FR 2081428 A1 19711203 FR 7100732 A 19710112 71 00732 1 2081428 la présente invention concerne de nouvelles pénicillines, et elle a trait,en particulier,à une nouvelle classe de pénicillines qui sont des dérivés d'acide 6-aminopénicillanique et qui sont intéressantes comme agents antibactériens, comme suppléments nutri-5 tifs dans l'alimentation des animaux, comme agents destinés au traitement de la mammite de la vache et comme agents thérapeutiques pour la volaille et des animaux, y compris les êtres humains, notamment dans le traitement de maladies infectieuses causées par des bactéries G-ram-positives et Gram-négatives. 10 l'invention décrit une pénicilline de formule (I) : 20 ou un sel ou ester non toxique de cette pénicilline, formule dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur ou phényle ou un groupe phénylalkyle dont la chaîne alky-lique porte 1, 2 ou 3 atomes de carbone, et R' est un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy. 25 Les sels sont des sels non toxiques comprenant des sels métalliques non toxiques tels que les sels de sodium, de potassium, de calcium et d'aluminium, les sels d'ammonium et d'ammonium substitué, par-exemple des sels d'amines non toxiques telles que les trialkylamines comprenant la triéthylamine, d'amines telles que la 30 procaïne,- la dibenzylamine, la N-benzyl-bêta-phénéthylamine, la 1-éphénamine, la N,N'-dibenzyléthylènediamine, la déhydroabiétyl-amine, la N,N'-bis-déhydroabiéthyléthylènediamine et d'autres aminés qui ont été utilisées pour former des sels avec la benzyl-pénicilline. 35 Les esters des pénicillines de l'invention sont des esters non toxiques, notamment ceux qui subissent aisément une désestérification dans le corps en donnant les dérivés de l'acide 71 00732 2 2081428 pénicillanique de base. Des exemples de ces esters comprennent les esters acyloxyalkyliques, notamment des esters acyloxyméthy-liques tels que les esters d1acétoxyméthyle et de pivaloyloxymé-thyle. 5 Dans le présent mémoire, l'expression "alkyle inférieur désigne des groupes alkyle contenant 1 à 6 atomes de carboné. les composés de formule!(l),dans laquelle R' est un atome d'hydrogène,peuvent.être appelés sydnonyl-4-méthylpénicillines substituées en position 3. Dé' composé appelé sydnone a une structure 10 méso-ionique qui peut être représentée par les formules tautomères (II) et (III) suivantes : 30 H H \T pu CH N 15 v y\ ^ c \ _ 0 (II) C111) Les composés répondant à la formule (I) ci-dessus peuvent 20 être préparés par réaction de l'acide 6-aminopénicillanique ou .d"'un sel ou d'un ester de cet acide avec un dérivé réactif d'acylation de l'acide approprié de la sydnone (formule IY), les symboles R et R' répondant à la définition donnée pour la formule (i) : 25 Rv N — ÇH — C0oH 1' 2 . (iv) Les dérivés réactifs d'acylation qu'il convient d'utiliser comprennent le chlorure, l'anhydride et les anhydrides mixtes de l'acide de la sydnone. En général, on peut recourir à l'un quelconque des procédés usuels de préparation des pénicillines semi-synthétiques 35 à partir de l'acide 6-aminopénicillanique. Pour préparer des pénicillines de formule (I), il est nécessaire d'effectuer la synthèse de l'acide approprié de la sydnone, 71 00732 2081428 On peut y parvenir de diverses façons mais, en général, la synthèse de l'acide de la sydnone doit être faite alors que les groupes R et R' se trouvent déjà en position. Par exemple, lorsque le groupe R' est l'hydrogène, l'acide approprié de la sydnone peut être 5 préparé au moyen d'un procédé qui consiste à faire réagir l'anhydride maléique avec une aminé de formule RNH^dans laquelle R répond à la définition donnée dans la formule (l),pour produire un acide aspartique substitué sur l'azote , à faire réagir cet acide substitué avec de l'acide nitreux pour former un acide ÏT-nitroso-aspar-10 tique substitué sur l'azote, qui est ensuite déshydraté en donnant un ester de l'acide sydnone-4-acétique substitué en position 3. Cette réaction peut être illustrée par le schéma suivant : 15 (1) CH^OH (2) RNH2 NH /V0H3 CHj, I2 CH 20 R OH HONO 25 30 C0oCH, I 3 CHp ! c +/ \ N C — déshydratation p.ex(CP2C0)20 CH, COgCH^ CH / \ s R—N C I I N OH 35 71 00732 2061428 Pour préparer des pénicillines de formule (III),dans laquelle R'-n'est pas un atome d'hydrogène, la séquence réaction-nelle est modifiée par- l'intercalation d'un ou plusieurs stades dans lesquels le groupe R' est introduit. la séquence réactionnelle suivante peut être utilisée pour introduire les substituants R' : 10 15 20 C02h T CH C02H C0oE I 2 CH NaW04 | \ w CH C02H CH5NH2 H' H- Ç°2H -C—0H ■ C — C0oH l 2 NH I CH. HNO„ C0oE l 2 H—C 0H I H—C—COgH N N0 I CE, .5 25 PClc 30 H^C - C0C1 l H— ^ — Cl /C\ -f©f=° N 0 (V) 35 71 00732 5 2081428 Le substituant a-chloro, dans la formule (V) donnée ci-dessus, peut être éliminé et remplacé par d'autres groupes R' au moyen de procédés bien connus en pratique. Les pénicillines de la présente invention déploient une 5 activité intéressante contre une large gamme d'organismes bactériens. On peut les préparer soit sous la forme anhydre, soit à divers degrés d'hydratation. On peut aussi les purifier au moyen de l'une quelconque des techniques usuelles, en vue de les débarrasser des aller-gènes . 10 Les nouvelles pénicillines de la présente invention sont, pour la plupart, capables d'exister sous les formes épimères D ou L , et il va de soi que l'invention couvre les formes pures D et L, de même que le mélange DL. Les exemples suivants illustrent quelques formes de mise 15 en .oeuvre de l'invention : Exemple 1 Préparation du 6-(3-méthylsydnon-4-yl-acétamido)-•pénicillanate de sodium 20 On chauffe au reflux pendant 30 minutes une suspension de 60 g d'anhydride maléique dans 150 ml d'eau, on refroidit la suspension à la glace et on la traite avec 1 75 ml d'une solution aqueuse à 25 $ de méthylamine. Après chauffage au reflux à 110° pendant une heure, on concentre la solution à 100 ml et on la chauffe au reflux avec 300 ml de solution d'hydroxyde de sodium 25 à 25 jusqu'à ce que la méthylamine en excès ait été chassée. La solution résultante est concentrée sous vide à environ 100 ml et acidifiée à un pH égal à 2,0 avec de l'acide chlorhydrique 12N. On ajoute 100 ml d'éthanol et on triture la solution trouble résultante pour provoquer une précipitation. On obtient une matière 30 solide blanche qui, par recristallisation dans 1' éthanol aqueux, donne des aiguilles blanches d'acide N-méthyl-aspartique mono-hydraté ( 86 g, 96 i°, point de fusion 128-130°C) On ajoute goutte à goutte 14 g d'une solution de nitrite de sodium dans 35 ml d'eau à une solution sous agitation de 30 g 35 d'acide N-méthylaspartique dans 650 ml d'une solution d'acide chlorhydrique à 35 en. maintenant la température de la solution au-dessous de 5° pendant toute la durée de l'addition. On filtre 71 00732 6 2081428 le précipité blanc initialement formé et on extrait la solution de couleur "brune avec trois fois 200 ml d'acétate d'éthyle. On sèche les phases-organiques rassemblées sur du sulfate anhydre de magnésium pendant au moins une heure, on filtre, et on évapore 5 le filtrat à sec sous pression réduite, le résidu huileux de couleur jaune cristallise au repos et par trituration avec un mélange d'éther de pétrole .et d'acétate.d'éthyle. On filtre la matière solide, blanche que l'on obtient, on la lave avec de l'éther et on la sèche sous vide sur du pentoxyde de. phosphore, ce qui 10 donne 10 g (25 f°) d'acide îf-méthyl-K-nitroso-aspartique. fondant à 102-103°. Analyse : - C % H % ,ÏT 1° Calculé pour CJLJLO,-5 8 2 5 34,1 4,6 . 15,9 Trouvé 33,9 4,6 15,6. 15 -1 Spectre infrarouge : CO de l'acide carboxylzque ■ 1720 cm (net) Nitroso N = 0 1420 cm-' - - (large) Spectre de résonance magnétique des noyaux [(ŒD^^CO] 9,8 0 (2H,singulet) ; 5,8 et 5,68 (1H,doublet, 8 cps, 20 doublet, 7 cps) ; 3,26 ^ (1H, doublet, ' 7 cps) 3,2 ^ cps (1H, doublet, 8 cps) ; 3,08 $ (3H, singulet) [(CD^^CO +-D2O] le pic à 9,8 £ ■ disparaît-. On agite pendant 2 hëures à la température ambiante une solution de 200" mg d'acide ÏT-méthyl-ÏT-nitroso-aspartique dans 25 1ml d'anhydride trifluoracétique. On ajoute 5 ml d'eau en excès, puis on évapore la" solution claire- résultante à sec sous pression réduite. On refroidit le résidu jaune-à consistance gommeuse, on le triture avec un mélange d'éther de pétrole et d'acétate d'é-thyle pour obtenir une matière solide blanche, et on recristallise 30 cette dernière dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole, ce qui donne en un rendement quantitatif des aiguilles blanches d'acide 3-mëthyl-sydnone-4-acétique, fondant à 77-78°C. Analyse : C io H io N lo Calculé pour C^Hgï^Oj-.0,25 H^O 37,2 4,0 17,2 35 Trouvé 37,1 3,8 17,2 71 00732 7 2081428 Spectre infrarouge : . OH carboxylique 2600 cm (large) C=0 de la sydnone 1740 cm (net) C=0 carboxylique 1700 cm (net) Spectre ultraviolet : = 295 nm (logS= 3,1). d&X 5 Spectre de résonance magnétique des noyaux [(CD^^CO] 7,9q (1H, singulet) ; 4,185(3H,singulet) 3,8 g (2H, singulet) [(CD^)2Cp + D20], le pic à 7,95 disparaît. On agite à la température ambiante, pendant 30 minutes, une suspension de 500 mg d'acide 3-méthyl-sydnone-4-acétique et de 10 750 mg de pentachlorure de phosphore dans 15 ml de chlorure de méthylène ; après cette période de temps, la dissolution est pratiquement complète, le spectre infrarouge de la solution révèle alors _■] le groupe carbonyle du chlorure d'acide à 1790 cm et le groupe -1 carbonyle de la sydnone à 1750 cm . Cette solution est ajoutée 15 progressivement, sous agitation énergique, à une solution refroidie à la glace, préparée à partir de 650 mg d'acide 6-amino-péni-cillanique, 10 ml d'eau et 1,5 g de bicarbonate de sodium, le pH étant maintenu avec soin à 7,0 par l'addition d'un supplément de bicarbonate de sodium pendant toute la durée de l'acylation. Lors-20 que l'addition est terminée, on continue l'agitation pendant encore 30 minutes, sans autre refroidissement extérieur, puis on recouvre la solution de 25 ml d'acétate d'éthyle refroidi à la glace et on ajuste le pH à 2,0 par addition d'acide chlorhydrique 2N en agitant énergiquement. On sépare les phases, on réextrait la phase 25 aqueuse avec deux fois 25 ml d'acétate d'éthyle, et on sèche les phases organiques réunies sur du sulfate de magnésium pendant 30 minutes, on filtre et on concentre sous pression réduite à environ 20 ml. On traite le concentré avec du 2-éthyl-hexoate de sodium 2, ON" dans 3,0 ml de méthylisobutyl-cétone. On recueille la matière solide 30 blanche formée et on la lave complètement avec de l'éther anhydre pour obtenir le sel de sodium de la pénicilline (500 mg, 65 i°) fondant à 180° en se décomposant, dont un titrage colorimétrique à l'hydroxylamine montre que la pureté est de 81 i°. Lorsqu'il est soumis à une chromatographie sur papier dans un mélange de butanol/ 35 éthanol/eau (4:1:5, phase supérieure), le produit montre une zone unique d'activité antibactérienne de valeur R^ égale à 0,05. 71 00732 8 2081428 _ -t Spectre infrarouge : C = 0 du p-lactame 1790 cm C = 0 de la sydnone 1750 cm _1 C = 0 de l'amide secondaire 1660 cm COgC-) carboxylique 1600 cm 5 Spectre de résonance magnétique nucléaire : 5,58 0 (2H,singulet) ; 4,25 3 (1 H,singulet) ; 4,148 q (3H, singulet ; 3,67 § (2H,singulet) ; 1,673(3H,singulet) ; et 1,58.5 (3H,singulet). Exemple 2 10 Préparation du 6-(3-benzylsydnon -4-yl-acétamido) pénicillanate de sodium On chauffe au reflux pendant 30 minutes une suspension de 24 g d'anhydride maléique dans 100 ml d'eau, puis on refroidit cette suspension à la glace et on la traite avec précaution avec 15 81 g de benzylamine. Après chauffage au reflux pendant 1 heure à 100° puis refroidissement dans la glace, on ajoute de l'acétone en excès jusqu'à ce qu'une matière solide blanche soit complètement précipitée» Cette matière, par recristallisation dans l'étha-nol aqueux, donne des aiguilles blanches du sel de di(benzylammo-20 nium) de l'acide H-benzyl-dl-aspartique (72 g, 90 point de fusion 180-182°), qu'on dissout dans 100 ml de solution d'hydroxyde de sodium à 1 5 f° et qu'on extrait à l'éther diéthylique (4x50 ml). On acidifie la phase aqueuse avec de l'acide chlorhydrique concentré, à un pH égal à 4,0. Après concentration de la solution 25 sous pression réduite, puis refroidissement et trituration, on obtient des cristaux blancs de chlorhydrate d'acide ïT-benzyl-aspartique (43 g, 90 point de fusion 194°C (décomposition)). On ajoute goutte à goutte 30 ml d'une solution aqueuse de 12,5 g de nitrite de sodium à une solution sous agitation de 30 40 g d'acide F-benzyl-aspartique dans 36 ml d'acide chlorhydrique 5H, en maintenant la température de la solution au-dessous de 5° pendant toute l'addition. Après repos pendant 2 heures au-dessous de 10°, le mélange réactionnel est extrait à l'acétate d'éthyle (3 x 50 ml). Les phases organiques rassemblées sont 35 séchées sur du sulfate anhydre de magnésium pendant au moins 1 heure, filtrées, puis le filtrat est concentré à sec sous pression réduite. Le résidu, qui est une huile jaune, donne au repos une matière 71 00732 9 2081428 15 solide blanche consistant en acide ÏT-benzyl-SI-nitroso-aspartique (30 g, 70 point de fusion 132-134°). On agite à la température ambiante,pendant 12 heures, une solution de 6 g d'acide N-benzyl-N-nitroso-aspartique dans 10 ml 5 d'anhydride trifluoracétique. On ajoute un excès d'eau chaude (20 ml), puis on évapore la solution claire résultante à sec sous pression réduite. Le résidu, qui est une gomme de couleur jaune, donne, par trituration avec un mélange d'éther de pétrole et d'étha-noljdes aiguilles blanches d'acide 3-benzyl-sydnon-4-yl-acétique 10 fondant à 118-120°, en un rendement quantitatif. Spectre infrarouge : C=0 carboxylique 1700 cm C=0 de la sydnone 1730 cm Spectre ultraviolet: ^ = 300 nm (log £ .= 3,24) Spectre de résonance magnétique des noyaux : 7»5 singulet) ; et 3,65 £ (2H, singulet). Une suspension de 1 g d'acide 3-benzylsydnon-4-yl-acétique et de 1 g de pentachlorure de phosphore dans 20 ml de chlorure de /anhydre methylène7, est agitee à 0° pendant 10 minutes, et la dissolution 20 est alors complète. Le spectre infrarouge montre le groupe carbonyle du chlorure d'acide à 1790 cm" et le groupe carbonyle de la syd-_•] none à 1760 cm On ajoute cette solution goutte à goutte, sous agitation énergique,à une solution refroidie à la glace contenant 1,35 g 25 de 6-aminopénicillanate de triéthylammonium dans 20 ml d'acétone anhydre. On ajoute simultanément de la triéthylamine au mélange réactionnel pour déterminer le pH, par hydrolyse de parties aliquo-tes, et le maintenir entre 7,0 et 8,0. Lorsque l'addition est terminée, le mélange réactionnel est agité pendant encore 1 heure sans 30 refroidissement extérieur. Les solvants organiques sont éliminés sous pression réduite et le résidu huileux est redissous dans 20 ml d'eau. La solution est refroidie à 0°, recouverte de 25 ml d'acétate d'éthyle, et le pH est ajusté à 2,0, par addition d'acide chlorhydrique concentré effectuée avec précaution et sous agitation 35 énergique. Les phases sont séparées et la phase aqueuse est réextraite avec un supplément de deux fois 25 ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques rassemblées sont lavées avec 20 ml de saumure 71 00732 10 2081428 saturée, puis concentrées à environ 10 ml sous pression réduite. Le concentré est ensuite traité avec 3 ml de 2-éthylhexoate de sodium 1 ,7U dans l!isopropanol. La matière solide blanche résultante est filtrée et lavée à fond avec de l'éther, pour donner 5 le sel de sodium de la pénicilline (0,96 g, 44 $), dont le titrage colorimétrique à l'hydroxylamine indique un degré de pureté de 88 °/o. Lorsqu'il est soumis à une chromatographie sur papier dans un mélange de butanol, éthanol et eau (4:1:5), le produit montre une zone unique d'inhibition antibactérienne pour R„ égal à 0,35. — 1 10 Spectre infrarouge : 0=0 du P-lactame 1785 cm -1 0=0 de la sydnone 1740 cm 0=0 de l'amide secondaire 1670 cm — 1 CC^-) ^u carboxylate 1600 cm~ Spectre ultra-violet ^D.M.S.O. _ ^ (i0gg = 3,54) m 3. s 1 5 Exemple 3 Préparation du 6-(3-benzylsydnon-4-yl-a-hydroxy- acétamido^pénicillanate de sodium Pan:1 addition de 50 ml d'une solution aqueuse de 30 g d'hy-droxyde de sodium à une solution sous agitation de 58 g d'acide 20 maléique dans 1 50 ml d'eau, on observe une élévation de température de 65°. On ajoute le catalyseur, à savoir 3,3 g de tungstate de sodium, puis on introduit rapidement 69 ml d'une solution à 30 f° d'eau oxygénée, le pH du mélange réactionnel étant maintenu entre 4,0 et 5,5 pai" addition,goutte à goutte, d'une solution à 25 40 % d'hydroxyde de sodium (une partie de 25 ml). Après agitation, pendant 1 heure à 65°, on refroidit la solution à 40° et on la traite avec le reste de la solution d.'hydroxyde de sodium à 40 i°. Après concentration sous pression réduite à 150 ml, on verse le concentré sous agitation dans 750 ml d'acétone et on obtient, 30 après repos,une matière solide blanche consistant en cis-époxy-succinate disodique (fondant à 270° en se décomposant, rendement quantitatif). On ajoute une solution de 88 g du sel disodique dans 200 ml d'eau à une solution aqueuse (400 ml) de chlorure de baryum 35 (150 g), et on obtient un précipité de sel de baryum en un rendement quantitatif'(point de fusion 300° avec décomposition). 71 00732 2081428 On refroidit à 0° une suspension de 75 g du sel de baryum et 15 g de sulfate anhydre de magnésium dans 370 ml d'éther diéthyligue anhydre, on agite et on traite par addition, goutte à goutte, d'une solution refroidie à la glace d'acide sulfonique concentré 5 (25 ml) dans de l'éther diéthylique (200 ml) en une heure. Après avoir séjourné pendant encore 1 heure à 5-10°, le mélange est agité pendant environ 16 heures à la température ambiante, puis filtré et le filtrat est séché sur du sulfate anhydre de magnésium. Après filtration, le filtrat contenant l'éther est 10 évaporé sous pression réduite jusqu'à poids constant. Le résidu, qui consiste en une huile pâle, donne au repos des aiguilles blanches d'acide cis-époxysuccinique (point de fusion 100°C, rendement 50 fo). iL_ 71 00732 12 2081428 — 1 Spectre infrarouge : C=0 carboxylique 1720 cm C-O-C de l'époxy 1200 cm ^ Spectre de résonance magnétique des noyaux (CD^^CO 9,9 § (2ÏÏ, singulet) et 3,87 3 (2H, singulet) 5 On chauffe au reflux pendant 3 heures à 100°C une solution de 13,2 g d'acide cis-époxysuccinique dans 25 ml d'eau et 32 g de benzylamine, et on obtient,par refroidissement à la glace,un précipité blangâ.e N-benzyl~P-hydroxy-aspartate de di(benzylammo-nium). On filtre ce précipité et on le lave à l'acétone (36 g, 80 io, point de fusion 184° avec décomposition). Le sel de di(benzylammonium) (36 g) est dissous dans 200 ml de solution à 15 % d'hydroxyde de sodium et extrait avec deux fois 100 ml d'éther diéthylique. La phase aqueuse est acidifiée à un pH égal à 4,0 avec de l'acide chlorhydrique concentré, et le produit, 15 à savoir le chlorhydrate de l'acide ïï-benzyl-P-hydroxy-aspartique, est précipité en un rendement quantitatif (point de fusion 220-222°). Spectre infrarouge : -OH hydroxylique 3350 cm -C=0 carboxylique 1730 cm 20 Spectre de résonance magnétique des noyaux [i^O, HaOD] 7,4 £ (5H, singulet) ; 4,34 § (H, doublet) ; 3,87 § (2H, singulet) et 3,6 0 (H, doublet). On refroidit à 1^/glaoe une solution de 12 g d'acide N-benzyl-p-hydroxy-aspartique dans 20 ml d'acide chlorhydrique 5N, on 25 l'agite et on la traite par addition,goutte à goutte,d'une solution aqueuse (10 ml) de nitrite de sodium (3,5 g). Après agita- . tion pendant trois heures à 5°C, on filtre le mélange réactionnel et on extrait le filtrat avec cinq fois 50 ml d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques rassemblés, après séchage 30 pendant une heure sur du sulfate anhydre de magnésium, sont évaporés à sec sous pression réduite en donnant une.huile jaune. Cette huile, après repos pendant plusieurs jours, donne une matière solide blanche consistant en acide N-benzyl-ÏT-nitroso-P-hydroxy-aspartique (7 g, 60 point de fusion 98-100°). 35 Spe-ctre infrarouge : -OH hydroxylique 3400 cm C=0 carboxylique 1730 cm -1 Ïï-ÏÏT=0 du groupe nitroso 1400 cm 71 00732 13 2081428 Spectre de résonance magnétique des noyaux [(CD^^CO] 7,3 3 (5H, singulet) ; 5,4g (2H, quadruplet AB) ; 4,853 (H, doublet) et 3,6 O (H, singulet). On ajoute goutte à goutte à une solution refroidie à la 5 glace de 13,4 g d'acide N-benzyl-N-nitroso-|3-hydroxy-aspartique dans 20 ml de tétrahydrofuranne, une solution de 10 ml d'anhydride d'acide trifluoracétique dans 10 ml de tétrahydrofuranne. On agite le mélange réactionnel à la température ambiante pendant 4 heures, l'anhydride en excès est hydrolysé avec 50 ml d'eau 10 chaude et la solution limpide résultante est évaporée à sec sous pression réduite en donnant une huile jaune consistant en acide 3-benzylsydnon-4~yl-a-hydroxy-acétique en un rendement quantitatif. Spectre infrarouge : -OH hydroxylique 3400 -1 cm -1 cm -1 cm 15 0=0 carboxylique 2500 C=0 de la sydnone 1750 Spectre de résonance magnétique nucléaire [(CD^^CO] 7,6 g (H» singulet) ; 7,43 (5H, singulet) ; 5,8 $ (2H, singulet) ; 5,35$ (H, singulet) 20 [(CD^)2C0 + DgO], le pic à 7,6$ disparaît. On condense 4 g de phosgène dans 10 ml de tétrahydrofuranne, on refroidit à -10° et on traite avec 2,5 g d'acide 3-benzylsyd-non-4-yl-cc-hydroxy-acétique dans 5 ml de tétrahydrofuranne. On agite le mélange réactionnel à 0-5° pendant 3 heures et à la 25 température ambiante pendant 24 heures, l'excès de phosgène et le solvant sont chassés sous pression réduite, et le résidu, à savoir une huile de couleur jaune clair, est séché pendant environ 16 heures sous vide sur du pentoxyde de phosphore, les données spectroscopiques confirment qu'il s'agit de l'anhy-30 dride anhydro-O-carboxylique de l'acide a-hydroxy-acétique: Spectre infrarouge 0=0 de l'anhydride 1820, 1780 cm ^ 0=0 de la sydnone 1750 cm ^ ïï~tOH Spectre de résonance magnétique nucléaire X™ = 302 rwi niax 35 On ajoute goutte à goutte une solution de 2,76 g de dérivé anhydro-O-carboxylique dans 10 ml de chlorure de méthylène à 3,17g de 6-aminopénicillanate de triéthylammonium dans 40 ml de chlo 71 00732 14 2081428 rure de méthylène, en maintenant la température au-dessous de 10° pendant 24.heures. On verse le mélange réactionnel dans 50 ml d'eau et on sépare les phases. On refroidit la phase aqueuse à 0°, on l'agite et on l'acidifie avec soin à un pH de.2,0 au moyen d'acide 5 chlorhydrique concentré. On l'extrait avec deux fois 50 ml d'acétate d'éthyle et on lave les extraits rassemblés avec 25 ml de" saumure saturée, puis on concentre à environ 10 ml„ On traite ensuite le concentré avec une solution de 2-éthylhexoate de sodium 1,7 I (4 ml) dans 1'isopropanol et on obtient une matière solide 10 blanche par.trituration. On filtre cette substance et on la lave correctement avec de l'éther diéthylique anhydre pour obtenir le sel de sodium de la pénicilline (2 g, 50 %) dont l'analyse colo-rimétrique à 1 'hydroxylamine indique une pureté de 54 i°> lorsqu'il est soumis à une chromâtographie sur papier.dans .un. mélange de 15 butanol, dséthanol et d'eau (4:1:5), le produit montre une zone d'inhibition pour une valeur IL, de 0,55. -1 Spectre infrarouge : 0=0 du P-lactame 1780 cm 0=0 de la sydnone 1745 cm""' 0=0 de l'amide secondaire 1670 cm ^ 20 COg^) du carboxylate 1620 cm ^ Spectre de résonance magnétique des noyaux [(CD^^CO + D^O] 7,4 g (H, singulet)'; 5,7 3 doublet) ; .5,4 3 (2H, large singulet) ; 4,7 3 (H> sin~ gulet) ; 4,0 § (H, singulet) et 1,5 3 (6H, 25 doublet)» . Exemple 4 Préparation du 6-(3-méthylsydnon-4-yl-a-h.ydroxyacétamido)-pénicillanate de sodium On chauffe au reflux pendant 4 heures à 100° une solution 30 de 70,4 g de cis-époxysuccinate de sodium et 40 ml de méthylamine à 25 dans 200 ml d'eau» On concentre la solution à environ' 50 ml et on ajuste le pH à 9,0 avec une solution d'hydroxyde de sodium, à 15 i°* Après extraction avec 2 x 50 ml d'acétate d'éthyle,on acidifie la solution aqueuse à un pH de 4,0' au moyen d'acide 35 chlorhydrique concentré, on ajoute un volume égal d'éthanol et on obtient, par trituration, une matière solide blanche, à savoir le chlorhydrate d'acide ¥-méth.yl-j3-hydroxy~aspartique (point de 71 00732 15 2081428 fusion 240° avec décomposition) en un rendement quantitatif. On traite une solution refroidie à la glace, sous agitation, de 20 g d'acide N-méthyl-f3-hydroxy-aspartique dans 40 ml d'acide chlorhydrique 5N par addition,goutte à goutte,de 10 ml d'une so-5 lution aqueuse de 6,9 g de nitrite de sodium. On agite le mélange réactionnel à 0-5° pendant 4 heures, puis on l'extrait avec quatre fois 40 ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques rassemblées sont séchées sur du sulfate anhydre de magnésium et évaporées à sec sous pression réduite étonnant une huile jaune qui, 10 par trituration avec un mélange d'acétone et d'acétate d'éthyle, donne des aiguilles blanches d'acide N-méthyl-N-nitroso-p-hydroxy-aspartique (19 g, 80 %>, point de fusion 118-120°). Analyse : 0 # H % N f° Calculé pour C^gî^Og : 31,3 4,2 14,6 15 Trouvé : 31,2 4,2 14,4 _1 Spectre infrarouge -0H hydroxylique 3400 cm 0=0 carboxylique 1735 cm~^ -U-N=0 du groupe ni-troso 1435 cm 20 Spectre de résonance magnétique des noyaux [(CD^^CO] 6>8 § (3H, singulet) ; 6,0 § , 5,2 0 (2H, quadruplet AB) ; 3,2 3 (3H, singulet). [(CD^)2C0 + D20], le pic à 6,8 ^ disparaît. On agite à 50° pendant 30 minute s, et à la température am-25 biante pendant 4 heures, une solution de 10 g d'acide SF-méthyl-N-nitroso-P-hydroxy-aspartique dans 10 ml d'anhydride trifluor-acétique. On hydrolyse l'anhydride trifluoracétique en excès avec 30 ml d'eau chaude et on chasse les solvants sous pression réduite, ce qui donne une huile hygroscopique de couleur jaune, 30 à savoir l'acide 3-méthyl-sydnon-4-yl-a~hydroxy-acétique. Analyse : C $ H fo u Calculé pour C^gN^.CH^OH : 35,0 4,9 13,6 Trouvé : 35,2 4,9 13,4 Rendement : 70 $ 35 Spectre infrarouge C=0 carboxylique et de la sydnone 1750 cm ^ 71 00732 1 6 2081428 Spectre ultraviolet = 297 nm (loge = 3,75) III 3.X Spectre de résonance magnétique nucléaire [(CD^)2C0] 7,65 (2H, singulet ; 5,1 ^ singulet) ; 4,15 q (3H, singulet). [(CD^)2C0 + D20], le pic à 7,6 § disparaît. 5 On ajoute une solution de 2,06 g de dicyclohexylcarbodiimide à une solution refroidie à la glace de 1,7 g d'acide 3-méthyl-sydnon-4-yl-a-h.ydroxy-acétique dans 10 ml de diméthylformamide. Après agitation à 0° pendant 20 minutes, on ajoute goutte à goutte une solution de 3,3 g de 6-aminopénicillanate de triéthylammonium 10 dans 10 ml de diméthylformamide. On agite le mélange réactionnel à 0° pendant quatre heures et on le laisse s'équilibrer avec la température ambiante pendant environ 16 heures. Ensuite, on le filtre et on évapore le filtrat à sec à 30° sous pression réduite. Le résidu, à savoir une gomme de couleur jaune, est dissous dans 15 une solution de bicarbonate de sodium, le pH ne dépassant pas 7,5, puis il est filtré et le filtrat jaune est refroidi et acidifié avec pré-caution au moyen d'acide sulfurique concentré, jusqu'à un pH égal à 2,0. On l'extrait avec trois fois 20 ml d'acétate d'éthyle et les phases organiques rassemblées, après lavage avec 20 20 ml de saumure saturée, sont concentrées à. un faible volume sous pression réduite. Le concentré est traité avec 2 ml de 2-éthylhexoate de sodium 1,TE dans de 1'isopropanol et on obtient une matière solide de couleur blanche. On recueille cette matière et on la lave à fond avec de l'éther diéthylique anhydre pour 25 obtenir le sel de sodium de la pénicilline (0,23 g, 6 %). Lorsqu'il est soumis à une chromatographie sur papier dans un mélange de butanol, éthanol et eau (4:1:5), ce produit donne une znne unique d'inhibition bactérienne à une valeur de R^ égale à 0,05. La pureté, déterminée par titrage colorimétrique avec l'hydro-30 xylamine, est égale à 34 i°. Spectre infrarouge : 0=0 du (3-lactame 1780 cm _1 0=0 de la sydnone 1750 cm 0=0 de l'amide secondaire 1670 cm _-i COp(-) du carboxylate 1600 cm 35 Spectre ultraviolet ~ 11111 71 00732 17 2081428 10 REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) ou d'un sel ou ester non toxique de ce composé de formule : R ^ N>—x v •CH.CG.NH.CH' CH S y / V/ CH- C0« j ^ CK- CH. COOIi V d) 15 (dans laquelle R désigne l'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur ou un groupe phényle ou un groupe phénylalkyle dont la chaîne alkylique comprend 1,2 ou 3 atomes de carbone et R' est un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy), procédé caractérisé par le fait qu'il consiste à faire réagir un dérivé réactif d'un composé de formule (IV) : 20 30 N- CH C00H CO R 25 R ■ \. (IV) (dans laquelle R et R' ont les définitions données pour la formule (I)) avec l'acide 6-aminopénicillanique ou un sel ou ester de cet acide. 2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que le dérivé réactif du composé de formule (IV) est un chlorure, anhydride ou anhydride mixte d'acide. 3. Composé caractérisé par le fait qu'il répond à la formule (I) : 71 00732- 18 2081428 CH.CO.NH.CH- C O- q CH, /\/ OH Cv CH- N P CH.COOH (D 5 ou. qu'il se présente sous la forme d'un, sel ou ester non toxique, formule dans laquelle R désigne un atome d'hydrogène bu un groupe alkyle inférieur ou phényle ou un groupe phénylalkyle dont la chaîne alkylique comprend 1,. 2 ou 3 atomes de carbone et R1 est un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy. 10 4. l'acide 6-(3-méthylsydnon-4-yl-acétamido)~pénicillanique ou un sel ou ester non toxique de cet acide. 5._ L'acide 6-(3-benzylsydnon-4~yl-acétamido)-pénicillanique ou un sel ou ester non toxique de cet acide. 6. L'acide 6-(3-benzylsydnon-4-yl-a-hydroxyacétamido)-15 pénicillanique ou un sel ou ester non toxique de cet acide. 7. L'acide 6-(3-méthylsydnon-4-yl-«-hydroxyacétamido)-pénicillanique ou un sel ou ester non toxique de cet acide»