FR 2538385 A1 19840629 FR 8221965 A 19821227 -1- Composés énamides acylés, compositions pharmaceutiques les contenant, utilisation de ces composés et procédé de préparation de ces composés Cas S 82/25 SOLVAY & Cie (Société Anonyme) et BIOTEC S A (Société Anonyme) La présente invention concerne des composés énamides acylés constitués par des énamides acylés ainsi que par leurs sels, leurs complexes et leurs dérivés acylés et alkylés L'invention concerne également des compositions pharmaceutiques les contenant, utilisables en particulier pour la prévention ou le traitement-des cancers, l'utilisation de ces composés pour la prévention des cancers ainsi qu'un procédé pour la préparation de ces composés. Les composés énamides acylés selon l'invention sont des composés répondant à la formule générale: I CH 2 = C R NEH C-t CE il O n (I) C C OH dans laquelle Z représente un groupement donneur d'électrons, N vaut 1, 2 ou 3, et R 1 represente l'hydrogène, un halogène, ou un groupement organique quelconque, ou des sels, complexes, dérivés alkylés ou dérivés acyles de ces composés. Les sels de ces composés peuvent Ctre par exemple des sels d'ammonium, de métaux alcalins tels que le sodium ou le potassium, de métaux alcalino-terreux tels que le magnésium et le calcium et de bases organiques Les complexes de ces composés peuvent 9 tre -2- ceux formés par exemple avec des sels métalliques quelconques. Par dérivés acylés de ces composés, on entend des dérivés tels que les esters et les amides de ces composés; de préférence le noyau aromatique porteur de Z ne contient pas de substituants acyléso. Habituellement, le groupement donneur est un halogène ou un groupement sélectionné parmi les groupements OR 2, SR 2, Se R 2 MN=R 2 ou NR 2 R 3 dans lesquels l'oxygène, le soufre, le sélénium et l'azote peuvent faire partie d'un cycle et R 2 et Rs peuvent 9 tre identiques ou différents et représentent l'hydrogène ou un groupement organique aliphatique ou cyclique, saturé ou non, comptant de 1 à 20 atomes de carbone Le plus souvent, R 2 et R 3 représentent un groupement alkyle, substitué ou non comptant de 1 à 6 atomes de carbone De préférence, le groupement donneur est un groupement OR 2 o R 2 représente l'hydrogène ou un groupement alkyle substitué ou non comptant de 1 à 6 atomes de carbone De manière particulièrement préférée, le-groupement donneur est un groupement mêthoxy -0 CR 3. Habituellement, R représente l'hydrogène, un halogane, ou un groupement organique quelconque De préférence, R représente l'hydrogène, ou un groupement aliphatique, substitué ou non, et comptant de 1 à 4 atomes de carbone, ou un groupement aromatique comptant de 5 à 8 atomes de carbone De manière particulièrement préférée, R représente l'hydrogène. Les composés énamides acylés préférés selon l'invention sont les (méthoxyphénylacétyl)déhydroalanines de formule Na C CH 2 il HO CCR (II) CH 2 =C OC C -25 Parmi ceux-ci, le composé énamide acylé préféré est celui dans lequel le substituant méthoxy se trouve en position para. L'invention concerne également un procédé pour la préparation des composés énamides acylés selon l'invention. -3-3 Ce procédé consiste à faire réagir avec l'acide pyruvique un amide de formule C CH NHR l o (Z) 2 R n o R, Z et N sont tels que définis ci-avant La réaction peut être réalisée en mettant 1 mole d'amide en présence de 1,2 mole d'acide pyruvique fraîchement distillé en les portant à reflux dans le benzène dans un appareil muni d'un séparateur d'eau Le reflux est arrêté quand la séparation d'eau cesse On attend la formation d'un précipité, on filtre et traite le précipité avec une solution saturée en Na HCO 3 La fraction insoluble en milieu basique, qui est constituée d'amide n'ayant pas réagi est séparée et on ajoute alors progressivement au filtrat de l'acide chlorhydrique concentré Jusqu'à l'obtention d'un p H voisin de 3, 5 et d'un précipité Après filtration et recristallisation dans l'éthanol, on obtient des rendements situés entre 30 % et 95 % Il peut arriver que l'on n'obtienne pas de précipité après le reflux en solution benzénique; dans ce cas; on évapore le benzène et on traite le résidu de la même manière qu'indiqué ci-dessus. Les composés énamides acylés selon l'invention peuvent également être préparés par toute autre synthèse organique appropriée On peut par exemple appliquer le procédé décrit dans le brevet FR-B-2 349 567 (SUMITOMO CHEMICAL COMPANY). Les composés énamides acylés selon l'invention peuvent être utilisés comme médicaments, et notamment pour le traitement, en médecine humaine ou en médecine vétérinaire, de toutes les prolifé- rations tumorales malignes telles que les cancers d'origines diverses et ce quel que soit l'âge et le type histologique du tissu aux- dépens duquel elles se sont formées Ils peuvent également être utilisés pour la prévention de ces mêmes maladies, par exemple sous forme d'additif alimentaire. 2538385 J -4- L'invention concerne également les compositions pharmaceutiques contenant comme ingrédient actif un composé énamide acylé tel que défini ci-avant Ces compositions peuvent contenir en outre une substance antinéoplasique Les substances antinéoplasiques connues présentent généralement le grave inconvénient d'avoir un degré de toxicité élevé lequel provoque des effets secondaires particulière- ment néfastes tels que des dommages aux tissus normaux Les compo- sitions pharmaceutiques selon 1 ' invention présentent à la fois un degré de toxicité réduit et un effet thérapeutique amélioré par rapport aux compositions connues contenant seulement des substances antinéoplasiques. Par substance antinéoplasique, on entend désigner toute substance utilisable dans le but de détruire les cellules cancéreuses o d'en empêcher l'apparition et la prolifération On connait comme substan- ces antinéoplasiques, des composés de natures chimiques très variables parmi lesquelles figurent des agents alkylants, comme le cyclo- phosphamide, le melphalan, le chlorambucil, la chlormétine et d'autres moutardes à l'azote, les éthylène-imines parmi' lesquelles le thiothépa, les éthers sulfoniques parmi lesquels le busulfan, des antimêtabolites comme le méthotrexate et d'autres antifoliques, la mercaptopurine et autres antipuriques, le fiuorouracile, la cytarabine et autres antipyrimidiques, l'azasérine, des modificateurs hormonaux comme les androgènes, les oestrogènes, les progestatifs et les glucocorticoldes, des enzymes comme l'asparaginase, des antibiotiques parmi lesquels la bléomycine, la dactinomycine, la daunorubicine, la méractinomycine, la mitomycine, le rufocromycine, la méthramycine, la doxorubicine (parfois appelée l'adriamycine), des extraits de plantes comme les alcaloïdes de la pervenche et de la colchique et les autres poisons fusoriaux, des isotopes radio- actifs comme le radiophosphate de sodium, de radioiodure de sodium ou diautres composés tels le méthylglyoxalbis (guanylhydrazone), les dérivés de la podophyllotoxine, le mitotane, le pipobromane, les nitroso-urées et l'hydroxy-urée Les substances antinéoplasiques présentes de préférence dans les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont les moutardes à l'azote, les antibiotiques et les 253 385 -5,- antipyrimidiques et tout particuli rement le, cyclophosphamide, la daunorubicine, la doxorubicine et le fluorouracileo Les compositions phammaceutiques selon tlinvention peuvent tre utilisdes pour le traitement -et la prévention, en mjdecine 'humaine ou an médecine vétérinaire, de toutes les proliférations tumorales malignes telles que les cancers. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent aussi contenir d'autres substances actives utilisables dans les compositions pharmaceutiques pour la prdvention ou le traitement des cancers, et notamment de l'acide ascorbique. Habituellement, elles contiennent,àgalement des additifs de formulation permettant de les administrer commodément, par exemple sous forme de poudres, tablettes, pommades, lotions, capsules, dragéas, gélules, ampoules, sirops, dmulsions, suppositoires, injections ou solutions Ces additifs peuvent être des supports ou des agents auxiliaires pharmaceutiques, solides ou liquides, omga- niques ou inorganiques, appropriés tels que l'eau, les solvants organiques de type paraffini que, la gélatine, 1 e lactose, l'amidon, le stiarate de magnesium, le talc, les graisses et huiles végétales et animales, la gomme, les poiyalkylrnegl-ycols ou des liants et autres agents habituels. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention contiennent en gdndral entre 10 % et 99 %-en poids de compos Ds -namides acylts selon l'invention -et ventuellement de substance ant'inioplasique. Le rapport pondéral entre les quantits -de substance antinéoplasique et de composis inamides acyl 4 S selon l'invention présentes dans les compositions selon l'invention est compris an général entre 1/10 et /1, et de preférence entre 114 et 411. Les composés namides acylds et les compositions pharmaceutiques selon 11 invention peuvent itre administrds pour traiter ou -prdvenir des profilérations tumorales malignes telles que les cancers à tous les mammifàres mais en particulier à des patients humains sous forme d'une ou plusieurs "unités de dosagel" en quantité pharmacenti- quement efficace. -6- Tous les modes d'administration peuvent convenir, tels que l'administration par voie orale, rectale ou parentérale ainsi que par application épidermique du type onguents divers ou pastilles épidermiques Par mode d'administration parentéral on entend les injections intraveineuses, intramusculaires ainsi que la perfusion. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être administrées en médecine humaine par voie orale en unites de dosage comprenant en gén 6 ral au moins 0,05 mg et jusqu'à 500 mg, de préférence de 0,5 mg à 50 mg, de composés 5 namides acylés selon l'invention et éventuellement de substance antin 6 oplasique, avec un support non toxique acceptable en pharmacie On peut éventuellement administrer les compositions pharmaceutiques selon l'invention et les substances antinéoplasiques separement. Par "unité de dosage", on entend une dose unitaire qui peut ître administrée à un patient et peut facilement atre manipulée et conditionnée, an restant sous forme d'une dose unitaire physiquement stable, comprenant l'ingrédient actif soit seul, soit en melange avec des diluants ou supports pharmaceutiques solides ou liquides. Sous la forme d'unités de dosage, les compositions pharmaceu- tiques selon l'invention peuvent etre administrées une à plusieurs fois par jour, à intervalles appropriés, mais toujours selon l'état du patient et en fonction des prescriptions du medecin La dose journalière appropriée des compositions selon l'invention varie en général de 0,01 mg à 50 mg par kg de poids corporel. Pour le mode d'administration parentéral, notamment les injec- tions intraveineuses ou intramusculaires, les compositions selon l'invention sont administrées, par exemple en solutions ou suspen- sions aqueuses, sous forme d'une unité de dosage contenant de 0,5 mg à 50 mg de composé inamide acyl& selon l'invention et éventuel- lament de substance antinioplasique, à dissoudre ou suspendre immédiatement avant l'utilisation ou prêt à l'emploi avec un véhicule acceptable en pharmacie par exemple une ampoule injectable. Dans une thérapie faisant appel à un traitement continu, les gélules ou capsules peuvent être la forme appropriée de préparation pharmaceutique en raison des effets de longue durée obtenus lorsque le médicament est administré par voie orale. 2538385 i -7- Les exemples suivants illustrent l'invention. Exemple 1 Préparation de para(méthoxyphénylacétyl)déhydroalanine Dans un ballon en verre de deux cent cinquante millilitres muni d'un séparateur d'eau, on introduit à température ambiante 4,95 g ( 3 10-2 mole) de para(méthoxyphényl)acétamide On ajoute ensuite 3,2 g ( 3,6 10-2 mole) d'acide pyruvique franchement distillé et 120 millilitres de benzène On porte alors ce mélange à reflux; au début du reflux, la solution devient limpide puis se trouble progressivement par suite de la précipitation de la para(méthoxy- phénylacétyl)déhydroalanine On continue l'opération de reflux jusqu'à la fin de la séparation d'eau ce qui nécessite environ quarante-huit heures puis on chasse le benzène sous vide. On extrait la para(méthoxyphénylacétyl)déhydroalanine au moyen d'une solution saturée de Na HC 03 et on sépare par filtration 1,7 g de para(m Une fois la filtration terminée, on ajoute goutte à goutte quelques millilitres d'acide chlorhydrique jusqu'à obtention d'un p H voisin de 3 ou 4 La para(méthoxyphénylacétyl)déhydroalanine précipite et est récupérée par filtration et recristallisation dans l'éthanol On obtient 4,45 g de para(méthoxyphénylacétyl)déhydro- alanine avec un rendement de 62 % Le point de fusion du produit obtenu est mesuré à 1860 C Le spectre infrarouge (K Br) révèle des bandes d'absorption à 3400 cm-I (-OH), 1700 cm-1 (C= 0), 1620 cm-1 (C-C), 1510 cm 1, 1420 cm'1 et 1300 cm '1 La spectrographie de masse révèle un pic à 235. Le spectre de résonance magnétique nucléaire de la para(méthoxy- phénylacétyl)déhydroalanine dissoute dans le diméthylsulfoxyde fournit les déplacements chimiques suivants en valeurs de a (ppm): 1 H S 8,96 2 H m 7,20 2 H m 6,86 1 H S 6,32 1 H S 5,69 3 H S 3,73 2 H S 3,61 2538385 i' -8- Exemple 2 Composition pharmaceutique On prépare une composition pharmaceutique en mélangeant 4 g de para(méthoxyphénylactyl) déhydroalanine obtenu selon l'exemple 1 et 3,2 g de cyclophosphamide. On injecte à un groupe de 10 souris pesant chacune environ g, un million de cellules cancéreuses "Taper Liver Tumor" par - voie intrapiritoniale; 48 heures après cette injection, on admi- nistre, également par voie intrapéritoniale, aux souris la composi- tion pharmaceutique décrite ci-dessus à raison de 180 mg par kg de souris. A titre comparatif, un groupe de dix souris semblables, auxquel- les on a également administré un million de cellules cancéreuses "Taper Liver Tumor", est soumis uniquement à l'administration de cyclophosphamide par injection intrapgritoniale quarante huit heures après l'administration des cellules cancéreuses et un groupe de dix autres souris semblables, auxquelles on a également administré un million de cellules cancéreuses "Taper Liver Tumor", n'est soumis à aucun traitement ultérieur. Parmi le groupe de souris n'ayant subi aucun traitement ultg- rieur, toutes meurent entre le dix-huitième et le vingt-troisième jour. Parmi le groupe de souris ayant été uniquement traitées par du cyclophosphamide, toutes meurent entre le vingt-deuxième jour et le vingt-cinquième jour. Parmi le groupe de souris ayant été traites par la composition pharmaceutique selon l'invention, les souris ne meurent qu'entre le vingt-huitième et le trente-neuvième jour. Le traitement de l'ascite par la composition pharmaceutique selon l'invention a donc permis de prolonger sensiblement la durée de vie des souris atteintes. Exemple 3 Inhibition de la toxicité de la doxorubicine in vivo L'injection sous-cutanée d'une dose unique de doxorubicine ( 10 mg/kg) à des rats entra Sne, au niveau'hépatique, une perte de % du contenu minimal en cytochrome P 450, une chute de l'activité benzo(a)pyrene hydroxylase et une diminution de 85 % de l'action aldrine monoxygènase L'administration de cyst Samine utilisée 2538385 i -9 comme substance antitoxique de référence ne protège pas contre l'effet de la doxorubicine au niveau du cytochrome P 450 Par contre la chute de l'activité benzo(a) pyrène hydroxylase n'est plus que de 20 % et la diminution de l'activité aldrine monoxygènase est réduite à 40 %. On a injecté à des rats une dose unique ( 10 mg/kg) d'une composition contenant des quantités pondérales égales de doxorubicine et de para(méthoxyphénylacetyl)déhydroalanine On a alors observé une augmentation de 60 % du contenu minimal en cytochrome P 450, une augmentation de 20 % de l'activité benzo(a)pyrènehydroxylase et une diminution de 5 % de l'action aldrine monooxygènase. De ces essais, il ressort que le composé énamide acylé selon l'invention protège complètement contre les trois effets toxiques précités de la doxorubicine. Exemple 4 Composition pharmaceutique On prépare une composition pharmaceutique en mélangeant 4 g de para(méthoxyphénylacetyl) déhydroalanine obtenu selon l'exemple 1 et 0,2 g de doxorubine. On injecte à un groupe de six rats de souche LOU/2 et de poids corporel moyen égal à 160 g un million de cellules de leucémie L 311 par voie intrapiritoniale La leucémie L 311 est une tumeur trans- plantable chez les rats de souche LOU/2 décrite dans l'article C.Deckers, F Mare, L Deckers-Passeu et A Trouet, Adriamycin Review, Part I, 1975, pages 79 à 86. On administre, 48 heures après cette injection, également par voie intrapéritoniale, aux rats la composition pharmaceutique décrite ci-dessus à raison de 105 mg par kg de rat. A titre comparatif, un groupe de douze rats semblables, auxquels on a également administré un million de cellules de leucémie R 311, est soumis uniquement à l'administration de doxorubicine par voie intrapéritoniale 48 heures après l'administration des cellules de leucémie R 311, et un groupe de douze rats semblables, auxquels on a également administré un million de cellules de leucémie R 311, n'est soumis à aucun traitement ultérieur. 2538385 j' -10- La longueur de la survie moyenne après administration des cellules de leucémie est de 15,9 jours pour les rats leucémiques non traités, de 27,6 jours pour ceux traités uniquement à la doxo- rubicine et de 33,6 jours pour les rats traités à l'aide de la composition selon l'invention. Pour les rats leucémiques non traités, le premier décès survient quatorze jours après l'administration des cellules de leucémie Le délai est de seize jours pour les rats traités à la doxorubicine et de vingt et un jours pour les rats traités à l'aide de la composition selon l'invention. Le traitement de la leucémie par les compositions selon l'inven- tion a donc permis de prolonger sensiblement la durée de vie des rats leucémiques. 2538385 i -11- R E V E N D I C A T I N S 1 Composés énamides acylés caractérisés-en ce que ce sont des' composés répondant à la formule générale R NH C CH / 1 ca 2 o (Z)n C on \OH dans laquelle Z représente un groupement donneur d'électrons, N vaut 1, 2 ou 3, R représente l'hydrogène, un halogène ou un groupement organique quelconque, ou des sels, complexes, dérivés alkylés ou dérivés acylés de ces composés. 2 Composés énamides acylés selon la revendication 1, caractérisés en ce que Z est un halogène ou un groupement sélectionné parmi les groupements OR 2, SR 2, Se R 2, N=R 2 et NR 2 R 3 dans lesquels, l'oxygène, le soufre, le sélénium et l'azote peuvent faire partie d'un cycle, R 2 et R 3 peuvent être identiques ou différents et représentent l'hydrogène ou un groupement organique aliphatique ou cyclique, saturé ou non, comptant de 1 à 20 atomes de carbone. 3 Composés énamides acylés selon la revendication 1 ou 2, caractérisés en ce que Z est un groupement OR 2 o R 2 représente l'hydrogène ou un groupement alkyle substitué ou non comptant de 1 à 6 atomes de carbone et en ce que R représente l'hydrogène, un groupement aliphatique, substitué ou non, et comptant de 1 à 4 atomes de carbone ou un groupement aromatique comptant de 5 à 8 atomes de carbone. 4 Composés énamides acylés selon l'une quelconque des revendi- cations 1 à 3, caractérisés en ce qu'ils sont constitués de (méthoxy- phénylacétyl) déhydroalanines. 2538385 j' -12- Composés énamides acylés selon l'une quelcouque des revendi- cations 1 à 4 pour leur utilisation comme médicament. 6 Compositions pharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles contiennent un composé énamide acylé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. 7 Compositions pharmaceutiques selon la revendication 6, caractérisées en ce qu'elles contiennent en outre une substance antinéoplasique. 8 Compositions pharmaceutiques selon-la revendication 7, caractérisées en ce que la substance antinéoplasique est une moutarde à l'azote, un antibiotique ou un antipyrimidique. 9 Compositions pharmaceutiques selon la revendication 8, caractérisées en ce que la substance antinéoplasique est le cyclo- phosphamide ou la doxorubicine. 10 Compositions pharmaceutiques selon l'une quelconque des revendications 6 à 9 pour le traitement des cancers - 11 Utilisation des composés énamides acylés selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 pour la prévention des cancers. 12 Procédé pour la préparation de composés énamides acylés selon l'une quelconque des revendications I à 4, caractérisé en ce que l'on fait réagir un amide de formule O R C CH Iew O + Z) avec l'acide pyruvique.