FR 2656866 A1 19910712 FR 9000214 A 19900110 i Dérivés de porphyrine et méta L Loporphyrines éventuel- lement couplés à une mo Lécule biologiquement active, et composition pharmaceutique Les contenant. La présente invention a pour objet un dérivé de porphyrine éventuellement métallé, qui peut être couplé à une molécule biologiquement active. De façon plus précise, elle concerne des dérivés de porphyrine utilisables dans le domaine pharmaceutique, soit comme agents antitumoraux, soit comme agents de diagnostic ou de thérapie, notamment lorsqu'ils comprennent un métal radioactif. L'utilisation de composés marqués par un élément radioactif, comme agent de diagnostic ou de thérapie, est devenue d'une pratique courante dans les laboratoires d'analyses et les milieux hospitaliers o ces composés marqués sont employés soit pour réaliser des scintigraphies, soit pour irradier ponctuellement un centre malin. Pour ces utilisations, il est nécessaire d'obtenir une liaison stable entre l'élément radioac- tif et le composé, ce qui est difficile à obtenir avec la plupart des éléments radioactifs Aussi, on a surtout utilisé jusqu'à présent l'iode radioac- tif, qui est capable de se fixer directement à de nombreux principes actifs On a utilisé également dans ce but, le carbone-11, le tritium et le phospho- re-32 Cependant, l'instabilité "in vivo" de certains de ces éléments radioactifs a entraîné une nouvelle approche pour réaliser les composés marqués. Ainsi, afin de pouvoir utiliser des métaux et autres éléments, on a réalisé certains marquages par chélation des traceurs métalliques radioactifs; le complexe ainsi formé peut être fixé aux éléments protéiques ou à leurs dérivés par une liaison covalen- te Les agents de chélation les plus couramment utilisés sont l'acide éthylène diamine tétracétique (EDTA) et ses dérivés ainsi que l'acide diéthylène triamine pentacétique (DTPA). Bien que ces agents complexants aient permis d'obtenir de meilleurs résultats, notamment pour le marquage d'anticorps monoclonaux, il n'en demeure pas moins que les produits marqués obtenus présentent également une instabilité "in vivo". En effet, certaines protéines plasmatiques telles que la transférine, l'albumine etc déplacent les métaux du complexe EDTA et DTPA; de ce fait, les métaux radioactifs se retrouvent dans le sang circulant et perturbent l'analyse scintigraphique. Aussi, on a envisagé l'utilisation d'autres chélatants. Les porphyrines sont des composés de structure cyclique tétrapyrrolique, très largement répandus chez tous les êtres vivants, qui existent entre autres sous forme de complexes métalloporphyriques et peuvent de ce fait comporter de nombreux métaux Certaines de ces porphyrines possèdent une activité physiologique, en particulier un tropisme tumoral, ainsi que des propriétés photosensibilisatrices qui peuvent être utilisées pour le diagnostic ou pour la thérapie, comme il est décrit dans le document EP-A 0 210 351. Les porphyrines utilisées dans EP-A- O O 210 351 sont des dérivés substitués de la porphine qui comportent au moins trois groupes acides carboxy- liques Ces porphyrines ont une affinité pour les cellules tumorales et lorsqu'elles sont soumises à un rayonnement approprié, elles émettent de la lumière, ce qui permet de détecter la présence, la position et la taille d'une tumeur Ensuite, lorsque l'on irradie la tumeur avec une lumière d'une longueur d'ondes et d'une intensité appropriées, la porphyrine est activée et exerce un effet de destruction sur les cellules tumorales. Toutefois, le tropisme tumoral de ces porphyrines n'est pas exclusif et une concentration non négligeable de celles-ci se trouve dans tous les tissus, en particulier dans le foie comme il est indiqué dans EP-A O 322 198 De ce fait, dans le cas d'une utilisation pour la destruction des cellules tumorales, l'irradiation conduit également à une destruction des tissus sains De plus, certains composés porphyriniques ont un effet toxique notable, à forte concentration, sur la motricité nerveuse comme il a été décrit par A A F Sima et Col dans Can J Neurol Sci, 8, 105-114 ( 1981). Pour obtenir une affinité exclusive des porphyrines pour les cellules tumorales, on a envisagé de coupler les porphyrines à des anticorps spécifiques de ces cellules tumorales, comme il est décrit par J.C Roberts et col dans J Immunol Methods, 105, 153 ( 1987) et dans le document US-A 4 783 529. Selon ces documents, on obtient ce couplage en faisant réagir la porphyrine non métallée avec un composé benzyl diphénylsulfonium, en la conjuguant ensuite avec un anticorps et en réalisant en dernier lieu la métallation par l'élément radioactif Cepen- dant, ce mode de préparation ne peut être utilisé avec toutes les porphyrines car il est limité surtout à celles possédant des groupements carboxyliques. De plus, le couplage doit être réalisé en présence d'un cosolvant organique en raison de la faible hydrosolubilité du dérivé de porphyrine, et la métal- lation ultérieure ne peut être envisagée qu'avec des métaux de petite taille tels que le cuivre, le zinc, le nickel, car la température indispensable pour insérer des métaux lourds tels que l'indium, l'yttrium, le rhénium ou le technétium en des temps raisonnables entraînerait une dégradation de l'anti- corps. Aussi, il serait d'un grand intérêt de disposer de dérivés de porphyrine pouvant être métallés par n'importe quel métal et présentant une meilleure hydrosolubilité afin de pouvoir réaliser leur couplage avec des molécules biologiquement actives en solution aqueuse. On sait que certaines porphyrines substi- tuées peuvent être solubles dans l'eau comme il est décrit dans EP-A O 322 198, et EP-A O 186 982. Dans EP-A O 322 198, l'hydrosolubilité est obtenue en convertissant une phéophorbide en son chlorhydrate d'éthylène diamine. Dans EP-A O 186 982, l'hydrosolubilité est obtenue par la présence de substituants constitués par des groupes sulfonate, hydroxy-amino ou sulfhy- dryle. Cependant, dans ces deux documents, les porphyrines ne conviennent pas pour un couplage avec des molécules biologiquement actives et un élément radioactif. La présente invention a précisément pour objet de nouveaux dérivés de porphyrines hydrosolubles sur Lesquels on peut fixer de très nombreux métaux radioactifs et qui peuvent être couplés facilement à une molécule biologiquement active telle qu'un anticorps. Selon, l'invention, le dérivé de porphyrine répond à la formule: 1 R 1 (I) R dans laquelle les R 1 représentent un radical pyridyle, et R 2 représente un radical choisi parmi les radicaux répondant aux formules: NO 2 {X o; o 3-(CH 2)n-COOH; o R 3 '(CH 2)n-COO O dans lesquelles X représente F, Cl ou Br, R 3 est une simple liaison, S ou O, N est un nombre entier de 1 à 7 et R 4 est un radical alkyle en C 1 à C 4, un radical benzyle ou le radical de formule: R) p dans laquelle R 5 est choisi parmi F, Cl, Br, I, NO 2 et le radical de formule SR 6 dans laquelle R 6 est un radical alkyle en C 1 à C 4, p est égal à 1 Lorsque R 5 représente NO 2 ou SR 6, p est égal à 4 ou 5 lorsque R 5 représente F, Cl, Br ou I, et R 5 est en position ortho ou para Lorsque p est égal à 1. De préférence, R 4 et R 6 sont des radicaux méthyle ou éthyle. L'invention concerne également les sels de pyridylium du dérivé de formule (I) Ces sels de pyridylium peuvent répondre à la formule: O+ -R 7 NHN \ R 2, 3 A _II) +R 7 ±R 7 dans laquelle R 2 a la signification donnée ci-dessus, R 7 est un radical a Lkyle en C 1 à C 4 et A est un anion choisi parmi C 1-, Br et I-. De préférence, A est C 1 et R 7 est le radical méthyle ou éthyle. Dans les dérivés de porphyrine de l'inven- tion, le radical pyridyle R 1 peut être rattaché au noyau porphine par l'atome de carbone en position 2, 3 ou 4 par rapport à N du noyau pyridyle. Les dérivés de porphyrine de l'invention peuvent être métallés facilement Aussi, l'invention a également pour objet le dérivé de porphyrine répon- dant à la formule: R 1 R 1 R 2 \_N N- R 1 R 2 (III) R 1 Rl dans laquelle les R 1 représentent un radical pyridyle, et R 2 représente un radical choisi parmi les radicaux répondant aux formules: NO 2 X; X X;; 3 _(CH 2)n-COOH; 1 O Q R 3 CH 2)n-COOR 4 dans lesquelles X représente F, Cl ou Br, R 3 est une simple liaison, S ou O, N est un nombre entier de I à 7 et R 4 est un radical alkyle en C 1 à C 4, un radical benzyle ou le radical de formule: p dans laquelle R 5 est choisi parmi F, Cl, Br, I, NO 2 et le radical de formule SR 6 dans laquelle R 6 est un radical alkyle en C 1 à C 4, p est égal à 1 lorsque R 5 représente NO 2 ou SR 6, p est égal à 4 ou 5 lorsque R 5 représente F Cl, Br ou I, R 5 est en position ortho ou para lorsque p est égal à 1, et M est un métal; et les sels de pyridylium de ce dérivé de formule (III). Lorsque ce dérivé est sous la forme de sel de pyridylium, il répond par exemple à la formu- le: ±R 7 \" t R 2, 3 A (IV) dans laquelle R 2 a la signification donnée ci-dessus, R 7 est un radical alkyle en C 1 à C 4, A est un anion choisi parmi Cl-, Br et I-, et M est un métal. Dans ce cas, comme précédemment, A repré- sente de préférence Cl et R 7 est le radical méthyle ou éthyle. Dans ces dérivés métallés, le métal M est de préférence radioactif, et il peut être aussi bien un métal de petite taille comme Cu, Zn et Ni, qu'un métal lourd, par exemple In, Gd, Y, Re, Tc, Sn, Ga, dont les isotopes radioactifs possèdent des propriétés avantageuses pour la thérapie ou le diagnostic. Le métal radioactif peut être en particulier l'indium-111, le technétium99 m, le rhénium-186 ou le rhénium-188. Les dérivés de porphyrine de l'invention sont donc très intéressants pour une utilisation en médecine. En effet, la présence du substituant R 2 leur confère la propriété de pouvoir être liés de façon covalente à des molécules biologiquement actives telles que des anticorps. Ceci provient de la présence d'un halogène, d'un groupe COOH ou d'un groupe ester activé sur le substituant R 2, qui permet de faire réagir la porphyrine avec les fonctions amine, carboxylique, alcool ou thiol des résidus d'acides aminés et les résidus osidiques des protéines L'halogène peut réagir avec les fonctions amine de la chaîne latérale des lysines et du noyau imidazole des histidines, ainsi qu'avec les fonctions alcool et thiol des sérines, tyrosines et cystéines Les groupes COOH et les groupes COOR 4 peuvent réagir avec les fonctions amine des lysines, les fonctions thiol des cystéines et les hydroxyle des sérines et surtout des tyrosines. Par ailleurs, on peut obtenir avec les dérivés de l'invention les propriétés voulues de solubilité dans l'eau en quaternisant les groupes pyridyle pour former les sels de pyridylium correspon- dants. Ainsi, les dérivés de porphyrines de l'invention sont solubles dans l'eau, peuvent être métallés par un élément radioactif et possèdent de plus un substituant capable de réagir avec une molécule biologiquement active telle qu'un anticorps. Selon l'invention, R 2 peut représenter les différents groupements décrits ci-dessus. Toutefois, lorsque le dérivé de l'invention doit être couplé à une molécule biologiquement active, R 2 ne peut représenter un radical comportant un groupe ester si ce groupe ester n'est pas activé. Aussi, pour cette utilisation lorsque R 2 représente le radical de formule: R 3-(CH 2)n-COOR 4, R 4 représente (R 5)p avec R 5 et p ayant la signification donnée ci-dessus. Lorsque R 2 représente -(J R 3-(CH 2)n-COOH ou -D R 3-(CH 2)n-COOR 4, R 3 peut représenter O, S ou une simple liaison. A titre d'exemple de tels R 2, on peut citer: le radical de formule 0-(CH 2)n-COOH dans laquelle N est un nombre entier de 1 à 7, et le radical de formule: O (CH 2)n -COO $SR 6 dans laquelle N est un nombre entier de 1 à 7 et R 6 est le radical méthyle ou éthyle. L'invention a encore pour objet un composé conjugué d'une molécule biologiquement active et d'un dérivé de porphyrine répondant aux formules: R 1 - \Nil N R 1 R 2 HN HN R 1 1 N N Rk o Ms t R 2 -NN O -R 7 R 2, 3 A- + N HN\ R 7m-R _±R 7 ±R 7 s M' t 1 R 2,3 A- R 1 (II) (I) (III) (IV) dans Lesquelles R 1, R 2, R 7, A et M ont les significa- tions données ci-dessus à condition que R 2 ne repré- sente pas le radical de formule: R 3-(CH 2)n-COOR 4 avec R 4 représentant un radical alky Le ou benzyle. Les dérivés de porphyrines de l'invention non métallés peuvent être préparés par un procédé classique à partir du pyrrole, de formylpyridine et du benzaldéhyde substitué correspondant de formule R 2 CHO Cette réaction correspond au schéma réactionnel suivant: R 1 CHO + + R 2 CHO i (I) Cette synthèse conduit à un mélange de 6 porphyrines que l'on sépare par exemple par chroma- tographie pour isoler uniquement le dérivé tripyridy- lique de formule (I) de l'invention. Selon l'invention, le choix du dérivé tripyridylique de formule (I) permet d'éviter toute réticulation ultérieure lors du couplage de ce dérivé avec une molécule biologiquement active et surtout d'hydrosolubiliser ce dérivé en formant le sel de pyridylium correspondant par quaternisation des positions pyridyliques, par exemple par méthylation. Les dérivés de porphyrine sous la forme de sel de pyridylium répondant à la formule (II) peuvent être préparés facilement à partir du dérivé de formule (I) par une simple réaction d'alkylation au moyen d'un halogénure d'alkyle, par exemple l'iodu- re de méthyle On peut ensuite transformer l'iodure de pyridylium en chlorure par passage sur une résine anionique échangeuse d'ions chlorure. Les dérivés de porphyrines métallés de l'invention peuvent être préparés en portant au reflux le dérivé de porphyrine de formule (I)ou de formule (II) avec une solution d'un sel du métal M à inclure. Lorsque le métal à inclure est de l'indium, par exemple de l'indium radioactif, on met en contact une solution de la porphyrine, de préférence sous forme de sel de pyridylium, dans un mélange d'acide acétique et trifluoroacétique auquel on ajoute du trichlorure d'indium. Le fait d'inclure l'élément métallique avant couplage du dérivé de porphyrine avec une molécule biologiquement active, permet d'inclure n'importe quel métal, par exemple du cuivre, de l'indium, de l'étain, du gallium, du gadolinium, de l'yttrium, du rhénium, du technétium Après cette métallation, on peut coupler le dérivé de porphyrine avec une molécule biologiquement active, par exemple un anticorps. De préférence, pour cette réaction de couplage, on utilise le dérivé de porphyrine sous la forme de sel de pyridylium pour opérer en solution aqueuse On peut réaliser le couplage, soit par voie directe dans le cas des dérivés de porphyrine avec R 2 comportant un atome d'halogène ou une fonction ester activé, soit par l'intermédiaire d'un carbodi- imide et de N-hydroxysuccinimide dans le cas des dérivés de porphyrine avec R 2 comportant un groupe carboxylique La méthode utilisée peut être celle décrite par Lavallee et col dans US-A 4 783 529. Les molécules biologiquement actives susceptibles d'être couplées au dérivé de porphyrine de l'invention peuvent être de différents types. A titre d'exemple de telles molécules, on peut citer les antigènes, les anticorps, les haptènes, en parti- culier les anticorps et notamment les anticorps monoclonaux. Les dérivés de porphyrine de l'invention peuvent trouver de nombreuses applications dans le domaine médical pour le diagnostic ou pour la thérapie. Ainsi, les dérivés de porphyrine métallés par un élément radioactif ainsi que les dérivés non métallés peuvent être utilisés par exemple comme agents de diagnostic ou de thérapie des tumeurs. Aussi, l'invention a également pour objet des compositions pharmaceutiques comprenant de tels dérivés, de préférence dans une solution aqueuse. Ces compositions peuvent être administrées par injection, par exemple par voie intraveineuse. Après cette injection, le dérivé de porphyrine se localise dans la tumeur, ce qui permet de détecter ou traiter la tumeur. Lorsque le dérivé n'est pas métallé, on peut détecter la tumeur par irradiation à une longueur d'onde telle que l'on obtienne une émission de lumière fluorescente à partir de ce dérivé. Lorsque le dérivé est métallé par un élément radioactif, on peut détecter La tumeur par scintigraphie. Pour la thérapie, lorsque le dérivé injecté n'est pas métallé, on effectue ensuite une irradiation de La tumeur par une lumière ayant une longueur d'onde appropriée pour activer le dérivé de porphyrine et nécroser les cellules tumorales. Les doses de dérivé utilisées dépendent en particulier de l'importance de la tumeur, et peuvent se situer dans la gamme allant de 0,01 à mg/kg/jour. Les dérivés de porphirine non métallés ou métallés par un métal radioactif, et couplés à une molécule biologiquement active peuvent être utilisés dans le même but et sont plus intéressants car ils présentent une affinité améliorée due à la présence de cette molécule biologiquement active, par exemple d'un anticorps spécifique des cellules tumorales à détecter ou à détruire. D'autres caractéristiques de l'invention apparaitront mieux à la lecture des exemples suivants donnés bien entendu à titre illustratif et non limita- tif. Exempte I Préparation de la ( 3-nitro 4-fluoro phényl)tripyridyl porphyrine. Ce dérivé répond à la formule N N " " F (dérivé n l) Dans un ballon contenant 200 ml d'acide propionique maintenu sous agitation magnétique, on méLange 8 10-2 mol de pyrrole, 1,33 10-2 mol de 3-nitro 4-fluoro benzaldéhyde et 6,66 10-2 mo L de 4-formyl pyridine Après une heure à la température de reflux de l'acide, on laisse la solution revenir à la température ambiante On évapore l'acide propionique sous pression réduite et on précipite le mélange de porphyrines dans le minimum de diméthylformamide (DMF). On sépare ensuite les 6 macrocycles sur une colonne de gel de silice Le dérivé, n 1 attendu est obtenu par une élution chloroforme/méthanol ( 97:3) avec un rendement de 1,9 %. Exemp Le 2: Préparation de la ( 4-fluorophényl)tripyri- dyl porphyrine. Ce dérivé répond à la formule: NX NH F (dérivé n 2) On suit le même mode opératoire que dans l'exemple 1 pour préparer cette porphyrine, sauf que l'on utilise 1,33 10-2 mol de 4-fluorobenzaldéhyde au lieu de 1,33 10-2 mol de 3-nitro 4-fluoro benzaldé- hyde. On précipite le mélange de porphyrines après redissolution dans le minimum de DMF par addi- tion de méthanol On sépare les 6 macrocycles sur une colonne de gel de silice, le dérivé n 2 est obtenu par une élution chloroforme / méthanol ( 97:3) avec un rendement de 2,6 %. Exempte 3: Préparation de l'ester éthylique de la ( 4-(carboxyméthoxy)phényl)tripyridyl porphyrine. Ce dérivé répond à la formule: O.C Hr 2 COO Et N heure de reflux, on laisse revenir le milieu réaction- nel à la température ambiante On élimine l'acide propionique par évaporation sous pression réduite et on précipite les 6 porphyrines mixtes par addition de méthanol après redissolution du résidu dans le DMF chaud. On sépare ensuite les 6 macrocycles par chromatographie liquide sous haute pression préparati- ve en utilisant une colonne de silice d'une longueur de 200 mm et d'un diamètre de 40 mm contenant de la silice ayant une dimension moyenne de particules de 20 pm et un rayon moyen de pores de 60 A On utilise comme éluant un mélange de chloroforme et de méthanol dont le pourcentage en méthanol varie de O à 3 %, à un débit de 1,2 ml/min On obtient ainsi le dérivé de porphyrine n 3 avec un rendement de 5,6 %. L'ester éthylique du 4-(carboxyméthoxy)ben- zaldéhyde utilisé comme produit de départ dans cet exemple a été préparé à partir de l'acide 4-formyl phénoxy acétique par estérification en présence de N,N'carbonyl diimidazole. Exemple 4: Préparation de la ( 4-(carboxyméthoxy)phé- nyl)tripyridyl porphyrine. Ce dérivé répond à la formule: OCH 12-COOH N N ' 'N (dérivé n O 4) On dissout 7,22 10-5 mol de l'ester éthyli- que obtenu dans l'exemple 3 dans 50 ml de tétrahydrofu- ranne (THF) On ajoute lml d'une solution d'hydroxyde de sodium éthanol ( 4 g de Na OH dissous dans 5 ml d'eau auxquels on ajoute 50 ml d'éthanol) On porte le milieu réactionnel au reflux pendant une heure. On évapore le solvant et on reprend le résidu solide par du chloroforme, puis on le lave au moyen d'une solution d'acide chlorhydrique 0,1 M On filtre l'en- semble et on redissout le résidu solide dans du méthanol On filtre la solution alcoolique, puis on l'évapore pour récupérer le dérivé de porphyrine attendu n 4 avec un rendement de 95 %. Exemple 5: Préparation de l'ester 4-méthyl mercapto- phénylique de la ( 4-(carboxyméthoxy)phényl) tripyridyl porphyrine. Ce dérivé répond à la formule: 0 o S-CH 3 N N N(dérivé n 5) On dissout 2,5 10-5 mol de la ( 4-(carboxymé- thoxy)phényl)tripyridyl porphyrine obtenue dans l'exem- ple 4 dans 30 ml de THF et 5 ml de DMF avec 2,5 10-4 mol de dicyclocarbodiimide (DCC) Lorsque la solution est homogène, on ajoute à O C, 5 10-4 mol de 4-méthylmer- capto phénol Après cette addition, on laisse revenir le milieu réactionnel à la température ambiante et on le maintient sous agitation magnétique pendant 24 heures On évapore le solvant, et on chromatogra- phie sur gel de silice Le milieu réactionnel en utilisant comme éluant un mélange chloroforme - méthanol ( 97:3) On obtient ainsi le dérivé n 5 avec un rendement de 78 %. Ses caractéristiques physicochimiques sont les suivantes: Spectrométrie U V visible (CH C 13) A(ennm): 417; 513; 548; 588; 644,5. 1 H RMN (CDCL 13) (ppm): 8,94 ( 2 H, d); 8,81 ( 2 H, d); 8,85 ( 4 H, s); 9,06 ( 6 H, m); 8,17 ( 6 H, m); 8,12 ( 2 H, m); 7,33 ( 2 H, m); 2,88 NH. Exemp Le 6: Préparation du chlorure de ( 3-nitro 4-fluoro phényl)triméthylpyridylium phorphyrine. Ce dérivé répond à la formule: CH 3 (dérivé n O 6) -16 0- CH 3 On dissout 1,3 10-4 mol de la ( 3-nitro 4-fluorophényl)tripyridyl porphyrine obtenue dans l'exemple 1 dans 10 ml de DMF et 20 ml de iodométhane. On maintient la solution à 40 C pendant 2 heures sous agitation magnétique Après ce temps, on laisse revenir à la température ambiante, puis on ajoute ml d'éther éthylique pour précipiter la porphyrine. On récupère celle-ci par filtration, on la sèche, puis on la redissout dans du méthanol et on la chroma- tographie sur une résine anionique échangeuse d'ions chlorure On récupère ainsi le chlorure en solution dans le méthanol, on l'évapore à sec et on le sèche sous vide. On obtient ainsi le chlorure, soit le dérivé n 6, avec un rendement de 88 %. Ses caractéristiques physicochimiques sont les suivantes: Spectrométrie UV visible (méthanol))(en nm): 418; 512,5; 549,5; 589; 646,5. 1 H RMN (CD 30 D) ( a ppm): 9,05 ( 8 H, m, L); 9,39 ( 6 H, m); 8,93 ( 6 H, m); 9,2 à 8,95 ( 2 H, m) 8,71 ( 1 H, m); 2,92 (NH). Exempte 7: Préparation du chlorure de ( 4-fluorophé- nyl)triméthylpyridylium porphyrine. * Ce dérivé répond à la formule: H 3 Y > -drv Nn F 7 CH 3 On suit Le même mode opératoire que dans l'exemple 6 sauf que l'on part de 1,3 10-4 mol de la ( 4-fluorophényl)tripyridyl porphyrine obtenue dans L'exemple 2. On obtient ainsi le chlorure (dérivé n 7) avec un rendement de 87 %. Ses caractéristiques physico-chimiques sont les suivantes: Spectrométrie UV visible (méthanol), A (en nm); 422; 514,5; 551; 589,5; 646,5 1 H RMN (CD 30 D) a (ppm): 9,11 ( 8 H, m L); 9,39 ( 6 H, d)8,97 ( 6 H, d); 8,18 ( 2 H, m); 7,54 ( 2 H, m); 2,90 (NH). Exemp Le 8: Préparation du chlorure de ( 4-(carboxymé- thoxy) phényl)triméthylpyridylium porphyrine. Ce dérivé répond à la formule O-CH 2-COOH H 3 C-N N, ' '+ CH 3 (dérivé n 8) N 35 N N I H 3 C H 3 c On suit le même mode opératoire que dans l'exemple 6 pour préparer ce chlorure, sauf que l'on part de 1,3 10-4 mol de la ( 4-(carboxyméthoxy)phé- nyl)tripyridyl porphyrine obtenue dans l'exemple 4. On obtient ainsi le chlorure (dérivé n 8) avec un rendement de 70 %. Ses caractéristiques physico-chimiques sont les suivantes: Spectrométrie UV visible (Me OH) X(nm): 427,5; 518,5; 556; 592; 627,5. 1 H RMN (CD 30 D) a ( ppm): 9,05 ( 8 H m, l); 9,37 ( 6 H, d); 8,93 ( 6 H, d); 8,09 ( 2 H, m); 7,37 ( 2 H, m); 2,96 (NH). Exemple 9: Préparation du chlorure de la (( 3-nitro 4-fluoro)phényl) triméthyl pyridylium porphyrine d'indium (dérivé n 9). Dans cet exemple, on insère de l'indium dans la porphyrine fluorée quaternisée obtenue dans l'exemple 6 en utilisant un mélange isotopique d'indium. On évapore à sec sous courant d'azote une m Ci de trichlorure d'indium en solution chlorhy- drique Après évaporation, on ajoute 1,05 10-7 mol de trichlorure d'indium 115 et 1,40 10-7 mol de la porphyrine quaternisée (dérivé n 6) de l'exemple 6 en solution dans un mélange d'acide acétique et trifluoroacétique ( 96,7 et 3,3 %) On porte la solution au reflux pendant 3 heures sous agitation magnétique. On ajuste le p H de la solution à 4-5 par addition de soude 1 M On chromatographie le produit sur une résine anionique et on le récupère par fraction de lml On obtient ainsi le chlorure de la (( 3-nitro 4-fluoro) phényl) triméthylpyridylium porphyrine de l'indium avec un rendement de 75 %. Exempte 10: Préparation du chlorure de la ( 4-fluoro- phényl)triméthyl pyridy Lium porphyrine de L'indium(dérivé n 10). On suit le même mode opératoire que dans l'exemple 9, sauf que l'on part de La porphyrine obtenue dans l'exemple 7 (dérivé n 7). On obtient dans ces conditions le chlorure de la ( 4-fluorophényl) triméthylpyridylium porphyrine de l'indium avec un rendement de 85 %. Exempte 11: Préparation du chlorure de la ( 4-(carboxyméthoy)phényl) triméthyl pyridylium porphyrine de l'indium (dérivé no 11). On suit le même mode opératoire que dans l'exemple 9, sauf que l'on part de la porphyrine de l'exemple 8 (dérivé n 8). On obtient ainsi le chlorure de la ( 4 (car- boxyméthoxy)phényl) triméthyl pyridylium porphyrine de l'indium avec un rendement de 87 %. Exempte 12: Préparation de l'ester 4-méthylmercapto- phénylique de la ( 4-(carboxyméthoxy)phényl)tripyridyl porphyrine de l'indium (dérivé n 12). Dans cet exemple on utilise également un mélange isotopique d'indium. On évapore à sec sous courant d'azote lm Ci de trichlorure d'indium 111 en solution chlorhy- drique Lorsque l'évaporation est terminée on ajoute 1,05 10-7 mol de trichlorure d'indium 115 et 1,40 10- 7 mol de la porphyrine de l'exemple 5 en solution dans un mélange d'acides acétique et trifluoroacétique ( 96,7 et 3,3 %) On porte la solution au reflux pendant 3 h sous agitation magnétique Lorsque la réaction est terminée, on ramène le p H à 4-5 par addition de soude 1 M On extrait ensuite la métalloporhyrine par extraction chloroformique ( 2 fois 10 ml), on récupère la phase organique et on l'évapore. On obtient ainsi l'ester 4-méthylmercapto- phénylique de la ( 4 (carboxyméthoxy)phényl)tripyridine porphyrine de l'indium avec un rendement de 53 %. Ce rendement qui est plus faible que dans le cas des porphyrines précédentes confirme l'instabilité de l'ester en milieu acide. Exempte 13: Préparation du chlorure de l'ester 4-méthylmercaptophénylique de la ( 4-(carboxyméthoxy)- phényl)triméthylpyridylium porphyrine de l'indium. On dissout dans 5 ml d'iodure de méthyle, 7.10-8 mol de la porphyrine d'indium obtenue dans l'exemple 12 et on porte le milieu réactionnel à C pendant 2 h sous agitation magnétique On évapore ensuite l'iodure de méthyle en excès, on reprend la porphyrine quaternisée par 2 ml de méthanol et on la chromatographie sur une résine anionique échan- geuse d'ions chlorure et on l'évapore à sec On obtient ainsi la porphyrine quaternisée de l'indium avec un rendement de 74 %. Exempte 14: Préparation d'un composé conjugué de chlorure de ( 3-nitro 4-fluorophényl)triméthylpyridy- lium porphyrine de l'indium et de sérum albumine bovine (BSA). Dans cet exemple, on utilise la porphyrine quaternisée et métallée obtenue dans l'exemple 9 et on la couple avec une molécule biologiquement active constituée par BSA. On dissout 6,9 10-8 mol de la porphyrine métallée de l'exemple 9 dans 200 ul d'eau et on ajoute lml de BSA à 30 % dans l'eau On laisse l'ensemble à la température ambiante et sous agitation pendant 1 h 30, puis on chromatographie sur une colonne de ml de gel Sephadex G 75 On récupère le composé conjugué par fractions de lml entre la 3 è et la 8 è fraction Le rendement est de 95 %. Exempte 15: Préparation du composé conjugué du chlorure de ( 4fluorophényl)triméthylpyridylium porphyrine de l'indium 111 et de BSA. On suit le même mode opératoire que dans l'exemple 14, sauf que l'on part de la porphyrine métallée obtenue dans l'exemple 10. On obtient ainsi le composé conjugué avec un rendement de 97 %. Exempte 16: Préparation du composé conjugué du chlorure de l'ester 4méthylmercaptophénylique de la (( 4-méthoxycarboxy)phényl)triméthyl pyridylium de l'indium 111 et de BSA. On suit le même mode opératoire que dans l'exemple 14, sauf que l'on utilise la porphyrine de l'exemple 13 On obtient ainsi le composé conjugué avec un rendement de 67 %. Exempte 17: Préparation du composé conjugué du chlorure de la (( 4-méthoxycarboxy)phényl) triméthyl- pyridylium porphyrine de l'indium 111 et de BSA. On dissout 6,90 10-8 mol de la porphyrine d'indium obtenue dans l'exemple 11 dans 200 p L d'eau et on y ajoute lml de BSA à 30 % dans l'eau. On ajoute ensuite 1,30 10-5 mol de N-hydroxysuccinimi- de et 1,30 10-5 mol d'éthyldiméthylaminocarbodiimide. On laisse le milieu réactionnel pendant 1 h 30, puis on chromatographie sur colonne de gel Sephadex G 75 et on récupère le composé conjugué par fractions de lml entre la 3 è et la 8 è fraction On obtient ainsi ce composé avec un rendement de 38 %. Exempte 18: Préparation d'un composé conjugué de chlorure de ( 3-nitro 4-fluorophényl)triméthyl pyridy- lium porphyrine d'indium et d'un anticorps. L'anticorps utilisé est un anticorps monoclonal anti ACE (anti-antigène carcinoembryon- naire) Cet anticorps est dirigé contre les antigènes rs 2656866 exprimés par les tumeurs colorectales. On introduit, dans lm L d'une solution de bicarbonate de sodium 0,5 M, 2,6 10-2 pmol de l'anti- corps et 2,6 10-1 pmol de la porphyrine d'indium obtenue dans l'exemple 9 Après 12 h de contact, on chromatographie le composé conjugué anticorps-por- phyrine sur colonne de gel Sephadex G 100 préalablement saturé en sérum albumine humaine (HSA) On récupère le composé conjugué par fractions de lml entre la 4 è et la 7 è fractions. On vérifie le couplage par centrifugation sur une membrane qui laisse passer les molécules ayant une masse molaire inférieure à 50000 Le rende- ment de couplage est de 60 %. L'immunoréactivité du complexe est égale à 45 % et le nombre de porphyrines par anticorps est de 10. Exemple 19: Préparation d'un composé coniugué de la porphyrine métallée obtenue dans l'exemple 10 et d'un anticorps monoclonal anti ACE. On suit le même mode opératoire que dans l'exemple 18 et on obtient le composé conjugué corres- pondant ayant 10 porphyrines par anticorps Le rende- ment de couplage est de 75 %. Exemple 20: Préparation du composé conjugué du chlorure de l'ester 4méthylmercaptophénylique de la ( 4-(carboxyméthoxy)phényl) triméthylpyridylium porphyrine de l'indium et de l'anticorps anti ACE. On ajoute 12,5 10-2 pmol de la porphyrine obtenue dans l'exemple 13 à 2,6 10-2 pmol de l'anticorps ACE, puis on complète le volume à lml par addition d'eau (p H de 6 à 7) Apres un temps de contact de 2 h, on purifie le composé conjugué porphyrine-anticorps par chromatographie sur phase anionique Le rendement de coupage 35. anionique Le rendement de couplage est de 35 %. B 10302 MDT La stabilité des composés conjugués obtenus dans les exemples 18 à 20 est très bonne En effet, après 48 h à la température ambiante, la mesure de l'activité restante après une nouvelle centrifugation sur une membrane "centricon" montre que Les composés conjugués sont intégralement conservés. REVENDICATIONS 1 Dérivé de porphyrine répondant à la R 1 R 1 R 2 N MHN R 1 (I) dans laquelle les R 1 représentent un radical pyridy- le, et R 2 représente un radical choisi parmi les radicaux répondant aux formules: N 02 X X o 3-(CH 2)n-COOH; 2 O R 3-(CH 2)n-COO O dans lesquelles X représente F, Cl ou Br, R 3 est une simple liaison, S ou O, N est un nombre entier de 1 à 7 et R 4 est un radical alkyle en C 1 à C 4, un radical benzyle ou le radical de formule: (R 5) p dans laquelle R 5 est choisi parmi F, Cl, Br, I, NO 2 et le radical de formule SR 6 dans laquelle formule: O X; R 6 est un radical alkyle en C 1 à C 4, p est égal à 1 lorsque R 5 représente NO 2 ou SR 6, p est égal à 4 ou 5 lorsque R 5 représente F, Cl, Br ou I, et R 5 est en position ortho ou para lorsque p est égal à 1; et les sels de pyridylium de ce dérivé de formule (I). 2 Dérivé de porphyrine selon la revendica- tion 1, sous la forme de sel de pyridylium, caracté- risé en ce qu'il répond à la formule: ±R 7 dans laquelle R 2 a la signification donnée dans la revendication 1, R 7 est un radical alkyle en C 1 à C 4, et A est un anion choisi parmi Cl-, Br- et I-. 3 Dérivé selon la revendication 2, carac- térisé en ce que R 7 est le radical méthyle ou éthyle et A représente C 1. 4 Dérivé de porphyrine répondant à la formule: R 1 RN N R 1 Mo se R 2 (III) R 1 dans laquelle les R 1 représentent un radical pyridy- le, et R 2 représente un radical choisi parmi les radicaux répondant aux formules: NO 2 X X; X X /; 3 _ -(CH 2)n-COOH; Q 34 1 i CH 2)n-COOR dans lesquelles X représente F, Cl ou Br, R 3 est une simple liaison, S ou O, N est un nombre entier de 1 à 7 et R 4 est un radical alkyle en C 1 à C 4, un radical benzyle ou le radical de formule: (R 5)p dans laquelle R 5est choisi parmi F, CL, Br, I, NO 2 et le radical de formule SR 6 dans laquelle R 6est un radical alkyle en C 1à C 4, p est égal à I lorsque R 5 représente NO 2 ou SR 6, p est égal à 4 ou 5 lorsque R 5 représente F, Cl, Br ou I, R 5 est en position ortho ou para lorsque p est égal à 1, et M est un métal; et les sels de pyridylium de ce dérivé de formule (III). 5 Dérivé de porphyrine selon la revendica- tion 4 sous la forme de sel de pyridylium répondant à la formule: O ±R 7 O ' \ R 2, 3 A (IV) /N N 7 ±R 7 dans Laque L LeR 2 a la signification donnée dans la revendication 4, R 7 est un radical a Lkyle en C 1 à C 4, A est un anion choisi parmi CL-, Br et I-, et M est un métal. 6 Dérivé selon la revendication 5, carac- térisé en ce que R 4 est le radical méthyle ou éthyle, et A représente Cl. 7 Dérivé selon l'une quelconque des revendications 4 à 6, caractérisé en ce que M est un métal radioactif choisi parmi l'indium, le gadoli- nium, l'yttrium, le rhénium, le technétium, l'étain, le gallium, Le cuivre, le zinc et le nickel. 8 Dérivé selon la revendication 7, carac- térisé en ce que M est l'indium-111, le technétium-99 m, le rhénium-186 ou le rhénium-188. 9 Dérivé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que R 2 représente: NO 2 F Dérivé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que R 2 représente: _(o 9 F 11 Dérivé selon l'une quelconque des revendications I à 8, caractérisé en ce que R 2 représente le radical de formule: 0 O (CH 2) n COOH \ dans laquelle N est un nombre entier de 1 à 7. 12 Dérivé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que R 2 représente le radical de formule: O -(CH 2)n COO -( SR 6 dans laquelle N est un nombre entier de I à 7 et R 6 est le radical méthyle ou éthyle. 13 Composé conjugué d'une molécule biolo- giquement active et d'un dérivé de porphyrine répon- dant aux formules: R 1 3 0-R 7 NIIN 2 N R,3 A R 1, " R 2 (I) \ R 2, 3 A (II) N HN CNHN R 1 /7 Rl 4 R M / R 2 ( 3 IA)Ns N( IV) N N R 1 R 1,h±R 7 dans lesquelles R 1, R 2, R 7, A et M ont les significa- tions données dans les revendications 1, 2, 4 et à condition que R 2 ne représente pas le radical de formule: R 3-(CH 2)nCOOR 4 avec R 4 représentant un radical alkyle ou benzyle. 14 Composition pharmaceutique, caractéri- sée en ce qu'elle comprend un dérivé de porphyrine ou un composé conjugué selon L'une quelconque des revendications 1 à 13. Produit radiopharmaceutique pour la thérapie ou le diagnostic, caractérisé en ce qu'il comprend un composé conjugué d'une molécule biologiquement active et d'un dérivé de porphyrine répondant aux formules: R 1 -N N\N R 1 @_±R dans lesquelles R 1, R 2, R 7 et A ont Les significa- tions données dans les revendications 4 et 5 à condition que R 2 ne représente pas le radical de formule: R 3-(CH 2)nCOOR 4 avec R 4 représentant un radical alkyle ou benzyle, et M est un métal radioactif choisi parmi l'indium, le gadolinium, l'yttrium, le rhénium, Le technétium, l'étain, le gallium, le cuivre, le zinc et le nickel. 16 Produit radiopharmaceutique selon la revendication 15, caractérisé en ce que M est l'indium-111, le technétium-99 m, ou le rhénium-186 ou le rhénium-188. 17 Produit radiopharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 15 et 16, caractérisé en ce que la molécule biologiquement active est un anticorps.