FR 2565232 A1 19851206 FR 8508445 A 19850605 & La présente invention concerne de nouveaux diesters d'acides gras et d'd,e R2 0 OR, 0 OR' R'CO0 OR' dans laquelle R1 désigne un radical alkyle de 1 à 21 atomes de carbone, R désigne un atome d'hydrogène ou un groupe benzyloxycarbonyle et R3 représente un atome d'hydrogène ou un radical benzyle, ont d'une part des activités carcinostatiques outre leurs effets tensio-actifs et d'autre part une faible toxicité, ces constatatiorsayant permis d'élaborer la présente invention. En conséquence, l'invention a pour objet de nouveaux diesters d'acides gras et d'm,(c-tréhalose, répondant à la formule (I) et utiles comme substances carcinostatiques et comme matières tensio-actives, ainsi que leurs procédés de préparation. On peut classer les diesters d'acides gras et d'co O OH G OHOH(a) RCOO OH' BnOCOO_ Bn 1o Bn OCOOBn (lb) :, 0 O OR OBn dans lesquels Bn désigne un radical benzyle et R a la même. signification que ci-dessus. On peut préparer ces composés, par exemple, par les procédés ci-apres Procédé 1 Onfait agir du chlorure de carbobenzoxy (V) en présence d'une base sur la 2,3,2',3'-tétra-0-benzyl-o, -tréhalose (IV) pour obtenir la 2,3,2',3'-tétra-0-benzyl-6,6 '-di-Ocarbobenzoxy-o, o-tréhalose (II) sur laquelle on fait, en outre, agir un agent d'acylation (III) en pré- sence d'une base: HO- Bn O OBn O ffi C1COOBn lu1 OBn O' ('f) À) BnOCOO- Bn 0 OCOOBn OBn ;;OCOBn - (lb) I /Lo\ol R'COY OH OBn (I) (11) schéma dans lequel Y désigne un atome d'halogène ou un groupe R COO et R et Bn ont les mêmes significations que ci-dessus. Procédé 2 On dissout le diester en positions 4,4' de 2,3,2',3'-tétra-O- benzyl-6,6'-di-O-carbobenzoxy-&,v (la) Bn OCOR' catalyseur (lb) o R et Bn ont les mêmes significations que précédemment. Dans les réactions du procédé 1, on effectue le premier stade en utilisant le composé (V) en une quantité de 2 à 4 moles par rapport au composé (IV) et en les faisant réagir en présence d'une base, à une tempéra- ture choisie dans la plage allant de -30 C à la température ambiante, pen- dant 3 à 24 heures. La màtière de départ, à savoir le composé de formule (IV), est un composé connu et on l'obtient en trois stades à partir de la",c tréhalose. Comme base utile dans cette réaction, on peut mentionnée une base organique telle que la pyridine, la 4-diméthylaminopyridine ou la triéthylamine ou une base minérale telle que l'hydroxyde ou le carbonate de sodium ou de potassium ou l'hydrogénocarbonate de sodium. Pour ce qui est du solvant, on préfère un hydrocarbure halogéné tel que le chloroforme ou le chlorure de méthylène. Il est cependant possible d'employer une base organique telle quelle comme solvant lorsqu'on utilise une base organique comme base. On verse le mélange de réaction ainsi obtenu dans de l'eau glacée 3 et on l'extrait ensuite avec un solvant organique tel que le chloroforme. Après élimination du solvant par distillation sous pression réduite, on purifie le produit de réaction par chromatographie sur gel de silice et on le recristallise dans un solvant convenable pour obtenir ainsi le composé (II) à l'état pur. On peut effectuer la réaction du second stade en utilisant le composé (III) à raison de 2 à 6 moles pour 1 mole du composé (II) et en les faisant réagir en présence d'une base à une température choisie dans la plage allant de 0 C à la température ambiante, pendant 10 à 70 heures. Comme base et solvant, on peut utiliser la même base et le même solvant que ceux employés dans le premier stade. En conséquence, on peut obtenir le composé (Ib) directement en faisant réagir le composé (III) avec le composé (II) sans isoler le composé (II) du composé (IV). On peut obtenir le composé (Ib) à l'état pur en versant le mélange de réaction ainsi obtenu, dans de l'eau glacée et en le soumettant à une extraction avec un solvant organique tel que le chloroforme; après élimina- tion du solvant par distillation sous pression réduite, on purifie le com- posé (Ib) parchromatographie sur le gel de silice. On peut effectuer la réaction du procédé 2 en utilisant un cataly- seur à raison de 0,05 à 1 partie en poids pour 1 partie en poids du composé (Ib) obtenu dans le procédé (1) et en réduisant par voiecatalytique le composé (Ib) à une température choisie dans la plage allant de la tempéra- ture ambiante à 70 C, pendant 1 à 10 heures. Parmi les solvants-qui conviennent pour cette réaction, il convient de mentionner les alcools tels que le méthanol, l'éthanol, le propanol et l'isopropanol; les hydrocarbures halogénés tels que le chloroforme et le chlorure de méthylène; et leurs mélanges. D'autres part, on peut utiliser comme catalyseur des catalyseurs réducteurs bien connus tels que le char- bon palladié, le noir de palladium et le nickel Raney. Etant donné que le composé (Ib) est converti presque stoéchio- métriquement en composé recherché (Ia) dans la réaction ci-dessus, on peut facilement obtenir le composé (Ia) à l'état pur en éliminant par filtra- tion le catalyseur après l'achèvement de la réaction, en concentrant le filtrat résultant, puis en recristallisant le résidu dans un solvant con- venable tel que le méthanol, l'éthanols l'éther, le chloroforme, etc. On a testé le composé (I) selon l'invention pour certaines acti- vités pharmacologiques; les résultats obtenus sont décrits ci-après. Effets pharmacologiques 1. Activité contre le carcinome d'Ehrlich. On implante par voie i.p. à un groupe de 8 souris femelles ICR des cellules de carcinome d'Ehrlich à raison de 105 cellules par souris. 24 heures après l'implanta- tion, on administre par voie le composé (I) de l'invention en suspension dans un sérum physiologique salin contenant 0,5 % de CMC-Na, à des doses prédéterminées (0,4 mg/kg, 4,0 mg/kg et 40,0 mg/kg), une fois par jour pendant 10 jours. jours après l'implantation du carcinome, on détermine le temps de survie de chaque souris. On obtient respectivement les temps moyens de survie des souris du Groupe Témoin (C) et celui des souris du-Groupe (T) auxquelles a été administré le composé de l'invention. On détermine alors l'effet antitumoral (T/C %) selon l'équation suivante: Temps moyen de survie des souris du Groupe (T) auxquelles a été administré le composé de l'inven- tion Effet antitumoral = x 100 (T/C %) Temps moyen de survie des souris du Groupe témoin (C) Les résultats sont donnés dans le Tableau I. N mtn wN: box mD> PCi N SOU D CD M ZD M n m 00MCD L1On O%- C 2- oN N ""o m r N tn 0 C N m C o N X r-1 CC) CroDC%% L 4à cv f.. 0 0 0 _o wro o"Q= o c or vCD oCD CD oq r o o -* o o"ooroCo v0 CD a 0q0 0v 0v 0 w qCD CD CD CD 0 0 0 0 0 0 C D C Q0HCS^ vP U) vD rv OD 08 O 'Or - E- q (n w Ln - Co 1Y 0 0 c 2) Activité de destruction des cellules. On introduit des cellules de Leucémie L-5178Y à une concentration de 2 x 105 cellules/ml dans le milieu de culture PRMI 1640 qui contient % d'albumine de foetus bovin. A des portions du milieu de culture ainsi préparé, on ajoute le composé de l'invention à des concentrations respectives de 3,125, 6,25, 12,5, 25, 50, 100 et 300//g/ml. Après culture pendant 48 heures dans un incubateur à 5 % de C02 à 37 C, on compte à l'aide d'un microscope les nombres de cellules vivantes dans les portions respectives de la culture. On détermine le pourcentage de prolifération par rapport au Témoin et on obtient la concentration inhibitrice 50 % (CI50) par la méthode du diagramme probits. Les résultats sont indiqués dans le Tableau II. Tableau II | Composé N Ci50(/gg/ml) 13 300 14 35,1 11,2 16 8,4 17 12,6 18 300 Comme décrit plus haut, les composés de l'invention possèdent une activité carcinostatique en plus des effets tensio-actifs et ce sont des composés non dangereux puisqu'ils sont des dérivés de saccharides. En conséquence, les composés (I) de l'invention sont utiles comme agents carcinostatiques et comme surfactifs, ainsi que comme matières intermré- diaires pour la préparation de ceux-ci. Les exemples suivants dans lesquels toutes les proportions sont en poids sauf stipulation contraire, servent à illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée. Exemple 1 On dissout dans 20 ml de pyridine et 20 ml de chlorure de méthylène 2,808 g de 2,3,2',3'-tétra-0-benzyl-e," -tréhalose (IV), puis on ajoute goutte à goutte 2,046 g de chlorure de carbobenzoxy à 0 C avec agitation. On agite ensuite le mélange pendant une nuit à température ambiante. On verse le mélange de réaction dans de l'eau glacée et ensuite on extrait avec du chloroforme. On lave la couche de chloroforme avec de l'eau et on la sèche sur du sulfate de sodium anhydre. Après élimination du solvant par distillation, on purifie le résidu par chromatographie sur une colonne de "Florisil" en utilisant comme éluant un mélange de benzène et de chlorure de méthylène. Par recristallisation dans un mélange d'éther et d'hexane, on obtient 2,80 g de 2,3,2',3'-tétra-0-benzyI-6,6'-di-O-carbobenzoxy-o(,t - tréhalose (II) sous forme de cristaux aciculaires incolores, avec un rende- ment de 72 %. IRKBrx: 3500,1725 max RMN ippm (CDCl3): 2,1-2,7(1. s. 2H), 3,1-4,4(m. 12H) Exemple 2 Dans 30 ml de pyridine, on dissout 1,94 g de 2,3,2',3'-tétra-0- benzyl-6,6'-di-0-carbobenzoxy-C,'-tréhalose (II) et on fait suivre par une addition goutte à goutte de 1,82 g de chlorure de stéaroyle à 0 C avec agitation. On agite le mélange résultant à température ambiante pen- dant 40 heures. On verse le mélange de réaction dans de l'eau glacée et on extrait avec du chloroforme. On lave la couche de chloroforme-avec de l'eau et on la sèche sur du sulfate de sodium anhydre. On élimine le solvant par distillation. Après purification par chromatographie sur colonne de gel de silice, avec un éluant mixte hexane-éther, on obtient 2,70 g de 2,3,2',3'- tétra-0-benzyl-6,6'-di-0-carbobenzoxy-4,4'-di-0-stéaroyl-",CD-tréhalose (composé n 9), sous forme d'une cire incolore, avec un rendement de 90 %. Exemple 3 On met en suspension dans 60 ml de chlorure de méthylène, 4,217 g de 2,3, 2',3'-tétra-0-benzyl-oc,e(-tréhalose (IV), puis on ajoute 1,424 g de pyridine. Tout en refroidissant le mélange résultant à -15oC, on ajoute goutte à goutte 3,071 g de chlorure de carbobenzoxy. Après l'addition goutte à goutte, on élève progressivement la température du mélange à 0 C et on agite à cette température pendant 4 heures. On ajoute ensuite 1,424 g de pyridine, puis 3,433 g de chlorure de décanoyle. On agite le mélange résultant à température ambiante pendant 17 heures et on verse le mélange de réaction résultant dans de l'eau glacée, puis on extrait avec du chloro- forme. On lave la couche de chloroforme successivement avec de l'eau, de l'acide chlorhydrique 2N et de l'eau, puis on la sèche sur du sulfate de sodium anhydre. On élimine le solvant par distillation. Par purification par chromatographie sur gel de silice (éluant: hexane/acétate d'éthyle), on obtient 5,05 g de 2,3,2',3'-tétra-O-benzyl-6,6'-di-0O-carbobenzoxy 4, 4'- di-O-décanoyl-",o -tréhalose (composé n 5) sous forme d'un sirop incolore, avec un rendement de 66 %. Exemple 4 Dans 40 ml de chloroforme et 20 ml de méthanol on dissout 2,40 g de 2,3,2',3'-tétra-O-benzyl-6,6'-di-O-carbobenzoxy-4,4'-0-stéaryl-v tréhalose (composé n 9). On agite le mélange résultant en présence de noir de palladium (catalyseur), à température ambiante pendant 4 heures tout en introduisant de l'hydrogène gazeux. On recueille par filtration le catalyseur et le dépôt cristallin résultant, puis on les lave avec un mélange chaud de chloroforme et de méthanol. On concentre le filtrat sous pression réduite et on recristallise le résidu dans un mélange de chloroforme et de méthanol pour obtenir ainsi 0,90 g de 4,4'-di-0stéaroyl- Y, -tréhalose (composé n 19) sous forme de cristaux incolores en écailles (rendement 93 %). Exemple 5 De la même façon que dans les exemples 2, 3 et 4, on synthétise les composés indiqués dans les Tableaux III et IV. Les composés obtenus aux exemples 2, 3 et 4 sont également indiqués dans ces Tableaux. ú5 Tableau III BnOCOO Bn OBn t tOBn OCOOBn (lb) R' COO OBn OR Bn: radical benzyle Compos" R1 Rotation optique ["]'1 film -1 No. -R Aspect R io opi e IR cm RMN (ôppm dans CDC13) No. (C-1,00, c.hlorofo.rmerMax 3m -CH3Sirop incolore H 683507 7'5-7,1(m. 3OH), 5,06(s. 4H), 4,77(type-AB 4H), 4,64H 2 -(CH2)2C H3Sirop incolore +68,86 3050, 2965, 1745 - 3 _(s. 4H), 5,16(d. 2H), 4,5-3,4(m. 12H), 1,94(s. 6H) -C.CH Srpiclr+6,0345 7,5-7,1(m, 30H), 5, 05(s. 4H), 4,75(type-AB 4H), 4,64 2 C Sirop incolore +7634,25,1S -(CH2)2 CH3 2950, 1750 (s. 4H), 5,16(d. 2H), 4,5-3,4(m. 12H), 2,18(t. 4H), 1,57(q. t. 4H), 0,91(t. 6H) 7,5-7,1(m, 30H), 5,08(s. 4H), 4,79(type-AB 4H), 3 (CH) CH Sirop incolore +61,4 3050, 2950, 1750 4,66(s. 4H), 5,18(d. 2H), 4, 4-3,4(m. 12H), 2,21(t. 4H), 243 1,9-,1(m. 12H), 0,88(t. 6H) 7,5-7,1(m. 30H), 5,08(s. 4H), 4,78(type-AB4H), O 4 -(CH) CH Sirop incolore +56,3 3045, 2940, 17504,67(s. 4H), 5,19(d. 2H), 4,4-3,4(m. 12H), 2,21(t. 4H), 2 6 3 1,26(m, 20H), 0,88(t. 6H) 7,5-7,1(m. 30H), 5,10(s. 4H), 4,80(type-AB 4H), 6 -(CH) CH Sirop incolore +57,7 ô3045, 2945, 1755 4,68(s. 4H), 5, 19(d. 2H), 4,4-3,4(m. 12H), 2,22(t. 4H), 1,24(m. 28H), 0,88(t. 6H) 7,5-7, 1(m, 30H), 5,07(s. 4H), 4,76(type-AB 4H), 7 -(CH2) CH Sirop incolore. + 5794 3045, 2940, 17504,65(s. 4H), 5,17(d. 2H), 4,4-3,4(m. 12H), 2,21(t. 4H), 1,23(m. 36H), 0,88(t. 5H) 7,5-7,1(m. 3OH), 5,08(s. 4H), 4,78(type-AB 4H), 7 -(CH2)12CH3Sirop incolore +59,3 03040, 2940, 1750 4,66(s. 4H), 5, 18(d. 2H), 4,4-3,4(m. 12H), 2,21(t. 4H), -.... 1,23(m. 44H), 0,88(t. 6H) 0la Ln |fi4 W% Tableau III (suite) Composé -R Asiect Rotation optique [cliIRfilm- RMN (6ppm dans CDC13) N-Rl Aspect çio hoooe R cm No. (C=1,00, chloroforme) M (pmdas DC3) 7,5-7,1(m. 3OH), 5,06(s. 4H), 4,76(type-AB 4H), a -(CH)CH3 Sirop incolore +50,5 3045, 2940, 17504,64(s. 4H), 5,16(d. 2H), 4,4-3,4(m. 12H), 2,22(t, 4H). 2 143 I..1,23(m. 52H), 0,88(t. 6H) 0 _ _ 7,5-7,1(m. 30H), 5,08(s. 4H), 4, 78(type-AB 4H), 9 -(CH2)16CH3Cire incolore +54,7 3045, 2940, 17454,66(s. 4H), 5,18(d. 2H), 4,4-3,4(m. 12H), 2,20(t. 4H), __2_16__3_ 1,23(m. 60H), 0,88(t. 6H) (C 7,5-7,1(m. 30H), 5,08(s. 4H), 4,77(type-AB 4H), -(CH2) 20CH3Sirop incolore +43,9 3050, 2950, 17554,65(s. 4H), 5,18(d. 2H), 4,4-3, 4(m. 12H), 2,21(t. 4H), ____ ___ 20__ ____ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 1,26(m.76H), 0,88(t.6H) !%3 U"l o,, Ln MN "4 TableauIV HO HOH HO,@CtA 7,4-6,1(1. 6H), 5,9-5,4(m. 4H), 5,1-4,4(m. 4H), 13 -(CH)CH 3 en plaquettes +14510 3400, 2960, 1745 4,4-3t,9(m. 6H), 2,26(t. 4H), il-O,9(m. 12H), 2 43 C 73 ep-175 0,76(t. 6H) Cristaux incolore- 7,5-5,2(1. 6H), 6, 0-5,2(m. 4H), 5,1-4,4(m. 4H), o 14 -(CH2)CH en plaquettes +1312 3400, 2950, 1745 4,4-3,9(m. 6H), 2,30(t. 4H), 1,19(m. 2H), 63 _ 169 - 172 0, 83(t. 5H) Cristaux incolore 7,6-5,2(1. 6H), 5,95,2(m:. 4H), 5,0-4,4((m. 4H), -(CH2)8CH en paillettes +119,0 3400, 2945, 1745 4,4-3,9(m. 6H), 2, 28(t. 4H), 1,16(m. 28H), 2 83 183- 184 0,84(t. 6H) Cristaux incolore 7,3- 5,6(1. 6H), 5,8-5,2(m. 4H), 5,0-4,4Cm. 4H), 16 -(CH2)10CH3 en paillettes + 110,3 3400, 2940, 1748 4,3-3,9(m. 6H), 2,27(t. 4H), 1,18(m. 36H), 171 - 173 0,85(t. 6H)..DTD: ____ 181 -18 _ _ _. __.. _ _ _ Tableau IV (Suite) Composi -R1 Aspect Rotation optique [a]1 IR KBr -1 RMN (6ppm dans No. -R___ _ p Fs (ect (C.1,00, pyridine) MaRMx (6pm d pyridine) CFristauxincolore 6,27(1. s. 6H), 5,8-5,2(m. 4H), 5,0-4,4(m. 4H) , 17 -(CH2)1 CH en paillettes +103,2 3400, 2940, 1748 4,3-3,9(m. 6H), 2, 28(t. 4H), 1,23(m. 44H), 12 3156 - 159 0,87(t. 6H) 179 - 183 Cristaux incolore 6,21(1. s. 6H), 5,8-5,3(m. 4H), 5,0-4,4(m. 4H), 18 -(CH) 4CH en forme d'écaill 3s +94,8 3400, 2940, 1748 4,3-3,9(m. 6H), 2,26(t. 4H), 1,22(m. 52H), 21 106 - 110 0,86(t. 6H) 184 - 190 Cristaux incolore 7,2-5,1(1. 6H), 5,8-5,2(m. 4H), 4,9-4,3(m. 4H), 19 -(CH 2) CH en forme d'écaill s +91,5 3400, 2935, 1755 4,2-318(m. 6H), 2,5-2, 0(t. 4H), 1,26(m. 60H), 16 106 - 109 0,88(t. 6H) - 189 Cristaux incolore 6,20(1. s. 6H), 5,8-5,2(m. 4H), 5,0-4,3(m. 4H), -(CH2) 20CH3 en forme d'écaill s +82,60 3400, 2930, 1738 4,3-3,8(m. 6H), 2,5-2, 0(t. 4H), 1,28(m. 76H), 101 - 106 0,88(t. 6H) - 146 0r tn r\ ro REVENDICATIONS 1. Diester d'acide gras et d'",ve-tréhalose, caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (I) R20 OR3 R200 OR(3_ 0,_ORI R'C O3OCOR' dans laquelle R1 désigne un radical alkyle de 1 à 21 atomes de carbone, R désigne un atome d'hydrogène ou un groupe carbobenzoxy et R3 représente un atome d'hydrogène ou un radical benzyle. 2: Procédé de préparation d'un diester en positions 4,4'awec un acide gras de la 2,3,2'3'-tétra-O-benzyl-6,6'-di-O-carbobenzoxy-c," -tré- halose, répondant à la formule générale (Ib): OBn BnOCOO OBn XO, (lb) R'COO OBn OCOR dans laquelle R est un radical alkyle de 1 à 21 atomes de carbone et Bn résigne un radical benzyle, caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir un agent d'acylation de formule générale (III): R 1COY (III) dans laquelle R a la même signification que ci-dessus et Y désigne un atome d'halogène ou un groupe -COOR, sur la 2,3,2',3'-ttra-O-benzyl-6,6'- di-0-carbobenzoxy-c,( dans laquelle Bn est tel que défini ci-dessus. 3. Procédé de préparation d'un diester en positions 4,4' avec un acide gras de l'a,ç-tréhalose, répondant à la formule générale (Ia): 10H OH 0 (H HI (ÈH1 R'C OR, OH dans laquelle R désigne un radical alkyle de 1 à 21 atomes de carbone, caractérisé en ce qu'il consiste à soumettre un diester en positions 4,4' avec un acide gras de la 2,3,2',3'-tétra-0-benzyl-6,6'-di-O-carbobenzoxy- ",c à une réaction d'hydrogénolyse. 4. Procédé de préparation d'une 2,3,2',3'-tétra-0-benzyl-6,6'- di-O-carbobenzoxy--, OH Bn dans laquelle Bn a la même signification que précédemment. 5. Médicament à activité carcinostatique, caractérisé en ce qu'il est constitué par un dérivé selon la revendication 1.