FR 2606422 A1 19880513 FR 8704625 A 19870402 La présente invention concerne une protéine appelée cag,'env, qui comprend la protéine de la particule cen- trale (gag, et la protéine de l'enveloppe (env) du virus HTLV-III, l'agent étiologique du syndrome d'immuno- déficience acquise (SIDA). Cette protéine est produite par des méthodes de synthèse organique ou par l'emploi de techniques de recombinaison d'ADN dans lesquelles les séquences de gènes nécessaires sont insérées au moyen d'un vecteur d'ADN approprié dans un organisme hôte unicellulaire compatible. La présente invention concerne en outre l'isole- ment et la purification de la protéine gag/env et des méthodes de détection d'anticorps ou de virus de SIDA dans les sérums humains ou d'autres liquides biologiques et de protection immunoprophylactique des êtres humains contre le SIDA, basées sur l'emploi de la protéine. En 1985, près de 8000 cas de SIDA ont été diagnostiqués et leur nombre a continué à croître de façon constante. On s'attend à ce que 15.000 autres cas soient diagnostiqués en 1986 et il est possible que le nombre de cas double encore en 1987 [New York Times Magazine, 2 mars, 1986, p. 42]. Le SIDA a été caractérisé.par la survenue d'infections opportunistes sévères secondaires à un effet sur le système immuni- taire de l'organisme [Gottlieb et al., New Engl.J.Med. 305:1425 (1981)]..,La maladie a été détectée chez des homosexuels de sexe masculin, chez des patients rece- vant des produits-dérivant du sang, des toxicomanes utilisant des injections intraveineuses et des individus originaires de Haiti et d'Afrique Centrale [Piot et ali., Lancet 11:65 (1984)]. L'agent responsable a été supposé être d'origine virale parce que le tableau épidémiologique du SIDA était compatible avec celui d'une maladie transmissible. Au moins trois rétrovirus ont été isolés de lymphocytes T cultivés provenant de plusieurs patients atteints de SIDA ou de leucocytes de personnes à risque pour la maladie. Un nouveau rétrovirus humain appelé LAV virus ("lymphadenopathy-associated virus") a été décou- vert et ses propriétés étaient compatibles avec un rôle étiologique dans le SIDA. Ce virus a été isolé d'un pa- tient atteint de lymphadenopathie, d'adénopatie, d'o son nom [Montagnier et al., in Human T-cell Leukemia/Lymphoma Virus, R.C. Gallo et al. eds., Cold Spring Harbor Laboratory, pp. 363-370 (1984)]. D'autres rétrovirus humains, en particulier deux sous-groupes du HTLV virus (human T-cell leukemia/ lymphoma/lymphotropic virus"), types I [Poiesz et a'l., Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 77:7415 (1980)] et III [Popovic et al., Science 224:497 (1984)] ont également été isolés. Encore un autre virus, appelé ARV virus ("AIDS-associated retrovirus") a été proposé comme agent causal [Levy et ai., Science 225:840 (1984)]. Les rétrovirus HTLV-III et ARV présentent tous deux des propriétés biologiques et séro-épidémiologiques semblables à celles du LAV [Levy et al., supra, Popovic et al., supra]. Ainsi, au moins trois rétrovirus ont été considérés comme agent5 étiologiquespossiblesdu SIDA: LAV, ARV et HTLV-III. Pour la présente demande, ces virus seront désignés collectivement comme vrus du SIDA. Etant donné que HTLV-III est le virus prototype de ce groupe, il sera entendu que le terme "déterminant antigénique corres- pondant aux séquences d'une protéine d'un HTLV-III virus" se rapporte en réalité aux séquences des protéines de l'un quelconque des virus du SIDA. Une raison de la difficulté de déterminer le véri- table agent étiologique du SIDA était la réactivité croisée de divers antigènes rétroviraux avec des échan- tillons de sérum de patients atteints du SIDA. Par exemple, il a été montré que des échantillons de sérum de patients atteints du SIDA réagissent avec des anti- gènes à la fois de HTLV-I [Essex et ai., Science 220: 859 (1983)] et HTLVIII [Sarngadharan et ai., Science 224:506 (1984)]. Les produits des jiie. s de l'enveloppe de HTLV avaient des antigénicités qui présentaient une réactivité croisée avec les anticorps dans les sérums de patients adu1tes atteints de leucémie à lymphocytes T [Kiyokawa et al., Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A. 81:6202 (1984)]. Les leucémies à lymphocytes T de l'adulte (ATL) diffèrent du syndrome d'immuno-déficience acquise (SIDA) en ce que HTLV-I provoque des néoplasies à lymphocytes T qui sont caractérisées par la crois- sance incontrôlée des lymphocytes T. Dans le SIDA, au lieu de croissance cellulaire il y a mort de cellules. En fait, cette caractéristique cytopathique du HTLV-III s'est révélée critique dans la détermination finale de l'origine rétrovirale spécifique de la maladie. L'agent étiologique du SIDA a été isolé par l'emploi de lignées de lymphocytes T néoplasiques humains (HT) immortalisées infectées par le rétrovirus cytopathique caractéristique du SIDA, isolé à partir de patients atteints du SIDA. Les tests séro-épidémiologiques utilisant ce virus ont montré une corrélation complète entre le SIDA et la présence d'anticorps dirigés contre les antigènes viraux du HTLV-III [Montagnier et al., supra; Sarngadharan et al., supra; Schupbach et al., Science 224:503 (1984)]. De plus, on a trouvé que près de 85% de patients présentant un syndrome de lymphadéno- pathie et une proportion significative d'hommes homo- sexuels asymptomatiques dans des régions o le SIDA est endémique sont porteurs d'anticorps circulants anti-HTLV-III. Dans leur ensemble, ces données mettent en cause le HTLV-III comme principal agent étiolo- gique du SIDA. Avant que l'on ait réussi à cultiver le virus du SIDA en utilisant la liqnée cellulaire H-9, la protéine du SIDA env du virus du SIDA n'avait été ni isolée, ni caractérisée ni synthétisée. Cela était dû en grande partie au fait que le virus est cytopathique et l'isole- ment du virus n'était donc pas possible [Popovic et al., supra]. Mais après la découverte d'une lignée de lymphocytes T humains résistante aux effets cytopathiques du virus, le clonage moléculaire de l'ADN proviral du SIDA a pu être réalisé. I1 existe un très grand besoin de méthodes sensibles et rapides de diagnostic du SIDA dans le sang humain et d'autres liquides biologiques et d'une méthode de prévention de la maladie par la vaccination. Les ana- lyses et tests existants sont pratiquement tous grevés d'erreurs. En fait, le "Center for Disease Control" (CDC) a indiqué que les tests actuellement disponibles doivent être utilisés uniquement pour les unités de dépistage du sang en vue de la détection de la présence d'anticorps anti-HTLV-III. Le CDC est même allé plus loin en déclarant que les tests ELISA ("enzyme-linked immunosorbent assay") actuellement disponibles ne doivent être utilisés ni dans le dépistage général de populations à haut risque ni comme test diagnostique pour le SIDA [Federal Register 50(48):9909, 12 mars, 1985]. Les erreurs dans les tests utilisés précédemment pour le SIDA ont été attribuées au fait de ne pas avoir utilisé une protéine antigénique spécifique de l'agent étiologique du SIDA. Les protéines utilisées antérieure- ment provenaient d'un lysat viral. Etant donné que le lysat est préparé à partir de cellules humaines infectées par le virus, c'est-à-dire les cellules utilisées pour cultiver le virus, le lysa! doit contenir des protéines humaines aussi bien que des protéines virales. Ainsi, la préparation d'un antigène pur de protéine virale est très difficile. Les antigènes utilisés jusqu'à main- tenant ont donc donné des résultats faussement positifs et faussement négatifs [Budiansky, Nature 312:583 (1984j]. Les erreurs provoquées par l'emploi de ces protéines' peptides de lysat ont pu être évitées en utilisant une composition pour la liaison des anticorps anti-SIDA qui est pratiquement exempte de protéines nonspécifiques du SIDA. Des compositionide protéines d'enveloppe et de particule centrale de SIDA pratiquement pures peuvent être utilisées comme antigènes. Les protéines de l'enveloppe et de la particule centrale de HTLV-III ont toutes deux conservé les déter- minants antigéniques qui permettraient leur emploi pour dépister, diagnostiquer les virus du SIDA et/ou fournir une protection par vaccination contre les virus du SIDA. Et les individus qui ont été exposés au HTLV-III et qui peuvent présenter ainsi le risque de contracter le SIDA ou qui sont atteints de la maladie peuvent être identifiés par la présence dans leur sang d'anticorps dirigés contre la protéine de la particule centrale du virus (gag) et/ou la protéine de l'enveloppe virale (env) [Sarngadharan et al., Science 224:506 (1984)]. Il est également important de pouvoir disposer d'un test fiable et sensible pour détecter dans le sang ou d'autres liquides biologiques la présence du virus du SIDA lui-même ou de particules de celui-ci. Groopman et al. [Blood 66:742 (1985)] ont rapporté que des anti- corps anti-virus du SIDA ne sont pas toujours présents dans le sang de victimes du SIDA. Groopman et al. ont examiné un patient atteint du SIDA et un autre présen- tant des troubles apparentés (ARC) chez lesquels on O10 a prélevé des échantillons de sang qui étaient négatifs quant à la présence d'anticorps mais à partir desquels HTL'-III a pu être cultivé. La technique de recombinaison d'ADN a récemment été appliquée au problème du SIDA. Le clonage moléculaire et l'expression du gène env du HTLV-III ont été décrits [Crowl et al., Cell 41:979 (1985); Chang et ai., Bio- technology 3:905 (1985)]. Dobwenko et al. [Proc.Natl. Acad.Sci.U.S.A. 82:7748 (1985)] ont exprimé la protéine de la particule centrale du HTLV-III dans E. coli. Grâce à l'emploi de telles techniques de l'ingénierie génétique, on dispose maintenant d'antigènes viraux purifiés qui sont sans danger, fiables et moins onéreux à obtenir. Mais il serait encore plus avantageux de pouvoir disposer d'une protéine virale ayant des déterminants antigéniques qui sont présents à la fois sur les protéines env et gag. Une telle protéine serait un moyen exceptionnelle- ment puissant pour la détection des anticorps du SIDA et elle pourrait servir de base pour divers tests diagnostiques sensibles et pour un vaccin éventuel contre le virus du SIDA. 260642Z C'est pourquoi, une nouvelle protéine, désignée gag/env, ayant une séquence d'acides aminés correspon- dant à au moins un déterminant antigénique d'une pro- téinec ag de HTLV-III et d'une protéine env de HTLV- III a été fournie, qui permet de dépister, de diagnos- tiquer le virus du SIDA et/ou de protéger par vaccina- tion contre le virus du SIDA. La nouvelle protéine gag/ env peut être représentée par tout ou partie de la séquence d'acides aminés montrée sur la figure 2 ou son équivalent fonctionnel. L'invention fournit en outre les séquences d'AD\ nécessaires codant pour le polypeptide gag/env de la présente invention, des vecteurs recombinants conte- nant ces séquences d'ADN et des organismes unicellu- laires utilesdans l'obtention par la technologie de recombinaison d'ADN de la protéine gag/env de la pré- sente invention ainsi que des procédés de fabrication de telles séquences d'ADN, des vecteurs recombinants et des organismes unicellulaires. De plus des méthodes sont décrites pour l'expression et l'isolement de la protéine gag/env de la présente invention. La protéine gag/env ainsi obtenue peut être utilisée par les pro- cédés de cette invention pour un certain nombre de processus immunologiques. Grâce à l'emploi d'un réactif diagnostique, la protéine gag/env peut être utilisée pour détecter la présence d'anticorps dirigés contre les virus du SIDA dans les sérums humains ou dans d'autres liquides bio- logiques tels que larmes, sperme, sécrétions vaginales et salive. Du fait que la protéine peut être préparée sous une forme homogène, les problèmes de réactions non-spécifiques qui ont gêné dans le passé l'emploi' de réactifs diagnostiques basés sur des isolats de pro- téines virales de HTLV-III relativement brutes sont éliminés. Utilisée comme immunogène, la protéine gag/env peut être employée pour produire des anticorps chez les animaux contre les déterminants antigéniques qui y sont contenus. Ces anticorps peuvent à leur tour être utilisés, en liaison avec la protéine gag/env qui a été marquée de façon appropriée, dans un test de radio-immunodosage "RIA) ou dans un test ELISA ("enzyme-linked immunosorbent assag") pour détecter la présence de virus HTLV-III ou ses particules dans le sérum humain ou dans d'autres li- quides biologiques tels que larmes, sperme, sécrétions vaginales et salive. Les particules (ou fragments, qui pourraient être détectées par ces méthodes comprennent évidemment des morceaux de protéines de la particule cen- trale et de l'enveloppe virale. Par incorporation dans une composition vaccinale appropriée, la protéine gag/env de la présente invention peut en outre être utilisée pour combattre la propaga- tion du SIDA grâce à une immunisation prophylactique. Il y a d'importants avantages à utiliser la pro- téine gag/env de l'invention en comparaison de l'emploi séparé des protéines gag et env. La protéine env est très insoluble, ce qui rend la purification difficile. Z606422 En combinant les deux protéines, on obtient un produit qui est plus facilement solubilisé et en conséquence plus facilement purifié. Une production et une purification sur une grande échelle sont également simplifiées, bien entendu, étant donné qu'un seul composé doit être isolé. Finalement, la protéine gag/env rend possible l'élabora- tion d'une trousse de diagnostic qui fonctionne mieux dans une méthode sandwich que ne l'auraient fait les pro- téines gag et env séparément. Bien que la protéine gag/env ait été obtenue à 'partir de HTLV-III, il faut souligner que les méthodes diagnosti- ques et immunoprophylactiques décrites ici sont applicables à la détection de n'importe lequel des autres agents viraux qui ont été incriminés dans le SIDA ou associés avec le SIDA tels que le LAV virus (lymphadenopathy-asso- ciated virus) et l'ARV virus (AIDS-associated retrovirus. Cela est ainsi parce que Crowl et al. (Cell 41:979 (1985.] ont montré que les protéines de ces agents viraux sont immunologiquement apparentées à celles du HTLV-III et possèdent des segments de séquences d'acides aminés en commun. La présente invention peut être plus facilement com- prise en se fondant sur la description détaillée suivante lorsqu'elle est considérée en liaison avec les figures suivantes, o La FIG. 1 est une représentation schématique des plasmides d'expression qui commandelasynthèse des pro- téines gag (croquis du haut) et gag/env (croquis du bas). Les sites des endonucléases de restriction délimitant les gènes gag et env sont montrés et la zone hachurée transversalement indique le segment env du gène de fusion gag/env. Dans les deux plasmides la transcription est sous le contrôle du promoteur. PL et les signaux du début de la translation sont donnés par le plasmide pEV-vrf2; La FIG. 2 montre la séquence des acides nucléiques du gène de fusion gag/env (les numéros des positions choisies et les sites des endonucléases de restriction étant indiqués) et la séquence des acides aminés de la protéine gag/env qui en découle: La FIG. 3 montre les résultats de l'analyse par électrophorèse dans SDS-gel de polyacrylamide de la pro- téine gag/env produite dans E. coli. Le panneau 1 montre les protéines de cellles totales colorées au bleu de Coomassie, provenant de cellules hebergeant le plasmide recombinant portant le gène de fusion gag/env et de cel- lules témoin$.Les Panneaux 2 et 3 représentent les résul- tats de l'analyse par transfert "Westernt'de la protéine de cellules totalestestée soit avec des anticorps de lapin dirigés contre le peptide env 500-511 (panneau 2) soit des anticorps de mouton dirigés contre gag p24 (panneau 3). Les complexes immuns dans les panneaux 2 et 3 ont été visualisés par un second anticorps marqué à la per- oxydase de raifort. Dans les trois panneauy,g/e représente la protéine gag/env et c représente un échantillon témoin négatif utilisé pour montrer la spécificité. Les mobilités des standards de poids moléculaire (en kD) sont montrées et la position de la bande de la protéine gag/env dans le gel est indiquée par les flèches. Les méthodes de cette invention comportent un cer- tain nombre d'étapes qui, en succession logique, com- prennent (1) l'identification et l'isolement des gènes codant pour les protéines gag et env ou leurs fragments, (2) l'insertion de ces gènes ou fragments de gènes dans un vecteur de clonage approprié pour obtenir un vecteur recombinant contenant un gène de fusion gag/env, (3) le transfert du vecteur de clonage recombinant dans un organisme hôte unicellulaire compatible, (4) la sélection et la croissance d'hôtes modifiés de façon appropriée qui peu\ent répliquer et exprimer les séquences de gènes in- sérées, (5) l'identification et la purification du produit des gènes, (6) l'utilisation du produit des gènes pour détecter les anticorps dirigés contre HTLV-III ou des virus apparentés ou comme un immunogène pour produire des anticorps qui peuvent à leur tour être utilisés pour détecter les virus eux-mêmes ou leurs fragments dans les sérums humains ou dans d'autres liquides biologiques, et (7] l'utilisation de la protéine gag/env dans une com- position vaccinale en vue d'une protection immunopro- phylactique possible contre le SIDA. Des virions HTLV-III isolés pourraient être ut;]seés en tant que source pour les gènes gag et env de l'inven- tion. Par exemple, Dowbenko et al. [Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A. 82:7748 (1985)] ont utilisé un fragment de 2,2 kilobase (kb) de la région 5' du génome viral en tant que source du gène gag. Ou encore, l'ADN du génome pro- venant de cellules dans lesquelles le génome proviral de HTLV-III a été intégré peut être la source du gène [Shaw et al., Science 226:1165 (1984)] Crowl et al. [Cell 41:979 '1985)] ont utilisé un tel ADN de génome de cellules H9 infectées avec HTLV-III pour obtenir le gène env. D'autres possibilités d'isolement des gènes gag et env comprennent, sans que ce soit limitatif,la synthèse chimique des séquences de gènes et la préparation d'ADN qui est complémentaire de l'ARN messager produit à partir des gènes. Indépendamment de sa source, l'ADN codant pour les protéines gag et env peut être cloné dans des bactéries et les clones contenant les gènes gag ou env peuvent être identifiés par des méthodes qui sont bien connues dans la profession. Par exemple des sondes d'ADN complémentaire (AD\c) ont pu être préparées pour les gènes et utilisées pour détecter les clones portant les gènes grâce à des techniques d'hybridation. Dans une réalisation préférée de la présente inven- tion, une banque de gènes construite par digestion XbaI de l'ADN des cellules H9 infectées par HTLV-III décrites plus haut a été clonée en utilisant le vecteur de phage A, et les clones portant le génome proviral HTLV-III ont été identifiés par hybridation avec l'ADNc de HTLV-III. Un tel clone a été appelé XHXB-3 et un fragment de 1700 paires de bases codant pour la plus grande partie de la protéine précurseur gag a été isolé par digestion par ClaI/HinclI de l'ADN de ce clone. La source immédiate de séquences de gène env uti- lisée dans la réalisation préférée de l'invention a été un dérivé du plasmide pEV3/env 44-640 qui avait des co- donsenv correspondant aux résidus 514-524 enlevés. Cette délétion résulte de façon surprenante en une augmenta- tion significative de l'expression du gène env. Des séquences env contenant les codons 467 à 640 ont été obtenues par le clivage BgIII/HindIII du plasmide pEV3/env 44-640. Une fois identifiés et isolés, les gènes gag et en\ de HTLV-III sont insérés dans un vecteur d'expression approprié qui contient les éléments nécessaires pour la transcription et la translation des séquences de gènes insérées. Des vecteurs de clonage utiles peuvent con- sister en segments de séquences d'ADN chromosomiques, non-chromosomiques et synthétiques, tels que divers plasmides bactériens, ADN de phages, des combinaisons de plasmides et d'ADN de phages, tels que des plasmides qui ont été modifiés pour employer un ADN de phage ou d'autres séquences de contrôle d'expression, ou des plasmides de levures. Des vecteurs de clonage spécifi- ques qui pourraient être utilisés mais qui ne se limitent pas aux plasmides pEV-vrf (pEV-vrfl, -2 et -3), SV40, adénovirus, levure, lambda gt-WES-lambda B, Charon 4A et 28, lambda-gt-l-lambda B, vecteurs dérivés de M13 tels que pUC8, 9, 18 et 19, pBR313, 322 et 325, pAC105, pVA51, pACY177, pKH47, pACYC184, pUB110, pMB9, ColE1, pSC101, pm121, RSF2124, pCR1 ou RP4. L'insertion des gènes gag et env dans un vecteur de clonage est facilement réalisée lorsque à la fois les gènes et le vecteur de clonage voulu ont été coupés avec la ou les mêmes enzymes de restriction étant donné qu'ainli sont produites des terminaisons d'ADN complé- mentaire. Si cela ne peut pas se faire, il peut être nécessaire de modifier les extrémités coupées produites en digérant à nouveau l'ADN monocaténaire pour produire des extrémités franches ou en obtenant le même résultat en remplissant les extrémités à simples brins avec une ADN polymérase appropriée. De cette façon, une liaison des extrémités cohésives avec une enzyme telle que la TA ligase peut être effectuée. Ou encore, tout site voulu peut être produit en liant des séquences de nucléo- tides (linkers) aux extrémités del'ADN. De tels linkers peuvent comprendre des séquences d'oligonucléotides qui codent pour des séquences de reconnaissance de sites de restriction. Le vecteur clivé et les fragments de gènes gag et env peuvent également être modifiés par queutage homopolymère, comme décrit par Morrow [Methods in Enzvmo- logy 68:3 (1979)]. Une fois que le gène gag ou env ou un fragment de gène a été inséré dans un vecteur de clonage approprié, l'autre gène ou fragment de gène peut être introduit dans le vecteur par un clivage judicieux par une endonucléase de restriction pour placer le second gène ou fragment de gène en juxtaposition, créant ainsi un gène de fusion. Bien entendu si les gènes gag et env ont été synthétisés chimiquement, le gène de fusion pourrait être directement produit et introduit en tant que fragment d'ADN unique dans le vecteur de clonage. Dans la réalisation préférée de la présente inven- tion, le fragment de digestion ClaI/HincII contenant le gène gag de XHXB3 décrit plus haut a été lié dans le plasmide pEV-vrf2 qui avait été clivé avec ClaI et PuvII pour produire un plasmide d'expression recombinant pEV2/gag 15-512 (Fig.1, croquis du haut) qui a contrôlé la synthèse d'une protéine de 56 Kd comprenant les résidus gag 15-512. Les séquences gag en aval d'un site BgIII près du résidu 437 ont ensuite été remplacés par des sé- quences env dans un fragment BgIII/HindIII du dérivé de plasmide pEV3/env 44-640 (ayant les résidus 514-524 en- levés, décrit plus haut pour produire le plasmide pEV2 gag 15-436/env 467640 A 514-524 portant le gène de fusion gag/en (Fig. 1, croquis du bas). Les détails complets de cette construction sont donnés plus loin dans le chapitreintitulé "Exemple", en parti- culier dans les sous-chapitres B à E. La séquence des acides nucléiques du gène gag/env de la réalisation préfé- rée [déterminée par la méthode de clivage chimique de Maxam et al., Methods in Enzymology 65:499 (1980)] et la séquence d'acides aminés de la protéine gag/env qu'elle permet de prévoir sont montrées sur la Fig. 2. De nombreux vecteurs de clonage qui peuvent être utilisés dans cette invention contiennent une activité de marqueur ou plus qui peuvent être utilisées pour la sélection cbstransformants désirés, tels que résistance à l'ampicilline et à la tétracycline dans pBR322, résis- tance à l'ampicilline et activité 8-galactosidase dans pUC8 et résistance à l'ampicilline dans pEV-vrf2. La sélection des cellules hôtes dans lesquelles de tels vecteurs ont été insérés est grandement simplifiée lorsque les cellules hôtes sont dénuées par ailleurs des activités dans lesquelles interviennent les vecteurs. Il doit être entendu que les séquences de nucléotides des fragments de gènes gag et env insérés en un site choisi dans un vecteur de clonage peuvent comprendre des nucléo- tides qui ne font pas partie des gènes de structure réels. Ou encore, les fragments de gènes peuvent contenir seulement une partie des gènes complets. Tout ce qu'il faut est que les fragments de gènes insérés dans le vecteur de clonage soient capables de contrôler la production dans un organisme hôte approprié d'un polypeptide ou d'une protéine ayant au moins un déterminant antigénique corres- pondant aux séquences des protéines gag et env. Le choix d'un organisme hôte approprié est influencé par un certain nombre de facteurs connus dans la pro- fession. Ces facteurs comprennent, par exemple, la compa- tibilité avec le vecteur choisi, la toxicité des protéines codées par le plasmide hybride, la facilité de récupéra- tion de la protéine voulue, les caractéristiques d'expres- sion, la sécurité biologique et le coût. Un équilibre de ces facteurs doit être établi et il doit être entendu que les hôtes ne seront pas tous aussi efficaces quant à l'expression pour une molécule.d'ADN de recombinaison particulière. Les organismes hôtes unicellulaires appropriés qui peuvent être utilisés dans cette invention comprennent, sans que ce soit limitatif, des cellules de végétaux, de mammifères ou de levures et des bactéries telles que Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus stearothermo- philus et Actinomyces. Escherichia coli, souche MC1061, qui a été décrite par Casadaban et al. [J.MoLBiol. 138: 179 (1980)1], peut être utilisée comme peut être utilisée toute autre souche de E. coli K-12 contenant le plasmide pRK248cIts. Le plasmide pRK248cIts pour l'emploi dans d'autres souches de E. coli K-12 peut s'obtenir librement à l'"American Type Culture Collection" (ATCC) et son no de dépôt est 33766. E. coli souche MC1061 a également été déposé à l'ATCC (n de dépôt 53338) et il peut égale- ment s'obtenir librement sur demande. Le transfert du vecteur de clonage recombinant dans la cellule hôte peut s'effectuer de différentes façons. Suivant le système vecteur/cellule hôte particulier choisi, ce transfert peut s'effectuer par transformation,trans- duction ou transfection. Une fois qu'une telle cellule hôte modifiée est obtenue, la cellule peut être cultivée et le produit d'expression de la protéine peut être isolé de la culture. Telle qu'elle est produite dans E. coli, la protéine gag/env se limite largement aux corps d'inclusion cyto- plasmiques (agrégats protéiques insolubles) de la bactérie, fait qui facilite grandement la purification de la protéine. Pour isoler le produit protéique gag/env de cette inven- tion, les cellules bactériennes sont de préférence désinté- grées ou lysées et la protéine insoluble est récupérée par centrifugation. Une purification notable peut ensuite être obtenue par des lavages successifs du précipité avec des concentrations croissantes d'urée.suivis de l'emploi de techniques standard de purification des protéines. Pour de petites quantités de matériel telles que les échantillons prélevés pour l'analyse par électro- phorèse en gel de polyacrylamide, les cellules peuvent être désintégrées en les traitant avec un détergent tel que le dodécylsulfate de sodium (SDS). Il est préférable de récupérer de plus grandes quantités de protéine à l'aide d'ultrasons ou par d'autres moyens de désintégration mécanique, tel que la cellule de pression française. La désintégration des cellules pourrait également être réalisée par des moyens chimiques ou enzymatiques. Etant donné que des cations bivalents sont souvent né- cessaires pour l'intégrité de la membrane cellulaire, un traitement avec des agents de chélation appropriés tels que EDTA ou EGTA pourrait se révéler suffisamment désintégrant pour faciliter la sortie de la protéine hors des cellules. De même, des enzymes tels que le lysozyme ont été utilisées pour obtenir le même résultat. Cette enzyme hydrolyse le squelette de peptidoglycan de la paroi cellulaire. L'application successivement de congéla- tion et de décongélation en liaison avec le traitement avec le lysozyme pourrait également être utilisée. Une fois libérée des cellules, la protéine gag/env peut être identifiée dans le mélange par l'une quelconque des méthodes connues dans la profession. Par exemple, * un dosage radio-immunologique ou un test ELISA ("enzyme- linked immunosorbent assay") pourrait être réalisé en utilisant des anticorps dirigés contre la protéine. De préférence, la protéine est identifiée par électrophorèse SDS-gel de polyacrylamide, par analyse de transfert "Westerniou par une analyse similaire. La protéine gag/env de l'invention peut être con- centrée par précipitation avec des sels tels que le sul- fate de sodium ou d'ammonium, par ultrafiltration ou par l'emploi d'autres méthodes bien connues des per- sonnes expérimentées en la matière. Une purification plus poussée peut être réalisée par des techniques conventionnelles de purification des protéines compre- nant, mais sans que cela soit limitatif, la filtration sur gel, la chromatographie par échange d'ions, l'électrophorèse préparative sur disque en gel ou l'électro- phorèse en rideau ("curtain"), la focalisation isoélectri- que, le fractionnement par un solvant organique à basse température ou la distribution à contre-courant. Du fait que la protéine gag /env contient des déter- minants antigéniques de deux constituants majeurs du virus HTLV-III et du fait que ce virus est le principal agent étiologique du SIDA et est immunologiquement appa- renté aux autres agents viraux qui ont été incriminés dans le SIDA ou l'ARC ou associés au SIDA ou à l'ARC, la protéine est un outil diagnostique puissant pour la détection d'anticorps dirigés contre les virus du SIDA dans le sérum humain. La fusion peut être utilisée à cette fin de différentes façons connues dans la profession. Par exemple, la protéine gag/env pourrait être marquée de multiples façons, la protéine marquée pourrait être ajoutée à un échantillon de sérum humain supposé contenir des anticorps anti-virus du SIDA pour former des complexes protéine de fusion marquée-anti- corps et les complexes ainsi formés pourraient être détectés par des moyens appropriés. Suivant un autre exemple, la protéine pourrait être immobilisée sur un substrat solide, puis mise en contact avec un échan- tillon de sérum humain. Les anticorps anti-virus du SIDA présents dans l'échantillon se lieraient à la protéine immobilisée et les complexes ainsi formés pourraient être détectés par l'emploi d'un réactif tel que la protéine A de Staphylococcus aureus (marquée, par exemple, avec l'iode125) ou-un second anticorps anti-IgG humain (marqué, par exemple, avec un radio- isotope ou avec la peroxydase de raifort ou la lacto- peroxydase) après que les protéines et les anticorps non-complexés aient été éliminés par lavage. De nombreuses variantes apparaîtront au manipulateur ex- périmenté, certaines d'entre elles sont suggérées plus loin. Grâce à l'emploi d'anticorps dirigés contre la pro- téine gag/env, divers tests diagnostiques pour détecter la présence de virus du SIDA ou de leurs particules dans le sérum humain ou dans d'autres liquides biologiques peuvent être élaborés. Ces anticorps peuvent être ob- tenus en injectant àun mammifère ou à un oiseau une quan- tité suffisante d'une préparation vaccinale comprenant la protéine et un excipient pharmaceutique compatible pour provoquer la production d'anticorps dirigés contre la protéine. La quantité appropriée de la protéine qui serait nécessaire serait connue d'une personne expérimen- tée en la matière ou pourrait être déterminée par une expérimentation de routine. Tel qu'il est utilisé en liaison avec cette invention, le terme "excipient phar- maceutique" peut signifier soit les compositions standard qui conviennent pour l'administration à l'homme soit les adjuvants typiques utilisés pour la vaccination des animaux. Les adjuvants appropriés pour la vaccination des animaux comprennent, sans que cela soit limitatif, l'ad- juvant complet ou incomplet de Freund (ne convient pas pour l'emploi pour l'homme ou le bétail), l'adjuvant 65 (contenant de l'huile d'arachide, du monooléate de mannide et du monostéarate d'aluminium) et des gels mi- néraux tels que l'hydroxyde d'aluminium, le phosphate d'aluminium et l'alun; des tensio-actifs tels que l'hexa- décylamine, l'octadécylamine, la lysolécithine, le bromure de diméthyldioctadécylammonium, la N1-N-diocta- décyl-N'-N-bis(2-hydroxyéthyl-propanédiamine), le méthoxv- hexadécylglycérol, et des polyols pluroniques; des poly- anions tels que le pyrane, le sulfate de dextran, le pol, IC, l'acide polyacrylique, le carbopol; des peptides tels que le muramyl dipeptide, la diméthylglycine, la tuftsine; et des émulsions huileuses. La protéine gag'en pourrait également être administrée après incorporation dans des liposomes ou d'autres micro-véhicules ou après conjugaison avec des polysaccharides, d'autres protéines ou d'autres polymères. Spécifiquement, la première vaccination est suivie quelques semaines plus tard d'une ou de plusieurs vacci- nations "de rappel", dont l'effet net est la production de titres élevés d'anticorps dirigés contre la protéine gag/env, qui peut être recueillie de la façon habituelle. Evidemment, des anticorps monoclonaux dirigés contre la protéine pourraient être obtenus par la technologie courante pour arriver au même résultat. Des cellules somatiques ayant la capacité de produire des anticorps, telles que les cellules B, peuvent être fusionnées avec des lignées de cellules de myélome pour produire des cel- lules d'hybridome. Ces cellules peuvent être cultivées indéfiniment in vitro ou en tant que tumeurs ascitiques pour produire de grandes quantités d'anticorps spécifiques. Etant donné que les cellules d'hybridome peuvent être facilement clonées, il est possible de produire rapide- ment de grands nombres de cellules, toutes ces cellules produisant les mêmes molécules d'anticorps spécifiques dirigés contre un déterminant antigénique commun. Cette uniformité exceptionnelle dans la production d'anticorps peut être avantageuse là o les anticorps doivent être utilisés dans des tests diagnostiques spécifiques. Les ganglions lymphatiques et les rates d'animaux sensibilisés par injection d'un antigène sont des sources appropriées de cellules B, bien qu'il soit également pos- sible de prélever ces cellules chez des animaux non sen- sibilisés et de les sensibiliser in vitro après isolement. Les lymphocytes B de souris et de rat sont le plus fré- quemment utilisés dans la production d'hybridomes, mais des cellules de lapins, d'êtres humains, de grenouilles et d'autres animaux pourraient être utilisées également. De nombreuses lignées de cellules de myélome spécia- lisées ont été développées à partir de tumeurs lymphocy- taires pour l'utilisation dans la production d'hybridomes [Kohler and Milstein, European J.Immunol. 6:511 '1976: Shulman et al., Nature 276:269 (1978)]. Parmi les nom- breuses lignées cellulaires produites, P3/X63-Ag 8, P3/NSI/1-Ag 4-1, Sp2/0-Ag14 et S194/5.XXO.BU.1 ont été fréquemment utilisées. La fusion des cellules de rate ou de ganglion lympha- tique produisant des anticorps avec des cellules de myélome pour produire des hybridomes est réalisée habituelle- ment avec un excès de splénocytes ou de lymphocytes par rapport aux cellules de myélome, le rapport pouvant atteindre :1 bien que, spécifiquement, des rapports-moins élevés soient utilisés. La fusion est facilitée par l'emploi d'un agent favorisant la fusion tel que virus Sendai inactivé par les rayons UV ou polyéthylène glycol 'PEG). Gefter et al. [Somatic Cell Genet. 3:231 (1977)] ont rapporté que la combinaison du diméthylsulfoxyde avec le PEG stimule encore la fusion des cellules. Des appa- reils électriques existent également qui peuvent fusionner les cellules avec un degré d'efficacité extrêmement élevé. Une fois que la fusion s'est produite, les cellules d'hvbridome doivent être sélectionnées à partir des souches de cellules parentales non fusionnées. Ce processus de sélec- tion peut se réaliser facilement en cultivant les cellules sur un milieu qui entretient la croissance de l'hybridome mais non des cellules parentales. Les cellules B somatiques utilisées dans la fusion ont des durées de vie limitées en culture et par conséquent elles seront perdues à mesure qu'elles subissent la sénescence et meurent, mais les cellules de myélome parentales, avec des durées de vie indéfinies en culture, doivent être éliminées par des techniques de sélection spéciales. Dans un système utilisé couramment, des cellules de myélome déficientes en hypoxanthine phospho- ribosyl transférase (HPRT) sont employées. Ces cellules sont dépourvues de la voie d'épuration pour la réutilisa- tion de la base libre hypoxanthine et elles ne peuvent pas survivre si un inhibiteur, tel que l'aminopterine, est utilisé pour bloquer les voies de synthèse purique de novo. Les cellules parentales de myélome peuvent ainsi être contre-sélectionnées en cultivant le mélange de fusion sur un milieu hypoxanthine/aminoptérine/ thymidine (HAT), tandis que les cellules d'hybridome survivront grâce à l'apport de HPRT par les cellules parentales de fusion produisant les anticorps. Après une certaine période de culture de sélection, les cellules d'hybridome survivantes peuvent être clonées, des réserves peuvent être réalisées par des méthodes de culture cellulaire standard et des clones produisant les immunoglobulines spécifiques voulues peuvent être détectés par un test ELISA ("enzyme linked immunosorbent assays") ou par d'autres tests, basés sur l'emploi d'antigènes contre lesquels sont dirigés les anticorps. Les anticorps anti-protéine gag/env pouvant être obtenus par l'emploi de cette invention peuvent aussi être utilisés pour la préparation de divers tests diagnostiques pour les virus du SIDA ou leurs particules. Ces systèmes de diagnostic pourraient prendre la forme d'un système de dosage radio-immunol ogique, soit en solution libre soit à l'état solide. Ou encore, des tests ELISA ("enzyme linked immunosorbent assays") pourraient être élaborés comme pourraient l'être des tests basés sur l'analyse par immuno-transfert ("immunoblot analysis"). Ces tests pourraient être directs ou indirects, avec application d'un second anticorps dirigé contre les anticorps anti-protéine gag/env. De nombreuses activités enzymatiques ont pu être couplées anx anticorps, la peroxydase, la glucose oxydase, la B-galactosidase et l'alkaline phosphatase ne représentant que quelques unes des possibilités. Le principe fondamental sur lequel s'appuient beaucoup de ces tests consiste en ce qu'on fait réagir un échantillon de sérum humain ou d'un autre liquide biologique, dans lequel on soupçonne la présence de virus du SIDA ou de leurs fragments, avec un titre connu d'anticorps dirigés contre la protéine gag/env pour former des complexes antigène-anticorps. Les complexes ainsi formés sont détectés par un moyen approprié. Les personnes expérimentées en la matière reconnaîtront également qu'il existe beaucoup d'autres moyens qui permettraient d'utiliser un antisérum anti- protéine gag/env à une fin diagnostique, comme par exemple dans l'un d'un certain nombre de tests d'agglu- tination. Dans de tels tests d'agglutination, l'inter- action des anticorps et des virus du SIDA ou des fragments de virus peut être détectée en utilisant des systèmes dans lesquels les particules sont enrobées par les anticorps anti-protéine gag/env. Ces particules peuvent être des billes de latex, des liposomes, des érythrocytes, des billes de polyacrylamide ou l'un quelconque d'un certain nombre de polymères appropriés. La méthode de détermination du virus du SIDA ou des anticorps contre le virus du SIDA telle qu'elle est décrite plus haut peut être réalisée dans des trousses de test appropriées comprenant dans un récipient la protéine gag/env de la présente invention ou des anticorps dirigés contre le virus du SIDA produits par la protéine gag/env de la présente invention. Crowl et al. (Cell 41, 979 (1985)) ont décrit que le sérum des 50 patients atteints du SIDA testés avec la protéine env obtenue par la technique de génie génétique était hautement réactif à l'égard de la protéine. C'était le cas malgré le fait que la moitié de ces patients venaient de la côte ouest des Etats-Unis et l'autre moitié de la côte est. Le fait que tous les sérums étaient réactifs à l'égard de la protéine env a montré que les virus produisant les anticorps ayant ainsi réagi, bien que géographiquement séparés et sans aucun doute quelque peu différents génétiquement, ont dû avoir au moins un déterminant génétique en commun ou conservé dans leurs protéines d'enveloppe. Il a été trouvé que la protéine gag de la particule centrale de rétrovirus du SIDA induit la formation d'anticorps chez un grand pourcentage d'indi- vidus ayant été exposés au virus dans le passé (Montagnier et ai., Supra; Schupbach et ai., Supra; Sarngadharan et ai., Supra). Dans leur ensemble, les observations ci- dessus suggèrent que la protéine gag/env de cette invention, qui possède au moins un déterminant anti- génique correspondant aux séquences des protéines gag et env dont elle est composée, serait immunogène chez les êtres humains et peut être utile comme vaccin contre le SIDA. Ainsi, la protéine gag/env (obtenue comme décrit ici ou synthétisée par voie chimique) peut être utilisée dans une préparation vaccinale comprenant la protéine et un excipient pharmaceutique compatible. La protéine peut être utilisée à l'état purifié dans ces préparations ou bien elle peut être rendue plus immuno- gène par des modifications connues dans la profession. Par exemple, la protéine peut être transformée en une matrice hautement immunogène par réaction avec un agent de réticulation, tel que le 1,3-dicyclohexylcarbodiimide. Ou encore, la protéine pourrait être couplée de façon covalente avec une molécule porteuse de protéine hautement immunogène, soit directement soit avec une molécule liante appropriée. Les molécules porteuses qui pourraient être utilisées comprennent, par exemple, l'hémocyanine de patelle et diverses anatoxines (toxines inactives) de bactéries, telle que l'anatoxine diphtérique. Lorsque la protéine gag/env est conjuguée à une anatoxine bactérienne, une préparation vaccinale bivalente peut être obtenue qui assurera la protection à la fois contre le SIDA et la bactérie à partir de laquelle l'anatoxine a été obtenue. Les voies d'administration, la dose d'antigène, le nombre et la fréquence des injections sont des facteurs entrant dans le cadre de la technique habituelle. EXEMPLE L'Exemple suivant est un exemple non- exhaustif illustrant les méthodes par lesquelles un vecteur recombinant codant pour la protéine gag/env de virus HTLV-III peut être produit. Dans cet Exemple, les étapes suivantes ont été réalisées dont chacune sera décrite en détail (1) La séquence d'ADN codant pour les résidus 15-512 (tous mais les 14 premiers résidus N-terminaux) du gène gag a été excisée du clone de phage recombinant XHXB-3 et liée dans le plasmide d'expression de E.coli pEV-Vrf2 pour produire le plasmide pEV2/gag 15-512; (2) Les séquences d'ADN correspondant aux résidus d'acide aminés env 319331 ont été enlevées du plasmide d'expression pEV3/env 44-640 par muta- genèse dirigée par une amorce spécifique pour produire le plasmide pEV/env 44-640 319-331; (3) La mutagenèse dirigée par une amorce spécifique a été réalisée sur le plasmide pEV/env env. 44-640 A 319-331 pour produire la délétion des nucléotides codant pour les résidus d'acides aminés 514-524 et le plasmide pEV3/env 44-640 319-331 A 514-524; et (4) Un fragment d'endonucléase de restriction du gène env provenant du plasmide pEV/env 44-640 A 319-331 A 514-524 codant pour les résidus env 467-640 L 514-524 a été lié dans le plasmide clivé pEV2/gag -512, produisant ainsi un gène de fusion codant pour les résidus gag 15-436 et les résidus env 467-640 A 514-524 dans le plasmide pEV2/gag 15- 436/env 467-640 A 514-524. A chaque étape de la construction, les plasmides ont été reproduits par transformation dans E.coli souche MC1061 (pRK 248c Its). A.PROCEDES GENERAUX DE PREPARATION DU VECTEUR RECOMBINANT PREPARATION D'ADN Un isolement à petite échelle d'ADN plasmidique à partir de 1 ml de cultures saturées pendant une nuit a été réalisé selon le procédé de Birnboim et al. (Nucleic Acids Research 7: 1513 (1979)). Ce procédé permet l'isolement d'une petite quantité d'ADN à partir d'une colonie bactérienne à des fins d'analyse. Des quantités plus importantes d'ADN plasmidique ont été préparées en utilisant des cultures de 1 litre suivant un protocole standard avec centrifugation au chlorure de césium. CONDITIONS DES REACTIONS ENZYMATIQUES Les enzymes de restriction et la TY ADN ligase utilisées étaient des produits des New England Bio Labs, Beverly, MA. Les méthodes et les conditions d'utilisation de ces enzymes étaient celles publiées par le fabricant. Pour les endonucléases de restriction, une unité d'activité est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour provoquer une digestion complète de 1,0 pg d'ADN en 60 minutes dans un volume réactionnel total de 0,05 ml, la digestion étant menée à 37 C. Les mélanges de digestion, en plus de l'ADN devant être clivé, contenaient 100 pg/ml de sérum albumine bovine et les constituants tampon suivants: Bg III: 100 mM de NaCl, 10 mM de Tris-HCl (pH 7,4), mM de MgCl2 et 10 mM de 2- mercaptoéthanol (2-ME) Cl A I: 50 mM de NaCl, 6 mM de Tris-HCl (pH 7,9) et 6 mM de MgCl2 Hinc II: 10 mmM de NaCl, 10 mM de Tris-HC1 (pH 7,4), 7 mM de MgCl2 et 1 mM de dithiothréitol (DTT) Hind III: 50 mM de NaCl, 50 mM de Tris-HCI (pH 8,0) et mM de MgCl2 Hpa I: 6 mM de KCl, 10 mM de Tris-HC1 (pH 7,4), 10 mM de MgCl2 et 1 mM de DTT Pst I: 100 mM de NaCl, 10 mM de Tris-HCl (pH 7,5) et mM de MgCl2 Pvu II: 60 mM de NaCl, 6 mM de Tris-HC1 (pH 7,5), 6 mM de MgCl2 et 6 mM de 2-ME Stu I: 100 mM de NaCl, 10 mM de Tris-HC1 (pH 8,0), mM de MgCl2 et 6 mM de 2-ME. La liaison d'ADN T4 a été réalisée à 16 C dans un mélange cont&nant l'ADN et 50 mM de Tris-HCl (pH 7,8), 10 mM de MgCl2, 20 mM de DTT, 1,0 mM d'ATP et pg/ml de sérum albumine bovine. Une unité d'activité de TYADN ligase est définie comme la quantité nécessaire pour donner une liaison de 50 % de fragments Hind III d'ADN lambda en 30 minutes à 16 C dans 20 pl de mélange d'incubation et une concentration d'extrémités ADN 5' de 0,12 pM (300 pg/ml). PURIFICATION DES FRAGMENTS D'ADN DANS L'AGAROSE Après clivage par les endonucléases d.e restriction, les fragments d'ADN pour le clonage ont été isolés par électrophorèse dans 1 % d'agarose. Après révélation par 1 pg/ml de bromure d'éthidium, les coupes de gel contenant les fragments d'ADN souhaités ont été extrudées par une aiguille de calibre 21 dans 4 ml de solution contenant 10 mM de Tris-HCl (pH 7,4), 1 mM d'EDTA et 300 mM de NaCl. Ce mélange a ensuite été congelé pendant 3 heures à -80 C, décongelé pendant minutes à 37 C et centrifugé à 10.000 x g pendant minutes. Le liquide surnageant a été filtré sur un filtre Millex de 0,45 micron, concentré à 0,25 ml avec du sec.-butanol et précipité à l'éthanol trois fois avec 10 pg de l'ARNt (ARN de transfert) d'E.coli en tant que porteur. MILIEUX DE CULTURE Le milieu M9CA contenant 10 g de Na2HPO4, 3 g de KH2PO4, 0,5 g de NaCl et 1 g de NH4Cl par litre, avec 1 mM de MgSO4, 0,5 % de glucose et 0,5 % de casamino-acides, ajusté à pH 7,4. Le bouillon "Luria Broth" (LB) contenait g d'extrait de levure ("Bactoyedst extract"), 10 g de Bacto-triptone et 10 g de NaCl par litre, ajusté à pH 7,5. Les antibiotiques tétracycline et ampicilline ont été ajoutés aux concentrations finales respectivement de 15 et 50 pg/ml, suivant les besoins. TRANSFORMATION ET ISOLEMENT DES RECOMBINANTS La transformation d'E.coli souche MC1061 (pRK 248 c Its) a été réalisée en utilisant une modifi- cation du protocole de Kushner (dans Genetic Engineering, eds, Boyes et Al., Elsevier / Hollande du nord, Amsterdam, p. 17 (1978)) dans l'essentiel de la façon suivante. Deux cent ml de cellules bactériennes ont été cultivées à 30 C dans LB jusqu'à un DE600 compris entre 0,5 et 1,0, puis les cellules ont été recueillies par centrifugation à 6.000 x g pendant 5 minutes à 4 C et remises en suspension dans 50 ml de solution contenant mM d'acide morpholinopropane sulfonique (MOPS; pH 7,0) et 10 mM de RbCl. Les cellules ont été de nouveau recuil- lies par centrifugation et remises en suspension dans une solution contenant 10 mM de MOPS (pH 6,5), 50 mM de CaC12 et 10 mM de RbCl. Après incubation à 0 C pendant 30 minu- tes, les cellules ont été recueillies, remises en suspension dans 6 ml de 10 mM MOPS (pH 6,5) avec 50 mM de CaCl2, 10 mM de RbCl et 15 % de glycérol, placées par parties alignotes dans 40 tubes d'Eppendorf (300 pl par tube) et congelées à -80 C. La transformation a été effectuée en décon- gelant une partie alignote de 10 pl de cellules et en incubant pendant 30, 2 et 2 minutes respectivement à 0 , 37 et O C en présence d'un échantillon de 10 pl de mélange de liaison contenant 100 ng d'ADN et en ajoutant 0,1 à 0,5 ml de LB au tube. On a ensuite laissé incuber le tube à 22 C pendant 60 minutes, puis 200 pl de la suspension cellulaire ont été étalés sur une plaque de LB contenant de l'ampicilline et laissés incuber à 30 C pendant heures. CROISSANCE DES CELLULES ET INDUCTION DE L'EXPRESSION DES GENES On a fait pousser des cultures d'E.coli MC1061 contenant le plasmide pRK248cIts et un plasmide d'expression sur le milieu M9CA jusqu'à la moitié de la phase logarithmique de croissance à 30 C; puis les cultures ont été transférées à 42 C pour inactiver le répresseur XPL Après 2 heures d'incubation à 42 C, les cellules de 1 ml de la culture induite ont été recueillies par centrifugation et remises en suspension dans un tampon TG contenant 10 mM de Tris-HCl (pH 7,4) et 10 % de glycérol en préparation pour analyse. ELECTROPHORESE SDS - GEL DE POLYACRYLAMIDE ET ANALYSE PAR TRANSFERT "WESTERN" Les cellules induites remises en suspension dans un tampon Tris-glycine (TG) ont été mélangées avec un volume égal à 2 x le tampon échantillon (Laemmli, Nature 227: 680 (1970)), incubées à 95 C pendant minutes et soumises à l'électrophorèse SDS-gel de polyacrylamide dans des gels à 12, 5 % comme décrit par Laemmli. Après l'électrophorèse, les protéines du gel ont été déposées par électro-transfert sur une membrane de nitrocellulose de 0,1 micron pendant 6 heures à volts dans 12,5 mM de Tris et 96 mM de glycine avec 20 % de méthanol et 0,01 % de SDS à pH 7,5. L'analyse par transfert "Western" a ensuite été réalisée comme décrit par Towbin et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76: 4350 (1979)). MUTAGENESE DIRIGEE PAR UNE AMORCE SPECIFIQUE Une mutagenèse sur un site spécifique dirigée par une amorce spécifique a été réalisée selon les méthodes décrites par Morinage et al. (Biotechnology 2: 636 (1984)). Les oligonucléotides de synthèse utili- sés pour réaliser le procédé de mutagenèse ont été préparés par la méthode au phosphite (Beaucage et al., Tetrahedron LeH. 22: 1859 (1981); Matteucci et al., J. Am. Chem. Soc. 103: 3185 (1981)) en utilisant un synthétiseur automatique et purifiés par électrophorèse en gel de polyacrylamide par la méthode de Maxam et al. (Methods in Enzymology 65: 499 (1980)). HYBRIDATION DE COLONIES Les hybridations de colonies ont été effec- tuées par la méthode de Grunstein et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 72: 3961 (1975)). Le même oligo- nucléotide que celui utilisé pour la mutagenèse sur un site spécifique dirigée par une amorce a été utilisé comme sonde pour les hybridations après masquage de l'extrémité 5' par la 32P-(polynucléotide kinase utilisant l'ATP) comme décrit par Maniatis et al. (Cell 15: 687 (1978)). B.CONSTRUCTION DU PLASMIDE pEV2/GAG 15-512 Comme indiqué plus haut, la construction d'un plasmide d'expression final exprimant la protéine de fusion gag/env a été commencée par la construction d'un plasmide (pEV2/gag 15-512) contenant les nucléo- tides codants pour tous les résidus sauf les 14 résidus N-terminaux. Certains des nucléotides codant pour les résidus gaz carboxyl terminaux ont ensuite été remplacés par des séquences env pour obtenir le produit de fusion final. Pour faire le plasmide pEV2/gag 15-5i2, la séquence d'ADN codant pour les résidus 15-512 de la pro- téine gag a été obtenue à partir de 50 pg de clone recombinant de phagelambda XHXB-3 contenant le génome proviral HTLV-III par clivage avec 50 unités de ClA I et 50 unités de HinC II pendant 120 minutes à 37 C pour produire un fragment de 1700 paires de bases. Ce fragment d'ADN a été isolé par électrophorèse préparative sur gel d'agarose et remis en suspension dans le tampon 0,1 x TE (1 mM de Tris-HCl (pH 7,4) avec 0,1 mM d'EDTA) à une concentration finale de 0,03 pmole/pl. Pour recevoir le fragment d'ADN gag, 2 pg de plasmide d'expression E.coli pEV-vrf2 ont été clivés avec 5 unités de Cla I et 5 unités de Pvu II pendant minutes à 37 C et un fragment de 1700 paires de bases contenant le promoteur XPL a été isolé par électrophorèse en gel de 1 % d'agarose et remis en suspension après précipitation à l'éthanol à une concentration finale de 0,03 pmole/pl. Le plasmide pEV-vrf 2 utilisé dans cette construction est un dérivé du plasmide pBR322 (ATCC 31344) qu'il est facile de se procurer. La construc- tion du plasmide pEV-vrf2 a été décrite en détail par Crowl et al. (Gene 38: 31 (1985)). Le clone recombi- nant de phage lambda XHSB-3 utilisé dans cette construc- tion a été décrit par Shaw et al. (Science 226: 1165 (1984)). Ce clone a été obtenu en utilisant des techniques de recombinaison d'ADN standard à partir de la lignée cellulaire H-9 infectée par HTLV-III décrite plus haut. Une lignée cellulaire humaine infectée par HTLV-III désignée par H9HTLV-IIIB, qui convient pour l'emploi dans cette invention, a été déposée à l'"American Type Culture Collection" et a reçu le numéro de dépStCRL8543. Etant donné que Shaw et al. ont publié la séquence du génome HTLV-III, une sonde d'ADN peut être facilement construite en utilisant les données qui peuvent servir à isoler le génome de H-9 ou de toute autre lignée capable de propager le virus. Trois centièmes (300) de pmole du fragment gag/cla I - Hinc II ont été mélangés avec 0,03 pmole du fragment pEV-vrf2/Cla7-PvuII et liés avec 200 unités de TY ADN ligase pendant 18 heures à 15 C dans un volume final de 10 pl. Le produit de liaison a ensuite été transformé dans E.coli souche MC1061 (pRK248c Its) et les transformants ont été sélectionnés par croissance sur des plaques de gélose à LB avec de ltampicilline après incubation à 30 C pendant 18 heures. Les ADN du plasmide recombinant ont été analysés pour la taille correcte des fragments de restriction après clivage avec Bg III, Pst I ou Hind III. Les isolats positifs à l'analyse de la taille des ADN ont ensuite été évalués pour la synthèse du polypeptide précurseur de gag par électrophorèse SDS-gel de polyacrylamide et par analyse par transfert western". Des cultures contenant le plasmide pEV2/ gag 15-512 ont été induites à 40 C et des échantillons en double des cellules induites ont été préparés pour analyse par électrophorèse SDS-gel de polyacrylamide. Après l'électrophorèse, le gel a été coupé en deux et une moitié du gel a été colorée au bleu brillant de Coomassie tandis que l'autre côté du gel a été soumis à un électro-transfert ("electro-blotting") et à une analyse par transfert "Western" en utilisant des anti- corps anti-gag. L'analyse a montré que les cellules in- duites produisaient des protéines qui migraient en deux bandes principales dans les gels ayant des poids molécu- laires apparents d'environ 56 et 53 kd. La taille de la protéine 15-512 gag complète est d'environ 56 kd. Les deux principales protéines ont réagi avec les anticorps anti-gag. Un certain nombre de protéines mineures de plus faible poids moléculaire qui étaient réactives avec les anticorps ont également été observées. C.CONSTRUCTION DU PLASMIDE pEV3/env 44-640 A 319-331 Les séquences env présentes dans le plasmide typique final de cette invention ont été traitées en deux étapes (décrites dans cette section et dans la section D plus loin), dont chacune comportait la délétion de séquences de nucléotides courts spécifiques par muta- genèse sur un site spécifique dirigée par une amorce. La première de ces déletions (décrite dans cette section) était nécessaire pour produire le plasmide pEV3/env 44-640 A 319-331 A 514-524 (section D). Le plasmide d'expression pEV3/env 44-640 dont la construction à partir de XHXB-3 et des plasmides pEV-vrf a été décrite par Crowl et al. (cell 41: 979 (1985)), contrôle la synthèse d'une protéine spécifique env de HTLVIII de 68 kd dans E.coli. Les séquences d'ADN correspondant aux résidus d'acides aminés env 319-331 sont enlevées par mutagenèse dirigée par une amorce spécifique en utilisant un oligonucléotide synthétique 18-mex ayant la séquence 5' GCA TTT GTT AAC ATT AGT 3'. Cet oligonucléotide était prévu pour com- pléter les séquences env afin de lier les nucléotides codant pour le résidu 318 à ceux codant pour le résidu 332. Comme conséquences du rapprochement de ces sé- quences, un nouveau site HpaI unique a été introduit dans l'ADN plasmidique tandis que 33 paires de bases ont été enlevées. Les sites Stu I et Hind III dans le plasmide pEV3/env 44-640 ont été utilisés pour former la "brèche" pour la molécule de l'hétéroduplex. Les ADN des colonies isolées qui étaient positifs pour l'hybridation avec l'oligonucléotide synthétique masqué au 32p pendant la sélection des colonies ont été transformés dans MC1061 (pRK248cIts) et analysés pour la présence d'un nouveau site HpaI unique. D. CONSTRUCTION DU PLASMIDE pEV3/env 44-640 A 319-331 A 514-524 Une seconde délétion dans les séquences codantes env a été créée par mutagenèse dirigée par une amorce spécifique en utilisant un oligonucléotide synthétique ayant la séquence 5' AGA GCA GTG GCA GCA GGA 3'. Cet oligonueléotide a placé les séquences codant pour le résidu 313 de la protéine env à côté de celles codant pour le résidu 525, facilitant ainsi la délétion des nucléotides codant pour les résidus 514-524. Cette délétion a été produite dans le plasmide en utilisant les sites de restriction HpaI et HindIII pour créer une brèche à simples brins dans la région env. Après la retransformation, l'ADN des isolats positifs identifiés par la sonde oligonucléotide marqué au 32p a été analysé pour la délétion de 33 paires de bases par clivage de restriction avec HpaI et HindIII suivi d'électrophorèse dans 1 % d'agarose. Cette délé- tion a également été confirmée par séquençage d'ADN selon la méthode de clivage chimique de Maxam et Gilbert (Methods in Enzymology 65: 499 (1980)). Comme déjà noté, la délétion A 514-524 provoque une augmentation significative de l'expression d'env. E. CONSTRUCTION DU PLASMIDE pEV2/gag 15-436/env 467-640 L 514-524 Deux pg de pEV2/gag 15-512 ont été double- ment digérés avecsoit5unités de Cla I et 4 unités de Bg III pour produire un fragment d'environ 1300 paires de bases codant pour les résidus gag 15436 soit avec 10 unités de Pst I et 5 unités de ClaI pour produire un fragment d'environ 1 Kb contenant le promoteur PL'. Trois dixièmes d'mg de pEV3/env 44-640 A 319-331 A 514-524 ont été soumis à la restriction avec 10 unités de Pst I et 4 unités de Bg III pour produire un fragment d'environ 4 Kb codant pour les résidus env 467-640 A 514-524. Les divers fragments d'ADN ainsi produits ont été 260.6422 séparés dans 1 % d'agarose et récupérés comme décrit précédemment. Trois centièmes de pmole de chacun des fragments d'ADN isolés ont été mélangés et liés pen- dant 18 heures à 15 C en présence de 200 unités de T4 ADN ligase. Les produits du mélange de liaison ont ensuite été transformés dans MC 1061 (pRK 248c Its) et les transformants ont été sélectionnés sur des plaques de gélose à LB avec de l'ampicilline. L'ADN plasmidique a été préparé à partir de colonies uniques et analysé pour la taille correcte des fragments de restriction *après digestion avec Pvu II. Onze des douze isolats étaient positifs à l'analyse pour les fragments Pvu II prévus de 3505 et 2882 paires de bases. Deux isolats positifs ont été en outre évalués pour la synthèse de la protéine de fusion gag/env. Ces cultures ont été induites et des échantil- lons de cellules ont été prélevés pour analyse par électrophorèse SDS-gel de polyacrylamide, électro- transfert ("electroblotting") et méthode de transfert "Western" avec les résultats montrés sur la Figure 3. Le panneau 1 de la Figure 3 montre les protéines de cellules totales colorées au bleu de Coomassie à partir de cellules hébergeant le plasmide recombinant portant le gène de fusion gag/env (g/e) et de cellules témoins (c). Les panneaux 2 et 3 montrent les résultats d'échantillons en double soumis à l'analyse par transfert "Western" en utilisant des anticorps polyclonaux de lapin dirigés contre un peptide synthé- tique correspondant aux résidus 500-511 (panneau 2) ou en utilisant des anticorps polyclonaux de mouton dirigés contre la protéine gag p 24 qui est disponible dans le commerce (panneau 3; voir Dowbenko et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82: 7748 (1985) pour la description de la protéine p 24). Sur la Figure 3, les complexes immuns des panneaux 2 et 3 ont été visualisés par un second anticorps marqué à la peroxydase de raifort et les mobilités de standard de poids moléculaire (en Kd) sont indiquées. Les positions des bandes de la protéine gag/env dans les gels sont indiquées par des flèches. De nombreuses modifications et variations de cette invention peuvent etre faites sans s'écarter ni de son esprit ni de son but, ainsi que cela deviendra apparent aux personnes expérimentées en la matière. Par exemple, des substitutions d'acides maléiques pourraient être faites dans le gène codant pour la protéine gag/env de l'invention (en utilisant les données sur les séquences contenues ici à titre de référence) et une protéine de fusion quelque peu différente (mais fonctionnellement équivalente) pourrait être produite. Un tel produit modifié serait toujours couvert par cette invention tant qu'il possède au moins un déterminant antigénique correspondant à la séquence d'une protéine gag et env d'un virus HTLV-III. De même, la séquence des acides aminés de la protéine elle-même pourrait être manipulée directement, avec le meme résultat. Les réalisations spécifiques décrites ici ne sont données qu'à titre d'exemple, et l'invention est limitée uniquement par les termes des revendications jointes. REVENDICATIONS 1.- Protéine ayant une séquence d'acides aminés corres- pondant à au moins un déterminant antigénique d'une protéine gag de HTLVIII et d'une protéine env de HTLV-III. 2.- Protéine selon la revendication 1 de séquence d'acides aminés Met Asn Arg Ile Arg Ile His Arg Trp Glu Lys Ile Arg Leu Arg Pro Gly Gly Lys Lys Lys Tyr Lys Leu Lys His Ile Val Trp Ala Ser Arg Glu Leu Glu Arg Phe Ala Val Asn Pro Gly Leu Leu Glu Thr Ser Glu Gly Cys Arg Gln Ile Leu Gly Gln Leu Gln Pro Ser Leu Gln Thr Gly Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val His Gln Arg Ile Glu Ile Lys Asp Thr Lys Glu Ala Leu Asp Lys Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys Ser Lys Lys Lys Ala Gln Gln Ala Ala'Ala Asp Thr Gly His Ser Ser Gln Val Ser Gln Asn Tyr Pro Ile Val Gln Asn Ile Gln Gly Gln Met Val His Gln Ala Ile Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Val Glu Glu Lys Ala Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Ser Ala Leu Sec Glu Gly Ala Thr Pro Gln Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly Gly His Gln Ala Ala Met Gln Met Leu Lys Glu Thr Ile Asn Glu Glu Ala Ala Glu Trp Asp Arg Val His Pro Val His Ala Gly Pro Ile Ala Pro Gly Gln Met Arg Glu Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr Ser Thr Leu Gln Glu Gln Ile Gly Trp Met Thr Asn Asn Pro Pro Ile Pro Val Gly Glu Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly Leu Asn Lys Ile Val Arg Met Tyr Ser Pro Thr Ser Ile Leu Asp Ile Arg Gln Gly Pro Lys Glu Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Arg Ala Glu Gln Ala Ser Gin Glu Val Lys Asn Trp Met Thr Glu Thr Leu Leu Val Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile Leu Lys Ala Leu Gly Pro Ala Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gln Gly Val Gly Gly Pro Gly His Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu Ala Met Ser Gln Val Thr Asn Thr Ala Thr Ile Met Met Gln Arg Gly Asn Phe Arg Asn Gln Arg Lys Met Val Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Thr Ala Arg Asn Cys Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys Glu Gly His Gln Met Lys Asp Cys Thr Glu Arg Gln Ala Asn Phe Leu Gly Lys Ile Phe Arg Pro Gly Gly Gly Asp Met Arg Asp Asn Trp Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys Val Val Lys Ie Glu Pro Leu Gly Val Ala Pro Thr Lys Ala Lys Arg Arg Val Val Gln Arg Glu Lys Arg Ala Val Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly Ala Ala Ser Met Thr Leu Thr Val Gln Ala Arg Gln Leu Leu Ser Gly Ile Val Gln Gln Gln Asn Asn Leu Leu Arg Ala Ile Glu Ala Gln Gln His Leu Leu Gln Leu Thr Val Trp Gly Ile Lys Gln Leu Gln Ala Arg Ile Leu Ala Val Glu Arg Tyr Leu Lys Asp Gln Gln Leu Leu Gly Ile Trp Gly Cys Ser Gly Lys Leu Leu Cys Thr Thr Ala Val Pro Trp Asn Ala Ser Trp Ser Asn Lys Ser Leu Glu Gln Ile Trp Asn His Thr Thr Trp Met Glu Trp Asp Arg Glu Ile Asn Asn Tyr Thr Ser Phe Asn Ala Val Val Tyr His Ser ou une partie fonctionnelle d'un équivalent de celle-ci. 3.- Protéine selon la revendication 1 ou 2 sous une forme pratiquement pure. 4.- Séquence d'ADN codant pour une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 3. 5.- La séquence d'ADN selon la revendication 4, caracté- risée en ce que la séquence d'ADN comprend tout ou partie de la séquence d'acides nucléiques ATGAATAGAA TTCGGATCCA TCGATGGGAA AAAATTCGGT TAAGGCCAGG GGGAAAGAAA AAATATAAAT TAAAACATAT AGTATGGGCA AGCAGGGAGC TAGAACGATT CGCAGTTAAT CCTGGCCTGT TAGAAACATC AGAAGGCTGT AGACAAATAC TGGGACAGCT ACAACCATCC CTTCAGACAG GATCAGAAGA ACTTAGATCA TTATATAATA CAGTAGCAAC CCTCTATTGT GTGCATCAAA GGATAGAGAT AAAAGACACC AAGGAAGCTT TAGACAAGAT AGAGGAAGAG CAAAACAAAA GTAAGAAAAA AGCACAGCAA GCAGCAGCTG ACACAGGACA CAGCAGTCAG GTCAGCCAAA ATTACCCTAT AGTGCAGAAC ATCCAGGGGG AAATGGTACA TCAGGCCATA TCACCTAGAA CTTTAAATGC ATGGGTAAAA GTAGTAGAAG AGAAGGCTTT CAGCCCAGAA GTAATACCCA TGTTTTCAGC ATTATCAGAA GGAGCCACCC CACAAGATTT AAACACCATG CTAAACACAG TGGGGGGACA TCAAGCAGCC ATGCAAATGT TAAAAGAGAC CATCAATGAG GAAGCTGCAG AATGGGATAG AGTACATCCA GTGCATGCAG GGCCTATTGC ACCAGGCCAG ATGAGAGAAC CAAGGGGAAG TGACATAGCA GGAACTACTA GTACCCTTCA GGAACAAATA GGATGGATGA CAAATAATCC ACCTATCCCA GTAGGAGAAA TTTATAAAAG ATGGATAATC CTGGGATTAA ATAAAATAGT AAGAATGTAT AGCCCTACCA GCATTCTGGA CATAAGACAA GGACCAAAAG AACCTTTTAG AGACTATGTA GACCGGTTCT ATAAAACTCT AAGAGCCGAG CAAGCTTCAC AGGAGGTAAA AAATTGGATG ACAGAAACCT TGTTGGTCCA AAATGCGAAC CCAGATTGTA AGACTATTTT AAAAGCATTG GGACCAGCGG CTACACTAGA AGAAATGATG ACAGCATGTC AGGGAGTAGG AGGACCCGGC CATAAGGCAA GAGTTTTGGC TGAAGCAATG AGCCAAGTAA CAAATACAGC TACCATAATG ATGCAGAGAG GCAATTTTAG GAACCAAAGA AAGATGGTTA AGTGTTTCAA TTGTGGCAAA GAAGGGCACA CAGCCAGAAA TTGCAGGGCC CCTAGGAAAA AGGGCTGTTG GAAATGTGGA AAGGAAGGAC ACCAAATGAA AGATTGTACT GAGAGACAGG CTAATTTTTT AGGGAAGATC TTCAGACCTG GAGGAGGAGA TATGAGGGAC AATTGGAGAA GTGAATTATA TAAATATAAA GTAGTAAAAA TTGAACCATT AGGAGTAGCA CCCACCAAGG CAAAGAGAAG AGTGGTGCAG AGAGAAAAAA GAGCAGTGGC AGCAGGAAGC ACTATGGGCG CAGCGTCAAT GACGCTGACG GTACAGGCCA GACAATTATT GTCTGGTATA GTGCAGCAGC AGAACAATTT GCTGAGGGCT ATTGAGGCGC AACAGCATCT GTTGCAACTC ACAGTCTGGG GCATCAAGCA GCTCCAGGCA AGAATCCTGG CTGTGGAAAG ATACCTAAAG GATCAACAGC TCCTGGGGAT TTGGGGTTGC TCTGGAAAAC TACTTTGCAC CACTGCTGTG CCTTGGAATG CTAGTTGGAG TAATAAATCT CTGGAACAGA TTTGGAATCA CACGACGTGG ATGGAGTGGG ACAGAGAAAT TAACAATTAC ACAAGCTTTA ATGCGGTAGT TTATCACAGT TAA ou un équivalent fonctionnel de celle-ci. 6.- Vecteur recombinant comprenant une séquence d'ADN selon la revendication 4 ou 5, capable de diriger l'expression de ladite séquence d'ADN dans un organisme hôte unicellulaire compatible. 7.- Vecteur recombinant selon la revendication 6 qui est le plasmide pEV2/gag 15-436/env 467-640 A 514-524. 8.- Organisme unicellulaire contenant un vecteur recom- binant selon la revendication 6 ou 7. 9.- Organisme unicellulaire selon la revendication 8, qui une cellule procaryote. 10.- Organisme unicellulaire selon la revendication 9, qui est une cellule d'Escherichia coli. 11.- Organisme unicellulaire selon la revendication 10, qui est une cellule d'Escherichia coli MC 1061. 12.- Organisme unicellulaire selon la revendication 8, qui est une cellule eucaryote. 13.- Protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, en tant que constituant d'un vaccin. 14.- Protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 en tant qu'antigène. 15.- Procédé pour la production d'une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, comprenant: (a) la culture d'un organisme unicellulaire contenant un vecteur recombinant selon la revendication 6 ou 7 dans des conditions appropriées de crois- sance de sorte que ladite protéine soit exprimée, et (b) l'isolement de ladite protéine de la culture et, si on le souhaite, sa purification. 16.- Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que l'organisme unicellulaire est une cellule d'Escherichia coli. 17.- Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que le vecteur recombinant est un plasmide pEV2/gag 15-436/env 467-640 A 514-524. 18.- Procédé pour la préparation d'un organisme uni- cellulaire selon l'une quelconque des revendications 8 à 12, caractérisé par l'introduction d'un vecteur recombinant selon la revendication 6 ou 7 dans un organisme unicellulaire. 19.- Procédé selon la revendication 18, dans lequel le vecteur recombinant est introduit dans l'organisme uni- cellulaire par transformation. 20.- Procédé selon la revendication 18, dans lequel le vecteur recombinant est introduit dans l'organisme uni- cellulaire par transduction. 21.- Procédé selon la revendication 18, dans lequel le vecteur recombinant est introduit dans l'organisme uni- cellulaire par transfection. 22.- Procédé pour la détection de la présence d'anti- corps anti-virus du SIDA dans le sérum humain compor- tant les étapes consistant à: (a) masquer une protéine de l'une quelconque des revendications 1 à 3; (b) faire réagir la protéine marquée de l'étape avec un échantillon de sérum humain et laisser se former des complexes protéine marquéeanticorps dans le mélange réactionnel; et (c) déterminer les complexes protéine marquée - anticorps de l'étape (b). 23.- Procédé pour la détection de la présence d'anti- corps anti-virus du SIDA dans le sérum humain, comprenant les étapes consistant à: (a) immobiliser une protéine selon les revendications 1 à 3 sur un support solide; (b) mettre en contact un échantillon de sérum humain avec la protéine immobilisée de l'étape (a) et laisser se former des complexes protéine immo- bilisée-anticorps; (c) éliminer par lavage des complexes de l'étape (b) la protéine et les anticorps non liés; et (d) déterminer ces complexes par l'addition d'un réactif choisi dans un groupe comprenant une protéine A de Staphylococcus aureus marquée et un second anticorps anti IgG humain marqué. 24.- Procédé pour la détection de la présence de virus du SIDA ou de leurs fragments dans le sérum humain ou un autre liquide biologique comprenant les étapes consistant à: (a) faire réagir un échantillon de sérum humain ou d'un autre liquide biologique avec un titre connu d'anticorps dirigés contre une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 3; (b) laisser inter-réagir les anticorps et l'échan- tillon pour former des complexes antigène- anticorps dans le mélange réactionnel et- (c) détecter les complexes antigène-anticorps de l'étape (b). 25.- Procédé selon la revendication 24, dans lequel les anticorps sont marqués par des enzymes et les complexes antigène-anticorps formés dans le mélange réactionnel sont détectés par un test ELISA ("enzyme linked immunosorbent assay"). 26.- Procédé selon la revendication 24, dans lequel une quantité connue d'une protéine selon les revendica- tions 1 à 3 marquée avec un isotope radioactif est ajoutée à l'échantillon de sérum ou d'un autre liquide biologique et les complexes antigène-anticorps formés dans le mélange réactionnel sont détectés par dosage radio-immunologique. 27.- Procédé pour la préparation d'un vaccin comprenant le mélange d'une protéine selon les revendication 1 à 3, avec un excipient physiologiquement acceptable. 28.- Procédé pour la préparation d'anticorps anti-virus du SIDA comprenant l'injection à un animal, mammifère ou oiseau, d'une quantité suffisante de protéine selon les revendications 1 à 3 pour provoquer la production d'anti- corps dirigés contre ladite protéine et la récupération desdits anticorps à partir du sérum desdits animaux. 29.- Préparation vaccinale comprenant une protéine selon les revendications 1 à 3 et un excipient phar- maceutique compatible. 30.- Anticorps dirigés contre une protéine selon les revendications 1 à 3. 31.- Anticorps selon la revendication 30 qui sont des anticorps monoclonaux. 32.- Emploi d'une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 pour la préparation d'un vaccin d'immunisation préventive. 33.- Emploi d'une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 pour la préparation d'anticorps anti-virus du SIDA. 34.- Emploi d'une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 pour la détection de la présence d'anticorps anti-virus du SIDA dans le sérum humain. 35.- Protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 préparée chaque fois par un procédé selon la revendication 15. 36.- Organisme unicellulaire selon l'une quelconque des revendications 8 à 12 préparé chaque fois par un procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 21. 37.- Anticorps selon la revendication 30 ou 31 préparés chaque fois par un procédé selon la revendication 28. 38.- Vaccin selon la revendication 29 préparé chaque fois par un procédé selon la revendication 27. 39.- Trousse de test pour la détermination d'anticorps anti-virus du SIDA comprenant une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 contenus dans un récipient. 40.- Trousse de test pour la détermination du virus du SIDA comprenant, contenus dans un récipient, des anti- corps anti-virus du SIDA produits par une protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 3.