FR 2507482 A1 19821217 FR 8210178 A 19820611 2507482 v La présente invention concerne un procédé de traitement extracorporel du sang humain en vue de réduire la population active d'un constituant sanguin en particulier des lymphocytes contenus dans ce sang. L'invention vise également le dispositif pour la mise en oeuvre du procédé précité pour permettre le traitement en continu du sang humain prélevé L'inven- tion s'applique principalement au traitement de la leucémie. Le procédé selon l'invention s'applique notam- ment à de nombreuses maladies très graves, dont certai- nes formes de leucémie, o la population de certains types de leucocytes, et en particulier de lymphocytes, croît anarchiquement comparativement aux autres popula- tions de cellules nucléées dans le sang normal Bien que la population excessive de ces lymphocytes constitue un effet de la maladie plutôt que la cause qui est à son origine, cette population excessive inflige au patient des effets néfastes directs si des mesures ne sont pas prises pour la réduire Se développent alors rapidement des complications qui altèrent le fonctionnement des organes, lesquelles aboutissent à une situation de dan- ger de mort. Il est également à noter qu'un accroissement excessif de la population de lymphocytes du volume san- guin peut se produire dans d'autres maladies humaines, en plus des leucémies lymphocytaires Ainsi, par exemple, des résultats de ce genre peuvent se produire consécuti- vement à des réactions allergiques graves à des agents administrés, tels notamment que des produits médicamen- teux ou similaires, ou dans de nombreuses maladies fai- sant intervenir les lymphocytes. En plus de la mise au point au fil des années d'agents pharmaceutiques et similaires susceptibles de réduire de façon non spécifique la population des lymphocytes, par exemple en altérant la vitesse de pro- duction sous-jacente de ceux-ci, diverses techniques ont été utilisées de temps à autre pour tenter d'attaquer directement le problème, par exemple en extrayant méca- niquement de tels lymphocytes du volume sanguin Ainsi, il est par exemple connu de faire traverser au volume sanguin une centrifugeuse continue, en laquelle on cherche à extraire sélectivement des lymphocytes afin de réduire la population de ces derniers dans le volume sanguin ainsi traité Toutefois, cette méthode tend en général à être très inefficace, notamment parce que les différences de densité entre les fractions sanguines renfermant les lymphocytes non désirés et les fractions qui renferment des constituants sanguins désirés sont insuffisantes pour assurer l'élimination de forts pour- centages des premières avec conservation de fortes pro- portions des secondes. Il est également bien connu de traiter des maladies telles que la leucémie par des radiations électromagnétiques à haute énergie, y compris dans la région des rayons X Bien qu'un tel traitement soit souvent dirigé sur des organes internes dans lesquels sont engendrées des cellules du sang, il est également connu d'irradier le volume sanguin par des rayons X en opérant en un point extérieur au corps (le sang ayant été d'abord extrait) ce qui permet de ne pas exposer directement au rayonnement le corps ou ses organes internes Bien qu'elle soit puissante, cette méthode est non sélective en ceci que l'énergie à effet de rupture intense, en plus de ce qu'elle détruit les cellules indésirables, détériore ou détruit des consti- tuants du sang que l'on souhaite faire rester à l'état vivant. Parmi les agents pharmaceutiques utilisés pour traiter la population excessive de lymphocytes due à la leucémie figurent des agents qui sont actifs contre le lymphocyte lui-même La cortisone est un agent de ce genre, mais son efficacité est limitée car elle ne sup- prime pas complètement l'activité métabolique aberrante du lymphocyte malin Le mécanisme par lequel la corti- sone agit sur les cellules lymphocytaires n'est pas pleinement élucidé, mais on présume qu'elle se lie ini- tialement de façon spécifique aux récepteurs de corti- sone se trouvant dans le lymphocyte et qu'elle est ache- minée par ces récepteurs mobiles jusqu'au noyau de la cellule, dans lequel elle a pour effet d'altérer l'acti- vité métabolique de la cellule. Certains autres agents chimiques sont connus ou tenus comme propres à se lier faiblement aux acides nucléiques de certaines cellules nucléées, o ils s'in- tercalent en formant des complexes moléculaires faisant intervenir des interactions chimiques ou des attractions moléculaires à faible énergie, qui sont généralement transitoires et insuffisantes pour affecter notablement la vitesse de synthèse de l'ADN dans la cellule. Constituent des substances chimiques de ce genre les "psoralènes" qui sont décrits dans le brevet des Etats- Unis d'Amérique no 4 321 919. Certaines protéines fixatrices, connues sous le nom d'anti-corps, sont également actives contre les lymphocytes L'intéraction d'un anticorps avec un lymphocyte particulier nécessite que le lymphocyte possède un site ou antigène qui soit géométriquement et chimiquement réceptif à un site actif correspondant de l'anticorps Les forces qui fixent un anticorps à un antigène sont constituées par des forces d'attraction, comprenant des liaisons hydrogène, des liaisons apolai- res, des interactions ioniques et des interactions de Van der Waals, dont la force est inversement propor- tionnelle à la distance entre les groupes intéragissants. En conséquence, toute modification structurale de la membrane du lymphocyte qui est susceptible d'altérer la géométrie de l'antigène peut servir à empêcher la fixation d'un anticorps à l'antiaène En outre, une fois qu'un anticorps se trouve fixé à un antigène sur une cellule, la cellule est susceptible de subir une "modulation antigénique" ou une différenciation cellu- laire altérée et de rompre de ce fait la liaison des anticorps fixés sur elle, et de détruire l'affinité des anticorps à son égard Lorsqu'une membrane de lymphocyte présente une structure qui s'oppose à l'accès de l'anti- corps à son site antigénique, l'anticorps reste attiré vers l'antigène, mais il est inapte à former une quel- conque liaison de nature permanente Vu que les modifi- cations de structure cellulaire sont davantage la règle que l'exception pour les cellules malignes et qu'il se produit une "modulation antigénique" dans une forte proportion des couplages anticorps-antigène cellulaire, il n'a pas été possible jusqu'à présent de combattre efficacement les cellules leucémiques avec des anticorps. L'utilisation d'anticorps en vue de rendre inactifs de façon permanente ou d'éliminer des corps chimiques immunogènes, tels que des anticorps naturels indésirables, susceptibles de se trouver dans le sang a étéégalement entravée par l'inaptitude d'un anticorps à se complexer de façon irréversible ou forte avec les antigènes. Les interactions pharmacologiques ci-dessus décrites peuvent être renforcées grâce à l'utilisation de succédanés chimiques photo-actifs Les agents chimi- ques photo-actifs sont des composés contenant un ou plusieurs groupes qui sont excités par un rayonnement ultraviolet incident et qui, lorsqu'ils sont activés, ont tendance à former des liaisons covalentes avec des groupes chimiques avoisinants La réactivité des divers agents photoactifs s'échelonne entre celle d'agents à réactivité chimique spécifique, ce qui est le cas pour les agents tels que les psoralènes, et celle d'agents présentant une grande réactivité à l'égard de pratique- ment n'importe quel groupe, ce qui est le cas pour les groupes diazo et azide Les groupes diazo et azide sont les radicaux ou portions moléculaires photo-actifs pré- férés pour conférer à des agents chimiques destinés à être utilisés dans la mise en oeuvre de l'invention la photo-activité qui est essentielle dans le procédé selon l'invention. Antérieurement à la présente invention, des agents chimiques photo-actifs n'ont été utilisés que de façon très limitée Sur le plan clinique, une classe de composés photo-actifs, les psoralènes, a été utilisée pour traiter des patients souffrant de psoriasis Les autres usages de ces agents se sont limités presque exclusivement à des recherches expérimentales en matière de physiologie et de chimie cellulaires, dont des compte- rendus types ont été donnés dans les articles suivants, "Annals of N Y Acad Sci 346: "Photoaffinity Probes in the Antibody Combining Region", Richards, F F et Lifter, J., pages 78-89; et "Photolabile Antibiotics as Probes of Ribosomal Structure and Function", Cooperman, B S, pages 302-323. Selon la présente invention, il a été décou- vert un procédé qui permet une réduction sûre et effi- cace de la population active de certains constituants sanguins Plus précisément, le procédé selon la présente invention permet de réduire la population active de cer- taines cellules nucléées et de substances chimiques antigènes indésirables, telles que des anti-corps auto- réactifs indésirables, dans le volume sanguin d'un sujet humain. Conformément au procédé selon l'invention, du sang nécessitant un tel traitement est prélevé au sujet et est irradié par des rayons ultraviolets de longueur d'onde comprise entre environ 2000 et 4000 Angstr 5 ms, et de préférence entre environ 3200 et 4000 Angstrbms (UVA), en présence d'une quantité efficace d'un agent chimique photo-actif dissous du type capable d'association inter- moléculaire ou chimique avec: 1 Les acides nucléiques de cellules sanguines nucléées. 2 Les sites récepteurs de stéroïdes de cellu- les sanguines nucléées. 3 Les sites antigéniques existant sur des cellules sanguines nucléées. 4 Ou les sites antigéniques existant sur des substances chimiques immunogênes. A l'irridiation, l'agent chimique photo-actif est amené à former un photoadditif permanent avec son site associé dans ou sur la cellule sanguine nucléée ou la substance chimique immunogène, ce qui assure la des- truction du constituant qui a subi l'addition Le sang irradié est ensuite restitué au sujet. Lorsqu'un agent chimique ayant une affinité pour l'acide nucléique de cellules nucléées telles que les lymphocytes est mis en oeuvre selon la présente invention, les forces d'attraction intermoléculaire mentionnées plus haut amènent l'agent à établir une relation d'intercalation avec les acides nucléiques des lymphocytes Avant l'activation, l'agent n'a que peu ou pas d'effet sur la chimie cellulaire Par contre, lors de l'irradiation, l'agent forme certaines liaisons covalentes avec les acides nucléiques de la cellule et il inhibe de ce fait les fonctions métaboliques de la cellule Les processus de la cellule se trouvant ainsi rompus, et en particulier son aptitude à se diviser, la mort de la cellule s'ensuit. La famille des corps chimiques connus dans la technique sous le nom de psoralènes, qui sont plus ample- ment décrits dans le brevet des Etats-Unis N O 4 321 919 cité plus haut, et auquel on se reportera utilement à ce -sujet, se sont avérés avoir l'activité décrite et sont estimés bien adaptés à être mis en oeuvre selon la pré- sente invention Lorsqu'ils sont mis en oeuvre selon l'invention, les agents chimiques photo-actifs présen- tant de l'affinité pour l'ADN, tels les psoralènes, offrent un avantage très appréciable en ceci que l'alté- ration et la destruction des lymphocytes tend, dans cer- taines maladies telles que la leucémie, à avoir lieu sélectivement sur les cellules que l'on cherche le plus à réduire, en vertu du fait que d'abord, ce sont ces cellules qui sont sujettes aux activités métaboliques les plus intenses, ce qui fait d'elles les cellules les plus susceptibles d'être rendues inopérantes par le pré- sent procédé. La cortisone est un agent chimique qui présente de l'affinité pour des récepteurs particuliers à l'inté- rieur de la cellule lymphocytaire nucléée Comme on l'a indiqué plus haut, les applications de la cortisone dans la réduction de la population active des lymphocytes chez les patients atteints de leucémie laissaient à désirer dan-s le passé Par contre, selon la présente invention, la cortisone peut être utilisée pour traiter la leucémie d'une façon nouvelle et beaucoup plus effi- cace. Préalablement à son application selon l'inven- tion, la cortisone doit d'abord être rendue photo-active. Le spécialiste en la matière sait que la photo-activation de la cortisone peut être réalis&e en recourant à des techniques chimiques classiques On considère que les détails de cette chimie sortent du cadre de la présente invention, qui se limite à un procédé grâce auquel peuvent être mis en oeuvre certains agents chimiques pour obte- nir des réductions antérieurement irréalisables de la population active de certains constituants sanguins. Il ira également de soi pour le spécialiste qu'en recou- rant à des méthodes chimiques classiques, incluant lors- que nécessaire la protection du ou des sites de liaison, on peut perfuser de la cortisone comportant une portion de molécule photo-active en plusieurs positions, évaluer les cortisones substituées, et déterminer facilement l'homologue qui conserve la plus forte proportion de l'activité biologique normale de la cortisone La chimie de la photo-activation ci-dessus décrite et la détermi- nation de l'homologue le plus actif sont examinées de façon approfondie dans les articles suivants: 1 Katzenellenbogen, J A H N Myers et H J. Johnson, Jr, 1973, J Org Chem 38: 3525-33. 2 Katzenellenbogen, J A H J Johnson, Jr. et H N Myers, 1973, Biochemistry 12: 4085-92. 3 Katzenellenbogen, J A, H J Johnson, Jr, K E Carlson et H N Myers, 1974, Biochemistry 13: 2896-94. Comme l'exposent ces articles, la photo- activation de stéro,-des a été réalisée avec grand succès par substitution des portions moléculaires photo-actives connues sous le nom de groupes diazo et azide Ces grou- pes possedent individuellement un haut degré de photo- activité intrinsèque, et ils conservent cette activité lorsqu'ils sont incorporés dans un autre agent chimique, en le rendant ainsi phto-actif. En recourant ensuite à des techniques classi- ques de photo-dérivation, la 16-diazocortisone, qui est préférée dans la mise en oeuvre de l'invention quant à sa conservation d'une grande partie de son activité pharmacologique d'origine, peut être synthétisée avec un bon rendement en nitrosant d'abord la cortisone pour obtenir de la 16oximocortisone, laquelle peut être convertie en 16-diazocortisone par oxydation à la chlo- ramine D'autres cortisones substituées peuvent être obtenues par la nitration de la cortisone en utilisant de l'acide nitrique dans de l'acide acétique concentré. Les produits de cette opération dé nitration sont un certain nombre de dérivés azides, qui peuvent être faci- lement séparés par chromatographie sur colonne Les paramètres de réaction adoptés pour obtenir ces produits sont donnés dans tout le détail utile dans l'article précité de Katzenellenbogen, J Org Chem 38: 3525-33. A leur addition au sang, la cortisone photo- dérivée présentant la structure préférée indiquée ci- dessus ou l'un des autres homologues possibles considé- rés comme moins avantageux pénètrent facilement dans les lymphocytes ou dans d'autres cellules nucléées et s'asso- cient aux sites récepteurs de cortisone de ces cellules. Après un intervalle convenable, calculé de façon à per- mettre à une grande partie de la cortisone substituée d'atteindre ces sites récepteurs, et compris générale- ment entre 1 minute et 2 heures, et de préférence entre et 15 minutes, le sang contenant un dosage de cortisone photo-activée dissoute qui est approximativement égal à celui qui est classiquement adopté dans le traitement des cancers, qui est généralement compris entre environ 1 nanogramme et 100 microgrammes par ml de sang, est irra- dié par des rayons ultraviolets L'irradiation du sang active la partie photo-active des molécules de cortisone in situ aux emplacements des sites récepteurs de corti- sone, et elle donne lieu à la formation de photo- additifs entre la cortisone substituée et le récepteur de cortisone, d'ou s'ensuit que l'aptitude du récepteur à transmettre la cortisone essentielle à la poursuite de l'activité métabolique de la cellule se trouve détruite. En conséquence, vu qu'une très-grande partie des récepteurs de cortisone des lymphocytes ont été rendus inactifs, les cellules deviennent rapidement inaptes à fonctionner, et tout particulièrement à se diviser, et leur destruction s'ensuit rapidement. Des anticorps spécifiques à des constituants sanguins particuliers peuvent être engendrés mais, comme on l'a vu plus haut, il n'était pas possible jusqu'à présent de les utiliser avec des bons résultats dans la réduction de la population des cellules malignes dans le sang en raison des altérations de structure qui sont communes chez les cellules malignes et des phéno- mènes cellulaires tels que la modulation antigénique, qui permettent aux cellules de se débarrasser des anti- corps complexés Ainsi par exemple, des anticorps qui sont spécifiques à un type particulier de lymphocytes T malins peuvent être inaptes à se complexer avec une grande partie des cellules de ce type que contient le sang, indépendamment du fait que les anticorps présen- tent de l'affinité pour ces cellules, et un nombre impor- tant des lymphocytes qui ont été complexés par les anti- corps se délestent des antigènes qui leur sont fixés en ôtant prise sur eux aux anticorps Par contre, selon la présente invention, des anticorps photo-activés peuvent être utilisés pour réduire la population active de lymphocytes à un degré qui était antérieurement impossi- ble à atteindre De plus, la mise en oeuvre du procédé selon la présente invention permet aussi d'utiliser des anticorps photo-activés qui sont spécifiquement réactifs à d'autres constituants sanguins, tels que les anticorps indésirables, en vue de réduire la population de ces constituants dans le sang avec une efficacité semblable- ment grande. Les méthodes par lesquelles peut être produit et purifié un anticorps spécifique d'une cellule ou d'un corps chimique immunogène particulier sont en elles- mêmes bien connues et n'ont pas besoin d'être précisées ici, et on se bornera à dire que de grandes quantités d'anticorps monoclonaux très spécifiques peuvent être préparées par hybridome ou par d'autres techniques classiques. Les techniques chimiques grâce auxquelles on peut rendre photo-actif un anticorps que l'on désire mettre en oeuvre selon la présente invention sont égale- ment bien connues du spécialiste Il sera également évident pour le spécialiste que les anticorps possèdent pratiquement tous un certain nombre de sites se prêtant à l'obtention de dérivés photo-actifs Des méthodes grâce auxquelles des fragments moléculaires étrangers à un anticorps peuvent être ajoutés à celui-ci sans porter atteinte à l'aptitude de l'anticorps à se com- plexer avec ses antigènes spécifiques, par exemple, ont été décrites dans le Handbook of Experimental Immunology, Weir, D M, pub J B Lippingcott, 1978, pages 15 1-15 30. Pour favoriser l'atteinte de l'objectif de la présente invention, il est important que le processus de dériva- tion ne détruise pas la région de combinaison de l'anti- corps qui est spécifique pour la cellule cible A cet -égard, il est à noter qu'en considération du nombre de sites potentiels de dérivation existant sur la plupart des anticorps et de nombreuses techniques différentes qui permettent d'y faire apport d'un fragment moléculaire photo-actif, tel que les groupes diazo et azide préférés, il sera rarement nécessaire de prendre la précaution de protéger spécifiquement la région de combinaison Par contre, lorsqu'il s'avère que sans cela, la région de combinaison d'un anticorps serait détruite par la photo- dérivation de cet anticorps, on peut faire appel à des techniques classiques de protection des sites de combi- naison et d'élimination ultérieure du groupe protecteur. Lorsque des anticorps photo-activés qui sont spécifiquement réactifs à un certain constituant sanguin, qui pourrait être par exemple formé, dans une forme d'exécution préférée de l'invention, par les lymphocytes T malins d'un patient, sont ajoutés au sang de ce patient dans le procédé selon la présente invention, ils se complexent très rapidement avec les lymphocytes T pour lesquels il existe la correspondance voulue entre région de combinaison d'anticorps et site antigénique de cellule Par contre, du fait de défauts que présen- tent leurs régions de combinaison propres ou les récep- teurs de leurs cellules cibles, de nombreux anticorps sont inaptes à former un complexe anticorps-antigène vrai bien qu'étant attirés par les lymphocytes cibles. A l'irradiation par des rayons ultraviolets d'une lon- gueur d'onde propre à activer le fragment moléculaire photo-actif particulier qui a été introduit dans les anticorps, les fragments moléculaires photo-actifs présents sur les anticorps qui se sont complexés forme- ront préférentiellement des phbto-additifs avec les cellules complexées, en établissant ainsi une liaison permanente entre celles-ci et leur anticorps complexé et en éliminant la modulation antigénique en tant que moyen susceptible de provoquer la rupture du complexe. D'autres anticorps qui ne parvenaient auparavant à se complexer avec aucune des cellules cibles vers lesquel- les ils étaient attirés en raison d'une correspondance insuffisante de leurs rêaions de liaison respectives formeront préférentiellement par photo-activation des photo-additifs avec ces cellules, en créant ainsi un complexe à photo-additif là o aucun n'avait existé auparavant De la façon décrite, des dosages d'anticorps photo-activé se rapprochant de ceux classiquement adoptés dans le traitement de maladies, à savoir de l'ordre d'environ 1 nanogramme à 100 microgrammes par ml de sang, peuvent être appliqués au sang avec efficacité thérapeutique. La complexation anticorps-antigène photo- induite ci-dessus décrite est amplifiée par l'apport de groupes photoactifs multiples dans la structure de l'anticorps, car la présence de plusieurs fragments moléculaires photo-actifs sur l'anticorps augmente la probabilité de complexation d'un même anticorps avec plusieurs cellules cibles Lorsque de tels anticorps sont utilisés conformément au procédé selon l'invention, ils présentent une tendance accentuée à former des réseaux ou des chaînes de cellules complexées, lesquel- les peuvent être éliminées du sang avec une facilité particulière. Est également visée par la présente invention la possibilité de rendre photoactifs des anticorps spécifiques à des anticorps naturels indésirables parti- culiers ou autres corps chimiques immunogènes et de les utiliser conformément au procédé selon l'invention pour former des complexes qui lient fortement ces corps chimi- ques, en permettant de les éliminer du corps avec une efficacité beaucoup plus grande qu'il n'était possible antérieurement. Conformément au procédé selon l'invention, et indépendamment du type d'agent chimique photo-actif qui y est mis en oeuvre, du sang prélevé à un sujet pour traitement peut être traité par fractions successives, mais on lui fait de préférence former une circulation extracorporelle et on lui fait traverser un poste de traitement en lequel l'irradiation est effectuée Un tel poste de traitement peut prendre la forme d'un pas- sage tubulaire aplati et allongé dont les parois sont sensiblement transparentes à la lumière ultraviolette incidente utilisée pour activer l'agent chimique photo- actif Les doses d'irradiation normales sont comprises entre environ 0,1 et 100 joules par cm 2, et de préfé- rence entre environ 5 et 60 joules par cm 2 de surface sanguine, que le processus soit effectué en mode continu ou en mode discontinu, et les débits d'écoulement types traversant le poste d'irradiation peuvent être compris entre environ 10 et 75 ml/min. Consécutivement au traitement, la totalité de la fraction sanguine ou de l'écoulement de sang de déri- vation irradié peut être restituée au patient Toute-. fois, selon l'agent chimique photo-actif qui a été utilisé dans le traitement du sang, il peut être préfé- rable de filtrer ou de centrifuger le sang traité avant son renvoi au patient Les cas dans lesquels un tel traitement peut être estimé-opportun sont plus amplement considérés dans la description détaillée de l'invention. L'invention est schématiquement illustrée à titre d'exemple par les dessins ci-annexés, sur lesquels: la figure 1 est un schéma fonctionnel repré- sentant une forme de réalisation préférée d'un dispositif fonctionnant conformément à la présente invention; la figure 2 est une vue schématique en élé- vation de la partie formant le poste d'irradiation du dispositif de la figure 1; la figure 3 est une vue en plan à caractère schématique d'une forme de réalisation du poste d'irra- diation de la figure 2; les figures 4 et 5 sont des vues en coupe, prises suivant les lignes 4-4 et 5-5 de la figure 3, qui représentent les configurations du passage d'écoulement et du passage de sortie du dispositif de la figure 3. La figure 1 représente sous forme schématique un dispositif 10 conforme à la présente invention. Exception faite pour le poste d'irradiation, les consti- tuants du dispositif 10 sont en majorité connus eneux- mêmes et classiques, et on considère par conséquent qu'il n'est ni utile ni nécessaire de les décrire en grand détail. Comme indiqué sur la figure, du sang peut être initialement prélevé à un sujet humain, en un point schématisé en 12 Le sang est normalement prélevé par une aiguille de prélèvement, qui peut par exemple être mise en place dans la veine antécubitale droite Dans les dispositions représentées par la figure 1, on suppose que le traitement du sang conformément à l'invention est effectué en mode continu En d'autres termes, pour les besoins de la présente description, l'écoulement peut être considéré comme s'effectuant en continu depuis le prélèvement au point 12 jusqu'au retour final du sang au sujet en 14 Un tel retour-14 s'effectue normalement par une aiguille de perfusion mise en place dans la veine antécubitale gauche Lorsque l'écoulement s'effec- tue en fait en continu de cette façon, on peut normale- ment adopter dans la mise en oeuvre de l'invention un débit sanguincompris entre environ 10 et 75 ml/min, et plus avantageusement entre environ 40 et 50 ml/min Les débits d'écoulement indiqués sont obtenus au moyen d'une pompe 16, qui est insérée dans le circuit d'écoulement sanguin extracorporel globalement schématisé en 18, et qui peut être de l'un d'entre les nombreux types de pompes utilisées pour le traitement de débits sanguins, parmi lesquelles celles fournies sous la désignation de modèle 30 par la firme Haemonetics Corporation. Comme classique dans le domaine médical con- cerné, des anticoagulants sont de préférence injectés dans la circulation sanguine extracorporelle en 20, c'est-à-dire près du point de prélèvement du sang De tels anticoagulants peuvent comprendre des solutions de citrate acide, de dextrose et/ou d'héparine, ou d'autres compositions classiques utiles à cet effet. * Un détecteur d'occlusion de veine 22 est de préférence disposé dans le circuit 18 à des fins classi- ques Un tel détecteur comprend fondamentalement un réservoir ou volume tampon dont la fonction est de pré- venir ou d'empêcher la génération ou la poursuite de l'existence de bulles dans le circuit d'écoulement sanguin. Selon un mode de mise en oeuvre préféré de la présente invention, l'agent chimique photo-actif est de préférence ajouté extracorporellement au sang du sujet humain Ainsi, comme visible sur la figure 1, son introduction dans le flux sanguin peut être effec- tuée en aval de la pompe 16 et immédiatement en amont de l'endroit o le sang pénètre dans le poste d'irra- diation 24. Comme on l'a vu dans le préambule de la des- cription, les agents chimiques préférés pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention sont les psoralènes, la cortisone photo-activée, les anticorps photo-activés spécifiquement réactifs à des lymphocytes malins et les anticorps phôto-activés spécifiquement réactifs à des anticorps indésirables d'un patient Comme également indiqué plus haut, d'autres agents chimiques photo- actifs sont également utilisables dans la mise en oeuvre du procédé selon l'invention La technique de base utilisée pour introduire les agents chimiques photo-actifs est de les dissoudre dans une solution isotonique, qui est ensuite directement injectée dans le circuit de circulation sanguine comme schématisé en 26 Les agents sont injectés sous un débit propre, en considération du débit d'écoulement sanguin, à réaliser dans le sang auquel on fait ensuite traverser le poste d'irradiation 24 une concentration située dans la gamme désirée, décrite pour chacun des agents chimiques selon l'invention. Relativement à ce qui précède, il est à noter que l'objectif fondamental des opérations décrites jus- qu'ici est d'obtenir la concentration de dissolution désirée de l'agent chimique photo-actif avant l'admis- sion du sang dans le poste d'irradiation Selon un autre aspect de l'invention, on peut donc se rendre compte que l'agent photo-actif précité n'a pas obliga- toirement besoin d'être directement introduit par injec- tion dans le circuit sanguin extracorporel 18 de la figure 1 Ainsi, il est également admissible de réali- ser la concentration désirée d'agent photo-actif en administrant oralement ou autrement le composé directe- ment au patient S'agissant par exemple selon l'inven- tion d'administrer oralement du psoralène, l'administra- tion peut être effectuée en dosages oraux allant d'en- viron 0,6 à 1,0 mg par kg de poids du sujet La gamme de concentration désirée dans le sang utilisé pour la mise en oeuvre de l'invention est ensuite obtenue en environ deux heures après l'administration orale D'au- tres modes d'administration pour les autres agents chimi- ques photo-actifs englobés par le cadre de l'invention et les doses appropriées qui leur correspondent seront évidents pour le spécialiste. Cependant, il est préféré d'introduire les agents chimiques photo-actifs selon l'invention dans le circuit extracorporel (ou dans le volume de prise extra- corporel) afin d'obtenir des niveaux de concentration plus exacts; et aussi, d'écarter ou de réduire au mini- mum les possibles effets secondaires et similaires sus- ceptibles d'être consécutifs à l'administration directe au système corporel de toute substance étrangère. Au poste d'irradiation 24, qui est formé par une chambre d'irradiation 28 et par une source de rayon- nement 30, le sang portant à présent en solution la concentration désirée d'agent chimique photo-actif est soumis à un rayonnement ultraviolet, et de préférence à rayonnement ultraviolet dont la plus grande partie des composantes spectrales est située dans la gamme préférée pour l'activation de l'agent photo-actif particulier qui est utilisé dans le traitement appliqué Les maté- riaux de construction du poste d'irradiation 24 sont choisis en sorte qu'ils n'arrêtent pas le rayonnement dans la portion désirée du spectre ultraviolet. La figure 2 représente schématiquement en élévation un poste d'irradiation 24 d'un type se prê- tant à être mis en oeuvre selon l'invention Un tel poste est formé par une chambre de traitement sanguin ou d'irradiation 28, qui présente une entrée 31 et une sortie 32 permettant à un flux sanguin de traverser la chambre et une source 30 de rayonnement ultraviolet disposée à distance La chambre 28 peut prendre diver- ses formes, l'exigence fondamentale à laquelle elle doit satisfaire étant que sa paroi 34 qui fait face à la source 30 soit sensiblement transparente au rayonne- ment ultraviolet incident Ladite chambre (ou au moins la paroi 34) peut par conséquent être ordinairement formée de diverses matières plastiques sensiblement transparentes aux ultraviolets, telles que celles commu- nément utilisées dans la réalisation de tubes destinés à l'administration de solutions intraveineuses classi- ques, comme par exemple le chlorure de polyvinyle et analogues. Dans une forme de réalisation préférée de la chambre d'irradiation 28, qui s'adapte aisément à l'un et l'autre des modes de traitement en continu et par prises fractionnées de mise en oeuvre de l'invention, le dispositif comprend une simple enveloppe qui est irradiée du dessus et du dessous En conséquence, dans, cette forme de réalisation, le sang à traiter traverse la chambre d'irradiation 28 en passant dans un vide central 36 qui est sensiblement à section transversale rectangulaire mince L'aire de la chambre 28 est adap- tée, compte tenu des sources lumineuses, à assurer l'application au sang contenu dans celle-ci de la dose de rayonnement désirée Dans une variante de réalisa- tion, la chambre de traitement sanguin 28 présente la configuration représentée par les figures 3, 4 et 5. Dans cette variante, un enroulement tubulaire 38, dont la section transversale (figure 5) est aplatie de façon à former-une ellipse très allongée, est maintenu fixe dans ou sur une plaque de support 40 L'entrée 30 d'accès de l'écoulement sanguin à l'enroulement est à section transversale circulaire et, en considérant la figure 1, elle se trouve en un point situé en aval de la pompe 16 L'admission de l'agent chimique photo- actif est schématisée en-26 La section transversale fortement aplatie de l'enroulement permet de conférer un bon écoulement au sana traversant l'enroulement, mais, ce qui est plus important, elle permet d'assurer une bonne exposition du sang en circulation au rayonne- ment ultraviolet incident La sortie 32 revient à une section transversale circulaire. Indépendamment de la configuration adoptée pour la chambre 28, il est préféré que la chambre soit aussi mince que pratiquement possible, Des chambres d'épaisseur comprise dans la gamme allant d'environ 0,05 à 10 mm sont dans la gamme envisagée par l'invention, des épaisseurs de chambre comprises entre environ 0,05 et 1 mm étant préférées. La source d'ultraviolet 30 peut comprendre une ou plusieurs sources lumineuses 41 disposées côte à côte ou différemment, dont chacune peut être pourvue d'un réflecteur dorsal 42 Les sources-d'ultraviolet peuvent être formées par des lampes du commerce, dont de nombreux types sont connus dans la technique. A titre d'exemple, la source 30 peut compren- dre une lampe au mercure unique de 1000 watts du type commercialisé sous la désignation de modèle 6287 par la firme Oriel Corporation, sise à Stamford, Connecticut, E.U A Lorsqu'elle est utilisée avec des filtres appro- priés, cette source fournit un bon spectre relativement continu de rayonnement à forte intensité entre 3200 et 4000 A, avec un maximum d'émission à environ 3650 , qui est préféré lorsque le psoralène est l'agent photo- actif mis en oeuvre dans le procédé selon l'invention. La lampe précitée, munie d'un réflecteur convenable, peut être disposée à environ 5 à 30 cm de la chambre 28. Pour les débits d'écoulement adoptés conformément à l'un des aspects de l'invention, une telle source donnera lieu dans le sang en circulation à une absorption d'éner- gie comprise dans la gamme intéressante pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention. En circulant comme représenté par la figure l, le flux sanguin qui quitte le poste d'irradiation 24 en traversant l'orifice de sortie 32 peut être directement renvoyé au sujet en 14 Toutefois, avant que le sang traité soit renvoyé au patient, il peut facultativement être soumis à un échange thermique propre à ramener sa température à celle du sang de la circulation du patient. Un tel échange thermique est nécessaire chaque fois que le sang traité, du fait de son traitement, a atteint une température s'écartant sensiblement de celle du patient. Lorsque le procédé selon l'invention a été mis en oeuvre pour réduire la population active de lymphocytes du sang, en faisant appel soit à un agent actif sur l'ADN, tel qu'un psoralène, soit à une corti- sone photo-activée, les lymphocytes traités à leur retour au patient par suite de leur traitement se trouvent rapidement altérés et détruits par les proces- sus normaux se produisant dans le patient Plus préci- sément, par leur traitement conformément aux formes de mise en oeuvre mentionnées plus haut de l'invention, les fonctions métaboliques des lymphocytes traités sont détériorées au point que pour des doses appropriées d'agent photo-actif et de rayonnement ultraviolet un pourcentage important des cellules traitées se trouvent détruites de façon graduelle en quelques jours. Un avantage de cette caractéristique de l'invention est qu'il est de ce fait possible de traiter sensiblement la totalité du volume sanguin d'un patient en une même opération sans donner lieu à la surcharge catastrophi- que du système de purification sanguine de l'organisme qui s'ensuivrait si toute la population des lymphocytes traités devaient succomber en même temps. Lorsque des anticorps photo-actifs spécifiques d'un lymphocyte malin sont utilisés dans les autres formes de mise en oeuvre préférées de l'invention, les lymphocytes (ou bien un anticorps indésirable) du sang renvoyé au sujet se trouvent complexés par l'anticorps activé, et donc "marqués" pour être éliminés du circuit sanguin Cependant, comme les complexes à anticorps photo-activé qui se trouvent formés selon cette forme de mise en oeuvre de l'invention le sont de façon pra- tiquement complète dès avant que le sang quitte le poste d'irradiation 24, le sang doit soit être additionné de doses relativement faibles d'anticorps activé, afin de ne pas provoquer de choc ou de surcharge du système de filtration sanguine biologique du patient, soit subir après traitement de filtration ou une centrifugation préalablement à son renvoi au patient. Indépendamment de la nature de l'agent photo- activé qui est utilisé ou du dosage sous lequel celui-ci est administré, la tâche incombant à l'organisme du sujet peut être davantage allégée par association au présent dispositif d'une centrifugeuse continue 44 (ou autre organe de filtration), appareil qui remplit plusieurs-fonctions. Il est à noter que les centrifugeuses conti- nues du type présentement utilisé sont en usage depuis longtemps dans les dispositifs de traitement d'écoule- ment sanguin commercialisés par différents fabricants, parmi lesquels les firmes Haemonetics Corporation, Braintree, Massachusetts, E U A, et IBM Corporation, Medical Products Division, Monsey, New York, E U A. Dans les dispositifs de la technique antérieure dans lesquels de tels appareils sont déjà utilisés, tous les éléments de la figure 1 sont présents, à l'excep- tion, essentielle, du poste d'irradiation 24 La fonc- tion de la centrifugeuse continue dans de tels dispo- sitifs de la technique antérieure est de séparer les lymphocytes ou autres constituants sanguins intéres- sants excédentaires Lorsqu'il est utilisé ainsi, un tel dispositif a pour inconvénient d'être inefficace, en ceci que le processus de centrifugation ne peut au mieux éliminer qu'environ 40 à 50 % des lymphocytes, et qu'il élimine malheureusement aussi des constituants que l'on souhaite en fait conserver. Dans le dispositif 10 selon la présente inven- tion, deux fonctions peuvent être remplies par la centri- fugeuse continue 44 L'unè d'elles est l'élimination des lymphocytes ou autres constituants sanguins com- plexés, comme on l'a vu plus haut Du fait que la pré- sente invention, dans ses formes de mise en oeuvre s'appliquant au traitement par les psoralènes et la cortisone, s'appuie principalement sur l'endommagement fonctionnel des lymphocytes pour aboutir à la réduction de la population active de ceux-ci, il n'est pas besoin de faire jouer à la centrifugeuse 44 un rôle d'une importance comparable à celui qui est le sien dans les dispositifs de l'art antérieur mentionnés plus haut Du point de vue mécanique, ceci implique que l'on n'a pas besoin de travailler aussi prés du point de séparation de masses spécifiques entre la fraction à lymphocytes du sang et les fractions sanguines utiles que l'on cherche à conserver De ce fait, on peut éviter qu'il se produise une séparation indue de ces fractions utiles du sang entier. Dans les formes de mise en oeuvre de l'inven- tion qui font appel à des anticorps photo-activés, les complexes à anticorps formés se séparent facilement des autres fractions sanguines utiles, que ce soit par fil- tration ou dans l'appareil de type centrifuge 44 repré- senté. La centrifugeuse continue 44 peut en outre remplir une fonction supplémentaire importante En particulier, une partie ou la quasi-totalité du plasma sanguin peut être éliminée en 46 et remplacée par du plasma frais en 48 Cette technique de lavage permet d'éliminer efficacement les composés à agent chimique photo-actif excédentaires qui sont susceptibles d'être présents dans le plasma sanguin, en remplaçant le plasma en 46 par du fluide isotonique exempt de ces composés Ainsi, lorsque le sang est restitué au sujet en 14, il est pratiquement dépourvu de tout agent chimique excédentaire, c'est-à-dire autre que ceux qui se sont combinés au constituant sanguin traité de la façon désirée. Il convient également de resouligner que bien que le mode préféré de mise en oeuvre de la présente invention, comme représenté par la figure 1, vise un fonctionnement en continu, le traitement sanguin selon l'invention peut être opéré par des techniques de traitement par fractions Ainsi par exemple, on peut prélever initialement au sujet une quantité fixe pré- cise de sang Une telle quantité ou fraction est suscep- tible de contenir déjà les quantités désirées d'agent chimique photoactif dissous, par exemple du fait d'une administration préalable au patient, l'agent précité pouvant aussi être mélangé de façon externe avec le prélèvement sanguin La fraction sanguine précitée contenant l'agent désiré peut ensuite être portée à un poste d'irradiation, o on lui fait recevoir la quan- tité d'éhergie ultraviolette désirée Pendant ce proces- sus, on peut faire traverser le poste d'irradiation à la fraction sanguine comme décrit plus haut, ou bien, si la quantité de sang s'y prête et si la chambre de traitement sanguin 28 est de dimensions appropriées, on peut se borner à traiter la fraction sous des condi- tions statiques jusqu'à ce que l'énergie désirée se trouve dissipée A la suite de ceci, le sang traité est extrait du poste d'irradiation, et soit centrifugé comme considéré plus haut, soit directement restitué au sujet. Les agents chimiques additionnels indiqués ci-après sont connus pour intéragir avec des cellules intactes consécutivement à une exposition à de la lumière ultraviolette et à de la lumière visible Ces agents peuvent également être utilisés dans le disposi- tif selon l'invention. 1 Ethidium et acridines ( Yielding K L et Yielding L W: "Photoaffinity Labeling of DNA", in Annals of N Y Acad Sci 346: 368-378, 1980). De même, l'adriamycine, la daunomycine, la rubidazone. 2 Sulfonamides, sulfonylurées, phénothiazines, tétracyclines, dérivés des goudrons, anthracènes, pyri- dine, phénanthrène (Kornhauser A, "Molecular Aspects of Phototoxicity", in Annals of N Y Acad Sci 346: 398-414, 1980). 3 Anticorps à réactivité spécifique (Richard F.F et Lifter J, "Photoaffinity Probes in the Anti- body Combining Region", in Annals of N Y Acad Sci 346: 78-89, 1980). L'exemple ci-après est donné afin d'illustrer l'application du procédé et du dispositif selon la pré- sente invention à l'obtention d'une réduction thérapeu- tique de la population active d'un constituant du sang dans le volume sanguin d'un sujet humain. On a prélevé cina cents centimètres cubes ( 500 cc) de sang à un patient atteint de leucémie aiguë. Ce sang a été placé dans une poche à sang, et on a dis- posé des conduits allant de la poche à sang au disposi- tif de traitement sanguin, puis retournant de ce dispo- sitif à la poche à sang. Dans cette expérience, le dispositif mis en oeuvre était formé par une pompe et par un poste d'expo- sition aux UVA à passages multiples, comportant une cham- bre d'exposition de 1,0 mm d'épaisseur et de 0,312 m 2 d'aire totale On a irradié la chambre d'exposition du dessus et du dessous par des sources lumineuses d'ultra- violets A qui fournissaient un rayonnement dont la plus grande partie des composantes spectrales était située entre 3200 et 4000 Angstr 5 ms, avec des intensités maxima au voisinage de 3600 à 3700 Angstrams La valeur mesurée du niveau de rayonnement tombant sur les surfaces de la chambre d'exposition était d'environ 28,8 J/cm 2/h. Dans le sang à traiter, on a établi une teneur en psoralène de 100 nanogrammes par millimitre par admi- nistration orale de psoralène au patient deux ( 2) heures avant la prise du sang destiné à cette expérience Ulté- rieurement à la prise, on a additionné l'échantillon sanguin d'un dosage de 20 unités de sulfate d'héparine par millilitre de sang, afin de prévenir la coagulation de l'échantillon de sana dans l'appareillage. Avant le début de l'expérience, le nombre de globules blancs de l'échantillon sanguin était de 500 000/mm 3, valeur s'écartant très défavorablement du nombre normalde 5000 globules/mm 3 L'examen des globules a révélé que la quasi totalité des globules blancs de l'échantillon étaient des lymphocytes T malins. Dans la mise en oeuvre du procédé, on a soutiré du sang de la poche à sang sous un débit de cc/min, on lui a fait traverser la chambre d'irra- diation et on l'a ensuite renvoyé dans la poche à sang. On a prélevé un échantillon sur le conduit de retour avant le début de l'irradiation aux UVA, et ensuite à intervalles d'une heure, le dernier échantillon ayant été prélevé 3 heures après le début de l'irradiation. Les échantillons ont été maintenus dans des cultures dont on a extrait des prélèvements pour évaluation les troisième, quatrième, cinquième et sixième jours après l'irradiation. On a examiné chaque prélèvement extrait des trois échantillons sanguins irradiés pour y compter le nombre total de cellules sanguines nucléées et le nombre d'entre elles qui demeuraient viables Le nombre de cellules nucléées viables demeurant dans un échantillon a été déterminé en traitant celui-ci au bleu trypan, qui est absorbé par les cellules nucléées mortes et est rejeté par les cellules viables. Les résultats figurant dans le tableau ci- après sont présentés comme suit: Colonne I intervalle entre irradiation et évaluation du nombre de cellules de l'échantillon (en jours). Colonne II nombre de cellules nucléées de l'échantillon au moment de l'évaluation (x 104). Colonne III nombre total de cellules nucléées (viables + mortes)/nombre de cellules nucléées à l'ins- tant zéro (%). Colonne IV nombre de cellules nucléées via- bles/nombre total de cellules nucléées à l'instant zéro (%). TRAITEMENT DE 500 cc de I II III Témoin (non irradié) Echantillon prélevé 1 heure après exposition aux UVA Echantillon prélevé 2 heures après exposition aux UVA 6 94 0 71 3 33 4 35 21 6 27 0 125 3 83 4 47 41 Echantillon prélevé 3 heures après exposition aux UVA 0 137 3 70 4 -43 7 1 SANG IV 6 9 Du tableau ci-dessus, il ressort que la mise en oeuvre de l'invention a réalisé une destruction rapide de la population de lymphocytes en excédent dans le sang traité, sans effets cliniquement néfastes obser- vables sur d'autres constituants sanguins Par analyse, on a établi que dans les six jours consécutifs au trai- tement selon le présent procédé, la population de cellu- les lymphocytaires viables de chaque échantillon sanguin avait notablement diminué Plus précisément, dans les six jours consécutifs à l'exposition pendant des durées de 1, 2 et 3 heures dans le dispositif décrit, les pour- centages de lymphocytes viables demeurant dans le sang traité se trouvaient respectivement réduits à 13 %, 2 % et 1 % de leur valeur d'origine A titre comparatif, dans un échantillon témoin qui n'avait pas été exposé aux UVA, 86 % de la population de lymphocytes étaient viables au bout du même laps de temps. Bien que l'on vienne de décrire l'invention en en considérant des exemples de mise en oeuvre parti- culiers, il doit être bien entendu qu'au vu de la pré- sente description, de nombreuses modifications et varian- tes de réalisation de l'invention se trouvent mises à la portée du spécialiste tout en restant comprises dans le cadre de-l'invention En conséquence, le cadre de l'invention ne saurait être apprécié et limité que par la portée des revendications ci-annexées. REVENDICATIONS 1 Procédé de traitement extracorporel du sang humain en vue de réduire la population active d'un cons- tituant sanguin en particulier des lymphocytes contenus dans ce sang, caractérisé en ce qu'il comprend les opéra- tions consistant à irradier le sang ( 12) avec un rayon- nement ultraviolet ( 30) en présence d'une quantité effi- cace d'un agent chimique ( 26) dissous, préalablement introduit dans le sangqui est spécifique d'un site récepteur existant dans ou sur le constituant sanguin et est apte lorsqu'il est activé par ledit rayonnement ultraviolet à former des photo-additifs avec ledit site récepteur, pour établir ainsi une liaison chimique entre ledit agent chimique photo-activé et ledit site récep- teur en amorçant ainsi la destruction et/ou l'élimina- tion dudit constituant sanguin du volume sanguin du sujet, ledit agent chimique ( 26) étant choisi de préfé- rence parmi le groupe comprenant (a) un agent ayant une affinité pour les récepteurs de stéroïdes, (b) un anti- corps spécifique pour les produits chimiques immunogéni- ques. 2 Dispositif pour la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il com- prend une source de rayonnement ultraviolet ( 30), une chambre de traitement sanguin ( 28) adaptée à recevoir du rayonnement en provenance de ladite source en permet- tant ainsi à l'agent chimique ( 26) contenu dans le sang ( 12) d'être activé; et des moyens ( 16 > d'acheminement en continu adaptés à acheminer du sang ( 12) d'un patient à travers ladite chambre de traitement sanguin et à le ramener audit patient. 3 Dispositif conforme à la revendication 2, caractérisé en ce qu'il comprend en outre des moyens pour introduire dans le sang ledit agent chimique ( 26).