FR 2654339 A1 19910517 FR 8914922 A 19891114 Yr La présente invention est relative à de nou- veaux dérivés solubles et non toxiques des macrolides polyéniques basiques et notamment à de nouveaux amino-1- désoxy-1-cétoses Elle est également relative au procédé de préparation de ces dérivés et à leur application en tant que médicaments. Les macrolides polyéniques constituent une classe d'antibiotiques antifongiques présentant un large spectre d'action sur des champignons et des levures pathogènes pour l'homme Ceci est particulièrement vrai pour l'Amphotéricine B (Am B), ar ntifongique à action fongistatique et fongicide à large spectre: Candida albicans, Coccidioïdes immitis, Sporotrichum, Crypto- coccus neoformans, Histoplasma, Blastomyces, Rhizopus orizae, Aspergillus niger, etc Elles sont toujours, malgré l'introduction des imidazoles, le médicament le plus efficace pour bon nombre d'affections. L'Am B possède en outre des propriétés immuno- modulatrices chez la souris et dans une certaine mesure chez l'homme Elle renforce aussi l'action d'un certain nombre de médicaments anti-cancéreux. Toutefois, de par sa nature macrocyclique et son caractère amphotère, l'Am B qui répond à la formule A ci-a Drès:A OU | om ,, S J 4 M A i 1 _I zs 4 4 \>O en solution aqueuse De plus, la toxicité de l'Am B vis-à- vis des cellules animales et en particulier des cellules rénales, des lymphocytes et des érythrocytes, impose d'importantes précautions d'utilisation en clinique. C'est en particulier le cas pour le traitement des my- coses profondes et systémiques qui doivent être traitées par administration intraveineuse. Ces considérations ont conduit de nombreux chercheurs à rechercher des dérivés non toxiques et plus solubles On a ainsi réalisé un grand nombre de dérivés, modifiés soit au niveau de la fonction acide en C 16, soit au niveau de la fonction amine primaire en C 3 ' Il y a lieu de citer notamment les travaux de: BRUZZESE et al, J Pharm sci ( 1975), 64,462: estérification du groupe carboxyle; FALKOWSKI et al Brevet allemand N' 3013631: amidification du groupe carboxyle WRIGHT Brevet Américain N' 4 272 525: estérification du groupe carboxyle et substitution de l'amine en C 3 ' par des acides aminés; SCHAFFNER et BOROWSKI, Antib & Chemo ( 1961), II,724: acétylation de l'amine; SIPOS et KESELSKI Brevet Américain N 4 235 993: substitution du groupe amine par un groupe benzyle; KULBAKH et al Brevet Américain N' 4 C 07 166 forma- tion d'un coclexe N-m y lcane-mat:e FALKOWSKI et ai Brevet Américain N 4 195 172, Brevet Britannique N'1 387 187: glycolisation du groupe amine. On a également tenté d'augmenter la solubilité de l'Amphotéricine B par addition de tensio-actifs ou par la formation de sels (Brevet Européen 31 722) Malheureu- sement toutes ces tentatives ont abouti à des dérivés in- stables en solution ou à des dérivés ayant perdu leurs propriétés antibiotiques. La présente invention s'est par conséquent donné pour but de pourvoir à de nouveaux dérivés de macrolides polyéniques basiques et notamment de l'Am B qui i répondent mieux aux nécessités de la pratique que les dé- rivés antérieurement connus, en ce qu'ils sont solubles, peu ou pas toxiques, en ce qu'ils conservent le caractère amphotère de l'Am B et en ce qu'ils sont stables en milieu aqueux L'on sait depuis fort longtemps (Amadori, 1925) qu'en mi-lieu -acide, les glycosylamines se transforment en amino-1-desoxy-l-cétoses Les mêmes composés peuvent être obtenus directement à partir d'un ose et d'une amine en présence d'un catalyseur approprié, suivant le schéma B: CHNM Ph CH-NH Ph l I I N 2 C OH HOCHHOC S Schéma B HCOH HîOH HCO HCOH I I CH 2 OH CH 20 N-phenyl-D-glycosylamine anilino-1-désoxy-1- D-fructose Cet arrangement est dit d'Amadori et a été décrit plus particulièrement dans Adv Ca-rbohydr Chem ( 1955), 10, 169 Dans leur recherche de dérivés originaux solubles et- peu toxi ques, qui conservent leur stabilité en solution aqueuse, les Inventeurs ont consaptée aue, lors de la condensation d'ur sucre sur la c:z ane p Dria' re ne la mycosamine du macrolide, (qui a été tentée et réalisée par différents chercheurs), la nature du sucre condensé jouait un rôle essentiel sur la solubilité et la stabi- lité des dérivés obtenus Si les différents sucres utili- sés sont théoriquement tous capables de former une glyco- sylamine avec l'Am B, il est apparu que les propriétés de solubilité, la stabilité et les propriétés biologiques dépendaient de l'aptitude de la glycosylamine ainsi for- mée à effectuer un réarrangement d'Amadori. La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de macrolides polyéniques basiques, caractérisés en ce qu'ils comprennent un macrolide polyénique basique N- substitué par un groupe amino-l-désoxy-l-cétose, lui même éventuellement substitué. Au sens de la présente invention on entend par groupe amino-l-désoxycétose tout groupe, résultant de la condensation d'un sucre réducteur, éventuellement substitué, sur une fonction amine, et présentant une fonctionnalité béta-amino-cétone caractéristique. Selon un mode de réalisation préféré des dérivés conformes à l'invention, ils répondent à la formule générale I ci-après: 9-gi I I- 10 I / z dans laquelle: R 1 désigne la partie polyènique et R 2 représente: macrocyclique d'un macrolide __ une structure répondant à la formule (a) ci-après: a /- dans laquelle R 3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle,et R 4 représente un atome d'hydrogène, un groupe méthyle, trichlorométhyle, tertiobutyle, propyle, benzyle, phényle, ou phényle substitué par un ou plu- sieurs groupes méthoxy, nitro ou phosphate, ou bien R 3 et R 4 sont des maillons d'un groupe cycloalkyle, ou bien une structure b répondant à la formule ci-après: 6 b o OR O L' I -a I O dans laquelle R 5 et R 6 sont des groupes alkyle, aryle, ou acyle, ou bien une structure répondant à la formule c ci-après c R 4 OH CH dans laquelle R 7 est un groupe électroattracteur, tel qu'un groupe carboxyle, ester, acyle, amide, nitrile, trihalogénométhyle, ou un groupe hétérocyclique, et R 8 est un groupe hydroxyle, un groupe amine, ou un groupe thiol, ou bien une structure de formule d ci-après, dans laquelle R 9, Ro 10,R 11, représentent des groupes alkyle, acyle ou aryle, et R 12 représente un groupe hydroxyle, amine ou alcoxyle, d OR OR I 5 ou bien un diholoside. De façon avantageuse, les amino-l-désoxy-l-cétoses conformes à la présente invention, contrairement aux glycosylamines décrites dans l'Art Antérieur précédemment -cité qui s'hydrolysent rapidement dans l'eau, sont stables en milieu aqueux neutre ou acide, et présentent des propriétés de solubilisation ou de dispersion dans l'eau très satisfaisantes les propriétés biologiques de la glycosylamine de dé- part et une cytotoxicité réduite par rapport à celle de la glycosylamine de départ. Les dérivés conformes à l'invention peuvent être obtenus sous la forme de sels mixtes dont la nature dépend du catalyseur choisi pour le réarrangement, ou de la mise en oeuvre, consécutive audit réarrangement, d'une étape de déplacement, par un autre sel, du sel mixte obtenu. Suivant un mode de réalisation préféré, les amino-1-désoxy-l-cétoses conformes à l'invention sont sous forme de sels de l'acide de Br Onsted utilisé pour le réarrangement Suivant une modalité particulièrement avantageuse de ce mode de réalisaticn, les amino déscxy-l-cétoses sont sous forme de ses mixes d'zxala:e et d'ammonium. Selon un autre mode de réalisation préféré de l'objet de l'invention, les amino-l-désoxy-l-cétoses sont sous forme de sels de N-méthyl glucamine La présente invention a également pour objet un procédé de préparation des dérivés de macrolides polyéniques basiques conformes à l'invention, caractérisé en ce qu'au cours d'une première étape on forme une glycosylamine par condensation de la fonction amine du macrolide sur le carbone anomérique d'un sucre réducteur, et en ce qu'au cours d'une deuxième étape on réarrange la glycosylamine obtenue, en milieu acide anhydre, pour former un amino-1- désoxy-1-cétose présentant une fonctionnalité béta amino- cétone caractéristique et en ce que l'on sépare, au cours d'une troisième étape, l'amino-l-désoxy-l-cétose obtenu du milieu réactionnel. Suivant un autre mode de réalisation du pro- cédé objet de l'invention, l'étape de condensation a lieu à l'abri de la lumière, sous atmosphère inerte et dans un solvant anhydre, et à une température comprise entre 35 'C et 50 'C. Suivant encore un autre mode de réalisation du procédé objet de l'invention, l'étape de réarrangement est induite par l'addition d'un catalyseur choisi dans le groupe qui comprend les acides de Br 5 nsted, tels que, par exemple, l'acide oxalique ou l'acide acétique, et les ca- talyseurs dits "à méthylène actif", tels que, par exemple, le malonate d'éthyle ou la pentane-2-4-dione. Selon une modalité préférée de ce mode de réa- lisation, la séparation du dérivé obtenu est opérée par addition d'une solution aqueuse de sulfate d'ammonium. Selon une autre modalité préférée de ce mode de réalisation, le sel mixte obtenu peut être déplacé avantageusement par un autre sel Le sel mixte est sus- pendu dans le méthanol puis on ajoute volume à volume une solu ion aqueuse contrenan: i 3 cu v -lents D 'acide de base L'addition de 3 volumes de butanol permet en- suite d'éliminer l'eau azéotropiquement et de récupérer le produit sous forme cristalline. La présente invention a également pour ob 4 et de nouveaux médicaments, caractérisés en ce qu'ils contiennent en tant que constituant actif, au moins l'un des dérivés de macrolides conformes à la présente inven- tion. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend d'autres dispositions, qui ressorti- ront du complément de description qui va suivre. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples de préparation, tests et études pharmacologiques sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLES DE PREPARATION DE DERIVES DE MACROLIDES DE FOR- MULE GENERALE I CONFORMES A L'INVENTION EXEMPLE 1: Obtention d'un sel mixte d'oxalate et d'ammonium de 1-amino-1-deoxy-4,6-0-méthyl-benzylidène-D- fructosyl-Am B (Am B 40 G) Formule IV: 1-amino-l-deoxy-4,6-0-méthyl-benzylidène-D- fructosyl-Am B _ 0 R 4 M 3 IV o 1 oCl o A l'abri de la umière, sous atmcsphèr e, et e conditions strictement anhydres, l'Am B est mise en suspension dans le diméthyleformamide (anhydre, fraiche- ment distillé) Sous agitation magnétique, 1,5 équiva- lents de 4,6-0-méthylbenzylidène-D-alucopyrar nse sont ad- ditionnés, en une fois On porte la température du mé- lange à 38 C et on laisse agiter pendant une période pou- vant aller de 3 heures jusqu'à 12 heures Lorsque la so- lution est parfaitement limpide, le catalyseur est ajouté (un équivalent s'il s'agit d'un acide de Brônsted, tel que l'acide oxalique, 10 % du volume pour un "catalyseur à méthylène actif" et on chauffe pendant encore 24 H Le mé- lange est alors refroidi et le 1-amino-l-déoxy-4,6-0- méthyl-benzylidène-D-fructosyl-Am B est précipité en addi- tionant sous agitation, au goutte à goutte, une solution à 10 % de sulfate d'ammonium dans l'eau La précipitation est parachevée en laissant la suspension pendant 2 H à 4 'C On récupëre alors un produit cristallin jaune clair (après centrifugation et élimination du surnageant, que l'on lave 2 fois avec de l'eau (ou un mélange acé- tone/eau) afin d'éliminer l'excès de carbohydrate de dé- part et toute trace de solvant. Exemple 2: Obtention de sel de N-mrthyl-qlucamine de 1- amino-1 deoxy-4,6-0-méthyl-benzylid 4 ne-D-fructosyl-Am B (Am B 40 F) On prépare le sel de N-méthyl-glucamine de la fonction carboxylique de ce dérivé en suspendant le produit final de l'Exemple 1 dans le méthanol et en ajoutant 2 équiva- lents d'une base polyhydroxylée (N-méthylglucamine) dis- soute dans un volume d'eau équivalent à celui de métha- nol Le mélange devient rapidement limpide et on rajoute alors 3 volumes d'un azéotrope (r -butanol) On évapore sous pression réduite jusqu'à élimination du méthanol et de l'eau Le dérivé recristallise lentement dans le buta- nol résiduel et on laisse la suspension à 4 'C Le produit est récupéré après centrifugaion, lavé 2 fois avec du butan ol puis 2 fois avec de 'éeher Le dérivé es= fina- lement séché sous vide poussé. il Exemple 3 Obtention de sel mixte d'oxalate et d'ammonium de 1-amino-ldéoxy-4,6-diméthoxy-fructosyl-Am B (Am B 42 G) Formule V: 1-amino-1-déoxy4,6-diméthoxy-fructosyl-Am B V o HO Le procédé pour l'obtention de ce sel est similaire à ce- lui utilisé dans l'Exemple 1 sauf que le carbohydrate couplé au macrolide est le 4,6-di-O-méthyl-D-gluco- pyranose. Exemple 4: Obtention de sel de N-méthvl qlucamine de 1- amino-1-déoxy-4,6-d-methoxy- uc csvl-Am B (Aim 542 F) On prspar se le sel de e aonci acide de ce dérivé en suspendant le produit final de l'exemple 3 dans le méthanol puis en suivant le procédé décrit dans l'exemple 2. fk 10 Exemple 5: Obtent d'ammonium de fructosyl-Am B (Am B 20 G) Formule VI: fructosyl-Am B ion de sel mixte d'oxalate et 1-deoxy-1-amino-4,6-0-benzylidène-D- 1-deoxy-1-amino-4,6-0-benzylidène-D- VI ô o'-' Le procédé utilisé pour l'obtention de ce sel est simi- laire à celui utilisé dans l'Exemple 1 sauf que le carbo- hydrate couplé au macrolide est le 4,6-0-benzylidène-D- glucopyranose. 2 ô Exem Dple 6: tention de sels de;_'uluoamine de 1 deoxy1 amino-4,6-0-benzylidène-D-fructosyl-Am B (Am B 20 F) On prépare le sel de N-méthyl-glucamine de la fonction acide de ce dérivé en suspendant le produit final de l'exemple 5 dans le méthanol puis en suivant le procédé décrit dans l'exemple 2. Exemple 7 Obtention de sels mixtes d'oxalate et d'ammonium de 1-deoxy-l-amino-4,6-0-éthylidêne-D- fructosyl-Am B ( Formule VII 1-deoxy-1-amino-4,6-0-éthylidène-D- fructosyl-Am B HD Le procédé utilisé pour l'obtention de ce sel est simi- laire à celui utilisé dans l'exemple I sauf cue le carbo- hydrate couplé au macrolide est Le 4,6-Q-éthylidene-D- glucopyranose. Exemple 8: Obtention de sel de N-méthvl-qlucamine de i- déoxy-1 amino 4,6-0-éthylidène-D-fructosyl-Am B (Am B 22 F) On prépare le sel de N-méthyl-glucamine de la fonction acide de ce dérivé en suspendant le produit final de l'exemple 7 dans le méthanol puis en suivant le procédé décrit dans l'exemple 2. Exemple 9: Obtention de sels mixtes d'oxalate et d'ammonium de 6-déoxy-6-N-acétyl-l-déoxy-1-amino- fructosyl-Am B (Am B 23 G) Formule VIII: 6-déoxy-6-N-acétyl-l-déoxy-l-amino- fructosyl-Am B VII I 0 O CH Le procédé utilisé pour l'obtention de ce sel est simi- laire à celui utilisé dans l'Exemple 1 sauf que le carbo- hydrate couplé au macrolide est le 6-déoxy-6-N-acétyl-D- glucopyranose. Exemple 10: Obtention de sels de N-méthyl-Qlucamine de 6 déoxy-6 N-acétyl-1 déoxy-1 amino-fructosyl Am B (Am B 23 F) On prépare le sel de N-méthyl-glucamine de la fonction acide de ce dérivé en suspendant le produit final de l'exemple 9 dans le méthanol puis en suivant le procédé décrit dans l'exemple 2. Exemple 11: Obtention de sels mixtes d'oxalate et d'ammonium de 1-aminodéoxy-D-arabino-qlucuronyl-Am B par condensation de D-glucurono-6,3lactone et d'Am B (Am B 17 Formule IX: 1-amino-déoxy-D-arabino-glucuronylAm B J 43 IX OH Le procédé utilisé pour l'obtention de ce sel est simi- laire à celui utilisé dans l'Exemple 1 sauf que le carbohydrate couplé au macrolide est le D-glucurono-6,3- lactone. Exemple 12: Obtention de sels de N-méthvl-qlucamine de 1-amino-déoxy-D arabino-glucuronyl-Am B par condensation de D-glucurono-6,3-lactone et d'Am B (Am B 17 F) On prépare le sel de N-méthyl-glucamine de la fonction acide de ce dérivé en suspendant le produit final de l'exemple 11 dans le méthanol puis en suivant le procédé décrit dans l'exemple 2. Exemple 13: Obtention de sels mixtes d'oxalate et d'ammonium de 1-amino-l-déoxy-D-arabino-glucuronamidyl- Am B (Am B 12 G) Formule X: 1-amino-1-déoxy-D-arabino-glucuronamidyl-Am B o RI 1 H OH M x Le procédé utilisé pour l'obtention de ce sel est simi- laire à celui utilisé dans l'Exemple 1 sauf que le carbohydrate couplé au macrolide est le glucuronamide. Exemple 14: Obtention de sels de N-méthyl-qlucamine de 1-amino-1-déoxy-Darabino-qlucuronamidyl-Am B (Am B 12 F) On prépare le sel de N-méthylglucamine de la fonction acide de ce dérivé en suspendant le produit final de l'exemple 13 dans le méthanol puis en suivant le procédé décrit dans l'exemple 2. Exemple 15: Obtention de sels mixtes d'oxalate et d'ammonium de 1,3-di-amino-1,3-di-déoxy-D-arabino- glucuronyl-Am B (Am B 50 G). Formule XI: 1,3-di-amino-1,3-di-déoxy-D-arabino- glucuronyl-Am B I OH Le procédé utilisé pour l'obtention de ce sel est simi- laire à celui utilisé dans l'Exemple 1 sauf que le carbohydrate couplé au macrolide est le 3-amino-3-déoxy- D-glucurono-6,3-lactame. Exemple 16: Obtention de sels de N-méthyl-clucamine de 1,3-di-amino-1,3di-déoxy-D-arabino-qlucuronyl-Am B (Am B 50 F) On prépare le sel de Nméthyl-glucamine de a fonction acide de ce dérivé en suspendan le produf final de l'exemple 15 dans le méthanol puis en suivant le procédé décrit dans l'exemple 2. Exemple 17: Obtention de sels mixtes d'oxalate et d'ammonium de l-amino-ldéoxy-D-arabino-qlucuronyl- -m B (Am B 17 G) par condensation d'acide qlucuronique et d'Am B Le procédé utilisé pour l'obtention de ce sel est simi- laire à celui utilisé dans l'Exemple 1 sauf que le carbohydrate couplé au macrolide est l'acide D-glucuro- nique Le produit obtenu est identique à celui de l'exemple 11. COMPTE RENDU D'ETUDES MICROBIOLOGIQUES ET TOXICOLOGIQUES REALISES POUR METTRE EN EVIDENCE LES PROPRIETES THERAPEU- TIQUES DES DERIVES DE L'Am B DE FORMULZ GENZRALZ I A) ETUDES MICROBIOLOGIQUES A 1: Etude de l'efficacité antibiotique en milieu li- quide de dérivés de 1 'Amfi B sur différentes -levures L'efficacité antibiotique a été testée selon la méthode d'inhibition de croissance en milieu liquide (bouillon Sabouraud) en présence de différentes concentrations des dérivés étudiés. Une suspension de levures a été mise en crois- sance dans du bouillon de façon à obtenir environ 1 102 cellules/ml. Les tubes contenant les différentes concentra- tions de substance antifongique ont été ensemencés avec une même quantité de cellules de levures puis ils ont été incubés à 28 'C avec agitation pendant 18 heures Pour chaque concentration de substance antifongique deux tubes identiques ont été préparés. L'inhibition de croissance fongique selon les différentes concentrations a été évaluée pour chaque molécule en spectrophotométrie à 620 nm et exprimée en pourcentage par rapport à un témoin sans antifongique. A.2: Etude de l'efficacité antibiotique en milieu qélosé de dérivés de l'Amphotéricine B sur As Dergillus L'activité antibiotique a été testée selon la technique de diffusion en milieu gélosé (gélose Sabouraud). L'efficacité de chaque mcolécule a été détermi- née par la taille de la zone d'inhibition de croissance autour d'un disque de papier WHATMAN 3 M imbibé par la substance antibiotique à une concentration donnée. Une suspension de spores d'Aspergillus a été préparée en bouillon, 0,2 ml de cette suspension ont été ensemencé en surface sur le milieu gélosé solidifié de façon à obtenir une nappe homogène de croissance Une fois l'étalement effectué les disques de papier WHATMAN 3 M (diamètre: 1 cm) ont été déposés sur la surface de la gélose puis ont été imbibés de 0,1 ml de substance antibiotique à différentes concentrations. Les doses donnant 50 % d'inhibition de la croissance des espèces S cerevisiae, C neoformans, P orbiculare, C albicans, C albicans B 2630, et les doses donnant une zone d'inhibition de la croissance des espèces A flavus et A fumigatus, de 1 cm autour d'un disque déposé sur milieu de culture solide, déterminées dans les deux cas avec les dérivés 12, 17, 20, 22 et 23 des séries G et F, sont représentées sur les Tableaux 1 et ibis ci-après Ces tableaux montrent que les dérivés de l'Am B préparés selon l'invention conservent donc les propriétés antibiotiques de la molécule dont ils sont issus, l'Am B. TABL AU 1 ACTIVITE ANTIFONGIQUE IN VITRO DES DERIVES DE l'Am B SUR DIFFERENTES ESPECES DE FONGII: COMPARAISON DES SELS SUR LES DIFFERENTS DERIVES DE 1 'Am B IC 50 en Molarité* DERIVES Saccharomyces Cryptoccocus Pytirosporum cerevisiae neoformans orbiculare FUNGIZONE++ N D 5 10-8 1,5 10-8 Am B' 5,4 10-7 8 10-8 DIFFERENTES ESPECES DE FONGII: COMPARAISON DES SELS SUR LES DIFFERENTS DERIVES DE l'Am B IC 50 en Molarité* DERIVES Candida Candida Aspergillus** Aspergillus* albicans albicans flavus fumigatus B 2630 FUNGIZONE 1,9 10-8 8 10-8 N D N D. Arm B' 8 10-8 3,5 10-7 5 10-5 5 10-5 Série F Am B 12 9 10-8 2,4 10-7 3 104 8 10-5 Am B 17 1,3 10-7 N D 2 10-4 2 10-4 Amb 20 8,5 10-8 1,5 10-7 1,5 10-4 2 10-4 Am B 22 5,6 10-7 N D 1,5 10-4 5 10-4 Am B 23 4 10-7 N D 6 104 2 10-4 Série G Am B 12 1 10-7 N D 9 10-5 1 10-4 Am B 17 1,2 10-7 N D 9 10-5 3,5 10-5 Am B 20 1 10-7 N D 6 10-4 1,3 10-4 Am B 22 9 10-8 N D 9 105 1 10-4 Am B 23 1 10-7 N D 5 04 9 10-5 Tableaux 1 et Ibis Série F: Catalyse par l'acide oxalique, sel de NMG Série G: Catalyse par l'acide oxalique, sel mixte d'ammonium et d'oxalate (*) IC 50 = concentration inhibant 50 % de la croissance des germes (') Am B dissous dans une solution glucosée à 5 % (**) concentration donnant une inhibition de la croissance de 1 cm autour d'un disque en milieu solide (+ +) marque déposée B) ETUDES TOXICOLOGIOUES Les propriétés toxiques des dérivés ont été étudiées sur des globules rouges humains et murins ainsi que sur des cellules lymphoïdes du sang périphérique, de la moelle osseuse, du Thymus chez l'Homme, sur les lymphocytes T et B sphériques de la souris et sur deux lignées tumorales: XG 3 (souris)j Daudi (Homme). B.1: Etude de la toxicité sur les globules rouges Toutes les solutions des dérivés de l'Am B conformes à l'invention sont préparées extemporanément en diluant 4 mg des molécules dans 100 gl de solution de glucose à 5 % puis, après 15 minutes à l'abri de la lu- * mière, on ajoute 100 Ri d'eau distillée stérile et on complète avec une solution de glucose à 5 % pour obtenir des solutions mères à 4 mg/ml Pour étudier comparativement les effets de l'Am B, 4 mg de FUNGIZONE sont dilués dans 1 ml de glucose à 5 %. Les cellules sont préparées en déposant lml de sang périphérique prélevé et dilué au demi sur du Ficoll- hypaque pour éliminer les lymphocytes, puis en centrifu- geant 20 min à 2000 rpm Le culot de globules rouges est récupéré, lavé une fois en Na Cl à 0,9 % puis deux fois en K Cl 150 m M, Tris H Cl 0,5 m M, p H 7,4. On fait ensuite une suspension à 1,25 % dans une solution KC 1 150 m M, Tris HC 1 0,5 m M, p H 7,4 et on en distribue 150 Fi par puits ainsi que 50 Al de chacune des dilutions de dérivés, plus un puits de contrôle (solution de glucose à 5 %). Les cellules sont alors incubées 1 heure 30 à 37 C en étuve humide. Pour évaluer la lyse cellulaire, l'hémoglobine est dosée en prélevant 100 pi de surnageant dans chaque puits et en les diluant dans lml d'eau distillée. On calcule la concentration en hémoglobine en mesurant la densité optique à 540 nm et en tenant compte de l'absorption des dérivés de l'Amphotéricine B. La DL 50 est la dose qui entraîne la lyse de 50 % des hématies (un témoin de lyse de 100 % est obtenu avec l'eau distillée, un témoin de lyse de 0 % est obtenu avec la solution de glucose à 5 %). B.2: Etude de la toxicité sur les cellules nucléées Les solutions de dérivés de l'Amphotéricine B sont préparées d'une façon similaire à celles mentionnées au paragraphe B 1. Les cellules sont préparées en déposant 20 ml de sang dilué au 1/2 avec du Na Cl 0,9 %, sur 10 ml de Ficoll-hypaque et en centrifugeant 30 mn à 2000 pm. L'anneau de cellules est récupéré et lavé deux fois en tampon PBS contenant 5 % de sérum de veau foetal. Les cellules sont préparées en suspendant 1,14 106 cellules/ml dans du RPMI 1640 contenant 2,5 % de sérum de veau foetal et en distribuant 150 il par puits. 50 gl de chaque dilution des dérivés sont ajoutés ainsi qu'un contrôle (solution de glucose à 5 %). Les cellules sont ensuite incubées lh 30 dans une étuve humide à 5 % de C 02, à 37 C ou à une température ambiante. Afin d'évaluer la toxicité des dérivés, on fait une numération cellulaire en présence de bleu de tryptan et on calcule la DL 50 (concentration de dérivé entraînant 50 % de mortalité) par rapport au contrôle (solution de glucose à 5 %) pour chaque concentration de chaque dérivé. Les tableaux 2, 2 bis et 3, 3 bis ci-après montrent que les dérivés préparés selon l'Invention sont beaucoup moins toxiques que l'Amphotéricine B pour les cellules humaines et murines, ceci pouvant varier d'un dérivé à l'autre Le tableau 4 représente une étude comparative in vitro de la toxicité de l'Am B, du dérivé non réarrangé, et du même dérivé réarrangé en utilisant différents catalyseurs. En conclusion, ces études montrent que les dérivés obtenus selon la présente invention conservent les propriétés antibiotiques de l'Am B et que leur toxicité a été perdue totalement ou a diminué considérablement. TABLEAU 2 TOXICITE IN VITRO DES DERIVES DE L'Am B SUR DIFFERENTES CELLULES DE SOURIS: COMPARAISON DES SELS SUR LES DIFFERENTS DERIVES DE l'Am B. DL 50 en Molarité DERIVES GLOBULES CELLULES CELLULES ROUGES T DE GANG + B DE GANG + FUNGIZONE++ 6 10-6 1,5 10-6 2 10-6 SERIE F Am B 12 2 10-5 1 10-5 1 10-5 Am B 17 3 10-5 2 10-5 1,5 10-4 Am B 20 1,210-4 1 10-4 1 10-4 Am B 22 9 10-5 2 10-5 2 10-5 Am B 23 1,2 10-5 N D N D. SERIE G Am B 12 2 10-5 N D N D. Am B 17 1 10-5 N D N D. Am B 20 4 10-6 N D N D. Am B 22 1 10-5 N D N D. Am B 23 4 10-6 N D N D. TABLEAU 2 bis TOXICITE IN VITRO DES DERIVES DE L'Am B SUR DIFFERENTES CELLULES DE SOURIS: COMPARAISON DES SELS SUR LES DIFFERENTS DERIVES DE l'Am B. DL 50 en Molarité DERIVES THYMOCYTES X 63 ** FUNGIZONE++ 2 10-6 4 10-5 SERIE F Am B 12 4 10-6 > 1 10-3 Am B 17 8 10-6 > 1 10-3 Am B 20 8 10-6 > 1 10-3 Am B 22 3,5 10-6 > 1 10-3 Am B 23 3 10-6 > 1 10-3 SERIE G Am B 12 5 10-6 5 10-4 Am B 17 5 10-6 1,5 10-4 Am B 20 4 10-6 1,5 10-4 Am B 22 5 10-6 4 10-4 Am B 23 2,5 10-6 5 10-4 SERIE F: catalyse par l'acide oxalique, sel de NMG SERIE G: catalyse par l'acide oxalique, sel mixte d'ammonium et d'oxalate (+) gang: ganglions paraaortiques et inguinaux (**) X 63: lymphome B murin (++) marque déposée TABLEAU 3 TOXICITE IN VITRO DES DERIVES DE L'Am B SUR DIFFERENTES CELLULES HUMAINES: COMPARAISON DES SELS DES DIFFERENTS DERIVES DE 1 'Am B DL 50 en Molarité DERIVES PBL GLOBULES MOELLE ROUGES OSSEUSE FUNGIZONE++ 3,5 10-5 3 10-6 2 10-4 SERIE F Am B 12 > 1 10-3 1 10-4 > 1 10-3 Am B 17 > 1 10-3 2 10-4 > 1 10-3 Am B 20 > 1 10-3 2 10-4 1 10-3 Am B 22 > 1 10-3 1 10-4 1 10-3 Am B 23 8 10-5 5 105 N D. SERIE G Am B 12 4,5 10-5 3 10-5 N D. Am B 17 1 10-5 5 10-5 N D. Am B 20 3 10-5 8 10-5 N D. Am B 22 3 10-5 5 10-5 N D. Am B 23 8 10-6 1 10-5 N D. TABLEAU 3 bis TOXICITE IN VITRO DES DERIVES DE L'Am B SUR DIFFERENTES CELLULES HUMAINES: COMPARAISON DES SELS DES DIFFERENTS DERIVES DE l'Am B DL 50 en Molarité DERIVES THYMOCYTES DAUDI** FUNGIZONE++ 6 10-5 2 10-5 SERIE F Am B 12 > 3 10-4 > 1 10-3 Am B 17 > 3 10-4 > 1 10-3 Am B 20 > 3 10-4 > 1 10-3 Am B 22 > 3 10-4 > 1 10-3 Am B 23 N D > 1 10-3 SERIE G Am B 12 N D > 3 10-4 Am B 17 N D 3 10-4 Am B 20 N D 5 10-4 Am B 22 N D 7 10-4 Am B 23 N D 3 10-4 SERIE F: catalyse par l'acide oxalique, sel de NMG SERIE G: catalyse par l'acide oxalique, sel mixte d'ammonium et d'oxalate (**) DAUDI: lymphome B humain (++) marque déposée TABLEAU 4 TOXICITE IN VITRO DU DERIVE Am B 12 SUR LES PB Ls HUMAINES: COMPARAISON DE DIFFERENTS CATALYSEURS DERIVE DL 50 FUNGIZONE++ 3,5 10-5 Sans catalysera) 8 10-5 sel de NMG Malonate d'éthyle(b) > 1 10-3 sel de NMG acide oxalique(b) > 1 10-3 sel de NMG acide acétique(b) 2 10-4 sel de NMG (a) dérivé non réarrangé (b) catalyseur utilisé pour le réarrangement (++) marque déposée C) ETUDE DE LA STRUCTURE ET DE LA STABILITE DES DERIVES SELON LA PRESENTE INVENTION C.1 Etude analytique de la structure C l a Spectre UV Les spectres UV des dérivés d'Am B selon l'invention montrent la conservation de la structure polyénique de l'Am B. La figure 1 représente en exemple le spectre UV de l'Am B 12 F. C.1 b RMN du carbone Les spectres RMN 13 C des dérivés selon l'invention permettent de confirmer leur structure amado- rienne. Le spectre 13 C RMN de l'Am B 12 F est donné en exemple, figure 2. C.l c: HPLC Les spectres HPLC en phase inverse du dérivé Am B 12 réarrangé et du dérivé correspondant non réarrangé sont donnés en exemple à la figure 3. Les conditions expérimentales sont les suivantes: Eluant: (Isocratique) Tampon citrate-phosphate p H 5: 63 % Acétonitrile: 30 % Tétrahydrofuranne: 7 % Préparation du tampon: Solution dibasique de phosphate de sodium 0,2 M = 125 ml Solution d'acide citrique 0,1 M = 135 ml Eau distillée QSP 1000 ml (Solution dibasique de phosphate de sodium 0, 2 M: 53,65 g de Na 2 HPO 4, 7 H 20 dans 1000 ml d'eau distillée ou 71,7 g de Na 2 HPO 4, 12 H 20 dans 1000 ml d'eau distillée. Solution d'acide citrique 0,1 M: 19,21 g d'acide citrique dans 1000 ml d'eau distillée) Le p H du tampon est ajusté à PH 5 Débit: 1 à 1,2 ml/mn Détecteur: = 405 nm Colonne: LKB, C-18, 5 pm, 4 mm/100 ml Concentration échantillon: 1 mg/ml Volume d'injection: 1 La figure 3 a représente le spectre du produit non réarrangé; un pic principal, correspondant à un temps de rétention de 4,94 dans les conditions opératoires définies cidessus, est nettement visible La figure 3 b représente le spectre du produit réarrangé; le pic correspondant au temps de rétention de 4,94 n'apparaît plus; en revanche, deux pics correspondant respectivement à des temps de rétention de 2,58 et 4,78 sont visibles C.2 Solubilité des dérivés d'Am B suivant la présente invention L'Am B ou les dérivés obtenus sont dissous à température ambiante dans une solution de glucose à 5 %, jusqu'à saturation. Dans ces conditions, l'Am B est insoluble. Le dérivé Am B 17 est soluble jusqu'à une concentration de 20 mg/ml. Le dérivé Am B 20 est soluble jusqu'à une concentration de 40 mg/ml. Le dérivé Am B 12 est soluble jusqu'à une concentration de 150 mg/ml. C.3 Stabilité des dérivés d'Am B suivant la présente invention C 3 a: en solution La dégradation des dérivés au cours du temps est suivie par HPLC La figure 4 montre les résultats obtenus (pourcentage du dérivé non dégradé) pour une solution à 2,5 mg/ml d'Am B 12 à 370 C. La figure 5 montre les résultats obtenus avec une solution d'Am B 20 à 37-C température ambiante 4-C C 3 b: sous forme de poudre Lorsque -les dérivés selon la présente invention sont conservés sous forme de poudre, ils restent stables pendant plusieurs mois REVENDICATIONS 1 ') Dérivés de macrolides polyéniques basiques, caractérisés en ce qu'ils comprennent un macrolide polyénique basique N-substitué par un groupe amino-1-désoxy-1-cétose, lui même éventuellement substitué 2) Dérivés de macrolides polyéniques basiques selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale (I) ci-après: I Mo I dans laquelle: R 1 désigne la partie macrocyclique d'un macrolide polyènique et R 2 représente une structure répondant à la formule (a) ci- après: a -c'le" dans laquelle R 3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, et R 4 représente un atome d'hydrogène, un groupe méthyle, trichlorométhyle, tertiobutyle, propyle, benzyle, phényle, ou phényle substitué par un ou plusieurs groupes méthoxy, nitro ou phosphate, ou bien R 3 et R 4 sont des maillons d'un groupe cycloalkyle, ou bien une structure répondant à la formule (b) ci-après: o R 6 o ON o Roc H O b dans laquelle R 5 et R 6 sont des groupes alkyle, aryle, ou acyle, ou bien une structure répondant à la formule (c) ci-après c / dans laquelle R 7 est un groupe électroattracteur, tel qu'un groupe carboxyle, ester, acyle, amide, nitrile, trihalogénométhyle, ou un groupe hétérocyclique, et R 6 est un groupe hydroxyle, un groupe amine, ou un groupe l thiol, ou bien une structure de formule (d) ci-après, dans laquelle R 9, R 10, Rll, représentent des groupes alkyle, acyle ou aryle, et R 12 représente un groupe hydroxyle, amine ou alcoxyle, 40 o RQ o d OR Ro ou bien un diholoside. 3 ') Dérivés selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisés en ce que lesdits dérivés sont sous forme de sels d'un acide de Brônsted. 4 ') Dérivés selon la revendication 3, ca- ractérisés en ce que lesdits dérivés sont sous forme de sels mixtes d'oxalate et d'ammonium. ') Dérivés selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisés en ce que lesdits dérivés sont sous forme de sels de N-méthyl glucamine. 6 ') Dérivés selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisés en ce que le macrolide polyènique est l'Amphotéricine B. 7 ') Dérivé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il est le 1- amino-1-déoxy-D-arabino-glucuronyl-Am B répondant à la formule (IX) suivante, ax ou son sel de N-méthyl glucamine, ou son sel mixte d'oxalate et d'ammonium. 8 ') Dérivé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il est le 1- amino-l-déoxy-D-arabino-glucoronamidyl-AMB répondant à la formule (X) ciaprès: X C'Il OH ou son sel de N-méthyl-glucamine, ou son sel mixte d'oxalate et d'ammonium. 9 ') Dérivé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il est le 1- deoxy-1-amino-4,6-0-benzylidène-D-fructosyl AMB de formule (VI) ci-après: Ol? 1 O VI ou son sel de N-méthyl-glucamine, ou son sel mixte d'oxalate et d'ammonium. ) Procédé de préparation des dérivés selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il comprend la combinaison des étapes suivantes, dans l'ordre suivant: a) une étape de condensation d'un macrolide polyènique et d'un sucre réducteur, éventuellement substitué, apte à effectuer un réarrangement d'Amadori; b) une étape d'induction du réarrangement d'Amadori par un catalyseur pris dans le groupe constitué par les acides de Brônsted et les catalyseurs à méthylène actif, c) une étape de séparation du dérivé réarrangé du milieu réactionnel. 11 ) Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'il comprend en outre une étape de préparation du sel de N-méthyl-glucamine du dérivé réarrangé. 12 ') Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que le sucre réducteur subissant le réarrangement est le D-glucopyranose ou un de ses dérivés. 13 ') Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce le sucre réducteur subissant le réarrangement est l'acide 8-D-glucuronique ou un de ses dérivés. 14 ') Médicaments, caractérisés en ce qu'ils contiennent, en tant que principe actif, un dérivé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9.