FR 2656317 A1 19910628 FR 8917231 A 19891227 -t MICROSPHERES MAGNETISABLES A BASE DE POLYSILSESQUIOXANE, LEUR PROCEDE DE PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN BIOLOGIE. La présente invention a pour objet des microsphères magnétisables à base d'une matrice de polysilsesquioxane et de charges magnétisables uniformément réparties à l'intérieur de ladite matrice, le procédé de préparation desdites microsphères et leur application notamment en biologie. La demanderesse a décrit dans sa demande de brevet français publiée sous le n 2 618 084 des particules composites magnétisables constituées d'une matrice à base d'organopolysiloxane linéaire et, encapsulées dans ladite matrice, de charges magnétisables La préparation de ce type de particules fait intervenir l'usage d'un fluide magnétique (ferrofluide) dont les charges magnétiques sont revêtues d'un agent dispersant rendu non hydrosoluble par décomposition thermique. Sont également connues, d'après la demande de brevet français publiée sous le n 2 624 873, des particules magnétisables constituées d'une matrice dérivant de l'hydrosilylation d'un organopolysiloxane Si Vi et d'un hydrogenopolysiloxane Si H et, encapsulés dans ladite matrice, de charges magnétisables revêtues d'un agent dispersant rendu non hydrosoluble par décomposition thermique. La préparation de ces deux types de particules fait intervenir des charges magnétisables dont la surface est revêtue d'un agent dispersant rendu non hydrosoluble La présence de cet agent dispersant peut être un inconvénient en biologie car ledit agent peut migrer vers la surface des particules et entraîner des phénomènes secondaires. La demanderesse a maintenant trouvé des microsphères magnétisables dont la charge magnétisable n'est pas recouverte d'un agent surfactant hydrophobe, ladite charge étant en outre répartie d'une manière homogène à l'intérieur de la matrice de silicone. Selon l'invention il s'agit de microsphères magnétisables caractérisées en ce qu'elle sont constituées: d'une matrice à base d'un réseau de polysilsesquioxane; et, réparties uniformément à l'intérieur dudit réseau, de charges magnétisables liées chimiquement à des motifs silsesquioxanes, lesdites charges présentant une taille généralement inférieure à 300 10- 4 pm, de préférence de l'ordre de 50 à 120 10-4 lm; lesdites microsphères présentant une surface spécifique BET de l'ordre de 2 à 50 m 2/g, de préférence de l'ordre de 2 à 10 m 2/g. Les polysesquioxanes peuvent être représentés par la formule unitaire R Si O 3/2 et obtenus par polycondensation d'un alcoxysiloxane de formule R Si (OR')3 (I) R 1 RI 1 R 1 ou (R 1)3 Si (O Si)X (O Si)y (O li)z O Si(R 1)3 (II) ai R 2 Z formules dans lesquelles R 1 représente un radical alkyle en C 1-C 3 (de préférence méthyle ou éthyle) un radical phenyle R 2 représente un radical R 1 un radical alkyle en C 1-C 4 substitué par des fonctions amino, epoxy, mercapto, halogéno (de préférence aminopropyle, glycidylpropyle, mercatopropyle, bromopropyle, chloropropyle, trifluoropropyle) un radical vinyle R représente un radical R 1 un radical R 2 un radical ethyleniquement insaturé (de préférence ester insaturé tel que methacryl-oxy-propyle) un radical diorganopolysiloxy présentant de 4 à 20 groupements diorganosiloxy OR' est un radical OH ou un radical hydrolysable tels que ceux dans lesquels R' représente un radical alkyle en C 1-C 4 un radical -CO-CH 3, -CO-C 2 H 5, -CO-CH 2-CO- CH 3, -CH 2 CH 20 H, -CH 2 CH 2 OCH 3, -CH 2-CH 2 OC 2 H 5 Z représente un radical -r-Si(R 1)3-n (OR')n dans lequel r est un groupement alkylène en C 1-C 18, de préférence en C 2-C 6. Les symboles x, y et z ont une valeur suffisante pour assurer une viscosité inférieure à 100 m Pas à 25 C (de préférence de 10 à 100 m Pas à C), les symboles x et y pouvant être séparement nuls. -2- Parmi les matériaux pouvant constituer les charges magnétisables, on peut citer la magnétite, l'hématite, le dioxyde de chrome, les ferrites telles que les ferrites de manganèse, nickel, manganèse-zinc Les matériaux préférentiels sont la magnétite et l'hématite Ces matériaux peuvent également être présents en mélange avec des charges présentant un spectre de fluorescence telles que oxyde ou oxysulfure d'yttrium activé à l'europium, borate de gadolinium cerium terbium, aluminate de cerium - terbium, aluminate de magnésium baryum dopé à l'europium divalent La quantité de charges magnétisables correspond à environ 0,5 à 98 % (dont 0, 01 % à 0,5 % des charges fluorescentes éventuelles) du poids des microsphères et de préférence de 5 à 80 % dudit poids. Les microsphères magnétisables faisant l'objet de l'invention sont parfaitement sphériques; elles peuvent être de taille uniforme ou présenter une granulométrie étalée; leur diamètre peut être de l'ordre de -5 0,05 à 3 im et généralement de l'ordre de 0,2 à 2 im. Elles peuvent se présenter telles quelles ou en dispersion dans l'eau; la quantité de microsphères magnétisables à l'état dispersé dans l'eau peut correspondre à environ 10 à 70 % en poids par rapport au poids total de dispersion et généralement de l'ordre de 15 à 50 % en poids. La présente invention a également pour objet le procédé de préparation des microsphères magnétisables ci-dessus décrites. Ledit procédé consiste: à disperser dans un solvant organique non miscible à l'eau une suspension aqueuse de charges magnétisables non revêtues d'agent dispersant, charges présentant une taille généralement inférieure à 300 -4 pm, de préférence de l'ordre de 50 10-4 à 120 10-4 pm. à dissoudre dans la phase organique de la dispersion obtenue un alcoxysiloxane de formule I ou II susceptible de se polycondenser en un polysesquioxane. à polycondenser ledit alcoxysiloxane à éliminer l'eau à séparer les microsphères magnétisables et éventuellement à redisperser lesdites microsphères dans de l'eau. Une variante du procédé consiste à introduire tout ou partie de l'alcoxysilane dans la suspension aqueuse de charges magnétisables préalablement à la mise en dispersion de ladite suspension aqueuse dans le solvant organique. -3- Le solvant organique mis en oeuvre à l'étape de dispersion est un solvant des alcoxysiloxanes de formule I ou II A titre d'exemple on peut citer le cyclohexane, le chlorure de méthylène, le benzène, l'hexane, le toluène, le tetrachlorure de carbone, l'octane, les esters de diacides gras. L'opération de dispersion est réalisée en une ou plusieurs étapes à une température de l'ordre de 20 à 60 'C, à l'aide d'un système d'agitation énergique tel que moulin à colloïdes, pompes à haute pression, agitateur à vibration, appareil à ultra-sons La suspension aqueuse de charges magnétisables peut être obtenue par mise en suspension de charges broyées; toutefois une forme préférentielle de suspension est un sol aqueux de charges magnétisables obtenu par tout procédé connu comme par exemple celui décrit dans le brevet US no 3.480 555. Le type de matériau pouvant constituer les charges à déjà été mentionné ci-dessus D'autres charges peuvent être présentes à côté des charges magnétisables comme par exemple les charges luminescentes citées cidessus. La concentration de charges magnétisables dans la suspension aqueuse peut être de l'ordre de 0,5 à 50 % en poids, généralement de l'ordre de 5 à % en poids La quantité de charges mise en oeuvre est telle que le rapport pondérai charges magnétisables/alcoxysiloxane soit de l'ordre de 0,005 à 50. La quantité de solvant organique mise en oeuvre est telle que le rapport pondérai phase aqueuse/phase organique soit de l'ordre de 0,005 à 2. Un agent tensio-actif est mis en oeuvre pour réaliser l'opération de dispersion Celui-ci peut être choisi parmi ceux permettant d'obtenir des émulsions eau dans l'huile (de HLB généralement inférieur à 10, de préférence inférieur à 5) tels que les agents non-ioniques du type esters d'acides gras du sorbitol, mono et trioleates de sorbitan, copolymères séquences oxyde d'ethylène/oxyde de propylène, les alkylphenols ethoxylés contenant moins de 10 motifs ethoxylés, les polycondensats d'acides gras, les copolymères séquences organosiloxane oxyde d'éthylène oxyde de -4propylène; les agents anioniques tels que les dialkylsulfosuccinates; les agents cationiques tels que le bromure de cetylammonium, les copolycondensats polyéthyléneimine-polyester L'opération de polycondensation est réalisée à une température de l'ordre de 20 à 80 'C pendant environ 5 à 24 heures. L'eau est ensuite éliminée par distillation par exemple. Après refroidissement les microsphères magnétisables peuvent être séparées du milieu organique par tout moyen connu, notamment par aimantation. Si désiré, lesdites microsphères magnétisables peuvent être redispersées dans de l'eau déionisée jusqu'à obtenir un taux d'extrait sec de l'ordre de 10 à 70 % en poids, de préférence de l'ordre de 15 à 50 % en poids Cette opération est réalisée en présence d'au moins un agent tensio-actif permettant d'obtenir des emulsions huile dans l'eau (de HLB généralement supérieur à 10, de préférence supérieur à 15) tels que alkyl sufates, alkylsulfonates Les microsphères magnétisables faisant l'objet de l'invention sont notamment intéressantes en biologie. Elles peuvent être utilisées par exemple comme supports actifs d'anticorps ou d'antigènes pour les test de diagnostiques, les séparations par affinité des composés biologiques; la fixation des molécules biologiques peut, si nécessaire, être réalisée par des méthodes de couplage bien connues faisant intervenir des agents de couplage (glutaraldéhyde, carbodiimide hydrosoluble), ou bien consistant à activer les fonctions éventuelles du polyorganosiloxane (par exemple par diazotation, par action du bromure de cyanogène, de l'hydrazine) et à faire réagir la molécule à fixer, etc de systèmes enzymatiques pour réactions biologiques de fixation de cultures cellulaires de médicaments ou de substances de révélation pour guider ceux-ci ou celles-ci in vitro ou in vivo vers le point de traitement choisi de molécules chimiques permettant une croissance de ces molécules par enchaînement rapide de réactions particulières comme la synthèse peptidique de groupements chimiques catalyseurs de réaction de groupements chimiques pour la séparation ou l'extraction de métaux ou d'isomères optiques. -5- -6- Lesdites microsphères peuvent egalement être utilisées comme charges de renforcement pour élastomères ou pour la préparation de dispersions organiques utilisées dans les circuits hydrauliques de freins et d'amortisseurs. Lorsqu'elles renferment en outre des charges luminescentes, elles peuvent être mises en oeuvre comme marqueur cellulaire ou comme agent de contraste en imagerie médicale. Les exemples suivants sont donnés à titre indicatif et ne peuvent être considérés comme une limite du domaine et de l'esprit de l'invention. La suspension aqueuse non surfactée d'oxyde de fer magnétique mise en oeuvre dans les exemples ci-après est préparée de la manière suivante. g de Fe(NO 3),9 H 20 et 75 g de Fe(SO 4),7 H 20 sont dissous dans 250 g d'eau permutée et 55 g d'acide nitrique concentré; sous agitation rapide on ajoute 250 g d'une solution aqueuse à 20 % d'ammoniaque Après décantation et élimination de la solution surnageante, le précipité est lavé une fois par de l'eau Le milieu est ensuite ajusté à p H 0,5 par 35 g d'acide perchlorique, et le précité filtré; cette opération est répétée 3 fois, après quoi l'oxyde est remis en suspension dans de l'eau et ultrafiltré par de l'eau permutée La suspension ainsi obtenue a une teneur en solide de 26,5 % pour un p H de 1,2 Le rendement exprimé en Fe 304 est de 57 % L'examen en microscopie electronique à transmission indique des tailles de particule d'oxyde de fer comprises entre 50 10-4 et 200 10-4 microns. EXEMPLE i: Préparation de microsphères magnétisables à base de polv(methvl)sil- sesqui-oxane 2 g de suspension d'oxyde de fer préparée ci-dessus sont dispersés dans un mélange constitué de 50 g de Solvesso 200 (coupe polyaromatique petrolière fournie par Esso (France)) et 0,1 g de SPAN 80 (monooléate de sorbitan commercialisé par ICI (UK)), à l'aide d'un homogeneiseur ultrasonique Cette émulsion inverse est chargée dans un réacteur en verre de 50 ml thermorégulé, muni d'une agitation mécanique et d'un condenseur. On introduit 2 g de methyltrimethoxysilane (MTMS) et le milieu est laissé sous agitation à 20 C pendant 6 heures L'eau présente dans l'émulsion est ensuite éliminée par distillation azéotropique La teneur en solide de la suspension organique est 2,95 % en poids, soit un rendement de polyconden- sation proche de 100 % (exprimé en poids de poly(methyl)sil-sesqui-oxane formé). La teneur en oxyde de fer dans les particules est de 35 %, estimée par dosage de fer en absorption atomique Le pigment magnétique est réparti uniformément dans le volume de la bille comme l'atteste la vue donnée par microscopie électronique à transmission; l'échelle mentionnée représente 0,09 micron; les tailles de particules sont comprises entre 0,05 micron et 0,5 micron. Ces mêmes particules sont collectées par aimantation et redispersées dans l'eau en présence de Cemulsol NP 30 (nonyl-phénol-ehoxylé à 30 molécules d'oxyde d'éthylène, commercialisé par SFOS (France), à la concentration de 1 g/l pour former un latex magnétique à un extrait sec de %. EXEMPLE 2: L'exemple I est répété à la différence que le Solvesso 200 est remplacé par du cyclohexane, et le SPAN 80 remplacé par l'Hypermer LP 8 (agent dispersant commercialisé par ICI (UK)) Le rendement exprimé en poids de poly(methyl)sil-sesqui-oxane formé est proche de 100 %. EXEMPLE 3: L'exemple i est répété à la différence que le Solvesso est remplacé par le Garbexol A 6 (diester de l'acide adipique commercialisé par SFOS (France)) Le rendement exprimé en poids de poly(methyl)sil-sesqui-oxane formé est proche de 76 %. EXEMPLE 4: L'exemple 1 est répété en remplaçant le Solvesso 200 par de l'octane. Les 2 g de methyltrimethoxysilane (MTMS) sont introduits au préalable dans la suspension d'oxyde de fer et agités quelques minutes pour hydrolyser le MTMS et obtenir une suspension homogène Celle-ci est alors dispersée dans l'octane et homogeneisée aux ultra-sons L'émulsion dans l'octane est agitée pendant une heure à 20 C puis on introduit 2 g supplémentaires de MTMS dans l'émulsion Le traitement est poursuivi comme indiqué dans l'exemple 2 Le rendement exprimé en poids de poly(methyl)sil- sesqui-oxane formé est proche de 100 % La teneur en oxyde de fer dans les particules est de 21 %. EXEMPLE 5: Préparation de microsphères magnétisables à base de Poly(vinvl)sil-sesqui- oxane On reprend les conditions de l'exemple I en substituant le MTMS par du vinyl-trimethoxysilane (VTMO) Le rendement exprimé en poids de poly(vinyl) sil-sesqui-oxane formé est de 67 % La teneur en oxyde de fer dans les particules est de 43 %. -7- EXEMPLE 6: Préparation de microsphères magnétisables à base de Poly(methacrvl-oxv- propvl)sil-sesqui-oxane On reprend les conditions de l'exemple 1 en substituant le MTMS par du méthacryl-oxy-propyltrimethoxysilane (MEMO) Le rendement exprimé en poids de poly(methacryl-oxy-propyl)sil-sesqui-oxane formé est de 42 % La teneur en oxyde de fer dans les particules est de 47 %. EXEMPLE 7: Préparation de microsphères magnétisables à base de Polv(glvcidvl-propvl) sil-sesqui-oxane On reprend les conditions de l'exemple 1 en substituant le MTMS par du glycidyl-propyltrimethoxysilane (GLYMO) Le rendement exprimé en poids de poly(glycidyl-propyl)sil-sesqui-oxane formé est de 19 % La teneur en oxyde de fer dans les particules est de 66 %. EXEMPLE 8: Préparation de microsphères magnétisables à base de Polv(aminopropyl)sil- sesqui-oxane On reprend les conditions de l'exemple 1 en substituant le MTMS par de l'amino-propyltrimethoxysilane (AMEO) et en l'introduisant au préalable dans la suspension aqueuse d'oxyde de fer; ceci s'accompagne d'une floculation passagère de la suspension Le reste du traitement est poursuivi comme indiqué dans l'exemple 1. EXEMPLE 9: (comparatif à l'exemple 1) Dans cet exemple on substitue la suspension aqueuse non surfactée d'oxyde de fer par une suspension d'oxyde de fer surfacté préparée selon le procédé revendiqué dans le brevet US 4094804; il s'agit d'oxyde de fer précipité en présence d'acide oleique, que l'on repeptise en milieu aqueux par ajout d'émulsifiant anionique (dioctylsulfosuccinate), Aerosol OT commercialisé par American Cyanamid La synthèse est poursuivie comme indiqué dans l'exemple 1: dans ce cas on n'obtient pas de microsphères magnétisables; en effet l'oxyde de fer a diffusé progressivement de la phase aqueuse vers la phase organique. -8- 7 2656317 REVENDICATIONS 1) Microsphères magnétisables caractérisées en ce qu'elle sont constituées: d'une matrice à base d'un réseau de polysilsesquioxane; et, réparties uniformément à l'intérieur dudit réseau, de charges magnétisables liées chimiquement à des motifs silsesquioxanes, lesdites charges présentant une taille généralement inférieure à 300 10-4 pm, lesdites microsphères présentant une surface spécifique BET de l'ordre de 2 à 50 m 2/g. 2) Microsphères selon la revendication 1 caractérisées en ce que les polysesquioxanes peuvent être représentés par la formule unitaire R Si O 3/2 et sont obtenus par polycondensation d'un alcoxysiloxane de formule R Si (OR')3 (I) R 11 RI IR ou (R 1)3 Si (O Si)x (O li)y (O Si)z O Si(R 1)3 (II) 1 R 2 i U R 2 Z formules dans lesquelles Ri représente un radical alkyle en C 1C 3 un radical phenyle R 2 représente un radical R 1 un radical alkyle en C 1-C 4 substitué par des fonctions amino, epoxy, mercapto, halogéno un radical vinyle R représente un radical R 1 un radical R 2 un radical ethyleniquement insaturé tel que methacryl-oxy-propyle un radical diorganopolysiloxy présentant de 4 à 20 groupements diorganosiloxy ff O 2656317 OR' est un radical OH ou un radical hydrolysable tels que ceux dans lesquels R' représente un radical alkyle en C 1-C 4 un radical -COCH 3, -CO-C 2 H 5, -CO-CH 2-CO-CH 3, -CH 2 CH 20 H, -CH 2 CH 2 OCH 3, -CH 2-CH 2 O C 2 H 5 Z représente un radical -r-Si(R 1)3-n (OR')n dans lequel r est un groupement alkylène en C 1-C 18, de préférence en C 2-C 6. Les symboles x, y et z ont une valeur suffisante pour assurer une viscosité inférieure à 100 m Pas à 25 C, les symboles x et y pouvant être séparement nuls. 3) Microsphères selon la revendication 1 ou 2 caractérisées en ce que la quantité de charges magnétisables correspond à environ 0,5 à 98 % du poids des microsphères. 4) Microsphères selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisées en ce que les charges magnétisables ont une taille de l'ordre de 50 à 120 10-4 microns. 5) Microsphères selon l'une quelconque des revendications I à 4 caractérisées en ce que leur diamètre est de l'ordre de 0,05 à 3 microns. 6) Procédé de préparation de microsphères magnétisables consistant: à disperser dans un solvant organique non miscible à l'eau une suspension aqueuse de charges magnétisables non revêtues d'agent dispersant, charges présentant une taille généralement inférieure à 300 -4 pm à dissoudre dans la phase organique de la dispersion obtenue un alcoxysiloxane susceptible de se polycondenser en un polysesquioxane. à polycondenser ledit alcoxysiloxane à éliminer l'eau à séparer les microsphères magnétisables et éventuellement à redisperser lesdites microsphères dans de l'eau. 7) Procédé selon la revendication 6 caractérisé en ce que l'alcoxysiloxane a pour formule R Si (OR')3 (I) RI R 1 ou (R 1)3 Si (O Si) x R 1 R 1 (O si)y (O - R 2 RI R 1 Si)z O Si (R 1)3 k formules dans lesquelles Ri représente un radical alkyle en C 1-C 3 un radical phenyle R 2 représente un radical Ri un radical alkyle en C 1-C 4 substitué par des fonctions amino, epoxy, mercapto, halogéno un radical vinyle R représente un radical Ri * un radical R 2 un radical ethyleniquement insaturé tel que methacryl-oxypropyle un radical diorganopolysiloxy présentant de 4 à 20 groupements diorganosiloxy OR' est un radical OH ou un radical hydrolysable tels que ceux dans lesquels R' représente un radical alkyle en C 1-C 4 un radical CO-CH 3, -CO-C 2 H 5, -CO-CH 2-CO-CH 3, -CH 2 CH 20 H, -CH 2 CH 2 OCH 3, -CH 2-CH 2 O C 2 H 5 Z représente un radical -r-Si(R 1)3-n (OR')n dans lequel r est un groupement alkylène en C 1-C 18, de préférence en C 2-C 6. Les symboles x, y et z ont une valeur suffisante pour assurer une viscosité inférieure à 100 m Pas à 25 C, les symboles x et y pouvant être séparement nuls. 8) Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 7 caractérisé en ce que les charges magnétisables présentent une taille de l'ordre de 50 à 10-4 microns. (II) -42 f 9) Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 8 caractérisé en ce que la concentration de charges magnétisables dans la suspension aqueuse est de l'ordre de 0,5 à 50 % en poids et en ce que la quantité de charges mise en oeuvre est telle que le rapport pondéral charges magnétisables/al- coxysiloxane soit de l'ordre de 0,005 à 50. ) Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 9 caractérisé en ce que la quantité de solvant organique mise en oeuvre est telle que le rapport pondéral phase aqueuse/phase organique soit de l'ordre de 0,005 à 2. 11) Utilisation des microsphères telles quelles ou en dispersion aqueuse faisant l'objet de l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou obtenues selon le procédé faisant l'objet de l'une quelconque des revendications 6 à 10 comme supports actifs en biologie.