FR 2479234 A1 19811002 FR 8025574 A 19801202 La présente invention se rapporte au monohydrazide de l'acide 3-(4- hydroxyphényl)pentanedioique, à des dérivés et composés analogues, à leur préparation et à leurs utilisations. Les composés selon l'invention répondent à la for- mule: R,, CH -C-OR 2 Ir R HO / ' - (CH2)n-CH / 4 I CH2-C-NH-N_ 0 dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1C3; R4 et R5 représentent tous deux des atomes d'hydrogène ou forment ensemble un radical de stéroide, et n est égal à O, 1, 2, 3 ou 4; l'invention comprend également les sels des composés de formule I dans laquelle R4 et R5 représentent tous deux des atomes d'hydrogène, formes par addition avec un acide. Dans toute la pré- sente demande, les symboles R> R4, R5 et n ont les significations qu'on vient d'indiquer. Lorsque R4 et R5 représentent tous deux des atomes d'hydrogène, les composés selon l'invention répondent a la formule O H -C-OH HO (CH2 - C Ia CH2 C-NH-NH2 0 dans laquelle R et n ont les significations indiquées ci-dessus, à l'état libre ou à l'état de sels formés par addition avec un acide. Ces composés nouveaux répondant à la formule Ia sont des réactifs utiles permettant de faire des dérivés de composés organiques qui permettent la radio-iodation de ces composés et leur utilisation comme marqueurs dans des radio-immunotests. Les composés organiques mis à l'état de dérivés à l'aide d'un réactif de formule Ia peuvent également être utilisés comme haptènes. Parmi les composés répondant à la formule Ia, on préfère le composé pour lequel R représente un atome d'hydrogène et n est égal à 0, et ses sels formés par addition avec un acide. Ces réactifs répondant à la formule Ia contiennent un groupe amino primaire et, par conséquent, réagissent facilement (en présence d'une base organique ou minérale) avec des composés organiques contenant un substituant facile à déplacer. En particuliers on peut traiter par un réactif de formule Ia des composés portant un groupe carbonyle (y compris les acides carboxyliques, les esters, les amides et les halogénures d'acides; les aldéhydes, les cétones, les hémicétals et les hémiacétals). Cependant, une classe de composés particulièrement appréciés parmi ceux qui peuvent être transformés en dérivés à l'aide d'un réactif de formule Ia consiste en les sté- roïdes contenant un groupe oxo. Parmi ces stéroîdes, on citera l'aldostérone, le 6-céto-oestradiol, le 6-céto-oestriol, la pro- gestérone, la testostérone et le cortisol. Lorsque R4 et R5 pris ensemble forment un radical de stéroïde, les composés selon l'invention répondent à la formule: O O St=N-NH-C -CH2-CH-CH2-C-OH (CH2)n Ib R on dans laquelle R et n ont les significations indiquées ci-dessus et St représente un radical de stérotde. Ces dérivés de stéroIdes cons- tituent une classe préférée de dérivés selon l'invention. Le dosage de substances variées au moyen de techniques de radioimmunotests a pris une importance considérable au cours des années récentes. Yalow et Berson, In vitro Procedures With Radio- isotopes In Medicine, International Atomic Energy Agency, Vienne (1970), pages 455 et suivantes, expliquent le principe du radio- immunotest en les termes suivants: * "Un antigène non marqué dans des échantillons incon- nus entre en concurrence avec un antigène marqué ("traceur") pour la combinaison avec l'anticorps et, par suite, amoindrit la fixation de l'antigène marqué. Le degré d'inhibition par concurrence observé dans les échantillons inconnus est comparé avec celui obtenu dans des solutions étalons connues pour la détermination de la concentration de l'antigène dans les substances inconnues". Les radio-immunotests exigent un anticorps spécifique, un antigène marqué par un radio-isotope (en abrégé ci-après "radio- marqué"), un échantillon pur de l'antigène soumis au dosage pour servir d'étalon, et des moyens permettant de séparer l'antigène libre de l'antigène fixé sur l'anticorps. Les radio-immunotests suivent le principe fondamental de l'analyse par saturation, c'est-à-dire la concurrence entre un antigène marqué et un antigène non marqué pour un nombre déterminé de sites de fixation de l'anticorps. Lorsqu'on met en contact l'antigène radio-marqué, l'antigène non marqué et l'anticorps, la quantité d'antigène radio- marqué qui se fixe sur l'anticorps et la quantité d'antigène radio- marqué qui reste non combiné (libre) sont en relation directe avec la quantité d'antigène non marqué présente avec une quantité déter- minée d'anticorps. Ainsi, donc, en utilisant une quantité constante d2anticorps et d'antigène radio-marqué, et des concentrations connues d'antigène non marqué, on peut établir une courbe d'étalonnage donnant la concentration de l'antigène en fonction de la quantité d'antigène radio-marqué fixée ou en fonction de la quantité d'antigène radio- marqué non fixée, ou en fonction d'un rapport des deux mesures. La concentration d'un antigène dans un échantillon inconnu peut être lue sur la courbe d'étalonnage par détermination de la quantité d'antigène radiomarqué combinée ou libre (ou du rapport des deux mesures) après mélange de l'échantillon inconnu avec la quantité d'antigène radio-marqué et d'anticorps utilisée pour établissement de la courbe. Dans toutes les techniques de radio-immunotests, il est nécessaire de disposer de moyens de séparation de la matière marquée combinée d'avec la matière marquée libre. On a déjà mis au point et exploité de nombreuses techniques variées; on citera par exemple l'électrophorèse, la chromatographie, l'échange d'ions, l'adsorption sur du charbon revêtu de dextrane, du talc ou de la cellulose; et un certain nombre de techniques sur anticorps en phase solide. 24?9234 L'exprcssion "antigène" telle qu'elle est utilisée dans le domaine des radio-immunotests peut s'appliquer a des substances d'immunogénicité (aptitude à produire des anticorps) limitée. Dans l'état o la substance soumise au dosage présente une immunogénicité limitée, on peut la coupler avec un support immunogène, habituellement une protéine, pour accrottre son immunogénicité. Une substance par elle-même non immunogène, mais qui acquiert l'immunogénicité lors- qu'elle est fixée sur un support, est appelée "haptène". On a exploité les techniques de radio-immunotests pour déterminer la concentration de divers stéroides endogènes et exogènes dans les liquides physiologiques. Lors de la mise au point de radio-immunotests pour des stéroides variés, la préparation d'un antigène radio-marqué présente une importance fondamentale. Les radio-isotopes permettant un marquage sont le tritium, le carbone-14, l'iode-125, l'iode-I31 et d'autres encore. Toutefois, comme le tritium et le carbon,-14 doivent être comptés par scintillation de liquide (une opération longue et coQteuse), on préfère l'iode-125 et l'iode-131. Pour des raisons bien connues (par exemplela période, les risques de radiation, l'efficacité du compte et d'autres facteurs), l'iode-125 est devenu le radio-isotope de choix pour l'utilisation dans les radio-immunotests sur stéroides. La structure chimique des stéroides est telle qu'en général il n'est pas possible de les radio-ioder directement. Par suite, il faut utiliser comme précurseur de l'antigène radio-marqué un dérivé du stéroide en question,lui-même facile à ioder. Dans le choix ou la mise au point d'un tel dérivé, le facteur principal réside dans l'affinité du dérivé pour les anticorps du stéroïde soumis au dosage; naturellement, l'affinité du dérivé pour les anticorps doit être aussi proche que possible de l'affinité du stéroîde lui-même pour les anticorps. Dans la demande de brevet des Etats-Unis d'Amérique n 901 952, en date du ler mai 1978, au nom de la demanderesse, on décrit des dérivés de stéroYdes répondant à la formule: 0 0 St-0-C-CH,-CH-CH2-C-OH (CH2)n R t OH dans laquelle St représente un radical de stéroîde déshydroxylé de (i) un stéroïde hydroxylé prévu pour un radio-immunotest ou (ii) un dérivé hydroxylé d'un stéroïde prévu pour radio-immunotest, ce dérive présente une forte affinité pour les anticorps du stéroîde soumis au radioimmunotest; R représente l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C3 et n est égal à 0, 1, 2, 3 ou 4. On indique que ces stéroides peuvent être radio-marqués. La même demande décrit également des anhydrides répondant à la formule R CH2- 4 R1-O - (CH2) n-CH O CH2-- C.> dans laquelle R et n ont les significations indiquées ci-dessus, et R1 représente un groupe alcanoyle en C2- 6. Dans la demande de brevet des Etats-Unis d'Amérique n 908 924, en date du 22 mai 1978, au nom de la demanderesse% on décrit des dérivés de stéroldes répondant à la formule O 0 J! Il 6-(HO-C-CH2 -CH-CH2-C-O-CH2 -' St' (CH2)n R OH dans laquelle St' représente un dérivé déshydrogdné en position 6 d'un 3-oxo-4,5-déshydro-stérolde prévu pour radio-immunotest, ce stéroide étant saturé en position 1,2, R représente l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C3 et n est égal à 0,.1, 2, 3 ou 4. On indique que ces stéroides peuvent être radio-marqués. Dans la demande de brevet des Etats-Unis d'Amérique n 910 568,en date du 30 mai 1978, au nom de la demanderesse, on décrit des dérivés de la vitamine B12 répondant à la formule O O ilI vitamine B 2-5'-O-C-CH -CH-CH2-C-OH 12 2 (CH2) R OH dans laquelle R représente un groupe alkyle en C1-C3 et n est égal à 0, 1, 2, 3 ou 4. On indique que ces dérivés de la vitamine B12 peuvent être radio-marqués. La réaction d'un anhydride glutarique répondant à la formule R Co0 R-O (CH2)n - CH 0 II CH2-C.. avec l'hydrazine donne le produit correspondant répondant à la for- mule Ia. La réaction peut être effectuée dans un solvant organique, de préférence un solvant aprotonique comme le tétrahydrofuranne, et peut également 8tre effectuée à température ambiante. Le produit de réaction est fortement hygroscopique et peut être isolé à l'état de sel d'acide organique ou minéral de formule Ia selon des techniques classiques. Ainsi, par exemple, le produit de réaction peut être jeté sur une colonne de résine échangeuse d'ions, la colonne étant ensuite éluêe à l'aide d'un acide, ce qui donne le sel correspondant d'un composé de formule Ia. Les anhydrides glutariques répondant à la formule II sont décrits dans la demande de brevet des Etats-Unis d'Amérique n 901 952 en date du ler mai 1978, et dans la demande de brevet de la République Fédérale d'Allemagne publiée sous n DOS 2 834 516. Dans ces demandes de brevets, on indique qu'on peut préparer un anhydride glutarique de formule II en faisant d'abord réagir un aldéhyde aliphatique portant un groupe méthoxyphényle en position 4 et répondant à la formule R H 0 O CH3 \ CH2) CH III avec au moins deux équivalents molaires d'acide cyano-acétique en présence d'une base (l'hydroxyde de sodium, par exemple), la réaction donnant, après hydrolyse acide, un composé qui répond à la formule: R O -- (el2)-CH IC-0V 3 / '2C1 CH -(cil2) CH IV H3( n,r C'I -C-OH 2 I o Un autre moyen de préparer le composé de formule IV, dans laquelle n est égal à O et R représente l'hydrogène, c'est-à- dire l'acide 3-(4-méthoxyphényl)-glutarique, est décrit par Smith et col., dans J.A.C.S., 72, 1877 (1950). Selon ce procédé, on condense l'aldéhyde anisique avec l'acétylacétate d'éthyle en présence de pipéridine; la réaction donne le bis-acétylacétate d'éthylanisal. La scission de ce produit conduisant à l'acide 3-(4-méthoxyphényl)- glutarique recherché peut être rdalisée au moyen d'une solution alcoolique d'hydroxyde de sodium à l'ébullition. L'élimination d'un groupe méthyle dans les dérivés de l'acide glutarique répondant à la formule IV conduit à d'autres dérivés de l'acide glutarique qui répondent à la formule 0 CH2-C-OH HO (CH2) -Ci V 2n, V CH2-C-OH 2, on et l'opération peut être effectuée selon l'une quelconque des diverses techniques générales connues pour l'élimination d'un groupe méthyle dans des oxydes d'aryle et de méthyle. Un tel mode opératoire est décrit par Feutrill et col., Aust. J. Chen., 25, (1972), et comporte le traitement de l'oxyde d'aryle et de méthyle par un ion thioéthylate (préparé facilement in situ à partir de l'éthane- thiol et de l'hydrure de sodium) dans un solvant aprotonique polaire, de préférence le diméthylformamide. Le groupe hydroxy phénolique d'un composé de for- mule V peut être protégé au moyen d'un groupe alcanoyle selon des techniques connues. Une telle technique consiste à faire réagir le dérivé d'acide glutarique avec l'anhydride d'acide approprié (de préférence l'anhydride acétique). Le mode opératoire préféré pour préparer un dérivé d'anhydride glutarique de formule II à partir du dérivé d'acide glutarique de formule V consiste à combiner la conversion de l'acide en anhydride et la protection du groupe hydroxy phénolique en une seule opération. Si le groupe protecteur R est un groupe acétyle, il faut chauffer un dérivé d'acide glutarique de formule V dans l'anhydride acétique. Comme on l'a dit précédemment, on peut faire réagir un réactif selon l'invention (c'est-à-dire un composé de formule Ia à l'état libre ou à l'état de sel formé par addition avec un acide) avec un composé organique quelconque portant un substituant facile à déplacer et l'on obtient un produit qui peut être soumis à radio- iodation. La réaction de déplacement s'applique en particulier à un composé contenant un groupe carbonyle (c'est-à-dire un groupe R 2=0 dans lequel R2 est un radical organique). La réaction d'un tel composé avec un composé de formule Ia, à l'état libre ou à l'état de sel d'acide, en présence d'un alcool (R3-OH, par exemple le méthanol), d'une base minérale telle que l'acétate de sodium, ou l'acétate de sodium en présence d'un acide faible, tel que l'acide acétique gla- cial, donne un acide ou un ester répondant à la formule: O O R2 =NL-NH-C-CH -CH-CH - C-OR 2 2, 2 3 (CH 2)n i 2n r_11 VI dans laquelle R. représente unr. atomae d'hydrogène ou un groupe alkyle. Con peut saponifier un ester de formule VI sealon des techniques bien c:innues. Ainsi, par exemple) on peut traiter l'ester par une base forte. Les produits de saponification constituent un objet de l'in!er.tion. Dans certains cas, il sera souhaitable de faire réagir un hydrazide de formule la (à l'état libre ou a l'état de sel d'acide) avec un composé organique contenant plusieurs groupes carhouyle. Selon la réactivité rclative de ces groupes, il peut Etre nécessaire d'en bloquer un au moyen de techniques bien connues avant cde faire réagir le composé avec l'hvdrazide. Avant ou après la saponification, on peut marquer un composé de formule VI au moyen d'un radio-isotope, de préférence l'iode-125 ou l'iode-131, selon des techniques bien connues. Parmi les techniques connues à cet effet, on citera celles de Hunter et Greewood, cf. Nature, 19f:495 (1962). Lcs haptrnes radionmarqués peuvent etre u:iiiss co.rTe traceurs dans des techniques de radio- immunotests selon les principes généraux qui sont à l'arrière-plan de l'invention, comme on l'a expliqué plus haut. On trouvera des exemples de modes opératoires détailles dars Jaffe et col., "Methods in Investigation and Diagnostic Endocrinology", volume 3 de "Steroid Hlorrmones", North Holland, Amsterdam (1975). Les haptènes radio- marqués peuvent également être utilisés dans dessystèmes de radio- immunotestz automatisés, par exemple le système décrit par Brooker et col., dns le brevet des Etats-Unis d'Amérique n 4 022 577. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée. Dans ces exemples, les indications de parties et de pourcentages s'entendent en poids sauf mention contraire, EXEIPLE 1 Trifluoroacétahe du monohydrazide de l'acide 3-(4-hydroxyphényl)- pentanedio ue A) Acide 3-(4-méthoxXEhényl)glutarqiue On agite à température ambiante pendant 5 h un mélange de 27,7 g de p-anisaldéhyde, 52,1 g d'acétylacétate d'éthyle et 4 ml de pipéridine dans 10 ml d'éthanol àA 95 %; il se forme une substance solide qu'on isole par filtration, qu'on lave à l'éthanol à 25 % et rU'2n racr.'sti!ise dans l'éth: -l 5; on tie,. 3. g c '-:"4-..J-thc::,yten:'.vl:'-5-bis-ac,;:-;_:. a tat 'J:L fi._d. e- l'....e - r.at par ditn:aec...- d' , . one su.stancc s-lide qu'on recris illise dansr "-'tha-il 95 X; on Lbti.ent un second,et d. 8,5 g dc a. tanc f.mnd1r- - 137-;-2' C'rn p.rte à re-_lux. énc-i.-u D -nain t un ri..élange de 30 g de 2'2'-(4-î'Jthoxybenzylidne)-bis-acétylacétate d'ethyie, 450 ml d'éthanol et 450 g d'hydroxvde de àdium a 50 %. On ajute -- d;-au et on élline i1 plus,ran:de.arti2s d=e 1' thn-2. ?ar distillaticn sous vide. OC. acidifie le concentré par de l'acide chX] reyd:ique con^c--ré et on e-.xtrait ?-r 'ac taîe d'étbv]e., lave!'extrait dans l'acétate d'éthyle à la saumure, on le sè;che, on évapore et on recristallise le résidu dans le mélange benzène- méthanol; on obtie t 3,3 g d'acide 3-(4-m-thoxyphényl)-glutarique fondant à 147-150 C. B) Acide 3- -hydvoxhobnvl)-olutariqT:e A 6ó45 g d'tne susprension d'hydrure de sod-' ur à 57 % dans l'huile de paraffine, dans 70 mi de dln. -thylfrrmiamide sec, on aeute l.teient 11,6' r.l d'éthane-t'.i.'' dans rO mi de d --' _t=.- formrnide sec. On agite ia dispers lrn pendant 15J nin et on aj te une saiutiDn de 3,0 g d'acide 3-(4-nlthoxyphény)glutarique dans ml de dimînéthylforramide sec. On chauffe la dispersion dans un bain à 165 C pendant 5 h et on élimine la plus grande partie du sol- vant par distillation sous vide. On dilue ie résidu par l'eau, on acidifie par l'acide chlorhydrique concentré ct on extrait à deux reprises par l'éther (on rejette les extraits). On sature la solution de chlorure de sodium et on extrait par l'acétate d'éthyle. On lave l'extrait dans l'acétate d'éthyle une fois par la saumure, en le sèche et on recristallise le résidu dans le mélange chloroforme-he:ane; on obtient 2,3 g d'acide 3-(4-hydroxyphenyl)-glutarique fondant à 168-170 C. C) Anhydride 3-(4-acétoxyDhényl)lutari9ue On chauffe une solution de 800 mg d'acide 3-(4- hydroxyphényl)glutarique dans 15 ml d'anhydride acétique à 100C pendant 2 h 30 min et on évapore à sec sous vide. On recristallise la substance solide résiduelle dans un mélange chloroforme-hexane; 1l on obtient 600 mg d'anhydride 3-(4-acétoxyphényl)glutarique fondant à 140-143C. D) Trifluoroacétate du mnonoh drazide de l'acide 3-(4-hbd r2lyUhénI1.) A une solution de 2,8 g d'anhydride 3-(4-acétoxy- phényl)glutarique préparé comme décrit ci-dessus dans 30 ml de tétrahydrofuranne, on ajoute 2,8 g d'hydrazine à 95 % sous agita- tion. On évapore le trétrahydrofuranne sous vide et on dilue le sirop résiduel à l'eau régléà pH 7,0; on jette ensuite sur 30 g d'une résine échangeuse d'anions du type polystyrène à groupes ammnonium quaternaire, lavée au préalable successivement par l'hydroxyde de sodium 2N et l'eau déminéralisée. On élue d'abord la colonne par 600 ml d'eau déminéralisée qui élimine les impuretés neutres et basiques. On élue ensuite par 1,5 1 d'acide trifluoro- acétique M dans l'eau déminéralisée. On évapore l'Vluat sous vide à 4045 C. On lyophilise le résidu gommeux; on obtient 3,4 g du composé recherché. EXE}PLE 2 Chlorhydrate du monohydrazide de l'acide 3-(4-hydroxyphényl)pentane- diolgue On suit le mode opératoire de l'exemple 1, mais on remplace l'acide trifluoroacétique par l'acide chlorhydrique 1,0 M. EXMPLE 3 6-[2-[RS-4-carboxy-3-(4-hydroxyphénYl)-l-oxobutYI]hydrazono]oestra- l,3,5(10)-triène-3,179-diol A) Ester méthylique du 6:Lj2-q:RS-4-caboxy-4hdovhnl 1oo On porte au reflux pendant 20 h une solution de 93 mg de 6céto-oes'tradiol et 41 mg de trifluoroacétate du monohydrazide de l'acide 3-(4-hydroxyphényl)pentanedioïque dans 10 ml de méthanol contenant 300 mg d'acétate de sodium et 0,1 ml d'acide acétique glacial. On ajoute ensuite une deuxième portion de 82 mg de tri- fluoroacétate du munohydrazide de l'acide 3-(4-hydroxyphényl)- pentanedioïque et on reprend la réaction pour 20 h. On évapore la solution et on sèche sous vide; on obtient une substance solide présentant.1'aspect d'une mousse qu'on lave à l'eau (trois portions de 3 ml); on rejette les lavages. Après séchage sous vide, on redissout le résidu dans un mélange chloroforme-méthanol 9:1 et on soumet à chromatographie sur couche mince sur quatre plaques (de 0,5 x 200 x 200 mm) de gel de silice refroidie au préalable, en développant par le mélange chloroforme-méthanol. La zone correspon- dant au mélange des isomères du composé recherché est localisée sous une lampe à lumière ultraviolette et isolée par extraction avec le mélange chloroforme-méthanol 4:1; on obtient 100 mg du composé recherché fondant à 171-186 C. B) 6-[2-[RS-4-carboxy-3-(4hodroxhy)--oxbutyl]hydrazono] oestra:l 3L,5(l0)triène-3 17f-diol On agite en atmosphère d'azote pendant 5 h une solution de 75 mg de l'ester méthylique préparé ci-dessus dans du méthanol à 70 7% contenant 0,6 ml d'hydroxyde de sodium 3 M; le pro- duit de départ disparatt. On règle la solution à pH 4,5 par addi- tion d'acide acétique, on évapore le méthanol dans un courant d'azote et on dilue par 3,0 ml de saumure. On refroidit le mélange un court moment au bain-marie, on isole les substrats solides par filtration, on les lave à l'eau à deux reprises (0,5 ml à chaque fois) et on sèche sous vide à 60 C;on obtient 58 mg du composé recherché. EXEMPLE 4 Ester méthylique de la 3RS-3,16a,17f-trihydroxyoestra-1,3,5(10)- triène-6-one, [4-carboxy-3-(4-hydroxyphényl)-l-oxobutyljhydrazone A) 3RS-3 1 6"1l7P-trihydroxyoestra-1 3L5(1)-triène-6-oneL[4:- carbox:- 3--1-oxobutyl]h-drazone On porte au reflux pendant 20 h une solution de mg de 6-céto-oestriol et 250 mg du monohydrazide de l'acide 3-(4hydroxyphényl)pentanedioYque dans 7,0 ml de miéthanol contenant 250 mg d'acétate de sodium et 0,1 ml d'acide acétique glacial; le stéroide de départ est consommé. On évapore les solvants sous vide, on dilue' le résidu à l'eau et on isole les substances solides par filtration. On extrait le filtrat à l'acétate d'éthyle, on combine les extraits, on évapore et on mélange le résidu avec les substances solides isolées auparavant. On agite avec 20 ml d'in mélange dichloro- méthane/méthanol 4:1 et on fltre les insolubles. On concentre le filtrat et on applique sur deux plaques de chromatographie sur couche mince de gel de silice (1,0 x 200 x 200 mm). On développe les plaques par le mélange chlorométhane/méthanol, 9:1 et on extrait la bande principale (plus polaire que le stérolde de départ) compre- nant les stér6o-isomeres recherchés par le mélange dichlorométhane/ méthanol, 7:3; on obtient 110 mg du composé recherché fondant à 70-84'C. Ce produit est un mélange des isomères syn et anti en posi- tion 6. B.) 3RS-3 l6Q 17 p-trihydroxyoestra-1 l3 5(10) -triène -6-one [4-ca rbor. y- 3-(4-hvdroxyEhény1) -1-oxobutZl1]hydraz one On règle à pli 10-11 à l'aide d'hydroxyde de sodium 3M une soluton de 43 mg de l'ester méthylique dans 2,6 ml de méthanol à 85 /. On agite ensuite pendant 24 h à température ambiante et on règle à pli 4,0 par addition d'acide acétique. On transfère le mélange dans un tube de centrifugeuse a fond conique et on élimine d'abord la plus grande partie des solvants dans un courant d'azote, puis finalement sous vide. On mélange le résidu avec 2,O mil de saumure, on triture, on refroidit brièvement au bain de glace et on centri- fuge. On décante le liquide surnageant et on répète une fois cette opération de lavage sur la substance solide résiduelle. On sèche le tube sous vide à 40C et on extrait par quatre portions de 5 ml de mélange dichlorométhane/méthanol, 9:1, On combine les extraits, on concentre à volume final d'environ 2,0 ml, on dilue par 2,0 ml de dichloromé.thane et on jette sur une colonne de 5,0 g de gel de silice. On élue la colonne successivement par le dichlorométhane et des mélanges dichlorométhane/méthanol (95:5 et 8:2); dans le der- nier mélange solvant, on recueille 32 mg du composé recherché fondant à 287-295C. EXEMPLE 5 3RS-Pre na-4-ène-3,20-dione,3-[4-carbox -3-(4-hydroxyphnyl)-l-oxo- butyl hydrazone On agite à temperature ambiante pendant 36 h une solution de 188 mg de progestérone, 100 mg du trifluoroacétate de l'hydrazide de l'acide 3-(4-hydroxyphényl)pentanediotque, 88 mg d'acétate de sodium et O,1 ml d'acide acétique dans 4,0 ml de mntha- nol. On transfère la solution dans un tube de centrifugeuse à fond conique et on évapore d'abord dans un courant d'azote, puis sous vide à 400C. On lave le résidu à deux reprises par une saumure saturée (portions de 3,0 ml), on triture, on centrifuge et on décante. On sèche le tube sous vide à 40 C et on lave les substrats solides avec quatre portions de 5,0 ml de mélange dichlorométhane/méthanol, 4:1. On combine les lavages, on concentre et on jette sur deux plaques de gel de silice de' 1,0 x 200 x 200 mm. On développe les plaques par le mélange dichlorométhane/méthanol, 9:1. On localise la bande contenant les stéréoisomêres du composé recherché (plus polaire que le stéroïde de départ) à la lumière ultraviolette et on extrait par le mélange dichlorométhane/méthanoI,4:1. On obtient 110 mg du composé recherché fondant a 184-186 C. EXEMPLE 6 3RS-pregna-4-ène-3,20-dione,20-[4-carboxy-3-(4-hydroxyphényl)-l1-oxo- butyl]hydrazone Au cours de la purification par chromatographie sur couche mince du composé de l'exemple 5, on localise sur la plaque une autre bande plus polaire que la première. On l'isole par extrac- tion avec le mélange dichlorométhane/méthanol, 8:2; on obtient 23 mg du composé recherché fondant à 180-185 C. EXEMPLE 7 11, 18-époxy-18,21-dihydroxypregna-4-ène-3 20-d ione, 20-[4-carboxy-l- oxo-3- (4-hydroxyphényl)butyl]hydrazone A) 18,20-hémiacétal de la 21- f (lLl étyéhy)iétyslylxl aldos térone A une solution de 108 mg d'aldostérone dans 2,5 ml de diméthylformamide sec, on ajoute successivement 105 mg de tert-butyl- diméthylchlorosilane et 82 mg d'imidazole, On agite la solution à température ambiante pendant 1 h 30 min, on la jette dans 20 ml d'eau contenant 0,1 ml d'acide acétique et on extrait à trois reprises par 20 ml à chaque fois de dichlorométhane. On combine les extraits, on lave à l'eau1 on sèche, on évapore et on sèche sous vide. La trituration du résidu avec l'hexane donne 115 mg de cristau du composé recherché fondant à 158-159 C. B) 21-:[(L, ll2:Ét8ylRt[yl2Èiméthvlsilvl]oxy]-18-RS-[(triméthyl- silyl2)o2xy]:alostérone - A une solution de 110 mg de l'hémiacétalprépa ci-dessus dans 3,0 ml de diméthylformamide sec, on ajoute successi- vement 101 mg de triméthylchlorosilane franchement distillé et mg d'imidazole. On agite la solution à température ambiante pen- dant 20 h et on la jette dans 20 ml d'eau contenant 0,1 ml d'acide acétique; on extrait à trois reprises par 20 ml à chaque fois de dichlorométhane. On combine les extraits, on-lave à l'eau, on sèche, on évapore et on sèche sous vide; on obtient 122 mg du composé recherché, substance vitreuse. C) C) 2!:[[|1!:a.i.m!thz!!tbx!!dimat.hzh!ilyhll:l-8RS:[(tri z!hyl zl:ll oxylaldostérone,3-[4-carboxy:3- (4-hydroxyEhenyl) l-oxobutyllhydra: zone -- - 22 2 2--- -- - --- - - -- - - On agite a température ambiante en atmosphère inerte pendant 20 h une solution de 505 mg du dérivé silylé préparé ci-dessus et 500 mg de trifluoroacétate de l'hydrazide de l'acide 3-(4-hydroxy- phényl)pentanedioique dans 12,0 ml de méthanol contenant de la tri- éthylamine. On évapore le mélange sous vide et on lave le résidu successivement avec 30 ml d'eau contenant 1,5 ml d'acide acétiques et 10 ml d'eau, puis on sèc he sous vide. On redissout dans le dichlorométhane et on absorbe sur une colo n ne de 20 g de gel de silice. On élue la colonne successivement par le aichloro- méthane et par des mél a n ges dichlorométhane/méthanol, 98:2 et 4:1; on récupère 325 mg du stéroYde de départ et, dans les fractions contenant du méthanol, on obtient 200 mg du composé recherché à l'état solide. En répétant la réaction sur les 325 mg de stéroYde récupéré, mais en remplaçant la triéthylamine par 300 mg d'acétate de sodium, on obtient un second jet de 270 mg du composé recherché. D) p1,l :Éeo2x:y- I2-dih drox!eregna-4-èûe-3 20-dione&L4:carboxy-i oEoz3:. (4.:h.Xdrox.h!gZ!).butyl]hyd%raoe On agite à température ambiante pendant 4 h une solu- tion de 470 mg du composé obtenu ci-dessus dans 30 ml d'acide acétique à 70 %. On élimine l'acide acétique et l'eau par distillation sous vide à température ambiante. On redissout la substance solide rési- duelle dans la quantité minimale de méthanol et on jette sur une colonne de 30 g de gel de silice. On élue la colonne successivement par des mélanges dichlorométhane/méthanol, 85:5, 9:1 et 4:1. Les * premières fractions donnent un peu d'aldostérone et un peu de sté- roïde de départ non converti. Les dernières fractions constituent un mélange du produit de départ et du composé recherché, comme on peut le constater en localisant les fractions à la chromatographie sur couche mince. On combine les dernières fractions, on évapore et on soumet à. nouveau à chromatographie sur une colonne de 10 g de gel de silice; on isole successivement le stérolde de départ non converti et 167 mg du composé recherché. On redissout ce composé dans le méthanol à chaud et on concentre la solution méthanolique à volume final à 1,3 ml; on dilue par l'eau glacée réglée à pH 4,0 par l'acide chlorhydrique. On filtre la substance solide qui se sépare et on la sèche sous vide; on obtient 128 mg du composé recherché. Le.spectre de résonance magnétique nucléaire de ce composé montre qu'il s'agit d'un mélange des isomères en position 4. On ne peut pas déterminer de point de fusion exact parce que, même à 400C, on ne constate pas de fusion: il y a apparition d'une colo- ration brun noirâtre indiquant une décomposition avant la fusion. R E V E N D I C A T I ON S 1. Composés caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule O O II i St=N-NH-C-CH2-CH-CH2-C-OH 2, 2 (CH2)n R OH dans laquelle St représente un radical de stéroïde, R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkylé en C1-C3, et n est égal à O, 1, 2, 3 ou 4. 2. Composé selon la revendication 1, pris dans le groupe formé par les suivants: 6-L 2-L RS-4-carboxy-3-(4-hydroxy- phényl)-1-oxobutyl /hydrazono/oestra-1,3,5(10)-triène,3,17f -diol; 3RS-3, 16c(,,17-trihydroxyoestra-1,3,5(10)-triène-6-one, / 4-carboxy- 3-(4-hydroxyphényl)-1-oxobutyl,/hydrazone; 3RS-pregna-4-ène-3,20- dione, 3-/-4-carboxy-3-(4-hydroxyphényl)-l-oxobutyl7hydrazone; 3RS-pregna-4-ène-3,20-dione,20-I 4-carboxy-3-(4-hydroxyphényl)-l- oxobutyl/hydrazone;11,,18-époxy-18,21-dihydroxy-pregna-4-ène-3,20- dione,20-/-4-carboxy-1-oxo-3-(4-hydroxyphényl)butyl7hydrazone. 3. Procédé de préparation des composés selon la revendication 1, ce procédé se caractérisant en ce que l'on fait réagir un anhydride glutarique répondant à la formule R /0 -lCHi- C\ R. " RI-O - - (CH2) -CH 0 CH2- C 2 % avec l'hydrazine et on fait ensuite réagir avec un stéroïde.