FR 2650503 A1 19910208 FR 9009493 A 19900725 La presente invention se rapporte à une composition pharmaceutique contenant de la N-acetyl-cysteine cocme ingredient actif et, plus particulièrement, elle se rapporte a une composition pnarmaceutique permettant d'obtenir dans le sang, par administration orale, des teneurs plus elevees en medicament non modifié. La i-acetyl-cysteine (Merck index X Ed., no. 82, page 13) qui sera ciapDrès désignee iplus brièvement par NAC, est un medicament connu utilise en thérapie humaine pour son activité mucolytique, mais qui possede plusieurs autres propriétés utiles actuellement à l'étude a cause de son action expectorante, bronchorrhéique et =ucoregulatrice, de son aptitude a restaurer les niveaux réduits de glumathion (GSH), de son activité en tant cu'adjuvant du système immunitaire débilité par des infections virales incluant celles provoquées par le virus HIV. de son action directe ou indirecte en tant que "eliminateur de radicaux libres" (free radical scavanger) par exemple dans la prévention des tumeurs des poumons. On connait plusieurs compositions pharmaceutiques contenant de la NAC et convenant pour différentes voles d'administration telies que les liquides injectables, les sirops, les comprimés, les comprimés à mâcher, les granulés hydrosolubles et les comprimés effervescents. Pour le traitement prolongé et chronique de plusieurs maladies, la voie orale est la plus simple et est celle que les patients préfèrent. Lorsaue la NAC est administrée par la voie orale, elle subit, lors de son passage successivement a travers les intestins et a travers le foie, une dégradation Cprincipaiement une desacetviation>, qui reduit la disponibilite de NAC sous une forme non modifiee dans le flux sanguin. Même si ce zhenomene bien connu n'a pas emDeche l'utilisation par vole orale de medicaments a base de NAC.:1 est bien evident cu'il conviendrait de pouvoir disposer d'une for=e zharmaceutiaue administrable oralement oui permettrait d'atteindre des niveaux plus iélevas de NAC non modifiée dans le sanz. Plus:eurs sels de NAC, tels aue ceux formes avec des metaux alcalins cu avec des amino-acides basiques, ont ete décrits. Cependant, aucun de ces produits n'est capable d'accroître les niveaux de NAC non modifiée dans le sang par administration orale. Le trihydroxvmethvl-aminomethane une meilleure biodisponibilite. Comme cela sera démontre dans les exemples qui suivent, dans le cas de NAC, le problème indiqué ci- dessus ne consiste pas en un problème de solubilité. En fait, la NAC est en elle-même suffisamment soluble et ses sels très solubles tels que ses sels alcalins n'augmentent pas les niveaux de NAC non modifiée dans le sang. D'autre part, le problème ne peut pas être simplement réduit à un problème d'absorption, parce que dans le cas de la NAC ce qui est important n'est pas la quantité absorbée mais la quantité de forme non modifiée présente dans le flux sanguin. Deux articles recents [N. Saltzman et al., J. Urol., l16, 846. (1986); J. R. Burns et al., J. Urol., 136, 850; (1986)] concernent des études de laboratoire sur la dissolution de calculs urinaires de cystine. Les deux articles décrivent l'emploi- de solutions de NAC ou de THAM ou de leurs melanges. Les auteurs des deux articles suggèrent d'utiliser lesdites solutions exclusivement oar irrigation des voies urinaies et ils en arrivent à la conclusion que les melanges de solutionsdeNACet de THAM ne sont pas plus efficaces que les solutions des ingredients employes isolément. La demanderesse a maintenant trouve de facçon surprenante et c'est là l'objet de la présente invention une composition pharmaceutique administrable par voie orale, qui contient de la N-acetyl-cystéine et du trihydroxymethyl-aminomethane dans un rapport molaire compris entre 1:0,8 et 1:1,2, de préférence 1:1, et d'autres additifs communément utilisés dans le domaine pharmaceutique, laquelle composition permet d'obtenir dans le flux sanguin des niveaux plus élevés de NAC non modifiée après administration orale. Le rapport molaire sus-indiqué est celui qui s'est revéle expérimentalement efficace pour le but recherché. même si la demanderesse ne peut pas exclure que des valeurs légèrement en dehors du rapport sus-indiqué soient également efficaces. Par contre, il a été expérimentalement démontré que des valeurs nettement en dehors du rapport sus-indiqué, comme par exemple NAC:THAX = 1:0,5 et NAC:THAM = 1:2 ne sont pas efficaces. Les niveaux de NAC non modifiée obtenus avec les compositions qui sont l'objet de la présente invention sont significativement supérieurs & ceux que l'on peut obtenir en administrant des quantités équimoléculaires de NAC ou de sels de NAC tels que le sel de sodium ou les sels de NAC et d'amino-acides basiques tels que la lysine et l'arginine ou le sel de NAC et de glucosamine. Ce résultat est d'autant plus surprenant si l'on tient compte du fait que si l'on administre des compositions pharmaceutiques contenant différents rapports molaires de NAC et de THAM, on n'observe pas une augmentation des niveaux dans le sang de NAC non modifiée. De fait, comme rapporte ci-dessus, des rapports molaires NAC:THAX de 1:0, 5. mas aussi de 1:2 et de 1:4, Sor.t inefficaces pour ce qui est du but recherché. Les teneurs du sang en NAC non modifiee ont eté determinees chez le rat et chez le chien par utilisation C'un svsteme chromatographie en phase gazeuse- s$ectrometrie de masse (voir.es exemples 1 et 2). e st intéressant d'observer qu'après administration d'une composition contenant NAC et THAM dans le rapport. molaire 1:1, outre l'augmentation significative de la concentration de la NAC pliasmatique non modifiée, laà cuantite absorbee de NAC n'est pas significativement différente que la NAC soit administrée seule ou avec le THAM. Ce resultat a éte mis en évidence par l'administration de NAC radioactive (voir les exemples 1 et 2). Ce fait signifie que, avec la composition objet de la presente invention, la quantité de NAC non modifiée dans le flux sanguin et par conséquent sa disponibilité pour l'accomplissement de son action pharmacologique dans les différents sites d'action sont augmentées sans modification des autres caractéristiques pharmacocinétiques. Les paramètres pharmacocinétiques tels que la demi- vie, les constantes d'absorptlon et d'élimination sont en fait sensiblement les mèmes que la NAC soit admlnistrée seule ou qu'elle soit administrée avec THAN suivant la présente invention. Ces résultats démontrent que, de façon inattendue, seule l'administration orale de NAC et THAX dans un rapport sensiblement equimolaire est capable d'augmenter significativement les valeurs de NAC non modifiée dans le flux sanguin. On prépare les compositions faisant l'obJet de la présente invention d'une manière traditionnelle en mélangeant de façon convenable le mélange de NAC et de THAN avec les excipients et les additifs pharmaceutiques usuels. La source convenable de THAM peut être aussi bien le THAM lui-même qu'un sel de THAM disponible dans le commerce. Les sels preférés de THAN sont ceux formes avec des acides faibles pharmaceutiquement acceptables tels que l'acetate, le carbonate, le citrate et le succinate. Le choix entre le THAN et un sel de celui-ci est fonction de la composition pharmaceutique.a preparer. En fait, étant donne la légère hygroscopicité du THAX, un sel de THAM peut être préféré pour certaines com=ositions solides, conformément à la pratique usuelle en Technologie pharmaceutique. Des compositions convenables sont toutes les formes pharmaceutiques administrables par vole orale autant solides que liquides, comme les comprimés, les gélules, cachets et capsules, les comprimés enrobés de sucre, les comprimés effervescents, les solutions, les.suspensions, les granules et les granulés hydrosolubles. Les compositions qui font l'objet de l'invention seront utilisées en une dose convenable pour fournir la quantité requise de NAC, en tenant compte du fait qu'elles fournissent des niveaux plus élevés de NAC non modifiée dans le sang. La quantité de NAC habituellement administrée à un patient dépend de plusieurs facteurs, incluant la nature de la maladie & traiter. *Des quantités de 100 mg & 1,8 g/jour sont habituellement administrées pour un traitement mucolytiqué, tandis que des quantités allant jusqu'a 34 g/Jour et plus sont habituellement administrées pour d'autres traitements tels sue celui d'une intoxication aigue. Les exemples suivants sont. destines a mieux illustrer. l'invention. ExemDle 1 Des rats Sprague Dawlev ayant jeûne toute la nuit sont divises en 7 groupes de 33 animaux chacun. Ces sent -roupes d'animaux sont traités avec différentes solutions de NAC par voie orale conformément au schema suivant: Groune 1 - SAC (300 mg/kg) dissoute dans l'eau (10. ml/kg) croupe 2 - SAC gCi/kg. - Des échantillons de sang sont prélevés juste avant le traitement et 15, 20, 45, 60, 90, 120, 240, 360, 480 et 1440 minutes après le traitement, au moyen d'une seringue héparinisée. Le sang est immédiatement transféré dans des tubes en plastique contenant du dithionite de sodium (1 mg/5 pl) et de 1'EDTA de sodium 0.02N (200 ml). Le plasma est separe par centrifugation a 5000 x g a 4'C pendant 20 minutes et les echantillons ainsi obtenus sont stockes a -20'C jusqu'a l'analyse. Determination de la quantite totale de NAC non modifiée Aux échantillons de plasma (0,5 ml) on ajoute une solution de dithiothreitol (I mg/kg) dans un tampon PhosPhate de pH 7,4 (0,1 M). Les échantillons sont maintenus a 37'C pendant une heure et on y ajoute un melange acetone:acide formicue = 4:1.lml >. Les proteines sont separees a 20000 x g par 20 minutes par centrifugation. Aux phases surnageantes on ajoute HCI 2M melange acétate d'éthyle:anhydride pentafluoro- propionique = 3:1 Après élimination de l'excès du réactif, le résidu est dissous dans de l'acétate d'éthyle (50 pil) et 1-2 gl de la solution obtenue sont injectés dans le système chromatographie en phase gazeuse-spectrométrie de masse pour l'évaluation de la quantité totale de NAC présente dans le plasma. L'analyse par chromatographie en phase gazeuse est realisée au moyen d'une colonne.capillaire en silice fondue, conformément aux conditions expérimentales suivantes: colonne: "phase liée" (linked phase) SE54, 1=15m, diamétre interne 0,32 mm programme de température: 60'C 50'C/mn 120'C 25'C/um 230'C injecteur: sur la colonne gaz porteur: He (2 ml/mnm) temDerature d'élution: 172'C pour l'étalon interne 183'C pour NAC Spectromtrie de masse: Appareillage:Finnigan-MAT 8222, secteurs doubles magnetique et électrostatique, geomeètrie inverse ionisation Dar imzact d'electrons energie d'lonisation: 70 eV potentiel d'acceleration: S kV courant dans le filament: 3 mA resolution::500 cons des fragments contrô61es: etalon interne m/z 230,1 et 248,1 NAC m/z 360,1 et 392.1. Dans le tableau i suivant, sont rapportees les valeurs de la concentration plasmatique de NAC obtenues a partir de chaque groupe d'animaux traités et exprimees en AUCo-.a,. uI n IqJ o o o ( ó tUI,,) Ló19ó96 tóiO+6t5l; 51ú5ú 6,ú4f6@00 1,ú76c96 8+ "O + 0 8 v *L a(dnoi b:l ia (g adrioa2) Z:l '(S adnoj2) I:l '(b adnoa2) S'O:I '(C adnoâ:) SZ'O:I laodde. al suep WVH OaAie no (2 adno.2) I:T 4aodde. al suep OlDHeN oaAe uosTeuTqwoo ua a (T ednoa2) elnas '(DVN-I1 ap /ToDrf OOT uueuauo.) DVN ap 2X/'uB OC) oP uo;e.4s.uTwpe saade (I/uw) DVN ap nbuewsield uoeauaouoD: I neeIq. La concentration plasmatique de NAC n'est significativement différente des valeurs obtenues après administration de la NAC seule (groupe 1) que pour le groupe d'animaux traités avec la NAC et le THAM dans le rapport 1:1 (groupe 5) ainsi que pour les animaux traités avec la NAC et le THAM dans le rapport 1:0,8 et 1:1,2. Détermination de la radioactivité totale On ajoute des échantillons de plasma (50 Ml) & du Lumagel (10 ml), on les agite puis on les laisse reposer dans le compteur de scintillations Beckman LS 8100 à 'C pendant. 4 heures. On mesure la quantite de radioactivité après le temps de stabilisation.- Les valeurs de radioactivité totale dans le plasma après administration de 300 mg/kg de NAC (contenant lCi/kg de 3H-NAC) (groupe 1) et après administration de la même quantité de NAC avec du THAX dans le rapport 1:1 (groupe 5) sont rapportées dans le tableau 2. Tableau 2: Concentration plasmatique (mg/1) de radioactivité totale après administration de 300 mg/kg de NAC (contenant 100 pCi/kg de H-NAC) (groupe 1) et après administration de la même quantité de NAC avec du THAX dans le rapport 1:1 Group1 Group5 NAC-THAM NAC 1:1 AUto24h 0-24 4048,3+105,9 4243,1+59,3 (mghl) D'après les données rapportées dans le tableau 2, il' est évident que la radioactivité totale présente dans le plasma des animaux du groupe 1 et du groupe 5 ne sont pas significativement différentes c'est-a-dire que la quantite de NAC absorbée est sensiblement égale que la NAC soit administree- telle quelle (groupe 1) ou qu'elle soit administrée en combinaison avec du THAN dans le rapport 1:1 Exem.le 2 Des chiens mâles Beagle ayant jeûné toute la nuit sont divises en 4 groupes de 4 animaux chacun. Les quatre groupes sont traites par voie orale avec différentes solutions de NAC conformément au schéma suivant: GrouDe - NAC %50 mg/kg) dissoute dans de l'eau (1 ml/kg Groupe 2 - NAC (50 mg/kg) et THA! (37,11 mg/kg) (rapport molaire NAC:THAM = 1:i) dissous dans de l'eau (Il ml/kg) Groupe 3 - iysinate de NAC {94,79 mg/kg, correspondant à mg/kg de NAC) dissous dans de l'eau c1 ml/kg) Groupe 4- sel de glucosamine de NAC (104,89 mg/kg, correspondant à 50 mg/kg de NAC) dissous dans de l'eau (1 ml/kg). Pour chaque groupe d'animaux, la dose de NAC (50 ml/kg) contient une quantité de ''C-NAC égale à 20 GCi/kg. Des échantillons de sang sont prelevés au moyen d'une seringue heparinisée Juste avant le traitement et 10, , 30, 45, 60, 120, 240, 360, 480 et 1440 minutes après le traitement. Les échantillons de sang sont traités et stockes suivant le même mode opératoire que celui décrit dans l'Exemple 1. La détermination de la NAC non modifiée présente dans le plasma et celle de la radioactivité totale sont effectuées conformément aux modes opératoires décrits dans l'Exemple 1. Les résultats sont rapportes dans les tableaux 3 et 4 ci-après. Tableau 3: Concentration.plasmatique de NAC (mg/l) après administration de 50 mg/kg de NAC (contenant 20 jCi/kg de I"C-NAC) seule (groupe 1), en combinaison avec du THAH dans le rapport 1:1 (groupe 2), ou sous forme de lysinate de NAC (groupe 3) et de sel de glucosamine de la NAC (groupe 4). Group2 Group3 Groue4 NACupez NAC-THAM NAC-lysinate NAC-glucosamine 1:1 AUCO_ =. 1 57,53+7,29 90,6+10,81 73,37+10,33 55,48+6,21 (mghl-) Remarques concernant le tableau 3: * p NAC-glucosamine (groupe 4). el Gpez Groupe3 Groue4' NAC NAC-THAM NAC-lysinate NAC-glucosamine 1:! AUC0-4h 1864,13+856,57 1170,63+189,94 1247,23+185,18 1394$59+106,11 (mghl) E D'apreés les données rapportées dans le tableau 3, il est evident que l'administration de NAC et de THAX dans le rapport 1:1 est capable d'augmenter la quantité de NAC non modifiee dans le plasma par rapport a l'administration de NAC seule, alors que les sels de NAC formes avec la lysine ou avec la giucosamine fournissent des concentrations plasmatiques de NAC qui ne sont pas significativement différentes de celles fournies par la NAC:seule. Les donnees du tableau 4 montrent que la quantité Fotaie de NAC absorbée n'est pas différente, que la NAC soit administree telle quelle ou conjointement avec une auantite équimoleculaire de THAX, ou sous forme de sel forme avec la lysine ou la glucosamine. Exemple 3 Dn a prépare les compositions suivantes pour administration par la voie orale: - Solutiion Chaque petite bouteille contient: NAC 200 mg THAX 148 me EDTA 2 mg Sorbitol 3 g Eau purifiée q.s. pour 10 ml Les ingrédients sont dissous dans de l'eau purifiée, puis la solution est répartie dans de petites bouteilles en verre convenablement scellées. - Granules Chaque sac contient: NAC 200 mg THAM 119 mE Gomme arabique 100 mg Dextrose 300 mg Arôme de fruit - 50 mg Saccharine 5 mg Saccharose 2226 mg La NAC et le THAM sont tout d'abord granulés separement avec la gomme arabique et le dextrose. Les granulés sont séchés, mélanges avec la saccharine, le saccharose et l'arôme, puis ils sont repartis dans des sacs. - Solution Chaque sac contient: NAC 100 mg THAM 74 mg EDTA 3 mg Arôme citron 50 mg Saccharose 3 g Eau purifiée q.s. pour 10 ml Les ingredients sont dissous dans de l'eau purif-ee, puis la solution obtenue est reêartie dans des sacs - Granuies Chaque petite bouteille contient: NAC 3 THAM 1,780 g m-Hydroxybenzoate de méthyle 0,150 g ?-Hydroxybenzoate de propyle 0,035 g Agent colorant 0,007 g Arôme orange 2,000 g Sorbitol 63, 028 g le THAM est mélange avec les agents de conservation, l'agent colorant et le sorbitol. Il est ensuite melange avec de l'eau, puis granulé et séché. La NAC et l'arôme sont ajoutés et les granulés sont répartis dans de petites bouteilles en verre ayant la couleur de l'ambre. - COmpri=Me mAcher Chaque comprime contient NAC. 600 mg THAM 534.mg Gomme arabique 200 mg Dextrose 600 mg Arome citron 100 mg Saccharine 15 mg Mannitol 251 mg La NIAC et le THAM sont granulés sèparement avec une solution aqueuse de gomme arabique et de dextrose. Les granulés sont sechés, melanges avec l'arôme, la saccharine et le mannitol et ils sont pressés en comzrimes. On prépare une composition similaire en remplaçant le THAM par du carbonate de THAM (807 mg correspondant à 534 mg de THAM). REVENDICATIONS 1.- Composition pharmaceutique administrable par la voie orale, caractérisée en ce qu'elle contient de la N- acétyl-cystéine et du trihydroxyméthyl-aminométhane dans un rapport molaire compris entre 1:0,8 et 1:1,2 ainsi que d'autres additifs utilisés en pharmacie. 2.- Composition pharmaceutique suivant la revendication 1, caractérisée en ce que le rapport molaire de la N-acétyl-cystéine au trihydroxyméthyl- aminométhane est de 1:1. 3.- Composition pharmaceutique suivant la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle est sous forme de comprimés, de gélules, cachets ou capsules, de comprimes enrobés de sucre, de comprimés effervescents, de solutions, de suspensions, de-granulés ou de granulés hydrosolubles.