FR 2137543 A1 19721229 FR 7215949 A 19720504 72 15949 On prépare les complexes de cuivre II du 6-méthoxy-1-phénazinol 5,10-dioxyde en combinant une solution de 6-méthoxy-1-phénazinol 5,10-dioxyde (myxine) avec une solution de sel de cuivre II. Le précurseur, 6-méthoxy-1-phénazinol 5»10-dioxyde, 5 est facilement préparé par méthylation sélective de l'iodinine (1,6-phénazinediol 5»10-dioxyde), par exemple en traitant le sel monosodique de 1'iodinine avec un agent méthylant comme le dimé-thylsulfate dans un solvant organique inerte. Une solution de 6-méthoxy-1-phênazihol 5,10-dioxyde, quand elle est combinée à une 10 solution d'un sel. cuivrique, par exemple l'acétate cuivrique, forme un complexe de cuivre II contenant-une mole de cuivre II pour deux molécules de 6-méthoxy-1-phénazinol 5»10-dioxyde. D'autres sels cuivriques qui conviennent sont ceux des acides faibles ayant des valeurs de pKa d'environ 4,2 ou davantage 15 comme les acides alcanoïques inférieurs, par exemple les acides acétique, propionique et l'acide benzoïque. Les sels d'acides minéraux, connue le sulfate cuivrique, peuvent aussi être utilisés,. m$±s ils doivent être employés dans des systèmes solvants tamponnés pour éviter des conditions fortement acides. 20 Chimiquement, le cuivre peut exister, sous forme ioni sée, sous deux états de combinaison, l'état réduit, c'est-à-dire cuivreux ou de cuivre I, ayant une valence de +1, et l'état oxydé, c'est-à-dire cuivriqu^6u de cuivre II, ayant une valence de +2. Quand, dans ce qui suit, le terme "cuivre" est employé autre-25 ment que pour désigner le métal lui-même, il faut entendre qu'il y. s'agit de cuivre II, c ■ est-à^ire ayant une valence de 2. La réaction peut être conduite à la température ambiante ou bien on peut utiliser des températures supérieures à celle-ci pour faciliter la dissolution des réactifs et réduire la quan-30 tité de soldant nécessaire. Comme il est désirable de précipiter le produit final du milieu réactionnel, il est préférable, d'utiliser un solvaût ou un mélange solvant dans lequel aussi bien le 6-méthoxy-1-phénazinol 5,10-dioxyde que le sel cuivrique sont plus solubles que le complexe formé par leur réaction. Des exem-35 pies de solvants organiques qui peuvent être convenablement utilisés sont l'acétonitrile, le diméthyl formamide, le méthanol, l'éther, le chloroforme, etc. Le complexe cuivrique du 6-méthoxy-1-phénazinol 5»10- 72 15949 -2- 2137543 dioxyde possède un degré élevé et un large spectre d'activité anti-microbienne aussi bien dans les études in vitro que dans les infections topiques in vivo. En particulier, le complexe de cuivre a montré un degré élevé d'activité contre une large variété 5 de bactéries aussi bien gram-positives que gram-négatives, de fungi, de protozoaires et d'helminthes. Ce large spectre d'activité anti-microbienne s'est manifesté par l'efficacité du complexe de cuivre comme agent chimiothérapeutique pour combattre les infections topiques. 10 Le complexe de cuivre, du 6-méthoxy-1-phénazinol 5,10- dioxyde ne convient pas, du point de vue physique, pour être .employé seul, c'est-à-dire sans excipients appropriés, dans le traitement des infections microbiennes topiques. De plus, le complexe de cuivre, lorsqu'il est utilisé,dans certaines formulais tions topiques, c'est-à-dire des crèmes et suspensions, bien qu'il soit efficace, est instable au stockage. Il est donc nécessaire de trouver une méthode de stabilisation pour ces compositions. La.demanderesse a déterminé que l'addition d'un excès 20 d'ions cuivre à une préparation, crème ou suspension, contenant de la myxine cuivrique, stabilise la myxine cuivrique contenue. Plus spécialement ce but est atteint en ajoutant une quantité d'un sel de cuivre soluble dans l'eau provenant d'une solution tampon contenant le sel, c'est-à-dire d'une solution tampon du 25 stabilisant, en.quantité suffisante pour obtenir un excès molaire de 2 â 20 % d'ions cuivre sur la base de la teneur en cuivre de la myxine cuivrique. La présente invention concerne en conséquence un procédé de stabilisation de compositions pharmaceutiques contenant le 30 . complexe de cuivre II dû 6-méthoxy-1-phénazinol 5,10-dioxyde, selon lequel on ajoute aux compositions une quantité suffisante d'un sel soluble de cuivre II pour obtenir un excès molaire d'environ 2 % à environ 20 % d'ions cuivre II sur la base de la teneur en cuivre dudit complexe de cuivre II. 35 Comme la myxine cuivrique est le plus stable à un pH égal à.la neutralité ou voisin de cette dernière et comme les ions cuivre du sel de cuivre soluble, par ..exemple de .l'acétate de cuivre, précipiteront sous forme d'hydroxyde dans la solution 72 15949 -3- 2137543 alcaline, la solution tampon du stabilisant est de préférence tamponnée, à un pB de 5,7 - 6,2. La myxine cuivrique, en raison de la stabilisation de la molécule de myxine par formation de chélate, est, par sa na-5 ture, plus stable que la myxine. Dans les préparations sous forme de crèmes et de suspensions, il est nécessaire d'éviter les systèmes qui provoqueraient la dissociation de la myxine cuivrique. Cette dissociation de la myxine cuivrique peut, sous forme simplifiée, être schématisée comme suit t 10 Myxine cuivrique (solide) myxine cuivrique (solution)- > Myxine cuivrique ©>+ Myxine ®—j».cuivre ® ® + 2 myxine® . Ainsi donc, toute substance qui se combine, se solubilise ou se complexe avec les cations cuivre ou avec les anions myxine, peut déplacer l'équilibre vers la droite et augmenter la dissociation 15 pour donner la myxine libre plus labile. Si examinant la stabilité de la myxine cuivrique dans les crèmes ou suspensions, il faut tenir compte de ce qui suit. a) jaH - Dans les milieux fortement alcalins, le cuivre est éliminé par formation d'hydroxyde de cuivre insoluble. Dans 20 les milieux acides, avec la concentration accrue en ions hydrogène, les protons qui en résultent réagissent avec le cuivre» Ces deux effets provoquent la dissociation du complexe cuivrique en myxine libre. b) -âgents complexant le cuivre - Des concentrations 25 appréciables d'ammoniaque, aminés, acide éthylènediamine tétra- acétique, citrates, etc qui peuvent, par elles-mêmes, complexer le cuivre, augmentent la dissociation du complexe cuivrique de la fflyxine. c) Compatibilités particulières de la myxine cuivrique: 30 Les études de compatibilité de la myxine cuivrique avec un certain nombre drexcipients ont été effectuées en utilisant la formation de la myxine libre comme mesure de l'incompatibilité. Comme résultats de ces études, on a trouvé que des excipients pharmaceutiques bien connus comme le ïween 80 (mono-35 oléate de polyoxyéthylène sorbitan), le Span 80 (monoester d'acide gras du sorbitan) et l'acide stéarique étaient incompatibles avec la myxine cuivrique. 72 15949 -4- 2137543 d) Matériaux d'emballage - Des métaux, comme l'étain et l'aluminium, agissent comme des réducteurs sur les formulations de myxine cuivrique contenant une phase aqueuse. e) Systèmes à plusieurs phases - Les équilibres de 5 dissociation de la myxine cuivrique, tels qu'on les a exposés précédemment, deviennent plus compliqués dans les systèmes à plusieurs phases. Dans les systèmes lipophiles à une seule phase, surtout s'ilgéont complètement non polaires, comme une pommade à base de vaseline, il y a, au plus, une petite possibilité de 10 dissociation donnant la myxine libre,, de sorte que le système est nettement stable. Des systèmes aqueux à une seule phase fortement polaires n'ayant qu'une faible aptitude à dissoudre la myxine ou la myxine cuivrique, ou n'en ayant pas du tout, sont également stables. Par ailleurs, dans les crèmes où existe un système à 15 deux phases lipophile-hydrophile, plusieurs facteurs compliquent la stabilité de la myxine cuivrique. La myxine cuivrique possède un pouvoir substantiel de dissociation en myxine» spécialement dans les systèmes aqueux. La dégradation de la myxine cuivrique se produit par dissociation dans la phase aqueuse avec migration 20 subséquente de la myxine libre vers la phase lipophile dans laquelle elle a une solubilité appréciable. Les ions cuivre restent dans la phase aqueuse dans laquelle ils sont plus solubles. Par suite la migration de la myxine libre provenant de la phase aqueuse provoque la dégradation d'une quantité supérieure de myxine 25 cuivrique selon les équations de dissociation données précédemment. f) Systèmes solvants - Des dosages comportant des concentrations élevées de solvants'faiblement polaires susceptibles de dissoudre la myxine libre doivent être évités lorsqu'on pré- 30 pare des formulations de myxine cuivrique. Cela comprend des concentrations élevées de propylène glycol, polyéthylène glycol, etc. Les difficultés exposées dans ce qui précède peuvent être réduites au minimum par un contrôle sévère des conditions 35 employées et des matériaux utilisés dans la formulation des préparations pharmaceutiques. Ainsi, en présence d'eau ou d'un autre solvant fortement polaire, l'effet de l'addition d'un excès molaire d'ions A I i 72 15949 -5- 2137543 cuivre pour diminuer la dissociation de la myxine cuivrique est d'une importance critique dans l'élaboration des formulations. Par exemple la myxine cuivrique dans une suspension aqueuse contenant 50 % de propylèneglycol et 2,5 % de polyvinylpyrrolidone 5 présente, après centrifugation, une coloration rouge-rosé dans la couche glycolique en raison de la dissociation partielle de la myxine cuivrique en myxine libre. Cette coloration est instan tanément changée en la coloration noir-vert de la myxine cuivrique par addition d'un excès molaire d'environ 2 % d'ions 10 cuivre. Comme on l'a indiqué précédemment, ma myxine libre est éliminée de la couche aqueuse par migration vers la phase lipo-phile, causant ainsi davantage de dissociation de la myxine cuivrique dans la phase aqueuse. Ainsi est mis en évidence l'effet bénéfique de l'addition d'ions cuivre, sous forme d'un sel de 15 cuivre soluble dans l'eau, à des préparations pharmaceutiques contenant de la myxine cuivrique. Un effet analogue se produit dans un système à deux phases. Les crèmes peuvent être des émulsions eau-dans-huile ou huile-dans-eau. Les crèmes particulières utilisées ici sont 20 toutefois dû type huile-dans-eau. Les agents tensio-actifs utilisés ici doivent non seulement agir comme des émulsionnants, mais ils doivent aussi être compatibles avec la myxine cuivrique Dans les recherches initiales on préparait des crèmes et on ajou tait de la myxine cuivrique, en dispersion, directement à la 25 crème, Toutefois, il se formait immédiatement de la myxine libre en raison de la plus grande solubilité de la myxine dans la phase huile de l'émulsion par rapport à la solubilité de la myxine cuivrique. Dans les préparations ultérieures, la myxine cuivrique, dispersée dans une solution tampon stabilisante qui 30 contenait un sel de cuivre soluble dans l'eau, était ajoutée à un' précurseur constitué par une émulsion aqueuse. Les exemples suivants illustrent l'invention. Exemple 1 Cet exemple illustre la préparation d'une solution 35 tampon stabilisante et son emploi dans la préparation d'une dispersion de myxine cuivrique sous forme micronisée. On prépare des solutions tampon stabilisantes ayant les compositions suivantes : 72 15949 -6- 2137543 Ingrédients grammes par kg de crème finale A B Acétate cuivrique monohydraté 0,035 0,19 t Acétate de sodium trihydraté 2,041 2,041 Acide acétique glacial 0,05 0,05 Eau distillée, q.s. > 493,0 486,7 Des portions de 5,5 g de myxine cuivrique sous forme agglomérée sont apportées à des quantités aliquotes de 100 gram-10 mes et 170 grammes, respectivement, des solutions tampon stabilisantes A et B. Par une technique de désagrégation liltrasonique et de dispersion, qui ne fait pas partie de l'invention mais qui est mentionnée pour que la description soit complète, les aggré-gats sont rapidement et complètement détruits en formant des 15 particules fines dispersées dans la solution tampon stabilisante. En bref, la technique comporte l'exposition des aggrégats humides à des vibrations de fréquence ultrasonique. Les dispersions qui en résultent sont utilisées directement dans la préparation des formulations de crèmes. 20 Exemple 2 Cet exemple illustre l'effet stabilisant sur des formulations de crèmes à base de myxine cuivrique, obtenu par addition d'un excès d'ions cuivre à ces formulations. On prépare les formulations suivantes de crèmes à base 25 de myxine cuivrique. Ingrédients Formulation (g/kg) II-A II-B II-C Myxine cuivrique 5,5 5,5- 5,1 Alcool stéarylique 170,0 170,0 170,0 Vaseline Perfecta 128,0 128,0 128,0 Myrj 52 66,0 -- 66,0 66,0 Propylène glycol 137,5 137,5 137,9 Kéthocel 65 HG 4000 - 6,3 - Eau distillée - - 493,0 Tampon 493 , 0 486,7 - Excès molaire de cuivre % 2 10 0 72 15949 "7" 2137543 La vaseline Perfecta, mélange purifié d'hydrocarbures semi-solides du pétrole, a un intervalle de fusion de 38°-50°C. et une longueur de chaîne moyenne de 20-22 atomes de carbone. Le Myrj 52 est un ester partiel d'acide gras du polyéthylène. 5 le Méthocel 65 HG 4000 est 1'hydroxypropylméthylcellulose de Dow Chemicals. Les solutions tampons stabilisées ("Tampon") ajoutées aux formulations II-Â et II-B ci-dessus sont les solutions A et B respectivement, telles que préparées dans l'exemple 1 ci-10 dessus. La crème est préparée comme suit. La phase huileuse (alcool stéarylique, vaseline et Myrj 52) et la phase aqueuse (propylène glycol et la solution tampon sans le sel de cuivre soluble dans l'eau) sont chauffées, séparément, à 80°C environ. 15 Ensuite on ajoute la phase aqueuse, en agitant» à la phase huileuse. La crème ainsi obtenue est refroidie à 60-65°C et on la mélange avec la solution tampon de Méthocel 65 HG, chauffée à 50°C. (Cette solution est préparée en dispersant le Méthocel 65 HG dans une portion aliquote de la solution tampon ne conte-20 nant pas d'ions Ou à 70°C en appliquant une agitation à grande vitesse. La dispersion est refroidie à 5°C pendant 12 heures de façon à hydrater le Méthocel. La solution résultante est alors chauffée à 5û°C avant qu'on l'ajoute à l'émulsion). La dispersion de myxine cuivrique (préparée comme dans l'exemple 1 ci-25 dessus en utilisant la solution tampon contenant le sel de cuivre soluble dans l'eau) est ajoutée soit avant que la crème commence à se former, soit à 55°-60°C. On continue à agiter jusqu'à ce que la crème soit refroidie à la température ambiante. Des échantillons des formulations ci-dessus sont stoc-30 kées à différentes températures pendant différentes périodes. Après cette période de stockage, an analyse les échantillons pour déterminer leur perte d'efficacité, c'est-à-dire la dégradation de la myxine cuivrique en myxine et la réduction subséquente de la myxine. Les résultats sont donnés ci-après. 72 15949 -8- 2137543 Maintien pour cent de l'activité de la myxine cuivrique Formulation II-A II-B II-C Après 3 jours à ?0°C 85 105 72 Après 1 mois à 45°C 115 109 91 Après 2 mois à 45°C 115 109 76 Après 3 mois à 37°C 113 109 74 Après 1 mois à 55°C 116 108 69 10 Exemple 3 Cet exemple illustre l'effet de l'addition d'un excès molaire de 10 % et 20 % d'excès de cuivre à des formulations de myxine cuivrique antimastitis. On prépare les formulations suivantes î 15 Ingrédients III-A III-B III-C III-P Myxine cuivrique, mg 0,588 1,18 Monooléate de polyéthylène sorbitan (Tween 80), mg 60,0 60,0 20 Este^Ô*acide gras du sorbitan (Span 80), mg 40,0 40,0 Hydroxypropylméthylcellulose (Méthocel 15 HG 4000), mg - - Alcool benzylique, ml 0,01 ' 0,01 Acétate de sodium, 3H20, mg 25 Acétate cuivrique, H^O, mg - - Chlorure de sodium, mg - Hydroxypropyleellulose à 2 % (Klucel HA) dans l'eau distillée désionisée, q.s. . - - 30 1,05 1,75 22,5 22,5 0,01 0,01 2,0 2,0 0,038 0,12 8,5 8,5 1,0 g 1,0 | 10 20 Excès molaire % de cuivre - Des échantillons de chaque formulation sont stockés à différentes températures pour des durées différentes et sont titrés après stockage pour déterminer la perte en myxine cuivrique. Les résultats sont donnés ci-après. 72 15949 -9- 2137543 10 15 20 25 30 35 Maintien pour cent de l'activité de la myxine cuivrique Après stockage 4°C pendant 5 mois 4°C pendant 6 mois 25°C pendant 6 mois 36°C pendant 6 mois à 45°C pendant 3 mois à 55°C pendant 1 mois III-A 56 50 III-B III-C III-D 69 51 101 100 92 88 106 105 107 98 Exemple 4 Cet exemple illustre l'accroissement de stabilité obtenu par l'emploi de quantités accrues d'un excès de cuivre. On prépare les suspensions suivantes : grammes/kg Ingrédients Myxine cuivrique PVP E-90 Propylène glycol Solution tampon Eau distillée - Excès de cuivre (molaire %) 2,0 IY-A 5,1 25,0 249,9 720,0 IV—B 5,1 25,0 249,0 720,0 10 IV-C (témoin) 5,1 25,0 249,9 720,0 0 PVP K-90 est une marque commerciale de GAF Corp. pour une polyvinylpyrrolidone ayant un poids moléculaire moyen de 360.000 et une valeur K (calculée selon Fikentsctier) de 80-100. Ces formulations diffèrent seulement par la composition des solutions tampon comme indiqué ci-après. grammes par kg de formulation Solution tampon Solution tampon Ingrédients Acétate cuivrique, H„0 Acétate de sodium, 51^0 Acide acétique glacial Chlorure de sodium Eau distillée q.s. pour IV-A 0,055 2,041 0,05 720 pour IV-B 0,175 2,041 0,05 8,5 720 Les formulations sont stockées à différentes températures pendant des durées différentes et sont titrées après stockage pour déterminer la perte en myxine cuivrique. Les résultats sont donnés ci-après. 72 15949 -10- 2137543 Stockage Initial à 25°C 3 jours à 70°C 6 mois à 25°C 1 mois à Maintien pour cent de l'acti-vité de la myxine cuivrique IV-A IV-B IV-G (témoin) 92 101 90 81 102 72 101 102 80 74 102 40 72 Î5949 -11- 2137543 - RE?ENDICA!I?I OKS - 1 - Procédé pour la stabilisation de préparations pharmaceutiques contenant le complexe de cuivre II du 6-méthoxy-1-phénazinol 5*1Q-dioxyde caractérisé en ce qu'on ajoute à la com- 5 position une quantité d'un sel soluble de cuivre II suffisante pour assurer un excès molaire d'environ 2 % à environ 20 % d'ions cuivre II sur la base de la teneur en cuivre dans ledit complexe de cuivre II. 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en 10 ce que la quantité de sel de cuivre II ajoutée assure un excès molaire de cuivre d'environ 10 %. 3 — Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que le sel de cuivre II est l'acétate de cuivre II monohydraté. 15 4 - Procédé selon l'une des revendications 1 à 3» ca ractérisé en ce que le sel de cuivre II est ajouté par une solution tampon stabilisante comprenant, en plus du sel de cuivre II, un sel de métal alcalin comportant le même radical anionique que le sel de cuivre II et l'acide correspondant, ladite solution 20 tampon ayant un pH de 5,7 à 6,2. 5 - Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que le sel de cuivre II est l'acétate de cuivre II monohydraté, le sel de métal alcalin est l'acétate de sodium et l'acide est l'acide acétique. 25 6 - Procédé selon la revendication 5» caractérisé en ce que les ingrédients sont ajoutés en quantité suffisante pour fournir environ 0,5 % en poids, basés sur le poids total de la composition du complexe de cuivre II du 6-méthoxy-1-phénazinol 5,10-dioxyâe» environ 0,02 % en poids, basés sur le poids total 30 de la composition, d'acétate de cuivre II monohydraté et 0,2 % en poids, basés sur le poids total de la composition d'acétate de sodium trihydraté. 7 - Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contientt comme ingrédient actif, le complexe de cuivre 35 II du 6-mé thoxy-1-phénazino1 5,10-dioxyde et, comme stabilisant, un excès molaire d'environ 2 % à environ 20 % d'ions cuivre II, basés sur la teneur en cuivre dudit complexe de cuivre II. 72 15949 -12- 2137543 8 - Composition pharmaceutique selon la revendication 7, caractérisée en ce que l'excès de cuivre provient d'une solution tampon stabilisante contenant un sel de cuivre II soluble dans l'eau tamponnée à un pH de 5,7 - 6,2 par l'emploi d'un sel 5 de métal alcalin ayant le même radical anionique que le sel de cuivre II et l'acide correspondant. 9 - Composition pharmaceutique selon la revendication 8, caractérisée en ce que le sel de cuivre II est l'acétate de cuivre II monohydraté, le sel de métal alcalin est l'acétate de 10 sodium trihydraté et l'acide est l'acide acétique» 10 - Composition pharmaceutique selon la revendication 9, caractérisée en ce qurelle contient environ 0,5 % en poids, basés sur le poids total de la composition, du complexe de cuivre II du 6-méthoxy-1-phénazinol 5,10-dioxyde et une solution tampon 15 aqueuse contenant environ 0,02 %, basés sur le poids total de la composition, d'acétate de cuivre II monohydraté et environ 0,2 % en poids, basés sur le poids total de la composition, d'acétate de sodium trihydraté. 11 - Composition pharmaceutique caractérisée en ce 20 qu'elle contient, comme ingrédient actif, le complexe de cuivre II du 6-jméthoxy-1-phénazinol 5,10-dioxyde, et, cornue stabilisant, un excès molaire d'environ 2 % à environ 20 % d'ions cuivre II, basés sur la teneur en cuivre dudit complexe de cuivre II, pour autant qu'elle est préparée par un procédé selon l'une des re-25 vendications 1 à 7.