FR 2550445 A1 19850215 FR 8412457 A 19840807 La présente invention concerne un composé d'inclusion de l'acide eicosapentaénoique dans la -cyclodextrine, un produit alimentaire contenant ce composé et des procédés de leur préparation. Plus particulièrement l'invention concerne un composé d'inclusion dans la 6 -cyclodextrine contenant environ 20 à 50 % p/p d'acide eicosapentaénolque et un produit alimentaire contenant ce composé. L'acide eicosapentaénoîque, la cyclodextrine et 10 leur composé d'inclusion sont désignés ci-après respectivement par les abréviations "AEP", "CD" et "AEP/CD". Il ressort de façon évidente de Up-to-Date Foodprocessing, Vol 17, n 11, pp 15-22 ( 1982) que l'AEP évite l'artériosclérose, inhibe l'agrégation des plaquettes san15 guines et abaisse les teneurs sériques en cholestérol et en graisses neutres Ces dernières années, l'AEP a été commercialisé comme agent thrombolytique pour éviter l'infarctus cardiaque ou cérébral ainsi que comme agent favorisant et entretenant une bonne santé. On a confirmé que l'administration de L'AEP doit être poursuivie pendant une période prolongée, par exemple avec un produit alimentaire, car, contrairement aux agents pharmaceutiques tels que les antibiotiques, une à plusieurs administrations d'AEP ne permettent pas d'espérer un réta25 blissement ou une guérison considérables. On a également confirmé que l'AEP est difficile à ingérer, car c'est une substance huileuse ayant une odeur caractéristique des poissons frais à peau bleue, tels que la sardine ou le maquereau, et qu'il est également très ins30 table en raison de sa grande sensibilité au rancissement. Ces fait rendent très difficile l'administration prolongée de l'AEP même à faible dose. La demande de brevet japonais publiée, non examinéen 13 541/83 décrit un composé d'inclusion AEP/CD pro35 duit avec un système eau-méthanol Il apparait cependant que le composé d'inclusion ainsi obtenu a une très faible teneur en AEP qui n'est que de 4 à 15 % p/p. Sur les dessins, les figures 1 et 2 illustrent respectivement les spectres infrarouges des composés d'in5 clusion AEP/ (CD et AEP/ -CD. Pour accroître l'utilisation de l'AEP dans des produits alimentaires, destinés à l'emploi prolongé, la demanderesse a étudié divers moyens permettant de masquer ou de supprimer l'odeur indésirable et la sensibilité au rancissement de 1 'AEP, afin de solubiliser dans l'eau l'AEP et de lui conférer un caractère émulsifiant, tout en conservant les activités physiologiques propres de l'AEP La demanderesse a ainsi découvert un nouveau composé d'inclusion AEP/CD ayant une teneur en AEP bien supérieure à celle du 15 composé d'inclusion AEP/CD classique, c'està-dire une teneur en AEP d'environ 20-50 % p/p que l'on peut obtenir par incorporation d'AEP dans des conditions hydratées pour former un composé d'inclusion AEP/ -CD L'invention repose sur cette découverte. Dans l'invention, 1 'AEP n'est pas limité à de l'AEP de grande pureté et consiste en l'AEP lui-même et ses dérivés tels que ses sels et ses esters, en plus de préparations brutes qui contiennent également un autre acide gras très insaturé, tel que l'acide docosahexaénoique ou un de 25 ses dérivés. Les CD, que l'on peut utiliser dans l'invention, sont la ^-CD que l'on peut obtenir à partir de l'amidon ou de l'amylose à l'aide de la cyclodextrine-glucannotransférase (EC 2 4 1 19) et également des produits amylacés saccha30 rifiés la contenant Par rapport à d'autres CD, par exemple 1 ' ( ou la f-CD, la t-CD inclut bien plus d'AEP et le stabilise beaucoup plus Egalement, la g-CD en soi est très sensible à 1 ' r-amylase lorsqu'on l'administre par voie perorale ou parentérale Ces caractéristiques de la t-CD sont 35 avantageuses pour l'incorporation de l'AEP. En ce qui concerne les modes de préparation du composé d'inclusion AEP/ yCD, on peut utiliser un procédé par saturation de solution et un procédé par malaxage En particulier le dernier procédé qui comporte un stade de malaxage de 1 'AEP et de la ^-CD en conditions hydratées est favorable On a confirmé que l'on peut obtenir un composé d'inclusion satisfaisant selon le procédé par malaxage en utilisant des quantités relativement faibles d'eau et d'AEP, c'est-à-dire des quantités équivalentes ou infé10 rieures à la quantité de j -CD On a également confirmé que le composé d'inclusion AEP/ y -CD ainsi obtenu conserve les activités physiologiques propres de 1 'AEP, mais que, contrairement à 1 'AEP non transformé, il est presque dépourvu d'odeur indésirable et que le composé d'inclusion est 15 bien moins sensible à la détérioration ou au rancissement. Le composé d'inclusion AEP/ -CD peut être ingéré tel quel ou, s'il est nécessaire, séché, pulvérisé et façonné sous une forme appropriée, par exemple de granulés ou de comprimés, avant l'emploi De plus le composé d'inclusion 20 peut être additionné d'une quantité appropriée d'une substance minérale, de vitamines ou de médicament brut On peut également le colorer, l'aromatiser ou l'assaisonner de façon appropriée avant l'emploi. L'expression "produit alimentaire" désigne ici tout produit utilisable par voie perorale ou parentérale capable de transporter dans l'organisme une quantité du composé d'inclusion AEP/ ï-CD efficace pour favoriser ou entretenir une bonne santé Les produits utilisables par voie perorale comprennent par exemple les assaisonnements, les confi30 series, les produits dérivés de la viande, du lait et du poisson, les boissons et les médicaments à usage interne; et les produits utilisables par voie parentérale comprennent par exemple un aliment liquide pour l'administration orale, un produit de suralimentation et les cosmétiques. L'invention est de plus expliquée relativement à l'expérience suivante. Expérience Préparation de composés d'inclusion AEP/CD On prépare plusieurs composés d'inclusion AEP/CD. A des portions de 20 g d' r-, E ou Y -CD, on ajoute des portions de 15 ml d'eau et de l'AEP très pur du commerce à raison respectivement de 2, 5, 10, 20, 30 ou 40 g et on malaxe les mélanges pendant 10 minutes Après séchage par chauffage à 100 C pendant 2 heures, on lave le produit 10 obtenu avec du chloroforme et on sèche pour obtenir des composés d'inclusion AEP/CD. On détermine les-teneurs en AEP des composés d'inclusion de la façon suivante: à 100 mg du composé d'inclusion on ajoute 10 ml d'une solution mixte de chloroforme et 15 de méthanol ( 2/1) et on agite pendant 1,5 heure pour extraire On détermine l'absorbance à la longueur d'onde de 244 nm du surnageant obtenu Les résultats figurent dans le tableau 1. Comme il ressort des résultats qui figurent dans 20 le tableau 1, il se forme un composé d'inclusion AEP/CD quel que soit la CD utilisée On confirme que la teneur en AEP des composés d'inclusion est dans la gamme d'environ 1-50 % p/p mais qu'elle varie beaucoup selon les types de CD utilisés: lorsqu'on utilise 1 ' l-CD, la teneur en AEP 25 est d'au plus 10 % p/p; lorsqu'on utilise la 6-CD, la teneur est d'au plus 5 % p/p et lorsqu'on utilise la -CD, la teneur est d'au plus 50 % p/p ce qui est dix fois supérieur à ce qu'on obtient avec la >-CD Chaque composé d'inclusion forme une émulsion lorsqu'on le dissout dans l'eau à 30 une concentration de 0,5 % p/v Le produit obtenu par malaxage de l'AEP avec l' o(-, ou t-CD mais sans emploi d'eau, n'est pas un composé d'inclusion mais un simple mélange Dans un tel mélange de CD et d'AEP, l'odeur indésirable n'est pas masquée et 1 'AEP 35 huileux flotte sur l'eau lorsqu'on ajoute de l'eau pour obtenir une concentration de 0,5 % p/v. TABLEAU 1 utilisée Essai No Quantité CD (g) 1 2 3 4 5 alpha-CD Il il il I il il il l 20 20 20 20 AEP (g) 10 20 30 40 Teneur en AEP dans le composé dl'inclusion solide (% p/p) 4,6 8,3 10,1 10,4 9,8 15 6 bêta-CD 20 5 1,9 7 " " 20 10 2,8 8 " " 20 20 4,3 9 " " 20 30 4,6 " " 20 40 4,8 11 gamma-CD 20 5 5,2 12 " " 20 10 19,5 13 " " 20 20 42,3 14 " " 20 30 43,1 " " 20 40 47,6 Comme le composé d'inclusion AEP/ -CD selon l'invention est émulsifiable, on peut l'utiliser de façon avan20 tageuse dans divers produits alimentaires, tels que ceux constitués d'une phase d'huile, d'eau ou d'émulsion. Les propriétés des composés d'inclusion AEP/CD n 3 et 13 indiqués dans le tableau 1 ont été étudiées. Le p H des solutions aqueuses à 0,2 % p/v de ces composés d'inclusion sont respectivement de 5,1 et 4,1 Les spectres d'absorption ultraviolette, déterminés par spectrométrie ultraviolette des solutions aqueuses, ne présentent pas d'absorption caractéristique. Les spectres d'absorption infrarouge des composés 30 d'inclusion AEP/C(CD et AEP/ -CD ont été déterminés selon la méthode à la pastille de K Br et sont illustrés respectivement par les figures 1 et 2. L'invention sera mieux comprise à la lecture des exemples non limitatifs suivants. Exemple 1 Poudre contenant un composé d'inclusion AEP/ï-CD. A 40 g de I-CD on ajoute 40 ml d'eau et 30 g d'AEP très pur du commerce et on malaxe le mélange pendant 15 minutes, on sèche sous vide à 60 C pendant 4 heures et on pulvérise pour obtenir environ 70 g du produit indiqué. Le composé d'inclusion est une poudre jaune pâle presque dépourvue d'odeur indésirable De plus ce composé d'inclusion est très stable en raison de sa sensibilité 10 réduite au rancissement. Exemple 2 Poudre contenant un composé d'inclusion AEP/ t-CD A 100 g de K-CD, on ajoute 70 ml d'eau et 140 g d'AEP brut du commerce, la teneur en AEP étant d'env>iron 50 % p/p, et on malaxe le mélange pendant 15 minutes puis on sèche à 90 C pendant 2 heures On lave au chloroforme le solide sec obtenu et on sèche à 100 C pendant encore 2 heures pour obtenir environ 180 g d'un composé d'inclusion AEP/ -CD brut. Ce composé d'inclusion est une poudre jaune pâle ayant une teneur en AEP d'environ 30 % p/p et presque dépourvue d'odeur indésirable De plus ce composé d'inclusion est très stable en raison de sa sensibilité réduite au rancissement. Exemple 3 Sirop contenant un composé d'inclusion AEP/( -CD A 5 kg d'un sirop d'amidon du commerce contenant g de -CD, ayant une teneur en humidité d'environ 20 % p/p, on ajoute 150 g d'AEP très pur du commerce et on agite 30 énergiquement le mélange sous atmosphère d'azote pendant minutes en refroidissant à 10 C pour obtenir le produit indiqué. Ce composé d'inclusion est un sirop blanc laiteux presque dépourvu d'odeur indésirable et i'AEP qu'il contient 35 est moins sensible au rancissement. Exemple 4 Bonbons durs On dissout dans 5 1 d'eau en chauffant 6 kg de saccharose, 3 kg de "SUNMALÈ', qui est une poudre cristal5 line de maltose commercialisée par Hayashibara Co, Ltd, Okayama, Japon, et 1 kg d'un sirop contenant le composé d'inclusion AEP/ -CD préparé selon le procédé décrit dans l'exemple 3 et on fait bouillir la solution à 145-150 C, on concentre sous vide pour obtenir une teneur en humidité in10 férieure à 2 % p/p, on ajoute 80 g d'acide citrique et de petites quantités d'arôme de citron et d'agent colorant et on façonne de façon habituelle pour obtenir le produit indiqué. Le produit est un bonbon dur approprié présentant 15 les activités physiologiques propres à l'AEP, c'est-à-dire une activité de prévention de l'artériosclérose. Exemple 5 Chocolats On mélange 40 g de pâte de cacao, 10 g de beurre 20 de cacao, 15 g de sucre en poudre, 15 g de lait entier et 500 g de poudre contenant le composé d'inclusion AEP/X -CD préparé selon le procédé décrit dans l'exemple 1 et on fait passer à travers un raffineur pour réduire la taille des particules On place le produit dans une cuve de conchage, on 25 ajoute 500 g de lécithine et on malaxe à 50 C pendant 2 jours On place le produit dans un moule o il se solidifie pour former le produit désiré. Le produit a une texture et un arôme excellents et ne présente pas d'exsudation de graisse ni de sucre lors du stockage Le produit est un chocolat approprié, présentant les activités physiologiques propres à l'AEP, par exemple une activité anticholestérolémique et une activité d'abaissement des graisses neutres dans le sérum. Exemple 6 Boisson carbonatée Dans 8 1 d'eau on dissout 1,97 kg d'une solution de sucre isomérisé du commerce (degré de conversion 55 %), g d'une poudre contenant le composé d'inclusion AEP/t-CD préparé selon le procédé décrit dans l'exemple 2, 23 g d'acide citrique, 0,2 g de nitrate de vitamine B 1 et 0,5 g de vitamine B 6 en agitant et on gazéifie la solution obtenue de façon classique avec deux volumes de dioxyde de carbone au moyen d'un appareil de carbonation pour obtenir le produit indiqué. Le produit est une boisson de santé présentant les activités physiologiques propres à l'AEP. Exemple 7 Gelée On mélange en chauffant 1,5 g de saccharose, 30 g 15 de citrate de sodium, 110 g de "GF-100 ", un stabilisant commercialisé par Nitta Gelatine Co, Ltd, Osaka, Japon, 10 g du composé d'inclusion AEP/ g-CD préparé selon le procédé décrit dans l'essai n 13 de l'expérience et 7,3 1 d'eau. On maintient le mélange à 80 C pendant 10 minutes et on mé20 lange avec 1 kg d'extrait de pruneau (teneur en humidité % p/p) et 30 g d'acide citrique dans un minimum d'eau en agitant On introduit le produit dans un récipient à 60-70 C, on stérilise à 90 C pendant 30 minutes et on refroidit pour obtenir le produit indiqué. Le produit est une gelée sucrée de saveur rafraîchissante Le produit est une gelée de santé présentant les activités physiologiques propres à l'AEP. Exemple 8 Comprimés On mélange 100 g de "SUNMALI', qui est une poudre cristalline de maltose commercialisée par Hayashibara Co., Ltd, Okayama, Japon, 10 g d'amidon de mals et 10 g d'une poudre contenant un composé d'inclusion AEP/ K-CD, préparé selon le procédé décrit dans l'exemple 1, et on fa35 çonne le mélange en utilisant une machine à comprimés, mu- nie d'un poinçon 20 R de 12 mm de diamètre pour former des comprimés pesant chacun 680 mg épais de 5,25 mm et ayant une dureté de 8 1 kg. Le produit est un comprimé facile à administrer, ayant les activités physiologiques propres à l'AEP, par exemple une activité de prévention de l'artériosclérose, une activité d'inhibition de l'agrégation des plaquettes sanguines, une activité anticholestérolémique et une activité d'abaissement des graisses neutres dans le sérum. 10 Exemple 9 Emulsion On mélange avec un mélangeur de façon habituelle pour obtenir un liquide partiellement émulsifié, 9 kg d'huile de soja, 1 kg d'une poudre contenant le composé d'inclusion AEP/ ^-CD préparé selon le procédé décrit dans l'exemple 1, 1 kg de lécithine d'oeuf, 1 kg de maltose et 90 1 d'eau On émulsifie encore le mélange avec un mélangeur haute pression pour obtenir une émulsion huile dans l'eau dont les particules ont une taille moyenne de 0,01-0,3 20 4 m On traite l'émulsion avec une membrane filtrante, pour éliminer les bactéries, et on conditionne dans des flacons qu'on bouche et stérilise par chauffage pour obtenir une émulsion de suralimentation. Le produit qui présente des activités physiologi25 ques propres à l'AEP est une émulsion convenant à la suralimentation et à l'alimentation par intubation perorale ou parentérale ainsi que comme additif hypercalorique. Bien entendu l'invention est susceptible de diverses variantes sans sortir de son cadre. Revendications 1 Composition caractérisée en ce qu'elle est constituée de 2 Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est sous une forme utilisable oralement, parentéralement ou percutanément, en particulier à l'état façonné, granulé, en comprimés, en émulsion ou sous la forme d'un 10 cosmétique. 3 Procédé pour la préparation d'un composé d'inclusion de l'acide eicosapentaénoique (AEP) dans la e -cyclodextrine (X-CD) caractérisé en ce qu'il comprend un stade de mélange de la (t-CD) et de 1 'AEP à l'état hydraté jusqu'à homogénéi15 té. 4 Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend le séchage du mélange obtenu. Procédé selon la revendication 3 ou 4, caractérisé en ce qu'il comprend le traitement du solide par le chloro20 forme suivi d'un séchage. 6 Procédé selon une des revendications 3 à 5, caractérisé en ce qu'il comprend le traitement du mélange obtenu sous une atmosphère d'azote. 7 Produit alimentaire caractérisé en ce qu'il contient 25 un composé d'inclusion de l'acide eicosapentaénoique (AEP) dans la t -cyclodextrine ( 4 -CD). 8 Produit alimentaire selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il est sous une des formes selon la revendication 1 ou 2 ou sous celle d'une boisson ou d'aliment liqui30 de.