FR 2600250 A1 19871224 FR 8609166 A 19860623 i La présente invention concerne un procédé pour conditionner une composition anti-bactérienne, en vue d'empêcher sa dégradation pendant la période de stockage située entre la fabrication et la consommation. Elle concerne également une composition anti-bactérienne conditionnée selon le procédé. La composition anti-bactérienne à conditionner selon le procédé faisant partie de la présente invention, contient de la lactoperoxydase, du thiocyanate, un donneur d'oxygène natif et peut être de la lactoferrine. On sait que la présence du thiocyanate, de l'oxyggène natif et de la lactoperoxydase dans un milieu aqueux produit un inhibiteur bactérien sous une forme d'ion du hypothiocyanate monovalent (OSCN) en équilibre acide-base avec sa forme acide (HOSCN). (voir par exemple EP O 133 736). La présence de l'eau est donc nécessaire pour faire démarrer la réaction ci-avant citée. Par conséquent le stockage de ces produits mélangés peut causer des dégradations. Le degré de la dégradation est fonction de la durée de stockage, et aussi de l'humidité du milieu. Dans le brevet EP O 133 736, on essaie de surmonter cette dificulté, soit par l'usage d'un milieu non-aqueux par exemple la glycerine ou le glycol de propylène, soit par limitation de la quantité d'eau dans la composition (10% maximum par poids). Le même brevet enseigne également l'usage du silica gel dans la composition à un taux de 1 à 5% par poids, ceci pour capter l'eau libre dans le milieu. Dans le GB 2162063, on essaie de surmonter cette difficulté (sans le citer explicitement),en dispersant les matières actives dans une grande masse de poudre sèche. Ceci aide à minimiser la chance de rencontre entre les particu7. les actives, d'abord pour dégager,en supposant que le degré d'humidité n'est pas nul, le peroxyde d'hydrogène et puis pour produire les ions (OSCN) en équilibre avec leur forme acide (HOSCN). Une fois que le milieu est rendu aqueux, la mobilité de ces particules augmente en raison de la grande quantité d'eau qui facilite et/ou participe en même temps à la réaction. L'utilisation d'une grande masse de poudre sèche pour véhiculer les matières actives, rend l'usage d'une telle composition difficile notamment chez l'homme. Dans tous les cas, soit pour les compositions décr-ites par EPO 133 736, soit pour celles décrites par GB 2 162 063, le risque de dégradation des matières actives est présent. Pour ces raisons, la présente invention propose, entre autres, un procédé pour conditionner la composition anti-bactérienne contenant de la lactoperoxydase, du thiocyanate,un donneur d'oxygène natif et peut-être de la lactoferrine. Le donneur d'oxygène peut être un système enzymatique oxydant ou un peroxyde soit organique soit inorganique. Un autre but du procédé faisant partie de la présente invention est de donner la possibilité de stocker une telle composition, à toutes concentrations voulues pour de longues périodes. Ceci tout en préservant l'intégralité de l'activité enzymatique à la dite composition. A cet effet,suivant une disposition de l'invention, le procédé en faisant partie se caractérise essentiellement en ce que: -dans le cas d'utilisation d'un système enzymatique oxydant un, au moins, de ses composants est isolé du reste de la composition, - dans le cas d'utilisation d'un peroxyde, celui-ci est isolé du reste de la composition, Suivant une autre disposition de l'invention, une variante de la combinaison anti-bactérienne conditionnée selon le procédé se caractérise en ce qu'elle est préparée sous forme de poudre sèche dans laquelle un des composants du système enzymatique oxydant ou le peroxyde est enrobé par une couche isolante hydrosoluble, cette poudre peut être présentée, soit en sachet, soit en gélule4soit sous forme de comprimés. La combinaison anti-bactérienne, suivant une autre variante, se caractérise en ce qu'elle est préparée sous la forme de deux parties séparées,à mélanger extemporarément, l'une de ces parties contenant soit un des deux composants du système enzymatique oxydant, soit la peroxyde, et l'autre contenant la lactoperoxydase, le thiocyanate et peut-être la lactoferrine, ces parties séparées pouvant avoir une forme liquide ou une forme de poudre, une forme pâteuse molle ou une forme pâteuse ferme, deux parties de même composition pouvant avoir la même forme ou non. La présente invention sera mieux comprise à la lecture de la description détaillée ci-dessous accompagnée par des exemples donnés à titre indicatif. Les propriétés anti-bactériennes de la lactoferrine et du système (lactoperoxydase-thiocyanate-H202)sont bien connues. La lactoférrine capte le fer disponible dans le milieu et empêche le développement bactérien pour lequel ce fer est nécessaire. La lactoperoxydase joue un rôle de catalyseur pour aider la réaction entre le thiocyanate et le donneur d'oxygène pour produire les ions d'hypothiocyanate monovalent (OSCN) qui sont des inhibiteurs antibactériens. Ces ions existent en équilibre acide-base avec leur forme acide ( HCSCN). Un milieu aqueux est nécessaire pour que cette réaction ait lieu. Dans cette description, le péroxyde ou le système enzymatique oxydant sont appelés donneurs d'oxygène natif. En effet le rôle de ces donneurs d'oxygène natif est de produire, dans le milieu aqueux nécessaire, des molécules de peroxyde d'hydrogène (H202). Ces derniers oxydent, à l'aide de la lactoperoxydase, les ions de thiocyanate (SCN) pour produire les ions d'hypothiocyanate (OSCN). Pour que la production de l'eau oxygénée (H202) et des ions d'hypothiocyanate soit assurée,un milieu aqueux est nécessaire. Ces deux étapes de réaction peuvent démarrer à un taux d'humidité supérieur à 2%, ceci à une vitesse relativement lente. Cette vitesse dépend de la concentration de molécules participant aux réactions dans la masse globale dans laquelle ces dernières existent. Il est évident que si la concentration de ces molécules est relativement élevée, à une humidité permettant la réaction, la vitesse de la réaction sera plus élevée. D'autre part, à des concentrations élevées de molécules actives et à un taux d'humidité inférieur à celui permettant les réactions ci-dessus citées, l'existence d'un oxydant fort en contact avec les enzymes peut détériorer ces dernières. Le procédé faisant partie de la présente invention, se base sur la séparation physique entre les enzymes et tous autres composants carables de produire l'oxygène natif. Le terme " tous autres composants" signifie ici un ensemble capable de produire de l'oxygène natif d'une façon autonome. De ce fait des concentrations plus élevées d'enzymes peuvent être utilisées, tout en évitant le risque, soit de faire démarrer des réactions produisant un effet antibactérien, soit de détériorer les enzymes elles-mêmes. Le donneur d'oxygène natif nécessaire, pour les réactions ci-avant citées, dont les produits ont des effets antibactériens peut être,comme c'est connu, soit du peroxyde organique ou inorganique, soit un système enzymatique oxydant. Le peroxyde inorganique peut être par exemple le peroxyde de magnésium ou de sodium et le peroxyde organique peut être par exemple le peroxyde de benzoyle. Le système enzymatique oxydant peut être par exemple gluco- se-glucose oxydase ou autres (voire par exemple EP O 133 736. Tous ces donneurs d'oxygène sont décrits dans la littérature. Selon le procédé faisant partie de la présente invention, dans le cas d'utilisation d'un système enzymatique oxydant, un de ses composants est isolé du reste de la composition antibactérienne; ce composant à isoler peut-être le glucose pour le système glucose,glucose-oxydase, et dans le cas d'utilisation d'un peroxyde soit organique,soit inorganique, ce peroxyde est isolé du reste de la composition anti-bactérienne. Il est à noter que dans le cas d'utilisation d'un système enzymatique oxydant, comme par exemple le système glucose, glucose-oxydase, le substrat,c'est à dire le glucose dans notre cas, peut être soit fourni sous sa forme exploitable par l'enzyme "glucose-oxydase",soit fourni en utilisant d'autres produits capables de le produire lors de l'usage. A titre d'exemple, on peut utiliser,à la place du glucose,l'amidon ou la malto dextrine, ceci, bien evidemment, en leur y associant les enzymes adequates lors de l'usage pour produire le glucose selon la réaction: Amidon alpha-am1ylase Alto Dextrine amyloglucosinaseClucose Dans ce cas là, l'amidon ou la malto dextrine est à isoler du reste de la composition anti-bacterienne qui contient, entre autres,soit l'alphaamylase, soit l'amyloglucosinase seulement. De même on peut utiliser, à la place du glucose, le système fructose,glucose-isomerase. Pour augmenter l'activité de la lactoferrine,autrement dit pour donner à la lactoferrine une très grande capacité de former des complexes avec le fer disponible dans le milieu, on incorpore dans la dite composition antibacterienne du bicarbonate d'un métal alcalin, comme par exemple le bicarbonate de sodium. Pour que la lactoferrine ait une bonne activité complexante, elle doit se trouver lors de son action, dans un milieu dont le bicarbonate représente environ de 0,1 à 1% par poids. Cette concentration du bicarbonate est de préférence de 0,6% par poids du milieu. D'une façon générale la quantité d'oxygène à offrir pour oxyder le thiocyanate doit être le double de celle nécessaire pour cette oxydation. Par exemple si on incorpore xM de thiocyanate dans la composition, il faut incorporer une quantité suffisante du peroxyde ou de système enzymatique oxydant, pour produire 2xM de H202. Ceci nous parait préférable pour s'assurer d'une utilisation complète de la quantité de thiocyanate. Il est possible aussi d'utiliser de la lactoferrine exempte de fer, cette lactoférrine est connue sous le nom apo-lactoferrine. Il est à noter aussi qu'il faut éviter les substances faisant concurrence avec la lactoferrine pour produire des complexes avec le fer disponible dans le milieu, ceci si ces substances malgré leur effet complexant,sont suceptibles de liberer tout ou partie de ce fer le rendant à nouveau disponible pour les bactéries. Un exemple de ces substances est le citrate. Selon une variante du procédé, faisant partie de la présente invention, un des composants du système enzymatique oxydant ou le peroxyde est enrobé par une couche isolante hydrosoluble. La composition anti-bactérienne, dans ce cas, est constituée d'une poudre sèche dont certains granulés sont enrobés par la couche isolante ci-avant décrite. Cette poudre peut être présentée,soit en sachet soit en gélules, soit sous forme de comprimés. Selon une autre variante du procédé faisant partie de la présente invention,la composition anti-bactérienne est à préparer sous la forme de deux parties séparées à mélanger extemporanément, l'une de ces deux parties contient soit un des deux composants du système enzymatique oxydant,soit le peroxyde et l'autre partie contient la lactoperoxydase, le thiocyanate et peut-être la lactoferrine. Ces parties séparées peuvent avoir une forme de poudre ou une forme liquide, une forme pâteuse molle ou une forme pâteuse ferme. Les deux parties de même composition peuvent avoir la même forme ou non. On peut avoir par exemple une même composition dont une partie sous forme de poudre et l'autre en forme de liquide ou vice-versa. Les liquides utilisés pour préparer les formes liquides ou pâteuses peuvent être aqueux ou non. La composition anti-bactérienne conditionnée selon le procédé, peut être sous une forme de poudre sèche composée de granulés dont certains contiennent le peroxyde ou un des composants du système enzymatique enrobés dans une couche hydrosoluble. Cette couche peut être composée de saccharose et d'ami on. Il est à noter que la technique d'enrobage est connue en ellemême dans l'industrie pharmaceutique. Dans le cas d'utilisation d'un système enzymatique oxydant constitué d'un susbstrat et d'une enzyme, il est préférable d'enrober le substrat. Par exemple pour le système enzymatique glucose,glucose-oxydase, on enrobe le glucose par la dite couche isolante. Cette composition peut être présentée dans des formes habituelles comme par exemple, sachet, gélules ou comprimés. Une telle composition peut être administrée oralement sous la forme de gélule ou de comprimé. Elle peut aussi être utiliseé comme soluté, après l'avoir fait se dissoudre dans l'eau juste avant l'usage. Une fois dissoute, elle peut être utilisée: à administration orale, comme bain de bouche, comme lavage vaginal thérapeutique ou spermicide, pour des besoins dermatologiques ou cosmétiques ou ophtalmologiques. Ceci bienévidemment à des dosages adéquats à chacun de ces usages.Des exemples de ces dosages - 2600250 seront donnés plus tard. Selon une variante,la composition anti-bactérienne peut être présentée sous forme de deux poudres sèches séparées, l'une contient le peroxyde ou le glucose,dans le cas d'utilisation d'un système enzymatique oxydant,et l'autre contient ds la lactoperoxydase, du thiocyanate du glucose oxydase et peut-être de la lactoferrine. Cette composition sous la forme de deux poudres sèches séparées peut être présentée de la même facçon que celle citée plus haut et composée d'une seule poudre. L'usage de cette composition sous sa forme sèche à administration orale ou sous sa forme liquide, c'est-à-dire dissoute dans une solution aqueuse extemporanément est strictement identique à celle sous forme d'une seule poudre dont certains granulés sont enrobés. Il est possible de mettre ces deux poudres, lors de la fabrication, sous forme de deux liquides aqueux séparés à mélanger extemporarément,est strictement identique à celle sous forme d'une seule poudre dont certains granulés sont enrobés. Il est possible de mettre.ces deux poudres séparées, lors de la fabrication, sous forme de deux liquides aqueux séparés à mélanger extemporanément. L'utilisation de ce mélange,à concentration précise,est identique à celle de deux poudres séparées mélangées et dissoutes dans une solution aqueuse juste avant l'usage. Il est bien entendu que la concentration de ces deux liquide est ajustée en fonction de l'usage prévu. Il est encore possible de faire véhiculer ces deux parties de même composition par deux pâtes molles. Chaque pâte molle peut être par exemple une crème ou un gel, une émulsion ou une pommade. Ces deux pâtes molles peuvent être contenues dans deux tubes à mélanger lors de l'usage ou dans un seul tube muni de deux compartiments séparés qui mènent vers une seule sortie. Multitudes d'utilisations peuvent être envisagées pour la composition anti-bactérienne sous sa forme de deux pâtes molles séparées,soit dans deux tubes,soit dans un seul tube muni de deux compartiments menant vers une seule sortie. Cette composition sous la forme de deux pâtes séparées peut être utilisée par exemple: - comme un dentifrice présenté de préférence dans un seul tube, - comme une pommade ou un gel ou une crème à usage dermatologique, comme un gel ou une crème à usage cosmétique, - comme une pommade intra-mammaire pour traitements des mammites "usage vétérinaire". - comme une crème ou un gel à injecter dans le vagin pour traiter des infections ou comme un spermicide. Il est bien évident que la pommade,le gel ou la crème peuvent avoir toutes concentrations désirées en substances actives, ceci, bien sor, est selon l'usage envisagé. Ces pâtes molles peuvent avoir une base aqueuse ou non, ceci n'altère point leur contenu en susbstances actives. De nouveau, les deux parties séparées constituant la composition antibactérienne peuvent être véhiculées par deux parties de pâte ferme à base de corps gras ou de gélatine. Ces deux parties en pâte ferme peuvent constituer un ovule, chaque partie constitue la moitié de l'ovule. Les deux moitiés seront séparées par un film hydrosoluble ou thermofusible. Ces deux parties peuvent constituer chacune un ovule séparé. Ces ovules sont à usage gynécologique soit pour traiter des infections soit pour être utilises comme spermicide. Les deux parties séparées constituant la composition anti-bactérienne peuvent être véhiculées par deux parties de pâte ferme à utiliser comme une pâte à mather. Dans ce dernier cas, la pâte à mâcher,proprement dite, est préparée d'une façon classique. Deux parties de pâte sont collées côte à cOte. Une de ces parties contient les enzymes y compris le glucose oxydase dans le cas d'utilisation d'un système enzymatique oxydant et,l'autre contient le peroxyde ou le glucose dans le cas d'utilisation d'un système enzymatique oxydant. Une comosition constituée de deux parties séparéees dont l'une est un liquide et l'autre est une poudre peut être utilisée. Dans ce qui suit, nous donnons quelques exemples des doses de matières actives à inclure dans les différents produits pour obtenir ainsi, dans chaque cas une composition antibactérienne: BAIN DE BOUCHE ( par 25 ml de solution) DENTIFRICE (par 2 g de pate) PATE A MACHER (par chaque tablette) lactoférrine lactoperoxydase thiocyanate glucose glucose oxydase de 5 à 50 mg de 0,1 à 1 mg mg de 25 à 50 mg de O,1 à 1 mg L'ensemble constitué par le glucose et le glucose-oxydase peut être remplacé par exemple, par le magnésium peroxyde à un taux de 20 à 100 mg et de préférence 35 mg environ. COLLYRE( par 5 à 25 ml) Les quantités de substances actives inclues dans le bain de bouche par 25 ml peuvent être inclues dans une quantité de soluté de 5 à 25 ml à usage ophtalmologique. POMMADE, GEL OU CREME à usage dermatologique (100 gr de pate) SOLUTE à usage dermatoloqique (par 100 ml de soluté) lactoferrine lactoperoxydase thiocyanate glucose glucose oxydase de 10 à 100 mg de 3 à 10 mg de 25 à 35 mg de 25 à 100 mg de 0,1 à 2 mg L'ensemble constitué de glucose et de glucose oxydase peut être remplacé, par exemple, par le peroxyde de magnésium à un taux variant de 35 à 150 mg. CREME OU GEL à usagqe cosmétique (par 100 gr de pâte) SOLUTE à usage cosmétique (par 100 ml de soluté) lactoférrine 5 mg lactoperoxydase 3 mg thiocyanate 25 mg Mg 02 35 mg COK'PRIME GELULE POUR INFECTION INTESTINALE (par dose) soluté pour infection intestinale (par dose) lactoferrine et de préférence lactoperoxydase et de préférence glucose et de préférence glucose oxydase et de préférence de de de de de de de de à 150 mg 60 à 100 mg 4 à 10 mg 6 à 8mg 100 à 500 mg mg 0,5 à 2 mg. 1 mg L'ensemble constitué de glucose et de glucose oxydase peut être remplacé par exemple par le peroxyde de magnésium à un taux de 25 à 150 mg et de préférence de 35 mg. POMMADE à usage intra mammaire (par 100 gr de pâte) lactoferrine lactoperoxydase thiocyanate glucose glucose oxydase de 10 de 3 de 25 de 25 de O à - 100 mg à 10 mg à 35 mg à 100 mg à 2 mg L'ensemble constitué de glucose et être remplacé par exemple par le taux de 35 à 150 mg. de glucose oxydase peut peroxyde de magnésium à un OVULE à usage gynécoloqique antibactérien (par dose) lactoférrine lactoperoxydase et de préférence thiocyanate glucose glucose-oxydase de 5à de 1 à de 4à de 24à de 100à de 1 à mg 10 mg 5 mg 35 mg 200 mg 2 mg L'ensemble constitué de glucose et de glucose-oxydase peut être remplacé par le peroxyde de magnésium à un taux de 25 à 100 mg. OVULE à usage spermicide (par dose) lacoférrine au choix lactoperoxydase 10 mg thiocyanate 25 mg MgO2 35 mg Il faut noter que la-lactoférrine n'a pas d'effet spermicide, elle peut être incorporée dans la composition à titre d'agent d'hygiène en raison de son pouvoir anti-bactérien. Il faut également noter que la pression osmotique dans les deux parties de l'ovule contenant la composition antibactérienne ou spermicide doit être égalisée. Ceci pour éviter la migration des particules actives d'un côté à l'autre de l'ovule. Si la pression osmotique ne peut pas être égalisée,la séparation de deux moitiés de l'ovule par un film hydrosoluble ou thermofusible diminue beaucoup cette migration. REVENDICATIONS R1/ Procédé pour conditionner une composition antibactérienne contenant de la lactoperoxydase, du thiocyanate, un donneur d'oxygène natif et peut être de la lactoferrine en vue d'empêcher sa dégradation pendant la période située entre la fabrication et la consommation, le donneur d'oxygène natif pouvant être un système enzymatique oxydant ou un peroxyde soit organique soit inorganique, procédé étant caractérisé en ce que: dans le cas d'utilisation d'un système enzymatique oxydant, un de ses composants est isolé du reste de la composition, - dans le cas d'utilisation d'un peroxyde, celui-ci est isolé du reste de la composition. R2/ Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'on incorpore dans la dite composition, dans le cas o la lactoferrine en fait partie, du bicarbonate d'un métal alcalin comme par exemple le bicarbonate de soude, ceci à telle concentration que la lactoferrine se trouve, lors de son action, dans un milieu contenant de 0,1% à 1% par poids et.de préférence de 0,6 % par poids environ du dit bicarbonate. R3/ Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'on prépare la dite composition sous forme de poudre sèche dans laquelle un des composants du système enzymatique oxydant ou le peroxyde est enrobé par une couche isolante hydrosoluble, cette poudre peut être présentée soit en sachet soit en gélule,soit sous forme de comprimés. R4/ Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'on prépare la dite composition sous la forme de deux parties séparées à mélanger extemporanément l'une de ces deux parties contenant, soit un des deux composants du système enzymatique oxydant, soit le peroxyde, et l'autre contenant la lactoperoxydase, le thiocyanate et peut être de la lactoférrine, ces parties séparées pouvant avoir une forme liquide ou une forme pâteuse molle ou une forme pâteuse ferme, deux parties de même composition pouvant avoir la même forme ou non. R5/ Procédé selon la revendication 4 caractérisé en ce que les liquides utilisés pour préparer les formes liquides ou pâteuses peuvent être aqueux ou non. R6/ Composition antibactérienne à administration orale à l'état sec, à usage dermatologique ou ophtalmologique ou comme bain de bouche ou comme lavage vaginal ou encore à administration orale à un dosage adéquat pour chacun de ces usages,caractérisée en.ce qu'elle est conditionnée selon le procédé revendiqué dans les revendications 1, 2 et 3. R7/ Composition antibactérienne selon la revendication 1, la revendication 2 et la revendication 4 à administration orale à l'état sec, à usage dermatologique ou ophtalmologique IIBS 2600250 ou comme bain de bouche ou comme lavage vaginal ou encore à administration orale, ceci une fois qu'elle es-t dissoute juste avant l'utilisation dans une solution aqueuse à un dosage adéquat pour chacun de ces usages, caractérisée en ce qu'elle a la forme de deux poudres séparées qui peuvent être présentées en sachets ou en gélules ou sous forme de comprimés. R8/ Composition antibactérienne selon la Ri, la.R2 et la R4 à administration orale, à usage dermatologique ou ophtalmologique, pouvant être utilisée comme bain de bouche ou comme lavage vaginal à dosage adéquat pour chacun de ces usages caractérisée en ce qu'elle est constituée de deux liquides séparés ou d'un liquide et d'une poudre. R9/ Composition antibactérienne selon Ies revendications 1, 2 et 4 à usage dermatologique ou cosmètique à usage intramammaire, à usage de dentifrice, ceci à dosage adéquat pour chacun de ces usages, caractérisée en ce qu'elle est constituée de deux pâtes molles séparées, soit dans deux tubes à mélanger lors de l'usage, soit dans un seul tube ayant deux compartiments séparés qui mènent vers une seule sortie. & R1iO/ Composition antibactérienne selon les revendications 1, 2 et 4 à usage gynécologique, caractérisée en ce qu'elle est constituée de deux parties en pâte ferme à base de corps gras thermofusible ou de gélatine hydrosoluble, ces deux parties pouvant être deux ovules séparés à utiliser si- z0 multanément ou pouvant constituer les deux moitiés d'un même ovule séparées par un film hydrosoluble ou thermofusible. Rll/ Composition antibactérienne selon les revendications'l, 2 et 4 destinée a être utilisée comme pâte à mâcher caractérisée en ce qu'elle est constituée de deux parties de pâte fermes collées côte à côte, ces deux parties étant mélangées et humidifiées lors de l'usage. R12/ Composition antibactérienne selon les revendications 1, 2, 3 et 4 à mélanger aux aliments pour animaux, caractérisée en ce qu'elle est constituée, soit d'une poudre unique selon la revendication 3, soit de deux parties séparées à mélanger extemporarément selon la revendication 4, ces deux parties pouvant avoir chacune indifféremment une forme liquide ou une forme de poudre.