FR 2560188 A1 19850830 FR 8502842 A 19850227 Procedé de séparation de la phénylalanine et de l'acide cinnamique La présente invention concerne un procédé de séparation de la phénylalanine et de l'acide cinnamique et, plus particulièrement, un procédé de ce type et qui consiste dans la mise en contact d'une solution mixte con- tenan; la phénylalanine et l'acide cinnamique, avec un -adsorbant synthétique dans des conditions particulières- La phénylalanine est l'un des amino-acides essentiels et on iUutise dans les produits pharmaceutiques, en particulier dans les solu- tions inedicinales pour transfusion d'acides aminés, etc. et, depuis peu de temps, ce produit a éveillé t lintérêt des spécialistes en tant qu'amino- acide entrant dans la constitution de l'ester méthylique de l1 9asparthyl! pI-énylaanine.ui est un édulcorant du type peptide. Jusqu'à présent, on a produit la phenylalanine par synthèse him:que, hydrolyse de protéines, fermentaticn, ete, mais le rendement de prioduction était faible avec chacun de ces procédés et on a done étudié des procédés plus efficaces de production. L'un de ces procédEs est un procédé de production de la L-phényl- alanire à partir de l'acide cinnariLque, mettant en oeuvre une réaction rzymaticque utilisant la L-phenylalanine ammonialyase en présence d'ammoniaque at ce procédé a attiré l'attention en tant que procédé industriel car la prouticti-it6, en phiénylalanine était extrémement élevée. Cependant, dans le procédé ci-dessus, la L-phénylalanine pro- nuite est en mélange avec l'acide cinnamique et 1'armmoniaque et pour obbenir la piénylalanine en tant que substance unique, il est nécessaire de la sé- parer et de l'isoler du mélange en question. Touterois, étant donné que la ohérnivlalanine et l'acide cinnamique ont des structures similaires, il est difficile de les sépare!l'ux de l'autre. Par conséquent, pour produire avantageusement de la L-phénylalanine à l'échelle industrielle, il.1 est im- portant d'exécuter efficacement la séparation de l'acide cinnamique pré- sent. Dans ces circonstances, la Demanderesse a procédé à des études poussées pour découvrir un procédé efficace de séparatin et de purification de la phénylalanine co-présente avec l'acide cinnamique, et elle a constaté qu'en effectuant un traitement à l'aide d'un adsorbant synthétique poreux dans des conditions particulières, on pouvait réaliser d'une façon extrgmement efficace la séparation-de la phénylalanine de de l'acide cinnamique. L'adsorbant synthétique poreux est composé d'un polymère réticulé obtenu par polymérisation, polycondensation ou copolymérisation de divers monomères organiques, ou d'un polymère réticulé obtenu par polymérisation ou polycondensation de divers monomères suivie d'une reticulation Ledit adsorbant, présente une surface spécifique et"un volume de pores élevés et il est utilisé pour la separation et purification de diverses substances, en particulier de médicaments, d'aliments, etc, Les exemples d'adsorbants synthétiques sont nombreux et, en particulier, ils ont été fabriqués st sont vendus sous les marques déposées "Diaion' HP 10, 20, 21, 30,40,50, "Diaion" HP 2 MG (produits par Mitsubishi Chemical Industries, Ltd); "Amberlite" XAD 2, 4I, 7, 8 (produits par Rohm & Haas Co., U.S.A). On sait déjà que de tels adsorbants synthétiques adsorbent de façon satisfaisante les amuno- acides et les acides organiques; on sait également que las amino-acides sont le mieux adsorbés quand on se place dmls des conditions vo--isines du point iscélectrique, tandis que les acides organiques sont bien adsorbés à un faible pH, c'est-à-dire lorsque l'acide organique n'est pas dissocié. En partant de ces considérations, la Demanderesse a procédé à des études poussées concernant un procédé de séparation de purification de la phénylalanine à partir d'une solution mixte contenant de la phényl- alanine et de l'acide cinnamique, en utilisant un adsorbant synthétique et elle a ainsi découvert que les adsorptions de la phénylalanine et de iacide cinnamique par un adsorbant synthétique dépendent de la concentration d'un sei co-présent, que, de façon surprenante, l'adsorption relative (c'est-à- dire la sélectivité de l'adsorption) de la phénylalsnine par rapport à celle de l'acide cinnamique varie grandement selon la concentration du sel eo- présent et qu'en conséquence, enutilisant judicieusement ces phénomènes, on pouvait effectuer d'une façon extreîrt efficace la séparation de la phényl- alanine et de!l'acide cinnamique. La présente invention a ainsi pour objet un procédé industrielie- ment avantageux de séparation et de purification de la phénylalanine mélangée avec de l'acide cinnamique, et plus précisément un procédé de séparation de la phénylalanine et de l'acide cinnamique à partir d'une solution mixte con- tenant la phénylalanine et l'acide cinnamique, qui consiste à soumettre la- dite solution mixte à un développement chromatographique en utilisant un 3- adsorbant synthétique en présence d'un sel qui est à une concentration située dans la plage dans laquelle l'effet de relargage sur l'acide cin- namique est plus grand que celui sur la phénylalanine et dans laquelle la phénylalanine et l'acide cinnamique peuvent être tous deux dissous. Sur les dessins annexés: La figure 1 est un graphe montrant les relations entre les quantités de phénylalanine et d'acide cinnamique adsorbés et la concentra- tion de chlorure d'ammonium dans la solution quand on met des solutions de chlorure d'ammonium ayant diverses concentrations et contenant la phényl- alanine et l'acide cinnamique en contact avec l'adsorbant synthétique "Diaion"l HP 20 selon l'exemple de référence 1, ce graphe donnant en abaisse la concentration du sel dans la solution et en ordonnée la quantité adsorbée. Sur cette figure, (a) et (b) représentent respectivement l'acide cinnamique et la phênylalanine quand le pH de la solution est de 7 et (c) et (d) repré- sentent respectivement l'acide cinnamique et la phénylalanine quand le pH de la solution est de 10. La figure 2-A est un graphe montrant l'adsorption relative de la phénylalanine par rapport à l'acide cinnamique dans l'exemple de référence 1 en fonction du sel dans la solution; sur cette figure, on donne en ordonnée l'adsorption relative et en abcisse la concentration du sel; sur cette figure, (a) correspond aux rémltats obtenus- qaund le pH de la solution est de 10 et (b) correspond à ceux obtenus quand le pH de la solution est de 7. La figure 2-B est un graphe montrant l'adsorption relative de la phénylalanine par rapport à l'acide cinnamique dans l'exemple de référence 2 en fonction de la concentration du sel dans la solution, l'ordonnée don- nant l'adsorption relative et l'abcisse donnant la concentration du sel; sur cette figure, (a) correspond aux résultats obtenus quand on utilise du sulfate d'ammonium à titre de sel, (b) aux résultats obtenus avec le nitrate de sodium, (c) aux résultats obtenus avec le citrate de diammonium, (d) aux résultats obtenus avec le citrate de sodium et (e) ceux obtenus avec l'acétate de sodium. La figure 3 est un graphe donnant les concentrations des com- posants respectifs dans l'éluat en ordonnée-et le volume d'éluat en abcisse, quand on élue et développe une solution mixte contenant de la phénylalanine et de l'acide cinnamique sur une colonne de l'adsorbant synthétique "Diaion" HP 20 en utilisant de l'eau dessalée conformément à l'exemple de référence 3; sur cette figure, (a) correspond à l'acide cinnamique et (b) à la phényl- alanine. La figure 4 est un graphe donnant les concentrations des composants respectifs dans l'éluat en ordonnée et le volume d'éluat en abcisse quand on élue et développe une solution mixte contenant de la phénylalanine et de l'a- cide cinnamique avec une solution aqueuse 0,4 N de chlorure d'ammonium ayant un pH de 7,5 sur une colonne de l'adsorbant synthétique "Diaion" HP 20 selon l'exemple 1. La figure 5 est un graphe donnant les concentrations des composants respectifs dans l'éluat en ordonnée et le volume d'éluat en abcisse quand on fait passer de l'eau ammoniaquée 1N selon l'exemple de référence 4. La figure 6 est un graphe donnant les concentrations (c) des com- posants respectifs dans l'éluat de la colonne exprimées sous forme de rapports C/C o C représente les concentrations dans la solution initiale, quand une o o solution mixte contenant de la phénylalanine et de l'acide cinnamique est fractionnée par chromatographie frontale en utilisant une colonne de l'adsor- bant synthétique "Diaion" HP 21 selon l'exemple 1; sur cette figure, (a) représente la concentration en acide cinnamique, (b) en phénylalanine et (c) en chlorure d'ammonium et d'ammoniaque. L'invention a pour but de séparer la phénylalanine et l'acide cinnamique en utilisant un adsorbant synthétique, et lorsqu'une solution mixte contenant à la fois la phénylalanine et l'acide cinnamique est mise en contact avec un adsorbant synthétique, les quantités adsorbées des deux composés et leur adsorption relative varient grandement selon les concentrations de phényl- alanine et d'acide cinnamique, la concentration d'un sel co-présent, l'état de la solution, c'est-à-dire par exemple son pH et ainsi de suite et surtout la concentration du sel co-présent. Par exemple, la figure 1 montre les quantités de phénylalanine et d'acide cinnamique adsorbées quand on ajoute 50 ml d'un adsorbant synthétique "Diaion" HP 20 à un litre d'une solution contenant 5 g des constituants (qua- lité spéciale réactif) phénylalanine et acide cinnamique et une quantité Pré- déterminée de chlorure d'ammonium en qualité de sel, solution dont on règle le pH à une valeur prédéterminéeavec de l'ammoniaque. La figure 2-A montre l'adsorption relative de la phénylalanine par rapport à l'acide cinnamique dans les mêmes conditions que sur la figure 1, exprimée comme le rapport de la quantité de phénylalanine adsorbée à la quantité d'acide cinnamique 2560 188 adsorbée que l'on considère comme 1. Il ressort clairement de l'examen de la figure 1 que, bien que la quantité de phénylalanine adsorbée par l'adsorbant synthétique dépende de la concentration du chlorure d'ammonium dans la solution, le degré de changement de cette quantité adsorbée est faible, que pour la quantité d'acide cinnami- que adsorbé qui dépend également de la concentration du sel dans la solution, le degré de changement est beaucoup plus grand que dans le cas de la phényl- alanine et, en particulier, qu'à une concentration du sel de 0,2 N ou plus, de préférence de 0,5 N ou plus, l'acide cinnamique est mieux adsorbé que la phénylalanine. En conséquence, en réglant la concentration du sel, on peut séparer la phénylalanine et l'acide cinnamique l'un de l'autre en modifiant l'adsorption relative de la phénylalanine par rapport à l'acide cinnamique, comme il est indiqué sur la figure 2. Ce phénomène suivant lequel l'adsorption relative de la phényl- alanine par rapport à l'acide cinnamique varie selon la concentration du sel, signifie que l'effet de relargage sur l'acide cinnamique par le sel (effet de réduction de la solubilité au moment du relargage) est plus grand que celui sur la phénylalanine et la présente invention utilise cette différence des effets de relargage de sorte que la phénylalanine peut être séparée et puri- fiée à partir d'une solution mixte contenant de la phénylalanine et de l'acide cinnamique. L'effet de relargage précité peut être obtenu par l'emploi de divers sels, notamment de chlorure d'ammonium ainsi que de sels organiques. La figure 2-B est un graphe montrant l'adsorption relative de la phénylalanine par rapport à l'acide cinnamique quand on emploie des sels variés; (b) nitrate de sodium, (c) citrate de diammonium, (d) citrate de sodium et (e) acétate de sodium. La solution contenant la phénylalanine et l'acide cinnamique, que l'on doit traiter en vue d'effectuer la séparation selon l'invention n'est pas particulièrement limitée et les concentrations de phénylalanine et d'acide cinnamique dans la solution sont en général d'environ 0,05 à 20 % pds/vol res- pectivement. La concentration du sel dans la solution est choisie de façon appropriée dans la plage ou aussi bien la phénylalanine que l'acide cinnamique sont dissous, en prenant en ligne de compte l'adsorption relative de la phényl- alanine par rapport à l'acide cinnamique par le sel que l'on se propose d'utiliser. En général, la concentration est égale ou supérieure à 0,2 N, de préférence égale ou supérieureà 0,5 N. Toutefois, quand on utilise un procédé de séparation de la phénylalanine et de l'acide cinnamique compor- tant l'introduction d'une certaine quantité d'une solution mixte contenant de la phénylalanine et de l'acide cinnamique dans une colonne garnie d'un adsorbant synthétique et la chromatographie de développement par élution consistant à faire passer sur cette colonne une solution différente ne con- tenant pratiquement pas de phénylalanine ou d'acide cinnamique comme éluant, il n'est pas indispensable que la concentration du sel dans la solution mixte de phénylalanine et d'acide cinnamique soit égale ou supérieure à 0,2 N, et il suffit que la concentration du sel dans l'éluant, qui sert de solvant pendant la majeure partie du temps de contact de la phénylalanine et de l'acide cinnamique avec l'adsorbant synthétique, soit égale ou supérieure à 0,2 N. Si la concentration du sel est inférieure à 0,2 N, la différence d'adsorption entre la phénylalanine et l'acide cinnamique sur l'adsorbant n'est pas suffisamment importante et la séparation est donc difficile. En ce qui concerne le sel, on peut utiliser, par exemple, des combinaisons d'un cation choisi parmi l'ion ammonium et les ions de métaux alcalins et d'un anion choisi parmi les ions halogène, l'ion sulfate, l'ion nitrate, l'ion phosphate, l'ion carbonate et les ions carboxylate aliphatique et, en parti- culier, on préfère les halogénures d'ammonium, le sulfate d'ammonium, les nitrates de métaux alcalins, les sels d'ammonium et les sels de métaux alcalins d'acides gras, etc. Le pH de ces solutions n'estpas spécialement limité mais en raison de la tendance que plus le pH est élevé, plus faible sera l'adsorption, surtout en ce qui concerne l'adsorption de l'acide cin- namique, on conseille de maintenir le pH de la solution dans la plage de 4 à 12 et, de préférence, de 5 à 11. L'asorbant synthétique utilisé dans la présente invention est un polymère réticulé obtenu en polymérisant, copolymérisant ou polyconden- sant divers monomères organiques ou un copolymère réticulé obtenu par poly- mérisation ou polycondensation de divers monomères suivie d'une réticulation, un tel polymère réticulé présentant une surface spécifique et un volume de pores élevés. La capacité d'adsorption de l'adsorbant synthétique est forte- ment influencée par la surface spécifique et le volume de pores et il est souhaitable d'utiliser un adsorbant dont la surface spécifique est d'au 7. moins 100 m /g, de préférence de 300 m /g ou davantage et dont le volume des pores est d'au moins 0,1 ml/g, de préférence de 0,5 ml/g ou plus. D'autre part, la structure unitaire formant l'élément de base de l'adsorbant synthétique est, de préférence, une structure fondamentale composée d'un copolymère aromatique à base de styrène et de divinylbenzène, du point de vue de la capacité d'adsorption. Comme exemples de commerce de tels adsorbants synthétiques, on peut citer "Diaion" HP 10, 20, 21, 30, 40, 50 (Mitsubishi Chemical Industries Limited), "Amberlite" XAD 2,4 (Rohm & Haas, USA), etc. Le mode opératoire spécifique utilisé pour séparer la phényl- alanine et l'acide cinnamique lors de la mise en oeuvre du procédé selon l'invention, n'est pas particulièrement limité pour autant que l'on effectue la mise en contact avec l'adsorbant synthétique dans des conditions telles que la concentration du sel dans la solution mixte soit au moins de 0,2 N, mais pour effectuer la séparation dans de bonnes conditions, on préfère effec- tuer une séparation chromatographique consistant à garnir une colonne d'un adsorbant synthétique et à faire passer sur cette colonne garnie une solu- tion contenant la phénylalanine et l'acide cinnamique. Quand on alimente en continu ladite colonne en solution mixte contenant la phénylalanine et l'acide cinnamique et dont la concentration en sel est d'au moins 0,2 N, on peut, étant donné que la phénylalanine à faible adsorption est éluée en premier lieu et que l'acide cinnamique ne commence à être élué que plus tard, obtenir une phénylalanine exempte d'acide cinnamique en récupérant les fractions produites depuis le début de l'éluà- tion de la phénylalanine jusqu'à un moment qui précède tout juste le début de l'élution de l'acide cinnamique, c'est-à-dire par ce que l'on appelle une séparation chromatographique frontale. A ce moment là, le sel présent dans la solution initiale accentue les adsorptions de la phénylalanine et de l'acide cinnamique par l'adsorbant synthétique mais il est lui-même difficile- ment adsorbé par l'adsorbant synthétique et il commence à être élué avant la phénylalanine de sorte qu'il est également possible de récupérer le sel en collectant ces fractions éluées. D'autre part, quand on poursuit l'in- troduction de la solution initiale sur la colonne garnie, l'adsorption par l'adsorbant synthétique arrive à saturation et les compositions des solutions qui pénètrent dans la colonne et qui sortent de celle-ci deviennent égales et, en général on arrête le passage de la solution sur la colonne à un moment approprié avant ou après que l 'acide cinnamique coMenoe à éluer et la majeure partie de l'acide cinnamique adsorbé par l'adsorbant synthétique à ce stade ainsi que la phénylalanine restante autre que celle déjà éluée sont ensuite éluées par passage, par exemple d'une solution aqueuse 0,1 à 5 N, de préférence 0,5 à 2 N, d'ammoniaque ou d'hydroxyde de sodium de sorte qu'on peut obtenir de l'acide cinnamique ayant une teneur réduite en phénylalanine. D' autre part, après traitement par l'éluant, l'adsorbant synthéti- que peut évidemment être réutilisé pour la séparation de la phénylalanine et d'acide cinnamique. Selon un autre mode de séparation chromatographique utilisant une couche d'adsorbant synthétique formant le garnissage de la colonne, on peut également effectuer le développement chromatographique et l'élution en alimentant cette couche avec une certaine quantité d'une solution contenant la phénylalanine et l'acide cinnamique et en faisant passer une solution ayant une concentration en sel d'au moins 0,2 N à titre d'éluant. Dans une telle opération, il n'est pas toujours indispensable que la concentration en sel de la solution mixte contenant la phénylalanine et l'acide cinnamique soit au moins de 0,2 N mais il suffit que la concentration en sel dans l'éluant constituant la majeure partie de la solution mise en contact avec l'adsorbant synthétique dans le stade de séparation et dominant pratiquement la séparation, soit au moins de 0,2 N. Dans ces procédés, bien que la hauteur de la couche d'adsorbant synthétique soit de préférence aussi grande que possible en prenant en con- sidération l'appareil et le mode de fonctionnement, on emploie en général une hauteur d'environ 0,5 à 5 m. Le débit de passage de la solution est de préférence d'environ 0,1 à 10 m/h en VLS (vitesse linéaire spatiale). Quand on effectue la séparation par développement chromatographique et élution, la charge de la solution mixte sur la couche d'adsorbant, bien qu'elle dé- pende quelque peu des concentrations des composants respectifs dans la solu- tion mixte et du degré requis de séparation, est en général égale à 0,05- fois la quantité-d'adsorbant synthétique formant le garnissage entre le moment du dépôt de la solution mixte sur ledit garnissage et le moment ou l'acide cinnamique commence à être élué de la colonne. Etant donné que conformément à l'invention, l'acide cinnamique est plus fortement adsorbé par l'adsorbant synthétique que la phénylalanine, on peut obtenir si l'on utilise par exemple la séparation par chromato- graphie frontale, de la phénylalanine dont l'acide cinnamique a été en- tireirement éliminé, en adsorbant et éliminant l'acide cinnamique de la solution contenant la phénylalanine et l'acide cinnamique. La concentration en phênylalanine dans la solution ainsi obtenue n'est pratiquement pas abaissée par ccmparaison a celle de la solution initiale mais, au contraire, étant donné que la phénylalanine une fois qu'elle est adsorbée sur l'adsor- bant synthétique, est remplacée par]'acide cinnamique plus facilement adsorbé et denc libéré, il est meme possible de la récupérer avec une concentration plus levée que dans la solution initiale. Daunre part, si l'on utilise la chromatographie par élut-ion pour le Drocede selon l'invention, on constate que par comparaison avec une opéra- tico dans laquelle la solution est éluée avec de l'eau dessalée, 1 'lution de l'acide cinnamique est fortement retardée et on peut donc séparer la oh nyl.alanine et l'acide einnamique avec des rendements élevés et obtenir des produits séparas de haute pureté. Les exemples et les exemples de référenee suivants servent à iliustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée: Exemple de référence 1 ón dissout dans des solutions aqueuses de chlorure d'ammonium ayant diverses concentrations, 5 g de L-phénylalanine et 5 g d'acide trans- cinnamique, tous deux de "qualité spéciale réactif", le pH de chaque solution étant ensuite réglé à 7 ou à 10 avec de l'eau ammoniaquée et on amène le volume total do chaque solution à i litre. A chaque solution, on ajoute l'adsorbant synthétique "Diaion"' HP 20 préparé en disposant 50 ml de ce produit dans l'eau et en éliminant l'eau à l'aide d'um séparateur centri- fuge, puis on agite la solution résultante dans un appareil d'agitation à température constante à 30 C pendant 10 heures. On mesure les concentrations en phénylalanine et en acide einnamique restant dans la solution et on déter- mine les quantité adsorbées par "Diaion" HP 20 en faisant la différence avec les concentrations dans la solution initiale. Les résultats obtenus sont illustrés par la figure 1 et la figure 2-A qui expriment respectivement la relation existant entre la concentration en sel dans la solution et les quantités adsorbées de phénylalanine et d'acide cinnamique et la relation existant entre la concentration en sel dans la solution et l'adsorption relative de la phénylalanine et de l'acide cinnam.i- que (c'est-à-dire le rapport de la quantité de phénylalanine adsorbée par "Diaion" HP 20 à la quantité d'acide cinnamique absorbé sur celui-ci). Exemple de référence 2 On détermine les quantités de phénylalanine et d'acide cinnami- que adsorbés par "Diai&V' HP 20 à pH 7, par le nême procédé que dans l'exemple de référence 1 sauf que l'on remplace la solution aqueuse de chlorure d'ammonium utilisée dans cet exemple de référence i par des solu- tions de (a) sulfate d'ammoniîm, (b) nitrate de sodium, (c) citrate de diammonium, (d) citrate de sodium et (e) acétate de sodium. Ces résultats sent illustrés par la figure 2-B qui illustre la relation existant entre La concentration du sel et l'adsorption relative de la rihénylalanine par rapport à l'acide cinnamique. Exemple de référence 3 On garnit une colonne en résine acrylique ayant 30 mm de dia- mètre intérieur et 1,5 m de hauteur avec 1,0 litre d'adsorbant synthétique "Diaion" HP 20. On dissout de la L-phénylalanine et de l'acide trans-iXnnamique dans de l'eau ammoniaquée pour préparer une solution mixte contenant 5 g/l de Lphénylalanine, 5 g/l d'acide trans-cinnamique et de l'ammoniaq:e et ayant un pH de 10,0. On fait passer 100 ml de cette solution sur la colonne décrite ci-dessus à un débit de 2 l/, puis on y fait passer de l'eau dessalee (pH 6,5) à titre d'éluant à un débit de 2 I/h. Les relations entre le volume d'éluat issu de la colonne (abcisse) et les concentrations des composants respectifs (ordonnée) sont données sur la figure 3, sur laquelle (a) représente l'acide cinnamique et (b) la phénylalanine. Exemple 1 La figure 4 montre les résultats obtenus quand on fait passer 8 litres d'un éluant lors de la mise en oeuvre de modes opératoires similaires à ceux de l'exemple de référence 3 sauf que l'on remplace l'eau dessalée utilisée comme éluant dans l'exemple de référence 3 par une solution aqueuse 0,4 N de chlorure d'ammonium dont le pH est réglé à 7,5 avec de l'ammoniaque. Lors d'une comparaison avec l'exemple de référence 3, l'ordre d'élution de la phénylalanine et de l'acide cinnamique est inversé, les points d'élution pour les deux composants sont retardés et en particulier, l'acide cinnamique n'est pas du tout élué même à l'achèvement de l'élution de la phénylalanine, c'est-à-dire après passage de 8 litres d'éluant, ce qui permet de récupérer une phénylalanine absolument exempte d'acide cinna- mique. Exemple de référence 4 Après passage de 8 litres d'un éluat sur la colonne comme dans l'exemple 1, on fait passer de l'eau ammoniaquée 1N sur la colonne à partir du sommet à un débit de 2 1/h. La relation entre le volume d'éluat issu de la colonne (abaisse) et la concentration de l'éluat en acide cinnamique Il apparaft ainsi que, l'acide cinnamique qui n'est pas élué dans l'exemple 1 est élué dans le cas présent et récupère un acide cinnamique absolument exempt de phénylalanine. Exemple 2 On garnit une colonne en résine acrylique ayant 15 mm de diamètre intérieur et 1,5 m de hauteur, avec 250 ml de l'adsorbantsynthétique "Diaion" HP 21. On prépare une solution contenant 5,6 g/l de L-phénylalanine, g/l d'acide trans-cinnamique et 100 g/l de chlorure d'ammonium (1,9 N), on ajuste son pH à 7,5 avec de l'ammoniaque et on l'amène en tête de la colonne décrite ci-dessus à un débit de 500 ml/h. Les résultats de la mesure des concentrations des composants respectifs dans l'éluat issu de la base de cette colonne sont exprimés sur la figure 5. On récupère une solution de chlorure d'ammonium ne contenant pas d'acide cinnamique ou de phénylalanine entre 125 ml et 900 ml d'éluat, puis, on récupère 9,2 g de phénylalanine ne contenant pas d'acide cinnamique entre 900 et 2380 ml. REVENDICATIONS 1. Procédé de séparation de phénylalanine et d'acide cinnamique à partir d'une solution mixte contenant de la phénylalanine et de l'acide cinnamique, caractérisé en ce qu'il consiste: à soumettre ladite solution mixte à un développement chromatographique en utilisant un adsorbant synthé- tique en présence d'un sel qui est à une concentration située dans la plage dans laquelle l'effet de relargage sur l'acide cinnamique est plus grand que celui sur la phénylalanine et dans laquelle la phénylalanine et l'acide cinnamique peuvent être tous deux dissous. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le sel est celui composé d'un cation choisi parmi l'ion ammonium et un ion de métal alcalin et d'un anion choisi parmi un ion halogène, l'ion sulfate, l'ion nitrate, l'ion phosphate, l'ion carbonate et un ion carboxylate ali- phatique, la concentration de ce sel étant dans la plage allant de 0,2 à 5 N. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le sel est constitué par un ou plusieurs sels choisis parmi les halogénures d'ammonium, le sulfate d'ammonium, les nitrates de métaux alcalins et les sels d'ammonium et de métaux alcalins d'acides gras. 4. Procédé selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce que l'on effectue le développement chromatographique à une température de 10 à 50 C. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'adsorbant synthétique présente une surface spécifi- que de 100 à 1500 m /g et un volume de pores de 0,1 à 1,5 ml/g. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que les concentrations en phénylalanine et en acide cinnamique dans la solution mixte sont respectivement de 0,05 à 20 % pds/ vol.