797 Ala Thr Ser Tyr Met Asp Cys Pro Ala Ile Asp Ala Thr Val Phe Arg Sly Cys 1245 AGA GAC GCT GTG GTA TAT GCT CAA CCT CAT GAT AGA GTA CAA CCT TTT CCC GAA 4851 Arg Asp Ala Val Val Tyr Ala Gln Pro His Asp Arg Val Gin Pro Phe Pro Glu 1263 AAG GGA ACA TTG TTG AGA ATT GTC GAA CCC AGA GTA TCA GAT ACA GGC AGC TAT 4905 Lys Gly Thr Leu Leu Arg lie Val Glu Pro Arg Val Ser Asp Thr Gly Ser Tyr 1281 TAC ATA CGT GTA GCT CTC GCT GGA AGA AAT ATG AGC GAT ATA TTT AGA ATG GCT 4959 Tyr Ile Arg Val Ala Leu Ala Gly Arg Asn Met Ser Asp Ile Phe Arg Met Ala 1299 GTT ATT ATA AGG AGT AGC AAA TCT TGG GCN TGT AAT CAC TCT GCT AGT TCA TTT 5013 Val Ile lie Arg Ser Ser Lys Ser Trp @@ Cys Asn His Ser Ala Ser Ser Phe 1317 CAG GCC CAT AAA TGT ATT CGC TAT GTC GAC CGT ATG GCC TTT GAA AAT TAT CTG 5067 Sln Ala His Lys Cys Ile Arg Tyr Val Asp Arg Met Ala Phe Glu Asn Tyr Leu 1335 ATT GGA CAT GTA GGC AAT TTG CTG GAC AGT GAC TCG GAA TTG CAT GCA ATT TAT 5121 Ile Gly His Val Gly Asn Leu Leu Asp Ser Asp Ser Glu Leu His Ala Ile Tyr 1353 AAT ATT ACT CCC CAA TCC ATT TCC ACA GAT ATT AAT ATT ATA ACG ACT CCA TTT 5175 Asn lie Thr Pro Gln Ser Ile Ser Thr Asp Ile Asn I le Ile Thr Thr Pro Phe 1371 19 2666589 TAC GAT AAT TCG GGA ACA ATT TAT TCA CCT ACG GTT TTT AAT TTG TTT AAT AAC 5229 Tyr Asp Asn Ser Gly Thr Ile Tyr Ser Pro Thr Val Phe Asn Leu Phe Asn Asn 1389 AAT TCC CAT GTC GAT GCA ATG AAT TC 5255 Asn Ser His Val Asp Ala Met Asn 1397 2666589 SEO ID N 1 B Longueur de la séquence: 1 188 paires de bases Type de molécule séquencée: ADN génomique Origine de la molécule: virus de la maladie de Marek souche RB 1 B Source expérimentale: plasmide p MDV 05 Caractéristique: de 1 à 324 paires de bases: région non codante de 325 à 1 135 paires de bases: gène U 51: le gène est transcrit de droite à gauche la séquence indiquée est complémentaire à la séquence SEQ ID n 1 2-le -iya r t A-ï E m _ i ei C-ii {;i i 5 N W î-ii T -s Ai A eit TAT Teii i 2 k AGT -25 T 'i e T 2 e T T-f C M-i et le Thr T 7 e e al A Te, Ar-g AGA l _ ATA Phes 1 Li TTT L Ys i,r l Asp His L'.AT Tim ATT Fre Pr-o Te T i AA tuy TE.C _-Sly GG Ay ATA As F ln CAI Atla Pro CCA Phe TTT vd i flrr A 2 G ai A C CCT L-f r-o Lf- A Ai Ly Ala GCT Asp GAT Ly s AAA Pro CCA I l e lia ATA Le u CTA Leu TTG Leu T TiTrr TG_ Pro Lse AAA Ser- TúA ATA Ala GCA Asp F GAT Pro CCC Asp T GAT Val GTG TC i T- Ser- Gi I L 2 Tr-rf TGG Alla Asp Lys t 2 ", ' úAA ,AA Ar-g A er TCT V. al GTG Me t ATG G y GG.A Ar-g f t r i G y Ie GA 1. ATA L As A Af A ie ATT Aif Ai TC A-sp -AT AT; Tr Leu Leu ACA CTT CTA Thr Leu Trp ACT TTA TGG Gly Val Pro ii T GTG CCC Leu le Leu i TTA ATT CTT Thr Gi Val ACT GGA GTIT Leu Ph'e u C Ti A TTT AA Tyr Leu Me-t TT T Tf-i AT V-al Gly Aa 1 Gi TT GGG Gl GC Gi Ar-g L eu Leu E i T A f- 1 Ut C u: -v 7 r Ar-o Asp Asa Prc 61 u 'Jsi F A G MA G AA GT ieu 1 Lys y Se f-C AT E TACC Sef Ser Tfr- A Gie T A-C-T AC:A -Srg,4,p A 1-l, P.3 Gi AT Ge CG; ih Lys Lys C-AG ^^^r' ^^^ts Asp lle ATA Ilte i ATA Pro CCT ti-, Arg is_ As 3 p bi AT Eau Ala Cy CA ATT Pr-o AT-T Gl u GAA TTC Tie i ATC Arg Vai 2 fii GTT G lu A Asp r AT C, e ATC A-. Pr-o i CA Ar-g AGA-'f Cys Leu CTT V a il Gtn CAA Thr Ata GCA T -r ATA Ls Ai AA Thr Hls CAT Ashf Ai AT ATT Aia C GAT f. ' Ar-g AGA -1 r c A his f-AT Gty i f Giy C:ys T-S T Leu CT Cx TTT Proi L-u j TTA Pro -C Gj_ f-ity GG T rpg C Gi A Lys AAG Ala GCT CGA TTG Val CGC i-i;f A Tp C li*f Leu TGT Cs Ti TC V 3 al Seif A Tit _eu T Ti-f Pn CAA Ala GCA Pr-o CCG Ai 1 Ser TC C Ser- G,A i ACA Tx, r-g C Ag T r o fcc A Ors Tfi T A, FA G 1 y As A CGA ies Gî Gr ATA 61 y i 1 P f Aj Uri TAC Ae.f Thr Ser- er-o TGT- T Af Gty rr A Hert ATG Leu CTA Va l GTA Tkr- ACT Gllu Asn r-A Leu i -Tr _,_,_ r As F Gi AT Gt 7 y Tihr- Arg Gitu GAA i-ne TTC Arg AGG Arg AGG T G G Trp TGG Ma Al Glu AA Ser Tr p ATG- L s Ala GCG,- TCT 1113 Gin CAA 1069 Ar-g CGT 1015 Th.r ACCA 961 Asp CGAT 907 G 1 n C Af G 853 P Po f rffi f C^ 799 C ys GT 745 tT 691 G AA, 637 V 3 al TA 583 AT 529 ys Ti 6 4 '75 i Thr ACA 367 Ti AGCT GIT, TATTCGAC 310 A Gf ACCúTA Cf-T Tf L Cf:TACCA Af 2 TTAGATATAATTACATGATGGGGCTATA Cf AC,-ATTACGATTAG-Gf UTGC-f-ATCC t,}J TA At F G AAC Tf:C i TATGTG Ti AC m TATAATTT 3 TATATTA TG- AATA-ACAAACT Tf TACATA TTA Tf TA TCCAGGSCTAT CT-i CC ATATACTT TAAATCAGGAGAGATTT C AAATC G CGCATTTGAAACA AACGAT GAGCAGAGTCAATGCTACAATGTT CATGATATGGATAT ACCAAGAGGACGATTTGGTAAGCCA Ci GAGAAA GIATTACTAATGTAAATTTTTG 22 2666589 SEO ID n 2 Type de séquence: oligonucléotide Longueur de la séquence Type de molécule: ADN ' GGA CTC GAA CCA TGG AGT CTA TTA CC 3 ' I NCO 1 SEO ID n 3 Type de séquence: oligonucléotide Longueur de la séquence Type de molécule: ADN ' GAC GGG TGT CGA CAT ATG AG 3 ' I I Sal I SEO ID n 4 Type de séquence: oligonucléotide Longueur de la séquence Type de molécule: ADN ' CTG GAG CCC ATG GTG CAC CTT TG 3 ' I I NCO 1 SEO ID N O 5 Type de séquence: oligonucléotide Longueur de la séquence Type de molécule: ADN ' CAA ATT GCT ATT GTC GAC ACC TCC GCC TCT C 3 ' Sal I Sal I REVENDICATIONS 1) Séquence nucléotidique, et ses variantes, du domaine court unique (Us) du virus de la maladie de Marek, caractérisée en ce qu'elle correspond au gène U 53, non essentiel à la replication, et homologue du gène de la protéine kinase du virus herpès simplex. 2) Séquence nucléotidique U 53 du virus MDV, et ses variantes, selon la revendication 1 apparaissant sur la séquence ID no 1. 3) Séquence nucléotidique ID N O 1 et gènes et leurs variantes appartenant à cette séquence. 4) Virus recombinant choisi parmi les virus herpès, comprenant au moins un gène hétérologue inséré dans la région Us du génome dudit virus, correspondant au gène de la protéine kinase. 5) Virus recombinant selon la revendication 4, caractérisé en ce que le gène est un gène codant pour un immunogène viral, bactérien ou parasitaire. 6) Virus recombinant de la maladie de Marek, selon la revendication 5, comportant au moins un gène hétérologue, caractérisé en ce que ce gène est inséré dans la région de son génome correspondant au gène U 53, de manière à pouvoir s'exprimer. 7) Virus recombinant selon la revendication 6, caractérisé en ce que le gène hétérologue insèré code pour un pathogène choisi dans le groupe constitué par la bronchite infectieuse aviaire, la maladie de Newcastle, la maladie de Gumboro, la peste aviaire, l'anémie aviaire, le syndrome chute de ponte, la variole aviaire, la laryngotrachéite infectieuse, la colibacillose, la pasteurelose, la coccidiose, l'hémophilose. 8) Virus recombinant selon l'une des revendications 6 et 7, caractérisé en ce qu'il s'agit du virus MDV. 9) Virus recombinant selon l'une des revendications 6 et 7, caractérisé en ce qu'il s'agit du virus HVT. ) Virus recombinant selon la revendication 9, caractérisé en ce que le gène inséré code pour un immunogène d'un virus de la maladie de Marek de sérotype 1 ou 2. 11) Virus recombinant selon l'une quelconque des revendications 4 à 10, caractérisé en ce que le gène est inséré pour être exprimé sous le contrôle des séquences régulatrices de transcription du gène de la protéine kinase. 12) Virus recombinant selon l'une des revendications 4 à 11, caractérisé en ce que le gène hétérologue inséré est susceptible d'être exprimé sous la dépendance de séquences promotrices du virus considéré, ou d'autres virus herpès. 13) Virus recombinant selon l'une quelconque des revendications 4 à 12, caractérisé en ce que les codons. d'initiation et de terminaison du gène inséré sont20 substitués à ceux du gène U 53. 14) Vaccin caractérisé en ce qu'il comprend un virus recombinant selon l'une quelconque des revendications 3 à 9. ) Procédé de préparation d'un virus recombinant de la maladie de Marek, caractérisé en ce que l'on insère au moins un gène hétérologue dans la région de son génome correspondant au gène U 53, de manière à pouvoir s'exprimer.