FR 2077750 A1 19711105 FR 7004784 A 19700211 70 04784 1 2077750 L'invention porte sur les produits définis par la formule suivante : _ q _ 0=C HO. «2 \ 1 1 10 l R, 3 OH R, où R^ et Rg désignent chacun un atome d'hydrogène ou forment ensemble une double liaison, 15 R^ représente un hydrogène ou un fluor, R^ représente un hydrogène ou un groupe méthyle, Rcj désigne le radical acyle dérivant d'un amino-acide soufré tel que la méthionine ou la cystéine, dans lequel le groupe amino est relié à un groupe 20 protecteur tel que le groupe benzyloxy carbonyle ou le groupe acétyle et où l'atome de soufre est attaché à un radical méthyle ou à un groupe protecteur en particulier le groupe benzyloxy carbonyle ou le groupe benzyle. 25 Appliqués localement ces produits présentent une activité anti-inflammatoire très intéressante et, en général, largement supérieure à celle des stéroîdes anti-inflammatoires dont ils sont issus. L'invention comprend en outre un procédé de préparation 30 des composés définis ci-dessus, procédé qui est une application de lâ méthode de W.T. MQRELAND (Journal of Organic Chemistry, 1956, 21_, 820 ; SHUNSAKU NOGUCHI, Yakugaku Zasshi, 1961, 81., 373). Selon ce procédé , on fait réagir le dérivé d'amino-acide soufré R^-OH, R^ ayant la définition indiquée ci-35 dessus, avec le dérivé iodé en 21 de l'alcool répondant à la formule 2077750 0 On peut conduire la réaction d'esterification en ^ présence d'un accepteur d'acide iodhydrique, en particulier de triéthylamine en utilisant, de préférence, comme diluant, le diméthylformamide au lieu de l'acétone,, diluant habituellement employé. Pour préparer l'amino-acide Rc-0H à fonction aminé 15 ■ -* et à fonction thiol bloquées, on peut appliquer le procédé décrit par Stephan GOLDSCHMIDT et Christian JUTZ dans Chemische Berichte, 1953* 86, 1116 ou le procédé décrit par WOOD et Du VIGNEAUD dans Journal of Biological Chemistry, 1939» 130, 110. Pour isoler l'ester stérolique.cherché, on peut ajouter au 20 milieu réactionnel un diluant tel que l'acétate d'éthyle ou le chlorure de méthylène, laver la solution organique plusieurs fois avec de l'eau pour éliminer le diméthyl formamide, sécher avec du sulfate de sodium et évaporer le diluant. On peut purifier le composé résiduaire obtenu soit par cristallisation O C - ' dans un solvant tel que 1'isopropanol, soit par mise en solution dans un hydrocarbure tel que le benzène puis précipitation par de l'éther de pétrole, cette opération pouvant être précédée, le cas échéant, d'une chromatographie. Les produits se présentent sous la forme de poudres blanches et se révèlent purs à l'étude chromatographique. Les points de fusion ne sont pas absolument caractéristiques de la pureté, la fusion étant précédée, d'un ramollissement. Ils sont cependant mentionnés, à titre indicatif, dans les exemples. ^ Les spectres IR correspondent aux structures mentionnées et présentent en particulier, entre 1500 et 1550 cm~^, pour les composés en dispersion dans KBr, une large fcande que l'on peut attribuer à la bande amide II. Les spectres de RMN sont en accord avec les structures 40 annoncées. 70 04784 70 0478'+ 3 2077750 La préparation des dérivés iodés en 21 peut être conduite, selon les procédés cités ci-dessus, en deux étapes à partir des stérols portant en 21 une fonction alcool : d'abord l'action de chlorure d'acide p-toluène sulfonique dans du 5 diméthyl fortnamide qui fournit quantitativement le dérivé chloré, puis l'action d'iodure de sodium dans de l'acétone qui forme le dérivé iodé attendu. Pour obtenir ce dernier, on peut également utiliser le méthane sulfonate de l'alcool stéroïdique au lieu de son 10 dérivé chloré. Le méthane sulfonate peut être obtenu par l'action, au bain de glace, de chlorure de méthane sulfonyle dans de la pyridine sur l'alcool stéroïdique envisagé. Le tableau suivant fait apparaître, par référence à la formule donnée au début, la structure de composés typiques 15 faisant l'objet de l'invention ; il renvoie en outre aux exemples donnés plus loin. N° de référence R1 R2 H? r4 R5 Exemple N° 28 001 H H H H CH2-CH2-S-CH5 -C0-CH ^ NH-CO-CH-, 3 1 28 006 désignent une liaison supplémentaire H H „CH0-CH~-S-CHU / d d. } -CO-CH ^NH-CO-CH, 3 2 28 017 -d°- H H , CH0-CH0-S-CH-, / d d * J -CO-CH \NH-COOCH2-C6H5 3 28 018 -d°- h h , CH^-S-COOCH^-C^-H,-2 2 6 5 -CO-CH \ NH-C00CH2-CgH5 4 28 019 -d- h h . ce^-s-chg-cghj- -C0-CH \nh-cooch2-c6h5 5 BAD ORIGINAL- 70 04784 2077750 N° de référence R-j R2 R3 R4^ V Exemple N° 28 007 désignent une liai- „ son supplémentaire oh-, 3^ -co- „chg-chg-s-ch^ ■ch xnh-c0ch, 3 6 5- 394 -d°- P ch, 3 -co- ^ ch0-ch0-s-ch, ■ch 2 2 3 7 nh-c00cho-c^h_ 2 6 5 5 395 -d°- F ch, 3 ^•ch2-s-cooch2-c6h 5 -co- •ch \.nh-c00cho-c,-hc 2 6 5 8 5 396 -d°- P ch3 -CO-r / ch2-s-ch2-c6h5 ■ch \NH-C0-0-CH2-CgH5 9 5 397 -d°- P ch, 3 -c0- ^-ch -s-co-o-ch^-c •ch " * ^nh-co-ch, 3 /-Hc 6 5 10 5 398 -d°- P ch, 3. -co- /ch2-s-ch2-c6H5 •ch ^nh-co-ch^ 11 10 15 20 25 'Dans les exemples qui suivent, les spectres de RMN ont été effectués sur un appareil Varian A.60., en solution dans le deutério chloroforme, avec le tétraraéthyl silane comme 30 référence interne. Les spectres IR ont été déterminés en dispersion dans KBr, EXEMPLE 1 : (Acétylamino-5 dioxo-1,4 oxa-3 thia-8 nonyl)-17!3 dihydroxy-11 p , 17otoxo-3 androstène-4. ( 28 001 CB). ^5 On dissout 5 g du dérivé iodo en 21 de 1'hydrocortisone (0,0106 mole) et 6,07 g de N-acétyl méthionine (0,0318 mole) dans 50 cm^ d'acétone sèche. On ajoute -9 cxrP de triéthylamine, on maintient la solution avec agitation pendant deux heures à 30°, BAD original 70 04784 5 2077750 et on chasse sous vide l'acetone et la triethylamine en exces. On reprend la masse visqueuse avec 200 cnr de chlorure de méthylène, on lave soigneusement la solution trois fois à l'eau, on la sèche sur du sulfate de sodium et on évapore le solvant. 5 On obtient le produit à l'état brut sous la forme d'une poudre blanche. Par chroraatographie sur du gel de silice (élution au benzène-acétate d'éthyle) on recueille le produit pur après évaporation du solvant, dissolution du résidu dans le benzène et précipitation dans l'éther de pétrole. 10 P = 108-110° (microplatine) Le spectre de RMN du produit présente quatre pics principaux dont le déplacement chimique et l'intensité correspondent aux groupements CH^ dans S - CH^ (2,1 ppm) ; CH^ dans 0 4 - CH, 3 15 (2,0 ppm) ; méthyl-18 et méthyl-19 (0,95 et 1,45 pptn). Le spectre infrarouge présente, entre autres, plusieurs bandes caractéristiques : bande amide II vers 1530 cm~^ et bandes C = 0 vers 1645, 1715 et 1740 cm~^. 20 EXEMPLE 2 : (Acétylamino-5 dioxo-1,4 oxa-3 thia-8 nonyl)-17p dihydroxy-11p,17a oxo-3 androstadiène-1,4 (28 006 CB). Dans 90 cm^ de diméthyl fortnamide on dissout 8,8 g du dérivé iodé en 21 de la prednisolone et 10,75 g de N-acétyl 25 méthionine et on ajoute 8,1 cm^ de triethylamine. On maintient la solution, avec agitation, pendant deux heures à 30°, on ajoute 350 cm^ de chlorure de méthylène et on verse dans 1,5 litre d'eau. Après isolement et chromatographie selon la technique exposée dans l'exemple 1, on obtient le produit à l'état pur. 30 P " 1 16-117° (microplatine). Spectre de RMN : CH^ dans S-CH^ (2,12 ppm); CH^ dans iî: -CH^ (2,01 ppm) ; méthyl-18 et méthyl-19 (0,96 ppm et 1,47 ppm). — 1 Spectre infrarouge : bande amide II vers 1530 cm ; ^ bandes C=0 vers 1650 ctn"\ 1715 et 1740 cm-1. EXEMPLE 3 : (Benzyloxy-carbonylamino-5 dioxo-1,4 oxa-3 thia-8)-173 dihydroxy-11(3 17a oxo-3 androstadiène-1,4 (28 017 CB). 40 70 04784 6. 2077750 On dissout 4,5 g du dérivé iodé en 21 de la prednisolone dans 20 cra-^ de diméthyl formamide. On ajoute 5 cnp de triethylamine et 3,38 g (1,25 équivalent) de N-benzyloxy-carbonyl DL-méthionine. Cette solution est maintenue pendant 5 une heure avec agitation à 45°. Après traitement par de l'acétate d'éthyle, lavages successifs avec une solution aqueuse diluée d'acide chlorhydrique puis de carbonate de sodium, une solution diluée de bisulfite, enfin de l'eau, séchage et évaporation, on obtient le produit brut. On reprend ce produit 10 par du méthanol et on traite au noir décolorant. Après filtra-tion et évaporation du méthanol on dissout le produit dans le minimum de benzène et on le précipite dans de l'éther de pétrole. F = 92-94° (microplatine). Le spèctre de RMN présente, en particulier, cinq pics : 15 méthyl-18 et méthyl-19 (0,95 ppm et 1,46 ppm) y CH^ dans S-CH^ (2,1 ppm) ; CH2 dans CgH^C^ (5,11 ppm) ; CgH^. (7,33 ppm). EXEMPLE 4 : (Benzyloxy-carbonylamino-5 phényl-10 trioxo-1,4,8 dioxa-3,9 thia-7 décyl)-17p dihydroxy-11p , 17a 20 oxo-3 androstadiène?1,4 (28 018 CB). On opère selon la technique employée pour l'exemple 5, en remplaçant la N-benzyloxy-carbonyl DL-méthionine par la N,S-dibenzyloxy-earbonyl L-cystéine en quantité stoechiométrique. 25 F = 90-92°(microplatine). Spectre de RMN : CgH,- (7,3 ppra) î CHg dans -NH-C00-CH2-C6H5 ( 5,2 ppm) ; CH2 dans S-COO-CI^-Cg^ pmj. méthyl-18 et méthyl-19 (1,45 ppm et 0,95 ppm). EXEMPLE 5 : (Benzyloxy-carbonylamino-5 phényl-8 dioxo-1,4 oxa-3 thia-7 )-17 P dih3^droxy-11 a , 17 g oxo-3 androstadiène-1,4 (28 019 CB). . . . .. On le prépare selon la technique décrite dans, l'exemple 3 en remplaçant la N-benzyloxy-carbonyl DL-méthionine. tpar:la -N-benzyloxy S-benzyl L-cystéine en quantité stoechiométrique. F - 88-90°. • Le spectre de RMN présente, entre autres, six pies caractéristiques des groupements suivants : 7 2077750 gnoIoginfcsTq si ' _ deux groupements C/-Hj- : l'un à 7,33 PP®, 95 l'autre à 7,28 ppm p -CHg dans la chaîi^e COOCH^-CgH^ à 5,11 ppro 3ns£>rîsq sur:-ob Tsq SéaSSÏÇIffofojIo bcz -CH^ dans la chaîne S-CHg-CgH,- à 3,75 PP® -méthyl-18 et méthyl-19 à 1,45 ppm et 0,92 ppm. (Acétylamino-5 dioxo-1,4 oxa-3 thia-8 nonyl)-9 dihydroxy-11 ft 17a fluoro-9a méthyl-l6a oxo-3 .te 3gf;rio9a androstadiène-1,4 (28 007 CB). -■}iuboT'3 30 bn on dissout 9,5 S du dérivé iodé en 21 de la dôXâmëlhâéSSê et 17 g de N-acétyl méthionine dans 100 cm^ de dîéé€fi^l Féi'feamide. On ajoute 15 cnp de triéthylamine. On mâifi^ïèïït^Sa^solution à 40° pendant deux heures avec agitation, on reprend le résidu par 400 cra^ d'acétate d'éthyle, on lave : ëôîgnêûiêmeiïi la phase organique avec de l'eau carbonatée puis a^'êcr-unë=lblùtion diluée d'acide chlorhydrique, avec une ^ soluéïïéïnî éi-ïiiée de bisulfite de soude et enfin avec de l'eau. On sèche sur du sulfate de sodium, on évapore à siccité, on reprèîidt F = 125-127° (capillaire). on _ i r ^ Spectre de Ri®! : CH^ dans S-CH (2,1 ppm) et —I dans CO-CH, (^,03 ppm). s nci: spectre IR : Bande C=0 complexe vers 1660 cm ; large bande C=0 complexe de 1700 à 1760 cm ; large bande C=0 amide II 25 _1 vers 1540 cm . EXEMPLE 7 :r. ; * { 'Tr'"* ~ *-'0 » c" l r'* U ""i'A (Benzyloxy-carbonylamino-5 dioxo-1,4 oxa-3 thia-8 nonyl)-17 p dihydroxy-11 (3 , 17a fluoro-9a méthyl-l6a oxo-3 androstadiène-1,4 (5394 CB). ^50 :-3>.o +-. i --on dissout 3 g du dérivé iodé en 21 de la dexaméthaso- i t ôgyf 9grâé N-benzyloxy-carbonyl DL-méthionine dans 20 cm^ de diméthyl formamide. On ajoute 5 cm? de triethylamine. Après sâgÊta^ionî^eédant deux heures à 40°, on isole le produit selon le m 55 .p = 113-115° (capillaire). — 1 Spectre IR : autour de 1530 cm" (amide II) ; C0 conjugué vers 1650 cm-'' ; bandes com- 40 — 1 plexes C=0 autour de 1650 cm" et de 1715 cm-"' avec inflexion à .1750 cm"""', 70 04784 8 2077750 EXEMPLE 8 : (Benzyloxy-carbonylamino-5 phényl-10 trioxp-1.,4,8. dioxa-3,9 thia-7 décyl)-17p dihydroxy-11 -p, 17 a"'-fluoro-9a méthyl-16a oxoT3.androstadiène-1,4 (5395 CB). On dissout 10 g du dérivé iodé en 21 de la dexaméthasone 5 - « et 9,4 g de N,S-dibenzoylbxy-carbbnyl L-cystéine dans 100 crrr de diméthyl formamide. On ajoute 12 çuP de. triethylamine.. ■_ On chauffe durant quarante cinq minutes•avec agitation 10 à 60On isole le produit selon la technique décrite pour l'exemple 6. " F = 90-92° (capillaire). Spectre IR : large "bande autour de 1520 cm-'' (amide II) ; bandes C=0 complexes autour de 1650 cm et 1710 cm avec une inflexion vers 15 1750 cm-1. EXEMPLE 9 : (Behzyloxy-cârbohylamino-5 phéhyl-8 dioxo-1,4 oxa-3 thia-7 .octyl)-17 P dihydroxy-11(3 ' , 17a fluoro-9a méthyl-16 a 0x0-3 androstadiène-1,4 (5396 CB)* 2o On dissout 3,5 g du dérivé iodé en 21 de la dexa - méthasone et 3,2 g de N-benzylpxy carbonyl S-benzyl L-cystéine 3 * dans 35 cm de diméthyl formamide, on ajoute 6 cm- de- triéthylamine, on chauffe à 60° pendant une heure avec agitation et oh isole selon la technique décrite pour l'exemple 6. 25 F = 142-1-43° (capillaire). r . .Spectre IR : large bande autour de 1520 cm-'' ; bandes C=0 complexes autour de 1650, 1710 et 1750 cm"1. EXEMPLE 10 : . •30 (Acétylamino-5 phényl-10. trioxo-1,4,8. dioxa-3,9 thia-7 décyl)-17 p dihydroxy-11p , 17a fluor0-9 a méthyl-16 a oxo-3 androstadiène-1,4 (5397 CB). On dissout 3,5 g du dérivé iodé en 21 de la dexaméthasone et 2,7 g de N-acétyl S-berizyloxy-carbonyl L-cystéine dans 35 crn^ de diméthyl formamide, on ajoute 6 cm? de triéthylamine, on chauffe à 60° pendant une heure avec agitation et on isole.le produit commè indiqué sous l'exemple 6". ' F - 125-12.8° (capillaire). - : 35 70 04784 9 2077750 Spectre IR : large bande autour de 1530 cm ; bandes C=0 complexes autour de 1650, 1710 et 1740 cm EXEMPLE 11 : (Acétylamino-5 phényl-8 dioxo-1,4 oxa-3 thia-7 octyl)-^ 17P dihydroxy-11 t: , 1Jx. fluoro-Stx méthyl-l6a oxo-3 androstadiène-1,4 (5398 CB). On dissout 2,7 g du dérivé iodé en 21 de la dexa-méthasone et 1,7 g de N-acétyl S-benzyl L-cystéine dans 25 om^ de diméthyl formamide, on ajoute 5 cm^ de triéthylamine, on chauffe •jq pendant deux heures à 40° avec agitation et on isole le produit selon la technique décrite dans l'exemple 6. F = 95-97° (capillaire). Spectre IR : large bande autour de 1540 cm-'' ; bandes C=0 complexes autour de 1650, 1715 et 15 1740 cm-1. Les nouveaux composés ont été étudiés pour la recherche de propriétés anti-inflammatoires éventuelles par administration locale. Les épreuves suivantes ont été mises en oeuvre : 1.- Influence sur le développement du granulome sous-20 cutané au coton chez le rat - Etude par incorporation du produit à la boulette de coton. L'activité anti-inflammatoire topique de ces dérivés a été recherchée au moyen de l'épreuve du granulome expérimental (HERSHBERGER et CALHOUN Endocrinology 1957, 60, 153). 25 Cette épreuve consiste à implanter sous la peau du rat des boulettes de coton de même poids imprégnées du produit à étudier. Les essais sont effectués chez le rat mâle, élevage Charles River, d'un poids moyen de 200 grammes. Les animaux sont répartis au hasard en lots de 10 puis ■jO on réalise l'implantation des boulettes sous une légère anesthésie à l'éther. Chaque rat reçoit deux boulettes dans la région dorsale et deux boulettes dans la région pectorale. L'imprégnation des boulettes par les produits à étudier a été réalisée de la façon suivante : le produit est mis 25 en solution dans le dioxane et on fait varier la concentration de cette solution de manière à déposer sur chaque lot de boulettes, sous un même volume, des doses de produit allant de 0,001 mg à 4 mg par boulette. Avant d'être implantées, les boulettes sont placées en étuve pour faciliter 1'évaporation 70 04784 10. 2077750 du solvant organique. Pour chaque produit on expérimente ainsi plusieurs doses, chaque dose étant faite sur un lot de 10 rats. On joint à chaque expérience un lot de 10 rats témoins recevant 5 les mêmes boulettes de coton imprégnées du solvant seul, puis évaporé, dans les mêmes conditions. Le septième jour après l'implantation, les animaux sont sacrifiés. On prélève les granulomes formés autour des boulettes de coton imprégnées soit de produit, soit 10 de solvant seul. Ces granulomes sont séchée en étuve pendant 48 heures puis pesés. On compare le poids des granulomes traités et des granulomes témoins. Dans le tableau qui suit, les résultats sont 15 exprimés en pourcentage de variation du poids des granulomes traités par rapport au poids des granulomes témoins, en fonction de la dose de chaque produit. Le tableau est divisé en deux parties correspondant aux dérivés de la prednisolone et- aux dérivés de la dexaméthasone. Voir le tableau page suivante. r Produit l Dose de produit déposé sur chaque boulette de coton (en mg) 0,001 0,005 0,01 0,025 0,0311 0,05 0,0625 0,1 ! 0,125 0,25 0,50 ,1 4= 28 006 CB l-21-f5*«j 28 017 CB -11* L 26,6* i-£9,7*i l Dérivés ! de la v ! r- 1 r J Predniso-/ 28 018 CB ■-34,1*141,4* j-40,2* lone I .'i » : i- -43,7*", -49,2" -46,0*, 16V j 28 019 CB j -11,3*1-35,-26,8: i -45,4 -20,7* -40,7* -52* -64* -44,4' -64,7*• «57,5?* j -54' i-47,7* -49,4e -69,5* | -55* ^Prednisolone j +-t9,5T -17* -34, .8" /'28 007 CB ! ! . 1 —20,2 j !-32,4* ; ■ I '■! 1.-47,4* ' | j . 5 394 CB ! +2,4- !-v,i j ' ■ -52,9*i '-44,3* j t ît' ! -43,4* ' !. 1 i 1 ) ■ ! ■ i ! i : Dérivés de la 5 395 CB i -22,6 1 * *1-50* I -67,2*; i -48,3* ! i en c a i-55,4 i j 1 >. : ■ i y. : ■ i -Dexamétha-sone j 5 396 CB ! i i- -63,8*, » [ j -51 ,6* i . 1-53,1*} ! 'I : 1 ■ i 1 5 397 CB ! +2,4 ! :-24,i* ! : —58,5*: « ! ; -37,2 [ -44,0* ! : i i .• ! ! ! ' ! ' ! 5 398 CB | +0,2 |tÛ6,6* ! i *i I ;-44,9*! i ; | % j ;-27,6* 1 -33, S*; 1 i i i \ • Dexamétha-Vsone +10,6 35,5* i I j -34,8*| i l 1 |-18,8* | ! i ■i ! xk.) • j -34,9 j ! -61 ,1*1 : 1 st Résultats statistiquement significatifs "NI--O o 4> \! OO IV> O -vj VJ O 70 04784 12 2077750 Ainsi, tous les dérivés étudieront montré une activité anti-inflammatoire topique riëttei ' '' Parmi les dérivés de la prednisolone, le 28 006 CB a une activité, sensiblement égale à' celle de 'la prednisolone. 5 Les trois, autres dérivés, '28 017, 28 018 et 28 019 sont nettement plus actifs et c'est le dérivé 28 018 CB qui est le plus anti-inflammatoire. On retrouve des résultats à peu près semblables avec les dérivés de la déxaméthàsone. I,e 5395 CB se détache nettement 10 des autres produits. Il est encore très actif â 0,001 mg et il offre un effet antagoniste soutenu à la prolifération du tissu de granulation.. ■ - " - 2.- Action, topique à -l'égard de la nécrose à l'acide sulfurique chez le rat. - - - 15 L'épreuve a été pratiquée chez des rats Sherman de sexe mâle, épilés chimiquement. Une nécrose cutanée dorsale a été produite, sous anesthésie générale, par application d'acide sulfurique à 20 % pendant 90 secondes. Le produit 5395 CB,-le plus actif dans l'épreuve précé-20 dente, a été incorporé à deux doses à un excipient anhydre hydrophile ("Polyéthylène-glycol ointment" selon USP XVII). Le traitement a été appliqué par massage cutané de deux minutes chaque jour pendant cinq jours, à partir du troisième jour suivant la nécrose. Le pli cutané a été mesuré chaque jour. 25 Produit Concentration Variation du pli à en % 1'issue du traitement en % Excipient anhydre Dexaméthasone 5395 CB 0,001 0,001 + 1 -40 -47 Dexaméthasone 0,003 -54 5395 CB 0,003 -57 A faible concentration (0,001 %) la différence d'activité entre le 5395 CB et la dexaméthasone apparaît nettement. 3.- Pénétration cutanée. La pénétration transcutanée a été étudiée chez le rat simplement rasé. 70 04784 13 2077750 Rat Sherman ; peau saine : Après rasage à la tondeuse, une crème contenant la substance à étudier a été appliquée une fois par jour durant 5 jours sur les deux flancs, à l'aide d'un massage de 2 minutes 5 exactement. Un essuyage très soigneux a suivi chaque application L'excipient était le même que dans les essais rapportés plus haut (PEG ointment USP XVII) et la concentration choisie de 0,1 % (en Dexaméthasone). Les critères de pénétration choisis ont été les suivants 10 variation du poids corporel, taux des lymphocytes circulants/mm-^, rapport polynucléaires/mononucléaires, chacun par mm^, variation de poids du thymus et variation de poids de la rate. Les résultats sont rassemblés pour trois des composés dans le tableau suivant. (Voir tableau page suivante) Produit % &% ' A:* Poids Thymus rate corporel Lymphocytes polynucléaires neqtrophiles Lymphocytes mononucléaires Avant Après trai- % * Avant Après traitement tement traite- traite» ment ment A % * Rapport Poly Mono Avant Après trai- traitement tement Excipient +2,5 ' Référence Référence 3470 3475 +13 10335 12110 +18,9 0,336 0,28 Dexaméthasone -16,9 - -58,8 3840 61 10 +69,9 9350 16C0 —82,5 0,410 3,94 5395 : -15,7 -73,5 -56 2965 5490 +102 9740 1964 -79,5 0,304 2,80 5396 -16,6 -75,1 -65,6 2885 3910 +72,4 12045 1470 -87,7 0,240 2,66 5397 -18,5 -75,1 -57,9 2715 2965 +1 C,5 10155 886 -91 0,267 3,35 O O J> Xi co 4>' * Moyenne des variations individuelles. Cette valeur est donc différente du % calculé sur les valeurs moyennes. PO Q. V] VI U1 O 70 04784 15 2077750 A la concentration et dans les conditions expérimentales choisies, la pénétration cutanée s'est révélée très forte ce qui est conforme aux caractéristiques de la peau du rat qui possède un épiderme très mince, perforé de très nombreux 5 follicules pileux. A cette relativement forte concentration, peu de différences sont visibles entre les produits. Si l'on classe néanmoins chaque produit en fonction de la réponse obtenue pour chaque critère de pénétration, on obtient le classement global ci-dessous qui indique pour le 5395 CB la 10 pénétration la plus réduite, en faveur donc d'une action locale anti-inflammatoire de longue durée. Dans chaque cas, la plus forte action est affectée du rang 1. 15 Critère de pénétration Rang d'activité à l'égard de chaque critère de pénétration Excipient Dexaméthasone 5395 CB ^396 CB 5397 CB Poids corporel 5 2 - 4 3 1 A Thymus 5 1 4 2 2 /\Rate 5 2 4 . 1 3 A Lymphocytes 5 3 4 2 1 Apoly/mono 5 1 ; 3 4 2 Total 25 9 19 12 9 30 20 25 35 40 Rat Sherman - Peau nécrosée à l'acide sulfurique. Le protocole expérimental est le même que celui qui'a été indiqué sous 2. L'évolution du poids corporel ainsi que le poids du thymus et de la ratie à l'issue du traitement ont permis d'évaluer la pénétration des produits à travers la peau nécrosée. L'étude a été faite sur deux produits et pour deux concentrations. 70 04784 Résultats - :... 2'077750 Concen-. tration en % Variation du poids corporel -en % Variation du thymus en ' * Variation de la rate en % Excipient, anhydre' - ' +3,9 -34' -16,5 Dexaméthasone 0,001 -7,3 -49 -27,4 5395 CB 0,001 -1,2 -34,9 -7,8 5396 CB 0,001 0 -20,9 -3,2 Dexaméthasone 0,003 -9,2 -85 -9,5 5395 CB 0,003 -8,1 -86 -12,5 5396 CB 0,003 -7,5 -85 -29 En conclusion, pour ce qui concerne la pénétration cutanée, les composés 5395 CB et 5396 CB exercent, à la concentration de 0,001 $, des effets généraux plus faibles 25 que les autres produits mis en oeuvre, indiquant une pénétration à travers la peau nécrosée plus faible,donc une cértaine rétention au niveau de celle-ci. A plus forte concentration (0,003 fo), la pénétration générale est très élevée et se manifeste, comme pour la 30 dexaméthasone, par une involution importante du thymus et de la rate et une chute du poids corporel. Ainsi, les nouveaux composés, notamment ceux de la dexaméthasone, possèdent l'activité anti-inflammatoire du dérivé stéroïdique de départ mais leurs effets locaux sont plus favorables et leur diffusion générale,donc leurs effets secondaires généraux,sont plus limités. Le phénomène est particulièrement appréciable avec le 5395 CB. 70 04784 17 2077750 Le 5395 CB présente une spécificité locale particulièrement nette. Il peut être administré sous forme de pommade, crème, solution, émulsion, aérosol, implant et sous toute autre forme d'usage local pour application cutanée, muqueuse ou tissulaire. Il peut être appliqué pour le traitement d'affections locales, inflammatoires, allergiques et autres, justiciables de la corticothérapie locale, chez l'homme et les animaux. 70 04784 18 2077750 revendications 10 15 20 30 1.- Les composés répondant à la formule h2c-o-r5 c=0, r. ou 1 désignent chacun un atome d'hydrogène ou forment et r,. ensemble une double liaison ; représente un hydrogène ou-un fluor ; représente un hydrogène ou un groupe méthyle ; désigne le radical acyle dérivant d'un amino-acide soufré tel que la méthionine ou la cystéine, dans lequel le groupe amino est relié à un groupe protecteur tel que le groupe benzyloxy carbonyle ou le groupe acétyle et où l'atome de soufre est attaché à un radical méthyle ou à un groupe protecteur en particulier le groupe benzyloxy carbonyle ou le groupe benzyle. 2.- Ceux des composés revendiqués sous 1 qui répondent à la formule 25 hgc-o-co-c h CH2-r6 1Œ-ff-R7 0 h 35 dans laquelle R^ et ont les significations indiquées sous 1, R6 représente CHg-S-CH^, S-COO-CH^CgH^ ou S-CH^-CgE^ tandis que R^ représente CH^ ou 0 CH^ CgH^. 3.- Les composés revendiqués sous 2 et pour lesquels R1=R2=H. 4. -Les dérivés de prednisolone qui appartiennent à la classe définie sous 1 et qui répondent à la formule 0^x^0(^784 19 2077750 iso 30 35 40 /CH2- R6 HoC-O-C -C 2, || i ^ NH-C-R C=0 0 H & 7 où Rg et sontu définis comme sous 2. 10 5.- Ceux des composés revendiqués sous 1 qui répondent à la formule " ra ^ ^ ^ 6 " HoC-0-C0-C d! NH-C-R H |) 7 0 C=0 15 -C H_ dans laquelle Rg et R^. sont définis comme sous 2. 6.-*Le dérivé de dexaméthasone qui répond à la formule ';it- ' "Vï ÇHg-S-COOCHg-CgH^ 25 H0C- O - CO-C 2 1 I ^NH-C00CHo-C,-H H 2 6 5 - >7rr* Les. compositions pharmaceutiques qui renferment yn auvmoins des composés définis dans l'une quelconque des "•revendications précédentes. 8.- Les compositions pharmaceutiques, plus spécialement ^ •-vi.fiV" " : cèïlés' "qui sont destinées à la corticothérapie locale, qui comprennent'le dérivé de dexaméthasone défini dans la revendication 6 en tant que principe actif. ^.-"Un procédé de préparation d'un des composés spécifiés, dans l'une quelconque des revendications précédentes, 70 04784 20. 2077750 ce procédé étant caractérisé en ce qu'on fait réagir un dérivé d'amino-acide soufré répondant à la formule Rc - OH j> avec le composé iodé répondant à la formule H2Ç-1 C=0 iodhydrique. 10.- Procédé selon la revendication 9, caractérisé par le fait que la réaction est conduite dans du diméthyl formamide.