FR 2523135 A1 19830916 FR 8303834 A 19830309 -1 2523135 La présente invention se rapporte à la 3 "-déoxystreptomycine qui est un nouveau composé et qui est utilisable comme agent antibactérien. L'invention se rapporte également à un procédé de fabrication de la 3 "- déoxystreptomycine. La streptomycine constitue un antibiotique bien connu qui a été découvert par Waskman La streptomycine, et le dihydrostreptomycine qui est obtenue par réduction du groupe aldéhyde de la streptomycine sont largement utilisées en médecintdans le traitement thérapeutique d'infections bacté- riennes Cependant, à mesure que la streptomycine et la dihydrostrepto- mycine ont été de plus en plus largement utilisées, il s'est produit des réactions de bactéries résistant à ces antibiotiques et, de ce fait, les effets thérapeutiques de la streptomycine et de la dihydrostreptomycine ont été considérablement réduits L'apparition de telles bactéries résis- tantes est généralement observée non seulement avec les antibiotiques du type streptomycine mais, également, avec d'autres antibiotiques tels que kanamycines, lividomycines et similaires Ces faits historiques sont dé- taillés dans les remarques générales citées par Hamao Umezawa qui est un des présents inventeurs et qui a été le premier à découvrir le mécanisme de résistance des bactéries à des antibiotiques amino-glycosidiques (H. Umezawa; "Advances in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry" Vol 30. page 183, Academic Press 1974) Avec la streptomycine, on a constaté que le groupe hydroxyle placé dans la position 3 " de la molécule de strepto- mycine peut être adénylé par des bactéries résistantes capables de produire de l'adényltransférase de streptomycine et il se forme ainsi de la 3 "-0- adénylstreptomycine, avec pour conséquence que les streptomycines peuvent être rendues inactives en ce qui concerne leurs effets antibactériens (Umezawa et al; "Journal of Antibiotics", Vol 21, page 81 ( 1968)) Dans ces circonstances, les présents inventeurs ont entrepris une étude en vue de tenter d'enlever le groupe 3 "-hydroxyle de la molécule de streptomycine et d'éliminer ainsi la possibilité d'inactivation de la streptomycine qui se produirait du fait d'une adénylation du groupe 3 "-hydroxy de la strep- tomycine, de façon à obtenir un nouveau dérivé de streptomycine qui soit également actif contre des bactéries résistant à la streptomycine Cette étude a abouti à la synthèse de la 3 "-déoxydihydrostreptomycine à partir de streptomycine, et on a trouvé que cette 3 "-déoxydihydrostreptomycine était active contre des bactéries résistantes (cf la demande de brevet japonais prépubliée "Kolçai" sous le n 105154/77; et "Journal of Antibiotics" Vol 29, 978 ( 1976)). -2- 2523 1 35 On a maintenant réussi à produire synthétiquement de la 3 "- déoxystreptomycine à partir de la 3 "-déoxydihydrostreptomycine, et on a découvert que le nouveau composé, 3 "-déoxystreptomycine, était également actif contre une diversité de bactéries résistant à la streptomycine. Conformément à un premier aspect de l'invention, celle-ci concer- ne un nouveau composé, la 3 "-déoxystreptomycine représenté par la formule: NH NHC=NH NH 1 HNHC=NH / HO - 0 OH 1 ' c HO O H HC OH j ON H O /CH 2 H 3 C c HO 3 " ou un sel d'addition acide pharmaceutiquement acceptable de ce composé. Le sel d'addition acide pharmaceutiquement acceptable du nouveau composé de la formule (I) ci-dessus, comprend un sel de 3 "-déoxystreptomycine avec un acide ordinaire non-toxique tel qu'un acide minéral, comme par exem- ple l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique, l'acide carbonique et similaires, ou un acide organique, comme par exemple, l'acide acétique, l'acide citrique et similaires. Le chlorhydrate de 3 "-déoxystreptomycine conforme à l'invention se présente sous la forme d'une substance solide incolore qui a un pouvoir ro- tatoire spécifique 25 -2 taoire sp-cifique / /25 -729 (c=l, eau) mais qui ne possède pas un point de fusion défini. - 3- 252313 5 L'activité antibactérienne de la 3 "-déoxystreptomycine conforme à l'invention est mise en évidence dans le Tableau 1 ci-dessous, qui donne les concentrations minimales inhibitrices (mcg/ml) de la 3 "déoxystreptomycine en fonction de différentes bactéries, conformément à une estimation faite avec une méthode standard de dilution en série en utilisant un milieu nu- tritif d'agar comme milieu d'incubation, l'incubation étant faite à 37 C pendant 17 heures Les concentrations minimales inhibitrices (mcg/ml) de la streptomycine et de la 3 "-déoxydihydrostreptomycine comme produits de com- paraison ont été également estimées de la même manière que ci-dessus et elles sont indiquées dans le Tableau 1 ci-dessous. TABLEAU 1 organisme soumis à Essai Staphylococcus aureus 209 P Sarcia lutea 1001 Bacillus subtilis NRRL B 558 Salmonella typhi T-63 Escherichia coli K-12 "ML 1629 "ML 1630 W W 677 "JR 66/W 677 C 600 R 135 Pseudomonas aeruginosa A 3 il il No 12 Mycobacterium smegmatis 607 Concentration 3 "-déoxy- streptomycine 3,12 1,56 1,56 0,78 1,56 1,56 3,12 1,56 12,5 3,12 6,25 0,78 Minimale d'Inhibition Streptomycine (comparatif) 3,12 1,56 0,78 1,56 > 100 1,56 > 100 6,25 1,56 (meg/mî) 3 '-déoxydihydro- streptomycine (comparatif) 3,12 3, 12 1,56 3,12 1,56 3,12 1, 56 1,56 12, 5 3,12 12,5 0,78 J Ln -5 2523135 La 3 "-déoxystreptomycine conforme à l'invention peut être produite à partir de 3 "-déoxydihydrostreptomycine par oxydation du groupe hydroxymé- thyle -CH 2 OR de la position 3 ' de la molécule de 3 "déoxydihydrostreptomycine en groupe aldéhyde -CHO avec introduction de certains groupes aminoprotec- teurs et certains groupes hydroxy-protecteurs, puis élimination de ces groupes protecteurs Un procédé de fabrication de 3 "-déoxystreptomycine à partir de 3 "-déoxydihydrostreptomycine est décrit dans la suite. La 3 "-déoxydihydrostreptomycine qui est utilisée comme substance de départ est un composé représenté par la formule: NH t N Ii îH -C-NH 2 OH o I OH OH O HOC 3 O(II) Ji H 33 a OH OH HO HO 3 " 2 " CH 3 comme décrit dans la demande de brevet japonais prépubliée "Kokai" n 105154/77 Pour effectuer la synthèse de la 3 "-déoxystreptomycine conforme à l'invention à partir de la substance de départ mentionnée ci- dessus, on assure en premier une protection sélective du groupe 2 "- méthylamino de la 3 "-déoxydihydrostreptomycine à l'aide d'un groupe amino-protecteur connu tel qu'un groupe aralkyloxycarbonyle Dans ce but, on peut de préférence faire réagir le composé de départ de formule (II) dans une proportion équi- molaire ou sensiblement équimolaire avec le chlorure de benzyloxycarbonyle dans un mélange d'eau et d'acétone à une température de -20 à 50 C, de pré- férence à O C en présence d'une base, de préférence un carbonate de métal alcalin tel que du carbonate de sodium, pour produire de la 2 "-Nbenzyloxy- carbonyl-3 "-déoxydihydrostreptomycine de formule: -6- 2523 1 35 (III) CH 3 NH o G désigne un groupe guanidyle -NH-l-NH 2, et Z un groupe benzyloxycarbonyle -C 02 CH 2 C 6 H 5. En second lieu, on protège deux groupes 3 ' et 3 'a-hydroxyle du composé de formule (III) par un groupe hydroxy-protecteur connu tel qu'un groupe alkylidène Dans ce but, on peut de préférence faire réagir le com- posé de formule (III) avec un léger excès, par rapport à la proportion équi- molaire, de 2,2-diméthoxypropane dans de la diméthylformamide anhydre (DMF) en présence d'un catalyseur de réaction tel que de l'acide p-toluènesulfo- nique, de manière qu'une paire des deux groupes 3 ' et 3 'a-hydroxyle du composé (III) soit protégée simultanément par un seul groupe isopropylidène, ce qui permet d'obtenir la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxy-3 ',3 'a-O- isopropylidènedihydrostreptomycine de formule: -7- G G O OH O 0 oml (IV) HO CH 3 O HO O CH 3 HO z o G et Z ont les définitions données ci-dessus. Ensuite, tous les groupes hydroxyle libres restants du composé de formule (IV) sont protégés par un groupe hydroxy-protecteur connu tel qu'un groupe alkanoyle Dans ce but, tous ces groupes hydroxyle restants peuvent de préférence être bloqués par des groupes acétyle Le réactif d'acétylation utilisable dans ce but peut être de l'anhydride acétique qui est utilisé en présence d'acide p-toluènesulfonique comme catalyseur de réaction En consé- quence, lorsqu'on fait réagir le composé de la formule (IV) avec un léger excès par rapport à la proportion de 5 moles d'anhydride acétique en pré- sence d'acide p-toluènesulfonique, on obtient la 2,5,6,4 ",6 "-penta-0acétyl- 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxy-3 ',3 'a-0-isopropylidènedihydrostreptomycine de formule: 2523 13 5 G A Co c -0 O Ac 3 a CH (y) 3 c O; C CH 3 ACO o J -\ Ac/ z o G et Z ont la même signification que ci-dessus, tandis que Ac désigne un groupe acétyle. En outre, le composé 3 "-déoxydihydrostreptomycine à protection-N,O de formule (V) est traité de manière à éliminer le groupe isopropylidène et à libérer les groupes hydroxyle libres dans les positions 3 ' et 3 'a du com- posé (V) Dans ce but, on peut utiliser un procédé classique pour éliminer le groupe isopropylidène et par exemple le composé (V) à protection-N,O peut être hydrolysé dans une solution aqueuse d'acide acétique On obtient alors la 2,5,6,4 ",6 "-penta-O-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "déoxydihydrostrepto- mycine de formule: Ft 2523 135 OAC (VI) o O CH 3 Ac O z o G, Z et Ac ont les mêmes significations que ci-dessus Ensuite, le composé de formule (VI) est traité de manière à oxyder le groupe 3 '-hydroxyméthyle -CH 2 OH (groupe méthylol) pour former le groupe aldéhyde -CHO Dans ce but, on peut de préférence faire réagir le composé de formule (VI) avec du diméthylsulfoxyde comme réactif d'oxydation en présence de pyridine et d'acide trifluoroacétique ainsi que de dicyclohexyl- carbodiimide, pour obtenir ainsi la 2,5,6,4 ",6 "-penta-O-acétyl-2 "-Nbenzyloxy- carbonyl-3 "-déoxystreptomycine de formule: -9- -10 2523135 G G Ac O Ac O O Ac O H C (VII) H 3 OH O Ac H O Ac O z o Z et Ac ont les significations données ci-dessus. Enfin, le dérivé 3 "-déoxystreptomycine à protection-N,O de formule (VII) est soumis à des traitements connus pour éliminer les groupes acétyle hydroxy-protecteurs et pour éliminer le groupe benzyloxycarbonyle amino- protecteur Pour éliminer les groupes acétyle du composé aldéhyde de formule (VII), ce composé aldéhyde (VII) peut être avantageusement hydrolysé en le faisant réagir dans du méthanol avec l'ammoniac aqueux concentré et il se produit alors de la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "déoxystreptomycine Ce dernier composé est ensuite traité de manière à éliminer le groupe benzyloxyearbonyle amino-protecteur qui reste encore dans le groupe 2 "-amino dudit composé, et on obtient alors la 3 "déoxystreptomycine de formule (I) comme désiré Pour l'élimination du groupe benzyloxycarbonyle, on peut appliquer avantageuse- ment un procédé classique d'hydrogénolyse catalytique à la 2 "-Nbenzyloxy- carbonyl-3 "-déoxystreptomycine de manière que ce dernier composé soit soumis à une hydrogénolyse avec de l'hydrogène gazeux à la température ambiante en présence de noir de palladium qui est un catalyseur d'hydrogénolyse connu. -11- 2523 135 Dans la description donnée ci-dessus, le procédé de fabrication du composé (I) selon l'invention est décrit en référence à un cas o le groupe benzyloxycarbonyle, le groupe isopropylidène et le groupe acétyle sont choisis en particulier comme groupes de protection Cependant, il est évident que la protection-N,O nécessaire peut être assurée en utilisant un groupe amino-protecteur connu qui soit équivalent au groupe benzyloxy- carbonyle, ainsi que des groupes hydroxy-protecteurs connus qui sont équi- valents respectivement au groupe isopropylidène et au groupe acétyle. Conformément à un second aspect de l'invention, il est par consé- quent prévu un procédé de fabrication de 3 "-déoxystreptomycine, qui comprend les étapes consécutives consistant à: (a) faire réagir la 3 "déoxydihydrostreptomycine avec une mole, ou une proportion sensiblement équimolaire, de chlorure de benzyloxycarbo- nyle dans un mélange d'eau et d'acétone à une température de -20 C à 50 C en présence d'un carbonate de métal alcalin pour produire de la 2 "-Nbenzyl- oxycarbonyl-3 "-déoxydihydrostreptomycine, (b) faire réagir la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxydihydrostrepto- mycine avec du 2,2-diméthoxypropane pour produire la 2 "-Nbenzyloxycarbonyl- 3 "-déoxy-3 ',3 'a-0-isopropylidène-dihydrostreptomycine, (c) faire réagir la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxy-3 ',3 'a-0- isopropylidène-dihydrostreptomycine avec de l'anhydride acétique pour pro- duire la 2,5,6,4 ",6 "-penta-0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxy-3 ',3 'a- 0-isopropylidène-dihydrostreptomycine, (d) hydrolyser le composé obtenu dans l'étape (c) pour éliminer de celui-ci le groupe isopropylidène et pour produire la 2,5,6,4 ",6 "penta- 0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxydihydrostreptomycine, (e) oxyder le groupe hydroxyméthyle dans la position 3 ' du composé obtenu dans l'étape (d) ci-dessus en groupe aldéhyde de manière à produire la 2, 5,6,4 ",6 "-penta-0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxystreptomycine, et (f) éliminer les groupes acétyle et le groupe benzyloxycarbonyle du composé produit dans l'étape (e) précitée d'une manière connue pour éliminer le groupe hydroxy-protecteur et le groupe amino-protecteur afin de produire de la 3 "-déoxystreptomycine. Dans le procédé conforme à l'invention qui a été décrit ci-dessus, il est inattendu que l'étape (a) du procédé en question puisse se dérouler préférentiellement et donner de la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "déoxydihydro- streptomycine d'une manière telle que le groupe 2 "-méthylamino de la 3 "- déoxydihydrostreptomycine de départ puisse être sélectivement benzyloxy- carbonylé sans faire intervenir une benzyloxycarbonylation des groupes guanidyle remplissant une fonction similaire dans le composé de départ. -12 2523135 Dans les étapes (b) et (c) du procédé selon l'invention, on a choisi des groupes hydroxy-protecteurs de natures différentes pour assurer la protec- tion des groupes 3 ' et 3 'a-hydroxyle (à l'aide d'un seul groupe isopropy- lidène) et pour la protection des groupes 2-, 5-, 6-, 4 " et 6 "hydroxyle restants (par des groupes acétyle) et cette sélection judicieuse des groupes de protection-hydroxyle particuliers de natures différentes peut rendre pos- sible l'obtention de la 2,5,6,4 ",6 "-penta-0-acétyl-2 "-Nbenzyloxycarbonyl- 3 "-déoxydihydrostreptomycine dans l'étape d'hydrolyse (d) suivante du pro- cédé selon l'invention et un traitement du produit intermédiaire, partielle- ment déprotégé, de l'étape d'hydrolyse (d) dans les autres étapes (e) et (f) du procédé selon l'invention jusqu'à ce qu'on obtienne la 3 "déoxystrepto- mycine désirée de formule (I) En conséquence, il est clair, que la sélection judicieuse du grbupe amino-protecteur particulier et des groupes hydroxy- protecteurs particuliers ainsi que la combinaison ingénieuse des étapes consécutives du procédé conforme à l'invention permettent d'effectuer la synthèse de la 3 "-déoxystreptomycine à partir de la 3 "déoxydihydrostrepto- mycine conformément au processus selon l'invention. Le nouveau composé conforme à l'invention, à savoir la 3 "-déoxy- streptomycine, a une faible toxicité, comme cela est démontré par le fait que, lors de l'estimation d'une toxicité aig Ue de la 3 "déoxystreptomycine par injection intraveineuse de ce composé à des groupes de souris (souris ICR, femelle adulte, poids corporel 20 g + 0,5 g, six dans chaque groupe), toutes les souris traitées ont survécu pendant plus de 14 jours après l'administra- tion intraveineuse de 3 "-déoxystreptomycine à chaque souris avec une dose de 4 mg/kg (LD 50 > 200 mg/kg). Le nouveau composé conforme à l'invention est efficace pour traiter thérapeutiquement des infections bactériennes lorsqu'il est administré intra- musculairement suivant des doses allant d'environ 100 mg à 1000 mg par jour avec répartition des doses trois ou quatre fois dans une journée Générale- ment, le nouveau composé selon l'invention peut être administré par voie orale, intrapéritonéale, intraveineuse ou intramusculaire, en utilisant toute forme pharmaceutique connue dans le domaine pour une telle adminis- tration et d'une manière semblable à la streptomycine et à la dihydrostrep- tomycine Des exemples de formes pharmaceutiques pour une administration orale, sont constitués par des poudres, des capsules, des tablettes, du sirop et similaires Le nouveau composé selon l'invention peut être uti- lisé sous la forme d'une solution injectable aqueuse. Conformément à un troisième aspect de l'invention, il est par conséquent prévu une composition antibactérienne contenant une quantité efficace de 3 "-déoxystreptomycine comme ingrédient actif, en association -13 2523 135 avec un support pharmaceutiquement acceptable pour l'ingrédient actif. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. EXEMPLE 1 (a) Synthèse du chlorhydrate de 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "déoxydihydrostreptomycine. On adissous du chlorhydrate de 3 "déoxydihydrostreptomycine ( 1,40 g) et du carbonate de sodium anhydre ( 250 mg) dans un mélange de 24 ml d'eau et 12 ml d'acétone et on a ajouté à la solution résultante 0,36 ml de chlorure de benzyloxycarbonyle en refroidissant avec de la glace. On a vigoureusement agité le mélange obtenu à une température de O C pendant 1 heure (pour effectuer la réaction consistant dans l'introduction du groupe benzyloxycarbonyle dans le groupe 2 "-amino de 3 "déoxydihydrostreptomycine). On a mélangé la solution résultante avec 24 ml d'éther éthylique, cette opération étant suivie par une agitation accentuée, et on a laissé le mé- lange se séparer en une phase organique (éther éthylique) et en une phase aqueuse On a enlevé la couche aqueuse et on l'a concentrée à sec tout en réglant le p H de la solution concentrée à environ 7 par addition d'acide chlorhydrique. Le résidu ainsi obtenu a fait l'objet d'une extraction avec en- viron 70 ml d'éthanol chaud et la solution éthanolique résultante a été concentrée à sec Le solide obtenu ( 1,50 g) a été repris dans un petit volume d'eau et on a fait passer la solution aqueuse résultante dans une colonne de 150 ml d'une résine échangeuse d'ions, Dowex 1 x 2 200-400 meshes (forme C-, produit de Dow Chemical Co, U S A), en utilisant de l'eau comme solvant de développement L'éluat provenant de la colonne de résine a été collecté en fractions de 10 ml et les fractions n 15 à 30, qui ont donné un résultat positif pour la réaction avec du diacétyle, ont été combinées ensemble et concentrées à sec pour obtenir 1,24 g du composé précité sous la forme de son di-chlorhydrate Rendement 78 % -a 720 -68 (c=l, H 20). (b) Synthèse de 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxy-3 ',3 'a-O- isopropylidène-dihydrostreptomycine. Le produit précédent (le dichlorhydrate) ( 1,20 g) obtenu à l'étape (a) de cet exemple a été dissous dans 15 ml de DMF (diméthylfor- mamide) anhydre et on lui a ajouté 35 mg d'acide p-toluènesulfonique et 1, 2 ml de 2,2-diméthoxypropane Le mélange ainsi obtenu a été,chauffé à C pendant 3 heures (pour effectuer la réaction consistant dans l'intro- duction du groupe 3 ',3 'a-O-isopropylidène) On a mélangé la solution réac- tionnelle avec 0,4 ml de triéthylamine et on l'a concentrée sous forme d'un sirop qui a été ensuite mélangé avec un volume d'éther éthylique pour -14 2523135 provoquer le dépôt d'un solide Ce solide contenant le produit de mono-O- isopropylidénation et un peu de produit de poly-O-isopropylidénation) a été lavé avec de l'éther éthylique et le solide lavé ( 1,41 g) a été dissous dans 20 ml d'un mélange d'acide acétique et de méthanol ( 1:4 en volume). On a chauffé la solution résultante à 50 C pendant 4 heures (pour assurer la conversion hydrolytique des produits de poly-O- isopropylidénation en produit de mono-O-isopropylidénation, c'est-à-dire en le composé désiré). La solution réactionnelle obtenue a été concentrée sous forme d'un sirop, qu'on a ensuite mélangé avec un volume d'acétone pour faire déposer un solide (produit du titre brut) correspondant au composé désiré. Le solide ainsi obtenu ( 1,14 g) a été ensuite soumis à une chromatographie en colonne sur de la cellulose ( 200 g, disponible sous la marque déposée "Avicel" pour utilisation chromatographique) et élué avec un mélange pyridine-acétate d'éthyle-acide acétique aqueux à 10 % ( 2:2:1 en volume), et l'éluat provenant de la colonne de cellulose a été collecté en fractions de 50 ml Les fractions n 50 à 80 contenant le composé désiré ont été combinées et concentrées jusqu'à siccité On a dissous le solide résultant ( 0,66 g) dans de l'eau et on a fait passer la solution aqueuse obtenue dans une colonne de 200 ml d'une résine échangeuse d'ions Dowex 1 x 2 ( 200-400 mesh, forme C) en utilisant de l'eau comme solvant de développement L'éluat provenant de la colonne de résine a été collecté en fractions de 10 ml et les fractions n 15 à 25 contenant le composé désiré ont été combinées et concentrées à sec pour produire 640 mg de chlorhydrate correspondant au composé désiré Rendement 51 % C-a 70 -70 (c= 1, H 20) / (c) Synthèse de 2,5,6,4 ",6 "-penta-0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl- 3 "-déoxy-3 ',3 'a-O-isopropylidène-dihydrostreptomycine. Le produit (chlorhydrate) ( 840 mg) obtenu à l'étape (b) de cet exemple a été mis en suspension dans 16 ml d'anhydride acétique, auquel on a ensuite ajouté 200 mg d'acide p-toluènesulfonique On a chauffé le mélange obtenu à 50 C pendant 16 heures et, pendant l'échauffement, la solution réactionnelle est devenue homogène lorsque la réaction d'introduction des groupes acétyle s'est effectuée La solution réactionnelle a été mélangée avec 100 mg d'hydrogénocarbonate de sodium et elle a été ensuite concentrée à un petit volume On a mélangé la solution concentrée avec un volume d'hexane pour provoquer le dépôt d'un solide Ce solide a été soigneusement lavé avec un mélange d'éther éthylique et d'hexane ( 1:3) puis on l'a dissous dans un volume de chloroforme La solution résultante dans le chloroforme a été lavée avec du chlorure de sodium aqueux saturé, puis elle a été séchée sur du sulfate de sodium anhydre et elle a été concentrée à sec Le solide -15 2523135 résultant a été incorporé à un mélange d'eau et de méthanol ( 1:4) et on a fait passer la solution obtenue dans une colonne de 50 ml d'une résine échangeuse d'ions, Dowex 1 x 2 ( 200-400 mesh, forme CZ-) en utilisant le même mélange d'eau et de méthanol ( 1:4) comme solvant de développement. L'éluat provenant de la colonne de résine a été collecté en fractions de ml et les fractions n 7 à 12 contenant le composé désiré précité ont été combinées et concentrées à sec On a dissous le résidu solide dans du chloroforme et on l'a fait ensuite reprécipité à partir de la solution de chloroforme par addition d'hexane à cette dernière, en obtenant 910 mg de chlorhydrate du composé désiré Rendement 86 % | a 70 -57 (c=l, -D acétone). (d) Synthèse de la 2,5,6,4 ",6 "-penta-O-acétyl-2 "-N-benzyloxy- carbonyl-3 "-déoxydihydrostreptomycine. Le produit (chlorhydrate) ( 510 mg) obtenu à l'étape (c) de cet exemple a été dissous dans 10 ml d'acide acétique aqueux à 75 % (un mélange de 75 % d'acide acétique et de 25 % d'eau en poids), et on a chauffé la solu- tion résultante à 55 C pendant 4,5 heures (pour effectuer la réaction ser- vant à éliminer le groupe isopropylidène) On a mélangé la solution réac- tionnelle avec un volume de toluène et on a concentré à sec le mélange obtenu en éliminant le toluène par distillation azéotropique Le résidu solide obtenu a été dissous dans un volume de méthanol, puis on l'a fait reprécipiter à partir de la solution méthanolique par addition d'éther * éthylique à celle-ci On a dissous le solide obtenu ( 470 mg) dans un mé- lange d'eau et de méthanol ( 1:3) et on a fait passer la solution résul- tante dans une colonne de 50 ml d'une résine échangeuse d'ions, Dowex 1 x 2 ( 200-400 mesh, forme CA-) en utilisant le mélange d'eau et de mé- thanol ( 1:3) comme solvant de développement L'éluat provenant de la colonne de résine a été collecté en fractions de 10 ml et les fractions n 6 à 10 contenant le composé désiré précité ont été combinées et con- centrées à sec On a dissous le résidu solide dans un volume de méthanol et on l'a fait reprécipiter à partir de la solution méthanolique par ad- dition d'éther éthylique à celle-ci On a séparé le solide reprécipité par filtration et par lavage avec de l'éther éthylique de manière à obtenir 380 mg de chlorhydrate du composé désiré précité Rendement 77 %. Ca 720 -63 (c=l, acétone). -D (e) Synthèse de la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxystreptomycine. Le produit (chlorhydrate) ( 490 mg) obtenu dans l'étape (d) de cet exemple a été dissous dans 2,5 ml de diméthylsulfoxyde anhydre (DMSO) (servant de réactif d'oxydation et servant également de milieu de réaction,) auquel on a ensuite ajouté 0,17 ml de pyridine et 0,08 ml d'acide trifluoro- -16 2523135 acétique On a mélangé la solution obtenue avec une solution de 600 mg de dicyclohexylcarbodiimide dans 3 ml de DMSO anhydre, cette opération étant suivie par une agitation du mélange résultant pendant 2 heures à la température ambiante (pour effectuer la réaction d'oxydation du groupe hydroxyméthyle) Le solide ainsi formé (contenant de la N,N'-dicyclohexyl urée) a été éliminé de la solution réactionnelle par filtration et le fil- trat a été mélangé avec de l'éther éthylique (environ 20 ml) en agitant. Le mélange obtenu a été laissé au repos et il s'est ainsi séparé en une couche supérieure et une couche inférieure La couche inférieure de liquide a été séparée par décantation et elle a été ensuite lavée soigneusement avec de l'éther éthylique par agitation du mélange de ladite couche liquide inférieure et de l'éther éthylique On a laissé ce mélange au repos de manière qu'il se sépare en une phase supérieure et une phase inférieure. La phase liquide inférieure a été concentrée et on a repris le résidu par environ 40 ml de chloroforme, puis on a lavé la solution résultante dans du chloroforme à l'aide de chlorure de sodium aqueux saturé (environ 10 ml) et ensuite on a séparé la phase chloroformique de la phase aqueuse, on l'a séchée sur du sulfate de sodium anhydre et on l'a concentrée à sec pour obtenir un solide de coloration brune On a dissous ce solide ( 485 mg) dans un mélange ( 20 ml) d'ammoniaque aqueux concentré et de méthanol ( 1:14) et on a laissé le mélange résultant au repos pendant 3 heures à la tempé- rature ambiante (pour effectuer la-réaction d'élimination des groupes acé- tyle) On a concentré la solution réactionnelle la sec et on a repris le résidu ( 370 mg) par l'eau ( 2 ml) La solution obtenue a été filtrée pour éliminer les matières insolubles (environ 40 mg, comprenant de la N,N'- dicyclohexyl urée) On a soumis le filtrat à une chromatographie en colonne en opérant sur de la résine Dowex 1 x 2 ( 30 ml, 200-400 meshes, forme Cú) en utilisant de l'eau comme solvant de développement L'éluat provenant de la colonne de résine a été collecté en fractions de 5 ml et les fractions no 4 à 8 contenant le composé désiré précité (qui a donné un seul spot de Rf = 0,6 en chromatographie sur couche mince de cellulose, développée avec un mélange butanol-pyridine-eau-acide acétique ( 6:4:3:1) ) ont été combinées, puis elles ont été neutralisées par addition d'acide chlorhydrique 0,1 N et elles ont été ensuite concentrées à un petit volume La solution concen- trée obtenue a été ajustée à un p H d'environ 4 par addition d'acide chlorhydrique 0,1 N puis on l'a mélangée à un volume d'acétone pour faire déposer un solide Le solide obtenu a été soigneusement lavé avec de l'acétone de manière à obtenir 84 mg de chlorhydrate correspondant au composé désiré. Rendement 21 % /a 7 D -64 (c=l, H 20). -17 2523135 (f) Production de 3 "-déoxystreptomycine. Le produit (chlorhydrate) ( 80 mg) obtenu à l'étape (e) de cet exemple a été dissous dans 2 ml d'eau, et on a ajouté à ce mélange environ 0,1 ml de nickel de Raney (R-100, un produit de Nikko Rika Kagaku Sangyo, Co, Japon) (pour enlever certaines impuretés indésirables) On a soigneu- sement agité et mélangé puis on a filtré pour enlever le nickel de Raney. On a effectué un lavage du nickel de Raney avec de l'eau et on a mélangé le produit aqueux de lavage avec le filtrat La solution aqueuse ainsi obtenue a été ajustée à un p H d'environ 4 par addition d'acide acétique, puis elle a été soumise à une hydrogénolyse catalytique avec de l'hydrogène à une pression de 3 kg/cm 2 pendant 1 heure en présence d'environ 0,3 ml de noir de palladium et en utilisant un appareil Parr pour effectuer la réaction d'élimination du groupe benzyloxycarbonyle On a filtré la solution réac- tionnelle pour éliminer de celle-ci le noir de palladium et on a concentré le filtrat à sec On a dissous le solide obtenu ( 65 mg) dans un petit volu- me d'eau et on a soumis la solution aqueuse résultante à une chromatographie sur colonne de résine Dowex 1 x 2 ( 10 ml, 200-400 meshes, forme C 0-) en utilisant de l'eau comme solvant de développement L'éluat provenant de la colonne de résine a été collecté en fractions de 1 ml et les fractions n 7 à 12 contenant la 3 "-déoxystreptomycine désirée ont été combinées et con- centrées à sec pour produire 53 mg de chlorhydrate du composé désiré. Rendement 75 % lai 7 -72 (c=l, H 2 O). D 2 -18 22523135 REVENDICATIONS 1 La 3 "-déoxystreptomycine représentée par la formule: NH 2 NHC=NH OH (I) O O HO O H CH Oi HO ainsi que ses sels d'addition acides pharmaceutiquement acceptables. 2 Procédé de fabrication de la 3 "-déoxystreptomycine, caracté- risé en ce qu'il comprend les étapes consécutives consistant à: (a) faire réagir la 3 "-déoxydihydrostreptomycine avec une pro- portion sensiblement équimolaire de chlorure de benzyloxycarbonyle dans un mélange d'eau et d'acétone à une température de -20 C à 50 C en présence d'un carbonate de 'métal alcalin pour produire la 2 "-N-benzyloxycarbonyl3 "- déoxydihydrostreptomycine, (b) faire réagir la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxydihydrostrepto- mycine avec du 2,2-diméthoxypropane pour produire la 2 "-Nbenzyloxycarbonyl- 3 "-déoxy-3 ',3 'a-O-isopropylidène-dihydrostreptomycine, -19 2523135 (c) faire réagir la 3 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxy-3 ',3 'a-O- isopropylidène-dihydrostreptomycine avec de l'anhydride acétique pour pro- duire la 2,5,6,4 ",6 "-penta-0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxy-3 ',3 'a- O-isopropylidène -dihydrostreptomycine, (d) hydrolyser le composé obtenu dans l'étape (c) pour éliminer de celui-ci le groupe isopropylidène et produire la 2,5,6,4 ",6 "-penta-O- acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxydihydrostreptomycine, (e) oxyder le groupe hydroxyméthyle en position 3 ' du composé obtenu dans l'étape (d) ci-dessus en groupe aldéhyde de manière à produire la 2,5,6,4 ",6 "penta-0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxystreptomycine, et (f) éliminer les groupes acétyle et le groupe benzyloxycarbonyle du composé produit dans l'étape (e) ci-dessus d'une manière connue pour éliminer le groupe hydroxy-protecteur et le groupe amino-protecteur pour obtenir la 3 "-déoxystreptomycine. 3 Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que de l'acide ptoluène sulfonique est utilisé comme catalyseur de réaction dans l'étape (b) du procédé. 4 Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que de l'acide ptoluène sulfonique est utilisé comme catalyseur de réaction dans l'étape (c) du procédé. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le groupe hydroxyméthyle placé en position 3 ' de la'2,5,6,4 ",6 "-penta-0acétyl- 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-déoxydihydrostreptomycine est oxydé dans l'étape (e) du procédé par réaction avec du diméthylsulfoxyde en présence de pyridine et d'acide trifluoroacétique ainsi que de dicyclohekylcarbodiimide. 6 Composition antibactérienne, caractérisée en ce qu'elle comprend comme ingrédient actif la 3 "-déoxystreptomycine ou un de ses sels, en asso- ciation avec un support pharmaceutiquement acceptable pour l'ingrédient actif. 7 La 2,5,6,4 ",6 "-penta-0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "- déoxydihydrostreptomycine.