FR 2550449 A1 19850215 FR 8313281 A 19830812 La présente invention a pour objet des agents de relaxation spécifiques d'organes ou de pathologies, utilisables pour modifier les contrastes en imagerie médicale par résonance magnétique nucléaire. 5 La spectroscopie par résonance magnétique nucléaire (RMN) a été mise au point en 1946 par Bloch et Purcell, et cette technique a été largement utilisée depuis dans les domaines de la physique, de la chimie organique et de la biochimie, pour étudier la 10 structure chimique des molécules et des groupements moléculaires "in vitro" Le principe de la RMN utilise la conjonction de champs magnétiques et d'ondes de radiofréquence pour mettre en résonance les noyaux de certains atomes L'un des atomes les plus intéressants 15 étant l'hydrogène, qui est présent dans l'eau constituant la majorité des tissus biologiques ( 75 à 80 % des tissus mous), il a été possible d'envisager l'utilisation de la technique RMN dans le domaine médical, et le développement de l'imagerie par résonance magnéti20 que nucléaire dans ce domaine a connu, depuis moins de deux ans, un essor considérable L'image de la distribution des protons est obtenue à partir du signal émis, après mise en résonance des noyaux, et la reconstruction par ordinateur conduit à la visualisation 25 des coupes transverses, sagittales et frontales du corps humain. L'analyse des fréquences de résonance ainsi que celle des paramètres caractéristiques des noyaux s'obtient par spectrométrie RMN: c'est l'observation 30 de la réponse impulsionnelle des noyaux à l'excitation par une onde de radiofréquence Les noyaux reviennent à leur état d'équilibre initial selon des constantes de temps qui dépendent de leur environnement et sont appelées temps de relaxation. t Le temps de relaxation T 1 (dit spin-réseau) caractérise le comportement du noyau observé dans le champ magnétique environnant (modifié par les noyaux et électrons de voisinage) Le temps de relaxation T 2 5 (spin-spin) est significatif des liaisons moléculaires dans lesquelles le noyau observé est impliqué Sa modification traduit les mouvements microscopiques de ce noyau par rapport aux noyaux voisins. Un autre paramètre qui peut être mesuré, est 10 la densité f des protons dans le milieu; elle représente en première approximation la quantité d'eau libre contenue dans l'échantillon Il apparait donc que la densité de l'eau dans le tissu, mais aussi la mobilité relative des molécules d'eau induisent des varia15 tions des paramètres mesurés, ce qui se rencontre dans des conditions pathologiques, mais peut aussi être provoqué par l'introduction d'éléments modifiant le milieu environnant. Actuellement, l'image par résonance magné20 tique nucléaire représente la distribution de ces paramètres p, T 1, T 2 ou de leur combinaison Le contraste entre un tissu donné et les tissus adjacents est d'autant plus important que les tissus contiennent plus ou moins d'eau ou de protons mobiles et que les 25 temps de relaxation sont différents Aussi, on peut modifier le contraste en faisant varier un ou plusieurs de ces paramètres L'expérience a montré qu'il était plus intéressant de modifier les temps de relaxation pour améliorer le contraste de l'image En 30 effet, la densité des protons (en pratique ceux de l'eau et des graisses) varie peu d'un organe à l'autre et souvent moins entre tissus normaux et pathologiques En revanche, les caractéristiques de relaxation dépendent d'un grand nombre de facteurs (dynamique mi35 croscopique des molécules, échange chimique, pertur- bations paramagnétiques) beaucoup plus variables. Les possibilités techniques de sélection, au moins relative, des différents paramètres pour l'obtention de l'image finale (par expérience d'échos de spins favo5 risant le rôle de T 2, ou par expérience d'inversionrécupération de l'aimentation permettant la mesure locale de T 1), ont montré tout l'intérêt de la technique, l'exemple le plus spectaculaire étant celui du constraste possible entre la substance blanche et la 10 substance grise sur les images du cerveau normal ou pathologique. Malgré l'importance des phénomènes naturels, le contraste peut être encore insuffisant, particulièrement entre tissus sains et pathologiques, au 15 sein d'un même organe, ou pour mettre en évidence des compartiments anatomiques définis tels que les voies biliaires, l'arbre urinaire etc Aussi, on a envisagé d'accentuer artificiellement le contraste en introduisant dans l'organisme à examiner des éléments modi20 fiant notamment le champ magnétique, par exemple des composés paramagnétiques, afin de perturber les temps de relaxation des noyaux déjà présents dans l'organisme, en ajoutant à la relaxation nucléaire une composante liée à des perturbations par un moment magnéti25 que électronique. L'utilisation d'agents de contraste de ce type est en particulier décrite par Brasch, Runge et al, et Brasch et al dans Radiology, vol 147, n 3, juin 1983 pp 773-791 Ces agents de contraste peuvent 30 être des sels de métaux de transition ou de gadolinium, des radicaux nitroxydes ou de l'éthylènediamine tétraacétate de chrome. Cependant, l'utilisation de tels agents de contraste n'est pas satisfaisante, car il est néces35 saire d'injecter dans l'organisme une quantité relati- vement importante de produit pour obtenir l'effet recherché au niveau de l'organe examiné De ce fait, de nombreux agents ne peuvent être utilisés car ils ne permettent pas l'obtention d'une amélioration signi5 ficative du signal de RMN, à des doses non toxiques. La présente invention a précisément pour objet de nouveaux agents de relaxation qui permettent de modifier les contrastes en imagerie médicale par résonance magnétique nucléaire, en palliant l'incon10 vénient précité. L'agent de relaxation utilisable pour modifier les contrastes en imagerie médicale par résonance magnétique nucléaire, selon l'invention, se caractérise en ce qu'il est constitué par un complexe d'un 15 lanthanide paramagnétique comportant un ligand biologiquement actif, spécifique d'un organe ou d'une pathologie. On rappelle que dans la série des lanthanides, les éléments suivants sont paramagnétiques: cé20 rium, praséodyme, néodyme, prométhium, samarium, europium, gadolinium, terbium, dysprosium, holmium, erbium et thulium. De préférence, selon l'invention, le lanthanide paramagnétique est choisi parmi le gadolinium, 25 le dysprosium, l'holmium, le thulium, le terbium et le samarium Parmi ces derniers éléments, on préfère encore davantage le gadolinium. Les agents de relaxation de l'invention présentent en particulier l'avantage de pouvoir modifier 30 le contraste d'une image RMN grâce à la présence de l'élément paramagnétique constitué par un lanthanide et de pouvoir se fixer sélectivement sur l'organe à examiner en raison du choix du ligand De ce fait, on peut réduire d'un facteur important la quantité 35 d'agent injectée et atténuer les risques de toxicité. En effet, l'agent de relaxation comporte une partie vectrice constituée par le ligand biologiquement actif, spécifique de l'organe ou de la pathologie à examiner et il se fixe par cette partie vectrice sur 5 l'organe ou la zone à étudier Une fois fixé, il améliore le contraste de l'image RMN en raison de la présence de l'élément paramagnétique. Le fait d'utiliser des complexes de lanthanides paramagnétiques permet d'obtenir le résultat re10 cherché malgré l'union de l'élément paramagnétique à une molécule vectrice En effet, dans ce cas, l'effet paramagnétique du lanthanide sur les temps de relaxation du proton n'est ni annulé, ni trop diminué par la présence de la molécule ou ligand biologiquement ac15 tif De même, le ligand biologiquement actif conserve ses propriétés, et sa fixation sélective sur l'organe ou la zone à examiner n'est pas perturbé par l'élément paramagnétique. Selon l'invention, on choisit le ligand du 20 complexe en fonction de l'organe ou de la zone du corps humain à étudier afin d'obtenir une bonne fixation du complexe sur la partie à observer. Ainsi, lorsqu'on veut obtenir une image du squelette ou étudier un processus pathologique libé25 rant des phosphatases, le ligand du complexe peut être constitué en particulier par un monodi ou polyphosphonate qui se fixe sur le squelette. A titre d'exemplesde phosphonates susceptibles d'être utilisés comme agents de relaxation selon 30 l'invention, on peut citer le méthanehydroxydiphosphonate de lanthanide, l'éthylènehydroxydiphosphonate de lanthanide, le méthylènediphosphonate de lanthanide, l'aminoéthyldiphosphonate de lanthanide Ces phosphonates de 35 lanthanide peuvent être obtenus par réaction de l'aci- 2550449. de correspondant avec un sel ou un oxyde de lanthanide, par exemple un chlorure. Pour étudier le squelette et plus généralement les processus pathologiques libérant des phospha5 tases, on peut aussi utiliser un pyrophosphate de lanthanide. Lorsqu'on veut obtenir une image du cerveau ou étudier la pathologie du cerveau, on peut utiliser des complexes constitués par des gluconates, des dici10 trates, des polycitrates ou des diéthylène triaminopentaacétates de lanthanides paramagnétiques Ces complexes peuvent être également obtenus par action de l'acide correspondant sur un sel ou un oxyde du lanthanide paramagnétique. Pour l'étude du coeur, on peut utiliser des complexes comportant comme ligands des trialkyl phosphine ou des acides phosphoniques ou pyrophosphoriques. Lorsqu'on veut obtenir une image du rein, on 20 utilise avantageusement des complexes constitués par des gluconates, des dimercaptosuccinates, des diéthylènetriaminopentaacétates ou des thiomalates de lanthanides paramagnétiques Ces complexes sont également obtenus par réaction de l'acide correspondant 25 avec un sel ou un oxyde du lanthanide paramagnétique. Lorsqu'on veut obtenir une image des voies biliaires, on utilise avantageusement un complexe constitué par un phénylcarbamoyl-méthyliminodiacétate de lanthanide paramagnétique substitué ou non sur le 30 noyau phényle. Pour l'étude du foie, on peut utiliser un phytate de lanthanide paramagnétique, soit un myo-inositol hexaphosphate de lanthanide. Généralement, on utilise les complexes de 35 lanthanide paramagnétique de l'invention sous la forme de solutions stériles, apyrogènes, par exemple sous la forme de solution dans du sérum physiologique, et on les injecte par voie intraveineuse, par voie intrarachidienne ou encore par voie orale Les doses injec5 tées sont généralement faibles et sont choisies compte tenu de la toxicité du produit, de façon à obtenir une modification optimale du contraste sans engendrer de toxicité. Ainsi, dans le cas du dimercaptosuccinate de 10 gadolinium la dose injectée peut correspondre à 0,6 liunol de gadolinium et 1,8 j Jmol de dimercaptosuccinate pour 200 g de poids du corps Ceci est très en dessous de la dose pour laquelle apparaît un effet de toxicité aiguë dû au gadolinium, qui est de 29,6 wimol 15 de gadolinium pour 200 g, soit de 55 mg de Gd par kg. Par ailleurs, la dose injectée est choisie en fonction du taux de fixation du complexe sur l'organe à examiner et de la grandeur de cet organe, tout en tenant compte de la toxicité. Après injection du produit, on attend que le taux de fixation de ce produit sur l'organe à examiner ait atteint son maximum Ce maximum peut varier en fonction de la nature du complexe utilisé Ainsi, dans le cas du phytate de gadolinium, le taux de fixation 25 du complexe sur le foie est d'environ 80 % et ce taux est atteint au bout de 5 à 30 minutes environ Dans le cas du dimercaptosuccinate de gadolinium, on obtient un taux de fixation maximal de 15 % sur le rein et ce taux est atteint en environ 2 h. Dès qu'on a atteint ce taux maximal de fixation, on peut réaliser une image de l'organe à examiner par résonance magnétique nucléaire en utilisant des appareillages classiques. Les exemples suivants sont donnés à titre 35 non limitatif pour illustrer l'invention. EXEMPLE 1 Cet exemple concerne la préparation du dimercaptosuccinate de gadolinium et son utilisation pour obtenir une image du rein par résonance magnéti5 que nucléaire. On dissout dans de l'eau additionnée de quelques gouttes de soude, l'acide dimercaptosuccinique en s'assurant que le p H ne dépasse pas 2,5 On ajoute ensuite à la solution une solution de chlorure 10 de gadolinium de façon à obtenir un rapport molaire acide dimercaptosuccinique/Gd 3 + de 3/1, une concentration en acide dimercaptosuccinique de la solution finale au plus égale à 6 mmol 1-1 et une concentration en gadolinium au plus égale à 2 mmol 1 l On ajuste le 15 p H à 2,5 et on conserve le produit à l'abri de la lumière à 4 C dans une atmosphère inerte. On a vérifié que le produit obtenu donne un élargissement du pic du proton proportionné au temps de relaxation T 2 de 4 Hz en solution à lmmol 1-1 l (la 20 largeur du pic du proton de l'eau est d'environ 1 Hz). Ainsi, l'effet du dimercaptosuccinate de gadolinium est pratiquement identique à celui de l'ion Gd 3 + qui donne un élargissement de 4,5 Hz en solution à 1 mmol 1-1. On injecte à des rats de 200 g, 0,2 cm 3 de la solution obtenue, ce qui correspond à une dose de 0,6 limol de gadolinium et 1,8 -lmol d'acide dimercaptosuccinique Après 90 minutes, les rats sont sacrifiés, et leurs reins prélevés On examine alors les reins 30 prélevés par RMN, en utilisant l'appareil BRUKER WP 60 dont le spectre RMN par transformée de Fourier en présence d'un gradient de champ statique sur z fournit une projection en tranches de l'organe étudié. Dans ces conditions, on obtient une varia35 tion du temps de relaxation T 1 atteignant localement % et globalement 15 % pour le rein entier Par ailleurs, on a vérifié que le dimercaptosuccinate de gadolinium se fixe à 30 % sur les deux reins. EXEMPLE 2 Cet exemple concerne la préparation de phytate de gadolinium. On prépare une solution à 20 mmol 1-1 d'acide phytique en traitant une solution de phytate de sodium par une résine cationique AG 50 x 8 ayant une 10 dimension de particules inférieures à 0,038 mm ( généralement inférieure à 3 mmol 1-1. On a vérifié que ce produit donne un élar20 gissement du pic du proton de l'eau proportionnel au temps de relaxation T 2 de 16 Hz pour une solution à 1 mmol 1-1. L'effet de ce complexe est donc supérieur-à celui du gadolinium ionique ( 4,5 Hz en solution à 25 1 mmol -11). Ce produit est utilisé pour l'étude du foie car il se fixe sur le foie à des taux supérieurs à 80 %. EXEMPLE 3 Cet exemple concerne la préparation de dié30 thylène triamino pentaacétate de gadolinium On met en suspension dans 60 ml d'eau, 2,5 g de Gd 203 et 5 g d'acide diéthylènetriaminopentaacétique On agite la suspension pendant environ 48 h à environ 50 C L'acide diéthylènediaminopentaacétique dissout lentement 35 l'oxyde de gadolinium On dilue à 100 ml et on ajoute 2550449, de l'acétone pour précipiter le complexe de gadolinium formé On filtre à l'abri de l'humidité et on sèche le précipité sous vide dans un dessicateur avec du chlorure de calcium. Le produit obtenu donne un élargissement du pic du proton de l'eau proportionnel au temps de relaxation T 2 de 3,4 Hz en solution à 1 mmol 1-1. Ce produit est utilisable pour l'étude des anomalies de perfusion des organes tels que le rein, 10 le cerveau, etc 2550449, Il REVENDICATIONS 1 Agent de relaxation utilisable pour modifier les constrastes en imagerie médicale par résonance magnétique nucléaire, caractérisé en ce qu'il est constitué par un complexe d'un lanthanide paramagnéti5 que comportant un ligand biologiquement actif, spécifique d'un organe ou d'une pathologie. 2 Agent selon la revendication 1, caractérisé en ce que le lanthanide est choisi parmi le gadolinium, le dysprosium, l'holmium, le thulium, le ter10 bium et le samarium. 3 Agent selon la revendication 1, caractérisé en ce que le lanthanide paramagnétique est le gadolinium. 4 Agent de relaxation pour l'examen du rein 15 selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il est constitué par un dimercaptosuccinate de lanthanide paramagnétique. Agent de relaxation pour l'examen du foie selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, ca20 ractérisé en ce qu'il est constitué par un phytate (myo-inositol hexaphosphate) de lanthanide paramagnétique. 6 Agent de relaxation pour l'examen du rein selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, ca25 ractérisé en ce qu'il est constitué par un diéthylène triamino pentaacétate de lanthanide paramagnétique. 7 Agent de relaxation pour l'examen des os et du coeur selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il est constitué par un 30 phosphonate ou un pyrophosphate de lanthanide paramagnétique. 8 Agent de relaxation pour l'examen du cer- veau selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il est constitué par un gluconate, un dicitrate, un polycitrate ou un diéthylène triaminopentaacétate de lanthanide paramagnétique. 9 Agent de relaxation pour l'examen du rein selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il est constitué par un gluconate de lanthanide paramagnétique. Agent de relaxation pour l'examen des 10 voies biliaires selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il est constitué par un phénylcarbamoyl-méthyliminodiacétate de lanthanide paramagnétique substitué ou non sur le noyau phényle.