FR 2518989 A1 19830701 FR 8221680 A 19821223 i Forme cristalline ' de la bestatine et procédé pour sa préparation. La présente invention concerne la forme cristalline Y de la bestatine et un procédé pour sa préparation. L'invention a pour but de fournir une forme cristal- line Y stable de la bestatine, cette forme cristalline 9 de l'invention ayant un diagramme de diffraction des rayons X représenté par le tableau suivant: On peut préparer cette forme cristalline d par (a) chauffage de cristaux hygroscopiques de bestatine et/ou d'un de ses hydrates, à une température allant de 148 C ou le point de fusion de la bestatine, ou (b) mise en sus- o d (A) I/I 1 27,59 0,23 13,80 1,00 6,86 0,08 ,57 0,03 ,47 0,0-3 ,09 0,02 4,79 0,02 4,55 0,28 4,41 0,03 3,78 0,03 3,43 0,04 pension de cristaux hygr Qscopiques de bestatine et/ou d'un de ses hydrates dans un ou plusieurs solvants choisis parmi le groupe constitué par l'acétone, la méthyléthylcétone, la diéthylcétone, le tétrahydrofuranne, l'acétate d'éthyle, le dioxanne, l'alcool isopropylique et le méthanol aqueux, ou par malaxage de cristaux hygroscopiques de bestatine et/ou d'un de ses hydrates avec lesdits solvants organiques. La forme cristalline Y de l'invention n'est pas hygroscopique, elle ne contient pas d'eau de cristallisation et elle est stable dans la mesure o elle ne change pas de poids lorsqu'on l'expose à une forte humidité ou lorsqu'on la chauffe Donc, les cristaux peuvent être très facilement manipulés dans la préparation d'une forme d'administration pharmaceutique contenant de la bestatine. La bestatine L/( 2 S, 3 R)-3-amino-2-hydroxy-4-phénylbu- tanoyl-(S)-leucine 7 est une substance extrêmement peu toxique isolée par Umezawa et coll, d'un filtrat de culture de Streptomyces olivoreticuli, qui est un inhibiteur de l'amino- peptidase (voir le brevet US n 4 052 449: brevet japonais non examiné n 7187/1976) et il a été trouvé que ce composé a pour effet d'accroître une réponse immunitaire, telle que l'hypersensibilité retardée, et d'activer les mécanismes de défense d'un organisme vivant en présentant ainsi un effet carcinostatique (voir le brevet japonais non examiné n 117435/1977) et est un produit pharmaceutique plein de promesses. Comme procédés de production de la bestatine, on connait un procédé par fermentation' décrit dans le brevet US n 4 052 449 précité, un procédé par synthèse décrit dans le brevet US no 4 189 604 (brevet japonais non examiné n 136118/1977), le brevet-US n 4 281 180 (brevet japonais non examiné n 79353/1980) etc, ainsi que d'autres procédés. Au cours de recherches concernant la préparation de produits pharmaceutiques contenant de la bestatine préparée selon le procédé décrit dans l'exemple 19 du brevet US n 4 281 180 précité, qui semble être un procédé avantageux du point de vue industriel, les inventeurs de cette invention ont découvert que la bestatine est malaisée à manipuler par suite de son hygroscopie citée et ont ef- fectué diverses études pour améliorer l'hygroscopie. On a ainsi découvert que l'hygroscopie citée de la bestatine est due à la présence de cristaux hygrosco- piques de bestatine (appelée ci-après forme cristal- line B), que cette forme cristalline B, par séjour à l'air, se transforme en des cristaux ihydratés non hy- groscopiques (appelés ci-après forme cristalline a) par absorption d'eau, et que la forme cristalline a et la forme cristalline B, lorsqu'on les met en sus- pension dans un solvant déterminé, ou lorsqu'on les malaxe avec ce-solvant, se transforment en des cris- taux anhydres non hygroscopiques très stables ayant un diagramme déterminé de diffraction des rayon X (ces cristaux de l'invention sont appelés ci-après-forme cristalline y). L'invention a été développée sur la base de ces découvertes. L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description détaillée qui suit faite en regard des dessins annexés dans lesquels: La figure 1 est un diagramme de diffraction des rayons X de la forme cristalline yde l'invention; et La figure 2 est un thermogramme différentiel de la forme cristalline Y de l'invention. L'invention va maintenant être décrite de façon détaillée. La forme cristalline y de l'invention a-les propriétés physicochimiques suivantes: 1 Diagramme de diffraction des rayons X. Le tableau 1 de la figure 1 illustrent les diagrammes de diffraction des rayons X en poudre obtenus par mesure avec un appareil de dif- fraction des rayons X Rikagakudenki muni d'un disposi- tif d'irradiation émettant une radiation du cuivre avec un filtre fait d'une feuille mince de nickel et d'un compteur 2 scintillation. TABLEAU 1. ( Source électrique: Cu; Ni, 30 KV, 20 m A X= 1 5405) 2 Analyse thermiaue. Lors d'une analyse thermique différentielle avec un appareil d'analyse thermique Shimadzu-DT-Model , on n'observe pas de réaction exothermiq ue ou endo- thermique jusqu'à environ 233 C, température à laquelle la bestatine fond et se décompose De plus, lors d'une analyse thermogravimétrique, on n'observe-pas de changement de poids-avant la décomposition Lors d'une analyse thermogravimétrique, on constate que la forme cristalline a commence à présenter une diminution de poids à environ 48 O C et perd environ 9 à 10 % de son poids. 3 Masse volumique vraie. La masse volumique vraie, mesurée selon une méthode pycnométrique avec du kérosène comme milieu d (A) I/I 1 d (A) I/I 1 27.59 0 23 4 79 0 02 13.80 1 00 4 55 0 28 6.86 0 08 4 41 0 03 5.57 0 03 3 78 0 03 5.47 0 03 3 43 0 04 5.09 0 02 dispersant, est de 1,173 g/ml. 4 Hygroscopicité. On laisse la forme cristalline y, présentant une perte en poids par séchage inférieure à 0,5 %, dans les conditions suivantes: température 250 C et 37 OC et humidité relative 31 et 83 X Dans les deux cas, on n'observe pas de changement de poids, par conséquent la forme cristalline y n'est pas hygroscopique D'autre part, la forme cristalline Beprésente des gains de poids de 8,2 % et 9,7 % lorsqu'on la laisse séjourner pendant 6 heures à 31 % et 82 % d'humidité relative. On peut produire la forme cristalline y-de l'invention selon l'un des prodédés (a) et (b) sui- vants. Le procédé (a) comprend le chauffage de la forme cristalline a ou B à une température de 1480 C au point de fusion de la bestatine, ou de préférence de à 2000 C Cette température, 148 WC, est celle à laquelle la forme cristalline B se transforme en la forme cristalline y A des températures inférieures, la forme cristalline a se transforme simplement en la forme cristalline B, et la forme cristalline y ne peut pas être obtenue De plus, de façon indésirable, la bestatine se décompose à des températures supé- rieures à son point de fusion. La durée de chauffage est de préférence au moins égale à une heure Si elle est plus brève, la transformation en-la forme y n'est pas complète. Le procédé (b) comprend la mise en suspension de la forme cristalline a ou B dans un solvant organique déterminé ou le malaxage de la forme cristalline a ou B avec ce solvant. Comme solvants organiques déterminés, on peut utiliser le méthanol aqueux, de préférence du méthanol contenant 6 à 86 X en volume, et mieux 10 à 80 % en 6 - volume d'eau, l'acétone,la mêthvléthylcétone, la diéthylcéto- ne, le tétrahydrofuranne, l'acétate d'éthyle, le dioxanne ou l'alcool isopropylique On peut utiliser des combi- naisons de 2 ou plus de ces solvants Tous les solvants précités, à l'exception du méthanol aqueux, sont de pré- férence exempts d'eau, bien qu'ils puissent contenir une quantité d'eau n'altérant pratiquement pas la forme cristalline Par exemple, l'acétone peut contenir jusqu'à % en volume, et de préférence jusqu'à 15 % en volume d'eau. Parmi les solvants précités, on préfère du point. de vue de l'élimination du solvant, un solvant choisi parmi le groupe constitué par ceux ayant up bas point d'ébullition tels que du méthanol ayant une faible teneur en eau (par exemple 50 à 10 % en volume), l'acétone et le tétrahydrofuranne,et l'acétone est le solvant le mieux approprié. Bien que la durée de mise en suspension et de mala- xage varie avec les conditions telles que la température, elle est par exemple supérieure à 10 minutes et, en pratique, d'environ 20 minutes à 3 heures De plus, la température de mise en suspension ou de malaxage n'est pas précisée mais la température ordinaire est pratique. La proportion relative du solvant précité à la forme cristalline a ou B n'est pas précisée tant que les cris- taux sont entièrement mouillés et une proportion, par exemple de 0,3 partie de solvant/1 partie de cristaux (en poids) est suffisante. La forme cristalline a utilisée dans l'invention peut être synthétisée selon le procédé décrit dans le- brevet US n 4 281 180 précité, et on peut l'obtenir se- lon un procédé de précipitation au point isoélectrique comprenant une séparation de la forme cristalline d'une solution aqueuse à un p H de 5 à 6 On peut obtenir la forme cristalline B par séchage de la forme cristalline a, à une température inférieure à 148 C. 251-8989 7 - Le procédé de production de la forme cristalline y de l'invention est illustré concrètement par les exemples suivants. Exemple 1 On laisse séjourner dans un dessiccateur à 150 C pendant 3 heures, 100 g d'une bestatine (forme cristal- line a) obtenue selon le procédé de-précipitation au point isoélectrique, pour obtenir la forme cristalline y. On confirme la forme cristalline selon la méthode de dif- fraction des rayons X en poudre. Exemple 2 On met en suspension 10 g de la forme cristalline B obtenue par séchage de la forme cristalline a utilisée dans l'exemple 1, à 60 C, dans 100 ml d'acétone On agite la suspension pendant une heure à la température ordinai- re, puis on filtre On sèche le gâteau obtenu sous pression réduite à 30 C pendant 3 heures On obtient 9,3 g de la forme cristalline y. Exemple 3 On met en suspension 10 g d'une forme cristalline B de la bestatine dans 100 ml de méthyléthylcétone On agite la suspension pendant 30 minutes, puis on filtre. On sèche le g Rteau obtenu dans un courant d'air à 60 C pendant 5 heures On obtient 7,6 g de la forme cristal- line y. Exemple 4 On met en suspension 100 g de la forme cristalline a dans 600 g de diéthylcétone On agite la suspension à la température ordinaire pendant 20 minutes, puis on centrifuge On sèche le gâteau obtenu sous pression réduite à 30 C pendant 6 heures On obtient 91 g de la forme cristalline y. Exemple 5 On met en suspension 10 g d'une bestatine (forme cristalline $) dans 10 g de tétrahydrofuranne On agite la suspension pendant une heure, puis on filtre On 8- sèche le gâteau obtenu dans un courant d'air à 60 C pendant 4 heures On obtient 9,2 g de la forme cristal- line y. Exemple 6. On mélange et malaxe 10 g d'une bestatine (forme cristalline 8) avec 30 ml de dioxanne dans un mortier pendant 30 minutes, pour former une pâte On sèche cette pâte sous pression réduite à 60 C pendant 10 heures On obtient 8,6 g de la forme cristalline y. Exemple 7 On met en suspension 10 g d'une bestatine (forme cristalline B) dans 100 ml d'alcool isopropylique On agite la suspension à la température ordinaire pendant minutes, puis on filtre On sèche le gâteau obtenu I 5 sous pression réduite à 60 C pendant 5 heures On obtient- 9,0 g de la forme cristalline y. Exemple 8 On met en suspension 10 g d'une bestatine (forme cristalline B) dans 100 ml de méthanol contenant 10 % d'eau On agite la suspension à la température ordinaire pendant une heure, puis on filtre On sèche le gâteau obtenu dans un courant d'air à 50 C pendant 10 heures. On obtient 8,1 g de la forme cristalline y. Exemple 9 A 100 g d'une bestatine (forme cristalline a), on ajoute 70 ml de méthanol contenant 50 % d'eau On malaxe le mélange dans un petit malaxeur pendant 20 minutes. On sèche le produit malaxé dans un courant d'air à 50 C pendant 10 heures On obtient 94 g de la forme cristalline y. Exemple 10 On met en suspension 10 g d'une bestatine (forme cristalline B) dans 100 ml de méthanol contenant 80 % d'eau On agite la suspension S la température ordinaire pendant une heure, puis on filtre On sèche le gâteau obtenu sous pression réduite à 50 C pendant 5 heures On obtient 8,9 g de la forme cristalline y- -9 - REVENDICATIONS 1 Forme cristalline y de la bestatine, caractérisée en ce qu'elle a un diagramme de diffraction des rayons X représenté par le tableau A suivant: Tableau A O d (A) I/I 27,59 0,23 13,80 1,00 6,86 0,08 5,57 0,03 ,47 0,03 ,09 0,02 4,79 0,02 4,55 0,28 4,41 0,03 3,78 0, 03 3,43 0,04 2 Procédé pour produire la forme cristalline y de la bestatine, caractérisé par (a) le chauffage de cris- taux hygroscopiques de bestatine et/ou d'un de ses hy- drates, à une température de 148 C au point de fusion de la bestatine, ou (b) la mise en suspension de cristaux hygroscopiques de bestatine et/ou d'un de ses hydrates, dans un ou plusieurs solvants organiques choisis dans le groupe constitué par l'acétone, la méthyléthylcétone, la diéthylcétone, le tétrahydrofuranne, l'acétate d'éthyle, le dioxanne, l'alcool isopropylique et le méthanol aqueux, ou le malaxage desdits cristaux et/ou dudit hydrate avec lesdits solvants organiques. 3 Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'on effectue ledit chauffage à une température comprise dans la gamme de 150 à 200 C. 4 Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que ledit solvant est constitué d'un ou plusieurs solvants choisis dans le groupe constitué par l'acétone, le tétrahydrofuranne, et le méthanol aqueux. - Procécé pour produire la forme cristalline y de la bestatine, caractérisé par la mise en suspension de cristaux hygroscopiques de bestatine et/ou de ses hydra- tes, dans l'acétone.