FR 2550791 A1 19850222 FR 8412905 A 19840817 v/, 2550791 Cette invention concerne de nouveaux dérivés de la frédéricamycine A. On sait déjà qu'un antibiotique anti-tumoral, 5 la frédéricamycine A (NSC 305 263), représenté par la formule suivante (II) Ocî HO ' O H H \ Q (II) peut être isolé d'une culture de streptomyces griseus FCRC 48 ("J Antibiotics", 34 1389-1401 ( 1981); ibid, 15 34, 1402-1407 ( 1981)). La frédéricamycine A présente toutefois l'inconvénient d'avoir une faible activité anti-bactérienne et une médiocre stabilité. Les auteurs de la présente invention ont en 20 conséquence réalisé la synthèse de divers dérivés de la frédéricamycine A, et ont étudié leurs effets pharmacologiques et leur stabilité en vue de surmonter les inconvénients sus-mentionnés de la frédéricamycine A. A la suite de ces études, il a été constaté que les 25 dérivés de la frédêricamycine A qui sont représentés par la formule générale suivante (I) AO ÀO 14 N 1 dans laquelle R désigne un atome d'hydrogène ou up o radical acyle; A désigne un radical de formule OCH 3 ou RO anti-bactériens et comme médicaments anti-tumoraux. Dans un aspect de cette invention, il est ainsi procuré des dérivés de la frédéricamycine A qui sont représentés par la formule générale suivante (I): 20 RO A dans laquelle R désigne un atome d'hydrogène ou un radical acyle, A désigne un radical de formule OCH Oc R 303 O=( O RD-' 4 R et les liaisons en traits interrompus sont facultatives avec cette réserve que, lorsque A est un radical de formule OCH 3 ou que les liaisons en traits interrompus 35 RO # OR sont présentes, R est autre qu'un atome d'hydrogène. Les objectifs, caractéristiques et avantages ci-dessous de la présente invention, ainsi que d'autres, ressortiront de la description qui va suivre et dûs revendications ci-jointes, prises conjointement avec les dessins annexés dans lesquels: Les figures 1 et 2 représentent respectivement le spectre infrarouge (IR) et le spectre de résonance magnétique nucléaire pour l'atome d'hydrogène normal 10 (H 1-RMN) du composé 1 décrit ci-après; Les figures 3 et 4 représentent respectivement le spectre IR et le spectre H 1 RMN du composé 13 ciaprès; Les figures 5 et 6 représentent respectivement 15 le spectre IR et le spectre H 1-RMN du composé 17 ciaprès, et Les figures 7 et 8 représentent respectivement le spectre IR et le spectre H 1 RMN du composé 18 ciaprès. Les dérivés (I)de la frédéricamycine A selon cette invention, peuvent en outre être classés grosso modo dans les trois groupes suivants: oc eo. o fi O OR O 4 R'O. R'O OC. l/ 7 OR' OR' (lb) RO OCH 3 Izc) Dans ces formules, R a la même définition que ci-dessus, et R' désigne un radical acyle. Les dérivés (I) de la frédéricamycine A selon cette invention peuvent être prépares par l'un 10 ou l'autre des procédés suivants: Procédé n 1: On peut préparer séparément les dérivés diacylés (la) de la frédéricamycine A en faisant réagir, conformément au procédé d'acylation habituel, la 15 frédéricamycine A (II) avec un acide carboxylique représenté par exemple par la formule Rl-CC-OH, dans laquelle R 1 désigne un radical alkyle ou un radical phényle éventuellement substitué, le radical alkyle contenant de préférence de 1 à 18 atomes de carbone 20 et le radical phényle pouvant être substitué par un radical alkyle inférieur ou alcoxy inférieur contenant de 1 à 6 atomes de carbone, à chaine droite ou ramifiée, ou par un atome d'halogène tel que le chlore, le brome, le fluor ou l'iode, ou bien avec un dérivé réactif de cet acide carboxylique Dans le procédé ci-dessus, il est préférable de mener la réaction dans un solvant tel que la pyridine par exemple, à une température de O à 4 QC et pendant 2 à 48 heures, en utilisant un agent d'acylation dans 30 un rapport molaire de 3 à 10 fois la frédéricamycine A Il est également possible de faire réagir la frédéricamicyne A directement avec l'acide carboxylique en utilisant un agent de combinaison tel que le dicyclohexylcarbodiimide (DCC) ou un agent similaire. Procédé n 2: On peut préparer les différentes leucotétraacyltétrahydrofrédéricamycine A qui sont représentées par la formule(Ib)ci-dessus en faisant réagir la frédéricamycine A (II) avec un agent réducteur approprié, et un acylant la frédéricamycine A ainsi réduite. La réduction se fait à l'aide d'un réducteur habituel. Il est préférable par exemple de faire subir à la frédéricamycine A (II) une réduction catalytique en présence d'un catalyseur tel que le palladium sur support de charbon actif ou l'oxyde de platine en y insuflant de l'hydrogène gazeux On mène la réaction en faisant réagir l'intermédiaire réduit ainsi obtenu 15 avec un acide carboxylique représenté par exemple par la formule R 1-COOH dans laquelle R 1 a la même signification que cidessus, ou bien avec un de ses dérivés réactifs, conformément au procédé d'acylation habituel. Comme dérivé réactif de l'acide carboxylique, on peut utiliser un halogénure d'acide, un anhydride d'acide, un anhydride d'acide mixte, un ester activé ou un dérivé similaire Il est ici préférable de mener la réaction dans un solvant tel que la pyridine par exemple, à la température ambiante et pendant une à 48 heures, 25 en utilisant le dérivé de l'acide carboxylique dans un rapport molaire de 5 à 20 fois l'intermédiaire réduit sus-mentionné Il est également possible de faire réagir l'intermédiaire réduit directement avec l'acide carboxylique en utilisant un agent de combinaison 30 tel que le DCC. Procédé n 3: On peut préparer les tétrahydrofrédéricamycines A qui sont représentées par la formule (Ic) ci-dessus en faisant réagir la frédéricamycine A(II) avec un agent réducteur approprié, puis en oxydant ou acylant partiellement l'intermédiaire ainsi réduit La réduction se fait à l'aide d'un agent réducteur habituel. Il est préférable de faire subir à la frédéricamycine A(II) une réduction catalytique en présence d'un catalyseur tel que le palladium sur support de charbon actif ou l'oxyde de platine, en y insuf Iant de l'hy5 drogène gazeux On peut effectuer l'oxydation partielle en faisant subir, à l'intermédiaire réduit, après sa réduction, par exemple une oxydation à l'air ou un traitement équivalent dans un solvant approprié En revanche, on sait que l'on peut effectuer l'acylation 10 en faisant réagir le composé ainsi obtenu avec un acide carboxylique représenté par exemple par la formule R 1-COOH, dans laquelle R 1 a la même signification que cidessus, ou bien avec un de ses dérivés réactifs, conformément au procédé d'acylation habituel. 15 Comme dérivé réactif de l'acide carboxylique, on peut utiliser un halogénure d'acide, un anhydride d'acide, un anhydride d'acide mixte, un ester activé ou un dérivé équivalent Il est ici préférable de mener la réaction dans un solvant tel que la pyridine par exemple, à une 20 température de O à 4 C et pendant 2 à 48 heures, en utilisant le dérivé d'acide carboxylique dans un rapport molaire de 3 à 10 fois la tétrahydrofrédéricamycine A (R=H dans la formule en utilisant un agent de combinaison tel que le DCC. On a essayé l'activité anti-bactérienne et anti-tumorale de certains composés représentatifs de cette invention qui avaient été obtenus de la manière 30 décrite ci-dessus Les essais ont donné les résultats suivants: ( 1) Activité anti-bactérienne: 1 Le tableau 1 ci-dessous montre la concentration inhibitrice minimale (CIM) des composés repré35 sentatifs de cette invention vis à vis de divers micro-organismes Il y a lieu de noter que la CIM de la frédéricamycine A était de 100 gg/ml ou plus pour chacun des micro-organismes essayés. Conditions de culture des micro-organismes d'essai: Taille de l'inoculum: 1 x 106 cellules/ml. Dans le cas des bactéries, on cultivait chaque bactérie à 37 C pendant 18-20 heures sur une gélose de Mueller Hinton (produit de Difco Corp). Dans le cas des levures et des moisissures, on cultivait chaque micro-organisme à 28 C pendant 120 heures sur 10 une gélose de glucose-peptone. Tableau 1 Micro-organisme d'essai Bacillus subtilis ATCC 6633 Staphylococcus aureus FDA 209 P Staphylococcus aureus TERAGIMA Staphylococcus aureus Smith Staphylococcus epidermidis ATCC 20 12228 Sarcina lutea ATCC 9341 Streptococcus faecalis IFO 12964 Micrococcus lysodeikticus IFO 3333 Escherichia coli 0-1 25 Salmonella typhi TD Shigella flexneri 2 b Pseudomonas aeruginosa IFO 13736 Klebsiella pneumoniae ATCC 10031 Proteus vulgaris OXK Seratia marcescens NHL Candida albicans NHL 4019 Saccharomyces ruxii 6507 Aspergillus niger ATCC 9642 Aspergillus oryzae IFM 4014 Penicillium chrysogenum ATCC 6010 Trichophyton mentagrophytes QM 248 Microsporum gypseum IFO 8231 Concentration inhibitrice minimale CIM (gg/ml) Composé 1 Composé 18 0,39 50 12,5 6,25 25 0,10 0,78 0,39 1,56 0,78 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 0,39 3,12 1,56 0,78 0,39 0,39 25 25 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 Gibberella fujikuroi IAM 8046 > 100 Cladosporium fulvum IAM 5006 1,56 Fusarium moniliforme IAM 5062 50 Helmintsporium sesamum IAM 5012 0,78 Piricularia oryzae IAM 5016 0,05 0,78 Debaryomyces Kloecheri IFO 0015 100 > 100 2 La CIM de divers dérivés de la frédéricamycine A est indiquée dans le tableau 2 ci-dessous. 10 Les conditions de culture des microorganismes d'essai étaient les mêmes que celles utilisées cidessus pour la détermination de l'activité anti-bactérienne 1). Tableau 2 Micro-organisme d'essai (CIM = g/ml) Dérivé de la Staphylococcus Piricularia oryzae frédéricamycine epidermidis ATCC 12228 IAM 5016 A Composé 5 25 0,39 Composé 7 25 1,56 Composé 3 25 6,25 Composé 10 12,5 1, 56 2) Activités anti-tumorales: On a essayé, conformément aux modes opératoires suivants, les effets anti-tumoraux de certains dérivés de la frédéricamycine A vis à vis du carcinome d'Ehrlich, du fibrosarcome Meth A et de la leucémie des souris P 388 Les essais anti-tumoraux vis à vis 30 du carcinome d'Ehrlich et du fibrosarcome Meth A sont exprimés en pourcentages du temps de survie moyen des animaux d'essais et des animaux témoins Les effets anti-tumoraux sur P 388 sont exprimés par le pourcentage de temps de survie moyen des animaux d'essai 35 et des animaux témoins. Ces résultats sont donnés dans le tableau 3 ci-après. Modes opératoires d'expérience: (i) Carcinome d'Ehrlich: On a inoculé par la voie intrapéritonéale x 106 cellules tumorales à des souris ICR (, Clea Japan Inc) On a administré chaque composé d'essai par la voie intrapéritonéale une fois par jour pendant jours à partir du premier jour suivant l'inoculation de la tumeur. (ii) Fibrosarcome Meth A et leucémie des souris 10 P 388. On a inoculé par la voie intrapéritonéale 1 x 106 cellules tumorales à des souris CDF 1 (t, Charles River Japan Inc) On a administré chaque composé d'essai par la voie intrapéritonéale mune Lois par jour pendant 15 10 jours à partir du premier jour suivant l'inoculation de la tumeur. Composé d'essai Tableau 3 Posologie Carcimone (mg/kg/j) d'Ehrlich 0,125 147 0,25 267 0,5 295 1,0 Fibrosarcome P-388 Meth A 127 191 242 Composé 1 Composé 2 Composé 4 0,5 1,0 O 2,0 0,5 1,0 2,0 0,5 1,0 2,0 > 168 > 229 > 282 > 288 > 247 > 229 > 256 Composé 5 Composé d'essai Composé 7 Posologie 0,5 1,0 2,0 Carcimone 104 96 194 Fibrosarcome P-388 Composé 8 10 Composé 10 15 Composé 11 Composé 12 20 Composé 17 0,5 1,0 2,0 0,5 1,0 2,0 0,5 1,0 O 2,0 2,0 4,0 8,0 0,125 0,25 0,5 1,0 2,0 4,0 8,0 166 > 199 171 > 202 > 139 > 198 > 260 116 136 > 203 142 146 152 187 248 250 102 129 164 232 143 152 Composé 18 2,0 4,0 8,0 > 188 > 212 138 142 147 ( 3) Stabilité: On a essayé la stabilité de certains dérivés de la frédéricamycine A et de la frédéricamycine A elle- même, en solution aqueuse, conformément aux modes opératoires suivants Les résultats sont donnés dans le tableau 4 ci-après. Modes opératoires d'expérience: On a dissous séparément chacun des composés d'essais dans du diméthylsulfoxyde, puis on a dilué les solutions résultantes avec une solution saline physiologique pour ajuster les concentrations finales respectives des composés d'essai et de la frédérica10 mycine A à 10 gg/ml On a ensuite fait subir aux solutions d'essai ainsi préparées une chromatographie liquide à haute performance, après des laps de temps prédétermines, pour mesurer les pourcentages restants des composés d'essai. Tableau 4 Composé d'essai Pourcentage restant (%) Oh 3 h 6 h 24 h 48 h 72 h Composé 5 100 93,2 88,0 67,6 57,8 47,9 Composé 12 100 99,0 98,3 97,1 95,7 94,4 Composé 21 100 95,3 92,2 87, 3 80,5 74,8 Frédéricamycine A 100 78,9 64,0 38,1 27,3 18,4 L'invention va être décrite ci-après par les 25 exemples suivants: Exemple 1: On a dissous dans 20 ml de pyridine 0,54 g ( 1,0 mmole)de frédéricamycine A et à cette solution on a ajouté goutte à goutte en 30 mn environ 1,02 g ( 10 mmoles) 30 d'anhydride acétique dissous dans 5 ml de pyridine. On a agité le mélange résultant à O C pendant 3 heures. On a versé le mélange réactionnel liquide résultant dans ml d'acide chlorhydrique 2 N refroidi dans la glace, puis on a extrait à l'acétate d'éthyle On a lavé la couche à l'acétate d'éthyle successivement avec de l'acide chlorhydrique dilué puis avec de l'eau, et on l'a ensuite séchée sur sulfate de sodium anhydre. Apres filtration, on a chassé l'acétate d'éthyle par dispersion, et on a recristallisé le résidu dans un solvant mixte d'acétate d'éthyle et d'acide acétique S pour obtenir 0,52 g de diacétate de frédéricamycine A. (R' =-COCH 3 dans la formule(Ia), composé 1) sous la forme de cristaux bruns jaunâtres (rendement 83,5 %). Point de fusion: > 300 C Masse M+ m/z: 623 UV >x Et O Hnm(g): 393 ( 21, 200), 374 ( 32,100), max 359 ( 27,200), 333 ( 22,400), 319 ( 21,400), 305 ( 17,300), 258 ( 49,800), 235 ( 46,600). IR maxrm 1780, 1720, 1690, 1655, 1625. max-' (voir, Figure 1). 1 H-RMN ppm(CDC 13): 12; 02 (br s,l H), 10 32 (br,l H), 3/84 (s,3 H), 3; 21 (t,2 H), 2/45 (s,6 H), 1; 56 (d,3 H) Exemple 2: On a dissous dans 20 ml de pyridine, 0,54 g ( 1,0 mmole) de frédéricamycine A, et à cette solution on a ajouté goutte à goutte, en agitant, à O C, en 30 mn environ, 0,60 g ( 5,0 mmoles) de chlorure d'isovaléryle dissous dans 5 ml de pyridine On a ensuite agité le mélange résultant à O C pendant 5 heures On a versé le mélange réactionnel liquide résultant dans ml d'acide chlorhydrique 2 N refroidi dans la glace, puis on a extrait à l'acétale d'éthyle On a lavé la couche acétate d'éthyle successivement avec de l'acide chlorhydrique dilué puis avec de l'eau, et on l'a ensuite séchée sur du sulfate de sodium anhydride. Après filtration, on a chassé l'acétate d'éthyle par distillation sous pression réduite On a ajouté au résidu 100 ml d'éther pour faire cristalliser un précipité On a recueilli ce précipité par filtration, puis on l'a recristallisé dans un solvant mixte d'acétate d'éthyle, d'acide acétique et de méthanol pour obtenir 0,35 g de diisovalérate de frédéricamycine A. (R' = -COCH 2 CH(CH 3)2 dans la formule (Ia); composé 2), sous la forme de cristaux bruns jaunâtres (rendement: 49,5 %). Point de fusion: 260 C t 5 Masst M+ m/z: 707 Et O Ho UV max nm(E): 393 ( 23,800), 374 ( 33,700), 359 ( 28,500), 333 ( 23,500), 319 ( 22,800), 305 ( 19,900), 20 260 ( 50,600), 235 ( 44,000). IR Kma Brcm 1: 1775, 1720, 1690, 1655, 1620. maxc 1 H-RMN F ppm(CDC 13): 12 > 04 (br s,l H), 9 t 82 (br,1 H), 6176 (s,1 H), 6/64 (m,1 H), 6/25 (sl H)l, 6,11 (s,1 H), 6,2-5; 5 (m,3 H), 3,83 (s,3 H), 3,22 (t,2 H), 2,8-2 t 0 (m,8 H), 1,60 (d,3 H), 30 1,09 (d, 12 H). Exemple 3: On a dissous dans 25 ml de pyridine 0,54 g ( 1,0 mmole) de frédéricamycine A, et à cette solution 35 on a ajouté petit à petit, un agitant à O C, 2,54 g ( 10 mmoles) d'anhydride paraméthylbenzolque Apres avoir 14 2550791 agité le mélange résultant à O C pendant 5 heures, on l'a laissé reposer à O C pendant 1 jour On a ensuite versé le mélange réactionnel liquide résultant dans 200 ml d'acide chlorhydrique 2 N refroidi dans 5 la glace On a recueilli par filtration le précipité qui a cristallisé, on l'a lavé avec de l'eau puis on l'a séché On a lavé ce précipité deux fois avec 100 ml d'éther isopropylique très chaud, puis on l'a recristallisé dans un solvant mixte d'acétate d'éthyle, 10 d'acide acétique et de méthanol pour obtenir 0,61 g de di-p-méthylbenzoate de frédéricamycine A (R' = -C-G CH 3 dans la formule (Ia); composé 3), sous O la fôrme de cristaux bruns jaunâtres (rendement 78,7 %). 15 Point de fusion: > 300 C Masse M+ m/z: 775 -20 UV m Et O Hnm($): 393 ( 23,200), 374 359 ( 28,800), 333 ( 23,700), 319 ( 22,800), 305 ( 18,900), 254 ( 78,300). IRK Br__-i. IR rmacm 1: 1750, 1720, 1690, 1660, 1625. max 1 H- 2 f 39 ( 9,6 H), 1/68 (d,3 H). Exemples 4-11: De la même façon que dans les exemples 1 à 3, on a obtenu les composés suivants En l'occurence, les composés seront identifiés par le substituant R' de la formule (Ia). Composé 4 R' = -C-CH 2 CH 3 II o Point de fusion: > 300 C Aspect: cristaux bruns jaunâtres. Masse M+ m/z: 651 20 25 30 35 _ Et UV >max nm(f): 393 ( 22,100), 374 ( 31,700), maxn 359 ( 26,200), 333 ( 21,900), 319 ( 21,200), 305 ( 17,700), 258 ( 51,200), 235 ( 46,400). K Br IR Omaxcm: 1775, 1720, 1690, 1655, 1620. 1 H-RMN e ppm(CDC 13): 12 01 (br s,l H), 9/87 (br,1 H), 6/79 (s,l H), 6/64 (m,1 H), 6/30 (s,l H), 6/11 (s,1 H), 6,3-5,6 (m,3 H), 3; 87 (s,3 H), 3125 (t,2 H), 2 F 81 (q,4 H), 2 149 (t,2 H), 1/.70 (d,3 H), 1 t 33 (t,6 H). Composé 5 R' =-C-(CH 2)4-CH 3 I o Point de fusion: 162-164 C Aspect: cristaux bruns jaunâtres Masse M+ m/z: 735 UV >Et O Hnm():393 ( 23,300), 374 ( 34,900), max 359 ( 29,200), 333 ( 24,200), 319 ( 23,300), 305 ( 19,000), 258 ( 53,800), 235 ( 50,100). IRK Br IR maxcm 1775, 1720, 1690, 1655, 1620 H-RMN e ppm(CDC 13): 12)04 (s,1 H), 10,06 (br s,1 H), 6; 74 (s,l H), 6; 62 (m,1 H), 6; 24 (s,l H), 10 6; 12 (s,1 H), 6,1-5; 5 (m,3 H), 3/86 (s,3 H), 3 r 22 (t,2 H), 2; 77 (t,4 H), 2147 (t,2 H), 1; 59 (d,3 H), 2 0-1 11 (m,12 H), 0; 90 (t,6 H). Composé 6 R' -C-(CH 2)8-CH O Point de fusion: 120-1220 C Aspect: cristaux bruns jaunâtres Masse M+ m/z: 847 Et O Ho UV Amax nm 1151 (d,3 H), 2, 10-1;l(m,28 H), 0,84 (t,6 H). Composé 7 R' = -C-(CH 2)10-CH 3 O Point de fusion: 112-114 C Aspect: cristaux bruns jaunâtres. Masst M+ m/z: 903 Et OH UV Aax nm( ): 393 ( 23,100), 374 ( 34,100), 10 ax 359 ( 28,600), 333 ( 23,500), 319 ( 22,200), 305 ( 18,200), 260 ( 53,500), 235 ( 49,500). 15 IR QK Br-cm-1 1775, 1720, 1690, 1655, 1625. max H I{N l ppm(CDC 13): 12 02 (br,l H), 1016 (br,l H), 6/74 (s,l H), 6163 (m,l H), 6/24 (s,l H), 6,11 (s,l H), 20 6 11-55 (m,3 H), 3 85 (s,3 H) , 3/22 (t,2 H), 2 t 76 (t,4 H), 2 j 47 (t,2 H), 1/58 (d,3 H), 2,0-1,0 (m,36 H), 0,86 (t,6 H). Composé 8 R' =-Col O Point de fusion: > 300 C Aspect: cristaux bruns jaunâtres Masse M+ m/z: 747 UV X Et OH m(): 393 ( 24,000), 374 ( 35,400), 35 max 359 ( 29,700), 333 ( 24,700), 319 ( 24,100), 305 ( 20,000), 255 ( 64,900), 237 ( 70,000). IRQK Br -1 IR maxcm 1 1750, 1720, 1690, 1655, 1625. 1 H-4 MN J ppm(CDC 13): 12 08 (br,l H), 9; 23 (br,l H), 8; 24 (br d,4 H), 7 7-7,3 (m,6 H), 6,74 (s,1 H), 6/60 (m,1 H), 6,25 (s,l H), 6 111 (s,l H), 6; 1-5,6 (m,3 H), 3; 81 (s,3 H), 10 3 t 19 (t,2 H), 2 p 49 (t,2 H), lf 73 (d,3 H). Composé 9 R' = -C CH(CH 3)2 O Point de fusion: > 300 C Aspect: cristaux bruns jaunâtres Masst M+ m/z: 831 Et OH UV X maxnm( IR Q maxcm K 1 1750, 1720, 1690, 1660, 1625. H- RMN y ppm(CDC 13): 12,08 (br,1 H), 9,66 (br,1 H), 8 f 16 (d,4 H), 7 f 32 (d,4 H), 6 t 70 (s,1 H), 6,61 (m,1 H)} 30 G,06 t 22,1 H), 6 t 10, l H), 6,1-St 6 (m, 3 H), 3,80 (s,3 H), 3,16 (t,2 H), 2,95 (m,2 H), 2,48 (t,2 H), 1,66 (d,3 H), 1/26 (d,12 H). Composé 10 R' = -C OCH 3 o Point de fusion: > 300 C Aspect: cristaux bruns jaunâtres Mass M+ m/z: 807 Et OH UV ax, nm(r): 393 ( 23,100), 374 ( 33,600), 359 ( 28,300), 333 ( 23,600), 319 ( 22,800), 304 ( 20,700),.' 263 ( 85,700). K Br IR cmax Cm: 1740, 1720, 1690, 1655, 1620, 1605 H-RMN ppm(CDC 13): 12 04 (br,1 H), 9786 (br,1 H), 8,19 (d,4 H), 6,95 (d,4 H), 6 67 (s,1 H), 6, 62 (m,1 H), 20 6120 (s,1 H), 6 > 09 (s,l H), 6 t 1-5 p 6 (m,3 H), 3 t 82 (s,6 H), 3 t 79 (s,3 H), 3 f 15 (t,2 H); 2,47 (t,2 H), 1/61 (d,3 H) . Composé 11 R' = -C Cl o Point de fusion: > 300 C Aspect: cristaux bruns jaunâtres 30 Masse M+ m/z: 815, 817, 819. ÀEt OH UV Xmax nm(i): 393 ( 24,300), 374 ( 36,200), max 359 ( 30,800), 333 ( 25,800), 319 ( 24,900), 305 ( 20,800), 253 ( 87,200). IR QK Br -1 I Rmaxcm: 1750, 1720, 1690, 1655, 1625. 1 H-RMN ppm(CDC 13): 12; 10 (br,1 H), 9/40 (br,1 H), 8,17 (d,4 H), 10 7745 (d,4 H), 6/74 (s,l H), 6; 60 (m,1 H), 6 24 (s,1 H), 6 10 (s,l H), 6; 1-5; 6 (m,3 H), 15 | 3,82 (s,3 H), 3 t 17 (t,2 H), 2; 48 (t,2 H), l? 69 (d,3 H). Exemple 12: On a dissous dans 30 ml de tétrahydrofuranne 0,50 g de frédéricamycine A, puis on a ajouté 0,05 g de palladium à 10 % sur charbon On a fait subir à la frédéricamycine A, en l'agitant,une réduction catalytique 25 à la température ambiante Après que la réaction se fut poursuivie pendant 10 heures, on a ajouté 10 ml de pyridine et 1 ml d'anhydride acétique au mélange réactionnel liquide, sous un courant gazeux d'azote On a agité le mélange résultant à la température ambiante 30 pendant encore 1 heure On a filtré le mélange réactionnel liquide résultant et on a ajouté le filtrat, en agitant, à du n-hexane refroidi dans la glace On a recueilli par filtration le précipité résultant On a recristallisé ce précipité dans un solvant mixte de 35 chloroforme et d'acétate d'éthyle pour obtenir 0,53 g de leucotétraacétyltétrahydrofrédéricamycine A 21 2550791 (R' = -COCH 3 dans la formule (Ib); composé 12), sous la forme de cristaux jaunes (rendement 80 %). Point de fusion: 273 C (décomposé) UV >dioxanenm(ú): 241 ( 51,300), 287 ( 68,400), max 338 ( 17,100), 352 ( 20,000 >. K Br IR Qmaxcm 1 1780, 1740, 1715, 1660, 1650, 1620. 1 H-RMN J ppm(DMSO d-6): 10 12 96 (s,1 H), 1152 (s,l H), 7 87 (s,1 H), 6; 90 (s,l H), 6735 (s,IH), 3 96 (s,1 H),, 3 16 (t,2 H), 2/5 (m,4 H), 2 P 44 (s,12 H), 1,8-11 l(m,6 H), 0,80 (t,3 H). Massp M+ m/z: 713 Anal Calc po Or C 38 H 35 NO 13: C, 63)95; H, 4 ? 94; N, 1 t 96 Trouvé C, 20 63 f 93; H, 4 t 95; N, 1,93. Exemples 13-16 De la même façon que dans l'exemple 12, on a obtenu les composés suivants: Ces composés seront 25 identifiés par le substituant R' dans la formule Ib. Composé 13 R' = -C-CH 2 CH 3 i o Point de fusion: 255-256 C 30 Aspect: cristaux jaunes dioxane UV > M xanex nm( IR Kmaxcm: 1780, 1745, 1715, 1660, 1655, 1620. (voir Figure 3). 1 H-RMN ppm(CDC 13): 12; 02 (s,l H), 1048 (br s,l H), 7; 15 (s,l H), 10 6 f,75 (s,1 H), 6,14 (s,l H), 3,89 (s,3 H), 3; 21 (t,2 H), 2,67 (q,8 H), 2 t 42 (m,4 H), 1,7-1,1 (m,6 H), 1,31 (t,12 H), 0,73 (t,3 H). (voir Figure 4). 15 MassM+ m/z: 769. Composé 14 R' = -C-4-CH 2 4 CH 3 o l{ 3 Point de fusion: 175-176 C Aspect: cristaux jaunes dioxane UV di M xanxm(ú): 238 ( 52,700), 287 ( 65,600), 25 338 ( 16,100), 352 ( 19,100). IR)K Brcm-1: 1780, 1745, 1715, 1660, 1655, 1620. max 1 H-RMN t ppm(CDC 13): 11/98 (s,l H), 10,44 (br s,l H), 7/13 (s,l H), 30 6175 (s,1 H), 614 (s,1 l H), 3,89 (s,3 H), 3; 21 (t,2 H), 2/63 (t,8 H), 2 t 43 (m,4 H), 2,0-0,7 (m,42 H), 0/72 (t,3 H). Composé 15 R'=R o Point de fusion: 229-230 C Aspect: cristaux jaunes UV Xdioxanenm(): 236 ( 82, 200), 287 ( 69,800), max 339 ( 16,900), 352 ( 20,300). K Br IR maxcm 1: 1750, 1715, 1660, 1650, 1620. 1 H- RMN ppm(CDC 13): 12100 (br s,1 H), 9/70 (b,1 H), 7 t 89 (d,8 H), 73-3 (s,1 H), 7/06 (m,12 H), 6/63 (s,1 H), 6,07 (s,1 H), 3 t 90 (s,3 H), 3 110 (t,2 H), 15 2,41 (m,4 H), 1; 7-101 m,6 H), 0,79 (t,3 H). Composé 16 R' = -C c 1 o It O O Point de fusion: > 300 C Aspect: cristaux jaunes dioxane UV >dmax nm(ú): 242 ( 101,400), 286 ( 73,500), 25 338 ( 17,800), 352 IR ma Bm À 1750, 1720, 1660, 1650, 1620. 1 H-MN ppm(CDC 13): 12; 06 (br,l H), 9 ? 12 (br,l H), 7/81 (d,8 H), 30 7 34 (s,1 H), 7/11 (d,8 H), 6 t 68 (s,l H), 6 10 (s,l H), 3 93 (s,3 H), 3 14 (t,2 H), 2,43 (m,4 H), 1,7-1; 1 (m,6 H), 0; 82 (t,3 H). Exemple 17: On a dissous dans 30 ml de tétrahydrofuranne 0,50 g de frédéricamycine A, puis on a ajouté 0,07 g de palladium à 10 % sur charbon On a ensuite fait subir 24 2550791 à la frédéricamycine A, en agitant,une réduction catalytique à la température ambiante Après que la réaction se fut poursuivie pendant 10 heures, on a repris le produit jaune cristallisé résultant de la réduction dans un solvant mixte de chloroforme et de méthanol On a séparé par filtration le palladium sur charbon, et on a ajouté au filtrat une petite quantité de diméthylsulfoxyde On a ensuite agité le mélange résultant pendant trois heures à la température ambiante On a recueilli par filtration les cristaux rouges déposés puis on les a recristallisés dans un solvant mixte de chloroforme et de méthanol pour obtenir 0,29 g de tétrahydrofrédéricamycine A ( R = H dans la formule (Ic); composé 17), sous 15 la forme de cristaux rouges (rendement 60 %). Point de fusion: > 300 C d U Vixane nm( 298 ( 18,900), 322 ( 9,500), 337 ( 11,400), 353 ( 10,600), 507 ( 10,600). IR Q)K Brcm 1 1750, 1720, 1650, 1610. *max C( voir Figure 5). 1 H-RMN ppmlCDC 13-CF 3 COOD( 10:l)l: 6 r 96 (s,1 H), 6 t 44 (s,1 H), 6 t 32 (s,1 l H), 30 3196 (s,3 H), 3,32 (t,2 H), 2; 55 (t,4 H), 1.8-1,1 (m,6 H), 0188 (t,3 H). (voir Figure 6). Masst M+ m/z: 543 Anal calc pour C 30 H 25 NO 9 (p m. 543 t 53): C, 66,29; H, 4,63; N, 2,58. T-rouvé: C, 66,11,; H, 4,65; N, 2,57. Exemple 18 On a dissous dans 6 ml de pyridine 0,25 g de tétrahydrofrédéricamycine A, puis on a ajouté 0,5 ml d'anhydride acétique On a agité le mélange à 0-4 C pendant une heure On a ajouté le mélange réactionnel liquide résultant, en agitant à du n-hexane refroidi dans la glace On a recueilli par filtration le précipité résultant et on l'a séché On a ensuite recristallisé le précipité dans un solvant mixte d'acétate d'éthyle 10 et d'acide acétique pour obtenir 0,25 g de diacétyl -C -CH tétrahydrofrédéricamycine A (R = -t 3 dans la O formule (Ic); composé 18), sous la forme de cristaux de couleur jaune orangé pâle (rendement 90 %). Point de fusion: 265 C (décomposition) 15 dioxane UV >max nm(f): 238 ( 67,700), 323 (sh), 338 ( 15,700), 352 ( 17,600). IR Krcm: 1785, 1760, 1725, 1690, 1660, 1620. IR max Cm ( voir Figure 7). 1 H-RMN J ppm(CDC 13): 12,06 (s,1 H), 1027 (s,1 H), 6,75 (s,1 H), 25 6,14 (s,1 H), 6,10 (s,l H), 3 > 85 (s,3 H), 3; 25 (t,2 H), 2,,50 (m,4 H), 2,44 (s,6 H), 1,8-1,1 (m,6 H), 0,76 (t,3 H). ( voir Figure 8). Masse M+ m/z: 627 Anal Calc pour C 34 H 29 N Oll: C, 65.07; H, 4 66; N, 2 23 trouvé: C, 65.11; H, 4 65; N, 2 18. 35 Exemples 19-23: De la même manière que dans l'exemple 18, on a obtenu les composés suivants Ces composés seront identifiés par le substituant R de la formule (Ic). Composé 19 R = -C-CH 2 Ch 3 o n Point de fusion: 278-179 C Aspect: cristaux de couleur jaune orangé pale UV di Mxannm(t): 237 ( 59,500), 338 ( 13,800), ç 352 ( 15,100). K Br -1 IR maxcm 1 1780, 1760, 1725, 1690, 1660, 1625. maxct 1 H-RMN: >ppm(CDC 13): 12; 08 (s,l H), 10; 20 (br s,1 H), 6/81 (s,l H), 6120 (s,1 H), 615 (s,1 H), 3,90 (s,3 H), 3; 28 (t,2 H), 2,83 (g 4 H), 2,45 (m,4 H), 1,7-1 lrl(m,6 H), 1,35 (t,6 H), O,77 (t,3 H). Mass&M+ m/z: 655. 25 Composé 20 R =-C CH JH 3 ol 2 Point de fusion: 254-255 C Aspect: cristaux de couleur jaune orangé pale dioxane UV max nm( ): 237 ( 66,800), 339 ( 14,600), 353 ( 16,200) IR Q ma Bm 1: 1780, 1760, 1725, 1690, 1660, 1625. max M 1 H-RMN J ppm(CDC 13) : 12/07 (s,1 H), 10,74 (s,1 H), 6,73 (s,1 H), 6 14 (s,2 H), 3 f 88 (s,3 H) , 3124 (t,3 H), 10 2,79 (t,4 H), 2,44 (m,4 H), 2,0-1,0 O(m,18 H), 0 Y 91 (t,6 H), O; 73 (t,3 H). Masse-M+ m/z: 739, Composé 21 R = -C-&CH 2 ft H 3 O i 13 Point de fusion: 216-217 C Aspect: cristaux de couleur jaune orangé pâle 20 UV Xdioxanenm(f)p 237 ( 63,000), 339 ( 13,700), max 353 ( 15,100). IR K Bcm 1 1780, 1760, 1725, 1690, 1655, 1625. max 1 H-RMN J ppm(CDC 13): 12,13 (s,1 H), 10,08 (br 1 H), 6,79 (s,1 H), 6, 19 (s,1 H), 6,13 (s,1 H), 3,88 (s,3 H), 3,27 (t,2 H), 2,78 (t,4 H), 2,45 (m,4 H), 30 2,0-0; 9 (m,42 H), O 087 (t,6 H), 0,78 (t,3 H). Composé 22 R =-Co Point de fusion: 290-292 C Aspect: cristaux de couleur jaune orangé pale U Vmax dioxanm(): 239 ( 79,700), 338 ( 14,200), Max 352 ( 15,200). K Br IR 9 maxcm-l: 1755, 1725, 1690, 1655, 1625. 10 1 H-RMN ppm(CDC 13): 12; 10 (br s,ÀH), 8,70 (br,l H), 8,22 (d,4 H), 7,56 (m,6 H), 6,74 (s,j H), 6/14 (s,l H), 610 (s,l H), 3 t 84 (s,3 H), 3,22 (t,2 H), 15 2 t 45 (m,4 H), 1; 7-1,O(m,6 H), O; 83 (t,3 H). Mass-M+ m/z: 751. Composé 23 R = -C Oci O Point de fusion: 289-290 C Aspect: cristaux de couleur jaune orangé pale UV Xdi xanenm(f E): 245 ( 93,900), 338 ( 15,000) , max 352 ( 16,400). v K Br IR Jmaxcm-1: 1755, 1725, 1690, 1655, 1625. 30 1 H_-RMN J ppm(CDC 13): 12,16 (br,1 H)# 10,20 (br,1 H), 8; 18 (d,4 H), 7 e 47 (d,4 H), 6,73 (s,1 H), 6,14 (s,2 H), 3,84 (s,3 H), 3,22 (t,2 H), 2/45 (m,4 H), 35 1,7-1 Exemple de référence: On a inoculé Streptomyces SPS 9816 (FRI Dépôt FERM BP 561, date de dépôt: 26 janvier 1983) micro-organisme producteur de frédéricamycine A, à un milieu de culture liquide contenant 4,0 % d'amidon soluble, 4,0 % de glucose, 1,0 % de Soyton (Difco Corp) 1,0 % d'extrait de levure, 0,25 % de chlorure de sodium, 0,32 % de carbonate de calcium, 0,0005 % de sulfate de cuivre, 0,0005 % de chlorure de manganèse et 0,005 % de sulfate de zinc (p H 7,0) On a cultivé le micro-organisme en secouant à 27 C pendant deux jours pour préparer une culture d'ensemencement. Dans un ballon de Sakaguchi ayant un volume interne de 500 ml, on a introduit 120 ml d'un milieu de culture 15 liquide ayant la même composition que celle utilisée ci-dessus, auquel on a inoculé 0,6 ml de la culture d'ensemencement prépaoée ci-dessus Sur une machine de culture à secouage alternatif, on a cultivé la culture d'ensemencement pendant 7 jours dans les 20 conditions suivantes: Amplitude: 9 cm Vitesse de révolution: 100 t/mn Température de culture: 27 C. La culture une fois achevée, on a ajouté de 25 l'acide chlorhydrique dilué à 10 litres de la culture liquide résultante pour ajuster son p H à 2,0 On a ensuite ajouté à la culture liquide 20 litres d'un solvant mixte 1:1 de méthanol et de chloroforme. On a agité soigneusement le mélange résultant pour extraire la culture avec le solvant mixte On a répété deux fois ce processus On a recueilli les couches chloroformiques résultantes et on les a concentrées sous pression réduite On a lavé le concentré résultant avec une petite quantité de N hexane puis on l'a séché 35 pour obtenir 8,1 g d'une poudre rouge On a ensuite dissous cette poudre rouge dans du chloroforme contenant 1 % d'acide acétique On a ensuite fait passer la solution préparée dans une colonne qui contenait 800 g de "Kiesel Gel 60 " (Produit de Merck & Co Inc) et que l'on avait garnie à l'avance de chloroforme contenant 1 % d'acide acétique On a ensuite élué la colonne avec le même solvant On a recueilli les fractions de frédéricamycine A, et on a concentré l'éluat sous pression réduite On a laissé reposer le concentré dans un endroit froid, ce qui a permis à environ 5,0 g de frédéricamycine A de se déposer 10 sous forme de fins cristaux d'une couleur violet foncé. 2550791 31 RÉPUBLIQUE FRAN AISE 2550792 INSTITUT NATIONAL DE LA PROPRIÉTÉ INDUSTRIELLE PARIS Ce numéro n'a donné lieu à aucune publication N G 3 o N L REVENDICATIONS 1 Dérivé de la frédéricamycine A, caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale suivante (I): A (I) dans laquelle R désigne un atome d'hydrogène ou un radical acyle, A désigne un radical de formule OCH 3 Ou: H et les liaisons en traits interrompus 10 O 4 o RO sont facultatives, avec cette réserve que, lorsque A est un radical de formule OCH 3 ou que des liaisons RO 6 OR en traits interrompus sont présentes, R est autre qu'un 15 atome d'hydrogène. 2 Dérivé diacylé de la frédéricamycine A,caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale suivante (Ia): 25 OCH 3 R f O (Ia) -o dans laquelle R' désigne un radical acyle. 3 Leucotétraacyltétrahydrofrédéricamycine A, 30 caractérisé en ce qu il répond à la formule générale suivante (Ib): R 'O. OCR 3 3 - R (Ib) OR ' OR ' dans laquelle R' désigne un radical acyle. 4 Dérivé de la tétrahydrofrédéricamycine A, caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale suivante (Ic): RO,, oc H 3 OH' M l (Ic) J 1 I l dans laquelle R désigne un atome d'hydrogène ou un radical acyle -