FR 2568774 A2 19860214 FR 8408570 A 19840530 "Médicaments favorisant les propriétés d'écoulement du sang et leur utilisation en thérapeutique" L'invention se rapporte à des médicaments favorisant les propriétés d'écoulement du sang et à leur utilisation en thérapeutique. Cette invention constitue un développement de la demande de brevet principal No 78 31357 du 6 novembre 1978 dans laquelle on a décrit des médicaments renfermant des fractions mucopolysaccharidiques dotées de propriétés biologiques leur permettant de jouer un rôle régulateur vis-à-vis de la coagulation sanguine, plus particuliè- rement dans le sens d'un.retard à la coagulation. Cette ac- tion régulatrise&s'exerce par la mise en jeu d'actions inhibi- trice plus sélectives que celles de l'héparine, à l'égard d'un nombre plus réduit de facteurs de la coagulation, plus particulièrement du facteur X activé (facteur Xa). Ces mucopolysaccharides peuvent être obtenus; par fractionnement alcoolique à partir de l'héparine ou de fractions comportant des constituants hépariniques tels que récupérés par extraction à partir de tissus ou d'organes d'animaux, en particulier de mammifères.(On notera que le terme "héparine" est utilisé pour désigner indifférem- ment une héparine commerciale de qualité pharmaceutique ou une héparine obtenue par extraction). Sous leur aspect le plus général, les fractions, selon la demande de brevet principal, sont caractérisés notamment par les propriétés suivantes: - elles possèdent un poids moléculaire d'environ 2000 à 10 000 daltonà; - elles sont solubles dans un milieu hydro alcoolique (eauéthanol) ayant un titre de 55-61 GL; -2- - elles tendent à l'insolubilité dans un milieu eau-alcool ayant une teneur en alcool plus élevée - elles sont insolubles dans l'alcool pur; - elles possèdent un rapport du titre anti-Xa (mesuré par le titre Yin-Wessler) au titre USP, d'au moins 2, notamment d'au moins 3, et même supérieur à 6. Les inventeurs ont à présent constaté que ces fractions exercent une action puissante sur le comportement rhéologique du sang. Les travaux développés sur ces résultats ont permis de mettre en évidence une telle action, d'une manière générale,chez d'autres fractions et compositions mucopolysaccharidiques répondant aux caractéristiques générales ci-dessus. Dans la suite du texte, ces produits seront également désignés par le terme oligosaccharide. L'invention a donc pour but de fournir de nouveaux médicaments permettant de favoriser, de manière importante, l'écoulement du sang. Elle vise également leur utilisation sous différentes formes d'administration pour combattre les facteurs responsables de l'hyperviscosité sanguine. Les médicaments actifs sur la viscosité sanguine, selon l'invention, sontcaractérisés en ce qu'ils renferment une quantité efficace d'oligosaccharides correspondant ou comportant des fragments d'héparine d'un poids moléculaire inférieur à 10 000, possédant un rapport du titre Yin-Wessler au titre USP d'au moins 2 et présen- tant les propriétés de solubilité rappelées ci-dessus, ou de leurs sels pharmacologiquement acceptables. Dans une famille préférée, ces médicaments renferment au moins une fraction mucopolysaccharidique -3- selon la demande de brevet principal. Des médicaments particulièrement efficaces pour l'activité considérée comprennent des fractions mucopoly- saccharidiques ayant un poids moléculaire d'environ 2000 à 8000, notamment de l'ordre de 3500 à 5000. Les spectres RMN (13C; radiation de 20 MHz) de solutions de fractions préférées dissoutes dans de l'eau deutériée montrent des signaux ayant les caractéristiques suivantes: 23.A ppm: CH3 (croupe NH-acétyle) 54.7 ppm: carbone en position 2 des motifs glucosamine- acétyle 59.2 et 58.8 ppm: carbone en position 2 des motifs sulfate glucosamine (le pic dans la région des 58 Dpm n'apparaît pas dans des conditions de mesure identiques avec l'héparine) 61.7 ppm: carbone en position 6 avec des groupes -OH 67.4 ppm: carbone en position 6 avec des groupes -O-sulfates 98.3 x ppm: carbone en position 1 100.00 ppm X M: carbone en position 1 des motifs acide iduronique sulfaté - 103 ppm: carbone en position 1 des motifs acide glucuronique Des médicaments spécialement avantageux renferment une fraction du type de celle de l'exemple 1 de la demande de brevet principal. Une telle fraction appelée ci-après CY 216 possède un rapport du titre Yin-Wessler au titre USP supé>rieur de l'ordre de 3,55. Elle est obtenue par extrac- tion alcoolique à partir d'héparine. 4- D'autres médicaments de cette famille comprennent les fractions-obtenues par fractionnements alcooliques suc- cessifs suivis, le cas échéant, d'opérations de fractionne- ments selon le poids moléculaire telles que des gel-filtra- tions ou des gel-perméations. Les produits obtenus sont caractérisés par des rap- ports des titres Yin-Wessler-USP supérieurs à 10, notamment de l'ordre de 13 à 16 avec des titres Yin-Wessler supérieurs à 130 u/mg, notamment de l'ordre de 135 à 160 u/mg. Par purification de ces fractions à l'aide d'antithrombine III ou AT III, selon la demande de premier certificat d'addition No 79 18873 du 20.7. 1979 à la demande de brevet principal, on obtient des compositions de muco- polysaccharides dont le titre Yin-Wessler est au moins égal à 300 u/mg, avantageusement supérieur à 1300 u/mg avec des rapports du titre YinWessler au titre USP d'au moins 6 et pouvant dépasser 65 environ. Dans une autre famille préférée, les médicaments renferment des oligosaccharides du type des compositions mucopolysaccharidiques décrites dans la demande de deuxième certificat d'addition No 80 06282 du 20 mars 1980. Il s'agit de compositions possédant plus spécialement un poids moléculaire de 3000 à 6000 daltons - 5 - environ et un titre Yin-Wessler d'au moins 200 u/mg. Ces compositions sont avantageusement obtenues par dépolymérisation ménagée d'héparine à l'aide d'un agent chimique. L'utilisation d'acide nitreux, dans les conditions rapportées dans cette deuxième demande de certificat d'addition conduit à des chaînes oligosaccha- ridiques avec des motifs tEinfau mannose. Par traitement approprié, ces structures termi- nales sont avantageusement transformées en groupes plus stables de structure 2,5-anhydro-mannitol ou acide 2,5-anhydro-mannonique. Des médicaments préférés de cette famille renferment des compositions du type de celles de l'exemple 2 de cette deuxième demande de certificat d'addition qui se terminent par des motifs de structure 2,5-anhydro mannitol et possèdent un poids moléculaire de l'ordre de 2000-2500 daltons. Des compositions de ce type,telles qu'obtenues par dépolymérisation autorégulée de l'héparine selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR No 81 07 283 du 10.04.1981, sont également avantageusement utilisées pour la préparation des médicaments de l'invention. D'autres oligosaccharides de faible poids molé- culaire par rapport à l'héparine possèdent également des propriétés avantageuses sur la viscosité sanguine. I1 en est ainsi des oligosaccharides du type de ceux décrits dans la demande No 80 401 425.6 du 6 octobre 1980. Ces oligosaccharides sont caractérisés notamment par le fait qu'ils ne renferment pas plus de 8 motifs saccharidiques, qu'ils possèdent une affinité spécifique pour 1'ATIII et un rapport du titre Yin-Wessler au titre USP d'au moins 30. L'activité USP observée est pratiquement nulle alors que le titre YinWessler peut dépasser de dix fois celui de l'héparine et même atteindre une valeur de 2000 u/mg environ avec un octasaccharide appelé ABCDEFGH obtenu par dépolymérisation enzymatique de structure: CO- OR OR COO Q Lo CO O Lo! - o O503 N SO OH NHAc OH IciHS 0 CSOO NHSO5 A B C D E F H Des compositions hexasaccharidiques de grande homogéneit6 -u tyre d celles décrites dans la demande de brevet FR No 81 08604 du 23.04.81 présentent également un grand intérêt pour l'élaboration des médicaments de l'invention. Ces compositions de structure C'DEFGH obtenues selon un procédé ménagé de dépolymérisation enzymatique possèdent notamment des titres Yin-Wessler supérieurs à 2000 u/mg et des titres USP ou APTT de l'ordre de ou inférieurs. Dans une autre famille préférée de médicaments de l'invention, les oligosaccharides de faible poids molé- culaires ont constitués par les produits décrits dans la demande de brevet FR No 82 18003 du 27 octobre 1982. Ces produits obtenus par voie de synthèse possèdent un degré de pureté élevé et peuvent comporter étant donné leur mode d'obtention -7- les substituants souhaités favorisant une action donnée. D'une manière générale, ces oligosaccharides possèdent la structure de fragments d'héparine ou d'héparan-sulfate ou sont constitués par de tels fragments à motifs alternés sucre aminé-acide uronique (ou analogue de structure) ou l'inverse. Parmi les produits décrits, on citera le pentasaccharide de structure DEFGH portant le numéro 50. D'autres oligosaccharides qui se sont révélés précieux pour l'élaboration des médicaments de l'invention correspondent à ceux décrits dans la demande FR No 84 07589 du 16 mai 1984. Selon une variante de l'invention, les oligo- saccharides mis en ôeuvre! dans les différentes familles de médicaments évoquées ci-dessus sont utilisés sous des formes de conjugués avec 1'ATIII unis par liaison covalente ou,comme décrit dans la demande de brevet FR No 83 11004 du 1.07.1983, sous forme de complexes résultant de l'affinité de ces oligo- saccharides pour 1'AT-III. Comme déjà souligné, ces oligosaccharides de faible poids moléculaire excercent une action de grand intérêt sur le comportement rhéologique du sang diminuant considérablement la viscosité sanguine. Ces propriétés permettent leur utilisation dans divers syndromes d'hyperviscosités o jusqu'à alors il était fait essentiellement appel à des techniques d'hémodilution d'effets de courte durée. On citera les syndromes d'hyperviscosités associées à un certain nombre de maladies en particulier des artériopathies, des insuffisances cérébrales chroniques chez 2568774' les sujets âgés, les problèmes d'hyperviscosités rencontrés chez lesbrûlés, les syndromes d'hyperviscosités associées à des états d'insuffisances artérielles sub-aigUes, par exemple, dans des cas d'ischémie cérébrale (thromboses localisées dans le cerveau) d'insuffisance cardiaque (état de mal angineux). L'étude de l'action de ces médicaments a montré, sur un tout autre plan, qu'ils permettent d'éviter les risques de déminéralisation rencontrés sur un traitement à long terme,par exemple dans le cas de femmes enceintes ou de malades thrombo-emboliques réagissant mal aux anticoagulants oraux et soumis de ce fait à un traite- ment à long terme avec de l'héparine. Les oligosaccharides ci-dessus sont associés aux excipients pharmaceutiques habituels. La bonne absorption de ces oligosaccharides par la muqueuse du transit intesti- nal permet leur utilisation sous de nombreuses formes galéniques. L'invention concerne, en particulier, les médica- ments dans lesquels le véhicule est approprié pour l'admi- nistration par voie orale. Des formes d'administration correspondantes comprennent, des comprimés, capsules, dragées, granulés, pilules et autres. L'administration sous forme de liposomes des différents oligosaccharides de bas poids moléculaires évoqués ci-dessus s'avère particulièrement appropriée pour le traitement des syndromes d'hyperviscosité. D'autres compositions pharmaceutiques comprennent ces oligosaccharides en association avec les excipients appro- priés pour l'administration par voie rectale. Des formes d'administration correspondantes sont constituées par des suppo- sitoires. - 9 - En particulier, l'invention concerne également des com- positions pharmaceutiques injectables, stériles ou stérilisables, pour l'administration par voie intravei- neuse, intramusculaire ou sous-cutanée. D'une manière générale, l'administration de 3 à 10 x 10 u anti-Xa, (YinWessler), notamment de l'ordre de 5 x 103 u anti-Xa environ deux ou trois fois par jour apparaît satisfaisante. Ces posologies seront cependant adaptées en fonction de la condition du patient. Etant donné la parfaite inocuité de ces produits, des doses plus importantes peuvent être administrées sans effet néfaste. Afin d'illustrer l'invention, on rapporte dans l'exemple qui suit les résultats obtenus sur des volontaires sains auxquels on a administré des médicaments renfermant des oligosaccharides tels que définis ci-dessus. La figure 1 comporte les courbes de la varia- tion de la viscosité du sang total de sujets en fonction du temps après administration de sérum physiologique, d'hé- parine et d'un médicament de l'invention. EXEMPLE: Etude de l'effet d'un médicament renfermant du CY 216 sur la viscosité du sang de sujets en bonne santé - Les résultats qui suivent concernant cette étude ont porté sur 6 sujets en bonne santé auxquels on a administré, par voie intraveineuse, après une nuit de jeune, à une semaine d'intervalle, 70 unités anti-Xa/kg de CY 216, d'héparine, puis d'un volume équivalent de sérum physiologique. Préalablement à l'administration des médicaments, puis 30, 120 et 240 mn après cette administration, on a 256 774 -10 - prélevé des échantillons sanguins et déterminé la viscosité à différentes vitesses de cisaillement à l'aide d'un viscosi- mètre rotatif classique. Les résultats obtenus sont rapportés sur là figure 1 dans laquelle les courbes a) à c) correspondent respectivement aux mesures effectuées dans le cas de l'ad- ministration du CY 216, d'héparine et de sérum physiolo- gique. L'examen de cette figure montre une diminution importante de la viscosité du sanq total lors de l'administration du CY 216,mettant en évidence l'ef- ficacité de ce produit sur les propriétés d'écoulement du sanq. De fortes diminutions de la viscosité du sang ont été également observées en utilisant à la place du CY 216 des oligosaccharides de faible poids moléculaire obtenus par dépolymérisation nitreuse ou enzymatique tels que le produit désigné ci-dessus par CY 222 ou encore des octasaccharides du type ABCDEFGH et des hexasaccharides du type CDEFGH. De même, les-produits obtenus par voie de synthèse tels que le pentasaccharide du type DEFGH, le tétrasaccharide de type DEFG ou d'autres oligosaccharides contenant au moins une séquence disaccharidique de l'octa- saccharide A-H ci-dessus se sont révélés d'une grande efficacité. D'autres essais ont été réalisés sur des patients souffrant de maladies vasculaires. L'administration des oligosaccharides à raison de 100 unités anti-Xa/kg trois fois parjour durant un mois a permis d'agir de manière favorable sur l'état de ces patients. l1 FEVENDICATIONS 1.- Médicaments favorisant les propriétés d'écoulement du sang, caractérisés en ce qu'ils renfer- ment une quantité efficace d'oligosaccharides, ou de leurs sels pharmacologiquement acceptables, correspondant ou comportant des fragments d'héparine d'un poids molé- culaire inférieur à 10 000, possédant un rapport du titre Yin-Wessler au titre USP d'au moins 2 et présentant les propriétés de solubilité des fractions mucopolysaccha- ridiques selon la revendication 1 de la demande de brevet principal No 78 31357 du 6.11.1978. 2.- Médicaments selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils renferment au moins un oligosaccharide corres- pondant à S-ue fraction mucopolysaccharidique selon la demande de brevet principal, en particulier une fraction ayant un poids moléculaire de 2000 à 8000 daltons, le cas éch4ant une fraction du type de celles résultant de fractionnements alcooliques successifs suivis si on le désire d'opérations de fractionnements selon le poids moléculaire telles que des gel-filtrationsou des gels permêations, ces fractions ayant des raDports de l'ordre de 13 à 16 avec des titres Yin-Wessler supérieurs a u/mg, notamment, de l'ordre de 135 à 160 u/mg - une fraction mucopolysaccharidique du type de celles obtenues par purification des fractions précédentes sur AT-III, ayant un titre Yin-Wessler au moins égal à 300 u/mg, avantageusement supérieur à 1300 u/mg avec des rapports du titre Yin-Wessler au titre USP d'au moins 6 et pouvant dépasser 65 environ; - 12 - - une composition mucopolysaccharidique, possédant plus spécialement un poids moléculaire de 3000 à 6000 daltons environ et un titre Yin-Wessler d'au moins 200 u/mg, cette composition étant terminée par des motifs de structure 2,5-anhydromannose, 2,5-anhydro- mannitol ou acide 2,5-anhydromannonique; - une composition mucopolysaccharidique du type de celle obtenue par dépolymérisation autorégulée de l'héparine; - un oligosaccharide du type de ceux ne renfermant pas plus de 8 motifs saccharidiques, possédant une affi- nité spécifique pour 1'AT-III et un rapport Yin-Wessler au titre USP d'au moins 30, plus spécialement un octa- saccharide de structure ABCDEFGH ayant une activité USP pratiquement nulle et un titre Yin-Wessler dépassant de dix fois celui de l'héparine et même atteignant une valeur de 2000 u/mg environ; - une composition hexasaccharidique de grande homogénéité du type de celles présentant une structure du type C'DEFGH obtenue selon un procédé ménagé de dépo- lymérisation enzymatique, possédant notamment un titre Yin-Wessler supérieur à 2000 u/mg et un titre USP ou APTT de l'ordre de 10 ou inférieur; - un oligosaccharide de faible poids moléculaire du type de ceux obtenus par voie de synthèse, plus spécialement le pentasaccharide de structure DEFGH; - un oligosaccharide du type de ceux comprenant de 4 à 12 motifs choisis parmi les motifs sucre aminé et acide uronique, ou l'inverse, et contenant un enchai- nement tétrasaccharidique de structure DEFG; - un oligosaccharide ou une fraction tels que définis ci-dessus sous forme de conjugués avec 1'AT-III 13 - unis par liaison covalente ou sous forme de complexe résultant de l'affinité de ces produits pour 1'AT-III. 3.- Médicaments selon la revendication 2, caracté- risés en ce qu'ils renferment une quantité efficace d'oligosaccharides dont les spectres RMN (C13; radia- tion de 20 MHz) de solutions dissoutes dans de l'eau de deutériée montrent des signaux présentant les carac- téristiques suivantes: 23,4 ppm: CH3 (groupe NH-acétyle), 54,7 ppm: carbone en position 2 des motifs glucosamine- acétyle, 59,2 et 58,8 ppm: carbone en position 2 des motifs sulfate glucosamine (le pic dans la région des 58 ppm n'apparaît pas dans des conditions de mesure identiques avec l'héparine) 61,7 ppm: carbone en position 6 avec des groupes -OH, 67,4 ppm: carbone en position 6 avec des groupes -O-sulfate, 98,3 ppm: carbone en position 1, ,00 ppm: carbone en position 1 des motifs acide iduronique sulfaté, X103 ppm: carbone en position 1 des motifs acide glucuronique. 4.- Médicaments selon l'une quelconque des revendica- tions 1 à 3, caractérisés en ce qu'ils renferment une quantité efficace d'au moins une fraction mucopolysaccha- ridique selon l'exemple 1 de la demande de brevet prin- cipal possédant un rapport du titre Yin-Wessler au titre USP de l'ordre de 3,55. 5.- Médicaments selon l'une quelconque des revendi- cations 1 à 3, caractérisés en ce qu'ils renferment une quantité efficace d'au moins un oligosaccharide possédant plus spécialement un poids moléculaire de 3000 à 6000 - 14 - daltons environ et un titre Yin-Wessler d'au moins u/mg, et possédant un groupe terminal de structure 2,5-anhydromannitol. 6.- Médicaments pour le traitement de syndromes d'hyperviscosité, notamment, d'hyperviscocités associées à des maladies telles que des artériopathies, des insuf- fisances cérébrales chroniques chez les sujets âgés, des problèmes d'hyperviscosités rencontrés chez les brûlés, des syndromes d'hyperviscosités associées à des états d'insuffisance artérielle subaigiie, par exemple, dans des cas d'ischémie cérabrale ou d'insuffisance cardiaque, caractérisés en ce qu'ils renferment une quantité efficace d'au moins un oligosaccharide selon l'une quelconque des revendications 1 à 5. 7.- Compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles renferment un médicament selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, en association avec un véhicule approprié pour l'administration par voie orale. - 8.- Procédé de préparation d'un médicament favorisant les propriétés d'écoulement du sang selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'on transforme les oligosaccharides définis dans les revendi- cations ci-dessus en une forme d'administration galénique.