FR 2002747 A1 19691031 FR 6904490 A 19690221 69 04490 2002747 .. -i- la présente inv ent i or/c once me de nouveaux epmpase s an'ti-fibrinolytique s, ainsi qu'un procédé permettant "dtàgir contre certains états hémorragiques et autres nalaises résultant chez-les naïades cl1 un état pathologique fibrinolyticue. Elle con-5 cerne également plus particulièrement le- nouveau composé, l'acide 4-aninojnéthj-lcubane-l-c»rooxyliqu'e ayant la structure ZI 10 | L "2' 2 GGOH T7 Au point de vue chimique, le composé est également appelé acide 4-aminométhyl-pentacyclo [4-»2.0.0.^'^(y> ] octane-l-car- bozylique. Ce composé est intéressant pour le traitement préventif 15 ou curatif d'un état pathologique fibrinolytiaue chez les mammifères, comprenant les personnes et les animaux, par une administration par voie orale de 1 à 20, et de préférence de 2 à 8 mg/kg de poids du corps, par jour, du composé ci-dessus, pendant des périodes de trsitement variables. 20 La dissolution des dépôts de fibrine chez les mammifères est due à leur Ij'se par la plasmine (fibrinolysine), enzyme qui se forme dans le sang à partir du plasminogène, également présent dans le sang. Cette conversion du plasminogène en plasmine est favorisée par des activateurs qui se trouvent dans le 25 sang, et il semblerait qu'un excès d'activité fibrinolyticue résulterait d'une surabondance de ces activateurs. Quand il y a trop de plasmine, le système de coagulation du sang perd son équilibre, les caillots viables ne peuvent être maintenus, et il peut en résulter une hémorragie. Cet état est connu sous le 30 nom d'état fibrinolytique. D'autres systèmes d'enzymes (c'est-à-dire les kallideines, le complément) peuvent également être activés d'une manière indésirable quand un tel état existe. Un intérêt est récemment porté sur le développement d'agents anti-fibrinolytiaues, c'est-à-dire des médicaments qui 55 empêchent l'activation du plasminogène pour xorser la plasmine,. c BAD ORIGINAL 6v 04470.- 2002747 -2- ' " On pense- que ces agents ànti-fibrinblytiques empêchent les ac-, tivateurs d'agir- pour transformer le plasminogène en plasmine. les applications chimiques de'tels médicaments comprennent leur administration à des personnes soumises à diverses interventions 5 chirurgicales (prostate, coeur et poumons), en cas de- problèmes d'hémorragies obstétricales, de ménorragies, ou dans de nombreux • autres cas suggérés dans la littérature (voir par exemple l'article de lilssen, dans Acta Hedica Scand. Suppl. 448, volume 180-1966). . . 10 Un agent anti-fribrinolytique classique, par rapport au quel on a essayé et comparé les agents plus récents, est l'acide epsilon-aminocaproïque, connu sous le nom de BACA. Cet agent a comme défaut de nécessiter des doses très élevées, dans certains cas, de 3 à. 6 g ou plus, toutes les 4 à 6 heures. On 15 observe également des effets secondaires tels que vertiges, nausées, et diarrhée. Deux autres agents efficaces ont récemment été décrits , à savoir l'acide trans-4-aminométhylcyclohexane-carboxylique (AIICHA) et l'acide 4-aminométhylbenzoïque (PAMBA). Ces agents sont tous les deux séparément -plus actifs que le 20 composé EACA, dans les essais in vitro et in vivo (voir par exemple les articles d'Andersen et coll. S cand. J. Haecaat. 1965 2 230 et Melander et coll. Acta Fharmacol. et Toxicol 1965-22 340 qui ont trait au composé AMCHA). Dans les recherches qui ont abouti à l'invention, on a 25 trouvé que le composé ci-dessus possède une activité 15 fois supérieure à celle du composé SACA dans les essais in -yi tro. ces essais étant essentiellement identiques à ceux dont on connaît la bonne corrélation avec les résultats de clinique humaine. 30 la Demanderesse a également trouvé que le traitement thérapeutique perfectionné des étais fibrinolytiques à l'aide du composé de l'invention nécessite des doses de médicaments nettement plus faibles. On prépare le composé de la présente invention à partir 35 du composé connu, le cubane-l,4-dicarboxylate de diméthyle, également appelé pentacyclo-[4.2.0.0^,^»0^'^.0Zi",r'7] octane-1,4-dicarboxylate de diméthyle. On le prépare essentiellement comme décrit par P.E. Eaton et coll. (J. An. Chem. Soc. 86.962-1964). .... BAD ORIGINAL 69 04190 2002747 -3- - Les spectres dans l'infra-rouge, de. résonance magnétique nucléaire, le point de fusion et l'analyse élémentaire du composé, correspondent bien aux valeurs rapportées. Le composé s'avère également homogène lorsqu'on l'examine par chromatographie en 5 couches minces, et par chromâtographie en phase vapeur." L'exemple suivant illustre les différents stades du procédé de préparation du composé de l'invention. . BXB]>IPL5' Préparation du cubane~l,4-dicarboxylate acide de méthyle (2). 10 CK-^OOC ■ A s j -COOCEL 0 lJUaOH Z_JZ Jli Oîli 2 JIICl (1) GH_OOC 3 GOOH 7 (2) On dissout un échantillon de 5,34 g (0,0265 mole) de cubane-1,4-dicarboxylate de diméthyle (l) dans 75 ml de méthanol absolu* 15 en ébullition (dissolution lente). On ajoute ensuite cette solution à une solution de méthylate de sodium préparée en dissolvant 0,61 g (0,0265 mole) de sodium métal dans 75 ml de méthanol absolu. Après avoir ajouté 10 ml d'eau distillée, on agite la solution magnétiquement on la chauffe au reflux sous azote pen-20 dant 22 heures. Après élimination du méthanol sous vide (40-50°C.) on ajoute 25 ml d'eau distillée, qui dissolvent tout le produit, excepté une faible quantité de solide. On retire ce produit par extraction avec trois fois 25 ml de chloroforme. Après déshydratation sur du sulfate de magnésium, les couches de chlorofor-25 me combinées donnent 0,73 g (12,5 f°) de diester solide non saponifié (l) que l'on peut recycler. On acidifie la couche aqueuse après refroidissement avec 5,0 ml d'acide chlorhydrique 6,0 H. On extrait ensuite la quantité importante de précipité blanc résultant- avec 5 portions séparées de 100 ml chacune d'acétate 30 d'éthyle, on lave les extraits combinés avec de l'eau et on les déshydrate sur du sulfate de magnésium. Par filtration et élimination du solvant sous vide, on obtient 4,02 g d'un solide BAD ORIGINE 69 04 490 2002747 -4- blanc (74 f> calculé en mono-acide). Une chromatographie par couches minces indique que le produit est un mélange des deux composents acides escomptés, le mono-acide et le diacide, ce dernier se trouvant seulement en faibles quantités. La chro-5 matographie par couches minces est réalisée sur une colonne de "Sil G" avec cornue éluant un. mélange de benzène/dioxanne/acide acétique (90/25/4) sur plaque préalablement carbonisée à l'acide sulfurique, Ef (monoacide) 0,73 ; Sf (diacide) 0,55. le produit, une fois séché, semble pratiquement insoluble dans le 10 chloroforme, pas très soluble dans l'acétate d'éthylo, et solu-ble dans l'éthanol et le méthanol. On -réalise la séparation sur une colonne de "Silicar 7G Analtech Unibcr", au moyen d'une chromatographie ascendante, en utilisant comme éluant un mélange de benzène/dioxanne/acide acé-15 tique (90/25/4), puis par une extraction avec du méthanol. 4,90 g du mélange acide brut donnent, en un passage, 2,79 g de mono-acide pur, le restant passant en queues dans la zone du diacide. Le produit impur peut être soumis à une nouvelle chromatographie ou êtr^èstérifié. Le mono-acide pur, tel que récupéré 20 de la colonne, fond à 172-176°C. En recristallisant trois fois le monoacide dans de l'acétate d'éthyle, on obtient un échantillon de qualité analytique fondant à 174,5-176°C. Son spectre de résonance magnétique nucléaire (diméthylsulfoxyde ou de.utériuni) présente un singulet à 3,70 ppm (3 protons, COOCH^), 25 et un autre singulet à 4,22 ppm (6 protons, cube). Préparation du 4-carboxamidocubane-l-carboxylate de néthyle (3). 1)£2H5)33 Coaposé (2) 2)C1C00C2H, . ) î-Tuf JAin3 CH^OOC 3 30 On dissout dans une atmosphère sèche sous azote,- 2,22 g (10,80 millimoles) de cubane-1,4-dicarboxylate acide de méthyle (2) dans 50 ml de tétrahydrofuranne anhydre (distillé sur de l'hydruru BAD ORIGINAL f4 S -c-m. (3) 69 04490 2u027 47 -5- de sodiux). Cn ~gite siécaniqusaent le nélaiige; après l'avoir refroidi à -10°C., on ajoute en une fois 1,14 g (11,26 nillimo-les) de triéthylamiiie dans 10 al de tétrahvdrofuranne (ïHF), puis pendent • 5 minutes, 1,21 g (11,24 nillirzcles). de chloro-5 forniate d'éthyle ions 10 si de THF, tout en maintenant la température à -10 + 2°C. Le chlorhydrate de triétûylEinine se sépare du mélange reactionnel. Après agitation pendant encore 30 minu-tes à -10°C., on fait barboter de l'ammoniac gaseux dans le mélange pendant 10 minutes, tout en continuant à le refroidir 10 (la température s'élève à +10°C.). On retire le bain de glace et on agite le nélcnge pendant 16 heures. Après avoir ajouté 40 ml d'eau distillée, on évapore sous vide la solution incolore limpide à 50-60°C. afin d'éliminer THF. Le produit cristallise pendant 1'^vaporation. Par refroidissement, on obtient 1,14 g 15 (51,7* 7°) de solide. Lorsqu'on continue à extraire de façon continue la ccuche aqueuse avec de 11 acétate d'éthyle, "ouis en recristallisant le résidu dans du méthanol, on obtient seulement encore 105 mg de produit (total : 56,7 ?-). Le produit cristallise dans le méthanol sous forme de lames brillantes, mais la 20 matière brute semble pratiquement aussi pure que la matière recristallisée. Le produit ne fond pas nettement, mais sa couleur s'assombrit à 228-235°C., puis il fond à 238-240°C. en donnant un produit marron foncé. Son spectre de résonnance magnétique nucléaire (dirafthyl-25 sulfoxyde au dentérium) présente les absorptions suivantes t singulet à 3,63 ppc; (3 protons, COOCïL,) ° singulet à 4,11 ppm (6 protons, cube) j large absorption à 6,8 - 7,3 jjpm (2 protons, coke2). Préparation du 4-cy anccubane-1-car b oxy1ate de méthyle (4). 5CComposé (y) P0C1_ -UL; C1CHCEC1— y - CH..OOC ' 5 (4) On ajoute 1,0 mi d'cxychlorure de phosphore à 410 es (2,00 millirnoles) de carboxyamidocubane-l-carbcxylate de mé- (j'k) 04490 2u027 47 thyle/en suspension dans 15 ml de 1,2-diciiloroéthane fraîchement distillé. Quand on chauffe au reflux pendant 30 minutes, ls solide se - issout, puis le '.mélange commence à-devenir légèrement trouble. Après élimination du solvant et de l'excès d'oxy-5 chlorure de phosphore sous vide, à 60-70°C., on reprend le résidu dans 25 si de chloroforme. Après l'avoir lavé avec soin avec une solution saturée de bicarbonate de sodium, on déshydrate la couche de chloroforme sur du sulfate de magnésium anhydre, puis on la rectifie jusqu'à ce qu'on obtienne un solide blanc, pesant 10 296 mg (79 f* du produit brut), fondant à 138-143°C. Un petit échantillon se recristallise admirablement bien dans de l'éthanol absolu, il fond à 145,5-147°C. Son spectre de résonance magnétique nucléaire dans du chloroforme au deutérium présente un singulet à 5,70 ppm (5 protons) et un singulet à 4,32 ppm (6 pro-15 tons). Bon spectre dans 11 infra-rouge (pastille de KBr) présente des absorptions à 2220 cm ^ et à 1720 cm Préparation de l'acide 4-cyano cubane-1-carb oxyliq us (5) Cîf -4—vi Composé (4) gl ^ [/' f/' ' ^ HOOC ~^ (5) 20 On ajoute à 290 ml (1,55 millimole) de 4-cyanocu.ba- ne—1-carbozyls.te :j méthyle (4) dissous dans 10 ml d'éthanol abso- -lu chaud, 1,C ml d'hydroxyde de sodium 2îî. On agite la solution et on la chsuffe au reflux pendant deux heures, puis on la laisse à la température ambiante pendant 16 heures. Après l'é-25 liminatior. de l'éthanol sous vide, on ajoute 10 ml d'eau, on filtre la solution, on la refroidit et on l'acidifie avec 1,0 ml de ïïCl 635. l'acide se sépare et on le fait passer par extraction dans de l'acétate d'éthyle, on déshydrate les extraits sur du sulfate de magnésium, on les filtre et on les purifie sous 30 vide, on obtient 217 ng d'acide cyané brut (81 , fondant à 196-202°C. Par chromâtographie on obtient un échantillon suffisamment pur pour être utilisé dans la stade synthétique K~ ;-j OHIQINAU 69 04490 2 a0 2747 -7- suivant. Son spectre dans 1'infra-rouge présente des absorptions à 2220 ce et à 1690 cn:~\ Préparation de l'acide 4-a^l,noin6th:.'lcubane-l-ca,rboxylicue (6). l)H2/PtfC2E5OH,HpO,ECl Composé (5) rrr-,—77—^ -, ^—= r~"—A 2JÀceta'ce de Dowex-1 pi (Résine échangeuse d'ions) H0îîGH0 -k£- X 7 C00E (6) On ajoute à 156 ng (0,90 millimole) à.1 acide 4-cyanocubane-1-carboxylique (5) dissous dans 25 al de néthanol, 10 ni d'eau 10 distillée, 0,50 ml de HC1 6,0 IT, et 100 mg d'o:-:yde de platine. On hydrogène le nélsnge à 2,4 bars dans un appareil de Parr pendant 70 minutes. Après filtration pour éliminer le catalyseur, on élimine sous vide le âéthanol et on filtre la solution aqueuse résultant en la faisant passer sur de la Mcelite:: afin de faire 15 disparaître le léger trouble. Par évaporation on obtient le chlorhydrate brut, le spectre de résonance magnétique nucléaire du chlorhydrate d ' acide aminé brut d.ans D^Ci présente un singulet à 3,32 ppm (2 protons) et un quadruplet (type .4.^32Rentré à 4,11 ppm (6 protons). On transforme le sel en acide aminé li-20 bre par passade d'une solution aqueuse sur du acétate de -Dowex-1 et on purifie l'acid.e aminé libre par recristallisation (aiguilles) dans un mélange d'eau et d'acétone. Le prod.uit pur- (6) se décompose sans fondre à 245-255°C. quand on le net dans un bain destiné à la détermination du point 25 de fusion à 180°C. Le produit présente une tache jaune pâle (ninhydrine) quand on le soumet à une chromatographie par couches minces dans une colonne de Gel de silice G, sa utilisant corne éluant un mélange de Alcool bu.tylique/Âcide acétique/ H^O (3/l/'l), Rf = 0,60, et des absorptions dans l'infra-rouge . 30 (pastille de K3r) -s. 23.30 cm i64o cm 1625 cm~\ 1560 cm-", 1530 cm \ 15oc cm 146o cm \ 1400 cm "*" (large), 1310 cm-"'", 1240 cm-1, 1200 cm-1, 1170 coTx, 1160 cm-1, 760 cm-1. L'invention envisage également que les esters carboxyliqu.es dérivés de (6) puissent être préparés par une estsrification \ 67 0447Q 2002747 -8- directe de 1'-acide aiciné, par exemple en utilisant une solution alcoolique dracide chlorhydrique ou du chlorure de thionyle puis de l'alcool. D'une manière semblable, on prépare les dérivés alcanoyl—aminés de (6) en acylant les acides aminés. 5 Ces esters et ces dérivée alce-aoyl-ariines sont à considérer comme entrant C-«ns le oc-are des composes représentés par la formule structurale ci-dessus (S). le composé de l'invention est utilisé dans la méthode de traitement de l'invention par administration par voie orale ou 10 intraveineuse, bien qu'on prépfëre habituellement l'administrer par voie orale. Les esters et les amides de cette classe de composés ne sont pas par eux-mêmes très actifs in vitro mais l'action des ensyues in vivo peut entraîner une libération lente des acides f.ninés très actifs, conduisant ainsi à une disponi-15 bilité prolongée du médicament dans le corps. Ceci est important car ces méeicaaient-s ont tendance à s'éliminer rapidement dans l'urine. Le composé de l'invention peut être utilisé avec n'importe quel excipient acceptable en pharmacie, sous forme de cora-20 primés, de pilules ou de capsules. Les sels acceptables en pharmacie,(tant ceux du groupe amino, tels que le chlorhydrate, le bromhydrate, le sulfate, le citrate, le tartrate, etc. que ceux du groupe ccrboxy, tels eue les sels de métal alcalin, de métal alcalino-terreux, etc.) sont facilement utilisables, en parti-25 culier dans des compositions injectables. Il va de soi que la présente invention n'a été décrite et représentée qu'il titre explicatif, mais nullement limitatif, et quelle est susceptible de diverses variantes sans sortir de son cadre. 1 %m ÔRIfâMAl 69 0449Q 2002747 . -9- BEV5IIDIGA"I0Iî3-1. Composé caractérise en ce qu'il a la formule structurale suivante : ' ■/I f ; V "2 2. Procédé de préparation du composé /J II 7 ci-i2m2 -G00H caractérisé en ce quron réduit le composé : 10 KG ■ 1 [ !/' C00H 3. Sels pharmaceutiquement acceptables du groupe aminé du composé défini dans la revendication 1. 4. Procédé préparation des sels de la revendication 3, par réaction u'un acide pharmaceutiquement acceptable avec le 15 composé de la revendication 1, 5. Sels phar&aceutiquemc-nt acceptable du groupe c^rbcry du composé défini dans la revendication 1. 6. Procédé 6g préparation des sels de la revendication 5, par réaction d'une base phar'ûaceutiquerient acceptable avec le coin-- 20 F°sé te la revendication 1. QAD ORIGINAL 69 04490 2002747 10- 7. Esters c&rboxyliques du composé défini .-ans la revendication 1. 5. Procédé de prépjration des esters de 1s revendication 7 par esterification directe de l'acide mine de la revendication 1 revendication 1. 10. Procédé •: 3 préparation des dérivés de la revendication 9, par acylatic-n de l'acide aminé de la revendication 1. 11. Cor-position comprenant un o xcipient acceptable en 10 pharnacir- et un composé défini dans la revendication 1, 3, 5, 5 Dérivés alcanoyl-aninés du composé défini dans la 7 ou 9