FR 2051559 A1 19710409 FR 7019201 A 19700526 70 19201 i 2051559 Cette invention concerne des dérivés du peptide secrétine, ses sels et intermédiaires. La secrétine porcine a la formule : His-Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-12 3-4 5 6 7 8 9 10 11 5 Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Glu(NH2) -Arg- 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Leu-Leu-Glu(nh2)-Gly-Leu-Val-NH2 22 23 24 25 26 27 et est par conséquent un peptide contenant 27 restes amino-10 acidea/ contenant les amino-acides suivants î L-Histidine (His); acide L-aspartique (Asp)y L-sérine (Ser)y glycine (Gly)y L-thréonine (Thr)y L-phénylalanine (Phe)y acide L-glutamique (Glu)y L-glutamine ^Glu(NH2i7; L-leucine (Leu)y L-arginine (Arg)y L-alanine (Ala)y et L-valinamide (Val-NH2). 15 Ca peptide est sujet à l'attaque enzymatique qui fait que son action est de courte durée en raison de la dégradation. On a découvert que les dérivés de la secrétine de formule I R-secrétine dans laquelle R est un acide carboxylique, un amino-acide ou un 20 dipeptide, présentent une activité de durée plus longue que la secrétine. On peut préparer la R-secrétine et ses sels synthétiquement en synthétisant des intermédiaires de longueuis variables et en les associant jusqu'à ce que la R-secrétine désirée soit 25 formée. Selon le- procédé de cette invention, on peut préparer la R-secrétine synthétiquement en commençant avec le L-valinamide et en ajoutant les autres amino-acides, un à la fois ou par groupes, pour former le dérivé désiré. On effectue cette addition 30 en protégeant le groupement aminé de 1*amino-acide à ajouter, comme en activant le groupement acide carboxylique de cet amino-acide, comme en le transformant en son dérivé benzyloxy-carbonyle et en le transformant en son dérivé ester de nitrophényle, et ensuite en faisant réagir 1'amino-acide avec 35 un peptide préparé antérieurement dans la chaîne, après avoir éliminé le groupement protecteur présent à l'origine dans le peptide. On peut aussi préparer les composés de l'invention selon l'équation : 40 •••/... 70 19201 2 2051559 Rj-His-Ser-Asp-Gly + Thr-Phe-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Glu(NH2)-Arg-Leu-Leu-Glu(NH2)-5 Gly-Leu-Va1-NH, J, Rj-secrétine dans laquelle R^est un acide carboxylique, un amino-acide, ou un dipeptide. 10 L'équation précédente prend en considération le fait qu'on a réalisé la protection convenable des parties nécessaires. En outre, lorsqu'on utilise un acide, on peut faire réagir l'acide désiré avec la secrétine selon l'équation : R2-COX + Secrétine ^ R2-CO-Secrétine 15 dans laquelle R2 est un groupement alcoyle inférieur (par exemple, méthyle, éthyle, isopropyle, hexyle), aryle (par exemple phényle ou naphtyle), phényle substitué ( par exemple o-chlorophényle, p-éthylphényle, m-trifluorométhylphényle, m-nitrophényle), aralcoyle (par exemple, benzyle ou phènéthyle), alcoxy inférieur 20 (par exemple méthyloxy, éthyloxy, butyloxy ou heptyloxy), aryloxy (par exemple phénoxy, naphtyloxy ou aryloxy substitué) ou aralcoyloxy ( par exemple benzyloxy) et X est un reste prévu pour augmenter la réactivité du groupement carboxyle décrit ci-dessous. 23 Parmi les groupements activateurs convenables on peut mentionner tout groupement qui entraîne une plus grande réactivité de la fonction acide, tel que anhydrides mixtes ( par exemple, un anhydride d'un amino-acide acylé et de l'acide isovalérique), azides, chlorures d'acides, produits de réaction avec les 30 carbodiimides, composés N-acylés réactifs, dérivés de l'O-acyl hydroxylamine, et esters actifs , tels que esters d'alcoyle avec substituants qui attirent les électrons (électronégatifs), esters de vinyle, esters d'énol, esters de phényle, esters de thiophényle, esters de nitrophényle, esters de 2,4-dinitro-35 phényle, esters de trichlorophényle, et esters de nitrophénylthiol. On préfère particulièrement utiliser les esters de nitrophényle du point de vue du rendement; de l'absence de produits secondaires, et de la facilité de purification qui en découle. Lorsqu'on forme les séries peptidiques de cette invention, 40 on peut protéger les fonctions aminé avec des groupements 70 19201 3 2051559 protecteurs d1aminé couramment utilisés tels que les groupements benzyloxycarbonyle, nitrobenzyloxycarbonyle, méthoxybenzyloxycar-bonyle, butyloxycarbonyle tertiaire, phtalyle, o-nitrophénylsul-fényle, tosyle et etc. On peut utiliser les groupements 5 méthyle, éthyle, propyle, butyle tertiaire, benzyle, nitrobenzyle, triméthylbenzyle, etc... pour protéger les groupement carboxyle. Les groupements protecteurs de l'hydroxyle peuvent être les groupements benzyle, tert-butyle, tétrahydropyranyle, et etc., et les groupements protecteurs de la guanidine peuvent être les 10 groupements nitro, tosyle, p-nitrobenzyloxycarbonyle, la protonation, et etc.. On peut trouver une liste complète de groupements protecteurs convenables pour les fonctions aminé, carboxyle et hydroxyle dans "Peptide Synthesis" de Bodanszki et Ondetti, pp 21-74. 15 On peut éliminer les groupements protecteurs par des réactions connues telles que réduction par le sodium dans lTammoniac liquide, hydrogénolyse (par exemple, en présence d'un catalyseur de palladium sur charbon), traitement par un acide halohydrique (comme les acides bronihydrique. ou chlorhydrique )dans 20 l'acidê acétique ou traitement par l'acide triflùoroaçétique. Pour préparer les aminés libres après traitement par un acide halohydrique dans l'acide acétique, on traite le sel halohydrate par une résine échangeuse d'ions telle que Amberlite IR400 ou bien on le neutralise par une aminé comme 25 la triéthylamine. Les sels de peptide mentionnés ci-dessus comprennent, par exemple les chlorhydrates, bromhydrates, acétates, fluoroacétates, tels que trifluoroacétate, et chloroacétates tels que dichloroacétate. 30 Les groupements amino-acides que l'on peut utiliser dans la pratique de cette invention sont la glycine, la proline, la valine efc l'acide L-os-aminobutyrique. Les acides aliphatiques que l'on peut utiliser sont ceux qui ont moins de 12 atomes de carbone, par exemple l'acide tert-butyloxycarbonique, l'acide 35 acétique, acide propionique, et etc... Les dipeptides que l'on peut utiliser sont les L-Leu-Gly, L-Leu-L-Pro et L-Leu-L-Val. Les nouveaux dérivés de secrétine, formés par les procédés de cette invention, administrés de manière analogue à la secrétine, sont actifs pendant une durée à peu près doublée. 40 L'invention peut être illustrée plus en détail par 70 19201 4 2051559 les exemples suivants : Exemple 1 Benzyloxycarbonylhydrazide de t-butyloxycarbonylglycyl-L-histidyl-o-benzyl-L-sérvl-L-aspartyl-qlycyle. 5 On dissout le tétrapeptide protégé, le benzyloxycarbonylhy drazide de t-butylcxycarbonyl-L-histidyl-o-benzyl-L-séryl-L-aspartyl-glycyle (800 mg)dans l'acide trifluoroacétique (5 ml). Après environ 15 minutes à la température ambiante, on élimine la plus grande partie de l'acide trifluoroacétique sous vide 10 et on triture le résidu avec de l'éther (50 ml). On centrifuge le peptide trifiuoroacétate-amine libre, on le lave à l'éther et on le sèche sous vide sur hydroxyde de sodium (830 mg). A une solution du trifluoroacétate (753 mg) dans le diméthylformamxde (6 ml), on ajoute de la triéthylamine (0,28 ml) 15 et on refroidit (5°) la solution dans un bain de glace. On ajoute de l'ester de t-butyloxycarbonylglycine nitrophényle (355 mg) . et en laisse la solution atteindre la température ambiante . Après 4 heures, on ajoute une autre portion d'ester de t-butyloxycarbonylglycine nitrophényle (15 mg, 0,05 mmol).Après 5 heures 20 (au total) on élimine partiellement le solvant sous vide. On ajoute de l'acétate d'éthyle et on ajuste le pH à 6 par l'acide acétique. On filtre la matière solide, on la lave à l'acétate d'éthyle et on la sèche sous vide pour obtenir le pentapeptide protégé,le benzyloxycarbonylhydrazide de t-butyloxycarbonylglycyl~ 25 L-histidyl-o-benzyl-L-séryl-L-aspartyl-glycyle. Exemple 2 Gly-His-Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arq-Asp-Ser-Ala-Arcr-Leu-Glu (NH,J -Arq-Leu-Leu-Glu (NEL.) -Gly-Leu Val-NH2 30 On ajoute du palladium sur charbon (10 %, 100 mg) à une solution de benzyloxycarbonylhydrazide de t-butyloxycarbonyl-glycyl-L-histidyl-o-benzyl-L-séryl-L-aspartylglycyle (330 mg) dans un mélange de méthanol (20 ml), d'eau (10 ml), et d'acide acétique (10 ml). On agite la suspension en atmosphère d'hydrogène .35 pendant 5 heures. On filtre le catalyseur et on concentre le filtrat sous vide. On traite le résidu par l'alcool absolu et en concentre sous vide. On répète ce traitement trois fois. Ensuite en triture le résidu avec de l'acétate d'éthyle, on le filtre, en le lave et on le sèche sous vide pour obtenir 213 mg 40 de l'hydrazide de t-butyloxycarbonylglycyl-L-histidyl-L-séryl- BAD ORIGINAL. 70 19201 5 2051559 L-aspartyglycyle. On ajoute de l'acide chlorhydrique concentré (0/03 ml) à une solution de l'hydrazide du pentapeptide protégé (32 mg) dans le diméthyformamide (0,5 ml) et on refroidit dans un bain carbo-5 glace-acétone à -15° pendant 5 minutes. On ajoute une solution aqueuse à 14 % de nitrite de sodium (0/05 ml) et après 5 minutes, la température du bain est abaissée à -25°. On ajoute de la N-éthylpipéridine (0,042 ml), puis on ajoute l'amide du tricosapep-tide libre, Thr-Phe-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-10 Arg-Leu-Glu (N^) *" Arg-Leu-Leu-GlufHHg) - Gly-Leu-Val-NEL^, (56 mg) et on lave avec du diméthylformamide (0,7 ml). On conserve le mélange réactionnel à 5° et après 24 heures, on ajoute une autre quantité de l'azide du pentapeptide (la moitié de la quantité initiale). Après 48 heures au total, on concentre le 15 mélange réactionnel sous vide à sec. - On dissout le résidu dans lacide trifluoroacétique froid (5ml). Après l'avoir laissé 15 minutes à la température ambiante, on élimine la plupart de l'acide trifluoroacétique sous vide et on ajoute de l'éther pour achever la précipitation. On purifie 20 le trifluoroacétate par chromatographie par échange d'ions sur carboxyméthylcellulose (25 mg). Exemple 3 Benzyloxycarbonylhydrazide de t-butvloxvcarbonvl-L-leucvl-qlvcyl-L-histidvl-o-benzyl-L-séryl-L-aspartyl-qlycine. 25 On dissout le pentapeptide protégé de l'Exemple 1 (700 mg) dans l'acide trifluoroacétique (5 ml). Après l'avoir laissé 15 minutes à la température ambiante, on élimine la plupart de l'acide trifluoroacétique sous vide et on ajoute de l'éther au résidu. On filtre le précipité solide et ensuite on le sèche 30 sous vide sur hydroxyde de potassium. On dissout cette forme ' trifluoroacétate dans le diméthylformamide (5 ml)et on fait réagir avec l'ester p-nitrophénylique de t-butyloxycarbonyl-L-leucine (450 mg) en présence de triéthylamine (0,28 ml). Après l'avoir laissé une nuit à la température ambiante, on 35 élimine partiellement le solvant sous vide et on isole le produit par précipitation par l'acétate d'éthyle (600 mg). 70 19201 6 2051559 Exemple 4 Leu-Glv-His-Ser-Asp-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Leu-Arg-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Glu(NH^)-Arg-Leu-Leu-Glu (NH„)-Glv-Leu-Val-NH^ 5 On hydrogène l'hydrazide de 1*hexapeptide protégé de l'exemple précédent (350 mg) en présence de palladium sur charbon et après l'avoir transformé en azide, on le fait réagir avec l'amide du tricosapeptide libre (56 mg) comme il est décrit dans l'Exemple 2. On isole l'amide du nonacosapeptide (25 mg), après 10 élimination du groupement protecteur, par chromatographie par échange d'ions• Exemple 5 Propionyl-His-Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Glu-Leu-Ser-Arg-Iieu-Arq-Asp-Ser-Ala-Arg-Leu-Glu (NH^ ) -Arg-Leu-Leu-Glu (NH?) -15 Glv-Leu-Val-NH^ On dissout 335 mg de l'acétate d'amide de l'heptacosapep-tide libre (secrétine) dans 3 ml de diméthylformamide et on fait réagir avec 50 mg de l'ester p-nitrophénylique de l'acide propionique jusqu'à ce que la réaction à la ninhydrine soit 20 négative. On isole le produit par précipitation par l'acétate d'éthyle (330 mg). 70 19201 7 2051559 REVEND ICATIONS lv- Un peptide de formule : R - Secrétine dans laquelle R est un amino-acide, un acide carboxylique ou 5un dipeptide. 2.- Un peptide ayant la formule : r2~ CO-Secrétine dans laquelle R2 est un groupement alcoyle inférieur, aryle, phényle substitué, aralcoyle, alcoxy inférieur, aryloxy, lOou aralcoyloxy. 3.- Un peptide selon la revendication 1 dans lequel l'amino-scide est la glycine, la proline, la valine ou l'acide L-a-amino-butyrique. 4»- "Jr peptide selon la revendication 1 dans lequel le î 5dipeptide- est L-Leu-Gly-, L-Leu-L-Pro-, ou L-Leu-L-Val-„ 5.- Ur. précédé pour préparer un peptide selon la revendication 1 qui consiste à coupler 11aminc-acide terminal en N de la secrétine c-vec le groupement hydroxyle terminal en C d'un amino-acide, avec .3 groupement terminal en C d'un dipeptide, ou avec un acide ^-carboxylique. G.- Un procédé pour préparer un peptide selon la revendication 2, dans lequel l'acide carboxylique est un acide alcanoique inférieur, un acide aryl carboxylique, un acide(phényl substitué) carboxylique, un acide aralcoyl carboxylique, un acide (alcoxy 25inférieur) carboxylique, un acide aryloxy carboxylique ou un acide aralcoyloxy carboxylique. 7.- Un procédé selon la revendication 5 dans lequel l1amino-acide est la glycine, la proline, la valine ou l'acide L-oc-aminobutyrique. "'S.- * Un procédé selon la revendication 5 dans lequel le dipeptide est L-Leu-Gly-, L-Leu-L-Pro-f ou L-Leu-L-Val-. Une composition thérapeutiquement active contenant comme ingrédient actif un peptide selon la revendication 1» 1Une composition anti-acide peur traiter las étacs .. • ••.yreraciditê de 1 ' estomac et -lu duodénum contenant cciane :„-édi^nt actif un dérivo de la secrétine selon la revendication 1. BAD ORIGINAL