FR 2634497 A1 19900126 FR 8809785 A 19880720 NOUVEAU PROCEDE D'OBTENTION DE DERIVES DU SACCHAROSE MODIFIES EN POSITION 4' La présente invention concerne un nouveau procédé d'obtention de dérivés du saccharose modifiés en position 4' et plus particulièrement un procédé permettant d'obtenir sélectivement des intermédiaires de synthèse monoalcools dérivés du saccharose dont la fonction alcool est en posi- tion 4' (les numéros avec prime correspondent au noyau fructose du saccharose, les numéros sans prime correspondent au noyau glucose du saccharose). Le remplacement dans le saccharose ou ses dérivés substitués du groupe- ment hydroxyle en position 4' peut conduire à des modifications impor- tantes des propriétés de la molécule du composé de départ, comme par exemple l'augmentation remarquable du pouvoir édulcorant lorsque l'hydroxyle en position 4' est remplacé par un atome d'halogène dans la série des chlorosaccharoses décrite dans l'EP-A-0073093. Des méthodes ont été proposées pour attaquer directement la position 4' du saccharose, comme par exemple l'attaque par du chlorure de sulfuryle (J.C.S. Perkin I, 1973, 1524), mais une telle attaque n'est pas sélec- tive et on obtient des mélanges complexes de produits. Il existe dans la littérature des méthodes d'accès à la position 4', comme par exemple celle proposée par R. KHAN et al (Carbohydr. Res. 1987, 162, 199) consistant à protéger convenablement le saccharose par acétonation et acétylation partielle, à époxyder ensuite lès positions 3'et 4', ouvrir l'époxyde ainsi formé par un réactif convenable et à libérer les positions initialement protégées. Cette méthode présente l'inconvénient de comporter de nombreuses étapes. Le même type d'approche est suivi par C.K. LEE (Carbohydr. Res. 1987, 162, 53). La demanderesse a découvert de façon surprenante qu'il était possible de réaliser, au moyen d'une hydrolyse enzymatique appropriée, une désesté- rification remarquablement régiosélective de peresters du saccharose ou d'un dérivé substitué du saccharose. Par "perester", il faut entendre dans la présente description, le pro- duit o toutes les fonctions hydroxyle du saccharose ou du dérivé subs- titué du saccharose de départ ont été estérifiées; dans le cas du saccharose ledit perester est un octaester. Le procédé d'obtention de dérivés du saccharose modifiés en position 4' de la présente invention consiste donc à: 2 2634497 a) effectuer l'estérification de toutes les fonctions hydroxyle du pro- duit de départ saccharose ou dérivé substitué du saccharose pour donner un perester dudit produit de départ; b) effectuer une hydrolyse partielle dudit perester de l'étape a) con- duisant & un ester de saccharose ayant une fonction hydroxyle libre en position 4'; c) effectuer toute réaction appropriée sur ladite fonction hydroxyle libre en position 4' du produit de l'étape b) pour obtenir le dérivé du saccharose modifié en position 4' souhaité; ce procédé étant caractérisé par le fait que ladite hydrolyse partielle de l'étape b) est effectuée à l'aide d'une enzyme lipolytique. L'estérification de l'étape a) ci-dessus est effectuée de façon connue en soi, à l'aide d'un chlorure d'acide, d'un anhydride d'acide, ou par toute autre méthode bien connue de l'homme de l'art, pour obtenir un perester dont les groupements acyle, identiques ou différents, peuvent avoir de 1 à 30 atomes de carbone. Lesdits groupements acyle seront commodément chacun le groupement acétyle. L'hydrolyse d'esters du saccharose a été réalisée antérieurement par voie chimique (voir par exemple Collect. Czeckoslovak Chem. Commun. 1986, 51, 1476) mais une telle hydrolyse conduit à des mélanges de monoalcools sans régiosélectivité, contrairement à ce que l'on obtient par la voie enzymatique de l'invention. L'hydrolyse partielle de l'étape b) est effectuée selon la présente in- vention à l'aide d'une enzyme lipolytique, c'est-à-dire une enzyme appartenant à la classe des lipases. Parmi les lipases utilisables dans la présente invention, on peut citer de façon non limitative les lipases pancréatiques, les lipases obtenues à partir de Candida telles les Candida cylindracea, de germe de blé, d'Aspergillus telles les Aspergillus niger, de Pseudomonas telles les Pseudomonas fluorescens, de Mucor, d'Enterobacterium, de Chromobac- terium, de Geotrichum, de Penicillum, de Rhizopus,-etc... L'enzyme peut être immobilisée ou non. L'hydrolyse partielle selon l'invention est effectuée en milieu bipha- sique eau/solvant organique généralement dans le rapport eau/solvant organique d'environ 9/1, ce qui permet de recycler la phase aqueuse contenant l'enzyme et de récupérer les produits obtenus par simple sé- paration de la phase organique. On choisit le solvant organique 3 2634497 de façon à obtenir la meilleure activité possible de l'enzyme; on peut citer à titre d'exemples non limitatifs de solvants organiques utili- sables dans la présente invention: le toluène, le xylène, le benzène, l'hexane, le chloroforme, le dichlorométhane, l'éther de pétrole, le glyme, le diglyme, l'éther éthylique, l'éther propylique, l'éther butylique, etc... La température est choisie en fonction de l'activité optimale de l'enzyme et se situe en général entre environ 15 et 70 C. Le pH est maintenu constant, par exemple au moyen d'un pH-STAT automatique, généralement dans l'intervalle compris entre 6 et 9. La réaction peut également être favorisée par l'addition de sels minéraux tels CaC12, MgCl2, MgS 4, SrC12, etc... L'hydrolyse enzymatique sera poursuivie pendant une durée suffisante pour obtenir l'hydrolyse d'une fonction hydroxyle dudit perester, et obtenir, selon la présente invention, un ester de saccharose ayant une fonction hydroxyle libre en position 4'. L'hydrolyse peut être poursuivie et, selon les conditions mises en oeu- vre, on obtient un ester de saccharose pouvant avoir plusieurs fonctions hydroxyle libres, dont une en position 4'. L'homme de l'art déterminera aisément, au moyen de techniques analyti- ques bien connues, le temps au bout duquel la réaction doit être stoppée pour n'obtenir que le monoalcool dont la fonction hydroxyle se trouve, selon l'invention, en position 4'. Une fois l'hydrolyse terminée, la phase organique contenant le produit souhaité peut être évaporée et traitée de façon classique (cristallisa- tion, extraction, chromatographie) afin d'isoler l'intermédiaire re- cherché, ou bien peut être traitée directement pour obtenir, par des réactions connues, des dérivés du saccharose modifiés en position 4'. L'exemple ci-après illustre l'invention de façon non limitative. Exemple Préparation du 1',2,3,3',4,6,6'-hepta-O-acétyl-p-D-fructofuranosyl-a-D- glucopyranose (I) Une solution d'octaacétate de saccharose (678 mg, i mmol) dans 1 ml de toluène est mise en contact avec-9 ml d'une solution de 100 mg de lipase de Candida cylindracea (Lipase AY AMAN0 30) dans un tampon phosphate (0,1 M, pH 7). Le mélange est fortement agité à 45 C et le pH maintenu à une valeur constante de pH égale à 7 par addition automatique d'une solution de soude 10-3 M. Après 48 heures de réaction les deux phases sont séparées. La phase organique est lavée à l'eau et la phase aqueuse -4 - 2634497 au toluène. Les fractions organiques sont rassemblées ainsi que les différentes fractions aqueuses. La phase aqueuse est mise en contact avec une nouvelle solution d'octaacétate de saccharose dans le toluène et recyclée ainsi plusieurs fois. La phase organique est séchée, éva- porée et l'heptaacétate de saccharose (I) purifié sur colonne de silice avec un éluant composé d'acétate d'éthyle: hexane 80: 20. Le rendement en produit I est de 40 % (les 60 % restants représentent pratiquement l'octaacétate de saccharose de départ non-réagi qui peut être recyclé). L'heptaacétate de saccharose obtenu peut être mis en réaction sans séparation préalable. Microanalyse calculée pour C26H56018: C 49,05; H 5,70 expérimentale C 48, 99; H 5,40 [a]20 + 53,8 (C 0,5, CHCL3) r.m.n. H (C6D6, 300 MHz) 5,84(d,1H, H-,J1,2=3,8) 5,81(dd, iH,H-3,J3,4=9,8) 5,52(d,lH,H-3',J3,4'=7,5) 5,30(dd, lH, H-4,J4,5=9,8) ,07(dd, 1H,H-2,J2 3=10,2) 4,48(m,lH,H-5) 4,40-4,26(m,7H, H-6a,- H-6b,-H-6'a,H-6'b,H-l'a,H-l'b,H-4') 4,15(m,IH,H-5'). 3o 2634497 REVENDICATIONS 1. Procédé d'obtention de dérivés du saccharose modifiés en position 4' consistant à effectuer les étapes suivantes: a) estérification de toutes les fonctions hydroxyle du produit de départ choisi parmi le saccharose et les dérivés substitués du saccharose, conduisant à un perester dudit produit de départ; b) hydrolyse partielle dudit perester obtenu dans l'étape a), par laquelle on obtient un ester de saccharose ayant une fonction hydroxyle libre en position 4'; c) Mise en réaction appropriée dudit ester de saccharose ayant une fonction hydroxyle libre en position 4' provenant de l'étape b) conduisant à un dérivé du saccharose modifié en position 4'; caractérisé par le fait que ladite hydrolyse partielle de l'étape b) est effectuée à l'aide d'une enzyme lipolytique. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite en- zyme lipolytique est choisie parmi les lipases pancréatiques, les lipases obtenues à partir de Candida, telles les Candida cylindra- cea, de germe de blé, d'Aspergillus, telles les Aspergillus niger, de Pseudomonas telles les Pseudomonas fluorescens, de Mucor, d'Ente- robacterium, de Chromobacterium, de Geotrichum, de Penicillium, de Rhizopus, etc... 3. Procédé selon la revendication 2, dans lequel ladite enzyme lypo- litique est une lipase de Candida cylindracea. 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, dans lequel ladite hydrolyse partielle est effectuée en milieu biphasique eau/solvant organique. 5. Procédé selon la revendication 4, dans lequel ledit solvant organi- que est choisi parmi le toluène, le xylène, le benzène, l'hexane, le chloroforme, le dichlorométhane, l'éther de pétrole, le glyme, le diglyme, l'éther éthylique, l'éther propylique et l'éther butylique. 6 2634497 6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5 dans lequel ledit pro- duit de départ est le saccharose. 7. Procédé selon l'une. des revendications i à 6 dans lequel les grou- pements acyle dudit perester formé dans l'étape a) sont identiques ou différents et choisis parmi les groupements alkyle ayant de 1 à atomes de carbone. 8. Procédé selon la revendication 7 dans lequel lesdits groupements :. acyle sont chacun le groupement acétyle.