FR 2604177 A1 19880325 FR 8713109 A 19870921 La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés phosphorylés du glucopyranose, utilisables comme médicaments, notamment comme immunomodulateurs, comme agents anti-viraux et comme agents anti-inflammatoires. En particulier, l'invention concerne les composés répondant à la formule I Of dan h.O \ (OH RR dans laquelle R] représente un reste répondant à l'une des formules IHa à IIk suivantes: CH20H ID I I CE{OH CH2OH HO- -0 OH^ - (ZIa) OR4 (Ib) HOH2 ' ' 0 2 H O\-- V OH l( ic) !H oH \.M \ CH2OH CEOHGO c'R4. O- s ( IId) COR4 _2OH CH20H O ]0 HO - (îie) OH OH CH2OH 0HO- _ A.o- I Et4.o- -2OH OH -...c O4 O CH (IIg) C2 0 O- OH cH2 OH 3 HDH CH>o COO I CI-DH Et,,.../-.-,.,,,CoR4 ID CH0H \0\ ( Ilh) E- S CVOHC I cEH cH2OH 1 5 *CHEH OOJOR4 cHOH CH2It!CH2 H ED I c6 R4 ". /..o- (IIi) O2OR4 ' [CH20H HD CK)H FCOH O- CII2OH îOR4 (ROR4 [CE20H 11 o R4 représente l'hydrogène, l'équivalent d'un métal ou un groupe alkyle, X et Y, qui peuvent être identiques ou différents, représentent l'oxygène ou un groupe imino, et R2 et R3, qui peuvent être identiques ou différents, représentent un groupe acyle éventuellement substitué, et leurs sels. L'invention a également pour objet un procédé de préparation des composés de formule I, procédé selon lequel a)-on fait réagir un composé de formule III CH2OH HC R Y YR3 dans laquelle R2, R3, X et Y ont les significations données précédemment et R5 représente un groupe pro- tecteur, avec un composé de formule IV Ri - Z (IV) dans laquelle R' a la même signification que R1, les groupes hydroxy présents dans le reste R1 étant cependant protégés et les groupes R4 éventuellement présents dans le reste Ri signifiant un groupe alkyle ou un groupe protecteur, et Z représente un groupe éliminable, et, dans le composé ainsi obtenu répondant à la formule V o H R2X% ? %..r4.i OR5 (V) YR3 dans laquelle Rî, R2, R3, R5, X et Y ont les signifi- cations données précédemment, on introduit ensuite le groupe phosphate, ou b) on fait réagir un composé de formule VI CH20H 0 't R60' \X.- OR (VI) "4OR YR 3 vi YR3 dans laquelle R2, R3, R5, X et Y ont les significa- tions données précédemment et R6 représente un groupe protecteur, avec un composé de formule IV tel que défini précédem- ment, et on élimine les groupes protecteurs dans le composé ainsi obtenu répondant à la formule VII RGO C2 (VII) R6Cr P R P-X */\-.\oRs YR3 dans laquelle R2, R3, R5, R6, Ri, X et Y ont les signifi- cations données précédemment. La réaction du composé de formule III ou VI avec le composé de formule IV est effectuée dans un solvant inerte sous les conditions de la réaction, par exemple dans un hydrocarbure chloré tel que le dichlorométhane. On opère en l'absence d'humidité, de préférence à la température ambiante. Pour introduire le groupe phosphate dans le composé de formule V conformément au procédé a), on dissout à la température ambiante ou à une température inférieure le composé de formule V dans un solvant inerte sous les conditions de la réaction, par exemple dans un hydrocarbure chloré tel que le dichlorométhane, ou dans un éther cyclique tel que le tétrahydrofuranne, et on fait réagir un phosphoro-chlorhydate protégé. Le composé ainsi obtenu peut ensuite être isolé et éventuellement purifié selon les méthodes connues. L'élimination des groupes protec- teurs peut être effectuée selon les méthodes connues en une ou plusieurs étapes. Par exemple, un groupe pro- tecteur peut être éliminé sous des conditions acides, par exemple avec un acide aqueux (échangeur d'ions), ou par hydrogénolyse. Comme groupe protecteur, on peut utiliser n'importe quel groupe protecteur habituellement utilisé dans la chimie des glucides, par exemple le groupe ben- zyle, allyle, chloroacétyle ou un groupe silyle éventuel- lement substitué. Comme groupes protecteurs du reste phosphate, on peut également utiliser des groupes protecteurs connus, par exemple le groupe benzyle ou phényle. Les symboles R2 et R3 peuvent être identiques ou différents; de préférence, R2 et R3 sont identiques. Les symboles R2 et R3 représentent un groupe acyle contenant par exemple de 4 à 20 atomes de carbone, plus particulièrement de 12 à 16 atomes de carbone, et spécialement 14 atomes de carbone. R2 et R3 peuvent être substitués en position 3 par un groupe hydroxy, acétoxy ou acyloxy, tel que défini ci-dessus, l'atome de carbone C3 pouvant avoir la configuration R ou S. Dans les composés de formule I, les symboles R2 et R3 peuvent donc être présents sous forme achirale, sous forme R ou S ou sous forme racémique. La configura- tion demeure inchangée au cours du procédé de l'inven- tion, ce qui signifie que lorsqu'on utilise un produit de départ sous forme R ou S ou sous forme de racémique, on obtient le produit final R, S ou racémique correspon- dant. Les composés de formule I sont de préférence obtenus sous forme de sels.Comme ions complémentaires destinés à augmenter la solubilité dans l'eau, on utilise de préférence des composés basiques hydrophiles, par exemple le tris(hydroxyméthyl)-aminométhane ou la L-lysine. Le groupe éliminable Z signifie de préférence un halogène, en particulier le chlore ou le fluor. Les produits de départ de formule V sont en partie nouveaux et peuvent être obtenus en faisant réagir un composé de formule IVa R.-Z' (IVa) dans laquelle R' a la signification donnée précédemment et Z' représente un groupe acyloxy, en particulier un groupe 4-nitrobenzoyloxy, ou un groupe hydroxy, avec un acide halogénohydrique ou un acide Lewis, par exemple HC1, HBr, un réactif de Vilsmeyer sous forme de chlorure ou de bromure, le chlorure de thionyle, TiC14, TiBr4 ou le trifluorure de diéthylaminosoufre (DAST). Les produits de départ de formule III et IV sont connus ou peuvent être préparés de manière analogue auxprocédés connus ou de manière analogue à celle décrite dans la présente demande. Les exemples suivants illustrent la présente invention sans aucunement en limiter la portée. Dans ces exemples, les températures sont indiquées en degrés Celsius et Tris signifie tris(hydroxyméthyl)- aminométhane. Exemple 1 6-0-(a-D-Arabinofuranosyl)-2-désoxy-4-0-phosphono-3-0- têtradécanoyl-2-[3-(R)-tétradécanoyloxytétradécanamido]- D-glucopyranose.Di-sel de Tris a) Benyl: :-2,3,5-tri-Obenzyl::D:arabinofuranosyl)- 2:dês2oxï:3-0-tétradécanoyl:-2-E3:- l:1ét radécan oïl oxy:_ tétradécanamido]-:-D-2:uco.yranoside On sèche convenablement 270 mg de benzyl- 2- désoxy-3-O-tétradécanoyl-2-[3-(R)-tétradécanoyloxyté- tradécanamido]-5-D-glucopyranoside et on le dissout dans 50 ml de dichlorométhane anhydre (distillé sur P205). On ajoute 3 g de Driérite pulvérisee (chaufféeau préalable à 160 sous vide poussé) et de 2 g de carbonate d'argent. Sous agitation vigou- reuse, on ajoute ensuite goutte à goutte une solu- tion de 2,3,5-tri-O-benzyl-l-chloro-l-désoxy-a-D-arabino- furanose (fraîchement préparé à partir de 600 mg de 2,3,5-tri-0-benzyl-1-0-4-nitrobenzoyl-a,f-D-arabino- furanose) dans 50 ml de dichlorométhane anhydre. Onveille à opérer en l'absence de toute humidité. La réaction est terminée après environ 2 heures (chromatographie en couche mince: Rf = 0,54, toluène/acetate d'éthyle = 2:1). On élimine par filtra- tion les produits solides de la solution limpide, on évapore le solvant et on chromatographie le résidu sur deux colonnes de gel de silice MerckLobar montées en série dimension B, éluant gradient linéaire de 800 ml chacun toluène / acetate d'éthyle (7:1) puis toluène / acetate d'éthyle (3/1). b) Benzyl-6-0-:2,3,5-tri-0-benzyl-a-D-arabinofuranosyl)- 2-désoxy-4-0-di2hénylho2sehono-3-0-tétradécanoyl-2- [3:1R1:lttradécanoylox2tétradécane-amido-l-D-:2Iuco: pyranoside On traite à plusieurs reprises avec du benzène anhydre dans un évaporateur rotatif, 1 g du composé du titre de l'exemple la) ci-dessus et on le reprend dans 30 ml de dichlorométhane fraichement distillé (sur P205). On ajoute ensuite 278 mg de 4-diméthyl- aminopyridine (évaporée à 3 reprises avec du benzene anhydre) et 1 ml de pyridine anhydre fraichement distillée. Sous argon, on ajoute ensuite directement dans la solution 810 ml de phosphorochlorhydate de diphényle. La chromatographie en couche mince (toluene / acetate d'éthyle = 5 /1) indique qu'après 3 à 4 heures il n'y a pratiquement plus de produit de départ (Rf =.0,20). Pour le traitement ultérieur, on traite la phase organique par de l'hydrogénosulfate de potassium et du bicarbonate de sodium, on la lave à l'eau, on la sèche sur sulfate de magnésium et on l'évapore. Le résidu est chromatographié (toluène / acetate d'éthyle = 5/1, Rf = 0,4) sur une colonne de gel de silice (Merck Lobar type C). c) 6::la:D-arabinofuranosyll-:2-d:sox-4:-:-di2hénle2hos:- 2hono:3-0-tétradécanoyl-2-[3-(Rl-tétradécanol oxytetra- décanamido]:-D-:U:21ïranose Dans 15 ml d'éthanol absolu, on met en suspen- sion 100 mg du composé du titre de l'exemple lb) ci-dessus et on hydrogène pendant 8 heures à la température ambiante et sous pression atmosphérique, en présence de charbon palladié (10%). Le produit de départ passe progressi- vement en solution. On élimine le catalyseur par filtra- tion sur célite et on évapore le solvant. F = 87-92 (méthanol); Rf = 0,46 (acétate d'éthyle). d) 6-::0a-D-arabinofuranosyll-2-désoxy-4-0-phosphono- 3-0-tétradécanoyl-2-[3:lRl:têtradécanooxyt étra- décanamidoJ-D-qlucoyran2ose Ldi-sel de Trisl 260 4 1 7 7 On reprend 30 mg du composé du titre de l'exemple lc) ci-dessus dans 5 ml d'acide acétique glacial, on ajoute 15 mg d'oxyde de platine et on hydrogène pen- dant environ 2 heures à la température ambiante et sous pression atmosphérique. Apres cette période, la bande des produits de départ (Rf0, 93) n'est plus décelable en chromatographie en couche mince et une nouvelle bande apparaît à Rf,0,55 (chloroforme / méthanol / acide acétique glacial / eau = 16/5/1/1). Exemple 2 2-désoxy-6-0-a-D-glucopyranosyl-4-0-phosphono-3-0-tétra- décanoyl-2-[3-(R)-tètradécanoyloxytétradécanamido]-D-glu- copyranose a) Benzy-6-:-2 34,6-tétra-O-ben zyl-ca-D-guoyaoy) 2-désox:-3-0-tétradécanoyl-2-[3-:Rl-têtradécanoyloxy- tétradécanamido]-5-D-gluco2yranoside A 1 g de benzyl-2-désoxy-3-0-tétradécanoyl- 2-[3-(R)-tétradécanoyloxytétradécanamido]-5-D-gluco- pyranoside dans 50 ml de dichlorométhane franchement distillé sur P205, on ajoute 3 g de Driérite pulvérisée(séchêependant 8 heures à 160 sous vide poussé) et 6 g de carbonate d'argent. A l'abri de la lumière, on ajoute ensuite lentement goutte à goutte l'halogénure de glucosyle obtenu à partir de 3,07 g de 2,3,4,6-tétra-0-benzyl-l-0-4-nitrobenzoyl- D-glucopyranose (environ 50 ml). Apres une heure, on ajoute encore 3 g de carbonate d'argent et on laisse réagir au total pendant environ 24 heures. On élimine ensuite les produits solides par filtration, on évapore le filtrat et on chromatographie le résidu sur une colonne à pression moyenne de 50 x 6 cm (gradient: de 800 ml chacun toluène / acétate d'éthyle 7/1 et toluène / acétate d'éthyle 3/1). Le composé du il titre est élue ensemble avec le 2,3,4,6-tétra-O- benzylglucose. La séparation est effectuée sur colonne de gel de silice Merck Lobar, type C (conditionnée avec un mélange d'hexane / acétate d'éthyle = 3/1) avec deux gradients successifs: 1) 800 ml chacun hexane / acetate d'éthyle = 3/1 et hexane / acetate d'éthyle = 2/1, 2) 800 ml chacun hexane / acétate d'éthyle = 2/1 et hexane / acétate d'éthyle = 1/1. b) B 2,3,4,6-tétra-O-benzyl-a-D-glucoEyranosyl 1 2-désox-4-O- dgihénle2hos2hono-3-O-tétradécanoyl-2- C3:-(R-tétradécanoyl oxtétradécane-amido]-B-D- g1 uc2yrranoside On dissout 700 mg du composé du titre de l'exemple 2a) ci-dessus dans 20 ml de dichlorométhane fraichement distillé sur pentoxyde de phosphore. On ajoute 184 mg de 4-diméthylaminopyridine et 1 ml de pyridine franchement distillée. Sous argon, on ajoute direc- tement dans la solution 517 ml de phosphorochlorhydate de diphényle et on agite pendant 72 heures à la tempé- rature ambiante. La réaction n'est pas complète (chromatographie en couche mince: RfyjO,39, toluène / acetate d'éthyle = 5/1). Pour le traitement ultérieur, on ajoute au mélange 1 ml d'eau et, après 10 minutes d'agitation, on extrait par de l'hydro- génosulfate de sodium et du carbonate de sodium. On sèche la phase organique sur sulfate de magnésium, on évapore le solvant et on chromatographie le résidu sur une colonne de gel de silice Merck Lobar de type C (1200 ml de toluène / acétate d'éthyle = 6/1 puis 800 ml de toluène / acétate d'éthyle = 3 /1). Dals 40 ml d'éthanol à 96%, on met en suspen- sion 150 mg du composé du titre de l'exemple 2b) ci-dessus et on ajoute 33 mg de charbon palladié à 10%. On hydro- gène ensuite pendant environ 7 heures àa la température ambiante et sous pression atmosphérique. Le catalysa- teur est ensuite séparé par filtration sur célite et le filtrat est évaporé. On obtient ainsi le composé du titre sous forme d'un sirop incolore. Rf;. 0,78 (dans le choroforme / méthanol / acide acétique gla- cial / eau = 16/5/1/1). d) 2:dêsoxy:6-O-c-D-91YEgrangs2!: 4-:gihgs2bono-3-O- tétradécanoyl-2-[3-:R:-tétradécanoylox2tétradécanamido]- P:21uc2eyranose On dissout 80 mg du composé du titre de l'exemple 2c) ci-dessus dans 25 ml d'acide acétique glacial. On ajoute ensuite 40 mg d'oxyde de platine et on hydro- gène pendant environ 80 minutes à la température am- biante et sous pression atmosphérique. On sépare ensuite le catalyseur par filtration, on élimine l'acide acétique glacial par 3 évaporations avec du toluène, on reprend le résidu dans 40 ml d'éthanol à 96% et on ajoute 14,7 mg de tris(hydroxyméthyl)amino- méthane. Apres addition de 50 ml de toluene, tous les produits solides passent en solution. On évapore le mélange et on le traite à l'évaporateur rotatif encore 2 fois avec un peu d'éthanol absolu. Rf = 0, 63 (chloroforme / méthanol / acide acétique glacial / eau = 16/5/1/1). 2604 1 77 Exemple 3 2-désoxy-6-O-Eméthyl-(3-désoxy-5-D-manno-2-octulopyra- nosyl)-ono]-4-O-phosphono-3-O-tétradécanoyl-2-[3(R)- tétradécanoyloxytétradécane-amido]-a,B-D-glucopyranose a):zl-6-0Eméthylttra-0-chloracétyl-3-d::ésox:y-a,B-:_ D-manno-2octulo2yranos1ylono]-2-désoxy:-:4-O-dibhénl 2hos2hono-3-0-tétradécanol:-2[3-:R: tétradécanoyl2oxy tétradécanamido -i-D-lucopyranoside On dissout 98 mg d'ester méthylique de l'acide 4,5,7,8-tétra-O-chloracétyl-2,3-didésoxy-2-fluoro- a,6-D-manno-2-octulopyranosonique et 100 mg de benzyl- 2-désoxy-4-O-diphénylphosphono-3-O-tétradécanoyl- 2-[3-(R)-tétradécanoyloxytétradécanamido]-6-D- glucopyranoside dans 2 ml du dichlorométhane anhydre. On ajoute 200 mg de tamis moléculaire 4 A pulvérisé, et, après refroidissement à 0 , environ 3 gouttes d'éthérate de trifluorure de bore. On agite ensuite le mélange réactionnel pendant 30 minutes à 0 et pendant encore 24 heures à la température ambiante (vérification par chromatographie en couche mince dichlorométhane / éther = 7/1). On verse ensuite le mélange réactionnel dans une solution aqueuse de bicar- bonate de sodium refroidie par de la glace, on l'extrait au dichlorométhane, on sèche la phase organique sur sulfate de sodium anhydre et on l'évapore. Le résidu obtenu est chromatographié sur gel de silice (a: dichlorométhane; b: dichlorométhane / méthanol = 500/1). On obtient d'abord le composé a comme compo- sante d'élution plus rapide et ensuite le composé À, F = 47-50 Composé a: [E]D = 9,4 ( c = 0,36 dans le chloroforme) Composé y: [a]D = 4,0 ( c = 0,55 dans le chloroforme) b) Benzl: O:121[méthl:1-3:désox:-a-Dmanno-2-octuloy: ranosyl1ono]-2-désoxy-4-:-diphényl2hos2hono-3-O- tétradécanol:-2- L31R-tétradécanoy oxy-tétradécana- mido]-f-D-lucqpyranoside On dissout 30 mg de benzyl-6-0-[méthyl(tétra-0chloroacétyl-3-désoxy-a,-D-manno-2-octulopyranosyl) ono]-2-désoxy-4-O-diphénylphosphono-3-O-tétradécanoyl- 2-[3-(R)-tétradécanoyloxytétradécanamido]-f-D-gluco- pyranoside dans 0,6 ml d'acide acétique glacial et on ajoute 1,2 ml de 2, 6-lutidine. On refroidit le mélange réactionnel à 0 et on ajoute, sous agita- tion, 0,48 ml de dithiocarbonate d'hydrazine. On agite ensuite pendant 2 heures à 0 O (vérification par chromatographie en couche mince: dichlorométhane/ méthanol = 10/1) et on évapore ensuite à la tempéra- ture du bain de 30 -35 avec du toluène. On extrait le résidu avec du dichlorométhane, on lave la solu- tion à chaque fois à froid avec de l'acide chlorhy- drique dilué, de l'eau, une solution diluée de carbo- nate de sodium et de l'eau glacée, on la sèche et on l'évapore. Le résidu est chromatographié sur colonne de gel de silice (a: dichlorométhane; b: dichloro- méthane / méthanol = 100/1; c: dichlorométhane / méthanol = 50/1). On obtient ainsi le composé du titre. F = 54-56 , [Ea]D = -1,7 (c = 0,24 dans le chloroforme). c) Benz:yl:2-désox-:6-0-[méthl:3-deésox:-i-D-manno-2- octulopyranosyll-ono]-4-20-di2hényl h0sehono-3-O- tétradecanol:-2-:[3-il:-tétradécanoyloxtétradécana- mido]-:i-D: u2c2ïr52oside Un mélange de 51 mg du composé du titre de l'exemple 3b) ci-dessus,de 1 ml d'acide acetique glacial et de 2 ml de 2, 6-lutidine est traité par 0,8 ml d'une solution de dithiocarbonate d'hydrazine, comme décrit sous b) ci-dessus. F = 62-65 , [a]D = 4,3 (c = 0,35 dans le chloroforme). 2-[3-1R1:-ttradécanoyloxytétradécanamido]-a,B -D- q1ucopïraDqs On hydrogène le composé du titre de l'exemple 3c) ci- dessus dans un mélange d'éthanol et de méthanol, en présence de charbon palladié. F = 58-60 , [a]D = 22 (c = 0,31 dans le chloroforme). e):2-désox:::-6-0-[méth l:ésox::!nno-2-octulo- P ranosyll2n9!-4:2:2h2s2hono-3-0-tétradécano l-2-[3- iR):t tradécanoyl2xytétradécanamido]-a,3-D:l Yuú2y- ranose On dissout dans du méthanol le composé du titre de l'exemple 3d) ci-dessus et on l'hydrogène en présence d'oxyde de platine ( catalyseur d'Adam). On obtient ainsi le composé du titre. F = 138-139 ; [a]D = 26 (c = 0,26 dans un mélange 3/1 d'éthanol et de chloro- forme). Exemple 4 2-désoxy-6-[4-0-(3-désoxy-a-D-manno-2-octulopyranosyl) onate de méthyle-3,5-didésoxy-a-D-arabino-2-octulopyra- nosylonate de méthyle]-4-O-phosphono-3-O-tétradécanoyl-2- [3-(R)-têtradécanoyloxytétradécanamido]-D-glucopyranose a) Benzyl:2:dêsoxy-6-0-[4-0:-3-désoxy-4,5:7,8-diiso- pro2plidène-a-D-manno-2-octulopyranosyll2natede méthyle-3,5-didésoxy-7,8iso2roeylidène-D-arabino- 2-octulopyranosylonate de méthy'e]:-4-O:diehényleh2s: 2hono-3-O-tétradécanoyl-2-[3-:R:-tétradécanoyloxy- tétradécanamido] --D-gl1ucOPïra noside A une solution de 146 mg de [3,5-didésoxy-7,8- O-isopropylène-4-0-(3-désoxy-4,5:7,8-di-0-isopropy- lidène-a-D-manno-2-octulopyranosyl)-onate de méthyle- a-D-manno-2-octulopyranosyl]onate de méthyle dans du dichlorométhane anhydre,on ajoute 64 mg de chlorure de chlorométhylènediméthyliminium (réactif de Vils- meier) et on agite pendant 2 heures à la température ambiante.On secoue rapidement la solution avec une solution saturée de NaHCO3 refroidie par de la glace, on la sèche sur MgSO4 et on l'évapore. On dissout le résidu dans 5 ml de dichlorométhane anhydre et on l'ajoute goutte à goutte à une suspension de 574 mg de 2-désoxy-4-O-phosphono-3-O-tétradécanoyl-2-[3-(R)- tétradécanoyloxytétradécanamido]-D-glucopyranose, 76 mg de Hg(CN)2, de 36 mg de HgBr2 et de 0,5 g de tamis moléculaire 4 A dans 5 ml de dichlorométhane anhydre. Après 48 heures d'agitation à la température ambiante, on filtre, on évapore le mélange et on chromatographie le résidu obtenu sur gel de silice (toluene / acetate d'éthyle = 2/1). On obtient ainsi * le composé du titre sous forme d'un sirop incolore. Spectres 1H-RMN: 7,45-7,09 (m,t5H,aromatique);5,73 (d, 1H, JNH,2 9'5, N-H) ; 5,24 (dd, 1H, J2,3,' 110, J3,4 9e0, H-3); 5,03 (dddd, 1H, CH-OR); 4,92 et 4162 (3AB 12,5, C6H5CH20); 4.59 (d, 1H, J1,2' 85, H-1); 4y51 (ddd, 1H, 34, 5, 8,0, 34,,3,e 4y5, 34.,3"a 3,0, H-4"); 4,47 (dd, 1H, J4 5' 95, H-4); 4",51#-8ol J411,3fle 4,5 y 4>43-4,36 (m, 2H, H-4', 7"); 4,29 (dd, 1H, J5, 6"20,O, H-5"); 4>14 (dd, 1H, J8a, 8"b90, J8"a,7..6j0, H-8"a); 4>07 (dd, 1H, 38"b,7.5.0, H-8"b); 4,08-3>67 (m, 7H); 3,63 (dd, 1H, H-6"); 3,59 (s, 3H, CH30CO); 3,56 (s, 3H, CH3OCO); 2>95 (dd, 1H, J3,,e,3"a-.15,0, H-3"e); 2,43 (dd, 1H, J3,e,3,a1510, 33,e,4,'50, H-3'e); 2>36-1>96 (m, 6H, CH2-CO); 1,90 (dddd, 1H, H-5'e); 1>09 (dd, 1H, H-3"a); 1>73-1,00 (m, 82H, H-3'a, 5'a, (CH2)n, (CH3)2C); 0,87 (t, 12H, CH3). b) 2-désoxy -6-O-4:--O-:3-désox:-a-D-manno-2-octulopyrano- syi2nate de méthl e -3,5-didésoxy-a-D-arabino-2-octulo- 2yr212yloat de mét hyle)-4- O:2hos2hono-3-0-tétradé- canoyl:2:[3:1Ri:t tradécanoyl2xytêtradécanamidol-D- 91ucopïran2se On élimine successivement les groupes protec- teurs benzyle et phényle dans le composé du titre de l'exemple 4a) cidessus, en procédant comme décrit dans les exemples 1 à 3. Il se produit simultanément l'hydro- lyse des groupes isopropylidène catalysée par l'acide. On obtient ainsi le composé du titre; [a]20 = +3,2 (c = 0,2 dans un mélange 2/1 de chloro- forme et de méthanol). Exemple 5 2-désoxy-6-O-[5-O-[(3-désoxy-a-D-manno-2-octulopyranosyl)- onate de méthyle]-a-D-arabinofuranosyl]-4- O-phosphono-3-O-tétradécanoyl-2-[3-(R)-tétradécanoyloxy- tétradécanamido]-D-glucopyranose a) Benzyl-2-désoxy-6-0-[2,3-di-0-benzyl-5-0-[:-désoxy- 4,5:7,8-diisopropylidène-a-D-manno-2-octuloeranosyl) onate de méth le]-a-D-arabinofuranosl]:-4-0- dihényl- 2hos2hono-3-0-tétradécanoyl:-2:[3: R-tétradécanoyl- ox2tétradécanamido]-:i-D-:luco yranoside On dissout 280 mg de 2,3-di-O-benzyl-5-O-[(3- désoxy-4,5:7,8-diisopropylidène-a-D-manno-2-octulo- pyranosyl)onate de méthyle)-D-arabinofuranose (séché sous vide poussé sur sulfate de calcium) dans 10 ml de dichlorométhane anhydre. A une o suspension de 0,5 g de tamis moléculaire 4 A (séché à 180 sous vide poussé sur sulfate de calcium) dans un mélange de 25 ml de dichlorométhane anhydre et de 2 ml d'acétonitrile anhydre, on ajoute 120 mg de chlorure de chlorométhylènediméthyliminium et on agite pendant 10 minutes à l'abri de l'humidité. A cette suspension, on ajoute la solution préparée précédemment du produit de départ dans du dichlorométhane et on agite à nouveau pendant 10 minutes. La réaction du dérivé du diholoside réducteur en halogénure est suivie en laissant réagir des quantités analy- tiques d'échantillons pour chromatographie en couche mince avec un mélange méthanol / carbonate d'argent (transformation en méthylglucoside). Dès que la formation de l'halogénure du diholoside est achevée, on verse le mélange dans une solution saturée froide d'hydrogéno- carbonate de sodium et on l'extrait immédiate- ment avec du dichlorométhane. On sèche la phase organique sur sulfate de magnésium, on l'évapore et on sèche le sirop obtenu sur sulfate de calcium sous vide poussé. Dans 40 ml de benzène anhydre, on met en suspension 250-mg de cyanure de mercure, mg de bromure de mercure, 2 g de tamis moléculaire o 4 A et 1,7 g de benzyl-2-désoxy-4-0-(diphényl)phosphono- 3-0-tétradécanoyl-2-[3-(R)-tétradécanoyloxytétradécana- mido]-f-D-glucopyranoside, tous ces composés étant pulvérisés et séchés sur sulfate de calcium sous vide poussé. On élimine par distillation 20 ml de benzène. A cette suspension on ajoute, après refroidissement, une solution du chlorure de diholo- side préparé précédemment dans 25 ml d'un mélange anhydre 1:1 de benzène et de dichlorométhane et on agite le tout à l'abri de l'humidité pendant 18 heures. On élimine les produits solides par filtration sur célite, on évapore le filtrat et on sépare les produits par chromatographie sur colonne de gel de silice (gradient: toluène / acétate d'éthyle = 5/1 -> 2/1). Dans le mélange tolène / acetate d'éthyle (2!1), le produit a-ara a un Rf de 0,44; [a]D0 = +12,4 (c = 0,44 dans le chloro- forme).; -ara: Rf = 0,36. b) 2-désox2-6-O -5'-0-::3 -désoxy-a-D-manno-2oc'tulo2yra: S 9 nate de mét!:hyle -a-D -arabinofuranosyl]-4-0- 2hos2hono-3-0-tétradécanol:-2:-[3-tR-tétradécanoyl- ox2Uétradécanamido]-O-:1ucoEpranose L'élimination successive des groupes protecteurs benzyle et phényle dans le composé du titre de l'exemple 5a) ci-dessus, est effectuée de manière analogue à celle décrite aux exemples 1 à 3. Il se produit simultanément une hydrolyse des groupes isopropy- lidène catalysée par l'acide. On obtient ainsi le composé du titre;[a]0 = +1,4 (c = 0,5 dans un mélange 1/1 de dichlorométhane et de méthanol). Exemple 6 2-désoxy-6-0-[acide-(3-désoxy-a-D-manno-2-octulopyranosyl) onique 3 -2 - [3-(R)-hydroxytétradécanamido]-4-0-phosphono- 3-[3-(R)-tétradécanoyloxytétradécanoyl)-D-glucose a) cBégz!E-6:02 e3:ésoxy::,5,:,8-tétra-0-chloractyl-a-:_ On agite pendant 3 heures à la température ambiante et à l'abri de l'humidité, un mélange constitué de 0,13 g de benzyl-2-[3-(R)-3-(benzyloxy- méthoxy)tétradêcanamido]-2-dêsoxy-4-0-diphénylphosphono- 3-0-[3-(R)-tétradécanoyloxytétradécanoyl]--D-gluco- pyranoside (M. Kiso et col., Carbohydr. Res., 162, 247-256 [1987]), de 1 ml de dichlorométhane anhydre, o de 0,1 g de tamis moléculaire 4 A, de 55 mg de cyanure de mercure et de 19 mg de bromure de mercure. On ajoute ensuite une solution de 0,1 g de bromure (3-désoxy-4,5,7,8tétra-0-chloracétyl-D-manno-2-octu- lopyranosyle)onate- de benzyle dans du dichlorométhane anhydre et on agite le mélange réactionnel pendant 4 jours à la température ambiante. La réaction terminée (vérification par chromatographie en couche mince: dichlorométhane / éther = 7,1), on élimine les produits solides par filtration et on lave avec du dichlorométhane. On réunit le filtrat et les solutions de lavage, on traite la solution organique globale par une solution aqueuse de bicarbonate de sodium, on la sèche et on l'évapore. Le résidu obtenu est chromatographié sur gel de silice (dichlorométhane et dichlorométhane / méthanol= 500/1); [a]20 = 12 (c = 1,8 dans le dichlorométhane). EaD b) nzy6-O-E:I 3:9ésoxy::g:eno-2-octulo:ranos! l) _ _9 ____ ____ __z __ _zl__ __9 _9 __l 9 onate de benzyle-2-E3- R -:benzyloxyméthoxyltétra- décanamidol-2-désoxy-4-0-diphénlebhosehono-3-0- [3:1CB:t:tradécanol9ox9tétradécanol]-i-D-:lucoE2[ra: noside A une solution de 30 mg du composé du titre de l'exem- ple 6a) ci-dessus dans 1,8 ml d'un mélange 2/1 de 2,6-lutidine et d'acide acétique, on ajoute à 0 O, 48 ml de dithiocarbonate d'hydrazine fraîchement préparé. On agite le mélange pendant 2 heures à 0 puis on l'évapore sous vide à une température du bain de 35 . On reprend le résidu dans du chloro- forme et on le lave successivement avec de l'acide chlorhydrique 1M refroidi par de la glace, de l'eau, une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et de l'eau, on sèche la phase organique et on l'évapore. Le résidu est chromatographié sur gel de silice (a: chlorométhane; b: dichlorométhane/methanol = /1; c:dichlorométhane / méthanol = 50/1); [a] 0= +8 (c = 1,0 dans le dichlorométhane). c):2-désox::9-6-0-:[_ acide(3désoxy:::-a-D-manno-2-octuloeyra tétradécanamido)-3-0-[3:ERl:tétradécanolox2 tétra- decanoïll:D-glucose On hydrogène 78 mg du composé du titre de l'exemple 6b ci-dessus,dans 20 ml d'un melange 3/2 d'éthanol et de méthanol à 40 en présence de 80 mg de charbon palladié à 10%. La réaction terminée (vérifi- cation par chromatographie en couche mince: dichloro- méthane / méthanol = 10/1 et 2/1) on sépare le cata- lyseur par filtration et on le lave avec un mélange d'éthanol / méthanol /dichlorométhane. On réunit le filtrat et les solutions de lavage et on évapore la phase organique globale. On obtient ainsi le composé l3l4a* 20 du titre. F = 138-140 ; Ea[]0 = +23 (c = 0,6 dans un mélange 3/1 d'éthanol et de dichlorométhane). d):2-désoxy: :-6-0-:[ acide:(3-desox:y -a::D-manno-2-octulo- 2yranosylloni9ue]-2:?3:L1: t-droxytêtradécanamidoJ-4- 2:2ho!2hono-[3 -(R-tétradécano loxïtétradécanoyl]- D-luc2se A une solution de 35 mg du composé du titre de l'exemple 6c) cidessus dans 15 ml d'éthanol, on ajoute 30 mg de catalyseur au platine d'Adams, réduit au préalable, et on agite le mélange à la température ambiante. La réaction terminée, on sépare le catalyseur par filtration sur célite et on le lave avec un mélange d'éthanol, de méthano* et de dichlorométhane. Le filtrat et les solutions de lavage sont réunis et la solution organique globale est évaporée. Apres purification par chroma- tographie en couche mince préparative (dichloro- méthane / méthanol = 2/1), on obtient le composé du titre. F = 162-164 ; [a]0 = +26 (c = 0,5 dans un mélange 1/1 de dichlorométhane et d'éthanol). Exemple 7 2-désoxy-6-O-[ acide(3-désoxy-a-D-manno-2-octulopyranosyl) onique]-4-O-phosphono-3-0-tétradécanoyl-2-[3-(R)-tétra- décanoyloxytétradécanamido]-D-glucose a) Benz:yl-6-O (- é[(3- esoxy-4,5,7,8-tétra-0-chloro- acétl:H-:-a:dnno-2-octuloeyran2syl:2natde benzylej- Ce composé est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple 6a) en utilisant comme produitsde départ le benzyl-2-désoxy-4-0-diphénylphos- phono-3-O-tétradécanoyl-2-E 3-(R)-tétradécanoyloxy- tetradécanamido]-,-D-glucopyranoside et le bromure de (3-désoxy-4,5,7,8-téetra-O-chloroacétyl-D-manno- 2-octulopyranosyle)onate de benzyle. F = 32-33c; [:]D = +10 (c = 1,3 dans le dichlorométhane). b) Benzïl:6-0-[_3-désoxï:-q-D-manno-2-octuloyranosyli:_ onate de benz]le:-2-deéso ox-4-O - di 2h i hg s2hs:no - :g3-0-tétradéancano!::Cl- t tradécano!tradé- canamido]-]-B2-cogluo2nosid e el Le composé est préparée de manière analogue à celle décrite à l'exemple 6b). F = 56-58 ; 2[a]0 = +20 (c = 1, 6 dans le dichlorométhane) c) un:sox-6-- a[_cide(3-désoxy--D-manno-2-octulopyra- 320st1i2 tri 9 Q o 2 -[3-n -12 d2 hno-3-0-té tradé- cn21 radnoy étrad écanamido]-D- u Loecopsesprprdemnèeaaou 2 6 0 4 177 On procède de manière analogue à celle décrite à l'exemple lc). F = 114115 ; a]20= +13 (c = 1,3 dans un mélange 3/1 d'éthanol et de dichlorométhane). d) 2-désoxy-6-0-:[,acide 3-désoxy-:-D-manno-2-octuloyrano- sl2onigue]-4-0EhosEhoúno-3-0-tetradecanoyl:::-2:-l. tétradécanoloxtétradécanamido]-D9:glucose On procède de manière analogue à celle décrite à l'exemple ld). F =168-169 ; [a]20 = +22 (c = 1 dans un mélange 1/1 de méthanol et de dichlorométhane). Exemple 8 2-dèsoxy-6-O-[ acide(3-désoxy-a-D-manno-2-octulopyranosyl) onigue] -4 - 0-phosphono-2-[ 3-(R)-têtradécanoyloxy- tétradécanamido]-3-O-[3-(R)-tétradécanoyloxytétradécanoyl]- D-glucose Le produit est obtenu en procédant de manière analogue à celle décrite à l'exemple 6a) en utilisant comme produitsde départ le benzyl-2-désoxy-4-0-diphényl- phosphono-2-[3-(R)-tétradàcano.yloxytétradécanamidoJ-3-O- [3-(R)-tétradécanoyloxytétradécanoyl7-B-D-glucopyra- noside et le bromure de (3-désoxy-4,5,7,8-tétra-0- chloroacétyl-D-manno-2-octulopyranosyle)onate de b) e nzyle. [::30:= + 20(c =, dannos2loctul ocrany1nate de-benzyl eJ-2-désoxï:4 -0-di 2é n.1 2hs 2h2no2:E:13:1R2: tétradécanoal oxïItrad écanamidol-3-0- E3:2:tétradé- tet2ïe2nolétradé lu:::y u2nosisd 2604 1 77 Préparé de manière analogue à celle décrite à l'exemple 6b) []20 = +80 (c = 1 dans le dichloro- D méthane). c) 2:désoxy:6-:[_ acide(3-désoxy-a-D-manno-2-octulopvra- nosyloniue 1-4-0-di hênyi 2hos2 hono-2-[3- R -tétra- décanoïloxytêtradécanami do)-3-0 3-3: R2 -tétradécanoyloxy- tétradécanoïl]:-O-21cose Préparé de maniène analogue à celle décrite à l'exemple lc). F = 138-140 . [a]0= +23 (c = 0,6 dans un mélange 3/1 d'éthanol et de dichlorométhane. d) 2:désoxy:6:0-[ acide(3-désoxy-a:-D-manno-2-octulooyrano- syllonigue]-4-:-2hosphono-2-[3-:LR-têtradécanoyl- oxtradcaamo-3--3-(R)tétradéaoyloxytétradcanamido]-3--3-(R)ttradcaoyloyttrad- sHMDs 2:2:!Ym Préparé de manière analogue à celle décrite =+2 (=0, à l'exemple ld). F= 162-164 ; [a]D = +260 (c = 0,5 dans un mélange 1/1 d'éthanol et de dichlorométhane. Les produits de départ peuvent être obtenus comme suit: - A) Benzvl-2-désoxv-3-0-tétradécanoyl-2-[3-(R)-tétradécanoy- oxytétradécanamido]-5-D-glucopyranoside (pour l'exemple 1) On dissout 500 mg de benzyl-2-désoxy-4,6- O-isopropylidène-3-0-tétradécanoyl-2-[(3-(R)-tétra- décanoyloxytétradécanamido]-g-D-glucopyranoside dans 80 ml de tétrahydrofuranne fraîchement distillé. On ajoute ensuite par portions, à la température am- biante et sous agitation vigoureuse, un mélange de 2 ml d'acide fluorhydrique à 40% et de 4 ml de tétrahydrofuranne. La réaction est suivie par chroma- tographie en couche mince et estterminee après environ 24 heures. RfO0,28 (toluène / acétate d'éthyle = 1/1). B) Benzyl- 2-désoxy-3-0-tétradécanoyl-2-[3-(R)-tétradéca- noyloxytétradécanamido]-B-D-glucopyranoside (pour l'exemple 1) Sous réfrigération à l'aide d'un bain de glace, on dissout 2 9 de benzyl-2désoxy-4,6-O-isopropyli- dène-3-0-tétradécanoyl-2-[3-(R)-tétradécanoyloxy- tétradécanamido]-f-D-glucopyranoside dans 20 ml d'acide trifluoroacétique à 90% et on maintient à cette température pendant environ 7 minutes. Apres cela, la réaction est pratiquement terminée. Vérifi- cation par chromatographie en couche mince: RfO0,28 (toluène / acétate d'éthyle = 1/1). Une grande partie de l'acide trifluoroacétique est éliminée par évaporation à basse température et le résidu est réparti entre du dichlorométhane et une solution de bicarbonate de sodium. On sèche la phase organique sur sulfate de magnésium, on l'évapore et on chromatographie le résidu sur une colonne de gel de silice (gradient: 400 ml chacunmélange 2/1 de toluène et d'acétate d'éthyle et acétate d'éthyle pur). C) 2,3,5-tri-0-benzyl-l-chloro-l-désoxy-a-D-arabino- furanose (pour l'exemple 1) On dissout 600 mg de 2,3,5-tri-0-benzyl-l-0-4- nitrobenzoyl-a,B-D-arabinofuranose dans 50 mg de dichlorométhane anhydre et on fait barboter dans la solution de l'acide chlorhydrique gazeux sec jusqu'à ce que l'acide 4-nitro-benzolque ne précipite plus. On vérifie par chromatographie en couche mince que la réaction est terminée. On sépare par filtra- tion l'acide 4-nitrobenzolque qui a précipité, on lave rapidement avec du dichlorométhane anhydre, on extrait rapidement la solution de dichlorométhane avec une solution froide de bicarbonate de sodium, on la sèche sur sulfate de magnésium, on l'évapore et on l'utilise directement pour la réaction suivante. Le degré d'hydrolyse de l'halogénure de glyco- syle peut être déterminé comme suit: on verse un échantillon pour chromatographie en couche mince dans une goutte de méthanol anhydre et on ajoute une trace de carbonate d'argent. On secoue plusieurs fois pendant 5 minutes et on place sur une plaque pour chromatographie en couche mince. Le méthyl- glucoside (RfO0,37, toluène / acétate d'éthyle = 10/1) se forme quantitativement à partir de 'l'halogénure initialement présent. Par contre, le composé 1-OH- demeure inchangé (RfJO,ll). D) 2,3,4,6-tétra-O-benzyl-l-chloro-l-desoxy-a-D-gluco- pyranose (pour l'exemple 2) Le 2,3,4,6.tétra-O-benzyl-l-O-4-nitrobenzoyl- D-glucopyranose est dissout dans du dichlorométhane de manière analogue à celle décrite sous C), et on fait passer dans la solution du HC1 gazeux sec (2 heures en refroidissant par un bain de glace durant l'introduction, puis abandon pendant 24 heures). Chromatographie en couche mince: Rf (nitrobenzoate)40,44; Rf (chlorure). 0,5 (toluène / acetate d'éthyle = 10/1). Apres réaction quantitative, on sépare par filtration l'acide 4nitrobenzolque, on élimine la majeure partie du HCl-gazeux par évaporation à l'évaporateur rotatif, on extrait rapidement avec un solution froide de bicarbonate de sodium, on sèche sur sulfate de magné- sium et on utilise directement pour la réaction suivante. Le rendement est pratiquement quantitatif; les quantités nécessaires pour la réaction suivante sont calculées à partir du 4-nitrobenzoate. E) 4,5,7,8-tétra-O-chloracetyl-2,3-didésoxy-2-fluoro- a,f-D-manno-2-octulopyranosonate de méthyle (pour l'exemple 3) a) 4,5,7,8-tétra--acétyl:-3-désox:-D-manno-2-octulopy: ranosonate de méthyle On dissout 1,19 g de 4,5,7,8-tétra-O-acetyl- 2-bromo-2,3-didésoxy-a-D-manno-2-octulosonate de méthyle dans 10 ml d'acetone et on refroidit la solution à 0 . Après addition de 2,5 ml d'une solution aqueuse 1 M de bicarbonate de sodium, on agite pendant encore 30 minutes à 0 (verifica- tion par chromatographie en couche mince: dichlorométhane / éther = 5/1). On élimine ensuite l'acétone par évaporation et on extrait le résidu avec du dichlorométhane. On lave la phase orga- nique à l'eau, on la sèche et on l'évapore, ce qui donne un sirop. La chromatographie sur gel de silice (hexane / acetate d'éthyle = 2/1) donne le composé du titre. [a]20 = 50,7 (c = 1,08 dans le chloroforme). b) 4,5,7,8-tétra-0-acétyl-3-désoxy-a-D-manno-2-0- Itétrahydr2 yranne-2:yll:?-octulo2yranosonate de méthyle A une solution de 0,917 g du composé du titre de l'exemple Ea) ci-dessus dans du dichlorométhane, on ajoute 0,99 ml de dihydropyranne, une quantité catalytique d'acide ortho-toluènesulfonique mono- hydraté et du tamis moléculaire 4 A et on agite le mélange pendant 2 heures à la température ambiante. On neutralise ensuite l'acidepar addition d'une solution de bicarbonate de sodium et on élimine les produits solides par filtration. On évapore le filtrat et on chromatographie le résidu sur gel de silice ( hexane / acetate d'éthyle = 3/2). On obtient ainsi le compose du titre. [Ea]20 = 69,5 (c = 1,26 dans le chloro- forme). c) c) 3-déso xy-a-D-manno-2 -O-(tétr ahydropyranne:2:yl)- 2-octulopyranosonate de. méthyle A une solution de 0,4 g du composé du titre lO de l'exemple Eb) ci-dessus dans 3 ml de méthanol absolu, on ajoute à 0 et sous agitation une quantité catalytique de sodium. La réaction terminee (vérification par chromatographie en couche mince: dichlorométhane / méthanol = 4/1), on neutralise avec de l'amberlite IR 120 (H+), on sépare la résine par filtration et on lave au méthanol. Le filtrat et les solutions de lavage sont réunis et évaporés. On obtient ainsi le composé du titre sous forme d'un sirop. []0 = 75 (c = 1,05 dans un mélange 10/1 de chloroforme et de méthanol). La chromatographie en couche mince révèle que le produit est un mélange à parts égales des éthers tétrahydro- pyrannyliques diastéréoisomères. d) 415Z 8-téetra-:-chloroacetl:-3-désoxy:-a-D-manno- :2:- tétrahdroEg:ranne-2-:yl-2- octuloEyranosonate de méthyle A une solution de 1,14 g du composé du titre de l'exemple Ec) ci-dessus dans 5 ml de dichloro- méthane, on ajoute 6,5 ml de 2,6-lutidine anhydre et 2,05 ml de triéthylamine. On refroidit la solution à 0 et on ajoute 3,5 g d'anhydride chloroacetique. Après 20 heures d'agitation à la température ambiante, on refroidit à nouveau le mélange réactionnel, on ajoute du méthanol pour détruire l'excès de réactif et on évapore le mélange, ce qui donne un sirop. Le résidu est dissout dans du dichlorométhane. La solution est lavée successivement avec de l'acide chlorhy- drique 2N refroidi par de la glace, de l'eau et une solution diluéede bicarbonate de sodium,on la sèche sur sulfte de magnésium et on l'évapore. Le produit est purifié par chromatographie sur gel de silice (hexane / acetate d'éthyle = 2/1) et est obtenu sous forme d'un sirop. Les deux éthers tétrahydropyrannyliques dia-stéréoisomères peuvent être séparés par chromatographie. Composant élué plus rapidement: [a]0 = 77,2 (c = 0, 5 dans le chloroforme); composant élué plus lentement: la]0 = 56,4 (c = 0,47 dans le chloroforme). e) 4,5,7,8-tétra-0-chloroacétyl-3-d:ésox-a-D-ma:nno- 2-octulopyranosonate de méthyle On chauffe à 45 une solution de 1,90 g du composé du titre de l'exemple Ed) ci-dessus dans 50 ml d'acide acétique glacial. On ajoute ensuite goutte à goutte 5 ml d'eau et on maintient le mélange à 45 pendant 5 à 6 heures (vérifica- tion par chromatographie en couche mince: dichlorométhane / méthanol = 50/1). On lyophilise ensuite le mélange et on chromatographie le résidu sur gel de silice (hexane / acétate d'éthyle = 2/1). On obtient ainsi le composé du titre. [a]20 = 40,8 O (c = 0,93 dans le chloroforme). f) 415,7,8-tétra-0-chloroacétel-2,3-didésoxy-2-fluoro- a,5-D-manno-2-octul o2ranosonate de méthyle On dissout 323 mg du composé du titre de l'exemple Ee) dans 2 ml de toluène et on refroidit la solution à -60 . On ajoute ensuite une solution de 0,5 ml de trifluorure de diéthylamino-soufre dans 2 ml de toluène et on agite le mélange pendant 10 minutes à -60 . On ajoute ensuite de l'eau glacée, une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et on extrait au dichlorométhane. On lave la phase organique à l'eau, on la sèche et on l'évapore. Le résidu sirupeux est chroma- tographié sur gel de silice (hexane / acétate d'éthyle = 2/1). On obtient ainsi le composé du titre,homogène selon la chromatographie en couche mince (dichlorométhane / éther = 7/1). [a]D 0 57,3 (c = 0,51 dans le chloroforme). F) [3,5-didésoxy-7,8-O-isopropylidène-4-O-méthyl-(3- désoxy-4,5:7,8-di-O-isopropylidène-a-D-manno-2- octulopyranosyl)onate de méthyle-a-D-manno-2- octulopyranosyl]onate de méthyle (pour l'exemple 4) a). A1!l -3,5didésoxy:-4,7,8-tri-O-acétl!-a--: manno-2-octul 1oranosidel-onate de méthyle et 1A11,l-3,5-didésoxy-4,7,8-tri-O-ac étyl:-B- manno-2-octu l1oranosidelonate de méthyle A une solution de 7,5 g de (3,5-didésoxy- 2,4,7,8-têtra-O-acétyl-a-O-manno-2-octulopyrano- side)onate de méthyle dans 30 ml de dichloromé- thane, on ajoute à 0 10 g de TiBr4 et on main- tient à 4 pendant la nuit. La solution est diluée avec du chloroforme, extraite avec une solution de NaHCO3 refroidie par de la glace, séchée et évaporée. On dissout dans du nitro- méthane le sirop jaunâtre obtenu et on l'ajoute à 0 à une suspension de 5 ml d'alcool allylique, de 4,5 g de cyanure de Hg(II) et de 3 g de 2 6 0 4 1 7 7 o tamis moléculaire 3 A dans du nitrométhane. Après heures, on filtre le mélange, on l'évapore et on chromatographie le résidu sur gel de silice (toluene / acetate d'éthyle = 3/1). L'évapora- * tion des fractions de Rf X 0,46 (toluène / acetate d'éthyle = 2/1) fournissent le composé du titre sous forme d'un sirop. [a]0 = + 70,2 (c = 0,9 dans le chloroforme). b) 1Al lyl:-7,8-0-carbonyl:-3,5:didésoxy-5>-D-manno-2-oc- tuio2yraflo5ide1onate de méthyl e et 1allyl-7,8- O-carbonïl-3,5-didésox::-a-D-manno-2-octulopyra- nosideqonate de méthyl e A une solution de 4,3 g du mélange de composés du titre de l'exemple Fa) ci-dessus dans 50 ml de méthanol absolu, on ajoute une solu- tion de 70 mg de sodium et de 10-ml de méthanol et on agite pendant 3 heures à la température ambiante. On neutralise le mélange avec une résine échangeuse d'ions Dowex 50 (H+), on filtre et on évapore. On reprend le résidu dans de la pyridine anhydre, on ajoute 5 g de chloroformiate de p-nitrophényle et on agite pendant 20 heures. On évapore la solution, on reprend le résidu dans de l'acétate d'éthyle, on extrait la so- lution avec une solution saturée de NaHCO3 et on l'évapore. On obtient le composé du titre sous forme d'un sirop après chromatographie sur gel de silice avec de l'acétate d'éthyle comme éluant. [a]20 = +23,20 (c = 1,4 dans le chloroforme) 3D0 et [a]0 = +53,7o (c = 1,0 dans le chloroforme). c) [A11yl:Z,8-0-carbonyl-3,5-didésoxy-4-0-méthyl- J3:5ésoxy:4,5,7,8-tétra-0-acétyl-a-D-manno-2-octu- lo9yranosv1lonate de méthyle-a-D-manno-2-octulo- pyran2sidejonate deméthy le A une suspension de 0,58 g de (Allyl-7,8-0-carbo- nyl-3,5-didésoxy-a-D-manno-2-octulopyranoside) - onate de méthyle, de 1,25 g de Hg(CN)2 et 1 g o de tamis moléculaire 3 A, on ajoute goutte à goutte une solution de 1,7 g de bromure de KDO dans du nitrométhane anhydre et on agite pendant heures à la température ambiante. On filtre é le mélange réactionnel, on l'évapore et on purifie le produit sur gel de silice (toluene / acetate d'éthyle 2/1). On obtient le composé du titre sous forme d'un sirop incolore. [a]0D = +90,2 (c = 2,2 dans le chloroforme). Spectres RMN 1H: ,85 (m, 1H, =CH-); 5,37 (large signal, 1H, H-5'); 5;30-5, 15 (m, 2H, CH2=); 5,25 (ddd, 1H, J4,,5,3)>0, 34,,3,e- 5;0, J4,,3% 125, H4'); 5,19 (ddd, 1H, 317,,8,ae,0, 7,,8,b'V325, J7,6"w9,5, H-7'); 4)78 (dd, 1H, 38.,B,b. 12;5, H-8'a); 4,61 (ddd, 1H, J7,8.8;0, J7,sb120 J7,6 11 0, H7); 4p54 (t, 1H, J8a,8b.870, H-8a); 4754 (dd, 1H, H-8b); 4732 (m, 1H, H-4) ; 4,16 (dd, 1H, J6,5,15, H-6'); 4,04 (dd, 1H, H-8'b); 3795 (m, 2H, OCH CH=); 3>85 (ddd, 1H, J6,5e 5;0, 6, 125, H-6); 83 (s, 3H, CH3OCO); 3>79 (s, 3H, CH3OCO); 2,40 (ddd, 1H, J3e,55e 20' 33e,4,' 0, J3e,3a,12,5, H-3e); 221 (dd, 1H, J3,e 3,al3);, H-3'e); 2;06 (t, 1H, H-3'a); 211 (s, 3H); 2,07 (s, 3H); 1i98 (s, 6H, CH3CO); 193 (dddd, 1H, e,45M, H-Se); 1,69 (dd, 1H, 33aJ4,11/0, H-3a); 1)31 (t, 1H, J5%ae4 11,0, H-5a). d) [Allv!:3_l5-didésoxy:-7,8-0-isonroevlène-4-0-. me-.thyl!3_dso'xy-_4:_5'7,]:di:0_:isoProe[ylne-a-D- manno-2:sOCtu!2,ra_ o s_2lonate de méthyl::e-aD- manno-2:-ocútulE2ranoside]onate -de m.thyle A une suspension de de 1,24 g du composé du titre de l'exemple Fc) ci-dessus dans 30 ml de méthanol anhydre, on ajoute une solution de 50 mg de sodium dans 50 ml de méthanol et on agite pendant 60 minutes à la température ambiante. Après neutralisation avec une résine Dowex 50 (H) on filtre et on évapore. On dissout le résidu dans 10 ml de diméthylformamide anhydre, on ajoute 10 mg d'acide p-toluènesulfonique et 5 ml d'acétone diméthylacétal et on agite pendant 48 heures à 60 sous faiblevide. Après évaporation de la solution, on chromatographie le résidu sur gel de silice ( toluène / acétate d'éthyle = 1/1). On obtient ainsi le composé du titre sous forme d'un sirop incolore. a]20 = 54,9 (c = 1,2 dans le chloroforme). e) e3,5-didesoxy-7,8-0-isoro ylidène::0:l3-deésoxy - tétrahydrofuranne anhydre, on ajoute sous azote mg de [Ir(COD)[PCH3(C6H5) 2]2]PF6 activé 4,57,8-avec de l'hydi-0rogne et on agite pend-D-manno-2-oct 90 minuteslo- yrla temprsyInaturdeambiante. On dilue la solution avec du dichloromthane, on l'extrait avec unet A une solution sature de NaHCO3,400 mg du composé du titre on de l'exemvapore. On dissout le rsidu dans 25 ml de td'un mlange 4/1 de ttrahydrofuranne anhydre, on ajoute sous azoteet d'eau, mg de [Ir(COD)EPCH3('6H5)2]2]PF6 atv on ajoutvec de l'hydro250 mg d'iodène et on agite pendant 90 minutes à30 20 minutes la température ambiante. On dilue la solution Aprs avoir dilu avec 0 m de dichlorométhane, on l'extrait avec une on extrait avec une solution 5%saturée de NaHCO3, sèche et on l'évon neutralise avec une solution sature deml d'un mélange 4/1 de tétrahydrofuranne et d'eau, on ajoute 250 mg d'iode et on agite pendant 20 minutes à la température ambiante. Après avoir dilué avec l00 ml de dichlorométhane, on extrait avec une solution à 5% de NaHC03, on neutralise avec une solution saturée de NaHC03, on la sèche et on l'évapore. Après chromatographie sur gel de silice (toluene / acétate d'éthyle = 1/1), on obtient le composé du titre. Spectres RMN 1H: 4%52 (ddd, 1H, J4, 5""e8>O J4'3,3'e37 J4,3a' 2,5, H-4'); 4,38 (m, 1H, J4,5a" 1j 34,5e 4>0, J4,3e 50, J4,3a--110, H-4); 4,38 (m, 1H, J,75 8'a' 60, J 7', 8'b' 46"'5 H-7'); 4,28 (dd, 1H, J5,,6,-20, ,41 840, H-5'); 414 (dd, 1H, 8ea,8,b 9)0, H-8'a); 4,04 (dd, 1H, H-8b); 3/99 (dd, 1H, 38a,8be75, 3J8a,76)O, H-8a); 3,91 (ddd, 1H, 37 8bb4'5 J7,67'5, H-7); 3,80 (dd, 1H, H-8b); 3,80 (ddd, 1H, 36,5eJ 2,0, 36 5a 11>0, H-6); 3776 (d, 1H, 33e,oH2>0); 3,82. (s, 3H, CH3OCO); 3,78 (s, 3H, CH30_CO); 3,58 (dd, 1H, H-6'); 2>99 (dd, 1H, 33',a,3,e'"15, H-3e'); 2p06 (ddd, 1H, 33e,3a12,5, J3 e,5e' 17, H-3e); 1,94 (dd, 1H, H-3a); 1,92 (ddd, 1H, J,,5..12,5, H-5e) ; 179 (dd, 1H, H-3'd); 144, 1e38, 1j36, 1732 (s, 18H, CH3); 1,29 (t, 1H, H-5a). G) 2,3 - di-0-benzyl-5-0-[(3-désoxy-4,5:7,8-diisopro- pylidène - a-D-manno-2-octulopyranosyl)onate de méthyle]-Darabinofuranose (pour l'exemple5) a) 1,5:di-:-:acétyl-2,3:-di-:-:benz:l-Darabinofuranose On refroidit à 10 une solution de 10 g de 2,3,5-tri-0-benzyl-1-0-p-nitrobenzoyl-D-ara- binofuranose dans 150 mg d'anhydride acétique anhydre. On ajoute ensuite un mélange de 15 ml d'anhydride acétique et de 100 ml d'acide sulfu- rique à 95-97% et on abandonne le mélange pendant 30 minutes à la température ambiante. Après refroidissement à 10 , on ajoute encore quelques gouttes d'acide sulfurique et on abandonne à nouveau pendant 30 minutes à la température ambiante. On verse avec précaution le mélange réactionnel dans de l'eau glacée et on l'agite pendant 10 minutes. On neutralise le 2 6 0 4 1 77 mélange avec une solution saturée d'hydrogéno- carbonate de sodium qui a été refroidie. A pH 7,5 - 8,on extrait à 3 reprises la phase aqueuse avec 100 ml de dichlorométhane à chaque fois. On sèche la phase organique sur sulfate de magnésium et on l'évapore. Après chromato- graphie sur gel de silice, on obtient le composé du titre. Rf = 0,39 (toluène / acetate d'éthyle = /1). b):O:acêty1:l:-chloro-1-désoxy-2,3:di:-0-benzyl: D-arabinofuranose On dissout 1 g de 1,5-di-O-acétyl-2,3-di- O-benzyl-D-arabinofuranose dans 5 ml d'acide acétique glacial et on ajoute à la température ambiante 20 ml d'acide acétique glacial saturé d'acide chlorhydrique gazeux. Après 20 minutes, on ajoute 35 ml de dichlorométhane et 100 ml d'eau glacée et on extrait. On lave les phases aqueuses avec 35 ml de dichlorométhane, on réunit les phases organiques, on lave la phase organi- que globale avec 40 ml d'une solution saturée froide d'hydrogénocarbonate de sodium et on la sèche sur sulfate de magnésium. Après évapora- tion sous vide, on maintient le composé du titre sous forme d'un sirop. Rf = 0,33 (toluène / acetate d'éthyle = 5/1). c) Allyl:5:O:acyl-:,3-di-0-benzyl-a-D-arabinofura- noside Sous atmosphère d'argon, on introduit dans un ballon 40 ml de dichlorométhane séché sur P205, 1,2 g de sulfate de calcium (pulvérisé et séché à 120 sous vide poussé), 4,5 g de carbonate d'argent (séché sur sulfate de calcium sous vide poussé) et 0,4 ml d'alcool allylique. A l'abri de la lumière, on ajoutegoutte à goutte en l'espace de 45 minutes 0,9 g de 5-0-acetyl- 1-chloro-1-désoxy-2,3-di-O-benzyl-a-D-arabino- furanose dissousdans du dichlorométhane-- séché sur P205. On agite le mélange réactionnel pendant 18 heures à la température ambiante, on filtre la suspension sur célite, on la lave une fois avec du dichlorométhane et on l'évapore sous vide. On obtient le composé du titre par chromatographie sur gel de silice. Rf = 0, 54 (toluène / acetate d'éthyle = 5/1). b) A11ïl-2,3-di-O-benzyl -D- D-arabinofuranoside On dissout 2 g d'allyl-5-O-acétyl-2,3-di-O- benzyl-a-D-arabinofuranoside dans 100 ml de méthanol fraîchement distillé sur tournures de magnésium. On ajoute ensuite 2 ml d'une solution obtenue en dissolvant 50 mg de sodium dans 5 ml de méthanol et on abandonne le mélange à la température ambiante pendant 1 heure. On neutra- lise ensuite avec des petites portions de résine DowexQ50-H+, on élimine la résine par filtra- tion et on concentre la solution. On reprend le sirop dans 10 ml de dichlorométhane et on le fait cristalliser par addition de pentane F = 6162 , Rf = 0,43 (toluène / acetate d'éthyle 2/1). e) Allyl-2,3-di-O-benzyl -5-:-3-désoxy-4,5,7,8-tétra- 0-acet!:yl:manno-2-octuloyEranossllonate de rêthïe:c!:2:arabinofuranoside 2 6 0 4 1 7 7 On dissout 3,6 g d'allyl-2,3-di-O-benzyl-a-D- arabinofuranoside dans 40 ml de nitrométhane o (séché sur tamis moléculaire 3 A). On ajoute ensuite 15 g de tamis moléculaire pulvérise (séché à 160 sous 13 torr) et 3,15 g de cyanure de mercure (pulvérise et séché sur sulfate de calcium sous vide poussé). Sous agitation, on ajoute goutte à goutte en l'espace de 6 heures 6,5 g de bromure de (3-désoxy- 4,5,7,8-tétra-O-acetyl-a-D-manno-2-octulopyra- nosyl)onate de méthyle (séché sous vide poussé) dissous dans 12 ml de nitrométhane anhydre et on continue d'agiter pendant 18 heures. On dilue ensuite avec 130 ml de dichlorométhane, on agite pendant 30 minutes, on sépare les produits solides par filtration sur célite et on évapore la solution sous vide. Le sirop obtenu est séparé par chromatographie sur colonne (gel de silice, gradient: toluène / acetate d'éthyle = 7/1-- 2/1). On rassemble les fractions ayant un Rf de 0,35 et on les évapore. Ces fractions sont constituées du mélange de cetoside désiré (a,,) aique l'alcool qui n'a pas réagi. On sèche bien le sirop et on le dissout dans 40 ml de pyridine anhydre. Tout en refroidissant par un bain de glace, on ajoute goutte à goutte 6 ml d'anhydride acétique dans la solution. Apres 6 heures, on ajoute à 0 ml de méthanol. Apres 30 minutes, on concentre sous vide, on élimine les solvants restants avec du toluène et on reprend dans du dichloro- méthane. On extrait cette solution avec une solution de bisulfate de sodium, une solution 26 0 4 177 de bicarbonate de sodium et de l'eau et on la sèche sur sulfate de magnésium. Après évapora- tion, le résidu obtenu est chromatographié sur gel de silice (gradient: toluène / acétate d'éthyle = 4/1-) 2/1). On obtient l'aglucone acétylée évaluée à Rf = 0,66 (toluène / acetate d'éthyle = 2/1). Le mélange de cétosides est - obtenu à Rf = 0,35. f) Aiil-2,3-di-0-benzyl-5-0- E[3-désoxy-a,-D-manno- 2-octulo2yranosyll:2t de méthylej-a-D-ara- binofuranoside On dissout 7,07 g d'allyl-2,3-di-O-benzyl- -0[4,5,7,8 -tétra-O-acétyl-3-désoxy-a,f-D- manno-2-octulopyranosyl)onate de méthyle]-a-D- arabinofuranoside à la température ambiante dans du méthanol absolu. On ajoute 2 ml de méthanolate de sodium O,lN. Après 1 heure, on neutralise avec une résine Dowex 50H+, on sépare la résine par filtration et on évapore la solution. On obtient ainsi le composé du titre sous forme d'un sirop. Rf = 0,08 (toluène / acetate d'éthyle = 1/1). mgth,!e]:-a-D-arabinofuranoside g) On dissout 5,5 g d'allyl-2,3-di--benzyl-5-O[(nl-3- désoxy-a,-D-manno-2-octulo pyranosyl)onate de méthyle]-a-D-arabinofuranoside etdans 350 ml de py-3- ridine anhydre et on refroi4,57,8di-0t la solutirbon l -3-35 déso xy.--Dmanno-2- octul o2yranosyl lonate de niét hyle:-D-a ra bin of uranosid e On dissout 5,5 g d'allyl-2,3-di-0-benzyl-5-OE(3- désoxy-a,ff-D-manno-2-octulopyranosyl)onate de méthyle]-a-D-arabinofuranoside dans 350 ml de py- ridine anhydre et on refroidit la solution à -.35 . 2 6 0 4 1 7 7 Sous vive agitation, on ajoute goutte à goutte une solution de 1,2 ml de chloroformiate de trifluorométhyle dans 40 ml de benzène anhydre. Après 1 heure et demie à -35 , on porte le mélange à la température ambiante et on vérifie que la réaction est complète par chromatographie en couche mince (toluène / acetate d'éthyle = 1/1). Valeur Rf: Produit de depart.O,08; a KDO a ara (di-O-carbonyl) = 0,31;, KDA a ara (di-O-carbonyl) = 0,15. La réaction terminee, on ajoute goutte à goutte 5 ml d'éthanol. On évapore le mélange sous vide et. on l'évapore à 3 reprises avec du toluène. On lave une solution du résidu dans du dichlorométhane avec une solution d'hydrogéno- carbonate de sodium et de l'eau, on la sèche sur sulfate de magnésium et on évapore le solvant. La séparation des KDO anomèressur gel de silice (toluène / acetate d'éthyle = 2/1) donne le composé du titre. a KDO-di-holoside []20=-7,1 D (c = 4,8 dans le chloroforme). 5-KDO-di-holoside [a]2 0 _5,2 (c = 2,1 dans le chloroforme); F = 146-148 . h) 811ïl-2,3,-di-0-be nzyl:-5::[{3:dé soxï-:- D:manno-2- octuloeyran2syllona de méthl:e]-a-D-arabino- furanoside On dissout 2,4 g d'allyl-2,3-di-O-benzyl-5-O [(4,S,:7,8-di-O-carbonyl-3-désoxy-a-D-manno-2- octulopyranosyl)onate de méthyle]-a-D-arabino- furanoside à la température ambiante dans 40 ml de méthanol absolu. On ajoute 2 ml de méthanolate de sodium 0,1 N. Après 3 heures, on neutralise avec une résine Dowex 50H+ on filtre et on évapore le solvant sous vide. Rf = 0,08 (dans le toluène / acétate d'éthyle = 1/1). i) 811y-2,3-di-O-benzyl-5-O-t-3deésoxy-4,5:7,8- diiso ropylidène-a-D-manno-2-octulop2ranosyl) onate de méthyle-a-Darabinofuranoside On dissout 0,8 g du composé du titre de l'exemple Gh) ci-dessus dans 100 ml de diméthyl- formamide (distillé sur tamis moléculaire 4 A) et on ajoute une quantité catalytique d'acide p-toluènesulfonique. Dans cette solution, on ajoute directement 0,49 ml de 2-méthoxypropène à l'aide d'une seringue à injection et on bouche immédiatement. Apre 5 heures, on ajoute encore une fois à 0,49 ml de 2-méthoxypropêne et on laisse reposer pendant 18 heures. On neu- tralise avec du carbonate de sodium solide et on élimine le solvant sous vide. On obtient ainsi le composé du titre après chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène / acétate d'éthyle= 2/1) Rf0,O43; [a]0 = _9,3 (c = 3,3 dans le chloroforme). lidène-a-D-manno-2-octuloepranosyl _nate de méthyle]:-D-arabinofuranose On dissout 1,6 g du composé du titre de l'exemple Gi) ci-dessus dans 40 ml de tétrahydro- furanne anhydre et on ajoute 3,2 g d'hexafluoro- phosphate de 1,5-cyclooctadiène-bis-[méthyl- diphénylphosphine)iridium. On purge soigneusement l'appareil avec de l'argon (99,996%) et on agite la solution pendant 3 minutes sous argon exempt d'oxygène. Pour activer le catalyseur, on purge 2 à 3 fois avec de l'hydrogène. Après - 41 minutes, on purge à nouveau avec de l'argon et on laisse sous agitation pendant 2 heure à la température ambiante. On verse le mélange réactionnel dans 150 ml d'un mélange 4/1 de tétrahydro- furanne et d'eau, on ajoute 1,5 g d'iode et on l'agite pendant 5 minutes à la température ambiante. On dilue ensuite avec 1,2 litre d'eau, on extrait au chloroforme, on lave la phase organique à deux reprises avec à chaque fois 500 ml d'une solution à 5% de pyrosulfite de sodium, on la sèche sur sulfate de magnésium et on l'évapore sous vide. Le sirop obtenu est chromatographié sur colonne de gel de silice ( gradient: toluène/ acetate d'éthyle = 3/1 --) 1/1). Rf = 0,58 (toluène /acetate d'éthyle = 1/2); [a]20 = +33,2 (c = 1,6 dans le chloroforme). H) Allyl-2,3-di-0-benzyl-5-0-[(3-désoxy-a-D-manno- 2 -octulopyranosyl)onate de méthyle]-a-D-arabinofurano- side a) 2:anislidène-amino-2-désoxy-D-:glucose A une solution de 10 g de chlorhydrate de glucosamine dans 47 ml d'hydroxyde de sodium 1N, on ajoute goutte à goutte 5,7 ml d' anisal- dehyde ce qui provoque la formation d'un précipité. On maintient le mélange réactionnel pendant 1 heure au bain de glace. On filtre ensuite le mélange et on lave les cristaux avec de l'eau glacee et un mélange 1/1 d'alcool et d'éther. On laisse sécher le produit à l'air; F = 161-164 (décomposition). b) 2-anisylidèneamino-2-désoxy-1,3,4,6-tétra-0- acêtïX:2D:1uco2yranose A une solution de 10 g de 2-anisylidèneamino- 2-désoxy-D-glucose dans 10 ml de pyridine anyhdre, on ajoute goutte à goutte, sous réfrigération au bain de glace, 60ml d'un mélange 1/1 de pyridine et d'anhydride acétique. Apres deux heures, on chauffe à la température ambiante et on laisse reposer pendant la nuit. On verse ensuite un mélange dans l'eau glacée, ce qui fait cristalliser le produit. On filtre les cris- taux et on les recristallise dans un mélange de dichlorométhane et de pentane; F = 180-182 . c) chorhdrate de 2-amino-2-désoxy-1,3,4,6-tétra- O-acétyl - D:21qco2mnose On dissout 10 g de 2-anisylidèneamino-2-désoxy- 1,3,4,6-tétra-0-acétyl-D-glucopyranose dans 400 ml d'acétone et on chauffe au reflux. On ajoute ensuite 1 équivalent molaire d'acide chlorhydrique 5N (goutte à goutte), ce qui fait précipiter immédiatement le composé du titre. Après refroidissement, on ajoute 300 ml d'éther, on agite vigoureusement pendant 30 minutes et on sépare par filtration. On lave les cristaux à l'éther et on les sèche dans un exsiccateur sur sulfate de calcium. F = 220 (décomposition). d) 2:amino-2-désoxy:1,3,4,6-tétra-0-acétyl:-D- s1 ucopyranes On dissout 17,7 g de chlorhydrate de 2-amino - 2-désoxy-l1,3;4,6-tétra-0-acétyl-D-glucopyranose dans un peu d'eau, on ajoute 16,34 g d'acétate de sodium et on agite à la température ambiante pendant 30 minutes. On extrait ensuite à 5 reprises avec chaque fois 50 ml de dichlorométhane, on sèche les phases organiques sur sulfate de magnésium et on les évapore sous vide. Le composé du titre est recristallisé dans l'éther bouillant. F = 132-134 . e) N-:[3:lRkhydroxytétradécanoyloxy]succinimide On dissout 22 g d'acide 3-(R)-hydroxytétra- décanolque dans 1 litre d'acétate d'éthyle, on refroidit la solution à 4 , on ajoute 10,35 g de N-hydroxysuccinimide et 18,54 g de dicyclo- hexylcarbodiimide et on agite vigoureusement, ce qui provoque la formation d'un précipité de dicyclohexylurée. Apres 3 à 4 heures, on chauffe le mélange à la température ambiante et on l'agite pendant la nuit. On sépare ensuite par filtration la cyclohexyluree et on éva- pore le solvant. On dissout le résidu sirupeux dans un peu de méthanol à 40 et on refroidit lentement la solution à 4 , ce qui fait cristal- liser le composé du titre. F = 103-104 . f) 2:desoxy:2:[3:iRl:hydr2xïtetradécanamido]-1,3,4,6- t:tra-0-acé -!!e1yEranose On dissout 10 g de 2-amino-2-désoxy-l1,3,4,6- tétra-O-acetyl;D-glucopyranose dans 60 ml de tétrahydrofuranne fraichement distillé, on ajoute 14,7 g du composé du titre de l'exemple He) ci-dessus, et on agite pendant 48 heures au reflux. On évapore ensuite le mélange réaction- nel sous vide et on chromatographie le résidu sur gel de silice. On obtient ainsi le composé du titre; Rf = 0,47 (toluène / acétate d'éthyle = 1/2); F = 143-145 . g) Benzyl-2-désoxy-2-[3-tRl:hydr2xytétradécanamido]- 3,4,6-tri-O-acétyl:-f-D-glu2copyranoside On agite pendant 10 minutes une suspension de 2,03 g de chlorure ferrique anhydre et 3,9 g 260 4 177 de sulfate de calcium anhydre dans 65 ml de dichlorométhane anhydre. On ajoute ensuite 7,8 ml d'alcool benzylique franchement distillé et 4,68 g du composé du titre de l'exemple Hf) ci-dessus et on agite la suspension pendant 96 heures à la température ambiante. On verse ensuite le mélange dans une solution saturée froide de bicarbonate de sodium et on l'extrait à 6 reprises avec chaque fois 100 ml de dichloro- méthane. On lave les phases organiques à l'eau, on lessèche sur sulfate de magnésium et on les évapore sous vide. Apres chromatographie sur gel de silice (gradient: toluène / acetate d'éthyle = 2/1 -- 1/2,900 ml),on obtient le composé du titre. F = 150-152 ; Rf = 0,48 (toluène / acétate d'éthyle = 1/2). h) benzyl-2-désoxy:-2-E: R}-: rox.2têtradécanamido1-S-- D-gluc2ERanDsi-de On dissout 4 g du composé du titre de l'exemple Hg) cidessus dans 100 ml de méthanol anhydre et on ajoute 3 ml dans un solution de 5 g de sodium dans 5 ml de méthanol. Apres 1 heure, on neu- tralise le mélange avec une résine Dowex 50H+, on sépare la résine par filtration et on évapore la solution. On obtient ainsi le composé du titre; Rf = 0,71 (chloroforme / méthanol acétique glacial/ eau = 16/5/1/1). I) Benzyl-2-désoxy-4-O-diphénylphosphono-3-O-tétradé- canoyl-2-[3-(R)-tétradécanoyloxytétradécanamido]--5- D-glucopyranoside (pour l'exemple 5) a) Benzl-2-désox:2d[3:l:yroxytétradécanamido]- ---- -O-isorgylidène-ffi-D-guc2eïrÈDpside On dissout 3 g de benzyl-2-désoxy-2-[3(R)- hydroxytétradécanamido]-f-D-glucopyranoside dans 40 ml de diméthylformamide fraîchement distillé et on ajoute 1 à 2 pointes de spatule d'acide p-toluènesulfonique monohydraté et 1,3 ml d'éther de méthyleet d'isopropényle. Après 2 heures à la température ambiante, on neutralise avec de l'hydrogénocarbonate de sodium solide (10 minutes d'agitation). On élimine le solvant par évaporation sous vide poussé et on évapore le résidu à 3 reprises avec chaque fois 20 ml lO de toluène. On dissout le résidu dans du dichloro- méthane, on élimine par filtration les produits non dissous, on lave la solution à l'eau, on la sèche sur sulfate de magnésium et onl'évapore. Le résidu est séché sous vide, ce qui donne une poudre amorphe; Rf = 0,43 (acétate d'éthyle). b) 5enzyl:2:désoxy:4,6-0:isopr2pylidène-3-0-tétra- décanol:-2:[3LR}-tétradécanol oxytétradécanamido]- :2:2luc2pïran2side On dissout 3,4 g du composé du titre de l'exemple Ia) ci-dessus dans 50 ml d'un mélange 2/1 de dichlorométhane anhydre et de pyridine fraîchement distillée, on ajoute une pointe de spatule de diméthylaminopyridine et on refroidit au bain de glace. On ajoute ensuite goutte à goutte un mélange de 5,2 ml de chlorure de tétra- décanoyle et de 5 ml de dichlorométhane et on agite pendant 48 heures sous bain de glace. On ajoute ensuite goutte à goutte 5 ml de méthanol, on dilue avec 25 ml de toluène et on évapore sous vide. On évapore encore une fois avec du toluène pour éliminer la pyridine restante et on chromatographie sur gel de silice (toluène/ acetate d'éthyle = 10/1); Rf = 0,32. c) Benzyl-2-désoxy-3-O-tétradécanoyl-2-:3- R - têtradécanolox.ytêtradécanamidoJ- -D-91uc eyra- noside On abandonne pendant environ 7 minutes 0,5 g du composé du titre de l'exemple Ib) ci-dessus dans 10 ml d'acide trifluoroacetique à 90% refroidi par de la glace. On évapore le mélange sous vide, on dissout le résidu dans du dichloro- méthane et on extrait la solution avec une solution saturée de bicarbonate de sodium. On sèche la phase organique sur sulfate de magnésium et on chromatographie le produit sur gel de silice (gradient: toluène /acétate d'éthyle = 2/1 --4 acétate d'éthyle). Rf = 0,22 (toluène /acetate d'éthyle = 1/1). d) nzyl:?:-ésoxy:3:g:letrad cano 1-2-[3-(RI tétradécanoyloxytétradécanamido]-6-0-tri 2bnyl: méthïI: :D:21uco2Eranoside On dissout 15 g du composé du titre de l'exemple Ic) ci-dessus dans 1,3 litre d'aceto- nitrile et on chauffe la solution ài 60 . On ajoute ensuite par portions 4 x 5 g de tétra- fluoroborate de tritylpyridinium. La formation du produit est suivie par chromatographie en couche mince ( Rf = 0,43, toluène / acetate d'éthyle = 5/1). Dès que la réaction est terminée, on évapore le solvant, on dissout le résidu dans du dichlorométhane et on lave la solution à l'eau. On sèche la solution sur sulfate de magnésium et on purifie par chromatographie (toluene / acétate d'éthyle = 11/1). e) Benzyl:2:Éesoxy:4:0:diphenïl2h2sph2no-3-0-tétra- décanoyl:2:E3: R}:tetradécanol2oxytétradécanamidol- 6:O:triphênylmethyl-:,:D:iuco2yranoside On sèche soigneusement 330 mg du composé du titre de l'exemple Id) ci-dessus, et on le dissout dans 50 ml de dichlorométhane anhydre. On ajoute ensuite 107 mg de dimréthylaminopyridine, 1 ml de pyridine anhydre et 300 ml de phosphoro- chlorhydate de diphényle et on agite le mélange lO pendant 90 heures à la température ambiante. * On dilue ensuite avec du dichlorométhane, on l'extrait avec une solution saturée de bicarbonate de sodium, on sèche la phase organique sur sulfate de magnésium et on chromatographie sur gel de silice (gradient: toluène / acetate d'éthyle = 11/1 -- 9/1). On obtient ainsi le composé du titre; Rf = 0,34 (toluène / acétate d'éthyle = 10/1). f) 3enzyl:?:É2soxy:1:2:-iehénylphosph2no-3-0-tétra- décanoyl-2:[3: R):tetradécanol2oxytétradécanamido]- $iQ:21ucqpyranoside On dissout 120 mg du composé du titre de l'exemple Ie) ci-dessus, dans du dichlorométhane. Tout en refroidissant par un bain de glace, on ajoute de l'acide trifluoroacétique à 90% aussi longtemps que la solution demeure jaune. On extrait la solution avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, on sèche la phase organique sur sulfate de magnésium, on l'évapore et on chromatographie le résidu sur gel de silice (gradient:500 ml chacun toluène/acétate d'éthyle = 6/1 - 3:1). Rf = 0,45 (toluène /acétate d'éthyle = 2/1). K) Bromure de (3-désoxy-4,5,7,8-tétra-O-chloracétyl-D- manfo-2.octuloypranosyle)onate de benzyle (pour l'exemple 6) a) 3:-ésoxy2:?:2: - trahy2r2 nne-2-y 1:):-D-manno- 2-octulopyranosonate de benzyle A une solution de 1,14 g de 3-désoxy-2-O-(tétra- hydropyranne-2-yl)-D-manno-2-octulopyranosonate de méthyle dans 20 ml de dioxanne anhydre, on ajoute 26,9 ml d'hydroxyde de potassium 0.2M et on agite le mélange pendant 1 heure à la température ambiante. La réaction est suivie par chromatographie en couche mince (dichloro- méthane / méthanol = 2/1). On traite ensuite le mélange par de l'Amberlite IR-120 (H +) pour éliminer la base. On sépare la résine par filtration et on la lave avec un mélange 10/1 de méthanol et d'eau. On réunit le filtrat et les solutions de lavage et on les évapore. On dissout le résidu dans 10 ml de N,N-diméthyl- formamide et on l'abandonne pendant 12 heures à la température ambiante avec 0,373 g de carbonate de potassium et 1,4 g de bromure de benzyle. On ajoute ensuite de l'eau glacée et on extrait le produit avec de l'acétate d'éthyle et du dichlorométhane. On réunit les extraits, on les sèche sur sulfate de sodium, on les éva- pore et on chromatographie le résidu sur gel de silice (dichlorométhane / méthanol = 30/1). Le produit est un mélange d'éthers t-étrahydro- pyrannyliques diastéréoisomères; les composantes migrent ensemble très prochesl'une de l'autre dans le chromatogramme en couche mince (dichloro- méthane / méthanol = 3/1). Isomère plus rapide: 2 6 0 4 1 7 7 F = 30 [a] = +400 (c = 0,64 dans du dichloro- méthane); isomère plus lent: F = 39-40 , la] = +44 (c = 2,2 dans le dichlorométhane) D b) 2?::acétyl-:3désox.:4,57, 8-tétra-0-chloroacétyl- D-manno-2-octulo.2ranosonate de benzïle On dissout 0,3 g du composé du titre de l'exemple Ka) ci-dessus, 1,9 ml de 2,6-lutidine et 0,59 ml de triéthylamine dans 5 ml de dichloro- méthane anhydre et on ajoute progressivement 1 g d'anhydride acétique. On agite le mélange pendant 18 heures à la température ambiante, on ajoute ensuite une petite quantité de glace et on évapore le solvant sous vide. On reprend le résidu dans du dichlorométhane, on lave successivement avec de l'acide chlorhydrique 1M glacée, de l'eau, une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et de l'eau, et on sèche. Après évaporation, on chromatographie le résidu sur gel.de silice ( dichlorométhane). On dissout le produit intermédiaire ainsi obtenu dans 20 ml d'acétonitrile, on ajoute 0,1 ml d'acide tétrafluoroborique aqueux à 42% et on agite le mélange vigoureusement pendant 15 minutes à la température ambiante. On ajoute ensuite 0,1 ml de triéthylamine et on évapore le solvant. Le résidu est chromatographié sur gel de silice (dichlorométhane) , ce qui donne le composé 2-OH; [a]D0 = +30 (c = 0,72 dans le dichlorométhane). On dissout ce composé dans 4,5 ml d'un mélange 2/1 dichlorométhane et de 2,6 -lutidine et on ajoute une solution de 0,1 ml de chlorure d'acétyle dans 3 ml de dichlorométhane. On agite le mélange pendant la nuit (20 ) et on le verse dans une solution aqueuse froide de bicarbonate de sodium. On extrait le produit avec du dichlorométhane, on lave l'extrait avec de l'acide chlorhydrique 1M glacé et de l'eau, on le sèche et on l'évapore. Le résidu est chromatographié sur gel de silice (dichlorométhane), ce qui donne le composé du titre sous forme amorphe, [a]0 = +47 c) Bromure de _ 3:désox4:,5,7Z,8-tétra-0-chloroacetyl- D-manno-2-octulo2eranosyllonate de benzyle A une solution de 0,1 g du composé du titre de l'exemple Kb) ci-dessusdans 2 ml de dichloro- méthane anhydre, on ajoute à 0 une solution de 0,35 g de tétrabromure de titane dans un mélange de 2,5 ml de dichlorométhane anhydre et d'acétate d'éthyle anhydre (10/1) et on agite le mélange à la température ambiante. La réaction terminée (vérification par chromatographie en couche mince: dichlorométhane / éther=15/1), on ajoute 15 ml de dichlorométhane anhydre et on traite le mélange sous agitation vigoureuse par de l'acétate de sodium anhydre. On filtre la suspension sur célite et on évapore le filtrat à 20 sous vide. On lyophilise le résidu dans du dioxanne anhydre et on l'utilise directement pour la réaction suivante. L) 3,5-didésoxy-2,4,7,8-tétra-O-acetyl-D-arabino-2- octulopyranosonate de méthyle On dissout 8 g de 2-désoxy-D-ribose et 50 mg de bicarbonate de sodium dans 43 ml d'eau distillée et on règle la solution à pH 11 avec de l'hydroxyde de sodium. On ajoute ensuite par portions 3 g d'acide oxalique et on maintient le pH aussi exacte- ment que possible à 11 pendant 2 heures. On chauffe ensuite la solution à 50 et on ajoute une résine Dowex 50H+ jusqu'à pH d'environ 5,7. On maintient le mélange pendant 2 heures à 500. Le pH s'élève à environ 6,2. On sépare ensuite la résine par filtration et on verse le mélange dans une colonne (80 x 3 cm) de Dowex 1X8 ( forme bicarbonate). On lave avec 500 ml d'eau et on élue avec un gra- dient linéaire (800 ml d'eau et 800 ml de bicarbonate d'ammonium 0,3M). On continue d'éluer avec 800 ml de bicarbonate d'ammonium 0,3M. Pendant toute l'élution, on recueille des fractions d'environ ml. L'analyse des fractions par chromatographie en couche mince indique la présence de l'acide 3,5-didésoxy-D-arabino-2-octulosonique désiré dans les fractions 175-220 (méthanol / chloroforme / eau = 10/10/3.) On réunit ces fractions, on les dêbarasse du bicarbonate à l'aide de résine Biorex-70 (H +), on amène à pH 8,5 avec quelques gouttes d'ammoniaque à 30% et on lyophilise. Le lyophilisat est acetylé comme décrit pour le 3-désoxy-D-manno-2octulosonate (F.M. Unger, D. Stix et G. Schulz, Carbohydr. Res. 80, 191 0], et l'acide 3,5-didésoxy-2,4,7,8-tétra-0- acétyl-D-arabino-2-octulosonique est transformé en ester méthylique, également comme décrit dans la publication ci-dessus. Rf = 0,28 (toluène / acetate d'éthyle = 2/1). Les composés de formule I se signalent par d'inté- ressantes propriétés pharmacologiques et peuvent par conséquent être utilisés en thérapeutique comme médicaments. En particulier, ils exercent une influence favorable sur la résistance microbienne non spécifique.Cette activité peut être mise en évidence par exemple dans les essais suivants. 1. Détermination de l'activité endotoxique à l'aide du test LAL au limulus (lysat d'amibocytes de limulus) L'endotoxine catalyse l'activation d'un proenzyme dans le lysat d'amibocytes de limule. On mesure la scission de p-nitro- aniline à partir d'une substance incolore. Le taux d'élimination est détecté photométriquement, la corrélation entre l'absorption et la concentration d'endotoxine (ou bien, respectivement, l'activité endotoxique pour les analogues) étant linéaire dans le domaine de 0,01 à 0,1 ng/ml d'endotoxine(comparaison avec les valeurs d'ab- sorption d'une endotoxine standard). A partir de chaque échantillon (dissous dans de l'eau bidistillée stérile et exempte de pyrogène), on prépare une dilution en série 1:10. A 100 pl d'un échantillon d'essai ou bien d'un échantillon de référence ou d'un échantillon à blanc, on ajoute 100 pl de lysat d'amibocytes de limule. Après 10 minutes d'incubation à 37'C, on ajoute 200 pl de substrat. On arrête la réaction avec 200 pl d'acide acétique à 50% après 3 autres minutes d'incubation. Après agitation de l'échantillon, on mesure l'absorption à 405 nm avec un spectrophotomètre en soustrayant la valeur de base. On calcule les teneurs en endotoxine (activité endotoxique) de l'échantillon en unités endotoxine (UE) par régression linéaire avec les valeurs de l'endotoxine standard. 2. Induction du choc à l'endotoxine chez la souris L'essai consiste à induire un choc à l'endotoxine ou une condition clinique létale analogue au moyen de substances appa- rentées au LPS chez des souris sensibilisées à la galactosamine (GalN). On administre par voie intrapéritonéale à des souris mâles C57 bl. (6 animaux par groupe) simultanément 8 mg de GalN dissous dans 0,5 ml de PBS et 0,1 pg de LPS de Salmonella abortus equi (Sigma) dissous dans 0,2 ml d'une solution saline physiologique. Ce traitement tue tous les animaux en l'espace de 6 à 12 heures [voir C. Galanos et coll., Proc.Natl.Acad. Sci., USA 76 (1979) 5939-5943]. A la place du LPS dans le traitement standard, les substances à essayer sont administrées à des doses variées simulta- - nément avec la GalN, ou par voie parentérale ou orale avant ou après le traitement à la GalN. On évalue les résultats en comparant les doses les plus faibles qui sont létales pour tous les animaux d'un groupe, ou en calculant la DL50 selon la méthode Spearman-K-rber. 3. Septicémie microbienne chez la souris neutropénique Ce modèle permet de déterminer un accroissement de la réponse immunitaire provoquée par la substance d'essai chez une sou- ris neutropénique,infectée par des microbes.Pour induire la neutropé- nie,n -administre en unefois par voie sous-cutanée 200mg/kg de cyclo- phosphamide dissous dans 0,2 ml d'eau distillée, au jour O, à des groupes de 20 souris femelles B6D2Fl. Au jour 3, on administre la substance à essayer par voie parentérale (principalement par voie intrapéritonéale) ou par voie orale, si possible dissoute dans une solution physiologique du chlorure de sodium, ou bien dissoute d'une autre manière (0,3 ml). On provoque l'infection au jour 4 en injectant par voie intraveineuse l'inoculat approprié dans un volume de 0,2 ml (nombre de germes par souris: par exemple Pseudomonas aeruginosa L 12:1 x 105; E. coli 120:2 x 106; Staph. aureus A 113:1 x 106; Candida albicansn 124:1 x 104. Les animaux sont observés jusqu'au jour 10 à partir de l'infection et on enregistre chaque jour le nombre d'animaux morts. Les paramètres suivants sont déterminés par rapport aux témoins infectés ou par rapport aux standards: a) durée moyenne de survie b) taux de survie. Après administration par voie parentérale, les composés de formule I améliorent nettement la durée et le taux de sur- vie par rapport aux témoins infectés non traités, aussi bien dans le cas d'infections expérimentales provoquées par des agents à gram négatif (par exemple les souches Pseudonomas et E. coli), que dans le cas d'infections provoquées par des agents à gram positif (par exemple les souches Staph. aureus) ou des levures (par exemple la souche Candida albicans). 4. Activation du métabolisme d'oxydation des neutrophiles sanguins humains On incube à 37C des neutrophiles (purs à 95% au moins) avec la substance d'essai à 3 différentes concentrations pendant 1 à 2 heures. La libération d'anions superoxydes par les cellules témoigne de leur activation et est mesurée par l'inhibition de la superoxyde-dismutase qui catalyse la réduction du cytochrome C. On ajoute 1 x 106 neutrophiles préalablement traités ou non par la substance à essayer,h une solution contenant du cytochrome C (80 4Mol) ainsi que de la formylméthionylleucylphénylalanine (10-6M). Les témoins contiennent en outre 50 Mg de superoxyde- dismutase. Après 15 minutes d'incubation à 37'C, on arrête la réac- tion en refroidissant les tubes à essai dans un bain de glace. On centrifuge ensuite ces tubes à 400 g pendant 5 minutes pour éli ner les cellules. La réduction du cytochrome C, qui est proportion- nelle à la quantité d'anion superoxyde libéré, est mesurée par pho- tométrie à 550 nm. L'effet inhibiteur de la substance à essayer sur l'activation du PMN par le LPS est mesuré comme décrit ci-dessus, excepté qu'après la préincubation des leucocytes, on continue d'in- cuber les cellules avec une concentration stimulante de LPS. 5. Essai de clairance au carbone Cet essai est fondé sur le principe selon lequel les par- ticules d'une dimension comprise entre 200 et 250 A, par exemple des particules du carbone, ne peuvent être éliminées de l'organisme que par phagocytose par des macrophages. Apres administration par voie intraveineuse de particules de carbone, celles-ci sont élimi- nées de la circulation sanguine par phagocytose des macrophages dans le foie (cellules étoilées de Kupffer) et dans la rate. On détermine l'activation RES d'une substance en l'administrant une seule fois ou de façon répétée en solution aqueuse ou sous forme de suspension. Les substances à essayer sont administrées par voie intrapéritonéale ou souscutanée à raison de 4 doses quotidiennes ou en une fois 24 heures avant le début de l'essai. On dilue une suspension contenant 10% de noir de carbone avec une solution de gé- latine etde chlorure de sodium à 1% jusqu'à une teneur en carbone de 16 mg/ml. On injecte à chaque souris par voie intraveineuse 0,2 ml par 20 g de poids corporel. On recueille 25 pl de sang par ponction dans le plexus orbital 3, 6, 9, 12 et 15 minutes après l'administration par voie intraveineuse. On hémolyse le sang dans 2 ml d'eau distillée. On détermine par photométrie la concentration de carbone. On sacrifie ensuite les animaux et on calcule le poids du foie et de la rate. 6. Infection herpétique (souris) L'infection herpétique par voie intracutanée permet de déterminer l'augmentation de la réponse immunitaire provoquée par une substance chez les souris contaminées par des virus herpé- tiques. L'évolution de la maladie est prolongée et permet d'obser- ver l'apparition successive de plusieurs paramètres. Les lésions herpétiques apparaissent à l'endroit de l'infection et ensuite com- mencent à s'ulcérer. Eventuellement, on observe une paralysie de la patte adjacente à l'infection, cette paralysie évoluant progressi- vement jusqu'à la mort. Des souris nudes immunocompétentes sont in- fectées par voie intracutanée au jour O par administration intra- cutanée de l'inoculat dans un volume de 0,025 ml (par exemple 1 x 106 unités formant plaque d'Herpès simplex type 1 / par sou- ris). La substance à essayer est administrée par voie intra- péritonéale dans une solution, par exemple dans une solution saline physiologique (0,1 ml). L'infection herpétique systémique permet également la détermination d'une augmentation de la réponse immunitaire provo- quée par une substance chez les souris infectées par un virus her- pétique. Des souris NMRI immunocompétentes sont infectées au jour O par administration intrapéritonéale de l'inoculat dans un volume de 0,1 ml (par exemple 1,3 x 105 unités formant plaque d'Herpès simplex type 1 / par souris). La substance à essayer est admi- nistrée par voie sous-cutanée dans une solution, par exemple une solution physiologique de chlorure de sodium. On observe les animaux d'essais jusqu'au jour 20 après l'infection et on enregistre l'apparition de lésions, de paralysie ainsi que les animaux morts. On mesure et on compare les paramètres suivants avec les témoins infectés ou un standard: a) nombre de souris présentant des lésions (cumulativement) b) nombre de souris atteintes de paralysie (cumulativement) c) durée moyenne de survie d) taux de survie. Dans l'infection HSV-1 expérimentale, les composés de for- mule I produisent une amélioration marquée au niveau de l'évolution de la maladie, de la durée de survie et du taux de sur- vie par rapport aux témoins non traités. Ces effets sont observés apres une seule administration par voie intrapéritonéale ou sous- cutanée entre les jours O ou -1 et +6. 7. Induction de CSF (facteur stimulateur de colonie) Les CSF sont des médiateurs produits par l'organisme à la suite d'infections ou en réponse à des toxines. Leurs effets biolo- giques sont complexes; ils sont détectés par l'intermédiaire de la stimulation de la prolifération du système hémopoïétique, en parti- culier des cellules de la moëlle osseuse. On administre à des sou- ris B6D2F1 la substance à essayer une ou plusieurs fois par voie parentérale ou orale, à des doses allant jusqu'à 50 mg/kg. On recueille le sérum des animaux à différents intervalles. Les titres de l'activité CSF du sérum sont déterminés dans un essai de culture cellulaire comme taux de prolifération de cultures de moelle os- seuse provenant de souris B6D2F1 [voir D. Metcalf, The Hemopoietic Colony Stimulating Factors, (1984), Elsevier; T. Mosmann, J.Immunol.Methods, 65 (1983) 55-63; L.M. Green et coll., J.Immunol.Methods, 70 (1984) 257-268]. Les composés de formule I* induisent chez la souris la formation des CSF à différents degrés, des différences ciné- tiques dans les activités CSF étant également observées. Ces diffé- rences peuvent présenter des avantages dans l'utilisation en théra- peutique. 8. Induction d'Interleukine-1 (IL-1) L'aptitude d'une substance à stimuler les cellules à pro- duire IL-1 est déterminée dans des essais de culture de tissus. Les macrophages résidents ainsi que les macrophages libérés par le thioglycolate sont tout d'abord récupérés sous forme de macrophages adhérents. Ceux-ci sont incubés dans un milieu RPMI pendant 48 heures avec diverses concentrations de la substance à essayer et les cellules surnageantes sont recueillies. L'activité IL-1 de ces cellules est mise en évidence dans des cultures de thymocytes pro- venant de souris C3H/HeJK. On induit les cellules surnageantes con- tenant IL-1 produit par les macrophages à faire proliférer les thymocytes pendant une période d'incubation de 72 heures. On mesure la prolifération par incorporation de 3H-thymidine à l'aide d'un compteur à scintillation [voir J. Gery et coll., J.Exp.Med. 136 (1972) 128-142; J. Oppenheim et coll., Cellular Immunol. 50 (1980) 71-81]. Les composés de formule I possèdent à des degrés divers (concentrations de l'ordre de 0,1 à 50 pg/ml) la capacité d'induire la production de IL-1 dans les macrophages. 9. Induction de la tolérance (tolérance de l'effet létal) au LPS (endotoxine) Une tolérance de ce type peut être induite chez des souris par administration parentérale de LPS, une à trois fois par jour. Cette tolérance protège l'animal contre l'effet létal du LPS après administration de galactosamine (voir plus haut sous "Induction du choc à l'endotoxine chez la souris"). Les composés de formule I assurent déjà cette to- lérance après administration par voie intrapéritonéale à une dose unique de 0,25 mg/souris. Les souris préalablement traitées (tolé- rantes) sont soumises à une provocation au LPS à une dose de 0,01 pg de LPS + 8 mg de galactosamine/souris, administrée par voie intrapéritonéale à des périodes diverses (de 1 jour à 3 semaines) après le dernier traitement. Un plus grand nombre d'animaux survit à cette provocation au LPS, en particulier après administration répétée (3 fois), par rapport aux animaux témoins non traités préa- lablement et soumis à la provocation. Les composés de formule I, possèdent en outre une activité antiinflammatoire, en particulier dans les inflammations non spécifiques, dans les inflammations induites immunologiquement, dans les inflammations induites par hypersensibilité ainsi que dans les réactions allergiques. Cette activité peut être mise en évi- dence au moyen de diverses méthodes d'essai, par exemple en étu- diant l'influence de ces composés sur la synthèse des prostaglan- dines in vivo et in vitro. On a examiné l'inhibition exercée in vitro sur la libération de PGE2 et de PGF1 induite par le LPS et le Zymosan. On incube pendant 24 heures des leucocytes péritonéaux stimulés par le thioglycolate, provenant de souris NMRI, avec du LPS ou la substance à essayer. Apres changement de milieu et triple lavage des cellules, ces dernières sont stimulées pendant 2 heures avec du LPS ou pendant 1 heure avec du Zymosan. Les PGE2 et les PGF1 sont déterminées dans les cellules surnageantes. On constate une inhibition de la production de PGE2 stimulée par le LPS ou le Zymosan. On a mesuré in vivo l'inhibition exercée par les composés sur la libération de PGE2 induite par le LPS dans les leucocytes péritonéaux de souris. Des groupes de 3 souris NMRI sont traités par voie intrapéritonéale aux jours 1, 2 et 3 avec du LPS ou avec la substance à essayer. Au jour 4, on administre par voie intra- péritonéale aux animaux d'essais ainsi qu'aux animaux témoins 1,5 ml de thioglycolate; au jour 7, on recueille les leucocytes péritonéaux et on les stimule avec du LPS. On constate une nette diminution de la libération de PGE2 par rapport aux animaux témoins. Dans un autre essai, on a mesuré l'influence des composés sur l'activité procoagulante (PCA). Après stimulation avec du LPS, les cellules endothéliales humaines synthétisent la PCA, ce qui peut être mis en évidence par une réduction du temps de coagula- tion du plasma. Les macrophages péritonéaux de souris obtenus après traitement au LPS ainsi que les leucocytes péritonéaux (prélevés sur des lapins) après libération de la réaction de Schwartzman généralisée, réduisent eux aussi la durée de coagulation du plasma recalcifié. Pour déterminer l'influence de la PCA induite par le LPS in vitro, on traite pendant toute une nuit des leucocytes péri- tonéaux de souris B6D2F1 stimulés par du thioglycolate soit unique- ment avec du LPS, soit avec du LPS et la substance à essayer, dans un milieu DMEM dépourvu de sérum foetal de veau (FCS) (essai a)). Dans un essai b), on traite des leucocytes péritonéaux de souris pendant 24 heures avec du LPS ou avec la substance à essayer. Après changement de milieu, on stimule les cellules pendant une nuit en- tière avec du LPS. On détermine le temps de coagulation du plasma humain recalcifié de contrôle en utilisant la méthode de Hàkchen après avoir ajouté une suspension de leucocytes péritonéaux de souris qui a été auparavant congelée à plusieurs reprises et traitée aux ultrasons. L'addition de la substance à essayer réduit la PCA provo- quée par le LPS par rapport aux valeurs témoins, comme il résulte de l'augmentation du temps de coagulation. De même, un traitement préalable avec la substance à essayer a pour résultat une réduction de la PCA. In vivo, l'influence de la PCA induite par le LPS dans les leucocytes péritonéaux de souris après traitement préalable avec la substance à essayer peut être démontrée comme suit: des souris B6D2F1 sont traitées par voie intrapéritonéale aux jours 1, 2 et 3 avec du LPS ou avec la substance à essayer. Au jour 3, tous les animaux reçoivent en plus 1,5 ml de thioglycolate par voie intra- péritonéale. Au jour 6, on recueille les leucocytes péritonéaux, on règle l'échantillon provenant de chaque animal à 1 x 106 cel- lules/ml, et on les stimule pendant 24 heures avec du LPS dans un milieu DMEM exempt de FCS. La PCA de ces cellules est déterminée selon la méthode décrite précédemment. Un traitement préalable au LPS ou avec la substance à essayer, provoque une réduction marquée de la PCA. On observe une réduction semblable chez le lapin. La PCA des leucocytes péritonéaux de lapin peut être réduite après réac- tion de Schwartzman généralisée, et par traitement préalable avec le LPS ou la substance à essayer. Pour étudier l'inhibition de la réaction de Schwartzman locale, des groupes de 3 lapins chinchilla sont traités préalable- ment par voie intraveineuse ou intrapéritonéale avec du LPS ou avec la substance à essayer, aux jours 1, 2 et 3. Le 6ème jour, on admi- nistre par voie intradermale 40, 20, 10, 5, 2,5 et 1,25 pg de LPS. Le 7ème jour, on déclenche la réaction avec 2 pg de LPS/kg par voie intraveineuse. L'essai est évalué semi-quantitativement par un exa- men des nécroses de la peau. On constate une inhibition pratique- ment totale de la réaction de Schwartzman après traitement préa- lable avec du LPS ou avec la substance à essayer. Les composés de formule I possèdent en outre une activité contre les tumeurs, comme cela a été mis en évidence dans les essais suivants. 1. Induction du facteur de nécrose tumorale (TNF) Dans le but de stimuler les macrophages de la moelle os- seuse chez la souris, on dilue des cellules de moelle osseuse pré- levées sur des souris BDF1 (âgées d'environ 10 à 13 jours, induites - avec du CSF) de façon à obtenir 1 x 106 cellules/ml dans un milieu ERPMI 1640 + 1% Pen/Strep (5000 U/ml) + 1% glutamine] et on incube pendant 4 heures à 37 C/5% C02 dans des microplaques plates avec la substance à essayer dans une solution dont la concentration finale (étapes de dilution 1:10) est de l'ordre de 100 pg à 0,1 pg/ml. Après filtration à travers des filtres de 0,45 pm, on congèle les cellules surnageantes à -70'C avant de les utiliser. Des cellules L 929 sont précultivées pendant une nuit (37C, 5% C02) dans des microplaques 3 x 104 cellules/godet/100 pl, puis on ajoute 100 Il de chaque échantillon et on continue de diluer la culture en étapes 1:2. On ajoute 100 pl d'actinomycine D (8 Mg/ml de milieu) et on poursuit l'incubation pendant encore 18 heures à 37*C/5 % C02. Après avoir retiré les cellules surna- geantes, on colore la couche de cellules restantes avec une solu- tion Giemsa et on mesure l'absorption à 620 nm au moyen d'un appa- reil Titertek Multiscan Autoreader (Flow). Une unité de TNF est définie comme étant l'activité qui produit une lyse de 50% des cellules cibles L 929. 2604 177 2. Essai de mélanome B16F1 On cultive des cellules de mélanome B16F1 in vitro pendant jours. On synchronise ces cellules un jour avant d'effectuer l'essai en séparant la monocouche en cellules individuelles en uti- lisant de la trypsine-EDTA et en remettant la quantité totale dans le même flacon dans un milieu frais. On compte les cellules et on fait une préparation contenant 106 cellules/ml de milieu. On injecte par voie intraveineuse 0,1 ml de la suspension cellulaire (105 cellules) dans la veine caudale de souris B6D2F1. 21 jours après, on sacrifie les animaux et on compte le nombre de tumeurs pulmonaires. La substance à essayer est mise en solution et injec- tée par voie intrapéritonéale aux jours -6, -4 et -1. On a trouvé que les composés de formule I possè- dent une activité immuno-prophylactique qui se traduit par une réduction du nombre de métastases du mélanome B16F1 dans les pou- mons. Comme essai de l'activité thérapeutique de ces composés, on traite des souris aux jours 3, 6, 8, 10, 13 et 15 après leur avoir inoculé les cellules tumorales. Dans ce cas également, on a consta- té une nette diminution du nombre de métastases. Les composés de formule I peuvent donc être utili- sés en thérapeutique comme modulateurs de la résistance anti- microbienne non spécifique, dans le renforcement systémique de la réponse immunitaire et dans le renforcement de l'immunité non spé- cifique. Les composés de formule I peuvent donc être utili- sés pour le traitement ou le traitement d'appoint (par exemple avec d'autres formes thérapeutiques spécifiques ou d'appoint) de condi- tions associées à une baisse de la réponse immunitaire, en particu- lier une baisse de la réponse immunitaire humorale et/ou une baisse de la réaction d'hypersensibilité de type prolongé, 'et pour le traitement de conditions dans lesquelles en général une modulation de la réponse immunitaire est indiquée. En particulier, les compo- sés de formule I sont utiles dans le traitement ou le trai- tement d'appoint de conditions pathologiques dues à des immuno- déficiences idiopathiques ou des immuno-déficiences du type rencon- tré chez les patients âgés, ou bien chez les sujets atteints de 260 4177 brûlures graves ou d'infections généralisées. Les composés de for- mule I peuvent également être utilisés dans le traitement ou le traitement d'appoint des maladies virales (telles que l'Herpès disséminé, la variole progressive et les formes de varicelle disséminée), la maladie de Hodgkin et autres tumeurs malignes. Les composés de formule I peuvent en outre être utilisés pour la prévention du choc endotoxinique, par exemple en cas d'accidents, de brûlures et d'interventions chirurgicales, et comme agents anti-inflammatoires. Pour les indications mentionnées ci-dessus, la dose à administrer variera évidemment en fonction du composé utilisé, du mode d'administration et du traitement désiré. D'une manière géné- * rale, on obtient des résultats satisfaisants en administrant ces composés en une dose quotidienne, ou bien en une dose unique comme effet d'appoint, par exemple dans le cadre d'un traitement d'ap- point, à raison d'environ 0,0015 mg/kg à environ 1 mg/kg de substance active. En thérapeutique humaine, la dose quotidienne apnropriée sera de l'ordre d'en- viron 0,1 mg à environ 70 mg, administrée avantageusement en doses O20 fractionnées 2 à 4 fois par jour sous forme de doses unitaires con- tenant d'environ 0,025 à environ 35 mg de substance active, ou sous une forme à libération prolongée. Une dose unique d'appoint peut aller jusqu'à 70 mg de substance active. Grâce à leur activité immuno-modulatrice, les composés de formule I peuvent également être utilisés comme adjuvants dans des vaccins. Pour cette utilisation, la dose appropriée sera comprise entre environ 0,5 et environ 100 mg, de préférence environ mg, administrée le jour de la vaccination, avantageusement sui- vie d'un rappel à la même dose 2 à 4 semaines après. Les composés de formule I peuvent être administrés sous forme libre ou sous forme de sels pharmaceutiquement acceptables. De tels sels ont le même ordre d'activité que les formes libres. L'invention concerne donc les composés de formule I sous forme libre ou sous forme de sels, pour l'utilisation comme médicaments, en particulier comme immuno-modulateurs, comme agents anti-viraux et comme agents anti-inflammatoires. L'invention concerne également une composition pharmaceu- tique comprenant un composé de formule I, sous forme libre ou sous forme de sel, en mélange avec des diluants ou véhicules pharmaceutiquement acceptables. De telles compositions peuvent être préparées selon les méthodes galéniques connues et se présenter par exemple sous une forme destinée à l'administration par voie entérale, de préférence orale, par exemple sous forme de comprimés ou de capsules, ou destinée à l'administration par voie parentérale, par exemple sous forme de solutions ou de suspensions injectables. Une dose unitaire contient par exemple entre environ 0,025 mg et environ 35 mg d'un composé de formule I sous forme libre ou sous forme d'un sel pharma- ceutiquement acceptable. REVENDICATIONS 1.- Les composés de formule I CH2OH2CO HOO OH OH YR3 dans laquelle R1 représente un reste répondant à l'une des formules IIa à IIk suivantes CH20 Ho HO 2 0 (lia) O R (IIb) HOH, - \ V OH (uc) CH2OH \HO o CHOH l0 CH OH CH2OH HOS \X-. t/.( I 2-. 0 0 OH OH 1 5 CH2OH E sE j CHOH ( IHf) '--H20H o \ * 1Y. '.o- O CH2 O X O 'S--..-' = R4 (IIg) CH2 30. '.. OH 2 6 0 4 1 77 CH20H HO DH X--. coeR4 HOO HOt\ O CCOR4 CHO CHOE l 0:".0 -@ '- HOIc4 C H2OH aHOH oCH2OH tdu O ô' \ (HO IIÈ i6 \CHO H )R4\\ s OH COR4 aoH CH OH CHOH 0 (IIk) COOR4 s - OCOR4 o R4 représente l'hydrogène, l'équivalent d'un métal ou un groupe alkyle, X et Y, qui peuvent être identiques ou différents, représentent l'oxygène ou un groupe imino, et R2 et R3, qui peuvent être identiques ou différents, représentent un groupe acyle éventuellement substitué, et leurs sels. 2.- Un composé choisi parmi le 6-0-(a,D- arabinofuranosyl)-2-désoxy-4-0-phosphono-3-0-tétra- lO décanoyl-2-[3-(R)-tétradécanoyloxytétradécanamido]-D- glucopyranose, le 2-désoxy-6-O-a-D-glucopyranosyl-4- 0-phosphono-3-0-tétradécanoyl-2-[3-(R)-tétradécanoyl- oxytétradécanamido]-D-glucopyranose et le 2-désoxy-6- 0-méthyl-(3-désoxy-g-D-manno-2-octulopyranosyl)-ono- 4-0-phosphono-3-O-tétradécanoyl-2-[3-(R)-tétradécanoyl- oxytétradécanamido]-a,g-D-glucopyranose,et leurs sels. 3.- Un composé choisi parmi le 2-désoxy-6-[4- 0-(3-désoxy-a-D-manno-2-octulopyranosyl)onate de méthyle- 3,5-didésoxy-a-D-arabino-2-octulopyranosyl-onate de méthyle]-4-0-phosphono-3-0-tétradécanoyl-2-[3-(R)- tétradécanoyloxytétradécanamido]-D-glucopyranose, le 2-désoxy-6-0-[5-0-(3-désoxy-a-D-manno-2-octulopyra- nosyl)onate de méthyle]-a-D-arabinofuranosyl]-4-0-phos- phono-3-0-tétradécanoyl-2-[3-(R)-tétradécanoyloxy- tétradécanamido]-D-glucopyranose, le 2-désoxy-6-0- [acide(3-désoxy-a-D-manno-2-octulopyranosyl)onique]- 2-[3-(R)-hydroxytêtradécanamido]-4-0-phosphono-3- [3-(R)-têtradécanoyloxy-tétradécanoyl]-D-glucose, le 2-désoxy-6-0-[acide(3-dêsoxy-a-D-manno-2-octulopyra- nosyl)onique]-4-0-phosphono-3-0-tétradécanoyl-2-[3- (R)-tétradécanoyloxytétradécanamido]-D-glucose et le 2-désoxy-6-0-[acide (3-désoxy-a-D-manno-2-octulopyrano- syl)onique]-4-0-phosphono-2-[3-(R)-tétradécanoyloxy- tétradécanamido]-3-O-[3-(R)-tétradécanoyloxytétradé- canoyl]-D-glucose,et leurs sels. 4.- Un procédé de préparation des composés de formule I spécifiés à la revendication 1, caractérisé en ce que a) on fait réagir un composé de formule III CH20H HO- \Ä o _, (III) R2._-... O YR3 dans laquelle R2, R3, X et Y ont les significations données à la revendication 1 et-R5 représente un groupe protecteur, avec un composé de formule IV Ri - Z (IV) dans laquelle R' a la même signification que R1, les groupes hydroxy présents dans le reste R' étant cependant protégés et les groupes R4 éventuellement présents dans le reste Ri signifiant un groupe alkyle ou un groupe protecteur, et Z représente un groupe éliminable, et, dans le composé ainsi obtenu répondant à la Ri formule V À co Hv 72 t -. OR5(V) YR3 dans laquelle Rl, R2, R3, R5, X et Y ont les signifi- cations données à la revendication 1. on introduit ensuite le groupe phosphate, ou b) on fait réagir un composé de formule VI R0 CH20H O R60\ - X X R0 _._- (VI) 6 À X.,v-\X OR5 YR3 dans laquelle R2, R3, R5, X et Y ont les significa- tions données à la revendication 1 et R6 représente un groupe protecteur, avec un composé de formule IV tel que défini ci-dessus, et on élimine les groupes protecteurs dans le composé ainsi obtenu répondant à la formule VII R e (VII) R6 YR3 dans laquelle R2, R3, R5, R6, Ri, X et Y ont les signifi- cations données à la revendication 1, et on récupère le composé. de formule I ainsi obtenu sous forme libre ou sous forme d'un sel. 5.- Un composé tel que spécifié à l'une quelconque des revendications 1 à 3,sous forme libre ou sous forme d'un sel pharmaceutiquement acceptable, pour l'utilisation comme médicament. 6.- Une composition pharmaceutique caracté- risée en ce qu'elle contient, comme substance active, un composé tel que spécifié à l'une quelconque des reven- dications 1 à 3, sous forme libre ou sous forme d'un sel pharmaceutiquement acceptable, en association avec un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.