FR 2584409 A1 19870109 FR 8510257 A 19850704 -- 1 -- CHLORHYDRATES DE CHLORURES DE DERIVES D'AMINOALKYL-2 HYDROXY-9 ELLIPTICINIUM ET COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES EN CONTENANT. La présente invention concerne les chlorhydrates des chlorures de dérivés d'aminoalkyl-2 hydroxy-9 ellipticinium, un procédé pour leur préparation ainsi que des compositions pharmaceutiques contenant lesdits composés en tant qu'in- grédients actifs. On a décrit dans le brevet No. 4.310.667 des Etas Unis d'Amérique des sels quaternaires hydrosolubles d'hydroxy-9 ellipticines de formule: CH3 R R2O !s 4 ()I R1 CH3 dans laquelle R1 est l'hydrogène ou un groupe alkyle, R2 est l'hydrogène, un groupe alkyle ou un groupe acyle, R est un groupe alkyle éventuellement substitué et X(-) est un anion de quaternisation convenable. Les sels quaternaires hydrosolubles de formule (I) ci-dessus sont pré- parés par traitement de l'hydroxy-9 ellipticine correspondante avec l'halo- génure R-X1, X1 représentant un atome d'halogène, et par transformation de l'halogénure d'ellipticinium ainsi obtenu, pratiquement insoluble dans l'eau, en sel hydrosoluble correspondant par une résine échangeuse d'ions. Dans le brevet U.S. No. 4.310.667 cité ci-dessus tous les exemples rela- tifs aux halogénures quaternaires intermédiaires ne concernent que des bro- mures ou des iodures. Parmi les sels quaternaires hydrosolubles du brevet ci-dessus les acétates sont indiqués comme étant préférés; le composé de formule I dans laquelle R1 et R2 sont l'hydrogène, R représente méthyle et X(-) représente l'anion acétate est d'ailleurs utilisé en thérapeutique humaine pour le traitement de formes tumorales. Ce composé qui a reçu la Dénomination Com- mune Internationale "acétate d'elliptinium" est actuellement disponible sur le marché sous forme de lyophilisat dosé à 60,65mg d'acétate d'elliptinium, lyophilisat destiné à être repris dans 10ml d'eau pour préparations injec- tables. - 2 - Comme indiqué précédemment, les acétates quaternaires en question sont préparés par échange d'anion sur une résine appropriée. Cette méthode présente cependant certains inconvénients. Ainsi, dans le cas de la préparation de l'acétate d'elliptinium, on a mentionné, dans le brevet US en question, le passage transitoire à une solu- tion métastable de dérivé d'ellipticinium, solution qu'il est nécessaire d'utiliser rapidement pour la suite des opérations. En outre, cette méthode de préparation donne fréquemment naissance à des composés secondaires particulièrement gênants lors de la préparation ultérieure de compositions pharmaceutiques. Par conséquent, les acétates quaternaires en question apparaissent peu stables, surtout en solution, ce qui nécessite de stabiliser les spécialités pharmaceutiques contenant de tels composés en vue d'en prolonger les délais de péremption. D'autres composés, très actifs et plus hydrosolubles que l'acétate d'elliptinium ont été décrits dans le même brevet US, à savoir des composés de formule (I) ci-dessus dans laquelle X(-) est l'anion acétate, R1 et R2 sont l'hydrogène et R est un groupe éthyle substitué par un groupe diéthyl- amino ou pipéridino. Ces composés sont cependant beaucoup plus instables que l'acétate d'elliptinium, surtout en solution. Dans la pratique, on ne réussit pratiquement pas à les intégrer dans une composition pharmaceutique. On a maintenant trouvé, de manière surprenante, que les chlorhydrates des chlorures de dérivés d'aminoalkyl-2 hydroxy-9 ellipticinium présentent plusieurs avantages par rapport aux dérivés acétates antérieurs et notamment par rapport à l'acétate d'elliptinium. Ainsi, on a pu mettre en évidence chez les chlorhydrates des chlorures de dérivés d'aminoalkyl-2 hydroxy-9 ellipticinium une très grande solubilité dans l'eau ainsi qu'une très bonne stabilité aussi bien à l'état solide qu'en solution. Par exemple, la solubilité dans l'eau du chlorhydrate du chlorure de (diéthylamino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipticinium est d'au moins 50 mg/ml. Par conséquent, pour la préparation du principe actif destiné à être incorporé dans des spécialités pharmaceutiques on peut dissoudre 100mg de chlorhydrate du chlorure de (diéthylamino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipticinium dans 2ml d'eau en vue d'une lyophilisation et, ensuite, dissoudre 100mg du lyophilisat ainsi obtenu dans 5 ou 10ml d'eau pour préparations injectables - 3 - Par contre, dans le cas de l'acétate d'elliptinium, on peut dissoudre mg de ce sel dans 4ml d'eau pour l'opération de lyophilisation. Cependant, la limite supérieure de solubilité du produit n'est que de 60mg de lyophi- lisat dans 10ml d'eau. En effet, à des concentrations plus importantes, la vitesse de dissolution de l'acétate d'elliptinium dans l'eau est trop lente compte tenu d'impératifs cliniques. Il est donc possible de préparer des solutés de chlorhydrate du chlorure de (diéthylamino)2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipticinium en concentration supé- rieure à celle de l'acétate d'elliptinium ce qui, associé à une toxicité moindre du produit, permet de mieux programmer le traitement du malade. En outre, la méthode utilisée pour l'obtention des composés de l'invention évite l'utilisation de résine échangeuse d'ions, ce qui se traduira, sur le plan industriel, par une simplification de procédé et sur le plan de la pu- reté par une absence de produits secondaires indésirables. On a également trouvé que lesdits chlorhydrates des chlorures de dérivés d'aminoalkyl-2 hydroxy-9 ellipticinium sont plus actifs que l'acétate d'el- liptinium et, d'une façon inattendue, que les composés correspondants portant l'anion acétate. On a finalement trouvé que lesdits chlorhydrates des chlorures de déri- vés d'aminoalkyl-2 hydroxy-9 ellipticinium sont moins toxiques et présentent moins d'effets secondaires que les composés correspondants portant l'anion acétate. Cette supériorité par rapport aux acétates correspondants, apparemment surprenante, peut être expliquée par la faible stabilité des acétates des produits basiques. La plus grande stabilité des chlorhydrates des chlorures se traduit donc par un avantage sur le plan de l'activité biologique. En outre, par rapport aux produits du brevet US N 4.310.667, les chlorhydrates des chlorures ont l'avantage de ne pas comporter d'échange d'anion dans leur préparation, mais uniquement une simple salification avec de l'acide chlorhydrique. Ainsi, selon un de ses aspects, la présente invention a pour objet le chlorhydrate du chlorure d'un dérivé aminoalkyl-2 ellipticinium caractérisé par la formule suivante: -4 - CH3 HOO- Alk -Am (I Ci (-) HC1 CH3 dans laquelle Z représente l'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur, Alk représente un groupe alkylène inférieur et Am représente un groupe di (alkyle inférieur)amino, pyrrolidino ou pipéridino. Le groupe "alkyle inférieur" tel qu'utilisé dans cette description et dans les revendications, désigne le radical monovalent d'un hydrocarbure aliphatique saturé contenant jusqu'à 4 atomes de carbone, tel que méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, n-butyle. Le groupe "alkylène inférieur", tel qu'utilisé dans cette description et dans les revendications, désigne le radical bivalent non géminal d'un hydrocarbure aliphatique saturé contenant de 2 à 4 atomes de carbone, tel que éthylène-1,2, propylène-1,2, propylène-1,3, butylène-1,4. Le groupe di(alkyle inférieur)amino représenté par Am peut être symé- trique, comme dans le cas d'un radical diméthylamino, diéthylamino ou di- isopropylamino, ou asymétrique, comme dans le cas d'un radical méthyl- éthylamino, méthylpropylamino ou éthylpropylamino. Selon un autre de ses aspects, la présente invention a pour objet un procédé pour la préparation des composés de formule II ci-dessus, caractérisé en ce que l'on traite une hydroxy-9 ellipticine de formule: CH3 HO / Z CH3 dans laquelle Z est tel que défini ci-dessus, avec une chloroalkylamine de formule: _ 5- Cl-Alk-Am (IV) dans laquelle Alk et Am sont tels que définis ci-dessus, dans un solvant organique inerte à une température comprise entre la température ambiante et 140 C puis l'on transforme le chlorure quaternaire ainsi obtenu de formule: CH3 HO N (+)-Alk - Am (V) I I Cl(-) i I Z CH3 dans laquelle Z, Alk et Anm sont tels que définis ci-dessus, en son chlorhy- drate par traitement avec l'acide chlorhydrique. La réaction des composés (III) avec les composés (IV) est conduite selon les méthodes connues en littérature pour la préparation de composés d'ammonium quaternaire. De préférence, le solvant utilisé est un solvant aprotique polaire tel que le diméthylformamide, le diméthylacétamide ou le diméthylsulfoxyde, mais d'autres solvants, inertes dans les conditions de réaction, peuvent être utilisés. Le temps de réaction dépend de la température; en général, à une tem- pérature de 90 à 130 C la réaction est complète après 2-4 heures de chauffage et le produit (V) ainsi obtenu est isolé selon les modes opératoires con- ventionnels, par exemple par précipitation avec un solvant approprié tel que l'éther diéthylique. Les composés de formule (V) ci-dessus sont nouveaux. La transformation des composés (V) en chlorhydrates de la présente invention est effectuée selon les méthodes bien connues de salification. De préférence, la salification du composé (V) est effectuée avec une solution hydroalcoolique d'acide chlorhydrique et le chlorhydrate est isolé selon les techniques usuelles. - 6 - Les composés de formule (II) ci-dessus sont beaucoup moins toxiques que les dérivés acétate correspondants et leur activité antitumorale est supérieure à celle des acétates correspondants dans tous les tests d'ac- tivité antitumorale effectués. Par exemple, dans le test en aiguë de l'activité antitumorale vis-à- vis de la leucémie L1210 chez des souris mâles CDF1 inoculées avec 1.10-5 cellules de L1210 lignée LEA03806 dans 0,1ml d'eau distillée par souris, le composé de l'Exemple 1 (SR 95156 B) a montré une certaine activité à mg/kg (1/10 survivant) et une bonne activité à 20 mg/kg (3/10 survivants) et à 50 mg/kg (5/10 survivants). Un autre composé représentatif de la présente invention, le SR 95157 B (Exemple 2) s'est montré actif à 20 mg/kg (2/10 survivants) et à 50 mg/kg (5/10 survivants). Dans le même test, aucun des animaux de contrôle et des animaux trai- tés avec jusqu'à 200 mg/kg de fluoro-5 uracile et avec jusqu'à 50 mg/kg d'acétate de (diéthylamino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipticinium et d'acétate de (pipéridino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipticinium n'a survécu. En outre, des tests de néphrotoxicité ont pu mettre en évidence une toxicité plus faible des chlorhydrates de chlorure de l'invention par rapport au chlorure correspondant. Le tableau suivant reproduit les résul- tats obtenus à partir du chlorhydrate du chlorure de (diéthylamino-2 éthyl)- 2 hydroxy-9 ellipticinium (SR 95196 B) et du chlorure correspondant (Composé A) en comparaison avec un dérivé acétate en l'occurrence l'acétate d'elliptiniu Tableau Néphrotoxicité comparée chez le rat après injection réitérée du composé à étudi : Dose:Poids de rein: Urée:Créatinine:Histopatholo-: (5 mg/kg) en valeur re- g (M)ie (tubulopa-: glative (g/100)::thie proximale>. ::: :: :Acétate d'el-:: : :liptinium: 0,87: 6,5: 91,2 +++ Composé A 0,83 5,8 85, 4: ++ : SR 95156 B: 0,70: 3,8: 60,4: environ + Témoins 0,68 3,2: 55,2 rien +++: importante ++: moyenne +: faible -7- Ces résultats montrent que le passage du dérivé basique à savoir le Composé A au chlorhydrate de ce dérivé basique (SR 95156 B) diminue, de manière surprenante, la toxicité. Les composés de l'invention peuvent être utilisés pour le traitement de formes tumorales sensibles aux dérivés de l'ellipticine. A cet effet, on utilisera par exemple des doses de 50 à 500 mg/m par cure de traitement, en général par traitement répétitif de 3 jours. Ainsi, selon un autre de ses aspects, la présente invention a pour objet des compositions pharmaceutiques renfermant au moins un composé de formule (II) ci-dessus en tant qu'ingrédient actif. Les compositions pharmaceutiques de l'invention peuvent être présen- tées sous des formes appropriées convenant à l'administration en thérapie humaine ou vétérinaire de préférence sous forme d'unité d'administration pour l'administration parentérale. La quantité totale de principe actif peut varier de 50 à 500mg par unité d'administration, ledit principe actif étant de préférence associé à des véhicules pharmaceutiques notamment à de l'eau distillée. Généralement, on prépare des compositions selon l'invention en dissol- vant dans l'eau le principe actif selon l'invention, en procédant à la lyophilisation de la solution et en introduisant le lyophilisat obtenu dans de l'eau pour préparation injectable ou du sérum physiologique. La solution ainsi obtenue peut être introduite dans des flacons pour perfusion intraveineuse contenant par exemple du sérum glucose. La forme d'administration préférée sera constituée d'un flacon de 50 à 5OOmg de principe actif selon l'invention destiné à être dissous dans 5 à 20ml d'eau pour préparation injectable ou de sérum physiologique contenus dans une ampoule. Les Exemples non limitatifs suivants illustrent l'invention. EXEMPLE 1 Chlorhydrate du chlorure de (diéthylamino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipticinium (a) Chlorure de (diéthvlamino-2 éthyl)-2 hXdroxX-9 ellipticinium On chauffe à 100 C une solution d'hydroxy-9 ellipticine (obtenue par neutralisation de 23,3 mmole de son bromhydrate) dans 100ml de dlméthyl- formaeide. On y ajoute alors progressivement et sous agitation, une solution de chloro-1 diéthylamino-2 éthane (obtenue par neutralisation de 58 mmoles de son chlorhydrate) dans 20ml d'éther diéthylique tout en distillant l'éther au fur et à mesure de son introduction. Au bout de 3 heures à 100 C sous agitation, le produit de réaction commence à précipiter. Après refroidissement on filtre le précipité. On le lave avec 10ml de diméthylformamide et, ensuite, avec 2 fois 25ml d'éther diéthylique puis on le sèche à 40 C sous pression réduite. On isole ainsi 6,9g de chlorure de (diéthylamino-2 éthyl)-2 hydro- xy-9 ellipticinium brut de couleur orange. (b) Chlorhvdrate du chlorure de (diéthylamino-2 éthvl)-2 hvdroxy-9 ellipti- cinium On dissout 6,9g de chlorure de (diéthylamino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipticinium dans une solution formée par 2,45ml d'acide chlorhydrique 12N, 26ml d'eau et 180ml d'éthanol, solution préalablement portée au reflux. On ajoute alors 0,25g de charbon activé et on filtre la solution à chaud. Après refroidissement, on filtre le précipité, on le lave avec 20ml d'éthanol absolu puis avec 2 fois 30ml d'acétone. On le sèche ensuite à C pendant 12 heures. On obtient ainsi 5,64g de chlorhydrate du chlorure de (diéthylamino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipticinium pur de couleur rouge brique (SR 95156 B). Pureté par HPLC (chromatographie liquide haute pression): 99,8% Les spectres IR (infra-rouge) et H-RMN (résonnance magnétique nucléaire du proton) confirment la structure du produit. Le rendement global est de 56% par rapport au bromhydrate d'hydroxy-9 ellip- ticine. EXEMPLE 2 Chlorhydrate du chlorure de (pipéridino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipticinium En opérant comme décrit dans l'Exemple 1(a), on traite à 110-130 C pendant 5 heures, une solution d'hydroxy-9 ellipticine (obtenue par neu- tralisation de 44 mmoles de son bromhydrate) dans 480ml de diméthylformamide, par une solution de chloro-1 pipéridino-2 éthane (obtenue par neutralisation de 110 mmoles de son chlorhydrate), on salifie alors une partie (15g) du chlorure de (pipéridino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipticinium de couleur orange ainsi obtenu avec une solution de 5,1ml d'acide chlorhydrique 12N, 260ml d'eau et 240ml d'éthanol comme décrit dans l'Exemple 1(b). On obtient ainsi 12,3g de chlorhydrate du chlorure de (pipéridino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 -9 - ellipticinium pur de couleur orange (SR 95157 B). Analyse élémentaire (ramenée au produit desséché): Calculé: C%: 64,57 H%: 6,55 N%: 9,41 Trouvé: 64,68 6,55 9,71 Chlorures: 16,56% Pureté HPLC: 99,4% Les spectres IR et H-RIN confirment la structure du produit. Le rendement global est de 84% par rapport au bromhydrate d'hydroxy-9 ellipticine. EXEMPLE 3 Chlorhydrate du chlorure de (diéthylamino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipticinium Le mode opératoire décrit dans l'Exemple 1 a été exactement répété à partir d'hydroxy-9 ellipticine obtenue par neutralisation de 300g de son bromhydrate. Le produit final obtenu est identique au SR 95156 B de l'Exemple 1. Rendement global par rapport au bromhydrate d'hydroxy-9 ellipticine: 68%. EXEMPLES 4 à 9 En opérant comme décrit dans l'Exemple 1, par traitement d'hydroxy-9 ellipticine avec, respectivement, le chloro-1 diisopropyl-2 éthane, le chloro-1 éthylméthylamino-2 éthane et le chloro-1 pyrrolidino-2 éthane, on obtient: - le chlorhydrate du chlorure de (diisopropylamino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipticinium (Ex. 4); - le chlorhydrate du chlorure d'(éthylméthylamino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipticinium (Ex. 5); et - le chlorhydrate du chlorure de (pyrrolidino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellip- ticinium (Ex. 6). En remplaçant l'hydroxy-9 ellipticine par la méthyl-6 hydroxy-9 ellip- ticine et en opérant de la même façon, on obtient: - le chlorhydrate du chlorure de (diisopropylamino-2 éthyl)-2 méthyl-6 hydroxy-9 ellipticinium (Ex. 7); - le chlorhydrate du chlorure d'(éthylméthylamino-2 éthyl)-2 méthyl-6 hydroxy-9 ellipticinium (Ex. 8); et - le chlorhydrate du chlorure de (pyrrolidino-2 éthyl)-2 méthyl-6 hydroxy-9 ellipticinium (Ex. 9). - 10 - EXEMPLES 10 à 13 En faisant réagir le chloro-1 diéthylamino-2 éthane, avec respectivement la méthyl-6 hydroxy-9 ellipticine et l'éthyl-6 hydroxy-9 ellipticine comme décrit dans l'Exemple 1, on obtient: - le chlorhydrate du chlorure de (diéthylamino-2 éthyl)-2 méthyl-6 hydroxy-9 ellipticinium (Ex. 10); et le chlorhydrate du chlorure de (diéthylamino-2 éthyl)-2 éthyl-6 hydroxy- 9 ellipticinium (Ex. 11). En remplaçant le chloro-1 diéthylamino-2 éthane par le chloro-1 pipé- ridino-2 éthane et en opérant de la même façon, on obtient: - le chlorhydrate du chlorure de (pipéridino-2 éthyl)-2 méthyl-6 hydroxy-9 ellipticinium (Ex. 12); et - le chlorhydrate du chlorure de (pipéridino-2 éthyl)-2 éthyl-6 hydroxy-9 ellipticinium (Ex. 13). EXEMPLE 14 On prépare une composition pharmaceutique injectable par dissolution de 100mg du composé de l'Exemple 1 ou de l'Exemple 2 dans 2ml d'eau, lyo- philisation de la solution obtenue et redissolution du lyophilisat dans ml d'eau pour préparation injectable. REVENDICATIONS 1. Chlorhydrate du chlorure d'aminoalkyl-2 hydroxy-9 ellipticinium de formule: CH3 HO -( N) Alk - Am M]. cIl(), Hcl Z CH3 dans laquelle Z représente l'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur, Alk représente un groupe alkylène inférieur et Am représente un groupe di(alkyle inférieur)amino, pyrrolidino ou pipéridino. 2. Chlorhydrate du chlorure de (diéthylamino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellip- ticinium. 3. Chlorhydrate du chlorure de (pipéridino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellipti- cinium. i5 4. Chlorhydrate du chlorure d'aminoalkyl-2 hydroxy-9 ellipticinium selon la revendication 1 pour leur application en tant que substances théra- peutiquement actives. 5. Chlorhydrate du chlorure de (diéthylamino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 ellip- ticinium en tant qu'agent antitumoral. 6. Chlorhydrate du chlorure de (pipéridino-2 éthyl)-2 hydroxy-9 elliptici- nium en tant qu'agent antitumoral. 7. Procédé pour la préparation des chlorhydrates de chlorure selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on traite une hydroxy-9 ellipti- cine de formule: CH HO CH3 dans laquelle Z est tel que défini ci-dessus, avec une chloroalkylamine de formule: Cl-Alk-Am - 12 - dans laquelle Alk et Am sont tels que définis ci-dessus, dans un solvant organique inerte à une température comprise entre la température ambiante et 140 C puis l'on transforme le chlorure quaternaire ainsi obtenu de formule: CH3 H0O -\ N (+) Alk - Am I @ I() Z CH3 dans laquelle Z, Alk et Amn sont tels que définis ci-dessus, en son chlorhydrate par traitement avec l'acide chlorhydrique. 8. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient au moins un chlorhydrate de chlorure selon une des revendications 1 à 3. 9. Composition pharmaceutique ayant une action antitumorale caractérisée en ce qu'elle contient au moins un chlorhydrate de chlorure selon une des revendications 1 à 3 en association avec un véhicule pharmaceutique. 10. Composition pharmaceutique selon une des revendications 8 et 9 carac- térisée en ce qu'elle se présente sous forme d'unité d'administration pour l'administration parentérale.