FR 2542617 A2 19840921 FR 8304426 A 19830316 -j- Le brevet principal a pour objet une solution protectrice pour la conservation de cellules fonctionnelles, contenant de l'adénine, du glucose, et un tampon phosphates, caractérisée en ce qu'elle contient, en outre, du saccharose, et le tampon phosphate présente une concentration élevée, l'osmolarité de la solution étant de 330 10 m Osm et son p H de 7,3 0,2. Le pouvoir tampon de la solution est élevé et ses constituants sont mélangés en proportions non toxiques. La présente demande de certificat d'addition a pour objet une variante de réalisation de la solution destinée plus particulièrement à la conservation d'hématies humaines décongelées. Conformément à l'invention, la solution présente avantageuse- ment la composition préférentielle suivante: Adénine O0085 g + 0,010 Glucose 5 g + 0,5 Saccharose 47 g + 2 Phosphate monosodique monohydraté 0, 75 g + 0,08 Phosphate disodique dihydraté 4 g + 0,5 Chlorure de sodium, 5 g -+ 0,5 Eau distillée qsp 1000 ml le p H du milieu étant égal à 7,40 + 0, 10 et son osmolaritéà 320 + 10 m Osm Les différents composants sont à l'état pulvérulent et sont mélangés dans l'eau distillée. A cet effet, la préparation d'une telle solution consiste à peser séparément sur une balance de précision les différents compo- sants, puis à les mélanger, à introduire dans un ballon jaugé de un litre 0,9 litre d'eau distillée et à y ajouter le mélange des poudres, à agiter l'ensemble afin de réaliser un mélange rapide, puis à mettre au bain marie pendant deux heures à une température de 370 C pour assurer une dissolution complète des poudres, à ajuster ensuite le volume à 1 litre par adjonction d'eau distillée, à mesurer le p H et l'osmolarité, et enfin, à filtrer la solution sous membrane stérilisant E L'invention a également pour objet un procédé de traitement d'hématies humaines décongelées, déglycérolées et lavées Après décongé lation desdites hématies dans un bain marie à 420 C pendant 9 minutes, on fait une déglycérolation par prédilution manuelle dans une bouteille en verre neutre de 1 litre, par transvasement à l'aide de tubulures de transfert, simultanément et pendant une durée de 5 minutes, des hématie décongelées et de 400 ml de solution de chlorure à 3,5 X, et lavage du mélange obtenu effectué par branchement de la bouteille sur une tubulure- de la poche de lavage d'un lave-globule automatique, les autres tubulures de la poche de lavage étant reliées à des bouteilles de 500 ml de chlorure de sodium isotonique à 0,9 2 Le sang déglycérolé est introduit dans la poche de lavage et centrifugé à 3000 t/min pendant 3 minutes, puis le surnageant est éliminé par évacuation dans une poche de recueil des eaux de lavage Trois lavages successifs sont ainsi réalisés en chlorure de sodium isotonique, en introduisant à chaque lavage, automatiquement, 500 ml de solution dans la poche de lavage et en réalisant un barbotage d'une durée de 100 secondes suivi d'une centrifugation du mélange à 3000 t/min pendant-90 secondes et d'une évacuation du surnageant dans la poche de recueil, les hématies restant dans la poche de lavage sous forme de concentré érythrocytaire Le dernier lavage est suivi d'une centrifu- gation à 3000 t/min pendant 3 minutes afin d'obtenir un hématocrite de 85 % Le concentré érythrocytaire lavé obtenu est introduit dans une poche plastique, ou autre, à usage transfusionnel, au moyen de la tubulure de transfert de cette dernière, puis la poche est pisée et le volume de concentré est noté. Ce concentré érythrocytaire est alors traité selon un procédé de traitement qui est aussi objet de l'invention La poche de concentré est mise en agitation constante et douce sur le plateau d'un agitateur de concentrés plaquettaires, ou analogue, et un demi-volume de solution conservatrice est ajouté au moyen de la tubulure de transfert de la poche, en 10 minutes, la tubulure de transfert étant alors soudée à 2 cm, 2,5 cm et 3 cm de la pocheà l'aide d'une sou- deuse spéciale pour tubulures plastiques médicales Cette agitation de la poche est encore poursuivie pendant 20 minutes pour obtenir un sang prêt à l'emploi qui peut être stocké en armoire réfrigérée ou transporté en conditionnement réfrigéré à 40 C. En cas de maintien rigoureux de la température de 40 C, les qualités transfusionnelles du sang décongelé ainsi conservé sont assurées pendant 12 jours avec une sécurité absolue pendant 9 jours, alors qu'avec les solutions existantes ce délai ne peut excéder un aucun cas 3 jours, et le plus souvent 24 heures. Bien entendu, l'invention n'est pas limitée au mode de réalisation décrit Des modifications restent possibles, notamment du point de vue des constituants de la solution et de leur concentration, sans sortir pour autant du domaine de protection de l'invention. R E V E N D I CATIONS 1 Solution protectrice pour la conservation de cellules fonctionnelles, suivant la revendication du brevet principal, carac- térisée en ce que, pour la conservation d'hématies humaines déconge- lées, elle présente avantageusement la composition préférentielle suivante: Adénine 0,085 g + 0,010 Glucose 5 g + 0,5 Saccharose 47 g + 2 - Phosphate monosodique monohydraté 0,75 g + 0,08 Phosphate disodique dihydraté 4 g + 0,5 Chlorure de sodium 2,5 g + 0,5 Eau distillée qsp 1000 ml le p H du milieu étant égal à 7,40 + 0,10 etson osmolaritéà 320 + 10 m O sm. 2 Procédé de traitement d'hématies humaines décongelées par application de la solution suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste, apres décongélation desdites hématies dans un bain marie a 42 C pendant 9 minutes, et lavage du mélange obtenu dans un lave-globule automatique dont le programme est réglé pour obtenir un hématocrite moyen de 85 % en fin de lavage, suivi d'une introduction du concentré érythrocytaire lavé obtenu dans une poche plastique, ou autre, à usage transfusionnel, au moyen de la tubulure de transfert de cette dernière, la poche étant pesée et son volume de concentré noté, à mettre la poche en agitation constante et douce sur le plateau d'un agitateur de concentrés plaquettaires, ou analogue, à ajouter alors, au moyen de la tubulure de transfert de la poche, en 10 minutes, un demi-volume de solution conservatrice, à souder la tubulure de transfert à 2 cm, 2,5 cm et 3 cm de la poche à l'aide d'une soudeuse spéciale pour tubulures plastiques médicales, et enfin, à poursuivre l'agitation de la poche pendant 20 minutes pour obtenir un sang prêt à l'emploi qui peut être stocké en armoire réfrigérée ou transporté en conditionnement réfrigéré à 4 C.