FR 2007610 A1 19700109 FR 6913957 A 19690430 69 13957 2007610 la présente invention se rapporte à ion appareil comportant en combinaison une capsule et un moule, et à un traitement d'un échantillon biologique appliqué en utilisant cet appareil dans lequel on peut réaliser les étapes suivantes : placer un échantillon 5 biologique à l'intérieur d'une capsule constituée par un moule ouvert semblable à une boîte dont la partie supérieure est ouverte et comportant une paroi de fond perforée et un couvercle perforé amovible; après avoir traité l'échantillon placé à l'intérieur de la capsule au moyen des fluides voulus, retirer le couvercle de la 10 capsule pour former un moule ouvert, transférer l'échantillon du moule ouvert à un moule de base semblable à une boîte dont la partie supérieure est ouverte, et placer le moule ouvert au-dessus du moule de base en les assemblant l'un à l'autre, verser ensuite de la paraffine fondue dans le moule de base' à travers le moule ouvert, 15 après durcissement de la paraffine, séparer du moule de base le moule ouvert et le corps en paraffine contenant l'échantillon qui lui est fixé de façon rigide, et monter le moule ouvert dans le support d'un microtome afin de couper ensuite en tranches l'échantillon enrobé de paraffine» 20 On sait bien dans la technique qu'on peut couper des tissus biologiques en tranches sur un microtome pour en faire des lamelles destinées à être examinées ensuite au microscope par un pathologis-te, par exemple. Pour obtenir une lamelle satisfaisante dans laquelle le tissu ne soit pas déformé, celui-ci doit être sensiblement ri-25 gide au moment du découpape en tranches par le microtome. l'un des procédés communément utilisés pour obtenir cette rigidité consiste à noyer le tissu dans la paraffine durcie« Afin d'appliquer convenablement la paraffine, on doit d'abord traiter le tissu au moyen de différents fluides pour le déshydrater, 30 le nettoyer au moyen d'une huile appropriée et lui infiltrer une cire de paraffine ou un mélange de cite et de matière résineuse. On a réalisé commodément ce traitement en plaçant l'échantillon dans une capsule perméable au fluide et en immergeant successivement la capsule dans des fluides nécessaires. On retire ensuite de la capsule 35 l'échantillon traité résultant et on le noie dans un bloc en cire de paraffine pour le monter ensuite dans un microtome en vue de le couper en tranches. On peut réutiliser la capsule pour traiter des échantillons suivantsa BAO ORIS'nAU 69 13957 2 2007610 On a utilisé dans la technique antérieure différents appareils pour noyer les échantillons dans de la paraffine » la plupart àef ces appareils étaient grossiers et donnaient des échantillons enrobés présentant de nombreux inconvénients, l'appareil du brevet des 5 Etats Unis d'Amérique n° 2,,996,762 a apporté un perfectionnement important aux appareils d'enrobage» Ce perfectionnement consistait en -une boîte d'enrobage qui aboutissant à une structure unitaire de bloc de paraffine et de boîte destinés à être serrés facilement et avec précision dans un support placé sur un microtome. Bien que 10 l'appareil du brevet des Etats Unis d'Amérique n° 2.996^762 précité ait présenté de nombreux avantages, il nécessitait toutefois un appareil à capsule indépendante pour traiter l'échantillon avant l'opération d'enrobage de paraffine0 les buts de l'invention sont en conséquence de fournir un 15 appareil perfectionné servant à noyer l'échantillon dans de la paraffine, et qu'on puisse également utiliser pour monter l'échantillon dans un microtome; et qu'on puisse utiliser à la fois pour traiter l'échantillon avant de l'enrober et pour noyer l'échantillon dans de la paraffine. 20 Selon la présente invention, on réalise un appareil combinant une capsule et un moule utile pour traiter, enrober de paraffine et couper en tranches des échantillons biologiques, qui comprend un moule de base semblable à une boîte dont la partie supérieure est ouverte et comportant une paroi de fond, un élément de moule ouvert 25 semblable à une boîte dont la partie supérieure est ouverte et susceptible d'être placé en rapport d'assemblage sur la partie supérieure ouverte du moule de base, ce moule ouvert comportant une paroi de fond perforée et un couvercle amovible, ce moule ouvert formant avec le couvercle amovible une fois mis en place une capsule 30 perméable au fluide dans laquelle on peut traiter un échantillon biologique au moyen d'un fluide choisi, le moule de base étant susceptible de contenir un échantillon traité qui lui est transféré de la capsule, la mise en place de ces moules en rapport d-' assemblage, alors qu'un échantillon est disposé à l'intérieur du moule 35 de base, permettant de remplir celui-ci de paraffine fondue que l'on verse, à travers le moule ouvert dont le couvercle est enlevé jusqu'à ce que la paraffine s'étende au dessus de la paroi de fond perforée du moule ouvert, le moule de base déterminant la forme du *ÔAD ORIGINAL 69 13957 3 2007610 corps en paraffine quand celui-ci a durci et comportant une face de l'échantillon enrobé située le long de la paroi~de fond du moule de base; et la paroi de fond perforée du moule ouvert fournissant un moyen pour ancrer le corps en paraffine au moule ouvert 5 pour qu'en séparant le moule de base en faisant cesser ce rapport d'assemblage, le moule ouvert et le corps en paraffine restent sous la forme d'un ensemble terminé susceptible d'être monté dans un support d'échantillon d'un microtome,. D'autres caractéristiques et avantages de la présente inven-10 tion ressortiront de la description qui va suivre, faite en regard du dessin-annexé et donnant à titre explicatif, mai's nullement limitatif, une forme de réalisation conforme à l'invention. La figure 1 est une vue en perspective éclatée des pièces distinctes d'un appareil combinant -une capsule et un moule; 15 la figure 2 est une vue en coupe transversale suivant d'une façon générale le plan A - A de la figure 1, et montrant la capsule formée par le couvercle et par l'élément de moule ouvert, cette capsule contenant un échantillon biologique; la figure 3 est une vue en coupe transversale suivant d'une 20 façon générale le plan A - A de la figure 1, et montrant l'élément de moule ouvert dont le couvercle a été enlevé, et cet élément de moule ouvert ajusté sur le moule de base, ce dernier contenant un échantillon biologique; la figure 4 est -une vue semblable à celle de la figure 3, et 25 montrant l'élément de moule ouvert et le moule de base contenant de la paraffine d'enrobage; La figure 5 est une vue semblable à celle de la figure 4 avec le moule de base retiré; La figure 6 est une vue semblable à celle de la figure 3, 30 montrant l'utilisation d'un moule de base comportant une zone d'emmagasinage plus petite pour contenir un échantillon plus petit, comme représenté; et La figure 7 est une vue latérale partiellement en coupe transversale représentant la structure unitaire de la figure 5 disposée 35 dans un support d'échantillon de microtome. En se reportant aux figures de 1 à 3, l'appareil de la présente invention comprend -un moule de base 10, une capsule à fins multiples et un élément de moule ouvert 12, et un couvercle amovible 14. Le moule de base 10 présente- une forme générale rectan- HBAD OftlGlNAL 69 13957 4 2007610 rectangulaire semblable à celle d'une boîte dont la partie supérieure est ouverte et comporte une paroi de fond 16 sensiblement plate, des parois latéralâs transversales 18 et 19, des parois latérales longitudinales 20 et 21, et une partie supérieure ouverte 5 22 » Les parties supérieures des parois latérales 18 à 21 sont déportées à l'extérieur pour former une surface annulaire au rebord horizontal 24 disposé à l'intérieur de la partie supérieure' ouverte 22 ei/qui est sensiblement parallèle à la paroi de fond 16 0 Des parois longitudinales formant rebord 23 et 25 s'étendent vers 10 le haut et horizontalement à l'extérieur à partir des bords supérieurs des parois latérales longitudinales 20 et 21 et relient ces parois latérales à des ailettes longitudinales verticales 26 et 27 respectivement» Des parois transversales formant rebord 30 et 31 s'étendent vers le haut et horizontalement à l'extérieur à 15 partir des bords supérieurs des parois latérales transversales 18 et .19 et relient ces parois latérales à des ailettes transyersales tournées vers le bas 28 et 29, respectivement. Cette dernière disposition est représentée en particulier sur la figure 3» On forme de préférence le moule de base 10 en métal ou en une autre matière 20 appropriée présentant un coefficient de transmission de chaleur relativement élevé» En se reportant aux figures 1, 2 et 3, la capsule à fins multiples et élément de moule ouvert 12 présente une forme généralement rectangulaire semblable à celle d'une boîte à partie supérieure ou-25 verte avec une paroi de fond 32 comportant une série de perforations 34, des parois latérales longitudinales 36 et 37, des parois latérales transversales 38 et 39, et une partie supérieure ouverte 40. Les parois latérales 36, 37, 38 et 39 comportent des surfaces de bord supérieures 42, 43, 44 et 45, respectivement situées dans 30 un.même plan et qui sont perpendiculaires à ces parois latérales et qui forment une surface d'extrémité annulaire sensiblement plate délimitant la partie supérieure ouverte 40» La face extérieure de la paroi latérale transversale 38 comporte le long de son bord supérieur une nervure 48 faisant saillie 35 extérieurement» A la partie de bord supérieure de la paroi latérale transversale 39, est assemblée une paroi inclinée 58 s'étendant vers le bas et vers l'extérieur à partir de cette partie 'de bord, et les parties d'extrémité voisines des parois latérales longitudinales 36 et 37 s'étendent extérieurement au delà de la paroi £AD OfttêrtNM» 69 13957 5 2007610 transversale 39 pour rejoindre la paroi inclinée 58 le long de bords obliques 52 et 54 respectivement» les parties de bord supérieures de la paroi transversale 39 et de la paroi inclinée 58 sont entaillées comme en 64 pour former une fente transversale 66 qui 5 fournit un accès à la chambre transversale 63, de section transversale de forme générale triangulaire, qui est formée entre la face extérieure de la paroi latérale 39 et le dessous de la paroi inclinée 58. On forme de préférence l'élément de capsule 12 en une matière organoplastique ou en une autre matière appropriée présen-10 tant un plus faible coefficient de transmission de chaleur que celui du moule de base 10. En se reportant à la figure 1, le couvercle amovible 14 est formé en une plaque plate 68 de forme générale rectangulaire qui présente de préférence une série de perforations 70. la plaque 68 15 comporte des bords longitudinaux 72 et 74 et des bords transversaux 76 et 78. Une partie formant languette 80 s'étend vers le bas et vers l'extérieur à partir de la partie moyenne du bord 78, et une partie formant une patte ou une poignée 82 s'étend de la partie moyenne du bord 76 dans le même plan que la plaque 68. De cha-20 que côté de la partie de patte.82, un élément de verrou à ressort 84 présentant en section transversale la forme générale d'un "S", comme on le voit sur les figures 1 et 2, est fixé au bord 76 et s'étend vers le bas dans une direction perpendiculaire d^une façon générale à la plaque 68. le couvercle 14 est de préférence en mé-25 tal, mais on peut également le former en d'autres matières, comme par exemple des matières organoplastiques. Pour utiliser ce nouvel appareil on place un échantillon biologique 86 à l'intérieur de l'élément 12, comme on le voit sur la -figure 2» On ajuste ensuite le couverile 14 au dessus de la partie 30 supérieure ouverte 40 de 1'élément 12 en introduisant la languette 80 à travers la fente 66 et en enclenchant brusquement les éléments de verrouillage 84 sur la nervure 48, comme on le voit sur la figure 2, pour fermer la capsule. Des dimensions en coupe transversale des perforations 34 formées dans la paroi de fond 32, et des per--35 forations 70 formées dans la plaque de couvercle 68 sont à .la fois -plus petites qu'une dimension correspondante quelconque *de l'échantillon 86, de sorte que celui-ci est retenu à l'intérieur de--la capsule ainsi formée. On peut ensuite placer successivement"la capsule perméable au fluide contenant l'échantillon dans des 69 13957 6 2007610 solution^ d'agents déshydradants, d'agents de clarification et dans de/cire de paraffine pour préparer convenablement 1'échantillon en vue de l'enrober ensuite de paraffine» li-'es fluides de traitement traversent facilement les perforations 34 et 70. 5 On retire ensuite le couvercle 14 de l'élément de capsule 12 en soulevant la poignée 82. On. retire ensuite l'échantillon 86 de l'élément 12 et on le place dans le moule de base lo, comme on le voit sur la figure 3» On oriente l'échantillon de façon à ce que sa partie qui doit être finalement coupée en tranches la première 10 dans un microtome soit en contact avec la paroi de fond 16. On peut alors verser une petite quantité de paraffine fondue dans le moule de base 10 pour la faire durcir autour de l'échantillon 86, et maintenir l'orientation voulue de celui-ci par rapport à la paroi de fond 16. 15 °n place ensuite l'élément de moule ouvert 12 sur le moule de base 10 en l'emboîtant dans celui-ci comme représenté sur la figure 3. Dans cette position, l'élément de moule 12 repose sur la surface horizontale annulaire 24, les surfaces extérieures des parois latérales 36, 37 et 38 de l'élément 12 venant buter contre les 20 surfaces- intérieures des parois formant rebord 25, 23 et 30, res- -pectivement. îj© bord inférieur 50 de la paroi inclinée 58 vient buter contre la paroi formant rebord 31. l'élément 12 est de ce fait maintenu dans -la position appropriée, la surface supérieure annulaire plate de l'élément de moule 12 formée par les surfaces de 25 bord supérieures situées dans un même plan 42, 43, 44 et 45, est alors sensiblement parallèle à la paroi inférieure 16 du moule de base 10. On verse ensuite de la paraffine fondue chaude par les perforations 34 de l'élément de moule ouvert 12 dans le moule de base 10 30 jusqu'à ce que ce dernier, ainsi qu'à peu près la ottalité de l'élément de moule 12, soient remplis de paraffine. Etant donné que le moule de base présente de préférence un coefficient de transmission de chaleur plus élevé que celui de l'élément de moule ouvert, la chaleur émise par la paraffine se dissipe à travers les parois de 35 fond et' latérales du moule de base 10 plus rapidement qu'à travers les parois latérales de l'élément" de moule ouvert 12, de sorte que la paraffine se solidifie initialement contre les surfaces intérieures du moule de base 10. la contraction de la paraffine qui se produit quand elle se refroidit la déplace également vers le moule 69 13957 7 2007610 de "base. Quand le corps en paraffine 88 a durci en totalité, il présente la structure représentée en coupe transversale sur la figure 4, comprenant un ménisque supérieur 90 de contraction,, On remarquera que la paroi de fond perforée 32 de l'élément de moule 5 ouvert 12 est noyée dans le corps en paraffine solidifiée 88, de sorte que cet élément de moule 12 est ancré de façon rigide au corps en paraffine terminé 88 pour former un ensemble terminé, ^e fond et les parois latérales du moule de base 10 servent à déterminer la forme du corps en paraffine terminé 88 quand il est durci avec 10 1*échantillon orienté le long de la paroi de fond 16 de moule de base, appareil de la présente invention nécessite pour enrober un échantillon de dimensions données un pourcentage en poids de paraffine inférieur de 20 à 30 % à celui exigé par l'appareil du brevet des Etats Unis d'Amérique n° 2.996.762 précité. 15 les ailettes 26, 27, 28 et 29 partant de la périphérie de la partie supérieure ouverte du moule de base 10 aident à dissiper la chaleur à l'écart des faces de contact communes de l'élément de moule ouvert 12 et -de 11 élément de base 10. On peut ensuite séparer facilement le moule de base 10 du 20 corps en paraffine terminé 88 pour former l'ensemble terminé représenté en coupe transversale sur la figure 5 et comportant une face 92 d'échantillon enrobé. lia surface supérieure de l'élément 12 est parallèle à "la face 92. On peut ensuite monter facilement cet ensemble terminé dans le support d'échantillon d'un microtome, comme 25 représenté en coupe transversale partielle sur la figure 7. le support d'échantillon 94 qui constitue une partie d?une seule pièce du microtome ou qui est supporté par celui-ci, présente une face d'alignement 96 à peu près plate qui est située dans un plan parallèle au parcours 98 d*une lame 100-de microtome qui est animée d'un 30 mouvement de va et vient par rapport au support de l'échantillon. Le support d'échantillon 94 comporte également un dispositif de serrage fixe 102 et un dispositif de serrage mobile 104 comportant tous les deux des faces de serrage perpendiculaires à la face 96. On place la partie d'élément de moule de l'ensemble terminé 35 à l'intérieur du support 94 en faisant reposer la surface d'extrémité annulaire de l'élément de moule ouvert, formée par les surfaces de bord 42 à 45, contre la face d'alignement plate 96 du support 94. On met la paroi latérale 36 en contact avec le dispositif de serrage fixe 102, et on verrouille àe façon appropriée le 69 13957 8 2007610 dispositif de serrage mobile 104 en le mettant en contact de serrage avec la paroi latérale 37. De ce fait, l'ensemble terminé est supporté de façon rigide dans le support 94, avec sa face 92 d'enrobage "d'échantillon disposée dans un plan parallèle au chemin de 5 parcours 98 de la lame 100 du microtome. Cette relation physique . entre la face 92 et le mouvement de la lame le long du parcours 98 est avantageuse pour obtenir des tranches d'échantillon d'épaisseur uniforme. Dans la pratique, on déplacerait le support 94 du microtome vers la gauche, comme on l'observe sur la figure 7, jusqu'à 10 ce que la face 92 se trouve au dessus de la lame 100. On déplacerait ensuite la lame- 100 vers le haut, comme_on_l'observe sur la figure 7, par rapport au corps,en paraffine 88 pour couper une tranche de l'échantillon noyé dans le corps 88» Après avoir coupé sur i'échantillon la tranche ou les tran-15 ches voulues,' on peut retirer l'ensemble terminé du support 94 pour l'emmagasiner. Etant donné que la face d'-extrémité annulaire de l'élément de moule ouvert 12 est parallèle à la-face 92 du corps en paraffine 88 d'enrobage de l'échantillon,.chaque fois qu'on doit produire par la suite des tranches supplémentaires, en remet-20 tant l'élément 12 en position contre la face d'alignement 96 du support 94 on replace la face 92 dans tua plan parallèle au déplacement de la lame du microtome» Dans un laboratoire dans lequel on manipule un grand nombre d'échantillons, il est nécessaire de conserver une identification 25 appropriée des échantillons, l'appareil de la présente invention utilise la paroi inclinée 58 à cette fin. la paroi 58 présente une surface sur laquelle on peut écrire facilement avec un crayon ou une plume pour appliquer une désignation d'identification. Ceci permet d'identifier l'échantillon continuellement au cours du trai-30 tement, de l'enrobage et de la coupe en tranches. Le moule de base représenté sur les figureâ 1, 3 et 4 est destiné principalement aux échantillons présentant une dimension passablement grande. Si on mtilisait ce moule de base particulier pour un échantillon assez petit, une quantité de paraffine exces-35 sive serait nécessaire pour enrober l'échantillon,, Le moule de base 10' représenté en coupe transversale sur la figure 6 comporte une chambre d'un volume relativement petit, formée par une paroi de fond 16' et des parois latérales, comme par exemple 18' et 191, qui ne présente qu'une dimension sensiblement pas plus grande que 13957 9 2007610 nécessaire pour contenir le petit échantillon "861. On peut utiliser danb l'appareil de la présente invention des moules de hase compcr.i-tant des chambres de dimensions variées» Sauf toutefois en ce qui concerne les dimensions des chambres, les dimensions des moules 5 de base 10* de la figure 6 sont les mêmes que celles du moule de base 10 représenté sur les figures 1, 3 et 4, de sorte quton peut utiliser avec eux l'élément de moule ouvert 12 de la même dimension. Etant donné qu'on emmagasine généralement les - ensembles,de moule et de paraffine terminés en vue de s'y reporter dans l'avenir après 10 avoir fourni des tranches d8échantillons, il est,préférable d'utiliser des éléments de moule ouverts 12 présentant"la- même dimension pour tous les échantillons, du fait que ceci simplifie l'emmagasinage et le repérage des ensembles. En résumé, la présente invention se rapporte à une combinai-15 son d'appareil perfectionnée que l'on peut utiliser pour traiter des échantillons biologiques, les enrober de paraffine et les faire supporter enrobés dans un micrctome"pour les couper en tranches par la suite. Il va de soi que la présente invention n'a été décrite et 20 représentée qu'à titre explicatif, mais nullement limitatif, et qu'elle est susceptible de diverses variantes sans sortir de son cadre. 13957 10 2007610 . HEYBMDIOAJIONS lo Appareil combinant une capsule et un moule, convenant pour 0 traiter, enrober de paraffine et couper en tranches des échantillons biologiques, caractérisé en ce qu'il comprend un meule de base ressemblant à une boîte dont la partie supérieure est ouverte 5 et comportant une paroi de fond, un élément de moule ouvert ressemblant à une boîte dont la partie supérieure est ouverte et susceptible d'être placé en rapport d*assemblage sur la partie supérieure ouverte du moule de base, le moule ouvert comportant une paroi de fond perforée et un couvercle amovible pourrie moule, ce 10 moule ouvert avec le couvercle amovible mis en place formant une capsule perméable au fluide dans laquelle on peut traiter un échantillon biologique au moyen d'un fluide choisi, le moule "de base étant susceptible de contenir un échantillon traité'qui lui a été transféré de la capsulej la mise en place de ces moules en rapport 15 d'assemblage pendant qu'un échantillon est disposé à l'intérieur du moule de base permettant de remplir le moule de base de paraffine fondue qu'on déverse à travers le moule.ouvert dont le couvercle est enlevé jusqu'à ce que la paraffine s'étende au-dessus de ' la paroi de fond perforée du moule ouvert, le moule de base déter-20 minant la forme, du corps en paraffine quand il durcit en présentant une face d'enrobage d'échantillon disposée le long de la paroi de fond du moule de base, et la paroi de fond perforée du moule ouvert fournissant un moyen servant à ancrer le corps en paraffine au moule ouvert de sorte qu'en retirant le moule de base du tapport d'as-25 semblage, le moule ouvert et le corps en paraffine restent sous la forme d'un ensemble terminé susceptible d'être monté dans un support d'échantillon d'un microtome. 2o Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que le couvercle amovible est perforé. 30 3. Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que la paroi de fond du moule ouvert et le couvercle amovible présentent tous les deux une série de perforations dont les dimensions en coupe transversale sont inférieures.aux dimensions correspondantes quelconques d'un échantillon qu'on doit traiter dans l'ap-35 pareil. 4. Appareil selon la revendication 1, caractérisé en ce que le moule de base comporte une paroi de fond sensiblement plate, 13957 ii 2007610 l'élément de moule ouvert comporte des parois latérales formées avec des surfaces supérieures situées dans un même plan et qui sont sensiblement parallèles à la paroi de fond du moule de base quand le moule de base et le moule ouvert sont en rapport d'as-5 semblage, et dans lequel l'ensemble fini est susceptible d'être monté dans un support d'échantillon d'un microtome avec les surfaces supérieures situées dans un même plan du moule ouvert et, de ce fait, la face d'enrobage de 1'échantillon du corps en paraffine parallèle au trajet de 'déplacement de la lame du microtome. 10 5. Appareil selon la revendication 1, dans lequel le moule de base est en une matière présentant un coefficient de transmission de la chaleur supérieur à celui de l'élément de moule ouvert. 6. Appareil selon la revendication 1, dans lequel le moule 15 de base comporte également une série d'ailettes partant de la périphérie de la partie supérieure ouverte. 7. Appareil dans lequel l'ensemble terminé de la revendication 4 est monté dans un support de façon à ce^ue la surface supérieure de l'élément de moule ouvert soit montée dans un plan paral- 20 lèle au trajet de déplacement d'une lame de microtome, le support étant susceptible d'être supporté par un microtome de façon à assurer la relation cièdessus.