FR 2537436 A1 19840615 FR 8319909 A 19831213 PROCEDE DE REGULATION DE L'APPETIT ET DE L'EFFICACITE DE L'UTILISATION DES ALIMENTS UTILISANT DE L'INTERFERON La présente invention concerne d'une manière générale un nouveau procédé de régulation de l'appétit des vertébrés à sang chaud Elle concerne plus particulièrement l'utilisa- tion d'isolats d'interféron pour moduler l'appétit et aug- menter l'efficacité de l'utilisation des aliments chez des animaux tels que le bétail, les porcs et les poulets. "Interféron" est un terme générique qui couvre un groupe de glycoprotéines et de protéines de vertébrés qui sont connues pour avoir diverses activités biologiques, telles que des activités antivirales, anti-proliférantes, et immuno- modulatrices chez les espèces animales dont dérivent ces substances La définition ci-après de l'interféron a été acceptée par un comité international réuni pour mettre au point un système de nomenclature ordonnée des interférons "Pour être classé comme interféron, un facteur doit être une protéine qui exerce une activité antivirale non spécifi- que d'un virus, au moins dans les cellules homologues par des processus métaboliques cellulaires mettant en jeu à la fois la synthèse de RNA et de protéine" (Journal of Interferon Research, 1, p vi ( 1980). Depuis les premières descriptions de l'interféron par Isaacs et Lindeman (Voir, Proc Roy Soc London (Ser B), Vol. 147, p 258 et suivantes ( 1957) et Brevet des Etats-Unis d'Amérique No 3 699 222), l'interféron a fait l'objet de recherche intensive dans le monde entier Les publications abondent concernant la synthèse de l'interféron, ses caractérisations moléculaires proposées, ses applications cliniques, et les mécanismes proposés pour ses activités anti-tumorales, antivirales et sur le système immunitaire. Voir par exemple, De Maeyer, et coll, "Interferon", chapitre , dans Comparative Virology, Vol 15, p 205-284, Plenum Press, N Y, N Y ( 1979); Cantrell, "Why is Interferon Not in Clinical Use Today", dans Interferon 1979, I Fresser, éd., Vol 1, p 1 à 28, Academic Press, Londres ( 1979); Stewart, "The Interferon System" Springer éditeur, N Y, N.Y ( 1979); et Dunnick, et Coll, "Clinical Trials with Exogenous Interferon", J Infect Diseases,, 139, No 1, p 109 à 123 ( 1979). En raison de l'intensité et des origines disparates des recherches concernant l'interféron, ses caractéristiques et ses utilisations, il existe une insuffisance notable d'unifor- mité dans des matières telles que la classification des types d'interféron Il existe également de nombreuses théories, parfois contradictoires concernant le mode d'action de l'interféron dans la production d'effets cliniques Le bref résumé ci-après de l'état actuel des connaissances concernant l'interféron aidera à la compréhension de la présente inven- tion. Bien qu'isolée initialement de cellules d'origine aviaire (cellules allantoiques de poulet), la production d'interféron a été observée dans des cellules de toutes les classes de vertébrés, parmi lesquelles les mammifères, les amphibiens et les reptiles La production d'interféron par les cellules des vertébrés est rarement spontanée, mais elle est souvent "induite" aisément par traitement des cellules (in vivo ou in vitro) par diverses substances telles que virus, acides nucléiques (y compris ceux d'origine virale ainsi que des polynucléotides synthétiques), lipopolysaccha- rides et divers antigènes et mitogènes. L'interféron a généralement été baptisé en fonction de l'espèce de cellules animales produisant la substance (par exemple, humaines, murines ou bovines), le type de cellule intervenant (par exemple leucocyte, lymphoblastoide, fibro- blaste) et occasionnellement, le type de matériel inducteur responsable de la production d'interféron (par exemple, virus, immune) L'interféron a été classé de manière appro- ximative par certains chercheurs en fonction du mode d'induc- tion, en type I ou type II, la première classification comprenant l'interféron induit par un virus et un acide nucléique et la dernière classification comprenant la matière produite en tant que lymphokine par induction par des antigènes et des mitogènes Plus récemment, le comité international mettant au point un système de nomenclature ordonnée pour l'interféron a classé l'interféron en deux types sur la base des spécificités antigènes Dans cette nouvelle classifica- tion, les désignations alpha (a), beta (O) et gamma (y) ont été utilisées pour correspondre aux désignations antérieures d'interféron de leucocytes, de fibroblastes, et de type II (immuns), respectivement Les interférons alpha et beta sont habituellement stables aux acides et correspondent à ce que l'on a appelé les interférons du type I; les interférons gamma sont habituellement acidolabiles et correspondent à ce que l'on a appelé des interférons du type II Les recomman- dations de nomenclature du comité international ne s'appli- quent qu'aux interférons humains et murins Journal of Interferon Research, 1, p vi ( 1980) Par conséquent, l'interféron utilisé dans le présent mémoire est identifié simplement par l'espèce animale et le type de cellule produi- sant l'interféron, par exemple interféron de fibroblaste bovin. La détermination de structures moléculaires précises pour l'interféron est restée pendant un certain temps hors des capacités de la technique Dans les années qui ont suivi la caractérisation de l'interféron comme étant du type protéique sur la base de son inactivation par la trypsine, les essais en vue de le purifier et de le caractériser d'une manière univoque ont échoués en raison de son activité spécifique élevée ainsi que de son hétérogénéité apparente A l'heure actuelle, certaines précisions dans la détermination de structures moléculaires ont été obtenues pour l'interféron dérivant d'un type unique de cellule et en utilisant un inducteur spécifique unique, par exemple de l'interféron alpha humain. Dans ses premières applications, l'interféron était utilisé exclusivement comme agent antiviral, et ses applica- tions thérapeutiques cliniques qui ont eu le plus de succès à l'heure actuelle ont été dans le traitement d'affections : RS 237436 i virales ou apparentées à des virus Il est devenu clair, cependant, qu'un interféron exogène était parfois capable de provoquer une régression ou une rémission de diverses maladies métastasiques Un résumé d'essais cliniques sur l'interféron comme agent thérapeutique antiviral et anti-proliférant jusqu'à la fin de 1978 se trouve dans l'article de Dunnick et coll. précité. L'agent clinique de choix dans ce travail a été l'inter- féron de leucocytes humains "produit en masse" par des procédés mettant en jeu la collecte et la purification de grandes quantités de couches leucocytaires humaines, l'induc- tion par un virus et l'isolement à partir de mileux de culture Le besoin d'un interféron d'origine humaine est évidemment en accord avec-la conclusion ancienne que l'interféron est "spécifique d'une espèce", c'està-dire qu'il n'est biologiquement actif, in vivo, que dans des espèces homologues aux cellules d'origine. Dans le travail décrit ci-dessus, l'interféron a été administré par voie parentérale, c'est-à-dire par voie intra- musculaire et intradermique, certains usages locaux couronnés de succès ayant été signalés Il a rarement été administré par voie intraveineuse en raison d'effets secondaires inifortants attribuables à des "contaminants" dans les isolats bruts et même hautement purifiés Avant l'invention de la demanderesse, décrite dans la demande de brevet des Etats-Unis d'Amérique no 180 464, déposée le 22 août 1981, et dans la demande internationale PCT no PCT/US 81/01103, déposée le 18 août 1981, publiée le 4 mars 1982, qui sont incorporées au présent mémoire à titre de référence, on ne trouve aucune indication d'une administration orale thérapeutiquement couronnée de succès de l'interféron Cette circonstance est en accord avec l'opinion très répandue que l'interféron ne résisterait pas à l'exposition à un environnement digestif tel que celui qui existe chez les mammifères. Outre son utilisation dans le traitement antiviral et anti-tumoral, on a observé assez récemment que l'interféron possédait des effets immunomodulateurs, à la fois immuno- potentiateurs et immunosuppresseurs Voir par exemple, Sonnenfeld et Coll, "A Regulatory Role for Interferon In Immunity", Annals, No Y Acad Sci, Vol 322 p 354 à 355 ( 1979) Bien qu'aucun travail clinique chez l'homme ou in vivo chez l'animal spécifiquement conçu pour évaluer les effets immunologiques de l'interféron n'ait été signalé, il a été proposé par certains que les effets anti-tumoraux de l'interféron sont liés au moins en partie à une stimula- tion ou à une activation immune des "cellules tueuses naturelles", les macrophages et les lymphocytes To Voir par exemple, Kershner, "New Directions in Cancer Chemotherapy" A.S M News, Vol 46, No 3, pp 102 et suivantes ( 1980). En outre, des activités biologiques "nouvelles" pour l'interféron exogène sont régulièrement établies Cantrell, et Coll, New Eng Jour Med, Vol 302, No 18, p 1032, ( 1980) signale un effet de l'interféron consistant à réduire transitoirement les taux de lipoprotéines de haute densité et les taux de cholestérol total, ce qui suggère que chez l'homme, l'interféron peut avoir une influence sur les maladies cardio-vasculaires. Avant l'invention de la demanderesse décrite et revendi- quée dans la présente demande de brevet, on n'a pas signalé d'activité biologique d'aucune forme d'interféron ayant un impact direct sur l'appétit ou l'efficacité de l'utilisation des médicaments chez les vertebrés En ce qui concerne la possibilité d'utiliser l'interféron pour stimuler l'appétit, l'interféron a été considéré dans la technique comme exer- çant l'effet opposé Il a été signalé dans la littérature que des malades humains recevant un traitement anti-cancéreux par l'interféron éprouvaient une perte d'appétit comme effet secondaire de ce traitement Marx, Science 210, p 998 ( 1980); Journal of Infectious Diseases, 139, p 109-125 ( 1979). Cette suppression de l'appétit a été un des effets secondaires tels que l'abaissement du nombre des leucocytes, nausées, fièvre, perte des cheveux, éprouvés par l'homme dans des essais cliniques de l'interféron En outre, la littérature de la technique antérieure n'a signalé aucun effet de l'interféron sur l'appétit chez les espèces non humaines. Conformément à la présente invention, il a été décou- vert que l'appétit d'un vertébré à sang chaud peut être régulé par-un procédé consistant à administrer aux vertébrés à sang chaud une fraction biologiquement active d'interféron dans une quantité efficace pour moduler l'absorption d'aliments par le vertébré ou l'efficacité d'utilisation des aliments Les quantités d'interféron efficaces pour moduler l'absorption d'aliments se sont révélées beaucoup plus faibles que celles nécessaires pour réaliser ses effets anti- viraux, anti-tumoraux et modulatoires Bien que le mécanisme exact par lequel l'interféron affecte l'appétit reste à confirmer, la demanderesse estime qu'elle a découvert un effet de l'interféron sur-le centre de la satiété et sur les centres de la faim du cerveau et du système nerveux central, plutôt qu'un simple effet secondaire ou effet toxique provenant de l'administration d'interféron On estime que ce procédé de régulation de l'appétit a son principal intérêt dans la stimulation de l'appétit des mammifères, mais il trouve également des applications dans la modulation de l'absorption d'aliments ou de l'efficacité d'utilisation des aliments de n'importe quels vertébrés à sang chaud, parmi lesquels des espèces aviaires. Dans le procédé de la présente invention, on peut utiliser un interféron provenant de n'importe quelle source cellulaire On peut également utiliser un interféron obtenu par ingénierie génétique L'interféron de fibroblaste trouvé dans les cellules d'origine bovine est actuellement le type d'interféron préféré principalement en raison de sa disponi- bilité aisée en quantité relativement importante. Dans le procédé de stimulation de l'appétit du bétail, qui fait aussi partie de la présente invention, on administre par voir orale au bétail une fraction biologiquement active d'interféron de fibroblaste dérivant de cellules d'origine bovine Lorsque l'administration est effectuée par voie orale, le bétail doit recevoir au moins une dose d'au moins 10.000 unités de cet interféron par kg de poids corporel. Bien que l'administration orale d'interféron de fibro- blaste bovin soit préférée, l'appétit au bétail peut aussi être stimulé par administration intraveineuse de l'interféron de fibroblaste bovin Lorsque l'administration est effectuée par voie intraveineuse,'chaque bovin doit recevoir quotidien- nement pendant trois jours au moins, au moins une dose d'environ 4 000 unités de cet interféron par kg de poids corporel. Bien que l'interféron de fibroblaste bovin soit préféré pour l'utilisation dans la stimulation dans l'appétit du bétail, l'interféron peut aussi être secrété par voie nasale par le bétail en réponse à l'inoculation d'un souche de virus vaccinal telle que celle du virus de la rhinotrachéite infectieuse bovine (IBR) On doit inoculer à chaque bovin au moins environ 104 TCID 50 de cette souche vaccinale. L'invention couvre également un procédé de stimulation de l'appétit des porcs consistant à administrer une fraction biologiquement active d'interféron A l'heure actuelle, ce procédé de stimulation de l'appétit des porcs comporte l'administration orale d'interféron de fibroblaste bovin à des porcelets avant le sevrage Chaque porcelet reçoit de préférence environ 5 000 à environ 50 000 unités par kg de poids corporel de cet interféron par jour pendant un à cinq jours avant le sevrage. Un procédé d'augmentation de l'efficacité d'utilisation des aliments chez le poulet fait également partie de la présente invention Ce procédé consiste à administrer une fraction biologiquement active de glycoprotéine d'interféron, l'interféron préféré étant un interféron de fibroblaste bovin Les poulets-reçoivent de préférence l'interféron de fibroblaste bovin dans leur eau de boisson, dans une quantité d'au moins 70 unités par ml d'eau de boisson. L'invention a également pour objet une fraction biolo- giquement active d'interféron, ou composition alimentaire la contenant, pour utilisation dans la régulation de l'appétit des vertébrés, ledit interféron étant notamment tel que défini pré- cédemment. Des exemples des caractéristiques les plus importantes de l'invention ont été ainsi résumés de façon assez générale pour faire mieux comprendre la description détaillée ci-après, et pour que la contribution à la technique soit mieux appréciée. Il existe évidemment d'autres caractéristiques de l'invention qui seront décrites ci-après et qui font également l'objet des revendications en annexe. Le terme "interféron" possède ici la signification qui lui est ordinairement attribuée dans la technique, et qui com- prend à titre non limitatif celle qui lui est assignée dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique no 3 699 222. Les interférons d'origine humaine et murine ont été quantifiés dans la technique en Unités Internationales ("UI"), en dépit du fait que l'on sait par exemple que la masse molé- culaire du leucoyte et du lymphoblastolde va de 13 000 à 25.000 daltons Le terme "unité" d'interféron désigne ici l'inverse d'une dilution de matière contenant de l'interféron, dont le dosage montre qu'elle inhibe la moitié d'une plaque virale de provocation, le virus de provocation étant le virus de la stomatite vésiculaire (VSV). Sauf indication contraire, dans tous les exemples ci- après, les expressions "interféron de fibroblaste bovin", "IFN bovin", ou "IFN", désignent l'interféron qui a été préparé conformément aux modes opératoires de l'exemple 1. EXEMPLE 1 On cultive des cellules primaires de rein de foetus bovin (BFK) ou de testicules de bovin (BT) jusqu'à confluence dans une culture cellulaire On prépare des stocks de virus de la fièvre catarrhale maligne (sérotype international 10) dans des cellules de rein de bébé hamster (BHK) ou de cellules VERO ayant des titres de 106 à 108 unités formatrices de plaques (PFU)/ml Les cellules BFK ou BT sont provoquées avec du virus de la fièvre catarrhale maligne (le mieux est une multiplicité d'infections supérieure à 1), et les fluides surnageants sont généralement récoltés lorsque l'effet cytopathique (CPE) intéresse la feuille cellulaire entière, c'est-à-dire au bout d'environ 24 à 48 heures Les fluides surnageants sont dialisés pendant 24 heures dans un tampon K Cl-H Cl (p H 2,0) et pendant 24 heures dans une solu- tion saline tamponnée au phosphate (p H 7,4) avant l'ultra- centrifugation à 100 000 x g pendant 60 minutes L'activité de l'interféron (exprimée en "unités" par opposition aux U.I) est dosée par un procédé de réduction de la plaque en utilisant du VSV comme virus de provocation sur des cellules BFK (Rosenquist-et Loan, "Interferon Production with Strain SF-4 of Parainfluenza-3 Virus" Am J Vet Res, 28, p 619 à 628 ( 1967). Bien qu'une solution saline tamponnée par du phosphate ait été utilisée comme excipient pour l'interféron, d'autres diluants, adjuvants et excipients pharmaceutiquement accep- tables du type ordinairement utilisés dans les traitements par voie orale et parentérale peuvent être utilisés. EXEMPLE 2 Une série de cobayes sains, consommant déjà une quantité d'aliments au voisinage du maximum, ont été utilisés pour déterminer la toxicité de l'interféron de fibroblaste bovin de l'exemple 1 A chaque animal, on aadministré par voie orale la quantité d'IFN bovin indiquée dans le tableau A La préparation d'IFN particulière administrée dans cette étude a un titre de 3000 unités/ml Comme il est indiqué dans le tableau A, les cobayes auxquels on a administré l'IFN ont gagné une moyenne de 30 grammes chacun, tandis que les témoins ont perdu une moyenne de 20 grammes. Tableau A Cobayes ayant reçu par voie orale de 1 'IFN ou un placebo pendant 7 jours Animal t'lvn,An 4 's 4 1 Témoin 2 Témoin 3 IFN une fois par jour ( 2 ml/jour) 4 IFN une fois par jour ( 2 ml/jour) FN deux fois par jour ( 4 nil/jour) 6 IFN deux fois par jour ( 4 xml/jour) * Total Moyenne Moyenne Moyerme Tous les an imaux Tous les animaux FN Se Uloe Ment Témoins seuleoent k V 1 oa L initial 475, 4 429 5 904, 9 450, O 378, 6 828,6 428,3 ' 861,0 2.594,5 4323,425 42.2,400 452,r 450 -Poids fina 11 (g) 457,4 407,2 864,6 493, 8 432 8 926, 6 419 7 465 O 884,7 2 675,9 445,983 452 e 825 432,300 variation nette (g) 18,0 22,3 ,3 + 43 y 8 + 54,2 n + 98, O 8,6 + 32, 3 + 23, 7 + 81 $ 14 + 13, 558 + 30,425 > 150 * Poids f inal déterminé 10 jours après le poids initial O- -.4 Jd o, 4 = " L t 4 LL= 11 il EXEMPLE 3 Dans un autre essai sur des cobayes, on a utilisé dix cobayes comme témoins contre 8 cobayes auxquels on a adminis- tré oralement 1 ml/jour d'une préparation d'IFN bovine ayant un titre de 8 000 unités/ml Les données de cette étude sont résumées dans le tableau B L'IFN bovine a été administrée pendant cinq jours seulement, et tous les cobayes ont été observés pendant dix jours supplémentaires Au cours des cinq premiers jours de traitement, chaque groupe consom- mait presque les mêmes quantités d'aliments, mais les cobayes traités par l'IFN mangeaient 8,1 % de plus après traitement et les témoins mangeaient 1,2 % de moins. TABLEAU B Consommation quotidienne d'aliments (g) par cobaye par groupe ayant reçu de l'IFN par rapport aux témoins Groupe (Nombre) Période IFN ( 8) Témoins ( 10) lère période de 5 jours 38,2 38,4 2 ème période de 5 jours 40,0 37, 6 3 ème période de 5 jours 41,3 38,0 Variation (%) - lère -2 ème période de 5 jours + 4,7 2,2 lère 3 ème période de 5 jours + 8,1 1,2 EXEMPLE 4 Des batteries de poulets sont testés pendant deux semaines pour fournir des données sur l'effet de 1 'IFN bovine sur l'efficacité de l'utilisation d'aliments et sur la consommation d'aliments des poulets Cette étude porte sur quatre groupes de seize poussins chacun, un des groupes étant un groupe témoin Les poussins reçoivent de 1 'IFN bovine dans leur eau de boisson à des diluations de 1:10, 1:100 et 1:1000 respectivement d'une préparation ayant un titre de 7000 unités/ml Comme le montre le tableau C, le groupe de poulets recevant la dilution d'IFN 1:10 donne une une réponse favorable Les groupes de poulets ont tous presque le même poids moyen final, mais ceux traités par la dilution d'IFN 1:10 étaient plus efficaces de 10,4 %, ils exigeaient moins de nourriture pour une livre de gain en poids corporel. TABLEAU C Effet de l'interféron sur l'efficacité de l'utilisation des aliments et de la consommation des aliments chez les poulets de batterie males Traitement par l_'ea (unités â,IFN/ml) Poids moyen (g) 194,0 194,5 194,8 J 192,3 kg de nourriture/ kg de gain de poids 1 > 54 1,38 1, 60 1 > 53 Nourriture consao Mxie/poulet H 20 conscmmne/ poulet (ml) w ru Ln LA O' wi os -14 EXEMPLE 5 Dans une autre étude sur l'effet de l'IFN bovine sur les poulets de batterie, quarante poulets de batterie males ont été soumis à des essais, vingt ont été traités par 19 IFN et vingt ont servi de groupe témoin Pour les poulets traités par l'IFN, on a ajouté 700 unités d'IFN par ml à leur eau de boisson normale pendant deux semaines Tous les poulets ont été obervés et leurs gains de poids ont été suivis pendant huit semaines Comme le montre le tableau D, la consommation d'aliments a été affectée dans un sens défavorable à la dose particulière d IIFN étudiée. L'effet de l'IFN observé dans les exemples 4 et 5 sera utile pour éviter un gain de poids excessif dans la produc- tion de troupeaux en aviculture La dose appropriée d'IFN conduira à une moindre consommation d'aliments mais une efficacité accrue de l'utilisation des aliments, permettant un moindre dépôt de graisse et un dépôt plus important de protéines. Tableau 10 Effet de l'interféron sur les poulets de batterie lorsqu'il est fourni par l'intermé'diaire de l'eau de boisson Semaines de traitement Poids (g) 2 3 4 5 Total Efficacité de ml H O la nourriture 8 0-4 0-8 semaines semaines Traités par IFN 106; 5237,9 334,9 553,9 867,4 1106,8 1442,9 1533,5 1193,0 2 > 47 Témoins 105,8 243,4 358 > 1569,4 915,6 1211,3 1537 > 21656 e 4 1221,7 2 > 30 u- L Ji ui M -.4 EXEMPLE 6 Un groupe de veaux, -souffrant tous d'une maladie grave accompagnée d'anorexie, ont été utilisés pour étudier les effets d'IFN bovine administrée par voie orale Dix des veaux ont servi de témoins, et à trois des veaux, on a administré par voie orale une dose unique de 90 ml d'une préparation d'IFN bovine ayant un titre de 7000 unités/ml. Comme le montre le tableau E, la consommation d'aliments totale des veaux pendant quatre jours ( 2 ème jour 5 ème jour) avant l'administration d'IFN, enregistrée par l'indicateur, n'était que de 0,13 à 0,72 kg Un veau de 180 kg mange normalement 1 % de son poids la première semaine- dans la parcelle de pâture et 2 % la seconde semaine Ainsi, tous les veaux utilisés dans cette étude présentaient une réduction grave de l'appétit -En deux jours du traitement unique par 1 'IFN, les veaux traités par l'IFN mangeaient tous 2,25 kg d'aliments ou davantage, tandis que seul un des dix témoins en mangeait autant Les trois veaux traités par 1 'IFN ont survécu à l'étude, tandis que seuls quatre des dix témoins ont survécu. TABLEAU E Consommation quotidienne d'aliments par du bétail malade Nombre de Destin 2 mois veaux -Jours après le début de 2-5 * l'essai 2-5 * 6 b** 7 8 9 10 11 12 lessai Témoins 63 0,13 0 0 O mort mort 77 0,72 O O O O O retiré a survécu 0,54 O O O O O retire mort 91 0,36 O O O O O mort mort 143 0,41 0, 13 1,0 2,5 4,4 3,8 4,2 3,9 a survécu 191 0,13 0 O 0 0 1,0 1,2 retiré a survécu 254 0,32 O 0,27 O O O retiré mort mort 290 0,13 O O O mort mort 299 0,32 0 0 0 0,6 2,0 2,5 3 t 9 a survécu 375 0,18 O 0 O O 0,3 retiré mort mort Traités -par l'IFN 44 0,36 0,18 0,5 2,35 4,6 2,3 2,5 4,9 a survécu 112 0,13 O 1,8 4,6 4,3 6,7 7,3 7,0 a survécu 173 0,54 0,18 1,1 2, 4 2,8 1,1 O,6 1,3 a survécu Les nombres sous les jours représentent des kg d'aliments consommés ce jour. "Retiré" signifie que le veau a été traité pour sa maladie et retiré de l'indicateur * kg totaux d'aliments consommés aux jours 2 à 5 ** IFN administré le matin du 6 ème jour -4 ré Ln w w N * j EXEMPLE 7 Un essai a été effectué pour étudier l'effet de l'IFN bovine sur des veaux vaccinés contre la septicémie hémorra- gique du bétail Trente sept ( 37) veaux ont été vaccinés par voie intradermique avec 0,5 ml de vaccin contre la septicémie hémorragique de A H Robin (Pasteurella hemolytica vivante, sérotype 1), tandis que 45 recevaient une injection dë placebo Au moins vingt jours après les vaccinations, 24 des veaux non vaccinés et 18 des veaux vaccinés recevaient chacun une dose orale unique d'IFN bovine d'un titre de 7000 unités/ml Aux veaux restants, on administrait à chacun un placebo Chacun des veaux traités par l'IFN recevait ml d'IFN s'il pesait plus de 180 kg ou 90 ml de l'IFN s'il pesait moins de 180 kg La consommation d'aliments et le gain de poids moyen pour chaque groupe, sept jours après le traitement par l'IFN sont donnés dans le tableau F Les veaux vaccinés ayant reçu de l'IFN mangeaient 40 % de plus la première semaine suivant le traitement que les veaux vac- cinés ayant reçu un placebo Les veaux non vaccinés auxquels on avait administré un placebo mangeaient 30 % de plus la première semaine suivant le traitement que les veaux non vaccinés ayant reçu de l'IFN La différence de réaction entre les animaux vaccinés et les témoins peut être due à une certaine interaction entre le traitement par l'IFN et la vaccination qui peut avoir produit une suppression de l'appétit plus grave chez les animaux vaccinés De même, la comparaison entre les veaux traités par l'IFN et les veaux témoins avait une validité plus grande pour les veaux vaccinés parce que les poids moyens des veaux traités par l'I Fn et des veaux témoins étaient beaucoup plus proches que pour les veaux non vaccinés Dans le groupe non vacciné, les témoins étaient plus lourds que les veaux traités par l'IFN, ils étaient donc probablement plus vieux et avaient plus de chance de mieux se comporter. TABLEAU F Effet du traitement par l'IFN par voie orale sur des veaux vaccinés contre la septicémie hémorragique Résultats au bout de 7 jours sur 82 veaux consommant la quantité de nourriture déterminée par l'indicateur Groupe N 1 re dePoids Poids du consomnation Consomation % du poids moyen uveaauxmoyen l) groupe (kg) sur 7 jours quotid oyenne consommé par jour Non vacciné 24 190,6 4575 472,5 2,8 kg 1,50 pas d'IFN Non vacciné IFN 21 177,7 3732 346,2 2,3 kg 1,33 Vacciné IFN 18 187,0 3367 377,7 3,0 kg 1,63 Vacciné pas d'IFN 19 184,7 3508 282,7 2,1 kg 1,16 M 0 % EXEMPLE 8 A deux veaux qui consommaient une moyenne de 6,6 kg d'aliments par jour, pendant quatre jours, on a administré par voie intraveineuse 800 000 unités d'IFN bovine chacun des quatre jours (jour 0, 1, 2 et 3 du tableau G) Chaque jour du traitement par l'IFN, chacun des veaux a consommé moins de 10,6 kg, tombant même jusqu'à 2,95 et 3,0 kg respectivement le dernier jour du traitement Après la fin du traitement par l'IFN lui-même, la consommation d'aliments des deux veaux a notablement augmenté. TABLEAU G Consommation d'aliments (kg) par des veaux ayant reçu de 1 'IFN bovine par voie intraveineuse veau Jours apres l'inoculation intraveineuse No O 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 461 5,9 5,3 6,26 2,9 7,89 10,6 10,1 8,03 10,6 8,89 9,93 12,6 490 6,08 5,44 5,58 3,0 7,44 6,35 9,75 7,94 6,99 7,98 9,48 8,48 t-3 ri Ln- w -.4 w os EXEMPLE 9 Dans cette étude, l'inerféron provenait de sécrétions nasales induites par une vaccination par un vaccin (TSV-2) préparé à partir d'un mutant sensible à la température de virus de la rhino-trachéite infectieuse bovine (IBR) et d'un virus du parainfluenza-3 (PI-3) La souche sensible à la température du virus IBR atténué était préparée par Norden Laboratories de Lincoln, Nebraska Les matériels et méthodes utilisés dans la préparation de la souche sensible à la température du virus IBR sont décrits plus en détail dans 'Evaluation of the Safety and Efficacy of an Intranasal Vaccine Containing a Temperature-Sensitive Strain of I fectious Bovine Rhinotracheitis Virus", Kucera et coll, Am J Vet Res, 39, 607-610 ( 1978) Le vaccin TSV-2 contient également une souche sensible à la température de Pi-3 Par sensibilité à la température, on entend que les virus sont traités de telle sorte qu'ils ne puissent pas se reproduire à la température du corps de la vache et que leur développe- ment est limité à la muqueuse nasale Huit veaux ont reçu du TSV-2 et huit veaux ont été traités comme témoins Un ml du vaccin TSV-2 contenant environ 300 000 TCID 50 de virus IBR a été administré dans chaque naseau de chacun des veaux traités Les titres de virus complet pour le vaccin TSV-2 administré dans la quantité recommandée par Norden- Laboratories sont donnés dans le tableau H Après vaccina- tion, chacun des veaux était suivi pour enregistrer son gain de poids et sa consommation quotidienne d'aliments déterminée par un indicateur Le tableau I donne les résultats de consommation d'aliments pour chaque veau et montre que les veaux vaccinés consommaient davantage d'aliments que les témoins non vaccinés Le tableau J donne les poids corporels et montre que les veaux vaccinés gagnaient davantage de poids et le faisait plus efficacement que les témoins non vaccinés. TABLEAU H_ Doses de vaccin IBR/PI-3 TSV-2 IBRTS = 10 5 TCID 50; PI-3 T1 OTCID 5 Rhivin IBR = 106,1 TCID 0; PI-3 = 107,1 TCID 5 Rhivin/10 IBR = 10 'l TCID 50; PI-3 = 106 > 1 TCID t'., w N Un. N TABLEAU I Consommation d'aliments (kg) par des veaux après vaccination par de 1 'IBR administré par voie intranasale et par du vaccin PI-3 (TSV-2) Nos des veaux Jours apres la vaccination 1-14 15-28 1-28 Teimoins: 22 Total Moyenne 99,3 86,6 52,6 128,4 78,0 102,1 73,9 103,0 723,9 ,7 Moyenne quotidienne 6,48 Vaccinés- 123,8 123,4 51,7 81,6 ,3 59,9 ,2 99,3 Total 730,2 Moyenne 91,2 Moyenne quotidienne 6,53 127,9 73,0 72,6 121,1 93,9 ,2 77,1 128,4 809,2 101,1 7, 21 123,8 188,2 69,8. 66,2 104,3 ,7 133,3 138,3 909,6 8,12 227,2 159,7 ,2 249,5 171,9 217,3 151,0 231,3 1533,1 191,9 6,85 247,7 311,6 121,6 - 147,9 194,6 ,6 233,6 237,7 1640,3 205,0 7,30 :15 TABLEAU J Poids corporesl de veaux après vaccination par de 1 'IBR et du vaccin PI3 administré par voie intranasale (TSV-2) Veau no Jours après vaccination 0 14 28 gain 1-28 Témoins 22 Total Gain quoti- dien moyen 0,37 1,94 1,15 Vaccinés 1 Total Moyenne Gain quoti- dien moyen 288 312 *239 245 193 200 201 215 258 254 217 231 297 300 197 124 1890 1951 236 243,9 _ 0,54 276,1 2,30 39,8 1,42 La présence de l'interféron dans les sécrétions nasales de chaque veau de l'étude était suivie pendant dix jours après la vaccination par administration intranasale du vaccin TSV-2 Comme le montre le tableau K, au cours des dix jours suivant la vaccination, l'IFN a été détectée dans 56 sur 76 ( 74 %) et dans 2 sur 63 ( 3 %) des échantillons de sécrétions nasales recueillies des animaux vaccinés et des témoins, respectivement De 3 à 8 jours après la vaccination, l'IFN était détectés dans 51 sur 55 ( 93 %) des échantillons recueillis des animaux vaccinés. TABLEAU K Titres en interféron dans les sécrétions nasales de veaux après administration intranasale de vaccin IBR (TSV-2) Veau No Jours après l'inoculation intraveineuse 0 2 3 4 5 6 7 8 9 10 7 Témoins O O O O O -* O O O O 8 U O O O O -0 O O O O 9 0 O O O 50 O O 22 O O O O O O O O - O O O O O O O O O O 41 O O O 0 O O O O O 88 O 42 O O O 0 0 00 O O 91 O 00 O O O O O O ** 0/8 0 > 4 1/7 0/8 0/7 0/4 0/6 1/5 0/8 0/7 0/7 Vaccinés 1 O '0 O 62 400 200 ' O 55 32 O 490 1 l O O O 49 420 200 160 400 2000 33 O 12 O 23 42 46 200 O 33 32 100 320 O 62 O 20 500 230 160 49 110 O O 79 O O 80 110 150 370 270 1100 20 O 82 t O O 62 34 O 31 52 290 680 38 20 62 O 35 140 O 78 20 2000 700 440 93 O O 250 450 120 200 44 44 O O ** 1/8 3/6 1/7 7/7 8/8 6/8 6/8 8/8 8/8 5/8 4/8 * Quantité de sécrétions nasales insuffisantes pour l'essai ** Nombres de veaux avec interféron /nombre de veaux soumis à l'essai. Ni Mi ri W- Ob- 253743 à Tous les échantillons de sécrétions nasales ont été dialysés dans un tampon K Cl-H Cl (p H 2,0) pendant une nuit, puis un tampon PBS (p H 7,4) pendant une nuit avant le dosage par réduction de la plaque La méthode de réduction de la plaque modifiée par Rosenquist et Loan (Am J Vet Res 28: 619-628, 1967) a été utilisée Des dilutions en série d'échantillons préparés ont été confectionnées dans le milieu d'entretien Des quantités de 2 ml de ces dilutions ont été appliquées à des cultures en boîte de Pétri à six puits de cellules de rein de foetus de boeuf et abandonnées une nuit à 37 C Les cultures témoins ont été traitées une nuit par 2 ml de milieu d'entretien Après la période d'incubation, les fluides ont été aspirés, les plaques ont été lavées avec 2 ml de BSS de Hank et 0,25 ml de VSV (calculé pour contenir 50 PFU) ont été ajoutés à chaque boite de Pétri Après adsorption à 370 C pendant une heure, l'excès de fluides viraux a été aspiré, et le milieu de couverture a été ajouté. Les plaques étaient habituellement striées le 3 ème jour. Les titres en interféron ont été déterminés par la méthode des probits (Lindenman et Gifford, Virology 19-302-309, 1963) et ont été exprimés comme les inverses des dilutions qui produisent une réduction de 50 % du nombre des plaques de VSV, par comparaison avec leur nombre dans les cultures témoins. EXEMPLE 10 Dans cette étude, la source d'interféron était les sécrétions nasales induites par la vaccination avec un certain nombre de vaccins pour la rhinotrachéite infectieuse bovine (IBR) La consommation d'aliments pour tous les veaux y compris dix veaux témoins utilisés dans cette étude a été étudiée pendant 4 jours avant la vaccination Chaque veau dans son groupe de vaccination a eu la faculté de manger dans un des cinq indicateurs Les résultats de cette observation sur la consommation d'aliment chez les veaux sont donnés dans le tableau L. TABLEAU L Nourriture consommée en kg, consommation totale en quetre jours avant l'essai Numéro de 27 ** BL l'indicateur NA Moyenne Consommation Quotidienne moyenne ,0 22,9 22,8 ,73 5,70 Veau No. Total '6 B 18,0 4,51 18,7 4,67 -* Veau retiré du parc, au jour O Veau ballonné retiré de l'étude * * 2537436- En plus des veaux témoins, dix veaux vaccinés avec le vaccin IBR intranasal TSV-2 de la même manière qu'à l'exemple 9 ont été étudiés Cet essai comprenait aussi 9 veaux vacci- nés avec un vaccin IBR/PI-3 intramusculaire (IM) fabriqué par Anchor Laboratories, dix veaux vaccinés avec une dose complète d'un vaccin intranasal IBR/PI-3 (Rhivin) fabriqué par Pitman-Moore, Inc, et dix veaux vaccinés avec un dixième de la dose complète de vaccin Rhivin Les doses pour chacun de ces traitements par des vaccins sont données dans le tableau H. Pour chaque groupe de veaux étudié, le gain total et les gains quotidiens moyens pendant la période de 60 jours ayant précédé l'essai sont donnés dans le tableau M Les résultats recueillis avant l'essai indiquent certaines différences dans les performances avant l'essai comme le montrent les tableaux L et M Bien que les groupes n'aient pas été identiques, les résultats reflètent le fait que les groupes de traitement étaient équilibrés et permettaient d'assez bonnes comparaisons. Tableau M Résultats avant l'essai sur les poids et le gain de poids Nbre ae po Is Poldas au Gain total gain quotidienmoyen Traitement veaux au 608 j jour O avant essai ap essai av essai apr essai variation Témoin 10 188,6 267,4 68,76 29,2 1,15 1,04 0,09 Anchor Labs (IM) 9 190,6 255,9 65,27 31,3 1,09 1,11 + 0,02 TSV-2 10 192,1 261,3 69,1 33,5 1,15 1,20 + 0,05 RHIVIN 10 188,7 256,7 68,00 30,6 1,13 1,09 0,04 RHIVIN/10 10 188,5 259,5 71,03 31,5 1,18 1,12 0,06 w- ré w o' Un résumé des résultats pour l'essai après les traite- ments spécifiques est présenté dans la tableau N Les veaux traités par le vaccin intranasal TSV-2 présentaient le gain total le plus élevé, le meilleur gain quotidien moyen et la meilleure efficacité d'utilisation des aliments. Tableau N' Résumé des poids, des gains et de la consommation d'aliments Parc Traitement 1 Témoin **** 2 Anchor Labs (IM)*** 4 TSV-2 6 RHIVIN 8 RHIVIN/10 Poids moyen * dihut,_fin 257,4 286,6 255,9 287,2 261,3 294,8 256,7 287,3 259,5 291,1 Gain total moyen 29,2 31,3 33,5 ,6 31,6 augmen- tation en % 11,4 12,2 12,8 11,9 12,1 gain Nourriture quotidien moyenne oonsamrée moyen 1 ontidienn =m=n 1,04 6,87 1,11 6,99 1,20 7,21 1,09 6,89 1,12 7,41 Nourriture/ gain ** 6,58 6,26 6,31 6,31 6,59 * Poids initial = moyenne de deux poids pris à O et 2 jours Poids final = moyenne de deux poids pris à 28 et 29 jours ** Nourriture/gain calculé en divisant les kilos quotidiens moyens de nourriture consommée par le gain quotidien moyen *** Un veau supprimé des résultats du parc 2 en raison d'un ballonnement *** Veaux témoins séroconventis au virus IBR à-28 jours, indiquant une infection non apparente par le virus IBR rla w w os w w EXEMPLE 11 L'effet de l'interféron de sécrétion intranasale a été essayé dans une autre étude mettant en jeu six taureaux et six bouvillons pour chaque groupe d'essai Un groupe a été traité comme témoin, un groupe a été vacciné avec le vaccin intranasal IBR TSV-2 de la même manière que dans l'exemple 9, et un groupe a été vacciné avec le vaccin IBR/PI-3 intra- musculaire de la même manière que dans l'exemple 10 o Le tableau O montre le poids moyen au départ et les gains de poids moyens par veau au 7 ème, 14 ème, 21 ème, 28 ème et 58 ème jour après la vaccination Le tableau P présente le gain de poids quotidien moyen et le gain de poids moyen en pourcenta- ge du poids corporel au 28 ème et au 58 ème jours Les veaux vaccinés avaient en moyenne un gain de poids quotidien supé- rieur, tous les veaux traités par le vaccin intranasal TSV-2 'présentant le gain de poids quotidien moyen le plus élevé. TABLEAU O Gain de poids moyen pour des veaux vaccinés par le vaccin IBR Parc Traitement Poids Gain moyen -a * - _ moyen 7 e jour 14 e jour 2 ie jour 28 e jour 58 e 3 our Témoin taureaux 244,6 13,7 21,9 25,7 39,6 93,1 26 _Témoin bouvillon 263,7 18,5 19,4 33,4 43,3 93,4 27 -Taureaux IM 245,8 18, 2 19,9 26,4 50,5 111,4 28 -Bouvillons i M 270,4 7,35 12,6 30,5 42,9 95,6 29 -Taureaux TSV-2 245,1 13,3 19,5 35,6 46,8 101,4 Bouvillons TSV-2 273,4 17,7 18,9 34,5 52,5 108,3 W (A * Six veaux par parc tee w os. TABLEAU P Gain quotidien moyen pour chaque groupe d'essai Traitement Témoin IM TSV2 gfain quotidien Ivi 28 iour 58 è inur 1,48 1,67- 1,77 1, 61 Gain en % du poids corporej 2 Btjour 58-è jour 16,> 3 18,j 1 1,78 1,80 19, 2 36,7 ,31 , 4 w- ru -.4 AN 0 % EXEMPLE 12 L'effet de fibroblaste bovin sur l'appétit de porcelets élevés en litière a été examiné Soixante-dix porcelets ont été choisis à la naissance pour l'essai, trente cinq porce- lets servant de témoins A chacun des 35 porcelets choisis pour recevoir le traitement IFN, on a administré par voie orale 5 ml d'une IFN bovine ayant un titre de 7 000 unités/ml. L'interféron a été administré à chacun des trois jours avant le sevrage Les poids des porcelets tels-qu'ils ont été suivis sont donnés dans le tableau Q Les poids des porcelets élevés en litière ne différaient que d'environ 45 g/porcelet à l'âge de 21 jours, mais 38 jours après le sevrage, les porcelets traités par 1 'IFN dépassaient le poids des témoins de 0,68 kg. Tableau Q Effet de l'IFN bovine sur le poids de 70 porcs Nbre de Poidsc (kg) -,I jour porcs T Raitement naissance 10 21 -28 sug S + 353 + 10 + 3-8 UFN 1,6 3,2 5,0 5,80 6,17 6,57 7,71 - 21,9 témoins 1,7 3,3 5,0 5,90 6,08 6,35 7,35 21,3 Avantage pour l'I Fkq-0,1 -0, 1 + 0 -0,1 + 0,09 + 0,22 + 0,36 + 0,6 w oe w -Ni EXEMPLE 14 Une autre étude sur l'effet de l'IFN bovine sur le gain de poids de porcelets élevés en litière a été effectuée. 72 porcelets ont été utilisés dans l'essai, 36 d'entre eux recevant un traitement par l'interféron, tandis que le reste servait de témoins Les porcs traités par l'IFN recevaient chacun 7 ml d'IFN bovine d'un titre de 7000 unités/ ml L'IFN était administrée par voie orale chacun des trois jours précédant le sevrage Les poids des porcelets sont présentés dans le tableau R Bien que les porcelets élevés en litière différaient de poids en moyenne de 59 g seulement à l'âge de 21 jours, les porcs traités par l'IFN dépassaient le poids des témoins d'une moyenne de 770 g 38 jours après le sevrage. TABLEAU R Effet de l'IFN bovine sur le poids de 72 porcs Nbre de Poids-i Qljur porcs "'zit=l tnaissance 10 21 era S + 3 S + 10 S + 38 36 UFN 1,7 3,2 5,17 6,53 6,82 8,19 18,92 36 Témoinsl 1,7 3,1 5,11 6,45 6,71 7,96 18,15 Avantage pour 11,IF O + 0,1 + 0,06 + 0,08 + 0,11 + 0,25 + 0,77 CD. M t A U, 1 -14 C" cx REVENDICATIONS 1.Procédé de régulation de l'appétit d'un animal verté- brâ à sang chaud, caractérisé en ce qu'on administre audit -animal une fraction biologiquement active d'interféron en quantité efficace pour moduler l'absorption d'aliments par ledit animal. 2 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit animal estun mammifère. 3 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit animal est un oiseau. 4 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2 ou 3, caractérisé en ce que l'interféron est iso Lé de cellules d'origine bovine. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'interféron est un interféron de fibroblaste. 6 Procédé pour stimuler l'appétit du bétail, caracté- risé en ce qu'on administre au bétail une fraction biolo- giquement active d'interféron trouvée dans des cellules d'origine bovine - 7 Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'interféron est de l'interféron de fibroblaste. 8 Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'on administre par voie orale à chaque bovin au moins une dose d'au moins 10 000 unités d'interféron de fibroblaste de bovin par kg de poids corporel. 9 Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'on administre par voie intraveineuse à chaque bovin, quotidiennement pendant au moins trois jours, au moins une dose d'au moins 4 000 unités d'interféron de fibroblaste de bovin par kg de poids corporel. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'interféron est secrété par les naseaux par chaque bovin en réponse à une inoculation avec une souche de virus vaccinal. 11 Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que la souche de virus vaccinal est une souche vaccinale de virus de la rhinotrachéite infectieuse des bovins. 12 Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce qu'on inocule à chaque bovin au moins environ 10 TCI Df 5 de cette souche vaccinale. 13 Procédé pour stimuler l'appétit des porcs caractéri- sé en ce qu'on administre au porc une fraction biologiquement active d'interféron trouvé dans des cellules d'origine bovine. 14 Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que l'interféron est un interféron de fibroblaste. Procédé selon la revendication 14, caractérisé en ce que les porcs sont des porcelets non encore sevrés et en ce qu'on administre par voie orale aux porcelets environ 5 000 à environ 50 000 unités d'interféron de fibroblaste de bovin par kg de poids corporel par jour un à cinq jours avant le sevrage. 16 Procédé pour augmenter l'efficacité de l'utilisation d'aliments chez les poulets, caractérisé en ce qu'on administre aux poulets une fraction biologiquement active d'interféron trouvé dans des cellules d'origine bovine. 17 Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que l'interféron est un interféron de fibroblaste. 18 Procédé selon la revendication L 7, caractérisé en ce que les poulets reçoivent l'interféron de fibroblaste de bovin dans leur eau de boisson en une quantité d'environ unités à environ 7 000 unités par ml d'eau de boisson. 19 Fraction biologiquement active d'interféron, ou composition alimentaire la contenant, pour utilisation dans la régulation de l'appétit des vertébrés. Fraction biologiquement active selon la revendication 19, caractérisée par le fait que ledit interféron est un interféron isolé de cellules d'origine bovine. 21 Fraction biologiquement active selon la reven- dication 20, caractérisée par le fait que ledit interféron est isolé de fibroblastes.