FR 2475038 A1 19810807 FR 8101162 A 19810122 1 k47503 L'invention concerne des éthers basiques de 7-oxo- 7H-benzo/c/fluorène, de formule générale I: (Formule I en fin de description) dans laquelle R1 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyl ou éthyl et Z représente un groupe de formule générale II: (Formule II en fin de description) dans laquelle R2 est un groupemâthyl ou éthyl et x est un nom- bre entier égal à 2 ou 3, ou un groupe de formule III (FormuleIII en fin de description) et les sels de ces produits avec des acides organiques et miné- raux, tolérés du point de vue pharmacologique. L'invention concerne également un procédé pour la production de composés de formule générale I. Les substances de formule générale I dans laquelle R1 et Z ont les significations données précédemment, ont montré dans des expériences biologiques, des actions tendant à inhiber la croissance de tumeurs transplantées sur des animaux de labo- ratoire, et des actions prolongeant la période de survie des animaux porteurs de telles tumeurs. Des exemplesd'actions de ce type sont représentés dans les tableaux 1-3. De plus, la substance 13468 a inhibé, au cours de tests in vitro, de façon marquée, l'incorporation radio-active de l'adenine-14C et de la valine-14C dans la fraction cellu- laire insoluble dans l'acide trichloracétique, de tumeurs asci- tiques d'Ehrlich (c'est-à-dire des protéines, de façon prépon- dérante). De ce point de vue, elle a été plus de 10 fois plus efficace que le Tiloron (NSC 143969; 2,7-bis-/2-(diéthylamino) étoxy/fluorène-9- one). Les exemples des résultats de ces tests sont présentés dans lo tableau 4. L'inhibition de l'incorpora- tion de l'adénine et de la valine dans le système utilisé de cellules de tumeurs, est considérée comme une indication de l'inhibition d'une action cytostatique antituneur. Cette acti- vité biologique du composé 13468 est bien plus élevée que celle de son congénère Tiloron. La substance 13468 a exhibé en outre des effets immuno-suppressifs sur la formation d'anticorps, dans les souris. Un exemple d'effet de ce type est représenté dans le tableau 5. (Procédé identique à celui de la communication de M.Svorcova, t. Rezabek, et M. Semonsky dans Arzneimittel-Forschung 30/0/, 6, 978-980 /1980/). 2 4 7 75O Une inhibition de la formation d'anticorps de sérum immunologique par le composé 13468 apparaît évidente en examinant le tableau. Se basant sur les résultats présentés, on peut s'attendre à constater des effets antitumeurs et immunosuppres- sifs des substances énumérées précédemment, sur l'homme égale- ment. Les composés de formule générale-I, avec R et Z ayant les significations données plus haut, peuvent être obte- nus selon l'invention, en faisant réagir un composé de formule générale IV: (Formule IV en fin de description) dans laquelle Ri a la même signification que dans la formule I, et M représente un atome de sodium ou de potassium, avec un composé de formule générale V (Formule V en fin de description) dans laquelle R2 et x ont la même signification que dans la formule 1, ou avec un composé de formule VI: (Formule VI en fin de description) Les composés de formule générale V ou de formule VI, sont utilisés en quantités de 1 à 3 équivalents molaires, et la réaction est conduite soit dans un milieu anhydre, dans un solvant organique inerte anhydre, de préférence un hydrocarbure aromatique chloré, à la température d'ébullition du solvant, soit dans un système à deux phases constitué par un solvant organique inerte, non-miscible à l'eau, comme par exemple, un hydrocarbure aromatique, de préférence le toluène et une solu- tion aqueuse d'hydroxyde de sodium ou d'hydroxyde de potassium, à la température d'ébullition du mélange réactionnel. Les composés de formule générale IV, dans laquelle R et M ont les significations définies plus haut, sont obtenus à partir des composés de formule générale VII: (Formule VII en fin de description) dans laquelle Ri a la même signification que plus haut, par substitution sur l'atome d'oxygène hydroxylique du noyau, avec un métal alcalin, au moyen de procédés classiques, dans un milieu réactionnel aqueux ou anhydre. La réaction du composé de formule générale IV avec les composés de formule V ou VI, est également conduite dans un solvant inerte anhydre ou dans un système à deux phases, 3 ?4750:J constitué par une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium ou de potassium, et un solvant organique inerte, non miscible à l'eau. Les solvants inertes appropriés pour réaliser les deux procédés peuvent être choisis parmi les hydrocarbures aro- matiques comme le benzène, le toluène ou le xylène, ou les sol- vants chlorés comme le dichloroéthane ou le tétrachloroéthane; néanmoins, c'est l'utilisation du toluène ou du chlorobenzène qui est la plus recommandée pour cette application, compte tenu du rendement obtenu en produit souhaité. La réaction dans le système à deux phases peut éga- lement se dérouler en présence d'un catalyseur de transfert de phase, mais cette technique n'apporte pas un avantage substan- tiel. Les mélanges réactionnels sont traités après réac- tion par les procédés classiques impliqués dans les réactions d'alcoylation, selon le procédé choisi. Par exemple, la méthode de Andrews E.R. et al, J. Med. Chem. 17, 882 (1974) est appro- priée. Le produit réactionnel brut est purifié par cristallisa- tion dans un solvant ou un mélange de solvants appropriés, et caractérisé sous la forme d'une base, ou alors, il est traité au moyen d'un excès d'environ 10 % d'un acide organique ou minéral toléré du point de vue pharmaceutique, dans un milieu alcool à chaîne courte conmne le méthanol ou l'éthanol, pour donner le sel d'addition respectif, qui est finalement purifié par cristallisation à partir d'un solvant approprié. Les acides appropriés pour la préparation des sels d'addition sont des acides minéraux comme l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique ou l'acide phosphorique, et des acides orga- niques comme les acides maléique, tartrique, méthane ou éthane- sulfonique, napsylique, fumarique et citrique. Les produits de départ des réactions mentionnées précédemment, a savoir, les composés de formule générale VII, avec R1 ayant la signification donnée plus haut, sont des subs- tances connues, aisément disponibles: Koelsch C.F.: J. Org. Chem. 26, 2590 (1961), Krepelka J. et al.: Czech. Pat. 200.094, 202.213, 204.211 Les exemples ci-dessous donnent une description plus détaillée du procédé pour la préparation des composés de formule géné.rale I, o R1 et Z ont la signification donnée plus hauts et nour la préparation de leurs sels, formés par addition 247505X avec des acides organiques et minéraux. Les températures de fusion, données dans les exemples, ont été déterminées sur bloc Kofler et ne sont pas corrigées; les températures sont exprimées en degrés centigrades. ExemPle 1: -/2-(diméthylamino)éthoxy/-7-oxo-7H-benzo/c/fluorène. On traite une solution de méthylate de sodium, pré- parée par dissolution de 2,76 g (0,12 mole) de sodium dans ml de méthanol, avec 150 ml de chlorobenzène et 14,8 g (0,06 mole) de 5-hydroxy-7-oxo-7Hbenz'c/fluorne; on chauffe progressivement le mélange réactionnel jusqu'à la température d'ébullition du chlorobenzène, avec distillation simultanée du méthanol. On ajoute alors une solution de 13 g (0,12 mole) de chlorure de 2-(diméthylamino)éthyl dans 30 ml de chlorobenzène et le mélange réactionnel est soumis au reflux durant 5 heures. Ensuite on refroidit, puis décompose par l'eau, on sépare la couche organique et l'extrait au moyen d'une solution d'hydroxyde de potassium à 10 %; on sèche sur sulfate de sodium anhydre et évapore à sec. Le résidu cristallin est purifié par cristal- lisation dans un mélange tétrachlorométhane-hexane (1:1) et l'on obtient 14,8 g (78,3 %) du produit recherché; point de fusion 91-93 . Exemple 2: Maléate acide de 5-/2-(diméthylamino)éthoxy/-7-oxo- 7H-benzo/c/fluorène. Une solution de 318 mg (1 millimole) de 5-/2- (diméthylamino)éthoxy/-7-oxo-7H-benzo/c/fluorène, préparé selon l'exemple 1, dans 5 ml de méthanol, est traité avec 127 mg (1,1 millimole) d'acide maléique. Lorsqu'on refroidit à -5 , le solide précipité est isolé par aspiration, et cristallisé dans l'éthanol, pour donner un produit dont le point de fusion est de 119-124 . On prépare de la même manière le napsylate de -/2-(diméthylamino)éthoxy-7oxo-7H-benzo/c/fluorène, point de fusion 85-87 (éthanol). L'hydrochlorure de 5-/2-(diméthylamino)éthoxy/-7- oxO-7H-benzo/c/fluorène, point de fusion 268-269 (éthanol). Exemple 3: Hydrochlorure de 3,9-diéthyl-5-/2-(diméthylamino) éthoxy/-7-oxo-7H-benzo/c/-fluorène. - Une solution de méthylate de sodium, préparée par dissolution de 0,92 g (0,04 mole) de sodium dans 15 ml de méthanol, est traitée avec 50 ml de chlorobenzène et 6,04 g (0,02 mole) de 3,9-diéthyl-5-hydroxy-7-oxo7Hèbenzo/c/fluorène, et la réaction est conduite comme dans l'exemple 1, en utili- sant 4,3 g de chlorure de 2-(diméthylamino)éthyl. Le produit brut obtenu (point de fusion 88-90 ) est dissout dans l'éthanol et acidifié avec une solution éthanolique d'acide chlorhydrique; en refroidissant, il précipite un solide cristallin que l'on sépare par aspiration et purifie dans l'éthanol; on obtient 6,2 g (76 %) du produit cité en titre de l'exemple, avec un point de fusion de 241-243 . On prépare de façon similaire l'hydrochlorure de 3,9-diméthyl-5-/2-(diméthylamino)éthoxy /-7-oxo-7H-benzo/c/- fluorène, point de fusion 250-252 /éthanol-hexane/. Exemple 4: Hydrochlorure de 5-/2-( diéthylamino)éthoxy/-7-oxo- 7H-benzo/c/fluorène. Un mélange de 320 ml de toluène et de 80 ml d'eau contenant 13,2 g (0,24 mole) d'hydroxyde de potassium, est traité avec 9, 84 g (0,04 mole) de 5-hydroxy-7-oxo-7H-benzo/c/ fluorène et 14,9 g (0,088 mole) de chlorure de 2-(diéthylamino) éthyl. Le mélange réactionnel est soumis au reflux durant 12 heures, et, lorsqu'on refroidit, la couche de toluène est séparée de la couche aqueuse et traitée comme dans les exemples 1 et 3. La recristallisation du produit brut dans l'éthanol produit 13,6 g (89,5 %) du composé cité en titre de l'exemple, point de fusion: 248-250 . On prépare de manière analogue les produits suivants: - hydrochlorure de 3,9-diméthyl-5-/2-(diéthylamino)éthoxy/-7- oxo-7H-benzo/c/-fluorène, point de fusion 251-254 (éthanol- hexane) - hydrochlorurede 5-/3-(diméthylamino)propoxy/-7-oxo-7H-benzo- /c/fluorène, point de fusion 242-244 (éthanol-tétrachloro- méthane); - hydrochlorure de 3,9-diéthyl-5-/2-(diéthylamino)éthoxy/-7- oxo-7H-benzo/c/-fluorène, point de fusion 190-192 (éthanol- hexane); - hydroch!orure de 5-/3-(diméthylamino)-2,2-diméthylpropoxy-7- oxo-7H-benzo/c/-fluorène, point de fusion 216-218 (méthanol- acétone); 6 2475038 - hydrochlorure de 5-/2-(diméthylamino) éthoxy/-7-oxo-7H-benzo /c/fluorène, point de fusion 268-269 (éthanol). 7 't-475033 Ex:plication des abréviations utilisées dans les tableaux 13: = différence significative du point de vue statisti- que, par rapport au contr8le à P = 0,05 K = contr8le La = leucémie La chez les souris C57B1 La 1210 = leucémie croissant sous la forme de tumeurs asciti- ques chez les souris hybride DBA/H Sa 37 = tumeurs ascitiques chez les souris H EST = tumeur solide d'Ehrlich chez les souris H Y = tumeur ascitique de Yoshida chez des rats Wistar 13466 = hydrochlorure de 5-(3-diméthylaminopropoxy)-7-oxo- 7H-benzo/c/fluorène 13467 = hydrochlorure de 5-(3-diméthylamino-2,2-diméthyl- propoxy)benzo/c/-fluorène 13468 = hydrochlorure de 5-(2-diméhylaminoéthoxy)-7-oxo-7H- benzo/c/fluorêne. -8 Tab.1. Action de la substance 13466 sur l'évolution des tumeurs transplantées sur des animaux servant aux expériences Especes Tumeur' Md=' 0de- Dose enmg/kg jeur d'injec- jour de 1'im.rel.de it durée de sur ie Adini.doses. tion (après évaluatilon tumeur (% dedes animaux par partnd es- partiel- totale transplanta- _es.dimen-- la gtndeur 'rapport à la moyen- parties le *s p' c e tion.. sions de 1 de contr8le,ne géométrique les,., Dose e.m'/r oi LA.C. lx 200 1 200 3 _. 113%e Souris. ', HK Oec. 8X 50 400 5-10,12,13 14 66% 121% o. e8x 50 I 400 5-10,12,13 14 82% 131% d 0e 8X 100 800 5-10,12,13 14 76% ll2% o, -o Cu Lni -4- - 9 - Tab.2. Acticbn de-la substance 13467 sur l!évolution des tumeurs transplantées sur des animaux servant aux expériences. Esces Tumeur Mode d' des Dose en mg/kg jours d'.injec-jour de 1'' dimensionsdurée de survie Pumeur admini. oses par par- totaltion (après évolufion Irelatives de des animaux par admini. aoses par- par- todes eoses epar- par- total transplanta- des dimen- la tumeur(% rappott à la moyen- tielles tee tielle tion) sions de la de la gran-ne géométrique À...', tumeur deur de con, Souris LA S.c. lx 300 t 300 3 e - 186% --.,, L1210 s. c. lx 250 250 1 _. __ 136-, HK s.c. 8x 25 200 5-10,12,13 14 45% 89 Rat Y s.c 5x 50 250 1-5 2 32%e. o. 5x 100 500 1J5 256%i,, _ _ _ _-_ _ _ _* 1_ _ _ _ _ _ __ _ _ _ _ __ _ _ _ _._ _ _ _ _ __ _ _ _ _i._ _ _ _-jmI LMl cU - 10 - Tab.3. Action de la substance 13468 sur l'évolution des tumeurs transplantées sur des animaux servant aux expériences. i.i 1. ,, - l.ode Ido desoseenjours d'in- jour d dimens. durée de survie% d'animaux Espces Tumeu r N des dsenngjtion- Espèeces Tumeur Mode' ses dose enmg/kt ection evolu- rel. de à des animaux parsurvivant au doses toaeÀcin1pa sriata adman..partiel par-ttl (aptès-trans- tion des tumeur. (rapport à la'35ème jour les tele plantation)dimen-, de la moyenne géomé-après trans- L 6.. sionsde grandeurtrique plantation la tu- de con- -. . meur tr81e. La s.c. lx 250 250 3 - - 500% r Souris _- L 121C 8.ce. 6x 50 300 1;5;8;12;15; -. 117% 19; c. 6x 75 450 5 12;15; 142% s.c. 6x. 100 600 1 9 3;5;8;12;15; - 4 127o& s.c. 6x 125 750 1; 8; 12; 1; 168% Sa 37 p.o. 3x 75 225 1,4,7, 1à 92% 123% i I Kr 2 p.o. 2x 150 300 1,8 10 62%4 128%2 3 HK s.c. 8x 50 400 5-10,12,13 14 58% 107%. p.o. 8x 50 400 5-10,12,13 14 73%g 102%[ p.o. 4x 100 400 5,7,9,12 14 48% 125% 4 p.o. 2x 150 300 5,12' 14 66% 123% iim i,. .l EST p.o. 4x 50 200 5, 79 9,12 14 77% 135%, p.o. 4x 100 400 5,7,9,12 '14. 70%,0 134%. - - ... l. _ _. i.l À /... to LO I-. cmJ Suite du Tableau 3: ActiQn de la substance 13468 sur l'évolution des tumeurs transplantées sur des animaux servant aux expériences. s. . Tumeur Mode d' admini. N? des doses partiel les I dose en. mg/kg partiel total le jour d'in- jection (après transw plantation) Rat Y 2, c0 x 50 1 250 1-5 ' o. 3x 50 1 150 1,4,8.,' o-. 3s 5 '225 1,4.8 0 o,, 3X 75 I 225 1 4,8 o. 5 100 1 500 15 - - i Pour d.d' evolu- tion des dimens de la tu. e mur - I dimens. rel. de tumeur (> de la grandeur de con- tr8le durée de survie des animauxpar rapport à la moyenne géomé- trique % d'animaux survivant au ème jour après trans- plantation %(KKi0%)& % (K K0%) ix% 4-. %r Espèces I - - l _ _ _ _ - 12 - À, 14C Tab.4. Action du.Tiloron et de la substance 13468 sur l'incorporation de l'adénine _C et de la valine - C dans la fraotion,pellulaire de, carcinomes ascitiques d'Ehrlich, insoluble dans., l'acide. trichloroacétique., in..vitro. Incorporation radioactive exprimée en cpm. IC50 concentration inhibant l'incorporation &.50 %. i iii. -- I_. i i,.LII Concentration (JuM) 0 18,75 37,5 75 150 300 600 1C50 acide, Substance anorporé incorporé Tiloron Adenine 1060 - 1160 1252 1096 979 563 600 JM (100%) (109%) (118%) (103) (92%) (53%) Valine 24514 0/ Valine 2455 -. 2395 2374 2247 2443 1944 600,uM (100%) (98%) (97%) (92%) (100%) (79%) 13 468 Adenine 1060 757 714 266 59 - - 53 PuM HCi (100%) (71%) (67%) (25%) (6%) _I. _..... =, Iii.J Valine 2455 2394 2253 887 349 -.. 65 uM l(100%) (98%) (92%) (36%) (14%) aCo Po Ln. cr- cj - 13 - Tab.5. Titre en haemagglutinine' et haemolysine dans le sérum de souris le 9ème jour après immunisation ram rythrocyte sous l'action de la substance 13468. Substance injectée par voie sous-cutanée 1 fois par jour, soit pendant 5 jours,. (2 jours avant, 2. jours après etle jour de l'immunisation) soit pendant I1l jours (2 jours avant, 8 jours après etle jour de l'immunisation). Groupes de 12 animaux chacun. Titre exprimé par la grandeur moyenne de l'atténuation la plus élevée d'aggluti- nation ou'd'haemolyse complètes par sérum. IDose partiel- Dose totale Haemagglutinines Haemolysines Nère de doses le mg/g)g) Titre Titre % ( m g / k g) ( m g / k g) g /k gg) _ TI. tl.'o - TIt O 0 0 343 100% 37 100% x 8 40 243 71% 49 132% (Supprimé en- (en-dessous x 40 200 12 3,5% dessous de de 27 %) .-I.w_... 3... 10) 71% Supprimé.eD- dessous de 10) 2.9%) (Supprimé en (en-desous dessous de 10.) de 27 %) I. (Supprimé en dessous de.10) s,.. _ ( en-desso.us de 2'7 %' N% o M otr -4. tuJ Llx 11x 2,9%) R1 0' -(CH2) -E - CH2 - C(CH3)2 R2 R1 0- z CH3 - OH2 - N CH3 R1 ( IV) -M R1 Cl - (CH2) - N R2 R2 CH3 01 - CH2 - (CH3)2 - CH2 - N CH3 R1 C vii) o0 ( I) ( II) ( III) ( V) (VI) - 1L4 - we1 E 1Z475038 R E V E N D I C A T I 0 N S 1 ) Ethers basiques de 7-oxo-7H-benzo/c/fluorène, de formule générale I: (Formule I, page 14) dans laquelle R1 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyl ou éthyl et Z représente un groupe de formule générale II: (formule II, page 14) dans laquelle R2 est un groupe méthyl ou éthyl, et x est un nombre entier égal à 2 ou 3, ou un groupe de formule III (Formule III, page 14) et leurs sels d'addition avec des acides organiques ou minéraux acceptables du point de vue pharmacologique. 2 ) 5-/2-(diméthylamino)éthoxy/-7-oxo-7H-benzo/c/ fluorène. 3 ) Hydrochlorure de 5-/2-(diméthylamino)éthoxy/-7- oxo-7H-benzo/c/-fluorène. 4 ) Napsylate de 5-/2-(diméthylamino)éthoxy/-7-oxo- 7H-benzo/c/-fluorène. ) Maléate acide de 5-/2-(diméthylamino)éthoxy/-7- oxo-7H-benzo/c/-fluorène. 6 ) Hydrochlorure de 5-/2-(diéthylamino)éthoxy/-7- oxo-7H-benzo/c/-fluorêne. 7 ) Hydrochlorure de 5-/2-(diméthylamino)propoxy- 7-oxo-7H-benzo/c/-fluorène. 8 ) Hydrochlorure de 5-/3-(diméthylamino)-2,2-diméthyl- propoxy/-7-oxo-7H-benzo/c/fluorène. 9 ) Hydrochlorure de 3,9-diméthyl-5-/2-(diméthylami- no)éthoxy/-7-oxo-7H-benzo/c/fluorène. ) Hydrochlorure de 3,9-diméthyl-5/2-(diéthylamino) éthoxy/-7-oxo-7H-benzo/c/fluorène. 11 ) Hydrochlorure de 3,9-diéthyl-5-/2-(diméthylamino) éthoxy/-7-oxo-7Hbenzo/c/fluorène. 12 ) Hydrochorure de 3,9-diéthyl-5-/2-(diéthylamino) éthoxy/-7-oxo-7H-benzo/c/fluorène. 13 ) Procédé pour la préparation d'éthers basiques du 7-oxo-7H-benzo/c/fluorène de formule générale I, et de leurs sels d'addition avec des acides organiques ou minéraux accepta- bles du point de vue pharmacologique, comme défini dans la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait réagir un composé de formule générale IV. (Formule IV, voir page 14) dans laquelle R a -a même signification que dans la formule 1 et M représente un atome de sodium, ou de potassium, avec un composé de formule générale V (formule V, voir page 14) dans laquelle R et x ont la même signification que dans la formule II, ou avec un composé de formule VI (formule VI, voir page 14) après quoi le produit formé est isolé sous forme de base, neutralisé à l'aide d'un acide organique ou minéral, acceptable du point de vue pharmacologique, pour obtenir le sel d'addition correspondant. ) Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que la réaction d'un composé de formule générale IV, avec les significations de la revendication 13 pour R et M, avec un composé de formule générale V ou de formule VI, utilisé en quantité de 1 à 3 équivalents molaires, est conduite dans un système à deux phases, constitué par une solution aqueuse d'hy- droxyde de sodium ou d'hydroxyde de potassium, et un solvant organique inerte, non miscible à l'eau, de préférence le toluène, à la température d'ébullition du mélange réactionnel.-