FR 2583431 A1 19861219 FR 8608570 A 19860613 La présente invention concerne un procédé d'hydrolyse de graisse ou d'huile. Plus particulière- ment, elle concerne un procédé d'hydrolyse de graisse ou d'huile au moyen de lipase, caractérisé en ce qu'il consiste à maintenir constante, dans un intervalle de à 40 % en poids, la concentration du glycérol dans la phase aqueuse du système réactionnel, afin d'empê- cher une inactivation de la lipase dans le système ré- actionnel, pour hydrolyser ainsi efficacement la grais- se ou l'huile. On sait, depuis longtemps, hydrolyser des graisses ou des huiles au moyen de lipase pour produi- re du glycérol et un ou des acides gras. Cependant, il existe de nombreux obstacles à la mise en application industrielle de cette technique.-Avant tout, la lipase est en général rapidement inactivée à mesure que pro- gresse la décomposition de la graisse ou de l'huile, en sorte qu'il est impossible de récupérer la lipase pour la réutiliser. Il est donc inévitable de consom- mer une grande quantité de l'enzyme coteuse. Par con- séquent, ce procéda ne présente aucun avantage du point de vue économique comparé à l'hydrolyse classi- que à température et pression élevées et les possibi- lités de l'enzyme ne sont pas efficacement mises à profit à l'heure actuelle. On a récemment fait diverses tentatives pour stabiliser l'enzyme et la récupérer pour la réutiliser. Par exemple, la Demanderesse a découvert que l'enzyme peut être stabilisée en maintenant la concentration du glycérol dans la phase aqueuse du système réactionnel dans un intervalle de 10 à 40 % en poids tout au long de l'hydrolyse (demande de brevet japonais N 13903/ 1985). Le glycérol, qui stabilise la lipase, provo- que une diminution du rapport d'hydrolyse des graisses ou des huiles lorsqu'il est utilisé trop largement. Ainsi, la concentration en glycérol est maintenue en- tre 10 et 40 % en poids dans le procédé de la demande de brevet japonais N 13903/1985. Ce procédé est avan- tageux pour stabiliser l'enzyme ainsi que pour empêcher la diminution du rapport d'hydrolyse. Cependant, la concentration en glycérol ajustée a 10 à 15 % en poids au stade initial de la réaction s'élève a 20 à 30 % en poids a la fin de la réaction. En ce qui concerne le rapport d'hydrolyse des graisses ou des huiles, une concentration inférieure de glycérol est la plus avan- tageuse. Autrement dit, lorsque le glycérol est pré- sent en excès, la réaction d'hydrolyse évolue en sens inverse ou atteint un équilibre, comme représenté par la formule suivante, ce qui aboutit à une diminution du rapport d'hydrolyse: lipase huile (graisse) + eau acide(s) gras + glycérol lipase Par conséquent, il peut être plus avantageux de maintenir continuellement la concentration en glycé- rol au niveau minimum nécessaire à la stabilisation de l'enzyme, contrairement au procédé décrit dans la deman- de de brevet japonais N 13903/1985 dans lequel la con- centration en glycérol présente une augmentation au der- nier stade de la réaction, en tenant compte de la stabi- lité de l'enzyme tout autant que de l'hydrolyse de la graisse ou de l'huile. La Demanderesse a cherché à mettre au point un système réactionnel enzymatique dans lequel la réac- tion évolue tout en maintenant constante la concentra- tion en glycérol et elle a constaté que ce but peut être atteint en réglant l'introduction des matières dans le système réactionnel et l'évacuation des phases huileuse et aqueuse du système, ce qui a donné lieu à la présente invention. La présente invention fournit, par conséquent, un procédé d'hydrolyse de graisse ou d'huile dans un système réactionnel composé de graisse ou d'huile, d'eau et de lipase, qui est caractérisé par l'introduction de la graisse ou d'huile et d'eau dans le système réaction- nel, chacune de façon continue à un débit constant ou de façon semi-continue par portions, et l'évacuation si- multanée d'une solution contenant un ou plusieurs acides gras et une solution aqueuse contenant le glycérol formé par la réaction enzymatique de façon continue aux mêmes débits que ceux de la graisse ou huile et de l'eau res- pectivement, ou de façon semi-continue par portions, de manière à maintenir constante, dans un intervalle de 10 à 40 % en poids, la concentration du glycérol dans la phase aqqeuse du système réactionnel. Dans la présente invention, le rapport de la graisse ou huile à l'eau introduites peut être détermi- né de la manière suivante. On donne maintenant un exemple dans lequel la concentration du glycérol dans la phase aqueuse du sys- tème réactionnel doit être maintenue a 20 % en poids. Débit d'admission continue ou semi-continue de la graisse (huile) = X(kg/h) Débit d'admission continue ou semi-continue d'eau = Y (kg/h) Rapport de décomposition de la graisse (huile) = - (%) Poids moléculaire de la graisse (huile) = M Poids moléculaire du glycérol = 92 X 92 M 100 0,2 (1) y - 3. X. 18 M 100 Le rapport de X à Y peut être déterminé d'après l'équation (1) ci-dessus. Par exemple, lorsque M = 900 et4 = 95 %, X/Y = 1,84. Ainsi, le rapport d'admission continue ou semi-continue de la graisse ou huile et de l'eau peut être déterminé. Par ailleurs, les quantités de la graisse ou huile et de l'eau à introduire dans un procédé dans le- quel, par exemple, l'enzyme, l'eau et la graisse ou huile sont mélangées ensemble par agitation peuvent être déterminées par le volume de la phase huileuse du récipient réactionnel. Le temps de séjour théorique, t, de la graisse ou huile dans le récipient réaction- nel peut être déterminé par l'équation suivante: t = V/Q1 o V = volume (m3) de phase huileuse dans le réci- pient réactionnel; et 1S Q1= débit d'admission (m3/h) de la graisse ou huile. Lorsque la valeur de t est extrêmement basse, le débit d'admission de la graisse ou huile et de l'eau dépas- se la vitesse de réaction enzymatique en sorte qu'il devient impossible de maintenir un temps de séjour suffisant dans le récipient pour achever l'hydrolyse de la graisse ou huile. Autrement dit, la graisse ou huile introduite dans le récipient est éliminée par lavage sans être totalement hydrolysée, ce qui aboutit a une diminution de son rapport d'hydrolyse. La durée de séjour théoriquement nécessaire pour un rapport d'hydrolyse suffisant de la graisse ou huile ne peut être définie car elle varie selon la quantité d'enzy- me, la température de réaction et d'autres facteurs. Elle est, en général, d'au moins cinq heures, de pré- férence d'au moins dix heures, et mieux encore d'au moins 20 heures. (Le rapport d'admission de la graisse ou huile et de l'eau est déterminé par l'équation (1)). Ainsi, l'admission continue ou semi-continue de la graisse ou huile et de l'eau permet de maintenir constante la concentration du glycérol dans la phase aqueuse du système réactionnel. Cependant, un récipient réactionnel très grand est nécessaire à moins que le ou les acides gras et le glycérol formés par la réaction ne soient successivement évacués du système réactionnel. Par conséquent, il est préférable de conduire ce procé- dé en continu. Les quantités de la solution d'acides gras et de la solution aqueuse de glycérol à évacuer doivent être les mêmes que celles de la graisse ou hui- le et de l'eau introduites, respectivement. Etant donné que le système réactionnel con- siste en une émulsion eau/huile, il est nécessaire d'en retirer une solution d'un ou plusieurs acides gras et une solution aqueuse de glycérol, chacune exempte d'émulsion, afin d'évacuer ces deux solutions. On peut y parvenir par centrifugation, séparation sur membrane ou séparation statique. Pour que la solution d'acides gras et la solution aqueuse de glycérol, cha- cune exempte d'émulsion, soient efficacement retir6es par séparation statique, entre autres techniques sus- mentionnées, il est nécessaire de laisser reposer le système réactionnel pendant une longue période de temps ou de le chauffer a environ 60 C ou plus. Cepen- dant, ces modes opératoires sont indésirables, car le premier ne convient pas pour une opération continue, tandis que le second aboutit a une inactivation de l'enzyme par le chauffage. Ainsi, il est préférable d'effectuer la séparation par centrifugation ou sépa- ration sur membrane. L'émulsion peut être ainsi divi- sée en trois phases consistant en une phase huileuse, c'est-à-dire une solution d'un ou plusieurs acides gras, une phase d'émulsion et une phase aqueuse, c'est-à-dire une solution aqueuse de glycérol. Parmi ces trois phases ainsi séparées, la phase d'émulsion contient généralement environ 80 à 95 % d'enzyme et la phase aqueuse en contient envi- ron 5 a 20 %, bien que ces teneurs varient en fonc- tion de la température. Dans le procédé de la présen- te invention, il est préférable de recycler au système réactionnel la quantité totale de la phase d'émulsion et la solution enzymatique obtenue par concentration et récupération de la phase aqueuse en utilisant une membrane d'ultrafiltration, c'est-a-dire le concentré d'ultrafiltration, de manière a recycler l'enzyme. Dans le cas d'une centrifugation, la phase huileuse se trouve au-dessus, la phase d'émulsion au milieu et la phase aqueuse au fond. La quantité totale de la phase d'émulsion médiane est ramenée au système réactionnel. La phase aqueuse est traitée par ultrafil- tration. La centrifugation peut être effectuée en con- tinu ou par charges. Dans ce dernier cas, le système réactionnel est centrifugé en discontinu, par portions. Ainsi, la solution d'acides gras et la solution aqueu- se de glycérol sont retirées en semi-continu. D'autre part, dans le cas de la séparation sur membrane, la solution d'acides gras et la solution aqueuse de glycérol, chacune exempte d'émulsion, peu- vent être obtenues en filtrant l'émulsion sur des mem- branes de séparation ayant chacune une dimension de po- res inférieure a la dimension particulaires de l'émul- sion. La dimension des pores des membranes de sé- paration ne peut être définie par principe, car la di- mension particulaire de l'émulsion varie en fonction de divers facteurs comprenant la forme d'un agitateur du récipient réactionnel et la vitesse d'agitation. Il convient généralement d'utiliser une dimension moyenne de pores de 0, 01 a 5 pm, de préférence de 0,05 a 2 pm. Il est préférable d'effectuer l'ultrafiltra- tion sous une pression de 0,2 MPa ou moins, car une pression supérieure aboutirait a une obstruction ou colmatage grave. Lorsque la phase huileuse doit être séparée, il est préférable d'utiliser une membrane réalisée en une matière ayant une faible tension in- terfaciale avec les huiles, comme des polymères hy- drophobes comprenant le Teflon, une polysulfone, le polyéthylène et le polypropylène, les matières cérami- ques ou des métaux tels que l'acier inoxydable ou l'aluminium. Dans ce cas, il est préférable d'immer- fer la membrane de séparation dans une huile pure avant de l'utiliser dans la filtration afin d'obtenir la phase huileuse sous une forme plus pure. Lorsque la phase aqueuse doit être séparée, il est préférable d'utiliser une membrane réalisée en une matière ayant une faible tension interfaciale entre la matière de membrane et l'eau, par exemple des polymères hydrophi- les comprenant le polyacrylonitrile, l'acétate de cel- lulose, le polyamide et le polyuréthanne, les matières céramiques et les métaux tels que l'acier inoxydable ou l'aluminium. Dans ce cas, il est préférable d'im- merger la membrane de séparation dans de.leau avant de l'utiliser dans la filtration afin d'obtenir la phase aqueuse sous une forme plus pure. La forme de la membrane n'est pas limitée, en sorte qu'elle peut avoir toute forme telle qu'une feuille plane, un tube, un serpentin ou une fibre creuse. Lorsqu'une membrane de séparation de la pha- se aqueuse est une membrane d'ultrafiltration ayant un poids moléculaire de fractionnement d'environ 300Q & 20 000, qui est constituée des matières de départ énu- mérées ci-dessus, on peut ne pas se servir de la mem- brane d'ultrafiltration destinée à récupérer une enzy- me qui est utilisée comme décrit ci-dessous. Comme décrit ci-dessus, la phase aqueuse ob- tenue par centrifugation ou séparation sur membrane contient 5 a 20 % de l'enzyme ajoutée. Par conséquent, il est nécessaire de récupérer l'enzyme qui y est dis- soute. Cette récupération s'effectue de préférence en utilisant une membrane d'ultrafiltration. Dans la ré- cupération de l'enzyme à partir de la phase aqueuse, on peut utiliser n'importe quelle membrane d'ultrafil- tration, sans limitation de matière, de forme ou de propriétés, pourvu que l'enzyme ne puisse pas la tra- verser. Par exemple, elle peut être réalisée en toute matière telle que l'acétate de cellulose, le polyacry- lonitrile, le polysulfonate ou le polyamide, et sous toute forme telle qu'une feuille plane, un tube, un serpentin ou une fibre creuse. Le poids moléculaire de fractionnement de la membrane d'ultrafiltration est de préférence d'environ 3000 a 20 000. L'utilisa- tion d'une telle membrane d'ultrafiltration pour la séparation de la phase aqueuse évite d'utiliser une membrane d'ultrafiltration pour récupérer l'enzyme comme décrit ci-dessous. Par l'ultrafiltration, -la - solution aqueuse de glycérol exempte de l'enzyme tra- verse la membrane alors qu'une solution concentrée de l'enzyme reste sur la membrane et est de préféren- ce ramenée dans le système réactionnel. La solution d'enzyme est concentrée au moins d'un facteur cinq, de préférence d'au moins un facteur 20. Comme décrit ci-dessus, 5 a 20 % de l'enzy- me introduite sont dissous dans la solution aqueuse de glycérol. Par conséquent, il est également possi- ble d'ajouter de l'enzyme fraîche en remplacement de l'enzyme dissoute au lieu d'effectuer l'ultrafiltra- tion. L'invention sera maintenant décrite en ré- férence aux dessins annexés sur lesquels: les Figures 1 et 2 illustrent chacune une forme de réalisation o est utilisé un réacteur préféré, les références numériques de ces Figures désignant les éléments suivants: 1 réacteur; 2 - garniture; 3 - ajutage pour l'insufflation de N2 gazeux; 4 ajutage pour l'introduction du substrat (phase de solution non aqueuse); chicane supérieure; 6 - réservoir de produit (phase de solution non aqueuse); 7 - déversoir; 8 - membrane d'ultrafiltration; 9 - réservoir pour le traitement de la phase aqueu- se par la membrane; - réservoir de produit (phase aqueuse); 11 - réservoir de substrat (phase aqueuse); 12 - réservoir de substrat (phase de solution non aqueuse); 13 à 16 - pompes; 17 - chicane inférieure; 18 et 19 vannes; - 20 - pales d'agitation; et 22 - tube d'aspiration; et les Figures 3 et 4 montrent une forme de réalisa- tion de l'invention, utilisée dans les Exemples 9 et 11, dans laquelle l'huile ou graisse est hydrolysée au moyen de lipase, les références numériques de ces Figures désignant les éléments suivants: 31 est un récipient réactionnel; 32 est un réservoir d'huile; 33 est un réservoir d'eau; 34 est une membrane de séparation pour séparer la solution d'acides gras; 35 est une membrane de séparation pour séparer la solution aqueuse de glycérol; 36 est une membrane d'ultrafiltration; 37 est un réservoir de solution aqueuse de gly- cérol; 38 à 43 sont des pompes; 44 est un réservoir de solution d'acides gras; est un réservoir de solution aqueuse de glycé- rol; et 46 et 47 sont des vannes. Les Figures 3 et 4 montrent et décrivent chacune un système réactionnel de l'invention utili- sant la séparation sur membrane. Une membrane 34 des- tinge a séparer une solution d'acides gras et une mem- brane 35 destinée à séparer une solution aqueuse de glycérol peuvent être alignées, soit en parallèle, comme représenté sur la Figure 3, soit en série, com- me représenté sur la Figure 4. Lorsque les membranes sont alignées en série, il est préférable de placer la membrane 35 devant la membrane 34 afin d'élever le rapport de la phase d'huile à la phase aqueuse dans le courant d'alimentation avant de l'envoyer a la mem- brane 34. On augmente ainsi le degré de perméation de la solution d'acides gras a travers la membrane 34. Les formes de réalisation, représentées sur les Figures 3 et 4, montrent l'utilisation d'un réci- pient réactionnel. Dans l'invention, on peut utiliser plus d'un récipient réactionnel. Le procédé susmentionné permet de récupérer l'enzyme de façon stable et de la réutiliser. En ou- tre, dans le procédé de la présente invention, l'enzy- me peut être facilement récupérée et réutilisée sans être inactivée même à température élevée. En général, les enzymes sont très instables a la chaleur, sans exception pour la lipase qui présente une diminution progressive d'activité à une température dépassant 400C. Par conséquent, beaucoup de recherches ont été faites pour obtenir une lipase stable à la chaleur. Cependant, le procédé de la présente invention permet d'empêcher l'inactivation de la lipase classique, qui est susceptible d'être inactivée à température éle- vée, de manière à la réutiliser de façon stable sans avoir recours à une telle lipase thermostable. En ef- fet, le procédé de la présente invention procure un rapport élevé d'hydrolyse des graisses ou huiles, c'est-à-dire de 80 a 90 %, a une température aussi élevée que 45 à 50C, l'enzyme pouvant encore être récupérée et réutilisée. Ainsi, les huiles ou grais- ses qui sont solides a la température ambiante, par exemple le suif de boeuf ou l'huile de palmiste, peu- vent être efficacement hydrolysés par le procédé de la présente invention en utilisant l'enzyme. De plus, étant donné que le procédé de la présente invention peut être mis en oeuvre à température élevée, la vi- tesse d'hydrolyse des graisses ou huiles est grande. Par conséquent, il est possible d'hydrolyser à cette température en une période donnée de temps une plus grande quantité de graisse ou d'huile que dans une ré- action effectuée à température plus basse. L'invention peut être mise en pratique de la manière indiquée ci-après en référence aux Figures 1 et 2. Ceci constitue une forme préférée de réalisa- - tion de l'invention. Par exemple, un système de réaction enzyma- tique de A + B -> C + D, o A et B sont des substrats et C et D sont des produits réactionnels et o A et C sont solubles dans l'eau, tandis que B et D sont inso- lubles dans l'eau, sera illustré en référence à la Fi- gure 1 dans laquelle la référence numérique 1 désigne un réacteur équipé d'un tube d'aspiration. La phase aqueuse et la solution non aqueuse sont introduites dans le réacteur a un rapport donné. Ensuite, la phase aqueuse présente au fond est soule- vée par les pales d'agitation disposées dans le tube d'aspiration pour former une émulsion, établir un con- tact intime entre l'émulsion et l'enzyme et effectuer la réaction enzymatique. Dans l'exemple représenté sur la Figure 1, une garniture est disposée autour du tube d'aspiration afin d'augmenter l'efficacité du contact entre les substrats et l'enzyme et de maintenir l'enzyme en exer- çant une rétention très efficace. Si ces conditions sont remplies, la garniture n'est pas nécessaire. Il est préférable que des chicanes 5, 17 soient placées aux parties supérieure et inférieure du réacteur afin d'éviter que les deux phases ne se mélan- gent complètement l'une avec l'autre et de constituer une zone de séparation par laquelle la phase aqueuse et la phase non aqueuse sont séparées l'une de l'au- tre. Selon cette forme de réalisation, les pro- duits peuvent être séparés du mélange réactionnel, tandis que la réaction progresse. La séparation con- tinue peut être effectuée. En outre, la séparation des produits et l'introduction des corps réactionnels * peuvent être effectuées en même temps, de manière con- tinue ou semi-continue. Dans le réacteur, la plus grande partie de l'enzyme utilisée dans la réaction est retenue dans la couche de garniture. De plus, il est préférable de concentrer et de récupérer l'enzyme dissoute dans la phase aqueuse, puis de la réutiliser efficacement. Dans ce but, on peut utiliser une membrane d'ultrafil- tration. On peut utiliser n'importe quelle membrane en ce qui concerne la matière et la forme, pourvu que l'enzyme que l'on utilise ne la traverse pas. La ma- tière en question peut être l'acétate de cellulose, le polyacrylonitrile, la polysulfone et le polyamide. La forme en question peut être une feuille plane, un tube, un serpentin ou une fibre creuse. La membrane n'est pas limitée quant au poids moléculaire de frac- tionnement, pourvu qu'elle empêche l'enzyme à utili- ser de la traverser. En pratique, il est préférable que le poids moléculaire de fractionnement soit de 3000 a 50 000. Par l'ultrafiltration, la phase aqueuse exempte de l'enzyme est éliminée en continu et le li- quide concentré de l'enzyme est recyclé dans le sys- tème réactionnel, de manière continue ou semi-conti- nue. Lorsque la plus grande partie de l'enzyme utilisée est maintenue dans le réacteur et que l'enzy- me n'est dissoute qu'en quantité négligeable, la sépa- ration de l'enzyme par ultrafiltration n'est pas né- cessaire. En variante, on peut utiliser une enzyme im- mobilisée et en garnir le réacteur sans effectuer d'é- tape de récupération de l'enzyme telle qu'une ultrafil- tration. En outre, on peut ne pas procéder a l'ultra- filtration si l'on introduit de l'enzyme franche dans le réacteur, de manière à remplacer celle qui a été dissoute dans la phase aqueuse. Selon le procédé de l'invention, une enzyme peut être retenue dans un réacteur et récupérée en un rendement élevé sans traitement préalable particulier. Dans ce but, une enzyme peut être retenue par adsorp- tion sur une matière de garnissage sans traitement préalable. Elle peut être introduite sous forme immo- bilisée par un procédé classique d'immobilisation. Ou bien, elle peut être utilisée telle quelle. Le choix du procédé le plus approprié dépend des propriétés de l'enzyme à utiliser et des conditions de réaction. Dans la forme de réalisation représentée sur la Figure 1, on peut utiliser un tube d'aspiration de n'importe quel diamètre. Le diamètre peut être choi- si de manière à s'adapter aux conditions de réaction. Il est préférable qu'il ait une dimension correspon- dant a 5 à 90 pour cent du diamètre du réacteur. Les pales d'agitation peuvent être actionnées a une vites- se de rotation telle que la phase inférieure contenue dans le réacteur puisse être efficacement soulevée, qu'un mélange souhaité puisse être réalisé aux envi- rons de l'interface entre la phase huileuse et la pha- se aqueuse et qu'en outre la phase huileuse et la pha- se aqueuse puissent être séparées lorsqu'elles se trouvent dans la partie supérieure et la partie infé- rieure du réacteur, respectivement. Dans la forme de réalisation représentée sur la Figure 1, on utilise une matière de garnissage. Tout type de matière de garnissage convient à l'inven- tion. Il s'agit couramment d'anneaux de Raschig, d'an- neaux de Lessing, d'une selle de Berl, d'une selle In- talox, d'anneaux de Paul et d'un filet cylindrique. Il peut s'agir de métal, de matière céramique ou de matiè- re plastique. L'immobilisation de l'enzyme peut être effec- tuée d'une manière classique, y compris par le procédé de liaison par covalence, le procédé par réticulation, le procédé par inclusion, et une combinaison de ceux- ci. Dans le but de faire remonter la phase aqueu- se de la partie inférieure du réacteur, on peut choisir n'importe quel procédé pourvu qu'il convienne aux con- ditions de réaction et la phase supérieure et la phase - inférieure soient mélangées ensemble aux environs de leur interface. Par exemple, on peut utiliser un procé- dé faisant appel à un tube d'aspiration représenté sur la Figure 1. Un gaz inerte tel que l'azote gazeux est insufflé à partir d'une position située sous l'interfa- ce des deux phases, comme on le voit sur la Figure 2. Un gaz inerte tel que de l'azote gazeux est introduit dans le tube aspirant, comme on le voit sur la Figure 1. L'agitation aux environs de l'interface est effica- ce sans utiliser de tube d'aspiration. Comme décrit ci-dessus a propos de la forme de réalisation de l'invention, la phase supérieure et la phase inférieure sont mélangées ensemble aux envi- rons de leur interface et, par ailleurs, elles restent telles quelles, respectivement, au sommet et au fond du réacteur. La réaction s'effectue dans ces condi- tions. Dans le procédé, la phase huileuse et la phase aqueuse peuvent avantageusement être évacuées séparé- ment, tandis que la réaction progresse, et l'on peut finalement obtenir les produits désirés. Ainsi, le pro- cédé peut être conduit en continu avec simultanément des substrats introduits en continu et des produits ob- tenus en continu. Le procédé continu peut Etre mis en oeuvre en sorte que chaque ingrédient puisse avoir une concentration constante durant la réaction. L'enzyme utilisé dans le procédé peut avantageusement être sta- ble. On remarque que la stabilité d'une lipase, dans l'hydrolyse de graisse ou d'huile au moyen de li- pase, dépend de la concentration en glycérine. Dans l'invention, lorsque la concentration de glycérine dans la phase aqueuse est située entre 10 et 40 pour cent en poids, l'enzyme utilisée est efficacement sta- bilisée et l'hydrolyse s'effectue convenablement. La forme de réalisation représentée ci-des- sus, également illustrée sur les Figures 1 et 2, per- met d'assigner sans difficulté une concentration cons- t- ante à chaque ingrédient et d'effectuer efficacement l'hydrolyse de l'huile ou graisse. A cet effet, on dé- termine un rapport d'introduction approprié de l'huile ou graisse à l'eau et la concentration en glycérol est maintenue a une valeur constante appropriée conformé- ment au procédé décrit dans le présent mémoire. Le procédé peut s'appliquer a une réaction dans laquelle sont engagées deux phases en dispersion constituées d'une phase aqueuse et d'une phase non aqueuse, y compris une phase hydrophobe qui est peu ou pas soluble dans l'eau, par exemple une réaction enzy- matique et une réaction microbienne. Et plus de l'exem- ple de l'invention dans lequel l'huile ou la graisse est hydrolysée avec la lipase, le procédé peut être utilisé par exemple pour la synthèse de triglycéride avec la lipase, une réaction d'échange d'esters de triglycéride et des synthèses de peptides avec la pro- téase, par exemple la synthèse d'aspartame (ester mé- thylique d'aspartylphénylalanine) à partir d'acide carbobenzyloxy-laspartique et d'ester méthylique de K-phénylalanine avec la thermolysine et la déshydra- tation ou l'hydroxylation avec un microbe. En d'autres termes, le procédé s'applique pratiquement & la réac- tion a deux phases dans laquelle une phase comprend un substrat ou un produit qui n'est pas ou qui est diffi- cilement soluble dans l'eau,et l'autre phase comprend un autre substrat ou un autre produit qui est soluble dans l'eau. Il peut s'étendre à d'autres applications. Le procédé décrit ci-dessus est avantageuse- ment efficace, de sorte qu'on peut utiliser une enzyme et un microbe sous forme immobilisée, on peut les uti- liser avec un garnissage approprié, non immobilisés, ou ils peuvent être retenus dans un réacteur dans une certaine mesure sans utiliser de garnissage. L'enzyme et le microbe peuvent être efficacement récupérés en utilisant une membrane d'ultrafiltration, même s'ils ont été dissous dans la phase aqueuse. Pour cette rai- son, ils peuvent être récupérés sans étape compliquée d'immobilisation. L'enzyme et le microbe récupérés peuvent être utilisés de nouveau. L'invention utilise avec succès une enzyme et un microbe qui n'ont pas encore été purifies à un haut degré. On peut utiliser tels quels un liquide d'extraction, un produit partiellement purifié et un liquide de fermentation. Les Figures 1 et 2 illustrent une forme de réalisation dans laquelle on utilise un seul réacteur. En outre, l'invention peut être mise en pratique avec plusieurs réacteurs afin d'effectuer plus efficacement une réaction à étages multiples. La lipase utilisée dans la présente inven- tion n'est pas strictement limitée. Des exemples géné- raux en sont des lipases provenant de microbes apparte- nant aux genres, par exemple, Candida, Chromobacterium, Aspergillus, Penicillium, Mucor, Geotrichum, Rhizopus, Arthrobacter et Phycomyces; celles obtenues à partir d'organes d'animaux tels que le pancréas; et celles provenant de graines végétales telles que la graine d'huile de ricin. La pureté de ces enzymes n'est pas strictement limitée en sorte qu'on peut utiliser non seulement des échantillons d'enzymes purifiés mais également des produits non purifiés. Des exemples de la graisse ou huile utilisée dans la présente invention comprennent les huiles vé- gétales telles que l'huile de soja, l'huile de palmis- te, l'huile de coprah, l'huile d'olive, l'huile de graine de lain, l'huile de ricin et l'huile de Canton, et des graisses et huiles animales telles que le suif de boeuf, le saindoux et l'huile de poisson. Comme décrit ci-dessus, la présente invention fournit un nouveau procédé de réaction enzymatique, dans lequel la concentration en glycérol de la phase aqueuse du système réactionnel est maintenue constante en procédant à une réaction continue ou semi-continue, de manière a stabiliser l'enzyme et empêcher une dimi- ntion du rapport de décomposition. Par conséquent, le procédé de la présente invention présente de nom- breux avantages en ce sens qu'on peut maintenir un rapport élevé de décomposition, que l'enzyme peut être réutilisée et que la réaction peut être conduite â tem- pérature élevée, ce qui résout les problèmes rencon- très dans les procédés classiques. Les exemples non limitatifs suivants illus- trent l'invention. EXEMPLE 1 On hydrolyse de l'huile de soja avec la lipase dans un système réactionnel tel que celui représenté sur la Figure 1. Dans le cas de l'hydrolyse de graisse ou d'huile avec la lipase, la référence 4 désigne un ajuta- ge pour l'introduction de la graisse ou huile, la réfé- rence 6 désigne un réservoir de solution d'acide gras, la référence 9 désigne un réservoir pour le traitement d'une solution aqueuse de glycérol par une membrane, la référence 10 désigne un réservoir de glycérol aqueux et la référence 12 désigne un réservoir d'eau, dans chacu- ne des Figures 1 et 2. Dans un réacteur 1, on introduit 1 kg d'acides gras hydrolysés obtenus par une hydrolyse prélable d'huile de soja avec une ou plusieurs enzymes et contenant 85 % d'acides gras, 1 kg d'une solution aqueuse à 20 % en poids de glycérol, et 2 g (320 000 U/g) de lipase produite par Candida: cylindracea et l'on conduit la réaction tout en maintenant le réac- teur a 30 C. Le rapport du diamètre du réacteur à ce- lui du tube d'aspiration est de 10:6. On effectue l'agitation au moyen de pales en ruban, comme repré- senté sur la Figure 1, à une vitesse d'environ 0.5 m/ seconde. On introduit en continu de l'huile de soja contenant O % d'acides gras a partir d'un réservoir d'huile 12 dans le réacteur 1 au moyen d'une pompe 13 à un débit de 50 g/h par le fond du réacteur. On in- troduit séparément en continu de l'eau a partir d'un réservoir d'eau 11 dans le réacteur 1 au moyen d'une pompe 14 à un débit de 25 g/h par le dessus du réacteur. Ainsi, le temps moyen de séjour de l'huile de soja dans le réacteur est réglé a 20 heures et la concentration en glycérol dans la phase aqueuse est maintenue a envi- ron 20 %. L'eau présente dans la partie inférieure du réacteur est remontée au moyen du tube d'aspiration. La lipase, l'huile et l'eau viennent en contact tandis que des gouttes d'eau traversent la couche de garnissage autour du tube d'aspiration. D'autre part, des chicanes 5 et 17 sont pré- vues aux parties supérieure et inférieure du réacteur, respectivement, pour obtenir ainsi des acides gras presque exempts d'eau et une solution aqueuse de glycé- rol presque exempte de l'huile. Ainsi, les acides gras sont évacués en continu par débordement au même débit que celui de l'huile introduite. D'autre part, la solu- tion aqueuse de glycérol est évacuée en continu de la base du réacteur au moyen d'une pompe 15 et stockée dans un réservoir 9, puis soumise à une ultrafiltration au moyen d'une membrane 8 pour concentrer et récupérer ainsi l'enzyme dissoute dans la phase aqueuse. La solu- tion aqueuse de glycérol est évacuée à un débit réglé à 25 g/h. Dans cet Exemple, on utilise comme membrane d'ultrafiltration une membrane en polyacrylonitrile ayant un poids moléculaire de fractionnement de 30.000 et l'enzyme est concentrée et ramenée de façon semi- continue dans le réacteur. La réaction se poursuit dans le système ré- actionnel comme décrit ci-dessus, tandis qu'ont lieu les opérations continues d'introduction de l'huile de soja et de l'eau et l'évacuation continue de la solu- tion d'acides gras et de la solution aqueuse de gly- cérol. Après 20 heures, ce qui correspond au temps de séjour moyen dans le réacteur, on prélève la solu- tion d'acides gras dans le réservoir 6 de solution d'acides gras et l'on détermine son indice d'acide et son indice de saponification. On a ainsi constaté que l'indice d'acide est de 170 tandis que l'indice de sa- ponification est de 194. Le rapport d'hydrolyse calcu- lé selon l'équation suivante est de 86 %: Rapport d'hydrolyse = Indice d'acide x 100 de l'huile (%) Indice de saponification La concentration en glycérol dans le réser- voir 10 de solution aqueuse de glycérol est de 20 % en poids. De même, le rapport d'hydrolyse et la concen- tation en glycérbol sont déterminés 40, 60, 80 et 100 - heures après le début de l'introduction de l'huile de soja. Le Tableau 1 présente les résultats. TABLEAU 1 () Période de réaction (h) 20 40 60 80 100 () Rapport d'hydrolyse (%) 86 85 86 85 85 ( Concentration en glycérol(%): 20 19 18 19 19) ( -...... :% '' ' Ainsi, l'enzyme n'est aucunement inactivée, après une réaction continue de 100 heures et le rap- port d'hydrolyse de l'huile de soja est maintenu à - 86 %. De même, la concentration en glycérol dans la phase aqueuse est maintenue a 18 - 20 %. D'autre part, la teneur en humidité de la solution d'acides gras obtenue dans le réservoir 6 est inférieure à 0,5 %. La solution aqueuse de gly- cérol traversant la membrane d'ultrafiltration pré- sente une excellente qualité. Par conséquent, on constate que ce système réactionnel permet de sépa- rer les produits réactionnels en même temps que s'ef- fectue la réaction, pour récupérer et réutiliser ef- ficacement l'enzyme et maintenir un rapport élevé d'hydrolyse. EXEMPLE 2 On utilise le même système réactionnel que celui utilisé dans l'Exemple 1. La quantité d'huile de soja hydrolysée introduite initialement dans le réacteur ainsi que celles de la solution aqueuse à 20 % en poids de glycérol et de l'enzyme sont les mêmes que celles de l'Exemple 1, mais les débits de l'huile de soja et de l'eau introduites en continu par les pompes 13 et 14, respectivement, sont modifiés comme suit: huile de soja 25 g/h; et eau - 12,5 g/h. Ainsi, le temps moyen de séjour de l'huile de soja est fixé à 40 heures. La solution d'acides gras est évacuée par débordement, tandis que la solution aqueuse de glycé- rol est évacuée en réglant le débit à 12,5 g/h. Ainsi, l'hydrolyse s'effectue en continu. Le rapport d'hydro- lyse de l'huile de soja et la concentration en glycé- rol sont déterminés a chaque instant considéré. Le Ta- bleau 2 présente les résultats. TABLEAU 2 ( Période de réaction (h) 40 80 120 (: ) ( Rapport d'hydrolyse %) 90 89 90) ( Concentration en glycérol(%): 17 18 18) 10... ....... On voit ainsi que le rapport d'hydrolyse at- teint environ 90 % en ajustant le temps de séjour à 40 -heures. EXEMPLE 3 Dans l'Exemple 1, l'eau contenue dans le ré- acteur est soulevée par les pales d'agitation du tube d'aspiration de manière à effectuer l'hydrolyse. Dans cet Exemple, de l'azote gazeux est insufflé depuis le fond du réacteur, comme on le voit sur la Figure 2, afin de faire monter les gouttes d'eau dans la phase huileuse et d'amener la lipase retenue dans la couche de garnissage en contact avec l'huile et l'eau, de manière à réaliser l'hydrolyse. Une chicane du type entonnoir est prévue à la partie supérieure du réac- teur afin de recueillir l'azote et empêcher ainsi les solutions de se mélanger ensemble au-dessus de la chicane. Les quantités d'huile de soja hydrolysée, de solution aqueuse à 20 % en poids de glycérol et d'enzyme sont les mêmes que celles de l'Exemple 1. De plus, le temps moyen de séjour de l'huile de soja est le même que celui de l'Exemple 1. Ainsi, l'huile de soja est hydrolysée en continu en insufflant de l'a- zote gazeux a raison de 100 ml/min. Le rapport d'hy- drolyse de l'huile de soja et la concentration en glycérol sont déterminés a chaque instant considéré. Le Tableau 3 présente les résultats. TABLEAU 3 ( Période de réaction (h) 20 40 60 (:) ( Rapport d'hydrolyse (%) 86 85 86 ) ( Concentration en glycêrol (%): 17 18 18) On voit ainsi que le procédé consistant à insuffler de l'azote gazeux depuis le fond du réacteur assure un effet analogue a celui obtenu au moyen de l'agitation, comme représenté sur la Figure 1. Autre- ment dit, le procédé de cet Exemple permet de mainte- nir le rapport d'hydrolyse e 85 - 86 %, ce qui laisse supposer que la séparation de la phase de solution d'acides gras et de la phase aqueuse de glycérol est effectuée efficacement, comme dans le cas de l'Exem- ple 1. EXEMPLE 4 Dans les Exemples 1, 2 et 3, chaque hydro- lyse continue est réalisée à l'aide d'un réacteur unique 1. D'autre part, on procède a une hydrolyse continue en deux étages en utilisant deux réacteurs, tels que celui représenté sur la Figure 2, afin d'ob- tenir un rapport d'hydrolyse élevé. Dans ce cas, l'huile de soja est introduite de manière a passer en contrecourant vis-à-vis de * l'eau. Autrement dit, l'huile de soja est tout d'a- bord introduite dans le réacteur du premier étage, et la solution d'acides gras ainsi obtenue est intro- duite a son tour dans le réacteur du second étage. D'autre part, l'eau est introduite cependant que la concentration en glycérol dans les réacteurs est ré- glée à environ 20 %. L'huile de soja est introduite à raison de g/h. Un mélange d'eau douce et de solution aqueuse de glycérol récupérée du réacteur du second étage, ayant une concentration d'environ 15 %, est introduit dans le réacteur du premier étage à raison de 3 g/h, tandis qu'un mélange de solution aqueuse de glycérol récupérée du réacteur du premier étage et d'eau douce est introduit dans le réacteur du second étage à rai- son de 20 g/h. Le rapport d'hydrolyse de l'huile de soja et la concentration en glycérol sont déterminés à chaque instant considéré. Le Tableau 4 présente les résultats. - TABLEAU 4 (Période de réaction (h) 20 40 60 ( (. ) ler étage *) ( Rapport d'hydrolyse (%): 85 86 85) Concentration en glycérol (%) 20 19 20 () (2ème étage Rapport d'hydrolyse (%): 93 93 93) ( Concentration en glycérol (%) 24 2 3 (: ) On a ainsi constaté que l'hydrolyse de l'huile pouvait être effectuée plus efficacement en utilisant une réaction à plusieurs étages. L'invention est illustrée plus en détail ci-après en ce qui concerne la forme de réalisation dans laquelle l'huile ou graisse est hydrolysée avec la lipase pour produire un acide gras et du glycérol. EXEMPLE 5 Un système réactionnel est représenté sur la Figure 3. Dans un récipient réactionnel 31, équipé d'un agitateur, on introduit 3 litres d'acides gras hydro- lysés obtenus avec de l'huile de soja préalablement hydrolysée avec des enzymes et contenant 85 % d'acides gras, 1,5 litre d'une solution aqueuse à 20 % en poids de glycérol et 1,5 g (320.000 U/g) de lipase produite par Candida cylindracea, et on agite tout en maintenant le récipient réactionnel à 30 C. On introduit en continu de l'huile de soja dans le récipient réactionnel 31 depuis un réservoir d'huile 32 au moyen d'une pompe 38 à un débit de 0, 15 l/h, tout en introduisant de l'eau en continu dans le récipient réactionnel 31 depuis un réservoir d'eau 33 -. au moyen d'une autre pompe 39 à un débit de 0,08 lh. L'huile de soja et l'eau ainsi introduites sont mélan- gées ensemble par agitation dans le récipient réaction- nel. Ainsi, a lieu une réaction enzymatique à une tem- pérature de réaction de 30 C. Il se forme ainsi dans le récipient réactionnel une émulsion eau/huile. Par ailleurs, l'émulsion contenue dans le récipient réactionnel 31 est envoyée sur une membrane 34 de séparation pour séparer les acides gras, qui est réalisée en polyoléfine et a une dimension moyenne de pores de 0, 2 pm et une surface de membrane de 0,2 m2, sous une pression d'entrée de 0,1 MPa. La solution traversant le filtre à membrane 34 est une solution d'acides gras exempte d'eau et de l'enzyme. Le filtre 34 à membrane a été préalablement immergé dans l'huile de soja. La solution obtenue à la sortie du filtre est renvoyée dans le récipient réactionnel 31. La vitesse moyenne de perméation de la solution d'acides gras pouvant traverser le filtre est de 0,4 1/h. Etant don- né que ce débit ddpasEe le débit d'admission de l'hui- le de soja, c'est-à-dire 0,15 l/h, la solution d'acides gras ayant traversé est provisoirement stockée dans un réservoir 44 de solution d'acides gras et renvoyée dans le récipient réactionnel 31 à un débit moyen de 0,25 1/ h. D'autre part, l'émulsion contenue dans le ré- cipient réactionnel 31 est envoyée sur une membrane de séparation 35 pour séparer la solution aqueuse de gly- cérol, qui est un filtre en matière céramique et qui a une dimension moyenne de pores de 1,5 pm et une surfa- ce de membrane de 0,015 m2, au moyen d'une pompe 41 sous une pression d'entrée 0,1 MPa. La solution obte- nue ayant traversé le filtre en matière céramique est une solution aqueuse de glycérol exempte d'huile. Ce filtre a été préalablement immergé dans l'eau. La so- lution évacuée par la sortie du filtre est recyclée dans le récipient réactionnel 31. La vitesse moyenne de perméation de la solution aqueus de glycérol est de 2,3 1/h. La solution ayant traversé le filtre est stockée dans un réservoir 37 de solution aqueuse de glycérol et envoyée au moyen d'une pompe 42 sur une membrane d'ultrafiltration 36 qui est réalisée en po- lyacrylonitrile et présente un poids moléculaire de fractionnement de 13. 000 et une surface de membrane de 0,2 m2, de manière à concentrer et récupérer ainsi l'enzyme. Le débit de la solution traversant la mem- brane 36 d'ultrafiltration est maintenu à la même va- leur que le débit d'introduction de l'eau dans le ré- cipient réactionnel, c'est-a-dire 0,08 1/h, en réglant la pression de la pompe 42 et celle de la vanne 46. La solution traversant la membrane d'ultrafiltration, qui est une solution aqueuse de glycérol exempte d'enzyme, est stockée dans un réservoir 45, tandis qu'une partie (0,01 l/h) de la solution provenant de la sortie de la membrane 6 d'ultrafiltration est renvoyée dans le ré- cipient réactionnel 31. La solution ainsi renvoyée est un concentré de l'enzyme dans la solution aqueuse de glycérol. En utilisant ce système réactionnel, la réac- tion est poursuivie pendant l'introduction continue d'huile de soja et d'eau et l'évacuation continue de la solution d'acides gras et de la solution aqueuse de glycérol. Au bout de 20 heures, ce qui correspond a la durée de séjour théorique dans le récipient réaction- nel, la solution d'acides gras est prélevée du réser- voir de solution d'acides gras 44 et ses indices d'a- cide et de saponification sont déterminés. On a ainsi constaté que son indice d'acide était de 175 tandis que son indice de saponification était de 194. Le rap- port d'hydrolyse, calculé par l'équation suivante, était de 90 % Rapport d'hydrolyse, Indice d'acide x 100 de l'huile Indice de saponification La concentration en glycérol de la solution aqueuse de glycérol contenue dans le réservoir 15 est de 20 % en poids. De même, on détermine le rapport d'hydrolyse et la concentration en glycérol 40, 60, 80 et 100 heu- res après le début de l'introduction de l'huile de so- ja. Le Tableau 5 présente les résultats. TABLEAU 5 ( Période de réaction (h) 20 40 60 80 10 () ( Rapport d'hydrolyse (%) 90 91 89 90 90 () ( Concentration en glycérol (%): 20 19 19 19 19) (.) Ainsi, l'enzyme n'est aucunement inactivée mê- me après la réaction continue de 100 heures et le rap- port d'hydrolyse de l'huile de soja est maintenu a 89- 91 % durant toute la durée de la réaction. En outre, la concentration en glycérol de la phase aqueuse est main- tenue à 19-20 % en poids à tout moment. EXEMPLE COMPARATIF 1 On utilise le même système réactionnel que celui décrit dans l'Exemple 5. La quantité d'huile de soja hydrolysée initialement introduite et la quanti- té de solution aqueuse à 20 % en poids de glycérol in- troduite et celle de l'enzyme sont les mêmes que dans l'Exemple 5, mais on fait varier de la façon suivante les quantités d'huile de soja et d'eau ajoutées en con- tinu au moyen des pompes 38 et 39, respectivement: huile de soja - 0,3 1/h; et eau - 0,16 1/h (temps de séjour théorique = 10 h). La réaction enzymatique est poursuivie à 300C sous agitation continue, comme dans l'Exemple 5. La so- lution d'acides gras et la solution aqueuse de glycérol formées par la réaction enzymatique sont évacuées à raison de 0,3 1/h et 0,16,1/h, respectivement, chacune au même débit que le débit d'introduction correspondant. Etant donné que la vitesse moyenne de passage de la so- lution d'acides gras à travers le filtre à membrane 34 est de 0,4 l/h, une portion (0,1 l/h) en est renvoyée dans le récipient réactionnel 31 au moyen de la pompe 43. D'autre part, étant donné que la vitesse moyenne de passage de la solution aqueuse de glycérol à travers la membrane 35 est de 2,3 l/h, sa vitesse de passage à travers la membrane d'ultrafiltration 36 est ajustée a 0,16 1/h en réglant la pression de la vanne 46 et celle de la pompe 42. Ainsi, la réaction s'effectue en conti- nu et le rapport d'hydrolyse de l'huile de soja et la concentration en glycérol sont déterminés à chaque ins- tant considéré. Le Tableau 6 présente les résultats. TABLEAU 6 ( Période de réaction (h) 10 20 40 60 () ( Rapport d'hydrolyse (%) 83 79 72 65 ( ( Concentration en glycérol (%): 19 17 15 14) Ainsi, le rapport d'hydrolyse de l'huile dé- croit progressivement quand on réduit la durée théori- que de séjour à 10 heures. EXEMPLE 6 - Dans l'Exemple Comparatif 1, le rapport d'hy- drolyse de l'huile décroit progressivement lorsque la durée théorique de séjour est réduite, c'est-à-dire à heures. Dans cet Exemple, la température de réac- tion est augmentée et la quantité d'enzyme est augmen- tée, tandis que la durée théorique de séjour est main- tenue brève, c'est-à-dire de 10 heures. En effet, la température de réaction est portée à 45"C et la quan- tité d'enzyme ajoutée est portée à 12 g. La réaction d'hydrolyse est poursuivie dans les mêmes conditions que dans l'Exemple Comparatif 1, à la différence de celles décrites ci-dessus. Le Tableau 7 présente les résultats. TABLEAU 7 ( Période de réaction (h) 10 20 40 60 100 ---(: ) ( ( Rapport d'hydrolyse (%) 90 90 92 91 90) :) ( Concentration en glycérol (%): 20 19 19 19 19) ( ':) Ainsi, on constate que des augmentations de la concentration d'enzyme et de la température de réac- tion accélèrent la réaction enzymatique. Par conséquent, l'huile ajoutée est intimement hydrolysée pendant la du- rée de séjour sans diminution du rapport d'hydrolyse même lorsque la quantité de l'huile ajoutée est im- portante, autrement dit, même si la durée de séjour dans le récipient réactionnel est brève.- EXEMPLE 7 On utilise un système réactionnel tel que celui représenté sur la Figure 4. On disposé en série une membrane de séparation pour séparer la solution d'acides gras et une membrane de séparation pour sépa- rer la solution aqueuse de glycérol. Une solution aqueuse contenant du glycérol est évacuée au moyen de la membrane 35, tandis qu'une solution huileuse con- tenant les acides gras est évacuée seule au moyen de la membrane 34. La membrane 35 est un filtre en matiè- re céramique ayant une dimension moyenne de pores de 1,5 >m et une surface de membrane de 0,015 m2 et elle a été préalablement immergée dans l'eau, tandis que la membrane 34 est constituée du même filtre en ma- tière céramique qui a été préalablement immergé dans l'huile de soja. On introduit,dans un récipient réactionnel 31, 3 litres d'acides gras hydrolysés contenant 85 % d'acides gras, 2 litres de solution aqueuse à 15 % en poids de glycérol et 1,5 g de la même enzyme que cel- le utilisée dans l'Exemple 5, et on agite de la même manière que dans l'Exemple 5. L'huile de soja et l'eau sont introduites au moyen d'une pompe 38 à raison de 0,075 1/h et au moyen d'une pompe 39 à raison de 0,05 1/h, respectivement, avec une durée théorique de sé- jour de 40 heures. La réaction est poursuivie à 30 C sous agitation. D'autre part, une solution aqueuse de glycérol et une solution d'acides gras sont séparées de l'émulsion contenue dans le récipient réactionnel 31 au moyen des membranes 35 et 34, respectivement, et l'émulsion résiduelle est renvoyée dans le réci- pient réactionnel 31. La vitesse moyenne de passage de la solution d'acides gras a travers la membrane 34 est de 0,15 l/h, tandis que celle de la solution aqueu- se de glycérol à travers la membrane 35 est de 1,7 1/h. La solution aqueuse de glycérol traversant la membrane 35 est envoyée sur une membrane d'ultrafiltration 36 qui est réalisée en polysulfone et présente un poids molé- culaire de fractionnement de 6000 et une surface de membrane de 0,2 m, de manière à recueillir l'enzyme dissoute dans la solution aqueuse de glycérol. Les vitesses de passage de la solution d'acide gras et de la solution aqueuse de glycérol à travers les membra- nes 34 et 36, respectivement, sont réglées comme les -- débits des pompes 38 et 39, respectivement, en réglant les pompes 42 et 41 et une vanne 46. L'excès de solu- tion d'acides gras et de la solution aqueuse de glycé- rol est renvoyé dans le récipient réactionnel 31. Ainsi, la réaction est poursuivie tout en introduisant et en évacuant en continu, avec une durée de séjour théorique de 40 heures, et le rapport d'hy- drolyse de l'huile et la concentration en glycérol dans la phase aqueuse sont déterminés a chaque ins- tant considéré. Le Tableau 8 présente les résultats. TABLEAU 8 25... Période de réaction (h) 40 80 120 160 ( (________--- - - - - - -- - - - - - - -- ----- - -- - -- - ( Rapport d'hydrolyse (%) 90 90 92 91 ( Concentration en glycérol (%): 15 14 14 14) (3- -:) Ainsi, l'enzyme est stable à une concentration en glycérol de 15 % en poids, dans la phase aqueuse du système réactionnel, et on obtient un rapport d'hydroly- se élevé tout au long d'une période prolongée de temps. EXEMPLE COMPARATIF 2 On utilise le même système réactionnel que dans l'Exemple 7. On conduit la réaction en ajustant la concentration en glycérol de la phase aqueuse du systè- me réactionnel a 5 % en poids. En effet, on introduit 3 litres d'acides gras hydrolysés contenant 85 % d'acides gras, 5,6 litres d'une solution aqueuse à 5 % en poids de glycérol et 1,5 g de la même enzyme que celle utili- sée dans l'Exemple 5, dans un récipient réactionnel 31 et on introduit de l'huile de soja et de l'eau eu moyen d'une pompe 38 à raison de 0,15 1/h et au moyen d'une pompe 39 a raison de 0,28 1/h, respectivement. La durée de séjour théorique dans le récipient réactionnel est de 20 heures. On poursuit la réaction sous agitation à - 30 C en évacuant en continu de la même manière qu'à l'Exemple 7 les mêmes quantités de solution d'acides gras et de solution aqueuse de glycérol formées par la réaction que celles d'huile et d'eau respectivement introduites. Le rapport d'hydrolyse de l'huile et la con- centration en glycérol de la phase aqueuse sont déter- minés à chaque instant considéré. Le Tableau 9 présen- te les résultats. TABLEAU 9 ( Période de réaction (hi 20 40 60 (............:............): (à Rapport d'hydrolyse (%) 86 61 38) :) ( Concentration en glycérol (%): 5 3 2) (: ) Ainsi, lorsque la concentration en glycérol est ajustée à 5 % en poids, le rapport d'hydrolyse de l'huile accuse une diminution s'accompagnant d'une di- minution de la concentration en glycérol, ce qui rend impossible le maintien de la concentration en glycérol à 5 % en poids. EXEMPLE COMPARATIF 3 Dans cet Exemple Comparatif, la concentration en glycérol est ajustée à 50 % en poids. On utilise le même système réactionnel que celui décrit dans l'Exemple 7. On introduit,dans un ré- cipient réactionnel 31, 3 litres d'acide gras hydroly- sés contenant 85 % d'acides gras, 0,7 litre de solution à 50 % en poids de glycérol et 1,5 g de la même enzyme que celle utilisée dans l'Exemple 5. On ajoute de l'hui- le de soja et de l'eau au moyen d'une pompe 38 a raison de 0,15 1/h et au moyen d'une pompe 9 a raison de 0,035 1/h, respectivement, tout en agitant à 30 C. La durée - de séjour théorique dans le récipient réactionnel est de 20 heures. Comme représenté sur la Figure 4, les mêmes quantités de solution d'acides gras et de solution aqueu- se de glycérol que celles de l'huile et de l'eau intro- duites, respectivement, sont évacuées en continu du sys- tème réactionnel au moyen de membrane. Le rapport d'hydrolyse de l'huile et la concen- tration en glycérol de la phase aqueuse sont déterminés à instant considéré. Le Tableau 10 présente les résultats. TABLEAU 10 -- - - ( Période de réaction (h) 20 40 60 80 (: ----------------------------- ---------------- ( Rapport d'hydrolyse (%) 72 69 68 68 ( Concentration en glycérol (%): 40 37 37 37) (: ) Ainsi, le rapport d'hydrolyse de l'huile est bas, c'est-à-dire d'environ 70 %, lorsque la concentra- tion en glycérol est de 50 % en poids. EXEMPLE 8 On conduit une réaction continue dans le même système réactionnel que celui décrit dans l'Exemple 7, en utilisant du suif de boeuf comme graisse ou huile à une température de 50 C qui est supérieure au point de fusion du suif de boeuf. On introduit dans un récipient réactionnel 31, comme dans l'Exemple 7, 3 litres d'acides gras hy- drolysés contenant 85 % d'acides gras, 2 litres d'une solution aqueuse à 15 % en poids de glycérol et 4,5 g de la même enzyme que celle utilisée dans l'Exemple 5, et on mélange en agitant à 50 C. On introduit du suif de boeuf et de l'eau maintenus a 50 C au moyen d'une pompe 38 à raison de 0,15 1/h et au moyen d'une pompe 39 à raison de 0,1 l/h, respectivement, ce qui donne une durée de séjour théorique dans le récipient de 20 heures. On poursuit la réaction e 50 C. D'autre part, une solution aqueuse de glycérol et une solution d'aci- des gras sont séparées de l'émulsion du récipient ré- actionnel 31 au moyen des membranes 35 et 34, respecti- vement. L'émulsion restante n'ayant pas traversé est renvoyée dans le récipient réactionnel 31. La vitesse moyenne de permeation de la solution d'acides gras à travers la membrane 34 est de 0,16 1/h tandis que cel- le de la solution aqueuse de glycérol à travers la mem- brane 35 est de 1,9 1/h. Comme dans l'Exemple 7, la so- lution traversant la membrane 35 contient l'enzyme qui est ainsi recueillie au moyen d'une membrane d'ultra- filtration 36. Les solutions traversant les membranes 34 et 36 sont évacuées aux mêmes débits que ceux des pompes 38 et 39, respectivement, en réglant les pompes 42 et 41 et une vanne 46. Ainsi, la réaction est poursuivie en donnant des rapports d'hydrolyse tels que présentés sur le Ta- bleau 11. hBIEAU 11 ( Période de réaction (h) 20 40 60 120 ( ( à..............:) ( Rapport d'hydrolyse ( 91 90 91 91 ( Concentration en glycérol (%): 15 15 15 15) ( --: - -') Ainsi, l'enzyme n'est pas inactivée à une tenm- pérature élevée, c'est-a-dire 50 C, lorsqu'on utilise le suif de boeuf comme graisse ou huile, ce qui maintient de façon stable un rapport d'hydrolyse élevé pendant une longue période de temps. EXEMPLE 9 Dans cet Exemple, on utilise de lEhuile d'oli- ve comme huile et l'huile et l'eau sont introduites en semi-continu par portions, tandis que l'évacuation est également réalisée d'une manière semi-continue. On introduit dans un récipient réactionnel 3 litres d'acides gras hydrolysés contenant 85 % d'acides gras, 2 litres d'une solution aqueuse à 15 % en poids de glycérol et 1,5 g de la même enzyme que celle utili- sée dans l'Exemple 5, et on les mélange ensemble sous agitation à 30 C. On y ajoute une fois par heure 0,15 litre d'huile d'olive et 0,1 litre d'eau. D'autre part, on prélève environ 0,5 litre drémulsion dans le réci- * pient réactionnel une fois par heure tout en agitant à C. L'émulsion prélevée est centrifugée à 8000 tr/min pendant dix minutes. Ainsi, l'émulsion est divisée en phases supérieures (huileuse), intermédiaire (émulsion) et inférieure (aqueuse). On prélève une portion aliquo- te de 0,15 litre de la phase huileuse constituée d'une solution d'acides gras et une portion aliquote de 0,12 litre de la phase aqueuse constituée d'une solution de glycérol, et on renvoie dans le récipient réactionnel les phases huileuse et aqueuse résiduelles et la phase d'émulsion entière. On traite encore la phase aqueuse avec une membrane d'ultrafiltration en polyacrylonitrile ayant un poids moléculaire de fractionnement de 20 000 de ma- nière a isoler l'enzyme. La membrane utilisée ici est une membrane plane présentant une vitesse moyenne de perméation- de 0,4 litre/heure sous une pression de 0,1 MPa et une surface de membrane de 162 cm2. On ob- tient, sur 0,12 litre, une portion aliquote de O,1 li- tre de la phase aqueuse sous forme d'une solution ayant traversé la membrane d'ultrafiltration, tandis que le résidu, c'est-à-dire 0,02 litre, est renvoyé dans le récipient réactionnel en tant que concentré d'enzyme. Ainsi, la réaction est poursuivie en intro- duisant l'huile et l'eau, en évacuant la solution d'a- cides gras et la solution aqueuse de glycérol formées et en soumettant la solution aqueuse de glycérol à une ultrafiltration, une fois par heure dans chaque cas. Le rapport d'hydrolyse de l'huile et la con- centration en glycérol sont déterminés à chaque ins- tant considéré. Le Tableau 12 présente les résultats. TABLEAU 12 ( Période de réaction (h) 20 40 60 100) ( à---à.....-------_-____ -) ( Rapport d'hydrolyse (%) 92 93 92 92 ( Concentration en glycérol (%): 15 16 16 16) (: ) Ainsi, l'enzyme n'est pas inactivée lorsque l'introduction et l'évacuation sont effectuées d'une manière semi-continue et la réaction pourrait être poursuivie à un rapport élevé d'hydrolyse. EXEMPLE 10 Dans l'Exemple 9, l'huile et l'eau sont intro- duites d'une manière semi-continue. En revanche, elles sont introduites en continu tandis que la solution d'a- cides gras et la solution aqueuse de glycérol sont éva- cuées d'une manière semi-continue dans cet Exemple. En effet, les acides gras hydrolysés, une so- lution aqueuse à 15 % en poids de glycérol et une enzy- me sont mélangés ensemble par agitation comme dans l'Exemple 9 et on y ajoute en continu 0,15 1/h d'huile d'olive et 0,1 1/h d'eau au moyen de pompes. On agite le mélange à 3OQC de manière à effectuer la réaction. La solution d'acides gras et la solution aqueuse de glycérol formées par la réaction sont évacuées une fois par heure à raison de 0,15 1/h et 0,1 1/h, respective- ment, par centrifugation de la même manière que dans - l'Exemple 9. Ainsi, la réaction est poursuivie et le rap- port d'hydrolyse de l'huile et la concentration en gly- cérol de la phase aqueuse sont déterminés a chaque ins- tant considéré. Le Tableau 13 présente les résultats qui sont presque les mêmes que ceux de l'Exemple 9. TABLEAU 13 Période de réaction (h) 20 40 60 100 ) (Rapport d'hydrolyse () 92 92 91 91 (. ( Concentration en glycérol (%): 15 16 15 15) (: -) Ainsi, cette réaction peut être conduite en combinant l'introduction continue et l'évacuation semi- continue. REVENDICATIONS 1. Procédé d'hydrolyse de graisse ou d'huile au moyen d'eau et d'une lipase, caractérisé en ce qu'il comprend les stades d'introduction de la graisse ou de l'huile et de l'eau en continu, chacune à un débit cons- tant, ou en semi-continu par portions, et l'évacuation simultanée du système réactionnel d'une solution conte- nant un ou plusieurs acides gras et une solution aqueuse contenant un glycérol formé par la réaction enzymatique, de façon continue et aux mêmes débits que ceux de l'in- troduction de la graisse ou de l'huile et de l'eau, res- pectivement, ou de façon semi-continue par portions, de manière à maintenir constante, dans une plage de 10 à % en poids, la concentration du glycérol dans la pha- se aqueuse du système réactionnel. 2. Procédé selon la revendication 1, caracté- risé en ce qu'il comprend enoutre la division du mé- lange réactionnel en trois phases consistant en une phase huileuse comprenant une solution contenant un ou plusieurs acides gras, une phase d'émulsion et une pha- se aqueuse comprenant une solution aqueuse contenant le glycérol, au niveau de l'évacuation continue de la so- lution du ou des acides gras et de la solution aqueuse de glycérol, et l'évacuation continue ou semi-continue des phases huileuse et aqueuse, alors que la phase d'é- mulsion est recyclée telle quelle de façon continue ou semi-continue. 3. Procédé selon la revendication 1, caracté- risé en ce qu'il comprend en outre la concentration et la récupération de la lipase présente dans la solution aqueuse contenant le glycérol évacuée du système réac- tionnel, à l'aide d'une membrane d'ultrafiltration, et le recyclage de la lipase dans le système réactionnel. 4. Procédé selon la revendication 1, caracté- risé en ce qu'il comprend en outre le mélange et l'agi- tation de la phase huileuse et de la phase aqueuse aux environs de leur interface dans le réacteur dans lequel les deux phases peuvent être séparées l'une de l'autre en phase supérieure et phase inférieure, respectivement, tandis que les deux phases sont laissées là o elles sont, respectivement au sommet et à la base, la mise en contact finalement de la graisse ou de l'huile et de l'eau avec la lipase afin de produire des acides gras et du glycérol et l'évacuation d'une partie de la phase huileuse et une partie de la phase aqueuse du sommet et de la base, respectivement, du réacteur. 5. Procédé selon la revendication 4, caracté- risé en ce que le mélange aux environs de l'interface entre les deux phases est effectué & l'aide de pales d'agitation disposées dans un tube d'aspiration. 6. Procédé selon la revendication 4, caracté- risé en ce que le mélange est effectué en insufflant un gaz interte par dessous l'interface pour faire monter la phase inférieure. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendi- cations 4 à 6, caractérisé en ce que la lipase n'ayant pas été traitée préalablement est adsorbée ou retenue par une garniture ou est immobilisée sur un support d'immobilisation et est placée aux environs de l'inter- face entre la phase supérieure et la phase inférieure dans le réacteur.