FR 2034537 A1 19701211 FR 7004155 A 19700205 70 04155 1 2034537 L'invention fournit de nouveaux composés utiles pour l'inhibition des virus de la rhinite (dits ci-après "virus rfrino"), et des compositions contenant de tels composés à titre d'ingrédients actifs pour inhiber la croissance de virus rhino, de virus Coxsackie, 5 et de virus de la grippe dits "virus de la parainfluenza". Plus particulièrement, l'invention concerne les stéréo-isomères D, 1, mésomères et racémiques de benzimidazoles à substituant(s) alkyle inférieur et alcoxy .inférieur, et leurs sels solubles. Les benzimidazoles substitués de la présente invention ont 10 la structure suivante : oh oh i v__ i_i: 15 W h à h où les radicaux R, identiques ou différents, sont chacun un groupe alkyle inférieur ayant 1 à 5 atomes de carbone ou un groupe alcoxy inférieur ayant 1 à 5 atomes de carbone. Des composés représentatifs de la présente invention sont les suivants : le 1,2-bis[5(6)-méthoxy-20 2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le 1,2-bis [ 5 (6) -éthoxy-2-ben/.i mi -dazolyl]éthylène-glycol, le 1,2-bis[5(6)-propoxy-2-benzimidazolyl] éthylène-glycol, le 1,2-bis[5(6)-pentoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le 1,2-bis[5(6)-métbyl-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le 1,2-bis[5(6)-éthyl-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le 1,2-bis [5(6)-25 propyl-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le 1,2-bis[5(6)-isobutyl-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le 1,2-bis[5(6)-pentyl-2-benzimi-dazolyl]éthylène-glycol, le 1 ,2-bis[4(7)-méthoxy-2-benzi.midazolyl] éthylène-glycol, le 1,2-bis[4(7)-éthoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le 1,2-bis[4(7)-propoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, 30 le 1 ,2-bis[4(7)-pentoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le 1,2-bis[4(7)-méthyl-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le 1,2-bis[4(7)-éthyl-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le 1,2-bisl4(7)-propyl-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le 1 ,2-bis[4(7)-isobuty1-2-benzimi-dazolyl]éthylène-glycol et le 1,2-bis[4(7)-pentyl-2-benzimidazolyl] 35 éthylène-glycol. La science commence à s'assurer la maîtrise de divers virus' au moyen de vaccins d'immunisation. Il y a, cependant, une autre voie d'accès à la maîtrise réussie de ces maladies et en particulier 70 04155 2 2034537 pour combattre la propagation des virus. Cette voie consiste à trouver des composés capables d'inhiber la croissance des virus et d'éviter que ces virus n'endommagent les cellules. La Demanderesse a trouvé que les stéréo-isomères D, L, mésomères et racémiques des 5 benzimidazoles substitués décrits ci-dessus sont des inhibiteurs puissants de la croissance de virus rhino, de virus Coxsackie A et B, de virus ECHO et de virus de la parainfluenza III. Les trois premiers virus font partie de la classe des picornovirus cependant que les virus de la parainfluenza III font partie du groupe des 10 mixovirus. En outre, la Demanderesse a trouvé que les composés ci-dessus sont utiles pour le traitement de s maladies de Marek, qui sont une leucose aviaire complexe résultant principalement d'un virus du type acide désoxyribonucléique. Cependant, cette application 15 ne fait pas partie de la présente invention, mais elle a été décrite dans une autre demande de brevet déposée par la même Demanderesse. Les buts de la présente invention sont donc de fournir : - de nouvelles formes optiques des benzimidazoles substitués décrits ; 20 - un procédé pour combattre la croissance de certains picorno virus par un traitement à l'aide des benzimidazoles substitués de la présente invention; - des compositions utiles pour appliquer les composés de l'invention à l'organisme infecté par les divers picornovirus. 25 Dans la préparation des composés de la présente- invention, on condense le 1,2-diaminobenzène avec une forme optiquement active de l'acide tartrique. L'acide tartrique, COOHÇCHOH^COOH, est un exemple classique d'un composé ayant une activité optique, due au fait que ce composé 30 possède deux atomes de carbone similaires et asymétriques. On se . réfère dans ce cas aux isomères optiques en les désignant comme étant des acides tartriques D, L, mésomère et racémique. Les symboles "D" et "L" concernent la convention-pour désigner la configuration de la molécule, dessinée selon la projection plane de 35 Fischer. Les formes D et L de l'acide tartrique sont respectivement lévogyre et dextrogyre. La forme mésomère est un isomère inactif à compensation interne, comportant un plan de- symétrie dans la molécule. L'acide racémique est un mélange en parties égales des formes 70 04155 3 2034537 D et 1, mais il est optiquement inactif en raison de la combinaison de quantités égales, c'est-à-dire qu'il s'agit d'un isomère à compensation "externe". La littérature a fait mention de composés préparés à partir de la forme L de l'acide tartrique. Cependant, la 5 Demanderesse fournit actuellement les nouveaux composés formés à l'aide des formes D et mésomère de l'acide tartrique. En outre, le benzimidazole préparé à l'aide de l'acide tartrique racémique s'est avéré utile comme agent antiviral. Le 1 ,2-diaminobenzène que l'on utilise dans la présente 10 invention peut se représenter par la formule suivante : R- 2 ÏŒL 2 15 où R peut être un groupe alkyle inférieur ayant 1 à 5 atomes de carbone ou un groupe alcoxy inférieur ayant 1 à 5 atomes de carbone. On prépare ces 1,2-diaminobenzènes à partir du 1-amino-2-nitrobenzène substitué de façon correspondante. Le 1-amino-2-nitro-benzène peut être hydrogéné par voie catalytique pour donner la 20 forme 1 ,2-diaminobenzène. En outre, il apparaîtra à un expert en la matière que l'on peut préparer le 1-amino-2-nitrobenzène substitué selon diverses voies de synthèse de la chimie organique. On peut utiliser pour mettre en oeuvre la présente invention n'importe quel benzène substitué qui peut finalement être transformé en la forme 25 du dérivé 1,2-diamino. Les procédés généraux servant à la réaction de condensation du 1 ,2-diamino-benzène avec l'acide tartrique sont bien connus et décrits dans la littérature. On chauffe au reflux deux moles de la diamine avec une mole du diacide dans l'acide chlorhydrique ou 30 l'acide sulfurique. On applique une période de reflux relativement longue, d'environ 3 à 10 heures. On refroidit ensuite la solution réactionnelle et.l'on isole le- bis-benzimidazole, résultant de la condensation, sous forme du dichlorhydrate ou du sulfate. On peut utiliser le dichlorhydrate 35 ou le sulfate tels que ou bien les transformer en la base libre par réaction avec du bicarbonate ou avec une solution aqueuse d'ammoniaque. On applique des techniques classiques de purification et de récupération. On peut également produire in situ la base libre sans 70 04155 4 2034537 effectuer urt isolement séparé du sel de l'acide. On vérifie l'efficacité des composés de la présente invention à inhiber des viras en appliquant le mode opératoire suivant : on se procure à des sources commerciales des cultures de tissusde 5 cellules pulmonaires embryonnaires humaines diploïdes (WI-38) et des cellules euploïdes de carcinome humain (BK) et l'on maintient ces cellules en culture continue sur un milieu nutritif. On utilise ces cultures de tissus pour évaluer les composés et déterminer leur effet d'inhibition sur la multiplication des virus. L1expérimenta-10 tion est effectuée sur des cultures de cellules effectuées en quadruple dans des tubes rotatifs par dilution du composé. L'inoculum • du virus contient environ 10 fois les doses infectieuses moyennes pour les cultures de tissus (DICT^q) . Au 4ème ou au 5ème jour, des cultures témoins des cellules, effectuées en l'absence de tout com-15 posé d'essai, sont complètement détruites par l'infection due au virus. On mesure l'activité d'un composé par trois valeurs.: deux valeurs déterminées expérimentalement et une valeur dérivée. Le titre de toxicité, donné en microgrammes par ml, est la plus grande 20 concentration possible du composé qui ne soit pas toxique pour l'organisme et les cellules de l'hôte en l'absence de tout virus. L'examen microscopique de la cellule indique les dégâts visibles. S'il n'y a pas de dégâts visibles, le composé est considéré comme non toxique. Si toutes les cellules sont détruites, le composé est 25 toxique. Le titre antiviral, qui est une autre valeur déterminée expérimentalement, est la concentration la plus faible du composé qui fait preuve d'un effet inhibitoire sur le virus dans l'organisme hôte, ce qu'on détermine par l'absence de variations cytopathogènes 30 dans la cellule. En d'autres termes, la cellule est exempte de tout dommage dû à un virus, ce qu'on détermine par la présence ou l'ab-' sence de cytopathogénèse. Les variations cytopathogénétiques sont observées au microscope. Dans les cas où l'on donne une gamme de concentrations antivirales d'un composé, la concentration la plus 35 faible indique la plus faible concentration du composé à laquelle on ne constate pas de cytopathologie virale. L'indice thérapeutique, valeur dérivée, est le résultat obtenu par la division du titre antiviral par le titre de toxicité. 70 04155 5 2034537 Bien que l'indice thérapeutique soit, bien évidemment, une valeur relative pour chaque composé, pour chaque concentration du composé et chaque virus, chaque valeur positive indique quelque activité "bénéfique. 5 l'activité de certains des composés décrits dans la présente invention est indiquée dans les Tableaux I et II. les virus utilisés pour 1 'expérimentation ont été le virus rhino I, le virus rhino 20,3e virus rhino 28, le virus rhino 47, le virus Coxsackie B2 et le virus de la parainfluenza III. Dans le Tableau I, la cellule hôte est 10 WJ-38, et dans le Tableau II, la cellule hôte est le BK. Dans les expériences conçues pour étudier l'efficacité thérapeutique de ces composés contre des infections in vitro dues au virus rhino, des résultats d'études préliminaires montrent une puissante activité. On a montré qu'une dose de 25 microgrammes de 15 ces composés respectifs par ml empêche complètement l'apparition d'une cytopathologie virale lorsqu'on ajoute le composé aussi tard que 24 heures après le début de l'infection virale. Des cultures témoins ont fait preuve d'une lyse complète des cellules due à l'infection virale. TABLEAU I Composé Titres (microgrammes/ml) Toxicité WI-38 Activité antivirale Indice thc srapeutique Rhino I Rhino 20 Rhino 23 Rhino 47 Rhino I Rhino 20 Rhino 23 Rhino 47 1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl] éthylène-glycol 400 0,4 0,2 0,4 0,013 0,025 0,013 0,025 1024 1024 2048 1 6384 32768 16384 32768 Dichlorhydrate de L-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl] éthylène-glycol 100 0,4 0,4 0,2 0,013 0,025 0,013 256 1024 2048 8192 4096 8192" D~1 ,2~bis[5(6)~méthoxy-2~ bonziiriidazolyl ] éthy1ène-glyc01 200 1,57 0,8 3,13 0,2 0,1 0,2 128 64 1 024 2048 1024 Dichlorhydrate de D~ 1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl] éthylène-glycol 100 1,57 1,57 0,05 0,2 64 64 2048 512 Dichlorhydrate de méso-1 ,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl] éthylène-glycol 400 0,4 0,2 0,025 '• 0,05 0,025 1024 2048 16384 81 92 16384 O G 7 TABLEAU II Titres (microgrammes/ml) Composé Toxicité Activité antivirale Indice thérapeutique BK Coxsackie B2 Paraflu III fihino I 2060 Rhino 23 5007 Coxsackie B2 Paraflu III Rhino I 2060 Rhino 23 5007 1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-b enz imiâaz 0lyl] éthylène-glycol 50 0,025 0,1 0,2 0,1 2048 512 256 512 Dichlorhydrate de L-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl] éthylène-glycol 50 0,025 0,1 0,2 0,05 2048 512 256 1024 D-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-b enz imidaz olyl] éthylène-glycol • 12,5 0,4 0,2 0,4 0,4 32 64 32 64 Dichlorhydrate de D-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl] éthylène-glycol 25 0,2 0,05 0,8 0,05 128 512 32 512 Dichlorhydrate de méso-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-b enz imidaz 0lyl] éthylène-glycol 50 0,05 0,1 0,2 0,1 1024 512 256 512 *-4 O O en en K3 o LO -fc* en ou ->4 O "O - 70 04155 8 2034537 Etant donné que les bis-ben/.imidazoles de la présente invention sont d'utiles inhibiteurs des picornovirus décrits, on peut utiliser ces composés dans des compositions pharmaceutiques convenant pour des injections, pour une application locale ou topique 5 sous forme d'onguent, ou pour une pulvérisation orale ou nasale. Par exemple, on peut disperser un sel hydrosoluble d'addition d'acide des bis-benzimidazoles sous forme micronisée dans une composition d'agent de propulsion. Une très faible quantité d'un agent de suspension peut être présente comme revêtement sur les 10 particules du composé micronisé. L'agent de propulsion choisi peut être n'importe lequel des agents liquides volatils non toxiques appropriés et connus en technique. Ces matières sont généralement des hydrocarbures aliphatiques inférieurs saturés fluorés ou fluoro-chlorés. 15 La préparation de ces compositions d'aérosols s'effectue par un mélange intime, par exemple, de deux parties en poids de 1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol avec trois parties en poids d'alcool oléylique ou myristylique (on peut utiliser jusqu'à 4eux parties en poids pour une partie d'agent de sus-20 pension). On peut faire passer le mélange résultant dans un moulin à colloïdes. On utilise ensuite ce mélange pour préparer une composition auto-propulsive par mélange avec un agent propulsif approprié, volatil et non toxique, en mélangeant environ 100 à 500 mg du produit colloïdal avec 10 à 20 g d'agent propulsif. 25 La présente invention est encore décrite, mais non limitée, à l'aide des exemples suivants : EXEMPLE 1 Préparation du dichlorhydrate de L-1 ,2-bis[5(6)-méthoxy-2- benzimidazolyl]éthylène-glycol. 30 On dissout 8,4 g, soit 0,05 mole, de 4-méthoxy-2-nitro-1- aminobenzène dans 50 ml d'acide chlorhydrique 4ÎT,-.on ajoute 1 g de catalyseur à 5 de palladium sur alumine et l'on effectue l'hydrogénation dans une bombe de Parr. Après absorption de la quantité théorique d'hydrogène, on enlève le catalyseur par filtration et 35 l'on mélange le filtrat, contenant le 4-méthoxy-1,2-diaminobenzène, avec 3,75 g, soit 0,05 mole, d'aeide L-tartrique, 3 ml d'acide sul-furique concentré, et l'on chauffe le mélange réactionnel durant 8 heures au reflux. On fait recristalliser le dichlorhydrate de 70 04155 9 2034537 L-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol dans de l'acide chlorhydrique 6N et l'on obtient le produit analytiquement pur sous forme de l1 hémi-hydrate, ayant un point de fusion de 268°-269°C. 5 EXEMPLE 2 Préparation du L-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl] éthvlène-glvcol. On extrait le dichlorhydrate de L-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, préparé dans l'exemple 1, à l'aide 10 d'une solution diluée et chaude d'hydroxyde d'ammonium et on lave à l'eau. On fait recristalliser le produit, le L-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, dans un système éthanol-eau à l'aide de charbon décolorant. EXEMPLE 5 15 Préparation du dichlorhydrate de D-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2- b enz imidazolyl1éthylène-glyc ol. On dissout 8,4 g, soit 0,05 mole»de 4-méthoxy-2-nitro-1 -aminobenzène dans 50 ml d'acide chlorhydrique 4ïT, on ajoute 1 g de catalyseur à 5 $ de platine sur alumine, et l'on effectue l'hydro-20 génation dans un appareil comportânt une bombe de Parr. Après absorption de la quantité théorique d'hydrogène, on enlève le catalyseur par filtration, et l'on mélange le filtrat contenant le 4-méthoxy-1,2-diaminobenzène avec 3,75 g, soit 0,05 mole, d'acide D-tartrique, 3 ml d'acide sulfurique concentré et l'on chauffe le 25 mélange réactionnel durant 8 heures. On fait recristalliser le dichlorhydrate de D-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol dans de l'acide chlorhydrique 6ÎT et l'on obtient un produit analytiquement pur, ayant un point de fusion de 257° à 260°C (avec décomposition). 30 EXEMPLE 4 Préparation du D-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl] éthylène-glycol. On extrait le dichlorhydrate de D-1,2-bxs[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, préparé dans l'exemple 3, à l'aide 35 d'une solution aqueuse et chaude de bicarbonate de sodium et l'on lave à l'eau. On fait recristalliser le produit, le D-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol dans un système d'éthanol et d'eau à l'aide d'un charbon décolorant. Le composé a un point de 70 04155 10 2034537 fusion de 220,5° à 222°C (avec décomposition) et une valeur du pouvoir rotatoire [«1^ cLe +11,5° dans l'éthanol. EXEMPLE 5 Préparation du dichlorhydrate de méso-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2- 5 benzimidazolylléthvlène-glycol. On suit le même mode opératoire général que celui décrit à l'exemple 3, sauf que l'on fait réagir l'acide méso-tartrique avec le 4-méthoxy-1 ,2-diaminobenzène. Le produit récupéré est le dichlorhydrate de méso-1,2-bis-[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-10 glycol, ayant un point de fusion de 274° à 275°C (avec décomposition) . On peut ensuite transformer ce dernier composé en la forme à hydrogène libre du méso-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimi dazolyl] éthylène-glycol par extraction à l'aide d'une solution diluée et chaude d'hydroxyde d'ammonium comme dans'l'exemple 2. 15 EXEMPLE 6 On applique le mode opératoire décrit à l'exemple 3, sauf que l'on fait réagir le 3-méthyl-1,2-diaminobenzène, le 4-éthyl-1,2-diaminobenzène, le 3-isobutyl-1,2-diaminobenzène, le 3-propoxy-1,2-diaminobenzène ou le 4-pentoxy-1,2-diaminobenzène avec l'acide 20 D-tartrique après préparation àpartir du 2-irLtro -1-aminobenzène. çarr espon-dant substitué en position 3 ou 4. On isole les benzimidazoles résultante, à savoir le D-1,2-bis[4(7)-méthyl-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le D-1,2-bis[5(6)-éthyl-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le D-1,2-bis[4(7)-isobutyl-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le D-1,2-bis-25 [4(7)-pi*opoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, le D-1,2-bis[5(6)-pentoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol, après extraction à l'aide d'une solution aqueuse chaude de bicarbonate de sodium, lavage,et recristallisation dans un système d'éthanol et d'eau contenant du charbon décolorant. 70 04155 n 2034537 REVENDICATIONS 1. Médicament nouveau utile pour combattre une infection provoquée par la croissance de virus rhino, de virus Coxsackie, et de virus de la parainfluenza (ou de la grippe), caractérisé par le fait que le composé actif est un benzimidazole substitué répondant à la formule suivante : oh oh h h 10 ou qu'il s'agit d'un de ses sels d'addition d'acides, les symboles R, identiques ou différents, étant chacun un groupe alkyle inférieur ayant 1 à 5 atornas de carbone ou un groupe alcoxy inférieur ayant 1 15 à 5 atomes de carbone. 2. Médicament nouveau selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend le 1 ,2-bis[5(6)-méthoxy-2-ben7,imi.dazolyl] éthylène-glycol. 3. Médicament nouveau selon la revendication 2, caractérisé 20 en ce qu'il comprend la forme D, la forme I ou la forme mésômère du benzimidazole substitué. 4. Médicament nouveau selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il comprend le dichlorhydrate de 1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol. 25 5. Un D-1,2-bis[5(6) ou 4(7)-(alcoxy inférieur ou alkyl inférieur)-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol ou un de ses sels d'addition d'acides. 6. le composé selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il s'agit du D-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]éthylène- 30 glycol. 7. Un méso-1,2-bis[5(6)- ou 4(7)-(alcoxy inférieur ou alkyl inférieur)-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol ou un de ses sels d'addition d'acides. 8. Un composé selon la revendication 7, caractérisé en ce 35 qu'il s'agit du méso-1 ,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]éthylène-glycol. 9. Une composition pour combattre une infection due à la croissance du virus rhino, du virus Coxsackie, ou du virus de la 70 04155 12 2034537 parainfluenza,"cette composition étant caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité efficace d'un benzimidazole substitué répondant à la formule suivante : ' —fA r. W A (où les symboles R, identiques ou différents, représentent chacun 10 un groupe alkyle inférieur ayant 1 à 5 atomes de carbone ou un groupe alcoxy inférieur ayant 1 à 5 atomes de carbone) ou un de ses sels d'addition d'acides, dans un excipient pharmaceutiquement acceptable. 10. Procédé pour préparer un D- ou méso-benzimidazole subs-15 titué, répondant à la formule suivante : -V OH OH N . , - m i — i Arv. 20 H H (ou les symboles R, identiques ou différents, sont chacun un groupe alkyle inférieur ayant 1 à 5 atomes de carbone ou un groupe alcoxy inférieur ayant 1 à 5 atomes de carbone) ou un de ses sels d'addition d'acides, ce procédé étant caractérisé en ce qu'on fait réagir un 25 1,2-diaminobenzène avec l'acide D-tartrique ou avec l'acide méso-tartrique, respectivement. 11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que R est un groupe méthoxy. 12. Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce 30 qu'on utilise l'acide D-tartrique ou l'acide méso-tartrique.