FR 2521009 A1 19830812 FR 8301790 A 19830204 Solutions stabilisées d'insuline et procédé pour la préparation de celles-ci. La présente invention concerne des nouvelles solutions stabilisées d'insuline qui conviennent spécifiquement pour être utilisées dans des dispositifs débitant de l'insuline en continu; elle concerne également un procédé pour la préparation de telles solutions stabilisées d'insuline. Ces dernières années, on a consacré des efforts toujours plus importants au développement de systèmes portatifs ou pouvant être implantés permettant l'infu- sion continue de l'insuline aux patients, le but principal de ces efforts étant de fournir aux patients diabétiques un régime d'administration d'insuline qui peut être mieux adapté aux variations diurnes des besoins physiologiques d'insuline qu'il n'est possible par une médication d'insuline classique. La partie mécanique d'un dispositif destiné à l'infusion continue d'insuline comporte essentielle- ment un réservoir d'insuline, un système de pompage et un cathéter adéquat pour amener l'insuline au site choisi, généralement de manière sous-cutanée, par voie intraveineuse ou dans la cavité péritonéale. Le système de pompage peut être commandé automatique- ment et peut également être muni d'un dispositif supplémentaire pour le réglage manuel de l'injection d'insuline au moment o des besoins spécifiques se font sentir. Si la solution d'insuline est injectée par une seringue, celle-ci assumera généralement la fonction de réservoir d'insuline Les dispositifs de ce genre sont généralement portés de manière extra- corporelle On a, cependant, également développé des systèmes beaucoup plus élaborés dans lesquels l'unité mécanique toute entière est destinée à être implantée, généralement en position sous-cutanée Le réservoir d'insuline est généralement conçu pour permettre les remplissages par voie percutanée. La tendance que présente l'insuline à se séparer par précipitation des solutions disponibles dans le commerce, obstruant ainsi les parties mécaniques et les cathéters d'injection, constitue un inconvénient majeur pour le développement plus avancé et l'applica- tion clinique de dispositifs destinés à l'injection de l'insuline en continu En outre, pour des raisons évidentes, il convient de réduire la dimension de tous systèmes destinés à l'injection en continu, ce qui impose l'emploi de solutions d'insuline plus concentrées que'celles qui sont disponibles jusqu'à présent, ce qui augmente encore plus les difficultés mentionnées ci-dessus. Il est généralement admis que l'explication du phénomène de précipitation doit être recherchée dans la tendance de l'insuline à former des fibrilles insolubles, particulièrement lorsque des solutions de celles-ci sont maintenues à des températures élevées pendant des périodes prolongées Il est également évident que tout genre de mouvement de la solution ou dans la solution, y compris par exemple la turbulence impliquée par son passage à travers une ouverture étroite ou un orifice, provoque la fibrillation de l'insuline Les solutions d'insuline sont évidemment soumises à la plupart de ces actions ou à toutes ces actions dans tout dispositif destiné à l'injection d'insuline en continu Les inconvénients de préparations d'insuline de l'état de la technique, en ce qui concerne les points susmentionnés, sont amplement repris dans les publications, par exemple dans un récent article de W D Lougheed et autres (Diabetologia, volume 19, pages 1-9, 1980). Afin de résoudre ce problème, on a'proposé d'utiliser des solutions acides d'insuline contenant de l'acide glutamique ou aspartique, voir Diabetes 30, 83, ( 1981), ou des formulations à p H neutre contenant un sucre, comme le glucose (D S Schade et autres Satelite-Symposium to 16th European Association for the Study of Diabetes-meeting, Grèce, du 22 au 23 septembre, 1980, page 107) On a en outre proposé d'utiliser un agent tensio-actif non ionique (H Thurow: demande de brevet allemand P 29 52 119 5). Toutefois, l'insuline est chimiquement instable dans un milieu acide, même à une température inférieure à celle du corps, et peut réagir, de manière réversible ou irréversible, avec des hydrates de carbone, cf. J Brange et S Havelund, "Properties of Insulin in Solution", Proceedings from International Symposium on Artificial Systems for Insulin Delivery, Assise, du 20 au 23 septembre, 1981, éditeur: Raven Press (en cours d'impression) En outre, l'agent tensio- actif non physiologique susmentionné peut être indésirable dans des médicaments à usage parentéral. La présente invention vise à pallier les incon- vénients précités en fournissant des nouvelles solutions d'insuline dans lesquelles l'insuline à moins tendance à préciter dans les conditions régnant dans les dispositifs destinés à injecter l'insuline en continu que ce n'était le cas pour les solutions d'insuline classiques. L'invention est basée sur la découverte que des ions de zinc exercent, à certaines concentrations, un effet stabilisant marqué sur des solutions d'insuline à p H neutre. Pendant de nombreuses années, on a utilisé le zinc comme métal favorisant la cristallisation en vue d'obtenir des cristaux d'insuline C'est pourquoi les cristaux d'insuline utilisés pour la préparation de solutions d'insuline à p H neutre contiennent généralement du zinc, voir par exemple le brevet britannique 840 870 et le brevet danois 116 527. La limite supérieure de la teneur en zinc des solutions d'insuline à p H neutre se situe aux environs de 1 % en poids d'ions zinc (calculé sur la base de cristaux d'insuline secs). En présence de substances formant des composés légèrement solubles ou des composés complexes avec le zinc, les préparations peuvent contenir considérablement plus de zinc, à condition que la quantité d'ions zinc à la disposition de l'insuline et, par conséquent, non liés à de telles substances ne dépasse pas la limite supérieure susmentionnée. Si la teneur en ions zinc à la disposition de l'insuline dépasse la limite supérieure susmentionnée d'environ 1 % en poids, ce qui correspond à environ 5.Zn 2 + / insuline hexamère, des complexes de zinc - insuline précipitent de la solution. Afin d'être certain d'éviter la précipitation de complexes d'insuline et de zinc, la teneur en zinc dans- les préparations d'insuline disponibles dans le commerce a toujours été maintenue nettement en dessous de la limite supérieure susmentionnée, et, en fait, toutes les recherches de la Demanderesse effectuées sur les préparations d'insuline à p H neutre disponibles dans le commerce, qu'elle connaît, ont montré que la con- centration en ions zinc se situe aux environs de 2 à 3,5 Zn 2 + / insuline hexamère. Comme on peut cependant le voir à la figure 1, les préparations d'insuline présentant une teneur en ions zinc de 2 et même jusqu'à 4 ions par unité d'insuline hexamère, sont instables dans les conditions nécessaires à une injection d'insuline en continu, étant donné que l'insuline précipite après quelques jourts. De ce fait, il est étonnant qu'un accroissement de la teneur en ions zinc jusqu'à certaines concentra- tiond particulières juste en dessous de la limite supérieure d'environ 5 Zn 2 + 1 insuline hexamère, correspondant à la limite de précipitation des complexes Zn insuline, exerce un effet stabilisant sur les solutions d'insuline dans les conditions décrites ci-dessus, nécessaires à l'injection d'insu- line en continu. La présente invention porte sur une nouvelle solution d'insuline convenant pour l'utilisation dans un dispositif à injection d'insuline en continu, la solution d'insuline étant physiquement stable dans les conditions nécessaires pour une telle injection en continu et contenant, éventuellement, un agent de conservation, un agent rendant la solution isotonique et un tampon, caractérisé en ce qu'elle contient un sel de zinc essentiellement à l'état ionisé en une concentration correspondant à une teneur en ions zinc à la disposition de l'insuline supérieure à 4 Zn 2 + insuline hexamère. Par "ions zinc à la disposition de l'insuline", on entend les ions zinc qui ne sont pas liés à d'autres substances par exemple le citrate, la glycine ou le phosphate. La limite supérieure de la teneur en ions zinc est la quantité de zinc qui provoque la précipitation de complexes de zinc et d'insuline, à savoir environ 5 Zn 2 +/ insuline hexamère, comme mentionné ci-dessus. Dans un mode d'exécution préféré de l'invention, la teneur en ions zinc à la disposition de l'insuline ne dépasse pas 4,8 In 2 + / insuline hexamère et est, de préférence, comprise dans l'intervalle d'environ 4,2 à environ 4,5 Zn 2 + / insuline hexamère. Les sels de zinc préférés sont l'acétate de zinc et le chlorure de zinc. Suivant un autre mode d'exécution préféré de l'invention, on utilise du phénol comme agent de conservation et le glycérol comme agent rendant la solution isotonique. Comme mentionné précédemment, les teneurs en zinc précitées se rapportent à des ions zinc à la disposi- tion de l'insuline En présence d'un agent complexant le zinc, une partie du zinc est liée à l'agent complexant Si, toutefois, la teneur en ions zinc à la disposition de l'insuline doit être supérieure à 4 Zn 2 + / insuline hexamère, il faut ajouter plus de zinc Par conséquent, la teneur globale en zinc dans une préparation d'insuline contenant un agent complexant le zinc se situe plus ou moins au-dessus des limites susmentionnées en fonction de la quantité d'agent complexant utilisée et de la constante de complexation de celui-ci. On préfère souvent utiliser un agent complexant le zinc pour assurer une plus grande gamme utilisable de la teneur globale en zinc basée sur la teneur en insuline Si on suppose par exemple qu'une partie du dispositif utilisé comme réservoir, système de pompage, conduits, etc; lie ou libère du zinc, la présence d'un agent complexant le zinc assure que le taux des ions zinc à la disposition de l'insuline est compris dans l'intervalle suivant l'invention. C'est pourquoi la présente invention fournit également une nouvelle solution d'insuline convenant pour l'utilisation dans un dispositif d'injection d'insuline en continu, la solution étant physiquement stable dans les conditions nécessaires pour une telle injection en continu et contenant, éventuellement, un agent de conservation, un agent rendant la solution isotonique et un tampon ainsi que, en outre, un agent complexant le zinc, caractérisée en ce que la teneur globale en zinc est d'au moins 5 Zn + / unité d'inusline hexamère et, dans un mode d'exécution préféré de la présente invention, d'au moins 6 Zn 2 + / insuline hexamère. Les agents complexants le zinc utilisés dans les nouvelles solutions d'insuline doivent être solubles et physiologiquement acceptables. Des agents adéquats complexant le zinc sont les acides aminés, par exemple la glycine, l'alanine, la valine, la leucine, l'isoleucine, le sérine, la thréonine, la phénylalanine, la proline, le trypto- phane, l'asparagine, l'acide glutamique et l'histidine, ainsi que les oligopeptides, comme la diglycine. Un autre groupe d'agents complexant le zinc adéquats sont les acides carboxyliques tels que l'acide acétique ou les acides hydroxycarboxyliques, comme l'acide citrique, l'acide 3-hydroxybutyrique et l'acide lactique. Des agents complexants le zinc préférés sont la glycine et l'acide citrique La diglycine et l'histidine sont également des complexants préférés. La concentration minimale en ions zinc permettant d'obtenir un effet stabilisant substantiel, à savoir un facteur de stabilité (défini dans la partie détaillée de la description), dans la gamme de 5 à 10, dépend du choix de l'agent complexant utilisé On préfère, néanmoins, un facteur de stabilité supérieur à 10. Dans le cas de l'utilisation d'un agent complexant faible, par exemple de glycine 10 m M, on obtient une stabilisation notable pour une teneur globale en zinc Z 2 + d'environ 5 I Zn / insuline hexamère, voir tableau I et figure 2, et la gamme préférée pour la teneur globale en zinc est comprise dans la gamme d'-environ à environ 8 Zn 2 +/insuline hexamère. Tableau I UI d'insuline porcine par ml dans une solution -2 molaire de glycine présentant une concentration en zinc variable, préparée d'une manière analogue à celle de l'exemple 7. Zn 2 + Conc en zinc Zn 2 + par unité Facteur de stabilité (M) d'insuline 1,0 10 -4 2,4 1 -4 1,8 10 4,4 4 2,0 10-4 4,9 7 2,2 10 5,4 45 2,6 10 -4 6,4 49 3,4 10-4 8,4 8 3,8 10-4 9,4 10 4,0 10 -4 9,9 15 * Teneur globale en ions zinc Si on utilise un agent complexant plus fort, par exemple l'acide citrique, il faut une teneur globale en zinc d'environ 40 à 200 Zn 2 + / insuline hexamère pour obtenir une stabilisation notable, voir le tableau II suivant. Si on utilise l'acide citrique comme agent complexant, la teneur globale en zinc préférée, à p H 7,4, exprimée en millimoles par litre, peut être de 0,004 x A + k x B, A représentant les unités internationales d'insuline par ml et B représentant la concentration du citrate en millimoles par litre. Le coefficient k est compris dans l'intervalle de 0,5 à 1,0, de préférence d'environ 0,7 à 0,9. TABLEAU II UI d'insuline porcine par ml ayant une concentration en zinc et en citrate variable, la solution étant préparée d'une manière analogue à celle de l'exemple 8. : X) Teneur globale en ions zinc Si on utilise un agent complexant le zinc, la limite supérieure de la teneur globale en zinc correspond à la quantité de zinc provoquant la précipitation du complexe de zinc et d'insuline, c'est-à-dire lorsque la teneur en ions zinc non liés par l'agent complexant dépasse environ 5 Zn 2 + / insuline hexamère. Le test de stabilité décrit ci-après peut être conseillé pour s'assurer que les agents complexants con- sidérés et leurs proportions laissent bien la valeur pré- férée de 4,2-4,5 Zn 2 +/insuline hexamère à la disposition de l'insuline On peut s'attendre à ce que le contenu to- tal en zinc dans la solution d'insuline contenant l'agent complexant soit compris entre 5 et 10 Zn 2 +/insuline hexa- mère lorsque des agents complexants faibles sont présents et soit compris d'environ 10 à environ 200 Zn 2 +/insuline Conc en zinc Zn 2 + par) Citrate Facteur de unité stabilité d'insuline (M) hexamère (M) 1,0 10-4 2 10-2 1 0,6 10-2 150 10-2 6 0,8 10-2 200 10-2 10 0,9 10-2 225 10-2 10 0,95 10-2 238 10-2 19 1,0 10-4 2 2,0 10-3 1 1,6 10-3 40 2,0 10-3 6 1,8 10-3 45 2,0 10-3 30 2,0 10-3 50 2,0 10-3 19 hexamère lorsque des agents complexants forts sont présents. En plus du test de stabilité, la limite supé- rieure du contenu total de zinc, par exemple le contenu de zinc causant la précipitation du complexe insuline zinc peut être utilisée pour déterminer la quantité de zinc total dans la solution d'insuline contenant l'agent complexant d'o il résulte un accroissement important dans la stabilité. L'expérience de l'inventeur a révélé que l'on peut s'attendre à ce que la quantité totale d'ions zinc dans la solution d'insuline contenant l'agent complexant soit d'environ 50 à environ 90 % de la quantité d'ions zinc qui causeraient la précipitation du complexe zinc insuline. La quantité totale d'ions zinc est de préféren- ce d'environ 60 à environ 90 % et de préférence encore d'environ 75 à environ 90 % de la quantité d'ions zinc qui causeraient la précipitation du complexe insuline zinc. Des préparations d'insuline à p H neutre contenant des agents complexants ou des tampons formant des complexes avec le zinc sont connues par le brevet danois n'116 527 susmentionné et par la demande de brevet danois nô 1851/80 Cependant, la teneur en zinc la plus élevée qui est décrite est de 1 % Zn calculée sur la base du poids à sec de l'insuline- cf exemples 2 et 6 La Demanderesse a reproduit ces deux exemples, voir les exemples 9 et 10 ci-après. On en conclut que les préparations connues présentent un facteur de stabilité de, respectivement, 3,5 et l seulement. La concentration en insuline dans la solution est de préférence comprise dans la gamme de 5 à 750 UI et, plus particulièrement, de 40 à 500 UI par ml. La présente invention concerne également un procédé pour la préparation de nouvelles solutions d'insuline convenant pour l'utilisation dans un dispositif d'injection d'insuline en continu, les solutions étant physiquement stables dans les conditions nécessaires pour une telle injection en continu et contenant éventuellement un agent de conservation, un agent rendant la solution isotonique et un tampon, le procédé étant caractérisé en ce qu'on introduit dans ladite solution d'insuline un sel de zinc essentielle- ment à l'état ionisé, en une concentration correspondant à une teneur en ions zinc à la disposition de l'insuline supérieure à 4 Zn 2 + / insuline hexamère. Un procédé de préparation des solutions d'insuline de la présente invention, donné à titre d'exemple, consiste à dissoudre l'insuline de zinc cristalline, par exemple de l'insuline d'une grande pureté comme l'insuline "monocomposée" (voir le brevet britannique n'1 285 023), dans de l'eau, en présence d'acide, par exemple l'acide chlorhydrique On prépare, séparément, une solution aqueuse de l'agent de conser- vation, par exemple du phénol ou un alkylphénol, comme le crésol ou le parahydroxybenzoate de méthyle; si on le désire, la solution peut également contenir un agent réglant la pression osmotique, comme le glycérol, de préférence en une quantité calculée de manière à rendre la solution finale isotonique; (si on le désire,) la solution peut encore contenir un agent complexant, comme le citrate ou la glycine. Cette solution est ensuite ajoutée à la solution acide d'insuline, puis on y introduit une base, par exemple une solution d'hydroxyde de sodium, pour porter le p H à la neutralité Dans cette description, il faut entendre par "neutralité" ou "p H neutre", une valeur du p H comprise dans la gamme d'environ 7 à environ 8 Les quantités calculées de sel de zinc, comme l'acétate de zinc, de tampon (si on le désire), comme le TRIS, et d'agent complexant peuvent être ajoutées à cette étape opératoire, en réglant ensuite de nouveau le p H. En variante, on peut introduire le sel de zinc dans la solution acide d'insuline avant la neutralisation de celle-ci La solution obtenue est finalement portée au volume calculé au moyen d'eau, stérilisée par filtration et ensuite transvasée dans des fioles stériles. La présente invention fournit également un procédé pour l'infusion d'insuline à l'homme, carac- térisé en ce que la préparation d'insuline utilisée à cet effet est une préparation d'insuline conforme à l'invention. Essai de stabilité Les solutions d'insuline ainsi préparées sont soumises à un essai de stabilité dans des conditions forcées comme décrit cidessous: Des fioles (ayant une capacité de 12,5 ml) contenant l'échantillon d'essai ( 10 ml) et pourvues chacune d'un bouchon en caoutchouc sont disposées verticalement sur une table vibrante (type 01 T 623 TBSHO 2, vendue par HETO, Birkered, Danemark) qui est complètement immergée dans un bain d'eau maintenu à 41 VC 0,1 C La table vibrante est soumise à des mouvements de chocs horizontaux suivant une fréquence de 100 t/min et une amplitude-de 50 mm. L'opalescence des échantillons d'essai est contrôlée à des intervalles de temps réguliers sur un néphélomètre Fischer DRT 1000 muni d'un adaptateur pour fioles Le temps de fibrillation est défini en tant que laps de temps nécessaire pour que l'échantil- lon d'essai développe une turbidité de 10 unités néphélométriques de turbidité (UNT). Chaque essai est effectué au moyen d'échantillons d'essai et d'échantillons à blanc ne contenant pas de sel de zinc ajouté ( 4 à 5 fioles de chaque) traités l'un à côté de l'autre. Les échantillons témoins correspondent aux échantillons tes- tés sauf qu'ils contiennent environ 2 Zn 2 +/insuline hexamère, le zinc dans les échantillons témoins provenant de la cristallisation de l'insuline. Le facteur de stabilité est calculé en tant que rapport du temps de fibrillation moyen de l'échantillon d'essai à celui de l'échantillon à blanc. L'invention est décrite plus en détail en référence aux des- sins annexés dans lesquels la figure 1 représente le facteur de stabilité à 410 C en fonction de la concentration de l'ion zinc ( 100 UI d'insuline porcine par ml préparée suivant l'exemple 1), et lafigure 2 représente le facteur de stabilité à 410 C en fonction de la teneur globale en ions zinc, en présence d'un agent complexant faible ( 40 UI d'insuline porcine par ml dans la glycine 10-2 mo- laire préparée d'une manière analogue à celle de l'exemple 7). De la figure 1, il apparaît que la stabilité de la solution d'insuline est brusquement accrue pour une teneur en ions zinc su- périeure à 4 Zn 2 +/insuline hexamère. En présence d'un agent complexant faible, on obtient un ac- croissement substantiel de la stabilité pour une teneur en ions zinc plus élevée, à savoir environ 5 Zn 2 +/insuline hexamère puis- qu'une partie du zinc est liée par l'agent complexant et n'est,par conséquent, pas à la disposition de l'insuline. D'autres détails de la présente invention appa- ra Itront dans les exemples suivants qui ne doivent cependant pas être considérés comme apportant une S limitation à la portée de l'invention. Dans les exemples, la solution aqueuse et l'eau utilisée sont stérilisées, la première par filtration, et les opérations subséquentes sont effectuées dans des conditions aseptiques. Exemple 1 UI d'insuline porcine par ml contenant 4,2 Zn 2 + / insuline hexamère On a dissous de l'insuline porcine monocomposée cristalline ( 264 mg) contenant 0,4 % de zinc et ayant une activité totale de 10 000 UI dans de l'eau ( 50 ml) contenant de l'acide chlorhydrique 325 1 l de H Cl 1 N) et on a ensuite ajouté une solution aqueuse ( 25 ml) contenant du glycérol ( 1,6 g) et du phénol ( 200 mg). On a réglé le p H de la solution à 7,5 au moyen d'une solution d'hydroxyde de sodium On a ajouté de l'acétate de zinc ( 1,56 ml d'une solution 10 molaire), on a réajusté le p H à 7,5 et on a porté le volume total à 100 ml au moyen d'eau La solution ainsi obtenue a été stérilisée par filtration et puis transvasée de manière aseptique dans des fioles ( 10 ml). Facteur de stabilité: > 15. Exemple 2 500 UI d'insuline porcine par ml contenant 4,2 Zn 2 + insuline hexamère. On a dissous de l'insuline porcine monocomposée cristalline ( 20,75 g) contenant 0,4 % de zinc et ayant une activité totale de 550 000 UI dans de l'eau ( 550 ml) contenant de l'acide chlorhydrique ( 10 ml de HCL 1 N). A une partie aliquote de cette solution ( 50 ml), on a ajouté de l'acétate de zinc ( 78 ul d'une solution molaire) et ensuite une solution aqueuse ( 25 ml) contenant du glycérol ( 1,6 g) et du phénol ( 200 mg). On a régle le p H de la solution à 7,4 au moyen d'une solution d'hydroxyde de sodium et on a porté le volume total à 100 ml avec de l'eau La solution ainsi obtenue a été stérilisée par filtration et ensuite été transférée de manière aseptique dans des fioles ( 10 ml). Facteur de stabilité: 5. Exemple 3: UI d'insuline humaine par ml contenant 4,3 Zn + / insuline hexamère On a dissous de l'insuline porcine monocomposée cristalline ( 1,67 g) contenant 0,4 % de zinc et ayant une activité totale de 45 000 UI dans de l'eau ( 225 ml) contenant de l'acide chlorhydrique ( 1,46 ml de H Cl 1 N). A une partie aliquote de cette solution ( 25 ml) on a ajouté de l'acétate de zinc ( 100 ul d'une solution 0,1 molaire) et ensuite une solution aqueuse ( 10 ml) contenant du glycérol ( 0,8 g) et du phénol (O,1 g). On a réglé le p H de la solution à 7,4 au moyen d'une solution d'hydroxyde de sodium et on a porté le volume total à 50 ml avec de l'eau La solution ainsi obtenue a été stérilisée par filtration et ensuite été transférée de manière aseptique dans des fioles ( 10 ml). Facteur de stabilité: 26. Exemple 4: UI d'insuline porcine par ml contenant 4,5 Zn 2 + / insuline hexamère. La procédure est analogue à celle de l'exemple 1 sauf qu'on a ajouté 1,89 ml d'une solution 10 2 molaire d'acétate de zinc offrant donc ainsi une quantité de 4,5 Zn 2 + insuline hexamère. Facteur de stabilité: > 33. Exemple 5: UI d'insuline humaine par ml contenant 4,2 Zn 2 + / insuline hexamère. On a dissous de l'insuline humaine monocomposée cristalline ( 741 mg) contenant 0,4 % de zinc et ayant une activité totale de 20 000 UI dans de l'eau ( 60 ml) contenant de l'acide hydrochlorique ( 640 pl de HCL 1 N) et de l'acétate de zinc ( 3,96 ml d'une solution 10 2 molaire) On a ajouté une solution aqueuse ( 400 ml) de phénol ( 1 g) et de glycérol ( 8 g); on a finalement réglé le p H à 7,45 au moyen d'une solution d'hydroxyde de sodium et porté le volume à 500 ml avec de l'eau. La solution ainsi obtenue a été stérilisée par filtra- tion et ensuite transférée de manière aseptique dans des fioles ( 10 ml). Facteur de stabilité: 34. Exemple 6: UI d'insuline humaine par ml contenant 4,2 Zn 2 + / insuline hexamère dans une solution 10-2 molaire de TRIS. On a dissous de l'insuline humaine monocomposée cristalline ( 1852 mg) contenant 0,4 % de zinc et ayant une activité totale de 50 000 UI dans de l'eau ( 60 ml) contenant de l'acide chlorhydrique ( 1600 pl de HCL 1 N) et de l'acétate de zinc ( 99 pl d'une solution molaire). On a ajouté une solution aqueuse ( 400 ml)de phénol ( 1 g) et de glucérol ( 8 g); on a finalement réglé le p H à 7,45 au moyen de TRIS ( 606 mg) et d'une solution d'hydroxyde de sodium et porté le volume à 500 ml avec de l'eau La solution ainsi obtenue a été stérilisée par filtration et a été transférée ensuite de manière aseptique dans des fioles ( 10 ml). Facteur de stabilité: 16. Exemple 7: UI d'insuline porcine par ml dans une solution 2,6 10-4 et 10 _ 2 molaire, respectivement,de zinc et de glycine. On a dissous de l'insuline porcine' monocomposée cristalline ( 1,49 g) contenant 0,4 % de zinc et ayant une activité totale de 40 000 UI dans de l'eau ( 120 ml) contenant de l'acide chlorhydrique ( 1280 1 de HCL IN). On a ensuite ajouté une solution aqueuse ( 730 ml) de phénol ( 2 g), de glycérol ( 8 g) et de glycine ( 751 mg), on a réglé le p H à 7,5 au moyen d'une solution d'hydro- xyde de sodium On a ajouté de l'acétate de zinc ( 160 p 1 d'une solution molaire), réglé le p H à 7,5 et porté le volume à un total de 1 000 ml avec de l'eau. On a stérilisé la solution par filtration et on l'a ensuite transférée demanière aseptique dans des fioles ( 10 ml). Facteur de stabilité: 63. Exemple 8: UI d'insuline porcine par ml dans une solution 1,8 10-3 et 2 10-3 molaire, respectivement de zinc *et de citrate. On a dissous de l'insuline porcine monocomposée cristalline ( 746 mg) contenant 0,4 % de zinc et ayant une activité totale de 20 000 UI, dans de l'eau ( 60 ml) contenant de l'acide chlorhydrique ( 640 p 1 d'une solution N) On a ajouté une solution aqueuse ( 400 ml) de phénol ( 1 g) et de glycérol ( 8 g) et on a réglé le p H à 7,5 au moyen d'une solution d'hydroxyde de sodium. On a ensuite ajouté de l'acide citrique ( 210 mg de monohydrate) et de l'acétate de zinc ( 850 1 d'une solution molaire) et on a de nouveau réglé le p H à 7,5 La solution a été stérilisée par filtration et ensuite été transférée de manière aseptique dans des fioles ( 10 ml). Facteur de stabilité: 30. Exemple 9 UI d'insuline bovine par ml dans une solution 13,3 10 3 molaire de phosphate de sodium (teneur totale en zinc 1 % correspondant environ à 5, 5 Zn 2 + insuline hexamère. On a reproduit l'exemple 2 du brevet danois n'116 527 On a réglé la teneur en zinc à environ ,5 Zn 2 + / insuline hexamère en ajoutant de l'acétate de zinc et on a réglé le p H à 6,91 La solution a été stérilisée par filtration et ensuite été transférée de manière aseptique dans des fioles ( 10 ml). Facteur de stabilité: 3,5. Exemple 10 UI d'insuline bovine par ml dans une solution 1 e 2 molaire de citrate (teneur totale en zinc 1 % correspondant environ à 5,5 Zn 2 + / insuline hexamère). On a reproduit l'exemple 6 du brevet danois n'116 527 On a réglé la teneur en zinc à environ ,5 ZN 2 + / insuline hexamère en ajoutant de l'acétate de zinc et on a réglé le p H à 7,5 La solution a été stérilisée par filtration et ensuite transférée dans des fioles ( 10 ml). Facteur de stabilité: 1. Revendications 1 Solution d'insuline convenant pour l'utilisa- tion dans un dispositif d'injection d'insuline en continu, la solution d'insuline étant physiquement stable dans les conditions nécessaires pour une telle injection en continu et contenant, éventuellement, un agent de conservation, un agent rendant la solution isotonique et un tampon, caractérisée en ce qu'elle contient un sel de zinc essentiellement à l'état ionisé en une concentration correspondant à une teneur en ions zinc à la disposition de l'insuline supérieure à 4 Zn 2 + / insuline hexamère. 2 Solution d'insuline suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la teneur en ions zinc à la disposition-de l'insuline dans ladite solution est supérieure à 4 Zn 2 + / insuline hexamère et inférieure à environ 4,8 Zn 2 + / insuline hexamère. 3 Solution d'insuline suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la teneur en ions zinc à la. disposition de l'insuline dans ladite solution est comprise dans la gamme d'environ 4,2 à environ 4,5 Zn 2 +/ insuline hexamère. 4 Solution d'insuline suivant l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le sel de zinc est l'acétate de zinc ou le chlorure de zinc. Solution d'insuline suivant l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle contient à titre d'agent de conservation, du phénol et, à titre d'agent rendant la solution isoto- nique, du glycérol. 6 Solution d'insuline suivant l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le p H est compris dans la gamme d'environ 7 à environ 8. 7 Solution d'insuline suivant l'une quelconque des revendications précédentes,caractérisée en ce que la concentration en insuline est comprisedans l'inter- valle correspondant à 5 750, de préférence 40 500 unités internationales d'insuline par ml. 8 Solution d'insuline suivant l'une quelconque des revendications précédentes, contenant encore un agent complexant le zinc, caractérisée en ce que la teneur totale en zinc est d'au moins 5 Zn 2 + / insuline hexamère. 9 Solution d'insuline suivant la revendication 8, caractérisée en ce que la teneur totale en zinc est d'au moins 6 Zn 2 + / insuline hexamère. Solution d'insuline suivant la revendication 8, caractérisée en ce qu'elle contient la glycine ou de l'acide citrique à titre d'agent complexant le zinc. 11 Solution d'insuline suivant les revendications 1 et 8, caractérisée en ce que la teneur totale en zinc est comprise dans la gamme d'environ 5 à environ 8 Zn 2 +/insuline hexamère, dans le cas d'un agent complexant faible. 12 Solution d'insuline selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'en outre elle présente un facteur de stabilité dépassant 5. 13 Solution d'insuline selon la revendication 8, dans laquelle la quantité d'ions zinc présente est d'en- viron 50 à 90 % de la quantité de zinc qui causeraient la précipitation du complexe d'insuline zinc. 14 Solution d'insuline selon la revendication 13, dans laquelle la quantité d'ions zinc présente est d'en- viron 60 à environ 90 % de la quantité d'ions zinc qui causeraient la précipitation du complexe zinc insuline. Solution d'insuline selon la revendication 13, dans laquelle la quantité d'ions zinc présente est d'en- viron 75 à environ 9 o % de la quantité d'ions zinc qui causeraient la précipitation du complexe insuline zinc. 16 Procédé de préparation d'une solution d'insuline suivant l'une quelconque des revendications précédentes, convenant pour l'utilisation dans un dispositif d'injec- tion d'insuline en continu, la solution étant physique- ment stable dans les conditions nécessaires pour une telle injection en continu et contenant, éventuellement, un agent de conservation, un agent rendant la solution isotonique et un tampon, le procédé étant caractérisé en ce qu'on introduit dans ladite solution d'insuline un sel de zinc essentiellement à l'état ionisé, en une concentration correspondant à une teneur en ions zinc à la disposition de l'insuline supérieure à 4 Zn 2 + / insuline hexamère.