FR 2524486 A1 19831007 FR 8305271 A 19830330 1 - Souches de champignon Pour le traitement des maladies fongiques des plantes et utilisation de ces souches. La présente invention se rapporte à un procédé pour le traitement des maladies fongiques des plantes cultivées dans un milieu contenant de la tourbe. On a déjà tenté de contrôler les maladies des plantes cultivées en serre par désinfection et remplacement du sol et au moyen de diverses méthodes de culture et de contrôle par les produits chimiques Jusqu'à présent, on a à peine utilisé le contrôle biologique pour les maladies des plantes Toutefois, certaines cultures importantes telles que la laitue, le concombre et la tomate, souffrent de maladies propagées par un sol défectueux, qu'il n'a pas été possible de contrôler en raison des restrictions imposées à l'utilisation des agents de contrôle chimiques et des périodes dangereuses dues à des résidus possibles, ou encore en raison de l'absence de produits suffisamment efficaces Si l'on pouvait développer un procédé de contrôle biologique pour les cultures de ce type et qui puisse être appliqué à des cultures de ce genre, ceci constituerait un important progrès à la fois pour le producteur et pour le consommateur. Il est déjà connu d'isoler l'antibiotique produit par les champignons actinomycete de la famille Streptomyces et d'utiliser cet antibiotique en qualité de fongistatique. Toutefois, l'action de l'antibiotique est brève et cesse lorsque l'antibiotique a été consommé. Le but de la présente invention est donc de produire une souche de champignon actinomycete de la famille Streptomyces, qui prospère dans la terre et soit capable de concurrencer les autres micro-organismes contenus dans le sol. La Demanderesse a observé avec surprise qu'en ajoutant des souches d'actinomycete ATCC 39 271, ATCC 39 272 et ATCC 39 273 de la famille Streptomyces au sol ou à la végétation, les maladies propagées par 2 - le sol aussi bien que par les graines peuvent être contr 8 lées de façon durable et efficace Les souches d'actinomycete de la famille Streptomyces qui prospèrent dans la végétation ou Cans le sol et qui sont utilisables dans le procédé suivant l'invention ont été trouvées, par exemple, dans la tourbe et peuvent être isolées de la tourbe par des procédés classiques. Les souches d'actinomycete ATCC 39 271, 39 272, 39 273 de la famille Streptomyces, isolées de la tourbe, peuvent être ajoutées au sol ou à la végétation sous la forme d'une suspension aqueuse, par exemple par pulvérisation Dans ce cas, la suspension aqueuse contient de préférence au moins environ 100 000 spores par millilitre La dose pulvérisée est de préférence d'au moins 1 dl/m En variante, les graines peuvent être immergées dans la solution aqueuse avant d'être plantées. Les souches d'actinomycete de la famille Streptomyces selon l'invention inhibent l'action des maladies sur les plantes ou limitent leur propagation d'un semis infecté à un semis sain. Cette propriété fongistatique avantageuse est nettement manifeste dans le contr 8 le biologique des maladies des plantes lorsque de la tourbe qui contient une souche d'actinomycete de la famille Streptomyces suivant l'invention est ajoutée au sol après désinfection, le sol acquérant alors une base microbienne utile. Les figures 1 et 2 montrent cet effet, la maladie traitée étant le flétrissement dû au Fusarium oxysporum. Le procédé selon l'invention fait usage des propriétés fongistatiques des souches de champignons Streptomyces actinomycete ATCC 39 271, 39 272 et/ou 39 273 qui sont présentes dans la tourbe Ces souches de Streptomyces actinomycete se sont révélées constituer des inhibiteurs efficaces de la croissance, par exemple, des agents pathogènes suivants: Alternaria brassicicola, Fusarium 3 - culmorum, F oxysporum, Helminthosporium sativum, Rhizoctonia solani, Phoma exicue var exicue, P exicue var foveata, Pythium spp, Sclerotinia sclerotiorum, Botrytis cinerea. L'invention sera décrite ci-après plus en détails à l'aide d'exemples. Exem Dle 1 On a contrôlé efficacement des brunissures précoces du chou par le traitement des graines par un champignon du genre actinomycete Le Tableau 1 montre les propriétés fongistatiques des souches de Streptomyces actinomycete ATCC 39 271 et 39 272 selon l'invention. Tableau l Action de diverses souches de Streptomyces actinomycete utilisées pour le traitement de graines, sur des graines atteintes de la brunissure précoce du chou, traitées par pulvérisation t Contamination des graines par Alte 3 natbrassicicola. Il y a certaines différences'individuelles entre les différentes souches d'actinomycete Le Mfeilleur résultat en ce qui concerne diverses maladies et diverses plantes varie selon le procédé de traitement et selon la dilution. Par exemple, avec le chou, le résultat le plus efficace a été obtenu en utilisant le traitement des graines mais, avec l'orge, le meilleur résultat a été obtenu par traitement du sol. La culture des souches de Streptomyces actinomycete _ Spécimens sins et Souche actinomycete Plantules viables à lazfin de l'expérience ' ATCC 39 271 91 84 ATCC 39 272 107 78 Graines infectées seulement 16 3 Graines saines 7 100 4 - selon l'invention dans les conditions du laboratoire est rapide, facile et économique Les champignons actinomycetes croissent et se propagent rapidement et efficacement, par exemple, dans une plate-bande de tourbe, soit lorsqu'ils sont pulvérisés dans la couche de tourbe plantée, soit lorsqu'ils sont inoculés en même temps que les graines. Environ deux à trois semaines après l'inoculation, on peut observer une coloration blanche, ayant l'aspect de la chaux, à la surface de la tourbe et également à l'intérieur Il s'agit du champignon Streptomyces actino- mycete et la présente invention est basée sur son effet surprenant sur les agents pathogènes nuisibles des plantes. Quelques autres exemples sont présentés ci-dessous pour illustrer l'action inattendue observée des souches de Streptomyces actinomycete selon l'invention sur des maladies nuisibles des plantes. Exemple 2 On a obtenu d'excellents résultats en utilisant des champignons actinomycetes pour contrôler la brunissure précoce par Alternaria brassicicola Les efficacités de douze souches ont été comparées dans les expériences en utilisant des plantules de choux-fleurs contaminées et en appliquant le traitement des graines et le traitement du sol La souche ATCC 39 271 avait l'action la plus uniforme et toujours parmi les meilleures Les résultats sont indiqués au Tableau 2 ci-après. - Tableau 2 Plantules, %//plantules saines, % Traitement des grainesi Traitement du sol Graines saines 89,8/89,8 89,8/89,8 Témoins (infec 14,7/5,6 14,7/5,6 tés) Souches actino 147152830 mycete ATCC 39271 8147,5,/30 Le traitement des graines s'est avéré plus efficace que le traitement du sol. Une comparaison entre une suspension aqueuse de champignons actinomycete et une suspension en milieu nutritif de ces champignons actinomycete n'a pas révélé de grandes différences en ce qui concerne les solutions concentrées Mais, lorsque les solutions sont diluées, meme à 10, l'efficacité de la suspension aqueuse décroît, tandis que l'efficacité d'une solution contenant des substances nutritives reste pratiquement inchangée, -6 même si elle est diluée à 10 En outre, on ne peut pas observer de différences d'efficacité si le champignon actinomycete a été préalablement cultivé dans une substance nutritive du type agar ou si il a été pris directement dans sa solution de culture Si l'on mélange entre elles des souches possédant des efficacités différentes, le résultat final est habituellement conforme à celui de la souche la plus faible. Exemple 3 Des plantules de laitue ont été traitées par pulvérisation,juste avant d'être plantées, avec une suspension de Stroptomyces actinomycete (ATCC 39 271) (environ 1 ml/plantule) Certaines de ces plantules ont été soumises à deux autres traitements ultérieurement. Des ensembles de deux rangées ont été contaminés dans une rangée (au moyen d'une pipette automatique -6 - autour de la base de la plante), l'aide de Botrytis cinerea ou Ce Phizoctonia solani, une rangée sur deux Ètant laissée non contaminée La derniére souche pathogène mentionnée a été tellerment affaiblie qu'il n'y avait pratiquement pas de différence dans l'expérience, mais, en ce qui concerne Botrytis, l'occurrence de la maladie a été nettement réduite et les récoltes ont été améliorées m 8 me dans les rangées non contaminées Les résultats sont indiqués au Tableau 3 ci-après. Tableau 3 _, i i Occurrence de la maladie (index 0-3)*/récolte (kg/zone) Plantules Plantules traitées Botrytis cinerea Témoin + 2 traitements additionnels Plantes infectées plantes/zone 2,22/2,2 1,45/2,8 1,43/3,0 Plantes adjacentes plantes/zone 0,93/4,7 0,63/5,1 0,48/5,2 * O = sain 3 = vendable Exemple 4 On a pu observer une action de contr 8 le manifeste sur des maladies affectant la base de concombres (principalement Èusarium oxysporum) pour la souche ATCC 39 271 L'inoculation a été effectuée par pulvérisation de la surface de la tourbe à la base du plant de concombre. Les résultats sont indiqués au Tableau 4 ci-dessous. Tableau 4 Non traitées Traitées Occurrence de la maladie: Index 0-3 1,37 1,07 Plantes saines, ', 32 50 7- Exemple 5 On a expérimenté l'efficacité de la souche Streptomyces actinomycete ATCC 39 271 pour le contrôle de Potrypis cinerea, par traitement par pulvérisation de la variété de fraises Senga Sengana à trois reprises pendant l'année de production, avec une solution aqueuse à 1 % de la souche d'actinomycete mentionnée plus haut, calculée sur la base d'une suspension dans une solution de substance nutritive Le produit a été récolté huit fois et la quantité de produit est exprimée au Tableau 5 ciaprès en kg/ha. Tableau 5 Traitementde Potrypis cinerea de la fraise (variété Senga Sengana), première année de culture productrice. Dimensions des zones 1 X 10 m, 4 repiques. Pulvérisations effectuées le 7 Juin, + 11 C; le 14 Juin, + 8 O C; et le 22 Juin, + 130 C. Récolte récoltée huit fois. 1) Pour l'application, la dilution était de 1 % à partir de la suspension dans une solution de substance nutritive. po IN) t. co os Réot dplnesaes Récolte de plantes Récolte totale non saines Elément d'essai kg/ha rapport kg/ha rapport kg/ha rapport 1 Non traitée 12 841 100 296 100 13 137 100 O 2 Ronilan 3 X 0,1 ' 11 694 91 169 57 il 863 90 3 Euparen 3 X 0,25 & 13 639 106 208 70 13 847 105 4 Actinomycete 3 X 1 % 1) 14 384 112 280 94 14 664 112 I I O 9 - "Ronilan" est un produit commercial dans lequel l'ingrédient actif est la vinclozoline "Euparen" est un produit commercial dans lequel l'ingrédient actif est la dichlofluamide. On peut voir que les plants de fraises traités par pulvérisation avec une suspension aqueuse de la souche actinomycete ATCC 39 271 ont non seulement donné une récolte plus substantielle mais également une plus grande quantité de fraises saines. Exemole 6 L'effet de la souche Streptomyces actinomycete ATCC 39 271 sur des récoltes de grains a été étudié en cultivant des graines d'orge karri, qui ont tout d'abord été immergées dans une suspension aqueuse dudit actinomycete et ensuite séchées Les résultats sont indiqués au Tableau 6 ci-après. Tableau 6 Effet du traitement par streptomyces de la graine d'orge Karri (dilution 10 % pour l'application + dilution 10 % 5 de substances nutritives, mouillage des graines + séchage) sur une récolte de grains en différents types de rotation des récoltes. + 452 I o l ( 9,4 %) *) Avoine, féverole, colza **) Une année sur deux 0 l oo Plantes cultivées les Récolte non traitée Graines traitées par streptomyces (ATCC 39 271) années précédentes kg/ha Supplément de récolte kg/ha (%) 1 an orge + jachère 4755 + 837 ( 17,6 ) 2 ans orge + jachère 4500 + 948 ( 21, 0 %) 3 ans orge + jachère 4563 + 102 ( 2,2 %) 6 ans orge 4527 + 285 ( 6,3 7) Féverole **) 5241 + 165 ( 3,1 %) Avoine **) 4935 + 15 ( récolte dans tous les cas étudiés. Exemple 7 Finalement, on a étudié l'effet inhibiteur des souches de Streptomyces actinomycete ATCC 39 271, 39 272 et 39 273 sur diverses maladies fongiques dans un lit de substances nutritives Les résultats sont indiqués ci-après au Tableau 7. Tableau 7 Action inhibitrice de maladies d'isolats de Streptomyces ATCC 39 271, ATCC 39 272 et ATCC 39 273 sur diverses maladies fongiques dans des expériences de cultures sur une couche de substances nutritives. *) O = inefficace; 1 = moyenne: 2 = forte; 3 = très forte. Formulation et stockage Un procédé pouvant être appliqué pour préparer une solution aqueuse qui contient une souche de Streptomyces actinomycete selon l'invention consiste à isoler un actinomycete cultivé dans une solution de substances nutritives et à l'homogénéiser dans de l'eau stérilisée. Ensuite, on centrifuge la suspension et on stocke la pulpe de spores humide dans un sac en matière plastique. Pour l'utilisation, on met le contenu du sac en matière plastique en suspension dans de l'eau Dans des études Champignons expérimentés Isolats ATCC No 39 271 1 39 272 1 39 273 Action inhibitrice, 0-3 *) Phomopsis sclerotioides 1 2 Pythium ultimum O 1 1 Rhizoctonia solani 3 3 12 - de l'effet de la température de stockage, on a observé que, lorsque les spores d Cactinomycete étaient stockés dans de l'eau distillée ou dans une solution saline physiologique, il ne se posait pas de prob 11 me de stockage dans les six mois à -20 C, + 4 C ou + 20 C. Une coupelle de Petri d'actinomycete contient environ 1010 spores qui, mis en suspension dans 5 dl d'eau, par exemple, suffisent largement pour l'immersion de 2 kg de graines de chou ( 300 g de graines/ha). 13 - REVENDICATIONS 1. Souches d'actinomycete ATCC 39 271, ATCC 39 272, ATCC 39 273 de la famille Streptomyces, ou mélange de ces souches. 2. Utilisation des souches actinomycete ATCC 39 271, 39 272, 39 273 de la famille Streptomyces, ou d'un mélange de ces souches, dans le sol ou sur la végétation, pour contrôler les maladies fongiques des plantes. 3. Utilisation des souches selon la revendication 1, consistant à ajouter au sol une souche d'actinomycete de la famille Streptomyces, isolée de la tourbe, sous la forme d'une suspension aqueuse. 4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, consistant à ajouter une souche d'actinomycete de la famille Streptomyces, isolée de la tourbe, sous la forme d'une suspension aqueuse contenant au moins environ 100 000 spores/ml. 5. Utilisation selon la revendication 4, consistant à pulvériser la suspension aqueuse dans une proportion minimum de 1 dl/m ou à immerger les graines dans la suspension aqueuse. 6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, consistant à utiliser comme sol de la tourbe traitée à la vapeur. 7. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, dans laquelle on sépare une souche d'actinomycete de la famille Streptomyces, isolée de la tourbe, après culture, et on la lave pour produire une pulpe pure que l'on empaquette dans un sac en matière plastique pouvant être fermé, à raison d'environ 1 g par sac, à partir de quoi on prépare une solution de lavage en mélangeant le contenu avec environ 1 dl d'eau.