FR 2601012 A1 19880108 FR 8709111 A 19870626 La présente invention a pour objet une nouvelle application thérapeutique des dérivés de la 1,4-dihydropyr4 dine. La demande de brevet européen n 0 000 150 décrit des 1,4dihydropyridines de formule I R6 N x(10 N/ I N 1 R40C" COR3 R5 2 dans laquelle R1 reg,'serte l'hydrogèn, un groupe alkyle en C1-C6, 15 alcényle en C3-C6, alcynyle en C3-C6, cycloalkyle en C3-C7, cycloalkylalkyle en C4-C8,ou un groupe phénylalkyle en C7-C9 ou phénylalcényle en C%-C12 dans lesquels le cycle phényle peut porter un, deux ou trois substituants choisis parmi les halogènes.et les groupes hydroxy, 20 alkyle en C1-C4 et alcoxy en C1-C4, R2 et R5, indépendamment l'un de l'autre, représentent l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6, R et R4, indépendamment l'-un de l'autre, représentent un groupe alkyle en C1-C6, alcényle en C3-C6, alcynyle en C3-C6, cycloalkyle en C3-C7, cycloalkylalkyle en C4-C8, alcoxy en C1-C6, hydroxyalcoxy en C2-C6, alcoxyalcoxy en C3-C6, hydroxyalcoxyalcoxy en C4-C8, alcényloxy en C3-C6, alcynyloxy en C3-C6, cycloalkyloxy en C3-C7 ou cycloalkylalcoxy en C4-C8, 30 R6 représente l'hydrogène, un halogène ou un groupe alkyle en C1-C4, alcoxy en C1-C4, alkylthio en C1-C4, alkylsulfonyle en C1-C4, trifluorométhyle, nitro ou hydroxy, et X représente l'oxygène ou le soufre. Ce document indique que les composés de formule I exercent une action antihypertensive et une 5 dilation des vaisseaux coronaires et qu'ils peuvent être utilisés en thérapeutique comme anti-hypertenseurs et pour le traitement des insuffisances coronaires. Le brevet belge n 886 259 indique que les composés de formule I augmentent le flux sanguin cérébral 10 et qu'ils peuvent être utilisés pour le traitement de l'insuffisance cérébrovasculaire, en particulier des accidents cérébrovasculaires, des angiospasmes cérébraux et ------------------------------de l'insuffisance cérébrovasculaire aigu',comme par exemple les attaques cérebrovasculaires. Le brevet belge indique également que les composés de formule I exercent une activité antagoniste du calcium et qu'ils peuvent être utilisés en thérapeutique comme agents spasmolytiques, notamment pour le traitement des spasmes 20 des muscles lisses, par exemple les muscles du côlon. Le brevet belge n 894 272 indique que les composés de formule I diminuent le flux sanguin du shunt artérioveineux dans la zone carotidienne et exercent un effet antagoniste sélectif sur la vaso25 constriction de l'artère basilaire provoquéepar la sérotonineet qu'ils peuvent être utilisés en thérapeutique pour le traitement des céphalée vasculaires comme la migraine et les algies vasculaires de la face. Le brevet belge n 897 821 indique que les composés de formule I provoquent une augmentation du volume expiratoire maximal pendant la première seconde et qu'ils peuvent être utilisés en thérapeutique pour le traitement de l'asthme, en particulier de l'asthme d'effort. La demanderesse a trouvé maintenantde façon surprenanteque les composés de formule I exercent un effet inhibiteur prononcé sur le potentiel de deformabilité érythrocytaire lié aux ions calcium. Les composés de formulé I particulièrement intéressants pour la nouvelle application selon l'invention sont l'ester diéthylique de l'acide 4-(2,1,310 benzoxadiazol-4-yl)l,4-dihydro-2,6-diméthyl-pyridine3,5-dicarboxylique, désigné ci-après KP 1, l'ester isopropylique de l'acide 4-(2,1,3benzoxadiazol-4-yl)1,4-dihydro-2,6-diméthyl-o-méthoxyc rbonyl-pyridine5carboxylieue, designé ci-après KP 2, et l'ester dimé-hy15 lique de l'acide 4-(2,1,3-benzothiadiazol-4-yl)-2,6diméthyl-l1,4-dihydropyridine-3, 5-dicarboxylique, désigné ci-après KP 3, et spécialement le composé KP 3. Cette activité a été mise en évidence dans les essais suivants: A) Potentiel de rigidité des globules rouges lié au calcium et filtrabilité L'ionophore calcique A 23187, c'est-à-dire le composé de formule e} w,-K P&. 30. 2 6 0 1 0 1 2 est capable de transporter sélectivement les cations divalents, en particulier le calcium, à travers la membrane érythrocytaire. Le A23187 et les ions calcium sont utilisés 5 comme médiateurs pour rendre rigidesdes érythrocytes normaux. Le degré d'hémolyse activé par des forces de contrainte résultant du passage, à une pression donnée, descellules à travers des pores plus petites que leur diamètre cellulaire moyen, permet de déterminer 10 unindice de déformabilité. Cet indice de déformabilité est défini comme le pourcentage d'hémolyse ou d'inhibition de celle-ci en présence de substances actives sur la rhéologie. La flunarizine et la pentoxifylline sont utilisées comme témoins pour les comparaisons. 15 La flunarizine inhibe les modifications de forme provoquées par le calcium sur les érythrocytes et réduit également la capture du 45Ca.Celà est une évidence indirecte que la flunarizine normalise ou inhibe la perte de plasticité des érythrocytes 20 soumis à une contrainte calcique. La relation dose réponse entre l'inhibitionde l'hémolyse et la concentration de flunarizine et de KP 3 est représentée à la figure 1 annexée. Les substances sont incubées aux concentrations indiquées, à 37 C en présence de 2,5 mM d'ions calcium et 5 x 10-7 M de A23187 pendant une heure. Les effets du composé KP 3 sont approximativement Il fois supérieurs à ceux de la flunarizine (tableau I). La figure 1 annexée représente la relation 30 entre le logarithme des concentrations de substance (en abscisse) et le pourcentage d'inhibition de l'hémolyse (en ordonnée).La courbe de gauche est celle relative au KP 3 et la courbe de droite est relative à la flunarizine. Les cellules sont incubées pendant 1 heure en présence de 5 x 10-7 M de A23187 et 2,5 mM d'ions calcium, puis filtrées comme décrit ci-dessus. Les résultats sont normalisés à 100% par rapport au degré d'hémolyse observé en l'absence de la substance à examiner. Les points représentent la moyenne +/- S,T.D. d'au moins 3 essais séparés. Tableau 1 -log CI50 en présence de 2,5 mM KP 3 Flunarizine d'ions calcium (globules rouges humai ns 4,75 3,87 humains) -log CI50 esc le logarithme négatif de la concentration à laQL!r?'e l'aPtagonistA!par exemple KP 3) inhibe 15 de 50% la réponse de l'agoniste, c'est-à-dire les ions calcium. On a constaté que la pentoxifylline était inactive jusqu'à la plus forte concentration utilisée, à savoir 0,6 mM. B) Etudes ectacytométriques Les effets du KP 3 et de la flunarizine sur des érythrocytes humains mis en présence de fortes concentrations d'ions calcium,ont-été également examinés en utilisant la technique ectacytométrique décrite à l'origine par Bessis et Mohandas [Blood Cells 1 (1975) 307-313]. L'instrument utilisé dans ces essais a été construit par la société Technicon Instruments (Tarrytown, N.Y.) et comprend un système automatique d'analyse d'image [W. Groner et al., Clin. Chem 26 30 (1980) 1435]. L'ectacytomètre est constitué d'un viscomètre rotatif et d'un laser h'lium-néon. Un faisceau lumineux passe à travers la suspension de globules rouges se trouvantdans l'espace situé entre les deux cylindres du viscomètre. Sous l'action de contraintes mécaniques d'un fluide physiologiquement approprié, les érythrocytes normaux subissent une déformation et s'alignent parallèlement à la direction du flux. En l'absence de flux, la courbe de diffraction produite est circulaire et se transforme en courbe elliptique sous l'action des contraintes du fluide. L'intensité de lumière est mesurée à quatre points différents,.deux dans le plan horizontal et deux dans le plan vertical. On peut en déduire ainsi un indicedit"indice de déformabilité" (ID) par mesure de l'ellipticité d'une population de cellule se déformant uniformément. L'ID peut être mesurée soit comme fonction continue de la force de 15 contrainte ou à une force de contrainte constante comme fonction continue de la conductivité du milieu de suspension (Continuous gradient ektacytometry, M.R. Clark et col. Blood 61 [1983] 899-910). A des fins de comparaisons, on utilise l'indice 20 de déformabilité maximal atteint, c'est-à-dire ID(max), pour comparer la déformabilité d'échantillons différents et l'influence du KP 3 et de la flunarizine sur les erythrocytes soumis à une forte concentration d'ions calcium. De plus, on obtient des profils de déformabilité osmotique pour des érythrocytes humains soumis à une forte concentration d'ions calcium et on compare les effets du KP 3 et de la flunarizine. La figure 2 indique l'influence du KP 3 sur l'indice de déformabilité ectacytométrique (ID) des érythrocytes 30 charges d'ions calcium. L'ID a été enregistré en continu comme fonction des forces de contrainte et porté en ordonnée sur le diagramme en % de l'ID maximal obtenu pour une population témoin normale d'érythrocytes humains. Comme on peut le voir sur la figure 2, la réduction de I'ID liée au calcium est inhibée par le KP 3. La figure 2 représente l'amélioration de la 5 déformabilité des érythrocytes par KP 3. L'indice de déformabilité ectacytométrique maximal ou ID (max) des cellules normales est de 100%. Les érythrocytes humains sont incubés pendant 1 heure en présence de 2,5 mM d'ions calcium et 2,5 x 10- 7 d'ionophore calcique A23187 10 et de différentes concentrations de KP 3. Sur la figure 2, on a reporté en abscisse le logarithme des concentrations de KP 3.L'ID (max)est mesuré à une force de contrainte de 255 dynes x cm 2. Les points représentent la moyenne +/-S.E.M de 2 à 6 essais. Les données obtenues par ectacytométrie sur le gradient osmotique des globules rouges charges d'ions calcium, indiquent aussi bien une flexibilité réduite de la membrane qu'une réduction concomitante du rapport surface / volume etde la teneur en eau des cellules. A des faibles concentrations, le KP 3 inhibe en premier lieu la perte de flexibilité de la membrane, alors que des concentrations plus élevées normalisent à la fois la perte en eau des cellules et la flexibilité de la membrane. L'osmolarité à laquelle la déformabilité atteint un minimum hypotonique n'est pas influencée d'une manière générale par la contrainte aux ions calcium ou par le traitement par KP 3. Etant donné que l'osmolarité à laquelle le minimum hypotonique se produit est en relation lineaire 30 avec une hémolyse de 50% dans un essai de fragilité osmotique classique, les données suggèrent que ni la contrainte aux ions calcium,ni le KP 3 n'influencent la fragilité osmotique des globules rouges. Dans les essais ci-dessus, on obtient des résultats similaires lorsqu'on remplace le KP 3 par le KP 1 ou le KP 2. Il apparait par conséquent que les composés de formule I inhibent le potentiel de rigidité des érythro5 cytes lié au calcium,à une concentration d'environ 6 M à environ 104 M comme il ressort aussi bien du modèle de filtration des globules rouges que des études ectacytométriques. Comme cela a été montré précédemment, les composés de formule I sont environ 10 fois 10 plus efficaces que la flunarizine. La pentoxifylline est inactive. C) De plus, bien qu'il n'existe aucun modèled'animal.pathophysiologique permettant d'examiner des substances actives sur la rhéologie, la preuve que le KP 1, le KP 2 et le 15 KP 3 agissent également in vivo sur la déformabilité des globules rouges, est fournie par les effets observés avec ces substances sur la récupération du tissu cérébral post-ischémique après ischemie biphasique complète induite dans la tête de rat isoléeet perfusée [P. Gygax et col., Brain and Heart Infarct II, SpringerVerlag Berlin Heidelberg (1979) pages 293 - 305]. On a trouvé que si on utilise dans le milieu de perfusion des globules rouges ayant sur micropore des temps de filtration prolongés, l'activité de l'électroencéphalogramne 25 décline rapidement et devient isoeléctrique. Les résultats des essais indiqués précédemment montrent que les composés de formule I ont des effets thérapeutiques bénéfiques chez les patients souffrant de troubles vasculaires d'origine ischémique lorsque ces derniers 30 sont associés à une perte de plasticité des érythrocytes liée aux ions calcium, en particulier les troubles vasculaires périphériques et cérébraux. Les composés de formule I sont donc indiqués pour l'utilisation comme agents hémorhéologiques, en particulier pour améliorer la microcirculation, spécialement pour la prophylaxie et le traitement des troubles vasculaires d'origine ischémique lorsque ceux-ci sont associés à une perte de plasticité des érythrocytes, par exemple dans les cas suivants: - ischémie vasculaire périphérique, par exemple la claudication intermittente, 10 - l'angine de poitrine, - les troubles microcirculatoires de la rétine, par exemple les baisses réversibles du champs visuel, par cxcî-ple le scotome vasospastique réversible, - comme adjuvant dans le traitement de l'infarctus 15 du myocarde, - ischémie vasculaire cérébrale, y compris les attaques cérébrovasculaires et les accidents ischémiques transitoires, - l'anémie drépanocytaire, - comme adjuvant dans le traitement du diabète sucré, - comme adjuvant dans le traitement de la démence sénile, - comme agent de protection érythrocytaire, par exemple après implantation de valves cardiaques artificielles, - la maladie de Raynaud et - l'athérosclérose oblitérante, lorsque ces conditions sont associées à une perte de plasticité des érythrocytes liée aux ions calcium. Les composés de formule I sont utilisés de préférence pour le traitement de l'ischémie vasculaire 30 périphérique et cérébrale, spécialement la claudication intermittente, pour le traitement de la maladie de Raynaud, pour le traitement de l'athérosclérose oblitérante et pour le traitement de l'anémie drépanocytaire. 2 6 0 1 0 1 2 Les composés de formule I peuvent par conséquent être administrés de la même manière que des produits de référence connus, par exemple la flunarizine et/ou la pentoxifylline. Ils seront administrés avantageusement aux mêmes doses ou à des doses plus faibles que celles utilisées généralement pour la flunarizine et la pentoxifylline. Pour les utilisations hémorhéologiques indiquées précédemment, la posologie variera en fonction du mode d'administration et du traitement thérapeutique désiré. Une dose quotidienne appropriée est comprise entre environ 10 mg et environ 300 mg de composé de formule I, de préférence environ 50 mg à environ 300 mg. Les doses unitaires appropriées pour l'administration 15 par voie orale ou non-orale comprennent entre environ 2,5 et environ 30 mg de composé de formule I, en mélange avec un véhicule-ou diluant pharmaceutique solide ou liquide. Les composés de formule I sont administrés 20 avantageusement sous forme d'une composition pharmaceutique comprenant le composé de formule Isous forme de base libre ou sous forme d'un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable, en association avec un véhicule ou diluant pharmaceutiquement acceptable. 25 De telles compositions sont connues ou peuvent être préparées selon les méthodes connues, par exemple sous forme de solutions ou de comprimés. Comme sels appropriés des composés de formule I, on peut citer le chlorhydrate. La présente invention concerne également une composition pharmaceutique destinée à l'application mentionnée ci-dessus et comprenant un composé de formule I, sous forme de base libre ou sous forme 1l d'un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable, en association avec un véhicule ou diluant pharmaceutiquement acceptable. De telles compositions peuvent se présenter par exemple sous forme d'une solution ou d'un comprimé. L'administration par voie orale est préférée. L'invention a également pour objet l'utilisation des composés de formule I, sous forme de base libre ou sous forme d'un sel d'addition d'acide pharma10 ceutiquement acceptable, pour la préparation d'un médicament à activité hémorhéologique, ainsi qu'un médicament pour le traitement des troubles vasculaires d'cricine ischomiqu et comDrenant un composé de formule I, sous forme de base libre ou sous forme d'un sel d'addi15 tion d'acide pharmaceutiquement acceptable. -2601012 REVENDICATIONS 1.- Utilisation des composés de formule I R6 N x N R40C. COR3 () R5 R1 dans laquelle R 1représente l'hydrogène, un groupe alkyle en'C1-C6, alcényle en C3-C6, alcynyle en C3-C6, cycloalkyle en C3-C7, cycloalkylalkyle en C4-C8,ou un groupe phénylalkyle en C7-C9 ou phénylalcényle en C9-C12 dans lesquels le cycle phényle peut porter un, deux ou trois substituants choisis parmi les halogènes et les groupes hydroxy, alkyle en C-C4 et alcoxy en C-C4, R2 et R5, indépendamment l'un de l'autre, représentent l'hydrogène ou un groupe aTkyle en Cl-C6, R3 et R4, indépendamment l'un de l'autre, représentent 20 un groupe aikyle en C1-C6, alcényle en C3.-C6, alcynyle en C3-C6, cycloalkyle en C3-C7, cycloalkylalkyle en C4-C8, alcoxy en C1-C6, hydroxyalcoxy en C2-C6, alcoxyalcoxy en C3-C6, hydroxyalcoxyalcoxy en C4-C8, alcényloxy en C3-C6, alcynyloxy en C3-C6, cycloalkyloxy en C3-C7 ou cycloalkylalcoxy en C4-C, R6 représente l'hydrogène, un halogène ou un groupe alkyle en C1-C4, alcoxy en C1-C4, alkylthio.en C1-C4, alkylsulfonyle en C1-C4, trifluorométhy-le, nitro ou hydroxy, et X représente l'oxygène ou le soufre, commle agents hémorhéologiques. 2.- Utilisation de l'ester diéthylique de l'acide 4-(2,1,3-benzoxadiazol4-yl)-l,4-dihydro2,6-aiméthyl-pyridine-3,5-dicarboxylique et de ses sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables, comme agents hémorheologiques. 3.- Utilisation de l'ester isopropylique de l'acide 4(2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)-l,4-dihydro2,6-diméthyl-3-méthoxycarbonylpyridine-5-carboxylique et de ses sels d'addition d'acides pharmaceutiquement 10 acceptables, comme agents hémorhéologiques. 4.- Utilisation de l'ester diméthylique de l'acide 4-(2,1,3benzothiadiazol-4-yl)-2,6-diméthyl1,4-dihydro-pyridine-3,5-dicarboxylique -t de ses sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables, 15 comme agents hémorhéologiques. 5.- L'application en thérapeutique des 1,4dihydropyridines spécifiées à l'une quelconque des revendications 1 à 4, sous forme de base libre ou sous forme d'un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement 20 acceptable, pour la prophylaxie et le traitement des troubles vasculaires d'origine ischémique associés à une perte de plasticité des érythrocytes. 6.- Les 1,4-dihydropyridines spécifiées à l'une quelconque des revendications 1 a 4, sous forme de base 25 libre ou sous forme d'un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable, pour l'utilisation comme médicament destiné à la prophylaxie et au traitement des troubles vasculaires d'origine ischémique associés à une perte de plasticité des érythrocytes. 7.- L'utilisation des 1,4-dihydropyridines spécifiées à l'une quelconque des revendications 1 à 4, sous forme de base libre ou sous forme d'un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable, pour la préparation d'un médicament destiné à la prophylaxie et au traitement des troubles vasculaires d'origine ischémique associés à une perte de plasticité des érythrocytes. 8.- Une composition pharmaceutique comprenant comme substance active une 1,4-dihydropyridine telle que spécifiée à l'une quelconque des revendications 1 à 4, sous forme de base libre ou sous forme d'un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable, pour l'utilisation dans la prophylaxie et le traitement 10 des troubles vasculaires d'origine ichémique associés à une perte de plasticité des érythrocytes. 9.- Une composition pharmaceutique selon la revendication 8, caractérisée en ce qu'elle contient, entre environ 2,5 mg et environ 300 mg de substance active en mélange avec un véhicule ou diluant pharmaceutique solide ou liquide. O10.- Un médicament pour la prophylaxie et le traitement des troubles vasculaires d'origine ischémique associés à une perte de plasticité des érythrocytes, et contenant une 1,4-dihydropyridine telle que spécifiée à l'une quelconque des revendications 1 à 4, sous forme de base libre ou sous forme d'un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable.