FR 2538404 A1 19840629 FR 8221934 A 19821228 Heparine dépolymérisée et supersulfatée, procédé Pour sa préparation et composition:pharmaceutique en contenant. La présente invention concerne une heparine dépolymériséeet supersulfatée, un procédé pour sa préparation et des compositions pharmaceutiques la renfermant en tant que principe actif. L'héparine est un polysaccharide constitué par des molécules d'acide glucuronique ou d'acide iduronique éventuellement sulfaté en position 2, associées à des molécules de glucosamine, éventuellement sulfatée en position 6 et sulfatée ou acétylée sur l'amine en position 2. La structure de l'heparine peut être statistiquement représentée par la formule suivante COO CH 20-A - O O OH O 4 I O-A NH-B n o A représente H et SO-, B représente SO et COCH et N est compris 3 3 3 entre 20 et 30. L'expression "n est compris entre 20-et 30 " indique que la majorité des molécules d'héparine est représentée par la structure I ci-dessus, o l'unité disaccharidique est repétée 20 à 30 fois, ce qui correspond à un poids moléculaire de 12000 à 18000. Les expressions "H et SO 3 " et "SO et COCE H 3 ", telles qu'utilisées ici 3 3 3 pour, respectivement, les substituants A et B, indiquent que dans les 20 à 30 unités disaccharidiques ci-dessus A est dans certains cas l'hydrogè- ne et dans d'autres cas un groupe SO et, d'une façon analogue, Best dans la majorité des cas SO et dans d'autres cas un groupe acétyle. De même, la liaison I, telle qu'indiquée ici, indique que le groupe COO- peut, dans les 20 à 30 unités disaccharidiques ci-dessus, avoir dans cer- tains cas la configuration COOH o de l'acide D-glucuronique et dans la majorité des N unités la configu- ration o de l'acide L-iduronique. L'héparine est douée d'une bonne activité antithrombotique, ce qui jus- tifie son emploi thérapeutique actuel notamment dans la prévention des throm boses veineuses profondes post-chirurgicales Toutefois, cette activité anti- thrombotique de 1 'héparine est largement attribuée à son action anticoagulante et suscite dès lors des problèmes serieux de surveillance de la part du méde- cin à cause du haute risque hémorragique associé à l'héparinothérapie. Il est connu en littérature que par dépolymérisation de l'héparine jusqu'à des héparines de bas poids moléculaire (par "héparine de bas poids moléculaire" on entend ici des héparines dépolymérisées ayant un poids moléculaire entre 2000 et 9000) on obtient des composés ayant pratiquement la même activité antithrombotique mais un effet anticoagu- lant amoindri (Seminars in Hematology 1978, 15, 1-17). Il est aussi généralement reconnu qu'à égalité de degré de polymérisa- tion, l'activité biologique des polysaccharides augmente avec leur de- gré de sulfatation. Le terme "degré de sulfatation",dans le cas de l'héparine et, en général, des autres glycosaminoglycanes, désigne le nombre de groupes sulfate ( 50) par unité disaccharidique I ci-dessus Les héparines commerciales pures, généralement obtenues de la muqueuse intestinale de porc, ont en moyenne un degré de sulfatation de 1,9 à 2,3 Le degré de sulfatation est exprimé par le rapport SO/C 00-. De nombreux procédés pour la dépolymérisation de l'héparine et l'ob- tention conséquente d'héparines de bas poids moléculaire ont été dé- crits en littérature. Ainsi, la demande de brevet européen publiée au n 37 318 et la deman- de de brevet international 81,00 519 décrivent un procédé d'hydrolyse déaminative par action de l'acide nitreux Ce procédé comporte l'obten- tion d'une héparine dépolymérisée ayant, à unboutde la chaîne, un aldé- hyde ayant le squelette CHO La demande de brevet européen publiée au n 40 144 décrit un procédé d'hydrolyse basique qui conduit, par bétaélimination, à des héparines dépolymérisées ayant, àunboutde la chaîne, un sucre insaturé ayant le squelette COO- O III La demande de brevet français publiée au n 2 474 508 décrit une hydro- lyse acide effectuée avec de l'acide ascorbique et de l'eau oxygénée qui conduit à des héparines dépolymérisées ayant perdu le groupement SO- dans la position 2 de la glucosamine, responsable de l'activité Le pro- duit ainsi obtenu doit donc être resulfaté pour récupérer son activité. Un autre procédé connu pour la dépolymérisation de l'héparine (J Biol. Chem 1982, 257, 7310-7313) consiste en une hydrolyse enzymatique qui, de toute façon, conduit à un produit ayant,àunbout de la chaîne, le su- cre insaturé III ci-dessus et ayant perdu 90 % de son activité. On a maintenant trouvé que par traitement de l'héparine avec un mélan- ge d'acide sulfurique et d'acide chlorosulfonique on obtient, avec des bons rendements, une héparine dépolymérisée ayant un poids moléculaire entre 2000 et 9000. On a aussi trouvé d'une façon surprenante que l'héparine dépolymérisée ainsi obtenue possède un degré de sulfatation d'au moins 20 % supérieur à celui de l'héparine de départ On obtient donc une héparine ici dési- gnée "supersulfatée". On a également constaté que dans l'héparine dépolymérisée et supersul- fatée ainsi obtenue au moins pratiquement tous les hydroxyles primaires sont estérifiés par un groupe sulfate. On a finalement trouvé que la nouvelle héparine dépolymérisée et su- persulfatée montre une bonne activité fibrinolytique et hypolipémiante associée à une très faible activité anticoagulante. Ainsi, selon un de ses aspects, la présente invention a pour objet une nouvelle héparine dépolymérisée et supersulfatée ayant un poids molécu- laire compris entre 2000 et 9000 et un degré de sulfatation supérieur d'au moins 20 % à celui de l'héparine correspondante. Cette augmentation du degré de sulfatation est donnée en pourcentage car les héparines commerciales ont un degré de sulfatation qui peut va- rier selon la source et le procédé d'extraction et/ou de purification. De toute façon, le degré de sulfatation de la nouvelle héparine dépo- lymérisée et supersulfatée de la présente invention est au moins 2,5, à savoir supérieur à celui de toutes les héparines connues, obtenues de la muqueuse intestinale de porc, etde toutes les héparines de bas poids moléculaire décrites en littérature. La nouvelle héparine dépolymérisée et supersulfatée de la présente invention est caractérisée par une structure représentée par la formule suivante C 00 CO O 1 J O O i IV O O-A O-A O-A NE-B *m dans laquelle A et B sont tels que définis ci-dessus et m est compris entre 4 et 15. Comme pour la formule I ci-dessus, les expressions "H et SO" et "SO O 3 3 et COCH 3 ",11 utilisées pour, respectivement, A et B, ainsi que le m et la liaison I mettent en évidence le caractère statistique de la formule IV. Dans les formules I et IV ci-dessus, ainsi que dans les revendications, les produits sont indiqués sous forme anionique Le cation peut être l'hydrogène, un métal alcalin, le sodium de préférence, ou alcalino-ter- reux, le calcium de préférence, ou un amine organique physiologiquement compatible. Selon un autre de ses aspects,la présente invention a pour objet un procédé pour la préparation d'une héparine dépolymérisée et 'supersulfa- tée ayant un poids moléculaire entre 2000 et 9000, plus particulièrement représentée par la formule IV ci-dessus, caractérisé en ce qu'on traite une héparine d'origine naturelle avec un mélange d'acide sulfurique et d'acide chlorosulfonique. Les deux acides, dans le mélange, sont concentrés; de préférence, leur concentration est supérieure à 95 % en poids. Le rapport des deux acides est très variable, mais un rapport acide sulfurique: acide chlorosulfonique d'environ 2: 1 est particulièrement préféré. La température de réaction peut varier entre -20 C et + 40 C; après une période variable de quelques minutes à 2 heures, la dépolymérisation sou- haitée est achevée etl'héparine de bas poids moléculaire et supersulfa- tée est isolée sous forme de sel alcalin en solution aqueuse par précipi- tation dans un solvant approprié, par exemple éther diéthylique ou diiso- propylique, dissolution dans l'eau, neutralisation par un hydroxyde alca- lin ou un carbonate alcalin, de sodium de préférence, et dialyse finale pour l'élimination des fragments plus petits. L'héparine dépolymérisée et supersulfatée est isolée sous forme de sel alca- in selon les techniques conventionnelles, par exemple par lyophilisation ou évaporation sous pression réduite et caractérisée par les méthodes physico- chimiques connues. D'autres sels, par exemple le sel de calcium, peuvent être obtenus à 6 2538404 partir des sels alcalins, le sel de sodium de préférence, par réaction d'échange avec le sel approprié, par exemple le sel de calcium, en uti- lisant éventuellement une résine échangeuse d'ions. Les méthodes physico-chimiques employées ont montré queles nouvelles héparines dépolymérisées et supersulfatées de la présente invention sont qualitativement différentesdes héparines correspondantes et de toutes les héparines dépolymérisées connues car, àégalitédedegré de polymérisation, leur profil de sulfatation est significativement différent à cause des groupes sulfate additionnels. Une telle différence est mise en évidence aussi bien par le comporte- ment électrophorétique que par les caractéristiques des spectres RSN. Selon la technique de l'électrophorèse dans l'acétate de barium, la migration des espèces sulfatées est inversement proportionnelle à leur capacité de complexer les ions Ba++ Cette capacité complexante est fonction aussi bien du poids moléculaire que de la densité de charge. Dans le cas de l'héparine non modifiée, les chaines ayant une plus grande affinité pour le barium s'arrêtent (espèces "slow-moving") tandis que les autres migrent vers l'anode (espèces "fast-moving"). Dans le cas des héparines dépolymérisées connues, on n'observe que des espèces "fast-moving". Au contraire, et à la différence des héparines naturelles, lesnouvelles héparines dépolymérisées et supersulfatées de la présente invention ne mon- trent que-des espèces "slow-moving". Les spectres RU confirment la différence qualitative entre les hépari- nes commerciales ou les héparines dépolymérisées connues (dont les spec- tres sont substantiellement identiques, sauf pour ce qui concerne les signaux des groupes terminaux)et les héparines dépolymnérisées etsupersulfa- tées de la présente invention N effet, les spectres Pi N de ces dernières pré- sentent des déplacements significatifs de signaux quipeuvent être attribués à des groupes sulfate nouveaux introduits dans les positions normalement non sulfatés De tels spectres RMN justifient la formule IV ci-dessus. Le procédé de la présente invention peut être conduit non seulement sur des héparines commerciales, mais aussi sur des fractions de telles héparines pour obtenir les nouvelles héparines dépolymérisées et super- sulfatées de la présente invention. Selon le procédé de la présente invention, la dépolymérisation a lieu dans des conditions qui ne provoquent pas de variation structurelle dans les unités saccharidiques, notamment sans que l'on obtienne des produits insaturésou aldéhydiques et pratiquement sans provoquer de décarboxyla- tion. Les nouvelles héparines dépolymérisées et supersulfatées de la présen- te invention ont été évaluées chez le rat dans les tests de coagula- tion sanguine, de fibrinolyse et sur le test de l'activité lioprotéine lipase circulante. L'action des composés de la présente invention sur la coagulation san- guine a été quantifiée par le rapport entre l'activité vis à vis du fac- teur Xa (action anti-Xa) et celle sur la coagulation globale extrinsèque (APTT; activated partial thromboplastin time). Le facteur Xa-est l'enzyme responsable de la transformation de prothrom- bine en thrombine; l'action anti-Xa prévient donc l'apparition de thrombi- ne circulante L'action sur 1 'APTT tient compte de tous les effets vis à vis de l'ensemble des facteurs de la coagulation participant à la voie extrinsèque y compris la thrombine, il est donc considéré comme une mesure indirecte du risque hémorragique particulièrement sous héparinothérapie. Le rapport anti-Xa/APTT permet donc de juger de la composante anticoagu- lante de l'activité antithrombotique potentielle des héparines dépolyméri- sées et supersulfatées de la présente invention sans risques hémorragiques associés. L'autre composante de cette activité antithrombotique potentielle est évaluée par la mesure de l'activité fibrinolytique. L'activité hypolipémiante des,composés de la présente invention a été déterminée en évaluant leur action sur la lipoprotéine lipase qui permet d'accélérer le catabolisme des triglycérides. 2538404; Trois composés représentatifs de la présente invention, Ies héparines dépolymérisées et supersulfatées, désignées respectivement par leur numé ro de code AH-16, AH-17 et AH-19, ainsi que les héparines de départ, en tant que produits deréférence, ont été administrées chez le rat par la voie intraveineuse à une dose unique de 50 U/kg ( 0,3 mg/kg), et les di- vers paramètres biologiques ont été déterminés 15 minutes après l'admi- nistration des produits L'action sur la coagulation sanguine globale a été mesurée sur des échantillons de plasma citraté selon la technique usuelle (R R Proctor and S I Rapaporti, Am J Clin Pathol, 36, 212, 1961) Ces mêmes échantillons ont été utilisés pour la détermination de l'activité anti-Xa selon un dosage chronométrique (E T Yin, S Wessler, J.V Batler, 81, 298, 1973). L'action fibriniolytique a été appréciée par la mesure de l'aire de lyse provoquée par les englobulines plasmatiques sur des plaques de fi- brine (C Kluft, Haemostasis, 5, 136, 1976) Dans ce cas biefi précis, la dose adminsitrée en I V a été de 0,75 mg/kg. L'activité lipoprotéine lipase est mesurée par sa capacité d'hydroly- ser le substrat 14 C-trioléine en acide 14 C-oléique selon la technique de Ni Lkkola et col (Metabolism, 26 ( 2), 179, 1977). Le tableau I résume l'action ex-vivo des composés de la présente in- vention sur la coagulation sanguine, la fibrinolyse et la lipoprotéine lipase. De ce tableau il ressort que les fractions étudiées sont plus actives vis à vis du facteur Xa (activité anti-Xa) que sur la coagulation globa- le (APTT) Elles montrent un rapport Anti-Xa/APTT au moins double de ce- lui des héparines D-212/A de référence Une augmentation statistiquement significative de l'aire de lyse sur plaque de fibrine a été obtenue pour les échantillons d'englobulines plas- mati:es des animaux traités avec l'héëarine standard (D-212) Cette aug- mentation a été par ailleurs plus prononcée pour les animaux traités avec l'héparine dépolvmérisée et supersulfatée (AH-16). TABLEAU I k D (b) Analyse statistique test de Student comparativement à l'héparine. ** p PARAMETRES PRODUITI' DOSEAPTT AT-a A'l X FIBRINOLYSE (a) LIPOPROTEINE UI/kg/I V Ui U /ml aiedels LIPASE (b) Chronométrique APIT % libération Témoins 220,25 gpm 2 + 17,51 AU 16 50 0,06 + 0,02 0,18 + 0,01 3 304,26 min 2 + 12,63 (* 95 * AII-17 50 0,05 + 0,02 0,17 + 0,01 3,4 AHJ-19 50 ' 0,05 + 0,03 0,22 + 0,04 4,4 D-212 272,83 min 2 + 15,43 (* 28 D-212/A 50 0,212 + 0,04 0,324 + 0,04 1,61 2538404 i Par ailleurs, les résultats obtenus sur lalipoprotéine lipase témoi- gnent d'une action de l'ordre de 3 fois supérieure àcelle de l'héparine D-212. Les héparines dépolymérisées et supersulfatées de la présente invention sont donc non seulement des antithrombotiques potentiels sans risques hémorragiques associés, mais également des agentshypolipémiants potentiels. Ainsi, laprésente invention apour objet, selonunautrede ses aspects, des compositions pharmaceutiques renfermant, en tant que principe actif, une héparine dépolymérisée et supersulfatée de formule IV ci-dessus. Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, in- traveineuse, transdermique ou rectale, les ingrédients actifs de la for- mule IV ci-dessus peuvent être administrés sous formes unitaires d'admi- nistration, en mélange avec des supports pharmaceutiques classiques, aux animaux et aux êtres humains dans les cas de hausse pathologique de la thrombine et des lipides, notamment dans la prévention des maladies throm- botiques et le traitement de l'athérosclérose Parmi- les formes unitaires d'administration appropriées, il y a les formes par voie otale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales et les formes d'administration parentérale utiles pour une administration sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse. Afin d'obtenir l'effet antithrombotique et hypolipémiant désiré chez lesmammifères et l'homme, la dose de principe actif peut varier entre 0,1 et l O Omg par kg de poids du corps et par jour. Chaque dose unitaire peut contenir de 1 à 1500 mg d'ingrédient actif en combinaison avec un support pharmaceutique Cette dose unitaire peut être administrée 1 à 4 fois par jour pour le traitement des trou- bles du métabolisme des lipides et en général pour le traitement de la maladie athérosclérotique. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limi- ter. 11 ' EXEMPLE 1 A un mélange de 20 ml d'acide sulfuriqueà 95 % et 10 mld'acide chlorosul- fonique, refroidi à -4 à O C, on ajoute 1 g d'héparine provenant de muqueuse intestinale de porc (PROQUIFIN, lot 7926-7935, numéro de code: D212)ayant un degré de sulfatation de 1,95 et un P M de 13500,puis on abandonne le mélan- ge réactionnel une heure à la même température sous agitation et encore minutes à la température ambiante On verse le mélange dans 500 ml d'éther diéthylique froid (-4 à + 4 C), on filtre le précipité et on le lave avec de l'éther diéthylique froid On dissout le produit ainsi ob- tenu dans l'eau, on le neutralise par de l'hydroxyde de sodium 0,5 N et on le dialyse contre l'eau distillée dans des membranes à 3500 D (THOMAS DIALYZER TUBING 3787-H 47, diamètre de 11 mm) On obtient ainsi un dessalement ainsi que l'élimination des fragments à plus bas poids moléculaire Par évaporation lente sous pression réduite, on obtient avec un rendement de 93 % en poids une héparine sodique dépolymérisée et supersulfatée (n de code: AH-16) sous forme de poudre ayant-les ca- ractéristiques suivantes: P M " 6000 (Formule IV, m % 9). Analyse élémentaire: S: 12,93 %; C: 18,48 %; H: 3,30 %; N: 1,76 %. Degré de sulfatation (Rapport SO/COO-): 3,0. Spectre IR: Large bande dans la région 1300-1200 cm-1, caractéristi- que des groupes O-SO 3 Na. Electrophorèse en acide chlorhydrique: dans cette technique, la mi- gration est fonction du degré de sulfatation La Fig 1 montre l'aug- mentation significative de la migration électrophorétique de l'hépa- rine dépolymérisée et-supersulfatée par rapport à l'héparine de dé- part. Electrophorèse en acetate de barium La Fig 2 montre que l'héparine dépolymérisée et supersulfatée a une caractéristique électrophoré- tique "slow-moving", à la différence de l'héparine de départ qui contient aussi bien les espèces "slow-moving" que les "fast-moving". Spectre RMN 13 C La Fig 3 montre la comparaison des spectres de l'héparine de départ et de l'héparine dépolymérisée et supersulfatée obtenue Dans le spectre de la nouvelle héparine de bas poids molécu- laire on note l'apparition de nouveaux signaux dus à l'effet de la dépolymérisation et de l'introduction de groupes sulfate addition- nels. L'héparine dépolymérisée et supersulfatée ainsi obtenue présente un degré de sulfatation supérieur de 53 % à celui de l'héparine de départ sans qu'il y ait eu de décarboxylation significative. EXEMPLE 2 A un mélange de 10 ml d'acide sulfurique à 98 % et 5 ml d'acide chloro- sulfonique, refroidi entre -4 et O C, on ajoute 500 mg d'une fraction de poids moléculaire élevé (P M 16500) de l'héparine PROFIQUIN lot 7926-7935 (n de code D-212/B), obtenue par précipitation avec éthanol,ayant un degré de sulfatation SO-/CO O = 2 On abandonne le mélange 1 heure à la tempé- * rature ambiante, puis on le verse dans 250 ml d'éther diéthylique froid (de -10 à + 4 C), on le filtre, on dissout le précipité obtenu dans de l'eau, on neutralise la solution ainsi obtenue avec de l'hydroxyde de sodium 0,5 M et on dialyse contre H 20 distillée dans de membranes de 3500 D (THOMAS DIALYZER TUBING 3787-H 47) ayant un diamètre de 11 mm afin d'éliminer les sels et lesproduits de réaction de taille plus pe- tite Par évaporation sous pression réduite on obtient, avec un rende- ment de 60 %, les sel sodique d'une héparine dépolymérisée et supersul- fatée (n de code AH 18), ayant les caractéristiques suivantes: P M 3000-5000 (Formule IV, m 5-8). Analyse élémentaire: S: 13,56 %; C: 18,03 %; H: 3,00 %; N: 1,70 %. Degré de sulfatation(SO 0/COO-) = 2,6. Spectre IR: large bande dans la région de 1300-1200 cm-1 caractéris- tique des groupes O-SO 3 Na. Electrophorèse en acétate de barium: la Fig 4 montre que l'AH 18 ne montre que les espèces "slow-moving", tandis que le produit de départ montre aussi des espèces "fast-moving". EXEMPLE 3 A un mélange de 10 ml d'acide sulfurique à 98 % et 5 ml d'acide chloro- sulfonique, refroidi entre -4 et O C, on ajoute 500 mg du sel sodique d'une héparine provenant de muqueuse intestinal de porc (PROOUIFIN,lot 7926- 7935; n de code D-212) ayant un degré de sulfatation SO-,/CO = 1,95. 3, On abandonne le mélange 1 heure à la température ambiante, puis on la verse dans 250 ml d'éther diéthylique froid (de -10 à + 4 C) et on la traite ensuite comme décrit aux Exemples 1 et 2 On obtient ainsi, avec un rendement de 90 %, une héparine sodique dépolymérisée et super- sulfatée (n de code AI-19) ayant les:caractéristiques suivantes: P M i 6000 (Formule IV, m = 9) Degré de sulfatation (SO-/COO-): 3 Spectre IR: large bande entre 1300 et 1200 cm-1 caractéristique des groupes OSO 3 Na. Electrophorèse en acétate de barium: la Fig 5 montre que l'AH-19 ne montre que des espèces "slow-moving", tandis que le produit de départ montre également des espèces "fast-moving". EXEMPLE 4 A un mélange de 10 ml d'acide sulfurique à 98 % et d'acide chloro- sulfonique à 95 %, refroidi à une température entre -4 et 0 C, on ajoute 500 mg d'une fraction de poids moléculaire moyen (P M 10000) de l'héparine PROFIQUIN lot 7926-7935 (n de code: D-212/A), obtenue par fractionnement avec l'éthanol, dont le profil électropho- rétique dans l'acétate de barium montre un composant "fast-moving" très important et ayant un degré de sulfatation SO-/CO O = 1,5 On abandonne le mélange 1 heure sous agitation à la température ambian- te, puis on la verse dans 250 ml d'éther diéthylique froid (-10 à + 4 C) et on la traite ensuite comme décrit aux Exemples 1 et 2 On obtient ainsi une héparine sodique dépolymérisée et supersulfatée (n de code: AH 17) ayant les caractéristiques suivantes: P M 3000-5000 (Formule IV, m = 5-8). Analyse élémentaire: S: 12,70 %; C: 17,24 %; H: 3,10 %; N: 1,67 %. Degré de sulfatation (SO-/COO-) = 2,5. 2538404 i Spectre IR: large bande entre 1300 et 1200 cm-1 des groupes OSO 3 Na. Electrophorèse en acétate de barium: la Fig 6 montre que l'AH-17, comparé à la fraction héparinique de départ, ne montre que le compo- sant "slow-moving". EXEMPLE 5 A un mélange de 20 ml d'acide sulfurique à 95 % et 10 ml d'acide chlo- rosulfonique à 98 %, refroidi à -4 à O C, on ajoute 1 g d'héparine pro- venant de muqueuse intestinale de porc (PROQUIFIN, lot 7926-7935, numé- ro de code: D-212) ayant un degré de sulfatation de 1,95, puis on aban- donne le mélange réactionnel une heure à la température ambiante sous agitation On verse le mélange dans 500 ml d'éther diéthylique froid (-4 à + 4 C), on filtre le précipité et on le lave avec de l'éther diéthy- lique froid On dissout le produit ainsi obtenu dans une solution aqueuse de chlorure de calcium 0,1 M, on ajoute à la solution ainsi obtenue de l'hydroxyde de calcium 0,5 M jusqu'à p E 8 et on dialyse d'abord contre 500 ml d'une solution de chlorure de calcium 0,1 M et ensuite contre l'eau distillée Par évaporation lente sous pression réduite, on ob- tient le sel de calcium d'une héparine dépolymérisée et supersulfatée, sous forme de poudre blanche. 2538404 i REVENDICATIONS 1 Héparine dépolymérisée et supersulfatée ayant un poids moléculaire entre 2000 et 9000 et un degré de sulfatation d'au moins 2,5, re- présentée par la formule suivante COQ c oso 3 J O-A Q-0 O-A NH-B dans laquelle A représente H et SO-, B représente SO et COCH et m 3 3 3 est compris entre 4 et 15 2 Héparine dépolymérisée et supersulfatée selon la revendication 1, sous forme de sel de sodium. 3 Héparine dépolymérisée et supersulfatée selon la revendication 1, sous forme de sel de calcium. 4 Procédé pour la préparation de l'héparine selon une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'on traite une héparine d'origine naturelle, ou une de-ses fractions, avec un mélange d'acide sulfurique et d'acide chlorosulfonique. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que la réaction est conduite à une température entre -20 et + 40 WC. 6 Procédé selon une des revendications 3 et 4, caractérisé en ce que la concentration des deux acides est supérieure à 95 % en poids. 7 Procédé selon une des revendications 3 à 5, caractérisé en ce que la rapport acide sulfurique: acide chlorosulfonique est d'environ 2: 1. 8 Héparine dépolymérisée et supersulfatée telle qu'obtenue par le procé- dé selon une des revendications 4 à 7. 2538404 i 9 Héparine selon la revendication 8, caractérisée en ce qu'elle pré- sente un degré de sulfatation d'au moins 20 % supérieur à celui de l'héparine de fraction de départ. Compositions pharmaceutiques pour le traitement de l'athéroscléro- se et la prévention des thromboses renfermant, en tant qu'ingré- dient actif, une héparine dépolymérisée et supersulfatée selon une des revendications 1 à 3, 8 et 9.