FR 2040228 A1 19710122 FR 7015046 A 19700424 70 15046 . 1 2040228 La présente invention a pour objet de nouveaux agents micro-bicides, ainsi qu'un procédé de lutte contre les micro-organismes qui endommagent ou détruisent les matières et les objets d'utilité de nature organique, procédé qui met en jeu ces agents, ou les 5 substances actives ou mélanges de substances actives qu'ils contiennent. Elle concerne également les matières et objets d'utilité protégés par ces substances actives et ces agents. Elle a plus particulièrement trait à des agents microbicides permettant de lutter contre les micro-organismes qui endommagent et détruisent 10 les matières cellulosiques, ou contenant de la cellulose, et les enductions de tous types. En vue de la protection des matières organiques, on a déjà signalé un certain nombre de substances douées d'activité microbi-cide, mais une grande partie de celles-ci ne répond pas entière-15 ment aux conditions exigées. C'est ainsi, par exemple, que les produits le plus couramment utilisés pour la lutte contre les mycètes qui endommagent ou détruisent la cellulose ou les matières contenant de la cellulose, comme les phénols, en particulier le pentachlorophénol, et les oxydes de trialkylétains, en particulier 20 l'oxyde de tributylétain, ne sont utilisables que de façon limitée, en raison de leurs caractéristiques, par exemple de leur pression de vapeur élevée, de leur odeur désagréable, de leur manque de résistance à la lumière. Ces substances actives ont bien un large spectre d'activité mais leur durée d'action est insuffisante. Des 25 benzimidazoles, portant comme substituants sur le noyau benzéni-que un ou plusieurs atomes de chlore, ont été déjà signalés comme substances à activité herbicide, comme substances à activité pesticide et comme substances permettant de combattre les insectes kératinophages (cf. brevet suisse n° 443 777)-30 Or, la Demanderesse a trouvé que des agents contenant comme substances actives un 2-chloro-benzimidazole portant au moins 2 atomes de chlore sur le noyau benzénique, ou des mélanges de tels polychloro-benzimidazoles entre eux, conviennent remarquablement bien pour la lutte contre les micro-organismes qui endommagent ou 35 détruisent les matières et les objets d'utilité de nature organique. Les substances actives et/ou les mélanges de substances actives contenus dans les nouveaux agents entravent ou inhibent même entièrement la croissance des bactéries, des mycètes et des levures, mais plus particulièrement la croissance des mycètes et des 40 bactéries qui endommagent et détruisent la cellulose, les matières 70 15046 2040228 contenant de la cellulose et les enductions de tous types. Ces polychloro-benzimidazoles présentent un large spectre d'activité, montrent une grande stabilité à l'égard de l'humidité de l'air et de la lumière ; ils ont une très bonne affinité pour les matières 5 qui ont été indiquées et leur action dure longtemps. En raison de ces caractéristiques, ainsi que de leur basse pression de vapeur, jointes à leur résistance à l'action de la lumière et à leur absence d'odeur, les nouveaux agents conviennent particulièrement bien pour l'apprêtage microbicide au moyen d'enductions colorées de 10 tous types, par exemple de teintures sur les supports les plus variés, de laques, de vernis, ainsi que pour l'apprêtage des tapis, du bois et des produits ligneux, et des textiles de toutes variétés . En ce qui concerne les substances actives contenues dans les 15 agents conformes à la présente invention, il s'agit, de préférence des polychloro-benzimidazoles suivants : le 2,5,6-trichloro-benzi-midazole, le 2,4,5j6-tétra-chloro-benzimidazole et le 2,4,5>6,7-pentachloro-benzimidazole, ou de mélanges de ces composés, lesquels présentent de préférence les compositions suivantes : 20 A. 42,6% de 2,5,6-trichloro-benzimidazole 29,7% de 2,4,5,6-tétrachloro-benzimidazole 27,7% de 2,4,5,6,7-pentachloro-benzimidazole ; B. 61,6% de 2,4,5,6,7-pentachloro-henzimidazole 33,0% de 2,4,5,6-tétrachloro-benzimidazole 25 4>4% de 2,5,6-trichloro-benzimidazole. La préparation de ces composés est décrite dans le brevet suisse n° 443 777. Le texte en question décrit également la préparation des différentes composantes, ainsi que celle du mélange A, par chloration du 2-mercapto-benzimidazole dans l'eau. Selon un 30 procédé amélioré, on obtient les mélanges A et B en chlorant le 2,5-dichloro-benzimidazole en présence de chlorure de fer-(III) . dans l'acide acétique glacial, avec addition d'une base. Lors de la mise en oeuvre du procédé, on interrompt à plusieurs reprises l'amenée de chlore et on diminue l'acidité du mélange réactionnel 35 par addition d'un composé à réaction basique, par exemple l'acétate de sodium. La chloration s'arrête pratiquement au stade représenté par les mélanges A et B. Par cristallisation fractionnée on peut séparer l'un de l'autre les deux mélanges. Les mélanges présentent des points de fusion bien définis ; on peut déterminer 40 leur composition par chromatographie en phase gazeuse. 70 15046 3 2040228 L'utilisation des nouveaux agents confère aux matières traitées un remarquable apprêtage microbicide. Comme les substances actives sont dépourvues d'odeur, elles conviennent en particulier pour le traitement des matières qui se trouvent dans un espace 5 clos, comme le bois, le papier, les enductions de toutes sortes, etc. Les matières traitées, comme le papier, ne présentent aucune altération de leur coloration sous l'action de la lumière pendant une longue durée. Contrairement â l'oxyde de tribùtylétain, les polychloro-benzimidazoles ne sont pratiquement pas volatils ; 10 après un stockage de 16 jours à 90°, la perte de poids de l'oxyde de tribùtylétain est d'environ 34% ; par contre, la perte de poids du mélange de polychloro-benzimidazoles A n'est que de 0,4%. Il y a avantage à ce que les agents conformes à l'invention se présentent sous la forme de concentrés de substance active, 15 lesquels peuvent être, soit liquides (solutions, concentrés émul-sionnables), soit pâteux. On peut diluer les concentrés, peu de temps avant l'utilisation, jusqu'à la concentration nécessaire. Comme les substances actives sont solubles dans les solvants organiques, elles conviennent pour les applications où l'on n'utilise 20 pas d'eau. Les polychloro-benzimidazoles forment des sels avec les ions de métaux alcalins, et peuvent par conséquent être mis également en'oéuvre sous la forme de dispersions ou solutions aqueuses. Le traitement du bois et des objets en bois au moyen des nouveaux agents est ainsi considérablement facilité. 25 Pour déterminer l'action bactéricide et fongicide des poly chloro-benzimidazoles utilisés conformément à l'invention, on effectue les essais suivants : 1.Largeur du spectre d'action On mélange la solution de substance active avec de la gélose 30 nutritive encore chaude. On coule ensuite la gélose en plaques sur lesquelles on applique, après solidification, les germes d'épreuve. On utilise les micro-organismes suivants : A. Bactéries Escherichia coli, Bacillus pumilus, Sarcina ureae, Bacillus 35 subtilis, Sarcina lutea, Streptococcus faecalis, Staph. saproph., Staph. aureus, Corynebact. diphtheroides 17, Brevibact. ammonia-genes, Salmonella pullorum, Proteus vulgaris HXL, Proteus vul-garis ox 19, Proteus mirabilis. B. Mycètes 40 la. Aspergillus niger, Pénicillium italicum, Fusarium oxysporum, 70 15046 4 2040228 Candida albicans, Stemphylium botryosum ; lb.Agents dégradant la cellulose : Ghaetomium globosum, Trichoder- raa viride, Metarrhizium glutinosum, Stachybotrys atra, 2. Levures : Saccharomyces cerevisiae, Torula utilis, Monilia nigia; 5 3- Dermatophytes : Trichopyton gypseum, Gtenomyces Spec., Keratin-omyces ajelloi, Epiderraophyton floccosum ; 4» Saprophytes ubiquitaires : Rhizopus nigricans, Paecilomyces varioti, Pénicillium citrinum, Aspergillus oryzae, Aspergillus clavatus, Aspergillus fiavus ; 10 5- Mycètes imparfaits': Scopulariopsis brevicaulis, Alternaria tenuis, Acrostalagmus cinnabarinus ; 6. Pourriture domestique-: Coniophora cerebella, Poria vaporaria, Poria incarnata; 7» Pourriture des matières entreposées : Polystitus versicolor, 15 Daedalea quericina, Lencites abietina, Lentinus lepideus ; 8. Parasites : Fomes annosus ; 9. Organismes provoquant une altération de la couleur du bois : Scopularia phycomyces, Pullularia pullulans.. Dans le tableau qui suit sont indiqués les milieux nutritifs 20 utilisés pour les divers organismes, la température et la durée de l'incubation, ainsi que la concentration de la substance active. 25 30 35 Xppm = parties de substance active pour 10^ parties de diluant. Organismes Milieu nutritif Incubations Tempéra-ture A Bactéries Gélose nutritive 37° • 48 heures: 30-10-3-1 B Mycètes la Gélose nutritive 37° 48 heures 100-30-10-3 lb Maltose-gélose + flocons d'avoine 2â° 5 jours 100-30-10 2 Moût-gélose 20° 5 jours 100-30-10 3 4 Dextrose-gélose de Sabouraud 20° 10jours 100-30-10 5 Maltose-gélose } de Sabouraud $ 28° 5 jours 100-30-10 6-9 Maltose-gélose de Sabouraud 28° 7 jours 100-30-10 : Concentration de : la substance ac-r Durée : tive en ppm* 70 15046 5 2040228 Evaluation : On détermine la concentration-seuil d'inhibition des divers micro-organismes. Les tableaux 1 et 2 indiquent respectivement l'activité bac-5 tériostatique et l'activité fongistatique des polychloro-benzimidazoles sur quelques-uns des micro-organismes précédemment mentionnés (les chiffres représentent la concentration-seuil en ppm). On utilise comme substances actives : 1. le 2,5,6-trichloro-benzimidazole 10 2. le 2,4,5,6,7-pentachloro-benzimidazole 3. le mélange A : 42,6% de 2,5,6-trichloro-benzimidazole 29,7% de 2,4,5,6-tétrachloro-benzimidazole et 27,7% de 2,4,5,6,7-pentachloro-benzimidazole. 4« le 2,4,5,6-tétrachloro-benzimidazole 15 5- le mélange B : 61,6% de 2,4,5,6,7-pentachloro-benziinidazole, 33,6% de 2,4,5,6-tétrachloro-benzimidazole et 4,4% de 2,5,6-trichloro-benzimidazole. TABLEAU 1 20 Bactéries 'j ■ ■ ■— Substances actives 1 2 3 4 5 Staphylococcus aureus SG 511 10 3 1 1 1 Escherichia coli NCTC 8196 30 300 10 10 30 25 Bacillus pumilus Féy 3 1 1 1 1 Sarcina ureae 10 1 1 1 1 Bacillus subtilis NCTC 646O 10 1 1 3 1 Sarcina lutea NCTC 196 30 >30 0 A >30 >30 Streptococcus faecalis NCTC 6619 10 3 10 10 3 30 Staphylococcus saproph. NCTC 7292 10 3 3 10 3 Staphylococcus aureus ATCC 6536 30 3 3 3 1 Salmonella pullorum VBIZ 30 ' - 30 30 - Diphtheroides 17 30 >30 >30 10 10 Proteus vulgaris HXL NCTC 4636 . 30 - 30 30 30 35 Proteus vulgaris ox 19 NCTC 6313 30 - 30 30 30 Proteus mirabilis oxk NCTC 6309 30 - 30 30 30 Brevibacterium ammon. ATCC667I 30 3 10 3 10 70 15046 TABLEAU 2 2040228 Mycètes Substances actives 1 2 3 4 5 Aspergillus niger 10 10 10 10 10 5 Pénicillium italicum 10 10 10 10 3 Fusarium oxysporum 10 10 10 10 3 Candida albicans 10 - 10 10 10 Stemphylium botryosum 10 10 10 10 3 Chaetomium globosum. 30 100 30 30 30 10 Trichoderma viride 30 100 30 30 100 Metarrhiz ium glutinosum 30 100 30 30 100 Stachybotrys atra 30 100 30 10 30 Saccharomyces cerevisiae 30 >100 30 30 10 Torula utilis 30 >100 30 30 30 15 Monilia nigra 30 >100 50 30 30 Trichophyton gypseum 10 10 10 10 10 Ctenomyces spec. 10 10- . 10 10 10 20 Mycètes Substances actives 1 2 2 4 5 Keratinomyces ajelloi 10 10 10 10 10 25 Epidermophyton floccosum 10 10 10 10 10 Rhizopus nigricans 10 10 10 10 10 Paecilomyces varioti 10 >100 30 30 30 Pénicillium cïtrinum 10 10 10 10 10 Memnoniella échinâta 10 10 10 10 10 30 Aspergillus oryzae 30 >100 30 30 30 Aspergillus clavatus 10 > 100 30 10 30 Aspergillus flavus 30 > 100 30 30 30 Scopulariopsis brevicaulis 10 10 10 10 10 Alternaria tenuis 10 10 10 10 10 35 Acrostalagmus cinnabarinus 10 10 10 10 10 70 150.46 7 2040228 Mycètes du bois Substances actives 1 2 3 4 5 10 10 30 10 100 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 30 - 10 30 - 30 100 100 30 10 10 30 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 30 10 10 10 10 10 Coniophora cerebella Poria vaporaria 5 Poria incarnata Polystictus versicolor Daedalea quercina iencites abietina Lentinus lepideus 10 Fouie s annosus Pullularia pullulans 2. Epreuve des zones d'inhibition Selon les procédés analogues à ceux dits d'épuisement et de 15 foulardage en teinturerie, on applique les substances actives, à partir de solutions en contenant des concentrations variables, sur des rondelles de papier. Comme solvant, on utilise l'éther monomé-thylique de 1'éthylène-glycol. Comme gélose nutritive, on utilise des plaques de gélose à deux couches. Ces plaques comprennent une 20 couche de "Bacto-Agar" et une couche de gélose convenant pour les différents organismes utilisés pour les épreuves. Au préalable, on ensemence ces deux plaques avec les organismes en question. On applique ensuite sur ces plaques les rondelles portant les substances actives, puis on fait incuber pendant 24 heures à 37°• On 25 évalue alors la croissance des organismes au-dessus et au-dessous de la rondelle. Pour les épreuves, on utilise les organismes suivants : Bactéries : Staphylococcus aureus SG 511 (gélose nutrivive + tellu-rite de potassium) 30 Escherichia coli (gélose nutritive) Mycètes : Aspergillus niger (gélose au moût) Candida albicans (gélose au moût) 70 15046 d 2040228 Substance active Bactéries Staph. aur. 0,05% 0,1% ™_ch Mycètes coli'Asp. nig. Gand. 0,1% 0,05% 0,1% 0,05% alb. 0,1% Mélange A (Pour la composition, cf. l.x) +++ +++ +++ +++ +++ ++ +++ Mélange B (Pour la composition, cf. 1.*) +++ +++ +++ +++ +++ +++ 2,4,5,6,7-pentachloro-benzimidazole +++ +++ - ++• ++ - 2,4,5,6-tétrachloro-benzimidazôle +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ 2,5,6-trichloro-benzimidazole +++ +++ ++ ++ +++ +++ ++ x Etude de la largeur du spectre d'action. 15 Dans le tableau, les symboles ont les significations suivan tes : : inefficacité, la croissance correspond à celle des témoins ; ++ : faible efficacité, la croissance va de 25 à 50% de 20 celle des témoins ; +++ : efficacité totale, aucune croissance. 3. Epreuve de désinfection Selon le procédé d'épuisement (ou de foulardage), on applique les substances actives, à partir de solutions conte-25 nant différentes concentrations de substances actives, sur des rondelles de papier. On ensemence ensuite ces échantillons avec des suspensions (dans du soluté physiologique contenant 10% de bouillon) des différents organismes servant à l'épreuve, après quoi on fait incuber les rondelles à l'étuve humide, pendant 24 30 heures à 37°, puis on les rince dans 20 ml de soluté physiologique, lequel contient, pour bloquer la substance active, du mono-oléate de polyoxéthylène-sorbitol. On prélève des quantités déterminées du soluté, et on les applique sur des milieux nutritifs appropriés. On laisse incuber ensuite les milieux nutritifs pendant 24 heures 35 à 37°• Les organismes servant à l'épreuve sont les mêmes que ceux indiqués sous 2. On détermine ensuite le nombre des organismes encore vivants et on le compare à celui des témoins. Dans le tableau qui suit, les symboles -, ++ et +++ ont les significations indiquées pour le tableau précédent. 70 15046 9 2040228 Bactéries Mycètes Substance Staph. aur'. Esch.coli Asp. nig. C'and. alb. active 0,05% 0,1£- 0,05£ 0,1% 0,05% 0,1% 0,05% 0,1% 2,5,6-trichloro-benzimidazole ++ ++ - +++ +++ 2,4,5,6-tétra chlo-r 0-be nz imida z oie ++ ++ — +++ +++ _ Mélange A (pourla composition, cf.: 1) +++ +++ +++ +++ +++ +++ ++ + ++ 10 X Etude de la largeur du spectre d'action. 4- Action sur les micro-organismes dégradant l'urée Dans l'un de deux flacons à poudre reliés entre eux, on introduit une rondelle de papier, après quoi on ensemence sur celle-ci une suspension de germes constituée d'un milieu nutritif liqui-15 de à l'urée et de bactéries dégradant l'urée. Dans l'autre flacon, - on introduit une solution décinormale d'acide chlorhydrique. On fait ensuite incuber le contenu des flacons sur un chevalet à rouleaux, pendant 3 jours et à la température de 20°. On détermine ensuite, en examinant la variation du pH, la quantité d'ammoniac 20 produite par la dégradation de l'urée. On utilise pour l'épreuve les germes suivants : Brevibacterium ammoniagenes et Proteus OS 19- A des concentrations comprises entre 0,05 et 0,1%, les polychloro-benzimidazoles conformes à l'invention inhibent la crois-25 sance.de ces bactéries. Il n'est pas possible de mettre en évidence une modification du pH de l'acide chlorhydrique décinormal par absorption de l'ammoniac. 5. Epreuve des taches Sur une plaque de gélose ou moût stérile, on dépose des .ron-30 delles de papier sur lesquelles on a appliqué, selon le procédé de"foulardage", les solutions de substances actives, après quoi on ensemence à.l'aide d'une suspension des germes des organismes servant à l'épreuve. On met ensuite les rondelles à incuber pendant '3 jours, à une température de 2o° et avec une humidité relative de 35 l'air allant de 75 à 85%. • Les organismes utilisés pour l'épreuve sont les suivants : Pénicillium expansum, Aspergillus niger et Alternaria tenuis. Dans le tableau qui suit sont indiquées les activités fongicides pour diverses concentrations des substances actives. 70 15046 ^ 2040228 Dans ce tableau les symboles ont les significations suivantes : - : inefficacité, la croissance correspond à celle des témoins, 5 ++ : faible efficacité, la croissance va de 25 à 50% de celle des témoins ; +++ : efficacité totale, aucune croissance. Composé 10 Croissance des mycètes pour une concentration en % des substances ? .^ives égales à 0,05 0,1 2,5,6-trichloro-benzimidazole +++ +++ 2,4,5,6-tétrachloro-benzimi-dazole +++ +++ Mélange A (peur la composition, cf. l.X) +++ +++ Etude de la largeur du spectre d'action 6. Action microbicide dans les peintures faites par enduction On dissout d'abord x parties de la substance active dans 5 20 parties d'un mélange à parties égales de diméthylformamide et d'éther monométhylique de 1'éthylène-glycol, après quoi on agite le tout, de façon à obtenir une peinture prête pour 1'enduction, avec 90-x parties d'une peinture en dispersion existant dans le commerce, â base d'un copolymère du poly-(acétate de vinyle) et 25 d'acrylate d'éthyle, et avec 5 parties d'eau. On revêt de l'enduit un papier-filtre, par exemple le papier.whatmann 3 MM, puis on sèche pendant 3 jours à la température ambiante. On fait ensuite passer un courant d'air sur les pièces, pendant: ê jours dans une soufflerie, à une température de 65° et sous une humidité re-30 lative allant de S0 à 90%. On découpe ensuite les pièces, puis on les applique sur des plaques de gélose ensemencées (l'enduction pour les mycètes tournée vers le dessus, celle pour les bactéries vers le dessous). On utilise comme substance active le mélange A : 35 42,6% de 2,5,6-trichloro-benzimidazole, 29,7% de 2,4,5, 6-tétrachloro-benzimida-zole et 27,7% de 2,4,5,6,7-pentachloro-benzimidazole» Les organismes utilisés pour les épreuves sont les suivants : 70 15046 Mycètes : Bactéries 11 Pullularia pullulans Paecilomyces varioti Pénicillium cyclopium^ Aspergillus oryzae Chaetomium globosum Aspergillus niger Candida albicans Staphylococcus aureus Escherichia coli 2040228 Gélose de Sabouraud au maltose Gélose nutritive 10 On met ensuite les plaques à incuber dans les conditions suivantes : Mycètes : pendant 7 jours à 20°, avec une humidité relative de l'air allant de 70 à 00 Bactéries : pendant 24 heures à 37°, avec une humidité relative 15 de l'air égale à 60°. Dans le tableau qui suit sont indiquées les concentrations de substance active inhibant la croissance des micro-organismes, avant et après l'aération. 20 Micro-organisme Concentration de substance active en % avant aération après aération Pull, pullulans 0,3 0,3 Paec. varioti 1,0 1,0 25 Pen. cyclopium 1,0 1,0 Asp. oryzae 3,0 3,0 Chaet. globosum 1,0 1,0 Asp. niger 1,0 1,0 Candida albicans 1,0 1,0 30 Staph. aureus 0,3 0,3 Esch. coli 96 3,0 3,0 Par contre, l'oxyde de tribùtylétain ne présente qu'une action partielle, même à une concentration de 6%. 35 7. Action de protection contre les agents provoquant la pourriture Pour déterminer leur poids sec, on chauffe des billettes de bois de hêtre et de l'aubier de pin (dimensions : 200 x 10 x 5mm) à 105° pendant 14 heures, après quoi on les pèse. On imprègne 40 ensuite les éprouvettes de bois, pendant 24 heures à la tempéra 70 15046 iz 2040228 ture ambiante et sous la pression normale, avec une solution acé-tonique à 2,5 ou à 1% de substance active, puis on les conserve pendant une semaine, à la température ambiante et sous la pression normale. On enfonce ensuite les éprouvettes dans la terre, jusqu'à 5 environ 2/3 de leur longueur ; le tiers qui reste se trouve au-dessus du niveau du sol. On laisse ensuite séjourner dans la terre, dont la teneur en eau est comprise entre 23 et 35%, à une température de 28° et sous une humidité relative allant de 70 à 80°, les éprouvettes de bois de hêtre pendant une durée de 3 mois, et cel-10 les en bois de pin pendant une durée de 6 mois. On lave ensuite les éprouvettes sous un courant d'eau, au moyen d'une brosse molle, après quoi on les sèche pendant 14 heures à la température de 105°, puis on les pèse. Les éprouvettes de bois présentent, par comparaison avec la pesée effectuée avant l'essai, une perte de 15 poids. Le degré de perte de poids indique dans quelle mesure le bois est protégé contre les agents provoquant la pourriture (micro-organismes dégradant la cellulose et la lignine). Dans le tableau qui suit sont indiquées,en -pourcentages, les pertes de poids des éprouvettes de bois traitées à l'aide des 20 substances actives. Concen Perte de poids Substance active tration Pin au bout Hêtre au bout de 6 mois de 3 mois Mélange A : cf.6) 1% (Pour la composition, 1,8 0,8 Des valeurs indiquées dans le tableau, il ressort que le mélange de chloro-benzimidazoles protège mieux les bois de hêtre et 30 de pin contre les agents provoquant la pourriture (mycètes dégradant la cellulose et la lignine) que le pentachlorophénol, lequel, à une concentration de 2,5%, se montre inefficace pour le pin au bout de 6 mois, tandis que, pour le hêtre, il ne présente qu'une efficacité partielle au bout de 3 mois. 35 8. Pourriture domestique Pour évaluer leur poids sec, on chauffe à 105°, pendant une durée de 16 à 20 heures, des éprouvettes de diverses variétés de bois. Sous application de vide, on imprègne ensuite les éprouvettes avec des solutions acétoniques contenant les substances acti-40 ves à diverses concentrations. On détermine par pesée en retour la quantité de substance active absorbée. 70 15046 13 2040228 On remplit, d'autre part, jusqu'à la moitié, des flacons à poudre avec du sable-quartzeux et avec 15 ml d'une solution nutritive constituée de glucose, de peptone, dissoute dans un tampon phosphate, et d'extrait de malt. Dans le sable quartzeux on intro-5 duit une billette de bois d'un type convenant pour la croissance du mycète, on ensemence avec la culture mycétienne et on effectue une incubation préalable d'une durée de 3 semaines. Sur la couche mycétienne uniforme ainsi obtenue on applique les billettes de bois imprégnées de substance active. On maintient 10 le tout pendant 2 mois à la température de 24°• On évalue ensuite la croissance du mycète et la qualité du bois, après quoi on aère les éprouvettes pendant 4 semaines dans une soufflerie à 65°, au moyen, d^air frais, .puis on les soumet encore une fois à une évaluation de la croissance des mycètes. 15 Les organismes' et les types de bois utilisés pour l'épreuve sont les suivants : Coniophora cerebella sur le pin (Pinus silvestris) Coriulus versicolor sur le hêtre (Fagus silvatica} Poria incarnata sur le tilleul (Tilia spec.) 20 Dans le tableau qui suit sont indiquées les concentrations de substance active qui inhibent la croissance des mycètes. Substance active- Coniophora cereb. Coriulus vers. Poria incar. Pin Hêtre - • Tilleul Original aéré Original aéré Original aéré 20 Mélange A : (Pour la composition, cf. 6) Pentachlorophénol 25 0,4$ 2,5% 0,4% 1% 0,4% 0,4% aucune action à 1% action insuffisante à 1% Pour déterminer la volatilité de ces substances, on compare le mélange A sous forme de poudre, avec de l'oxydé de bis-tributyl-étain de degré technique, liquide, et de l'hydroxyde de triphényl-30 étain de degré technique, sous forme de poudre. La volatilité de ces substances est déterminée par la perte de poids en % après qu'on a conservé 1 g de préparation dans une boîte de Pétri, au laboratoire, à une température d'environ 20 à 25°, et dans une étuve sèche, à la température de 90°. 70 15046 2040228 Durée de la Volatilité en % à Produits conservation 20-25° 90° Mélange A 1 jour 0 0,3 (Pour la composition, 4 jours 0 0,3 cf. 6) 8 jours 0 0,4 16 jours 0 0,4 Oxyde de bis-tribùtyl 1 jour 0 étain 4 jours 0 7.,Ô 8 jours 0 17,0 16 jours 0 33,6 Hydroxyde de triphényl- 1 jour 0 2,7 étain 4 jours 0 2,9 8 jours 0 3,0 16 jours 0 3,1 L'exemple.qui suit décrit la préparation de mélanges de poly-15 chloro-benzimidazoles. Les températures y sont indiquées en degrés Celsius. EXEMPLE On met en suspension 708 g de 2,5-diehibro-benzimidazole et 2,45 g de chlorure de fer-(III) dans "5800-'ml d'acide acétique 20 glacial. On chauffe le mélange réactionnel à 40°, on le refroidit, puis on fait passer dans le mélange, à la température de 20°, 380 g de chlore gazeux, après quoi on chauffe à une température de 40 à 50°, et on ajoute 390 g d'acétate de sodium. Une fois terminée la réaction exothermique, on fait passer encore 380 g de 25 chlore gazeux, on chauffe ensuite de nouveau a une température de 45 à 50°, on ajoute, après refroidissement, 589 g d'acétate de sodium et on fait passer encore 500 g de chlore gazeux à travers le mélange réactionnel. Après avoir laissé reposer pendant une heure, on verse le mélange sur 30 kg de glace et on ajoute 1500ml 30 d'une solution aqueuse à 30% d'hydroxyde de sodium, de telle sorte que le mélange a un pH de 4«- On sépare par filtration la bouillie qui a précipité, on la traite par le méthanol bouillant, puis on filtre. Du filtrat, il se sépare par cristallisation le mélange A, constitué de 42,6% de 2,5,6-trichloro-benzimidazole, 35 de 29,7% de 2,4,5,6-tétrachloro-benzimidazole et de 27,7% de 2,4,5j6,7-pentachloro-benzimidazole, dont le point de fusion est compris entre 212 et 214° et dont la teneur en chlore est de 54%. On traite encore le gâteau de filtration par ébullition dans 1000 ml de méthanol, et on filtre immédiatement après. Le mélange B, 70 15046 i5 2040228 constitué de 4,4% de 2,5,6-trichloro-benzimidazole et de 61,6% de 2,4,5,6,7-pentachloro-benzimidazole, fond à 260° avec décomposition. La teneur en chlore du mélange est de 59,12%. Pour la protection des matières, et plus particulièrement du 5 bois, on utilise les nouveaux agents sous la forme de solutions ou d'émulsions. On peut appliquer ces agents liquides sur le bois ou les objets en bois par imprégnation, enduction, immersion ou pulvérisation. Le traitement peut s'effectuer extérieurement ou être réalisé selon les procédés techniques bien connus utilisés 10 pour l'imprégnation du bois. Pour préparer les solutions, on utili.se plus particulièrement des solvants organiques, lesquels sont pratiquement dépourvus d'odeur et peu volatils, par exemple des fractions d'huile minérale, les huiles de goudron, des hydrocarbures aliphatiques et 15 aromatiques à haut point d'ébullition, ainsi que des dérivés chlorés de ces composés, isolément ou en mélange entre eux. Pour améliorer le pouvoir de pénétration, ces solvants peuvent contenir des additifs, en l'espèce des hydrocarbures aliphatiques à bas point d'ébullition et des dérivés de ces composés. Il est 20 préférable d'utiliser des solvants possédant de leur côté une action insecticide. Pour préparer les concentrés émulsionnables, on utilise des solvants organiques, des agents de dispersion et de l'eau. Comme solvants, on peut envisager par exemple des alcools, des hydro-25 carbures aromatiques, ainsi que les solvants indiqués plus haut. Comme dispersants, on peut employer les substances suivantes : des produits de polyoxéthylation de mono- et di-alkylphénols, dont la molécule contient de 5 à 15 restes d'oxyde d'éthylène et dont le reste alkyle a 6 ou 9 atomes de carbone £~par exemple les 30 produits que l'on trouve dans le commerce sous les désignations de "Triton" (Firme Rohm et Haas, Philadelphie), de "Tergitol" (Union Carbide Chemical Co., New York) et d' "Igepal" (General Anilin + Film Corp., Antara Chemicals Div., New York)_7 ; des produits de polyoxéthylation d'alcools gras, dont la molécule 35 contient de 5 à 20 restes d'oxyde d'éthylène et dont la partie alcool gras a de 8 à 16 atomes de carbone / par exemple les produits que l'on trouve dans le commerce sous la désignation de "Genapol" (Hoechst, Francfort sur le Main)_/ ; des produits de condensation de l'oxyde d'éthylène et de l'oxyde de propylène 40 [_ par exemple les produits que l'on trouve dans le commerce sous 70 15046 " 2040228 la désignation de "Pluronics" (fabricant : Wyandotte Chemicals Corp., Industrial Chemical Div., Wyandotte, Michigan)_7 ; des polyvinylpyrrolidones ; des produits de condensation de l'urée et du formaldéhyde ; des produits de condensation du naphtalène sul-5 fone et de dérivés du naphtalène sulfoné avec le formaldéhyde /par exemple le produit que l'on trouve dans le commerce sous la désignation de "Sellasol" (fabricant : J.R. Geigy A.G., Bâle)_7 ; des produits de condensation du naphtalène ou des acides naphtalène-sulfoniques avec le phénol et le formaldéhyde /"par exemple les 10 produits que l'on trouve dans le commerce sous la désignation d' "Irgatan" (fabricant : J.R. Geigy, A.G., Bâle_]7 également des alkylarylsulfonates, des sels de métaux alcalins ou alcalino-ter-reux et de l'acide dibutylnaphtalène-sulfonique ; des sulfates d'alcools gras, comme des sels d'hexadécanols, d'heptadécanols, 15 d'octadécanols et d'octadécénols sulfatés et des sels d'éthers polyglycoliques d'alcools gras sulfatés /"par exemple les produits que l'on trouve dans le commerce sous la désignation d' "Eriopon" (fabricant : J.R. Geigy A.G. Bâle)_J ; des sulfates d'alcools gras animés JHpar exemple les produits que l'on trouve dans le 20 commerce sous la désignation de "Duponol" (fabricant : Du Pont, Wilmington, Delaware)_7 ; le sel sodique de 1'oléoyl-méthyl-tauride /"les produits que l'on trouve dans le commerce sous la désignation d' "Arkopon" (fabricant : Hoechst, Francfort-sur-le Main)_7 ; des acétylène-glycols ditertiaires /""par exemple les 25 produits que l'on trouve dans le commerce sous la désignation de "Surfynol" (fabricant : Air Réduction Chemical Company, New YorkJ^ un chlorure de dialkyl-dilauryl-ammonium /""le produit que l'on trouve dans le commerce sous la désignation d' "Aliquat" (fabricant : General Mills, Inc. Kankakee, Illinois)_J. 30 Les solutions et les concentrés émulsionnables contiennent habituellement la substance à une concentration comprise entre 1 et 80% ; la teneur en substance active des solutions utilisées est comprise, de préférence, entre 4 et 10%. Ces solutions peuvent être appliquées directement par imprégnation, pulvérisation ou 35 enduction sur le bois et les objets en bois. Pour l'emploi les concentrés émulsionnables sont dilués de façon à obtenir des émulsions dont la teneur en substance active va de 4 à 15%. On peut ajouter encore aux agents conformes à l'invention qui viennent d'être décrits d'autres substances ayant une activité bioci-40 de. C'est ainsi que les nouveaux agents peuvent contenir, en plus 70 15046 17 2040228 des polychloro-benzimidazoles, par exemple des insecticides, comme les substances actives du DDT, d'autres fongicides, bactéricides, fongistatiques et bactériostatiques, en vue d'élargir leur spectre d'action. Les agents peuvent éventuellement contenir aussi 5 des substances hydrofugeantes. Les exemples qui suivent illustrent la préparation de quelques modes typiques de réalisation des agents conformes à l'invention. Les parties y sont données en poids. Concentré émulsionnable : 10 Pour préparer un concentré émulsionnable à â%, on utilise les ingrédients suivants : Ô parties du mélange A, constitué de : 42,6% de 2,5,.6-trichloro-benzimidazole, 29,7% de 2,4,5,6-tétrachloro-benzimidazole, et 15 27,7% de 2,4,5,6,7-pentachloro-benzimidazole, 7 parties de la substance active du DDT (dichloro-diphényl-trichloro-éthane), 00 parties de xylène et 5 parties d'un émulsionnant combiné constitué d'un produit 20 de polyoxéthylation du nonylphénol et du sel calcique de l'acide dodécylbenzène-suifonique. On mélange intimement les composés actifs avec la substance . active du DDT, puis on dissout le tout dans le xylène, avec addition de 1'émulsionnant combiné. On obtient un concentré émulsion-25 nable, que l'on peut diluer avec de l'eau jusqu'à toute concentration souhaitée. Lorsqu'on imprègne, enduit ou asperge le bois ou les objets en bois, en particulier le bois de construction, avec ces émulsions aqueuses, la matière traitée est protégée contre les attaques des micro-organismes et des insectes destructeurs. 30 Solution Pour préparer une solution à l+%, on utilise les ingrédients suivants : 35 4 parties du mélange A constitué de 42,6% de 2,5,6-trichloro-benzimidazole, 29,7'/o de 2,4,5j6-tétrachloro-benzimidazole, et 27,7% de 2,4,5j6,7-pentachloro-benzimidazole, 3 parties de la substance active du DDT, 93 parties d'un solvant ayant une teneur de 93% en composés aromatiques, bouillant entre 212 et 273°} ayant un poids 40 spécifique égal à 0,930. 70 15046 18 2040228 On dissout le mélange de composés actifs conjointement avec la substance active du DDT. On peut utiliser directement la solution pour imprégner, enduire ou asperger le bois, etc., et les objets en bois, ce qui apporte à la matière traitée un apprêt 5 microbicide et insecticide. 70 15046 19 2040228 REVENDICATIONS 1. Agent destiné à la lutte contre les micro-organismes et à la protection des matières organiques et des objets d'utilité en matières organiques contre l'attaque par les micro-organismes, 5 agent caractérisé en ce qu'il contient, comme substance active, au moins un 2-chloro-benzimidazole portant au moins 2 atomes de chlore sur le noyau benzénique, en même temps que des supports et/ou des agents dispersants appropriés, y compris- des substances surfactives. 10 2. Agent selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient comme substance active le 2,5,6-trichloro-benzimidazole. 3. Agent selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient comme substance active le 2,4,5,6-tétrachloro-benzimi-dazole. 15 4' Agent selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient comme substance active le 2,4,5,6,7-penta-chloro-benzimidazole. 5. Agent selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient comme substances actives un mélange de 2,5,6-trichloro- 20 benzimidazole, de 2,4,5,6-tétrachloro-benzimidazole et de 2,4,5, 6,7-pentachloro-benzimidazole. 6. Agent selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient, en plus des substances douées d'action microbicide indiquées, également une substance douée d'action insecticide. 25 7. Agent selon la revendication 6, caractérisé en ce que la substance douée d'activité insecticide est la substance active du DDT. 8. Procédé de lutte contre les micro-organismes et de protection des matières organiques et des objets d'utilité en 30 matières organiques contre l'attaque par les micro-organismes, procédé caractérisé en ce que l'on traite les matières et les objets indiqués avec un 2-chloro-benzimidazole ayant au moins deux atomes de chlore sur le noyau benzénique, avec des mélanges de ces polychloro-benzimidazoles, ou avec des agents contenant 35 ces substances actives. 9. Les matières protégées contre l'attaque des micro-organismes grâce au procédé de la revendication 8. 10. Les matières organiques et objets protégés contre l'endom- magement et la destruction par les micro-organismes, caractérisés 40 en ce qu'ils contiennent au moins un 2-chloro-benzimidazole portant au moins 2 atomes de chlore sur le noyau benzénique.