FR 2117884 A1 19720728 FR 7142732 A 19711129 71 42732 2117884 La présente invention concerne un procédé pour l'extratioi} de substances thérapeutiques•à partir de tissus de rate par formation d'une suspension acqueuse de tissus de rate broyés et par dialyse. Elle s'étend à un dispositif tel que moulin pour l'exécution de ce procédé. Il est connu de former, à partir de tissus de rate broyés et d'eau, une bouille et de former à partir de cette bouillie, au moyen de différentes opérations de précipitation et d'extraction, une solution acqueuse exemplte d'albumine à partir de laquelle sont ensuite isolées par dialyse des substances thérapeutiques. Il est connu aussi de former à partir d'embryons broyés une bouillie organique, à partir de laquelle on expulse sous pression en faisant usage de tissus pour compression un jus organique à partir duquel on obtient ensuite par dialyse une solution contenant les substances thérapeutiques. L'invention a pour but d'aménager un procédé du genre mentionné au début d'une matière telle qu'il soit, sur une grande échelle, économique. Le procédé de l'invention est caractérisé en ce que la matière à mettre en suspension est broyée finement de manière à former une suspension à dispersion colloïdale à partir de laquelle les substances sont ensuite extraites par dialyse. Les opérations ou procédé suivant l'invention à savoir broyage et préparation de la matière de tissus à mettre en suspension, mise en suspension de cette matière par broyage fin et exécution de la dyalise de la suspension peuvent être exécutées toutes sans nécessiter de dépense particulière et cela même dans le procédé continu, ainsi que cela est souhaitable pour une production économique en grande quantités. La grandeur des particules dans la suspension à dispersion colloïdale de préférence a un diamètre S 3 compris dans 11 intersalle- de 10" à 10 millimètres. Des essais cliniques ont montré que les substances extraites par le procédé suivant l'invention possèdent, si on les compare à celles qui sont extraites au moyen des procédés connus des actions thérapeutiques qui sont nettement supérieures. Il s'agit ici d'une activation hormonale du lobe antérieur de l'hypophyse ou des gonades, mâles et femelles, activation qui devient ainsi pour la première fois systématiquement utilisée d'une manière thérapeutique. Cela provient vraisemblablement de ce que, d'après COPY 71 42732 2117884 le procédé suivant l'invention, le tissu de rate est divisé seulement par broyage c'est-à-dire par une action mécanique, assez finement pour que les substances ayant une action thérapeutique soient libérées dans un très grand pourcentage des cellules ou tissu sans être décomposées ou détruites lors de cette libération, par une action chimique ou biologique. Toute la matière à mettre en suspension passe dans la suspension, elle est soumise à la dialyse de sorte que toute les substances, une fois qu'ëlles ont été libérées, participent à l'opération de dialyse et ne peuvent pas quitter la suspension auparavant avec des extraits quelconques, les substances à extraire sont somprises manifestement, pour leur partie de beaucoup la plus grande, dans une zone de poids moléculaires qui sont plus petits que le poids moléculaire des complexes de molécules contenues dans la suspension et qui sont nuisibles pour les utilisations thérapeutiques de sorte qu'il est possible, au moyen de la dialyse, d'extraire de la suspension, dans une concentration relativement élevée, les substances souhaitées, ces substances étant suffisamment exemptes de complexes nuisibles de molécules pour que soit possible même une injection intraveineuse • On peut appliquer les substances extraites par le procédé suivant l'invention, même d'une manière répétée, par voie intraveineuse, par voie intramulsculaire, par voie sous-cutanée, par voie orale ou d'une autre manière. On obtient ainsi des actions qui activent les échangent organiques, qui activent 1'irrigation et en particulier l'irrigation des centres cérébraux, qui activent aussi en particulier la mobilité des spermatozoïdes et augmentent en outre le nombre des spermatozoïdes et qui produisent d'autres actions hormonales. Un développement de l'invention a pour but d'entreprendre avec le plus grand ménagement possible la suspension de la matière à mettre en suspension afin que dans toute la mesure du possible, les substances à isoler ne soient pas détruites. Ce procédé de l'invention est caractérisé en ce que la matière à mettre en suspension est chassée, en vue de son broyage fin, à travers une masse de grains de broyage qui est soumise à un brassage constant. Le broyage fin peut être exécuté avec ménagement dans ce développement du procédé de l'invention parce que les grains de broyage de la masse de grains roulent l'un sur l'autre tandis que la matière à mettre en suspension est chassée de sorte 71 42732 - 3 - 2117884 que les petites particules de tissu de rate, sont écrasées doucement dans de nombreuses petites opérations d'écrasement. Dans ce développement de l'invention, des chocs ou d'autres actions massives, qui pourraient conduire à des surchauffes locales, se trou-5 vant évitées. Indépensamment de ce qui.précède, le procédé suivant l'invention peut être appliqué en continu c'est-à-dire d'une manière économique. I«a libération des substances à isoler hors des cellules est déterminée entre autres, par la finesse avec 10 laquelle s'effectue la suspension. Ce degré de finesse est fonction, entre autres, dans le développement suivant l'invention, de la durée ou du séjour de la matière à mettre en suspension dans la masse des grains de broyage et ce temps peut être réglé très facilement à une valeur optimale, à déterminer empiriquement dans cer-15 taip.es circonstances, du fait que la matière à mettre en suspension est pompée à travers la masse des grains de broyage en un courant constant de volume dosé. Dans une dialyse, il faut que soient retenus outre les composants inutilisables du tissu, avant tout, les composants thérapeutiquement nuisibles, puis les bactéries, les 20 virus et leurs produits de dégradation tels que les pyrogènes. Un développement de l'invention a pour but de donner à ce procédé de dialyse une forme telle que, compte tenu de la composition chimique qui naturellement, n'est pas toujours uniforme, du tissu de rate obtenu en règle générale sur des animaux 25 de boucherie puisse être exécuté d'une manière simple eti soit accessible à une utilisation sur une grande échelle et qu'on puisse en attendre un rendement optimal. Ce développement de l'invention est caractérisé en ce que la suspension, avec une grandeur de passage maximale pour des poids moléculaires dans la zone de 5000, est 30 dialysée par rapport à de l'eau stérile exempte de pyrogènes, par rapport à de l'alcool ou à des produits analogues pour fournir un liquide de dialyse convenant pour des applications intraveineuses sur l'homme et en ce que le dialysat est concentré par distillation. Un moulin pour la suspension de la matière à 35 mettre en suspension est caractérisé en ce qu'il est prévu une enveloppe de moulin en forme de cylindre à base circulaire, fixe, • remplie de grainsde broyage dont le diamètre atteint au maximum 5 mm, comportant un agitateur mécanique qui traverse le remplissage en grains de broyage et qui est relié à une commande extérieure, 40 et dans laquelle débouche d'une extrémité une conduite d'introduction de la matière à mettre en suspension tandis que de l'autre 71 42732 "4" 2117884 extrémité sort une conduite de sortie pour la silspension qui passe au préalable à travers un dispositif de tamisage. Ce moulin se distingue par- la simplicité de son démontage: un développement de l'invention, qui concerne le moulin, permet de régler le degré de 5 finesse de la suspension et il est caractérisé en ce que la conduite d'entrée est reliée au côté refoulement d'une pompe de dosage» EXEMPLE 1. 0n broie, dans un récipient, 20 kilogrammes de tissu de rate provenant de veaux abattus, pour en faire une 10 bouillie, et l'on met cette matière en suspension dans 40 litres d'eau exempte de pyrogènes. Au moyen d'un moulin qui sera décrit plus loin en détail, à l'aide du dessin annexé, on transforme cette suspension ordinaire, par un broyage fin, en une suspension à dispersion colloïdale contenant des particules ayant une grandeur * 15 d'environ 10 mm, La solution qui sort du moulin est suffisamment stable pour que, même après qu'elle a passé quelques heures à l'état de repos, il ne soit pas possible d'observer un dépôt notable• On chauffe la «uopension pour la porter à 20 la température de 3C°C et, au moyen de 240 litres d'un liquide dialyseur, comprenant 220 litres d'eau exempte de pyrogènes et 20 litres d'alcool iscpropyliaue, on la dialyse pendant quatre jours en la brassant d'une manière permanente, en faisant usage d'une membrane de cellulose semi-perméable ayant une surface de deux 25 mètres carrés et présentant des passages de dimensions convenant pour- des poids moléculaires jusqu'à 5000. Le dialysat vérifié pour ce qui concerne les pyrogènes suivant la norme USP XYII et reconnu étant exempt de pyrogènes, est une solution des substances thérapeutiques à isoler 30 qui, concentré par évaporation jusqu'à obtention d'un résidu sec de 40/45 mg/ml, convient pour des applications intraveineuses pratiqués sur l'homme. EXEMPLE 2. Conforme h l'exemple 1, mais avec les niodifi- 35 cations suivantes ; Au lieu le procéder à la mise en suspension 40 litres d'eau exempte de pyrogènos, on se sert d'un mélange comprenant 36 litres d'eau exempte de pyrogènos et 4 litres d'alcool éthylirue. Au lieu qu'il y ait 20 litron d'alcool isopropyliqtie, 40 la partie alcoolique des 240 litres du liquide de dialyse est 71 42732 "5" 2117884 constituée par 20 litres d'alcool éthylique. Au lieu de mettre en oeuvre du tissu de rata de veaux, on met en oeuvre du tissu de rate de chevaux abattus. EXEMPLE 3. 5 Conforme à l'invention 1, mais avec la modi fication suivante : Les dimensions des passages de la membrane de cellulose, au lieu d'être prévues pour des poids moléculaires jusqu'à 5000 ne sont prévues-que pour des poids moléculaires jusqu'à v3500. 10 EXEMPLE 4. Conforme à l'exemple 1, mais avec les modifications suivantes : La matière à mettre en suspension, avant d'être broyée pour former la suspension est réglée de manière à être acide, 15 avec un tampon de phosphate de sodium et de potassium, de telle sorte qu'elle présente un pH ayant une valeur comprise entre 5,2 et 6,5. La suspension est neutralisée au moyen d'un tampon de phosphate de sodium et de calcium, de manière que son pH soit amené à 7, avant que lui soit ajouté le liquide diaiyseur . Le broyage en 20 milieu acide favorise la libération des molécules de constituants actifs hors de leurs édifices moléculaires. EXEMPLE 5 T>our application. Le résidu sec obtenu suivant l'exemple 1, 2,3 ou 4 est appliqué, pour une excitation gonadofaqpe chez les adultes, 25 jusqu'à deux fois par jour en doses de 50 à 100 mm, qui sont dissoutes dans chaque portion de deux centimètres cubes d'eau distillée exemptes de pyrogènes, ces applications étant faites par voie parentérale (c'est à dire avec dérivation par rapport au trajet estomac-intestin^ 30 EXEMPLE 6 pour application. Le résidu sec obtenu suivant 1'exemple-1, 2, 3 et 4 est administré par voie orale en doses de 50, 100 milligrammes d'une à deux fois pour les adultes pour une excitation gonadotrope. La description ci-après et les dessins annexés se rapportent à un 35 exemple de réalisation de l'invention qui a pour objet un moulin pour l'obtention de la suspension, dessins dans lesquels : - la figure 1 représente une coupe transversale du moulin, - la figure 2 représente à plus grande échelle 40 une.partie de la figure 1, 71 42732 "6" 2117884 - la figure 3 représente une e'oupe partielle telle qu'elle se présente à un observateur regardant suivant la flèche III de la figure 1. Le moulin 22 présente une enveloppe 40 en forme 5 de cylindre à base circulaire, dont l'axe 41 es"t horizontal, ce cylindre étant fixé par une platine fixe. L'enveloppe du cylindre est à double paroi, la paroi extérieure est désignée par le repère 43 et la paroi extérieure est désignée par le repère 44. Entre ces parois, il existe un espace annulaire 45 qui, par l'intermédiaire 10 d'une tubulure d'entrée 46 et d'une tubulure-de sortie 39, est parcouru, dans la mesure nécessaire, par de l'eau de réfrigération. L'enceinte de monture 47 qui est entourée par la paroi interne 44 a une capacité d'environ 14 litres et elle va en se rétrécissant coniquement dans la direction de transport indi-15 quée par la flèche 48. Cette enceinte est remplie Presque complètement, c'est-à-dire jusqu'à ligne 98 tracée en traits mixtes par des billes de verre 97 qui ne sont représentées que-dans la partie gauche du dessin et qui forment vin garnissage en grains de broyage. Il est prévu, disposé coaxialement à l'axe 41 20 du cylindre et pouvant tourner à l'intérieur de l'enceinte de broyage, un arbre de broyage 41 sur lequel sont montés 6 disques de broyage 52, 53. L'arbre est supporté à.l'une de ses extrémités '■Ontre la paroi d'extrémité côté sortie et il est supporté dans la 25 paroi d'extrémité 54, côté entrée, au moyen d'un élément de passage 55 étanche à la pression et aux liquides. L'arbre sort de l'enveloppe à travers cet élément de passage et il est relié à un moteur électrique de commande 96, la puissance absorbée par ce moteur étant mesurée d'une manière continue au moyen d'un wattmètre 27 pour la 30 surveillance du fonctionnement du moulin. Une tubulure d'amenée 60, qui-est raccordée au côté refoulement d'une pompe de dosage 19, débouche dans l'enceinte de broyage 47. Par le côté aspiration de la pompe de dosage, pénètre dans cette dernière la substance à mettre en suspension. 35 Le repère 57 désigne un dispositif de tamisage qui débouche dans la tubulure d'écoulement 58 et qui présente un morceau de tube qui est introduit sur l'extrémité de l'arbre 51 et qui est supporté, en soi, dans un palier 71 étanche aux liquides. Le bouclier72 du palier 71 limite, avec la paroi d'extrémité 56, une 40 chambre 73 d'où part la tubulure de sortie 58 et dans laquelle est logé le palier 74 pour l'arbre 57. Le repère 75 désigne un disque 71 42732 - 7 - 2117884 à fente qui est introduit sur l'arbre 51 et qai est monté de manière à ne pas pouvoir tourner sur cet arbre. En outre le disque à fente est fixé à la pièce tubulaire 70. Trois autres disques à fente 76 à 78 sont introduits sur la pièce tubulaire. 5 Dans la zone des fentes 81 et 82 entre ces dis ques à fente, la pièce tubulaire 70 présente des ouvertures 87. A l'intérieur des fentes 80 et 81, sont montés sur la pièce tubulaire 70f par rapport auquel ils ne peuvent pas tourner, des disques annulaires 85, 86 dont les pourtours élargis 82, 92 laissent par 10 rapport aux disques des intervalles annulaires étroits 93, 94, 83, 84 ayant une largeur de 0,3 millimètre. les ouvertures 87 ont un diamètre d'un millimètre. On a désigné par les repères 25 et 26 des manomètres pour la surveillance du fonctionnement» Toutes les parties de la pompe qui entrent en contact ni avec la suspension 15 (y compris les grains de broyage) sont en une matière qui ne contient pas de composants toxiques. Avant de mettre le moulin en fonctionnement on remplit l'enceinte '47 de broyage, par l'intermédiaire de la tubulure d'entrée 60 et jusqu'à la ligne 98, de billes de verre ayant un dia-20 mètre de 3 mm. On met en circuit le moteur de commande 96 et la pompe de dosage 19 et l'on amène du côté aspiration de la pompe de dosage 19 la matière devant fournir la suspension en la pompant en un débit uniforme à travers le garnissage en corps de broyage en billes de verre et la chambre de broyage 47 et l'on obtient ainsi 25 la mise en suspension de cette matière qui s'écoule, en tant que suspension, à travers le dispositif de tamisage 57 et s'écoule à la tubulure de sortie 58 d'où elle est amenée à un dispositif de dialyse, non représenté. Bien entendu, l'invention n'est pas limitée à 30 l'exemple de réalisation ci-dessus décrit et représenté, à partir duquel on pourra prévoir d'autres modes et d'autres formes de réalisation, sans pour cela sortir du cadre de l'invention. 71 42732 - 8 - 2117884 R B -g i; I S I G A I I 0 N S 1°/ Procédé pour 1*extraction de substances therapeutiqu.es à partir de iissus de rate par formation d'une suspension aqueuse de tissus de rate broyés et par dialyse, procédé 5 caractérisé en ce que la matière est broyée finaieat pour farmer me suspension à dispersion colloïdale, suspension à partir de laquelle les substances sont ensuite extraites par dialyse. 2°/ Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'on fait passer la matière à mettre en suspen-10 sion, pour son broyage fin, à travers une garniture en grains de broyage qui est soumise à un brassage permanent. 3°/ Procédé suivant la revendication 2, caractérisé en ce que la matière à mettre en suspension est pompée à travers la masse de grains de broyage en un courant constant à vo-15 lume dosé. 4°/ Procédé suivant l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la suspension est dialysée avec une dimension maximale de passage pour des poids moléculaires dans la zone de 5000, avec de l'eau stérile exempte de matières 20 pyrogénées, de l'alcool ou 101 produit analogue, pour l'obtention d'un liquide de dialyse convenant pour des applications intraveineuses sur l'homme, le dialysat ainsi obtenu étant concentré par distillation. 5°/ Moulin pour la suspension de la matière 25 à mettre en suspension suivant l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il est prévu une enveloppe en forme de cylindre à base circulaire, fixe, remplie de grains de broyage ayant un diamètre pouvant atteindre 5 mm. cette enveloppe étant munie d'un agitateur mécanique qui traverse la masse de grains de broyage 30 et qui est relié à une commande extérieure, cette enveloppe étant munie en outre à line extrémité d'une conduite d'entrée, qui débouche dans ladite enveloppe, pour la matière à mettre en suspension et à son autre extrémité d'une conduite de sortie, qui part de l'enveloppe et qui est destinée à l'évacuation de la suspension qui franchit 35 avant de sortir un dispositif de tamisage. 6°/ Moulin suivant la revendication 6, pour la mise en application du procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce que la conduite d'entrée est reliée au côté refoulement d'une pompe de dosage. 40 70/ Extrait de rate caractérisé en ce qu'il 71 42732 "9" 2117884 est obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4.