FR 2590445 A1 19870529 FR 8610417 A 19860717 - 1 - La présente invention concerne de manière générale des procédés génétiques utilisant des plants de mais et a plus précisément pour objet des procédés destinés à mettre au point et utiliser des semences de mais à sté- rilité mâle pour l'utilisation dans la production de mais hybride. Dans la production de mais aux Etats-Unis, la grande majorité des semences de mais utilisées par les agriculteurs est formée de variétés hybrides F1, obtenues par croisement simple. Les techniques industrielles classi- ques pour la production de semences de mais hybrides néces- sitent la réalisation de croisements prévisibles entre des plants parentaux mâles et femelles choisis précisément. Ainsi, des plants des lignées mâles et femelles concernées. sont plantés ensemble dans un champ de sorte que le pollen des plants parentaux mâles peut se répandre et polliniser les plants parentaux femelles. Ce procédé est facilité par le caractère hermaphrodite des plants de mais. Chaque plant possède des inflorescences mâles et des inflorescences femelles sépa- rées. Ainsi, afin de s'assurer qu'un croisement convenable est réalisé entre le plan parental mâle désiré et le plant parental femelle désiré, il est nécessaire de s'assurer que du pollen du plan parental femelle n'autopollinise pas ce même plant ou ne pollinise pas un plan parental femelle jumeau. Afin de s'assurer qu'une telle autopollinisation indésirable ou pollinisation de plants jumeaux ne se pro- duise pas, la pratique courante dans l'industrie consiste à éliminer physiquement l'inflorescence mâle des plants parentaux femelles concernés en supprimant manuellement les fleurs mâles des plants parentaux femelles. Bien que des dispOsitifs mécaniques soient à présent disponibles dans - 2 - la pratique pour éliminer les fleurs mâles des plants pa- rentaux femelles, en raison de la variabilité de taille des plants de mais dans un champ donné et de la nécessité de ne pas couper une trop grande partie du plant de mais, une opération mécanique n'est pas efficace, et ainsi le pro- cédé de suppression des fleurs mâles est effectué classi- quement à la main, procédé quelquefois associé à un dispo- sitif mécanique. Ce procédé est une activité très laborieuse et est concentré dans le temps, normalement dans une période de quatre à six semaines en Juin, Juillet ou Août, dans l'hémisphère nord, l'opération devant être effectuée à des intervalles rapprochés au cours de la période de floraison de la lignée pure de mais utilisée comme parent femelle. Cette opération de suppression manuelle des fleurs mâles est à la fois une opération difficile du point de vue logis- tique, en raison de la nécessité d' utiliser de grandes quantités de main d'oeuvre temporaire, et un procédé coûteux en raison du travail intensif nécessaire. En conséquence, des efforts considérables ont été faits depuis longtemps pour produire des plants de mais à sexe mâle stérile. L'expression stérilité mâle désigne de manière générale un plant dans lequel les inflorescences mâles sur le plant à maturité ne produisent aucun pollen viable, mais la plante conserve une capacité reproductrice femelle intacte. L'utilisation de plants de mais à sexe mâle stérile dans un système de production d'hybrides per- met d'éviter la nécessité de supprimer manuellement les fleurs mâles, puisque le seul pollen disponible pour les plants parentaux femelles concernés, à stérilité mâle, est le pollen produit par le plantparental mâle concerné. De cette manière, des croisements prévisibles peuvent être effectués afin de pouvoir obtenir une descendance hybride convenable pour la culture. Malheureusement, l'utilisation de plants de mais à sexe mâle stérile a présenté auparavant plusieurs inconvénients particuliers. - 3 - Il y a deux catégories de systèmes connus et utilisés actuellement pour conserver des souches de plants de mais à sexe mâle stérile. Un système est fondé sur un caractère de stérilité mâle appelé cytoplasmique ou non-nucléaire, et l'autre système est fondé sur l'héri- tage d'un caractère génique, ou nucléaire, pour maintenir la stérilité mâle. Le système de stérilité mâle cytoplasmique est fondé sur des gènes non contenus dans le noyau des cellules, d'o son nom. Ce système est dénommé plus correc- tement système cytoplasmique-nucléaire puisqu'il dépend à la fois d'un gène cytoplasmique et de l'absence de gènes nucléaires de rétablissement nour la stérilité mâle. Puisaue le matériel génétique cytoplasmique est transmis normalement exclusivement par le plan parental femelle chez le mais, et passe seulement très rarement, sinon jamais, par le pollen, l'utilisation d'un caractère cytoplasmique de sté- rilité mâle chez une lignée parentale femelle permet au pollen d'être apporté par un parent à sexe mâle fertile tout en obtenant une descendance formée de manière sûre de plants à sexe mâle stérile en raison de l'apport du gène cytoplasmique du parent femelle. Un système découvert pour l'utilisation de la stérilité mâle cytoplasmique afin de produire du mals hybride industriel est révélé dans le bre- vet des E.U.A. N 2 753 663. Pendant quelque temps, l'industrie de pro- duction de semences hybrides aux Etats-Unis a utilisé des lignées de mais à stérilité mâle cytoplasmique pour la pro- duction de semences de mais hybrides. Le type le plus cou- rant de stérilité mâle cytoplasmique a été appelé cytoplas- me Texas-Stérile ou T-Stérile. Cette stérilité cytoplasmique a été largement utilisée dans la production de plusieurs types et variétés de semences hybrides commerciales jusqu'en 1970 lorsqu'une épiphytie d'une race d'Helminthosporium maydis de type T est apparue, provoquant une forme d'Helmin- - 4 - thosporiose du mais chez la plupart des plants à sexe mâle stérile et des hybrides produits à partir de ces plants, existant alors. Cet événement a convaincu de nombreux sélectionneurs de mais que la stérilité mâle cytoplasmique constituait un mécanisme inapproprié par nature pour obte- nir des plants à sexe mâle stérile puisque les différences entre le cytoplasme normal et celui portant la stérilité mâle semblaient affecter intrinsècuement non seulement la fertilité du pollen mais tout aussi bien la sensibilité aux maladies. En outre, les dégâts importants causés par l'appa- rition de cette épiphytie ont suscité une répugnance géné- rale à l'utilisation de lignées à stérilité mâle cytoplas- mique en raison des craintes des utilisateurs concernant la réapparition d'une épiphytie chez d'autres lignées à stéri- lité mâle cytoplasmique. A ce jour, deux autres lignées à- stérilité mâle cytoplasmique ont été identifiées. Désignés types C et S, ces types ont des problèmes de stabilité et de stérilité inhérents aux lignées pures en plus de la répu- gnance normale de l'utilisateur et du sélectionneur à se servir d'un système de stérilité mâle cytoplasmique. L'autre base pour la stérilité mâle chez les plants de mais est la stérilité mâle génique dans la- quelle les gènes nucléaires du plant de mais provoquent la stérilité mâle. De nombreux travaux ont été effectués sur l'identification des gènes de stérilité mâle chez le mais et, à ce jour, au moins dix-neuf mutations géniques nuclé- aires pouvant provoquer la stérilité mâle sont connues. Voir la liste des gènes de stérilité mâle, par exemple, dans la colonne 15 du brevet des E. U.A. N 3 861 079. Dans chaque caractère transmissible entraînant la stérilité mâle connu jusqu'à présent, la stérilité est déterminée par un seul gène, et l'allèle pour la stérilité mâle est récessif. La possibilité d'utilisation de lignées à stérilité mâle géni- que existe depuis longtemps pour les producteurs de semences hybrides mais ne s'est pas révélée d'utilisation très - 5 - pratique. Le problème lié à l'utilisation de lignées à stérilité mâle génique classiques est qu'il est impossible par nature de conserver une souche naturelle qui soit homo- zygote pour l'allèle récessif engendrant la stérilité mâle. La raison à cela est simplement que des plants de la lignée sont incapables de produire le pollen nécessaire à l'auto- pollinisation ou la pollinisation de jumeaux homozygotes pour l'allèle récessif. Bien sûr, il est possible d'effec- tuer une pollinisation croisée entre des plants à sexe mâle stérile homozygotes pour l'allèle de stérilité mâle réces- sif et des plants à sexe mâle fertile qui sont hétérozygo- tes pour le gène de stérilité mâle, c'est-à-dire ayant dans leur paire de gènes un allèle de fertilité mâle et un allè- le de stérilité male (Ms/ms). La descendance de ce croise- ment donnerait approximativement 50 % de stérilité mâle et 50 % de fertilité mâle. Ainsi, s'il était envisagé d'utiliser des plants provenant d'une lignée à stérilité mâle génique simple comme souches parentales femelles dans un schéma de fécondation croisée, le mieux qui puisse être attendu est que 50 % de la descendance destinée à l'utili- sation pour la production de semences hybrides possède un sexe mâle stérile. Par conséquent, une opération de suppres- sion des inflorescences mâles est nécessaire, dans tous les cas, pour éliminer les inflorescences mâles des 50 % res- tants des plants. La suppression des inflorescences mâles étant ainsi de toute manière nécessaire dans un champ o on utilise ce procédé, il y a peu d'avantages commerciaux à utiliser ce procédé, qui n'est pas largement utilisé actuellement. Une autre approche pour l'obtention de plants à stérilité mâle génique destinés à être utilisés dans la pro- duction de semences hybrides a été étudiée. Une technique développée par Patterson utilise des translocations réci- proques et diverses formes de délétions et de duplications - 6 -2590445 pour la production de souches à sexe mâle stérile. Ce procédé est décrit en détail dans les divulgations des brevets des E.U.A. N 3 710 511 et N 3 861 079. Ce procé- dé ne nécessite pas une description détaillée dans le présent mémoire, sauf pour suggérer que l'approche qu'il utilise pour produire des plants à stérilité mâle génique diffère complètement de l'approche proposée dans le présent mémoire, bien que l'objectif de ces deux approches soit la production de plants à stérilité mâle génique, par opposi- tion à la stérilité cytoplasmique, pour la production de semences hybrides. Le procédé de la présente invention utilise un exemple d'une classe d'éléments génétiques connus sous le nom d'éléments transposables. Les éléments transposables sont des éléments génétiques qui peuvent spontanément se transposer d'un locus à un autre sur un chromosome ou à n'importe quel endroit sur tout autre chromosome situé dans le génome de la plante. Des éléments transposables ont été tout d'abord identifiés chez le mais, dans le travail pré- curseur du Dr Barbara McClintock. Plusieurs systèmes d'élé- ments transposables ont été identifiés initialement par le Dr! Clintock, puis par d'autres. Des éléments transposables ont été identifiés à pré- sent chez d'autres espèces, comprenant des bactéries et des animaux, mais sont mieux caractérisés chez le mais. Parmi les systèmes d'éléments transposables identifiés par McClintock, le système particulièrement intéressant pour la Demanderesse est le système Suppresseur- mutateur (Spm)(McClintock,1955). Le même système a été iso- lé indépendamment par Peterson (1953) qui a appelé les composants facteur d'accroissement (, et inhibiteur (I). Le Spm est un élément capable de transposition (autonome) qui code l'information permettant son excision d'un endroit dans le génome et sa réintégration à un autre endroit. Il affecte l'expression de tout locus dans lequel il s'insère. Un second composant peut également être présent, constituant un système à deux éléments. On a montré que ce second - 7-- composant est un Spm défectif dans lequel une portion de la séquence d'ADN du Spm a été perdue par délétion (Pereira et al, 1985) et qui a perdu simultanément l'aptitude à cataly- ser sa propre transposition, mais dont la transposition peut être induite lorsqu'un Spm est présent dans le génome. Ce dérivé de Spm défectif vis-àvis de la transposition a été diversement désigné récepteur de Spm, Rs et I. Ce second composant est désigné dans le présent mémoire Spm défectif (dSpm), puisque son origine est connue à présent du point de vue moléculaire, et également facteur récepteur (Rs), ce qui définit son rôle fonctionnel. Ces Spms défectifs peuvent se transposer d'un locus à un second locus lorsqu'un Spm actif est pré- sent dans le génome. En l'absence de Spm, un dSpm est inté- gré de manière stable dans un locus dans lequel il peut ou non affecter le phénotype de la plante homozygote pour ce locus (McClintock, 1965). Lorsqu'un Spm est présent dans le génome, il supprime toute activité de tout locus dans lequel un dSpm a été inséré, produisant de ce fait un phénotype mutant (nul) jusqu'à ce que le dSpm réponde à un signal de trans-activité du Spm en étant excisé du locus. Si la sur- venance de cette excision rétablit l'organisation normale du locus dans une cellule, cette cellule et sa descendance clonale auront un phénotype non-mutant (type normal ou type sauvage). La possibilité existe qu'un dSpm puisse être intégré dans un locus de telle manière qu'un phénotype non-mutant soit produit en l'absence d'un Spm actif, mais en présence d'un Spm actif, l'activité du gène est supprimée et un phénotype mutant est obtenu, cela étant particulièrement important pour ce procédé de production de semences hybrides. Le sys- tème d'éléments transposables doit être utilisé comme un interrupteur destiné à arrêter l'activité du gène et pro- duire des plants à sexe mâle stérile lorsque cela est sou- haité pour les besoins de la production de semences hybri- des. -2590445 - 8 - A ce point de vue, il est souhaitable, oien que probablement non nécessaire, de produire et d'utiliser un Spm qui possède une activité mutatrice atténuée ou nulle afin de supprimer la possibilité qu'une excision catalysée par le Spm d'un dSpm intégré dans un allèle Ms (et produi- sant un phénotype de stérilité mâle en présence d'un Spm actif) puisse se produire suffisamment tôt au cours du développement de la plante pour produire des zones mâles fertiles dans les inflorescences mâles. Ainsi, on désire des éléments Spm qui soient eux-mêmes partiellement défec- tifs en ayant perdu l'activité mutatrice mais en conservant l'activité de suppression. McClintock a décrit ces Spm partiellement défectifs. La présente invention est caractérisée en ce que des semences de mais sont produites qui, par culture, donnent des plants de mais à sexe mâle stérile génétiquement stables, semences de mais qui comprennent dans leur génome: un facteur de suppression capable d'activer un facteur ré- cepteur situé autre part dans le génome; un allèle de sté- rilité mâle, et un allèle de fertilité male mutant par inser- tion, allélique avec l'allèle de stérilité mâle et muté. par - l'insertion dans cet allèle d'un facteur récepteur relati- vement à l'allèle de fertilité mâle de manière à permettre la fertilité du sexe mâle en l'absence du facteur de suppres- sion et la suppression de la fertilité mâle en présence du facteur de suppression. Un objectif de la présente invention est également de proposer un procédé de production de semences de mais à sexe mâle stérile qui comprend les étapes consis- tant à polliniser des plants de mais homozygotes pour la stérilité mâle à un locus de stérilité mâle choisi et homo- zygotes pour un facteur de suppression situé à un autre endroit de son génome avec du pollen provenant de plants de mais homozygotes pour un allèle de fertilité mâle mutant au même locus de stérilité mâle choisi, l'allèle de fertilité - 9 - mâle mutant étant muté en y insérant un facteur récepteur de suppression efficace pour supprimer l'expression de l'allèle de fertilité mâle en présence du facteur de suppres- sion dansle génome, et à récolter les semences produites à partir des plants homozygotes à sexe mâle stérile. Un objectif de la présente invention est de produire et d'utiliser dans la production des semences de mais hybrides des plants à sexe mâle génétiquement stérile qui soient stables, stériles en toute sécurité, et non sen- sibles par nature à une activité pathogène. Un autre objectif de la présente invention est de produire et d'utiliser des plants de mais à sexe mâle stérile dans un système de sélection dont la stérilité puisse être transférée à n'importe quelle lignée consanguine de mais désirée. Encore un autre objectif de la présente inven- tion est de proposer un tel procédé pour la production de plants à stérilité mâle génique dans lesquels la stérilité mâle est étroitement liée à la coloration de l'endosperme, ou à un autre phénotype des semences aisément reconnaissable, de manière à permettre une sélection optique aisée des semen- ces à sexe mâle stérile. D'autres objectifs, avantages et caractéris- tiques dela présente invention apparaîtront dans la descrip- tion en détail suivante et les exemples proposés ci-après. Le système décrit dans le présent mémoire est destiné à permettre aux phytogénéticiens d'obtenir et de faire reproduire en toute sécurité du mais à stérilité mâle génique en utilisant les composants du système d'éléments transposables Spm (Suppresseur-mutateur) dans un procédé coordonné dans lequel les souches parentales qui sont repro- ductibles et aptes à être conservées peuvent être utilisées directement pour produire une descendance à stérilité mâle génique pour la production de mais hybride. Il est nécessai- re que les deux souches parentales particulières possèdent - 10 - des allèles particuliers pour un locus de stérilité mâle choisi. Une des deux souches parentales, comme cela est décrit, porte une copie défective du système d'éléments transposables, qui fonctionne comme récepteur, tandis que l'autre souche parentale porte une copie de l'élément suppresseur-mutateur total, bien que de préférence avec un mutateur inactif. Le système révélé dans le présent mémoire comprend une méthodologie pour la production des deux souches parentales nécessaires à partir de la même lignée consanguine de mais afin que les plants à sexe mâle stérile puissent être produits en toute sécurité à partir de cette unique lignée consanguine de mais et ainsi qu'une lignée de mais particulière ou, par extension, toute autre lignée consanguine de mais puisse être utilisée pour la production de mais hybride comme souche parentale femelle, en gardant intact le reste de son génome. Le procédé destiné à utiliser les souches parentales pour la production de plants à sexe mâle stérile est également décrit dans le présent-mémoire. Le procédé de production des souches paren- tales nécessaires pour obtenir du mais à sexe mâle stérile commence par la création d'un allèle de fertilité mâle mu- tant par insertion. Pour produire cet allèle, il est tout d'abord nécessaire de choisir un système d'éléments trans- posables et un locus de stérilité mâle devant être utilisés. Le système d'éléments transposables doit comprendre deux éléments fonctionnels qui peuvent être localisés séparément dans le génome de la plante. Un élément fonctionnel est un facteur récepteur qui, s'il est inséré convenablement, est capable d'empêcher l'expression d'un allèle dans lequel il est placé lorsque, et seulement lorsque, un facteur de suppression fonctionnel séparé est localisé quelque part ailleurs dans le génome de la plante. Chacun de ces élé- ments fonctionnels est, en réalité, une copie complète ou défective de l'élément Spm, le facteur récepteur étant dé- fectif pour la fonction de suppression et les deux éléments - 11 - ayant de préférence des mutateurs inactifs. Le Spm défectif (dSpm) fonctionnant comme facteur récepteur doit être con- venablement inséré dans l'allèle de fertilité mâle pour obtenir la stérilité mâle contrôlable désirée. Il est déterminant, comme on le verra plus en détail ultérieurement, que le facteur de suppression soit capable de commander le facteur récepteur pour empêcher l'expression du gène de fertilité mâle lorsque le facteur de suppression est situé dans le génome. L'utilisation du système Spm pour obtenir un facteur récepteur et un facteur de suppression permet d'empêcher l'expression du gène lors- que le récepteur est convenablement inséré sans tenir compte de l'endroit o se trouve le facteur de suppression dans le génome. Actuellement, étant donné les limitations des connaissances actuelles sur les éléments transposables dans le mais, parmi les systèmes d'éléments actuellement connus, seul le système Spm est capable de fonctionner dans le pro- cédé de la présente invention. Cependant, il faut bien com- prendre que d'autres éléments transposables peuvent être découverts dans le mais et qu'il peut bien sûr exister d'au- tres systèmes d'éléments qui possèdent deux composants capa- bles de remplir les fonctions des éléments Spm révélés conformément à la présente invention. Des systèmes similai- res peuvent également être utilisables chez d'autres plantes en agriculture ou en horticulture. Ainsi, bien que la pré- sente invention soit décrite particulièrement en détail en ce qui concerne le système d'éléments transposables suppres- seur-mutateur Spm chez le mais, il faut s'attendre à ce que. d'autres systèmes d'éléments transposables similaires, s'ils sont identifiés ultérieurement, puissent également être utilisés dans le cadre de la présente invention chez le mais de même que chez d'autres plantes. Il est également nécessaire au début de l'utilisation de ce procédé de choisir un locus de stéri- lité mâle à utiliser dans le système. Actuellement, quel- 2590445. - 12 - ques dix-neuf loci chromosomiques différents de gènes de stérilité mâle ont été identifiés. Pour tous les loci de stérilité mâle connus, des allèles récessifs conditionnent la stérilité mâle et un allèle dominant conditionne la fertilité mâle. La présente invention peut utiliser n'impor- te lequel de ces loci. La présente invention est décrite dans le présent mémoire avec une application particulière au locus de stérilité mâle ms1. Le locus msI a été choisi pour l'utilisation dans le procédé de la présente invention car il est fortement lié à un gène déterminant la colora- tion de l'endosperme dans les semences du mais. Cette liai- son étroite, qui permet seulement environ 0,5 % de recom- binaison, peut être utilisée dans le procédé de l'invention pour mettre en corrélation un gène de stérilité mâle réces- sif avec une coloration particulière de l'endosperme.et peut être utilisée pour choisir commodément des plants homozygotes à sexe mâle stérile par une sélection conve- nable de la coloration de l'endosperme. Cependant, il faut bien comprendre que d'autres loci de stérilité male peuvent également être utilisés dans la présente invention. Le schéma de production de maîs hybride décrit dans le présent mémoire, utilisant le système Spm et la liaison à la coloration de l'endosperme, nécessite des souches parentales particulières possédant des allèles de stérilité mâle et des allèles de fertilité mâle en un même locus de stérilité mâle. Les lignées nécessaires sont les suivantes: (A) msy Sp msy Sp (B) Msy Sp ms Y Sp (C) Ms(Rs) Y Ms(Rs) Y lignées dans lesquelles Sp désigne un Spm avec de préfé- rence la déficience d'un mutateur actif (et fonctionnant - 13 - ainsi seulement comme facteur de suppression) et Ms(Rs) désigne un dSpm possédant un facteur de suppression inactif (et fonctionnant ainsi seulement comme facteur récepteur) qui est inséré dans l'allèle Ms de sorte que l'expression du gène est inhibée lorsqu'un facteur de suppression Spm est présent à un endroit quelconque du génome. Les lignées (A) et (B) sont croisées et sélectionnées avec la coloration jaune de l'endosperme (en ignorant temporairement les recombinaisons) pour obtenir une souche msy Sp ms Y Sp qui est croisée avec la lignée (C) pour obtenir en propor- tions égales les souches suivantes: msy Sp et ms Y Sp Ms(Rs) Y - Ms(Rs) Y - Toutes les semences de cette génération présentent la stérilité mâle et peuvent être utilisées pour la production de semences hybrides par croisement avec n'importe quelle lignée parentale mâle désirée. Dans ces plantes, l'allèle Ms(Rs) est inactivé par la présence du facteur de suppression Spm empêchant l'expression de l'allèle de fertilité mâle. Des recombinaisons au cours du croisement des lignées A et B obligent à éliminer quelques plants indésirables à sexe mâle fertile et entrainent la produc- tion de quelques grains blancs (> 1 %). A titre d'alternative au procédé ci-dessus, il est également possible de croiser directement (A) et (C) pour obtenir en totalité une souche msy SP Ms(Rs) Y - qui puisse être utilisée comme souche parentale femelle dans la production de semences hybrides. Ce procédé a pour résultat l'obtention d'une quantité supérieure de grains blancs au cours de l'étape de production et peut être ainsi moins souhaitable. -14- Avant de pouvoir commencer la produc- tion de semences hybrides, il est donc tout d'abord néces- saire de produire les souches parentales en décelant le transfert d'un facteur récepteur dans une lignée de mais portant un Spm au locus de stérilité mâle choisi. Des plants à sexe mâle stérile sont utilisés comme souche parentale femelle pour le croisement avec une souche portant un Spm. Il faut s'attendre à ce que la génération F1 obtenue par ce croisement possède une fertilité mâle intacte car chacun des plants doit être hétérozygote pour les allèles de fertilité mâle et de stérilité mâle (Ms/ms) au locus de stérilité mâle désiré. Cependant, les transpositions provo- quées par le système Spm doivent entraîner une stérilité mâle chez un faible pourcentage des plants F1, et ces plants F1 à sexe mâle stérilepeuvent avoir une copie entière ou défective du système Spm à l'endroit du locus de stérilité mâle. Par le tri des plants F1 à sexe mâle stérile, on doit obtenir quelques plants qui portent le dSpm désiré, fonc- tionnant comme facteur récepteur au locus de stérilité mâle désiré. Pour vérifier l'insertion du dSpm au locus désiré, les plants F1 à sexe mâle stérile peuvent être croi- * sés avec un fond génétiquement uniforme pour obtenir le gène muté au locus de stérilité mâle désiré dans une souche de plants uniforme. Puis des plants de cette souche (F1) peuvent être croisés en retour avec la souche à sexe mâle stérile (ms1Spm/ms1Spm) et le résultat attendu du croisement peut être comparé au résultat réel pour déterminer si l'allèle muté est effectivement affecté par le système Spm. Si l'allèle de stérilité mâle est la souche obtenue par une mutation de stérilité mâle au hasard, alors l'auto-fécondation de la descendance (auto-fécondation Fl') et le croisement d'épreuve (Fl' x mslSpm/mslSpm) donnent une descendance devant conduire à environ 25 % et 50 % de sté- rilité mâle. Cependant, si la stérilité mâle est due à la présence de l'insertion d'un dSpm dans l'allèle de fertilité mâle, alors la des- cendance de l'auto-fécondation (Fl' autofécondée) est une descendance à sexe mâle fertile en l'absence de Sp et la descendance du croisement d'épreuve (Fl' x ms1Spm/ms1Spm) donne 50 % ou 100 % de stérilité mâle - 15 - selon que le plant Fl' était hétérozygote (Ms (Rs)/Ms) ou homozygote (Ms(Rs)/Ms(Rs) pour l'allèle muté. Si une autre copie non défective du Srm est présente dans la génération Fl', alors les résultats peuvent varier entre ces extrêmes. Une fois déterminé qu'une copie de dSpm fonctionnant comme récepteur est située au locus de stéri- lité mâle choisi de manière appropriée, il est alors des plus utiles de tenter d'éliminer ou d'inactiver partielle- ment le mutateur de toutes les copies du système Spm dans les souches utilisées, et en particulier de la souche des- tinée à la sélection et apportant la fonction de suppres- seur. Cela peut être effectué séparément à partir de la lignée-souche utilisée pour produire le gène de stérilité mâle muté en partant directement de la lignée bronze muta- ble-13, ou d'une autre lignée-souche portant un Spm, et en sélectionnant à partir de plants de la descendance trans- posée qui présentent une répression mais qui sont généti- quement stables. A cette étape du procédé, il y a deux lignées importantes de plants. Une lignée de plants contient une copie de dSpm fonctionnant comme récepteur, insérée à un locus de stérilité mâle souhaité, et l'autre lignée-souche doit être homozygote pour la stérilité mâle au même locus avec une copie de Spm fonctionnant comme suppresseur (de préférence avec un mutateur inactive) située également en un autre endroit du génome de la plante. L'étape suivante consiste à transférer ces deux composants à une lignée con- sanguine de mais appropriée désirée pour l'utilisation dans la production de mais hybride. La lignée consanguine est utilisée comme parent récurrent et la lignée portant le récepteur au locus de stérilité mâle désiré est utilisée comme parent non-récurrent. Des croisements en retour sont effectués sur la lignée consanguine parentale jusqu'à ce que le gène de stérilité mâle muté soit transféré à la lignée consanguine de fond. La descendance issue des croise- ments en retour peut être croisée avec une souche d'épreuve - 16 - consistant en la lignée homozygote à sexe mâle stérile conte- nant un composant suppresseur fonctionnel, pour sélectionner des plants hétérozygotes pour la fertilité mâle et pour l'allèle de fertilité mâle muté portant la fonction du récep- teur du dSpm. Comme mentionné précédemment, pour utili- ser une lignée consanguine dans la production de mais hybride suivant le procédé de l'invention, il est nécessaire d'avoir deux souches de générations parentales,l'une avec le gène de fertilité mâle muté et l'autre avec une fonction de suppresseur de Spm contenue dans le génome de la plante qui est par ailleurs de la lignée consanguine. En recommençant avec la souche de lignée consanguine, qui est de nouveau utilisée comme parent récurrent, une lignée homozygote à sexe mâle stérile contenant le suppresseur de Spm dans son génome en un endroit autre que le locus de stérilité mâle est utilisée comme parent non- récurrent. Une souche d'essai consistant en plants à sexe mâle stérile contenant le récepteur de Spm est utilisée pour isoler les plants désirés qui sont des plants homozygotes à sexe mâle stérile contenant le compo- sant suppresseur du système Spm. Telle que décrite ci-dessous, l'utilisa- tion du locus ms1 permet d'utiliser un gène Y1 de coloration de l'endosperme comme marqueur pour la stérilité mâle de manière telle que la sélection du marqueur lié permet d'aug- menter considérablement la proportion de la descendance à sexe mâle stérile. Le procédé décrit en détail ci-dessus a pour but la production de trois souches originelles qui peuvent être identifiées de la manière suivante: (1) msy Spm msy Spm (2) Ms y Spm ms Y Spm (3) Ms(Rs) Y Ms(Rs) Y 2590445' - 17 - souches dans lesquelles ms est un allèle récessif condi- tionnant la stérilité mâle, Ms est un allèle dominant qui conditionne la fertilité mâle, Y est récessif et conditionne la coloration blanche de l'endosperme, Y est dominant et conditionne la coloration jaune de l'endosperme; Spm est la fonction de suppresseur de Spm (de préférence une copie complète de Spm avec un mutateur inactif) et Ms(Rs) est un allèle de fertilité mâle muté ayant la fonction de récepteur de Spm (c'est-à-dire une fonction de suppression de la défi- cience de dSpm) située dans le gène de fertilité mâle. Ces souches sont celles produites dans le procédé tel que dis- cuté jusqu'ici. Les souches (1) et (2) sont conservées par croisement avec des souches de maintenance. La souche (1) est conservée en croisant msy/Msy et Spm/Spm, croisement qui donne le même nombre de plants homozygotes à sexe mâle stérile ms1/ms1) désirés et de plants hétérozygotes à sexe mâle fertile (Msl/msl) à rejeter. La souche (2) est conser- vée en croisant msY/MsY et Spm/Spm, croisement qui donne également le même nombre de plants à sexe mâle fertile St de plants à sexe mâle stérile, les plants à sexe mâle fertile étant conservés. Pour utiliser ces souches dans la pratique, (1) est tout d'abord croisée avec (2) pour obtenir essentiellement Msy Sp et msy Sp msy SP msY Sp Les semences des plants à sexe mâle fertile peu- vent alors être triées et rejetées d'après la coloration blanche de l'endosperme. Le taux de recombinaison de 1 % peut avoir pour résultat le rejet de quelques plants msy Sp et msy Sp peut également avoir pour résultat quelques plants (c est-à- dire 1 %) de génotype MsY sp qui échappent à l'examen en msy Sp raison de leur endosperme de coloration jaune. Ces plants doivent être éliminés dans le champ avant émission de leur pollen, mais puisqu'ils sont très peu nombreux, la rentabi- lité de l'opération doit être tolérable. La fertilité mâle - 18 - des plants est facilement apparente dans le champ avant émission du pollen, les panicules des plants à sexe mâle stérile au locus ms1 étant facilement identifiables. Les plants homozygotes à sexe mâle stérile obtenus sont alors croisés avec la souche (3). Tous les plants de la descendance sont hétérozygotes, avec des pro- portions égales des souches suivantes: ms Sp et ms Y Sp Ms(Rs)Y - Ms(Rs)Y - Toutes les semences obtenues par ce croi- sement sont jaunes et tous les plants provenant des semences de cette souche possèdent un phénotype de stérilité mâle. La présence d'une copie de Spm active comprenant une fonc- tion de suppresseur dans le génome de la plante entraine le fonctionnement du dSpm comme facteur récepteur pour empe- cher l'expression de l'allèle de fertilité mâle dans lequel il est inséré, avec pour résultat la stérilité mâle. Les semences de cette souche de mais peuvent alors être utili- sées dans la production de mais hybride en effectuant un croisement simple avec un plan parental mâle MsY de n'impor- te quelle autre souche parentale de lignée consanguine. Toutes les semences hybrides F1 de ce croisement sont plei- nement fertiles en agriculture. EXEMPLE 1 Transposition de la fonction de récepteur Spm au locus ms1. On a obtenu une lignée-souche de départ de semences de mais mixtes homozygotes pour l'allèle récessif de sté- rilité mâle au locus msl et hétérozygotes pour la stérilité au mêne locus. La lignée a été conservée en croisant des plans hétérozygotes pour la fertilité mâle avec des plans homozyqotes pour la stérilité mâle. La seconde lignée-souche de départ utilisée est désignée bronze-mutable 13. Cette lignée a été identi- fiée auparavant par un des inventeurs. Nelson & Klein, Genetics, 1984. Cette lignée possède un récepteur (Rs) du système Spm situé au niveau du locus pour le pigment de - 19 - couleur bronze de l'aleurone (Bz). L'allèle bronze mutable obtenu, appelé bz-m13, conditionne la production globale de pigment en l'absence de Spm mais est supprimé et forte- ment susceptible de mutation lorsqu'une copie de Spm com- plète est située autre part dans le génome. Les semences de cette lignée étaient hétérozygotes au locus bz et possé- daient une copie active de Spm à un autre endroit du géno- me, tel que mis en évidence par une coloration bigarrée des semences. Toutes les semences de cette lignée étaient probablement homozygotes pour des allèles de fertilité mâle fonctionnels à tous les loci de stérilité mâle, y compris ms1. Des plants obtenus à partir des grains de cette lignée ont été autopollinisés continuellement pour conserver cette lignée. On a fait pousser ces deux souches jusqu'à maturité. Par des semis échelonnés, les plants des deux lignées ont été synchronisés afin qu'ils arrivent à maturité sexuelle en même temps. Les inflorescences femelles (styles) des plants à sexe mâle stérile ont été fertilisées avec du pollen de la lignée Spm, bronze-mutable 13, c'est-à-dire msI x Ms1 (Rs) s_ ms1 MS1 {Rs) Spm On a fait pousser jusqu'à maturité les se- mences F1 résultant de ce croisement, en Floride au cours de l'hiver 1982-3 et dans le Wisconsin au cours du prin- temps 1983. Lorsque les plantes ont commencé à fleurir, leurs panicules ont été examinés en ce qui concerne la stérilité totale ou partielle du pollen, visuellement ou bien en colorant le pollen avec du carmin acétique. Sans transposition, il faut s'attendre à ce que tous les plants F1 possèdent un sexe mâle fertile puisqu'ils sont hétéro- zygotes au locus de stérilité mâle (Msl/msl). Cependant, dans le cas d'une transposition d'une fonction de récepteur de SPm (Rs) à un allèle dominant au locus ms1, le récepteur - 20 - supprime la fonction du gène en présence du composant suppresseur de Spm, au même locus ou bien à un autre endroit du génome. Dans certaines insertions, la fonction de récepteur de Spm (Rs) peut empêcher l'expression du gène proprement dit sans tenir compte de la présence ou de l'absence du suppresseur de Spm, ce qui n'est pas accep- table puisque l'expression du gène en l'absence du suppres- seur de Spm est désirée. Des plants à sexe mâle stérile ont été identi- fiés dans la génération F1 tant dans les cultures du Wis- consin que dans celles de Floride. Bien que certains de ces plants aient possédé probablement un dSpm, ou une copie du Spm total, au locus ms1, il existe également une cer- taine teneur de mutation spontanée et certains facteurs non génétiques qui peuvent entraîner une stérilité mâle. Afin d'établir la transposition du Rs au locus de stérilité mâle, les plants à sexe mâle stérile ont été croisés avec W64A, une lignée consanguine classique. Ce croisement a amené l'allèle potentiellement maltrisable dans un fond généti- que uniforme connu, et la descendance a été alors auto- fécondée et un croisement d'épreuve a été également effec- tué avec des souches d'essai homozygotes pour la stérilité mâle (msl/msl; Spm/Spm). Si les plants F1 présentaient la stérilité mâle due à une mutation spontanée, cette auto- fécondation produirait 25 % de plants à sexe mâle stérile puisqu'elle croiserait un hétérozygote à sexe mâle stérile/ fertile avec lui-même, et le croisement d'épreuve produi- rait 50 % de plants à sexe mâle stérile puisqu'il croise- rait un plant hétérozygote avec un plant homozygote. Si les plants F1 présentaient la stérilité mâle due à l'insertion d'une fonction Rs de Spm dans le locus ms1, alors la des- cendance de l'auto-fécondation et du croisement en retour de quelques plants F1 x W64A serait intégralement fertile puisque quelques-uns auraient perdu le suppresseur de Spm, permettant de ce fait l'expression du gène, Des plants - 21 - provenant du croisement F1 x W64A qui engendrent une des- cendance intégralement fertile ont été identifiés. Cepen- dant, un résultat similaire serait également observé si des plants F1 présentaient une stérilité mâle à cause de facteurs non génétiques ou à cause de plants ayant une copie complète de Spm au locus ms1 capable de s'exciser d'elle-même au cours du développement de la plante si le mutateur de Spm était encore actif. Pour les visualiser, des plants provenant du croi- sement F1 x W64A ont été auto-fécondés et un croisement d'épreuve a été effectué avec une souche d'essai de plants homozygotes pour la stérilité mâle portant le suppresseur de Spm. La descendance de ce croisement serait fertile à 50 % au moins si la stérilité initiale était due à des facteurs non génétiques, mais la stérilité mâle serait d'environ % ou 100 % si le Rs est dans le locus ms1 selon que le plant sur lequel le croisement d'épreuve a été effectué était homozygote ou hétérozygote pour l'insertion de la fonction Rs dans le locus ms1. EXEMPLE 2 Un procédé similaire à celui de l'exemple 1 a été suivi et est à une étape similaire, sauf en ce qui concerne la sélection effectuée pour le Rs au locus ms2 avec la souche d'essai de plants homozygotes pour la sté- rilité mâle (ms2/ms2 Spm/Spm). EXEMPLE 3 Identification des éléments Spm qui ont perdu leur activité mutatrice. Deux souches de semences ont été utilisées: A. bz-m13 (sans Spm); et bzm13 B. bz + Spm bz Spm - 22 - Les grains provenant de la lignée A sont uni- formément rougeâtres en l'absence de la fonction de suppres- seur de Spm (c'est-à-dire une autre copie de Spin). Les grains de la lignée B ci-dessus ont une couleur bronze uniforme. Des plants des lignées A et B ont été croisés au cours de l'été 1983 dans le Wisconsin en utilisant la lignée A comme souche parentale femelle. Des épis provenant de la descen- dance de ce croisement ont été examinés en ce qui concerne les grains de couleur bronze solide, étant escompté qu'en l'absence de mutation ces grains possèdent l'allèle muté bz-m13 activement supprimé (raison pour laquelle ils ne sont pas rouges) mais possèdent un mutateur inactif comme le suggère l'absence de clones de cellules colorées. Des grains avec un mutateur faible, indiqués par une faible diversité de couleurs (apparaissant tardivement et avec une fréquence faible), ont été identifiés sur ces épis et la présence du mutateur faible a été confirmée en les croisant en retour avec des souches de la lignée A comme souche parentale femelle. Ces plants avec un composant mutateur faible mais présentant toujours le composant suppresseur de Spm, sont à présent croisés en retour continuellement avec la souche de la lignée A à grande échelle pour identifier des grains dans lesquels le Sp a perdu totalement l'activité mutatrice, mais en conservant la fonction de suppresseur de Spm. De cette manière, il est possible de produire une lignée de mais comprenant la fonction de suppresseur de Spm avec une fonction mutatrice inactivée de sorte que la fonction de suppresseur de Spm soit stable, et de transférer alors la fonction de suppresseur de Spm seule à une autre lignée par les procédés mentionnés ci-dessous. EXEMPLE 4 Transfert de la fonction de récepteur (Rs) de Spm au locus ms1 à des lignées pures souhaitées. Une fois l'insertion de la fonction de récep- teur Rs (en réalité une copie de dSpm) dans le locus de - 23 - stérilité mâle désiré identifiée avec certitude, il est alors souhaitable de transférer cet allèle de fertilité male muté -la lignée consanguine désirée devant être utilisée pour la production de semences hybrides. Ce procédé peut être mis en oeuvre en utilisant les souches suivantes: A. Lignée consanguine désirée, par exemple W64A B. Une lignée avec la fonction de récepteur (Rs) de Spm (un dSpm) insérée au locus ms1 de sorte qu'elle ne conditionne pas la stérilité en l'absence de la fonction de suppresseur de Spm, ou bien avec le composant Spm complet dans une autre portion du génome. Les lignées produites dans les exemples 1 et 2 ci-dessus sont convenables. C. Une souche d'essai de plants homozygotes à la stérilité mâle au locus désiré et portant un système Spm complet (de préférence sans le composant mutateur) à un autre endroit de son génome. Puisqu'il n'est pas important qu'une fonction de récepteur (Rs) soit située à un autre locus dans la souche d'essai, on utilise une lignée dou- blement mutante (ms/ms; bz-m13/bz-ms13), dans laquelle l'allèle bz-m13 sert d'indication de la présence de Spm. Ce procédé comprend fondamentalement le croi- sement de la souche A, utilisée comme parent récurrent, avec la souche B utilisée comme parent non récurrent, la descendance obtenue étant croisée en retour avec le parent récurrent pendant cinq ou six générations. La descendance du premier croisement en retour, appelée BC1, et des croi- sements en retour suivants, sont alors croisés avec la lignée C pour sélectionner les plants portant l'allèle de stérilité mâle contenant une fonction de récepteur de Spm. Au cours de l'étape finale, la descendance des croisements en retour est autopollinisée pour obtenir des plants homo- zygotes pour l'allèle muté. L'essai des plants homozygotes est effectué avec la souche d'essai, puisque des croisements de l'allèle homozygote portant le récepteur avec la souche d'essai, lignée C ci-dessus, donnent une progéniture à sté- rilité mâle totale tandis que des plants hétérozygotes - 24 - ms/Ms croisés avec la souche d'essai produisent une des- cendance présentant 50 % de fertilité mâle. EXEMPLE 5 Transfert du composant suppresseur à la lignée consanguine désirée. Une souche consanguine ayant la fonction de suppres- seur de Spm stable, appelée Sp, a été produite dans l'exem- ple 3 ci-dessus. Ce peut être de nouveau un dSpm tant que l'activité de suppression est maintenue, ou une copie com- plète de Spm, bien que la déficience d'activité mutatrice soit préférée. Afin d'utiliser le gène de stérilité mâle muté dans la production de plants hybrides, il est à pré- sent nécessaire de transférer ce suppresseur à la lignéecon- sanguine désirée devant être utilisée dans le procédé. Cette étape nécessite les souches suivantes: A. La souche consanguine désirée, par exemple W64A. B. ms_ Y p ms1 l C. La souche d'essai suivante: ms1 bz-m13 (sans Spm) ms1 bz-m13 Ce procédé comprend le croisement des souches A et B, puis le croisement de la descendance obtenue, à la fois avec A comme parent récurrent et avec la lignée C comme croisement d'épreuve pour identifier et sélectionner le génotype désiré. Le procédé est répété sur cinq ou six générations de croisements en retour pour obtenir la cons- titution génétique de la lignée consanguine désirée de la souche A. Au cours de l'étape finale, la descendance est auto- fécondée et les souches désirées sont sélectionnées en croisant la descendance avec la souche d'épreuve pour véri- fier la présence du constituant suppresseur. - 25 - EXEMPLE 6 Production de semences à sexe mâle stérile. La production de semences à sexe mâle stérile nécessite les trois souches suivantes, dont tous les carac- tères sont transférés dans la lignée de fond désirée qui est la souche parentale femelle dans la production de mais hybride. A. ms1Y Sp mslY Sp B. MslY Sp ms1Y Sp C. Ms1 (Rs) Y Ms1 (Rs) y La production de semences présentant la stérilité mâle débute par le croisement des lignées A et B, la lignée A étant la lignée parentale femelle. Le résultat de ce croisement, sans tenir compte des recombinaisons, consiste en 50 % de chacun des génotypes suivants ms1y Sp Ms1y Sp ms1y Sp ms1Y Sp qui sont respectivement à sexe mâle stérile avec un endo- sperme jaune et à sexe mâle fertile avec un endosperme blanc. Quelques recombinaisons peuvent également être impliquées, pouvant engendrer des grains homozygotes pour la stérilité mâle et homozygotes pour la coloration blanche, ou bien des grains hétérozygotes pour la fertilité mâle et hétérozygotes pour la coloration jaune. Dans tous les cas, il faut noter qu'en général les plants hétérozygo- tes pour la stérilité mâle, ou les grains présentant la fer- tilité mâle provenant du croisement ci-dessus, sont blancs tandis que les grains présentant la stérilité mâle sont jaunes. En consequence, un tri optique des grains peut être décidé pour conserver essentiellement seulement les grains homozygotes pour la stérilité mâle, tels qu'ils sont sélec- - 26 - tionnés pour la coloration. En consequence, par un tri optique des résultats de ce croisement, les semences à sexe mâle stérile peuvent être sélectionnées. La recombinaison peut avoir pour résultat quelques génotypes "sexe mâle fertile-coloration jaune", mais cela représente dans tous les cas moins de 1 % du nombre total des plants et ces plants pourront être éliminés aisément sur le terrain avant que leur pollen soit émis, ce qui peut être facilement effectué sur le terrain en raison des différences d'aspect du panicule. EXEMPLE 8 AccroissEnent de production de la semence hybride présentant la stérilité mâle. Afin de reprendre les résultats de l'exemple 7 ci-dessus et d'augmenter la quantité de semences présen- tant la stérilité mâle de manière suffisante pour une pro- duction de semences à grande échelle, le procédé suivant est adopté, en utilisant de nouveau les trois souches d'ori- gine telles que mentionnées dans l'exemple 7 ci-dessus. Les plants de la lignée A de l'exemple 7 sont croisés avec des plants de la lignée C de l'exemple 7, la lignée A étant utilisée comme lignée parentale femelle. Ce croisement donne en proportions égales les deux souches suivantes: ms1y Sp mSy SpY Ms1(Rs)Y - Msl(Rs)Y - Comme on peut le constater, ces deux souches présentent la stérilité mâle car la fonction de suppresseur de Spm active la fonction de récepteur située dans l'allèle de fertilité mâle mutant pour empêcher l'expression de l'allèle de fertilité mâle. Tous les grains sont jaunes. Par conséquent, tous les grains de cette génération peuvent être recueillis et engendrent des plants à sexe mâle stérile. - 27 - EXEMPLE 9 Production de semences hybrides. Tous les grains sont recueillis, tels que produits dans l'exemple 8 cidessus, et sont semés. Tous les plants présentent la stérilité mâle et peuvent être utilisés comme souche parentale femelle dans la réalisation d'un croisement avec n'importe quelle lignée consanguine parentale mâle choisie. Les semences produites par la souche parentale femelle sont les semences hybrides F1 qui peuvent être vendues aux agriculteurs et tous les plants présenteront une fertilité mâle et femelle en admettant que le parent mâle à la génération hybride est homozygote pour la fertilité mâle. Une conséquence de l'utilisation de l'allèle y comme marqueur est qu'il faut s'attendre à ce qu'environ 1/64 de la production dans la culture possède des grains blancs. Cela ne doit pas prêter à objection. Comme on peut le constater d'après les exem- ples ci-dessus, ce procédé peut être mis en oeuvre avec n'importe quelle lignée consanguine de mais existante, et bien que des manipulations importantes soient impliquées dans le transfert et la production des souches appropriées dans la lignée consanguine, toutes ces manipulations concernent seulement un des deux parents potentiels de l'hybride dé- siré, c'est-à-dire la souche parentale femelle, et aucun remaniement particulier n'est nécessaire pour le parent donneur mâle de la génération de mais hybride. Des semences de mais de la lignée bronze- mutable 13 ont été déposées à l'American Type Culture Collection, à Rockville, Maryland,E.U.A (ATCC) et sont ainsi disponibles. La disponibilité de ces semences ne doit pas être interprétée comme une licence pour la mise en pratique de la présente invention en contravention avec les droits accordés sous l'autorité de tout gouvernement conformément à ses lois concernant les brevets. Le numéro de dépôt dans l'ATCC est le N 40189. - 28 - REVENDICATIONS 1. Procédé de production de semences de mais à stérilité mâle génique caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant: à polliniser tout d'abord des plants de mais homozygotes pour la stérilité mâle à un locus de stérilité mâle choisi et également homozygotes pour un facteur de suppression à un autre locus dans son génome avec du pollen provenant d'autres plants de mais homozygotes pour un allèle de fertilité mâle muté par insertion, allèle avec le locus de stérilité mâle et muté en y insérant un facteur récepteur de transposition dont la relation avec l'allèle de fertilité mâle est choisie de manière à permettre la fertilité mâle en l'absence du facteur de suppression et à éviter la ferti- lité mâle en présence du facteur de suppression; et à récolter les semences produites sur les plants homozygotes pour la stérilité mâle. 2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que les éléments fonctionnels facteur de suppression et facteur récepteur sont des'éléments ou des copies complètes du système d'éléments transposables Spm. 3. Procédé suivant la revendication 2, caractérisé en ce que le mutateur du Spm est atténué ou inactivé. 4. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le locus de stérilité mâle est choisi dans le groupe comprenant les loci de stérilité mâle ms1 et ms2. 5. Procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce que le locus de stérilité mâle ms1 est utilisé et l'allèle pour la stérilité mâle est lié à un allèle dominant pour la coloration jaune de l'endosperme de sorte que la coloration de l'endosperme peut être utilisée pour visualiser des semences à stérilité mâle dans un croisement de plants homozygotes pour la stérilité mâle avec des plants hétérozygotes pour la fertilité mâle. - 29 - 6. Procédé de production de mais hybride au moyen d'un parent à stérilité mâle génique,caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant: à sélectionner une première lignée de mais homozygote à un locus de stérilité mâle choisi et portant un facteur de suppression dans son génome-; à sélectionner une deuxième lignée de mais homozygote pour un allèle de fertilité mâle muté par inser- tion, allélique avec le locus de stérilité mâle et muté en y insérant un facteur récepteur dont la position par rapport à l'allèle de fertilité mâle est choisie de manière à per- mettre à l'allèle de fertilité mâle de conditionner la fertilité mâle en l'absence du facteur de suppression et empêcher l'expression de la fertilité mâle en présence du facteur de suppression; à polliniser des plants de la première lignée avec du pollen des plants de la deuxième lignée et à récolter les semences produites sur les plants de la première lignée; à cultiver lesdites semences pour produire des plants de mais matures possédant la stérilité mâle; à polliniser lesdits plants possédant la sté- rilité mâle avec du pollen de plants possédant la fertilité mâle d'une troisième lignee de mais sélectionnée; et à récolter les semences produites sur les plants à stérilité mâle. 7. Procédé suivant la revendication 6,caractérisé en ce que les éléments fonctionnels, facteur de suppression et facteur récepteur, sont des copies défectives d'éléments, ou bien des copies complètes du système d'éléments trans- posables Spm. 8. Procédé suivant la revendication 7, caractérisé en ce le mutateur du sytème Spm est atténué ou inactive. 9. Procédé suivant la revendication 6, caractérisé en ce que le locus de stérilité mâle est choisi dans le groupe comprenant les loci ms1 et ms2. - 30 - 10. Procédé suivant la revendication 8,caractérisé en ce que le locus de stérilité mâle ms1 est utilisé et l'allè- le pour la stérilité mâle est lié à l'allèle dominant pour la coloration jaune de l'endosperme de sorte que la colora- tion de l'endosperme peut être utilisée pour visualiser des semences à stérilité mâle d'un croisement de plants homo- zygotes pour la stérilité mâle avec des plants hétérozygotes pour la fertilité mâle, et comprenant en outre après ladite première étape de pollinisation et avant ladite étape de culturele tri des semences à coloration jaune de l'endo- sperme associée à la stérilité mâle. 11. Procédé suivant la revendication 6, caractérisé en ce que la première lignée et la deuxième liqnée de mais sont produites à partir de la même lignée consanguine de mais originelle.