FR 2574798 A1 19860620 FR 8419047 A 19841213 "Nouvelle sdénosine substituée en N et médicament la contenant comme orincipe actif" Ls présente invention concerne, une nouvelle adénosine substituée en N6, à savair la N&-(caboxamido-3-pprapy})- adénosine, de formule: H. (H)-C NHz Hl>,Q OH OH qui présente des pztpriÉtés pharmacologiques conduisant à de nombreuses applications thérapeutiques. On connait déj des adénosines substituées en N6 pour le traitement géiéral de l'hypertensidn, mais le nouveau composé s'en distingue par l'étenduede son domaine d'ac- tivité, la puissance et la durée de ses actions. 1û On indiquera ci-après le mode opératoire de la synthese du chloXhydrate du nouveau composé désigné par la suite, Agr 529. On chauffe sous reflux pendant 10 heures un mélange de 4 g (13,2 mmoiles) de chloro-6 purins riboside, 3,6 g (ZC,4 mmoles) de chlorhydrate de l'amide Y-amino buty- zique et de 4 9 (39,6 mmoles) de triéthylamine, dans ml de mélange éthanol-eau (8: 2). On laisse refroidir la asolution, e oui entraine ia f.=r- m.ation d'un s:i=i - ue:'n 'te. O -...... st ^ rC r __= u - ne u-m_- fs Zns ' t eau, D: _Zn5 i' onsnol a:u!u. _n __ient 3,5 9 f'un priii u!-ln: floconneux soit 9,9 mmoles (75 %) C.C.M.: Rf = 0,66 Plaque de cellulose F 0,1 mm Solvant de migrstion NH3 10 % H20 20 % Isopropanol 70 % p.f.: 215 OC. On dissout ces 9,9 mmoles de N6-(carboxamido-3 propyl) adénosine dans 400 ml d'isopropanol chaud auxquels on aJoute goutte à goutte 10 mmoles de HCl conc. 35 % soit 0,36 g. On laisse refroidir et le chlorhydrate attendu précipite. On filtre, ce qui fournit 3 g (78 %) de pou- dre blanche. p.f.: 170 C. M.A.: calculé: C: 43,35; H: 5,45; N: 21,67 trouvé: C: 43,20; H: 5,60; N: 21,30 RMN: confirme la structure du produit. La toxicité de l'Agr 529 a été étudiée sur le rat, en utilisant 7 rats mâles de 250-300 grammes, l'Agr 529 étant administré en intrapéritonéale. Le résultat des essais est-donné dans le tableau ci-dessous, donnant le pourcentage de mortalité en fonction du temps. TOXICITE DE L'AGR 529 CHEZ LE RAT % Mortalité % Mortalité % Mortalité % Mortalité % Mortalité Doses à 1 heure à 2 heures à 6 heures à 24 heures 7 jours d'Agr 5 500 mg/kg 0 % 0 % 0 % 100 % 350 mg/kg 0 % 0% 0% 100% / 300 mg/kg 0 % 0 % 0 % 0 % 100 % (48 h) 250 mg/kg 0 % 0 % O % 0 % 0 % On constate que pour des doses inférieures ou égales à 250 mg/kg la mortalité est nulle à 7 jours et plus. Les doses pharmacologiques se situent entre 0,25 et mg/kg. Action anti-inflammatoire. Cette action a été testée sur l'oedème provoqué par le kaolin chez des rats miles, Sprague-Dawley, d'un poids moyen de 350 grammes. Les animaux sont répartis au hasard dans quatre groupes, un groupe-témoin qui reçoit par voie intrapéritonéale (ip) du sérum physiologique, et trois groupes traités appelés Essais 1, Essais 2, Essais 3 qui reçoivent (ip) l'Agr 529, respectivement 5 mg/kg, mg/kg, et 50 mg/kg. Puis trente minutes après le trai- tement, tous les animaux reçoivent par voie sous plan- taire 0,1 ml d'une suspension à 10 % de kaolin. Le volu- me de la patte est mesuré à l'aide d'un pléthysmomètre (Hugo Basile 7150), une heure avant l'oedème et une, deux, quatre et cinq heures après. Les résultats exprimés dans le tableau I (voir page 4) montrent qu'à la dose de 50 mg/kg, l'Agr 529 assure 100 % d'inhibition à la quatrième heure et présente une action antiinflammatoire déjà considérable pour 5 et mg/kg. Action analgésique. Cette action a été testée sur des souris mâles de trente grammes, l'Agr 529 étant administré en intrapéritonéale, et le test utilisé étant celui de la plaque chauffante. L'appareil utilisé est un analgésimétre à plaque chauf- fante électrique SOCREL (Apelex). La température de la plaque est stabilisée à 56 C. On note le temps de réponse correspondant au temps nécessaire à l'animal pour se lé- cher les pattes antérieures ou postérieures. Pour chaque animal, le temps de réponse moyen correspond à la moyen- ne de trois mesures consécutives. Le test est réalisé Tableau 1 Evolution du volume de la patte exprim,é en pourcentage du volume initial. Traitement Oedème 1 heure 2 heures 4 heures 5 heures - t- Témoins Soluté salé Kaolin 15,3-2,25 17,35-2,4 20,9-2,8 21,1-5,7 isotonique 9. (6) (6). Agr 529 Essais 1 + Esi1 t 5 mg/kg l Kaolin 8,1-2,3 11,0-3,3 9,6-3,3 12,8-1,6 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _(5) (5) Essais 2 Agr 529 Kaolin 10,1-1,3 9,9-1,3 8,4-1,1 7,1-1,55 mg/kg _.... . .. . (5) Agr 529 Essais 3 Agr 529 Kaolin 1,3-2,4 -0,15-3,0 1,3-2,3 mg/kg Uré -o CO au temps 0, puis 10 minutes après l'injection de la dro- gue, et 30 minutes après. Les résultats sont donnés dans les tableaux 2 ci-dessous et 3 (voir page 6) qui montrent l'importante action anal- gésique de la molécule. TABLEAU 2 Test anal- NIature et do- Temps moyen ini- Temps- moyen de re- Temps moyen de gésique ses du pro- tial de réponse cherche au test réponse au tes duit étudié au test t en 10 mn après injec- 30 mn après in seconde o tion du produit jection du pro considéré to10 en duit considéré seconde t30 en seconde Plaque Soluté salé chauf- isotonique 4,2 -+ 0,3 4,9 + 0,4 4,9 + 0,4 fante 9 %0 iP 56C Plaque AGR 529 chauf- 10 mg/kg 3,4 + 0,5 18,4 + 2,4 15,4 - 4,9 fante iP 560C Plaque AGR 529 chauf- 5 mg/kg 3,3 + 0,5 8, 3.+ 1,5 9,2 + 1,9 fante 56oC L'action sur l'activité locomotrice. Elle a été testée sur la souris à l'aide d'un dispositif électronique à comptage automatique qui enregistre sépa- rément les déplacements et les mouvements de redressement de deux lots de cinq souris mâles, toutes les cinq minu- tes et pendant une heure. L'évolution de l'activité motrice est comparée à celle d'un lot témoin dont les animaux reçoivent du soluté salé isotonique dans les mêmes conditions que le lot TABLEAU 3 Etude de l'effet analgésique consécutif à l'administration d'Agr 529 à la dose de 1 mg/kg en intrapéritonéale. Nature et dose du Temps moyen initial de Temps moyen de réponse Test analgésique p au test dix minutes après produit étudié réponse au test en S injection du produit en S e - = 1 e 5 Ma n=8+ +) +13% NS + Plaque chauffante 56oC Soluté salé 6,1-0,6 6,9-0,6 isotonique 9, i.p. (2,5012) f (2,4993) n-8 + +81%S +65% Plaque chauffante 560C Agr 529 6,3-0,7 11,4-1,9 1 mg/kg i.p. (_,_47Q)_(_R,99_ La comparaison des lots est faite par le test de Student avec NS: non significatif; et * P w uo soumis à l'action de l'Agr 529 en intrapéritonéale. On constate qu'à partir d'une dose de I mg/kg l'Agr 529 conduit à une diminution de 75 % d'activité, après une heure. La molécule de l'invention présente une action fortement hypotensive ou anti-hypertensive, comme le prouve notam- ment le fait qu'en perfusion i.v. sur le rat de 25 à mg/kg, l'Agr 529 provoque une chute de tension de mm de Hg. En intrapéritonéale, à la dose de 10 mg/kg, il potentialise la chute de tension due au phénobarbital i.p. en dose de 12 ou 30 mg/kg. L'intérêt de l'Agr 529 en anesthésie est démontré par le fait que chez le rat, pour une dose de pentobarbital (PO) induisant le sommeil anesthésique (30 mg/kg, i.p.), l'ad- ministration trente minutes avant, de 10 mg/kg d'Agr 529, augmente la durée de la narcose de 119 %. Pour une dose i.p. de PB de 12 mg/kg, qui ne fait pas perdre à l'animal son réflexe de redressement, l'injec- tion (i.p.), trente minutes avant, de 10 mg/kg d'Agr 529 provoque une narcose comparable à celle des doses anes- thésiques de P.8. (30 mg/kg). L'étude pharmacologique permet donc de proposer, comme indications thérapeutiques à l'emploi de la molécule de l'invention, un grand nombre de désordres patholo- giques. Ont été soulignés particulièrement, plus haut, les effets antiinflammatoires, analgésiques, tranquillisants, anti- hypertenseurs et anesthésiques. Comme indiqué plus haut, le composé de l'invention se distingue des adénosines substituées en N connues notam- ment par la puissance de son action. C'est ainsi que si l'on compare l'action sur l'activité locomotrice d'Agr 529 et du composé de formule (X) H N(CH2)3-COOH } (X) N Ht OH OH on constate que pour obtenir une réduction, après une heure, de l'activité locomotrice de 75 %, il faut uti- liser une injection i.p. de - 14 mg/kg du composé X - et I mg/kg d'Agr 529, qui dans ce test, parait donc 14 fois plus puissant. De même - on a comparé (par le test de la plaque chauf- fante) l'action analgésique de l'Agr 529 du composé X et d'une autre adénosine substituée N6, connu, de for- mule Y HX N>/(CH2)4-COOH N HO OH OH Les résultats de l'étude comparative sont donnés dans le tableau suivant, o sont indiqués les pourcentages d'augmentation du temps de réponse, 10 minutes et minutes après injection de la drogue, par rapport au temps de réponse au temps O. X (70 mg/kg) 10 minutes 30 minutes + 306,25 % + 342,85 % Y (73 mg/kg) + 136l % + 230 % Agr 529 (10 mg/kg) + 440 % + 353 % On voit que l'Agr 529 a une action analgésique nettement plus forte que celle des composés X et Y et en particulier que celle du composé Y. Outre la forme intrapéritonéale d'administration, on propo- sera en clinique l'utilisation des voies intra-veineuse, intramusculaire et orale. Les doses intra-veineuses chez le lapin s'échelonnent entre 1 et 75 mg.kg avec survie définitive. Pour l'étude sur l'homme, des doses de 0,5 à 10 mg.kg peuvent être envisa- gées pour l'introduction par voie intra-veineuse. Par voie orale (intubation) chez l'animal, les doses dix fois supérieures aux doses utilisées par voie I.P. sont nécessaires. On peut penser que chez l'homme des doses de 50 mg.kg seront utiles. Pour la voie intra-musculaire chez l'homme, on peut pen- ser qu'une dose intermédiaire sera utile. RE I:D I S A1 'S REVE.;DISAT!0,!5: t.- Nouvelle adénosine substituée en N6, savois 1 Nl - (carboxamido-3-propyl)-adénosine, de formule: H. (CH2)3-C-NHz w,,: HIJ OH OH Z.- Nouveaux médicamments utiles, notamment, comme anti- inflammatoires, analgésiques, tranquillisants, antihyper- tenseurs et anesthésiques, caractérisés par le fait qu'ils contiennent, comme principe actif, au moins un composé selon la revendication 1.