FR 2672493 A1 19920814 FR 9201559 A 19920212 La présente invention concerne une nouvelle utilisation des stéroïdes 4, 9, li-triénique pour accroître la résistance des poissons au stress en cours d'élevage. 5 Un objet de l'invention est l'utilisation des composés de formule (I) R ox dans laquelle R représente un radical alkyle contenant de 1 à 4 atomes de carbone et X représente un radical acyle obtenu à partir d'un acide carboxylique contenant de 1 à 18 atomes de carbone, pour la fabrication de médicaments contre le stress destinés à être administrés aux poissons. R représente de préférence un radical méthyle. OX représente de préférence un radical acétoxy, amyloxy ou hexabenzyloxycarbonyle. Le poisson est un animal dont l'élevage est difficile; son état de santé est directement lié au milieu dans lequel il évolue Par conséquent, toute variation du milieu peut être un facteur de stress pour le poisson. Parmi les facteurs du stress, on peut citer: Les facteurs physiques tels que les variations de la tempé- rature d'eau, les variations de gaz dissous dans l'eau, Les facteurs mécaniques dûs au transport, au surpeuplement de poissons dans un endroit donné, Les facteurs chimiques ou biologiques dûs aux bactéries, aux virus et aux parasites. Le poisson est un animal très sensible au stress On crée d'importantes réactions de stress chaque fois qu'on le trans- fère de réservoir en réservoir, de réservoir en étang ou au cours de calibrage à l'aide de filets. La réaction de stress induit des modifications importantes 1) Internes: La libération des catécholamines et des corti- costéroïdes qui modifient considérablement les paramètres sanguins, le métabolisme et l'excrétion. 2) Externes: L'épiderme des poissons est bien moins épais que celui des vertébrés supérieurs et ne contient pas de kératine, l'épiderme recouvre les écailles et il est très facilement 5 endommagé et égratigné au cours de manipulations. Très souvent, à la suite des manipulations, il s'est produit des maladies et des morts avec une intensité variable selon les espèces et l'âge des poissons et la connaissance du pisciculteur.10 La réduction de cette mortalité dûe aux manipulations représenterait une percée en aquaculture. Plus particulièrement, un objet de l'invention est l'uti- lisation de l'acétate de trenbolone (TBA) pour la fabrication d'aliments médicamenteux destinés à l'administration aux15 poissons. On vient de découvrir qu'il est possible d'obtenir d'excellents résultats chez le poisson d'eau douce, le poisson d'eau de mer et le poisson d'eau saumâtre. D'excellents résultats ont été obtenus à l'aide des médicaments de l'invention chez des Salmonidés tels que la truite ou le saumon, chez des Anguillidés tels que l'anguille, chez des Cypranidés tels que la carpe, chez le poisson cycloïde tel que le tilapie et chez le poisson de mer tel que le serran ou la daurade.25 Les résultats histologiques suivants ont été obtenus à partir des travaux présentés ci-après. Le pancréas: Moins de dégénérescence graisseuse dans le groupe traité au TBA que dans le contrôle. Meilleure irrigation d'organe: Meilleure sécrétion d'insuline à partir des îlots de Langerhans. Meilleure production d'enzymes digestives ce qui améliore l'utilisation des aliments. Le foie: Moins de dépôts graisseux dans le groupe traité a conduit à une amélioration de l'irrigation et donc à une amélioration des fonctions hépati- ques: Dépuration Synthèse La peau: Epaississement de l'épiderme. Baisse de la dégénérescence graisseuse du muscle sous-cutané. Dans un mode de réalisation préféré, l'utilisation s'effectue par voie orale, le produit étant susceptible par exemple d'être incorporé dans un aliment pour poisson. A titre d'aliment pour poisson, on peut utiliser des mélanges commerciaux contenant des farines de poissons, des protéines, des levures, de la farine de soja et des vitamines, qui se présentent sous forme de poudres ou de granulés. Plus particulièrement, un objet de l'invention est l'uti- lisation caractérisée en ce qu'on effectue l'administration pour le saumon, la truite ou l'anguille.15 En particulier, un objet de l'invention est l'utilisation caractérisée en ce que le produit de formule (I) est incorporé dans un aliment pour poisson à raison de 1 à 20 ppm en poids de principe actif par poids d'aliment pour poisson, par exemple, à raison de 5 à 15 ppm.20 Plus particulièrement, un objet de l'invention est l'utilisation caractérisée en ce que le produit de formule (I) est utilisé pour accroître la résistance des poissons au stress en cours d'élevage. En particulier, l'objet de l'invention est d'accroître la résistance aux champignons, aux virus, aux bactéries et à d'autres agents pathogènes. Plus particulièrement, un objet de l'invention est l'invention caractérisée en ce que l'agent pathogène est la Saprolégnie Ceci est assez remarquable car il s'agit d'un30 agent pathogène difficile à traiter. De très bons résultats ont été obtenus en utilisant le médicament de l'invention comme traitement de 20 à 30 jours avant le facteur provoquant le stress, par exemple avant le changement de réservoir. La posologie journalière peut varier de 0,1 à 0,5 mg par kg de poids corporel de poisson par jour. Exemples: a) On a préparé une poudre destinée à être administrée au poisson, contenant le produit au TBA à raison de 10 mg de produit au TBA pour 1000 g de mélange. b) On a préparé un aliment pour poisson contenant: 1000 g de farine, 700 g d'eau, 70 g d'huile d'arachide, 17,7 mg de TBA. Le mélange a été homogénéisé par agitation mécanique. L'aliment préparé contient 10 mg de principe actif TBA par kg. COMPTE-RENDU BIOLOGIQUE 1) Méthode d'essai: Les poissons, Oncorhynchus kisutch (Saumon Coho) élevés dans un étang d'aquaculture ont été relâchés dans les réservoirs d'élevage au jour 0, de telle sorte que chaque groupe se compose de 70 poissons Tous les poissons étaient apparemment normaux et similaires entre eux en taille corporelle (les poissons extrêmement grands ou petits étant exclus), le poids corporel moyen étant de 22,2-22,4 g dans chaque réservoir Les poissons ont été amorcés en cours d'acclimatation Les poissons ont été nourris de façon à ce qu'ils consomment de l'aliment correspondant au total à 1,8 % (en poids) du poids corpo- rel total des poissons dans chaque réservoir La consom- mation alimentaire par les poissons s'est complètement stabilisée au jour 6, et par conséquent, l'administration du TBA a démarré ce jour-là L'administration a pris fin au jour 25 Au cours de ces 25 jours, l'aliment a été fourni pendant 21 jours (sauf les dimanches) L'aliment a été fourni en quantité correspondant à 1,8 % de poids corporel de poisson tant pour les groupes traités que pour les groupes de contrôle L'aliment a été préparé de la manière suivante: De l'eau correspondant à la moitié de la poudre ali- mentaire (en volume) et une quantité déterminée d'huile de table ont été ajoutées à l'aliment pour truite (poudre) Le mélange a été mis dans un sac en poly- éthylène, puis broyé pour donner un mélange homogène. Ensuite, le mélange a été passé dans un presse-ail pour la mise en forme puis séché à l'air. Au cours de la préparation de l'aliment pour le groupe traité au TBA, le TBA a d'abord été dissous dans l'huile de table à un taux précis de sorte que la teneur finale en TBA soit de " 10 mg/1000 g d'aliment ( 10 ppm)" Il varie entre 0,2 à 0,5 mg de TBA par 1000 g de poids corporel. Les conditions d'élevage: Les poissons ont été relâchés dans des réservoirs de " 30 cm x 70 cm x 29 cm" (profondeur d'eau: 25 cm) chacun, à raison de 70 poissons par réservoir La température de l'eau a été maintenue à 8,8 10,20 C et le débit d'eau a été maintenu à 3 5 litres/minute. Méthode de test de la Saprolégniase: Conformément à la Méthode "AMIMOMII" du Dr Hoshiai (test de stress mécanique ou de stress par agitation de filet) on a soumis les poissons au stress et ils ont subit des dommages épithéliaux Pour augmenter la fiabi- lité de l'étude, " 1 'AMIMOMI" a été réalisée dans diverses conditions: le nombre de poissons par "AMIMOMI" a été de ou 10, et le temps "AMIMOMI" a été de 30 secondes, de 1 minute ou de 2 minutes Pour soumettre les poissons à l'attaque par les zoospores de Saprolégnie, les poissons ont été relâchés dans de l'eau contenant " 2 x 10 zoospores/ litre d'eau" Pendant la durée du test, toute l'eau dans les réservoirs de " 60 cm x 30 cm x 45 cm (pro- fondeur d'eau: 40 cm)" a été changée tous les 3 jours. L'attaque par les zoospores et l'observation des poissons a duré pendant 14 jours, du 22 septembre au 6 octobre Pendant cette période, l'alimentation en eau a été arrêtée; l'aération a été poursuivie; et la tempé- rature de l'eau a été maintenue à 12 130 C Pendant la période d'élevage, l'alimentation en eau a été assurée par 2 tuyaux pour tenir compte du risque d'un possible endommagement accidentel d'un tuyau, par exemple par une forte chute de pluie, etc. 2) Résultats et Discussion Concernant le Test d'Infection. Les résultats du test sont présentés dans les figures 1 à 6 comme suit: Chaque figure montre le nombre de poissons infectés dans le groupe de contrôle et le groupe traité au TBA, et le nombre de poissons morts (seulement parmi les poissons du contrôle, aucune mortalité n'ayant été enregistrée dans le groupe traité au TBA). Le jour O est le jour pour le test du stress. Figure 1: test du stress: 30 S sur 5 poissons. Figure 2: test du stress: 30 S sur 10 poissons. Figure 3: test du stress: 60 S sur 5 poissons. Figure 4: test du stress: 60 S sur 10 poissons. Figure 5: test du stress: 120 S sur 5 poissons. Figure 6: test du stress: 120 S sur 10 poissons. a) Tendance observée dans les groupes de contrôle: Pour le même nombre de poissons par "AMIMOMII", plus le temps d"'AMIMOMI" a été long, plus élevé a été le taux d'infection, plus tôt les symptômes se sont déve- loppés, plus élevée a été la mortalité, et plus rapi- dement ils sont morts Ceci est parce que plus le temps "d'AMIMOMI" a été long, plus élevé a été le stress et plus sérieux a été le trauma Pour le même temps "d'AMIMOMI", plus le nombre de poissons par "AMIMOMI" a été petit, plus rapidement se sont déve- loppés les symptômes et plus élevée a été l'incidence d'infection La même tendance a été observée en ce qui concerne les paramètres suivants, les conditions du milieu telles que la dimensions des réservoirs, le nombre de zoospores par réservoir, la température de l'eau d'élevage, etc; plus le nombre de poissons par "AMIMOMI" est petit, plus élevé est le nombre de zoospores attaquantes par poisson. b) Tendance observée dans les groupes traités au TBA: La tendance est généralement similaire à celle observée dans les groupes de contrôle Toutefois, les groupes traités au TBA ont présenté des grandes différences par rapport aux groupes de contrôle sur les points suivants Parmi les poissons ayant subit " 1 'AMIMOMI" en un groupe de 5, l'infection a d'abord été confirmée au 3 ème jour et elle a disparu au 6 ème, quelle que soit la durée de " 1 'AMIMOMI" Toutefois, plus " 1 'AMIMOMI" a été longue, plus élevé a été le taux d'infection Dans le cas des poissons ayant subit "l'AMIMOMII" en groupe de 10 et o " 1 'AMIMOMI" a duré pendant 30 secondes, l'infection a été confirmée au 4 ème jour et a disparu au 9 ème jour Pour les poissons ayant subit " 1 minute d'AMIMOMI" en un groupe de 10, l'infection a été confirmée 1 jour plus tôt, c'est-à- dire au 3 ème jour, mais ils sont redevenus normaux au 9 ème jour Dans ce dernier groupe, le taux d'infection a été plus élevé que celui du groupe de " 30 secondes d'AMIMOMI" Le groupe de " 2 minutes d'AMIMOMI" a pré- senté pratiquement la même tendance que celle présentée par le groupe de " 1 minute d'AMIMOMI", tous les poissons se rétablissant de la Saprolégniase sauf celui chez lequel la maladie a encore été confirmée le dernier jour De plus, le taux d'infection a été plus faible que dans le groupe de " 1 minute d'AMIMOMI". Selon l'analyse comparant les conditions d'infection entre les poissons du même groupe de temps d'AMIMOMI: Dans le "groupe de 2 minutes d'AMIMOMI" le taux d'infection a été beaucoup plus élevé que les autres dans le groupe "d'AMIMOMI à 5 poissons". Dans le groupe de 30 secondes et de 1 minute d'AMIMOMI, il n'y a eu aucune différence sauf qu'un rétablissement à 100 % a été réalisé plus tard que dans le groupe de 2 minutes. Se basant sur ce qui précède, l'auteur a conclu que lorsqu'ils sont attaqués par des zoospores, les poissons traités au TBA sont aussitôt infectés mais se débarrassent rapidement de l'hyphe, puis se rétablis- sent Ainsi, une prophylaxie contre la Saprolégniase est obtenue par traitement au TBA. c) Différences entre les groupes: tant dans le groupe d'AMIMOMI à 5 poissons que dans le groupe d'AMIMOMI à poissons, l'infection a été observée 1 2 jours plus tard et le degré d'infection a été remarquable- ment plus faible comparé aux groupes de contrôle quelle que soit la durée d'AMIMOMI Si l'on compare les deux groupes dans les mêmes conditions, le taux d'infection a été plus faible, le rétablissement est apparu plus tôt et il n'y a eu aucun mort dans le groupe traité au TBA Dans le groupe TBA ( 10 poissons), de 2 minutes d'AMIMOMI, seulement 1 poisson ne s'est pas rétabli au terme de l'étude. REVENDICATIONS 1) Médicament pour lutter contre le stress chez le poisson comportant les composés de formule (I): R (I) dans laquelle R représente un radical alkyle contenant de 1 à 4 atomes de carbone et X représente un radical acyle obtenu à partir d'un acide carboxylique contenant de 1 à 18 atomes de carbone. 2) Médicament selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'administration est effectuée par voie orale. 3) Médicament selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en qu'il est incorporé dans un aliment pour poisson. 4) Médicament selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'administration est effectuée chez les Salmonidés tels que la truite ou le saumon, chez les Anguillidés tels que l'anguille, chez les Cypranidés tels que la carpe, chez le poisson cycloïde tel que le tilapie et chez le poisson de mer tel que le serran et la daurade. 5) Médicament selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le produit de formule (I) est incor- poré dans un aliment pour poisson à raison de 1 à 20 ppm en poids de principe actif par poids d'aliment pour poisson. 6) Utilisation des composés de formule I tels que définis à la revendication 1 pour la fabrication de compositions destinées à lutter contre le stress chez le poisson en cours35 d'élevage. 7) Utilisation des composés de formule I tels que définis à la revendication 1 pour la fabrication de compositions destinées à accroître la résistance aux champignons, aux virus, aux bactéries et à d'autres agents pathogènes chez le poisson en cours d'élevage.