FR 2605221 A1 19880422 FR 8614555 A 19861020 COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES OU VETERINAIRES CONTENANT DE LA DE(HYDROXYMETHYL)-25 DEOXY-25 OXO-25 MONENSINE. La présente invention se rapporte, d'une manière générale, à des compositions pharmaceutiques, vétérinaires ou alimentaires utiles notamment pour combattre la coccidiose. En particulier, l'invention concerne des compositions pharmaceutiques, vétérinaires ou alimentaires contenant comme principe actif essentiel, la de(hydroxymethyl)-25 deoxy-25 oxo-25 monensine de formule laquelle sera désignée par la suite sous l'appellation "monensine lactone", ainsi que ses sels non toxiques. Par sels non toxiques, on entend plus particulièrement les sels de métaux alcalins, tels que lithium, sodium ou potassium, les sels de métaux alcalino-terreux, tels que calcium ou magnésium ou les sels d'ammonium tels que ceux obtenus à partir d'ammoniac ou d'une amine telle que méthylamine, éthylamine, diméthylamine, diéthylamine, triéthylamine, éthanolamine, diéthanolamine et semblables. La coccidiose est une maladie commune et répandue chez la volaille, le porc, le lapin, le chat, le chien, chez certains ruminants etc..., maladie causée par des parasites appartenant à l'embranchement des proto zoaires du genre Eimeria tels que E.tenella, E.necatrix, E.acervulina, E.maxima, E.brunetti, E.mivati, E.adenoldes et E.maleagrimitis. E.tenella et E.acervulina sont les agents responsables des formes les plus sévères et souvent fatales de cette maladie. Elles se caractérisent par une hémorragie sévère et importante, une accumulation de sang dans le caecum et par passage de sang dans les matières fécales. E.necatrix attaque. l'intestin grêle du poulet causant une coccidiose intestinale tandis que E.maleagrimitis et E.adenoldes sont responsables de la coccidiose chez le dindon. Laissées sans traitement, les coccidioses conduisent à un gain de poids inférieur à la normale, à une efficacité alimentaire réduite et à une mortalité élevée chez les oiseaux. Par conséquent, la morbidité et la mortalité occasionnées par les infestations à coccidies créent une perte économique importante lorsqu'elles sont laissées sans traitement ou sans surveillance. L'élimination ou le contrôle de cette maladie est, par conséquent, de première importance, notamment pour l'élevage de la volaille. On a trouvé dans le cadre de la présente invention, que la monensine lactone ainsi que ses sels non toxiques présentent de très intéressantes propriétés anticoccidiennes notamment vis-à-vis d'Eimeria tenella susceptibles d'etre utilisées pour la destruction de parasites chez les oiseaux et certains ruminants (ovins). En outre, on a trouvé de manière surprenante que la monensine lactone et ses sels non toxiques, tout en présentant une activité anticoccidienne équivalente à celle de la monensine, se révèlent beaucoup moins toxiques que ce composé. En tant qu'agent anticoccidien, la monensine lactone présentera, par conséquent, un avantage incontestable par rapport à la monensine. En outre, on mentionnera que la monensine lactone est capable, en association avec certains antibiotiques, en particulier les antibiotiques aminoglycosides, de potentialiser l'action de ces composés. A ce titre, la monensine lactone et ses sels non toxiques, en association avec certains antibiotiques, pourraient être utilisés en médecine humaine. Des essais pharmacologiques ont été pratiqués en vue de mettre en évidence les propriétés qui, prises dans leur ensemble, sont capables de rendre la monensine lactone et ses sels non toxiques, utiles notamment comme agents anticoccidiens. I. Activité anticoccidienne Des tests ont été effectués dans lesquels on a relevé les résultats zootechniques (poids, indice de consommation) et les symptômes cliniques de coccidiose (morbidité, mortalité, aspect des matières fécales, excrétion ookystale, lésions). On a utilisé à cet effet le protocole expérimental suivant On répartit des coquelets de souche génétique Warren Sex Sal Link âgés de 15 jours en 4 groupes de 4 animaux chacuns et on les alimente avec une nourriture type poulet de chair ler âge. On administre, en supplément, un composé à étudier aux animaux de 2 groupes à savoir 100 ppm/jour de monensine lactone ou 100 ppm/jour de monensine. Après 48h (Jour JO) on inocule avec 250.000 oocystes sporulés d'Eimeria tenella les animaux des 2 groupes ayant recu un composé à étudier ainsi que ceux d'un troisième groupe. On poursuit alors l'alimentation et le traitement initiés pour chacun des 4 groupes pendant 8 jours après l'inoculation des oocystes. On pèse les animaux, on les sacrifie et on les examine de manière à déceler d'éventuelles lésions dues aux coccidies. Le Tableau suivant rapporte l'ensemble des résultats obtenus avec les groupes suivants NCNT : animaux non contaminés, non traités CTNT : animaux contaminés, non traités CTMO : animaux contaminés, traités avec la monensine CTML : animaux contaminés, traités avec la monensine lactone portant sur les critères suivants déterminés durant la période globale du test - Les gains de poids (GP) en g déterminés de J-3 à J+8 (P' = poids en g à J-3, P = poids en g à J+8) - L'excrétion ookystale (EO) journalière de J+5 à J+7 - La morbidité (M) notée de O à 4 à savoir O : attitude normale des animaux 1 : plumes ébouriffées (surtout celles du cou) 2 : début de la frilosité et de la prostration 3 : la frilosité et la prostration sont plus marquées et les animaux sont tristes 4 : les animaux dont les plumes sont ébouriffées ont une position "en boule", les ailes sont tombantes, la station debout leur est pénible et ils ont les yeux fermés. - L'aspect des fécès (MF) noté de à 4 à savoir O : normal 1 : traces d'hémorragies 2 : quelques tâches de sang 3 : nombreuses tâches de sang 4 : très hémorragiques - La mortalité (M2) exprimée en pourcentage - Les lésions (L) notées selon la notation de REID (W.Malcolm REID, A diagnostic chart of nine species of fowl coccidia-Georgia Agri cultural Experiment Stations - Dec. 1964, Technical Bulletin N.S. 39) à savoir O : pas de lésions macroscopiques 1 : rares pétéchies clairsemées sur la muqueuse caecale pas d'épaississement des parois caecales - contenu caecal normal 2 : lésions plus nombreuses avec sang dans le contenu caecal - paroi caecale quelque peu épaissie présence d'un contenu caecal normal 3 : quantité importante de sang ou de pus caecal paroi caecale fortement épaissie - peu ou pas de matières fécales dans le caecum 4 : paroi caecale fortement distendue avec des amas de sang ou de pus caseeux - débris fécaux inexistants ou inclus dans les amas caseeux Les animaux morts sont cotés 4. - Les indices de consommation (IC) : rapport de la quantité de nour riture ingérée de J-2 à J+8 au gain de poids de J-3 à J+8. TABLEAU Groupes N C N T C T N T C T M O C T M L Critères P' P GP P GP P GP P GP Poids indivviduel 110 223 113 189 79 235 125 236 126 : 111 : 261 150 : 212 101 : 235 124 : 228 117 129 235 106 194 65 . 275 146 . 266 137 : 138 : 312 174 : 181 63 : 245 107 : 200 62 Poids moyen 122 258 136 194 77 247 125 232 110 I C / 1,902 / 2,987 / 2,018 / 2,011 : J+5 : 0 2150 : 1580 : 1150 J+6 0 1030 930 840 @@@103 à J+7 0 420 22 73 TOTAL 0 3600 2532 2063 % / 70,33 57,30 : J+5 : 0 4 : 2 : 3 M à J+6 0 2 0 3 J+7 0 1 0 0 J+5 0 4 3 2 MF à J+6 0 3 1 2 J+7 0 1 1 0 : 0 : 4 : O : 0 0 Lésions 1 0 0 3 1 (nombre d'ani- 2 0 2 0 0 maux par note) 3 0 0 1 0 4 0 2 0 3 Mortalité % 0 0 0 0 Les résultats montrent qu'à la dose de 100 ppm/jour, la monensine lactone et la monensine augmentent la croissance pondérale de coquelets âgés de 15 jours et contaminés par E.tenella par rapport aux animaux contaminés non traités quand ces produits sont distribués pendant 10 jours. Toutefois, la monensine lactone freine davantage l'excrétion oocystale que la monensine, ce qui se traduit par un risque réduit de contamination des animaux sains par les fécès des animaux infestés. II. Toxicité Des tests de toxicité aiguë ont été pratiqués sur souris mâles, par voie orale et à jeûn depuis au moins 6 heures. On a utilisé à cet effet des suspensions du composé à étudier dans de l'eau à 10% de gomme arabique. Les animaux ont été observés pendant 14 jours puis ont été abattus. On a relevé les résultats ci-dessous comparativement à la monensine DL50 (mg/kg) Monensine lactone entre 500 et 700 Monensine entre 150 et 175 Dans les mêmes conditions, la toxicité d'autres polyéthers polycycliques apparaît également beaucoup plus importante. Les résultats cidessous sont extraits de "The Merck Index", 10ème édition (1983). DL50 (mg/kg) Lonomycine 50 Sal inomycine 50 La monensine lactone sous forme de sel sodique est un composé connu ayant été publié, ainsi que son procédé de préparation dans J. Am. Chem. Soc. 1982, 104, pp. 7274-7281. Ce composé y est présenté comme intermédiaire de synthèse sans qu'aucune propriété pharmacologique ou application thérapeutique n'ait été signalée Suivant le procédé décrit, on obtient le sel sodique de la monensine lactone en oxydant à température ambiante et dans un mélange méthanol éthanol, le sel de sodium de la monensine au moyen de métapériodate de sodium. La monensine lactone quant à elle peut être'préparée à température ambiante et dans un mélange eau/tertiobutanol selon la méthode décrite dans Antimicrobial Agents and Chemiotherapy, 1967, pp. 359-362, c'est-à-dire par oxydation de la monensine au moyen de métapériodate de sodium. Généralement, la monensine lactone est obtenue à température ambiante et dans un solvant organique par exemple le dioxanne, par oxydation de la monensine par exemple au moyen d'un métapériodate tel que le métapériodate de sodium et acidification de la phase organique au moyen d'un acide fort par exemple l'acide chlorhydrique. Quant aux sels non toxiques de monensine lactone, ceux-ci peuvent être produits de manière connue par réaction de la monensine lactone avec une base organique ou inorganique appropriée telle qu'un hydroxyde de métal alcalin, un oxyde de métalalcalino-terreux, l'ammoniac ou une amine. La monensine lactone et ses sels non toxiques peuvent donc être administrés en tant que principe actif médicamenteux sous forme de compositions unitaires convenant à l'administration en thérapie humaine ou vétérinaire ou en tant qu'additif alimentaire à usage vétérinaire. Sous son aspect le plus général et en tenant compte de l'utilisation finale choisie, les compositions pharmaceutiques ou vétérinaires en question sont préparées en associant le principe actif selon l'invention, avec un véhicule, diluant ou excipient approprié, ce dernier pouvant être sélectionné parmi des substances telles que l'eau distillée, l'alcool benzylique, le lactose , les amidons, le talc, le stéarate de magnésium, la polyvinylpyrrolidone, l'acide alginique, la silice colloïdale, la cellulose microcristalline, des esters phtaliques ou acryliques, le dioxyde de titane, les agents édulcorants, etc... Pour ce qui concerne l'unité d'administration celle-ci peut prendre la forme, par exemple, d'un comprimé, d'une dragée, d'une capsule, d'une gélule, d'une poudre, d'une suspension ou d'un sirop pour l'administration orale, d'un suppositoire pour l'administration rectale, d'une solution stérile ou suspension pour l'administration parentérale. A titre d'exemple, une composition anticoccidienne peut être obtenue par addition de monensine lactone ou d'un de ses sels non toxiques, à la ration alimentaire de base en quantité de 50 à 200 ppm en poids du mélange final. On décrit par la suite, de manière plus particulière mais non limitative, quelques modes de réalisation de compositions selon l'invention. On prépare, par exemple, des poudres pour l'administration orale en broyant simplement le principe actif à une finesse convenable et en mélangeant avec un diluant broyé de manière semblable, lequel peut être par exemple un composé glucidique comestible, tel que l'amidon. Avantageusement, on incorpore un agent édulcorant ou un sucre ainsi qu'une huile aromatisante. On peut également obtenir des comprimés en formant d'abord un mélange pulvérulent à partir du composé actif de formule I ou un de ses sels, convenablement broyé et d'un diluant ou d'une base telle qu'amidon, saccharose, kaolin, phosphate bicalcique etc... puis en granulant ou en tron çonnant après addition d'un lubrifiant et finalement en comprimant. La granulation du mélange pulvérulent peut se faire en mouillant avec un liant tel que sirop, pâte d'amidon ou mucilage d'acacia et en forçant au travers d'un tamis. Une autre méthode de granulation consiste à tronçonner le mélange pulvérulent en le faisant passer au travers d'une machine à comprimés puis à casser en fragments (tronçons) les comprimés résultant imparfaitement formés. On peut lubrifier les tronçons pour les empêcher de coller en formant des cubes par addition d'un sel stéarate, de talc ou d'une huile minérale. On comprime ensuite le mélange lubrifié pour constituer les comprimés définitifs. Si nécessaire, les comprimés obtenus peuvent être dragéifiés, enrobés d'un vernis à délitage entérique ou encore enrobés de telle manière que le principe actif se libère graduellement. A usage vétérinaire, l'unité d'administration peut prendre la forme d'un prémélange contenant le principe actif dispersé sur le véhicule ou diluant ou encore la forme d'un supplément de nourriture contenant le principe actif mélangé au véhicule ou diluant. Dans ces deux derniers cas, un tel véhicule est de préférence un composant alimentaire pour animaux, par exemple avoine, graine de soya, luzerne, froment, résidus de fermentation, coquilles d'huîtres broyées, mélasses, substances végétales comestibles, farine de soya, kaolin, talc, calcaire broyé etc... Sous forme de prémélange, des compositions de l'invention destinées à lutter contre la coccidiose peuvent contenir de 10% à 80% en poids de monensine lactone ou d'un de ses sels non toxiques et de 90% à 20% de véhicule ou diluant en poids de la composition. Ces prémélanges peuvent être dilués avec un supplément alimentaire pour animaux ou peuvent être ajoutés directement à une ration alimentaire animale de manière à fournir une alimentation thérapeutique qui peut être ingérée par la volaille. Alternativement, la monensine lactone et ses sels non toxiques peuvent être administrés sous forme d'une solution ou suspension contenant une quantité thérapeutiquement efficace de ce principe actif dans l'eau de boisson de la volaille. Une telle quantité thérapeutiquement active peut varier de 0,5mg à 30mg par poulet et par jour. Cette dose journalière peut être par exemple de 1,3mg par poulet âgé de 7 jours ou de 10,5mg par poulet âgé de 70 jours. Les exemples, non limitatifs suivants, illustrent la préparation du principe actif selon l'invention ainsi que des compositions le contenant EXEMPLE 1 Préparation de la de(hydroxyméthyl)-25 deoxy-25 oxo-25 monensine ou monensine lactone. Dans 7ml de dioxanne, on dissout 0,75 mM de monensine produite à partir de la souche S.cinnamonensis ATCC 15413 (brevet US No.3.501.568)puis purifiée. On ajoute alors 1,85 mM de métapériodate de sodium (NalO4) dissous à chaud dans 3ml d'eau puis on place la solution sous azote et à l'abri de la lumière. On agite durant 2 heures avec un agitateur magnétique puis on laisse reposer environ 15 heures. On dilue le mélange dans environ 200ml d'eau et on extrait 3 fois au chloroforme. On réunit les fractions organiques et on acidifie avec de l'acide chlorhydrique 0,5N. On extrait la phase acide au chloroforme, on réunit les phases chloroformiques et on rince 3 fois à l'eau désionisée. On réunit les eaux de rinçage et on extrait au chloroforme. On réunit les phases organiques et on sèche durant 4h sur sulfate de magnésium. Après filtration, on évapore la solution avec un évaporateur rotatif. On reprend le produit obtenu dans l'acétone et on évapore 3 fois de façon à bien sécher. De cette manière, on obtient la de(hydroxyméthyl)-25 deoxy-25 oxo25 monensine. Rendement : environ 100% Pureté : environ 95% P.F. : 68-7O0C 25 43o (c = 16 mg/ml, chloroforme) a 578 nm Spectre de masse : technique F.A.B. (fast atom bombardment) F.A.B. - : M = 637 (molécule déprotonée : A) F.A.B. + : M = 661 (molécule plus un ion sodium : AH Na+) Spectre I.R. : 1720 cm 1 (raie beaucoup plus intense que la monensine indiquant la présence d'une bande C=O). Spectre R.M.N. : Le spectre R.M.N. confirme la structure de la molécule disparition du carbone 26 à 67,9 ppm et apparition du carbone 25 à 174,5 ppm au lieu de 97,0 ppm. EXEMPLE 2 On prépare des comprimés renfermant, en tant que principe actif, la monensine lactone, associée à.un excipient pour former la composition cidessous : mg Monensine lactone 30 Lactose 173 Amidon 25 Amidon prégélatinisé 20 Stéarate de magnésium 2 250 On mélange intimement et pendant 15 min. dans une mélangeusepétrisseuse tous les ingrédients sauf le lubrifiant puis on pétrit par addition graduelle d'eau. On fait passer la masse à travers un tamis de 1,25mm puis on sèche le granulé dans une étuve à ventilation forcée jusqu'à obtenir une humidité résiduelle relativement réduite (environ 2%). On uniformise le granulé, on ajoute le lubrifiant et on forme des comprimés par compression. EXEMPLE 3 On prépare des comprimés contenant la monensine lactone, comprimés ayant la composition suivante mg Monensine lactone 30 Lactose 192 Cellulose microcristalline 45 Amidon 30 Stéarate de magnésium 3 300 On fait passer les poudres à travers un tamis de 0,3mm puis on mélange la monensine lactone avec la même quantité de lactose. On ajoute ensuite la cellulose microcristalline, l'amidon et le reste de lactose puis on mélange à nouveau. On additionne alors le stéarate de magnésium et on mélange le tout jusqu'à obtenir un ensemble homogène que l'on comprime puis granule. Les granulés ainsi obtenus sont utilisés pour former des comprimés par compression. EXEMPLE 4 On prépare des gélules contenant le mélange de composition suivante mg Monensine lactone, sel sodique 60 Lactose 194 Amidon 30 Talc 15 Stéarate de magnésium 1 300 On mélange intimement le sel sodique de la monensine lactone, le lactose et l'amidon dans un mélangeur puis on ajoute le talc et le stéarate de magnésium. On mélange rapidement l'ensemble puis on introduit dans des capsules molles de gélatine. EXEMPLE 5 On prépare des prémélanges alimentaires pour animaux en mélangeant intimement les ingrédients suivant : Ingrédients Parties en poids 1) Monensine lactone 50 Granulés de luzerne 50 2) Monensine lactone 40 Mélasses solubles 60 3) Monensine lactone 30 Grains séchés de maïs 70 4) Sel de sodium de la monensine lactone 40 Farine de maïs 30 Grains séchés de maîs 30 5) Sel de sodium de la monensine lactone 60 Graines moulues de soya 40 6) Sel de sodium de la monensine lactone 20 Grains séchés de mals 60 Son de froment 20 7) Monensine lactone 80 Son de froment 20 8) Monensine lactone 25 Graines de soya 75 9) Monensine lactone 15 Ecorce de grain de riz 85 REVENDICATIONS 1. Compositions pharmaceutiques ou vétérinaires caractérisées en ce qu'elles contiennent, comme principe actif essentiel, la de(hydroxy methyl)-25 deoxy-25 oxo-25 monensine de formule ou un de sels sels non toxiques en association avec un véhicule, diluant ou excipient approprié. 2. Compositions vétérinaires ayant une activité anticoccidienne, carac térisées en ce qu'elles contiennent comme principe actif essentiel, la de(hydroxymethyl)-25 deoxy-25 oxo-25 monensine ou un de ses sels non toxiques en association avec un véhicule, diluant ou excipient approprié. 3. Compositions selon l'une des revendications lou 2 caractérisées en ce qu'elles sont sous forme d'unité de dosage. 4. Compositions selon l'une des revendications 1 ou 2 caractérizéesen ce qu'elles sont sous forme de prémélange. 5. Compositions selon la revendication 2 caractérisées en ce qu'elles sont sous forme de ration alimentaire contenant le principe actif à raison de 50 à 200 ppm en poids du mélange final. 6. Compositions selon la revendication 4 caractérisées en ce qu'elles contiennent de 10% à 80% en poids de principe actif.