FR 2035820 A1 19701224 FR 6941817 A 19691204 69 41817 i 2035820 10 20 50 La présente invention est relative à la préparation de nouveaux dérivés, thérapeutiquement actifs, de l'acide 7-amino-céphalosporanique (ACA) de formule E1~CH2~C0~1ÎH " A N 0^ \/y GH9Rp (I) 2 2 COOH dans laquelle R^ représente un reste tétrazolique lié par"un atome d'azote et représente de l'hydrogène ou un groupe hydroxyle libre ou un groupe hydroxyle estérifié par un acide carboxylique et dans lequel les atomes d'oxygène de l'ester peuvent être remplacés par des atomes de soufre, mais toute-^ fois par le groupe acétoxy, un groupe carbamoyloxy éventuellement N-substitué, dans lequel les atomes d'oxygène peuvent être remplacés par du soufre, ou bien représente un groupe aminogène quaternaire, et de leurs sels éventuellement internes. Un groupe hydroxyle ^ estérifié, dans lequel les atomes d'oxygène peuvent être remplacés par du soufre, dérive, d'un acide carboxylique et est, par exemple, un groupe alcanoy-loxy inférieur éventuellement substitué, par exemple par des atomes d'halogène, en particulier par du chlore, comme les groupes formyloxy, propionyloxy, butyryloxy, pivaloyloxy, ^ chloracétoxy, ou bien un groupe aryl-carbonyloxy ou aryl- thiocarbonyloxy, aryl-carbonylmercapto ou aryl-thiocarbonyl-mercapto monocyclique ou bicyclique éventuellement substitué, par exemple par des restes alcoyle inférieur, par des restes alcoxy inférieur ou par des restes alcoyl(inférieur)-mercapto, par des atomes d'halogène ou par le groupe ITC^, en particulier le groupe benzoyl-mercapto. Le radical R2 peut aussi être un groupe carbamoyloxy éventuellement substitué, par exemple un groupe de formule ,c -O-CO-HH-R, dans laquelle R^ représente de l'hydrogène ou représente un reste aliphatique, aromatique, araliphatique ou hétérocyclique, en particulier un reste alcoylique inférieur, linéaire ou 1 69 41817 2 2035820 ramifié, non substitué ou substitué, de préférence par un ou. plusieurs groupes alcoxy inférieur ou par un ou plusieurs atomes d'halogène, comme le reste méthyle, le reste éthyle, mais surtout le reste p-chloréthyle. 5 Le radical Rg peut en outre être un groupe thio- carbamoyl-mercapto de formule -S-CS-N 10 R4 dans laquelle R^ a la signification indiquée ci-dessus, et R^ représente de l'hydrogène ou représente R^. Le radical Rg représente en outre un groupe aminogène quaternaire, dans lequel l'atome d'azote quaternaire fait par exemple partie d'un, noyau aromatique, tel qu'un noyau quino-léine, isoquinoléine ou pyrimidine, mais en particulier d'un noyau pyridine non substitué ou substitué, par exemple de formule 20 15 dans laquelle R^ représente de l'hydrogène ou m ou plusieurs 25 groupes alcoyl(inférieur)-carbonyle, alcoxy(inférieur)-carbo-nyle, carbamoyle ou carboxyle, ou -un ou plusieurs atomes d'halogène. Les sels des nouveaux composés sont des sels métalliques, surtout ceux de métaux alcalins ou alcalino-terreux 30 thérapeutiquement utilisables, comme le sodium, le potassium, l'ammonium, le calcium, ou des sels avec des bases organiques, par exemple avec la triéthylamine, la ïf-éthyl-pipéridine, la dibenzylaminé, la N-benzyl-p-phénéthylamine, la N,ÎT' -dibenzyl-éthylène-diaminé, la procaïne, 1 ' éphénamine. Si -le radical Rg 35 est basique, il peut alors se former des sels internes. Les nouveaux composés présentent un effet antibactérien particulièrement bon. Ils sont actifs aussi bien vis-à-vis des bactéries Gram positif, que surtout vis-à-vis des bactéries Gram négatif, par exemple contre Staphylococcus 69 41817 3 2035820 aureus pénicillino-résistant, Esch.erich.ia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhosa et Bacterium proteus, comme le montre également un essai effectué sur l'animal, par exemple sur des souris. Par application sous-cutanée, et suivant le 5 "type de l'infection bactérienne, une quantité de 0,1 à 100 mg • par kg est chimio-thérapeutiquement active sur ces animaux. Les composés peuvent par suite être utilisés pour combattre des infections provoquées par de tels micro-organismes, ainsi que comme additifs à la nourriture des animaux, pour la conser-10 vation d'aliments ou comme désinfectants. Particulièrement' précieux sont les composés dans lesquels le reste représente le groupe (3-chloréthyl-carbamoyle ou un groupe pyridinio non substitué ou substitué comme indiqué ci-dessus. Les composés de la présente invention peuvent être 15 préparés suivant des méthodes connues en elles-mêmes. On les obtient lorsque : a) on fait réagir sur du tétrazole un composé de formule 20 30 Z-HH-CH CH . CH2 G H . C-0Ho-Ro (II) , / 2 2 25 ' C00H dans laquelle Z représente un reste halogéno-acétyle, comme le reste fluoracétyle, chloracétyle, iodacétyle ou surtout bromacétyle, et Rg représente de l'hydrogène ou un groupe hydroxyle libre ou estérifié (auquel cas dans le groupe ester les atomes d'oxygène peuvent être remplacés par des atomes de soufre), ou lorsque b) on acyle par le groupe R-j^-CHg-CO- 35 un composé de la formule (II), dans laquelle Z représente de l'hydrogène et R2 représente de l'hydrogène ou un groupe hydroxyle libre ou estérifié (tandis que dans le groupe ester les atomes d'oxygène peuvent être remplacés par des atomes de 41817 4 2035820 soufre) et lorsqu'on transforme les composés obtenus suivant a) où b), dans lesquels B2 représente le groupe acétoxy, en composés renfermant un groupe ester autre que le groupe acétoxy (dans lequel les atomes d'oxygène peuvent éventuelle-5 ment être remplacés par des atomes de soufre), ou en composés qui, à la place du groupe acétoxy, renferment un atome d'hydro-'gène, un groupe hydroxyle libre, un groupe carbamoyle éventuellement ïï-substitué, dans lequel les atomes d'oxygène peuvent être remplacés par des atomes de soufre, puis, si on 10 le désire, transforme les composés obtenus en leurs sels métalliques thérapeutiquement utilisables, par exemple en leurs sels de métaux alcalins ou alcalino-terreux, ou en sels avec de l'ammoniac ou des bases organiques, ou forme à partir des sels obtenus les acides carboxyliques libres ou éventuellement 15 les sels internes. La réaction sur le tétrazole du composé (II), où Z représente un groupe halogéno-ac.étyle, a lieu à la température ambiante ou à me température légèrement accrue ou abaissée, de préférence à une température &ô 20 à 40°G. Elle est de 20 préférence effectuée dans un solvant organique inerte comme le chlorure de méthylène, le chloroforme, le tétrachlorure de carbone, le tétrahydrofuranne, le dioxanne, le diméthylforma-mide ou 1'acétonitrile, en présence d'un agent capable de lier l'hydracide halogéné, par exemple d'une base minérale faible 25 telle qu'un carbonate, bicarbonate ou acétate de métal alcalin, ou d'une aminé tertiaire (en particulier d'une tri-alcoyl (inférieur)-amine, de préférence la di-isopropyl-éthylamine (base de Hunig). L'acylation du composé (II), où Z représente de 30 l'hydrogène, est effectuée de la manière connue pour l'acylation des amino-acides, par exemple à l'aide d'un halogénure d'acide, en particulier d'un chlorure d'acide, ou d'un azothy-drure ou d'un anhydride d'acide, en particulier d'un anhydride mixte, par exemple d'un anhydride mixte formé avec l'acide 35 carbonique, l'acide pivalique ou l'acide trichloracétique mono-est érifié, ou avec l'acide libre proprement dit, en présence d'un agent de condensatiôn tel qu'un carbodiimide, par exemple le dicyclohexyl-carbodiimide.- On peut effectuer aussi l'acylation du composé (II) en silylant ou en stannylant d'abord 69 41817 5 2035820 le composé (II), dans lequel Z représente de l'hydrogène, en acylant le produit de silylation ou de stannylation avec l'acide ou avec tm dérivé réactif d'acide renfermant le groupe R, -CH--CO-5 1 ^ puis en éliminant les groupes silyle ou stannyle éventuellement présents par de l'alcool ou de l'eau, (cf. par exemple le brevet britannique 1.073*330 et la demande hollandaise 67.17107)» Les dérivés de la céphalosporine qui sont utilisés 10 comme substances de départ sont connus ou peuvent être préparés suivant des procédés connus en eux-mêmes. Les composés de la formule (II), dans laquelle Z représente de l'hydrogène et R représente un groupe ester autre que le groupe acétoxy, sont avantageusement préparés suivant le procédé décrit dans la 15 demande de brevet déposée en FRANCE par la Demanderesse le 4- Juillet 1968 sous le n° PV 157»833 et-ayant pour titre "Procédé de préparation de dérivés de l'acide céphalosporanique". La transformation du composé de la formule (I), dans laquelle R représente le groupe acétoxy, en un composé 20 comportant un groupe hydroxyle libre, et son estérification avec d'autres acides que l'acide acétique ou sa transformation en dérivés carbamoylés ou en composés dans lesquels R est un groupe aminogène quaternaire, a lieu d'une manière connue en soi. 25 L'invention concerne également les formes d'exécution du procédé suivant lesquelles on part d'un composé obtenu comme produit intermédiaire à un stade quelconque du procédé et effectue les phases encore manquantes dudit procédé, ou interrompt ce dernier à l'un quelconque de ses stades, ou bien 30 dans lesquelles on forme les substances de départ dans les conditions de la réaction ou bien dans lesquelles les composants de la réaction se présentent le cas échéant sous la forme de leurs sels. Les nouveaux composés peuvent être utilisés comme 35 médicaments, par exemple sous la forme de préparations pharmaceutiques. Ces dernières renferment les composés en mélange avec une matière de support pharmaceutique, organique ou minérale, solide ou liquide, convenant pour l'application entérale, topique ou parentérale. Pour la formation de cette 69 41817 6 2035820 matière de support, on envisage des substances ne réagissant pas sur les nouveaux composés, comme par exemple l'eau, la gélatine, le lactose, l'amidon, l'alcool stéarylique, le stéarate de magnésium, le talc, des huiles végétales, des 5 alcools benzyliques, des gommes, le propylène-glycol, des polyalcoylène-glycols, la vaseline, la cholestérine ou d'autres excipients connus. Les préparations pharmaceutiques peuvent se présenter, par exemple, à l'état de comprimés, de dragées, d'onguents, de crèmes, de capsules, ou sous forme liquide à 10 l'état de solutions, de suspensions ou d'émulsions. Le cas échéant, elles sont stérilisées et/ou renferment des substances auxiliaires, telles que des agents de conservation, de stabilisation, des agents mouillants ou émulsionnants, des solubilisants ou des sels servant à faire varier la pression osmotique, 15 ou des tampons. Elles peuvent aussi renfermer d'autres substances thérapeutiquement précieuses. Les préparations sont obtenues suivant des méthodes usuelles. L'invention est décrite plus en détail dans les exemples non limitatifs qui suivent, dans lesquels les tempé-20 ratures sont indiquées en degrés centigrades. Dans la chromâtographie en couche mince sur des plaques de gel de silice, on utilise les systèmes suivants : Système 52 = mélange (75 ' 7»5 : 21) de n-butanol, d'acide acétique glacial et d'eau. 25 Système 101 A = mélange (42 ; 24 : 4 : 30) de n-butanol, de pyridine, d'acide acétique glacial et d'eau. 69 41817 7 2035820 EXEMELE 1 Dans 25 ml de chlorure de méthylène et en ajoutant 3,45 ml de ÏT,rr-di-isopropyl-éthylamine, on dissout 3>93 S 5 d'acide 7-bromacétylaminO~céphalosporanique. On ajoute au tout une solution qui a été préparée en dissolvant 0,84 g de tétrazole dans 5 ml de diméthylformamide et en diluant ensuite avec 10 ml de chlorure de méthylène. On rince ensuite avec 7 ml de chlorure de méthylène. 10 Au bout de 30 heures, on ajoute au mélange réaction- nel 40 ml d'une solution à 10 % de dihydrogéno-phosphate de potassium et établit le pH dans la phase aqueuse à- une valeur de 5,2 en ajoutant peu d'une solution binormale de carbonate de sodium. On secoue et sépare ensuite les deux phases. On 15 extrait encore la phase aqueuse à une reprise avec 100 ml d'acétate d'éthyle et jette les deux solutions organiques, après les avoir au préalable lavées à deux reprises avec chaque fois 20 ml d'une solution 1/15-molaire d'un phosphatè-tampon d'un pH de 5. 20 Après avoir réuni les phases aqueuses, on les recouvre de 500 ml d'acétate d'éthyle, ajuste à un pH de 2,6 en agitant avec de l'acide chlorhydrique normal et sature de chlorure de sodium. Après avoir séparé la phase organique, on 'extrait encore la solution aqueuse successivement avec 200, 100 et 25 100 ml d'acétate d'éthyle. On lave successivement les solutions obtenues à l'acétate d'éthyle avec 40 ml d'une solution saturée de chlorure de sodium, les sèche avec du sulfate de sodium et les concentre à sec sous vide. On obtient d'abord, 3>5 g d'une résine jaunâtre. On dissout cette dernière dans 15 ml de 30 méthanol, puis ajoute 4,0 ml d'une solution méthanolique tri-molaire d'a-éthyl-hexanoate de sodium et ensuite ajoute lentement de l'éther. Après avoir laissé reposer à 0° pendant une demi-heure, on peut isoler par filtration,sous forme cristalline, 3>6 g du sel de sodium de l'acide 7-£~tê-bTaz°lYl-(l')-35 acétylamino_7-céphalosporanique. L'acide cristallin est obtenu en extrayant en retour dans de l'acétate d'éthyle à un pH de 2. R^ = 0,17 dans le système 52 = 0,47 dans le système 101 A 69 41817 8 2035820 J/~a_7p° = + 157° 11° (c = 1 dans l'eau, à l'état de sel de sodium). Spectre ultra-violet dans l'eau, à l'état de sel de sodium : Nnax = 250 (e = 7-9ÛO) 5 Spectre de résonance magnétique nucléaire dans le sulfoxyde de deutéro-diméthyle (100 Me) : En dehors des signaux caractéristiques pour l'acide 7-amino-céphalosporanique, on observe un singulet pour .ô = 5>35 ppm, qui. peut être attribué au gx'oupe -Cïïg du reste 10 tétrazolylacétyle, et un singulet pour Ô = 9>35 ppm pour le groupe =CH- dans le noyau tétrazolique. Il n'y a pas d'échange, avec I>20 dans le reste tétrazolyle. Dans une atmosphère d'azote, on met en suspension, dans 35 ml d'eau, 8,8 g d'acide 7-/"~tétrazolyl-(l)-acétyl-15 amino_7-céphalosporanique et 5,0 g de thiocyanate de potassium, puis, tout en agitant de façon intensive, fait passer en solution en chauffant à 60°. On ajoute alors 5>0 ml de pyridine et continue d'agiter à 60° pendant 6 heures et demie, sous atmosphère d'azote. On extrait le mélange réactionnel obtenu, 20 d'abord avec 300 ml, puis avec 200 ml de méthyl-isobutyl-cétone. On procède ensuite à une extraction à six reprises avec chaque fois 120 ml d'une solution de "Amberlite LA-1", sous la forme acétate, dans de la méthyl-isobutyl-cétone, solution qui est préparée en agitant pendant Une demi-heure, avec 160 ml d'eau, 25 un mélange constitué par 200 ml de "Amberlite LA-1", par 24 ml d'acide acétique glacial et par 600 ml de méthyl-isobutyl-cétone, et en séparant la phase organique. On extrait alors encore à deux reprises avec chaque fois 120 ml de méthyl-isobutyl-cétone. On concentre d'abord la solution aqueuse, sous 30 un vide de l'ordre de 0,5 mm de mercure, jusqu'à la moitié de son volume, puis ajoute yo ml de diméthylformamide et concentre le mélange, sous le même vide, jusqu'à un volume de 20 ml environ. Il se forme alors un précipité que l'on sépare par essorage et sèche sous un vide poussé. On peut faire cristal-35 liser l'acide 3-(désacétoxyméthyl)-3-pyridiniométhyl-7-/—tétra-zolyl-(l)-acétylamino_7-céphalosporanique en le dissolvant dans s peu d'eau et en laissant reposer à 0°. Le composé présente un pouvoir rotatoire spécifique 41817 9 2035820 /TaJ7^ - + ^0° i 1° (c = 0,92 dans l'eau). Spectre ultra-violet : ^max = 256 mil (e = 13.700). La valeur de E^ est de 0,01 dans le système 52 et de 0,11 dans le système 101 A. EXEMPLE 2 Dans 60 ml de diméthylformamide et en ajoutant 10,5 ml .de ÎT,IT-di-isopropyl-éthylamine, on dissout 14,1 g d'acide 10 3-(désacétoxyméthyl)-3-benzoylthiométhyl-7-bromacétylamino-céphalosporanique. On ajoute au tout une solution de 2,52 g de tétrazole dans 10 ml de diméthylformamide. On rince ensuite avec 5 ml de diméthylformamide. Après avoir laissé reposer pendant 46 heures à la 15 température ambiante, on introduit, tout en agitant de façon intensive, dans le mélange réactionnel maintenant refroidi avec de la glace, 95 ml d'acide chlorhydrique 1/12-normal. On sépare, par filtration à travers une mince couche de "Hyflo", lé précipité floconneux brun qui s'est alors formé, puis le 20 jette. On ajoute au filtrat, de la manière décrite ci-dessus, une autre quantité de 505 ml d'acide chlorhydrique 1/12-normal et sépare le précipité presque incolore, par filtration et lavage avec 20 ml d'eau. On purifie cette matière brute par chromâtographie sur une colonne de 340 g.de gel de silice 25 (diamètre 5 cm) avec des mélanges de chloroforme et d'acétone. On concentre à sec sous vide les éluats obtenus avec des proportions volumétriques de chloroforme et d'acétone de 3 1 1 à 1:1, dissout à nouveau dans le méthanol et transforme, à l'aide d'a-éthyl-hexanoate de sodium, en le sel de sodium pur 30 de l'acide 3-(désacétoxyméthyl)-3-benzoyl-thiométhyl-7-/f~ tétra-zolyl-(1)-acétylamino_7-céphalosporanique. Spectre ultra-violet dans l'eau ^max = 243 mu (e = 15.800) et 275 m|i (e = 20.100)., La valeur de E^ est de 0,36 dans le système 52 et de 0,48 dans 35 le système 101 A. La matière de départ peut être préparée comme suit : Dans une solution (bien agitée et maintenue à une température de - 13 à - 15°) de 9,2 ml de bromure de bromacé-tyle dans 100 ml de chlorure de méthylène, on ajoute goutte-à- 69 41817 10 2035820 goutte, sous atmosphère d'azote, au cours d'une heure, line solution de 17,5 g d'acide 3-(désacétoxyaiéthyl)-3-benzoyl-thiométhyl-7-amino-céphalosporaniçjue (cf. brevet belge 650 444) et de 12,5 ml de triéthylamine dans un litre de diméthylfor-5 mamide. On laisse la température monter lentement à 10° au cours d'une heure et demie et la maintient à cette valeur pendant une demi-heure encore. On élimine ensuite par distillation sous vide, contre un réfrigérant à la glace sèche et à l'acétone la majeure partie du solvant, sous une pression de 10 0,5 à 1 mm de mercure. On verse le produit huileux dans un- phosphate -tampon d'un pH de 6 et secoue avec un litre d'acétate d'éthyle. A la limite des deux phases, il se forme un précipité que l'on sépare par filtration ou centrifugation. On ajuste alors le pH de la phase aqueuse à une valeur de 2, sature cette 15 phase avec du chlorure de sodium et sépare la phase organique. On extrait ensuite la phase aqueuse avec 600 et 400 ml d'acétate d'éthyle. Après avoir lavé avec une solution saturée de chlorure de sodium, on sèche les phases organiques sur du sulfate de sodium et les filtre successivement à travers une 20 colonne de 100 mg de gel de silice. On concentre les filtrats à sec sous vide, ajoute 30 ml d'éthanol au résidu et cristallise à - 20°. On obtient 7>8 g d'acide 3-( Xmax = 243 mu (e = 16.800) et 275 mu (e = 20.600). Le pouvoir rotatoire spécifique est 30 Z~°L7d0 = - 47 ! 1° /~c = 1 ; dans un mélange (1 : 1) d'une solution décimolaire de bicarbonate de sodium et d'acé- tone_7» EXEMPLE 3 35 Dans 35 ml de pyridine, on dissout 4,32 g du sel de sodium de l'acide 3-(dés-acétoxyméthyl)-3-benzoylthiométhyl-7-J/~tétrazolyl-(l)-acétylamino__7-céphalosporanique et ajoute ensuite 35 ml de dioxanne. On ajoute alors au tout 20,9 ml d'une solution à 40 % de perchlorate de mercure et, tout en 69 41817 îi 2035820 agitant vigoureusement, laisse réagir pendant 45 minutes à 4-5° sous atmosphère d'azote. On refroidit, ajoute 11,1 ml d'acide thiobenzoïque et secoue pendant 5 minutes. On élimine les solvants par distillation sous vide et filtre à travers de la 5 "Celite" une solution du résidu dans 140 ml d'eau. On lave successivement le filtrat avec 90 ml de toluène, à deux reprises avec chaque fois 55 ml de "Amberlite" LA-2 dans 115 ml de toluène et à deux reprises avec chaque fois 90 ml de toluène. ■On filtre ensuite la phase aqueuse à travers une colonne qui 10 renferme, de bas en haut, 8,5 ml de "Sephadex" CM-25 (forme H+), 34 ml de "Alox", 8,5 ml de "Dowex-1" (forme acétate) et 8,5 ml de "Sephadex" CM-25 (forme H+). On extrait ensuite la "Celite", les phases organiques et la colonne à deux reprises avec chaque fois 30 ml d'eau, puis élue de plus la colonne avec 200 autres 15 millilitres d'eau. Après avoir réuni les éluats, on les concentre sous vide, élimine une petite quantité d'un précipité par ^ filtration et concentre à sec. On digère le résidu dans 10 ml d'alcool et obtient à l'état pur l'acide 3-(désacétoxyméthyl-3-pyridinio-méthy1-7 -20 tétrazolyl-(l)-acétylamino_7-céphalosporanique qui présente un pouvoir rotatoire spécifique = + 40° 11° (c = 0,92 dans l'eau). Spectre ultra-violet : 25 *max = 257 (e = ^^OO) La valeur de est de 0,01 dans le système 52 et de 0,11 dans le système 101 A. EXEMPLE 4 3® Dans 300 ml d'eau, on dissout 10,2 g du sel de sodium de l'acide 7-Z~^étrazolyl-(l)-acétylamino_"7-céphalosporanique, chauffe à 37° et ajuste à un pH de 7,5 à l'aide d'une solution 0,2-normale d'hydroxyde de sodium. On ajoute ensuite au tout une suspension de 240 mg d'acétylestérase (obtenue à partir de ^ Bacillus subtilis ATCC 6633> cf. brevet belge 1 080 904) dans environ 5 ml d'eau, puis neutralise l'acide formé, en continu, avec une solution 0,2-normale d'hydroxyde de sodium (ajustement à un pH de 7,5 ; température : 37°)• Au bout de 5 heures et 69 41817 12 2035820 demie, la réaction est terminée. On ajuste le pH à une valeur de 6,5» filtre la solution à travers un verre fritté G4 et lyophilise. Il en résulte 11,49 g d'une résine jaunâtre du sel de sodium de l'acide 7-/~tétrazolyl-(l)-acétylamino_7-5 O-désacétyl-céphalosporanique. On met 9,61 g de ce produit brut en suspension dans 100 ml de diméthylformamide absolu et ajoute ensuite 0,15 ml de (Bu^Sn^O (oxyde de tributyl-étain). On ajoute alors goutte-à-goutte au cours de 15 minutes une solution de 10,6 ml 10 .d'isocyanate de p-chloréthyle dans 45 ml de diméthylformamide et continue d'agiter pendant une heure encore. On filtre le mélange réactionnel et concentre le filtrat à sec sous un vide poussé. On malaxe le résidu résineux à trois reprises avec chaque fois 500 ml d'éther absolu (la fraction insoluble dans 15 l'éther,à savoir 4,03 g d'une huile, est jetée) et on reprend ensuite dans 250 ml d'une solution à 10 % d'un phosphate-tampon d'un pïï de 6,7. On extrait successivement avec 1,5 litre et avec 0,5 litre d'acétate d'éthyle. On extrait en retour les phases organiques à deux reprises avec chaque fois 100 ml d'un 20 tampon d'un pH de 6,7 et les jette ensuite. On réunit les phases aqueuses, les recouvre avec 1,5 litre d'acétate d'éthyle, ajuste un pïï d'une valeur de 2,4 en ajoutant de l'acide chlorhydrique binormal et en secouant, puis sépare les phases. Après saturation avec du chlorure de sodium, on extrait la 25 phase aqueuse à deux reprises encore avec chaque fois un litre d'acétate d'éthyle, lave successivement les phases organiques à deux reprises avec chaque fois 200 ml d'une solution saturée de chlorure de sodium, sèche avec du sulfate de sodium et concentre à sec sous vide. On.obtient 6,32 g d'un résidu 30 amorphe, à partir duquel on peut, à l'aide d'a-éthyl-hexanoate de sodium, obtenir le sel de sodium (produit brut). On reconvertit ce dernier en la forme cristalline acide en acidifiant et en extrayant avec de l'acétate d'éthyle. A partir de la forme cristalline acide, on obtient, de la manière décrite 35 ci-dessus, le sel de sodium cristallin pur de l'acide 0-désa- cétyl-0-(P-chloréthyl-carbamoyl)-7-/"tétrazolyl-(l)-acétylamino7-céphalosporanique. x 69 41817 15 2035820 Spectre ultra-violet : Xmax = 260 (e = 9*200) Pouvoir rotatoire spécifique 5 Z~°L7d° = + 121 î 1° (c = 1 dans l'eau). Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de E^ est de 0,5 dans le système 101 A et de 0,23 dans le système 52. EXEMPLE 5 10 Dans 270 ml d'eau, on dissout 9,15 S du sel de sodium de l'acide 7-i/~tétrazolyl-(l)-acétylamino_7-céphalospo-ranique et transforme à 37°, à l'aide de 240 mg d'acétylesté-rase, de la manière décrite dans l'exemple 4, en le sel de sodium (10,3 g) de l'acide 7-Z~^étrazolyl-(l)-acétylamino_7-O-désacétyl-céphalosporanique. On met ce produit brut en suspension dans 100 ml de diméthylformamide absolu et ajoute 0,16 ml d'oxyde de tri-n-butyl-étain /"(Bu^S )~0_7. Tout en refroidissant, on ajoute 20 v alors goutte-à-goutte, au cours de 5 minutes, une solution de 8,1 g (10,8 ml) d'isocyanate de méthyle dans 45 ml de diméthylformamide et continue d'agiter pendant une heure encore. On filtre le mélange réactionnel et concentre le filtrat à sec sous un vide poussé. On malaxe le résidu" résineux à trois 2^ reprises avec chaque fois 500 ml d'éther absolu (la fraction soluble dans l'éther est séparée et jetée) et on reprend ensuite dans 250 ml d'une solution à 10 % d'un phosphate-tampon d'un pH de 6,7* On extrait successivement avec 1,5 litre et 0,5 litre d'acétate d'éthyle. On extrait en retour les 5° phases organiques à deux reprises avec chaque fois 100 ml d'un tampon d'un pH de 6,7 et les jette ensuite. On réunit les phases aqueuses, les recouvre avec 1,5 litre d'acétate d'éthyle, ajuste à un pH de 2,4 en ajoutant de l'acide chlorhydrique pentanormal et en secouant, puis sépare les phases. Après saturation avec du chlorure de sodium, on extrait la phase aqueuse à trois reprises encore avec chaque fois un litre d'acétate d'uéthyle. On lave successivement les phases organiques à deux reprises avec chaque fois 200 ml d'une solution 69 41817 14 2035820 saturée de chlorure de sodium, sèche avec du sulfate de sodium et filtre à travers une colonne (diamètre : 4,5 cm) de 100 g de gel de silice. On lave ensuite la colonne avec 500 ml d'acétate d'éthyle et concentre à sec sous vide, après les 5 avoir réunis, les éluats qui ont été obtenus à l'acétate d'éthyle. Il en résulte un résidu amorphe de 4,7 g. On reprend ' ce dernier dans 20 ml d'acétone, ce qui fait qu'il passe en majeure partie en solution. En ajoutant ensuite 80 ml de chloroforme, il se forme un précipité brun-clair que l'on sépare par 10 filtration et so-umet ensuite à nouveau au même traitement avec le mélange d'acétone et de chloroforme. Le précipité qui en résulte (1,2 g) est repris dans 40 ml de méthanol et, après addition de 1,7 ml d'une solution méthanolique d'oc-méthyl-hexanoate de sodium (trimolaire), on le fait passer en solution. 15 A l'aide d'une pointe de spatule de "Uorit" (charbon actif), eten filtrant ensuite à travers de la "Celite", on décolore et concentre ensuite jusqu'à un volume de l'ordre de 10 ml. Os. obtient de cette manière le sel de sodium cristallin, que l'on sépare par filtration et lave à l'acétone. Les filtrats qui se 20 forment lors du traitement décrit ci-dessus avec le mélange d'acétone et de chloroforme sont successivement versés sur une colonne de 100 g de gel de silice (d'un diamètre de 3 cm et d'une hauteur de 27,5 cm). On chromâtographie en augmentant lentement la teneur en acétone de l'agent d'élution. Pour une 25 proportion volumétrique de 1 : 3 entre l'acétone et le chloroforme, on élue la substance désirée. On la transforme de la manière décrite ci-dessus en le sel de sodium cristallin. Après avoir réuni les fractions du sel de sodium (d'une pureté de 90 % environ), on les transforme, pour les 30 purifier davantage, à nouveau en la forme acide. A cet effet, on dissout dans 30 ml d'eau, recouvre avec 300 ml d'acétate d'éthyle, ajuste à un pH de 2,4 à l'aide d'acide chlorhydrique dilué et sature de chlorure de sodium. Après séparation des phases, on extrait encore la phase aqueuse avec 200 et 100 ml 35 d'acétate d'éthyle. Après avoir réuni les phases organiques, on les lave avec une solution saturée de chlorure de sodium, les sèche avec du sulfate de sodium, les filtre à travers une colonne de 10 g de gel de silice et les concentre à sec sous vide. A l'aide d'une solution méthanolique trimolaire d'a-éthyl-40 hexanoate de sodium, on transforme directement le résidu en le 69 41817 15 2035820 20 sel de sodium pur cristallin de l'acide O-désacétyl-O-méthyl-c arb amoyl-7 -£~tétrazolyl-(l)-acétylamino_7 -c éphalo sp orani que. Spectre ultra-violet : Xmax : 262 mtA = 8-^50) 5 Pouvoir rotatoire spécifique : /~a_720 = + 127 1 1° (c = 0,98 dans l'eau). Chromâtogramme en couche mince sur du gel de silice : E^ = 0,17 dans le système 52 10 = 0,40 dans le système 101 A. EXEMPLE 6 Dans -270 ml d'eau, on dissout 9»15 S du sel de sodium de l'acide 7-/~tétrazolyl-(l)-acétylamino_7-céphalosporanique et transforme à 37°» à l'aide de 240 mg d'acétylestérase, de manière décrite dans l'exemple 4, en le sel de sodium (10,3 g) de l'acide 7-/~tétrazolyl-(l)-acétylamino_7-0-désacétyl-céphalo-sporanique. On met ce produit brut en suspension dans 100 ml de diméthylformamide absolu et ajoute 0,16 ml d'oxyde de tri-n-butyl-étain çfiJJ • On verse alors le tout goutte-à- goutte, au cours de 5 minutes, tout en refroidissant, dans une solution de 11,2 ml d'isocyanate d'éthyle dans 45 ml de diméthylformamide et agite encore pendant une heure. On filtre 2^ le mélange réactionnel et concentre le filtrat à sec sous un vide poussé. On malaxe le résidu résineux à trois reprises avec chaque fois 500 ml d'éther absolu (la fraction soluble dans l'éther est séparée et jetée) et reprend ensuite dans 250 ml d'une solution à 10 % d'un phosphate-tampon d'un pH de 6,7» On extrait successivement avec.1,5 litre et avec 0,5 litre d'acétate d'éthyle. On extrait en retour les phases organiques à deux reprises avec chaque fois 100 ml d'un phosphate-tampon d'un pïï de 6,7 et les jette ensuite» On réunit les phases aqueuses, les recouvre avec 1,5 litre d'acétate d'éthyle, 55 ajuste à un pïï de 2,4 en ajoutant de l'acide chlorhydrique pentanormal et en secouant, puis sépare les phases. Après saturation avec du chlorure de sodium, on extrait la phase aqueuse à trois reprises encore avec chaque fois un litre d'acétate d'éthyle. On lave successivement les phases organiques à deux reprises avec chaque fois 200 ml d'une solution 30 40 69 41817 16 2035820 saturée de chlorure de sodium, les sèche avec du sulfate de sodium et les filtre à- travers une colonne (diamètre : 4,5 cm) de 100 g de gel de silice. On lave ensuite la colonne avec 500 ml d'acétate d'éthyle frais et concentre à sec sous vide, 5 après les avoir réunis, les éluats qui ont été obtenus à l'acétate d'éthyle. Il en résulte un résidu amorphe de 5,49 g. On reprend celui-ci dans 20 ml d'acétone, où il passe partiellement en solution. En ajoutant 80 ml de chloroforme, il se forme un précipité brun clair que l'on sépare par filtration 10 et soumet ensuite à nouveau au même traitement avec un mélange d'acétone et de chloroforme, le précipité (2,8 g) qui en résulte est repris dans 80 ml de méthanol et amené à dissolution après addition de 3,6 ml d'une solution méthanolique trimolaire d'a-éthyl-hexanoate de sodium. A l'aide d'une pointe 15 de spatule de "Norit" (charbon actif) et en filtrant ensuite à travers de la "Celite", on décolore, puis concentre jusqu'à un volume de l'ordre de 5 ml. On obtient de cette manière le sel de sodium cristallin que l'on sépare par filtration et lave au chloroforme. Les filtrats qui se forment lors du trai-* 20 tement décrit ci-dessus avec le mélange d'acétone et de chloroforme sont versés successivement sur une colonne de 100 g de gel de silice (d'un diamètre de 3 cm et d'une hauteur de 27,5 cm). On chromatographie en augmentant lentement la teneur en acétone de l'agent d'élution. Pour une proportion volumétrique 25 de 1 : 3 entre l'acétone et le chloroforme, on élue la substance désirée. On la transforme de la manière décrite ci-dessus en le sel de sodium cristallin. Après avoir réuni les fractions du sel de sodium (d'une pureté de 90 % environ), on les transforme à nouveau 30 en la forme acide pour les purifier davantage. A cet effet, on dissout dans 35 ml d'eau, recouvre avec 350 ml d'acétate d'éthyle, ajuste à un pH de 2,4 à l'aide d'acide chlorhydrique dilué et sature de chlorure de sodium. Après séparation des phases, on extrait la phase aqueuse avec 250 et 150 ml 35 d'acétate d'éthyle. Après avoir réuni les phases organiques, on te lave avec une solution saturée de chlorure de sodium, les sèche avec du sulfate de sodium, les filtre à travers une colonne de 15 g de gel de silice et les concentre à sec sous vide. A l'aide d'une solution méthanolique trimolaire d'a-éthyl- 69 41817 2035820 hexanoate de sodium, on transforme directement le résidu en le sel de sodium cristallin pur de l'acide O-désacétyl-O-éthylcarbamoyl-7-/- tétrazolyl-(l)-acétylamino_7"-céphalospora-nique. 5 Spectre ultra-violet : Xmax = 261 m|jL = 8,550) Pouvoir rotatoire spécifique : = + 124 +1° (c = 0,98 dans l'eau). 10 Chromatograpliie en couche mince sur du gel de silice : R^ = 0,21 dans le système 52 R^ = 0,44 dans le système 101 A. 69 41817 18 2035820 REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation de nouveaux dérivés de l'acide 7-amino-céphalosporanique, caractérisé par le fait 5 qu'on prépare, suivant des méthodes connues en elles-mêmes, des composés de formule 10 20 25 Rl-CH2-C0-NH- \ 0 S -CH2R2 (I) COOH dans laquelle R-^ représente un reste tétrazole lié par un atome d'azote et R0 représente de l'hydrogène ou un groupe 15 ■ y hydroxyle libre ou un groupe hydroxyle estérifié par un acide carboxylique, dans lequel les atomes d'oxygène de l'ester peuvent être remplacés par des atomes de soufre, mais pa^ple groupe acétoxy, un groupe carbamoyloicy éventuellement N-substitué, dans lequel les atomes d'oxygène peuvent être remplacés par du soufre, ou représente un groupe aminogène quaternaire, ou leurs sels éventuellement internes. 2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que a) on fait réagir sur du tétrazole un.composé de frmule •S- Z-NH-CH CH CH2 30 0 G —-N , 0-CHo-Ro / \ // 22 (II) COOH dans laquelle Z représente un reste halogéno-acétyle et Rg ^ -représente de l'hydrogène ou un groupe hydroxyle libre ou estérifié (les atomes d'oxygène pouvant, dans le groupe ester, être \ remplacés par des atomes de soufre), ou que b) on acyle par le groupe R-L-CHg-CO- 69 41817 W 2035820 un composé de la formule (II), dans'laquelle Z représente de l'hydrogène et R2 représente de l'hydrogène ou un groupe hydroxyle libre ou estérifié (les atomes d'oxygène pouvant, dans le groupe ester, être remplacés par des atomes de soufre) 5 et qu'on transforme les composés obtenus suivant a) ou b), dans lesquels R2 représente le groupe acétoxy, en composés renfermant un groupe ester autre que le groupe acétoxy (dans lequel les atomes d'oxygène peuvent être éventuellement remplacés par des atomes de soufre) ou en des composés qui, à la 10 place du groupe acétoxy, renferment un atome d'hydrogène,..un groupe hydroxyle libre, un groupe carbamoyloxy éventuellement N-substitué, dans lequel les atomes d'oxygène peuvent être remplacés par des atomes de soufre, ou bien qui renferment un groupe aminogène quaternaire, puis, si on le désire, qu'on 15 transforme les composés obtenus en leurs sels éventuellement internes qui sont thérapeutiquement utilisables ou qu'on forme à partir des sels obtenus les acides carboxyliques libres. 3. Procédé suivant la revendication 1 ou 2, caractérisé par le fait qu'on part d'un composé de la formule (II), 20 dans laquelle Z représente le reste bromacétyle. 4. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3» caractérisé par le fait qu'on prépare un composé de la formule (I), dans laquelle R1 a la signification indiquée et R2 représente le groupe benzoylthio. 25 5- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3i caractérisé par le fait qu'on prépare un composé de la formule (I), dans laquelle R-^ a la signification indiquée et R2 représente un groupe pyridinio éventuellement substitué. 6. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 30 1 à 3, caractérisé par le fait qu'on prépare un composé de la formule (I), dans laquelle R^ a la signification indiquée et R2 représente le groupe pyridinio. 7. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait qu'on prépare un composé de la 35 formule (I), dans laquelle R-^ a la signification indiquée et R2 représente un groupe alcoyl(inférieur)-carbamoyloxy. 8. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3» caractérisé par le fait qu'on prépare un composé de la formule (I), dans laquelle R-^ a la signification indiquée et 69 41817 20 2035820 R2 représente un groupe carbamoyloxy de formule -O-CO-NH-R, 3 dans laquelle R^ représente un reste alcoylique inférieur 5 substitué par un ou plusieurs groupes alcoxy inférieur ou atomes d'halogène. 9. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3» caractérisé par le fait qu'on prépare -un composé de la formule (I), dans laquelle R-^ a la signification indiquée et 10 R2 représente un groupe carbamoyloxy de formule -O-CO-NH-R, 3 dans laquelle R^ est un reste alcoylique inférieur substitué par ou plusieurs atomes de chlore. 15 10. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3» caractérisé par le fait qu'on prépare un composé de la formule (I), dans laquelle R^ a la signification indiquée et R2 représente le groupe p-chloréthyl-carbamoyloxy. 11. Les composés de formule 20 25 30 Rj-CHg-CO-HH- ï \ 0' -ch2R2 (I) COOH dans laquelle R1 représente un reste tétrazole lié par un atome d'azote et R2 représente de l'hydrogène ou un groupe hydroxyle libre ou un groupe hydroxyle estérifié par un acide carboxylique, et dans lequel les atomes d'oxygène de l'ester peuvent être remplacés par des atomes de soufre, mais par* le groupe acétoxy, un groupe carbamoyloxy éventuellement N-substitué, et dans lequel les atomes d'oxygène peuvent être remplacés par du soufre, ou un groupe aminogène quaternaire, et leurs sels éventuellement internes. 35 12. Les composés de la formule (I) comme indiqué dans la revendication 11, daq.s lesquels R^ a la signification indiquée dans la revendication 11 et R2 représente le groupe benzoylthio et leurs sels éventuellement internes. 13. Les composes de la formule (I), comme indiqué dans 69 41817 21 2035820 la revendication 11 et dans lesquels R^ a la signification indiquée dans la revendication 11 et B2 représente un groupe pyridinio éventuellement substitué .et leurs sels internes. 14. Les composés de la formule (I)', comme indiqué 5 dans la revendication 11, dans lesquels B^ a la signification indiquée dans la revendication 11 et R2 représente un groupe pyridinio et leurs sels internes. 15. Les composés de la formule (I), comme indiqué dans la revendication 11, dans lesquels R^ a la signification 10 indiquée dans la revendication 11 et E2 représente un groupe alcoyl(inférieur)-carbamoyloxy, et leurs sels. 16. Les composés de la formule (I), comme indiqué dans la revendication 11, dans laquelle B-^ a la signification indiquée dans la revendication 11 et E2 représente un groupe 15 carbamoyloxy de formule -O-CO-NH-R^ dans laquelle est un reste alcoylique inférieur substitué par un ou plusieurs groupes alcoxy inférieur ou atomes d'halo- 20 gène, et leurs sels. 17. Les composés de la formule (I), comme indiqué dans la" revendication 11, dans laquelle B^ a la signification indiquée dans la revendication 11 et E2 représente un groupe carbamoyloxy de formule 25 -O-CO-NH-R, 3 dans laquelle R- est un reste alcoylique inférieur substitué par un ou plusieurs atomes de chlore, et leurs sels. 18. Les composés de la formule (I) comme indiqué 30 dans la revendication 11, dans laquelle R-^ a la signification indiquée dans la revendication 11 et R2 est le groupe P-chloré-thyl-carbamoyloxy, et leurs sels. 19. Les préparations pharmaceutiques renfermant des dérivés de l'acide céphalosporanique suivant l'une quelconque 35 des revendications 11 à 18. 20. Les substances alimentaires pour les animaux et les adjuvants à la nourriture des animaux renfermant des composés suivant l'une quelconque des revendications 11 à 18.