FR 2658419 A1 19910823 FR 9102058 A 19910215 1 - MEDICAMENT POUR LE TRA-r Mf Nil' DE LA DERMATITE La présente invention se rapporte à un médicament pour le traitement de la dermatite atopique, et plus particu- lièrement à l'utilisation nouvelle d'un lysat bactérien connu, pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement de la maladie précitée. On connaît déjà du brevet suisse CH 633 188, propriété de la même titulaire, un médicament immunobiothérapique contre des maladies infectieuses des voies respiratoires, contenant comme principe actif un lysat bactérien prove- nant d'au moins une des souches suivantes: Staphylococcus aureus 1-049, 1050, 1-051, 1-052, 1-053, I-054 Streptococcus viridans 1-046, 1-047, I-048 Neisseria catarrhalis I-045 et d'au moins une des souches suivantes: Hemophilus influenzae sérotype b NCTC 8467 Diplococcus pneumoniae sérotypes 1, 2, 3, et 47 NCTC 7465, 7466, 7978, 10319 Klebsiella pneumoniae NCTC 204, 5056 Klebsiella ozaenae NCTC 5050 Streptococcus pyogenes groupe A NCTC 8191 Neisseria catarrhalis NCTC 3622, 3625 %, 2 - Les souches NCTC sont cataloguées par la National Col- lection of Type Cultures, Londres, Colindale Avenue 175, Londres NW 9 5 HT (GB) et accessibles au public, tandis que les souches I ont été déposées par la titulaire du brevet précité le 14 mars 1978 auprès de la Collection nationale de cultures de micro-organismes, Institut Pasteur, 28 Rue du Dr Roux, 75724 Paris (FR). Toutes ces souches proviennent de germes responsables des maladies infectieuses des voies respiratoires. Or, le lysat bactérien faisant l'objet du brevet suisse précité a démontré un effet remarquable, et ceci de manière tout à fait inattendue, sur la dermatite atopique qui est une maladie chronique déterminée héréditairement. De récentes études ont montré que la dermatite ato- pique serait liée à un déficit immunitaire complexe, ca- ractérisé notamment par de faibles réactions d'hypersensi- bilité retardée à médiation cellulaire et une augmentation de la synthèse des immunoglobulines E (Ig E) En plus, la voie gastro-intestinale peut servir de porte d'entrée pour les allergènes responsables de la maladie. En conséquence, l'objet de la présente invention consiste en l'utilisation d'un lysat bactérien tel que dé- fini dans la revendication 1 pour la fabrication d'un mé- dicament destiné au traitement de la dermatite atopique. De préférence, le lysat bactérien provient de toutes les souches mentionnées dans la revendication 1, et se présente sous une forme concentrée et lyophilisée Le mé- dicament est réalisé de préférence sous la forme de cap- 3 - sules pour une administration par voie orale contenant chacune 7 mg de lysats bactériens lyophilisés. On décrira maintenant, à titre d'exemple, la prépara- tion des lysats bactériens, ainsi qu'une forme galénique du médicament et les résultats de tests cliniques. Préparation des lysats bactériens Un milieu de culture standard stérile de base peut être préparé pour toutes les souches; il contient les sub- stances suivantes, dans les quantités indiquées pour un volume final de 1 lt. Chlorure de sodium Monohydrogénophosphate de sodium Acétate de sodium Aneurine Acide nicotinique Lactate de sodium (solution à 70 %) Lactate d'ammonium (solution à 50 %) Extrait de viande Extrait de levure Glucose 2,5 g 2 g 0,5 g 0,003 g 0,003 g 2 ml 2 ml 22,5 g 7,5 g 3 g Les différentes souches sont cultivées séparément dans des conditions optimalisées, en milieu liquide. Le milieu de culture de base est de préférence enrichi à 2 % avec de l'extrait de levure et à 0,5 % avec de l'ex- trait de Fildes, pour la culture de la souche Hemophilus 4- influenza. De préférence également, le milieu de base est enrichi à 0,5 % avec du sérum de cheval et à 0,3 % avec du glucose pour la culture des souches Diplococcus pneumoniae. Enfin, le même milieu de base est de préférence enri- chi à 0,3 % avec du glucose pour la culture des autres souches respectivement Steptococcus viridans et pyogènes, Klebsiella ozaenae et pneumoniae, Staphylococcus aureus et Branhamella catarrhalis. Ces cultures séparées sont pratiquées en fermenteur, à 370 C et à un p H de 7,0. Après récolte et dénombrement, les germes sont centri- fugés et suspendus dans une solution saline, toujours de manière séparée pour chacune des souches. Les diverses suspensions bactériennes sont alors sou- mises à une lyse alcaline dans des conditions standardi- sées de p H (env 9-10 > et de température (env 20-40 'C), l'évolution étant surveillée au microscope. Puis, le volume de lysat provenant de chaque souche bactérienne est ajusté selon le nombre de germes et selon le volume final de concentré Les divers lysats sont en- suite mélangés dans les proportions appropriées, puis cen- trifugés Le surnageant est dilué dans une solution saline à un volume final calculé pour chaque lot de fabrication. Le concentré est alors purifié par filtrations en profon- deur et enfin stérilisé sur membrane de 0,2 pi Le produit est ensuite testé chimiquement et microbiologiquement Il peut être conservé à 40 C. Préparation des capsules Avant la préparation même de la forme galénique choi- sie, on procède de manière connue en soi à une neutralisa- tion du concentré de lysats bactériens, puis à une lyophi- lisation de ce concentré pour obtenir un lyophilisat, qui est récolté de manière aseptique, tamisé et stocké sous vide dans un récipient approprié Le produit obtenu appelé lyophilisat standardisé contient de préférence, pour 40 mg, 7 mg de lysats bactériens lyophilisés, qui constitue- ront le principe actif du futur médicament Ce lyophilisat standardisé est enfin soumis à un contrôle de qualité chi- mique et microbiologique. Puis, on prépare également de manière connue en soi des capsules du médicament pour administration par voie orale, contenant chacune 40 mg de lyophilisat standardisé, en remplissant des capsules, par exemple du type Capsugel, avec un mélange dudit lyophilisat et des excipients appro- priés choisis aisément par l'homme du métier. Tests de toxicité Des études de toxicité aiguë chez la souris, avec des doses allant jusqu'à 5 '000 mg/kg de poids pour déterminer la dose léthale 50 (DL 5 O), ont montré que le médicament n'a pas d'effet toxique Les examens macro et microsco- piques n'ont de plus révélé aucun changement au niveau des organes. -6Tests cliniques En clinique, des tests ont été effectués avec le médi- cament ainsi préparé pour étudier ses effets sur la derma- tite atopique 26 patients adultes avec dermatite atopique (DA) de longue durée ont été traités avec le médicament pendant 5 mois Le médicament a été administré à raison d'une capsule ( 7 mg de lysat bactérien) par jour, pendant 1 mois, et durant 10 jours consécutifs de chacun des 3 ème, 4 ème et 5 ème mois de l'étude 15 de ces patients avaient déjà reçu le médicament, à la même posologie, durant 5 mois également mais 1 an auparavant. Une attention particulière a été donnée au degré de gravité du prurit et de la dermatite avec "lichénifica- tion" qui a été évalué mensuellement selon l'échelle sui- vante: O = absent; 1 = léger; 2 = modéré; 3 = sévère et 4 = très sévère. Une amélioration clinique a été considérée lorsque la gravité des symptômes (prurit et dermatite) et l'emploi de thérapies conventionnelles ont baissé de plus de 50 %. Le taux sérique des immunoglobulines A, G et M (mesuré par immunodiffusion radiale) et le taux sérique global des Ig E (mesuré par des techniques radioimmunologiques) ont été déterminés avant l'étude, et après 1 et 5 mois de traitement respectivement. Des tests cutanés à médiation cellulaire (Multitest CMI) ont également été utilisés Une amélioration clinique a été observée chez 57,7 % des 26 patients traités durant les 5 mois de l'étude Si l'on considère les 15 patients qui ont été traités durant 2 périodes de 5 mois, on note une amélioration dans 73,3 % des cas. Les taux d'immunoglobulines A, G, M et E chez les 26 patients montrent une baisse statistiquement significative après 1 et 5 mois de traitement (voir tableau I). Chez les 15 patients traités avec le médicament pen- dant 2 périodes, on constate une baisse statistiquement significative du taux d'Ig E à la fin de la première péri- ode qui s'accentue à la 2 ème période (voir Tableau II). Les tests cutanés (Multitest CMI) ont montré chez les 26 patients une faible réponse avant traitement (reflétant un déficit de l'immunité cellulaire), soit 7,21 + 1,5, qui augmente après 5 mois de traitement pour atteindre des va- leurs normales, soit 22,25 + 2,7 mm (les valeurs moyennes normales de l'induration de la peau étant comprises entre environ 18 et 28 mm). Ainsi, il ressort des résultats des tests effectués que le médicament selon l'invention présente un effet re- marquable sur la dermatite atopique. -8- Tableau I: Taux moyen d'immunoglobulines A, G, M et E chez 26 patients avec DA traités durant une seule période de 5 mois. Paramètre Valeurs Après 1 mois p = Après 5 mois P = Initiales Ig A (IU/ml) 332,62 + 17,29 313,23 + 18,42 0,077 306,15 + 16,36 0,012 Ig G (IU/ml) 1844,23 + 68,18 1687,31 59,62 0,001 1672,69 + 60,72 0,00 Ig M (IU/ml) 228,84 + 12,74 182,31 + 8, 22 0,0001 195,73 + 11,86 0,002 Ig E (IU/ml) 1935,54 + 468,65 1553,08 + 368,49 0,007 1286,46 281,38 0,01 Tableau II: Taux moyen d'Ig E chez les 15 patients avec DA traités durant 2 périodes de 5 mois. Valeurs moyennes d'Ig E (IU/ml) Période d'étude Valeurs initiales Après 1 mois Après 5 mois lère 4593,6 1089,6 4315,4 1014,8 * 3304,1 819,5 ** 2 ème 2961,7 + 681,6 2329,7 530,9 *** 1888,6 + 384,33 **** * p = 0, 038 ** p = 0,007 *** p = 0,008 **** p = 0,014 9 REVENDICATIONS REVENDICATIONS 1 Utilisation d'un lysat bactérien provenant d'au moins une des souches suivantes: Haemophilus influenzae, sérotype b NCTC 8467 Diplococcus pneumoniae, sérotypes 1,2,3,47 NCTC 7465, 7466, 7978, 10319 Klebsiella pneumoniae NCTC 204, 5056 Klebsiella ozaenae NCTC 5050 Staphylococcus aureus 1-049, 1-050, 1-051, 1-052, 1-053, I-054 Streptococcus viridans 1046, 1-047, I-048 Streptococcus pyogenes, groupe A NCTC 8191 Branhamella catarrhalis 1-045, NCTC 3622, 3625 (anc Neisseria catarrhalis) pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement de la dermatite atopique. 2 Utilisation selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le lysat bactérien provient de toutes les souches mentionnées dans la revendication 1. 3 Utilisation selon la revendication 1 ou la revendica- tion 2, caractérisé par le fait que le lysat bactérien est sous forme concentrée et lyophilisée. 4 Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, ca- ractérisé par le fait que le médicament est sous la forme de capsules pour administration par voie orale, chaque capsule contenant à titre de dose journalière 7 mg de lysat bactérien.