FR 2632187 A1 19891208 FR 8807372 A 19880602 La présente invention a pour objet de nou- veaux dérivés de métalloporphyrines, leur préparation, leur application en thérapeutique, et leur utilisation pour la préparation de molécules hybrides à usage thé- rapeutique. L'utilisation de certains dérivés hématopor- phyriniques dans le traitement des cancers par photo- thérapie a été décrite par exemple par 3. Moan (Photo- biol. Photochem. 43, 681 (1986). Ces molécules présen- tent la particularité de s'accumuler au niveau des tumeurs, ce qui permet de les utiliser comme marqueurs biologiques ou agents thérapeutiques. Toutefois, la préparation de ces dérivés conduit souvent à un mélan- ge de produits pas toujours bien définis et de compo- sition variable. Cet état de fait justifie le dévelop- pement de dérivés porphyriniques obtenus par synthèse totale et pouvant se substituer aux hématoporphyrines dans le traitement de cancers par photothérapie. Par ailleurs, des travaux récents ont montré que des dérivés métallés de porphyrines synthétiques sont capables de couper les acides nucléiques (ADN) in vitro selon un processus d'oxydation (EP-A-118 913; E. Fouquet, G. Pratviel, 3. Bernadou et B. Meunier, J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1169 (1987). Cette activité nucléase de métalloporphyrines hydrosolubles est d'au- tant plus intéressante qu'elle est observable pour des concentrations très faibles de réactifs (de l'ordre de 106 à 10-8 M), inférieures à celles de Ja bléomycine (un antibiotique antitumoral possédant une forte acti- vité nucléase en présence d'ions ferriques, d'oxygène moléculaire et de réducteurs). Les nombreuses études menées ces dernières années sur la pharmacologie molé- culaire de ce médicament majeur de la chimiothérapie anticancéreuse indiquent que son activité cytotoxique et antitumorale peut être due à sa capacité à dégrader 1'ADN de cellules tumorales. Selon la présente invention on a effectué la synthèse de métalloporphyrines (dont la sphère de co- ordination autour d'ions fer ou manganèse modélise l'arrangement des ligands peptidiques de la bléomy- cine) ayant les deux propriétés suivantes: - activité nucléase sur l'ADN in vitro, et - activité cytotoxique sur cellules en- tières, qui, à la connaissance des inventeurs, n'ont pas en- core été décrites pour des métalloporphyrines. L'in-- vention concerne donc de nouveaux dérivés porphyri- niques possédant cette double propriété. Par ailleurs, on montre également que cette double propriété est conservée dans des molécules hybrides lorsque le sque- lette porphyrinique est relié à une-entité possédant une affinité pour les acides nucléiques et capable. aussi de moduler l'activité biologique de ces métal- loporphyrines cytotoxiques (polyamines, polylysine, oligonucléotides.... Les nouveaux dérivés de métalloporphyrines selon l'invention répondent à la formule générale a 3 0 dans laquelle Z+ représente N±R ou C-N1R R R R; é tant un groupe 1 1 2 3 i aliphatique droit ou ramifié en C 1à C 10' et R2 et R3 étant chacun un atome d'hydrogène ou un grou- pe aliphatique droit ou ramifié en C à C I 10' R représente un groupe NH,OH,COOH ou un atome d'ha- logène, n est 0 ou un entier de 1 à 10, le groupe alkylène correspondant pouvant être droit ou ramifié, M représente un métal de transition, et X représente l'anion d'un acide carboxylique pharma- ceutiquement acceptable. De préférence, R1 représente un groupe al- kyle, en particulier méthyle ou éthyle, et R2 et R3 représentent chacun un atome d'hydrogène ou méthyle, M représente notamment Cr, Mn, Fe, Co, Ni, Cu, Zn ou Ru, de préférence Mn ou Fe. X- est choisi notamment parmi les anions des acides carboxyliques solubles couramment utilisés en pharma- cie, en particulier: acétate, propionate, butyrate ascorbate, benzoate, cinnamate, citrate, fumarate, glycolate, malonate, tartrate, malate.maléate et man- délate. De préférence encore Z représente le groupe N -R Les composés de formule I peuvent être pré- parés par (a) condensation d'un phényl-carboxaldéhyde de formule 4' -CHEOI 3 / R'I - (CH2 dans laquelle n a la mbme signification que dans la formule I et R' est le groupe R éventuellement protégé de la formule [, avec un aldéhyde de formule 4 CHIII dans laquelle Z représente N ou *Z.-NR2R R et R -' 3' 2 3 ayant la même signification que dans la formule I, et avec le pyrrole en milieu acide, de façon à obtenir une porphyrine (PP) tétrasubstituée en positions 5,10, 15,20 de formule générale È une déportection du radical R' pour obtenir une por- phyrine tétrasubstituée en 5,10,15,10 de formule géné- rale P) / (CH2 n-R) V dans laquelle Z' a la même signification que dans la formule III et n et R ont la même signification que dans la formule I, c) le composé de formule V est soumis à une réaction d'alkylation à l'aide d'un halogènure R 1-hal, R1 ayant la même signification que dans la formule I et hal désignant le brome ou d'iode, de manière à obtenir une porphyrine tétrasubstituée en 5,10,15,10 de formule générale 263218? +. l __/ \- (CH2) n-R hal -/3J et d) ce composé est métallée à l'aide d'un sel MXp, M et X ayant la même signification que dans la formule I et p correspondant à la valence du métal M. L'étape a) est effectuée en milieu acide, notamment acide propionique au reflux, en présence d'anhydride acétique. Selon la signification du radical R, une protection est nécessaire. Si R = NH2, on choisira R' = NO2 et alors l'étape b) consistera à réduire NO2 en NH2, notamment par le chlorure stanneux en milieu acide fort. Si R = COOH, on choisira pour R' un ester d'alkyle correspondant et l'étape.b) consistera à hydrolyser cet ester. Une protection n'est pas néces- saire dans les autres cas. L'étape c) d'alkylation est effectuée de manière classique, dans un solvant polaire neutre tel que le diméthylformamide (DMF) au reflux. L'étape d) de métallation, peut aussi être effectuée dans le DMF au reflux, notamment en présence de 2,4,6-collidine. Selon une variante, les étapes c) et d) peuvent être inversées. L'invention concerne aussi l'utilisation des composés (I) pour la préparation de molécules hybrides à usage thérapeutique, comprenant, par exemple une métalloporphyrinrie (1) reliée à un intercalant tel que la 9méthoxy-ellipticine, ce qui permet de disposer de molécules ayant l'activité biologique de chacun des deux composants. Les exemples suivants illustrent l'inven- tion. Les spectres de résonance magnétique nu- cléaire ont été obtenus sur un appareil Bruker 250 WM FT. Les spectres de masse ont été obtenus soit sur un appareil Ribermag R1010 pour les spectres en DCI (NH3), Varian Mat 311A en désorption de champ ou ZAB pour les spectres en FAB et les spectres UV-visible sur un appareil Varian-Cary 2300. EXEMPLE 1: Pentaacétate de 5- (III). a) 5-(4-nitro-phényl)-10,15,20-tris(4-pyri- dyl)-porphyrine Un mélange de 3 g (0,020 mole, 1,75 eq.) de nitro-4-phényl carboxaldéhyde dans 158 ml d'acide pro- pionique et 8 ml d'anhydride acétique est chauffé à *C sous agitation. A cette solution-, on ajoute len- tement 3,2 ml (0,034 mole, 3 eq.) de pyridine-4-carbo- xaldéhyde puis 3,1 ml (0,045 mole, 4 eq.) de pyrrole et on porte le mélange au reflux pendant 1 h 30. Reve- nu i la température ambiante, le mélange est évaporé à sec neutralisé avec une solution aqueuse d'ammoniaque. Après filtration, le précipité est lavé plusieurs fois avec du dichlorométhane, La phase organique est ensuite concentrée puis purifiée sur une colonne de silice sèche (éluant: dichlorométhane puis dichloro- méthane/éthanol: 95/5). Produit isolé = 0,526 9; Rdt = 7,1 Z. CCM: Rf = 0,51 (éluant: CH2Cl2/EtOH 95/5). UV-visible (CHCl3) >(> 3 3 '3 3 ); 546 (2,8 x 10); 512 (6,7 x 10); 418 (1,6 x ) (bande de Soret). - RMN 1H (DMSOd6); 6: 9,16 (d, 4H, J = 5,6 Hz, protons 2,6-pyridine); 9,02 (m, 8 H, -pyrrole); 8,78 (d, 2H, J = 8,60 Hz, p-?,r,-pyridine); 8,61 (d, 2H, J = 8,60 Hz, p-3,5-pyridine); 8,38 (d, 4H, J = 5,6 Hz, p-3,5- pyridine); 8,26 (d, 2H, J = 8,60 Hz, p-2,6-nitro-4- phényl); 8,19 (d, 2H, 3 = 8,60 Hz, p-3,5-nitro-4-phé- nyl);-2,84 (s, 2H, NH Pyrrole). Analyse: (dans les calculs, on a considéré qu'il y avait une molécule d'eau de solvatation), C41 H26N802' H20. C H N Calculé Z 72,34 4,15 16,46 Trouvé Z 72,87 4,06 16,93 b) 5-(4-amino-phényl)-10,15,20-tris(4-pyri- dyl)-porphyrine A 0,252 g (0,38 mmole) de la porphyrine (a) dans 18 ml d'acide chlorhydrique 6N, on ajoute 0,672 9 (3 mmoles, 8 eq.) de chlorure stanneux dihydraté et on laisse le mélange sous agitation à température ambi- ante pendant 15 h. Le mélange est ensuite neutralisé avec de la soude 1 N puis extrait au dichlorométhane. La phase organique est lavée à l'eau puis séchée sur sulfate de magnésium. Le solvant est évaporé à sec. Le résidu repris dans du dichlorométhane est précipité par l'addition de l'hexane (CH2Cl2/hexane: 1/10) puis filtré et séché sous vide. Produit isolé = 0,21 g: Rdt = 87 Z. CCM: Rf = 0,23 (éluant:CH2Cl2/EtOH 95/5) UV-visible (CHCl3) (CE): 652 (3,0 x 10 3) 590 (3,2 x 3 3 3 3 ); 554 (4,5 x 10); 516 (7,8 x 10); 420 (8,8 x 104) (bande de Soret). M+ + Masse (DCI): M = 633 et (FD): M -H - 63? RMN H (DMSOd6 à 303 K I: 9,15 (d, 6H, J = 5,50 Hz, p-2,6 pyridine); 8,98 (m, 8H, -pyrrole); 8,3-6 (d, 6H, J = 5,50 Hz, p-3,5-pyridine); 7,99 (d, 2H, J = 8,20 263218 7 Hz, p-2,6-amino-4-phényl); 7,14 (d, 2H, 3 = 8,20 Hz, p-3,5-amino-4-phenyl) ; 5,87 (s, 2H, NH2);-2,80 (s, 2H, NH pyrrole). c) Iodure de [5-(4-amino-phényl)-10,15,20- tris(N-méthyl-4-pyridyl)_porphyrine A 0,014 g (0,02 mmole) de porphyrine (b) dans 4 ml de DMF,.on ajoute goutte à goutte 0,014 ml (0,2 mmole, 10 eq.) d'iodure de méthyle et on porte le mélange au reflux pendant 3 heures. La solution est ensuite agitée à la température ambiante pendant 15 heures puis le solvant est évaporé à sec. Le résidu est trituré avec du dichlorométhane, du méthanol puis de l'acétone. Après filtration, le produit est séché sous vide. Produit isolé = 0,019 g; Rdt = 83%. UV-visible (MeOH/AcOH): 99/1)> (E): 655 (1,3 x 103); 590 (4 x 103); 560 (4 x 103); 515 (1,3 x 104); 421 (7,0 x 10) (bande de Soret). Masse (FD): m/e = 660 RMN H (DMSO-d6 à 303 K) F: 9,60 (d, 6H, 3 = 5,9 Hz, p-2,6-pyridine); 9,27 (m, 8H,-pyrrole); 9,13 (d, 6H, J = 5,9 Hz, p-3,5pyridine); 8,18 (d, 2H, 3 = 8,6 Hz, p-2,6-amino-4-phényl); 7,34 (d, 2H, 3 = 8,6 Hz, p-3,5- amino-4-phényl); 4,86 (s, 2H, NH2), 3,29 (s, 9H, CH3); -2,73 (s, NH Pyrrole). d) Pentaacétate de 5-(4-amino-phényl)-10, ,20-tris (N-méthyl-4-pyridyl)-porphyrine de manga- nèse (III) A 0,053 g (0,05 mmole) de iodure de porphy- rine (c) dans 4 ml de DMF, on ajoute 0,062 ml (0,047 mmole, 10 eq.) de 2, 4,6-collidine puis 0,047 mmole (10 eq.) d'acétate de manganèse, Mn (CH3C0)2,4H20. Le mé- lange est porté au reflux pendant 3 heures puis on le laisse sous agitation à température ambiant-e pendant heures. Le solvant est évaporé à sec et le résidu est lavé à l'eau puis repris dans du méthanol. L'ad- dition de résine essorée d'échangeurs d'ions de type Amberlite IRN 78 sous forme acétate (4 eq.) à cette solution suivie d'une agitation de 3 heures à la tem- pérature ambiante permet, après filtration puis évapo- ration du solvant, d'obtenir l'acétate du titre. Le produit est ensuite purifié par précipitation dans un mélange méthanol/acétone. Rdt = 80Z. P.F. supérieure à 240"C. la formule développée de ce composé est représentée à la dernière page de la description. e) Variante de préparation par inversion des étapes c) et d) précédentes. A 0,030 g (0,05 mmole de porphyrine (b) dans 3 ml de DMF, on ajoute 0,062 ml (0,047 mmole, 10 eq.) de 2,4,6 collidine puis 0.047 mmole (10 eq.) de sel de manganèse, Mn (CH3C0)2 4H20, de fer ou de zinc. Le mélange est porté au reflux pendant 3 heures puis on le laisse sous agitation à température ambiante pen- dant 15 heures. Le solvant est évaporé à sec et le résidu est lavé à l'eau puis, purifié sur une colonne sèche d'alumine neutre (éluant: dichlorométhane puis dichlorométhane/éthanol). A la métalloporphyrine ainsi obtenue dans 3 ml de DMF, on ajoute l'iodure de méthy- le (10 eq) et on porte le mélange au reflux pendant 4 heures puis, on le laisse agiter à la température am- biante pendant 15 heures. Le mélange est ensuite éva- poré à sec puis repris dans du méthanol. L'addition de résine essorée d'échangeurs d'ions de type Amberlite IRN 78 sous forme acétate (4 eq) à cette solution sui- vie d'une agitation de 3 heures à la température am- biante permet, après filtration puis évaporation du solvant, d'obtenir l'acétate du titre. Le produit est ensuite purifié par précipitation dans un mélange mé- thanol/acétone. Rdt = 82 Z. Sa formule développée (M = Mn, X = CH3COO) est représentée sur la dernière page de la description. On a obtenu de la même manière le dérivé de fer et de zinc correspondant en remplaçant l'acétate de manganèse respectivement par FeCI2,4H20 ou Zn (CH3COO)2, 2H20 (10 eq chaque fois). EXEMPLE 2: Préparation d'une molécule hybride métal- loporphyrine-intercalant. a) Bromure de N -(4-éthoxycarbonyl-butyl) -9méthoxy-ellipticinium, Lin mélange de 9-méthoxy-ellipticine* (0,102 9; 0, 37 mmole) et de 5-bromo-valérate d'éthyle (0,058 ml; 0,37 mmole; 1 eq.) dans 2 ml de DMF anhydre est chauffé à 120'C sous agitation pendant 4 heures. L'a- gitation est maintenue pendant la nuit à température ambiante puis, on ajoute de l'éther au mélange. Après filtration, la poudre orange obtenue est lavée à l'éther puis séchée sous vide. Produit isolé = 0,156 g; Rdt = 871. UV-visible (CHCl)) (ú): 406 (3,9 x 103); 390 (4,15 x 3 33 3 103); 348 (3,4 x 103); 332 (6,5 x 103) RMN H (DMSO-d6 à 303 K) ': 10,11 (s, 1H, H1); 8,57 (d, 1H, 3 = 7,1 Hz, H3); 8,43 (d, 1H, 3 = 7,1 Hz, H4); 7,82 (d, 1H, 3 = 1,9 Hz, H10); 7,62 (d, 1H, 3 = 8,8 Hz,H7); 7,33 (dd, 1H, 3 = 2,2 Hz, 8,7 Hz, H8); 4,83 (t,2H, 3 = 7,1 Hz, (CH2)12); 4,16 (q, 2H, 3 = 7,1 Hz, (CH2)17); 4,02 (s,3H,CH30); 3,44 (s,3H,(CH3) i); 2,84 (s,3H, (CH3)5); 2,53 (t,2H,3 = 7,3 Hz, (CH2) 15); 2,16 (m,2H,(CH2 13); 1,73 (m, 2H,(CH2) 14); 1,28 (t,3H,3 = 2 13 ' 2 14 7,1 Hz,(CH3)18). Les atomes de carbone du bras ont été numérotés de 12 à 18 en partant de l'azote 2 de la 9- méthoxy-elJripticiriJne (le méthyle de la partie ester ayant le numéro 18). 2632 187 * Ce composé et son activité ont été notamment décrits dans J. Le Men et coll., Rev. Europ. Etud. Clin. et Biol. 1970, XV, 534-538. b) chlorure de N -(4-carboxybutyl)-9-métho- xy- ellipticinium 0,148 g (0,3 mmole) d'ester (a) dans 14 ml d'acide chlorhydrique 1N sont chauffés au reflux sous agitation pendant 3 heures. L'agitation est maintenue pendant toute la nuit à la température ambiante. Le mélange est ensuite évaporé à sec; le résidu est re- pris dans du méthanol et on fait précipiter le produit par l'éther sous forme d'une poudre orange. Après fil- tration, le produit est séché sous vide. Produit isolé = 0,125 g; Rdt = 99Z. La présence d'ions chlorure a été vérifiée par un test avec le nitrate d'argent. UV-visible (CHC13 /MeOH) > (E): 452 (1,29 x 10 3); 386 3 3 4 (2,5 x 103); 321 (1,8 x 104) Masse (DCI) =: M = 377 Déc. 210'C RMN1 H (DMSO-d6 à 303 K): 12,19 (lH,s,COOH); 10,22 (1H,s,H1); 8,65 (d, 1H, J = 7, 2 Hz, H3); 8,59 (d, 1H, J = 7,2,Hz,H4); 8,05 (d,1H,J = 2,3 Hz,H10); 7,73 (d, 1H,3 = 8,7 Hz,H7); 7,44 (dd,1H,3 = 8,7 Hz, 3 = 2,3 Hz, H8); 4,84 (t, 2H,3 = 7,0 Hz, (CH2) 12); 4,06 (s,3H,CH3 0);3,46 (s,3H, (CH3)l); 3,43 (s, 1H,NH); 2,97 (s,3H, (CH3)5); 2,45 (t,2H,3 = 7,4 Hz, (CH2)15); 2,16 (m,2H, (CH2)13); 1,70 (m,2H,(CH2)4). Le chlorure obtenu est dissous dans du mé- thanol. L'addition de résine essorée d'échangeurs d'ions de type Amberlite IRN 78 sous forme acétate (4 eq.) à cette solution suivie d'une agitation de 3 heures à la température ambiante permet, après fil- tration puis évaporation du solvant, d'obtenir l'acé- tate correspondant. Le produit est ensuite purifié par précipitation dans un mélange méthanol/éther. -1 IR (lames NaCl):' = 1656 cm Co 263218? UV-visible (CH O30H) (: 385 (5,7 x 103); 318 (5,7 x 104). c) chlorure de 5-j4-ú5-(9-méthoxy N -ellip- ticinium)-butyryl amino7-phényli-10,15,20-tris-(4- pyridyl)porphyrine A 0,054 g (0,13 mmole; 5,4 eq.) de (b) dans 2 ml, de dichlorométhane anhydre, on ajoute 0,023 ml (0,16 mmole; 6,7 eq.) de la triéthylamine puis 0,021 ml (0,22 mmole; 9,1 eq.) de chloroformiate d'éthyle et on laisse le mélange sous agitation à températ_.. F- biante pendant 30 mn. Le mélange est ensuite évapora à sec puis repris dans 2 ml de dichlorométhane anhydre. On ajoute 0,023 ml (0,16 mmole) de la triéthylamine puis 0,015 g (0,024 mmole) de la porphyrine de l'exem- ple 1 b) et on porte le mélange au reflux pendant 4 heures. L'avancement de la réaction est suivi par CCM. On laisse ensuite le mélange revenir.à la température ambiante puis, le solvant est évaporé à sec. Le résidu repris par le dichlorométhane est purifié sur plaque de silice (éluant: EtOH/CH2Cl2 20/80) à l'abri de la lumière. Le produit est repris par du méthanol et de l'acide acétique. Le filtrat est évaporé à sec, lavé à l'eau distillée puis séché sous vide. Produit isolé = 0,011 g; Rdt = 45Z. Masse (FD): M±H = 991. UV-visible (CH O30H/AcOH: 99/1) (>): 318 (7,6 x 10); 414 (5,2 x 104); 508 (3,7 x 103). RMN1 H (DMSO-d6 à 303 K) c: 10,32 (s,1H,H); 9,16(cd, 6H, 3 = 5,3 Hz, p-2,6-pyridine); 9,01 (m,8H,Q-pyrro- le); 8,73 (m,1H,H3); 8,67 (m,1H,H 4); 8,38 (d,6H,J3 = ,3 Hz,p-3,5pyridine);8,21 (m,4H,arnino-4-phényl);8,09 (s élargi, 1H,H1);7,76 (d,1H,J = 8,7 Hz,H7); 7,44 (d 1 0 7' élargi, 1H,J = 8,7 Hz, H8); 4,96 (m,2H(CH2-)12; 4,10 (m,1H,NH); 4,02 (s, 3H,CH30); 3,53 (s,3H,Me11); 3,01 263218 7 (s,3H,Me5)2,34 (m,2H,(CH2)15; 2,10 (m,4H,(CH2) 13 et 14); -2,90 (s,2H,NH pyrroje). d) tétraacétate de 5-j4-a5-(9-méthoxy-N - ellipticinium)-butyrylaminoJphénylî-10,15,20-tris(N- méthyl-4-pyridyl)porphyrine Le résidu de l'étape (c) précédente est repris dans 3 ml de DMF sec, 0,021 ml (0,34 mmole, 10 eq.) d'iodure de méthyle est ajouté puis, on porte le mélange au reflux pendant 3 heures. On laisse le mé- lange sous agitation à la température ambiante pendant heures. Le solvant est ensuite évaporé à sec et le résidu est lavé à l'eau plusieurs fois. Après filtra- tion, le précipité est trituré avec l'acétone puis filtré et séché sous vide. Produit isolé = 0,041 g; Rdt = 76Z. UV-visible (MeOH) >(E): 655 (2,19 x 10); 592 (3,4 x 103; 555 (5,0 x 10; 519 (8,4 x 10 3); 425 (1,00 x 5), bande de Soret); 318 (5,9.10 4). L'échange d'ions iodure en acétate s'effec- tue avec de bons rendements à partir d'une solution méthanolique de ce produit ajoutée à la résine essorée d'échangeurs d'ions de type Amberlite IRN 78 sous for- me acétate. Après 2-3 heures d'agitation à la tempéra- ture ambiante, le mélange est filtré et le solvant évaporé à sec. Le résidu est trituré avec de l'acéto- ne, filtré et séché sous vide (Rdt = 80Z). * UV-visible (MeOH) > (): 652 (1,7 x 103); 590 (1,5 x 103); 545 (2,3 x 103); 512 (5,3 x 103); 415 (7,7 x 4), bande de Soret); 318 (2,7 x 10 4). + Masse (FAB -dans HCl): 1091. RMN'H (DMSO-d6 à 296 K): 10,32 (s,1H,H1); 9,16 (d, 6H,J = 5,1 Hz, p-2,6pyridine); 9,00 (m,8H,-pyrrole); 8,73 (m,1H,H3); 8,61 (m,1H,H); 8,37 (d, 6H,J = 5,1 Hz, p-3,5-pyridine); 8,24 (s,4H,amino-4-phényl); 8,03 (s, 26 3 2 187 1HH 10); 7,73 (d,1H,J = 8,70 Hz,H7); 7,42 (dd,1H,J3 = 8,70 Hz,J = 2,4 Hz, H8); 4,98 (m,2H,(CH)12;4,01 (s,3H, OCH3); 3,70 (s,3H,Me11); 3,48 (s,9H, CH3); 2,98 (s,3H, Me5); 2,33 (m,2H,(CH2)15; 2,13 (m,4H,(CH2)13 et 14); 2, 03 (s,3HCH3COO); -2,91 (s,2H,NH pyrrole). Cette molécule peut étre métallée de la méme manière que la prophyrine correspondante selon l'exem- ple 1 c). On préfère toutefois utiliser la méthode suivante combinant les étape c) et d) du présent exemple. e) méthode générale de synthèse de métallo- porphyrines hydrosolubles liées à une molécule d'in- tercalant consistant en la 9-méthoxy-ellipticine. A 0,070 g (0,17 mmole, 4,8 eq.) de (b) dans 3 ml de dichlorométhane anhydre, on ajoute 0,037 ml (0,26 mmole; 7,6 eq.) de triéthylamine, puis 0,035 ml (0,37 mmole; 10,6 eq.) de chloroformiate d'éthyle et on laisse le mélange agiter à la température ambiante- pendant 30 mn. Le mélange est ensuite évaporé à sec, puis repris dans 3 ml de dichlorométhane sec. On ajoute 0,037 ml (0,26 mmole) de triéthylamine, puis 0,022 g (0,35 mmole) de la prophyrine de l'exemple 1 b) et on porte le mélange au reflux pendant 4h. Le mélange est ensuite évaporé à sec, puis repris dans 3 ml de DMF anhydre. 0,050 ml (0,38 mmole, 11 eq.) de 2,4,6-collidine, puis 0,39 mmole (11 eq.) de sel de manganèse, de fer ou de zinc (Mn(CH3COO)2,4H20; FeCl2, 4H20; Zn(CH3COO)2,2H20) sont ajoutés à la solution. Le mélange est chauffé à 140'C pendant 3h, puis on le Jaisse agiter à Ja température ambiante pendant 15h. Le solvant est ensuite évaporé à sec. Le résidu est Javé à l'eau distillée, puis purifié sur une colonne sèche d'alumine neutre (éluant: CH2C12 puis -CH2Cl2/ MeOH). La métalloporphyrine ainsi obtenue est re- prise dans 3 ml de DMF anhydre. I 'iodure de méthyle (10 eq.) est ajouté à la solution. On porte le mélange au reflux pendant 3h, puis on le laisse agiter pendant 15 h à la température ambiante. Le solvant est évaporé à sec et le résidu repris dans du méthanol. L'addition de résine essorée d'échangeurs d'ions de type Amber- ]ite IRN 78. sous forme acétate (4 eq.) à cette solu- tion, suivie d'une agitation de 3h à la température ambiante, permet, aprés filtration puis évaporation du solvant, d'obtenir l'acétate correspondant. Le résidu est ensuite lavé au dichlorométhane, puis recristal- lisé dans un mélange méthanol/acétone. Rdt = 60-80Z. UV-visible (H20) (f) pour les trois composés hybrides métallés, respectivement les dérivés: (Mn): 565 (4,8 x 10); 465 (3,7 x 10 4), bande de So- ret); 316 (4,7.10 4). (Fe): 430 (2,7 x 10, bande de Soret; 315 (2,4 x 104). (Zn): 615 (5,01 x 10); 570 (9,9.10 3); 442 (9,5.10 4), bande de Soret; 3,15 (6,1 x 104). Masse (FAB): pour (Mn): 1182 et pour (Fe): 1183. Les métalloporphyrines Mn et Fe étant paramagnétiques, nous ne pouvons décrire que le spectre RMN 1H du com- posé (Zn): RMN1H (DMSO d6 à 303 K): 10,24 (s,1H,H1); 9,54 (d,6H,J = 5,2 Hz, p-2,6-pyridine); 9,10 (s,4H, amino- 4-phényl); 9,00 (m,8H, -pyrrole); 8,62 (m,2H,H3 et H4); 8,20 (m,6H, p-3,5pyridine); 8,09 (s élargi, 1H, H10; 7,77 (d,1H,J = 8,7 Hz, H7); 7,45 (d, 1H,J = 8,7 Hz, H 8); 4,83 (m,2H, (CH2)12); 4,04 (s,3H,OCH3); 3,55 (s, 3H, Me11); 3,44 (s,9H.,CH3); 3,03 (s,3H,Me5); 2,3S (m,2H,(CH 2) 15); 2,12 (m, 4H, (CH2) 13+14); 2,02-(s,3H, CH3COO 263218 7 Pour chacun de ces composés on n'observe aucun point de fusion en-dessous de 240 C. Activités biologiques des métalloporphyrines hydrosolubles selon l'invention. L'activité cytotoxique a été déterminée sur des cellules leucémiques murines de type L1210 selon une méthode déjà décrite (par C. Paoletti, S. Cros et coll., Chem. Bio. Ineract., 25, 45 (1979). L'effet sur Ja croissance cellulaire est exprimé en termes de dose inhibant 50X de la croissance cellulaire (DI 50). Seu- les les valeurs des DI50 inférieures à 2 pM peuvent être considérées comme significatives sur le plan bio- logique. Les résultats de cytotoxicité sont rassem- blés dans le tableau 1. Seuls les composés porphyrini- ques ayant un métal central susceptible d'atteindre de hauts degrés d'oxydation ou capables ce conduire à des espèces métal-oxo en présence d'oxygène ou de dérivés réduits de l'oxygène présentent une cytotoxicité ap- préciable: c'est le cas des complexes du manganèse. Les composés métallés avec le zinc n'ont pas de toxi- cité significative (tableau 1). Le composé métallé avec le fer, possède une toxicité plus faible que le composé analogue avec le manganèse. Le produit le plus intéressant de cette série est le composé de l'exemple 1 (Mn). Il s'agit là d'une métalloporphyrine hydrosoluble présentant une fonction amine sur l'un des substituants en position méso du macrocycle, ce qui permet d accorcher par l' intermédiaire d'un bras cette molécule active à une autre entité présentant une affinité pour les acides nucléiques. Il peut conduire à la synthèse de molé- cules hybrides cytotoxiques avec un vecteur-(interca- lant, oligonucléotides, oligopeptides, protéines ou fragments de protéines) adapté à la cible biologique (cellules tumorales, virus...). Nous avons décrit un tel exemple (intercalant) dans l'exemple 2. Par ailleurs, ces molécules cytotoxiques présentent une activité nucléase sur de l'ADN in vitro. Cette activité a été mise en évidence en étu- diant les coupures sur la forme superenroulée (forme I)- de 1'ADN de bactériophage X 174 (voir tableau 2). L'efficacité de coupure avec le composé (1), possédant trois groupes pyridinium est très nette. En effet il ne reste que 13X de la forme I au bout de 2 mn en présence de 250 nM de métalloporphyrine et 5 uM d'hydrogénopersulfate de potassium. KHSO5 Il s'agit ' là de coupures simples brins, puisque la forme II (ADN duplex circulaire avec une coupure) s'accumule avant de conduire à la forme III (ADN duplex linéaire) . Les conditions expérimentales et les détails de la méthode d'analyse sont indiqués dans la référence Fouquet et coll. (cf. page 1). Activités biologiques des molécules hybri- des, Nous avons choisi comme molécule hybride une métalloporphyrine (I1) reliée à un intercalant de la série pyrido-carbazole comme vecteur, à savoir la 9- méthoxy-ellipticine. La molécule hybride la plus cytotoxique est celle o le métal central est Je manganèse (DI50 du composé (2) = 0,58 uM, voir tableau 1). Le composé analogue avec le fer reste toujours cytotoxique (DI50 : 3,2 uM), par contre la toxicité devient beaucoup plus faible lorsque le métal est le zinc. Ceci con- firme que Je m,étal de la partie porphyrinique joue un role essentiel dans l'expression de la toxicité de ces molécules hybrides. Ce même effet du métal central a été observé pour les metalloporphyrines sans vecteur. Il faut noter que la molécule de l'exemple 2 présente toujours une activité nucléase importante, bien que plus faible que l'exemple 1. La quasi-com- plète transformation de la forme I en forme II est obtenue à une concentration de 4 uM en composé (2). Les molécules hybrides selon l'invention peuvent être considérées comme les premiers modèles biologiquement actifs de la b]éomycine, médicament antitumoral agissant par dégradation oxydante de l'ADN en présence de sels métalliques (Sausville et coll., Biochemistry, 17, 2740 (1978). En conclusion, les métalloporphyrines hydro- solubles et portant une fonction pour l'accrochage de vecteurs selon l'invention présentent à la fois une activité cytotoxique sur des ceJlules.tumorales et une capacité à couper Jes acides nucléiques in vitro. Ces deux activités biologiques sont conser- vées lorsque ces mêmes métallopophyrines sont reliées par l'intermédiaire d'un bras à un vecteur capable de moduler l'affinité ou l'interaction de ces molécules cytotoxiques vis-à-vis des acides nucléiques (les vec- teurs peuvent être des lntercalants, cas décrits ci- dessus, des oligonucléotides, oligo- ou polypeptides, ou des polyamines...). Il s'agit là d'une nouvelle série originale de molécules cytotoxiques ayant pour cible les acides nucléiques. La large gamme des vecteurs qui leur sont associables permet d'envisager une activité cytotoxi- que sur des cellules de type très différent: cellules tumorales, virus... les composés de l'invention sont donc utili- sables en thérapeutique, notamment comme antitumoraux, antileucémiques et antiviraux. L'invention a aussi 2 6 3 2 187 pour objet les compositions pharmaceutiques contenant ces composés ainsi qu'un véhicule ou excipient pharma- ceutiquement acceptable. Tableau 1 - Effets in vitro sur des cellules L1210 de quelques composés selon l'invention Composé D50 (M) ______________________________________________________ 1 (Mn) 0,54 1 (Fe) 2,1 1 (Zn) 10,9 2 b) >23 2 (Mn) 0,58 2 (Fe) 3,2 2 (Zn) >7,5 Tableau 2 - Observation par électrophorèse sur gel d'agarose des effets endonucléases Composé Conditions 1 pM en métalloprophyrine PM en KHSO5 temps de pré-incubation (ADN+métallo- porphyrine):a)20 mn, b) 1 mn temps d'incubation (avec oxydant): 2mn 25...........................................-- Formes I II III (ADN témoin) 85X 15Z7 - 1 (Mn) (250 nM)a 13Z 78Z 9Z 1 (Mn) (250 nM)b 63X 37Z - 1 (Fe) (250 nM)b 75Z 257 - 1 (Zn) (250 nM)b 85Z 157 - 1 (Mn) (1 M)a - 597 411 2 (Mn) (1 PM)a 327 65 37 2 (Mn) (4 pM)a - 71 107 2 (Fe) (4 ?M)a 58Z 31Z - à-- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - co _t9 rt ó v - - (%J C'4 *' E X ty., e N HN CD I N '- -' - J OH:D -N-., ' REVENDICATIONS 1. Dérivés de métalloporphyrines selon l'invention répondant à la formule générale X X-,ZX dans laquelle Z représente N -R1 ou C-N RR 1 étant un groupe aliphatique droit ou ramifié en C1 à C10, et R2 et R3 étant chacun un atome d'hydrogène ou un grou- pe aliphatique droit ou ramifié en C1 à C10, R représente un groupe NH2,OH,COOH ou un atome d'ha- logène, n est O ou un entier de 1 à 10, le groupe alkylène correspondant pouvant être droit ou ramifié, M représente un métal de transition, et X représente l'anion d'un acide carboxylique pharma- ceutiquement acceptable. 2. Composés selon la revendication 1, carac- térisés en ce que R1 représente un groupe méthyle ou éthyle. 3. Composés selon la revendication 1, carac- térisés en ce que R2 et R3 représentent chacun un atome d'hydrogène. 4. Composés selon la revendication 1, carac- térisés en ce que M représente Mn ou Fe. 5. Composés selon l'une quelconque des re- vendications 1 à 4, caractérises Pr ce que Z repré- sente le groupe N R1. 6. Le Pentaacétate de 5-(4-aminophényl)- 10,15,20-tris(N-méthyl-4-pyridyl)-porphfyrine de man- ganèse (III). 7. Procédé de préparation des composés (I) selon la revendication 1, caractérisé par les étapes suivantes: (a) condensation d'un phénylcarboxaldéhyde de formule 4 ICHO I 3- R '-(CH2) 2 2n dans laquelle n à la même signification que dans la formule I et R' le groupe R éventuellement protégé de la formule I, avec un aldéhyde de formule III / _4 CHO dans laquelle Z' représente N ou C-NR2R3' R2 et R3 ayant la même signification que dans la formule I, et avec le pyrrole en milieu acide, de façon à obtenir une porphyrine (PP) tétrasubstituée en positions 5,10, ,20 de formule générale fi y / x t (CH')-R"\ IV dans laquelle R, n et Z ont les mêmes significations que dans les formules II et III respectivement. b) le cas échéant le composé IV est soumis à une déportection du radical R' pour obtenir une por- phyrine tétrasubstituée en 5,10,15,10 de formule géné- rale dans laquelle Z' a la même signification que dans la formule III et n et R ont la même signification que dans la formule I, c) le composé de formule V est soumis à une réaction d'alkylation à l'aide d'un halogènure R -hal, R1 ayant la même signification que dans la formule I et hal désignant le brome ou d'iode, de manière à obtenir une porphyrine tétrasubstituée en 5,10.15,10 de formule générale PP i (CF2)n-R) 3 hal VI et d) ce composé est métallée à l'aide d'un sel MXp, M et X ayant la même signification que dans la formule I et p correspondant à la valence du métal M. 8. Procédé selon la revendication 4, carac- térisé en ce que les étapes c) et d) sont inversées. 9. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient un composé selon l'une quel- conque des revendications 1 à 6, et un véhicule ou excipient phramaceutiquement acceptable. 10. Utilisation des composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour la prép- ration de molécules hybrides à usage thérapeutique. 11. Utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que la molécule hybride est obtenue avec la 9-méthoxy-ellipticine.