FR 2158791 A1 19730615 FR 7221551 A 19720615 72 21551 -1- 2158791 La présente invention a pour objet un agent de diagnostic perfectionné pour déceler les composés de la classe des urobilinogènes dans les liquides du corps et notamment dans l'urine. Il est connu que l'on peut déceler la présence des compo-5 sés de la classe des urobilinogènes, de l'indol, des sulfamides, du porphobilinogène, de l'indican urinaire et de l'acide 5-hydroxyindol acétique, à l'aide d'une solution de p-diméthylaminobenzaldéhyde dans l'acide chlorhydrique. Cette analyse est connue dans la littérature sous le nom de réaction d'Ehrlich. Elle a pris une grande 10 importance dans le diagnostic médical comme test de l'accroissement de 1'urobilinogène dans l'urine. Bien que le test ne soit pas très spécifique il convient comme méthode standard pour le diagnostic des maladies du foie et de la vésicule biliaire. Du fait que les papiers-test ont pris de plus en plus 15 d'importance dans le diagnostic clinico-chimique, on a également rais au point des papiers-test pour détecter 1'urobilinogène sur la base de la réaction d'Ehrlich. Ces papiers-test ont deux inconvénients importants : 1) La réaction colorée se développe si lentement que l'on 20 doit attendre au moins une minute avant la lecture du test. 2) Les papiers-test possèdent évidemment le manque de spécificité de la réaction d'Ehrlich elle-même, de sorte que des résultats faussement positifs ne sont pas exclus. Il existe depuis longtemps des tests dans lesquels l'uro-25 bilinogène est copulé avec de l'acide sulfanilique diazoté pour donner un colorant jaune. Cette réaction a été découverte par Ehrlich en 1884 et elle est connue sous le nom de "diazoréaction jaune". La réaction a été étudiée encore à plusieurs reprises par la suite mais il n'a 30 pu être cependant établi Jusqu'à présent s'il s'agit sans aucun doute d'une diazocopulation avec 1'urobilinogène ou bien si d'autres substances ne sont pas aussi responsables de la formation du colorant jaune (voirnBiologie du colorant jaune de la vésicule" Georg Thieme-Verlag, Stuttgart, i960, pages J2 et 211). Comme il s'agit 35 i On a maintenant trouvé que les sels de benzène diazcnium 40 stables, éventuellement plusieurs fois substitués, dont le radical 72 21551 ~cL- 2158791 phényle contient en position ortho ou para au moins un groupement poly-atomique donneur d'électrons avec au moins une paire d'électrons susceptible de mésomérie, sont particulièrement utilisables poir 11 analyse de 1'urobilinogène lorsque la somme des valeurs 5 sigma selon Hammet, de tous les substituants, ne dépasse pas + 0,4. Les groupements donneurs d'électrons sont suivant l'invention, ceux qui renferment l'oxygène, le soufre ou l'azote en liaison directe avec le groupement phényle. Les groupements oxygénés sont par exemple les groupements hydroxy, alcoxy, aralcoxy ou aryloxy. 10 Comme groupements soufrés, on peut citer les groupements alkyl- mercapto ou arylmercapto, tandis que les groupements mercapto libres ne sont en général pas utilisables en raison de leur sensibilité à l'oxydation. Comme groupements azoté^ on peut utiliser les groupements acylamino, arylamino ou aryl-alkylamino, tandis que les grou-15 pements amino son substitués et les groupements alkylamino, en raison de leur basicité dans les conditions de la réaction , deviennent souvent protoniques et ne possèdent donc pas de paire d'électrons susceptible de mésomérie. Dans le choix des substituants, il faut aussi veiller à ce que ceux-ci ne réagissent pas avec les groupements 20 diazo. Cela vaut notamment pour les groupements o-acylamino et o-arylamino. Des combinaisons qui conviennent particulièrement bien pour la mise en oeuvre de l'invention sont les sels de benzène-diazonium, de formule générale I : 25 A R2^5-N m X© (I) Ri l4 dans laquelle : X0 représente un anion stabilisant et R^ et Rg sont 30 des groupements polyatomiques donneurs d'électrons avec au moins une paire d'électrons susceptible de mésomérie, l'un des radicaux R^ et Rg pouvant aussi être de l'hydrogène, un halogène ou un groupement alkyle de faible poids moléculaire, les radicaux R^ et R^ étant de l'hydrogène ou des groupements ne s'opposant pas par empêchement 35 stérique à la diazocopulation avec 1'urobilinogène, la somme des valeurs sigma selon Hammet de tous les substituants R-^, R2, R^ et R^ ne devant pas dépasser + 0,4. Les combinaisons sont utilisables notamment pour l'emploi sur des supports absorbants. 40 Les sels de benzène-diazonium suivant l'invention 72 21551 -3- 2158791 réagissent avec 1'urobilinogène presque immédiatement et donnent des colorants très spécifiques dont la teinte va du rouge au bleu, qui conviennent bien pour la détermination de concentrations, même très faibles. De plus, les combinaisons suivant l'invention présen-5 tent le grand avantage que la réaction colorée n'est pas perturbée par l'urée. Les papiers-test connus antérieurement sont colorés en jaune selon la concentration de l'urée dans l'urine, ce qui peut rendre très difficile la détermination de faibles quantités d'urobilinogène. En outre, la réaction colorée suivant l'invention n'est 10 pas influencée non plus par les substances qui se trouvent souvent dans l'urine et qui gênent la plupart du temps, ainsi qu'il est connu, la réaction de Ehrlich. Parmi ces substances gênantes, on peut citer notamment les aminés aromatiques, sulfamides, sulfonyl-urées, etc... qui se trouvent souvent dans l'urine et proviennent 15 des médicaments. La présence de ces aminés aromatiques dans l'urine a conduit jusqu'à présent à des réactions colorées du jaune à l'orange qui peuvent masquer ou altérer la coloration produite par 1'urobilinogène. Pour la détermination de la bilirubine^ qui est très Impor-20 tante dans le diagnostic des affections du foie et de la vésicule, on a utilisé certes depuis longtemps des sels de diazonlum comme l'acide diazosulfanilique, le sel de para-nitrobenzène-diazonium ou de 2,4-dichlorobenzène-dlazonium. Toutefois, ainsi qu'on pouvait s'y attendre, ces substan-25 ces ne donnent pas de réaction colorée utilisable avec l'urobilinogène . Au contraire, les combinaisons selon la présente invention permettent de déceler de façon spécifique 1'urobilinogène en présence de bilirubine. Dans certains cas certes, la bilirubine réagit 30 aussi avec les combinaisons selon l'invention, cependant la réaction ne se fait que lorsque la réaction colorée avec llirobilino-gène s'est déjà largement développée et se distingue par sa teinte de façon si nette qu'il est alors même possible de déceler les deux colorants vésiculaires présents ensemble avec un seul réactif et 35 d'apprécier la teneur quantitativement d'après la teinte mixte qui se développe. Ainsi, une teinte rouge atteste la présence d'urobilinogène et la formation ultérieure d'une teinte bleue, celle de la bilirubine. Dans le cas où les deux substances colorantes de la vésicule sont présentes , le papier-test se colore d'abord en rouge 40 et vire ensuite au violet. Dans des cas exceptionnels les deux réac 72 21551 2158791 tions colorées se produisent en même temps mais le résultat du test n'est pas affecté pour autant. Dans le cas où la réaction avec la bilirubine doit être empêchée, cela peut être obtenu en utilisant comme indicateur un 5 sel de diazonium d'électrophilie relativement faible et en effectuant la réaction avec addition d'un agent mouillant cationique. On peut dè cette façon modifier le réactif pour l'analyse de 1'urobilinogène éventuellement en même temps que celle de la bilirubine, de façon à obtenir le résultat optimum en fonction du 10 but recherché. Les combinaisons de formule générale I sont utilisées de préférence pour la préparation des papiers-test. Dans ce but, les substances sont appliquées sur un support poreux_avec un acide et éventuellement avec addition d'adjuvants tels que des stabilisants 15 ou des mouillants. Les combinaisons de formule I d'autre part conviennent pour la préparation de rubans ou films-test, selon la demande de brevet allemand publiée 1 598 153 ainsi que pour la recherche de 1'urobilinogène dans les solutions. 20 Pour la préparation des formes préférées des nouveaux agents de diagnostic selon l'invention, on imprègne un support poreux, notairi ment du papier filtre, avec une solution contenant 0,05-5 S et de préférence 0,1-1 g (pour 100 cm3) d'un sel de diazonium de la formule générale I ainsi que 2-30 g, de préférence 5-20 g, d'un acide 25 solide organique ou minéral et éventuellement des agents mouillants et/ou stabilisants. Comme solvant pour la solution d'imprégnation, on peut citer avant tout l'eau et les solvants organiques volatils ne réagissant pas avec les sels de diazonium, comme par exemple les alcools 30 de faible poids moléculaire, l'ester acétique et 1'acétonitrile. Dans la préparation de la solution de sel de diazonium, on peut ou bien introduire le sel déjà préparé dans la solution, ou bien produire le sel dans la solution même par diazotation d'une aminé aromatique suivant la méthode connue. -, — 35 On préfère pour la mise en oeuvre de l'invention, en premier lieu les combinaisons de la formule I dans lesquelles R-^ représente un groupement hydroxy-, alkylmercapto- ou alcoxy- inférieur, et R2 représente un groupement hydroxy-, alcoxy-, phénoxy-, aralcoxy-, alkylmercapto-, phénylmercapto-, phénylalkylamino ou des groupe-40 ments phénylamino- ou acylamino- éventuellement substitués, l'un 72 21551 -5- 2158791 des radicaux R^ et R2 pouvant aussi être l'hydrogène, un halogène ou un groupement GH^ et R^ et R^ représentent l'hydrogène, un halogène, un groupement hydroxy-, alcoxy-, phénoxy-, alkylmercapto-phénylraercapto-, phénylaikylaœino- et des groupements phénylamino-, 5 acylaraino-, alkyl-, sulfo- et carboxyle éventuellement substitués et X© représente un halogénure ou l'anion d'un acide oxygéné ou un acide de Lewis saturé coordinativement par un halogénure d'hydrogène . Pour des raisons de conservation, on utilise normalement 10 uniquement des sels de diazonium stables, c'est-à-dire des sels contenant un anion stabilisant. Ce sont par exemple les anions sulfate, tétrafluoroborate, tétrachlorozincate, hexachloro-antimoniate et les arylsulfonates. Comme acide minéral ou organique, on peut citer l'acide 15 orthophosphorique, métaphosphorique, sulfosalicylique, oxalique ou des sels acides comme le bisulfate de potassium. On peut aussi utiliser des produits d'addition d'acides de Lewis et de bases de Lewis quand ils ont une réaction acide. On peut recommander particulièrement l'acide métaphosphorique du commerce contenant environ 20 50 à 60 % de son sel de sodium,car celui-ci donne des papiers-test particulièrement stables. Les acides métaphosphorique et oxalique ont en outre l'avantage de fournir des papiers-test qui réagissent très lentement avec la bilirubine. 25 Les additions stabilisantes sont déjà connues depuis long temps dans la chimie des composés diazo'iques. De telles additions sont par exemple le fluoborate de sodium, les arylsulfonates de sodium, le sulfate de magnésium ou le métaphosphate de sodium. L'emploi d'agents mouillants est indiqué non seulement en J>0 vue d'améliorer l'aptitude du papier à être mouillé mais aussi pour des actions spécifiques supplémentaires. Ainsi les agents mouillants anioniques, notamment les sulfates et suifonates, procurent une augmentation de la sensibilité et un faible ajustement batho-chrome de la teinte dans la recherche de 1'urobilinogène. Comme 35 exemples de mouillants anioniques, on peut citer le laurylsulfate de sodium et le p. dodecylbenzènesulfonate de sodium. Dans bien des cas, il est souhaitable de ne déterminer que des accroissements vraiment significatifs du taux d'urobilinogène. Dans ce cas il est possible de diminuer la sensibilité et la vites-40 se de réaction par une addition d'agent mouillant catlonique comme 72 21551 -6- 2158791 par exemple le chlorure de laurylpyriraidlnium. Les agents mouillants non ioniques comme les polyoxyéthy-lène triglycérides n'agissent en général que sur la facilité d'imprégnation du papier-test. 5 Les agents mouillants sont ajoutés dans des proportions de 0,1 à 3 g, de préférence 0,3 à 1 g pour 100 cm-' de solution d'imprégnation. Les constituants individuels des compositions peuvent aussi être introduits successivement lorsque les solubilités l'exigent ou 10 lorsque l'on veut obtenir des effets particuliers. Ainsi il peut être avantageux au point de vue par exemple de la stabilité, d'ajouter d'abord le sel de diazonium et le stabilisant et ensuite seulement d'imprégner avec l'acide. Après l'imprégnation des supports absorbants, ceux-ci sont 15 séchés à température aussi basse que possible pour ne pas altérer le sel de diazonium. Comme support absorbant, on peut utiliser en premier lieu du papier filtre mais aussi des feutres et voiles de substances fibreuses artificielles comme le polypropylène et les polyesters. 20 Les supports absorbants imprégnés des réactifs sont avan tageusement découpés en petits rectangles et scellés sur des feuilles de matière plastique ou scellés entre deux feuilles de matière plastique, ou entre une feuille de matière plastique et un réseau à fines mailles en matière artificielle. Bien que les papiers-test 25 constituent une forme de réalisation de l'invention et le plus élégant moyen de diagnostic pour l'analyse des substances contenues dans les liquides biologiques, il est naturellement possible aussi d'utiliser les sels de diazonium selon l'invention pour la détermination de 1'urobilinogène en phase liquide. Si on verse goutte-à-30 goutte le sel de diazonium en solution acide dans de l'urine contenant de 1'urobilinogène, on obtient des colorations allant du rouge au bleu, ou des précipités de teinte correspondante qui peuvent être éventuellement extraits à l'aide de solvants organiques comme le chloroforme. 35 Pour la mise en oeuvre du procédé de l'invention pour la recherche de 1'urobilinogène dans les liquides physiologiques, on plonge les nouveaux moyens de diagnostic dans la solution à tester et on examine le changement de coloration après un court laps de temps. ^0 Les sels de diazonium utilisés suivant l'invention, notamment 72 21551 -7- 2158791 les aminés correspondantes, sont connus d'une façon générale. Pour la détermination quantitative de 1'urobilinogène dans l'urine à l'aide de méthodes photométriques, on peut recommander comme réactif les sels de 4-méthoxy-benzène-diazonium ainsi que les sels de 2?4-diméthoxy-benzène-diazonium. 5 Les valeurs sigma suivant Hammet sont connues, ce sont des nombres mesurant l'effet d'attraction ou de fourniture d'électrons par des substituants. (Dans le premier cas la valeur sigma est positive et dans le second cas elle est négative). Les valeurs sigma sont additives et le signe de la somme algébrique indique (par com-10 paraison avec les substituants hydrogène) si l'effet d'attraction des électrons, ou au contraire le caractère de donneur d'électrons prédomine. La valeur limite de + 0,4 qui caractérise l'invention indique ainsi que l'action des substituants fournissant des électrons ne doit être affaiblie que jusqu'à une valeur sigma de + 0,4 par 15 les substituants attirant les électrons. Ainsi par exemple un sel de benzène diazonium avec un groupement hydroxy en position para (valeur sigma = -0,37) peut encore contenir un ou plusieurs groupements ayant une valeur sigma globale jusqu'à + 0,83, tandis qu'un sel de "diazonium substitué par un groupement o-méthoxy ou p-20 acétamino (valeur sigma dans les deux cas de + 0) ne peut contenir des groupements attirant les électrons que jusqu'à une valeur sigma globale de + 0,4. Bien que' les calculs de la valeur sigma selon Hammet soient fait actuellement par routine et représentent un moyen précieux pour les évaluations théoriques en chimie aromatique, il 25 ne faut pas les considérer comme des valeurs absolues valables dans tous les cas. Il s'agit au contraire de valeurs approximatives qui sont entachées d'une certaine imprécision par rapport aux données empiriques. Ces imprécisions ne jouent cependant un rôle que dans de rares cas-limite qui ne contredisent nullement les enseignements 30 techniques de la présente invention. Dans les exemples qui suivent on décrit plus en détail, sans limiter l'invention, les agents d'analyse et le procédé suivant la présente invention. Exemple 1 35 On imprègne du papier-filtre (Schleicter et Schiill 23 SL), avec une solution de la composition suivante et on sèche à 40°C : 4-méthoxybenzène diazonium fluoborate 0,3 g Acide métaphosphorique 10,0 g Acide dodécylbenzènesulfonique.(sel dè Na) 0,4 g 72 21551 2158791 méthanol . 5,0 ral Eau q.s. pour 100 ml Le papier filtre donne par immersion dans l'urine après 5 à 10 secondes, les réactions colorées suivantes : 5 urine exempte d'urobilinogène : aucune coloration urine avec teneur normale en urobilinogène : rose urine avec teneur élevée en urobilinogène : rouge carminé On obtient des réactions colorées similaires avec des papiers-test contenant 0,3 g des sels de diazonium ci- 10 dessous : fluoborate de 2-méthoxybenzène-diazonium sulfate de 2-hydroxybenzène-diazonium sulfate de 4-hydroxybenzène-diazonium fluoborate de 2,4-dihydroxybenzène-diazonium 15 Exemple 2 On imprègne du papier-filtre (Schleicher et Schtlll . 23 SL) avec la solution suivante et on sèche à 40°C : fluoborate de 4-méthoxybenzène-diazonium 0,3 g acide oxalique - 10,0 g 20 méthanol q.s. pour 100 ml On prépare maintenait différentes bandes du papier (a) ainsi imprégné, par imprégnation de chaque fois une bande dans une solution dans 100 ml de chlorure de méthylène de triglycéride ' polyoxyéthylène/(b), de sel de sodium d'acide dodécylbenzène 25 sulfonique (c), et de chlorure de laurylpyridinium (d) et on sèche àl'air chaud. Les papiers-test donnent avec des urines contenant de 1'urobilinogène, après 5 à 10 secondes, les réactions suivantes : 72 21551 -9- 2158791 Papier test Réaction colorée Urine avec mg % d1urobilinogène 0^5 1^0 2,0 a rouge brique + + + + + + b rouge brique + + + + + + 5 c rouge carmin ++ +++ ++++ d rouge brique - + + + Dans le tableau ci-dessus, les croix ont la signification suivante : + faible 10 + + notable + + + forte + + + + très forte EM2EÎÏ-2 23 SL On imprègne du papier-filtre (Schleicher et SchtllV) avec 15 la solution suivante et on sèche à 40°C : 4-éthoxyaniline.... 0,25 g nitrite d'isoarayle 1,0 ml acide oxalique . 10,0 g acide de dodecylbenzènesulfonique (sel sodique)... 0,4 g 20 méthanol q. s. pour 100 ml Le papier-test réagit avec l'urine contenant de 1'urobilinogène en donnant une coloration rouge carminé. Des papiers-test dans lesquels la 4-éthoxyaniline est remplacée par des quantités identiques de 2-éthoxy-, 4-butoxy-, 4-phénoxy-, 4-méthoxy-2-méthyl-, 25 2-méthoxy-5-méthyl-, 2-méthylraercapto-, 4-méthylmercapto-, 4-chloro-2-méthoxy-5-méthyl-, 5-chloro-2-hydroxy- ou 4-benzyloxy-aniline, donnent des résultats identiques avec parfois des teintes un peu plus violacées. Exemple 4 30 On imprègne du papier-filtre (Schleicher et Schtlll 23 SL) avec les solutions suivantes et on sèche : I - Fluoborate de 4-acétamido benzène-diazonium.. 0,3 g métaphosphate de sodium 5,0 g eau q.s. pour 100 ml 35 II - Acide oxalique 15,0 g laurylsulfate de sodium 0,5 g méthanol q.s. pour 100 ral Le papier-test réagit à l'urine contenant de l'urobilinogène en donnant une coloration rouge carminé. Un papier imprégné 40 de façon analogue en utilisant du fluoborate de 3-méthoxy-4- acétamidobenzène-diazonium réagit en donnant une teinte rouge violacé 72 21551 -10- 2158791 Exemple 5 On imprègne du papier-filtre (Schleicher et Schtlll 23 SL) avec la solution suivante, et on sèche à 40°C : Toluène sulfonate de 3-chloro-4-méthoxybenzène-diazonium.... 0,5 S~ 5 acide sulfosalicylique 5,0 g acide dodecylbenzène sulfonique (sel sodique) 0,8 g méthanol q.s. pour 100 ml Par immersion dans de l'urine contenant de 1'urobilinogène, le papier-test prend aussitôt une coloration rouge carminé. Par 10 immersion dans de l'urine contenant de la bilirubine, on obtient après 10 à 20 secondes une coloration bleu-vert. L'urine contenant à la fois de 1'urobilinogène et de la bilirubine donne suivant la teneur en chacune des deux substances, des teintes intermédiaires entre ces deux teintes. 15 Exemple 6 On imprègne avec des solutions de compositions suivantes. un voile de polyester et on sèche à 40°C. sel de benzène-diazonium (a-f) 0,1 g acide sulfosalicylique 10,0 g 20 acide dodécylbenzène sulfonique (sel sodique) 0,4 g méthanol/eau 1/1 q.s. pour 100 ml On a utilisé les sels de diazonium suivants : a) tétrachlorozincate de 2-méthoxy-5-chloro-benzène-diazonium (sel rouge RC) 25 b) tétrachlorozincate de 4-benzamido-2-méthyl-5-méthoxy-benzène-diazonium (sel violet B) c) tétrachlorozincate de 4-benzamido-2,5-diméthoxy-benzène-diazo-nium (sel bleu RR) d) tétrachlorozincate de 4-benzamido-2,5-diéthoxy-benzène-diazonium 30 (sel bleu BB) e) chlorure de 4-méthoxyphénylamino-benzène-diazonium (bleu variamine B) f) sulfate acide de phénylamino-benzène-diazonium avec l'urine contenant de 1'urobilinogène, on obtient les colorations 35 ci-après : a) rouge —> bleu b) rouge violet c) bleu violet d) bleu violet 40 e) bleu vert f) bleu vert 72 21551 .h. 2158791 Exemple 7 On imprègne des papiers filtres (Schleicher et Schtlll 23 SL) avec des solutions aqueuses différentes qui contiennent pour 100 ral 5 g de sulfate acide de potassium et respectivement 0,5 6 de l'un 5 des sels de diazonium ci-après : fluoborate de 2,4-diméthoxybenzène-diazoniura fluoborate de 3*4-diraéthoxybenzène diazonium fluoborate de 2,5-diméthoxybenzène diazonium fluoborate de 3»^>5-triméthoxybenzène-diazoniura 10 fluoborate de 4-hydroxy-3,5-dichlorobenzène-diazonium fluoborate de 5-ckloro-2.»4-diméthoxybenzène-d!azonium Tous ces papiers-test réagissent avec l'urine renfermant de 1'urobilinogène pour donner des teintes allant du rouge au rouge lilas. 15 Si ces papiers-test sont imprégnés avec des solutions à 1 % des agents mouillants ci-dessous, on obtient des colorations plus foncées du violet->rouge au bleu violet : - acide dodécylbenzène sulfonique (sel sodique) dans du chlorure de méthylène, 20 - laurylsulfate de sodium dans un mélange chloroforme-méthanol - acide dodécanesulfonique (sel sodique) dans un mélange ehlor o forme-mé thano1 - suifosuccinate de dioctylsodium dans du chlorure de méthylène. Exemple 8 25 On imprègne du papier filtre (Schleicher et Schtlll 23 SL) avec la solution suivante et on sèche à 40°C : acide 5-aminosalicylique 0,2 g acide métaphosphorique 15,0 g nitrite de sodium 0,1 g 30 acide dodécylbenzène sulfonique (sel sodique) 0,4 g méthanol 5 ml eau q. s. poitr 100 ml Le papier test réagit avec l'urine contenant de l'urobilinogène en donnant une teinte rouge brique. Un papier imprégné de 35 façon analogue avec de l'acide 5-amino-3-sulfosalicylique donne aussi une coloration rouge brique. Exemple Q On ajoute à 5 ni d'urine contenant de 1'urobilinogène, 2 ml d'une solution à 2 % de fluoborate de 2,4-diméthoxybenzène-40 diazonium dans de l'acide chlorhydrique 2n. Après 2 minutes, on 72 21551 .12. 2158791 ajoute encore 5 de chloroforme et on agite fortement. Une partie de la phase chloroformlque est alors transférée dans une cuvette et on mesure l'extinction pour une longueur d'onde de 495 nanomètres. En comparant avec l'extinction obtenue avec un échantillon stan-5 dard, on peut mesurer avec précision la teneur en urobilinogène de 1'urine. 72 21551 -13- 2158791 REVENDICATIONS 1. Application nouvelle de sels de benzène-diazonium stables caractérisé en ce que l'on utilise des sels de benzène diazonium stables dont le radical phényle, pouvant porter un ou plusieurs 5 substituants, contient en position ortho ou para un groupement poly-atomique donneur d'électrons avec au moins une paire d'électrons susceptible de mésomérie, la somme des valeurs sigma selon Hammet de tous les substituants ne dépassant pas la valeur de + 0,4, comme substances indicatrices de la présence d'urobilinogènes, éventuel-10 lement en présence de bilirubine. 2. Application selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on utilise des composés de formule générale I : 15 N® X© ( I ) dans laquelle : X© représente un anion stabilisant et R^ et R2 représentent des groupements polyatomiques donneurs d'électrons avec au moins une paire d'électrons susceptible de mésomérie, l'un 20 des radicaux R-^ ou R^ pouvant aussi représenter l'hydrogène, un halogène ou un groupement alkyle de faible poids moléculaire et J les radicaux R^ et R^ étant de l'hydrogène ou des groupements ne s'opposant pas par empêchement stérique à la diazocopulation avec 1'urobilinogène, la somme des valeurs sigma selon Hammet de tous 25 les substituants R-^, R2> R^ et R^ ne dépassant pas + 0,4. 3. Application selon la revendication 2, caractérisé en ce que dans la formule générale , R^ est un groupement hydroxy-, alkylmercapto- ou un alcoxy inférieur et R2 est un groupement hydroxy, alcoxy, phénoxy, aralooxy, alkylmercapto, phénylmercapto- 2Q ou phénylalkylamino,ou un groupement acylamino ou phénylamino éventuellement substitué, l'un des radicaux R^ et R2 pouvant aussi représenter l'hydrogène, un halogène ou ion groupement CH^ et R^ et R^ représentent l'hydrogène, un halogène ou un groupement hydroxy, alcoxy, phénoxy, alkylmercapto, phénylmercapto ou phénylalkylamino, 35 ou un groupement phénylamino ou acylamino éventuellement substitué ou un groupement alkyle, sulfo ou carboxyle, et X^ est un halogénure ou l'amion d'un acide oxygéné ou un acide de Lewis coordina-tivement saturé par un halogénure d'hydrogène. 4. Application selon la revendication 3* caractérisée en ce 40 qUe X© représente un reste chlorure, sulfate, tétrafluoborate, 72 21551 -i"- 2158791 tétrachlorozincate, hexachloro-antimoniate, arylsulfonate ou car-boxylique. 5. Application selon la revendication 1, caractérisée en ce que les sels de diazonium sont incorporés dans des réactifs des- 5 tinés à l'analyse de 1'urobilinogène éventuellement en présence de bilirubine. 6. Composition pour la détection d'urobilinogènes éventuellement en présence de bilirubine, caractérisée en ce qu'elle contient au moins un des sels de diazonium décrits dans la reven- 10 dication 1 et un acide solide minéral ou organique. 7. Composition selon la revendication 6, caractérisée en ce qu'elle contient en outre un agent mouillant. 8. Composition selon l'une quelconque des revendications 6 et 7» caractérisée en ce qu'elle contient comme acide de l'acide 15 métaphosphorique. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications 6 et 7» caractérisée en ce qu'elle contient un sel de 4-méthoxy-benzène-diazonium. 10. Composition selon l'une quelconque des revendications 20 6 et 7, caractérisée en ce qu'elle est imprégnée sur un support absorbant.