FR 2531951 A1 19840224 FR 8214219 A 19820817 253195 1 En 1970, UMEZAWA a isolé à partir d'une culture de streptomyces un pentapeptide désigné sous le nom de Pepstatine dont la structure a été établie ulérieurement et répond à la formule - Isovaléryl L-valyl L valyl Statyl L-alanyl - Statine dans laquelle on désigne sous le nom de statine un acide amine non usuel, l'acide ( 3 S, 4 S) amino-4-hydroxy-3 méthyl-6 heptanoique. Il a été montré que la pepstatine est un inhibiteur de protéases acides et agit en particulier sur la pepsine et la rénine Spécialement, la rénine, enzyme d'origine rénale, intervient dans la séquence angiotensi- nogène, angiotensine I, angiotensine II au niveau de la transformation de l'angiotensinogène en angioten- sine I. L'angiotensine étant responsable de l'élé- vation de la tension artérielle, on a envisagé d'utiliser la pepstatine pour lutter contre l'hypertension chez l'homme. Toutefois, la pepstatine agissant sur l'ensemble des protéases acides,son emploi en thérapeu- tique s'est avéré difficile. Quelques dérivés de la pepstatine ont été décrits dans la littérature scientifique Il apparait toute fois que leur niveau d'activité est en général relative- ment modeste et leur sélectivité faible. La présente invention a pour objet la préparation de nouveauxdérivés de la pepstatine présen- tant un niveau d'activité élevé sur l'inhibition de la rénine et de la pepsine. Les composés, selon l'invention, répondent à la formule générale: - R X Y Statyl-Ala-Statyl-OR' (I) dans laquelle on désigne par Statyl le radical dérivant de l'amino-acide statine, à savoir: 2531951 i -NH - H CHOH CH - a 2 CH 2 CH H/,( \ isomère ( 35, 45) R désigne un atome d'hydrogène ou un groupement acylant ou N-protecteur fixé sur le groupe amino terminal de l'aminoacide X En particulier R peut désigner les groupements t bu- toxycarbonyl (Boc), benzyloxycarbonyl (Z), ou adaman- tyloxycarbonyl (Adoc) R'représente l'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur tel que méthyleou éthyle; X et Y identiques ou différents désignent des acides aminés de configuration L ou D, choisis parmi la valine, la leucine, l'isoleucine, la phénylalanine, la tyrosine, le tryptophane, l'histidine et la proline; avec la condition que X et Y ne peuvent désigner simultané- ment la valine. Les produits, selon l'invention, peuvent être préparés selon les méthodes habituelles de la chimie des peptideso En particulier, ils peuvent être préparés, par un procédé étape par étape dit "procédé Stepwise" à partir du C terminal. Le produit de départ est un ester d'alkyl inférieur de la statine sur lequel est codensé l'acide aminé suivant. Après libération de la fonction amine du dipeptide on procède à l'élongation de la chaîne peptidique par couplage de l'acide aminé suivant con- venablement protégé Chaque phase de couplage est suivie d'une opération sélective de libération de l'amine qui va entrer en réaction lors de la création de la liaison peptidique suivante. Les différentes opérations de couplage sont effectuées, soit en utilisant un ester activé de 2531951 l l'amino acide à coupler, soit en utilisant l'amino acide N protégé lui-même en présence de dicyclohexylcarbodiimide. Les phases de déprotection sélective de l'amine sont effectuées selon la nature du groupe protec- teur utilisé, soit par hydrogénolyse, soit par hydrolyse en milieu acide fort tel que l'acide trifluoracétique. Enfin,-lorsque l'acide aminé à intro- duire dans la séquence possède dans sa chaîne latérale une fonction susceptible de réagir (c'est notamment le cas de l'histidine), il convient de bloquer celle-ci par un groupe protecteur convenable que l'on élimine ultérieure- ment. Enfin, les peptides (I) sous forme acide (R' = H) peuvent être obtenus à partir des esters correspondants par saponification en milieu alcalin dilué. Les exemples suivants non limitatifs, sont donnés à titre d'illustration de la présente invention. Dans tous cés exemples, les abréviations suivantes seront utilisées: Acides amins et Eroupes protecteurs ou activateurs. Ces abréviations sont en accord avec celles indiquées par la Commission de Nomenclature de 1 'IUPAC-IUB section Biochimie Acides aminés: Ala: Alanine His: Histidine Ile: Isoleucine Leu: Leucine Phe: Phenylalanine Pro: Proline Trp: Tryptophane - Tyr: Tyrosine- Val: Valine Ces acides aminés sont, sauf indication contraire, de configuration Lo 4. Ceux de la série D sont indiqués par (D) précédant l'abréviation. Groupes protecteurs et activateurs. Adoc: Adamantyloxycarbonyl Boc: T butyloxycarbonyl HON Su: Nhydroxysuccinimide O Et: Ester éthylique O Me: Ester méthylique O Np: Ester p nitrophénylique ON Su: Ester de N-hydroxysuccinimide O Tcp: Ester trichloro-2,4,5 phénylique i Va:'Isovaléryl Z: Benzoyloxycarbonyl De plus nous utiliserons les abréviations suivantes: Ac O Et: Acétate d'éthyle - Ac OH: Acide acétique Bop: Hexafluorophosphate de benzotria- zolyl oxy tris diméthylamino phos- phonium DCCI: Dicyclohexylcarbodiimide DCHA: Dicyclohexylamine DCU: Dicyclohexylurée DIPEA: Diisopropyléthylamine DMF: Diméthylformamide DMSO: Diméthylsulfoxyde Ether: Ether éthylique HO Bt: hydroxy-1 benzotriazole KH 504 K 2504: Solution aqueuse contenant 16,6 g de bisulfate de potassium et 33,3 g de sulfate de potassium pour 1 litre Me OH: Méthanol NEM: N-éthyl morpholine TA: Température ambiante TFA: Acide trifluoracétique Enfin, les spectres de résonance magné- tique nucléaire ont été enregistrés à 250 li Z en solution dans le diméthylsulfoxyde, l'étalon interne étant l'hexa- méthyldisiloxane. Les abréviations suivantes sont utilisées: s: singulet d: doublet m: multiplet ou massif EXEMPLE 1 Z-Phe Phe Sta Ala-Sta-O Me (SR 41320) 1 Z-Ala-Sta-O Me Dissoudre à température ambiante dans 35 ml de DMF, 1,44 g de H-Sta-O Me, TFA, 595 mg de NEM, 2,06 g de Z-Ala-O Tcp et 1,29 g de HO Bt Ajuster le p H à 6-7 au papier p H, si nécessaire, par NEM et agiter à température ambiante durant 48 h Evaporer le DMF au bain-marie à 40 sous 0,01 mm Reprendre l'huile résiduelle dans 50 ml d'Ac O Et et laver celui-ci successivement avec KIH 504- K 2504 5 %, Na Cl/H 20, Na HCO 3 5 %, Na Cl/H 200 Sécher sur Mg 504 et évaporer le solvant. Reprendre dans l'éther, un solide apparait. Laisser une heure au réfrigérateur; essorer; sécher. Rendement: 1,46 g ( 86 %); Fe: 117-120 C. 2 H-Ala-Sta-O Me Dissoudre 1,46 g de Z-Ala-Sta-O Me dans ml de Me OH, puis à température ambiante, ajouter 1,03 g de formiate d'ammnonium, agiter jusqu'à dissolution, puis ajouter 400 mg de Pd/C 10 % et agiter 5 min à température ambiante Après 5 min, un contrôle en CCM montre la dis- parition du produit de départ Le p H est de 8 au papier p H Filtrer l'ensemble sur célite et évaporer le solvant. Filtrer le méthanol sur une colonne de résine Amberlite IR 45 (OR) et évaporer le méthanol. Reprendre dans l'éther et évaporer à sec. Dissoudre dans du chlorure de méthylène, filtrer l'inso- luble et évaporer à sec; nous obtenons une poudre blanche. Rendement: 810 mg ( 75 % 5); Fc: 123-134 C. 3 Boc-Sta-Ala-Sta-O Me Dissoudre successivement dans 50 ml de chlorure de méthylène à température ambiante 960 mg de H-Ala-Sta-O Me, i g de Boc-StaOH, 420 mg de HON Su, 750 mg de DCCI Très rapidement un précipité blanc apparaito Agiter à température ambiante, Après 7 h,filtrer la DCU formée et laver celle-ci avec du chlorure de méthylène. Laver la solution organique successivement avec KHSO 0- 4-, K 2504, ( 5 % H 20), Na HCO 3 5 % H 20 Sécher sur Mg 504, fil- trer et évaporer le solvant Le produit est solubilisé dans le minimum de mélange chloroforme-Me OH 97,5-2,5 et déposé en tête d'une colonne (L: 24 cm { 2,5) de gel de silice Merck HR type 60 montée dans le mélange Eluer avec le même mélange et fractionner. Nous obtenons un lot produit pur (rende- ment: 1 g) et deux lots de produit à recycler dans les mêmes conditions, d'o un rendement global: Rendement: 67 %; Fc: 95-8 C. 4 H-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA 1 g de Boc-Ala-Sta-O Me est solubilisé dans 5 ml de chlorure de méthylène Ajouter 10 ml de TFA à température ambiante et laisser ainsi 30 min. Evaporer les solvants sous trompe à eau Reprendre l'huile résiduelle dans l'éther Essorer le solide obtenu; rincer à l'éther; sécher. Rendement: 850 mg ( 85 %); Fc: 148-1510 C. 5 Boc-Phe-Sta-Ala-Sta-O Me 470 g de H-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA sont recouverts de 50 ml de chlorure de méthylène Ajouter 102 mg de NEM et 382 mg de Boc-Phe-ON Su Après une heure, le produit ayant du mal à se solubiliser, ajouter 10 ml de DMF; vérifier que le p H est à 6-7 au papier p H, 253195 1 sinon ajuster par N éthyl morpholine; agiter 20 h à température ambiante, puis évaporer les solvants à fond Dissoudre le résidu dans le chlorure de méthylène et laver cette phase organique successivement par KHSO- K 250 04, eau, Na HC 03, eau Sécher sur Na 2504; filtrer et évaporer le solvant. Reprendre le résidu dans l'éther, essorer et sécher Rendement: 410 mg ( 70 %) 6 H-Phe-Sta-Ala-Sta-O Me 1 TFA 400 g de Boc-Phe-Sta-Ala-Sta-O Me sont re- couverts de 5 ml de TFA Laissé 20 min à température ambiante, le solide s'est rapidement solubilisé Evaporer le solvant sous vide Reprendre l'huile résiduelle dans l'éther et agiter Le solide obtenu est essoré, lavé à l'éther et séché. Rendement: 400 mg ( 98 %) 7 Z-Phe-Phe-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41320) mg de HPhe-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA sont solublisés dans 10 ml de DMF Ajouter 25 mg de NEM, puis 105 mg de Z-Phe-ON Su Ajuster le p H à 6-7 au papier p H, par NEM si nécessaire, puis agiter 5 h à température ambiante Evaporer le solvant sous haut vide, reprendre le résidu dans l'eau et le solide obtenu est essoré, lavé à l'eau, séché, puis lavé à l'éther Dissoudre dans méthanol-chloroforme 1/99 et introduire sur une R colonne (L: 35 cm, O 1 cm) de gel de silice 60 Merck ( 70-230 Mesh) dans le même mélange Eluer avec le rleme mélange 150 ml, puis avec méthanol-chloroforme 2/98: 100 ml et méthanol-chloroforme 3/97: 100 ml. Faire une CCM et évaporer les fractions pures Reprendre dans l'éther et évaporer. Nous obtenons une poudre blanche. Rendement: 130 mg ( 69 %) Fc: -188-191 C. EXEMPLE 2: Z-Phe-Phe-Sta-Ala-Sta-OH (SR 412 5) mg de Z-Phe-Phe-Sta-Ala-Sta-O Me (exemple 1) sont solubilisés dans 5 ml de DMF Ajouter 2 ml d'eau. A température ambiante, ajouter ensuite 0,2 ml soude normale; agiter 30 min à température ambiante, puis ajouter 0,2 ml de C 1 H N; le p H est redescendu de 12,5 à 6,5 Evaporer les solvants, reprendre le résidu dans l'eau, essorer le solide, laver à l'eau, sécher. Rendement: 70 mg ( 64 %). Analyse d'acides aminés: Ala: 1,03 ( 1) Phe: 2,05 ( 2) Sta: 1,92 ( 2) EXEMPLE 3: Z-Phe-(D) Phe-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41330) l Boc (D)Phe-Sta-Ala-Sta-O Me 470 mg de H-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA (exemples 1-4) sont recouverts de 50 ml de dioxane Ajouter 102 mg de NEM, puis 382 mg de Boc(D)Phe-ON Su Agiter à température ambiante Après 24 heures, évaporer le solvant, reprendre le résidu dans le chlorure de méthylène et laver celui- ci successivement avec KHISO 4-K 2504, eau, Na HCO 3, eau. 3 Sécher sur Na 2 SO 4 et évaporer le solvant Reprendre dans l'éther et évaporer De nouveau, reprendre dans l'éther et ajouter du pentane, le solide obtenu est essoré, dissous dans le chloroforme, et déposé en tête d'une colonne de gel de silice 60 Merck R ( 70-230 Mesh) dans le chloroforme (L 10 cm, O: 3 cm) Eluer avec le chloroforme puis méthanolchloroforme 1/99 fractionner Evaporer les fractions pures Reprendre dans éther-pentane, essorer, sécher. Rendement: 200 mg ( 37 %). 2 H-(D)Phe-Sta-Ala-Sta-O Me_ TFA mg de Boc(D)Phle-Sta-Ala-Sta-O Me sont recouverts de 2 ml de TFA Après 30 min à température ambiante, évaporer le solvant, reprendre dans l'éther, et le solide blanc obtenu est essoré, séché. Rendement: 190 mg ( 93 %). 2531951 l 3 Z-Phe-(D>-Phe-Sta-Ala-Sta-0 01 e -(SR 41330) mg de H-(D)PheSta-Ala-Sta-01 le, TFA sont solubilisés dans 25 mi de dioxane contenant 64 mg de NEM Ajouter 133 mg de Z-Phe*-ONL Su et 45 mg de Ho Bt, agiter à température ambiante Ajuster le p H à 6-7 par NEIN si nécessaire Après 24 * heures, évaporer le solvant, reprendre le résidu dans l'eau, triturer, laisser reposer 30 minutes, essorer, laver à 1 '6ther, sécher. Rendement:190 mg Analyse d'acides aminés Ala 0,97 ( 1) Phe:2100 ( 2) Sta: 2114 ( 2) Spectre de RMN 0,75 1,09-1,60 2,0 8-2937 2,43-3,05 3,49 3,79 4,16 4,53 4,989 7, 04-7,26 7,31 7,36 7,52 7,84 8,27 m d d d ni d d d d d 12 H 9 H 4 H 4 H 3 H 4 H attribution b C(CH)2 Sta CH 2 CH Sta i CH Ala CH Sta 3 CH 2 The 4 CH 33 ester CH CH Sta 2 CH (D)Phe, Phe, Aia OH Sta CH 2 Z -OH Sta aromatiques NH Nil Nil NH - NH 2531951 - EXEMPLE 4: Boc-Phe-Phe-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41331) 230 mg de H-Phe-Sta-Ala-Sta-Oile, TFA (Exemple 1-6) sont solublisés dans 25 ml de dioxane contenant 80 mg de NEM Ajouter 145 mg de Boc-Phe-ON Su et 54 mg de HO Bt, agiter à température ambiante et ajus- ter à p H 6-7 par NEM, si nécessaire Après 24 heures, évaporer le solvant, reprendre le résidu dans l'eau, tri- turer Laisser reposer 30 minutes, filtrer, laver à lbau, puis à l'éther; sécher. Rendement:180 mg ( 65 %). Analyse d'acides aminés: Ala: 1 04 ( 1) Phe: 2,00 ( 2) Sta: 1,83 ( 2) Spectre de RMN. 0,77 1,02-1,58 1,90-2,38 2,46-3,23 3,49 3,74 4,05 4,20 4,52 4,78 4,93 6,82 7,04 7,34 7,52 7,77 7,93 m m m ni s ni m ni m d(J d( d m d d d d = 6 Hz) ") 12 H 18 H 4 H 4 H 3 H 4 H 1 H 11 H 1 H 1 H 1 H 1 H 1 H 1 H 1 H 1 H 1 H Attribution 0 C(CH 3)2 Si CH 2-6 CH Si CH Ala Boc Phe 2 CH Sta CH 2 Phe CH 3 ester 4 CH 3 CH Sta 2 CH ta ta Phe, Phe, Ala OH Sta OH Sta NH aromatiques NH NH NH NH j 253195 1 EXEMPLE 5: Boc-Trp-Trp-Sta-Ala-Sta-0 Me (SR 41376) 1 Boc Trp-Sta-Ala-Sta-O Me 470 mg de H-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA (exemples 1-4) sont solubilisés dans 50 ml de dioxane contenant 102 mg de NEM Ajouter 380 mg de Boc-Trp-O Np et 120 mg de HO Bt Agiter à température ambiante, ajuster le p H à 6-7 par NE Msi nécessaire Après 48 h,éevaporer le solvant sous vide, reprendre le résidu dans le chloroforme et disposer en tête d'une colonne de gel de silice 60 Merck R ( 70-230 Mesh) dans le chloroforme (L: 15 cm, O: 3 cm). Eluer avec: 300 ml de chloroforme, 200 ml de méthanol- chloroforme 1/99, 200 ml de méthanol-chloroforme 2/98, ml de méthanol-chloroforme 3/97, 500 ml de méthanol- chloroforme 5/95 Fractionner enfractions de 25 ml, faire le suivi en CCM, évaporer les fractions pures, reprendre dans le pentane avec un peu d'éther, essorer, sécher O Rendement: 320 mg ( 56 %) 2 H-Trp-Sta-Ala-StaO Me, TFA 200 mg de Boc-Trp-Sta-Ala-Sta-0 Me, TFA sont recouverts de 5 ml de chlorure de méthylène auxquels on ajoute 4 gouttes d'éthane dithiol et 2 gouttes d'anisol, puis 2 ml de TFA Laisser à température ambiante, évaporer les solvants et reprendre le résidu dans l'éther Essorer le solide, laver abondamment à l'éther, sécher. Rendement: 170 mg. 3 Boc-Trp-Trp-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41376) mg de H-Trp-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA sont recouverts de 30 ml de dioxane contenant 60 mg de NE Mo Ajouter 117 mg de Boc-Trp-O Np et 38 mg de HO Bt Agiter à température ambiante, ajuster le p H à 6-7 par NEM;si nécessaire Après 24 heures, évaporer le solvant et reprendre le résidu dans leau; laisser au repos Essorer le solide obtenu et dissoudre dans le chlorure de méthy- lène et laver la solution organique avec KH 504-K 2504, eau Na HCO 0, eau. 2531951 - Sécher sur Na 2 SO 04;évaporer le solvant Dissoudre le produit dans 3 ml de chloroforme et déposer en tête d'une colonne (L: 30 cm, O 2 cm) de gel de silice 60 Merck ( 70-230 Mesh) dans le chloroforme Eluer avec chloroforme 100 ml, méthanol-chloroforme 1/99 100 ml et méthanolchloroforme 5/95 jusqu'à sortie du produit Fractionner, évaporer les fractions pures Reprendre le résidu dans l'éther, essorer, sécher. Rendement: 90 mg ( 44 %) Analyse d'acides aminés: Ala: 0,98 ( 1) Trp: 2, 08 ( 2) Sta: 1,97 ( 2) Spectre de RMN. aspects intégration attribution 0,69-0,85 12 H C(CH 3)2 Sta sta CH 3 Ala 0,93-1,58 m 181 H 5 CH 2 6 CHSta (CH 3)3 C Boc Boc 1,90-2,38 m 4 H 2 CH 2 Sta 2 3 H t 2,69-3,15 mn 4 CH 2 Trp 3,50 S 311 CH 3 ester 3,71-3,89 m 4 H CH-3 CH Sta 4,00-4,27 m 2 CH Ala 4,53 m 1 ri 2 x CH Trp 4,75 d 2 l 2 x OH Sta 4,94 d aromatiques 6,72-7,92 m 15 ' 5 x NH EXEMPLE 6 Boc-(D)Phe-Val-Sta-Ala-Sta-OCH 3 (SR 41377) 1 Boc-Val-Sta-Ala-Sta-O Me 450 mg de HL Sta-Ala-Sta-O Me, TFA (exemple 1-4) sont recouverts de 50 ml de dioxane contenant 211 mg de NEM Ajouter 314 mg de Boc-Val-ON Su et 135 mg de -O Bt. Agiter à TA, ajuster le p H à 6-7 par NE Msi nécessaire. Après 24 h, évaporer le solvant, reprendre le résidu dans l'eau, essorer le solide obtenu après 3 h, sécher. Dissoudre le produit brut dans le chloroforme, le déposer en tête d'une colonne (L 18 cm, j 3 cm) de gel de silice 60 Merck R ( 70-230 Mesh) dans le même solvant. Eluer en faisant un gradient de méthanol-chloroforme jusqu'à 7/93 (vol/vol) par fractions de 200 ml de solvant, fractionner Evaporer les fractions pures. Rendement ' 200 mg ( 38 %) 2 H-Val-Sta-Ala-Sta-O Me mg de Boc-Val-Sta-AlaSta-O Me sont recouverts de 3 ml de TF Ao Après 30 min à température ambiante, évaporer le solvant à froid, reprendre le ré- sidu dans l'éther, essorer le solide blanc obtenu, laver à l'éther, séchero Rendement: 180 mg ( 100 o%) 3 o Boc=(D)Phe-Val-Sta-Ala-Sta-O Me mg de H-Val-Sta-Ala-Sta-O Mes TFA sont recouverts de 35 ml de dioxane contenant 90 mg de NE Mo Ajouter 101 mg de Boc=(D)Phe ON Su et 38 mg de HO Bto Ajouter 3 ml de DM Fajuster le p H à 6-7 par NE Mo Après heures, évaporer les solvants, reprendre le résidu dans lgeau et le solide obtenu est essoré, lavé à laeau, puis à l'éther; séchero Rendement 150 mg ( 85 %) _ Analyse d'acides aminés Ala: 1,00 ( 1) Val: 1,08 ( 1) Phe 0,97 ( 1) Sta 1,96 ( 2) Spectre de RNN. î aspects intégration attribution 0,67-0,83 ni 18 H f 6 C(CH)2Sta C 3 (CH 3)2 Val f CH 2-6 CH S ta 1,09-1,58 ni 1811 (C 3 3 Boc k CH 3, Ala 1, 92 ni 1 H 3 CH Val 2, 00-2,35 ni 411 2 C 2 Sta 2,50-2,94 ni 2 H 3 CH 2(D) Phe 3,50 S H CH 3 ester 3,78 4 H CH CH Sta 4,08 -4,26 W 3 H CH (D)Phe,Val, Ala 4,75 d 111 OH Sta 4,91 d 1 H OH Sta 6,90 d 1 H N Hl 7,06-7,33 ni 6 H aromat + i NH 7,50 d i H NH 7,75 d 1-1 N Hl 7,82 d 1 H NH EXEMPLE 7 Boc-Tr-P (D) lr-p-Sta,-Ala-Sta-0 Me (SR 4 i 394) B o p ta -A l -S t O 470 mg de il-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA (Exemple 1-4) sont recouverts de 50 ml de dioxane contenant 195 mng de NEM 4; puis ajoutler 380 r g de Boc-(D)Tr-p0 Np et 120 mg de li O Bt, Aggiter à 'TA, ajuster le p H à 6-7 au papier p H par NEM>sî nécessaire O Après 6 jours évaporer le solvant, reprendre dans le chlorure de mi 6thylène et laver la solution organique successivement par KHISO 4-K 504, par l'eau, Na HCO 3, par l'eau Sécher sur Na 2 SOI Evaporer le solvant à sec, dissoudre le produit dans le chlora- forme et déposer en t 8 te d'une colonne (L 27 cm, 9 i: 2 cm) de gel de silice Merck ( 70-230 Mesh) dans - le chloroforme Eluer en faisant un gradient méthanol- chloroforme jusqu'à 5/95 Fractionner, évaporer les fractions pures. Rendement: 330 mg ( 58 %). 2 H-(D)Trp-Sta-Ala-Sta-O Me_, TFA 220 mg de Boc(D)Trp-Sta-Ala-Sta-O Me sont recouverts de 10 ml de chlorure de méthylèneo Ajouter 8 gouttes d'éthane dithiol et 2 ml de TFA Après 30 min à TA, évaporer les solvants Reprendre le résidu dans l'éther, ajouter un peu de pentane, essorer, laver à l'éther; sécher. Rendement: 210 mg ( 95 %). 3 Boc-2 Trp -(D)Tr-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41394) 120 mg de H(D)Trp-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA sont solubilisés dans 10 ml de dioxane contenant 41 mg de NEM Ajouter 85 mg de Boc-Trp-O Np et 27 mg de HO Bt. Agiter à TA et vérifier que le p H est à 6-7 au papier p H, sinon ajuster par NEM Après 48 heures, évaporer le solvant, reprendre le résidu dans le chlorure de méthylène et laver la solution organique successivement par KHSO 4-K 2504, par l'eau, Na HC Os l'eau Sécher sur Na 2504, évaporer le solvant Dissoudre dans l'acétate d'éthyle R et passer sur un gel de silice 60 Merck ( 70-230 Mesh) (H: 30 cm,: 3 cm) et éluer avec l'acétate d'éthyle, puis progressivement avec le méthanol Fractionner, éva- porer les fractions pures, reprendre le résidu dans l'éther, essorer; sécher. Rendement: 120 mg ( 85 %). Analyse d'acides aminés: Ala 1,05 ( 1) Sta: 1,91 ( 2) Trp: 2,04 ( 2) S Dectre de RMN. aspects intégration attribution 0,59-0,83 ni 12 *H CH 3)25 t *CH Ala 0,911,57 1 i 8 H 5 H 6 i C:H 2 CH Sta 2,03-2,38 ni 411 CH 2 Sta 2,56-3 z,23 ni 4 H 3 CH 2Trp 3,50 3 H CH ester 3,70-3,89 ni 4 H_ CH-3 CH Sta 4,05-4, 24 ni 2 H 2-CH Ala 4,41-4,54 i 1 H k 2 x 2 CH Trp 4,'75 d 4,9 2 H 2 x OH Sta 6,58 d 1 H NH 6,78-7,67 IL 2 H laromatiques. 7,'81 d 1 H NH 8,03 d 1 H NH ,69 S 1 H NH indole ,74 S 1 H NH indole EXEMPLE 8 Boc-Phe-His-Sta-Ala-St-a O Me (SR 41395) 1 Boc-His (Boc) -Sta-O Me 0,8 g ( 0,0015 M) de Boc-His(Boc)-OH, DCHA sont solubi lisrés dans 80 ml de chlorure de méthylène; a- jouter 306 mn de H-Sta-O Me, TFA et agiter jusqu'à dissolution, puis ajouter 0,8 g de Bop et 233 mig de DIPEA. Contrôler le p H a cours du temps, et ajuster à 6-7 par DIPEA, si nécessaire Après 24 heures, évaporer le solvant. Dissoudre le produit dans l'acétate d'éthyle et déposer en t 8 te d'une colonne (L: 60 cm, -: 3 cm) de gel i 6 de silice 60 Mlerck ( 70-230 Mesh) dans l'acétate d'éthyle Eluer avec lacétate d Béthyle, fractionner. Evaporer les fractions pures Reprendre dans hexane, évaporer lehexane et le solide obtenu est séchéo Rendement: 610 mg ( 77 %) Boc-Phe-His-Sta-O Me 350 mg de Boc-His(Boc)-Sta=O Me sont recouverts de 5 ml de TFA à température ambiante Après minutes, évaporer à fond celui-cio Dissoudre dans 50 ml de dioxane, puis ajouter 237 mg de NESM et vérifier que le p H est à 6-7 sinon ajustero Ajouter 89 mg de 1-D Bt et 260 mg de Boc-Phe-ON Suo Ajuster le pl H à 6-7 par NEM Isi nécessaire Agiter 24 heures à TA 9 évaporer le solvanto Dissoudre dans acétate d PÈthyle-m 6thanol 95/5 et chromatographier sur une colonne (L O 40 cm, R 2 cm) de gel de silice 60 Merck ( 70-230 $Wesh) dans le même solvant Eluer avec 300 ml du mbme mélange solvant, puis avec acétate deéthyle-m Athanol 90/10; fractionner et évaporer les fractions pures. Rendement: 130 mg ( 34 %)o 3 o Boc-Phe-His-Sta-OH 450 mg de Boc=Phe-HisSta-O Me sont solubilisés dans 20 ml de méthanolo Ajouter 5 ml d'eau, puis 200 mg de baryte en poudreo Après 45 minutes 2 ajouter à nouveau 100 mg de baryteo Après 1 hfi 307 la réaction est arr 8 tée; faire barboter du gaz carbonique durant 30 minutes et filtrer sur célite 7 laver celle- ci avec du méthanolo Evaporer les solvants; reprendre le résidu dans l'éther, essorer, sécher. -Rendement t 400 mg 4 o Boc-Phe=His-Sta=Ala-Sta-O Me mg de B 3 oc-Ala-StaOlle sont recouverts de 5 ml de TF Ao Après 30 minutes à température ambiante, évaporer le solvant, ajouter de l'&ther, et de nouveau évaporero Dissoudre 10 huile dans 10 ml de Dle et ajouter DIPEA jusqu'à l'obtention de p H 6-7 au papier p H. Ajouter ensuite 230 mg de Boc-Phe- His-Sta-OIH dans 10 ml de DMF contenant 53 mg de DIPEA, puis une solution de 268 mg de Blop dans 10 mil de DMF contenant 76 mg de DIPEA; agiter à TA,, ajuster le p H à 6-7 si nécessaire par DIPEA Après 24 heures, éva*porer le solvant à fond sous haut vide au bain-marie à 40 % Reprendre le r 6 sidu dans l'eau, extraire avec du chlorure de méthylène et laver la solution organique avec de lgeau, Na HCO 3 de l'eau Séàcher sur Ne 250 4, puis 6 vaporer le solvant, dissoudre le résidu dans méthanol- chloroforme 2/98 et' c 1 romatographier sur une colonne-(L 35 cm, 2 cm) R de gel de silice 60 Marck ( 70-230 Mesh) dans le meme mélange solvant O Eluer avec un gradient méthanol-CH -jusqu'à 10/90 Fractionner, évaeporer les fractions pures Reprendre le résidu dans 'te et essorer; S 6 cher O Rendement: 150 'g( 5) Analyse d'acides ami Ln 6 s l AE 0,99 (I) ( 1) ( 1) Sp Oectre de R 12 il. È- rri Yt;c 0586-_i _ 7 1,9 ?-2,38 296 i-2,96 3,150 3,65-3,87 4,03-11 26 4 e 42 4,93 6, 98 7,108-7,27 7,33 7,38 7,52 7, 96 8, î 4 aspec ts s d ra d d d 3 H 4 H 2 H * 5 H 1 H 1 attribution or; ( a)2 S ta G CH 3 'A La (CH-3 > 3 C Boc CI Cil Sta 2 2 EXEMPLE 9 Z-Phe-Val-Sta-Ala-Sta-O Me (SR- 41405) mg de H-Val-Sta-Ala-Sta-0 Ole, TFA * (exemple 6 -2)-sont recouverts de 10 ml de dioxane conte-. nant 40 tng de NEM Ajouter 75 g de Z-Phe-ON Su et 25-,5 mig de HO Bt Agiter à température ambiante, ajuster le p H à 6-7 par NEM,si nécessaire Après-24 heures, évaporer le solvant, reprendre le résidu dans l'ea-u Essorer-le. solide, laver à l'éther;-sécher. Rendement: 105 mg ( 81 %). Analyse d'acides aminés: Ala 1 t,00 ( 1) Val: 0,99 ( 1) Phe:1,03 ( 1) Sta: 1,98 ( 2 > S-Pectre de RMN. aspects integràation attribution n 18 H '6 Sta 3 C(CH,3)2 Val 1,07-1,57 i 9 H SCH,-6 CH Sta 1,81-2,37 m 5 Il 3 CH -Val 2 CH 2 Sta 2,58-2,98 ni 2 H 3 CH Phe 3,50 S 3 H CH ester 4 3 3,78 ni 4 H CH -3 CH Sta 4,06-4,34ni 3 H CH Phe, Val, Ala 4,78 d (OH Sta 4,86 S 4 C 2 z 4,90 d OH Sta 7,00-7,34 îîH aromatiques 1 NH 7,42 'n 2 H 2 NH 7,79 d 1 H NH 7,87 d i H N Hl 253195 1 EXEMPLE 10 Z-Phe-(D)Phe-Sta-Ala-Sta-OH (SR 41406) mg de Z-Phe-(D)Phe-Sta-Ala-Sta-O Me (exemple 3) sont solubilisés dans 5 ml de DMF Ajouter 2 ml d'eau, puis à TA, ajouter 0,2 ml de soude normale(l,5 équivalent) Agiter 30 minutes à température ambiante, puis ajouter 0,2 ml d'acide chlorhydrique normal (le p Hli est alors à 6 au papier p H) Evaporer les solvants sous haut vide au bain-marie à 40 Reprendre le résidu dans l'eau, triturer et essorer le solide; sécher. Rendement: 90 mg ( 83 %). Analyse d'acides aminés: Ala: 0,91 ( 1) Phe: 2,00 ( 2) Sta: 2,03 ( 2) EXEMPLE 11: Z Phe -(D)Trp-Sta-Ala-Sta-0 Me (SR 41407) mg de H-(D)Trp-Sta-Ala-Sta-O Me (exemple 7) sont recouverts de i O ml de dioxane contenant 27 mg de NEM, puis ajouter 51 mg de 3-Phe-ON Su et 17 mg de HO Bt. Ajuster le p H à 6-7 au papier p H, si nécessaire et agiter à TA; après 24 heures, évaporer le solvant sous vide, reprendre le résidu dans l'eau, après une heure, essorer le solide, puis le dissoudre dans le chlorure de méthy- lène et laver la solution organique successivement avec KH 504-K 2504, eau, Na HC 03, eau Sécher sur Na 2 SO 4 et éva- porer le solvant Dissoudre le produit dans méthanol- chloroforme 2/98 et le déposer en tête d'une colonne R (L: 40 cm, O: 2 cm) de gel de silice 60 Merck ( 70-230 Mesh) dans le même mélange de solvant Eluer avec 200 ml de méthanol-chloroforme 2/98 et 400 ml de méthanol- chloroforme 5/95 Fractionner, faire une CCM et évaporer les fractions pures Reprendre dans l'èther, essorer; sécher. Rendement 50 mg ( 51 %). Analyse d'acides aminés: Ala: 1,01 ( 1) Phe: 1,01 ( 1) Sta: 1,99 ( 2) Trp: 1 ( 1) Spectre de RMN. aspects intégration attribution 06-,6 C 64 _, 86 lu 12 C 6 C(CH 3)2Sta f CH 3 Ala 1,00-1,60 m 9 il CH 3 6 H Ata 2, 10-2,42 m 4 n CH 2 Sta 2,48-3,20 m 4 i 3 CH Phe, Trp 3,50 S 3 H CH 3 ester 3,71-5,89 m 4 H CH-3 CH Sta 4,13-4,26 m 2 d 2 CH Phe, Ala 4,51 m 1 H 2 CH Trp 2 OH Sta 4,75-4,95 m 4 (CH 2 Z ar omartique s 6,85-7,49 m 17 (o 2 Ni l 2 NH 7,60 d 1 H NH 7,84 d 1 i NH 8,24 d 1 H NH EXEMPLE 12: Z-Phe-Trp-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41416) 80 mg de H-Trp-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA (exemple 5) sont solubilisés dans 20 ml de dioxane contenant 27 mg de NEM puis ajouter 51 mg de Z-Phe-ON Su et 17 mg de HO 3 t Agiter à TA, ajuster le p H à 6-7 par NEM,si nécessaire Après 48 heures, évaporer le solvant, reprendre le résidu dans l'eau et le solide est essoré, Laver successivement avec KHS Or K 2 S puis l'eau, puis C O O H Na 4 2 3 puis l'eau Dissoudre dans acétate d'éthyle, sécher sur Mg SO 4, puis évapoer à seco Triturer dans l'éther, essorer, sécher. Rendement: 90 Analyse d'acides aminés: Ala Phe Sta Trp mg ( 92 %) o : 0,97 ( 11) o 0,99 ( 1) : 2,00 ( 2) : 1,04 ( 1) Spectre de RMN. aspects intégratio I attribution 0,69-0,85 m 12 in 6 C(CH 3)2 Sta 1,09-1, 58 _ m 9 H i CH 3 Ala /5 CH_-CH Sta 1,90-2,4 m 4 i CH 2 Sta 2,53-3,20 m 4 H 3 CH 2 Phe, Trp 3,50 S 3 l H CH 3 ester 3,79 m 4 i 4 CH 3 CH Sta 4,11-4, 27 m 2 Hf 2 CH Phe, Ala 4,51 m 1 N 2 CH Trp 4,75-5,0 00 m 4 H 2 O t CH 2 Z 8 c Iaromatiques 6,86-7,50 m 17 H t 2 NH 7,57 d 1 f NH 7,79 d 1 H NH 8,19 d 1 hl NH ,69 S 1 h NH indole EXEMPLE 13: Z-Tyr-Val-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41476)- 100 mg de H-Val-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA (exemple 6-2) sont recouverts de 10 ml de dioxane conte - nant 45 mg de NEM Ajouier 82,5 mg de Z-Tyr-ON Su et 27,5 mg de HO Bt Ajuster le p H à 6-7 par NE Msi nécessaire. Agiter 48 heures à température ambiante Evaporer le solvant à froid, reprendre le résidu dans l'eau et lesolide blanc obtenu est essoré, lavé à l'eau et séché Laver à l'éther et sécher. Rendement: 110 Analyse d'acides aminés: Ala: Val: Tyr: Sta: mg ( 85 %). 1,02 ( 1) 0,99 ( 1) 0,99 ( 1) 2,01 ( 2) Spectre de R'MN'. aspects inltégration attribution 0,69-0,88 ni 18 ai C(CH 5) Sta C(CH 3)2 Val 1,09-1,58 ni 9 fi (CH 3 Ala (JCH 2 _ CH Sta 1, 82-2, 00 if 3 C Va 2, 00-2,40 i 4 fil CH Sta 2 3 2 2,50-2,88, ni 2 Il 3 CH 2 Tyr 3,50 S -3 li CH ester 3,70-3,86 ni 4 fi 4 CH CH Sta 4,06-4,27 ni 3 C Hlyl Val 4 Aia 4,80 d OH Sta- 4,88 S f CH 2 Z 4,91 d ' I OH -Sta 6,58 d 2 3 ',-5 ' CH aroniTyr 7,00 d 2 ki 2 ', 6 'CH aromTyr 7,09-7,50 N 8 h (aromiatiques Z 7,77-7,90 ni 2 ri 2 x NH EXEMPTLE 14 Z Phe -I Le S t a-Ala-S ta-OO Me (s R 41477 > 1 Boc-Ile-Sta-Ala-Sta-O Me 265 mig de il-Stà-Ala-Sta-O Ne, TFA(exemiple 1-4) sont recouverts de 30 mil de dioxane contenant 206 mg de DIPEA Ajouter 125 mig de Boc-Ile-OH et 270 mg de Bop. Ajuster le p H à 6-7 par DIPEA/si nécessaire/et agiter 48 heures à TA Evaporer le solvant sous-videl reprendre le résidu dans l'éther, essorer le solide Déposer le produit en solution dans méthanol-chloroformne 2, 5/97,5 en t 9 te d'une colonne (L 30 cm, O 2 cm) de gel de silice 60 'Merck R ( 70-230 Mesh) das le mêmie solvant. 253195 1 Eluer avec le même mélange solvant ( 250 ml) puis avec ml de méthanolchloroforme 5/95 et 200 ml de méthanol-chloroforme 7,5/92,5 Fractionner, évaporer les bonnes fractions, reprendre dans l'éther, essorer, sécher. Rendement: 180 mg ( 56 o%) 2 H Ile-Sta-Ala-Sta-O Me TFA mg de Boc-Ile-StaAla-Sta-O Me sont recouverts de 2 ml de TFA Après 30 minutes, évaporer le solvant, reprendre le résidu dans l'éther et le solide blanc est essoré, Iavé à l'éther et séché. Rendement: 140 mg ( 93 %). 3 Z-Phe-Ile-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41477) 126 mg de H-Ile-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA sont recouverts de 20 ml de dioxane contenant 51 mg de NEM. Ajouter 95 mg de Z-Phe-ON Su et 32-mg de HO Bt Ajuster le p H à 6-7,si nécessaire,'par NEM Iet agiter 48 heures à TA, évaporer le solvant sous vide Reprendre le résidu dans l'eau, triturer, essorer, sécher Laver ' à l'éther, sécher. Rendement: 140 mg ( 86 %). Analyse d'acides aminés: Ala: 0,96 ( 1) Ile: O,98 ( 1) Phe: 1,03 ( 1) Sta: 2,03 ( 2) Spectre de Rl V. 0,#64 -0,91 0,91-1,81 2100-2,39 2,50-2, 96 3,50 3,79 4,08-4,35 4,8 o 4,88 4,93 7,09-7,36 7,44 7, 79 7, 94 _ à Jaspects intégration J attribution- ni ni ni ni s ni ni d s d ni 2 d d d 18 f-i 12 H 4 Hf 4 Hk 3 Hf il t' idk ( 6 ( H)2 Sta 3 CH 3 C 3 l ( CH 3 Ala - CH 6 C Sta 4 CH 3 CH lie 2 CH Sta 3 CH Phie CH 3 ester 4 CH-3 CH Sta 2 CH Plie, lie, Al OH CH 2 OH Sta z Sta aromatiques + i NH 2 NH NH NH EXEMPLE 15 Z-P Hle (D)Val-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41478) 1 B 3 oc-(D) Val-Sta-Ala-Sta-O Me- 53 l'n g de H-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA(exemiple 1-4) sont recouverts de 50 mg de dioxane contenant 253 mg de NEM; puis ajouter 380 mg 'de Boc-(D) V 41-0 N Su et 1135 mg - 4 ki 2531951 - de HO Bt Ajuster le p H à 6-7 par NE Msi nécessiare,et agiter 3 jours à TA; évaporer le solvant sous vide, reprendre le résidu dans l'eau et extraire au chlorure de méthylène Laver la phase organique à l'eau, sécher sur Na 2 SO 4 et évaporer le solvant Reprendre le résidu dans l'éther,laisser reposer Le précipité blanc formé est essoré sous vide et séché. Rendement: 250 mg ( 40 % 0). 2 H-(D)Val-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA 150 mg de Boc-(D) Val-Sta-Ala-Sta-O Me sont recouverts de 2 ml de TFA Après 30 minutes à température ambiante, évaporer le solvant à fond Reprendre le résidu dans l'éther et le solide obtenu est essoré sous vide, lavé à l'éther et séché. Rendement: 150 mg ( 100 %). 3 Z Phe-(D)Val-Sta-Ala-Sta-O Me Dans 25 ml de dioxane contenant 40 mg de NEM on introduit successivement 100 mg de H-(D)Val- Sta-Ala-Sta-O Me, TFA puis 75 mg de Z-Phe-ON Su et 25,5 mg de HO Bt Agiter à TA, 3 jours après avoir ajusté le p H à 6-7 isi nécessaire Evaporer le solvant sous vide, laver à l'eau, puis à l'éther; sécher. Rendement: 80 mg ( 29 %). Analyse d'acides aminés: Ala: 0,97 ( 1) Val: 1,03 ( 1) Phe: 1,01 ( 1) Sta: 1,98 ( 2) Snectre de RMN EXEMPLE 16 Z-Trp-Val-Sta-Ala-Sta O Me (SR 414 85) mg de H-Val-Sta-Al a-Sta-O Me, TFA (exemple 6), sont recouverts de 20 ml de dioxane contenant mg de NEM Ajouter à TA 67 mg de Z-Trp-O Np et 20 mg de 11 O Bt Ajuster le pli à 6-7 par NEM,si nécessaire et agiter à TA; après 48 heures, évaporer le solvant' sous vide, reprendre-le résidu huileux dans l'eau, décanter l'eau et reprendre dans l'éther Le solide obtenu est essoré, lavé à l'éther, séché. Rendement: 40 mg. 6 aspects inté 6 g-rat Uonattribution 0,62-0,85 Ai 1II ( 6 Sta 3 C(CH 3)2 Val 1,06-1,57 ni 9 i-i { 5 c H 26 C Sta (.CH 3 Ala 1,92 i li 3 CH Val 2, 06-2,35 ni 4 fi CH 2 Sta 2,50-3,00 ni 2 n' 2 C h 3,51 S 3 l CH 3 -ester 3, 77 m 4 i CH CH St 4,10-4,38 N 3 fi 2 CH Pliv',(D)Va 1 l,Ala 4,72-4,94 * 1 4 f (àO t 7,-04-7,92 i 15 f aromatiques Analyse d'acides aminés: Ala Val Sta Trp Spectre de RMN. : 1,01 : 1 : 2,03 : 0,95 EXEMPLE 17: Boc-(D)Phe-Val-Sta-Ala-Sta-OH (SR 41491) 76 mg de Boc-(D)Phe-Val-Sta-AlaSta-O Me (exemple 6) sont solublisés dans 4 ml de DMF; ajouter 1 ml dteau, puis, à TA, 0,15 ml de soude normale Agiter 40 min à TA, puis ajouter 0, 15 ml d'acide chlorhydrique normal Evaporer les solvants sous haut vide au bain marie à 35 "C Reprendre le résidu dans l'eau Essorer le solide, sécher Laver à l'éther; sécher. Rendement: 60 mg ( 80 %). ( 1) ( 1) ( 2) ( 1) aspects intégration attribution 0,71-0,93 m 18 fi H 6 C(CH) Sta 3 c ( 32 3 C(CH 3)2 Val 1,09-1,62 m 9 à {CH 36 Ala PCH 2 _ CH Sta 3 CH Val' 1,87-2,40 m 5 H 3 CH Va CH 2 Sta 3,50 S 3 H CH 3 ester 3,713,89 m 4 i 4 CH-3 CH Sta 4,05-4,43 m 3 i 2 CH Trp,Val,Ala 4,77-5,00 m 4 H H , k CH 2 Z aromatiques 6,83-800 m 15 H x NH ,72 S 1 HI NH indole 253195 1 Analyse d'acides aminés: Ala: 0,98 ( 1) Val: 0,96 ( 1) Phe: 0,97 ( 1) Sta: 2,05 ( 2) EXEMPLE 18: Boc-Phe-His-Sta-Ala-Sta-OH (SR 41492) mg de Boc-Phe-His-Sta-Ala-Sta-O Me (exemple 8) sontsolubilisés dans 4 ml de DMS; ajouter 1 ml d'eau, puis à TA ajouter 0,12 ml de soude normale. Agiter 40 minutes à TA, puis ajouter 0,12 ml d'acide chlorhydrique normal Evaporer les solvants sous haut vide au bain marie à 35 Reprendre le résidu dans l'eau et le solide obtenu est essoré et séché. Rendement: 30 mg. Analyse d'acides aminés: Ala: 1,01 ( 1) Phe: 1,01 ( 1) His: 0,96 ( 1) Sta: 2,02 ( 2) EXEMPLE 19: Boc-(D)Phe-Phe-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41518) mg de H-Phe-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA (exemple 1) et 37 mg de HO Bt sont recouverts de 30 ml de dioxane contenant 57 mg de NEM Ajouter 98 mg de Boc-(D) Phe-ON Su et agiter à TA Contrôler le p H et ajuster à. p H 6-7 par NE'Msi nécessaire Après 48 heures, évaporer le solvant, reprendre le résidu dans l'eau et le solide blanc obtenu est essoré, lavé à l'eau, puis à l'éther et séché. Rendement: 150 mg ( 82 %) Analyse d'acides aminés: Ala: 1,0 ' ( 1) Phe: 1,92 ( 2) Sta: 2,07 ( 2). 3 o Spectre de RNN. _ | aspects intégration attribution 1 -1 0,71-0,86 1,07-1,59 1,97-2,37 2,37-2,62 2,65-3,06 3,50 3,67-3,90 4,02-4,15 4,15-4,28 4,46-4,60 4,76 4,92 6,58 6,96-7,25 7,31 7,45: 7,80 8,16 x intégration à ' = 2,45 m m m m s m m m m d d d m d d d d impossible 12 H 18 a 4 H 2 H 3 f H 12 H par 1 H 1 id 1 i s i d 1 ff 1 il 1 H- suite du 1 C(CH 3)2 Sta f CH Ala 3 ô 3 (CH 3)3 C Boc CH 2CH Sta CH 2 Sta 3 CH 2 (D)Phe CH 2 Phe CH 3 ester 4 CH-3 CH Sta 2 CH (D)Phe 2 CH Ala 2 CH Phe 2 x OH Sta NH (D)Phe aromatiques 2 x NH Sta NH NH pic Ala Phe de DMSO EXEMPLE 20: Adoc-Phe-Phe-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41540) 221 mg de H-Phe-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA (Exemple 1) et 54 mg de HO Bt sont recouverts de 30 ml de dioxane contenant 84 mg de NEM Ajouter 175 mg de Adoc- Phe-ON Su Agiter à température ambiante Contrôler le p H et ajuster à p H 6-7 par NEM)si nécessaire Après 48 heures, évaporer le solvant sous vide, reprendre le résidu dans l'eau, essorer le solide,-sécher Le produit en solution dans méthanol-chloroforme 1/99 est déposé en t 8 te d'une m- 253195 1- colonne de gel de silice 60 Merclck ( 70-230 mesh) dans le même solvant (L: 40 cm O: 2 cm) Eluer avec: ml de méthanol-chloroforme 1/99 300 ml de méthanol-chloroforme 2/98 300 ml de méthanol-chloroforme 5/95 Fractionner et évaporer les fractions pures Reprendre dans l'éther, essorer, sécher. Rendement: 170 mg ( 58 %). Analyse d'acides aminés Ala: 1,05 ( 1) Sta: 1,97 ( 2) Phe: 2,04 ( 2) Spectre de RM aspects inté 6 gration attribution 0,71-0,91 m 12 h 6 Sta FCH 3 Ala 1,09-2,03 m 24 H 5 CH 2 CH Sta CH 2 et CH Adoc 2,08-2,37 m CH 2 Sta 2,56-3,06 m 3 CH Phe 3,50 S CH 3 ester 3,68-3,87 nm 4 H 4 CH-3 CH Sta 3,94-4,58 m 3 H CH Phe,Ala 4,78 4,783 d 3 _ OH Sta 4,93 d 6,86 d 1 H NH 7, 06-7,26 m 10 H aromatiques 7,34 d 1 h NH 7,52 d 1 H NH 7,78 d 1 H NH 7,94 d i H NH 7,94 d 1 M N EXEMPLE 21: Boc-His(Boc)-Phe-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41541) mg de H-Phe-Sta-Ala-Sta-OJ Ie (exemple 1) et 75 mg de Boc-His(Boc)OH, DCHA sont solubilisés dans 20 ml de dioxane, contenant 10 ml de DMF Ajouter 72 mg de BOP et 20,6 mg de DIPEA Agiter à TA, ajuster le p H à 6-7 par "IPEA,si nécessaire Après 48 heures, évaporer les solvants au bain-marie à 35 sous haut vide Reprendre le résidu dans l'eau et extraire au chlorure de méthy- lène La phase organique est séchée sur Na 2 SO 4 Evaporer le solvant Dissoudre dans le chloroforme et déposer en tête d'une colonne (L: 40 cm 2 cm) de gel de R silice 60 Merck ( 70-230 mesh) dans le chloroforme. Eluer dans: 200 ml de chloroforme ml de méthanol-chloroforme 1/99 ml de méthanol-chloroforme 2/98- ml de méthanol-chlor Qforme 3/97 300 ml de méthanol-chloroforme 4/96 Fractionner Evaporer les fractions pures Reprendre dans l'éther-hexane 50/50, essorer Sécher. Rendement 70 mg ( 60,) - Analyse d'acides aminés: Ala: 0,91 ( 1) o o His: 1,20 ( 1) Phe: 1,05 ( 1) Sta: 1,80 ( 2) Spectre de RMN. 0,69-0, 83 1,09-1,54 1,94-2,37 2,50-3,02 3,50 3,68 -3,87 ' 4,00-4,26 4,43-4,59 4,78 4,93 6,85 7,0 o 6-7,22 7,36 7,58 7, 81 7,88 8,03 a jaspects intégration_ attribution m m s d. d. d d d s 12 h- 27 Il 4 Hk 4 Hà 4 Ji 111 1 H 1 HI 1 H la C(CH 3) 2 CH 3 CH 4 CH-3 CH Sta Ala di Boc Sta S t a Phe, His Sta Sta 2 CH Phe, Ala, Hie 2 x OH Sta ( 4 NH' ai-om, CH NH NH NH NH 2 ' CH plie His His EXEMPLE 22 Z-Tyr-Tvr-Sta-Ala-Sta O Me (SR 41542) 1 Z-Tyr-Sta-Ala-Sta-0 Me c 3 Dans 25 ml de dioxane contenant 244 ing de NEM, on introduit successivement 400 rng de H-Sta-Ala-Sta- O Me, TFA, Puis 310 mng de Z-Tyr-ON Su et 101 mg de HO Bt. 34 2531951 Agiter à TA, ajuster le p H à 6-7 par NEM,si nécessaire. Après 3 jours, évaporer le solvant au bain-marie à 40 , sous trompe à eau Le résidu est repris dans l'eau et l'eau est décantée Reprendre-le résidu dans le chlorure de méthylène et le solide obtenu est essoré, lavé avec méthanol-chloroforme 2/98 Sécher. Rendement: 340 mg ( 75 %) 2 H-Tyr-Sta-Ala-Sta-Ol Me mg de Z-Tyr-Sta-AlaSta-O Me sont dissous dans 50 ml de méthanol Ajouter 40 mg de Pd/C 10/o et hydrogéner sous une pression d'un mètre d'eau Après une nuit, filtrer, laver le noir avec du méthanol, éva- porer le solvant, reprendre le résidu dans l'éther et évaporer à sec Reprendre dans l'éther, gratter et le solide obtenu est essoré Sécher. Rendement À 110 mg ( 96 %) 3 Z-Tyr-Tyr-Sta-Ala-Sta-O Me mg de H-Tyr-StaAla-Sta O Me, 82 mg de Z-Tyr-ON Su, 27 mg de HO Bt sont solubilisés dans 30 ml de dioxane contenant 23 mg de NEM Agiter à TA Ajuster le p H à 6-7 par NE Msi nécessaire Après 48 heures, éva- porer le solvant, reprendre le résidu dans l'eau, tri- turer Après 30 minutes, le solide obtenu est essoré, lavé à l'eau, séché Laver à l'éther, puis au chlorure de méthylène Dissoudre dans le méthanol, filtrer, évaporer le solvant, concentrer et précipiter par l'éther. Essorer, sécher. Rendement: 100 mg ( 71 %) Analyse d'acidesaminés: Ala:1,03 ( 1) Tyr:1,92 ( 2) Sta:2,02 ( 2) Spectre de RM EXEMPLE 23: Boc-Pro-Pro-Sta-Ala-Sta O Me (SR 41543) 1 Boc-Pro-Sta-Ala-Sta-O Me Dans 70 ml de dioxane contenant 253 mg de NEM, on ajoute successivement 630 mg de H-Sta-Ala-Sta- O Me, TFA (exemple 1-4) puis 374 mg de Boc-Pro-ON Su et 162 mg de HO Bt Agiter à TA Ajuster le p H à 6-7 par NEI si nécessaire Après 48 heures, évaporer le solvant sous vide, reprendre le résidu dans l'eau Extraire avec le chlorure de méthylène Sécher sur Na 2504, et évaporer le solvant Dissoudre dans le chloroforme et déposer en t 9 te d'une colonne (L: 40 cm:2 cm) de gel de silice 60 Merck ( 70-230 mesh)dans le chloroforme Eluer silice 60 Merck ( 70-230 mesh)-dans le chloroforme Eluer' aspects intégration attribution 0,70-0,86 m 12 H C(CH 3)2 Sta f CH 3 Ala 1,12-1, 60 m 9 H 5 CH 2-6 CH Sta CH 2 6 CH St 1,95-2,37 ' m 4 H 2 CH Sta 2,48-2, 94 m 4 H 3 CH 2 Tyr 3,50 S CH 3 ester 3,70-3,89 m 4 di 4 CH-3 CH Sta 4,004,48 m 3 H CH Tyr, Ala ( 2 x OH Sta 4,75-4,96 m 4 H CH 2 z 6,51-6,63 2 d 4 H ' 5 'CH Tyr 2 ' 6 'H Ty 6,90-7,07 2 d 4 H 6 CH Tyr 7,14-7,50 m faromat Z -3 x NH 7,81 d 1 H NH 8,o 00 d 1 H NH 9,06 s 4 'OH Tyr 9,10 s avec: ml de chloroforme 300 ml de méthanol-chloroforme 1/99 ml de méthanol-chloroforme 2/98 100 ml de méthanol-chloroforme 3/97 ml de méthanol-chloroforme 4/96 ml de méthanol-chloroforme 5/95. Fractionner Evaporer les fractions pures Reprendre le résidu dans l'hexane Essorer le solide Sécher. Rendement: 530 mg ( 85 %). 2 H-Pro-Sta-Ala-Sta-O Me 500 mg de Boc-Pro-Sta-Ala-Sta-O Me sont recouverts de 8 ml de TFA Après 30 minutes à TA, évaporer le solvant, reprendre le résidu dans l'éther, triturer, ajouter de l'hexane, essorer Sécher. Rendement: 510 mg ( 100 %). 3-Boc-Pro-Pro-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41543) mg de H-Pro-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA sont recouverts de 35 ml de dioxane contenant 48 mg de NEM. Ajouter 69 mg de Boc-Pro-ON Su et 30 mg de HO Bt Agiter à TA Ajuster le p H à 6-7 par NE Msi nécessaire Après 48 heures, évaporer le solvant sous vide, reprendre le résidu dans l'eau et extraire au chlorure de méthylène. Sécher la phase organique sur Na 2 SO 4 et évaporer à sec. Dissoudre le résidu dans le chloroforme et déposer en tête de colonne (L: 40 cm: 2 cm) de gel de silice 60 Merck R ( 70-230 mesh) dans le' chloroforme Eluer avec: ml de chloroforme 200 ml de méthanol-chloroforme 1/99 ml de méthanol-chloroforme 2/98 ml de méthanol-chloroforme 3/97 300 ml de méthanol-chloroforme 5/95 Fractionner et évaporer les fractions pures, reprendre dans l'éther, évaporer l'éther à sec. Rendement: 30 mg Analyse d'acides aminés: Ala Pro Sta Spectre de RM : 1 ( 1) : 1,54 ( 2) : 2,12 ( 2) À iaspects I gration attribution o,69-o,85 m 12 ki 6 C(CH 3)2 Sta CH 3 Ala CH 2-6 CH Sta 1,09-2,35 m 30 i (CH) C Boc et y CH Pro 2 t 2 CH 2 Sta. 3,18-3,65 m {CH:o Pr O CH 3 ester 3,65-3,89 m 4 d 4 CH-3 CH Sta 4,08-4,21 m 1 h 2 CH Ala 4,29-4,40 m 2 i 2 CH Pro 4,72 d 1 i -OH Sta 4,86 d 1 Hi OH Sta 7,30 2 d 2 H 2 x NH) 7,86 d 1 H NH) Sta, Ala EXEMPLE 24: Adoc-Phe-Trp-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41581) 143 mg de H-Trp-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA (exemple 5) sont recouverts de 30 ml de dioxane contenant 49 mg de NEN Ajouter 97 mg de Adoc Phe-ON Su et 30 mg de HO Bt Ajuster le p H à 6-7 par NEM,si nécessaire et agiter à TA Après 48 heures, évaporer le solvant, reprendre le résidu dans leau, triturer et essorer le solide Dissoudre le produit dans le chloroforme et déposer en t 8 te d'une colonne (L: 60 cm: 2 cm) de gel R * de silice 60 Merck ( 70-230 mesh) dans le chloroforme. Eluer avec: 253195 1 ml de chloroforme ml de méthanol-chloroforme 1/99 ml de méthanolchloroforme 3/97 ml de méthanol-chloroforme 5/95 Evaporer les fractions pures, reprendre dans l'éther, essorer, sécher. Rendement: 120 mg ( 65 %). Analyse d'acides aminés: Ala: 0,95 ( 1) Trp: 0,75 ( 1) Phe: 0,99 ( 1) Sta: 2,05 ( 2) Spectre de RMN. à_ aspects intégration attribution 0,70-0,85 m 12 6 b C-(CH 3)2Sta CH Ala CH 2CH Sta 1,14-2,42 m 28 Hl CH et CH Adoc 1,14-2,42 m 28 fi - CH 2 Sta 2,50-3,20 m CH 2 Phe, Trp 3,50 S CH ester 4 33 3,73-3,92 m 4 H 4 CH-3 CH Sta 3,95-4,61 m 3 H 2 CH Phe,Trp,Ale 4,61 d 4,61 d _ OH Sta 4,96 d 6,83-7,31 m 10 Hil aromatiques 7,41 d 1 H NH 7,46 d i 1 l Nil 7,57 d 1 H NH 7,81 d 1 H NH 7,94 d 1 H NH ,64 S 1 Hi NH indole EXEMPLE 25: - Z -_ Phe-Pro-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41603) mg de H-Pro-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA (exemple 23-2) sont recouverts de 20 ml de dioxane conte- nant 59 mg de NEM, puis ajouter 110 mg de Z-Phe-ON Su et 37 mg de HO Bt. Ajuster le p H à 6-7 par NEM,si nécessaire et agiter 48 heures à TA Après 48 heures, évaporer le solvant,. reprendre le résidu dans l'eau et extraire au chlorure de méthylène Sécher sur Na 2504, évaporer le solvant, puis dissoudre dans le chloroforme et déposer en tête d'une colonne (L = 60 cm: 2 cm) de gel de R silice 60 Merck ( 70-230 mesh) dans le chloroforme. Eluer avec ml de chloroforme ml de méthanol-chloroforme 1/99 ml de méthanol-chloroforme 3/97 300 ml de méthanol-chloroforme 5/95 Evaporer les fractions contenant le produit. Rendement: 100 mg ( 54 %) Spectre de RMN. aspects intégration attribution 0,66-0,85 m 12 H C) Sta 3)2 Sta CH 3 Ala 1,09-2,35 m 17 H SCH 2-6 CH Sta Jgetr CH 2 'Pro 2 CH 2 Sta 2,50-3,02 m 2 H CH 2 Phe 3,20-3,65 m (CH 2 Pro CH 3 ester 3,66-3,86 m 4 H e CH-3 CH Sta 4,06-4,42 m 3 H 2 CH Phe,Pro,Ala 4,72-4,93 m 4 H 2 H Sta t 2 O CH 2Z' aromatiques m 2 x NH 7,09-7,44 m 12 H x N 7,63 d 1 H NH 7,88 d 1 H N Hl EXEMPLE 26: Boc-(D) Trp-Trp-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41604) mg de H-Trp-Sta-Ala-Sta-O Me, TFA (exemple 5-) sont recouverts de 10 ml de dioxane contenant 41 mg de NEM Ajouter 85 mg de Boc-(D) Trp-O Np et 27 mg de HO Bt Ajuster A p H 6-7 par NEM,si nécessaire et agiter 48 heures à TA Evaporer le solvant, ajouter de l'eau, extraire au chlorure de méthylène, sécher celui-ci sur Na 2 SO 4 et évaporer: dissoudre le résidu dans le chloro- forme et déposer en t 9 te d'une colonne (L = 60 cm - : 2 cm) de gel de silice 60 Merck R ( 70-230 mesh) dans le chloroforme. Eluer avec: ml de chloroforme 200 ml de méthanol-chloroforme 1/99 ml de méthanol-chloroforme 2/98 ml de méthanol-chloroforme 3/97 mi de méthanolchloroforme 4/96 300-ml de méthanol-chloroformé 5/95. Fractionner Evaporer les fractions contenant le produit, reprendre dans l'éther Essorer, sécher. Rendement: 60 mg ( 42 %) Analyse d'acides aminés: Ala: 0,99 ( 1) Trp: 1, 97 ( 2) Sta: 2,04 ( 2) 253195 1 J d T aspectsj intégration attribution 0,72-0,92 1,12-1,60 2,00-2,38 2,50-3,15 3,50 3,73-3,91 4,08-4,59 4,72 4,93 6,54 6,80-7,47 7,57 7,84 8,08 ,66 12 H 18 H 4 H 4 H 3 H 2 H 1 H 11 H 1 H 1 H 1 H 2 H 0 C-(CH 3)2 / CH CH 2 CH (CH 3) 3 C 2 CH 3 2 CH 2 CH 3 e, CH CH 2 CH 2 x 2 CH 2 x OH Sta Ala - Sta Boc Sta Trp ster Sta Ala Trp Sta NH aromatiques 1 l NH NH NH - NH 2 x NH indole EXEMPLE 27: Boc-Trp-His-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41619) 1 Boc-His-Sta-OH 2,63 g de Boc-His(Boc)-Sta-O Me (exemple 8-1) sont solubilisés dans 200 ml de DMF contenant 40 ml d'eau. La température étant à 25 , ajouter 3,15 g de baryte finement pulvérisée Agiter et ajouter progressivement ml d'eau froide pour éviter une élévation de tempé- rature Après i heure 30 à TA, faire barboter du gaz carbonique, puis filtrer et évaporer les solvants sous haut vide au bain-marie à 40 Dissoudre le résidu dans le méthanol,filtrer, concentrer et verser sur de l'éther, nous avons obtenu un gel qui est essoré avec difficulté. Sécher. m m m m s m m d 3 d d m d d d s Rendement: 1,23 g ( 60 %) 2 BocIlis-Sta-A-la-Sta-O Me 360 mg de Boc-Ala-Sta-O Me (exemple 1-) sont recouverts de 3 ml de TFA Après 30 min à TA évaporer le solvant et dissoudre l'huile résiduelle dans le DMF; ajouter DIPEA jusqu'aà obtention de p H 7-8 au papier p H, puis ajouter 412 mg de Boc-His-Sta-OH et 672 mg de BOP Ajuster le p H à 6-7 par DIPEA,si nécessaire et agiter 48 heures à TA Evaporer le sol- vant sous haut vide au bain-marie à 400 C Reprendre le résidu dans du chloroforme et déposer en tête d'une colonne (L = 40 cm ": 2 cm) de gel de silice Merck R ( 70-230 mesh) dans le chloroforme et éluer avec: 200 ml de chloroforme ml de méthanol-chloroforme 1/99 ml de méthanol- chloroforme 2/98 ml de méthanol-chloroforme 3/97 ml de méthanol- chloroforme 4/96 400 ml de méthanol-chloroforme 5/95 400 ml de méthanol- chloroforme 6/94 ml de méthanoi-chloroforme 10/90 et fractionner. Evaporer les fractions contenant le produit, reprendre par l'éther, triturer et essorer le solide Sécher. Rendement: 350 mg ( 53 %) 3 H-His-Sta-Ala-Sta-O Me, 2 TFA 220 mg de BocHis-Sta-Ala-Sta-O Me sont recouverts de 3 ml de TFA Après 30 min à TA, évaporer le solvant, reprendre le résidu dans l'éther, essorer le solide et sécher aussit 8 t sur P 205. Rendement 235 mg ( 91 %) 4 Boc-Trp-His-Sta-Ala-Sta-O Me (SR 41619) 235 mg de H-His-Sta-Ala-Sta-O Me, 2 TFA sont recouverts de 30 ml de dioxane contenant 68 mng de NEM. Ajouter 170 mg de Boo-Trp-O Np et 54 mg de HO Bt Ajuster le p H à 6-7 par NEM et agiter 48 heures à TA Evaporer le solvant sous vide, reprendre le r 6 sidu dans l'eau, extraire au chlorure de méthylène et laver la phase organique avec de l'eau, puis Na HC 03 5 % et à l'eau - Séchersur Na 2 SO 4 Evaporer le solvant Dissoudre dans le chloroforme et disposer en tête d'une colonne (L = 60 cm R p: 2 cm) de gel de silice 60 Merck ( 60 230 mesh) dans le chloroforme. Eluer avec: ml de chloroforme ml de méthanol-chloroforme 1/99 ml de méthanol-chloroforme 2/98 ml de méthanol-chloroforme 3/97 300 ml de méthanol-chloroforme 4/96 500 ml de méthanol-chloroforme 5/95 300 ml de méthanol-chloroforme 10/90 Fractionner Evaporer les fractions contenant le produit, reprendre dans l'éther, essorer, sécher. Rendement: 75 mg ( 32 %) Analyse d'acides aminés: Ala:0,89 ( 1) His:0,80 ( 1) Trp:0,77 ( 1) Sta:2,31 ( 2) Spectre de RWI diés en ce qui Les produits selon l'invention ont été étu- concerne leurs propriétésthérapeutiques et notamment leur action inhibitriceenzymatique. Plus particulièrement les composés ont été évalués "'in vitro", d'une part sur l'inhibition de l'activité Rénine Plasmatique Humaine et d'autre part sur l'inhi- bition de la Pepsine de Porc. I METHODES 1 INHIBITION DE L'ACTIVITE RENINE PLASMATIQUE HUMAINE (A R P) Notre méthode est inspirée de GUYENE (J. Clin Endocri Metab 43, p 1301, 1976) dans la mesure o l'inhibition de i'A R P est évaluée à partir d'un pool de plasmas humains, riche en rénine ( 15 à 20 ng d'angio- tensine I libérée par millilitre et par heure) incubé à 37 C en présence de concentrations croissantes du produit à étudier. aspects intégration attribution 0,50-1,57 m 30 H ( C(CH 3)2 Sta CH 3 Ala (CH 3) C Bo C Boc SCH 2-6 CH Sa CH Sta 1,96-2,38 4 H 2 CH 2 $ta 2,70-3,16 m 4 H 3 CH 2 Trp,His 3,50 S 3 H CH 3 ester 3,67-3,88 m 4 H 4 CH-3 CH Sta 4,05-4,57 m 3 H 2 CH Trp,His,Ala 4,82-5,00 m 2 H OH Sta aromatique-Trp Hls 6,72-7,59 m 10 H ( x i 3.x NH' 7,95-8,20 m 2 H 2 x NH ,74 S 1 H NH indole L'angiotensine I libérée au cours de la réaction (les plasmas humains contiennent et le substrat: l'angio- tensinogene, et l'enzyme: la rénine)-est mesurée par dosage radio-immunologique à l'aide d'un kit. Bien entendu, un inhibiteur de l'enzyme de conversion du Pi SF (phénylméthylsulfonyl)fluorure est rajouté au milieu d'incubation. Deux typesd'expériencesont été effectués: -l'une à p H 6 qui est le p H optimal de la réaction enzymatique avec la rénine humaine (tampon maléate, incubation 30 min), -l'autre à p H 7,4 qui est le p H physio- logique (tampon phosphate, incubation min). Les résultats sont exprimés par la dose de composé évaluée en moles qui inhibe de 500/o (IC 50) l'Activité Rénine Plas- matique Humaine présente en l'absence d'inhibiteur. 2 INHIBITION DE LA PEPSINE DE PORC La méthode utilisée est celle de TAKAAKI AOYAGI (J Antibiotics, 24, p 687694, 1971) Le substrat utilisé est de l'hémoglobine bovine, l'enzyme est de la pepsine de porc. L'hémoglobine à 0,5 % est hydrolysée par la pepsine (lmcg/ml) à 37 'C dans du tampon K Cl-H Cl 0,02 M à p H 2. Une pré-incubation de 3 min a lieu, suivie d'une incubation de 25 min Après précipitation des pro- téines à l'acide perchlorique 1,7 M, on détermine la densité optique du surnageant au spectrophotomètre à 280 nm. Les résultats sont exprimés en pour- centage d'inhibition de la densité optique maximale obtenue en absence d'inhibiteur Ils sont égalementexprimés par une IC 50. 3 SOLVANISDES PEPTIDES UTILISES POUR LES DEUX METHODES. Une solution-mère du peptide à 10-3 M est effectuée dans un mélange contenant volume à volume une solution A ( 19 ml méthanol + 1 ml acide acétique) et mune solution B ( 4 ml méthanol + 2 ml soude). Les dilutions ultérieures du peptide sont alors effectuées dans le tampon adéquat selon les protocoles décrits ci-dessus. La quantité de solvant présente dans une solution du peptide à une concentration inférieure à 10-4 M n'interfère pas avec les résultats. II RESULTATS Les résultats obtenus avec divers pro- duits de l'invention sont représentés dans le Tableau suivant, o figurent les IC 50 de chaque molécule en ce qui concerne leur inhibition de l'activité rénine plas- matique humaine, et leur inhibition de la pepsine. De 5 à 10 doses ont été nécessaires pour déterminer ces IC 50 La pepstatine, en tant que substance de réfé- rence, est toujours testée en parallèle dans chaque expérience. No#CODE INHIBITION A n P 4 HUMAINE INHIBITION PEPSINE PO Rt CINE ( 1 c 50)u ( 1 C 50) p HG 6 11-7, 4 p'1 i 2 6 68 PEPSTATINE 1,2 à 1,6 x 10 M 1,2 à 1,4 x 10-5 M 1,5 à 2,8 x 107 M SR 41225 7 x 118 M 10 6 M 9 x 1 o-M SR 4132 È 1, 7 x 1 l& 8 M 35 x 10-6 M 3 x 10-8 M SR 41331 3,5 x lÈ 9 ' 07 M 1,8 SR 41376 1,7 10 -8 M 1,5 x 10 7 M 1,2 x 10-7 m SR 41377 3 x MO 7 ô 5 SR 41395 1,8 xl O-M 2,7 x 1 iôM 1,3 xl Of 6 M SR 41405 10-8 1,8 x lcf 7 M 6, 5 x i&-8 M s R 41416 8 x I 8 m 1,4 x 1-0 f M 6,5 c 1 I 8 M SR 41476 1,7 x 1-722 x 06 24 x 1 OM -8 -6 1 8 SR 41477 3,5 x 10M 10 M 3,8 x 10 o M SR 41485 6,75 x 1079 M 1,5 x 107 M 2, 9 x 10 o:8 M SR 41491, x l 4 x 10-M 212 x 1-8 SR 41492 4 x 10 & 9 M 4,5 x 1 &i 8 M 5,5 'x 10-7 SR? 41518 9,5,x îo-7 m 4,8 x 10-7 M Ả.R P =, Activité Rénine Plasmatique Z Ie SO = Dose inhibitrice de'50 P/o de l'effet servant de r 6 f 6 rence. N w. %O Un Les composés de la présente invention ont une action inhibitrice sur l'activité rénine plas- matique humaine très importante et de façon générale nettement supérieure à celle du produit naturel la pepstatine, à ce titre ils peuvent être utilisés dans le traitement de l'hypertension artérielle. Ils possèdent également une action inhi- bitrice marquée sur la pepsine On peut donc envisager l'utilisation des produits selon l'invention en théra- peutique humaine en particulier pour le traitement des maladies digestives telles que les ulcères pour lesquelles l'inhibition de la sécrétion de pepsine est bénéfique. Les peptides de la présente invention peuvent être utilisés en thérapeutique par voie injectable: intraveineuse, intramusculaire ou souscutanée Ils sont utilisés dans un solvant tel que le sérum physiologique (solution saline isotonique) ou dans un tampon tel que le tampon phosphate. La quantité de principe actif à utiliser varie suivant les effets thérapeutiques recherchés, la gravité de l'affection à traiter et la voie d'administra- tion choisie Elle doit être déterminée pour chaque patient et est le plus souvent comprise entre 1 et 100 mg de principe actif. REVENDICATIONS 1 Dérivés peptidiques de formule générale: R X Y Statyl-Ala-Statyl-OR' (I) dans laquelle: Statyl est le radical dérivant de 11 amino-acide statine àsavoir -NH CH CHOH CH 2 CH 2 CH isomère ( 35, 45) CH 3 CH 3 R est H ou un groupe acylant ou N protecteur fixé sur le radical amino terminal de l'amino-acide X. R' est H ou alkyl inférieur. et X et Y, identiques ou différents,sont des acides aminés choisis parmi la valine, la leucine, l'isoleucine, la phénylalanine, la tyrosine, la tryptophane, l'histidine et la proline, avec la condition que X et Y ne peuvent désigner, simul- tanément, la valine. 2 Procédé de préparation des produits de formule (I), caractérise en ce que l'on utilise comme produit de départ un ester d'alkyl inférieur de la statine à partir duquel on couple, étape par étape, les divers acides aminés convenablement protégés Le produit obtenu à chaque étape étant déprotégé, selon des procédés connus, avant d'être soumis à un nouveau couplage. 3 Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que chacune des opérations de couplage est effectuée en utilisant/soit un ester activé de l'amino-acide à coupler soit l'amino-acide N protégé en présence de di- cyclohexyl-carbodiimide. 4 Procédé selon l'une des revendications 2 et 3, caractérisé en ce que la déprotection du produit obtenu est effectuée par hydrogénolyse ou par hydrolyse en milieu acide fort. 253195 1 Procédé selon l'une des revendications 2 à 4, caractérisé en ce qu'en fin de réaction la fonction ester d'alkyl inférieur de la statine est saponifiée en mi- lieu alcalin,de façon à obtenir les produits de formule (I) dans lesquels R' est H. 6 Médicaments caractérisés en ce qu'ils contiennent un produit de formule (I). 7 Médicaments selon la revendication 6, utilisables notamment pour le traitement de la tension artérielle et de maladies digestives, caractérisés en ce qu'ils contiennent de 1 à 100 mg de produit de formule (I).