FR 2584076 A1 19870102 FR 8609350 A 19860627 - 1 - La présente invention a pour objet de nouveaux disaccha- rides, leur préparation et leur utilisation comme médicaments. L'invention concerne en particulier les disaccharides de formule I HO-. w z HO_\ -.OH Io_./ 4.o-i R' R'4 O 34 Y X I I P4 P I dans laquelle Ri', R2', R3' et R4' représentent, indépendamment les uns des autres, l'hydrogène ou un groupe acyle éventuellement substi- tué, et W, X, Y et Z représentent, indépendamment les uns des autres, l'oxygène ou un groupe imino, avec la condition que a) au moins un des symboles R1', R2', R3' et R4' représente un groupe acyle éventuellement susbtitué, et b) lorsque Z et X représentent un groupe imino et W et Y repré- sentent l'oxygène, a) RI' et R2' ne signifient pas simultanément un groupe (R)-3-hydroxytétradécanoyle, pour autant que R3' et R4' soient identiques et représentent un groupe (R)-3-hydroxy- tétradécanoyle ou que R4' représente un groupe (R)-3- dodécanoyloxytétradécanoyle et R3' un groupe (R)-3-tétra- décanoyloxytétradécanoyle, * B) R2' soit autre que l'hydrogène ou qu'un groupe (R)-3-hydroxytétradécanoyle, pour autant que R1' et R3' représentent l'hydrogène et R4' représente un groupe (R)-3hydroxytétradécanoyle, et - 2 - t) R3' soit autre qu'un groupe -(CO)2-CH2(CHOH)4-CH20H, pour autant que les autres substituants représentent l'hydro- gène, et leurs sels. L'invention a également pour objet un procédé de prépara- tion des composés de formule Ia HO- _ \O HIO-_/ \*%.-O _CH2 g \. -O OH Ia W Z - HO".o-OoPf k3 4 /OH À1 R2 dans laquelle X, Y, W et Z ont les significations données précédem- ment, et R1, R2, R3 et R4 représentent, indépendamment les uns des autres, l'hydrogène ou un groupe acyle éventuellement substitué, avec la condition qu'au moins un des symboles R1, R2, R3 et R4 représente un groupe acyle éventuellement substitué, et de leurs sels, procédé selon lequel on condense par voie enzymatique un composé de formule II B0_ HO-_ \,OH OH - P t O |RX -3- dans laquelle W et Z ont les significations données précédemment, R3" et R4" ont les significations données précédemment pour R3 et R4 excepté l'hydrogène, et U représente l'uridine, avec un composé de formule III HO-. _ OH HO./ O./ o.III __ OH I I R" R" 1 2- dans laquelle X et Y ont les significations données précédemment, et R11' et R2" ont les significations données précédemment pour R1 et R2, avec la condition qu'au moins un des deux substituants repré- sente un groupe acyle éventuellement substitué et que lorsque X ou Y représente un groupe imino, le sustituant RI" ou R2" lié au groupe imino soit autre que l'hydrogène, et, si on le désire, on hydrolyse le composé résultant en composé correspondant de formule Ia dans laquelle, lorsque X, Y, Z et/ou W représentent l'oxygène, R1, R2, R3 et/ou R4 représentent l'hydro- gène, ou si on le désire, on soumet le composé résultant à une réaction d'acylamidase, ce qui donne le composé de formule Ia dans laquelle, lorsque X, Y, Z et/ou W représentent un groupe imino, R1, R2, R3 et/ou R4 représentent l'hydrogène, et on récupère les composés de formule Ia sous forme libre ou sous forme de sels. La condensation enzymatique peut par exemple être effec- tuée dans un système tampon, par exemple dans le tampon tris à pH 7. On peut opérer à des températures égales ou supérieures à la température ambiante, par exemple à 30 C. On peut utiliser comme extrait enzymatique une préparation obtenue à partir d'une bactérie à gram négatif, de préférence à partir des souches de E. coli - 4 - [Raetz, J.Biol.Chem. 259 (1984) 4852]. Les souches préférées sont celles produites par manipulation génétique en vue d'une surproduc- tion de l'enzyme désirée. L'hydrolyse éventuelle peut être effectuée selon les méthodes décrites dans la littérature. On peut effectuer la réaction d'acylamidase en procédant de manière analogue à celle décrite par C.R. Verret et coll. dans J.Biol.Chem. 257 [1982] 10 222. Les composés de formule I ainsi obtenus peuvent être iso- lés et, si on le désire, être purifiés selon les méthodes connues. Les composés de formule Ia et III peuvent exister sous forme libre ou, éventuellement, sous forme de sels. Une forme libre peut être transformée en sel selon les méthodes habituelles, et vice-versa. Les symboles R1, R2, R3 et R4 sont de préférence iden- tiques. Ils représentent de préférence l'hydrogène ou un groupe acyle contenant de préférence de 4 à 20, plus particulièrement de 12 à 16 atomes de carbone, spécialement 14 atomes de carbone. Ils peuvent par exemple être substitués en position 3 par un groupe hydroxy, acétoxy ou acyloxy tel que défini ci-dessus. La configura- tion de l'atome de carbone en position 3 peut être (R) ou (S). Les symboles R1, R2, R3 et R4 peuvent donc être présents dans un compo- sé de formule Ia sous forme achirale ou sous forme (R), (S) ou racémique. Cela s'applique également aux composés de formule II, III ou IV. La configuration demeure inchangée au cours du procédé de l'invention, ce qui signifie que lorsqu'on utilise un produit de départ sous forme (R), (S) ou racémique, on obtient un produit final (R), (S) ou racémique correspondant. Les composés préférés sont les composés de formule Ia dans laquelle RI, R2, R3 et R4 représentent un groupe acyle éventuelle- ment substitué. D'autres composés préférés sont les composés de formule Ia dans laquelle, lorsque R1, R2, R3 et/ou R4 représentent l'hydrogène, Y, X, W et/ou Z représentent l'oxygène. - 5 - Les composés de formule Ia sont de préférence obtenus sous forme de sels. Pour augmenter la solubilité dans l'eau, on utilise de préférence des composés basiques hydrophiles, par exemple le tris-(hydroxyméthyl)aminométhane ou la L-lysine. Les composés de formule II peuvent être obtenus selon les méthodes connues en faisant réagir un composé de formule III avec l'uridine-5'-monophosphate activé. Les composés de formule III dans laquelle a) Y représente l'oxygène et X représente un groupe NH avec la condition que a) lorsque Ri" représente un groupe (R)-3-hydroxytétra- décanoyle, R2" soit autre qu'un groupe (R)-3- hydroxytétradécanoyle ou (R)-3-hexadécanoyloxy- tétradécanoyle, 3) Ri" soit autre que l'hydrogène, et Y) Ri" et R2" ne signifient pas simultanément un groupe acétyle ou -CO(CH2)o10CH3, b) Y et X représentent l'oxygène ou c) Y représente un groupe NH et X représente l'oxygène, avec la condition que au moins un des deux substituants R1i"' et R2" représente un groupe acyle et que lorsque X ou Y représente un groupe imino, le substi- tuant Ri" ou R2" lié au groupe imino soit autre que l'hydrogène, sont nouveaux et font également partie de la présente invention. Les composés de formule III peuvent être obtenus selon un procédé comprenant a) pour la préparation des composés de formule IIIa 1Ro-- OH Ho _ / \. _o.PIa % / ÈOH Y' X' R" R" R1 2 - 6 - dans laquelle RI" et R2" ont les significations données précédemment et soit X' et Y' représentent l'oxygène, soit Y' représente un groupe imino et X' représente l'oxygène, la transformation du groupe hydroxy libre dans un composé de formule IV RO-. \.__/ RO-! \.oH IV RO_/ OH _. 1. I _ Y' X'. I I R" R" dans laquelle Ri", R2", X' et Y' ont les significations données précédem- ment, et R signifie un groupe protecteur, en un groupe protégé sous forme d'ester phosphorique, ou bien b) pour la préparation des composés de formule IIIb HO- OH -0 /O IlIb HO _...- 0. - - - / 0 0 14H. lI I R1 Rj dans laquelle RI" et R2" ont les significations données précédemment, l'acylation des composés correspondants de formule IIIc -7RO-. -0..0 RO-'/ \IIIc.10 >' 'O'POR' \ i ô "-O R ' IIC i HO NH I po _ R" dans laquelle R2" et R ont les significations données précédemment, et R' représente un groupe protecteur, et l'élimination subséquente des groupes protecteurs. On peut effectuer par exemple le procédé a) en dissolvant le composé de formule IV dans un solvant inerte, par exemple un éther cyclique tel que le tétrahydrofuranne, et en faisant réagir à basse température, par exemple à -70 C, avec du butyllithium dans un hydrocarbure aliphatique tel que l'hexane, puis en ajoutant du phosphorochloridate de dibenzyle. Le produit obtenu peut être isolé et éventuellement purifié selon les méthodes habituelles. Les grou- pes hydroxy libres du reste phosphate sont protégés, par exemple par des groupes benzyle. L'élimination des groupes protecteurs peut également être effectuée selon les méthodes connues. On peut par exemple éliminer selon les méthodes classiques un groupe protecteur sous des conditions acides, par exemple avec un acide aqueux (échangeur d'ions), ou par hydrogénolyse. On peut effectuer par exemple le procédé b) en dissolvant le composé de formule IIIc dans un solvant inerte, par exemple dans un hydrocarbure chloré tel que le chlorure de méthylène, avec un agent d'acylation, avantageusement avec addition de dicyclohexyl- carbodiimide et de 4-diméthylaminopyridine, et en opérant à basse température, par exemple à environ 4 C. On peut isoler le produit du mélange réactionnel et le purifier, si on le désire, selon les méthodes habituelles. On élimine ensuite les groupes protecteurs présents selon les méthodes connues. -8- Comme groupe protecteur, on peut utiliser n'importe quel groupe utilisé habituellement comme groupe protecteur dans la chi- mie des saccharides. Les deux substituants R peuvent par exemple représenter tous les deux un groupe benzylidène ou isopropylidène. Comme groupes protecteurs du reste phosphate, on peut aussi uti- liser des groupes protecteurs connus tels que le groupe benzyle. Les composés de formule HIIIc sont nouveaux et peuvent être obtenus selon le schémaréactionnel suivant: HO_. HO-- \--OH HO_/ \oH HO\ acylation HO_. N/ HOi \-OH \. HO NHR2 ROn >protection (pos. 4 + 6) RO_ -._OH / \ HO NHR" Protection 2 RO_. \_-_ ROI OH TBDMS.O | NHR" j 2 RO-.. RO. OR' OR' R\ o ROUI. J \Ow > RONx % OR TBDMS. O IHR2 HO NHR 2 HO IIIc TBOMS= tert, -butyldirnthylsilyl - 9 - Les composés de formule IV peuvent être obtenus selon les schémas réactionnels suivants, les groupes hydroxy qui ne partici- pent pas à la réaction étant avantageusement sous une forme proté- gée. Les substituants ont les significations suivantes: R, R' = groupes protecteurs R5 = les deux symboles possèedent, indépendamment l'un de l'autre, la signification donnée pour R1, R2, R3 ou R4 Ac = acétyle TBDMS = tert. butyldiméthylsilyle. - 10 - 1. Préparation des composés de formule IVa: O--. AcO -. _Y \-o '. -_o O-_./\.-OH ' ' ';AcO-__/.-OAc / \ _N3 O2N N3 H3 HOH.O 0 réductionHO %.__ 0 N N3 / \ reduction 02N{NH2 HO_. HO-. protection (pos. 2)-. e HO-./ >.--OH \.-o \._ HO--', >OHOH HO! \.-OH H2N NH2 \HO--.- accyation_ O 2N!NHR HO_ I réduction -OH HO--/.H _OH - À I HN NHRs _de 9rotection(pos. 4+6) H2N/' 'NHRR_ HO -acylation RO-! OH HO-j-.\._oH I HO..o_ _oHR5 HN N,.. RS'HNH %.HNI %HR IVa (les 2 Rsidentiques) deprotection (p.os. 2) nv-'".% O protection (pos. 4 + 6) RO_ /\._OH i /---\ R5HN NHR5 IVa (les 2 Rdifférents)- \_//z - 11 - 2. Préparation des composés de formule IVb HO -. HO \-OH N un i-T 3 O protection (pos. 4 + 6) RO / RO_- \ --OH N3| OH RO.... N0 protection (pos. 1) RO o \._0 RO / %-O.TBDMS I I N31 OH 1. réduction RO-.. 2. acylation RO../.-O.TBDMS \; R5H | ORS RO5 '..[O deprotection (pos. 1) RO_ I RO.- \-OH J R5HN. OR5 IVb - 12 - 3. Préparation des composés de formule IVc AcOO. --O AcO! % OAc _/ / 'OA AcO OAC AcO._ VI.. protection (pos. 1) AcO! _ O.CH2CC1 ! /. 2 3 _. AcO OAc HO, deprotection p(os. 2, 3, 4, 6) HO--.O HO- _ -_O.CH2CC13 HO OH RO protection (pos. 4 + 6) RO-* \ - O.CH2CC13 À _ HO OH RO -. ', acylation RO _. 4 déprotection (pos. 1) -0 RO-!-.\. I RO OH \,.. R50 OR5 o 0% IVc - 13 - Lorsque la préparation d'un produit de départ quelconque n'est pas décrite en détail, ce produit est connu ou peut être pré- paré selon les méthodes connues ou en procédant de manière analogue à celle décrite dans les exemples. Les exemples suivants illustrent la présente invention sans aucunement en limiter la portée. Dans ces exemples, les tempé- ratures sont indiquées en degrés Celsius. EDTA signifie l'acide édétique (acide éthylènediaminetétraacétique), DTE signifie la 1,4-dithioérythrite, UDP représente l'uridinephosphate et tris est une abréviation du tris(hydroxyméthyl)aminométhane. 2S84076 Exemple 1 6-0-[2-déoxy-3-0-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-2-[(R)-3- hydroxytétradécanoylamido]--D-glucopyranosyl]-2,3-di-0- [(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-1-O-phosphono-a-D-gluco- pyranose On dissout 2,03 mg de UDP-2-dêoxy-3-O[(R)- 3-hydroxytétradécanoyl]-2-[(R)-3-hydroxy-tétradécanoyl- amido]-a-D-glucopyranose et 1,42 mg de 2,3-di-O-[(R)- 3-hydroxytétradécanoyl]-1-0-phosphono-a-D-glucopyranose, tous les deux sous forme de sels tris, dans du tampon tris 10 mM, pH 7,contenant 0,2 mM de EDTA et 0,2 mM de DTE et on incube à 30 avec 60 pi d'extrait enzy- matiqpe. L'extrait enzymatique peut être obtenu comme suit: On cultive E. coli JB 1104 dans une culture L (préculture + 10 ug d'ampicilline / ml à 30 pendant la nuit; culture principale à 300 dans un fermenteur à agitation, en partant à partir de OD550nm= 0,1 jusqu'à OD550nm = 1). On recueille les cellules par centrifugation à 10.800 g (10 minutes / 4 ), on met en suspension le culot de centrifugation dans du tampon tris 10 mM, pH 7,0 + 0,2 mM de EDTA et 0,2 mM de DTE et on centrifuge à nouveau (6000 g, 10 minutes / 4 ). Le culot de centrifugation est ensuite remis en suspension dans le tampon ci-dessus et est fractionné aux ultra-sons (5 x 20 secondes/ secondes de pause avec 120 watts). Les fragments cellulaires sont séparés par centrifugation (12000 g, 10 minutes / 4 ) et la solution est soumise à une ultracentrifugation (150.000 g, 90 minutes / 7 ). On récupère les 2/3 supérieurs du surnageant. Cette fraction est soumise à une précipitation fractionnée avec du sulfate d'ammonium. Comme préparation enzymatique,on utilise la fraction à 10-40% de sulfate d'ammonium. Le culot de centrifugation résultant est mis en suspen- sion dans le tampon ci-dessus. - La réaction terminée (vérification par chromatographie en couche mince), on acidifie la solution à pH 2 avec de l'acide citrique et on la centrifuge. Le culot de centrifugation est mis en suspension dans le mélange chloroforme / méthanol / acide acétique / eau (65/15/5/2) et on le chromato- graphie sur gel de silice en utilisant le même éluant. Les fractions contenant le produit sont rassemblées et évaporées jusqu'à élimination complète de tout solvant organique, et le résidu est lyophilisé. On dissout le lyophilisat dans un mélange tétrahydrofuranne/ eau (8/2) et, dans ce solvant, on le transforme en sel tris sur un échangeur de cation sous forme tris. On évapore le tétrahydrofuranne et on lyophilise le résidu. Toutes les valeurs Rf sont déterminees sur plaques de gel de silice. Rf = 0,48 (chloroforme / méthanol / acide acétique / eau, 65/25/5/5). Exemple 2 6-O-[2-déoxy-3-O-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-2-[(R)-3- hydroxytétradécanoylamido]-f-D-glucopyranosyl]-2- déoxy-3-O-[(S)-3-hydroxytétradécanoyl]-2-[(S)-3-hydroxy- tétradécanoylamido]-l-O-phosphono-a-D-glucopyranose parties en volume d'une solution mM de 2-déoxy-3-0-[(S)-3-hydroxytétradéca- noyl]-2-[(S)-3-hydroxytétradécanoylamido]-l-0-phosphono- a-D-glucopyranose dans du tampon tris / HC1 10 mM (pH 7) contenant 0,2 mM de EDTA et 0,2 mM de DTE, 20 * parties d'une solution 5mM de UDP-2-déoxy-3-0-[(R)-3- hydroxytétradécanoyl]-2-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl- amido]-a-D-glucopyranose dans le même tampon et 20 parties de tampon tris / HC1 100 mM (pH7) contenant 2 mM de EDTA et 0,2 mM de DTE sont mis à réagir pendant 8 heures à 30 avec 40 parties d'une préparation enzymatique préparée comme décrit à l'exemple 1, dans du tampon tris / HC1 10 mM (pH 7) contenant 2 mM de EDTA, 2 mM de DTE et 0,1 % de Triton X100, la concentration finale en Triton X-100 étant réglée à 0,1 %. Le mélange réactionnel est lyophilisé, dissous dans environ 1/3 du volume initial d'éluant servant à la chromatographie subséquente pour la séparation selon le poids moléculaire (Sephadex LH 20, éTuant: pyridine / acide acétique / eau, 98/1/1) et filtré. Le volume de la colonne est environ 20 fois celui du volume de l'échantillon. Les fractions contenant le produit pur sont rassemblées et évaporées sous pression réduite, mises en suspension dans de l'eau exempt de pyrogène et lyophilisées. Apres lyophilisa- tion, on élimine le Triton X-100 en faisant digérer le produit dans de l'éther diéthylique. Apres centri- fugation, on dissout le culot de centrifugation dans un mélange de chloroforme et de méthanol 1/1, on filtre et on élimine le solvant sous pression réduite. A une suspension aqueuse du résidu, on ajoute la quantité stoechiométrique de L-lysine (base libre) sous forme d'une solution aqueuse 100 mM, pour obtenir le monosel de L-lysine, et on lyophilise à nouveau le mélange. Rf = 0,44 (chloroforme / méthanol/ acide acétique / eau / 65/25/5/5). Exemple 3 6-0-[2-déoxy-3-0-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-2-[(R)-3-hydroxy- tétradécanoylamido]-6-D-glucopyranosyl]-2-déoxy-3-0-[(R)-3- hydroxytétradécanoyl]-l-0-phosphono-2-[(R)-3-tétradécanoyloxy- tétradécanoylamido]-a-D-glucopyranose parties en volume d'une solution 5 mM de 2-déoxy-3-0-[(R)-3-hydroxy-tétradécanoyl]-l-0- phosphono-2-[(R)-3-têtradécanoyloxytétradécanoyl-amido]- a-D-glucopyranose dans du tampon tris / HCl 10 mM (pH 7) contenant 0,2 mM de EDTA et 0,2 mM de DTE, 20 parties d'une solution 5 mM de UDP-2-déoxy -3-0- [(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-2-[(R)-3-hydroxytétradé- canoylamido]-a-D-glucopyranose dans le même tampon et parties de tampon tris / HCI 100 mM (pH 7) contenant 2 mM de EDTA et 0,2 mM de DTE, sont mis à réagir pendant 48 heures à 30 avec 40 parties d'un extrait enzymatique (préparé comme décrit à l'exemple 1) dans du tampon tris / HC1 10 mM (pH 7) contenant 2 mM de EDTA, 2 mM de DTE et 0,1 % de Triton X- 100, la concentration finale en Triton X-100 étant réglée à 0,1%. On lyophilise le mélange, on le traite par de la pyridine et on le filtre. On concentre le filtrat sous pression réduite et on le chromatographie sur gel de silice en utilisant, comme éluant, un mélange chloroforme /.méthanol / eau / bromure de 2-phénéthyl- picolonium 800/175/22,5/2,5 On rassemble les frac- tions contenant le produit pur et on élimine le bromure de 2phénéthylpicolonium servant d'agent générateur de paire d'ions, par agitation avec 20 mM de H3P04 dans de l'eau. On concentre la phase organique sous pression réduite, on ajoute la quantité stoechiométrique de L-lysine base sous forme d'une solution aqueuse mM pour former le mono sel de L-lysine, et on lyophilise le mélange. Rf = 0,53 (chloroforme / métha- nol / acide acétique / eau 65/25/5/5). En procédant de manière analogue à celle décrite aux exemplesl à 3, on obtient les composés de formule I suivants, les quantités d'enzyme étant choisies, selon les composés de formule II et III Z584076 utilisées, de telle manière que la réaction se déroule de préférence pendant environ 24 à 48 heures. TABLEAU R1 = R2 = R3 = R4 = (R)-3-hydroxytétradecanoyl - Exemple 10 6-O-[2-déoxy-3-0-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-2-[(R)-3- hydroxytétradécanoylamido]-5-D-glucopyranosyl]-2-déoxy- l-O-phosphono-3-0-tétradécanovl-2-tétradécanoylamido-a- D-glucopyranose Le composé du titre est obtenu de manière analogue à celle décrite aux exemples 1 à 3. Rf = 0,50 (chloroforme / méthanol / acide acétique / eau 65/25/5/5). Exemple ll 6-0-[2-déoxy-3-0-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-2-[(R)-3- hydroxytétradécanoylamido]-6-D-glucopyranosyl]-2- acétamido-2-déoxy-3-0-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-1-0- phosphono-a-D-glucopyranose Le composé du titre est obtenu de manière analogue à celle décrite aux exemples 1 à 3. Rf = 0,32 (chloroforme / méthanol / acide acétique / eau / 65/25/5/5). Exemple W Z Y X Rf 4 O NH NH NH 0,45 NH NH NH NH 0,40 6 O O O NH 0,49 7 O NH NH O 0,39 8 NH NH O NH 0,41 9 O O O O 0,48 Exemple 12 6-0-[2-déoxy-2-[(R)-3-hydroxytétradécanoylamido]-g-D- glucopyranosyl -l-O-phosphono-a-D-glucopyranose On dissout 5 mg de 6-O-[(2-déoxy-3-O- [(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-2-[(R)-3-hydroxytétradéca- noylamido]-f-D-glucopyranosyl]-2,3-di-O-[(R)-3-hydroxy- tétradécanoyl]-l-O-phosphono-a-D-glucopyranose dans un mélange à parts égales de chloroforme et de méthanol, on fait réagir avec une solution ammonicale aqueuse à 25% (1/3 du volume) et on laisse reposer pendant la nuit. La réaction terminée, on évapore le mélange-à sec, on triture le résidu dans de l'éther diéthylique afin d'éliminer les acides gras formés par coupure, on filtre le précipité et on le lave à l'éther. On dissout le résidu dans de l'eau, on ajoute la quantité calculée de tris pour former le di-sel de tris, et on lyophilise le produit. Rf = 0,45 (chloroforme / méthanol / acide acétique / eau 25/15/2/4). Exemple 13 2-déoxy-3-O-[(R)-3-hydrox'ytétradécanoyl]-2-[(R)-3- hydroxytétradécanoylamido]-l-O-phosphono-a-D-gl ucopyranose a) 4,6:0:benzylidène-3-0-[(R)-3-benzyloxytetradécanoyl]-:_ 2:[.(R-3- benz. yl:oxttradcano2lamido]-2-déox-::-: dibenzylBhos2bhono-a-:D-:g!ucoYranose A une solution refroidie à -l0 et constituée de 3,9 g de 4,6-O-benzylidène-2-[(R)-3- benzyloxytétradécanoylamido]-2-déoxy-1-0-dibenzyl- phosphono-a-D-glucopyranose, de 2 9 d'acide (R)-3- benzyloxytétradécanol'que et de 50 mg de 4-diméthyl- aminopyridine dans 20 ml de chlorure de méthylène, on ajoute 2 g de dicyclohexylcarbodiimide et on maintient le mélange réactionnel à 4 pendant la nuit. On filtre ensuite le mélange, on évapore le filtrat à siccité, on reprend le résidu dans une petite quantité d'un mélange toluene / acétate d'éthyle 8/2 et on chromatographie avec le même solvant. F = 96-98 . 20[a]D= +33,3 (c = 1, chloroforme). Rf = 0,5 (toluène / acétate d'éthyle 2/1). b) 2-doxZ-3-::-[(R)-3-hydrox2t6tradécanoyl]-2-[(R)-3- hydroxytétradécanoylamido]-l-O-phose2hono-:a-D- luco- eyranose On dissout 4,2 g de 4,6-0-benzylidène-3-0- [(R)-3-benzyloxytétradécanoyl]-2-[(R)-3-benzyloxytétra- décanoylamido]-2-déoxy-1-0-dibenzylphosphono-a-D- glucopyranone dans 900 ml d'un mélange tétrahydro- furanne / eau (85/15) et on hydrogène pendant 2 heures à 40 et sous 10 bar, en présence de 1,5 g de charbon palladié à 10%. On élimine e'nsuite le catalyseur par filtration, on évapore le tétrahy- drofuranne et on lyophilise la suspension aqueuse. a]D = +28,5 (c = 0,2, chloroforme + 1 goutte [aD de méthanol). Rf = 0,56 (chloroforme / méthanol / acide acétique / eau 125/75/10/20). La purification ultérieure peut être effectuée comme suit: g de 2-déoxy-3-O-[(R)-3-hydroxytétra- décanoyl]-2-[(R)-3-hydroxytétradécanoylamido]-1-0-phos- phono-a-D-glucopyranose et 1,7 g de tris dans 150 ml de méthanol sont traités aux ultra-sons pendant 10 minutes à 45 dans un bain à ultra-sons. On centrifuge la suspension et on sépare le surnageant limpide et le culot de centrifugation par décantation. A cette solution, on ajoute 1,7 g de tris (dissous dans 20 ml de méthanol), on amorce la solution et on laisse cristalliser à la température ambiante. On obtient le di-sel de tris du composé du titre. On évapore les liqueur-mères à siccité. On dissout ensemble le résidu et le culot de centrifu- gation dans un mélange de 300 ml de chloroforme, de 600 ml de méthanol et de 240 ml d'eau (exempte de pyrogène). A cette solution, on ajoute encore 300 ml de chloroforme et 300 ml d'acide chlorhydrique 0,1 N, on agite avec précaution et on laisse les phases se séparer. On sépare la phase chloroformique et on l'évapore à sec. Le résidu est constitué de 2-déoxy- 3-0-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-2-[(R)-3-hydroxytétra- décanoylamido]-l-O-phosphono-a-D-glucopyranose impur. Le produit résultant est traité aux ultra-sons avec du tris et du méthanol comme décrit ci-dessus et est ensuite centrifugé. La solution est ensuite chromatographiee sur colonne de Sephadex LH 20 avec du méthanol comme éluant. On rassemble les fractions contenant le produit et on les évapore à sec. On obtient le mono-sel de tris du composé du titre. On dissout à 45 5,1 g de ce produit dans 40 ml de méthanol dans le bain à ultra-sons, on ajoute une solution de 0,74 g de tris dans 10 ml de méthanol, on amorce la solution et on laisse cristalli- ser d'abord à la température ambiante puis à 4 . On obtient ainsi des quantités supplémentaires de cristaux du di-sel de tris du composé du titre. Le résidu provenant des liqueur-mères et le culot de centrifugation peuvent être soumis à un autre essai de purification. F = 183-185 (décomposition); a]20 = +15 (c = 1,0 dans l'eau). Exemple 14 3-déoxy-2-O-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-3-[(R)-3-hydroxy- tétradécanoylamido]-l-O-phosphono-a-D-glucopyranose a) ?:2-0-:[ R-3:benzyloxtétradécanoyl]-3-[(R:-3-benzyloxy: tétradécanoyl amido]-3-déoxy1-0-dibenzylEphoshno- 4,6-O- isopreylidène-a-D-9ucopyranose A une solution refroidie à -70 et constituée de 4,85 g de 2-O-[(R)-3-benzyloxytétra- décanoyl]-3-[(R)-3-benzyloxytétradécanoylamido]-3- déoxy-4,6-0-isopropylidène-D-glucopyranose dans 40 ml de tétrahydrofuranne anhydre, on ajoute 8 ml de butyllithium 1,6 M dans de l'hexane. Apres 5 minutes, on ajoute à la même température une solution de 3,8 g de phosphorochloridate de dibenzyle dans 10 ml de benzène. On continue d'agiter à -70 pendant minutes, on ajoute 0,3 ml d'acide acétique et on concentre la solution au quart du volume initial. On dilue la solution avec 200 ml de chlorure de méthylène, on l'extrait avec 50 ml d'eau, 50 ml d'une solution diluée d'hydrogénocarbonate de sodium et 50 ml d'une solution de chlorure de sodium, en la sèche sur sulfate de sodium, on l'évapore à sec et on chromatographie le résidu(toluène / acétate d'ethyle 7/3). Rf = 0,58 (toluène /acetate d'éthyle 2/1). b) 3:deoxy:2:0:IIR2:3:hydr2xytétradécanoyl]-3:[(R2:3- hyldroxtêtradécanoylamido)-l:-0:2ohono-a-2sDh-qluco- pyranose Une solution de 980 mg de 2-0-[(R)-3- benzyloxytétradêcanoyl]-3-E(R)-3-benzyloxytétradé- canoylamido]-3-déoxy-1-0-dibenzylphosphono-4,6-0- isopropylidène-a-D-glucopyranose dans 100 ml de tétra- hydrofuranne, est hydrogénee pendant environ 5 heures sous pression normale, en présence de 300 mg de charbon palladié à 10%. On élimine ensuite le catalyseur par filtration, on ajoute de l'eau (10 ml) et du Dowex AG50WX8 H+ et on agite le mélange à la température ambiante jusqu'à scission complète du groupe isopropylidêne. On sépare l'échan- geur d'ions par filtration, on neutralise la solution avec du tris et on élimine le tétrahydrofuranne et l'eau par évaporation sous pression réduite. On lO dissout le résidu dans du méthanol et on le chromato- graphie sur Sephadex LH 20. Rf = 0,65 (chloroforme / méthanol /acide acétique / eau 125/75/10/20). Exemple 15 2,3-di-O-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-l-O-phosphono-a- D-glucopyranose a) d,6-0-benzylidène-2,3-di-O-[ I-3-benzl2oxytétra- décanol]-l-j:I:-dibenzylEhosBhono-a-D-glucoEyranose A une solution de 1 g de 4,6-0-benzy- lidène-2,3-di-0-[(R)-3-benzyloxytétradécanoyl]-D- glucopyranose dans 10 ml de têtrahydrofuranne anhydre refroidie à -70 , on ajoute goutte à goutte 0,9 ml de butyllithium 1,6 M dans de l'hexane. Apres 5 minutes, on ajoute goutte à goutte, à la même tempé- rature,une solution de 420 mg de phosphorochloridate de dibenzyle dans 4 ml de benzène. On continue d'agiter pendant 10 minutes à -70 , on neutralise la solution avec de l'acide acétique et on l'évapore à sec. Le résidu est chromatographié (gel de silice, hexane / toluène / acétate d'éthyle 4/4/1). Rf = 0,65 (tolène / acétate d'éthyle 6/1). b) 2,3-di-0-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-l-0-phosphono- a-D-2lucopyr nes On dissout 230 mg de 4,6-0-benzylidène-2,3-di-0- [(R)-3-benzyloxytétradécanoyl]-l-0-dibenzylphosphono- a-D-glucopyranose dans un mélange tétrahydrofuranne / eau 9/1 et on hydrogène pendant environ 5 heures sous pression normale en présence de 80 mg de charbon palladié à 10%. On élimine le catalyseur par filtra- tion, on neutralise la solution avec du tris et on l'évapore à siccite. Le résidu est chromatographié sur Sephadex LH 20 avec du méthanol. Rf = 0, 65 (chloroforme / méthanol acide acetique / eau /75/10/20). Exemple 16 2-deoxy-3-0-E(S)-3-hydroxytétradécanoyl]-2-E(S)-3-hy- droxy-tétradécanoylamido]-l-O-phosphono-a-D-glucopy- ranose a) 4,6-0-benzylène:-3-0-[S:-3-benzyloxytétradécanoyl]-2- E)1:-3:benzylxy!tétradécanoylamido]-2-déoxy-l-0- dibenzylphosphono-a:D:gluco2yranose Le composé est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple 13a). Rf = 0,44 (toluène/ acetate d'éthyle 4/1). b) 2-d:oxy-3-O-[:S:-3-h:drox2tètradécanoyl]:2-[Eji:3 hydroxytetradecanoylamido]-l-O-:2hoshono-a-D- luco: pïranose Le composé du titre est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple 13b). F = 150-200 (avec décomposition). Rf = 0,5 (chlorure de méthylène / méthanol / ammoniaque 1/1/1; phase inférieure). Exemple 17 2-deoxy-3-0-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-1-0-phosphono- 2-[(R)-3-tétradécanoyloxytétradécanoylamido]-a-D-gluco- pyranose a)),-:Q:b2 zylidêne-3-0-[(R)-3-benzyloxytétradécanoyl]- 2-déoxy-l--dibenzylehos2 eshono-2-[R -3-tétradécanovl- oxytétradécanooloamido] antlucnraose Le composé du titre est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple 13a). F = 82-950. Ea]0D = + 24,1 (c = 1, chloroforme). Rf = 0,7 (toluène/ acétate d'éthyle 2/1). b) 2:d:oxy:3-:O{R)-3:hydroxytétradécanoyl]-l:ophos2hono: 2-dx-h-3-:O ttradécanoyloxytétradécanoylamidol-a-D- gluco2pyranose Le composé du titre est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple 21b). aIDe= +14,30 (c = 1, tétrahydrofuranne / pyridine). Rf = 0,35 (chloroforme / méthanol / acide acétique / eau 80/25/5/5). Exemple 18 2-déoxy-1-0-phosphono-3-0-tétradécanoyl-2-tétradécanoyl amido-a-Dglucopyranose a) 4 60::benzylidène-2-déoxy-1-0-dibenzyl2hos hono-3-0- tétradécanoyl-2-tétradécanoylamido-a -D.-quc oyranose Le composé du titre est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple 13a) en utilisant de l'acide tétradécanoIque et un mélange toluène / acétate d'éthyle (4/1) comme éluant. F = 123-129 . Rf = 0,6 (toluène / acétate d'éthyle 2/1). b) 2:d2ox.y:1:2:hoseholno-3-0-tétradécanoyl-2-tétradé- canoylamido- -D gluc2opïranos e Le composé du titre est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple 21b). Rf = 0,65 (chloroforme / méthanol / acide acétique / eau /75/10/20). Exemple 19 2-déoxy-2-[(R)-3-hydroxytétradécanoylamido]-1-0-phospho- no-3-0O-[(R)-3-tétradécanoyloxytétradécanoyl]-a-D-gluco- pyranose a) 4,6-O-benzylidène-2-[1R2-3-benzyloxytétradécanoïlamido]- 2deéoxy:-1-0-dibenzylpos hon2:_:2:t::3_:ltradécanoyl: oxytétradécanoyl]-aD:gluc2yranose Le composé du titre est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple 13a), en utili- sant l'acide (R)-3-tétradécanoyloxytétradécanolque et le système toluene /acetate d'éthyle (4/1) comme mélange de solvants. F = 89-90 . [a]D20 = + 30,9 (c = 1, chloroforme / méthanol 1/1). Rf = 0,5 (toluène/ acétate d'éthyle 4/1). b) 2:déox>y:2:[IR1:3:hïdrOXtétradécanolOlaido]. 1:-0-pho s 2hono-3-O- [R:-3-tétradécano/loxytétradécanoyl -a-D- q1ucopXr2nose Le composé du titre est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple 21b). Le lyophi- lisat est dissous dans du méthanol et chromatographié sur Sephadex LH 20 en utilisant le même solvant. Rf = 0,32 (chloroforme / méthanol /acide acetique / eau / 80/25/5/5). Exemple 20 2-deoxy-2-E(R)-3-hydroxytétradécanoylamido]-l-0-phospho- no-3-0-tétradécanoyl-a-D-glucopyranose a) 4,6-0-benzylidène-2-[Rl:-3-benzyloxytétradécanol!:- amido]-2-deox:::-1-0-dibenzyl2EhosEhono-3-0-tétradé- ú2noyl-a-D-luc2pyranose Le composé du titre est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple 13a), en uti- lisant l'acide tétradécanolque et le système toluène/ acétate d'éthyle (3/1) comme mélange de solvants. F = 125,5 - 126,5 . Rf = 0,6 (toluène / acétate d'éthyle 3/2). b) 2éoxydroxyétradcanolamido]-1-0-ehos- ehono-3-0O-tétradécanoyl-a-D-glucoBpyranose On dissout 354 mg de 4,6-Obenzylidène- 2-[(R)-3-benzyloxytêtradécanoylamido]-2-déoxy-l-0- dibenzylphosphono-3-O-têtradécanoyl-a-D-glucopyranose dans 30ml d'un mélange tétrahydrofuranne / eau (9/1) et on hydrogène pendant 10 heures souslapression normale en présence de 200 mg de palladium sur charbon. On sépare le catalyseur par filtration et on règle la solution à pH 7,5 avec du tris (hydroxyméthyl)- aminométhane. On évapore le têtrahydrofuranne sous pression réduite et on lyophilise la solution aqueuse. On triture 2 fois le lyophilisat dans de l'éther et on le sèche. Rf = 0,6 (chloroforme / méthanol / acide acétique / eau 125/75/10/20). Exemple 21 2-acétamido-2-déoxy-3-O-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-1- O-phosphono-a-D-glucopyranose a) 2-acétamido-4,6-0-benzylidène-3-0-[IR:-3-benzyloxy- _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _._ _ _ _ _ _. _ _ _ _ tétradécanol] -2-déoxy-1 -0-dibenzylp 2hosehono-a-D- 2!ucoeyranose À On refroidit à 0 une solution de 3,55 g de 2-acétamido-4,6-O-benzylidène-2-déoxy-l-O-diben- zylphosphono-a-D-glucopyranose et de 2,1 g d'acide (R)-3benzyloxytêtradécanoïque dans 15 ml de chlorure de méthylène et on ajoute 1,32 g de dicyclohexylcarbodiimide et de la p-diméthylamino- pyridine. Après 2 heures à cette température, la réaction est terminée. On filtre le mélange, on l'évapore à siccité et on chromatographie le résidu sur gel de silice d'abord avec un mélange chlorure de méthylène / méthanol (50/1) et ensuite avec un mélange toluène / acétate d'éthyle (2/1). Rf = 0,7 (chloroforme / méthanol 20/1). b) 2-acétamido-2-déooxy-3-0-:[LR-3-h:dro2xtétrad écanoyll] On dissout 2,08 g de 2-acétamido-4,6-O- benzyl idène-3-O-[(R)-3-benzyloxytétradécanoyl]-2- déoxy-l-O-dibenzylphosphono-a-D-glucopyranose dans un mélange tétrahydrofuranne / eau (9/1) et on hydro- gène pendant 3 heures sous pression normale en présence de 1 g de charbon palladié à 10%. On sépare le cata- lyseur par filtration, on évapore le filtrat et on le lyophilise. On dissout le lyophilisat dans du méthanol, on le neutralise avec du tris(hydroxyméthyl)- aminométhane et on le chromatographie sur Sephadex LH 20 avec du méthanol. [a]20 + 43,30 (c = 1, méthanol). Rf = 0,4 (chloroforme / méthanol I acide *acétique / eau 125/75/10/20). Exemple 22 1-0-phosphono-2,3-di-O-[(R)-3-tétradécanoyloxytétra- décanoyl]-a-D-glucopyranose a) 4,6-0-ben.: zl!idène-:-0-dibenz_!hbos.hono-2,3-di-O- _[5R:3:têtradé_canoyloxt_étrad_écanoïl]-a-D - gluco2_ra- nose Le composé du titre est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple 15a), le produit étant purifié par chromatographie sur gel de silice avec un mélange à parts égales d'éther et d'hexane comme éluant. Rf = 0,5 (éther / hexane 1/1). b) 1!:2Ohosphono-2,3-di:-O-[R2-3-tétradécanoyl xtétra- décanoyl]-a-D- lucoo ranose On dissout 470 mg de 4,6-O-benzylidene-1- 0-dibenzylphosphono-2,3-di-O-E(R)-3-tétradécanoyl- oxytétradécanoyl]-a-D-glucopyranose dans 47 ml de tétrahydrofuranne et on hydrogène pendant 1 heure sous pression normale en présence de 230 mg de charbon palladié. On sépare le catalyseur par filtra- tion, on concentre le filtrat à sec et on chromato- graphie le résidu sur gel de silice (chloroforme / méthanol / eau / triéthylamine 15/10/2/0,2). Les fractions contenant le produit sont rassemblées et évaporées à sec. Le composé du titre est obtenu sous forme de sel de di-triéthylamine-amine. Rf = 0,5 (chloroforme / méthanol /acide acétique / eau 80/25/5/5). Exemple 23 2-déoxy-3-0-[(R)-3-hydroxytétradécanoyl]-2-[(S)-3- hydroxytétradécanoylamido]-l-O-phosphono-a-D-glucopy- ranose a) 4,6-::benzylidène-3-0-[(R -3-benzyloxytétradécanoyl]- 2:[LS -3-benzyloxytétradécanoylamido]-2-déoxy-l-0- dibenzyl.hosehono:a:D:21uco2yranose Le composé est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple 13a). Rf = 0,44 (toluène/ acétate d'éthyle 4/1). b) 2-déox-3-0-[RL1:-3-hydroxytétradécanoyl:]-2-E[S) 3-:ydr2oxytradécanoylamido]-l-0-hos2ehono-a-D- 91 uc2pyranose Le composé est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple 13b). Rf = 0,5 (chlorure de méthylène / méthanol / ammoniaque 1/1/1, phase inférieure). D'autres caractéristiques des composés ont été obtenus en spectroscopie de masse par bombardement d'atomes rapides (FAB) (ions négatifs) (Raetz, J. Biol. Chem. 259/4852 [1984]). TABLEAU Exemple No. Masse 1 1325 2 1324 3 1534 4 1323 1322 6 1325 7 1324 8 1323 9 1326 1292 il 1140 12 647 Exempl e No: Spectre RMN (C1 N) 9.82 (d, 9 Hz, 1H); 6.65 (dd,8,8 et 3,5 Hz, 1H); 6.25 (t, 10 Hz, 1H); (C D5N) 5.83 (t, 10 Hz, 1H); 5.63 (d, 8,8 Hz, 1H); 5.35 (dd,10Q et 2,5 Hz, lH); 4.0 (t, 10 Hz, iH); 3.83 (m 1H). 13 5.49 (dd,3,5 et 7,5 Hz, 1H); 5.24 (dd,9,5 et 10,5 Hz, 1H); (CD3oD) 4, 17 (ddd, 2,5,3,5 et 10,5 Hz, 1H); 4.0 (m, 3H); 3.90 (dd, 2 et 12 Hz, 1H); 3.75 (dd, 5,5 et 12 Hz, 1H); 3.71 (s, Tris); 3,63 (t, Hz, 1H). 14 5.77 (dd,3,5 et 7,5 Hz, 1H); 4.77 (ddd, 2,5,3,5et 10,5 H-, (CDCi / 1H); 4.38 (dd, 9,5 et 10,5 Hz); 3.8 à 4.1 (m, 4H); 3.73 (dd, C3D) 5,5 et 12 Hz, 1H); 3.53 (t, 10 Hz, 1H). 5.71 (dd, 3,5 et 7,5 Hz, 1H); 5.48 (t, 10 Hz, 1H); 4.77 (ddd, 2, (C3OD) 4 et 10 Hz, 1H); 3.9 à 4.05 (m, 3H); 3.86 (dd, 2 et 12 Hz, 1H); 3.7'(dd, 5, 5 et 12 Hz, 1H); 3.67 (s, Tris); 3.58 (t, 10 Hz, 1H). 16 5.58 (dd,3 et 7 Hz, 1H); 5.22 (t, 10 Hz, 1H); 4.19 (dt, 3 et (CD i/ 10 Hz, 1H); 3.8 à 4.1 (m, 4H); 3.7 (s, Tris et d,d,lH); 3.46 C3) (t, 10 Hz, 1H). 17 5.46 (dd, 3 et 7 Hz, 1H); 5.22 (t, 10 Hz, 1H); 5.17 (m, 1H); (CrCI 4. 19 (dt, 3 et 10 Hz, 1H); 3.9 à 4.1 (m, 3H); 3.7 (s, Tris); CD303 3.65 (dd, 1H); 3.51 (t, 10 Hz, 1H). 18i étape a) 7.38 (m, 15H); 5.70 (dd, 3,5 et 6 Hz, 1H); 5.63 (d, 9,5 Hz, (protégé) 1H); 5.50 (s, 1H); 5.26 (t, 10 Hz, 1H); 5.08 (m, 4H); 4.38 (m, (CDC13) 1H); 4.08 (dd, 5 et 10Hz, 1H); 3.95 (dt,5 et 10 Hz, 1H); 3.73 (t, 10 Hz, 1H); 3.69 (t, 10 Hz, 1H); 2.29 (m, 2H); 1.89 (m, 2H). 19/ étape a) 7.2 à 7.45 (m, 20H); 6.34 (d, 9 Hz, 1H); 5.77 (dd, 3,5 et (protégé) 6 Hz, 1H); 5.49 (s, 1H); 5.29 (t, 10 Hz, 1H); 5.14 (quintet (CDC13) 6 Hz, 1H); 5.0 (m, 4H);4,51 et 4.41 (AB, 12 Hz, 2H); 4.41 (m, - 1H); 4.08 (dd,5 et 10 Hz, 1H); 3.95 (dt,5 et 10 Hz, 1H); 3.7 (m, 3H); 2,58 et 2.47 (ABX, 5,5,7,5 et 15,5 Hz, 2H). /étape a) 7.2 à 7.45 (m, 20H); 6.29 (d, 9 Hz, 1H); 5.74 (dd, 3,5 et (protégé) 6 Hz, 1H); 5.49 (s, 1H); 5.30 (t, 10 Hz, 1H); 5.0 (m, 4H); 4.52 (C:13) et 4.42 (AB, 11 Hz, 2H); 4.44 (m, 1H); 4.03 (dd, 5 et 10 Hz, 1H); 3.94 (dt, 5 et 10 Hz, 1H); 3.7 (m, 3H); 2.15 à 2.35 (m, 4H). 21/ étape a) 5.47 (dd, 3,5 et 7,5 Hz, 1H); 5.23 (dd, 9,5 et 10,5 Hz, 1H); (protégée) 4. 18 (ddd, 2,5, 3,5 et 10,5 Hz, 1H); 3.90 (m,- 3H); 3.85 (dd, 2 (CD3OD) et 12 Hz, 1H); 3.72 (dd, 5,5 et12 Hz, 1H); 3.68 (s, Tris); 3.61 (t, 10 Hz, 1H); 1.94 (s, -3H). 22/ étape a) 7.3 à 7.45 (m, 15H); 5.92 (dd,3,5 et6,7 Hz, 1H); 5.60 (tr 9, 5 (protégé) et 10 Hz, 1H); 5.48 (s, 1H); 5.02 à 5.22 (m, 6H); 4.95 (ddd, (CDC3) 2,5, 3,5 et 9,5 Hz, 1H); 4.10 (dd,4,5 et 10 Hz, 1H); 3.96 (ddd, ,9 et 10 Hz, 1H); 3.67 (t, 9,5 Hz, 2H); 2.60 (m, 2H); 2.38 (d, 6,5 Hz, 2H); 2.24 (t, 7,5 Hz, 2H); 2.12 (t, 7,5 Hz, 2H). 23/étape a) 7.2 à 7.42 (m, 25H); 6.49 (d, 9 Hz, 1H); 5.77 (dd, 3,5 et (protégé) 6 Hz, 1H); 5.45 (s, 1H); 5.35 (t, 10 Hz, 1H); 5.0 (m, 4H); 4.54 (CDC13) et 4.40 (AB, 11 Hz, 2H); 4,47 et 4.36 (AB, 11 Hz, 2H); 4.45 (m, 1H); 3.9 bis 4.1 (m, 2H); 3.6 à 3.8 (m, 4H); 2.58 (dd, 6,5 et 15,5 Hz, 1H); 2.34 (dd, 6 et 15,5 Hz, 1H); 2.2 (mrn, 2H). Les composés uti 1 i sés comme produits de départ peuvent être obtenus comme suit: - 33 - A) 4,6-O-benzylidène-2-[(R)-3-benzyloxytétradécanoylamido]-2- déoxy-1-O-dibenzylphosphono-a-D-glucopyranose (pour les exemples 13, 19 et 20) a) 2-[(R)-3-benzyloxytétradécanoylamido]-2-déox-:D-glucopyranose On agite pendant 24 heures à la température ambiante un mélange de 5,4 g de chlorhydrate de D-glucosamine, 10,8 g de N-[(R)-3-benzyloxytétradécanoyloxy]succinimide et 5 ml de diiso- propyléthylamine dans 25 ml de diméthylformamide sec. Le solvant est éliminé par distillation et le résidu est dissous dans un mé- lange de 150 g de chloroforme, 300 ml de méthanol et 120 ml d'eau. Aprèes avoir ajouté une partie supplémentaire constituée de 150 ml de chloroforme et de 150 ml d'eau, on sépare la phase inférieure et on la lave deux fois avec la phase supérieure constituée de 100 ml de chloroforme, 100 ml de méthanol et 90 ml d'eau. On évapore la solution et on la sèche sous vide poussé. On utilise le produit ainsi obtenu dans l'étape suivante sans autre purification. A des fins d'analyse, on purifie par chromatographie (toluène/éthanol 9/1) une petite partie du produit à l'état brut, F = 150-158'. [aD20 = +53' (c = 1,diméthylformamide) Rf (chloroforme/méthanol 9/1) = 0,3. b) 4,6:ç: -enylidène-2-[(R)-3-benzyloxytétradécanoylamidoj-2- déoxY-D-glucopyran2se Une solution de 5,83 9 de 2-[(R)-3-benzyloxytétradécanoyl- amido]-2-déoxy-D-glycopyranose, 3 9 de benzaldéhydediméthylacétal et 500 9 de monohydrate d'acide p-toluène-sulfonique dans 200 ml de diméthylformamide anhydre est maintenue pendant environ 3 heures à 55-60 et sous 30-40 mbar dans un évaporateur rotatif. Il ne reste ensuite aucun produit de départ. On sépare la majeure partie du diméthylformamide par distillation, on ajoute 500 ml de chlorure de méthylène et on extrait la solution deux fois avec 200 ml d'une solution diluée d'hydrogénocarbonate de sodium et 200 ml d'eau. On sèche la solution avec du sulfate de sodium, on l'évapore à sec et on chromatographie le résidu (toluène/acétate d'éthyle 6/4). - 34 - F = 162-165'. []a0 = +5,5' (c = 1, chloroforme) Rf (toluène/acétate d'éthyle 1/1) = 0,2. c) 4,6-O-benzylidène-2-[(R)-3-benzyloxytétradécanoylamido]-2- déoxy-1-O-dibenzylphosphono-a-D-glucopyranose A une solution de 4,86 g de 4,6-O-benzylidène-2-[(R)-3- benzyloxytétradécanoylamido]-2-déoxy-D-glucopyranose dans 40 ml de tétrahydrofuranne anhydre refroidie à -70 , on ajoute goutte à goutte 8 ml de butyllithium 1,6 M dans de l'hexane. Après 5 minutes à cette température, on ajoute goutte à goutte une solution de 3,8 g de phosphorochloridate de dibenzyle dans 10 ml de benzène. Après avoir agité pendant 10 minutes à -70, on ajoute 0,3 ml d'acide acétique et on concentre la solution à 1/4 de son volume initial. On dilue la solution avec 200 ml de chlorure de méthylène, on l'extrait avec 50 ml d'eau, 50 ml d'une solution diluée d'hydro- génocarbonate de sodium et 50 ml d'une solution diluée de chlorure de sodium, on la sèche sur du sulfate de sodium et on l'évapore à sec. Le résidu est chromatographié (toluène/acétate d'éthyle 7/3). F = 102-105'. [ta20 = +31,7- (c = 1, chloroforme) Rf (toluène/acétate d'éthyle 1/1) = 0,32. B) 4,6-0-benzylidène-2,3-di-0-E(R)-3-benzyloxytétradécanoyl]-D- glucopyranose (pour l'exemple 15) a) trichloroéthyl-2,3,4,6- tétra-Oacétyl:-i-D-gucopu ranoside A une solution refroidie avec de la glace et constituée de 2,34 g de penta-O-acétyl-D-glucopyranose dans 9 ml de trichloro- éthanol, on ajoute 0,9 ml de trifluoroéthérate de bore et on main- tient la solution pendant 4 heures à cette température. La solution est ensuite versée sur 100 ml.d'eau glacée, extraite avec 100 ml de chlorure de méthylène, la phase organique est séparée, lavée avec ml d'une solution d'hydrogénocarbonate de sodium et 50 ml d'eau, séchée sur du sulfate de sodium et évaporée à sec. Après purifica- - 35 - tion par chromatographie (gel de silice, toluène/acétate d'éthyle, 4/1), le produit est cristallisé dans un mélange d'acétate d'éthyle/éther de pétrole. F = 138-140'. Rf (toluène/acétate d'éthyle 1/1) = 0,67. b) trichloroéthyl-4,6-Obenzylidène-3-D-9lucopyranoside On dissout 7,13 g de trichloroéthyl-2,3,4,6-tétra-0- acétyl-B-D-glucopyranoside dans un mélange de méthanol et de chlorure de méthylène, on refroidit la solution avec de la glace et on fait réagir avec une solution de méthanolate de sodium (60 mg de sodium dans 26 ml de méthanol). Après 2 heures à 0 , la solution est neutralisée avec du Dowex AG 50 WX8 H+, les échangeurs d'ions sont filtrés et le solvant est évaporé sous pression réduite. On dissout le résidu dans 60 ml de benzaldéhyde, on ajoute 4,1 g de chlorure de zinc et on agite le mélange pendant 10 heures à la tem- pérature ambiante. On verse ensuite le mélange sur de l'eau glacée, on l'extrait avec de l'éther, on sèche la solution éthérée sur du sulfate de sodium et on l'évapore à sec. Le résidu est chromatogra- phié (gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 4/1). Rf (chloroforme/méthanol 9/1) = 0,60. c) trichloroéthyl-4,6-0-benzylidène-2,3-di-0-E(R)-3-benzyloxy- tétradécanoyl -J-D-glucopyranoside A une solution constituée de 800 mg de trichloroéthyl- 4,6-0-benzylidène-1-D-glucopyranoside, 1,4 g d'acide (R)-3- benzyloxytétradécanoïque et 20 mg de diméthylaminopyridine dans ml de chlorure de méthylène refroidie à 0 , on ajoute 930 mg de dicyclohexylecarbodiimide et on maintient le mélange réactionnel à 4 jusqu'au lendemain. On filtre ensuite le mélange réactionnel, on évapore le filtrat à sec, on dissout le résidu dans un mélange hexane/toluène/acétate d'éthyle (12/5/1) et on le chromatographie avec le même mélange de solvants. Rf (hexane/acétate d'éthyle 5/1) = 0,52. - 36-- d) 4 -:2:XIbz2Xidène-2,3-di-O-[(R)-3-benzyloxytétradécanoylj-D- glucopy'ranose On dissout 480 mg de trichloroéthyl-4,6-O-benzylidène- 2,3-di-O-E(R)-3-benzyloxy-tétradécanoyl]-f-D-glucopyranoside dans 50 ml d'un mélange de dioxanne et d'acide acétique (1/1) et on fait réagir par portions à la température ambiante avec de la poudre de zinc jusqu'à ce que le produit de départ soit entièrement consom- mé. On filtre le mélange réactionnel, on l'évapore à sec et on chromatographie le résidu (gel de silice, hexane/toluène/acétate d'éthyle 2/5/1). Rf (toluène/acétate d'éthyle 9/1) = 0,32. C) 2-0-[(R)-3-benzyloxytétradécanoyl]-3-[(R)-3-benzyloxytétra- décanoylamido]-3-déoxy-4,6-O-isopropylidène-D-glucopyranose (pour l'exemple 14) a) 3-azido-3-déoxy-4,6-O-isopropylidène-D-: l ucopyranose On dissout 1,02 g de 3-azido-déoxy-D-glucopyranose dans ml diméthylformamide sec, on ajoute 940 pi de 2-méthoxypropène et une quantité catalytique du monohydrate de l'acide p-toluène- sulfonique et on maintient la solution à la température ambiante pendant environ 2 heures. On neutralise l'acide p-toluènesulfonique avec de l'hydrogénocarbonate de sodium, onévapore la solution à sec et on chromatographie le résidu (gel de silice, chloroforme/ méthanol 9/1). Rf (chloroforme/méthanol 9/1) = 0,64. b) tert.-butjldiméthylsilvl-3-azido-3-déoxy-4,6-O- isopropylidène-5-D-glucopyranoside A une solution constituée de 560 mg de 3-azido-3-déoxy- 4,6-O-isopropylène-D-glucopyranose et de 310 mg d'imidazole dans ml de chlorure de méthylène sec, on ajoute 345 mg de chlorure de tert.butyldiméthylsilyle et on agite le mélange pendant 2 heures à la température ambiante. On filtre l'excès du chlorhydrate d'imi- dazole, on agite le filtrat deux fois avec 10 ml d'eau, on le sèche 25840'6 - 37 - sur du sulfate de sodium et on l'évapore à sec. Le résidu est chro- matographié (gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 12/1). Rf (toluène/acétate d'éthyle 1/1) = 0,6. c) tert.-butyldiméthylsilyl-2-0[4(R)-3-benzyloxytétradécanoyl- 3-[ (R)-3-benzyloxytétradécanoylamido)-3-déoxy-4,6-O- isopropylidène-3-Dglucopyranoside On hydrogène une solution de 3,1 g de tert.-butyldiméthyl- silyl-3-azido-3-déoxy-4,6-0-isopropylidène-5-D-glucopyranoside dans méthanol pendant 2 heures avec 300 mg de palladium à 10% sur charbon. Le catalyseur est filtré et le filtrat est évaporé à sec. Le résidu est dissous avec 5,35 g d'acide (R)-3-benzyloxytétra- décanoïque et 100 ml de diméthylaminopyridine dans 50 ml de chlorure de méthylène sec. On refroidit la solution avec de la glace et on ajoute 4,1 g de dicyclohéxyl-carbodiimide.Après environ 3 heures à la température ambiante, la solution est filtrée, le solvant évaporé et le résidu chromatographié (gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 9/1). Rf (toluène/acétate d'éthyle 6/1) = 0,42. d) 2-0-[(R)-3-benzyloxytétradécanoyl]-3-[(R)-3-benzyl oxtétra- décanoylamido] 3-déoxe-4,6-0-isopropylidène-D-glucopyranose A une solution comprenant 5 g de tert.-butyldiméthyl- silyl-2-O-[(R)-3-benzyloxytétradécanoyl]-3-E(R)-3-benzyloxytétra- décanoylamido]-3-déoxy-4,6-0-isopropylidène-1-D-glucopyranoside dans 100 ml de tétrahydrofuranne anhydre et refroidie à -60 , on ajoute goutte à goutte 5,2 ml d'une solution de fluorure de tétra- butylammonium dans du tétrahydrofuranne. On laisse monter la tempé- rature de cette solution à -40 et on la maintient à cette tempéra- ture jusqu'à disparition du produit de départ (environ 30 mi- nutes). On ajoute ensuite 5 ml de méthanol, on fait chauffe jusqu'à la température ambiante et on évapore le solvant. On extrait le résidu avec un mélange de chlorure de méthylène et d'eau, on sèche la phase organique sur du sulfate de sodium et on évapore le sol- - 38 - vant. Après purification par chromatographie (gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 3/1), on obtient le composé du titre sous forme d'un mélange d'anomères. Rf (toluène/acétate d'éthyle 1/1) = 0,48 et 0,52. D) 4,6-0-benzylidène-2-[(S)-3-benzyloxytétradécanoyl]-2-déoxy-1- Odibenzylphosphono-a-D-glucopyranose (pour l'exemple 16) a) ?:2 1:-3:bnylo2 1étradécano.lamido)-2-déoxy-D-l2ucopyranose On obtient le composé du titre en procédant de manière analogue à celle décrite à l'exemple Aa). Rf (chloroforme/méthanol 7/1) = 0,37. b) 4 6-0-benzylidène-2-[(S)-3-benzyloxytétradécanoylamido)-2- déoxy-D-glucopyranose On obtient le composé du titre en procédant de manière analogue à celle décrite à l'exemple Ab). [a 20 = -3,5o (c = 1, chloroforme). Rf (toluène/acétate d'éthyle 1/1) = 0,37. c) 4,6-0-benzylidène-2-:(S)-3-benzyloxytétradécanoylamido)-2- déox:l-0di benzyl phosphono-a-D-gl ucopxranose On obtient le composé du titre en procédant de manière analogue à celle décrite à l'exemple Ac). [a]20 = +39,2 (c = 1, chloroforme). Rf (toluène/acétate d'éthyle 1/1) = 0,46. E) 4,6-0-benzylidène-2-déoxy-1-0-dibenzylphosphono-2-[(R)-3- tetradécanoyloxytétradécanoylamido]-a-D-glucopyranose (pour l'exemple 17) a) 2:déoxyy-2?[ERc:3tétradécanoyloxytétradécanoylamido]-D- Un mélange composé de 650 mg de chlorhydrate de D-glucosamine, 1,9 g de N-E(R)-3-tétradécanoyloxytétra- décanoyloxy]succinimide et 0,5 ml de diisopropyléthylamine dans ml de diméthylformamide est agité pendant 20 heures à la température ambiante. Le solvant est ensuite éliminé par distilla- tion et le résidu est chromatographié sur gel de silice avec un - 39 - mélange acétate d'éthyle/méthanol (8/1) comme éluant. [a]20 = +25 (c = 1, méthanol). Rf (acétate d'éthyle/méthanol 6/1) = 0,5. b) 4,6-0-benzylidène-2-déoxy-2-[(R)-3-tétradécanoyloxytétra- décanoylamido)-D-glucopyranose Une solution composée de 5,83 g de 2-déoxy-2-[(R)-3-tétra- décanoyloxytétradécanoylamido]-D-glucose, 3 g de benzaldéhyde- diméthylacétal et 500 mg de monohydrate de l'acide p-toluène- sulfonique dans 200 ml de diméthylformamide sec est maintenue pen- dant 3 heures à 55-600 et sous 30-40 mbar dans un évaporateur rota- tif. Le produit de départ a alors disparu. On distille ensuite la majorité du diméthylformamide, on ajoute 500 ml de chlorure de méthylène et on extrait la solution deux fois avec 200 ml d'une solution diluée d'hydrogénocarbonate de sodium et 200 ml d'eau. Après séchage sur sulfate de sodium et évaporation, le résidu est chromatographié (toluène/acétate d'éthyle 6/4). F = 162-165 . [a]20 = -1,5 (c = 1, chloroforme/méthanol 1/1). D Rf (toluène/acétate d'éthyle 1/1) = 0,32. c) 4,6:2:p01nylidène-2-déoxy-1-0-dibenzylphosphono-2-[(R)-3- tétradécanoylpoxtétradécanoylamido)-a-D-:2ucopyranose A une solution constituée de 950 mg de 4,6-0-benzylidène- 2-déoxy-[(R)-3-tétradécanoyloxytétradécanoylamido]-D-glucopyranose dans 40 ml de tétrahydrofuranne sec et refroidie à -40 , on ajoute gouttej goutte 1,25 ml de butyllithium 1,6 M dans de l'hexane. Après 5 minutes, on ajoute une solution de phosphorochloridate de di- benzyle dans du benzène et on continue d'agiter pendant 5 minutes à la même température. On neutralise ensuite la solution avec de l'acide acétique, on évapore le mélange à sec et on extrait le résidu avec du chlorure de méthylène et de l'eau. On sèche la phase organique sur du sulfate de sodium, on l'évapore à sec et on chromatographie le résidu sur du gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 3/1). [a]20 = +19,30 (c = 1, chloroforme). Rf ?toluène/acétate d'éthyle 1/1) = 0,6. - 40 - F) 4,6-O-benzylidène-2-déoxy-1-O-dibenzylphosphono-2-tétra- décanoylamido-a-D-glucopyranose (pour l'exemple 18) a) 2-déoxy 2tétradécanoylamido-D-glucose Un mélange composé de 3 g de chlorhydrate de D-gluco- samine, 4,56 g de N-tétradécanoyloxysuccinimide et 2,8 ml de di- isopropyléthylamine dans 40 ml de diméthylformamide sec est mainte- nu à la température ambiante durant 24 heures. Le produit est en- suite filtré, lavé avec du diméthylformamide et de l'eau, séché sous vide et utilisé pour l'étape suivante sans autre purification. b) nlidne:déoxy-2-tétradécanoylamido-D-lucose On dissout à 55 4 g de 2-déoxy-2-tétradécanoylamido-D- glucose dans 320 ml de diméthylformamide sec, on ajoute 2,6 ml de diméthoxytoluène et 400 mg de monohydrate de l'acide p-toluène- sulfonique et on maintient le mélange dans un évaporateur rotatif pendant 4 heures à 55-60 et sous 30-40 mbar. Le solvant est en- suite distillé, le résidu est lavé avec une solution diluée d'hydrogénocarbonate de sodium, de l'eau et de l'éthanol, séché sous vide et utilisé directement pour l'étape suivante. c) 4,6:g:benz lidene-3-0-(tert.:buyldiméth lsilyl) 2-déoxe-2- têtradécano lamido-D-glucopyranose On dissout à 60 2,2 g de 4,6-0-benzylidène-2-déoxy-2- titradécanoylamidM-D-glucose dans 250 ml de diméthylformamide sec, en ajoute 960 mg d'imidazole et 2,13 g de tert.-butyldiméthyl- chlorosilane et on maintient le mélange réactionnel à la même tem- pérature pendant 24 heures. Aprèes addition de 480 mg d'imidazole et i g de tert.-butyldimnthylchlorosilane et 24 heures de plus a 60', le produit de départ a complètement disparu. Le solvant est séparé par distillation, le résidu est extrait avec du chlorure de méthylène et de l'eau, la phase organique est lavée une fois avec de l'eau, séchée sur du sulfate de sodium et distillée. Le résidu est chromatographié sur du gel de silice avec un gradient toluène/acétate d'éthyle (20/1 à 2/1). On obtient deux fractions principales: le composé du titre (650 mg) et le composé 1,3-bis- *- 41 - silylique correspondant (1,82 g). On dissout le composé 1,3-bis- silylique dans 25 ml de tétrahydrofuranne sec, on refroidit la solution à -40 et on ajoute goutte à goutte 2,5 ml d'une solution 1N de fluorure de tétrabutylammonium dans du tétrahydrofuranne. Après environ 1 heure à -40 , le groupe protecteur du groupe silyle anomère est éliminé. On ajoute 3 ml de méthanol, on chauffe jusqu'à la température ambiante et on élimine le solvant sous vide. Le ré- sidu est extrait avec du chlorure de méthylène et de l'eau, la phase organique est extraite une fois avec de l'eau, puis elle est séchée et distillée. On obtient une quantité supplémentaire de 1,52 g du composé du titre sous forme d'un mélange anomère. Rf (toluène/acétate d'éthyle 1/1) = 0,42. dibenzylp2hosphono-2-tétradécanoylamido-a-D-glucopyranose A une solution composée de 2,46 g de 4,6-O-benzylidène-3- O-(tert.-butyldiméthylsilyl)-2-déoxy-2-tétradécanoylamido-D-gluco- pyranose dans 100 ml de tétrahydrofuranne sec et refroidie à -60', on ajoute goutte à goutte 3,12 ml de butyllithium 1,6 M dans de l'hexane. Après 5 minutes h cette température, on ajoute goutte à goutte une solution de phosphorochloridate de dibenzyle dans du benzène. On maintient sous agitation à -60 pendant encore 5 mi- nutes, puis on neutralise la solution avec de l'acide acétique et on l'évapore à sec. Le résidu est repris dans du chlorure de méthylène et extrait avec de l'eau. Après traitement et chromato- graphie sur gel de silice avec un mélange toluène/acétate d'éthyle (3/1) comme éluant, on obtient le composé du titre. Rf (toluène/acétate d'éthyle 7/4) = 0,75. e) 4,6:O:benzylidène-2-déox-y-1-0-dibenzylphosphono-2-tétra- décanoylamido:a:D:glucopyIranose A une solution refroidie à -10' et constituée de 2,05 g de 4,6-O-benzylidène-3-O-(tert.-butyldiméthylsilyl)-2-déoxy-1-0- dibenzylphosphono-2-tétradécanoylamido-a-D-glucopyranose dans 40 ml de tétrahydrofuranne anhydre, on ajoute goutte à goutte 2,5 ml - 42 - d'une solution 1N de fluorure de tétrabutylammonium dans du tétra- hydrofuranne et on maintient sous agitation pendant 2 heures à 0 . On ajoute ensuite 3 ml de méthanol, on évapore la solution à sec et on extrait le résidu avec du chlorure de méthylène et de l'eau. Après traitement selon les méthodes habituelles et chromatogra- phie sur gel de silice avec un mélange toluène/acétate d'éthyle (3/2) comme éluant, on obtient le composé du titre. Rf (toluène/acétate d'éthyle 1/1) = 0,35. G) 2-acétamido-4,6-0-benzylidène-2-déoxy-1-0O-dibenzylphosphono- a-D-glucopyranose (pour l'exemple 21) a) 2-acétamido-46-0-:benzylidène-3-0-(tert -butldliméthylsilyl)- 2-déoxy-D-:lucopyranose Une solution constituée de 5,17 g de 2-acétamido-4,6-O- benzylidène-2-déoxy-D-glucopyranose, 3,4 g d'imidazole et 6,3 g de tert.butyldiméthylchlorosilane dans 300 ml de diméthylformamide est maintenue à 60-70 . Après 6 heures, on ajoute 500 mg d'imida- zole et 1 g de tert.-butyldiméthylchlorosilane et on maintient le mélange à la même température jusqu'à ce que la réaction soit ter- minée. Le solvant est évaporé, le résidu est extrait avec du chlorure de méthylène et de l'eau et purifié par chromatographie avec un mélange toluène/acétate d'éthyle (5/1). Pour l'élimina- tion du groupe tert.-butyldiméthylsilyle anomère, on dissout le produit dans 600 ml de tétrahydrofuranne sec, on refroidit la solu- tion à -40- et on ajoute 14 ml d'une solution 1N de fluorure de tétrabutylammonium. Après 10 minutes, on arrête la réaction en ajoutant 17 ml de méthanol. On évapore le mélange à sec, on reprend le résidu dans du chlorure de méthylène et on l'extrait avec de l'eau. On sèche la phase organique et on distille le solvant. Rf (chloroforme/méthanol 9/1) = 0,5. - 43 - b) 2-acétamido-4, 6--benzylidène-3-O-(tert.-butyldiméthylsil l): 2-déoxy1-O- di benz'l phosphono-a-D.-glucopyranose On obtient le composé du titre en procédant de manière analogue à celle décrite à l'exemple Ec) et aprs chromatographie avec un mélange toluène/acétate d'éthyle (1/1,) comme éluant. Rf (toluène/acétate d'éthyle 2/1) = 0,58. c) 2-acétamido-4, 6-O-benzyldne2dox10di nzlhspoo a-0-glucopyranose A une solution refroidie par de la- gTace et composée de 4,4 g de 2-acétamido-4,6-0-benzylidène-3-0-(tert.-butyldiméthyl- silyl)-2-déoxy-1-0-dibenzylphosphono-a-D-gluco.pyranose dans O0O ml de tétrahydrofuranne sec, on ajoute goutte à goutte 6,5 ml d'une solution 1N de fluorure de tétrabutylammonium dans du tétrahydro- furanne et on maintient le mélange pendant 2 heures a 0 O. On ajoute ensuite 7 ml de méthanol et on évapore la solution à sec. Une solu- tion du résidu dans du chlorure de méthylène est lavée avec de l'eau, séchée et évaporée à sec. Rf (chloroforme/méthanol 9/1) = 0,65. H) 4,6-O-benzylidène-2,3-di-O-[(R)-3-tétradécanoyloXytetra- décanoyl]-D-glucopyranose (pour l'exemple 22) a) trichloroithyl:lS6-O-benzylidène,2:3-di-O-:R:-3-3tétra- décanoyloxy-tétradécanoyl]-B-D- lucopyraoside On obtient le composé du titre en procédant de manière analogue à celle décrite à l'exemple Bc) en utilisant l'acide (R)-3-tétradécanoyloxytétradécanoïque comme agent d'acylation et un mélange toluène/acétate d'éthyle comme éluant. Rf (toluène/acétate d'éthyle 9/1) = 0,75. b) 4X6:Obeflzy2idène-2 3-di-O:[(R)-3-tétradécanoyloxytétra- lécanoyl]-D-,ql2c2Pïran9s On obtient le composé du titre en procédant de manière analogue à celle décrite à l'exemple Bd) après purification par chromatographie sur gel de silice en utilisant un mélange toluene/acétate d'éthyle (15/1) comme éluant. Rf (toluène/acétate d'éthyle 9/1) = 0,25. - 44 - I) Synthèse des UDP-2,3-diacyl-hexoses On dissout 1,4 g de sel d'uridine-5'-phosphoro- morpholidate-N,N'-dicyclohéxylcarboxamidine dans 25 ml de pyridine anhydre et on sèche deux fois par évaporation et par redissolution dans 25 ml de pyridine anhydre. A cette solution, on ajoute une so- lution composée de 1 g de 2,3-diacyl-hexose-1-phosphate dans 25 ml de pyridine et qui a été préalablement traitée de la même manière, on maintient le mélange à 37 pendant 24 heures, puis on le refroi- dit avec de la glace. On ajoute ensuite 50 ml de chloroforme et 12 ml d'acide formique à 90%. On chromatographie cette solution sur gel de silice et on élue le produit de départ qui n'a pas réagi avec un mélange chloroforme/pyridine/acide formique à 90% (30/30/7). On lave la colonne avec un mélange chloroforme/ méthanol (9/1) pour la débarasser de la pyridine et on élue le dérivé UDP avec un mélange chloroforme/méthanol/eau (66/33/4). On évapore sous vide le chloroforme et 'le méthanol de la fraction pic et on filtre la suspension aqueuse restante. On dissout le pré- cipité dans 100 ml d'un mélange têtrahydrofuranne/eau (2/1) et on agite la solution pendant 2 heures avec du Dowex AG50WX8 Esous une forme tris(hydroxyméthyl)-aminométhane]. On filtre l'échangeur d'ions, on élimine le tétrahydrofuranne par distillation et on lyo- phylise la solution aqueuse. Le lyophylisat est utilisé dans l'étape suivante sans autre purification. Les composés de formule II peuvent être obtenus de ma- nière analogue à celle décrite sous I), à partir des composés de formule III correspondants. Les composés de formule Ia et III se signalent par d'inté- ressantes propriétés pharmacologiques et peuvent par conséquent être utilisés en thérapeutique comme médicaments. Ils exercent une influence favorable sur la résistance microbienne non spécifique. Cette activité peut être mise en évidence par exemple dans les essais suivants. - 45 - 1. Détermination de l'activité endotoxique à l'aide du test LAL au limulus (lysat d'amibocytes de limulus) L'endotoxine catalyse l'activation d'un proenzyme dans le lysat d'amibocytes de limule. On mesure la scission de p-nitro- aniline à partir d'une substance incolore. Le taux d'élimination est détecté photométriquement, la corrélation entre l'absorption et la concentration d'endotoxine (ou bien, respectivement, l'activité endotoxique pour les analogues) étant linéaire dans le domaine de 0,01 à 0,1 ng/ml d'endotoxine(comparaison avec les valeurs d'ab- sorption d'une endotoxine standard). A partir de chaque échantillon (dissous dans de l'eau bidistillée stérile et exempte de pyrogène), on prépare une dilution en série 1:10. A 100 pl d'un échantillon d'essai ou bien d'un échantillon standard de référence ou d'un échantillon a blanc, on ajoute 100 pl de lysat d'amibocytes de limule. Après 10 minutes d'incubation à 37 C, on ajoute 200 pl de substrat au mélange réactionnel. On arrête la réaction avec 200 pl d'acide acétique à 50% aprèes 3 autres minutes d'incubation. Après agitation de l'échantillon, on mesure l'absorption à 405 nm avec un spectrophotomètre en soustrayant la valeur de base. On calcule les teneurs en endotoxine (activité endotoxique) de l'échantillon en unités endotoxine (UE) par régression linéaire avec les valeurs de l'endotoxine standard. 2. Induction du choc à l'endotoxine chez la souris L'essai consiste à induire un choc 'à l'endotoxine ou une condition clinique létale analogue au moyen de substances appa- rentées au LPS chez des souris sensibilisées à la galactosamine (GaIN). On administre par voie intrapéritonéale à des souris mâles C57 bl. (6 animaux par groupe) simultanément 8 mg de GalN dissous dans 0,5 ml de PBS et 0,1 pg de LPS de Salmonella abortus equi (Sigma) dissous dans 0,2 ml d'une solution saline physiologique. Ce traitement tue tous les animaux en l'espace de 6 à 12 heures [voir C. Galanos et coll., Proc.Natl.Acad. Sci., USA 76 (1979) 5939-5943). A la place du LPS dans le traitement standard, les substances à essayer sont administrées à des doses variées simulta- nément avec la GalN, ou par voie parentérale ou orale avant ou - 46 - après le traitement à la GalN. On évalue les résultats en comparant les doses les plus faibles qui sont létales pour tous les animaux d'un groupe, ou en calculant la DL50 selon la méthode Spearman-KArber. 3. Septicémie microbienne chez la souris neutropénique Ce modèle permet de déterminer un accroissement de la réponse immunitaire provoquée par la substance chez une souris neu- tropénique, infectée par des microbes. Pour induire la neutropénie, on administre en une fois par voie sous-cutanée 200 mg/kg de cyclo- phosphamide dissous dans 0,2 ml d'eau distillée, au jour 0, à des groupes de 20 souris femelles B6D2F1. Au jour 3, on administre la substance à essayer par voie parentérale (principalement par voie intrapéritonéale) ou par voie orale, si possible dissoute dans une solution physiologique du chlorure de sodium, ou bien dissoute d'une autre manière (0,3 ml). On provoque l'infection au jour 4 en injectant par voie intraveineuse l'inoculat approprié dans un volume de 0,2 ml (nombre de germes par souris: par exemple Pseudomonas aeruginosa i 12:1 x 105; E. coli l120:2 x 106; Staph. aureus A 113:1 x 106; Candida albicans 124:1 x 104. Les animaux sont observés jusqu'au jour 10 à partir de l'infection et on enregistre chaque jour le nombre d'animaux morts. Les paramètres suivants sont calculés par rapport aux témoins infectés ou par rapport aux standards: a) durée moyenne de survie b) taux de survie. Après administration par voie parentérale, les composés de formule Ia et III améliorent nettement la durée et le taux de sur- vie par rapport aux témoins infectés non soignés, aussi bien dans le cas d'infections expérimentales provoquées par des agents à gram négatif (par exemple les souches Pseudonomas et E. coli), que dans le cas d'infections provoquées par des agents à gram positif (par exemple les souches Staph. aureus) ou des levures (par exemple la souche Candida albicans). - 47 - 4. Activation du métabolisme d'oxydation des neutrophiles sanguins humains On incube à 37 C des neutrophiles (purs à 95% au moins) avec la substance d'essai à 3 différentes concentrations pendant 1 à 2 heures. La libération d'anions superoxydes par les cellules témoigne de leur activation et est mesurée par l'inhibition de la superoxyde-dismutase qui catalyse la réduction du cytochrome C. On ajoute i x 106 neutrophiles préalablement traités ou non par la substance à essayer à une solution contenant du cytochrome C (80 pMol), ainsi que de la formylméthionylleucylphénylalanine (10-6M). Les témoins contiennent en outre 50 pg de superoxyde- dismutase. Après 15 minutes d'incubation à 37 C, on arrête la réac- tion en refroidissant les tubes à essai dans un bain de glace. On centrifuge ensuite ces tubes à 400 g pendant 5 minutes pour élimi- ner les cellules. La réduction du cytochrome C, qui est proportion- nelle à la quantité d'anion superoxyde libéré, est mesurée par pho- tométrie à 550 nm. L'effet inhibiteur de la substance à essayer sur l'activation du PMN par le LPS est mesuré comme décrit ci-dessus, excepté qu'après la préincubation des leucocytes, on continue d'in- cuber les cellules avec une concentration stimulante de LPS. 5. Essai de clairance au carbone Cet essai est fondé sur le principe selon lequel les par- ticules d'une dimension comprise entre 200 et 250 A, par exemple des particules du carbone, ne peuvent être éliminées de l'organisme que par phagocytose par des macrophages. Après administration par voie intraveineuse de particules de carbone, celles-ci sont élimi- nées de la circulation sanguine par phagocytose des macrophages dans le foie (cellules étoilées de Kupffer) et dans la rate. On détermine l'activation RES d'une substance en l'administrant une seule fois ou de façon répétée en solution aqueuse ou sous forme de suspension. Les substances à essayer sont administrées par voie intrapéritonéale ou souscutanée à raison de 4 doses quotidiennes ou en une fois 24 heures avant le début de l'essai. On dilue une suspension contenant 10% de noir de carbone avec une solution géla- tineuse de chlorure de sodium à 1% jusqu'à une teneur en carbone - 48 - de 16 mg/ml. On injecte à chaque souris par voie intraveineuse 0,2 ml par 20 g de poids corporel. On recueille 25 pl de sang par ponction dans le plexus orbital 3, 6, 9, 12 et 15 minutes après l'administration par voie intraveineuse. On hémolyse le sang dans 2 ml d'eau distillée. On détermine par photométrie la concentration de carbone. On sacrifie ensuite les animaux et on calcule le poids du foie et de la rate. 6. Infection herpétique (souris) L'infection herpétique par voie intracutanée permet de déterminer l'augmentation de la réponse immunitaire provoquée par une substance chez les souris contaminées par des virus herpé- tiques. L'évolution de la maladie est prolongée et permet d'obser- ver l'apparition successive de plusieurs paramètres. Les lésions herpétiques apparaissent à l'endroit de l'infection et ensuite com- mencent à s'ulcérer. Eventuellement, on observe une paralysie de la patte adjacente à l'infection, cette paralysie évoluant progressi- vement jusqu'à la mort. Des souris nudes immunocompétentes sont in- fectées par voie intracutanée au jour O par administration intra- cutanée de l'inoculat dans un volume de 0,025 ml (par exemple 1 x 106 unités formant plaque d'Herpès simplex type i / par sou- ris). La substance à essayer est administrée par voie intra- péritonéale dans une solution, par exemple dans une solution saline physiologique (0,1 ml). L'infection herpétique systémique permet également la détermination d'une augmentation de la réponse immunitaire provo- quée par une substance chez les souris infectées par un virus her- pétique. Des souris NMRI immunocompétentes sont infectées au jour O par administration intrapéritonéale de l'inoculat dans un volume de 0,1 ml (par exemple 1,3 x 105 unités formant plaque d'Herpès simplex type 1 / par souris).,La substance h essayer est admi- nistrée par voie sous-cutanée dans une solution, par exemple une solution physiologique de chlorure de sodium. - 49 - On observe les animaux d'essais jusqu'au jour 20 après l'infection et on enregistre l'apparition de lésions, de paralysie ainsi que les animaux morts. On mesure et on compare les paramètres suivants avec les témoins infectés ou un standard: a) nombre de souris présentant des lésions (cumulativement) b) nombre de souris atteintes de paralysie (cumulativement) c) durée moyenne de survie d) taux de survie. Dans l'infection HSV-1 expérimentale, les composés de for- mule Ia et III produisent une amélioration marquée au niveau de l'évolution de la maladie, de la durée de survie et du taux de sur- vie par rapport aux témoins non traités. Ces effets sont observés après une seule administration par voie intrapéritonéale ou sous- cutanée entre les jours O ou -1 et +6. 7. Induction de CSF (facteur stimulateur de colonie) Les CSF sont des médiateurs produits par l'organisme à la suite d'infections ou en réponse à des toxines. Leurs effets biolo- giques sont complexes; ils sont détectés par l'intermédiaire de la stimulation de la prolifération du système hémopoïétique, en parti- culier des cellules de la moëlle osseuse. On administre à des sou- ris B6D2F1 la substance à essayer une ou plusieurs fois par voie parentérale ou orale, à des doses allant jusqu'à 50 mg/kg. On recueille le sérum des animaux à différents intervalles. Les titres de l'activité CSF du sérum sont déterminés dans un essai de culture cellulaire comme taux de prolifération de cultures de moëlle os- seuse provenant de souris B6D2F1 [voir D. Metcalf, The Hemopoietic Colony Stimulating Factors, (1984), Elsevier; T. Mosmann, J.Immunol.Methods, 65 (1983) 55-63; L.M. Green et coll., J.Immunol.Methods, 70 (1984) 257-268]. Les composés de formule Ia et III induisent chez la souris la formation des CSF à différents degrés, des différences ciné- tiques dans les activités CSF étant également observées. Ces diffé- rences peuvent présenter des avantages dans l'utilisation en théra- peutique. - 50 - 8. Induction d'Interleukine-1 (IL-1) L'aptitude d'une substance à stimuler les cellules à pro- duire IL-1 est déterminée dans des essais de culture de tissus. Les macrophages résidents ainsi que les macrophages libérés par le thioglycolate sont tout d'abord récupérés sous forme de macrophages adhérents. Ceux-ci sont incubés dans un milieu RPMI pendant 48 heures avec diverses concentrations de la substance à essayer et les cellules surnageantes sont recueillies. L'activité IL-1 de ces cellules est mise en évidence dans des cultures de thymocytes pro- venant de souris C3H/HeJK. On induit les cellules surnageantes con- tenant IL-1 produit par les macrophages h faire proliférer les thymnocytes pendant une période d'incubation de 72 heures. On mesure la prolifération par incorporation de 3H-thymidine à l'aide d'un compteur à scintillation [voir J. Gery et coll., J.Exp.Med. 136 (1972) 128-142; J. Oppenheim et coll., Cellular Immunol. 50 (1980) 71-81]. Les composés de formule Ia et III possèdent à des degrés divers (concentrations de l'ordre de 0,1 à 50 pg/ml) la capacité d'induire la production de IL-1 dans les macrophages. 9. Induction de la tolérance (tolérance de l'effet létal) au LPS (endotoxine) Une tolérance de ce type peut être induite chez des souris par administration parentérale de LPS, une à trois fois par jour. Cette tolérance protège l'animal contre l'effet létal du LPS après administration de galactosamine (voir plus haut sous "Induction du choc à l'endotoxine chez la souris"). Les composés de formule Ia et III assurent déjà cette to- lérance après administration par voie intrapéritonéale à une dose unique de 0,25 mg/souris. Les souris préalablement traitées (tolé- rantes) sont soumises à une provocation au LPS à une dose de 0,01 Mg de LPS + 8 mg de galactosamine/souris, administrée par voie intrapéritonéale à des périodes diverses (de 1 jour à 3 semaines) après le dernier traitement. Un plus grand nombre d'animaux survit à cette provocation au LPS, en particulier après administration répétée (3 fois), par rapport aux animaux témoins non traités préa- lablement et soumis à la provocation. -.51 - Les composés de formule Ia et III possèdent en outre une activité antiinflammatoire, en particulier dans les inflammations non spécifiques, dans les inflammations induites immunologiquement, dans les inflammations induites par hypersensibilité ainsi que dans les réactions allergiques. Cette activité peut être mise en évi- dence au moyen de diverses méthodes d'essai, par exemple en étu- diant l'influence de ces composés sur la synthèse des prostaglan- dines in vivo et in vitro. On a examiné l'inhibition exercée in vitro sur la libération de PGE2 et de PGF1 induite par le LPS et le Zymosan. On incube pendant 24 heures des leucocytes péritonéaux stimulés par le thioglycolate, provenant de souris NMRI, avec du LPS ou la substance à essayer. Après changement de milieu et triple lavage des cellules, ces dernières sont stimulées pendant 2 heures avec du LPS ou pendant i heure avec du Zymosan. Les PGE2 et les PGF1 sont déterminées dans les cellules surnageantes. On constate une inhibition de la production de PGE2 stimulée par le LPS ou le Zymosan. On a mesuré in vivo l'inhibition exercée par les composés sur la libération de PGE2 induite par le LPS dans les leucocytes péritonéaux de souris. Des groupes de 3 souris NMRI sont traités par voie intrapéritonéale aux jours 1, 2 et 3 avec du LPS ou avec la substance à essayer. Au jour 4, on administre par voie intra- péritonéale aux animaux d'essais ainsi qu'aux animaux témoins 1,5 ml de thioglycolate; au jour 7, on recueille les leucocytes péritonéaux et on les stimule avec du LPS. On constate une nette diminution de la libération de PGE2 par rapport aux animaux témoins. Dans un autre essai, on a mesuré l'influence des composés sur l'activité procoagulante (PCA). Après stimulation avec du LPS, les cellules endothéliales humaines synthétisent la PCA, ce qui peut être mis en évidence par une réduction du temps de coagula- tion du plasma. Les macrophages péritonéaux de souris obtenus après traitement au LPS ainsi que les leucocytes péritonéaux (prélevés sur des lapins) après libération de la réaction de Schwartzman généralisée, réduisent eux aussi la durée de coagulation du plasma Z584076 - 52 - recalcifié. Pour déterminer l'influence de la PCA induite par le LPS in vitro, on traite pendant toute une nuit des leucocytes péri- tonéaux de souris B6D2F1 stimulés par du thioglycolate soit unique- ment avec du LPS, soit avec du LPS et la substance à essayer, dans un milieu DMEM dépourvu de sérum foetal de veau (FCS) (essai a)). Dans un essai b), on traite des leucocytes péritonéaux de souris pendant 24 heures avec du LPS ou avec la substance à essayer. Après changement de milieu, on stimule les cellules pendant une nuit en- tière avec du LPS. On détermine le temps de coagulation du plasma humain recalcifié de contrôle en utilisant la méthode de Hàkchen après avoir ajouté une suspension de leucocytes péritonéaux de souris qui a été auparavant congelée à plusieurs reprises et traitée aux ultrasons. L'addition de la substance à essayer réduit la PCA provo- quée par le LPS par rapport aux valeurs témoins, comme il résulte de l'augmentation du temps de coagulation. De même, un traitement préalable avec la substance h essayer a pour résultat une réduction de la PCA. In vivo, l'influence de la PCA induite par le LPS dans les leucocytes péritonéaux de souris après traitement préalable avec la substance à essayer peut être démontrée comme suit: des souris B6D2F1 sont traitées par voie intrapéritonéale aux jours 1, 2 et 3 avec du LPS ou avec la substance à essayer. Au jour 3, tous les animaux reçoivent en plus 1,5 ml de thioglycolate par voie intra- péritonéale. Au jour 6, on recueille les leucocytes péritonéaux, on règle l'échantillon provenant de chaque animal à 1 x 106 cel- lules/ml, et on les stimule pendant 24 heures avec du LPS dans un milieu DMEM exempt de FCS. La PCA de ces cellules est déterminée selon la méthode décrite précédemment. Un traitement préalable au LPS ou avec la substance à essayer, provoque une réduction marquée de la PCA. On observe une réduction semblable chez le lapin. La PCA des leucocytes péritonéaux de lapin peut être réduite après réac- tion de Schwartzman généralisée, et par traitement préalable avec le LPS ou la substance à essayer. - 53 - Pour étudier l'inhibition de la réaction de Schwartzman locale, des groupes de 3 lapins chinchilla sont traités préalable- ment par voie intraveineuse ou intrapéritonéale avec du LPS ou avec la substance à essayer, aux jours 1, 2 et 3. Le 6ème jour, on admi- nistre par voie intradermale 40, 20, 10, 5, 2,5 et 1,25 pg de LPS. Le 7ème jour, on déclenche la réaction avec 2 pg de LPS/kg par voie intraveineuse. L'essai est évalué semi-quantitativement par un exa- men des nécroses de la peau. On constate une inhibition pratique- ment totale de la réaction de Schwartzman après traitement préa- lable avec du LPS ou avec la substance à essayer. Les composés de formule Ia et III possèdent en outre une activité contre les tumeurs, comme cela a été mis en évidence dans les essais suivants. 1. Induction du facteur de nécrose tumorale (TNF) Dans le but de stimuler les macrophages de la moelle os- seuse chez la souris, on dilue des cellules de moelle osseuse pré- levées sur des souris BDF1 (âgées d'environ 10 à 13 jours, induites avec du CSF) de façon h obtenir 1 x 106 cellules/ml dans un milieu [RPMI 1640 + 1% Pen/Strep (5000 U/ml) + 1% glutamine] et on incube pendant 4 heures à 37 C/5% C02 dans des microplaques plates avec la substance à essayer dans une solution dont la concentration finale (étapes de dilution 1:10) est de l'ordre de 100 pg à 0,1 pg/ml. Après filtration à travers des filtres de 0,45 pm, on congèle les * cellules surnageantes à -70 C avant de les utiliser. Des cellules L 929 sont précultivées pendant une nuit (37C, 5% C02) dans des microplaques 3 x 104 cellules/godet/100 pl, puis on ajoute 100 pl de chaque échantillon et on continue de diluer la culture en étapes 1:2. On ajoute 100 pl d'actinomycine D (8 mg/ml de milieu) et on poursuit l'incubation pendant encore 18 heures à 37C/5 % C02. Après avoir retiré les cellules surna- geantes, on colore la couche de cellules restantes avec une solu- tion Giemsa et on mesure l'absorption à 620 nm au moyen d'un appa- reil Titertek Multiscan Autoreader (Flow). Une unité de TNF est définie comme étant l'activité qui produit une lyse de 50% des cellules cibles L 929. - 54 - 2. Essai de mélanome B16F1 On cultive des cellules de mélanome B16F1 in vitro pendant jours. On synchronise ces cellules un jour avant d'effectuer l'essai en séparant la monocouche en cellules individuelles en uti- lisant de la trypsine-EDTA et en remettant la quantité totale dans la même bouteille dans un milieu frais. On compte les cellules et on fait une préparation contenant 106 cellules/ml de milieu. On injecte par voie intraveineuse 0,1 ml de la suspension cellulaire (105 cellules) dans la veine caudale de souris B6D2F1. 21 jours après, on sacrifie les animaux et on compte le nombre de tumeurs pulmonaires. La substance à essayer est mise en solution et injec- tée par voie intrapéritonéale aux jours -6, -4 et -1. On a trouvé que les composés de formule Ia et III possè- dent une activité immuno-prophylactique qui se traduit par une réduction du nombre de métastases du mélanome B16F1 dans les pou- mons. Comme essai de l'activité thérapeutique de ces composés, on traite des souris aux jours 3, 6, 8, 10, 13 et 15 après leur avoir inoculé les cellules tumorales. Dans ce cas également, on a consta- té une nette diminution du nombre de métastases. Les composés de formule Ia et III peuvent donc être utili- sés en thérapeutique comme modulateurs de la résistance anti- microbienne non spécifique, dans le renforcement systémique de la réponse immunitaire et dans le renforcement de l'immunité non spé- cifique. Les composés de formule Ia et III peuvent donc être utili- sés pour le traitement ou le traitement d'appoint (par exemple avec d'autres formes thérapeutiques spécifiques ou d'appoint) de condi- tions associées à une baisse de la réponse immunitaire, en particu- lier une baisse de la réponse immunitaire humorale et/ou une baisse de la réaction d'hypersensibilité de type prolongé, et pour le traitement de conditions dans lesquelles en général une modulation de la réponse immunitaire est indiquée. En particulier, les compo- sés de formule Ia et III sont utiles dans le traitement ou le trai- tement d'appoint de conditions pathologiques dues à des immuno- déficiences idiopathiques ou des immuno-déficiences du type rencon- tré chez les patients âgés, ou bien chez les sujets atteints de - 55 - brûlures graves ou d'infections généralisées. Les composés de for- mule Ia et III peuvent également être utilisés dans le traitement ou le traitement d'appoint des maladies virales (telles que l'Herpès disséminé, la variole progressive et les formes de varicelle disséminée), la maladie de Hodgkin et autres tumeurs malignes. Les composés de formule Ia et III peuvent en outre être utilisés pour la prévention du choc endotoxinique, par exemple en cas d'accidents, de brûlures et d'interventions chirurgicales, et comme agents anti-inflammatoires. Pour les indications mentionnées ci-dessus, la dose à administrer variera évidemment en fonction du composé utilisé, du mode d'administration et du traitement désiré. D'une manière géné- rale, on obtient des résultats satisfaisants en administrant ces composés en une dose quotidienne, ou bien en une dose unique comme effet d'appoint, par exemple dans le cadre d'un traitement d'ap- point, à raison d'environ 0,0015 mg/kg à environ 1 mg/kg de substance active. L'administration peut être faite par exemple par voie parentérale, de préférence par voie intrapéritonéale. En thérapeu- tique humaine, la dose quotidienne appropriée sera de l'ordre d'en- viron 0,1 mg à environ 70 mg, administrée avantageusement en doses fractionnées 2 à 4 fois par jour sous forme de doses unitaires con- tenant d'environ 0,025 à environ 35 mg de substance active, ou sous une forme à libération prolongée. Une dose unique d'appoint peut aller jusqu'à 70 mg de substance active. Grâce à leur activité immuno-modulatrice, les composés de formule Ia et III peuvent également être utilisés comme adjuvants dans des vaccins. Pour cette utilisation, la dose appropriée sera comprise entre environ 0, 5 et environ 100 mg, de préférence environ 70 mg, administrée le jour de la vaccination, avantageusement sui- vie d'un rappel à la même dose 2 à 4 semaines après. - 56 - L'invention concerne donc les composés de formule Ia et III sous forme libre ou sous forme de sels, pour l'utilisation comme médicaments, en particulier comme immuno-modulateurs, comme agents anti-viraux et comme agents anti-inflammatoires. L'invention concerne également une composition pharmaceu- tique comprenant un composé de formule Ia ou III, sous forme libre ou sous forme de sel, en mélange avec des diluants ou véhicules pharmaceutiquement acceptables. De telles compositions peuvent être préparées selon les méthodes galéniques connues et se présenter par exemple sous forme de solutions injectables. REVENDICATIONS 1.- Une composition pharmaceutique comprenant un composé de formule Ia HO-. _O HO_/ \_o -CH II. -. O OH (Ia) w Z HO O.p I I__ / f H R o( 34. I { Y X I I RR dans laquelle R1, R2, R3 et R4 indépendamment signifient l'hydrogène ou un groupe acyle éventuellement substitué, et X, Y, W et Z indépendamment signifient l'oxygène ou un groupe imino, avec la condition qu'au moins un des symboles R1, R2, R3 et R4 signifie un groupe acyle éventuellement substitué, sous forme libre ôu sousforme d'un sel pharmaceutiquement accep- table, en association avec un véhicule ou diluant pharmaceuti- quement acceptable. 2.- Les composés de formule I HO- \ o HO_ 0 -CH2 \._* \ o OH (I) o _ / z \ Z HO H 3 41- y XI Ào_ R. dans laquelle RI1', R2', R3' et R4' représentent, indépendamment les uns des autres, l'hydrogène ou un groupe acyle éventuellement substi- tué, et W, X, Y et Z représentent, indépendamment les uns des autres, l'oxygène ou un groupe imino, avec la condition que a) au moins un des symboles RI', R2', R3' et R4' représente un groupe acyle éventuellement susbtitué, et b) lorsque Z et X représentent un groupe imino et W et Y repré- sentent l'oxygène, a) R1' et R2' ne signifient pas simultanément un groupe (R)-3-hydroxytétradécanoyle, pour autant que R3' et R4'- soient identiques et représentent un groupe (R)-3-hydroxy- tétradécanoyle ou que R4' représente un groupe (R)-3- dodécanoyloxytétradécanoyle et R3' un groupe (R)-3-tétra- décanoyloxytétradécanoyle, 6) R2' soit autre que l'hydrogène ou qu'un groupe (R)-3-hydroxytétradécanoyle, pour autant que R1' et R3' représentent l'hydrogène et R4' représente un groupe (R)-3hydroxytétrad&canoyle, et )) R3' soit autre qu'un groupe -(CO)2-CH2-(CHOH) 4-CH20H, pour autant que les autres substituants représentent l'hydro- gène, et leurs sels. 3.- Un procédé de préparation des composés de formule Ia spécifiés à la revendication 1, caractérisé en ce qu'on condense par voie enzymatique un composé de formule II (formule II voir page suivante) HO.- 0o0 HO _,/\ OH OH 5. / 6o - P -U ", Z w z I I R" Rue 3 4 dans laquelle W et Z sont tels que définis à la revendication 1, R" et Rj ont les significations données à la revendiction 1 pour R3et R4excepté l'hydrogène et U représente l'uridine, avec un composé de formule III HO-. X. 0OH (III) \o / I I 1* Rue R" 1 2 dans laquelle X et Y ont les significations données à la revendication l, et Ri" et R2" ont les significations données à la revendication 1 pour R etR2,avec la condition qu'au moins un des deux substituants repré- sente un groupe acyle éventuellement substitué et que lorsque X ou Y représente un groupe imino, le sustituant RI" ou R2" lié au groupe imino soit autre que l'hydrogène, et, si on le désire, on hydrolyse le composé résultant en composé correspondant de formule Ia dans laquelle, lorsque X, Y, Z et/ou W représentent l'oxygène, R1, R2, R3 et/ou R4 représentent l'hydro- gène, ou si on le désire, on soumet le composé résultant à une réaction d'acylamidase, ce qui donne le composé de formule Ia dans laquelle, lorsque X, Y, Z et/ou W représentent un groupe imino, R1, R2, R3 et/ou R4 représentent l'hydrogène, et on récupère les composés de formule Ia sous forme libre ou sous forme de sels. 4.- Une composition pharmaceutique, caractérisee en ce qu'elle comprend un composé de formule III HO-o OH o_/ H _ / (III) I R" R" 1 2 dans laquelle X et Y sont tels que définis à la revendication 1 et R' et RI ont les significations données à la revendication 1 pour R1 et R2 avec la condition qu'aumoins un des deux substituants représente un groupe acyle éventuellement substitué et que lorsque X ou Y représente un groupe imino, le substituant R'j ou R2 lié au groupe imino soit autre que l'hydrogène, sous forme libre ou sous forme d'un sel pharmaceutiquement acceptable, en association avec un véhicule ou diluant pharmaceu- tiquement acceptable. 5.- Les composés de formule III HO-. \.. u0 OH (II) / R" R" 1 2 dans laquelle Rï et R" signifient indépendamment l'hydrogène ou un groupe acyle éventuellement substitué et a) Y représente l'oxygène et X représente un groupe NH avec la condition que a) lorsque R1' représente un groupe (R)-3-hydroxytétra- décanoyle, R2" soit autre qu'un groupe (R)-3- hydroxytétradécanoyle ou (R)-3-hexadécanoyloxy- tétradécanoyle, 3) Rj" soit autre que l'hydrogène, et È) R1" et R2" ne signifient pas simultanément un groupe acétyle ou -CO(CH2)10CH3, b) Y et X représentent l'oxygène ou c) Y représente un groupe NH et X représente l'oxygène, avec la condition que au moins un des deux substituants R1" et R2" représente un groupe acyle et que lorsque X ou Y représente un groupe imino, le substi- tuant R1u ou R2" lié au groupe imino soit autre que l'hydrogène, et leurs sels. 6.- Un procéde de préparation des composés de formule III tels que spécifiés à la revendication 4, caractérisé en ce qu'il comprend a) pour la préparation des composés de formule IIIa HO -- \ 0 OH HO- Y' X. 1 1 R" R" i 2 dans laquelle R1# et R2" ont les significations donnéesà la revendication4 et soit X' et Y' représentent l'oxygène, soit Y' représente un groupe imino et X' représente l'oxygène, la transformation du groupe hydroxy libre dans un composé de formule IV RO-. RO--. RO_/ OH \ / I. I (IV) Y' X' i I 1 pH dans laquelle Ri", R2", X' et Y' ont les significations données à la revendication 4, et R signifie un groupe protecteur, en un groupe protégé sous forme d'ester phosphorique, ou bien b) pour la préparation des composés de formule IIIb HO-. 0 OH HO_./ o._ O.p11 (IIIb) .../ ou I I I UH R1 R dans laquelle R'I et R2" ont les significations données à la revendication 4, l'acylation des composés correspondants de formule IIIc R_0. \..-O., RO_ ^/ \-.P _ O 1 O. P \./ ô OR' I HO NF (IIIc) dans laquelle R2" et R ont les significations données précédemment, et R' représente un groupe protecteur, élimination subséquente des groupes protecteurs, récupère le composé résultant sous forme libre ou sous de sel. 7.- Un composé de formule Ia tel que défini à la revendication 1 ou un composé de formule III tel que défini à la revendication 4, sous forme libre ou sous forme d'un sel pharmaceutiquement acceptable, pour l'utilisation comme médica- ment. et 1 et on forme