FR 2460290 A1 19810123 FR 7916845 A 19790629 t 2460290 La présente ilnvenlLion, à la réalisation de laquelle ont participé Messieurs Jean BOUCIHAUDON, Daniel FARGE et Claude JAMES, concerne de nouveaux tétra- ou pentapeptides de formule générale: R - NH Ctl - CO - Nlt - CH - CO - R CH3 CH2CH - CO - NH - fH -CO - R2 (I) 3 22 212 (, H2)3 R3 - NH - CH - R4 éventuellement leurs sels, leur préparation et les médicaments qui les contiennent. Les parois bactériennes, par exemple les parois de mycobactéries, sont constituées essentiellement d'un peptidoglycane formé d'acide Nacétyl- muramique sur lequel sont fixés des peptides renfermant l'enchatnement L Ala- D Glu-DAP. Par ailleurs, les parois bactériennes sont très riches en lipides dont certains sont libres et extractibles et d'autres sont liés à la structure de la paroi et sont constitués par des acides mycoliques (acides gras géants, a-ramifiés et 3-hydroxylés). L'ensemble des constituants de la paroi cellu- laire forme une structure covalente composée d'un peptidoglycane et d'un myco]ate d'arabinogalactane liés entre eux par des liaisons phosphodiesters. Ces parois bactériennes présentent la plupart des propriétés biologiques des cellules entières lorsqu'elles sont associées à une huile minérale ou végétale et administrées après mise en suspension dans du soluté physiologique. Dans les brevets belges 821 385, 852 348 et 852 349 sont décrits des peptides, couplés avec l'acide N-acétylmuramique, qui contiennent l'enchat- nement L Ala-D Glu ou L Ser-D Glu et qui sont efficaces comme adjuvants immuno- logiques et comme agents antiinfectieux. Dans le brevet français 75.24440, publié sous le numéro 2 320 107, sont décrits des produits de couplage entre un acide gras et un saccharide heptapeptide isolé à partir d'une mycobactérie contenant une cire "D" et qui peuvent être représentés par la formule suivante: NAG NM NAG - NAM Ala Ala 1 la Glu R oo) n DAP n (AP 2 2460290 dans laquelle en particulier: NAG = N-acétylglucosamine; NAM = acide Nacétylmuramique R = radical alcoyle contenant 9 à 17 aLomes de carbone. Ces produits sont des adjuvants immunologiques de la production d'anticorps et de l'hypersensibilité retardée capables d'agir seuls, c'est-à- dire sans qu'il soit nécessaire de les administrer en solution huileuse. Tous ces produits se caractérisent par la présence d'acide Nacétylmuramique qui, d'après KASUMOTO et al., Tetrahedron Letters 49, 4899 (1978), est considéré comme lié à l'activité immunologique. Il a maintenant été trouvé que les peptides de formule générale (I) présentent, malgré ltabsence d'acide N-acétylmuramique, des propriétés adju- vantes et immunostimulantes remarquables. Par ailleurs ces composés, qui sont bien définis, peuvent être obtenus aisément avec la pureté suffisante requise pour l'emploi en thérapeutique. Dans la formule générale (I) R représente un atome d'hydrogène ou un reste d'acide gras R1 représente un radical hydroxy ou amino, R2 représente un radical hydroxy ou un reste N-glycyle ou N-D alanyle, R3 représente un atome d'hydrogène ou un reste d'acide gras ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est éventuellement substituée par un reste d'acide gras, étant entendu que l'un au moins des symboles R2 et R3 représente un reste glycyle ou D alanyle et que l'un au moins des symboles R et R3 représente ou contient un reste d'acide gras, et R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle. Dans la formule générale (I), l'alanine liée à l'acide glutamique est sous forme L, l'acide glutamique est sous forme D, la lysine, lorsque R4 représente un atome d'hydrogène, est sous forme L et l'acide diamino-2,6 pimélamique, lorsque R4 représente un radical carbamoyle, est sous forme D,D; L,L; DD,LL (racémique) ou D,L (méso). Par reste d'acide gras, il faut entendre un radical alcanoyle contenant 1 à 45 atones de carbone éventuellement substitué par un radical hydroxy, phényle ou cyclohexyle, un radical alcénoyle contenant 3 à 30 atomes de carbone pouvant contenir plus d'une double liaison ou un reste d'acide mycolique tel que rencontré dans la structure de la paroi bactérienne de mycobactéries, de Nocardia ou de corynébactéries. Selon la présente invention, les nouveaux tétra ou pentapeptides de formule générale (I) peuvent &tre obtenus selon les méthodes généralement 3 2460290 utilisées en syrnthèse pepLidiqlue; les différentes réactions sont mises en jeu après blocage par des groupcLielLts protecteurs convenables des fonctions amines ou acides qui;,, doivent pas participer à ces réactions, et suivies du déblocage de ces fonctions. Dans ce qui suit, et pour simplifier,on désignera par aminoacides cL peptides les aminoacides et peptides eux-memes et leurs dérivés substitués sur les fonctions amines et/ou acides. Selon l'invention, les nouveaux produits de formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un aminoacide de formule générale: R. - Nil - CH - COR' (III) R6 dans laquelle R5 représente un atome d'hydrogène, un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine tel que le radical benzyloxycarbo- nyle ou t.butyloxycarbonyle, R6 représente un atome. dhydrogène ou un radical méthyle étant entendu dans ce cas que l'alanine est sous forme D, et R' représente un radical hydroxy ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, sur un tri- ou tétrapeptide de formule générale: R7 - NH - CH - CO - NH - CH - CO - R8 cil3 {2cil2 -CO - NH CH - co - R 9 ! (Iv) (RCH2)3 RO1 - NH - CH - R4 dans laquelle R4 est défini comme précédemment, R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine tel que le radical benzyloxycarbonyle ou t.butyloxycarbonyle, R8 représente un radical hydroxy ou amino ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomnies de carbone éventuel- lement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, R9 représente un radical hydroxy ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-glycyle ou N-D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atonies de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et RO10 représente un atome d'hydrogène ou un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine tel que le radical benzyloxycarbonyle ou t. butyloxycarbonyle ou un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est éventuellement substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de la fonction amine tel que le radical benzyloxycarLboiiylc ou t.buLyloxycarbonyle, étant entendu que l'un au moins des radicaux R7 ou R10 rlpr:seruiLe ou contient un reste d'acide gras et que, R9 représentant un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou un reste N-glycyle ou N-D alanyle dont la fonction acide est protégée, R10 représente un atome d'hydrogène, eL que R9 représentant un radical hydroxy, R10 représente un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est subs- tituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de la fonction amine, suivie éventuellement du remplacement des radicaux R5, R7 et/ou R10 (lorsqu'ils représentent un groupement protecteur de la fonction amine) par un atome d'hydrogène et du remplacement des radicaux R', R8 et/ou R9 (lorsqu'ils représentent ou contiennent un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle) par un radical hydroxy. Plus particulièrement, les nouveaux peptides de formule générale (I) dans laquelle R, R1, R3 et R4 sont définis comme précédemment et R2 représente un radical glycyle ou D alanyle peuvent être obtenus par action d'un aminoacide de formule générale (III), dans laquelle R6 et R' sont définis comme précé- demment et R5 représente un atome d'hydrogène sur un tri-ou tétrapeptide de formule générale (IV) dans laquelle R4 et R7 sont définis comme précédemment, R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, R9 représente un radical hydroxy et R10 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine,- étant entendu que l'un au moins des symboles R7 ou R10 représente ou contient un reste d'acide gras, suivie éventuellement du remplacement du radical R7 ou R10, lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine, par un atome d'hydrogène et des radicaux R8 et/ou R' lorsqu'ils représentent un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone (éventuellement substitué par un radical phényle ou nitro- phényle) par un radical hydroxy. Généralement, il est nécessaire d'activer la fonction acide libre du peptide de formule générale (IV) préalablement à l'action de l'aminoacide de formule générale (III). De préférence, le dérivé activé du peptide de formule générale (IV) est un anhydride mixte préparé in situ par action d'un halogéno- formiate d'alcoyle tel que le chloroformiate d'isobutyle sur le peptide de 2460290 formule générale (IV). La condensation du dérivé activé s'effectue dans un solvant organique tel que le dioxanne, le tétrahydrofuranne, le chloroforme, le toluène ou le diméLhylfornmanide ou en milieu hydroorganique, en présence d'une base (minérale, telle que la soude, ou organique, telle que la triéthyl- amine), à une température comprise entre -10 et +30 0C. Le remplacement éventuel des radicaux protecteurs R7 ou R10 par un atome d'hydrogène et des radicaux protecteurs R8 et R' par des radicaux hydroxy peut être effectué selon les méthodes connues, en fonction de la nature de ces groupements. Il est particulièrement avantageux de choisir les radicaux R7 ou R10, R8 et R' de telle manière que leur remplacement par un atome d'hydrogène ou par un radical hydroxy puisse s'effectuer en une seule étape. Par exemple, R7 ou Ro10 peuvent représenter un radical benzyloxycarbonyle et les symboles R8 et R' représenter un radical benzyloxy, et,dans ces conditions, le remplacement de ces radicaux par des atomes d'hydrogène s'effectue par hydrogénolyse en opérant dans un solvant organique approprié tel que l'acide acétique (éventuellement en mélange avec un autre solvant organique tel que le méthanol) ou dans un solvant hydroorganique, en présence d'un catalyseur tel que le palladium, par exemple le palladium sur noir, à une température voisine de 200C et sous une pression voisine de 760 mm de mercure. Cependant, il peut être nécessaire d'éliminer un ou plusieurs de ces groupements protec- teurs sans toucher aux autres. Dans ce cas les groupements protecteurs des fonctions amines pourront ttre, par exemple, l'un un radical t.butyloxy- carbonyle(éliminable par hydrolyse acide) et l'autre un radical benzyloxycar- bonyle (éliminable par hydrogénolyse) et les groupements protecteurs des fonctions acides pourront être, par exemple, l'un un radical méthyle ou t. butyle (éliminable par hydrolyse acide ou basique) et l'autre un radical benzyle(éliminable par hydrogénolyse). Plus particulièrement, les nouveaux peptides de formule générale (I) dans laquelle R, R1, R2 et R4 sont définis comme précédemment, et R3 représente un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est éventuel- lement substituée par un reste d'acide gras, peuvent etre obtenus par action d'un aminoacide de formule générale (III) dans laquelle R6 est défini comme précédemment, R5 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine eL R' représente un radical hydroxy, sur un tri ou tétrapeptide de formule générale (IV) dans laquelle R4, R7, R8 et R9 sont définis conmme précédemment et R10 représente un atome d'hydrogène, étant entendu que l'un au moins des symboles R5 et R7 représente un reste d'acide gras, suivie éventuellement du remplacement du radical R5 ou R7, lorsqu'il b représente un groupenxnL protecLeur de la fonction amine, par un atome d'hydrogène et des radicaux R8 eL/ou Rg, lorsqu'ils représentent ou contiennent un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone (éventuellement subs- titué par un radical phényle ou nitrophényle) par un radical hydroxy. GénéralemenL, il est nécessaire d'activer la fonction acide de l'aminoacide de formule générale (III) préalablement à son action sur le peptide de formule générale (IV). Généralement, le dérivé activé de l'amino- acide de formule générale (III) est un anhydride mixte préparé in situ par action d'un halogénoformiate d'alcoyle (tel que le chloroformiate d'isobutyle) sur l'aminoacide de formule générale (III). La condension du dérivé activé s'effectue dans un solvant organique tel que le dioxanne, le tétrahydrofuranne, le chloroforme, le toluène ou le diméthylformamide ou dans un milieu hydro- organique, en présence d'une base (minérale, telle que la soude, ou organique, telle que la triéthylamine), à une température comprise entre -10 et + 30 0C. Le remplacement des radicaux protecteurs R5 ou R7 par un atome d'hydrogène et des radicaux protecteurs R8 et/ou R9 par un radical hydroxy peut etre effectuée selon les méthodes connues en fonction de la nature de ces groupements. Il est particulièrement avantageux d'effectuer ce rempla- cemnent dans les conditions données précédemment. Selon l'invention, les nouveaux peptides de formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un dipeptide de formule générale: R7 - NH - CH - GO - NH - CH - GO - R8 I (V) CH CH2CH2COOH () dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine et R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, sur un di- ou tripeptide de formule générale: H2 - CH - CO - R9 2 3 (ch2)3 (VI) RO - NH - CH - R4 dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, R9 représente un radical hydroxy, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone (éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle) ou un reste N-glycyle ou N-D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle coitLenant 1 à 4 atomes Liu arbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophénylu eL R10 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D-alanyle (dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine), l'un au moins des symboles R9 et R10 repre- sentant un radical glycyle ou D-alanyle tel que défini ci-avant et l'un au moins des symboles R7 eL R10 représentant ou contenant un reste d'acide gras, suivie éventuellement du remplacement du radical R7 ou R10 (lorsqu'il repré- sente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine) par un atome d'hydrogène et des radicaux R8 eL/ou R9 (lorsqu'ils représentent un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle) par un radical hydroxy. Généralement il est nécessaire d'activer la fonction acide libre du dipeptide de formule générale (V) préalablement à son action sur le peptide de formule générale (VI). De préférence, le dérivé activé du dipeptide de formule générale (V) est un anhydride mixte, préparé in situ par action d'un halogénoformiate d'alcoyle tel que le chloroformiate d'isobutyle. Dans ces conditions la condensation s'effectue comme indiqué ci-dessus pour l'action d'un aminoacide de formule générale (III) sur un tripeptide de formule géné- rale (IV). Le remplacement éventuel des radicaux protecteurs R7 ou R10 par un atome d'hydrogène et des radicaux protecteurs R8 et/ou R9 par un radical hydroxy s'effectue selon les méthodes connues indiquées précédemment. Selon l'invention, les nouveaux peptides de formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un dérivé de la L alanine de formule générale: R7 - NH - CH - COOH (VII) CH3 dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, sur un tri-ou tétrapeptide de formule générale: H2N - CH - CO - R8 CH2CH2 - CO - NH - CIH - CO - R9 2 2 1 9 (Viii) (CH2)3 R10 - Nil - CH - R4 dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, R8 représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de 8 2460290 carbone éventuellellenL stubsLiLuc par un radical phényle ou nitrophényle, R représente un radical hydroxy, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone (éventuellenment substitué par un radical phényle ou nitrophényle) ou un reste N-glycyle ou N-D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle conte- nant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et R10 représente un reste d'acide gras, un groupement protecteur de la fonction amine ou un radical glycyle ou Dalanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine, l'un au moins des symboles R9 et RO10 représentant un radical glycyle ou D-alanyle tel que défini ci-avant et l'un au moins des symboles R7 et R10 représentant ou contenant un reste d'acide gras, suivie éventuellement du remplacement du radical R7 ou RO10 (lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine) par un atome d'hydrogène et des ou contiennent radicaux R8 et/ou R9 (lorsqu'ils représentent/un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle) par un radical hydroxy, dans les conditions décrites ci-dessus pour l'action d'un aminoacide de formule générale (III) sur un tri- ou tétra- peptide de formule générale (IV). Selon l'invention, les nouveaux peptides de formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un acide de formule générale: R" - CO - OH (IX) (dans laquelle R" - GO - représente un reste d'acide gras tel que défini ci-avant) sur un tetra-ou pentapeptide de formule générale: R11- NH - CH - CO - NH - CH - CO - RB CH3 Li2CGH2 CO -N- f - H - CO - R9(X) (fH2)3 RlO- NH - CH -R4 dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, R8 représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, R9 représente un radical hydroxy, un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone (éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle) ou un radical N-glycyle ou N-D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, RO10 représente un atome d'hydrogène, un reste -.- '- -2460290 d'acide gras, un groupeitnL protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D-alanyle dont la fonction amine libre est éventuellement substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine et Ril représente un atome d'hydrogène, un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, étant entendu que l'un au moins des symboles R9 et Ro10 représente un reste glycyle ou Dalanyle tel que défini ci-avant et que l'un au moins des symboles Rlo et Rll représente un atome d'hydrogène ou, pour Rlo, un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est libre, et que lorsque l'un des radicaux R10 ou Rll représente ou contient un reste d'acide gras celui-ci et le reste R" - GCO- sont identiques ou différents, suivie du remplacement du radical Ro10 ou Rill (lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonction amine) par un atome d'hydrogène et des radicaux R8 et/ou R9 (lorsqu'ils représentent ou contiennent un radical alcoyl- oxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle) par un radical hydroxy. Lorsque, dans la formule générale (X), le symbole R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et le symbole R9 représente un reste N-glycyle ou N-D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitro- phényle ou un radical alcoyloxy contenant 1 à-4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, la condensation de l'acide de formule générale (IX) est effectuée généralement en présence d'un agent de condensation tel que le dicyclohexylcarbodiimide en opérant dans un solvant organique tel que le chlorure de méthylène ou le diméthylformamide, à une température comprise entre -10 et +30 C. Lorsque, dans la formule générale (XI l'un des symboles R8 et R9 représente ou contient un radical hydroxy, il est nécessaire d'activer l'acide de formule générale (IX) préalablement à son action sur le tétra-ou penta- peptide de formule générale (X). Comme dérivé activé de l'acide de formule géné- rale (IX) il est particulièrement avantageux d'utiliser un halogénure d'acide ou un anhydride mixte préparé in situ par action d'un halogénoformiate d'alcoyle, tel que le chloroformiate d'isobutyle, en présence d'une base. Lorsque l'on utilise l'acide de formule générale (IX) sous forme d'halogénure d'acide, de préférence le chlorure, la réaction s'effectue dans un solvant organique tel que l'éther diéthylique ou le chlorure de méthylène, enErésence d'une base (minérale, telle que la soude, ou organique, telle que la triéthylamine), à une température comprise entre 0 et 30 C. - 2460290 Lorsque l'on utilise]'acide de formule générale (IX) sous forme d'un anhydride mixte, la réaction s'effectue dans un solvant organique tel que le dioxanne, le tétrahydrofuranne, le chloroforme, le toluène ou le diméthylformamide ou dans un milieu hydroorganique, en présence d'une base (minérale, telle que la soude, ou organique, telle que la triéthylamine), à une température comprise entre -10 et +30 C. Le remplacement éventuel des radicaux 50 et/ou R11 par un atome d'hydrogène et des radicaux R8 et/ou R9 par un radical hydroxy s'effectue selon les méthodes connues indiquées précédenmment. Pour obtenir un produit de formule générale (I) dans laquelle R représente un reste d'acide gras et R3 représente le reste du même acide gras ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par le reste du nmme acide gras, la condensation de l'acide de formule générale (IX) s'effectue sur un produit de formule générale (X) dans laquelle Ro10 représente un atome d'hydrogène ou un reste glycyle ou D alanyle et Rll représente un atome d'hydrogène ou sur un produit de formule générale (X) dans laquelle R10 représente ou contient un reste d'acide gras identique à celui de l'acide de formule générale (IX) mis en oeuvre et Rll représente un atome d'hydrogène ou bien sur un produit de formule générale-(X) dans laquelle R10 représente un atome d'hydrogène ou un reste glycyle ou D alanyle et Rll représente un reste d'acide gras identique à celui de l'acide de formule générale (IX) mis en oeuvre, en opérant dans les conditions habituelles. Pour obtenir un produit de formule générale (I) dans laquelle les symboles R et R3 représentent ou contiennent des restes d'acides gras différents, il est nécessaire d'effectuer la condensation d'un acide de formule générale (IX) sur un produit de formule générale (X) dans laquelle RO10 représente ou contient un reste d'acide gras différent de celui de l'acide de formule générale (IX) mis en oeuvre ou un groupement protecteur de la fonction amine et R1l repré- sente un atome d'hydrogène ou bien sur un produit de formule générale (X) dans laquelle RO10 représente un atome d'hydrogène ou un reste glycyle ou D alanyle et R11 représente un reste d'acide gras différent de celui de l'acide de formule générale (IX) mis en oeuvre ou un groupement protecteur de la fonction amine, puis, le cas échéant, après élimination de ce groupement protecteur, d'effectuer la condensation d'un autre acide gras de formule générale (IX), en opérant dans les conditions habituelles. ll LtaminoaLide de formule générale (III) dans laquelle R6 représente un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, R' représente un radical hydroxy ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou niLrophényle et R5 représente un reste d'acide gras, peut être obtenu par action d'un acide de formule générale (IX) ou d'un dérivé activé de cet acide sur la glycine ou la D alanine dont la fonction acide est éventuellement protégée sous forme d'ester suivie, le cas échéant, de l'éli- mination du groupement protecteur de la fonction -acide. Que la fonction acide de la glycine ou-de la D alanine soit protégée ou non, la condensation s'effectue dans les conditions indi quées précédenmment pour la condensation de l'acide de formule générale (IX) sur le tétra- ou pentapeptide de formule générale (X). Le tri- ou tétrapeptide de formule générale (IV) dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, R8 repré- sente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuel- lement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, R10 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle substitué par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de la fonction amine et R9 représente un radical hydroxy, peut être obtenu par action, dans les conditions habituelles, d'un dipeptide de formule générale (V), dans laquelle R7 et R8 sont définis comme ci-dessus, sur un aminoacide ou un dipeptide de formule générale (VI), dans laquelle R4 et R10 sont définis comme ci-dessus et R9 représente un radical hydroxy ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, suivie le cas échéant du remplacement du radical R9, lorsqu'il représente un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone (éventuelle- ment substitué par un radical phényle ou nitrophényle) par un radical hydroxy, sans toucher au reste de la molécule. En particulier, lorsque R8 et R9 forment avec le groupement carbo- nyle auquel ils Sont respectiveluent liés une fonction ester, ilpeut être néces- saire que les radicaux R8 et R9 soient différents et choisis de telle manière que le remplacement du radical R9 par un radical hydroxy s'effectue sans toucher au radical R8. Par exemple, le radical R9 peutreprésenter un radical benzyloxy, éliminable pour hydrogénolyse et le radical R8 un radical méthoxy qui n'est pas sensible à l'hydrogénolyse. Le tri- ou tétrapeptide de formule générale (IV) dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, R8 repr&- sente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuel- lement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, R9 représente un radi- cal hydroxy, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substi- tué par un radical phényle ou nitrophényle ou D-glycyle ou N-D alanyle éventuel- lement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et R10 repré- sente un atome d'hydrogène peut être obtenu par action, dans les conditions habituelles, d'un dipeptide de formule générale (V) dans laquelle R7 et R8 sont définis comme ci-dessus sur un aminoacide ou un dipeptide de formule générale (VI) dans laquelle R4 et R9 sont définis comme ci-dessus et R10 représente un groupement protecteur de la fonction amine, suivie du remplacement de ce grou- pement protecteur par un atome d'hydrogène, sans toucher au reste de la molécule. En particulier les groupements protecteurs de la fonction amine définis pour R7 et R10 doivent être différents et choisis de telle manière que le rempla- cement du radical Ro10 par un atome d'hydrogène s'effectue sans toucher au radical R7. Le dipeptide de formule générale (V) peut être obtenu par action d'un dérivé activé de la L alanine de formule générale (VII) dans laquelle R7 repré- sente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine sur un dérivé de l'acide D-glutamique de formule générale Il 2N - CH - GO - R8 2 8 (XI) CH2CH2-COOH dans laquelle R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitro- phényle, dans les conditions décrites ci-dessus pour l'action de l'aminoacide de formule générale (VII) sur le peptide de formule générale (IV). Le dipeptide de formule générale (V) dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras peut aussi ttre obtenu par action d'un acide de formule générale (IX) sur un dipeptide de formule générale: H2N - Cil - CO - NH CH - CO - R8 CO-R8 (XII) CH3 CH2CH2COO1t dans laquelle R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitro- phényle, dans les conditions décrites précédemment pour l'action d'un acide de - formule générale (IX) sur un tétra- ou pentapeptide de formule générale (X). L'aminoacide de formule générale (VI) dans laquelle R4 représente un radical carbamoyle, R9 représente un radical hydroxy et R10 représente un radical benzyloxycarbonyle sous forme m;so, et plus précisément le D monoamide de l'acide benzyloxycarbonyl-(D)-méso-diamino-2,6 pimélique, peut être préparé selon le procédé décrit dans le brevet belge 821 385. L'aminoacide ou le dipeptide de formule générale (VI) dans laquelle R4 représente un radical carbamoyle, R9 représente un radical hydroxy et R 0 représente un reste d'acide gras, un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine, sous forme racémique, D,D ou L,L peut être préparé à partir de l'acide diamino-2,6 pimélique correspondant. A cet effet on prépare selon les méthodes connues l'ester dibenzylique de l'acide dibenzyloxycarbonylamino-2,6 pimélique, qui est monosaponifié selon la méthode décrite par A. ARENDT et coll., Roczniki Chemii Ann. Soc. Chim. Polonorum, 48, 1305 (1974), [Chem. Abstr., 82, 31497g (1975)] puis transformé par action du méthanol ammoniacal en monoamide de formule générale: Z - NH - CH - COOH (CH2)3 (XIII) Z - NHi - CH - CONH2 (dans laquelle Z représente le radical benzyloxycarbonyle) qui, après hydrogéno- lyse en présence de palladium sur noir, fournit l'acide diamino-2,6 piméla- mique. Par action d'un sel de cuivre, tel que le bromure cuivrique ou le carbonate basique de cuivre, sur l'acide diamino-2,6 pimélamique, il se forme un complexe qui peut ftre représenté par la formule: Hl2N - Ctl CONII2 (Cil2)3 Hl N - CH -C0 cu* (xIv) - CH -"NH I 2 (CH2)3 H2N - CO - CH - NH2 dans lequel le reste amino en a du groupement carbamoyle peut être acylé par action d'un dérivé activé d'un acide de formule générale (IX) ou d'un amino- acide de formule générale (III) dans laquelle R5 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine et R' représente un radical hydroxy, ou protégé par action d'un halogénoformiate d'alcoyle ou de benzyle. Le complexe ainsi formé est déplacé par action de l'hydrogène sulfuré pour donner l'aminoacide ou le dipeptide de formule générale (VI) dans laquelle R9 représente un radical hydroxy, R4 représente un radical carbamoyle et RO10 est défini comme ci-dessus. L'aminoacide ou le dipeptide de formule générale (VI) dans laquelle R4 représente un radical carbamoyle, R9 représente un radical hydroxy et R10o représente un reste dtacide gras ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine, sous forme méso, dans lequel l'atome de carbone porteur des radicaux R4 et R10 est sous forme D, peut atre préparé par action d'un dérivé activé d'un acide de formule générale (IX) ou d'un aminoacide de formule générale (III) dans lequelle R5 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine sur le (D) monoamide de l'acide méso-diamino-2,6 pimélique (obtenu à partir du (D)-monoamide de l'acide benzyloxycarbonyl-(D) méso-diamino-2,6 pimélique par hydrogénolyse). L'aminoacide, di- ou tripeptide de formule générale (VI), dans laquelle R4 représente un radical carbamoyle, R9 représente un radical alcoyl- oxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou un reste N-glycyle ou N-D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et Ri0 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine, peut être obtenu par action dans les conditions habituelles d'un aminoacide de formule générale (III) dans laquelle R5 représente un atome dthydrogène, ou d'un aminoester correspondant, ou d'un alcool aliphatique contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitro- phényle ou de ses dérivés, sur un aminoacide ou un dipeptide de formule générale: Y - NH - CH - COOH I (CH2)3 (xv) R10 - NH - CH - R4 dans laquelle R4 et R10 sont définis comme ci-dessus et Y représente un groupement protecteur de fonction amine, en opérant dans les conditions habi- tuelles suivie du remplacement du groupement protecteur Y par un atome d'hydro- gène et éventuellement du groupement ester (porté par le reste glycyle ou D alanyle) par un radical hydroxy, sans toucher au reste de la molécule. En particulier lorsque RiO représente ou contient un groupement protecteur de fonction amine, il importe de choisir Y de telle manière que son rempla- cement par un atome d'hydrogène s'effectue sans toucher au radical Rlo. Le di- ou tripeptide de formule générale (VI) dans laquelle R4 représente un radical carbamoyle, R9 représente un reste glycyle ou D alanyle et R10 représente un reste d'acide gras ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine peut être obtenu par action dans les conditions habituelles d'un dérivé activé d'un acide de formule générale (IX) ou d'un aminoacide de formule générale (III), dans laquelle R5 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine sur un dipeptide de formule générale: Y - NH - CH - GO - R9 (CH2)3 (XVI) NH2 - CH - R4 dans laquelle R4 et R9 sont définis comme ci-dessus et Y représente un groupe- ment protecteur de la fonction amine, en opérant dans les conditions habi- tuelles, suivie du remplacement du groupement Y par un atome d'hydrogène. * Le dipeptide de formuIe générale (XVI) peut être obtenu selon les méthodes habituelles utilisées en chimie peptidique pour luintroduction d'un groupement protecteur de la fonction amine à partir d'un dipeptide de formule générale (VI) dans laquelle R4 et R9 sont définis comme ci- dessus et R10 représente un groupement protecteur de fonction amine, suivies du renmplacement du groupement protecteur R10 par un atome d'hydrogène sans toucher au reste de la molécule. En particulier, les groupements protecteurs des fonctions amines de l'acide diamino-2,6 pimélamique seront différents et choisis de telle manière que le remplacement de R10 n'entratne pas le remplacement de Y. Le di- ou tripeptide de formule générale (VI) dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène, R9 représente un reste glycyle ou D alanyle et R10 représente un reste d'acide gras ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine peut être obtenu à partir de la L lysine en appliquant les méthodes utilisées pour la préparation du di- ou tripeptide de formule générale (VI) dans laquelle R4 représente un radical carbamoyle et R9 et Ro10 ont les définitions correspondantes. L'aminoacide de formule générale (VII) dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras peut être obtenu par action d'un acide de formule géné- rale (IX) ou d'un dérivé activé de cet acide sur la L alanine dont la fonction acide est éventuellement protégée sous forme d'ester, suivie éventuellement du remplacement de la fonction ester par la fonction carboxy, en opérant dans les conditions indiquées ci-dessus pour l'action de l'acide de formule géné- rale (IX) sur le tétra-ou pentapeptide de formule générale (X). Le tri- ou tétrapeptide de formule générale (VIII) peut être obtenu par action, dans les conditions habituelles, d'un dérivé de l'acide D glutamique de formule générale (XI), dans laquelle R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, sur un di- ou tripeptide de formule générale (VI) dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, R9 représente un radical hydroxy ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-glycyle ou N-D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et R10 représente un reste d'acide gras ou un groupe- ment protecteur de fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de fonction amine (l'un au moins des symboles R9 et Ro10 représentant un radical glycyle ou D alanyle tel que défini précédemment), suivie du remplace- ment éventuel du radical R8 et/ou R9 (lorsqu'ils représentent ou contiennent un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle) parun radical hydroxy, sans toucher au reste de la molécule. Toutefois, lorsque R8 et R9 forment avec le groupement carbonyle auquel ils sont respectivement liés une fonction ester, il peut ttre nécessaire que les radicaux R8 et R9 soient différents et choisis de telle manière que le rempla- cement du radical R9 par un radical hydroxy s'effectue sans toucher au radical R8. Par exemple le radical R9 peut représenter un radical benzyloxy, éliminable par hydrogénolyse et le radical R8 un radical méthoxy qui ntest pas sensible à lthydrogénolyse. Le tétra-ou pentapeptide de formule générale (X) peut etre obtenu, dans les conditions habituelles,par action d'un dérivé activé de la L alanine de formule générale (VII) dans laquelle R1 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine sur un tri- ou tétrapeptide de formule générale (VIII) dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, R8 représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, R9 représente un radical hydroxy, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-glycyle ou N-D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement subs- titué par un radical phényle ou nitrophényle et R10 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine, étant entendu que ltun au moins des radicaux R9 et R10 représente un reste glycyle ou D alanyle tel que défini ci-avant et que l'un des radicaux R7 ou RO10 représente ou contient un groupement protecteur de fonction amine, suivie du remplacement du radical R7 et/ou RO10 (lorsqu'ils représentent ou contiennent un groupement protecteur de la fonction amine) par un atome d'hydrogène et du remplacement éventuel des radicaux R8 et/ou R9 (lorsqu'ils représentent ou contiennent un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomesde carbone éventuellement substituéparun radicalpléndyleou nitirphnyle) par un 18 2460290 radical hydroxy sans toucher au reste de la molécule. Lorsque les symboles R7 et R10 représentent ou contiennent des groupements protecteurs de fonction amine, il est possible de choisir des groupements protecteurs différents et choisis de telle manière que le remplacement d'un de ces groupements s'effectue sans toucher à l'autre. Lorsque R8 et R9 forment avec le groupement carbonyle auquel ils sont respectivement liés une fonction ester, il est possible que les radicaux R8 et R9 soient différents et choisis de telle manière que le remplacement du radical Rg par un radical hydroxy s'effectue sans toucher au radical Y. Par exemple, le radical Rg peut représenter un radical benzyloxy éliminable par hydrogénolyse et le radical R8 un radical méthoxy qui n'est pas sensible à l'hydrogénolyse. Le tétra- ou pentapeptide de formule générale (X) peut être obtenu par action, dans les conditions habituelles, d'un dipeptide de formule géné- rale (V) sur le di- ou tripeptide de formule générale (VI) dans les conditions données précédemment pour préparer le tri- ou tétrapeptide de formule géné- rale (IV), suivie de l'élimination des groupements protecteurs R7 et/ou R10 dans les conditions données ci-dessus. Les nouveaux tétra- ou pentapeptides de formule générale (1) peu- vent etre éventuellement purifiés par des méthodes physiques (telles que la cristallisation ou la chromatographie) ou chimiques (telles que formation d'un sel, cristallisation de celui-ci puis décomposition). Les nouveaux produits selon l'invention peuvent être transformés en sels d'addition avec les acides ou en sels métalliques ou en sels d'addition avec les bases organiques selon la nature des substituants. Les sels daddition avec les acides peuvent être obtenus par action des nouveaux produits sur des acides dans un solvant approprié. Géné- ralement on solubilise le produit dans l'eau par addition de la quantité théo- rique d'acide puis on lyophilise la solution obtenue. Les sels métalliques ou les sels d'addition avec les bases organiques peuvent être obtenus par action des nouveaux composés sur des bases minérales ou organiques dans un solvant approprié. Généralement on solubilise le produit dans l'eau par addition de la quantité théorique de base puis on lyophilise la solution obtenue. Les nouveaux composés selon la présente invention sont des adju- vants et des stimulants de l'immunité: ils augmentent les réactions d'hyper- sensibilité et/ou la production d'anticorps cqr.ulants vis-à-vis des ntigènes avec lesquels ils sont admiinistrée et ils stimulent de manière non spécifique des réactions de défense coniLre certailjes infections (par exemple l'infection de la souris par la bactérie intracellulaire Listeria monocytogenes). In vitro, ils SOnL actits à des concentrations molaires généralement -3 -8 comprises entre 10 et 10, ni particulier dans les tests suivants: stimulation de la synthèse de l'ADN (pouvoir mitogène) selon la technique de G. MARCHAL, Ann. Inmunol. (Inst. Pasteur), 125 C, 519 (1974). - stimulation de la réaction allogénique (réaction d'histoincompatibilité) selon la technique de R.W. DUTTON, J. exp. Med., 122, 759 (1966) et A.B. PECK et F.H. BACH, J. Ilmmunol. Methods, 3, 147 (1973) stimulation de la production d'anticorps selon la technique de P.H. KLESIUS, Proc. Soc. exp. Biol. Med. (N.Y.), 135, 155 (1970) et H. VAN DIJK et N. BLOKSMA, J. Immunol. Methods, 14, 325 (1977) - augmentation du nombre de macrophages phagocytaires selon la technique de J. MICHL et coll., J. exp. Med., 144, 1465 (1976) - stimulation de l'activité phosphatase acide et N-acétylglucosamidinase (enzymes lysosomiales des macrophages) en l'absence d'une augmentation de la deshydro- génase lactique selon la technique de P. DAVIES et coll., J. exp. Med., 139, 1262 (1974). In vivo, chez la souris, à des doses comprises entre 1 et 30 mg/kg, ils augmentent l'hypersensibilité retardée et la production d'anticorps en par- ticulier selon la technique de T.E. MILLER et coll., J. Nath. Cancer Inst. , 51, 1669 (1973). Chez le cobaye, ils augmentent la réaction d'hypersensibilité à l'antigène monoazobenzènearsonate - N-acétyltyrosine (ABA-tyrosine) à des doses voisines de 10 mg/kg selon la technique de B. BENACERRAF et coll., J. exp. Med., 118, 945 (1963) et C. NAUCIEL et M. RAYNAUD, Europ. J. Immunol., 1,257 (1971) et ils augmentent la réaction d'hypersensibilité et de production d'anticorps contre la gammaglobuline bovine couplée avec l'haptène dinitrophénol selon la technique de F. FLOC'H et coll., Immunol. Communic., 7, 41 (1978). Chez la souris, ils stimulent les réactions de défense contre ltinfection de la souris à Listeria monocytogenes à des doses comprises entre 1 et 100 mg/kg selon la technique de R.M. FAUVE et B. HEVIN, C.R. Acad. Sci.(D) , 285, 1589 (1977). Chez le lapin, à des doses généralement comprises entre 0,1 et 3 mg/kg, ils stimulent la formation d'anticorps sériques anti-virus grippal selon la technique de G.11. WERNER et coll., Biomedicine, 22, 440 (1975). Les exemples suivants, donnés à titre non limitatif, montrent comment l'invention peut être mise en pratique. 2460290 EXEMPLE 1 - on ajoute 0,27 cm3 de chloroforniate d'isobutyle à une solution, maintenue à -50C, d 303iiigde N-t.butyloxycarbonylglycine dans 40 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,29 cmi3 de triéLhylanine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à -5oC, puis onl ajoute une solution, refroidie à 5oC, de 1,26 g de chlorhydrate d'acide N -(N-lauroyl L alanyl-y-D glutamyl) DD, LL diamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 14,5 cm3 d'eau et de.6,2 cm3 de soude 1N. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 heures à une température vosine de C. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 400C; le concentrat est refroidi vers 100C, acidifié à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 1N, puis extrait 4 fois par 400 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées par cm3 d'eau, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées à sec sous pres- sion réduite (20 mm de mercure) à 450C. Le résidu ainsi obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther jusqu'à pulvérisation totale. Après filtration et séchage sous pression réduite (20 mm de mercure), on obtient 1,11 g d'une poudre à laquelle on ajoute 440 mg d'un produit préparé dans les mêmes conditions et on chromatographie sur 77 g de gel de silice neutre (0,0635-0,20 mm) contenus dans une colonne de 2,3 cm de diamètre. On élue successivement par.120 cm3 d'acétate d'éthyle, 210 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 120 cnm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (85-15 en volumes), cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes), 90 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (7-3 en volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyleméthanol (6-4 en volumes) et 150 cm3 d'un mélange acétate d'éthyleméthanol (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 30 cm3. Les fractions 15 à 34 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 400C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 1,12 g d'acide N2-(N-lauroyl L alanyl-y-D glutamyl)N6-(N-t.butyloxycarbonylglycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique. Rf = 0,56 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]. On dissout 1,12 g d'acide N2-(N-lauroyl L alanyl-y-D glutamyl)N - (N-t.butyloxycarbonylglycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 5 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,65 N dans l'acide acétique. On agite pendant 4 heures à une température voisine de 200C puis on ajoute le milieu réctionnel à 100 cm3 d'éther anhydre. Le précipité blanc obtenu est séparé par 21 2460290 filtration, lavé par 20 cmn3 d'éther et séché sous pression réduite (20 mm de mercure). On obtient ainsi 1,05 g d'une poudre blanche que l'on chromatographie sur une colonne de Sephadex G 15 (diamètre: 2 cm; hauteur: 2 m). On élue par de l'eau en recueillant des fractions de 14 cm3. Les fractions 26 à 29 sont réunies et lyophilisées. On obtient ainsi 0,5 g de chlorhydrate d'acide N2-(N-lauroyl L alanyl-y-D glutamyl) N -glycyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique. Rf = 0,29 Lsilicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]. Analyse: Calc. % C 52,36 H 8,03 N 12, 63 Tr. 52,5 7,0 12,4 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants: Ala 1,10 (théorie = 1) Dap 1,01 (théorie = 1) Glu 1,12 (théorie = 1) Gly 1,00 (théorie = 1) L'acide N2-(N- lauroyl L alanyl-y-D glutamyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante: on dissout 4,07 g d'acide N2-[Ol-benzyl N- (N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 200 cm3 d'acide acétique. On ajoute 4 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 7 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à C, la meringue obtenue est reprise par 45 cm3 au total de méthylcyclohexane et amenée chaque fois à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 600C. La poudre ainsi obtenue est séchée sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 50 C. On obtient 2,76 g d'acide N2-(N-lauroyl L alanyl-y-D glutamyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique. Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants: Ala 1,00 (théorie = 1) Dap 0,99 (théorie = 1) Glu 1,05 (théorie = 1). Llacide N2-[O -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N - benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante: 22 2460290 On ajoute 3,17 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue vers 100C, de 11,9b g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 490 cmn3 de dioxanne et de 3,43 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 20 minutes vers 100C, puis on ajoute une solution de 8,87 g d'acide N -benzyloxyuarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique à 88,8 % (dosage perchlorique) dans un mélange de 219 cm3 d'eau et de 24,4 cm3 de soude 1N.Le mélange réactionnel est agité pendant 2 heures à une température voisine de 10OC puis pendant 15 heures à une température voisine de 200C; il est ensuite filtré. Au filtrat, on ajoute 360 cm3 d'eau et on sépare par fil- tration un léger insoluble formé. Le filtrat est acidifié à pH 2 par addition de 49 cm3 d'acide chlorhydrique IN. Le précipité formé est séparé par filtra- tion, lavé 3 fois par 750 cm3 au total d'eau et séché. On obtient ainsi 16,3 g d'une poudre blanche que l'on chromatographie sur 800 g de gel de silice neutre (0,0635-0,20 mm) contenus dans une colonne de 6 cm de diamètre. Pour cela on dissout les 16,3 g de poudre dans 800 cm3 de m4thanol et à la solution obtenue, on ajoute 160 g de sable de Fontainebleau. On évapore à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 600C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue successivement avec 1 litre d'acétate d'éthyle, 4 litres d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 7 litres d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (85-15 en volumes) et 4 litres d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 250 cm3. Les fractions 45 à-60 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 6000. On obtient ainsi 9,4 g d'acide N2-[L01-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6benzyloxycarbo- nyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique. Rf = 0,83 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]. Le N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé selon l'une des deux méthodes suivantes: a) A une solution de 12,75 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D gluta- mate de benzyle dans 75 cm3 de soude 1N,on ajoute simultanément en 37 minutes, 8 g de chlorure de lauroyle dissous dans 75 cm3 d'éther et 37,4 cm3 de soude 1l de façon à maintenir le pH du mélange réactionnel compris entre 8 et 9. Le mélange est agité pendant 1 heure 20 minutes. Après décantation, la phase aqueuse est acidifiée à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 1N (60 cm3) et extraite 3 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques 23 2460290 réunis sont lavés par 25 cmd d'eau, séchés sur du sulfate de sodium anhydre et concentrés à sec souus pression réduite (20 mm de mercure) à 450C- On obtient ainsi 7,4 g d'un solide blanc que l'on chromatographie sur 80 g de gel de silice neutre contenus dans une colonne de 2 cm de diamètre. On élue successivement par 100 cs3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes) et 200 cr3 d'un mélange acétate dtéthyle-méthanol (1-1 en volumes), en recueillant des tractions de 50 cm3. La fraction 1 est concentrée à sec sous pression réduite (20 nn demercure) à 450C. On obtient ainsi 2 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamnate de benzyle fondant à 1300C. Les fractions 2 à 4 sont de même concentrées à sec et chromatographiées sur 100O g de gel de contenus silice neutre (0,063-0,20 mm)/dans une colonne de 2 cm de diamètre. On élue par 250 cm3 d'acétone en recueillant des fractions de 25 cm3. Les fractions 1 et 2 sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 450C. On obtient ainsi 4,07 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle fondant à 1300C dont les caractéristiques sont les suivantes: Rf = 0,9 Lsilicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50- 20-6-24 en volumes)] Analyse Calc. % C 66,10 H 8,63 N 5,71 Tr. 66,3 8,8 5, 6 b) On ajoute 31 tm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à une température voisine de 100C, de 47,75 g d'acide laurique dans 3 litres de dioxanne et 33,3 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant minutes à 100C, puis on ajoute en 10 minutes une solution, refroidie à 1O0C, de 88,95 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle, dans un mélange de 1 litre de dioxanne, de 476 cm3 d'eau et de 476 cm3 de soude iN. Lemélangeréactionnel est agité pendant 1 heure à 100C, puis pendant 18 heures à une température voisine de 20C; il est ensuite dilué par addition de 4 litres d'eau, acidifié à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 1N (environ 475 cm3) et conservé pendant 2 heures à 0oC. Le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé successivement par 500 cm3 d'eau et 500 cm3 d'éther, puis séché sous pression réduite (20 mm de mercure) à 200C. Le produit est mis en suspension dans 800 cn3 d'éther, agité pendant 1 heure, séparé par filtration et lavé 2 fois par 200 cn3 au total d'éther. Après séchage sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20OC, on obtient 71,79 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle fondant à 1300C. Rf = 0,77 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (4-1 en volumes)]. Le chlorhydrate de L alaiinyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé de la façon suivante: On dissout 9/,lo g de N-L.butyloxycarbonyl L alanyla-D glutamate de benzyle dans 970 e:a3 d'une soluLion anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. On agite lpendant 2 heures, puis on ajoute rapidement 3,8 litres d'éther anhydre et on laisse reposer pendant 2 heures à 0oC. Le précipité huileux qui s'est forré, séparé du surnageant par décantation, est dissous dans 500 cm3 d'acétone; la solution ainsi obtenue est concentrée à sec sous pression réduite (20 nml de mercure) à 500C. On obtient ainsi 88,9 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle. Le N-t.butyloxycarbonyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé selon la méthode de E. BRICAS et coll., Biochemistry 9, 823 (1970) . L'acide N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pixélamique peut être préparé de la façon suivante: A une solution de 9,7 g de dichlorhydrate de l'acide DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 63 cm3 d'eau amenée à pH 10 par addition de 37 cm3 de soude 1N, on ajoute 4,35 g de bromure cuivrique dissous dans 44 cm3 d'eau. On agite le mélange réactionnel pendant 2 heures à 200C environ. On sépare par filtra- tion un léger insoluble, puis on refroidit le filtrat à une température comprise entre -3aC et 0OC. On ajoute 9,2 g de bicarbonate de sodium et ensuite, goutte à goutte en 30 minutes, 7,9 cm3 de chloroformiate de benzyle.Le mélange réaction- nel est agité pendant 18 heures à une température voisine de 200C. Le précipité bleu formé est séparé par filtration,lavé par 15 cm3 d'eau, 2 fois par 30 cm3 au total d'éthanol et 15 cm3 d'éther. Après séchage sous pression réduite (20 mm de mercure) à 500C, on obtient 9,6 g de complexe cuivrique de l'acide N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique que l'on ajoute à cm3 d'acide chlorhydrique 1N. On agite pendant 1 heure à une température voisine de 200C. Un insoluble est séparé par filtration. Au filtrat, on ajoute 30 cm3 de méthanol puis on fait passer un courant d'hydrogène sulfuré pendant 1 heure 1/2. On laisse reposer pendant 16 heures. La bouillie noire obtenue est filtrée, lavée 4 fois par 160 cm3 au total d'eau. Les filtrats réunis sont concentrés jusqu'à un volume de 30 cm3 sous pression réduite (20 mm de mercure) à 500C, amenés à pH 9 par addition de 7,5 cm3 de triéthyl- amine, dilués par addition de 20 cm3 d'eau et amenés à pHli 6 par addition de 5,5 cm3 d'acide chlorhydrique 1N. La bouillie blanche ainsi obtenue est conservée à OOC pendant 2 heures. Le produit qui se sépare par filtration est 2460290 lavé successivement par 20 cm3 d'eau et 20 cmn3 d'éthanol et séché sous pres- sion réduite. On obtient ainsi 5,8 g d'acide N6-benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique à 96 % (dosage perchlorique). Le dichlorhydrate de l'acide DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante; On dissout 83 g d'acide DD,LL dibenzyloxycarbonylamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 1,6 litre de méthanol et de 14,6 cm3 d'acide chlorhydrique concentré (d = 1,19). On ajoute 83 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un courant d'hydrogène pendant 10 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 600C, on obtient 40,5 g de dichlorhydrate de l'acide DD,LL diamino-2,6 pimélamique sous forme de meringue. L'acide DD,LL dibenzyloxycarbonylamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante: On dissout 168 g d'ester monobenzylique de l'acide DD,LL dibenzyloxy- carbonylamino-2,6 pimélamique dans 1,68 litre de méthanol. On refroidit cette solution vers 0oC et on la sature d'ammoniac. Dès qu'elle est saturée, on la transvase dans 3 autoclaves de 1 litre. Après avoir fermé ces autoclaves, on les conserve pendant 40 heures à 200C environ. Après dégazage, la solution ainsi obtenue est concentrée sous pression réduite (20 mm de mercure) à 600c. Le résidu est dissous dans 2 litres d'eau et la solution obtenue est amenée à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 4N. I1 se forme un précipité gommeux qu'on isole par décantation, triture avec 2 litres d'éther, sépare par filtration, lave 2 fois par 400 cm3 au total d'éther et 2 fois par 400 cm3 au total d'eau. Après séchage, on obtient 83,5 g d'acide DD,LL dibenzyloxycarbonylamino-2, 6 pimélamique fondant à 145-1500C. Rf = 0,69 [silicagel; n.butanol-éthanol-eau-ammoniaque concentrée (4-4-1-1 en volumes)]. Le monoester benzylique de l'acide DD,LL dibenzyloxycarbonylamino-2,6 pimélique peut être préparé selon la méthode de A.ARENDT et coll., Roczniki Chemii Ann. Soc. Chim. Polonorum 48, 1305 (1974) [Chem.Abstr., 82, 31497 g (1975)]. EXEMPLE 2 - On ajoute 0,42 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à OOC, de 557 mg de N-t.butyloxycarbonylglycine dans un mélange de 60 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,45 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à OoC, puis on ajoute une solution, refroidie à OoC, de 1,68 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysine dans un mélange de 14 cn3 d'eau et de 6,3b cm3 de soude iN. Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes à O C, puis pendant 18 heures à 200C environ. Il est ensuite concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 400C. Le résidu est repris par 60 cm3 d'eau amenée à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique IN (7 cm3). La phase aqueuse ainsi obtenue contenant un précipité huileux est extraite 4 fois par 200 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées par 25 cm3 d'eau et séchées sur du sulfate de magnésium anhydre. Après concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 400C, on obtient 2,9 g d'un produit que l'on chromato- graphie sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 60 g de gel de silice neutre. On élue successivement par 150 cm3 d'acétate d'éthyle, 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (95-5 en volumes), 50 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes) et 300 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes) en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fractions 9 à 15 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 400C. On obtient ainsi 1,44 g de N a-[N-(N- lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N ú-(t.butyloxycarbonylglycyl) L lysine. Rf = 0,55 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]. On dissout 1,44 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e- (t.butyloxycarbonylglycyl) L lysine dans 22 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures, puis on ajoute 220 cm3 d'éther anhydre. Le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé par 20 cm3 d'éther anhydre et séché sous pression réduite (0,15 ma de mercure) à 200C. On obtient ainsi 1,31 g d'une poudre blanche que l'on dissout dans 5 cm3 d'eau et chromatographie sur Sephadex G 10 (colonne de 2,5 cm de diamètre et 2 m de hauteur). On élue par 400 cm3 d'eau en recueillant des fractions de 14 cm3. Les fractions 23 à 28 sont réunies et lyophilisées. Le lyophilisat est dissous dans 50 cm3 d'eau et 1,5 cm3 d'acide chlorhydrique 1N à nouveau lyophilisé. On obtient ainsi 710 mg de chlorhydrate de N a[N- (N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N ó-glycyl L lysine. Rf = 0,25 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]. Analyse Calc. 7% C 54,05 H 8,42 Cl 5,70 N 11,26 Tr. 54,0 7,9 5,4 11,2 27 2460290 Après hydrolyse LoLa]e, 1'nalyse aur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acideb aminés suivaints Ala 0,99 (théorie = 1) Glu 1,04 (théorie = 1) Gly 1,00 (théorie = 1) Lys 0,97 (théorie = 1) Le N a-[N-(Nlauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysine peut être préparé selon l'une des méthodes suivantes: a) On dissout 1,77 g de N a-[o -benzyl N-(N- lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N 6-benzyloxycarbonyl L lysine dans 177 cm3 de méthanol. On ajoute 1,77 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) puis on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 4 heures. Après filtration, concentraction à sec du filtrat, l'huile résiduelle est reprise par 20 cm3 d'acétone. On obtient ainsi 1,06 g d'un solide blanc que l'on recristallise dans un mélange d'éthanol (12 cm3) et d'acétone (24 cm3). On obtient ainsi 0,9 g de N ca-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutantyl] L lysine fondant à 180-186oC (fusion pâteuse). Rf = 0,29 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]. Analyse Calc. % C 59,07 H 9,15 N 10,60 Tr. 58,4 8,8 10,0 b) On dissout 2, o5 g de N a-LO -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyll N 6benzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle dans 265 cm3 d'acide acétique. On ajoute 2,65 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mma de mercure) à 500C, on obtient 1,81 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysine identique au produit obtenu sous a). Le N a-[O -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxy- carbonyl L lysine peut être préparé de la façon suivante: On ajoute 1,88 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 100C, de 7, 03 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 280 cm3 de dioxanne et 2,0 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 100C puis on ajoute une solution de 4,04 g de N ebenzyloxycarbonyl L lysine dans un mélange de 30 cm3 de dioxanne et de 14, 4 cm3 de soude 1N. Le mélangeréactionnel est agité pendant 20 heures à 180C environ. L'insoluble formé est dissous par addition de 280 cm3 d'eau. La solution obtenue est agitée elcore pendant 1 heure, puis acidifiée à pH 3 par addition de 20 cm3 d'acide Ahl]orhydrique 1N.L'insoluble formé est séparé par tiltration, lavé par 20 LLii3 d'eau et séché sous pression réduite (0,3 rmm de mercure) à 20C. On obtient ainsi 7,72 g d'un solide blanc que l'on chromato- graphie sur une colonne de 3,5 cim de diamètre contenant 230 g de gel de silice neutre. On élue successivement par 700 cm3 d'un mélange acétonecyclohexane (9-1 en volumes), 1,1 litre d'acétone et 1,7 litre de méthanol en recueillant des tractions de 100 cm3. Les fractions 22 à 35 sont réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 450C. On obtient ainsi 5,97 g de N a-IO -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonyl L lysine. Rf = 0,84 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]. La N e-benzyloxycarbonyl L lysine peut être préparée selon la méthode de A. Neuberger et coll., Biochem. J., 37, 515 (1943). Le N a-[N-(O -benzyl N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyl- exycarbonyl L lysinate de benzyle peut être préparé de la façon suivante: On ajoute 0,65 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à -100C, de 2,45 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 80 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,70 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à -100C puis on ajoute une solution, refroidie à -1OOC, de 2,24 g de chlorhydrate de N ebenzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle dans un mélange de 40 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,77 cm3 de triéthylamine. Lemélangeréactionnel est agité pendant 2 heures à -100C, puis pendant 2 jours à 200C environ. On concentre ensuite le mélange réactionnel à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 400C. Le solide blanc obtenu est repris dans 100 cm3 d'acétate d'éthyle à 40C, trituré jusqu'à pulvérisa- tion, séparé par filtration, trituré à nouveau dans 50 cm3 d'acide chlorhy- drique 0,1 N, séparé par filtration et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure). On obtient ainsi 2,69 g de N a-[N-(O -benzyl N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N ó-benzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle. Rf = 0,80 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes)]. Le N ó-benzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle peut être préparé selon la méthode de T. Shiba et coll., Bull. Chem. Soc. Japan, 33, 1721 (1960). EXEMPLE 3 - On ajoute 0,48 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue vers -10oC, de 1,82 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 90 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,52 cm3 de triéthylamine. 29 2460290 Le mélange est agité pendant 20 minutes à -10oc, puis on ajoute une solution, refroidie à -10oC, de 1,74 g de N e-(benzyloxycarbonylglycyl) L lysinate de benzyle dans 90 cm3 de tétrahydrofuranne. Le mélange réactionnel est agité pendant 2 heures à une température comprise entre 10o0C et OOC, puis pendant 18 heures à 200C environ. On obtient une masse réactionnelle d'aspect gélatineux que l'on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 400C. On reprend le résidu par un mélange de 50 cm3 d'acétate d'éthyle et de 50 cm3 d'eau, on agite, on sépare l'insoluble par filtration et le lave successivement 2 fois par 50 cm3 au total de soude N/10 et par 25 cm3 d'eau. Après séchage, l'insolu- ble est lavé 4 fois par 100 cm3 au total d'acétate d'éthyle à 200C et puis par cm3 d'acétate d'éthyle à 750C et enfin séché. On obtient ainsi 1, 51 g de N a-[O 1-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N ebenzyloxycarbonylglycyl) L lysinate de benzyle. La phase acétate d'éthyle de lavage (125 cm3) est chargée sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 150 g de gel de silice neutre. On élue par 835 cm3 d' acétate d'éthyle, 320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (95-5 en volumes) et 400 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (90-10 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les frac- tions 34 à 38 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 450C. On obtient ainsi 0,42 g de N a-[Ol1-benzyl N-(Nlauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonylglycyl) L lysinate de benzyle. Rf = 0,84 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes)]. On dissout 1,93 g de N a-[Ol-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(benzyloxycarbonylglycyl) L lysinate de benzyle dans 100 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,93 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 2 heures. Après filtra- tion et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 500oC, l'huile résiduelle est triturée dans 50 cm3 d'éther. On obtient un précipité qui est séparé par filtration et est dissous dans 15 cm3 d'acide acétique. Cette solution est filtrée, puis on ajoute au filtrat 100 cm3 d'éther. Après 30 minutes d'agitation le précipité obtenu est séparé par filtration. Après séchage sous pression réduite (0,15 mm de mercure) à 200C, on obtient 1,16 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-glycyl L lysine fondant à 140-142 C (fusion pâteuse). Rf = 0,31 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]. Analyse Calc. % C 57,41 H 8,78 N 11,96 Tr. 55,3 8,6 11,2 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants: Ala 1,00 (théorie = 1) Glu 1,11 (théorie = 1) Gly 1,00 (théorie = 1) Lys 0,95 (théorie = 1). Le N e-(N-benzyloxycarbonylglycyl) L lysinate de benzyle peut être préparé selon la méthode de M. KHOSLA et coll., J. Sci. Ind.Res. (India) 21 B, 318 (1962). EXEMPLE 4 - On ajoute 0,13 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à -100C, de 491 mg de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 25 cm3 de tétrahydrofuranne et de 0,14 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 10 minutes à -10C puis on ajoute une solution, refroidie à 0OC, de 337 mg de N ó-(benzyloxycarbonylglycyl) L lysine dans cm3 de tétrahydrofuranne et 1 cm3 de soude 1N.Le milieu réactionnel est agité pendant 2 heures à 10oC, puis pendant 20 heures à une température voisine de 200C. Il est ensuite acidifié à pH 1 par addition de 2 cm3 d'acide chlorhy- drique 1N.On évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 40OC. La solution aqueuse restante est extraite par 50 cm3 d'acétate d'éthyle, la phase organique est lavée 2 fois par 20 cm3 au total d'acide chlorhydrique 0,1 N et o10 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium et séchée sur sulfate de magnésium anhydre. Après concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 400C on obtient 600 mg d'un solide blanc qui est chromato- graphié sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 30 g de gel de silice neutre. On élue successivement par 60 cm3 d'acétate d'éthyle, 100 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes) et 80 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle- méthanol (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions à 13 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 450C. On obtient ainsi 430 mg de N a-[o 01-benzyl N-(Nlauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e Rf = 0,77 [silicagel; n.butanol-acide acétique-eau (7-1-2 en volumes)]. On dissout 420 ig du N c-LO -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyll N E-(benzy]oxyLrbuiLylglycyl) L lysine dans 25 cm3 de méthanol. On ajoute 420 mg de palladiun sur noir (à 3 %, de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat, on obtient 270 mig de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-glycyl L lysine. Le N E-(benzyloxycarbounylglycyl) L lysine peut être préparé selon la méthode de D. THEODOROPOULOS J. Org. Chem. 23, 140 (1958). EXEMPLE 5 - On ajoute 1,2 clO de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 100C, de 4,42 g de N-lauroyl L alany-l-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 180 cm3 de dioxanne et de 1,3 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 20 minutes à une température voisine de 10C, puis on ajoute une solution, refroidie à 100C, de 4,09 g de chlorhydrate de N ó-benzyloxycarbonyl L lysyl-D alaninate de benzyle dans un mélange de 30 cm3 de dioxanne, de 5 cnd d'eau et de 1,3 cm3 de triéthylamine. Le mélange réaction- nel est agité pendant 20 heures à une température voisine de 200C. On ajoute ensuite 500 cm3 d'eau et on refroidit le mélange à OoC. Après 2 heures à OOC, l'insoluble est séparé par filtration, lavé par 100 cm3 d'eau et séché. On obtient ainsi 7,86 g de N a-[O1-benzyl-N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-benzyloxycarbonyl L lysyl-D alaninate de benzyle. Rf = 0,92 Lsilicagel; acétate d'éthyle-méthanol (4-1 en volumes)]. On dissout 7,80 g de N a-LO -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N 6-benzyloxycarbonyl L lysyl-D alaninate de benzyle dans un mélange de 250 cm3 de méthanol et de 530 cm3 de dioxanne. On ajoute 7,80 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 5 heures. On observe une cristallisation sur le palladium sur noir. Le catalyseur est séparé par filtration, lavé par 100 cm3 d'un mélange méthanol- dioxanne (1-2 en volumes) puis par 5 fois 500 cm3 au total de méthanol entrainant ainsi le produit cristallisé. La phase méthanolique est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 500C. On obtient 1,5 g d'une poudre qui est chromatographiée sur une colonne de Sephadex LH 20 (diamètre: 2 cm; hauteur; 2 m). On élue avec du méthanol en recueillant des fractions de 5 cm3. Les fractions 41 à 69 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 500C. On dissout le résidu dans 50 cm3 de méthanol bouillant 32 2460290 puis on ajoute 120 cii3 de dioxamiie. On laisse revenir à une température voisine de 200C. Après 5 jours de repus, le précipité apparu est séparé par filtration, lavé par 10 cm3 de dioxanmlt puis séché sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 600C. On obtient ainsi 1,37 g de N a-LN-(Nlauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysyl-D alanine fondant à 1700C (fusion pâteuse). Rt = 0,26 Lsilicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]. Analyse Calc. % C 58,07 Hl 8,91 N 11,68 Tr. 57,4 8,9 11,4 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants: Ala 2,00 (théorie = 2) Glu 1,04 (théorie = 1) Lys 1,01 (théorie = 1). Le chlorhydrate de N e-benzyloxycarbonyl L lysyl-D alaninate de benzyle peut être préparé selon la méthode de S. KUSUMOTO et coll., Bull. Chem. Soc. Japan, 49, 533 (1976). EXEMPLE 6 - * On ajoute 1,3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 100C, de 4,91 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 200 cm3 de dioxanne et de 1,4 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 20 minutes à une température voisine de 100C, puis on ajoute une solution de 4,64 g de chlorhydrate de N ó-benzyloxycarbonyl L lysylglyci- nate de benzyle dans un mélange de 30 cm3 de dioxanne, de 5 cm3 d'eau et de 1,4 cm3 de triéthylamine.Le mélange réactionnel est agité pendant 20 heures à 20oC environ. On verse ensuite le mélange réactionnel dans 500 cm3 d'eau. L'insoluble formé est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 d'eau puis séché. On obtient ainsi 8,94 g d'une poudre blanche qui est dissoute dans 500 cm3 de diméthylformamide à 60 C. On ajoute 500 cm3 d'eau. Après refroidissement à oOC l'insoluble est séparé par filtration, essoré, lavé avec 100 cm3 d'eau puis séché. On obtient ainsi 6,26 g de N a-Lo -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N ó-benzyloxycarbonyl L lysyl-glycinate de benzyle. Rf = 0,89 Lsilicagel; acétate d'éthyle-méthanol (5-1 en volumes)]. On dissout b,20 g de N a-LO -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamylJ N e-benzyloxycarbunyl L lysyl-glycinate de benzyle dans un mélange à 600C de 425 cm3 de dioxanniie et de 125 cm3 de méthanol. On refroidit la solution à 40 C, on ajoute 6,20 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) puis on fait passer un courant dthydrogène pendant 4 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à oc, on obtient 5,44 g d'un mélange contenant encore du produit de départ. Le résidu est dissous dans un mélange à 600C de 1 litre de méthanol et de 200 cm3 de dioxanne. On refroidit la solution à 30 C, on ajoute 5,44 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un courant d'hydrogène pendant 4 heures. On filtre lemélangeréactionnel, on lave le filtre 2 fois par 200 cm3 au total de méthanol et 4 fois par 800 cm3 au total de méthanol bouillant. La phase de lavage obtenue avec le méthanol bouillant est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 40OC. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'éther jusqu'à pulvérisation. Après séparation de la poudre par filtration et séchage, on obtient 1,74 g de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysyl-glycine fondant à 165-170OC (fusion pâteuse). Rf = 0,39 Lsilicagel; méthanol] Analyse Calc. % C 57,41 H 8,78 N 11,96 Tr. 57,4 9,1 11,8 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants: Ala 1,00 (théorie = 1) Glu 1,01 (théorie = 1) Gly 1,01 (théorie = 1) Lys 0,84 (théorie = 1) Le chlorhydrate de N e-benzyloxycarbonyl L lysyl-glycinate de benzyle peut être préparé selon la méthode de V. Bondar et coll., Dokl. Akad. Nauk. Tadzh. SSR 13 14 (1970), (Chem. Abstr. 73, 66884 e). EXEMPLE 7 - On ajoute 0,85 cnm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à -40C, de 1,67 g de N-lauroyl glycine dans 150 cm3 de tétrahydro- furanne et 0,91 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 20 minutes à -40C puis on ajoute une solution, refroidie à 20C, de 3,74 g de N a-[N(N-t. butyloxycarbonyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysine dans un mélange de 50 cm3 de tétrahydrofuranne et de 13 cm3 de soude 1N. Le mélangeréactionnel est agité pendant 1 heure à 0C, puis pendant 18 heures à 200C environ. On évapore ensuite le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 40oC; le concentrat est dilué par addition de 50 cm3 d'eau, acidifié - si à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique IN. L'insoluble est séparé par filtration, lavé par 50 co3 d'eau puis séché. On obtient ainsi 5,8 g d'une poudre qui est chromatographiée sur une colonne de 12 mm de diamètre contenant g de gel de silice neutre (0, 04-0,063 mm). On élue successivement par 220 cm3 d'acétate d'éthyle, 120 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (95-5 en volumes), 80 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes), 100 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (7-3 en volumes) et 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 21 à 38 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite(20 mm de mercure) à 500C. On obtient ainsi 780-mg d'une poudre à laquelle on ajoute 270 mg d'un produit préparé dans les mnmes conditions et on dissout l'ensemble dans 25 cm3 de méthanol contenant 5 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec le mélange et on charge l'ensemble sur une colonne de 12 mm de diamètre contenant 50 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 200 cm3 d'acétate d'éthyle, 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (98-2 en volumes), 560 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (96-4 en volumes), 680 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes) et 280 cm3 de méthanol en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 43 et 44 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 500C. On obtient ainsi 850 mg de N a-[N- (N-t.butyloxycarbonyl L alanyl)-y-D glutamyl] N ó-(N-lauroyl glycine) L lysine. Rf = 0,50 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]. On dissout 830 mg de N a-[N-(N-t.butyloxycarbonyl L alanyl)-y-D glutamyl] N e-(N-lauroyl glycyl) L lysine dans 20 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures, on ajoute ensuite 100 cm3 d'éther. Le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (0, 2 mm de mercure) à 50OC. On obtient ainsi 790 mg de chlorhydrate de N a[N-L alanyl-y-D glutamyl] N e-(N-lauroyl glycyl) L lysine. Rf = 0,34 Lsilicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]. Après hydrolybse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivanLts Ala 1,04 (théorie 1) - Glu 1,02 (Lthéorie- 1) Gly 1,00 (théorie = 1) Lys 1,00 (théorie = 1) Le N a-[N-(N-t.butyloxycarbonyl L alanyl)-y- D glutamyl] L lysine peut être préparé de la façon suivante: On dissout 4,95 g de N a-(o -benzyl N-t.butyloxycarbonyl L alanyl)- y-D glutamyl] N e benzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle dans 250 cm3 d'acide acétique. On ajoute 4,95 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 2 heures. Après filtration et concen- tration à sec du filtrat sous pression réduite (0,2 mmn de mercure), on obtient 3,74 g de N a-[N-(N-t.butyloxycarbonyl L alanyl)-y-D glutamyl L lysine. Rf = 0,20 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Le N a-[O - benzyl N-(N-t.butyloxycarbonyl L alanyl)-y-D glutamyl] N ó-benzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle peut être préparé de la façon suivante: On ajoute 1,95 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à -10 C, de 6,13 g de t.butyloxycarbonyl L alanyl- a-D glutamate de benzyle dans 200 cm3 de téLtrahydrofuranne et 2,1 cm3 de triéthylamine. La solu- tion est agitée pendant 20 minutes à -10 C puis on ajoute une solution de 6,71 g de chlorhydrate de N ç-benzyloxycarbonyl L lysinate de benzyle dans 100 cm3 de tétrahydrofuranne et 2,3 cm3 de triéthylamine. Lemélangeréactionnel est agité pendant 30 minutes à -5 C, puis pendant 66 heures à 20OC environ. Le mélange réactionnel est ensuite concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 300C. On obtient ainsi 15,95 g d'une huile qui est chromatographiée sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 150 g de gel de silice neutre (0,063-0,20 mn). On élue successivement par 400 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane (4-b en volumes), 240 cm3 dtun mélange acétate d'éthyle- cyclohexane (6-4 en volumes) et 560 cm3 d'acétate d'éthyle en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 15 à 23 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 rmm de mercure) à 400C. On obtient ainsi 9,25 g d'une huile cristallisant partiellement qui est dissoute dans 40 cm3 d'acétate d'éthyle à 45 C. On ajoute 100 cm3 de cyclohexane. On laisse revenir à une température 3 fi 2460290 ' voisine de 20 'C. Leiisolubl,: est stiparé par filtration, lavé par 25 cm3 d'un mélange acétate d'éLtlyle - cycloliexane (4-o en volumes) puis séché. On obtient ainsi 4,99 g de N x-[0 -bcnzyl N-(N-L.butyloxycarbonyl L alanyl)- y-D gluLamayl] N e-beii:yloxycarboLlyl1 I. lysinaLe de benzyle. Rf = 0,80 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes)] Spectroneétrie de masse: M = 7b0 (théorie = 760) Exemple 8 - On ajoute 0,41 cm3 de chloroformiate dtisobutyle dans une solution, maintenue à -5 C, de 808 mg de N-lauroyl glycine dans 50 cm3 de têtrahydro- furanne et 0,44 cm3 de triéLhylamnine. La solution est agitée pendant 20 minutes à -5 C, puis on ajoute une solution, refroidie à 0 C, de 1,81 g de N a-[N(N- lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lysine dans un mélange de 20 cm3 de tétra- hydrofuranne et de 6,3 cmn3 de soude 1 N. Le mélangeréactionnel est agité pendant 1 heure vers -5 C, puis pendant 18 heures à 20 C environ. On acidifie ensuite le mélangeréactionnel vers pHli 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N, on évapore le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 imn de mercure) à 45 C, puis on ajoute au concentrat 50 cm3 d'acétate d'éthyle et cm3 d'eau. L'insoluble est séparé par filtration, lavé par 20 cm3 d'acétate d'éthyle et 10 cm3 d'eau et séché sous pression réduite (20 mm de mercure) . On obtient ainsi 1,18 g d'une poudre qui est chromatographiée sur une colonne de 12 nmm de diamètre contenant 50 g de gel de silice neutre (0, 063-0,20 mm). On élue successivement par 80 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (75-25 en volumes), 320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en-'volumes) et cm3 de méthanol en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 4 à 8 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure).à 50 C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient 0,88 g d'une poudre qui est chromatographiée sur une colonne de 12 mmran de diamètre contenant 20 g de gel de silice neutre (0,04-0, 063 mm). On élue successivement par 180 cm3 d'acétate d'éthyle, 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (99-1 en volumes), 100 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle- méthanol (98-2 en volumes), 260 cm3 d'un mélange acétate d'éthyleméthanol (95-5 en volumes), 120 cm3 d'un mélange acétate d'éthyleméthanol (9-1 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (85-15 en volumes), 280 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes), 40 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-mnéthianol (7-3 en volumes), 40 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (6-4 en volumes) et 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-mnéthanol (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de cm3. Les fractions 41 à 60 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 500C. On obtient ainsi 740 mg de N a-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N;-(NIauroyl glycyl) L lysine fondant à 167-171 C (fusion pâteuse). Rf = 0,58 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Analyse: Calc. % = C 62,55 H 9,58 N 9,12 Tr.(corrigé) = 62,5 9,6 9,3 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants: Ala 1,01 (théorie = 1) Glu 0,95 (théorie = 1) Gly 1,00 (théorie = 1) Lys 0,97 (théorie = 1) Exemple 9 - On ajoute 0,5 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à 120C, de 1,89 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans cm3 de dioxanne et 0,54 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant minutes à 120C, puis on ajoute une solution refroidie à 100C, de 1,95 g de chlorhydrate de N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoylglycinate de benzyle dans un mélange de 20 cm3 de dioxanne, de 1,5 cm3 d'eau et de 0,54 cm3 de triéthylamine. Lemélange réactionnel est agité pendant 18 heures à une tempé- rature voisine de 20 C, puis dilué par addition de 150 cm3 d'eau et acidifié à pH 1 par addition de 5 cm3 d'acide chlorhydrique IN. Le précipité ainsi obtenu est séparé par filtration, lavé 3 fois par 75 cm3 au total d'eau et séché. On obtient 3,36 g d'un produit blanc qui est chromatographié sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 60 g de gel de silice neutre (0,04- 0,063 nmm). Pour cela, le produit est dissous dans 30 cm3 d'acide acétique. A la solution obtenue, on ajoute 20 g de silice puis on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 450C. Le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne et ; on élue successivement par 160 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle.acide acétique (95-5 en volumes), 1040 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) et 360 cm3 d'acide acétique en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 10 à 16 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 C. On obtient ainsi 1,09 g de N -[o - benzyl N-(N-lauroyl 6L alanyl)-y-D glutamyl N -benzyloxycarbonyl DDLL diami-2,6 pimélayl- L alanyl)-y-D glutamyl N -benzyloxycarbonyl DD, LL diamino-2,6 pimélamoyl- 38 2460290 glycinate de benzyle fondalLt à 204-206 G. Les fractions 17 à 48 sont réunies et concentrées à sec. Le résidu est chromatographié sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 40 g de gel de silice neutre (0,040,063 nm). On élue par 280 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cmin3. Les fractions 4 et 5 réunies sont concen- trées à sec. Le résidu est triturédans 20 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 0,7 g de N -[o -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)y-D- glutamyl] N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle fondant à 204-206 C. Rf = 0,83 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)] On dissout 1,74 g de N -[o -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D gluta- myl] N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle dans cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,74 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) puis on fait passer un lent courant d'hydrogène pendant 2 heures. Après filtration, on ajoute 200 cm3 d'éther au filtrat. Après I heure de repos à 20 0C, le précipité formé est séparé par filtration, lavé par 25 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (0,2 nmmn de mercure) & 500C. On obtient ainsi 1,09 g de N -[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl- glycine fondant à 180-182 OC(fusion piteuse) et contenant 1,4 % d'eau (méthode de Fischer). Rf = 0,30 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide aóétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Analyse: Calc. % = C 55,40 H 8,34 N 13,36 Tr. = 53,4 8,5 12,4 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants Ala = 1,02 (théorie = 1) Glu = 1,01 (théorie = 1) Gly = 1,00 (théorie = 1) Dap = 0,98 (théorie = 1) Le chlorhydrate de N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl- glycinate de benzyle peut être préparé de la façon suivante: On dissout 2, 48 g de N -t.butyloxycarbonyl N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle dans 12,5 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures, puis on ajouLe 200 *],J3 d'éLhur. Le précipité pâteux qui s'est formé, séparé du surnageant par décantation, est dissous dans 150 cm3 d'acétone chaud. Après refroidissement, on ajoute 150 cr.3 d'éther. Les cristaux formés sont séparés par filtration, lavés 2 lois par 40 cm3 au total d'éther et séchés sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 20 C. On obtient ainsi 1,95 g de chlorhydrate de N -benzyJoxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle. Rf = 0,61 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Le N2-t.butyloxycarbonyl N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino- 2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle peut être préparé de la façon suivante: On ajoute 1,17 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à -1 C, de 3,81 g d'acide N -t.butyloxycarbonyl N - benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 90 cm3 de tétrahydrofuranne et 1,26 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à -lC, puis on ajoute une solution, refroidie à -1 C, de 3,028 g de p.toluènesulfonate de glycinate de benzyle dans 90 cm3 de tétrahydrofuranne et 1,3 cm3 de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité pendant 2 heures à -1 C, puis pendant 70 heures à c environ. Il est ensuite concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 350C. On reprend le résidu par 100 cm3 d'acétate d'éthyle. La solution obtenue est lavée successivement par 20 cm3 d'eau, 3 fois par 60 cm3 au total d'une solution à 5 % de bicarbonate de sodium, 3 fois par 60 cm3 au total d'une solution saturée d'acide citrique puis par 10 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium. La phase organique est séchée sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 0C. On obtient ainsi 4,8 g d'une meringue crème qui est chromatographiée sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 100 g de gel de silice neutre (0,04- 0,063 mm). On élue successivement par 320 cm3 d'un mélange cyclohexaneacétate d'éthyle (1-1 en volumes), 360 cm3 d'un mélange cyclohexaneacétate d'éthyle (1-3 en volumes) et 640 cm3 d'acétate d'éthyle, en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 13 à 23 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mmn de mercure) à 45 C. On obtient ainsi 2,29 g de N -t. butyloxy- carbonyl N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-glycinate de benzyle. Rf = 0,26 [silicagel; acétate d'éthyle] X 2460290 l'aiK Nd; -.I ulyI uxarboiiyl N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimII]aliliquu peut êtr prpr$ de la laqon suivante A une SU:,pCl,:ion de eoE g d'acide N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique et de 2, u5 g de carbonate de sodium dans un mélange de 50 cmi3 d'eau eL de 150 c., ' du dioxaline, on ajoute 6 g de dicarbonate de di t.butyle en solution dans 50 cm3 de dioxanne. Le mélange réactionnel est agité pendant 16 heures i une température voisine de 20 C. L'insoluble est séparé par filtration eL le filtrat est concentré à Sec sous pression réduite (20 nun de mercure) à 45 C. Le résidu est repris par 50 cm3 d'eau et 50 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase aqueuse est acidifiée à pH 3 par addition de cm3 dtune solution saturée d'acide citrique. La phase organique est séparée par décantation puis la phase aqueuse est extraite 2 fois par 50 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont réunies, lavées par 20 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur du sulfate de magné- situmn anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 2 6 C. On obtient ainsi 7,47 g d'acide N2-t.butyloxycarbonyl N benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique sous forme d'une meringue blanche. Rf = 0,62 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes)] Exemple 10- On ajoute 0,30 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, maintenue à -5 C, de 484 mg de N-benzyloxycarbonyl glycine dans 50 cm3 de tétra- hydrofuranne et 0,323 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant minutes à -5 C, puis on ajoute 1,32 g d'acide N -[N-(N-lauroyl L alanyl)- D isoglutaminyl] DD,LL diamino-2,b pimélamique en solution dans un mélange refroidi à 2 C de 50 cm3 d'eau, 25 cm3 de tétrahydrofuranne et 2, 31 cm3 de soude 1 N. Le mélange est agité pendant 1 heure à 5 C et 18 heures à 200C environ. Ensuite, on évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 C et on acidifie à pH 1 le concentrat par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 3 fois par 30 cm3 au total d'eau et séché. On obtient ainsi 1,57 g de poudre beige que l'on chromatographie sur 30 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 rnm) contenus dans une colonne de 15 mm de diamètre. On élue successivement par cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (7-3 en volumes),- 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle- méthanol (6-4 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle- méthanol (1-3 en volumes) en recueil]ant des fractions de 20 cm3. Les fractions 11 à 17 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50oC. L'huile résiduelle est triturée dans 50 cm3 d'éther. Après filtration et séchage, on obtient 1,02 g d'acide N2-[N-(N- lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] N6-benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 piméla- mique sous forme d'un solide blanc fondant à 115-1200C (fusion pàteuse). Rf = 0,41 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes)] On dissout 1 g d'acide N -[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] N6(benzyloxycarbonylglycyl) DD,LL-diamino-2,6 pimélamique dans 25 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) puis on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 509C, le résidu obtenu est trituré dans 30 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé par 10 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 500C. On obtient ainsi 790 mg d'acide N -[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] N -(glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique fondant à 170-174oC (fusion pàteuse). Rf = 0,34 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Analyse: Calc. 7. G 55,48 H 8,51 N 15,62 Tr. = 54,25 8,31 14, 82 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants: Ala 1,02 (théorie = 1) Dap 0,98 (théorie = 1) Glu 1,05 (théorie = 1) Gly 1,00 (théorie = 1) L'acide N -[N(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante: On dissout 1,76 g d'acide N -[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isogluta- minyl] N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 80 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,76 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) puis on fait passer un courant d'hydrogène pendant 2 heures et demie. Après filtration, le filtrat est concentré à 5 cm3 environ et dilué par addition de 100 cm3 dtéther. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 2 fois par 40 cm3 au total d'éther et séché. On obLieit ainsi 1,37 g d'acide N -[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamique. Rf = 0,40 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] L'acide N -[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] N benzyloxy- carbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut &tre préparé de la façon suivante: On ajoute 0,81 cm3 de chloroformiate dtisobutyle dans une solution, maintenue à -50C, de 2,5 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutamine dans 150 cm3 de diméthylformamide et 0,87 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à -5 C, puis on ajoute une solution, refroidie à + 2C, de 2,02 g d'acide N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2, 6 pimélamique dans un mélange de 62,5 cm3 d'eau et 6,25 cm3 de soude 1 N. Lemélangeréactionnel est agité pen- dant 1 heure à 0 C puis pendant 18 heures à 20 0C environ, et est ensuite filtré. Le filtrat, dilué par addition de 300 cm3 d'eau, est acidifié à pH 1 par addi- tion de 15 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. Le précipité apparu est séparé par filtration, lavé 3 fois par 30 cm3 au total d'eau puis séché. On obtient ainsi 2,03 g d'un solide blanc auquel on ajoute 680 mg d'un produit obtenu dans des conditions analogues. Le mélange est dissous dans 30 cm3 d'acide acétique contenant 5 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On concentre à sec puis on dépose le résidu sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 60 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 400 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 360 cm3 d'un mélange acétate d1éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), 240 cm3 d'lun mélange acétate d'éthyle-acide acétique (7-3 en volumes), 160 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle- acide acétique (1-1 en volumes) et 480 cm3 d'acide acétique en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 17 à 49, sont réunies et concentrées à sec. On obtient ainsi 1,78 g d'acide N -[N-(N-lauroyl L alanyl)-D isoglutaminyl] N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique Rf = 0, 65 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)] Le Nlauroyl L alanyl-D isoglutamine peut etre préparé de la façon suivante: On dissout 6,6 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle dans 330 cm3 d'acide acétique. On ajoute 6,6 g de palladium sur noir (à 3.7. de palladium) puis on fait passer un lent courant dihydrogène pendant 2 heures. Après filtration du mélangeréactionnel, on verse le filtrat dans 3 litres d'eau. Après 2 heures de repos à O C, le précipité apparu est séparé par filtration, 4'i 2460290 lavé 2 Lois par d0., O au Lut-il dJ'eu, puis séché. On obtient ainsi 5,16 g de produit auquel on ajJuLî; o,5 g d'un produit obtenu dans des conditions analogues. Ce mélange est dissou= dans 90 tni3 de iméthanol bouillant et à la solution obtenue on ajoute ', i 3 d'eau. Après 2 heures de repos à une température voisine de 200C, les cristaux apparus sont séparés par filtration, lavés 2 fois par 60 cmn3 au total d'eau et béchés sous pression réduite (20 mm de mercure). On obtient ainsi 5,1 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutamine fondant à 16b3 C. Rf = 0,18 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (4-1 en volumes)] Analyse: Calc. % = O, 12 H 9,33 N 10,52 Tr. o0,2 9,5 10,9 Le N-lauroyl L. alanyl-D isoglutaminate de benzyle peut être préparé de la façon suivante On ajoute 2,54 cmni3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à 0 C, de 3,9 g d'acide laurique dans 156 cm3 de toluène anhydre et 2,7 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à OOC, puis on ajoute une solution, refroidie à 0 C, de 6,7 g de chlorhydrate de L alanyl-D isoglutaminate de benzyle dans 52 cm3 d'eau et 2,7 cm3 de triéthyl- amine. Le mélange réactionnel est agité pendant 65 heures à une température voisine de 20 00. On obtient une masse réactionnelle d'aspect gélatineux à laquelle on ajoute 150 cm3 d'acétate d'éthyle. Le précipité est séparé par filtration, lavé par 30 cm3 d'eau puis séché. On obtient 7, 6 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle sous forme d'une poudre blanche. La phase aqueuse du filtrat précédent est extraite 2 fois par 100 cm3 au total d'acétate d'éthyle, cette phase acétate d'éthyle est réunie avec la phase organique du filtrat, lavée par 125 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1 N, 120 cm3 d'eau, séchée sur sulfate de magnésium puis concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à C. On obtient à nouveau 1,5 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle. Le produit (7,6 g et 1,5 g) est recristallisé dans 120 cm3 de méthanol. On obtient ainsi 6,bo g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle fondant à 1690 C. Rf = 0,13 [silicagel; acétate d'éthyle] Le chlorhydrate de L alanyl-D isoglutaminate de benzyle peut être préparé selon le procédé de S. KUSUMOTO, Bull. Chem. Soc. Japon 49, 533 (1976). Exemple 11 - On OUlIo u, 4 îi:3 c JIîlo)rotoriiiaLe d'isobutyle dans une solution maintenue à -5>(; de 710 mg de N-benzyltxycarbonyl glycine dans 67 cm3 de tétra- liydrofurainne tL 0,475 cJ3 de tritéLilyldiaine. Le mélange est agité pendant minutes à -5 C, pui: oil ajoute 1,75 g d'acide N2-[N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutairiyl] DD, LL diamiion-2,) pil,,élaImique en solution dans un mélange refroidi à 2 C de 6,7 cm3 d'eau eL 6,78 cm3 de soude 1 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 1/2 heure à 0 C et 18 heures à 200C environ. Ensuite, on évapore le tétra- hydrofuranne sous pression réduite (20 imn de mercure) à 45 C; la phase aqueuse restante est diluée par 50 cm3 d'eau et acidifiée à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 3 fois par 30 cm3 au total d'eau et séché. On obtient ainsi 1,65 g de poudre blanchâtre que l'on chromatographie sur 33 g de gel de silice neutre (0, 04- 0,063 mm) contenus dans une colonne de 22 mm de diamètre. Pour cela, on la dissout dans 20 cm3 d'acide acétique, on ajoute 5 g de silice et on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 C. Le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne et on élue successivement par 280 cm3 d'un mélange acetate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 160 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (85-15 en volumes), 560 cm3 dtun mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 11 à 24 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 C. L'huile résiduelle est triturée dans 40 cm3 d'éther. Après filtration et séchage, on obtient 1,37 g d'acide N2-[N-(N- octanoyl L alanyl)-y-D glutamnyl] N6-(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique sous forme d'un solide blanc fondant vers 100 C (fusion pâteuse). Rf = 0,47 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes)] On dissout 1,35 g d'acide N2-[N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 30 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,35 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 C, le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé par 10 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 50 C. On obtient ainsi 1,05 g d'acide N2-[N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N6-(glycyl) DD,LL diauiino-2,6 pimélamique fondant à 170-1740C (fusion pâteuse). Rf = 0,24 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] 2460290 Analyse: Calc. % = C 52,44 tH 7,74 N 14,08 Tr. 51,29 7,96 14,00 Apres hydrolyse LotLale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants Ala 1,01 (théorie - 1) Dap 0,98 (théorie - 1) Glu 1,03 (théorie = 1) Gly 1,00 (théorie = 1) L'acide N2[N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut ltre préparé de la façon suivante On dissout 2,82 g d'acide N -[0 Obenzyl N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 80 cm3 d'acide acétique. On ajoute 2,82 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) puis on fait passer un courant d'hydrogène pendant 2 heures 1/2. Après filtration, le filtrat est concentré à 5 cm3 environ sous pression réduite (20 mm de mercure) à 500Cet dilué par addition de 100 cm3 d'éther. On obtient un précipité qui est séparé par filtration, lavé par 20 cm3 d'éther puis séché. On obtient ainsi 2,0 g d'acide N -[N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimé- lamique fondant à 160-164 C (fusion pâteuse). Rf = 0,30 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)j] Analyse: Calc. % 53,58 H 8,02 N 13,58 Tr. 53,05 8,17 13,06 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants: Ala 1,00 (théorie = 1) Dap 0,95 (théorie = 1) Glu 1,02 (théorie = 1) L'acide N - [O1-benzyl N-(N-octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N -benzyl- oxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut tre préparé de la façon suivante: On ajoute 0,91 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à 0OC, de 3,04 g de N-octanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans 150 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,98 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 00C, puis on ajoute une solution, refroidie à 20C, de 2,26 g d'acide N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 70 cm3 d'eau et de 7 cm3 de soude 1 N. Le mélange réactionnel est 46 2460290 agité pendant 1 heure à OoC, puis pendant 20 heures à une température voisine de 20 C. Le tétrahydrofuranrie est ensuite évaporé sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 C. Le concentrat esL dilué par addition de 50 cm3 d'eau et acidifié à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. Le précipité blanc obtenu est séparé par filtration, lavé 3 fois par 75 cm3 au total d'eau puis séché. On obtient ainsi 4,73 g d'un solide blanc qui est chromatographié sur une colonne de 2,2 cm de diamètre contenant 100 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). Pour cela, le produit est dissous dans 20 cm3 d'acide acétique. A la solution obtenue, on ajoute 10 g de gel de silice neutre et concentre à sec sous pression réduite (20 mmun de mercure) à 50 C. Le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne et on élue successivement par 280 cm3 d'acétate d'éthyle, 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle- acide acétique (9-1 en volumes), 200 cm3 d'un mélange acétate dtéthyle- acide acétique (8-2 en volumes), 160 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle- acide acétique (1-1 en volumes) on recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 13 à 23 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 G. On obtient une huile qui se soli- difie dans l'éther. Après séparation par filtration et séchage, on obtient 2,84 g d'acide N -[10 -benzyl N-(N-octanoyl L alanyl)y-D glutamyl] N -benzyloxycarbouyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique. Rf = 0,68 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)] Le N-octanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé de la façon suivante: On ajoute 3,6 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à -1 C, de 3,95 g d'acide octanofque dans 140 cm3 de tétrahydrofuranne et 3,8 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à -1.C, puis on ajoute une solution, refroidie à 0 C, de 9,45 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 54,8 cm3 de soude 1 N et cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à -1oC puis pen- dant 20 heures à 20 C environ. Il est ensuite acidifié à pH 1 par addition d'acide chlorhydrique 1 N. Le tétrahydrofuranne est évaporé sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 C, puis le concentrat est extrait par 100 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique ainsi obtenue est lavée 2 fois par 50 cm3 au total d'acide chlorhydrique 1 N et par 25 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium et concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 450C. On obtient ainsi 10 g d'une huile jaune pâle qui est chromatographiée sur une colonne de 2,5 cnt de dir,:tèire ontLenanL 200 g de gel de silice neutre (0,0O3- 0,20 Imn). On élue avec de l taéLtate d'éLhyle en recueillant des fractions de cm3. Les fractions 7 à 9 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 nui de mercure) à 4S C. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'un mélange étiher-éther de pétrole (P.E. = 35-oO0 C) (1-4 en volumes), séparé par filtration et séché. On obtient ainsi 3,27 g de N-octanoyl L alanyl-aD gluta- mate de benzyle sous forne dune poudre blanche. Rf - 0,5 [silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (8-2 en volumes)] Exemple 12 - On ajoute 0,32 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution maintenue à -5 C de 512 mg de N-benzyloxycarbonyl glycine dans 25 cm3 de tétra- hydrofuranne et 0,35 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité 20 minutes à -50C, puis on ajoute 1,54 g d'acide N2-[N-(N-palmitoyl L alanyl) -y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimélaminque en solution dans un mélange refroidi à 2 C de 5 cm3 d'eau, et 4,9 cm3 de soude 1 N. Le mélange réactionnel est agité 1 heure à -5oC et 18 heures à 20 0C environ. Ensuite, on évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mmn de mercure) à 500C. La phase aqueuse restante est diluée par 50 cm3 d'eau et acidifiée à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 3 fois par 30 cm3 au total d'eau et séché. On obtient ainsi 1,80 g de poudre beige que l'on chroma- tographie sur 36 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 22 mm de diamètre. Pour cela, on le dissout dans 20 cm3 d'acide acé- tique, on ajoute 5 g de silice et on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 C. Le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne et élue successivement par 120 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle acide acétique (9-1 en volumes), 60 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle acide acétique (8-2 en volumes), bO cm3 d'un mélange acétate d'éthyle acide acétique (7-3 en volumes), 60O cm3 d'un mélange acétate d'éthyle acide acétique (1-1 en volumes) et 80 cm3 d'acide acétique, en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 10 à lb sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 nmmn de mercure) à 50 C. L'huile résiduelle est triturée dans cm3 d'éther. Après filtration et séchage, on obtient 0,83 g d'acide N2-[N-(N-palmitoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N -(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,b pimélamique fondant à 124-128OC (fusion piteuse) . Rf = 0,50 [silicagel; acétate dféthyle-acide acétique (1-1 en volumes)] On dissout 1,1f g d'a ide N -[N-(N-palmitoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N (benuzyloxycarboiyl glycy l) DJL, I. di lino-2,b púimélamique dans 30 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,14 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 3 heures. Ensuite, on chadufe le milieu réactiontiel vers o5 G, le filLre et le concentre à sec sous pression réduite (20 nmm de mercure) à 50 C; le résidu obtenu est trituré dans cin3 d'éther, séparé par filtration, lavé par 10 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (0,2 um de mercure) à 50 C. On obtient ainsi 880 mg d'acide N -[N-(N-palmitoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N -(glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimé- lamique fondant à 198-200O C (fusion pâteuse). Rf = 0,28 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Analyse: Calc. % = C 57,87 H 8,83 N 12,27 Tr. 54,64 8,67 10, 98 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants Ala 1,00 (théorie = 1) Dap 1,0O2 (théorie = 1) Glu 1,05 (théorie = 1) Gly 1,00 (théorie = 1) L'acide N -[N(N-palmiitoyl L alanyl)y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante 2_ 1 - On dissout 2,14 g d'acide N -[O -benzyl N(N-palmitoyl L alanyl)-y- D glutamyl] N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 80 cm3 d'acide acétique. On ajoute 2,14 g de palladium sur noir (à 3 %. de palladium) puis on fait passer un lent courant d'hydrogène pendant 2 heures 1/2. Après filtration, le filtrat est concentré à 5 cm3 environ sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 C puis est dilué par addition de 100 cm3 d'éther. On obtient un précipité qui est séparé par filtration, lavé 2 fois par 20 cm3 au total d'éther et séché. On obtient ainsi 1,58 g d'acide N -[N-(N-palmitoyl L alanyl)y-D glutamyl] DD,LL diamino-2,6 pimélamique. Rf = 0,30 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)]. L'acide N -[O -benzyl N-(N-palmitoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique peut être préparé de la façon suivante: On ajouLe 0,70 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à 2 C, de 2,91 g de N-palmitoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans 120 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,75 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 2 C, puis on ajoute une solution, refroidie à 2 C, de 1,726 g d'acide N - benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans un mélange de 53,4 cm3 d'eau etL de 5,34 cm3 de soude 1 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à 20C, puis pendant 18 heures à une température voisine de 20 C. Le tétrahydrofuranne est évaporé sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 C. Le concentrat est dilué par addition de 50 cm3 d'eau et acidifié à pH i par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique I N. Le précipité blanc obtenu est séparé par filtration, lavé 3 fois par 75 cm3 au total d'eau et séché. On obtient ainsi 4,15 g d'un solide blanc qui est chromatographié sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 85 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). Pour cela, le produit est dissous dans de l'acide acétique à 60 C. A la solution obtenue on ajoute 10 g de gel de silice neutre puis on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 500C. Le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne et on élue successivement par 320 cm3 d'acétate d'éthyle, 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) en recueil- lant des fractions de 40 cm3. Les fractions 14 à 22 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 0C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration, et séché. On obtient ainsi 2,20 g d'acide N -[O -benzyl N-(N- palmitoyl L alanyl)-y-D glutamyl] N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimé- lamique. Rf = 0,75 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique (3-1 en volumes)] Le N-palmitoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle peut être préparé de la façon suivante: On ajoute 3,b cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à 0 C de 7,03 g d'acide palmitique dans 140 cm3 de tétrahydrofuranne et 3,8 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 0 C, puis on ajoute une solution, refroidie à 00C, de 9,45 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 54,8 cm3 de soude 1 N et de 30 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à 0 C, puis 2460290 pendant 18 heures à 20 C environ; il est ensuite acidifié à pH 1 par addition de 70 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé 5 fois par 200 cmni3 au total d'eau et séché. On obtient ainsi 12,11 g d'une poudre blanche qui est chromatographre sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 200 g de gel de silice neutre (0,063-0,20 mm). On élue successivement par 200 cm3 d'acétate d'éthyle, 300 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 1,6 litre d'un mélange acétate d'éthyle-mnéthanol (8-2 en volumes), 400 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (6-4 en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 5 à 23 réunies sont concen- trées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 C. On obtient ainsi ,18 g d'un solide que l'on triture dans 50 cm3 d'éther bouillant pendant 1/2 heure. Après refroidissement à une température voisine de 200C, l'insoluble est séparé par filtration, lavé 3 fois par 75 cm3 au total d'éther puis séché. On obtient ainsi 2,94 g de N-palmitoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle. Rf = 0,77 [silicagel; acétate d'éthyle] Exemple 13 - On ajoute 0,46 cm3 de chloroformiate dtisobutyle à une solution, maintenue à -7 C, de 738 mg de N-benzyloxycarbonyl glycine dans 65 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,494 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à -70C, puis on ajoute une solution, refroidie à 2 C, de 2,02 g d'acide N -[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] DD,LL diamino2,6 pimélamique dans 10 cm3 d'eau et 7,06 cm3 de soude 1 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure vers -5 C et pendant 18 heures à 20 C environ. Ensuite, on évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 0C. La phase aqueuse restante est diluée par addition de 50 cm3 d'eau et acidifiée à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé par 25 cm3 d'eau et séché. Le résidu obtenu est dissous dans 5 cm3 d'acide acétique. On ajoute 10 g de silice puis on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 C. Le résidu obtenu est chargé sur une colonne de 35 mm de diamètre, contenant 100 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 160 cm3 d'acétate d'éthyle, cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes), 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (7-3 en volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (6-4 en volumes) et 440 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 23 à 32 oll ruulLius eL concentrées à sec sous pression réduite (20 tmain de mercure) à 50OC. lthuile rtsiduelle est triturée dans 50 cm3 d'éther jusqu'à pulvérisation totale du produit. Le produit est séparé par filtration et séché. On obtiei t ainsi, bous forme d'une poudre blanche 1,7 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl I. alanyl)-j -D glutamy]] N -(benzyloxycarbonyl glycyl) DD, LL diamino-2,6 pimélamique fondant i 134-136 C (fusion pâteuse). Rf = 0,7b [silicagel; acétate d'ethyle-acide acétique (1-1 en volumes)] On dissout 1,7 g d'acide N -[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N (benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 45 cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,7 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un léger courant dWhydrogène pendant 3 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 C, cm3 le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé par/ d'éther et séché sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 50 C. On obtient ainsi 1,32 g d'acide N2-[N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N -(glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamique fondant à 180-184oC (fusion pâteuse). Rf = 0,23 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Analyse: Calc. % = C 55,40 H 8,74 N 13,36 Tr. = 54,31 7,96 12,55 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants Ala 0,99 (théorie = 1) Dap 0,96 (théorie = 1) Glu 1,01 (théorie = 1) Gly 1,00 (théorie = 1) Exemple 14- On ajoute 0,52 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à 12 C, de 1,96 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans cm3 de dioxanne et 0,56 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant minutes à 12 C, puis on ajoute une solution, refroidie à 5 C, de 1,78 g de chlorhydrate de N e-benzyloxycarbonyl glycyl L Iysyl- D alanine dans un mélange de cm3 d'eau et de 8 cm3 de soude 1 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 heures à une température voisine de 20 0C. On acidifie ensuite le milieu réactionnel à pH 2 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N et on ajoute cm3 d'eau. L'insoluble est séparé par filtrationetlavé par 100 cm3 d'eau. 52 2460290 Après séchage, on obtient 3,14 g d'ulle poudre blanche qui est recristallisée dans un mélange bouillant de 500 cni3 d'acétate d'éthyle et de 60 cm3 de méthanol. Après 18 heures de repos à 5 C, les cristaux apparus sont séparés par filtration et séchés. On obtient ainsi 2,26 g de N a-[O -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] N óbenzyloxycarboriyl glycyl L lysyl-D alanine fondant à 193-196oC. Rf = 0, 76 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] On dissout 2,23 g de Na-[Ol-benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)-y-D gluta- myl] Ne-benzyloxycarbonyl glycyl L lysyl-D alanine dans 250 cm3 de méthanol à 60 0c. On refroidit la solution à 40 C, puis on ajoute 2,23 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) et on fait passer un lent courant d'hydrogène pendant heures. On filtre le mélange réactionnel, on lave le palladium sur noir fois par 300 cm3 au total de méthanol bouillant. Les filtrats réunis sont concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 500C. Le résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'éther. Après filtration, lavage par 100 cm3 d'éther et séchage, on obtient 1,31 g de Na-[N-(N- lauroyl L alanyl-y-D glutamyl] Ne-glycyl L lysyl-D alanine fondant à 155-158 C. Rf = 0,48 [silicagel; méthanol] Analysé: Calc. % = C 56,69 H 8,59 N 12,80 Tr. = 57,0 9,1 13,1 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants: Ala 1,98 (théorie = 2) Glu 1,06 (théorie = 1) Gly 1,00 (théorie = 1) Lys 1,00 (théorie = 1) Le chlorhydrate de Ne-benzyloxycarbonyl glycyl L lysyl-D alanine peut être préparé de la façon suivante: On dissout 3,20 g de Na-t. butyloxycarbonyl Ne-benzyloxycarbonyl * glycyl L lysyl-D alanine dans 15 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhy- drique 1,7 N dans l'acide acétique. Après 5 minutes d'agitation du mélange réactionnel, il se forme un précipité. Après 2 heures de repos, on ajoute cm3 d'éther, on sépare le précipité par filtration, le lave 2 fois par 50 cm3 au total d'éther puis le sèche. On obtient ainsi 2,73 g de chlorhydrate de Ne-benzyloxycarbonyl glycyl L lysyl-D alanine. Rf = 0,40 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] 53 2460290 Le Na-t.butyloxycarbonllyl Ne-benzyloxycarbonyl glycyl-L lysyl-D ala- nine peut etre préparé de la façon suivante: On ajoute 2,bO cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution maintenue à 10 C de 3,54 g de N-benzyloxycarbonyl glycine dans 200 cm3 de dioxanne et 2,8 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 20 minutes vers 10 C, puis on ajoute une solution, refroidie à 10 C, de 6,35 g de Na-t. butyloxycarbonyl L lysyl-D alanine dans un mélange de 40 cm3 d'eau et de cm3 de soude 1 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 heures à 20 0C environ. Il est ensuite acidifié jusqu'à pH 3 par addition d'acide chlorhydrique 1 N. On évapore le dioxanne par concentration sous pression réduite (20 mm de mer- cure) à 450G. On extrait le concentrat 3 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle; la phase organique est lavée 2 fois par 100 cm3 au total d'une solution saturée d'acide citrique et par 20 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium puis concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 C. On obtient 12,89 g d'une huile qui est chromatographiée sur colonne de 3 cm de diamètre contenant 200 g de gel de silice neutre (0,063-0,2 mmn). On élue par de l'acétone en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 5 et 6 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mmn de mercure) à 45 0C. On obtient 10,15 g d'une huile qui est chromatographiée sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 200 g de gel de silice neutre (0,063-0,2 ta) . On élue successivement par 100 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétone (9- 1 en volumes), 500 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétone (8-2 en volumes), 500 cm3 dtun mélange cyclohexane-acétone (7-3 en volumes), 400 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétone (6-4 en volumes), 500 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétone (1-1 en volumes), 1 litre d'un mélange cyclohexaneacétone (4-6 en volumes) et 200 cm3 d'acétone en recueillant des fractions de 100 cm3. Les fractions 25 à 32 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45oC, On obtient ainsi 3, 21 g de Na-t.butyloxycarbonyl Ne-benzyloxycarbonyl glycyl-L lysyl-D alanine. Rf = 0,69 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50- 20-6-24 en volumes)] Le Na-t.butyloxycarbonyl L lysyl-D alanine peut être préparé de la façon suivante: On dissout 16,23 g de Na-t.butyloxycarbonyl Ne-benzyloxycarbonyl L lysyl-D alaninate de benzyle dans 200 cm3 de méthanol. On ajoute 16,23 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) puis on fait passer un lent courant -54 2460290 d'hydrogène pendant 4 heures. On filtre le mélange réactionnel, puis on lave le palladium sur noir 3 lois par 60 cm3 au total de méthanol. Les filtrats réunis sont concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45oC. On obtient ainsi 8,87 g de Na-t.butyloxycarbonyl L lysyl-D alanine sous forme de meringue. Rf = 0,08 [silicagel; acétate d'éthyle - méthanol (4-1 en volumes)] Exemple 15- On ajoute 0,5 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une solution, maintenue à 13 C, de 1,91 g de N-(N-lauroyl L alanyl)-a-D glutamate de benzyle dans 80 cm3 de dioxanne et 0,55 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 13 C, puis on ajoute une solution refroidie à 4^C, de 1,90 g de chlorhydrate de N -(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine dans 7,8 cm3 de soude 1 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 18 heures à 20 C environ, puis acidifié à pH 1 par addition de 10 cm3 d'acide chlorhydrique 1 N et dilué par addition de 120 cm3 d'eau, Le précipité formé est séparé par filtration, lavé par 20 cm3 d'eau et séché. On obtient ainsi 3,21 g d'une poudre blanche qui est chromatographiée sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 60 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 nmu). On élue avec 40 cm3 d'acide acétique et 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle- acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 5 à 10 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 C. On obtient ainsi 2,88 g d'une poudre blanche qui est chromatographiée sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 60 g de gel de silice neutre (0,040,063 ôm). On élue successivement par 180 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 180 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8-2 en volumes) et 100 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (6-4 en volumes) en recueillant des fractions de 20 cm3. Les fractions 4 à 17 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 450C. Le résidu obtenu est dissous dans 25 cm3 d'acide acétique bouillant et la solution obtenue, additionnée de 0,2 g de noir décolorant, est filtrée à chaud; le filtrat est dilué par addition de 100 cm3 d'acétate d'éthyle. Après 1 heure de repos à 20 C environ, les cristaux apparus sont séparés par filtration, lavés 2 fois par 10 cm3 au total d'acétate d'éthyle et séchés. On obtient ainsi 1,53 g 2_ 1 -y6 de N -[O -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)y-D glutamyl] N6(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine fondant à 225-2271?, Rf = 0,71 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] On dissout 1,51 g de N -[O -benzyl N-(N-lauroyl L alanyl)y-D gluta- myl] N -(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine dans cm3 d'acide acétique. On ajoute 1,51 g de palladium sur noir (à 3 %. de palladium) puis on fait passer un lent courant d'hydrogène pendant 2 heures. Après filtration, on ajoute 500 cm3 d'éther au filtrat. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 20 C. On obtient ainsi 710 mg de N -[N-(N-lauroyl L alanyl)y-D glutamyl] N -glycyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine contenant 0,4 % d'eau (méthode de Fischer). Rf = 0,32 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Analyse: Calc. %= C 54,92 H 8,21 N 14,01 - Tr. = 52,6 8,0 12, 3 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants Ala 2,00 (théorie = 2) Dap 0,98 (théorie = 1) Glu 1,05 (théorie = 1) Gly 0,95 (théorie = 1) Le chlorhydrate de N6-(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine peut être préparé de la façon suivante: On dissout 2, 21 g de N2-t.butyloxycarbonyl N6-(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino2,6 pimélamoyl-D alanine dans 20 cm3 d'une solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 N dans l'acide acétique. On agite pendant 2 heures à 200C environ, puis on ajoute 250 cm3 d'éther. Le précipité formé est séparé par décantation, et trituré dans 100 ci3 d'acétone. Après filtration, lavage par cm3 d'éther et séchage, on obtient 1,96 g de chlorhydrate de N (benzyloxy- carbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine. Rf = 0,46 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Le N2-t.butyloxycarbonyl N -(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine peut être préparé de la façon suivante - On ajoute 0,89 cm3 de chloroformiate d'isobutyle & une solution, maintenue à 1D0C, de 1,20 g de N-benzyloxycarbonyl glycine dans 68 cm3 de tétra- hydrofuranne et 0,95 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant minutes à 1 C, puis on ajoute une solution, refroidie à 2oC, de 2,45 g de 56 2460290 N -L.butyloxycarbonyl DD,L.L pimiélamioyl-D alanine dans 13,6 cm3 de soude 0,5 N. Le-leange réactionnel est agité petndatiL 4 heures vers 5 C. On évapore ensuite le tétrahydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 C; la phase aqueuse restdlLnte esL diluée par addition de 50 cm3 d'eau, acidifiée à pli 3 par addition d'une solution saturée d'acide citrique et extraite fois par 125 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées par 10 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 450C. On obtient une meringue blanche qui est chromatographiée sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 90 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 800 cm3 d'acétate d'éthyle, 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes), 400 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 25 à 28 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 C. On obtient ainsi 2,4 g de N -t.butyloxycarbonyl N -(benzyloxycarbonyl glycyl) DD,LL diamino-2,6 pimé- lamoyl-D alanine. Rf = 0,67 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Le N -t.butyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alanine peut être préparé de la façon suivante: On dissout 4,52 g de N -t. butyloxycarbonyl N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alaninate de benzyle dans 45 cm3 d'acide acétique. On ajoute 4,52 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium) puis on fait passer un lent courant d'hydrogène pendant 3 heures. Après filtration, on verse le filtrat dans 800 cm3 d'éther; après 30 minutes dRagitation, on sépare le précipité formé par filtration, le lave par 100 cm3 d'éther et le sèche. On obtient ainsi 2,5 g de N -t.butyloxycarbonyl DD,LL diamino-2, 6 pimélamoyl-D alanine. Rf = 0,37 [silicagel; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] 2 6 Le N -t.butyloxycarbonyl N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alaninate de benzyle peut etre préparé de la façon suivante: On ajoute 1,53 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une solution, 2 6 maintenue à -1oC, de 5 g d'acide N -t.butyloxycarbonyl N benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamique dans 120 cm3 de tétrahydrofuranne et 1,65 cm3 de 57 2460290 triéthylamine. Le mélange ubt agité pendant 20 minutes à -1 C, puis on ajoute une solution, refroidie à O C, de 4,15 g de p.toluènesulfonate de D alaninate de benzyle dans 120 cm3 de tétrahydrofuranne et 1,65 cm3 de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à -10C, puis pendant 18 heures à 20 C environ. Il est ensuite concentré sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 C. On reprend le résidu par 100 cm3 d'acétate d'éthyle. La solution obtenue est lavée successivement par 25 cm3 d'eau, 4 fois par 80 cm3 au total d'une solution saturée de bicarbonate de sodium, 4 fois par 80 cm3 au total d'une solution saturée d'acide citrique et 10 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchée sur du sulfate de magnésium anhydre puis concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45 0C. On obtient ainsi 6,64 g d'une meringue rosée qui est chromatographiée sur une colonne de 2 cm de diamètre contenant 120 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On élue successivement par 40 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane (1-1 en volumes), 80 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-cyclohexane (3-1 en volumes), 1,16 litre d'acétate d'éthyle et 520 cm3 d'acétone en recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 10 à 39 réunies sont concentrées à sec sous pression réduite (20 mmn de mercure)à 45 C. On obtient ainsi 4,52 g de N t.butyl- oxycarbonyl N -benzyloxycarbonyl DD,LL diamino-2,6 pimélamoyl-D alaninate de benzyle. Rf = 0,37 [silicagel; acétate d'éthyle] La présente invention concerne également les compositions pharma- ceutiques qui contiennent au moins un composé selon l'invention en association avec un ou plusieurs diluants ou excipients compatibles et pharmaceutiquement acceptables. Ces compositions peuvent être utilisées soit comme adjuvants de vaccins soit comme stimulants non spécifiques de l'immunité anti-infectieuse et anti-tumorale. Utilisés comme adjuvants de vaccins, les produits selon l'invention sont administrés en mime temps et par la mnme voie que l'antigène (viral, bactérien, parasitaire ou d'autre nature) contre lequel on souhaite augmenter chez le sujet immunisé (homme ou animal domestique) les réactions d'immunité cellulaire (hypersensibilité du type retardé) ou la production d'anticorps circulants ou locaux. Les produits sont administrés à des doses relativement faibles (de l'ordre du mg), mélangés avec l'antigène et par la même voie (intramuscu- laire, sous-cutanée, intraveineuse, intranasale, buccale). Si nécessaire, le 58 2460290 produit et l'antigène peuvent ê&re émulsifiés dans un excipient huileux approprié ou incorporés dans des liposomes. En tant qu'immtnosLimulants non spécifiques, ils sont administrés à des doses comprises entre 0,1 et 50 mg/kg par voie parentérale (intraveineuse, sous-cutanée, intramusculaire), intranasale, buccale rectale, ou éventuellement intratumorale. Comme compositions solides pour administration orale peuvent 8tre utilisés des comprimés, des pillules, des poudres ou des granulés. Dans ces compositions le produit actif est mélangé à un ou plusieurs diluants tels que saccharose, lactose ou amidon. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un lubrifiant, tel que le stéarate de magnésium. Comme compositions liquides pour administration orale, on peut utiliser des émulsions pharmaceutiquement acceptables, des solutions, des suspensions, des sirops ou des élixirs contenant des diluants inertes, tels que l'eau ou l'huile de paraffine. Ces compositions peuvent comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, édul- corants ou aromatisants. Les compositions pour administration parentérale peuvent être des solutions stériles aqueuses, des suspensions ou des émulsions. Comme véhicule dans ces derniers cas, on peut employer le polyéthylèneglycol le propylèneglycol, les huiles végétales, en particulier l'huile d'golive, et les esters organiques injectables, par exemple l'oléate d'éthyle. Ces compositions peuvent contenir également des adjuvants, en particulier des agents mouillants, émulsifiants ou dispersants. La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple à l'aide d'un filtre bactériologique, en incorporant à la composition des agents stérilisants ou par chauffage. Elles peuvent être également préparées sous forme de compositions solides, rendues stériles par exemple par irradiation, qui peuvent être dissoutes dans de l'eau stérile ou dispersées dans tout autre milieu stérile injectable, éventuellement au moment de l'emploi. Les compositions pour administration intra-nasale peuvent être des solutions stériles aqueuses, des suspensions ou des émulsions qui peuvent être éventuellement associées à un agent propulseur compatible. Les compositions pour administration rectale sont des suppositoires qui peuvent contenir, outre le produit actif, des excipients, tels que le beurre de cacao ou la suppo-cire. J 9 [. exue.,]-. ul v-l i I,,I î,,.; t J l _ ú 0t 1 Im, i]ú11iL aLif, il lusLre une Luoij)ObiL ioII bedl oi 1J 11 IVL'-11t lmi: Oi, prdpJiu:t'ln Id lut:lllniqut,abituelle une solution administrable par voie illl'aveincllUc dyJnlt I a d OllJp:.i { Jio suivante: - clhlorliydrat-u de Iljcidv N -(Nl-lauroyl 1. dlanyl- y-D glutansyl) N -glyyl DDLlI.jLI. dial,,ino-2,o pimélamique... 0,53 g soluté ilnjtCLablh.. 5 cnm3 R L. V t: b 1 C A T I 0 N S 1. Lin niouveau téLra- ou p)eLaltepLidL caracLerise en ce qulil répond à la formule générale: R - Nil - CIl - ( - Nil - Clh - CO - R1 I 1 CilI CH2Ci2 - CO NH - CH CO- R2 2 2 (CH ( 2) 3 R3 -NH - CH -R4 dans laquelle R représente un aLome d'hydrogène ou un reste d'acide gras, R1 représente un radical hydroxy ou amino, R2 représente un radical hydroxy ou un reste N-glycyle ou N-D alanyle, R3 représente un atome d'hydrogène ou un reste d'acide gras ou un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est éventuellement substituée par un reste d'acide gras, étant entendu que l'un au moins des synboles R2 et R3 représente un reste glycyle ou D alanyle et que l'un au moins des symboles R et R3 représente ou contient un reste d'acide gras et R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, étant entendu que l'alanine liée à l'acide glutamique est sous forme L, l'acide glutamique est sous forme D, la lysine, lorsque R4 représente un atome d'hydro- gène, est sous forme L et l'acide diamino-2,6 pimélamique, lorsque R4 repré- sente un radical carbamoyle, est sous forme D,D; L,L; DD,LL (racémique) ou D,L (méso), ainsi que ses sels. 2. Un nouveau tétra- ou pentapepLide selon la revendication 1 caractérisé en ce que le reste d'acide gras est un radical alcanoyle contenant 1 à 45 atomes de carbone (éventuellement substitué par un radical hydroxy, phényle ou cyclo- hexyle), un radical alcénoyle contenant 3 à 30 atomes de carbone et contenant éventuellement plus dlune double liaison ou un reste d'un acide mycolique. 3. Un procédé de préparation d'un tétra- ou pentapeptide selon les revendi- cations 1 ou 2 caractérisé en ce que l'on fait agir un aminoacide de formule générale: R5 - Nil - CH - GO - R' R b dans laquelle R5 représente un atome d'hydrogène, un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de fonction amine, R' représente un radical hydroxy ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et R6 représente un atome d'hydrogène 61 2460290 ou un radical méthyle, 1'alanine éLant dans ce cas sous forme D, sur un tri- ou tétrapeptide de formule générale: R7 - NH - CH - CO - NH - i - CO - R8 iH3 C2CH2 - Co - NH - CH - Co - R9 (CH2)3 R - NH - CH - R4 dans laquelle R4 est défini comme dans la revendication 1, R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, R8 repré- sente un radical hydroxy, amino ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, R9 représente un radical hydroxy ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle ou un reste N-glycyle ou N-D alanyle éventuellement estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone (éventuellement substitué par un radical phé- nyle ou nitrophényle) et R10 représente un atome d'hydrogène, un reste d'acide gras, un groupement protecteur de fonction amine ou un radical glycyle ou D-ala- nyle dont la fonction amine est éventuellement substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine, étant entendu que l'un au moins des radicaux R7 ou R10 représente ou contient un reste dtacide:gras et que, R9 représentant un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou un reste N-glycyle ou N-D alanyle dont la fonction acide est protégée, R10 représente un atome d'hydrogène, et que R9 représentant un radical hydroxy, R10 représente un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine, on remplace éventuellement les radicaux R5, R7 et/ou R10 (lorsqu'ils représentent un groupement protecteur de la fonction amine) par un atome d'hydrogène et les radicaux R', R8 et/ou R9 (lorsqu'ils représentent ou contiennent un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle) par un radical hydroxy puis on isole le produit obtenu, éventuellement sous forme d'un sel. 4. Un procédé selon la revendication 3 pour la préparation d'un produit selon la revendication 1 ou 2, dans la formule duquel R2 représente un radical glycyle ou D alanyle, caractérisé en ce que l'on fait réagir un aminoacide de formule générale: R5 - NH - CH - COR' R6 dans laquelle R5 représente un atome d'hydrogène, R' représente un radical hydroxy ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et R6 représente un atome d'hydrogène ou un radical miéLiayle, sur un tri- ou tétrapeptide de formule générale: R - NiH - Cti - CO - Nit - Cit - CO - R i I 8 C113 C1i2CH2 -C H Nl- CH - CO- R (CH 2) 3 RlO -NH - CH - R4 dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, R8 représente un radical amino ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, R9 représente un radical hydroxy et R10 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine, l'un au moins des symboles R7 et R10 représentant ou contenant un reste d'acide gras, on remplace éventuellement R7 ou RlO (lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de la fonc- tion amine) par un atome d'hydrogène et les radicaux R' et/ou R8 (lorsqu'ils re- présentent ou contiennent un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle) par un radical hydcoxy puis.on isole le produit obtenu, éventuellement sous forme de sel. 5. Un procédé selon la revendication 3 pour la préparation d'un produit selon la revendication 1 ou 2, dans la formule duquel R3 représente un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est éventuellement substituée par un reste d'acide gras, caractérisé en ce que l'on fait réagir un acide de formule générale: R5 - NH - CH - COOH R6 dans laquelle R5 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine et R6 représente un atome d'hydrogène ou un radical méthyle (ou un dérivé activé de cet acide), sur un tri- ou tétrapeptide de formule générale: R7 - NH - CH - CO - NH - CH - CO - R8 I I CH3 CH2CH2C- CO - NH - CH - CO - R9 (} I2)3 Cil3 2 2 j 29 R10 -NH - CH -R4 dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de fonction amine, R8 reprébeLt utit rtdial lydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atonmes de carbone bvuiîtuellc:nLit,ubtituè par un radical phényle ou nitro- phényle, R9 représente un radical hydroxy, un reste N-glycyle ou N-D alanyle éventuellement ebLeritlée u iun rddical al:oyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellelunenLt ubstitué par un radical phényle ou nitrophényle et Ri0 représente un aLoi:,e dthydrogène, l'un au moins des symboles R5 et R7 représentant un reste d'acide gras, un remplace éventuellement le radical R5 ou R7 (lorsqu'il représente un groupement protecteur de fonction amine) par un atome d'hydrogène, et les radicaux R8 et/ou R9 (lorsqu'ils représentent ou contiennent un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuel- lement substitué par un radical phényle ou nitrophényle) par un radical hydroxy, puis on isole le produit obtenu, éventuellement sous forme de sel. 6. Un procédé de préparation d'un Létra- ou pentapeptide selon les revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que I 'on fait réagir un dipeptide de formule géné- rale: R7 - N - Cit - GO - Nil - H - CO - R8 CH3 CH2CH2COOH dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de fonction amine et R8 représente un radical amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone (éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle), sur un di- ou tripeptide de formule générale: Nm2 - CH - CO - R9 ( ii2)3 R10 - NH - Cil - R4 dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, R9 représente un radical hydroxy, alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone (éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle) ou un reste N-glycyle ou N-D alanyle éventuellement estérifié et R10 représente un reste d'acide gras, un groupement protecteur de fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle (dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de fonction amine), l'un au moins des symboles R9 et R10 représentant un radical glycyb ou D alanyle tel que défini ci-dessus et l'un au moins des symboles R7 et R10 représentant ou contenant un reste d'acide gras, on remplace éventuellement le radical R7 ou R10 (lorsqu'il représente t4 OU COiiLiul1L un groulCt-i..!, 't>l, Lcur de la foncLion amine) par un atome d8hydro- radical gèni eL les ladicdu. l L/od 19 (l orsqu'ils représentent ou contiennent un! alcoyloxy contenant 1 a 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical plhényle ou niLroplhéeryle) par un radical hydroxy, puis on isole le produiL obtenu, vetl uu ell elit boui orturlle de sel. 7. Un procédé de préparation d'un tLéLtra- ou pentapeptide selon les revendications 1 ou 2 caractérisé en ce que l'on lait réagir un dérivé de la L alanine de formule générale: R7 - Ni - GII - COOH Cti3 dans laquelle R7 représente un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, sur un tri- ou tétrapeptide de formule générale: H2N - CH - CO - R8 I 2C2H2 O - C0-NH - CH - CO - R9 I (CHt2)3 Ri - Ni - CH - R4 dans laquelle R8 représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant t à 4 atomes de carbone (éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle), R9 représente un radical hydroxy, un reste N-glycyle ou ND ala- nyle éventuellement estérifié ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle et RiO représente un reste d'acide gras, un groupement protecteur de fonction amine ou un reste glycyle ou D- alanyle dont la fonction amine est substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement protecteur de fonction amine, l'un au moins des symboles R9 et R10 représentant un reste glycyle ou D alanyle tel que défini ci-avant et l'un au moins des symboles R7 et R10 représentant ou contenant un reste d'acide gras, on remplace éventuellement le radical R7 ou R10O (lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de fonction amine) par un atome d'hydrogène et les radicaux R8 et/ou R9 (lorsqu'ils représentent ou contiennent un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuelle- ment substitué par un radical phényle ou nitrophényle) par un radical hydroxy, puis on isole le produit obtenu, éventuellement sous forme de sel. o5 8. Un procédé de préparaLion dfunr LéteLra- ou pentapeptide selon les revendications 1 ou 2 caractérisé en ce que l'on faiL réagir un acide de formule générale: R" - GO - OH dans laquelle R"; - CO - représente un reste d'acide gras, ou un dérivé activé de cet acide, sur un LéLra- ou pentapeptide de formule générale: Ril - Nl - - CO - NH - H - CO - R8 C1i3 CH2CH2 - CO - Nil - fH - CO - R9 ( H2) 3 R O- NH - CH -R4 dans laquelle R4 représente un atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, R8 représente un radical hiydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone (éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle), R9 représente un radical hydroxy, un reste N-glycyle ou N-D alanyle éventuel- lement estérifié ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle, RO10 repré- sente un atome d'hydrogène, un reste d'acide gras, un groupement protecteur de fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est éventuellement substituée par un reste d'acide gras ou par un groupement pro- tecteur de fonction amine, l'un au moins des symboles R9 et R10 représentant un reste glycyle ou D alanyle tel que défini ci-avant et Rll représente un atome d'hydrogène, un reste d'acide gras ou un groupement protecteur de la fonction amine, étant entendu que l'un au moins des radicaux R10 et Rll représente un atome d'hydrogène ou, pour R10, un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est libre et que lorsque l'un des radicaux R10 ou Rll représente un reste d'acide gras celui-ci et le reste R"-CO- sont identiques ou différents, on remplace éventuellement le radical R10 ou Rll (lorsqu'il représente ou contient un groupement protecteur de fonction amine) par un atome d'hydrogène et les radicaux R8 et/ou R9 (lorsqu'ils représentent ou contiennent un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éventuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle) par un radical hydroxy, puis isole le produit obtenu, éventuellement sous forme de sel. 9. Un médicament caractérisé en ce qutil est constitué par un produit selon les revendications 1 ou 2 à l'état libre ou sous forme de sel, pur ou en association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles et pharma- ceutiquement acceptables.