FR 2642648 A1 19900810 FR 8901546 A 19890207 Depuis de nombreuses années, des dérivés de pyridazine ont été proposés en tant que médicaments. Dans un grand nombre de cas, il s'agit de substances actives sur le système cardiovasculaire et présentant en particulier un effet hypotenseur ou vasodilateur, dans d'autres cas on a mentionné pour des dérivés de pyridazine une action antiinflammatoire et analgésique. Enfin les brevets français 2 141 697, 2 510 997 et 2 510 998 di- vulguent des dérivés de pyridazine diversement substitués sur le cy- cle pyridazinique et portant tous en position 3 un substituant X aminé du type -NH-Alkyl-N o X et Y représentent indépendamment Y L'hydrogène, un groupe alkyle ou forment avec l'atome d'azote au- quel ils sont liés un hétérocycle tel que la morpholine. Tous ces composés présentent une activité sur le système nerveux central en tant qu'antidépresseurs. Plus particulièrement le brevet français n 2 510 998 décrit une famille de dérivés de pyridazine comprenant parmi ses membres un dérivé alkyl-5 pyridazine à. savoir la (morpholino-2 éthylamino)-3 méthyl-5 phényl-6 pyridazine (1). Ce composé présente des propriétés antidépressives d'intensité moyenne. Des études ultérieures ont montré qu'il possède également d'intéressantes propriétés en tant que ligand des récepteurs cholinergiques. Chez les mammiféres, il existe deux sous classes de récepteurs cholinergiques muscariniques: les récepteurs M1 et M2 Les récepteurs de type M1 sont concentrés dans certaines zo- nes de cerveau telles que l'hippocampe, le cortex cérébral, le striatum ainsi que dans les ganglions sympathiques. Ces sites de liaison peuvent être sélectivement marqués par la 3H J] pirenzépine. Ceux de type M2. prédominent dans le coeur et dans l'iléon et peuvent être marqués par le r3H 7 N- méthylscopolamine. Les démences séniles et notamment les démences de type Alzheimer sont des affections graves dont la fréquence tend à augmenter en fonction de l'augmentation de la longévité de la population. Les études entreprises par différents auteurs, ont mis en évidence dans ces maladies l'existence d'un déficit spécifique des marqueurs cholinergiques corticaux provoquant des troubles graves des fonctions supérieures. Les résultats obtenus par utilisation d1agonistes muscariniques pour le traitement des démences séniles se sont montrés encoura- geants. Toutefois les agonistes muscariniques n'existent qu'en petit nombre et se sont avérés de maniement difficile chez l'homme. Par suite la recherche d'agonistes muscariniques post-synaptiques comme traitement des démences séniles s'avère aujourd'hui tout à fait souhaitable. L'intérêt de disposer d'agonistes muscariniques centraux sélectifs pour remédier au déficit cholinergique dans la maladie d'Alzheimer a été mentionné notamment dans ISI Atlas of Science: Pharmacology (1987), p. 98 à 100. La présente invention a donc pour objet l'utilisation du composé (I) et de composés voisins en tant qu'agonistes muscariniques cen- traux sélectifs utilisables comme médicaments pour le traitement des maladies liées à un déficit cholinergique central et notamment pour le traitement des démences séniles. Ces composés répondent à la formule générale: R1 R2 -N'H-CH2CH2-N (II) R3 dans laquelle R1 représente un groupe alkyle en C1-C4 R2 et R3 représentent indépendamment un groupe alkyle en C1-C4 ou encore R2 et R3. considérés avec l'atome d'azote auquel ils sont liés constituent un groupe morpholino. L'invention comprend également les sels que les composés de formule (II) sont susceptibles de former avec les acides pharmaceu- tiquement acceptables. Les composés de formule (II) o R1 est un alkyle en C1-C4 peuvent être préparés par action d'une amine R R H2N-CH2CH2-N (1) sur le dérivé chloré 1 (2) R R3 La réaction est effectuée par chauffage entre 100 et 150 C du dérivé chloré (2) avec un large excès d'amine (1) éventuellement en présence de chlorure d'ammonium. On opère sans solvant ou dans un solvant inerte comme le n- butanol. Les dérivés chlorés (2) peuvent être préparés à partir d'une phénylcétone (3) suivant le schéma réactionnel: CHO R OH I 1 / COOCI CH-CH --C-CH -R 1 2 CC= Il 2 1 Il 0 \l/ /-- H5 C20 3 4 R1 OH R\1 H NH2NH2 CH- CH C= C/ \C 0 =C - N--N \\N-N H H 6 R H \1! POC13 C =-C C C-Cl - NN-N A partir de la cétone 3, par chauffage avec le glyoxylate d'éthyle à une température comprise entre 80 et 140 C, on obtient l'hydroxy céto ester 4. Le mélange réactionnel brut est alors repris dans un solvant inerte tel que le n-butanol et additionné d'hydrate d'hydrazine. Par chauffage au reflux pendant 24 heures, on obtient l'hydroxypyridazinone 5 qui chauffée en milieu acide conduit par déshydratation à la 2H-pyridazinone-3 6. Cette dernière chauffée avec de l'oxychlorure de phosphore en excès fournit la chloro-3 pyridazine 2. On opère sans solvant ou en présence d'un solvant inerte tel que l'acétonitrile. Dans tous les cas, les produits (II) isolés sous forme de base peuvent être salifiés par action d'une quantité équimoléculaire d'un acide pharmaceutiquement acceptable au sein d'un solvant convenable. Les exemples suivants illustrent la préparation des composés de formule (II) EXEMPLE 1 (Morpholino-2 éthylamino)-3 méthyl-5 phényl-6 pyridazine dioxalate (CM 30316). R (II) R1 = CH3 =-N O A) Chloro-3 méthyl-5 phényl-6 pyridazine. 1. Hydroxy-2 méthyl-3 phényl-4 oxo-4 butyrate d'éthyle. On chauffe à 135 C pendant 5 heures, le mélange de 13,4 g de propiophénone et 15,3 g de glyoxylate d'éthyle. Le produit ainsi obtenu est utilisé tel quel pour l'opération suivante. 2. Méthyl-5 phényl-6 2H-pyridazinone-3. On dissout le produit brut obtenu ci-dessus dans 150 ml de n-butanol, puis on ajoute 9,44 ml d'hydrate d'hydrazine et chauffe au reflux pendant 24 heures. On distille à pression ordinaire une partie du n-butanol de façon à éliminer l'eau formée dans la réaction sous forme d'azéotrope. On concentre ensuite à siccité sous vide. On reprend le résidu dans un mélange de 100 ml d'acide acétique et 10 ml d'acide chlorhydrique concentré. On chauffe le mélange à 100 C pendant 4 heures. On verse la solution dans l'eau froide et laisse cristalliser. On essore le solide et sèche. - Poids: 11,6 g F: 218 C. 3. Chloro-3 méthyl-5 phényl-6 pyridazine. A 12 g de pyridazinone obtenue ci-dessus on ajoute 50 ml d'oxychlorure de phosphore et chauffe à 80 C pendant 4 heures. On verse lentement le mélange sur de la glace et alcalinise avec une solution de soude à 20 %. On essore le précipité, lave abondamment avec de l'eau et recristallise dans l'isopropanol. On obtient 9,9 g du produit attendu. F: 1220C. B) CM 30316 On chauffe à reflux pendant 12 heures un mélange de 8 g du dérivé chloré obtenu ci-dessus et 10 g de morpholino-2 éthylamine dans 80 ml de n-butanol. On verse la solution chaude dans 200 ml d'eau et filtre le précipité qu'on lave avec un peu d'éther. On sépare la phase aqueuse que l'on extrait avec de l'éther. On réunit les extraits éthérés et on les extrait avec une solution d'acide sulfurique iN. On sépare la phase aqueuse acide et alcalinise avec une solution de carbonate de sodium à 10 %l. On extrait avec de l'acétate d'éthyle, sèche la solution sur sulfate de sodium et évapore à siccité sous vide. On dissout la base obtenue dans l'éther isopropylique et ajoute 2 équivalents d'acide oxalique. On chauffe à l'ébullition jusqu'à dis- solution. Par refroidissement le dioxalate cristallise. On essore et recristallise dans le même solvant. Poids: 6 g F: 182-183 C. EXEMPLES 2 A 6 A) En opérant comme dans l'exemple lA mais en faisant varier la cétone de départ, on obtient les chloro-3 pyridazines réunies dans le tableau suivant: TABLEAU 1 R : R1: Ci : R1: Constantes physiques: i0:: : -C--CH- :-CH2CH3: F: 70 C: -CH2CH2CH3 F:600C A partir de ces dérivés chlorés et de celui de l'exemple lA en faisant varier les amines utilisées, on obtient suivant la technique de l'exemple lB, les composés (II) rassemblés dans le tableau 2. TABLEAU 2 R1 R 7.2 / \ - NHCHC2N N Réf. R2 Sel : /2 :Ex.: SR: R1:-N: F: C R :::: R3 :- :::: T: 2: 96169 A: -CH2CH3 -N 0: Monooxalate 1,5H20: 195 :::: 3: 96186 A: -CH CH CH3 Monooxalate: 19 * CH CH /2 3 CH2CH3: z 5 96180 A:-CH3C : -N: Dioxalate: 152 : 96180 A:-CH CH::Dioxalate : 106 22 3 : 6 9 A::Dioxatate : 143 Les composés dé formule (II) ont été étudiés en ce qui concerne leurs propriétés thérapeutiques et notamment en ce qui concerne leur affinité pour les récepteurs cholinergiques muscariniques. In vitro nous avons étudié l'interaction des produits (II) avec les fixations à haute affinité de la pirenzépine tritiée et de la N- méthylscopolamine tritiée sur des membranes d'hippocampe de rat et de muscle lisse d'iléon de cobaye, respectivement. Methodologies A) Recherche d'une affinité pour le récepteur cholinergique muscarinique de type M1. L'intéraction des molécules avec les récepteurs muscariniques de type M1 a été étudiée en mesurant in vitro sur homogénat d'hippocampe de rat, le déplacement de la pirenzépine tritiée ( -3H] PZ) de ses sites de fixation spécifiques. Des aliquots (100 il) d'un homogénat d'hippocampe de rat à 5 %O (P/v) dans un tampon Na2HP04 (50 mM, pH 7,40), sont incubés 2 h à 4 C en présence de 3H H PZ (76 Ci/mmole; 1 rnM final) et de concen- trations croissantes en produits à étudier. Le volume final est de 2 ml. La réaction est arrêtée par centrifugation 10 mn à 50.000 xg. Après décantation et lavage des culots, la radioactivité fixée est comptée par scintillation liquide. La fixation non spécifique est déterminée en présence de 10 pM de sulfate d'atropine. La concentration inhibitrice 50 (CI0) est déterminée graphiquement. (Réf.: Watson J.D., Roeskoe W.R. and Yamamura7H.I., Life Sci., 31, 2019-2029, 1982). B) Recherche d'une affinité pour le récepteur cholinergique muscarinique de type M2. L'intéraction avec les récepteurs muscariniques de type M2 a été étudiée en mesurant in vitro sur un homogénat de muscle lisse d'iléon de cobaye, le déplacement de la N-méthyl-scopolamine tritiée ( 3Hl NMS) de ses sites de fixation spécifiques. Des aliquots (50 pl) d'un homogénat de muscle lisse de cobaye à 0,625 %O (P/v) dans du tampon HEPES (20 mM) contenant NaCl (100 mM) et MgC12 (10 mM) (pH final: 7,5), sont incubés 20 mn à 30 C en présence de _ 3H 7 NMS (85 Ci/mmole; 0,3 nM final) et de concen- trations croissantes en produits à tester. Le volume final est de 1 ml. La réaction est arrêtée par centrifugation 5 mn à 15.000 xg. La fixation non spécifique est déterminée en présence de 10 pM de sulfate d'atropine. (Réf.: Hammer R., Berrie C.P., Birdsall N.I.M., Burgen A.S.V. and Hulme E.C., Nature, 283, 90-92, 1980. Hulme E.C., Birdsall, N.I.M., Burgen A.S.V. and Mettha P., Mol. Pharmacol., 14, 737-750, 1978). Resultats Le tableau 3 indique les affinités des produits de l'invention pour les récepteurs M1 et M2 - Les résultats sont exprimés en concentrations inhibitrices 50 pour cent (CI50), soit la concen- tration (en pM) qui inhibe de 50 %' la fixation du ligand tritié aux récepteurs membranaires. La CI50 de déplacement de la H-pirenzépine représente l'affinité pour le récepteur M1; la CI50 de déplacement de la 3H-NMS représente l'affinité pour le récepteur M2 De plus dans la 3e colonne on a indiqué le rapport r entre les les CI50 M2 et M1 qui exprime la sélectivité des produits vis-à-vis du récepteur M1. TABLEAU 3 :: 3H-PZ : 3H-NMS:: -: Produit: (Ml): (M2): r =: : n : CI50 pM: CI50 pM:M2/M1: : CM 30316: 0,55: 100: 182: SR 96169 A: 3,7: 30 8 :: :-:: : SR 96186 A: 0,6: 18: 30: : SR 96150 A: 0,06: 2,8: 47: : :: :: : SR 96180 A: 0,07: 1: 14: : SR 96187 A: 0,4 3,5 9 Ces résultats montrent que les composés selon l'invention présentent une forte affinité pour les récepteurs cholinergiques muscariniques avec une spécificité marquée pour les récepteurs cen- traux de type M1. Par ailleurs, les composés de formule (II) ont été soumis à une étude in vivo. La pirenzépine (PZ) est un antagoniste spécifique des ligands des récepteurs cholinergiques muscariniques centraux M. L'injection intrastriatale de PZ chez la souris induit un comportement rotatoire. On a étudié l'antagonisme de ce comportement par les produits à étudier. Les produits selon l'invention sont administrés par voie orale après avoir été solubilisés dans l'eau distillée ou mis en suspension dans une solution de gomme arabique à 5 %. Les contrôles sont réalisés par injection du solvant pur dans les mêmes conditions. Les animaux utilisés sont des souris femelles (Swiss, CD 1, Charles River, France) de poids corporel entre 25 et 30 grammes. La pirenzépine est mise en solution dans un tampon phosphate, le pH de la solution est 6. Les produits à étudier ou leurs solvants sont administrés par voie orale sous un volume de 0,4 ml pour 20 g de poids corporel, 4 heures avant injection directe de pirenzépine à la dose de 1 pg de produit dans 1 p1 de solvant dans le striatum droit de la souris, selon la méthode décrite par P. Worms et al. dans Psychopharmacology 1987, 93, 489-493. Le nombre de rotations contralatérales (sens opposé au côté de l'injection) a été compté pendant trois périodes de 2 minutes après injection de pirenzépine: minutes 2 à 4, 8 à 10 et 13 à 15. Chaque traitement comporte 10 animaux par dose. Pour chaque traitement, on calcule le nombre total de rotations et le pourcentage d'antagonisme vis-à-vis du lot contrôle. Dans le tableau 4 sont réunis les résultats obtenus avec les pro- duits de formule (II) administrés par voie orale à la dose de 3 mg/kg de poids corporel. TABLEAU 4 : Produits : % inhibition rotations: : n : PZ 3 mg/kg p.o.: :CM 30316: - 20 % * ::: :SR 96169 A : - 46 % * : SR 96186 A: - 41% **: SR 96150 A:49 % :: : SR 96180 A: - 48 % ^*: : SR 96180 A : - 3S % -:: :SR 96187 A: - 37 %: Test t de Student p toxicité aux doses o ils sont actifs. Par suite les composés (II) peuvent être utilisés en tant que médicaments dans tous les cas o se manifeste un déficit cholinergique cortical notamment pour le traitement des syndromes dégénératifs liés à la sénescence et particulièrement les troubles de la mémoire et les démences séniles. En conséquence selon un autre de ses aspects, la présente demande concerne les compositions pharmaceutiques contenant au moins un des composés de formule (II) ou un de leurs sels en tant qu'ingrédient actif. Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, transdermique ou rectale, les ingrédients actifs de formule (II) ci-dessus peuvent être administrés sous forme unitaire d'administration, en mélange avec les supports pharmaceutiques classiques, aux êtres humains notamment pour le traitement des démences séniles. Les formes unitaires d'admi- nistration appropriées comprennent les formes par voie orale, telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granulés et les so- lutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale et buccale, les formes d'administration sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse et les formes d'administration rectale. Afin d'obtenir l'effet désiré, la dose de principe actif peut va- rier entre 20 et 500 mg par jour. Chaque dose unitaire peut contenir de 5 à 200 mg d'ingrédient ac- tif en combinaison avec un support pharmaceutique. Cette dose uni- taire peut être administrée 1 à 4 fois par jour. Lorsqu'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange l'ingrédient actif principal avec un véhicule pharmaceu- tique tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme arabique ou analogues. On peut enrober les comprimés de saccharose ou d'autres matières appropriées ou en- core on peut les traiter de telle sorte qu'ils aient une activité prolongée ou retardée et qu'ils libèrent d'une façon continue une quantité prédéterminée de principe actif. On obtient une préparation en gélules en mélangeant l'ingrédient actif avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans les gélules molles ou dures. Les poudres ou les granulés dispersibles dans l'eau peuvent contenir l'ingrédient actif en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents de mise en suspension comme la polyvinylpyrrolidone, de même qu'avec des édulcorants ou des cor- recteurs de goût. Pour une administration rectale, on recourt à des suppositoires qui sont préparés avec des liants fondant à la température rectale, par exemple du beurre de cacao ou des polyéthyléneglycols. Pour une administration parentérale, on utilise des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion et/ou des mouillants pharmacologiquement compatibles, par exemple le propylèneglycol et le butylèneglycol. Le principe actif peut être formulé également sous forme de microcapsules, éventuellement avec un ou plusieurs supports ou addi- tifs. A titre de préparation galénique on peut préparer des gélules contenant: Principe actif 0,010 g Lactose 0,050 g Stéarate de magnésium 0, 005 g en mélangeant intimement les ingrédients ci-dessus et en versant le mélange dans des gélules de gélatine dure. REVENDICATIONS 1. Utilisation de dérivés d'alkyl-5 pyridazine de formule: R1 R2 /05 -NH-CH2CH2-N\( R3 o R1 représente un groupe alkyle en Cl-C4, R2 et R3 représentent indépendamment un groupe alkyle en C1-C4 ou encore R2 et R3 considérés avec l'atome d'azote auquel ils sont liés constituent un groupe morpholino, ou d'un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables pour la préparation de compositions pharmaceutiques destinées à combattre les états pathologiques liés à un déficit cholinergique cortical. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que les compositions pharmaceutiques sont utilisées pour le traitement des syndromes dégénératifs liés à la sénescence. 3. Utilisation selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que les compositions pharmaceutiques sont sous la forme de doses unitaires contenant de 5 à 200 mg du composé de formule (II) en mélange avec un excipient pharmaceutique. 4. Compositions pharmaceutiques pour le traitement des états pathologiques liés à un déficit cholinergique cortical caractérisées en ce qu'elles comprennent comme principe actif un dérivé d'alkyl-5 pyridazine de formule (II) telle que défini dans la revendication 1, et en ce qu'elles sont destinées à l'administration par voie orale, injectable ou rectale.