FR 2482860 A1 19811127 FR 8110379 A 19810519 L'invention concerne la composition et la préparation d'un agent antimicrobien qui peut être utilisé dans les prépara- tions dentaires, savons chirurgicaux et autres, diverses autres préparations topiques, médicaments injectables, et autres appli- 5 cations pharmaceutiques. En particulier, l'invention se réfère aux compositions contenant des sels d'acides minéraux d'alcaloïdes benzophénanthridine mélangés avec un sel métallique, de préférence un sel métallique d'un acide minéral, bien que les sels des aci- des mono- et dicarboxyliques entre autres, puissent également 10 être utilisés. L'une des sources importantes de sanguinarine est une herbe vivace originaire d'Amérique du Nord, appelée Sanguinaria canadensis TLinne (famille : papavéracées), couramment connue sous le nom de sanguinaire. La plante contient des alcaloïdes de benzophénanthriciine comprenant de la sanguinarine, chélérythrine et plusieurs autres. Les principaux alcaloïdes présents sont la sanguinarine et la chélérythrine. La huitième édition de l'Indice Ierck énu nère les alcaloïdes comme la sanguinarine, chélérythrine, protopine et homochélidonine. Les produits chimiques purs, sangui- 20 narine, chélérythrine et autres alcaloïdes de benzophénanthridine peuvent être isolés d'autres plantes outre la Sanguinariao Ils existent également, mame si c'est très rare, chez certaines mai- sons d'approvisionnement en produits chimiques. Des formes semi- purifiées des alcaloïdes existent dans le commerce, et on les 25 désigne généralement sous l'appellation de nitrate de sanguinarine et sulfate de sangUinarine. Ces "sels" sont les sels des alcaloïdes mélangés de la plante Sanguinaria : essentiellement la sanguina- rine, chélérythrine et protopine. Bien que l'on ne puisse trouver que peu de références dans la documentation concernant l'utilisation de certains des alcaloïdes de benzophénanthridine purs, les plantes contenant ces composés ont été utilisées à des fins médi- cales depuis déjà quelques temps, pour une large diversité d'ali- ments. L'utilisation principale de la sanguinarine jusqu'à ré- 35 cernment encore, était un expectorant stimulant des sirops pour la toux, contenant du "nitrate de sanguinarine". L'utilisation de la sanguinarine avec l'acide thiophosphorique dans divers néoplasmes humains et animaux, est présentée dans les Brevets Français NO 70.22029 et 2.152.972. 40 On a montré que la sanguinarine alcaloïde en solution 2482860 -2- a des propriétés anti-moisissures et anti-protozoaires. La san- guinarine est appliquée conmme émulsion localement aux infections dues aux moisissures. L'activité antibactérienne de la sanguina- rine varie, on l'a constaté, avec les radicaux attachés, et on a 5 montré que divers sels de sanguinarine ont une certaine activité. On a constaté que le chlorhydrate et les sels de sulfate ont une certaine activité contre certaines bactéries à diverses concen- trations. On rapporte que le nitrate de sanguinarine a une faible action bactériostatique sur divers types de bactéries. 10 La présente invention se réfère à la préparation et l'utilisation d'agents anti-microbiens formés en particulier à partir de ssls d'acide minéral d'alcaloïdes benzophénanthridine et d'un sel métallique, et sont utiles dans les préparations dentaires, eaux dentifrice, rinçages, savors chirurgicaux, sham- 15 poings, crèmes, lotions, poudres, produits injectables, etc... et autres formes de préparation pharmaceutique et désinfectants. les sels d'acide mineral des alcaloïdes benzophénanthridine peuvent être utilisés à diverses concentrations avec un sel métallique comme agent anti-microbien, utilisé pour traiter les infections 20 et maladies humaines et animales. Les sels métalliques particulièrement utiles dans les formulations de la présente invention, englobent des sels métal- liques d'acides halogènes. Parmi ces sels, on trouve le chlorure de zinc, le fluorure stanneux et le fluorure de sodium, bien que 25 l'on puisse utiliser n'importe quel sel métallique. Ceci englobe l'alcali, alcalinoterreux, et les fluorures de métaux denses, chlorures, bromures et iodures. Bien que l'on préfère les sels métalliques non toxiques d'acides halogènes pour utilisation dans les formulations selon 30 la présente invention, on a constaté que les sels non toxiques d'autres acides, comme les acides minéraux et acides mono- et dicarboxyliques, sont également efficaces. Des exemples d'acides dont les sels métalliques non toxiques peuvent être utilisés, en- globent l'acide sulfurique, l'acide nitrique et l'acide acétique. 35 Le glycérol est le véhicule préféré des formulations selon la présente invention, bien que d'autres véhicules qui puis- sent être utilisés englobent les solvants organiques comme le propylèneglycol, diméthylsulfoxyde (DeSO), les alcools inférieurs et similaires. 40 Par conséquent, l'objet et les avantages de la présente 2482860 -3 invention, sont de fournir un agent antimicrobien de sels d'acide minéral d'un alcalo5de benzophénanthridine et un sel métallique, utile pour l'administration locale, produits injectables et au- tres formes de préparations pharmaceutiques. 5 Un autre objet de l'invention est de fournir une prépa- ration de sel alcaloïde benzophénanthridine-sel métallique, pour le traitement des maladies périodontiques, prévention des caries dentaires et autres altérations de la cavité buccale similaires. Encore un autre objet de l'invention est de fournir une 10 préparation pharmaceutique d'un alcaloîde benzophénanthridine et d'un sel métallique, utile pour le traitement des infections de teigne tonsurante, acné, herpès à frigore et diverses infections parasitiques. Encore un autre objet de l'invention est de fournir une 15 préparation pharmaceutique d'un alcaloîde benzophénanthridine et d'un sel métallique, utile pour le traitement des diarrhées des animaux. Ces objets et avantages et d'autres objets et avantages de l'invention, peuvent être aisément constatés par la description 20 suivante et les exemples de préparation de l'invention. La préparation pharmaceutique de la présente invention peut 9tre incorporée dans les préparations dentaires, dentifrices, eaux dentifrice, savons chirurgicaux et autres, véhicules pour applications locales, véhicules pour injection parentérale ou 25 intramusculaire, et similaires. PREPARATION DE L'AGENT ANTIMICROBIEN Le produit chimique pur, soit sanguinarine,chélérythrine, soit 30 autres alcaloïdes benzophénanthridine, est dissous dans un mélange chloroforme/méthanol et acidifié avec un acide minéral comme l'acide chlorhydrique. Le mélange acide est évaporé jusqu'à siccité et le résidu est recristallisé à partir d'alcool éthylique/chloroforme, 50/50. 35 Pour l'utilisation, le sel d'acide minéral de l'alcaloïde benzo- phénanthridine est dissous soit dans l'eau désionisée, soit dans les alcools C1 - C6 , glycérine, propylène glycol, vaseline offi- cinale ou autres solvants organiques à 70 degrés centigrades, et 40 un sel métallique ou un acide formant sel, est ajouté aux solutions 2482860 - 4- ci-dessus. Les préparations contiennent généralement 0,1 pour cent en poids et jusqu'à 20 pour cent en poids,de sel d'alcaloïde benzophénanthridine, et au moins 1 pour cent et jusqu'à 60 pour 5 cent en poids, d'un sel métallique, le reste étant le solvant. La matière peut être diluée à la concentration souhaitée, suivant le type d'utilisation, avec les solvants énumérés ci-dessus. Le sel d'alcaloide benzophénanthridine est utilisé dans les préparations contenant 0,01 pour cent - 10 pour cent de benzo- 10 phénanthridine en poids. Le sel métallique est présent en quan- tités variarts d'environ 2 pour cent à environ 60 pour cent. Les concentrations plus faibles sont généralement efficaces pour le traitement de la plupart des maladies, comme indiqué ci-dessous : 15 Un exemple de préparation de base : Chlorure de sanguinarine 0,3 pour cent glycérine U.S.P. 64,7 pour cent chlorure de zinc AR 35,0 pour cent La préparation de base peut être modifiée en utilisant, 20 au lieu du chlorure de sanguinarine, 0,3 pour cent d'un autre sel d'acide minéral d'un alcaloïde benzophénanthridine, comme le chlo- rure de chélérythrine. Un second exemple de préparation est : 25 Chlorure de sanguinarine 1,0 pour cent glycérine U.S.P. 96,0 pour cent chlorure de zinc AR 3,0 pour cent Un troisième exemple d'une telle préparation est : 30 Chlorure de sanguinarine 1,0 pour cent glycérine U.S.P. 64,0 pour cent chlorure de zinc AR 35,0 pour cent Un quatrième exemple d'une telle préparation pour usage dentaire 35 est : Chlorure de sanguinarine 1,0 pour cent glycérine U.S.P. 95,6 pour cent chlorure de zinc AR 3,0 pour cent fluore stanneux 0,4 pour cent 40 2482860 - 5- Les formulations complémentaires pour une préparation de base sont les suivantes : chlorure de sanguinarine 1,0 pour cent fluorure stanneux 0,4 pour cent 5 glycérine U.S.P. 98,6 pour cent et Chlorure de sanguinarine 1,0 pour cent fluorure de sodium 3,0 pour cent glycérine U.S.P. 96,0 pour cent 10 De nombreux types de maladies ont été traités chez les humains et chez les animaux avec la composition de la présente invention, conmme suit : Exemple 1 - teigne tonsurante canine. 15 Une solution à 5 - 10 pour cent de la première préparation de base a été utilisée, appliquée directement à la zone infectée, une à trois applications, comme indiqué, à intervalles de 48 heures. Exemple 2 - Teigne tonsurante féline. 20 Une solution à 4 - 8 pour cent de la première préparation de base a été appliquée directement à la zone infectée, à intervalles de 48 heures, jusqu'à trois applications. Exemple 3 - Teigne tonsurante bovine. 25 L'agent étiologique de cette complication est habituellement la moisissure connue sous le nom de Trychophyton album. La durée de la maladie va de 4 à 12 mois. On utilise une dilution à 30 pour cent de la première préparation de base appliquée directement aux zones concernées, toutes les 30 48 heures. Trois applications se sont révélées adéquates pour le traitement de cet état, avec succès. Exemple 4 - Diarrhée néo-natale bovine. Douze animaux ayant présenté le diagnostic confirmé de diarrhée 35 néo-natale, ont été traités avec 0,75 grammes de la première prépa- ration de base, oralement, une fois par animal, et ont présenté une guérison clinique à une exception. Ceci constitue un excellent résultat, compte tenu de ce que la thérapie antibiotique traditionnelle actuellement utilisée, a un 40 pourcentage de succès bien inférieur. 2482860 - 6- Le chlorure de sanguinarine et le chlorure de chéléry- thrine ont de fortes propriétés artimicrobiennes. Le chlorure de zinc a des propriétés antimicrobiennes uniquement à des concen- trations élevées. On peut voir, d'après le tableau I, que le 5 chlorure de sanguinarine mélangé au chlorure de zinc, dans Un rapport 1/1, en règle générale, n'a pas présenté d'effet syner- gique ou m9me une action en plus contre la plupart des micro- organismes testés in vitro. De plus, on a constaté que dans ia plupart des cas, l'action antimicrobienne du mélange de chlorure 10 de sanguinarine et de chlorure de zinc, a dépendu essentiellement de la quantité de chlorure de sanguinarine présente dc3ns le mé- lange, et a été relativement indépendante de la quantité de chlo- rure de zinc. 15 TABLEAU I Micro-organieses 20 Bacillus subtilis Escherichia coli Klebsiella pnemmoniae Proteus vulgaris Staphylococcus aureus 25 Streitococcus faecalis Streptococcus mutans Candida Albicans Saccharomyces cere- visiae 30 Pseudomonas aerugi- nosa Dose mcyenne ins- -te en ' ...~...-. par millilitre u Il de milieux. ZnC!2 Chlor'ure e ún C: :orrc _ saruinarie .:?,-: r, e -e (1 /I ) 25.000 22 I.000 6.250 270 5 00 3.125 540 1.000 12.500 590 1.000 6.250 70 50O 25.000 ?93 500 1.563 161 65 ...... 150 -- 6.250 20 63 400 3.500 7.000 Un essai séparé a été réalisé pour déterLiner la coacen- tration inhibitoire du chlorure de sanguinarine seui. Ces conrce-n- 35 trations, pour les micro-organismes in vitro, sont les suivantes 100 microgrammes par millilitre pour Escherichia coli 100 " " " Candida Albicans 50 " " " Streptococcus mutans 10 " " " Staphylococcus aureus 40 2482860- - 7 - On a, de plus, constaté qu'une concentration de chlorure de sanguinarine de 25 microgrammes/millilitre, a provoqué une réduction de 100 pour cent de la plaque-dentaire, en inactivant les micro-organismes formant la plaque, récemment prélevés de la 5 plaque dentaire humaine. Le chlorure de sanguinarine s'ast com- paré favorablement in vitro à la chlorhéxidine (HibitaneR), ma- tière utilisée comme norme pour l'évaluation des micro-organismes formant la plaque dentaire humaine. Cependant, dans des conditions d'essais in vivo, on a 10 constaté que le chlorure de sanguinarine est inefficace contre les micro-organismes de formation de la plaque. Lorsque l'on a appliqué le chlorure de sanguinarine à la zone affectée des chiens et des humains, un traitement répété avec le chlorure de sanguinarine seul, n'a pas réduit la plaque den- 15 taire ni diminué les symptômes de gingivite ou de maladie pério- dontique. Un traitement continu au chlorure de sanguinarine n'a pas empêché l'accumulation de plaque dentaire sur les dents, ni l'apparition de maladie périodontique. Cependant, on a constaté qu'une combinaison de chlorure de sanguinarine et de chlorure de 20 zinc dans la glycérine, est efficace in vivo, pour la réduction de la plaque dentaire et l'apparition de maladie périodontique, et s'est montrée définitivement prometteuse pour le traitement et la prévention de la maladie périodontique humaine. Les résultats des essais sur les cobayes avec provocation 25 d'infection de teigne tonsurante, les chiens avec maladie pério- dontique et les humains avec maladie périodontique, ont montré que les préparations de glycérine,du chlorure de sanguinarine plus du chlorure de zinc, sont bien supérieures pour la maîtrise des infec- tions in vivo, soit au chlorure de zinc seul, soit au chlorure de 30 sanguinarine seul. Lorsque l'on a remplacé le chlorure de zinc par un sel de fluorure dans les préparations présentes, l'activité de la pré- paration contre les micro-organismes que l'on croyait associée à la causalité des caries dentaires et maladie périodontique (strep- 35 tococcus mutans), ainsi qu'à d'autres micro-organismes, est restée identique. Les données soutenant ce phénomène sont présentées dans les tableaux suivants : TABLEAU II 40 2482860 - 8TABLEAU II 5 MiICRO-ORGANISME AEROBIE TESTE. Concentrations inhibitoires minimales (MIG) en ug/ml 1,0% de chlorure de 1,0% de chlorure de sanguinarine sanguinarine 3,0% de chlorure de 0,4% de fluorure de zinc dans glycérol stanneux dans glycérol 10 Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Proteus vulgaris Streptococcus mutans Streptococcus faecalis 15 Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Saccharomyces cerevisiae Candida albicans TABLEAU III MICR0-0RGANISME 25 ANAEROBIES TESTES Concentrations (MIC) en ug/ml 1,0% de chlorure de sanguinarine 3,0% de chlorure de zinc dans glycérol inhibitoires minimales 1,0% de chlorure de sanguinarine 0,4% de fluorure stanneux dans glycérol Bacteroïdes melanino- 30 genicus Eikenella corrodens Actinomyces viscosus Actinobacillus actinomycetemcomitans 35 Capnocytophaga gingivalis CaPnQcytophaMa sputigena TABLEAU IV 158 158 79 dement, n'exigeant qu'une à trois applications pour éliminer rapi- dement les infections. De plus, ces préparations n'ont pas semblé avoir les effets indésirables du chlorure de zinc à la concentra- 25 tion nécessaire pour obtenir l'efficacité anti-microbienne. Exemple 5 - Maladie périodontique humaine. On a signalé que la maladie périodontique (gencives) affecte 2 américains d'âge moyen sur 3. La destruction du tissu et des 30 structures qui retiennent fermement les dents dans leur cavité explique 75 pour cent des pertes de dents avant l'age de 40 ans. La plupart des cas de maladie périodontique résultent de négli- gence et peuvent en grande partie, être empêchés par un programme régulier d'hygiène approfondie. Dans le type le plus courant de 35 maladie périodontique, les trois principaux coupables, sont les bactéries, le calcul (tartre) et les fragments de produits ali- mentaires. L'invention a été utilisée par des dentistes pour le traitement clinique de plus de quarante cas de divers types de 40 maladie périodontique humaine. 2482860 - 12 - Dans certains cas, même un traitement simple a apporté des améliorations majeures des conditions des gencives malades. La guérison clinique résultant du traitement a été tout à fait apparente et a comporté : élimination de l'inflammation, ton 5 normal de tissu rétabli, les cavités ont été éliminées, les in- fections ont disparu, la mobilité a été réduite, et le ton gin- gival a été nettement amélioré. Les matières et les méthodes utilisées ont été les sui- vantes : 10 1. Pâte non diluée pour bourrage : Dans les cas d'implication de tissu largement répandue, la prépa- ration non diluée a été utilisée en quantité suffisante (q.s) pour "couvrir" ou "bourrer" les zones infectées ou enflanmmées des tissus gingivaux. Le processus clinique a consisté en deux traitements 15 distants d'environ 2 semaines, avec l'application d'au moins une épaisseur de 1,0 mm de la préparation de base à la membrane pério- dontique malade. Dans le cas o l'on a utilisé de la matière non diluée, elle a été appliquée soit localement avec une spatule, soit 0,25 ml ont été comprimés par une aiguille de calibre 22 fi- 20 xée à une seringue sous pression de 1,0 ml. La matière a été introduite dans les gencives à l'accessoire (q.s) pour remplir la cavité et la médication a été laissée en place pendant 10-15 mi- nutes. 2. Technique de la-ficelle : ficelle de coton saturée de prépara- 25 tion pharmaceutique. Dans le cas o des dents individuelles ont du être traitées, une - ficelle de coton doux ordinaire, stérilisée avant usage, ou "gingipak", a été utilisée (gingipak contient une solution 8-100 de chlorhydrate d'adrénaline racémique et 1 pour cent d'alcool 30 benzylique comme antiseptique. Les ficelles de coton de 1 - 1,5 cm de long, ont été saturées de matière non diluée en utilisant une spatule et des morceaux pré- découpés de ficelle qui ont ensuite été imprégnés sur un tampon de mélange de dentiste. Ces ficelles, une fois bien imprégnées de 35 la préparation, pèsent environ 35 mg/cm. Une à trois ficelles ont été utilisées par dent, suivant la cir- conférence de la dent. On a parfois utilisé jusqu'à trois ficelles pour un total d'environ 10,5 mg de la préparation. Les ficelles imprégnées ont été laissées en place 10-15 minutes. 40 De la soie grège dentaire ou substrat similaire, comme de la fi- 248Z860 - 13 - celle en fibres creuses synthétiques, peuvent être imprégnés de la préparation de base, pour utilisation lors du traitement des d(lents et gencives. 3. Dilution de la pâte pour irrigation. 5 En plus du bourrage de la membrane périodontique ou de l'emploi de la technique de la "ficelle" sur les dents individuelles, l'irrigation a souvent été utilisée couramment, comme partie du régime. Généralement, la membrane périodontique malade a d'abord été bourrée de préparation non diluée ou les dents ont été trai- 10 tées individuellement par la technique de la ficelle décrite ci- dessus. Ces méthodes de traitement ont été suivies par l'irrigation avec une suspension de la préparation, soit dans l'eau soit dans la glycérine. Les suspensions ont été préparées pour contenir une 15 partie de matière à concentration totale/1partie de glycérine ou 1 partie 6'eau, suivant si l'on souhaite une suspension à la gly- cérine ou à l'eau. La suspension finale a été un mélange V/V d'une partie de matière pour 1 partie de diluant. L'irrigation a été réalisée en remplissant une seringue de 7,0 ml pour contenir 20 420 mg de suspension. Pour le traitement des dents individuelles, un total de 1,0 ml de matière en suspension a été utilisé pour irriguer les zones buccale, linguale et proches de la dent. Lors- qu'indiqué, toutes les dents ont été irriguées avec 840 mg de suspension contenue dans deux seringues. 25 Exemple 6 Caries dentaires. Des préparations contenant environ 0,3% de chlorure de sanguinarine et environ 35% de chlorure de zinc ont été utilisées sur sept pa- tients ayant des caries dentaires. La carie a été enlevée des dents 30 avec une gouge en cuillère laissant une couche de tissu carié d'environ 1 mnm à 1,5 mm de profondeur. La préparation antimicrobienne a été placée sur le reste de la carie, environ 56,1 mg de prépa- ration, avec un couteau Hollenbeck, et a été appliquée uniformément sur la zone cariée, avec un morceau de coton tenu dans des pinces 35 à coton. De la matière reconstituante intermédiaire (IRM) a été utilisée comme reconstituant temporaire pour étancher la matière dans la préparation de la cavité. Après plusieurs semaines (6 semaines), des éprouvettes pour les études bactériologiques et histologiques, y compris microscopie 40 électronique, ont été prélevées. 2482860 - 14 - Les conclusions des chercheurs ont été que la préparation pour- rait être considérée conmme un agent cariostatique. De plus, la matière peut activer la formation de dentine sclérotique, formant ainsi un plancher protecteur dur, entre la lésion cariée et la 5 pulpe. La composition chlorure de benzophénanthridine chlorure de zinc - glycérine, peut être utilisée en liaison avec un composé fournissant du fluorure. Ces composés sont caractérisés par l'aptitude à dégager des ions fluorure dans l'eau, et par l'ab- 10 sence substantielle de réaction avec d'autres composés présents dans la préparation orale. Parmi ces matières, il y a les sels de fluorure inorganique comme les sels métalliques alcalins, métal- liques alcalino-terreux, et sels de métaux lourds. Les fluorures d'étain et métaux alcalins, comme les fluorures de sodium et 15 stanneux, et mélanges de ceux-ci, sont préférés. La quantité de composé fournissant du fluorure dépend dans une certaine mesure, du type de composés, de sa solubilité, et du type de préparation orale, mais ce doit être une quantité non toxique-. On peut utiliser toute quantité minimale adéquate de 20 ce composé, mais il est préférable d'employer un composé suffisant pour dégager de 0,005% à 1%, et de préférence environ 0,1% en poids d'ion fluorure. Typiquement, dans-les cas de fluorure de métal alcalin et fluorure stanneux, ce composé est présent dans une quantité allant jusqu'à 3% en poids, en se basant sur le poids de 25 la préparation, et de préférence de l'ordre de 0,05% à 1%. Exemple 7 - Traitement des tumeurs de la peau chez les animaux. Sarcolde équin (une tumeur du tissu cellulaire localement maligne constatée sur la peau des chevaux semblable aux fibro-sarcoiies . 30 qui se produisent chez d'autres animaux et chez l'home) : probF- blement d'origine virale,transmissible entre chevaux. Ces tumeurs sont envahissantes et résultent couramment dans l'affaiblissenent suffisant du cheval pour réaliser l'euthanasie. L'extraction chirurgique est le moyen de thérapieaccepté. La 35 récidive de la tu:eur est la règle plutôt que l'exception. Soixante tumeurs ont été traitées avec la préparation en employant la méthode de traitement suivante : soit étaler la première préparation de base sur la tumeur, avec un applicateur en bois, bandage, et observer à 24 heures d'inter- 40 valles, soit placer environ 3 mmi d'épaisseur de préparation sur 2482860 - 15 - un tampon 2elfa (R) couvrant une zone légèrement supérieure à la surface de base de la twumeur, en fixant le tampon Telfa (R) sur la tumeur avec un bandage. Observer à 24 heures d'intervalles. Répéter l'application si besoin est,après 48 heures. 5 3 ou 4 applications ou plus, peuvent être nécessaires dans les cas de longue durée et si la tumeur est profonde. La récidive de la tumeur s'est produite, seulement dans 25 pour cent des cas. Dans tous les cas, les tumeurs ont été enlevées par l'action excisante de la préparation, et en aucun cas ainsi traité, une 10 infection après traitement (infection secondaire) ne s'est pro- duite. Ceci a été vrai malgré le fait qu'aucune couverture n'a été maintenue sur les lésions après l'extraction de la tumeur, et l'on n'a pas non plus, appliqué une forme quelconque d'autre médication antibactérienne. 15 Après la 2ème ou 3ème application, la tumeur s'est détachée, une croate tris ferme s'est formée sur la base de la tumeur, et la cicatrisation s'est déroulée sous la croûte. La cicatrisation de la blessure a été lente, mais sans incidents. Les croates res- tantes ont été très petites. 20 Exemple 8 - fibro-sarcomes dermiques équins. 75 cas de fibro-sarcomes dermiques équins ont été traités localement suivant description à l'exemple 7. Seulement 20 pour cent des tumeurs ont récidivé dans la période d'observation d'un an. Alors 25 que le pourcentage de guérison est quelque peu inférieur à 80%, ceci supporte favorablement la comparaison avec le pourcentage de guérison approximatif de 55% de cette tumeur, après extraction chirurgique et radiothérapie. 30 Exemple 9 - cancer cellulaire squameux bovin Sept bovins de Hereford présentant la maladie ont été traités avec environ 15 g de la première préparation de base appliquée directement sur les lésions. L'amélioration de l'état clinique s'en est suivie dans tout les cas. 35 Exemple 10 traitement du cancer cellulaire squameux et cancer baso-cellulaire chez les animaux des espèces non bovines. Espèce canine cancer cellulaire squameux histologiquement con- firmé des deux yeux ; cinq applications avec la première prépa- 40 ration de base, en cinq jours : dans un délai de deux semaines, --~ ~2482860 - 16 - les tumeurs ont réduit en grosseur et se détachaient. Espèce équine - le cancer baso-cellulaire histologiquernent con- firmé, a été traité par six applications locales directes de la 5 préparation localement, une fois par jour. En trois semaines, la plupart des tumeurs visibles avaient disparu. Espèce équine - cancer de follicule pileux histologiquement con- firmié sur le poitrail ; tumeur enlevée par chirurgie ; dix appli- 10 cations locales de la préparation dans la blessure ouverte. En trois mois, la lésion a cicatrisé et aucune récidive de la tumeur n'a été notée. Exemple 11 - traitements des tumeurs de la peau chez l'homme. 15 Epithélioma baso-cellulaire: Une équipe de dermatologues qualifiés et de chirurgiens a traité soixante patients avec épithélioma baso-cellulaire diagnostiqué et histologiquement confirmé (cancer baso-cellulaire). La première préparation de base a été appliquée directement loca- 20 lement à la zone concernée et a été maintenue en place par un bandage. Les lésions ont été observées à intervalles de 48 heures et la préparation a été réappliquée si ceci était indiqué. Dans la plupart des cas, 2-3 applications ont été adéquates. La guérison clinique a suivi le traitement dans tous les cas et au- 25 cane récidive des tumeurs n'a été notée sur une période de 4 ans. Exemple 12 - Cancer cellulaire squameux. Seize cas de cancer cellulaire squameux histologiquement confirmé ont été traités par la même méthode que celle utilisée à l'exemple 30 11. Dans tous les cas traités, la guérison clinique a suivi le traitement et uniquement dans un cas, il y a eu récidive de la tumeur dans un délai de 4 ans. Exemple 13 - Activité anti-microbienne. 35 Afin d'illustrer l'efficacité anti-microbienne de la composition conformément à la présente invention, une série d'essais in vitro et in vivo a été réalisée. Ces essais ont 4té conçus pour démontrer la plus basse concentration de chlorure de sanguinarine qui inac- tivera les micro-organismes. 40 2482860 - 17 - Les constatations ont été les suivantes : En moyenne, une solution de 22 ug,/ml de chlorure de sanguinarine inactivera les cultures des bactéries Bacillus subtilis, une solution de 270 ug/ml, les cultures d'Escherichia coli, une solu- 5 tion de 540 ug/ml, les cultures de Klebsiella pneumoniae, une solution de 590 ug/ml, les cultures de Proteus vulgaris, une solution de 70 ug/ml, les cultures de Staphylococcus aureus, une solution de 393 ug/ml, les cultures de Streptococcus faecalis, et une solution de 161 ug/ml, les cultures de Streptococcus mutans 10 (voir tableau I). De plus, en moyenne, une solution de 150 ug/ml et 20 ug/ml inac- tive également les cultures de ferments Candida albicans et Saccharomyces cerevisiae. Une concentration considérablement infé- rieure à la concentration d'inactivation de la préparation pharma- 15 ceutique est utile comrie inhibiteur de développement des mêmes organismes. En outre, en moyenne, une concentration de chlorure de sanguinarine présentée au tableau VI a été suffisante par centimètre cube de milieu, pour empêcher le développement de certains fongi connus, 20 comme appartenant au groupe des organismes produisant des teignes tonsurantes. TABLÈEAU VI Micro-organismes Dose moyenne inhibitrice de chlo- 25 rure de sanguinarine en ug/ml de -_____________ .milieu Microsporumn canis 867 IMicrosporum nanum 650 Trichophyton mentagrophytes 900 30 Trichophyton schoenleini 467 Trichophyton terrestre 467 Trichophyton vanbreuseghemi 750 Les préparations de base, ont été en de nombreuses occa- 35 sions, également testées sur une diversité d'animaux et également d'humains infectés de teigne tonsurante et fongus de pied d'athlète. On a constaté que les préparations conformément à la présente in- vention, hâteront considérablement la guérison de l'infection de teigne tonsurante et faciliteront la guérison rapide des lésions. 40 Les résultats des essais cliniques effectués par de e 2482860 - 18 - nombreux dentistes et organismes dentaires confirment que i'appli- cation régulière de la composition de l'invention aux surfaces des dents réduira l'apparition de caries dentaires et l'utilisation sur les gencives, soit par bourrage, soit par irrigations, empê- 5 chera ou guérira rapidement la maladie périodontique ou les in- fections microbiennes des gencives et des tissus environnants. L'application des compositions de la présente invention aux herpès a frigore hâte énormérent le processus de guérison. Les herpès a frigore sèchent et cicatrisent en quelques jours. 10 Lorsque les animaux souffrant de diarrhées sont traités de façon interne avec des préparations conformément à la présente invention, le taux de guérison dépasse celui des antibioỉques couramment utilisés pour le traitement des diarrhées. --2482860 - 19 - R E V E N D I C A T I 0 N S -1- Procédé pour la préparation d'un agent anti-microbien caractérisé en ce qu'il comprend les phases suivantes : 5 a) la dissolution d'un alcaloïde benzophénanthridine dans un mélange de chloroforme et de méthanol ; b) l'acidification de la solution avec un acide minéral pour transformer l'alcaloïde en un sel d'alcaloïde ; c) l'évaporation de la solution acide jusqu'à la siccité 10 d) la recristallisation du résidu à partir d'un mélange de 50 pour cent d'éthanol et 50 pour cent de chloroforme ; e) la dissolution des cristaux dans un solvant pour faire une solution d'au moins 0,3 pour cent en poids de cristaux ; f) le mélange de la solution avec au moins 35 pour cent en poids 15 d'un sel métallique d'un acide. -2- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le solvant est choisi à partir du groupe comprenant de l'eau, glycérine, propylène glycol, vaseline officinale, diméthylsulfoxyde, 20 et alcools C1 - 6 -3- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'alcaloïde de benzophénanthridine est choisi à partir du grou- pe comprenant la chélérythrine, la sanguinarine, la protopine et 25 l'homochélidonène. -4- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'alcaloïde est la chélérythrine. 30 -5- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'alcaloïde est la sanguinarine. -6- Une composition antimicrobienne caractérisée en ce qu'elle renferme un sel d'acide minéral d'un alcaloide de benzo- 35 phénanthridine et un sel métallique d'un acide dans un solvant choisi à partir du groupe comprenant l'eau, la glycérine,.le propy- lène glycol, diri,éthylsulfoxyd(le, et alcools C1 - C6 -7- La composition selon la revendication 6, caractérisée 40 en ce que l'alcaloïde de benzophénanthridine es.t choisi à partir 2482860 - 20 - du groupe comprenant la chélérythrine, la sanguinarine, la pro- topine et l'honiochélidonène. -8- La composition selon la revendication 7, caractérisée 5 en ce que l'alcaloide est la sarnguinarine. -9- La composition selon la revendication 6, caractéri- sée en ce que le solvant est la glycérine. 10 -10- La composition selon la revendication 9, caractéri- sée en ce que le sel d'acide minéral est le chlorure de sanguina- rine. -11- La composition selon la revendication 10, caracté- 15 risée en ce que le sel de métal est un sel de fluorure choisi à partir du groupe comprenant le fluorure stanneux et le fluorure de sodium. -12- La composition selon la revendication 11, caracté- 20 risée er. ce que le sel du fluorure est le fluorure stanneux. -13- La composition selon la revendication 9, caracté- risée en ce que le sel métallique est le chlorure de zinc. 25 -14- La composition selon la revendication 6, caracté- risée en ce que l'alcalo!de est la chélérythrine. -15- La composition selon la revendication 1, caracté- risée en ce que le sel d'acide minéral est le chlorure de chéléry- 30 thrine. -16- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle À ~ 8~~~~dfinie contient une quantité de la composiỉon/selon la revendication 6 utile pour le traitement des infections chez les mammifères. 35 -17- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient Lune quantité de la composition définie selon la revendi- cation 15 utile pour le traitement des infections chez les mrammi- fères. 40 2482860 - 21 - -18- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une quantité de la composition définie selon la revendication 6 utile pour le traitement de la teigfe tonsu- rante chez les mammifères. 5 -19- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une quantité de la composition définie selon la revendication 13 utile pour le traitement de la teigne tonsu- rante chez les mammifères. 10 -20- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle confent une quantité de la composition définie selon la revendication 6 utile pour le traitement de la diarrhée chez les mammifères. 15 -21- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle conient une quantité de la composition définie selon la revenicestion 13 utile pour le traiterient de la diarrhée chez Jes mammifères. 20 -22- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une quantité de la composition définie selon la revendication 6 utile pour le traitement de maladie périodon- tique. 25 -23- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une quantité de la composition définie selon la revendication 10 utile pour le traitement de maladie périodon- tique. 30 -24- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une quantité de la composition définie selon la revendication 6 utile pour le traitement des caries dentaires. 35 -25- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une quantité de la composition définie selon la revendication 10 utile pour le traitement des caries dentaires. -26- Composition pharmaceutique caractérisée en ce 40 qu'elle contient une quantité de la composition définie selon * 22 - ~2482860 - 22 - la revendication 6 utile pour le traitem:ent des tumeurs de la peau chiez les mammifères. -27- Composition pharmaceutique caractérisée en ce 5 qu'elle contient une quantité de la composition définie selon la revendication 13 utile pour le traitement des tLmbeurs de la peau chez les rmammifères. -28- Composition pharmaceutique caractérisée en ce 10 qu'elle contient une quantité de la composition définie selon la revendication 6 Lutile pour le traitement du cancer cellulaire squ;nneuxchez les mammifères. -29- Composition pharmaceutique caractérisée en ce 15 qu'elle contient une quantité de la composition définie selon la revendication 13 utile pour le traitement au cancer cellulaire squannex chez les mammifères. -30- Composition pharmaceutique caractérisée en ce 20 qu'elle contient une quantité de la composition définie selon- la revendication 6 utile pour le traitement des caries dentaires -31- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une quantité de la composition définie selon 25 la revendication 11 utile pour le traitement des caries dentaires. -32- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une quantité de la composition définie selon la revendication 6 utile pour le traitement de la gingivite et 30 la périodontite. -33- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une quantité de la composition définie selon la revendication 11 utile pour le traitement de la gingivite et 35 de la périodontite. -34- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une quantité de la composition définie selon la revendication 6 utile pour le traitement de la gingivite. 40 2482860 - 23 - - -35- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une quantité de la composition définie selon la revendication 10 utile pour le traitement de la gingiviteo -36- La composition selon la revendication 13, caractérisée en 5 ce qu'elle comprend 0,1 - 3% d'un sel de fluorure choisi à partir du groupe comprenant le fluorure stanneux et le fluorure de sodium. -37- Une composition anti-microbienne caractérisée en ce qu'elle comprend un sel d'acide minéral d'un alcaloïde de benzophénanthridine et un sel métallique non toxique d'un acide dans un véhicule solvant adéquat. 10 -38- La composition anti-microbienne selon la revendication 37 caractérisée en ce que le sel métallique non toxique est choisi à partir du groupe comprenant les fluorures, chlorures, bromures, iodures, sulfates, nitrates, et acétates. -39- La composition antimicrobienne selon la revendication 37, 15 caractérisée en ce que l'alcaloïde de benzophénanthridine est choisi à partir du groupe comprenant la chélérythrine, la sanguinarine, la protopine et 1' homchél idon ne. homoch61 idonene.