FR 2593503 A1 19870731 FR 8601220 A 19860129 1 2593503 La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés radioactifs marqués à l'iode, leur procédé de préparation et leur application aux dosages radioimmunologiques. Plus particulièrement, elle a pour objet des dérivés marqués à l'iode de formule générale CI): 7r \O J) NI- \9 c"oq) Co dans laquelle R représente le reste d'un acide aminé R-NH2 ou le R reste d'un dérivé de ce dernier, ce reste possédant un groupe accepteur d'iode et étant marqué à l'iode 125 ou 131. L'invention a plus particulièrement pour objet les dérivés radioactifs marqués à l'iode de formule générale (I) dans laquelle R représente le reste d'un acide aminé RNH2 ou le reste d'un dérivé de ce dernier choisi dans le groupe constitué par l'histidine, la tyrosine, l'histidinol, l'histamine, la tyramine et le tyrosinate de méthyle marqués à l'iode 125 ou 131 Parmi les produits de formule générale (I), on citera notamment le /1R /1 i S, 2 i / 4-/3-/cyano///3-(2,2-dibromoéthényl) 2,2-diméthyl cyclopropyl/carbonyl/oxylméthyl/phénoxy/benzène-N-/2-(2-iodo 125I 4-1Himidazolyl) éthyl/propanamide de formule: DrX OC -0 -C __'IyI L'invention a également pour objet un procédé de préparation des produits répondant à la formule générale ci-dessus. Ce procédé est caractérisé en ce que l'on fait réagir un produit de formule (II): avec un réactif fixateur d'un groupement activateur de La fonction carbonytle pour obtenir le produit de formule (III): p. O -^ l0 uL r c ri b.- Ce procd est encore aractris enc que o (ct) C - OR 2., o - dans Laquelle R1 représente un groupement activateur de La fonction carbonyle que L'on fait réagir avec un acide aminé RNH2 possédant un groupe accepteur d'iode marqué à L'iode 125 ou 131 ou avec un dérivé de cet acide aminé et obtient le produit cherché de formuLe générale (Ii, que L'on purifie par des moyens physiques classiques. Ce procédé est encore caractérisé en ce que: - L'acide aminé accepteur d'iode ou le dérivé d'acide aminé est choisi dans le groupe constitué par L'histidine, la tyrosine, L'histidinol, L'histamine, la tyramine et le tyrosinate de méthyle; - on fixe sur La fonction acide un groupement activateur de la fonction carbonyle en faisant agir un haLogénoformiate d'aLcoyle en présence d'une base tertiaire, en milieu anhydre et sous atmosphère inerte. Dans des conditions préférentieLles de mise en oeuvre, Le procédé est caractérisé en ce que L'halogénoformiate d'aLcoyLe est le chLoroformiate d'isobutyLe et on opère en présence de tri-n-butyL amine. L'invention a pour objet un procédé de préparation des composés de formule générale CI) caractérisé en ce que L'acide aminé ou son dérivé que L'on fait réagir avec le produit de formule générale (III) dans laquelle R1 représente un groupement activateur de la fonction carbonyle, est l'histamine marquée à l'iode 125 ou 131 ou son dérivé et que l'on opère sous atmosphère inerte. L'invention a plus précisément pour objet un procédé de préparation des composés de formule générale (I), caractérisé en ce que l'on obtient le produit de formule: 3 2593503 0 0 C 9 (.- c - M ==CW> _ ie L'invention a également pour objet l'appLication des produits de formule générale (I) et notamment du /1R /1 S, 2co /4- /3-(cyano///3-(2,2-dibromo éthényl) 2,2-diméthyl cyclopropyl/ carbonyl/ oxy/méthyl/phénoxy/benzène-N-/2-(2-iodo 125I 4-1 H imidazoLyL)éthyl/ propanamide (produit A) à L'étude et au dosage radioimmunologique de La deltamethrine (produit B) dans les fluides biologiques, chez L'homme ou l'animal. L'invention a égaLement pour objet, à titre de produits industriels nouveaux et notamment à titre de produits intermédiaires nécessaires à l'exécution du procédé de l'invention les produits de formule (II) et (III): C -0- CH- <> r C M \ Coo0w cri o o R1 représente un groupement activateur de la fonction carbonyle et notamment un radical -CO2aLc, alc étant un radical alcoyle ayant au plus 6 atomes de carbone, comme par exemple un radical méthyle, éthyle ou n-propyle, isobutyle. Parmi ces produits, L'invention a pLus particulièrement pour objet le produit répondant à la formule III dans laquelle R1 représente un radical -C-0-CH2CH(CH3)2. 0 O 4 2593503 le produit de formule (III') br t i") (Cil) Je Fée-o-I 32. 2 Le produit de formule (II) est un produit de départ utile également pour la préparation d'antigènes, ceux-ci étant eux-mêmes nécessaires aux dosages radioimmunologiques du produit B précité. L'application des produits (II) à la préparation d'antigènes fort l'objet également de la présente invention. Elle est caractérisée en ce que l'on conjugue (II) avec de l'albumine sérique bovine (B.S.A.) ou avec une autre protéine immunogène telle que l'albumine sérique humaine, la thyroglobuline porcène ou bovine, l'anatoxine tétonique, l'anatoxine diphtérique, l'ovalbumine, l'hémocyanine de Patelle (KLH) ou les Y globulines, et obtient l'antigène recherché. Cette application est encore caractérisé en ce que: - l'on fait réagir un produit de formule (II): r t -t X O(cF1) -- coo en vue de l'activation de la fonction carbonyle, avec un halogéno- formiate d'alcoyle, en présence d'une base tertiaire, en milieu anhydre et sous atmosphère inerte, pour obtenir l'anhydride mixte correspondant de formule générale (III): Cri x (0 d -I- o dans laquelle R1 conserve sa signification précédente, que l'on conjugue avec l'albumine serique bovine (B.S.A.) ou avec une autre protéine immunogène et obtient l'antigène cherché. Cette application est encore caractérisée par les points suivants: - L'halogénoformiate d'alcoyle est le chloroformiate d'isobutyle et l'on opère en présence de tri-n-butyl amine; - on fait réagir l'anhydride mixte de formule générale (III) avec l'albumine sérique bovine (BSA), ou une autre protéine immunogène L'application décrite permet d'obtenir respectivement, au départ du produit de formule (II):- _______,O--CH O r CH O les antigènes de formule (IV) et (V): ro c M R CO--CH Ci dans laquelle n = 10 à 30 et: __ V - ri H = -SP dans Laquelle n = 10 à 100. L'invention a également pour objet, à titre de produits industriels nouveaux, Les antigènes obtenus lors de L'application décrite ci-dessus et notamment les produits de formule générale (IV) et (V). L'invention a également pour objet l'application des antigènes ci-dessus à la préparation des anticorps par injection chez l'animal en présence d'adjuvants. Les produits de formule générale I, objet de L'invention, et notamment le produit A, peuvent être utilisés lors des études et lors du dosage radioimmunologique de la deltaméthrine. Lors de ces études, le produit (A) permet un dosage spécifique aisé de quantités de l'ordre de quelques dizaines de Picogrammes de deltaméthrine, sans que l'on soit obligé de recourir à des méthodes d'isolement et de purification par chromatographie, avant de procéder au dosage proprement dit selon des méthodes radioimmunologiques conventionnelles telles que celles décrites par: - S.A. BERGSON et R.S. YALOW, HORMONE 4, p. 557 (1964) et - G.E. ABRAHAM J. of CHEM. ENDOCRINAL METAB., 29, p. 866 (1969). Les exemples suivants illustrent l'invention, sans toutefois la limiter. Exemple I: Acide 1R /1 (R), 2 14-/3/cyanoi/C2-(2,2-dibromoéthényl) 3,3diméthylcyclopropyl/ carbonyl) oxyl/éthyl/phénoxy/ benzène propanoique. Stade A: 4-/3-(1,3-dioxolan 2-yl) phénoxy/ benzaldéhyde. On mélange 12,05 g de parahydroxybenzaldéhyde, 30 cm3 de pyridine et 5,5 g de méthylate de sodium, chauffe pour distiller 4 cm3 de pyridine, ajoute 2,5 g de chlorure cuivreux et 38 g de 2-(m-bromophényl) 1,3- dioxolane, chauffe en agitant énergiquement jusqu'à 200uC (température extérieure), tout en distillant la pyridine, et maintient à 200= C (température extérieure) pendant 5 heures. Après refroidissement, on reprend le résidu au chlorure de méthylène, lave par une solution aqueuse N d'acide chlorhydrique puis à l'eau. On sèche les phases organiques, concentre à sec par distillation sous pression réduite, chromatographie le résidu sur silice en éluant par un mélange hexane-acétate d'éthyle (6/4) et obtient 18,28 g de produit attendu. Spectre IR (chloroforme): 2 830 cm-1 2 738 cm-1 aldéhyde 1 696 c1 C = O I 696 cm-1 C=O0 7 2593503 1 598 cm-1 i 580 cm-1 aromatique I 500 cm-1 ) I 240 cm-1 C -IC 1 097 cm-1 - I 071 cm- 1 - 1 076cm-1 833 cm-1 Spectre de RMN (CDCI3) "o.o,:. ,:/r phényl/1,3-dioxolane. On mélange 137 cm3 de tétrahydrofuranne et 13,72 g de bromure de lithium, refroidit à -30uC, ajoute d'un coup 11,94 cm3 de diisopropylamine, puis un mélange de 10 g de 4-/3-(1,3-dioxolan 2-yl phénoxy/ benzaldéhyde de 200 cm3 de tétrahydrofuranne et de 10,09 g de 0,0diéthylterbutyloxycarbonylméthyl phosphonate, agite pendant 16 heures à 15uC, verse le mélange réactionnel dans l'eau, extrait à l'éther éthylique, concentre à sec par distillation sous pression réduite, chromatographie le résidu sur silice en éluant par un mélange d'hexane et d'acétate d'éthyle (8/2) et obtient 13,48 g de produit attendu. Spectre IR (chloroforme): 1 700 cm-1 C Il 1634cm- C=C0 I 634 cm-1 C = C 8 2593503 1 602 cm-1 1 590 cm-1 1 506 cm-i f aromatique 1 487 cm-1 982 cm-1 -CH = CH- spectre de RMN (CD C13) S c_ 4 1 / t j-.3-\,4po W5 3C ccH CC Stade C mélange de: diméthoxy méthyl 3(4 /b E (1,1-diméthoxy éthoxy) 1oxopropényl) phénoxy benzène et de méthoxy méthyl 3 (4 /lfE (1,1-diméthoxy éthoxy) 1-oxopropényl/ phénoxy) benzene. On méLange 1,5 g d'hydroxyde de palladium déposé sur sulfate de baryum à 5 % de palladium et 10 cm3 de méthanol, introduit une solution de 12 g de 2/3(4 / E (1,1-diméthyléthoxy 1-oxopropényl/phénoxy) phényl/ 1,3dioxolane, agite sous hydrogène pendant I heure et 15 minutes en absorbant 717 cm3 d'hydrogène, on filtre, concentre à sec le filtrat par distillation sous pression réduite, chromatographie le résidu sur silice en éluant par un mélange d'hexane et d'acétate d'éthyle (9/1) et isole 7, 16 g d'un mélange 50/50 des deux composés: Spectre IR (chloroforme): 1 605 cm-1 1 1 586 cm-1 1 506 cm-i j aromatique 1 483 cm-1 1 250 cm-1 iO--c 1 720 cm-1 C de C02 tBu 2o 1 369 cm-1 méthyle 9 2593503 I 147 cm-1 C-O- C Spectre de RMN (CD Cl3): /1 - io0 1 Coz to îo g4I4' pp --,42 p ^ CHP 2 OCK i- ,3) 3,oGpp > i cs5 1 r,3 152 2. I CO.t Z 3 1,(4Z pp' Stade D: 3/4/(1,1-diméthyléthoxy) 1-oxopropyL/phénoxy/benzaldéhyde. On mélange 6 g de mélange de composés obtenu au stade C, 30 cm3 d'acétone et 24 cm3 de solution aqueuse N d'acide chlorhydrique, ajoute une quantité d'acétone nécessaire pour obtenir une seule phase (soit 42 cm3), agite pendant 2 heures et 30 minutes à 20uC, verse dans l'eau, extrait au chlorure de méthylène, concentre à sec par distillation sous pression réduite, chromatographie le résidu sur silice en éluant par un mélange d'hexane et d'acétate d'êthyle (9/1) et obtient 2,77 g de méthoxy méthyl 3 (4 / Q E (1,1-diméthyléthoxy) 1-oxopropényl/phénoxy) benzene et 2,74 g d'aldéhyde attendu. Spectre IR (chloroforme): 2 740 cm-1 2820 cm-1 C-H 1 701 cm-1 C = 0 de CHO C = O de C02 tBu 1 720 cm-' 2593503 Spectre de RMN: 1,45 ppm H du ter butyle 2,38 à 3,1 ppm H de CH2 6,9 à 7, 65 ppm H aromatiques 10,01 ppm H de CHO. Stade E: /1R-(1 d (S), 3 d)/3-(2, 2-dibromoéthényl) 2,2-diméthyl cyclopropane carboxylate de cyano /3/4/3(1, 1-diméthyl éthoxy) 3-oxopropyl/phénoxy) phényle/méthyle et /1R-(1 cD (R), 3 i/ 3-(2,2-dibromoéthényl) 2,2-diméthyl cyclopropane carboxylate de cyano /3/4/3 (1,1-diméthyléthoxy) 3-oxopropyl/phénoxy/phényl/méthyle. On mélange 0,45 g de cyanure de sodium 0,0137 g de bromure de tétradécyl triméthyl ammonium, 8,22 cm3 d'eau, introduit à 20uC sous agitation vigoureuse un mélange de 2,74 g de 3/4/ (1,1-diméthyléthoxy) 1oxopropyl/phénoxy/benzaldéhyde obtenu au stade D, 0,0137 g de bromure de tétradécyl triméthyl ammonium, 2,74 cm3 de toluène et un mélange de 2,68 g de chlorure de l'acide 1R, cis 3-(2,2-dibrométhényl) 2,2-diméthyl cyclopropane carboxylique et de 2,74 cm3 de toluène, agite pendant 3 heures à 20cC, ajoute une solution aqueuse N d'acide chlorhydrique, jusqu'à pH = 7, décante, lave à l'eau la phase organique, extrait au toluène la phase aqueuse, concentre à sec les solutions tolu niques réunies par distillation sous pression réduite, chromatographie le résidu sur silice en éluant par un mélange d'hexane et d'acétate d'éthyle (9/1) et obtient 4,92 g de mélange brut des isomères (R) et (S). On chromatographie le mélange brut sur silice en éluant par un mélange d'hexane et d'éther isopropylique (7/3) et obtient 3 fractions. a/. 1,46 g de fraction contenant l'isomère R, b/. 2,64 g de fraction contenant un mélange des isomères R et S. c/. 0,395 g de fraction contenant l'isomère S. La fraction b) est à son tour purifiée par chromatographie sur silice en éluant par un mélange d'hexane et d'éther isopropylique (7/3) et obtient 2 fractions: d/ 0,67 g de fraction contenant l'isomère R e/ 1,66 g de fraction contenant l'isomère S il Spectre IR: (chLoroforme) isomère R isomère S A -I cO- cmi 1 736cm-1 Il i o cri 1 603cm-1 1 603cm-1 1 591cm-1 1 591cm-1 c 1 506H- 1 506cm-l CW2- I 487cm-l(max) 1 487cm-1(max) CH2-CO2tBu C 72m-1 722cm-1 Ii Me 1 370cm-1 1 370cm-1 C-O-C 1 148cm-1 1 148cm-1 Spectre RMN (CD Ct3) isomère R isomère S hydrogènes des méthyles géminés 1,31 ppm 1,2-1,25 ppm hydrogène de trBu 1,44 ppm 1,42 ppm les hydrogènes du cyclopropyle 1,82 à 2,18 ppm 1,75 à 2, 2 ppm les hydrogènes des CH2 de la chaîne alkyle 2,37 à 3,07 ppm 2,33 à 3, 0 ppm hydrogène de -CH-CN 6,33 ppm 6,37 ppm hydrogèneséthyléniques 6,65 à 6,7 ppm 6,63 à 6,77 ppm hydrogènes aromatiques 6,88 à 7,43 ppm 6,86 à 7,4 ppm Dichroisme circulaire: isomère R isomère S Max 4 230 nmA =-9 max vers 225 mnAL-= +11 Max 268 nmOS-= -0,4 max 285 mn Max 280 nmA/ = -0,45 A /-= + 0,4 Stade F: Acide 1R-/1 c( (R), 2 c// 4-/3/cyano//3-(2,2-dibromo- éthényl) 2,2-diméthyl cyclopropyl/carbonyl/oxy/méthyl/phénoxy/benzène propanoique. On mélange 1,1 g d'ester terbutylique de l'isomère R obtenu au stade précédent avec 55 cm3 de toluène, porte au reflux, ajoute 0,1 g d'acide paratoluène sulfonique, maintient le reflux pendant 30 minutes, refroidit, filtre, concentre à sec par distillation sous pression réduite, chromatographie le résidu sur silice en éluant par un mélange d'hexane et d'acétate d'éthyle (1/1) et obtient 0,93 g d'acide attendu. Spectre IR (chloroforme): 1 742cm-1 C ester lI 1 604cm-1 1 591cm-1t 1 509 cm- t aromatiques 1 487cm-1) 1 712cm-1 acide C dimère I Spectre RMN (CD Cl3) hydrogènes des méthyles géminés et du tBu 1,3 ppm hydrogènes du cyclopropyle (cis) 1,8 à 2,19 ppm les hydrogènes des CH2 de la chaÂne aLkyle 2,5 à 3,17 ppm hydrogène de -CH-CN 6,23 ppm hydrogène éthylénique 6,6-6,73 ppm hydrogènes aromatiques 6,88 à 7,43 ppm Exempte 2: acide 1R /lci (S), 2 c /14-/3-/cyanoi///2-(2,2-dibrono éthényl) 2,2-diméthyl cycLopropyt/carbonyl/oxy/méthyt/phénoxy/benzène propanolque. On mélange 1,805 g d'ester terbutylique (S) obtenu à l'exemple 1 avec 90, 25 cm3 de toluène, porte au reflux, ajoute 0,18 g d'acide paratoluène sulfonique, maintient le reflux pendant 30 minutes, refroidit, filtre, concentre à sec par distillation sous pression réduite, chromatographie le résidu sur silice en éluant par un mélange d'hexane et d'acétate d'éthyle (1/1) et obtient 1,33 g d'acide attendu. Spectre IR (chloroforme): 1 742 cm-1 c ester 1 604 cm-1 1 591 cm-1 1 509 cm-1 t aromatiques 1 487 cm-1 J 1 712 cm-1 acide C dimère 0I 4O 0 13 2593503 Spectre RMN (CO Cl3) les hydrogènes des méthyles géminés: 1,2-1,25 ppm les hydrogènes du cyclopropyle: 1,82 à 2,23 ppm les hydrogènes des CH2 de la chaîne alkyle 2,5 à 3,17 ppm hydrogène de -CH-CN 6,43 ppm hydrogène éthylénique 6,68 à 7,16 ppm hydrogènes aromatiques 6,97 à 7,7 ppm Exemple 3: /1R /lc, (S), 2 oa /4-/3-/cyano///3-(2,2-dibromo éthényl) 2,2-diméthyt cyclopropyl/carbonyl/oxy/méthylt/phénoxy/benzène N-/2-(2-iodo 125! 4-1H imidazoLyl) éthyl/propanamide. Stade A: Préparation de l'anhydride mixte en solution (solution A). On mélange sous argon 25 l de dioxane anhydre, 10 il de tri-n- butylamine dilué au 1/125 dans du dioxane anhydre et 10 Il de chloroformiate d'isobutyle dilué au 1/250 dans du dioxane anhydre, ajoute une solution de 150 4g d'acide 1R /1 c (S), 2 o\/4-/ 3-/cyano///2-(2,2dibromoéthényl) 3,3-diméthyl cyclopropyl/ carbonyl/ oxy/méthyl/phénoxy/benzène propanoique en solution dans 25 Rl de dioxane anhydre, maintient 30 minutes à 20xC sous agitation, dilue le mélange réactionnel par 125 >l de dioxane anhydre et obtient la solution A d'anhydride mixte. Stade B: Marquage de l'histamine On mélange à 20C 10 Rl de solution d'histamine base 2 mM dans du tampon au phosphate de sodium 0,5 M à pH.7, 4, 1 m Ci de 125 IN a, 10;l de solution aqueuse de chloramine T à 5 mg/ml, après 90 secondes, on ajoute 10 A l de solution aqueuse de métabisulfite de sodium à 25 mg/ml. Le milieu obtenu B est contrôlé par chromatographie (voir tableau A). Stade C: Condensation: Dans le tube contenant le milieu réactionnel B, on introduit Il de solution A d'anhydride mixte, conserve pendant 2 heures à 4mC. On obtient alors la solution C qui est analysée par chromatographie (voir tableau B). Stade D: Purification. Le milieu réactionnel C est purifié par HPLC sur une colonne Zorbax Golden Sil 100 x 7,5 nme 3 A m, lué par le mélange chloroforme-méthanol (92/8). La radioactivité de l'effluent est suivie grâce à un détecteur à cristal d'iodure de sodium Beckman 170 couplé à un enregistreur intégrateur. On obtient 4 pics (voir tableau 1). Seul le 14 2593503 pic 3 contient un antigène qui se Lie à un anticorps "antideltaméthrine". Les fractions contenant le produit immunoréactif sont réunies. La solution D (tableau C) obtenue est concentrée à sec sous argon, le résidu est additionné de 5 ml d'éthanol. On obtient environ 600 p Ci de conjugué radioactif. Le produit stocké à -30c C est stable pendant au moins 2 mois. IJrtedJn Jt la, VOCCUI;W Id FC3 -I Il &J. 4 1 21 - qt TEMf14PS, m t"uRST tffO;l 14rI.c dLw tv.%uR;Oj-T. CvdPlF0G Je -. SE COUS X Zo1 CtlJe, C1 ae; FUIR N*;t CuCI3 mr{eOR (8iIlt, "Vî); J; r-. lo POlt; EC-tauG,' 2s C2tt; -: '- K-W 11- 1 UV tVfto1-1 0,0? V;4tô>^,s\. tt i te o If O, l4 z,: T- -Taia Ctt&,c l'. I I Je, A: ?ûtaL.rs Je. úiVte Èez L ro(ç2s 1-etÉe,r "par" IBUGLo( If oo - u 0,33 0,41 b !252g12s o0,1c Il M ________________ _____________________ '-n L>4 Bt Ca &oiatÀf4Àfeu.e.' C r N-/2-(2-iodo 125 I 4-1H-imidazoLyl) éthyL/propanamide. Stade A: Préparation de l'anhydride mixte en solution (soLution A). On mélange, sous argon, 25 Al de dioxane anhydre, 10 Al de tri-n-butyL amine dilué au 1/125 dans du dioxane anhydre, 10 ALl de chLoroformiate d'isobutyle dilué au 1/250 dans du dioxane anhydre, ajoute 150 A g d'acide 1 R /1 i (R), 2 d /4-/3-/cyano///3- (2,2-dibromoéthényi) 2,2-diméthyl cycLopropyl/ carbonyl/oxy/méthyl/ phénoxy/benzène propanoique en solution dans 25 l L de dioxane anhydre, conserve pendant 30 minutes à 20OC, dilue Le mélange réactionnel par 125 4L de dioxane anhydre et obtient La solution A d'anhydride mixte. Stade B: Marquage de l'histamine On mélange à 20C 10 I L de solution d'histamine base 2 mM dans du tampon phosphate de sodium 0,5 M à pH 7,4, 1 m Ci de I Na, 10 4L de solution aqueuse de chtoramine T à 5 mg/ml, après 90 secondes, on ajoute 10 4L de solution aqueuse de métabisulfite de sodium à 25 mg/ml. Le milieu obtenu B est contr8lé par chromatographie (voir tableau A). Stade C: Condensation Dans le tube contenant le milieu réactionn3l B, on introduit 50 4L de solution A d'anhydride mixte, conserve pendant 2 heures à 4nC. On obtient alors la solution C qui est analysée par chromatographie (voir tableau B). Stade D: Purification. Le milieu réactionnel C est purifié par HPLC sur une colonne Zorbax Golden Sil 100 x 7,5 nm, 3 I m, éluée par le mélange chloroforme-méthanol (97/3). La radioactivité de L'effLuent est suivie grâce à un détecteur à cristal d'iodure de sodium Berthold. On obtient 4 pics (voir tableau I). Seul Le pic 3 contient un antigène capable de se lier aux anticorps "antideLtaméthrine". Les fractions contenant le produit immunoréactif sont réunies. La solution D (tableau C) obtenue est évaporée à sec sous argon. Le résidu est additionné de mL d'éthanol. On obtient 220 FCi de conjugué radioactif. Le produit stocké à -30u C est stable pendant au moins 2 mois. R o c Lio. e 1\ G k taa i i. & rL doeincs bws A.mi1 o Pt I t I s. 4 N. tI tV A C C q e.o0 'L c, Ca % CI k 0, 0o. ' "Ira, $,. -. I.' lx;. -'qrf" PL -.,., d;; 9hWjaoti6:ool;Mnu 1pb: ^fii lol.oc t av. Q Ic J O. s?. *1 I, C> o q CD 4e iC^^ A ODiS I o N ru Trc,,L..t,,,2, nJ Tah- w N o%n 0,35 d1 o c-\. CC-. c. L.. -- r %) O 'o cl,.A edol Svtar Cu Pars" îteA& Lae 211-x. Exemple 5: Conjugué d'albumine serique bovine et d'acide 1R /1 f (S), 2, 1/4-13-/cyanoll//3-(2,2-dibromo éthényl) 2,2-diméthyl cyctopropyt/carbonyL/oxylméthyl/phénoxy/benzène propanotque. Stade A: Préparation de l'anhydride mixte. On mélange 115,5 mg d'acide 1R/1 (S), 2 a 14-/3-/cyano/// 3-(2,2dibromoéthényl) 2,2-diméthyl cyclopropyl/carbonyl/oxy/méthyl/ phénoxy/benzène propanolque, 2 mL de dioxane anhydre, ajoute un mélange de 47 A L de tri-n-butyl amine et de 27 4l de chloroformiate d'isobutyle, agite pendant 30 minutes à 13cC. Stade 8: Préparation de La solution de BSA. On mélange 8 ml d'eau, 276 mg de BSA, 800 IL de dioxane, agite pendant 20 minutes à +4=C, ajoute 18 mL de dioxane, note la formation d'un précipité blanc laiteux qui disparait par addition de AL de solution aqueuse N de soude, ajuste le pH de la solution à 7,9-8,0. Stade C: Condensation. A la solution de BSA, on ajoute lentement à +4=C la solution d'anhydride mixte, note la formation d'un précipité laiteux. Le pH passe de 8,0 à 7,4, valeur à laquelLe il est maintenu durant 5 heures d'agitation à +4=C. Stade D: Purification. La solution laiteuse obtenue est mise à dialyser dans un boyau Visking 36/32 de 20 x 3 cm, contre 6 fois 5 Litres d'eau. Le résidu obtenu est lyophilisé durant 48 heures dans un appareil Usifroid SMH 015. On obtient 311 mg d'un solide blanc. Analyse: X Br 8,7 X N 11,9 Spectre UV, dichroisme circulaire: chromophore o absorbant dans la même région que la BSA, ce qui rend le dosage imprécis. Estimation: 6.10'5 mole/g de produit. ExempLe 6: conjugué d'albumine serique bovine et d'acide 1R /1 (R), 2 "14/3-1cyano///3-(2,2-dibromo éthényl) 2,2-diméthyl cycLopropyl/carbonyl/oxy/méthyL/phénoxylbenzène propanolque. 21 - 2593503 Stade A: Préparation de l'anhydride mixte. On mélange 115,5 mg d'acide 1R/1. (R), 2 ou /4-/3-/cyano/// 3-(2,2dibromoéthényl) 2,2-diméthyl cyclopropyl/carbonyl/oxy/méthyl/ phénoxy/benzène propanoique, 2 ml de dioxane anhydre, ajoute un mélange de 47 u l de tri-n-butyl amine et de 27 k l de chloroformiate d'isobutyle, agite pendant 30 minutes à 15=C. Stade B: Préparation de la solution de BSA. On mélange 8 ml d'eau, 276 mg de BSA, 800 Iul de dioxane, agite pendant 20 minutes à +4uC, ajoute 18 ml de dioxane, note la formation d'un précipité blanc laiteux qui disparait par addition de 4l de solution aqueuse N de soude, ajoute le pH de la solution à 7,9-8,0. Stade C: Condensation. A la solution de BSA, on ajoute lentement à +4nC la solution d'anhydride mixte, il y a formation d'un précipité laiteux. Le pH passe de 8,0 à 7,5, valeur à laquelle il est maintenu durant toute l'agitation (5 heures à +4C). Stade D: Purification. La solution laiteuse obtenue est mise à dialyser dans un boyau Visking 36/32 de 3 x 15 cm, contre 12 fois 5 litres d'eau. On obtient une suspension qui est lyophilisée durant 48 heures dans un appareil Usifroid SMH 015. On obtient 329 mg d'un solide blanc qui sera utilisé pour produire des anticorps par injection chez l'animal. Analyse: % Br 9,5 % N 11,5 22 2593503 REVENDICATIONS 1/. Produits marqués à l'iode 125.ou 131 de formuLe généraLe (I): SrX l 0-CH - t (I) r (C rCo dans LaqueLLe R représente Le reste d'un acide aminé R-NH2 ou te R reste d'un dérivé de ce dernier, ce reste possédant un groupe accepteur d'iode et étant marqué à L'iode 125 ou 131 2/. Produits selon La revendication 1, dans laquelLe R représente Le reste d'un acide aminé RNH2 ou Le reste d'un dérivé de ce dernier choisi dans Le groupe constitué par l'histidine, La tyrosine, L'histidinoL, L'histamine, La tyramine et Le tyrosinate de méthyLe marqués à l'iode 125 ou 131 3/. Le /1R /1 c S, 2c/ 4-/3-/cyano///3-(2,2-dibromoéthényl) 2,2-diméthyl cycLopropyL/carbonyL/oxy/méthyl/phénoxy/benzène-N-/2- (2-iodo 125I 4-1H-imidazolyL) éthyl/propanamide de formule: X Bru ce r5 f t c-O-7i _Htr -19_C C4h 4/. Procédé de préparation des produits définis aux revendications 1 à 3 caractérisé en ce que l'on-fait réagir un produit de formuLe B. ="; cZ-c: n crm_ C-O- H /c 00 avec un réactif fixateur d'un groupement activateur de la fonction carbonyte pour obtenir te produit--de formule (III): -C -0 -cfi)C _ O R dans laqueLle R1 représente un groupement activateur de la fonction carbonyLe que L'on fait réagir avec un acide aminé RNH2 possédant un groupe accepteur d'iode marqué à L'iode 125 ou 131 ou avec un dérivé de cet acide aminé et obtient te produit cherché de formule généraLe (I), que L'on purifie par des moyens physiques. 5/. Procédé selon La revendication 4, caractérisé en ce que L'acide aminé accepteur d'iode ou te dérivé d'acide aminé est choisi dans le groupe constitué par L'histidinet la tyrosine, L'histidinot, L'histamine, La tyramine et Le tyrosinate de méthyLe. 6/. Procédé seLon La revendication 4 ou 5 caractérisé en ce que: - on fixe sur La fonction acide un groupement activateur de la fonction carbonyle en faisant agir un halogénoformiate d'atcoyle en présence d'une base tertiaire, en mitieu anhydre et sous atmosphère inerte. - L'haLogénoformiate d'aLcoyte est te chtoroformiate d'isobutyLe et on opère en présence de tri-n-butyL amine. 7/. Procédé suivant L'une quelconque des revendications 4 à 6 caractérisé en ce que l'acide aminé ou son dérivé que l'on fait réagir avec te produit de formule (III) dans Laquelle R1 représente un groupement activateur de ta fonction carbonyte, est l'histamine marquée à L'iode 125 ou 131 ou son dérivé et que L'on opère sous atmosphère inerte. 8/. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 4 à 7 caractérisé en ce que L'on obtient le produit de formule: o o Àr - CtL \9 t"ç) _C - Nw 0/ -4 4iYq , 4ILS 9/. Application des produits tels que décrits aux revendications I à 3, aux études et aux dosages radioimmunulogiquesdu 1R, cis 2,2-diméthyl 3-(2,2-dibromo vinyl) cyclopropane - 1 - carboxylate de S - cyano 3- phénoxybenzyle non radioactif. 10/. A titre de produits intermédiaires nécessaires pour la préparation des produits de formule générale (I), seton les revendications I à 3 Les produits de formule (II) et (III): C-10e. \( ry C eh\ X cO -c - ( III) C -O-CH- o R1 représente un groupement activateur de la fonction carbonyle. 11/. Le produit répondant à La formule III de la revendication 10 dans lequel R1 représente te radical: H -CO-CH2-C-CH3 Il I 0 CH3 12/. Application du produit de formule (II) à la préparation d'antigènes, caractérisée en ce que l'on conjugue ce produit ou'une forme active de ce produit avec de L'albumine sérique bovine (B.S.A.) ou avec une autre protéine immunogène et obtient L'antigène cherché. 2593503 13/. Application selon la revendication 12, caractérisée en ce que l'on fait réagir Le produit de formule (II) o ' q/= A Ct -o --CH,, en vue de L'activation de la fonction carbonyle, avec un hatogéno- formiate d'aLcoyle, en présence d'une base tertiaire, en milieu anhydre et sous atmosphère inerte, pour obtenir l'anhydride mixte correspondant de formule générale (III): o(i" C-OR dans laquelle R1 conserve sa signification précédente, que l'on conjugue avec l'albumine serique bovine (B.S.A.) ou une autre protéine immunogène et obtient l'antigène cherché. 14/. Application selon la revendication 13 caractérisé en ce que l'halogénoformiate d'alcoyle est Le chloroformiate d'isobutyle et L'on opère en présence de tri-n-butyl amine et sous atmosphère inerte. - on fait réagir l'anhydride inerte de formule générale (III) avec l'albumine sérique bovine (BSA), ou une autre protéine immunogène en ayant préalablement dissout cette dernière dans un mélange eau-dioxane, sous atmosphère inerte. /. Antigènes constitués-par La conjugaison du produit de formule (II), avec de l'albumine serique bovine (B.S.A.) ou avec une autre protéine immunogène, à savoir les antigènes de formule (IV) et (V): ( v) __ X " C-0-c- - en ri m5n dans Laquelle n = 10 à 30 et: (V) _CH - r-4. NH j FAncne, dans LaqueLLe n' = 10 à 100. 16/. AppLication des antigènes seLon La revendication 15 à La préparation des anticorps.