FR 2124124 A1 19720922 FR 7104139 A 19710208 71 04139 2124124 La présente invention consiste dans l'introduction en thérapeutique humaine, sous les formes pharmaceutiques convenables, de suhstances à action immunisante obtenues à l'état soluble à partir de plusieurs germes pathogènes.ou saprophytes rencontrés 5 dans la phatologie bucco-dentaire. Conformémer.b à l'invention, le nouveau médicament contenant des substances immunisantes est constitué par des aminolysats pouvant être soumis à une filtration bactériologique, à l'adjonction d'un conservateur, d'un stabilisait, d'un adjuvant éven-10 tuel nécessaire, ces différents aminolysats étant mélangés entre eux dans des proportions déterminées, puis un excipient est ajouté pour donner au médicament une forme pharmaceutique convenable. Suivant une autre caractéristique de l'invention, le nouveau médicament a la formule suivante : 15 - Lysat de lactobacillus acidophilus - S 210 70ml - Lysat de lactobacillus helveticus - 3 135 70ml - Lysat de lactobacillus lactis - 8 175 70ml - Lysat de lactobacillus fermentatum - S 1Ç1 70ml - Lysat de streptococcus groupe A - 3 107 - 70ml 20 - Lysat de streptococcus groupe A - S 170 70ml - Lysat de streptococcus groupe A - S 218 70ml - Lysat de streptococcus groupe D - S 226 70ml - Lysat de streptococcus groupe D- S 19 70ml - Lysat de staphylococcus aureus - S108 50ml 25 - Lysat de Corynebacterium seudodiph- teriticus - S 222 100ml - Lysat de fusiformis fusiformis - S 221 100ml - Lysat de klebsiella pneu:..oniae - 3 32 50ml - Lysat de candida albicans - B 119 70ml 30 - Kerthiolate 0,025 g Principe de fabrication La transformation lytique de germes est obtenue par l'action d'un acide aminé tel que le glycocolle et, pour les microorganismes levuzoïdes par l'action du désoxycholate de sodium dans 35 des conditions données de température, de pH et de concentration sur une suspension aqueuse de microorganismes vivants saprophytes ou pathogènes de l'homme. Les lysats filtrés ainsi obtenus sont lyophilisés ou atomisés et sont utilisés après mélange à la confection des formes 71 04139 2124124 pharmaceutiques telles que comprimés, etc. Procédé de fabrication : 1°) Choix et culture du ou des germes microbiens a) le choix a été dicté par le souci de réunir à la fois: 5 - le plus grand nombre de germes responsables d'in fections bucco-dentaires, - de se rapprocher le plus possible de la flore responsable de la plaque dentaire et des caries dentai-res, 10 - des germes responsables des parodontopathie. Aussi, il a été utilisé : - des Lactobacillus (de divers types) . Acidophilus . Helveticus 15 • Lactis . Ferment atum - des Streptocoques isolés par hémogingivoculture chez l'homme, appartenant aux groupes A et D de Lance-field. 20 - un Staphylocoque doré. - un Corynebacterium pseudodiphteriticus. - un Fusiformis Fusifornr s - un Klebsiella pneumoniae . - un Candida albicans. 25 b) Les germes sont cultivés selon les méthodes usuelles en bactériologie dans les conditions de culture convenant le mieux à leur développement. c) Le ou les germes sont recueillis en phase active de croissance se]on les méthodes connues de façon à réa-30 liser une ou, selon les espèces microbiennes, des suspensions aqueuses contenant isolément les germes vivants considérés. 2°) Production des substances immunisantes sous forme d'un lysat microbien : 35 a) pour l'ensemble de bactéries Après centrifugation des cultures bactériennes, les culots sont lavés deux fois avec de l'eau distillée stérile. Les culots sont ensuite dilués dans une solution 71 04139 2124124 aqueuse de glycocolle à 10 % de manière à mesurer au photomètre une densité optique =1,1. Les suspensions ainsi préparées sont portées à 11étuve à 37°C pendant dix jours. 5 Le nombre de germes vivants est pour la densité optique considérée : O - Lactobacilles = 10 germes/ml o - Streptocoques = de 1 à 10 x y\0J germes/ml - Staphylococcus aureus = 10 x 10^ germes/ml 10 - Klebsiella pneumoniae = 10^ germes/ml - Corynebacterium ^ pseudodiphteriticus =10 germes/ml o - Fusiformis Fusiformis = 10' germes/ml b) Pour la levure 15 Après centrifugation de la culture, lavage deux fois du culot avec de l'eau distillée stérile. Le culot est ensuite dilué dans une solution aqueuse de dés'oxycholate de sodium à 1 % de manière à mesurer au photomètre une densité optique =1,1. 20 La suspension ainsi préparée séjourne dans l1étuve à 37°C pendant dix jours. Q Le nombre de germes vivants est de 10 x 10y germes/ml. La lyse des suspensions microbiennes obtenues est illustrée par la mesure photométrique de densités optiques 25 au premier et au dernier jour, après séjour dans l'étu de. (voir page 8 ). 3°) Fabrication du médicament L'aminolysat ainsi obtenu est utilisé après, s'il y a lieu, filtration bactériologique et adjonction d'un con-30 servateur, d'un stabilisant ou de tout autre adjuvant éventuellement nécessaire autorisé. Le mélange des différents aminolysats s'effectue selon la formule suivante : - Lysat de lactobacillus acidophilus - S 210 70ml 35 - Lysat de lactobacillus helveticus - 3 135 70ml - Lysat de lactobacillus lactis - S 178 ........ 70ml - Lysat de lactobacillus fermentatum - ,3 1Ç1 70ml - Lysat de streptococcus groupe A - S 107 70ml - Lysat de streptococcus groupe A - 3 i70 70ml 71 04139 4 2124124 - Lysat de streptococcus groupe A - S 218 70ml - Lysat de streptococcus groupe D - S 226 70ml - Lysat de streptococcus groupe D - S 19 70ml - Lysat de staphylococcus aureus - S 108 50ml 5 - Lysat de Corynebacterium pseudodiphteriticus - S 222 100ml - Lysat de fusiformis fusiformis - S 221 100ml - Lysat de Klebsiella pneumoniae - 8 31 50ml - Lysat de candica albicans - S 119 70ml 10 - Merthiolate 0,025 g La lyophilisation ou 11 atomi s ation permettent l'obtention de poudres antigènes stables pouvant se prêter à la préparation des formes pharmaceutiques diverses : - comprimés, 15 - suppositoires, - dentifrices, etc. - gomme à mâcher. Identification et contrôle Le contrôle s'effectue, selon la technique de déviation du 20 complément de Kolmer ou par la technique de diffusion sur gélose pour certains antigènes, à l'aide des sérums spécifiques. Propriétés pharmacologiques Chez le lapin, la voie permuqueuse a été utilisée pour démontrer la production des anticorps "in vivo". 25 Aussi, par exemple, des suppositoires adaptés à l'anatomie du lapin ont été préparés contenant les antigènes eous forme lyophilisée et administrés à raison de un suppositoire par jour pendant quatre semaines (5 jours/semaine). Le tableau page 9 résume les résultats obtenus avec les di-30 lutions des sérums (agglutinines). Exemple (voir page 9) Un autre exemple du pouvoir immunogène des lysats ainsi obtenus est donné par celui de Fusiformis fusiformis se prêtant mal aux tests d'agglutination (agglutination spontanée en eau dis-35 tillée ou soluté aqueux physiologique). Le lysat de Fusiformis fusiformis, préalablement filtré sur membrane millipore 0,22 m jix, est injecté par voie intradermique aux différents points ae la nuque de lapin, après avoir été mélangé avec l'adjuvant de Freund complet. 71 04139 5 2124124 ' Le 25ème jour une injection de rappel est effectuée par voie intra-musculaire. Le sérum de l'animal recueilli est fortement précipitant, comme le témoigne l'essai par diffusion sur gélose. 5 Du point de vue toxicologique, le mélange des différents lysats glycocolliques est atoxique, la détermination de la dose léthale 50 chez la souris était supérieure à 2500 mg/kg. Propriétés thérapeutiques Chez l'homme adulte, à titre de traitement préventif ou cura-10 tif immunisant des affections stomatologiques, le médicament a été utilisé sous forme de comprimés sub-linguaux légèrement effervescents, dont la composition est la suivante : - mélange antigènique sous forme de poudre lyophilisée 0,050 g 15 - excipient q.s.p un comprimé - Mannitol - Lactose - P.V.P. 20 - Bicarbonate de sodium - Saccharine - Acide citrique - Précirol - Poudre de menthe 25 Dix-huit malades atteints d'affections variées de la bouche ont été traités à raison de 4 à 8 comprimés par jour» La durée était variable, pour les cas aigus de 5 à 8 jours, pour les cas chroniques pendant plusieurs semaines. L'analyse des cas traités montre : 30 - une action rapide sur les phénomènes douloureux, - une action anti-inflammatoire donnant une amélioration dans les 4-8 heures de signes cliniques : - disparition des gingivorragies spontanées, - diminution et souvent, en fin de traitement, disparition 35 des gingivorragies provoquées-, - diminution de l'oedème, - disparition des ulcérations. - une action anti-infectieuse, dans les cas de parodontite, 71 G4139 2124124 - diminution ou suppression de la suppuration. - la fétidité de l'haleine disparaît. Exemples d'observations cliniques Observation No 1 5 (Décembre 1969) - Monsieur D.F. , étudiant, 25 ans Bon état général. Gingivite ulcéreuse ; gingivorragies spontanées, douleurs. 8 microcettes par jour pendant huit jours. 10 Résultat excellent, soulagement et amélioration en 48 heures. Guérison complète à la fin du traitement ; depuis, il n'y a pas eu de récidive. Observation No 2 (Janvier 1970) 15 - Madame S. A , infirmière, 26 ans l'roubles hormonaux (irrégularité des cycles menstruels). Parodontite simple. Gencives rouges, tuméfiées, présence de culs-de-sac, Suppuration localisée. 20 8 microcettes par jour pendant quinze jours. Bons résultats, suppression des gingivorragies. Les huit jours suivants, application de poudre, réapparition des gingivorragies. Observation lio 3 25 (Janvier 1970) - .Mademoiselle D. de S , vendeuse, 20 ans Bon état général. Gingivite érythémateuse et début de parodontite. Etiologie fonctionnelle à retenir, reconstitution antérieure 30 très traumatique et, de plus, mauvaise hygiène. Gencives rouges oedématisées, douloureuses, gingivorragies provoquées et spontanées, suppuration, abcès parodontaux, dents mobiles. Les premiers signes remontent à plus de trois ans. 35 8 microcettes par jour pendant quinze jours- Bons résultats, disparition de la suppuration et des phénomènes douloureux, diminution des gingivorragies. Cette patiente a été revue vers le 15 Septembre : pas de réci- 71 04139 2124124 dives. Observation No 4 (Janvier 1S70) - Monsieur J.P. M. , surveillant d'externat, 25 ans. 5 Bon état général. Gingivite érythémateuse et début de parodontite ayant commencé il y a trois ans. .Gencives très congestionnées, gingivorragies spontanées et provoquées, douleurs, suppuration au niveau des incisives 10 inférieures et supérieures. Occlusion traumatique, mauvaise hygiène. 8 microcettes par jour pendant quinze jours. Très bons résultats, plus de douleurs, plus de gingivorragies spontanées, disparition de l'inflammation. 71 04139 8 2124124 Microorganismes 1er jour 10ème jour La suspension a été lysée en % Lactobacilles 5 - Acidophilus S 210 1,20 0,31 75 - Helveticus 8 135 1,20 0,66 45 - Lactis S 178 1,20 0,60 50 - Fermentatum S 191 •1,20 0,10 91,7 Streptocoques 10 - Groupe A S 107 1 ,20 0,72 45 - Groupe A S 170 1,20 0,49 59 - Groupe A 3 218 1,20 0,96 20 - Groupe D S 226 1,20 0,52 66 - Groupe D S 19 1,20 0,06 95 15 Staphylococcus aureus S 108 1,20 0,24 80 Klebsiella pneumoniae S 31 1,20 0,48 60 Oorynebact erium pseudodiphteriti eus 20 S 222 1,20 0,96 20 Fusiformis fusiformis S 221 1,20 0,52 56 Candida albicans s 119 1,20 0,49 69 71 04139 9 2124124 Exemple tableau Strept-oeoccus Groupe A St aphylo c o c eus aureus k. Pneumoniae Jo J30 J 0 J30 Jo J30 Lapin No 1 pur dil. 1 T~ dil. 1 dil. 1 dil, 1 dxl. 55 Lapin No 2 pur dil. 1 dil. 1 dil. 1 dil. 1 dil. 1 32 2 128 52 Lapin No 3 0 dil. 1 pur dil. 1 . dil. 1 32" dil» 1 2 Lapin No 4 0 dil. 1 pur i dil. 1 dil. 1 dil. 2 128 64 Lapin No 5 0 dil. 1 pur A dil. 1 dil. 1 dil. 4 128 8 32 71 G4139 2124124 REVENDICATIONS 1 - Nouveau médicament contenant des substances immunisantes des affections bucco-dentaires, caractérisé en ce qu'il est constitué par des amynolysats pouvant être soumis à une filtra-5 tion bactériologique, à l'adjonction d'un conservateur, d'un stabilisant, d'un adjuvant éventuel nécessaire, ces différents aminolysats étant mélangés entre eux dans des proportions déterminées, puis un excipient est ajouté pour donner au médicament une forme pharmaceutique convenable. 10 2 - Nouveau médicament contenant des substances immunisan tes des affections bucco-dentaires suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le médicament a la formule suivante : - Lysat de lactobacillus acidophilus - S 210 .... 70ml - Lysat de lactobacillus helveticus - 3 135 70ml *15- - Lysat de lactobacillus lactis - S 178 70ml - Lysat de lactobacillus fermentatum - 3 191 70ml - Lysat de streptococcus groupe A - 3 107 70ml - Lysat de streptococcus groupe A - S 170 70ml - Lysat de streptococcus groupe A- S 218 70ml 20 - Lysat de streptococcus groupe D - S 226 70ml - Lysat de streptococcus groupe D- S 19 ...... 70ml - Lysat de staphylococcus aureus - S 108 50ml - Lysat de Corynebacterium pseudodiph- teriticus - S 222 100ml 25 - Lysat de fusiformis fusiformis - S 221 100ml - Lysat de klebsiella pneumoniae - S 31 50ml - Lysat'de candica albicans - S 119 ...... 70ml - Merthiolate 0,025 g .3 - Nouveau médicament contenant des substances immunisan-30 tes des affections bucco-dentaires suivant la revendication 2, caractérisé en ce que les lysats sont lyophilisés afin d'obtenir des poudres antigènes stables.