FR 2667243 A1 19920403 FR 9011887 A 19900927 La présente invention concerne l'utilisation des dérivés de la triazine et de la pyrimidine pour l'obtention de médicaments reversant la résistance aux agents anticancéreux et antimalariques. Plusieurs dérivés de la triazine et de la pyrimidine, doués de propriétés pharmacologiques intéressantes, sont connus dans la littérature. Certains parmi ces composés, favorisent la captation d'oxygène et sont utilisés dans le traitement du déclin cérébral, (Brevets FR 2 525597, FR 2 521 560 et FR 2 524 467). D'autres trouvent leurs applications dans le traitement de l'insuffisance respiratoire (Brevet FR 2 019 646) ou de tout type d'hypoxie tissulaire (Bevet FR 2 544 315). La demanderesse a maintenant trouvé que certains de ces dérivés possèdent d'autres propriétés pharmacologiques très intéressantes En effet, ils reversent partiellement ou totalement la résistance acquise aux agents anticancéreux et aux médicaments antimalariques. La résistance aux agents anticancéreux est un obstacle majeur à l'efficacité des drogues antitumorales Les cellules tumorales lorsqu'elles sont exposées in vitro ou in vivo à un agent anticancéreux, deviennent résistantes, à divers degrés à ces composés. De nombreux mécanismes d'acquisition par une cellule de résistance aux agents anticancéreux ont été décrits Parmi les différents types de résistance, la "Multidrug Résistance" (MDR) est particulièrement intéressante Le phénomène de résistance est dû à l'action d'une protéine membranaire inductible, la g P 170, dont le rôle est d'augmenter l'efflux du cytotoxique, donc de diminuer sa concentration intracellulaire, d'o la perte de sensibilité de ces cellules à la drogue. Des médicaments, utilisés dans d'autres pathologies, sont connus pour reverser, partiellement ou totalement cette résistance (Int J Cancer Res ( 1988) 19 pp 285-296; J N C I ( 1989) 81 pp 907-910; Trends Pharmacol Sci ( 1989) 9 pp 54-58; Annu Rev Biochem ( 1989) 58 pp 137-171). -2- L'agent modulateur, lorsqu'il est ajouté en même temps que le cytotoxique diminue ou supprime totalement la résistance de type MDR. Certains médicaments utilisés pour le traitement d'autres maladies comme l'amiodarone, le verapamil ou la ciclosporine, ont été utilisés en clinique pour lever cette résistance, mais leurs propriétés pharmacologiques intrinsèques (agents hypotenseurs ou immunosuppresseurs) souvent indésirables lors du traitement du cancer et leurs toxicités, limitent considérablement leur utilisation. Le mécanisme de la résistance à la chloroquine, developpée par le Plasmodium falciparum est similaire Le verapamil restaure la sensibilité d'une lignée résistante, ce qui démontre l'intérêt potentiel de composés reversant le phénotype MDR des cellules tumorales, pour une utilisation en parasitologie (Science ( 1987), 238, pp 1283-1285; Science ( 1987), 235, pp 899-901). La présente invention a particulièrement pour objet l'utilisation, pour l'obtention de médicaments reversant la résistance acquise aux agents anticancéreux et antimalariques, des composés de formule I HNR 1 () N A R 2 NiN B-R 3 dans laquelle A représente un groupe -CH ou un atome d'azote, Rl et R 2 identiques ou différents représentent chacun un radical hydrocarboné ayant 3 à 5 atomes de carbone en chaine droite ou ramifiée renferment éventuellement une ou deux double liaisons et éventuellement substitué par un ou plusieurs radicaux hydroxyles, B représente un radical de formule Yl: (Y 1) N (CH 2)m N - R 4 R 4 R 4 (dans laquelle R 4 représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ayant de 1 à 5 atomes de carbone, et m représente un nombre entier de 2 à 6), un radical de formule Y 2: (Y 2) -N \ / (CH 2)n (dans laquelle N représente les nombres entiers 2 ou 3), un radical de formule y 3: (CH 2) p N R N- I R 5 (Y 3) (dans laquelle p représente zéro ou les nombres entiers 1 ou 2, / -3- N - 113 MI 71 A '2 4 c. et R 5 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle ayant de 1 à 5 atomes de carbone, un radical cycloalkyle ayant de 3 à 7 atomes de carbone), ou un radical de formule 4: (CH 2)q (y 4) -NO o- (dans laquelle q représente zéro ou les nombres entiers 1 ou 2) R 3 représente un radical diphénylméthyle, éventuellement substitué sur les cycles benzéniques par un ou plusieurs atomes d'halogène, un radical de formule z 1: R 6 (z 1) -CH 2-CH =CH (dans laquelle R 6 représente un atome d'hydrogène ou un atome d'halogène), un radical de formule Z 2: x Rg 11 (z 2) CH 2 t R 9 Y y (dans laquelle X-Y représente un reste de formule: -CH=CH-(CR 7 R 8)r dans laquelle r représente O ou 1 et R 7, R 8 identiques ou différents représentent chacun un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, Z représente un atome d'oxygène ou de soufre et Rg représente un atome d'hydrogène ou un atome d'halogène), ou, (à condition toutefois que B soit un radical de formule y 3 ou un radical de formule y O), un radical de formule z 3 -SO 2 Rl O (z 3) (dans laquelle Rlo représente un radical alkyle de 1 à 3 atomes de carbone ou un radical phényle), ainsi que leurs sels d'addition obtenus avec un acide minéral ou organique thérapeutiquement compatible. Comme acides utilisés pour la formation des sels d'addition, on peut citer l'acide chlorhydrique, sulfurique, bromhydrique, phosphorique, acétique, propionique, maléique, benzoïque, méthanesulfonique. Les médicaments obtenus en utilisant selon l'invention les composés de formule I ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, seront présentés sous des formes pharmaceutiques convenant pour l'administration par voie orale, parentérale per ou transcutanée comme par exemple comprimés, gélules, tablettes, solutions injectables ou buvables. La posologie peut varier largement selon l'âge et le poids du patient, la voie d'administration, la nature de la maladie et des traitements associés, et s'échelonne de 0,10 à 7 g par prise. Les activités pharmacologiques des composés de formule I décrites dans les brevets FR 2 525 597, FR 2 521 560, FR 2 524 467, Fr 2 019 646 et FR 2 544 315, ne laissaient présager en aucun cas les propriétés fort intéressantes découvertes par la demanderesse Toutefois, les activités antérieurement connues, ne constituent pas un facteur limitant de - l'utilisation des composés de formule I lors d'un traitement anticancéreux ou antimalarique Par ailleurs, la toxicité des composés de formule I est très petite ce qui permet l'administration des doses très élévées. A titre d'exemple des composés de formule I, on peut citer les produits suivants: Composé 1: Difumarate de la 1-( 4,6-bis allylamino 1,3,5-triazin-2-yl) 3-bis parafluorobenzhydrylamino pipéridine. Composé 2: Difumarate de la 1-( 4,6-bis allylamino 1,3,5-triazin-2-yl) 4(benzofuran-2- yl méthyl amino) pipéridine. Composé 3: 1-( 4,6-bis allylamino 1,3,5-triazin-2-yl) 4-( 5-fluro benzofuran-2-yl méthyl) pipérazine. Composé 4: Chlorhydrate de la 1-( 4,6-bis allylamino 1,3,5-triazin-2-yl) 4-(bis parafluorobenzhydryloxy) pipéridine. Composé 5: Fumarate de la N,N'-diéthyl N-( 4,6-bis allylamino 1,3,5triazin-2-yl) N'-(benzothien-2-yl méthyl) éthylène diamine. Composé 6: Difumarate de la 1-( 4,6-bis allylamino 1,3,5-triazin-2- yl) 4-(N-bis parafluorobenzhydryl N-éthyl amino) pipéridine. Composé 7: Difumarate de la 1-( 4,6-bis allylamino 1,3,5- triazin-2-yl) 4-(bis parafluorobenzhydrylamino) pipéridine. Composé 8: Difumarate de la 1-( 4,6-bis allylamino 1,3,5-triazin-2-yl) 4(benzothien- 2-yl méthyl amino) pipéridine. -6- 7 2667243 Composé 9: Dichlorhyrate de la 1-( 4,6-bis allylamino 1,3,5- triazin-2-yl) 4-(parafluorobenzhydrylamino) pipéridine. Composé 10: Difumarate de la 1-( 4,6-bis allylamino 1, 3,5-triazin-2-yl) 4-benzhydrylamino pipéridine. Composé 11: Réthanesulfonate de la 1-( 4,6-bis allylamino 1,3,5triazin-2-yl) 4-(parafluorobenzhydryl) pipérazine. Les exemples suivants illustrent l'invention. -8- EXEMPLE 1 Evaluation de l'augmentation de la cytotoxicité de l'adriamycine sur la lignée P 388/ADR-1 in vitro Lors de cette étude, on a mesuré la cytotoxicité de l'adriamycine, en absence et en présence du composé reversant Pour cet essai, on a utilisé la leucémie murine P 388/ADR-1 dont la résistance a été induite par l'adriamycine Son facteur de résistance est de 40 par rapport à la lignée sensible (résistance moyenne). Les cellules sont cultivées dans un milieu de culture (RPMI 1640) complet, contenant 10 % de sérum de veau foetal, 2 n M de glutamine, 50 UI/ml de pénicilline, 50 pg/ml de streptomycine, 10 m M de Hepes et 20 n M de bêta-mercaptoéthanol. Les cellules sont réparties dans des microplaques et exposées -à l'adriamycine à 9 concentrations différentes. Les produits testés pour leur capacité à reverser la MDR sont ajoutés en même temps que le cytotoxique Les cellules sont ensuite incubées pendant 48 heures. Le nombre de cellules viables est ensuite quantifié par un essai colorimétrique, le Microculture Tetrazolium Assay (Cancer Res ( 1987), 47, pp 936-942). Les résultats sont exprimés en IC 50, concentration en cytotoxique qui inhibe à 50 % la prolifération des cellules témoins Les résultats sont exprimés en Facteur de Réversion (FR). FR = IC 5 o Cytotoxique seul IC 50 Cytotoxique en presence du composé reversant Le tableau I donne les valeurs des facteurs de reversions obtenus avec les différents composés de formule I et les produits de référence, et démontre l'activité très intéressante des composés de formule I. Concernant la reserpine (un des produits de référence), ce composé a une très bonne activité in vitro mais in vivo, il est inutilisable à cause de sa grande toxicité. TABLEAU I COMPOSES | 2,5 p M| 5 PM 1 10 PM 1 20 p M PRODUITS DE REFERENCE PHENOTHIAZINE 0,5 0,5 0,4 CHLOROPROMAZINE 2,6 3,8 TOX YOHIMBINE 0,4 0,9 2,1 NIFEDIPINE 1,0 2,2 2,1 PROGESTERONE 0,6 0,7 2,1 QUININE 0,8 2,0 2,1 DILTIAZEM 3,1 6,1 6,5 FLUNARIZINE 1,5 2,9 6,9 DIPYRIDAMOLE 2,2 4,2 8,5 QUINIDINE 0,8 2,5 3,5 QUINACRINE 3,4 TOX* TOX TRIFLUOPERAZINE 2,9 TOX TOX VERAPAMIL 7,5 10,7 14,5 AMIODARONE 8,1 10,6 TOX PIMOZIDE 7,9 19,3 TOX TOX RESERPINE 41 42 35 TOX CICLOSPORINE 21 23 TOX COMPOSES DE FORMULE I COMPOSE 6 24,4 27,0 20,7 41,1 COMPOSE 7 10,3 17,3 40,9 COMPOSE 9 6,9 16,3 51,2 COMPOSE 10 12,4 27,3 26,7 COMPOSE 11 11,5 24,3 34,5 144 * Les composés sont considérés comme toxiques lorsque la toxicité tissulaire est Ä 50 % -9- -10 2667243 EXEMPLE 2 Evaluation de l'augmentation de la cytotoxicité de l'actinomycine D sur la lignée de poumon de hamster chinois, DC-3 F/AD Le protocole utilisé pour cette étude est identique à celui utilisé pour l'essai décrit dans l'exemple 1 mais le milieu de culture ne contenait pas de bêta-mercaptoéthanol et les cellules ont été incubées pendant 4 jours au lieu de 48 heures Le cytotoxique utilisé était l'actinomycine D. La lignée DC-3 F/AD est une lignée extrêmement résistante Son facteur de l O résistance est supérieur à 10 000. Les résultats de cette étude sont donnés dans le tableau II: Les résultats du tableaux II démontrent que les composés de formule I diminuent de manière significative ou suppriment la résistance au cytotoxique. -11 - TABLEAU II COMPOSES 2,5 p M 5 p M 10 p M 20 p M PRODUITS DE REFERENCE PHENOTHIAZINE CHLOROPROMAZINE COMPOSES DE FORMULE I COMPOSE 1 COMPOSE 2 450 451 2148 COMPOSE 3 340 831 2189 COMPOSE 4 290 970 3302 COMPOSE 5 -12- EXEMPLE 3 Cytométrie en flux Certains composés anticancéreux comme l'adriamycine (ADR) ont la propriété d'être fluorescents après excitation par une source lumineuse de longueur d'onde connue. Par la mesure de cette fluorescence, il est possible de mesurer de façon relative la concentration intracellulaire en ADR La cytométrie en flux (CMF) est un outil de choix pour effectuer ce type de mesure et ainsi déterminer rapidement si certains composés actifs agissent en augmentant la concentration intracellulaire en adriamycine. Les cellules ( 500 103) par ml ont été exposées simultanément à l'adriamycine à une concentration fixe ( 50 p M) et aux composés testés, aux concentrations de 2,5, 10 et 20 p M Après 5 heures d'incubation, l'uptake de l'adriamycine intra-cellulaire a été évalué par CMF. Les analyses ont été réalisées sur un cytomètre en flux ATC 3000 (Bruker France) équipé d'un laser argon 2025 (Spectra-Physics-France ) optimisé à 488 nm pour une puissance de 600 m W. L'analyse de chacun des échantillons a été effectuée sur un total de 10000 cellules à une vitesse de 1000 cellules/sec. Les résultats ont été collectés sous forme d'histogrammes linéaires de la fluorescence de l'ADR intra-cellulaire. Expression des résultats: Pour chacun des histogrammes, le canal moyen (MEAN) de fluorescence a été déterminé par le système informatique de l'appareil. Pour toutes expériences: Un contrôle négatif (cellules sans ADR) a fixé le seuil d'auto- fluorescence. Un contrôle positif (cellules avec ADR) a déterminé la valeur MEAN = MN 1. Les tubes "tests" (cellules avec ADR et avec produit) ont déterminé pour chacun des produits et à chacune des concentrations, les valeurs MEAN = MN 2. Les résultats sont exprimés sous forme de variation de la moyenne de fluorescence obtenue pour chacun des tubes "tests" (MN 2) par rapport à la moyenne de la fluorescence obtenue avec le contrôle positif (MN 1): VAR-MEAN = MN 2 MN 1 Le paramètre exprimé est donc l'augmentation de la fluorescence de l'adriamycine en présence des composés testés. Le tableau III donne l'augmentation de la fluorescence de l'ADR obtenue avec les différents composés sur la lignée DC-3 F/AD et le tableau IV sur la lignée P 388/ADR-1. TABLEAU III COMPOSES 2,5 Ip M 5 p M 10 PIM 20 p M PRODUITS DE REFERENCE VERAPAMIL 2,00 2,60 7,55 11,45 AMIODARONE 8,80 16,65 21,55 26,35 PIMOZIDE 5,85 8,85 15,65 21,60 RESERPINE 26,18 29,43 31,73 29,95 CICLOSPORINE 1,90 3,20 8,05 15,10 COMPOSES DE FORMULE I COMPOSE 2 1,60 2,70 23,00 20,30 COMPOSE 4 4,60 11,40 16,10 20,60 COMPOSE 6 31,30 42,70 44,70 52,10 13- 98 'ZB 09 'OL S L'OE L L 35 Od VIO) 00 '58 E O 'E 8 06 '89 S'L Lb O L 35 Od Vl O) 06 'E 8 59 'L 8 59 '69 O L'OS 6 3 S Odl AIO) Otb'LL SO'L 9 OL'úEt SL'EZ 8 35 Odl AO) OL'L 6 8 b Z 8 O Z'99 SS'Et 7 L 35 Od Vl O) 0556 OO O 'Z 659 '88 SL'EL 9 35 Odl AO) OL't 6 90 't 8 Ol 'LL OZ'SS t 35 Odl AO) OZ'OL O Z'59 E O ú'5757 '8 Z Z 35 Odl AO) I:319 ll OI 3 (i 535 Odl AO) LZ'06 89 '96 E 9 'L 6E 1 '6 L 3 NIU Od SO:I) 6 E'58 06 'L 6 8 b'08 9 V'EL 3 N Id U 353 U b 9 'EL E L'EL Z 1 '6 b09 'SZ 3 CIZOIA Id 58 '56 EE'9 L SZ'59 017 'EE 3 NOUVCOIIAV OS'9 S Z 9 '6 ú 06 'LZ 68 '6 I 1 AI Vd VI 3 A SO'LS SS'17 E SL't L S', LL 3 NIZVU 3 d On 1 i:11 iu LL'ZS úL'LZ EL'SL E 8 'LL 3 NIU)DVN Ifln 06 '6 Z O 'ZZ 08 'Z L 59 '9 3 NIGIN If IO OO'Ob SL'l Z SS'L SE'Z 310 IAIV OI Udl IC OO'L 17 06 '6 L OL'OL SEúL 3 NIZIUV Nnld Sl'úEZ St 7 'EL 59 '9 OL'E v IA 3 ZV I 11 i 1 a 06 '8 L OO'ZL O t,'S 58 'b 3 NIN Inf O 08 'L L 58 '9 OO'L S' L 3 NOB 5319 MO Ud OV'E 56 'S 08 '0 00 '0 3 N Idl O 3-1 N SV'E ú OL' SO'0 O E'Z 3 NI 51 AVIHOA OZ'9 09 'b SL'S OE'E 3 NIZV Vl O Ud OUO 9 H) 00 '0 00 '0 00 '0 00 '0 3 NIZVIH 1 ON 3 Hd 3:)N 3 U 3 3 aa 51 Ilnc O Ud wr OZ | 1 O O L Wrid S |i S'Z 53 S Od V 0:O) AI fnv 3 l'/, -17 L - úVZZ 99 Z - Les tableaux III et IV démontrent que les composés de formule I augmentent la concentration intracellulaire de l'adriamycine et ils sont aussi actifs que la ciclosporine et l'amiodarone. EXEMPLE 4 Composition pharmaceutique Gélules dosées à 200 mg de principe actif. Composé 11 Amidon de maïs Lactose Talc mg mg mg mg -16- R E V E N D I C A T 1 O N S 1 Utilisation pour l'obtention de médicaments reversant la résistance acquise aux agents anticancéreux et antimalariques de composés de formule I: HNR 1 N / ^A /,IB-R 3 R 2 NHN > BR dans laquelle A représente un groupe -CH ou un atome d'azote, (I) R 1 et R 2 identiques ou différents représentent chacun un radical hydrocarboné ayant 3 à 5 atomes de carbone en chaine droite ou ramifiée renferment éventuellement une ou deux double liaisons et éventuellement substitué par un ou plusieurs radicaux hydroxyles, B représente un radical de formule yl: (y 1) -N (CH 2)m -N - l l R 4 R 4 (dans laquelle R 4 représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ayant de 1 à 5 atomes de carbone, et m représente un nombre entier de 2 à 6), un radical de formule Y 2: :J > -17 2667243 t -17- / \ (Y 2) N N - \ / (CH 2)n (dans laquelle N représente les nombres entiers 2 ou 3), un radical de formule y 3: (CH 2)/ (Y 3) -N N- I R 5 (dans laquelle p représente zéro ou les nombres entiers 1 ou 2, et R 5 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle ayant de 1 à 5 atomes de carbone, un radical cycloalkyle ayant de 3 à 7 atomes de carbone), ou un radical de formule 4: (CH 2) () -N o- (dans laquelle q représente zéro ou les nombres entiers 1 ou 2) R 3 représente un radical diphénylméthyle, éventuellement substitué sur les cycles benzéniques par un ou plusieurs atomes d'halogène, un radical de formule zl: (z 1) = -R 6 -CH 2 CH = CH - (dans laquelle R 6 représente un atome d'hydrogène ou un atome d'halogène), un radical de formule Z 2: R 9 (z 2) X - -CH 2 1 Y . (dans laquelle X-Y représente un reste de formule: -CH =CH-(CR 7 R 8)r- dans laquelle r représente O ou représentent chacun un atome d'h représente un atome d'oxygène ou d'hydrogène ou un atome d'halogène), 1 et R 7 R 8 identiques ou différents ydrogène ou un radical méthyle, Z de soufre et R 9 représente un atome ou, (à condition toutefois que B soit un radical de formule y 3 ou un radical de formule y 4), un radical de formule z 3: -502 R 10 (z 3) (dans laquelle R 1 o représente un radical alkyle de 1 à 3 atomes de carbone ou un radical phényle), ainsi que leurs sels d'addition obtenus avec un acide minéral ou organique thérapeutiquement compatible. -18- -19 2667243 ainsi que leurs sels d'addition obtenus avec un acide minéral ou organique thérapeutiquement compatible. 2 Composition pharmaceutique utilisable pour renverser la résistance acquise aux agents anticancéreux et antimalariques renfermant un composé de formule I, selon la revendication 1 ou un de leurs sels d'addition avec un acide minéral ou organique pharmaceutiquement acceptable. 3 Composition pharmaceutique utilisable pour reverser la résistance acquise aux agents anticancéreux et antimalariques renfermant un composé de formule I selon la revendication 1 ou un de leurs sels d'addition avec un acide minéral ou organique pharmaceutiquement acceptable, en association ou en mélange avec un excipient ou un vehicule inerte, non toxique, pharmaceutiquement acceptable. 4 Composition pharmaceutique utilisable pour reverser la résistance acquise aux agents anticancéreux et antimalariques renfermant un composé de formule I selon la revendication 1 ou un de leurs sels d'addition avec un acide minéral ou organique pharmaceutiquement acceptable, en association avec un autre agent cytotoxique ou antimalarique. Composition pharmaceutique selon les revendications 2, 3 ou 4 renfermant le principe actif à la dose de 0,1 à 7 g.