FR 2124218 A1 19720922 FR 7138737 A 19711028 71 38737 1 2124218 La présente invention concerne un procédé perfectionné pour la préparation de certains 6,6-difluoro-3,20-dicéto-11j3,16a,17a.-trihydro:xy—4-prégnène 16,17-cétals substitués èn position 21, qui sont utiles comme agents anti-inflamma-5 toires et gluco-corticoïdes convenant pour le traitement de troubles allergiques, de maladies du collagène ou de maladies de la peau, etc.. On décrit de nouveaux progéniteurs et des dérivés choisis. I A une insaturation en pour donner un agent biologique encore plus puissant. Dans la séquence ci-dessus de réactions, le 20 rendement de l'hydroxylation en position 11 (3 est généralement très bas et les composés anti-inflammatoires de cette classe ainsi obtenus, bien que très puissants, sont coûteux. Il est connu que certains stéroïdes peuvent être hydroxylés microbiologiquement dans la position 11 par des 25 souches choisies d'organismes. L'activité corticoïdale se trouve dans la configuration 11 (3 qui est obtenue par incubation avec des micro-organismes Curvalarla. Bien que le brevet des E.U.A. N° 3.471.477 indique que cette réaction est efficace pour des 6-fluorostéroïdes, il est connu d'après le brevet des 30 E.U.A. N° 3«530.038 qu'elle dépend des substituants sur le stéroïde. On prépare industriellement le fluocinolone acétonide par hydroxylation en 11 (3 d'un progéniteur 6a-fluoro. Toutefois, les tentatives pour effectuer la même réaction sur des 6a,6(3-difluoro stéroides donnent des rendements extrê-35 mement bas. L'hydroxylation par des organismes choisis est connue aussi comme donnant un dérivé 11a-hydroxyle. Ceci a été appliqué à un 6a-monohalogéno prégnène comme indiqué dans le brevet des E.U.A. 3.033.759. Même si cette hydroxylation était applicable à des 6,6-difluoro stéroïdes, plu-40 sieurs autres transformations seraient nécessaires pour trans 71 38737 2 212^218 former le produit en composé 11 (3, qui est l'isomère nécessaire pour l'utilisation comme agent anti-inflammatoire. Selon la présente invention, des composés de la formule 5 CH- 10 20 25 50 dans laquelle X est H0- H' , E Ov ou 0= et E' est un groupe H''" 15 acyle ayant jusqu'à 4- atomes de carbone, en particulier acé-tyle, sont transformés par une séquence de réactions en d'autres composés nouveaux de la formule II R' R- 2 3 dans laquelle R et R sont chacun OH ou constituent ensemble une double liaison entre les atomes de carbone des positions C-16 et C-17, et R^ est H ou OH, avec la condition que R^ est 2 3 H quand R et R^ sont une double liaison. Ces composés à leur tour sont transformés par une séquence de réactions en d'autres composés nouveaux de la formule : CH- 35 III 40 -°X'R6 .-O^R*3 71 38737 3 2124218 r /• dans laquelle a est une simple ou double liaison; E5 et E , identiques ou différents, sont des groupes phényle, alcoyles ayant jusqu'à 5 atomes de carbone, cyeloalcoyles de 5 ou 6 atomes de carbone ou forment ensemble un groupe tétraméthylêne 5 ou pentaméthylène ; Y est {3-OH et 2 est a-Br ou a-ï, ou Y est a-sOH et Z est a-H, ou Y et Z forment ensemble un groupe f3-époxy ou une double liaison entre les positions C-9 et C-11. La réaction particulièrement nouvelle et importante concerne 1'hydroxylation microbiologique en 11a de stéroïdes 10 de la formule CH- 15 par des organismes choisis pour donner un rendement élevé en 20 dérivé 11a-hydroxyle. Ce dernier est transformé par une série de réactions, comme indiqué ci-après, pour donner le dérivé 113-hydroxyle, nécessaire pour une haute activité corticoïdale. On a maintenant découvert que le 6,6-difluoro-3,20-25 dicéto-l6a,17a-dihydroxy-4~prégnène peut être hydroxylé micro-biologiquement pour donner le dérivé 11a-hydroxyie avec de bons rendements. Le procédé complet à partir d'un prégnène facilement disponible est illustré pair le schéma de réaction suivant : 30 35 71 38737 4 2124218 10 15 oxydation * 0 F, ( F F OH, ! 5 c=o agent alcalin _ » 20 25 30 hydroxylation microbiologique 71 38737 5 2124218 ; CH5S020 CH, i o c=o 10 15 0>v/Rg -O^R ;.:gxl6 - - -0 /\E -OwR, Xi6 c-—O^SI -O^R 12 20 25 OySf; --O^R6 14 OHgBr 0=0 r-ZX-l6 30 35 0 16 1£ 71 38737 6 2124218 30 CHgOH C=0 X.T--6 (1)GH5S02C1 (2)01- ôô" 10 15 20 25 35 40 18 19 Le stéroïde de départ utilisé dans ce schéma de réaction est facilement disponible. Dans les modes opératoires i ci-dessus, le groupe R représente un radical alcanoyle inférieur, par exemple acétyle, propionyle ou butyryle, dans les positions 3 ou 21 quand c'est possible. En général, toutefois on préfère le groupe acétyle parce qu'il est facilement disponible et réactif. 5 6 et R- du groupement cétal sont habituellement des groupes méthyle comme dans l'acétonide, mais peuvent être aussi individuellement d'autres groupes tels que, par exemple éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, pentyle, hexyle, cyclopentyle ou cyclohexyle et peuvent former ensemble le radical tétraméthylêne ou pentaméthylène. Le cétal désiré est préparé à partir de la cétone appropriée et du I6a,17ot-dihydroxy stéroïde en présence d'un catalyseur acide. La première étape (a) du présent procédé, la réaction d'un 3-alcanoyl- r,5,16 -prégnadiène avec du fluorure de nitro-syle aux positions 5»6 est conduite dans un solvant inerte, par exemple un hydrocarbure halogéné, comme le chlorure de méthylène, le chloroforme, le tétrachlorure de carbone, le fluorodichlorométhane et le chlorure d'éthylène, ou des mélan ges de ces composés avec le glyme, l'acétonitrile et le sul-folane. Du tétrafluoroborate de nitrosyle peut être ajouté avec le fluorure de nitrosyle dans cette étape. Un mélange de ces deux matières est bien plus efficace que le fluorure de nitrosyle seul. On obtient de cette manière de plus hauts rendements en 5-fluoro-6-nitriminoprégnène. Le tétrafluoroborate de nitrosyle, qui est une matière solide cristalline, peut aussi être formé in situ en utilisant un mélange de fluorure de nitrosyle et de trifluorure de bore. Le rapport 71 38737 ? 2124218 : molaire du fluorure de nitrosyle au tétrafluoroborate de nitrosyle dans le mélange peut varier entre des limites assez larges, par exemple entre 50:1 et 1:50. Habituellement, le rapport optimal est de 1:1. 5 La quantité de fluorure de nitrosyle utilisée doit évi demment être au moins stoechiométrique, c'est-à-dire de 2 moles C par mole du £* -prégnène de départ. Toutefois, il est avantageux d'utiliser un excès de fluorure de nitrosyle. On a trouvé qu'un rapport molaire initial du fluorure de nitrosyle au 10 û^-prégnène d'environ 5 pour 1 est particulièrement commode, des rendements élevés en 5-fluoro-6-nitrimino-16-prégnène étant obtenus en de courts laps de temps. La réaction est conduite à des températures modérées, de préférence pas plus élevées que 100°C environ et spéciale-15 ment entre -10 et 30°C environ. Dans cet intervalle, les vitesses de réaction sont satisfaisantes et peuvent être contrôlées facilement. La pression atmosphérique est suffisante, bien que des pressions plus élevées puissent être nécessaires quelquefois pour maintenir une concentration suffisante des corps 20 en réaction aux températures de réaction. L'humidité est indésirable dans cette étape en raison du danger d'hydrolyse de NOF et/ou de NOBF^. Le produit d'addition de fluorure de nitrosyle obtenu dans la première étape, le 5-fluoro-6-nitrimino-16-prégnène, 25 peut être isolé d'une manière classique quelconque, comme par exemple évaporation du solvant et recristallisation du résidu. Dans la pratique, cette étape d'isolement et de purification n'est pas nécessaire et la solution brute peut être soumise directement à l'étape (b) suivante, c'est-à-dire la transfor-30 mation du groupe nitrimino en groupe céto. La solution peut être mise en contact avec une base faible, comme un bicarbonate de métal alcalin aqueux, pour . élimination du NOF et/ou du NOBF^ en excès et des sous-produits acides de la réaction. La solution est chromatographiée sur 35 de l'alumine neutre contenant de 5 à 15% en poids d'eau (qualité d'activité III). Le 5-fluoro-6-céto-16-prégnène formé dans cette étape est élué avec un solvant approprié ou une combinaison appropriée de solvants, comme des hydrocarbures aliphatiques ou aromatiques. Au lieu de la technique chromato-^■0 graphique, on peut utiliser n'importe quelle autre technique 71 38737 2124218 appropriée pour mettre en contact le fluoronitrimino-16-pré-gnène avec de 1'alumine humide ; par exemple, en agitant éner-• giquement une suspension d'alumine dans la solution de fluoro-nitriminoprégnène du stéroïde dans du dioxanne aqueux. 5 La réaction du 5-fluoro-6-céto-16-prégnène obtenu dans l'étape (h) avec un mélange tétrafluorure de soufre/acide fluorhydrique ou tétrachlorure de soufre/acide de Lewis est conduite dans l'étape (c) dans un solvant inerte du même type que ceux utilisés dans la première étape, c'est-à-dire le 10 chlorure de méthylène, le chloroforme, le tétrachlorure de carbone, le fluorodichlorométhane, le chlorure d'éthylène et les solvants du même genre. Le tétrafluorure de soufre peut être remplacé par du tétrafluorure de sélénium ou par un fluorure d'organosoufre, comme le trifluorure de phénylsoufre, 15 mais le tétrafluorure de soufre est le réactif le meilleur marché et le plus facilement disponible. Comme le tétrafluorure de soufre et l'acide fluorhydrique sont tous deux des gaz à la température de réaction, il est commode de conduire cette étape dans un réacteur fermé, comme un autoclave secoué. La 20 réaction est conduite de préférence à des températures modérées au-dessous de 100°C environ, et de préférence entre -10 et 30°C Habituellement, il n'est pas pratique d'abaisser la température au-dessous d'environ -10°C parce que les vitesses de réaction sont trop petites pour une opération efficace. 25 Les proportions relatives de tétrafluorure de soufre et d'acide fluorhydrique peuvent varier entre des limites assez larges; la proportion molaire d'acide fluorhydrique en mélange avec le tétrafluorure de soufre peut être aussi basse que zéro ou aussi élevée que d'environ 90%, l'intervalle de 15 à 30 20% étant préféré. Bien qu'on puisse utiliser d'autres acides de Lewis fluorés, on préfère l'acide fluorhydrique, ajouté directement ou formé in situ. On peut préparer l'acide fluorhydrique in situ en ajoutant au mélange réactionnel un composé contenant au moins un hydrogène actif, comme de l'eau ou un 35 alcool. La réaction d'un tel composé contenant de l'hydrogène actif avec le tétrafluorure de soufre libère de l'acide fluorhydrique. Le 5,6,6-trifluoro-16-prégnène peut être recueilli par des techniques classiques, comme par évaporation du solvant et recristallisation du résidu ou par chromatogra-40 phie sur colonne. 71 38737 9 2124218 On effectue facilement 1'hydrolyse du groupe ester à la position C-3 (étape "d") en mettant en contact "une solution du stéroïde dans un solvant miscible avec l'eau avec un agent alcalin aqueux, comme du carbonate de sodium ou de potassium 5 ou de l'hydroxyde de sodium. Cette étape est habituellement conduite à la température ambiante, mais l'intervalle de température de -10°C à 35°C environ peut être utilisé commodément. Les solvants appropriés comprennent des alcools inférieurs, comme les alcools méthylique, éthylique, propylique, isopropy-10 lique et t-butylique; et des éthers miscibles avec l'eau, comme le tétrahydrofuranne et le dioxanne. Des mélanges alcool méthylique/tétrahydrofuranne sont préférés en raison de leurs bonnes propriétés de solvants tant envers le stéroïde qu'envers l'agent alcalin aqueux. 15 Le groupe 3-hydroxyle est ensuite oxydé pour dohner le groupe 3-céto (étape "e") d'une manière classique connue de l'homme de l'art, par exemple avec de l'acide chromique. Le réactif préféré est une solution d'acide chromique et d'acide sulfurique dans l'eau [L. F. Fieser et M. Fieser, Beagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons, page 142 (1967)]» Le 3-hydroxystéroïde est dissous dans un solvant miscible avec l'eau, comme un éther ou une cétohe, par exemple le dioxanne, le tétrahydrofuranne, l'acétone ou la méthyléthyl-cétone. La réaction est conduite à la température ambiante ou 25 au-dessous, bien qu'une température allant jusqu'à 35°C environ puisse être utilisée. La déshydrofluoration du 5-céto-5,6,6-trifluoro-16-prégnène pour donner le ,16-3-céto-6,6-trifluoroprégnadiène est effectuée en présence d'une base, comme l'alumine, le car-30 bonate de potassium, l'oxyde d'argent, l'hydroxyde de potassium ou le carbonate de lithium (étape "f"). Bien qu'un solvant non aqueux, comme le méthanol ou l'éthanol, soit souhaitable, la réaction peut quelquefois être conduite en présence d'eau. La déshydrofluoration exige parfois un chauffage, même au 35 reflux, mais habituellement est effectuée approximativement à la température ambiante. L'oxydation de la double liaison en C-16, C-17 sans effet sur celle entre C-4- et C-5 (étape ng") est effectuée avec des agents oxydants comme du permanganate de potassium dans 4-0 \in mélange acétone/acide acétique à 0-10°C. D'autres agents 71 38737 ™ 2124218 pour cette transformation, comme le tétroxyde d'osmium, sont efficaces aussi. L'hydroxylation microbiologique qui se produit dans la position 11a est effectuée par la technique générale utilisée 5 pour l'hydroxylation en 11|3, à ceci près que le microorganisme doit être spécifique pour l'introduction de la configuration désirée. L'organisme est généralement cultivé sur un milieu de gélose incliné utile pour la propagation de l'organisme et ce dernier est ensuite introduit dans des flacons pour 10 cultures liquides et ensuite agité pendant plusieurs jours avec le stéroïde, après quoi le 11a-hydroxy stéroïde est extrait. Des organismes utiles pour 1'hydroxylation en 11a appartiennent à la famille Aspergillus comme décrit dans le brevet des E.U.A. N° 3.033.759. Un autre organisme utile est 15 Rhizopus nigrican. La particularité surprenante est que les rendements sont très élevés pour 1'hydroxylation en 11a de 6,6-difluorostéroïdes tandis que l'hydroxylation en 11(3 est ■ très faible. La transformation des dérivés 16a,17a-hydroxyle en 20 acétals, par exemple en acétonide, avec les cétones mentionnées ci-dessus s'effectue avec un catalyseur acide (étape "i"). Ceci laisse le 11a-hydroxyle comme seul hydroxyle pouvant être estérifié et enlevé (utilisation d'un halogénure de sul-fonyle comme le chlorure de p-toluènesulfonyle ou le chlorure 25 de méthanesuifonyle généralement à 0-25°C, suivie du traitement par un alcanoate de métal alcalin à 50-100°C, "j" et "k") pour donner 1'insaturation en 9-11. L'addition du stéroïde précédent avec un acide hypo-halogéneux (qui peut être préparé in situ et mis à réagir à 30 20-35°C) donne le 113-hydroxy-9a-halogéno stéroïde. On préfère l'acide hypobromeux comme indiqué dans (1). Le traitement de ce dernier avec une base, de préférence un alcanoate de métal alcalin à 50-100°C a pour résultat que les positions 9,11 donnent le dérivé époxy correspondant (appelé aussi 35 oxydo ou oxy) comme représenté dans l'équation "m". Ce dernier époxy stéroïde réagit avec HF ajouté commodément sous la forme d'un complexe de HF avec une base comme l'urée approximativement à la température ambiante (étape "n"). Le stéroïde ainsi formé a la configuration désirée pour une 40 activité améliorée de corticostéroïde, à savoir un groupe 71 38737 ,, 2124218 hydroxy le en 11(3 et un atome de fluor en 9a. D'autres transformations pour l'obtention d'un stéroïde anti-inflammatoire encore plus actif peuvent être effectuées par transformation d'un 21-hydrogène en groupe hydroxy ou en 5 halogène, spécialement en chlore, et aussi par déshydrogéna- 1 4- tion à la position 1,2 pour donner le & * -stéroïde* Un schéma est représenté dans les équations o, p, q, r et s. La A non-saturation en & peut éventuellement être introduite par une déshydrogénation microbiologique avec Arthrobacter simplex 10 ou par des moyens chimiques comme la dichlorodicyanoquinone ' ou des agents de déshydrogénation équivalents. La non-saturation en & peut être introduite à un stade quelconque par ces derniers procédés après l'étape "n", c'est-à-dire après la formation du dérivé |3-hydroxyle. 15 Des prégnènes choisis avec un 11 (3-hydroxyle sont utiles dans le traitement de troubles allergiques, de maladies du collagène, de la peau et de troubles musculo-osseux. Ils peuvent être administrés par voie orale, parentérale ou topique à des doses comprises entre 0,0001 et 1 mg par kg 20 de poids du corps et par jour. De nouveaux produits intermédiaires dans la préparation des corticostéroïdes très actifs (obtenus en utilisant toutes ou les principales réactions successives) sont représentés par les formules données précédemment. Les produits 25 intermédiaires peuvent aussi être utilisés comme agents progestatifs ou comme anti-androgènes. Les exemples non limitatifs suivants montreront bien comment l'invention peut être mise en oeuvre. Sauf spécification contraire, toutes les parties sont en poids. 30 La description détaillée suivante montre le mode opé ratoire utilisé en partant d'un prégnadiène facilement disponible. L'hydroxylation en 11a est illustrée dans la partie "F". Bien que plusieurs des composés obtenus soient actifs, le mode opératoire montre la préparation finale de l'anti-35 inflammatoire topique très actif 21-chloro-6,6,9a-trifluoro-11p,l5a,17a-trihydroxy-1,4—prégnadiène-3?20-dione 16,17-acétonide. 71 38737 ,2 2124218 KîtF.lgU5 -I : A. Acétate de 5 AcC/ 1.N0F ou NOBÏV/NOE 2.A120j(III) AcO ; } 10 . 1 r » 2 De l'acétate de 3P-hydroxy-5,16-prégnadièn-20-one (1) (75 g, 0,211 mole) dans 600 cm^ de chlorure de méthylène, refroidi à 0°G, est traité avec 25 g (0,51 mole) de fluorure de nitrosyle. Le mélange réactionnel est agité à 0°G pendant 15 3 heures, ensuite soigneusement lavé avec du "bicarbonate de sodium aqueux, de l'eau et de la saumure. Les couches organiques sont séchées à l'aide de sulfate de magnésium anhydre et le solvant est évaporé pour donner une huile verte visqueuse. Cette huile dans du "benzène est appliquée à une colonne de 20 3 kg d'alumine III tassée dans de l'hexane et le produit est élué au moyen de "benzène pour donner 45 g (55%) â.e matière. La cristallisation à partir de méthanol donne 38,1 g (46,5%) d'acétate de 5 25 Dans un autre mode opératoire, qui est préféré, le même stéroïde (1_) initial (125 g> 0,35 mole) dans 500 cm^ de chlorure de méthylène est ajouté à un mélange de 40 g (0,342 mole) de tétrafluoroborate de nitrosyle dans 500 cm^ de glyme refroidi à 0°C. En même temps, on fait "barboter du fluorure 30 de nitrosyle (40 g, 0,815 mole) dans ce mélange pendant 1 heure. Le mélange réactionnel est agité pendant 4 heures à 0°C et ensuite versé dans de la saumure froide. La couche organique est séparée, lavée deux fois encore à la saumure, puis évaporée par un courant d'azote pour donner une huile verte visqueuse 35 (volume de 300 cm^ environ). On forme une bouillie de cette huile avec 3 kg d'alumine III dans 1 litre d'hexane. Après agitation pendant 4 heures, le produit est élué à partir de l'alumine avec du benzène (8 litres) pour donner 99 g de matière brute. La recristallisation à partir de méthanol donne 40 82,3 g de produit. La chromatographie des liqueurs-mères sur 71 38737 2124218 du Florisil (marque déposée) donne une quantité supplémentaire de 8,0 g, soit un total de 90,3 g (66%) de stéroïde (2). Un échantillon pur pour analyse est cristallisé à partir d'acétone-hexane, point de fusion 196-197,5°C. 5 Analyse. Calculé pour : 0, 70,74; H, 7,99; F, 4,86 Trouvé : C, 70,41, 70,70; H, 7,58, 8,05; P, 4,81, 4,85 Ultraviolet (éthanol) : 303 m/KK 0,29, £190) 237 m,w(K 22,8, £8.580) 10 Infrarouge (KBr) : 3,25/'(=CH); 5»79/^(acétate et Cg=0); 6,0/v(C20=0); 6,31/^(C16=C17) B. Acétate de 5o^6,6-trifluoro-3(3-hydroxy-l6-prégnène-20-one (3) \=0 15 HF, AcO y il AcO 20 0 2 3 Le stéroïde 2 (25 g, 0,0642 mole) obtenu en "A" ci- 7. ~ 3 dessus dans 150 cm de chlorure de méthylène et 6,3 cnr d'eau (0,35 mole) est mis à réagir avec 115 g (1,065 mole) de tétra-25 fluorure de soufre à 10°C pendant 18 heures dans une bombe en Hastelloy hermétiquement fermée. Le mélange de réaction est ensuite versé dans de l'eau et la couche organique séparée est lavée avec une solution aqueuse de bicarbonate, de sodium, à l'eau et à la saumure. Il est séché (sulfate de magnésium) et on éva-30 pore le solvant. Le résidu est chromatographié sur 400 g de Florisil et élué avec un mélange hexane-3 à 5% d'acétone pour donner, après recristallisation à partir d'acétone-hexane, 24,0 g de produits (91%). Un échantillon pur pour analyse recristallisé deux fois à partir d1acétone-hexane donne un point 35 de fusion^177-178°C pour l'acétate de 5a.,6,6-trifluoro-3(3-hydroxy-16-prégnèn-20-one (3). Analyse. Calculé pour Cg^H^O^F^: C, 66,96; H, 7*58; F, 13,82. Trouvé : C, 66,76; H, 7,65; F, 13,77 Ultraviolet (éthanol) : 322 m/1* (£ 0,129, £-53) 40 237 m/4- (K 23,6, €9-720) 71 38737 14 2124218 Infrarouge (KBr) : 5,77/t'(acétate 0=0); 6,0/"(C20=0) ; 6,30y"' (0,6-017) C. 5a,6,6-trifluoro-3(3-hydroxy-16-prégnèn-20-one (4-) De l'hydroxyde de potassium (8,2 g, 0,147 mole) dans 3 > 3 20 cnr d'eau est ajoute à 800 cnr de tétrahydrofuranne et 250 cm^ de méthanol. La solution est refroidie à 0°C et purgée à l'azote. On ajoute du stéroïde ^ (57 g, 0,139 mole) dans 350 cm^ de tétrahydrofuranne. La solution est agitée entre 0 et 5°C pendant 1 heure, puis versée dans 5 litres d'eau et agitée énergiquement. La matière solide résultante est séparée 20 par filtration et séchée sous vide pour donner 50,2 g (98,5%) de matière. Un petit échantillon est chromatographié sur du Florisil (élué avec un mélange 15% acétone-hexane) pour donner, après recristallisation à partir d'acétone-hexane, un échantillon pur pour analyse, point de fusion 182-183°C, de 5a,6,6-25 trifluoro-3(3-hydroxy-16-prégnèn-20-one (4). Analyse. Calculé pour C21H29I'302 5 C' ^8,07; 7,89; F,15,38; Trouvé : 0,68,32, 68,46; H, 7,74, 7,82; F, 15,45, 15,40; Ultraviolet (éthanol) : 322 m(K 0,147 , 6 54); 237 m/*(K 25,9,£ 30 ' 9.580 Infrarouge (KBr) : 2,99^ (OH); 6,00 et 6,01./> (C20=0)-,6,31/+ ^C*16s017^ D. 6,6-difluoro-4,16-préKnadièn-3,20-dione (6) 71 38737 2124218 Du stéroïde 4 (18,7 g, 0,0505 mole) dans 300 cm^ d'acétone à 0°C est traité avec du réactif de Jones jusqu'à obtention d'une couleur rouge persistante. On suit aussi la réaction jusqu'à ce qu'elle soit complète en observant la disparition de la 5 matière de départ par chromatographie sur couche mince (5% acétate d'éthyle-chloroforme; plaques de gel de silice). On ajoute du méthanol pour détruire le réactif en excès. On filtre ensuite le mélange et le filtrat est concentré et ensuite dilué avec de l'eau. L'extraction au chlorure de méthylène donne un résidu semi-10 solide (5c*.,6,6-trifluoro-16-prégnèn-3,20-dione, produit de l'équation (e) dans le schéma de réaction mentionné précédemment) qui est chromatographié directement sur de l'alumine III (500 g) et élué avec du benzène pour donner 14,0 g (79,5%)» Un échantillon pur pour analyse de la 6,6-difluoro—4,16-prégnadièn-3,20-15 dione (6) est cristallisé deux fois à partir d'acétone-hexane, point de fusion 118,5-119,0°C. Analyse. Calculé pour ^2^2^^ 2 ' C> 72,39; H, 7,52; 3?, 10,91 Trouvé ; 0, 72,46; H, 7,64; F, 11,13. Ultraviolet (éthanol) 325 m/>(K 0,23, £80) 20 234 m/~(K 62,3, £21.700) Infrarouge (KBr): 3,25/*- (=CH) : 5,90/* (0^=0) ; 6,02/M.(C20=0) ; 6,29y*(c15=c17). E. 6,6-difluoro-16a, 17a—dihydroxy-4-prégnèn-3,20-dione (7) 25 30 6 Du stéroïde 6 (9,10 g, 0,026 mole) dans 253 cm^ d'acé- ■x ~ tone et 3,1 cur d'acide acétique glacial est refroidi à 3°C dans un bain de glace. Une solution de 4,10 g de permanganate de je; potassium dans 195 cm^ d'acétone aqueuse à 85% (refroidie à 3°C) est ajoutée en une seule portion. Après 4 minutes, le mélange de réaction est traité avec 42 cm^ de solution aqueuse saturée de sulfite de sodium. Il est ensuite filtré à travers 71 38737 2124218 lavé à l'eau, à la saumure et séché avec du sulfate de magnésium. Le solvant est évaporé et le résidu est trituré avec de l1acétone pour donner 6 g de matière. La recristallisation à partir d'acétone-hexane donne 4,0 g (40,5%) de 6,6-difluoro-16a,17a-5 dihydroxy-4-prégnèn-3,20-dione (2), point de fusion 202-207°C. Un échantillon pur pour analyse est recristallisé trois fois à partir d'acétone-hexane, point de fusion 213-217°C (tube scellé). Analyse. Calculé pour Cg^ïï^gO^IFg : C, 66,95; H, 7,38; F, 9,94 10 Trouvé : C, 66,17, 66,59, 65,97; H, 7,43, 7,47, 7,45; F, 9,53. Ultraviolet (éthanol) : 303 m/^K 0,187, f_ 71) 227 m32,8, k 12.500) Infrarouge (KBr) î 2,94/ F. 6,6-difluoro-11a, 16a, 17a-trihydroxy-4-prégnèn-3 25 Dans 6 flacons de 250 cmr contenant chacun 0,5 g de farine de soja, 2,0 g de dextrose, 0,5 g d'extrait de levures, 0,5 g de chlorure de sodium, 0,5 g de phosphate de potassium (dibasique) et de l'eau distillée (100 cm^) avec le pH du mélange réglé à 6,5 au moyen d'acide chlorhydrique concentré, on inocule 30 Aspergillus ochraceus AICC 18500. On place ces flacons sur un secoueur rotatif et on les agite énergiquement pendant 48 heures à 29°C. Au bout de ce temps, on transfère les contenus dans six flacons de 2 litres (contenant chacun 400 cm^ du bouillon décrit ci-dessus) et on poursuit la culture à 29°C avec agitation pen-35 dant 24 heures. Du stéroïde 2 (1*0 g, 2,62mmoles) dans 6 cm^ de diméthylformamide est distribué également entre les six flacons et on continue l'agitation pendant 96 heures. Les contenus des flacons sont ensuite combinés et filtrés d'abord à travers un filtre en verre fritté grossier et ensuite à travers de la 40 Celite. Le filtrat est ensuite traité par extraction à l'acétate 71 38737 17 2124218 ; d'éthyle (total de 6 litres environ). L'extrait organique est lavé à l'eau, à la saumure, séché (sulfate de magnésium) et évaporé sous azote. Le résidu résultant est trituré avec de l'acétate d.'éthyle pour donner 630 mg de poudre brune. Les liqueurs-mères 5 résultant de cette trituration sont chromatographiées sur du gel de silice (élution avec de l'acétate d'éthyle) pour donner une quantité supplémentaire de 133 mg de matière. Un échantillon pur pour analyse de la 6,6-difluoro-11a,16a,17a—trihydroxy-4— prégnèn-3,20-dione (8) est cristallisé deux fois à partir d'acétone-10 hexane, point de fusion 203-208°C. Infrarouge (KBr) : 2,89 et 3,02/a(0H); 3,25/K^H) ; épaulement à 5» 87/*" , 5»92/*et épaulement à 6,0/^-en relation avec Cgo^O» 0^=0 et C^=C^. G, 6,6-difluoro-11a, 16a, 17a-trihydroxy—4-prép;nèn-3^20 dione 15 . 16,17-acétonide (9) 20 XGH3 ^CH? 0^ 0 2 8 9 Du stéroïde 8 (630 mg, 1,58 mmole) dans 50 cm d'acé-25 tone est traité avec 1 goutte d'acide chlorhydrique à 37%« On suit le cours de la réaction par chromatographie sur couche mince (75% acétate d'éthyle : benzène; plaques de gel de silice) et elle se révèle complète après 20 heures. Le mélange de réaction est concentré sous vide à 5 cm^ environ. Le précipité ré-30 sultant est séparé par filtration pour donner 463 mg (un seul constituant par chromatographie sur couche mince en utilisant dés plaques de gel de silice avec un mélange 75% acétate d'éthy-le:benzène). La chromatographie de préparation sur couche mince donne 50 mg supplémentaires de produit, soit un total de 513 mg 35 (74%) de 6,6-difluoro-11a,16a,17a-trihydroxy-4-prégnèn-3,20-dione 16,17-acétonide (9). Un échantillon pur pour analyse est recristallisé deux fois à partir d'acétone-hexane, point de fusion 300-302°C. Analyse. Calculé pour : 65,74; H, 7»36; F,8,67 40 Trouvé : C, 65,93; H, 7,48; F,10,26 71 38737 18 2124218 Ultraviolet (éthanol) : 300 m/>" (K 0,28, L 123) 227 m/y" (K 24,9, e 10.900) Infrarouge (KBr) : 2,88 ^(OH); 5,85/^(0^=0); 5,90 A (0^=0). H. 6,6-difluoro-11a,16a.17a-trihydroxy-4-prégnèn-3 1 . °_ 0. . CH. ---O^CH? 10 MsO 0 F, 10 Une solution de stéroïde 9 (330 mg, 0,75 mmole) 3 3 15 dans 2,5 cnr de pyridine est traitée avec 0,57 cnr de chlorure de méthane-suifonyle et le mélange est abandonné à lui-même à 5°C pendant 24 heures. La solution foncée est diluée avec 3 3 20 cnr de chlorure de méthylène, lavee avec 20 cnr d'acide X chlorhydrique aqueux à 5% et avec 20 cnr d'eau. Elle est séchée 20 sur du sulfate de magnésium et le solvant est évaporé pour donner 490 mg d'une huile jaune du mésylate correspondant (10). Infrarouge (pur) : 5,85, 5,90/*-(C2q=0 et C^=0); 6,10 et 6,15/^ (ArC=C); 7,3 et 8,5/K-S02-0-) . I. 6,6-difluoro-16a, 17o-dihydroxy-4,9(11)-prégnadiène-3 % 20-25 dione 16,17-acétonide (11) 30 =0 --- °VCH3 0XCK1 0 . =0 .... 0 CH, --- O^CH? — 11 Le stéroïde mésylate JHD (490 mg) obtenu ci-dessus ^ et 490 mg d'acétate de sodium anhydre sont mélangés avec 6 cm^ d'acide acétique glacial et le mélange est chauffé au reflux pendant 2 heures. Il est ensuite dilué avec de l'eau et le précipité résultant est séparé par filtration et séché à l'air pour donner 236 mg (75% par rapport à 9) de 6,6-difluoro-16a, 40 17a-dihydroxy-4,9(11)-prégnadi ène-3,20-dione 16,17-acétonide 71 38737 ^ 2124218 (11). Un échantillon pur pour analyse est recristallisé à partir de chlorure de méthylène-éther de pétrole, point de fusion 225-227°C. Analyse. Calculé pour : C, 68,55; H, 7,19; F» 9*04 5 Trouvé : C, 68,14; H, 7*28 Ultraviolet (éthanol) : épaulement 300 m/>--(K32, '■ 134).; 226 m (K 34,4, ^ 14.400) . 6,6-dif luoro-9a-bromo-11B,16a.17a-trihydroxy-4-prég;nèn-5 - 20- dione 16,17-acétonide (12) 10 X =0 °y --. O CH^ 15 12 Du steroxde 11 (170 mg, 0,405 mmole) dans 5 cnr de —' 7. dioxanne est traité avec 0,26 cet d'acide perchlorique 0,5N et 20 81 mg de N-bromo-acétamide recristallisé. Le mélange réactionnel est agité à 25°C dans l'obscurité pendant 4 heures. Une solution aqueuse de 120 mg de bisulfite de sodium dans 3 cm d'eau est ajoutée goutte à goutte pour faire disparaître la couleur jaune. Le mélange de réaction est ensuite dilué avec de l'eau 25 glacée (20 crn^) et traité par extraction au chlorure de méthylène. Les extraits organiques sont lavés trois fois avec un volume égal d'eau, puis à la saumure et finalement séchés (sulfate de magnésium) et le solvant est évaporé pour donner 251 mg d'une huile jaune de 6,6-difluoro-9a.-bromo-1ip-16a,17cx-trihydroxy-30 4-prégnèn-3,20-dione 16,17-acétonide (12). Infrarouge (pur) : 2,90^(0H); 5,88/*-(C20=0) ; 5,95/A(C3=0). K. 6,6-difluoro-16a, 17cx-dihydroxy-9P,11B-époxy-4-prégnèn-3,20- 35 dione 16,17-acétonide (13) • 0 CH? 3 40 ~ °x-CH3 —0 CH$ 3 71 38737 20 2124218 . La bromohydrine stéroïdale 12 (251 mg) obtenue ci-dessus est reprise dans 10 cm^ d'acétone, traitée avec 310 mg d'acétate de potassium anhydre et chauffée au reflux pendant 2 heures. L'acétone est évaporée sous vide et le résidu est dilué 5 avec de l'eau glacée. Le précipité résultant est séparé par filtration et séché pour donner 159 mg de produit. La recristallisation à partir d'acétone-hexane donne 14-5 mg d'un produit ayant un point de fusion de 201,5-203,0°C et qui est du 6,6-difluoro-16a,17a-dihydroxy-9P , 11p-époxy-4-prégnèn-3,20-dione 16,17-10 acétonide (1J5). Infrarouge (KBr) : 5» 84/* (C20=0) ; 5,92/'-(c5=0). Ultraviolet (EtOH) : 300 m/4- (K 0,28, £ 123) 227 m/*- (K 25,8, f 11.400) Bésonance ©agnétique nucléaire (ŒDCl^) : 46 cps (H-18); 70 et 15 88 cps (CHj d'acétonide); 92 cps (H-19); 214 cps (H-11); 301 et 306 cps (H-16); 279 et 283 cps (H-4). L. 6,6,9a-trifluoro-11B *16a,17a-trihydroxy-4-prégnèn-3,20-dione 16,17-acétonide (14). 20 25 F. 13 ^T-.OyCH, 3 L'époxy-stéroxde 13 ci-dessus (111 mg, 0,257 mmole) est mélangé avec 4 cm^ de complexe urée-acide fluorhydrique et le mélange réactionnel est agité à 25°C pendant 5 heures. On verse ensuite le mélange de réaction dans un mélange de 10 cm^ 30 d'hydroxyde d1ammonium concentré et de 50 g de glace. Le précipité résultant est séparé par filtration, bien lavé à l'eau et çéché pour donner 60 mg. Cette matière est ensuite chromatogra-phiée sur 2 g de Florisil et éluée avec des fractions d1acétone-hexane pour donner 45 mg de 6,6,9a-trifluoro-11p,16a,17a-35 trihydroxy-4-prégnèn-3,20-dione 16,17-acétonide après recristallisation à partir d'acétone-hexane, point de fusion 234-235°0. Analyse. Calculée pour C24H31°5P3 : °' H, 6,84 Trouvé : C, 63,14; H, 6,93. 71 38737 2124218 M. 6,6,9a-trifluoro-11B, 16a, 17cx,21-tétrahydroxy-1 ,4-prégnadièn-3,20-dione 16,17-acétonide 21-acétate (17) . - O s^CH-, —C -CH VGH, — O CHj 3 10 15 OAc C ' 0-^H >— O CH? Du 6,6,9a-trifluoro-11P, 16a, 17oc-trihydroxy-4-prégnèn-20 3,20-dione 16,17-acétonide (100 mg) dans 10 crn^ de tétrahydrofuranne à 50°C est traité avec 165 mg de perbromure de "bromure de pyridinium. On agite le mélange entre 50 et 60°G pendant 1 heure, après quoi on ajoute une quantité supplémentaire de 90 mg de perbromure de bromure de pyridinium. On continue l'agitation 25 entre 50 et 60°C pendant 4 heures. On verse le mélange de réaction dans de l'eau glacée et le précipité est séparé par filtration. La matière solide est cristallisée à partir d'acétone-hexane après traitement au charbon décolorant pour donner 66 mg de 2,21 -dibromo-6,6, 9 Cette matière brute (50 mg), 25 mg d'acétate de potassium et 40 5 cm^ de diméthylformamide sont chauffés à 90°C. Quand la réac 71 38737 22 2124218 tion est complète, comme déterminé par chromatographie sur couche mince, le mélange de réaction est versé dans de l'eau et traité par extraction au chlorure de méthylène. Les extraits organiques sont lavés à l'eau, à la saumure, séchés (MgSO^) et 5 concentrés. Le résidu est chromatographié sur 3 g de Florisil et élué avec des mélanges acétone-hexane pour donner du 6,6,9a-trifluoro-11p,16a,17a,21-tétrahydroxy-l,4--prégnadièn-3,20-dione 16,17-acétonide 21-acétate, point de fusion 284—286°G (17)» N. 21-chloro-6,6,9a-trifluoro-11B,16a,17a-trihydroxy-1,4— 10 prégnadièn-3 0 II 15 20 30 GHo0C-CH, c=o "'OAch^ CHo01 » e- c=o HO ryv-;-X' 25 19 A2 Un échantillon de 21-acétate (12) est hydrolysé avec du carbonate de potassium et de l'eau dans une solution tétra-hydrofuranne-méthanol. Le 6,6,9a-trifluoro-11p,16a,17a,21-tétrahydroxy-l ,4— prégnadièn-3,20-dione 16,17-acétonide (100 mg) (18) dans 3 cm^ de pyridine à 0°G est traité avec 34- de chlorure de méthanesuifonyle. On laisse réchauffer la solution à 25°C et on l'agite pendant 24- heures. On la verse ensuite 35 dans de l'eau et le précipité résultant est séparé par filtration. Cette matière solide est reprise dans 15 cm^ de chlorure de méthylène, séchée (sulfate de magnésium anhydre), et la solution est ensuite ajoutée lentement à un mélange chauffé au reflux de 70 mg de chlorure de lithium dans 6 cm^ de diméthyl-4-0 formamide. Le mélange de réaction est chauffé au reflux pendant 71 38737 2124216 1 heure après la fin de l'addition et ensuite il est abandonné à lui-même à 25 °C pendant 24 heures. On le verse dans de l'eau glacée et le précipité est séparé par filtration. La cristallisation à partir d1acétone-hexane donne 60 mg, point de fusion 5 285-287°C, de 21-chloro-6,6,9oc-trifluoro-11(3,16oc,17oo-trihydroxy-1,4-prégnadièn-3,20-dione 16,17-acétonide (19). Ultraviolet : A 234 m/> (£, 16.100) 297 m/* (E 0,49) 10 Spectre de masse : Calculé pour 02^28^5^3^ : 488,1576 Mesuré : 488,1582 Les procédés décrits ci-dessus donnent des stéroïdes biologiquement actifs. Les composés 5 à 11 présentent des propriétés progestatives et anti-androgènes et les composés 12 à 15 15 présentent des effets anti-inflammatoires. Ces composés sont aussi des produits intermédiaires dans la préparation des composés 16 à 19 qui sont des agents glucocorticoïdes et antiinflammatoires très puissants. L'excellente activité antiinflammatoire topique et orale est montrée comme suit î 20 Bxpérimentation anti-inflammatoire topique (essai sur des oreilles de rats) Des rats mâles entiers âgés de 21 jours (60 à 70 g) sont anesthésiés et le composé essayé dans un véhicule comprenant 20% de pyridine, 5% d'eau distillée, 74% d'oxyde d'éthyle 25 èt 1% d'huile de croton en volume est appliqué sur l'oreille 3 3 gauche, 0,05 cnr à 1'intérieur de l'oreille et 0,05 cnr à l'extérieur. Un groupe de 9 rats reçoit le véhicule seulement, 3 groupes (6 ou 7 rats par groupe) reçoivent des doses croissantes 3X du composé dans le véhicule et 3 groupes (6 ou 7 30 rats par groupe) reçoivent des doses croissantes 3X de fluoci-nolone acétonide, l'étalon de comparaison, dans le véhicule. Six heures plus tard, les rats sont sacrifiés et des morceaux d'oreilles de grosseur uniforme sont prélevés au moyen d'un perce-bouchon 11° 4. Les morceaux d'oreilles sont pesés et on 35 calcule les poids moyens pour les groupes témoins et pour ceux traités avec la substance essayée. On établit des diagrammes du pourcentage de réduction par rapport aux témoins en fonction du logarithme de la dose et les doses du composé essayé et de l'étalon de comparaison (en mg par kg de poids du corps) 40 qui provoquent une réduction de 30% du poids des morceaux 71 38737 3it 2124218 d'oreilles par rapport aux témoins sont déterminées d'après des lignes dose-réponse établies visuellement. Les valeurs DEJO% sont comparées pour donner des rapports de puissance des composés par comparaison avec le fluocinolone acétonide. 5 Le composé 19 présente sensiblement la même activité que le fluocinolone acétonide aux doses utilisées (0,1, 0,3, 0,9 et 2,7 j*g). Le composé 17 est environ 0,4 fois aussi puissant . Ces composés sont 150 et 20 fois environ aussi efficaces respectivement que 11 hydrocortisone. 10 Les composés préparés par le procédé de la présente invention sont administrés dans les formes pharmaceutiquement acceptables usuelles. Par exemple, ils peuvent être administrés oralement à l'état de matières solides sous la forme de pilules, de comprimés, de poudres (libres ou encapsulées), etc; ou à 15 l'état de matières liquides sous la forme de solutions, de Suspensions, de sirops, etc; ces composés sont habituellement administrés par voie parentérale à l'état de liquides dans des suspensions ou solutions. Les doses pour administration orale ou parentérale sont comprises entre 0,001 mg et 1 mg 20 environ par kg de poids du corps et par jour. Topiquement, ces composés sont administrés sous la forme de poudres, de crèmes, de pommades, de solutions, de suspensions, d'aérosols, de mousses, etc, contenant de 0,001% à 1% environ du stéroïde, le reste étant un véhicule inerte pharmaceutiquement acceptable 25 ou des combinaisons de véhicules inertes. 71 38737 25 2124218 KEYEWDIGATIGm 1. Les stéroïdes ayant la formule CH- F ïp 1 1 10 dans laquelle X est HO-^, R O^.ou 0= et R est un groupe H''' H-'' acyle ayant jusqu'à 4 atomes de carbone. 2. Un stéroïde selon la revendication 1, dans lequel ^ X est CH^C-Or , qui est l'acétate de 5 hydroxy-16-prégnèn-20-one. 3. Un stéroïde selon la revendication 1, dans lequel X est H0\ , qui est la 5a,6,6-trifluoro-3P-hydroxy-16-prégnèn- 20 H-' 20-one. dione. 25 4. Un stéroïde selon la revendication 1, dans lequel X est 0=, qui est la 5a»6,6-trifluoro-16-prégnèn-3,20- 5. Les stéroïdes ayant la formule - H, - R- 30 0 F- 2 3 dans laquelle R et R^ sont chacun OH ou forment ensemble une double liaison entre les atomes de carbone des positions C-16 35 4 4 et C-17» et R est H ou OH, avec la condition que R est H 2 3 quand R et R^ sont une double liaison. 6. Un stéroïde selon la revendication 5» dans 2 3 lequel R et R^ ensemble sont une double liaison entre les 40 atomes de carbone des positions C-16 et C-17 et R est H, 71 38737 se 2124218 qui est la 6,6-dif luoro-4-,16-prégnadiène-3,20-di one. 7. Un stéroïde selon la revendication 5j dans lequel 2-5 4- R et R sont chacun OH et R est H, qui est la 6,6-difluoro- 16a,17a-dihydroxy-4—pré gnèn-3,20-dione. 5 8. Un stéroïde selon la revendication dans lequel 2 3 4- E , et R sont chacun OH, qui est la 6,6-dif luoro-11a, 16a, 17a-t rihydroxy-4-- p ré gnèn-3,20-di one. 9. Les stéroïdes ayant la formule 10 1Ç> ■ R^ et R^, identiques ou différents, sont des groupes phényle, alcoyles ayant jusqu'à 5 atomes de carbone, cyclo-2q alcoyles de 5 ou 6 atomes de carbone ou forment ensemble un groupe tétraméthylêne ou pentaméthylène; Y est (3-0H et Z est a-Br ou a-F ou Y est a-OH et Z est a-H ou Y et Z ensemble forment un groupe p-époxy ou une double 2^ liaison entre les positions C-9 et C-11. 10. Un stéroïde selon la revendication 9, dans lequel C. f. a est une simple liaison, Z est a-H, Y est a-OH et R^ et R sont chacun CH^, qui est le 6,6-difluoro-11a,16a,17a-trihydroxy-4—prégnèn-3,20-dione 16,17-acétonide. 11. Un stéroïde selon la revendication 9, dans lequel 30 a est une simple liaison, Y et Z ensemble sont une double liaison entre les positions C-9 et C-11 et R^ et R^ sont chacun CH^, qui est le 6,6-difluoro-16a,17a-dihydroxy-4-,9(11)-prégnadiène-3,20-dione 16,17-acétonide. je 12. Un stéroïde selon la revendication 9} dans lequel a est une simple liaison, Y est P-OH, Z est a-Br et B? et R sont chacun CH^, qui est le 6,6-difluoro-9a-bromo-11(3,16a, 17a-trihydroxy-4—prégnèn-3,20-dione 16,17-acétonide. 13» Un stéroïde selon la revendication 9, dans lequel 4q a est une simple liaison, Y et Z ensemble sont un groupe p- 71 38737 2124218 C C. époxy entre les positions C-9 et C-11 et ïr et E sont chacun CH^, qui est le 6,6-difluoro-16a,17a-dihydroxy-9P j 11P-époxy-4-prégnèn-3»20-dione 16,17-acétonide. 14-. Un stéroïde selon la revendication 9» dans lequel 5 6 5 a est une simple liaison, Y est P-OH, Z est a-î1, et E sont chacun CH^, qui est le 6,6,9ct-f luor o-11p,16a,17a- trihydroxy-4-prégnèn-3,20-dione 16,17-acétonide. 15- Un procédé pour la préparation d'un a-hydroxy-stéroïde, caractérisé en ce que le composé de la formule 10 CH, i o C=0 est traité avec une enzyme provenant de champignons du genre Aspergillus ou de l'espèce Bhizopus nigrican. 16. Une composition pharmaceutique à usage topique, 20 caractérisée en ce qu'elle comprend de 0,001% à 1% d'un stéroïde selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, le complément étant un véhicule inerte pharmaceutiquement acceptable ou une combinaison de véhicules inertes. 17» Une composition pharmaceutique à usage oral ou 25 parentéral, caractérisée en ce qu'elle contient un stéroïde selon l'une quelconque des revendications 1 à 14 dans un véhicule inerte non toxique pharmaceutiquement acceptable ou une combinaison de véhicules.