FR 2596762 A1 19871009 FR 8618433 A 19861231 l. La présente invention concerne des dérivés d'acides nucléiques ayant une activité physiologique utile comme produits pharmaceutiques. L'acide nucléique est composé de sucres tels que le ribose qui sont liés à un cycle purine ou pyrimidine et qui sont disposés en chaînes par l'intermédiaire de l'acide phosphorique. Parmi les acides nucléiques, le RNA (polymère de ribonucléotides) est un composé de masse moléculaire élevée dans la chaîne duquel le ribose est contenu comme sucre et les parties 10 sucre sont combinées par des liaisons diester de l'acide phosphorique. La double chaîne a une structure stérique en forme de spirale constituée par une combinaison de la partie cycle purine ou pyrimidine de la base (par exemple inosine, cytidine, uri15 dine, etc.) qui constitue l'acide nucléique. Les acides nucléiques ayant des torons doubles présentent une activité physiologique utile et en conséquence de nombreuses études leur ont été consacrées. Parmi ceux-ci, le RNA naturel (par exemple, le RNA 20 provenant d'un virus) et des RNA synthétiques à double toron tels que les dérivés acide polyinosinique-acide polycytidylique 2. (désignés ci-après en abrégé par "poly I. poly C"), les dérivés de l'acide polyadénylique-polyuridylique etc. ont été étudiés par de nombreux chercheurs (par exemple Declark et coll.: Texas Reports on Biology and Medicine, 41, 77, 1982). 10 3. r 6 R ONH OCH HO-PI=O HO-P 0 R 25 HO-P=O0 OCH, o Ro 0O R /O Acide ribonucléique (R = OH, R' = H); Acide dMsoxyribonucléique (R = H, R' = CH-) 35 l0 HO-P-OH.C 2 I OH (acide 5'-cytidylique) HN O HO-P-OH C 2 0 OH OH OH (acide 5 -inosinique) 4. Parmi ceux-ci, de nombreux dérivés de l'acide nucléique RNA ont été préparés par synthèse et leurs activités physiologiques ont été étudiées. Le poly I. poly C est une substance ayant une activité élevée; son utilité a été évaluée et des études lui ont été consacrées. Un composé dans lequel seule une partie de la cytidine du poly I-poly C est transformée en uridine (C'est-à-dire un RNA mal apparié) a été étudié en raison de son activité physiologique semblable à celle du poly I-poly C 10 (voir brevet japonais 50/082226). Les études sur l'acide polycytidylique se sont également poursuivies et on a rapporté (demande de brevet britannique n 2 038 628) que lorsqu'un groupe mercapto (-SH) est introduit (à raison de 50 % ou davantage) à la place du groupe -NH2 du cycle pyrimidine de l'acide polycytidylique, l'activité physiologique augmente. On peut s'attendre à ce que les substances physiologiquement actives classiques indiquées ci-dessus présentent des effets utiles bien que leur toxicité, telle qu'observée 20 avec le poly I.poly C, soit indéniable (Declard et coll. Infect. Immuni., 6, 344, 1972) et il est nécessaire d'y apporter certaines améliorations. On souhaite également augmenter leur activité physiologique. Au cours des études poursuivies depuis de nombreu25 ses années par la demanderesse, celle-ci a trouvé bien que par pure coïncidence que le RNA pouvait former des dérivés stabilisés par certaines liaisons covalentes. Lorsqu'on a mesuré l'activité physiologique de ceux-ci, on a trouvé qu'ils présentaient une activité beaucoup plus forte que les substances phy30 siologiquement actives avec une très faible toxicité, et la présente invention a été réalisée. La caractéristique de la présente invention est que, grâce à la combinaison par un pont de liaisons covalentes ou la substitution d'une partie de la structure moléculaire de 35 l'acide nucléique par un ou plusieurs groupes SH, on obtient un acide nucléique sous forme stable. 5. Les dérivés d'acides nucléiques de la présente invention peuvent être préparés par synthèse à partir d'une base d'acides nucléiques dans laquelle un groupe -SH peut être introduit. Un exemple particulier des dérivés d'acides nucléiques de la présente invention est celui ayant une structure en spirale double complémentaire d'un composé en chalne (désigné sous le nom de "poly C" dans le présent mémoire) qui est un polymère de l'acide cytidylique et un autre composé en chaîne (désigné sous le nom de "poly I" dans le présent mémoire) qui est un polymère de l'acide inosinique. Bien que ce composé présente une structure semblable à celle du poly I-poly C déjà indiqué, les dérivés d'acide nucléique de la présente invention présentent toujours des caractéristiques pour les raisons suivantes. Les dérivés d'acides nucléiques de la présente invention forment des dérivés par substitution partielle avec un atome de soufre (groupe SH), par une liaison transversale (liaison S-S) ou par la présence simultanée de deux substituants. Les atomes de soufre présents dans les dérivés d'acides nucléiques de la présente invention peuvent être introduits, 20 avant ou après la préparation du polymère, en utilisant une réaction enzymatique. L'introduction est effectuée en substituant la base d'acide nucléique par un groupe -SH, de telle sorte qu'un groupe -NH2 d'un cycle pyrimidine de l'acide cytidylique est substitué par un groupe -SH. Le radical substituant est appelé 25 acide 4thiouridylique. S HNt $ 0 oHi N HO-;-OH C ' OH OH OH Acide 5'-4-thiouridylique 6. Le groupe -SH introduit est ensuite oxydé par un procédé approprié tel qu'indiqué ci-après, de telle sorte qu'un pont S-S peut être formé. Des dérivés ayant à la fois des groupes SH et S-S dans une molécule peuvent être préparés soit par oxydation partielle d'un composé dans lequel un groupe -SH est introduit soit par réduction partielle d'un composé dans lequel un groupe S-S est introduit. Le polymère d'acides nucléiques indiqué ci-dessus (poly C) comporte un seul toron. Le polymère d'acides nucléiques à toron unique après substitution du SH ou formation du pont S-S peut être associé à un polymère d'acides nucléiques à toron unique complémentaire par un procédé approprié qui sera indiqué ci-après pour former des torons multiples. Inversement, il est 15 également possible que le polymère d'acides nucléiques à toron unique soufré le premier soit associé au polymère d'acides nucléiques complémentaire pour former des torons multiples, après quoi on effectue l'oxydation pour donner un pont S-S. Les dérivés d'acides nucléiques ainsi préparés figurent égale20 ment parmi les dérivés d'acides nucléiques ayant une activité physiologique qui fait l'objet de la présente invention. Ainsi, tous les polymères d'acides nucléiques appartiennent à la présente invention dans la mesure o ils contiennent des bases d'acides nucléiques dans lesquelles des groupes -SH peuvent être introduits. Par exemple, les composés obtenus par disulfuration de polymères d'acides nucléiques contenant de la 4thiouridine, de la 2-thiouridine, de la 2-thioguanosine, de la 6mercaptopurine, de la 8-percaptopurine etc. entrent dans le domaine de la présente invention. 3 Les dérivés d'acide nucléique de la présente invention peuvent être coupés au niveau de leur chatne latérale acide phosphorique pour donner des composés de masse moléculaire plus faible et ces composes de masse moléculaire plus faible appartiennent également à la présente invention. En conséquence, dans ce sens, il y a une différence avec le poly I-poly C classique. 7. En raison de la caractéristique des dérivés d'acides nucléiques de la présente invention, à savoir substitution par SH, formation de liaison transversale S-S et formation de substances de faible masse moléculaire par clivage de la chalne latérale acide phosphorique, il est possible pour la première fois d'obtenir l'effet de la présente invention, à savoir que (1) l'activité physiologique peut être augmentée et (2) la sécurité peut être accrue. L'activité physiologique des dérivés d'acides nucléiques de la présente invention est très utile comme produits pharmaceutiques. Comme on le décrira ci-après, les dérivés d'acides nucléiques de la présente invention présentent une forte action comme inducteurs d'interféron. Cette action n'est qu'une des diverses actions physiologiques des dérivés 15 d'acides nucléiques de la présente invention. En ce qui concerne les actions physiologiques, des dérivés d'acides nucléiques de la présente invention, on peut en énumérer plusieurs qui seront indiquées ci-après. Parmi celles-ci, on citera la capacité de production de TNF, la capacité de production d'interleukine 1, la capacité de production d'interleukine 2, la capacité d'activation des macrophages, la capacité d'activation des cellules NK, l'action d'inhibition de la prolifération des cellules tumorales, l'action d'inhibition de la prolifération des tumeurs chez des souris portant des cancers, l'action 25 d'inhibition de la prolifération chez des souris rasées portant des cancers de cellules tumorales humaines, l'action de prévention de la métastase de cellules tumorales vers les poumons, etc. Les dérivés d'acides nucléiques de la présente invention sont beaucoup plus sQrs que les inducteurs d'interféron tels que le poly I-poly C classique. En conséquence, les composés de la présente invention sont utilisables comme agents antiviraux et comme agents antitumoraux. L'expression "paire de base" (en abrégé "pb") fréquemment utilisée pour indiquer la taille moléculaire d'un acide nucléique exprime la taille moléculaire par les nombres de 8. bases dans l'acide nucléique (c'est-àdire que 10 pb désignent un polymère à double toron ayant dix bases) dans chaque toron complémentaire. Comme il est également fait référence dans le présent mémoire à des polymères d'acides nucléiques autres que les polymères à double toron, on utilisera l'expression "nombres de radicaux" à la place de pb. Par exemple, "un nombre de radicaux de 10" désigne un polymère d'acide nucléique ayant 10 bases dans un toron. Les dérivés d'acides nucléiques de la présente invention contiennent des substances comportant diverses espèces de tailles moléculaires et on préfère généralement que la taille ne soit pas inférieure à 50 radicaux, par exemple de à 10 000 radicaux. La taille peut être encore plus élevée, par exemple 200 000 radicaux conviendront aussi et l'on sait 15 que la taille moléculaire a peu d'influence sur l'activité physiologique de la présente invention. Pour indiquer les nombres de soufre dans les dérivés de l'acide nucléique de la présente invention, on utilise dans le présent mémoire le degré de sulfuration (n). L'acide cytidylique se transforme en acide 4thiouridylique par substitution du groupe -NH2 dans le cycle pyrimidine par un groupe -SH et "n" indique les nombres d'acide cytidylique existant pour un acide 4-thiouridylique. Les dérivés d'acides nucléiques de la présente invention contiennentdes substances comportant de nombreuses espèces de "n" et on préfère que ce n ne soit pas inférieur à 6. Lorsque n est inférieur à six, il a été confirmé que l'activité physiologique diminuait. Pourvu que n soit égal ou supérieur à 6, il n'y a pas d'autre limitation et n peut atteindre 39, et il a peu d'influence sur l'activité phy30 siologique de la présente invention. Lorsqu'on prépare les dérivés d'acides nucléiques de la présente invention, on peut utiliser divers procédés. Le poly C etc. qui sont les matières de départ des dérivés de la présente invention sont faciles à se procurer. Le poly C peut aisément être soufré par exemple par réaction avec un agent de sulfuration tel que l'hydrogène sulfuré. Sous l'effet de 9. cette réaction, certains nombres d'acide cytidylique dans le poly C peuvent être transformés en acide 4thiouridylique. En faisant varier des conditions réactionnelles telles que la température de réaction et le temps de réaction, on peut préparer des poly C ayant les valeurs "n" désirées. Le poly C sulfuré peut être associé à un poly I qui est aisément accessible par des procédés connus. Le poly Cpoly I soufré obtenu peut être introduit dans les dérivés d'acides nucléiques de la présente invention par une réaction de formation de disulfure telle que, par exemple, une oxydation par l'iode. Les dérivés d'acides nucléiques de la présente invention peuvent être obtenus presque quantitativement par les procédés ci-dessus, et il est connu que le rendement 15 global est d'environ 90 %. Dans le cas de la synthèse d'autres acides nucléiques tels que le poly Apoly U ayant un pont disulfure,le polymère est d'abord préparé par une réaction enzymatique en utilisant une base d'acides nucléiques contenant unatome de soufre. 20 Des procédés classiques de préparation d'hétéropolymères peuvent être utilisés. Par exemple, lorsqu'on fait réagir 36 el d'uridine '-diphosphate (UDP) et 7 mM de 4-thiouridine-5'-diphosphate (4-SDH UDP) à 37 C pendant 5 heures dans 150 mM de tampon Tris 25 (pH 8,2) en utilisant 0,5 unité/ml de polynucléotide phosphorylase (PNPase, type 15, PL Biochemical), on obtient un hétéropolymère contenant une 4-thiouridine pour 13 radicaux uridine avec un rendement d'environ 50 %. Lorsqu'on utilise le 2-thiouridine-5'diphosphate à la place de 4-thiouridine-diphosphate, on 30 obtient un poly U contenant de la 2-thiouridine. Dès l'instant o l'on a préparé un polymère d'acides nucléiques contenant des groupes -SH, on peut obtenir les dérivés suivants par la même opération que dans le cas du poly Ipoly C soufré décrit Cans les exemples. Plus précisément, on 46 dissout à la fois de l'acide polyuridylique soufré et un acide polyadénylique équimolaire dans une solution aqueuse neutre 10. et on les soumet à un recuit pour la formation d'un complexe. Ainsi, après avoir dissous à l'eau dans un incubateur, on élève progressivement la température à 85 C, puis on chauffe pendant 10 minutes, et on laisse reposer à la température ambiante. Le complexe ainsi obtenu est oxydé dans les mêmes conditions que pour la disulfuration du poly Ipoly C, c'està-dire oxydé avec une solution d'iode 1N pour donner un dérivé poly A-poly U ayant un pont disulfure. Le rendement après le 10 recuit est d'environ 80 %, et le rendement global est d'environ 40 %. Le complexe disulfuré est soigneusement dialysé contre une solution aqueuse et lyophilisé pour donner un solide blanc et fibreux. Le type de structure stérique des dérivés d'acides nucléiques de la présente invention, déterminé par leur liaison S-S, caractéristique, n'est pas toujours clair. Les dérivés d'acide nucléique de la présente invention donnent certaines courbes de fusion claires telles que dé20 crites ci-après et, en conséquence, ils présentent manifestement des structures fondamentales stables. En ce qui concerne la température de fusion à 50 % (valeur Tm), elle est de 59,0 C dans le poly I-poly C en milieu neutre en présence d'ion sodium O,lM, tandis que dans le cas 25 d'un dérivé d'acides nucléiques substitué par SH contenant de la 4-thiouridine à raison de n = 20 et de sondérivé d'acide nucléique substitué par S-S, les valeurs sont de 59,5 C et 59,3 C, et en conséquence, elles sont stabilisées au même degré ou davantage. Dans le cas d'un dérivé d'acides nucléiques substitué par OH contenant de l'uridine à raison de n = 20 (comme cidessus), la valeur est de 53,1 C seulement. Ainsi, l'introduction d'atomes de soufre est plus efficace pour stabiliser la structure macromoléculaire d'un acide nucléique qu'avec d'autres dérivés substitués tels que 35 ceux substitués par NH2 ou par OH. On a comparé ensuite la résistance à l'hydrolyse par 11. la RNAase A (une enzyme qui décompose le RNA) en ce qui concerne le rapport des temps jusqu'à ce que la décomposition parvienne à 50 %. Ainsi, dans certaines conditions de réaction enzymatique, le temps pour le poly I-poly C est de 50 minutes 5 tandis que ceux de la 4-thiouridine (groupe SH) et son dérivé d'acide nucléique (n = 20; contenant S-S) sont de 60 minutes; au contraire, ceux pour les dérivés d'acide nucléique (n = 20) contenant de l'uridine (groupe OH) sont de 20 minutes seulement. Il est donc clair que l'atome de soufre présente un ef10 fet substituant même dans la stabilité biochimique. Lorsque les dérivés d'acide nucléique de la présente invention sont administrés sous forme de produits pharmaceutiques, ils sont administrés à l'animal et à l'homme tels quels ou sous la forme d'une composition pharmaceutique contenant 15 par exemple 0,1 à 99,5 % (de préférence 0,5 à 90 %) d'ingrédient dans un excipient pharmaceutiquement acceptable non toxique et inerte. Comme excipients, on peut utiliser un ou plusieurs diluants, charges et autres auxiliaires aux préparations 20 pharmaceutiques liquides, solides ou semi-solides. Il est souhaitable que les compositions pharmaceutiques soient administrées sous forme de dose unitaire. Les dérivés d'acides nucléiques de la présente invention peuvent être administrés par voie orale, parentérale, locale ou rectale. Ils sont évidemment 25 administrés sous des formes convenant pour chaque voie d'administration. Par exemple, ils sont administrés sous forme d'administration orale, d'injection, d'inhalation, de lotion oculaire, de pommade, de suppositoire, etc. On péfère particulièrement l'administration parentérale ou locale. Il est souhaitable que la dose comme médicament pour les tumeurs malignes soit déterminée en tenant compte de l'état du malade (par exemple, de l'âge, du poids corporel, etc.), de la voie d'administration et du type et du degré de la maladie. En général, on utilise 0,05 à 1000 mg à la fois comme quantité efficace de l'acide nucléique de la présente invention pour les adultes, et de préférence, on administre communément 0, 5 à 50 mg en perfusion intraveineuse. 12. Dans certains cas, une dose inférieure est suffisante et dans d'autres cas, des doses plus élevées sont nécessaires. Il est également possible d'administrer le médicament une à plusieurs fois par jour ou à des intervalles d'un à plusieurs jours. La dose comme remède pour les tumeurs bénignes ou par les maladies causées par des virus est de préférence déterminée en tenant compte du type et du degré de la maladie, de la voie d'administration, de l'état du malade, etc. et en 10 général, la dose est ordinairement de 20 à 100 % de celle administrée pour les tumeurs malignes ci-dessus. Activité physiologique des dérivés d'acides nucléiques de la présente invention: L'activité physiologique des dérivés d'acides nucléi15 ques de la présente invention est illustrée ci-dessous. (1) Activité d'inducteur de l'interféron: En ce qui concerne le dérivé poly C-poly I soufré qui est un des dérivés d'acides nucléiques de la présente invention, son action comme inducteur de l'interféron a été déterminée par une méthode de détermination de l'activité antivirale. Le dérivé poly C-poly I soufré utilisé comme échantillon I pour l'essai est un dérivé substitué par SH tandis que l'échantillon II est un dérivé substitué par S-S. Tous deux ont une valeur n de 13 et des nombres de radicaux de 50 à 2 000. 25 Les lymphocytes (106 cellules par ml) obtenus à partir de sang périphérique humain ont été traités pendant 2 heures par l'échantillon (10 microgrammes/ml) dans un liquide de culture (RPMI 1640; 20 % de FCS). Le liquide de culture ayant réagi est éliminé; les cellules sont-à nouveau mises 30 en suspension dans un liquide de culture frais (RPMI 1640; % de FCS), mises à incuber pendant 20 heures et le liquide surnageant est soumis à une méthode de mesure ordinaire de l'activité antivirale de l'interféron en utilisant le virus Sindbis et la cellule FL (voir Rinsho Kensa, 28, 1726, 1984). 35 Le résultat est donné dans le tableau suivant. Le titre de 13. l'interféron est mesuré par une méthode de dilution en utilisant la méthode CPEI50 (Inhibition de l'effet cytopathogène ). L'échantillon I est un dérivé d'acide nucléique substitué par S-S contenant de la 4-thiouridine à raison de n = 20 S tandis que l'échantillon II est son dérivé substitué par SH. Comme échantillon témoin, on a utilisé un poly I-poly C classique. Concentrations (microgrammes/ml) 100 o 200 5o00 Echantillon d'essai I 100 >6400 >6400 >6400 Echantillon d'essai II 100 >6400 >6400 >6400 Témoin Echantillon 100 800 1600 >6400 (Titre de l'interféron: unités/ml). On constate que le dérivé d'acides nucléiques de la présente invention présente une forte action comme inducteur d'interféron. Parmi les dérivés d'acides nucléiques poly C-poly I 20 soufrés de la présente invention obtenus dans l'exemple cidessus, celui ayant 20 pour la valeur de n et de 50 à 300 radicaux pour la taille moléculaire, et un autre ayant 20 pour la valeur de n;de 200 à 2000 radicaux pour la taille moléculaire ont été pris comme échantillons d'essai et soumis aux mêmes 25 essais d'activité physiologiques et ils ont donné les mêmes résultats. Le même résultat a également été obtenu avec le dérivé d'acides nucléiques (valeur n de 20 et taille moléculaire non inférieure à 20 000 radicaux) avant la réaction de réduction des dimensions moléculaires. (2) Capacité d'induire le TNF (facteur de nécrose des tumeurs). Des macrophages de vésicules germinatives de lapins pré-traités par du BCG 10 à 14 jours auparavant ont été prélevés, ajustés à 2 x 10 par millilitre dans un milieu RPMI 1640 additionné de 10 % de FCS, un millilitre de celui-ci a été placé sur une boite de Pétri en matière plastique et cultivé 14. dans un incubateur à gaz carbonique (5 % de C02) en présence ou en l'absence de l'échantillon à 37 C. Le liquide surnageant de la culture cellulaire après 2 ou 8 heures a été soumis à l'essai d'activité du TNF. Les résultats sont donnés ci-dessous. Les valeurs d'activité du TNF ont été déterminées en mesurant l'activité d'inhibition des cellules pour la cellule LM au bout de 72 heures en utilisant la méthode de fixation de colorant,-et la dilution à 50 % d'inhibition des cellules a été indiquée comme titre. 10 Le fait que cette inhibition des cellules était dû au TNF a été confirmé, en utilisant un anticorps monoclonal pour le TNF de lapin, par sa neutralisation de l'activité. i Activité de TNF Neutralisa(2 h) i (8 h), tion par 1anticorps anti-TNF Témoin - LPS 32 >64 I + Echantillon d'essai I 32 >64 + Echantillon d'essai II 32 >64 I + Echantillon témoin 32 >64 + Le LPS a été utilisé à la concentration de 1 microgramme/ml et les échantillons d'essai et témoin étaient aux mêmes concentrations de 10 microgrammes/ml. Les échan25 tillons d'essai et témoin utilisés étaient les mêmes qu'en (1). On constate que l'activité d'induction du TNF du dérivé de l'acide nucléique de la présente invention est élevée. (3) Activité d'induction du TNF in vivo Des tumeurs Meth A (2 x 105) ont été transplan30 tées derrière la peau de l'abdomen de souris BALB/c (âgées de 6 à 8 semaines, mâles); les médicaments ont été administrés aux 2ème et aux 12ème jours après la transplantation; du sang a été prélevé une heure après la seconde administration, et l'activité du TNF dans le sérum a été mesuré.Le phénomène de nécrose sur la partie cancéreuse apparu par la suite a également été observé. Les résultats sont donnés 15. ci-dessous. Les valeurs du tableau correspondent au même titre en (2) ci-dessous. Traitements Activité de Nécrose (ler) (2ème) TNF dans le (ler) (2me)séu , sérum BCG LPS 192 Observée BCG Echantillon d'essai I 48 Observée BCG Echantillon d'essai II 50 Observée BCG Echantillon témoin 24 Observée Echantillon Echantillon d'essai I d'essai I 12 Observée Echantillon Echantillon d'essai II d'essai II 24 Observée 15. ... _ __ _ _ _ __ _ _ _ __ _ _ Les échantillons d'essai et témoin ont été les mêmes qu'en (1) ci-dessus. On observe que la capacité de production de TNF in vivo du dérivé de l'acide nucléique de la présente invention est élevée. (4) Activité d'induction de l'Interleukine 1. Du sang périphérique humain normal additionné d'héparine a été séparé de particules mononucléaires par une méthode de centrifugation utilisant un appareil Ficoll-Hypaque (Farmacia, Ficoll-paque,marque déposée), les nombres ont été ajustés à 5 x 106/ml dans un milieu RPMI additionné de 10 % de FCS, placé dans une boîte de Pétri en matière plastique, mis à incuber à 37 C pendant une heure, et les cellules cohésives ont été utilisées comme source de production d'interleukine 1. Du médicament a été ajouté aux 5 x 10 particules isolées/ml, mis à incuber à 37 C pendant 24 heures, et l'activité de l'interleukine 1 dans le liquide surnageant a été mesurée au moyen d'une méthode de fixation de la H-thymidine dans des cellules de thymus de souris stimulées par la PHA 35 en utilisant la capacité de prolifération des cellules du thymus comme cible. Le résultat est donné dans le tableau suivant. Le témoin était une solution saline physiologique. La 16. concentration de l'interleukine était de 1,25 unité/ml et celle des échantillons d'essai I et II et de l'échantillon témoin était de 100 grammes/ml. Les échantillons I et II et l'échantillon témoin utilisés étaient les mêmes que ceux utilisés en (1) ci-dessus. Echantillons utilisés Quantite incorporée (DPM (x104)) Témoin 3370 Echantillon d'essai I 11384 Echantillon d'essai II 11560 Echantillon témoin 8397 Interleukine 1 12517 On constate que le dérivé d'acide nucléique de la 15 présente invention présente une forte activité d'induction de l'interleukine 1. (5) Activité d'induction de l'interleukine 2. Des particules de lymphe obtenues à partir de cellules de rate de souris BALC/c ont été utilisées comme source 20 pour la production d'interleukine 2. A 5 x 106 particules de lymphe/ml, on a ajouté le médicament, on a fait incuber le mélange à 370C pendant 2448 heures, et on a déterminé l'activité de l'interleukine 2 dans le liquide surnageant dans une méthode d'incorporation 25 de H-tymidine en utilisant le CTLL-2 ou le NK- 7 qui est une souche cellulaire proliférant en fonction de l'interleukine 2 en utilisant la capacité de prolifération comme cible. Le résultat est donné dans le tableau suivant. Le témoin est une solution saline physiologique. L'interleukine 2 était à une concentration de 5 unités/ml et les échantillons d'essai I, II et l'échantillon témoin étaient à la même concentration de 100 grammes/ml. Les échantillons d'essai et témoin utilisés étaient les mêmes qu'en (1). 2596762 17. Echantillons Quantité incorporée (DPM (x103)) Témoin 230 Echantillon d'essai I 3247 Echantillon d'essai II 3320 Echantillon témoin 653 Interleukine 2 3778 On constate que le dérivé d'acide nucléique de la présente invention présente une forte activité d'induction 10 de l'interleukine 2. (6) Activation des macrophages On a administré des échantillons à des souris Balb/c (âgées de 7 à 10 semaines, males) par voie intrapé15 ritonéale; les cellules exsudant du péritoine 3 à 5 jours après l'administration ont été recueillies; les cellules adhérant au plastique (principalement des macrophages) ont été séparées en tant que cellules effectrices et l'activation des macrophages a été étudiée par une méthoded'isolement de la 3H-thymidine en utilisant des cellules tumorales Meth-A comme cible (le rapport E/T étant de 15-20: 1). Les résultats sont donnés dans le tableau suivant. Le témoin était constitué de 0,2 ml de solution saline physiologique. On a administré 50 microgrammes/souris de l'échantillon d'essai III ou de l'échantillon témoin, respectivement. Les échantillons d'essai et témoin 25 utilisés étaient les mêmes qu'en (1). Le pourcentage de cytotoxicité a été calculé par la formule: (valeur expérimentale) - (fond) x 100 (100 % de libération de la 3H) - (fond) 18. Echantillons Cytotoxicité % Témoin 0,5 Echantillon d'essai I 10,3 Echantillon d'essai II 10,8 Echantillon témoin 5,7 On constate que le dérivé d'acide nucléique de la présente invention présente une forte activation des macrophages. (7) Activation des cellules NK L'activation des cellules NK dans le sang périphérique humain a été déterminée en mesurant l'activité d'inhibition au moyen de K562 comme cellule cible par une méthode d'isolement du 51Cr. Les résultats sont donnés ci-dessous.Le 15 témoin utilisé était une solution saline physiologique. Les échantillons d'essai et témoin étaient les mêmes qu'en (1) ci-dessus. 25 30 35 Echantillons (microgrammes/ml) Fusion % (% d'isolement de Cr) _Témoin| 30 Echantillons d'essai I ( 10) 47 (30) 55 (100) 57 (300) 50 (500) 30 Echantillonsd'essai II (10) 51 (30) 59 (100) 63 (300) 60 (500) 45 Echantillons témoins ( 10) 52 (30) 60 (100) 65 (300) 62 (500) 52 On constate que le dérivé d'acides nucléiques de la présente invention présente une activation d'une cellule NK. (8) Activité inhibitrice de la prolifération des cellules tumorales. L'action inhibitrice de la prolifération de cellules 19. tumorales d'une lignée cellulaire a été mesurée. Des cellules (3 x 104/ml) ont été traitées pendant 48 heures dans un liquide de culture contenant 10 % de FCS en même temps que des échantillons (10 microgrammes/ml et 100 microgrammes/ml), puis mises à incuber pendant 48 heures avec de la thymidine marquée par le tritium. Le pourcentage d'inhibition a été donné par la quantité de thymidine incorporée à un témoin qui n'a pas été traité par l'échantillon. Les résultats sont donnés ci-dessous. Les échantillons d'essai et témoin étaient les mê10 mes qu'en (1) ci-dessus. Cellules Inhibition % Echantillon Echantillon Echantillons témoins i d'essai I d'essai. II 1100 10 100 10 microram ms/ml iNAMALWA 65,6 55,7 61, 2 46,4 56,9 37,4 RAJl 68,3 64,6 67,8 61,5 74,7 69,4 L929 36,9 35,7 36,8 34,7 32,7 20,5 RAMOS 40,8 42,2 45,5 40,5 40,1 52,4 On constate que le dérivé d'acides nucléiques de la présente invention présente une activité inhibitrice pour la prolifération de cellules tumorales. (9) Action inhibitrice de la prolifération d'une tumeur chez des souris portant des cancers. L'activité inhibitrice de la prolifération des tumeurs a été mesurée par la méthode suivante chez des souris portant un cancer Meth-A qui est le même type de cancer transplanté. Les cellules Meth-A (3 x 10 /0,1 ml) ont été mises en suspension dans une solution saline physiologique, injectées 30 hypodermiquement à des souris Balb/c (âgées de 5 semaines, mâles) et au bout de 2 jours, on a commencé l'administration du médicament trois fois par semaine pendant deux semaines. Le deuxième jour après l'administration finale, les cellules tumorales ont été extraites et leur poids a été déterminé. Les résultats sont donnés ci-dessous. Les échantillons d'essai et témoin étaient les mêmes qu'en (1) ci-dessus. 20. Echantillons Nombre Moyenne Inhibi(microgrammes/souris) de sou- écart-type tion % ris Echantillon d'essai I ( 10) 7 2,09 + 0,15 3 ( 30) 7 1,52 + 0,28 30 (100) 5 0,96 - 0,43 36 Echantillon d'essai II ( 10) 7 2,10 0,27 ( 30) 7 1,62 + 0,25 (100) 7 0,97 - 0,30 Echantillon témoin ( 10) 7 2,12 0,27 2 ( 30) 8 1,38 + 0,38 36 (100) 8 1,08 - 0,27 50 15 20 25 On constate que le dérivé 'acides nucléiques de la présente invention inhibe la prolifération des cellules tumorales chez la souris cancéreuse. (10) Action d'inhibition de la prolifération chez des souris rasées portant un cancer provenant de cellules tumorales humaines. On transplante 2,5 x 106 cellules de la souche HeLa S provenant d'un cancer du col de l'utérus humain et 2,5 x 106 cellules de la souche Hep-2 provenant d'un cancer de la gorge sous la peau de l'abdomen et, du 7ème au lOème jour après la transplantation, la cohésion vivante de la tumeur est confirmée. On administre ensuite deux fois par semaine pendant 4 semaines 100 Ig/souris d'échantillon d'essai (par voie intraveineuse) et 25 mg/kg de 5-FU (par voie intrapéritonéale). On extrait la tumeur quatre semaines après l'administration et on la pèse. Les résultats sont donnés dans le tableau suivant. L'échantillon d'essai utilisé est le même qu'en (1) ci-dessus. 21. 10 (HeLa S) Echantillon Poids (g) + écart-type Taux d'inhibi- I l] tion (%) + Témoin 3,85 + 0,23 f + Echantillon d'essai I 1,57 - 0,19 59 Echantillon d'essai II 1,55 + 0,20 60 -FU 2,06 - 0,35 47 (Hep-2) Echantillon Poids (g) - écart-type Taux d'inhibition (%) Témoin 0, 88+ 0,07 -Echantillon d'essai I 0,38 - 0,07 57 Echantillon d'essai II 0, 35 + 0,05 60 -FU 0,56 - 0,12 36 On constate que le dérivé d'acides nucléiques de la présente invention présente une forte action d'inhibition de la prolifération. (II) Action inhibitrice contre la métastase des cellules tumorales dans le poumon. A des souris C57BL/6 (mâles, âgées de 5 semaines) 205 on transplante par voie intraveineuse 2 x 10 cellules B16F10 qui sont un mélanome transplantable du même type et on compte les nombres de nodosités qui ont essaimé vers le poumon (nombre de colonies) la deuxième semaine après la transplantation. L'échantillon est administré par voie intraveineuse 24 heures avant la transplantation du mélanome B16FlO. Les cas étaient au nombre de 9. Les résultats sont donnés ci-dessous. Les échantillons d'essai et témoin utilisés sont les mêmes qu'en (1) ci-dessus 22. Echantillon (microgrammes/sou- Nombre de nodosités qui ont ris) essaimé vers le poumon + écarttype Témoin 112 - 17 Echantillon d'essai I ( 1) 33 + 61 (10) 21 10M (100) 4 -2 Echantillon d'essai II ( 1) 21 + 6K (10) 15 - m (100) 4 - 1 + Echantillon témoin ( 1) 36 + 16K ) 3 0,7 (100) 7 - 3 On constate que le dérivé d'acides nucléiques de la présente invention présente une action inhibitrice contre 15 la métastase de cellules tumorales vers le poumon. Sécurité des dérivés d'acides nucléiques de la présente invention La sécurité du dérivé d'acides nucléiques de la présente invention sera illustrée ci-dessous. Le dérivé poly C-poly I sulfuré, qui est un des dérivés d'acides nucléiques de la présente invention, est soumis à un examen de son effet cytotoxique pour les cellules principales de la moëlle osseuse. Le dérivé poly C-poly I sulfuré utilisé a une valeur n de 20 et une taille moléculaire de 150 à 2 OO0 radicaux. L'échantillon est injecté par voie intraveineuse 25 à des souris (âgées de 8 semaines; mâles, chaque groupe comprend souris) à la dose de 100 microgrammes/souris et, au bout de 24 heures, on recueille des cellules de moëlle osseuse de celles-ci. Les cellules sont fixées et colorées avec du Giemsa. 30 Des cellules du frottis sont examinées au microscope et le degré d'apparition de réticulocytes est compté en pourcentage. Un poly I-poly C connu est utilisé comme témoin. Une solution saline physiologique est administrée au témoin. Les résultats sont donnés dans le tableau suivant. 23. Erythrocytes (%) Témoin 40 Echantillon d'essai I 38 Echantillon d'essai II 39 Echantillon témoin 11 On constate que le dérivé d'acides nucléiques de la présente invention présente une sécurité élevée. On étudiera à présent l'effet pyrogène des déri10 vés d'acides nucléiques de la présente invention. L'injection du poly I-poly C in vivo est connue pour être pyrogène. L'essai du pyrogène sur le lapin a montré que le poly I-poly C provoque en moyenne une augmentation de la température du corps de 1,45 C. Au contraire, les déri15 vés d'acides nucléiques de la présente invention (tant les substances SH que les substances S-S dans l'expérience de cytotoxicité ci-dessus) ne montrent qu'une augmentation moyenne de la température du corps de 0,25 C seulement, et le résultat de l'essai pyrogène cité est négatif. Dans ces expériences, on a 20 utilisé trois lapins par groupe, et une solution de l'échantillon (0,2 microgramme/kg) dans 10 ml de solution saline physiologique a été injectée par voie intraveineuse derrière l'oreille de lapins et la température du corps 4 heures après l'injection a été mesurée. On constate que les dérivés d'acides nucléiques de la présente invention présentent une très haute sécurité. Le résultat de l'essai de toxicité aiguë des déribés d'acides nucléiques de la présente invention sont les suivants. En ce qui concerne les souris ddY normales, la dose 30 de dérivés d'acides nucléiques de la présente invention est restreinte par la limite supérieure de la solubilité du médicament administré et la DL50 n'est pas inférieure à 394 mg/kg. L'effet a été apprécié par le fait que la souris était morte ou vivante une semaine après l'injection intraveineuse. Le 35 même essai en utilisant d'autres souris (C57BL6 et Balb/c) 24. a donné aussi le résultat que le dérivé d'acide nucléique (le même que ci-dessus) de la présente invention présente une toxicité plus faible que le poly I-poly C. On constate que la sécurité des dérivés d'acides nucléiques de la présente invention est très élevée. DL50 Sou- Voie d'adminis- 5 Sou- Voie d'adminis-Echantillon Echantillon Echantillon che tration d'essai I d'essai II témoin ddY intraveineuse >394 mg/kg >394 mg/kg 132 mg/kg 10... . (Exemple de travail) La présente invention sera encore illustrée au moyen d'exemples du procédé de préparation des dérivés d'acides nucléiques de la présente invention, ces exemples n'étant 15 pas limitatifs. EXEMPLES (1) Synthèse de l'acide polycytidylique soufré Du poly C (0,5 g) est dissout dans un solvant mélangé de 4 ml d'eau et 2 ml de pyridine; la solution est 20 placée dans un tube à réaction en acier inoxydable de 30 ml avec 5 ml d'hydrogène sulfuré liquide et mise à réagir à 37 C pendant 6 heures. La pression dans le tube scellé au cours de la réaction est de 20 à 22 kg/cm2. Apres la réaction, on refroidit le tube à réaction 25 à 0 C ou moins pour réduire la pression suffisamment et on ouvre le tube à réaction. On élimine un excès d'hydrogène sulfuré n'ayant pas réagi; on fait passer la solution de poly C soufré dans un ballon à fond rond de 50 mlet on élimine l'hydrogène sulfuré n'ayant pas réagi sous vide. La solution obtenue est 30 dialysée trois fois contre du tampon Tris (pH 7,5) contenant litres de chlorure de sodium 50 mM, et le Iiquide transparent obtenu est encore lyophilisé pour donner 0,47 g de substance fibreuse blanche. Les spectres d'absorption ultraviolets de la subs35 tance obtenue ont été mesurés dans une solution aqueuse neutre, et l'on a obtenu les résultats de la figure 1. Il est connu que la longueur d'onde d'absorption maximum de l'acide 25. cytidylique est de 271 nm et que la longueur d'onde d'absorption de l'acide 4-thiouridylique dans lequel un groupe -NH2 en position 4 du cycle pyrimidine de l'acide cytidylique est substitué par un groupe -SH est de 330 nm. A partir du rapport des hauteurs des pics de la figure 1, il a été confirmé qu'il y a un acide 4-thiouridylique pour 13 acide cytidylique. De la même manière, on a fait varier les températures de réaction et le temps de réaction du tube en acier inoxy10 dable et l'on a obtenu des acides polycytidyliques ayant les degrés de sulfuration indiqués dans le tableau suivant. Le degré de sulfuration est indiqué ici par "n", ce "n" désignant les nombres d'acide cytidylique pour un acide 4-thiouridylique. Température de réaction Temps de réaction n C 12 heures 1 6 6 1 37 6 13 + 2 37 4 26 2 37 2,5 39 - 2 * (2) Préparation de dérivés d'acides nucléiques à double toron: On dissout du poly I et du poly C soufrés obtenus 25 en (1) ci-dessus dans les mêmes quantités molaires, dans un tampon Tris contenant 50 mM de chlorure de sodium pour obtenir une concentration de 10 à 20 mg/ml, et au bain-marie on élève progressivement la température depuis la température ambiante jusqu'à 68 C. On maintient le mélange à 68 C pendant environ 10 minutes; on le laisse reposer jusqu'à ce qu'il 30 revienne à la température ambiante et on le stocke à 4 C. On lyophilise la solution obtenue, ce qui donne 1,2 g d'undcrivé d'acide nucléique ayant des groupes SH sous la forme d'un solide blanc. Puis on ajoute à celui-ci environ 10 fois son volume (en rapport molaire) d'une solution d'iode 1N (mélange d'un tiers de mole d'iode et de 2/3 de mole d'iodure de sodium). 26. On agite énergiquement le mélange pour l'homogénéiser et on le laisse reposer à 0 C pendant 1 heure. On dialyse soigneusement la solution réactionnelle contre de l'eau jusqu'à ce que la couleur jaune de l'iode disparaisse. On lyophilise la solution ainsi obtenue, ce qui donne 0,98 g d'un solide blanc. Le fait que le solide obtenu contient une liaison S-S est confirmé de la manière suivante. On dissout 0,1 g de ce solide dans 10 ml de tampon Tris (pH 7,5) contenant du 10 sulfite de sodium O,03M, stocke à la température ambiante pendant O à 7,5 heures et on examine chaque fois les spectres d'absorption aux ultraviolets. Les résultats sont donnés dans la figure 2. Il est connu que les liaisons S-S sont généralement réversibles et que la liaison S-S se coupe par réduction 15 en donnant un groupe S-H. Avec le temps, l'épaulement à 310 nm qui est une longueur d'onde d'absorption de la liaison S-S diminue tandis qu'une absorption à 330 nm, due à la substance -SH (4-thiouridine) augmente et, au bout de 7,5 heures, le degré d'absorption à 330 nm devient identique à celui du poly C 20 soufré avant l'oxydation. Il est donc clair que la liaison S-S a été quantitativement réduite en groupe -SH. (3) Structure réticulée et activité biologique Parmi les dérivés d'acides nucléiques dans lesquels les atomes de soufre sont introduits, les méthodes de 25 synthèse et les activités physiologiques de l'échantillon d'essai I (dont tous les groupes SH sont du type réduit) et de l'échantillon d'essai III (dont tous les groupes S-S sont du type oxydé) ont été décrits comme précédemment. Les substances réticulantes des dérivés d'acide nucléique décrits dans le présent mémoire sont les composés dans lesquels une partie des atomes de soufre introduits dans la même molécule présentent une liaison disulfure entre les molécules ou dans les molécules. Par exemple, les dérivés réticulants ayant 80 % 35 de groupes SH et 20 % de groupes S-S dans la même molécule peuvent former une structure réticulante multitorons dans 20 % de la totalité. En d'autres termes, le poly C ayant 27. 1000 pb par exemple, a une structure réticulante en dix parties. Tout dérivé d'acide nucléique ayant divers nombres de réticulation peut aisément être préparé par oxydation partielle de la substance SH dans des conditions modérées ou par réduc5 tion partielle de la substance S-S dans des conditions modérées. Les conditions de synthèse sont les mêmes que celles décrites dans les exemples. Le rapport des nombres de groupe SH et des nombres de groupe S-S, c'est-àdire le degré de réticulation, peut être calculé comme un rapport des valeurs obtenues en divisant l'absorbance ultraviolette à 310 nm du groupe S-S et à 330 nm du groupe SH, respectivement, par les coefficients d'absorption moléculaire. Une autre solution est la suivante: les dérivés 15 d'acides nucléiques sont RNA-ase (par exemple, la ribonucléase P1), le produit décomposé est soumis à une chromatographie liquide à haute performance (HPLC) du système à phase inversée, et la 4-thiouridine (ou acide 4-thiouridylique) et une substance bis formée par une liaison disulfure de celle-ci sont séparées et 20 leurs quantités sont déterminées. En ce qui concerne les activités physiologiques, on a trouvé que les dérivés d'acides nucléiques ayant n'importe quel degré de réticulation de 1 (substance totalement sous forme S-S; par exemple, échantillon d'essai II) à 0 (substance 25 totalement sous forme SH; par exemple, échantillon d'essai I) présentent la même activité et la même sécurité que les échantillons d'essai I et II mentionnés ci-dessus. Ce fait suggère que même si ces dérivés d'acides nucléiques peuvent être partiellement oxydables ou réductibles, 30 ils peuvent présenter la même activité physiologique stable que les dérivés initiaux. (4) Transformation en dérivés de faible masse moléculaire Le dérivé d'acide nucléique contenant des SH (1 g) 35 obtenu en (2) ci-dessus est dissous dans 120 ml d'eau et on ajoute 30 ml de solution de chlorure de sodium 5M et 150 ml de 28. formaldéhyde. On agite énergiquement le mélange pour obtenir une solution uniforme. On chauffe la solution à 80 C pendant 8 heures; on la dialyse soigneusement contre de l'eau, et on la lyophilise, ce qui donne 0,95 g de solide blanc. Lorsque le dérivé d'acide nucléique contenant des liaisons SS obtenu cidessus est soumis à une transformation en dérivé de faible masse moléculaire comme ci-dessus, on obtient le même résultat. On soumet ce dérivé à une chromatographie liquide 10 à haute performance par filtration sur gel et le diagramme obtenu est donné en figure 3. Les conditions sont les suivantes: gel de TSK G4000SW (0,65 x 60 cm), éluat: tampon Tris HC1 50 mM (pH 7,5) contenant du chlorure de sodium 0,5M. Chacune des flèches de la figure montre la position 15 d'élution de chaque marqueur de taille étalon (l'unité de ce marqueur de taille est le pb), et il ressort de la figure 3 que celui-ci a une distribution maximum d'environ 500 radicaux et qu'il a une taille moléculaire qui distribue 150 à 1000 radicaux. Le résultat concorde bien avec la valeur obtenue à par20 tir d'une électrophorèse utilisant un gel de polyacrylamide ou un gel d'agarose. Comme on l'a déjà dit, la taille moléculaire est indiquée dans ce mémoire par l'expression "nombre de radicaux" et dans la figure 3 le "nombre de radicaux" est en accord avec le "pb" comme unités. Lorsqu'on fait varier le temps de réaction et la température de réaction de cette réaction de transformation en composés de fable masse moléculaire, on obtient de la même manière les substances ayant les dimensions moléculaires suivantes. 29. Température de Temps de Distribution Distribution (bp) réaction réaction max (bp) - O h - 2.000 C 24 30 10 - 55 C 16 200 50 - 300 C 8 500 150 -1000 C 8 1000 200 -5000 ,.....DTD: Parmi les dérivés d'acides nucléiques obtenus conformément à l'exemple ci- dessus, on a pris ceux ayant des nombres de radicaux de 200 à 5000 et on a déterminé leurs courbes-de fusion. On a chauffé l'échantillon I ou II (0,70D/ml) dans du tampon Tris 10 mM (pH 7,5) contenant du chlorure de sodium 0,1 M en élevant la température de 2 C/4 minutes de 20 C à 90 C. 15 On a mesuré l'absorbance ultraviolette à chaque température à la longueur d'onde de 260 nm, et une augmentation de l'absorbance ultraviolette par hyperchromicité a été représentée par rapport relatif donnant l'état à 20 C comme base. Un spectrophotomètre Beckman DU-8B a été utilisé pour la mesure. Les résultats 20 sont donnés en figure 4. La fusion des dérivés d'acide nucléique a été progressivement observée de 35 à 55 C, et aux alentours de 59 C, on a obtenu une courbe de fusion brusque. A plus de 70 C, la courbe passe presque par un palier et cela signifie la disparition de structures de grandes dimensions et de la formation de structures spiralées par liaison hydrogène des dérivés d'acide nucléique. Les températures de fusion à 50 % pour les échantillons I et II ont été de 59, 5 et 59,3 C, respectivement. A partir de calculs basés sur la vitesse d'augmentation/décroissance de l'absorbance ultraviolette à 260 nm entre 90 C et 25 C, il a été confirmé que l'hyperchromicité (effet d'assombrissement de la couleur) pour les échantillons I et II était, respectivement, de 43,5 % et 42,4 %. Ceci indique que les dérivés d'acide nucléique ont des structures très stables dans les conditions physiolo35 giques. 30. La figure 1 représente des spectres d'absorption ultraviolettes d'un acide polycytidylique soufré obtenu en (1) de l'exemple. Les ordonnées et les abscisses sont respectivement l'absorption et la longueur d'onde (nm). La figure 2 représente le spectre d'absorption ultraviolet du dérivé d'acide nucléique obtenu en (2) de l'exemple. Il s'agit d'un spectre UV de réduction par le thiosulfate de sodium. Les ordonnées et les abscisses représentent respectivement l'absorbance et la longueur d'onde (nm). La figure 3 représente les diagrammes d'élution obtenus par chromatographie liquide à haute performance d'un dérivé d'acide nucléique de la présente invention obtenu en (3) de l'exemple. Les abscisses et les ordonnées représentent respectivement le temps d'élution (en minutes) et la quantité éluée. 15 Chacune des flèches indique la position d'élution du marqueur de dimensions. La figure 4 représente la courbe de fusion du dérivé d'acide nucléique de la présente invention dans laquelle la distribution des tailles moléculaires est de 50 à 2000 radicaux. 20 Les abscisses et les ordonnées représentent respectivement la température (0C) et l'absorption relative. La présente invention n'est pas limitée aux exemples de réalisation qui viennent d'être décrits, elle est au contraire susceptible de modifications et de variantes 25 qui apparaîtront à l'homme de l'art. 31. REVENDICATIONS i - Dérivé d'acides nucléiques, caractérisé en ce que, dans un polymère d'acides nucléiques, une partie des cycles purine ou pyrimidine qui en sont un élément constitutif est substituée par un ou plusieurs atomes de soufre ou en ce que ce ou ces atomes de soufre substitués forment des ponts par une liaison disulfure, d'o il résulte une meilleure conformation. 2 - Dérivé d'acides nucléiques selon la revendica10 tion 1, dans lequel ce polymère d'acides nucléiques est un polymère de ribonucléotide à toron unique. 3 - Dérivé d'acides nucléiques selon la revendication 2, dans lequel ce polymère de ribonucléotide à toron unique est un poly C contenant certaines proportions d'acide 4-thiouri15 dylique contenant des atomes de soufre résultant de la substitution d'un groupe -NH2 du cycle pyrimidine de l'acide cytidylique dans le poly C par un groupe -SH. 4 - Dérivé d'acides nucléiques selon la revendication 3, dans lequel la longueur du polymère est de 50 à 5000 20 calculée en nombres de base. - Dérivé d'acides nucléiques selon la revendication 3, dans lequel le nombre d'atomes de soufre est de un pour 6 à 39 acides cytidyliques présents dans le poly C. 6 - Dérivé d'acides nucléiques selon la revendica25 tion 4, dans lequel le nombre d'atomes de soufre est de un pour 6 à 39 acides cytidyliques présents dans le poly C. 7 - Dérivé d'acides nucléiques selon la revendication 1, dans lequel le polymère d'acides nucléiques est un polymère de ribonucléotide à double toron. 8 - Dérivé d'acides nucléiques selon la revendication 7, dans lequel le polymère de ribonucléotide à double toron est composé de poly I et de poly C contenant certaines proportions d'acide 4-thiouridylique contenant des atomes de soufre en substituant un groupe -NH2 dans le cycle pyrimidine de l'aci35 de cytidylique dans le poly C par un groupe NH. 32. 9 - Dérivé d'acides nucléiques selon la revendication 8, dans lequel la longueur du polymère est de 50 à 10 000, calculée en nombre de paires de base. - Dérivé d'acides nucléiques selon la revendica5 tion 8, dans lequel le nombre d'atomes de soufre est de un pour 6 à 39 acides cytidyliques présents dans le poly C. 11 - Dérivé d'acides nucléiques selon la revendication 9, dans lequel le nombre d'atomes de soufre est de un pour 6 à 39 acides cytidyliques présents dans le poly C.