FR 2558728 A1 19850802 FR 8401213 A 19840126 - I1- Composition pharmaceutique destinée à combattre le paludisme. La présente invention se rapporte, d'une manière générale, à une composition pharmaceutique et plus particulièrement à une composition pharmaceutique ayant une action antipaludéenne. Le paludisme est probablement la plus répandue de toutes les maladies humaines. On a estimé que quelques 300 millions de personnes en sont affligées chaque année, la maladie étant fatale chez 1% d'entre elles. Il est donc impératif de disposer de moyens efficaces pour combattre ce fléau et toute amélioration à des traitements existants pourra être consi- dérée comme un apport bénéfique à la thérapeutique. La quinine constitue encore, à l'heure actuelle, un des agents les plus ré- pandus et les plus indiqués dans la lutte contre la malaria. Cet alcaloide est efficace à la fois pour supprimer et pour contr8ler des crises manifestes de paludisme dues à Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax et Plasmodium malariae. D'autres alcaloïdes fortement apparentés.à la quinine, comme la quinidine, la cinchonine et la cinchonidine ont montré une efficacité assez semblable à celle de la quinine dans ce traitement [L.H. SCHMIDT, Alkaloids, 1955, vol. V, p. 141 et sq (1956)] et certaines associations de quinine avec de tels alcaloides de cinchona ont été décrites et utilisées. Dans ces associations, les alcaloïdes sont mélangés par exemple à la résor- cine pour améliorer la solubilité. Toutefois, la quinine n'a pas encore été surpassée pour le traitement d'in- fections sévères dues à P.falciparum. On a maintenant trouvé que certaines associations médicamenteuses comprenant la quinine, la quinidine et la cinchonine, dans des rapports pondéraux définis, présentent un taux d'activité antipaludéenne supérieur à celui enregistré avec la quinine seule. On a aussi trouvé d'une façon surprenante que de telles associations présen- tent non seulement une activité améliorée par rapport à la quinine, mais 2 - aussi une bonne activité sur les souches résistantes à la quinine. Ainsi, la présente invention concerne une composition pharmaceutique anti- paludéenne, sous forme d'unité de dosage, composition comprenant de 20 à 2000 mg d'un mélange constitué de: 30 à 60% de quinine à 40% de quinidine à 40% de cinchonine chacun de ces constituants étant sous forme de base ou de sel pharmaceuti- quement acceptable, en association avec un véhicule pharmaceutique ou un excipient approprié. Des compositions préférées selon l'invention comprendront de 50 à 1000 mg d'un mélange de quinine, quinidine et cinchonine dans un rapport de 1:1:1, chacun des composants de ces mélanges étant sous forme de base ou de sel pharmaceutiquement acceptable. D'autres compositions préférées selon l'invention pourront renfermer de 50 à 1000 mg d'un mélange de 50% de quinine, 20% de quinidine et 30% de cincho- nine, chacun de ces composants étant sous forme de base ou de sel pharma- ceutiquement acceptable. Comme sels pharmaceutiquement acceptables, on peut citer, par exemple, le chlorhydrate, le bromhydrate, le sulfate, le maléate, le formiate, le fumarate, le benzoate, le méthanesulfonate, le carbonate, le gluconate ou le résorcinate. Des études pharmacologiques effectuées avec des compositions selon l'invention ont révélé une activité antiparasitaire importante in vitro comme in vivo. Les résultats de tests effectués en vue de démontrer cette activité sont mentionnés ci-dessous: 1) In vitro a) On a effectué des tests ex vivo sur des cultures de P.falciparum provenant de 20 patients thaïlandais infestés. Suivant ces tests, on soumet les cultures en question pendant trois jours à l'action de la composition à étudier puis on mesure la prolifération du parasite par incorporation d'un précurseur radio-marqué. Selon ce protocole expérimental, on a réalisé un essai avec un mélange de monochlorhydrate de quinine-résorcine/monochlorhydrate de quinidinerésorcine/ monochlorhydrate de cinchonine-résorcine dans un rapport de 1:1:1. A titre comparatif, on a effectué un test semblable avec différentes concen- trations de monochlorhydrate de quinine-résorcine utilisé seul. Les résultats montrent que sur les cultures provenant des 20 patients en ques- - 3 - tion la DI50, c'est-à-dire la dose d'agent thérapeutique étudié nécessaire pour diminuer la parasitose de 50%, est de 49,8.10 -9g dans le cas de la composition de l'invention et de 161.10-9g dans le cas du sel de quinine seul. La composition de l'invention présente donc un taux d'activité 3,2 fois plus important que celui du sel de quinine. b) On a également pratiqué des essais sur des souches de P.falciparum main- tenues en culture continue en milieu R.P.M.I. 1640 (Roswell Park Membrial Institute) complété de 35mMi d'H.E.P.E.S. (acide N-hydroxy-2 éthyl pipérazino N'-éthanesulfonique-2) et de 10% de sérum humain de cordon ombilical. Au moment du test, on ramène la parasitémie à 0,2% par adjonction de globules rouges humains ORh+ conservés au préalable pendant 8 à 20 jours à +4 C. On élimine la partie supérieure du culot de globules rouges au cours de 3 la- vages de façon à réduire les globules blancs et les plaquettes à-des quantités négligeables. On répartit chaque composition à tester en des concentrations décúoisaantes de- façon à obtenir des concentrations finales allant de 8.000 à,u/L:-J.ans les puits d'une microplaque de culture. On met les globules o.'e. ' "-;? p: azasitéie en suspension dans du milieu de culture complété ly.:-.n.,,n, --;,.de on à obtenir, dans chaque puits de culture, un -,oJe de 2,' p! d -lieu 6 pl de culot globulaire et 0,8 pCi d'H3-hypo- J: *: = i- in cbe.ça;:s ies plaques pendant 3 jours à 37 C en atmosphêre :'...,-,-: z::.iep ga,-e -- ' 5% d'anhydride carbonique, 18% d'oxygàne et fP.- =-::-:- 9 v; _1--... ceil:- es par aspiration sur un -filtre en fibre ,::':.:{ s.-.- o-.ure 'ds.ns un compteur à scintillation, la --.,: es: d;pou.?roa chaque concentration de omposition ::-,-- f- T.. '- L.. end etémoins suivanits* globules rouges :., s-.:.] '',-s --sa:'s;:ssans agent antimala'ique. -. gvz-_u- ^:..-s de far.;o. graphi.qua les doses inhibiitrices et la pente de --.:e '9 'tues it- on a enregistré des résultats semblables à. to'-zt:, 3.-u':e,.....- 'l7é tude ex- vivo i.;:. on a i.-rua -_.- essais semblables à ceux décrits précédemment en ?t -._ i.- t.'o:---.;Ci. f'inCvertion renfermalt le monochlorhydrate de 0q.-[.e,!e -no"rh!orLyd a':d:i4 de quinidine et le monochlorhydrate de cinchonine dans un r-.ippo'rt de i:!: et ce, comparativement au monochlorhydrate de quinine. Dans les tests ex vivo co me in vitro, on a enregistré des résultats semblables à ceux cités précédemment -4- 2) In vivo On a effectué, in vivo, le test suivant en utilisant une souche de Plasmodium berghei comme agent infestant. On inocule, par voie intraveineuse, à des souris blanches mâles (Swiss Albino F1) pesant 18 à 22 grammes, 107 globules rouges parasités avec une souche de Plasmodium berghei N. Les globules rouges infestés proviennent d'une souris donneuse qui est tuée par inhalation de chloroforme lorsque sa parasitémie atteint 20%. On collecte les globules rouges dans une seringue légèrement héparinée et on dilue ensuite le sang dans du NCTC medium 199 (National Cancer Tissue Culture) de façon que 0,2 ml contienne approximativement 107 globules rouges. On dissout ou met la composition à étudier en suspension dans du Tween et de l'eau distillée stérile puis on administre, par voie sous-cutanée. On administre les compositions à étudier une fois par jour durant 4 jours et on détermine alors la parasitémie par étalement de sang en couche mince le jour suivant le dernier traitement. On détermine alors la DI90, c'est-à-dire la dose de composition réduisant la parasitose de 90%. On a obtenu les résultats suivants avec les compositions ci-dessous: Composition 1 Monochlorhydrate de quinine-résorcine/monochlorhydrate de quinidine-résorcine/ monochlorhydrate de cinchonine-résorcine: 1:1:1. Composition 2 Monochlorhydrate de quinine-résorcine/monochlorhydrate de quinidine-résorcine/ monochlorhydrate de cinchonine-résor-ciae: 50%, 20%, 30, comparativement au monochlorhydrate de quinine-résorcine utilisé seul. Tableau DI90 (en mg/kg) Sel de quinine 380 : Composition I 160: Composition 2 165 Ces résultats montrent clairement que les compositions de l'invention sont au moins 2,3 fois plus actives que le sel de quinine utilisé seul. Des résultats semblables à ceux cités précédemment ont été enregistrés avec des compositions identiques aux Compositions 1 et 2 mais dans les- quelles la résorcine est absente. Les compositions pharmaceutiques de l'invention peuvent se présenter sous toute forme convenant à l'administration en thérapie humaine ou vétérinaire pour le traitement du paludisme. Co.mme forme d'administration, on peut citer l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermique ou rectale. Pour ce qui concerne l'unité d'administration, celle-ci peut prendre la forme, par exemple, d'un comprimé, d'une dragée, d'une capsule, d'une gélule, d'une poudre, d'un granulé, d'une suspension ou d'un sirop pour l'administration orale, d'un suppositoire pour l'administration rectale ou d'une solution stérile ou suspension pour l'administration parentérale. La quantité totale de principe actif à savoir le mélange de quinine, qui- nidine et cinchonine, ou d'un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, est de 20 à 2000 mg par unité d'administration selon que cette unité est destinée à l'administration orale, rectale ou parentérale. L'unité comprend, de préférence, 50 à 500 mg de principe actif dans le cas d'administration orale, de 100 à 150 mg dans le cas d'administration rectale et de 20 à 2000 mg dans le cas d'administration parentérale, par exemple par infusion. L'administration journalière de compositions selon l'invention dépend de la voie d'administration choisie. Généralement, une unité d'administration sera nécessaire 1 à 4 fois par jour de manière que la quantité journalière de principe actif ci-dessus puisse varier de 1 à 30 mg par kg de poids corporel. De préférence, elle sera de l'ordre de 25 mg/kg. Sous leur aspect le plus général et en tenant compte de la voie d'adminis- tration choisie, les compositions pharmaceutiques de l'invention sont pré- parées en associant le principe actif défini ci-dessus à un véhicule phar- maceutique ou un excipient approprié, ce dernier pouvant être sélectionné parmi les substances telles qu'eau distillée, amidons, talc, stéarate de magnésium, polyvinylpyrrolidone, acide alginique, silice coloidale, chlo- rure de sodium, dioxyde de titane, beurre de cacao, agents édulcorants etc... On décrira par la suite, de manière plus particulière mais non limitative, quelques modes de réalisations de compositions de l'invention. On prépare, par exemple, une composition de l'invention sous forme de com- primé en formant un mélange pulvérulent à partir de principe actif cidessus et d'un diluant ou d'une base telle qu'amidon, saccharose, kaolin, phosphate bicalcique etc... puis en granulant ou en tronçonnant après addition d'un lubrifiant et finalement en comprimant. La granulation du mélange pulvérulent peut se faire en mouillant avec un 6 - liant tel que sirop, pâte d'amidon ou mucilage d'accacia et en forçant au travers d'un tamis. Une autre méthode de granulation consiste à tronçonner le mélange pul- vérulent en le faisant passer au travers d'une machine à comprimés puis à casser, en fragments (tronçons) les comprimés résultants imparfaitement formés. On peut lubrifier les tronçons pour les empêcher de coller par addi- tion d'un stéarate sous forme de sel, de talc ou d'une huile minérale puis en formant des cubes. On comprime ensuite le mélange lubrifié pour constituer les comprimés défi- nitifs. Si nécessaire, les comprimés obtenus peuvent être dragéifiés, enrobés d'un vernis à délitage entérique ou encore enrobés de telle manière que le prin- cipe actif se libère graduellement. De même, on obtient une composition de l'invention sous forme de gélulespar simple mélange du principe actif ci-dessus avec un véhicule pharmaceutique, ce mélange pulvérulent étant par la suite introduit dans des gaines de géla- tine molle ou dure. Avant l'opération de remplissage, il est avantageux d'ajouter, au mélange pulvérulent, un lubrifiant tel que talc, stéarate de magnésium ou stéarate de calcium. Des poudres pour l'administration orale peuvent être préparées en broyant le principe actif ci-dessus à une finesse convenable et en mélangeant avec un diluant broyé de-manière semblable lequel peut être un dérivé glucidique comestible tel que l'amidon. Avantageusement, on incorpore un agent édulco- rant ou un sucre ainsi qu'une huile aromatisante. En vue de l'obtention d'une composition liquide orale, on façonne des granules en mouillant le principe actif ci-dessus et un diluant hydrosoluble tel que saccharose, glucose etc... avec un liant tel que mucilage d'accacia, gélatine en solution, méthylcellulose en solution et en forçant au travers d'un tamis pour former des granules que l'on fait sécher. De préférence, on introduit dans la composition un agent de mise en suspension comme la gomme adragante. On peut ensuite préparer des compositions liquides pour administration orale sous formes posologiques unitaires telles que sirop, dans lesquelles chaque cuillère à café d'une telle composition contient une quantité prédéterminée du principe actif ci-dessus à administrer. Une préparation sous forme de sirop ou d'élixir peut renfermer, outre le prin- cipe actif, un édulcorant, un antiseptique comme le méthylparaben ou le pro- pylparaben ainsi qu'un colorant et un agent édulcorant appropriés. -7- On peut préparer, également, une composition pour administration par voie rectale sous forme de suppositoire en coulant, dans un moule approprié, un - mélange formé du principe actif ci-dessus et d'un agent liant fondant à la température rectale par exemple beurre de cacao, polyéthylèneglycols ou $ lanoline. Pour une administration pareatérale, on réalise des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles et injectables contenant le principe actif ci-dessus ainsi qu'un agent de solubilisation si nécessaire, par exemple le polysorbate 80, des agents mouillants appro- 0 priés par exemple le propylèneglycol ou le butylèneglycol et un agent de conservation tel que l'alcool benzylique. Les Exemples non limitatifs suivants illustrent des compositions pharma- ceutiques selon l'invention: EXEMPLE 1 Compositions administrables par voie orale I. Comprimé On prépare des comprimes ayant la composition ci-dessous: -!onochlorhydrate de quinine, 2H O 25,2 mg Mouochiorhydrate de quinidine, 1H20 24,8 mg 0 onocbilorhydrcate ade cinclhonine,. 2H20 256 mg don e rais 5624 mg Poly. id-on, excipient: 5,0 mg Csr:yt'ylamid!on sodiquoe 7,5 mg Tae l. 4,5 mg Stéarat e de magnes.um 1,0 mg e;t ee, de la manière suivante: On s.!age imtimei ent dans une mialngeuse-pétrisseuse tous les ingrédients auf ie lu ri. -nL (talc, st-arate de magnésium), pendant 15 minutes. On ptrit patr addition gradue.ii dreau et on fait passer la masse au travers d'un tamis d_ 1,25 ma. On sache le granulé obtenu dans une étuve à ventil- lation Xorcez jusqu'à obtenir une humidité résiduelle relativement réduite. Par c.....re, 511on forme acor-s des comprimés pesant chacun 150 mg et ren- fermant chacun 75,6 mg de principe actifo !l. G] e tt On prépare des gélules ayant la composition ci-dessous t -8 - Sulfate de quinine, 2H20: 49,7 mg Sulfate de quinidine, 2H20 51,2 mg Sulfate de cinchonine, 2H20 50, 4 mg Lactose: 19,2 mg Silice coloidale: 0,2 mg Talc: 5,0 mg EXEMPLE 2 Composition administrable par voie parentérale Une composition aqueuse stérile injectable a été préparée, répondant à la formulation suivante: Monochlorhydrate de quinine, 2H20 25,2 mg Monochlorhydrate de quinidine, 1H20: 24,8 mg Monochlorhydrate de cinchonine, 2H20 25,6 mg Uréthane: 75,5 mg Chlorure de sodium: 7,0 mg Acide chlorhydrique, eau qs. pour 1 ml. - 9 - Revendications 1. Composition pharmaceutique, sous forme d'unité de dosage, ayant une action antipaludéenne, caractérisée en ce qu'elle comprend de 20 à 2000 mg d'un mélange constitué de: 30 à 60% de quinine à 40% de quinidine à 40% de cinchonine chacun de ces constituants étant sous forme de base ou de sel pharmaceu- tiquement acceptable, en association avec un véhicule pharmaceutique ou un excipient approprié. 2. Composition pharmaceutique selon la Revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend de 50 à 1000 mg d'un mélange de quinine, ou d'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, de quinidine, ou d'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables et de cinchonine, ou d'un de ses sels phar- maceutiquement acceptables, dans un rapport de 1:1:1. 3. Composition pharmaceutique selon la Revendication 1 caractérisée en ce qu'elle comprend de 50 à 1000 mg d'un mélange de 50% de quinine, ou d'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, 20% de quinidine, ou d'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables et 30% de cinchonine, ou d'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. 4. Composition pahrmaceutique selon l'une quelconque des Revendications l à 3 caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme d'unité d'administra- tion pour l'administration orale. 5. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des Revendications 1 à 3 caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme d'unité d'administra- tion pour l'administration rectale. 6. Composition pharmaceutique-selon l'une quelconque des Revendications 1 à 3 caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme d'unité d'administra- - tion pour l'administration parentérale. 7. Composition pharmaceutique selon la Revendication 4 caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de comprimé, dragée, capsule, gélule, pou- dre, granulé, suspension ou sirop. 8. Composition pharmaceut5que selon la Revendication 5 caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de suppositoire. 9e Composition pharmaceutique selon la Revendication 6 caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de solution ou suspension.