FR 2092023 A1 19720121 FR 7112468 A 19710408 71 12463 1 « 2092023 La présente invention concerne un nouveau dipepti-de-amide et les médicaments qui renferment ce composé à titre de substance active. Le dipeptide-amide en question répond à la formule 5 . C&2 - CH2 Pyr-His-N (l) \H2 - CH2 10 dans laquelle Pyr désigne le reste L-pyroglutamyle et His le reste L-histidyle. L'invention concerne également un procédé de préparation du composé de formule I, selon lequel : ou bien on condense, suivant des méthodes bien connues 15 dans la chimie des peptides, l'acide L-pyroglutamique ou un dérivé de l'acide glutamique répondant à la formule générale II NH-Mbh 20 f (II) Ac-Glu-OH dans laquelle Àc désigne le reste tertiobutyloxy-carbonyle, benzyloxy-carbonyle, adamantyloxy-carbonyle ou isobornyloxy-carbonyle et Mbh désigne le reste 4,4'-diméthoxybenzhydryle, avec le L-histidyl-pyrrolidide répondant à la formule III 25 /CH2 ~ CH2 H-His-N \ (III) CH2 - CH2 ou bien on fait réagir le dipeptide répondant à la.formule 30 générale IV NH-Mbh i Ac-Glu-His-OH (IV) dans laquelle Ac et Mbh ont les significations données 35 ci-dessus, avec la pyrrolidine (formule V) CH„ - CH. X HN ^ch2 - CH2 (V) 40 à l'aide du dicyclohexyl-carbodiimide, en présence du N-hydroxy-succinimide, du 1-hydroxy-benzotriazole ou de la 71 12463 2 2092023 3-hydroxy~4-oxo-3,4-dihydro-1,2,3-benzotriazinê,° et, lorsque le produit réactionnel est ledipeptide-amide répondant à la formule générale VI on le convertit, par ébullition dans de l'acide trifluoro-10 acétique, en le composé pyroglutamique (I). Le dipeptide-amide conforme à l'invention possède, chose étonnante, une haute activité TRH (TRH = Thyreotropin-Releasing Hormone), qui n'est qu'un peu inférieure à celle de la TRH naturelle. Mais étant un composé dipeptidique, elle est beaucoup plus facile à obtenir que la TRH naturelle, même si 15 celle-ci est préparée synthétiquement. Le procédé conforme à l'invention met en oeuvre des méthodes bien connues dans la chimie des peptides, dont quelques-unes se sont avérées particulièrement avantageuses. L'une de ces méthodes part du composé de formule 20 générale III, préparé d'une manière connue par condensation de Z-His-OH (c'est-à-dire la N-benzyloxy-carbonyl-L-histidine) ou de Z-His-N-j (autrement dit l'azide de la benzyloxy-carbonyl-histidine) avec la pyrrolidine (V) et élimination ultérieure du groupe Z par hydrogénolyse ou par solvoiyse protonique. La 25 réaction de l'acide L-pyroglutamique a lieu dans des solvants, tels que le diméthyl-formamide, le tétrahydrofuranne ou l'acétate d'éthyle, avec le dicyclohexyl-carbodiimide, éventuellement en présence d'un composé générateur d'esters actifs, par exemple le N-hydroxy-succinimide, le 1-hydroxy-benzotriazole ou la 30 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-1,2,3-benzotriazine : au début de la réaction on maintient une température allant de -10 à 0°C et on termine la réaction à la température ambiante. Il est particulièrement avantageux de faire réagir l'amide de formule III avec des esters actifs de l'acide L-pyroglutamique, tels que 35 l'ester 2,4,5-trichloro-phénylique ou l'ester N-hydroxy-succinimi-. dique dans l'un des solvants mentionnés. On opère de préférence à la température ambiante ou à une température peu élevée. Pour purifier le dipeptide-amide conforme à l'invention on filtre le produit, par exemple à travers une colonne à échangeur. d'ions 40 basique, tel que Amberlite IR-45 ou IRA-400, on concentre le 5 NH-Mbh Ac-Glu-His-N (VI) ^ca, - CE. 71 12468 3 2092023 filtrat, on triture le résidu-avec de l'éther et on recristallise dans une petite quantité d'éthanol en ajoutant de l'acétone, de l'acétate d'éthyle ou de l'éther. • -! On peut faire réagir également l'amide (LU) avec 5 les dérivés de l'acide glutamlque répondant à la formule générale II. On prépare Z-Glu(NH-Mbh)-OH, par exemple, d'après Chem. Ber. 103 (1970), page 2041. Si l'on élimine de ce composé le groupe Z par hydrogénolyse et qu'on acyle le produit réactionnel avec le tertiobutyloxy-carbonyl-azide, le chlorure 10 d'adamanty1oxy-carbony1e ou le chlorure d'isobornyioxy-car-bonyle, on obtient d'autres composés de formule générale II. On fait réagir ceux-ci de la même manière que l'acide L-pyroglutamique 'avec les amides (III). On obtient de cette manière des produits intermédiaires de formule générale VI, qui cris-,15 tallisent remarquablement bien. Cette propriété facilite considérablement la purification. Pour éliminer les groupes protecteurs et, en même temps, eycliser le radical glutamyle en radical pyro-glutamyle, on fait bouillir pendant une durée de 30 minutes à 20 1 heure dans de l'acide trifluoro-acétique contenant environ 10 % d'anisole. On évapore ensuite à siccité sous vide et on filtre à travers un echangeur d'ions basique, par exemple Amberlite IR-45 ou IRA-400. Le filtrat est lyophilisé.' Suivant une autre méthode avantageuse, on part du 25 composé de formule générale IV, que l'on obtient par exemple par condensation de Ac-Glu(NH-Mbh)-0H avec H-His-OMe et par saponification du dipeptide-ester. On fait réagir avec la pyrrolidine dans le diméthylformamide ou le diméthyl-acétamide comme solvant, en présence du dicyclohexyl-carbodiimide comme 30 agent de condensation, avec addition de composés générateurs d'esters actifs, par exemple le N-hydroxy-succinimide, le 1-hydroxy-benzotriazole ou la 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-1,2,3-benzotriazine, et on obtient, là encore, le composé (VI) qui est facile à purifier et que l'on transforme, de la manière dé-35 crite ci-dessus, en le composé (I) conforme à 1Jinvention. Il est bon d'opérer, au début de la condensation, à une température allant de -10 à 0°C et de terminer "à la température ambiante. En médecine, le dipeptide-amide conforme â l'in-40 vention sert pour 1Texploration de la fonction hypophysaire, 71 12468 4 2092023 exploration qui repose sur la mesure du taux d'incorporation de l'iode lors de la formation de la thyroxine, et pour le traitement de l'hypothyroïde et de ses conséquences, par exemple le myxoedème, chez 1'homme et l'animal. 5 La posologie du composé peut varier entre dès limites éloignées. Tandis qu'on observe déjà un effet avec une dose de 1 à 10 mg chez l'homme dans 'le cas dé l'administration intraveineuse et qu'on administre notamment de 10 à 50 mg, on peut donner, per os, une dose allant jusqu'à 1000 mg, à la suite 10 de quoi l'effet est nettement prolongé. Les exemples qui suivent illustrent la présente invention. EXEMPLE 1 : . (a) Z-His-pyrrolidide. 15 On ajoute, à 0°C, 10 ml de pyrrolidine à une solu tion de 10,5 g de Z-HLs-azide dans 100 ml d'acétate d'éthyle. On conserve le mélange pendant 15 à 20 heures à +4°C. Après avoir ajoute 200 ml supplémentaires d'acétate d'éthyle on lave avec 100 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium. 20 On sèche la phase d'acétate d'éthyle sur dû sulfate de magnésium et on l'évaporé. On dissout le résidu dans 100 ml de méthanol à 90 # et on filtre la solution à travers 50 ml d'échangeur d'ions Amberlite IR-45 (sous la forme OH). On lave avec du méthanol à 90 %, on porte le filtrat à siccité sous vide à 25 une température de bain de 30 °C et on triture le résidu avec de l'éther. Rendement : 9,7 g.Rf = 0,65 (méthanol/eau dans le rapport 8/2). (b) Acétate de H-Hi s-pyrroli dide On hydrogène catalytiquëïnent 6,9 S de Z-His-30 pyrrolidide dans 100 ml d'acide acétique à 90 % en présence de palladium. Après evaporation.de la solution il reste une huile que l'on triture avec de l'éther-absolu. Rendement : 5> 1 g. Un échantillon de l'huile fournit avec une solution d'HCl dans l'éther, le dichlorhydrate (point de fusion 242°C). 35 (c) Pyr-His-pyrrolidide On met en suspension 2,0 g du composé obtenu suivant (b) dans 30 ml de diméthylformamide. On ajoute à la suspension une solution de 3,1 g de pyroglutamate de 2,4,5-trichloro-phényle dans 25 ml de diméthylformamide et on agite 40 pendant 20 heures à 0°C ou pendant la nuit à la température 71 12468 5 2092023 ambiante. Après élimination du solvant par distillation on fait cristalliser le résidu par trituration avec de l'éther. Rendement : 4,3 g. Recristallisation dans un mélange d'éthanol et d'acétone. — - 22° (c = 0,5 dans méthanol/éthanol - 1/1). 5 EXEMPLE 2 : (a) Z-Gln(Mbh)-His-OMë On dissout dans 220 ml de chloroforme 16,5 g de Z-Gln(Mbh)-OH, 7,85 g de H-His-0Me.2 HC1, 8,8 g de 1-hydroxy-benzotriazole et 9,0 ml de triéthylamine. On ajoute, à 0°C, 10 une solution de 7,2 g de dicyclohexyl-carbodiimide dans 12 ml de chloroforme et on agite pendant 3 heures à la température ambiante. Ensuite, bien qu'il y ait un précipité, on chasse le chloroforme par distillation et on dissout le résidu dans 60 ml de diméthylformamide chaud. On élimine alors par filtration la 15. dicyelohexyl-urée non -dissoute et on verse la solution dans 400 ml d'eau. On essore le précipité gélatineux, on le lave à l'eau et à l'éther et on le sèche à l'air. Rendement : 21,3 g. (b) Z-Gin(Mbh)-Hi s-OH On dissout 20,5 g de Z-Gln(Mbh)-His-OMe dans 20 un mélange de 40 ml de méthanol, 65 ml d'eau et 160 ml de dioxanne et on saponifie l'ester à pH 12,7 en ajoutant goutte à goutte une solution normale de NaOH et en contrôlant le pH dans 1'auto-titreur (Autotitrator). Consommation 45,2 ml de NaOH 1N. On ajoute ensuite 45,2 ml de HC1 1N, on concentre sous vide à un 25 petit volume et on ajoute beaucoup d'eau. On essore le précipité et on le sèche. Rendement : 14,4 g. Pour la purification on fait bouillir deux fois avec delléthanol. Rendement 11,5 g (c) Z-Gln(Mbh)-His-pyrrolidide On ajoute 0,50 ml de pyrrolidine à une suspension de 30 3,2 g de Z-Gln(Mbh)-His-OH et 1,35 g de 1-hydroxy-benzotriazole dans 30 ml de diméthylformamide, puis, à 0°C, on ajoute une solution refroidie de 1,,1 g de dicyclohexyl-carbodiimide dans le diméthylformamide. On agite pendant 1 heure à 0°C et pendant une autre heure à la température ambiante, on essore le précipité 35 et on concentre le filtrat. On triture le résidu avec une solution 2N de carbonate de sodium, on essore et on lave à l'eau. On recristallise la substance dans l'acétate d'éthyle. Rendement : 2,7 g (79 %). 71 12463 6 2092023 (d) Pyr-His-pyrrolidide. On chauffe à reflux, pendant une durée de 1,5 à 2 heures, 1 g de Z-Gln(Mbh)-His-pyrrolidide avec 0,5 ml d'ani-sole dans 5 ml d'acide trifluoro-acétique. On élimine l'acide 5 trifluoro-acétique par distillation sous vide et on distribue le résidu entre l'éther et l'eau. On secoue de nouveau la phase éthérée avec de l'eau. On clarifie au moyen de charbon actif les phases aqueuses combinées et on les fait passer à travers un échangeur d'ions très basique (par exemple Serdolite 10 Bleu). On lyophilise l'éluat. Rendement : 313 mg (67 %). Recristallisation dans un mélange d'éthanol et d'acétone. 71 12^63 7 2092023 K E V E W D I C A II OMS 1.- Dipeptide-amide répondant à la formule I ch2 - ch2 5 . . Pyr-His-N | ■ ; • (I) ^CHg - CH2 dans laquelle Pyr désigne "le reste L-pyroglutamylè et His le reste L-histidyle. 2.- Procédé de préparation du composé de formule I 10 selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on condense l'acide L-pyroglutamique ou un dérivé de l'acide glutamique répondant à la formule générale II NH-Mbh 15 1 lD Ac -Glu-OH (II) dans laquelle Ac désigne le reste tertiobutyloxy-carbonyle, benzyloxy-carbonyle, adamantyloxy-carbonyle ou isobornyloxy-carbonyle et Mbh désigne le reste 4,4'-diméthoxy-benzhydryle, 20 avec le L-histidyl-pyrrolidide (formule III) cHg - CH2 H-His-N ch2 - ch2 (III) ^ et, si la réaction a donné un composé de formule VI NH-Mbh ^CH2 _CIj2 Ac-Glu-His-N 1 (VI) ^-CH2 - CH2 30 on transforme celui-ci en le dipeptide-amide (i) par ébullition dans de l'acide trifluoro-acétique 3.- Procédé de préparation du composé de formule I selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on fait réagir le dipeptide répondant à la formule générale IV 55 NH-Mbh I Ac -Glu-His-OH (IV) dans laquelle Ac et Mbh ont les significations données à la revendication 2, avec le pyrrolidine (formule V) 71 12463 8 2092023 ^CH2 - CH2 HN (V) CH2 - CH2 ^ à l'aide du dicyclohexyl-carbodiimide en présence du N-hydroxy-succinimide, du 1-hydroxy-benzotriazole ou de la 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro~1,2,3-benzotriazine, et on transforme en le dipeptide-amide de formule I le produit réactionnel répondant à la formule générale VI 10 NH-Mbh GHg - CH2 Ac-Glu-His-N (VI) 15 par ébullition dans de l'acide trifluoro-acétique. 4.- Procédé de préparation de compositions pharmaceutiques ayant une action sur la sécrétion de la thyréo'tro-phine par l'hypophyse, caractérisé en ce qu'on présente le dipeptide-amide spécifié à la revendication 1 sous une forme 20 d'administration convenant à des fins thérapeutiques ou diagnostiques. 5.- Médicaments agissant notamment sur la sécrétion de la thyréotrophine par l'hjpophyse» caractérisés en ce qu'ils contiennent le dipeptide-amide selon la revendication 1 en une 25 dose allant de 1 à 1000 mg par unité de prise.