FR 2594334 A1 19870821 FR 8602332 A 19860220 La présente invention concerne une nouvelle préparation injectable à base d'amoxicilline. L'amoxicilline est un antibiotique de la famille des bétalactamines, dont l'intérêt thérapeutique est connu depuis longtemps. Des compositions pharmaceutiques à base d'amoxicilline pour administration orale peuvent être préparées aisément sous toutes les formes habituelles telles que par exemple gelules, comprimés ou autres compositions destinées à l'absorption orale. Contrairement à celà, les préparations injectables de telles compositions nécessitent l'emploi de dérivés solubles d'amoxicilline et d'un solvant approprié, qui peut être l'eau. Aussi, les sels solubles d'amoxicilline, tels que notamment le sel sodique ont été utilisés jusqu'à présent pour la réalisation des préparations injectables. Cependant, de telles solutions présentent une stabilité limitée et sont donc difficiles à préparer industriellement avec une pureté satisfaisante car les sels sonDt dégradables. De plus, l'injection par voie intramusculaire des préparations en solution aqueuse est douloureuse et irritante pour le tissu. Il s'est donc avéré nécessaire d'adjoindre à ces solutions un anesthésique. Cependant, le choix d'un anesthésique local à utiliser pour rendre l'injection supportable est très limité, notamment en raison de l'incompatibilité des sels d'amoxicilline avec certains types d'anesthésiques. C'est ainsi qu'on connaît une préparation injectable à base d'amoxicilline contenant de l'alcool benzylique en tant qu'anesthésique local. Cette préparation doit être injectée immédiatement après la reconstitution. Cependant, ce produit a un titre bas et la teneur globale en produits de décomposition et impuretés est élevée, et peut atteindre 10%. De plus, il faut pratiquer plusieurs injections d'antibiotique par jour pour maintenir les concentrations sériques nécessaires. En outre, l'alcool benzylique bien que efficace contre la douleur, provoque néanmoins lors de l'injection intramusculaire des irritations locales. Du fait des difficultés rencontrées avec les solutions injectables connues, notamment à base de sel sodique d'amoxicilline, il fallait donc envisager une formule alternative. La présente invention a pour objet de résoudre les problèmes précités en proposant une composition pharmaceutique qui soit facile à injecter, qui présente une bonne pureté et stabilité dans le temps et qui lutte efficacement contre la douleur locale lors de l'injection sans provoquer d'irritation. La solution proposée par la présente invention, pour résoudre ce problème consiste en une composition pharmaceutique injectable à base d'amoxicilline, caractérisée en ce qu'elle comprend du trihydrate d'amoxicilline en suspension dans un véhicule ou milieu liquide approprié. On a en effet découvert d'une manière surprenante que la tolérance locale à l'injection d'une suspension de trihydrate d'amoxicilline était meilleure que celle d'une solution aqueuse de sel sodique d'amoxicilline. L'administration parentérale des suspensions rencontre une opinion à priori défavorable et est généralement réservée aux produits ne pouvant être solubilisés dans des véhicules usuels, l'objection portant sur la mauvaise tolérance locale à l'injection. C'est pourquoi jusqu'à présent, on utilisait uniquement des dérivés solubles d'amoxicilline, et il n'y avait pas lieu pour l'homme du métier de s'orienter vers des dérivés d'amoxicilline, tels que le trihydrate, mis en suspension dans un milieu liquide. Selon une caractéristique particulière de l'invention, la taille des particules du trihydrate d'amoxicilline dans la suspension est choisie de façon à permettre l'injection de la composition. Avantageusement, cette taille est comprise entre environ 1 et 25 microns et est de préférence de l'ordre de 5 microns. Selon une autre caractéristique particulière, la concentration du trihydrate d'amoxicilline dans la suspension est comprise entre environ 0OOmg activité/ml et 700 mg activité/ml et est de préférence comprise entre 200 et 500 mg activité/ml. Selon encore une autre caractéristique de l'invention, le trihydrate d'amoxicilline est sous forme micronisée dans le solvant. La micronisation est 2C particulièrement avantageuse du fait que la conformation des particules obtenues est tout à fait compatible avec les contraintes de l'injection. L'invention sera mieux illustrée à la lecture de la description explicative qui va suivre, faite en référence aux expériences et observations données ci-après uniquement à titre d'exemple. L'algie locale après injection subplantaire chez le rat, la tolérance locale à l'injection intramusculaire chez le lapin et la biodisponibilité chez le chien d'une suspension aqueuse de trihydrate d'amoxicilline micronisée, selon l'invention, ont été étudiées en comparaison avec une solution aqueuse de sel sodique d'amoxicilline. Le véhicule choisi pour la comparaison est l'eau qui est le milieu liquide le plus simple, et également le moins coCteux. Cependant, tout autre milieu liquide usuel approprié peut être utilisé sans sortir du cadre de l'invention. Le trihydrate d'amoxicilline a été micronisée par passage sur un appareil Christo Jet Mill dans des conditions strictement définies et reproductibles. Cette technique connue est décrite par exemple par G. BOULLAY (Colloque APGI Dec. 1984). L'analyse granulométrique de la poudre obtenue révèle la répartition des tailles de particules suivante: environ 80% des particules ont une taille inférieure à 5 microns; environ 10% des particules ont une taille comprise entre 5 et 10 microns; environ 10% des particules ont une taille comprise entre 10 et 20 microns. Comme mentionné précédemment, la micronisation du trihydrate d'amoxicilline est avantageuse car elle permet de surmonter la plupart des contraintes de l'injection de la suspension selon l'invention. Il est cependant bien entendu que d'autres techniques peuvent être utilisées, comme par exemple le microbroyage ou broyage prolongé. L'intégrité du principe actif, après ce traitement, a été vérifiée, de façon conventionnelle, par dosage et recherche des impuretés. La poudre obtenue a été mise en suspension dans de l'eau par simple agitation. La suspension obtenue est homogène et facilement administrée par une seringue. Deux suspensions distinctes ont été préparées, à des concentrations respectives de 200 mg activité/ml et 500 mg activité/ml, exprimées en terme d'amoxicilline sous forme d'acide libre anhydre. Expérience 1: Algie à l'injection. L'algie à l'injection a été étudiée chez le rat femelle de souche OFA selon la technique de E. CELOZZI, V.J. LOTTI, E.O. STAPLAY et A.K. MILLER décrite dans J. of Pharmaceutical Methods 1980, Volume 4, pages 285 à 289. Des lots de rats pesant de 60 à 80g ont reçu les quatre préparations suivantes: - amoxicilline trihydrate/eau pour préparation injectable (500 mg activité/ml); - amoxiciline trihydrate/eau pour préparation injectable (200 mg activité/ml); - sel sodique d'amoxicilline/eau pour préparation injectable (500 mg activité/ml); - sel sodique d'amoxicilline/alcool benzylique à 3% (500 mg activité/ml). L'alcool benzylique est ici utilisé comme anesthésique local. 0,1 ml de chacune des solutions et suspensions précitées est injecté dans le tissu subplantaire de la patte. La douleur causée par l'injection est évaluée par le test du réflexe de léchage de la patte du rat. On compte le nombre de léchages de la patte, consécutifs à l'injection, par intervalle de 3 minutes sur une durée de minutes. On définit le léchage de la patte comme suit: léchage suivi du détournement de la tête ou 5 secondes de léchage ininterrompu. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 1. Tableau 1. Algie locale après injection subplantaire chez le rat N Nombre moyen de léchages pendant des intervalles de 3 minutes 0-3 3-6 6-9 9-12 12-15 0-15 2Amoxicilline Na g 25 15,3 7,6 1,4 1,2 0,7 26,2 2 ml eau distillée Amoxicilline Na I 9 + 2 ml alcool benzylique 9 0 0,1 0 0 0 0,1 3% Amoxicilline microniséeli + 2 ml eau distillée 10 0,2 0,1 0 0 0 0,3 Amoxycilline micronisée 1. + 5 meau distillée 5 0,2 0,2 0 0 0 0,4 + 5 ml eau. distillée N = Nombre d'animaux O) I.rl L0 Lm avec un anesthésique local. Expérience 2: Tolérance à l'injection intramusculaire Ces expériences ont pour but d'étudier l'irritation musculaire provoquée au point d'injection et l'évolution dans le temps des lésions observées. Le test est pratiqué chez 12 lapins Néo-zélandais adultes (élevage Froxfield Farms Hampshire). Ces lapins sont répartis en 3 lots de 4; la région dorsolombaire est rasée, et ils subissent chacun 6 injections intramusculaires simultanées dans les muscles sacrospiraux d'un volume de 0,5 ml, des compositions ?, suivantes: - eau pour préparation injectable (E) - alcool benzylique à 3% (B) - amoxicilline sodique/alcool benzylique à 3% (C + B) (concentration de 200mg activité/ml) - amoxicilline trihydrate/eau (200 mg activité/ml) (A + E) - amoxicilline trihydrate/alcool benzylique à 3% (A + B) (200 mg activité/ml). Les trois groupes de lapins sont sacrifiés respectivement 2,5 et 14 jours après les injections. On procède ensuite à l'examen macroscopique des sites d'injection. Les lésions sont mesurées et reçoivent un score en fonction de leur intensité définie comme suit: 0: pas de modification 1: atteinte très légère 2: atteinte modérée 3: atteinte marquée. Les résultats individuels de cet examen macros- copique sont rapportés dans le tableau 2. Les échantillons représentatifs de chaque site d'injection sont alors prélevés, inclus en paraffine, coupés à 5 micromètres,colorés à l'hemalunphloxine-safran et font l'objet d'un examen histologique habituel, dont les résultats sont donnés ci-après dans le tableau comparatif 3. Tableau 2. 48 heures 5 jours 14 jours I I. Taille des intensité Taille des i intensités Taille des intensités lésions des lésions lésions des lésions lésions Ides lésions _____ _(mm(mm) - (mm) ' '_ Compositionlapin 1 lapin 5 lapin 9 mort J+4 A + E 3 X 3 I 15 X 10 3 10 X 5 1 A + B 20 X 5 1 12 X 5 3 0 0 C + B 0 0 10 X 5 36 X 5 2 B 20 X 10 3 10 X 5 0 0 E 8 X 4 1 15 X 8 2 15 X 10 1 lapin 2.lapin 6 lapin 10 A+ E 8 X 8 1 3 X 2 I 17 X 8 2 A + B 12 X 7 2 non mesurable 1 non mesurable' 1 C + B 20 X 15 2 18 X 15 2 6 X 3 1 B 20 X 15 3 12 X 5 2 10 X 5 2 E 0 0 8 X 5 2 10 X 5 1 A___ lapin 3 _ lapin 7 lapin 11 A+ E 10X 5 1 0 0 0 A + B 25 X 5 2 10 X 4 1 0 0 C + B 20 X 12 3 12 X 6 2 22 X 4 ' 2 B 15 X 3 ' 1 15 X4 ' 2 18 X 2, 1 E1X I1 0 0 0 ' 0 __ _ _ lapin 4 lapin 8 lapin 12 mnr't.1I--7 A+E 9 X4 21 6X3 0 1 mn5. 2 A + B 20 X 5 3 12 X 10 I 1 25 X 3 2 C + B 15 X9 3 8 X 2 ' 2 10 X 5 ' 2 B 13 X 4 2 15 X 13 2 15 X 5 2 E 10 X 1 1 3 X 2 1 I 5 X 4 1 l.. . , . _ Co r'o -o L4 Lq -el. Tableau 3. EXAMEN HISTOLOGIQUE - Résultats comparés Dégénérescence Fibres musc. Régénération Infiltrat Fibres musc. cellulaire Fibrose hémorragie Total Amoxicilline micronisée + eau ppi (pour préparation injectable) (i)(ii) (iii) J + 2 4/4 (2-3) 0/4 4/4 (1-2) 0/4 0/4 J + 5 3/5 (2-4) 2/5 (1-2) 3/5 (2-3) 0/5 1/5 (1) J + 14 2/3 (3) 2/3 (1-2) 2/3 (3) 2/3 (2-3) 0/3 Total 9/12 4/12 9/12 2/12 1/12 Amoxicilline micronisée + alcool benzylique J + 2 3/4 (3-4) 0/4 3/4 (2) 0/4 3/4 (1) J + 5 4/5 (3-4) 3/5 (2) 4/5 (3) 0/5 0/5 J + 14 1/3 (3) 1/3 (2) 1/3 (3) 1/3 0/3 Total 8/12 4/12 8/12 1/12 3/12 24 Sel sodique + alcool benzylique J + 2 3/4 (3-4) 0/4 3/4 (1-2) 0/4 2/4 (2-3) J + 5 5/5 (3-4) 5/5 (1-3) 5/5 (2-3) 0/5 2/5 (1-2) J + 14 3/3 (2-4) 3/3 (2) 3/3 (3-4) 1/3 (3) 0/3 Total 11/12 8/12 11/12 1/12 4/12 35 Alcool benzylique J + 2 4/4 (3-4) 1/4 (1) 4/4 (2) 0/4 3/4 (1-3) J + 5 4/5 (3-4) 3/5 (1-3) 4/5 (2-3) 0/5 1/5 (2) J + 14 2/3 (3) 2/3 (2) 2/3 (3) 2/3 (1-3) 0/3 Total 10/12 6/12 10/12 2/12 4/12 32 Eau ppi J + 2 2/4 (1-2) 0/4 2/4 (1-3) 0/4 1/4 (3) J + 5 1/5 (3) 1/5 (3) 1/5 (3) 0/5 1/5 (2) J + 14 1/3 (1) 1/3 (1) 0/3 0/3 0/3 Total 4/12 2/12 3/12 0/12 2/12 11 (i) Nombre de lapins présentant la lésion (ii) Nombre de lapins examinés (iii) Intensité de la lésion il Les tableaux 2 et 3 ont permis de classer les préparations de la plus irritante à la mieux tolérée. Ce classement est le suivant: - amoxicilline sodique/alcool benzylique à 3% - alcool benzylique à 3% - amoxicilline trihydrate micronisée/eau pour préparation injectable et amoxicilline trihydrate micronisée/alcool benzylique - eau pour préparation injectable. Le tableau 3 montre en particulier les résultats médiocres de l'alcool benzylique- utilisé seul, ou comme anesthésique local avec une solution d'amoxicilline sodique. Expérience 3: Biodisponibilité On a étudié, au moyen des tests usuels, la biodisponibilité d'une suspension aqueuse de trihydrate d'amoxicilline micronisée en comparaison avec une solution aqueuse de sel sodique d'amoxicilline. L'étude a été conduite chez le chien en 2C utilisant d'une part de l'amoxicilline sodique reronrtituiée avec]'alcool benzylique à 3% comme solvant, et d'autre part la forme trihydrate en suspension dans l'eau pour préparation injectable. 6 chiens Beagle (3 mâles - 3 femelles) d'un poids compris entre 10,8 kg et 14,5 kg ont reçu par voie intramusculaire (à la dose de 50 mg/kg) les deux préparations suivantes: - sel sodique d'amoxicilline/alcool benzylique à 3% - trihydrate d'amoxicilline/eau pour préparation injectable. Les taux sériques et les éliminations urinaires ont été déterminés par voie microbiologique par la méthode des disques (souche Sarcina Lutea ATCC 9341) Les prélèvements sanguins ont été effectués aux temps suivants: 30 min, lh, lh 30, 2h, 4h, 6h, 8h, 10h, 12h, 2Ah, 32h 48h après l'injection. Les urines ont été recueillies de O à 6h, de 6 à 12h, de 12 à 24h. Le tableau 4 donne pour chacune des compositions étudiées, les valeurs des taux sériques dans le temps. Le tableau 5 donne pour chaque composition étudiée les valeurs des excrétions urinaires dans le temps. Le tableau 6 donne pour chaque composition étudiée les aires sous la courbe d'évolution des taux sériques dans le temps. Ces résultats montrent que les pics sériques sont plus élevés et plus précoces pour la préparation d'amoxicilline sodique en solution, tandis qu'il y a persistance des taux sériques dans la composition micronisée. (voir tableau 4). On a défini de fagon arbitraire mais en fonction des concentrations inhibitrices habituelles de l'amoxicilline un seuil de concentration inhibitrice minimum à 5 mcg/ml. Le tableau 4 montre que la décroissance des taux sériques en dessous du seuil de 5 mcg/ml est atteinte en 5 heures pour le sel sodique d'amoxicilline, et en 10 heures après administration pour la préparation micronisée. Les aires sous la courbe des concentrations sériques (tableau 5) ne sont pas statistiquement différentes pour les deux préparations. L'élimination urinaire (tableau 6) en 24 heures n'est pas statistiquement différente pour les deux préparations; pendant les six heures suivant l'administration d'antibiotique, elle est significativement plus élevée pour le sel sodique, par contre entre la sixième et la vingt-quatrième heure elle est significativement plus élevée pour l'amoxicilline trihydrate. Toutefois l'importante élimination de l'antibiotique dans l'intervalle 12-24 heures observée pour le trihydrate micronisé permet de prévoir la persistance des taux urinaires bien au-delà de vingt-quatre heures. Tableau 4. Dose: 50 mg/kg Animal Taux sériques mcg/ml Composition No. sexe poids 0,5 1 1,5 2 4 6 8 10 12 24 32 48 (Temps en -(kg) heures) Sel sodique d'amoxicil- line I M 14,5 2 M 13,1 3 M 14,5 4 F 12,9 F 12,7 6 F 10,8 88,0 102,0 83,0 102,0 83,0 92,0 ,0 78,0 88,0 88,0 ,0 57,0 ,0 ,0 53,0 ,0 46,0 31,0 36,4 33,3 34,6 37,6 ,1 17,9 7,0 2,3 0,7 7,0 1,8 0,5 7,0 1,8 0,6 9,7 2,1 0,6 ,0 1,1 0,4 2,2 0,5 0,2 91,6 74,3 47,5 30,8 6,3 1,6 0,5 Trihydrate d'amoxicil- line micronisé 1 M 14,5 2 M 13,1 3 M 14,5 4 F 12,9 F 12,7 6 F 10, 8 Moyenne 7,21 10,23 12,20 13,7311,73 8,98 6,20 5,00 3,41 1,83 0,43 0,10 Moyenne 6,2 7,5 7,3 8,8 7,3 6,2 7,6 13,0 12,0 12,0 9,2 7,6 7,9 13,6 ,4 ,5 11,5 9,3 9,4 ,4 ,4 16,6 13,6 12,0 8,7 12,8 12,8 14,7 11,2 ,2 6,7 8,3 8,3 11,8 9,4 9,4 4,3 4,2 6,2 5,6 ,9 4,9 8,2 6,4 6,4 4,2 6,2 4,7 3,3 4,1 4,0 3,5 2,6 3,0 2,0 1,6 2,2 2,0 1,6 1,6 0,6 0,3 0,4 0,6 0,4 0,3 0, 15 0,09 o,12 Tableau 6. Dose: 50 mg/kg Composition Chien 0-6 h 6 -12h 12-24 h 0-24 h No. mg / excrétions% mg/ excrétion% mg/ excrétion% mg/excrétion% Amoxicilline sodique' 1 408,0 2 394,0 3 21,8 4 355,7 317,4 6 267,1 moyenne 294,0 ,67 75,6 11,06 ,75 1,68 380,36 58,23 Trihydrate d'amoxicilline micronisé moyenne 67,0 10,71 144,86 22,79 96,2 15,28 308,08 48,78 ro t-,, no L:- 56,28 ,15 3,01 ,15 49,98 49,46 48,0 23,() 259, 2 ,0 41,9 37,8 ,77 3,51 ,75 7,75 6,60 7,00 ,6 1,2 39,2 2,9 4,1 1,5 2,15 0, 18 ,41 0,45 0,65 0,28 465,4 418,2 320,2 408,6 363,4 306,4 64,19 63,81 44, 16 63,34 57,23 56,74 66,5 54,9 53,9 63,4 71,4 92,0 9,17 8,38 8,62 9,83 11, 24 17,04 142,6 174,? ,1li ,4 166,5 129,5 cn 19,64 26,67 16,90 23,32 26,22 23,98 68,4 81,8 183,6 78,4 83,1 82,0 9,43 12,49 29,36 12,16 13,09 ,19 277, 3 311,4 343,1 292,2 321,0 303,5 38,24 47,54 54,89 ,30 ,55 56,20 Tableau 5. Aires sous les courbes mg/ml x h No. animal Produits administrés sel sodique trihydrate 1 168,80 120,89 2 174,72 151,11 3 173,45 156,15 4 193,70 172,79 140,97 129,19 6 117,97 127,54 Moyenne 161,60 194,94 Les résultats ci-dessus permettent donc de penser que la composition pharmaceutique selon l'invention peut également être administrée chez l'homme avec succès. A cet égard les propriétés pharmacologiques d'une telle suspension n'ont pas besoin d'être décrits ici, puisque ce sont celles du trihydrate d'amoxicilline qui est un composé dont les effets sont en soi connus depuis longtemps. 2594334- REVENDICATIONS l. Composition pharmaceutique injectable à base d'amoxicilline, caractérisée en ce qu'elle comprend du trihydrate d'amoxicilline en suspension dans un véhicule ou milieu liquide approprié. 2. Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que la taille des particules du trihydrate d'amoxicilline dans la suspension est choisie de façon à permettre l'injection de ladite composition. 3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que la taille des particules du trihydrate d'amoxicilline est comprise entre environ 1 et p et est de préférence de l'ordre de 5 P. 4. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la concentration du trihydrate d'amoxicilline en suspension est comprise entre 100 mg activité/ml et 700 mg activité/ml, et de préférence entre 200 mg activité/ml et 500 mg activité/ml. 5. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le trihydrate d'amoxicilline est sous une forme micronisée dans le véhicule ou milieu liquide précité. 6. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications i à 5, caractérisée en ce que le véhicule précité est de l'eau.