FR 2595248 A1 19870911 FR 8701255 A 19870203 -1- La présente invention concerne un agent améliorant pour la fibrose pulmonaire qui comprend un composé représenté par la formule générale (I), o0 1 11 R Voc%_ = " R OC = S-CH R2OC C = CS_H I O (I o R1 et R2 sont identiques ou différents et représentent des groupes alcoyle en C1 à C4, et un diluant pharmaceutiquement acceptable; et son application. Alcoyle en C1 à C4 est en particulier méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, ou isobutyle; mais peut être également sec-butyle ou tert.-butyle. -2- Les dérivés dithiol représentés par la formule générale (I) (appelés ci-dessous les présents compo- sés) sont des composés connus comme composants pour les compositions pharmaceutiques permettant de lutter contre les maladies hépatiques (cf. p. ex. brevets britanniques n 1.509.819 ou 1.513.936). Les présents inventeurs ont réalisé l'invention sur la base des découvertes, à la suite de recherches intensives sur les effets pharmacologiques de ces composés représentés par la formule générale (I), selon lesquelles les com- posés ont un effet pharmacologique inattendu auquel on ne peut s'attendre d'après les découvertes antérieures. Autrement dit, on a trouvé que les présents composés peuvent améliorer la fibrose pulmonaire- lorsqu'on les administre in vivo. Autrement dit, l'invention ne peut être conçue d'après les découvertes antérieures, la lutte contre les maladies du foie; comme la cause de la fibrose pulmonaire est considérée comme étant entièrement différente de celle des maladies hépatiques. Naturel- lement, la fonction des poumons est très importante pour le maintien de la vie. Si le collagène, qui est un tissu conjonctif nécessaire pour préserver la structure normale du poumon et sa fonction, s'accroit de façon anormale pour former une fibroplasie diffuse, ceci aboutit à son désordre fonctionnel. Ceci est cependant une fibrose pulmonaire typique, et il n'y a pas de moyens thérapeutiques efficaces ni de procédé d'amélioration tandis que la normalisation et/ ou l'amélioration d'une telle situation est très impor- tante. La fibrose pulmonaire est causée par la bronchite, la collagénose, les poussières comme les particules de silice, certains médicaments et les rayons-X. Il - 3 - existe des procédés cliniques et biochimiques pour le diagnostic de la présente maladie. Ces derniers procé- dés sont pratiques et dans ces procédés on dose géné- ralement le niveau d'hydroxyproline qui est un indice du collagène (Hesterberg, T. W., Bleomycin-induced pulmonary fibrosis: Correlation of biochemical, physiological and histological change Tox. & Appl. Pharmacol. 60, 360-376 (1981)). Afin d'étudier la fibrose pulmonaire, les travaux expérimentaux sont très importants ainsi que les travaux cliniques. La fibrose pulmonaire peut être induite-par la bléomycine, les particules de silice, l'ozone ou CC14 (Adamson, I.Y.R., Bowden, D.H.: The pathogenesis of bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice. Am. 3. Pathol. 77, 185-190 (1974), Reisen, K.M., Last, 3.A.: Silicosis and fibrogenosis: fact and artifact. Toxicology, 13, 51-72 (1979), Hesterberg, T.W., Last, J.D.: Ozone-induced acute pulmonary fibrosis in rats. Am. Rev. Respir. Dis. 123, 47-52 (1981), Anttinen, H., Oikarinen, A., Puistola, U., Paakko, P., Ryhanen, L: Prevention by zinc of rat lung collagen accumulation in carbon tetrachloride injury. Am. Rev. Respir. Dis. 132, 536-540 (1985)). En outre, on a également effectué des recherches pour trouver un procédé afin d'améliorer la fibrose pulmonaire en utilisant des modèles de fibrose induite expérimentalement (Anttinen, H., et coll., ibidem, Pepin, J.M., Effect of dimethyl sulfoxide (DMSO) on bleomycin-induced puhonary fibrosis, Biochemical. Pharmacol. 34, N 13, 2386-2389, (1985)). - 4 - Les présents inventeurs ont trouvé que la fibrose pulmonaire induite par ces agents expérimentalement à des animaux peut être améliorée par l'administra- tion des présents composés. 5. Les présents composés sont donc efficaces comme agents améliorants pour la fibrose pulmonaire. Les composés préférés des dérivés de dithiol représentés par la formule générale (I) sont donnés au Tableau I. TABLEAU I o R-OC /S-CH R2O C = SC H Il O Composé n R1 R2 Pf ou indice de réfaction 1 CH3 CH3 Pf 134,50. 1350 C 2 C2H5 C2H5 Pf 113 C 3 n-C3H7 n-C3H7 Pf 73 - 75 C 4 i-C3H7 iC3H7 Pf 590 - 60 C n-C4H9 n-C4H9 P 55 - 57 C 4 9 491 Pf5 7C 6 i-C4H9 iC4H9 Pf 76 - 7S .C 7 C2H5 i-C3H7 Pf 57 - 55 C 8 CH3 i-C4H9 nD20 1,5928 -5- Le numéro du composé utilisé iei dans la présente description--dénote celui qui correspond au numéro du Tableau I présenté ci-dessus. Les présents composés sont extrêmement peu toxiques pour les mammifères, et les valeurs de DL50 des toxi- cités orales aiguës pour les souris mâles sont à un niveau très faible, de l'ordre de 1 000 à 6 000 mg/ kg de poids corporel ou plus, en général. Les toxicités des composés préférés données au Tableau I sont les suivantes: Composé nO DL50 1 > 6 000 2 4 900 3 > 6 000 4.3 120 >6 000 6 4 700 7 2 700 8 5 800 En outre, ces composés n'ont pas d'effet nocif sur les animaux expérimentaux auxquels on les adminis- tre, dans la mesure o les doses employées sont dans l'intervalle ordinaire d'administration. Lorsqu'on emploie les composés représentés par la formule générale I selon l'invention, on les utilise sous la forme appropriée pour qu'ils présentent l'ef- ficacité visée comme agent améliorant pour la fibrose pulmonaire. On peut également les formuler, selon des procédés et moyens habituels adoptés dans ce domaine, - 6 - en compositions pharmaceutiques sous la forme d'un mélange avec un diluant pharmaceutiquement acceptable et/ ou une autre substance pharmacologiquement active. Autrement, on peut également fournir les compositions pharmaceutiques de l'invention sous la forme d'unités pharmaceutiques commodes pour leurs objectifs indivi- duels d'applications qui contiennent le composé de l'invention seul ou le contiennent mélangé-à-un diluant pharmaceutiquement acceptable et/ ou à une autre substance pharmacologiquement active. Les compositions pharmaceutiques de l'invention peuvent être administrées par voie orale ou parenté- rale. L'agent pharmaceutique de l'invention peut donc prendre une forme appropriée à l'administration orale ou parentérale. On peut également fournir l'agent pharmaceutique de l'invention sous forme d'unités d'administration. Dans ce cas, la composition pharmaceutique contient une quantité efficace de composés ingrédients actifs. Ladite quantité efficace doit désigner un certain inter- valle selon les modifications dans diverses conditions. La forme sous laquelle les compositions pharmaceu- tiques de l'invention peuvent être fournies, comprend, par exemple, les poudres, granulés, comprimés, compri- mes enrobés, pilules, capsules, suppositoires, suspen- sions, liquides, émulsions, ampoules, injections, produits à inhaler, etc... Les compositions pharmaceutiques de l'invention sont fournies, selon les besoins, à l'état aseptique ou sous la forme d'une solution aqueuse isotonique. -7- La présente invention comprend le mode selon lequel le composé de formule générale I est administré sous la forme d'un mélange avec un diluant pharmaceutique- ment acceptable. Le diluant ici mentionné désigne une matière autre que les composés représentés par la formule générale I. Le diluant peut être un solide, un semi-solide, un liquide ou une capsule ingérable. Comme exemples de diluants, on peut citer les véhicules, produits de charge, agents liants, agents mouillants, désintégrateurs, agents tensioactifs, lubrifiants, dispersants, agents tampons, agents assaisonnants, désodorants, colorants, agents de sapidité, agents de conservation, adjuvants de dissolution, solvants, agents de propulsion, etce.., bien que cette liste ne soit pas limitative. Ces diluants peuvent être utili- sés seuls ou sous la forme de deux ou plusieurs membres. Les diluants pharmaceutiquement acceptables tels que ci-dessus sont quelquefois utilisés sous la forme d'un mélange avec une autre substance pharmacologiquement active, relevant également de l'invention. On peut préparer la composition pharmaceutique de l'invention selon n'importe quel procédé connu. Ainsi, on forme un mélange de l'ingrédient actif et d'un diluant, par exemple, en granulés, et on moule la com- position granulaire ainsi formée, par exemple, en comprimés. Dans le cas ou la composition pharmaceutique est conçue pour l'administration parentérale, il est préférable de la rendre aseptique et, si nécessaire, de la rendre isotonique par rapport au sang. CGénéralement, la composition pharmaceutique de l'invention contient d'environ 0,01 à 100 % en poids, sur la base du poids de la composition, de composés - 8 - actifs. Ainsi, l'invention comprend le mode selon lequel ledit composé est utilisé indépendamment. Dans le cas o le composé de l'invention est for- mulé en unités d'administration, les constituants indi- viduels formant la composition formulée peuvent être identiques ou différents quant à leur forme. Les formes les plus fréquemment adoptées comprennent, par exemple, les suivantes: comprimés, granules, pilules, poudres, comprimés enrobés, capsules, ampoules, etc... Pour l'amélioration de la fibrose pulmonaire, la composition pharmaceutique de l'invention peut être appliquée aux mammifères, y compris l'homme, selon un procédé ordinaire adopté dans ce domaine, afin d'obte- nir des effets tels que ceux présentés dans les tests ci-dessus effectués chez l'animal. Ainsi, la composi- tion de l'invention est administrée par voie orale ou parentérale. L'administration orale comprend l'adminis- tration sublinguale et l'inhalation, et l'administra- tion parentérale comprend l'administration au moyen d'une injection y compris, par exemple, les injections sous-cutanées, intramusculaires et intraveineuses et l'instillation. La dose de la composition pharmaceutique de l'in- vention varie selon de nombreux facteurs, y compris le type de mammifères, la différence de sensibilité, l'âge, le sexe, le poids corporel, l'état clinique, l'état physique des malades, les modes d'administration, le moment et l'intervalle de l'administration, le type et les propriétés de la composition pharmaceutique, le type d'ingrédient actif, etc... Dans certains cas, on peut donc rendre la dose de la composition pharmaceu- -9- tique plus faible que la dose minimale mentionnée ci- dessus, tandis que dans d'autres cas, la dose dépasse la dose maximale mentionnée ci-dessous. Dans le cas o la composition pharmaceutique doit être administrée à une dose importante, il est préférable que la compo- sition pharmaceutique soit administrée de façon frac- tionnée, plusieurs fois par jour. Dans le cas de l'administration orale, la dose efficace pour les animaux est dans un intervalle allant O10 de 0,1 à 500 mg, de préférence de 1 à 100 mg, d'ingré- dient actif par kg de poids corporel et par jour. Dans le cas de l'administration parentérale, la dose effi- cace pour les animaux est dans l'intervalle allant de 0,01 à 250 mg, de préférence de 0,1 à 25 mg, d'ingré- dient actif par kg de poids corporel et par jour. Dans le cas de l'administration orale, la dose efficace pour l'homme, déduite de la dose efficace mentionnée ci-dessus, pour les animaux, en considérant les différences de sensibilité et les marges de sécu- rité, se situe avantageusement dans un intervalle allant de 0,1 à 250 mg, de préférence de 0,5 à 50 mg par kg de poids corporel et par jour. Dans le cas de l'administration parentérale, la dose efficace pour l'homme est dans l'intervalle allant de 0,01 à 100 mg, de préférence de 0,1 à 25 mg, par kilogramme de poids corporel et par jour. L'invention est précisée plus en détail ci-dessous avec référence aux exemples o toutes les parties sont pondérales. Les types et rapports des composants à employer peuvent être modifiés selon les besoins. - 10 - Exemple 1 Composé 2 Oxyde de magnésium lourd Lactose parties parties parties On mélange de manière homogène les composants mentionnés ci-dessus pour obtenir une poudre ou un granulé. Exemple 2 Composé 3 Silicate d'aluminium synthétique Phosphate acide de calcium Lactose parties parties parties parties On traite les composants mentionnés ci-dessus de la même manière que dans l'exemple 1 pour obtenir une poudre. Exemple 3 Composé 4 Amidon Lactose Cellulose cristalline Polyvinyle alcool Eau parties parties parties parties parties parties - il - On pétrit de façon homogène les composants mention- nés ci-dessus, on granule, on sèche et on tamise pour obtenir un granulé. Exemple 4 On incorpore 99 parties du granulé obtenu dans l'exemple 3 avec une partie de stéarate de calcium, puis on soumet à un moulage par compression pour obte- nir un comprimé de 10 mm de diamètre. Exemple 5 Composé 7 95 parties Polyvinyl alcool 5 parties Eau 30 parties On-traite les composants mentionnés ci-dessus de la même manière que dans l'exemple 3 pour obtenir un granulé. On incorpore 90 parties du granulé ainsi obtenu avec 10 parties de cellulose cristalline, puis on procède à un moulage par compression pour obtenir un comprimé de 8 mm de diamètre. Ensuite, on forme ce comprimé en un comprimé enrobé de sucre en utilisant des quantités appropriées d'une suspension comprenant du sirop, de la gélatine et du carbonate de calcium précipité et un pigment. - 12 - Exemple 6 Composé 4 0,5 partie Agent tensio-actif non ionique 2,5 parties Solution isotonique de chlorure de sodium 97,0 parties On mélange les uns avec les autres les composants mentionnés ci-dessus en chauffant pour former une solution, qu'on refroidit ensuite, et qu'on stérilise pour obtenir une injection. Exemple 7 On répartit la poudre obtenue dans l'exemple 1 dans des capsules du commerce pour obtenir une capsule. Les exemples expérimentaux sont donnés ci-dessous. Exemple expérimental 1 Modes opératoires Animaux Les animaux utilisés sont des rats Sprague-Dawley femelles auxquels on donne un régime alimentaire du commerce (Hankkija Cy, Helsinki, Finlande). On répar- tit 40 rats en 4 groupes de 10, le premier servant de groupe témoin. Afin d'examiner l'effet du composé 4 sur l'accumulation de collagène dans le poumon, on induit une lésion en injectant du tétrachlorure de - 13 - carbone (CC14) par voie intrapéri tonéale à des doses de 0,1 ml/100 g de poids corporel (dilué avec un volume égal d'huile de paraffine) deux fois par semaine pen- dant 40 jours. Le troisième groupe reçoit des doses simultanées de CC14 et de composé 4. On met le composé 4 en suspension dans la gomme arabique et on l'admi- nistre par intubation gastrique à des doses de 100 mg par kg de poids corporel 5 fois par semaine pendant jours. Le 4e groupe ne reçoit que le composé 4. Deux animaux appartenant tous deux au groupe CCl4 décèdent pendant l'expérience. Procédés de dosage A la fin de l'expérience, on anesthésie les rats avec de l'éther, on les pèse et on les décapite. On prélève rapidement les poumons, on les pèse et on conserve le poumon droit à -70 C jusqu'au dosage. On homogénéise des spécimens de tissus pour la détermina- tion de l'hydroxyproline et de la protéine totale avec un homogénéiseur Ultra-Turrax à 0OC dans l'acide acé- tique 0,5 M (5 ml/ g de tissu), on dialyse contre l'acide acétique 0,5 M, et on hydrolyse dans HC1 6 M à 120 C pendant la nuit. On dose l'hydroxyproline tissulaire par le procédé de Kivirikko et coll. et les protéines tissulaires totales en utilisant le procédé de l'azote d' -amino de Rubinstein et Pryce. Procédé de dilatation-fixation On fixe le poumon gauche en injectant lentement une solution à 4 % de formaldéhyde et à 1 % de glutar- aldéhyde dans la bronche principale avec la seringue - 14 - de 1 ml en contrôlant avec une lentille grossissante. On poursuit la dilatation des poumons avec le fixatif jusqu'à ce que la plèvre soit lisse et que l'organe semble rempli. On laisse alors la bronche non fermée et on met les poumons dans la même solution jusqu'à fixation. Lorsque la bronche est laissée non fermée, les poumons humains, au moins, semblent prendre un volume assez constant pendant la fixation, un peu supérieur à la capacité résiduelle fonctionnelle. On découpe alors les poumons de façon sagittale et on inclut les tranches dans la paraffine. On découpe des sections à 5 1m et on les colore à l'hématoxyline- éosine, au colorant au fer de Pearl, et aux colorants élastiques de van Gieson et de Verhoeff. Résultats et Commentaires Induction de la fibrose pulmonaire par CC1: effet du présent composé La dose totale de 1,2 ml de CC14 pour 100 g de poids corporel reçue par les rats accroit de façon significative le rapport du poids du poumon au poids corporel total et la teneur totale en protéinesdu poumon, tandis que la teneur relative en protéinesdes poumons diminue. Le composé 4, administré par voie orale, permet de normaliser complètement ces paramètres (voir Tableau II). L'induction par CC14 provoque également un accroissement significatif de la teneur totale en hydroxyproline des poumons et là encore le traitement au composé 4 normalise les valeurs (voir figure 1). - 15 - Effet du présent composé sur la morphologie de la lésion à CCl4 La structure alvéolaire dans les poumons des dix rats témoins et les dix rats qui reçoivent le composé 4 est normale mais dans 8 poumons sur 9 provenant de rats ayant subi une induction par CC14, les parois alvéolaires sont élargies presque dans tout l'organe et infiltrées par des cellules inflammatoires, y com- pris surtout des macrophages et des lymphocytes et seulement de façon occasionnelle des granulocytes neu- trophiles. Certains espaces aériens contiennent un oedème alvéolaire abondant et des macrophages, qui présentent souvent une vacuolisation cytoplasmique. Tous les poumons présentent des foyers de parois alvé- olaires nécrotiques. 5 poumons sur 9 provenant de rats ayant reçu CC14 et de rats traités au composé 4 pré- sentent une structure alvéolaire assez normale, tandis que 4 présentent des signes variables de réaction inflammatoire avec un minimum d'oedème. Ces poumons présentent également moins de fibroses interstitielles que ceux provenant des rats induits par CC14 n'ayant pas reçu le composé 4. Tous les poumons présentent certains foyers de parois alvéolaires nécrotiques, cependant, ce qui indique une lésion alvéolaire diffuse. - 16 - TABLEAU II Effet de CCI4 et du composé 4 sur le rapport poids du poumon/ poids corporel total et la teneur du poumon en protéines Teneur totale Teneur relative Poids du en protéines en protéines du Groupe poumon! du poumon poumon poids corporel (mg/ g de poids (mg/ poumon) du poumon) (%) du poumon) Témoin (T) 0,86 0,19 40,88 6,38 22,79 2,89 Composé 4 (M) 0,810 , 12 38,31+4,90 22,20 2,76 CC14 (I) 1,49 0,31* 48,14 8,91** 16,40 2,14*** CC14 + composé 4 (M+I) 0,89 0,17 40,07 6,05 20,61 2,05 Différences significatives d'avec tous les autres groupes dans les analyses univoques de la variance **: P *: P - 17 - a C) -d o o $4E a. z >a o x CL o :.4 _- I- l o0 Figure 1.: Effet du composé 4 sur la teneur en hydroxyproline du poumon dans les lésions induites par CC14. - 18 - Le traitement avec le composé 4 normalise complè- tement le rapport du poids du poumon au poids corporel et la teneur relative en protéineset la teneur totale en hydroxyproline. Morphologiquement, le composé 4 semble empêcher les modifications inflammatoires exsudatives et la fibrose interstitielle, mais non l'effet toxique primaire de CC14 sur l'endothélium capillaire ou l'épithélium alvéolaire, d'o une lésion alvéolaire diffuse. On en conclut que le composé 4 peut être un médicament utile pour la prévention de la fibrose pulmonaire. Brève explication des dessins La figure 1 montre l'effet du composé 4 sur la teneur en hydroxyproline du poumon dans les lésions induites par CC14 o T dénote le groupe témoin, M dénote le groupe au composé 4, I dénote le groupe à CC14 et M + I dénote le groupe à CC14 et le composé 4. - 19 - REVENDICATIONS 1. Agent améliorant pour la fibrose pulmonaire qui comprend un dérivé de dithiol représenté par la formule générale (I), O R1 cc. S-CH XC = CI || (1) R2OC,, S-CH Il O ou R1 et R2 sont identiques ou différents et représentent des groupes alcoyle en C1 à C4, et un diluant pharmaceutiquement acceptable. 2. Agent améliorant pour la fibrose pulmonaire selon la revendication 1, o ledit dérivé de dithiol est le diisopropyl 1,3-dithiol-2-ylidène malonate. 3. Application d'un composé représenté par la formule générale (I) O 1 11 2 O N- NS-CH 1 R OC S-CH Il O ou R1 et R2 sont identiques ou différents et représentent des groupes alcoyle en C1 à C4, pour la préparation d'un médicament pour le traitement amélioratif de la fibrose pulmo- naire. - 20 - 4. Application selon la revendication 3, o ledit composé est le diisopropyl 1,3-dithiol-2-ylidène malonate. 5. Application d'un composé de formule I défini dans la revendication 3 pour l'amélioration d'unefibrose pulmonaire. 6. Application selon la revendication 5 o ledit composé est le diisopropyl 1,3-dithiol-2-ylidène malonate.