FR 2629346 A1 19891006 FR 8904310 A 19890331 i La présente invention est relative à des compositions synergiquement actives, utiles en particulier pour le traitement de la mastite et de la métrite. L'invention concerne de plus un procédé pour préparer ces compositions. La mastite et la métrite de diverses espèces animales peuvent provoquer d'importantes pertes économiques. Ce processus d'inflammation, induit par diverses bactéries, est accompagné, par exemple d'une notable diminution de ta production laitière et du nombre de progéniture du bétail, Actuellement, on emploie divers agents antibactériens pour le traitement généralement local de la mastite et de la métrite. Bien que l'infection en elle-même soit provoquée par des bactéries, une infection fongique apparaît souvent pendant le traitement, si bien qu'un résultat réellement favorable ne peut être assuré que par une composition vétérinaire aussi efficace contre des bactéries gram-positives et gram-négatives que contre des champignons. En pratique, le traitement est effectué au moyen d'antibiotiques dans la plupart des cas. Une suspension de 6,9,18-tris-(2-aminoéthyll- 15- benzyl-2 1-[2,8-bis-(2-aminoéthyl)-5-( l -hydroxyéthyl)- 15-méthyl-4, 7,1 O-trioxo-3,6,9-triazaheptadécanamido]-3-{ 1-hydroxyéthgl)- 12- isobutyl- 1,4,7,10,13,16,1 9-heptaazacyclotricosane-2,5,8,11,14,17, -heptaone (polymyxine B) et de 4-diméthylamino-3,5,6,10,12,12a- hexahydroxy-6-méthyl- 1,11 -dioxy- 1,4-4a,5,Sa,6,1 1,12a-octahydro- naphtacène-2-carboxamide (oxytétracycline), est utilisée pour traiter à la fois la mastite et la métrite; cependant, cette composition exerce un très faible effet sur plusieurs espèces bactériennes (par exemple Staphylococcus aureus ou Streptococcus zooepidermicus). Une combinaison de 2,4-diamino-5-(2,6-diamino-2,6- didésox4y-P-D-glucosyloxy]-6-[3-O-(2,6-diamino-2,6-didéoxy-p-L- idosylJ-0-0-ribosyloxy]-[ l,25,411,55,6S)- 1 -cyclohexanol (néomy- cinel et d'oxytétracycline, est utilisée dans une forme de perfusion mammaire ou de batônnet utérin. -Cependant, ces compositions connues exercent une très faible action sur des bactéries gram- négatives. Un batônnet utérin contenant de la 3-[(5-nitro- furfurylidène)-amino]-2-oxazolidinone (furazolidone] utilisée pour te traitement de la métrite, a un inconvénient résidant en ce que le composant actif est toxique. _ Le D-(-)-thréo-2,2-dichloro-N-[2-hydroxyj- 1 -hydroxy- méthyl-2-14nitrophényl)-éthyll-acétamide (chloramphénicol) seul ou avec du N 1 -(4,6diméthylpyrimidinyl)-sulfanylamide (sulfadimidine, sont aussi utilisés pour le traitement de la métrite sous forme d'une mousse ou d'une gélule utérine. Cependant, ces compositions ne sont pas favorables parce qu'elles n'ont pratiquement aucune action sur des bactéries gram-négatives. La 6-[4-diméthylamino-3-hydroxy-6-méthyl-2-tétra- hydropyranyloxy]- 14-éthyl-7,12,1 3-trihydroxy-4-(5-hydroxy-4- méthoxy-4,6-diméthyl-2-tétrahydropyranyloxy)-3,5,7,9, 1 1,13-hexa méthyl1 -oxa-2, 1 0-tétradécanedione (érythromycinel est utilisée en perfusion mammaire pour le traitement de la mastite. Cette composition connue n'exerce non plus aucun effet sur des bactéries gram-négatives. On utilise aussi une perfusion mammaire contenant de I'acide 6-phénylacétylamino-3,3-diméthyl-7-oxo-4-thia- 1 -azabi- cyclo[3.2.01-heptane-2-carboxylique tbenzylpénicilline) et du sulfate de 3,5-diguanidino-6-[2-O-(2-méthylamino-2-désoxy--N-glucosyi] --L-streptosyloxy]- 1,2,4-cyclohexanetriol (sulfate de strepto- mycine), cependant, celle-ci n'agit que sur certaines bactéries (comme Streptococcus et Staphylococcus] [Proceedings of Symposium on Mastitis Control, Espoo, Finlande, Juin 1986, pages 10 à 12, Ed. Markus Sandholm; Belak-Tuboly et Varga: Allartorvosi mikrobiologia ("Microbiologie vétérinaire"; en hongrois), Budapest, Mezogazdasagi Konyvkiado, 1983; Mészaros et Szent-lvanyi: Haziallatok fertozo betegségei ("Maladies infectieuses des animaux domestiques", en hongrois; Mezogazdasagi Kiado, 1986; Goodman- Gilman: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 7ème éd. MacMillan Publishing Go. Inc. New-York, 1986; M. Jones, H. Nicholas Booth et L.E. McDonald: Veterinary Pharmnacology and Therapeutics, 4ème Ed., lowa State University Press, USA]. En résumé, on peut affirmer qu'environ 30 à 50X seulement des pathogènes induisant l'inflammation sont sensibles aux compositions connues utilisées pour le traitement de la mastite et de la métrite du bétail et que ces compositions ne possèdent aucun effet fongicide du tout La majorité des compositions connues est utilisée depuis des dizaines d'années si bien qu'une résistance se développe rapidement Le but de la présente invention est de fournir une nouvelle composition vétérinaire à large spectre qui est également efficace à faible dose et agit à la fois sur des bactéries et des champignons. On a trouvé que le but ci-dessus peut être entièrement atteint par l'utilisation de la polymyxine B ou d'un sel de celle-ci acceptable du point de vue pharmaceutique comme le sulfate ou le chlorure, avec du 1-(2-chlorophényll-diphényl-méthyl-1H- imidazole (clotrimazole) ou avec de la 2-méthyl-5,7-dichloro-8- hydroxyquinoléine (chlorquinaldol), respectivement L'invention repose sur la constatation selon laquelle la polymyxine B et le clotrimazole ou la polymyxine B et le chlorquinaldol, respectivement, sont capables de potentialiser notablement les effets antibactérien et fongicide les uns des autres. Ainsi, la présente invention est relative à une nouvelle composition synergiquement active, utile en particulier pour le traitement de la mastite et de la métrite, qui comprend pour 1 partie en poids de polymyxine B ou d'un sel de celle-ci acceptable du point de vue pharmaceutique, 1 à 1000 parties en poids de 1-(2- chlorophényl]-diphényl-méthyl- 1 H-imidazole (clotrimazole) ou I à 400 parties en poids de 2-méthyl-5,7-dichloro-8-hydroxyquinoléine (chlorquinaldoi), respectivement, éventuellement en mélange avec des supports et/ou additifs couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutique. L'effet des compositions de la présente invention est démontré par les résultats in vitro suivants. Les concentrations d'inhibition minimum [valeurs CIM) des composants cidessus et des combinaisons de ces deux composants selon un rapport 1:1 en poids, contre les microorganismes suivants procèdant des processus de mastite et de métrite du bétail, ont été évaluées selon la méthode de la dilution en série dans un milieu de culture de rouge phénol-glucose (fabriqué par DIFCO) ou, dans un milieu de culture de Sabouraud, respectivement, dans le cas de souches fongiques. A - Staphylococcus aureus B - Streptococcus zooepidermicus C - Escherichia coli 494 D - Escherichia coli 17 E - Klebsiella pneumoniae F - Pseudomonas aeruginosa 13 - Candida albicans H - Streptococcus agalactiae I Streptococcus dysgalactiae J - Streptococcus uberis K - Streptococcus faecalis L - Listeria monocytogenes M - Corynebacterium pyogenes N Salmonella typhimurium O - Campylobacter fetus P - Campylobacter jejuni P - Bacteroides fragilis S - Fusobacterium necrophorum T - Mycoplasma bovis U - Mycoplasma bovirhinis V - Mycoplasma canadense Z - Aspergillus fumigatus. Les souches Campylobacter ont été testées dans un milieu de culture de thiol semi-liquide Ifabriqué par DIFCO). Les souches Bacteroides fragilis et Fusobacterium necrophorum ont été étudiées selon la méthode de la dilution d'agar sur une gélose sanguine contenant aussi de la tryjptose. Les souches bactériennes ont été cultivées à 37C tandis que la souche fongique (Candida albicans était reproduite. à TABLEAU I Valeurs CIM en pg/ml pour les microorganismes Substance d'essai A B C' - E F G Polymyxine B 50 5 0.5 0.5 5 0.5 200 Clotrimazole 0.5 0.5 >200 >200 > 200 >200 5 Chlorquinaldol 5 0.5 5 5 200 200 1 l Mélange I/1 en poids de polymyxine B /clotrmazole 0.2 0.3 0.3 0.2 2 0.2 0.5 Mélange 1/! en poids de polymyxine B / chlorquinaldol 0.5 0.2 0.2 0.2 0.5 0.3 0.5 0% *IN w %O Ul4 TABLEAU I (suitQe) Substance d'essai Valeurs CIM en g!/ml pour les microorganismes H I J K L M N O Po]ymyxineB 5 5 10 200 5 200 1 0.5 Clotrimazole 5 0.5 0.5 5 5 25 200 100 Chlorquinaldol 0.5 0.5 0.5 5 1 5 200 10 l PolymyxineB + clotrimazole 1 0. 2 0.1 1 1 5 0.5 0.2 PolymyxineB + chlorquinaldol 0.1 0.1 0.1 2 0.5 1 0.5 0.2 rN3 o 0% do TABLEAU I (fin) Substance d'essai ValeurS CIM en pjg/ml pouP les microorganismes P R S T U V Z Polymyxine B 5 200 200 32 32 32 200 Clotrimazole 100 200 100 32 32 32 1 Chlorquinaldol 5 1.5 3 32 4 8 25 PolymyxineB + clotrimazole 1 20 15 10 10 15 0.5 Polymyxine8 + chlorquinaldol 1 0.8 1 10 2 5 10 ru r0 r> no U4 26"C. Les concentrations d'inhibition minimum (valeurs CIMI montrant un effet bactéricide, c'est-à-dire une inhibition complète du développement des microorganismes telle que les milieux inoculés restaient stériles, sont indiquées dans le Tableau I. Il est évident d'après les données du Tableau 1 que par exemple le Staphylococcus aureus n'est inhibé que par une forte concentration 150 Mg/ml de polymyxine B, mais que la présence simultanée de 0,1 Jlg/ml de polymyxine B avec 0,1.g/ml de clotrimazole est suffisante pour assurer l'effet bactéricide. Les souches Escherichia coli sont inhibées par une faible concentration (0,5 J.g/ml) de polymyxine B seule, cependant, une concentration inférieure de 0,15 ou 0, 1 ilg/ml de polymyxine B est aussi suffisante en présence. de clotrimazole. Le clotrimazole seul a un très faible effet sur ces souches bactériennes. Les mêmes observations peuvent être notées lors de la présence commune de polymyxine.B et de chlorquinaldol. Il est très important de noter que la polymyxine B n'a pratiquement aucune action fongicide, mais que la présence simultanée de 0,25 Lg/ml de polymyxine B avec 0,25 lg/ml de clotrimazole ou de chlorquinaldol, respectivement, est suffisante pour tuer la souche de Candida albicans étudiée. On peut donc nettement conclure d'après les données du Tableau I que tous les microorganismes testés sont inhibés même par une très faible concentration de polymyxine B.combinée avec du clotrimazole ou du chlorquinaldol respectivement, et qu'ainsi le risque d'un développement d'une résistance est aussi réduit. Selon le procédé de la présente invention, on mélange 1 partie en poids de polymyxine B ou d'un sel de celle-ci acceptable du point de vue pharmaceutique, avec 1 à 1000 parties en poids de clotrimazole ou 1 à 400 parties en poids de chlorquinaldol, respectivement, et avec des supports et/ou additifs couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutique et l'on convertit le mélange ainsi obtenu en une composition pharmaceutique par une méthode connue en elle-même. Selon un mode de réalisation préféré de la présente g invention, la composition comprend pour 1 partie en poids de polymyxine B ou d'un sel de celle-ci acceptable du point de vue pharmaceutique, 5 à 50 parties en poids de clotrimazole ou de chlorquinaldol, respectivement, en mélange avec des supports et/ou additifs couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutique. Les composants actifs dont de préférence convertis en compositions vétérinaires qui conviennent pour traiter la mastite et la métrite comme des suspensions, des aérosols, des comprimés utérins (batônnets utérins), des gélules utérines, des mousses et similaires. Ces compositions contiennent généralement les composants actifs en une quantité totale de 0,01 à 90% en poids, de préférence de 0,1 à 10% en poids, convenablement de 0,1 à 2P,0. en poids. Les. compositions vétérinaires peuvent être préparées avec des supports et des adjuvants couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutique, selon des procédés de formulations pharmaceutiques connus en eux-mêmes (voir par exemple Pharmaceutical Sciences de Pemington, 16ème Ed., Mack Pubiishing Go., Easton, USA, 19801. Des supports et des additifs convenables sont des esters d'acides gras et des éthers d'alcools gras; des agents émulsifiants; du dioxyde de silicium colloïdal; des adjuvants d'empastillage comme le lactose, la polyvinylpyrrolidone, le talc, le stéarate de magnésium et similaires; des agents stabilisants et similaires; on utilise de préférence comme agent stabilisant, du 1,1,1trichloro-2-méthylpropan-2-ol en une quantité de 0,1 à 10% en poids, convenablement de 0,5 à 2% en poids. Les compositions vétérinaires selon la présente invention sont utiles pour traiter efficacement la mastite et la métrite ainsi que pour combattre les infections fongiques qui apparaissent souvent simultanément. L'invention est illustrée en détail à l'aide des exemples non-limitatifs suivants. Exemple 1 Préparation d'une suspension Composants g Polymyxine B 0,01 Clotrimazole 0, i0 Softigen 701 (glycéride partiel d'acide gras hydroxy insaturé, fabriqué par Dynamit Nobel Co.) 0,20 1,,1 -trichloro-2-méthylpropan-2-ol 0,05 Dioxyde de silicium colloïdal (avec une surface spécifique de 200 m2/g) 0,24 Mygliol 812 (triglycéride d'acides gras saturés en C8-12, fabriqué par Oynamit Nobel Co.) 9,40 ,00 Après dissolution du Softigen. 701 dans le Mygliol 812, les autres composants sont dispersés dans la solution. (Avant la dispersion, les particules solides sont broyées par exemple dans un broyeur à jet d'air à une dimension inférieure à 10 PJm). La suspension obtenue est introduite dans une seringue mammaire en matière plastique et utilisée pour le traitement de la mastite. Exemple 2 Préparation d'une suspension Composants g Polymyxine B 0,01 Chlorquinaldol 1,00 Softigen 701 0,20 1,1,1 -trichloro-2-méthylpropan-2- ol 0,05 Dioxyde de silicium colloïdal 0,24 Mygliol 8 12 8,50 ,00 La procédure décrite dans l'exemple 1 est répétée pour fournir une composition qui est utile pour eIQ traitement de la mastite. Exemple 3 Préparation d'une suspension Composants g Polymyxine B 0,01 Clotrimazole 0,10 Cremophor A 6 (éther formé à partir d'alcools gras saturés avec de l'oxyde d'éthylène, contenant 6 groupes éthoxy par molécule; fabriqué par BASF] 0,15 Cremophor A 25 (éther formé à partir d'alcools gras saturés avec de l'oxyde d'éthylène, contenant groupes éthoxy par molécule; fabriqué par BASF] 0,15 t, 1,1 -trichloro-2-méthylpropan-2-ol 0,05 Myristate d'isopropyle 5,00 Monostéarate de glycéryle 0,14 2Ethylhexanoate de cétyl stéaryle 4,40 ,00 Le monostéarate de glycéryle et les agents émulsifiants de type Cremophor sont dissous dans le mélange de myristate d'isopropyle et de 2-éthylhexanoate de cétyl stéaryle, puis les particules solides sont dispersées dans la solution. La suspension ainsi obtenue est utilisée pour le traitement de la mastite. Exemple 4 Préparation d'une suspension Composants g Polymyxine B 0,01 Clotrimazole 0,10 Polyéthylène glycol (poids moléculaire 250001 0,34 1,1,1 -trichloro2-méthylpropan-2-ol 0,06 Propylène glycol 10,00 Caprylate de glycéryle 10, 00 Mygliol 812 9,00 Ether de nonyl phénol et de polyéthylène glycol 0,50 , 00 Le polyéthylène glycol, l'éther de nonyl phénol et de polyéthylène glycol et le Mygliol 812 sont ajoutés au mélange de propylène glycol et de caprylate de glycéryle et les particules solides préalablement broyées à une dimension inférieure à 10 Jilm sont mises en suspension dans la solution. La suspension ainsi obtenue est mise dans un flacon en plastique et utilisée pour le. traitement de la métrite, par exemple, par introduction de la - composition dans l'utérus par l'intermédiaire d'un cathéter utérin. Exemple 5 Préparation d'un batônnet utérin (comprimé utérin. Composants g Polymyxine B 0,01 Clotrimazole 0,10 Lauryl sulfate de sodium 1,10 Acide citrique anhydre 118 Carbonate acide de sodium 1,82 Lactose 3, 00 1,1,1 -trichloro-2-méthylpropan-2-ol 0,05 Polyvinylpyrrolidone 0,30 Talc 0,20 Stéarate de magnésium 0,20 Dioxyde de silicium colloïdal (avec une surface spécifique de 200 m2/g] - 0,04 7,00 L'acide citrique anhydre ayant une dimension particulaire inférieure à 200 Pm, le carbonate acide de sodium et la polyvinylpyrrolidone sont agités tandis que de l'eau est ajoutée dans un dispositif de granulation à écoulement tourbillonnaire pendant 6 minutes. Les granulés humides sont séchés de 70 à 808C, puis les granulés secs sont brisé à travers un tamis dont la distance entre les fils est de 1,0 mm. Les autres composants sont ajoutés et le mélange obtenu est transformé en batônnet utérin pesant 7,0 g chacun avec une matrice à presse de 80 mm de long et 10 mm de largeur dans une machine d'empastillage excentrique. Le batonnet utérin obtenu est utilisé pour le traitement de la métrite. Exemple 6 La procédure décrite dans I'exemple 5 est répétée, si ce n'est que 2,00 g de clotrimazole et 1,10 g de lactose sont utilisés. Exemple 7 La procédure décrite dans I'exemple 5 est répétée, si ce n'est que 0,01 g de clotrimazole et 3,0 g de lactose sont utilisés. Exemple 8 La procédure décrite dans I'exemple 5 est répétée, si ce n'est que 0,01 g de chlorquinaldol à la place du clotrimazole et 3,09 g de lactose sont utilisés. Exemple 9 Préparation d'un batânnet utérin (comprimé utérin. Composants g Polymyxine B 0,05 Clotrimazole 0, 10 Dioctyl sulfosuccinate de sodium 0,10 Acide adipique 1,40 Carbonate acide de sodium 1,10 1,1,1 trichloro-2-méthylpropan-2-ol 0,05 Lactose 3,50 Polyvinylpyrrolidone 0,30 Talc 0,20 Stéarate de magnésium 0,24 7,00 La solution de polyvinylpyrrolidone et de dioctyl sulfosuccinate de sodium dans 100 ml d'éthanol est ajoutée au mélange d'acide adipique ayant une dimension particulaire inférieure à 200 ipm, de carbonate acide de sodium et de lactose sous agitation dans un appareil à écoulement tourbillonnaire. Les granulés sont séchés après 6 minutes de granulation, puis brisés à travers un tamis ayant une distance de 1,0 mm entre les fils, les autres composants sont ajoutés et le mélange obtenu est transformé en bat0nnets utérins selon la procédure de l'exemple 5. Exemple 10 La procédure décrite dans I'exemple 9 est répétée, si ce n'est que du chlorquinaldol est utilisé à la place du clotrimazole. PEVENDICATIONS 1. Composition vétérinaire synergiquement active, utile en particulier pour le traitement de la mastite et de la métrite, caractérisée en ce qu'elle comprend pour 1 partie en poids de 6,9,1 8-tris-(2-aminoéthyll- 1 5-benzyl-2 1 -12,8-bis-(2-aminoéthyl)-5- (1 -hydroxyéthyl)- 1 5-méthyl-4, 7,1 0-trioxo-3,6,9-triazaheptadécana midol-3-( 1 -hydroxyéthyll- i 2-isobutyl- 1,4,7,10,13,16,19-heptaaza- cyclotricosane-2,5,8,11,14,17,20-heptaone ou d'un sel de celle-ci acceptable du point de vue pharmaceutique, 1 à 1000 parties en poids de 1 -12-chlorophényl)-diphényl-méthyl- 1 H-imidazole ou 1 à 400 parties en poids de 2-méthyl-5,7-dichloro-8-hydroxyquinoléine, respectivement, éventuellement en mélange avec des supports et/ou additifs couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutique. 2. Composition vétérinaire suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend pour 1 partie en poids de 6,9,18-tris-(2-aminoéthyll- 1 5-benzyl-21 -[12,8-bis-(2-aminoéthyll-5- ( 1 -hydroxyéthyl)- 15-méthyl-4,7,1 0-trioxo-3,6,9-triazaheptadéca- namido]-3- 1 -hydroxyéthyl)- 12-isobutyl- 1,4,7,10,13,16,1 9-heptaaza cyclotricosane-2,5,8,11,14,17, 20-heptaone ou d'un sel de celle-ci acceptable du point de vue pharmaceutique, 10 parties en poids de 1 -(2chlorophényl)-diphéngl-méthyl- 1 H-imidazQle comme agents actifs. 3. Procédé pour la préparation -d'une composition vétérinaire synergiquement active, utile en particulier pour le traitement de la mastite et de la métrite, caractérisée en ce qu'il comprend le mélange en tant que composant actif de 1 partie en poids de 6,9,1 8-tris-[2-aminoéthyll- 1 5-benzyl-21 -[2,8-bis-(2- aminoéthyl)-5- 1 -hydroxyéthyll- 15-méthyl-4,7, 1 0-trioxo-3,6,9-tri- azahepta-décanamidol-3-( 1 -hydroxyéthyl]- 1 2-isobutyl- 1,4,7,10,13, 16, 19-heptaazacyclotricosane-2,5,8,11,14,17,20-heptaone ou d'un sel de celleci acceptable du point de vue pharmaceutique, avec 1 à 1000 parties en poids de 1 -(2-chlorophényll-diphényl-méthyl- 1H- imidazole ou avec 1 à 400 parties en poids de 2-méthyl-5,7-dichloro- 8-hydroxyquinoléine, respectivement, et éventuellement avec des supports et/ou additifs couramment utilisés dans I'industrie pharmaceutique et la conversion du mélange ainsi obtenu en une composition vétérinaire par une méthode connue en elle-même. 4. Procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend l'utilisation en tant que composant actif, de 1 partie en poids de 6,9,1 8-tris-(2-aminoéthyl)- 15-benzyl-21-[2,8-bis-t2- aminoéthyl)-5-( 1 -hydroxyéthyl)- 1 5-méthyl-4,7, 1 0-trioxo-3,6,9-trH- azahepta-décanamido]-3-( 1 -hydroxyéthyl)- 12-isobutyl- 1,4,7,10,13, 16, 19-heptaazacyclotricosane-2,5,6,,1 1,14,17,20-heptaone ou d'un sel de celle-ci acceptable du point de vue pharmaceutique, et de 10 parties en poids de 1-(2-chlorophényl)-diphényl-méthyl- 1 H- imidazole.