FR 2016283 A1 19700508 FR 6928824 A 19690822 mé~ô.oat:euu ^ . On a if-vrix- fea,- français ITC 3C34&, une classe à «al- 5 pha-asiiixo~ai;:iia" {L"d„ u:.v;b,în"l)niét^*rlp&n.icilli^®3 ds fornule gens-- raie ; °sr~^. 10 -v ; • -'T: et l-.v'OÏ-.: .; -10ii t-L. ... J '? ; .~l->? :: . CCii^C ;? ^•sOuieres a«t :urc-l7f suc^t;wT*.ar*; ir*irc-rr ; «n >• :=si.fcion or»XAO sista ou pa?" > L,exi3"cer.c-- â-rm atc:: - .:.? -jartens asyaésricue (repéré 15 par "OTi asl"-r_i-.ru.e) 'tans la chaîne 1«,~ éïale uidique que chacun des trois comç-nés à si--stituaiit hyâroxy peut exister selon deux torses isomères oiv-.tcrues©?}t actives» Ces forces isomères sont des épimères et non pas des énantiouiorphes, étant donné que l'acide 6-axinopé-nicillanique utilisé pour la synthèse est lui-même un composé opti-20 quement actif. Ainsi, ls brevet français Iï° 3034M couvre six dérivés différents le pénicillines, mais ceux-ci ne sont décrits en fait que sous forme de trois paires d'épimères et non pas cojame des composés individuels. On a indiqué dans le brevet français ïrc3Q3C-r que deux des pai-25 re« épircèree» à savoir celles dans lesquelles le substituant hydro-xy est c*7. position méia ou para, présentent l'avantage d'aris1 une activité particulièrement boxiiie vis-à-vis des bactéries ^raœ-aié.sa-fcives» 3n psrtic.ilisr. elles sont plus actives que la pénicilline à large spectre standard, l'épimère S(-) de 11alpha-aniinobsnsylpé-30 nicilline (ssipicilline), lors d'un essai vis-à-vis de Salmonella typhimurium et Klebsiella pneumoniae chez la souris. les épimères individuels des composés meta et para-hydroxy sont préparés à partir de l'acide alpha-amino-méta-hydroxyphénylacétique et de l'acide alpha-amino-para-hydroxy-pénylacétique, résolus en leurs 35 antipodes optiques et couplés avec l'acide 6-aminopénicillanique par les processus généraux décrits dans le brevet français IIe 3034H. Iss droT-'r-enicillinss résultantes sont ensuite soumises ù X /CH3 f T * \ J- ! I -û nr>r* f 3 bad ork3w4m. 3ubstiv'''3ilt nuojsaire Pouvoir rotateirs de l5ty^ino-acide de la c.kaîne latérale 0,1.M. (jug/ml) S. ^oli Proteus : Salin, mirabilis ■ trphi, i - - 31iigs.ll £• flerî.eri riefc* paeum- 5 1,25 0,6 1 s s 2f-3 " 12,5 O G = 5 e\r* ...rV- .--j 12,5 t. 12,'" ~ ri 0 - 1 rr 1,2'- 2, ;• 1,25 ; : iri a 1.25 1,25 2,5 1,25 î JCH I 25 - 1 ? K 12,5 - >".e taclsau contre que les pénicillines dérivées des isomères (-) des acides de la chaîne latérale sont uniformément plus votives que celles dérivées des isomères , la différence d'activité des épimères étant plus prononcée pour les composés hydroxy que pour 20 les épimères déjà connus de l'alpim-aaincfeenaylpénàoillir.e. On en conclut que, pareil les six pénicillines coiivertes par le brevet français F0 3034M, le3 deux plus actives sont les épimères (•=) des composés à substituants raéta et para-hydroxy. Des essais poussés sur les animer.-??: montrent que, comme l?-: plus grande partie des 25 pénicillines, ces épimères sont virtuellement non toxiques« Les deux pénicillines sont ensuite comparées avec 1 '-jaapieil-line au cours d'études à*absorption chez des êtres àiimairs volcn-+•?.-? T3S. On administre à chaque groupe de volontaires de moeurs dis-" Ip^es 500 ml de pénicilline appropriée, par voie buccale, en cap-30 suies ou gélules, on prélève des échantillons de sang à des intervalles réguliers et on les soumet à un titrage biologique pour déterminer la concentration des pénicillines dans le sérum» On re-cv-ille également l'urine sur un© période de six heures et on la scuaet à vs. essai analogue pour déterminer la proportion de la dose 35 excrétéa par les reins» les valeurs moyennes obtenues sont indiquées r*-= s le tableau II» â désignant l'isomère (-) du- composé méta-hydro-~1-' «t l'isomère («■») du composé para-kyâror^s BAD ORIGINAL 69 28824 0 3 2016283 TAUT^tn TT Pénicilline Sombre de sujets Concentration moyenne dans le sérum (jag/ml) ia excrété dans l'urine ( 0-6h. ) £h. 1h. 2b. 4h. 6h. Upiàilline 22 1,29 3,12 4,06 1,16 0,38 42* A 8 0,91 2,50 2,86 1,15 0,44 31# B 20 2,9 8,25 10,75 3,1 1,13 74,5* 10 Les résultats montrent que les concentrations dans le sang du dérivé (-) méta-hydroxy après une administration orale sont plutôt plus faibles que ceux obtenus avec une dose similaire d'ampiei11ine. Par ailleurs» les concentrations trouvées dans le sans dans le cas 15 4u dérivé (-) para-hydroxy représentent plus de deux fois celles obtenues pour 1'ampicilline, et dans certains cas trois fois celles obtenufs pour le dérivé (-) méta. Les concentrations trouvées dans l'urine confirment entièrement ces conclusions. Dans le cas de l'ampicilline et du dérivé (-) méta, on trouve dans l'urine beaucoup 20 *©ina que la moitié de la dose, mais dans le cas du dérivé (-) para-hydroxy, on obtient de cette manière une proportion élevée égale à 74,55*. Cela signifie qu'au moins les trois quarts du dérivé (-) para hydroxy administré par voie buccale ont été absorbés par le courant sanguin* 25 II est remarquable de constater que l'introduction du substi tuant para-hydroxy augmente nettement l'absorption orale de 1*ampicilline , en particulier compte tenu du fait que le même substituant en position aéta.'. réduit légèrement cette absorption. Il existe divers exemples concernant d'autres séries de péneillines, pour 30 lesquelles l'introduction de substituants dans la aaaîne latérale augmente l'absorption orale, mais il s'agit dans es cas d'une augmentation du coefficient de séparation lipide/eau qui facilite la diffusion de l'antibiotique à travers la membrane lipoîde de la pasre4 de l'estomac ou de l'intestin* Ainsi, dans le cas des alpha-phénosy» 35 alcoylpénicillines, l'absorption augmente avec la taille du substituant alpha-hydrocarboné (Ph^> Bt^> Me^> H). De même, dans la série iaoxazolyle, la dicloxacilline est mieux absorbée que la cloxacil-line, qui à son tour est mieux absorbée que l'oxacilline. Toutefois, les groupes hydrocarbonés et les atomes d'halogène constituent des 40 exemples bien connus de substituants lipophiles (c'est-à-dire hydro- BAD ORIGNAL 69 28824 4 2016283 phobes), tandis que le groupe hydroxyle est hydrophile. Il n'existe pas d'exemple connu de pénicillines ayant une stabilité comparable axa acides, dans lesquelles l'introduction d'un groupe hydroxyle ou de n'importe quel autre groupe hydrophile dans la chaîne latérale 5 fournit use absorption orale accrue» lia combinaison d'une forte activité anti-bactérienne et d'une forte absorption orale chez l'homme confère à l*épimère (-) du composé para-hydroxy dénommé ici "acide 6/C-)alpha-amino-para-hydrozy-phénylaoétemidoj-pénicillaxiique" un avantage remarquable relative-10 ment aux.cinq autres isomères mentionnéer dans le brevet français N°3034M, de même qu'à toutes les autres pénicillines à large spectre. l'invention concerne en conséquence, à titre de médicament nouveau, l'acide 6-/C-)alpha-amino-para-hydroxy-phénylaeétamido7-péni-cillanique et ses sels non toxiques* 15 l'invention concerne également un procédé pour la préparation de l'acide 6-/C-)alpha-amino-para-hydroxyphénylacétamido7-pénieilla-nique et ses sels non toxiques, consistant à faire réagir â© l'acide S-ajaàaaopênieillanique ou trn sel de celui-ci avec un dérivé fonctionnel de l'isomère (-) d®un acide carboxylique de foiœule générale : 20 25 où X représente un groupe amino, un groupe amino protégé ©u un groupe qui est ensuite converti en un groupe amino* Si désiré, le groupe hydroxy; phénolique peut également être protégé pendant le stade d'acylation, par exemple sous fossa© d'un groupe O-bansyle ou O-benzylosyearbonyle qui est ensuite éliminé, y) mais généralement la protection de ce groupe n'est pas essentielle» A titrs d'exemples de groupes amino protégés, on peut citer le groupe aaino formait proton (X = HHj+) qui, après la réaction de couplage-, @st reconverti ea EBp par simple neutralisation, le groupe bensjicsyoai-'bonylanjin© (X « M.OCL». OH^.Ph) ou les groupes "sea-33 zylosyfiarDônylaiairiO substitués nu i soat ensuite ossarerti® douce o A tits?e d'exemples de groupes X pouvant être ensuite convertis bad original 69 28824 5 2016283 en HE, par hydrolyse fvsxle douce.- on po~ifc citer I-se groupes sna&ine de formule générale (IHj ou leurs modifications tautomères, et les groupes ortho-fcydrozrarylidtne de foKaule générale (IV) ou leurs modifications tautomères. 5 H1 I .A, /0ÏÏV Rà-(f ? E- J i z [I R-'-CL H V C., H 10 S--" \c^ (III) (IV) ."...lis l^s structures (III «t IV) ; les lignes en pointillé représentent des liaiscîia hydrogène. Bans la structure (III), R* est o 15 un groupe a^ocyle inférieur, R désigne un atome d'hydrogène ou 1 3 ferre conjointement à R un noyau carbocyclique et ïr est un groupe alcoyle inférieur, aryle ou alcoxy inférieur. Dans la structure (IV), Z représenta le résidu d'un noyau benzène ou naphtalène substitv.e ou non substitué. A titre d'exemples de groupe X pouvant 20 être ensuit > converti e:i ÏÏHg par hydrolyse alcaline douce, on. peut citer les groupes 2-sulfonyl-éthoxycarbonylamino R.SOg.CHg.CHg-O. CO.HH-, où R représente un groupe alcoyle, aralcoyle ou aryle substitué ou non substitué. Un autre exemple de groupe X pouvant être converti en NHg 25 après couplage de l'acide (II) avec l'acide 6-aminopénicillanique est le groupe azido. Dans ce cas, la conversion finale en HEL^ peut être provoquée par hydrogénation catalytique ou par réduction élec-trolytique. Lorsqu'on effectue le couplage de l'acide (II) en acide S-ami-30 nopénicillanique, le choix du groupe d'activation de la fonction carboxyle va être influencé par la nature chimique du substituant alpha X, Ainsi, quand X est un groupe stable vis-à-vis des acides, comme le groupe amino formant proton ou le groupe azido, il est souvent judicieux de convertir l'acide (II) en un halogénure 35 d'acide, par exemple en le traitant avec du chlorure de thionyle ou du pentachlorure de phosphore, pour obtenir le chlorure d'acide. Toutefois, ces réactifs sont évités quand X est un groupe labile vis-à-vis des acides, du type (III) ou (IT), auquel je3 il est souvent .judicieux d'utiliser un anhydride airfee* A oei s' 69 28824 6 2016283 ;-?a anhydrides mixtes particulièrsînexxt judicieux sont les saûs^dïlâaB alcozy-foEniques, qui sont avantageusement préparés par traiSs-i'mii . d'un sel de méfcal alcalin ou d'aminé tertiaire de l'acide (IX) a?se le chloroformiate d'alcoyle approprié, en milieu anhydre, à la tez-5 pérature ambiante ou au-dessous de cette température. D'autres «to—- des d'activation du groupe carboxyle comprennent une réaction avec- •: une carbodiimide pour donner une O-acylisourée active , ou vue ré- action avec un carbonyldiimidazole pour donner un imidasoli-le ré-actif» Ces derniers dérivés sont, comme les anhydrides miztîs,- des 1C substances relativement instables, et par suite ne sont pas liabi-tusllsaent isolés, la réaction avec l'acide 6-aminopénicil^ inique étant effectuée in situ. A titre d'autres dérivés réactifs de l'acide ali-àa-ami2i©=-para-hydrosyphénylacétiqu® utilisables pour la préparation du 15 suivant l'Invention» on peut citer l'anhydride de leuch» Eans "• structure, le groupe qui active le groupe carboxyl'? sert égel^*.5:i" à protéger le groupe amino. le composé suivant l'invention peut être isolé de n'impciT'--:. quelle manière habituellement utilisée pour l'isolement des adao»-20 pénicillines. Ainsi, on peut l'obtenir sous forme de molécule sis»-tre, bien que celle-ci soit probablement représentée d'un® façea plus précise par l'ion complexe chargé à la fois positivement donné que la molécule renferme à la fois les fonctions basisus at 25 acide, les sels sont de deuz types. Les sels d'addition &r&i 1*2 acides9 dont certains sont un peu solubles dans l'eau et sont aiiîsi utilisables à des fins d'isolement, comprennent les sels avec- " î® acides minéraux comme l'acide chlorhydrique, phosphorique es tbio— cyanique, de même qu'avec des acides organiques forts comme 7.;rr.M® 30 naphtalène-bêta-sulfonique. Les sels d'addition avec des fcasss çoe-prennent les sels des métaux alcalins et alcalino-terreuxf 1s -..I d'ammonium et les-sels obtenus avec des aminés non toxiques» ÎT"importe laquelle de ces foiroes peut être anhydre ou hydraté®c Ci peut les obtenir également sous forme amorphe ou cristallin®, mais 35 Xss formes cristallines sont préférables étant dorme qu' sentent uns plus grande stabilité. A n'importe quel stade convenable au cours du processus r, .i.«. - - r, mati-V^e p$ut .être soumise à de® stades de purification évuALis -fia £&no;/i à éliœinor Isa traces d'impiétés allergesc:" à votts £ ^ "i ."^1 f ^ e«> Oriq,NAl 69 28824 7 2016283 La pénicilline suivant l'invention peut être utilisée en mélange avec d'autres véhicules ou excipients pharmaceutiques convenables, selon diverses doses médicinales» En outre, cette pénicilline peut être utilisée selon des combinaisons synergiques avec 5 des pénicillines connues résistant à la pénicillinase, par exemple avec la méthylcilline, la cloxacilline, la dicloxacilline, la flu-coxacilline et la nafcilline» Les exemples donnés ci-après à titre non limitatif permettront de mieux comprendre comment l'invention peut être miseen oeuvre» 10 Des modifications peuvent y être apportées, dans le domaine des équivalences techniques, sans s'écarter de l'invention» • •P.TnSffPT.-R T?0 1 Résolution de l'acte fti-pVift-"benzyloxycar"bonylaB±no-T)ara-hydroxv-phénvlacétiaue » 15 On laisse refroidir une solution de 224 g de l'acide sus-men- tionné et de 285 g de quinine trihydratée dans 2,5 litres d'éthanol à l'ébullition. On recueille les cristaux qui se séparait et on recristallise deux fois dans l'éthanol, ce qui donne tua rendement égal à 7du sel de quinine de l'acide lévogyrs, /Jâlp&aJ^-l58,5 e 20 (C, 1 dans MeOH). Le traitement du sel de quinine (68 g) avec de la soude diluée, l'élimination de la quinine par extraction par l'éther et l'acidification de la solution aqueuse donne l'acide lévogyre. On cristallise celui-ci deux fois dans l'éthanol aqueux, ce qui donne 28 g (85$) d'acide (-)alpha-fcenzyl©xyearbonylamino-25 para-hydroxyphénylacétiques F» 159-161.°C, /alphaT^® - 120*0° (C, 1 dans MeOH). (Cg^H^NOY calculé s 0, 6^,9; H, 4,9, M» 4,7s trouvé l C, 64,1; H, 5,2; H, 4,7*)» On fait évaporer à siccité sous vide la Xiqueire-mère provensr. j du sel de quinine hrut, ce qui laisse un sirop qus l'on traite 30 dè la soude «a solution aqueuse et on élimine la quâJiisie par extraction par l'éther. L'acidification de la couche aqueuse donne 108 g d'acide dextrogyre taut, qui est recueilli? séché et traité avec 63 g d'éphédrine dans 450 al d ' othancl à 12 êtmXIitioîi» Lorc -qu'on refroidit la solution, le sel d'éphédrins d© X"solde dextra-35 gyre se sépare et on 1& recueille et le resristallis© à partir d'éthanol. Rendement 111 g, 4- 46,8° (Cp î Sans H^O). Ga récupère l'acide à partir de o© sel de la manière usuelle, ce qui donne l'acide (+) alpîm-fcenzyloa^Garbûnylamino-paxa^hydroxyphényX'-acétique (96£), qui, après recristallisation Sans l8éthanol aqueiaz BAD ORIGINAL 69 28824 8 2016283 à 50$, a un point de fusion de 158-161°C, ,/âlpha7^ + 120,2°, (0,1 dans MeOH). (C^H^HOy calculé : C 63,9î H, 4,9; H, 4,7$; Trouvé : 0, 64,1; H, 5,3; H, 4,8?£). EXEMPLE N° 2 5 Les deux épimères de 1 ' alpha-benzyloxgcarbonvlamino-para-hydroxy-benzylpénici lline (a) On ajoute goutte à goutte 6,3 ml de chloroformiate d•éthyle à -5e0 à «ne solution vigoureusement agitée, formée par 20 g d'acide (-) alpha-benzyloxycarbonylamino-para-hydroxyphénylacétiq'ue et 10 8,3 ml de 2,6-lutidine dans 140 ml d*acétone anhydre pure. On maintient la mélange entre -5°C et +5°C pendant trente minutes pour compléter la formation de l'anhydride éthoxyformique mixte. On ajoute rapidement une solution glacée de 14,3 g d'acide 6-amino-pénicillanique et de 10,5 ml de 2,6-lutidine dans 140 ml d'eau et 15 on agite le mélange entre 0 et 5°0 pendant trente minutes, puis pendant encore une heure jusqu'à ce qu'il atteigne la température ambiante. On concentre la solution à basse température et sous pression réduite pour éliminer l'acétone, puis on recouvre le concentré aqueux avee 100 ml de méthylisobutylcétone et on ajuste le 20 pH à 2 en ajoutant de l'acide chlorhydrique dilué. On sépare les couches et on extrait la phase aqueuse avec une nouvelle quantité d® méthylisobutylcétone (deux fois 50 ml). On lave les extraits organiques combinés avec de l'eau, puis on secoue avec une quantité suffisante de solution aqueuse de bicarbonate de sodium pour donner 25 une phase aqueuse neutre (pH 7). La séparation des couches et l'é-vaporation de la solution aqueuse neutre à basse température et sous pression réduite donnent le sel de sodium solide de 18acide 6/T-)alpim-benzyl©xycarbonylaiaino-para-hydroxyphénylacéiaaiâ,Q7-pénicillanique (32 g, 92fo). 30 (b) û& procède comme indiqué précédemment, mais on utilise l'isomère (4-) de l'acide alpha-benzyloxycarbonylamino-para-hydrosyphé-aylaeétiqu© 5 ce qui donne un rendement égal à 90$ du sel de sodium êL® l'aeid® (?/(+) e.lpb.a-bsiiEyloxycai'bonylamino-para-hydroayphényl-acétamMo/'-pénici-llaîiiqmee 35 mm g° 3 âoide S/J-j alpha-amine-para-nydroj^hénylacétamidoJ-pénieillanique. Ôa secoue une suspension de 40 g de catalyseur au pallaâiïsa à 5% sur du carbonate de calcium dan-s 150 ml d'eatij, dans 18hydrogènes pendant une heure. On ajoute une solution de 16 g de 6/C-)alpha- BAD ORIGINAL 69 28824 o 2016283 benzyloxycarbonylamino-para-hydroxyph.énylacétamido7-pénicillanate de sodium dans 50 ml d'eau et on secoue le mélange dans l'hydrogène pendant quarante minutes. On sépare le catalyseur par filtration à travers un tampon de kieselguhr et on lave avec trois fois 50 ml 5 d'eau. On ajuste le filtrat et les eaux de lavage combinés à un pH égal à 1,9 et on lave avec trois fois 50 ml de méthylisobutylcétone. On ajuste la phase aqueuse à un pH égal à 5,1 et on concentre à basse température et sous pression réduite à un volume de 75 ml environ. On recueille le solide cristallin incolore qui se sépare, 10 on le lave avec un peu d'eau, puis avec de l'acétone, et finalement avec de l'éther. L'aminopénicilline résultante pèse, après séchage dans un exciccateur sous vide, 6,3 g (rendement 56$) et on constate à l'analyse qu'il s'agit du trihydrate. (C.j gE^M^O^S, 3 H^O calculé; C, 45,8j H, 6,0; H", 10,1; S, 7,6$; Trouvé : C, 46,0; H, 6,5; N,10,3; 15 S, 7,4$). Un échantillon stocké dans l'air humide fixe l'eau pour former le tétrahydrate, /âlpha7^ + 246,5° (G 0,1 dans H^O). (C^gH^g ff305S, 4^0; Calculé : 0, 43,9; H, 6,2; H, 9,6; S, 7,4; 1^0, 16,4$; trouvé : C, 44,1; H, 6,1; H, 10,0; S 7,6, ^0, 16,3$). EXEMPLE U° 4 20 Acide 6/7+)alphft-«Tnirm--para-hydroxyphénvlacétamido7-pénicillaaique. On effectue l'hydrogénation du sel de sodium de l'acide 6/T+) alpha-benzyloxycarbonylamino-para-hydroxy-phénylac ét amido7-pénicil-lanique de la même manière et à la même échelle que l'épimère. mentionné dans l'exemple N°3. Après séchage dans un exciccateur sous 25 vide, suivi d'une mise en équilibre dans l'air, le produit cristallisé (6,1 g 54$), a un ,^âlpha7p® de + 154,6° (C, 0,1 dans &>0) et correspond comme le montre l'analyse au tétrahydrate. gH^N^O^S, 4H2O, calculé 0, 43,9; H, 6,2; U, 9,6; S, 7,3; E^O, 16,4$); trouvé : C, 43,7; H, 6,5; N, 9,3; S, 7,6; 1^0, 15,8$). 30 HiYTiMPT.-R TJQ R Résolution de l'acide alpha-benzyloxycarbonylamino-méta-hydroxy-phénylacétiaue. On résout l'acide méta-hydroxy racémique avec de la quinidine dans l'éthanol à l'ébullition (1,875 litre par mole), le sel de qui-35 nidine de l'isomère (-) cristallisant par refroidissement. On recueille les cristaux, on fait bouillir avec de l'éthanol (1,3 litre par mole) et on refroidit et on filtre la suspension. On libère l'acide libre à partir du sel sensiblement de la même manière que celle décrite dans l'e-se&ple Sî°1 pour l'isomère para-hydrosfo Ttes t BAD ORIGINAL. 6-# 28824 2016233 2>ecristallisation à partir de chloroforme ou de toluène donne im rendement égal à 79% d'acide (-)alpha-benzyloxycarbonylamino-méta-hydroxyphénylacétique, - 118,8° (C, 1 dans MeOH). On fait évaporer sous vide le filtrat éthanolique et les pro-5 duits de lavage provenant de la cristallisation précitée du sel de quinidine, et on provoque la cristallisation du sirop résiduel en triturant avec de l'éther. Une recristallisation à partir d'ioo-propanol donne le sel de quinidine de l'acide (+), à partir duquel on libère l'acide libre de la manière usuelle. Une recristallisation 10 à partir de chloroforme ou de toluène donne tin rendement égal à 73$ en acide (+)alpha-henxyloxycarbonylamino-méta-hydroxyphénylacétique » ^lpha7p° + 110,5° (C, 1 dans MeOH). EXEMPLES- 6 Les deux épimères de l'alpha-benzyloxycarbonylamino-méta-h.y&roxy 15 benzylpénicilline. Ils sont préparés exactement comme décrit dans l'exemple Me2 pour les isomères para-hydroxy. A partir de l'acide (-)alpha-benzyloxycarbonylamino-ïBéta-hydro-xyphénylacétique, on obtient un rendement égal à 9Cfî en sel d© so-20 dium de l'acide ô/T-Oalpha-benzylqxycarbonylamino-méta-hydrexy-phénylacétamidç7-pénicillanique• On obtient le sel de sodium de l'acide 6/T+)alpha-benzyloxyear» bonylamino-méta-hydroxyphénylacétamidoj-pénicillanique selon un rendement égal à 9Qfc à partir d'acide (+)alpha-benzyloxycarb©nyl&mino-25 méta-hydroxyphénylacétique. •RYRMPT.TC NO 7 Acide 6/T- ) alpha-amino-méta-hydroxyphénylacétamido7-pénioillanxque » On soumet le sel de sodium de l'acide 6/T-)alpha-bensyloxy-carbonylamino-méta-hydroxyphénylacétamido7-pénicillanique à mi pro-30 cessus d'hydrogénation catalytique tel que décrit dans l'exemple N°3. On ajuste finalement la solution aqueuse de la pénicilline réduite à un pH égal à 5,5 et on concentre à basse température et sous pression réduite, ce qui donne un rendement égal à 50# en aminopsnicilline hydratée, 239° (C, 0,2 dans H^O). Un ti~ 35 trage Karl Fischer indique que les cristaux renferment 15$ d'eau. EXEMPLE! îl° 8 Acide 6/Th-)alpha-amino-mé'ta-h.vdgoxyphénvla.cétamido7-"oénici3J.s.niaug! „ On prépare est acide avec wi rsndement égal à'60^ comme Aéerit w-r.-f r.3^x&.„.p1.«® IC^'î ^ niais an pas* tant div sel'-(le acdiisa ds* l'&oi&s BAD ORIGINAL 69 28824 2016283 6/r+)alpha-benzyloxycarbonylamino-méta-hydrozyph.énylacétamido7-pénicillanique. L1amino-pénicilline cristallisée renferme 155^ d'eau et a tm /âlphaT^de +135° (G, 0,2 dans HgO). EXEMPLE N° 9 5 Acide 6/T-)alpha-amino-alpha-(para-hydroxyphényl)-acétamido7-pénicillanique» (a) On traite une suspension de 21,8 g d'acide (-)alpha-benzyl-oxycarbonylamino-alpha-( para-hydro xyphényl) acétique dans 180 ml d'eau avec une solution diluée de soude, ce qui donne me solution 10 limpide ayant un pH égal à 8,7. On ajoute 2,2 g de catalyseur formé par 5# de palladium sur du carbonate de calcium et on secoue le mélange dans l'hydrogène à la pression atmosphérique jusqu'à ce que l'absorption de gaz cesse. On sépare le catalyseur par filtration à travers un tampon de kieselguhr et on lave avec de l'eau. On 15 ajuste le filtirat et les produits de lavage combinés à un pH égal à 5,0 et on fait évaporer la solution sous vide jusqu'à un faible volume. On sépare le produit brut sous forme d'un précipité gélatineux qui est redissous quand le mélange est porté à ébullition® L'acide (-)alpha-amino-alpha-(para-hydroxyphényl)acétiqu© criatal-20 lin incolore se sépare, quand on refroidit la solution. On le recueille, on le lave avec un peu d'eau froide et on le sèche sous vide sur de l'anhydride phosphorique. Le rendement est égal à 10,1 g (835É), ?. 225-22600, /âlpha7§2 -108° (c, 1 dans E^O). (CgHgïïO^ calculé ï C, 57,5î H, 5,4ï H, 8,4$; trouvé 0, 57,2; h, 5,4; ÏT, 8,30) 25 Résonance magnétique nucléaire (DgO + HaOD) s multiplet centré sœ? T 3,15 (4H, aromatique), singlet T 5f8 (1H ^H-CHC, ). (b) On ajoute 60 ml de soude en solution méthanolique (0,324£, 0,0195 molé) à 3,34 g d'acide (-)alpha-amino-alpha-(para-hydroxy-phényl)acétique (0,02 mole) et on lave avec 20 ml de xaéthanol. 30 Quand on chauffe la suspension presqu'à 1'ébullition, on obtient une solution limpide, mais au reflux le sel de so&iiaa cristallisé de l'amino-acide se sépare« On ajoute à la suspension soue agitation à l'ébullition, en dis minutes, 2,4 al d.'aeétylaeétate de mé~ thyle (0,022 mole) dans 20 -il ds méthanol. Après ea,s©2?a vingt 35 minutes d'ébullition5 on obtient taie solution clair® et on fait bouillir celle-ci pendant encore vingt minute®. L© Estiiaaol est éliminé par distillation (température du bais, 150®0) et remplacé simultanément, selon le même débit, par du toluène anhydre, Quaad 90 ml de toluène ont été ajoutés, un solide cristallin blanc se BAD ORIGINAL 69 28824 12 2016283 sépare. On poursuit le processus jusqu'à ce que la température de distillation atteigne 100°C et on constate que 170 ml de toluène ont été ajoutés. On maintient la suspension pendant une nuit à 5°C, puis on recueille le produit. On lave avec du toluène anhydre et 5 on sèche sous vide à 40°0 sur de l'anhydryde phosphorique. Le rendement en (-)N-( 1 -méthoxycarbonylpropén-2-yl)-alpha-amino-alpha-(para-hydroxyphényl)acétate de sodium est égal à 4,5 g (95%) C1 jli,4*I05Na Calculé ; C, 54,4; H, 4,9; N, 4,9%; Trouvé t 0, 54,35; H, 4,9; 1, 4,9%. Infra-rouges (Nujol) î 3300 cssT^ (N-H ——), 10 1655 esT1 (C == 0 —-), 1560 cm"1 (COO"). (c) On ajuste une suspension agitée de 2,16 g d'acide 6-amino-pénicillanique (0,01 mole) dans 25 ml d'eau à un pH égal à 7,8 par 1'addition de soude ©a solution aqueuse à 10%, en veillant à ce que le pH ne s'élève pas au-dessus de 8,0 pendant 1'addition. 15 On ajoute 40 ml d'acétone et on refroidit la solution à-lO°C» On agite 25 ml d'acétone anhydre et on maintient entre -10 à -QeC tout ©3a ajoutant 1,0 ml de chloroformiate d'éthyle (0^0104 mole), pais 1,5 ml d® K-méthylmorpholine à 1% dans l'acétone, et £inalem©acë 2,87 g de (-)!*-( 1-méthoxycarbonylpropén-2~3rl)-=alphs,-20 amino-alpha-(para-hydroxypliéayl}acétate de sodium (0,01 mole) lavé avec de 13acétone anhydre froide (15 ml). On agite le mélange à -106o pendant trente minutes, puis on ajoute à la solution de 6-a-minopênieillanate de sodium décrite ci-avant et on lave avss 20 ml d8aeét©ae êaataydre froide® Oa agite le mélange pendant vingt minu-'àd tes à -îQ°C, puis on élimine l'acétone par distillation sous ^ide à la tempéïature ambiante et on ajoute 40 ml d'iaobutylsaéihyloétone à la solution aqueuse résiduelle. On refroidit le mélange à 5QG9 on agit® vigoureusement et on ajuste à un pH égal à 0,9 pai5 l'addition d8acide chlorhydrique concentré. On maintient le mélange >0 à un pïï égal à 0,9 et à 5-1Ûs0- pendant soixante-quinze minutes, puis on sépare les couches. On lave la couche aqueuse avec 10 ml d°isobutyliaëthylcétone puis on élimine le solvant résiduel sous 'dd©0 Oa refroidit la solution aqueuse à 5°C ©t" oa ajuste à ma pH égal à 5*2 mee uns solution aqu®us© à 10% de soude. Oa agite la 35 suspension résultant© à 5®0 pendant cinq minutes, puis on concen-t±-@ 60^,3 /iia à 2oô0 au tiers de son volume. On recueille 13acide 6ZT» ) al pae,-gjaiïiG»aipha~ ( para»hydroxyphényl ) aeétamidj>7-pénieilla-nlqu© erâstaliisé blanc, on le lave- avec 20 ml ds@au et on le sèche à l8ai2? a 40°G. Ls produit (2,8 g) ©st déterminé par spectroscopie BfiS> OBIGINAL 69 28824 2016283 aux infra-rouges et par résonance magnétique nucléaire, et par chromât ographi a avec une "bande de papier; on constate qu'il est identique à celui obtenu dans l'exemple N°3. L'intermédiaire décrit sous (b) ci-avant peut également être 5 préparé comme suit :-(d) On ajuste une suspension sous agitation de 4,32 g d'acide 6-aminopénicillanique (0,02 mole) dans 50 ml d'eau à un pH égal à 7,8 par addition avec précaution d'une solution à 10$ de potasse. On ajoute 80 ml d'acétone et on refroidit la solution à -10°G. c 10 On agite 50 ml d'acétone anhydre et on maintient entre -10° et 8°C tout en ajoutant 2,0 ml de chloroformiate d'éthyle (0,0208 mole), puis de la N-méthylmorpholine à 1$ dans l'acétone (3 ml) et finalement 5,74 g de (-)N-(l-méthoxycarbonylpropén-2-yl)alpha-amino-alpha-(para-hydroxyphényl)acétate de sodium (0,02 mole), qu'on incorpore 15 par lavage avec 30 ml d'acétone anhydre froide. On agite le mélange à -10°C pendant trente minutes, afin de compléter la formation de l'anhydride mixte en solution, puis on refroidit à -25°C et on filtre rapidement à travers du kieselguhr lavé par un acide. On lave le tampon de filtration avec 20 ml d'acétone anjiydre froide et on 20 ajoute le filtrat et les produits de lavage combinés à la solution acétonique aqueuse agitée froide de 6-amino-pénicillanate de potassium décrite ci-avant. On agite la solution claire sans refroidissement extérieur pendant trente minutes, puis on fait évaporer à siecité sous pression ré 25 duite à des températures inférieures à 20°G. On sèche la gomme résiduelle sous vide sur de l'anhydride phosphorique. Le produit brut obtenu pèse 9,7 g. On traite la plus grande partie (9,5 g) avec 70 ml de méthanol anhydre dans lequel il est largement dissous, mais on élimine un peu d'acide 6-aminopénicillanique (0,54 g) par filtration. 30 On agite le filtrat jaune pendant cinq minutes avec du charbon de bois (2,3 g), puis on filtre de nouveau le mélange. On dilue le filtrat avec 250 ml d'isopropanol anhydre, on déclenche la cristallisation par raclage et on laisse le mélange reposer à 5°0 pèndant une nuit. On recueille le solide blanc résultant par filtration, on le 35lave avec de l'éther anhydre et on sèche sous vide sur de l'anhydride phosphorique, ce qui donne 3,5 g de 6/C-)N-(l-méthoxycarbonylpropén-2-yl)alpha-amino-alpha-(para-hydroxyphényl)acétamidoj-pénicillanate de potassium hémihydraté. (C21H24N507SK, 5 huo calculé î C, 49,4; H, 4,9; n, 8,25; S, 6,25; 40 K, 7,65$; trouvé : 0, 49,25;H,5,2; N, 8,3; S,6,35; K 7,6$). 69 28824 14 2016283 Une solution aqueuse de ce sel acidifié à un pH égal à 2 libère rapidement l'acétylacétate de méthyle et l'acide 6/C-)alpïia-amino-alpha-(para-hydroxyphényl)acétamidç7-pénicillanique. exemple k° 10 5 On met 2 g d'acide 6/T-)alpha-amino-para-hydroxyphénylacéta- mido7-pénicillanique trihydraté à l'état finement broyé en suspension dans 5 ml d'eau et on ajoute 2,5 ml d'acide chlorhydrique 5N, On secoue le mélange jusqu'à ce que la plus grande partie du solide soit dissoute et on filtre rapidement. On ensemence le filtrat et 10 on laisse reposer à 5°C pendant trente minutes, des cristaux de forme hexagonale se séparent alors de la solution. On sépare les cristaux par filtration, on lave avec un peu d'eau froide et on sèche dans un four à 35-40°C, ce qui donne le chlorhydrate de 1'acide 6/C-)alpha-amino-para-hydroxyphénylacétamido7-pénicillani-15 que trihydraté (1,6 g) F. brunissage à 90°C, puis déshydratation} décomposition à 216-218°C. Titrage à l'hydroxylamine 100$. Poids moléculaire 496,0, teneur en HgO 11,9$. (G^ Cl. 3Hg0; cal culé ï G, 42,2; H, 5,7; N, 9,2; S, 7,0; Cl, 7,8$; trouvé : C, 42,1; H, 5,7; N, 9,1; S, 7,2; Cl, 7,9$), 20 EXEMPLE M0 11 On met 2 g d'acide 6/t-)alpha-amino-para-hydroxyphénylacéta-mido7-pénicillanique trihydraté à l'état finement broyé en suspension dans 200 ml d'eau et on ajoute 2,5 ml d'acide sulfurique 5N, puis on agite le mélange à la température ambiante pendant cinq 25 minutes. On filtre le mélange et on fait évaporer jusqu'à un faible volume (environ 50 ml) à basse température et sous pression réduite. On sépare par filtration le solide blanc qui cristallise à partir de la solution, on le lave avec un peu d'eau froide et on le sèche au four à 35-40°C, ce qui donne 1,2 g du sulfate d'acide di(6)x,X*) 30 plpha-amino-para-hydroxyphénylacétamido7-pénicillanique, F. brunissage à 210°C, décomposition à 230-231°C, titrage à l'hydroxylamine 227$; teneur en HgO 1,1$ (°32H40N6S3°14' calcu:L^ 1 c» 46,4; H, 4,9, ïï, 10,1; 3, 11,6$; trouvé : C, 46,1; H, 4,9; ïï, 10,1; S, 11,8$), EXEMPLE N° 12 35 Acide (-)alpha-benz.vloxyoarbonamido-alpha-(para-bert7.vlnmrcarbonylo-xvphénvl)acétique. (a) On ajoute, à une solution glacée vigoureusement agitée de 15 g d'acide (-)alpha-benzyloxycarbonamido-alpha-(para-hydroxy-.phényl)acétique et de 7 g de soude dans 1500 ml d'eau, 13 g de fchlo- 69 28824 15 2016283 roformiate de benzyle. Après agitation pendant deux heures, on extrait la solution avec de l'éther et on sépare par filtration et on rejette une petite quantité du solide précipité. On fait barboter un courant d'air à travers la phase aqueuse séparée pour éliminer 5 l'éther en solution, lors de l'addition de la solution à un excès d'acide chlorhydrique, une gomme est précipitée. On sépare par décantation le liquide qui surnage et on ajoute 200 ml de benzène à la gomme humide résiduelle. Lors d'un chauffage au reflux, la gomme est dissoute et on élimine l'eau sous forme âTun azéotrope (appa-10 reil Dean and Stark). Lors du refroidissement de la solution benzé-nique, on obtient de l'acide (-)alpha-benzyloxycarbonamdo-alpha-" (para-benzyloxycarbonyloxyphényl)acétique sous forme d'un solide cristallisé blanc (14 g). F. 94-95°0. L'analyse montre que le composé renferme une molécule de benzène de cristallisation. ^24^21 ^*78 15 CgHgî calculé : C, 70,2; H, 5,3» H, 2,7$, trouvé : C, 69,8, H, 5,3? H, 2,8$. ppm de GBG13 ï 10,34 (s, 1H, HH); 7,25 (m, Ar, 20H); 5,35 (s, 1H,CH) 5,25 (s, 2H, CHg) et 5,05 (s, 2H, CHg). kr\byri -rirto f.. ) N-carbox.v- ( para-benavloxvcarbonyloxyphényl ) °glvcvliau® », 20 (b) On recouvre 4,35 g de solution dans le benzène de l'acide D-alpha-benzyloxycarbonamido-alpha- ( para-benzyloxy carbonyloxyphényl) acétique avec du chlorure de thionyle et on chauffe la solution sa reflux pendant deux heures. On élimine le chiorure de thionyle en excès sous pression réduite, les dernières traces étant elles-mêmes 25 éliminées par co-distillation avec du benzène anhydre sous pressisa réduite, puis stockage sous vide pendant trente minutes« On ajoute alors 15 ml d'éther anhydre au résidu gommeux, ce qui donne une so= lution claire qui, lorsqu'on la laisse reposer pendant cinq à dix minutes, provoque la précipitation d'anhydride (-)H-carboxy-(para-30 benzyloxycarbonyloxyphényUglycylique sous forme ô.8un solide cristallisé blanc (1,33 g). F. 118-120°C. C^H^NOg calculé s C, 62,4? H, 4,0; N, 4,3$; trouvé î 0, 62,3; H, 4,1; B, 4,3$« Acide 6/T- ) alpha-amino-alpha- ( para-bensyloxycarbonyloxyphényl ) acém° mido7-pénicillanique. 35 (c) On ajuste une suspension de 0,66 g d8acide 6-smin©pénieilX«v= nique dans 100 ml d'eau à un pH égal à 5,5 et on ajoute à 5°C à la suspension agitée vigoureusement, par fractions en cinq minutess 0,99 g d'anhydride (-)îî-carboxy-(para-benzyloxycarbonyloxyphényl) glycylique. Le pH demeure à 5,5 pendant l'addition. On poursuit BAD ORIGINAL 69 28824 16 2016283 l'agitation de façon vigoureuse pendant deux heures à 5-10°C. On filtre le mélange à travers du kieselguhr et on concentre 1© filtrat à 25 ml. 0,09 g d'acide 6/T-)alpha-amino-alpha-(para-benzylo-xycarbonyloxyphényl)acétamido7-pénieillanique précipite sous forme 5 d'un solide blanc. Une chromatographie sur papier indique que le produit a été contaminé avec environ 5$ d'acide 6-aminopénicilla-nique. Dans le système butanol/éthanol/eau î Acide 6/T-)alpha-amino-alpha-(para-benzyloxycarbonyloxypliényl) acétamido7-pénicillanique 0,47; acide 6-aminopénicillanique Ep 10 0,13» Le produit inhibe E. coli 2 selon une concentration égale à 5 ^jg/ml et'Staph. Oxford à une concentration de 0,1 jig/ml. Hydrolyse du groupe O-benz.vloxycarbonvle. (d) On fait dissoudre la pénÉilline qui précède dans une solution tampon phosphatée à un pH égal à 9 et on maintient à ce pH d m frac-15 tions étant prélevées à certains intervalles et examinées par chro-matoferaphie sur papier» Après trois jours à la température asMante, la conversion en acide 6/T-)alpha-amino-alpha-(parahydroxyphsnyl) acétamido7-pénicillanique est virtuellement terminée. F.TTWMPTiR TJQ 20 Anhydride (-)N-carboxy-(para-hydroxyphényl)glycyligue (a) On fait passer du phosgène gazeux à travers une suspension d'acide (-)alpha-amino-alpha-(para-hydroxyphényl)acitique (4 g) dans 150 ml de dioxane, à 50-60°C, jusqu'à ce qu'on obtienne une solution claire. On évacue le phosgène en excès par purge avec de 25 l'azote et on filtre la solution. On élimine le dioxane à partir du filtrat à 50°C sous pression réduite, ce qui laisse une huile, laquelle se solidifie par stockage sous vide sur de 11 anhydi-iie phosphorique. On fait dissoudre le solide dans 50 ml d'acétate d'I-thyle à l'ébullition,,ce qui laisse une petite quantité de solide 30 gommeux. On ajoute du charbon de bois et on agite le mélange tout en lui permettant de refroidir à la température ambiante. Après filtration à travers du kieselguhr, on ajoute lentement le filtrat à 400 ml d'éther de pétrole 40-60°C sous agitation, ce qui précipite l'anhydride (-)N-carboxy~(para-hydroxyphényl)-glycylique sous 35 forme d'un solide cristallisé blanc (3,1 g). F. 260°C (décomposition). C9H7ïr04.' calculé : 0, 56,0; H, 3,65; N, 7,25$; trouvé : G, 56,1; H, 3,7; S, 7,1$. 69 28824 17 2016283 Acide 6/r-)alpha-amino-alpha-(para-hydro xyphényl)acétamido7-pénicillanique. (h) On ajuste une suspension de 1,5 g d'acide 6-aminopénicillanique dans 100 ml d'eau à un pH égal à 5,6 par l'addition d'une solu-5 tion de soude. On ajoute à la solution agitée, à 5°C, 1,5 s d'aniiy-dride (-) lî-carboxy-C p&rahydroxyphényl) glycylique en plusieurs fractions, en cinq minutes. On agite le mélange à 5-10°C pendant une heure, puis pendant une autre heure à la température ambiante. Il se produit orne quantité considérable de mousse, qui est contrôlée par 10 l'addition d'une ou deux gouttes d'alcool n-octylique. On filtre ensuite le mélange à travers du kieselguhr et on ajuste le pH du filtrat à 5,0. Aucun solide n'est précipité par concentration; par suite, on fait évaporer la solution à siccité, ce qui donne un solide blanchâtre (1,7 g). Uns chromatographie sur papier indique que 15 le produit renferme de l'acide 6-aminopénicillanique et l'acide 6/T'-) alpha-am ino-alpha-( para-hydro xyphényl) -acétamido/-pénicillanique requis, selon des proportions sensiblement égales. EXEMPLE JP 14 Réaction de l'acide 6-aminopénicillanique avec le chlorhydrate du 20 chlorure de (-)alpha-amino-alpha-(-para-hydroxyphényl) acét.vle. On met 1,67 g d'acide (-)alpha-amino-alpha-(para-hydroxyphényl) acétique en suspension dans 50 ml de chlorure d'acétyle et on refroidit à 0°C, tandis qu'on ajoute finalement 4,16 g de pentachlo-rure de phosphore à l'état finement pulvérisé, tout en agitant. On 25 ajoute deux gouttes de diméthylformamide et on fait barboter de l'acide chlorhydrique anhydre à travers le mélange glacé pendant quatre-vingt-dix minutes, puis de l'azote anhydre pendant une heure. Pendant le passage des gaz, une gomme se sépare, puis cristallise. On recueille le solide granuleux jaune, on le lave soigneusement 30 avec de l'éther anhydre et on le stocke sous vide sur de l'anhydride phosphorique, étant donné qu'il se décompose par exposition à l'air humide. Le produit (1,27 g) que l'on considère comme un chlorhydrate du chlorure d'acide, présente une absorption carbonyle caractéristi-que aux infra-rouges (1780 cm ). 35 On ajuste 0,63 g d'acide 6-aminopénicillanique dans 20 ml d'eau à un pH é-^al à 6,2 et on ajoute 80 ml d'acétone. On refroidit la solution à C°0 et on ajoute. 1,27 g de chlorhydrate du chlorure d'acide solide décrit précédemment, par fractions, en dix minutes. Quand la moitié environ du réactif a été ajoutée, le pH est tombé à 2. pen 69 28824 18 2016283 dant l'addition de la quantité restante, on le maintient à cette valeur par l'addition d'une solution à 10^ de soude, suivant les besoins. On agi-je le mélange à C°0 pendant dix minutes, puis on concen-5 tr-e sous pression réduite pour éliminer l'acétone- et on clarifie par filtration à travers du kieselguhr. On lave le filtrat avec daus fois 25 inl de méthylisobutylcétone et on concentre la solution aqueuse à basse température et sous pression réduite à un volume de 20 ml environ» Après une nouvelle clarification par filtration à 1C travers du kieselguhr; on ajuste la solution à un pH égal à 5f on fait évaporer à siccité sous vide. Le solide blanc résiduel (1,6 g) contient, cornue le montre une chromatographie sur papier, de l'acide 6-/T - ) alpha-amino-alpha- ( para-hydro sqrphéîiyl ) acétamidoj-pénicillanique . 15 SXISivPLE 15 Bê ta-naphtal eue suifona te de l'aciae M. -)alpha1-amino-alpha-(para-hydrozyphényl ) acétamido7 -pénicillanique. On agite 2,09 g d'acide 6/C-)alpha-amino-alpha-(para-hydroxyphényl )acétainidoj-pénicillanique trihydraté (0,005 mole) avec 20 ml 20 d'eau et 10 ml d'éthanol. On traite le mélange avec une solution aqueuse 1 M d'acide naphtalène-bêta-sulfonique (5 ml, 0,005 mole), ce qui donne une solution claire qui cristallise par repos. Après une heure, on recueille les cristaux, on les lave avec ae l'eau glacée et on sèche à l'air à 30°0. Le produit (0,82 g) a un point 25 de fusion égal à 1S4°0 (décomposition) et est foraé comme le montre l'analyse par le bêta-naphtalène-sulfonate trihydraté. (-'26^'27^3^2^8' SH^O; calculé : C, 49»7; H, 5,3; ÎT, 6,7; S, 10,2$; trouvé : G 49»5; H, 5,4; N, 6,6; S, 10,0$. EXEMPLE H° 16 30 6JJ-)alpha-amino-alpha-(para-hydroxyphényl)acétamido7-pénicillanate de sodium. On met 8,40 g d'acide 6-/C-)alpha-amino-alpha-(para-hydroxy-phényl)acétainido7-pénicillanique trihydraté à l'état finement pulvérisé (0,02 mole) en suspension dans 250 ml de dichlorure de mé->5 thylène, on traite avec 1,75 g de diéthylamiue et on agite pendant quinze minutes. On provoque une dissolution complète par l'addition àe 25 ml de r.iéthanol et on déshydrate la solution par agitation avec 5 g de tamis moléculaire Linde de type 4A pendant trente minutes. Cn filtre la solution et on traite le filtrat avec une solution 1M BAD ORIGINAL 69 28824 2016283 de 2-éthylhexanoate de sodium dans 20 ml de méthylisobutylcétone. le sel de sodium se sépare sous forme d,un solide blanc qui est ensuite recueilli après quinze minutes, lavé avec du dichlorure de méthylène et séché sous vide. Rendement 77$. 5 cl6H1gir205sna calculé î C, 49,6; H, 4,7; f, 10,8; s, 8,3; Na, 5,9%; trouvé : c, 49,6; H, 5,2; N, 10,3; S, 8,0} Ua, 5,5$. EXEMPLE U° 17 Combinaisons synergiques de l'acide 6/Ç-)alpha-amino-alpha-(para-hydroxyphényl)aeétamido7-pénicillanique avec des pénicillines ré-10 sistant à la pénicillinase. Certaines souches de bactéries Grain-négatives qui sont relativement insensibles à l'acide 6/T"- ) alpha-amino-alpha- ( para-hydroxy-phényl)acétamido7-pénicillanique seul sont inhibées par des concentrations extrêmement faibles de cet antibiotique en présence de 15 100 jig/ml de diverses pénicillines résistant à la pénicillinase comme la méthicilline, la cloxacilline, la dieloxacilline, la fluo-cloxacilline et la nafcilline. Aucune de ces pénicillines résistant à la pénicillinase n'inhibe par elle-même les bactéries Grain-négatives à une dose de 100 jag/ml. 20 les résultats désirés sont obtenus par dilution en série dans de l'agar-agar nutritif, l'inoculum est formé par une goutte d'un bouillon de culture laissé pendant une nuit et les valeurs de C.I.M. sont lues après dix-huit heures à 37°C. Concentration d'inhibition minimum (yig/ml) de AB.2333 en présence de 25 100 jig/ml des antibiotiques suivants : Bactérie Néant Méthicilline Cloxa- Dicloxa- Pluo- Haf- cilline cilline cloxa- cilliœ E. coli 37 Proteus 30 morganii G Proteus vulgaris E Paracolon 232 ELebsiella C 978 cilline 125 1,25 1,25 1,25 1,25 2,5 250 1,25 12,5 5,0 5,0 125 250 50 12,5 2,5 5,0 125 125 2,5 1,25 1,25 1,25 12,5 250 50 50 50 25 50 69 2S824 20 2016283 HBV3HDIOA 9 I G £ 3 1Acide 6/T-)alpha-anino-para-hyiroxypLénylacét amidç>7-péni- eillarâque et ses sels non toxiques. 2.- Procédé pour la préparation de l'acide 6/C-)alp3m-amiiio-para-hydroxyphénylacétamidoj-pénicillanique et de ses sels non toxiques, caractérisé en ce qu'on fait réagir de l'acide 6-amino-pénicillariique ou un sel de celui-ci avec un dérivé fonctiormel de l'isomère (-) d'un acide carboxylique de formule générale : 10 çh.0g0h (ii) x où X représente un groupe amino, tm groupe amino protégé ou un 15 groupe qui est ensuite converti en un groupe amino. BAD ORIGINAL