FR 2517680 A1 19830610 FR 8220476 A 19821207 Dérivés N-(vinblastinoyl-23) d'acides amines, leur préparation et leur application thérapeutique. La présente invention se rapporte à de nouveaux alcaloïdes bis-indoliques Plus particulière- ment, l'invention est relative à de nouveaux produits de couplage d'acides aminés avec des dérivés de la vin- blastine, à leur procédé de préparation, à leur appli- cation en tant qu'agents antitumoraux et aux composi- tions pharmaceutiques les contenant. Ces nouveaux dérivés de la vinblastine peuvent être utilisés pour le traitement des leucémies et des tumeurs malignes chez l'homme. Les alcaloïdes bisindoliques du type de la vinblastine sont des composés bien connus possédant le squelette carbone de la formule générale suivante: I OH CH 3 2 I (I) C 30 C OR, J HO s 23 C=O R 1 c On citera à titre d'exemple la vincaleuko- blastine (brevet américain 3 097 137), la leurocristine ou vincristine et la leurosidine (brevet américain 3 205 220), le vinglycinate (brevet belge 659 112) et la vin- désine (brevet belge 813 16 a) Ce dernier composé a été obtenu par transformation chimique de la vinblastine naturelle (I, Ri 3 OCH 3, R 2 X COCH 3), qui elle-même est obtenue par extraction à partir de feuilles de Catharan- thus roseus. La vinblastine, la vincristine et la vin- désine sont commercialisées pour leur utilisation en thérapeutique humaine, plus particulièrement pour le traitement de leucémies et de certaines tumeurs solides. Ces médicaments possèdent néanmoins des effets secondaires défavorables La vincristine est neurotoxique et la vinblastine est fortement toxique au niveau des tissus hématopoétiques. Leur mécanisme d'action est analogue à celui qui a été postulé pour l'action antimitotique de la colchicine Ces médicaments agiraient par inhibi- tion de la polymérisation de la tubuline en microtubules et arrêt subséquent de la division cellulaire en métapha- se. L'utilisation de complexes 1:1 d'alcaloïdes bisindoliques antitumoraux avec la tubuline a été décrite dans le brevet belge 854 053. Dans certains cas, il peut en résulter une toxicité moindre et une activité chimiothérapeutique plus importante que celles des alcaloïdes libres correspondants. D'autres dérivés obtenus par modification chimique de la vinblastine ont été testés Ainsi le sulfate de vinglycinate (I, sulfate, Rl OCH 3, R 2 COCH 2 N (CH 3)2, Cancer Research 1967, 27, 221-227) a été étudié en expérimentation clinique mais ne s'est gé- néralement pas révélé supérieur à la vinblastine et à la vincristine. Le brevet belge 813 168 décrit la vindésine (I, R 1 NH 2, R 2 = H) et d'autres dérivés carboxamide en C 3 de la vinblastine Des publications postérieures ont confirmé l'intérêt thérapeutique de la vindésine ou carboxamide-3 déacétyl-0-4 vinblastine, mais ce compose s'est cependant révélé inactif pour le traitement de tumeurs L 1210 transplantées chez la souris (C J Barnett et al, J Med Chem 21, 88, 1978. Les nouveaux composés décrits dans la pré- sente invention sont capables de retarder efficacement la mort de souris auxquelles on a transplanté par voie intraveineuse des tumeurs P 388 et L 1210. Les activités sur ces tumeurs expérimentales P 388 se sont révélées, de manière surprenante, très supérieures à celles des alcaloïdes Vinca de référence. De nombreuses rémissions complètes ont é-té observées. Les dérivés de l'invention possèlent en outre d'autres avantages importants et inattendus comparative- ment à la vinblastine et à ses analogues connus, en par- ticulier la vindésine. En particulier, les toxicités observées sont généralement inférieures à celles correspondant à la vindésine ou à la vincristine. La présente invention-concerne, les dérivés de la vinblastine répondant à la formule générale II suivante: 1 In (II) C-R Il o O dans laquelle R représente un ester d'acide aminé-, éventuellement protége, couplé au fragment vinblastinoyl-23 par un lien amide, le groupe ester ramifié ou non possédant de 2 à 9 atomes de carbone, R 1 représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxyle, R 2 représente un atome d'hydrogène, un groupe formyle ou acyle comportant de 2 à 9 atomes de carbone, R 5 représente un atome d'hydrogène un groupe méthyle ou un groupe formyle, à l'exclusion du cas o R 5 représente un groupe méthyle et R 1 représente un groupe P-hydroxyle ainsi que ses sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques. Les nouveaux composés de l'invention répon- dent plus particulièrement à la formule générale III. I I (III) Ca 5 C H-C OH R dans laquelle Rl représente un groupe hydroxyle ou un atome d'hydrogène, R 2 représente un atome d'hydrogène, un groupe acyle ou formylecomportant de I à 9 atomes de carbone; R 3 représente chaque fois indépendamment, un atome d'hydrogène, un groupe alkyle ramifié ou non comportant de I à 8 atomes de carbone, un groupe hydroxy CI-C 8 alkyle, amino-hydroxy CI-C 8 alkyle, carboxy-CI-C 8 alkyle, amido CI-C 8 alkyle, guanadino CI-C 8 alkyle, amino CI-C 8 alkyle, thiol C 1-C 8 alkyle>cystéinyl méthyle, thiométhyl-éthyl, benzyle, hydroxybenzyle, H 2 N ou I ou R 3 représente avec l'atome de carbone auquel il est 3 attaché et l'azote du groupe amide, un cycle azole ou attaché et l'azote du groupe amide, un cycle azole ou hydroxyazole; R 5 représente un atome d'hydrogène, un groupe méthyle ou un groupe formyle, et R 4 représente un groupe alkyle, linéaire ou ramifié possédant de I à 8 atomes de carbone, ou un groupebenzyle, à l'exclusion des composés o R 1 = D 3 OH et R 5 CH 3, COOR 4 représente de préférence un groupe carboéthoxy ou carbométhoxy, ainsi que leurs sels d'addition avec des acides minéraux ou organiques. Plus particulièrement, le fragment structu- ral de la formule III R R 3 's -NH-CH-COR 4 représente un ester de n'importe lequel des acides aminés naturels et de leurs isomères optiques de configuration D, notamment: la glycine acide aspartique cystine alanine acide glutamique méthionine valine asparagine phénylalanine leucine glutamine tyrosine isoleucine arginine tryptophane sérine lysine proline thréonine cystéine histidine hydroxyproline ou hydroxylysine. On peut considérer ces composés comme étant des dérivés de la descarbométhoxy-3 désacétyl-0-4 vinblas- tine carboxamide-3 On préférera cependant les désigner comme étant des dérivés N-(vinblastinoyl-23) ou N-(vin- cristinoyl-23) d'acides aminés. Les composés préférés de l'invention ré- pondent à la formule II dans laquelle R 2 représente un atome d'hydrogène et la partie acide aminé est dérivée d'un des acides aminés suivants: L ou D tryptophane, leucine, valine, isoleucine, alanine et'phénylalanine. Parmi ces derniers, le L-tryptophane, la L-isoúeucine et la L-alanine se sont révélés plus particulièrement intéressants. La présente invention divulgue plus particulièrement des produits de couplage d'acides aminés avec la vincristine, la désacétyl-0,4-vincristine, la desformyl-désacétyl-0-4-vincristine et la désoxy-vinblas- tine p. Ce dernier composé peut être obtenu par hydrogénation de l'anhydrovinblastine obtenue par déshydra- tation de la vinblastine ou par couplage de la vindoline à la catharantine (Potier et al, JACS 98 7017 1976). Le composé préféré de la présente invention est le N-(désacétyl-04 déoxy-4 'vinblastinoyl-23) tryptophanate d' éthyle. Lorsque l'acide aminé contient des groupes fonctionnels dans la chaîne latérale R 3 (formulet II), comme la lysine ou la cystéine, il peut être nécessaire de protéger ces groupes fonctionnels en utilisant les méthodes bien connues de l'homme de l'art. Cette protection peut être effectuée, selon la nature du groupe à protéger, par le greffage d'un groupe benzyle, t-butyle, benzyloxy-carbonyle, t-butoxy- trifluoroacétyl carbonyle ou trityle D'autres agents bien connus en chimie peptidique peuvent être avantageu- sement utilisés. Selon le procédé mentionné ci-dessus, les composés suivant l'invention peuvent être obtenus à partir des dérivés correspondants de la vinblastine, de manière classique, par hydrazinolyse suivie de nitrosation, puis couplage avec l'ester d'acide aminé selon le schéma réactionnel I N 2 H 4 CH Ot Na NO 2 HCL O C OH HO C-N " 3 ester d'acide aminé CH CI 2 -OR 4 Schéma I La première étape consiste à additionner un excès d'hydrazine anhydre à une solution de vinblastine base dans le méthanol anhydre Le mélange réactionnel est alors chauffé sous atmosphère inerte pendant 12 heures à 12 jours à une température comprise entre 30 et 70 C. De préférence, la température sera maintenue vers 60 'C. L'hydrazide du dérivé bis-indolique est alors isolé par addition d'eau, extraction au dichlorométhane et concentration Le composé peut être ultérieurement purifié par chromatographie préparative (silice neutre). Dans le cas de la vincristine, le produit obtenu est la 0-4 désacétyl déformyl-vincristine carboxhydrazide. Lors de la deuxième étape, la fonction hydrazide de la vinblastine modifiée est transformée en azoture d'acide Cette transformation est effectuée de manière connue, par addition de nitrite de sodium à l'hydrazide en solution dans un mélange eau-méthanol-acide. L'acide utilisé peut être l'acide chlorhy- drique. La température de réaction est maintenue entre 0 et 5 C Apres extraction par un solvant aprotique non soluble dans l'eau, de préférence le chlorure de méthylène la phase organique est partiellement concentrée. L'azoture d'acide lui-même n'est de préférence pas isolé, mais directement mis en présence de l'ester d'acide aminé ou, le cas échéant, le dérivé correspondant protége, en solution dans le chlorure de méthylène. La quantité d'acide aminé mise en oeuvre est de I à 5 équivalents de vinblastine carboxazide modifiée. Le milieu réactionnel est maintenu entre 3 et + 10 OC pendant 8 à 72 heures, le plus souvent en- viron 15 heures La réaction est facilement suivie par chromatographie sur couche mince Apres concentration, on isole le composé de l'invention II Iqui peut être transformé en sulfate ou un autre sel d'acide minéral ou organique par cristallisation à partir d'une solution méthanolique de l'acide correspondant. Les composés de l'invention sont purifiés en utilisant les techniques bien connues de chromatogra- phie et de recristallisation. Le cas échéant, le dérivé de désacétyl- 0-4 vinblastine ainsi obtenu peut être réacétylé soit directement pour donner le dérivé de la vinblastine II dans lequel R 2 = COCH 3 (J Med Chem 22, 391, 1979) ou par formation préliminaire du dérivé diacétoxy-3, 4 suivie d'une hydrolyse sélective du groupe acétoxy en position 3. Le groupe hydroxyle en C 4 peut être, de manière connue en soi, estérifié par d'autres dérivés activee d'acides comportant de 2 à 9 atomes de carbone Les dérivés 0-4 formylés sont obtenus par formylation (acide formique - anhydride acétique) des 0-4 désacétyl correspondants, voir brevet belge 660 843. La présente invention s'étend également aux applications industrielles et notamment pharmaceutiques des composés bisindoliquesnouveaux. Les composés de l'invention présentent en particulier des propriétés antitumorales particulièrement intéressantes et susceptibles d'être utilisées en thérapeu- tique humaine. Ces dérivés d'acide aminé peuvent être, en particulier, utilisés pour le traitement des leucémies du type L 1210, P 388, de gliomes, lymphosarcomes et d'autres leucémies ou tumeurs malignes. En thérapeutique humaine, ils sont utilisés pour le traitement de la maladie de Hodgkin et pour d'autres tumeurs pouvant bénéficier d'un traitement avec la vinblastine, la vincristine et la vindésine. Ces composés peuvent également être utilisés en médecine vétérinaire pour le traitement des tumeurs chez les animaux. D'autres applications thérapeutiques inté- ressantes peuvent être envisagées pour ces nouveaux dérivés d'alcaloïdes bisindoliques Il a en effet été relevé que la vinblastine pourrait être utilisée dans le traitement de certaines arthrites (brevet des Etats- Unis d'Amérique n 4 208 411) et la vincristine pour le traitement de psoriasis (brevet des Etats-Unis d'Amérique n 3 749 784). Pour leur application thérapeutique, les composés de l'invention, éventuellement sous forme lyo- philisée sont de préférence administrés par voie paren- térale, dissous dans un solvant pharmaceutiquement acceptable, sous la forme d'une base ou d'un sel d'addi- tion d'un acide pharmaceutiquement acceptable Parmi les sels d'addition, on préférera les sels non toxiques, pharmaceutiquement acceptables, tels que les sels d'acides minéraux comme l'acide chlorhydrique, l'acide phospho- rique et l'acide sulfurique, ou d'acides organiques comme l'acide acétique, propionique, succinique, tartri- que, oxalique, méthanesulfonique, benzenesulfonique. L'eau physiologique ou d'autres solutions salines tamponnées, par exemple avec un phosphate, sont des solvants appropriés D'une manière générale, ces composés peuvent être utilisés en s'inspirant des techni- ques et des limitations qui sont connues pour les traite- ments thérapeutiques avec les autres alcaloïdes de la classe des Vinca. La substance active est généralement admi- nistrée à une posologie pouvant varier de 0,01 mg à envi- ron 5 mg/kg, en fonction du dérivé utilisé et du schéma thérapeutique adopté Les doses hebdomadaires totales varieront géné- ralement de 0,1 mg à environ 35 mg/kg. Les compositions selon l'invention sont présentées sous des formes d'administration contenant le principe actif à la dose unitaire de 2 à 900 mg. Les composés de l'invention peuvent être utilisés seuls ou en combinaison avec un ou plusieurs agents carcinostatiques incluant par exemple les agents alkylants, les antimétabolites tels que le méthotrexate, le fluoro5-uracile, la mercapto-6 purine, la thio-6 guanine, les arabinosides de la cytosine et les anti- biotiques tels que l'actinomycine D, la daunorubicine, l'adriamycine, et le cis-diamino-dichloro-platine En- particulier, ces nouveaux dérivés de la vinblastine peuvent être utilisés en association entre eux. Les exemples suivants illustrent de manière non limitative le procédé conduisant aux composés de l'invention. // Exemple I 1 1 Préparation de la 0-4-désacétyl-N-desformyl-vincristine monohydrazide A. 985 mg de vincristine base sont mis en solution dans un mélange de 10 ml d'hydrazine anhydre et 10 ml de méthanol Le milieu réactionnel est porté à 60 C sous agitation pendant 22 heures Le mélange ré- actionnel est alors traité à l'eau puis à l'eau sa- turée en Na Cl La solution aqueuse est extraite 8 fois par 15 ml de dichlorométhane Les phases or- ganiques rassemblées sont traitées avec 20 ml d'eau puis 25 ml d'eau saturée en Na Cl puis séchées sur Na 2 SO 4 Après filtration et concentration sous vide on obtient 900 mg de 0-4 désacétyl vincristine mono- hydrazide (pureté supérieure à 90 %). Spectre de résonance magnétique nucléaire (CDC 13,360 M Hz) 9,76 (s,IH), 8,37 (s,l H), 8,06 (s,IH), 7,53 (d,IH) 7,24 et 7,07 (m,3 H), 6,82 (s,l H), 6,22 (s,1), 5,87 (dd,lh), 5,67 (d,l H), 5,43 (s,IH), 4,03 (s,IH), 3,94 s, 3 H), 3,86 (s,1 H) 3,73 (s,3 H), 3,52 (s,3 H) 2,82 (s,2 H), 2,51 (s,IH) 0,93 ( 2 t, 2 x 3 H). Spectre de masse (ionisation impact électronique) 154, 294, 355, 413, 524, 555, 695, 710, 723, 736, 0 739, 755 (M + 1) 768, 769, 782 calculé pour C 42 H 54 N 607 754 942 2 Préparation de l'azoture d'acide de la vincristine modifiée. Une solution de 850 mg de vincristine monohydrazide A dans 20 ml de méthanol est traitée par 63 ml de H Cl IN et 175 5 mg de nitrite de sodium pendant 15 minutes à O O C. La solution, maintenue à OOC, est alors neutralisée par Na HCO 3 à O C puis extraite six fois avec 15 ml de dichlorométhane Les phases organiques rassem- blées sont séchées sur Na 2 SO 4, filtrées puis conc- centrées sous vide sans chauffer jusqu'à l'obtention d'une solution d'environ 10 ml. 3 Couplage avec le tryptophanate d'éthyle 300 mg de tryptophanate d'éthyle sont alors ajoutés sous agitation à environ 4 C et la réaction est suivie par ccm Aprs 10 jours, le produit de couplage est purifié par séparation chromatographi- que ( 40 g silica-gel 60, solvant d'élution éther, méthanol sat en NH 96:4, v:v) On recueille ainsi des fractions de 15 ml qui sont contralées par ccm L'acide aminé non couplé est d'abord re- cueillie (fractions 30 à 40) On change d'éluant (éther, méthanol sat en NH 3 86: 14) et on recuéille les dérivés couplés en trois portions: fractions 44 et 45 30 mg, fractions 46-53 257 mg, fractions 54-60 115 mg). La deuxième portion est constituée de N-( 0-4-désacétyl- desformyl-vincris tine-23-oyl) tryptophanate d' éthyle Ia homogène en ccm. Spectre de masse 899 (DCJ isobutane) 181. 984, 970, 956 (M' + 1) 913, 912, calculé pour C 55 H 66 N 609 955, Spectre UV (CH 3 OH) max 282 ( 4,20) 290 ( 4,18) 322 ( 3,96) min:254 287 305 Spectre IR (cm 1) 3400 2920 1720 1660 1610 1485 1450 1370 1345 1330 1290 1220 1165 1130 1025 1005 920 885 830 740 Spectre RMN (CDC 1. 8,50 (s, IHI) 8,03 (s, 2 H) 7,77 (d, 1 H) 7,60 (d, 1 H) 7,57 (de 1 H) 6, 95 (se I H) 6,35 (se I H) ,89 (d d,IH) ,78 (d,1 H) 4,75 (q,IH) 3,88 (s,3 H) 3,67 (s,3 H) 1,23 ( t 311) 0,98 (t,3 H) 0,89 (t$ 13 H) 3) 360 MH (p pm) z N-(O-4-désacétyl-vincristine-23-oyl)-tryptophanate d'éthyle Ib. Le dérivé déformylé Ia ( 257 mg) est reformylé en appliquant la méthode décrite dans le brevet belge 811 110. Le produit brut ainsi obtenu est purifie par sépara- tion chromatographique en utilisant une colonne de 20 cm (silica gel, 30 g) et en utilisant successive- ment 3 éluants: ether/Me OH sat en NH 3 92: 8, 88: 12, 86: 14 L'effluent est récolté par fractions de 15 ml Les fractions 44 à 54 ( 34 1 mg) contiennent le dérivé N-reformylé Ib. Spectre de masse (DCI à l'isobutane): 1011, 997, 983 (M + 1), 970, 982, 996, 998, 999, 1012. calculé pour C 56 H 66 N 6010 983, 192. Spectre UV (CH 3 OH) max: 270 ( 4,18) 290 ( 4,11) plateau 280 ( 4,12) épaulement ( 4,03) Spectre I R (K Br) bandes à 3400 3040 2960 2920 2880 2850 - 1735 1725 1680 1670 1665 1610 1490 - 1450 1225 745. Exemple 2 N-( 0-4-désacétyl désoxy 4 ' vinblastine 23 oyl -) tryptophanate d'éthyle(Ic). La 0-4-désacétyl désoxy vinblastine hydracide est pré- parée selon le mode opératoire repris dans le brevet US 4 203 898 (Lilly, colonne 24 ligne 51 et suivantes). 500 mg de l'hydrazide dans 12 ml de méthanol sont alors traités avec 37 ml de H Cl IN et 104 mg de Na NO 2 pendant ' à O C. La solution est ensuite neutralisée avec Na HCO 3 puis extraite six fois avec 15 ml de dichlorométhane Les phases organiques sont séchées sur Na 2 SO 4 et concentrées jusqu'à obtenir un volume de 10 ml environ. L'azide en solution est alors mis en présence de trypto- phanate d'éthyle ( 300 mg) à 4 C sous agitation La réaction est suivie par ccm (éther, Me OH) Après 6 jours laréaction est terminée et le produit de couplage est purifié par chromatographie sur colonne de silica- gel ( 18 cm, 30 g) élution par fractions de 15 ml. Les éluants suivants ont été successivement utilisés: éther 96 Me OH sat avec NH 3 4 fraction 1 49 92 8 fractions 50 57 86 14 fractions 71 90. Les fractions 50-57 contiennent le produit de couplage désiré ( 108 mg) Ic. Le sulfate est préparé par précipitation dans l'éther. ( 2 Z H 2 SO / éthanol). 2 4 éhao. Spectre UV du sulfate (CH 30 H) max: 224 ( 4,63) 272 ( 4,32) min: 247 ( 4, 03) épaulement: 286 ( 4,22) 312 ( 3,72) Spectre IR (K Br) du sulfate 3420 3060 1660 1615 1060 1015 2960 2930 2880 2600 *1500 1455 1430 1375 920 745 cm 1 920 745 cm (faible) 1725 1230 1105 - Spectre RMN (CD C 13) 9,46 8,34 7,92 7,67 7,59 7,53 7,30 6,51 6,04 s IH s IH s IH d IH d IH d 1 H d 1 H s IH s IH 360 MHZ de la base 3,58 3,47 2,82 2,77 2,59 1,14 0,95 0,87 en ppm. s RH s 1 H s 2 H s 3 H s 111 t 3 H t 3 H t 3 H m presque s. 4,94 q l H 4,18 d IH 4,05 q 2 H 3,77 S 3 H centre sur'5,81 Spectre de masse de la base DCI isobutane M + I + à 954 M + 14 + 1 à 968 M + 28 + I+ à 982 ions à 153 155 157 171 172 185 186 199 213 223 227 255 257 279 281 283 - 285 349 398 459 516 569 952 953 - 955 967 969 981 983. Calculé pour C 56 H 68 N 6 08: 953,208 Exemple 3 N-( 0-4-désacétyl-4 '-désoxy-vinblastine-23-oyl-)-isoleucinate d'éthyle. Une solution de 0-4-désacétyl-4 '-désoxy-vinblastine hydrazide ( 0,6 g; 0,79 m N voir brevet américain 4 203 898 - colonne 24, ligne 51) dans un mélange de 15 ml de méthanol et 45 ml HC 1 IN est refroidi à -7 C On ajoute O,15 g de Na NO 2 à la solution et poursuit l'agitation pendant 13 minutes à -70 C Apres addition d'une solution aqueuse saturée de Na HCO 3 jusqu'à atteindre un p H de 9, la solu- tion obtenue est extraite quatre fois par CH 2 C 12 Les phases organiques combinées sont lavées par une solution saturée de Na Cl et séchées sur Mg SO 4. La solution est concentrée jusqu'à un volume de 15 ml et de l'isoleucinate d'éthyle(l,25 m N) y est ajouté Le solvant est ensuite évaporé sous pression réduite Le résidu est purifié sur colonne de chromatographie (Si O 2,60 g) et élué par éther CH 3 OH / NH 3 ( 96:4). On obtient 0,25 g d'un produit amorphe (rendement 35 Z). Spectre de masse:(Ionisation Molec isobutane) 880 (M+), 894, 836, 849, 832, 445; 391, 355 cm-1 51 69 508 880 1 Point de fusion 180-190 C a D = 104 (c O 154) -1 IR (CHC 13) 3470, 2970, 1728, 1655, 1612, 1502 cm UV (CH 30 H) 289, 268, 216 nm RMN (CDC 13) 7,9 (NH), 654 et 6 06 H 9, H 12, 5,81 (H 14-H 15) 4,60 (CHCO 2 (NH) 3,76 CO 2 CH 3, 3,58 CH 3-0, 3,33 et 2,E (H 3 A et H 3 B), 2,73 (N-CH 3), 0,69 (H-15 '). 2517680- Toxicité aiguë Détermination de la LD 50 La toxicité aiguë du composé de l'exemple 2 N-( 0-4-désacétyl-désoxy-4 ' vinblastine-23-oyl-0) triptophanate d'éthyle a été étudiée sur des souris NMRI femelles Des doses croissantes deproduit sont administrées par voie intraveineuse en une injection. Le pourcentage de mortalité est suivi en fonction du temps Les valeurs de LD 50 obtenues pour le composé de l'exemple 2 (désoxy V Trp E) et un produit de référence (désoxy vinblastine = désoxy VBL) sont reprises cidessous: Produit LD 50 Désoxy VBL 20 Désoxy V Trp E (Ic) 91 5 Le dérivé désoxy V Trp E est donc moins toxique que la composé de référence. Activité antitumorale L'activité chimiothérapique du sel sulfate de désoxy V Trp E a été étudiée sur les leucémies lymphoblastiques L 1210 et P 388. 251708 d 1 L 1210 Des souris DBA 2 femelles sont inoculées avec 10 cellules leucémiques Leproduit est administré par voie intraveineuse le lendemain de la greffe à la dose de 50 mg/kg La mortalité des animaux est suivie en fonction du temps Le tableau 1 reprend les résul- tats obtenus avec le composé de l'exemple 2 (le). A la dose testée le dérivé est plus actif que la VBL. Cette supériorité a été confirmée par rapport à la désoxy VBL. 2 P 388 Des souris DBA 2 femelles reçoivent par voie intraveineuse 104 cellules leucémiques Les produits sont administrés par voie i v le lendemain de la greffe La mortalité des animaux est suivie au cours du temps Les résultats sont repris dans le tableau 1. Le désoxy V Trp E est nettement plus actif que le composé de référence et présente un pourcentage très important de survivants à long terme. Tableau 1. Tumeur L 1210 P 388 Pourcentage de Pourcentage de Produit Dose Nombre MST ILS survivants au survivants au d'animaux jour 30 Z jour 30 jour 60 VBL VBL Désoxy V Trp E Désoxy VBL Désoxy VBL Désoxy V Trp E ,4 ,8 11,2 ,6 ,8 16,5 o 57,6 -21,6 -42 58,7 o o o o o o 73,3 o O. Des souris DBA 2 femelles sont inoculées par voie i v avec 104 cellules leucémiques Les produits sont administrées par voie i v aux doses et schémas précisés. MST median survival time jcur moyen de survie ILS % % of increase in life span pourcentage d'augmentation de la durée de survie. ro u 1 oo o J Co R E V E N D I C A T I O N S I. A titre de composés nouveaux, les dérivés de la vinblastine répondant à la formule générale II suivante: (II) C-R O dans laquelle R représente un ester d'acide aminé, éventuellement protége, couplé au fragment vinblastinoyl-23 par un lien amide, le groupe ester ramifié ou non possédant de 2 à 9 atomes de carbone, R représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxyle, R 2 représente un atome d'hydrogène, un groupe formyle ou acyle comportant de 2 à 9 atomes de carbone, R représente un atome d'hydrogène un groupe méthyle ou J un groupe formyle, à l'exclusion du cas o R 5 représente un groupe méthyle et R 1 représente un groupe ehydroxyle ainsi que ses sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques. 2. Composés de la formule générale III. I pr 1 I (III) OR 4 t 1, c " 5 'S Ol dans laquelle R 1 représente un groupe hydroxyle ou un atome d'hydrogène, R 2 représente un atome d'hydrogène, un groupe acyle ou formylecomportant de I à 9 atomes de carbone; R 3 représente chaque fois indépendamment, un atome d'hydrogène, un groupe alkyle ramifié ou non comportant de I à 8 atomes de carbone, un groupe hydroxy CI-C 8 alkyle, amino-hydroxy CI-C 8 alkyle, carboxy-CI-C 8 alkyle, amido CI-C 8 alkyle, guanadino CI-C 8 alkyle, amino C 1-C 8 alkyle, thiol CI-C 8 alkyle cystéinyl méthyle, thiométhyl-éthyl, benzyle, hydroxybenzyle> î x 1 j CH 2ou (a 2 N (IV) ' (V) H ou R 3 représente avec l'atome de carbone auquel il est attaché et l'azote dugroupe amide, un cycle azole ou hydroxyazole; l R 5 représente un atome d'hydrogène, un groupe méthyle ou un groupe formyle, et R 4 représente un groupe alkyle, linéaire ou ramifié possédant de 1 à 8 atomes de carbone, ou un groupe benzyle, à l'exclusion des composés o RI = t 3 OH et R 5 = CH 3, ainsi que leurs sels d'addition avec des acides minéraux ou organiques. 3 Composés suivant les revendications 1 et 2, caractérisés en ce qu'il s'agit du N(désacétyl-0-4 vin- cristinoyl-23)-L-tryptophanate d'éthyle ou de méthyle et ses sels d'addition avec des acides pharmaceutiquement acceptables. 4 Composés suivant les revendications 1 et 2, caractérisés en ce qu'il s'agit du N-(désacétyl-0-4 des- formyl vincristinoyl-23)-L-tryptophanate d'éthyle ou de méthyle et ses sels d'addition avec des acides pharmaceu- tiquement acceptables. Composés suivant les revendications l et 2, caractérisés en ce qu'il s'agit du N-(désacêtyl-0-4- désoxy-vinblastinoyl-23-3)-L-tryptophanate d'éthyle, et ses sels d'addition avec des acides pharmaceutiquement acceptables. 6 Composés suivant les revendications 1 à 5, caractérisés en ce qu'il s'agit de sels d'addition 1: 1 avec l'acide sulfurique. 7 Composition pharmaceutique utilisée en médecine humaine et vétérinaire pour le traitement de maladies néoplasiques, caractérisée en ce qu'elle contient un ou plusieurs dérivés définis dans l'une quelconque des revendications I à 6. 8 Composition pharmaceutique selon la revendi- cation 7, caractérisée en ce qu'elle est sous une forme d'administration dans laquelle le principe actif est présent à une dose unitaire comprise entre environ 2 et 900 mg. 9 Composition pharmaceutique selon la revendication 7 caractérisée en ce que le principe actif est le N-(désacdtyl-O-4 vincristinoyl-23)-L-tryptopha- nate d'éthyle, éventuellement sous la forme d'un sel d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable. Composition pharmaceutique selon la revendication 7, caractérisée en ce que le principe actif est le N-(d 9 sacétyl-0-4 desformyl vincristinoyl-23)-L- tryptophanate d'éthyle, éventuellement sous la forme d'un sel d'addition avec un acide pharmaceutiqu ement acceptable. 11 Composition pharmaceutique selon la reven- dication 7, caractérisée en ce que le principe actif est la N-(dgsacgtyl-0-4 dgsoxy-4 ' vinblastinoyl-23 3)-L- tryptophanate d'éthyle ou le sulfate correspondant.