FR 2581063 A1 19861031 FR 8506568 A 19850430 La présente invention concerne de nouveaux amino-2 thiazoles N-substitués ayant une activité anti- inflammatoire et antiallergique. Ces composés peuvent être utilisés notamment dans le traitement des phénomènes inflammatoires, en par- ticules dans le traitement des phénomènes inflammatoires oculaires. La réponse inflammatoire oculaire est la séquence des évènements entraînés par une lésion ou une irritation des tissus de l'oeil. Elle se traduit par l'augmentation de la pression intraoculaire, une infiltration leuco- cytaire dans les tissus et les liquides de l'oeil, une augmentation du taux de protéines dans l'humeur aqueuse et une uvéite. Bien que la nature de la réponse inflammatoire soit extrêmement variée et ses médiateurs multiples (kinines, histamine, etc..), il y a toujours production de métabolites de l'acide arachidonique proinflammatoires au niveau du tissu lésé, à savoir prostaglandines (PGS) et hydroxy-acides eicosatétraénoïques (HETEs). Cette production est augmentée par l'infiltration des leucocytes polymorphonucléaires (PMNS) vers le lieu de l'inflamma- tion, qui produisent à leur tour durant la phagocytose des PGs et des HETEs. Les effets biologiques connus des HETEs sont, entre autres, le chimiocinétisme et le chimio- tactisme vis-à-vis des PMNs. Les PGs et les HETEs sont des métabolites de l'acide arachidonique, acide gras en C20. Ils sont synthétisés selon deux voies distinctes: - La voie de la cyclooxygénase conduit successi- vement aux endoperoxydes PGG2 et PGH2, précurseurs des divers PGs de la série 2. Parmi celles-ci, PGE2 et PGI2 (prostacycline) sont particulièrement vasodilatatrices. - la voie de la lipoxygénase conduit aux acides - 2 - non cyclisés monoet dihydroxyeicosatétraénoïques (HETEs) qui sont pour la plupart des agents proinflammatoires, comme leurs précurseurs, les acides hydroxyperoxylés correspondants (HPETEs). Ainsi, le 5,12-diHETE ou leucotriène B4 (LTB4) est l'agent chimiotactique le plus puissant connu pour les leucocytes humains. Des métabo- lites de cette voie sont impliqués en outre dans les réactions allergiques telles que l'asthme. Contrairement aux PGs qui ont des précurseurs communs, PGG2 et PGH2, les produits de lipoxygénase ont des précurseurs différents: - le 12-HPETE dans les plaquettes, synthétisé sous l'action d'une 12-lipoxygénase, conduit à la forma- tion de 12-HETE. - dans les leucocytes, 5-HPETE et 15-HPETE sont principalement invoqués, conduisant aux 5-HETE,5,12-diHETE et 15-HETE. La recherche d'agents thérapeutiques susceptibles de s'opposer à la réaction inflammatoire était orientée vers les voies suivantes: - inhibition de la libération d'acide arachido- nique par les glucocorticoldes. L'inconvénient majeur des glucocorticoldes est de provoquer une augmentation de la pression intraoculaire et de favoriser l'apparition d'un glaucome ou d'une cataracte. - inhibition de la voie de la cyclooxygénase par des antiinflmmatoires non stéroïdiens tels que Aspirine, Indométacine, Tandéril. Mais des études expérimentales récentes montrent que l'Indométacine augmente l'infil- tration leucocytaire dans l'humeur aqueuse: en inhibant la voie de la cyclooxygénase, elle favorise la voie de la lipoxygénase et donc la libération de produits chimio- tactiques. - 3 - L'inhibition simultanée de la voie de la 5-lipo- xygénase et de la cyclooxygénase est susceptible de bloquer la synthèse des différents médiateurs proinflam- matoires comme le font les glucocorticoldes mais sans en présenter les effets gênants. De plus l'inhibition de la voie 5-lipoxygénase est susceptible de bloquer la synthèse des leucotriènes peptidiques LTC4 et son méta- bolite LTD4 (anciennement connus sous le nom SRS-A) qui jouent un rôle pathophysiologique important dans les réactions d'hypersensibilité immédiate. La présente invention est précisément basée sur la découverte que certains amino 2-thiazoles inhibent à la fois la lipoxygénase leucocytaire et la formation des prostanoides plaquettaires. Ils s'opposent donc au développement de la phase vasculaire de l'inflammation (impliquant les HETEs). La présente invention a ainsi pour objet des composés de formule OH R R2 R R1 x X dans laquelle: X représente un groupe C-H ou un atome d'azote: R1 et R2 représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un radical alkyle en Cl-Cl2, un radical alkoxy en ClC6, un radical alkylthio en C1-C6, un radical alkenyloxy en C2-C6, un radical cycloalkyle en C5-C7, un radical trifluorométhyle, un groupe nitro, un groupe amino, un groupe (alkyl en C1-C6) amino ou un groupe di(alkyl en C1-C6) amino, R3 représente un atome d'hydrogène, un groupe CH2OH ou un groupe -COOR4, R4 étant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl-C6, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables. -4- La présente invention a également pour objet des compositions thérapeutiques contenant à titre de principe actif un composé de formule I ou l'un de ses sels phar- maceutiquement acceptables. Par sels pharmaceutiquement acceptables, on désigne des sels d'addition que forment les composés de formule (I) avec des acides pharmaceutiquement acceptables, ainsi que les sels que forment les composés de formule (I) à groupe acide (R3 = COOH) avec des bases pharmaceuti- quement acceptables. Les "sels d'addition avec des acides pharmaceu- tiquement acceptables" désignent les sels qui donnent les propriétés biologiques des bases libres, sans avoir d'effet indésirable. Ces sels peuvent être notamment ceux formés avec des acides minéraux, tels que l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide sulfurique, l'acide nitrique, l'acide phosphorique; des sels métalliques acides, tels que l'orthophosphate disodique et le sulfate monopotassique, et des acides organiques, tels que l'acide formique, l'acide acétique, l'acide propionique, l'acide glycolique, l'acide oxalique, l'acide fumarique, l'acide lactique, l'acide succinique, l'acide tartrique et l'acide pamoique. De même, "les sels avec des bases pharmaceutique- ment acceptables" désignent les sels qui ne modifient pas les propriétés biologiques des acides libres. Ces sels peuvent être notamment ceux formés avec des bases minérales, telles que l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium, l'hydroxyde de lithium, l'hydroxyde de calcium, l'hydroxyde de magnésium, ou des bases organiques telles que la glucamine, la N-méthyl-glucamine, la N,N- diméthylglucamine, l'éthanolamine, la diéthanolamine, la morpholine, la N-méthyl morpholine et la tris -(hydroxy- méthyl)-méthylamine. -5- Le terme "halogène" désigne le fluor, le chlore, le brome ou l'iode. Les groupes alkyle ont de préférence de 1 à 6 atomes de carbone. Une classe préférée de composés de formule I est celle dans laquelle R1 est un atome d'hydrogène, un atome d'halogène en position 5, un groupe alkyle en C1- C4 en position 4 ou 5 et R2 est un atome d'hydrogène ou bien dans laquelle R1 et R2 sont des groupes alkyle en C1-C4 en position 3 et 5. Les composés de formule I dans laquelle R3 est un atome d'hydrogène ou un groupe -COOR4, R4 étant un groupe alkyle en C1-C6, peuvent être préparés par réaction d'une thiourée N-substituée de formule OH S Ri L NH - C- NH2 (II) dans laquelle R!, R2 et X ont la définition donnée ci-dessus, avec du dichloro-l,2 éthoxy-2 éthane, du chloroacétaldéhyde, du chloroacétaldéhyde diéthylacétal, de l'acétate de dichloro-l,2 éthyle ou un bromopyruvate d'alkyle en Cl-C6. La réaction d'une thiourée N-substituée de formule II avec par exemple le chloroacétaldéhyde diéthylacétal peut être effectuée en portant au reflux pendant 30 minutes à 24 heures une solution alcoolique de quantités équimolaires de réactifs en présence d'un catalyseur acide tel que l'acide chlorhydrique ou l'acide p-toluène sulfonique. - 6 - Les thiourées de formule II peuvent être préparées par action du thiocyanate de benzoyle sur une amine de formule OH R2 t NH2 (III) R1 dans laquelle R1, R2 et X ont la définition donnée ci-dessus. Cette réaction peut être effectuée par exemple en ajoutant lentement une solution acétonique d'amine de formule III à une solution acétonique portée au reflux de thiocyanate de benzoyle préparé in-situ selon un procédé connu. Après un bref temps de reflux, le produit de condensation est hydrolysé par une solution aqueuse alcaline pour conduire à un dérivé de formule II. Les composés de formule I dans laquelle R3 est ?0 un groupe COOH peuvent être obtenus par saponification des esters d'alkyle correspondants. Les composés de formule I dans laquelle R3 est un groupe -CH2OH peuvent être obtenus par réduction de ces esters, par exemple par l'hydrure de lithium alumi- nium. Les sels d'addition des composés de l'invention avec des acides pharmaceutiquement acceptables peuvent être préparés de manière classique par réaction des bases libres avec un acide ou sel d'acide, notamment en solution éthérée ou alcoolique. Les sels des composés à groupe acide avec des bases s'obtiennent par réaction de l'acide avec une base dans un solvant usuel. On donnera ci-après dans le tableau I des exemples de composés de formule I. Les exemples suivants illustrent la préparation des composés de formule I. Exemple 1: a) Préparation de 1'(hydroxy-2 méthyl-4 phényl)- I thio-2 urée On ajoute goutte à goutte 0,2 mole de chlorure de benzoyle à une solution de 0,22 mole de thiocyanate d'ammonium dans 100 ml d'acétone anhydre. On porte à reflux 5 minutes après la fin de l'addition puis on ajoute goutte à goutte, de façon à maintenir un léger reflux, une solution de 0,2 mole d'amino-6 m-crésol dans 50 ml d'acétone anhydre. On poursuit l'agitation et le chauffage pendant 5 minutes après l'addition, on verse le mélange réactionnel dans 1,5 1 d'eau glacée, on essore et on met en suspension les cristaux obtenus dans 300 ml d'une solution de soude à 10%. On porte à ébullition pendant 10 minutes, _on filtre la solution sur laine de verre et l'acidifie fortement avec de l'acide chlorhydrique concentré. On ramène la solution à pH 8 avec de l'ammoniaque. Les cristaux qui préci- pitent par refroidissement sont essorés, lavés avec de l'eau et recristallisés dans l'éthanol (F: 175 - 7 C) Rdt: 65%. b) Préparation du chlorhydrate d'(hydroxy-2 méthyl-4 phényl) amino-2 thiazole. On porte à reflux pendant 12 heures un mélange de la thiourée obtenue en a (0,1 mole),de chloro- acétaldéhyde diéthylacétal (0,1 mole), d'acide p.toluène sulfonique (0,015 mole) dans 300 ml d'alcool à 70 C. Après évaporation sous vide du solvant, on triture le résidu huileux dans une solution aqueuse d'acétate de sodium. On extrait la phase organique avec de l'éther, on lave la solution éthérée avec de l'eau, on la sèche sur sulfate de sodium anhydre puis on la décolore avec du charbon. Après filtration la solution éthérée est saturée par un courant d'acide chlorhydrique gazeux sec. Les cristaux formés sont isolés puis recristallisés dans un mélange éthanol-éther (F: 184 - 6 C) Rdt: 50%. 8- Exemple 2: Préparation du bromhydrate d'(hydroxy-2 méthyl-4 phényl) amino-2 carbéthoxy-4 thiazole. On porte à reflux pendant 3 heures 0,065 mole d'(hydroxy-2 méthyl-4 phényl)-l thio-2 urée et 0,077 mole de bromopiruvate d'éthyle dans 100 ml d'éthanol à 95 . Après évaporation du solvant, on fait cristalliser l'huile résiduelle dans l'éther diéthylique. On recris- tallise ensuite dans un mélange éthanol-éther. (F: 158 - C). Rendement:65%. Exemple 3: (hydroxy-2 méthyl-4 phényl) amino-2 hydroxy- méthyl-4 thiazole. On ajoute, par petites fractions, à température ambiante, 0,02 mole du produit obtenu à l'exemple 2 à une suspension de 0,05 mole d'hydrure de lithium aluminium dans 100 ml de THF anhydre. On maintient l'agitation pendant 1 heure à température ambiante, refroidit et détruit l'excès d'hydrure par addition d'eau, on essore et évapore sous vide le filtrat au bain-marie. Le résidu huileux est ensuite cristallisé dans de l'éther et recristallisé dans un mélange méthanol- éther. (F: 188-90 C). Rendement: 30%. Exemple 4: Chlorhydrate de l'acide (hydroxy-2 méthyl-4 phényl) amino-2 thiazole carboxylique-4. On porte à reflux pendant 2 hedures 0,03 mole de bromhydrate d'(hydroxy-2 méthyle-4 phényl) amino-2 carbéthoxy-4 thiazole dans 100 ml d'une solution de soude 1 N. Après refroidissement, on précipite le chlorhydrate de l'acide par addition d'acide chlorhy- drique concentré. On recristallise dans l'éthanol. (F: 248-500C). Rendement: 60%. TABLEAU I Composés de formule I Compose RR Rendement Fusion Solvant de n0 R 1 R2 x 3 ( (OC) recristallisation Sel 1 H H CH H 40 159-61 Acétone- Chlorhydrate éthanol 2 5-C1 H CH H 30 172-4 Acetone Chlorhydrate 3 4-CH3 H CH H 50 1846 Ethanol Chlorhydrate 3 4-CH3H CH H 50 184-6 Ethanol Chlorhydrate 4 5CH3 H CH H 40 162-4 Ethanol Chlorhydrate CH3 Acétone- 4-CH3-C H CH H 25 172-4 Acétone- Chlorhydrate 3 méthanol CH3/ 6 3-CH3 5-CH3 CH H 40 209-11 Ethanol Chlorhydrate 7 H H N H 20 238-40 Méthanol- Chlorhydrate éther Co a, Lm TABLEAU I (suite) Composés de formule I Composé Rendement Fusion Solvant de R1 R2 X R3 (%) ( C) recristallisation Sel 8 4-CH3 H CH COOC2H5 65 158-60 Ethanol-éther Bromhydrate 9 4-CH3 H CH -CH2OH 30 188-90 Ether 4-CH H CH -COOH 60 248-50 Ethanol Chlorhydrate 1l 5-CH3 H CH -COOH 70 253-55 Ethanol Chlorhydrate _ _ 11 _ On donnera ci-après des résultats des études phar- macologiques et toxicologiques mettant en évidence les propriétés des composés de formule I. 1 - Pharmacologie biochimique "in vitro" 1.1 Inhibition de la lipoxygénase des leucocytes cir- culants humains (PMNs) par radioimmunodosage du LTC4 Méthodes - Préparation d'une suspension leucocytaire On fait sédimenter pendant 1 heure à 37"C du sang humain hépariné dans une solution saline stérile conte- nant 4,5 % de Dextran T 500. La phase supérieure riche en leucocytes est collectée, déposée sur du Ficoll Paque (7/3 v/v) puis centrifugée (20 minutes, 400 x g, 4 C). Le culot de centrifugation est traité avec du NH4 Cl 0,75% pour lyser les hématies. Après centrifugation (20 minutes, 400 x g, 4 C), on élimine le surnageant et remet le culot en suspension dans un tampon PBS Dulbecco contenant 1 mM de chlorure de calcium. On ajuste le volume de la suspension pour avoir la concentration leucocytaire sou- haitée. - Radioimmunodosage du LTC4 On préincube pendant 2 minutes la suspension leucocytaire avec le composé de formule I à tester, incube ensuite pendant 8 minutes à 37WC en présence d'ionophore calcique A23187 (0,25 pm). On bloque l'incu- bation par addition d'un volume d'eau glacée et centri- fuge (15 minutes, 1500 x g, 4 C). Des aliquots du surna- geant sont ensuite soumis au radioimmudosage (KIT New England Nuclear). Résultats Le pourcentage d'inhibition de la voie 5-lipo- xygénase est mesuré en fonction de la concentration de chaque composé. De ces courbes on déduit la concentration inhibant 50% de formation du traceur LTC4 (CI50). 258 1063 _12 _ A titre d'exemple, un certain nombre de résultats sont donnés dans le tableau II. 1.2 - Inhibition du métabolisme du 14c-Arachidonate dans les plaquettes de lapin Méthodes - Préparation d'un plasma riche en plaquettes (PRP) On prélève en intracardiaque 12 ml de sang sur ACD (anticoagulant constitué par une solution aqueuse contenant 0,27 g d'acide citrique, 0,5 g de citrate disodique et 0,02 g de glucose pour 20 ml d'eau), à raison de 1 volume d'ACD pour 6 volumes de sang. On centrifuge (10 minutes, 200 x g, 20 C), collecte le surnageant (PRP) et le recentrifuge (15 minutes, 1500 x g, 20 C). On lave le culot plaquettaire dans le tampon I (NaCl: 8 g/l, Tris: 1,21 g/l, KC1: 0,2 g/l, Gélatine: 2,5 g/l; on chauffe à 90'C pour dissoudre la gélatine, puis ajoute glucose: 1 g/l, acide N,N'éthylèneglycol bis (p-aminoéthyl) éther tétraacétique ou EGTA: 0, 075 g/l) . On centrifuge la suspension (15 minutes 1500 x g, 20 C) et reprend le culot dans le tampon II (NaCl: 8 g/l, Tris: 1,21 g/l, KCl: 0,2 g/l, CaC12: 0,145 g/l, MgC12: 0,2 g/l, gélatine: 2,5 g/l; on porte à "C, ajoute glucose: 1 g/l, ajuste à pH 7,4, avec HCl 0,1 N). - Métabolisme du 14C-Arachidonate On préincube la suspension plaquettaire (0,4 ml/ tube) 10 minutes à 37"C, soit avec 10 pl de DMS0 (témoin), soit avec des concentrations variées de composés à tester en solution dans 10 pl de DMS0. L'incubation est faite en présence de l4c-Arachi- donate (1 fg, 0,2 pCi) réparti dans 0,1 ml de tampon II puis on bloque l'incubation au bout de 15 minutes par p1 d'acide citrique de 250 pl de NaCl saturé. - 13 - Après extraction par l'acétate d'éthyle les méta- bolites du 14c-Arachidonate sont séparés par chromato- graphie sur couche mince et quantifiés à l'aide d'un radio scanner. Résultats Le pourcentage d'inhition des voies des prostanoides est estimé par mesure de la disparition du thromboxane B2 (TXB2) en fonction de la concentration de chaque composé. Des résultats correspondant à 50 pM et 100 aM de composés de formule I sont donnés à titre d'exemple dans le tableau II. TABLEAU II Inhibition du LTC4 Inhibition du TxB3 dans les plaquettes de lapin (%) dans PMNs humains CIse(x10'-M) 50 pM 100 PM I 1,2 34 91 2 0,3 100 100 3 0,33 100 100 4 0,25 68 n. d. 1,6 76 n. d. 6 0,2 70 n. d. -------------------- ----------------------------------- --------------------------------------.......... 7 n.d. 36 36 ta d o (n. d.: non déterminé) c - 15 - 2 - Pharmacologie fonctionnelle Activité antiinflammatoire mesurée par inhition de l'afflux protéique dans la chambre antérieure de l'oeil après para- centèse cornéenne Cette activité est mesurée selon la technique de K. Masuda et coll. (Bibl. Anat., 1977, 6, 99-104). L'effet des diverses concentrations de chaque composé est mesuré sur 6 yeux de lapins Néozélandais albinos. Les résultats ci-après sont donnés à titre d'exemple. Composé Dose mg/100 ml Inhibition (%) Indométacine 1 80 0,1 20 3 0,5 35 1 50 3 - Toxicité aigae Les rats utilisés sont de souche Wistar d'un poids moyen de 150 g. La DL50 est déterminée après 14 jours d'observation. Les résultats ci-après donnent les valeurs de- DL50 pour le composé 3 de l'invention accompagnées de l'intervalle de confiance à 5%. DL50 (mg/kg) IV 51 + 2 Rat mâle P02950 + 96 IV 51+ 2 Rat femelle P0 2350+ 90 - 16 - Les compositions thérapeutiques selon l'invention peuvent être administrées à l'homme ou aux animaux par voie topique, orale ou parentérale (y compris par voie intraarticulaire). Elles peuvent être sous la forme de préparation solides, semi-solides ou liquides. Comme exemples, on peut citer les comprimés, les gélules, les suppositoires, les solutions ou suspensions injectables, les pommades, les collyres huileux ou aqueux, les collutoires, les solutions nasales et otologiques, ainsi que les formes retard. Dans ces compositions le principe actif est géné- ralement mélangé avec un ou plusieurs excipients phar- maceutiquement acceptables habituels bien connus de l'homme de l'art. Les compositions thérapeutiques administrables par voie topique peuvent contenir notamment de 0,1 à % en poids de principe actif. - Les compositions thérapeutiques administrables par voie orale ou parentérale peuvent contenir notamment de 1 à 60% en poids de principe actif. La quantité de principe actif administrée dépend évidemment du patient qui est traité, de la voie d'ad- ministration et de la sévérité de la maladie. Cependant, pour l'administration par la voie orale ou parentérale, on peut administrer environ de 0,25 à 5 mg/kg/jour, soit chez un homme de 70 kg de 17,5 à 350 mg/jour et, de préférence, de 25 à 250 mg/jour. Les composés de formule I et leurs sels d'addition avec des acides pharmaceutiquement acceptables sont également utilisables en raison de leurs propriétés antioxydantes comme conservateurs et antioxydants en alimentation humaine et animale. - 17 - REVENDICATIONS 1. Composés de formule OH R R2 R R1 X dans laquelle: X représente un groupe C-H ou un atome d'azote: R1 et R2 représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un radical alkyle en Cl-C12, un radical alkoxy en C1-C6, un radical alkylthio en C1-C6, un radical alkenyloxy en C2-C6, un radical cycloalkyle en C5-C7, un radical trifluorométhyle, un groupe nitro, un groupe amino, un groupe (alkyl en C1-C6) amino ou un groupe di(alkyl en C1-C6) amino, R représente un atome d'hydrogène, un groupe - CH2OH ou un groupe -COOR4, R4 étant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 2. Composés selon la revendication 1, caractérisé en ce que R1 est un atome d'hydrogène, un atome d'halogène en position 5, un groupe alkyle en C1-C4 en position 4 ou 5 et R2 est un atome d'hydrogène, ou bien dans lesquels R1 et R2 sont des groupes alkyle en 1-C4 en position 3 et 5. 3. Composés selon la revendication 2, caractérisé en ce que X est CH, R1 est un radical 4-méthyle et R2 est un atome d'hydrogène. 4. Procédé de préparation d'un composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait réagir - 18 - une thiourée N-substituée de formule OH 2 i 2 R t X/ H NH2 (I dans laquelle R1, R2 et X ont la signification donnée ci-dessus avec du dichloro-l,2 éthoxy-2 éthane, du chloroacétaldéhyde, du chloroacétaldéhyde diéthylacétal, de l'acétate de dichloro-l,2 éthyle ou un bromopyruvate d'alkyle en Ci-C6 et pour obtenir un composé de formule I dans laquelle R3 est un groupe -COOH on effectue une saponification d'un ester correspondant et pour obtenir un composé de formule I dans laquelle R3 est un groupe -CH2OH on effectue une réduction de cet ester. 5. Composition thérapeutique, caractérisé en ce qu'elle contient à titre de principe actif un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3.