FR 2670796 A1 19920626 FR 9016248 A 19901224 Composition biologique pour la décontamination de sols pollués Procédé et dispositif pour l'utilisation de cette composition. Le problème de la dépollution de sols contaminés par des produits chimiques soit accidentellement, soit à la suite de rejets de déchets industriels, est traité selon différentes stratégies En particulier on connait la possibilité d'utiliser certaines méthodes de traitement physico-chimique et notamment de traiter des quantités déterminées de sols pollués, selon des protocoles d'insinération. De tels traitements d'insinération présentent des qualités intéressantes mais demeurent néanmoins peu satisfaisants sur le plan de la mise en oeuvre étant donné la nécessité de les réaliser sur des sites appropriés Ce procédé peut être avantageusement utilisé dans des conditions d'urgence et en cas de forte contamination Depuis quelques années d'autres tentatives ont été faites pour traiter des sols pollués, notamment en ayant recours à différents microorganismes dont on souhaitait utiliser les capacités de dégrader les agents chimiques toxiques contenus dans des sols pollués. La mise en oeuvre des capacités que présentent certains microorganismes connus, de dégrader des produits chimiques et notamment des produits chimiques organiques, ne suffit toutefois pas pour le traitement de tous les sols pollués En effet il est clair que certains types de déchets industriels en particulier d'origine organique ou certaines pollutions accidentelles résistent à un traitement par des microorganismes habituellement utilisés pour leur capacité de biodégradation. Le problème du traitement des sols contaminés par des produits chimiques résistants aux microorganismes habituellement utilisés pour ce type de traitement restait donc posé. S'écartant du principe appliqué dans les techniques connues, selon lequel la dépollution biologique des sols contaminés par des déchets industriels nécessite une dégradation des polluants par des microorganismes, les inventeurs ont mis au point de nouveaux moyens efficaces pour le traitement biologique des sols pollués, sans avoir recours de façon nécessaire à la biodégradation des contaminants. Pour l'élaboration des moyens selon l'invention, les inventeurs se sont en particulier intéressés au cas de polluants organiques résistants à l'ensemble des microorganismes connus Des polluants particulièrement résistants à des traitements biologiques courants utilisés dans le cadre de la mise au point des moyens de l'invention, sont des contaminants toxiques organiques appartenant à la famille des polychlorures de biphényle (PC Bs), qui appartiennent au groupe des hydrocarbures aromatiques halogénés. Les résultats obtenus, par mise en oeuvre des moyens de l'invention lors du traitement de PC Bs, se sont révélés être applicables pour le traitement d'autres polluants. A cet égard, les inventeurs ont remarqué de façon tout à fait intéressante et originale, que certains microorganismes peuvent être utilisés pour concentrer des contaminants toxiques sans avoir obligatoirement recours à leur dégradation et par conséquent offrir un moyen d'éliminer les polluants de façon plus aisée qu'en utilisant les méthodes mises en oeuvre à ce jour. Selon l'invention, les microorganismes utilisables sont capables d'agir comme des biofiltres cellulaires pouvant ainsi capter et accumuler les polluants au moins au niveau de leur paroi cellulaire. Cette action des microorganismes de l'invention a lieu tout au long de leur parcours dans le sol traité et est notamment favorisée par la circulation ou la recirculation simultanée d'un flux liquide constitué par exemple par l'eau de lixiviation traitée si besoin. L'invention propose par conséquent des compositions à base de microorganismes, susceptibles d'intervenir dans le traitement de sols contaminés par des contaminants toxiques. L'expression "contaminants toxiques" s'applique dans le cadre de l'invention pour désigner des produits chimiques organiques ou minéraux toxiques ou dangereux à éliminer du sol De façon particulièrement avantageuse, l'invention propose des moyens adaptés au traitement des contaminants organiques toxiques, notamment des contaminants de la famille des PC Bs. L'invention concerne également un procédé pour le traitement de sols pollués par des contaminants toxiques, ainsi qu'un dispositif pour la mise en oeuvre de ce procédé. Une composition selon l'invention est caractérisée en ce qu'elle comprend un inoculum à base de cellules procaryotes et/ou eucaryotes notamment de bactéries, de champignons ou de levures ou de plusieurs types de ces cellules, sélectionnées pour leur capacité à: se développer dans un milieu de culture contenant comme seule source de carbone des contaminants toxiques déterminés, en particulier de contaminants organiques, capter, adsorber et accumuler ces contaminants à partir d'un sol à traiter, au niveau de leur paroi cellulaire et éventuellement au niveau de leur cytoplasme et/ou par l'intermédiaire de leurs produits de lyse. La capacité des cellules contenues dans l'inoculum, de se développer lorsqu'elles sont mises en culture dans un milieu dont la seule source de carbone est constituée par un ou plusieurs contaminants toxiques déterminés, peut être vérifiée par la mise en oeuvre d'un test tel que celui décrit dans les exemples, qui permet de déterminer la résistance des souches au produit toxique à éliminer. D'une façon générale, un tel test comprend: a) l'ensemencement d'un milieu de culture minéral adapté pour le développement d'organismes cellulaires du type procaryotes et/ou eucaryotes, ce milieu contenant en outre à titre de seule source de carbone, au moins un contaminant toxique déterminé, avec une quantité déterminée de cellules eucaryotes ou procaryotes choisies, b) l'incubation à une température donnée, de préférence la température optimale de croissance des souches eucaryotes ou procaryotes par exemple entre 4 C et 35 C environ de préférence entre 100 C et 350 C, notamment supérieure à 150 C, de façon particulièrement avantageuse entre environ 20 et environ 320 C, de façon particulièrement avantageuse environ 30 'C pour des bactéries et environ 250 C pour des microorganismes filamenteux ou des levures pendant un temps suffisant pour favoriser le développement des cellules résistantes aux contaminants, c) l'étalement sur un milieu nutritif spécifique des différents types cellulaires présents pour estimer leur capacité de développement, d) le cas échéant un ou plusieurs repiquages successifs des cultures avec des concentrations croissantes de contaminants et la répétition de l'étape c) après chaque repiquage, e) la culture avec un milieu nutritif exempt d'extrait de levure, spécifique des différents types cellulaires présents pour estimer leur capacité de développement, f) la récupération des souches capables de se développer dans ce milieu. L'absence d'extrait de levure est destinée à vérifier que le développement des souches cellulaires présentes est effectivement dû à la présence des contaminants L'extrait de levure suffit en effet à certaines souches cellulaires pour leur développement. Une composition adaptée à la réalisation de l'invention comprend par exemple des champignons notamment filamenteux en particulier de la famille des Ascomycètes, par exemple Fusarium, Aspergillus, ou Penicillium On peut utiliser également des champignons unicellulaires comme des levures dans l'inoculum. Une telle composition comprend aussi avantageusement des bactéries telles que celles décrites dans les exemples. Les inventeurs ont mis en évidence que l'inoculum agit différemment sur les contaminants toxiques, selon qu'il contient des bactéries ou des cellules eucaryotes Par exemple les bactéries captent les contaminants, par l'intermédiaire de leurs produits de lyse Les cellules eucaryotes sont capables de capter, d'adsorber et d'assimiler les contaminants au niveau de leur paroi, voire de leur cytoplasme. Selon un premier mode de réalisation préféré de l'invention, la composition est caractérisée en ce que l'inoculum comprend des cellules capables de résister et de se développer en culture avec des contaminants de la famille des PC Bs, de les capter, de les adsorber, et de les accumuler au niveau de leur paroi cellulaire, voire au niveau de leur cytoplasme. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, la composition comprend des microorganismes dont la lyse libère des produits captants selon la définition précédemment donnée. La famille des PC Bs comporte de très nombreuses molécules présentant un taux de substitution en particulier par le chlore, variable La très grande diversité de cette famille, conduit à des résultats très différents lorsque l'on recherche des moyens pour traiter des sols contaminés par les PC Bs L'invention est de façon avantageuse, adaptée au traitement de sols contaminés par tous les types de PC Bs et notamment par des PC Bs appartenant aux isomères les plus stables de cette famille A titre d'exemple, on mentionne que l'invention est particulièrement adaptée au traitement des pyralènes connus sous les marques Aroclor 1260 et Aroclor 1242, qui ont une stabilité différente. En d'autres termes la composition selon l'invention peut être particulièrement adaptée au traitement de sols contaminés par des PC Bs hautement substitués. La composition selon l'invention constitue un filtre biologique, utilisable pour la lixiviation à travers un sol chargé en matière chimique toxique, en particulier en produits d'origine organique. La composition selon l'invention permet avantageusement de décontaminer des sols pollués, quel que soit le niveau de profondeur des contaminants toxiques. Les pyralènes ou leur dérivés ne sont pas les seuls constituants d'origine organique susceptibles d'être traités au moyen de la composition selon l'invention. En effet d'autres compositions selon l'invention sont encore caractérisées en ce que les cellules de l'inoculum sont choisies pour leur capacité à résister et à se développer en culture avec des contaminants toxiques halogénés ou non halogénés, possédant le cas échéant un ou plusieurs cycles aromatiques en particulier des composés tels que les huiles lourdes, des pesticides, des fongicides ou des insecticides ou des solvants organiques et de capter, d'adsorber et d'accumuler ces contaminants organiques toxiques au niveau de leur paroi cellulaire. De même l'invention fournit des moyens pour traiter des sols contaminés par des polluants non organiques, en particulier par des métaux lourds. Dans certains cas on peut avantageusement utiliser pour l'élaboration de la composition selon l'invention, des cellules susceptibles de métaboliser, au moins partiellement, les contaminants organiques toxiques. Par exemple l'inoculum peut comprendre des cellules capables par exemple de transformer certains PC Bs en des isomères moins stables. De façon avantageuse, l'inoculum de la composition comprend des cellules permettant ou favorisant la désorption des contaminants organiques toxiques associés à certaines fractions du sol. A titre d'exemple il peut être intéressant de réaliser une désorption des contaminants, notamment des PC Bs, liés à des fractions argileuses du sol. Les cellules comprises dans la composition peuvent consister uniquement en des cellules vivantes physiologiquement actives ou au contraire en des cellules vivantes en mélange avec des cellules physiologiquement inactives de même origine ou non, ayant conservé leur capacité de captation, d'adsorption et d'accumulation des contaminants. Lorsque la composition comprend un mélange de cellules vivantes et de cellules mortes ayant conservé les propriétés ci-dessus, les proportions respectives de chaque catégorie sont déterminées en fonction de l'utilisation faite et éventuellement du stade auquel l'inoculum est utilisé pour traiter le sol contaminé. En effet on peut avoir intérêt à mettre en oeuvre une proportion plus élevée de cellules physiologiquement inactives lorsqu'une seconde administration de l'inoculum est opérée. Un inoculum particulièrement avantageux pour réaliser l'invention comprend les souches de bactéries dont la description est donnée dans les exemples et qui sont désignées par X Ibpl, X Ibp 3, X Ibp 4, X Ibp 6, X Inb 2, X Inb 5, X Icl. D'autres inoculums préférés contiennent une ou plusieurs des bactéries ci-dessus et/ou une ou plusieurs cellules eucaryotes, par exemple choisies parmi les champignons. D'autres éléments peuvent naturellement être incorporés dans une composition de l'invention A cet égard on peut citer des nutriments, capables de stimuler la croissance des cellules de l'inoculum et/ou leur activité dans le sol On peut mentionner à titre d'exemple des minéraux, par exemple apportés sous la forme de sulfates On ajoutera par exemple de l'azote, du phosphore, du potassium, du fer, du zinc, du cuivre, du magnésium, du soufre, du cobalt, du molybdène ou tout autre oligoélément. La stimulation de la croissance des cellules peut en effet faciliter et/ou accélérer leur activité vis à vis des contaminants organiques toxiques. D'autres éléments pouvant intervenir dans l'élaboration des compositions sont par exemple des agents tensio-actifs qui peuvent être soit produits par des souches cellulaires ayant de telles propriétés ou encore des substances chimiques habituellement utilisées en tant que tensio-actif. L'apport d'agents tensio-actifs est déterminé en fonction de la nature du sol traité et l'on peut citer à titre d'exemple que cet apport peut être particulièrement intéressant dans le cas d'un sol argileux ou dans le cas d'un sol en général riche en matière humique, matière organique vivante et matière organique morte. De même un agent tensio-actif peut constituer une nouvelle source de carbone, différente de celle fournie par le contaminant, et générer un effet bénéfique pour la croissance des microorganismes de l'inoculum De plus la présence de tensio-actifs peut améliorer la désorption des contaminants organiques adsorbés sur certaines fractions du sol. Etant donné l'importance dans les moyens de l'invention, de la captation et de la fixation par les parois cellulaires des souches de l'inoculum, des différents contaminants du sol, on peut avantageusement mettre en oeuvre des cellules dont les parois auront été épaissies ou dont la zone mucilagineuse externe a été épaissie, ou encore dont la surface pariétale est accrue. S'agissant de l'accroissement de la paroi pariétale, on peut avoir recours à des cellules mortes qui permettent néanmoins la fixation des contaminants et en particulier des PC Bs tant au niveau de la surface externe que de la surface interne de la paroi. Pour épaissir les parois mucilagineuses des cellules de l'inoculum, on peut mettre en oeuvre les techniques classiques. En deuxième phase du traitement du sol contaminé, on peut avoir intérêt à favoriser l'activité de prédateurs des cellules de l'inoculum, notamment pour faciliter la séparation des cellules ayant adsorbé les contaminants du sol, des autres cellules Ces prédateurs sont généralement naturellement présents dans le sol traité. Ils peuvent aussi être ajoutés à la composition comprenant l'inoculum ci-dessus. On peut également favoriser l'action de prédateurs de certaines populations cellulaires de l'inoculum, lorsque l'on cherche à augmenter la surface pariétale disponible pour l'adsorption des contaminants. Un prédateur intéressant pour la mise en oeuvre de l'invention appartient à la famille des thécamoebiens bactériophages ou mycophages En particulier dans une composition selon l'invention utilisable pour la décontamination de sols contenant des PC Bs, un prédateur avantageux est l'amibe T Granifera. La composition de l'invention peut être conservée sous forme d'une solution comprenant l'inoculum sous forme de cellules en suspension. D'autres modes de conservation de l'inoculum sont néanmoins adaptés à la réalisation de l'invention; on peut citer à titre d'exemple la conservation de l'inoculum sous une forme lyophilisée De manière générale on peut envisager de conserver la composition de l'invention sous toutes formes adaptées à la conservation des souches cellulaires. Les compositions selon l'invention sous l'une des formes de conservation choisies peuvent contenir, des agents tensio-actifs chimiques ou des microorganismes susceptibles de produire ces agents On peut leur ajouter également une ou plusieurs sources de nutriments minéraux (N,P, K, Ca, oligoéléments), une source de carbone ou des résidus industriels contenant du matériel biologique capable d'entrer dans la composition de l'inoculum. L'invention vise naturellement l'utilisation des compositions précédemment décrites pour le traitement de sols contaminés par des polluants organiques toxiques et en particulier par des polluants de la famille des PC Bs. L'invention vise également un procédé de traitement de sols contaminés par des polluants organiques toxiques, caractérisé en ce qu'il comprend l'administration à travers une quantité de sols donnée d'une composition telle que décrite précédemment, dans des conditions permettant la lixiviation de cette composition à travers le sol et, la récupération dans l'eau de lixiviation des cellules ayant accumulé les contaminants toxiques. Un procédé de traitement avantageux selon l'invention est caractérisé en ce qu'il comprend: l'épandage et/ou l'injection dans le sol d'une composition répondant aux définitions ci-dessus, de il façon à permettre la lixiviation de cette composition à travers le sol, dans des conditions telles que les contaminants toxiques du sol sont captés par les cellules de l'inoculum, adsorbés au niveau de leur paroi cellulaire et éventuellement de leur cytoplasme, ou encore dans des conditions telles que les contaminants toxiques sont captés par l'intermédiaire des produits de lyse (par exemple d'autolyse) des cellules de l'inoculum, ces contaminants étant le cas échéant métabolisés et l'inoculum agissant éventuellement après désorption à partir de certaines fractions du sol, la récupération de l'eau de lixiviation contenant notamment les cellules ayant adsorbé les contaminants toxiques, le traitement de l'eau de lixiviation pour séparer les cellules ayant accumulé les contaminants toxiques, le cas échéant la répétition des étapes précédentes, à partir de l'eau de lixiviation traitée. Dans certains cas on aura avantage à utiliser à nouveau l'eau de lixiviation après traitement, pour des raisons économiques mais aussi pour éviter d'introduire des polluants dans le sol, par l'eau de lixiviation rejetée. On peut selon une variante de l'invention effectuer plusieurs administrations de l'inoculum au cours du traitement, par exemple au stade de l'administration à travers le sol dans la phase initiale de mise en oeuvre du procédé, ou encore au stade de la récupération de l'eau de lixiviation, avant le traitement de cette dernière. Selon une autre variante de réalisation du procédé de l'invention, l'inoculum administré soit à plusieurs étapes de réalisation du procédé ou seulement à l'étape initiale contient des cellules physiologiquement inactives. La récupération des contaminants organiques accumulés par les cellules de l'inoculum est réalisée par floculation du matériel cellulaire présent dans l'eau de lixiviation et/ou par coagulation des débris cellulaires ou encore par dégradation des cellules par un prédateur, par exemple une amibe telle que T Granifera, dégradation suivie d'une récupération des PC Bs. Le procédé selon l'invention peut être mis en oeuvre soit sous forme de traitement in situ, soit après excavation du sol. De même on pourra dans certains modes de réalisation de l'invention, épandre sur le sol à traiter, avec l'eau de lixiviation, des composés permettant d'augmenter l'épaisseur de la paroi, et/ou l'épaisseur de la zone mucilagineuse externe des cellules de l'inoculum et des cellules autochtones. L'invention vise par ailleurs un dispositif pour mettre un oeuvre le procédé ci-dessus décrit, caractérisé en ce qu'il comprend: des moyens pour réaliser l'épandage et/ou l'injection d'une composition répondant aux définitions précédentes et permettre la lixiviation de cette solution à travers la terre à traiter, des moyens pour recueillir et le cas échéant traiter l'eau de lixiviation. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaissent dans les exemples qui suivent. I EXEMPLE D'OBTENTION D'UN INOCULUN Les souches que l'on souhaite sélectionner pour la préparation des inoculum sont obtenues à partir de milieux naturels contaminés depuis plusieurs années par des produits classés selon la législation comme toxiques ou dangereux Ces souches ont déjà subi une sélection dans leur biotope initial Des échantillons de ces milieux ont été utilisés pour la préparation des inoculum. S'il s'agit d'obtenir un inoculum efficace pour le traitement de sols contaminés par un produit déterminé, un milieu naturel contaminé depuis plusieurs années par ce produit est utilisé comme échantillon de départ. ETAPES PRELIMINAIRES Avant la sélection des souches on met en oeuvre les étapes préliminaires suivantes: recherche et dosage d'un contaminant X déterminé dans un échantillon représentatif du milieu naturel défini ci-dessus, essais de solubilisation du contaminant X en vue de la mise au point de la technique de sélection, dénombrement total de la flore microbienne présente dans un échantillon de milieu naturel choisi, suivant la technique de la suspension-dilution détaillée ci- après: Dénombrement, technique de la suspension-dilution Définition: Le dénombrement total correspond à l'ensemble des microorganismes se développant à 25/300 C Il s'agit à la fois de bactéries, levures, actinomycètes et filamenteux. Le dénombrement sur milieu NB (Bouillon Nutritif) correspond aux bactéries et actynomycètes. Le dénombrement sur milieu MG (Extrait de Malt) correspond aux levures et filamenteux. Les résultats sont exprimés en UFC (Unités Formant des Colonies) par gramme d'échantillon. Méthodologie: On stérilise un erlen contenant 100 ml d'eau physiologique stérile (Na Cl à 9 %), on pèse 10 g de milieu naturel constituant l'échantillon que l'on introduit sous conditions stériles dans l'erlen. On soumet cet échantillon dans l'erlen à une agitation orbitale durant 1 heure. A partir de la solution de llerlen, on prépare des dilutions décimales avec transfert de 1 ml dans 9 ml d'eau stérile Puis on étale sur gélose 0,1 ml de chaque dilution, en commençant par la plus élevée. Composition des milieux gélosés utilisés, par litre: * pour le dénombrement des bactéries et actinomycètes g de bouillon nutritif (NB) g d'agar ajustement de p H à 7-7,5, avec une solution de soude, s'il y a lieu. stérilisation * pour le dénombrement des levures et filamenteux: g d'extrait de malt (MG) g d'agar ajustement de p H à 7-7,5, avec une solution de soude, s'il y a lieu. stérilisation réajustement du p H à 4-5, avec une solution d'acide phosphorique afin d'inhiber la croissance des bactéries, s'il y a lieu. Après l'étalement sur milieu gélosé, on réalise une incubation à 30 C, pour les cultures sur NB, durant 48 à 72 heures et à 250 C, pour les cultures sur MG, durant 3 à 4 jours. On procède ensuite au comptage des unités formant des colonies sur la gélose qui en comprend entre 30 et 300. SELECTION DES SOUCHES A partir d'une suspension réalisée lors de l'étape préliminaire du dénombrement, des milieux de culture liquides contenant le contaminant toxique X déterminé comme seule source de carbone sont ensemencés Après cette première phase, plusieurs repiquages successifs sont réalisés afin d'éliminer la probabilité de croissance à partir d'éléments nutritifs propres à des cellules physiologiquement mortes, et apportées avec l'ensemencement, et d'affirmer la qualité des souches par augmentation régulière de la teneur en contaminants toxiques. En parallèle, une sélection est éventuellement réalisée dans les mêmes conditions, le contaminant toxique X étant subsituté par un produit de structure chimique proche ou intéressante (exemple: le biphényle dans le cas o le contaminant correspond à des PC Bs). Le détail de cette technique est présenté ci- après: TECHNIQUE DE LA SELECTION DES SOUCHES Composition des milieux de sélection milieu minéral pour la sélection de bactéries, spécifique aux PC Bs. 1,6 g KH 2 PO 4 4,4 g K 2 HPO 4 2,1 g NH 4 Cl 0,4 g Mg SO 4, 7 H 20 0,05 g Mn SO 4, H 20 0,Olg Fe SO 4, 7 H 20 0,003 g Ca C 12, 2 H 20 complétés à 1 litre avec de l'eau distillée ou permutée. stérilisation milieu minéral pour la sélection de levures et filamenteux 2,0 g Na NO 3 0,5 g Mg SO 4, 7 H 20 0,5 g K Cl 0,Olg Fe SO 4, 7 H 20 complétés à 980 ml d'eau permutée ou distillée. stérilisation à froid, on ajoute les solutions stériles suivantes: ml de KH 2 P 04 à 10 % ml de Zn SO 4, 7 H 20 à 0,2 % ml de CUSO 4, 5 H 20 à 0,1 % milieu minéral pour la sélection de bactéries, actives vis à vis d'autres produits organiques que les PC Bs ml de solution A ml de solution B ml de solution C 0,lml de solution D 2 ml de solution E complétés à 1 litre avec de l'eau distillée ou permutée stérilisation Solution A: 34 g de KH 2 PO 4 44,5 g de Na 2 HPO 4, 2 H 20 complétés à 1 litre avec de l'eau distillée ou permutée Solution B: 35 g de Mg SO 4, 7 H 20 complétés à 1 litre avec de l'eau distillée ou permutée Solution C: 100 g de NO 3 NH 4 complétés à 1 litre avec de l'eau distillée ou permutée Solution D: 50 mg de Cu SO 4, 5 H 20 mg de H 3 BO 3 mg de Mn SO 4, H 20 mg de Zn SO 4, 7 H 20 mg de Nae Mo O 4, 2 H 20 mg de Co Cl 2, 6 H 20 complétés à 1 litre avec de l'eau distillée ou permutée Solution E: 10 g de Ca C 12 mg de Fe SO 4 complétés à 1 litre avec de l'eau distillée ou permutée Méthodologie: On procède à l'ensemencement des cultures en milieu liquide avec une teneur (a) en contaminant toxique X déterminé, à partir des dilutions décimales 10-2 et 10-3 pour les bactéries de 10-1 et 10-2 pour les levures et champignons Ensuite on fait incuber à 30 C pour la sélection de bactéries et à 25 C pour la sélection de filamenteux et levures, durant 20 jours (étape 1). Puis on réalise un étalement sur milieux NB et MG suivi d'une incubation et d'une estimation du développement. Ensuite on procède à des repiquages successifs de cultures en milieux liquides avec des teneurs (b) (c) (d) en contaminant respectivement pour les étapes 2, 3 et 4, avec entre chaque étape une phase d'étalement sur milieux NB et MG Ces ensemencements sont réalisés à partir de la culture de l'étape précédente. valeurs a, b, c et d en cultures liquides: f Contaminants toxiques X a b c d Aroclor 1242 0,01 0,1 0,5 1,0 Aroclor 1260 0,01 0,1 0,5 1,0 Biphényle 0,20 2,0 2,0 2,0 Toluène 1,0 2,0 2,0 5,0 Xylène 1,0 2,0 2,0 5,0 Pyridine1,0 2,0 2,0 5,0 Acrylonitrile 1,0 1,0 2,0 2,0 Perchloréthylène 1,0 1,0 2,0 2,0 Benzène Hexanone 2 Ester d'acétate Les teneurs dans le tableau sont exprimées en pourcentage massique pour les trois premiers produits et en pourcentage volumique pour les suivants. Remarque: lors des étapes 1, 2, 3 et 4, on est enprésence d'extrait de levure. A l'issue de l'étape 4, on procède aux cultures suivantes: * cultures sur milieux liquides de même composition que précédemment, à l'exception de l'extrait de levure. Il s'agit de l'étape 5. * cultures sur milieux gélosés, soit NB et Agar additionné de contaminant X (sans extrait de levure), en parallèle pour les bactéries et MG pour les levures et filamenteux le milieu Agar auquel on a ajouté le contaminant déterminé X, est obtenu avec un mélange de 35 g d'Agar et de 15 g de contaminant déterminé pour 100 g de gélose. PREPARATION D'INOCULUM A L'issue de la sélection des souches, des séries de cultures mixtes sont obtenues; elles peuvent être rassemblées notamment lorsque les cultures sur milieu solide indiquent la présence d'un faible nombre de souches. La technique de préparation des inoculum, dans laquelle la source de carbone est alors un sucre est décrite ci-après Le saccharose est choisi pour la facilité de mise en oeuvre D'autres sucres par exemple le lactose, le glucose peuvent le remplacer. TECHNIQUE DE PREPARATION DES INOCULUM Pour 1,5 litre de milieu propre aux bactéries, on utilise 100 ml de solution F, 100 ml de solution G, 1285 ml d'eau distillée ou permutée et on procède à une stérilisation avant d'ajouter à froid, 15 Ml de solution H. Les compositions des solutions F, G, H sont données ci-après. On ensemence à partir d'une culture liquide issue de l'étape 5 puis on incube en fermenteur ou sur agitateur à mouvement orbital pendant 48 heures. Solution F: 66 g de K 2 HPO 4 ,5 g de KH 2 PO 4 32,1 g de NH 4 Cl complétés à 1 litre avec de l'eau distillée ou permutée Solution G: 150 g de saccharose g d'extrait de levure complétés à 1 litre avec de l'eau distillée ou permutée Solution H: 39,49 g de Mg SO 4, 7 H 20 ,0 g de Mn SO 4, H 20 1,0 g de Fe SO 4, 7 H 20 0,3 g de Ca C 12, 2 H 20 complétés à 1 litre avec de l'eau distillée ou permutée et avec addition de 5 ml de H 2 SO 4 concentré. Pour 1,5 litre de milieu propre aux levures et filamenteux on utilise 100 ml de solution I, 100 ml de solution J de composition décrite ci- après, 1300 ml d'eau distillée ou permutée et on procède à une stérilisation avant d'ajouter à froid des solutions, stérilisées individuellement, suivantes: 2,5 ml de Cu SO 4 à 0,3 % 2,5 ml de Zn SO 4 à 0,6 % ,0 ml de KH 2 PO 4 à 15 % Solution I: 7,5 g de K Cl ,0 g de Na NO 3 7,5 g de Mg SO 4 0,15 g de Fe SO 4 complétés à 1 litre avec de l'eau distillée ou permutée Solution J: 150 g de saccharose g d'extrait de levure complétés à 1 litre avec de l'eau distillée ou permutée. II CONSERVATION DES INOCULUM ET DES SOUCHES ISOLEES Milieux cryoprotecteurs: pour les souches bactériennes sélectionnées sur les PC Bs commercialisés sous les marques Aroclor 1242, Aroclor 1260 et pour le biphényle: g de DMSO 1,5 g de NB complétés à 1 litre avec de l'eau saturée et Aroclor stérilisation pour les autres souches bactériennes: g de DMSO 1,5 g de NB complétés à 1 litre avec de l'eau distillée ou permutée stérilisation pour les levures et filamenteux sélectionnés sur Aroclor 1242, Aroclor 1260 et biphényle: solution de glycérol à 10 %, préparée avec de l'eau distillée ou permutée stérilisation Méthodologie: 0,15 ml de matériel biologique est mis en suspension dans 0,75 ml de milieu cryoprotecteur: Le matériel biologique est: le milieu de culture en fin de l'étape 5 de la sélection ou une culture sur NB liquide de 48 heures, dans le cas de bactéries ou une culture sur MG liquide de 5 jours, dans le cas de levures et filamenteux. Les récipients utilisés sont des cônes Eppendorf. Puis on effectue une congélation à 80 C. Les cônes sont placés au moins pendant 30 minutes dans une boite en polystyrène, elle-même installée dans le congélateur. La décongélation a lieu au bain-marie à 370 C La remise en culture est réalisée comme suit: 0,5 ml du contenu du cône décongelé est rapidement repris dans un milieu NB (pour les bactéries) ou un milieu MG (pour les levures et filamenteux) liquide, et un milieu gélosé NB ou MG est ensemencé en stries. III CARACTERISATION DES SOUCHES BACTERIENNES Les souches bactériennes sont caractérisées en fonction de leur aspect morphologique et de leurs propriétés biochimiques après isolement, selon les techniques microbiologiques connues Elles font notamment appel à l'utilisation des galeries Api (marque déposée) 20 E et Zym et font l'objet des tests suivants: SOUCHE: ORIGINE: A Pl 20 E ONPG ADH LDC ODC CIT H 25 URE MORPHOLOGIE: * colonie: forme hauteur - marge teinte pigmentation * état frais: forme mobilité * Gram spore PHYSIOLOGIE: * type respiratoire * oxydase * catalase * nitrate réductase * type métabolique TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA MAL FRU GAL APIZYM CULTURE SUR POLLUANT Composition des inoculums utilisés L'inoculum IV est constitué par un mélange de Fusarium tabacinum et de différentes levures. L'inoculum XI est constitué par les souches suivantes obtenues selon la méthodologie décrite ci-après: Isolement (selon les techniques connues) de chaque souche constituant la culture mixte à l'issue de la dernière étape de sélection selon la description donnée dans les pages précédentes. Quatre milieux solides de cultures sont ensemencés à partir d'une suspension de la culture mixte: NB, agar + biphényle, agar + Aroclor 1242, agar + Aroclor 1260. Les caractères morphologiques et biochimiques étudiés sont décrits ci-dessus. Certaines souches isolées se révèlent identiques Les caractères obligatoires pour définir une similitude entre des souches sont: le gram (+ ou -), la mobilité (oui ou non), l'aspect de la colonie, la forme de la colonie, la sporulation (oui ou non), pour les souches gram + seulement, l'oxydase (+ ou -). En outre, 60 % de similitude doivent être atteints avec l'ensemble des autres caractères, à l'exception des caractères APIZYM. Lorsqu'il subsiste un doute, ces derniers permettent de le lever. SOUCHE: X Ibpl ORIGINE: Site contaminé par des PC Bs MORPHOLOGIE: * colonie: forme hauteur - marge teinte pigmentation bombée, marge irrégulière, crème, circulaire, ombonnée, centre légèrement pigmenté * état frais: forme mobilité bacille, taille moyenne, mobile * Gram spore GRAM - PHYSIOLOGIE: * type respiratoire:aérobie strict * oxydase: + * catalase: + * nitrate réductase: NO 3 * type métabolique: inactif A Pl 20 E ONPG- ADH + LDC +/- ODC +/- CIT + H 25 - URE +/- TDA - IND - VP - GEL - GLU - MAN - INO - SOR - RHA- SAC - MEL + AMY - ARA- CULTURE SUR POLLUANT bp +/- APIZYM SOUCHE: X Ibp 3 ORIGINE: Site contaminé par des PC Bs MORPHOLOGIE: * colonie: forme hauteur - marge teinte pigmentation bombée, marge régulière, crème, circulaire * état frais: forme mobilité bacille long, mobile * Gram spore GRAM - *PHYSIOLOGIE: * type respiratoire:aérobie strict * oxydase: + * catalase: + * nitrate réductase: NO 2 * type métabolique: oxydatif A Pl 20 E ONPG- ADH - LDC ODC - CIT - H 25 - URE + TDA - IND - VP - GEL - GLU - MAN - INO - SOR - RHA - SAC - MEL- AMY - ARA- CULTURE SUR POLLUANT bp +/- APIZYM SOUCHE: X Ibp 4 ORIGINE: Site contaminé par les PC Bs MORPHOLOGIE: * colonie: forme hauteur - marge teinte pigmentation plate, marge régulière,translucide circulaire, bord irrégulier centre pigmenté * état frais: forme mobilité long bacille fin, mobile * Gram spore GRAM - PHYSIOLOGIE: * type respiratoire:aérobie strict * oxydase: + * catalase: + * nitrate réductase: NO 3 * type métabolique: oxydatif A Pl 20 E ONPG- ADH + LDC +/- ODC - CIT +/- H 25 - URE + TDA - IND - VP + GEL - GLU - MAN - INO - SOR - RHA - SAC - MEL + AMY - ARA - CULTURE SUR POLLUANT bp +++ APIZYM SOUCHE: X Ibp 6 ORIGINE: Site contaminé par les PC Bs MORPHOLOGIE: * colonie: forme hauteur - marge teinte pigmentation plate, marge régulière, crème- jaunâtre, circulaire, bord irrégulier * état frais: forme mobilité bacille de taille moyenne, mobile * Gram spore GRAM- PHYSIOLOGIE: * type respiratoire:aérobie strict * oxydase: + * catalase: + * nitrate réductase: NO 2 * type métabolique: alcalinisation A Pl 20 E ONPG- ADH + LDC + ODC + CIT + H 25 - URE+ TDA - IND - VP + GEL - GLU - MAN - INO - SOR - RHA- SAC - MEL- AMY ARA- CULTURE SUR POLLUANT bp +++ APIZYM SOUCHE: A Pl 20 E APIZYM X Inb 2 ONPG+ 1 ADH 2 5 ORIGINE: LDC + 3 1 Site contaminé par les PC Bs ODC 4 4 CIT + 5 1 MORPHOLOGIE: H 2 S 6 1 URE 7 1 * colonie: forme hauteur - marge teinte pigmentation TDA 8 1 plate, marge sinueuse, jaune IND 9 1 translucide, circulaire, bord VP 10 1 régulier * état frais: forme mobilité GEL + 11 2 bacille long associé par 2,mobile GLU 12 2 * Gram spore MAN 13 GRAM INO 14 PHYSIOLOGIE: SOR 15 RHA 16 * type respiratoire:aérobie strict SAC 17 2 * oxydase: MEL 18 * catalase: AMY 19 * nitrate réductase: NO 3 ARA 20 * type métabolique: alcalinisation à 24 heures, puis inactivité CULTURE SUR POLLUANT c: - bp:- SOUCHE: A Pl 20 E APIZYM X Icl ONPG 1 ADH + 2 1 ORIGINE: LDC + 3 1 Site contaminé par les PC Bs ODC+/ 4 3 CIT + 5 MORPHOLOGIE: H 2 S 6 2 URE+/ 7 1 * colonie: forme hauteur - marge teinte pigmentation TDA 8 plate, marge irrégulière, trans IND 9 lucide,circulaire,bord irrégulier VP + 10 * état frais: forme mobilité GEL 11 bacille court et fin, mobile GLU 12 * Gram spore MAN 13 GRAM INO 14 PHYSIOLOGIE: SOR 15 RHA 16 * type respiratoire:aérobie strict SAC 17 * oxydase: + MEL 18 * catalase: + AMY 19 * nitrate réductase: N 03 ARA 20 * type métabolique: oxydatif CULTURE SUR POLLUANT c: +/- SOUCHE: X Inb 5 ORIGINE: Site contaminé par les PC Bs MORPHOLOGIE: * colonie: forme hauteur - marge teinte pigmentation légèrement bombée, marge régulière crème, circulaire, bord régulier * état frais: forme mobilité fin bacille de taille moyenne, associé souvent par 2, non mobile * Gram spore GRAM - PHYSIOLOGIE: A Pl 20 E ONPG- ADH - LDC - ODC - CIT +/- H 25 - URE - TDA - IND - VP + GEL - GLU - MAN- INO - SOR - PRHA - * type respiratoire:aérobie strict SAC - * oxydase: + MEL - * catalase: + AMY - * nitrate réductase: NO 2 ARA - * type métabolique: alcalinisante CULTURE SUR POLLUANT bp: ++ c: - APIZYM IV EXEMPLE DE DECONTAKINATION D'UNE TERRE CONTENANT DE L'AROCLOR 1260 Il s'agit de terre obtenue suite à un accident de transformateur en région parisienne La contamination initiale fait l'objet d'un examen approfondi. La teneur en argile est de 14,5 %. 1) TENEUR INITIALE ET PLAN D'ETUDES 4 à 5 tonnes de terre sont disposées en tas 5 tas de à 60 Kg sont individualisés Leur point d'origine est dispersé par rapport au tas initial, mais déterminé au hasard. Chacun de ces 5 prélèvements étant destiné à un essai spécifique, nous le repérons selon le nom donné aux essais. Dans chaque prélèvement, 10 sous-échantillons sont réalisés au hasard, puis analysés Les résultats sont présentés dans le tableau suivant: ESSAIS CL Ci C 8 C 9 ANALYSES (ppm) 100 102 87 103 79 108 130 147 78 93 138 173 80 132 89 73 124 114 104 99 90 108 121 240 103 68 78 109 95 74 113 113 145 97 87 110 119 MOYENNES 88 101 126 119 ECART-TYPE 24 16 43 27 La teneur moyenne dans ce sol est de 115 ppm, mais avec un écart-type élevé de 33 Par conséquent, il y a une très forte probabilité pour qu'un échantillon prélevé au hasard ait une teneur comprise entre 82 et 148 ppm. Les minima et maxima sont respectivement 68 et 240 ppm. Par essai, la moyenne et son écart-type, les minima et maxima sont connus. Plan d'études: CL: caisson L, apports volontaires de minéraux et avec l'inoculum IV Cl: caisson 1, inoculum XI et apport de tensioactif C 8: caisson 8, inoculum IV C 9: caisson 9, inoculum XI Le tableau suivant présente l'ensemble des apports d'inoculum réalisés, sur les caissons: CAISSONS TEMPS CL Cl C 8 C 9 to + + + + to + 0,5 m + + + + to + 1 m + + + + to + 2,3 m + + + + +: apport de 500 ml d'ino o l'apport est de: 1000 ml pour Cl et CL, 500 ml pour C 8, 350 M 1 pour C 9. culum, sauf à to + 2,3 mois 2) RESULTATS Le tableau suivant présente l'ensemble des résultats obtenus (ppm): TEMPS CL Cl C 8 C 9 to + 1 m 140 99 157 119 to + 1,25 m 70 to + 2,25 m 70 85 139 124 * 75 * to + 4 m 76 100 106 126 to + 4,5 m 79 to + 5,5 m 62 to + 6 m 88 107 *: autre prélèvement et laboratoire d'analyse. Tous les prélèvements sont réalisés au niveau 1 et en zone rampe. Cl connait une baisse de teneur d'environ 33 %. C 8 connait une baisse de teneur d'environ 25 %. 3) CONCLUSION Le caisson 1 (apport de tensioactif) appparait comme le plus efficace. 4) REMARQUES a\ présence de corps en suspension dans l'eau de process: -Cl, corps provenant du bac d'eau, présentant une teneur de 99 ppm; CL, teneur en PC Bs dans l'eau de process, débarrassée des corps en suspension, à to + 2,25 mois: 1 ppb. b\ débit de l'eau de recirculation: environ 200 ml/heure c\ apport total en minéraux CAISSONS CL Cl C 8 C 9 Vol Tot d'Inoculum 2,5 2,5 2,0 1,85 Apport compl 2 O O O Minéraux (g): N 4,17 1,38 0,66 1,10 P 1,71 2,87 0,45 2,29 K 2,80 6,08 1,10 4,86 Fe 0,03 S 0,30 0,008 0,24 0,006 Na 7,03 O 1,08 O Mn O volontaire Sa teneur en argile est de 13,2 %. La contamination par l'Aroclor 1242 est réalisée avec un pulvérisateur qui projette le pyralène sur la terre, sous la forme d'un brouillard fin Cependant la répartition reste manuelle et le temps nécessaire pour la contamination de 50 litres de terre est d'environ mn. Apres contamination 6 échantillons sont prélevés. Résultats: Teneurs 122 195 154 93 279 179 Moyenne (M): 170 Ecart-type (s): 65 Le caisson est inoculé avec 700 ml d'inoculum à to (Temps initial) Cet inoculum correspond à l'inoculum IV de l'exemple précédent et contient des Fusarium et des levures. D'autres apports d'inoculum sont effectués par la suite, après prélèvement de sol pour analyse: Temps to+ 1,5 mois to+ 2,0 mois to+ 2,5 mois to+ 3,5 mois to+ 5,5 mois to+ 7,0 mois to+ 8,0 mois to+ 9,0 mois Volume apporté (ml) 5.1 SUIVI ANALYTIQUE Résultats: Temps Teneurs M (ppm) to+ 1,5 mois to+ 2,0 mois to+ 2,5 mois to+ 3,0 mois to+ 3,5 mois to+ 5,5 mois to+ 7,0 mois to+ 8,0 mois to+ 9,0 mois M: moyenne A to+ 1,5 mois, une différence de 50 % est observée; elle reste globalement stable jusqu'à to+ 3 mois Ces résultats, sont à nuancer en fonction de l'hétérogénéité initiale En effet l'écart-type sur les valeurs obtenues entre to+ 1,5 mois et to+ 3 mois (inclus) n'est que de 15, alors que sur la terre initiale il est de 65. A to+ 3,5 mois, un écart significatif est relevé par rapport à la teneur initiale, qui se confirme par la suite Les résultats obtenus à to+ 8 et to+ 9 mois indiquent un abattement de 80 % environ. REVENDICATIONS 1/ Composition comprenant un inoculum & base de cellules procaryotes et/ou eucaryotes notamment de bactéries, de champignons ou de levures ou plusieurs types de ces cellules, sélectionnées pour leur capacité à: se développer dans un milieu de culture contenant comme seule source de carbone des contaminants toxiques déterminés, en particulier des contaminants organiques, et capter, adsorber et accumuler ces contaminants à partir d'un sol à traiter, au niveau de leur paroi cellulaire et éventuellement au niveau de leur cytoplasme et/ou par l'intermédiaire de leurs produits de lyse. 2/Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'inoculum comprend des cellules capables de se développer en culture avec des contaminants organiques de la famille des PC Bs, en particulier avec des PC Bs hautement substitués, ces cellules étant en outre capables de les capter, de les adsorber, et de les accumuler au niveau de leur paroi cellulaire, voire au niveau de leur cytoplasme et/ou par l'intermédiaire de leurs produits de lyse. 3/ Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'inoculum comprend des cellules capables de se développer en culture avec des contaminants organiques toxiques différents des PC Bs, halogénés ou non halogénés, possédant le cas échéant un ou plusieurs cycles aromatiques, notamment des huiles lourdes, des pesticides, des fongicides, des insecticides ou des solvants organiques, ou encore avec des métaux lourds, les cellules de l'inoculum étant en outre capables de capter, d'adsorber, et d'accumuler ces contaminants organiques toxiques au niveau de leur paroi cellulaire. 4/ Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l'inoculum contient des cellules capables en outre de métaboliser, au moins partiellement, les contaminants organiques toxiques. / Composition selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l'inoculum comprend des cellules permettant ou favorisant la désorption des contaminants toxiques associés à certaines fractions du sol. 6/ Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que 1 'inoculum est constitué de cellules vivantes, de même origine ou non, ou d'un mélange de cellules vivantes et de cellules mortes, de même origine ou non, ayant conservé leur capacité de captation, d'adsorption et d'accumulation. 7/ Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce 1 'inoculum contient des des champignons notamment filamenteux en particulier de la famille des Ascomycètes, par exemple Fusarium, Aspergillus, ou Penicillium et/ou des cellules eucaryotes par exemple des levures. 8/ Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que l'inoculum contient une ou plusieurs types de cellules procaryotes et/ou un ou plusieurs types de cellules eucaryotes parmi X Ibpl, X Ibp 3, X Ibp 4, X Ibp 6, X Inb 2, X Inb 5, X Icl ou encore l'ensemble de ces cellules en mélange. 9/ Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en qu'elle contient en outre des nutriments capables de stimuler la croissance des cellules de l'inoculum et/ou leur activité dans le sol. / Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce qu'elle contient en outre un agent tensio-actif, ou une souche cellulaire capable de produire un agent tensio-actif. 11/ Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisée en ce que les parois des cellules de l'inoculum sont modifiées de façon à augmenter leur capacité d'adsorption des contaminants toxiques, la modification résultant par exemple de l'accroissement de leur épaisseur ou de l'épaisseur de la zone mucilagineuse externe, sous l'effet de lyse des produits toxiques, ou de l'augmentation de la surface de ces parois 12/ Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un prédateur des cellules de l'inoculum, notamment une amibe, par exemple T Graniféra. 13/ Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce qu'il s'agit soit d'une solution comprenant l'inoculum sous forme de cellules en suspension, soit d'une composition lyophilisée. 14/ Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, pour le traitement de sols contaminés par des contaminants toxiques, en particulier des contaminants organiques toxiques. / Procédé de traitement de sols contaminés par des contaminants toxiques en particulier des contaminants organiques, caractérisé en ce qu'il comprend l'administration à travers une quantité donnée de sol d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, dans des conditions permettant la lixiviation de cette composition à travers le sol et, la récupération dans l'eau de lixiviation des cellules ayant accumulé les contaminants toxiques. 16/ Procédé de traitement selon la revendication 15, caractérisé en ce qu'il comprend: l'épandage et/ou l'injection dans le sol d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 13 de façon à permettre la lixiviation de cette composition à travers le sol, dans des conditions telles que les contaminants toxiques du sol sont captés par les cellules de l'inoculum, adsorbés au niveau de leur paroi cellulaire et éventuellement de leur cytoplasme, ou encore dans des conditions telles que les contaminants toxiques sont captés par l'intermédiaire des produits de lyse des cellules de l'inoculum, ces contaminants étant le cas échéant métabolisés, et l'inoculum agissant éventuellement après désorption à partir de certaines fractions du sol, la récupération de l'eau de lixiviation contenant notamment les cellules ayant adsorbé les contaminants toxiques, le traitement de l'eau de lixiviation pour séparer les cellules ayant accumulé les contaminants toxiques, le cas échéant la répétition des étapes précédentes, à partir de l'eau de lixiviation traitée. 17/ Procédé selon l'une quelconque des revendications ou 16, caractérisé en ce que plusieurs administrations de l'inoculum sont effectuées au cours du traitement, par exemple au stade de l'administration à travers le sol et au stade de la récupération de l'eau de lixiviation. 18/ Procédé selon l'une quelconque des revendications ou 16, caractérisé en ce que l'inoculum administré contient des cellules mortes, ayant conservé leur capacité de captation, d'adsorption et d'accumulation. 19/ Procédé selon l'une quelconque des revendications à 18, caractérisé en ce que l'on épand avec la composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, des composés permettant d'augmenter l'épaisseur de la paroi et/ou l'épaisseur de la zone mucilagineuse externes des cellules de l'inoculum et/ou des microorganismes dont la lyse libère des produits captants. / Procédé selon l'une quelconque des revendications à 19, caractérisé en ce que la récupération des contaminants toxiques accumulés par les cellules de l'inoculum est réalisée par floculation du matériel cellulaire présent dans l'eau de lixiviation et/ou par coagulation des débris cellulaires ou encore par dégradation des cellules par un prédateur, par exemple une amibe, par exemple T Granifera, dégradation suivie d'une récupération des PC Bs. 21/ Dispositif pour mettre en oeuvre le procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 20, caractérisé en ce qu'il comprend: des moyens pour réaliser l'épandage et/ou l'injection dans le sol d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, et permettre la lixiviation de cette solution à travers la terre à traiter, des moyens pour recueillir et le cas échéant traiter l'eau de lixiviation.