FR 2630546 A1 19891027 FR 8805245 A 19880420 ! La présente invention a été faite au Laboratoire R.M.N. et Réactivité Chimique de l'Université de Nantes, Unité aseoclee au Centre National de la Recherche Scientifique N. 472. La présente invention se rapporte à une électrode enzymatique, en particulier, à une électrode a surface renouvelable par frottement ou découpe, de telle sorte que sa surface utile soit toujours identique à elle-même, quelles que soient la forme et l'application de l'électrode. L'invention s'applique également à une électrode enzymatique du type jetable. L'invention concerne également le procédé de préparation de cette électrode. Une électrode à enzyme résulte de l'association d'un capteur électrochimique et d'une enzyme sous forme notamment immobilisée. Le fonctionnement d'une telle électrode est base sur le principe qu'une dégradation' enzymatique du substrat à doser est réalisée et que, parallèlement, l'apparition ou la. disparition d'un des roduits de la réaction est mesurée. Ainsi, dans le cas de l'électrode à glucose comportant la glucose oxydase comme enzyme, la réaction enzymatique est la suivante: glucose + O0 + HO GOD Acide gluconique + HO,0 Plusieurs types de détection électrochimique sont 2 5 envisageables, à savoir la mesure de la disparition de 02, la mesure de l'apparition des ions H+ et l'oxydation anodique de H 02 (électrode de platine) à potentiel imposé et la mesure du courant qui en résulte. Pour immobiliser les enzymes, on connaît diverses $0 techniques, à savoir l'inclusion, suivant laquelle l'enzyme - est piégée de façon mécanique dans un polymère sous forme de gel; la réticulation, suivant laquelle des molécules chimiques bifonctionnelles, comme le glutaraldéhyde, permettent la réticulation des molécules d'enzyme entre elles ou leur coréticulation avec des protéines inactives, comme la gélatine et l'albumine; le confinement, suivant lequel l'enzyme est en solution à l'intérieur d'un compartiment separe de la solution à doser par une membrane el @p seiddnv senu e:uvui uos semXzue sel 'Csnb;T:.Xzua ePou;zel, a sel SUQp '1;ueallauuoTpeil TS enbTxo; jeala, as %nad Inb ja neTITm nr aaSuAva aouwlsqns eun au;rnpoaxuT,p ine@rm uel;u.tuoou;,* sjo;ernblenb aluesgad srwa s;uvsT;,es sç;-:.tnsz sep axua;qop s-mied w apoq;fl e;l.e '$soonI2 np agusop ap %a uoî;o%;gp O ap lugTs ap wvTAas anb;Tqooloel uo0;; IZue2@.z ws rp %uçino ael a asoonIS nw %zoddcl avd enb%;;l.;vo a,;;;uvnb ue %4npouluT a2e; s olv %rned ugoo.aie; e *( uoTovga) uininioTa tuOfl. iUe aupoozixe; np "enu",, pol.oelg rns uoT;vpxo,l se SanbTmîlo oal%, uooelep el ]+ ajZ [] HZ + ei [EO]EH+ [x]aC( +dZH Ch6O Z + [pa 1 [I] {P]O + enbpuoonls p$o - HO E + [x] aoO9 + esoonlî a-oo auioouie el oeAz (C)O es. pKxo esoon2 w epozlooe, aun avd asoonIs np aesop np seo el suup sa;u;ATns sel.31Os s5e @o suvp senb1TlduT sucTIo-eeu se' *,sna:72Tpç= aIIadde uo,. enb 'sAT;Tp sas;a augoozea; el:.uaw;ou @7ziX0,lw s;n;Qsis p ucTIvsTIT;n,i aasluazead e;@uaOEv i q.uo s;ue;ua uoou; sI 'SalqTw; %:UeTAap.ua$ejd auîi xo,p 9;%TuVnb eI anbs$ol sagssnv; %uos sesuod,@ se@o 'aw ap po.%o. rOI,t ap sesuodg9i set suep se;uq;%odm; suo;awIo.nl; sap zeTueurv %ueAned eue2Xxa,p uoTssaed Wl ap SUO;c.WîivA sap ';a;;a us eWa2sop ap enbiuqoel0; ez;az @p X.ue;Twr;t 0i naow; tun 'sanoT;oloTq sepTnbTI sel suvp saimsop sea n.od.te;;n.xWd ue 'svz suT;v;xeo susp ea;q 1.ned uoInlaos çl su$p snoss$p eue2Xxo,p %;;un5b -el ap enSb.%Xzue uoCT%0ve V ap eoupuedagp wI 4sinell;T ava *to-ellaz ap enmb;;a Iv:.wO,t swd zu4dToT;%ed au Tnb emazua, l ap sleuuo;ouo; s$uemadnoaa sep ae aeA% ee;ans eun awd s$;%od sleuuoT; ouo; suemednoui sel eliue u.oDT;;Ze avrgd ZTçV; es Tn0b eualeAco uo;x;eT; el :;a! salno.Icut $at;ad sel anb îasswd asscQI au $nb asnacod 9MS0ú9Z surface de l'électrode. C'est le car nztament de l''ectro-de à GODI décrite par T. IKEDA et al. dans Agric. Biol. Chem. 49(29), 541-543, 1985 et dans Agric. Biol. Chem. (4), 883-890, 1986, la surface de l'électrode chargée en GOD étant revêtue par un film de nitrocellulose. Dans la publication "Analytical Sciences Decembre 1985, vol. 1", pages 455-457, IKEDA et al. décrivent une électrode à GODI) dans laquelle la couche de GOD, appliquée sur l'électrode, est revêtue par une membrane de dialyse, une mini-grille en or et un filet de "Nylon". On constate donc que, selon la technique antérieure de fixation de l'enzyme à la surface de l'électrode, on est obligé de protéger l'enzyme par un "chapeau" perméable à la solution et non à l'enzyme. On a également proposé de fixer l'enzyme sur un support chimique. Les électrodes enzymatiques précitées permettent de faire un certain nombre de dosages spécifiques, mais elles sont souvent d'un emploi délicat, car elles demandent une préparation minutieuse-avant chaque mesure et elles se saturent assez rapidement. De plus, la surface de l'électrode peut s'abîmer facilement, et il en résulte une perte de signal et une diminution de la reproductibilité. En effet, la surface n'est pas renouvelable, sauf à effectuer à chaque fois un traitement de régénération. Par ailleurs,- dans le cas de la fixation d'enzymes par réaction chimique, notamment pour la fixation de plusieurs enzymes différentes à la surface de l'électrode, il peut se produire des interférences ou des compétitions qui rendent souvent la préparation de l'électrode incontrôlable. Selon l'invention, on propose d'emprisonner les enzymes dans une matrice conductrice. Pour les analyses, cette matrice est avantageusement contenue dans une gaine inerte, en un matériau isolant, par exemple, en verre ou en matière plastique, d'o elle émerge A une extremité pour constituer la surface utile. Avant une mesure, il suffit, si cela s'avère nécessaire, de nettoyer sommairement l'électrode par exemple, par simple frottement sur une feuille de papier, ce qui enlève la couche superficielle usée sur quelques angstr6ms, puis on plonge l'électrode dont la surface a ainsi été régénérée dans le milieu liquide a analyser. L'électrode de l'invention est facile à préparer, a moindre coût, elle peut se conserver facilement, elle est toujours prête à l'emploi, elle est très maniable et fournit des résultats reproductibles. Elle peut sans inconvénient renfermer un système multienzymatique, ainsi qu'un médiateur d'électrons. Elle peut être aussi à usage unique et jetable. L'électrode enzymatique selon l'invention est donc -5 caractérisée par le fait qu'elle consiste en une matrice réalisée à partir d'une poudre conductrice et renfermant au moins une enzyme immobilisée, incorporée de façon homogène dans sa masse. A titre d'enzyme, dans l'électrode selon l'invention, on peut utiliser n'importe quelle enzyme susceptible d'entrer en réaction avec le substrat à analyser et/ou avec toute autre substance pouvant fournir un signal électrique représentatif dudit substrat à analyser. Les enzymes les plus courantes sont plus particulièrement les oxydoréductases qui impliquent alors l'utilisation d'un agent, dit médiateur, pour le transfert d'électrons. L'origine de l'enzyme n'est aucunement critique, car l'électrode de l'invention ne fait appel qu'à sa propriété de réaction directement ou indirectement détectable par voie électrochimique. Il est également possible d'utiliser, conJointe- ment à une enzyme donnée, son co-enzyme, lequel est lui-même détectable par voie électrochimique. C'est le cas par exemple des différentes déshydrogénases. La quantité d'enzyme présente dans la matrice conductrice peut varier dans de larges limites, en fonction ce l'activité propre de chaque enzyme. Plus l'activité de l'enzyme est élevée, moins la quantité en poids de l'enzyme est grande dans la matrice, étant observé que des proportions excessives d'enzyme ne nuisent pas à la mesure proprement dite mais sont inutilement coûteuses. Mais il va sans dire que la quantité d'enzyme minimale doit être telle qu'elle fournisse un signal de mesure pratiquement exploitable. Par exemple, pour l'électrode à glucose oxydase (GOD), les proportions peuvent varier de 0,4 à 10% en poids avec un enzyme à UI = 200, et plus particulièrement de 1 à 5%- en poids. La granulométrie de la poudre conductrice n'est pas critique; on a obtenu de bons résultats avec une poudre de granulométrie comprise entre 1 pm et 25.m, par exemple de 5 pm en moyenne. TLa poudre conductrice est choisfe notamment parmf les poudres de carbone ou les poudres de graphite. De préférence, la matrice est formee par le mélange de la poudre avec un liant inerte, c'est-à-dire ne réagissint pas dans le domaine de potentiel considéré, et utilisé notamment à raison de 10 à 40 % en poids par rapport à la matrice conductrice pâteuse ainsi obtenue. Le liant est avantageusement un liant hydrophobe; l'huile de paraffine, l'abromonaphtalène et l'huile de silicone, ont donné de bons résultats. Pour le choix du liant, on pourra se reporter à R.N. ADAMS, dans "Electrochemistry at solid electrodes", Ed. Xarcel DEKKER, New York, 1969. Dans certains cas, le liant n'est pas indispensable, par exemple si la poudre de carbone est à l'état matriçable. 0 La quantité de liant est choisie de telle sorte que la matrice ne soit pas trop fluide par excès de liant, et, qu'à l'inverse, elle ne s'effrite pas par défaut de liant. Par ailleurs, l'enzyme est immobilisée au sein de 3 la matrice de matière conductrice par l'intermédiaire d'au moins un agent réticulant ou bien par emprisonnement physique dans la matrice constitutive de l'electrode par exemple du carbone. Comme agent reticulant, on peut mentionner le glutaraldéhyde. Selon l'invention, on peut également prévoir que la matrice de matière conductrice renferme en outre au moins un agent médiateur en une quantité de 0,01 à 2 % en poids, en particulier de 0,05 & 1% en poids, par rapport à ladite matrice, ce médiateur étant choisi notamment parmi le ferrocène, le nickeloc&ne et leurs dérivés, ainsi 'que la benzoquinone et autres agents de transfert d'électron=. A titre illustratif, les dérivés du ferrocène, décrits A titre de médiateurs en solution par A.E.G. GASS et al, dans "Anal. Chem. l984, U, 617-f71, peuvent être incorporés dans la matrice de l'invention. La matrice de l'électrode selon l'invention peut également renfermer au moins un co-enzyme. Pour-préparer l'électrode enzymatique selon l'invention, dans un premier mode de réalisation, on melange intimement: - une rate ou matrice homogène résultant du mélange intime d'une poudre conductrice avec un liant; - au moins une enzyme; - une solution de réticulation de l'enzyme; et dans un second mode de réalisation, on mélange intimement une poudre conductrice matriçable et au moins une enzyme et on soumet ce mélange à des efforts mécaniques, en particulier de compression, pour obtenir une matrice solide emprisonnant physiquement l'enzyme. Dans les deux cas, on peut incorporer à la pate ou matrice ou au mélange un médiateur et/ou un co-enzyme. Dans le cas o la pâte ou matrice ou le mélange renferment un médiateur, on peut préparer une fraction de poudre conductrice renfermant de façon homogène le médiateur, en mélangeant ce dernier en solution organique avec la poudre conductrice, puis en faisant évaporer le solvant, et cn méelange cette fraction au mélange pAteux renfermant l'enzyme immobilise. Pour les dosages, le montage utilisant l'!ectre de l'invention est un montage classique, l'une des extrémités de l'électrode étant mise en contact avec la solution dans la cellule de mesure, et l'autre, avec le circuit électrique du potentiostat. L'électrode enzymatique selon l'invention peut revêtir differentes formes, entre autres une forme portable à usage renouvelé ou à usage unique. L'invention sera illlustrée sans être aucunement limitée par la description qui suit, faite en référence aux dessins annexés et aux exemples suivants, dans lesquels les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire: - Les figures 1 à 17 sont des diagrammes montrant les résultats des dosages et mesures réalisés avec des électrodes selon l'invention; et - La figure 18 illustre schématiquement une électrode conforme à un mode de réalisation de l'invention, cette électrode ayant une forme générale tubulaire. L'électrode 1 est représentée de façon schématique sur la figure 18. Elle se compose d'un porte- électrode 2 à une extrémité duquel est disposée une fenêtre de lecture 3 et se terminant à l'autre extrémité par un contact 4. Au voisinage de ce contact, le porte-électrode présente un plus petit diamètre, cette partie 5 de plus petit diamètre portant un filetage 6. La matrice 7 selon l'invention renfermant l'enzyme est logée dans une gaine cylindrique 8, de façon à émerger à l'une des extrémités de ladite gaine 8 pour constituer la surface utile 9 de l'électrode. La gaine 8 se prolonge, à l'extrémité opposée, au-delà de la matrice 7 pour constituer une partie 10 portant un filetage 11, destiné à coopérer avec le filetage 6 du porte- électrode 2-, le contact 4 étant constamment en appui sur la face 9& de la matrice 7 opposée à la surface 9. ap alintlp lm go'o zeAv pueadai uo,t anb expnod ap ai os aun riuelqo.xnod a;-ev uo sa;nuTu oú q 01:uQpued 'o.t f 'Ue;a;om et suvp nuelqo çsuTw ag'uvlt el lesode. ass;t u0 *easvpxo esoontI ap eTsToqo;;uvnb el oaAe,nb $sue O x959 g'g ' H d eH qdsoqd uodMe: uoCInlog %6Z......... %5 auzAOq aujnnq1y %9Z ' '%5' pçI@plvae;nlo : luePATns uo:;-eTnmao.; 'el.XuvXQ 1 uoi;%lno$;a ap uo$%nlos eun,p im ú' oaAe o nue;qo isuTw auoqaozD ep e@%d et ep 2i e 0qu@em;u; aî2ueimr u0 eU;p2oOq al.d aun1p uoa.ue o,nbsn @U;F;> xd cp alTnqp jar gel anbSI Xzue aepol;oalal ? aeooss$;sa 8I ou- ap no/ea eu;TITxnv apooal;a auf 'an3oaluQ ae29;ez no aena; no auIt;.apdrd ap ZL aIIs$ d aun aenoTIdd g Sa,anbnp 9I puo; et ans gl uoaondvo un,p tI enS dd adnr el ep I ae2pnvI4 et DaAQ 2eaia;doo' 0 @u;$$Sap EI uiaex ez2, ea;zT; un e;iodmoo 8 g e el 'le, e7;Irs '6c e 9r.-O---F a1npacq es @Dp a5TlTsTzA ne ssanaljTe -5,i g 9 50 ú9 Z (b) Dosage du glucose Ce dosage est conduit en presence de l'acide monocarboxylioue du ferrocène comme médiateur, les réactions mises en jeu étant analogues à celles indiquées dans le préambule de la présente description pour le ferrocène. Le milieu d'analyse est un milieu tampon phospbate à pH 8-9. La Figure l(a> montre la forme du signal obtenu en voltamètrie cyclique avec cette électrode lorsque l'acide monocarboxylique du ferrocène est seul en solution. La courbe i = f(E) ainsi obtenue correspond à l'oxydation dudit acide en le cation ferroc$nique correspondant. La Figure l(b) est obtenue lorsque du glucose est ajouté à la solution précédente. On note une augmentation du courant d'oxydation en présence du glucose. Il faut signaler qu'aucun courant n'est détecte à ce potentiel avec l'électrode Iorsque le médiateur est absent de la solution, méme si la solution contient du gO lucose. Sur la Figure 2, on a tracé les courbes de reponse i = f(C) de cette électrode en fonction de la concentrnation en glucose, pour différentes concentrations en GOD dans la pàte de carbone de l'électrode, dans les conditions suivantes: * Concentration en médiateur dans le milieu d'analyse: -3 0,5 x 10 M * pH: 8,9. * vitesse de balayage: 2 mV/s Légende de la Figure 2 Abscisses: concentration du glucose en mX Ordonnées: intensité du courant en MA Courbe Nombre d'unités de GOD x 10 par gramme de pate de carbone en médiateur est grande. Exezple 2:Dosage du glucose à l'aide d'une électrode à pire de carbone contenant de la glucose oxydase et du 2;I p-anilidoferrocène comme médiateur. On dissout une quantité choisie de p-anilido- ferrocène (C 5H5)Fe(C5H4-C6 H4-NH2) dans du chlorure de méthylène, et à la solution obtenue, on ajoute une quantité déterminée de poudre de carbone, analogue à celle de l'Exemple 1. On fait évaporer le chlorure de méthylène tout en agitant la mélange. Après évaporation totale du solvant, on obtient une poudre de carbone contenant d'une façon homogène le médiateur. On mélange 1 g de cette poudre avec 0,36 ml d'huile de paraffine Jusqu'à obtention d'une pate homogène, puis on mélange intimement 300 mg de la pâte de carbone ainmi obtenue avec 300 mg de la pate contenant GOD préeparée - selon l'Exemple 1. (b) Dosage du glucose Les réactions mises en Jeu sont analogues a celles indiquées à l'Exemple 1. Le milieu d'analyse est un milieu tampon phosphate à pH = 8,8. La Figure 4(a) montre la forme du signal obtenu i = f(E), en voltamétrie cyclique, en milieu tampon précité et en l'absence de glucose, avec l'électrode contenant GOD et le médiateur. La Figure 4(b) montre ce même signal après addition de glucose. Sur la Figure 5, on a tracé la courbe 1/R = f(1/C), R étant étant le rapport du signal obtenu en présence de glucose à celui obtenu en l'absence de glucose, et C, la concentration en glucose exprimée en MX. Les conditions étaient les suivantes: -5 * quantité de médiateur dans la pate: 0,4 %; * quantité de GOD dans la pAte: 7.103 U/g; vitesse de balayage: 2 mV/s Une corrélation linéaire est obtenue entre 1/R et 1/C. On a également obtenu des relations linéaires entre 1/R et 1/C en faisant varier la concentration du médiateur et celle de l'enzyme dans l'électrode. Sur la Figure 6, on a tracé la courbe représentant la variation de R en fonction de la concentration en médiateur (exprimée en % par rapport à la totalité de la pate). Les conditions étaient les suivantes: * concentration en glucose dans le milieu d'analyse: -3 x 103 X À concentration en GOD dans l'électrode: 2,9 % (soit 6,25 x 103 U/g) * pH = 8,9 * vitesse de balayage: 2 mV/s Cette courbe montre que, bien qu'un important signal soit détecté pour toutes les concentrations en signal sait détecté pour toutes-les concentrations en médiateur (entre 0 et 0,6%) , celui-ci passe par un maximum pour des concentrations se situant aux alentours de 0,15%. Sur la Figure 7, on a trace la courbe représentant la variation de R en fonction de la concentration en GOD dans l'électrode (exprimée en U GOD/g de pate), pour de, concentrations en médiateur de 0,15 et 0,2% (courbes respectivement a et b) par rapport à la totalité de la pate, dans les conditions suivantes: * concentration en glucose fixée à 20 x 10 x; * pH = 8,9; vitesse de balayage: 2 mV/s. On note également ici qu'un signal optimum est obtenu lorsque l'électrode contient environ 5 x 10 Unités de GOD/g. Le signal reste cependant toujours important et exploitable pour des concentrations en-deçà et audelà de cette valeur. Exemnple 3:Dosage du galactose à l'aide d'une électrode à pAte de carbone contenant de la galactose oxydase et du p-anilidoferrocène. (a) Préparation de l'électrode On procède comme à l'exemple 2(a), en remplaçant la GOD par la galactose oxydase. (b) Dosage du galactose La Figure 8(a) montre la forme du signal obtenu en voltamétrie cyclique i = f(E) avec cette électrode dans un milieu tampon phosphate à pH = 8,9, en l'absence de galactose, et la Figure 8(b) montre ce même signal après l'addition de galactose. Exemple 4:Dosage de la L-leucine à l'aide d'une électrode à pAte de carbone contenant de la L-acide amino oxydase et de l'anilidoferrocène. (a) Préparation de l'électrode On procède comme à l'Exermple 2(a), en remplaçant la GOD par de la L acide amino oxydase. (b) Dosage de la L-leucine. La Figure 9(a) montre la forme du signal obtenu avec cette électrode dans un milieu tampon phosphate & pH = 8,9, en l'absence de L-leucine, et la Figure 9(b) montre l'effet de l'addition de L-leucine. Exempie 5:Dosage du glucose à l'aide d'une électrode à pate de carbone contenant de la glucose oxydase et du nickelocène. (a) Préparation de l'électrode -1 On procède comme à l'Exemple 2(a), en rempla-ant !'anilidoferrocène par le nickelocène: (C 5H5)Ni. (b) Dosage du glucose La Figure 10 montre le signal obtenu avec cette électrode dans un milieu tampon phosphate à pH ^8,9, en l'absence de glucose (courbe a) et après addition de glucose (courbe b). Exemple 6:Dosage du glucose à l'aide d'une électrode à pâte de carbone contenant de la glucose oxydase et de la benzoquïnone. (a> Preparation de l'électrode On procède comme à l'Exemple 2 (a), en remplaçant le p-anilidoferrocène par la benzoquinone. (b) Dosage du [lucose. La Figure 11 montre la forme du signal obtenu avec cette électrode dans un milieu tampon phosphate à pH = 8,9, en l'absence de glucose (courbe a) et après addition de glucose (courbe b). Exemple 7: Dosage du saccharose à l'aide d'une électrode à pate de carbone contenant de l'invertase et de la glucose oxydase, et de l'acide monocarboxyli- que du ferrocène comme médiateur en solution. (a) Prélparation de l'électrode On procède comme à l'Exemple 1, avec utilisation de 20 mg de GOD/(6300 U/g de pate) et 20 mg d'invertase (24000 U/g de pate), la quantité totale de poudre de carbone étant de 300 mg. (b) Dosage du saccharose La Figure 12 montre la forme du signal obtenu avec cette électrode dans un milieu tampon phosphate à pH = 8,9, en l'absence de saccharose (courbe a) et après addition de saccharose (courbe b). Sur la Figure 13, on a tracé les variations de I - I0 en fonction de la concentration en saccharose (exprimée en =M), dans les'conditions suiva:ntes: 20. milieu tampon phosphate pH = 8,9; * vitesse de balayage: 2 mV/s La relation entre le signal et la concentration en saccharose est une relation linéaire. Exeemple 8:Dosage du saccharose a l'aide d'une électrode à pate de carbone contenant de l'invertase, de la glucose oxydase et de l'anilidoferrocène. (a) Préparation de l'électrode On procède comme à l'Exemple 2, avec les concentrations suivantes: * GOD: 300 U/g de pate * Invertase: 28 000 U/g de pâte * Anilidoferrocène: 0,1% en poids de pAte. s/,&U OG SeXWellq ap eSSeFTA * 6'9 Hd e;eqdsoqd uodui$ naTI; * : se.uWA; nt sel xr;os sucoi;puaz sel -nvea/ouvq;- ua ;qc lu2u$s np auzia; el al-,ucr tj aan2T 721 -zoig8ezes np; é3i 9 S 0 9 3 gl 9098 ' La relation est une relation linéaire. L'électrode enzymatique selon l'invention peut être utiliseé dans tous les domaines mettant en Jeu des réactions enzymatiques, en tirant profit de leur sélectivité, par exemple, pour les dosages dans l'industrie chimique, dans les domaines médicaux et biologiques, ainsi que dans les industries agro-alimentaires. lO REVEND!CATIONS 1 - Electrode enzymatique. caractérisée par le fait qu'elle consiste en une matrice réalisée à partir d'une poudre conductrice et renfermant au minns une enzyme immobilisée, incorporée de façon homogee dans sa masse. 2 - Electrode selon la revendication 1, caractérisée par le fait qu'elle présente une surface renouvelable par frottement ou découpe, de telle sorte que sa surface soit toujours identique à elle-même. 3 - Eiectrode selon la revendication 1, caractérisée par le fait qu'elle est du type à usage unique, Jetable. 4 - Electrode selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée par le fait que la poudre conductrice est de la poudre de carbone ou de la poudre de Eraphite. - Electrode selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée par le fait que la matrice est formae par le mélange intime de la poudre avec un liant inerte, utilisé notament à raison de 10 à 40 % en poids par rapport à la pâte conductrice. 6 - Electrode selon la revendication 5, caractérisée par le fait que le liant est un liant hydrophobe. 7 - Electrode selon la revendication 6, caractérisée par le fait que le liant est constitué par de l'huile de paraffine, de l'a-bromonaphtalène ou une huile de silicone. 8 - Electrode selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée par le fait que l'enzyme est fixée au sein de la matrice de matière conductrice par l'intermédiaire d'au moins un agent réticulant. 9 - Electrode selon la revendication 8, caractérisée par le fait que l'agent réticulant est le glutaraldêhyde. - Electrode selon l'une des revendications I à 4, caractérisée par le fait qu'elle comprend une poudre conductrice matriçable emprisonnant physiquement l'enzyme. 1l - Electrode selon l'une des revendications 1 a , caractér:ise par le fait qu'elle contient plusieurs enzymes immobilisées dans la matrice. 12 - Electrode selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisée par le fait que la matrice de matière conductrice renferme en outre au moins un agent médiateur. -zô OS13 - Electrode selon la revendication 12, caractérisée par le fait que le médiateur est choisi parmi le ferrocène, le nickelocène et leurs dérivés, ainsi que la benzocuinone, et autres agents de transfert d'électron=. 14 - Electrode selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisée par le fait qu'elle renferme en outre au moins un co-enzyme. - Electrode selon l'une des revendications 1 A 14, caract.ri.ée _ar le fait cue la matrice est contenue dans une gaine inerte, d'o elle émerge à une extrémité pour constituer la surface utile de l'électrode. 16- Electrode enzymatique selon l'une des V 1,_*t.-., i. P Mur le draaze du caractérisée par le fait que l'enzyme est la glucose oxydase et que la matrice conductrice renferme en outre un médiateur choisi parmi le panilidoferrocène, le nickelocène et la benzoquinone. 17 - Electrode selon l'une des revendications 1 à , pour le dosage du saccharose, caractérisée par le fait que les enzymes immobilisées sont l'invertase et la glucose 0 oxydase.- 18 - Electrode selon l'une des revendications 1 à , pour le dosage de l'éthanol, caractérisée par le fait que l'enzyme est l'alcool deshydrogénase qui est associée à NAD. 2O 19 - Procédé de préparation de l'électrode enzymatique telle que définie à l'une des revendications 1 a 18, caractérisé par le fait qu'on mélange intimement: - une pAte ou matrice homogène résultant du mélange intime d'une poudre conductrice avec un liant; - au moins une enzyme; - une solution de réticulation de l'enzyme. - Procédé selon la revendication 19, caractérisé par le fait qu'on mélange intimement une poudre conductrice matriçable et au moins une enzyme et par le fait qu'on soumet ce mélange à des efforts mécaniques, en particulier de compression, pour obtenir une matrice solide emprisonnant physiquement l'enzyme. 21 - Procédé selon l'une des revendications 19 et , caractérisé par le fait qu'on incorpore a la pâte ou au mélange un médiateur et/ou un co-enzyme.