FR 2624523 A1 19890616 FR 8816486 A 19881214 ACIDE DESOXYRIBONUCLEIQUE PORTANT L'INFORMATION GENETIQUJE DE LA L-a-GLYCEROPHOSPHATE OXYDASE ET SON APPLICATION. La présente invention concerne un acide déeoxy- ribonucléique (ADN) portant l'information génétique pour la L-aglycérophosphate oxydase, un transformant possédant ledit ADN, un polypeptide que l'on prépare en amenant ledit transformant à exprimer l'information génétique dudit ADN, ainsi qu'un procédé de préparation de ladite L-a-glycéro- phosphate oxydase. La L-a-glycérophosphate oxydase est une enzyme qui catalyse une réaction enzymatique pour la production de dihydroxyacétone phosphate et d'une mole de peroxyde d'hydrogène à partir du L-a-glycérophosphate et d'une mole d'oxygène, conformément au schéma réactionnel suivant: L-aglycérophosphate + 02 - dihydroxyacétone phosphate + H202 Etant donné que la L-a-glycérophosphate oxydase (ci-après désignée par l'abréviation "GPO) "> est une oxydase ayant le L-a-glycérophosphate comme substrat, comme on peut le voir à partir du schéma réactionnel ci-dessus, elle peut être utilisée pour le dosage quantitatif du L-a-glycéro- phosphate. De plus, cette enzyme, lorsqu'elle est utilisée en combinaison avec d'autres enzymes telle que lipase, glycérol kinase, ou similaires, ou avec un réactif ATP, fournit une méthode de dosage simple et spécifique pour les composants mettant en jeu la réaction, tels que l'activité lipase, les triglycérides, la glycérine, l'ATP, et similaires. Pour ces raisons, la L-cc-glycérophosphate oxydase est une enzyme majeure pour l'analyse biochimique quantitative qui doit remplacer l'analyse chimique quantitative non-spécifique classique. Ainsi,cette enzyme est très utile dans le domaine du diagnostic clinique, ainsi que dans le domaine de la recherche. La GPO est connue depuis longtemps comme existant dans la nature. Par exemple, il a été rapporté que l'enzyme existe dans des microorganismes appartenant aux genres tels que Streptococcus, Lactobacillus, Leuconostock, Pediococcus, et Aerococcus [Archives of Biochemistry and Biophvsics, 88, 250 (1960); Brevet Japonais Publié n 72 892/1978; et Brevet Japonais Publié n 15 746/1980]. Cependant, la production de GPO par ces microorganismes producteurs de GPO connus de façon classique a posé plusieurs problèmes. De façon spécifique, tous les microorganismes producteurs de GPO connus n'ont donné qu'un faible rendement en GPO. Les microorganismes producteurs de GPO appartenant & la souche Streptococcaceae et à la souche Lactobacilleceae nécessitent l'addition d'une substance induisant la production de GPO, telle que le glycérol, l'acide ascorbique. les a-céto acides, ou similaires. De plus, l'élimination des autres enzymes et similaires, qui existent conjointement avec la GPO dans le produit de ces microorganismes, est très difficile. En raison de ces problèmes, une GPO de qualité élevée n'a pu être produite qu' à un coût extrêmement élevé, et ceci a donc empêché que la GPO soit largement utilisée comme réactif à des fins de recherche et pour le diagnostic clinique. De plus, il n'y a pas eu de rapports concernant la structure primaire détaillée du gène de OPO, ni sur la structure primaire de la séquence d'acides aminés pour la protéine constituant la GPO. Les présents inventeurs ont entrepris des études approfondies pour améliorer le rendement en GPO et pour réduire la quantité des autres enzymes co-existantes production de GPO dans le milieu de production. En conséquence, la présente invention a pour but de proposer un ADN ayant une séquence en bases codant pour une séquence d'acides aminés d'un polypeptide constituant la L-a-glycérophosphate oxydase (GPO), un transformant possédant ledit ADN, un polypeptide qui présente une activité GPO et qui est produit par la mise en culture dudit transformant, une GPO présentant des caractéristiques physico-chimiques supérieures, ainsi qu'un procédé de production d'une telle GPO. D'autres buts, caractéristiques et avantages de la présente invention apparaîtront plus aisément ci-après à la lecture de la description suivante. La Figure 1 est une représentation schématique montrant la con struc tion du plasmide pGPOS1. L'ADN de la présente invention peut être préparé, par exemple, par le procédé suivant, par l'application des techniques du génie génétique. L'ADN d'un microorganisme qui est le donneur du gène de GPO et possède une capacité de production de GFO est tout d'abord séparé et purifié. Cet ADN est digéré par l'utilisation d'ondes ultrasoniques ou d'endonucléases de restriction. Cet ADN digéré et un ADN vecteur d'expression, qui est rendu linéaire, sont réunis avec une ADN ligase. ou similaire, aux extrémités tronquées ("blunt") ou cohésives des deux ADN, pour former un cercle fermé. Le vecteur d'ADN recombinant ainsi obtenu est introduit dans un microorganisme hôte reproductible. On cultive les microorganismes possédant ledit vecteur d'ADN recombinant choisis,au moyen d'un criblage, à l'aide d'un marqueur du vecteur et de l'activité GPO en tant qu'indicateurs. Ledit vecteur d'ADN recombinant est ensuite séparé des cellules cultivées et il est purifié. L'ADN possédant l'information génétique de la GPO de la présente invention est ensuite séparé dudit vecteur d'ADN recombinant. Tout microorganisme ayant une capacité de production de GPO peut être utilisé comme microorganisme donneur du gène de GPO aux fins de cette invention. Des exemples sont * les microorganismes producteurs de GPO0 appartenant au genre Streptococcus décrits dans les Demandes de Brevets Japonais Publiéesn 72 892/1978, 15 746/1980, 165 789/1978 et similaires, comprenant les souches Streptococcus faecium F-24, Streptococcus faecalis 10C1, Streptococcus faecium ATCC 12755, Streptococcus faecium ATCC 8043, Streptococcus faecalis ATCC 19488, Streptococcus cremoris NRRL B684, et similaires; ò les microorganismes producteurs de GP0 appartenant au genre Pediococcus, comprenant les souches Pediococcus cerevisiae ATCC 8042 (Pediococcus acidilactici ATCC 8042), Pediococcus cerevisiae ATCC 8081 Pediococcus urinae-equi ATCC 29722 (Pediococcus urinae- equi IFO 12173), et similaires; * les microorganismes producteurs de GPO appartenant au genre Lactobacillus, comprenant les souches Lactobacillus delbruckii NRRL B445 (Lactobacillus casei subsp rhamnosus ATCC 10863), delbruckîi NRRL B445 Lactobacillus fermentum NRRL 8338, Lactobacillus leichmannii ATCC 4797, et similaires; * les microorganismes producteurs de GPO appartenant au genre Leuconostoc, comprenant la souche Leuconostoc mesenteroides et similaires; et * les microorganismes producteurs de GP0 appartenant au genre Aerococcus, comprenant les souches Aerococcus viridance IFO 12219, Aerococcus viridance IFO 12317, et sirmilaires. Parmi ceux-ci, les microorganismes producteurs de GPO appartenant au genre Streptococcus sont préférés. Les présents inventeurs ont encore entrepris des études approfondies pour la production d'une GPO ne présentant aucun défaut propre à toutes enzymes connues. et ils ont découvert qu'une nouvelle souche GPOS-53 appartenant au genre Streptococcus, qui a été isolée du sol d'un ranch à Yamaguchi, Susono City, Shizuoka Prefecture, Japon, produisait une GPO présentant des caractéristiques physico- chimiques supérieures. Cette souche GPOS-53 est un microorganisme particulièrement préféré pour produire ledit gène de GPO. Les caractéristiques taxonomiques de cette nouvelle souche GPOS-53 sont les suivantes: I. Conditions de croissance dans divers milieux de culture pas produit de substance pigmentaire soluble. (2) Culture sur milieu en plaque (milieu de gélose nutritive + extrait de levure 0;2%) Les colonies sont circulaires, de forme-convexe et de couleur blanc crémeux ou laiteux. Il n'est pas produit de substance pigmentaire soluble. (3) Milieu liquide (Bouillon de soja tryptique, fabriqué par Difco Co.) Les cellules se développent bien, le bouillon devenant trouble. Ensuite, les cellules précipitent et le surnageant devient clair. ( Le bouillon de culture devient acide. II. Caractéristiques morphologiques Les cellules sont sphériques ou ovoïdes. Ce sont des cellules individualisées, non-liées, des cellules à deux chaines, et des cellules à longue chaine. Les cellules sont nonmobiles et elles ne forment pas de spores. La dimension des cellules va de 0,8 à 1,0.m. III. Caractéristiques physiologiques et biochimiques (dans les descriptions ci-après, "+" signifie positif, "-n signifie négatif, et " F Croissance dans des conditions anaérobies + Température de croissance 45 C + C + 10oC + Résistance aux sels: à une concentration en NaCl de 0% + ,0% + 6,0% - Croissance à pH 9,5 + pH 8,0 + pH 4,0 + Croissance dans un milieu lait- bleu de méthylène + Production de catalase Production d'oxydase Production d'uréase (API 20 STREP> + Décomposition de la cellulose Décomposition de l'arginine + Production d'indole Production de sulfure d'hydrogène Production d'acétoine (NaCl) + Test MR + Réduction des nitrates Dénitrification Test d'utilisation Acide citrique (à la fois pour Simons et Chris) - Acide malique (pour Simons) (pour Chris) + Acide propionique (pour Simons> Acide malonique (pour Chris) + Production de gaz à partir du glucose Production d'acide à partir de carbohydrates: Adonitol L Inositol Inuline Lactose + Maltose + Mannitol + Mannose + Mélibiose + Mélézitose Raf f inose + L(+) Rhamnose - D-ribose + Salicine + L-sorbose Sorbitol Amidon + Saccharose + Xylose Tréhalose + Hémolyse (API 20 STREP) Sur la base des caractéristiques mycologiques ci-dessus, le nouveau microorganisme de cette invention peut être considéré en résumé comme un microorganisme gram- positif, sphérique ou ovoïde; existant sous forme individualisée, par paires ou à longue chaine; incapable de produire de la catalase ou de l'oxydase; décomposant par fermentation les carbohydrates pour produire des acides; i5 non-mobile; incapable de produire des spores; et ayant une taille de 0,8 à 1,0 im. Selon la description du Bergey's Mannual of Determinative Bacteriologv (8ème édition), le microorganisme est Jugé comme appartenant au genre Streptococcus. Des microorganismes appartenant au genre Streptococcus (désigné parfois ci-après pour simplifier par (S.)) peuvent être regroupés selon leur capacité à se développer à 10 C et 'C, à se développer dans un milieu de lait à 0, 1% de bleu de méthylène, à décomposer la gélatine, à présenter une résistance aux sels, et similaires. La comparaison entre les souches principales appartenant au genre Streptococcus et le microorganisme de la présente invention en ce qui concerne ces caractéristiques est résumée dans le tableau ci-dessous. Les microorganismes utilisés pour la comparaison étaient les suivants: (1) S.. pyogenes (2) S. equisimilis (3) S. equi (4) S. pneumoniae (5) S. salivaris (6) S. bovis (7) S. faecalis (8) S. feecium (9) S. lactis 2624SZ3 Mlcroorganisme de la présente Mieroorganisme (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9: invention Coloration de 6firam + t+ + + + + + Croissance à 1IO'C - - - - - + + Croissance à 45'C - - - - + + - + Croissance dans le bleu de eméthylène - - - - -+ + & 0,IX Décomposition d - - - - - - - - - de la gélatine Décomposition - d NT NT - + - - - - de l'amidon Décomposition - - - NT - d NT d +T de l'hippurate Décomposition + d - NT + + + d t de l'esculine Décomposition t + + NT - + + - + 0 de l'arginine Résistance aux sels- - - - - - + - - (à 6,5%) Croissance & pH 9,6 B - - - - (d'après Bergey's Manual; O' édition) De la comparaison ci-dessus, il ressort que le microorganisme de la présente invention est Jugé comme étant' une souche similaire à S. faecel s, S. faecium et S. lactis. Ces trois souches et le microorganisme de la présente invention sont comparés plus en détail dans le tableau suivant. Microoroanisme de Microorganisme S, faecalis, faeciuR. lacdis la présente invention Taille (gm) 0,5-1,0 0,5-1,0 0,5-1,0 0,5-1,0 x 1,0 Coloration de Gram 4 + + + Croissance à lO'C + + + Croissance à 45'C - + + + Croissance dans le bleu de méthylène à 0,1% + + + + Décomposition - - - de la gélatine Décomposition de l'amidon - - - Décomposition d d ou + d + de l'hippurate Décomposition d + + + de l'esculine 15. Décomposition + + + + de l'arglnine Résistance aux sels + t (tà 6,5%) Croissance à pH 9,6 + t + Utilisation + - de l'acide citrique Production d'acide: Gl61ucose + + + + Maltose + + + Lactose + + + 2 5 Xylose d d Arabinose d d ou+ t Sucrose d d d + Tréhalose d + + + Mannitol d + d + Salicine d + + Raffinose - - d + Inuline - - d + Gl61ycérol - + + + Sorbitol - + d ou - - Inositol Melézitose + - Mélibiose - + + ___ ____ - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ D'après la comparaison ci-dessus, le microorganisme de la présente invention montre de fortes analogies avec S. faeclun Cependant, il diffère de S. faecium en ce qui concerne la capacité de décomposition de l'hippurate et la résistance aux sels , caractéristiques qui sont l'indication de l'appartenance des microorganismes au genre Streptococcus. Ce microorganisme a donc été identifié comme un microorganisme appartenant au genre Streptococcus, et il a été appelé Streptococcus sp. GPOS-53 et déposé auprès de Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology [n de dépôt 2120, FERM BP-2120]. Le procédé d'obtention d'un ADN induit par le microorganisme donneur du gène va maintenant être décrit. On cultive tout d'abord n'importe lequel parmi les microorganismes donneurs du gène mentionnés ci-dessus, dans un milieu de culture liquide, sous aération, pendant 1 à 3 Jours. Le bouillon de culture est soumis à une centrifugation pour recueillir les cellules, après quoi les cellules sont lysées pour produire une bactériolyse contenant le gène de GPO. Le traitement par une enzyme lysant la paroi cellulaire, telle que le lysozyme ou la -glucanase, est utilisé pour la bactériolyse, en combinaison. si nécessaire, avec d'autres enzymes, telles que la protéase ou avec un agent tensio-actif, tel que le laurylsulfate de sodium. De plus, la digestion physique des parois cellulaires au moyen de la congélation-décongélation ou de la presse de French, par exemple, peut être employée conjointement avec le lysat. Des méthodes classiques de purification, comprenant, par exemple, un traitement de déprotéination par une extraction au phénol, un traitement par protéase, un traitement par ribonucléase, une précipitation dans un alcool,. et une centrifugation, peuvent être appliquées, soit indépendamment, soit en combinaison, pour la séparation et la purification de l'ADN provenant de la bactériolyse. La digestion de l'ADN du microorganisme ainsi séparé et purifié peut être effectuée & l'aide d'un traitement par ultrasons ou par des endonucléases de restriction. Cependant, afin d'assurer une jonction aisée des fragments d'ADN et de l'ADN vecteur, l'utilisation d'endonucléases de restriction est préférable, en particulier d'une endonucléase de type II, agissant sur les séquences nuclêotidiques spécifiques, telles que EcoR I, Hind III, BamH I, ou BamH II. Des vecteurs souhaitables employés sont ceux reconstruits pour être utilisés comme ADN recombinant génétique par traitement artificiel d'un phage ou d'un ADN de plasmide,qui est capable de se développer de façon autonome dans des cellules bactériennes hôtes. Dans le cas o Escherichia coIl est utilisé comme microorganisme hôte, par exemple, Xgt. XC, Xgt.XB, ou similaires, peuvent être utilisés comme vecteur de phage. Comme plasmides, pBR322, pBR325, pACYC184, pUC12, pUC13, pUC18, pUC19, ou similaires, sont utilisés lorsque Escherichia cols est le microorganisme hôte, alors que pUB110, pC194, ou similaires, sont utilisés lorsque Bacillus subtileis est le microorganisme hôte. De plus, on peut employer des vecteurs navettes, qui peuvent se développer de façon autonome dans des cellules bactériennes hôtesde microorganismes gram-positifs ou de microorganismes gram- négatifs, ou des deux, par exemple, dans Escherichia coli ou Saccharomyces cerevislae ou les deux. Ces vecteurs sont, de façon souhaitable, digérés à l'aide de la même endonucléase de restriction que celle utilisée dans la rupture de l'ADN du microorganisme donneur du gène de GPO mentionné ci-dessus. Une méthode classique de ligation utilisant une ADN ligase peut être employée pour relier l'ADN bactérien et le fragment de vecteur. Par exemple, l'extrémité cohésive de l'ADN bactérien et celle du fragment de vecteur sont tout d'a- bord mises sous forme bicaténaire, puis un ADN recombinant du fragment d'ADN bactérien et du fragment de vecteur peut. être préparé par l'action d'une ADN ligase appropriée. Si nécessaire, l'ADN bactérien-fragment de vecteur, soUS forme bicaténaire, est introduit dans le microorganisme hôte pour produire l'ADN recombinant & 1'aide d'une ADN ligase in vivo. On peut utiliser, comme bactérie hôte, tout microorganisme qui permet une croissance autonome et stable de l'ADN recombinant et qui est capable d'exprimer le caractère de l'ADN étranger. Des exemples de ces microorganismes comprennent Escherichia coli DH1, Escherichia coli HB101, Escherichia cols W3110, Escherichia col+ C600, et similaires, lorsque Escherichia coli est utilisé comme bactérie hôte. L'introduction de l'ADN recombinant dans le microorganisme hôte peut être effectuée en présence de l'ion calcium, lorsque le microorganisme hôte est une bactérie appartenant au genre Escherichia. Lorsqu'une bactérie appartenant au genre Bacillus est utilisée comme microorganisme hôte, on peut utiliser la méthode des cellules compétentes ou la méthode d'introduction par fusion électrique pour introduire l'ADN recombinant ribosomiue dans le protoplaste du microorganisme hôte. La méthode par micro-injection-peut être également utilisée. L'introduction de l'ADN désiré dans le microorganisme hôte peut être détectée au moyen d'un cri'lage utilisant un marqueur de résistance aux médicaments du vecteur et l'activité OPO en même temps. Par exemple, on peut choisir des bactéries qui se développent sur un milieu de culture sélectif à base du marqueur de résistance aux médicaments et qui produisent la OPO. L'ADN recombinant possédant ledit gène de OPO, une fois sélectionné de cette manière, peut être facilement extrait du transformant pour être introduit dans une autre bactérie hôte. En variante, l'ADN du gène de GPO peut être digéré à l'aide d'une endonucléase de restriction ou similaire, à partir d'un ADN recombinant possédant un gène de OPO, et il est réuni avec une terminaison d'un vecteur rendu linéaire obtenu d'une manière similaire, produisant ainsi une molécule d'ADN recombinant ayant de nouvelles caractéristiques. Celle-ci peut alors être introduite dans d'autres microorganismes hôtes. Un ADN codant pour une GPO mutéine, qui possède une activité GPO substantielle, désigne un ADN changé par mutation, produit par une technique de génie génétique, à partir d'un gène de GPO de la présente invention, Cette mutation peut être introduite dans le gène à l'aide de diverses techniques de génie génétique, comprenant la méthode de mutagénèse spécifique du site et une méthode pour remplacer un fragment d'ADN spécifique du gène visé par un fragment d'ADN changé par mutation. Parmi les mutéines ainsi préparées, les ADN de GPO mutéine, ayant des caractéristiques particulièrement souhaitables, peuvent être réunis avec un vecteur, pour produire un ADN recombinant, lequel est ensuite introduit dans un microorganisme hôte, pour produire une GPO mutéine. La séquence en bases de l'ADN de cette invention, préparé par la méthode décrite ci-dessus, peut être déterminée par la méthode didésoxy [Science 214, 1205 - 1210 (1981)]. Par exemple, la séquence en bases d'un gène de GPO dans un plasmide préparé à l'aide de la souche Streptococcus sp. GPOS-53, appartenant à un microorganisme donneur de gène de GPO, et Eschericheia coli comme bactérie hôte, est représentée par la formule (I) suivante: X-TTTTCAAACAAGACAAGACAAGATAGCATTCAAAATGCAGCAAGAAGAATTGGAT CTGTTGATCATCGGTGGCGGAATCACTGGTGCCGGTGTGGCAGTCCAGGCAGCAGCATCA GGAATCAAAACAGGATTGATCGAAATGCAAGATTTTGCAGAAGGGACGTCCTCTCGCTCG ACCAAACTTGTGCATGGCGGTATTCGTTATCTGAAAACATTTGATGTGGAAGTAGTAGCT GACACAGTTGGTGAACGTGCAGTCGTACAAGGTATTGCCCCACACATCCCAAAACCAGAT CCAATGCTTTTACCAATCTATGAAGATGAAGGAGCAACAACCTTCAATATGTTCTCTGTC AAAGTAGCAATGGACCTTTACGACAAACTGGCAAATGTGACAGGAACTAAATATGAGAAC TATACCCTCACACCAGAAGAAGTATTGGAAAGAGAACCATTTTTGAAAAAAGGAAGGCTA AAAGGTGCAGGTGTTTATCTGGATTTCCGCAACAATGATGCCCGTTTAGTGATCGATAAT ATCAAAAAGGCTGCAGAAGATGGGGCTTATCTAGTAAGTAAAATGAAAGCGGTTGGCTTT TTATATGAGGGCGATCAAATCGTTGGTGTCAAAGCTCGTGATCTGCTGACAGATGAAGTG ATAGAGATCAAAGCAAAATTAGTGATCAATACGAGTGGTCCTTGGGTAGATAAAGTACGG AACTTGAATTTTACGCGTCCAGTCTCTCCTAAAATGCGTCCAACCAAAGGGATCCATTTA GTCGTAGATGCGAAAAAACTGCCTGTACCGCAACCCACATACTTCGATACAGGAAAACAA GATGGGCGGATGGTTTTTGCTATCCCAAGAGAAAACAAGACTTACTTTGGTACGACAGAT ACGGATTACCAAGGAGACTTTACGGATCCAAAAGTCACACAAGAAGACGTGGATTATCTA TTGGATGTAATCACCCATCGCTATCCAGAAGCAAATATCACATTGGCAGATATCGAAGCA AGCTGGGCAGGGCTTCGTCCACTATTGATTGGTAATTCTGGTTCTGATTATAATGGTGGA GATAATGGATCGATTTCAGACAAGAGCTTCAATAAAGTGGTTGATACAGTAAGTGAATAT AAGGAAAATAAAGTTTCTCGTGCTGAAGTAGAAGATGTGTTGAACCATTTGGAAAACAGC CGCGACGAAAAAGCACCTTCTACGATTTCCAGAGGTAGTTCTTTAGAAAGAGAACCAGAT GGCTTGTTGACTTTATCAGGTGGGAAAATCACTGATTACCGTAAGATGGCAGAAGGAGCT TTACGATTGATTCGTCAGCTGTTAAAAGAAGAATACGGAATAGAGACGAAAGAAATCGAC TCTAAAAAATATCAGATTTCAGGTGGAAACTTCGATCCAACGAAATTAGAAGAAACAGTG ACGGAATTAGCAAAAGAAGGAGTAGCAGCCGGTTTAGAGGAAGAAGATGCTACTTATATC GCTGATTTTTACGGGACTAATGCTCGACGTATGTTTGAATTAGCAAAAGAAATGGCACCT TATCCTGGTTTGAGTCTCGCTGAGTCAGCTCGGTTACGTTATGGCTTAGAAGAAGAAATG GTTTTAGCTCCAGGTGATTATCTCATTCGTCGTACGAATCATCTGTTGTTTGAACGAGAT CAGCTGGATGAGATCAAGCAACCTGTGATCGATGCAATTGCTGAGTATTTTGGGTGGACA GAAGAAGAGAAGGCGCAACAGACTAAACGTTTAGAAGCATTGATCGCAGAATCAGATCTG CGGGAACTAAAGGGGGAGAAA-Y o - X représente un codon autre que TAA, TAG ou TGA, ou un groupe 5' terminal: et - Y représente un codon ou un groupe 3' terminal. Dans la formule (I) ci-dessus, le codon représenté par X peut être tout codon pour autant qu'il code pour un acide aminé. De plus, X peut posséder à son extrémité 5'. un ou plusieurs codons codant pour un acide aminé. Des exemples préférés de X sont ATG ou un acide polydésoxyribonucléique correspondant à un peptide signal. Le codon représenté.par Y peut être tout codon choisi parmi les codons de terminaison de translation et les codons codant pour un acide aminé. Y peut posséder, à son extrémité 3', un ou plusieurs codons codant pour - un acide aminé, et, dans ces cas, il est toutefois souhaitable qu'un codon de terminaison de translation soit prévu à l'extrémité 3' de ces codons. La séquence d'acides aminés du polypeptide produit par l'expression de l'ADN de la présente invention peut être prédite à partir de la séquence en bases de l'ADN. La séquence d'acides aminés de la fraction constituant l'extrémité N-terminale dudit polypeptide peut être déterminée par la méthode discutée ci-dessous. Un microorganisme donneur du gène de GPO, capable de produire la GPO, est tout d'abord cultivé dans un milieu nutritif, afin de produire et d'accumuler de la GPO dans les cellules. Les cellules cultivées ont été recueillies à partir du bouillon, par filtration, centrifugation, ou moyens similaires. Les cellules recueillies ont été ensuite détruites, soit par des moyens mécaniques, soit par des moyens enzymatiques, à l'aide de lisozyme ou similaire, et, au lysat, de l'EDTA et/ou un agent tensio-actif approprié ont été ajoutés, si nécessaire, pour solubiliser et séparer la GPO sous la forme d'une solution aqueuse. Cette solution aqueuse de GPO est ensuite condensée, ou, sans être condensée, soumise & un fractionnement au sulfate d'ammonium, une filtration sur gel, une chromatographie d'adsorption, ou une chromatographie d'échange d'ions, afin d'obtenir une GPO de pureté élevée. La séquence d'acides aminés de la fraction constituant l'extrémité N terminale du peptide GPO est déterminée pour cette GPO hautement purifiée, à l'aide d'un séquenceur de protéines en phase liquide (Beckman System 890ME, fabriqué par Beckman, Inc.). De cette manière, il a été confirmé que la séquence d'acides aminés de ladite fraction était identique à la séquence d'acides aminés de l'extrémité N-terminale de la GPO obtenue par une technique de génie génétique. La séquence d'acides aminés déterminée de cette manière & partir de la séquence en bases ci-dessus est représentée par la formule - B représente un reste d'acide aminé ou un groupe -OH. Dans la séquence d'acides aminés exprimée par la formule (II), le reste d'acide aminé représenté par A peut consister en un ou plusieurs acides aminés. Des exemples préférés de A sont un atome d'hydrogène, Met, ou un polypeptide signal. Le groupe représenté par B peut être, soit un amide d'acide, soit un ou plusieurs restes d'acides aminés. Le transformant ainsi obtenu, lorsqu'il est cultivé dans un milieu nutritif, peut produire une quantité importante de OPO d'une manière stable. La culture du transformant est conduite dans les conditions déterminées en prenant en considération les caractéristiques physiologiques et nutritives du microorganisme hôte. Dans la plupart des cas, on emploie une culture liquide. Cependant, dans une production à échelle industrielle, une culture dans des conditions d'agitation, forteinta4robies, est plus avantageuse. Une grande variété de milieux nutritifs habituellement utilisés pour la culture de bactéries peut être utilisée pour cultiver le microorganisme hôte. D'une manière spécifique, tous composés carbonés qui sont utilisables peuvent être utilisés comme sources de carbone. Ceux-ci comprennent, par exemple, le glucose, le sucrose, le lactose, le maltose, le fructose, les mélasses, et similaires. Comme sources d'azote, tous composés azotés disponibles peuvent être employés, y compris les peptones, les extraits de viande, les extraits de levure, les hydrolysats de caséine, et similaires. D'autres ingrédients, y compris des sels, tels que phosphates, carbonates et sulfates, de même que les sels de magnésium, de calcium, de potassium, de fer, de manganèse, de zinc, et similaires, et certains types d'acides aminés ou de vitamines, peuvent être utilisés s'ils conviennent. Le procédé ne nécessite pas l'utilisation de substances inductrices de GPO, telles que le glycérol, l'acide ascorbique, les a-céto acides, et similaires, qui sont essentielles dans le procédé classique de production de GPO. On peut faire varier la température de la culture dans une plage dans laquelle les bactéries peuvent se développer et produire de la GPO. La plage des températures que l'on préfère est 20 - 42'C pour Escherichie coli. On peut faire varier le temps de la culture d'un certain degré en fonction des conditions de la culture. En principe, la culture est terminée au moment o le rendement en GPO atteint un maximum. Dans la pratique habituelle, cela prend environ 12 - 48 heures. Il est possible de faire varier le pH des milieux de culture à l'intérieur de la plage dans laquelle les bactéries peuvent se développer et produire la GPO. La plage des pH particulièrement préférée est d'environ 6 - 8. La GPO peut être présentée à liutilisation sous la forme de bouillon de culture alors qu'il contient des bactéries. Cependant, la GPO contenue dans le bouillon de culture est généralement utilisée après avoir été séparée des cellules par filtration, centrifugation, ou moyens similaires. Lorsque la GPO est contenue à l'intérieur des cellules, les cellules sont tout d'abord séparées par filtration ou centrifugation. Les cellules recueillies sont ensuite digérées, soit par des moyens mécaniques, soit par des moyens enzymatiques, à l'aide du lysozyme ou similaire, et aux bactéries digérées, un agent chélatant, tel que 1'EDTA et/ou un agent tensio-actif approprié, sont ajoutés, si nécessaire, pour solubiliser la GPO, permettant ainsi de recueillir la GPO sous la forme de solution aqueuse. Les solutions contenant la GPO que l'on obtient ainsi, sont ensuite condensées par évaporation sous vide ou par l'utilisation d'un filtre, et elles sont soumises à un traitement de relargage par du sulfate d'ammonium, du sulfate de sodium, ou similaires, ou à une précipitation fractionnée à l'aide d'un solvant organique hydrophile, tel que le méthanol, l'éthanol, l'acétone, ou similaires. Le précipité est dissous dans l'eau, et la solution est dialysée à travers une membrane semiperméable, afin d'éliminer les impuretés de faible masse moléculaire. En variante, le précipité est purifié par filtration sur gel, chromatographie, chromatographie d'échange d'ions, ou similaires. La GPO purifiée est produite à partir de la solution contenant la GPO, qui-est obtenue par l'utilisation de ces divers moyens, par évaporation sous vide, lyophilisation, ou similaires. L'activité de la GPO ainsi préparée est mesurée conformément à la méthode suivante: Mélange réactionnel: 200 mM tampon PIPES-NaOH (pH 6,5) 300 mM Lx-glycérophosphate u/ml peroxydase 1,5 mM amino-4 antipyrine 0,05% Triton X-100 1,0 mM DAOS [sel sodique de la diméthoxy-3,5 N-éthyl-N-( mélange réactionnelet on équilibre la température à 37 C. On aJoute 0,02 ml d'une solution enzymatique et on incube à 37'C pendant 5 minutes. On fait cesser la réaction en ajoutant 2,0 ml de SDS à 0,5% et on mesure l'absorbance à 600 nm (As). On répète le mode opératoire en utilisant de l'eau de dilution à la place de la solution enzymatique (Ab). L'activité de la substance pour produire 1.mole de peroxyde d'hydrogène par minute a été prise comme 1 unité AA 3,02 1 1 Unités/mg = x x x - 16,8 x 1/2 0,02 X 5 o AA = As - Ab, 16,6 est le coefficient d'extinction moléculaire pour la substance colorante quinonique(cm2 /gmole) et X représente la concentration de GOP dans la solution enzymatique Dans la présente description, les acides aminés, peptides, acides nucléiques, et composés apparentés aux acides nucléiques sont indiqués de manière abrégée selon la nomenclature en vigueur. Quelques exemples des abréviations sont énumérés ci-dessous. Toutes les désignations des acides aminés se rapportent aux isomères L. ADN: Acide désoxyribonucléique ARN: Acide ribonucléique A: Adénine T: Thymine G Guanine C: Cytosine Ala: Alanine Arg: Arginine Asn Asparagine Asp: Aspartate Cys: Cystéine Gln Glutamine Glu: Glutamate Gly: Glycine His: Histidine Ile: Isoleucine Leu: Leucine Lys: Lysine Met: Méthionine Phe: Phénylalanine Pro: Proline Ser: Sérine Thr: Thréonine Trp: Tryptophane Tyr: Tyrosine Val Valine D'autres caractéristiques de la présente invention apparaîtront au cours de la description suivante des modes de réalisation qui sont donnés à titre d'exemples pour illustrer l'invention et qui ne sont pas destinés à en limiter la portée. EXEMPLES Exemple 1 [Préparation d'un ADN chromosomique] On a préparé un ADN chromosomique & partir de la souche Streptococcus sp. GPOS-53 Difco Co.; ci-après désigné par l'abréviation"milieu BHRI'. Le bouillon cultivé a été centrifugé à 3 000 tpm pendant 10 minutes, afin de recueillir les cellules. Les cellules ont été mises en suspension dans 5 ml d'une solution contenant 10% de saccharose, 50 mM de Tris acide chlorhydrique (pH 8,O) et 50 mM d'EDTA. A la suspension, on a ajouté 1 ml de solution de lysozyme (10 mg/ml), et le mélange a été incubé à 37 C pendant 15 minutes, en faisant suivre par l'addition de 1 ml de SDS (dodécylsulfate de sodium) à 10%. On a ajouté à la suspension ainsi obtenue un volume égal d'un solvant mixte de chloroforme et de phénol . Cette solution a été traitée par un volume égal de solvant mixte chloroforme- phénol (1:1), et elle a été à nouveau centrifugée afin de séparer la couche aqueuse. On a encore ajouté à cette solution 2 fois son volume d'éthanol, et l'ADN a été à nouveau séparé du mélange de la même manière que celle décrite ci-dessus. Cet ADN a été ensuite dissous dans 2 ml de TE. Exemple 2 [Préparation d'un ADN de plasmide pACYC 184] Escherichia coli pM191 portant pACYC 184 en lui- me [J. Bacteriol.. 134, 1141 (1981); ATCC 37033] a été soumis à une culture avec secousses dans 1 litre de milieu BHI (produit par Difco Co.). Lorsque la turbidité du bouillon a atteint DO660 = 1,0, on lui a aJouté de la spectinomycine à une concentration finale égale & 300 ig/ml. Le secouage du bouillon à 37'C a été poursuivi pendant au moins 16 heures. Après achèvement de la culture avec secousses, le bouillon a été centrifugé à 3 000 tpm, pendant minutes, afin de recueillir les cellules. L'ADN de plasmide, recueilli à partir des cellules, a été préparé conformément à la méthode au lysozyme - SDS et & la méthode au chlorure de césium - bromure d'éthidium [Maniatis et al, Molecular Cloning, 86 - 94, Cold Spring Harbor (1982)]. Exemple 3 [Construction du Plasmide pGPOS1 possédant le Gène de la L-xglycérophosphate oxydase] (1) On a mélangé et incubé à 37'C pendant 1 heure pour digestion, 2 il (environ 0,5 ig) de l'ADN chromosomique de Streptococcus sp préparé à l'Exemple 1, 1 l de t-ampon M [Maniatis et al, Molecular Cloning, 104,; Cold Spring Harbor (1982)], concentré 10 fois, 1 gl de Hind III (1,0 unité/il; produit par Takara Shuzo Co., Ltd. >, et 6 il d'eau. De façon séparée, l'ADN du plasmide pACYC 184 (environ 0,3 pg) a été digéré à l'aide de Hind III selon une méthode analogue. A celui-ci, on a ajouté 0,6 unité de phosphatase alcaline (produite par Takara Shuzo Co., Ltd.; ci-après désignée par l'abréviation "BAP">, et le mélange a été incubé & 65'C pendant 1 heure. Les deux solutions d'ADN ainsi digérées par Hind III ont été mélangées ensemble, et à cette solution d'ADN mélangés, O, 1 volume d'acétate de sodium 3M a été ajouté. Ensuite, la solution a été traitée par un volume égal d'un solvant mixte chloroforme-phénol, et centrifugée pour séparer la couche aqueuse. A celle-ci, on a aJouté 2 fois sa quantité d'l éthanol. et on a fiit précipiter l'ADN à l'aide d'une centrifugation et on l'a séché sous vide. L'ADN séché a été dissous dans 89 l1 d'eau, et à celui-ci, 10.1 de tamponde ligation [Tris acide chlorhydrique 0,5 M (pIH 7,6)MgCl2 0,1 M, dithio- thréitol 0,1 M, spermidine 10 mM, ATP 10 nM] concentré 10 fois et dithiothréitol 0,1 M, spermidine 10 mM, ATP 10 mM] et 1 il d'ADN ligase T4 (350 unités; produit par Takara Shuzo Co., Ltd. > ont été aJoutés et mélangés, et on a laissé reposer le mélange à 4'C pendant toute une nuit. Cette solution d'ADN a été traitée par un mélange chloroforme-phénol, et l'ADN a été précipité par l'éthanol, séché sous vide, et dissous dans 10 il de TE. (2) Escherichia coli DH 1 [J. Molecular Biology, 557 (1983); fourni par Genetic Stock Center; Yale University Medical Department] a été cultivé dans ml de milieu BHI, recueilli durant la phase de croissance logarithmique, par centrifugation (10 000 tpm, 2 minutes), et mis en suspension dans ml d'une solution refroidie par de la glace, contenant 30 mM d'acétate de potassium, 100 mM de RbCl, mM de CaC12, 50 mM de MnCl2, et 15% de glycérol e2 (pH 5,8). Après avoir laissé reposer la suspension à O'C pendant 5 minutes, celle-ci a été centrifugée afin d'éliminer le surnageant. Les cellules ont été mises en suspension dans 4 ml d'une solution contenant 10 mM de tampon MOPS (produit par Dotite Co.>), 75 mM de CaCl2, 10-mM de RbCl et 15% de glycérine (pH 6,5), et on a laissé la suspension à O'C pendant 5 minutes, afin d'obtenir des cellules compétentes. il de la solution d'ADN préparée selon (1) ci-dessus. Après avoir laissé reposer le mélange à O'C pendant minutes, on lui a ajouté 1 ml de milieu BHI, et le mélange a été maintenu à 37'C pendant 90 minutes. Une fraction aliquote du mélange (0,1 ml) a été étalée sur une plaque de gélose au BHI contenant 25 gg/ml de chloramphénicol, et cultivée pendant toute une nuit à 37C, pour produire des transformants. Ces transformants ont été répliqués sur une plaque de milieu GPOS (composition: - peptone......................... 5 g - extrait de viande.. ........... 2 g - extrait de levure............... 5 g NaCl.............DTD: ............... 1 g - K 2HPO4......................... 1 g - MgSO4........DTD: ....... O0,5 g peroxydase...................... 500 UI - dianisidine....DTD: ................. 0,1 g - Flycérophosphate de potassium... 15 g gelose......................... 15 g - eau distillée................... 1 litre pH 7,0), et ils ont été cultivés encore pendant toute..DTD: une nuit à 37 C. Environ 5 000 transformants ainsi produits ont été examinés, afin d'obtenir 4 colonies ayant des périphéries colorées par le charbon actif. L'une des quatre souches a été appelée Escherichia coli DHI pGPOS1 (déposée auprès de Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology; numéro de Dépôt n 9495, FERM BP-2133). Cette souche a été cultivée après purification dans un milieu BHI, pendant toute une nuit, à 37'C, afin de déterminer son rendement en GPO selon la méthode de mesure de l'activité GPO décrite ci-dessus. Comme résultat, on a trouvé que l'activité GPO était égale à 0,5 u/ml. L'ADN de plasmide contenu dans la souche a été séparé selon la même méthode qu'à l'Exemple 2, et le plasmide contenant le gène de la GPO et le gène pACYC 184 a été. appelé pGPOS1. Exemple 4 [Cartographie de pOPOS1 et Détermination de la Séquence en Bases du Gène de GPO] L'ADN de plasmidepGPOS1 a été préparé à partir de la souche Escherichia coli DHI pGPOS1 de la même manière que celle employée pour la préparation de pACYC 184. Une carte de clivage de l' ADN de plasmidepGPOS1 ainsi obtenu a été préparée & l'aide des endonucléases BamH I, Bgi II, Cta I, EcoR I, Pst I, Sel I, et Xho I (toutes produites par Takara Shuzo Co., Ltd.). Les résultats sont représentés sur la Figure 1. La séquence en bases de l'ADN contenant le gène de la GPO a été déterminée par la méthode di-désoxy [Science, 214, 1205-1210 (1981)] à l'aide du phage M13. La séquence en bases du gène de la GPO était celle ayant ATG pour X et TAA pour Y dans la formule (I). La séquence en acides aminés déterminée à partir de la séquence en bases était celle ayant Met pour A et -OH pour B dans la formule (II)>. Exemple 5 [Préparation de la L-a-glycérophosphate oxydase à l'aide de la souche Escherichia coli DHI pGPOS1] Escherichia coli DHI pGPOS1 a été cultivé dans 1 de milieu BHI à 37'C, pendant 18 heures, à l'aide d'un fermenteur, Les cellules ainsi produites ont été -25 recueillies par centrifugation à 5 000 tpm pendant minutes, lavées avec 2 1 de sérum physiologique, et mises en suspension dans 2 1 de tampon phosphate 10 mM . A cette suspension, on a ajouté du lysozyme, EDTA-2Na, et du Triton X-100 en des quantités telles que leurs concentra- tions respectives dans le mélange étaient de 1 mg/ml, 2 mM et 0, 1%. Après incubation à 37'C pendant 30 minutes, le mélange a été centrifugé à 5 000 tpm pendant 10 minutes pour séparer le surnageant. * Le surnageant (1,9 1) a été soumis à un relargage avec du sulfate d'ammontum , et le précipité a été recueilli. Ce précipité a été dissous dans 200 ml de tampon phosphate 10 mM (pH 7,0, contenant 10 FM de FAD), et la solution a été soumise à un traitement de dessalage sur Sephadex G-25. Des fractions actives ont été recueillies par chromatographie d'échange d'ions à l'aide de DEAE-Sepharose CL-6B, dessalées et lyophilisées, pour donner 0,395 g de L-a-glycérophosphate oxydase sous une forme pulvérulente (40 u/mg, rendement: 27%). Les caractéristiques physico-chimiques de la L-a-glycérophosphate oxydase ainsi obtenue étaient les suivantes: (a) Action: catalyse la réaction suivante: L-a-glycérophosphate + 02 - dihydroxyacétone phosphate + H202 (b) Spécificité de substrat: présente une spécificité de substrat pour le L-a-glycérophosphate. (c) pH optimal On a fait réagir de la GPO à chaque pH; tampon glycine-acide chlorhydrique (pH 2,0 - 5,0), tampon acide acétique . Comme résultat, il a été trouvé que le pH optimal de l'enzyme se situait dans la plage de 5,5 - 7,5. (d) Stabilité au pH: On a préparé des solutions de l'enzyme (5,0 u/ml> en utilisant 100 mM du tampon acide acétique (pH 4,0 - 6,0), mM du tampon acide diméthyl-3,3 glutamique-NaOH (pH 5,0 - 7,0), 100 mM du tampon phosphate (pH 6,0 - 8,0), et 100 mM du tampon Tris-acide chlorhydrique (pH 7,0 - 9,0), tous à 100 mM. On a fait incuber chaque solution à 50 C pendant 5 minutes pour déterminer l'activité résiduelle de l'enzyme. Comme résultat, il a été trouvé que l'enzyme était stable à pH 6,0 - 8,0 (e) Valeur de Km: 5,5 + 0,5 mM préparées à l'aide du tampon phosphate 0, 1 M, et l'activité résiduelle de chacune des solutions a été mesurée. Comme résultat, il a été trouvé que l'enzyme présentait une activité de 100% Jusqu'à 40 C. (h) Stabilité de l'enzyme au cours du temps: On a préparé des solutions de l'enzyme en utilisant un tampon MES-NaOH 0,1 M (pH 6,5) et on les a incubées à 37 C pendant différentes périodes de temps. Comme résultat de la mesure de l'activité résiduelle, il a été trouvé que l'enzyme présentait une activité d'au moins % au bout de 24 heures. Cette stabilité dans la solution représente la stabilité de l'enzyme dans des conditions rencontrées dans un diagnostic clinique réel, et démontre que l'enzyme est très utile. L'utilisation de l'ADN et du transformant de cette invention assure une production efficace de la L-a-glycéro- phosphate oxydase sans la nécessité de l'addition de substances inductrices de GPO, telles que le glycérol, l'acide ascorbique, ou similaires. De plus, l'invention a permis d'élucider les caractéristiques du gène de la GPO. Il va de soi que de nombreuses modifications et variantes de la présente invention sont possibles à la lumière des enseignements ci-dessus. Il doit par conséquent être entendu que le domaine de protection ne doit en aucune manière être limité aux modes de réalisation-décrits ici d'une manière spécifique, et que l'invention peut être mise en oeuvre autrement qu'avec ces modes de réalisation spécifiquement décrits. REVENDICATIONS 1 - ADN ayant une séquence en bases codant pour une séquence d'acides aminés d'un polypeptide constituant la L-a-glycérophosphate oxydase. 2 - ADN selon la revendication 1, caractérisé par le fait que ladite L-aglycérophosphate oxydase présente les caractéristiques physico-chimiques suivantes: (a) Action: catalyse la réaction suivante: L-aglycérophosphate + 02 dihydroxyacétone phosphate + H202 (b) Spécificité de substrat: présente une spécificité de substrat pour le L-aglycérophosphate. (c) pH optimal: ,5 - 7,5 (d) Stabilité au pH: stable à pH 6,0 - 8,0 3 - ADN selon la revendication 1, caractérisé par le fait que la séquence d'acides aminés du polypeptide constituant la L-a-glycérophosphate oxydase,en partant de l'extrémité Nterminale,est la suivante: APheSerAsnLysThrArgGlnAspSerIleGlnLysMetGlnGlnGluGluLeuAsp LeuLeuIleIleGlyGlyGlyI leThrGlyAlaGlyValAlaValGlnAlaAlaAlaSer GlyI leLysThrGlyLeuIleGluMetGlnAspPheAlaGluGlyThrSerSerArgSer ThrLysLeuValHisGlyGlyIleArgTyrLeuLysThrPheAspValGluValValAla AspThrValGlyGluArgAlaValValGlnGlyIleAlaProHisIleProLysProAsp ProMetLeuLeuProIleTyrGluAspGluGlyAlaThrThrPheAsnMetPheSerVal LysValAlaMetAspLeuTyrAspLysLeuAlaAsnValThrGlyThrLysTyrGluAsn TyrThrLeuThrProGluGluValLeuGluArgGluProPheLeuLysLysGlyArgLeu LysGlyAlaGlyValTyrLeuAspPheArgAsnAsnAspAlaArgLeuValIleAspAsn IleLysLysAlaAlaGluAspGlyAlaTyrLeuValSerLysMetLysAlaValGlyPhe LeuTyrGluGlyAspGlnIleValGlyValLysAlaArgAspLeuLeuThrAspGluVal IleGluIleLysAlaLysLeuValIleAsnThrSerGlyProTrpValAspLysValArg AsnLeuAsnPheThrArgProValSerProLysMetArgProThrLysGlyIleHisLeu ValValAspAlaLysLysLeuProValProGlnProThrTyrPheAspThrGlyLysGln AspGlyArgMetValPheAlaIleProArgGluAsnLysThrTyrPheGlyThrThrAsp ThrAspTyrGlnGlyAspPheThrAspProLysValThrGlnGluAspValAspTyrLeu LeuAspValIleThrHisArgTyrProGluAlaAsnIleThrLeuAlaAspIleGluAla SerTrpAlaGlyLeuArgProLeuLeuIleGlyAsnSerGlySerAspTyrAsnGlyGly AspAsnGlySerIleSerAspLysSerPheAsnLysValValAspThrValSerGluTyr LysGluAsnLysValSerArgAlaGluValGluAspValLeuAsnHisLeuGluAsnSer ArgAspGluLysAlaProSerThrIleSerArgGlySerSerLeuGluArgGluProAsp GlyLeuLeuThrLeuSerGlyGlyLysIleThrAspTyrArgLysMetAlaGluGlyAla LeuArgLeuIleArgGlnLeuLeuLysGluGluTyrGlyIleGluThrLysGluIleAsp SerLysLysTyrGlnIleSerGlyGlyAsnPheAspProThrLysLeuGluGluThrVal ThrGluLeuAlaLysGluGlyValAlaAlaGlyLeuGluGluGluAspAlaThrTyrIle AlaAspPheTyrGlyThrAsnAlaArgArgIlePheGluLeuAlaLysGluMetAlaPro TyrProGlyLeuSerLeuAlaGluSerAlaArgLeuArgTyrGlyLeuGluGluGluMet ValLeuAlaProGlyAspTyrLeuIleArgArgThrAsnHisLeuLeuPheGluArgAsp GlnLeuAspGluIleLysGlnProValIleAspAlaIleAlaGluTyrPheGlyTrpThr GluGluGluLysAlaGlnGlnThrLysArgLeuG1uAleLeuIleAlaGluSerAspLeu ArgGluLeuLysGlyGluLys-B o: - A représente un reste d'acide aminé ou un atome d'hydrogène; et - B représente un reste d'acide aminé ou un groupe -OH. 4 - ADN selon la revendication 1, caractérisé par le fait que la séquence an bases dudit ADN,en partant d.e l'extrémité 5', est: X-TTTTCAAACAAGACAAGACAAGATAGCATTCAAAAAATGCAGCAAGAAGAATTGGAT CTGTTGATCATCGGTGGCGGAATCACTGGTGCCGGTGTGGCAGTCCAGGCAGCAGCATCA GGAATCAAAACAGGATTGATCGAAATGCAAGATTTTGCAGAAGGGACGTCCTCTCGCTCG ACCAAACTTGTGCATGGCGGTATTCGTTATCTGAAAACATTTGATGTGGAAGTAGTAGCT GACACAGTTGGTGAACGTGCAGTCGTACAAGGTATTGCCCCACACATCCCAAAACCAGAT CCAATGCTTTTACCAATCTATGAAGATGAAGGAGCAACAACCTTCAATATGTTCTCTGTC AAAGTAGCAATGGACCTTTACGACAAACTGGCAAATGTGACAGGAACTAAATATGAGAAC TATACCCTCACACCAGAAGAAGTATTGGAAAGAGAACCATTTTTGAAAAAGGAAGGCTA AAAGGTGCAGGTGTTTATCTGGATTTCCGCAACAATGATGCCCGTTTAGTGATCGATAAT ATCAAAAAGGCTGCAGAAGATGGGGCTTATCTAGTAAGTAAAATGAAAGCGGTTGGCTTT TTATATGAGGGCGATCAAATCGTTGGTGTCAAAGCTCGTGATCTGCTGACAGATGAAGTG ATAGAGATCAAAGCAAAATTAGTGATCAATACGAGTGGTCCTTGGGTAGATAAAGTACGG AACTTGAATTTTACGCGTCCAGTCTCTCCTAAAATGCGTCCAACCAAAGGGATCCATTTA GTCGTAGATGCGAAAAAACTGCCTGTACCGCAACCCACATACTTCGATACAGGAAAACAA GATGGGCGGATGGTTTTTGCTATCCCAAGAGAAAACAAGACTTACTTTGGTACGACAGAT ACGGATTACCAAGGAGACTTTACGGATCCAAAAGTCACACAAGAAGACGTGGATTATCTA TTGGATGTAATCACCCATCGCTATCCAGAAGCAAATATCACATTGGCAGATATCGAAGCA AGCTGGGCAGGGCTTCGTCCACTATTGATTGGTAATTCTGGTTCTGATTATAATGGTGGA GATAATGGATCGATTTCAGACAAGAGCTTCAATAAAGTGGTTGATACAGTAAGTGAATiT AAGGAAAATAAAGTTTCTCGTGCTGAAGTAGAAGATGTGTTGAACCATTTGGAAAACAGC CGCGACGAAAAAGCACCTTCTACGATTTCCAGAGGTAGTTCTTTAGAAAGAGAACCAGAT GGCTTGTTGC TTTATCAGGTGGGAAAATCACTGATTACCGTAAGATGGCAGAAGGAGCT TTACGATTGATTCGTCAGCTGTTAAAAGAAGAATACGGAATAGAGACGAAAGAAATCGAC TCTAAAAAATATCAGATTTCAGGTGGAAACTTCGATCCAACGAAATTAGAAGAAACAGTG ACGGAATTAGCAAAAGAAGGAGTAGCAGCCGGTTTAGAuGAAGAAGATGCTACTTATATC GCTGATTTTTACGGGACTAATGCTCGACGTATGTTTGAATTAGCAAAAGAAATGGCACCT TATCCTGGTTTGAGTCTCGCTGAGTCAGCTCGGTTACGTTATGGCTTAGAAGAAGAAATG GTTTTAGCTCCAGGTGATTATCTCATTCGTCGTACGAATCATCTGTTGTTTGAACGAGAT CAGCTGGATGAGATCAAGCAACCTGTGATCGATGCAATTGCTGAGTATTTTGGGTGGACA GAAGAAGAGAAGGCGCAACAGACTAAACGTTTAGAAGCATTGATCGCAGAATCAGATCTG CGGGAACTAAAGGGGGAGAAA-Y o: - X représente un codon autre que TAA, TAG ou TGA, ou un groupe 5'terminal; et - Y représente un codon ou un groupe 3'-terminal. 5 - Transformant ayant un ADN qui est étranger par rapport au microorganisme hôte et qui comprend une séquence en bases codant pour la séquence d'acides aminés d'un polypeptide constituant la L-a-glycérophosphate oxydase. 6 - Transformant selon la revendication 5, caractérisé par le fait que ladite L-a-glycérophosphate oxydase présente les caractéristiques physicochimiques suivantes Action: catalyse la réaction suivante: L-aglycérophosphate + 02 - dihydroxyacétone phosphate + H202 (b) Spécificité de substrat: présente une spécificité de substrat pour le L-aglycérophosphate. (c) pH optimal: ,5 - 7,5 (d) Stabilité au pH: stable à pH 6,0 - 8,0 7 - Transformant selon la revendication 5, caractérisé par le fait que la séquence d'acides aminés du polypeptide constituant la L-a-glycérophosphate oxydase, en partant de l'extrémité N-terminale est la suivante': APheSerAsnLysThrArgGlnAspSerIleGlnLysMetGlnGlnGluGluLeuAsp LeuLeuIleIleGlyGlyGlyIleThrGlyAlaGlyValAlaValGlnAlaAlaAlaSer GlyIleLysThrGlyLeuIleGluMetGlnAspPheAlaGluGlyThrSerSerArgSer ThrLysLeuValHisGlyGlyIleArgTyrLeuLysThrPheAspValGluValValAla AspThrValGlyGluArgAlaValValGlnGlyIleAlaproHisIleproLysProAsp ProMetLeuLeuProIleTyrGluAspGluGlyAlaThrThrPheAsnMetPheSerVal LysValAlaMetAspLeuTyrAspLysLeuAlaAsnValThrGlyThrLysTyrGluAsn TyrThrLeuThrProGluGluValLeuGluArgGluProPheLeuLysLysGlyArgLeu LysGlyAlaGlyValTyrLeuAspPheArgAsnAsnAspAlaArgLeuValIleAspAsn IleLysLysAlaAlaGluAspGlyAlaTyrLeuValSerLysMetLysAlaValGlyPhe LeuTyrGluGlyAspGlnIleValGlyValLysAlaArgAspLeuLeuThrAspGluVal IleGluIleLysAlaLysLeuValIleAsnThrSerGlyProTrpValAspLysValArg AsnLeuAsnPheThrArgProValSerProLysMetArgProThrLysGlyIleHisLeu ValValAspAlaLysLysLeuProValProGlnProThrTyrPheAspThrGlyLysGln AspGlyArgMetValPheAlaIleProArgGluAsnLysThrTyrPheGlyThrThrAsp ThrAspTyrGlnGlyAspPheThrAspProLysValThrGlnGluAspValAspTyrLeu LeuAspValIleThrHisArgTyrProGluAlaAsnIleThrLeuAlaAspIleGluAla SerTrpAlaGlyLeuArgProLeuLeuIleGlyAsnSerGlySerAspTyrAsnGlyGly AspAsnGlySerlleSerAspLysSerPheAsnLysValValAspThrValSerGluTyr LysGluAsnLysValSerArgAlaGluValGluAspValLeuAsnHisLeuGluAsnSer ArgAspGluLysAlaProSerThrIleSerArgGlySerSerLeuGluArgGluProAsp GlyLeuLeuThrLeuSerGlyGlyLysIleThrAspTyrArgLysMetAlaGluGlyAla LeuArgLeuIleArgGlnLeuLeuLysGluGluTyrGlyIleGluThrLysGluIleAsp SerLysLysTyrGlnIleSerGlyGlyAsnPheAspProThrLysLeuGluGluThrVal ThrGluLeuAlaLysGluGlyValAlaAlaGlyLeuGluGluGluAspAlaThrTyrIle AlaAspPheTyrGlyThrAsnAlaArgArgIlePheGluLeuAlaLysGluMetAlaPro TyrProGlyLeuSerLeuAlaGluSerAlaArgLeuArgTyrGlyLeuGluGluGluMet ValLeuAlaProGlyAspTyrLeuIleArgArgThrAsnHisLeuLeuPheGluArgAsp GlnLeuAspGluIleLysGlnProValIleAspAlaIleAlaGluTyrPheGlyTrpThr GluGluGluLysAlaGlnGlnThrLysArgLeuGluAlaLeuIleAlaGluSerAspLeu ArgGluLeuLysGlyGluLys-B o: - A représente un reste d'acide aminé ou un atome d'hydrogène; et - B représente un reste d'acide aminé ou un groupe -OH. 8 - Transformant selon la revendication 5, caractérisé par le fait que la séquence en bases dudit ADN,en partant de l'extrémité 5', est: X-TTTTCAAACAAGACAAGACAAGATAGCATTCAAAAAATGCAGCAAGAAGAATTGGAT CTGTTGATCATCGGTGGCGGAATCACTGGTGCCGGTGTGGCAGTCCAGGCAGCAGCATCA GGAATCAAAACAGGATTGATCGAAATGCAAGATTTTGCAGAAGGGACGTCCTCTCGCTCG ACCAAACTTGTGCATGGCGGTATTCGTTATCTGAAAACATTTGATGTGGAAGTAGTAGCT GACACAGTTGGTGAACGTGCAGTCGTACAAGGTATTGCCCCACACATCCCAAAACCAGAT CCAATGCTTTTACCAATCTATGAAGATGAAGGAGCAACAACCTTCAATATGTTCTCTGTC AAAGTAGCAATGGACCTTTACGACAAACTGGCAAATGTGACAGGAACTAAATATGAGAAC TATACCCTCACACCAGAAGAAGTATTGGAAAGAGAACCATTTTTGAAAAAAGGAAGGCTA AAAGGTGCAGGTGTTTATCTGGATTTCCGCAACAATGATGCCCGTTTAGTGATCGATAAT ATCAAAAAGGCTGCAGAAGATGGGGCTTATCTAGTAAGTAAAATGAAAGCGGTTGGCTTT TTATATGAGGGCGATCAAATCGTTGGTGTCAAAGCTCGTGATCTGCTGACAGATGAAGTG ATAGAGATCAAAGCAAAATTAGTGATCAATACGAGTGGTCCTTGGGTAGATAAAGTACGG AACTTGAATTTTACGCGTCCAGTCTCTCCTAAAATGCGTCCAACCAAAGGGATCCATTTA GTCGTAGATGCGAAAAAACTGCCTGTACCGCAACCCACATACTTCGATACAGGAAAACAA GATGGGCGGATGGTTTTTGCTATCCCAAGAGAAAACAAGACTTACTTTGGTACGACAGAT ACGGATTACCAAGGAGACTTTACGGATCCAAAAGTCACACAAGAAGACGTGGATTATCTA TTGGATGTAATCACCCATCGCTATCCAGAAGCAAATATCACATTGGCAGATATCGAAGCA AGCTGGGCAGGGCTTCGTCCACTATTGATTGGTAATTCTGGTTCTGATTATAATGGTGGA GATAATGGATCGATTTCAGACAAGAGCTTCAATAAAGTGGTTGATACAGTAAGTGAATAT AAGGAAAATAAAGTTTCTCGTGCTGAAGTAGAAGATGTGTTGAACCATTTGGAAAACAGC CGCGACGAAAAAGCACCTTCTACGATTTCCAGAGGTAGTTCTTTAGAAAGAGAACCAGAT GGCTTGTTGACTTTATCAGGTGGGAAAATCACTGATTACCGTAAGATGGCAGAAGGAGCT TTACGATTGATTCGTCAGCTGTTAAAAGAAGAATACGGAATAGAGACGAAAGAAATCGAC TCTAAAAAATATCAGATTTCAGGTGGAAACTTCGATCCAACGAAATTAGAAGAAACAGTG ACGGAATTAGCAAAAGAAGGAGTAGCAGCCGGTTTAGAGGAAGAAGATGCTACTTATATC GCTGATTTTTACGGGACTAATGCTCGACGTATGTTTGAATTAGCAAGAAGAATGGCACCT TATCCTGGTTTGAGTCTCGCTGAGTCAGCTCGGTTACGTTATGGCTTAGAAGAAGAAATG GTTTTAGCTCCAGGTGATTATCTCATTCGTCGTACGAATCATCTGTTGTTTGAACGAGAT CAGCTGGATGAGATCAAGCAACCTGTGATCGATGCAATTGCTGAGTATTTTGGGTGGACA GAAGAAGAGAAGGCGCAACAGACTAAACGTTTAGAAGCATTGATCGCAGAATCAGATCTG CGGGAACTAAAGGGGGAGAAA-Y o: - X représente un codon autre que TAA, TAG ou TGA, ou un groupe 5'terminal; et - Y représente un codon ou un groupe 3'-terminal. 9 - Transformant selon la revendication 5, caractérisé par le fait qu'il appartient eu genre Escherichla colf. - Transformant selon la revendication 5, caractérisé par le fait qu'il est Escherichia coli DH1. pGPOS (FERM BP-2133). 11 - Polypeptide constituant la L-a-glycéro- phosphate oxydase qui est exprimé par la séquence d'acides aminés suivante, en partant de l'extrémité N-terminale: APheSerAsnLysThrArgGlnAspSerIleGlnLysMetGlnGlnGluGluLeuAsp LeuLeuIleIleGlyGlyGlyIleThrGlyAlaGlyValAlaValGlnAlaAlaAlaSer GlyIleLysThrGlyLeuIleGluMetGlnAspPheAlaGluGlyThrSerSerArgSer ThrLysLeuValHisGlyGlyIleArgTyrLeuLysThrPheAspValGluValValAla AspThrValGlyGluArgAlaValValGlnGlyIleAlaProHisIleProLysProAsp ProMetLeuLeuProlleTyrGluAspGluGlyAlaThrThrPheAsnMetPheSerVal LysValAlaMetAspLeuTyrAspLysLeuAlaAsnValThrGlyThrLysTyrGluAsn TyrThrLeuThrProGluGluValLeuGluArgGluProPheLeuLysLysGlyArgLeu LysGlyAlaGlyValTyrLeuAspPheArgAsnAsnAspAlaArgLeuValIleAspAsn IleLysLysAlaAlaGluAspGlyAlaTyrLeuValSerLysMetLysAlaValGlyPhe LeuTyrGluGlyAspGlnIleValGlyValLysAlaArgAspLeuLeuThrAspGluVal IleGluIleLysAlaLysLeuValIleAsnThrSerGlyProTrpValAspLysValArg AsnLeuAsnPheThrArgProValSerProLysMetArgProThrLysGlyIleHisLeu ValValAspAlaLysLysLeuProValProGlnProThrTyrPheAspThrGlyLysGln AspGlyArgMetValPheAlaIleProArgGluAsnLysThrTyrPheGlyThrThrAsp ThrAspTyrGlnGlyAspPheThrAspProLysValThrGlnGluAspValAspTyrLeu LeuAspValIleThrHisArgTyrProGluAlaAsnIleThrLeuAlaAspIleGluAla SerTrpAlaGlyLeuArgProLeuLeuIleGlyAsnSerGlySerAspTyrAsnGlyGly AspAsnGlySerIleSerAspLysSerPheAsnLysValValAspThrValSerGluTyr LysGluAsnLysValSerArgAlaGluValGluAspValLeuAsnHisLeuGluAsnSer ArgAspGluLysAlaProSerThrIleSerArgGlySerSerLeuGluArgGluProAsp GlyLeuLeuThrLeuSerGlyGlyLysIleThrAspTyrArgLysMetAlaGluGlyAla LeuArgLeuIleArgGlnLeuLeuLysGluGluTyrGlyIleGluThrLysGluIleAsp SerLysLysTyrGlnIleSerGlyGlyAsnPheAspProThrLysLeuGluGluThrVal ThrGluLeuAlaLysGluGlyValAlaAlaGlyLeuGluGluGluAspAlaThrTyrIle AlaAspPheTyrGlyThrAsnAlaArgArgIlePheGluLeuAlaLysGluMetAlaPro TyrProGlyLeuSerLeuAlaGluSerAlaArgLeuArgTyrGlyLeuGluGluGluMet ValLeuAlaProGlyAspTyrLeuIleArgArgThrAsnHisLeuLeuPheGluArgAsp GlnLeuAspGluIleLysGlnProValIleAspAlaIleAlaGluTyrPheGlyTrpThr GluGluGluLysAlaGlnGlnThrLysArgLeuGluAlaLeuIleAlaGluSerAspLeu ArgGluLeuLysGlyGluLys-B o: - A représente un reste d'acide aminé ou un atome d'hydrogène; et - B représente un reste d'acide aminé ou un groupe -OH. 12 - L-a-glycérophosphate oxydase présentant les caractéristiques physicochimiques suivantes: (a) Action: catalyse la réaction suivante: L-aglycérophosphate + 02 - dihydroxyacétone phosphate + H202 (b) Spécificité de substrat: présente une spécificité de substrat pour le L-aglycérophosphate. (c) pH optimal: ,5 - 7,5 laissée dans du tampon MES-NaOH (pH 6,5) à 37 C. 13 - Procédé de préparation d'une L-a-glycéro- phosphate oxydase, caractérisé par le fait qu'il consiste à: - cultiver le transformant tel que défini à la revendication 5, pour amener le transformant à exprimer l'information génétique de l'ADN tel que défini à la revendication 1; et - recueillir le polypeptide qui est un constituant de la L---glycérophosphate oxydase. 14 - Procédé selon la revendication 13, caractérisé par le fait que ladite L-a-glycérophosphate oxydase présente les caractéristiques physicochimiques suivantes: (a) Action: catalyse la réaction suivante: L-aglycérophosphate + 02 -- dihydroxyacétone phosphate + H202 (b) Spécificité de substrat: présente une spécificité de substrat pour le L-xglycérophosphate. (c) pH optimal: ,5 - 7,5 (d) Stabilité au pH: stable à pH 6,0 - 8,0 - Procédé selon la revendication 13, caractérisé par le fait que ledit ADN comprenant une- séquence en bases codant pour la séquence d'acides aminés d'un polypeptide constituant la L-a-glycérophosphate oxydase est un ADN issu d'un microorganisme producteur de L-a-glycérophosphate oxydase appartenant au genre Streptococcus. 16 - Procédé selon la revendication 13, caractérisé par le fait que la bactérie hôte est un microorganisme appartenant à Escherichia coli.