FR 2586429 A1 19870227 FR 8512827 A 19850826 Depuis Pasteur, on sait que la production conjointe d'acétone et de butanol est réalisable par voie fermentaire grâce à la bactérie anaérobie: Clostridium acetobutylicum. L'utilisation de ce microorganisme capable de transformer des substrats aussi variés que le saccharose ou l'amidon a permis dans le passé le développement de procédés industriels sur mélasses de betteraves ou farine de mais. De nos jours, l'exploitation de ces procédés est pratiquement abandonnée en raison de la concurrence de la voie pétrochimique. Depuis quelques années, cependant, l'apparition de nouvelles technologies comme l'utilisation des enzymes a redonné à cette fermentation un regain d'intérêt en rendant réaliste l'utilisation de nouveaux substrats tels que les résidus lignocellulosiques. La présente invention a donc pour objet la conversion des composés lignocellulosiques tels que pailles de blé, tiges de mais, copeaux de bois en acétone et butanol par hydrolyse enzymatique et fermentation acétonobutylique. L'hydrolyse enzymatique effectuée par exemple avec les enzymes produites par Trichoderma reesei, Trichoderma viride, Trichoderma harzianum, Sporotrichum pulverulentum, conduit respectivement au glucose qui dérive de la cellulose et aux xylose, arabinose, acide glucuronique, qui dérivent des hémicelluloses, tandis que la fermentation acétonobutylique transforme ce mélange d'hexoses et de pentoses en mélange acétone-butanol. Pour améliorer son accessibilité aux enzymes fongiques, la biomasse lignocellulosique subit avantageusement un prétraitement, par exemple, une hydrolyse acide, un prétraitement dit d'explosion à la vapeur d'eau ou de préférence le traitement décrit dans la demande de brevet français 85 06 027 du 18 avril 1985 qui met en oeuvre une explosion à la vapeur d'eau en présence d'acide. Ce dernier traitement comprend un chauffage du substrat lignocellulosique en présence d'eau et d'acide sous presion superatmosphérique à une température d'au moins 150 C, suivi d'une détente de pression, permettant l'explosion des particules de substrat, le pH étant de préférence de 1 à 4. L'acidité peut être conférée, par exemple, par l'acide sulfurique, l'acide phosphorique, le sulfate acide de sodium, le sulfate acide de potassium ou le sulfate acide d'ammonium. Le traitement acide précité produit une cellulose d'accessibilité améliorée aux cellulases, et d'autre part un mélange de pentoses (xylose, arabinose) résultant de l'hydrolyse directe et quasi totale des hémicelluloses dans les conditions adoptées. Contrairement au prétraitement à la soude, il ne nécessite pas obligatoirement un lavage de la biomasse prétraitée et il conduit à d'excellents rendements d'hydrolyse. Les prétraitements acides ou d'explosion à la vapeur présentent en revanche l'inconvénient de produire des inhibiteurs de fermentation, en particulier de la fermentation acétonobutylique, dérivant peut-être de la dégradation de la lignine ou de certains sucres durant le prétraitement. Pour lever cette inhibition, certains auteurs comme YU et al (YU E.K.C., DESCHATELETS L., SADDLER J.N. (1984) Biotechnology letters, 6, 327-332) ont eu recours à l'extraction à l'eau du substrat prétraité. Ce lavage présente cependant l'inconvénient, comme dans le cas du prétraitement à la soude, d'entrainer, en même cemps que les inhibiteurs, une fraction non négligeable des pentoses ce qui entraine finalement une baisse notable du rendement global de la transformation. D'autres auteurs comme MADDOX et MURRAY (MADDOX I.S. and MURRAY A.E. (1983) Biotechnology letters 5, 175-178) ont préconisé un entraînement à la vapeur suivi d'un traitement au charbon actif ou bien un double passage sur résines anionique ou cationique. L'efficacité réelle de ces prétraitements reste toutefois limitée puisque la production de butanol ne dépasse pas 5,8 gl1. La technique de détoxification de l'hydrolysat utilisée par le demandeur dans la présente invention consiste à chauffer le milieu fermentaire en présence d'ion Ca++, Mg++ ou A1 +++. Ce préchauffage peut avantageusement consister en la stérilisation du milieu qui précède usuellement la fermentation. On préfère les ions'Ca++ et Mg++. Le pH est avantageusement de 3 à 11, de préférence 6 à 8. Les ions précités peuvent être ajoutés sous forme de composés quelconques, par exemple oxydes, hydroxydes ou sels, à la paille ou autre substrat prétraité et ou à l'hydrolysat dont le pH est ajusté (habituellement à environ 8). Dans ce cas, en effet, la stérilisation qui suit l'hydrolyse et précède la fermentation acétonobutylique a pour effet d'entraîner une baisse de pH de 1,5 unité environ ce qui rend le milieu stérile tout à fait adapté à la fermentation acétono- butylique (pH de départ entre 6 et 7). Celle-ci doit être conduite de manière connue à pH contrôlé (le pH de cette fermentation se situe habituellement entre 4 et 8) avec une régulation basique par exemple par addition d'ammoniaque pour éviter une acidification du milieu trop importante durant la phase de production des acides acétique et butyrique. Les ions Ca ++, Mg++ ou A1. peuvent être introduits également sous forme de carbonate, de nitrate, de chlorure, d'acétate ou d'autre sel avec une neutralisation de l'hydrolysat par une base soluble telle la soude, la potasse ou l'ammoniaque, cette dernière servant par la même occasion de source d'azote pour le microorganisme. Avec un carbonate, le contrôle du pH est superflu puisque les ions carbonates exercent un rôle tampon qui s'oppose à l'autoacidification. Les ions peuvent être introduits en proportion de, par exemple, 0,3 à. 10 g1-1. Le chauffage est effectué à une température de préférence supérieure à 50 C. La durée du chauffage ou de la stérilisation peut être variable, par exemple d'une minute à 10 heures, une durée de 10 à 60 minutes étant préférée. Au terme du chauffage ou de la stérilisation, un précipité est parfois présent; ce précipité peut être enlevé ou laissé sans inconvénient dans le milieu. En résumé, le procédé qui fait l'objet de la présente invention comprend les étapes suivantes: 1) La matière première lignocellulosique subit un prétraitement par la vapeur d'eau, ledit prétraitement étant de préférence un traitement "d'explosion" en milieu acide. 2) La matière première prétraitée est ensuite hydrolysée de manière connue par une composition enzymatique de cellulases produite par exemple par le champignon Trichoderma reesei. 3) L'hydrolysat est chauffé en présence d'ions calcium, magnésium et/ou aluminium. 4) On effectue de manière connue la fermentation acétonobutylique de l'hydrolysat ainsi préparé. L'hydrolysat peut être amené du pH d'hydrolyse à un pH légèrement alcalin par addition de chaux, ou de magnésie. Alternativement, on peut ajuster le pH au moyen d'un composé basique tel que la potasse, la soude, ou l'ammoniaque et ajouter à l'hydrolysat un sel de calcium ou de magnésium ou d'aluminium. Dans une variante de l'invention, on ajoute la chaux, la magnésie ou le sel de calcium, de magnésium ou d'aluminium avant l'étape d'hydrolyse enzymatique. Les exemples qui suivent illustrent le protocole d'hydrolyse et fermentation de paille de blé prétraitée à la vapeur. Le protocole décrit n'est pas lié à l'utilisation stricte de paille de blé mais convient également pour la transformation de tout autre substrat lignocellulosique tel que des tiges de mais ou des copeaux de bois. De même, l'hydrolyse enzymatique n'est pas liée spécifiquement à l'utilisation du complexe cellulasique produit par Trichoderma reesei. L'utilisation qui en a été faite repose à la fois sur les caractéristiques spécifiques du mélange d'enzymes produits, riches en hémicellulose et cellobiose et sur l'exceptionnelle capacité d'excrétion de cellulase de la souche utilisée (T. reesei CL 847). Exemple 1: traitement avec Ca++ 1) Prétraitement à la vapeur et hydrolyse enzymatique Le prétraitement à la vapeur et l'hydrolyse enzymatique ont été effectués selon le protocole décrit dans la demande de brevet français n 85 06 027. La paille de blé hachée a été trempée pendant 24 heures à température ambiante dans l'acide sulfurique 0,1 N. Apres essorage, celle-ci a été traitée pendant 2 minutes à la pression de 14 bars (195 C) et pH 1,6 dans un appareil discontinu de prétraitement d'explosion à la vapeur. L'hydrolyse enzymatique a été réalisée dans les conditions suivantes: concentration de substrat: 100 g (poids sec) par kg de suspension concentration de l'enzyme produite par Trichoderma reesei: 10 unités "papier filtre" par gramme de substrat - pH: 4,8 - agent de neutralisation Ca(OH)2 - température: 50 C; durée d'hydrolyse 24 heures L'hydrolysat obtenu renferme: glucose 48,7 gl 1, xylose 27,2 gl1 arabinose 2,9 gl -1, cellobiose 7,7 gl1-1 2) Préparation du milieu de fermentation et stérilisation en présence de Ca++ Dans un fermenteur de 6 litres de capacité, on introduit 3 litres d'hydrolysat, 1 litre d'eau de ville, 12 g (poids sec) de liqueur de macération de mais, 12 g de sulfate d'ammonium et 5,2 g d'acide acétique. On neutralise ensuite le milieu jusqu'à pH 8 avec un lait de chaux (environ 6 g de CaO) et on stérilise le fermenteur à llO C pendant 25 minutes. Après stérilisation, on maintient le fermenteur sous atmosphère d'azote stérile pendant toute la durée du refroidissement et on prélève stérilement dans un erlenmeyer de 350 ml de capacité, 200 ml de ce milieu qui serviront pour la préculture. 3) Culture en fermenteur On ensemence un tube de 10 ml de milieu RCM (Reinforced Clostridial Medium) avec 1 ml de suspension de la souche NCIB 6441 de Clostridium acetobutylicum dans son milieu de conservation. Après 17 heures d'incubation à 34 C en l'absence d'air, la culture obtenue est transférée dans l'erlenmeyer précité contenant 200 ml d'hydrolysat traité à la chaux. Après 9 heures de croissance en anaérobiose, cette culture sert d'inoculum au fermenteur. Au début de la fermentation, le pH baisse du fait de l'excrétion des acides acétique et butyrique. Lorsqu'il atteint la valeur 5,5, il est maintenu constant par addition d'ammoniaque. Après 60 heures de fermentation, on obtient 7,0 g11 d'acétone et ,5 g1-1 de butanol contre 0,4 g1-1 d'acide acétique et 1,0 g1-1 d'acide butyrique. 100 litres de gaz (H2 et C02) ont été produits. Exemple 2: traitement avec Mg 1) Prétraitement et hydrolyse L'hydrolysat est préparé dans les mêmes conditions que dans l'exemple 1 en remplaçant la chaux par la soude. L'hydrolysat obtenu à la composition suivante: glucose 49,1 g11, xylose 30,1 gl, arabinose 3,7 g11, cellobiose 11,2 2) Préparation du milieu de fermentation et stérilisation en présence de Mg" On introduit dans le fermenteur 3 litres d'hydrolysat, 1 litre d'eau de ville et 12 g (poids sec) de liqueur de macération de mats. Le milieu obtenu est neutralisé à pH 8,0 avec NH40H puis additionné de 12 g de MgCO3. Il est ensuite stérilisé à la température de 110 C pendant 25 minutes. Comme dans l'exemple 1, une partie aliquote de ce milieu est prélevée pour la préparation de l'erlenmeyer de préculture. 3) Culture en fermenteur La chaine d'ensemencement est identique à celle de l'exemple 1 et la fermentation est conduite sans régulation de pH. Apres 54 heures de fermentation, on obtient 7,9 gl1 d'acétone, et ,1 gl-1 de butanol contre 0,25 gl-1 d'acide acétique et 1,15 gl-1 d'acide butyrique; 103 litres de gaz ont été produits. Exemple 3: traitement avec A1+++ 1) Prétraitement et hydrolyse L'hydrolysat utilisé est identique à celui de l'exemple 2. 2) Préparation du milieu de fermentation traité avec A1+++ et stérilisation On introduit dans le fermenteur 3 litres d'hydrolysat, 1 litre d'eau de ville, 12 g (poids sec) de liqueur de macération de mats, 12 g de sulfate d'ammonium. Le milieu obtenu est neutralisé à pH 8,0 avec l'ammoniaque puis additionné de 12 g de sulfate d'aluminium. On stérilise et prépare le fermenteur comme dans l'exemple 1. 3) Culture en fermenteur Elle est réalisée comme dans l'exemple 1. Après 80 heures de fermentation, on obtient 6,5 gl-1 d'acétone et 9,8 gl1 de butanol, contre 0,4 gl 1 d'acide acétique et 0,4 gl-1 d'acide butyrique. 84 1 de gaz ont été produits. Exemple 4: absence de traitement de l'invention On opère comme dans l'exemple 2 si ce n'est qu'on neutralise à l'ammoniaque à pH 8,0 sans addition de MgCO3. Dans ces conditions aucune fermentation n'a lieu. Exemple 5: absence de prétraitement On opère comme dans l'exemple 4, si ce n'est qu'on effectue l'hydrolyse enzymatique sur un lot de paille qui n'a pas subi de prétraitement. Le milieu obtenu n'est alors pas fermentescible. Exemple 6: On opère comme dans l'exemple 1, si ce l'hydrolyse enzymatique avec une préparation (MIAXAZYM de GIST BROCADES) qu'on utilise à unités "Papier filtré par gramme de substrat. n'est qu'on effectue enzymatique commerciale la concentration de 10 L'hydrolysat obtenu renferme: glucose 42 g 1 1, xylose 24 g 1 1 arabinose 2,8 g 1 1, cellobiose 9,0 g 1. Après le traitement par les ions Ca++ et une fermentation d'une durée de 60 heures on obtient 6,0 g 1-1 d'acétone et 9,7 g 1-1 de butanol contre 0, 8 g 1-1 d'acide acétique, 1,5 g 1-1 d'acide butyrique. 90 litres de gaz ont été produits. REVENDICATIONS 1 - Procédé de production d'acétone et de butanol, dans lequel une matière lignocellulosique est soumise dans l'ordre, à un prétraitement par la vapeur d'eau et/ou par un acide, à une hydrolyse enzymatique par une celluloase et à une fermentation acétonobutylique du produit d'hydrolyse enzymatique, caractérisé en ce qu'après le prétraitement et avant la fermentation le milieu est chauffé à au moins 50 C en présence d'ions calcium, magnésium et/ou aluminium. 2 - Procédé selon la revendication 1, dans lequel le chauffage est inclus dans un traitement de stérilisation. 3 - Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel le chauffage est réalisé à pH de 6,0 à 8,0. 4 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel on opère en présence d'ions calcium et/ou magnésium. - Procédé selon la revendication 4, dans lequel les ions sont introduits sous forme d'hydroxyde ou de carbonate. 6 - Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, dans lequel le prétraitement est un traitement d'explosion par la vapeur d'eau sous pression à température d'au moins 150 C.