FR 2503563 A1 19821015 FR 8107106 A 19810409 La présente invention a trait au domaine des compositions pour collyres destinés au traitement des maladies de l'oeil. Elle concerne tout particulièrement un nouveau collyre apte à se substituer à une sécrétion lacrymale anormale ou insuffisante. On sait que le liquide lacrymal, qui baigne en per- manence la cornée, la conjonctive, et les culs-de-sac conjonctivaux, joue un important rôle de défense contre les infections et participe à la physiologie de la cornée par le mouvement d'eau et le transport d'oxygène. La sécrétion lacrymale normale-composée d'une sécrétion de ba- se produite par les glandes appropriée et d'une sécrétion réflexe cau- sée par stimulation sensorielle-doit transmettre parfaitement les rayons lumineux du spectre visible et joue un rôle majeur dans la perfection du dioptre air-cornée. 1 Les affections de sécheresse oculaire, caractéri- sées par un manque ou une inefficacité des larmes - comme par exemple les syndromes de Gougerot-Sj3gren et de Stevens-Johnson- peuvent fré- quemment conduire à de graves complications cornéennes avec ulcères à répétitions et/ou des cicatrices et adhérences entre les paupières et le globe de l'oeil, lesquelles aboutissent parfois à la cécité. On a déjà préconisé, pour le traitement de telles affections oculaires, l'utilisation de médicaments pouvant contenir divers ingrédients actifs tels que par exemple des antipaludiens de synthèse, la bromhexine, l'anétholtrithione par voie orale, l'alcool polyvinylique, des dérivés de la cellulose, l'acétylcystéine par voie locale...etc. Toutefois, ces médicaments n'ont pas donné satis- faction. Les produits administrés par voie orale ont du être abandonnés du fait de leur toxicité. Par ailleurs, les compositions à action locale ne comblent pas suffisamment les fractions manquantes du film lacrymal et ne présentent pas la tension superficielle souhaitée aux doses adé- quates. Il a maintenant été trouvé que l'on pouvait pallier les inconvénients susvisés et mettre à la disposition des malades un nouveau collyre de grande efficacité, bien toléré et non toxique, capa- ble de traiter les hypolacrymies dues à une insuffisance de sécrétions lacrymales de base, en particulier dans: les kératoconjonctivites sè- ches, les brûlures oculaires, les larmoiements chroniques des vieillards, les irritations oculaires dues au port de lentilles de contact, et d'au- tres maladies telles que: syndromes de Gougerot-Sjogren, Riley-Day, 2 2503563 maladie de Stevens-Johnson, pemphigus... etc s1 Conformément à l'invention, la nouvelle composi- tion pour collyre renferme comme constituant actif le sel disodique du sulfate de chondroitine A. On sait que le sulfate de chondroitine est un mucopolysaccharide de haute viscosité existant sous forme endogène dans le sang et l'urine des mammifères et de propriétés pharmacolo- giques et thérapeutiques souvent comparables à celles de l'héparine. En pratique, il existe plusieurs formes de sulfates de chondro tine à savoir les sels de type A (ou athéroitine), de type B (ou béta-hé- parine) et de type C (Merck Index 9ème édition, 1976). Dans les compositions pharmaceutiques divulguées à ce jour et qui font appel à la chondroitine comme principe actif, ce sont toujours des mélanges de sulfates et notamment des types A et C précités qui sont mis en oeuvre. C'est le cas par exemple des médica- ments à action hypolipémique connus sous les marques Arteparon, Elepa- ron ou encore des produits, également présentés sous forme de gélules, proposés dans les états de déminéralisation osseuse (marque déposée Structum). Contrairement à cet art antérieur, l'invention fait appel au sulfate pur de type A de la chondroitine, produit chimique connu en soi se présentant sous la forme d'une poudre blanche hygrosco- pique, sans saveur ni odeur, soluble dans l'eau et insoluble dans l'al- cool, l'acétone, le chloroforme, de poids moléculaire moyen compris en- tre 25 000 et 50.000. En outre, les indications thérapeutiques découvertes par la Demanderesse pour ce produit, ainsi que les modes de présentation (collyre au lieu de gélules) et les voies d'administration sont totale- ment différents de ceux préconisés jusqu'ici pour les mélanges de sels précités. Outre, le constituant actif susvisé, les composi- tions pour collyres selon l'invention renferment divers agents jouant essentiellement les r3les de conservateurs, agents tampons, isotonisants.. de façon connue en soi. Parmi les produits de fonction tampon on peut citer notamment: le phosphate monopotassique et/ou le phosphate dipo- tassique, le chorure de sodium, des agents complexants comme l'acide éthy- lène diaminotétracétique;etc.. Les produits conservateurs peuvent être constitués par des sels de mercure non toxiques comme par exemple l'acé- tate ou le borate phénylmercurique, le th.merosal, le gluconate de chlorhexidine, le chlorbutol..etc. L'agent isotonique peut être choisi également parmi des produits bien connus pour cette fonction; à titre d'exemple, l'acide borique convient particulièrement bien dans ce cas. Bien entendu, comme dans le cas des autres collyres, les compositions sont diluées par de l'eau distillée. Les quantités de sel disodique sulfate A de chondrol- tine mises en oeuvre dans les collyres selon l'invention peuvent varier entre d'assez larges limites, généralement entre J0 et 100 g/litre de collyre. Elles sont toutefois avantageusement maintenues en- tre les fourchettes de 20 et 40 g/litre. Quant aux proportions des adjuvants annexes précités, elles ne sont évidemment pas critiques et sont fonction du type de produit utilisé. Un exemple de composition sera illustré au cours de la description suivante. Les nombreuses études de stabilité entreprises par la Demanderesse ont démontré, qu'après une durée de plus de 36 mois, le ' principe actif conservait sa teneur inchangée et qu'en outre il n'y avait pas interaction entre celui-ci et des récipients en matière plastique (par exemple en polyéthylène) utilisés pour la conservation des collyres à base de sulfate A de chonàroitine. Des séries d'expériences et observations faites à par- tir de compositions de collyres selon l'invention dans les domaines:toxi- cologie, pharmacologie, pharmacocinétique et biodisponibilité, ont don- né des résultats extrêmement intéressants. Au plan de la toxicité, les expériences d'administra- tion per os et par voie intrapéritonéale à des souris et à des rats ont montré une absence totale de toxicité aigue et une dose léthale DL 50 nettement supérieure aux doses maximales d'administration; l'indice d'irritation ooulaire est nul chez le lapin et il n'y a pas de toxicité subaiguë chez le rat; les expériences sur chiens ont conclu à une mortalité nulle et à un comportement tout à fait normal (croissance, digestion, aucune lésion constatée après tous les examens pratiqués); aucun effet tératogène n'a été relevé après essais sur lapins et l'on a pu conclure à une très bonne tolérance dans l'oeil de l'homme. Dans le domaine pharmacologique,les résultats d'expéri- mentations chez le lapin ont été hautement significatifs et ont montré, après simulation des yeux secs et traitement au collyre que l'on obte- nait une excellente humidification de l'oeil sec. Les essais sur bovins ont permis de conclure à une très mauvaise pénétration du collyre dans l'oeil, avec maintien de l'intégrité de la cornée. L'étude de la bio- disponibilité de la molécule des sulfate de chondroîtine A, après administra- tion orale chez le lapin, n'a pas permis de mettre en évidence l'absorp- tion orale de cette substance; l'absence de biodisponibilité est vraisem- blablement due au poids moléculaire très élevé du principe actif mis en oeuvre selon l'invention; aucune toxicité systémique n'a pu, en tout cas Atre mis en évidence. Enfin, les séries de nombreuses études cliniques sur malades, entreprises en divers centres hospitaliers par des experts cli- niciens en ophtalmologie ont mis en évidence la grande efficacité du mié- to dicament, nettement supérieure à celle de collyres de références dont le sérum physiologique à 9e/eo de Nacl, connu pour être le meilleur succé- dané des larmes. L'invention sera mieux comprise par une description détaillée des essais et observations entrepris à partir d'un exemple, non limitatif, de réalisation d'une composition de collyre selon l'inven- tion. Exemple de réalisation Le collyre retenu pour les séries d'expérimentations avait la composition pondérale suivante: Sel disodique du sulfate de chondroitine A.......... 3 g Phosphate dipotassique anhydre. .................. 0,25 g Phosphate monopotassique anhydre................DTD: ... 0,113 g Acide borique............................... 1,2 g Borate phénylmercurique........................... 4:0,0033 g Eau purifiée, quantité suffisante pour............. 100 ml Le sel disodique du principe actif avait une pureté d'au moins 95 Z et..DTD: un poids moléculaire moyen de l'ordre de 30.000. a) Essai d'inocuité du collyre Les observations ont été faites pendant 2 semaines après injection par sondage per os de 100 mg de principe actif/kg sur 12 la- pins albinos.New Zealand de poids moyen 3 kgs et de 280 mg de principe actif/kg sur 24 rats de poids moyen 210 g. Aucune mortalité n'a été constatée et on a observé aucune anomalie ni au niveau du comportement des animaux ni au niveau dutractus gastro-intesti- nal après autopsie. b) Recherche de la dose léthale 50 (DL 50) chez la souris et le rat. Les études ont été menées simultanément d'une part sur des lots de 50 souris males et 50 souris femelles et, d'autre part, sur un lot de 100 rats également répartis entre mâles et femelles. Après 8 jours d'acclimation, on a effectué des injections de collyre par voie intrapéritonéale et effectué des examens cliniques continus pendant les six premières heures puis, à intervalles réguliers, pendant les 13 jours suivant l'injection. L'injection de 0,5 ml de collyre correspondait sensible- ment à l'injection péritonéale de 3,13 - 4,70 - 7,10- 10,65 ou 16,0 g/kg du principe actif. La DL 50 approchée était de l'ordre de 12,8 g/kg pour les souris mâles avec des limites de 9,7 et 16,9 g/kg et de 13,0 g/kg pour les souris femelles avec des limites de 8,7 à 19,4 g/kg. Du fait que la posologie moyenne du collyre est de 1 à 2 gouttes par oeil soit 1,5 à 3mg de principe actif, on voit que, en comparaison des doses de DL 50, le collyre selon l'invention ne présente aucune toxicité. Les résultats étaient du même type dans le cas des rats avec des DL 50 moyennes de 8,10 g/kg pour les rats mâles et 8,30 g/kg pour les rats femelles. Dans des expériences correspondant à une administration par voie orale du principe actif chez des souris et par voie-sous-cuta- née à des rats, on a pu conclure que, dans le premier cas, la DL 50 était nettement supérieure àdaose maximale administrée (soit > 22 g/kg) et, dans le second cas la DL 50 était supérieure à 10 g/kg. c) Toxicité subaiguë On a effectué des expérimentations sur 6 lapins Albinos répartis à égalité de sexe en instillant le collyre précité dans la paupière inférieure éversée de l'oeil droit, l'oeil gauche servant de témoin pour chaque lapin. Les animaux ont reçu 4 fois 4 gouttes par jour, à intervalles de 2 heures. Le traitement a été effectué pendant jours à raison de 6 jours par semaine. Les examens des yeux étaient entrepris chaque semaine dans l'ordre suivant: conjonctive, iris,cornée. Il s'est avéré que l'indice d'irritation oculaire (I.I.0) était nul; le produit avait donc un pouvoir irritant nul. D'autres séries d'essais ont été entrepris par voie ora- le sur des rats en administrant, à raison de 7 jours par semaine pendant 8 semaines, 100 mg/kg per os de principe actif. Les examens pratiqués ré- gulièrement sur les animaux ont permis de conclure que: l'état clinique n'était pas modifié, la croissance était régulière, il n'y avait pas le signe d'intoxication sanguine ni modification de l'aspect et du poids des viscères. Ceci a permis de conclure à la toxicité nulle du principe actif selon l'invention. 6 2503563 d) toxicité chronique Les essais ont été entrepris sur une série de 22 chiens de race Beagle répartis en trois groupes: le premier (8 chiens) recevait 60 mg/kg/jour de sel disodique de sulfate de chondro^itine A; ceci en une seule prise par voie buccale, 6 jours par semaine. le second (8 chiens) recevait 200 mg/kg/jour du même principe actif dans les mêmes conditions que ci-dessus. le troisième (6 chiens) servait de lot témoin. Pendant toute la durée du traitement, on a noté l'as- pect et le comportement des animaux. Après 3 mois de traitement, on a sacrifié les chiens puis procédé à un examen hématologique complet et à une étude analytique des divers organes (foie, rein, rate, coeur, pou- mon, estomac, intestin, surrénale, pancréas, oeil, etc..) On a constaté que la mortalité était nulle pour tous les groupes d'animaux (traités ou non). Le comportement des animaux était normal avec croissance pondérale sans trouble digestif. Les examens hématologiques ne montraient pas de changement significatif du au trai- tement. Par ailleurs, les tests anatomopathologiques, macroscopiques et histologiques n'ont mis en évidence aucune lésion. On a donc pu conclure, à la lumière de ces résultats, que le principe actif du collyre selon l'invention pouvait être adminis- tré à l'homme aux doses de I g/jour au cours des essais cliniques, cette dose étant bien supérieure à celle recommandée pour l'administration 7'- quotidienne chez l'homme de la composition de collyre elle-même. e)toxicité foetale On a effectué des expertises sur des lots de 60 lapins et 60 rats (répartis par sexe) avec des doses de principe actif en gé- lules de 0,250 g. Après avoir sacrifié le 28ème jour de gestation la moitié des animaux femelles on n'a pu mettre en évidence aucun effet tératogène du principe actif selon l'invention. f)tolérance locale L'évaluation de cette toxicité a été faite par mesure de paramètres physiologiques tels que la différence de potentiel exis- tant entre la face épithéliale et la face endothéliale de la cornée ou encore l'épaisseur de cette cornée. Au contact de produits toxiques, on constate en effet un épaississement de la cornée et une chute de d.d.p. transcornéen. 7. 2503563 Les expériences, qui portaient à la fois sur le collyre de l'exemple précité, sur l'excipient seul (sans principe actif) de ce collyre et sur des produits connus tels que la tétracaine, et le beno- xinate et un ammonium quaternaire, ont montré que ces produits étaient toxiques pour la cornée alors qui aucune toxicité du collyre selon l'invention n'était décelable in vitro, même après 6 heures d'expérience. Cela a permis de conclure que le collyre conforme à l'in- vention pouvait être administré de manière chronique chez l'homme sans lésion des structures épithéliales de la cornée. g) Etude pharmacodynamique du collyre. Cette étude a été envisagée pour permettre de simuler les "yeux secs" chez le lapin et de traiter efficacement ces "yeux secs", ceci par un examen quantitatif des larmes puis une étude de stabilité du film lacrymal. Pour cela, on a utilisé le test de SCHIRMER, bien connu pour l'homme, en l'appliquant à des séries de 6 lapins Albinos de 3 kg environ. On avait provoqué auparavant une hypolacrymie expérimentale par instillation d'un collyre à base de bétoxycaine(anesthésique local). On a ensuite étudié le comportement du collyre selon l'invention à l'égard de ce dessèchement. Les essais ont été entrepris en trois étapes étude quantitative du film lacrymal chez l'animal aux yeux normaux; même étude sur l'animal aux yeux normaux, anesthésié étude chez l'animal anesthésié, traité au collyre selon l'inven- tion. En comparant, par calculs statistiques, les valeurs obte- nues, exprimées en mm de bandelette de papier filtre humidifié (oeil normal/oeil sec) on a pu constater une différence très significative entre les deux séries de valeurs comparées, puisque l'assèchement de l'oeil était de l'ordre de 45 %. En effectuant ensuite les séries de comparaison pour les résultats d'essais oeil traité/oeil sec et oeil normal/oeil sec, on a pu mettre en évidence une humidification évidente de l'oeil sec par le collyre de l'invention et une récupération d'au moins 80 % de l'humidité normale de l'oeil. Dans un deuxième temps, on a étudié la stabilité du film lacrymal en utilisant sur des lapins le test de LEMP (Arch.Ophtalm. Chicago 89 p.103,105, 1973) qui mesure le temps de formation de zones sèches après installation de fluorescéine de l'oeil. Si le temps de 8 2503563 rupture du film est inférieur à 15 secondes le film est considéré comme instable alors qu'il est tenu pour stable lorsque ce temps est compris entre 15 et 25 secondes. On a pu obtenir, par analyse statis- tique des très nombreuses données récupérées, des résultats hautement significatifs qui ont toujours mis en évidence: une amélioration de l'humidification de l'oeilpar le collyre selon l'invention, se tradui- sant par un film lacrymal plus long à se rompre pour l'oeil traité et également une bonne récupération de l'humidification de l'oeil. Ces essais ont permis de conclure à la possibilité de tester le médicament en médecine humaine avec les indications: hypolacrymie due à une insuffisance de sécrétions lacrymales. - h) Pharmacocinétique et disponibilité in vitro. On s'est livré à des études permettant de savoir si le principe actif du collyre selon l'invention pouvait traverser la cornée. Pour cela on a travaillé avec un appareillage approprié sur des cornées de bovins, maintenues en vie par perfusion et disposées dans un bac thermostats. On administrait le collyre de l'invention sur la face épithéliale de la cornée et, après un délai de perfusion, on dosait la quantité de principe actif ayant pu traverser la cornée et se retrouvant donc du côtéendothélial. Tout au long de la perfusion, l'intégralité de la cornée était contrôlée par un dispositif de mesure de la différence de potentiel produite par la cornée et par la mesure de l'épaisseur cornéenne à l'aide d'une lampe à fente. Les expériences ont été faites systématiquement d'une part sur le collyre de l'inven- tion selon la composition précitée et, d'autre part, sur l'excipient seul de cette composition, à titre de témoin. Malgré les conditions particulièrement favorables pour le passa- ge de la chondroftine sulfate A, il a été impossible de détecter ce produit dans le perfusat alors que des substances réputées pour leur faculté de traverser la cornée, telles que par exemple la procaine et la pilocarpine, voyaient leurs quantités cumulées, après passage transcornéen, s'élever respectivement à 100 microgrammes et 200 micro- grammes. D'autres séries d'expérimentations de biodisponibilité orale chez le lapin, effectuées par technique de dosage des mucopolysacchari- des totaux (taux endogène + chondroitine sulfate A administrée) et par mesure de l'activité pharmacologique (clarification du plasma par 9 2503563 l'administration d'héparine), ont permis de conclure que le principe actif selon l'invention n'était pas absorbé et qu'aucune toxicité systémique n'était donc à craindre pour le collyre à base de ce principe actif. i) Etudes cliniques sur sujets humains Les études cliniques, entreprises sur de nombreux malades en des séries de centres de soins différents, ont été faites en comparant l'action d'un collyre selon l'exemple précité de l'invention avec un collyre classique bien connu pour remplacer lelarmoiement (sérum physio- logique à 90/0o de chlorure de sodium). Dans tous les cas, la posologie d'emploi était de 1 à 2 gouttes dans chaque oeil malade, ceci 4 à 5 fois par jour pendant des périodes de temps déterminées (jusqu'à mois). A chaque consultation des malades, on effectuait des séries de tests connus pour déterminer: la quantité des larmes, la qualité des larmes, la stabilité du film lacrymal et la tolérance (locale et générale). Il ne parait pas indispensable de fournir ici les résultats analytiques détaillés tenant compte des différents groupes de malades avec les paramètres: sexe, âge, durée de traitements (en moyenne 7 à 24 semaines). On se bornera donc à reproduire dans le tableau 1 ci- dessous les résultats statistiques globaux sur une série de malades Tableau 1 (1) certains essais ont été stoppés pour intolérance. Ces résultats mettent bien en évidence la nette supériorité du collyre selon l'invention dans les deux séries de traitements comparés,puisque la proportion de très bons et bons résultats avec ce sul ats très bons bons modérés nuls mauvais total traitements Collyre selon 25 60 13 12 2 112 1 invention Collyre de O 24 44 28 13 109 (1) référence 03563 collyre est significativement plus élevée qu'avec le collyre témoin cependant bien connu pour son activité sur la sécheresse oculaire. Il faut signaler par ailleurs que les maladies de l'oeil traitées par le collyre de l'invention étaient diverses et notamment de types: sécheresse lacrymale, kérato-conjonctive sèche, irritation conjonctivale, brûlure oculaire, larmoiement chronique des vieillards, syndromes de GougerotSjogren, Riley-Day, polyarthrite évolutive chronique, maladie de Stevens-Johnson...etc. Il RE V E N D I C A I O N S 1. Collyre destiné aux affections de sécheresse oculaire, carac- térisé en ce qu'il comporte comme principe actif le sel disodique du sul- fate de chondroltine A. 2. Collyre selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il renferme comme excipient au moins un: agent tampon, produit conserva- teur, agent isotonique, l'ensemble étant dissous dans de l'eau purifiée. 3. Collyre selon la revendication 2, caractérisg en ce que l'agent tampon est constitué par un mélange de phosphate dipotassique et de phosphate monopotassique. 4. Collyre selon l'une quelconque des revendications 2 ou 3, caractérisé en ce que le produit conservateur est constitué par du borate phénylmercurique. 5. Collyre selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisé en ce que l'agent isotonique est de l'acide borique. 6. Composition aqueuse de collyre selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce qu'elle comprend: Sel disodique du sulfate de chondroitine A............. 3 g Phosphate dipotessiqueanhydre........................ 0,25 g Phosphate monopotassique anhydre...................... 0,113 g Acide borique.. *.... ................................ 1,2 g Borate phinylmercurique............DTD: .................0,0033 g Eau purifiée, quantité suffisante pour..........DTD: .... 100 ml..DTD: 7. Collyre selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 des- *tiné à l'hypolacrymie dueà une insuffisance de secrétions lacrymales de base, selon une posologie de I à 2 gouttes dans chaque oeil malade, plusieurs fois par jour pendant une période de 1 à 12 mois.