FR 2605222 A1 19880422 FR 8711957 A 19870826 1 - 2605222 La présente invention concerne un agent thérapeutique pour le traitement de troubles associés à l'ischémie céré- brale, caractérisé en ce qu'il contient en tant que composant actif le nitrate de N-(2-hydroxyéthyl)nicotinamide ou un de ses sels. Plus particulièrement, la présente invention concerne un agent très efficace pour le traitement de troubles qui sont associés à l'ischémie cérébrale, comme par exemple artériosclérose cérébrale, séquelle d'infarctus céré- bral, séquelle d'hémorragie cérébrale, séquelle d'apoplexie cérébrale, séquelle de trauma céphalique, etc., et de symp- tômes liés à ces troubles, par exemple hypoxie, anoxie, etc., ainsi que de symptômes neurologiques tels que vertiges, troubles de la parole, troubles moteurs et sensoriels, paropsie, etc. Le nitrate de N-(2-hydroxyéthyl)nicotinamide a été uti- lisé pour le traitement de patients souffrant d'angine de poitrine. Toutefois, ledit composé n'a pas été utilisé pour le traitement de l'ischémie cérébrale ou d'affections appa- rentées. D'autre part, on a utilisé divers agents thérapeutiques pour le traitement de troubles associés à l'ischémie céré- brale, comprenant à la fois les phases aiguës et chroniques. Ces agents sont en général répartis dans les deux catégories - 2- 2605222 suivantes: agents qui améliorent la circulation cérébrale, et activateurs du métabolisme cérébral. Tout en ayant générale- ment des effets vasodilatateurs sur les vaisseaux sanguins cérébraux, les agents thérapeutiques classés parmi ceux qui améliorent la circulation cérébrale ont aussi les mêmes effets sur les autres vaisseaux sanguins périphériques, ce qui a des conséquences indésirables, telles qu'hypotension systémique. On a par conséquent recherché des agents à action sélective sur les vaisseaux sanguins cérébraux. Par ailleurs, les activateurs du métabolisme cérébral sont considérés amé- liorer les états d'ischémie cérébrale en augmentant la consommation cérébrale d'oxygène et l'absorption du glucose par le cerveau, et également en exerçant des effets protec- teurs sur le système générateur d'énergie, comme on l'a mon- tré dans des expériences d'ischémie, bien que le mécanisme de leur action n'ait pas encore été élucidé. Seul un petit nombre des agents précédents pour le traitement de troubles circulatoires cérébraux ont des effets sélectifs sur les vaisseaux sanguins cérébraux, et certains d'entre eux provoquent une hypotension générale. En outre, le mécanisme d'action de la plupart de ces agents est inconnu. Les auteurs de la présente invention ont découvert que les composés de la présente invention, à savoir le nitrate de N-(2-hydroxyéthyl)nicotinamide et ses sels, dilatent les vaisseaux sanguins cérébraux sans provoquer aucune chute importante de la pression artérielle générale [Kekkan, (Vais- seaux sanguins) 6, 3 (1983); Japanese Heart Journal, 19, 112 (1977); et Chiryou (Traitement), 60, 1 (1978)]. Les auteurs de la présente invention ont en outre découvert que ces com- -posés stimulent le métabolisme cérébral en augmentant l'ab- sorption du glucose par le cerveau, et qu'ils sont efficaces dans le traitement de divers modèles d'hypoxie. On peut préparer les composés de la présente invention, à savoir le nitrate de N-(2-hydroxyéthyl)nicotinamide et ses sels, par exemple de la façon suivante: -3 -2605222 -3- On ajoute à l'ester nitrique de 2-aminoéthanol un cata- lyseur tel qu'hydrogénocarbonate de sodium, pyrimidine, ou un catalyseur basique tel que carbonate de potassium, triéthyl- amine, etc. On préfère utiliser un catalyseur, bien que la réaction puisse se dérouler en l'absence de celui-ci. On ajoute de l'eau ou un solvant organique, tel que chloroforme, pyridine, tétrachlorure de carbone, benzène, dichlorométhane, toluène, triéthylamine, etc., au mélange réactionnel, que l'on refroidit ensuite. Sous agitation, on ajoute par por- tions une quantité équimolaire ou un excès de chlorure d'acide nicotinique ou de son chlorhydrate ou d'un autre dérivé fonctionnel de l'acide nicotinique, en chauffant ou à la température ambiante, de préférence à une température comprise entre 0 et 5 C, pendant 5 à 90 minutes, encore mieux pendant 10-30 minutes. Après nouvelle agitation et séparation de la phase de solvant d'avec le produit résultant, on extrait à nouveau la phase aqueuse avec le solvant. On lave les phases de solvant réunies et on les sèche, puis on les concentre sous pression réduite. On recristallise dans un solvant organique le résidu formé, pour obtenir le composé recherché, sous forme de cristaux aciculaires incolores. On peut éventuellement transformer ce composé, par une méthode courante, en sels organiques ou inorganiques, tels que chlorhydrate, oxalate, ptoluènesulfonate, maleate, etc. Cet agent thérapeutique pour le traitement de troubles circulatoires cérébraux peut être administré à un sujet humain par des voies appropriées telles que voie orale ou parentérale (injection intramusculaire, sous-cutanée ou intraveineuse et suppositoires). On peut formuler le composé de la présente invention en des formes pharmaceutiques telles que comprimé, granule, poudre, capsule, suspension, composi- tion injectable, suppositoire, etc., par des méthodes cou- rantes dans le domaine de la technologie de la formulation. Par exemple, on peut le formuler en comprimé, granule ou poudre en le mélangeant avec un excipient, un liant, un sol- A 4 - 2605222 vant, etc., par exemple des excipients pharmaceutiques tels que lactose, amidon, mannitol, kaolin, cellulose cristalline, talc, carbonate de calcium, stéarate de magnésium, etc. On peut également formuler le composé en capsule, soit par rem- S plissage d'une capsule dure avec le composé sous forme de granule ou de poudre, soit par remplissage d'une capsule molle avec la forme du composé dissoute dans une huile. Dans le cas de formulation sous forme d'une suspension, on peut mettre le composé en suspension dans une solution aqueuse, conjointement avec de la poudre de gomme arabique ou du sucre blanc, et ajuster ensuite le pH de la suspension. Dans le cas de formulation d'une composition injectable, on peut mélanger le composé avec du mannitol. Les diverses formes pharmaceutiques telles que compri- més, capsules, etc., doivent contenir le présent composé en une quantité appropriée, afin que le composé manifeste son action thérapeutique et prophylactique sur des désordres cir- culatoires cérébraux, sans produire d'effets indésirables. En général, il est approprié que chaque comprimé ou capsule contienne 1-20 mg de cet agent pour le traitement de troubles circulatoires, sous forme de dose unitaire pour l'administra- tion orale, et pour l'administration parentérale, que chaque flacon contienne environ 0,1-12 mg de cet agent, sous forme de dose unitaire. La dose réelle à administrer à un patient, en utilisant la dose unitaire ci-dessus de la préparation, dépend de l'état particulier du patient. Il va sans dire qu'il est nécessaire d'adapter la dose réelle aux besoins du patient. Pour un sujet adulte, la dose journalière appropriée va environ de 1 à 100 mg dans le cas d'administration par voie orale, et environ de 0,1 à 150 mg dans le cas d'injection intraveineuse. On illustre la présente invention plus en détail à l'aide des exemples descriptifs et non limitatifs ci-après. -5 - 2605222 Exemple 1 (Préparation) (a) Comprimé sublingual Composé de la présente invention (forme libre) 5 mg Lactose 19,7 mg Mannitol 25 mg Stéarate de magnésium 0,3 mg mg/comprimé On a bien mélangé les composants ci-dessus, et au moyen d'un pilulier, on les a mis directement sous forme de comprimés ayant un diamètre de 5 mm et un poids de 50 mg. (b) Comprimé (pour administration orale) Composé de la présente invention (chlorhydrate) 10 mg Lactose 44,5 mg Amidon de mals 20 mg Cellulose cristalline 25 mg Stéarate de magnésium 0,5 mg mg/comprimé On a bien mélangé les composants ci-dessous, et au moyen d'un pilulier, on les a mis directement sous forme de comprimés ayant un diamètre de 7 mm et un poids de mg. (c) Gélule Composé de la présente invention (forme libre) 20 mg Lactose 176 mg Stéarate de magnésium 4 mg mg/gélule On a bien mélangé les composants ci-dessus, et au moyen d'une encapsuleuse, on les a introduits dans des gélules n 3, de manière que chaque gélule contienne 200 mg du mélange et ait un poids total de 250 mg. 6 2Z605222 (d) Granule (en gélule) Composé de la présente invention (forme libre) 10 mg Lactose 710 mg Colle d'amidon de mals 280 mg 1000 mg/conditionnement On a bien mélangé et malaxé les composants ci-dessus. Au moyen d'un granulateur, on a mis le mélange sous forme de granules de 1 mm de diamètre. On a introduit ces granules dans des capsules n 3, de manière que chaque gélule contienne 200 mg de granules et ait un poids total de 250 mg. (e) Composition injectable Composé de la présente invention (forme libre) 5 mg Mannitol 50 mg mg/flacon On a bien mélangé les composants ci-dessus, et on les a introduits dans un flacon approprié, puis on les a lyo- philisés en utilisant une méthode courante. On a ensuite scellé le flacon pour préparer une composition injec- table. Le produit est destiné à être dissous dans 1 ml d'eau distillée au moment de l'injection. Exemple 2 (Toxicité aiguë) On a déterminé sur des rats SD (Sprague-Dawley) mâles et femelles, âgés de 4 semaines, la toxicité aiguë du composé de la présente invention administré par voie orale et par voie intraveineuse. Les résultats ont montré que la LD50 orale est comprise entre 1 200 mg/kg et 1 300 mg/kg, chez les mâles et chez les femelles, et que la LD50 intraveineuse est comprise entre 800 mg/kg et 1 000 mg/kg, chez les mâles et chez les femelles. -7 -2605222 Exemple 3 (Effets sur l'hypoxie ou la mort provoquée par KCN) (1) Animaux et médicaments utilisés Dans cette étude, on a utilisé des rats F344/NS1c (Fischer) mâles pesant 178-210 g (âgés de 9 semaines). On a mis le médicament d'essai en suspension dans une solution de gomme arabique à 2%, et on l'a administré aux animaux par voie orale, 30 minutes avant l'administration de gaz ou l'injection intraveineuse de KCN. Le groupe témoin a reçu de la même façon par voie orale 2,0 ml/kg de la solution de gomme arabique à 2%. (2) Effet sur l'hypoxie à pression normale On a placé les rats dans une cage sous la pression atmosphérique normale, et on a introduit un mélange gazeux composé de 97% de N2 et 3% de 02, à un débit de 2 litres/min. On a noté comme le temps de survie (secondes) le temps entre le début de l'introduction du gaz et l'arrêt de la respira- tion. Les résultats sont donnés dans le tableau 1. Tableau 1 Médicament d'essai Dose (mg/kg) admi- Temps de survie (s) nistrée oralement (moyenne + E.T.) Témoin - 311,8 + 10,3 Composé de la 3 357,4 + 19,4 présente invention 10 446,5 + 31,2*** 30 411,8 + 28,6** 1 318,3 + 9,6 Nicardipine 3 293,7 + 15,3 283,8 + 14,4 348,3 + 18,1 Vinpocétine 30 367,8 + 18,6* 371,4 + 23,8 *) P - 8 - témoin). Trente minutes après l'administration du médicament d'essai, on a administré aux animaux 3 mg/kg de KCN dans la veine caudale, et on a noté le taux de survie. On a testé la signification du taux de survie par le test 2. Les résultats sont donnés dans le tableau 2. Tableau 2 Médicament d'essai Dose (mg/kg) admi- Taux de survie (%) nistrée oralement Témoin - 3/20 (15,0) Composé de la 3 2/10 (20,0) présente invention 10 3/10 (30,0) 8/10** (80,0) 1 0/10 (0,0) Nicardipine 3 0/10 (0,0) 3/10 (30,0) 3/10 (30,0) Vinpocétine 30 5/10 (50,0) 7/10** (70,0 **) P Exemple 4 (Effets sur l'absorption de glucose par le cerveau) (1) Animaux et médicaments utilisés On a utilisé des rats F344/NSlc (Fischer) mâles âgés de 9-11 semaines. On les a soumis à l'expérience après environ 18 heures de jeûne. On a mis le médicament d'essai en suspension dans une solution de gomme arabique à 2%, et on l'a administré par voie orale à chaque groupe, à raison de 2 ml/kg. Le groupe témoin a reçu de la même façon la solution de gomme arabique -à 2% par voie orale. (2) Accroissement de l'absorption de glucose par le cerveau chez des rats normaux On a réparti les animaux en quatre groupes, à raison de animaux par groupe. On a administré par voie orale le composé de la présente invention au groupe d'essai, en trois -9 -2605222 doses, à savoir 3, 10 et 30 mg/kg. Le groupe témoin a reçu la solution de gomme arabique à 2%. Trente minutes après l'admi- nistration, on a sacrifié les rats par irradiation de micro- ondes (applicateur micro-ondes Toshiba TMW-6402, 5 kW, 1,4 s) sur la tête. On a ouvert immédiatement le crâne pour exciser le cerveau et on a prélevé le cortex cérébral. On a préparé des échantillons pour le dosage quantitatif selon le méthode de Forbergrova et coll. [J. Neurochem., 19 (1972)]. A savoir, on a ajouté à un échantillon pesé de cerveau une solution glacée de HC104 0,3 N / EDTA 1 mM (2 ml/200 mg de tissu [poids humide]). On a homogénéisé le mélange et on l'a cen- trifugé (26 000 g, 10 minutes à 4 C), pour séparer le surna- geant que l'on a conservé. On a homogénéisé le dépôt obtenu et on l'a centrifugé à nouveau dans les mêmes conditions, puis on a joint le surnageant à celui obtenu dans la première centrifugation. On a neutralisé les surnageants réunis avec un mélange glacé de KOH 1,5 N, imidazole 0,4 M et KC1 0,3 N, et après centrifugation, on a utilisé le surnageant résultant comme échantillon pour le dosage quantitatif du glucose. On a dosé les échantillons au moyen d'un fluorophotomètre (lon- gueur d'onde d'excitation: 340 nm, longueur d'onde de fluo- rescence: 455 nm; Aminco Spectrophotofluorometer, fourni par American Institute Company), en suivant la formation et la décomposition du NADH ou du NADPH. Les résultats sont donnés dans le tableau 3. Tableau 3 Médicament Dose (mg/kg) N Taux de glucose dans le cerveau administré (p.o. ) (pmol/g de cerveau) (moyenne + E.T.) Témoin - 5 0,93 + 0,06 Composé de la 3 5 1,45 + 0,07*** la présente 10 5 1,53 + 0,10*** invention 30 5 1,80 + 0,08*** ***) P - 10 - 2605222 (3) Accroissement de l'absorption de glucose par le cerveau chez des rats dans des conditions hypoxiques On a administré par voie orale aux animaux, soit mg/kg du composé de la présente invention, soit une solu- tion de gomme arabique à 2% (témoin). Trente minutes après l'administration du médicament d'essai, on a placé les rats dans une cage et on y a introduit un mélange gazeux composé de 97% de N2 et 3% de 02f à un débit de 2 litres/min. pendant minutes, pour soumettre les animaux à une condition hypo- xique. Immédiatement après la période hypoxique, on a sacri- fié les rats par irradiation de micro-ondes. On a sacrifié de la même façcon les rats normaux du groupe témoin, 30 minutes après administration de la solution témoin. On a prélevé le cortex cérébral et on a préparé des échantillons pour le dosage comme décrit en (1), puis on a déterminé le taux de glucose. Les résultats sont donnés dans le tableau 4. Tableau 4 Médicament administré Dose N Taux de glucose dans (mg/kg, p.o.) le cerveau (Pmol/g de cerveau) (moyenne + E.T.) Condition Témoin - 8 0,92 + 0,05 hypoxique Composé de la présente 30 8 1,12 + 0,04** invention normale Témoin - 8 1,30 + 0,03*** **) P symptômes subjectifs et mentaux (léger rétablissement - réta- 11 - 2605222 blissement notable) et les résultats sont donnés dans le tableau 5. Tableau 5 Nombre total Nombre de cas dans lesquels le traitement a des cas été efficace (Taux d'efficacité) 49 33 (67,3%) Comme seule réaction indésirable observée, on a constaté dans deux cas une légère céphalée. Les résultats donnés plus haut montrent que le composé de la présente invention prolonge la durée de survie et aug- mente l'absorption de glucose par le cerveau chez le rat dans des conditions hypoxiques. Il se révèle donc utilisable en tant qu'agent thérapeutique pour le traitement de troubles associés à l'ischémie cérébrale. - 12 - 2605222 REVENDICATIONS 1. Agent thérapeutique pour le traitement de troubles associés à l'ischémie cérébrale, caractérisé en ce qu'il com- prend en tant que composant actif le nitrate de N-(2-hydroxy- éthyl)nicotinamide ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en une quantité efficace pour dilater les vaisseaux anguins cérébraux, conjointement avec un véhicule pharmaceu- tiquement acceptable. 2. Agent selon la revendication 1, lequel est sous la forme d'un comprimé contenant 0,1 - 20 mg dudit composant actif. 3. Agent selon la revendication 1, lequel est sous la forme d'une gélule contenant 0,1 mg dudit composant actif. 4. Agent selon la revendication 1, lequel est sous la forme d'une composition injectable contenant 1 - 12 mg dudit composant actif.