FR 2585705 A1 19870206 FR 8610892 A 19860728 SELS DE CEPHALOSPORINE ET COMPOSITIONS INJECTABLES La présente invention a pour objet des sels de cephalosporine semi- synthétiques résistant 3 la température dont la préparation n'a pas été décrite dans la littérature, la préparation de ces sels et des mélanges contenant ces sels. Le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 4 406 899 de Aburaki et coll. décrit le 7-["-(2-aminothiazol-4-yl)-a-(Z)-méthoxylminoacetamido]-3-r(1- méthyl-1-pyrrolidinlo)méthyl]-3-cephem-4-carboxylate sous sa forme d'ion dipolaire (zwitterion) et mentionne des sels d'addition d'acides correspon- dants (qui sont présents sous la forme d'ion dipolaire dans des composi- tions injectables) et indique que la forme d'ion dipolaire présente un spectre d'activité plus large que la ceftazidime et la cêfotaxime. Cependant, les céphalosporines mentionnées ci-dessus par Aburaki et coll. ne sont stables que pendant quelques heures sous la forme de composi- tions injectables et même la forme d'ion dipolaire sous forme de poudre sèche est instable a la température ambiante et perd 30% ou plus de son activité par stockage à des températures élevées (par exemple 45 C et plus) même pendant une semaine et elle necessite, de ce fait, un emballage spécialement isolé et/ou une réfrigération et par comparaison avec la ceftazidtme et la cefotaxime, elle est désavantagée par ses problèmes d'emballage et de stockage. Bien que Aburaki et coll. mentionnent les sels d'addition d'acides, le brevet n'explique pas comment les préparer ni n'indique si l'un quelcon- que de ces sels présente une bonne stabilité sous forme de poudre sèche. Kessler et coll., "Comparison of a New Cephalosporin, BMY 28142, with Other Broad-Spectrum e-Lactam Antibiotics", Antimicrobial Agents and Chemotherapy, volume 27, n 2, pages 207-216, février 1985, mentionne le sulfate mais n'indique pas comment le préparer et n'indique pas non plus si ce sel présente une bonne stabilité a la température ambiante et une bonne stabi- lité à une température élevee sous forme de poudre sèche. On a maintenant trouvé que certains sels cristallins d'addition d'acides du 7-[ú-(2-aminothiazol-4-yl)-a-(Z)-méthoxyiminoacêtamido]-3-[(1- méthyl-l-pyrrolidinio)méthyl]-3-céphem-4-carboxylate sous forme de poudre sèche présentaient une excellente stabilité à la température ambiante et une stabilité supérieure aux températures élevées par comparaison avec la forme d'ion dipolaire. Le terme "sous forme de poudre sèche" tel qu'utilisé ici, signifie une teneur en humidité inférieure à 5% en poids. Ces sels d'addition d'acides sont les sels cristallins du 7-["-(2- aminothiazol-4-yl)-"-(Z)-méthoxyiminoacétamido]-3-[(1-méthyl-1pyrrolidinlo)- méthyl]-3-céphem-4-carboxylate choisis dans le groupe constitué par les sels d'addition d'acides avec l'acide sulfurique, le dinitrate, le mono- chlorhydrate et le dichlorhydrate et les sels d'addition avec l'acide orthophosphorique (1,5 à 2 moles d'acide phosphorique par mole de sel, c'est-à-dire un intervalle compris entre les sesqui-orthophosphates et les di-orthophosphates) ou leurs solvates. Le terme "cristallin" est utilisé ici pour signifier au moins quelques arrangements caractéristiques des molécules. Tandis que les sulfates, les dinitrates, les dichlorhydrates et les orthophosphates obtenus par addition d'acide sont ici préparés sous une forme clairement cristalline (ceci étant mis en évidence par biréfringence au microscope polarisant) avec un arrangement précis des molécules, le monochlorhydrate n'a été préparé qu'avec un peu de régularité dans la disposition de ses molécules (ceci étant mis en évidence par une faible biréfringence au microscope polarisant) et non un arrangement pouvant être prédit de façon précise et il est ainsi "faiblement" cristallin. Le terme "cristallin" est utilisé ici pour embrasser non seulement les sels nette- ment cristallins mais aussi le monochlorhydrate qui apparalt "faiblement" cristallin. Les sels d'addition d'acides selon l'invention, lorsqu'ils sont introduits dans des compositions aqueuses injectables procurent l'ion dipolaire en solution. L'ion dipolaire présente la structure: : C-- ' CORH O-CH, cooe CH3 L'utilité de larges spectres vis-a-vis de divers organismes de la forme d'ion dipolaire, et donc de ces compositions aqueuses préparées à partir de ces sels, est indiquée par les données de Aburaki et coll., U.S. 4 406 899. Les compositions aqueuses préparées à partir des sels d'addition d'acides selon l'invention, simplement par addition d'eau stérile, procu- rent des solutions acides qui provoquent une irritation inacceptable lors de l'administration intraveineuse à des lapins et des sensations pénibles inacceptables lors de l'administration intramusculaire aux lapins. Le sulfate et le dinitrate, qui sont des sels d'addition d'acides, présentent des solubilités réduites qui sont insuffisantes pour des compositions - injectables typiques. On a maintenant trouvé que l'on pouvait remédier à ces caractéristiques discutables par utilisation de ces sels en mélange physique (c'est-à-dire sous la forme d'un mélange de solides) avec une base organique ou minérale non toxique pharmaceutiquement acceptable en propor- tions telles qu'elles donnent un pH d'environ 3,5 à environ 7 par dilution avec de l'eau jusqu'à une activité d'ion dipolaire de i mg/ml à 400 mg/ml, normalement de 250 mg/ml (tel que déterminée par chromatographie liquide à haute performance, ci-après désignée sous le nom de HPLC). Un sel que l'on préfère maintenant est le sulfate cristallin, sel d'addition d'acide sulfurique. On le préfère parce que sa faible solubilité dans l'eau (25 mg/ml) permet une récupération élevée dans un milieu aqueux lors de la cristallisation. Le sulfate cristallin, ou sel d'addition d'acide sulfurique, peut se préparer facilement par un procédé qui comprend les étapes de: (a) formation d'un mélange aqueux de (i) au moins 1 équivalent molaire d'acide sulfurique; et de (ii) un ion dipolaire en quantité telle qu'il soit présent dans le mélange à une concentration supérieure à 25 mg/ml; (b) déclenchement de la cristallisation du sulfate ou sel d'addition d'acide sulfurique; et (c) séparation du sulfate cristallin ou sel d'addition d'acide sulfurique. Les sels cristallins selon la présente invention (désignés dans ce qui suit simplement comme les présents sels) présentent une excellente stabilité à la température ambiante et leur perte de puissance (telle que déterminée par HPLC) est inférieure à 1% au stockage pendant 1 mois à la température ambiante. Ces sels présentent également une excellente stabi- lité aux températures élevées et leur perte de puissance (telle que deter- minée par HPLC) est inférieure à 15%k au stockage pendant 1 mois à 4556 C. Le sel d'addition d'acide sulfurique est le sel que l'on préfère ici. Il présente une perte de puissance inférieure à 10% au stockage pendant 1 mois à 45-56 C. Ce qui est très importante est qu'il a une faible sclubi- lité dans l'eau, c'est-à-dire d'environ 25 mg/ml, et qu'il cristallise dcrc dans l'eau avec un minimum de perte résiduaire. Le dinitrate, sel d'addition d'acide selon l'invention, présente également une faible solubilité dans l'eau, c'est-à-dire d'environ 60 mg/ml et il procure donc également une faible perte residuaire lors de sa cris- tallisation dans l'eau. Les monochlorhydrate, dichlorhydrate et sesqui- ou di-orthophosphate, autres sels d'addition d'acides, présentent des solubili- tés dans l'eau supérieures à 200 mg/ml et, de ce fait, on les fait cristal- liser de préférence dans des solvants organiques plutôt que dans l'eau en vue d'obtenir de bons rendements. On va maintenant décrire la préparation des sels selon la présente invention. Comme on l'a indiqué ci-dessus, le sulfate, sel d'addition d'acide sulfurique selon la présente invention, est préparé par un procédé qui comprend les étapes de: (a) formation d'un mélange aqueux de (i) au moins 1 équivalent molaire d'acide sulfurique; et (ii) un ion dipolaire correspondant à ce sel, en quantité telle qu'il soit présent dans le mélange à une concentration supérieure à mg/ml; (b) déclenchement de la cristallisation; et (c) séparation du sel d'addition d'acide sulfurique ou sulfate cristal- lin. On utilise de préférence l'ion dipolaire dans l'étape (a) en quantité telle qu'il soit présent dans le mélange à une concentration comprise entre environ 100 mg/ml et environ 200 mg/ml et l'on met en oeuvre l'étape (b) dans un milieu aqueux exempt de solvant organique. Normalement, on utilise dans l'étape (a) pas plus de 2 Équivalents molaires d'acide sulfurique. Normalement, l'ion dipolaire est utilisé dans l'étape (a) en quantité telle qu'il soit présent dans le mélange à une concentration inférieure à 500 mg/ml. L'étape (a) se met en oeuvre facilement soit par addition de l'ion dipolaire solide à la solution d'acide sulfurique (par exemple H2S04 1N) avec agitation rapide pour former une solution. Ou encore, on peut mettre l'étape (a) en oeuvre par dissolution dans l'eau de l'ion dipolaire solide et addition lente d'acide sulfurique tout en agitant pour former une solution. L'étape (b) se met en oeuvre par déclenchement de la cristallisation, de préférence par ensemencement, et ensuite m4se en bouillie, de préférence pendant 15 minutes à 2 heures. On préfère que cette étape de cristallisa- tion se réalise dans un milieu aqueux, exempt de solvant organique, et dans ce cas, on obtient normalement des puretés supérieures à 98%. Bien que la présence de solvant organique, par exemple l'acétone, favorise la cristal- lisation et accroisse le rendement par abaissement de la solubilité du sel d'addition d'acide, le sulfate formé, dans le milieu de cristallisation, il peut également favoriser la précipitation des impuretés et conduire à une diminution de la pureté. Lorsque l'on utilise l'ion dipolaire dans l'éta- pe (a) en quantité telle qu'il soit présent dans le mélange en quantité inférieure à 25 mg/ml, un solvant organique, de préférence l'acétone, doit être compris dans le milieu de cristallisation pour arriver e une récupéra- tion raisonnable. Lorsque l'on utilise l'acétone, on l'utilise de façon appropriée en quantité de 0,5 à 10 volumes/volume de milieu de cristallisa- tion aqueux. L'étape (c) est mise en oeuvre par séparation des cristaux dans le milieu de cristallisation, de préférence par filtration sous vide, et ensuite par lavage, par exemple avec un mélange acttone/eau, suivi d'un lavage à l'acétone seul ou à l'acide sulfurique O,1N (par exemple 1/10 en volume), suivi d'acétone (par exemple 1/4 en volume), et ensuite par séchage, par exemple par séchage sous vide à 30-50 C pendant 4 à 20 heures. La méthode selon l'invention de formation du sulfate, sel d'addition d'acide sulfurique, conduit à la purification de la forme Ion dipolaire à cause de la solubilité limitée du sulfate par comparaison avec la forme d'ion dipolaire et on peut l'utiliser pour purifier l'ion dipolaire sans le séparer sous sa forme solide. Si on souhaite obtenir l'ion dipolaire sensiblement pur (base libre) à partir du sulfate, sel d'addition d'acide formé, ceci peut se faire par dissolution du sel dans l'eau, addition de Ba(OH)2.8H20 en quantité de 80 à 100% de la théorie, à un pH qui ne soit pas inférieur à 6,5 pour précipiter BaSO4, filtration pour éliminer BaSO4 et récupération du filtrat qui contient l'ion dipolaire dissous et utilisa- tion en solution ou séparation de l'ion dipolaire solide (base libre) par sa lyophilisation ou addition d'acétone pour précipiter l'ion dipolaire amorphe et ensuite séparation de l'ion dipolaire solide par filtration sous vide, lavage par exemple à l'acétone et séchage sous vide. Ou encore, on transforme le sulfate ou sel d'addition d'acide sulfurique, en base libre en utilisant des résines échangeuses d'ions, par exemple Dowex WGR (résine échangeuse d'anions sous forme de base faible) et Dowex XU-40090. 01 (résine échange de cations d'acide fort) et ensuite lyophilisation. Venant maintenant à la préparation du dinitrate cristallin, qui est une sel d'addition d'acide selon l'invention, on l'obtient par mélange (1) d'au moins 2 équivalents molaires d'acide nitrique et (ii) d'ion dipolaire correspondant a ce sel de façon à qu'il soit présent dans le mélange à une concentration supérieure à 100 mg/ml, et ensuite déclenche- ment de la cristallisation par ensemencement ou frottement avec un agita- teur, dilution avec du propanol-2 et refroidissement. Le dinitrate cris- tallin, autre sel d'addition d'acide, se récupère par exemple par filtra- tion, lavage successivement par exemple avec un mélange propanol-2/H20 (50% v/v), propanol-2 et éther, et ensuite séchage sous vide à 50 C pendant 2 heures. Le monochlorhydrate, sel d'addition d'acide selon l'invention, se prépare par dissolution de l'ion dipolaire dans approximativement 1 équiva- lent molaire d'acide chlorhydrique et déclenchement de la cristallisation par addition d'acétone avec agitation et poursuite de l'agitation, que l'on fait suivre de la séparation des cristaux, par exemple par filtration sous vide que l'on fait suivre d'un lavage à l'acétone et d'un séchage sous vide. Ou encore, on prépare le monochlorhydrate à partir du dichlorhydrate, par mise en bouillie du dichlorhydrate dans le chlorure de méthylène et addition de 1 équivalent molaire de triéthylamine, que l'on fait suivre d'une mise en bouillie pour former le monochlorhydrate que l'on sépare, par exemple par filtration sous vide que l'on fait suivre d'un lavage au chlorure de méthylène et séchage sous vide. Le dichlorhydrate cristallin, qui est-un sel d'addition d'acide selon l'invention, se prépare par dissolution de l'ion dipolaire dans au moins 2 équivalents molaires d'acide chlorhydrique et ensuite déclenchement de la cristallisation par addition d'acétone et ensuite séparation des cristaux par exemple par filtration sous vide, lavage à l'acétone et séchage sous vide. Le di-orthophosphate cristallin, qui est un sel d'addition d'acide selon l'invention, se prépare par dissolution de l'ion dipolaire dans au moins 2 équivalents molaires d'acide phosphorique, déclenchement de la cristallisation par addition d'acétone et séparation des cristaux, par exemple par filtration sous vide, que l'on fait suivre d'un lavage tout d'abord a l'acétone et ensuite à l'éther, et ensuite séchage sous vide. Le sesqul-orthophosphate cristallin se forme par ce méme mode opératoire sauf que l'on utilise environ 1,5 équivalents molaires d'acide phosphorique. Les sels selon l'invention se mettent en compositions injectables par dilution avec de l'eau stérile et tamponnement à un pH de 3,5 à 7 pour former une concentration injectable de 1 mg/ml jusqu'à 400 mg/ml d'ion dipolaire. Les agents tampons convenables comprennent par exemple l'ortho- phosphate trisodique, le bicarbonate de sodium, le citrate de sodium, la N-méthylglucamine, L(+) lysine et la L(+) arginine. Pour l'administration intramusculaire ou intraveineuse à un être humain adulte, une dose totale d'environ 750 à environ 3 000 mg/j en doses divisées est normalement suffisante. Il n'est pas souhaitable que les sels selon la présente invention soit passés en compositions injectables simplement par addition d'eau stérile, parce que le sulfate et le dinitrate, qui sont des sels d'addition d'acides, ne sont pas suffisamment solubles pour former des compositions de concentration normale pour l'administration et parce que ces sels, lorsqu'on les dissout, donnent des compositions de pH très bas (1,8 à 2,5) qui donnent des sensations pénibles lors de l'injection. Comme on l'a indiqueé ci-dessus, on a maintenant trouvé que l'on pouvait remédier à ces incon- vénients en faisant passer ces sels en mélange physique, c'est-à-dire solide, avec des bases organiques ou minérales non toxiques normalement solides pharmaceutiquement acceptables en proportions telles qu'elles donnent un pH compris entre environ 3,5 et environ 7, de préférence entre environ 4 et environ 6, par dilution du mélange avec de l'eau à une concen- tration injectable de 1 mg/l allant Jusqu'à 400 mg/l en ion dipolaire, présentant par exemple une activité en ion dipolaire de 250 mg/ml tel que déterminee par un essai en HPLC. Les proportions exactes d'ingrédients dans le mélange physique varient de lot en lot du sel, puisque la pureté du sel varie de lot en lot. On détermine les proportions d'ingrédients d'un lot particulier par préti- trage d'un échantillon pour obtenir un pH sélectionné se trouvant dans l'intervalle mentionné ci-dessus. Le mélange physique peut facilement se stocker et s'expédier sous forme solide, profitant ainsi de l'avantage de la stabilité des sels selon l'invention et il se transforme facilement en composition injectable simplement par addition d'eau, ce que fait par exemple l'infirmière ou le docteur juste avant l'utilisation. On prépare le mélange physique par mélange des sels et de la base en un mélange uniforme, par exemple en utilisant un mélangeur classique en atmosphère sèche, et on l'introduit ensuite de préférence dans une fiole ou un autre récipient, tout cela dans des conditions aseptiques. Les bases que l'on utilise dans le mélange comprennent par exemple l'orthophosphate trisodique, le bicarbonate de sodium, le citrate de sodium, la N-méthylglucamine, la L(+) lysine et la L(+) arginine. La L(+) lysine et la L(+) arginine sont celles que l'on préfère puisque des mélan- ges qui les contiennent se reconstituent pour procurer des compositions injectables qui, lors de l'injection, font moins souffrir les animaux que les compositions provenant de mélange contenant d'autres bases. La L(+) ly- sine est très préférablement utilisée en proportion telle qu'elle donne un pH de 3,5 à 6 par dilution du mélange avec l'eau et procure une composition dont l'activité de l'ion dipolaire est de 250 mg/ml (telle que déterminée par essai en HPLC). Les sels selon l'invention et les mélanges physiques sensiblement secs qui les contiennent peuvent se stocker sans réfrigération ni emballage isolé et ils conservent une puissance élevee. Dans plusieurs des préparations selon l'invention, l'ion dipolaire instable est utilisé comme matière première. Sa préparation est décrite dans les exemples 1 à 3 de Aburaki et coll., brevet des Etats-Unis d'Amé- rique 4 406 899. L'ion dipolaire est indique dans Aburaki et coll. sous le nom de 7-ra-(2-aminothiazol-4-yl)-"-(Z)-méthoxyiminoacetamido]-3-[(1- méthyl-l-pyrrolidinio)méthyl]-3-cephem-4-carboxylate. Les figures suivantes sont données dans un but explicatif et de clarifi- cation: - la figure 1 - la figure 2 - la figure 3 L'invention est une représentation graphique du spectre d'absorption infrarouge du sulfate cristallin de 7-úa-(2-amino- thiazol-4-yl)-a-(Z)-méthoxyiminoacetamido3-3-[(1-méthyl- 1-pyrrolidinio)méthyl]-3-cephem-4-carboxylate mesuré sur une dilution de celui-ci dans le KBr; est une représentation graphique du spectre d'absorption infrarouge du sesquiphosphate cristallin du 7-[a-(2- aminothiazol-4-yl)-"-(Z)-méthoxyiminoacetamido]-3-[(1- méthyl-l-pyrrolidinio)méthyl]-3-céphem-4-carboxylate mesuré sur une dilution de celui-ci dans le KBr; est une représentation graphique du spectre d'absorption infrarouge du diphosphate cristallin du 7-ra-(2-amino- thiazol-4-yl)-a-(Z)-méthoxylminoacetamidoJ-3-[(1-methyl- 1-pyrrolidinio)méthyl1]-3-cephem-4-carboxylate mesure sur une dilution de celui-ci dans le KBr. est illustrée par les exemples de travail suivants. EXEMPLE I Préparation du sel d'addition d'acide sulfurique On ajoute 1,5 g d'ion dipolaire lentement à 10 ml de H2SO04 1N (1,59 équivalents molaires) agités rapidement à 20-26 C. On obtient une solution. On induit alors la cristallisation par ensemencement avec du sulfate cristallin et l'on fait passer la masse cristalline en bouillie pendant 0,5 heure. On sépare ensuite les cristaux par filtration sous vide, on lave avec 3 ml d'un mélange acetone/eau à 50% en volume et avec 2 por- tions de 5 ml d'acétone, et on sèche sous vide à 40-50 C pendant la durée d'une nuit. Un rendement typique est de 1,3 g de sel d'addition d'acide sulfu- rique. A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule: C19H24N605S2. H2S04 et on obtient les valeurs suivantes: C% H% N% S% H20% - calculées...... 39,44 4,53 14,52 16,62 aucun - trouvées....... 38,91 4, 57 14,64 16,71 1,42 EXEMPLE II Préparation du sel d'addition de l'acide sulfurique On dissout 1,5 g de l'ion dipolaire dans 5 ml d'eau. On ajoute lentement 5 ml d'H2S04 1M à cette solution tout en agitant. On induit ensuite la cristallisation par ensemencement avec un sel cristallin d'ad- dition d'acide et l'on fait passer la masse cristalline en bouillie pendant 0,5 heure. On sépare ensuite les cristaux par filtration sous vide, on lave avec 3 ml d'un mélange acétone/eau à 50% en volume et avec 2 portions de S ml d'acétone et on sèche sous vide a 40-50 C pendant la durée d'une nuit. Un rendement typique est de 1,3 g de sel d'addition d'acide sulfu- rique. EXEMPLE III Préparation du sel d'addition de l'acide (HN03)2 On dissout 300 mg d'ion dipolaire dans de l'acide nitrique 2N (0,5 ml). On frotte la solution avec un agitateur en verre, on dilue avec du propanol-2 (0,4 ml) et on refroidit. On recueille le composé cristallin en rubrique et on le lave successivement avec 0,4 ml d'un mélange propanol-2/H20 (1/1), propanol-2 et ensuite de l'éther, ce qui donne 127 mg de dinitrate. A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule: C19H24N605S2-2HNO3 et on obtient les valeurs suivantes: C% - calculées...... 37,62 4,32 18, 47 10,57 - trouvées....... 36,92 4,10 18,08 10,67 (teneur en H20: 0,90%). EXEMPLE IV Préparation du monochlorhydrate On dissout 1 g d'ion dipolaire dans 2,08 m de HCl IN (1 équivalent molaire) a 20-25 C. On aJoute trente ml d'acétone tout en agitant rapide- ment pendant une durée de 15 minutes, ce grace a quoi se forment des cristaux. On poursuit l'agitation pendant 1 heure. On sépare les cristaux par filtration sous vide, on lave a l'aide de 10 ml d'acétone et on sèche sous vide à 50 C pendant 2 heures. Le rendement typique est de 0,9 g de monochlorhydrate cristallin. A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule: C19H24N605S2.HCl et on obtient les valeurs suivantes: C% H% N% S% Cl% H20% - calculées...... 41,37 4,75 15,2 11,63 12,86 - trouvées....... 39, 32 4,88 13,95 11,28 12,44 4,5 (correction pour H20: C% = 41,17; N% = 14,61; S% = 11,82; Cl% = 13,03). EXEMPLE V Préparation du dichlorhydrate et préparation du monochlorhydrate, 1 partir de celui-ci On dissout 350 mg d'ion dipolaire dans 2 ml de HCl 1N. On aJoute ml d'acétone à la solution qui en résulte tout en agitant rapidement et pendant un intervalle de 5 minutes, grace A quoi se forment des cristaux. On poursuit l'agitation pendant encore 5 minutes. On ajoute alors une quantité supplémentaire de 10 ml d'acétone et on poursuit l'agitation pendant 0,5 heure. On élimine les cristaux par filtration sous vide, on lave avec '2 portions de 5 ml d'acétone et on sèche sous vide A 40-45 C pendant 24 heures. Le rendement typique est de 300 mg de dichlorhydrate cristallin. A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule: C19H24N605S2. 2HCl et on obtient les valeurs suivantes: C% H% N% S% Cl% H20% - calculées...... 41,38 4,75 15,2 11,62 12,8 - trouvées....... 40,78 4,98 14,7 11,25 1,25 (correction pour H20: C% = 41,1; NZ = 14,88; S% = 11,39; Cl% - 11,94). H% N% S% On met en bouillie 1 g de dichlorhydrate préparé comme indiqué ci-dessus dans 20 ml de chlorure de méthylène à 20-25 C dans un flacon scellé et l'on ajoute 0,28 ml de triéthylamine pendant un intervalle de minutes. On fait ensuite passer la masse cristalline en bouillie pendant 5 heures. Les cristaux de monochlorhydrate qui en résultent sont alors isolés par filtration sous vide, on lave avec deux portions de 5 ml de chlorure de méthylène et on sèche sous vide à 50 C pendant 2 heures. Le rendement typique est de 800 mg. EXEMPLE VI Préparation du di-orthophosphate On dissout 1 g d'ion dipolaire dans 3,4 ml de H3P04 à 144 mg/ml (2,2 équivalents molaires) à 15 C. La solution qui en résulte est conve- nablement filtrée pour la clarifier. On ajoute 12 ml d'acétone à la solu- tion clarifiée tout en agitant rapidement pendant une période de 10 minu- tes, ce grâce à quoi se forment des cristaux. On poursuit l'agitation pendant 10 minutes. On aJoute ensuite 30 ml d'acétone pendant une période de 10 minutes et on poursuit l'agitation pendant encore 15 minutes. On recueille les cristaux par filtration sous vide, on lave avec 2 portions de ml d'acétone et 2 portions de 5 ml d'éther, et on sèche sous vide poussé pendant 16 heures. Le rendement typique de ce type de préparation est de 1,1 g de di-orthophosphate cristallin. A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la formule: C19H24N605S2. 2H3P04 et on obtient les valeurs suivantes: C% H% N% H20% - calculées...... 33,72 4,47 12,41 - trouvées....... 33,43 4,65 12,02 1, 82 (corrigé pour H20: C% = 34,0; N% = 12,2). Le sesqui-orthophosphate est formé comme ci-dessus sauf que l'on utilise 1,5 équivalents molaires de H3P04 au lieu de 2,2 équivalents molaires. EXEMPLE VII Stabilités aux températures élevées On détermine les stabilités aux températures élevées par stockage des préparations dans des emballages secs A des températures et pendant des périodes de temps telles qu'indiquées ci-dessous, et l'on détermine les pertes ou les gains de puissance par HPLC. Un gain de puissance en % est indiqué sous la forme d'un signe "plus" au début d'une figure. Une puissance inférieure 9 10% pendant une période de 2 A 4 semaines a est habituellement indicatrice d'une perte de puissance inférieure pendant une période de 2 A 3 ans a la température ambiante. perte de -56 C à 10% EXEMPLE VIII Test des mélanges physiques Les mélanges physiques sont constitués du sulfate cristallin, avec (a) l'orthophosphate trisodique, (b) le bicarbonate de sodium, (c) la L(+) lysine et (d) la L(+) arginine. Les bases sont ajoutees en proportions telles qu'elles procurent par dilution du mélange avec l'eau à une activité de l'ion dipolaire de 250 mg/ml (déterminee par essai HPLC) de la façon suivante: l'orthophosphate trisodique des pH (procurant un pH de 6,0); le bicarbonate de sodium (procurant un pH de 6,0), la L(+) lysine (procurant un pH de 6,0); la L(+) arginine (procurant un pH de 6,0). Les compositions injectables se préparent par reconstitution avec de l'eau stérile à une activité d'ion dipolaire de 250 mg/ml, telle que déterminee par essai en HPLC. Il n'y a pas de problèmes de solubilité. On effectue des injec- tions (100 mg/kg) par voie intramusculaire sur des lapins, la douleur se PERTE EN % C 56oC 100oC (semaines) (semaines) (jours) Forme 1 2 4 6 1 2 4 1 Ion dipolaire 37 51 71 - 57 - 100 Sel-deR 2SO, 2,4 à +5 3 +5 1,4 5 A +6 +3 0 à +6 0-10 Sel de (!W03)2 8,8 3,4 0,68 10,3 3,7 2,4 - Sel de BC1 4,8 2,3 6,0 6,4 6,4 - - Sel de (BCl) 20 - 7,4 - 0 - 7,2 12,4 Sel de (H3P04)2 0 3,0 1,0 - 2,7 5,0 - - 3 42 maintenant à des seuils acceptables. La moindre douleur est celle que l'on obtient avec la composition contenant de l'arginine. Des résultats semblables de bonne solubilité et de douleur acceptable lors de l'injection intramusculaire sont obtenus par utilisation des autres sels selon l'invention en mélanges physiques avec les bases ci- dessus. La figure 1 représente le spectre d'absorption infrarouge du sulfate cristallin préparé comme décrit dans l'exemple I ou l'exemple II, mis en pastilles sous sa forme cristalline en présence de bromure de potassium. Le schéma de diffraction en poudre aux rayons X du sulfate cristallin du 7-r"-(2-aminothiazol-4-yl)-a-(Z)-méthoxyiminoacétamido]-3-[(1-méthyl- 1-pyrrolidinio)méthyl]-3-céphem-4-carboxylate préparé comme décrit dans l'exemple I ou II, se détermine avec un diffractomètre à poudre de Rigaku en utilisant un tube aux rayons X e cible de cuivre, un filtre de nickel et l'échantillon étant contenu entre deux plaques de verre. La vitesse de balayage est de 2 par minute sur l'intervalle de 5 à 40 C, et l'on enre- gistre mécaniquement le graphique pour indiquer les angles de diffraction maximum. A partir de cela, on calcule les espacements (D) et les intensités relatives (I/Io). Elles sont énumérées ci-dessous. o Espacement d (A) I/Io (X) 9,20 100 6,80 50 ,50 28 ,09 22 4,50 38 4,41 44 4,19 63 3,78 38 3,64 44 3,39 25 3,31 31 3,15 47 EXEMPLE IX Préparation du sesquiphosphate On dissout l'ion dipolaire, 0,70 g, tout en agitant rapidement dans 2,2 A 2,4 ml d'acide phosphorique 85% (2,1 A 2, 2 équivalents molaires) que l'on a dilué à 1/10 (v/v) avec de l'eau. On clarifie la solution par filtration sur membrane filtrante d'une dimension de pores de 0,22 à 0,45 microns. On ajoute de 5 e 7 parties en volume (15 e 20 ml) de méthanol au filtrat tout en agitant rapidement pendant une durée de 30 à 60 minutes. Pendant cette opération, des cristaux se forment et l'on poursuit une agitation rapide pendant 1,5 à 2 heures. On récupère le produit cristallin par filtration sous vide, on lave le produit sur filtre tout d'abord avec 6) 8 ml d'un mélange 1/1 (v/v) * méthanol/acetone en prenant soin de maintenir le gateau de filtre étroi- tement serré et ensuite à l'acétone. On sèche le produit sous vide à 50 C pendant 2 heures, le rendement typique est de 0,7 A 0,75 g. Interprétation de l'infrarouge (voir figure 2) (IR, pastille de KBr). Position des pics (cm- 1) groupe fonctionnel 2800-3400NH + 02800-3400 N NH, NH3+, carboxyle OH 1780 e-lactame C=O 1680 carboxyle C=O 1660 amide C=O 1630 C=N, C=C 1550 amide OH 980, 1040 P04 Comportement au chauffage: Un exotherme apparaît à 171,8 C dans le balayage différentiel du tracé au calorimétre. Schéma de diffraction aux rayons X Le schéma de diffraction en poudre aux rayons X du sesquiphosphate précédent est mesuré avec un diffractomètre à poudre de Rigaku, de la méme facon que décrit ci-dessus en ce qui concernait le sulfate, avec les résultats suivants: d 11,04 9,2 7,89 7,02 6,7 ,5 4,64 4,456 4,3 I/Io 3,88 3,75 3,56 3,31 3,05 Interprétation de la RMN: (1H 90 MHz RMN, solution dans D20) a CO. le COZ. Dérive chimique (ppm */TSP) 2,0-2,4 3,04 3,3-3,6 3,94 4,12 4,12 4,8 ,42 5,88 7,21 Stabilité Description multiplet singulet multiplet doublet singulet doublet doublet doublet doublet singulet Intégral Indication 14CH2, 14'CH2 12CH3 2CH, 13CH2, 13'CH2 2CH CH3 11CH 11CH 6CH 7CH 18CH Temps-température 1 jour - 100 C 3 jours 70 C 7 jours - 70 C 1 semaine - 56 C 2 semaines - 56 C 4 semaines - 56 C i semaine - 45 C 2 semaines - 45 C 4 semaines - 45 C 8 semaines - 45 C 1 mois - 37 C % de perte ,9 1,9 1,0 1,4 o 1,4 0,7 1,6 2,5 Analyse élémentaire (% en poids) trouvé base sèche C...... 35,44 36,3 H...... 4,66 4,41 N...... 12,88 13,2 H20.... 2,29 22, * H3P04.. 23,06 23,6 Méthode de Karl Fischer. théorie (sesquiphosphate) 36,4 4,7 13,4 monohydrate = 2,8% H20 23,6 REVENDICATIONS 1.- Sels cristallins stables à la température de 7-["-(2-amino- thiazol-4-yl)-a-(Z)-méthoxyiminoacetamido]-3-[(1-methyl-1-pyrrolidinio)- méthyl]-3-cephem-4-carboxylate choisis dans le groupe constitue par les sels d'addition de l'acide sulfurique, le dinitrate, le monochlorhydrate et le dichlorhydrate et les sels d'addition d'acides orthophosphoriques contenant de 1,5 à 2 équivalents molaires de H3P04 ou leurs solvates. 2.- Sels cristallins selon la revendication 1, choisis dans le groupe constitué par le sulfate, le monochlorhydrate, le dichlorhydrate et l'ortho- phosphate, sels d'additions d'acides, ou leurs solvates. 3.- Mélange physique du sel selon la revendication 1, avec une base organique ou minérale non toxique pharmaceutiquement acceptable en propor- tions telles qu'elles donnent un pH d'environ 3,5 à environ 7 par dilution du mélange avec l'eau à une concentration injectable. 4.- Mélange physique selon la revendication 3, dans lequel le sel et la base sont présents en proportions telles qu'elles donnent un pH d'envi- ron 4 à environ 6 par dilution du mélange avec de l'eau en concentration injectable. 5.- Mélange physique selon la revendication 4, dans lequel la base est la L(+) lysine. 6.- Mélange physique selon la revendication 4, dans lequel la base est la L(+) arginine. 7.- Procédé de préparation du sel d'addition d'acide sulfurique, comprenant les étapes de: (a) formation d'un mélange aqueux de: (i) au moins 1 équivalent molaire d'acide sulfurique; et (ii) un ion dipolaire correspondant à ces sels; (b) déclenchement de la cristallisation du sel d'addition d'acide sul- furique pourvu que lorsque l'ion dipolaire est présent dans le mélange à une concentration inférieure à 25 mg/ml, la cristallisation soit effectuée en présence d'un solvant organique; et (c) séparation du sulfate cristallin ou sel d'addition d'acide sulfuri- que. 8.- Méthode selon la revendication 7, dans laquelle on met l'étape (b) en oeuvre dans un milieu aqueux exempt de solvant organique. 9.- méthode selon la revendication 8, dans laquelle l'ion dipolaire est utilisé dans l'étape (a) en quantité telle qu'il soit présent dans le mélange à une concentration inférieure à 500 mg/ml. 10.- Méthode selon la revendication 7, dans laquelle la quantité d'ion dipolaire employée dans l'étape (a) est telle qu'il soit présent dans le mélange à une concentration supérieure à 25 mg/ml. 11.- Méthode selon la revendication 8, dans laquelle l'ion dipolaire est utilisé dans l'étape (a) en quantité telle qu'il soit présent dans le mélange P une concentration comprise entre 100 mg/ml à environ 200 mg/ml. 12.- Sulfate cristallin ou sel d'addition d'acide sulfurique selon la revendication 1. 13.- Sulfate cristallin du 7-E"-(2-aminothiazol-4-yl)-a-(Z)-méthoxy- iminoacétamidoJ-3-[(1-méthyl-1-pyrrolidinio)méthylJ-3-céphem-4carboxylate, présentant le schéma suivant de diffraction en poudre aux rayons X: Espacement d (A) I/Io (X) 9,20 100 6,86 50 5,50 28 ,09 22 4,50 38 4,41 44 4,19 63 3,78 38 3,64 44 3,39 25 3,31 31 3,15 47 14.- Orthophosphate cristallin selon la revendication 1 et ses hydrates. 15.- Phosphate cristallin de 7-ra-(2-aminothiazol-4-yl)-a-(Z)-méthoxy- iminoacétamidoJ-3-[(1-méthyl-l-pyrrolidinio)méthyll-3-céphem-4carboxylate, présentant le schéma de diffraction en poudre aux rayons X suivant: d I/Io 11,04 9,2 16 7,89 24 7,02 42 6,7 32 5,5 26 4,64 100 4,456 53 4,3 58 3,88 26 3,75 89 3,56 21 3,31 26 5.3,05 16