FR 2538387 A1 19840629 FR 8320597 A 19831222 1. La présente invention se rapporte à de nouvelles substances physiologiquement actives désignées par 0 F 4949, à leurs dérivés, et à un procédé pour les fabri- quer ainsi qu'à des produits pharmaceutiques les conte- nant comme ingrédients efficaces, Ainsi, la présente invention se rapporte à des composés représentés par la formule générale (Il et à leurs sels, et,en outre, à un procédé pour les fabriquer ainsi qu'à des produits pharmaceutiques les contenant; O 1 OR O o R 2 3 CH 2 ' CH R 4/ -CH CH-Y Co -N-CH CO NE f HC-OR-5 i x (T) 2 L 38337 2, o R 1 est l'atome d'hydrogène, un groupe alkyle ayant 1 à 10 atomes de carbone, ou un groupe acyle ayant 1 à 6 atomes de carbone; R est l'atome d'hydrogène ou un ato- me d'halogène; R est l'atome d'1 ydrogène ou un groupe alkyle ou acyle ayant 1 à 6 atomes de carbone F R 4 est l'atome d'hydrogène ou un groupe alkyle ayant 1 à 6 atomes de carbone; R est l'atome d'hydrogène ou un groupe acyle ayant 1 à 4 atomes de carbone; X est CONH 2 f un groupe hydroxyalkyle ayant 1 à 6 atomes de carbone, ou COOR 6 (o R 6 est l'atome d'hydrogène ou un groupe alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone); et ? est CONH 2, un groupe hydroxy, alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone ou COOR (o R est l'atome d'hydrogène, un groupe alkyle ayant 1 à 10 atomes de carbone ou le groupe benzyle). Parmi les composés représentés par la formule ( 1), les composés de formule CIT) OR 1 t o o 1: CH CH D 2 C 2 (i I) Ng -CH CH-COOH 2, CO NU CHCO-IM CHOH CON 2 o R 1 est l'atome d'hydrogène ou le groupe méthyle sont désignés par OF 49 49 dîns la présente description, et, parmi les deux indiqués ci-dessus, le composé (III), c'est-à-dire (II) o R 1 est le groupe méthyle est désigné par O F 4949-I et l'autre composé (IV), c'est-à-dire (II) o R 11 est l'ato- 253838 Y 3 t me, d'hydrogène, est dési gné p Ar O 494 q-r II OC Ro o CH Cen C CF. 9 "V 2 9 " 2 2 NH -CH CH-COO N 12-CH "CH-COOU CO-NH-CH-CO CO-NU-CH-CO-E CHO C-OH I i CONH 2(III) CON 2 (IV) La demandexes e a réalise de études pour trouver de nouvelles substances physiologiquement actives produites par des microorganismes et a trouvé que des nou- velles substances physiologiquement actives inhibant l'ac- tivité d'aminopeptidase B en grande proportion, qui sont solubles dans l'eau et des substances amphotères de type peptide nommées OF 4949 par la demanderesse, sont accumu- lées dans des microorganismes appartenant au genre Peni- cillium isolés dans le sol,. La demanderesse a réalisé d'autres études et a réussi à séparer deux substances semblables mais diffé- rentes,nommées OF 4949-I et-O F 4949- II a partir de 1 '0 F 4949 indiqué ci-dessus, D'après leurs propriétés physiques, chimiques et bi Qlogique$f on a confirmé que 11 QF 4949 I et 1 '0 F 4949- II sont de nouvelles substances physiologique-r ment actives ayant la même structure chimique sauf en ce qui concerne la présence d'un substituant, Ensuite, la de- manderesse a synthétisé divers dérivés et a confirmé que l'OF 494 g et ses dérivés présentent une activité d'inhibi. 4 ' tion contre l'aminopeptidase et une action d'immunomodu- lation contre les organismes vivants, et est arrivée à la présente invention. La thérapie dite d'immunomodulation a récemment été essayée vis-à-vis de maladies telles que des maladies d'auto-immunisation (telles que la néphrite, l'arthrite rhumatismale, l'érythématodee lupus généralisé et analo- gues) et les tumeurs malignes, et, dans un tel but, de nombreux produits pharmaceutiques ont été mis au point. Par exemple, le produit dit levamisole a été indiqué comme étant quelque peu efficace comme agent immunothérapeutique pour le cancer en tant que remède contre les maladies d'auto-immunisation telles que l'arthrite rhumastimale, On a mis au point de nombreux autres agents d'immunomodulation Cependant, il y a plusieurs problèmes tels que la plupart d'entre eux présentent des effets se- condaires non désirés quand on les administre pendant une longue période de temps et, à présent, des agents satisfai- sants thérapeutiques n'ont pas encore été disponibles, 2 Q La demanderesse a incidemment trouvé que l 1 OF 4949 et ses dérivés renforcent de manière marquée l'immunité cellulaire quand ils sont testés en utilisant une hypersensibilité du type retardé provoquée par l'inocu- lation d'érythrocytes de mouton comme antigènes sur les pattes arrière de souris Ainsi, l'0 F 4949 et ses dérivés présentent une action d'ixrmunomodulation et augmentent l'estimation immunologique eten conséquence, ils peu- vent être appliques comme agents d'immunomodulation pour des tumeurs malignes et d'autres maladies, En outre, l'0 F 4949 et ses dérivés présentent une activité anti-aminopeptidase e et présentent une action anti-inflammatoire inhibant la formation de bradykinine et, en conséquence, ils peuvent être appliqués comme remèdes pour les diverses maladies correspondantes, Des souches représentatives qui produisent 2538387,: 1 'QF 4949 ont été isolées à partir de sols dans la Préfec- ture de Kyoto par la demanderesse et leurs propriétés my- cologiques sont les suivantes, ( 1) Etat de croissance sur divers milieux de culture ( 24 WC, deux semaines), 1 Extrait de maltraga-iagar La croissance est lente et le diamètre des co- lonies est de 2,0 à 2,5 cm en deux semaines La couleur des surfaces des colonies est vert foncé à vert bleuâtre Les centres des colonies sont quelque peu en élévation, Les environnements des colonies sont plats et forment des mycéliumsdu genre velours, Les bords des colonies ont 1 à 2 mm de largeur et sont blancs, Certaines parties de l'en- vers sont jaunes mais aucune production de pigment dans l'agar-agar n'est observée. 2, Pomme de terreglucose'agar-agar La croissance est lente et le diamètre des colo- nies est de 2,5 A 3,0 cm en deux semaines, Les centres des colonies sont de couleur blanche à vert grisâtre Les envi- ronnements sont jaunes à vert jaunâtre et forment des my- céliums du genre velours A la surface des colonies, il y a des canaux qui rayonnent Les envers sont de couleur jaune pâle à orange jaunâtre, avec de légères fimbries, et ne produisent pas de pigment dans i Vagar=agar? 3 Agar-agar de Czapek La croissance est très lente et l'aspect et la croissance des spores de conidies ne sont également pas bons, Les diamètres des colonies sont de 1,5 à 2 O cm en deux semaines, A la surface, il se produit des mycé liums du genre velours de couleur jaune pâle à orange jau- nâtre, Il y a quelquefois certaines parties de couleur blanche à grise, Les envers ne sont pas colorés et ne pro- duisent pas de pigment dans l'agar-agar 9 4 Agar-agar de Czapek additionné de liqueur de mals macérée 6, La croissance est lente et les diamètres des colonies sont de 2,0 à 2,5 cm en deux semaines, A la sur- face, 1 il se produit des mycéliums du genre velours de cou- leur vert jaunatre à vert foncé Les centres des colonies peuvent quelquefois former des fimbries, Les bords des colonies sont de 1,0 2 mm de largeur et sont blancs, Les envers ne sont pas colorés et ne produisent pas de pigment dans l'agareagar - Malt-j usagar agar La croissance est bonne et les diamètres des colonies atteignent 3,0 à 4,0 cm en deux semaines Les centres des colonies sont quelque peu en élévation et du genre velours ayant une couleur vert foncé à vert bleuâtre Les environnements sont de couleur jaune à vert jaunatre Les deux surfaces et la face en arrière forment de nombreuses fimbries Les envers sont de couleur orange jaun&tre à marron jaunâtre et ne produisent pas de pigment dans l'agar-agar. ( 2) Données morphologiques Les mycéliums sont incolores et forment des sep- tums Laplupart des pénicillus sont symétriques de manière biverticillée à symétrique de manière monoverticillée dans de certains cas Les conidies sont elliptiques ayant 3,0 à 4 F O Pm de longueur et 2,5 à 3,O Pm de largeur La dimension des chaînes de conidies est de 50 à 80 Pm Les stérigmat E sont lancéolées avec des pointes acuminées et sont produits en groupes d'environ 4 à 8, parallèles La longueur est 10,0 à 13,0 Pm et la largeur est 2,0 à 2,5 Pm, Les métulées sont en groupes, en nombre d'environ 2 à 8, sous forme condensée ou dans un état quelque peu diversi- fié La longueur est 10 à '13 Pm et la largeur est 2,5 à 3,0 Pm, Les conidiophores ont 50 à 80 pm de longueur et 2,5 à 3,0 Pm de largeur, La plupart d'entre eux ne sortent pas des mycéliumsaériens ou des mycéliums végétatifs mais, en passant à travers,certains d'entre eux sortent des my- 2538387 ô 7, céliums. ( 3) Conditions de croisance p H; croissance observée dans une gamme de p H de 2 a 12,le pl optimum pour la croissance étant 3 à 6, Température: la croissance est possible dans un intervalle de temperature de 6 à 33 WC et l'intervalle optimum est 18 à 28 QC. D'après les résultats des observations ci-des sus, le présent microorganisme est identifié comme étant le Penicillium rugulosum Les propriétés mycologiques du P rugulosum sont décrites en détail dans "A Manual of the Penicillia'" par Raper et Thom (H'afner, 1968), "Fungi in Agricultural Soils"s par Domsh et Gams (Longman, 1972), et Journal of General and Applied Microbiology, volume 2,page 1, 1956, par Abe. La demanderesse a nommé le présent microorganis- me comme étant le Penicillium rugulosum OF 4949 par suite de son aptitude à produire la substance O F 4949, Incidem- ment, le présent microorganisme a été déposé à l'Institut de Recherches sur les Fermentations, Agence de Science Industrielle et de Technologie, Ministère du Commerce International et de lli Idustrie du Japon sous le numéro de dépÈt FERM BP-203. En ce qui concerne les microorganismes applica- bles dans la présente invention, celui indiqué ci-dessus qui a été déposé est simplement un microorganisme à titre d'illustration et,en outre, tous les microorganismes ap- partenant au genre Penicillium peuvent être utilisés pour autant qu'ils produisent 10 F 4949, De plus, des souches mu- tantes naturelles et artificieiles obtenues par exemple par irradiation avec des rayons ultraviolets ou par traiter ment avec des produits induisant la mutation pour les mi- croorganismes tels que la nitrosoguanidine produisentquel quefois de 1 'OF 4949 et ces souches mutantes peuvent,bien sur, être appliquées dans la présente invention, 2538387 i 8, Dans la culture du présent microorganisme, le milieu utilisé peut être liquide ou solide, et,en géné- ral, la culture avec agitation ou la culture aérée avec agitation en utilisant des milieux liquides est appli- quée Tous les genres de milieux peuvent être utilisés pour autant qu'ils soient convenables pour la croissance des champignons et qu'ils puissent produire de 10 F 4949, Ainsi, comme source de carbone, des hydrates de carbone tels que, par exemple, le glucose, le fructose, le malt tose, le saccharose, le lactose, la dextrine, l'amidon, le glycérol, le sorbitol et analogues et des huiles et des graisses végétales telles que par exemple l'huile de soja peuvent être utilisés, Des exemples de sources azotées applicables sont la peptone, l'extrait de levure, l'extrait de viande, la poudre de soja, la poudre de grai- nesde coton, la liqueur de mais macérée, l'extrait de malt, des aminoacides (tels que l'acide glutamique, l'aci- de aspartique, -la tyrosine, la phénylalanine et analogues) et leurs sels, l'urée, des sels d'ammonium, des nitrates etc De plus, des produits micro-nutrîtifs tels que des sels minéraux (tels que le phosphate de magnésium, des sels de potassium, de sodium, de calcium, de fer, de man- ganèse, etc) et des vitamines (telles que la vitamine B 1, le pantothénate de calcium, et analogues) peuvent être également ajoutés en quantité adéquate, Dans la culture en grandes quantités, il est souhaitable de cultiver dans un liquide, Les conditions de culture telles que les p H du milieu, la température de culture, etc peuvent être modi- fiées dans un intervalle tel que l'on puisse produire de l'o F 4 q 49-, Cependant, dans une culture avec secouage ou agitation ou une culture aérée avec agitation, en utilisant un milieu liquide, le p H peut de préférence être de 4 à 7, la température de culture peut de préférence être de 25 à 30 WC et le temps de culture peut de préférence être de 2 2 C 38387, à 10 jours Dans la culture ainsi obtenue, l'QF 494 q est accumulé, Les substances selon la présente invention sont présentes à la fois: dans le filtrat de culture et dans les mycéliums et peuvent être séparées de l'un quel- conque des deux, Dans la séparation des substances dési-e rées à partir du filtrat de culture ou des mycéliums, di- vers moyens classiquement utilisés pour la séparation et la purification de substances organiques à partir de cultures de microorganismes peuvent être appliqués selon les propriétés des substances de la présente invention. Ce sont par exemple la chromatographie par adsorption en utilisant du charbon activé ou une résine d'adsorption non ionique, la chromatographie à échange d'ions en uti- lisant des échangeurs d'ions, la chromatographie de parta- ge en utilisant la cellulose et analogues, et la chromato- graphie de partage à inversion de phasesen utilisant du gel de silice combiné avec des groupes alkyles, De manière plus concrète, le filtrat de cul- ture, l'extrait acétonique-aqueux de mycéliumsou une solution contenant les-substances de la présente invention est amené à passer à travers une colonne remplie de char-. bon activé (par exemple fabriquée par la société dite Wako Pure Chemicals) , le produit dit Diaion HP-20 (de la société dite Mitsubishi Chem, Ind), etc et les substan- ces adsorbées sont éluées avec un acidee un alcali, de l'eau, l'alcool méthylique, l'alcool éthylique, et/ou de l'acétone On fait alors passer l'éluat à travers une colonne remplie du produit dit Dowex 50 W (type H+, de la société dite Dow Chemical) et autre échangeur de cations fortement acide ou du produit dit Dowex lx 2 (type OH -; de la société dite Dow Chemical) et autre échangeur d'anions fortement basique et les substances adsorbées sont éluées avec un acide, un alcali ou une solution de sel. 2538387; , Il est aussi possible de retirer les impuretés en amenant la solution à passer à travers le produit dit Dowex lx 2 (type Cl) La solution résultante est traitée avec le produit dit Diaion HP-20 ou d'autres produits com- me décrit ci-dessus pour amener les subtances désirées à être adsorbées, puis on les élue avec un solvant pour le dessalement, et on les concentre sous vide pour fournir le produit désiré de couleur marron jaun Rtre Ce produit brut est soumis à un traitement avec une colonne de cellulose cristalline dite Avicel (de la société dite Funakoshi Co),de Li Choprep (gel de silice combiné avec des groupes alkyles de la société dite Waters Co)ou d'autres produits,puis il est développé avec un acide, un alcali, de l'eau, un tampon, l'alcool méthylique, l'acétonitrile, l'alcool propylique, l'alcool n-butylique et/ou analogues pour fournir un seul produit. Les structures chimiques des produits O F 4949-I et OF 49494 II selon la présente invention sont corme suit: 0 F 4949-I 0 F 4949-II OCH 3 a C 2 C NH 2-CH CH-COOH Ir l CO-NH-CH-CO-NEH CHOH CON 2 (III) OH 0 A O CH CH 2 2 2 N H-CH " CH-COOH CO-NH-CH-CO-Ku CHOH CONH 2 (Iv) Les propriétés pihysiques et chimiques de ces substances sont comme suit ( 1) Formiule moléculaire O F 4949-1 C 23 I 2608 N 4 OF 4949,II C 22 H 40 N 4 ( 2) Analyses élémentaires OF 494 g-I calculée pour C 23 H 20 N 4,2120 C 52,30, H 5,46, N 10,64; Trouvé; C 52,87, H 5,79, N 10,72 %. OF 4949,t II' calculée pour C 221-12408 N 4 2120: C 51,60, H 5,48, N 11, 06; Trouvé C 51,97, H, 5,55, N 11,02 % ( 3) Poids moléculaires Les poids' moléculaires mesurés par le procédé dit SIMS (spectrométrie de masse d'ions secondaires) sont 486 pour l'0 F 4949-,,l et 472 pour 1 'QF 4949 I'. ( 4) Points de fusion; L'o F 494 g-1 et 1 '0 F 4949--Il fondent à peu près à. 2800 C Avec décomposition. ( 5) Pouvoir rotatoire spécifique O F 4949-I: lal 25 64,81 (c = 1,0, eau) 0 F 4949-II:* la J 25 = 42,60 (c = 1,0, eau) ( 6) Spectre d'absorption dans l'ultraviolet 1 % Les longueurs d'ondes et les valeurs de E lcm présentant des absorptions maxima quand l'0 F 4949-I et 1 '0 F 4949-î 1 sont dissous dans les solvants suivants sont comme présentées dans le-tableau 1. TABLEAU:1 unité; nn' (E) max 1 cm Solvants O e'4949-I J F 4949II 31. cran 213 ( 304), 2301 paulém, 23-6) 214 ( 282), 272 ( 57), E.ai 1 273 ( 46), 283 epuim40) 279 ( 58) I-ICI 0,05 e 212 ( 302), 228 ft AU 1 èM 227) 213 ( 279), 272 ( 56), 273 c 46), 283 ( 00em40) 279 ( 57) 1214 ( 308), 273 ( 47) 218 ( 313), 242 (épaulem-175)J K 05 N 1283 Cepaulem40) 297 ( 68)l 253838; 7} 12. ( 7) Spectre d'absorption dans l'infrarouge: Les longueurs d'ondes présentant des absorp- tions maxima mesurées avec des tablettes de bromure de potassium pour 1 '0 F 4949-I et l'OF 4949-II sont comme don- nées dans le tableau 2, TABLEAU 2 Unité cm-1 0 F 4949-I OF 4949-II l O e 3400, 1650, 1580, 1500, 1380, 1260, 34004 1650, 1580, 1500 1430, 13803 1225, 1160, 1120, 1100, 1020 1270 1250, 1225, 1160, 1120 ( 8) Solubilités: L'OF 4 g 49-I et l'OF 4949 _r II sont solubles dans l'eau, l'eau alcaline et le diméthylsulfoxyde; difficile- ment solubles dans l'alcool méthylique et l'alcool éthyli- que; et insolubles dans l'alcool n-propylique, l'alcool n-butylique, l'acétone, l'acétate d'éthyle, le chloroforme, l'éther, le benzène et l'hexane, ( 9) Réactions c O olorées: L'OF 4949-I et l'0 F 4949-II sont positifs vis-à, vis de la réaction à la ninhydrine, la réaction au perman- ganate de potassium, la réaction de Rydon-Smith, et la réaction à l'iodenégatifs vis -zàvis de la réaction de Sakaguchi, la réaction de Prochazka, la réaction de Hanes, et la réaction à l'anthrone, L'OF 4949-II est positif vis- à-vis de la réaction au Fe Ci 3, ( 10) Propriétés neutres, acides ou basiques; L'OF 4949-I et l'0 F 4949-11 sont des substances amphotères. ( 11) Chromatographie sur couche mince; 2538387 i 13. Les valeurs de Rf sur des plaques de gel de silice (société dite Merck) sont données dans le ta' bleau 3. TABLEAU 3 Valeurs de Rf Solvants OF 4949-I O F 4949- II| Alcool n butylique, acide acétique et eau ( 3: 1: 1) 0,32 0,32 Alcool n-butylique, pyridine, acide acétique et eau ( 3: 4: 3: 1) 0,35 0,35 Alcool n-propylique et ammoniaque 28 % ( 2: 1) 0,41 0,32 Alcool éthylique et ammoniaque 28 % ( 2 t 1) 0,5-4 0,48 ( 12) Chromatographie en phase liquide à haute performance: Les volumes de rétention et les temps pour l'OF 4949 I et l'OF 494941 I en utilisant le produit dit Nucleosil 5 C 18 (de la société dite Macherey-Nagel Co) sont comme donnés dans le tableau 4. Dimension de la colonne: 4,0 mm de diamètre x 150,0 mm Produit de remplissage: Nucleosil 5 C 18 Solvant: Tampon au citrate 0,1 M (p H 5,7) et acétonitrile ( 90: 10) Vitesse de liquide: 0,5 ml/minute Identification: UV 275 nm TABLEAU 4 O O F 494 RI O 4949 - 9 II Temips de rétention q,9 minutes 4,2 minutes Volume de rétention 5,0 ml 2, 1 ml \ S, A r L À 13 > couleurs L'OF 49-49 et Qes sunstances; l'OPF 4949v I sont des poudres incolores. (.14) Spectre de résonance magnétique nucléai- 14. re de proton Les déplacements chimiques, les nombres de pro- tons et les multiplicités de 1 'OF 4949-KE et de 1 '0 F 4949 ?II mesurés dans de l'eau-ammoniaque lourde sont comme suit; Unité Déplacement chimique (ppm) Norme interne DSS 0 F 4949-I: 2,66 (in, t), 2,75-3,/00 ( 2 E, m), 3; 37 ( 11 f, dd) 3770 l E, dd), 3,93 ( 31, s), 4,42 ( 111, d), 4, -48 (in, da), 83 ( 111, da), 6,87 -( 21 î, m), 7,07 ( 2 H 1, m), 7 >,26 (lit, dd), 7,46 ( 111, dd) - 0 F 4949-II: 2,65 ( 111, t), 2,70-2,,95 ,05 ( 1 H, dd), 7,22 (ludd), 7,41 (la 1, dd) ( 15) Spectre de résonance magnétique nucléaire de C 13 Les déplacements chimiques de 1 '0 F 4949-I et de l'0 F 4949-Il mesurés dans de l'eau ammoniaque lourde 0,06 N sont comme suit: Unité; Déplacemgent chimique (ppm) Norme interne: p"dioxane ( 67,4 ppm) 0 F 4949-I: 178,7, 176,0, -174 A& 9, 168,3, 153,4, 149 y 4, 148,0, 1 L 36,5, 132 t 9 * 131,r 5, 128,2, 125,0, 123,1, 122,1, 116,2, 113,0, 72,9, 57 D 9, 56,7, 55,1, 53 ? 8, 39,,7, 38,9 0 F 4949-II: 178,8, 176,0, 175,8, 168,3, 154,1, 149,0, 145,6, 136,1, 132,8, 131 f 4, 12713, 12572, 123 1 I, 122,0, 11710, 116,8, 73,0, 57 t?, 55,1, 54,0, 39,7, 39,1 2538387 i , Comme cela apparaît ci-dessus, 1 '0 F 4949- I et l'OF 4949-II sont des substances semblables ayant des propriétés semblables, Ainsi, ce sont de nouvelles subs- tances ayant la même structure sauf que 1 'OF 4949 -II a un groupe hydroxyle phénolique alors que,dans 1 'OF 4 q 49-I, ce groupe est remplacé par un groupe méthoxy. La présente invention, évidemment,couvre non seulement 11 '0 F 4949-I et l'OP 4 g 49-II mais aussi leurs sels avec des métaux, des bases organiques, des acides minéraux et des acides organiques, L'OF 4949-I et l'OF 4 q 49 g-r I selon la présente invention peuvent être amenés à fournir de nouveaux déri-. vés, Des structures de dérivés représentatifs de 1 '0 F 4949 sont données dans le tableau 5 et leuo spectres d'absorption dans l'infrarouge et les spectre de résonan- ce magnétique nucléaire du proton sont donnés dans le ta- bleau 6, Pour autant que ces dérivés puissent former des sels, ces sels avec des métaux, des bases organiques, des acides minéraux et des acides organiques sont aussi cou- verts par la présente invention avec une limitation telle que ces sels soient pharmacologiquement acceptables, xlu 4 égo Cie 2 R' R R 3 1 R 4 R-5 x T Ic(PMPG;é j i 1 1 1 1 i 25383 s't; 16, TA Bi Fm 5 CRI CE R 3, 2 e 4 >-OE, CR-Y Co -m-ca Co j;R t Bc-OR-5 v x ( 1) z i i i is E H E H- R -H il R E lH 3 B CA- a R: il a E a u -a a.' E R - a. x - a R R. R a a R R a a ' il a a ' a i R 1 offl 2. COOR c.o OOE 3 CO,%. CI'& CIDIM 2 COIM 2 Co'OE 2 CONH 2 C"I'ma CO% COINOE 2 - Co% - C MI 2 Colmi Coffla - M'ma COOR COOCE 3 Cooa COD 03 CODE COOOELJ CVIII *Cazol, - CODE ' COOM 3 cool COOCK 3 COOK cou CDOIL COOK Cooca,3 COM 479 COWL 2 cê,, Co% COOEI COOC 53 CONZ 2 7 - - il 12 - 14 PF 4,9149-1) 14, - 16 ' v 1 20 H x a x R x x R R - x à R mi = 3 OE 3 CH 3 - OE 3 Ca 3 c'là "à a a x x" R R - a - a a a R ' a - R a a E a R x E E x E a E Cao CEIO COCH 3 COCH 3 OE 3 CA R a R a R ' u E a i i ç L-ç 9 m) Oc 19 C(M)çz" "(Zxa 2 xç E. 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TABLEAU 5 (Sui-te) 3350, 1660, 3580, 1500, 1390, 1250, 1220, 1120- 3400, 1650, 1590, 1500, 1390, 1225, 1120 3400, 1380, 3400, 1270, 3400, 1265, 3400, 1265, 3400, 1235, 1660, 1260, 1580, 1500, 1225, 1120, 1740, 1680, 1240, 1130, 1735 e 1670, 1235, 1130, 1740, 1650, 1230, 1160, 1670, 1510, 1130, 1020 3400, 1720, 1660, 1265, 1235, 1130, 3400, 1430, 1730, 1650, 1260, 1225, 1510, 1500, 1270, 1500, 1500, 1125, 3400, 1650, 1600, 1500, 1265, 1230, 1120, 1020 3400, 1650, 1505, 1260,- 1230, 1130, 1020 3400, 1505, 3400, 1265, 3350, 1500, 1720, 1680, 1270, 1230, 1740, 1640, 1230, 1125, 2950, 1735, 1265, 1235, 1645, 1500, 1680, 1130, 3350, 1730, 1670, 1500, 1265, 1230, 1130, 1020 3400, 1435, 3350,' 1425, 1120, 3300, 1390. 1740, 1660, 1500, 1265, 1235, 1130 1730, 1650, 1500, 1360, 1260, 1220, 1680, 1590, 1510, 1265, 1235, 1130, 1,.20 (G 1 t 3), 3,90 (CH), 4,32 (CH), 5198 (CH), 617-7,6 (CH x 6) 1,06 (C H 3 x 2), 4,27 (CH), 6,40 (Cri), 6,6-7,5 (CH x 6) 2,6-3,0 (CH), 3,38, 3,70 (CH 2), 3,93 (OCH 3), 4,4 (CII), 5182 (CH), 6,? 8-7,55 (CH x 6) 3,70 (OCH 3), 3,80 (OCH 3), 3,93 (CH), 4,60 (CR>, 4167 (CH), 5,p 86 (CH), 6,6-7,4 (CH x 6) 0,97 (CR 3), 3,86 (o CH 3), 4,80 (CH), ,92 (CH), 6,7-7,5 (CH x 6) 3787 (OCH 3), 5122 (CH 2), 5,98 (CH), 6,5-7 5 (CH x 6), 7,41 ( 5 H) 3,78 (OCHI 3), -5,77 (CH), 6,5-8 ?l 1 (CH x 6, CONK 2 x 2, CONU x 2) 3,083 (OCH 3), 4,56 (CR), 4,66 (CH), ,82 (CH), 6,,6-7,4 (CH xc 6) 3172 (OCH 3), 3,80 (oc R'3), 3,88 (rj CEH 3), 4,34 (CH), 6,7-7,94 (CH x 6 ? 3,79 (OCH 3), 4,24 (CH x 2), 6,54 (CH), 619-7,1 (CH x 6), 7,17 > 7,,35 C O LIE 2) 3,4-3,6 (CH 2), 3,6-3,8 (CH 2), 3,94 ( O C 93). 4,53 ( CH), 5,81 (CH), 6,8-7,5 (CI Lx 6) 3,84 (o CR 3), 4,,43 (CH), 5 _, 85 (CH), 6 y 5-7,6 (CH x 6), 8,F 07 (CHO) 3772 (OCH 3), 3; 8 O ( O CR 3),1 4,00 (CH), 5178 (CH), 6,4-7, 5 (CH x 6), 7,95 (Ci IO) 0,8-1,1 (CH 3), 3,76 (OCR 3), 5,92 (CH), 6,5-7,5 (CH x 6), 8,04 (CR 0) 1,99 (CR 3 CO), 3,87 ( O CH 3), 4,30 (CH), ,90 (CH), 6,5-7,5 (CH x 6) 1,9 (CH CO), 3,78 ( O CR 3), 3,84 ( O Cl 13), 4,3 H, 5,88 (CH), 6 5-7,5 (CH x 6) 1,82 (CR 3 C 0), 2,07 (CH 3 CO), 3 > 70 ( O CR 13), 3,78 ( O CR 3), 5)78 (CH), 6,4-7 >,4 (CH x 6) 0,9-1,3 (CH 3), 4,14 (CH), 4,70 (CH), ; 88 (CH), 6,5-7 > 5 (CH x 6) il à 16 - 17 18 i i i i t f / D 2538387 i 19, TABLEAU 6 (Suite) 29 3400, 1670, 1600, 1500, 3 r 91 ( O CH 3), 4,21 (CH), 5,96 (CH), 1385, 1260, 1225, 1145 618-7 5 (CH x 5) 3400, 1630, 1495, 1390, 3,87 ( O CH 3), 4 42 (CH), 5 r 94 (CH), 1220, 1170, 1145, 1020 6 y 7-7 e 5 (CH x 5) 31 3400, 1660, 1505, 1390, 196 (CH 3), 1 4-1,8 (CH 2 x 2) , 4 04 (CH 2), { 1260, 1235, 1130 4,18 (CH), 4 66 (CH), 5; 82 (CH), 676-7, 4 (C Hx 6) 2 13400, 1740 j 1680, 1500, 2,18 (CH 3 C 0), 2,35 (CH 3 C O O), 4 r 95 (CH), 1370, 1265, 1210, 1115 6 i O (CE), 6,7-7,6 (CH x 6) l __ Parmi les composés représentés par la formule (I) ci-dessus, ceux a l'exception de 110 F 4949-I et de l'0 F 4949-t II peuvent être fabriqués à partir de l'OF 4949-I ou de l'OF 4949-II suivant les manières indiquées ci-dessous et leur combinaison. (I) le composé (I) o& R est un groupe alkyle inférieur peut être fabriqué par un procédé d'alkylation connu du composé ( 1) o R 1 est l'atome d'hydrogène sur le groupe hydroxyle phénolique Des exemples d'agents d'al- kylation dans la réaction d'alkylation sont des halogénures d'alkyle, des sulfates d'alkyle, des p-toluènesulfonates d'alkyle, ou des diazoparaffines ou des alcools en présen- ce de catalyseurs acides ou d'agents de déshydratation tels que la U,N'dicyclohexylcarbodiïmide En se référant aux conditions réactionnelles, des températures de'réac- tion convenables, des temps de réaction convenables et des solvants convenables sont choisis selon les matières utilisées, les agents d'alkylation appliqués et les compo- sés recherchés, Dans certains cas, la réaction est amélio- rée par addition de basées, Par exemple, dans l'alkylation de la matière avec des halogénures d'alkyle, un halogénure de méthyle et un halogénure de butyle sont employés dans la fabrication des composés o le groupe méthyle et le groupe utyle sont présents dans R respectivement Dans groupe butyle sont présents dans R, respectivement Dans 20. ces réactions, on applique des solvants tels que le dimé- thylsulfoxyde, la N,N-diméthylformamide, le 1,2,diméthon xyéthane, le tétrahydrofurane, etc et on applique des bases telles que l'amidure de sodium, le carbonate de potassium, la triéthylamine, la soude, la baryte, l'oxyde d'argeft, l'hydrure de sodium,etc, La réaction est ordinairement conduite à la température ambiante jusqu'â 60 C et la température am- biante est très préférée Le temps de réaction varie selon la matière de départ utilisée, les agents d'alkylation ap- pliqués, les températures de réaction et des solvants et, dans la plupart des cas, la réaction est achevée à peu près en 50 minutes à 50 heures, Après la réaction, le produit souhité peut être isolé et purifié par des procédés connus tels que la concentration, l'extraction avec un solvant, le trans- fert à un autre solvant, la cristallisation, la chromato- graphie par échange d'ions, la chromatographie par adsorp- tion et la chromatographie de partage. ( 2) Les composés (I) o R est un groupe acyle inférieur peuvent être fabriqués par un procédé d'acylae tion connu à partir d'un composé (I) ou R est l'atome d'hydrogène - Des exemples de ces procédés d'acylation sont la réaction avec un acide carboxylique en présence d'agents de déshydratation tels que la N,N'-dicyclohexyl- carbodiimide, la réaction avec des halogénures d'acide en présence de bases telles que la pyridine, la diméthyl- aniline, la tétraméthylurée, le magnésium métallique, etc, et la réaction avec des anhydrides d'acidesen pré- sence de catalyseurs tels que l'acide sulfurique, l'aci- de p-toluènesulfonique, le chlorure de zinc, l'acétate de sodium et la pyridine,. Les conditions réactionnelles varient selon les matières utilisées et les agents d'acylation appliqués et 2538387 ' 21. aussi sont choisies d'après une combinaison convenable de températures de réaction de temps de réaction et de solvants selon les produits souhaités Par exemple, les comp QSéS (I) o il y a un groupe acétyle dans R sont fabriqués par l'utilisation d'anhydride acétique en présen- ce de catalyseurs tels que l'acide sulfurique, l'acide p-. toluènesulfonique, le chlorure de zinc, l'acétate de sodium ou la pyridine La température de réaction est ordinairement O à 60 QC et la température ambiante est très souhaitée Le temps de réaction varie selon la matiè- re de départ, le catalyseur, la température de réaction, etc et est:ordinairement d'environ 50 minutes à 50 heu- res, Après la réaction, le produit recherché est séparé et purifié à partir du mélange réactionnel par des procé- dés connus tels que la concentration, l'extraction avec un solvant, le transfert à un autre solvant, la cristalli- sation, et la chromatographie d'échange d'ions, d'adsorp-. tion et de partage. ( 3) Les composés (I) o R 2 est un halogène peu- vent être fabriqués, par un procédé d'halogénation connu pour des composés aromatiques en partant d'un composé (I) o R 2 est l'atome d'hydrogène Des exemples de ces procé& dés d'halogénation sont la réaction avec un halogène en présence de catalyseurs tels que le fer, un acide de Lewis, l'iode,etc; la réaction avec un agent d'halogéna, tion tel que l'imide N-bromosuccinique, le chlorure d'oxa- lyle, le chlorure de sulfuryle, l'hypochlorite de t-butyle, l'hypobromite de t-vbutyle, etc, La condition de réaction varie selon les matières utilisées et les agents d'halogé. nation appliqués,et aussi est choisieselon une combinaison convenable de température de réaction, de temps de réaction et de solvant selon les produits recherchés, Par exemple, le composé o l'atom e de hrome est présent dans R est fabriqué par la réaction avec la Nbromosuccinimide dans des solvants polaires tels que l'eau, un alcool et analo- 2538387 i 22, gues, La température de réaction est ordinairement dans l'intervalle de O C à 80 C et la réaction est de préférence conduite à la température ambiante Le temps de réaction est ordi, nairement d'environ 50 minutes à plusieurs heures, Après la réaction, le produit résultant est isolé et purifié par des procédés connus à partir du mélange réactionnel, tels que par exemple, la concentration, l'extraction avec un solvant, le transfert à un autre solvant, la cristallisa- tion et la chromatographie d'échange d'ions, d'adsorption et de partage ( 4) Des composés (I) ou R est un groupe acyle inférieur peuvent être fabriqués à partir d'un composé 3- (I) o R est l'atome d'hydrogène par un procédé connu dans lequel le groupe amino est acylé Des exemples de procédés d'acylation sont une condensation avec un acide carboxylique en utilisant un agent de condensation tel que des carbodiimides, du tétrachlorure de silicium- pyridine anhydre, du chlorure de titane et analogues la réaction avec des halogénures d'acidesen présence de bases telles que des amines tertiaires, la soude, l'acétate de sodium,des carbonates alcalins, la pyridine et analogues; la réaction avec un anhydride d'acide en présence de pro- duits accélérateurs, si cela est nécessaire,tels que l'acide sulfurique ou l'acétate de sodium L'état de réac- tion varie selon les matières de départ utilisées et les agents d'acylation appliqués et également est choisi d'après une combinaison de température de réaction, de temps de réaction et de solvant convenables pour les pro- duits désirés, Par exemple, les composés o un groupe formy- le est présent dans R 3 sont obtenus par la réaction avec de l'acide foxmique-anhydride acétique et ceux dans lesquels un groupe acétyle est présent dans R 3 sont obtenus par la réaction avec de l'anhydride acétique-eau, de l'anhydride acétique-alcool méthylique, de l'anhydride acétique-pyri- dine,de l'anhydride acétique-acétate de sodium et analogues. 23, La température de réaction est ordinairement de ODC à C et de préférence c'est la température ambiante, Le temps de réaction varie selon la matière dedépart utili- sée et -la température de réaction appliquée est ordinaire- ment d'environ 50 minutes à 50 heures Après la réaction, le produit recherché est isolé et purifié à partir d'un mélange réactionnel par des procédés connus tels que la concentration, l'extraction avec un solvant, le transfert à un autre substance,la cristallisation et la chromatogra- phie d'échange d'ions, d'adsorption et de partage. 3 4 ( 5.) Les composés (I) o R et/ou R sont un grou- pe alkyle inférieur sont fabriqués à partir d'un composé (I) o R 3 et R représentent des atomes d'hydrogène et sont soumis à un procédé d'alkylation connu Des exemples de ces procédés de N-alkylation sont la réaction avec des halogénures d'alkyle; la réaction avec des sulfates - d'alkyle (tels que le sulfate de diméthyle) ou avec des sulfonates d'alkyle; l'alkylation réductrice en utilisant des aldéhydes; et analogues La condition de réaction va- rie selon les matières de départ utilisées et les agents d'alkylation appliqués et est choisie selon une combinai- son de température de réaction, de temps de réaction et de solvant convenable pour les produits recherchés, Le compo- 3 4 sé o R ou R est un groupe alkyle inférieur est fabriqué par un contrôle adéquat de la quantité d'agent d'alkylation,de la température de réaction et du temps de réaction, Quand ces conditions augmentent, lt compoéso R 3 et R 4 sont un groupe alkyle inférieur peuvent être obtenus, Dans l'alkylation réductrice pour la fabrication de composés N-=méthyliques, Neéthyliqueset analogues, on re- commande d'utiliser des aldéhydes tels qu'une solution aqueuse de formaline ou de l'acétaldéhyde,puis de réduire les produits intermédiaires avec l'hydrure d'aluminium et de lithium, le cyanoborohydrure de sodium, le borohydrure de sodium et analogues, Il est très convenable de réduire 2538387 i 24, en utilisant du cyanohorohydrure de sodium, Des exem- ples de solvants applicables sont l'eau, un alcool et l'acétonitrile, La température de réaction est ordinaire- ment de O C à 60 C et est de préférence la température aibian- te, Le temps de réaction varie selon la matière de départ utilisée et les aldéhydes appliqués et, lorsque le temps de réaction devient plus long" le composé o un des R 3 et R est un groupe alkyle inférieur est d'abord produit 3 4 et transformé en composé o les deux R et R 4, sont des o 10 groupes alkyles inférieurs, e-t,en conséquence, la réaction peut être arrêtée quand une quantité adéquate du produit recherché est fournie La réaction est ordinairement ache- vée à peu près en 50 minutes a 50 heures Après la réac- tionle produit résultant est séparé et purifié par des pro- cédés connus tels que la concentration, l'extraction avec un solvant, le transfert A un autre solvant, la cristal- lisation et la chromatographie d'échange d'ions, d'adsorp- tion et de partage à partir du mélange réactionnel, ( 6) le composé ( 1) o R est un groupe acyle inférieur est fabriqué par un procédé connu pour acyler un groupe hydroxyle en partant d'un composé (I) o R 5 est un atome d'hydrogène Des exemples de ces procédés d'acyla- tion sont la réaction avec des halogénures d'acidesen présence de catalyseurs tels que la pyridine, la diméthyl- aniline, la tétraméthylurée, le magnésium métallique et d'autres bases; et une réaction avec des anhydrides d'aci- * desen présence de catalyseurs tels que l'acide sulfurique, l'acide p-toluènesulfonique, le chlorure de zinc, l'acéta- te de sodium et la pyridine, La condition de réaction va- rie selon les matières et l'agent d'acylation utilis&et peut être choisîe d'près la température de réaction, le temps de réaction et le solvant convenables pour les pro- duits recherchés, Par exemple, les composés o un groupe acétyle est pr 5 sent dans R sont fabrqus par la racton avec est présent dans R sont fabriqués par lia réaction avec 2538387; , de l'anhydride Acétique acide sulfurique, de l'anhydride acétique-acide p-toluènesulfonique, ou de l'anhydride acé- tique-pyridine, L'ut 4 lisation d'anhydride acétique et de pyridine est très préférée, La température de réaction est ordinairement QOC à 1 OQ O C et la température préférée est la température ambiante jusqu'à 60 C, Le temps de réaction varie selon la matière de départ, le réactif et la tempéra- ture de réaction et eût ordinairement d'environ 50 minutes à 50 heures Après la réaction, le produit recherché est séparé et purifié à partir du mélange réactionnel par des procédés connus tels que la concentration, l'extraction avec un solvantle-transfert à un autre solvant, la cris- tallisation et la chromatographie d'échange d'ions, d'ad- sorption et de partage, ( 7) Le composé (X) o X est un acide carboxyli- que est, par exemple, fabriqué en partant d'un composé ( 1) o X est une amide d'acide carboxylique par un procédé connu pour transformer l'amide d"acide carboxylique en acide carboxylique, Des exemples pour ces procédés sont - l'hydrolyse avec un acide ou un alcali; l'hydrolyse avec du peroxyde de sodium; ou la nitrosation avec une amide d'acidesuivie de décomposition en acide carboxyli- queo Des exemples d'agents de nitrosation sont des nitri- tes, des nitrites d'alkyle, le chlorure de nitrosyle, le peroxyde d'azote et analogues O La condition de réac- tion varie selon la matière de départ et le réactif utili- sé peut être choisi d'après une combinaison de tempéra- ture de réaction, de temps de réaction et de solvant con- venablespour 1 a f Abricatt Qn du produit recherchée par exemple, quand le composé (IT o X est une amide d'acide carboxyli'ue et Y est un acide carboxylique est chauffé dans l'acide chlorhydrique entre 50 et 1000 C pendant environ 50 minutes à 50 heures, très préférablem ment à 100 QC pendant 2 à 8 heures dans de l'acide chlorhy- drique 2 N,le composé (I) o X et Y sont des groupes acide 2538387 i' 26, carboxylique est obtenu Après la réaction, le produit recherché est isolé et purifié à partir du mélange réac- tionnel par des procédés connus tels que la concentra- tion, l'extraction avec un solvante le transfert à un autre solvanti la cristallisation et la chromatographie- d'échange d 'ions, d'adsorption et de partage, C 8) Le composé (lû o X est un ester d'acide carboxylique est fabriqué à partir du composé (I) ou X est un acide carbcxylique par une réaction d'estérification connue, Des exemples de ces réactions d'estérification sont une réaction de déshydratation avec un alcool en-uti- lisant un catalyseur tel que des acides minéraux (acide sul- furique, acide chlorhydrique, etc), des acides organi- ques (acides aromatiques, sulfoniques, etc), des acides de Lewis (éthérate de fluorure de bore, etc) et des ré- sines échangeuses de cationsi la réaction avec des agents d'O-alkylation tels que le diazométhane; la réaction avec des sulfates de dialkyle ou avec des halogénures d'alkyle, et analogues La condition de réaction varie selon les ma- tières utilisées et les réactifs d'estérification appli- qués,-et, selon le composé recherché, on choisit une comx binaison de température de réaction, de temps de réaction et de solvant convenables. Par exemple, un composé (I) ayant un groupe ester méthylique pour X est obtenu par traitement dans l'alcool méthylique avec un catalyseur tel que des acides minéraux (tels que l'acide sulfurique ou l'acide chlorhy- drique), des acides organiques (tels qu'un acide sulfoni- que aromatique), des ae Ides de Levws (tels que des éthéra- tes de fluorure de bore), des résines échangeuses de ca- tions et analogues, La température de-réaction est QOC à 60 C et, de manière très préférable, la température am- biante, Le temps de réaction varie selon le genre de ma- tière de départ et le 'catalyseur utilisé ainsi que la 27, température de réaction et ordinairement est à peu près minutes à 50 heures, Après la réaction, le produit recherché est isolé et purifié à partir du mélange réac- tionnel par des procédés connus tels que la concentration, l'extraction avec un solvant, le transfert à un autre solvant, la cristallisation et la chromatographie d'échan- ge d'ionstd'adsorption et de partage, ( 9) Le composé (I) o X est CH 20 U est obtenu en réduisant un composé (X 5 o X estun ester d'acide car- boxylique avec un réducteur qui n'affecte pas les parties autres que le groupe d'ester d'acide carboxylique Des exemples de ces réducteurs sont un hydrure d'alcoxyli- thium et d'aluminiumdu borohydrure de sodium, du boro- hydrure de lithium, du borohydrure de sodium-chlorure d'aluminium, du bromure de lithium, du diborane et analo- gues et l'utilisation de borohydrure de lithium est pré- férée La condition réactionnelle varie selon la matière utilisée et le réducteur appliqué, et,selon le produit recherché,on choisit une combinaison de température de réaction, de temps de réaction et de solvant convenables. Des exemples de solvants utilisés sont l'éther éthylique, le tétrahydrofurane et le dioxane, La température de réac- tion varie selon le genre de matière de départ, de sol- vant et de réducteur employe et ordinairement elle est de O OC jusqu'au point d'ébullition du solvant employé Le temps de réaction varie selon le réducteur et la tempéra- ture de réaction etdans la plupart des cas, la réaction est achevée à peu près en 50 minutes à à peu près 50 heures, Apres la réaction, le produit recherché est isolé et purifié à partir du mélange réactionnel par des procé- dés connus tels que la concentrationl'extraction avec un solvant, le transfert à un autre solvantf la cristalli- sation et la chxomatographie d'échange d'ions, d'adsorp- tion et de partage, ( 10) Le composé ( 1) o Y est un ester d'acide 2538387 i; 28, carboxylique est obtenu par traitement d'un composé (I) o Y est un acide carboxylique avec un agent d'estérifi- cation connu, Des exemples d'une réaction d'estérifica-, tion applicable sont une réaction de déshydratation avec un alcool en présence d'un catalyseur tel que,par exemple, des acides organiques (tels que les acides aromatiques), des acides minéraux (tels que l'acide sulfurique, l'acide chlorhydrique, etc), des acides de Lewis (tels que l'éthérate de fluorure de bore), une résine échangeuse de cations et analogues; la -réaction avec des agents d'0-alky- lation tels que le diazométhane; la réaction avec des sulfa- tes de dialkyle ou avec des halogénures d'alkyle; et ana- logues, La condition de réaction varie selon la matière utilisée et l'agent d'estérification appliqué, et,selon le produit recherché, une combinaison de température de réaction, de temps de réaction et de solvant convenables est choisie Par exemple,un composé (I) ayant un groupe ester méthylique ou un groupe ester benzylïque pour Y est obtenu en traitant avec de l'alcool méthylique ou de l'al- cool benzylique, respectivement, comme solvant en présence de catalyseurs tels que d es acides minéraux (tels que l'acide sulfurique, l'acide chlorhydrique), des acides or- ganiques (tels que les acides aromatiques sulfoniques), des acides de Lewis (tels que les éthérates de fluorure de bore) et des résines échangeuses de cations, La tempéra- ture de réaction est ordinairement de la température am- biante jusqu'à 100 C et le temps de réaction dépend des genres de matière de départ et d'alcool utilisÉ ainsi que de la température de réaction mais est ordinairement à peu près 50 minutes à 50 heures, Aprèes la réaction, le produit recherché est séparé et purifié à partir du mélange réac-, tionnel par des procédés connus tels que la concentration, l'extraction avec un solvant, le transfert à un autre sol- vant, la cristallisation et la chromatographie d'échange d'ions, d'adsorption et de partage, 2538387- 29. ( 11) Un composé (I) o Y est une amide d'acide carboxylique -st, par exemple,obtenu à partir d'un composé (I) o Y est un ester d'acide carboxylique par un procé- dé connu o l'ester d'acide carboxylique est transformé en amide d'acide carboxylique, Par exemple, le composé (I) o Y est unester d'acide carboxylique est traité avec de l'ammoniaque concentrée ou avec de l'ammoniac liqui- de pour fournir un composé (I) o Y est une amide d'aci- de carboxylique La réaction est accélérée par addition d'un catalyseur tel que du chlorure d'ammonium, du méthy- late de sodium, de l'amidure de sodium ou du butyllithium, au mélange réactionnel La température de réaction est ordinairement située entre 70 C et la température am- biante Le temps de réaction varie selon le genre de ma- tière de départ, le solvant et le catalyseur utilisés et, dans la plupart des cas, la réaction est achevée à peu près en 50 minutes à 50 heures 'Après la réaction, le pro- duit recherché est séparé et purifié à partir du mélange réactionnel par des procédés connus tels que la concentra- tion,l'extraction avec un solvant, le transfert à un autre solvant, la cristallisation et la chromatographie d'échan- ge d'ions, d'adsorption et de partage. ( 12) Le composé ( 1) o Y est CH 20 H est obtenu, par exemple, en traitant le composé (r) o Y est un ester d'acide carboxylique avec un réducteur qui n'affecte pas une partie autre que la partie d'ester carboxylique Des exemples de réducteurs applicables sont l'hydrure d'alcoxy- lithium et d'aluminium, le borohydrure de sodium, le boro- hydrure de sodium chlorure d'aluminium, le bromure de li- thium ou le diborane et l'utilisation de borohydrure de li- thium est préférée Les conditions de réaction varient se- lon le genre de matière de départ et le réducteur utilisés et, selon le produit recherche, une combinaison de tempéra- ture de réaction convenable, de temps de réaction convena- ble et de solvant convenable est choisie Des exemples de , solvants utilisés sont l'éther éthylique, le tétrahydro- furane et le dioxane La température de réaction varie selon le genre de matière de départ, le solvant,et est ordinairement de O C jusqu'au point d'ébullition du sol, vant utilisé Le temps de réaction varie selon le réduc- teur employé et la température de réaction appliquée, et, dans la plupart des cas,la réaction est achevée à peu près en 50 minutes à 50 heures Après la réaction, le produit recherche est séparé et purifié à partir du mélan- ge réactionnel par des procédés connus tels que la con- centration, l'extraction avec un solvant, le transfert à un autre solvant, la cristallisation et la chromatogra' phie d'échange d'ions, de partage et d'adsorption, ( 13) Le composé (r) peut être aussi fabriqué par un procédé o deux ou davantage des procédés comme indiqué en ( 1) ( 12) sont combinés Un ou plusieurs des substituants dans le produit résultant est/ sont reti- rés par un procédé connu pour fournir le produit final. Dans les procédés donnés en ( 1) à ( 12),le ou les groupes fonctionnel(s) dans le composé (I) peuvent être,selon le produit recherché,protégés, avant la réaction,avec un groupe de protection connu et puis ce groupe de protection est retiré. Par exemple, le composé (I) o R et R sont des atomes d'hydrogène et R est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur est traité pour introduire un groupe de protection dans le groupe amino par un procédé connu et de ce fait un composé (V) o P est un groupe de protection pour un groupe amino et R 7 est l'atome d'hydro- gène ou un groupe alkyle inférieur est obtenu, Ce composé est alors alkylé, comme indiqué dans le procédé de fabri- cation ( 1),par un procédé connu dans une alkylation du groupe hydroxyle phénolique, et,,si cela est nécessaire, l'enlèvement de la protection du groupa amino et/ou une hydrolyse de l'ester est/sont conduits j 38387. 31, coçxlp Qaé (y) OR t,2 P-NU-CH CE-COOR, CG -N-il-CHCo Nm CRGE CONI 2 (o P est un atome d'hydrogène ou un-groupe de protection pour le groupe amino et R 7 est l'atome d'hydrogène ou un groupe alkyle ayant i à 10 atomes de carbone). Composé (I OR"'1 O 2531 C R -NE-CH CHî-COOR 71 CO NUL -CHR CG-NE COMR 2 (Co est un groupe alkyle ayant i à 10 atomes de car- 31. bone, R est'l'atome d'hydrogène ou un groupe de protec- tion pour le groupe amino, et R 71 est l'atome d'hydrogè- ne Ou un gr oupe alkyle ayant 1 & 10,atomes de carbone) 32. pour donner un composé (VI) o R est un groupe alkyle inférieur, R 31 est l'atome d'hydrogène ou un groupe de pro- * 71 tection du groupe amino et R 71 est l'atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur. Des exemples de groupes de protection pour le groupe amino utilisa ici sont un groupe de protection du type uréthane (tel que le groupe benzyloxycarbonyle), un groupe de protection du type acyle (tel que le groupe formyle), et d'autres groupes de protection connus, Des procédés pour la suppression de protection du groupe de protection pour le groupe amino varient selon le procédé de protection appliqué et le procédé spécifique de suppression de la protection pour le groupe de protec- tion particulier peut être utilisé Par exemple, le groupe benzyloxycarbonyle peut être retiré par réduction catalytique et le groupe formyle peut être enlevé par trai- tement avec un acide ou avec un alcali L'hydrolyse de l'ester peut être conduite en utilisant un solvant (tel que l'eau ou son mélange avec des solvants organiques so- lubles dans l'eau tels que l'alcool éthylique, l'alcool méthylique, la N, N-diméthylformamide, etc,) en présence d'un catalyseur basique tel que la soude, le carbonate de potassium et analogues. Par exemple, le produit OF 4949 II est soumis à une N-formylation avec un mélange d'acide formique et d'anhydride acétique, puis amené à réagir avec un halogé- nure d'alkyle en présence de solvant (tel que la N,N- diméttylformamide) et une base (telle que le carbonate de potassium), et puis l'intermédiaire résultant est traité avec une solution de soude 4 N si bien que le groupe N-for- myle et l'ester alkylique sont simultanément hydrolysés et là-dessus un composé (VI) o Rli est un groupe alkyle inférieur et R 31 et R 71 sont des atomes d'hydrogène est ob- tenu. Quand l'iodure de méthyle est utilisé comme ha- 2538387: 33. logénure d'alkyle dans le procédé ci -dessus, le produit OF 4949-I (le composé 13) est obtenu en partant du compo- sé O F 4949-II, Après la réaction, le produit recherché peut être séparé et purifié à partir du mélange réactionnel par des procédés connus tels que la concentration, l'ex traction avec un solvant, le transfert à un autre solvant, la cristallisation et la chromatographie d'échange d'ions, d'adsorption et de partage. (Activités biologiques) Le produit O F 4949 et ses dérivés présentent une activité biologique telle qu'ils inhibent de manière marquée l'activité d'aminopeptidase B de cellules de can- cer d'Ehrlich. Pour le procédé de mesure de l'aminopeptidase B,le procédé par V K Hops et collaborateurs (V K. Hops, K K Makinen, G G Glenner: Archives of Bioche- mistry and Biophysics, 144, 557, 1966) est modifié et amé- lioré Ainsi, à 0,1 ml de solution de Sanks (fabriquée par la société dite Nissui Pharmaceutical Co,, Ltd) dans laquelle de l'arginine-bétanaphtylamide 3 m M est dissoute on ajoute 0,7 ml de solution de 5 anks contenant l'échan- tillon à mesurer, le mélange est chauffé,& 37 C pendant 3 minutes, on y ajoute 0,2 ml de suspension de cellules de carcinome d'Ehrlich pour amener la concentration des cellules à 2,5 x 107/ml, puis le mélange est maintenu à 37 WC pendant 30 minutes, on y ajoute alors un tampon d'aci- de acétique 1,OM (p H 4,2) contenant 0,3 mg/cm de grenat GBC (sel de diazonium d'oraminotoluène) (fabriqué par la société dite Sigma Co,) et 3 % du produit dit Tween (de la société dite Wako Pure Drugs Co J) on laisse le mélange reposer à la température ambiante pendant 15 minutes, et l'extinction (a) a 525 nm de la liqueur sur. nageante est mesurée, En même temps, l'extinction (b) de la solution 2538387. 34. de contrôle qui est seulement la solution de Hanks sans l'échantillon & tester est mesurée et le rapport d'inhibi- tion de l'aminopeptidase B est calculé d'après l'expres- sion suivante: b -a x 100 a, Les cellules de carcinome d'Ehrlich utilisées ci-dessus sont celles maintenues par une sous-culture dans une cavité péritonéale de souris de souche dd Y âgées de 4 à 6 semaines et sont séparées en transférant 2 x 106 cellules dans la cavité péritonéale de souris,suivi d'iso- lement à partir des ascites après 7 à 10 jours La suspen- sion de cellules est préparée en traitant les ascites conte- nant des cellules de carcinome d'Ehrlich avec une solution de chlorure de tris-ammonium (p H 7,2), en retirant les érythrocytes,en lavant avec une solution de Hanks trois fois et en diluant avec la solution de Hanks jusqu'à une certaine concentration de cellules, C'est un groupe de cel- lules uniformesne contenant pas moins de 96 % de cellules vivantes de carcinome d'Ehrlich. Au moyen du procédé expérimental comme donné ci- dessus, le rapport d'inhibition de l'OF 494 g et de ses dé- rivés à diverses concentrations est calculé et la concen- tration d'inhibition à 50 % pour chaque rapport est mesu- rée Les résultats du test avec des composés représentatifs de la présente invention sont donnés dans le tableau 7, '. TABLEAU 7 ' Composés once -tnd'niibiition à, 0 F 4949-I 0,0054 0 F 4949-I 1 0,0048 No 1 030056 2 1 r 35 * 3 O ro 095 4 0,025 0,54 ' * 6 3,6 13 12 5 14 0,0052 0,0117 16 0 0155 17 -0,1016 18 0,25 19 0 040 21 '0,30 22:2,2 28 lot 106 29 -0,86 * 30 14,0 * 31 0,025 32 0,156 Les composée de la présente invention présen- tent aussi une action de renforcement sur l'immunité cel- lulaire en mesurant avec une hypersensibilité du type retardé (indiquée en abréviation ci-après par DUT), pro, voguée par l'inoculation d'érythrocyt Es de moutons Aux pattes Arrière de souris, 2 Atnsi, les érythrocytes de mouton sont utïlisés commwe antigène et 1 I x 10 érythro- cytes sont soumis à une injection intraveineuse à des souris -f emuelles de, souch Le dite CDF 1 âgées de 10 semaines ( 8 souris par groupe) et, itmmédia temwent aprè's la eensi-r bilisation, une solution d'OF 4949 ou de ses dérivés dans 36. de l'eau stérilisée est injectée par voie intrapéritonéa- le à des doses de 5, 50 ou 500 P-g/kg et, après quatre jours, 108 érythrocytes de mouton sont injectés par voie sous-cutanée dans les pattes arrière gauches des souris Après 24 heures, le degré d'oedèmie (c'est-àn'dire épai ssissement des pattes à chaque fois) observé sur les pattes arrière est mesuré en utilisant un 'Pied à coulisse Las résultats-du test avec les composés repré- senta-tif S de la présente invention sont donnés dans le tableau 8. -TABLEAU 8 CCEP Osés' Doses Epa isseuri de l'oedèirl Rapport de rexi j (pz/lkg) x, rm) (Valeur moven forcaxernt par ne i rarstandlard) rprta r- (lst 1)*cpntri Je 7,2 * 0,3 100 DF 4949-I 5 9,5 * 0,6 132 1117 * 1,5 163 500 9,1 * 0,5 126 (Test 2) Cot 9,2 * 1 t O 100 F 4949-II5 11,7 é 1,9 127 ** 50 13,5 1 ? 2 147 * 500 11 Y 42 t 6 J 121 > (Test 3) Contrôle 8,0 * 0,,5 100 Ccmposé 2 5 913 * 112 i 116 911 * 1 1 I 114 500 10 r 2 * 019 128 (Test 4) orle 7,0 0,3 100 Coxrposé 1175 87,8 * 0,7 126 8,4 0,7 120 500 8,5 *t O 17 121 Coepbsé l 5 8,2 * 0,7 i 117 8,5 *t 0,7 j 121 500 7,5 * 0,6 107 718 O t 8 l Li. Composé 2 50 7,8 * 0,7 Ili 500 M:t 8,70,8 124 37. Tous les composés de la présente invention ont une faible toxicité et peuvent être utilisés comme pro, duits pharmaceutiques, Des résultats du test de toxicité aiguà par injection i ntrapéritonéale de 300 mg/kg de com- posés représentatifs de la présente invention à des souris de souche ICR sont donnés dans le tableau 9, TABLEAU 9 TABLEAU 9 Quand les composés de la présente invention sont fournis sous forme de produits pharmaceutiques, le composé de la présente invention lui-même ou une composition con- tenant le composé de la présente invention à une concentra- tion de 0,1 à 99,5 % ou, de manière plus préf 6 rable,O,5 à % dans un support pharmaceutiquement acceptable, non to- xique et inerte,est administré à des animaux y compris des êtres humains, Pour les supports, on utilise un ou plusieurs des diluants, des charges solides, semi-,solides ou liquides ou d'autres agents auxiliaires pour les préparations pharmaceu- tiques l est souhaitable que les préparations pharmaceuti- ques soient données sous une forme de dose unitaire Les pré- Composés Résultats expérimentaux OF 4949-I On n'observe pas de toxicité 0 F 4949-II l Composé 17 et 21 " 22 " 28 " 29 " 2538387,' 38. parations pharmaceutiques de la présente invention sont données par administration orale, administration dans les tissus, administration locale (telle que l'administration percutanée), ou d'administration intrarectale, Bien snr, 6 les formes d'administration convenables pour chaque voie sont établies, Par exemple, des injections sont particuliè- rement recommandées, Des doses comme agent d'immuno-modulation sont de préférence déterminées en tenant compte de l'état du malade(tel que l'Rge, le poids corporel, etc),la voie d'administration, le genre et le degré de la maladie etc. Ordinairement, les doses seront de 0,1 à 1000 mg comme quantité efficace du composé de la présente invention par jour Dans certains cas, une moindre quanti- té que celle indiquée ci-dessus sera suffisante,et au contrai- re, dans certains autres cas, une quantité plus importante sera nécessaire, Quand une grande quantité est administrée, il est souhaitable de la diviser et de l'administrer plu- sieurs fois par jour. L'administration orale peut être conduite au mo- yen de doses unitaires solides ou liquides telles que, par exemple, une poudre pure, une poudre diluée, des tablettes, des tablettes revêtues de sucre, des capsules,des granules, des suspensions, des liquides, des sirops, des gouttes, des tablettes sublinguales et analogues, La poudre pure peut être fabriquée en amenant les substances actives à des dimensions convenablement fines. La poudre diluée peut être fabriquée en amenant les substan- ces actives à des dimensions fines convenables,suivi du mét lange avec des supports pharmaceutiques pulvérisés finement tels que,par exemple, de l'amidon, du mannitol ou d'autres hydrates de carbone comestibles, Si cela est nécessaire, d'autres agents de goût, des produits de conservation, des agents de dispersion, des agents de coloration, des par- fums et analogues peuvent être ajoutés. 39. Les capsules sont fabriquées en transformant d'abord les poudres en substance pulvérulente pure ou son mélange avec un diluant ou des granulés (ce qui sera illustré dans le passage concernant les tablettes) et puis en les remplissant dans des sacs de capsule tels que les sacs de capsule en gélatine Des lubrifiants et des agents de fluidisation tels que la silice colloidale, le talc, le stéarate de magnésium, le stearate de calcium, du polyéthylèneglycol solide et analogues peuvent être mélangés avec la substance pulvérisée et puis le mélange peut être rempli pour fournir des capsules, Quand des agents de désintégration ou des agents de solubilisation tels que la carboxyméthylcellulose, le sel de calcium de carboxymêthylcellulose, le carbonate de calcium, le car- bonate de sodium, l'hydroxypropylcellulose a degré infé- rieur de substitution et analogues sont ajoutés, il est possible d'améliorer l'efficacité des produits pharmaceuti- ques quand des capsules sont administrées. En outre, la poudre du composé de la présente in- vention sous des dimensions fines est mise en suspension et dispersée dans des huiles végétales, du polyéthylènegly- col, du glycérol, des agents tensio actifs et analogues et puis empaquetée avec des feuilles de gélatine et de ce fait on peut obtenir des capsules molles, Les-tablettes sont fabriquées en préparant un mé- lange de poudre, en le transformant en granulés ou lin- gots, puis on y ajoute des produits de désintégration ou des lubrifiants et puis on les comprime en tablettes. Des mélanges de poudre sont préparés en mélangeant la substance finement pulvérisée avec les diluants ou les bases ci-dessus et,si cela est nécessaire, en mélangeant avec des liants-(tels que par exemple, la carboxyméthylcel- lulose sodique, des alginates, la gélatine, la polyvinyl- pyrrolidone, l'alcool polyvinylique, etc), des agents de retardement de solubilisation (tels que les paraffines), 2538387 i 40. des agents de réabsorption (tels que les sels quaternai- res) et/ou des agents d'adsorption (tels que la bentoni? te, le kaolin, le phosphate dicalcique, etc), Les mélan- ges de poudre résultant sont d'abord moui llés avec une so- lution de liants (tels qu'un sirop, une p Rte d'amidon, de la gomme arabique ou de la cellulose), ou avec une so- lution de polymère et puis obligatoirement passés à tra- vers des tamis pour fournir des granulés Au lieu de fabri- quer la poudre suivant des granulés comme mentionné ci- dessus,la poudre peut être d'abord traitée avec une machi- ne de transformation en tablettes, les lingots résultants de dimensions non uniformes sont pulvérisés et les granu- lés désirés peuvent être également obtenus. Aux granulés préparés comme tes, on ajoute des lubrifiants tels que par exemple l'acide stéarique, des stéarates, du talc et de l'huile minérale et là dessus l'adhérence deà granulés peut être empêchée, Ce mélange lubrifié est alors comprimé en tablet- tes. A titre de variante, les produits pharmaceuti- ques peuvent, au lieu de les transformer en granulés ou en lingots, être mélangés avec des supports inertes et flui- des et puis soumis à une compression directe pour fabriquer des tablettes, Des revêtements de protection transparents ou semi-transparents tels que de la gomme laque, du sucre, ou un revêtement de polymère ou un revêtement de polissage constitué de cire peuvent être également appliqués. D'autres genres de formes oralement applicables, tels que,par exemple, un liquide, un sirop, un élixir et analogues peuvent être transformées en formes de doses uni- taires contenant la quantité définie des produits pharma- ceutiques suivant la quantité définie de la forme, Les sirops sont fabriqués en dissolvant le composé dans une solution aqueuse édulcorée convenable, Les élixirs sont fabriqués par l'utilisation de supportsalcooliquesnon 41. toxiques Les suspensions sont préparées en dispersant le composé dans des supports non toxiques Si cela est nécessaire, des agents de solubilisation, des émulsion- nants (tels que des alcools isostéaryliques éthoxylés, des esters de polyoxyéthylène sorbitol et analogues), des produits de conservation, des agents de go Ut (tels que de l'huile de menthe poivrée, de la saccharine et analogues) peuvent être également ajoutées. Si cela est nécessaire, la forme de dose unitai- re pour l'administration orale peut être dans des micro- capsules Ces formes peuvent être aussi revêtues et en- castrées dans des polymères ou dans de la cire si bien que la prolongation de l'action ou l'effet de relâchement entretenu du produit pharmaceutique peut être espéré. L'administration parentérale peut être réalisée par l'utilisation de formes unitaires de dose liquide d'injections sous-cutanées, intramusculaires ou intra- veineuses,telle que sous une forme de solution ou de sus- pension Une telle forme de dose est fabriquée par mise en suspension ou dissolution d'une certaine quantité des com- posés dans un liquide, c'est-à-dire un solvant non toxique et huileux ou aqueux,suivi de stérilisation de la suspen- sion ou de la solution A titre de variante, une certaine quantité du composé est prise dans une fiole et puis la fiole avec son contenu peut être stérilisée et scellée. Pour dissoudre ou mélanger immédiatement avant l'adminis- tration, la poudre de substance lyophilisée efficace peut être préparée avec des fioles et des supports auxiliaires. Un sel non toxique ou une solution de sel peut être ajouté pour rendre la solution d'injection isotonique, Il est aussi possible d'ajouter d'autres agents auxiliaires tels que des produits de conservation, des stabilisants, des émulsionnants et analogues. L'administration par l'intermédiaire du rectum peut être conduite par l'utilisation de suppositoires préparés 2538387, 4 e. en mélangeant le composé avec des solides insolubles ou solubles dans l'eau et à faible point de fusion tels que, par exemple, du polyéthylèneglycol, du beurre de cacao, des esters supérieurs (tels que le palmitate de iryristy% le), ou leurs mélanges, Aux préparations pharmaceutiques des composés de la présente invention, on peut ajouter d'autres pro- duits pharmaceutiques tels que,par exemple, du cytosine arabinoside, de l'adriamycine et de la mitomycine ou lo ces produits pharmaceutiques peuvent Etre donnés simulta- nément. Certains exemples illustrant les procédés de fabrication des composés de la présente invention sont donnés ci-dessous, mais la présente invention n'y est pas limitée. EXEMPLE 1 Préparation d'OF 4949 (Etape 1) Du Pénicillium rugulosum O F 4949 (FERM BP-203) est cultivé pendant 7 jours sur une partie inclinée d'ex- trait de malt-agar-agar Le contenu d'une boucle de spores est inoculé sur 500 ml de milieu contenant 2 % de glucose, 0,5 % de polypeptone, 0,1 % d'extrait de levure, 0,05 % de phosphate diacide de potassium et 0,05 % de sulfate de magnésium, que l'on a placé au préalable dans un ballon de 2 litres et qu'on a stérilisé à 120 "C pendant 20 minu- tes,Ceci est cultivé pendant 6 jours à 27 "C avec agita- tion à 190 tours par minute, La culture résultante est ino- culée au taux de 1 litre par cuve à 15 cuves de fermen- tation en acier inoxydable (volume de 30 litres) contenant 20 litres stérilisés de milieu renfermant 2 % de glucose, 0,5 % de polypeptone, 0,1 d'extrait de levure, 0,05 % de phosphate diacide de potassium et 0,05 % de sulfate de magnésium, L'incubation est conduite à 27 'C avec 20 li " tres par minute d'aération et 300 tours par minute de ro- tation, et,si cela est nécessaire, un agent antimmousse y 43. est ajouté durant l'incubation, L'incubation est condui- te pendant 4 jours, la culture eat alors retirée, les mycéliums sont filtrés pour séparer le filtrat de culture et on obtient 6,5 litres (volume comprimé) de myceliuiset 300 litres de filtrat de culture. EXEMPLE 2 Préparation d'OF 4949 (Etape 2) Les mycéliumsobtenus dans l'exemple 1 sont ex- traits trois fois avec 24 litres d'acétone à 50 %-eau et l'extrait combiné ( 72 litres) est concentré à 30 litres sous vide pour retirer l'acétone Le concentré ( 30 litres) et 300 litres de filtrat de culture obtenus dans l'exemple 1 sont adsorbés dans une colonne de charbon activé, la colonne est bien lavée avec 80 litres d'eau et éluée avec 150 litres d'une solution-d'acide chlorhydrique (p H 2) contenant 50 % d'acétone La fraction ( 80 litres) présen- tant l'activité d'inhibition d'aminopeptidase est concen- trée à 30 litres sous vide pour retirer l'acétone, le con- centré ( 30 litres) est passé à travers une colonne ( 1,2 litre) de résine échangeuse d'anions fortement basique dite Dowex 1 x 2 (forme C 1) et la colonne est éluée avec de l'eau L'éluat ( 80 litres) est réglé à un p H de 3, ad- sorbé dans une colonne ( 2,0 litres) de résine échangeuse de cations fortemet acide dite Dowex 50 W (forme H), la co- lonne est lavée avec 10 litres d'eau et éluée avec 100 li- tres d'ammoniaque 1,ON La fraction active ( 60 litres) est neutralisée avec de l'acide chlorhydrique 2 N et adsorbée avec 2 litres de résine d'adsorption non ionique dite Diaion HP-20, La résine est lavée avec 20 litres d'eau, et éluée avec 20 litres de méthanol & 50 %reau, La frac- tion active résultante est concentrée sous vide pour fournir 28,8 grammes de substance brute, EXEMPLE 3 Préparation de produit O F 4949 (Etape 3) De la cellulose cristalline (Avicel) ( 30 grammes) 2538387 i 44. est pulvérisée sur 28,8 grammes de substance brute obte- nue dans l'exemple 2, le mélange est bien séché sous vide et rempli dans la partie supérieure d'une colonne de 1 li, tre d'Avicel I 1 est développé avec 12 litres de produit de développement (ammoniaque IN et alcool n-butylique suiv vant un rapport de 15: 85) pour fournir une fraction ac- tive composée principalement d'OF 4949-I et puis une autre fraction active composée principalement d'OF 4949 JII Chaque fraction active est neutralisée avec de l'acide chlorhy- 1 O drique 1 N,concentrée sous vide, puis dissoute dans l'eau une fois de plus, et adsorbée avec 500 ml de produit dit Diaion HP-20 La résine est lavée avec de l'eau, éluée avec 2 litres de méthanol à 50 %-eau, et la fraction acti- ve résultante est concentrée sous vide pour fournir 3,1 grammes de poudre brute d'OF 4949-I et 4,1 grammes de poudre brute d'OF 494 g 9 II. EXEMPLE 4 Préparation d'OF 494 g (Etape 4) De la poudre brute ( 3,1 grammes) du produit O F 4949-I obtenu dans l'exemple 3 est dissoute dans 15 ml d'eau et la solution est soumise à une chromatographie de partage à phases inversées en utilisant une chromatogra- phie en phase liquide à haute performance (dispositif dit System 500, société dite paters-Co) exclusivement pour la plus grande partie, dans des conditions d'application d'un produit de développement formé d'un tam- pon à l'acide citrique 0,1 M et d'acétonitrile (rapport go 90: 10 et une colonne-constituée par une colonne de car- touche (produit dit C 18 r société dite Waters Co) pour éva- luer l'activité inhibitrice d'aminopeptidase B, La fraco. tion active est adsorbée avec 200 ml de produit dit Diaion HP-20, la résine est lavée avec de l'eau, et éluée avec 1 litre de méthanol a 50 %eau, Les fractions actives sont rassemblées, concentrées sous vide et lyophilisées pour four- nir 455 mg de produit dit O F 4949-I, 45. Une autre poudre brute ( 4,1 grammes de produit dit OF 4949-II) obtenue dans l'exemple 3 est soumise de manière semblable à une chromatographie de partage à phases inversées sur le produit dit C 18 en utilisant un produit de développement constitué d'un tampon à l'acide citrique 0,1 Metd'acétonitrile (rapport 95; 5), suivi d'une chroma- tographie sur colonne avec le produit dit Diaion HP-20 pour fournir 671 mg de produit dit O F 4949 r II, EXEMPLE 5 Fabrication du composé 2 Le produit dit O F 4949 II ( 223,7 mg) est dissous dans 10 ml d'acide chlorhydrique 1 N, la solution est placée dans un tube scellé, et chauffée à 100 C pendant 7 heures. Le mélange réactionnel est évaporé à sec, le résidu est dissous dans 10 ml d'eau et développé avec une chromato- graphie en phase liquide à haute performance en utilisant le produit dit Nucleosil 30 C 18 ( 2,0 x 25,0 cm) comme co- lonne et un mélange de tampon à l'acide citrique 0,1 M et d'acétonitrile comme produit de développement pour fournir une fraction contenant le composé 2. Cette fraction est alors adsorbée avec 250 ml de résine échangeuse de cations fortement acide dite Dowex 50 W (forme H), la colonne est lavée avec de l'eau et -éluée avec de l'ammoniaque IN, L'éluat contenant le com- posé 2 est concentré sous vide, le résidu est dissous dans ml d'eau, adsorbé avec une colonne ( 2,0 x 25,0 cm) de produit dit Nucleosil 30 C 18 et élué avec de l'eau, L'éluat résultant contenant le composé 2 est concentré et séché pour donner 78,8 mg de poudre incolore du composé 2, EXEMPLE 6 Fabrication du composé 10 Le composé dit QF 4949 ' I ( 50 mg) est dissous dans ml de tampon phosphaté O,1 M (p H 7,0), on y ajoute 100 pl de formaline,le mélange est agité pendant 10 minutes à la température ambiante et agité encore pendant une heure à 2538387; 46. la température ambiante avec 30 mg de cyanoborohydrure de sodium, Le mélange réactionnel est développé avec une chromatographie en phase liquide à haute performance en utilisant une colonne de 2,0 x 25,0 cm de produit dit Nucleosil 30 C 18 et un mélange de tampon à l'acide citri, que 0,l M (p Hli 5,7) et d'acétonitrile comme produit de dé- veloppement pour fournir une fraction contenant le composé Cette fraction est concentrée, le-concentré est adsor- bé avec 20 ml de produit dit Diaion HP-20, la résine est o 10 lavée avec de l'eau, éluée avec du méthanol à 50 %,eau et l'éluat est concentré à sec pour fournir 24,6 mg de poudre incolore du composé 10. EXEMPLE 7 Fabrication du composé 12 Le produit dit OF 494 g-II ( 60 mg) est dissous dans 5 ml de tampon phosphaté 0,l M (p Hi 7,0) et la solution est agitée pendant 10 minutes à la température ambiante avec 50 p 1 d'acétaldéhyde Ensuite, 30 mg de cyanoboro- hydrure de sodium y sont ajoutés et le mélange est agité à la température ambiante pendant encore 1 heure La solution réactionnelle est développée avec une chromatographie en phase liquide à haute performance en utilisant une colon, ne de 2,0 x 25,0 cm de produit dit Nucleosil 30 C 18 et un mélange de tampon à l'acide citrique 0,/I (p H 5,7) et d'acétonitrile comme produit de développement pour fournir une fraction contenant le composé 12, Cette fraction est concentrée, le concentré est adsorbé avec 2 Q ml de produit dit Diaion HP-20, la résin ne est lavée avec de l'eau, puis éluée avec du méthanol à 50 %-eau et l'éluat est concentré à sec pour fournir 31,4 mg de poudre incolore du composé 12, EXEMPLE 8 Fabrication des composés 7, 23 et 13 A 267 mg du composé 6 on ajoute 20 ml de N,N. diméthylformamide, 200 mg de carbonate de potassium et 2538387, 47. pi d'iodure de méthyle et le mélange est agité à la température ambiante pendant 24 heures, La solution réactionnelle est neutralisée et développée avec une chro- matographie en phase liquide à haute performance en util- sant une colonne de 2,0 x 25 r O cm de produit dit Nucleosil C 18 et un mélange de tampon à l'acide citrique Ol M (p Hl 5,7) et d'acétonitrile comme produit de-développement pour fournir deux fractions contenant le composé 7 et le composé 23 respectivement. Chaque fraction est concentrée, le concentré est adsorbé avec 20 ml de produit dit Amberlite XAD-2 (de la société dite Organo), la résine est lavée avec de l'eau, éluée avec de l'alcool méthylique, l'éluat est con- centré à sec et 52,3 mg de poudre incolore du composé 7 et 137,2 mg de poudre incolore du composé-23 sont res- pectivement obtenus, A 42,2 mg de la poudre du composé 23 on ajoute ml de solution de soude 4 N, le mélange est agité à la température ambiante pendant 30 minutes, neutralisé avec de l'acide chlorhydrique 2 N, adsorbé avec 20 ml de produit dit Diaion HP'20, la résine est lavée avec de l'eau, éluée avec du méthanol a 50 % eau, et l'éluat est concentré à sec pour fournir 39,0 mg de poudre incolore du composé 13 qui est identique au produit dit OP 494 q -, EXEMPLE 9 Fabrication des composés 14, 1, 3 et 19 A 67,8 mg du produit dit O P 4 q 49,I on ajoute ml d'acide chlorhydrique 0,2 N dans de l'alcool méthyli- que, le mélange est agité toute la nuit à la température ambiante et concentré à sec, Le résidu est dissous-dans ml d'eau et la solution est développée avec une chromas tographie en phase liquide à haute performance en utili- sant une colonne de 2,0 x 25,0 cm de produit dit Nuclèosi Il C 18 et un mélange de tampon à l'acide citrique 9,1 M et d'acétonitrile comme produit de développement pour four- 2538387 ' 48. nir une fraction contenant le composé 14, Cette fraction est concentrée, le concentré est adsorbé avec 20 ml de produit dit Amberlite XAD 2, la résine est lavée avec de l'eau, puis éluée avec du méthanol à 50 %-eau, et l'éluat est concentré à sec pour fournir 30,6 mg de poudre incolore du composé 14, On prépare de manière semblable 74,3 mg du composé 1, 55,5 mg du composé 3 et 22,3 mg du composé 19 à partir de g 1 mg du produit dit O F 4949-II, 90,4 mg du com- posé 2 et 33,8 mg du conposé 18, respectivement, A titre de variante, 11 mg du produit dit OF 494 g-I sont mis en suspension dans 10 ml d'un mélange à volumes égaux d'alcool méthylique et d'éther, on fait pas- ser du diazométhane dans la suspension et,quand les cris- taux sont dissous, le mélange est concentré à sec Le ré- sidu résultant est dissous dans 0,5 ml d'eau et la solu- tion est purifiée par chromatographie en phase liquide à haute performance et avec le produit dit Amberlite XAD-2, le même que ci-dessus, pour fournir 3,6 mg de pou- dre incolore du composé 14, On prépare de manière sembla- ble 1,9 mg du composé 19 à partir de 10,5 mg du composé 18. EXEMPLE 10 Fabrication du composé 15 A 200 mg du produit dit OF 424 g-II on ajoute 10 ml de N,N-diméthylformamide et 10 ml d'acide chlorhy, drique 2 N dans de l'alcool butyrique et le mélange est agité toute la nuit à la température ambiante, La solution réactionnelle est dissoute dans 200 ml d'eau, la solution est adsorbée avec 20 ml de produit dit Amberlite XAD-2, la résine est lavée avec de l'eau, et éluée avec du métha" nol à 50 %- eau, La fraction contenant le composé 15 est concentrée à sec pour fournir 72,9 mg de la poudre incolo- re du composé 15, 49. EXEMPLE 11 Fabrication du composé 16 A 200 mg du produit O F 4949-I on ajoute 10 ml d'acide chlorhydrique 2 N dans de l'alcool benzylique et le mélange est agité toute la nuit à la température am- biante Dans la solution réactionnelle on ajoute 50 ml de mélange 1; 1 d'hexane et de chloroforme et le précipité résultant est rassemblé par filtration et séché pour don- ner 196,2 mg de la masse Ceci est dissous dans 1 ml de diméthylsulfoxyde et la solution est développée par chro- matographie en phase liquide à haute performance en utili- sant une colonne de 2,0 x 25,0 cm de produit dit Nucleosil C 18 et un mélange d'acétonitrile et de tampon à l'acide citrique 0,l M comme produit de développement pour fournir une fraction contenant le composé 16. Cette fraction est concentrée, le concentré est adsorbé avec 20 ml de produit dit Amberlite XAD-2, la ré- sine est lavée avec de l'eau, puis éluée avec de l'alcool méthylique et l'éluat est concentré à sec pour donner 19,1 mg de poudre incolore du composé 16. A titre de variante, 200 mg de produit dit 0 F 4949-I sont mélangés avec 10 ml d'alcool benzylique, ml de benzène et 100 mg d'acide ptoluènesulfonique et le mélange est chauffé au reflux pendant 4 heures, Dans la solution réactionnelle, on ajoute 100 ml d'un mélange d'éther et d'hexane ( 1: 1)e le précipité résultant est rassemblé par filtration, et séché pour fournir 343,7 mg de la masse Cette masse est dissoute dans 2 ml de dimé- thylsulfoxyde et la solution est développée par chromato- graphie en phase liquide à haute performance avec une co- * lonne de 2,0 x 25,0 cm de produit dit Nuclêosil 30 C 18 et unmélange d 'acétonitrile et de tampon à l'acide citri- que 0,l M comme produit de développement pour fournir une fraction contenant le composé 16. Cette fraction est concentrée, le concentré est 2538387; 50. adsorbé avec 20 ml de produit dit Amberlite XAD-2, la ré- sine est lavée avec de l'eau, puis éluée avec de l'alcool méthylique, et l'éluat est concentré à sec pour fournir 83,8 mg de poudre incolore du composé 16. EEXEIPLE 12 Fabrication du composé 17 A 102 mg du composé 14 on ajoute 5 ml d'ammo- niaque concentrée et le mélange est agité toute la nuit à la température ambiante La solution réactionnelle est neutralisée avec de l'acide chlorhydrique 6 N et dévelop, pée par chromatographie en phase liquide à haute perfor- mance en utilisant une colonne de 2,0 x 25,0 cm de produit dit Nucleosil 30 C 18 et un mélange de tampon à l'acide citri- que O,l M et d'acétonitrile comme produit de développement pour fournir une fraction contenant le composé 17. Cette fraction est concentrée, le concentré est adsorbé avec 20 ml de produit dit Diaion HP-20, la résine est lavée avec de l'eau, puis éluée avec du méthanol à %-eau, et l'éluat est concentré à sec pour fournir 48,3 mg de poudre incolore du composé 17. On prépare de manière semblable 30,8 mg du composé 17 à partir du composé g 19 ( 5 g,6 mg), EXEMPLE 13 Fabrication du composé 18 Le produit dit OF 4949,I ( 1,0 gramme) est dis- sous dans 20 ml d'acide chlorhydrique 1 N et chauffé dans un tube scellé à 1000 C pendant 7 heures La solution réac" tionnelle est concentrée à sec, le résidu est dissous dans ml d'eau, et la solution est développée par chromatogra- phie en phase liquide à haute performance en utilisant une colonne de produit dit Prep PAK '50 Q/C 18 (de la société di? te Waters) et un mélange de tampon à l'acide citrique Q,1 M et d'acétonitrile comme produit de développement pour fournir une fraction contenant le composé 18. Cette fraction est concentrée, le concentré est 51. réglé à un p H de 3 avec de l'acide chlorhydrique 6 N, adsorbé avec le produit dit Diaion HP-20 ( 70 ml), la rési- ne est lavée avec de l'eau, puis éluée avec du méthanol a 50 %-eau et l'éluat est concentré Les cristaux résul- tants sont obtenus par filtration pour donner 345,4 mg d'aiguilles incolores du composé 18 Il ne présente pas de point de fusion clair jusqu'à 300 C Analyse élémentai- re calculée pour C 23 H 25 N 30,gw 2 H 20: C 52,77, H 5 58 N 8,03; Trouvé: C 53,01, H 5,83, N 8,09. EXEMPLE 14 Fabrication du composé 20 A 59,6 mg du composé 19 g on ajoute 3 ml d'ammonia- que concentrée et le mélange est agité à la température am- biante toute la nuit La solution réactionnelle est diluée avec 3 ml d'eau et développée avec une chromatographie en phase liquide & haute performance en utilisant une colonne ( 2,0 x 25,0 cm) de produit dit Nucleosil 30 C 18 et un mé- lange de tampon à l'acide citrique 0,1 M et d'acétonitrile comme produit de développement pour fournir une fraction contenant le composé 20. Cette fraction est concentrée, le concentré est adsorbé avec 20 ml de produit dit Diaion HP-20, la résine est lavée avec de l'eau, et éluée avec du méthanol à 50 %- eau, L'éluat est concentré à sec pour fournir 9,2 mg de poudre incolore du composé 20. EXEMPLE 15 Fabrication des composés 21, 4 et 5 A 462,2 mg du composé 19 on ajoute 40 ml de té- trahydrofurane et le mélange est chaufé au reflux avec 500 mg de borohydrure de lithium pendant 6 heures Dans la solution réactionnelle on ajoute de l'acide chlorhydrique 2 N dans l'alcool méthylique siblen qu'un excès de borohy- drure de lithium est consommée Ensuite le mélange est con- centré à sec, le résidu-est dissous dans 10 ml d'eau, et la solution est développée par chromatographie en phase 2538387 i 52. liquide à haute performance en utilisant une colonne ( 2,0 x 25,0 cm) de produit dit Nucleosil 30 C 18 et un mélange de tampon à l'acide citrique 0,l M et d"acétoni trile comme produit de développement pour fournir une fraction contenant le composé 21, Cette fraction est con- centrée, le concentré est adsorbé avec 20 ml de produit dit Diaion HP 20, la résine est lavée avec de l'eau, éluée avec du méthanol à 50 %,eau, et l'éluat est con- centré à sec pour fournir 233,6 mg de poudre incolore du composé 21 On prépare de manière semblable 6,1 mg du composé 4 et 12,0 mg du composé 5 respectivement à partir de 37 mg du composé 1 et de 40 mg du composé 3. EXEMPLE 16 Fabrication des composés 22 et 6 A 100 mg du produit dit O F 4949,I on ajoute 5 ml d'acide formique à 98 % et, avec refroidissement par de la glace et agitation, on ajoute goutte à goutte 5 ml d'anhydride acétique Ensuite le mélange est agité pen- dant 30 minutes avec de l'eau et de la glace et on laisse reposer à la température ambiante pendant 1 heure Dans la solution réactionnelle résultante, on ajoute 10 ml d'eau,le mélange est agité pendant 10 minutes et concen- tré Le concentré est développé par chromatographie en phase liquide à haute performance avec une colonne de 2,0 x 25,0 cm de produit dit Nucleosil 30 C 18 et un mélan- ge de tampon à l'acide citrique O,l M et d'acétonitrile comme produit de développement pour fournir une fraction contenant le composé 22. Cette fraction est concentrée, le concentré est adsorbé avec 20 ml de produit dit Diaion H Pr 20 o, la rési- ne est lavée avec de l'eau et éluée avec du méthanol à %-eau L'éluat résultant contenant le composé 22 est concentré et filtré pour fournir 42,2 mg de microraiguil- les incolores du composé 22, Il ne présente pas de point de fusion clair jusqu'à 300 C, Analyse élémentaire calculée 2538387, 53. pour C 24 H 26 N 409; C 56,03, U 5,02, N 10,89, Trouvé: C 55,87, H 5,08, N 10,94. On prépare de manière semblable 24,1 mg du composé 6 à partir de 60 mg de produit dit OF 4949-II, EXEMPLE 17 Fabrication du composé 24 A 134,0 mg du composé 22 on ajoute 10 ml de N,Ndiméthylformamide, 100 mg de carbonate de potassium et 200 pi de bromure de n- butyle et le mélange est agi- té toute la nuit à la température ambiante, La solution réactionnelle est neutralisée et développée par chromato- graphie en phase liquide à haute performance avec une colonne de 2,0 x 25, 0 cm de produit dit Nucleosil 30 C 18 et un mélange tampon à l'acide citrique 0,1 M et d'acétoni- trile comme produit de développement pour fournir une fraction contenant ie composé 24, Cette fraction est concentrée, le concentré est adsorbé avec du produit dit Amberlite XAD-2 ( 20 ml), la résine est lavée avec de l'eau et éluée avec de l'alcool méthylique, L'éluat est concentré à sec pour fournir 59,0 mg de poudre incolore du composé 24. EXEMPLE 18 Fabrication des composés 25 et 8 Le produit dit OF 4949 'S ( 200 mg) est dissous dans 20 ml d'eauet,avec refroidissement par de la glace et agitation, on y ajoute goutte à goutte 10 ml d'anhydri- de acétique, Le mélange est agité pendant 15 minutes avec refroidissement par de la glace, et puis agité toute la nuit à la température ambiante, La solution réactionnelle est diluée avec 100 ml d'eau, adsorbée avec 20 ml de pro- duit dit Diaion HP 20, la résine est lavée avec de l'eau, éluée avec du méthanol à 50 %seau, l'éluat contenant le composé 25 est concentré à sec, et on obtient 156,9 mg de poudre incolore du composé 25, On prépare de manière semblable 44,9 mg de com'- 54. posé 8 à partir de 50 mg de produit O F 4949,II, EXEMPLE 19 Fabrication des composés 26 et 9 A 100 mg de produit dit O F 4949 -I on ajoute 10 ml d'alcool méthylique et 5 ml d'anhydride acétique et le mélange est agité toute la nuit à la température ambiante La solution réactionnelle est concentrée à sec, le résidu est dissous dans 7 ml d'un mélange d'eau et de diméthylsulfoxyde, et la solution est d Eveloppée par une chromatographie en phase liquide à haute performance avec une colonne de 2,0 x 25,0 cm de produit dit Nucleosil 30 C 18 et un mélange de tampon d'acide citrique O,l M et d'acétonitrile comme produit de développement pour fournir une fraction contenant le composé 26 Cette fraction est concentrée, le concentré est adsorbé avec 20 ml de produit dit Amberlite XAD-2, la résine est lavée avec de l'eau, éluée avec du méthanol à 50 %-eau et l'éluat est concen- tré à sec pour fournir 57,0 mg de poudre incolore du composé 26. On prépare de manière semblable 23,3 mg du com- posé 9 à partir de 50 mg de produit dit OF 4949-II, EXEMPLE 20 Fabrication du composé 27 A 30,6 mg du composé 14 on ajoute 1 ml de pyri- dine et 100 Pl d'anhydride acétique et le mélange est agi- té pendant 4 heures à la température ambiante Dans la solution réactionnelle on ajoute 2 ml d'eau et on dévelop- pe par chromatographie en phase liquide à haute performan- ce avec une colonne de 2,0 x 25,0 cm de produit dit Nucleo- sil 30 C 18 et un mélange de tampon à l'acide citrique O,1 M et d'acétonitrile comme produit de développement pour fournir une fraction contenant le composé 27, Cette fraction est concentrée, le concentré est adsorbé avec 20 ml de produit dit Amberlite XAD" 2, la résine est lavée avec de l'eau, et soumise à une élution par gradient avec 2538387, 55. de l'alcool méthylique à partir de l'eau pour fournir une fraction contenant le composé 27 qui est encore concen- trée et les cristaux résultants sont rassemblés par filtra- tion pour-fournir 12,9 mg de cristaux incolores du composé 27. EXEMPLE 21 Fabrication des composés 28 et 11 Le produit dit OF 4949-I ( 200 mg) est dissous dans 10 ml de tampon phosphaté O,l M (p H 7,0) et la solu- tion est agitée pendant 10 minutes à la température ambian- te avec 40 Pl d'acétaldéhyde Dans le mélange on ajoute mg de cyanoborohydrure de sodium et on agite à la température ambiante pendant 20 minutes Le mélange est concentré à sec, le résidu est dissous dans l'eau et la solution est développée par chromatographie en phase li- quide à haute performance avec une colonne de 2,0 x 25,0 cm de produit dit Nucleosil 30 C 18 et un mélange de tampon phosphaté O,l M (p H 5,7) et d'acétonitrile comme produit de développement pour fournir une fraction contenant le compo- sé 28, Cette fraction est concentrée, le concentré est adsorbé avec 20 ml de produit dit Diaion HP-20, la résine est lavée avec de l'eau, éluée avec du méthanol 50 %- eau et l'éluat est concentré à sec pour fournir 128,9 mg de poudre incolore du composé 28,. On prépare de manière semblable 28,6 mg du com- posé 11 à partir de 50 mg du produit dit OF 4949-II. EXEMPLE 22 Fabrication des composés 29 et 30 Le produit dit OF 4949 i-1 ( 200 mg) est dissous dans 20 ml d'eau et la solution est agitée pendant une heure à la température amh Iante avec 250 mg de Ni-bromosuc- cinimde Le précipité formé dans la solution réactionnel- le est dissous par addition de quelques gouttes d'ammonia- que 4 N et la solution est développée par chromatographie en phase liquide à haute performance avec une colonne 2538387 i 56. de 2,0 x 25,0 cm de produit dit Nucleosil 30 C 18 et un mélange de tampon à l'acide citrique O,l M et d'acétonitri- le comme produit de développement pour fournir une fracs tion contenant le composé 29. Cette fraction est concentrée, le concentré est adsorbé dans 20 ml de produit dit Amberlite XAD-2, la résine est lavée avec de l'eau, éluéeavec du méthanol à %-eau, l'éluat contenant le composé 29 est concentré et les cristaux qui sont apparus s Qnt rassemblés par fil- tration pour donner 75,8 mg d'aiguilles incolores du com- posé 29 Ce composé ne présente-pas de point de fusion clair jusqu'à 300 *C Analyse élémentaire calculée pour C 23 H 25 N 408 Br H 20: C 47,35, H 4,67, N 9,60; Trouvé: C 46,91, H 4,93, N g,57. On prépare de manière semblable 38,6 mg du composé 30 à partir de 41,0 mg du composé 18, EXEMPLE 23 Fabrication du composé 31 A 278,7 mg du composé 6 on ajoute 20 ml de N,N- diméthylformamide, 200 mg de carbonate de potassium et 500 Pil de bromure de n-butyle et le mélange est agité toute la nuit à la température ambiante La solution réac- tionnelle est neutralisée et développée par chromatographie en phase liquide à haute performance avec une colonne de 2,0 x 25,0 cm de produit dit Nucleosil 30 C 18 etunmélange de tampon à l'acide citrique 0,1 M et d'acétonitrile comme produit de développement pour donner une fraction conte- nant la substance n-butylée Cette fraction est concen- trée et le précipité-résultant est rassemblé par filtra- tion pour donner 52,0 mg de poudre, A 52,0 mg de la pou- dre, on ajoute 2 ml de solution de soude 4 N, le mélange est agité pendant 2 heures à la température ambiante, neu- tralisé et purifié par chromatographie en phase liquide à haute performance une fois de plus pour fournir une fraction contenant le composé 31, 57. Cette fraction est concentrée, le concentré est adsorbé avec 20 ml de produit dit Amberlite XAD-2, la ré- sine est lavée avec de l'eau, et éluée avec du méthanol à 50 %-eau L'éluat contenant le composé 31 est concen- tré,et les cristaux résultants sont rassemblés par fil- tration pour fournir 25 f 5 mg de microaiguilles incolores du composé 31 Il ne présente pas de point de fusion clair jusqu'à 300 C Analyse élémentaire calculée pour C 26 H 32 N 408: C 59,08, H 6,10, N 10,60; Trouvé: C 58,55, H 6,36, N 10,49. EXEMPLE 24 Fabrication du composé 32 Un mélange de 300 mg du produit dit O F 4949-II et de 100 mg de bicarbonate de sodium est dissous dans 10 ml d'eau, dans la solution on ajoute alors 5 ml d'éther et 1 p de chlorure de carbobenzoxy, et le mélange est agité à la température ambiante Après deux heures, le mélange est réglé à un p H de 3 avec de l'acide chlorhy- drique 2 N, le précipité résultant est rassemblé par filtra- tion, séché et on obtient 365,0 mg de poudre incolore. A 365,0 mg de la poudre on ajoute 10 ml d'anhy- dride acétique et 100 mg d'acétate de sodium, le mélange est agité pendant 3 heures à la température ambiante, puis dé- versé sur de la glace et de l'eau, le précipité résul- tant est rassemblé par filtration et séché pour donner 383,9 mg de poudre incolore. La poudre ( 104,2 mg) est dissoute dans 10 ml d'un mélange d'alcool méthylique, d'acide acétique et d'eau ( 8: 2: 1), Dans la solutions on ajoute 25 mg de palladium à 10 %-carbone et on introduit de l'hydrogène gazeux avec a 9 gtation, Après trois heures, la solution réactionnelle est filtrée et le filtrat est concentré à sec Le résidu est dissous dans 1 ml d'alcool méthylique et la solution est développée par chromatographie en phase liquide à haute performance avec une colonne de 2,0 x 25,0 2538387, 58. cm de produit dit Nucleosil 30 C 18 et un mélange d'acé- tonitrile et de tampon à l'acide citrique O 01 M pour fournir une fraction contenant le composé 32, Cette fraction est concentrée, le concentré est adsorbé avec 20 ml de produit dit Amberlite XAD 2, la ré- sine est lavée avec de l'eau, éluée avec du méthanol à %-eau, et l'éluat est concentré à sec pour donner 22 mg de poudre incolore du composé 32. On expliquera dans ce qui suit brièvement les différents dessins ci joints dans lesquels: La figure 1 est un graphique de spectre d'absorp- tion dans l'ultraviolet de la substance O F 4949-I Sur la figure, est une absorption quand le solvant est l'eau, est une absorption quand le solvant est l'acide chlorhydrique 0,05 N, et - est une absorption quand le solvant est de la soude 0,05 N. La figure 2 est un graphique de spectre d'ab- sorption dans l'infrarouge de la substance OF 4949,I mesu- ré dans du bromure de potassium. La figure 3 est un graphique de spectre de résonance magnétique nucléaire de protons de la substan- ce O F 4949 I mesuré dans de l'eau lourde ammoniaque 0,06 N (norme interne: DSS). La figure 4 est un spectre de résonance magné- tique nucléaire de C 13 de la substance O F 4949-I mesuré dans de l'eau lourde ammoniaque O,06 N (norme interne; p-dioxane 67,4 ppm), La figure 5 est un graphique de spectre d'absorp- tion dans l'ultraviolet de la substance O F 4949-II, Sur la figure, est une absorption quand le solvant est l'eau, est une absorption quand le solvant est de l'acide chlorhydrique 0,05 N et est une absorption quand le solvant est de la soude 0,05 N, La figure 6 est un graphique de spectre d'ab- sorption dans l'infrarouge de la substance O F 4949 II me- 59 c surée dans du bromure de potassium. La figure 7 est un graphique de spectre de résonance magnétique nucléaire de protons de la substan- ce OF 4949-II mesuré dans de l'eau lourde ammoniaque 0,O 6 N (norme interne: DSS). La figure 8 est un spectre de résonance ma- gnétique nucléaire de C 13 de la substance O F 4949-II mesu- ré dans de l'eau lourde ammoniaque-0,06 N (norme inter- ne: p-dioxane 67,4 ppm). La présente invention n'est pas limitée aux exemples de réalisation qui viennent d'être décrits, elle est au contraire susceptible de modifications et de va- riantes qui apparaîtront à l'homme de l'art. 2538387. 60. REVENDICAT IONS i A titre de produit industriel nouveau, composé représenté par la formule générale ( 1) suivante et ses sels: OR 1 O O R 2 CH 3 '2 2 R 4 N-CH CH-Y (I) CO -NH-CHCO N UC-OR 5 x is -15 o R est l'atome d'hydrogène, un groupe alkyle ayant 1 à 10 atomes de carbone, ou un groupe acyle ayant 1 à 6 atomes de carbone; R est l'atome d'hydrogène ou un atome d'halogène; R est l'atome d'hydrogène ou un groupe alkyle R 4 ou acyle ayant 1 à 6 atomes de carbone; R 4 est l'atome d'hydrogène ou un groupe alkyle ayant 1 à 6 atomes de car- bone; R 5 est l'atome d'hydrogène ou un groupe acyle ayant - 1 à 6 atomes de carbone; X est CONH 2, un groupe hydroxy- alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, ou COOR 6 (o R 6 est l'atome d'hydrogène ou un groupe alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone); et Y est CONH 2, un groupe bydroxyalkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone ou COOR 7 (o R 7 est l'atome d'hy- drogène, un groupe alkyle ayant 1 à 10 atomes de carbone ou le groupe benzyle) 2 Composé selon la revendication 1, caractéri- sé en ce que R *est l'atome d'hydrogène ou le groupe mé- 2 3 4 5 thyle; R 2, R 3, R et R sont des atomes d'hydrogène; X est CONH 2; et Y est COOH, le composé étant appelé OF 4949, -38387; 61. et ses sels. 3 Composé selon la revendication 2,caracté- i risé en ce que R est le groupe méthyle, le composé étant appelé OF 4949 'T et ses sels. 4 Composé selon la revendication 2, caractéri- sé en ce que R est l'atome d'hydrogène, le composé étant appelé O F 494 g-II et ses sels. -Procédé de fabrication de substances physio- logiquement actives dénommées OF 4949 =-I et/ou O F 4949-II, caractérisé en ce qu'un microorganisme producteur d'OF 4949 appartenant au genre Penicillium est cultivé dans un milieu,suivi de l'obtention de produits dits OF 4949-I et/ou O F 4949-II. 6 Procédé selon la revendication 5, caracté- risé en ce que le microorganisme producteur d'OF 4949 ap- partenant du genre Penicillium est le P rugulosum OF 4949. 7 Procédé de fabrication d'un composé repré- senté par la formule générale suivante (VI) O 31 CH 2 CH 2 R -NH-CH C-COOR l I CO SE -CH CO-NH CHOH CONH 2 (o 111 est un groupe alkyle ayant 1 a 10 atomes de car- 33. bone, R 31 est l'atome d'hydrogène ou un groupe acyle ayant 1 à 6 atomes de carbone, et R est l'atome d'hydrogène ou un groupe alkyle ayant 1 1 10 atomes de carbone), caracté- 2538387 j 62. risé en ce qu'un composé représenté par la formule géné- rale suivante (V) OH OR ,C 2 , 2 7 P-N-CH C H-COOR l l CO -NI-CH CO I CHOR l * ce 2 (ou P est l'atome d'hydrogène ou un groupe de protection pour le groupe amino et R 7 est l'atome d'hydrogène ou un groupe alkyle ayant I à 10 atomes de carbone) est amené à réagir avec un agent d'alkylation utilisé pour alkyler des groupes hydroxyles phénoliques et puis, selon le composé final à fabriquer, le groupe de protection du groupe amino est retiré et/ou le groupe ester est hydrolysé. 8 Procédé selon la revendication 7,caractéri- sé en ce que le composé final (VI) est le produit dit 0 F 4949-I, c'est-à-dire le composé (VI) ot R est le grou- pe méthyle et R 31 et R 71 sont des atomes d'hydrogène. 9 Agent d'immuno-modulation,caractérisé en ce qu'il contient un composé représenté par la formule (I) ou son sel comme ingrédient actif d'immunormodulation 2538387- 63. OR 1 O R 2 CH- R 3 C 2 C 12 (I Ro-C CH-Y CO NH Ca CO-NS HC-OR 5 X (.o Ri est l'atome d'hydrogène, un groupe alkyle ayant 1 à 10 atomes de carbone ou un groupe acyle ayant 1 à 6 atomes de carbone-:; R est l'atome d'hydrogène ou un ato- me d'halogène; R est l'atome d'hydrogène ou un groupe alkyle ou acyle ayant 1 à 6 atomes de carbone; R est l'atome d'hydrogène ou un groupe alkyle ayant 1 à 6 ato- mes de carbone; R 5 est un atome d'hydrogène ou un groupe acyle ayant 1 à 6 atomes de carbone, X est CONH 2, un groupe hydroxyalkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, ou 6 G COOR, o R est l'atome d'hydrogène ou un groupe aikyle ayant 1 à 4 atomes de carbone); et Y est CONH 2, un groupe hydroxyalkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone ou CO O OR (o R 7 est l'atome d'hydrogéne, un groupe alkyle ayant 1 à atomes de carbone ou le groupe benzyle), Agent d'immuno-modulation selon la reven- dication 9, caractérisé en ce que le composé (I) est le produit dit QF 4949, c'est- à-ire le composé (I), o R 1 est l'atom e d'hydrogène ou le groupe méthyle R 2 R 3 R 4 et R sont des atomes d'hydrogène, X est CONR 2 et Y est COOH ou ses sels.