FR 2548900 A1 19850118 FR 8410863 A 19840709 La présente invention concerne une composition pharmaceutique synergique pour le traitement des troubles du foie et un procédé de traitement des troubles du foie à l'aide d'gun telle composition. 1 Le développement des techniques de diagnostic concernant le foie (biopsie, endoscopie, sonographie, eut) permet un dépistage plus précoce et C 1 ls exact des troubles du foie Un diagnostic précoce devrait être suivi d'un procëdé d'intervention en temps utile qui 10 prend en considération le caractère progressif de la maladie étant donné qu'il existe sensiblement moins de procédés thérapeutiques pour le traitement de cette maladie que de procédés de diagnostic pour la dépister. En même temps, la prédominance des troubles du foie s'est rapidement accrue pendant les dernières décades. Selon les tests épidémiologiques, il est devenu évident que le nombre des maladies du foie est sur une pente nettement ascendante (Statistic YearBook 1949 à 1955 édité par Central Statistical Office, 20 Budapest, 1957; Statistic Year-Book de 1970 édité par le même organisme en 1971) On constate que le nombre de personnes décédées des suites d'une cirrhose du foie en 1977 était triple de celui en 1955. Un grand nombre de décès est le résultat 25 des cirrhoses de foie entre 40 et 59 ans, c'est-à-dire un âge d'activité Ainsi, en 1970, 35 % des patients et 41 % en 1978 sont morts entre 45 et 50 ans des suites d'une cirrhose du foie. Toutes ces données sont en accord avec les conclusions tirées des statistiques de mortalité concernant 26 pays sur quatre continents indiquant que l'importance de la cirrhose du foie augmente dans le monde tout entier à un degré tel qu'on pourrait parler d'une épidémie de cirrhose du foie. Outre certains autres facteurs, l'alcoolisme est le principal responsable cette diffusion intensive des maladies du foie Les maladies les plus fréquentes 10 sont la stéatose hépatique, lhépatite alcoolique et la cirrhose alcoolique Le traitement thérapeutique des troubles du foie ne peut pas être considérés comme résolu (Orvosi Hetilap 112:386 ( 1971); Z ârztl. Fortbildung, 68, 234 ( 1974); Knoll: Gyogyszertan 15 ( 1974); Szekeres: Orvosi gyogyszertan ( 1980)). La cause qui est à l'origine du procédé de lésion du foie est sans importance; on peut dire comme un principe fondamental que le résultat du processus pathologique est déterminé par l'équilibre entre l'effet nuisible de l'agent nocif (virus, alcool) et l'effet positif de l'activité régénératrice des tissus du foie De nos jours, il n'existe aucune possibilité d'éliminer les agents nocifs, surtout dans le cas de maladies du foie à un stade développé et progressif. 25 Le seul objectif réaliste à atteindre par le traitement thérapeutique est de rehausser la propriété régénératrice naturelle de la fonction du foie, ce traitement ne pouvant être sous forme d'une monothérapie. Le succès des traitements polythérapeutiques 30 est tributaire de la possibilité de découvrir un médicament de base pour la préparation des combinaisons pharmaceutiques de nature à influer sur le processus pathologique fondamental Une fois en possession d'un tel médicament, on peut élaborer des combinaisons susceptibles de convenir à l'l aboration de compositions pharmaceutiques ayant plusieurs "points d 1 attache". Les précurseurs des amino-acides peuvent être considérés comme de tels médicaments de base pour le traitement des désordres du foie E Dtsch Med, WSCHR, 78 1331, ( 953); Dtsch, Med, WISCHR, 81 573 ( 1956)7 Cependant, les nucléotids ou nucléosides en question sont en général incapables de traverser la membrane cellulaire et sont aussi parfois toxiques L Angew Che, 82, 730 ( 1970); J Med Chem 1334 ( 1972)j Le problème est encore aggravé du fait qlue la préparation de tels composés est très coûteuse et compliquée. En conséquence, les recherches ont été 15 orientées vers des structures chimiques capables de pénétrer aisément dans les cellules et pouvoir être transformées en nucleotides dans les cellules. Il est bien connu dans ce domaine que la stéatose hépatique provoquée par l'alcool, qui est 20 caractérisée par une accumulation des triglycérides et une baisse d'adénosine-triphosphate (ATP) ne peut être normalisée par l'administration de guanines GTP ou ATP úArch, Int Pharmacodyn 232, 302 ( 1978)7 Bien que la s Léatose hépatique ainsi produite et la baisse de ATP puissent être normalisées par une admainistration i.p d'adénine ( 6aminopurine), une partie de la 6-aminopurine est transformée en métabolites de 8-oxyadénine et de 2,6dioxy-adénine, qui sont extremement nuisibles pour les fonctions des reins lJ Pharmacol. 30 exper Ther 140 20 ( 1952 g 7. L'administration d'acide orothique qui est un précurseur de nucléotide aboutit également à des troubles du métabolisme lipidique du foie et provoque une stéatose hépatique f Biol Chem 238, 2464 U 1963)7. 35 Cette stéatose hépatique ainsi que celle provoquée par l'éthionine peuvent être normalisées par l'administration d'adénine ( 6-aminopurine) mais on ne peut-pas l'utiliser à des fins thérapeutiques en raison de son effet néphrotoxique dont il a été question. Le précurseur de purine qui est le 5-aminoimidazole-4-carboxamide (AICA) Ccience 112, 634 ( 1950); J Biol Chem 196, 513 ( 195217 a été utilisé dans des traitements thérapeutiques i J Med Sci 15, 171, ( 1964)3 sous forme de son sel préparé avec l'acide orothique sous la marque déposée "Aicorat" /Ann Histochim 14, 79 ( 1969)7. Ce produit "Aicorat" n'était pas thérapeutiquement efficace étant donné que l'acide orothique luimême est un agent qui lèse le foie l J Biol Chem 238, 15 2464 ( 1963)7, et ainsi dans le sel d'acide orothique de AICA, l'effet avantageux de AICA était annulé par l'effet nocif de l'autre composant. La Demanderesse a cherché à trouver des dérivés d'imidazole-carboxamides qui possedent les 20 effets avantageux d'un précurseur de purine mais sont dépourvus des effets négatifs qui ont été signalés à propos de "Aicorat". Exp Path 15, 271-287 ( 1978) signale les propriétés pharmacologiques avantageuses de l'ortho25 phosphate de 5-amino-imidazole-4-carboxamide (qu'on appellera par la suite phosphate de AICA) dans le traitement du foie artificiellement endommagé par le tétrachlorure de carbone. On sait dans ce domaine qu'on peut préparer 30 le phosphate de AICA en faisant réagir le 2-amino-2cyano-acétamide avec l'orthophosphate de la formamidine (voir brevet hongrois 164-397) Le phosphate brut de AICA ainsi obtenu ne convient pas à des usages thérapeutiques. Dans la demande de brevet hongrois n 2170/82 au nom de la mêrame Demanderesse on a décrit un procédé de preparation de phosphlate de AICA pur qui conlvient pour utilisation thérapeutique en faisant réagir 50 % en poids de solution alcoollue de 4,5-aminoimidazole5,4-carboxamide avec de l'acide orthophosphorique. Selon ce procédé,t on peut préparer le phosphate de AICA de haute pureté en faisant réagir Ai CA de base avec l acide orthophosp hor que dans un milieu alcoolique aqueux. i O t La Demanderesse a trouvé qu'on peut utiliser avantageusement le phosphate de AICA préparé coimie cidessus et les compositions contenant le phosphate de AICA et des vitamines, de préférence, les vitamines B et E pour le traitement de la stéatose hépatique alcoo15 lique et d'autres troubles du foie d'une origine différente aboutissant à une cirrhose hépatique, étant donné qu'ils inhibent la progression pathologique des maladies. Le phosphate de AICA hautement pur qui on 20 utilise pour le traitement possède lui-même les propriétés suivantes: 1 Dans les tests de toxicité aigue, le composé administré par voie i p ou i v, neprovoque pas de symptômes toxiques même aux dosages élevés ZDL 50 > 5000 mg/kg quand on l'administre par voie orale aux rongeurs, et DL 50 > 1000 mg/kg quand on l'administre par voie intraveineuse 7 de sorte qu'on peut considérer le phosphate de AICA comme un composé atoxique. Les tests de toxicité chronique ( 6 mois) sur des rongeurs et d'autres animaux montrent que même à un dosage de 15 à 20 fois supérieur au dosage thérapeutique planifié, aucun symptôme toxique n'apparaît. 2 Quand on examine les effets pharmacodynamiques généraux du phosphate de AICA, on peut stipuler que ce produit n'a pas d'effet notable sur d'autres organes ou d'autres systèmes d'organes lors des tests pharmacologiques classiques et on peut donc considérer que son effet sur le foie est un effet spécifique à cet organe. 3 Quand on examine l'effet spécifique du composé sur le foie on peut conclure que le phosphate de AICA fait preuve de plusieurs propriétés avantageuses, Selon les essais effectués en utilisant du phosphate de AICA radioactif, l'augmentation du quotient du sérum du foie peut être observé avec la progression du temps du traitement On peut détecter le phosphate de AICA radioactif dans la fraction RNS des cellules du foie Lors du traitement avec le phosphate de AICA, la synthèse des protéines est rehaussée et la quantité de glycogène augmente dans les cellules du foie La rétrogradation graisseuse du foie provoquée par l'éthionine est pratiquement réduite par le phosphate de AICA (les lésions du foie provoquées par l'é 6 hionine sont le plus ressemblantes à la stéatose hépatique provoquée par l'alcool chez l'homme) Z Trends in Pharmacological Sciences 82, vor 3 N 9 pages 365-3627. 4 Dans les réactions immunitaires, le nombre à la fois des rosettes actives et du total 25 des rosettes E augmente lors du traitement avec le phosphate de AICA. Les troubles chroniques du foie sont en général caractérisés par une carence en anions phosphates, plus exactement une baisse pathologique de la 30 concentration intracellulaire des ions phosphates Ce manque de ions phosphates est fréquemment le résultat d'un alcoolisme aig U ou plus souvent chronique _Clin. Chim Acta 78, 353 ( 1978)7. L'effet des autres sels de AICA, par exemple 35 du chlorhydrate, pyrophosphate et orothate de AICA sur le foie artificiellement lésé n'est pas aussi bon que celui du phosphate de AICA L'une des explications est que les ions phosphates administrés ensfemble avec le phosphate de AICA participent dans la synthèse de -Dribofuranose-l-pyrophosphate-5-1 oshae qui joue un rôle important dans la formation des nucléot-ides à partir des précurseurs. En considérant i 'effet fondamental du phosphate de ATCA, la Demanderesse vyounait élaborer 10 une composition qui conviendrait non seul ement pour accroitre les propriét-s de protection {régénération) du foie, mais aussi pour le traitemnt sy/ptomatique ainsi que pathogène de la stéatose hépatique d'origine alcoolique. On a trouvé que l'effet 3 u phosphate de AICA pouvait être notablement renforcé si on l'administre enl combinaison avec des vitamines de préférence les vitamines B ou E. L'activité des composants et de leur combi20 naison a été examinée sur un foie lésé par l'éthionine. L'activité des combinaisons est exprimée par l'indication de la teneur en triglycérides dans le foie Cette teneur en triglycérides après l'administration de 250 mg/kg d'éthionine au second jour est considéré comme une base et les résultats indiqués dans le Tableau sont des moyennes obtenues sur 10 animaux Les rats males CFY pesant 200 g ont été utilisés dans les essais. Les résultats sont indiqués dans le Tableau I. 2548900 ' TABLEAU I Traitement (p o) Teneur en trigly Baisse (B) cérides dans le foie % ___ mmoles/kg. éthionine 250 mg/kg 0,042 - 15 20 éthionine 250 mg/kg + phosphate de AICA 200 mg/kg 0,031 26 éthionine 250 mg/kg + phosphate de AICA 200 mg/kg + vit B 1 0,1 mg/kg 0,022 47,7 éthionine 250 mg/kg + phosphate de AICA 200 mg/kg + vit E 10 mg/kg 0,023 47,5 Les données du Tableau I indiquent clairement que les vitamines utilisées augmentent fortement l'activité du phosphate de AICA. Les tests d'histologie montrent qu'une dégénérescence diffuse en grand état de fléchissement du foie se développe à la suite du traitement avec 250 mg/kg d'éthionine au second jour après le traitement, alors que le cinquième jour, la pathographie histologique 30 est dominiepar une stéatose à fléchissement fin Une dose de 200 mg/kg de phosphate de AICA administrée par voie p.o inhibe la stéatose du foie et cette activité est intensifiée par les vitamines Bl ou E. Les résultats des tests histologiques sont 35 indiqués dans le Tableau II. TABLEAU II Traitement Agent toxique Estimation semiquantitative de l'engraissement du foie selon coloration rouge de l'huile (moyennes de 5 tests) 15 20 25 éthionine au 2 ème jour +++ au 5 ème jour ++/ éthionine phosphate de AICA au 2 ème jour ++/+/ au 5 ème jour +/+/ éthionine phosphate de AICA au 2 ème jour ++ + vitamine B 1 au 5 ème jour + éthionine phosphate de AICA au 2 ème jour ++ + vitamine E au 5 ème jour + Doses administrées éthionine: phosphate de AICA vitamine Bl vitamine E 250 mg/kg (p o) 200 mg/kg (p o) 0,1 mg/kg (p o) 10 mg/kg (p o) J 2548-900 L'invention concerne les compositions pharmaceutiques synergiques qui conviennent pour les traitements des troubles du foie, comprenant, comme ingrédient actif, l'orthophosphate de 5-amino-imidazole5 4-carboxamide et des vitamines, de préférence, la vitamine B 1 ou E facultativement en association avec d'autres excipients pharmaceutiques. La composition selon l'invention contient de préférence, en poids, 20 à 60 % d'orthophosphate de 10 5-amino-imidazole-4-carboxamide et 0,01 à 20 % d'une ou plusieurs vitamines. La composition selon l'invention peut être préparée pour administration par voie orale, par exemple en comprimés, dragées et gélules Les comprimés 15 contiennent de préférence 100 à 200 mg de l'ingrédient actif. Les exemples suivants servent à illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée. EXEMPLE 1 Phosphate de AICA 200 mg. Chlorure de tisamine vit B 5 g. Riboflavine (vit B 2) 5 mg. Piridoxyniumdloride (vit B 6 6 mg di-:\ -acetate de TocolféSrol (vit z) 4 mg. Talc 20 mg. Lactose 50 mg. Amidon 50 m,. Stéarine g. Luviscol (VA 64) 8 mg. Cellulose microcristallyne (Avicel) 44 mg 400 mg. Enrobage de la dragée: "Carbovax" 6000 1,0 mg. Bioxyde de titane 4,0 mg. Méthylcellulose 6,8 mg. Luviscol (VA 64) 6,S mg. Talc 21,4 mgo mg. On homogénéise le phosphate de AICA, I'amidon et le lactose. On dissout le L'viscol et la stéarine dans l'isopropanol et on granule le mélange pulvérulent par la solution ainsi obtenue On sèche les granules à une température de 40 50 C Ensuite on regranule sur un tamis de 1,17 mm Onr mélange les vitamines homo25 généisées, le lactose et la cellulose microcristalline avec les granules, on sèche le mélange jusqu'à ce que la teneur en humidité des granules soit de 1,5 % On presse des grains en dragées biconvexes à partir des granules d'une façon classique. On effectue l'enrobage dans un équipement sous haute pression 30 conformément aux reiles de production de dragées pelliculaires d'urn type connu. 2548900 O i EXEMPLE 2 premier stade Phosphate de AICA Nicotinamide Méthionine Acide pholique Luviscol (VA 64) Stéarine Lactose Amidon Gélatine mg. 9 mg. 50 mg. 1 mg. 4 mg. 4 mg. 108 mg. 12 mg. 2 mg. second stade 400 mg. Premier stade On dissout le Luviscol et la stéarine dans l'isopropanol puis on granule le phosphate de AICA On sèche le granulé et ensuite on le regranule sur un tamis industriel de 1,17 mm et on mélange les 15 autres composants du premier stade avec ces granulés. Second stade On dissout la gélatine dans de l'eau distillée sur un bainmarie a 70 C après gonflement et on mouille le mélange de lactose et d'amidon avec cette solution On granule le mélange mouillé sur un 20 tamis de 1,17 mm, puis on sache à 60 C par une technique de fluidisation On homogénéise les granulés ainsi obtenus dans le premier et le second stade et on presse des grains en dragées biconvexes. C On effectue l'enrobage comme indiqué dans l'exemple 1. EXEMPLE 3 premier stade second stade Phosphate de AICA Méthionine Asparginate d'ornityne Luviscol (VA 64) Stéarine Lactose Amidon Gélatine mg. 50 mg. 25 mg. 6 mg. 4 mg. 100 mg. 10 mg. 5 mg. 400 mg. On prépare les dragées comme dans l'exemple 2. 2548900 1 EXEMPLE 4 PROCEDE DE PREP-RATION DU PHOSPHATE DE AICA HAUTEMENT PURIFIE 34,48 g de 4-( 5)-amino-imidazol-5-( 4)-carbocamide5 monohydrate(ALCA) sont dissouts dans 200 mrl d'éthanol aqueux a 50 % en volume et agités à une température de 45 à 50 puis la solution est clarifiée sur charbon de boiso Ensuite, 27,7 g d'acide ortho-phosphorigue sont alors décharges. Après environ 5 minutes suivant l'additi Tn, les premiers 10 cristaux apparaissent Le mélange réactionnel est alors agité pendant 20 minutes et refroidi sur bain de glace pendant 2 hellres La solution est filtrée, lavée avec 30 mi d'éLhanolanhydre et séchée On obtient 51,2 g ( 95) de cristaux incolores ayant un point de fusion 15 de 192-1940 C. 25489001 ' REVENDICATIONS 1 Composition pharmaceutique synergiquepour le traitement des troubles du foie, caractérisé en ce qu'elle comprend, à titre d'ingrédient actif, l'ortho-phosphate de S-aminoimidazole-4carboxamide et une ou plusieurs vitamines ainsi que, facultative5 ment, un ou plusieurs autres excépients pharmaceutiquement acceptables. 2 Composition selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'elle comprend, en poids, 20 a 60 % d'ortho-phosphate de 5aminoimidazole-4-carboxamide et 0,01 à 20 % de vitamines. 3 Composition selon la revendica on 1 ou 2, caractérisé en ce qu'elle comprend, à titre de vitamines, les vitamines B et/ou la vitamine E. 4 Procédé de préparation du 4-( 5)-amnino-imidazol-5-( 4)carboxamide orthophosphate caractérisé en ce qu'on fait réagir 15 la 4,5-aminoimidazol-5,4-carboxamide avec de l'acide orthophosphorique en solution alcoolique et en ce que l'on sépare les cristaux obtenus. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que le milieu alcoolique est constitué par de l'éthanol aqueux. 6 Procédé selon les revendications 4 et 5, caractérisé en ce que le composant de départ ust utilisé sous forme de monohydrate. 7 Orthophosphate de AICA obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 4 à 6. 8 Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comporte à titre de principe actif au moins un orthophosphate de AICA selon la revendication 7.