FR 2034519 A1 19701211 FR 7003914 A 19700204 70 03914 i 2034519 Cette invention concerne des nouveaux composés antimicrobiens qui sont des acides 6,7-méthylènecîioxy-4 (1H) -oxocinnoline-3-carboxyliques substitués en 1 par un radical alcoyle ou alcoylène inférieur, ayant la formule : 10 N ■ R dans laquelle R est un membre du groupe constitué des radicaux 15 méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, vinyle et allyle, et des procédés pour les préparer. De plus, cette invention concerne aussi des composés intermédiaires utilisés dans la préparation de ces acides carboxyliques comprenant des composés de la catégorie constituée des composés 20 ayant la formule suivante ; O II N R 30 dans laquelle R est un membre du groupe constitué des radicaux méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, £-hydroxyéthyle et allyle. On peut préparer les nouveaux composés de la présente invention par une synthèse en plusieurs stades en partant du composé connu, 35 la 2'-nitro-4*,5'-méthylènedioxy-acétophénone. On réduit la matière de départ précédente, en utilisant le bioxyde de platine comme catalyseur, dans un appareil de Parr à hydrogénation, à secousses, à environ 3,5 kg/cm2 à une température d'environ 30-40°C pour former le nouveau composé, la 2T-amino-4', 5'-méthylènedioxy-40 acétophénone. L'homme de l'art saura aussi que l'on peut utiliser 70 03914 2 2034519 d'autres catalyseurs, comme le palladium sur charbon, ou le nickel de Raney, à des pressions et des températures autres que celles indiquées; ou que l'on peut effectuer la réduction en utilisant un procédé de réduction chimique approprié. 5 Le second stade de la série de réactions consiste à diazoter et à fermer le cycle du composé aminé en un dérivé cinnoline en diazotant 1'aminoacétophénone avec une quantité équimolaire d'un nitrite générateur d'acide nitreux, en présence d'un excès • cinq à dix fois mclaire d'une solution d'acide chlorhydrique 10 à une température de 0°C ou inférieure, ensuite à fermer le cycle en l'espace de 3-24 heures à une température de 0-80°C, les conditions réactionnelles préférées étant 3-4 heures à 80°C. La réaction donne le 6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol connu /_ Schofield and Simpson, J. Chem. Soc., 519 (1954)_/ de formule : 15 OH On peut bromer le dérivé cinnoline par le brome en présence 25 d'une quantité à peu près équimolaire d'acétate de potassium dans un excès cinq à dix fois molaire d'acide acétique à la température de reflux du mélange réactionnel. On peut transformer le nouveau composé résultant, le 3-bromo-6,7-méthylènedioxycin-noline-4-ol, en 6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol-3-carbonitrile 30 en traitant le dérivé bromé par le cyanure cuivreux allant d'une quantité environ équimolaire à un excès environ deux fois molaire . On effectue généralement la réaction dans un excès cinq à vingt fois molaire de diméthylformamide à la pression atmosphérique pendant 4-24 heures à une température allant d'envi-35 ron 50°C à la température de reflux du mélange réactionnel, de préférence aux températures de reflux pendant 4-6 heures. On peut effectuer 1'alcoylation du 6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol-3-carbonitrile par un bromure, chlorure, iodure,ou sulfate de méthyle, d'éthyle, de n-propyle, d'isopropyle,de n-butyle^â^allylf 40 selon des procédés connus, dans un solvant organique polaire tel COPY 70 03914 3 2034519 qu'un alcanol en à Cg, un alcanediol en à C^, le diéthylène-glycol, le triéthylèneglycol, le diméthylformamide, le diméthyl-acétamide, la N-méthylpyrrolidone, etc..., en présence d'un réactif basique pour obtenir les composés 1-méthyl, éthylf 5 n-propyl, isopropyl, n-butyl, ou allyl-6,7-méthylènedioxy-4- (1H)-oxocinnoline-3-carbonitrile correspondants de cette invention. Le stade final de la synthèse consiste en l'hydrolyse du carbonitrile en acide carboxylique correspondant. On peut effectuer commodément l'hydrolyse soit avec un acide soit avec une base 10 Le procédé préféré consiste à faire l'hydrolyse avec l'acide chlorhydrique concentré dans un milieu réactionnel d'acide acétique, où l'acide chlorhydrique et l'acide acétique sont présents dans un rapport molaire de 1:4 à 4:1 et la concentration de l'acide acétique par rapport au nitrile est dans un rapport molaire de 15 5:1 à 20:1. On prépare l'acide l-vinyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinno-line-3-carboxylique en alcoylant le 6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol-3-carbonitrile avec le l-bromo-2-hydroxyéthane pour former le 1-(P-hydroxyéthyl)-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-20 carbonitrile, et en hydrolysant le carbonitrile alcoylé en acide carboxylique correspondant comme il est décrit précédemment. Ensuite on estérifie l'acide 1-(P-hydroxyéthyl)-6,7-méthylènedioxy-4(1H)— oxocinnoline-3-carboxylique en utilisant le chlorure de p-toluène sulfonyle dans la pyridine pour former le tosylate. 25 L'élimination du tosylate à l'aide d'une base forte, comme l'étho-x jâe de sodium dans l'éthanol anhydre donne l'acide l-vinyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique. On peut aussi utiliser d'autres méthodes appropriées pour réaliser l'élimination des éléments de l'eau du substituant A-hydroxyéthyle. Une 30 variété de ces méthodes sont connues dans l'art. Sont également inclus dans le cadre de cette invention les sels des acides 6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxyliques substitués en 1 par un radical alcoylé ou alcoylène inférieur,.décrits ci-dessus, avec les métaux alcalins tels que 35 le lithium, le sodium et le potassium; les métaux alcalino- terreux comme le magnésium, le calcium, le strontium, et le baryum; et l'ammonium; et les sels d'aminés ayant un pKa supérieur, à 7,5 comme, par exemple, la triéthylamine, la pyrrolidine, etc... . On peut former les sels en faisant réagir l'acide libre avec une 40 base appropriée, une aminé ou un sel basique comme le bicarbonate 70 03914 4 2034519 de sodium, le carbonate de calcium, l'hydroxyde d'ammonium, la triéthylamine, etc... . Parmi les sels préférés se trouvent les sels de sodium, de potassium, de calcium, et d'ammonium. Les acides 6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxyli-5 ques substitués en 1 et leurs sels sont essentiellement des solides blancs cristallisés à point de fusion élevé. Les acides libres sont solubles dans la plupart des solvants organiques polaires, tandis que les sels cationiques monovalents sont solubles dans les solvants aqueux. 10 Cette invention est illustrée plus en détail par les exemples suivants : Exemple 1 Préparation de la 2'-amino-4',5'-méthylènedioxyacétophénone On a mis en suspension environ 90g (0,43 mole) de 2'-nitro-15 4',5'-méthylènedioxyacétophénone dans environ 300 ml d'éthanol absolu et on a ajouté 200 mg de bioxyde de platine. On a mis le mélange dans un appareil de Parr à hydrogénation, à secousses, et on a réduit par l'hydrogène sous 3,5 kg/cm2, à une température de 30-40°C pendant 3-4 heures jusqu'à ce què l'on n'observe plus 20 d'absorption d'hydrogène. On a évaporé le solvant du mélange réactionnel sous vide, et on a repris le résidu dans 500 ml de chloroforme chaud. On a filtré le mélange et on a évaporé le filtrat à sec. On a recristallisé le résidu dans un mélange 80:20 d'éthanol et d'eau pour obtenir environ 70 g de cristauxbruns-25 jaunâtres de 2'-amino-4',5'-méthylènedioxyacétophénone ayant un point de fusion d'environ 167-168°C. Le rendement était de 97,7%. Analyse : CgHgN03; Pds.mol.: 179; Cale.: C, 60,33; H, 5,06; N, 7,82; Trouvée: C,60,60; H, 5,33; N, 7,75. 30 Exemple 2 Préparation du 6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol On a ajouté environ 70 g (0,41 mole) de 2'-amino-41,5'-méthylènedioxyacétophénone à 800 ml d'acide chlorhydrique concentré à la température ambiante. On a refroidi le mélange résultant 35 à 0°C et on a ajouté goutte à goutte une solution de 35 g (0,5 mole) de nitrite de sodium dans 100 ml d'eau tout en maintenant la température à 0°C et en agitant. On a continué à agiter pendant 30 minutes après avoir fini d'ajouter le nitrite de sodium. On a filtré le mélange réactionnel résultant et on a 40 chauffé le filtrat à 80°C pendant quatre heures, on l'a laissé 70 03914 5 2034519 refroidir à la température ambiante pendant une nuit pour faire cristalliser le produit, et on a filtré. On a lavé les cristaux ainsi obtenus avec de l'eau et ensuite on les a recristallisés dans 600 ml d'un mélange 80:20 de suifoxyde de diméthyle et d'eau. 5 On a obtenu environ 65 g de 6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol sous forme de cristaux de couleur havane pâle. Le produit fondait à environ 338°C en se décomposant. Le rendement était de 83,6%. Analyse : CgHgL^O^- Pds.mol.: 190; Cale.:C,56,84; H,3,18; N, 14,73; Trouvée: C, 56,81; H, 2,93; N, 14,50. 10 Exemple 3 Préparation du 3-bromo-6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol On a ajouté environ 60 g (0,3 mole) de 6,7-méthylènedioxy-cinnoline-4-ol à une solution comprenant 30 g (0,3 mole) d'acétate de potassium anhydre dans 400 ml d'acide acétique. On a chauffé le 15 mélange résultant au reflux et on a ajouté goutte à goutte une solution comprenant 48 g (0,3 mole)de brome dans 100 ml d'acide acétique, en l'espace de 2 heures, en agitant. Après avoir fini d'ajouter le brome, on a agité le mélange réactionnel résultant pendant encore 30 minutes au reflux. On a laissé le mélange réac-20 tionnel refroidir à la température ambiante et ensuite on l'a versé dans un litre d'eau glacée. On a recueilli le précipité résultant par filtration et on l'a lavé avec 300 ml d'une solution de bicarbonate de sodium à 5%. La recristallisation dans un mélange 80:20 de sulfoxyde de diméthyle et d'eau a donné 76 g de 25 cristaux havane de 3-bromô-6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol, fondant à 330°C en se décomposant. Le rendement était de 94,3%. Analyse : CgH^BrN^O^; Pds.mol.: 269; Cale.: C,40,17; H, 1,87; N, 10,41; Br, 29,70: Trouvée : C, 40,31; H, 1,85; N, 10,60; Br, 29,90. 30 Exemple 4 Préparation du 6,7-méthvlènedioxycinnoline-4-ol-3-carbonitrile On a ajouté environ 100 g (0,37 mole) de 3-bromo-6,7-méthylène-dioxycinnoline-4-ol à une bouillie comprenant 63 g (0,70 mole) de cyanure cuivreux dans 1100 ml de diméthylformamide sec. On a 35 chauffé le mélange résultant au reflux pendant 4-5 heures en agitant. Au chauffage, la solution devenait homogène. A l'achèvement de la réaction, un précipité vert lourd se formait. On a refroidi le mélange réactionnel résultant à la température ambiante et on l'a versé dans une solution comprenant 160 g de chlorure 40 ferrique, 120 ml d'acide chlorhydrique concentré, et 250 ml d'eau. 70 03914 6 2034519 On a chauffé le mélange résultant à 60°C pendant 15-20 minutes, on l'a versé sur deux litres de glace pilée, et on l'a filtré. On a recristallisé le produit jaune dans un mélange 80:20 de suifoxyde de diméthyle et d'eau et on a obtenu 75 grammes (93,8%) 5 de 6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol-3-carbonitrile sous forme de cristaux havane qui fondaient à 330-340°C en se décomposant. Analyse : C^qHj-N^O^; Pds. mol.: 215; Cale.: C, 55,82; H, 2,34; N, 19,53: Trouvée: C, 55,74; H, 3,04; N, 18,63. Exemple 5 10 Préparation du l-éthyl-6,7-méthylènedioxv-4(1H)-oxocinnoline-3-carbonitrile On a mis en suspension environ 70 g (0,36 mole) de 6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol-3-carbonitrile dans 500 ml de diméthylformamide sec. On a ajouté environ 18 g (0,36 mole) 15 d1hydrure de sodium sec (préparé en lavant de l'hydrure de sodium à 50 pour cent dans de l'huile minérale par un solvant Skelly B) à la bouillie mentionnée précédemment, en agitant. Le mélange devenait homogène au fur et à mesure que l'hydrogène se dégageait. Après cessation du dégagement d'hydrogène, on a jouté 20 goutte à goutte environ 63 g (0,40 mole) d'iodure d'éthyle à la température ambiante en agitant. On a continué à agiter pendant une heure après avoir fini d'ajouter l'iodure d'éthyle. Ensuite on a chauffé le mélange réactionnel résultant à 100°C pendant deux heures, on l'a refroidi à la température ambiante, et on 25 l'a versé dans un litre d'eau glacée et on a acidifié par l'acide chlorhydrique. On a recueilli le précipité qui s'était formé,par filtration et on l'a recristallisé dans un mélange 80:20 de suifoxyde de diméthyle et d'eau. On a recueilli 50 g, soit un rendement de 62,5 pour cent, de l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-30 oxocinnoline-3-carbonitrile sous forme de cristaux havane pâle qui fondaient à 268-269°C. Analyse : °i2H9N3°3? Pâs mo1-^243,22; Cale.: (59,26; H, 3,73; N, 17,28; Trouvée : C, 59,05; H, 3,74; N, 17,10. 35 En suivant le procédé précédent et en remplaçant l'iodure d'éthyle y utilisé, par un bromure, un chlorure, un iodure ou un sulfate de méthyle, de n-propyle, d'isopropyle, de n-butyle, ou d'allyle, on obtient les composés suivants : l-méthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carbonitrile 40 l-n-propyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carbonitrile 70 03914 7 2034519 l-isopropyl-6,7-méthylènedioxy-4 (1H) -oxocinnoline-3-carbonitrile l-n-butyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carbonitrile l-allyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carbonitrile Exemple 6 5 Préparation de l'acide 1-éthyl -6,7-méthylènedioxv-4(1H)-oxocin-noline-3-carboxylique On a ajouté environ 23 g (0,095 mole) de l-éthyl-6,7-méthylène-dioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carbonitrile à un mélange de 200 ml d'acide chlorhydrique concentré et de 200 ml d'acide acétique. On 10 a chauffé le mélange réactionnel résultant au reflux pendant 18 heures. On a éliminé sous vide les acides en excès, et on a repris le résidu dans 150 ml d'une solution de bicarbonate de sodium à 5 pour cent. On a traité la solution résultante par 5 g de charbon et on l'a filtrée. On a acidifié le filtrat en ajoutant 15 de l'acide chlorhydrique et on a éliminé le précipité résultant par filtration. On a recueilli 23 g, représentant un rendement de 91,6 pour cent, d'acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique sous forme de cristaux havane pâle, qui fondaient à 261-262°C en se décomposant. 20 Analyse : C^2HlON2^5* Pds.mol.: 262; Cale.: C, 54,96; H, 3,84; N, 10,68; Trouvée: C, 54,77; H, 3,84; N, 10,61. En utilisant le procédé d'hydrolyse précédent avec le nitrile substitué en 1 approprié, on obtient les composés suivants : Acide l-méthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique, 25 p.f. 308°C (d.) Analyse: Cale, pour cnHgN2°5: C/ 53,23; H, 3,29; N, 11,29; trouvée: C, 53,01; H, 3,27; N,ll,59. Acide l-n-propyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique , p.f. 229-30°C. 30 Analyse: Cale, pour ci3Hi2N2®5: C/ ^6,52; H, 4,38; N, 10,14; Trouvée: C, 56,31; H, 4,45; N, 10,36. Acide l-isopropyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxy- . lique, p.f. 304-5°C (d.) Analyse : Cale, pour C^H^^Oj.: C, 56,52; h, 4,38; Hr 10,14; 35 trouvée: Ç, 56,31; H, 4,29; N, 10,24. Acide l-allyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxy- lique, p.f. 214-5°C. Analyse : Cale, pour C^3HioN205: C' ^6,93; H, 3,68; N, 10,22; trouvée: C, 56,68; H, 3,86; N, 10,25. Acidô 40 l-n-butyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique, 70 03914 8 2034519 p.f. 210—llflC. Analyse : Cale, pour C]_4H^4N2°5: C' 57,93; H, 4,86? N, 9,65? Trouvée: C, 57,71; H, 4,98; N, 9,71. Les nouveaux composés acidqg 6,7-méthylène-dioxy-4 (1H) -5 oxocinnoline-3-carboxyliques substitués en 1 par un radical alcoylé ou alcoylène inférieur de cette invention et leurs sels, possèdent une activité antimicrobienne remarquable. Parmi les organismes, pathogènes pour les animaux à sang chaud, vis-à-vis desquels on a démontré une activité importante in vitro se trouvent 10 Mycoplasma gallisepticum et les bactéries Gram-négatives Escherichia coli. Salmonella dublin, et Vibrio coli. On a également trouvé que ces nouveaux composés sont actifs contre les agents pathogènes des végétaux, Erwinia amylovora, l'agent responsable du "fire blight" des pommes et des poires, Xanthomonas phaseoli, 15 l'agent responsable du flétrissement bactérien commun des haricots, et la jaunisse de l'Aster, une maladie à Mycoplasma. Les nouveaux composés représentatifs de cette invention (sous forme de leurs sels de sodium) ont les concentrations inhibitrices minimales suivantes (exprimées en microgrammes par 20 millilitre) vis-à-vis des organismes précédents, avec le test de dilution en tubes conventionnel. TABLEAU I Activité antimicrobienne in vitro 25 Concentration inhibitrice minimale, mcg./ml.; testée avec : M.galli- Composé- E. coli jS. dublin V. coli septicum Acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4 (1H)-oxocinnoline-3- carboxylique, sel de sodium 12,5 6,25 25,0 3,12 30 Acide l-isopropyl-6,7-méthy-lènedioxy-4(1H)-oxocinnoline- 3-carboxylique, sel de sodium 25,0 12,5 50,0 25,0 35 Acide l-allyl-6,7-méthylènedioxy-4 (1H)-oxocinnoline-3- carboxylique, sel de sodium 50,0 12,5 50,0 50,0 Les acides 6,7-méthylènedioxy-4(1H)oxocinnoline-3-carboxy-liquessubstitués en 1 par un radical alcoylé ou alcoylène inférieur, 70 03914 9 2034519 et leurs sels, sont aussi des agents thérapeutiques efficaces pour les infections microbiennes chez les animaux â sang chaud. En outre, ils sont efficaces qu'ils soient administrés par voie parentérale ou par voie orale, comme il a été démontré par 5 des essais avec des poussins. Par exemple, on a injecté le sel de sodium de l'acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique dans le cou de poussins de un jour à raison d'approximativement 50 mg par poussin. On a ainsi traité deux groupes de chacun cinq poussins. On a inclus deux groupes de cinq 10 poussins comme témoins non traités. On a immédiatement soumis les quatre groupes de cinq poussins chacun à l'action de 0,1 ml d'une culture de Salmonella typhimurium administré par voie intramusculaire. Le sixième jour on a déterminé le nombre de survivants dans chaque groupe. Le nombre de survivants indiquait l'activité 15 du composé vis-à-vis de l'organisme-test. Les résultats de cet: essai sont rassemblés dans le Tableau II. On a également administré le sel de sodium par voie orale en en incorporant 200 g/tonne à la nourriture des poussins donnée de manière continue à partir du moment de l'éclosion. On a donné la nourriture renfermant le 20 médicament à quatre groupes de neuf poussins chacun. A quatre groupes de neuf poussins chacun on a donné la même ration mais sans composé actif. On a attaqué les huit groupes de neuf poussins chacun en donnant 50 ml d'une culture sur bouillon de S., typhimurium à chaque groupe de poussins au lieu de leur donner de l'eau 25 à boire, la consommation étant totale en 24 heures. On a déterminé le nombre de survivants le dixième jour. On a indiqué l'activité orale du composé vis-à-vis de l'organisme-test par la différence entre le nombre de survivants des groupes traités et non traités. Le Tableau III donne les résultats de cet essai. 70 03914 10 2034519 TABLEAU II Activité antimicrobienne de l'acide l-éthyl-6,7-méthvlène-dioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxyligue, sel de sodium. Injection sous-cutanée à des poussins de un jour. Survivants (6 jours)/ 5 Essai Traitement Nbre essayé 1 Acide l-éthyl-6/7-méthylènedioxy-4(1H)- 4/5 oxocinnoline-3-carboxylique sel de sodium, 50 mg. 10 2 " " 3/5 TOTAL 7/10 la Témoins contaminés 0/5 2a 0/5 15 TOTAL 0/10 TABLEAU III Activité antimicrobienne de l'acide l-éthvl-6,7-méthvlène-dioxv-4 (1H) -oxocinnoline-3-carboxylique, sel de sodium,-incorporation à la nourriture de poussins d'éclosion récente. 20 Survivants (10 jours)/ Essai Traitement Nbre essayé 1 Acide l-éthylr6/7-méthylènp/3ioxy-4 (1K) - 6/9 oxocinnoline-3-carboxylique sel de sodium, 200 g/t 25 ?. 2 » " 0/9 3 " " 8/9 4 " " 5/9 30 35 TOTAL 19/36 la Témoins contaminés 0/9 2a " 0/9 3a " 3/9 4a " 1/9 TOTAL 4/36 70 03914 ii 2034519 De plus, l'injection d'acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique, sous forme de sel de sodium, dans le cou de poulets âgés de six semaines, pour rôtisserie, pesant environ 600 g, protégeait les poulets traités de doses d'attaque 5 de E. coli. On a utilisé dix groupes de dix poulets chacun pour l'essai. On a fait une injection sous-cutanée du composé actif à six des dix groupes. Les quatre autres groupes ont servi de témoins contaminés. On a utilisé des doses de 50, 100, et 200 mg/kg. Immédiatement après le traitement, on a fait dans le 10 sac aérien de chaque poulet, une injection de 0,5 ml d'une dilution 10 d'une culture de 24 heures sur bouillon de tryptose d'une souche de E_. coli, la moitié des groupes recevant la souche Gross, l'autre moitié la souche Glantz. Sept jours après le traitement, on a sacrifié et autopsié les poulets survivants. On a 15 examiné chaque poulet pour voir s'il y avait des lésions du sac aérien, de la péricardite, et de la périhépatite. On a déterminé la valeur moyenne des lésions pour chaque groupe en attribuant l'échelle arbitraire à chaque poulet : 4 = mort avant autopsie; 3 = lésion du sac aérien plus péricardite plus périhépatite; 20 2 = lésion du sac aérien plus soit péricardite soit périhépatite; 1 = lésion du sac aérien; O = pas de lésion. Pour chaque groupe on a fait le total et on l'a divisé par le nombre de poulets contenu dans le groupe. Une valeur moyenne des lésions de 4,0 signifie que tous les poulets sont morts avant la fin de l'essai, 25 tandis qu'une valeur de 0,0 signifie qu'il n'y a pas eu de morts et que l'on a observé aucune lésion à l'autopsie. La différence des valeurs moyennes des lésions entre les poulets traités et les poulets non traités indique l'activité du composé vis-à-vis de l'organisme-test. Le tableau IV donne les résultats de ce test. 70 03914 12 2034519 TABLEAU IV Activité anti-infectieuse de l'acide l-éthvl-6i7-méthvlène-dioxy-4(1H)-oxocinnoline-S-carboxyliquef sel de sodium; injection sous-cutanée à des poulets de six semaines. Nombre de Souche Valeur Traitement Acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-10 4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique, sel de sodium, 50 rng/kg poulets dans l8 essai de E. coli moyenne des lésions 15 Acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxyliquer sel de sodium, 100 mg/kg 20 Acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique, sel de sodium, 200 mg/kg 10 Gros s 0,9 10 Glantz 1,9 10 Gross 1,0 10 Glantz 0,6 10 Gross 0,0 10 Glantz 0,5 10 Gross 1,7 10 Gross 2,6 10 Glantz 1,7 10 Glantz 2,3 25 Témoins contaminés Il II Il II 30 " " On a dissous le sel de sodium de l'acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique dans l'eau à une concentration de 1000 p.p.m. et on a ajouté à la solution 0,0175 pour cent, poids/volume, de Toximul R et 0,175 pour cent, 35 poids/volume, de Toximul S (mélanges spéciaux d'agents mouillants non ioniques et anioniques fournis par Stepan Chemical Co., Northfield, Illinois). On a pulvérisé la solution résultante sur des poiriers Bartlett âgés de 6 ans, cultivés en verger, artificiellement inoculés avec Erwinia amylovora ("fire blight"), 40 jusqu'à ce que les feuilles, les branches, et le tronc soient 70 03914 13 2034519 mouillés au point que la solution ruisselle. On a déterminé et relevé les symptômes de la maladie qu'est le "fire blight". On peut préparerun concentré liquide stable du sel de sodium de l'acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-5 3-carboxylique en dissolvant environ 10 à environ 50 pour cent en poids/volume, de l'agent actif dans de l'eau désionisée et en y ajoutant environ 1 à environ 10 pour cent, poids/volume, d'un agent mouillant de polyoxyéthylène (10 moles) alcoyl phénol. Généralement, on inclut dans la formulation environ 1 à environ 10 10 pour cent poids/volume, d'un sel d'un sulfonate de lignine pour servir d'agent de chélation des ions métalliques lourd s rencontrés dans l'eau dont on dispose comme diluant en de nombreux endroits. Une formule représentative est constituée de : Acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-15 oxocinnoline-3-carboxylique, sel de sodium 480 grammes Triton X-100 /polyoxyéthylène(10 mol.) octylphénol, agent mouillant_/ 100 grammes La formulation donnée ci-dessus contient 480 grammes de l'agent 25 actif par litre de concentré, qui est une concentration couramment utilisée dans les formulations chimiques pour l'agriculture. On dilue ce concentré liquide avec l'eau disponible jusqu'à une concentration d'ingrédient actif appropriée à l'utilisation voulue. Par exemple, pour faire une solution de pulvérisation contenant • 30 environ lOOOp.p.m. de l'agent actif on ajoute 0,95 litre du concentré décrit ci-dessus à environ 480 litres'd'eau. On applique la solution résultante à l'aide d'un pulvérisateur sous pression d'environ 1,3 atm. à"environ 6,8 atm. aux plantes à traiter jusqu'à ce que tout le feuillage et toutes les tiges soient mouillés 35 au point que la solution ruisselle. Les acides 6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxyli-ques substitués en 1 par un radical alcoylé ou alcoylène inférieur, et leurs sels, ont un faible degré de toxicité pour les mammifères. Ainsi, par exemple, on ne rencontre aucun cas de mort lorsqu'on 40 administre le sel de sodium de l'acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy- 20 Polyfon H (lignine sulfonate de sodium) 100 grammes Eau désionisée Q.S. 1000 ml 70 03914 14 2034519 4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique à la souris, à des taux allant jusqu'à 200 mg/kg par voie intrapéritonéale ou 500 mg/kg par voie orale. Les nouveaux composés de cette invention et leurs sels 5 sont efficaces pour lutter contre les infections microbiennes chez les animaux à sang chaud, lorsqu'ils sont administrés à des doses quotidiennes totales d'environ 25 mg à environ 500 mg/kg de poids corporel. En raison de leur plus grande solubilité dans l'eau, de leur 10 stabilité chimique, de leur efficacité importante, de leur facilité de préparation, et de leur aptitude à être incorporés dans diverses formes posologiques pharmaceutiques et aliments médicamenteux, on préfère utiliser les sels de métaux alcalins et d'ammonium des acides 6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline carboxyliques 15 substitués en 1 par un radical alcoylé ou alcoylène inférieur dans la pratique de cette invention. Dans un mode de réalisation préféré de la présente invention, on administre par voie orale l'acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique dans un aliment approprié dans 20 lequel le composé est présent à raison d'environ 25 à environ 2500 g par tonne de nourriture totale, la concentration exacte dépendant de la quantité nécessaire pour procurer l'ingestion d'une dose efficace de l'agent actif lorsque des quantités normales de nourriture sont consommées. De préférence, on réalise l'addition 25 des composés de cette invention à la nourriture en préparant un prémélange alimentaire approprié et en incorporant le prémélange dans la ration complète. Sinon, on peut mélanger dans la nourriture un concentré intermédiaire ou un supplément alimentaire contenant le composé. 30 On peut effectuer la préparation d'un prémélange alimentaire approprié en broyant les composés de cette invention en une poudre et en les mélangeant à un excipient convenable tel que gruaux de luzerne, aliment de soja extrait par solvant, farine de maîs, hydrobiotite exfoliée, et excipients analogues. Ensuite on mélange 35 le prémélange ainsi préparé avec la ration alimentaire, quelle qu'elle soit,-donnée à l'animal au moment d'administrer les composés de cette invention. On peut tout d'abord diluer le prémélange alimentaire avec un supplément alimentaire ou un concentré alimentaire jusqu'à une concentration voulue du composé actif, 40 et on peut soit donner le supplément ou le concentré médicamenteux 70 03914 15 2034519 concuramment avec le reste de la ration soit le mélanger dans l'aliment final. Un autre procédé pour préparer le prémélange consiste à dissoudre le composé actif dans un solvant approprié comme l'eau, 5 ou à préparer une bouillie du composé dans un excipient approprié comme une "huile végétale comestible ou un glycol comestible, et à ajouter cette solution ou cette bouillie à l'excipient de prémélange en pulvérisant sur l'excipient tout en mélangeant convenablement. 10 On peut administrer les acides carboxyliques substitués en 1 par un radical alcoylé ou alcoylène inférieur, et leurs sels en une seule fois ou en plusieurs fois sous forme posologique pour la voie parentérale ou la voie orale. Lorsqu'une forme posologique parentérale est indiquée, on peut dissoudre l'agent actif dans 15 un excipient aqueux à une concentration d'environ 25 à environ 200 mg/ml, la concentration exacte étant fonction de la dose efficace nécessaire de l'agent actif et du volume de solution totale qui peut être injecté commodément à l'animal. Les nouveaux composés de cette invention peuvent être également 20 administrés par voie orale sous l'une des formes posologiques orales habituelles? par exemple, capsules remplies, liquides, suspensions, comprimés, etc... .Ces formes posologiques de voie orale contiennent habituellement la quantité voulue du composé actif accompagnée de charges, liants, solvants, véhicules, subs-25 tances de conservation, et autres excipients appropriés^ A titre illustratif, on peut mettre l'acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique sous forme de comprimés appropriés à une administration par voie orale, par la méthode suivante : on mélange 5,0 g d'acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-, 30 oxocinnoline-3-carboxylique avec 22,0 g de lactose, 2,9 g d'amidon, et 0,1 g de stéarate de magnésium, et l'on comprime le mélange en comprimés ayant une taille telle que chaque comprimé contienne 50 mg de l'agent actif. 70 03914 16 2034519 REVENDICATIONS 1. Un composé ayant la formule suivante : O II c - oh 10 dans laquelle R est un membre du groupe constitué des radicaux méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, vinyle et allyle, et ses sels cationiques formés avec un métal alcalin, un métal 15 alcalino-terreux, l'ammoniac et les aminés ayant un pKa supérieur à 7,5. 2. Un composé selon la revendication 1 qui est l'acide l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1h)-oxocinnoline-3-carboxylique. 3. Un composé selon la revendication 1, qui est l'acide 20 l-méthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique. 4. Un composé selon la revendication 1, qui est l'acide l-vinyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique. 5. Un composé selon la revendication 1, qui est l'acide 1-(n-propyl)-6,7-méthylènedioxy-4-(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique. 25 6. Un composé selon la revendication 1, qui est l'acide allyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique. 7. Un composé selon la revendication 1, qui est l'acide l-isopropyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique. 8. Un composé selon la revendication 1, qui est l'acide 30 1-(n-butyl)-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboxylique. 9. Une méthode pour préparer un composé de la catégorie des composés ayant la formule suivante : O 70 03914 17 2034519 10 15 20 dans laquelle R est un membre du groupe constitué des radicaux méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, vinyle et allyle, méthode qui consiste à : a) réduire par voie catalytique la 2'-nitro-4',5'méthylènedioxyacétophénone en 2'-amino-4',5'-méthylènedioxyacétophénone b) diazoter la 2'-amino-41,5'-méthylènedioxyacétophénone par l'acide nitreux et cycliser pour obtenir le 6,7-méthylène-dioxyc innol ine-4 -ol ; c) traiter le 6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol par le brome pour obtenir le 3-bromo-6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol; d) traiter le 3-bromo-6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol par le cyanure cuivreux pour former le 6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol-3-carbonitr ile; e) alcoyler le 6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol-3-carbonitrile par un bromure, chlorure, iodure ou sulfate d'alcoylé, d'alcoylène ou de /3-hydroxyéthyle pour former un 6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carbonitrile substitué en 1 par un radical alcoylé ou alcoylène inférieur, ayant la formule suivante : - CN 25 dans laquelle R est un membre du groupe constitué des radicaux 30 méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, /3-hydroxyéthyle, et allyle; et f) hydrolyser le 6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carbonitrile substitué en 1 par un radical alcoylé ou alcoylène inférieur, ou bien, lorsque R est le radical P-hydrbxyéthyle, 35 éliminer ensuite l'eau de la partie fi-hydroxvéthyle pour obtenir le dérivé 1-vinyl correspondant. 10. La 2'-amino-41,5'-méthylènedioxyacétophénone. 11. Le 3-bromo-6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol. 12. Le 6,7-méthylènedioxycinnoline-4-ol-3-carbonitrile. 40 13. Un composé de la catégorie constituée des composés ayant 70 03914 18 2034519 la formule suivante s - CN 10 âans laquelle R est un membre du groupe constitué des radicaux méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle,,/î-hydroxyéthyle, et allyle. 14. Un composé selon la revendication 13, qui est le 15 l-méthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)oxocinnoline-3-carbonitrile. 15. Un composé selon la revendication 13, qui est le l-éthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carbonitrile. 16. Un composé selon la revendication 13, qui est le 1-(n-propyl)-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carbonitrile. 20 17. Un composé selon la revendication 13, qui est le l-isopropyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carboni-trile. 18. Un composé selon la revendication 13, qui est le l-(n-butyl)-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carbonitrile. 25 19. Un composé selon la revendication 13, qui est le l-P-hydroxyéthyl-6,7-méthylènedioxy-4(1H)-oxocinnoline-3-carbonitrile. 20. Un composé selon la revendication 13, qui est le l-allyl-6,7-méthylènedioxy-4-(1h)-oxocinnoline-3-carbonitrile. 30 21. La méthode de lutte contre les infections microbiennes, qui consiste à administrer le composé de la revendication 1 à un animal à sang chaud, à la dose quotidienne d'environ 25 à environ 500 mg/kg de poids corporel. 22. La méthode de la revendication 21, qui consiste à admi-35 nistrer le composé par voie orale en une seule fois ou en plusieurs fois à raison d'une dose quotidienne totale d'environ 25 à environ 500 mg/kg de poids corporel. 23. La méthode de la revendication 21, qui consiste à administrer le composé comme constituant de l'alimentation animale 40 à raison d'environ 25 à environ 2500 g/t d'aliment. 70 03914 i9 2034519 24. La méthode de la revendication 21, qui consiste à administrer le composé par voie parentérale en une seule fois ou en plusieurs fois à raison d'une dolle quotidienne totale d'environ 25 à environ 200 mg/kg de poids corporel.