FR 2600335 A1 19871224 FR 8608896 A 19860619 Procédé d'analyse des séquences peptidiques immunoqènes portant un épitope caractéristique d'une protéine étran_ère_ l'organisme d'un hôte vivant, en vue de la production de vaccins L'invention concerne un procédé d'analyse de ceux des épitopes ou déterminants' antigéniques qui, au sein d'une protéine antigénique, peuvent être tenus pour responsables de l'action immunoqène de cette protéine vis-à-vis d'un hôte vivant déterminé. Il est bien connu que l'une des fonctions essentielles du système immunitaire est de reconnaître ce qui lui est étranger, pour l'éliminer, cependant sans s'attaquer aux protéines de l'hôte. Celles-ci ou l'ensemble des peptides qui résultent de la fragmentation au hasard des protéines de l'hôte seront dans ce qui suit 15 désignés par l'expression le "soi somatique". Une forme de défense courante par laquelle le système immunitaire se manifeste vis-à-vis d'une protéine étrangère consiste en la capacité qu'il a de produire des 20 anticorps reconnaissant spécifiquement certains sites antiqéniques ou épitopes de cette protéine. Ces épitopes sont souvent portés par des séquences peptidiques particulières relativement courtes, lesquelles ne constituent le plus souvent que des parties très petites de la séquence en acides aminés de la protéine antigénique 25 entière. Peu de moyens sont à l'heure actuelle disponibles pour déterminer la position et la nature de l'épitope ou des épitopes porteurs de l'immunoqénicité de la protéine, 30 même lorsque la séquence entière de cette protéine est connue ou peut être déduite de la séquence nucléotidique de l'ADN codant pour cette protéine, lorsque cet ADN particulier a été identifié. On mentionnera pour mémoire les mesures ou appréciations classiques qui sont faites des degrés d'hydrophilie de certaines régions de la séquence peptidique totale de la protéine concernée ou les tentatives que l'on fait quelquefois de les situer sur des boucles dont on pense qu'elles pourraient être exposées à 5 la surface de l'antigène. Les résultats que fournissent ces méthodes sont souvent décevants. Tant que l'on ne disposera pas de procédés d'analyse plus rapides et/ou efficaces des épitopes caractéristiques de ces protéines, le développement de vaccins synthétiques risque d'être 10 freiné. On sait que de nombreux peptides, dont la séquence d'acides aminés est contenue dans celle de la protéine contre laquelle une protection est recherchée, ont été synthétisés et testés dans des réactions immunologiques 15 mettant en jeu des anticorps préalablement formés contre la protéine. S'il a souvent été constaté que ces anticorps reconnaissaient ces polypeptides synthétiques, la capacité que possèdent ces derniers d'induire in vivo des anticorps protecteurs contre la protéine naturelle n'a été 20 constatée que dans un nombre réduit de cas, et cela même lorsque ces polypeptides avaient au préalable été rendus efficacement immunoqènes, par exemple par fixation sur un support macromoléculaire approprié. L'invention a pour but de remédier aux difficultés 25 rencontrées jusqu'à ce jour, à l'occasion de l'analyse des séquences peptidiques éventuellement responsables de l'immunogénicité d'une protéine antigénique à l'égard d'un hôte déterminé, dès lors que sa séquence en aminoacides a été réalisée ou peut-être déduite de la séquence nucléo30 tidique de l'ADN correspondant, dès lors qu'elle aura été déterminée au préalable. L'invention découle d'une approche différente des problèmes de l'immunité. D'une façon générale, il est admis que les épitopes des protéines antigéniques, sus'35 ceptibles d'induire des anticorps in vivo correspondent à des portions de molécules normalement exposées à la surface de ces protéines ou de cellules, en particulier lorsque l'antiqène est constitué par un micro-organisme ou tout autre type cellulaire étranger. Ces théories reposent sur l'hypothèse qui avait été faite que, pour être recoonus par le système immunitaire, les épitopes devaient être exposés à la surface de l'antigène et au contact des fluides biologiques circulants. L'approche différente que l'invention met en 10 oeuvre est en rapport avec une interprétation nouvelle que les inventeurs font des progrès importants qui ont récemment été réalisés au niveau de la compréhension de la présentation des antigènes par des molécules de classe I et de classe II codées par le complexe majeur d'histocom15 patibilité. Tout d'abord, il a été constaté que les antigènes de classe II exposés à la surface des macrophages sont capables de présenter d'une certaine manière des peptides à des cellules auxiliaires T (réf. 8). Ainsi le lysozyme de blanc d'oeuf est-il résolu en peptides, 20 dont certains peuvent être présentés par des antigènes de classe II (réf. 2). Il a également été montré que la nucléoprotéine de la qrippe est probablement présentée sous forme de petits peptides aux lymphocytes T cytotoxiques, en association avec des molécules de classe I 25 (réf. 12 et 13). Dans les deux cas, des peptides correspondants ont été synthétisés in vitro et mis en contact avec des cellules qui présentaient des antigènes de classe I ou de classe II à leur surface. Il devait alors être constaté que ces peptides acquéraient la capacité d'être 30 présentés d'une facon spécifique les rendant reconnaissables par le système immunitaire. L'interprétation que les inventeurs ont donné de cette expérience est qu'en fait le lysozyme et la nucléoprotéine de la grippe avaient subi une dégradation 35 intracellulaire, laquelle s'était manifestée par la production des peptides. Ceux-ci avaient alors été transférés à la surface des cellules en cause pour être présentés sous la forme appropriée au système immunitaire par les antiqènes de classe II et de classe I. De là découle l'hypothèse supplémentaire que l'ensemble des protéines cellulaires, étrangères ou non, peut subir cette dégradation en peptides, suivie de leur présentation à la surface. Il en résulte que le système immunitaire doit être capable de reconnaître des séquences peptidiques 10 étranqères à l'ensemble des séquences peptidiques appartenant au moi somatique de l'hôte. L'invention repose donc sur le principe d'une recherche dans la protéine antigénique à l'égard de laquelle une vaccination peut être recherchée de ceux des 15 peptides qui, par exemple au terme d'un processus comprenant l'internalisation du complexe protéine antigèneanticorps dans des lymphocytes B, la fragmentation au hasard de la protéine en petits peptides et le transfert de ces derniers à la surface de ces cellules, pourraient 20 être reconnus par les cellules possédant des récepteurs T comme étrangers vis-à-vis de l'ensemble des peptides du "moi somatique" En d'autres termes, l'invention peut être considérée comme découlant de l'hypothèse que l'antigé25 nicité de la protéine antiqénique devait être due à des peptides que le système immunitaire n'avait pas jusque là appris à reconnaitre comme appartenant au moi somatique de l'hôte. Le procédé selon l'invention pour l'analyse au 30 sein d'une protéine étrangère à l'organisme d'un hôte appartenant à une espèce déterminée de la séquence peptidique portant l'épitope responsable de l'immunogénicité qui pourrait être mise en oeuvre pour la fabrication ultérieure de peptides ou polypeptides 35 immunoqènes ayant des propriétés vaccinantes contre la protéine étrangère ou contre -l'antigène qui la comporte est caractérisé par la combinaison d'étapes que constituent: - la détermination et l'identification de la famille des 5 oligopeptides ayant une longueur déterminée, qui sont contenus dans la séquence en acides aminés constitutifs de cette protéine étranqère, - la comparaison de chacun des oliqopeptides de cette famille avec chacun des oliqopeptides de mêmes lonqueurs 10 de l'ensemble des familles d'oiiqopeptides contenus dans les protéines dont les séquences en acides aminés sont connues et qui sont disponibles dans un cataloque préétabli de ces protéines, toutes ces protéines étant caractéristiques du soi somatique de l'espèce correspon15 dante, - l'identification de ceux des oliqopeptides (oliqopeptides non coincidents) de la famille de la protéine étranqère pour lesquels n'existent que peu de coincidences et, de préférence, aucune coincidence avec 20 les oligopeptides disponibles dans le catalogue, - la recherche, au sein de la protéine étrangère de séquences formées d'oliqopeptides non coincidents qui-se chevauchent mutuellement, et - l'analyse parmi ces séquences d'oliqopeptides non 25 coïncidents et se chevauchant d'au moins une séquence d'acides aminés portant l'épitope requis pour la fabrication du polypeptide vaccinant. Il doit être entendu que dans ce qui précède "oligopeptide ayant une longueur déterminée" fait 30 référence à un peptide ayant un nombre déterminé d'acides aminés, naturellement quelles que soient leurs natures respectives. Dans les exemples qui suivent, les "oliqopeptides" possedent respectivement 4 aminoacides. Le "catalogue" dont il a également été question 35 plus haut, correspond à toutes banques de données dans lesquelles sont répertoriées les séquences en acides aminés de protéines en nombre de plus en plus important. L'expression s'applique également aux banques de données dans lesquelles sont rassemblées toutes les informations relatives aux séquences nucléotidiques des fragments d'ADNs séquences, parmi lesquels de nombreux ADNs codant des protéines dont les séquences en acides aminés peuvent alors être déduites au moyen du code génétique. On comprendra que toute protéine formée d'un 10 nombre x d'aminoacides contient x - 3 tétrapeptides, selon la définition qui a été donnée de l'invention. Si l'on part de l'extrémité N terminale de la protéine, le premier des tétrapeptides du qenre en question sera formé à partir des 4 premiers aminoacides à compter de l'extrémité N 15 terminale, le second oligopeptide ou tétrapeptide s'étendra entre le deuxième et le cinquième acide aminé de la séquence de la protéine totale, etc. et le dernier du (x - 3)ème à l'aminoacide C-terminal. Il en ira évidemment de même pour les différentes familles d'oliqopeptides, 20 plus particulièrement de tétrapeptides qui pourront être identifiés dans chacune des protéines appartenant à l'espèce déterminée étudiée, dont les séquences en acides aminés sont connues et répertoriées dans la banque de données utilisée. Le choix des "tétrapeptides" dans les exemples décrits plus loin s'explique par la qrande quantité de tétrapeptides qui peuvent être déjà déduits des séquences en acides aminés de l'ensemble des protéines dont les structures sont déjà connues et qui proviennent toutes 30 d'une même espèce. Il existe en effet 204 = 160.000 différentes combinaisons d'aminoacides dans un tétrapeptide. Partant de ces données, il a été remarquable de constater en rapport avec certains polypeptides de synthèse dont avait déjà été montrée la capacité d'induire 35 in vivo des anticorps reconnaissant la protéine entière correspondante, que ces polypeptides se sont finalement avérés contenir des oliqopeptides, plus particulièrement des tétrapeptides, qui n'avaient pas leur équivalent au sein des ensembles des familles d'oliqopeptides contenues dans les protéines, dont les séquences en acides aminés sont disponibles dans la banque de données, qui a été utilisée en rapport avec les exemples décrits plus loin. Il a même été constaté que cette absence de communauté entre oligopeptides de la protéine antigénique envisagée 10 et oliqopeptides, notamment tétrapeptides, des protéines répertoriées dans la banque de données s'étendait souvent à des oliqopeptides successifs se chevauchant mutuellement, c'est-à-dire décalées dans la séquence de la protéine chaque fois.d'un aminoacide, l'un vis-à-vis de 15 l'autre. Cette constatation donne donc un fondement raisonnable à l'hypothèse que les séquences peptidiques "non coïncidentes" correspondantes pouvaient correspondre à ceux des oliqopeptides, qui pouvaient résulter de la fragmentation au hasard de la protéine antigénique, à 20 l'occasion du processus rappelé plus haut de détection de la protéine antiqénique in vivo en vue de sa destruction. Le choix de tétrapeptides pour la réalisation des essais décrits plus loin a essentiellement été dicté par l'étendue des informations disponibles à l'heure actuelle 25 quant aux séquences en acides aminés de protéines appartenant à une espèce donnée. On mentionnera par exemple que le total des acides aminés contenus dans les séquences des protéines de souris répertoriées dans la banque utilisée était de 26.000 pour les protéines 30 "somatiques" de la souris et de 16.000 pour les protéines "somatiques" du lapin. Il va sans dire que lorsque les données relatives aux séquences en aminoacides des protéines disponibles dans les banques se seront suffisamment accrues, les 35 oligopeptides utilisables pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention pourront être constitués par des pentapeptides, des hexapeptides, voire même des oligopeptides de plus qrandes longueurs. A l'heure actuelle, les séquences disponibles dans les banques de données sont encore insuffisantes pour permettre une analyse statistiquement significative de la distribution ou au contraire de l'absence de distribution de certains pentapeptides ou hexapeptides entre la protéine étudiée, d'une part, et l'ensemble des familles d'oligopeptides contenues dans les 10 protéines "somatiques" de l'hôte, d'autre part. A l'inverse l'utilisation de séquences tripeptidiques ne permettait plus la mise en évidence significative de tripeptides "non coïncidents" dans la protéine antigénique étudiée et non présente parmi les protéines "somatiques" 15 de l'hôte. Les familles d'oligopeptides du "soi somatique", disponibles dans les banques de données et vis-à-vis desquelles la comparaison sus-indiquée est effectuée, peuvent provenir de la totalité des protéines de l'hôte 20 disponibles dans ces banques de données, ou le cas échéant être dépourvues de celles des protéines intervenant directement au niveau du système immunitaire: séquences connues des anticorps, des récepteurs de cellules T, molécules de classe I et de classe II, etc.. Il a en effet été constaté que ce dernier type de protéines contenaient 25 de nombreux tétrapeptides non coïncidents avec ceux des autres protéines au sein de la même espèce. Cette observation donne donc une certaine crédibilité à la notion qu'il existe chez tout individu un "soi somatique" et un 30 "soi immunitaire" qui ne coïncident pas. Le principe du procédé selon l'invention sera maintenant illustré par la description de certains exemples. Il sera fait référence aux dessins dans lesquels: - La fig. 1 fournit un graphique représentatif de la fréquence de distribution commune de mêmes tétrapeptides d'une nucléoprotéine de la grippe, d'une part, et dans l'ensemble des protéines séquencées de souris qui, au moment o l'essai a été réalisé, étaient disponibles dans la banque de données NBRF-PIR. _ La fig. 2 fournit des courbes fournissant les mêmes informations comparatives, cette fois-ci entre les tétrapeptides présents dans la structure d'un lysozyme, d'une part, et dans l'ensemble des protéines de la banquue de données sus-indiquée, d'autre part. - La fig. 3 fournit les mêmes donnée comparatives entre la séquence d'un fragment N- terminal de la protéine VP1 du poliovirus de type 1, d'une part, et les données disponibles relatives aux protéines du lapin dans la même banque de données, d'autre part. Enfin les fiq. 4 et 5 fournissent des données comparatives entre des molécules de classes I et II de la souris et la banque de données relatives aux familles d'oligopeptides -qui peuvent être déduites des séquences des protéines de souris de la même banque de données. 20 EXEMPLE I: Etude d'un peptide immunogène de la nucléoprotéine A/MT/60/68 de la grippe par rapport à une base de données relative au "moi somatique" de la souris. La fig. I permet l'évaluation de la fréquence 25 d'existence dans la base de données de chacun des tétrapeptides qui se trouvent être inclus dans la nucléoprotéine de la grippe, et ce à partir de la première séquence tétrapeptidique à compter de l'acide aminé N-terminal de la nucléoprotéine (position 0.00 sur l'axe des abscisses). 30 La fréquence d'apparition des fréquences correspondantes est appréciable vis-à-vis de l'axe des ordonnées. Les variations relatives qui apparaissent à la fig. 1 correspondent à la fréquence de détection dans la base de données de chacun des tétrapeptides chevauchants, décalés les uns par rapport aux autres d'un aminoacide de la séquence de nucléoprotéines. Ainsi évaluet'on les fréquences d'apparition des tétrapeptides LVWM, VWMA, WMAC...... à partir d'une séquence LVWMAC......, elle-même contenue dans la nucléoprotéine de la qrippe. Les nombres appa5 raissant sous l'axe des abscisses correspondent aux numérotations des aminoacides N-terminaux successifs des tétrapeptides successifs vis-à-vis de l'acide aminé N-terminal de la nucléoprotéine. La fig. 1 fait apparaître 25 régions de la sé10 quence dela nucléoprotéine dans lesquelles on constate la présence d'au moins 7 tétrapeptides dont les premiers acides aminés respectifs se suivent les uns les autres, tous absents de l'ensemble des tétrapeptides déductibles de la base de données. Il est à cet égard intéressant de 15 remarquer que deux régions de la séquence (repérées dans la fig. 1 par des flèches et s'étendant entre les résidus 335 et 349, d'une part, et entre 365 et 379, d'autre part) coincident avec deux réqions de la-séquence dont avait auparavant été démontrée la capacité de jouer un rôle au 20 niveau de la reconnaissance par les lymphocytes T cytotoxiques de la souris. Ces parties de la séquence d'aminoacides apparaît également dans le tableau I ci-après (alinéa a)). Comme on pourra le constater, le tableau I illustre: 1) une partie de la séquence en acides aminés de la nucléoprotéine (s'étendant entre les résidus 328 et 385) en utilisant le code à une lettre pour la désignation des acides aminés: en lettres majuscules; 2) En traits interrompus les peptides de synthèse 30 dont question plus haut, étant entendu que chacun des tirets des traits interrompus correspond aux mêmes aminoacides que celui qui se trouve situé à son aplomb dans la première ligne; 3) les séquences non coïncidentes résultant de la 35 comparaison effectuée par le procédé selon l'invention entre ces peptides de synthèse et les séquences peptidiques déductibles de la banque de données, en utilisant également le même code à une lettre pour la désiqnation des aminoacides: en lettres minuscules. Il est intéressant de constater que les séquences en lettres minuscules correspondent à des tétrapeptides se chevauchant successivement dont aucun équivalent n'a pour l'instant encore été retrouvé dans la banque de données concernant les protéines de de souris. En d'autres termes, les peptides à l'égard desquels l'intervention des lymphocytes T cytotoxiques avait déjà été constatée et les séquences non coincidentes avec celles du "moi somatique" témoignent au contraire d'une coïncidence remarquable entre elles. 15 EXEMPLE II: le lysozyme de blanc d'oeuf Comme on l'a déjà mentionné plus haut, l'immunisation de souris avec du lysozyme de blanc d'oeuf de poule comprend un processus d'absorption de la protéine -par les macrophages et la présentation d'un peptide (résidus 45 à 20 61) par les antigènes de classe II (réf. 2). Le résultat des opérations de comparaison entre la séquence en acides aminés et la banque du "soi somatique" de la souris résulte de la figure 2. Celle-ci fait de nouveau apparaître une séquence de 9 tétrapeptides consécutifs non coïncid25 ents avec les séqueences de référence de la souris. Le petide 45-61 s'est de nouveau révélé présenter un degré de coïncidence remarquable avec une séquence du lysozyme ne coïncidant pas elle-même avec l'une quelconque des séquences du "soi somatique" de la banque de données. 30 EEMPLE III: protéine M de Streptococcus pyrogenes Un peptide obtenu par la méthode au bromure de cyanogène à partir de la protéine M24 est connu comme étant capable de provoquer une réponse humorale et à déclencher une réaction des lymphocytes T cytotoxiques 35 chez le lapin (réf. 6). Le plus court des peptides synthétiques connus comme provoquant une réponse de la part des lymphocytes T cytotoxiques est de nouvau présenté par un trait interrompu dans le tableau I, chacun des tirets du trait interrompu identifiant l'aminoacide 5 correspondant par référence à la séquence plus longue représentée en utilisant un code à une lettre (lettres majuscules). Comme dans les cas précédents, ce peptide, qui comporte 12 aminoacides s'est révélé inclure une séquence de 9 résidus aminoacides formés de 6 tétra10 peptides consécutifs se chevauchant mutuellement, tous ces peptides s'étant révélés absents des informations contenues dans la banque de données quant aux séquences en aminoacides des protéines du "soi somatique" du lapin. EXEMPLE IV: peptides synthétiques immunoqènes issus de l'antiqène HBsAq du virus de l'hépatite B Les séquences de deux peptides immunogènes du virus de l'hépatite B sont indiquées dans le tableau I joint, selon -la méthodologie déjà décrite. Il est connuw' que ces peptides sont capables de provoquer une réponse 20 humorale chez le lapin, le plus lonq des deux étant le lus immunogénique (réf. 3). Là encore les deux peptides coincident avec une séquence faite de tétrapeptides se chevauchant mutuellement, dont à l'heure actuelle des équivalents n'ont pas été retrouvés dans la banque du "soi 25 somatique" du lapin. On remarquera d'ailleurs que le peptide le actif est également celui qui comprend la séquence la plus importante, en coincidence avec une séquence absente du "soi somatique". EXEMPLE V: peptides synthétiques correspondant à des 30 séquences de la protéine VP1 du poliovirus Plusieurs peptides du fraqment N-terminal de la protéine VP1 du poliovirus de type I ont été reconnus comme possédant la capacité de provoquer une réponse * anti-VP1 chez le lapin (réf. 7). La fiq. 3 fait de nouveau 35 apparaître une coincidence remarquable entre les positions 260O0335 de ces peptides synthétiques avec les séquences les plus lonques absentes à l'heure actuelle de la banque du "soi somatique" du lapin. EXEMPLE VI: molécules de classe I et de classe II de la souris Les séquences d'aminoacides de lymphocytes de d d. classe I H-2K et de la chaîne A de l'antigène de classe II (réf. 9 et 10) ont été analysées par la même procédures Les fig. 4 et 5 font apparaitre des propriétés inté10 ressantes. Ces molécules comportent des régions en commun avec les séquences de protéines communes du "soi somatique". Tel est le cas pour une séquence siqnal impliquée dans le transport de ces molécules à la surface de la membrane à travers les régions cytoplasmiques, ainsi 15 que pour des protéines des trosièmes domaines extracellulaires de H-2K (fiq. 4). Au contraire, les autres domaines extracellulaires, en particulier les régions NH2-terminales de ces deux molécules présentent un caractère remarquablement "étranger" par rapport à 20 l'ensemble des oligopeptides du "soi somatique" de la souris, tels qu'ils résultent de la banque de données. Les conclusions générales qui peuvent être tirées des exemples précédents sont les suivantes. Il est remarquable que dans tous les cas on ait 25 observé un nonchevauchement ou une "non-coincidence" siqnificatif entre les séquences du peptide dont on avait antérieurement reconnu le caractère immunoqénique et les séquences d'aminoacides telles qu'elles résultent des figures, qui correspondent à des séquences formées de 30 tétrapeptides chevauchants que l'on ne retrouvait pas dans les banques de données concernant les protéines du "soi somatique" de l'hôte correspondant. Les domaines extracellulaires des antigènes du complexe majeur d'histocompatibilité de souris de classe I 35 et de classe II qui interviennent sans doute dans le mécanisme de reconnaissance cellule-cellule contiennent des séquences qui ne sont pas non plus déductibles des familles de tétrapeptides du "moi somatique" de la souris. - Bien que les résultats n'aient été obtenus que par 5 comparaison avec les séquences d'un nombre limité de protéines disponibles dans les banques de données (100 à 200 protéines pour la souris et le lapin), il est légitime de penser que les épitopes caractéristiques des protéines antigéniques à l'égard d'un hôte donné resteront consti10 tués par des séquences d'aminoacides dont on ne retrouvera pas d'équivalents dans l'ensemble des protéines formant le "moi somatique" de l'hôte. Le développpement des informations relatives aux séquences des protéines du "moi somatique" aura certainement pour effet de réduire le 15 nombre des séquences contenues à l'intérieur des futures protéines antigéniques étudiées dont on ne retrouvera pas l'équivalent dans les protéines du "moi somatique" de l'hôte correspondant. Les hypothèses formulées ci- dessus paraissent néanmoins devoir conserver leur valeur, ne serait-ce que par le caractère "étranqer" évident qui 20 résulte de l'introduction dans l'orqanisme de l'hôte d'une séquence peptidique qui lui est manifestement étrangère. Avantageusement, le procédé selon l'invention pour détecter les zones d'une protéine susceptibles de porter 25 un épitope caractéristique est complété par des étapes supplémentaires consistant dans la synthèse des peptides correspondant aux séquences non communes présumées porter l'épitope susdit, leur utilisation pour l'immunisation d'un hôte vivant approprié, étranqer à l'espèce étudiée, 30 avec ces peptides synthétiques et la sélection parmi ceux de ces peptides synthétiques qui auront montré leur capacité à induire in vivo la production d'anticorps capables non seulement de les neutraliser eux-mêmes mais encore de neutraliser les protéines entières correspon35 dantes. Ces polYpeptides pourront donc être considérés comme contenant un épitope caractéristique de cette protéine. Naturellement le procédé selon l'invention peut également être couplé avec les méthodes de reconnaissance déjà appliquées pour identifier des épitopes vraisemblables (par exemple appréciation des degrés d'hydrophilie des régions concernées) qui permettront un premier tri dans le cas o la comparaison sus-indiquée ferait apparaître un nombre relativement important "de séquences 10 non coincidentes" entre la protéine antigénique étudiée et l'ensemble des protéines du "moi somatique" disponibles dans les banques de données. Il résulte de l'examen même des figures que le procédé selon l'invention permet, à l'examen de la sé15 quence en aminoacides d'une protéine antigénique de grande longueur, de rapidement situer celles des réqions qui pourraient éventuellement contenir un épitope caractéristique de la protéine, à tout le moins d'éliminer avec un qrand niveau de certitude les séquences en général 20 beaucoup plus longues qui ne devraient pas le porter. L'invention sera donc d'un usage particulièrement avantageux pour l'étudedes régions susceptibles de porter des épitQpes de toute protéine antigénique nouvellement séquencée. A l'inverse, l'invention permet de déterminer, en quelque sorte par anticipation, quelles seront les régions susceptibles de porter l'épitope dans toute protéine dont la séquence en aminoacides n'a pas encore été faite, dans la mesure o l'on disposerait néanmoins de la région du gène codant pour cette protéine et/ou cette région de gène 30 aurait elle-même fait l'objet d'un séquençage chimique, et ce par le truchement du code génétique. D'une façon générale, il y a lieu d'observer que l'on pourra éventuellement retenir comme région non 35 coincidente préférée, celle d'entre elles qui se révélerait formée d'oligopeptides se chevauchant et comportant en tout de 6 à 30 acides aminés. De tels peptides-sont aisément accessibles à la synthèse chimique. Dès lors qu'ils se révéleraient porter un épitope 5 caractéristique de la protéine étudiée, ils pourraient être directement mis en oeuvre dans la fabrication de principes actifs immunogènes, voire vaccinants contre la protéine entière correspondante, le cas échéant après amplification de leur caractère immunogène dans des 10 conditions bien connues de l'homme du métier, par exemple par couplage avec une molécule porteuse, telle qu'une anatoxine tétanique ou diphtérique ou une sérum albumine, ou encore par association ou couplage avec une molécule possédant des propriétés d'adjuvant immunologique. deUne généralisation de ce qui précède provient de ce que les molécules du système immunitaire, particulièrement les anticorps et les récepteurs des cellules T, peuvent être dégradées en peptides présentés à la surface des cellules du sytème immunitaire, o ils joueraient un 20 rôle régulateur par le biais de leur intervention dans les interactions entre cellules. Ainsi, selon que les régions variables des immunoglobulines ou des récepteurs des cellules T produisent des peptides qui ressemblent ou non au "soi somatique", des signaux régulateurs de nature très 25 différente seront obtenus. L'emploi de peptides ou de polypeptides ainsi définis et synthétisés par voie chimique est donc de nature à moduler l'équilibre du système, notamment par le biais des régulations dites idiotypiques. En d'autres termes, l'invention s'étend aussi aux peptides 30 ou polypeptides tirés des molécules du système immunitaire 30 qui pourront servir, soit de vaccins, soit d'adjuvants à des vaccins, dans des maladies liées soit à l'infection par des agents externes (virus, bactéries, parasites), soit à des désordres internes (maladies autoimmunes, 35 cancers). TABLEAU I: Corrélation des positions des peptides synthétiques immunogènes ou des séquences caractéristiques rares ou absentes dans les familles de protéines somatiques de lasouris et du lapin, respectivement telles qu'elles sont disponibles dans la banque de données. a) Nucléoprotéine de la grippe 330 340 350 360 370 380 LVMACNSA AFEDL RVLSFIRGTKVS PRGLSTR GQIASNENIDA HESSTLELRSR rvlsfirgt asnenmdam b) Lysozyme du blanc d'oeuf de poule 60 RNTDGSTDYGILQINSRWWCNDGRT lqinsrwwcndgr c) Protéine M de Streptococcus pyrogenes NFSTADDSAKIKTLEAEKAALAARKADLEKALEGAH laarkadle d) Antigène HBS STGPSKTCMTTAQGTSMYPSC ____________________stpsktcmtt e) Protéine VP1 du poliovirus 1 GLGQHLESHIDN;TVRETVOAATSRDALPK;TEASGPTHSK=IPALTAVETGATNLVPDT gqm1esmidntvretvga 61 VQTRHVVQHRSRSESSIESFFARGACVTIrnVDNPASTTNKDKLFAVW1ITYKDTVQLRR vvqhrsrsesslesrfarga ttnkdklravwkitykdtvq BIBLIOGRAPHIE 1.- ABASTADO, J.P., PLATA, F., MORELLO, D., DANIEL-VEDELE, F. & KOURILSKY, P. 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Procédé d'analyse de séquences peptidiques portant un épitope caractéristique d'une protéine étrangère à l'organisme d'un hôte appartenant à une espèce 5déterminée, pour la fabrication ultérieure de peptides ou de polypeptides immunogènes' contenant ces séquences peptidiques et ayant des propriétés vaccinantes contre cette protéine étrangère ou contre l'antigène qui la comporte, caractérisé par la combinaison d'étapes que 10 constituent: - la détermination et l'identification de la famille des oligopeptides ayant une longueur déterminée, qui sont contenus dans la séquence en acides aminés constitutifs de cette protéine étrangère, - la comparaison de chacun des oligopeptides de cette famille avec chacun des oligopeptides de mêmes longueurs de l'ensemble des familles d'oligopeptides contenus dans les protéines dont les séquences en acides aminés sont connues et qui sont disponibles dans un catalogue pré20 établi de ces protéines, toutes ces protéines étant caractéristiques du "soi somatique" de l'espèce correspondante, - l'identification de ceux des oligopeptides (oligopeptides non coincidents) de la famille de la protéine 25 étrangère pour lesquels n'existent que peu de coincidences et, de préférence, aucune coincidence avec les oligopeptides disponibles dans le catalogue, - la recherche, au sein de la protéine étrangère de séquences formées d'oliqopeptides non coincidents qui se 30 chevauchent mutuellement, et l'analyse parmi ces séquences d'oligopeptides non coincidents et se chevauchant d'au moins une séquence d'acides aminés portant l'épitope requis pour la fabrication du polypeptide vaccinant. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les susdits oligopeptides sont des tétrapeptides. 3. Procédé selon la revendication 1 ou la reven5 dication 2, caractérisé en ce que l'étape de'recherche de séquences formées d'oliqopeptides sechevauchant comprend la détermination de celles d'entre elles qui comprennent de 6 à 50 (notamment de 6 à 30) acides aminés. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendica10 tions 1 à 3, caractérisé en ce que l'étape de détermination et d'identification de la famille des oligopeptides de ladite protéine étrangère comprend le séquençage chimique de cette protéine étrangère, l'identification de ladite famille d'oligopeptides faisant alors immédiatement 15 suite à ce séuqençage chimique. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'étape de détermination de la famille des oligopeptides de ladite protéine étrangère comprend le séquençage chimique de la séquence 20 polynucléotique préalablement reconnue comme codant pour ladite protéine étrangère, l'identification de ladite famille d'oligopeptides faisant alors immédiatement suite, par l'intermédiaire du code génétique, au séquençage chimique de la séquence polynucléotidique. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l'étape d'analyse parmi les séquences d'oligopeptides non chevauchants et coincidents, d'une ou plusieurs de ces séquences d'acides aminés présumés porter l'épitope susdit, comprend la 30 synthèse chimique d'une ou de plusieurs de ces séquences d'oligopeptides non chevauchants, l'immunisation d'un hôte vivant approprié, étranger à l'espèce étudiée, avec ces séquences d'oligopeptides et la sélection de celles des séquences qui contiennent l'épitope étudié grâce à la 35 réaction immunologique de reconnaissance, voire de- neutralisation, de la protéine étrangère par les anticorps correspondants induits par ces séquences chez l'hôte vivant. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, carctérisé en ce que l'analyse de celles des séquences d'acides aminés qui portent l'épitope requis pour la fabrication du polypeptide vaccinant comprend également la détermination du deqré d'hydrophilie desdites séquences, ou toute autre propriété qui indique son 10 accessibilité possible à un anticorps. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, étendu à l'analyse des séquences peptidiques du "moi immunitaire" qui ne sont présentes dans le "moi somatique" du même hôte, le procédé étant 15 appliqué aux molécules du système immunitaire elles-mêmes (particulièrement anticorps et récepteurs des cellules T), de façon à déterminer la séquence des peptides dérivés de ces molécules et susceptibles de jouer un rôle régulateur dans le système immunitaire, pour ensuite synthétiser des 20 peptides ou polypeptides qui pourront être utilisés comme vaccins ou adjuvants de vaccins dans le traitement des infections ou désordres internes de l'organisme de l'hôte commun.