FR 2630740 A1 19891103 FR 8905753 A 19890428 COMPOSES DERIVES DE VITAMINE D3, PROCEDE POUR LES PREPARER, ET LEUR UTILISATION Cette invention concerne de nouveaux dérivés de vitamine D, ainsi qu'un procédé général pour leur préparation, et leur utilisation. Plus précisément, l'invention concerne des homologues de chaîne latérale de la la-hydroxyvitamine D, qui sont actifs, de façon spécifique et inattendue, dans la différentiation des cellules malignes, ainsi que des procédés d'utilisation de ces nouveaux composés pour le traitement de maladies néoplasiques, y compris en particulier les maladies de type leucémique. Les composés de la série de la vitamine D sont bien connus comme agents essentiels pour la régulation de l'homéostase du calcium chez les animaux ou chez l'homme. On sait aussi que ce n'est pas la vitamine D elle-même qui est efficace dans la régulation du métabolisme du calcium, mais que ce sont en fait les métabolités engendrés par elle dans le corps humain ou animal. Dans ce contexte, le métabollte le plus important de la vitamine D est la la,25-dihydroxyvitamine D3 (1,25- (OH)2D3). Ce composé, ainsi que certains analogues structuraux, comme la la-hydroxyvitamine D3 (la-OH-D3), la la-hydroxyvitamine D2 (la-OH-D2), ou certains dérivés fluorosubstitués de 1,25-(OH)2D3, est hautement efficace pour stimuler l'absorption intestinale du calcium, ainsi que la résorption du calcium à partir des os (mobilisation des os). En conséquence, ces composés sont maintenant utilisés ou ont été proposés pour utilisation en tant qu'agents pharmaceutiques pour le traitement de divers désordres du métabolisme du calcium, comme l'ostéodystrophle rénale, l'hypoparathyroidisme, le rachitisme résistant à la vitamine D, ou l'ostéopbrose. Des recherches plus récentes ont établi que la 1,25- (OH)2D3, en plus de son rôle dans la régulation de l'homéostase du calcium in vivo, assume également d'autres fonctions biologiques. En particulier, on a montré que la 1,25-(OH)2D3, et les composés qui lui sont étroitement apparentés (par exemple la-OH-D3, ou analogues fluorés de la 1,25-(OH)2D3) ont un pouvoir élevé d'induction de différentiation cellulaire. Le plus important est que l'on a trouvé que la 1,25-(OH)2D3 inhibe la prolifération des cellules malignes (en particulier, celle des cellules leucémiques) et provoque en culture leur différentiation en monocytes normaux (Abe, et al., Proc. Natl. Acad. Sci.USA 78, 4990 (1981); Honma et al., lbid, 80, 201 (1983). En raison de cette remarquable activité, la 1,25-(OH)zD3 et les composes apparentés ont été proposés comme agents anticancéreux, et en particulier antileucémiques (Suda et al. , brevet US n 4.391.802). Cependant, même si ces composés sont effectivement hautement efficaces pour différencier des cellules malignes en culture, leur utilisation pratique en thérapie par différentiation en tant qu'agents anticancéreux est extrêmement limitée en raison de leur activité également élevée comme agents affectant le métabolisme du calcium. Aux doses requises in vlvo pour une utilisation efficace en tant qu'agents antlleucémlques, ces mêmes composés peuvent provoquer l'apparition de taux de calcium nettement élevés et poucntiellement dangereux, en vertu de leur activité calcémlque inhérente. Cette activité calcémique empêche ou limite sévèrement l'utilisation de ces dérivés connus de vitamine D dans le traitement de maladies malignes, et on a donc besoin de composés présentant une spécificité et une sélectivité d'action plus grandes. Dans cette description, les.termes "activité calcémique" ou "action calcémique" désignent en abrégé l'aptitude bien connue des dérivés de vitamine D à élever les taux de calc:um sanguin, grâce à leur action stimulante sur l'absorption intestinale du calcium (transport de Ca) et sur la résorption du calcium à partir des os (mobilisation des os). Le terme "activité de différentiation" désigne l'activité, plus récemment découverte, de certains dérivés de vitamine D dans l'arrêt de la prolifération de cellules malignes et l'induction de leur différentiation en cellules normales. Un précédent travail a conduit à la préparation de plusieurs composés ayant une activité de différentiation exaltée. C'est ainsi que le brevet US 4.717.721, ainsi que d'autres publications (Ostrem & Deluca, Steroids, 49 73-102 (1988); Ostrem et al., J. Biol. Chem. 262, 14164 (1987)), révèlent que -les analogues de 1-,25-(OH)2D dans lesquels la chaîne latérale est allongée d'un atome de carbone présentent une activlté de différentiation pour les cellules leucémiques qui est environ dix fois plus grande que celle de la 1,25-(OH)2D3 elle-même. Cependant, ces composes sont encore à peu près aussi actifs que la 1, -(OH)2D3 pour stimuler l'absorption de calcium et élever les taux de calcium sérique, et ne résolvent donc pas le problème de l'action calcémique efficace indésirable, discuté ci-dessus. Ainsi, bien.que ces composés présentent un rapport amélioré différentiation/activité calcémique, il ne sont pas sélectifs en ce que leur activité calcémique est aussi élevée que celle du composé parent (1, 25-(OH)2D3). On a décrit d'autres composés apparentes aux vitamines D, dont on dit qu'ils présentent une activité préférentielle de différentiation (Ostrem et al., supra; Kubodera et al., Chem. Pharm. Bull. 34, 2286-89 (1986); Ikekawa et al., Chem. Pharm. Bull. 35, 4362 (1987)), mais ceux-cl se distinguent par leur structure et sont différents des composés de la présente invention. La présente invention fournit une nouvelle classe de composés présentant un tableau souhaité, et hautement avantageux, d'activité biologique. Ces composés sont caractérisés par une efficacité élevée (par rapport à celle de la 1,25-(OH)2D3) pour provoquer la différentiation de cellules malignes, tout en présentant une activité beaucoup plus basse que celle de la 1,25- (OH)2D3, en ce qui concerne leurs effets sur le métabolisme du calcium. Par conséquent, ces composés sont des agents de différentiation très spécifiques, et leurs tableaux d'activité permettraient leur utilisation dans des thérapies par -différentiation de maladies malignes. Leur très forte activité de différentiation, combinée à leur action nettement réduite ou supprimée sur le métabolisme du calcium, permet l'administration in vivo de ces composés pour le traitement de maladies malignes, sans provoquer l'apparition de taux excessivement élevés de calcium sanguin. En raison de ces caractéristiques, ils seraient les agents thérapeutiques préférés pour de tels buts. Du point de vue de la structure, la caractéristique déterminante des composés présentant ces fonctions biologiques souhaitables est que ce sont des homologues de chaîne latérale de la 1,25-(OH)2D3, dans lesquels la chaîne latérale est allongée par- insertion de deux ou trois groupes méthylènes dans la chaîne. Ainsi, les composés de ce type sont caractérisés par la structure générale suivante: XO o dans laquelle X, Y et Z, qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy-protecteur, et dans laquelle n est un nombre entier valant 3 ou 4. La 24-dihomo-l,25-(OH)2D3 et.ses dérivés hydroxy- protégés, c'est-à-dire les composés ayant la structure représentée ci-dessus dans laquelle n vaut 3, et la 24- trlhomo-1,25-(OH)2D3 et ses dérivés hydroxy-protégés, c'est-à-dire les composés tels que représentés ci-dessus et dans.lesquels n vaut 4, sont des exemples préférés des composés dont la structure est définie ci-dessus. Les composés de cette invention sont apparentés au composé 24-homo-vitamine D du brevet US-4.717.721. Cependant, les composés de cette invention peuvent être distingués par leurs caractéristiques structurales ainsi que par leurs caractéristiques biologiques. Du point de vue de leur structure, les composés sont des homologues nouveaux-de vitamine D, qui présentent comme caractéristique essentielle le fait que leur chaîne latérale est allongée par insertion de 2 ou 3 groupes méthylènes dans la chaîne carbonee, et du point de vue biologique, ces composés -sont des agents hautement sélectifs de différentiation cellulaire, qui présentent une efficacité au moins similaire ou supérieure à celle de la 1,25-(OH)2D3 pour inhiber la prolifération et provoquer la différentiation de cellules malignes, tout en présentant une activité calcémique nulle ou fortement réduite. La présente invention fournit- donc de nouveaux composés spécifiquement utiles pour promouvoir la différentiation de cellules malignes, et pour le traitement de maladies néoplasiques. Cette invention fournit également un nouveau procédé pour la préparation de dérivés de vitamine D..Ce procédé peut être utilisé pour la synthèse des nouveaux composés indiqués ci-dessus, ainsi que pour la synthèse de métabolites connus de vitamine D ou d'autres homologues, ou d'autres dérivés de la vitamine D3 à chaîne latérale modifiée. Le concept de base de cette synthèse est l'élaboration du dérivé souhaité de vitamine D par couplage de la chaîne latérale appropriée, synthétisée séparément, avec un noyau de vitamine D formé au préalable et portant un groupe déplaçable au niveau de l'atome de carbone 22. La chaîne latérale nécessaire est préparée sous la forme d'un dérivé phénylsulfone, et le noyau nécessaire de vitamine D, lorsque des composés du type lahydroxyvitamine D sont les objectifs de la synthèse, est un dérivé du sécostérol de structure suivante: "' L XO cOy dans laquelle X et Y représentent des atomes d'hydrogène ou des groupes hydroxy-protecteurs, et dans laquelle L est un groupe partant comme un halogénure, un groupe tosyloxy ou mésyloxy, ou une fonction déplaçable similaire. Un dérivé préféré de ce type est le composé hydroxyprotégé 22-tosyloxy-vitamine D. Les composés phénylsulfones nécessaires, utilisés pour l'élaboration de la chaîne latérale souhaitée, ont la structure suivante: PhSO2-CH2-R dans laquelle Ph représente un groupe phényle éventuellement alkyl-substitué, et dans laquelle R est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles, alkyles hydroxysubstitués, et alkyles fluorosubstitués et alkyles hydroxyf- luorosubstitués, les goupes hydroxyles étant de préférence protégés par des groupes hydroxy- protecteurs. Deux groupes R particulièrement préférés sont les groupes 4-méthyl-4-hydroxypentyle et 5-méthyle-5- hydroxyhexyle hydroxy-protégés. Le couplage entre le 22çtosylate de vitamine D, décrit cl-dessus, et la phénylsulfone appropriée repose sur les principes établis de la chimie des sulfones (voir par exemple P. D. Magnus, Tetrahedron 33, 2019 (1977); Trost et ai., Tetrahedron Letters, 347.7 (1986)). On effectue de façon convenable la réaction dans un solvant organique, qui est typiquement un hydrocarbure ou un éther, comme le benzène, un alcane en CS-C7, l'éther diéthylique ou le tétrahydrofuranne. La condensation implique l'utilisation d'une base forte, comme un alkyl- lithium ou un aryl-lithium, un alkylamide-lithium ou un halogénure d'alkyl-magnésium, de façon à engendrer la forme anionique du dérivé sulfone, qui réagit ensuite avec le dérivé de vitamine D pour donner la phénylsulfone de structure suivante: lOP I" h XO #' l O 1 0 dans laquelle R, X et Y représentent des groupements tels que définis ci-dessus. Les produits intermédiaires du type indiqué ci-dessus, qui sont des composés nouveaux, peuvent ensuite être réduits dans un milieu, par exemple un solvant alcoolique comme le méthanol ou l'éthanol, contenant un amalgame métalique (par exemple un amalgame de sodium, de zinc ou d'aluminium), en particulier à une température voisine de la température ambiante ou modérément élevée, pour donner le dérivé désiré de vitamine D, présentant la structure générale: x oy La désulfonation réductrice peut également être réalisee par d'autres moyens, comme des réductions par un métal dissous, par exemple à l'aide de mélanges métal/alkylamine ou métal/NH3. On peut ensuite éliminer les groupes hydroxy-protecteurs par des procédés établis,, connus dans la technique, de façon à produire les composes correspondants à groupes hydroxy libres. Le produit de départ (22-tosylate de vitamine D) décrit ci-dessus pour le procédé de couplage de chaîne latérale de cette invention est une substance connue, que l'on peut préparer par des procédés connus (-par exemple Andrews et al., J. Org. Chem. 51 4819 (1986)). On peut également le préparer par réduction par un hydrure, et tosylation subséquente, d'un 22-ester de vitamine D (voir également Kutner et al., Tet. Letters 28, 6129-6132 (1987)) ayant la structure suivante: oC ooA X00 dans laquelle X et Y sont des atomes d'hydrogène ou des groupes-hydroxy-protecteurs, et A représente un groupe alkyle ou aryle. La préparation et l'utilisation de ces nouveaux esters, en tant que partie de -la présente synthèse de dérivés de vitamine D, constituent un autre aspect de cette invention. Il est évident que le procédé décrit ci-dessus, dans lequel on utilise le 22-tosylate de vitamine D comme noyau vitaminlque et une phénylsulfone convenable en tant que résidu pour la chaîne latérale, peut être utilisé pour la préparation de nombreux analogues de chaîne latérale de lahydroxyvitamlne D, en fonction du radical R alkyle ou hydroxyalkyle choisi. Les phénylalkylsulfones préférés sont les composés dans lesquels R est un radical alkyle ou hydroxyalkyle, présentant l'une des structures générales suivantes: Y 9(pl2) H P. y2) -H p O--ou- _t$.H2). H (CH 2) Mn-H (CE2)mH dans lesquelles U est choisi dans le groupe constitué par les atomes d'hydrogène, les groupes hydroxy, et les radicaux hydrocarbonés de 1 à 4 atomes de carbone, et dans lesquelles 1, m et n sont des nombres entiers prenant indépendamment les valeurs 1 à 5, et dans lesquelles Z est un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy- protecteur. On préfère en particulier, pour la préparation des nouveaux composés présentant l'activité biologique désirée (c'est-à-dire activité élevée de différentiation et peu ou pas d'activité calcémique)j les sulfones indiquées ci-dessus dans lesquelles n vaut 3 ou 4. Tel qu'utilisé dans la description et dans les revendications, le terme "groupe hydroxy-protecteur" désigne n'importe quel groupe utilisé couramment pour la protection temporaire de fonctions hydroxyles, comme par exemple les groupes acyles, alkylsilyles et alcoxyalkyles, et un "groupe hydroxy protégé" est une fonction hydroxyle dans l'état dérivé obtenu grâce à un tel groupe protecteur. Le terme "acyle" désigne un groupe-alcanoyle de 1 à 6 atomes de carbone, dans toutes les formes isomères, ou un groupe carboxyalcanoyle de 1 à 6 atomes de carbone, comme un groupe oxalyle, malonyle, succlnyle ou glutaryle, ou un groupe acyle aromatique comme le groupe benzoyle ou un groupe benzoyle substitué par un atome d'halogène ou par un groupe nitro ou alkyle. Le mot "alkyle!', tel qu'utilisé dans -la description ou dans les revendications, désigne un radical alkyle à chaîne droite ou ramifiée de 1 à 10 atomes de carbone, dans toutes les formes isomères. Les groupes protecteurs alcoxyalkyles sont des groupes tels que méthoxyméthyle, éthoxyméthyle, méthoxyéthoxyméthyle, ou tétrahydrofuranyle et tétrahydropyranyle. Les -groupes protecteurs alkylsilyles préférés sont les groupes triméthylsilyle, triéthylsilyle, t- butyldiméthylsilyle et les radicaux silyles alkylés analogues. La présente invention est décrite de façon plus précise grâce aux exemples suivants, qui ne doivent être regardés que comme des illustrations du procédé de synthèse et des nouveaux composés que l'on peut obtenir par celui-ci. Dans ces exemples, les composés 'particuliers désignés par des chiffres arabes (par exemple les composés 1, 2, 3,... etc.) désignent des structures numérotées de la même manière dans les schémas de procédé. En outre, on donne des exemples qui illustrent les caractéristiques biologiques distinctives des nouveaux composés, ces caractéristiques servant de base pour l'application de ces composés en tant qu'agents de différentiation cellulaire et agents antinéoplasiques. Pr aration des composés Modes opératoires énéraux Les spectres infrarouges (IR) ont été obtenus avec un spectromètre FT-IR Nicolet MX-1, sur des films dei substances huileuses, sans solvant. Les spectres d'absorption dans l'ultraviolet (UV) ont été enregistrés avec un spectromètre UV-visible Hitachi, modèle 60-100. Les spectres de résonance magnétique nucléaire (RMN) ont été enregistrés à 270 ou 400 MHz, à l'aide de spectromètres FT Bruker WH-270 ou AM-400, dans les solvants indiqués. Les déplacements chimiques (8) sont indiqués en champ faible par rapport à une référence interne Me4Si (80,00) ou CHC13 (87,24). Les spectres de masse à faible résolution et à forte résolution sont enregistrés à 70 eV (à moins d'indication contraire) sur un appareil Kratos MS-50 TC, muni d'un système d'acquisition de données Kratos DS-55. Les données à haute résolution ont été obtenues par comparaison des pics. Les échantillons sont introduits dans la source d'ions, maintenu à 120-250 C, par l'intermédiaire d'une sonde à insertion directe. Pour la chromatographie sur colonne, on a utilise du gel de silice 60 (Merck, 70-230 ou 230-400 mesh). La chromatographie sur couche mince (CCM) est réalisé sur des feuilles d'aluminium prérevêtues de gel de silice, avec un indicateur UV fourni par EM Science (Gibbstown, NJ). Systèmes solvants utilisés: A: chloroforme/éthanol, - 85/15 (v/v); B: hexane/acétate d'éthyle, 1/1; et C: hexane/acétate d'éthyle, 3il/. On effectue les chromatographies en phase liquide- haute performance (HPLC) sur un chromatographe en phase liquide Waters Associates, équipé d'un système d'alimentation de solvant modèle 6000A, d'un injecteur modèle 6UK Universal, et d'un détecteur à longueur d'onde variable modèle 450. On a utilisé des colonnes Zorbax-Silica (Phenomenex) (6,2 mm x 25 cm et 10 mm x 25 cm). Systèmes solvants: A: 3% de 2-propanol dans l'hexane; B: 2% de 2-propanol dans l'hexane; C.: 6% de 2-propanol dans l'hexane; D: 10% de 2propanol dans l'hexane; E: 20% de 2-propanol dans l'hexane; F: 2% d'acétate d'éthyle dans l'hexane. On a utilisé des cartouches de gel de silice Sep-Pak (Waters Associates) pour la filtration préalable des échantillons pour HPLC. L'acide 3e-acétoxy-22,23-bisnor-5-cholénique a été fourni par Steraloids (Wilton, NH). Le tétrahydrofuranne (THF) était distillé en présence du composé formé par traitement de la benzophénone par le sodium. Les autres solvants ont été purifiés par des procédés habituels. Le n-butyllithium dans l'hexane (Aldrich) était titré avec du n-propanol, en présence de 1,10-phénantrollne, dans du THF ou sous argon. Les réactions impliquant des dérivés de vitamine D ont été effectuées sous atmosphère d'argon ou d'azote, avec agitation magnétique. _Les solutions et. les liquides étalent introduits à la seringue, & travers des capsules de caoutchouc. Exemple 1 _ypthèse de 22-ester de la-hydroxyvitamine (composé 1 etde ses dérivés hydroxy-protégésl (composés 8,11) (schéma de procédé I) (a) Préparatlon des esters de stéroide 1 et 2 On dissout 10 g d'acide 32-acétoxy-22,23-bisnor-5- cholenique dans 420 ml d'une solution de KOH à 5% dans le méthanol, et on agite la solution à la température ambiante pendant 15 minutes.pour hydrolyser l'acétate. A cette solution, on ajoute goutte à goutte, tout en agitant, 160 ml d'H2SO4 à 10% dans du méthanol, et on dilue la suspension résultante avec 400 ml de H2S04 à 1%. dans du méthanol. On chauffe le mélange au reflux pendant 48 heures pour compléter l'estérification (contrôlée par CCM, système solvant A). Le produit, l'ester méthylique (1) (9,0 g, 88%) est isolé par des modes opératoires habituels, et on dissout 4,4 g (12 mmoles) de cette substance dans 135 ml de diméthylformamide (DMF) anhydre et on ajoute 3,6 g d'imidazole (52,8 mmoles), puis 4,0 g de chlorure de tertbutyldiméthylsilyle (26,4 mmoles). On agite la solution à température ambiante pendant 5 minutes jusqu'à ce qu'il se forme un précipité volumineux, puis on poursuit l'agitation pendant 15 minutes supplémentaires. On extrait le mélange réactlonnel avec de l'hexane- (400ml), on lave à -l!eau, puis avec-une solution saturée de NaCl, et on sèche sur MgSO4. L'évaporation du solvant fournit l'ester silylé 2 (5,3 g), pur en CCM (système solvant B), sous forme d'une huile incolore qui est utilisée pour l'étape suivante sans autre purification. Un échantillon pour analyse est obtenu par chromatographie éclair avec 2% d'acétate d'éthvle dans de l'hexane: IR (film) 1737,99, 1604,89 cm-. (b) Préparationdu _5,7 diène (3) On chauffe au reflux, sous atmosphère d'azote et pendant 30 minutes, un mélange du composé 2 (1,0 g, 2,1 mmoles), de dibromantine (0, 42 g, 1,5 mmole) et de bicarbonate de sodium anhydre (0,91 g, 10 mmoles) dans 20 ml d'hexane, jusqu'e ce que l'on ne détecte plus de l'ester 2 de départ (CCM, système C). On sépare le précipité par filtration, et on évapore la solution sous pression réduite. On redissout le résidu dans 5 ml de THF anhydre, on ajoute 0,06 g de bromure de tétrabutyl- ammonium (0,19 mmole) et on agite le mélange à la température ambiante pendant 30 minutes sous azote. On ajoute ensuite une solution de fluorure de tétrabutylammonlum (10 ml, 1 M dans THF), puis 0,7 ml de s-collidine, et on agite le mélange sous azote a la température ambiante pendant 1 heure. On ajoute une autre fraction de 5 ml de solution de fluorure de tétrabutylammonlum, et on poursuit l'agitation pendant 3 heures. On ajoute de l'éther (50 ml) et on lave la phase organique a l'eau, avec du HC1 iN froid, avec une solution de NaHCO3 à 10%, et on la sèche sur MgSO4 anhydre. Le produit, dissous dans du benzène, est chromatographié sur du gel de silice 70-230 mesh (30 g). On élue l'ester 3 (0,44 g, 58%) avec de l'acétate d'éthyle dans de l'hexane. On obtient un échantillon pour analyse par HPLC, système solvant A, Rv 77 ml: UV (2- propanol à 3% dans l'hexane), X max = 262 nm (e 7000), kax = 272 nm (E 9800),>aax = 282 nm (E 10500), k.ax = 293 (E 6000); RMN1H (CDCl3 8, 0,54 (s, 3H, 18-CH3), 0,94 (s, 3H, 19-CH3), 1,22 (d, 2H, J=6 Hz, 21-CH3), 3,6 (m, 1H,3-H), 3,68 (s, 3H, CO2CH3), 5,42 (m, IH, 6-H), ,58 (m,lH,' 7-H); SM, m/z (intensité relative) M+ 358 (61),340 (12),325 (100), 299 (68, 271 (7), 253 (17), 237 (26),211 (27), 143 (72), 119 (35). (c) Préparation de l'ester de vitamine (4) A l'aide d'une lampe UV a moyenne pression Hanovla 608A36, on irradie pendant 40 minutes (4 fois 10 minutes) une solution du diène 3 (830 mg, 2,3 mmoles) dans 350 ml de benzène/éther éthylique, 1/4 (v/v), tout en agitant et sous azote, dans un puits d'immersion en quartz refroidi à l'eau et muni d'un dispositif de production de bulles d'azote et d'un filtre Vycor. La réaction est suivie par HPLC, à l'aide de 2-propanol à 2% dans l'hexane, à 265 nm. On évapore la solution sous pression réduite, on redissout le résidu dans 100 ml d'éthanol absolu et on chauffe au reflux sous atmosphère d'azote pendant 3 heures. Puis on concentre la solution, on redissout dans 1 ml d'acétate d'éthyle à 10% dans l'hexane, et on chromatographle sur-geI de silice 70-230 mesh (30 g). L'ester de vitamine 4 (298 mg, 36%) est élué Àà l'aide d'un mélange à 15% d'acétate d'éthyle dans l'hexane. On obtient un échantillon pour analyse par HPLC, système solvant B, Rv 94 ml: IR (film) 1738,95 cm-1; UV aMax 264 nm; RMN1H (CDCl3), 6, 0,56 (3H, s, 18- CH3), 1,20 (3H, d, J=7 Hz, 21-CH3), 3,66 (3H, s, CO2CH3), 3,95 (1H, m, 3- H), 4,80 (1H, d, J=1,2 Hz; 19Z-H), 5,05 (1H, d, J=1,2 Hz, 19E-H), 6,03 (1H, d, J=11 Hz, 7-H), 6,23 (1H, d, J=11 Hz, 6-H); SM, m/z (intensité relative), M+ 358 (45), 340 (9), 325 (45), 299 (22), 253 (19), 237 (18), 136 (6Q), 118 (100). (d) Préparation de l'ester de 3,5-cyclovitamine (6) On convertit l'ester 4 en le tosylate 5 par le procédé connu, en utilisant du chlorure de paratoluénesulfonyle dans de la pyridine à 4 C pendant 20 heures. Le tosylate 5 brut (102 mg, 0,2 mmole), dissous dans 2 ml de dichlorométhane anhydre, est ajouté sous agitation à une solution méthanolique (15 ml) contenant du bicarbonate de potassium anhydre (250 mg), à 55 C. On agite le mélange sous azote à 55'C pendant 24 heures. On ellmine ensuite les solvants sous pression réduite, et on extrait le résidu à l'éther. On lave la phase organique à l'eau, puis on la sèche sur MgSO4 anhydre. Le produit, l'ester de cyclovitamlne 6, est purifié par chromatographle sur gel de silice, avec de l'acétate d'éthyle à 20% dans l'hexane (50 mg, 68%) : RMN1H (CDCl3), 8 0,54 (3H, s, 18-CH3), 0,74 (m, 3H), 0,91 (m, 4-H), 1, 20 (3H, d, J=7 Hz, 21-CH3), 3,25 (3H, s, 6R-OCH3),.3,65 (3H, s, 22-CO2CH3), 4,15 (1H, d, J=9 Hz, 6-H), 4,88 (1H, 19E- H), 5,00 (1H, d, J=9 Hz, 7-H), 5,02 (1H, 19E-H); SM, m/z (intensité relative) 372 (M+, 17), 340 (100), 253 (48), 221 (40), 135 (72). (e) Prépration de l'ester de 5,6-cis-la-hydroxy- vitamine (8) et de l'isomère trans (9) On.ajoute de l'hydroperoxyde de tert-butyle (112 pl, solution 3,0 M dans du toluène, 0,34 mmole) à une suspension de dioxyde de sélénium (9 mg, 0,8 mmole) dans 2 ml de chlorure de méthylène anhydre. Le mélange est agité à la température ambiante sous azote jusqu'à ce qu'il se forme une solution limpide. On ajoute ensuite de la pyridlne anhydre (12 pl, 0,15 mmole), puis 50 mg d'ester 6, dissous dans 2 ml de dichiorométhane anhydre. On agite le mélange sous azote pendant 30 minutes. On ajoute 2 ml d'une solution froide à 10% de bicarbonate de sodium, et on extrait le mélange à l'éther. On lave la phase organique avec une solution aqueuse glacée de bicarbonate de sodium a 10%, puis on la sèche sur MgSO4 anhydre. La chromatographle sur gel de silice (acétate d'éthyle à 10-20% dans de l'hexane) fournit 12,5 mg de composé la-hydroxy (7). Ce produit est alors immédiatement dissous dans 0,5 ml d'acide acétique crlstallisable et on chauffe la solution à 55 C, tout en l'agitant, sous azote pendant 15 minutes. On verse ensuite le mélange réactlonnel sur de la glace, on extrait à l'éther et on lave avec une solution glacée saturée de bicarbonate de sodium. Les extraits éthérés réunis sont laves à l'eau et séchés sur MgSO4 anhydre. On isole l'ester 8 (6 mg, 20% de rendement global à partir de 5) selon le mode opératoire général décrit par DeLuca et al., brevet US-4.554.106. On obtient des échantillons analytiques des isomères (5Z, 7E) et (5E, 7E), respectivement 8 et 9, par HPLC préparative en des proportions de 2,5:1. Composé (8): HPLC, système solvant-C, Rv 68 ml; UV (EtOH) RmaX 264 nm, Xain 227 nm, A264 = 2,07; RMNIH A227 (CDC13) 6, 0,56 (3H, s, 18-CH3), 1, 20 (3H, d, J=6,5 Hz, -21-CH3), 2,04 (3H, s, 3B-acétyle), 3,66 (3H, s, 22-CO2CH3), 4,4 (1H, m, 1-Hi, 5,2 (1H, m, 3-H), 5,01 (19E- H), 5,34 (19Z-H), 6,01 (1H, d, J=10 Hz, 7-H), 6,33 (1H, d, J=10 Hz,6-H); SM, m/z (intensité relative),.416 (M+, 4), 356 (100), 338 (21), 251 (13), 134 (95). Composé (9): HPLC, système solvant C, Rv 78 ml; UV (EtOH), \max 267 nm, k. in 227 nm, A267 = 3,51; RMN1H A227 (CDCl3) 6, 0,56 (3H, s, 18-CH3), 1,20 (3H, d, J=6,5 Hz, 21-CH3), 2,04 (3H, s, 3is-OAc), 3,66 (3H, s, 22-CO2CH3), 4,5 (1H, m, 1-H), 5,3 (1H, m, 3-H), 4,99 (19E-H), 5,13 (19Z- H), 5,81 (1H, d, J=10 Hz, 7-H), 6,56 (1H, d, J=10Hz, 6-H). (f) Preparation de l'ester la-b ydroxy_10 et de l'ester disllyle (11) On ajoute une solutlon 0,1 N de KOH dans du méthanol (10 ml) à une solution agitée de l'ester acétate 8 (100 mg, 0,24 mmole) dans de l'éther éthylique (10 ml). On agite la solution résultante à la température ambiante pendant 90 minutes, jusqu'à ce que l'on ne détecte plus de prodult de départ par CCM (système solvant B). On isole le dihydroxyester (10) selon un mode opératoire usuel d'extractlon (acétate d'éthyle, solution saturée de NaCl, MgSO4 anhydre). Un mélange d'imidazole (250 mg, 3,6 mmoles) et de chlorure de tertbutyldimthylsilyle (250 mg, 1,6 mmole) dans du DMF (2 ml) est ajouté à une solution agltée d'ester (10) (86,2 mg, 0,23 mmole) dans 4 ml de DMF. Le mélange homogène obtenu est agité pendant 15 minutes à 'C, jusqu'à ce que l'on ne détecte plus de produit de départ par CCM (système solvant B). Le produit est isole avec de l'hexane, et l'extrait organique est lavé avec de la saumure, puis séché sur MgSO4 anhydre. Une solution dans l'hexane du produit bruL eat filtrée à travers une cartouche de gel de silice Sep-Pak, ce qui donne l'ester dlsllylé (11) (136 mg, 98%): UV (hexane), ?.ax 264 nm, imin 227 nm, A264 = 1,91; RMN1H (CDCl3), 6 0,07 (12H, s, A227 Si(CH3)z), 0,55 (3H, s, 18-CH3), 0,86 (18H, s, C(CH3)3), 1, 20 (3H, d, J=6,8 Hz, 21-CH3), 3,65 (3H, s, O-CH3), 4,18 (1H, m,--3-H), -4; 36 (1H, m, 1-H),-4-,83- (1H, d-, J=1,2-Hz, 19Z-H). 5,16 (1H, d, J=1,2 Hz, 19E-H), 5,96 (1H, d, J= 11,2 Hz, 7-H), 6,19 (1H, d, J=11,2 Hz, 6-H); SM, m/z (intensités rapportees à m/e 248), 602 (M+, 10), 470 (59), 413 (7), 338 (10), 248 (100). Exemple 2 Synthèse du C-22-alcool1 112) et du dérivé C-22- tosylé (13) (Schéma de procédé II) (a) PrÉparation_du C-22-alcool (12 2 De l'hydrure de lithium et d'aluminium (25 mg, 0,65 mmole) est ajouté à une solution agitée d'ester silylé (11) (136,2 mg, 0,23 mmole) dans du THF anhydre (5 ml), sous argon, à 0'C. On agite la suspension pendant 15 minutes à 0'C, et l'excès de LiAlH4 est décomposé par addition goutte à goutte de H20 à 10% dans THF. On dilue la suspension avec 10 ml de THF, et on poursuit l'agitation pendant 15 minutes supplémentaires à la temperature ambiante. Le produit est isolé par extraction usuelle à l'acétate d'éthyle et filtration sur gel de silice Sep-Pak, dans de l'acétate d'éthyle à 10% dans de l'hexane. On obtient l'alcool disilylé 12 sous forme d'une hulle incolore (118,4 mg) avec un rendement de 91%: UV (EtOH), > max 264, X min 227, A264 = 1,57; RMNIH A227 (CDCl3) 8 0,00 (12H, s, Sl-CH3) 0,53 (3H, s, 18-CH3), 0,85 (18H, s, Sl-C(CH3)3), 1,04 (3H, d, J=6,4 Hz, 21-CH3), 3,37 et 3,63 (1H et 1H, chacun m, 22-CH2), 4,17 (1H, m, 3- H), 4,35 (1H, m, i-H), 4,84 (1H, s large, 19Z-H), 5,16 (1H, s large, 19EH), 6,0 (1H, d, J=12,2 Hz, 7-H), 6,21 (1H, d, J=12,2 Hz, 6-H); SM, m/z (intensités rapportées à m/e 248), 574 (Mi, 17), 442 (67), 383 (11), 308 (17), 248 (100). (b) Preparationdu tosylate du 22-alcool 13) Une solution glacée de chlorure de p-toluene- sulfonyle (42,7 mg, 0,22 mmole) dans de la pyridine anhydre (50 pl) est ajoutée à une solution agitée de l'alcool 12, à 0'C, sous azote. Le mélange est agité à 5'C pendant 22 heures, jusqu'à ce qu'on ne détecte plus de produit de départ par CCM, avec le système solvant C. Le mélange réactionnel est versé sur une solution aqueuse saturée et glacée de NaHCO3, et on poursuit l'agitation pendant 30 minutes supplémentaires. On extrait le produit avec un mélange d'éther éthylique et d'hexane 1:1 (v/v). On lave la phase organique avec une solution saturée de NaCI,puis on la sèche sur MgSO4. Les solvants sont chassés sous pression- réduite, et la pyridlne est éliminée dans un courant d'azote. On purifie le produit brut par filtration sur gel de silice Sep-Pak (acétate d'éthyle à 5% dans de l'hexane), ce qui donne le tosylate 13 pur (54 mg, 98%): IR (film) 3500, 2950, 1580, 1367, 1267, 1189, 1178, 1099, 1085, 835 cm-'; UV (hexane) XAax 263 nm, X min 236 nm; RMNIH (CDC3la) 86 0,00 (12H, s, S1- CH3), 0,43 (-3H, s, 18-CH3), 0,81 (18H, s, Si-C(CH3)3), 0,93 (3H, d, J=6, 8 Hz, 21-CH3), 2,40 (3H, s, Ar-CH3), 3,64 et 3,91 (1H et-lH, chacun m, 22-CH2), 4,13 (1H, m, 3- H),4,31 (iH, m, 1-H), 4,79 (1H, s large, i9Z-H), 5,13 (1H, s large, 19-EH), 5,94 (1H, d, J=12,8 Hz, 7-H), 6,17 (1H, d, J=12,8 Hz, 6-H), 7,43 et 7, 84 (2H et 2H, chacun m, Ar-H); SM m/z (intensité rapportée à m/z 248), 728 (6), 596 (30),556 (7), 464 (7), 424 (44), 367 (19), 292 (23), 248 (100);masse exacte calculée pour C41H6805Si2S 728, 4338, trouvée 728,4326. Exemple 3 S yfthèSedeS hjnylsufonés pur chane latérale - (Schéma de procédé III) (a) Préparation de- la hénylsulfonepour chaîne latérale 18 Une solution dechlorure de 4-chlorovaléryle 14 (Aldrich; 3 g, 19,2 mmoles) dans du THF anhydre (25 ml) est ajoutée goutte a goutte, sous agitation vigoureuse, en 30 minutes, sous argon, à une solution de bromure de méthylmagnésium (12,9 ml d'une solution 3M dans de l'éther) dans 25 ml de THF anhydre a - 10'C. On laisse le mélange réactionnel se réchauffer jusqu'à la température ambiante en 2 heures, puis on arrête la réaction avec de l'eau, et on neutralise le mélange avec de l'acide chlorhydrique dilué. On extrait le mélange à l'éther, on lave à l'eau les phases organiques réunies et on les sèche sur sulfate de sodium. Après élimination du solvant, on distille le résidu sous vide pour obtenir le chloroalcool 15 sous forme d'un liquide incolore (2,1 g, 70%). Le produit 15 (1,5 g, 10 mmoles), en solution dans du diméthylformamide anhydre (5 ml), est ensuite ajouté à une solution agitée de thiophénol (1,32 g, 12 mmoles) et de t-butylate de potassium (1,32 g, 11,3 mmoles) dans du dlméthylformamide anhydre (25 ml). On agite le mélange réactionnel à la température ambiante pendant une nuit, et on partage la solution entre du dichlorométhane et de l'eau. On lave la phase organique avec une solution aqueuse de carbonate de sodium, avec de l'eau, puis on la sèche sur du sulfate de magnésium anhydre. On évapore le solvant sous vide, et on purifie l'huile brute par chromatographie éclair sur gel de silice avec un mélange d'hexane et d'acétate d'éthyle. On obtient le sulfure 16 (2,2 g, 98%) sous forme d'un liquide incolore. On dissout ensuite le sulfure 16 (1,01 g, 4,5 mmoies) dans du dlchlorométhane anhydre (40 ml), et on y ajoute par portions, sous agitation et avec refroidissement occasionnel, de l'acide 3-chloroperbenzoique (2,5 g, 11,6 mmoles); Aldrich 80-85%). On agite le mélange réactionnel pendant 2 heures, puis on arrête la réaction avec du bicarbonate de sodium à 10%. Les extraits organiques réunis sont lavés avec une solution aqueuse de sulfite de sodium, puis avec de la saumure, et séchés sur du sulfate de magnésium. On chasse le solvant sous vide, puis on purifie l'huile brute par chromatographie eclalr sur gel de silice, en utilisant des mélanges d'hexane et d'acétate d'éthyle, pour obtenir la sulfone 17 (1,1 g, 97%) sous forme d'un liquide incolore. A une solution agitée de sulfone 17 (1,3 g, 5,1 mmoies) et d'im!dazole (1,5 g, 22;7 mmoles) dans du diméthylformamide anhydre (50 ml), on ajoute du chlorure de triéthylsilyle (1,15 g, 7,7 mmoles). On maintient le mélange réactlonnel à la température ambiante pendant 2 heures, puis on le dilue avec du dichlorométhane. On lave le mélange avec une solution aqueuse de chlorure d'ammonium, puis avec de l'eau. Les phases organiques sont séchées sur du sulfate de sodium, et le solvant est éliminé sous vide. On purifie le résidu par chromatographie éclair sur gel de silice. L'hexaéthyldisiloxane est élué en premier avec de l'hexane. On élue la sulfone protégée par un groupe triéthylsilyle 18 (1,8 g, 97%) avec un mélange hexane/ acétate d'éthyle 9:1, sous forme d'un liquide incolore. IR (pur): 3045, 2940, 1440, 1360, 1130, 1020 cm-1; RMN1H (400 MHz, CDCl3) 6 0,518 (6H, q. J=6,2 Hz, Si-CH2), 0,899 (9H, t, J=6,2 Hz, Si-C-CH3), 1, 142 (6H, s, CH3), 1,307-1,462 (4H, m), 1,655-1,738 (2H, m, H-4), 3,080- 3,122 (2H, m, H-2), 7,567 (2H, t, J=6,8 Hz, H-aryle meta), 7,648 (!H, t, J=6,8 Hz, H-aryle para), 7,916 (2H, d,J=6, -83 Hz, H-aryle ortho); SM (EI, 7 eV): m/z (intensité relative) 372 (M+, 2), 341 (100), 229 (2), 227 (18) , 173 (24), 103 (22), 75 (45), 55 (33). Comme indiqué par les exemples illustratifs du schéma de procédé. III, d'autres phénylsulfones peuvent être preparees selon le procédé général décrit ci-dessus ou selon des procédés analogues décrits dans la litterature. Par exemple: (b) Preparatlon de la phénylsulfone (19) Par traitement du composé dichloro 14, selon le mode operatorre décrit dans l'exemple 3 (a) cl-dessus, mals en remplaçant le bromure d'éthylmagnéslum par du bromure de méthylmagnésium dans la première étape de réaction, on obtient l'homologue phénylsulfone de structure 19 (Z = Et3Si). (c) Prparatlon de laphénylsulfone _ 3I Une solution de chlorure de 6bromohexanoyle (20, 3,8 g, 2,8 ml, 18 mmoles) dans 10 ml de tétrahydrofuranne anhydre est ajoutée goutte à goutte, sous agitation vigoureuse, en 15-20 minutes et sous atmosphère d'argon,' à une solution de bromure de méthylmagnésium (14 ml de solution 3M dans l'éther) dans 15 ml de tétrahydrofuranne anhydre à -10 C. On agite le mélange à la température ambiante pendant 2 heures, on le refroidit à 0 C et on effectue soigneusement -la décomposition avec de l'acide chlorhydrique dilué. Le mélange est extrait à l'éther,les phases organiques réunies sont lavées à l'eau, séchées sur du sulfate -de magnésium anhydre, et soumises à une évaporation qui donne le bromo-alcool 21 sous forme d'une hulle incolore (3,6 g, 94%). Le bromo-alcool (3,4 g, 16 mmoles) est traité avec du benzene-sulflnate de sodium (3,3 g-, 20 mmoles) dans du dlméthylformamlde anhydre à 70 C pendant 4 heures et demie. Orn verse le mélange sur de la glace, on extrait au dlchloromethane-, on lave avec HCl 1-N-, puis avec de l'eau, et avec une solution à 10% de NaHCO3, on sèche sur MgSO4 anhydre, on- filtre et on évapore, ce qui donne la sulfone 22 qui est purifiée par chromatographie éclair sur gel de silice et éluee avec de l'acétate d'éthyle à 40-50% dans l'hexane, ce qui donne la sulfone contenant un peu de l'ester sulfinate correspondant (4,18 g, 98%); SM, m/z (270 (M+), 255 (M±15), 77, 59. A une solution agitée de la sulfone 22 (4 g, 14 mmoles) et d'imidazole (3, 8 g, 55 mmoles) dans 13 ml de diméthylformamide anhydre, on ajoute du chlorure de trièthylsilyle (4,6 g, 5,1 ml, 30 mmoles). On agite le mélange réactionnel à la température ambiante pendant 2 heures, on le verse sur de l'eau glacée, on extrait à l'éther, 'on sèche sur MgSO4 anhydre, on filtre et on évapore. Le résidu est purifié par chromatographie éclair. On- élue en premier avec de l'hexane l'hexaéthyldisiloxane; avec 3% d'acétate d'éthyle dans de l'hexàne, on élue l'ester sulfinate protégé, ainsi qu'un peu de la sulfone, et avec 10% d'acétate d'éthyle dans l'hexane,-on élue la sulfone protégée pure 23 (3,4 g, 60%). Analyse: calculée pour C2o0H3603SSi: C, 62,45% H,9,43%, S 38,34%; trouvé C, 61,97%, H, 9,45%, S, 8,33%. SM, m/z (intensité relative) 355 (100) M±29), 227 (15), 173 (35), 103 (43), 75 (95), (23); RMN (400. MHz, CDC13), 0,54 (6H, q, J=7 Hz, Si-CH2), 0,94 (9H, t, J=8 Hz), Si-C-CH3), 1,15 (6H, s, CH3), 1,31-1,36 (4H, m), 3,08-3,12 (2H, m, H-2), 7j57 (2H, t, J=6,8 Hz, H-aryle méta), 7,66 (1H, t), H-aryle para) , 7,92 (2H, d, J=6,8 Hz, H-aryle ortho). (d) Preéaration de la phénylsulfone (26) Le traitement de l'aclde 3-phénylsulfonyl- proplonlque (24), disponible dans le commerce, avec du méthanol, dans des conditions acides habituelles d'estérlfication, fournit l'ester méthylique correspondant, qul est ensuite soumls à une rëaction de Grignard, avec du bromure de méthylmagnésium, ce qui donne le dérlvé phenylsulfone 25. La réaction de 25 avec du chlorure de triéthylsilyle, dans les conditions indiquées dans l'exemple 3 (a) ci-dessus, donne alors la sulfone à groupe hydroxy-protégé 26. (e) Préparation de la sulfone_ (28 En appliquant le mode opératoire donné dans I'exemple 3 (d) à l'aclde 24, mia en remplaçant le bromure de méthylmagnésium par du bromure d'éthyi- magnesium dans l'étape de la reaction de Grignard, on obtient l'homologue sulfone protége 28. Comme l'illustrent les exemples ci-dessus, les phénylsulfones sont de préférence préparées et utilisées ensuite sous forme de dérivés a groupes hydroxy protéges. Outre les groupes protecteurs trlethylsilyle, d'autres groupes hydroxy-protecteurs préférés sont les groupes t- butyldimethylsilyle, tetrahydrofuranyle et tétrahydro- pyranyle. Exemple_4 Reactionde couplage de chaîne latérale (Schéma de procéde IV) (a) PrEparatéon des vitamine-sulfones 29 et 30 Une solution de 1,10phénantrollne (utilisée comme indicateur) dans du THF anhydre est ajoutée, sous argon, à une solution 1,35 M de n-BuLi dans l'hexane (48 pl, 64 pmoles), jusqu'a ce que l'on obtienne une couleur rouge sombre du mélange. La solution est placée dans un bain d'acétone et de carboglace, et on ajoute de la diisopropylamine (9 pl, 64 pmoles). On agite la solution résultante sous argon pendant 30 minutes à -77C. On ajoute ensuite la solution de sulfone 18 (29 mg, 80 pmoles) dans 100 pl de THF, puis une autre fraction de pl de THF utilisée pour le rinçage. On agite le mélange brun résultant à -75'C sous argon pendant 30 minutes, et on remplace le bain de réfrigération par un bain de CCI4 et de carboglace. Après 15 minutes d'agitation à -21C, on aj-oute la solution de tosylate 13 (11,6 mg, 16 pmoles), et la couleur du mélange réactionnel vire du noir au rouge. La solution est agitée entre -20 et -10'C pendant 3,5 h, et on ajoute à -10'C 1 ml d'une solution saturée de NH4Cl. On extrait le mélange à l'hexane et on lave la phase organique avec une solution saturée de NaCl. L'extrait organique est filtré sur une cartouche de gel de silice Sep-Pak, puis on fait passer 20 ml d'acétate d'éthyle à 10% dans l'hexane. Une HPLC préparatlve (colonne 6,2 mm x 25 cm) avec le système solvant F donne, pour un Rv de 37 ml, le tosylate 13 n'ayant pas réagi (3,0 mg). La sulfone 29 (2,1 mg, 19%) est ensuite eluee pour un Rv de 55 ml: IR (film) 3500, 2956, 1440, 1301, 1258, 1147, 1086, 1072, 1064 cm-'; UV (hexane) m ax 264 nm, A.in 230 nm, A264 = 1,96; RMNlI A230 (CDC13) 6 0,41 (3H, s, 18- CH3), 0,51 (6H, q, J=5,7 Hz, Si-CH2-), 0,86 et 0,88 (9H et 9H, chacun s, Si-C(CH3)3), 0,90 (9H, t, J=8 Hz, SiCH2-CH3), 1,13 (3H, d, J=5,8 Hz, 21- CH3), 1,23 (6H, s, 26,27-CH3), 4,17 (1H, m, 3H), 4,37 (1H,m, 1-H), 4,85 (1H, s large, 19Z-H), 5,17 (1H, s large, 19E-H), 5,99 (1H,d, J=11,0 Hz, 7- H), 6,21 (1H, d, J=10,8 Hz, 6-H), 7,54 (2H, t, J=7,3 Hz, Ar-H, méta), 7, 61 (1H, t, J=7,3 Hz, Ar-H, para), 7,33 (2H, d, J=7,3 Hz, Ar-H, ortho); SM, m/z (intensité relative), 926 (M+, 16), 794 (100), 737 (9), 530 (9), 521 (6), 389 (13), 301 (8). La sulfone 30 (3,8 mg, 35%) (épimère de 29 au niveau du carbone 23) est éluée pour une valeur de Rv de 87 ml: IR (film) 3500, 2955, 1440, 1304, 1257, 1148, 1086, 1072, 1064 cm-1; UV (hexane) ma x 264 nm, X min 229 nm, A264 = 2,06; RMN'H (CDCl3) S 0,49 (3H, s, 18-CH3), A229 0,51 (6H, q, J=5, 7 Hz, Si-CH2.-), 0,85 (18H, s, Si- C(CH3)3), 0,90 (9H, t, J=7,9 Hz, SiCH2-CH3), 1,13 (3H, d, J=6,2 Hz,21-CH3), 1,23 (6H, s, 26,27-CH3), 4,16 (1H, m, 3- H), 4,35 (1H, m, 1-H), 4,83 (1H, s large, 19Z-H), 5,16 (1H, s large, 19EH), 5,98 (1H, d, J=11,3 Hz, 7-H), 6,20 (1H, d, J=11,3 Hz, 6-H), 7,54 (2H, t, J=7 Hz, Ar-H, méta), 7,61 (1H, t,J=7 Hz, Ar-H, para), 7,86 (2H, d, J=7 Hz, Ar-H, ortho); SM m/z (intensité relative), 926 (19), 794 (100),737 (11i, 530 (28), 521 (14), 389 (33), 301 (14). (b) 24-dihomo-1,!25-dihydroxvvitamine D3_/32) On ajoute une solution saturée de Na2HP04 dans le methanol (0,5 mi) à une solution agitée de sulfone 29 (1,80 mg) dans 0,5 ml de THF anhydre, puis on ajoute 80 mg de Na2HPO4 anhydre en poudre. On agite le mélange sous argon pendant 30 minutes et on le refroidit à 0 C. On ajoute alors environ 200 mg d'un amalgame de sodium à 5% fraîchement préparé, et on agite le mélange pendant 3 heures à 5'C, jusqu'à ce que l'on ne détecte plus de produit de départ par CCM (système solvant C). Le mélange est dilué avec de l'hexane (3 ml) et on poursuit l'agitation pendant 15 minutes. On laisse décanter la solution, et les matières solides sont lavées avec de l'hexane (3 fols 2 ml). On ajoute de la glace et 2 ml de solution. saturée de NaCl, aux solutions organiques réunies. La phase organique est lavée avec une solution saturée de NaCl, puis filtrée sur une cartouche de silice SepPak, ce qui donne le dérivé à groupe hydroxy protégé 31 de la 24-dihomola,25-dihydroxyvitamine D3 (1,19 mg, 1,5 pmoles, 78%) sous forme d'une hulle incolore. On obtient également le composé 31 de la même manière, par réduction par un amalgame de sodium de la sulfone 30. Donc les sulfones 29 et 30, telles qu'on les obtient dans l'exemple 4 (a) ci-dessus, n'ont pas besoin d'être séparées avant la réduction par l'amalgame de sodium. Un mélange des deux composés peut être efficacement réduit pour donner le dérivé désire 31 de vitamine.D. On dissout 1,1 mg de composé 31 dans 0,5 ml de THF anhydre, et on ajoute à cette solution du fluorure de tétrabutylammonium dans THF (20 pl, solution 1 M). On agite le mélange sous argon pendant 50 minutes à 50 C. On ajoute ensuite 3 ml d'éther, et on lave la phase organique avec une solution saturée de NaCl. On élimine les solvants, et on dissout le résidu dans du 2-propanol à 10% dans l'hexane, et on filtre sur de la silice Sep- Pak. Une HPLC préparative (système solvant D, colonne 6,2 mm x 25 cm, Rv 62 ml) donne l'homologue désiré 32 de vitamine D (465 pg, 76%); IR (film) 3360, 2927, 1602, 1447, 1376, 1297, 1146, 1106, 1086, 1064 cm-1; UV (10% de 2-propanol dans l'hexane) > max 264 nm,>,in 228 nm, A264 = 1,91; RMNIH (CDCl3) 6 0,52 (3H, s, 18-CH3), 0,90 A228a (3H, d, J=6,4 Hz, 21-CH3), 1, 19 (6H, s, 26,27-CH3), 4,22 (1H, m, 3-H), 4,42 (1H, m, 1-H), 4,99 (1H, s large, 19Z- H), 5,31 (1H, s large, 19E-H), 6,00 (1H, d, J=11,1 Hz, 7-H), 6,36 (1H, d, J=11,2 Hz, 6-H); SM m/z (intensite relative) 444 (M+, 1,4), 426 (41), 393 (10), 251 (26), 209 (17), 197 (20), 157 (29), 155 (37), 134 (58), 105 (54), 59 (100) masse exacte calculee pour C29H4803 444,3603, trouvee 444,3609. (c) Couplage de chaine latérale utilisant la phényl- sulfone (231 On-fait réagir le tosylate -13 de vitamlne avec- la phenyisulfone 23, dans les conditions décrites dans l'exemple 4 (a) cldessus, pour obtenir le prodult d'addition v-tamine-sulfone correspondant. Après réduction de ce produit d'addition par Na/Hg, dans les conditions générales de l'exemple 4 (b) ci-dessus, et élimination subséquente des groupes hydroxy-protecteurs comme décrit dans l'exemple 4 (b), on obtient le produit désire, la 24-trihomo-1,25-dihydroxyvitamine D3, caractérisée par la structure ci-dessous: *"s Cé2) eQO CP""O Activité biologique de la 24-dihomo-1,25-dlhydroxy- vitamine D3 (Composé 32) Exemple 5 Mesure de la différentiation chez les cellules HL-60 (Tableau 1) La mesure de la différentiation dans les cellules HL-60 (cellules de leucémie humaine) est effectuée selon les modes operatolres généraux décrits par DeLuca et al, brevet US-4.717.721. En plus des procédés qui y sont décrits, on a mesuré l'activité d'acide-estérase non spécifique, comme décrit dans la trousse mise sur le marche par la Sigma Chemical Corporation, St. Louis, Missouri. Comme le montre le tableau 1, le degré de différentiation est mesuré par trois tests différents (réduction de NBT, phagocytose et activité d'estérase) et les résultats sont exprimés en pourcentages de cellules différenciées produites en réponse à un traitement avec diverses concentrations de dérivés de vitamine D. Tableau 1 Actlvlté de différentiation de la 24-dlhomo-1,25-(OH)2D3 dans des cellules HL-60 en culture % de cellules présentant une différentiation Composé Concentration Réduction de Phagocytose Esterase _molaire).__ NET __ I,25-(OH)2D3 1 X 10-9 32 + 3a 28 + 3a 28 + 2a 1 x 10-8 51 3 56 3 60 + 4 1 X 10-7 82 + 4 84 4 86 2 24-dihomo- 1,25-(OH)2D3 1 x 10-9 28 + 3 36 3 35 + 4 5 x 10-9 64 + 4 62 4 62 3 (composé 32) 1 x 10-8 70 2 68 2 68 4 x 10-8 93 5 94 2 94 2 a Erreur standard (écart quadratique moyen) sur la moyenne de 3-4 déterminations. Les résultats de ces trois tests sont indiqués dans le tableau 1.. Il est évident que le nouvel homologue 24- dihomo-1,25-(OH)2D3 (composé 32) est beaucoup plus actif que la 1,25-(OH) 2L3 elle-même pour ce qui est de provoquer la différentiation des cellules HL-60 en culture (tableau 1). Ainsi, la 1,25-(OH)2D3 provoque la différentiation d'environ 50 à 60% des cellules à une concentration de 1. 10-8 M, alors que le nouvel analogue 24-dlhomo (composé 32). donne plus de 60% de différentiation a une concentration deux fols plus faible (5.10- 9 M). De façon similaire, une concentration de 1.10-7 M est requise pour que la 1,25-(OH)2D3 produise environ 80% de cellules différenceiées, mals l'analogue dlhomo produit plus de 90%.de différentiation à 5.10-8 M, c'est-à-dire une cencentration deux fois plus faible. Ces résultats appuient fortement la conclusion selon laquelle la 24-dlhomo-l,25-(OH)2D3 est de 5 à 10 fois plus active que la 1,25-(OHI)2D3 pour ce qui est de provoquer la dlfférentlatlon de cellules HL-60 en culture. Exmle 6 Test d'activité_calcémique chez le rat (a) Activité de transport du calcium intestinal et minéralisation_-des, os_,de_ _rats rachîtiques (Tableau 2) On a obtenu chez la Harlan-Sprague Dawley Company de Madison, Wisconsin, des rats mâles, juste sevrés, et on les a nourris avec le régime rachitogène à haute teneur en calcium et basse teneur en phosphore, décrit par Suda et al. (J. Nutr. 100, 1049-1052, 1970). On les a nourris avec ce régime à volonté, pendant un total de 4 semaines. A la fin de la troisième semaine, on a divisé les animaux en groupes de 6 rats chacun. Un groupe a reçu une injection quotidienne, par vole lntraperitonéale, d'un véhicule (0,1 ml d'un mélange de 95% de propylene- glycol et de 5% d'éthanol). Les autres groupes ont reçu la même quantité de véhicule, mais celui-ci contenait l'une des doses suivantes:12,5 ng de 1,25-(OH)2D3; 25 ng de 1,25-(OH)zD3; 12,5 ng de 24-dihomo-1,25-(OH)2D3; ou 25 ng de 24-dihomo-1,25-(OH)2D3. Les animaux sont sacrifiés 24 heures après la dernlere dose, on prélève les intestins et on utilise les segments duodénaux pour mesurer le transport de calcium intestinal, selon la méthode décrite par Halloran et DeLuca (Arch. Biochem. Biophys. 208, 477-486, 1981). L'activité de transport du calcium est présentée dans le tableau 2 sous la forme d'un rapport de transport de calcium, indiqué par la notation I/O (concentration du calcium en milieux séreux (I) par rapport à concentration du calcium en milieux muqueux (O)). Pour estimer la minéralisation des os en - réponse aux composés d'essais, on prélève les fémurs de tous les animaux, on les soumet à une extraction pendant 24 heures avec de l'éthanol à 95% dans un extracteur Soxhlet et pendant 24 heures avec du chloroforme à l'aide d'un extracteur Soxhlet. On les sèche jusqu'à un poids constant, et on détermine le poids total de cendres, ainsi que leur pourcentage, dans les fémurs à la suite d'une calcination à 316'C pendant 24 heures. Le rapport de transport de calcium est indiqué en notation I/O (concentration du calcium en milieux séreux (I) par rapport à. la concentration du calcium en milieux muqueux (O)). La teneur en cendres est mesurée en poids total (mg) de cendres par fémur ou en pourcentage de cendres par rapport au poids de l'os dégraisse et sec. Tableau 2 Réponse de rats rachitiques à la 24-dihomo-i,25-dihydroxy- vitamine D3 Rapport de transport Cendres de Cendres de Groupe de calcium I/O fémur mg fémur % (moy ene ESMJ.. moyenne ESM)(moyenne +ESM) Témoin 4,0 0,2.a 17, 7 1,0a. 14,0 0,20a (vehlcuie> 1,25-(OH)2D3 12,5 ng/!our 10,4 0,8 26,3 1,6 18,9 0,52 25 ng/jour 13,2 1,0 26,4 1,7 19, 9 1,3 24-dihomo- 1,25-(OH)2D3 (composé 32) 12,5 ng/jour 3,0 0,3 21,0 1,0 14,75 1,4 25 ng/jour 3,0 0,4 18,7 1,5 14,8 0,69 a Erreur standard sur la moyenne de six déterminations. (b) Mesure du transport du calcium intestinal et - mobilisation du calcium des os (Tableaux 3 et 4) Des rats mâles juste sevres ont été fournis par la Harlan-Sprague Dawley Company et nourris avec le régime à faible teneur en calcium et déficient en vitamine D, décrit par Suda et al. (J. Nutr, 10Q, 1049-1052, 1970), pendant une période de 4 semaines. A la fin de la trolsième semaine, les animaux reçoivent les doses indiquées (tableaux 3 et 4), dissoutes dans un mélange de 95% de propylène-glycol et 5% d'éthanol. Chaque animal reçoit 0,1 ml de solvant-véhlcule contenant la. dose lndiquee, chaque jour pendant 7 jours; le groupe témoin reçoit le solvant seul. On mesure le transport de calcium intestinal comme le décrivent Halloran et DeLuca (Arch. Bloche_.m. Blophys. 208, 477-486, 1981), et on mesure le calcium seriqueàa l'aide d'un.spectrQphotomètre d'absorption atomique (brevet US-4.717.72i)j. Tableau 3 Réponse de rats, en régime à faible teneur en calcium, à la 24-dlhomo-1, 25-dihydroxyvitamine D3 Groupe Transport de calcium Calcium sérique I/O mg % _ _....._ _.__.(moyenne ESM). .._ (moyenne_ ESMI__ Témoin 4,8 0, 26a 4,1 0,05a 1,25-(OH)2D3 12,5 ng/jour 11,2 0,6 4,8 0,08 ng/jour 13,2 1,2 4,8 0,0$ 24dihomo-1,25-(OH)2 D3 (composé 32) nq/iQ.our. 3. 4. 8 __ __ 2 _ _ Q4.2 Q, .6 a Erreur standard sur la moyenne de 6 déterminations. Tableau 4 Réponse en calcium sérique de rats deficients en vitamine D, en régime à faible teneur en calcium, à la 24-dlhomo- 1,25-dihydroxyvitamine D3 __ __ ________________________ Groupe Calcium sérlque mg % ........... (rmoyenne ESM) Temoln 3,4 0, 07a 1,25-(OH)2D3 12,5 ng/jour/7 jours 3,7 0,17 ng/jour 4,1 0,07 ng/jour 4,6 0,09 24dlhomo-1,25-(OH)2D3 (compose 32)- 25 ng/jour 3,6 0,16 ng/jour 3,95 0,13 250 ng/jour 3,80 0,05 a Erreur standard sur la moyenne de 6 déterminations. Les résultats présentés dans les tableaux 2 et 3 illustrent le fait que la 24-dihomo-1,25-(OH)2D3 (composé - 32) est beaucoup moins active que la 1,25-(OH)2D3 pour la stimulation du transport de calcium intestinal. La 1,25- * (OH)2D3 réalise un transport maximal de calcium pour les doses situées entre 12,5 et 25 ng/jour, alors que la 24- dihomo-1,25-(OH)2D3 ne présente plus d'activité à l'une ou l'autre de ces doses (tableau 2), et ne donne une réponse significative qu'a la dose de 125 ng/3our (tableau 3). Même alors, la réponse est plus faible que celle donnée par la 1,25-(OH)2D3 à la dose de 12,5 ng/jour. Ces résultats montrent que l'analogue dlhomo ne présente qu'un dixième, ou moins, de l'activité de la 1,25-(OH)2D3 pour la stimulation du transport de calcium intestinal (tableaux 2 et 3). En ce qui concerne la minéralisation des os (tableau 2), on observe un manque similaire d'efficacité de la 24-dihomo-l,25-(OH)2D3 sur la minéralisation du squelette. Les entrées du tableau 2 "Cendres de fémur" montrent que les doses de 12,5 ng et de 25 ng du composé dihomo (32) neproduisent pas de changement significatif par rapport au témoin, alors que la 1,25-(OH)2D3 provoque une minéralisation significative à ces mêmes doses. Quand on mesure la mobilisation du calcium des os (teneur du sérum en calcium), il est clair que la 1,25- (OH)2D3 provoque une hausse significative du calcium sérique, aux dépens des os, aux doses de 12,5 et 25 ng/jour (tableaux 3 et 4). Au contraire, la 24-dihomo- 1,25-(OH)2D3 ne provoque pas de réponse significative à une dose de 25 ng/jour, et aucune réponse à 125 ng/jour dans un essai (tableau 3), mais dans un second essai (tableau 4), elle provoque une très modeste augmentation du calcium sérique Iorsqu'elie est administrée à des doses de 125 et 250 ng/jour. On peut noter également l'observation (tableau 4) selon laquelle l'augmentation des doses de 125 à 250 ng/jour ne provoque pas une augmentation supplémentaire des taux de calcium sanguin. Ces résultats indiquent que l'activité de la 24,24-dihomo- 1,25-(OH)2D3 représente moins du dixième de celle de la 1,25-(OH)2D3, pour ce qui est de l'augmentation du calcium sérique aux dépens des os. Ces résultats sont également confirmés par une troisième expérience, dans laquelle on mesure la mobilisation du.calcium des os, et dans laquelle l'analogue dihomo 32 ne fournit aucune réponse, lorsqu'il est testé sur un intervalle de doses allant Jusqu'à 1000 ng/jour. Il est ainsi évident que le nouvel homologue de vitamine D (composé 32) présente une activité préférentielle inattendue dans la différentiation cellulaire, tout en ayant peu d'effet sur le transport et la mobilisation du calcium. Il s'agit bien du type de schéma d'activité souhaité pour un dérivé de vitamine D destiné à être utilisé comme agent anticancéreux. En vertu de sa faible action calcémique (comparée à celle de la 1,25-(OH)2D3) , le nouvel analogue dihomo-1,25-(OH)2D3 peut être administré sans provoquer chez les patients une réponse.hypercalcémique indésirable, tout en présentant une efficacité même supérieure à celle de la 1,25-(OH)2D3 pour l'arrêt de la prolifération des cellules malignes et l'induction de la différentiation cellulaire. Le même type de schéma d'activité, à savoir une activité prononcée de différentiation combinée avec une efficacité calcemique très faible ou abolie, peut être attendu pour l'analogue 24-trihomo de cette invention, composé qui, par conséquent, présentera un rapport différentiation/ activité calcémique très augmenté et avantageux. Bien qu'apparentés du point de vue de la structure aux analogues 24-homovitamine D de l'art antérieur (brevet US- 4.717.721), les dérivés de vitamine D à chaîne latérale homologue de cette invention présentent un profil d'activlte radicalement modifié: une activité élevée de différentiation cellulaire, jqinte a une activité calcemque presque abolie. En outre, puisque i'actlvlté de différentiation s'exprime également dans le cas de cellules de leucémie humaine (cellules HL-60), il est clair que ces nouveaux homologues de vitamine peuvent être utilisés pour le traitement de maladies malignes chez les humains, et en particulier des leucémies. En vue des traitements, ces composés peuvent être formulés sous forme de solutions dans des solvants inoffensifs, ou bien sous forme d'émulsions, de suspensions ou de dispersions dans des solvants ou véhicules inoffensifs et acceptables, ou bien sous forme de pilules,de comprimés ou de capsules, selon les procédés classiques connus dans la technique. Ces formulations peuvent également contenir d'autres excipients pharmaceutiquement acceptables et non toxiques, tels que stabillsants, antioxydants, liants, colorants, émulslflants ou agents de modification du goût. Les composes sont avantageusement administrés par injection, ou par perfusion intraveineuse de solutions stériles convenables, ou bien sous forme de présentation orale par le canal alimentaire. Pour le traitement de la leucémie humaine, les dérivés homologues de vitamine D de cette invention sont administrés aux sujets à des doses suffisantes pour provoquer la différentiation des cellules leucemlques en macrophages. Les doses préférées vont de 0,5 pg à 50 pg par jour, étant entendu que ces doses peuvent être portées à des quantités encore plus élevées en fonction dela sévérité de la maladie ou de la réponse ou de l'état du sujet, comme cela est bien compris dans la technique. iSri*nú-}=^-X It H=k 'H=X ot 611-H=1 'o3VX 8 L 6 9 >5OH O,ox HO j úHDocy ' H3oOúH O H=X; ú 'H=X I >x OX ON Ig OH :0000I 1t'IOO N'H00/ ""OO I Oazoc au[ H:ltl: SCHEMA DE PROCEDE II je COOCH3 CH D" " OY XOY XO" OY aY=t-BUMeA 12 X=Y=t-BuMe2Si 13 XY=t-BuMe2Si >(=Y=t-BuMe2Si SCHEMA DE PROCEDE III 14rr. 15 L=CI, Z=H 16 L-PhS, Z-H 17 L-Ph$02, Z=H L=PhSO2, Z-SIEt3. O C I 'LCi PhSO OZ 14 198 )gs CI _ - L oZ 21 L'-Br, Z-H -2D 22 L=PhSO2, Z=H 23..PhSo02, Z-SiEt3 PnSO2 Oz - PhSO2,OZ 24 25 Z-H 26 Z=SiEt3 phSOPhSO2 OH Oz 27 Z-H 28 Z= SiEt o loxol+ i a CuJ EI Hô H I I Ln i (a1 - a o yZ -- D)o.d +a I. Q! - +0 ai Idt, S13!S0 Z O:S d + 4J, ,, slOZ:H3 AI usa3oui sa YNSHOS REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation d'un-dérivé de vitamine D présentant la formule générale: s, " R o l7 dans laquelle chacun de X et Y, qui peuvent être icenticues ou différents, représente un hydrogène ou un groupe yd.roxyprotecteur, et R représente un groupe al!kyle, un groupe alkyle fluorosubstitué, un groupe aikyle hydroxysubstitué, un groupe alkyle hydroxyfluoro- substitué, un groupe alkyle hydroxy-substitué à groupe hydroxy protégé, ou un groupe aikyle hydroxyfluoro- substitué à groupe hydroxy protégé, ledit procédé étant caractérisé en ce que l'on traite un dérivé de vitamine D, de formule générale: AeL xoY dans laquelle L est un groupe partant, avec un cdrlvé alkylphénylsulfone de formule genérale: Ph-SO2-CH2-R obtenant ainsl un produit d'addition à chaine latérale sulfone, présentant la formule générale suivante: , ";l et en ce cue l'on opère la désulfonaticn réductrice dudit prodult d'addition à chaîne latérale sulfone, de façon à oDtenir le dérlvé correspondant de vitamine D, et éventuellement, on élimine tout groupe hydroxy-protecteur présent. Procédé conforme à la revendicaticn 1, caractérisé en ce que X et Y représentent des groupes hydroxy-protecteurs. 3. Procédé conforme à la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que R représente le groupe 4-méthyl-4- hydroxypentyle à groupe hydroxy protegé. 4. Procédé conforme à la revendication 1 ou 2, caracetérisé en ce que R représente le groupe 5-méthyl-5- hydroxyhe.,:yle à groupe hydro::xy protegé. 5. Procédé conforme à l'une quelconque des revendications 1 A 4, caractérlsé en ce que L represente le groupe tosyloxy. 6. Composé caractérisé en ce qu'il présente la formule: I:P kil I I X O,,, o v dans làaquellé X, Y et R sont tel' que définis dans la revendication 1. 7. Composé conforme à la revendication 6, caractéris, en ce que X et Y représentent des atomes d'hydrogène. 8. Composé conforme à la revendication 6, caractérisé en ce que X et Y représentent des groupes hydroxy-protecteurs. 9. Composé conforme à l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisé en ce que R représente le groupe 4-méthyl-4-hydroxypentyle ou un.de ses dérivés à groupe hydroxy protégé. 10. Composé conforme à l'une quelconque des revendications-6 à 8, caractérisé en ce que R représente le groupe 5-méthyl-5-hydroxyhexyle ou un de ses dérivés à groupe hydroxy protégé. i1. Composé caractérisé en ce quJil présente la formule: vs - I X( dans laquelle chacun de X, Y et Z, qui peuventêtre identiques ou différents, représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy-protecteur, et n vaut 3 ou 4. 12. Compose conforme à la revendication 11, caractérisé en ce que X, Y et Z représentent des groupes hydroxy-protecteurs. 13. Composé conforme à la revendication 12, caractérisé en ce que X, Y et Z représentent des groupes aikylsilyles. 14.. Composé conforme à la revendication 11, caractérisé en ce que X, Y et Z représentent des atomes d'hydrogène. 15. 24-dihomo-la,25-dihydroxyvitamine D3. 16. 24-trihomo-la,25-dihydroxyvitamine D3. 17. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient un composé revendiqué dans l'une quelconque des revendications 11 à 16, conjointement avec u: exclplent pharmaceutiquement acceptable. 18. Compositicn conforme à la revendlcatlon 17, caractérisé en ce que le composé est la 24-dihomo-la,25- dihydroxyvitamine D3 ou la 24-trihomo-!a,25-dihydroxy- vitamine D3. 19. Composé selon l'une quelconque des revendications 11 à 16, utilisé pour provoquer et exalter la différentiation cellulaire des cellules malignes. 20. Composé selon l'une quelconque des revendications 11 à 16 utilisé dans le traitement des maladies néoplasiques.