FR 2504408 A1 19821029 FR 8108172 A 19810424 La présente invention a pour objet un nouveau procédé de préparation de particules submicroscopiques formées d'un cyanoacrylate d'alkyle polymérisé et contenant une substance biologiquement active L'inven- tion a également pour objet les dites particules submicroscopiques ainsi que les compositions pharmaceu- tiques les contenant. Des particules submicroscopiques d'un diamètre inférieur à 500 nanomètres formées d'un polymère cyanoacrylique sont déjà connues par le brevet belge n 869 107 qui décrit des particules submicro- scopiques formées par la polymérisation micellaire d'un cyanoacrylate d'alkyle, o le terme "alkyle" désigne un radical alkyle inférieur de 1 à 4 atomes de carbone, et contenant une substance biologiquement active. Le brevet belge n 869 107 décrit également un procédé de préparation de ces particules submicro- scopiques Suivant ce procédé de préparation décrit, le monomère (cyanoacrylate d'alkyle) est ajouté sous agitation à une solution aqueuse d'un agent tensio- actif dont le p H est ajusté à une valeur inférieure à 7, et de préférence comprise entre 2 et 3, avec un acide pharmacologiquement acceptable Le cyanoacrylate d'alkyle polymérise alors sous forme de particules submicroscopiques; la substance biologiquement active est introduite dans le milieu soit avant l'introduction du monomère soit après polymérisation. Les particules submicroscopiques conformes au brevet belge n 869 107 ont de nombreuses propriétés très précieuses en tant que véhicules pour des substances biologiquement actives qui peuvent être, par exemple, des substances médicamenteuses à usage humain ou vétérinaire ou des produits pour le diagnostic. Ces particules submicroscopiques connues présentent cependant certains désavantages qui limitent leur application en médecine. Un premier désavantage des particules submicroscopiques conformes au brevet belge N O 869 107 découle du procédé suivant lequel elles sont préparées. En effet, le procédé de préparation de ces particules submicroscopiques, tel que décrit dans le dit brevet belge, fait intervenir un agent tensioactif. Or, la présence d'agents tensio-actifs dans les préparations pharmaceutiques destinées à être administrées par voie parentérale n'est pas souhai- table, en raison notamment de la toxicité inhérente à ces produits. Il est vrai que le procédé de préparation décrit dans le brevet belge N O 869 107 prévoit en particulier l'utilisation d'agents tensio-actifs non ioniques Les agents tensio-actifs non ioniques qui peuvent ainsi être utilisés sont en général moins toxiques que les agents tensio-actifs ioniques, mais présentent néanmoins une certaine toxicité qui rend peu souhaitable leur présence dans des compositions pharmaceutiques, surtout lorsque celles-ci sont destinées à être administrées par voie parentérale Il est à noter à ce propos que l'élimination des agents tensio-actifs, après la préparation des particules submicroscopiques, est une opération quasi impossible ou très difficile qui nécessite le recours à des méthodes de purification extrêmement délicates (ultrafiltration, ultradialyse et/ou ultracentri- fugation) peu compatibles avec une fabrication à l'échelle industrielle. Il importe de noter en outre que dans certains cas il n'est pratiquement pas possible d'éli- miner de la composition les agents tensio-actifs sans éliminer en même temps une partie sensible de la substance biologiquement active qui était adsorbée dans les particules submicroscopiques. Un second désavantage des particules submi- croscopiques conformes au brevet belge N O 869 107, qui découle également de leur procédé de préparation, réside dans le fait que ces particules sont préparées dans un milieu de réaction dont le p H est ajusté à une valeur inférieure à 7, et de préférence comprise entre 2 et 3 La présence d'un acide dans le milieu de réaction est, en général, indésirable car il devra de toute manière être-neutralisé au stade final de la préparation de la composition pharmaceutique. En outre, la présence d'un acide dans le milieu de réaction peut être nettement nuisible lorsque l'on désire fixer sur les particules submicroscopiques une substance biologiquement active qui serait altérée ou décomposée au contact d'un acide. Il est vrai que, dans certains cas, cette difficulté pourrait être évitée en préparant les particules submicroscopiques dans un milieu acide et en n'ajoutant la substance biologiquement active qu'après avoir ajusté le p H du milieu à une valeur proche de 7. Cette manière de procéder, qui éviterait d'altérer la substance biologiquement active, n'est cependant pas sans inconvénient car la quantité de substance biologi- quement active qui peut être fixée sur les particules submicroscopiques est toujours plus faible lorsque la substance biologiquement active est introduite dans le milieu après formation des particules submicroscopi- ques, que lorsque cette même substance est introduite dans le milieu avant l'introduction du monomère. Outre les deux désavantages cités ci-dessus au sujet des particules submicroscopiques conformes au brevet belge n O 869 107, il faut encore noter que ces particules submicroscopiques, qui sont obtenues par la polymérisation de cyanoacrylates d'alkyle inférieurs, ne se prêtent pas à certaines applications en médecine du fait qu'elles sont trop rapidement biodégradées dans l'organisme, de telle sorte qu'elles ne conviennent pas comme véhicules pour des substances médicamenteuses nécessitant une libération plus lente. La présente invention remédie aux désavan- tages cités ci-dessus. Un but de l'invention est de préparer des particules submicroscopiques contenant au moins une substance biologiquement active, suivant un procédé qui ne fait pas intervenir des agents tensio-actifs ou substances toxiques analogues. Un autre but de l'invention est de préparer des particules submicroscopiques contenant au moins une substance biologiquement active, suivant un procédé qui ne fait intervenir ni des acides ni des agents tensio-actifs ou substances toxiques analogues. Un autre but de l'invention est de préparer des particules submicroscopiques contenant au moins une substance biologiquement active qui, dans l'organisme humain ou animal, ont une vitesse de biodégradation plus faible que celle des particules submicroscopiques connues à ce jour. La présente invention a pour objet un procédé de préparation de particules submicroscopiques d'un diamètre inférieur à 600 nanomètres formées d'un polymère synthétique et contenant au moins une substance biologiquement active, cette préparation se faisant en l'absence d'agent tensio-actif. Suivant une forme d'exécution de l'invention, le procédé consiste: à préparer une solution ou solution collol- dale aqueuse d'au moins une substance biologiquement active, cette solution ou solution colloïdale aqueuse étant exempte d'agent tensioactif, à ajouter, sous agitation, à cette solution ou solution colloïdale aqueuse au moins un cyanoacry- late d'alkyle, o le terme "alkyle" désigne un radical alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 12 atomes de carbone, à poursuivre l'agitation jusqu'à ce qu'en substance tout le cyanoacrylate d'alkyle introduit dans le milieu réactionnel se soit transformé en particules submicroscopiques formées de polycyanoacrylate d 'alkyle. Suivant une autre forme d'exécution de l'invention, le procédé consiste: à préparer une solution ou solution colloi- dale aqueuse d'au moins une substance biologiquement active et d'au moins une autre substance choisie parmi les sels, les sucres, les polysaccharides et les autres substances hydrosolubles pharmaceutiquement accepta- bles, cette solution ou solution colloïdale aqueuse étant exempte d'agent tensio-actif et ayant une pres- sion osmotique voisine de la pression osmotique du sérum sanguin, à ajouter, sous agitation, à cette solution ou solution colloïdale aqueuse au moins un cyanoacry- late d'alkyle, o le terme "alkyle" désigne un radical alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 12 atomes de carbone, à poursuivre l'agitation jusqu'à ce qu'en substance tout le cyanoacrylate d'alkyle introduit dans le milieu réactionnel se soit transformé en particules submicroscopiques formées de polycyanoacrylate d'alkyle. Suivant une autre forme d'exécution de l'invention, le procédé consiste: à préparer une solution ou solution colloî- dale aqueuse d'une ou plusieurs substances choisies parmi les sels, les sucres, les polysaccharides et les autres substances hydrosolubles pharmaceutiquement acceptables, cette solution ou solution colloïdale aqueuse étant exempte d'agent tensio-actif et ayant une pression osmotique voisine de la pression osmotique du sérum sanguin, à ajouter, sous agitation, à cette solution aqueuse au moins un cyanoacrylate d'alkyle, o le terme "alkyle" désigne un radical alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 12 atomes de carbone, à poursuivre l'agitation jusqu'à ce qu'en substance tout le cyanoacrylate d'alkyle introduit dans le milieu réactionnel se soit transformé en particules submicroscopiques formées de polycyanoacrylate d'alkyle, à ajouter à cette suspension de particules submicroscopiques une solution ou solution colloïdale aqueuse d'au moins une substance biologiquement active. Suivant un mode d'exécution particulier de chacun des trois procédés décrits ci-dessus, la solu- tion ou solution colloïdale aqueuse dans laquelle on ajoute le cyanoacrylate d'alkyle est exempte d'acide. Suivant un autre mode d'exécution de chacun de ces trois procédés, la dite solution ou solution colloïdale aqueuse est ajustée à un p H inférieur à 7 avec au moins un acide pharmaceutiquement acceptable. Plus particulièrement, ce p H peut être ajusté à une valeur comprise entre 2 et 3. Suivant une autre forme d'exécution de l'invention, le procédé consiste à préparer une solution aqueuse d'au moins un acide pharmaceutiquement acceptable (plus particu- lièrement, le p H de cette solution peut être compris entre 2 et 3), à ajouter, sous agitation, à cette solution aqueuse au moins un cyanoacrylate d'alkyle, o le terme "alkyle" désigne un radical alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 12 atomes de carbone, à poursuivre l'agitation jusqu'à ce qu'en substance tout le cyanoacrylate d'alkyle introduit dans le milieu réactionnel se soit transformé en particules submicroscopiques formées de polycyanoacrylate d'alkyle, à ajouter à cette suspension de particules submicroscopiques une solution ou solution colloïdale aqueuse d'au moins une substance biologiquement active. Lorsque, dans l'une ou l'autre forme d'exécu- tion de l'invention, le cyanoacrylate d'alkyle est introduit dans un milieu réactionnel acide, la suspen- sion de particules submicroscopiques formée sera avantageusement ajustée à un p H compris entre 6 et 8, par addition d'au moins une substance basique pharma- ceutiquement acceptable. Suivant une forme d'exécution particulière de l'invention, le procédé consiste: à ajouter à de l'eau pure, sous agitation, au moins un cyanoacrylate d'alkyle o le terme "alkyle" désigne un radical alkyle linéaire ou ramifié de 6 à 12 atomes de carbone, à poursuivre l'agitation jusqu'à ce qu'en substance tout le cyanoacrylate d'alkyle introduit dans l'eau se soit transformé en particules submicroscopi- ques formées de polycyanoacrylate d'alkyle, à ajouter à cette suspension de particules submicroscopiques une solution ou solution colloidale aqueuse d'au moins une substance biologiquement active. Lorsque, pour la mise en oeuvre de l'inven- tion, le cyanoacrylate d'alkyle est introduit dans un milieu réactionnel acidifié, l'acide utilisé peut être, par exemple l'acide chlorhydrique, bromhydrique, iodhydrique, sulfurique, phosphorique, acétique, succinique, lactique, citrique ou tout autre acide pharmaceutiquement acceptable, pour autant que le dit acide soit compatible avec les composants du milieu et particulièrement avec la substance biologiquement active. Le p H d'une suspension de particules submi- croscopiques préparée en milieu acide peut être ajusté à une valeur comprise entre 6 et 8 par l'addition d'au moins une substance basique pharmaceutiquement accep- table, comme par exemple une solution d'hydroxyde de sodium ou une solution tampon de phosphate monopotas- sique et d'hydroxyde de sodium. On peut ajouter au milieu réactionnel ou à la suspension de particules submicroscopiques des substances destinées à augmenter la pression osmotique, comme par exemple le chlorure de sodium, le glucose ou le dextrane Ces substances peuvent être ajoutées après la préparation de la suspension de particules submicro- scopiques, mais lorsqu'on utilise un sucre ou un polysaccharide (comme le glucose ou le dextrane) il est généralement avantageux d'introduire cette substance dans le milieu réactionnel avant que l'on y introduise le cyanoacrylate d'alkyle, car cette manière de pro- céder permet d'obtenir des particules submicroscopiques de diamètre moyen plus petit avec certains monomères. Les particules submicroscopiques suivant l'invention peuvent contenir une ou plusieurs substan- ces biologiquement actives Les substances biologique- ment actives que peuvent contenir les particules submicroscopiques sont, par exemple, les substances médicamenteuses à usage humain ou vétérinaire ou les produits pour le diagnostic Comme substances médicamenteuses, on peut citer plus particulièrement les produits chimiques doués de propriétés pharmacolo- giques et, par exemple, les substances antimitotiques ou antinéoplasiques comme le méthotrexate, 1 'actino- mycine D, la doxorubicine, la daunorubicine, la bléomycine et la vincristine, ou les substances antibiotiques, comme les pénicillines, les céphalo- sporines et l'acide nalidixique, les antibiotiques du type aminoglucoside et ceux de la famille de la virginiamycine, ou les substances hormonales, notamment les hormones stéroidiennes Ces substances médica- menteuses peuvent être notamment des composés chimiques à haut poids moléculaire comme l'insuline et l'hépa- rine, et l'expression "substance médicamenteuse" comprend également des produits biologiques comme les antigènes, les allergènes, les enzymes, les protéines, les virus, des constituants de virus, des constituants de bactéries ou des constituants de cellules Les particules submicroscopiques suivant l'invention peuvent également contenir un produit pour le diagno- stic comme par exemple la fluorescéine ou la séral- bumine humaine radio-active. La présente invention a également pour objet, à titre de produit industriel nouveau, les particules submicroscopiques d'un diamètre inférieur à 400 nanomètres, formées par la polymérisation micel- laire d'un cyanoacrylate d'alkyle, o le terme "alkyle" désigne un radical alkyle linéaire ou ramifié de 5 à 12 atomes de carbone et, en particulier, le radical hexyle, ces particules contenant au moins une substance biologiquement active. L'invention a également pour objet les compo- sitions pharmaceutiques de telles particules submicro- scopiques. L'invention a également pour objet les compositions pharmaceutiques qui contiennent des particules submicroscopiques contenant au moins une substance biologiquement active, obtenues suivant l'un ou l'autre des procédés conformes à l'invention. Les compositions pharmaceutiques suivant l'invention peuvent contenir un excipient pour l'admi- nistration orale ou parentérale. L'invention a également pour objet les compo- sitions pharmaceutiques qui consistent en une suspen- sion aqueuse de particules submicroscopiques telle qu'elle est obtenue par l'un ou l'autre des procédés de l'invention. Suivant une réalisation avantageuse de l'invention, les compositions pharmaceutiques contien- nent des particules submicroscopiques dont le diamètre moyen est inférieur à 200 nanomètres et de préférence inférieur à 100 nanomètres. De telles compositions pharmaceutiques con- viennent -tout spécialement pour l'administration par voie parentérale et plus particulièrement par voie intraveineuse. Les exemples suivants illustrent la présente invention sans aucunement en limiter la portée. On remarquera que les exemples 1 à 8 concernent en quelque sorte des essais "à blanc", puisqu'ils décrivent la préparation de particules submicroscopiques exemptes de substance biologiquement active On comprendra toutefois que des particules submicroscopiques contenant une substance biologi- quement active peuvent être préparées de manière analogue en introduisant dans le milieu de réaction la dite substance biologiquement active, soit avant l'introduction du cyanoacrylate, soit après la forma- tion des particules submicroscopiques et cela d'une manière analogue à ce qui est décrit aux exemples 9 à 13. Dans tous les exemples cités ci-dessous, la préparation des particules submicroscopiques se fait à la température ambiante (environ 20 C). Il est à noter d'autre part que pour tous les exemples cités ci-dessous, la taille des particules submicroscopiques a été mesurée avec un compteur à diffraction d'un rayon laser (Nanosizero) Il importe de savoir que les résultats des mesures obtenus ainsi doivent être considérés comme surestimés par rapport aux résultats qui seraient obtenus par une granulo- métrie au microscope électronique à balayage. EXEMPLE 1 - Dans 25 ml d'eau distillée on ajoute, sous agitation, 50 microlitres de cyanoacrylate d'hexyle. Après 4 jours de polymérisation, on ajoute à nouveau 50 microlitres de cyanoacrylate d'hexyle Après un nouveau délai de 4 jours, 50 microlitres de cyano- acrylate d'hexyle sont à nouveau ajoutés et on laisse la polymérisation se poursuivre pendant une nouvelle période de 4 jours Il est à noter que l'agitation a été maintenue depuis le début de la préparation La suspension de particules submicroscopiques ainsi obtenue présente un effet Tyndall caractéristique des solutions colloïdales Cette suspension est filtrée sur filtre en verre fritté (diamètre des pores: 9 à micromètres) Mesurées à l'aide d'un compteur à diffraction d'un rayon laser (Nanosizer(C), les particules contenues dans le filtrat présentent un diamètre moyen de 80 nanomètres. EXEMPLE 2 - On procède suivant la technique décrite dans l'exemple 1, mais l'eau distillée est remplacée par une solution de glucose à 5 % afin de rendre la suspension isotonique et donc propre à être injectée telle quelle. Le diamètre moyen des nanoparticules ainsi obtenues est de 170 nanomètres. EXEMPLE 3 - 100 mg de dextrane 70 et 200 mg d'acide citrique sont dissous successivement dans 10 ml d'eau distillée 120 microlitres de cyanoacrylate d'hexyle sont ensuite ajoutés, goutte à goutte Après filtra- tion, on obtient des particules dont le diamètre moyen est de l'ordre de 300 nanomètres. EXEMPLE 4 - mg d'acide citrique et 100 mg de dextrane sont dissous dans 10 ml d'eau distillée 120 micro- litres de cyanoacrylate de méthyle sont ajoutés goutte à goutte Après 2 heures de polymérisation, on filtre sur un filtre en verre fritté (diamètre des pores: 9 à micromètres) Les particules ainsi obtenues ont un diamètre moyen d'environ 600 nanomètres. EXEMPLE 5 - On procède suivant la technique décrite dans l'exemple 4, mais le cyanoacrylate de méthyle est remplacé par le cyanoacrylate d'isobutyle Les parti- cules ainsi obtenues ont un diamètre moyen d'environ 450 nanomètres. EXEMPLE 6 - 500 mg de glucose sont dissous dans 10 ml d'eau distillée 120 microlitres de cyanoacrylate de méthyle sont ajoutés goutte à goutte, Après 2 heures de polymérisation, on filtre sur un filtre en verre fritté (diamètre des pores: 9 à 15 micromètres) Les parti- cules ainsi obtenues ont un diamètre moyen de 160 nanomètres et la suspension est isotonique et prête à être injectée. EXEMPLE 7 - On procède suivant la technique décrite dans l'exemple 6, mais le cyanoacrylate de méthyle est remplacé par le cyanoacrylate d'éthyle Les particules ainsi obtenues ont un diamètre moyen de 150 nanomètres. EXEMPLE 8 - On procède suivant la technique décrite dans l'exemple 6, mais le cyanoacrylate de méthyle est remplacé par le cyanoacrylate d'isobutyle Les parti- cules ainsi obtenues ont un diamètre moyen de 18 D O nanomètres. EXEMPLE 9 - mg d'acide citrique et 100 mg de dextrane 70 sont dissous dans 10 ml d'eau distillée. microlitres de cyanoacrylate d'hexyle sont ajoutés goutte à goutte, sous agitation, et cette agitation est maintenue pendant 4 jours Apres neutralisation par Na OH N, jusqu'à p H 7, on ajoute à la suspension ainsi obtenue 1 mg d'actinomycine D et 5 microlitres de solution d'actinomycine D tritiée (activité spéci- fique: 14 Ci/millimole; concentration radio-active: 0,5 m Ci/ml) L'agitation est continuée pendant 2 heures et la suspension ainsi obtenue est ensuite centrifugée à 50 000 g Par le dosage de la radio-activité (scintillateur liquide) dans le liquide surnageant et dans le culot de centrifugation, on constate que la quantité d'actinomycine D fixée sur les particules submicroscopiques correspond à 50,2 % de la quantité totale engagée. Le diamètre moyen des particules obtenues est de 260 nanomètres. EXEMPLE 10 - mg d'acide citrique sont dissous dans ml d'eau distillée 120 microlitres de cyanoacrylate d'hexyle sont ajoutés, goutte à goutte, sous agitation, et cette agitation est maintenue pendant 4 jours Après neutralisation par Na OH N, jusqu'à p H 7, on ajoute à la suspension ainsi obtenue 5 mg de vincristine et microlitres de solution de vincristine tritiée (activité spécifique: 4,5 Ci/millimole; concentration radio-active: 0,25 m Ci/ml) L'agitation est continuée pendant 2 heures et la suspension ainsi obtenue est ensuite centrifugée à 50 000 g Par le dosage de la radio-activité (scintillateur liquide) dans le liquide surnageant et dans le culot de centrifugation, on constate que la quantité de vincristine fixée sur les particules submicroscopiques correspond à 69 % de la quantité totale engagée. Le diamètre moyen des particules obtenues est de 150 nanomètres. EXEMPLE 11 - mg d'acide citrique sont dissous dans ml d'eau distillée 120 microlitres de cyanoacrylate d'hexyle sont ajoutés, goutte à goutte, sous agitation, et cette agitation est maintenue pendant 4 jours Après neutralisation par Na OH N, jusqu'à p H 7, on ajoute à la suspension ainsi obtenue 100 U I d'insuline porcine et microlitres d'insuline marquée à l'iode 125 (activité spécifique: 50 /u Ci/mg; concentration radio-active 1 u Ci/ml) L'agitation est continuée pendant 2 heures et la suspension ainsi obtenue est ensuite centrifugée à 50 000 g Par le dosage de la radio-activité (scintillateur gamma) dans le liquide surnageant et dans le culot de centrifugation, on constate que la quantité d'insuline porcine fixée sur les particules submicroscopiques correspond à 93 % de la quantité totale engagée. Le diamètre moyen des particules obtenues est de 150 nanomètres. EXEMPLE 12 - 500 mg de glucose sont dissous dans 10 ml d'eau distillée Deux fois 40 microlitres de cyano- acrylate d'hexyle sont ajoutés, sous agitation, à 4 jours d'intervalle L'agitation est maintenue jusqu'au quatrième jour après la seconde addition de monomère 10 mg de doxorubicine sont ensuite ajoutés. Dans ces conditions, et après filtration, on obtient des particules d'un diamètre moyen de 190 nanomètres fixant une quantité de doxorubicine de l'ordre de 60 % de la quantité totale mise en oeuvre. EXEMPLE 13 - mg de dextrane 70 et 50 mg d'acide citrique sont dissous successivement dans 10 ml d'eau distillée 10 mg de Ca C 12 sont ensuite dissous dans le même milieu afin d'éviter une éventuelle hypocalcémie lorsque la composition pharmaceutique sera injectée On dissout alors dans le même milieu 10 mg de doxoru- bicine 100 microlitres de cyanoacrylate d'isobutyle sont enfin ajoutés, goutte à goutte, sous agitation, au milieu réactionnel Après 4 heures de polymérisation sous agitation, on tamponne la préparation à p H 7 par Na OH N et on isotonise la suspension par 72 mg de Na Cl. La préparation est prête à être administrée par voie intraveineuse et les particules ainsi obtenues ont un diamètre moyen de 140 nanomètres. Après centrifugation à 50 000 g de la suspension ultrafine et dosage fluorimétrique de la doxorubicine dans le liquide surnageant et dans le culot de centrifugation, on constate que la quantité de doxorubicine fixée sur les particules correspond à 94 % de la quantité totale engagée. Plusieurs mesures de toxicité sont effectuées avec des suspensions de particules obtenues suivant ce procédé Quel que soit le schéma d'administration, la toxicité inhérente à la doxorubicine est sensiblement diminuée lorsque celle-ci est adsorbée par les parti- cules submicroscopiques. Ainsi, par exemple, après administration intraveineuse de trois doses successives de 10 mg/kg/j de doxorubicine libre, 27,5 % des souris ne survivent pas à 15 jours Par contre, lorsqu'on administre à des souris la même quantité de doxorubicine fixée sur des particules submicroscopiques, aucune mortalité n'est enregistrée après 15 jours. De même, aucune souris ne survit à trois injections de 12,5 mg/kg/j de doxorubicine libre alors que lorsque ce médicament est fixé sur des particules submicroscopiques et administré aux mêmes doses, 30 % des souris survivent. Parallèlement, la perte de poids des souris traitées par la doxorubicine fixée sur des particules submicroscopiques est sensiblement plus faible que la perte de poids des souris traitées par la doxorubicine libre. La toxicité inhérente à la doxorubicine limite fortement les doses qui peuvent être admini- strées et donc l'efficacité thérapeutique Les essais décrits ci-dessus montrent que la fixation de ce médicament cytostatique sur des particules submicro- scopiques conformes à l'invention en diminue la toxicité, ce qui permet ainsi d'augmenter les doses et de ce fait l'effet thérapeutique du médicament. REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation de particules submicroscopiques d'un diamètre inférieur à 600 nanomètres formées d'un polymère synthétique et contenant au moins une substance biologiquement active, caractérisé en ce qu'il consiste: à préparer une solution ou solution colloi- dale aqueuse d'au moins une substance biologiquement active, cette solution ou solution colloïdale aqueuse étant exempte d'agent tensioactif, à ajouter, sous agitation, à cette solution ou solution colloïdale aqueuse au moins un cyanoacry- late d'alkyle, o le terme "alkyle" désigne un radical alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 12 atomes de carbone, à poursuivre l'agitation jusqu'à ce qu'en substance tout le cyanoacrylate d'alkyle introduit dans le milieu réactionnel se soit transformé en particules submicroscopiques formées de polycyanoacrylate d'alkyle. 2. Procédé de préparation de particules submicroscopiques d'un diamètre inférieur à 600 nano- mètres formées d'un polymère synthétique et contenant au moins une substance biologiquement active, caractérisé en ce qu'il consiste: à préparer une solution ou solution colloî- dale aqueuse d'au moins une substance biologiquement active et d'au moins une autre substance choisie parmi les sels, les sucres, les polysaccharides et les autres substances hydrosolubles pharmaceutiquement accepta- bles, cette solution ou solution colloïdale aqueuse étant exempte d'agent tensio-actif et ayant une pres- sion osmotique voisine de la pression osmotique du sérum sanguin, à ajouter, sous agitation, à cette solution ou solution colloïdale aqueuse au moins un cyanoacry- late d'alkyle, o le terme "alkyle" désigne un radical alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 12 atomes de carbone, à poursuivre l'agitation jusqu'à ce qu'en substance tout le cyanoacrylate introduit dans le milieu réactionnel se soit transformé en particules submicroscopiques formées de polycyanoacrylate d'alkyle. 3. Procédé de préparation de particules d'un diamètre inférieur à 600 nanomètres formées d'un polymère synthétique et contenant au moins une substance biologiquement active, caractérisé en ce qu'il consiste: à préparer une solution ou solution colloïdale aqueuse d'au moins une substance choisie parmi les sels, les sucres, les polysaccharides et les autres substances hydrosolubles pharmaceutiquement acceptables, cette solution ou solution colloïdale aqueuse étant exempte d'agent tensio-actif et ayant une pression osmotique voisine de la pression osmotique du sérum sanguin, à ajouter, sous agitation, à cette solution aqueuse au moins un cyanoacrylate d'alkyle, o le terme "alkyle" désigne un radical alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 12 atomes de carbone, à poursuivre l'agitation jusqu'à ce qu'en substance tout le cyanoacrylate d'alkyle introduit dans le milieu réactionnel se soit transformé en particules submicroscopiques formées de -polycyanoacrylate d'alkyle, à ajouter à cette suspension de particules submicroscopiques une solution ou solution colloidale aqueuse d'au moins une substance biologiquement active. 4. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la solution ou solution colloïdale aqueuse dans laquelle on ajoute le cyanoacrylate d'alkyle est exempte d'acide. 5. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que, avant 2 044 O# qu'on y ajoute le cyanoacrylate d'alkyle, la dite solution ou solution colloïdale aqueuse est ajustée à un p H inférieur à 7 avec au moins un acide pharma- ceutiquement acceptable. 6 Procédé suivant la revendication 5, caractérisé en ce que, avant qu'on y ajoute le cyano- acrylate d'alkyle, la dite solution ou solution colloïdale -aqueuse est ajustée à un p H compris entre 2 et 3 avec au moins un acide pharmaceutiquement acceptable. 7. Procédé de préparation de particules submicroscopiques d'un diamètre inférieur à 600 nano- mètres formées d'un polymère synthétique et contenant au moins une substance biologiquement active, caractérisé en ce qu'il consiste: à préparer une solution aqueuse d'au moins un acide pharmaceutiquement acceptable, à ajouter, sous agitation, à cette solution aqueuse au moins un cyanoacrylate d'alkyle, o le terme "alkyle" désigne un radical alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 12 atomes de carbone, à poursuivre l'agitation jusqu'à ce qu'en substance tout le cyanoacrylate d'alkyle introduit dans le milieu réactionnel se soit transformé en particules submicroscopiques formées de polycyanoacrylate d'alkyle, à ajouter à cette suspension de particules submicroscopiques une solution ou solution colloïdale aqueuse d'au moins une substance biologiquement active. 8 Procédé suivant la revendication 7, caractérisé en ce que la dite solution aqueuse d'au moins un acide pharmaceutiquement acceptable a un p H compris entre 2 et 3. 9. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 5 à 8, caractérisé en ce que, après la formation de la suspension de particules submicrosco- piques, le p H de cette suspension est ajusté à une valeur comprise entre 6 et 8, par addition d'au moins une substance basique pharmaceutiquement acceptable. 10. Procédé de préparation de particules submicroscopiques d'un diamètre inférieur à 600 nano- mètres formées d'un polymère synthétique et contenant au moins une substance biologiquement active, caractérisé en ce qu'il consiste: à ajouter à de 'l'eau pure, sous agitation, au moins un cyanoacrylate d'alkyle, o le terme "alkyle" désigne un radical alkyle linéaire ou ramifié de 6 à 12 atomes de carbone, à poursuivre l'agitation jusqu'à ce qu'en substance tout le cyanoacrylate d'alkyle introduit dans l'eau se soit transformé en particules submicroscopi- ques formées de polycyanoacrylate d'alkyle, à ajouter à cette suspension de particules submicroscopiques une solution ou solution colloidale aqueuse d'au moins une substance biologiquement active. 11. Particules submicroscopiques d'un diamètre inférieur à 400 nanomètres formées par la polymérisation d'un cyanoacrylate d'alkyle, o le terme "alkyle" désigne un radical linéaire ou ramifié de 5 à 12 atomes de carbone, et contenant au moins une substance biologiquement active. 12 Particules suivant la revendication 11, caractérisées en ce qu'elles sont obtenues par la polymérisation de cyanoacrylate d'hexyle. 13. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient des particules suivant l'une quelconque des revendications 11 et 12. 14. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient des particules submicroscopiques contenant au moins une substance biologiquement active, obtenues par un procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 10. 15. Composition pharmaceutique suivant l'une quelconque des revendications 13 et 14, caractérisée en ce qu'elle contient un excipient pour l'administration orale ou parentérale. 16. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle consiste en une suspension aqueuse de particules submicroscopiques telle qu'obtenue par un procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 10. 17. Composition pharmaceutique suivant l'une quelconque des revendications 13 à 16, caractérisée en ce que les dites particules ont un diamètre moyen inférieur à 200 nanomètres. 18. *Composition pharmaceutique suivant la revendication 17, caractérisée en ce que les dites particules ont un diamètre moyen inférieur à 100 nanomètres.