FR 2628972 A1 19890929 FR 8903812 A 19890323 () RÉPUBLI.QUE FRAN AISE Q N de publication: 2 628 972 (à n'utiliser que pour les INSTITUT NATIONAL commandes de reproduction) DE LA PROPRIÉ=TE INDUSTRIELLE DE LA PROPRIÉTÉ INDUSTRIELLE N d'enregistrement national 89 03812 PARIS () Int CI'4: A 61 K 33/04, 31/20, 35/74. @ DEMANDE DE BREVET D'INVENTION A1 ) Date de dépôt: 23 mars 1989. Q Demandeur(s): BIOREX KFT - HU. ) Priorité: HU, 23 mars 1988, n 1484/88. ( Inventeur(s): Péter Literati Nagy: Erzsébet Radvany née Hegedûs: Maria Boros; Jeno Szilbereky; Gyôrgy )Date de la mise à disposition du public de la Blask6; Bela Gachilyi; Gizella Hamar née Nemes; Gabor demande: BOPI " Brevets " n 39 du 29 septembre 1989. Németh. Références à d'autres documents nationaux appa- rentés: rné Titulaire(s): Mandataire(s): Cabinet Ores. Compositions pharmaceutiques agissant en particulier sur le système cardiaque et cardiovasculaire et procédé pour les préparer. L'invention concerne des compositions pharmaceutiques agissant en particulier sur les états thrombo-emboliques du système cardiaque et cardiovasculaire, qui comprennent 0,5 à %/ en masse d'un micro-organisme contenant du sélénium ainsi que 99,5 à 50 %0 en masse d'acides gras en C18.24 contenant au moins deux liaisons insaturées ou leurs dérivés, éventuellement en mélange avec des véhicules et/ou des additifs couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutique et éventuellement avec des antioxydants. En outre, l'invention concerne un procédé pour préparer ces compositions. I 1% N IL N Co UL D Vente des fascicules à l'IMPRIMERIE NATIONALE. 27. rue de la Convention - 75732 PARIS CEDEX 15 La présente invention concerne des compositions pharma- ceutiquei agissant en particulier sur les états thrombo-emboliques du système cardiaque et cardiovasculaire. - Selon un autre aspect de l'inventions on propose un prO- cédé pour la préparation desdites compositions. -On sait que les acides gras w - 3 insaturés en C18-24 possèdent des propriétés biologiques avantageuses. Parmi ces composés, l'acide eicosapentaénolque (EPA) et l'acide docosahexaénoIque (DHA) sont remarquables. Dyerberg et coll. /The Lancet 15, 117 (1978) 7 ont souligné l'timportance et les effets biologiques multiples de ces deux acides. Les effets liés au r8le important des acides gras polyin- saturés8 en particulier du EPA et du DHAq dans l'hyperlipidémie et les affections thrombotiques cnt été passées en revue par Goodnight et coll. /fArteriosclerosis 2, 87 (1982) Review 7. _ - Des compositions pharmaceutiques contenant le EPA et le DHA en tant qutingrédients actifs, ont été décrites par exemple, dans le mémoire descriptif du Brevet Allemand N 3.438.630 pour l1abais- sement du taux de cholestérol sanguin, et en outre dans les demandes de Brevets Japonais publiées sous les Nos. 58.08037 et 60. 49097 contre la sclérose cérébrale et pour empacher la formation du thrombus chez des malades souffrant de cardiopathies. Plusieurs articles ont été consacrés à l'effet inhibiteur d'agrégation piaquettaires donc à l'effet inhibiteur de formation du thrombus du EPA et du DHA i Spencer et Caraegas Prostagl. Leucotrie- r.es and Med. 23, 129 (1986); Knapp et coll.e New Engl. Journ. of Med. 314 937 (1986) 7. L'action antivirale du EPA et du DHA est décrite dans le mémoire descriptif du brevet des U.S.A. 0 4.513.008. Les ingrédients actifs de l'huile de poissons, par exem- ple le EPA et le DHA, sont des précurseurs de la biosynthèse de la sé- rie PG-3 et ils inhibent la formation de métabolites nocifs tels que TXA2 et TXB2 prover.nant de la "cascade de ltacide arachidonique", ainsi dites qui est une chatne de processus biochimiques compliqués partant de l'acide arachidonique. En dehors de leurs divers effets favorables les acides gras polyinsaturés ont la propriété pathologique désavantageuse d'être sujets à une décoemposition spontanée par oxydation dans l'organisme -10 humain en donnant lieu ainsi à la formation d'aldéhydes actifs, tels que le malonodialdéhyde qui est nocif pour l'organisme. Ces aldéhydes sont capables de réagir principalement avec les tissus conjonctifs d' une manière physiologiquement nuisible qui peut conduire à la "lipofus- cinose céroide"s ainsi dites du système nerveux central. On a commencé des recherches sur les effets biologiques des microéléments et des éléments traces dans la dernière décade. Il est ainsi connu à présent que le sélénium est ltune des substances les plus importantes et indispensables pour la vie. L'action favorable du sélénium est principalement due à son effet activateur en direction de l'enzyme glutathione-peroxydases du fait que le sélénium est un cons- tituart indispensable du groupe prosthétique de lfenzyme glutathione- peroxydase. Cette enzyme est ltinhibiteur endogénique le plus important des processus de peroxydation pernicieux. Le séléniums en lui-meie" a un effet hypotenseur, améiio- re les états ischémiquesj, hypoxiques et infarctieux du coeur et inhibe la lipofuscinose céroldep et, en outres il exerce aussi un effet avan- tageux sur la périodontite. Il a une activité anticancéreuse notable et diminue la probabilité d'évolution des maladies cancéreuses. De plus, il est considéré comme un agent inhibiteur de mutagénèse. Le sélénium ne s'accumule pas dans l'organisme, si bien qutil doit être suppléé en continu. Jusqu'alorss le sélénium a été prin- cipalement introduit dans l'organisme sous la forme de composés inorga- niquess par exemple le dioxyde de sélénium et le sélénite de sodium. Un certain nombre dtaltérations ou affections pathologiquess telles que la nécrose hépatiques la nécrose musculaires la destruction de la mem- brane érythrocytaires les lésions intersticielless l'élévation de ST dans lECGs le syndrome cardiaque de Mulberry, le syndrome kwashiorkor (malnutrition protéinique) et la sclérose multiple stavèrent ttre res- pectivement déclenchées par une carence en sélénium. Une revue dlensemble des effets biologiques du sélénium a été publiée par Thressa et coll. / Nutrition Review 35* 7 (1977) 7, Shamberger /=J. of Env. Path. and Tox. 4s 305 (1980) 7 ainsi que Masu- kawa et coil. / Experientia 39, 405 (1983) 7. Les composés organiques du sélénium peuvent &tre obtenus par des procédés de synthèse décrits, par exemple, par Klaiman et GUnther dans leur ouvrage intitulé "Organic Selenium Compour.ds, Their Chemistry and Biology", John Wiley and Sors., Inc. ew-York, 1973. Par ailleurs, on peut également préparer les composés organiques du sélé- nium en utilisant des micro-organismes. Selon ce dernier procédés on cultive les micro-organismes sur des milieux enrichis en composés inor- ganiques du sélénium. Les organismes qui conviennent à cet effet fixent le sélénium et, en l'introduisant dans leur métabolisme, ils le lient à des substances organiques, le plus fréqu-ement à des amino-acides ou des graisses. Ces possibilités sont décrites par Danch et Clbmielow. sky./ Pr. Nauk. Univ. Slask Katowich _ 57 (1985) 7 ainsi que parGerni- ty et coll. / Biochem. Biophys. Res. Commumn. 118 176 (1984) 7. On connatt un certain nombre de micro-organismes qui sont aptes à collecter quelques éléments, tels que le sélénium, dans leur environnement et à les accumuler dans leur propre organisme. La préparation de levure enrichie en sélénium est dé- crite dans le mémoire descriptif du Brevet des U.S.A. N 4.530.846 et dans les demandes de Brevets Japonais publiées sous les Nos 60.224451 et 57.174098. Llenrichissement en sélénium par d'autres micro-crga- nismess tels que des bactériess actinomycètes et hyphomycètes, outre la levures est décrit dans la demande de Brevet Japonais publiée sous le N 78.148587. Selon la demande de Brevet Japonais publiée sous le N 58.129954, on propose l'utilisation de levure contenant du sélénium, en mélange avec des huiles végétaless pour traiter des maladies sérni- les. Le but de la présente invention est de procurer une nouvelle composition pharmaceutique agissant sur le système cardiaque et cardiovasculaires qui rende possible la combinaison des propriétés avantageuses de micro-organismes contenant du sélénium organique nais- sant avec celles du' DHA et du EPA et qui élimine simultar.énment les pro- priétés désavantageuses des acides gras polyinsaturés. L'invention est fondée sur la découverte que l'objectif précité peut 9tre pleinement atteint grâce à une compositions utile pour éliminer la lipofuscinose cérolde, qui peut 1tre obtenue en uti- lisant un micro-organisme contenant du séléniums i ncn toxique du point de vue de l'utilisation humaines conjointement avec des acides gras polyinsaturés, Selon une caractéristique de l'inventions on propose ainsi une composition pharmaceutique agissant sur le système cardiaque et cardiovasculaires qui comprend 0,5 à 907. en masse d'un micro-orga- nisme contenant du sélénium ainsi que 9995 à 50% en masse d'acides gras en C18,24 con.tenant au moins deux liaisons insaturées et/ou leurs dé. rivés, éventuellement en mélange avec des véhicules et/ou des additifs couramment utilisés dans lindustrie pharmaceutique et éventuellement avec des antioxydants. En outre# l'invention vise un procédé pour préparer la composition précitée, qui consiste en ce qu'on mélange 0,5 à 50/ en masse d'un micro-organisme contenant du sélénium ainsi que 99,5 à 50/. en masse d'acides gras en C18.24 contenant au moins deux liaisons in- saturées et/ou leurs dérivés, éventuellement avec des véhicules et/ou des additifs, couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutiques et éventuellement avec des antioxydants, d'une manière couraent connue dans l'industrie pharmaceutique. La composition selon l'invention comprend convenable- ment l'acide eicosapentaénoique (EPA) et l'acide docosahexaénoique (DHA) ainsi qu'une levure contenant du sélénium. Comme matières premières des acides gras Cu- 3 insatu- rés en C18.24 représentant l'un des composants de la composition de l'invention, on peut utiliser des huiles susceptibles d't're obtenues à partir de divers poissons marins et d'eau douces principalement à partir de maquereau, morues harengs sardine, ou mollusques tels que calmars aussi bien qu'à partir du foie desdits poissons, par exemple de l'huile de foie de morue et de l'huile de foie de requin. En plus du EPA et du DHA, les huiles de poissons con- tiennent une grande quantité d'acides gras saturés ainsi que des aci- des gras partiellement insaturés et d'autres constituants non hydroly- sables. L'élimination de ces constituants est très importantes sinon l'administration des compositions thérapeutiques préparées à partir des huiles de poissons auraient pour effet d'augmenter sensiblement la quantité calorique introduite ainsi que le taux sanguin de triglycé- rides. En outres les constituants non hydrolysables peuvent contenir des stéro!des tels que le cholestérol, de la vitamine D (et sa provita- mine) et/oudelavitamine A. Les vitamines D et A sont accumulées dans l'organisme humains de sorte qu'un traitement prolongé, nécessaire pour l'effet désirés serait impossible en utilisant une composition contenant ces vitamines. Par suite, on doit éliminer à partir de l'hui- le de poissons les constituants précités, tels que les acides gras sa- turés et partiellement insaturés ainsi que les constituants non hydro- lysabless par exemple le cholestérol et les vitamines A et D. De cette manières la quantité totale de EPA et DHA de lthuile de poisson est enrichie à plus de 50%. Il est convenable d'utiliser des souches de micro-orga- nismes qui ne sont pas toxiques vis-à-vis de l'organisme humain et qui sont utiles pour la consommation humaine. Les genres largement utilisés en biotechnologie, tels que Lactobacillus Leukonostocp Pediococcus, Acetobacter, Streptococcuss Torula, Kluyveromycess Candida, Brettano- myces, Brevibacteriums Saccharomyces, Torulopsis, Pichia, Hansenula, Oidiums Rhodotorula" Trichospora, Penicillitum Rhizopuss Mucors Monas- cuss Aspergilluss entre autres# qui sont utiles pour la consommation O20 humaines sont très convenables à cet effet. Pour inhiber l'oxydation de la composition de ltinven- tion, il est convenable d'utiliser le "(-tocophérol (vitamine E), la glutathione ou les antioxydants courants tels que le butylhydroxy. toluènes en tant qu'agents conservateurs actifs. On peut utiliser comme véhicule ou support, des substan-. ces couramment utilisées dans l'industrie pharmaceutique, telles que le lactoses l'1amidon ou le stéarate de magnésium, Des recherches pharmaceutiques ont démontré que la compo- sition de l'invention est dépourvue d'effets secondaires dommageables pour la santé, car on n'observe aucune modification du système micro- so=al enzymatique du foie chez le rat en utilisant cent fois la quan- tité de'la dose courante. La quantité de lipofuscine accumulée dans l'organisme est nettement abaissée par comparaison avec le témoin a- près tra4tement avec la composition de l'invention. D'après des exa- mens effectués en utilisant la composition de l'invention chez des rates Wistar pendant 6 semaines# on observe un effet inhibiteur d'a- grégation plaquettaires exempt dtambiguité. La dose efficace quotidienne optimale (calculée pour un poids moyen du corps de 70 kg) de la composition de l'invention est de 0,l à 5 g. Le composant huile contient 22% de EPA et 43% de DHA en moyenne. La dose efficace quotidienne s'élève à 100-300 pg de sélénium. Les principaux avantages de la ccmposition de l'inven- tion peuvent 8tre résumés conmme suit: 1. Les propriétés avantageuses du EPA et du DHA ainsi que celles du sélénium et de la levure sont combinées. 2. Les effets dommageables des compositions connues contenant des huiles de poissonss qui sont provoqués par des consti- tuants tels que les stérols ainsi que les vitamines A et Ds sont dimi- nués cu éliminés. 3.La possibilité d'apparition de la "Iipofuscinose cé- ro!de" comme dans la consommation d'acides gras polyinsaturésp est exclue. 4. La composition de l'invention contient du sélénium en tant que substance naissante enrichie dans un micro-organisme tel que des bactéries, fongi ou levures. Le sélénium administré conjointe- ment avec le micro-organisme spécifique est mieux résorbé et exerce de manière préférable, son effet favorable. 5. Le sélénium lié dans des composés organiques peut 9tre économiquement préparé en grandes quantités, spécifiquement en- richi dans des micro-organismes, principalement dans des levures. 6. La composition exerce une action thérapeutique favo- rable dans le cas de troubles atopiques et est utile pour le traite- ment préventif de l'eczéma, de l'asthme, des sympt8mes allergiques, de la rhinite allergique et/ou de troubles atopiques tels que migraine$ maladie de Crohn# colite ulcérative, otite moyennes syndrome néphroti- que et diabète. Elle est particulièrement utile pour le traitement de troubles du système cardiovasculaire: pour des manifestations apoplec- tiques, des états thrombo-emboliques tels qu'ictuss infarctus et syndro- me de Keshan chez les patients jeunes, de m9me que pour la prévention des conditions anormales. L'invention est illustrée en détails par les Exemples suivants, donnés à titre indicatif, mais nullement limitatif. Les acides gras tO- 3 polyinsaturés utilisés dans la composition de l'invention peuvent ttre préparés conformément à l'Exem- pie 1, tandis que le micro-organisme enrichi en sélénium peut 9tre pré- paré commne décrit dans les Exemples 2 à 6. Les compositions pharmaceu- tiques selon l'invention sont illustrées par les Exemples 7 à 9. Exemple 1 On verse goutte à goutte 8 kg d'une solution d'hydroxyde de sodium à 40%, à 50-600C dans 24 kg d'huile de maquereau dissous à 600C dans 16 litres de méthanol sous agitation. Puis on agite le mélan- ge à 600C pendant 45 minutes supplémentaires. Après addition de 20 kg d'acide chlorhydrique à 157.% à la solution à environ 60 C, on sépare les couches et on lave la phase organique avec 10 kg d'acide chlorhy- drique à 15%. puis avec 180 litres d'eau du robinet chaude, jusqu'à neutralité. On sépare de nouveau les phases, on ajoute 10C litres d' acétone à la phase huileuse que l'on chauffe ensuite à environ 450C et on ajoute 3,8 kg d'hydroxyde de lithium dissous dans 30 litres d' eau. Après une agitation pendant 30 minutes, on laisse reposer le mé- lange pendant une nuit, puis on le filtre et on évapore le filtrat acé- tonique. On acidifie le résidu en ajoutant environ 8 kg d'acide chlorhydrique à 15%, on l'extrait 3 fois avec de l'hexane et on évapore la solution d'hexane. On utilise une antmosphère d'azote pendant l'opéra- tion entière de purification. On obtient ainsi 6,4 kg d'huile de pois- son purifiée. On verse goutte à goutte 1 kg de l'huile de maquereau purifiée comme décrit ci-dessus, à 600C dans une solution contenant 3 kg d'urée dans 9 litres de méthanol. On agite le mélange à la mrme température pendant 2 heures, puis on le refroidit. On l'abandonne au repos à -10oC pendant une nuit, puis on le filtre et on évapore le fil- trat. On ajoute 2s5 litres d'acide chlorhydrique 1:1 au résidu et on agite le mélange pendant 15 minuteso Après extraction à l'hexanes on lave la phase hexane avec de l'eau jusqu'à neutralité, on la sèche sur sulfate de sodium anhydre et on l'évapore en obtenant 0,34 kg d'acides gras W- 3 insaturés ayant un indice d'iode de 315 et contenant 247. de EPA et 42% de DHA. Exemple 2 On verse chaque fois 2 litres d'un milieu de culture à l'extrait de malt liquides stérilisés dans des flacons en verre d'un volume de 5 litres et on enrichit le milieu en ajoutant 3% en masse de glucose. Apres addition de 5/g/wl de sélénite de sodium, on l' inocule avec Saccharomyces cerevisiae. puis on le cultive sous aéra- tion & 320C pendant 72 heures. On ajoute une quantité supplémentaire de 51ug/ml de sélénite de sodium à la culture à la 48ème heure de 1l opération de culture. Après filtrations on lave plusieurs fois les cellules avec de l'eau et on les sèche à 68-70 C. Après micronisations on dé- termine la teneur en sélénium par absorption atomique en obtenant une valeur de 2600P g/g. - Exemple 3 On verse chaque fois 100 ml d'un milieu de culture à l'extrait de levure liquide dans des fioles Erlenmeyer d'un volume de 500 ml dans des conditions stériles. Après addition de 5/ug/ril de sé- lénite de sodiums on inocule le milieu avec la moisissure Aspergillus sojaes puis on secoue les cultures à 28-30 C. On ajoute une quantité supplémentaire de 5eg/ml de sélénite de sodium à la culture le 3ème jour de l'opération de culture. Après 5 jours, on recueille la matiè- re sèche par filtration, on la lave et on la sèche commne décrit dans lvExemple 2o Après micronisation, on détermine la teneur en sélénium d'un échantillon par absorption atomique et on trouve qu'elle est de 3000,ug/g. Exemple 4 On suit le mode opératoire décrit dans lWExemple 3p excepté que l'on utilise la levure Torulopsis utilis, au lieu de la moisissure. La masse microbienne obtenue durant la culture ccntient 1200 /g/g de sélénium. Exemple 5 On cultive Streptococcus thermophilus à 45oC dans un milieu de culture préparé comme décrit dans l'Exemple 3. Pprès la cul- ture et le traitement consécutifs la poudre microbienne contient 4200 pg/g de sélénium. Exemple 6 On cultive la bactérie Lactobacillus mesenteroides com- me décrit dans l'Exemple 39 excepté que l'on supplémente le milieu par il addition de 1% de glucose et 2% de carbonate de calcium en obtenant une masse bactérienne contenant 3000ug/g de sélénium. Exemple 7 On ajoute 10g dtune poudre de levure contenant du sé- lénium (teneur en sélénium: 2600/ug/g) à 150 g d'huile de maquereau (contenant 24% de EPA et 42% de DHA) enrichie à 65%.. Après homogér.é- isations on conserve le mélange par addition de 0915 g de vitamine E. On reriplit avec l'agent actif ainsi obtenu, des capsules de gélatine molle que lion emballe en feuilles blisters. Exemple 8 On suit le mode opératoire décrit dans l'Exemple 7, excepté que lMon utilise les substances de départ suivantes: 400 g d'huile de foie de morue enrichie à 65% ayant une teneur en EPA de 22% et une teneur en DHA de 43%; 100 g de poudre de levure à teneur en sélénium de 1200 pug/g; et 0&4 g de vitamine E. On remplit avec 1l homogénéisatIs des capsules aptes à recevoir chacune 500 mg d'agent actif. Exemple 9 On suit le mode opératoire décrit dans lt'cemple 8, excepté que l'on utilise comme composant huile de poissons 400 g dl une huile de poisson à 30/. (contenant 18% de EPA et 12% de DHA) (pro- duite par la firme Martens and Co., Bergen, Norvège). Exemple 10 On suit le mode opératoire décrit dans l'Exemple 8, excepté que l'on utilise coume composant huile de poissons 400 g d' une huile de poisson contenant 9,2% de EPA et 10,4% de DHA. Exemple 11 On prépare des comprimés ayant la composition suivante, en utilisant des dispositifs et procédés pharmaceutiques connus: Huile de foie de morue enrichie en EPA et DHA et contenant 011% de vitamine E (à teneur en DHA de 437. et à teneur en EPA de 22%) 200,0 mg Poudre de levure contenant du sélénium (teneur en sélénium: 1500,ug/g) 86$0 mg Lactose 140,0 mg Amidon 60,0 mE Polyvinyl pyrrolidone 3,5 mg Stéarate de magnésium 3,5 mg Si on le désire, on peut enrober les comprimés avec du sucre ou avec une autre substance dans une machine à confectionner des comprimés. Il est entendu que lion peut mettre en oeuvre 1' invention suivant de nombreuses variantes et modifications, sans pour autant s'écarter de son cadre et son esprit. REVENDICATIONS 1. Compositions pharmaceutiques agissant sur le système cardiaque et cardiovasculaires caractérisées en ce qu'elles compren- nent 0"5 à 50% en masse d'un micro-organisme contenant du séléntum ainsi que 99peà 50r en masse d'acides gras en C18-24 contenant au moins deux liaisons insaturées et/ou leurs dérivés, éventuellement en mélange avec - des véhicules et/ou des additifs couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutique et éventuellement avec des antioxydants. 2. Composition selon la revendication 1l caractérisée en ce qutelle comprend 5 à 357. en masse du micro-organisme contenant du sélénium et 95 à 65% en masse des acides gras insaturés ou leurs dérivés. 3. Ccmposition selon la revendication 1l caractérisée en ce qu'elle comprend 15 à 25% en masse du micro-organisme contenant du sélénium et 85 à 75% en masse des acides gras insaturés. 4. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend des acides gras extraits de l'huile de poissons marins en tant qu'acides gras insaturés. 5. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle comprend l'acide 5s81114,17-eicosapentaénotque et 1' acide 497$10s13,16,19-docosahexaér.olque en tant qu'acides gras insa- turés. 6. Procédé pour la préparation d'une composition pharma- ceutique agissant sur le système cardiaque et cardiovasculaire, caracté- risé en ce qu'on mélange 0,5 à 50% en masse d'un micro-organisme conte- nant du sélénium ainsi que 9995 à 50% en masse d'acides gras en C18.24 contenant au moins deux liaisons insaturées ou leurs dérivés avec des véhicules et/ou des additifs couramment utilisés dans l'industrie phar- maceutique et éventuellement avec des antioxydar.tss d'une nanière cou- ranment connue dans l'industrie pharmaceutique. 7. Procédé selon la revendication 6p caractérisé en ce que l'on mélange 5 à 35% en masse du micro-organisme contenant du sélé- nium avec 95 à 65% en masse des acides gras insaturés. 8. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'on mélange 15 à 25% en masse du micro-organisme contenant du sélé- nium avec 85 à 75% en masse des acides gras insaturés. 9. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'on utilise des acides gras extraits de l'huile de poissons marins en tant qu'acides gras insaturés. 10. Procédé selon la revendication 6S caractérisé en ce qu'il comprend l'utilisation de l'acide 5s8,1114p17-eicosapenta- énolque et l'acide 4s7O10,13,16,19-docosahexaénoique en tant qu'acides gras insaturés.