FR 2661919 A1 19911115 FR 9105766 A 19910514 L'invention concerne une méthode de préparation sous forme non-racémique, (c'est-à-dire sous forme d'un énantiomère seul ou d'un mélange dans lequel l'un des énantiomères est prédominant), de dérivés de furo l 3,4- cl pyridine et les produits ainsi obtenus. L'invention concerne plus particulièrement une méthode de préparation, sous forme non-racémique de dérivés de furo l 3,4-cl pyridine de formule o HO R R 6 AN R 4 ( 1) et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, dans lesquels R 3 et R'3 représentent, indépendamment un atome d'hydrogène, un groupe cyano; un groupement alcoyle linéaire, saturé ou insaturé; un groupement hétérocyclique de 3 à 6 chaînons; un groupement cycloalcoyle de 3 à 6 chaînons; un groupement phényle, phénylalcoyle ou phénylalcoylène, chacun pouvant être substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, groupements trifluoroalcoyle, alcoyle inférieur, alcoxy inférieur, thioalcoyle inférieur, dialcoylamino, dialcoylaminoalcoxy ou des groupements a ou palcoxy-N-pyrrolidinyle; avec la condition suivante: dans chacune des occurences ci-dessus, chaque radical 2 - alcoyle ou alcoxy comprend 1 à 5 atomes de carbone; ou un groupement de formule X (CH 2)2 (CH 2)n- CH 3 dans lequel N prend les valeurs 2, 3, 4 ou 5 et X représente 1 à 3 groupements méthoxy; R 4 représente un atome d'hydrogène ou d'halogène; R 6 représente un groupement alcoyle linéaire ou ramifié, ou un groupement alcoylène, tous deux comprenant de 1 à 5 atomes de carbone, et pouvant être substitués par un ou plusieurs groupements hydroxy, cyano, amino, amino substitué, alcoyle ou alcoylène comprenant de 1 à 4 atomes de carbone; ou un groupe de formule CN (CH 2)2-N-(CH 2)n CH 3 Y dans lequel N et X sont comme définis ci-dessus, et Y représente un groupement alcoyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 5 atomes de carbone; avec la restriction suivante: lorsque l'un des substituants R 3 et R'3 représente le groupement cyano, et l'autre le groupe de formule X (CH 2)2-N-(CH 2)n CH 3 alors R 6 ne peut représenter le groupe de formule CN X (CH 2)2-N-(CH 2)n CH 3 Y 3 - la méthode comprenant la résolution d'un mélange racémique de l'un des composés de formules: O O OR 7 R 70 RR 3 ( 3) R'3 () R 3 R 6 N R 4 ( 2) ou R 6 N R 4 ( 3) dans laquelle R 3, R'3, R 4, R 6 sont comme définis ci-dessus et R 7 représente un groupement acyl comprenant de 1 à 18 atomes de carbone, en soumettant le composé sélectionné à l'action d'une estérase capable d'hydrolyser l'énantiomère (+) ou (-) dudit composé, puis en séparant le composé hydrolysé et le composé non-hydrolysé. Le taux d'hydrolyse enzymatique obtenu dépend du composé de départ sélectionné et de la longueur de sa chaine acyle mais aussi de l'estérase utilisée Ainsi, pour l'obtention du composé souhaité, 4 voies sont à envisager comme le décrivent les schémas I et II, dans lesquels l'estérase est supposée hydrolyser de préférence la forme (+). Dans le cas o le composé ( 2) est utilisé comme produit de départ, soit le composé hydrolysé est le composé souhaité, soit le composé hydrolysé n'est pas le composé souhaité, et le composé non-hydrolysé doit être désestérifié. Dans le cas o le composé ( 3) est utilisé comme produit de départ, soit le composé hydrolysé est le précurseur souhaité, et une déprotection permet l'obtention de l'énantiomère souhaité de la furo l 3, 4-cl pyridine, soit le composé hydrolysé n'est pas le précurseur souhaité, et le composé non-hydrolysé doit être désestérifié puis déprotégé. 4 - R 7 RR 3 R 6NR 4( 2) R 1 O R 33 ( 1)-R( 3R 70eR 3 NR 4 R 6N R 4 ( 1)(+) ( 2)(-) ( 1)(-) I -5 - O OR 7 (R 3 Rq 3 R 6 N R 4 ( 3) )H R 3)/ > OR 7 R R'3 k R O :{ 4 % 14 R 6 N R 4 ( 4)(+) ( 3)(-) R'3 OH 1.4 3 R'3 ( 1)(+) ( 4)(-) | H 1 o HO -R 3 R 3 R 6 N R 4 ( 1)(-) II 6 - Les estérases sont sélectionnées parmi le groupe comprenant la protéinase-sérine (EC 3 2 21), l'a-chymotrypsine (EC 3 4 21 1), la trypsine, la lipase, la lipase de germe de blé (EC 3 1 1 3), la lipase de pancréas de porc, avec une préférence pour l'a-chymotrypsine. Lors de la séparation du composé hydrolyse et du composé non-hydrolysé, on utilise un solvant dans lequel les composés présentent une différence de solubilité. Les composés ( 2) et ( 3) R 7-estérifiés, et utilisés comme produit de départ, peuvent être préparés par des méthodes usuelles d'estérification, à partir des composés hydroxylés correspondants. Les composés de la formule ( 1) et leurs précurseurs non-estérifiés de la formule ( 3), sous forme racémique, sont décrits par exemple dans les brevets français No 2 499 574, 2 543 956, 2 553 417, 2 555 181, 2 554 817, 2 559 152, 2 565 589 et 2 572 405 Ils présentent différentes activités thérapeutiques, mais il a été découvert, pour la plupart d'entre eux, que l'un des stéréoisomères était plus actif que l'autre Il était donc souhaitable de trouver une méthode pour les séparer. L'invention sera mieux comprise par la description des exemples suivants. EXEMPLE 1 Résolution du (-)-(chloro-4 phényl)-3-dihydro-l,3-hydroxy- 7-méthyl-6 furo l 3,4-cl pyridine R 3 =H R'3 =p-chlorophényl R 4 =H R 6 =méthyl Composé de départ: (+)-(chloro-4 phényl)-3-dihydro- 1,3-acétoxy-7-méthyl-6 furo l 3,4-cl pyridine (R 7 =acétyl; composé ( 2)) 7 - Le taux d'hydrolyse est déterminé à l'aide d'une colonne chromatographie-liquide à haute performance en phase inverse C-18 Phénomex 10 micron ( 30 x 3,9 mm) La phase mobile est un mélange isocratique d'acétate d'ammonium ( 0,05 M, p H= 4,5)et de méthanol ( 2:3), de 1,0 ml/minute de débit La détection s'effectue à 254 nm. Le (+)-1 élue approximativement à 4 minutes, alors que le (+)-2 élue aux environs de 5 minutes. La stéréospécificité de la réaction est déterminée sur une colonne chromatographie liquide haute performance Chiralcel OJ ( 25 x 0,46 cm) La phase mobile est un mélange d'hexane et d'alcool isopropylique ( 3:1), de 1,5 ml/minute de débit La détection s'effectue aussi à 254 nm Dans ces conditions, les énantiomères (-)-1 et (+)-1 éluent respectivement aux environs de 4 et 6 minutes Les énantiomères (-)-2 et (+)-2 éluent aux environs de 8 et 10 minutes, l'ordre exact de l'élution n'étant pas connu. lère étape:hydrolyse enzymatique du (+)-(chloro-4 phényl)-3 -dihydro-l,3 acétoxy-7-méthyl-6 furo l 3,4-cl pyridine 300 mg de (+)-(chloro-4 phényl)-3-dihydro-l,3-acétoxy- 7-méthyl-6 furo l 3,4-cl pyridine (qui peut être obtenu à partir du ( )(chloro-4 phényl)-3-dihydro-l,3-hydroxy-7 méthyl-6 furo l 3,4-cl pyridine par des méthodes usuelles d'estérification), sont dissouts dans 30 ml d'acétonitrile puis ajoutés dans un Erlenmeyer contenant 3 g d'achymotrypsine (Sigma, C-4129) dans 270 ml d'un tampon phosphate 0,05 M (p H= 7) Le mélange d'incubation est ainsi agité à température ambiante pendant 3 heures afin de permettre l'hydrolyse. 8 - 2 ème étape: Isolation du (-)-(chloro-4 phényl)-3-dihydro- 1,3-hydroxy-7-méthyl-6 furo l 3,4-cl pyridine Suite à l'hydrolyse enzymatique, l'a-chymotrypsine est filtrée et le p H du filtrat est ajusté à p H 10 avec une solution d'hydroxyde de sodium 0,2 N La solution aqueuse est ensuite extraite avec de l'acétate d'éthyle ( 3 x 100 ml); l'ester (+)-2 non-hydrolysé est de préférence extrait de la phase organique Le p H de la phase aqueuse est ajusté à p H 3 avec une solution d'acide chlorhydrique 2 N et le précipité ( 100 mg) est collecté par filtration par suction La recristallisation du solide brut dans du méthanol, permet d'obtenir 75 mg du composé (-)-1 (par utilisation de chromatographie liquide haute performance tel que décrit ci-dessus). EXEMPLE 2 Résolution du (+)-triméthyl-2,2,8-(chloro-4-a-acétoxy- benzyl)-5 pyrido l 3,4-el-dioxane-l,3, précurseur de la furo-pyridine de l'exemple 1: (R 3 =H R'3 =p-chlorophényl R 4 =H R 6 =méthyl R 7 = acétyl; composé ( 3)). Le passage à la furo-pyridine de l'exemple 1 se fait comme décrit dans le brevet français N 2 499 574. Le taux d'hydrolyse est mesuré comme dans l'exemple 1. L'ester acétate ((+)-3) élue aux environs de 9 minutes, alors que le composé (+)-4 hydroxylé correspondant élue autour de 5,5 minutes La stéréospécifité est mesurée comme dans l'exemple 1 mais avec un débit de la phase mobile de 0,25 ml/minute Dans ces conditions, les énantiomères ()-4 et (+)-4 éluent respectivement à 22 et 24 minutes Les énantiomères (-) -3 et (+)-3 éluent à 25 et 30 minutes, l'ordre exact d'élution n'étant pas connu. g de (+)-triméthyl-2,2,8-(chloro-4-a-acétoxybenzyl) -5 pyrido l 4,3-eldioxane-l,3 (préparé à partir du composé -9- hydroxylé correspondant par des méthodes usuelles d'estérification), sont dissouts dans 200 ml d'acétone et ajoutés dans un Erlenmeyer contenant 10 g d'ac-chymotrypsine (Sigma, C-4129) dans 1 800 ml d'un tampon phosphate 0,05 M (p H= 7) Le mélange réactionnel est ainsi agité pendant 24 heures à température ambiante, puis l'acétone est éliminée par évaporation rotatoire et la solution aqueuse restante est extraite avec de l'acétate d'éthyle ( 3 x 500 ml) Après séchage sur sulfate de sodium et évaporation du solvant, le solide brut est redissout dans un mélange de chlorure de méthylène ( 20 ml) et de méthanol ( 5 ml), puis chargé au sommet d'une colonne de gel de silice ( 150 g), et élue avec du chlorure de méthylène/méthanol ( 98:2) Deux petites fractions sont ainsi collectées et déterminées comme étant le (-) triméthyl-2,2,8 (chloro-4-a-hydroxy-benzyl)-5 pyrido l 4,3-el-dioxane-l,3 ( 3,5 g) et le (+) -triméthyl-2,2,8 - -(chloro-4-a-acétoxy-benzyl)-5-pyrido-l 4,3-el dioxane-l,3 ( 3,2 g). Les préparations comprenant l'utilisation d'enzymes autres que l'achymotrypsine et/ou de mélanges racémiques différents de celui présenté, sont réalisées de façon similaire à celles décrites dans les exemples 1 et 2. EXEMPLE 3 Résolution du (-) (furyl-2)-3-dihydro-l,3-hydroxy-7- éthyl-6 furo l 3,4-cl pyridine R 3 =HR'3 =furyl-2 R 4 =H R 6 =éthyl La résolution est identique à celle décrite dans l'exemple 1, en résolvant un mélange racémique du (+)-(furyl-2)-3-dihydro-l,3 caprylyloxy-7-éthyl-6 furo- l 3,4-cl pyridine (R 7 =caprylyl; composé ( 2)), en utilisant la protéinase sérine comme estérase. - EXEMPLE 4 Résolution du (+)-diméthyl-2,2-éthyl-8-(a-caprylyloxy furfuryl) 5 pyrido l 4,3-el dioxane 1,3, précurseur de la furo-pyridine de l'exemple 3: (R 3 =H R'3 =furyl-2 R 4 =H R 6 =éthyl R 7 =caprylyl; composé ( 3)). Le passage à la furo-pyridine de l'exemple 3 se fait comme décrit dans le brevet français N 2 499 574. La résolution est identique à celle décrite dans l'exemple 2, la protéinase sérine ayant été choisie comme estérase. EXEMPLE 5 Résolution du (-)-diméthyl-3,3-dihydro-l,3-hydroxy-7- propyl-6 furo l 3,4-cl pyridine R 3 =méthyl R'3 =méthyl R 4 =H R 6 =propyl La résolution est identique à celle décrite dans l'exemple 1, en résolvant un mélange racémique du (+) diméthyl 3,3 dihydro 1,3 lauroyloxy 7-propyl-6 furo l 3,4-cl pyridine (R 7 =lauroyl; composé ( 2)), en utilisant la lipase comme estérase. EXEMPLE 6 Résolution du (+) diméthyl-2,2-propyl-8 (méthyl-l' lauroyloxy-l"éthyl)-5 pyrido l 4,3-el dioxane-l,3, précurseur de la furo-pyridine de l'exemple 5: (R 3 =méthyl R'3 =méthyl R 4 =H R 6 =propyl R 7 =lauroyl; composé ( 3)). Le passage à la furo-pyridine de l'exemple 5 se fait comme décrit dans le brevet français N 2 499 574. La résolution est identique à celle décrite dans l'exemple 2, la lipase ayant été choisie comme estérase. il - REVENDICATIONS 1 Méthode de préparation, sous forme non-racémique, de dérivés de furo l 3,4-cl pyridine de formule HO R 3 R 3 R 6 N R 4 ( 1) et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, dans lesquels R 3 et R'3 représentent, indépendamment un atome d'hydrogène, un groupe cyano; un groupement alcoyle linéaire, saturé ou insaturé; un groupement hétérocyclique de 3 à 6 chaînons; un groupement cycloalcoyle de 3 à 6 chaînons; un groupement phényle, phénylalcoyle ou phénylalcoylène, chacun pouvant être substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, groupements trifluoroalcoyle, alcoyle inférieur, alcoxy inférieur, thioalcoyle inférieur, dialcoylamino, dialcoylaminoalcoxy ou des groupements a ou falcoxy-N-pyrrolidinyle; avec la condition suivante: dans chacune des occurences ci-dessus, chaque radical alcoyle ou alcoxy comprend 1 à 5 atomes de carbone; ou un groupement de formule X; (CH 2)2-N-(CH 2)n CH 3 dans lequel N prend les valeurs 2, 3, 4 ou 5 et X représente 1 à 3 groupements méthoxy; R 4 représente un atome d'hydrogène ou d'halogène; R 6 représente un groupement alcoyle linéaire ou ramifié, ou un groupement alcoylène, tous deux comprenant de 1 à 5 atomes de carbone et pouvant être substitués par un ou plusieurs groupements hydroxy, cyano, amino, amino substitué, alcoyle ou alcoylène comprenant de 1 à 4 atomes de carbone; 12 - ou un groupement de formule ON I (CH 2)2-N-(CH 2)n-u- CH 3 Y dans lequel N et X sont comme définis ci-dessus, et Y représente un groupement alcoyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 5 atomes de carbone; avec la restriction suivante: lorsque l'un des substituants R 3 et R'3 représente le groupement cyano, et l'autre le groupe de formule X >(CH 2)2-N-(CH 2)n- CH 3 alors R 6 ne peut représenter le groupe de formule ON I (CH 2)2-N(CH 2)n CH 3 Y la méthode comprenant la résolution d'un mélange racémique de l'un des composés de formules: 0 OR 7 R 70 RR 3 R 6 N R 4 ( 2) ou R 6 N R 4 ( 3) dans lesquelles R 3, R'3, R 4, R 6 sont comme définis ci-dessus et R 7 représente un groupement acyl comprenant de 1 à 18 atomes de carbone, en soumettant le composé sélectionné à l'action d'une estérase capable d'hydrolyser l'énantiomère (+) ou (-) dudit composé, puis en séparant le composé hydrolysé et le composé non-hydrolysé. 13 - 2 Méthode selon la revendication 1, dans laquelle les estérases sont sélectionnées parmi le groupe comprenant la protéinase-sérine, l'achymotrypsine, la trypsine, la lipase, la lipase de germe de blé, la lipase de pancréas de porc. 3 Méthode selon les revendications 1 ou 2, dans laquelle le composé de départ est le composé ( 2). 4 Méthode selon les revendications 1 ou 2, dans laquelle le composé de départ est le composé ( 3). 5 Méthode selon les revendications 1 à 4, dans laquelle R 3 est l'atome d'hydrogène, R'3 le radical p-chlorophényl, R 4 l'atome d'hydrogène et R 6 le radical méthyl. 6 Méthode selon les revendications 1 à 4, dans laquelle R 3 est l'atome d'hydrogène, R'3 le radical furyl-2, R 4 l'atome d'hydrogène et R 6 le radical éthyl. 7 Méthode selon les revendications 1 à 4, dans laquelle R 3 est le radical méthyl, R'3 le radical méthyl, R 4 l'atome d'hydrogène, R 6 le radical propyl. 8 Enantiomères ou mélanges d'énantiomères de la furo l 3,4-cl pyridine, dans lesquels l'un des énantiomères est largement prédominant lorsqu'ils sont obtenus par les méthodes selon les revendications 1 à 7.