FR 2510574 A1 19830204 FR 8213032 A 19820721 La présente invention concerne de nouveaux dérivés de kanamycines modifiés en 2 ', utiles comme antibiotiques semi-synthétiques Elle concerne également des procédés pour leur fabrication ainsi que l'utilisation de ces composés comme agents antibactériens Les nouveaux dérivé&S de kanamycines modifiés en 2 ' selon l'invention, comprennent la 2 '-désoxykanamycine A, la 2 '-&pikanamycine A et la 2 '-épikanamycine B, ainsi que les sels d'addi- tion acides pharmaceutiquement acceptables de ces com- posés. De nombreuses recherches ont été entreprises sur dif- férents dérivés de kanamycine A et de kanamycine B; les dérivés de kanamycine synthétieés jusque à 1 A sont toute- fois pratiquement limit&és & ceux obtenus par modification des groupes 3 '-hydroxy, 4 '-hydroxy, 1 -amino et/ou 6 '-amino comme il ressort par exemple de la demande de brevet Japonais n' 7595/75 ou du brevet US correspondant n 3 753 973; de la prépublication de la demande de brevet japonais Kokal n 80038/74; des brevets US n 3 929 761 et 3 929 762; de la demande de brevet Japonais n 12039/80, ainsi que des brevets US n 3. 948 882, 3 939 143, 4 170 642 Ceci vient surtout du fait que les recherches ont été jusqu'alors poursuivies en se basant sur les découvertes selon lesquelles des souches résistantes aux bactéries doivent leur mécanisme de résistance aux antibiotiques aminoglycosidiques, A leur production de différents enzymes qui attaqueraient les groupes 3 '-hydroxy, 4 '-hydroxy, 3-amino, 2 "-hydroxy et/ou 6 '-amino des antibiotiques aminoglycosidiques. Les recherches antérieures ont permis d'obtenir diffé- rents dérivés des kanamycines véritablement utiles dans le traitement thérapeutique des affections bactériennes. Le problème de semi-synthèse des dérivés modifiés en 2 ' des kanamycines a été étudié ces dernières années, mais on a trouvé qu'il était difficile d'effectuer pré- férentiellement une modification chimique en position 2 ' des kanamycines On n'a donc jamais pu obtenir véritable- ment ces dérivés. Les inventeurs se sont efforcés d'effectuer la modi- fication chimique en 2 ' des kanamycines Ils mont arrivés & obtenir cette modification chimique préférentielle en 2 ' e t & synthétiser les composés nouveaux qui sont la 2 '-désoxykanamycine A, la 2 '- épikanamycine A et la 2 '-épikanamycine B Ces kanamycines modifiées en 2 ' pré- sentent une activité antibactérienne élevée, ce qui les rend très utiles dans le traitement thérapeutique des différentes affections bactériennes par des bactéries gram-positives et gram-négatives. Selon un premier aspect, l'invention a donc pour objet les dérivés de kanamycine modifiés en 2 ' de fornule g&- nérale CH 2 NH 2 NH 2 ' O 4 '1 O O 2 " HO) z OH dans laquelle X est un atome d'hydrogène, un groupe hy- droxy ou un groupe amino, ou l'un de leura sels d'addi- tion acides pharmaceutiquement acceptables Les dérivés de formule I selon l'invention comprennent le composé dans la formule duquel X est l'hydrogène ( 2 '-désoxykana- mycine A), celui dans la formule duquel X est un groupe -, - h Ydroxy ( 2 '-6 pikanamycine A) et celui dans la formule duquel X est un groupe amino, ( 21-6 pikanamycine B). Les propri 6 t 6 S Ph Ysicochimiques et biologiques des dfiriv 6 m de kanamycine modifi 6 S en 2 ' vont maintenant ê tre décrites La-2 '-d 6 ssxykanamycine A, la 2 '-épikana- mycine A et la 2 '-6 pikanamycine, B sont toutes trois nous forme de poudre incolore et amorphe - La table I ci-après r 6 sume les propriôtôs physico- chimiques des nouveaux composés selon l'inviention. Propriétés 2 e-D'aoxykanamycine A 21-Epikanamycine A 21 -E Pikanamycine B Point fusion 20 à 22 l"C (d'o) 194 225 C (dé'é 205 220-0 (delc) lal 25 la 123 + 100 8 * lal 24 Pouvoir rotation D + 124 8 * D D + 105 * spécifique 0.90, H 20) O 8, H 20) 0-5 o H 20) à 5 46 à 5-35 5 25 (J Ht do J= 3-75, Il-H) (l H, S 11-H) (Mi, Si 11-H) ô 5 02 5 25 5 09 (l Ho di J= 3-8, l'-H) Wit do J= 3-5 p 1 't-H (l H, dg J= 3-5, l'-H) 2.25 4-34 (IH 9 q, J= 4 and 10 Hz (Mi di J= 305 g 21-H)' 111-NMR (in D 0) 13 2 21 equatorial-H) C-NMR Un D 20) a'l-72 11-C 103-41 Ppm (l H? d-to J= 3 75 and 12 Hz, 21 axial H) 21-0 54-85 ppm C-NMR,(Pb 8 i 5) 11-0 101 09 ppm 21- C 54 40 ppm TABLE I w ut Ln- -1 a Les propriétés biologiques des nouveaux composés, selon l'invention, sont décrites en référence & la table II ci-après, qui rassemble leurs spectres antibactériens contre différentes bactéries La table II indique les concentrations minimum (mcg/ml) de ces composés inhibant la croissance de différentes bactéries, estimées selon une méthode de dilution standard, l'estimation étant faite après incubation des bactéries dans un milieu agar nutritif & 37-C pendant 24 heures. Dans un but de comparaison, on a également déterminé les concentrations inhibitoires minimum (mcg/ml) d'un composé témoin, la kanamycina A. Kanamyr ine A ( t éomin) 0.10 1. Concentrations inhïbîioires minîmum (mog/ml) 21-Désoxy- kanamyine A 2 1 -Epi- Icanamyoine A .- 0.39 - a 1 -Epi- kikâa M Ycine B 1.56 Organismes examinés Staphylococcus aureus Rosenbàch PDA 209-OJC-1 Staphylococcus epidermidïs 109 Escherichia'colî No 29 Escherichia coli JR 66/w 67,7 (A-20683) salmonela typhimlium LT-2 Xlebsiella'pneumoniae Providencia morgani Y'Sno Sérratia marcescens No 1 0.05 0 20 0.39 6.25 0.78 - 0.78 0.78 0.78 0.78 > 100 - 6 25 6 25 6.25 12.5 > 100 > 100, - e CI 1.56 p 0 O % H 1.56 M 3.13 3.13 Pseudomonas aeruginosa IAM-1007 1.56 6 * 25, > 100 ) 100 > 100 12.5 - r%) Ln -,.b C> 1 t A -à -P. of fi E-2 La toxicité aigle des composés selon l'invention a été déterminée par injection intra-veineuse de différen- tes doses, dans des souris; on a pu constater que ces composés présentaient tous une valeur LD 50 d'au moins 100 mg/kg, dans ce mode d'administration On peut trans- former les composés selon l'invention en sels d'addition acides en les faisant réagir avec des acides minéraux pharmaceutiquement acceptables tels que les acides chlo- rhydrique, sulfurique, phosphorique ou analogues, ou avec des acides organiques pharmaceutiquement acceptables tels que les acides acétique, propionique, oxalique, ascorbique ou analogues. Les procédés d'obtention des nouveaux composés de formule I selon l'invention vont maintenant être décrits. On peut tout d'abord les obtenir en plusieurs étapes, en partant de la kanamycine A par l'intermédiaire de la kanamycine A 2 '-O-trifluorom 6thylsulfonyl&e *,O-protég 6 e- qui constitue un produit intermédiaire nouveau synthétisé par les inventeurs Les composés selon l'invention peu- vent être obtenus, dans l'étape finale de réaction, à partir d'un dérivé 1,3,6 '3 "-t&tra-N-protégé 2 '-modifié de formule générale II. 6 ' CH 2 NERR 3 \R -0k O _/ OH H HO 2 ' o (h) 3 o HO dans laquelle X a les significations précédemment données et R est un groupe amino-protecteur, par élimination des groupes amino-protecteurs (R) de dérivé de kanamycine tétra-N-protégé, 2 '-modifié de formule II, par une tech- nique connue de déprotection de N, selon la nature des groupes amino-protecteurs (R), par exemple par hydroly- se en conditions acides ou alcalines, ou par hydrogé- nolyse catalytique qui peut être effectuée de la ma- nière connue dans la synthèse de peptides. Afin de faciliter la compréhension du procédé d'ob- tention des nouveaux composés selon l'invention, les tableaux I, II, III,et IV ci-après, illustrent des pro- cessus types des étapes réactionnelles successives de la préparation, & partir de la kanalycine A, des dérivés de kanamycine 1,3,6 ',3 "-tétra-Nprotég E, 2 '-modifi& (II); Cbe signifie que le groupe amino-protecteur est un groupe éthoxy et Bz que le groupe hydroxy -protecteur est un groupe benzoyl. Zao Ho' HO OZOE OH Cr% O O O Z Ho 0 ZELO O Ho O HO OZOE OH 0 -" 1, ci 1 r O i liyalleyli %r tl- 1 An CD Ir, t A tu (IA) (A) Zao OZR 9 W Zab HO 8 Z ozq ZEl eqo HN GUTP-P z ci 4 OCH zm?,H OUT PT J-k -L 4 9 9 3 '0 os go qq qqo HN NH Cbe BZO 'L- S Na 0- (Vi) > com P 086 Dle Bz O $a 1-à CH 3 O Na j, Ni de Ranney Et OH O Bz OH (VII) (VIII) (II-1) r%> L 4 c> 1 LA '- 11.4 4- TABLEAU II _r N 1 1 t A le- -in %â (XI) ZElO 1 OZúl qo z (X JO lax=x Ic 1-Qoogli 10 JO -oooç NL 1 (?,-II) HO OH Cg %-4 quodwoo H HO O -1 GCL aqo Hm OZS III avalmi %r N. tn C> VI' V' t'fi ( -ii) (Ix) (X) ZOEO HO OH 113 NOHo -E uo Tqonpeu. i cm V 4 -(I A) Rbso"oo Ai aylloillyil En se référant au tableau I, on va décrire la prépa- ration de la 1,3,5 ',3 "-tétra-N-éthoxycarbonyl-2 '-0-triftiuo- rométhylsulfonyl-3 ' 4 ',2 ", ",6 "-penta-O-benzoyl-kanamycine A de formule VI, & partir de la kamamycine A. On part de la kanamycine A, dont les quatres groupes amino sont protégés par un groupe amino-protecteur connu. Dans le tableau I, on fait réagir la kamazycine A avec du chloroformiate d'éthyle (chlorure d'éthoxycarb onyl) dans du méthanol aqueux, pour obtenir la 1,3,6 ',3 "- tétra-N éthoxycarbonyl-kanamycine A, de formule III Le groupe éthoxycarbonyl (Cbe) est alors utilisé comme groupe amino-protecteur, mis tout groupe amiho-protecteur connu peut être utilisé pour la protection en N de la kanamycine A On peut par exemple, effectuer cette pro- tection A l'aide d'un groupe alcoxycarbonyl tel que les groupes méthoxycarbonyl, éthoxycarbonyl, butoxycarbonyl; un groupe aralkyloxycarbonyl tel que le groupe bensy- loxywarbonyl;-ou un groupe aryloxycarbonyl tel que le groupe p-nétrophényloxycarbonyl et analogues Plus spécia- lement, on peut utiliser 1,&lthyl chloroformiate (pour 1 'éthoxycarbonylation), le chlorure de benzyloxycarbonyl (pour la benzyloxycarbonylation) ou le chlorure de t- butoxycarbonyl (pour la t-butoxycarbounylation,9 particu- li&rement pour l'introduction du groupe t-butoxycarbonyl, t c), comme réactif d'introduction des groupes amino- protecteurs La protection en N de la kanamycine A peut être effectuée de façon connue en soi, coue dans la synthèse de peptides On préfère pourtant faire réagir la kanamycine A avec des proportions 4 8 fois molaires de réactif amino-protecteur dans un solvant organique conve- nable tel que le smthanol ou lf'éthanol aqueux & une te&pé- rature de -10 e C & 20 C pendant h O & 20 heures en présence d'un agent alcalin tel que l'hydroxyde de sodium ou de potassium, le bicarbonate ou le carbonate de sodium ou de potassium. On effectue ensuite sur la kanawycine A tétra-N-proté- gée de formule III, la protection des groupes réactifs ' 0574 hydroxy A cette fin, on fait réagir, come montré dans le tableau I, la kanamycine A tétra-N protégée avec du chlorure de bensoyl dans de la pyridine pour obtenir la 1,3,6 ',3 "-tétra-N-éthoxycarbonyl-2 ',3 ',4 ',2 ",4 ",6 "-hexa- 0-benzoyl-kanamycine A de formule IV Cette O-benzoyla- tion des groupes réactifs hydroxy de la kanamycine A peut gén&ralement &tre menée A bien en faisant réagir la kanamycine A tétra-N-prot 6 gée (III) avec des proportions 6 à 8 fois molaires de chlorure de benzoyl dans de la pyridine, & une température inférieure A 10 C, pendant toute une nuit Le tableau I illustre la O-benzoylation de la kanamycine A tétra-N-protégée, pour effectuer la protection en O et donner la kanamycine A N,O-protgée (IV), mais l'on peut arriver A cette protection en O de la kanamycine A têtra-N-protég 6 e (III) par ac&tylation avec le chlorure d'acétyl On peut ainsi bloquer tous les groupes hydroxy de la kanamycine A autres que le groupe hydroxy en 5, moins réactif. On effectue ensuite l'élimination préférentielle du groupe bensoyl Oprotecteur en 2 ' de la kanamycine A N,O-protégée pour obtenir le dérivé déprotégé en 2 '-0, c'est-A-dire la 1,3,6 ',3 "-t 6 tra-N-éthoxycarbonyl3 ',4 ', 2 ",4 ",6 "-penta-0-benzoyl-kanamycine A de formule V Dans le tableau 1, on effectue l'élimination préférentielle du groupe 2 '-Obensoyl de la kanamycine A N,O-protégée (IV) en faisant réagir cette dernière avec de l'hydrate d'hydrazine (H 2 NNH 2 H 20) dans de la pyridine, pour ob- tenir le dérivé de kanamycine 2 '-0-déprot 6 gé (V) La réaction d'élimination préférentielle du groupe 2 '-0- protecteur-benzoyl ou ac&tyl, de la kanamycine A N,O- protégée (IV) a été le sujet principal des recherches des inventeurs Ils ont tout d'abord découvert que cette élimination préférentielle du groupe benzoyl ou acétyl 2 '-O-protecteur de la kanamycine A N,O-protégé& (IV) pou- vait être effectuée en faisant réagir cette dernière avec des quantités 1 A 5 fois molaires d'hydrate d'hydrazine, de méthyl hydrazine, d'hydroxylamine ou d'acétate ou de - 6 chlorure de ce produit dans un solvant organiquo tel que la pyridine, le diméthylformamide, le dioxane, l'éthanol et des mélanges de méthanol et de trichlorométhane, & une température entre -10 e C et 50 C, pendant 10 A 20 heures On obtient ainsi le dérivé de kanamycine A N,O- protégé de formule (VY) dans lequel tous les groupes amine et tous les groupes hydroxy autres que les groupes hydro- xy en 5 et 2 ' ont été protégés Il est possible, avec ce dérivé de kanamycine A partiellement N,O-protégé (V), dent le groupe hydroxy e 2 ' est libéré, d'effectuer la modification en 2 ' de la kanamycine A conduisant & la 2 '-d 6 soxykanamycine A, A la 2 '-épikanaiycine A et & la 2 ' -épikanamycine B; Les-inventeurs ont, en outre, trouvé que le dérivé de kanamscine A partiellement N,O-prot Sgée (V) peut être préf&rentiellement sufonylé en '2-0, sans protection préliminaire du groupe hydroxy en 5, quand on fait réagir ce dérivé de kanamycine A (V) avec une proportion molaire ou un léger excès de chlorure de trifluorométhylsulfo- nyl (CF 3 SO 2 C 1) ou d'anhydride trifluorom&thanesulfonique, en tant qu'agent de trifluorométhanesulfonylation, dans de la pyridine, entre O C et 300 C, pendant une durée allant de 20 minutes à 3-heures. Dans le tableau I, on fait réagir le dérivé de kana- mycine A partiellement N,0-protégé (V) avec du chlorure de trifluorométhylsulfunyl dans de la pyridine pour obtenir la 1,3,6 ',3 "-tétra-N-éthoxycarbonyl-2 '-0- trifluorométhylsulfonyl-3 ',4 ', 2 ", 4 ", 6 "-penta-0-benzoyl- kamamycine A de formule (VI) Ce dérivé (VI) constitue un produit interm&diaire extr 8 mement important & partir duquel on peut obtenir la 2 '-désoxykanamycine A, la 2 '-6 pikanamycine A et la 2 '-épikanamycine B selon dif- férentes voies. Le tableau Il illustre l'une de ces voies de produc- tion de la 2 '-désoxykanamycine A & partir du dérivé 2 '-O-trifluorométhanesulfonylé de kanamycine A (VI). 10574 On fait réagir ce dérivé avec une proportion molaire ou un léger excès de thiophénolate de sodium (C 6 H 55 Na) dans le diméthylformamide (DMF) ou tout autre solvant organique convenable tel que le dioxanne, l'acétone ou le tétrahydrofuranne (THF) à une température de 10 C à 4 O C et de préférence à température ambiante pendant une durée allant de 1 à 5 heures pour effectuer la 2 '- phényl-thioation, ce qui donne la 1,3,6 ',3 "-tétra-N-étho- xycarbonyl-2 '-désoxy-2 '-épi-2 V-phénylthio-3 ',4 ',2 ",4 ",6 "- penta-O-benzoyl-kanamycine A de formule (VII). On fait réagir ce dérivé VII avec du nickel de Ran- ney dans de l'éthanol, sous reflux pour effectuer l'éli- mination du groupe 2 '-phénylthio, ce qui donne la 1,3,6 ', 3 t'-tétra-N-éthoxycarbonyl-2 '-désoxy-3 ',4 ',2 '"," 4 6 "-penta- O-benzoyl kanamycine A de formule (VIII). On traite ensuite le dérivé (VIII) avec du méthoxyde de sodium dans du méthanol à une température entre O C et 400 C et de préférence à température ambiante pour effec- tuer la dé-benzoylation, ce qui donne la 1,3,6 ',3 "-tétra- N-éthoxycarbonyl-2 '-désoxykanamycine A de formule ( 11-1). Cette désoxykanamycine A N-protégée en 2 '-(II-1) est le dé- rivé de kanamycine N-protégé 2 '-modifié de formule géné- rale (II) dans laquelle X est un atome d'hydrogène et le groupe amino-protecteur R est le groupe éthoxycarbonyl. Le tableau III illustre une voie d'obtention de la 2 '-épi-kanamycine A à partir du dérivé de kanamycine A 2 '-0-trifluorométhanesulfonylé (VI). On fait réagir le dérivé de kanamycine A protégé (VI) avec une proportion molaire ou un léger excès de benzoate ou d'acétate de sodium ou de potassium de formule YM dans laquelle Y est un groupe benzoxy (C 6 H 5 COO-) ou acétoxy (CH 3 COO-) et M est un atome de sodium ou de potassium, comme indiqué dans le tableau III, dans un solvant orga- nique convenable tel que le diméthylformamide, le dioxanne, l'acétone, le THF à une température allant de l Ia tempéra- ture ambiante à la température de reflux du solvant em- ployé, pendant 1 à 6 heures, afin de transformer le groupe 21 '-trifluorométhylsulfonyloxy (-OSO CF) en groupe 2 '-6 pi- benzoxy ou 2 '-épi-ac 6 toxy, conduisant à la i,3-,69,3 '"-t 6- tra-N-éthoxycarbony 11-2 ' -O-6 pi-benzoyl ou épi-ac 6 t Yl-3 ',49, 2 ",4 ",6 " 1-penta-0-benzoyl-kanamycîne A de formule (I) * On fait ensuite réagir ce composé (IX) avec du me- thoxyde de sodium dans du méthanol de la manièére décrite dans le tableau II pour la dé-benzoylation, de sorte que la désac 6 tylation se produise sur les positions 2 '-, 3 '-, 4 '-, 2 "i-, 4 "t et 6 " 1 du dérivé de kanamycine A ce qui -10 'donne la 1,3,6 ',3 "'-ttra-N 4 r-thoxycarbonyl-2 ' -épi-kanany- cine A de formule (II-2) Cette épi-kanamycine A N-protégée en 2 ' (II-2) est le dérivé de kanamcyi-ne N-protégé, 2 '- modifié de formule générale (Il) dans laquelle X est un groupe-hydroxy et le groupe amino-protecteur R un groupe éthoxycarbonyl. Le tableau IV illustre une voie d'obtention de la 21-6 pikanamycine B à partir du dérivé 21-0-trifluorométhane- sulfenyl 6 de kanamycine A (VI) On fait réagir ce dérivé (VI) avec une proportion molaire ou un léger excès d'a zide de sodium ou de potassium dans uan solvant organique tel que le dim 6thylformnamide, le dioxanne, l'acétone ou le THF à une température se situant entre 500 C et la temi- pérature de reflux du solvant, de façon à remplacer le groupe 2 'trifluorométhylsulfonyloxy' (-OSO CF) par le groupe azido (-N 3) ce qui donne la 11,3,6 ',3 " 1-t 6 tra- N- 6thoxycarbonyl-2 '-d 6 soxy-2 '-6 pi-azido-3 ',4 ',2 t",411,6 "-pen- ta-0-benzoyl-kanamycine A de formule (X) On fait alors- réagir ce d 6 rivé de kanamycine A 2 '-6 pi-azido (X) avec du méthoxyde de sodium dans du méthanol pour une désacyla- tion (d 6 be-nzoylation) de la même maniè re que celle dé- crite dans le tableau Il-pour obtenir la-1,3,6 ',31- t 5 tra- N-éthoxycarbonyl-2 '-désoxy-2 ' -épi-azidokanamycine A de formule (XI) Ce composé (XI) est ensuite hydrogéné-par voie catalytique dans un solvant organique convenable tel que le méthanol, le dioxann e ou le THP en présence d'un catalyseur d'hydrogénation connu tel que le palla- dium-carbone pour réduire le groupe 2 '-azido (N 3 en groupe 2 '-amino (-NH 2) On obtient ainsi la 1,3,6 ',3 "-t 6- tra-N-6thoxycarbonyl-2 '-épikanamycine B de formule (II-3) qui est le dérivé N-protég 6 2 '-modifié de formule (II) dans laquelle X est un groupe amino et R un groupe étho- xycarbonyl. La désoxykanamycine A N-protégée en 2 ' (II-1) ob- tenue dans le tableau II, l'épikanamycine A N-protég 6 e en 2 ' (II-2) obtenue dans le tableau III et l'épikana- mycine B N-protégée en 2 ' (II-3) obtenue dans le tableau IV sont alors soumises à la technique classique d'6 élimi- nation du groupe éthoxy-carbonyl (Cbe) aminoprotecteur afin d'obtenir, respectivement, la 2 '-désoxykanamycine A, la 2 '-épi-kanamycine A et la 2 '-épi-kanamycine B. L'obtention des d 6 riv 6 S de kanamycine N-protég 6 s 2 '-modifiés de formule (II-1), (II-2) ou (II-3) est dé- crite dans les tableaux I, II, III et IV-ci-avant, en utilisant le groupe 6thoxycarbonyl comme groupe amino- * protecteur et le groupe benzoyl comme groupe hydroxy- protecteur Il est bien évident que l'on peut 6 galement utiliser, comme groupe amino-protecteur connu, d'autres groupes que le groupe 6thoxycarbonyl ainsi que d'autres groupes que le groupe benzoyl comme groupe hydroxy-pro- tecteur connu. Selon un deuxième aspect, l'invention a pour objet un procédé d'obtention de 2 '-désoxykanamycine A qui com- porte les 6 tapes cons 6 cutives suivantes: a) réaction d'une 1,3,6 ',3 "t 6 tra-N-protégée, 2 ',3 ', 4 ',2 t",4 ",6 "-hexa-0-benzoyl ou acétyl kanamycine A de formule (IV'): o zo (ivt) zo t - oz 1.5 dans laquelle R est un groupe amino-protecteur et'Z un groupe benzoyl, ou ac 5 tyl, avec de l'hydrazine, deltehy- drate d'hydrazine, de la méthylhydrazine ou de l'hydro- xylamine dans de la pyridine-, à une température allant de -100 C à 501 C pour éliminer préférentiellement du composé (IV'-) le groupe 2 '-0-benzoyl ou acétyl. b) réaction de la 1,3,69,3 " 1-tétra-N-protégée -3 ',4 ', 211,k",6 i"penta-0-benzoyl ou acétyl:-kanamycine A avec du chlorure de trifluorométhylsulfonyl ou de l'anhydride. trif'luorométhanesulfonique dans de-la pyridine à une température de 00 C à 30 'C pour obtenir une 136-3 " têtra-N-protég 6 e 2 ' -0trifluorométhylsulfonyl-3 ',4, 2 ", 4 " 1,6 " 1-penta-0-benzoyl- ou ac 6 tyl-?kanamycine A de formule (VI,) NER -o O o zo (vit) zo dans laquelle R et avant. Z ont les définitions données ci- c) réaction du composé (VI') avec un-thioph 6 nolate de métal alcalin dans un solvant organique à une tempéra- ture de 100 C à 400 C pour obtenir une 1,3,6 I,3 Il-tétra-N- prot 6 gée 2 '-désoxy-2 '-6 pi-2 '-phénylthio-3 ',4 ',2 ",4 "t,6 " 1- penta-0-benzoyl ou acétyl kanamycine A de formule (VII'). (Vil I') zo oz -10574 dans laquelle-R e t Z ont les définitions données ci- avant et 0 est un groupe ph 6 nyl. d) réaction du composé (VII') avec du nickel de Ran- ney dans de l'éthanol pour en éliminer le groupe 2 '-4 pi- 2 '-phénylthio. e) réaction de la 1,,3,6 ',3 "-tétra-N-pirotégée-2 '- déso XY-3 ',4 ',21 ",4 ",G" 1-penta -0-benzoyl ou ac 6 tyl-kanam- nmycine A obtenue avec un m 6thoxyde de métal alcalin pour éliminer les groupes benzoyl ou acétyl (,Z) et obtenir le 1.0 dérivé tétra-N-protégé de-la 2 '-désoxcy-kanamycine A de formule (III) o NH 1 R OH 01 HO OH O dans laquelle R a la définition donné 6 e ci-avant, et f) élimination des-groupes amino-protecteure ré - siduels (R) du dérivé N-prot 6 gé de 2 'l-d&soxykanamycine A (MI') de manière connue pour obtenir la 21-désoxyka- namycine A. Selon un troisième aspect, l'invention a pour ob- jet un procédé d'obtention de la 2 '-épi-ka-namycine A qui comporte les étapes consécutives suivantes a) r 4 action d'une 1,3,6#,3 " 1-t Ura-Nprotégée 21,3 ', 4 ',2 ",4 "t,6 " 1-hexa-0-benzoyl ou acétyl-kanamycine A de formule (IV,). zo 2 510574 NEIR NERR o oz (IV,) oz dans laquelle R est un groupe amino-protecteur et Z un groupe benzoyl ou ac 6 tyl avec de l'hydrazine, de l'hy- drate d'hydrazine,,de la méthylhydrazine ou de l Ihydro- xylamine dans de la pyridine à une température entre -1 00 C et 50 'C pour effectuer l'élimination préférentielle du groupe 2 '-0-benzoyl ou acétyl du composé (IV') b) réaction de la 1,3,6 '1,3 "-tétra'-N-protégée 3 ',4 ',12 ", 41 ?,&l I 1 _penta- 0- benzoyl ou acétyl-kanamycine A avec du chlorure de trifluorom 6thylsulfonyl ou de l'anhydride trifluorométhanesulfonique dans de la pyridine a une température de 00 C à 309 C pour obtenir une 136,1-é tra-N-protégée 2 ' -0- trifluorom'éthylsul Ionyl-3 ',4 ',2 ",4 ", 6 G"-penta-0-benzoyl ou acétyl-kananiycine A de formule (v I's). 251 0574- zo 0802 CF 3 (V If) zo oz dans laquelle R et Z ont les définitions données ci avant. c) réaction du composé (VII) avec du benzoate ou de I'ac 6 tate de sodium ou de potassium dans un solvant organique à une température allant de la température ambiante à la température de reflux du solvant employé pour obtenir une 1,,3,,6 ',3 "'-t Ura-N-pr'otégée 2 '-0-6 pi-benzoyl ou epi-ac 6 t Yl-3 ',4 ',21,4 "t,6 "-penta-0-benzoyl ou ac 6 tyl kanamycine A de formule (IX') O ZO (IX') ZO oz dans laquelle R et Z ont les définitions données ci- avant et Y est un groupe benzoyl ou acét:yl. d) réaction du composé (IX') ci-dessus avec un méthoxyde de métal alcalin pour éliminer les groupes benzoyl ou acétyl (Z et Y) et obtenir la 2 'épikanamycine A t 6 tra-N-protégée de formule O (I Tl") O HO O OH dans laquelle R a les définitions ci-avant et e) élimination des groupes amino-protecteurs ré- siduels (R) de la 2 '-6 pikanamycine A N-protégée (Il"s) de façon connue en soi pour obtenir la 2 '-5 pikanamnycine A. Selon un quatrième aspect, l'invention apour objet un un procédé d'obtention de la 2 '-épikanamycine B qui com- porte les étapes consécutives suivantes a) réaction d'une 1,3,6 ',3 "-tétra-N-protégée 2 ',3 ',. 4 ',2 " 1,4 ",6 '- hexa 0-benzoyl ou ac 5 tyl kanamycine A de formule (IV'). NHR Z OH zo oz o oz oz dans laquelle R est un groupe amino-protecteur et Z un groupe benzoyl ou acétyl, avec de l'hydrazine, de l'hy- drate d'hydrazine, de la mèthylhydrazine ou de 1 'hydro- xylamine dans de la pyridine' à une température entre -10 <>C et 50 'C pour éliminer préférentiellement le groupe 2 '-0-benzoyl -ou acétyl du composé (IV'). b) réaction de la 1,3,6 ',3 "'-t 6 tra-N-protégée -3 ',4 ',2 ",4 ", 6 "penta-0-benzoyl ou acétyl-kanamycine A obtenue avec du chlorure de trifluorométhylsulfonyle ou de l'anhydride trifluorom 6thanesulfonique dans de la pyridine entre O O C et 300 C pour obtenir une 136," têtra-Nprot 5 gée 2 ' -0-trifluo-rom 6thylsulfonyl-3 ',4 ',2 " 1, 10574 41#,6 't penta O benzoyl ou ac 6 tyl-Ikanamycine A de formule (vit). zo OSO CF 3 o (vit) zo oz dans laquelle R avant - et Z ont les définitions données ci- c) réaction du composé (VI?-) avec un azide de métal alcalin dans un solvant organique à une température entre 501 C et la température de reflux du solvant utilisé pour obtenir une 1,3,6 t,3 "-tétra-N-protégée 29-d 6 soxy-2 '-épi- azido-3 ',4 ',2 ",4 ",61 "-penta-0-benzoyl ou ac 6 tyl-kana- mycine A de formule (X'). NER zo (XI) - go oz dans laquelle R et Z ont les définitions données ci-avant. d) réaction du composé (XI) avec un méthoxyde de métal alcal in pour éliminer les groupes benzoyl ou ac 5 tyl (Z et obtenir la 1,3,6 ',3 " 1-t 6 tra-N-protégtée-2 ' -d 65-oxy-2 ' -épi- azido -ka-namycine A correspondante de formule (XI') o HO (XI') HO OH' " 2510574 dans laquelle R a les d 6 finitions données ci-avant. e) r 6 duction avec de l'hydrogène du groupe 2 '-6 pi- azido du compos 6 (XI') en groupe amino et obtention d'une 1,3,6 ',3 "tétra-N-prot 6 g 6 e-2 '-épikanamycine B de formule (II"'). NOR (II"') H O OH dans laquelle et R a les définitions donn 6 es ci-avant, f) élimination des groupes amino-protecteurs r 6 siduels (R) du dériv 6 de 2 '-6 pi-kanamycine B N-pro- tégé (II"') de façon connue en soi pour obtenir la 2 ' -épi-kanamycine B. Quand on met en oeuvre les proc 6 d 6 S selon les deuxième, troisième et quatrième aspects de l'inven- tion, tant l'6 tape (a) de réaction du dériv 6 de la ka- namycine A hexa-O-protégée, t 6 tra-N-prot 6 égée (IV') avec de l'hydrazine, de l'hydrate d'hydrazine ou au- tres pour l'élimination préférentielle du groupe 2 '-0-benzoyl ou acétyl, que l'étape (b) de r 6 action du dérivé de kanamycine A 2 '-0-déprot 6 g 6 obtenu avec du chlorure de trifluorom 6thylsulfonyl ou de l'anhy- dride trifluorométhanesulfonique pour l'obtention de la 2 '-0trifluorométhylsulfonyl-kanamycine A N',0-prot 6 gée 21 10574 (VI') peuvent être effectuées comme décrit ci-avant en référence au tableau I pour les étapes d'obtention du dériv é-de kanamycine A 2 '-0déprotégé de formule (V) et d'obtention du dérivé 2 '-0trifluoromèthylsulfonyl de kanamycine A de formule (VI). L'étape (c) de réaction du composé (VI') avec un thiophénolate de métal alcalin dans le procédé du deuxième aspect de l'invention peut être effectuée comme d 6 crit en référence au tableau II pour l'étape de réaction du dérivé 2 '-0trifluoromèthane sulfonylé de kanamycine A (VI) avec du thiophénolate de sodium. Le thiophénolate de métal alcalin peut être un thio- phénolate de sodium ou de potassium Les étapes (d) et (e) du deuxième aspect du procédé selon l'inven- tion peuvent aussi être effectuées comme décrit en ré- férence au tableau II pour les étapes correspondantes de production des dériv 6 S de kanamycine A de formule (VIII) et (II-1). De même, l'étape (c) de réaction du compos 6 (VI') avec le benzoate ou l'acétate de sodium ou de potas- sium et l'étape (d) de réaction du produit obtenu (IX') avec un méthoxyde de m 6 étal alcalin selon le pro- cédé du troisième aspect de l'invention peuvent être effectuées comme décrit en réf 6 rence au tableau III en ce qui concerne l'étape de production du dériv 6 2 '-0-épi- benzoyl ou 6 pi-ac 6 tyl de kanamycine A de formule (IX) et l'6 tape de production de la 2 '-épikanamycine A N- protégée de formule (II-2). Enfin, les étapes (c) de réaction du composé (VI') avec un azide de métal alcalin, (d) de r 6 action du dé- rivé 2,-épi azido-de kanamycine A obtenu (X') avec un m 6thoxyde de m 6 tal alcalin, (e) de réduction du déri- vé 2 '-6 pi-azido dibenzoylé ou désac 6 tylé de kanamycine A obtenu, du proc 6 dé selon le quatrième aspect de l'in- vention peuvent être effectuées comme décrit en r 6 f 6- rence au tableau IV en ce qui concerne les 6 tapes correspondantes de production des dérivés (X) et (XI) 10574 de kanamycine A et du d'rivé de la 2 '-epi-kanamycine B ( 11-3). De toute manière, on prépare dans l'avant-dernière étape des procédés selon l'invention le d 6 rivé 1,3,6 t, 3 "-t 6 tra-N-protégé de la 2 'désoxykanamycine A, de la 2 '-épi-kanamycine A ou de la 2 '-épikanamycine B représent 6 par une des formules (II') (II") ou (II"'). Afin d'obtenir la 2 '-désoxykanamycine A, la 2 '-épi- kanamycine A ou la 2 '-épi-kanamycine B il est donc nécessaire, dans l'étape finale des procédés selon l'invention, d'éliminer les groupes amino-protecteurs résiduels (R) du composé de kanamycine tétra-N-pro- t 6 égé 2 '-modifi 6 de formule (II'), (Il") ou (II"'), que l'on peut représenter de façon g 6 nérale par la for- mule(II)ci-avant. L'6 élimination des groupes amino-protecteurs rési- duels (R) peut être effectuée par la technique de dé- protection en N classique connue pour la synthèse des peptides, par exemple par hydrolyse alcaline, hydro- lyse acide ou hydrog 6 nolyse, selon la nature des grou- pes amino-protecteurs Les groupes amino-protecteurs du type alcoxycarbonyl ou aryloxycarbonyl peuvent être éliminés soit par hydrolyse alcaline de préfé- rence par chauffage dans une solution aqueuse satu rée d'hydroxyde de baryum, dans une solution aqueuse de soude ou de potasse 5 N, soit par hydrolyse acide, de préférence par traitement avec un acide tel que l'acide chlorhydrique en solution aqueuse N dans du methanol ou l'acide trifluoracétique en solution aqueuse à température ambiante ou à température élevée. Les groupes amino-protecteurs du type aralkyloxycar- bonyl comme le groupe benzyloxycarbonyl peuvent être éliminés par hydrogénolyse effectuée dans de l'eau ou dans des solvants organiques aqueux ou anhydres tels que le dioxanne, le m 6thanol ou autres à température ambiante ou A température élevée en présence d'un ca- talyseur d'hydrogénolyse connu comme le palladium- -2105 ? 4 carbone avec de l'hydrogène gazeux à pression atmos- phérique, super-atmosphérique ou sub-atmosphérique. Le mélange réactionnel venant de l réaction de déprotec- tion en N peut être neutralisé, si on le désire, avant récupération du dérivé de kanamycine modifié en 2 ' de formule (I) Ce composé de formule ( 1) peut être isolé et purifié par chromatographie de la façon classique utilisée dans la purification des antibiotiques con- nus solubles dans l'eau à l'aide de résine échangeuse -10 d'ions Par exemple, la solution réactionnelle conte- nant à l'état dissous le dérivé de kanamycine modifié en 2 ' de formule (I) peut être traité avec une résine 6 changeuse de cations telle que l'Amberlite IRC-50 ou l'Amberlite CG-50 (les deux sont des produits de Rohm & Haas C , U S A); le composé actif est adsorbé et la résine peut ensuite être éluée avec des solutions aqueuses d'ammoniaque à diverses concentrations; on concentre enfin-les, fractions actives de l'éluat à siccité ou par séchage-congélation On obtient ainsi le nouveau composé (I) selon l'invention et, si on le désire, on peut le transformer en sel d'addition acide en le faisant réagir avec-un acide pharmaceuti- quement acceptable, de façon connue en soi. Les nouveaux composés de formule (I) selon l'in- vention et leurs sels d'addition acide pharmaceuti- quement acceptables peuvent être administrés par voie orale, intrapéritonéale, intraveineuse, sous-cutanée ou intramusculaire en utilisant toute forme pharmaceu- tiquement connue pour le type d'administration, et de façon similaire, aux kanamycines connues Comme exemples de formes pharmaceutiques pour administration orale, on peut citer les poudres, les capsules, les tablettes, les sirops et autres La dose convenable de ces nouveaux composés pour traitement efficace des infections bactériennes se situe entre 0,1 à 1 g/per- sonne/jour quand il s'agit d'administration orale. On préfère adminitrer cette dose par voie orale en trois ou quatre fois par jour Les nouveaux composés selon l'invention peuventegalement être administrés par injection intramusculaire a une dose de 50 à 500 mg/personne en deux à quatre lois par jour De plus, ces nouveaux composés peuvent être formulés pour application externe sous forme de pommade à une-concen- tration de 0,5 à 5 % en poids en mélange avec un ex- cipient connu tel que le polyèthylèneglycol Les nou- veaux composes selon l'invention sont de plus utiles pour la stérilisation des instruments chirurgicaux et du matériel sanitaire. L'invention a donc également pour objet une compo- sition antibactérienne qui comporte, comme ingrédient actif, la 2 ''désoxykanamycine A, la 2 '-6 pi-kanamycine A ou la 2 '-épikanamycine B ou l'un de leurs sels d'ad- dition acides pharmaceutiquement acceptables, en quan- tité antibactériellement efficace pour combattre les bact 6 ries, en combinaison avec un support dudit in- grédient actif. L'invention va maintenant être illustrée par les exemples suivants qui ne sauraient en aucune façon en restreindre la portée. Exemple 1 Obtention de la 2 '-d 6 soxykanamycine A ( 1) Pr 6 paration de la tétra-N-éthoxycarbonylkanamy- cine A. On dissou* 40 g de sulfate de kanamycine A dans un mélange de 400 ml d'une solution aqueuse 2 N d'hydroxyde de sodium et de 200 ml de méthanol; on ajoute goutte à goutte A la solution obtenue 69 ml de chloroformiate d'éthyle Le mélange obtenu est agit 6 pendant 4 heures à température ambiante puis filtr 6 pour éliminer la partie solide qui est ensuite lavée à l'eau et sé- chée pour donner la 1,3,6 ',3 "-tétra-N-éthoxycarbonyl- kanamycine A Rendement 86 % ( 45,7 g) Pt f 266-267 C (déc) lalD 5 + 48,30 (c 0,5, DMF). Analyse élémentaire Calculé pour C 30 H 52 N 4019: C 6,62 H 6,80 N 7,25 Trouvé C 45,92 H 6,79 N 7,05 % ( 2) Préparation de la 1,3,6 ',3 "-tétra-N-6thoxy- carbonyl-2 ',3 ',4 ',2 ",4 ",6 -hexa-0-benzoyl-kanamycine A On dissout 7, 73 g de la tétra-N-éthoxycarbonyl kanamycine A obtenus en ( 1) dans 200 mlide pyridine et l'on m 6 lange la solution obtenue à 12,2 ml de chlo- rure de benzoyl On laisse le mélange reposer à 5 C toute une nuit pour effectuer l'O-benzoylation Le mélange r 6 actionnel est mélangé à 1 ml d'eau et dis- till 6 sous pression r 6 duite pour éliminer le solvant. Le résidu est mélangé à 300 ml d'ac 6 tate d'thyle et le mélange lavé 6 à l'eau puis avec une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium et enfin deux fois à l'eau La couche organique est séch 6 e sur sulfate de sodium anhydre puis concentrée à siccité sous pres- sion r 6 duite pour donner le compos 6 désiré Rendement 97,3 % ( 13,6 g) Pte 95 " 215 C 2 l 5 + 100,7 (c 0,9, CHC 13). Analyse élémentaire Calculé pour C H 76 N 4025 C 61,87 H-5,49 N 4,01 % 72 76 4 25 ' Trouv 6 C 61,78 H 5,42 N 3,87 % ( 3) Préparation de la 1,3,6 ',3 "-tétra-N-6thoxy- carbonyl-3 ',4 ',2 ",4 ",6 "-penta-0-benzoyl-kanamycim e A 42 g de tétra-N-éthoxycarbonyl-hexa-O-benzoyl-ka- namycine A obtenu dans l'étape pr 6 cédente sont dissous dans 60 ml de pyridine et la solution obtenue est me- langé 6 e à 0,48 ml d'hydrate d'hydrazine On laisse le m 6 lange obtenu reposer à temp 6 rature ambiante toute une nuit pour effectuer la réaction d'élimination pr 6 f 6 rentielle du groupe 2 '-O 0-benzoyl Le mélange réactionnel est mélangé à 2 ml d'ac 6 tone puis distil- lé sous pression réduite pour en 6 éliminer le solvant. Le r 6 sidu est mélangé à 150 ml d'acétate d'éthyle puis lavé à l'eau, ensuite avec une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium et enfin deux fois à l'eau La couche organique est S 6 chée sur sulfate 10574 de sodium anhydre et distillée sous pression réduite pour éliminer le solvant, ce qui donne 3,8 g du com- pos 6 recherch 6 sous forme brute Ce compos 6 est puri- fi& par chromatographie sur gel de silice ( 75 g) dé- velopp 6 e avec un mélange chloroforme-m 6thanol ( 50:1) pour donner le compos 6 d 6 sir 6 Rendement 67 % ( 2,6 g). Pt;f 193220 C l 25 + 85,50 (c 1,0, CH Cl). D 3 Analyse élémentaire Calcu 16 pour C 65 H 72 N 02: C 60,35 H 5,62 N 4,33 % Trouv 6 C 59,41 H 5,51 N 4,32 % ( 4) Préparation de la 1,3,6 ',3 "'-t 6 tra-N-6thoxy- carbonyl-2 '-0-trifluorom 6thylsulfonyl-3 ',4 ',2 ",4 ",6 "- penta-O-benzoyl-kanamycine A. 2,37 g de t 6 tra-N-6thoxycarbonyl-penta-O-benzoyl- kanamycine A obtenu dans l'6 tape pr 6 c 6 dente sont dis- sous dans 40 ml de pyridine et la solution obtenue est m 6 élang 6 e à 0, 9 g de 4-N-dim 6thylaminopyridine; on ajoute ensuite goutte à goutte 0,6 ml de chlorure de trifluorom 6thylsulfonyl sous refroidissement à la glace On laisse reposer le mélange liquide obtenu à temp 6 rature ambiante pendant 20 minutes, on mélange le mélange r 6 actionnel à 0,5 ml d'eau puis on distille sous pression r 6 duite pour éliminer le solvant Le r 6- sidu est mélang 6 à 60 ml d'acétate d'6thyle, on lave le mélange obtenu à l'eau puis avec une solution aqueuse satur 6 e de bicarbonate de sodium, ensuite avec une so- lution aqueuse N de sulfate acide de potassium et en- fin à l'eau La couche organique est S 6 ch 6 e sur sul- fate de sodium anhydre puis distillé 6 e pous pression r 6 duite pour donner 2,3 g du compos 6 d 6 sir 6, sous for- me brute Ce compos 6 est purifi 6 par chromatographie sur gel de silice ( 30 g) d 6 velopp 6 avec un mélange chloroforme-m 6thanol ( 50:1) pour donner le compos 6 d 6 sir 6 Rendement 85 % ( 2,2 g) Pt F 125 = 137 C (déc) 25 + 110,50 (c 0,7, CH Cl 3) -1 IR(KI Br) 1140, 1415 (SO 2 CF 3) 1 H-NMR(COCI):7,2 -8,3 ( 25 H, rn, -C-C 611, ( 5) Préparation de la 1 3,6 t,31-tétra-N-4thoxy- carbonyl-2 '-désoxy-2 '- épi-2 '-phénylthio-3 'l,4 2," 6 " penta-0benzoyl-kanamycine A- 2,1 g de 2 ' O-trifluorométhylsulfonyl-kanamycine A obtenu dans l'étape ( 4) ci-avant sont dissous dans ml de DMF (dim 6thylformamide)-et la solution ob- tenue est mélang 6 e à 430 g de thioph 5 nolate de so- lo O dium On laissele mé 6 lange obtenu reposer 3 heures à température ambiante pour effectuer l'introd-uction du groupe'6 pi-2 '-ph 5 nylthio dans le dérivé de kanamy- cine A Le mélange réactionnel est distillé sous pres- sion réduite pour en éliminer le solvrant et le rosi- l 5 du est mélange à 60 m 1 d'ac 6 tate d'éthyle puis lavé deux fois à l'eau La couche organique est séchée sur sulfate de sodium anhydre puis distîl 16 e sous * pression réduite pour donner 2,80 g du composé dé- siré, sous forme brute Ce produit brut est purifié par chromatographie sur gel de silice ( 30 g) dévre- loppéeavrec un mélange chl oroforme-méthanol ( 50:1)- pour donner le composé désiré Rendement 88 % ( 1,8 g). Pt f 148 i 650 C 1 Ia±87-17 o (c 1,0, CH C 13 1 H-NMR (CD C 13):6,8 -7,0 ( 5 H, m, s-C H) 6 -5 Analyse élémentaire Calculé pour 71 H 76 N 4023 S: C 61,54 H 5,54 N 4,04 S 2,31 % Trouvé C 61,68 H 5,50 N 3,'71 S 2,36 % ( 6) Préparation de la 1,3,6 ',3 " 1-tétra-N-éthoxycar- bonyl-2 '-désoc Y-3 ',4 ',2 "t,4 t'611-pen-ta-0-benzoyl kana- mycine A On dissout 1,5 g du dérivé 2 '-phénylthiokanamycine A-obtenu dans l'étape ( 5) précédente dans 35 ml d'k- 10574 thanol et l'on mélange la solution r 6 sultante à 10 ml de nickel de Ranney Le mélange obtenu est séch 6 sous reflux pendant 30 minutes Le mélange réactionnel est filtré pour en éliminer les éléments insolubles et le filtrat est concentr 6 à siccité pour donner 1,35 g du composé désir 6 sous forme brute Ce compos 6 est chromatographi 6 sur gel de silice ( 25 g), déve- lopp 6 avec un mélange chloroforme-m 6thanol ( 45:1) pour donner 1,3 g du composé d 6 siré Rendement 93 %. Pt f 140-155 C l 5 + 74 o (c 1,0, CH Cl 3) Analyse élémentaire Calculé pour C 65 H 72 N 4023: C 61,11 H 5,69 N 4,39 % Trouv 6 C 61,00 H 5,63 N 4, 24 % ( 7) Obtention de la 2 '-désoxykanamycine A On dissout 1,1 g du d 6 rivé N,O prot 6 gé de 2 '-d 6- soxy-kanamycine A, obtenu selon l'étape précédente ( 6), dans 30 ml de méthanol; on mélange la solution ré- sultante à 0,7 ml d'une solution à 28 % de m 6thoxyde de sodium dans du méthanol, pour régler le p H à 11; on maintient le mélange à température ambiante pen- dant 30 minutes pour effectuer l'élimination des groupes O-benzoyl Le mélange r 6 actionnel est neutra- lis 6 par addition de H Cl N et la solution neutralisée estconcentrée sous pression réduite La solution concentr 6 e est mélang 6 e à 3,5 g d'hydroxyde de baryum (Ba(OH)2 8 H 20) et A 50 ml d'eau et le mélange est 2 '2 agit 6 et chauffé pendant 3 heures sous reflux pour déprotéger de N Après refroidissement, le mélange r 6 actionnel est neutralisé en y faisant passer du gaz carbonique puis il est filtré pour éliminer les ma- tieres insolubles On fait passer le filtrat dans une colonne de r 6 sine 6 changeuse de cations, l'Amberlite CG-50 (forme NH 4) ( 20 ml) pour adsorption de la 2 '- d 6 soxykanamycine A La colonne de résine est alors la- v 6 e à l'eau puis avec une solution aqueuse 0,1 N d'ammoniaque et ensuite 6 éluée avec une solution aqueuse 0,3 N d'ammoniaque L'éluat est rassemblé en fractions de 2 ml, les fractions actives n 6 à 10 sont r 6 éunies et concentr 6 es à siccité sous pression r 6 duite pour donner 190 mg du composé désiré Ren- dement 47 % Pt f 208-221 C (dc) 25 124,80 (c 0,9, H 20). H-NMR (D 20): 5, 46 ( 1 H, d, J = 3,75, 1 '-H) ( 5,02 ( 1 H, d, J = 3,8, 1 "-H) 2,25 ( 1 H, q, J = 4 et 10 Hz, 2 ' équatorial-H) S 1,72 ( 1 H, d-t, J = 3,75 et 12 Hz 2 ' axial-H) Analyse élémentaire Calculé pour C 18 H 36 N O 3/2 20: C 43,61, H 7,94 N 11,30 % Trouvé C 43,36, H 7,50 N 11,30 % Exemple 2 Obtention de la 2 '-épi-kanamycine A ( 1) Préparation de la 1,3,6 ',3 "-tétra-N-éthoxycar- bonyl-2 '-0-6 pi-benzoyl-3 ',4 ',2 ",4 ",6 "-penta-0-benzoyl- kanamycine A 400 mg de 1,3,6 ',3 "-tétra-N-éthoxycarbonyl-2 '-0-tri- fluorométhylsulfonyl-3 ',4 ',2 ",i",6 '"-penta-0-benzoyl- kanamycine A obtenus dans l'exemple 1 ( 4) ci-avant sont dissous dans 10 ml de DMF et la solution obtenue est mélangée à 250 mg de benzoate de sodium Le mé- lange obtenu est agité à 80 "C pendant 5 heures pour effectuer la réaction de remplacement du groupe 2 '-0- trifluorométhylsulfonyl par le groupe 2 '-0-benzoyl. Le mélange réactionnel est distillé sous pression ré- duite pour en éliminer le solvant et le résidu est mélangé à 20 ml d'acétate d'éthyle puis lavé deux fois à l'eau La couche organique est séchée sur sulfate de sodium anhydre puis concentrée à siccité sous pres- sion réduite pour donner 380 mg du composé recherché sous forme brute Ce composé est purifié par chroma- tographie sur gel de silice ( 10 g) développée avec un m 1 élange chloroforme-m 6thanol ( 50:1) pour donner 270 mg du compos 6 recherché Rendement 69 %. Pt f 118,1340 C la 2 D 3 + 41,70 (c o,6, CHC 13) Analyse élémentaire Calculé pour C 72 H 76 N 4025: C 61,87 H 5,49 N 4,01 % Trouvé C 61,66 H 5, 53 N 3,80 % ( 2) Obtention de 2 '-épikanamycine A On dissout 250 mg du composé obtenu en ( 1) dans ml de m 6thanol et l'on mélange la solution m 6thano- lique à 0,15 ml d'une solution à 28 % de m 6thoxyde de sodium dans le méthanol pour r 6 gler le p H à 11 On lais- se reposer le mélange à temp 6 rature ambiante pendant minutes pour effectuer la réaction d'élimination des groupes benzoyl Le mélange réactionnel est alors neu- tralis 6 par addition d' H Cl N et la solution neutra- lisée est concentrée sous pression réduite La solution concentrée est mélangée à 800 mg d'hydroxyde de baryum (Ba(OH)2 8 H 20) et 10 ml d'eau; le mélange est agité et chauffé 3 heures sous reflux et agitation pour effec- tuer la réaction de déprotection en N Une fois refroi- die, la solution réactionnelle est neutralisée par pas- sage de gaz carbonique, puis filtrée pour en éliminer les matières insolubles On fait passer le filtrat dans une colonne d'Amberlite CG-50 (forme NH 4 +)5 ml pour adsor- ption de la 2 '-épi-kanamycine A La colonne de résine est lavée à l'eau puis avec une solution aqueuse 0,1 N d'ammoniaque et ensuite éluée avec une solution aqueuse 0,3 N d'ammoniaque L'éluat est rassemblé en fractions de O,7 ml, les fractions actives n 51 à 53 sont rassemblées et concentrées à siccité sous pres- sion réduite pour donner 45 mg du composé désiré. Pt f 194-225 C (déc) l)23 + 100,80 C (c 0,8, H 20) Analyse élémentaire Calculé pour C 18 H 36 N 4 Ol H 2 Co 3 5/2 H 20: C 38,57 H 7,34 N 9,47 % Trouvé C 38,46 H 6,97 N 9,64 % Exemple 3 Obtention de la 2 '-épi-kanamycine B ( 1) Préparation de la 1,3,6 ',3 "-tétra-N-éthoxycar- bonyl-2 '-d 6 soxy-2 '-6 pi-azido-3 ',41 ',2 ",4 ",6 "-penta-0- benzoyl-kanamycine A 1,0 mg de la 1,3,6 ',3 "-t 6 tra-N-6thoxycarbonyl-2 '-O- trifluorom 6thylsulfonyl-3 ',4 ',2 ",4 "",6 "-penta-0-benzoyl kanamycine A obtenue dans l'exemple 1 ( 4) ci-avant sont dissous dans 20 ml de DMF et la solution obtenue est m 6 élang 6 e à 250 mg d'azide de sodium (Na N 3) puis chauf- fée à 100 C pendant 3 heures sous agitation Le m 6- lange réactionnel est distillé sous pression réduite et le résidu mélang 6 à 50 ml d'ac 6 tate d'6thyl Le m 6 élange obtenu est lavé trois fois à l'eau La couche organique est S 6 ch 6 e sur sulfate de sodium anhydre puis distillée sous pression r 6 duite pour en éliminer le solvant On obtient 890 mg du composé désir 6, sous forme brute et on le purifie par chromatographie sur gel de silice ( 15 g) d 6 velopp 6 e avec un mélange chlo- roforme-m 6thanol ( 50:1) ce qui donne 708 mg du compo- sé désir 6 Rendement 77 % Pt f 167-18 O C. (e 254 + 90, 40 (c 0,8, CH C 13) -1 cm IR(H)K Br): 2100 (-N 3) 1140, 1415 disparu 502 CF 3) Analyse élémentaire Calculé pour C H N O C 59,21 H 5,44 N 7,44 % 71 7 23 5 Trouvé C 58,96 H 5,45 N 7,38 % ( 2) Obtention de la 2 '-épikanamycine B On dissout 500 mg du dérivé 2 '-azido de kanamycine A obtenu dans l'étape ( 1) ci-avant dans i 2 ml de m 6- thanol et l'on mélange la solution obtenue à 0,3 ml d'une solution de 28 % de méthoxyde de sodium dans du méthanol; on laisse alors reposer à température ambiante pendant 30 minutes pour effectuer la réac- tion d'élimination des groupes benzoyl La solution réactionnelle est neutralisée par addition d'H Cl N puis acidifiée par addition de 0,1 ml d'acide acétique et on ajoute 30 mg de noir de palladium Le mélange obtenu est soumis à une hydrogénation catalytique avec 10574 de l'hydrogène gazeux à température ambiante et sous pression atmosph 6 rique On soumet le mélange réac- tionnel à une analyse par chromatographie en couche mince sur plaque de gel de silice pour détecter le dérivé 2 '-épi-azido de kanamycine A n'ayant pas réagi. Le dérivé 2 '-épi-azido donne un Rf de 0,5 alors que le produit de réduction, c'est-à-dire la 1,3,6 ',3 "-tétra- N-éthoxycarbonyl-2 '-d 6 soxy-2 '-épi-amino-kanamycine A donne un Rf de 0, 24 en chromatographie en couche mince sur gel de silice développée avec un mélange chloro- forme-méthanol-solution aqueuse concentrée d'ammo- niaque ( 9:4:1 en volume) L'hydrogénation catalytique est poursuivie jusqu'à ce que la chromatographie con- firme que tout le dérivé 2 '-épi-azide de kanamycine A a été consommé Le mélange réactionnel est alors filtré pour en éliminer le catalyseur, et le filtrat concentré sous pression réduite pour en éliminer le solvant Le résidu est mélangé à 1,5 g d'hydroxyde de potassium et à 10 ml d'eau et le mélange est chauffé pendant 3 heures à 100 C pour effectuer l'éli- mination des groupes éthoxycarbonyl Une fois refroidi, le mélange réactionnel est neutralisé par addition d'acide chlorhydrique concentré, puis on le fait pas- ser dans une colonne d'Amberlite CG 50 (NH 4 +)10 O ml pour adsorption de la 2 '-épi-kanamycine B La colonne de résine est lavée à l'eau puis avec une solution aqueuse O,1 N d'ammoniaque et ensuite éluée avec une solution aqueuse 0,3 N d'ammoniaque L'éluat est rassemblé en fractions de 1,5 ml, les fractions actives n 3 à 8 sont combinées et concentrées à siccité sous pression réduite pour donner 74 mg du composé désiré Rende- ment 40 % Ptf 205-220 C (déc) + 105 (c 0,5 H 20). Analyse élémentaire Calculé pour C 18 H 37 N 5010 H 2 CO 3: C 41,82 H 7, 22 N 12,84 % Trouvé C 41,67 H 7,16 N 12,70 % = 2510574 ' REVENDICATIONS - 1 Dérivés de kanamycine modifiés en 2 ', caracté- risés en ce qu ils présentent la formule générale: H O ( 1) HO dans laquelle X est un atome d'hydrogène, un groupe hy- droxy ou un groupe amino, et leurs sels d'addition acides pharmaceutiquement acceptables. 2 D 6 rivé selon la revendication ses en ce qu'il est la 2 'désoxykanamycine quelle X est un atome d'hydrogène. 3 Dériv 6 selon la revendication ses en ce qu'il est la 2 '-épikanamycine A, X est un groupe hydroxy - 4 Dérivé selon la revendication 1, caractéri- A, dans la- 1, caractéri- dans laquelle 1, caractérisé en ce qu'il est la 2 '-épikanamycine B, dans laquelle X est un groupe amino. 5 - Procédé d'obtention de dérivés de kanamycine modifiés en 2 ', caractérisé en ce qu'il comporte les étapes consécutives suivantes: a) réaction d'une 1,3,6 ',3 "-tétra-N-protégée,2 ',3 ', 4 ',2 ",4 ",6 "-hexa-0-benzoyl ou acétyl kanamycine A de for- mule (IV'): NHR NHRR zo o (IV') oz dans laquelle R est un groupe amninoprotecteur et Z un groupe benzoyl ou acétyl, avec-de l'hydrazine, de l'hy- drate d'hydrazine, de la m 6thy 1 hydrazine ou de l'hydro- xylamine dans de la pyridine, à une température allant de -100 C à 5 O'C pour éliminer préférentiellemient du comn- posé (IV') le groupe 2 '-0-benzoyl ou acétyl. b) réaction de la 1,3,6 ',3 " 1-t 6 tra-N-protégée -PA,', 2 ",1411,6 " 1penta-0-benzoyl ou acétyl kanamycine A avec du chlorure de trifluoromé 6thylsulfonyl ou de l'anhydride- trifluorométhanesulfonique dans de la pyridine à une temnpérature de 00 C à 300 C pour obtenir une 1,3,6 ',3 "- têtra-N-protég 6 e 2 ' -0-trifluorométhylsulfonyl-3 ',4, 2 ",4 " 1, 6 " 1penta-0-benzoyl ou acétyl-kanamycine A de formule (vif) ZO (VI') ZO oz '0 Z dans laquelle R et Z ont les définitions ci-dessus. c) réaction du composé (VI') avec un composé choisi parmi les thioph 6 nolates de métal alcalin, les benzoate ou acétate de sodium et les azides de métal alcalin. d) du composé e) du composé élimination des groupes hydroxyprotecteurs (Z). obtenu dans l'6 tape c, et élimination des groupes amino-protecteurs (R) obtenu dans l'étape d, de formule (i I) 61 CH 2 NHR OH\X i HO 2 ' HO 31 " (Il) 2 " OH 6 Procédé d'obtention de la 2 'désoxykanamycine A selon la revendication 5, caractérisé en ce que les étapes (a) et (b) sont suivies des étapes suivantes: c) réaction du composé (VI') avec un thiophénolate de métal alcalin dans un solvant organique à une tempé- rature de 10 C à 400 C pour obtenir une 1,3,6 ',3 "-tétra-N- protégée 2 '-désoxy-2 '-épi-2 '-phénylthio-3 ',4 ',2 ",4 ",6 "- penta-0-benzoyl ou acétyl kanamycine A de formule (VII'). NHR ZO 9 X O zo (VII') oz zo * oz dans laquelle R et Z ont les définitions données ci- avant et O est un groupe phényl. d) r 6 action du composé (VII') avec du nickel de Ranney dans de l'thanol pour en éliminer le groupe 2 '-épi-2 '-phénylthio. e) réaction de la 1,3,6 ',3 "-tétra-N-protégée-2 '- désoxy-3 ',4,2 ",4 "tt,6 "-penta-0-benzoyl ou acétyl kanamy- cine A obtenue avec un méthoxyde de métal alcalin pour éliminer les groupes benzoyl ou acétyl (Z) et obtenir le dérivé tétra-N-protég 6 de la 2 '-désoxy kanamycine A de formule (II'). o - HO (II') I OH dans laquelle R a la définition donnée ci-avant, et - f) élimination des groupes amino-protecteurs ré- siduels (R) du dérivé N-protégé de 2 '-désoxykanamycine A (II') de manière connue pour obtenir la 2 '-désoxykanamy- cine A. 7 Procédé d'obtention de la 2 '-6 pikanamycine A selon la revendication 5, caractérisé en ce que les êta- pes (a) et (b) sont suivies des étapes suivantes: c) réaction du composé (VI') avec du benzoate ou de l'ac&tate de sodium ou de potassium dans un solvant organique à une température allant de la température ambiante à la température de reflux du solvant employé pour obtenir une 1,3,6 ',3 "-tétra-N-prot&gée 2 '-0-épi-ben- zoyl ou &pi-acétyl-3,41 ',2 ",4 ",6 "-penta-0-benzoyl ou acé- tyl kanamycine A de formule (IX'). o ZO (IX') oz dans laquelle R et Z ont les définitions donn 6 es ci- avant et Y est un groupe benzoyl ou acétyl. d) r 6 action du composé (IX') ci-dessus avec un m 6thoxyde de mé 6 tal alcalin pour éliminerles groupes benzoyl ou acétyl (Z et Y) et obtenir la 2 '-6 pikanamy- cine A tétra-N-prot 6 g 6 e de formule: (II") OH dans laquelle R a les définitions ci-avant, et e) élimination des groupes amino-protecteurs ré- siduels (R) de la 2 '-6 pikanamycine A N-prot 6 gée (II") de façon connue en soi pour obtenir la 2 '-6 pikanamycine A. 8 Procédé d'obtention dé la 2 '-épikanamycine B selon la revendication 5, caract 6 risé en ce que les éta- pes (a) et (b) sont suivies des étapes suivantes: c) réaction du composé (VI') avec un azide de m 6- tal alcalin dans un solvant organique à une température entre 50 C et la température de reflux du solvant utilisé pour obtenir une 1,3,6 ',3 "-tétra-N-protégée 2 '-désoxy-2 '- épi-azido-3 ',4 t',2 t,4 ",6 t'-penta-0-benzoyl ou acétyl-kana- mycine A de formule (X') NHR NHR O MIR zo (X') oz Z oz dans laquelle R et Z ont les définitions données ci- avant. d) réaction du composé (X') avec un méthoxyde de métal alcalin pour éliminer les groupes benzoyl ou acétyl (Z) et obtenir la 1,3,6 ',3 "-tétra-N-protégée-2 '-désoxy-2 '- épi-azide-kanamycine A correspondante de formule (XI'). HO O (x I') HO OH dans laquelle R a les définitions données ci-avant. e) réduction avec de l'hydrogène du groupe 21 épi-azido du composé (XI') en groupe amino et obtention d'une 1,3,6 ',3 "-tét ra-N-prot 6 gée-2 'épikanamycine B de formule (II"') O HO -(Titis) HO O dans laquelle R a les définitions donn&es ci-avant, et 1) 6 limination des groupes aminoprotecteurs résiduels (R) du dérivé de 2 '-6 pi -kanamycine B N-prot 6 gé (Il"'1)-de façon connue en soi pour-obtenir la 2 '-épi-ka- namycine B. 9 Composition autibact 6 rienne, caractérisée en ce qu'elle comporte, comme ingrédient actif, la-2 _'-dé- soxykanamycine A, la 2 '-épikanamycine A ou la 2 '-épika-, namycine B, ou un sel d'addition-acide pharmaceutiquement acceptable de ces composés, en quantité antibact 6 rielle- ment efficace pour combattre les 'bactéries-, en combinai- son avec le support dudit ingrédient actif - 1,3,6 ',31 "-t 6 tra-NX-6thoxycarbonyl-2 '-0-tri- ftluorométhylsulfonyl-2 '-3,41, 2 "l, 4, 6 "-pënta-0-benzoyl- kanmaycine A de formule'g 6 néraie CH 2 NH Obe Nsl E Cbe V 1 _ 1 Rbe Bz Q 0502 CF 3 O (VI) CH 20 O Bz BZO O Bz dans laquelle Cbe est un groupe 6thoxycarbonyl et Bz un groupe benzoyl, en tant que produit intermédiaire de la revendication 5.