FR 2463616 A1 19810227 FR 8018129 A 19800819 -21 - La présente invention concerne une furocoumarine pour la photochimiothérapie du psoriasis et d'autres rnala- dies de la peau qui lui sont sensibles et caractérisées par hyperprolifération cellulaire ou par absence de pigmentation de la peau. Les furocoumarines sont bien connues et très répandues dans le règne végétal. Elles comprennent les psoralènes, ou furocoumarines linéaires, et les angélicines ou furocoumarines angulaires. La propriété la plus caractéristique des furocou- marines linéaires et angulaires est representée par leur activité photosensibilisatrice qui s'exerce sur divers sub- strats biologiques. Ladite activité, ainsi qu'il est connu, requiert l'action combinée de la furocoumarine et de la lumière ultraviolette longue (UV-A). Les furocoumarines linéaires (psoralènes) sont très connues en raison de leur activité photosensibilisatri- ce sur la peau. Ainsi, si par exemple la peau de l'homme ou du cobaye est traitée tout d'abord avec des furocoumarines linéaires et par la suite est irradiée avec de la lumière ultraviolette longue (UV-A), on observe, après une période d'attente de 12-24 heures environ, l'apparition d'un érythè- me sur la peau, suivi, après quelques jours, d'une pigmenta- tion foncée. Cette propriété a été exploitée depuis 1948 par El Mofty qui a employé un psoralène naturel, la xanthotoxine (8 méthoxypsoralène) extraite d'une plante egyptienne, - 2 - i'Affmi Majus, pour soigner le vitiligo. (A.M.E1 Mofty: "ViLiligo and psora ens", édition A.M.El Mofty, Pergamon Prebb, Oxford, 1968). La guérison de cette maladie de la peau, caractérisée par la présence sur la peau de plaques blanches qui ne se pigmentent pas, même si elles sont exposées au soleil, se fait en traitant ces plaques avec du psoralène, et en les exposant par la suite à la lumière UV-A, ce qui reconstitue la pigmentation. Plus récemment les psoralènes ont été employés dans la photochimiothérapie du psoriasis et d'autres mala- dies de la peau caractérisées par hyperprolifération cellu- laire. Les psoralènes peuvent être administrés par voie orale ou appliqués par voie topique (H. Tronnier, R. Lôhning: About the current status of the methoxsalen UV-A-therapy in Dermatology, Castellania 2, 267(1974), J.A.Parrish, T.B.Fitzpatrick, L.Tanenbaum, M.A.Pathak: Pho- tochemotherapy of psoriasis with oral methoxsalen and long- wave ultraviolet light, N.Eng.J. Med. 291,1207 (1974). L'administration des psoralènes par voie orale est plus simple et permet un meilleur contrôle de leur photo- toxicité et de la pigmentation de la peau, qui résulte parfaitement homogène. Par contre, l'administration par voie orale comporte une possible toxicité hépatique (H.Tronnier, R.Lôhning: Photochemotherapy in Dermatology, in "Photochemo- therapy: basic technique and side effects", Proceedings of the GermanSwedish Symposium on Photomedicine in Oberursel (W.Germany) 23-25 april 1975, édition E.G. Jung, Schattauer Verlag, Stuttgart-New York, pag. 71(1976), E. Wolff: Report on Round Table, Photochemotherapy (PUVA) of psoriasis, in "Research on Photobiology", édition A. Castellani, Proceed- -3- lngs of the VI Int. Congress on Photobioiogy,.Gra 29/9-3/10,1976 Plenum Press, New York, pag. 751(1977)) et rn certain risque de cataracte, étant donné que les psor'al&nes s'accumulent dans les lentilles des yeux, toujours exposées à l'action de la lumière solaire (S.Lerman, R.F. Borkman: A method for detecting 8-mnethoxypsoralen in the ocular lens, Science 197,1287(1977)). Par contre, l'application topique des psoralènes apparaît plus complexe et dangereuse sous d'autres aspects, car elle rend plus difficile le contrôle de l'effet photo- toxique sur la peau en raison de la distriuution non uniforme du médicament; elle cause une pigmentation moins homogène et augmente le danger de cancer de la peau (T.B.Fitzpatrick: Discussion, in "Photochemotherapy: basis technique and side effects", Proceedings of the German-Swe- dish symposium on Photomedicine in Oberursel (W.Germany) 23-25 april 1975, édition E.G.Jung, Schattauer Verlag, Stuttgart-New York, pag. 120(1976), G.Rodighiero: The pro- blem of the carcinogenic risk by furocoumarins, Prog. biochem. Pharmacol. 14,94(1978), J.H.Epstein: Risk and Dene- fits of the treatment of psoriasis, N.Eng.J.Med. 300,852(1979), R.S.Stern, L.A.Thibodeaux, R.A.Kleinermran, J.A.Parrish, T. B. Fitzpatrick: Risk of cutaneous carcinoma in patients treated with oral methoxsalen photochemotherapy for psoriasis, N.Eng. J.Med. 300,852(1979)). Toutefois, malgré ces inconvénients, à l'heure actuelle la photochimiothérapie avec des psoralènes est préférable à d'autres formes de thérapie moins efficaces et plus dangereuses, telles que l'emploi des seules radiations dans l'ultraviolet court (UV-B) ou l'emploi de prouuits -4- typ]quemenL aritumoraux ou de produits à base ae goucdron. De toute manière, indépenuiemment de la forme d'administration, l'idée de base de la photochimiothérapie est l'exploitation des propriétés caractéristiques des pso- ralènes, à savoir qu'ils empêchent la synthèse de l'ADN et ae i'ARN et la réplication cellulaire. Toutefois, dans les psoralènes, ces propriétés inhibitrices sont intimement liées à des propriétés phototoxiques, qui causent i'appari- tion sur la peau, d'érithèmes et par la suite d'hyperpigmen- tation. Jusqu'à présent il s'est avéré très difficile,- dans le cas des psoralènes, de disjoindre l'effet thérapeutique a'un certain effet toxique. Il est aussi connu que l'angélicine (furocoumarine angulaire) tout en possédant la propriété d'empêcher la synthèse des acides nucléiques et d'arrêter la division cellulaire, ne cause sur la peau ni érithème ni hyper- pigmentation (F.Bordin, S.Marciani, G.Baccichetti, F.Dal- l'Acqua, G.Rodighiero: Studies on the- photosensitizing pro- perties of angelicin: contribution of monofunctional adducts furocoumarinDNA to the production of the photosensitized effects, Ital.J.Biochem. 24,258(1975), M.A.Pathak, T.B.Fitz- patrick: Bioassay of natural and synthetic furocoumarins (psoralens), J.Inv.Dermatol. 32,509(1959)). Toutefois l'an- gélicine, présentant une activité photobiologique très fai- bie, ne peut pas être employée en thérapie à cause de sa tendance réduite à se photoadditionner à l'ADN (G.Rodighie- ro, L.Musajo, F.Dall'Acqua, S.Marciani, G.Caporale, L.Cia- vatta: Mechanism of skin-photosensitization by furocouma- :ir.s: photoreactivity of various furocoumarins with native 3U DNA and with ribosomal RNA, Biochim.Biophys.Acta 2463616, - 5 - 217,40(1970)). Dans le tableau 1 qui suit les propriétés de quelques furocoumarines linéaires ou psoralènes (8-méthoxy- psoralène (8-MOP), 5-méthoxypsoralèn (5-MOP) et 4, 5', 8triméthylpsoralène (TMP) sont comparées avec celles de La furocoumarine non linéaire ou angélicine. TABLEAU I - Propriétés des furocoumarines Furocoumarines linéaires (8-MOP, 5 MOP, TMP) Activité photosensibili- satrice Stimulation de la pigmenta- tion de la melanine Capacité a produire des -car- cinomes blutagenicité Intercalation dans l'ADN Capacité d'inhibition de la synthèse de l'ADN Capacité de photoaddi tion à l'ADN Formation de complexes mono- fonctionnels Formation de liaison croisées Lntermoléculaires dans l'ADN Efficacité thérapeutique dans le vitiligo Efficacité thérapeutique dans le psoriasis Efficacité thérapeutique dans d'autres maladies connue, forte bien connue, forte connue, forte (topique) faible (orale) connue, forte bien connue,forte connue, forte connue, forte connue, forte connue, forte connue, de bonne à excellente connue, de bonne à excellente Furocoumarine non linéaire (Angéli- cine) connue, absente pas très bien étudiée ou inconnue, absente inconnue (orale et topique) connue, faible connue, évidente connue, faible connue, faible connue, faible connue, absente non connue et non étudiée non connue et non étudiée inconnue Propriétés connue - 6- 24636t1 Selon l'invention, la photochimiothérapie du pso- riasis et d'autres maladies de la peau peut être réalisée d'une manière très efficace et sans les risques liés à l'emploi des'psoralènes, avec une furocoumarine obtenue par modification de l'angélicine grâce à l'introduction de groupements alkyliques. En effet, on a constaté que l'alkylation, et de préférence la méthylation de l'angélicine, élève sa tendance à s'intercaler dans l'ADN et à se photoadditionner aux bases pyrimidiniques de la macromolécule et à bloquer par là la réplication cellulaire. Les alkylangélicines obtenues selon la présente invention, tout en ayant une action thérapeutique analogue à celle des psoralènes, ne présentent pas les inconvénients de ces derniers. En particulier: - elles ne causent aucun effet phototoxique sur la peau; ce qui épargne aux patients les phases de l'érithème et de la successive hyperpigmentation; - elles facilitent l'administration topique, car elles ne requièrent pas le strict contrôle de la phototoxicité; (ces contrôles par contre, sont absoluement nécessaires dans le cas des psoralènes), ce qui peut faciliter la diffusion de cette thérapie hors de la clinique; - elles ont une tendance réduite à donner lieu à des muta- 2 5 tions ce qui réduit sensiblement les risques inhérents à la formation de tumeurs de la peau. En effet l'angélicine et la 4,5'-diméthylangélici- ne ont déjà été étudiées afin de les comparer à certains psoralènes dans diverses colonies de Escherichia Coli. On a observé une activité mutagénique très réduite (beaucoup plus réduite que celle des psoralènes dans les colonies donu o1 savait qu'elles présentaient des fonctions de réparation très basses, alors qu'on ne découvrit aucune activité mutagénique dans les colonies de type sauvage (S. Venturini, M. Tamaro, C. Monti-Bragadin, F. Bordin, F. Baccichetci, F. Carlassare - Comparative mutagenicity of linear and angular furocoumarins in E. Coli, strains deficient in known repair functions, Chem. Biol. Interaction, 30,203(1980)). Le mécanisme de l'action des furocoumarines (pso- ralènes et angélicines) est connu: il est lié au photo-dégâz causé dans l'ADN par la lumière. En effet ces composés montrent une affinité pro- noncée avec l'ADN et agissent sélectivement sur celui-ci:si par exemple une furocoumarine est additionnée à une solution acqueuse d'ADN, se forme un complexe à l'état primaire o la molécule plate de la furocoumarine s'intercale entre deux couples des bases de l'ADN; lorsque par la suite le complexe est irradié avec une lumière ultraviolette longue (UV-A) les molécule intercalées de furocoumarine absorbent cette iumié- re, se photoexcitent et réagissent avec le double lien b,6- des bases pyrimidiniques de l'ADN suivant des réactions de C-quatrecycloaddition. Avec référence à cette photoréaction il est loisible de mettre en évidence une différence marquée entre les furocoumarines linéaires et celles angulaires: dans les furocoumarines (psoral-ènes et angélicines), il existe en effet deux positions différentes par lesquelles peut avoir lieu la C-quatre-cycloaddition aux bases pyrimi- diniques de la macromolécule: ou bien la double liaison en 3,4 ou celle en 4',5'. En particulier les psoralènes, étant donnée leur structure linéaire, peuvent soit engager une t;.ie double liaison, soit engager les deux doubles liaisons nun.oreactives et réaliser deux cycloadditions avec deux bases pyrimidiniques appartenant à deux chaînes distinctes de 'ADN, en formant, dans ce cas, une liaison croisée entre les deux chaSnes complémentaires (Inter-strand cross-link- ages) (F.Dall'Acqua, S. Miarciani, G.Rodighiero: Inter-Strana cross-linkages occuring in the photoreaction between psoral- en and DNA. FEBS letters 9,121(1970)). L'angélicine par contre, pour des raisons géometriques, étant donnée sa structure angulaire, peut engager seulement l'une de ses deux positions photoréactives pour se lier à une seule cnaîne d'ADN (F.Dall'Acqua, S.Marciani, L.Ciavatta, G.Roghi- ero: Formation of inter-strand cross-linkings in the photo- reactions between furocoumarins and DNA, Z.Naturforsch. 26b,561(1971)). En d'autres termes, alors que les psoralè- nes, dans leur photoréaction avec l'ADN, forment des compo- sés d'addition monofonctionnels et bifonctionnels, ltangéli- cine ne forme que des composés d'addition monofonctionnels. Sous l'aspect biologique, les conséquences qui Pu dérivent du dégât bifonctionnel sont beaucoup plus sérieuses t dangereuses que celles liées au dégât monofonctionnel. Il est en effet connu que dans les cellules vivantes, l'ADN, (macromolécule qui ne peut pas être substituée par un copie obtenue entièrement par synthèse, car elle peut se reprodui- 2 ru seulement en se copiant à elle même), représente un patrimoine essentiel que la cellule s'efforce de conserver dans la meilleure des manières possibles. Et comme dans son habitat la présence d'agents susceptibles d'endommager]'ADN (radiations, agents chimiques, etc.) est assez probable, les JO cellules sont pourvues de systèmes capables de "réparer" les -9 -_ dégâts soufferts par cette macromolécule (il s'agit là, pour la cellule, d'une nécessité absolue). Dans le cas de photodégâts causés sur I'ADN par les furocoumarines, il est connu que les liaisons interchaines introduites par les furocoumarines linéaires (psoralènes) doivent forcément être réparées par des processus très compliqués, permettant de recombiner la séquence génétique, ou bien par des processus exceptionnels, fortement sujets à erreur, comme la répara- tion dite S.O.S. (R.S.Cole: Repair of DNA containing inter strand cross links in Escherichia coli: sequential excision and recombination, Proc. Nat.Acad. Sci.USA 70,1064(1973), A.Belogurof, G.B.Zavilgelsky: A mechanism of inactivation effect of photosensitizing 8-methoxypsoralen on bacteria and bacteriophages, Mol.Biol.(URSS) 12,886(1978)). L'ADN ainsi réparé résulte modifié dans sa séquence de base, et la cellule impliquée risque d'être affectée par des mutations ou de mourir (F.Bordin, F.Carlassare, F.Baccichetti, L.An- selmo: DNA repair and recovery in Escherichia coli after psoralen and angelicin photosensitization, Biochim.Bio- phys.Acta 447,249(1976)). En outre, si l'ADN n'est pas fidèlement réparé, la cellule impliquée peut être atteinte par une transformation néoplasique. A ce fait est attribuée en général l'activité cancérogène observée dans certaines furocoumarines linéaires (D.L.Evans, K.J.Morrow: 8-methoxy- psoralen induced alteration of mammalian cells, J.Inv.Derma- tol. 72,35(1979) J.E.Trosko and Chia-Chang, Relationship between mutagenesis and carcinogenesis, Photochem.Photobiol. 28,157(1978)). Par contre, dans le cas des angélicines (ou Jo furocoumarines angulaires) c'est à dire dans le cas des - - 2463615 - 10 - composés d'addition monofonctionnels, les dégâts de L'ADN sont réparables grâce à des mécanismes plus simples et exempts d'erreurs, comme le processus bien connu sous le nom de "excision repair" (R.S.Cole: Repair of DNA containing S inter-strand cross-links in Escherichia coli: sequential excision and recombination, Proc. Nat.Acad.Sci.USA ,1064(1973), F.Bordin, F.Carlassare, F.Baccichetti, L.An- selmo: DNA repair and recovery in Escherichia coli after psoralen and angelicin photosensitization, Biochim.Bio- phys.Acta 447,249(1976)). Il s'en suit que la capacité de causer des muta- tions est bien plus prononcée dans le cas des psoralènes que dans celui des angélicines. En outre, la nécessité de recourir aux systèmes enzymatiques sujets à erreur, pour la réparation de l'ADN implique, dans le cas des psoralènes, une certaine activité cancerogène observée en particulier au cours d'expériences réalisées sur des animaux de laboratoire soumis à irradiation après des applications topiques répé- tées sur le peau, (D.D.Grube, R.D.Ley, R.J.M.Fry: Photo- sensitizing effects of 8-methoxypsoralen on the skin of hairless mice. 11- Strain and spectral differences for tumorigenesis, Photochem. Photobiol. 25,269(1977)). Avec les angélicines, par contre, le risque de formation de tumeurs est appréciablement réduit étant donné le type de répara- tions de 1'ADN affecté, et par là, la tendance réduite à donner lieu à des mutations (S.Venturini, M.Tamaro, C.Monti- -Bragadin, F.Bordin, F.Baccichetti, F.Carlassare: Comparati- ve mutagenicity of linear and angular furocoumarins in E. coli strains deficient in known repair functions. (Chem. Biol. Interactions 30,203(1980)). - 11 - 2463616 En conclusion, les angélicines présentent ese-- tiellement les traits ci-après: - inhibition de la synthèse de l'ADN et de i'ARN et ae -a réplication cellulaire, mais avec une mortalité moins élevée par rapport aux psoralènes ainsi qu'il a ct- observé dans des systèmes céllulaires de bactèries e; de mammifères; - réparation des photodégâts par des mécanismes dépourvus d'erreur (error-free mechanisms). La possibilité de muta- tion et de formation de tumeurs qui s'en suit est de beaucoup inférieure par rapport aux psoralènes, dans lesquels, la réparation des photodégâts a lieu suivant des systhèmes sujets à erreur (error-prone systems) (E.M. Witkin: Ultraviolet mutagenesis and inducible DNA repair in Escherichia coli, Bacteriol.Rev. 40,869(1976)>; - absence absolue de phototoxicité sur la peau normale de l'homme et du cobaye, et donc, (à différence des psoralè- nes), élimination des érythèmes et en géneral des succes- sives hyperpigmentations de la peau; - inhibition de la synthèse de l'ADN de l'épiderme sur des souris in vivo. L'angélicine, toutefois, présente une faible acti- vité photobiologique à cause de sa tendance limitée à se photoadditionner à l'ADN. En pratique, elle ne peut pas être 2, utilisée en thérapie. Selon l'invention, cette limitation est surmontée en modifiant l'angélicine par l'introduction de groupements alkyliques. On obtient, de cette manière, des composés qui présentent une activité pnotosensibilisatrice accrue ec une tendance plus élevée à s'intercaler dans l'ADN, et à se - 12 - phocoadditionner aux bases pyrimidiniques de la macromo- lécule. En raison de cette activité photosensibilisatrice accrue, et donc de la capacité d'inhiber la synthèse de l'ADN et de i'ARN et de bloquer la division cellulaire, les alkylangélicines sont très propres à être employées dans la photochimiothérapie du psoriasis et d'autres maladies de la peau qui lui sont sensibles. Par rapport à la photochimiothérapie qui emploie les psoralènes, celle qui se sert des alkylangélicines- représente un progrès certain. En effet, celles-ci, tout en donnant lieu au même effet thérapeutique des psoralènes (blocage de la duplication cellulaire au niveau de la peau) ne présentent aucun des inconvénients qui sont propres aux psoralènes. Les alkylangélicines, comme les méthylpsoralènes montrent un caractère lipophyle marqué et sont par consé- quent très peu solubles dans l'eau. En vue d'une possible amélioration thérapeutique, on a préparé aussi des dérivés hydrosolubles des alkylangélicines. 0 Préparation des alkylangélicines La préparation des alkylangélicines selon l'inven- tion peut se réaliser suivant plusieurs méthodes différentes selon que l'alkyle se trouve sur l'anneau furanique ou non. Pour préparer des alkylangéliciries on condIense avant tout la résorcine ou la 5-méthyl-résorcine avec de l'acide malique (ou acéto-acétate d'éthyle) afin d'obtenir les méthyl-dérivés 7-hydroxycoumariniques. Ces derniers sont par la suite ethérifiés avec du bromure d'allyle pour donner lieu à des 7-allyléthers. 0 -Par la suite, par transposition de Claisen, les ( - 13 - allyléthers donnent les dérivés 8-allylcoumariniques e% o-allylcoumariniques. Comme les derivés 6-allylcoumariniLue;- donnent lieu à la formation de psoralènes (furocoumirines linéaires) qui doivent être absolument évités en raison ae leur phototoxicité et de leur capacité à former des liaisons croisés intermoléculaires, on doit appliquer des soins particuliers dans la purification des dérivés 8-allylcouma- riniques. La description qui suit contribuera à faire de la clarté sur l'invention: le mélange de: 5-méthyl-resorcine gr. 25,0 acide malique gr. 26,0 et H2SO4 concentré 55 ml., est réchauffé prudemment jusqu'à ce que cesse presque complètement le développement de gas. Par la suite on verse le produit de la réaction dans un mélange de 700 ml. d'eau et de glace en le soumettant à forte agitation jusqu'à désagrégation complète du précipité. On sépare le précipité par filtration, et après des lavages répétés à l'eau on le cristallise deux fois de l'Me2CG. On obtient ainsi gr. 15 de 5-methyl-7-hydroxy-coumarine (I1 p.f. 256 C, sans traces de l'isomère 5-hydroxy-7-méthylcou- marine (II). En réchauffant à 1000 C pendant 1 heure un mélange de gr. 10,0 de 5méthyl-résorcine, 10 ml d'acétoacétate d'éthyle et gr. 5 de ZnCl2 anhydre, on obtient une masse semisolide que l'on réchauffe par la suite, pendant une heure, après addition de lOml d'HCl à 5%. On refroidit et on filtre le mélange. Le précipité, lavé avec H20 et cristalli- sé de MeOH, donne gr. 8,6 de 4,5-diméthyl-7-hydroxy-coumari- ne (III) p.f. 257-258 C. On fait réagir gr. 15 de 5-méthyl-7-hydroxy-coumarine (I) - 14 - 2463616 avec 20 ml de bromure d'allyle et gr. 5 de K2C03, en 250 ml de Me2CO. On réchauffe le mélange, à reflux, pendant 5 neures; on laisse refroidir et on filtre le K2C03, en le lavant avec du Me2CO. On concentre le filtrat et les eaux de lavage acétoniques. On cristallise le résidu séché du cyclohéxane et on obtient gr. 13,8 de 7 allyloxy-5méthylcoumarine (IV); p.f. 83 C. D'une manière analogue on obtient de la 7-hydroxy- coumarine la 7-allyloxycoumarine (V); p.f. 88-89 OC (cyclo- héxane); de la 4-méthyl-7-hydroxycoumarine la 4-méthyl-7-al- lyloxy-coumarine (VI); p.f. 107-1080C (cyclohéxane); de la 4,5-diméthyl-7-hydroxy-coumarine (III) la 4,5-diméthyl-7-al- lyloxy-coumarine (VII); p.f. 140oC, (MeOH). On réchauffe à reflux gr. 13,8 de 5-méthyl-7-al- lyloxy-coumarine (IV) en 60 ml de diéthylaniline pendant 5 heures. On ajoute au mélange de réaction refroidi 250 ml d'EtOAc et on lave plusieurs lois avec de l'HCl dilué et par la suite avec de l'eau. La phase organique séchée (Na2S04), après éloignement du solvant, forme un résidu. En cristalli- sant ce dernier de l'EtOAc on obtient gr. 4,5 de 5-mé- thyl-7-hydroxy-8-allyl-coumarine (VIII), p.f. 177 OC. Par chromatographie sur colonne de Si02 gel et en employant comme éluant du CHC13, le résidu du filtrat donne encore gr. 4,9 de 5-méthyl-7-hydroxy-8-allyl-coumarine (VIII) libre (TLC) de l'isomère 5-méthyl-6-allyl-7-hydroxy-coumarine (IX). De la même manière on obtient: de la 7-allyloxy- coumarine (V), la 7-hydroxy-8-allylcoumarine (X), p.f. 165 C (EtOAc) libre (TLC) de l'isomère 6-allyl-7-hydroxycouma- - 15 - 2463616 rine (XI); de la 4-méthyl-7-allyloxy-coumrarine (Vs), _a 4-méthyl-7hydroxy-8-allylcoumarine (XII) p.f. 195 OC (EtOAc), libre (TLC) de l'isomère 4-méthyl-6-allyl-7-ny- droxycoumarine (XIII); de la 4,5-diméthyl-7-allyloxycoumiari- ne (VII) la 4,5-diméthyl-7-hydroxy-8-allylcoumarine (XIV), p.f. 178 C , (MeOH) libre (TLC) de l'isomère 4,5-ci.n- thyl-6-allyl-7-hydroxy-coumarine (XV). Pour préparer les alkylangélicines avec un groupe- ment alkylique uur l'anneau furanique, on acétyle ie, 8-allylcoumarines et on les soumet par la suite à bromura- tion, ce qui donne lieu à des 8-(2',3'-dibromopropyi) dérivés. Ces derniers, cyclisés par traitement avec cu KOi en solution éthanolique donnent lieu aux 5-méthylangélJcinles correspondantes. Ainsi on réchauffe à reflux pendant une heure gr. 4,5 de 5-méthyl-7-hydroxy-8-allylcoumarine (VIII), en 30 ml d'anhydride acétique, contenant gr. 1 de AcONa. On hydrolyse à chaud, avec H20 pendant 10 minutes, le mélange de réaction. Après dilution et refroidissement on le neutralise avec du NaHCO3 et on l'extrait avec EtOAc. La phase organique séchée (Na 2S04), après éloigne- ment du solvant, laisse un résidu que l'on soumet à cristal- lisation de MeOH. On obtient ainsi gr. 4,3 de 5-méthyl-7-a- cetoxy-8-allylcoumarine (XVI), p.f. 113 OC. De la même manière, de la 7-hydroxy-8-allylcouma- rine (X) on obtient la 7-acétoxy-8-allylcoumarine (XVII), p.f. 93-93,5 C (ligroine); de la 4-méthyl-7-hydroxy-8-al- lylcoumarine (XII) la 4-méthyl-7-acétoxy-8-allylcoumarine (XVIII), p.f. 101-102 C (MeOH); de la 4,5-diméthyl-7-ny- - droxy-8-allylcoumarine (XIV) on obtient la 4,5-diméthyl-7-a- *- 16 - c.-oxy-8-allylcoumrarine (XIX) p.f. 168 (Ie0H). On ajoute, à Température ambiante, dans un lapse de 30 minutes, à gr. 4,5 de 5-méthyl-7-acétoxy-8-allylcouma- rine (XVI), dissous en 100 ml de acide acétique, la quantité stoechiométrique d'une solution de brome en acide acétique. Par la suite on maintient sous agitation la solution pendant minutes et on porte à sec. Le résidu cristallisé de ieOH donne gr. 5,2 de 5-méthyl-7-acétoxy-8-(2',3'-dibromo-pro- pyl)coumarine (XX), p.f. 39 C (MeOH). De la même manière on obtient de la 7-acé- toxy-8-allylcoumarine (XVII) le 7-acétoxy-8-(2',3'-dibro- mo-propyl)coumarine (XXI), p.f. 123-123,5 C (MeOH); de la 4-méthyl-7-acétoxy-8-allylcoumarine (XVIII), la 4-mé- thyl-7-acétoxy-8-(2',3'-dibromo-propyl)coumarine (XXII), p.f. 156157 C (MeOH); de la 4,5-diméthyl-7-acétoxy-8-allyl- coumarine (XIX), la 4,5-diméthyl-7-acétoxy-8-(2',3'-dibro- mo-propyl)coumarine (XXIII) p.f. 148 OC (MeOH). Gr. 5,2 de 5-méthyl-7-acétoxy-8-(2'1,3'-dibro- mo-propyl)coumarine (XX), dissous en 100 ml d'EtOH sont additionnés d'un volume de solution éthanolique de KOH au 4% tel qu'il s'établisse un rapport molaire coumarine/KOH égal a 1/10. On réchauffe à reflux le mélange pendant 80 minutes en le protégeant de toute source d'illumination; on refroi- dit et on ajoute un volume double d'Hi 20, acidifié avec de l'HCl à 10%. On sépare par filtration le précipité ainsi formé: après cristallisation de EtOH on obtient gr. 1,3 de ,5'-diméthylangélicine (XXIV) p.f. 204-205 C, dont la formule est: - 17 - (XXIV) C13 H10 03 CH" De la même manière on obtient: toxy-8-(2',3'-dibromo-propyl)coumarine (XXI), angélicine (XXV) p.f. 149,5 OC (MeOH) dont la x0CH0 (XXV) C12 H8 3 |_ de la 7-acé- la 5'-méthyl- formule est: de la 4-méthyl-7-acétoxy-8-(2',3'-dibromo-propyl)coumarine(XXII), la 4,5'-diméthylangélicine (XXVI), p.f. 185 C (MeOH), dont la formule est: CH3 (XXVI) C13 H1O 03 CH3 - 18 - de la 4,5-diméthyl-7-acétoxy-8-(2',3'-dibromo-propyl)couma- rine (XXIII), la 4,5,5'-triméthylangélicine (XXVII) p.f. 203-204 C (MeOH) dont la formule est: CH3 CH3 (XXVII) C14 H12 03 /-00 CH3J; * * * Une méthode pour préparer les alkylangélicines selon l'invention, sans groupements alkyliques sur l'anneau furanique, prévoit les phases ci-après: - obtenir par ozonolyse des 8-allyl derives des coumarines, (préparés suivant les méthodes ci-dessus indiquées), les 8coumarinil acétaldéhydes correspondantes; - cyclisation avec H3P04 à 85%: ce qui donne lieu à la formation des angélicines ci-dessus indiquées. La description qui suit explique plus-en détail cette méthode. s15 On dissout en 200 ml d'EtOAc gr. 3,0 de 5-mé- thyl-7-hydroxy-8-allyl-coumarine (VIII). On fait passer dans la solution, refroidie en bain de glace, un courant d'oxygè- ne ozonisé, jusqu'à atteindre le rapport stoechiométrique 1:1. Immédiatement après on soumet la solution à hydrogéna- tion en présence de 0,3 gr. de Palladium à 10% sur du CaCO3. Le mélange est maintenu sous agitation jusqu'à ce que cesse la rapide absorption d'hydrogène. On élimine le catalyseur par filtration; on évapore le solvant; on ajoute directement - 19 - au résidu ml 60 d'H3PO4 à 85% et on réchauffe le mélange a "C pendant 20 minutes. Par la suite on ajoute au mélange refroidi le volume double d'eau et on extrait avec CHCil. On sèche (Na2S04) la phase organique et on élimine le solvant. On traite par chromatographie sur colonne de SiO2 gel en employant comme éluant du CHC13, et on obtient gr. 0,63 de -méthylangélicine (XXVIII), p. f. 191-192 OC (MeOH), dont la formule est: CH3 (XXVIII) C12H803 De la même manière de la 4-méthyl-7-hydroxy-8-al- lylcoumarine (XII) on obtient la 4-méthylangélicine (XXIX) p.f. 194-195 C (MeOH) dont la formule est: H3 (XXIX) C12H803 o et de la 4,5-diméthyl-7hydroxy-8-allylcoumarine (XIV) on obtient la 4,5-diméthylangélicine (XXX), p.f. 211-212 OC (MeOH) dont la formule est: - 20 - (XXX) C 13H1003 A * * * Une méthode ulterieure, alternative à l'ozonolyse, pour préparer des alkyl-angélicines, sans groupements al- kyliques sur l'anneau furanique, comprend la préparatiorndes 8-coumarinilacétaldéhides, par epoxydation des 8-allyl-dé- rivés acétylés des coumarines, obtenus ainsi qu'il a été indiqué ci-dessus; leur hydrolyse à dioles et oxydation avec du tétracétate de plomb. En détail, cette méthode est décrite ci-après: On dissout gr. 0,7 de 5méthyl-7-acétoxy-8-allylcoumarine (XVI) en 50 ml de CHCl3 et on la traite avec la quantité stoechiométrique d'une solution chlorophormique à 2% d'acide perobenzoîque. Le mélange laissé pendant une nuit à tempéra- ture ambiante est lavé avec une solution saturée d'NaHCO3. lb Après élimination du solvant on obLient gr. 0,58 de b-mé- thyl-7-acétoxy-8-(2',3'-epoxy-propyl)coumarine (XXXI), p.f. 126-127,5 C (EtOAc-cyclohéxane). Gr. 0,5 de 5-méthyl-7-acé- toxy-8-(2',3'-epoxy-propyl)coumarine (XXXI) sont dispersés en 200 ml de solution à 1% d'acide oxalique, portés à ébullition et rechauffés à reflux pendant 10 minutes. Après refroidissement on extrait avec CHCl13 et on sèche (tNa2S04). Au résidu obtenu on ajoute directement 20 ml de benzène -et -gr. 1,0 de tetracétate de plomb, en petites portions, en - 21 - 2463616 - 21 - maintenant le tout à une température inférieure à 30 C. Une fois complétée l'addition des réactifs, on maintien le mélange sous agitation pendant 1 heure et on élimine par filtration la substance inorganique en la soumettant à des lavages avec du benzène. Après élimination du solvant les solutions benzéniques donnent gr. 0,31 de 8-(5méthyl-7-acétoxycoumarinyl)acétaldéhyde (XXXII). Ce dernier produit, soumis au traitement ci-dessus décrit avec H3PO4 à 85%, donne O,1 gr. de 5-méthylangélicine (XXVIi). o10 D'une manière analogue on obtient ae la 4-mé- thyl-7-acétoxy-8-allylcoumarine (XVIII) la 4-méthylangélici- ne (XXIX) et de la 4,5-diméthyl-7-acétoxy-8-allylcoumarine (XIX) la 4,5-diméthylangélicine (XXX). Les angélicines avec un groupement méthoxyque en position 5 se préparent à partir de la 5-méthoxy-7-hydroxy- coumarine ou de la 4-méthylcoumarine correspondante. Ici après on explique plus en détail cette méthode de prépara- tion. On condense gr 20,0 de fluoroglucine avec 40 ml d'acéto-acétate d'éthyle, dilués dans de l'alcool éthylique, ajoutant 10 ml de HCl concentré et réchauffant à reflux le mélange pendant 2 heures. Par refroidissement on obtient un abondant produit solide blanc. Séparé par filtration et cristallisé de MeOH, il donne gr 24,0 de 4-méthyl-5,7-di- hydroxycoumarine (XXXIII), p.f. 300-302 C. On réchauffe à reflux pendant une heure le mélange de 4-méthyl-5,7dihydroxycoumarine (XXXIII, gr 3,0), 20 ml d'anhydride acétique et gr 5,0 d'acétate de Na anhydre. On ajonte 300 ml d'eau et on continue à réchauffer à reflux pendant une autre heure. On sépare le précipité - 22 - obtenu en refroidissant: par cristallisation de MeOH on obtient g 24,8 de 4-méthyl-5,7-diacetoxycoumarine (XXXIV p.f. 148-149 C). La 4-méthyl-5,7-diacetoxycoumarine (XXXIV) est dissoute dans 80 ml d'éther diméthylique de l'éthylenglycol. On ajoute à la solution gr 6,6 de K2C03 sec et 3 ml de iodure de méthyle. On réchauffe le mélange à reflux pendant 6 heures, on fait évaporer le solvant et on réchauffe à reflux pendant 20 minutes le résidu après addition de 80 ml d'H20/MeOH (50:50). Après évaporation à pression réduite du MeOH et refroidéssement se forme un précipité. Après cri- stallisation de MeOH et par la suite de Me2CO, on obtient gr 1,52 de 4-méthyl-5-méthoxy-7-hydroxycoumarine (XXXV, p.f. 261-263 C). On fait réagir gr 6.0 de 4-méthyl-5-méthoxy-7-hy- droxycoumarine (XXXV) en le réachauffant à reflux, pendant 4h, dans ml 120 de solution acétonique, avec 12 ml de bromure d'allyle, en présence de K2C03 (gr. 4). On fait réfroidir. On filtre le solide par lavages repétés de Me2C0. Vo On élimine par la suite le solvant, par évaporation du filtrat et des eaux de lavage. On cristallise deux fois le résidu de MeOH: on obtient ainsi gr 4,40 de 4-méthyl-5-m6- thoxy-7-allyloxycoumarine (XXXVI, p.f. 141 OC). On réchauffe à reflux pendant 3 heures une solu- tion de gr 4,0 de 4-méthyl-5-méthoxy-7-allyloxycoumarine (XXXVI) dans 80 ml de diéthylaniline. On fait refroidir et on ajoute 400 ml de n-hexane. On sépare le précipité et on le lave à plusieurs reprises avec n-hexane. On cristallise deux fois de EtOAc: on obtient ainsi gr 2,8 de 4-mé- thyl-5-méthoxy-7-hydroxy-8-allylcoumarine (XXXVII, p.f. 198 - 23 - oC), (libre de l'isomère 4-mnéthyl-5-rriéthoxy-6-aily-7-ny- droxycoumarine, produit qui dans les phases suivantes peour- rait donner lieu à la formation d'une furocoumarine Lriné- aire. On fait réagir gr 3,0 de 4-méchyl-5-métnoxy-7-hy- droxy-8allylcoumarine (XXXVII) avec anydride acétique on présence de gr 4,0 d'acetate de Na, en réchauffant à reflux le mélange pendant 1 heure. On ajoute Hi 20 et on continue à réchauffer à reflux pendant 20 minutes encore. Après addi- tion de 200 ml d'eau on refroidit et on sépare le précipité qui s'est formé. Par cristallisation de i4eOH on obtient gr 2,4 de 4-méthyl-5méthoxy-7-acétoxy-8-allylcoumarine (XXXVIII, p.f. 143-144 C). On dissout en 150 ml de AcOH, gr 2,5 de 4-mé- thyl-5-méthoxy-7-acétoxy-8-allylcoumarine (XXXVIII) et on ajoute en agitant une solution acétique de brome contenant la quantité stoechiométrique de brome. Après avoir complété l'addition de brome, on continue l'agitation pendant 20 minutes; par la suite on évapore le solvant à pression reduite. Par cristallisation de MeOH le résidue donne gr 2,12 de 4-méthyl-5-méthoxy 7-acétoxy-8-(2',3'-dibromopro- pyl)coumarine (XXXIX, p.f. 184-185 C). A 150 ml d'une solution éthanolique de 4-mé- thyl-5-méthoxy-7-acétoxy-8-(2',3'-dibromopropyl)coumarine (XXXIX), on ajoute 35 ml d'une solution éthanolique de KOH à 4% et on réchauffe à reflux en absence de lumière pendant une heure et démie. On refroidit, on acidifie la solution avec HC1 dilué et on élimine le EtOH par évaporation à pression reduite. On lave plusieurs fois le résidu avec EtOH. Le residu obtenu de la substance organique séchée - 24 - 2463616 - 24 - (Na204), et par evaporation du solvant est purifié par 2 4 chromatographie sur colonne de SiO2 gel en employant comme éluant du CHCl3. On obtient ainsi par cristallisation de MeOH gr 0,062 de 4,5'-diméthyl-5-méthoxyangélicine (XL, p.f. 226 C) Par élimination des groupements méthyliques de la 4,5'-diméthyl-5méthoxyangélicine (XL) et introduction du groupement N,Ndialkylaminealkyle, ou peut obtenir d'autres produits dont les sels pharmaceutiques sont solubles dans il'eau. Par chlorométhylation des méthylangélicines on ootient les 4'-chloro-méthyl-dérivés desquels on prépare les dérivés hydroxyméthyliques, méthoxyméthylIiques, aminométhyli- ques, aminoalkoxyméthyliques et N,N-dialkylaminoalkoxy-mé- thyliques. Ainsi, on dissout en 150 ml d'AcOH gr. 3,0 de 4,5'diméthylangélicine (XXVI), et on additionne 23 ml de chlorométhylméthyléther; on laisse réagir le mélange à température ambiante pendant 15 heures. On ajoute une première portion de 10 ml de chlorométhylméthyléther et une deuxième après 8 heures. On laisse réagir le mélange pendant 36 neures après addition du dernier réactif et on laisse reposer pendant la nuit à O C. On filtre et on cristallise ae l'AcOH. Le précipité qui s'est formé est constitué par gr. 1,2 de 4,5'diméthyl-4'-chlorométhylangélicine (XLi) p.f. 213-214 C (AcOH). Du filtrat concentré on obtient par refroidissement à 0o, en laissant reposer, encore gr. 1,5 du produit. On réchauffe à reflux en H O pendant 4 heures, gr 0,50 de 4,5'-diméthyl-4'-chlorométhylangélicine (XLl); le mélange est par la suite refroidi et soumis à extraction avec CHCl3. La phase organique séchée (Na2S04), donne par - 25 - évaporation gr. 0,37 de 4-5'-diméthyl-4'-hydroxyméthyjn- gélicine (XLII), p.f. 202 OC (EtOAc) dont la formule est: (XLII) C 14H12 04 HC On réchauffe à réflux gr 0,5 de 4,5'-diméthyl- -4'-chlorométhylangélicine (XLI) pendant deux heures dans de l'acide acétique. Le mélange est refroidi, dilué avec de l'eau, neutralisé par addition de NaHCO3 solide, et soumis à extraction avec CHCl 3. La phase organique séchée (Na2SO 4) donne par évaporation du solvant gr 0,39 de la 4,5'-dimé- thyl-4'-acétoxyméthylangélioine (XLIII), p.f. 109 C (Cyclo- héxane/AcOEL) dont la formule est: CHI (XLIII) C 16H14 oc| H O--CO-CH3 On réchauffe à reflux pendant 3 heures en 75 ml de MeOH, gr. 0,2 de 4,5'diméthyl-4'-chlorométhylangélicine (XLI); en concentrant la solution et en la réduisant à petit volume on sépare gr. 0,14 de 4,5'-diméthyl-4'-méthoxyméthyl- angélicine (XLIV) p.f. 137 C (MeOH) dont la formule est: - 26 - CH, o0* (XLIV) C15H1404 0 HCN HCO- CHl. On suspend en 120 ml de N,N-diméthyl-formamide, gr. 1,2 de 4,5'-diméthyl4'-chlorométhylangélicine (XLI) et gr. 1,0 de K-phtalimide, (purifiée selon Gilman). On ré- chauffe le mélange à 100 C pendant 5 heures et on élimine le solvant à pression réduite. On reprend le résidu avec CHC13, on lave trois fois avec de l'eau et on sèche (Na2S04) l'extrait chloroformique. Après élimination du solvant on obtient gr. 0,9 de 4,5'-diméthyl-4'-phtalimidométhylangéli- cine (XLV) p.f. 271,5 C (CHCl3/CC14). On additionne gr. 0,17 de 4,5'-diméthyl-4'-phtali- mido-méthylangélicine (XLV) de 25 ml de EtOH à 95% et de 0,3 ml d'hydrate d'hydrazine (85% en H20), et on réchauffe à reflux pendant 4 heures. Après une nouvelle addition de 0,3 ml d'hydrate d'hydrazine on continue à réchauffer à reflux pendant 2 autres heures. On élimine le solvant et on reprend le résidu avec 70 ml de NaOH, O,1M. On lave la solution alcaline trois fois avec des portions de 150 ml de CHC13. On sèche la solution chloroformique (Na2S04) et on élimine 2 0 2 complètement le solvant. On reprend le résidu avec 40 ml d'HCl, 1,2M et on lave plusieurs fois la solution acide avec CHC13. On sèche la phase acqueuse, on dissout le résidu en EtOH absolu; on ajoute de l'éther anhydre jusqu'à ce que - 27 - l'on observe que le liquiae devient épais. On laisse c et refroidir. On obtient gr. 0,065 du chlorhydrate cle la 4,5'-diméthyl-4'-aminométhylangélicine (XLVI), qui se décom- pose à une température supérieure à 300 C, et présente la formule suivante: CHé (XLVI) C14H13 3 NC1 14 13 3 tiCX HaC-N ken * MnC I Ce produit est soluble en eau. En suivant une méthode analogue on obtient d'au- tres alkylangélicines, les 4'-hydroxyméthyl, les 4'-méthoxy- méthyl et les 4'-aminométhyl analogues. On dissout gr 0,20 de Na, finement divisé, en 10 ml de méthylaminoéthanole, et on ajoute gr 0,50 de 4,5'-di- méthyl-4'-chlorométhylangelicine (XLI) dissous dans 100 mi de tétrahydrofurane. On laisse réagir les produits en absence de lumière pendant 4 heurs, à température ambiante. On ajoute 200ml de HCl dilué et on extrait trois lfois le mélange avec des portions de EtOAc (300 ml). On neutralise la couche aqueuse par addition de NaHCO3 solide et on extrait avec EtOAc. On élimine le solvant et le diméthyiami- noéthanole en excès, par évaporation à basse pression de la couche organique, séchée sur Na2SO4. On purifie le résidu par chromatographie sur colonne de SiO2 gel en employant comme éluant du MeOH. La 4,5-diméthyl-4'-(N,N-diméthylami- 2b no-ethoxy-méthyl)angélicine (XLVII), (de laquelle on a obte- 246361-6 - 28 - lu gr 0,075), peut être transformée dans le chorrat:e correspondant, facilement soluble dans l'eapar solution dans un petit volume de HC1 dilué, et successive évaporation sous vide de l'eau et de l'HCi en excès. Sa formule est: CH, (XLVII) C H21 4N o 18 21 4 CHTO-CH7CHN'CH D'une manière analogue on peut obtenir d'autres N,N-dialkylaminoalkoxyméthyl- et aminoalkoxyméthyldérivé6. Propriétés des alkylangélicines L'introduction dans la molécule de l'angélicine d'un ou de plusieurs groupements alkyliques et en particu- lier de groupements méthyliques, augmente en général sa capacité à former le complexe dans l'obscurité, à se pnoto-additionner à l'ADN et par conséquent aussi son activité photobiologique. lb F:ormation du complexe dans l'obscurité Il eLst bien cornnu (F. Dal 'Acqua, l. T'erbOjvich, S. Marciani, D. Vedaldi et M14. Recher, Chem. Biol. Interac- tions, 1978) que la présence de complexes intercalés que les furocoumarines forment avec l'ADN, exerce une action vigou- reuse sur la photo-addition qui s'en suit, dans le sens d'augmenter ia vitesse de la photo-adaition. Dans le tableau Il sont indiqués les paramètres de iaison des complexes formés entre les alkylangélicines et ADN, à savoir- K (constante d'association du complexe, en PARAIETRES PHYSICO-CHIMIQUES DE L'INTERACTION ENTRE LES METHYLANGELICINES ET L'ADN "IN VITRO" DANS L'ETAT DE BASE ET DANS L'ETAT EXCITE à... à _.. __..... _ _. _.. ...... ---------------_-...... Paramètres de liaison des complexes avec 1'ADN (a) Constantes de vitess en d en ve F UROCOUMARINE rPsora1ène K costante d'association en % (ang=100) --------71,4-- 71,4 1/n fréquence des emplacements de liaison 0.108 en % (ang=100) __-- __.. __ des photoreactions a- vec 1'ADN (b) kxlO_2xmin- Il__en-1 3.43 an = luu) TABLEAU Il Capacité à former des liaisons croisé es intermolécu- laires en % (psr=100) (c) Xanthototoxine (8-MOP) 740 132 0.128 203 2.10 169 63 (c) 4'-N,N-Diméthylamino éthoxyméthyl -4,5- diméthy.langélicine 1.000 1.700 0.15 230 3.5 280 O - Méthylangélicine 1. 560 278 0.071 112 3.28 264 O 4'-Hydroxyméthyl-4,5'- diméthylangélicine 1.250 223 0.087 138 3.1 250 O 4,5LDiméthylangélicine 1. 410 252 0.094 149 3.76 303 O ,5'-Diméthylangélicine 1.750 312 0.085 135 2. 56 206 O ' - Méthylangélicine 1.200 214 0.073 116 2.35 189 0 4 'Methoxyméthyl-4,5' - diméthylangélicine 700 125 0.050 80 1.9 153 O 4 - Méthylangélicine 1.400 250 0.076 120 2.0 161 O Angélicine 560 100 0.063 100 1.24 100 0 4'Aminométhyl-4,5'-Diméthyl- Angélicine Chlorhydrate 16.300 2.910 0.255 1.05 0 0. Ch..... a) Determinées selon Mc Ghee et Von Hippel, J. Mol.Biol., 86,469 (1974) b) Determinées selon F. Dall'Acqua, S. Marciani, F. Zambon e G. Rodighiero, Photochem.Photobiol, 29,489 (1979) c) F. Dall'Acqua, S. Marciani, D.Vedaldi e G. Rodiqhiero 7.Natfrorsch., 29,635 (1974 i 2 tY CD Z- il tn -J 0. 8) cC -J a: se - 30 - 2463616 relation à un emplacement isolé) et 1/n (fréquence des emplacements de liaison ou nombre de molécules d'angélicine liées à chaque nucléotide); ces paramètres ont été déter- minés selon Mc Ghee et Von Hippel, J. Mol. Biol. 86,469 (1974). L'introduction d'un, deux ou trois groupements méthyliques cause une augmentation élevée de l'affinité par rapport à l'ADN, comme l'indique la forte augmentation des constantes d'association ainsi que le nombre accru des emplacements de liaison. L'introduction d'une tête cathionique en plus des deux groupements méthyliques pour former par exemple la 4'-aminométhoxyméthyl-4,5'diméthylangélicine et la 4'-N,N-diméthylaminoéthoxyméthyl-4,5'dirnéthylangélicine, augmente d'une manière très marquée l'affinité (K augmente plus de vingt fois). Cela est dû au fait qu'en plus de l'intercalation un deuxième type de liaison s'établit dans la formation du complexe, (à savoir une liaison ionique entre la tête cathionique et les groupements phosphatiques de l'ADN), ce qui augmente l'affinité de ces composés cathioniques solu- bles dans l'eau, par rapport à l'ADN. Capacité à la photo-addition L'introduction d'un ou de deux groupements iné- thyliques dans la molécule de l'angélicine a comme consé- quence une augmentation remarquable de la photo-addition à l'ADN (voir Tableau II). Seulement dans le cas de la 4,5,5'- triméthylangélicine dans laquelle ont été introduits trois groupements méthyliques, l'aptitude à la photo-addi- tion reste proche de celle de l'angélicine. *- 31 - 2463616 - 31 Des deux dérivés cathioniques solubles dans 'ea alors que le composé (XLVI) présente une capacité 2 la photo-addition à l'ADN inférieure à celle de l'angélicinu, le composé (XLVII) présente une capacité fortement accrue. Dans le Tableau II sont données les valeurs des constantes de vitesse des photoréactions déterminées selon DallAcqua et al. (Photochem. Photobiol., 29, 489 (1979)). Tous ces composés n'ont pas la propriété ce former des liasons croisés entre les groupments mroiculai'es: l'ADN, irradié en leur présence, ne montrait aucune tendance à se restructurer après sa déstructuration thérmiquc. En outre, son poids moléculaire, déterminé par des tests de sédimentation, restait sans changements. Ces déterminations ont été effectuées selon F. Bordin, F. Carlassare,.F. Baccichetti, A. Guiotto, P. Rodighiero, D. Vedaldi et F. Dall'Acqua, Photochem. Photobiol., 29, 1063 (1979). Activité photobiologique Une épreuve qui permet d'évaluer l'activité photo- biologique des alkylangélicines est l'étude de leur aptitude à empêcher la synthèse de l'ADN et de l'ARN dans les cellules de la tumeur ascitique d'Ehrlich. Dans le Tableau III les capacités d'inhibitLon sont exprimées en ID50, ce qui correspond à la dose d'irra- diation (en quanta à 365 nm) nécessaire à empêcher le bO"^ ice la synthèse de l'ADN et de l'ARN dans lesdites cellules, en presence d'une quantité constante d'alkylangélicine. Les alkylangélicines selon l'invention, présentent en génrai une tendance fortement accrue à bloquer la synthèse de i'ADiX et de l'ARN. (Seulement le composé cathionique soluble dans l'eau (XLVI) et le composé (XLVII) montrent une activité PROPRIETES PHOTOBIOLOGIQUES DES ALKYLANGELICINES SELON L'I:,?ENTION IABLLA- 1 11 à. Inhibition de la synthese de l'ADN etdel'ARN dans les I cellules de la tumeur ascitique de Ehrlich (a) F U R O C O U M A R I N E ID50 (quanta x 108) + S.E Phototoxicit de la peau e: % A D N en % A R N en % {uD Psoraléne 9.08 + 0.8 (ang=100) 14 + 1.1 (ang=100) Xanthototoxine (8-MOP) 10.04 + 0.6 249 25 + 3.3 7.1 4'-,N,NDimêthylamino éthoxyméthyl-4,5- diméthylangélicine 8.6 + 14.4 + o - Mêthylang1élicine 9.07 + 1.2 275 8.3 + 1.4 281 O 4'-Hydroxyméthyl-4, 5' diméthylangélicine 9.2 + 1.3 272 13.8 + 1.8 169 0 4,5'Diméthylangélicine 10.87 + 1.54 230 13.5 + 2.1 172 O ,5'Dimnéthylangêlicine 13.85 + 1.2 180 6.56+ 1.1 355 0 ' - Méthylangélicine 16.6 + 1.4 150 17.4 + 1.3 134 0 4'Methoxymëthyl-4,5' - diméthylangélicine 22.7 + 2.5 110 13.8 + 1.9 169 O 4 - Méthylangélicine 24 + Ang1lici né 25 + 4'Ami noniéthyl-4,5'-Diméthyl Angél icine Chlorhydt. . 100 3.1 1.1 18.1 + 23.3 + 1.7 1.6 __ 23.3 ...... e.... -. _ O > M Ob O Ob ) t/ IJ,;M cî o rZ 0 J a- Là, -J _._ ------- - 33 - inférieure à celle de l'angélicine). On peut en outre observer qu'en général, dans ce système biologique simple, il existe une corrélation étroite entre l'activité photobiologique et la tendance à causer des lésions photochimiques dans l'ADN (photoréactivité). Activité mutagénique L'activité mutagénique de la 4,5'-diméthylangéli- cine a été étudiée sur deux lignées d'Escherichia coli WP2 trp-; WP2 trpuvrA-. Deux furocoumarines linéaires, (le psoralène et le 8méthylpsoralène) ont aussi été employés dans les mêmes conditions comme substances témoin, (S. Venturini, M. Tamaro, C. Monti-Bragadin, F. Bordin, F. Baccichetti et F. Carlassare; "Comparative Mutagenicity of linear and angular furocoumarins, in E. Coli Strains defi- cient in known repair functions, Chem. Biol. Interactions, , 203 (1980)). La fréquence de mutation observée dans la lignée sauvage est très élevée dans le cas des deux furocoumarines linéaires, alors qu'elle est d'un niveau non appréciable dans le cas de la 4,5'-diméthylangélicine. L'activité mnuta- génique de cette dernière substance peut être détectée seulement dans la lignée uvrA, qui manque de fonction de réparation dans l'ADN. L'activité mutagénique de la 5-méthylangélicine observée sur la Salmonella Typhimurium TA 100 his G 46 (missense mutation) (uvrB-rfa) pKMlO1 (Ames test) était du même ordre de grandeur que celle de la 4,5'-diméthyl- angélicine. - 34 - Applications thérapeutiques Les applications thérapeutiques de ces produits se réfèrent aux maladies de la peau caractérisées par l'hyper- prolifération cellulaire, telles que le psoriasis, la mycose fongueuse, l'eczéma ou par l'absence de pigmentation de la peau telle que le vitiligo. Ces produits sont susceptibles de causer, d'une manière hautement sélective, des photodommages à l'ADN de l'épiderme, ce qui a comme conséquence l'inhibition de la 1o division des cellules, et le retour à l'état normal de la peau malade. Les alkylangélicines selon l'invention peuvent être employées en thérapie de deux manières différentes, à savoir par application topique ou par administration orale, suivies d'irradiation UV-A. L'application topique des alkylangélicines appa- rait plus simple et sûre que l'application topique des psoralènes. En effet tous les problèmes de la photosensibi- lisation de la peau toujours présents dans le cas de l'application topique des psoralènes, sont absents dans ce cas puisque les alkylangélicines ne présentent pas de phototoxicité pour la peau. En outre d'autres effets colla- téraux, tels que l'hepatotoxicité et le risque de cataracte qui peuvent se présenter lors de l'emploi par voie orale des psoralènes, sont éliminés par l'application topique des alkylangélicines. En relation à leur activité mutagénique plus réduite, le risque de cancer de la peau parait réduit par rapport aux psoralènes. Avant de réaliser des expérimentations cliniques sur des êtres humains afin d'évaluer l'efficacité théra- peutique des alkylangélicines selon l'invention, des ex- - 35 - périmentation préalables ont été faites sur des animaux de laboratoire. En effet, l'évaluation de l'ampleur de l'inhibi- tion de la synthèse de l'ADN de l'épiderme des souris "in vivo", après des applications topiques des composés et une irradiation UV-A, donne des informations précises sur l'ef- ficacité thérapeutique des composés sur des êtres humains, malgré l'impossibilité de reproduire le psoriasis ou d'au- tres maladies semblables de la peau sur des animaux de laboratoire. Dans le Tableau IV sont indiquées les données relatives à l'inhibition. TABLEAU IV - Inhibition de la synthèse de l'ADN épidermique des souris "in vivo" après application topique de derivés de l'angélicine et irradiation UV-A. Solvent, sans médicaments psoralène 8-méthoxypsoralène (8-MOP) 4,5'diméthylangélicine -méthylangélicine ,5'-diméthylangélicine 4,5diméthylangélicine 4-méthylangélicine 4'-diméthylaminoéthoxyméthyl- 4,5'-diméthylangélicine 4'-acétoxyméthyl-4,5'-diméthyl- angélicine angélicine Inhibition en pourcentage + l'erreur standard 2.5 + 1.3 47.8 + 7.9 61 + 1.6 37.6 + 4.9 47.5 + 1.19 48.3 + 2.9 36 + 1.1 68.5 + 19.5 29.4 + 16.2 10.6 + 17.5 + 4.5 2.5 - 36 - Pour obtenir ces données les produits ont été appliqués sur le peau depilée de l'abdomen de souris femelles en employant des solutions méthanoliques à 0,01% (50 pg/cm); après avoir gardé les souris dans l'obscurité pendant 45 minutes, on a irradié leur adbomen avec de la lumière UV-A (9J/cm). Par la suite on a injecté par v.p. de la 3Hthymidine (70Ci/mM; 10 yCi). Après 30 minutes, on a sacrifié les souris, on a enlevé les peaux irradiées et on a isolé l'épiderme (T.J. Slaga, G.T. Bowden, 'B.G. Shapas et R.K. Boutwell, Cancer Res., 33,769-776(1973)), on l'a homo- geneisé en employant un mixer Vortex et on l'a soumis à l'extraction de l'ADN (E. Szybalska et W. Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S., 48,20262034(1962)). On a dissous dans de l'eau les échantillons d'ADN et on en a determiné la radioactivité spécifique. Le pourcentage d'inhibition de la synthèse de l'ADN observé dans chaque échantillon, étant calculé en prenant comme témoin la radioactivité incorporée et obser- vée dans i'ADN épidermique de la peau du dos du même animaltraité e de la même manière. L'activité spécifique observée dans la peau de témoin étant de l'ordre de 0,9-1,2 x 104 dpm/mg d'ADN. Chaque produit à été étudie sur au moins six souris. Les données du Tableau IV indiquent que les alkylangélicines selon l'invention, sont évidemment appro- priées à inhiber la synthèse de l'ADN épidermique des souris. Ces données montrent une corrélation avec les données cliniques, démontrant ainsi que ce "test" peut fournir des renseignements importants sur la possible effi- cacité thérapeutique de cette catégorie de composés. - 37 - Données cliniques L'efficacité des diverses alkylangélicines selon l'invention, et en particulier: la 5-méthylangélicine, la 4,5'-diméthylangélicine; la 4'- hydroxyméthyl-4,5'-diméthyi- angélicine, la 4'-hydroxyméthyl-4,5'-diméthylangélicine et la 4,5diméthylangélicine, a été controlée en mesurant leur capacité à guérir le psoriasis chez divers patients. Dans un but de comparaison directe, l'efficacité de l'angélicine non substituée a aussi été controlée, ainsi que celle de trois furocoumarines linéaires dont on connaissait le haut degré d'efficacité c'est à dire le 8-méthoxypsoralène (8-MOP), le méthoxypsoralène (5-MOP) et le 4,5',8-triméthylpsoralène (TMP). Pour chaque traitement on a examiné quatre zones distinctes de la peau malade: (a) dans la première zone on appliqua une lotion alcoolique (contenant 10% de glycérine) du produit (O,1% poids/vo- lume), jusqu'à atteindre une concentration de 20 fg/cm2, et on la laissa s'évaporer par la chaleur du corps; une demie heure plus tard on irradia la zone par le moyen d'une lampe (high intensity UV-A emitting low pressure mercury fluorescent lamp wavelength 320-400 nm); les doses de l'irradiation étant de l'ordre de 4,5-13 J/em2 pour chaque application, en fonction de la sensibilité de la peau des patients; la quantité de radiation étant plus basse pour une peau plus sensible et vice-versa. (b) On traita une deuxième zone de la peau comme en (a), on la protégea de la lumière et la garda dans l'obscurité (témoin); (c) une troisième zone sur laquelle le médicament ne fut pas - 38 - 2463616 appliqué, fut exposée à une irradiation comme en (a) mais en général avec des doses plus élevées d'UV-A; (d) une quatrième zone ne fut pas traitée ni avec le médica- ment ni avec la lumière. On répéta le traitement avec les angélicines, ci-dessus expliqué, 5 fois par semaine, pendant deux semai- nes ou d'avantage. Le nombre total de traitements a été entre 8 et 20. Dans certains cas, comme par example dans le cas de la 5-méthylangélicine, une disparition satisfaisante du psoria- sis a été observée après 8 traitements. Dans les expérimen- tations témoin, réalisées avec des furocoumarines linéaires (8-MOP, 5-MOP, et TMP), on employa des doses de lumière moins élevées que pour les alkylangélicines afin d'éviter de causer l'apparition de phénomènes de sensibilisation à la lumière (rougeur, érythème). Les traitements ont été répétés trois fois par semaine au maximum. Un résumé des données cliniques obtenues apparait au Tableau V, sur la base duquel les angélicines peuvent être classées par ordre d'efficacité décroissante comme ci après: -méthylangélicine; 4,5'-diméthylangélicine; 4'-hydroxymé- thyl-4,5'-diméthylangélicine, 4,5-diméthylangélicine, cette dernière étant également efficace que l'angélicine. La 5-méthylangélicine apparaît très efficace, probablement plus que le 8-MO? lui même. En outre la 5-méthylangélicine en plus de présenter une efficacité très élevée, permet d'obte- nir plus rapidement la disparition du psoriasis que le 8-MO?, car les traitements peuvent être répétés plus fré- quemment étant donné l'absence de phototoxicité de la peau - 39 - (par exemple 1 traitement chaque jour pendant 5 jours par semaine). TABLEAU V - Résultats de la photochimiothérapie avec alkyl- angélicines sur des malades (l'angélicine, le 8-MOP, le 5-MOP et le TMP sont inclus a titre de comparaison) Furocoumarine No. de malades traités Excel- lents Bons Moyens 1) 8-méthoxypsoralène (8-MOP) 10 3 2) 5méthoxypsoralène (5-MOP) 9 O 3) 4,5',8-triméthylpsoralène (TMP) 8 2 4) Angélicine 8 0 ) 4,5'-diméthylangélicine 4 0 6) 4'-hydroxyméthyl-4,5'-di- méthylangélicine 4 0 7) 5-méthylangélicine 7 2 8) 4,5-diméthylangélicine 2 0 9) UV-A seulement 17 0 ) CONTROL (meaicament sans lumière) 17 0 Les résultats des produits 1, 2 et 3 se traitements seulement. Les résultats des produits 4,5,6,7 et 8 se traitements. Excellent = guérison > 90%; Bon = 70-90%; Mauvais 3 2 2 4 1 4 2 2 0 8 3 0 1 2 o 0 o 1 1 O' O 0 17 réfèrent a 10-12 réfèrent a 10-18 Moyen = 50-70%; Ainsi qu'il est connu la seule UV-A produit des resultats modestes mais à des doses de radiation bien plus élevées. Par contre on n'observe aucun résultat sur la peau traitée avec le médicament et maintenue dans l'obscurité. D'une manière analogue aux psoralènes les alkyl- angélicines selon l'invention peuvent être aussi admini- Mau- va i s 2463e16 - 40 - strées par voie orale. En effet leur toxicité aigue c îez e souris est du même ordre de grandeur de celles des psoralè- nes (LD50 du 8-i4OP = 0,8 g/Kg; LD50 de la 5-méthylangélici- 50 ne> 2 g/Kg; LD50 de 4-5'-diméthylangélicine> 2,5 g/Kg). Les alkylangélicines selon l'invention, après ad- mrinistration orale, se comportent d'une manière semnblable aux psoraiènes: en effet, elles présentent un tropisme évident pour la peau ainsi qu'il a été démontré aar.s les expérimentations réalisées sur les souris. Comme le médicament se localise au niveau de la peau, lorsque celle-ci est irradiée avec ce l'UV-A, il se produit une photoréaction. entre le médicament et l'ADNf de l'épiderme. Les photodommages dérivant de cette photoréac- tion donnent lieu à l'inhibition de la division cellulaire d'une manière très proche à ce qui arrive dans le cas des psoralènes. Il existe toutefois une différence fondamentale entre les effets des angélicines et ceux des psoralènes. Les angélicines causent seulement des lésions monofonctionnelles sur l'ADN, alors que les psoral&nes causent en même temps des lésions mono et bifonctionnelles. Ces dernières donnent lieu à des conséquences biologiques plus prononcées (fréquence plus élevée de mutations, risque plus élevée de cancer de la peau et phototoxicicé cutanée). En considérant que les expérimentations effectuées sur des souris afin d'évaluer l'efficacité de ces comrfposés appliqués topiquement, ont fourni des données en corrélation avec les données cliniques, cette expérimentation cocnvena- biement modifiée a été exploitée pour évaluer l'efficacité des alkylangélicines administrées oralement et suivies d'une JO Lrradiation UV-A. - 41 - A cet propos des expérimentations ont été effec- tués avec des souris (20 + 2 g de poids), qui ont été laissés à jeun pendant trois heures avant l'administration des alkylangélicines par voie orale. Des lots de 5 souris ont été alimentés avec une suspension de 0,5% de méthylcellulose dans de l'eau conte- nant des alkylangélicines selon l'invention (0,25 g/Kg); on garda les animaux dans l'obscurité pendant deux neures, c'est à dire le temps nécessaire à l'absorption, à la distribution systémique et à la localisation du médicament au niveau de la peau, qui a été par la suite irradiée avec de la lumière UV-A (9J/cm). On sacrifia finalement les animaux et on contr8la l'inhibition de la synthèse de l'ADN de l'épiderme (Tableau VI). TABLEAU VI - Inhibition de la synthèse de l'ADN épidermique des souris "in vivo" après administration orale des derives de l'angélicine et irradiation de la peau par lumière UV-A. Pourcentage d'inhibition + l'erreur standard Pas de médicament 3.2 + 1.8 8-méthoxypsoralène (8-MOP) 39.1 + 3.7 4,5'-diméthylangélicine 51.0 + 8.0 4,5-diméthylangélicine 55.0 + 6.0 4'-hydroxyméthyl-4,5'-diméthyl- angélicine 4'-acétoxyméthyl-4,5'-diméthyl- angélicine angélicine 54.2 + 6.8 64.8 + 28 + 13.9 La peau du dos protégée de la lumière avec du papier foncé, a été prise comme témoin. Comme composé de comparaison, le 8-MOP a aussi été -42- employé dans les mêmes conditions d'expérimentation. L'activité élevée des alkylangélicine selon l'in- vention (plus élevée que celle du 8-MOP) dans l'inhibition de la synthèse de l'ADN de l'épiderme chez les souris, après administration orale, permet de considérer ces composés comme efficaces chez les êtres humains par administration orale pour la photochimiothérapie du psoriasis et d'autres maladies de la peau caractérisées par une hyperprolifération cellulaire. Les présentations thérapeutiques ci-après peuvent être employées pour l'adiministration orale des alkylangéli- cines: Capsules: Alkylangélicine (médicament) 30 mg Lactose (diluant) 70-120 mg Stéarate de Mg (lubrifiant) 1-1,5 mg Lauril sulfate de Na (mouillant) 1,5 mg Introduits dans une capsule de gélatine appropriée (rigide ou molle). Comprimés: Alkylangélicine (médicament) 30 mg Lactose (diluant) 240 mg Stéarate de Mg (lubrifiant) 2 mg Lauril sulfate de Na (mouillant) 3 mg Amidon de mais (agent de désagrégation et lubrifiant) 60 mg Cellulose microcristalline (lu- brifiant et agent de désagrégation) 10 mg Polyvinylpyrrolidone (liant) 3% Selon le poids, l'âge et la sexe du patient, une - 43 - ou plusiers capsules ou comprimés pour 'ad. -..- >. orale, deux heures avant l'irradiation. - 44 - R E V D I C A i L ô S 1. Furocoumarine pour la photochimiothérapie du pso- riasis et d'autres maladies de la peau qui iui sont sensibles caractérisée en ce qu'elle est constituée par une angélicine modifiée par introduction de groupements aikyii- ques et par ses sels pharmaceutiques. 2. Furocoumarine selon la revendication I caraccér.- sée en ce qu'elle est constituée par une angélicine moaifiée par l'introduction d'au moins un groupement m&nyiuu. 3. Furocoumarine selon la revendication 1 caractéri-: sée en ce qu'elle est constituée par une angélicine;ao-iúiée par l'introduction d'au moins un groupement méthylénique fonctionnalisé. 4. Furocoumarine selon les revendications 1 et Ä caractérisée en ce qu'elle est constituée par une angé?icine modifiée par l'introduction d'un groupement méthylique en position 5. 5. Furocoumarine selon les revendications 1, 2 et 4 caractérisée en ce qu'elle est constituée par une angeiicine modifiée par l'introduction de deux groupements méthyliques dont l'un en position 5'. b. Furocoumarine selon les revendications i et 3. caractérisée en ce qu'elle est consticuée par une angélicine modifiée par l'introducLion d'un groupemnent liydroxymblcyié- nique en position 4' et d'au moins un groupement méthylique. 7. Furocoumarine selon les revendications 3,2 et 4 caractérisée en ce qu'elle est constituée par 'a C-me- tnylangélicine. * r. Furocoumarine selon les revendications ",2 et, caractérisée en ce qu'elle est constituée par la 4,5'-ci- - 45 2-24463616 - 45 - méthylangélicine. 9. Furocoumarine selon les revendications 1,2,4 et 5 caractérisée en c4 qu'elle.est constituée par la 5,5'-dimé- thylangélicine. 10. Furocoumarine selon les revendications 1,2,3,5 et 6 caractérisée en ce qu'elle est constituée par la 4,5'-di- méthyl-4'-hydroxyméthylangélicine. 11. Furocoumarine selon les revendications 1,2 et 3 caractérisé en ce qu'elle est constitué par une angélicine qui présente un groupement amino ou un groupement N,N-dial- kylaminoalkyloxyméthyle en position 4' et au moins un groupement méthylique. 12. Furocoumarine selon les revendications 1,2,3 et - 11, caractérisée en ce qu'elle est constituée par la 4,5'-diméthyl-4'-(N,N-diéthyl)amino-éthoxyméthylangélicine. 13. Furocoumarine selon les revendications 1 et 2, caracQtérisée en ce qu'elle est constituée par une angélicine modifiée par introduction d'un groupement oxyalkylique en position 5, et qu'elle presente an moins un groupement méthylique. 14. Furocoumarine selon les revendications 1,2 et 13, caractérisée en ce qu'elle est constituée par une angélicine modifiée par introduction d'un groupement aminoalkyloxy, ou par un groupement N,Ndialkylamino-alkyloxy, en position 5 et qu'elle présente an moins un groupement méthylique. 15. Furocoumarine selon les revendications 1,2,3,5 et 6 caractérisée en ce qu'elle est constituée par la 4'-ace- toxyméthyl-4,5'-diméthylangelicine. 16. Furocoumarine selon les revendications 1 et 3 caractérisée en ce qu'elle est constituée par la 4'-N,N-di- - 46 - méthyléthoxyméthyl-4,5'-diméthylangélicine. 246361 17. Furocoumarine selon les revendications 1 et 2 caractérisée en ce qu'elle;-est constituée par la 4-mé-thyl- angélicine. 18. Produit pharmaceutique' pour applications locales, pour la photochimiothérapie du psoriasis et d'autres mala- dies de la peau sensibles à ce traitement, aractérisé en ce qu'il comprend' au moins un des produits selon une o plusieurs revendications de 1 à 17 dans un pourcentage de 0,05-0,4 p/v dans une solution glycoalcoolique contenant -30% p/v de glycérine. 19. Produit pharmaceutique à administrer par voie orale pour la photochimiothérapie du psoriasis et d'autres -- maladies de la peau qui lui sont sensibles caractérisée en ce qu'il comprend une ou plusieurs alkylanEgélicines selon les revendications de 1 à 17 et ayant la composition suivante: Médicament 30 mg - Diluant 70-200 mg Lubrifiant 1-5% Mouillant 1 introduits dans une capsule de gélatine appropriée, rigide ou molle. 20. Produit pharmaceutique à administrer par voie orale pour la photochimiothérapie du psoriasis et d'autres maladies de la peau qui lui sont sensibles caractérisé en ce qu'il est constitué par une comprimé contenant une ou plusieurs alkylangélicines selon les r vendicacions de 1 à 17 et ayant la composition suivante: Médicament 30 mg Diluant 100-240 mg Lubrifiant 2-20 mg Agent de désagrégation 15-20 mg Mouillant 1 % Liant 3-5 % - 47 - 24 6 3616 21. Composé pour le photo-chimiothérapie du psoriasis et autres maladies de la peau qui lui sont sensibles, carac- térisé en ce que sa formule est R2 R1 Ré/ R4 dans laquelle R1 et R3 peuvent être identiques 0ou différents et représen- tent l'hydrogène ou un radical alkyle, RZ représenite l'hydrogène ou un radical alkyle, methoxy, ou le groupe formule / RS \R - O - (Cil) - i 2 n R et R est l'hydrogène, un radical al,yle methoxymethyle, hydroxyrme- thyle, acétoxyrnméthyle ou un groupe de l'une des formules R - (CH2),- N 2ri \ R6 ou -' - (c1)" - o - (c.2)' - l dans lesquelles 1R5 et R peuvent être indépendammenzt l'hydrogène 6 ou un radical alkyle et n et m sont des nombres entiers ayant des valeurs indépendantes de 1 à 3, ainsi que les sels pharmaceutiques de ce composé. 22- Composé conforme à la revendication21 caractérisé en ce que les radicaux Ri, 1t' R3 1 R4 qui peuvent être identiques ou différents représentent l'hydrogène ou le radical méthyle. - 48 - 23. Composé conforme à la revendication 21 caractérisé en ce que les radicaux R1 1 R2 R3 qui peuvent être identiques ou diffé - rents représentent l'hydrogène ou le radical méthyle et R4 est l'un des radicaux méthoxvnméthyle,- hydroxymnéthyle ou acétoxy- méthyle, ou un groupe ayant l'une des formules R /R5 _ (Cil) - N 2n 6 ou - CH) - 0 - (CH2) - N 2 n 2r dans lesquelles R et R6 peuvent être indépendamment l'hydrogène ou un radical alkyle et n et mn sont des nombres entiers ayant des valeurs indépendantes de 1 à 3. 24. Composé conforme à la revendication 21 caractérisé en ce que les radicaux R{1 et R3 qui peuvent être identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un radical alkyle, R représente le radical méthyle et R4 représente l'hydrogène ou l'un des radicaux méthoxyméthyle, hydroxyméthyle, acétoxyméthyle ou un groupe de formules -(C) N 5 ou (CH2) -0 -(Ci) - NC R''R dans lesqeles R et R6peuvent être indépendamment l'hydrog'ne ou un radical alkyle et n et m sont des nombres entiers ayant des valeurs independantes de 1 à 3. 25. Composé conforme à l'une quelconque des revendications 21 22 ou 24 caractérisé en ce que les radicaux R1 et R4 qui peuvent être 1 t4qpe ente - 49 - 2 4 6 3616 identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un radical alkyle et les radicaux R et R3 sont des groupes méthyle. Z 3 28. Composé conforme à l'une quelconque des revendications 21 ou 23 o R1, R2 P R qui peuvent être identiques ou différents représentent l'hydrogne ou un radical alkyle et 3 est le groupe hydroxy thyle l'hydrogène ou un radical alkyle et R est le groupe hydroxyrnéthyle.