FR 2557114 A1 19850628 FR 8419639 A 19841221 255 7 1 1 4 La présente invention est relative à de nouveaux dérivés de la gonadolibérine et à un procédé pour les prépa- rer. Plus spécifiquement, la présente invention est rela- tive à de nouveaux dérivés de la gonadolibérine représentés par la formule générale (I) ci-après: Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Xl-X2-X3-Pro-X4 (I) aux sels d'addition formés avec des acides utilisables en thérapie, ainsi qu'aux complexes de ceux-ci et aux composi- tions pharmaceutiques les contenant. Dans la formule générale (I): X1 est un groupe glycyle ou un D-isomère d'un quelconque groupe amino acide naturel ou synthétique, Xr X2 représente un groupe L-aminoacide ayant 1 à 4 atomes de carbone dans la chaîne latérale, un groupe L-phényl-alanyle ou L-tryptophyle, X3 représente un groupe L-aminoacide ayant une chaîne latérale alcoyle en Clà4 ou alcanoyl (en C2à4)-amide, et, X4est un groupe glycylamide ou alcoyl (en Clà4)-amide, à condition que dans le cas o X1 est un groupe autre que le radical glycyle et X2 est un groupe tryptophyle, X2 ne puisse pas être un groupe leucyle. Les abréviations utilisées dans la formule sont iden- tiques à celles de la nomenclature acceptée dans la chimie des peptides, décrite par exemple dans J. Biol. Chem.[ 241,527 (19661..7 Une propriété générale propre à la gonadolibérine (autres noms connus dans la littérature: hormone libérant les gonadotropes, GTRH, hormone lutéinisante et stimulant les follicules (LH/FSH) et à ses dérivés connus) réside en ce qu'ils sont capables de libérer l'hormone lutéinisante (LH) et l'hormone stimulant les follicules (FSH). Depuis le début des années quatre-vingt, on sait par la littérature que la gonadolibérine de certains poissons et oiseaux diffèrent par leur structure de celle d'un mammifèr( LJ.A. King et R.P. Millar, J. Biol. Chem. 257, 10722-28 (1982); South-African Journal of Science 78, 124 (1982); N. Sherwood et coll., Proc. Natl. Acad. Sci. 80, 2794-2798 (1983) ' Ces différences sont trouvées dans les aminoacides des posi- tions 7 et/ou 8. On sait également par la littérature, que les dérivw de la gonadolibérine qui contiennent en position 6 certains D-aminoacides à la place de la glycine, présentent une acti- vité biologique accrue par rapport à la gonadolibérine natu- relle (J. Sandow et coll. Control of Ovulation, Butterworth, London, 1978, pp. 49-70). On sait de plus, que la substitution de la partie glycine amide en position 10 par des groupes amides ayant une chaîne carbonée aliphatique r. Fujino et al., J. Med. Chem. 16, 1144-1147 (1973)], élève l'activité biologique encore à un niveau supérieur. La présente invention a pour but de préparer de nouveaux dérivés de la gonadolibérine qui peuvent être utilisÈ efficacement dans le processus de reproduction de poissons, oiseaux et mammifères. La présente invention fournit de plus d'autres déri vés ayant une activité biologique accrue par rapport aux dérivés naturels. La présente invention repose sur la constatation que le remplacement des aminoacides en position 7 et 8 dans la molécule de gonadolibérine par d'autres aminoacides et que certaines combinaisons de ces changements, respectivement, fournissent des analogues de la gonadolibérine convenables pour la reproduction des poissons, oiseaux et mammifères. De plus, la présente invention repose sur la cons- tatation selon laquelle l'efficacité des dérivés de la gona- dolibérine préparés par changement des aminoacides en positioi 7 et 8, peut être accrue par l'insertion de certains D-amino- acides en position 6 et de groupes alcoyl-amides en position à la place de la glycine et de la glycine amide respectivement. Les nonapeptide-C l4-alcoyl-amides et les décapep- tide amides représentés par la formule générale (I) ci-après Glp-His-TrpSer-Tyr-X 1-X 2-X3-Pro-X4 (M) dans laquelle Xi, X2, X3 et X4 sont tels que définis plus haut, leurs sels et leurs complexes peuvent être préparés conformé- ment à la présente invention de la façon suivante: a) en utilisant la méthode de la synthèse des peptides de phase solide, on couple, selon la séquence requise, les amino- acides protégés de façon appropriée à un support polymère solide à l'aide de carbodiimide ou d'un ester actif et, dans un cas donné, on détache le peptide terminé du support par une aci- dolyse ou une aminolyse, et, si cela est désiré, on élimine les groupes protecteurs des aminoacides du peptide, pendant, avant ou après le détachement du peptide du support polymère, ou b) on construit le produit final recherché à partir des aminoacides protégés convenables, en utilisant une combinaison appropriée de condensation de fragment et de synthèse en étape, en fonction du caractère chimique des composants amino- acides variables. Il est avantageux d'utiliser une résine benzhydryl- amine ou une résine Boc-proline, con-me support solide. Il convient de détacher du support le peptide pro- tégé, en le traitant avec de l'acide fluorhydrique et/ou en effectuant une éthyl-ammonolyse. Conformément à la variante b), il est préférable de préparer les nouveaux dérivés de nona- ou décapeptide, en condensant un pentapeptide azide représenté par la formule (II) ci-après: Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N3 avec un tétra- ou pentapeptide de formule générale (III) ci- après XX23ro4 (III) ou en condensant un hexapeptide azide représenté par la formule générale (IV) ci-après: Glp-HIis-Trp-Ser-Tyr-X 1-N3 (IV) avec un tri- ou tétrapeptide de formule générale (V) ci- après: X2-X3-Pro-X4 (V) ou en condensant un heptapeptide azide représenté par la for- mule générale (VI) ci-après: Glp-His-Trp-Ser-Tyr-X 1-X 2-N3 (VI) avec un di- ou tripeptide représenté par la formule générale (VII) ci-après: X3Pro-X4, (VII) o X1, X2, X3 et X4 sont tels que définis plus haut. On peut éventuellement convertir le nona- ou le décapeptide amide obtenu en un sel acide en le faisant réagir avec un acide convenable du point de vue pharmaceutique, ou si cela est désiré, on peut libérer la base libre à partir d'un sel d'addition acide avec une base, et si cela est désiré, on peut convertir en un complexe métallique un nona- ou un décapeptideamide. De plus, la présente invention est relative aussi à des compositions pharmaceutiques contenant comme composés actifs, les composés de la formule générale (I), leurs sels et leurs complexes. Les compositions pharmaceutiques sont généralement préparées par mélange d'au moins un composé de formule (I), ou d'un sel ou complexe de celui-ci acceptable du point de vue pharmaceutique, avec des supports et/ou des additifs utilisés couramment dans la préparation des compositions pharmaceutiques suivi de la mise des compositions obtenues, par exemple, sous la forme de comprimés, dragées, capsules, suppositoires, solu- 2557 114 tions injectables, pulvérisations nasales, etc.. Les dérivés de la gonadolibérine de formule (I) peuvent efficacement être utilisés chez des poissons, des oiseaux et des mammifères, lorsqu'ils sont administrés par voie intra-musculaire ou sous-cutanée à une dose de 0,1.g à mg. Le principal avantage des composés conformes à la présente invention réside en ce que les nouveaux dérivés de la gonadolibérine de formule générale (I), contiennent des combinaisons d'aminoacides en positions 7 et 8 qui sont caractéristiques des poissons et des oiseaux, si bien qu'ils peuvent être utilisés de préférence pour le processus de reproduction de ces espèces animales également. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre. L'invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en oeuvre du procédé objet de la présente invention. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples de mise en oeuvre sont donnés uniquement à titre d'illustra- tion de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. Dans les exemples 1 à 5, les composés sont synthé- tisés par la technique en phase solide rMerrifield, R. B., J. Am. Chem. Soc. 85, 2149-2151 (1953)3, avec une résine polystyrène divinylbenzène chlorométhylée dans le cas des pep- tides alcoyl-amides ou une résine benzhydrylamine dans le cas de peptideamides. Les aminoacides individuels sont couplés à la résine sous forme de leurs dérivés N-a-ter-butyloxy- carbonyles (Boc) à l'aide de dicyclohexylcarbodiimide (DCC), N,N'diisopropylcarbodiimide (DIC) ou bien selon la méthode de l'ester actif. Les groupes réactifs des chaînes latérales des aminoacides sont protégés, si cela est désiré, avec des groupes protecteurs appropriés. Le degré d'achèvement de la réaction de couplage est mesuré par le test de la ninhydrine [Kaiser, E., Coles- cott, R.L., Bossinger, C.D. et Cook, P.I., Anal. Biochem. 34, 595-598 (1970)1. Si le test est positif, le couplage est répété. La durée du couplage varie entre 1 et 16 heures, en fonction de l'aminoacide. La déprotection du peptide, ainsi que la séparation du peptide de la résine, sont de préférence réalisées en une étape, avec de l'acide fluorhydrique liquide (HF) VSakaki- bara, S., Shimonishi, Y., Kishida, Y., Okada, M., et Sugi- kara, H., Bull. Soc. Japan 40, 2164-2167 (1967)1. Lorsqu'on utilise un groupe protecteur Nlm-dinitrophényle (DNP), on l'enlève de la chaîne latérale de l'histidine avant de procé- der à la coupure par HF. La peptide-résine protégée est agitée dans du diméthylformamide (DMF) contenant quelques gouttes de propylamine. Apres élimination du solvant, la résine por- tant le peptide est traitée avec l'acide fluorhydrique de façon habituelle. Lorsqu'on veut préparer un composé de type peptide alcoylamide, on sépare le peptide de la résine par une alcoyl-ammonolyse, suivie d'une hydrogénolyse et/ou d'une acidolyse en fonction de la nature des groupes protecteurs Le produit brut récupéré après la coupure par HF, est soumis à une filtration sur gel, dans une colonne garnie de Sephadex 6-25, avec une solution d'acide acétique comme éluant. Une purification supplémentaire est réalisée par chromatographie préparative en phase liquide haute performance (CLHP) et/ou chromatographie sur gel de silice. La pureté des peptides est évaluée par l'analyse des aminoacides et par chromatographie sur couche mince (CCM). Les valeurs de R en CCM sont déterminées sur Kieselgel (DC, Alufolien, Merck) avec les mflanges de solvants suivants Merck) avec les mélanges de solvants suivants 1. Acetate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 30: 20: 6: 11 2. Acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 60: 20: 6: 11 3. Acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 120: 20: 6: 1l 4. Acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 240: 20: 6: 11 5. n-Butanol/acide acétique/eau/acétate d'éthyle 1: 1: 1: 1 6. n-Butanol/acide acétique/eau 4: 1: 1 7. i-Propanol/acide acétique 1 M 2: 1 8. Acetate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 5: 5: 1: 3 9. n-Butanol/acLde acétique/ammoniac (1 cc NH3: 4 H20)/eau 6: 1: 1: 2 10. Méthyl-éthylcétone/acide acétique/eau 120: 15:20 Exemple I Préparation de la D-Phe6, Gln -gonadolibérine M: 1243 a) Synthèse On fait gonfler 1,25 g (1 mmole) de résine benzhydry- lamine, EC1 (0,8 meq/g) (Pierce) dans du CH2C12 pendant deux heures, puis on suit les étapes suivantes pour effectuer le cDuplage des résidus aminoacides: Etape Réactifs et opérations Durée du mélange (min.) 1 CH2C12, laver 3 fois 1 2 Acide trifluoro acétique à 33 % (TFA) dans CH2Cl2 1 3 TEA à 33 % dans CH2C12 25 4 CH2C12, laver 3 fois 1 CHC13, laver 2 fois 1 6 Triéthyl-amine à 10 % (TEA) dans CHC13, 2 fois 2 7 CHC13, laver 2 fois 1 8 Ethanol, laver 2 fois 1 9 CH2C12, laver 2 fois 1 Boc- amino acide (3 mmoles) dans CH C12 et si cela est désiré, DMFplus DI 2 ou DCC (3 mmoles) dans CH2C12* 60 - variable * 11il CH2Cl2, laver 2 fois 1 12 Ethanol, laver 2 fois 1 *Gln est couplé sous forme de son dérivé Boc- Gln-ONP (p-nitrophényl),selon la méthode de l'ester actif; le groupe a-amino n'est pas protégé dans le cas de Flp. On prélève un aliquot après chaque cycle (après l'étape 12) pour réaliser le test & la ninhydrine; si le test est négatif, le cycle suivant est commencé à l'étape un et dans le cas o le test est positif, un autre recouplage (étapes 5 à 12) est introduit. A la fin de la synthèse, on recueille 2,28 g de Glp- -His(Tos)-Trp-Ser(OBzl)-Tyr(OBzl)-D-Phe-Leu-Gln-Pro-Gly- peptide-résine. AW: 1,05 g (66 %). Mpeptide protégé: 1577) b) Séparation par HF Le peptide protégé (2,28 g) est traité avec du HF redistillé (30 ml) en présence d'anisol (3 ml) et de dithio- thréitol (100 mg), pendant 60 minutes à 0 C. Le HF est éliminé dans un courant d'azote gazeux anhydre, la résine est ensuite mise en suspension dans de l'éther absolu et filtrée. Le résidu solide est lavé avec de l'acide acétique à 50 %, puis la solution est évaporée sous vide à 37 C. La matière évaporée est directement soumise à une filtration sur fel (voir l'étape c) ci-dessous). c) Filtration sur gel Le peptide brut (obtenu dans l'étape b)) est purifié sur une colonne de Sephadex G-25 (2,5 X 100 cm) dans de l'acide acétique à 50 % avec un débit de 15 ml/h. La séparation est suivie par spectre d'absorption UV à 280 nm et par CCM. Des fractions (300 à 350 ml) sont collectées et lyopholisées. Rendement: 690 mg (55 %). d) CLHP préparative Une autre purification est réalisée à l'aide d'une colonne CLHP préparative (Whatman) du gel de silice LRP-1 (13-24p) lié en C18 à phase inverse, équilibrée avec - 18 une solution de méthanol à 25 % dans de l'acide acétique à 30 %. Apres équilibre, on charge 230 mg de la matière filtrée 2557 1 14 sur gel, sur la colonne. L'élution est effectuée avec un système de gradient linéaire du méthanol-acide acétique à 30 % (25 à 40 % de méthanol) avec débit de 2 ml/minute et sous une pres- sion de 3,5.105Pa. Le contenu des fractions est analysé à 280 nm et suivi par CCM. La collecte et la lyophilisation du produit fournissent 133 mg de D-Phe6, Gln8-GnRH. La quantité absolue doit être multipliée par 3 pour correspondre aux 690 mg de la matière ayant subi une filtration sur gel (399 mg, 32 %) Rl _5 6 7 8,3;R,3 f = 0,76; R = 0,68; R6 = 0,33; R = 0,93; Rf = 0,83. Analyse des aminoacides Ser 0,93, Glu 1,96, Pro 0,95, Gly 1,02, Leu 1,00, Tyr 1,01, Phe 1,02, His 0,99. Point de fusion: 175 à 178"C;. 22 = - 68,00 (c = 0,1, 0, 1 M AcOH). Exemple 2 Préparation de la Trp, Gln -gonadolibérine M: 1226 a) Synthèse On fait gonfler 2,5 g (1 mmole) de résine benzhydry- lamine, HC1 (0,4 meq/g) dans du CH2C12, puis on prépare 3,62 g de GlpHis(DNP)-Trp-Ser(OBzl)-Tyr-Gly-Trp-Gln-Pro-Gly-peptide résine selon la procédure décrite dans l'exemple 1 a). AP: 1,12 g (76 %) (Mpeptide protégé: 1468). b) Déprotection et séparation du peptide de la résine. Elimination du groupe DNP La résine portant le décapeptide protégé (3,63 g) est agitée dans 20 ml de DMF et 1 ml de propylamine pendant 60 minutes, à la température ambiante, puis la résine portant le peptide partiellement protégé est séparée par filtration, lavée avec du CH2Cl2 et de l'éthanol, puis séchée sous vide. SéÈration par HF Après élimination du groupe DNP protecteur, le peptide est traité par du HF selon la procédure de l'exemple 1 b). On obtient de cette façon 0,8 g (65 %) de décapeptide amide brut. c) Filtration sur gel La filtration sur gel est effectuée selon la procédure de l'exemple 1 c). Rendement: 520 mg (42 %). d) CLHP préparative Le procédé est réalisé selon la méthode qui est décrit dans l'exemple 1 d), si ce n'est que le gel LRP-1 est équi- libre avec une solution à 18 % du méthanol dans de l'acide acétique à 30 %. La matière brut ayant subi une filtration sur gel, est éluée de la colonne avec un système à gradient liné- aire de méthanol-acide acétique à 30 % (18 à 35 % de méthanol). On obtient ainsi 380 mg du peptide pur (31%). R1 = 0,66; R5 = 0,57; R = 0,78. f f f Analyse des aminoacides: Ser 0,93, Glu 1,93, Pro 1,00, Gly 2,04, Tyr 0,98, Trp 1,86 His 1,03. Exemple 2 Préparation de Trp, Leu8, desGly10-gonadolibérine éthylamide M: 1198 a) Synthèse On prépare d'abord la Boc-résine selon la méthode de Merrifield Merrifield, R.B., J. Am. Chem. Soc. 86, 304 (1964), On fait gonfler 2,0 g (1 mmole) de Boc-Pro-résine (0,5 meq/g) pendant deux heures, puis on couple les aminoacides appropriés à la résine, l'un après l'autre, selon la procédure qui est décrite dans l'exemple 1 a). Apres le dernier cycle, on obtient 3,02 g de résine portant le Glp-His(DNP)-TrpSer(OBzl)-Tyr(OBz: -Gly-Trp-Leu-Pro-nonapeptide. M AP: 1,02 g (83 %) (peptide protégé: 1486). b) Déprotection et séparation du peptide de la résin Le groupe DNP protecteur est d'abord éliminé suivant la procédure de l'exemple 2 b). Le peptide partiellement protégé est alors détaché de la résine sous forme de son êthylamide boy, D.H. et coll. Biochemistry 13, 323-326 (1974)7. A ce propos, la résine portant le peptide est agitée avec 15 ml d'éthylamine condensée à 0 C, pendant 3 heures. L'excès d'éthyl- amine est éliminé dans un courant d'azote gazeux. Le résidu est lavé avec de l'éthanol et du DMF, puis filtré. Le filtrat est évaporé sous vide, le résidu est traité avec de l'éther et la matière solide est filtrée. Une déprotection complète du peptide est effectuée par traitement avec le HF anhydre selon la procédure de l'exemple 1 b). Rendement: 710 mg (59 %). c) Filtration sur gel Le nonapeptide éthylamide est envoyé à travers une colonne de Sephadex G-25 dans l'acide acétique à 30 %, selon la procédure de l'exemple 1 c). Ren dement 490 mg (41 %). d) Chromatographie sur gel de silice. Le peptide brut est purifié sur une colonne de Kieselgel 60, 2x 100 cm (230-400 mesh, Merck) dans un mélange :20:6:11 d'acétate d'éthyle: pyridine: acide acétique: eau, avec un débit de 8 ml/h. On collecte des fractions de 4 ml et suit l'élution par CCM. Les fractions renfermant la subs- tance pure sont évaporées et lyophilisées. Rendement: 320 mg (26 %). 1 2 8 Rf = 0,61; Rf = 0,42; R 0,75. Analyse des aminoacides: Ser 0,89, Glu 0,96, Pro 0,95, Gly 0,97, Leu 1,00, Tyr 1,02, Trp 1,88 His 1,03. Exemple 4 7 8t Préparation de la Phe, Gln -gonadolibérine M: 1187 a) Synthèse On fait gonfler 1,25 g (1 mmiole) de résine benzhy- drylamine, ICI (0,8 meq/g) dans du CE2Ci2 pendant deux heures, pulais on prépare selon la procédure de l'exemple I a), 2,9 g de résine portant le Glp-His(Tos)-Trp-Ser(OBzl)-Tyr(OBzl)-Gly- -Phe-Gln-Pro-Gly-peptide. AP: 1,27 g (83 %) (Mpeptide protégé: 1521). b) Séparation par HF Le peptide protégé est traité avec du HF anhydre selon la procédure de l'exemple 1 b). On recueille ainsi 980 mg (82 %) de matière déprotégée. c) Filtration sur gel dLe décapeptide amide brut est purifié sur une colonne de Sephadex G-25 dans de l'acide acétique 2M, selon la proce- dure de l'exemple 1 c). Rendement: 576 mg (49%). d) CLHP prêparative Le procédé est effectué selon la procédure de l'exemple 1 d), si ce n'est que le gel LRP-1 est équilibré avec une solution à 10 % de méthanol dans de l'acide acétique à 20 %. L'élution est réalisée avec un système à gradient linéraire de méthanol-20% d'acide acétique (10 à 25 % de méthanol, 150- ml), puis poursuivie avec un système à gradient linéaire contenant 25 à 40 % de méthanol (150-150 ml de chaque). Les fractions contenant le peptide pur sont collectées et évapo- rées. Rendement: 448 mg (38 %). R1 = 0,12, Rf = 0,7, R = 0,24, Rf = 0,87. Analyse des amino acides: - Ser 0,87, Glu 2,05, Pro 1,03, Gly 2,13, Tyr 0, 92, Phe 1,00, His 0,95, Trp 0,81. Point de fusion: 182 C. Exemple 5 7 0 Préparation de la Phe, Leu -gonadolibérine M: 1172 a) Synthèse On fait gonfler 0,62 g (0,5 mmole) de résine benzhy- drylamine, HC1 (0,8 meq/g) dans du CH2Cl2 pendant deux heures, puis selon la procédure de l'exemple 1 a), on synthétise 1,33g de résine portant Glp-His(Tos)-Tro-Ser(BOzl)-Tyr(OBzl)-Gly- -Phe-Leu-Pro-Gly-peptide. AP: 695 mg (92 %) (Mpeptide protégé: 1506) b) Séparation par HF - Le peptide protégé est traité par du HF selon la procédure de l'exemple 1 b). On obtient ainsi 510 ml (87 %) du décapeptide brut. c) Filtration sur gel Le décapeptide amide obtenu dans l'étape b) est chargé sur une colonne de Sephadex G-25 dans de l'acide acétique 2M et purifié selon la procédure de l'exemple i c). Rendement: 363 mg (62 %). d) Chromatographie sur gel de silice Le peptide est à nouveau purifié sur une colonne de Kieselgel 60 (2 x 100 cm) dans un mélange 1:1:1:1 de nbutanol: acide acétique: eau: acétate d'éthyle. Le contenu des frac- tions est suivi à 280 n et par CCM. On obtient ainsi 299 mg (51 %) du décapeptide amide pur. 1 25 7 Rf = R2,739 0f = 0,55; f = 0,39; Rf = 0,62; R = 0,73. Analyse des aminoacides: Ser 0,91, Glu 0,97, Pro 1,07, Gly 2,12, Leu 1,00, Tyr, 1,03, Phe 0,94, His 1,05. Exemple 6 Préparation du D-Phe6, Gln8, desGly0 gonadolibérine éthylamide M: 1198 Boc-His(DNP)-Trp-OMe M: 623 On dissout 21,12 g (50 mmoles) de Boc-His(DNP)-OH dans 100 ml de DMF et l'on refroidit la solution à 0 C. Ensuite, on ajoute tout en agitant, 10, 32 g (50 mmoles) de DCCI et 7,66 g (50 mmoles) de N-hydroxy-benztriazole. Le mélange est agité à 0 C pendant 10 minutes et la dicyclohexyl-urée préci- pitee est séparée par filtration. On dissout 12,74 g (50 mmoles)de H-Trp-OMe,HCl dans ml de DMF et l'on refroidit la solution à 0 C. Tout en agitant, on introduit 693 ml (50 mmoles) de triéthylanine et après une période de 5 minutes, on sépare le chlorhydrate de triéthylamine précipité en le filtrant. Les deux solutions sont combinées et agitées à 0 C pendant une nuit. Ensuite, on sépare par filtration la DCU précipitée et on évapore la solution à siccité. Le résidu huileux est dissous dans 500 ml d'acétate d'éthyle et on la secoue avec trois portions de 100 ml d'une solution KHSO4 1M refroidie par de la glace, cinq portions de 100 ml d'une solution saturée de NaHCO3 et enfin deux portions de 100 ml d'une solution de NaCl à 10 %. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et évaporée à siccité. La substance huileuse obtenue est pulvérisée avec de l'éther de pétrole, filtrée et séchée. Le produit cristallin obtenu peut être recristallisé à partir de l'acétate d'éthyle avec de l'éther de pétrole. Rendement: 27,7 g (89 %). Point de fusion: 119 à 122 C; a]2D = +14,1 (c = 1, DMF). R4 = 0,62. f b) H-His(DNP)-Trp-OMe,2HC1 M: 522,5 (base libre): 595 (,2HCl) On dissout 24,9 g (40 mmoles) du dépeptide, le Boc-His(DNP)-OMe dans 100 ml de méthanol et l'on ajoute 100 ml d'une solution d'acide chlorhydrique méthanolique 4N. Le mélange est laissé reposer 30 minutes à la température am- biante, tandis que cristallise le chlorhydrate du dipeptide. Les cristaux sont séparés par filtration, lavés à l'éther et séchés. Rendement: 21,91 g (92 %). Point de fusion: 198 à 202 C; ri2 = 0,49 (c = 1, DMF). 3 4 Rf = 0,46, Rf = 0,18. c) Glp-His(DNP)-Trp-OMe M: 634 On dissout 4,85 g (36,8 mmoles) d'acide L-pyro- * glutamique, 7,85 g de dicyclohexyl-carbodiimide et 5,63 g de N-hydroxybenztriazole dans 100 ml de DMF. Le mélange est agité de 5 à 10 C pendant 10 minutes, après quoi la DCU est séparée par filtration. On dissout 20,84 g (35 mmoles) de H-His(DNP-Trp- O.e,2HC1 dans 100 ml de diméthyl formamide, puis on ajoute 9,72 ml (70 mmoles) de triéthylamine à la solution. Apres minutes d'agitation, le chlorhydrate de triéthylamine préci- pité est sépare par filtration. Les deux solutions sont combi- nées et agitées à la température ambiante pendant 16 heures. On ajoute ensuite 90 ml d'acétone dans le mélange et l'on sépare par filtration la matière insoluble précipitée. L'éva- poration de la solution fournit une matière huileuse qui est triturée avec de l'acétate d'éthyle filtrée et séchée. La matière cristalline sèche est lavée avec trois portions de ml d'eau, puis séchée. Le produit peut être recristallisé par dissolution dans de l'acétate d'éthyle et refroidissement. Rendement: 18,42 g (83,1 %). Point de fusion: 148 à 151 C; 3 = +5,2 (c = 1, DMF). 3 4 R3 = 0,53, Rf = 0,38. f d) Glp-His-Trp-OMe M: 466 On dissout 15,84 g (25 mmoles) du tripeptide protégé le Glp-His(DNP)-TrpOMe, dans un mélange de 100 ml de DMF et de 40 ml d'eau. On ajoute 4 ml de mercapto-éthanol et on ajuste le pH de la solution à 8, à l'aide de triéthylamine. On laisse reposer à la température ambiante pendant 30 minutes et on évapore à siccité sous vide. La matière huileuse est triturée avec de l'éther,filtré et séchée. Le produit obtenu est dissous dans une petite portion de méthanol et recristal- lisé par addition d9éther. Les cristaux précipités sont séparés par filtration et séchés. Rendement: 10,92 g (93,6 %). Point de fusion: 228 à 232 C; ["] = +4,04 (c = 0,42, DMF). D=' Rf = 0,30. f e) Glp-His-Trp-N2H3 23. M: 466,5 On dissout 9,33 g (20 mmoles) du tripeptide de Glp-His-Trp-OMe dans 250 ml de méthanol. On ajoute 20 ml d' hydrazine hydraté à 98 % à la solution. Le mélange réactionnel est agité à 40 C pendant 3 heures et ensuite à la température ambiante pendant une nuit. La matière précipitée est alors séparée par filtration, lavée avec du méthanol froid et séchée. Rendement: 7,58 g (81,2 %). Point de fusion: 166 à 169 C; a]2D = -22,3 (c = 0,5, DMF). 1 2 Rf = 0,50, Rf = 0,14. f e) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-OMe M: 717 On dissout 7,0 g (15 mmoles) du Glp-His-Trp-N2H3 obtent dans l'étape e) dans 60 ml de DMF. La solution est refroidie I à 0 C et 7,5 ml (45 mmoles) d'une solution d'HCl 6N sont ajoutés sous agitation. Ensuite, on introduit goutte-à-goutte 1,035 g (15 mmoles) de NaNO2 dans le mélange sous forme d'une solution aqueuse concentrée et l'on agite le mélange à Q C pendant 15 minutes supplémentaires; Une solution de 4,78 g (15 mmoles) de H-Ser-Tyr-OMe, HC1 dans 15 ml de DMF est ajoutée au mélange réactionnel. Le pH est ajusté à la neutra- lité avec 6,25 ml (45 mmoles) de triéthylamine et l'on agite le mélange à 0-40 C pendant une nuit. Le jour suivant, il est évaporé à siccité sous vide et le produit huileux est trituré avec de l'éther. On recueille 12,1 g (100 %) du composé recherché contenant une petite quantité d'impuretés. Ce produit peut être converti en hydrazide sans purification et l'hydrazide obtenupeut être facilement cristallisé. Propriétés physiques d'un échantillon témoin recris- tallisé à partir du méthanol: Point de fusion: 188 à 190 C; OE22 = -3,48o (c= 1, DMF); i 2 Rf = 0,58, Rf = 0,26. g) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 M: 717 On dissout 12 g de l'ester de pentapeptide brut en poudre, le Glp-His-TrpSer-Tyr-OMe dans 200 ml de méthanol et l'on ajoute 10 ml d'hyrazine hydratée à 98%. Le mélange est agité à C pendant 3 heures, puis une nuit à la température ambiante, après quoi les cristaux précipités sont séparés par filtra- tion et séchés dans un dissiccateur sur de l'acide sulfurique concentré. La matière cristalline sèche est dissoute dans 250 ml d'une solution 0,5 N d'acide chlorhydrique. Le pH de la solution est ajusté à 8 avec une solution saturée de carbo- nate de sodium. Apres repos à 0 C pendant 2 heures, les cris- taux précipités sont filtrés, lavés avec de l'eau glacée et séchés. Rendement: 6,12 g (56,9 %, calculé pour les deux étapes). Point de fusion: 205 à 206 C; ri]22 = -21,510 (c = 1, DMF). R1 = 0,39, Rf = 0,14. Azote d'hydrazine: trouvé: 3,79 %, 3,76 % calculé: 3,91 % h) Z-Gln-ProNHEt M: 405 On dissout 3,242 g de proline éthylamide (obtenue à partir de 22,8 mmoles de Z-Pro-NHEt par hydrogénolyse) dans ml de tétrahydrofuranne (THF), puis on ajoute 5,6 g (20 mmoles) de Z-Gln-OH et 1,034 g de N-hydroxybenztriazole à la solution. Le mélange réactionnel est refroidi à 0 C et la solution de 5,34 g (25,9 mmoles) de dicyclohexylcarbodiimide 5 7 1 1 4 dans du THF est versée dans le mélange réactionnel agité. L'agitation est poursuivie à 0 C pendant 5 heures, puis pen- dant 20 heures à la température ambiante. Le précipité est filtré, lavé avec du THF, puis le filtrat est évaporé sous vide et le résidu est dissous dans du chloroforme. La solu- tion est secouée avec trois portions de 35 ml d'un mélange de NH40H et d'eau (1:5), deux portions de 20 ml d'eau, trois portions de 35 ml d'une solution de HC1 0,1 N et enfin deux portions de 20 ml d'eau. La phase organique est séchée sur du sulfate de sodium anhydre, filtrée, lavée avec du chloroforme et évaporée. Le résidu huileux obtenu est dissous dans un mélange de 35 ml de THF et de 50 ml d'acétate d'éthyle, puis filtré. La solution est évaporée et le résidu est trituré avec de l'éther. Le produit solide obtenu est filtré, lavé à l'éther et séché sous vide. Rendement: 7,68 g (95 %). R1 = 0,73, R6 = 0,45. i) Z-Leu-Gln-Pro-NHEt M: 518,6 On dissout 4,5 g (11 mmoles) de Z-Gln-Pro-NHEt dans ml d'acide acétique glacial et on ajoute 55 ml d'acide bromhydrique 4N, dans de l'acide acétique glacial, à la solution. Le mélange réactionnel est maintenu à la tempéra- ture ambiante pendant 90 minutes, puis additionné de 250 ml d'éther anhydre et le mélange est maintenu pendant 60 minutes à la température ambiante. Le surnageant est décanté, 100 ml d'éther sont ajoutés au résidu et 15 minutes plus tard, il est filtré et lavé à l'éther. Le résidu solide est séché sous vide sur du pentoxyde de phosphore et de l'hydroxyde de sodium. Rendement: 49 g (hygroscopique). On met en suspension 3,8 g (11 mmoles) du dipeptide éthylamide, HBr obtenu dans 150 ml de chloroforme et on ajoute 7 ml de trithylamine à cette suspension. On ajoute 6,4 g d'ester pentachlorophénylique de carbobenzoxy-leucyle dans 65 ml de chloroforme. Le mélange réactionnel est agité pendant une nuit à la température ambiante. Le jour suivant, il est lavé avec de l'acide chlorhydrique 1N, une solution de chlorure de sodium saturée, une solution d'hydroxyde d'ammonium 2N et à plusieurs reprises,avec une solution de chlorure de sodium saturée, La phase chloroformique est séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée sous vide. Le résidu est trituré avec de l'éther, filtré, lavé à l'éther et séché sous vide. Rendement: 4,6 g (81%). j) H-Leu-Gln-Pro-NHEt,HBr M: 465,5 Le produit brut préparé dans l'étape i) est dissous dans 10 ml d'un acide acétique glacial et agité pendant 60 minutes à la température ambiante, puis la solution est diluée avec 100 ml d'éther anhydre. Le précipité est filtré et séché sous vide. Rendement: 3,54 % (76 %). 1 1 5 6 8 Rf = 0,1, R = 0,55, R = 0,13, Rf = 0,77. Analyse des aminoacides: Glu 1,05, Pro 1,19, Leu 1,00. k) Boc-D-Phe-Leu-Gln-Pro-NHEt M: 631,7 On dissout 2,33 g (5 mmoles) de H-Leu-Gln-Pro-NHEt, HBr dans 5 ml de DMF et l'on refroidit à 0 C puis on ajoute 0,7 ml (5 mmoles) de triéthylamine et 2,57 g (5 mmoles) d'ester pentachlorophénylique ter.-butyloxycarbonyl-D- -phénylalanyle dans 10 ml de DMF à la solution. Le pH est ajusté à une valeur entre 7 et 8, puis le mélange réactionnel est agité pendant 48 heures à la température ambiante, pen- dant lesquelles le pH est ajusté de temps en temps à la neutralité, à l'aide de trithylamine. Après évaporation du mélange réactionnel, la substance restante est triturée avec de l'éther, puis filtrée et séchée. Le produit brut obtenu est soumis à une déprotection sans purification préalable. Rendement: 2,81 g (89 %). 1) H-D-Phe-Leu-Gln-Pro-NHET.TFA M: 645,6 On dissout 1,26 g (2mmoles) de Boc-D-Phe-Leu-Gln- Pro-NHEt dans 10 ml d'acide trifluoro-acétique et l'on agite pendant 20 minutes à la température ambiante. L'acide trifluo- roacétique est évaporé sous vide et le résidu est trituré avec de l'éther, filtré et séché. Le résidu est soumis à une chromatographie sur une colonne de gel de silice avec un mélange 4:1:1 de n-butanol: acide acétique: eau. Les fractions appropriées sont collectées et évaporées sous vide. Le résidu est dissous dans quelques ml d'eau, puis lyophi- lisé. Rendement: 880 mg (68 %). R2 = 0,25, Rf = 0,35. -2f Point de fusion: 142 C; La]0 = -66 (c = 0,1, DMF). m) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-Leu-Gln-Pro-NHEt M: 1199 On dissout 286 mg (0,4 mmole) du pentapeptide hydrazine, le Glp-His-TrpSer-Tyr-N2H3 préparé dans l'étape g) dans 10 ml de diméthyl formamide. La solution est refroidie à -10 C, puis, sous agitation, additionnée goutteà-goutte de 0,27 ml d'acide chlorhydrique 6N, puis d'une solution aqueuse concentrée de 30,2 mg de nitrite de sodium. Cinq minutes plus tard, on y ajoute la solution du sel trifluoro- acétique de 258 mg (0,4 mmole) du têtrapeptide H-D-Phe-Leu- Gln-Pro-NHEt préparé dans 1 ml de diméthyl formamide avec 0,27 ml de triéthylamine à -10 C. Si cela est nécessaire, on ajuste le pH du mélange réactionnel à la neutralité à l'aide du triéthylamine, puis le mélange est agité pendant 1 heure à une température de -5 C,pendant 1 heure à 0 C et pendant 12 heures à la température ambiante. Le diméthylformamide est éliminé sous vide, le résidu huileux est dissous dans 5 ml d'acide acétique 0,2N et la solution est soumise à une chromatographie sur une colonne de Sephadex G-25 (2 x 95 cm) avec de l'acide acétique 0,2N. Les fractions appropriées sont collectées et lyophi- lisées. Rendement: 298 mg (62 %). 1 2 5 6 R = 0,39, Rf = 0,13, R = 0,48, Rf = 0,14. ffff Analyse des aminoacides: Ser 0,89, Glu 1,98, Pro 0,97, Leu 1,00, Tyr 1,03, Phe 0,99, His 1,01, Trp 0,91. Exemple 7 7 8 10 Préparation du Trp, Gln, desGly -gonadolibérine éthylamide M: 1220 a) Boc-Gln-Pro-NHEt M: 370 On dissout 1,0 g (7 mmoles) de proline éthylamide dans 15 ml de diméthyl formamide et l'on ajuste le Ph à 8 avec de la triéthylamine, puis on ajoute à la solution, 3,2g (8,4 mmoles) de l'ester p-nitro-phénylique de ter.-butyloxy- carbonyl-glutaminyle dans 15 ml de diméthyl formamide. Le mélange réactionnel est agité pendant 48 heures à la tempé- rature ambiante, tandis que le pH est ajusté de temps en temps à 8, à l'aide de triéthylamine. Apres évaporation du mélange réactionnel, le résidu huileux est dissous dans de l'eau, lavé à l'éther et la phase aqueuse séparée est évapo- rée sous vide et séchée. Rendement: 1,93 g (74,5 %). Rf = 0,76. b) H-Gln-Pro-NHEt,TFA M: 270 (base libre) M: 367 (sel d'acide TFA) On dissout 1,9 g (7,2 mmoles) de Boc-Gln-Pro-NHEt dans 10 ml d'acide trifluoro-acétique et on agite pendant minutes à la température ambiante. La solution est évaporée sous vide, le résidu est trituré avec de l'éther, filtre et séché sous vide. Rendement: 1,52 g (58 %). 2557 1 1 4 R1 = 0,45, R7 = 0,45, R9 = 0,25, R10 = 0,30. f f f f Substance hydroscopique; [a]20 = -34,8 (c = 1, MeOH). c) Boc-Trp-Gln-NHEt M: 557 On dissout 500 ml (1,85 mmoles) de H-Gln-Pro-NHEt dans 10 ml de diméthyl formamide. Le pH est ajusté à 8 avec de la triéthylamine, puis on ajoute 60e mg (2 mmoles de ter.butyloxy-carbonyl-tryptophane dans 10 ml de diméthyl formamide et 620 pi (4 mmoles) de N,N'-diisopropyl carbodi- imide. Le mélange réactionnel est agité pendant 48 heures à la température ambiante, puis évaporé sous vide. Le résidu est dissous dans l'acétate d'éthyle et dilué avec de l'éther. Le Boc-Trp-Gln-Pro-NHEt précipité est filtré, lavé à l'éther et séché. Rendement: 740 mg (72 %). Rf = 0,75, Rf = 0,38. d) H-Trp-Gln-Pro-NHEt,TFA M: 456,5 (base libre) M: 554 (Sel d'acide T On dissout 700 mg (1,25 mmoles) de Boc-Trp-Gln- NHEt dans 15 ml d'un mélange 1:1 d'acide trifluoro-acétique et de CH2C12 et on agite pendant 20 minutes à la température ambiante. Puis, la solution est évaporée sous vide et le résidu est trituré avec de l'éther. Le résidu solide est filtré et séché. Le produit brut ainsi obtenu (environ 500mg est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice dans un mélange 47:20:6:11 d'acétate d'éthyle: puridine: acide acétique: eau. Les fractions appropriées sont collec- tées, évaporées à siccité sous vide et le résidu est trituré avec de l'éther. On obtient ainsi 360 mg (52 %) d'une poudre blanche. 1-0,46, 2 R f =0,46, R =0,18. f. Point de fusion: 119 à 123 C; L-J20 = 4,8 (c = 0,1, HC1 O,] n). 2557 114 e) Boc-Gly-Trp-Gln-Pro-NHEt M: 613,7 On dissout 350 mg (0,76 mmole) de H-Trp-G1n-Pro- NHEt dans du diméthyl formamide et on le couple avec 104 mg (0,8 mmole) de Boc-Gly selon la procédure de l'étape c) de l'exemple 7. On obtient ainsi 375 mg (81 %) d'une substance cristalline. =5 02 R6 = 0,61. Pl 0,88, Rf = 0,82, 0,1 f) H-Gl-Trp-Gn-Pro-NHEtTFA M: 609,6 On déprot-ge 375 mg (0,6 mmole) de Boc-Gly-Trp- Gln-Pro-NIEt et on le purifie selon la procédure de l'étape d) de l'exemple 7. On obtient ainsi 285 mg (76,6 %) d'une poudre blanche. 2 3 5 6 Rf = 0,0E, Rf = 0,16, Rf = 0,67, Rf = 0,28. g) Glp-His-TrP-Ser-Tvr-Gl-TrD-Gln-Pro-N2HEt M: 1216,4 On couple 286 mg (0,4 mmole) du pentapeptide hydra- zide Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 avec 243,8 mg (0,4 mmole) de H-GCly-Trp-Gln-Pro-NHEt,TFA obtenu selon la procedure de l'étape m) de l'exemple 6. On recueille ainsi 252,9 mg (52 %) d'une substance puare. ! Rf = 0,26, R = 0,32. f Rf Analyse des amninoacides Ser 0,87, Glu 2,02, Pro 0,91, Gly 1,00, Tyr 1,12, His 1,05, Trp 1,80. Exemp] e 8 Préparation d'injections pour l'administration par voie intramusculaire, sous-cutanée ou intraveineuse. a) Le dérivé de gonadolibérine de formule (1) est dissous dans de l'eau distillée, une solution saline physiologique ou une solution aqueuse tamponnée, & une concen- tration de 1 à 10 mg/ml. La solution est filtrée en petites portions stériles contenant 50 à 500 pg de composant actif, qui sont introduites dans des ampoules et lyophilisées, puis les ampoules sont fermées hermétiquement. Le composant actif contenu dans les ampoules est dissous juste avant le traitement, par addition de 1 à 10 ml d'eau distillée et un volume correspondant à la dose désirée est administré. b) On dissout 20 à 500 v/ml dans une solution aqueuse contenant 0,9 % de NaCl et 0,9 % d'alcool benzylique. Les portions contenant 20 à 500 u/ml de composant actif sont introduites dans des ampoules qui sont ensuite fermées hermétiquement. Les solutions obtenues peuvent être directe- ment injectées. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'inven- tion ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du techni- cien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée de la présente invention. REVENDICATIONS 1. Dérivés de gonadolibérine caractérisés par la formule générale (I) ciaprès: Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Xl-X2-X3-Pro-X4 (I) dans laquelle: X est un groupe glycyle ou un D-isomère d'un quelconque groupe aminoacide naturel ou synthétique, X2 est un groupe L-aminoacide dont la chaîne latérale comprend i à 4 atomes de carbone, un groupe L-phénylalanyle ou Ltriptophyle, X3 est un groupe L-aminoacide ayant une chaîne latérale alcoyle en C1ià4 ou alcanoyl (en C2à4)-amide, et X4 est un groupe glycine amide ou un groupe alcoyl (en Cîà4) amide, à la condition que dans le cas o X1 est un groupe autre que le radical glycyle et X2 est un groupe tryptophyle, X3 ne puisse pas alors être un radical leucyle, et les sels d'addition formés avec des acides utilisables en thérapie et les complexes de ceux-ci. 2. Composé choisi dans le groupe comprenant les Glp-His-Trp-Ser-Tyr-D-PheLeu-Gln-Pro-Gly-NH2 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Trp-Gln-Pro-Gly-NH2 Glp-HisTrp-Ser-Tyr-Gly-Trp-Leu-Pro-EA Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Phe-Gln-Pro-GlyNH2 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Phe-Leu-Pro-Gly-NH2 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-D-PheLeu-Gln-Pro-EA Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Trp-Gln-Pro-EA et les sels utilisables en thérapie et les complexes de ceux- ci. 3. Procédé de préparation de dérivés de la gona- dolibérine de formule générale (I) ci-après: Glp-His-Trp-Ser-Tyr-X1-X2-X3Pro-X4 (I) dans laquelle: X1 est un groupe glycyle ou un D-isomère, d'un quelconque groupe aminoacide naturel ou synthétique, X2 est un groupe L-aminoacide dont la chaine latérale com- prend 1 à 4 atomes de carbone, un groupe L-phénylalanyle ou L-triptophyle, X3 est un groupe-L-aminoacide ayant une chaîne latérale alcoyle en Clà4ou alcanoyle (en C2à4)-amide, et X4 est un groupe glycine amide ou alcoyl (en C1l4)-amide, à la condition que dans le cas o X1 est un groupe autre que le radical glycyl et X2 est un groupe tryptophyle, X3 ne puisse pas alors être un groupe leucyle, et les sels d'addition acides utilisables en thérapie et les complexes de ceux-ci, caractérisé en ce qu'il comprend: a) l'utilisation de la méthode de synthèse peptidique en phase solide, selon laquelle on couple les aminoacides convenablement protégés, dans la séquence requise sur un support solide polymère à l'aide de carbodiimide ou d'un ester actif, et dans un cas donné, on détache le peptide terminé du support par acidolyse ou aminolyse, et, si cela est désiré, on élimine les groupes protecteurs des aminoacides du peptide, pendant, avant ou après la séparation du peptide du support polymère, ou b) on construit le produit final recherché à partir des aminoacides protégés convenables, en utilisant une combi- naison appropriée de condensation de fragment et de synthèse par étapes, en fonction du caractère chimique des composants aminoacides variables. 4. Procédé suivant la revendication 3 a), caracté- risé en ce qu'une résine benzhydrylamine ou Boc-proline est utilisée à titre de support solide. 5. Procédé suivant la revendication 3 a), caracté risé en ce que le peptide protégé est détaché de la résine par traitement avec de l'acide fluorhydrique et/ou par éthyl- -ammonolyse. 2557114l 6. Procédé suivant la revendication 3 b), caracté- risé en ce qu'un pentapeptide azide représenté par la formule (II) ciaprès: Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N3 (II) est condensé avec un tétra- ou pentapeptide de formule géné- rale (III) ci-après: X1-X2-3-Pro-X4 (IIi) 1 2 4 dans lesquelles X1, X2, X3 et X4 sont tels que définis dans la revendication 1. 7. Procédé suivant la revendication 3 b) 0 caracté- risé en ce qu'un hexapeptide azide représenté par la formule générale (IV) ci-après: Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Xl-N3 (IV) est condensé avec un tri- ou tétrapeptide de formule générale (V) ci-après: X2-X 3-Pro-X4 (V) dans lesquelles X1, X2, X3 et X4 sont tels que définis dans la revendication 1. 8. Procédé suivant la revendication 3 b)i caracté- risé en ce qu'un heptapeptide azide représenté par la formule générale (VI) ci-après: Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Xi X2-N3 (VI) est condensé avec un diou tripeptide de formule générale (VII) ci-après: X3-Pro-X4 (VII) dans lesquelles X1, X2, X3 et X4 sont tels que définis dans la revendication 1. 9. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend comme composant actif, au moins un composé de formule générale (I) o Xi X2, X3 et X4sont tels que définis dans la revendication 1, ou un sel ou complexe de celui-ci acceptable du point de vue pharmaceutique, avec un support ou un diluant. 10. Procédé de préparation d'une composition phar- maceutique, caractérisé en ce qu'un composé de formule géné- rale (I) o X1, X2, X3 et X4 sont tels que définis dans la revendication 1, ou un complexe ou un sel de celui-ci accep- table du point de vue pharmaceutique, est mélangé a un diluant ou support acceptable du point de vue pharmaceutique.