FR 2554346 A1 19850510 FR 8416859 A 19841106 ENSEMBLE ET PROCEDE POUR L'ADMINISTRATION DE GANGLIOSIDES ET DE LEURS DERIVES PAR INHALATION ET COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES LES CONTENANT La présente invention concerne un ensemble ou kit et un procédé d'administration de gangliosides ou de dérivés de gangliosides par inhalation à des fins thérapeutiques et des compositions pharmaceutiques convenant a cette administration. Les préparations pharmaceutiques selon la présente invention sont utilisées pour traiter des désordres du système nerveux résultant d'accidents ou de maladies qui ont endommagé d'une certaine façon le tissu nerveux. Les gangliosides sont un groupe de glycosphingolipides et ils ont une structure comportant une partie hydrate de carbone à laquelle sont liés un radical céramnide et un radical acide sialique. La portion hydrate de carbone comprend au moins un radical galactose ou glucose et au moins un radical N-acétylglucosamine ou N-acétylgalactosamine. La structure générale d'un ganglioside peut ainsi être représentee par la formule suivante: -- une mole de céramide, - au moins une mole de galactose ou de glucose une mole d'un acide sialique - au moins une mole de N-acetylglu- cosamine ou de N-acétylgalacto- - samnine dans laquelle tous les radicaux sont lies par une liaison glucosidique. De nombreux gangliosides ont été identifiés et on a trouvé qu'ils etaient particulièrement abondants dans le tissu nerveux, notamment dans les tissus du cerveau. Diverses études ont montré que les plus impor- tants des acides sialiques que l'on rencontrait dans les gangliosides étaient l'acide N-acetylneuraminique (NANA) et à un moindre degré l'acide N-glycolylneuraminique. Parmi les nombreux gangliosides qui ont été identifiés, les ganqliosides suivants, désignés par leurs symboles internationaux ont été trouvés en quantité significative dans des mélanges de gangliosides extraits des tissus du cerveau des bovins. GDIb (16%) Gal(l3)GalNAC(l4)Gal(1B4)Glc(ll) Céramide c:) NANA 0 NANA GTlb (19%) Gal(13)GalNAC(14)Gal(14)Glc(11) Céramide Ct) Ct) NANA NANA 8 NANA GM1 (21%) Gal(13)GalNAC(1l4)Gal-(14)Glc(ll) Céramide C) NANA GDla (40%) Gal(1+3) GalNAC(1+4)Gal(1+4)Glc(1+1) Céramide /3 3 t) t2) NANA NANA dans ces formules: Glc représente le glucose, GalNAC représente la Nacetylgalactosamine, 2554346' Gal représente le galactose, NANA représente l'acide N-acétylneuraminique, et les pourcentages entre parenthèses indiquent la quantité de chaque ganglioside trouvé dans le mélange de gangliosides extrait du tissu du cerveau des bovins. On sait que les gangliosides jouent un rôle important dans le système nerveux et l'on a récemment démontré que les gangliosides étaient utiles dans le traitement des désordres du système nerveux périphérique et des pathologies du système nerveux central (Adv. Exp. Biol. 71, 275 (1976)); Brain Res. 197, 236, (1980); Acta Otoryngol. 92, 433-437 (1981); Muscle et Nerve 2, 382-389 (1979); Neuroscience 8, (3) 417-429 (1983); Neuroscience Letters, 34, 1-5 (1982); Eur. J. Pharmacol. , 243-245 (1982); Experientia 37, 301-302 (1981); Muscle et Nerve 5, 107110 (1982); Neurochem. Int. 4, (2-3) 167-174 (1982); Neuroscience 7, 495-499 (1982); Muscle et Nerve 5, 351-356 (1982); Acta Diabetol. Lat. , (3) 265-276 (1983); Rev. Clin. Esp. 168 (3) 193-198 (1983); Brain Res. 261, 163-166 (1983). L'action thérapeutique des gangliosides apparaît consister princi- palement dans la stimulation des phénomènes de bourgeonnement dans le tissu nerveux et dans l'activation des enzymes de membranes impliqués dans la conduction des stimuli nerveux, tels que l'enzyme (Na, K) ATPase (Brain Res., 197, 236 (1980); J. of Neurochem., 37, 350 (1981)). Le bourgeonnement nerveux stimulé par les gangliosides favorise la restauration du fonctionnement du tissu nerveux endommagé. En outre, il a été récemment établi par la demanderesse que quelques dérivés de ganglioside sont plus actifs que les gangliosides eux-mêmes pour favoriser le bourgeonnement des neurones et pour activer les enzymes de membranes impliqués dans la conduction des stimuli nerveux, tels que la (Na+, K+) ATPase. En particulier, il a été établi que les dérivés d'esters internes des gangliosides sont spécialement actifs dans le traitement des désordres du système nerveux et qu'ils sont plus actifs que les gangliosides apparentés initiaux. Les dérivés esters internes des gangliosides se forment par réaction entre le groupe carboxylique d'un radical acide sialique avec un groupe hydroxyl de l'un des radicaux hydrate de carbone ou d'un autre acide sialique voisin au sein de la même molécule de gangliosides (J. of Neurochemistry, 34, 1351 (1980); Bull. Mol. Biol. Med. 3, 170 (1978)). 2554346' A titre d'exemple, un dérivé d'ester interne possible d'un gan- glioside pourrait être représenté par la structure suivante: R 0H O I il-IH G! CN C (I) 'II3 CH ! O Cj0 ciO ! H 1, j-O I\,-H l'acide oléique, stéarique ou linoléique. Le dérivé de ganglioside d'ester interne (I) est un exemple d'un dérivé dans lequel le groupe carboxylique de l'acide sialique est un ester lié à un groupe hydroxyle de l'un des radicaux hydrate de carbone, notamment de galactose. La formation de la liaison ester interne, en même temps que de la liaison glucosidique normale entre l'acide sialique et le radical hydrate de carbone crée un cycle lactonique, typiquement à 2554346 ' ou 6 éléments, caractéristique de la structure des dérivés d'esters internes de gangliosides. Tandis que l'on a montré la formule (I) à titre d'exemple, il est à noter que d'autres cycles lactoniques possé- dant des structures cycliques à 5 éléments ou plus pourraient se former en tant que liaison ester du groupe de carboxyle de l'acide sialique avec le groupe hydroxyle d'un radical hydrate de carbone. Comme noté ci-dessus, les dérivés d'esters internes de ganglio- sides peuvent aussi se former lorsque le groupe carboxyle d'un ester d'acide sialique se lie à un acide sialique voisin auquel il est lié par une liaison glucosidique dans le ganglioside à parenté initial. Une telle structure pourrait être représentée par la formule suivante: c (II) H î O' HC-H O),C(5 F I'- e n.; la. 0ol,-- - C N HO -. C!O O, C-'DH i dans laquelle: R2 représente le radical hydrate de carbone qui est lié par une liaison glucosidique au radical acide sialique. Un autre dérivé de ganglioside ester interne possible pourrait être représenté par la formule suivante: 2554346' C.. OHH ( III \ -/ 0À, 0 CH--C-N /; | I Ol i k a CH3-C-Ni/,; K I 0 H -ic--s HO H ' ' dans laquelle: R3 représente le radical hydrate de carbone auquel l'acide sialique voisin est lié par une liaison ester. La formu- le (III) représente alors un dérivé d'ester interne de ganglioside dans lequel un acide sialique est lié par une liaison avec ester à un acide sialique voisin qui est lui-même lié par une liaison ester à un radical hydrate de carbone. Il est alors évident que de nombreuses variations des dérivés décrits ci-dessus peuvent se former de telle sorte que les dérivés d'esters internes de gangliosides sont généralement formés d'une portion hydrate de carbone, d'au moins un céramide-et d'au moins un radical acide sialique dans lequel un ou plusieurs des acides sialiques sont liés par une liaison ester à un radical hydrate de carbone et/ou un ou plusieurs des acides sialiques sont liés par une liaison ester à un acide sialique voisin. De nombreux dérivés d'esters internes de gangliosides sont ainsi possibles parmi lesquels ceux décrits ci-dessus sont donnés seulement à titre d'exemple. 2554346' Quelques méthodes de l'art antérieur pour la préparation des dérivés de gangliosides d'esters internes comprennent les méthodes suivantes: 1.- la formation des esters internes en laissant simplement séjourner les gangliosides dans une solution d'acide acétique ou d'acide trichloroacétique (Sphingolipides, Sphingolipidoses et désordres associés, Adv. Exp. Med. Biol. 19, 95 (1972); J. neurochem. 28, 1133 (1977)). 2.- la réaction d'un carbodiimide soluble dans l'eau avec des ganglio- sides dans un milieu aqueux (Carbohydr. Res. 41, 344 (1975)). 3.- selon le procédé de la demanderesse, des dérivés d'esters internes de gangliosides sont préparés en faison réagir les gangliosides avec un réactif de lactonisation dans un solvant organique non aqueux dans des conditions anhydres. Des solvants organiques convenables à utiliser dans la réaction comprennent: diméthylsul- foxyde (DMSO), diméthylformamide (DMF), sulfolane, tétrahydrofu- ranne, diméthoxyéthane et pyridine ou leurs mélanges. Des réactifs de lactonisation convenables comprennent des carbodiimides solu- bles dans des solvants organiques tels que: dicyclohexylcarbodii- mide, benzylisopropylcarbodiimide et benzyléthylcarbodiimide, des sels de 2-chiloro-1-méthyl-pyridinium, éthoxyacéthylène et réactif de Woodward (N-éthyl-5-phényllisoxazolium-3'-sulfonate). Les dérivés d'esters internes de gangliosides peuvent être utili- sés comme médicaments pour la thérapie de différentes pathologies du système nerveux central, particulièrement des désordres du système nerveux périphérique et du système nerveux central. Plus particulière- mnient, les dérivés d'esters internes de gangliosides peuvent être utili- sés dans le traitement des désordres du système nerveux périphérique dus à des causes traumatiques, compressives, dégénératives ou toxiques lorsque la stimulation de la régénération des nerfs et de la récupéra- tion de la fonction neuromusculaire sont nécessaires et dans les désor- dres du système nerveux central dûs à des causes traumatiques, anoxi- ques, dégénératives ou toxiques lorsque la stimulation du bourgeonnement des neurones est nécessaire pour la récupération fonctionnelle. Ces désordres ont été, jusqu'à maintenant, traités par utilisation de gangliosides; cependant, les dérivés esters internes de gangliosides ont une activité beaucoup plus grande que celle des gangliosides eux-mêmes. 2554346 ' Il a été déterminé que des gangliosides et leurs dérivés agissent par voie systémique. Par conséquent, les composés étudiés ci-dessus, soit en tant que composés gangliosides uniques, soit en tant que dérivés d'esters internes de gangliosides uniques en tant que tels ou sous la forme de sels pharmaceutiquement acceptables, ou d'un mélange de gang- liosides ou de leurs dérivés peuvent être administrés par voie systémi- que en vue d'obtenir un effet thérapeutique. Cette administration peut avoir lieu sous la forme d'une préparation pharmaceutique destinée à l'administration et peut être administrée à l'homme ou aux animaux par voies intra-musculaire, sous-cutanée ou intra-dermique, au moyen d'in- jection ou au moyen de perfusions intra-veineuse. Cependant, il n'était pas connu jusqu'à maintenant que ces composés étaient susceptibles d'atteindre le flux sanguin en passant par les membranes biologiques du système respiratoire. L'objet de la présente est la découverte que les gangliosides, en tant que tels ou sous la forme de leurs sels pharmaceutiquement accepta- bles, aussi bien que les dérivés de gangliosides, soit seuls, soit en mélanges, peuvent être administrés par inhalation et que ces composés sont facilement absorbés par cette voie qui leur permet d'atteindre le flux sanguin. La présente invention concerne spécifiquement la découverte inattendue que les gangliosides et leurs dérivés d'esters internes peuvent être efficacement et facilement administrés par inhalation. Pour cette administration par inhalation, les composés sont utilisés sous la forme de compositions pharmaceutiques telles que celles étudiées ci- dessous. Selon l'invention, un dispositif de pulvérisation peut être utilisé pour administrer les compositions pharmaceutiques sous la forme de solutions aqueuses. Un tel dispositif doit comprendre une bouteille souple ou une bouteille à pompe de pulvérisation adaptée à l'utilisation comme pulvérisation nasale pour administration par inhalation de la composition. Ou encore, des flacons de pulvérisation sous pression peuvent être utilisés pour administrer la composition sous la forme d'une suspension ou de solution des composants actifs en même temps que des propulseurs liquides classiques. En outre, on peut utiliser un ensemble ou dispositif d'inhalation en poudre par lequel la composition pharmaceutique est préparée sous la forme de poudre dans un capsule que l'on peut briser. Pour l'administration de la poudre, la capsule est zs2554346 brisée ou on lui pratique un trou avec, par exemple, un percuteur ou à la main et la poudre de la capsule est absorbée par inhalation. Les compositions pour cette inhalation de la poudre comprennent un composé de ganglioside ou un dérivé d'ester interne de ganglioside sous une forme solide mélangé avec des excipients pharmaceutiquement acceptables convenables ou des diluants tels que, par exemple, le lactose. Pour chacun des dispositifs décrits ci-dessus pour administration par inhalation, la composition pharmaceutique comprend comme ingrédients actifs au moins un dérivé de ganglioside ou au moins un dérivé d'ester interne de ganglioside ou des mélanges de ceux-ci dans lesquels les composés peuvent être présents sous la forme d'un de leurs sels pharma- ceutiquement acceptables. La composition pharmaceutique pour administra- tion par inhalation peut aussi comprendre d'autres ingrédients actifs qui sont connus en soi tels que des dilatateurs bronchiques pour agir contre les problèmes tels que la constriction des bronches qui est associée à l'inhalation de la poudre chez quelques patients. A cette fin, n'importe quel dilatateur bronchique peut être utilisé, par exemple l'adrénaline ou l'isoprénaline, à un niveau de dosage efficace. EXEMPLE 1 Les exemples suivants représentent des compositions pharmaceu- tiques contenant comme ingrédients actifs des gangliosides simples ou des mélanges de gangliosides pouvant être administrés par inhalation; Composition a - (formulation pour aérosol) À ganglioside.................. 2% 25. mélange propulseur Fréon 12 + Fréon 114 (60/40 poids/poids) 98% Composition b - (formulation solide) Chaque dose unitaire comprend: ganglioside.................... 50 mg 30. lactose ........................ 20 mg..DTD: EXEMPLE 2 Les exemples suivants représentent des compositions pharmaceuti- ques contenant comme agents actifs des gangliosides sous leur forme de sels de sodium, seuls ou en mélanges, pouvant être administrés par inhalation. Composition a - (formulation pour aérosol) sel de sodium de ganglioside... 2% mélange propulseur Freon 12 + Fréon 114 (60/40 poids/poids) 98% 2554346' Composition b - (formulation pour pulvérisation aqueuse) sel de sodium de ganglioside... 2% solution aqueuse tamponnée à pH7 98% Composition c (formulation solide) Chaque dose unitaire comprend: sel de sodium de ganglioside.. 100 mg lactose........................ 15 mg EXEMPLE 3 Les exemples suivants représentent des compositions pharmaceuti- ques contenant comme ingrédients actifs des dérivés d'esters internes de gangliosides, seuls ou en mélanges, pouvant être administrés par inhala- tion. Composition a - (formulation pour aérosol) ester interne de ganglioside... 3% 15. mélange propulseur Freon 12 + Fréon 114 (60/40 poids/poids) 97% Composition b - (formulation solide) Chaque dose unitaire comprend: ester interne de ganglioside... 75 mg 20. lactose ..... ................ 30 mg..DTD: EXEMPLE 4 Les exemples suivants représentent des compositions pharmaceuti- ques contenant comme ingrédients actifs des sels de sodium de ganglio- sides, seuls ou en mélanges, et du sulfate d'isoprénaline pouvant être administrés par inhalation. Composition a - (formulation pour aérosol) sel de sodium de ganglioside.. 2% sulfate de d'isoprénaline..... 0,1% À mélange propulseur Fréon 12 + Fréon 114 (60/40 poids/poids) 97,9% Composition b - (formulation solide) Chaque dose unitaire comprend: sel de sodium de ganglioside 75 mg À sulfate d'isoprénaline........ 0,1 mg 35. lactose ........................ 25 mg 2554346 ' PROPRIETES PHARMACOLOGIQUES L'absorption du ganglioside et des dérivés d'esters internes de gangliosides a été démontrée sur des animaux expérimentaux en utilisant des techniques comprenant l'administration d'une solution aqueuse de la substance active marquée par intubation par la trachée, par nébulisation, par intubation par la trachée de ces solutions aqueuses ou par atomisation par intubation par la trachée, ou d'un mélange de poudre sèche contenant les substances actives. On a utilisé deux espèces animales, c'est-à-dire des rats et des lapins. On a démontré l'absorp- tion en faisant des essais pour déceler la présence d'ingrédients actifs marqués dans le sang au cours du temps. Matériaux et méthodes 1.- Substances utilisées a.- galglioside simple marqué - --- -- --_--- ____ Du monosialotétrahéxosylganglioside GM1 marqué sur le radical sphingosine selon la méthode de Tettamanti et col. (dans "Gangliosides in Neurological and Neuromuscular Function, Development and Repair" Eds. M.M. Rapport, A. Gorio, Raven Press. (N.Y.) 1981, p.225-240) est utilisé comme molécule de ganglioside représentative. b.- mélange de ganglioside marqué Le mélange de ganglioside utilisé est semblable au mélange naturel que l'on obtient par extraction et purification à partir du cortex cébéral des bovins. Le mélange est préparé par compositions des fractions simples de gangliosides dans les proportions en % suivantes: monosialotétrahéxosylganglioside GM1 21% 30. disialotétrahexosylganglioside GDla 40% disialotétrahexosylganglioside GDlb 17% trisialotétrahexosylganglioside GTlb 19% Le monosialotétrahéxosylganglioside GM1 contient comme marqueur du 3H sur la sphingosine tel que spécifié dans le paragraphe a.- comme traceur du mélange. 2554346' c.- dérivés esters internes du GM1 marqué Les dérivés d'esters internes marqués du monosialganglioside sont obtenus à partir du monosialganglioside marqué sur le radical sphingosine selon la méthode citée dans le paragra- phe a.- Spécifiquement, les dérivés d'esters internes peuvent se préparer selon l'un des modes opératoires suivants: Mode opératoire 1 Un mélange de gangliosides est obtenu par extraction de cerveaux de bovins et 5 g de ce mélange sont dissous dans ml de DMSO. Ensuite, 4 g de résine de type styrénique anhydre (acide sulfonique) (50 à 100 mailles, forme H+) sont ajoutés au mélange et le système qui en résulte est agité pendant 30 minutes à la température ambiante. Ce traitement avec un résine échangeuse d'ions transforme tous les groupes carboxylates du ganglioside en groupe COOH (carboxyle). La conversion complète des groupes carboxylates est confirmée par une méthode analytique physique appropriée, par exemple par absorption atomique. La résine est alors filtrée par aspiration sous vide et la solution est traitée avec 1,5 g de dicyclohexylcarbodiimide et on la laisse séjourner pendant une heure. La dicyclohexylurée qui se précipite est enlevée par filtration et la solution qui reste est traitée avec 100 ml d'acétone, ce qui occasionne la précipitation des dérivés d'esters internes de ganglioside produits. La méthode donne 4,6 g d'esters internes (environ 90 à 95% de la valeur théorique). Mode opératoire 2 9 g d'un mélange de ganglioside (sel de sodium) sont dissous dans 80 ml d'eau distillée et on les fait passer à travers une colonne remplie de 20 g de Dowex 50 w x 8 (100-200 mailles, forme triéthylammonium). Ce produit, transformé en anhydride sous vide poussé, est dissous, (à l'aide d'un bain de traitement sonique), dans ml de tétrahydrofuranne anhydre contenant 8 ml de trié- thylamine. 2554346' Cette solution est lentement ajoutée à 600 ml de tétrahydrofuranne anhydre (4 heures) contenant 40 mM de sel de 2-chloro-1-méthyl-pyridinium (dans lequel l'anion peut être, par exemple, iodure, toluène-4-sulfonate9 trifluoromé- thane sulfonate, etc.), sous agitation continue et en mainte- nant une température constante de 45 C. Cette réaction est mise en oeuvre pendant 18 heures à 45 C. Le réactif en excès est éliminé par filtration et le mélange est concentré dans un courant d'azote, le résidu est redissous dans 90 ml d'un mélange chloroforme/méthanol 1/1 et on le précipite dans 400 ml d'acétone. Le produit est finale- ment séché sous vide poussé. Rendement: 7,9 g (89,7% de la valeur théorique). Mode opératoire 3 8 g de GM1 (sel de sodium) sont dissous dans 80 ml d'eau distillée et on les fait passer à travers une colonne remplie de 10 g de Dowex 50 w x 8 (100-200 mailles, forme triéthylammonium). Ce produit, transformé en anhydride sous vide poussé, est dissous, (à l'aide d'un bain de traitement sonique), dans ml de tétrahydrofuranne anhydre contenant 8 ml de trié- thylamine. Cette solution est lentement ajoutée à 600 ml de tétrahydrofuranne anhydre (4 heures) contenant 20 mM de sel de 2-chloro-1méthyl-pyridinium (dans lequel l'anion peut être, par exemple, iodure, toluène-4-sulfonate, trifluoromé- thane sulfonate, etc.), sous agitation continue et en mainte- nant une température constante de 45 C. Cette réaction est mise en oeuvre pendant 18 heures à 45 C. Le réactif en excès est éliminé par filtration et le mélange est concentré dans un courant d'azote, le résidu est redissous dans 80 ml d'un mélange chloroforme/méthanol 1/1 et on le précipite dans 400 ml d'acétone. Le produit est finale- ment séché sous vide poussé. Rendement: 7,0 g (88,4% de la valeur théorique). Mode opératoire 4 9 g d'un mélange de ganglioside (sel de sodium) sont dissous dans 80 ml d'eau distillée et on les fait passer à travers une colonne remplie de 20 g de Dowex 50 w x 8 (100-200 mailles, forme pyridinium). Ce produit, transformé en anhydride sous vide poussé, est dissous, dans 800 ml de tétrahydrofuranne anhydre et 4,2 g (60 mM) d'éthoxyacéthylène. Le mélange est traité à reflux pendant 3 heures, le dispositif de reflux est refroidi à -10 C et il est équipé d'une vanne de transformation en anhydride. Apres élimination des solvants et de l'excès d'étho- xyacéthylène, le résidu est dissous dans 80 ml d'un mélange chloroforme/méthanol 1/1 et on le précipite dans 400 ml d'acétone. Rendement: 8,1 g (92,0% de la valeur théorique). Mode opératoire 5 8 g de GM1 (sel de sodium) sont dissous dans 80 ml d'eau distillée et on les fait passer à travers une colonne remplie de 10 g de Dowex 50 w x 8 (100-200 mailles, forme pyridinium). Ce produit, transformé en anhydride sous vide poussé, est dissous, dans 800 ml de tétrahydrofuranne anhydre et 2,1 9 (30 mM) d'éthoxyacêthylène. Ce mélange est traité à reflux pendant 3 heures, le dispositif de reflux est refroidi à -10 C et il est équipé d'une vanne de transformation en anhydride. Apres élimination des solvants et de l'excès d'étho- xyacéthylène, le résidu est dissous dans 80 ml d'un mélange chloroforme/méthanol 1/1 et on le précipite dans 400 ml d'acétone. Rendement: 7,2 g (91,0% de la valeur théorique). Mode opératoire 6 9 g d'un mélange de ganglioside (sel de sodium) sont dissous dans 80 ml d'eau distillée et on les fait passer à travers une colonne remplie de 20 g de Dowex 50 w x 8 (100-200 mailles, forme pyridinium). 2554346' Ce produit, transformé en anhydride sous vide poussé et dissous dans 200 ml de pyridine anhydre est ajouté à une suspension de 5,52 g (10 mM) de réactif de Woodward dipolaire (N-éthyl-t-phénylisoxazolium-3'-sulfonate, Woodward et col., J. Am. Chem. Soc. 83, 1010-1012, 1961) dans 200 ml de pyri- dine anhydre. Ce mélange réactionnel est agité pendant jours à la température ambiante. Apres filtration du réactif en excès et élimination complète du solvant, le résidu est dissous dans 90 ml d'un mélange chloroforme/méthanol 1/1 et on le précipite dans 450 ml d'acétone. Rendement: 7,2 g (81,8% de la valeur théorique). Mode opératoire 7 8 g de GM1 (sel de sodium) sont dissous dans 80 ml d'eau distillée et on les fait passer à travers une colonne remplie de 10 g de Dowex 50 w x 8 (100-200 mailles, forme pyridinium). Ce produit, transformé en anhydride sous vide poussé et dissous dans 200 ml de pyridine anhydre est ajouté à une suspension de 1,26 g (5 mM) de réactif de Woodward dipolaire (N-éthyl-t-phénylisoxazolium-3'-sulfonate), dans 200 ml de pyridine anhydre. Ce mélange réactionnel est agité pendant jours à la température ambiante. Après filtration du réactif en excès et élimination complète du solvant, le résidu est dissous dans 80 ml d'un mélange chloroforme/méthanol 1/1 et on le précipite dans 400 ml d'acétone. Rendement: 6,3 g (79,5% de la valeur théorique). d.- Mélange marqué de dérivés d'esters internes de gangliosides -O_- _ Le mélange d'esters internes de gangliosides est obtenu de façon semblable à la façon dont on obtient le mélange des gangliosides décrit au paragraphe b.- ci-dessus, c'est-à-dire par mélange en proportions convenables des dérivés d'esters internes de gangliosides simples obtenus par la méthode d'estérification interne décrite dans la paragra- phe c.- ci-dessus. Spécifiquement, les espèces simples d'esters internes de gangliosides sont mélangées dans les 2554346' proportions suivantes: 21% du dérivé ester interne du monosialoganglioside GM1; % du dérivé ester interne du disialoganglioside GTla; 17% du dérivé ester interne du disialoganglioside GTlb; et 5. 19% du dérivé ester interne du trisialoganglioside GTlb. L'ester interne de monosialoganglioside contient les espèces marquées sur le radical sphingosine obtenues comme décrit dans le paragrpahe c.- cidessus sous forme de traceur du mélange. 2.- Compositions d'administration a.- administration d'une solution aqueuse par intubation à travers la trachée L'administation des solutions aqueuses des substances décri- tes ci-dessus est effectuée selon la méthode décrite dans Enna et Schancher (Life Sci. 12, (1) 231-239, 1973), par injection intratrachéenne au moyen d'une micro-seringue de mcl de la solution aqueuse des composés en considération. b.- administration de solutions aqueuses nébulisées par intuba- tion trachéenne Selon la méthode de Moss et Ritchie (Toxicol. Appl. Pharma- col. 17, 699-707, 1970) les solutions des composés décrits ci-dessus sont administrées au moyen d'une canule trachéenne reliée à un nébuliseur convenable. c.- administration d'un mélange solide atomisé sec par intubationtrachéenne Des poudres très fines des composés décrits ci-dessus sont atomisés par voie intra-trachéenne après pesée au moyen d'une canule selon la méthode citée par Moss et Ritchie (Toxicol. Appl. Pharmacol. 17, 699-707, 1970). 3.- Espèces animales a.- Rats Pour les expériences d'absorption pulmonaires, on utilise des rats Sprague Dawley fournis par Charles River (Calco) pesant entre 200 et 250 g. Les animaux sont traités selon les méthodes décrites ci-dessus avec 0,25 mg/kg de poids du corps de chaque composés marqué. Apres traitement, les animaux sont logés dans des cages méthaboliques. Les échantillons de sang sont obtenus 2, 4, 6, 8 heures après le traitement. La radioactivité totale des échantillons est comptée au moyen d'un scintillateur de Tricarb (Packard). b.- Lapins Des lapins mâles de Nouvelle Zélande pesant entre 1,8 et 2,0 kg sont traités comme décrit au paragraphe a.- avec les composés décrits ci-dessus. *Résultats a.- administration d'une solution aqueuse par intubation tra- chéenne La disponibilité biologique des composés à examiner après heures à partir du traitement, sur la base du calcul de la surface en-dessous de la courbe de diminution du plasma apparait être similaire pour les deux espèces animales. On note seulement des différences très légères entre les rats et les lapins. On trouve donc que la disponibilité biologique des composés à examiner est comparable. Les résultats indi- qués sur le tableau 1 sont exprimés en pourcentage par rapport à la voie intra-musculaire prise comme représentant 100%. b.- administration de solutions aqueuses nébulisées par intuba- tion trachéenne La disponibilité biologique, également exprimée en pourcen- tage par rapport à la voie intra-musculaire prise comme représentant 100%, est encore trouvée comme étant semblable pour l'intubation trachéenne des deux espèces et pour les différents composés à examiner. On note, cependant, une absorption pulmonaire accrue des composés après nébulisation des solutions aqueuses (voir tableau 2). c.- administration d'un mélange solide atomisé sec par intubation trachéenne Il est apparent, d'après les calculs de disponibilité biolo- gique après administration des poudres atomisées sèches, que cette méthode garantit la meilleure absorption pulmonaire des composés à examiner. Le tableau 3 montre que la disponibilité biologique 5 heures après l'administration par inhalation est semblable à la disponibilité biologique observée après injection intra-musculaire. 2554346' TABLEAU 1 Disponibilité biologique après 2 à 5 heures à partir de l'administration de 0,25 mg/kg par intubation trachéenne Solutions aqueuses des composés à examiner Composés Rat Lapin Composés Administrés (voie intra- (voie intra- musculaire = 100) musculaire = 100) monosialoganglioside 10,5 12 mélange de ganglioside 9,8 11 ester interne de mono- sialoganglioside 12 11,5 esters internes de mélange de gangliosides 10 11 TABLEAU 2 Disponibilité après 2 à 5 heures à partir de l'administration de 0,25 mg/kg par intubation trachéenne Solutions aqueuses nébulisées des composés à examiner Composés Rat Lapin Administrés (voie intra- (voie intra- Administrés musculaire 100) musculaire = 100) monosialoganglioside 34 22 mélange de ganglioside 31 35 ester interne de mono- sialoganglioside 35 33,5 35. esters internes de mélange de gangliosides 31,8 33 TABLEAU 3 Disponibilité après 2 à 5 heures à partir de l'administration de 0,25 mg/kg par intubation trachéenne Poudres sèches atomisées des composés à examiner Composés Rat Lapin Administrés (voie intra- (voie intra- musculaire = 100) musculaire = 100) monosialoganglioside 85 87 mélange de ganglioside 88 88 ester interne de mono- sialoganglioside 80 85 esters internes de mélange de gangliosides 82 84 A partir des résultats indiqués ci-dessus, on peut voir que l'administration par inhalation des gangliosides, des dérivés d'esters internes des gangliosides ou de leurs mélanges procurent une bonne disponibilité biologique des composés, sensiblement comparable à celle obtenue par administration intra-musculaire. Ceci est inattendu puis- qu'il n'était pas connu jusqu'à maintenant que ces composés étaient capables d'atteindre le flux sanguin en pénétrant à travers les membra- nes biologiques du système respiratoire. Cette découverte est à la fois inattendue et importante parce qu'elle montre que les composés peuvent être efficacement et facilement administrés par inhalation en utilisant des suspensions des solutions ou des poudres solides des composés utilisables avec des propulseurs liquides ou pressurisés de façon diverses ou compris dans des flacons pour pulvérisation. De cette façon, les composés de gangliosides ou leurs dérivés, particulièrement les dérivés esters internes, peuvent être administrés par des moyens plus sûrs, plus faciles et plus commodes que les voies utilisées précédemment d'injection ou d'infusion. Les patients individuels peuvent, ainsi, s'administrer les composés eux- mêmes sans l'aide de personnel médical ou d'autres fournitures médica- les. 2554346: Par conséquent, la présente invention procure un ensemble ou un dispositif pour administration par inhalation grâce auxquel les composés gangliosides ou leurs dérivés d'esters internes ou leurs mélanges peuvent être administrés au moyen d'un dispositif de pulvérisation nasale, d'un dispositif de pulvérisation sous pression ou d'une capsule contenant une poudre pour administration par inhalation. - REVENDICATIONS 1.- Ensemble pour administration par inhalation d'une composition pharmaceutique comprenant: - un dispositif de pulvérisation pour administration par inhalation; et - une composition pharmaceutique comprenant: a. au moins un dérivé de ganglioside ou de son sel pharmaceutiquement acceptable ou d'au moins un dérivé d'ester interne de ganglioside ou de son sel pharmaceutiquement acceptable ou de leurs mélanges dans lequel ledit dérivé d'ester interne de ganglioside comprend: (1) une portion hydrate de carbone, au moins un radical céramide et au mois un radical acide; (2) cette portion hydrate de carbone comprenant au moins un radical N-acétylgalactosamide ou N- acéthylglucosamine et au moins un radical glucose ou galactose; (3) ce radical acide comprenant au moins un acide N-acétylneura- minique ou un acide N-glycolylneuraminique; et (4) le groupe carboxylique d'au moins l'un de ces radicaux acides étant un ester lié à un groupe hydroxyle de l'un de ces hydrates de carbone ou de l'un de ces radicaux acides pour former un cycle lactonique; et b. un véhicule diluant pharmaceutiquement acceptable. 2.- Ensemble selon la revendication 1, caractérisé en ce que le dispositif de pulvérisation comprend une bouteille de pulvérisation sous pression. 3.- Ensemble selon la revendication 1, dans lequel cette compo- sition comprend encore un dilatateur bronchique. 4.- Ensemble selon la revendication 3, dans lequel ce dilatateur bronchite est l'isoprénaline. 5.- Ensemble selon la revendication 3, dans lequel ce broncho- dilateur est l'adrénaline. 6.- Ensemble selon la revendication 1, dans lequel cette compo- sition se trouve sous la forme d'une poudre atomisée. 7.- Ensemble selon la revendication 1, dans lequel cette compo- sition se trouve sous la forme d'une suspension de propulseur liquifié nébulisé ou d'une solution. 8.- Ensemble selon la revendication 1, dans lequel, dans le dérivé d'ester interne du ganglioside, chacun des groupes carboxyliques de ces radicaux acides est lié par une liaison ester avec un groupe hydroxyle -22 2554346' de l'un de ces hydrates de carbone ou avec l'un de ces radicaux acides pour former des cycles lactoniques. 9.- Ensemble selon la revendication 1, dans lequel cette compo- sition pharmaceutique est contenue dans ce dispositif de pulvérisation. 10.- A titre de composition pharmaceutique nouvelle pour le traite- ment de désordres du système nerveux, une composition contenant: a. au moins un dérivé de ganglioside ou de son sel pharmaceutiquement acceptable ou d'au moins un dérivé d'ester interne de ganglioside ou de son sel pharmaceutiquement acceptable ou de leurs mélanges dans lequel ledit dérivé d'ester interne de ganglioside comprend: (1) un radical hydrate de carbone, au moins un céramide et au mois un radical acide; (2) ce radical hydrate de carbone comprenant au moins un radical N-acétylgalactosamide ou N-acéthylglucosamine et au moins un radical glucose ou galactose; (3) ce radical acide comprenant au moins un acide N-acétylneura- minique ou un acide N-glycolylneuraminique; et (4) le groupe carboxyle d'au moins l'un de ces radicaux acides étant lié par une liaison ester à un groupe hydroxyle de l'un de ces hydrates de carbone ou de l'un de ces radicaux acides pour former un cycle lactonique; et b. un dilatateur bronchique; et c. un excipient ou diluant pharmaceutiquement acceptable. 11.- Composition pharmaceutique selon la revendication 10, dans laquelle ce dilatateur bronchique est le sulfate d'isoprénaline. 12.- Composition pharmaceutique selon la revendication 10, dans laquelle ce dilatateur bronchique est l'adrénaline. 13.- Composition pharmaceutique selon la revendication 10, dans laquelle cet excipient est le lactose. 14.- Composition pharmaceutique selon la revendication 10, dans laquelle, dans ce dérivé d'ester interne du ganglioside, chacun de ces groupes carboxyliques de ces radicaux acides est lié par une liaison ester avec un groupe hydroxyle de l'un de ces hydrates de carbone ou avec l'un de ces radicaux acides pour former des cycles lactoniques. 15.- Composition selon une quelconque des revendications 10 à 14, caractérisée en ce qu'elle contient un seul composé de ganglioside ou son sel pharmaceutiquement acceptable. 2554346' 16.- Composition selon une quelconque des revendications 10 à 14, caractérisée en ce qu'elle contient un mélange de dérivés de ganglio- sides ou de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 17.- Composition selon une quelconque des revendications 10 & 14, caractérisée en ce qu'elle contient un dérivé simple d'ester interne de ganglioside ou de son sel pharmaceutiquement acceptable. 18.- Composition selon la revendication 16, caractérisée en ce qu'elle contient un mélange de dérivés d'ester interne de ganglioside ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 19.- Composition selon la revendication 1 ou 18, caractérisée en ce qu'elle contient un mélange d'au moins un dérivé de ganglioside ou de son sel pharmaceutiquement acceptable et d'au moins un dérivé d'ester interne de ganglioside ou de son sel pharmaceutiquement acceptable. 20.- Composition selon une quelconque des revendications 10 à 14, caractérisée en ce que les composés formateurs de ladite composition, sont sous la forme d'une solution aqueuse nébulisée. 21.- Composition selon une quelconque des revendications 10 à 14, caractérisée en ce que les composés formateurs de ladite composition sont sous la forme de suspensions ou de solutions de propulseurs liqué- fiés nébulisés. 22.- Composition selon une quelconque des revendications 10 à 14, caractérisée en ce que les composés formateurs de ladite composition sont sous la forme d'une poudre atomisée. 23.- Composition selon une quelconque des revendications 10 à 22, caractérisée en ce que dans ce dérivé d'ester interne de ganglioside, chacun des groupes carboxyliques de ces radicaux acides est lié par une liaison ester avec un groupe hydroxyle de l'un de ces hydrates de carbone ou avec l'un de ces radicaux acides pour former des cycles lactoniques.