FR 2544317 A2 19841019 FR 8305905 A 19830412 Le présente certificat d'addition concerne des benzoazacycloalkyl-spiro-imidazolidines et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. Les benzoazacycloalkyl-spiro-imidazolidines selon le brevet principal répondent a la formule générale dans laquelle R1 représente un atome d'hydrogene ou d ' halogine, un radical hydroxy ou méthoxy, R2 représente un atome d'hydrogène, un radical allyle inférieur1 phXnyl-alkyle inférieur, alcanoyle inférieur ou p -tolubnesulfonyle, et n est 1 ou 2, ainsi que leurs sels obtenus avec des bases minérales ou organiques pharmaceutiquement acceptables, ou leurs sels d'addition (excepté pour R2 = acyle) obtenus avec des acides minéraux pharmaceutiquement acceptables. Le brevet donne, parmi les exemples de composés de formule 1, la chloro-6 tétrahydro-1,2,3,4 isoquinoléine-4spiro-4'-imidazolidine-dione-2',5', sous forme racémique. La présente invention concerne les isomères optique s de la chloro-6 tétrahydro-1,2,3,4 isoquinoléine-4-spiro-4' -imidazolidine-dione-2',5', de formule développée ou un de leurs sels d'addition obtenus avec des acides pharmaceutiquement acceptables. Les isomères optiques sont prépares par salification du composé racémique par un acide optiquement actif et séparation des sels par cristallisation.fractionnée. EXEMPLE : a) Camphosulfonate de l'isomère (d). On porte au reflux jusqu' dissolution complète 100 g (0,036 M) de chloro-6 tétrahydro-1,2,3,4 isoquinoléine -4-spiro-4'-imidazolidine-dione-2',5' racémique obtenu selon l'exemple 2 du brevet français 82.07203, 78 g (0,036 M) d'acide (l)-l0-camphosulfonique, 1300 cm3 d'eau et 400 cm3 d'6thanol. La solution ainsi obtenue, concentrée à sec, donne 162 g de sel attendu. D'une première recristallisation de 3200 cm3 de méthonol précipite, après une nuit au réfrigérateur à 30C, 70,7 g de produit.Une seconde recristallisation de 2950 cm3 de méthanol, 24 heures au congélateur à -180C conduit à 54,6 g de (1)-10-camphosulfonate de (d) -chloro-6 tétrahydro-1,2,3,4 isoquinoléine-4-spiro-4 ' - imidazolidine-dione-2',5'. F = 2570 (décomposition) 210 210 La = + 24,6 [&alpha;] = + 44 (0,5 % dans CH3OH) 589 436 b) Isomere (d) On met en suspension 13,8 g (0,0285 M) du camphosulfonate obtenu ci-dessus dans 145 cm3 d'une solution aqueuse à 2 % de triéthylamine. On porte au bainmarie jusqu'à l'obtention d'une solution de pH neutre. On laisse une nuit au réfrigérateur à 3 C pour précipiter 6,8 g de (d)-chloro-6 tétrahydro-1,2,3,4 isoquinoléine-4- spiro-4' imidazolidine-dione-2',5'. F = 2520 (décomposition et sublimation) 220 220 = = + 44,4 lez = + 86,4 (0,4 % dans CH3OH) 589 436 c) Chlorhydrate de l'isomère (d) On met en suspension 6,4 g (0,0255 M) de la base libre obtenue ci-dessus dans 15,4 cm3 d'acide chlorhydrique 1,65 N. Après 20 mn de contact puis 3 heures au réfrigérateur (3 C) on-obtient 6,7 g de chlorhydrate. F = 2450 220 22 = = + 78,3 las = + 177,7 (0,5 % dans CW3OH) 589 436 d) Isomère (1) On opère exactement comme pour la séparation de l'isomère (d) í-dessus, mais en partant de l'acide (d)-10 camphosulfonique pour obtenir ie (d)-10-camphosulfonate de (l}-chloro-6, tétrahydro-1,2,3,4 isoquinoléine-4-spiro-4 1 - imidazolidine-2' , 5'. Les constantes. physiques sont les mornes que celles de l'isomère (d), les pouvoirs rotatoires étant évidement inversés. La purete optique des isomères a été vérifiée et a été trouvee supérieure à 98 t. Etude pharmacologique des composés selon l'invention 1. Les composés selon l'invention ont été testés pour leur action inhibitrice sur l'aldose reductase extraite de cristallins de rat selon la technique décrite par S. Hayman et J.H. Kinoshita, J. Biol. Chem. 240 (1965) 877, modifiée par S.D. Warna et J.H. Kinoshita, Biochemical Pharmacology 5 (1976) 2505-2613. Les produits selon l'invention mis en solution dans du tampon pH 6,2 sont placés en incubation à 250 dans un récipient bouché contenant l'aldose-reductase extraite de cristallin de rats CD River. Après 10 mn de contact, on ajoute le substrat, et l'activité de l'enzyme est appréciée par la disparition du milieu du co-facteur Ac. Nicotinamideadénine diphosphorique réduite (NADPH) selon la rédaction. D - glucose + NADPH Sorbitol + NADPH + On calcule l'activité enzymatique par détermination de la quantite de NADPH disparue. Les résultats sont exprimés en pourcentage de 11 activité enzymatique de la préparation en l'absence de tout inhibiteur. Dans ces conditions, on peut déterminer la dose minima qui inhibe à 100 % l'aldosereductase et la minima qui inhibe à 50 % l'activité enzymatique. Les composés selon l'invention ont été testés à des concentrations s'échelonnant entre 10 8 M et 10 5 M. L'inhibition à 50 % de la préparation enzymatique (IC50) est obtenue avec la concentration de 5 x 10-8 M de l'isomère dextrogyre et avec 10 4 M de l'isomère levogyre. 2. La toxicité des composés selon l'invention est très faible et la DL50 déterminée sur la souris Swiss est suprerieure à 1 g/kg par voie intrapéritoéale. Par voie orale, la dose de 3 g/kg n'a pas entraîné de phénomène de toxicité aigle. 3. L'activité in vivo de ces composés a eté étudiée chez le rat rendu diabétique par injection intraveineuse de streptozotocine à 65 mg/kg. Les produits testés sont administrés en suspension dans une solution gommeuse (20 %) par voie orale matin et soir. Les animaux sont entraînEs à consommer leur nourriture entre 8 et 16 heures. Après 7 jours de traitement, les animaux sont sacrifiés par décapitation. Le sang est receulli pour dosage de la glycémie selon la méthode à la glucose-oxydase. Les cristallins sont prélevés immédiatement après la more, rapidement pesés et plongés dans l'azote liquide. Ces cristallins congelés sont broyés dans une solution aqueuse de sedoheptulose utilisé comme étalon interne pour le dosage par chromatographie en phase gazeuse. Les protéines sont précipitées. Après centrifugation, le surnageant est receuilli et lyophilisé. L'extrait sec est silylé par le TMGS/HDXS et repris dans l'heptane pour chromatographie à l'aide d'un chromatographe "Hewlett Packard 5710", dans les conditions suivantes : détection FID, colonne 2,5 m, 3 mn, 9 % E.G.S. chrome G AWDMCS 80-100 mesh (0,15 - 0,18 mm) température l700C, gaz vecteur : azote (30 ml/mn). Les résultats montrent que l'isomère (d), a la dose quotidienne de 2 x 1 mg/kg p.o., diminue de 88 E la teneur de sorbitol dans le cristallin du rat rendu diabétique (glycémie 4,0 + 0,4 g/l). La (d)-chloro-6 tétrahydro-l,2,3,4 isoquinoleine4-spiro-4' imidazolidine-dione-2',5' possède donc des propriétés pharmacologiques intéressantes. Elle manifeste en particulier des propriétés inhibitrices de l'enzyme aldose-réductase, l'enzyme principal qui contrôle la régulation du métabolisme des aldoses et notamment des aldohexoses comme le glucose et le galactose en les transformant en polyol correspondant {sorbitol ou galactitol par exemple) dans l'organisme humain. Un excès de fonctionnement d'une telle enzyme en présence d'un excès de substrat peut entralner une production anormalement élevée de galactitol ou de sorbitol chez les sujets galactosemiques. Des concentrations anormales en polyols entraînent l'accumulation de ces substances dans le cristallin, dans les nerfs périphériques èt dans les reins des sujets diabétiques. En effet, l'intervention de l'aldosereductase présente dans les tissus est peu sensible chez un sujet dont la glycémie est normale. Son roule devient beaucoup plus important chez les sujets diabétiques dont la glycémie est beaucoup plus élevée. On explique ainsi une modification des fonctions capillaires des troubles de la conduction nerveuse et l'apparition d'une cataracte diabétique avec perte de la transparence du cristallin. L'invention a pour but de réduire ou éviter totalement ces graves complications. D'autre part, les composés de l'invention diminuent la sécrétion de prolactine par l'hypophyse de rat in vitre à partir de 10 6 M et in vivo à la dose de 2 à 20 mg/kg. La sécrétion provoquée par un stress sympathique est inhibée, propriété qui peut s'avérer particulièrement intéressante dans le traitement des diabétiques; Par conséquent, l'application thérapeutique principale des composés de l'invention est le traitement du diabete en particulier pour s'opposer à l'augmentation de perméabilité capillaire à l'origine de la rétinopathie et des troubles trophiques, la-prévention ou le traitement de la neuropathie diabétique dans ses manifestations périphériques ou viscérales et la prévention et le traitement de la cataracte et de la néphropathie diabétique. D'une maniere préférée, les composés de l'invention sont administrés par voie orale ou parentérale. Les formes pharmaceutiques qui conviennent plus particulièrement pour de telles administrations sont les solutions ou suspensions injectables conditionnés en ampoules ou en seringues autoinjectables, les comprimés nus ou enrobés, les dragées, les gelules,- les pilules, les sirops ou les émulsions buvables,- pommades, gouttes, collyres, gels ophtalmologiques ou saccules (pour yeux). La posologie unitaire est variable selon la voie d'administration, l'age du patient et la sévérité de l'indication thérapeutique. Elle peut s'échelonner entre 15 et 150 mg par prise unitaire. La posologie journalière peut s'échelonner entre 30 et 300 mg chez l'adulte. EXEMPLE DE GELULE : chlorhydrate de (d)-chloro-6 tétrahydro-1,2,3,4 isoquinoléine -4-spiro-4'-imidazolidine-dione-2',5' ........... 30 mg lactose ......................................... 40 mg talc ............................................ 10 mg pour une gélule. REVENDICATIONS 1. Les isomères optiques de la chloro-6 tétrahydro1,2,3,4 isoquinoleine-4-spiro-4'-imidazolidine-dione-2',5' ou un de leurs sels d'addition à des acides pharmaceutiquement acceptables, selon la revendication 3 du brevet principal. 2. La (d)-chloro-6 tétrahydro-1,2,3,4 isoquinoleine- 4-spiro-4 '-imidazolidine-dione-2' , 5' ou son chlorhydrate. 3. Composition pharmaceutique contenant comme principe actif le composé selon la revendication 2 ainsi qu'un excipient ou véhicule pharmaceutiquement compatible.