FR 2111895 A1 19720609 FR 7138657 A 19711027 71 38657 1 2111895, La présente invention concerne de nouveaux dérivés de l'hydroxocobalamine, un procédé pour la préparation de ces dérivés et l'utilisation de ceux-ci en thérapeutique. On sait que l'hydroxocobalamine est un homologue de la vitamine 5 (aussi appelée cyanocobalamine) et qu'elle en dérive par remplacement du groupe cyano de la molécule par un groupe hydroxy-le. En d'autre termes, si l'on convient de représenter la cyano-cobalamine par la formule abrégée X Co - C — N , ■^l'hydroxocobalamine peut être considérée, sous forme non ionisée, comme correspondant à la formule X Co - OH On sait aussi qu'en solution aqueuse, l'hydroxocobalamine existe à la fois sous forme non ionisée et sous forme ionisée, en 15 raison d'une réaction d'équilibre qui peut s'écrire : h2o Cl Co - OH_7 —ï Z~H2°» CoX_7 OH ~ (1) (2) 20 La forme (1), non ionisée, prédomine en milieu alcalin et la forme (2), ionisée, en milieu acide /"cf. Smith J.L. et collab., The Analyst, 02, 1Ô3 (1962 )_J. Si l'on détermine la courbe de neutralisation de l'hydroxocobalamine par mesure avec un pH-mètre, on constate la présence 25 d'une fonction basique entre pH 6,2 et pH 0,5, le point isoélectrique étant sensiblement situé à pH 7,2. On connaît déjà des sels formés entre l'hydroxocobalamine et des acides minéraux ou organiques et, notamment, des sels obtenus à partir d'amino-acides par salification de la (ou d'une) 30 fonction acide de ceux-ci par l'hydroxocobalamine, composé à réaction basique. On a découvert suivant l'invention que de nouveaux dérivés d'hydroxocobalamine peuvent être obtenus par réaction de cette base avec des amino-acides, donnant lieu à la formation de 35 complexes où le groupe hydroxyle de l'hydroxocobalamine est apparamment bloqué par le reste amino de l'amino-acide. La structure des nouveaux dérivés conformes à l'invention diffère donc totalement de celle des dérivés connus et résultant de la neutralisation de la fonction basique de l'hydroxocobalamine 40 par la (ou une) fonction acide de l'amino-acide. 71 38657 2 2111895 ^ Les nouveaux dérivés d'hydroxocobalamine conformes à l'invention sont caractérisés en ce qu'ils correspondent à des complexes dans lesquels la fonction hydroxyle de l'hydroxocobalamine est bloquée par la fonction aminé d'un amino-acide de formule 5 générale (A) H2 N - (CHR)n - COOH dans laquelle R représente un atome d'hydrogène, lorsque n est égal à 1 ou 2 et un groupe méthyle, un groupe -CH2 COOH ou un groupe -CH2 - GHg COOH lorsque n est égal à 1. 10 Sans que l'invention soit pour autant limitée à cette inter prétation, il semble qu'on puisse attribuer à ces complexes l'une des deux formules suivantes : (B) X Co - NH - (CHR)n - COOH et 15 (C) X Co - OH, H2N - (CHR)n - COOH dans lesquelles R et n ont l'une des significations précitées et X représente le reste de molécule commun à la cyanocobalamine et à l'hydroxocobalamine. Suivant les différentes significations de R et de n l'amino-20 acide est choisi parmi le glycocolle, l'alpha-alanine, la bêta-alanine, l'acide aspartique et l'acide glutamique. L'invention a également pour objet un procédé pour la préparation des dérivés d'hydroxocobalamine tels que définis ci-dessus. Ce procédé est caractérisé en ce qu'on fait réagir, en 25 solution aqueuse et à température ambiante, avec neutralisation partielle, jusqu'à pH compris entre 6,2 et 8,6, un amino-acide de formule générale (A) H2 N - (CKR)n - COOH 30 dans laquelle R et n correspondent à l'une des significations précitées, avec une quantité au plus équimoléculaire d'hydroxocobalamine, et en ce que, la réaction terminée, on provoque la cristallisation par addition de plusieurs volumes d'un solvant organique miscible à l'eau et choisi parmi ceux qui ne dissolvent 35 pas l'hydroxocobalamine. Suivant un mode de réalisation préféré, on utilise, au titre d'un tel solvant, l'acétone, à raison d'au moins 4 volumes. 71 38657 3 2111895 En particulier, l'amino-acide utilisé est, suivant les différentes significations indiquées pour R et n dans la formule (A) précitée, le glycocolle, l'alpha-alanine, la bêta-alanine, l'acide aspartique ou l'acide glutamique. 5 Dans la mise en oeuvre du procédé tel que défini ci-dessus et pour satisfaire aux conditions déjà énoncées précédemment, il est nécessaire que le pH initial du mélange réactionnel soit supérieur à 6,2 et au plus égal à 0,6, l'optimum étant fonction de la nature de l'amino-acide utilisé. 10 Pour que la réaction soit complète, il faut constamment éviter qu'au cours de celle-ci, le pH descende au-dessous du seuil de 6,2 qui correspond à la fonction basique de l'hydroxocobalamine. Il y a donc intérêt à surveiller l'évolution du pH et à corriger éventuellement celui-ci par addition d'un agent alcalin. 15 On favorise également la réaction en opérant avec des solu tions aussi concentrées que possible. La concentration de la solution d'hydroxocobalamine utilisée comme matière première est avantageusement comprise entre 5 et 20 mg/crrr (g/l). Quel que soit l'amino-scide mis en oeuvre, il est également 20 nécessaire, pour que la réaction soit complète, de l'utiliser en excès par rapport à l'hydroxocobalamine. En effet, la totalité des groupes carboxyle ne peut être salifiée par me base forte qu'en atteignant un pH trop élevé pour que la réaction puisse avoir lieu. 25 L'invention prévoit donc de compenser la présence de ces groupes carboxyle non salifiés en utilisant l'amino-acide en excès par rapport à la quantité stoechiométrique, cet excès devant être d'autant plus important que l'amino-acide comporte davantage de groupes carboxyle. Par exemple, dans le cas de 30 l'acide aspartique ou de l'acide glutamique, amino-acides dont la molécule comporte deux groupes -COOH pour un seul groupe il faut en utiliser un plus grand excès que dans le cas du glycocolle et de l'alpha ou bêta alanine, qui sont des mono-acides monoaminés. 35 Comme indiqué ci-dessus, la réaction doit être effectuée à la température ambiante pour éviter tout risque de décomposition de l'hydroxocobalamine par la chaleur. 71 38657 4 2111895. Dans ces conditions, la réaction est pratiquement terminée en l'espace de quatre à cinq heures. Toutefois, il est préférable d'observer un délai de douze à trente-six heures à compter de la mise en présence des réactifs, avant de provoquer la cristallisa-5 tion du nouveau composé par l'addition au mélange réactionnel de plusieurs volumes d'acétone ou autre solvant analogue. Après cette addition, on peut laisser reposer le mélange pendant 24 heures au voisinage de 0°C, puis recueillir les cristaux en les séparant par filtration. 10 L'étude des nouveaux composés ainsi obtenus à l'état cristallisé permet de conclure à la formation d'entités chimiques définies. En effet : 1°) La solubilité des cristaux dans l'eau pure est égale à plus du double de celle de l'hydroxocobalamine. 15 2°) La couleur des solutions aqueuses de ces cristaux est, à concentration égale, d'un rouge sensiblement plus violacé que celle d'une solution aqueuse d'hydroxocobalamine. 3°) La solubilité des cristaux dans le méthanol, l'éthanol absolu ou l'éthanol à 95° GL est nettement supérieure à celle de 20 l'hydroxocobalamine, comme le montre le tableau ci-dessous ï Composé examiné Solubilité en g/1 méthanol éthanol absolu éthanol 95° GL - Hydroxocobalamine 120 40 ' 6 - Dérivé du glycocolle > 200 > 200 ^ 200 - Dérivé de l'alpha-alanine - > 100 ^ 100 - Dérivé de la bêta-alanine > 200 > 200 oAl50> - Dérivé de l'acide aspartique - > 60 60 - Dérivé de l'acide glutamique — > 100 ^ 100 4°) L'examen des cristaux au microscope montre une structure 35 homogène et, en même temps, différente de celle des cristaux d'hydroxocobalamine. 71 38657 5 2111895 5°) Au spectrophotomètre UV, la longueur d'onde correspondant au maximum d'absorbance de la solution aqueuse est,_dans tous les cas, différente de celle observée avec l'hydroxocobalamine base. Tandis qu'elle est de 351 millimicrons pour cette dernière, elle 5 atteint environ 357 millimicrons pour les dérivés formés respectivement à partir du glycocolle, de l'alpha alanine, de l'acide aspartique et de l'scide glutamique et 355,5 millimicrons dans le cas de la bêta-alanine. 6°) L'évolution du pH, telle qu'observée sur les courbes de 10 neutralisation des solutions aqueuses -, démontre que l'hydroxocobalamine n'est plus présente à l'état de base libre. La solution aqueuse de chacun des nouveaux composés présente un pH voisin de la neutralité et, si on alcalinise jusqu'à pH 9,5 pour, ensuite, acidifier jusqu'à pH 4, on constate qu'il n'y a aucun palier 15 correspondant aux zones tampon autrement observées, d'une part avec l'hydroxocobalamine libre et d'autre part avec l'amino-acide libre. De plus, si l'on acidifie les solutions de ces cristaux jusqu'à pH 2,5 ou 3 et qu'on laisse ensuite reposer pendant plusieurs heures, on constate que ces composés ont alors été décom-20 posés par hydrolyse avec reformation des substances de départ et un nouveau titrage potentiométrique jusqu'à pH 9,5 fournit alors une courbe dont le tracé présente les paliers caractéristiques des zones tampon propres à la fonction basique de l'hydroxocobalamine libre et à celle de l'amino-acide libre. 25 7") La chromatographiô des solutions hydroalcooliques (mélange méthanol/eau 130/30), effectuée sur papier Kodak type 511 V, fait apparaître pour ces nouveaux composés un R^ différent de celui de l'hydroxocobalamine aussi bien que de celui propre à l'amino-acide utilisé, dont la localisation est rendue visible 30 par traitement à la ninhydrine. Aucune tache n'apparaît à l'emplacement correspondant à l'hydroxocobalamine pure et, d'autre part, après révélation par la ninhydrine, on constate que la tache correspondant à l'amino-acide ne se forme plus à l'emplacement du R^ dudit amino-acide à l'état libre, mais 35 qu'elle est au contraire pratiquement superposée à celle de la première tache, violacée, obtenue avant cette révélation. 71 38657 6 2111895 Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois présenter aucun caractère limitatif. Exemple 1 Dans 500 cur* d'eau, on dissout 10 grammes d'hydroxocobalamine 5 base, puis on introduit 600 milligrammes de glycocolle et ajuste le pH à 8,3- On abandonne à lui-même le mélange réactionnel. Au bout de cinq heures, le pH est redescendu à 7,2 et se maintient ensuite à cette valeur. Passé ce même délai, on observe au spectro-photomètre que le maximum d'absorbance correspond alors à la 10 longueur d'onde de 357 millimicrons, contre 351 millimicrons pour la solution initiale. Douze heures après le début de la réaction, on ajoute 6 volumes d'acétone, on laisse séjourner pendant vingt-quatre heures dans un réfrigérateur et l'on sépare alors par filtration 15 0,6 grammes de cristaux rouges, d'une texture homogène et qui donnent en solution aqueuse une coloration violacée. Le pH de la solution aqueuse à 5 000 gammas/cm^ est compris entre 6 et 7. L'examen de la courbe de pH montre que les fonctions basiques 20 sont masquées. Si l'on effectue l'analyse chromatographique sur papier type 511 V vendu par la Société Kodak, en utilisant comme solvant un mélange de 130 parties de méthanol pour 30 parties d'eau, on constate un différent de celui correspondant à l'hydroxocobala-25 mine base et pratiquement aucune tache n'apparaît à l'emplacement correspondant à cette dernière. Le traitement du chromatogramme à la ninhydrine fait apparaître, à l'emplacement de la tache principale, la présence d'amino-acide, ce qui confirme la combinaison du glycocolle avec 30 l'hydroxocobalamine. Pour 500 mg de produit dissous et après hydrolyse acide, il O est nécessaire, pour passer de pH 6 à pH 10, d'ajouter 5,75 cm de solution aqueuse N/lO de soude caustique. Au contraire, si l'on établit la courbe de pH du produit obtenu comme ci-dessus à 35 l'état de cristaux, on constate qu'il suffit, pour passer de pH 6 à pH 10, de 0,6 cm^ de solution ïî/lO dé soude caustique, ce qui confirme la combinaison de l'hydroxocobalamine avec l'amino-acide par la fonction aminé de' celui-ci. 71 38657 2111895 . Le dosage de l'activité biologique du produit au moyen, du bacille Coli montre que cette activité est supérieure à celle de l'hydroxocobalamine de départ. Exemple 2.- 5 On dissout 5 grammes d'hydroxocobalamine dans 500 cm^ d'eau, puis on introduit dans cette solution 400 milligrammes d'alpha-alanine et on ajuste le pH à 0,2. Après douze heures de repos, on constate que le pH est descendu à 7,4 et que la longueur d'onde correspondant au maximum d'absorbance est passée de 351 milli-10 microns à 357 millimicrons. On provoque alors la cristallisation en ajoutant de l'acétone et en laissant reposer pendant vingt-quatre heures en réfrigérateur. On recueille alors par filtration 4,0 grammes de beaux cristaux. 15 Si l'on dissout dans de l'eau ces cristaux à raison de 5 000 gaiomas/crP, on obtient une solution de pH 7,2. La courbe de pH témoigne de la disparition de la fonction basique de l'hydroxocobalamine et du groupe amino de l'amino-acide. Par chromatographie sur papier dans des conditions telles 20 que décrites dans l'exemple 1, on obtient pratiquement le même que pour le dérivé correspondant, obtenu à partir du glycocolle. Le dosage de l'activité biologique au moyen du bacille Coli révèle une activité supérieure à celle de l'hydroxocobalamine. Exemple 3.- 25 On met en solution 5 g d'hydroxocobalamine base dans un litre d'eau. On ajoute 500 rag de bêta-alanine et on obtient un pH de 8. On laisse trois jours en contact, le pH descend jusqu'à pH 7,8 et on constate au spectrophotomètre que le maximum d'absorbance se situe à la longueur d'onde de 355,5 millimicrons 30 contre 351 millimicrons pour la solution initiale. On ajoute 5 volunes d'acétone et on laisse cristalliser. On obtient 4 g de complexe qui donnent en solution à 5000 gammas/ crir* un pH de 7,2. Les zones tampon entre pH 5 et pH 9,5 ont disparu et on retrouve après hydrolyse les zones basiques correspondant à 35 l'hydroxocobalamine et au groupement NHg de la bêta-alanine. Pour 500 mg de produit dissous et après hydrolyse acide, il est nécessaire, pour passer de pH 6 à pH 10, d'ajouter 4,7 cm^ de solution aqueuse N/'IO de soude caustique. Au contraire, si l'on 71 38657 7111895, établit la courbe de pH du produit obtenu comme ci-dessus à l'état de cristaux, on constate qu'il suffit, pour passer de pH 6 à pH 10, de 0,62 cm;> de solution -T/10 de soude caustique, ce qui confirme la combinaison de l'hydroxocobalamine avec la bêta-alanine par la 5 fonction aminé de celle-ci. Le dosage de l'activité biologique du produit au moyen du bacille Coli montre que cette activité est supérieure à celle de l'hydroxocobalamine de départ. En effet pour le complexe de bêta-alanine à 17/j d'humidité, soit 77$ d'hydroxocobalamine, on trouve 10 dans deux séries de dosage 92 gammas et 96 gamma s, soit une moyenne de 94 garnmas ; par contre pour l'hydroxocobalamine base à 17^ d'humidité, soit 63',; d'hydroxocobalamine, on trouve pour 100 gammas une moyenne de 83 gammas. Exemple 4.- 15 On dissout 10 grammes d'hydroxocobalamine dans 500 cnr d'eau, on ajoute 1,5 gramme d'acide aspartique et, avec une solution aqueuse N/10 de soude caustique, on ajuste le mélange à pH 8,4» Après douze heures de repos, le pH n'est plus que de 8,0 et la longueur d'onde correspondant au maximum d'absorbance est 20 passée de 351 milliuic.rons à 357 millimicrons. Ce délai écoulé, on ajoute 6 volumes d'acétone et on laisse la cristallisation s'effectuer pendant un séjour de vingt-quatre heures en réfrigérateur, après quoi l'on filtre et recueille ainsi 9,5 g de cristaux rouges d'une texture homogène. 25 Le pH de la solution aqueuse à 5 00û gammas/cm^ est sensiblement égal à 7» L'absence de paliers dans la courbe de pH montre qu'il y a bien eu combinaison des deux réactifs. Si l'on effectue alors l'hydrolyse à pH 2,5 et si l'on trace à nouveau la courbe de pH, 30 on observe cette fois les paliers correspondants aux composés mis en oeuvre. Le dosage de l'activité biologique au moyen du bacille Coli révèle une activité supérieure à celle de l'hydroxocobalamine. Exemple 5.- 35 On dissout 2 g d'hydroxocobalamine dans 200 cm^ d'eau, on introduit 0,7 g d'acide glutamique et on ajuste à pH 8. Après douze heures, le pH est descendu à 7,2 et la longueur d'onde correspondant au maximum-d'absorbance est passée de 351 à 357 millimicrons. 71 38657 9 711 1895 1 Après cristallisation par addition d'acétone, on obtient 1,8 g de cristaux dont la solution aqueuse, à la concentration de 5 000 gammas/crn^, présente un pH de 6,8. Les courbes de pH, effectuées avant et après hydrolyse acide, 5 conduisent aux mêmes conclusions que pour les exemples précédents. Il en est de même pour l'analyse par chromatographie. Le dosage de l'activité biologique au moyen du bacille Coli révèle une activité supérieure à celle de l'hydroxocobalamine. Un autre but de l'invention est de fournir un nouveau médica-10 ment pour le traitement des états pathologiques ou affections justiciables de l'administration d'hydroxocobalamine. Suivant l'invention, ce nouveau médicament comprend à titre de substance active, l'un des dérivés d'hydroxocobalamine et d'amino-acide précités. 15 On a constaté qu'en milieu aqueux, les nouveaux composés du type précité s'hydrolysent également si ce milieu est neutre ou légèrement alcalin, mais que cette hydrolyse est beaucoup plus lente qu'en milieu acide. Le sang étant un milieu aqueux tamponné naturellement à un pH de 7,2 qui est faiblement alcalin, il en 20 résulte donc que les nouveaux composés, introduits dans l'organisme par voie parentérale, permettent d'exercer un effet thérapeutique analogue à celui de l'hydroxocobalamine, avec cet avantage supplémentaire que, l'hydroxocobalamine étant libérée très progressivement, on obtient ainsi un effet retard qui est dans 25 certains cas très avantageux et intéressant. Bien que l'invention ne soit pas limitée à cette interprétation, il est vraisemblable que la faible vitesse d'hydrolyse en milieu faiblement basique des nouveaux complexes d'hydroxocobalamine et d'acides aminés puisse s'expliquer par les valeurs des 30 pK (point isoélectrique) des acides aminés, iCn effet, pour que leur hydrolyse soit la plus lente possible il faut que le pH de leur milieu soit le plus voisin possible des pK de l'acide aminé. Cette condition est réalisée pour les amino-acides envisagés dans la présente invention : Les pK du glycocolle se situent à 35 2,34 et 9,60, ceux de l'alpha-alanine à 2,35 et 9,^7 et ceux de la bêta-alanine à 3,6 et 10,19. 71 38657 10 7111895"'. Comme on peut en juger, parmi ces valeurs de pK, celles concernant la bêta-alanine paraissent être les plus favorables et c'est effectivement ce qui résulte de l'expérience ci-après. Exemple 6.- 5 Des solutions de complexes faites séparément à partir de bêta-alanine et de glycocolle sans addition annexe d'autres produits sont effectuées à pH 7,2 et à 100 gammas/cnr*. On suit au spectrophotoraètre la libération dans le complexe lui-même des produits qui se forment et l'on peut voir qu'après quelques 10 heures pratiquement l'hydroxocobalamine se sépare du glycocolle pour redonner l'acide aminé et l'hydroxocobalamine base, tandis que pour le complexe obtenu à partir de la bêta-alanine, pour obtenir le même résultat, il faut plus de trois jours. Il en résulte donc l'intérêt supérieur du complexe obtenu à 15 partir de la bêta-alanine et de l'hydroxocobalamine base. De plus, la plus grande solubilité des dérivés de l'invention relativement à l'hydroxocobalamine est favorable à leur absorption par l'organisme et à leur passage à travers les cellules. Ces avantages ont été mis en évidence chez l'homme de la 20 façon suivante : On a administré à différents individus, par voie buccale, en une seule fois, une dose prédéterminée d'hydroxocobalamine base d'une part et de dérivés conformes à l'invention d'autre part et on a dosé ensuite l'hydroxocobalamine retrouvée dans les urines. 25 Ces dosages ont montré que l'élimination de l'hydroxocobala mine est plus rapide lorsqu'elle est administrée sous forme d'hydroxocobalamine base que lorsqu'elle est administrée sous forme de dérivés conformes à l'invention. La quantité de cobalamine pénétrant dans l'organisme est donc, dans ce dernier cas plus 30 importante et son action est plus prolongée relativement à 1'hydroxocobalamine ba se. Le tableau ci-après donne un exemple de résultat obtenu avec le complexe bêta-alanine hydroxocobalamine d'une part et avec l'hydroxocobalamine base d'autre part : 71 38657 11 211 1895 ! Rature du produit administré Hydr o:co cobalamine base Quantité d'hydroxocobalamine administrée (gammas) 25.000 Hydroxocobalamine-bê'ta-alanine Quantité de cobala-mine dosée dans les urines (gammas) 7.000 25.000 13.000 10 les nouveaux dérivés de'l'hydroxocobalamine présentent en outre est avantage que lors de leur administration, l'amino-acide e. 15 C'est ainsi que pj.rmi les effets thérapeutiques obtenus on peut citer d'une part l'action vitaminique propre à l'hydroxocobalamine et d'autre part 1'action désintoxifiante et véhiculante (élimination de la fonction nitrile (CIT), des déchets de protéines, des toxines, etc.). 20 A ces avantages il convient d'ajouter également que la toxicité des nouveaux dérivés reste particulièrement faible. Cette toxicité reste sensiblement égale à celle de l'hydroxoco-balanine. les expérimentations ayant montré la faible vitesse d'hydro-25 lyse dans le sang, des nouveaux dérivés conformes à l'invention, ce qui pomet un effet retard sur l1 organisme particulièrement intéressant, le médicament peut donc être avantageusement présenté en ampoules injectables. De même qu'il a été montré que l'administration p r voie buccale de ces dérivés grâce à une meilleure 30 pénétration . dans l'organisme qui entraine une action prolongée sur ce dernier, le médicament peut donc également être présenté en ampoules buvables, ou sous forme solide telles que comprimés. la posologie quotidienne du nouveau médicament est comprise de préférence entre 1000 et 25 000 gammas, soit 1 à 25 mg de 35 sustance active, quel que soit son mode d'administration. 71 38657 12 2111895 E3VEKDICATI0NS 1. Dérivés d'hydroxocobalamine et d'amino-acides, caractérisés en ce qu'ils correspondent à des complexes dans lesquels la fonction hydroxyle de l'hydroxocobalamine est bloquée par la 5 fonction aminé d'un amino-acide de formule générale (A) H2 N - (CHR)n - COOH dans laquelle R représente un atome d'hydrogène, lorsque n est égal à 1 ou 2 et un groupe méthyle, un groupe - CH2 COOH ou un 10 groupe -CH2 - CHg COOH lorsque n est égal à 1. 2. Dérivés conformes à la revendication 1, caractérisés en ce que les amino-acides sont choisis parmi le glycocolle, l'alpha-alanine, la bêta-alanine, l'acide aspartique et l'acide glutamique. 3. Procédé pour la préparation des dérivés d'hydroxocobalamine 15 tels que définis dans la revendication 1, caractérisé en ce qu'on fait réagir, en solution aqueuse et à température ambiante, avec neutralisation partielle, jusqu'à pH compris entre 6,2 et 3,6, un amino-acide de formule générale 20 (A) H2 N - (CIIR)n - COOH dans laquelle R représente un atome d'hydrogène, lorsque n est égal à 1 ou 2 et un groupe méthyle, un groupe - CH2 COOH ou un groupe - CH2 - CH2 COOH lorsque n est égal à 1, avec une quantité ' au plus équimoléculaire d'hydroxocobalamine, et en ce que, la 25 réaction terminée, on provoque la cristallisation par addition de plusieurs volumes d'un solvant organique miscible à l'eau et choisi parmi ceux qui ne dissolvent pas l'hydroxocobalamine. 4. Procédé conforme à la revendication 3, caractérisé en ce qu'on effectue la neutralisation au moyen d'une solution aqueuse 3° de soude caustique. 5- Procédé conforme à la revendication 3, caractérisé en ce qu'on utilise, comme solvant organique miscible à l'eau, 1'acétone. 6. Procédé conforme à l'une quelconque des revendications 35 3 à 5, caractérisé en ce qu'on provoque la cristallisation par addition d'au moins 1+ volumes d'acétone à la solution réactionnelle. 71 38657 13 2111895 7. iiédicament pour le traitement des états pathologiques ou affections justiciables de l'administration d'hydroxocobalamine, caractérisé en ce qu'il comprend à titre de substance active un dérivé conforme à l'une quelconque des revendications 1 ou 2. 5 8. Médicament conforme à la revendication 7, caractérisé en ce qu'il est dosé, pour l'usage du poids médicinal à un poids de substance active compris entre 1 et .25 mg. 9' Médicament conforme à la revendication 7, caractérisé en ce qu'il est présenté en ampoules injectables ou buvables. 10 10, Ilédxcament conforme .à la revendication 7, caractérisé en ce qu'il est présenté en comprimés.