FR 2634375 A1 19900126 FR 8808874 A 19880630 La présente invention a pour objet un pro- cédé de préparation de systèmes colloïdaux dispersi- bles de lipides amphiphiles. sous forme de liposomes oligolamellaires submicroniques. On connait de nombreux documents décrivant la préparation et l'utilisation des liposomes, notam- ment comme véhicules de substances biologiquement actives telles que les médicaments, protéines, enzy- mes, agents de diagnostic ou produits cosmétiques. Ainsi. des substances hydrosolubles peuvent être encapsulées dans les espaces aqueux du liposome. ou des substances lipophiles peuvent être incorporées dans la paroi lipidique. Un procédé de préparation de systèmes vési- culaires oligolamellaires a déjà été décrit par Ban- gham et coll. (3. Mol. Biol. 13, 238-252; 1965). Selon ce procédé, les lipides et les substances lipophiles sont dissous dans un solvant organique et traités par une phase aqueuse sous forte agitation. Toutefois ce procédé, comme la plupart des procédés connus qui en dérivent, ne permet pas d'obtenir directement des liposomes de taille particulaire inférieure au micro- mètre, ce qui permettrait une bien plus grande stabi- lité des particules et de leurs dispersions. L'invention fournit un procédé simple et applicable à grande échelle, de préparation de lipo- somes de taille submicroscopique. L'invention concerne donc un procédé de préparation de systèmes colloidaux dispersibles de lipides amphiphiles, sous forme de liposomes oligo- lamellaire submicroniques, dont la paroi est cons- tituée par lesdits lipides et éventuellement d'une substance A et dont le noyau est constitué par de l'eau ou d'une solution aqueuse, et contenant éven- tuellement une substance B, caractérisé en ce que: (1) on prépare une phase liquide constituée essentiel- lement par une solution des lipides amphiphiles et éventuellement de la substance A dans un solvant ou dans un mélange de solvants, et pouvant contenir la substance B en solution, (2) on prépare une seconde phase liquide constituée essentiellement par de l'eau ou une solution aqueuse de la substance B, (3) on ajoute, sous agitation modérée, la première phase à la seconde phase, de manière à obtenir, pra- tiquement instantanément, une suspension colloidale de liposomes, (4) si l'on désire, on élimine tout ou partie du sol- vant ou du mélange de solvants et de l'eau, de manière à obtenir une suspension colloidale de concentration voulue en liposomes. La substance A, de nature lipophile, est destinée à modifier les caractéristiques physiques (charge électrique, rigidité) ou chimique de la paroi. Elle peut être du cholestérol, de la stéarylamine, de 1 acide phosphatidique, etc... La substance B est une substance biologique- ment active, notamment un principe actif médicamenteux ou un précurseur médicamenteux, un réa.ctif biologique ou un produit cosmétique. La substance B est intro- duite dans la phase (1) si elle est lipophile et dans la phase (2) si elle est hydrophile. Les lipides amphiphiles peuvent être des glycolipides, des phosphoaminolipides, et notamment les phospholipides, par exemple les lécithines (d'oeuf, de soja, etc...). Le solvant est de préférence un alcool miscible à l'eau en toutes proportions, notamment l' éthanol. La concentration des lipides dans le solvant peut être de 0.,1 à 10- en poids. de préférence 1 à 5X en poids. Il est avantageux que le volume de solvant utilisé pour la phase (1) soit compris entre 30 et 100.; par exemple environ 50Z, du volume d'eau de la phase (2), afin d'obtenir des liposomes de petite taille (notamment de 100 à 300 nm). Ainsi l'invention permet d'obtenir des médi- caments, notamment sous forme injectable, et des pro- duits cosmétiques qui sont très stables. Les exemples suivants illustrent l'inven- tion. Exemple 1: Préparation de liposomes. Phase organique 1 lécithine de soja (Epikuron 170) 2,0 g éthanol absolu 50,0 g Phase aqueuse 2 Eau - 100,0 g La phase 1 est ajoutée sous agitation ma- gnétique à la phase 2. Le milieu devient immédiatement opalescent par formation de liposomes? La taille moyenne des liposomes, mesurée immédiatement après préparation, dans un diffractométre à rayon laser R (Nanosizer de Coultronics), est de 180 nm, avec un indice moyen de dispersion de 0,5. L'alcool est éliminé sous pression réduite, et la suspension de liposome est filtrée sur un verre fritté (pores 9-15 nm). La taille des liposomes, à nouveau mesurée dans le filtrat demeure inchangée. L'examen en microscopie à transmission mon- tre des liposomes oligolamellaires de taille homogène. Exemple 2: Préparation de liposomes contenant du cholestérol (variante de l;exemple 1). On procède comme dans l'exemple 1, mais en ajoutant 0,30 g de cholestérol à la phase alcoolique. Les liposomes obtenus présentant les mêmes caracté- ristiques que dans l'exemple 1. Exemple 3: Variante de l'exemple 1. On 'procède comme dans l'exemple 1, mais en remplaçant la lécithine de soja par de la lécithine d'oeuf. Les liposomes obtenus présentent les mêmes caractéristiques que dans l'exemple 1. Exemple 4: Variante de l'exemple 2. On procède comme dans l'exemple 2, mais en remplaçant la lécithine de soja par de la lécithine d'oeuf. Les liposomes obtenus présentent les mêmes caractéristiques que dans l'exemple 1. Exemple 5: Préparation de liposomes contenant un principe actif hydrophile. On procède comme dans l'exemple 2, mais en ajoutant 0,20 g d'ampicilline (sel de sodium) dans la phase aqueuse. Le taux d'incorporation de l'ampicilline dans les liposomes, mesurée après séparation des liposomes de la phase aqueuse par chromatographie sur gel Sephadex, est de 10'. Exemple 6: Préparation de liposomes contenant un principe actif lipophile. On procède comme dans l'exemple 1, mais en ajoutant 66,7 mg de muramyltripeptide-cholestérol à la phase organique. Le taux d'incorporation du prin- cipe actif est de 100Z. REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation de systèmes colloïdaux dispersibles de lipides amphipiles, sous forme de liposomes oligolamellaires submicroniques, dont la paroi est constituée lesdits lipides et éven- tuellement d'une substance A et dont le noyau est constitué par de l'eau ou d'une solution aqueuse, et contenant éventuellement une substance B. caractérisé en ce que: (1) on prépare une phase liquide constituée essen- tiellement par une solution desdits lipides et éven- tuellement de la substance A dans un solvant ou dans un mélange de solvants, et pouvant contenir la substance 8 en solution, (2) on prépare une seconde phase liquide constituée essentiellement par de l'eau ou une solution aqueuse de la substance B, (3) on ajoute, sous agitation modérée, la première phase à la seconde phase, de manière à obtenir, pra- tiquement instantanément, une suspension colloïdale de liposomes, (4) si l'on désire, on élimine tout ou partie du solvant ou du mélange de solvants et de l'eau, de manière à obtenir une suspension colloïdale de con- centration voulue en liposomes. 2. Procédé selon la revendication 1, carac- térisé en ce que les lipides amphiphiles sont des phospholipides. 3. Procédé. selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que ledit solvant est un alcool miscible à l'eau en toutes proportions. 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'alcool est l'éthanol. 5. Procédé selon l'une quelconque des reve- dications 1 à 4, caractérisé en ce que la concentra- tion des lipides dans le solvant est de 0,1 à 10' en poids. 6. Procédé selon la revendication 5, carac- térisé en ce que la concentration des lipides dans le solvant est de 1 à 5Z en poids. 7. Procédé selon l'une quelconque des reven- dications 1 à 6, caractérisé en ce que le volume de solvant de la phase (1) est compris entre 30 et 100Z du volume aqueux de la phase (2). B. Procédé selon l'une quelconque des reven- dications 1 à 7, caractérisé en ce que la substance A est le cholestérol. 9. Procédé selon l'une quelconque des reven- dications 1 à 7, caractérisé en ce que la substance B est un médicament hydrosoluble. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que les liposomes ont une taille d'environ 100 à 300 nm.