FR 2523136 A1 19830916 FR 8303926 A 19830310 La présente invention se rapporte à de nouveaux dérivés de strep- tomycine qui sont de nouvelles substances trouvant une application comme agent antibactérien Plus particulièrement la présente invention se rapporte à la 3 "-épistreptomycine et à la 3 "-épidihydrostreptomycine ainsi qu'au procédé de préparation de ces nouveaux dérivés de streptomycine. La streptomycine est un antibiotique bien connu qui a été découvert par Waskman La streptomycine et la dihydrostreptomycine, cette dernière étant obtenue par réduction du groupe aldéhyde de la streptomycine, sont couramment utilisées en médecine dans le traitement thérapeutique d'infections bacté- riennes Cependant comme la streptomycine et la dihydrostreptomycine ont été largement utilisées, certaines souches bactériennes sont devenues résistantes à ces antibiotiques et, de ce fait les effets thérapeutiques de la strepto- mycine et de la dihydrostreptomycine ont considérablement diminué L'obser- vation de cette résistance bactérienne est généralement rencontrée non seulement avec les antibiotiques du type streptomycine mais également avec d'autres antibiotiques tels que les kanamycines, les lividomycines etc Ces faits historiques ont été rapportés dans les remarques générales mentionnées par Hamao Umezawa, co-inventeur de la présente demande et l'un des premiers à avoir fait état du mécanisme de résistance des bactéries à l'égard des anti- biotiques aminoglycosidiques (H Umezawa; "Advances in Carbohydrate Chemis- try and Biochemistry" Vol 30, page 183, Academic Press 1974). Avec les streptomycines, il a été constaté que le groupe hydroxyle en position 3 " de la molécule des streptomycines pouvait être adénylé par de telles bactéries résistantes capables de produire de la streptomycine adényl- transférase et ainsi des 3 "-O-adénylstreptomycines sont formés avec pour conséquence que les streptomycines peuvent être inactivées à l'égard de leur effet antibactérien (Umezawa et al; "Journal of Antibiotics" Vo L 21, page 81 ( 1968)) Dans ces circonstances des-recherches ont été dirigées en vue d'éliminer le groupe 3 "-hydroxyle de la molécule de streptomycine et ainsi éliminer la possibilité d'inactivation de la streptomycine susceptible de se produire par adénylation du groupe 3 "-hydroxy de la streptomycine Il est donc proposé selon la présente demande un nouveau dérivé de streptomycine susceptible d'être actif également à l'égard des bactéries résistantes à la streptomycine Ces recherches ont permis de synthétiser avec succès la 3 "- déoxydihydrostreptomycine à partir de la streptomycine et l'on a constaté que cette 3 "-déoxydihydrostreptomycine était active à l'égard des bactéries résistantes (voir demande de brevet japonais "Kokai" N O 105154/77; and "Journal of Antibiotics" Vol 29, page 978 ( 1976)). D'autres études ont été poursuivies et l'on a maintenant réussi à effectuer avec succès l'épimérization du groupe 3 "-hydroxyle de la strepto- _ 9 _ mycine et de la dihydrostreptomycine et l'on a constaté que la 3 "épistrep- tomycine et la 3 "-épidihydrostreptomycine nouvellement synthétisés étaient actives à l'égard d'une variété de bactéries résistantes à la streptomycine. Selon un premier mode de réalisation de l'invention, il est proposé comme composé nouveau une 3 "-épistreptomycine représentée par la formule générale suivante: MH il NHC-NH 2 NH )3 O HC-NH 2 4 OH HO 1 H 5 6 O OH (I) H 3 C 2 ' HO 5 " O fi/ 61" H i H N HO 1 CH 3 3 ' 2 " dans laquelle R représente un groupe hydroxyméthyle -CH 20 H pour la 3 "épi- dihydrostreptomycine, et R représente un groupe aldéhyde -CHO pour la 3 "- épistreptomycine et leurs sels d'addition d'un acide pharmaceutiquement acceptable. Le sel d'addition d'un acide pharmaceutiquement acceptable du nouveau composé de la formule générale ci-dessus (I) comprend un sel de 3 "- épistreptomycine ou de 3 "-épidihydrostreptomycine avec un acide non toxique courant tel qu'un acide minéral par exemple l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique et autres ainsi qu'avec un acide organique par exemple l'acide acétique, l'acide malonique, l'acide citrique et autres. Le trichlorhydrate du monohydrate de 3 "-épistreptomycine selon la présente invention est sous la forme d'une substance solide incolore qui -3 2 5 2 3 1 3 6 Z 3136 possède un pouvoir rotatoire spécifique /-_ 73 -80 ( c 1, eau) mais ne possède pas de point de fusion défini Son analyse élémentaire (trouvé: C , 22, H 6,51, N 13,58 %) correspond aux valeurs théoriques pour la formule brute C 21 H 39 N 7012, 3 HCZ,H 20 (Calculé: C 35,58, H 6,26, N 13,83 %). Le carbonate 3/2 de 3 "-épidihydrostreptomycine selon la présente invention est sous la forme d'une substance solide incolore qui présente un pouvoir rotatoire spécifique / 72/73 -79 ( c 0,9, eau) mais ne présente pas de point de fusion défini Son analyse élémentaire (Trouvé: C 39,63, H 6,47, N 14,33 %) correspond h celle calculée pour la formule brute (C 21 H 41 N 7012, 3/2 H 2 C 03) (Calculé: C 39,94, H 6,55, N 14,49 %). Les activités antibactériennes de la 3 "-épistreptomycine et de la 3 "épidihydrostreptomycine ont été mises en évidence au tableau 1 ci-dessous qui montre que les concentrations minimum inhibitrices (mcg/mz) des nouveaux composés selon l'invention tels que déterminés selon la méthode standard de dilution en série en utilisant un milieu nutritif d'agar comme milieu d'in- cubation, l'incubation étant réalisée à 37 "C pendant 17 heures Les concen- trations minimum inhibitrices (CMI) (mcg/m Z) de la streptomycine et de la dihydrostreptomycine ont été également déterminées de la même manière que ci-dessus dans un but de comparaison et sont indiquées dans le tableau 1 ci- dessous Comme représentés au tableau 1, les nouveaux composés de la formule (I) selon la présente invention présentent des spectres antibactériens similaires à ceux de la dihydrostreptomycine de comparaison et montrent des activités antibactériennes améliorées vis-à- vis des bactéries gram négatives, en particulier vis-h-vis de diverses souches résistantes d'Escherichia coli. TABLEAU I i CMI(Mcg/m 2) I 3 " 1-Epidihydro-f 31 "-Epi D Ihydro Streptomycine _______________________Istreptomycine streptomycinel (t C EM Pcm Y> (canreraison) Staphylococcus aureus Il il Bacillus subtilîs NRRL Salmonella typhi T-63 Escherichia coli K-12 Il Il j, I i 209 P POP B 558 P r il ML 1629 If ML 1630 Ili R 8125 if W 677 Il JR 66/W 677 Il C 600R 135 Providencia sp pv 16 Pseudomonas aeruginosa 33 il No 12 il 13-13 Mycobacterium smegmatis 607 12 5 12.-5 6 25 1.-56 1 56 > 100 > 100 > 100 1 56 > 100 3 12 3 12 1 56 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 3 12 > 100 r U -5 2523136 Les nouveaux composés selon la présente invention, à savoir la 3 "- épistreptomycine et la 3 "-épidihydrostreptomycine peuvent être administrés aux animaux vivants y compris les humains de façon aussi sûre que la strep- tomycine et la dihydrostreptomycine dans le traitement thérapeutique d'in- fections bactériennes, du fait que ces composés sont de faible toxicité comme, ceci sera montré par le fait que lorsque la toxicité aig Ue de la 3 "épistrep- tomycine ou de la 3 "-épidihydrostreptomycine a été déterminée par injection intraveineuse de ces composés dans des groupes de souris (souris ICR, adulte, femelle, poids corporel 20 g + 0,5 g, six pour chaque groupe), toutes les souris traitées ont survécu pendant plus de 14 jours après que les nouveaux composés selon l'invention aient été administrés par voie intraveineuse dans chaque souris à une dose de 4 mg/kg (DL 50 supérieure à 200 mg/kg). Les procédés pour la préparation de ces nouveaux composés de formule (I) selon la présente invention sont décrits ci-après Brièvement, la 3 "épidihydrostreptomycine selon l'invention est préparée à partir de la dihydrostreptomycine connue et la 3 '"-épistreptomycine est préparée à partir de la 3 "-épidihydrostreptomycine nouvellement synthétisée. Tout d'abord, un résumé d'un procédé de préparation de la 3 "- épidihydrostreptomycine est illustré par le premier schéma réactionnel qui montre la préparation de la 3 "-épidihydrostreptomycine à partir de la dihy- drostreptomycine par l'intermédiaire d'environ huit étapes -Dans le premier schéma réactionnel et également dans les autres schémas ultérieurs, les sites intermoléculaires des composés qui ont seulement subi un changement ou une modification chimique par réaction chimique à un stade particulier du procédé concerné sont préférentiellement représentés dans les schémas réactionnels respectifs, de telle sorte qu'un substituant ou des substituants qui est ou sont présents dans le composé à un stade particulier mais qui n'est pas ou ne sont pas modifiés dans le composé à l'étape ultérieure, (c'est-à-dire l'étape suivant juste l'étape particulière) n'est ou ne sont pas parfois représentés dans l'étape suivante du schéma réactionnel pour plus de simplicité Dans les schémas réactionnels suivants, Ac représente un groupe acétyle. %O rn -e- flo CM Ln cm ( E) ai nw a oj ( 2) 9-lnwaoa (j) ainuijoi HO C EHOOO HO' H & H Q (s ade 4 a) H Il Ai (v adty 4 s) à, HO 1 OH 2 HNOHN Il EHNOHN HN 1 HN D r 131 Wjj Zr M MZWS USU 4 ad CI % O Ir- m cm Ln C%à ( 9) a -l nuia OOE () a Enulaoq ( ) a-Enluioq ovo HO HD 1 (a aài?:rd) (D ade 4 s) 0- (a adi 2 qi) r- DVHNOMN OVN % O rn le- m C\j Ln CNJ ( à I) ainuijoq ( 8) elntuioa (L) ainuiao,,T HO H O l\ OH lov H Ho r. (H adreqa) -Q (E) adem) (a adr-qa) CD HO ?-HNOHN 1 EHNOHN HN 1 HN -9- -9 2523136 On va maintenant décrire un procédé pour la préparation de la 3 "- épidihydrostreptomycine en faisant référence aux étapes respectives du procédé représenté dans le premier schéma réactionnel mentionné ci-dessus et illustré par l'exemple 1 ci-après La dihydrostreptomycine qui est utilisée comme substance de départ dans ce procédé est le composé représenté par la formule ( 1) dans le premier schéma réactionnel Pour synthétiser la 3 "- épidihydrostreptomycine selon l'invention à partir de la dihydrostrepto- mycine, le groupe 2 "-méthylamino du composé de formule ( 1) est tout d'abord sélectivement protégé à l'étape A du procédé par un groupe aminoprotecteur connu tel qu'un groupe aralkyloxycarbonyle de préférence un groupe benzyl- oxycarbonyle Dans ce but le composé de départ de formule ( 1) peut de pré- férence être mis à réagir avec une proportion molaire ou substantiellement molaire de chlorure de benzyloxycarbonyle dans un mélange d'eau et d'acétone à une température de -20 C à 50 C, de préférence à O C sous refroidissement à la glace en présence d'une base de préférence un carbonate de métal alcalin tel que du carbonate de sodium apres quoi la benzyloxycarbonylation préfé- rentielle du groupe 2 "-méthylamino se produit pour conduire à la 2 "-Nben- zyloxycarbonyldihydrostreptomycine représentée partiellement par la formule ( 2) dans le premier schéma réactionnel. Ensuite, dans l'étape B de ce procédé, la paire des deux groupes 3 ' et 3 'a-hydroxyl ainsi que la paire des deux groupes 4 " et 6 "-hydroxyle du composé de formule ( 2) sont protégées par un groupe connu hydroxyle protecteur divalent tel qu'un groupe alkylidène, de préférence isopropy- lidène Dans ce but, le composé de formule ( 2) est de préférence mis à réagir avec le 2,2-diméthoxypropane dans le diméthylformamide anhydre (DMF) en présence d'un catalyseur de réaction tel que l'acide paratoluène sulfonique de sorte que la paire des deux groupes 3 ' et 3 'a-hydroxyle ainsi que la paire des deux groupes 4 " et 6 "-hydroxyle du composé de formule ( 2) sont chacun protégés simultanément par un seul groupe isopropylidène pour conduire à la 2 "-N-henzyloxycarbonyl-3 ',3 'a; 4 ", 6 "-di-0-isopropylidènedihydro- streptomycine représentée partiellement par la formule ( 3) dans le premier schéma réactionnel. Après quoi, dans l'étape C de ce procédé, tous les groupes hydro- xyles libres restant ( 4) et les deux groupes guanidyles du composé de formule ( 3) sont protégés respectivement Dans ce but, tous ces groupes fonctionnels hydroxyles et guanidyles peuvent être de préférence protégés par des groupes acétyles Le réactif d'acétylation disponible dans ce but peut être l'anhy- dride acétique employé en présence d'acétate de sodium Ainsi le composé de formule ( 3) est mis à réagir avec l'anhydride acétique en présence d'acétate de sodium en utilisant un excès d'anhydride acétique comme milieu réactionnel -1 o 2523136 pour conduire à la tétra-N -acétyl-2,5,6,3 "-tétra-0-acétyl-2 "-Nbenzyloxy- carbonyl-3 ',3 'a; 4 ", 6 "-di-0-isopropylidène-dihydrostreptomycine représentée par la formule ( 4) dans le premier schéma réactionnel. Ensuite, à l'étape D de ce procédé, le composé de formule ( 4) est traité de façon à éliminer préférentiellement le groupe 2 "-N-benzyloxycarbo- nyl et ensuite libérer le groupe 2 "-méthylamino libre Dans ce but, le com- posé de formule ( 4) est de préférence soumis à une hydrogénolyse catalytique à l'hydrogène en présence d'un catalyseur connu d'hydrogénolyse tel que le noir de palladium, comme ceci est conventionnellement réalisé selon la technique pour l'élimination du groupe benzyloxycarbonyl amino-protecteur On obtient ainsi la tétra-N -acétyl-2,5,6,3 "-tétra-O-acétyl-3 ',3 'a; 4 ", 6 "-di- O-isopropylidène-dihydrostreptomycine partiellement représentée par la formule ( 5) dans le premier schéma réactionnel. Ensuite, à l'étape E du présent procédé, le composé de formule ( 5) est traité de façon à éliminer de préférence le groupe acétyl protecteur du groupe 3 "-hydroxyle du composé ( 5) Dans ce but, le composé ( 5) est dissous dans un volume d'éthanol, et la solution éthanolique résultante est maintenue à la température de 20-30 C pendant une journée ou de préférence pendant une période d'environ 3 jours, ce qui provoque l'élimination sélective du groupe 3 "-O-acétyl par éthanolyse. La possibilité d'éliminer seulement le groupe acétyl protecteur du groupe 3 "-hydroxyle alors que les autres groupes O-acétyl protecteurs ne sont pas coupés à l'égard des groupes 2-, 5-et 6-hydroxyle dudit composé, était tout à fait imprévisible et surprenante Par cette étape E, on obtient la tétra-N -acétyl-2,5,6-tri-O-acétyl-3 ',3 'a; 4 ", 6 "-di-O-isopropylidène- dihydrostreptomycine partiellement représentée par la formule ( 6) du premier schéma réactionnel. Ensuite, dans l'étape F du présent procédé, le groupe 2 "-méthyl- amino du composé de formule ( 6) est à nouveau protégé par un groupe benzyl- oxycarbonyle Dans ce but, le composé de formule ( 6) peut être soit mis à réagir avec du chlorure de benzyloxycarbonyle de la même manière que dans l'étape A ci-dessus soit peut être mis à réagir avec du chlorure de benzyl- oxycarbonyle dans du chloroforme en présence de carbonate acide de sodium De cette manière, on obtient la tétra-N G-acétyl-2,5,6-tri-O-acétyl-2 "-Nbenzyl- oxycarbonyl-3 ',3 'a; 4 ", 6 "-di-O-isopropylidène-dihydrostreptomycine par- tiellement représentée par la formule ( 7). Ensuite à l'étape G du présent procédé, le composé de formule ( 7) est dissous dans un volume d'un solvant organique approprié tel que le dichlorométhane et la solution résultante du composé ( 7) est mis à réagir avec une proportion molaire de 1 à 10 d'anhydride d'acide trifluorométha- -11- nesulfonique en présence de pyridine sous refroidissement (de préférence à une température d'environ -50 C + 50 C), de sorte qu'il est rapidement formé un dérivé instable de 3 "-0-trifluorométhylsulfonyle du composé ( 7) sous forme d'une substance vitreuse, cette dernière substance est ensuite dissoute dans un volume de pyridine et laissé reposée à température de 10 C à 100 C, de préférence à température ambiante ce qui permet au groupe 3 '-trifluoromé- thylsulfonyl d'inter-réagir et de se condenser avec le groupe 2 "-benzyl- oxycarbonylméthylamino, de sorte qu'une réaction de cyclisation se produit pour former un groupe carbamate cyclique donnant le composé de formule ( 8) partiellement représenté dans le premier schéma réactionnel, à savoir la tétra-N -acétyl-2,5,6-tri-O-acétyl-2 ",3 "-N,O-carbonyl-3 "-épi-3 ',3 'a; 4 ", 6 "- di-0-isopropylidène-dihydrostreptomycine. Enfin, à l'étape H du présent procédé, le composé de formule ( 8) est soumis à un traitement N,Odéprotecteur ainsi qu'à l'élimination du groupe 2 ",3 "-N,0-carbonyle par rupture de cycle hydrolytique C'est-à-dire que l'élimination des groupes acétyles N,O-protecteurs et l'élimination du groupe carbamate cyclique (le groupe 2 ",3 "-N,0-carbonyl) du composé de formule ( 8) sont réalisées dans cette étape H Dans ce but, le composé de formule ( 8) peut de façon conventionnelle être hydrolysé dans du tétrahy- drofuranne aqueux en présence d'hydroxyde de baryum, de sorte qu'à la fois les groupes acétyles et le groupe carbamate cyclique peuvent être éliminés. Le groupe 3 "-hydroxyle libéré qui a subi la décarbonylation à ce stade particulier de l'élimination du groupe 2 ",3 "-N,0-carbonyl reste inversé dans la position épi, de sorte que l'on forme la 3 "-épi-3 ',3 'a; 4 ",6 "-diO- isopropylidène-dihydrostreptomycine A cette étape H, il est ensuite néces- saire que ce dernier composé soit soumis à l'élimination des groupes 3 ', 3 'a 4 ", 6 "-di-O-isopropylidène et ceci peut 8 tre réalisé selon une méthode conventionnelle pour l'élimination de groupe isopropylidène selon la techni- que usuelle Par exemple, l'élimination des groupes 3 ',3 'a; 4 ",6 "-di-0- isopropylidène peut être réalisée en hydrolysant la 3 "-épi-3 ',3 'a; 4 ", 6 "-di- 0-isopropylidène-dihydrostreptomycine intermédiaire dans de l'acide acétique aqueux De cette façon, on obtient la 3 "-épidihydrostreptomycine recherchée, représentée par la formule (I') du premier schéma réactionnel. Dans la description suivante, le procédé de préparation du composé de formule (I') selon l'invention est décrit en faisant référence au cas o les groupes benzyloxycarbonyl, isopropylidène et acétyle sont particulière- ment préférés en tant que groupes protecteurs. Il est cependant tout à fait évident que la N,0-protection requise des composés concernés peut être réalisée en employant un groupe amino- protecteur susceptible d'être équivalent au groupe benzyloxycarbonyl; un 12- groupe guanidyl-amino (ou imino) protecteur susceptible d'être équivalent à un groupe acétyl, de même que des groupes hydroxylprotecteurs susceptibles d'être équivalents au groupe isopropylidène et au groupe acétyl respective- ment. Selon un second mode de réalisation de l'invention, il est proposé un procédé pour la préparation de la 3 "-épidihydrostreptomycine, qui comprend les étapes consistant: (a) à faire réagir la tétra-N -acétyl-2,5,6,3 "-tétra-0-acétyl- 3 ',3 'a; 4 ",6 "-di-0-isopropylidène-dihydrostreptomycine de formule: N Ac NHCNH Ac N Ac I NHCNH Ac Ac O O Ae / Oa O Ac ( 5) H 3 C CH 3 O O CH 3 H 3 C X CH 2 CH 3 H 3 O Ac dans laquelle Ac représente un groupe acétyl, avec de l'éthanol à une tem- pérature de 20-30 'C pour effectuer l'élimination préférentielle du groupe 3 "- 0-acétyl de la dihydrostreptomycine ci-dessus N,0-protégée et ainsi conduire à la tétra-N -acétyl-2,5,6-tri-0-acétyl-3 ',3 'a; 4 ",6 "-0isopropylidène- dihydrostreptomycine, (b) à faire réagir le produit de l'étape (a) cidessus avec le I chlorure de benzyloxycarbonyl pour conduire à la tétra-N -acétyl-2,5,6tri-0- acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 ',3 'a; 4 ",66 "-di-0-isopropylidènedihydrostrep- tomycine, -13- (c) à faire réagir le produit de l'étape (b) ci-dessus avec de l'anhydride d'acide trifluorométhanesulfonique dans de la pyridine à une température de -50 C à 50 C pour former le dérivé 3 "-0trifluorométhylsul- fonyl, et à laisser ce dernier dérivé au repos en solution dans la pyridine à une température de 10 C à 100 C pour conduire à la tétra-NGacétyl-2,5,6-tri- 0-acétyl-2 ",3 "-N,O-carbonyl-3 "-épi-3 ',3 'a; 4 ",6 "-di-0isopropylidène-dihydro- streptomycine de formule: N Ac NHCNH Ac N Ac c NHCNH Ac O Ac/ O CH / O 4 ( 8) H 3 CHH 3 o H o 3 113 011221 dans laquelle Ac est tel que défini ci-dessus. (d) à hydrolyser le produit de l'étape (c) ci-dessus avec de l'eau en présence d'hydroxyde de baryum pour éliminer tous les groupes acétyles et le groupe 2 ",3 "-N,O-carbonyl et ainsi obtenir la 3 "-épi-3 ',3 'a; 4 ", 6 "-di-O- isopropylidène-dihydrostreptomycine, et (e) à hydrolyser le produit de l'étape (d) ci-dessus pour éliminer les groupes 3 ',3 'a; 4 ", 6 "-di-0-isopropylidène et ainsi obtenir la 3 "- épidihydrostreptomycine recherchée. En outre, le second nouveau composé selon l'invention à savoir la 3 "-épistreptomycine peut être obtenu au départ de la 3 "épidihydrostrepto- mycine tel que synthétisé ci-dessus. Un résumé d'un tel procédé de préparation de la 3 "-épistreptomycine est illustré par le deuxième schéma réactionnel dans lequel les sites inter- -14 25231 36 moléculaires des composés qui ont seulement subi un changement chimique ou une modification par réaction chimique à un stade particulier du procédé concerné sont préférentiellement représentés de telle sorte qu'un substituant ou des substituants qui est ou sont présents dans le composé à un stade particulier mais qui n'est pas ou ne sont pas modifiés dans le composé à l'étape ultérieure n'est ou ne sont parfois pas représentés dans l'étape suivante du schéma réactionnel pour plus de simplicité. %O Po m CM Ln cm (-l-l) afniuaoq ( 01) aintwoj ( 6) alnm-xoj 0 EHOO;D Ho G ?-Hn OOD EHO Ln I.-I "El Ce a d L-4 lu) OH i HNOH il HN -HNOHN HN HO e H ( 4 I) qs 6 duco -e (M ade 4 à) -c- ( 1 9 de 4 z) ovo DVHNOHN il VVN rf DWIJJ'r M VW 3 HDS GNOMS %O M -r- m (M tn (M (j) E)lniuaoéi (?T) ginuijoèl (,J); 91 nuijoq OH O iHDOO O HO H -E î il (N adv 4 a) HO OH 2 HNOHN Il HNOHN HN il %D 1-4 (ii a dr-q m (ri ad'?Tj) 1 ' HO 2 HNOH Il HN HNOH il HN Il HN -17 2523136 On décrit ci-après un procédé de préparation de la 3 "-épistrepto- mycine à partit de la 3 "-épidihydrostreptomycine en faisant référence aux étapes respectives du procédé représenté dans le second schéma réactionnel ci-dessus et illustré par l'exemple 2 donné ci-après. La 3 "-épidihydrostreptomycine qui est employée comme substance de départ dans ce procédé est le composé de formule (I') représenté dans le premier schéma réactionnel donné ci-dessus A l'étape I de ce procédé, le groupe 2 "-méthylamino du composé de départ de formule (I') est tout d'abord protégé de façon préférentielle par un groupe benzyloxycarbonyle en faisant réagir le composé de départ (I') avec du chlorure de benzyloxycarbonyle de la même manière que dans l'étape A du procédé selon le premier schéma réactionnel On obtient ainsi la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "épidihydrostrep- tomycine de formule ( 9) représentée dans le second schéma réactionnel, qui est généralement obtenue sous la forme de son chlorhydrate. A l'étape J de ce procédé, la paire des deux groupes 3 ' et 3 'a- hydroxyle du composé de formule ( 9) est protégé avec un groupe hydroxyl protecteur divalent connu tel qu'un groupe alkylidène Dans ce but le composé de formule ( 9) peut être mis à réagir avec un excès de la proportion molaire de 2,2-diméthoxypropane dans du DMF anhydre en présence d'acide p-toluène sulfonique de telle sorte que le produit recherché mono-O-isopropylidéné est formé en mélange avec certains produits poly-O-isopropylidénés Les produits poly-O-isopropylidénés peuvent être transformés en produit recherché monoO- isopropylidéné par traitement avec de l'acide acétique aqueux On obtient ainsi le 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-épi-3 ',3 'a-O-isopropylidènedihydrostrep- tomycine de formule ( 10) partiellement représentée dans le second schéma réactionnel. Dans l'étape K suivante de ce procédé, tous les groupes hydroxyles libres et tous Les groupes guanidyles du composé de formule ( 10) sont pro- tégés avec des groupes protecteurs appropriés Dans ce but, le composé de formule ( 10) est de préférence acétylé de la même manière que dans l'étape C du procédé selon le premier schéma réactionnel, c'est-à-dire par réaction avec une proportion molaire de 10 ou plus d'anhydride acétique en présence d'acétate de sodium Dans cette étape K, on obtient ainsi la tétra-NG- acétyl-2,5,6,3 ",4 ",6 "-hexa-0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-épi-3 ',3 'a-O- isopropylidène-dihydrostreptomycine de formule ( 11). * A l'étape L de ce procédé, le composé de formule ( 11) est ensuite soumis à l'élimination du groupe 3 ',3 'a-0-isopropylidène de la même manière que dans l'étape H du procédé selon le premier schéma réactionnel, par hydrolyse du composé ( 11) dans l'acide acétique aqueux, ce qui conduit à l'obtention du composé de formule ( 12) à savoir la tétra-NG-acétyl-2,5,6, -18- 3 ",4 ",6 "'-hexa-O-acétyl-2 "-N-henzyloxycarbonyl-3 "épidihydrostreptomycine. Ensuite, à l'étape M du présent procédé, le groupe 3 '-hydroxyméthyl (le groupe méthylol) du composé de formule ( 12) est oxydé en groupe aldéhyde -CHO Dans ce but, le composé de formule ( 12) est de préférence mis à réagir avec du diméthylsulfoxyde comme agent d'oxydation en présence de pyridine, d'acide trifluoroacétique et de dicyclohexylcarbodiimide On obtient ainsi la tétra-NG-acétyl-2,5,6,3 ",4 ",6 "-hexa-O-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "- épistreptomycine (qui n'est pas représentée dans le second schéma réaction- nel) Ce dernier composé aldéhyde est ensuite soumis à l'élimination des groupes acétyles et cette déacétylation est de façon appropriée effectuée par hydrolyse dudit aldéhyde avec une solution concentrée aqueuse d'ammoniaque dans le méthanol De cette façon on obtient la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "- épistreptomycine de formule ( 13). Après l'étape ci-dessus de déacétylation, le composé de formule ( 13) est soumis dans l'étape finale du présent procédé à l'élimination du groupe 2 "-N-benzyloxycarbonyl pour donner la 3 "-épistreptomycine recherchée de formule (I") Pour éliminer le groupe 2 "-N-benzyloxycarbonyl du composé ( 13), ce dernier est de façon convéniente soumis à une hydrogénolyse cata- lytique conventionnelle avec de l'hydrogène en présence d'un catalyseur connu d'hydrogénolyse tel que le noir de palladium selon la technique convention- nelle. Selon un troisième mode de réalisation de l'invention, il est proposé un procédé pour la préparation de la 3 "-épistreptomycine qui comprend les étapes successives consistant: (a) à faire réagir la 3 "-épidihydrostreptomycine avec une propor- tion molaire ou substantiellement molaire de chlorure de benzyloxycarbonyle dans un mélange d'eau et d'acétone à une température 20 C à 50 C en présence d'un carbonate de métal alcalin en vue de benzyloxycarbonyler sélectivement le groupe 2 "-méthylamino de la 3 "épidihydrostreptomycine et ainsi obtenir la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "épidihydrostreptomycine, (b) à faire réagir le produit de l'étape (a) ci-dessus avec le 2,2- diméthoxypropane en présence d'acide p-toluènesulfonique pour obtenir la 2 "- N-benzyloxycarbonyl-3 "-épi-3 ',3 'a-0-isopropylidènedihydrostreptomycine, (c) à faire réagir le produit de l'étape (b) cidessus avec de l'anhydride acétique en présence d'acétate de sodium pour obtenir la tétra- N -acétyl-2,5,6,3 ",4 ",6 "-hexa-0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-épi3,3 'a-0- isopropylidène-dihydrostreptomycine, (d) à hydrolyser le produit de l'étape (c) ci-dessus avec de l'acide acétique aqueux pour obtenir la tétra-NG-acétyl-2,5,6,3 ",4 ",6 "hexa- 0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-épidihydrostreptomycine, -19 2523136 (e) à oxyder le groupe 3 '-hydroxyméthyl du produit de l'étape (d) cidessus en faisant réagir ce dernier composé avec le diméthylsuloxyde en présence de pyridine, d'acide trifluoroacétique et de dicyclohexylcarbodii- mide pour obtenir la tétra-NG-acétyl-2,5,6,3 ",4 ",6 "-hexa-0-acétyl-2 "N- benzyloxycarbonyl-3 "-épistreptomycine, (f) à éliminer tous les groupes acétyles du produit de l'étape (e) ci-dessus par hydrolyse pour obtenir la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "- épistreptomycine, et (g) à soumettre la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "épistreptomycine à une hydrogénolyse catalytique pour éliminer le groupe 2 "-Nbenzyloxycarbo- nyle et ainsi obtenir la 3 "-épistreptomycine recherchée. Il a également été constaté qu'il était possible d'obtenir la 3 "- épidihydrostreptomycine de formule (I') par une voie différente de celle du procédé selon le premier schéma réactionnel par l'intermédiaire de la 2 "N- benzyloxycarbonyl-dihydrostreptomycine de formule ( 2) obtenu en tant que produit intermédiaire Ainsi un autre procédé de préparation de la 3 "- épidihydrostreptomycine faisant intervenir le composé intermédiaire de formule ( 2) partiellement représenté dans le troisième schéma réactionnel est plus complètement illustré par l'exemple 3 donné ci-après Le troisième schéma réactionnel est représenté partiellement de façon similaire à celui du premier et du second schéma réactionnel. % O Ni qr- m cm Ln CM (T) alnuiaoj ( 91) alnuijoa (T) elniuiog HO OVO ovo c 1 HO EH DVHNOHN Il ZVN DVHNOHN Z)j IMMLIOVM w qffl Tsicul % O Po t- rf) Cj Ln Cj ( 6 -1) a -1 nula ocq ( 9-E) 9-Enwioq (LI) aintujoi HO e (s 0 EH 0000 EHO (i ade 4 à) DSLIUI " (n au Lqs) HO M adleqa) z HNOH'\L N ^Hj il H HN 1 HN -22 22523136 Dans le procédé selon le troisième schéma réactionnel ci-dessus, l'étape O de ce procédé consiste à effectuer la N,O-acétylation protectrice de la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-dihydrostreptomycine, à savoir le composé de formule ( 2) représenté dans le premier schéma réactionnel et est réalisée de façon similaire à celle de l'étape C du procédé selon le premier schéma réactionnel ou à celle de l'étape K du procédé selon le second schéma réac- tionnel A l'étape O de ce procédé, le composé de formule ( 2) est de préférence mis à réagir avec une proportion molaire de 11 ou plus d'anhy- dride acétique en présence d'acétate de sodium en utilisant un excès d'anhydride acétique comme milieu de réaction pour acétyler tous les groupes libres hydroxyles restants ( 7) (à l'exception du groupe 3 'hydro- xyl) et tous les groupes guanidyles du composé de formule ( 2) et ainsi obtenir la tétra-NG-acétyl-2,5,6,3 'a,3 ",4 ", 6 "-hepta-O-acétyl-2 "-Nbenzyl- oxycarbonyldihydrostreptomycine représentée par la formule ( 14) dans le troisième schéma réactionnel. L'étape P de ce procédé est destinée à dé-benzyloxycarbonyler le composé de formule ( 14) et est réalisé de la même manière que dans l'étape D du procédé selon le premier schéma réactionnel Ainsi le composé de formule ( 14) peut être soumis à une hydrogénolyse catalytique convention- nelle avec de l'hydrogène en présence d'un catalyseur d'hydrogénolyse connu tel que le noir de palladium pour éliminer le groupe 2 "-Nbenzyloxycarbonyle dudit composé et ainsi pour obtenir la tétra-N -acétyl-2,5,6,3 'a,3 ",4 ", 6 "- hepta-O-acétyl-dihydrostreptomycine partiellement représenté par la formule ( 15) dans le troisième schéma réactionnel. L'étape Q de ce procédé est destinée à réaliser une élimination préférentielle du groupe 3 "-0-acétyl du composé de formule ( 15) et peut être réalisée de la même manière que dans l'étape E du procédé selon le premier schéma réactionnel Ainsi le composé de formule ( 15) est dissous dans un volume d'éthanol et la solution éthanolique résultante est laissée au repos à température de 20-30 C pendant une journée ou plus, ce qui permet l'éli- mination préférentielle par éthanolyse du groupe 3 "-O-acétyl du groupe 3 "- hydroxyl du composé ( 15) Le fait qu'il soit possible d'éliminer seulement le groupe acétyl du groupe 3 "-hydroxyl du composé ( 15) alors que tous les autres groupes O-acétyl protecteurs du composé ( 15) ne sont pas coupés était imprévisible et surprenant Par l'intermédiaire de cette étape Q, on obtient la tétra-NG-acétyl-2,5,6,3 'a,4 ",6 "-hexa-0-acétyl-dihydrostreptomycine par- tiellement représentée par la formule ( 16) dans le troisième schéma réac- tionnel. L'étape R de ce procédé consiste à effectuer la réintroduction d'un groupe benzyloxycarbonyl dans le groupe 2 "-méthylamino du composé de -23 2523136 formule ( 16) et peut être réalisée de la même manière que dans l'étape F du procédé selon le premier schéma réactionnel Ainsi le composé de formule ( 16) est soit mis à réagir avec le chlorure de benzyloxycarbonyle dans un mélange d'eau et d'acétone sous refroidissement à la glace en présence d'un carbonate de métal alcalin soit mis à réagir avec du chlorure de benzyloxy- carbonyle dans du chloroforme en présence de carbonate acide de sodium Par G cette étape R, on obtient ainsi la tétra-NG-acétyl-2,5,6,3 'a,4 ",6 "hexa-0- acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-dihydrostreptomycine partiellement représentée par la formule ( 17) dans le troisième schéma réactionnel. L'étape S de ce procédé consiste à méthylsulfonyler le groupe 3 "- hydroxyle du composé de formule ( 17) et peut être réalisée en faisant réagir le composé ( 17) avec une proportion molaire ou substantiellement molaire de chlorure de méthylsulfonyle dans de la pyridine à une température de -50 C à + 50 C Par cette étape S, on obtient ainsi la tétra-NG-acétyl-2,5,6,3 'a,4 ", 6 "-hexa-0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-0-méthylsulfonyldihydrostrepto- mycine partiellement représentée par la formule ( 18). L'étape T du présent procédé consiste à convertir le composé de formule ( 18) en dérivé correspondant 2 ",3 "-N,0-carbonylé Dans ce but, le composé de formule ( 18) peut être dissous dans un volume de 2-méthoxy- éthanol et la solution résultante est alors chauffée à une température élevée de 501 C à 1000 C en présence d'acétate de sodium, ou éventuellement le composé de formule ( 18) est mis à réagir avec du méthylate de sodium dans du méthanol à une température de -20 'C + 50 'C, de préférence à température ambiante, ainsi le groupe 3 "méthylsulfonyloxy inter-réagit et se condense avec le groupe 2 "benzyloxycarbonyl-(méthyl)amino, de telle sorte qu'une réaction de cyclisation se produit pour former le groupe 2 ",3 "-N,0-carbonyl (le groupe cyclique 2 ",3 "-N,0-carbamate), avec simultanément la réaction d'élimination de tous les groupes acétyles De cette façon, on obtient la 2 ",3 "-N,O-carbonyl-3 "-épidihydrostreptomycine de formule ( 19) représentée dans le troisième schéma réactionnel (voir exemple 3 (f), (g) donné ci- après). L'étape U du présent procédé consiste à-effectuer la rupture hydrolytique du noyau du groupe cyclique cis-2 ",3 "-N,0-carbamate de formule ( 19) Ainsi, cette étape U peut être réalisée en hydrolysant le composé de formule ( 19) avec de l'eau en présence d'hydroxyde de baryum dans du tétra- hydrofurane, ce qui permet d'éliminer le groupe 2 ",3 "-N,0-carbonyl (le groupe cyclique 2 ",3 "-N,0-carbamate) par rupture du noyau à partir du composé de formule ( 19) et le groupe 3 "-hydroxyl ainsi libéré reste inversé dans la position épi, pour fournir la 3 "-épidihydrostreptomycine recherchée, à savoir le composé de formule (I') du troisième schéma réactionnel. -Z 4 2523 136 Selon un troisième mode de réalisation de l'invention, il est proposé un procédé pour la préparation de la 3 "-épidihydrostreptomycine qui comprend les étapes consistant: (a) à faire réagir la tétra-N -acétyl-2,5,6,3 'a,3 ",4 ",6 "-hepta-O- acétyl-dihydrostreptomycine de formule: i'Ac Il NHCNH Ac N Ac I 1 NHCNH Ac Ac O O Ac O 0 H 3 C OH O Ac O O H > CH 3 Ac O Ac dans laquelle Ac représente un groupe acétyle, avec de l'éthanol à une température de 20-30 C pour effectuer préférentiellement l'élimination du groupe 3 "-O-acétyl de la dihydrostreptomycine N,O-acétylée ci-dessus men- tionnée et de la sorte conduire à la tétra-N -acétyl-2,5,6,3 'a,4 ",6 "hexa-O- acétyl-dihydrostreptomycine. (b) à faire réagir le produit de l'étape (a) ci-dessus, avec du chlorure de benzyloxycarbonyle pour fournir la tétraNG-acétyl-2,5,6,3 'a, 4 ",6 "-hexa-0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyldihydrostreptomycine, (c) à faire réagir le produit de l'étape (b) cidessus avec du chlorure de méthanesulfonyl dans de la pyridine pour conduire à la tétraNG- acétyl-2,5,6,3 'a,4 ",6 "-hexa-O-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-Ométhylsul- fonyl-dihydrostreptomycine, (d) à faire réagir le produit de l'étape (c) ci-dessus soit avec - le 2-méthoxyéthanol à une température de 50 C à 100 C ou avec du méthylate de sodium dans le méthanol à une température de -20 C 50 C, pour conduira à la 2 ",3 "-N,O-carbonyl-3 "-épi-dihydrostreptomycine, et A -25 2523136 (e) à hydrolyser le produit de l'étape (d) ci-dessus avec de l'eau en présence d'hydroxyde de baryum pour éliminer le groupe 2 ",3 "-N,Ocarbonyl et ainsi conduire à la 3 "-épidihydrostreptomycine attendue. Comme mentionné ci-dessus, les nouveaux composés selon la présente invention, à savoir la 3 "-épistreptomycine et la 3 "épidihydrostreptomycine présentent une faible toxicité Les nouveaux composés selon l'invention sont particulièrement actifs dans le traitement thérapeutique d'infections bac- tériennes, lorsqu'ils sont administrés par voie intramusculaire à une dose d'environ 100 mg à environ 1000 mg par jour à raison de 3 ou 4 prises journalières De façon générale, les nouveaux composés selon l'invention peuvent être administrés par voie orale, intrapéritonéale, intraveineuse ou intramusculaire sous une forme pharmaceutique acceptable pour l'une de ces voies d'administration et de la même manière que pour la streptomycine et la dihydrostreptomycine Parmi les exemples de formes pharmaceutiques accep- tables pour une administration par voie orale, on peut citer les poudres, les capsules, les sirops etc Les nouveaux composés selon l'invention peuvent être également formulés sous forme d'une solution aqueuse injectable. Selon un cinquième mode de réalisation de l'invention, il est proposé une composition antibactérienne comprenant une quantité antibac- térienne suffisante de la 3 "-épistreptomycine ou de la 3 "épidihydrostrep- tomycine comme ingrédient actif, en combinaison avec un véhicule pharmaceu- tiquement acceptable pour l'ingrédient actif. La présente invention va maintenant être illustrée à l'aide des exemples suivants se rapportant à la préparation des-nouveaux composés selon l'invention. EXEMPLE 1 Synthèse de la 3 "-épidihydrostreptomycine (a) Préparation du sulfate de 2 "-N-benzyloxycarbonyl-dihydrostreptomycine (étape A). Du sulfate 3/2 de dihydrostreptomycine ( 73 g) a été dissous dans un mélange d'l litre d'eau, et d'l litre d'acétone et 16 g de carbonate de sodium ont été dissous dans la solution résultante de dihydrostreptomycine, qui a ensuite été refroidie à O o C Du chlorure de benzyloxycarbonyle( 30 ml) a été mélangé avec la solution refroidie sous agitation, et le mélange obtenu a été maintenu à O OC pendant 4 heures et ensuite à la température ambiante pendant 15 heures pour réaliser la réaction d'introduction du groupe benzyloxycarbonyle sur le groupe 2 "-méthylamino de la dihydrostrep- tomycine. La solution réactionnelle a été neutralisée par addition d'acide sulfurique aqueux 2 M et ensuite concentrée à un volume de 70 ml sous pres- sion réduite La solution concentrée a été extraite avec de l'acétate -26 22523 13 6 d'éthyle et la phase aqueuse restante de ladite solution a été séparée et concentrée sous pression réduite pour donner un solide Ce solide a été repris dans du méthanol et la solution méthanolique résultante a été filtrée pour éliminer la matière insoluble La solution méthanolique (le filtrat) a ensuite été concentrée sous pression réduite pour conduire au composé recherché (correspondant à celui de formule ( 2) représentée dans le premier schéma réactionnel) Poids 80 g ( 98 %). (b) Préparation du carbonate de 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 ',3 'a; 4 ",6 "- di-O-isopropylidène-dihydrostreptomycine (étape B). Le produit ( 4,98 g) obtenu à l'étape A ci-dessus a été dissous dans 100 ml de diméthylformamide anhydre, dans laquelle on dissout ensuite 330 mg d'acide p-toluènesulfonique La solution résultante a été mélangée avec 4, 5 ml de 2,2-diméthoxy-propane, puis chauffée à 40 C pendant 18 heures pour effectuer la réaction d'introduction des groupes 3 ',3 'a; 4 ",6 "di-0- isopropylidène Durant cette réaction, des fractions de 220 mg d'acide p- toluènesulfonique ont été ajoutées à la solution réactionnelle aux temps 5 heures, 8 heures et 15 heures après le début de la réaction en vue d'ajuster la solution réactionnelle à p H 4 Après la fin de la réaction, la solution réactionnelle a été mélangée avec 0,4 ml de triéthylamine et ensuite concen- trée à un plus petit volume Un volume d'éther éthylique a été ajouté à la solution concentrée ce qui a provoqué la formation d'un précipité Ce dernier a été éliminé par filtration, puis lavé avec de l'éther éthylique et ensuite repris par de l'eau La solution aqueuse obtenue a alors été traitée sur colonne d'une résine échangeuse d'ions, Dowex 1 x 2 (forme CZ) et l'éluat de la colonne a été concentré à sec Le résidu solide résultant constitué d'un mélange de différents produits d'isopropylidénation a été soumis à une chromatographie sur colonne de gel de silice avec comme solvant un mélange benzène-pyridine-éthanol-eau- acide acétique ( 12:6:6:2:1 en volume) pour l'isolation et la purification des produits et a conduit au composé recherché (représenté par la formule ( 3)) Poids 2,08 g ( 39 %). Ce composé (carbonate) a présenté un pouvoir rotatoire spécifique " 723 -67 (c 1, eau). Analyse élémentaire: Trouvé: C 50,21, H 6,74, N 11,71 % Calculé pour C 35 H 55 N 7014 H 2 Co 3 C 50,28, H 6,68, N 11,40 % (c) Préparation de la tétra-NG-acétyl-2,5,6,3 "-tétra-0-acétyl-2 "-N- benzyloxycarbonyl-3 ',3 'a; 4 ",6 "-di-O-isopropylidènedihydrostreptomycine (étape C) Le produit ( 3,75 g) obtenu à l'étape cidessus C a été mis en -27 2523 136 suspension dans 38 ml d'anhydride acétique, auquel on a ajouté 3,54 g d'acétate de sodium anhydre La suspension obtenue a été agitée vigoureu- sement à 75 C pendant 18 heures pour effectuer la réaction d'introduction des groupes acétyles Après refroidissement à la température ambiante, la solution réactionnelle a été concentrée à un plus petit volume et du cyclo- hexane a été ajouté à la solution concentrée ce qui a provoqué la formation d'un précipité Le précipité a été éliminé par filtration, bien lavé avec du cyclohexane et ensuite repris dans du chloroforme La solution ainsi obtenue a été lavée avec une solution aqueuse saturée de carbonate acide de sodium et ensuite avec de l'eau, puis séchée sur sulfate de sodium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite Le résidu solide obtenu a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice élué avec le mélange toluène- acétate ( 4:1) pour conduire au composé recherché (représenté par la formule ( 4)). Poids 2,4 g ( 49 %) /-" 723 -39 (c 1, chloroforme). Analyse élémentaire: Trouvé: C 53,15, H 6,21, N 8,40 % Calculé pour C 51 H 71 N 7022 H 20: C 53,16, H 6,39, N 8,51 %. (d) Préparation de la tétra-Ng-acétyl-2,5,6,3 "-tétra-O-acétyl-3 ',3 'a; 4 ",6 "-di-O-isopropylidène-dihydrostreptomycine (étape D) Le produit ( 22,1 mg) obtenu dans l'étape C ci-dessus a été repris dans 0,4 ml d'éthanol et soumis à une hydrogénolyse avec de l'hydrogène gazeux sous 1 atm à la température ambiante pendant 2 heures en présence de noir de palladium ajouté à la solution éthanolique (pour effectuer la réaction d'élimination du groupe 2 "-N-benzyloxycarbonyl) La solution réac- tionnelle a été filtrée pour éliminer le catalyseur et le filtrat a été concentré à sec Le résidu solide obtenu a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice élué avec un mélange chloroforme-éthanol ( 18:1) pour conduire au composé recherché (représenté par la formule ( 5) dans le premier schéma réactionnel) Poids 16,8 mg ( 86 %) C a_ 7 3 -48 (c 1, chloro- forme). Analyse élémentaire: Trouvé:C 50,35, H 6,31, N 9,38 % Calculé pour C 43 H 65 N 7 C 20 1/2 H 2 CO 3 1/2 H 20 C 50,23, H 6,49, N 9,43 %. (e) Préparation de la tétra-N -acétyl-2,5,6-tri-0-acétyl-3 ',3 'a; 4 ",6 "-0- isopropylidène-dihydrostreptomycine (étape E) Le produit ( 299 mg) obtenu dans l'étape ci-dessus D a été dissous dans 6 ml d'éthanol et la solution éthanolique a été laissée au repos à 27 ( -28- -28 22523136 pendant 3 jours en vue d'effectuer la réaction de coupure préférentielle du groupe 3 "-O-acétyl La solution réactionnelle a été concentrée à sec sous pression réduite et le résidu solide obtenu a été soumis à une chromatogra- phie sur colonne de gel de silice élué avec le mélange au chloroforme- éthanol ( 15:1) pour l'isolation et la purification du produit de réaction ce qui a conduit au composé recherché (représenté par la formule ( 6) dans le premier schéma réactionnel) Poids 100 mg ( 35 %) Ca 723 -48 (c 1, chloro- D forme). Analyse élémentaire: Trouvé: C 49,95, H 6,13, N 10,17 %. Calculé pour C 41 H 63 N 709 1/2 H 2 CO 3 C P 416379 /2 3 C 50,40, H 6,52, N 9,91 % (f) Préparation de la tétra-N -acétyl-2,5,6-tri-0-acétyl-2 "-N-benzyloxy- carbonyl-3 ',3 'a; 4 ",6 "-di-O-isopropylidène-dihydrostreptomycine (étape F) Le produit ( 23,2 mg) obtenu dans l'étape E ci-dessus a été dissous dans 4,2 ml de chloroforme auquel on a ajouté 2,8 ml d'une solution aqueuse à 0,7 % en carbonate acide de sodium La suspension ainsi obtenue a été refroidie à O C et mélangée avec 0,013 ml de chlorure de benzyloxycarbonyle sous agitation Le mélange résultant a été maintenu à OC pendant 30 minutes et ensuite à la température pendant 1 heure sous agitation pour effectuer la réaction de réintroduction du groupe 2 "-Nbenzyloxycarbonyl On a alors laissé reposer la solution réactionnelle en une couche aqueuse et une couche chloroformique et cette dernière a été décantée, lavée à l'eau, puis séchée sur sulfate de sodium anhydre et concentrée sous pression réduite Le produit huileux ainsi obtenu a été mélangé avec de l'hexane en vue de provoquer la formation d'un précipité Ce précipité a été éliminé par filtration, lavé avec de l'hexane et ensuite purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice, élué avec un mélange benzène-acétone ( 7:3) pour conduire au composé recherché Poids 25,8 mg ( 98 %) L/a I 3 -52 (c 1, chloroforme). Analyse élémentaire: Trouvé: C 53,47, H 6,41, N 9,30 % Calculé pour C 49 H 69 N 7021: C 53,89, H 6,37, N 8,98 %. G (g) Préparation de la tétra-N -acétyl-2,5,6-tri-O-acétyl-2 ",3 "-N,O- carbonyl-3 "-épi-3 ',3 'a; 4 ",6 "-di-O-isopropylidènedihydrostreptomycine de formule suivante (étape G) -29 2523136 N Ac NHCNH Ac N Ac I 11 NHCNH Ac O Ac O Ac o on H 3 C CH 3 ol ' CH 3 H 3 C o O 00 H 3 C CH 3 dans laquelle Ac représente un groupe acétyle. Le produit ( 529 mg) obtenu dans l'étape ci-dessus F est dissous dans 12 ml de dichlorométhane anhydre auquel on ajoute ensuite 1,3 ml de pyridine anhydre La solution obtenue est ensuite refroidie à une tempéra- ture de -50 C et ensuite mélangée avec 0,182 ml d'anhydride d'acide trifluo- rométhanesulfonique et l'on poursuit la réaction à 5 C pendant 3,5 heures. La solution réactionnelle a ensuite été refroidie à la température de -50 C et ensuite mélangée avec 0,3 ml de pyridine anhydre et 0,05 ml d'anhydride d'acide trifluorométhanesulfonique puis la réaction a été poursuivie à 50 C pendant encore 2 heures, ce qui a permis de conduire à la tétra-N -acétyl- 2,5,6-tri-0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-O-trifluorométhylsulfonyl- 3 ',3 'a; 4 ",6 "-di-0-isopropylidène-dihydrostreptomycine Plusieurs gouttes d'eau sont alors ajoutées à la solution réactionnelle contenant le produit ci-dessus mentionné 3 "-0-trifluorométhylsulfonylé et cette solution est laissée au repos à température ambiante pendant 30 minutes, Après quoi la solution réactionnelle a été diluée avec du chloroforme et lavée avec une solution à 10 % de sulfate acide de sodium, puis avec une solution aqueuse de carbonate acide de sodium saturé et ensuite à l'eau La solution ainsi lavée a été séchée sur sulfate de sodium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite pour conduire au produit 3 "-Otrifluorométhylsulfonylé sous forme -30 2523136 d'une substance vitreuse Cette substance a été dissoute dans 12 ml de pyridine et la solution dans la pyridine a été chauffée à 65 C pendant 1 heure pour egfectuer la réaction de condensation du groupe 3 "-trifluoro- méthylsulfonyloxy avec le groupe 2 "-benzyloxycarbonyl(méthyl)amino en vue de former le groupe cyclique 2 ",3 "-N,0 O-carbamate sur la dihydrostreptomycine N,0-protégée, avec inversion simultanée de la configuration au C-3 " La solution réactionnelle contenant le composé recherché telle que formée a été concentrée sous pression réduite et le résidu solide obtenu a été repris dans le chloroforme La solution résultante dans le chloroforme a été lavée O 10 avec une solution aqueuse à 10 % de sulfate acide de potassium, avec une solution aqueuse saturée de carbonate acide de sodium et ensuite avec de l'eau puis séchée et concentrée sous pression réduite Le résidu solide obtenu a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice élué avec le mélange benzène-acétone ( 9:5) pour donner le produit attendu (re- présenté par la formule ( 8) dans le premier schéma réactionnel) Poids 244 mg ( 46 %) /-L 723 -60 (c 1, chloroforme). Analyse élémentaire: Trouvé: C 50,38, H 5,86, N 9,53 %. Calculé pour C 42 H 61 N 7020 H 20: C 50,34, H 6,34, N 9,79 %. (h) Préparation du carbonate de 3 "-épidihydrostreptomycine (étape H). Le produit ( 193 mg) obtenu dans l'étape G ci-dessus a été dissous dans 6 ml de tétrahydrofurane et la solution résultante a été mélangée avec 4 ml d'une solution aqueuse à 5,5 % d'hydroxyde de baryum Le mélange obtenu a été agité à 40 'C pendant 40 heures pour effectuer la réaction d'élimina- tion hydrolytique des groupes acétyles et du groupe 2 ",3 "-N,O-carbonyl par hydrolyse. Du gaz carbonique gazeux a été introduit dans la solution réac- tionnelle qui a ensuite été filtré pour éliminer le précipité Le filtrat a été concentré à sec sous pression réduite et le résidu solide a été repris dans une solution d'acide acétique aqueux à 75 % La solution obtenue a été chauffée à 55 C pendant 71 heures pour effectuer la réaction d'élimination des groupes isopropylidènes La solution réactionnelle a été concentrée sous pression réduite et le solide vitreux ainsi obtenu a été dissous dans l'eau. La solution aqueuse a alors été placée sur une colonne de 10 ml d'une résine échangeuse d'ions, Amberlite CG-50 (forme NH 4), et cette colonne a été éluée avec du carbonate d'ammonium aqueux. L'éluat de la colonne d'Amberlite a été recueilli sous forme de fractions de 1 ml et les fractions actives n'10 à 15 contenant le produit recherché ont été combinées et concentrées sous pression réduite La solu- -31 2523136 tion concentrée a été diluée avec de l'eau et ensuite à nouveau concentrée sous pression réduite Cette dilution avec de l'eau et cette concentration de la solution diluée ont été répétées plusieurs fois jusqu'à ce que le carbonate d'ammonium ne puisse plus être détecté dans la dernière solution concentrée De cette façon le composé recherché (représenté par la formule (I') du premier schéma réactionnel) a été obtenu sous forme d'un solide incolore n'ayant pas de point de fusion défini Poids 22 mg ( 17 %). 7 D 3 -790 (c 0,9, eau). Analyse élémentaire: Trouvé: C 39,63, H 6,47, N 14,33 Calculé pour C H 21 41 N 7012 3/2 H 2 CO C 39,94, H 6,55, N 14,49. Spectre de résonance magnétique nucléaire (dans D 20): 6 4,25 (triplet, 1 H, J 3 " 1,4 " 3 Hz, H-3 "). EXEMPLE 2 Synthèse de la 3 "-épistreptomycine. (a) Préparation du dichlorhydrate de 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "épidihydro- streptomycine (étape I). Du carbonate de 3 "-épidihydrostreptomycine ( 124 mg) a été dissous dans un mélange de 2,1 ml d'eau et 1,1 ml d'acétone, puis l'on a ensuite dissous 23 mg de carbonate de sodium anhydre La solution ainsi obtenue a été refroidie à O C et mélangée avec 0,033 ml de chlorure de benzyloxy- carbonyle sous agitation Le mélange résultant a été maintenu à O C pendant 1 heure et ensuite à la température ambiante pendant 4 heures poureffectuer la réaction d'introduction du groupe 2 "-N- benzyloxycarbonyl La solution réactionnelle a été ensuite concentrée à sec sous pression réduite tout en ajustant la solution à environ p H 7 par addition d'acide chlorhydrique aqueux 1 M Le résidu solide obtenu a ensuite été dissous dans de l'éthanol chaud et la solution éthanolique a été filtrée pour éliminer la substance insoluble La solution éthanolique telle que filtrée a été concentrée à sec sous pression réduite et le résidu solide a été repris dans un faible volume d'eau, puis la solution aqueuse résultante a été traitée sur une colonne de résine échangeuse d'ions, Dowex 1 x 2 (forme Ci) L'éluat de la colonne de résine a été concentré à sec sous pression réduite pour donner le composé attendu (représenté par la formule ( 9) dans le second schéma réactionnel) sous la forme de son di-chlorhydrate Poids 87 mg ( 60 %). -a 723 -66 (c 1, eau). -32 2523136 (bh) Préparation du dichlorhydrate de 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-épi-3 ', 3 'a- 0-isopropylidène-dihydrostreptomycine (étape J). Le produit ( 98 mg) obtenu à l'étape I ci dessus a Été dissous dans 1,3 ml de diméthylformamide anhydre auquel on a ajouté ensuite 3,3 mg d'acide p-toluènesulfonique La solution ainsi obtenue a été mélangée avec 0,1 ml de 2,2-diméthoxypropane et le mélange résultant a été maintenu à 40 C pendant 8 heures pour effectuer la réaction d'introduction du groupe 3 ', 3 'a- 0-isopropylidène De la triéthylamine ( 0,04 ml) a été ajoutée à la solution réactionnelle qui a ensuite été concentrée à un plus petit volume sous pression réduite La solution concentrée a été mélangée avec de l'éther éthylique en vue de provoquer la formation d'un précipité Ce précipité a été éliminé par filtration et bien lavé avec de l'éther éthylique et ensuite le solide a été dissous dans 1,6 ml d'un mélange acide acétique-méthanol ( 1:4) La solution résultante a été maintenue à 50 C pendant 4 heures pour effectuer la réaction d'élimination des groupes isopropylidènes qui auraient été occasionnellement introduits sur les groupes hydroxyles autres que ceux en positions-3 ' et 3 'a de la dihydrostreptomycine La solution réactionnelle ainsi formée a été concentrée à un plus petit volume sous pression réduite et ensuite mélangée avec de l'acétone en vue de provoquer la formation d'un précipité Ce solide (le précipité) a été purifié par chromatographie sur colonne de cellulose élué avec un mélange de pyridine-acétate d'éthyle- acide acétique aqueux 10 % ( 2:2:1), et les fractions de l'éluat contenant le produit recherché ont été combinées et concentrées à sec sous pression réduite Le résidu solide obtenu a été dissous dans l'eau et la solution aqueuse ainsi obtenue a été traitée sur une colonne de résine échangeuse d'ions, Dowex 1 x 2 (forme C%-) L'éluat de cette colonne de résine a été concentré à sec sous pression réduite pour donner le composé attendu (re- * présenté par la formule ( 10)) sous la forme de son di-chlorhydrate Poids 36 mg ( 35 %) / 7/23 -65 e (c 1, eau). Analyse élémentaire: Trouvé: C 46,02, H 6,81, N 11,55, Cg 8,97 % Calculé pour C 32 H 51 N 70142 HC: C 46,27, H 6,43, N 11,80, CQ 8,54 %. (c) Préparation de la tétra-N -acétyl-2,5,6,3 ",4 ",6 "-hexa-0-acétyl-2 "N- benzyloxycarbonyl-3 "-épi-3 ',3 'a-O-isopropylidène-dihydrostreptomycine (étape K). Le produit ( 78 mg) obtenu dans l'étape J ci-dessus a été mis en suspension dans 1,65 ml d'anhydride acétique, puis l'on a ensuite ajouté 88 mg d'acétate de sodium anhydre Le mélange obtenu a été vigoureusement ajouté à 750 C pendant 18 heures pour effectuer la réaction d'introduction -33 2523136 des groupes acétyles La solution réactionnelle a alors été refroidie à température ambiante et concentrée à un plus petit volume sous pression réduite, puis l'on a ajouté à la solution concentrée du cyclohexane en vue de provoquer la formation d'un précipité Ce précipité a été éliminé par filtration, lavé avec du cyclohexane et ensuite dissous dans du chloroforme. La solution résultante dans le chloroforme a été lavée avec une solution aqueuse saturée de carbonate acide de sodium et ensuite avec de l'eau puis séchée sur sulfate de sodium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite Le résidu solide obtenu a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice élué avec le mélange au chloroforme-éthanol ( 30:1) pour conduire au composé attendu (représenté par la formule ( 11)) Poids 76,3 mg ( 69 %) L a 7 D 23 -41 l (c 1, chloroforme). (d) Préparation de la tétra-NG-acétyl-2,5,6,3 ",4 ",6 "-hexa-0 O-acétyl-2 "-N- benzyloxycarbonyl-3 "-épidihydrostreptomycine (étape L). Le produit ( 83 mg) obtenu dans l'étape K ci-dessus a été dissous dans 3, 4 ml d'un mélange de dioxane-eau-acide acétique ( 1:1:6), et la solution résultante a été maintenue à 551 C pendant 50 heures pour effectuer la réaction d'élimination du groupe 3 ',3 'a-O-isopropylidène par hydrolyse. La solution réactionnelle a été mélangée avec du toluène puis concentrée, et au concentrat on a alors ajouté un nouveau volume de toluène et l'on a procédé à la concentration du mélange plusieurs fois Une solution finale concentrée de petit volume a ensuite été mélangée avec du cyclohexane pour provoquer la formation d'un précipité Ce précipité a été éliminé par filtration et lavé avec du cyclohexane et ensuite le solide a été purifié par chromatographie sur une colonne de gel de silice élué avec un mélange chloroforme-éthanol ( 25:1) pour conduire au composé attendu (représenté par la formule ( 12)) Poids 46,5 mg ( 58 %) / a 723 -42 (c 1, chloroforme). (e) Préparation du dichlorhydrate de 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "épistrepto- mycine (étape M). Le produit ( 63 mg) obtenu dans l'étape L ci-dessus a été dissous dans 0, 35 ml de diméthylsulfoxyde anhydre, auquel on a ajouté 0,035 ml de pyridine et 0,018 ml d'acide trifluoroacétique ainsi qu'une solution de 82 mg de dicyclohexylcarbodiimide dans 0,4 ml de diméthylsulfoxyde anhydre Le mélange obtenu a été maintenu à température ambiante pendant 90 minutes sous agitation pour effectuer la réaction d'oxydation du groupe 3 '-hydroxyméthyl en groupe aldéhyde pour obtenir ainsi la tétra-NG-acétyl-2,5,6,3 ",4 ",6 "-0- hexa-O-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-épistreptomycine. La solution réactionnelle a été filtrée pour éliminer la substance insoluble (comprenant de la N,N-dicyclohexyl urée) et le filtrat a été lavé avec du cyclohexane, dilué avec du chloroforme, lavé avec une solution -34- saturée aqueuse de chlorure de sodium puis séché La solution ainsi séchée a été concentrée à sec sous pression réduite Le solide obtenu a été dissous dans 2,8 ml 4 ' un mélange solution aqueuse d'amoniaque concentrée-méthanol ( 1:14) et la solution résultante a été maintenue à température ambiante pendant 3 heures pour effectuer la réaction d'élimination des groupes acétyles La solution réactionnelle contenant la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "- épistreptomycine ainsi formée a été concentrée sous pression réduite et le solide obtenu a été dissous dans l'eau, puis la solution aqueuse a été filtrée pour éliminer la substance insoluble Le filtrat a été purifié par chromatographie sur colonne de résine Dowex 1 x 2 (forme CZ, 3 ml) élué avec de l'eau L'éluat de la colonne de résine a été recueilli sous forme de fractions de 0,5 ml et les fractions N O 5 à 8 contenant le composé recherché ont été combinées La solution ainsi obtenue a été neutralisée par addition d'acide chlorhydrique aqueux 0,1 M, puis concentrée à un faible volume et ensuite ajustée à un p H d'environ 4 par addition d'acide chlorhydrique aqueux 0,1 M, et l'on a alors mélangé la solution avec de l'acétone en vue de provoquer la formation d'un précipité Ce précipité a été éliminé par filtration et lavé avec de l'acétone pour donner le produit recherché (représenté par la formule ( 13)) sous forme de son di-chlorhydrate Poids 4,8 mg ( 11 %) / a ID -66 (c 1, eau). Spectre de résonance magnétique nucléaire (dans D 20) S 3,05 (singulet, 3 H, NCH 3). (f) Préparation du trichlorhydrate de 3 "-épistreptomycine (étape N). Le produit ( 26 mg) obtenu dans l'étape M ci-dessus a été dissous dans 0, 9 ml d'eau, auquel on a ensuite ajouté 0,05 ml de nickel de Raney sous bonne agitation Le mélange ainsi obtenu a été filtré et le filtrat a été ajusté à p H 4 par addition d'acide acétique, mélangé avec environ 0,15 ml de noir de palladium comme catalyseur d'hydrogénolyse et ensuite soumis à une hydrogénolyse sous pression d'hydrogène de 3 kg/cm pendant 1 heure à température ambiante Le mélange réactionnel a été filtré pour éliminer le catalyseur et le filtrat a été concentré à sec sous pression réduite Le résidu solide obtenu a été purifié par chromatographie sur colonne de résine Dowex 1 x 2 (forme CZ-) élué avec de l'eau pour conduire au composé recher- ché (représenté par la formule (I") dans le second schéma réactionnel) sous forme de son trichlohydrate monohydrate, substance solide incolore n'ayant pas de point de fusion défini Poids 13,2 mg ( 56 %) / a_ 7 D -80 (c 1, eau). -35 2523136 Analyse élémentaire: Trouvé: C 35,22, H 6,51, N 13,58 %. Calculé pour C 21 H 39 N 70 2 3 HC H 2 O: 21 r 239 7112 ' 2. C 35,58, H 6,26, N 13,83 %. EXEMPLE 3 Synthèse de la 3 "-épidihydrostreptcoycine. (a) Préparation de la tétra-N -acétyl-2,5,6,3 'a,3 ",4 ",6 "-hepta-Oacétyl- 2 "-N-benzyloxycarbonyl-dihydrostreptomycine (étape 0). De la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-dihydrostreptomycine ( 18,0 g) obtenue à l'étape A de l'exemple 1 a été mise en suspension dans 180 ml d'anhydride acétique, puis l'on a ensuite ajouté 18 g d'acétate de sodium anhydre Le mélange obtenu a été vigoureusement agité à 75 C pendant 18 heures pour effectuer la réaction d'introduction des groupes acétyles La solution réactionnelle a été refroidie à la température ambiante et ensuite con- centrée à sec sous pression réduite Le résidu obtenu a été extrait avec 1, 2 1 de chloroforme et l'extrait dans le chloroforme a été lavé trois fois avec des fractions de 50 ml d'une solution aqueuse saturée de carbonate acide de sodium et trois fois avec des fractions de 50 ml d'eau La phase organique ainsi lavée a ensuite été séchée sur sulfate de sodium anhydre et concentrée sous pression réduite Le résidu obtenu a été dissous dans du chloroforme et ensuite précipité par addition d'hexane Le solide obtenu a été lavé avec de l'hexane puis séché pour conduire au produit attendu (représenté par la formule ( 14) du troisième schéma réactionnel) Poids 25,5 g ( 98 %). / a 73 -72 (c 1, chloroforme). Analyse élémentaire: Trouvé: C 52,01, H 5,92, N 8,35 %. Calculé pour C 51 H 69 N 7025: C 51,90, H 5,89, N 8,31 %. (b) Préparation de la tétra-NG-acétyl-2,5,6,3 'a,3 ",4 ",6 "-hepta-Oacétyl- dihydrostreptomycine (étape P). Le produit ( 1,896 g) obtenu dans l'étape O ci-dessus a été dissous dans 20 ml d'éthanol, puis l'on a ajouté une quantité de noir de palladium comme catalyseur d'hydrogénolyse Le mélange résultant a été mis à réagir avec de l'hydrogène à pression atmosphérique et à la température ambiante pendant 1 heure pour effectuer la réaction d'élimination du groupe 2 "-N- benzyloxycarbonyl par hydrogénolyse Le mélange réactionnel a été filtré pour éliminer le catalyseur et le filtrat a été concentré Etant donné que l'hydrogénolyse s'est effectuée sensiblement quantitativement, le composé attendu (représenté par la formule ( 15)) a été obtenu avec un rendement de 1,562 g ( 93 %) /-a 723 -82 (c 1, chloroforme). -36 2523136 Analyse élémentaire: Trouvé: C 49,17, H 6,09, N 9,12 %. Calculé pour C H 43 H 63 N 7023 43 637023 C 49,38, H 6,07, N 9,37 %. (c) Préparation de la tétra-N -acétyl-2,5,6,3 'a,4 ",6 "-hexa-0-acétvl- dihydrostreptomycine (étape Q). Le produit ( 513 mg) obtenu à l'étape P de cet exemple a été dissous dans 10 ml d'éthanol et la solution éthanolique a été maintenue à C pendant 35 heures pour effectuer la réaction pour l'élimination pré- férentielle du groupe 3 "-0-acétyl Durant la réaction, un courant de gaz carbonique a été lentement introduit dans la solution réactionnelle pour ajuster le p H de la solution à 7 La solution réactionnelle a été concen- trée sous pression réduite et le solide obtenu a été soumis à une chroma- tographie sur colonne de gel de silice élué avec un mélange chloroforme- éthanol ( 10:1) pour l'isolation et la purification du produit recherché, ce qui a permis de conduire au composé attendu (représenté par la formule ( 16) dans le troisième schéma réactionnel) en une quantité de 222 mg ( 43 %) _ 723 -71 (c 1, chloroforme) Le produit de départ n'ayant pas réagi a été récu- péré en une quantité de 194 mg. Analyse élémentaire: Trouvé: C 48,86, H 6,07, N 9,54 %. Calculé pour C 41 H 61 N 7022 C 49,05, H 6,12, N 9,77 %. (d) Préparation de la tétra-NG-acétyl-2,5,6,3 'a,4 ",6 "-hexa-0-acétyl- 2 "-N-benzyloxycarbonyl-dihydrostreptomycine (étape R). Le produit ( 979 mg) obtenu dans l'étape Q ci-dessus a été dissous dans 180 ml de chloroforme, puis l'on y a ajouté 120 ml d'une solution aqueuse à 0,7 % de carbonate acide de sodium La suspension ainsi obtenue a été refroidie à O C et mélangée avec 0,55 ml de chlorure de benzyloxycar- bonyl sous agitation Le mélange obtenu a été maintenu à O C pendant 30 minutes et ensuite à la température ambiante pendant 30 minutes sous agi- tation pour effectuer la réaction pour la réintroduction du groupe 2 "-N- benzyloxycarbonyl La solution réactionnelle a été laissée au repos, ce qui a permis la séparation de la phase aqueuse et de la phase chloroformique La phase chloroformique a été éliminée par décantation, lavée avec de l'eau, séchée-et concentrée sous pression réduite Le produit huileux ainsi obtenu a été mélangé avec du cyclohexane en vue de provoquer la formation d'un précipité Ce précipité a été éliminé par filtration et lavé avec du cyclo- hexane et le solide a ensuite été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice élué avec le mélange chloroforme-éthanol ( 20:1) pour conduire -37 22523 156 au composé attendu (représenté par la formule ( 17) dans le troisième schéma réactionnel) Poids 817 mg ( 74 %). /a 723 -71 ' (c 1, chloroforme). (e) Préparation de la tétra-N -acétyl-2,5,6,3 'a,4 ",6 "-hexa-O-acétyl- 2 "-Nibenzyloxycarbonyl-3 "-O-méthylsulfonyl-dihydrostreptomycine (étape S). Le produit ( 975 mg) obtenu à l'étape R ci-dessus a été dissous dans 34 ml de pyridine, puis l'on a ensuite ajouté 0,5 ml de chlorure de méthanesulfonyl à O C Le mélange résultant a été maintenu à O C pendant 1 heure et ensuite à la température ambiante pendant 1 heure pour effectuer la réaction d'introduction du groupe 3 "-O-méthylsulfonyl La solution réac- tionnelle a été refroidie à O C, mélangée avec une faible quantité d'eau et laissée au repos pendant plusieurs minutes puis versée dans 60 ml d'eau Le mélange obtenu a été extrait avec 100 ml de chloroforme La phase organique a été lavée avec une solution aqueuse saturée de carbonate acide de sodium puis avec une solution de chlorure de sodium aqueuse saturée, séchée sur sulfate de sodium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite Le résidu solide obtenu a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice en utilisant le mélange chloroforme-éthanol ( 25:1) comme solvant d'élution pour conduire au composé attendu (représenté par la formule ( 18)). Poids 944 mg ( 91 %) a 725 -72 (c 1, chloroforme). D Analyse élémentaire: Trouvé: C 49,09, H 5,64, N 7,76, S 2,73 %. Calculé pour C 50 H 69 N 70265: C 49,38, H 5,72, N 8,06, S 2,64 %. (f) Préparation du carbonate de 2 ",3 "-N,O-carbonyl-3 "-épidihydro- streptomycine (étape T). Le produit ( 359 mg) obtenu dans l'étape S ci-dessus a été dissous dans 7 ml de 2-méthoxyéthanol, que l'on a ensuite dissous 358 mg d'acétate de sodium trihydraté La solution obtenue a été maintenue à 950 C pendant 73 heures pour effectuer la réaction de condensation du groupe 3 "-méthylsul- fonyloxy avec le groupe 2 "-benzyloxycarbonyl-méthylamino (pour la formation du groupe 2 ",3 "-N,O-carbonyl) avec la réaction simultanée pour l'élimination des groupes acétyles La solution réactionnelle contenant la 2 ",3 "-N,0- carbonyl-3 "-épidihydrostreptomycine ainsi formée a été concentrée sous pression réduite et le résidu solide a été dissous dans l'eau La solution aqueuse résultante a été traitée sur une colonne de chromatographie échan- geuse d'ions de résine Dowex 1 x 2 (forme OH, 20 ml) en utilisant l'eau comme solvant d'élution L'éluat de la colonne de résine a été recueilli sous forme dé fractions de 2 ml, et les fractions n 9-13 de l'éluat con- -38 22523136 tenant le produit recherché ont été combinées, puis neutralisées par addi- tion d'acide chlorhydrique 0,5 M et enfin concentrées sous pression réduite. Le résidu solide obtenu a été repris dans l'eau et la solution aqueuse a été soumise à une chromatographie-sur colonne de résine échangeuse d'ions, Amberlite CG 50 (forme NH 4, 20 ml) en utilisant comme agent d'élution une solution aqueuse de carbonate d'ammonium. L'éluat a été recueilli sous forme de fractions de 2 ml et les fractions n'15-20 contenant le produit attendu ont été combinées et con- centrées sous pression réduite La solution concentrée ainsi obtenue a été diluée avec de l'eau et ensuite à nouveau concentrée sous pression réduite et la dilution de la solution concentrée avec de l'eau et une nouvelle concentration de la solution diluée a été répétée plusieurs fois jusqu'à ce que le carbonate d'ammonium ne soit plus détecté dans la solution concentrée finale De cette façon on a obtenu sous forme solide un mélange contenant le produit recherché (représenté par la formule ( 19) ) en une quantité de 153 mg ( 76 %). (g) Préparation du carbonate de 2 ",3 "-N,O-carbonyl-3 "-épidihydro- streptomycine (modification de l'étape T). La tétra-N -acétyl-2,5,6 > 3 'a,4 ", 6 "-hexa-0-acétyl-2 "-N'-benzyloxy- carbonyl-3 "-0-méthylsulfonyl-dihydrostreptomycine, plus particulièrement le produit ( 451 mg) obtenu sous forme solide dans l'étape S de cet exemple a été dissous dans 9 ml d'une solution de méthylate de sodium 0,2 M dans le méthanol, et la solution résultante a été maintenue à la température am- biante pendant 2 heures pour effectuer la réaction de formation du groupe carbamate cyclique 2 ",3 "-N,O-carbamate avec l'élimination simultanée des groupes acétyles. Le mélange réactionnel a été neutralisé par addition d'acide chlorhydrique aqueux l M et concentré à sec sous pression réduite, puis le résidu solide a été dissous dans l'eau et la solution aqueuse a été placée sur une colonne de résine échangeuse d'ions, Amberlite CG 50 (forme NH 4, 30 ml), qui a été élué avec du carbonate d'ammonium aqueux L'éluat a été recueilli sous forme de fractions de 3 ml et les fractions N O 20 à 40 contenant le produit attendu ont été combinées et concentrées sous pression réduite La solution concentrée obtenue a été diluée avec de l'eau et ensuite concentrée à nouveau sous pression réduite La dilution de la solution concentrée avec de l'eau puis la nouvelle concentration de la solution diluée a été répétée plusieurs fois jusqu'à ce que le carbonate d'ammonium ne puisse-plus être détecté dans la solution concentrée finale. On a ainsi obtenu le composé attendu (représenté par la formule ( 19)) sous forme de son carbonate Poids 157 mg ( 63 %) /5 a 7 D 5 -90 (c 1, eau). -JY 2523136 Analyse élémentaire: Trouvé: C 38,08, H 6,24, N 12,97 %. Calculé pour C 22 H 39 N 703 21 H 2 C 03 H 20 C 38,34, H 6,03, N 13,05 %. (h) Préparation de la 3 "-épidihydrostreptomycine ( 3/2 carbonate) (étape U). NH Il NH NHCNH 2 7 NHCNH 2 /HON OH / O OH O H 3 C O OH HO -O O OH N CH 3 HO H Le produit ( 128 mg) obtenu dans l'étape T de cet exemple 3 (f) a été mélangé avec 3,9 ml d'une solution aqueuse à 5,5 % d'hydroxyde de baryum, solution que l'on a agité à 40 C pendant 20 heures pour effectuer la réac- tion d'élimination du groupe 2 ",3 "-N,O-carbonyl (c'est-à-dire, la rupture hydrolytique du noyau du groupe cyclique 2 ",3 "-N,O-carbamate). Du gaz carbonique gazeux a été introduit dans le mélange réac- tionnel pour former un précipité contenant du carbonate de baryum, puis l'on a filtré la solution réactionnelle pour éliminer le précipité ainsi formé. Le filtrat a été placé sur une colonne de résine échangeuse d'ions, Amberlite CG 50 (forme NH 4, 10 ml) et a été élué avec une solution aqueuse de carbo- nate d'ammonium L'éluat a été recueilli sous forme de fractions de 1 ml et les fractions n 15 à 20 contenant le produit attendu ont été combinées et concentrées sous pression réduite La solution concentrée a été diluée avec de l'eau et à nouveau concentrée et la dilution de la solution concentrée avec de l'eau et une nouvelle concentration de la solution diluée a été répétée plusieurs fois jusqu'à ce que le carbonate d'ammonium ne soit plus qn - -40 2523136 détecté dans la solution concentrée finale On a ainsi obtenu le composé recherché (représenté par la formule (V) sous la forme de son carbonate 3/2, solide incolore, Poids 42 mg ( 36 %). t, ",t -41 25253 136 REVENDICATIONS 1 3 "-épistreptomycine ou 3 "-épidihydrostreptomycine correspondant à la formule générale suivante: N- NHCN -2 fi 2 1 N HCNH 2 H 0 OH H 3 C OH O HO CH 3 3 " dans laquelle R représente un groupe aldéhyde -CHO ou un groupe hydroxy- méthyl -CH 2 OH, et leurs sels d'addition d'un acide pharmaceutiquement ac- ceptable. 2 Composé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'il est la 3 "-épistreptomycine. 3 Composé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'il est la 3 "-épidihydrostreptomycine. 4 Procédé pour la préparation de la 3 "-épidihydrostreptomycine, caractérisé par le fait qu'il comprend les étapes successives suivantes consistant: (a) à faire réagir la tétra-N -acétyl-2,5,6,3 "-tétra-O-acétyl- 3 ',3 'a; 4 ",6 "-di-O-isopropylidène-dihydrostreptomycine de formule: 42- N Ac NHCNH Ac N Ac' ' ' NHCNH Ac NAC O Ac H 3 CH 3 CH 3 H 3 C\ CH 3 H 3 C O Ac dans laquelle Ac représente un groupe acétyl, avec de l'éthanol à une température de 20-30 C pour effectuer préférentiellement l'élimination du groupe 3 "-0-acétyl de la dihydrostreptomycine-N,O protégée et conduire ainsi à la tétra-N -acétyl-2,5,6-tri-O 0-acétyl-3 ',3 'a; 4 ",6 "-0isopropylidène- dihydrostreptomycine, (b) à faire réagir le produit de l'étape (a) cidessus avec du chlorure de benzyloxycarbonyle pour obtenir la tétra-N -acétyl-2,5,6-triO- acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 ',3 'a; 4 ",6 "-di-O-isopropylidènedihydro- streptomycine, (c) à faire réagir le produit de l'étape (b) ci-dessus avec de l'anhydride d'acide trifluorométhanesulfonique dans de la pyridine à une température de -50 C à 50 C pour former le dérivé 3 "-Otrifluorométhylsul- fonyl, puis à laisser ce dernier dérivé au repos en solution dans de la G pyridine à une température de 10 C à 100 C pour conduire à la tétra-N - acétyl-2,5,6-tri-O-acétyl-2 ",3 "-N,O-carbonyl-3 "-épi-3 ',3 'a; 4 ",6 "di-0- isopropylidène-dihydrostreptomycine de formule: -J 2523136 N Ac NHCNH Ac N Ac Ac O NHCNH Ac O O Ac H 3 C O H 2 CH 3 o CH 3 H 30 Cr, CH H 3 O dans laquelle Ac est tel que défini ci-dessus, (d) à hydrolyser le produit de l'étape (c) ci-dessus avec de l'eau en présence d'hydroxyde de baryum pour éliminer tous les groupes acétyles et le groupe 2 ",3 "-N,O-carbonyl et ainsi obtenir la 3 "-épi-3 ',3 'a; 4 ", 6 "-di-O- isopropylidène-dihydrostreptomycine, et (e) à hydrolyser le produit de l'étape (d) ci-dessus pour éliminer les groupes 3 ',3 'a; 4 ",6 "-di-O-isopropylidène et ainsi conduire à la 3 "- épidihydrostreptomycine. Procédé pour la préparation de la 3 "épidihydrostreptomycine, caractérisé par le fait qu'il comprend les étapes successives consistant: G (a) à faire réagir la tétra-N -acétyl-2,5,6,3 'a,3 ",4 ",6 "-hepta-0- acétyl-dihydrostreptomycine de formule: N Ac NHCNH Ac N Ac c NHCNH Ac |OACN O \ / O,O Ac Ac O 1-J -4.4- dans laquelle Ac représente un groupe acétyl, avec de l'éthanol à une tempé- rature de 20-30 C pour effectuer préférentiellement l'élimination du groupe 3 "-O-acétyl de, la dihydrostreptomyciie -çi-dessus mentionnée N,Oacétylée et ainsi obtenir la tétra-NG-acétyl-2,5,6,3 'a,4 ",6 "-hexa-O-acétyl-dihydro- streptomycine, (b) à faire réagir le produit de l'étape (a) ci-dessus avec du chlorure de benzyloxycarbonyle pour obtenir la tétra-NG-acétyl-2, 5,6,3 'a, 4 ",6 "-hexa-O-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl- dihydrostreptomycine, (c) à faire réagir le produit de l'étape (b) ci- dessus avec du chlorure de méthanesulfonyle dans de la pyridine pour conduire à la tétra- NG-acétyl-2,5,6,3 'a,4 ",6 "-hexa-0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-0méthyl- sulfonyl-dihydrostreptomycine, (d) à faire réagir le produit de l'étape (c) ci-dessus soit avec le 2-méthoxyéthanol à une température de 50 C à 100 C, soit avec du méthy- late de sodium dans du méthanol à une température de -20 C 50 C, pour obtenir la 2 ",3 "-N,O-carbonyl-3 "-épidihydrostreptomycine, et (e) à hydrolyser le produit de l'étape (d) ci-dessus avec de l'eau en présence d'hydroxyde de baryum pour éliminer le groupe 2 ",3 "-N,0-carbonyl et ainsi conduire à la 3 "-épidihydrostreptomycine. 6 Procédé pour la préparation de la 3 "-épistreptomycine, carac- térisé par le fait qu'il comprend les étapes successives consistant: (a) à faire réagir la 3 "-épidihydrostreptomycine avec une quantité molaire ou substantiellement molaire de chlorure de benzyloxycarbonyle dans un mélange d'eau et d'acétone à une température de -20 C à 50 C en présence d'un carbonate de métal alcalin pour benzyloxycarbonyler sélec- tivement le groupe 2 "-méthylamino de la 3 "-épidihydrostreptomycine et ainsi obtenir la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-épidihydrostreptomycine, (b) à faire réagir le produit de l'étape (a) ci-dessus avec le 2,2diméthoxypropane en présence d'acide p-toluènesulfonique pour obtenir la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-épi-3 ',3 'a-0-isopropylidènedihydrostreptomycine, (c) à faire réagir le produit de l'étape (b) cidessus avec de l'anhydride acétique en présence d'acétate de sodium pour obtenir la tétra- N -acétyl-2,5,6,3 ",4 ",6 "-hexa-0-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-épi3 ',3 'a- 0-isopropylidène-dihydrostreptomycine, (d) à hydrolyser le produit de l'étape (c) ci-dessus avec de l'acide acétique aqueux pour conduire à la tétra-N -acétyl-2,5,6,3 ",4 ", 6 "- hexa-O-acétyl-2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "-épidihydrostreptomycine, (e) à oxyder le groupe 3 '-hydroxyméthyl du produit de l'étape (d) ci-dessus en faisant réagir ce dernier composé avec le diméthylsulfoxyde en présence de pyridine, d'acide trifluoroacétique et de dicyclohexylcarbodiimide pour obtenir la tétra-N Gacétyl-2,5,6,3 ",4 " 1,611-hexa-0-acétyl-2 "-Nbenzyloxy- carbonyl-3 " épistreptomycine, - 9 (f) à éliminer tous les groupes acétyles,du produit de l'étap (e) ci-dessus par hydrolyse pour conduire à la 2 "-N-benzyloxycarbonyl -3 "épi- streptomycine, et (g) à soumettre la 2 "-N-benzyloxycarbonyl-3 "épistreptomycine à une hydrogénolyse catalytique avec de l'hydrogène pour éliminer le groupe 2 "-N-benzyloxycarbonyl et ainsi obtenir'la 3 "-épistreptomycine. 7 Composition antibactérienne, caractérisée par le fait qu'elle comprend comme ingrédient actif de la 3 "-épistreptomycine ou de la 3 "- épidihydrostreptomycine en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour l'ingrédient actif. 8 Tétra-N G-acétyl-2,5, 6-tri-0-acétyl-2 ",3 "-N,0-carbonyl-3 "-épi- 3 ',3 'a; 4 ",6 "-di-0-isopropylidène-dihydrosteptomycine. 9 Tétra-NG-aéy,, ,3,4 " '-hexa-0-acétyl-2 ",3 "-N,O-carbo- nyl-3 "-épidîhydrostreptomycine. Tétra-N G-acétyl-2,5,6, 3 ", 4 ", 6 "-hexa-0-acétyl-2 "-N-benzyloxy- carbonyl-3 "-épistreptomycine.