FR 2639830 A1 19900608 FR 8815845 A 19881202 Composition antivirale et ses applications Les infections virales posent aux médecins de multiples problèmes. Les agents pharmaceutiques capables de lutter efficacement et speciliquement contre les virus sont en nombre plus que limites En outre ils provoquent generalement des effets secondaires indesirables Les infections virales, non seulement détruisent les cellules hôtes mais affectent aussi le fonctionnement de diverses protéines et enzymes. L'invasion virale favorise l'infection par d'autres agents pathogenes, autres virus ou bacteéries, champignons. Alnsl, le virus de l'immunodéficience humaine (VIH) semble être la cause principale du syndrome du Sida chez les humains. Par la perte Immunitaire qu'il engendre, ce virus ouvre la voie a d'autres virus (herpes simplex, cytomegalovirus, virus de l'hepatite B) et agents pathogenes qul envahissent l'organisme humain, créant des situations dangereuses. Le virus du Sida (VIH I et 11I) provoque la chute des lymphocytes particulièrement des T4, T8 et cellules B qul sont directernelnt necessaires lors de la lutte contre les agents pathogenes De nombeuses années de recherches intensives n'ont permis la mise au point que de peu de médicaments, dont aucun n'est dénué d'inconvénients. Le vaccin ou des médicaments plus spécifiques contre le Sida ne sont pas encore developpes La présente invention repose sur une stratégie rationelle ou, sans effets secondaires néfastes, la multiplication des virus, virus à ARN (Slda en particulier) et virus à ADN est inhibée tandis que le système immunitaire est augmente. Cette strategie qui possede de solides bases théoriques et pratiques, combine l'utilisation de quatre substances offrant des effets coopératifs à différents niveaux. L'association de ces substances est essentielle pour juguler I'infection virale, Sida en part iculier car si chacune Joue un rôle blen defini a un niveau biologique précis, aucune n'est suffisante. Il est important de souligner qu'iln'y a pas de compétition entre ces quatre différentes substances chez le patient atteint d'infection virale. Autrement dit, les effets bénéfiques qu'apporte chaque substance ne sont pas entraves par la presence des trois autres substances. Autre aspect important de l'invention, ni 2o 2639830 separément. ni ensemble, les molécules nrie présentent d'effet secondaire toxique ou d'effet indesirable L'utillsation combinee de ces quatre substances dans la lutte antivirale constitue la base de la présente invention. Elles sont (1) la flavopereirine (un alcaloïde de la classe des B-carbolines), (2) la naringine et/ou la naringenine (flavanones); (3) les ARN amorceurs (ARN-tragments particullers); (4) le Bioparyl, preparation particuliere et standardisée obtenue à partir des feuilles dorees de l'arbre Gingko Biloba (voir brevet français n' 88 09738 du 19/07/88). Première et seconde substance Les substances ( 1) et (2) sont groupées dans le présent exposé car elles possèdent de nombreuses propriétés communes bien que des differences importantes existent et qui seront précisées en détail pus loin Les substances ( 1) et (2) arrêtent la multiplication virale, virus a ARN ou virus à ADN, mals n'ont pas d'effet agressif vis-à-vis des ARN ou ADN des cellules normales. Leur action est sélective vis-a-vis des genornes non conformes, c'est-a-dire ceux des cellules virosees ou ceux des cellules cancéreuses. En outre chacune de ces substances bloque l'activité de la transcriptase inverse ainsi que l'activité d'une deoxynucleotidyl transférase terminale. L'une (1) franchit la barrière hemato-encephalique, ce qui dans la lutte contre l'herpes et le Sida en particulier est essentielle, ces virus induisant des syndromes neurologiques sévères. CH3 FLAVOPEREIRINE FLAVOPEREIRINE OH HO 0 Naringenine Ainsi l'emploi des substances ( 1) et (2) permet une action sélective dans les processus viraux et cancéreux, même au-delà de la barrière cérébrale, sans toxicité pour les cellules normales, et en particulier les cellules hematologiques qul sont tres sensibles a la cytotoxicite des agents thérapeutiques et chimiques. La substance (1), alcaloïde de la classe des B-carboline, est la flavopereirine, qui agit in vivo contre le virus de l'influenza (virus a ARN), ainsi que contre les virus de l'herpes et du f ibrome de Shope (virus a ADN). Certificat d'addition n 79 05853 publié sous le ne 2 450 607 B.O.P.I. "Listes" ne 40 du 3 octobre 1980 (M. Beljanskl et J. Bugiel). Elle peut en outre inhiber la multiplication du virus de la mosaique du tabac (VMIT) lors d'un bref contact avec ce virus Brevet français n' 88 08434 du 23 juin 1988 (M. Bel janski). La flavopéreirine agit au niveau des sites d'initiation de 'ADN des cellules cancéreuses ou au niveau de la transcription, franchit la barriere du cerveau de la souris, y sejourne environ 30 minutes, sauf sl des cellules cancéreuses ou virosées sont présentes. Dans ce cas, elle se fixe à I'ADN de ces cellules, empêchant leur multiplication. Chez les humains, il en est de même. Les propriéetés de la flavoperelrine pour la destruction selective des cellules cancéreuses et l'arrêt de la multiplication de certains virus sont décrites dans le brevet européen n 0 059 817, accordé le 9 octobre 1985. La flavopéreirine fut isolée à partir des écorces de "Tariri Céliata Martlus", une variéte d'apocynaceae selon la methode de H Rapoport et Coll (J. American Chem. Soc. 80: 1601-1608 (1958)) La deuxième substance, une flavanonrie, est la narirgcilne et/ou la nairingerine, deux substances qui peuvent être utilisées de façon Interchangeable dans la presente invention La référence à l'une ou à l'autre implique chacune séparément ou ern combinaison. Lorsqu'on se réfère à l'une ou à l'autre, ceci inclut aussi les sels et esters acceptables sur le plan pharmaceutique, par exemrple Sels de magnesium, sodium et naringenine acetylee La naringine et la naringenine possèdent certaines propriétés de la Flavopereirine, mals quelques différences importantes existent: ( 1) ces deux substances rie semblent pas passer la barrière cérébrale. Contrairement a la I lavoperelrine qul n'agit qu'au niveau de l'initiation, elles agissent au niveau des sites d'initiation et d'élongation des ADN des cellules cancéreuses. Elles inhibent in situ la mutiplication du virus VMT en solution Différents virus (VIH, Herpès sirrmplex, Epstein Bar r...) sont impliques dans divers cancers humains, (sarcome de la bouche, de la peau, lymphome, sarcome de Kaposi,...). L'association: flavopereirine et naringine (naringenine) assure une parfaite inactivation des génomes viraux ou des génoîres des cellules cancéreuses, ce qul permet une remarquable double-action contre les cellules virosees et/ou cancéreuses Le mode de préparation et les propriétés de la naringine et de la Narngnenirie ont été décrites dans le brevet français n' 88 08434 du 23 juin 1988 au nom de M Beljanskl Trolsième substance Lors de la maladite induite par le virus HIV (Sida), une destruction dramatique des lymphocytes se produit Or ces cellules sont essentielles dans la lutte immunologique contre tous les agents pathogènes. Les lymphocytes T4, T8 B diminuent spectaculairement chez la plupart des malades atteints du Sida. Les ARN amorceurs (designés aussi R. L.B.) qui sont des ARN-fragments particuliers, stimulent de façon tres selectivep la genèse de toutes les cellules de la lignée blanche, c'est-àdire les granulocytes et les lymphocytes. Mais, fait essentiel, seuls les leucocytes normaux et les plaquettes sanguines subissent un accroissement de leur genese, accroissement qul cependant reste toujous dans des limites physiologiques C'est en stimulant la replication de I'ADN des cellules hématopoietiques que les R.LB., 2639830 relativement résistants à l'action des ribonucléases, peuvent favoriser l'hérriatopoiese et activer les gqènes des leucocytes (grarnulocytes et lymphocytes) Ils n'agissent que sur la genese des cellules saines et leur différentiation. Ils augmentent de façon non négligeable le nombre de lymphocytes totaux dont différentes sous populations T ainsi que celui de lymphocytes B, contribuant ainsi à l'élimination des cellules pathologiques Ils semblent egalement activer le systeme de reparation des cassures chromosomiques. Il1 semble plausible que les RL.B. participent indirectement dans l'excision du génome HIV des cellules I 0 infectées. Il est tres important de souligner que sans action sur les cellules cancéreuses ou virosees, ils n'entravent aucunement l'action des substances antivirales. Simples chaines de ribonucléotides comportant environ 20 a 80 unites de rinucleotldes (ou predominent les sequences GA), les RL B ont un rapport global de bases puriques/bases pyrimidiques (G + A / C + U) compris entre 1,0 et 2,5. Ils sont obtenus par scission enzymatique d'ARN selon le procéde décrit en détail dans le brevet USA n 4 190 649 ( 1 980) voir aussi BELANSKI et al Cancer Treatment reports vol n 7-8, jui 1 let-aout 1983, pp 611-619 Quatrième substance La quatrieme substance est tout a fait necessaire pour completer la stratégie thérapeutique, en ce sens que cancer ou maladie virale Induisent des anomalies de certaines protéines enzymatiques 1l s'agit donc de réguler ces divers paramètres biologiques, soit qu'ils soient trop actifs ou trop peu actifs, soit encore qu'ils soient quantitativement modifiés par la pathologie. Sans l'effet régulateur biologique du produit, nommé Bioparyl, ces paramètres normalisent, en particuliler les ribonucléases, enzymes dont les anomalies fonctionnelles participent activement et indirectement au processus pathologique. Le regulateur Bioparyl qui est totalement dénué d'effet toxique freine aussi de façon fort efficace l'accumulation tout à fait anormale de gamma-globulines lors de l'infection par le virus HIV. L'effet du Bloparyl est progressif, conduisant a une legere répression d'une super-extension de certains gênes, responsables de la programmation des gamma-globulines. Ainsi, lors d'un fort excès d'lmmuno-globullne, IgG par exemple, un ou deux mois de traitement par le Bloparyl permet de ramener le taux de ces globulines vers des valeurs normales ainsi que l'activité des RNases. Les propriéetés du Bioparyl ne sont en rien entravées --bien au contraire- par la présence des trois autres substances et l'état clinique s'en trouve rapidement amélioré. Le Bioparyl est un extrait standardisé obtenu par extraction, hydrolise et purification d'extraits de feuilles dorées automnales de l'arbre Glngko Biloba. Le mode de préparation et les propriétés du Bloparyl ont été décrites dans le brevet d'invention n* 88 09738 du 19 juillet 1988, au nom de M. Beljanski. ADMINISTRATION ET DOSAGFS La combinaison des quatre substances utilisées dans la stratégie antivirale proposée peut être administréSe à tous les animaux, mammifères en particulier, souffrant d'lnfection virale. Mals son intérêt principal est Indiqué naturellement dans le traitement des humains. Trois des quatre substances peuvent être administrées séparément, groupées par deux ou par trois, mais l'invention requiert la présence simultanée de toutes aux bonnes doses, dans l'organisme à traiter. Les R.L.B. (3) seront donnés à part (vole perlinguale). Du fait de sa non- toxicité, le traitement peut être poursuivi pendant tout le temps nécessaire, voire des moils. L'administration préconisée est la vole orale (sublinguale pour les R.L.B. ) sous forme galénique habituelle: solution, tablettes, pilules, gélules.. . Les voles parentérales, Intraperltonéales, intraveineuses ou intramusculaires sont possibles (mals moins recommandées). De toute façon, qu'elles soient utilisées séparément ou ensemble, chacune des substances ou la combinaison de plusieurs sera normalement conditionnée à l'aide d'un support pharmaceutique convenable adapté a la vole d'administration. Les dosages de chaque substance pourront varier selon l'atteinte virale du mammifère à traiter. Pour la forme orale, des doses quotidiennes de 0,25 à 1 gr de flavopéreirine, de 0,5 à 1,5 gr de naringine (naringenine) et de 0,5 à 2 gr, 2,5 gr de Bloparyl peuvent être administrées (ou prévues pour l'administration). 10 à 40 milligrammes de R.L B. seront retenus comme marge possible pour une administration sublinguale I1l sera preférable de reserver une dose journallere pour les RLB et des prises fractionnées à plusieurs moments de la journée pour les autres produits Une fois choisi un conditionnement donné, la quantité de produit adrnministré dépendra du choix du médecin prescripteur et de l'état d'avancement de la maladie. On peut envisager de disposer (medecin, pharmacien, vétérinaire) de produit en kit qui seront administrés soit ensemble, soit séparément. Pour combattre le Sida, les deux antiviraux et le Bioparyl sont necessaires, I'administrat ion de R.L B restant a l'appr-eciatiorn du thérapeute. Ceci dépend du taux des leucocytes Les séropositifs ne développant pas encore la maladie et, de ce fait, n'ayant pas ou très peu d'atteinte immunitaire, pourraient ne pas recevoir les RL.B tant que leur formule leucocytaire sera correcte PREPARATION DFS SUBSTANCFS I Favoperelrtne 2^0 La méthode d'obtention de cette substance a partir de l'écorce de "Pao Pereira" (tariri cIliata Martius) est celle décrite par H. Rapoport et coll. (J. American Cherm. Soc. 80 1601-1608 (1958)) M. Beljanriski et J. Bugiel, demande de certificat d'addition français n 79 05853 du 7 mars 1979 et brevet européen n" 81 400 374.5 délivré le 10 septembre 1985, (0 059 817) Bulletin 82/37. La substance ainsi isolée est dépourvue d'effet toxique et sanris effet secondaire I l. Naringine et Naringenine. Ces substances (flavanones) sont isolées et concentrées à patir d'un sirop commercial contenant, outre ces substances, un taux élevé de vitamine C. Cette derniere est éliminée et la preparation enrichie a 80- % en naringine (naringénine) selon la technique décrite par M. BelJanskl dans le brevet français d'invention n" 88 08434 du 23 Juin 111. R.L.B.: Les R.L B sont préparés à partir d'ARNS ribosomiques (E Coli) découpés de facon standardisée (RNase pancréatique) selon la méthode qui se trouve décrite par M. Beljanski dans le brevet nr' 76 16871 du 3 juin 1976 et Demriande de certificat d'addition n' 7709184 du 28 mars 1977 Brevet USA 4 190 649, 1980 Ces ARN fragments ont été définis par leur taille, le rapport en bases puriques et bases pyrimidiques ainsi que par leur activité biologique qui est spécifique, dans les cellules du systèmrne hematopoletlque IV Bioparyl extrait standardisé obtenu par différentes étapes de purification des feuilles dorées du Ginqko Biloba. La méthode de preparation est decrite par M Beljanskl en detail dans le brevet trançais nô 88 09738 du 19 07.1988. En conclusion, les subtarices I et Il sont nécessaires pour emnpêchler la multiplication virale (Inhibition des transcriptions inverses) d'ADN polymerase et de la Désoxynucleotidyl transférase terminale (TdT) autant d'enzymes qui permettent la transcription, replication, l'inteéqation de IADN viral dans le génome de l'hôte et la multiplication du virus; outre leur effet artiviral, ces substances possedent un pouvoir anticancéreux qui permet de lutter contre les cellules cancéreuses provoquées ou non par les infections virales au-delà même de la barrière cérébrale. Le mode d'action des substances I et Il a ete décrit par M Beljanskl dans les brevets français n' 88 08434 du 23 juin 1988 et n' 88 09738 du 19 Juillet 1988. Les R.L.B. (substance 3) assurent une protection et une génése des plaquettes et des leucocytes En outre, une tres substantielle impulsion est donnée à la genèse des sous-populations lymphocytaires, phénomène d'imrnportance essentielle dans la pathologie du Sida. Enf in le Bioparyl régule les enzymes et protéines diverses s'accumulant dans l'organisme et participant a la pathologie 9 -2639830 Revendicat ions I. Une composition pharmaceutique comportant tl) Flavoperelrlne, (2) Un ou plusieurs composes selectionnes du groupe constitue par naringine, naringénine et des esters ou sels de ces derniers acceptables sur le plan pharmaceutique, (3) ARN amnorceurs, (4) Extrait standardise obtenu a partir des feuilles dorees de l'arbre Glngko Blloba. 2. Une composition pharmaceutique selon la revendication 1, contenant un transporteur pharmaceutique acceptable 3. Une composition pharmaceutique selon la revendication 1, comme unité de dosage. 4. Une composition pharmaceutique sous forme d'unité de dosage selon la revendication 3, lorsque l'unite de dosage comprend des doses individuelles de substances (1) (2) (3) et (4), chacun d'eux pouvant être combiné en quantités appropriées pour être administré en dosage suffisant. Une unite de dosage de la composition pharmaceutique selon la revendication 3, lorsque l'unite de dosage est un melange de substances (1) (2) (3) et (4) pour un dosage approprié. 6. Une composition pharmaceutique selon la revendication 3. o chaque unité de dosage comprend environ 0,5 a I gramme de ( 1), environ 0,5 a 1, 5 grammes de (2), environ 10 a 40 mg de (3) et de 0,5 a 2 grammes de (4). 7. Un kit de produits destiné au traitement des patients atteints de Slda, contenant des quantites Individuellement empaquetées de (1) (2) (3) et (4) comme precise dans la revendication 1 8. Utilisation d'une composition selon la revendication 1, pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement des mamrnifères souffrant de maladie virale consistant a administrer et maintenir des doses efficaces dans l'organisme et durant le traitement 9. Utilisation selon la revendication 8, lorsque le mammifère est un être humain. 10. Utilisation selon la revendication 9, lorsque l'humain est infecte par le virus de l'immunodef science 2639830 11. Utilisation selon la revendication 10, lorsque l'humain est Infecté des virus a ADN ou des virus à ARN 12 Utilisation selon la revendication 10, lorsque l'humain souffre de cancer. 13. Utilisation des substances: (1) Flavopereirine (2) un ou deux composes selectiones du groupe consistant de naringine et naringénine, les deux ( 1) et (2) étant simultanément maintenus dans l'organisme de la personne pour l'obtention d'un médicament pour traiter un mammlfère séropositif a l'infection par HIV, mals essentiellement sans symptomes de Sida