FR 2008759 A1 19700123 FR 6915760 A 19690514 69 15760 1 2008759 La présente invention concerne de nouveaux composés stéroîdes et plus particulièrement de nouveaux stéroîdes de la série du 3,4-diaza-A -androstène 6-oxygéné et leur procédé de préparation. Les nouveaux produits de l'invention répondent à la formule : 10 15 (I) dans laquelle Y représente un radical alkyle inférieur, aryle, aryl-alkyle inférieur, halogénoalkyle inférieur, halogénoaryle, halogénoaryl-alkyle inférieur ou trifluorométhylaryle ; R et R" sont des groupes hydroxy ou 20 acyloxy ; R1 est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur, vinyle, éthynyle, halogénovinyle, halogénoéthynyle ou trifluorométhyléthynyle ; R'1' est un atome d'hydrogène ou bien R et R' pris ensembles et R" et R''' pris ensembles représentent des restes oxo. Parmi les substituants convenables représentés par Y on peut citer 25 les groupes' alkyle inférieurs, par exemple méthyle, éthyle, n-butyle et n-hexyle ; aryle par exemple phényle, naphtyle, o, m, et p-tolyle et les groupes xylyle ; aryl-alkyle inférieur par exemple benzyle, phénéthyle et Jb -phé-nylpropyle ; halogénoalkyle inférieur par exemple 2-chloroéthyle, 2,3-di-fluoroéthyle et 2,2,2-trifluoroéthyle ; halogénoaryle par exemple o-chloro-30 phényle, p-fluorophényle et o, p-dibromophényle ; halogénoaryl-alkyle inférieur, par exemple p-chlorobenzyle et o-iodophénéthyle ; et trifluorométhylaryle par exemple p-trifluorométhylphényle. Parmi les groupes acyloxy convenables ,on peut mentionner les radicaux acyloxy d'acides carboxyliquœ hydrocarboné ayant moins dé 12 atomes de carbone par exemple les acides acétique, 35 propionique, butyrique, hexanoîque et oenanthique, les acides alcénoîques inférieurs, les acides cycloalkanecarboxyliques, les acides cycloalcène-carboxyliques, les acides carboxyliques, aromatiques, monocycliquœ par exemple acide benzoîque,et les acides éQrîr.monocycliqueraicanoîques inférieurs 69 15760 2 2008759 par exemple acides phénacétique etjj-phénylpropionique. Parmi les radicaux vinyle halogènes convenables on peut mentionner les radicaux perhalogénô-vinyle tels que trifluorovinyle, trichlorovinyle, l,2-difluoro-2-chloro-vinylé et l,2-difluoro-2-bromovinyle ; les groupes dihalogétiovinyle tels 5 que 1,2-difluorovinyle, 2,2-difluorovinyle, l-chloro-2-fluorovinyie, 1-bromo-2-fluorovinyle et 1,2-dichlorovinyle et les groupes monohalogéno-vinyle tels que 1-fluorovinyle, 2-fluorovinyle, 1-chlorovinyle, 2-chloro-vinyle et 1-bromovinyle. Parmi les radicaux halogénoéthynyle convenables on peut mentionner les radicaux fluoroéthynyle, chloroéthynyle et bromo-10 éthynyle. Les composés de l'invention sont des stéroîdes physiologiquement actifs qui possèdent une activité antiandrogène, c'est-à-dire qu'ils inhibent l'action des androgènes et on peut les utiliser dans le traitement d'états tels que l'acné hyperandrogène. On peut formuler les composés pour 15 cette administration, la concentration et/ou la dose étant basées sur l'activité du composé particulier. En outre, les composés de l'invention sont des agents tensio-actifs et peuvent être par conséquent utilisés dans diverses applications nécessitant un agent de ce type. Par exemple, on peut utiliser les composés 20 de l'invention comme agents émulsifiants dans la préparation de lubrifiants, d'adhésifs, de cirages, de compositions de cire et les analogues. En outre, les composés de l'invention sont des substances absorbants les ultraviolets et on peut les utiliser comme écran solaire. On pëut aussi les utiliser comme antioxydants et inhibiteurs de corrosion pour divers 25 hydrocarbures et leurs mélanges. A titre d'exemple de substances auxquelles on peut ajouter les composés de l'invention à cet effet, on peut citer l'essence, les huiles et les graisses lubrifiantes hydrocarbonées, les solvants hydrocarbonés (par exemple toluène, kérosène) et les analogues. On prépare les composés de l'invention en soumettant un composé 30 de formule : R 69 15760 3 2008759 dans laquelle Y, R et R" sont tels que définis ci-dessus, à l'action des enzymes du microrganisme Colletotrichum linicola, la réaction s'effectuant de la manière habituelle par culture du microrganisme en présence du sté-roîde, ou par traitement du stéroîde avec des cellules non-proliférantes 5 du microrganisme ou par mélange du stéroîde avec les enzymes hydroxylants obtenus à partir du microrganisme. Les conditions de cette réaction microbiologique sont connues dans la technique et semblables à celles indiquées dans le brevet des E.ÏÏ.A. n° 3 179 698. On peut préparer les stéroîdes de départ de formule II par le 10 procédé décrit dans la demande de brevet des E.U.A. Sériai n° 492 320 du 1er Octobre 1965. Ce procédé comprend la réaction de la 3-oxa-A-norandro-stane- 5ji ,17|* -diol-2-one avec une hydrazine de formule Y-NH-NH^, dans laquelle Y est tel que défini ci-dessus, pour donner les composés de formule II dans laquelle R est un groupe hydroxy et R' un atome d'hydrogène. On peut 15 ensuite acyler les composés 17^-hydroxy par traitement avec un chlorure d'acyle ou un anhydride d'acide de l'un des acides mentionnés ci-dessus en présence d'une base organique telle que la pyridine pour obtenir les composés dans lesquels R est un groupe acyloxy ; ou bien on peut les oxyder, par exemple par traitement par le trioxyde de chrome pour donner les composés 20 de formule II dans laquelle R et R' représentent ensembles un reste oxo. On peut ensuite traiter les composés 17-céto avec un réactif de Grignard tel qu'un iodure d'élkyl' inférieur)-magnésium pour obtenir les composés de formule II dans laquelle R' est un groupe alkyle inférieur et R un groupe hydroxy ou bien avec un organo lithien R'-Li pour obtenir les composés de 25 formule II dans laquelle R' est un groupe vinyle, éthynyle, halogénovinyle, halogénoéthynyle ou trifluorométhyléthynyle et R un groupe hydroxy. On peut ensuite estérifier ces composés R' substitués par traitement par un chlorure d'acyle ou un anhydride d'acide en présence d'acide perchlorique pour obtenir les composés de formule II dans laquelle R' est différent de l'hydrogène 30 et R est un groupe acyloxy. L'hydroxylation microbiologique par Colletotrichum linicola donne le produit finàl de formule I dans laquelle R" est un groupe hydroxy et R' ' ' un atome d'hydrogène (c'est-à-dire les composés 6^>-hydroxy). On peut ensuite estérifier ces composés par traitement par un chlorure d'acyle ou un 35 anhydride d'acide dérivé de l'un des acides particuliers mentionnés ci-dessus, en présence d'une base organique telle que la pyridine, pour donner les composés dans lesquels R et R" sont des groupes acyloxy ; ou bien on peut les oxyder par exemple par traitement par le trioxyde de chrome, pour 69 15760 4 2008759 obtenir les composés de formule I dans laquelle R" et R11' pris ensembles forment un reste oxo. Cette oxydation oxyde également le groupé 17-hydroxy, si R' est un atome d'hydrogène, en groupe de 17-céto, donnant ainsi' le composé 2,6,17-tricéto. S Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée. EXEMPLE 1 3-N-méthyl-3,4-diaza-6ft ,17ft-dihydroxy-androsta -4-ène-2-one ) A) Fermentation On met en suspension, dans 5 ml d'une solution aqueuse à 0,01 % de laurylsulfate de sodium, deux cultures de surface de Colletotrichum linicola (NCTC-1194), (National Collection Type Culture, Londres, Angleterre) sur tranches de gélose, âgées de 2 semaines, les tranches conte-5 nant le milieu nutritif A suivant : Glucose 10 g Extrait de levure 2,5 g k2hpo4 1 g Gélose 20 g 3 Eau distillée q.s.p. 1 litre On utilise des portions de 1 ml de cette suspension pour inoculer 8 fioles d'Erlenmeyer de 250 ml contenant chacune 50 ml du milieu stérilisé B suivant : Liqueur de trempage de maîs 6 g 5 NH4H2P04 3g Extrait de levure 2,5 g Dextrose 10 g CaCOg 2,5 g Eau distillée q.s.p. 1 litre 3 Après 72 h d'incubation à 25°C avec agitation continue (seeou- euse rotative à 280 cycles/mn, 5,08 cm de course) on effectue des transferts de 10 °L en volume dans 34 fioles d'Erlenmeyer de 250 ml contenant chacune 50 ml du milieu B fraîchement stérilisé. On ajoute ensuite 300 y de stéroîde par ml en introduisant dans chaque fiole un supplément de 0,25 ml 5 d'une solution stérile à 60 mg/ml de 3-N-méthy1-3,4-diaza-17|î-hydroxy-an-" drosta -4-ène-2-one dans le N,N-diméthy1formamide. On soumet à la fermentation un total de 510 mg de stéroîde. 69 1S760 5 2008759 Après environ 30 h supplémentaires d'incubation dans des conditions identiques à celles décrites ci-dessus, on réunit le contenu des fioles et on filtre ensuite le bouillon à travers un tampon clarificateur de Seitz. On lave les fioles, le mycélium et le tampon avec des portions ■î successives de 100 ml d'eau tiède. Le filtrat et les liqueurs de lavage combinés ont un volume total de 1 900 ml„ B - Isolement On extrait trois fois par le chloroforme le filtrat ainsi obtenu. 10 On lave les extraits chloroformiques trois fois par l'eau, on sèche au sulfate de sodium et on évapore à siccité. On recristallise le résidu dans un mélange méthanol-éther isopropylique pour obtenir environ 312 mg de 3-N-méthyl-3,4-diaza-ôÇ,17 P -dihydroxy-androsta -4-ène-2-one, F environ 263,5-265,5 (décomposition). On prépare un échantillon analytique par re-i5 cristallisation dans un mélange méthanol-éther isopropylique, F environ 267,5-268,5 (décomposition) ; ° spectre RMN 20 Analyse : Calculé pour : C^gO N2 (PM 320,42) : C 67,47 ; H 8,81 ; N 8,74 Trouvé : C 67,28 ; H 8,60 ; N 8,68. De manière semblable en suivant le procédé de l'exemple 1 mais en remplaçant la 3-N-méthyl-3,4-diaza-17j^-hydroxy-androsta -4-ène-2-one 25 utilisée par 500 mg de la 3-N-Y-3,4-diaza- -hydroxy-androsta -4-ène-2-one indiquée on obtient la 3-N-Y-3,4-diaza-6^, 17p -dihydroxy-androsta -4-ène-2-one désignée dans le tableau ci-dessous : Exemple Réactif Produit 30 Y 1 2 phényle phényle 3 p-fluorophényle p-fluorophényle 4 éthyle éthyle 35 5 n-hexyle n-hexyle 6 naphtyle naphtyle 7 p-toTvle p-tolyle 8 Denzyle benzyle 69 15760 6 2008759 Exemple 9 5 10 11 12 13 10 EXEMPLE 14 3,17o 2-one : On traite une solution de 50 mg de 3-N-méthyl-3,4-diaza-17 jb -hydroxy-15 androsta -4-ène-2-one dans 10 ml d'acétone en ajoutant goutte à goutte la quantité équivalente de mélange sulfochromique (CrO^ + ^SO^)■ sépare le sulfate chromique par filtration et on lave avec de l'acétone supplémentaire. On concentre le filtrat on le dilue à l'eau et on l'extrait par le chloroforme. On lave les extraits chloroformiques avec une solution de sel à 8 % 20 on sèche sur sulfate de sodium et on évapore à siccité pour obtenir la 3-mêthyl-3,4-diaza-androsta -4-ène-2,17-dione. On traite une solution de 150 mg de 3-méthy1-334-diaza-androsta-^- 4-ène-2,17-dione dans 20 ml de tétrahydrofuranne par un excès de 500 % d'iodure de méthylmagnésium dans 20 ml d'éther et on chauffe au reflux pen- 25 dant 5 h. On traite le mélange réactionnel avec une solution saturée de chlorure d'ammonium et on sépare la couche organique. On lave la couche organique avec une solution de sel à 8 °b3 on sèche sous sulfate de sodium et on évapore pour obtenir la 3,17e -hydroxy-androsta^ • 4-ène-2-one. 30 b) Préparation de la 3 ,17o(-diméthyl-3,4-diaza-ôfl,17ft-dihydroxy-androsta--4-ène-2-one : En suivant le procédé de l'exemple 1 mais en remplaçant la 3-méthyl-334-diaza-17(i- hydroxy-androsta -4-ène-2-one par 550 mg de 33lfa(-35 diméthyl-3,4-diaza-17f*-hydroxy-androsta -4-ène-2-one on obtient la 3SI7P(-diméthy1-3 3 4-diaza-ôJ\ 17fî-dihydroxy-andros ta -4-ène-2-one. Réactif Y 2-chloroéthyle 2,2,2-trifluoroéthyle o3 p-dibromophényle p-chlorobenzyle p-trifluorométhyl-phényle Produit Y 2-chloroéthyle 2 3 2 3 2-trifluoroéthyle 03 p-dibromophényle p-chlorobenzyle p-trifluorométhyl-phényle 69 15760 7 2008759 De manière semblable en suivant le procédé de l'exemple 14 mais en remplaçant dans l'étape a la 3-N-méthyl-3,4-diaza- 17^ -hydroxy-andros ta-r-4-ène-2-one par la 3-Y-334-diaza- 17$ -hydroxy-androsta -4-ène-2-one, on obtient la 3-Y-17c -dihydroxy-androsta -4-ène-2- -5 one. Exemple Réactif Produit Y Y 15 p-fluorophényle p-fluorophényle 16 phényle phényle 17 éthyle éthyle 18 n-hexyle n-hexyle 19 naphtyle naphtyle 20 p-tolyle p-tolyle 21 benzyle benzyle 22 2-chloroéthyle 2-chloroéthyle 23 2,2,2-trifluoroéthyle 2,2,2-trifluoroéthyle 24 o, p-dibromophényle o, p-dibromophényle 25 p-chlorobenzyle _ p-chlorobenzyle 26 p-trifluorométhylphényl p-trifluorométhylphényl De manière semblable en suivant le procédé de l'exemple 143 mais en remplaçant l'iodure de méthylmagnésium par l'organo lithien R'-Li indiqué ci-après, on obtient la 3-méthyl-17o EXEMPLE Réactif Produit ri 27 éthyle éthyle 28 vinyle vinyle 29 trifluorovinyle trifluorovinyle 30 l-chloro-2-fluorovinyle l-chloro-2-fluorovinyle 31 1-fluorovinyle 1-fluorovinyle . 32 trifluorométhyléthynyle trifluorométhyléthynyle 69 1576D 8 2008759 EXEMPLE 33 3-N-méthy1-3,4-diaza- -diacétoxy-androsta :-4-ène-2-ônë " On chauffe au bain de vapeur pendant 2 h une solution de 50 mg de 3-N-méthyl-3,4-diaza-6|i,17p-dihydroxy-androsta -4-ène-2-one dans 0,25 ml 5 d'anhydride acétique et 0,50 ml de pyridine. On dilue la solution par l'eau et on extrait par le chloroforme. On lave les extraits chloroformiques avec une solution de sel à 8 %, on sèche sur sulfate de sodium et on évapore à siccité. La chromatographie sur plaque du résidu sur alumine neutre utilisant le chloroforme comme solvant de développement et la détection de la 10 bande principale en lumière ultraviolette doniBTtaprès élution par l'acétate d'éthyle environ 14 mg de 3-N-méthyl-3,4-diaza-6^,17|i-diacétoxy-androsta- • 4-ène-2-one ; spectre RMn'X(3)C13: 9,14 (s, 18-Me), 8,86 (s, 19-Me), 6,62 (s, 3-N-Me), 5,52 (m, 17®t-H) et 4,42 (m, 6o De manière semblable en suivant le procédé de l'exemple 33 mais 15 en remplaçant le stéroîde utilisé par la 3-Y-3,4-diaza-6 (U7fi -dihydroxy- androsta -4-ène-2-one, on obtient la 3-Y-3,4-diaza-6ji, 17j^-diacétoxy-andros-ta -4-ène-2-one. Exemple Réactif Produit 20 I " I 34 p-fluorophényle p-fluorophényle 35 phényle phényle 36 éthyle éthyle 37 n-hexyle n-hexyle 25 38 p-tolyle p-tolyle 39 naphtyle naphtyle 40 benzyle benzyle 41 2-chloroéthyle 2-chloroéthyle 42 2,2,2-trifluoroéthyle 2,2,2-trifluoroéthyle 30 43 o, p-dibromophényle o, p-dibromophényle 44 p-chlorobenzyle p-chlorobenzyle 45 p-trifluorométhylphényle p-trifluorométhyIphényle. De manière semblable en suivant le procédé de l'exemple 33, mais 35 en remplaçant l'anhydride acétique utilisé dans cet exemple par un chlorure d'acyle ou un anhydride de l'un des acides particuliers mentionnés ci-dessus", on obtient le 6p,17j3-diester correspondant. 69 15760 9 2008759 EXEMPLE 46 3-N-méthyl-3,4-diaza-androsta :-4-ène-2,6,17-trione On traite une solution de 73 mg de 3-N-méthyl-3,4-diaza-ô/îj17^ --dihydroxy-androsta .-4-ène-2-one dans 30 ml d'acétone par un léger excès 5 de mélange sulfochromique et on agite à la température ambiante pendant 5 mn. On ajoute du méthanol pour décomposer l'excès et on fait passer la suspension à travers une couche de Hy-flo. On concentre le filtrat on le dilue par l'eau et on extrait par le chloroforme. On lave les extraits chloroformiques avec une solution de sel à 8 %, on sèche sur sulfate de 10 sodium et on évapore. On soumet le résidu à la chromatographie sur plaque sur gel de silice en utilisant un mélange acétate d'éthyl-ehloroforme ("2 : 1) comme solvant de développement et en décelant la bande principale en lumière ultraviolette. L'élution par l'acétate d'éthyle et la recristallisation dans un mélange acétone-éther isopropylique donnent environ 15 20 mg de 3-N-méthyl-3,4-diaza-androsta :-4-ène-2,6,17-trione, F environ 239-241°C (décomposition) ; spectre ÏÏV : À £îfyH 295 m^u ; spectre RMN : 9'06 (s' 18_Me)' 8>87 's> «-Me)» et 6,49 (s, 3-N-Me). De manière semblable en remplaçant la 3-N-méthyl-3,4-diaza-6{J, 170 -dihydroxy-androsta .-4-ène-2-one. Dans le procédé de l'exemple 46, par 20 la 3-Y-3,4-diaza- 6|î,17p -dihydroxy-androsta -4-ène-2-one indiquée ci-après, on obtient la 3-Y-3,4-diaza-androsta -4-ène-2,6,17-trione indiquée. Exemple Réactif Produit Y Y 25 47 p-fluorophényle p-fluorophényle 48 phényle phényle 49 éthyle éthyle 50 n-hexyle n-hexyle 51 naphtyle naphtyle 30 52 p-tolyle p-tolyle 53 benzyle benzyle 54 2-chloroéthyle 2-chloroéthyle 55 2,2,2-trifluoroéthyle 2,2,2-trifluoroéthyle 56 o, p-dibromophényle o, p-dibromophényle 35 57 p-chlorobenzyle p-chlorobenzyle 58 p-trifluorométhylphényle p-trifluorométhylphényle. 69 15760 10 2008759 REVENDICATIONS 1 - A titre de nouveaux médicaments utiles comme agents anti-5 androgènes, un stéroîde de formule : /N R1 10 0 R" R1 • (I) 15 dans laquelle Y représente un groupe alkyle inférieur, aryle, aryl-alkyle inférieur, halogénoalkyle inférieur, halogénoaryle, halogénoaryl-alkyle inférieur ou trifluorométhylaryle, R et R" représentent chacun un groupe hydroxy ou un radical acyloxy dérivé d'un acide carboxylique hydrocarboné 20 ayant moins de 12 atomes de carbone ; R' représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur, vinyle, éthynyle, halogénovinyle, halogéno-éthynyle ou trifluorométhyléthynyle, R'1' représente un atome d'hydrogène ou bien R et R' pris ensembles et R" et R''' pris ensembles représentent des restes oxo. 25 2 - Les stéroîdes selon la revendication 1, caractérisés en ce que Y est un groupe alkyle inférieur. 3 - Les stéroîdes selon la revendication 1, caractérisés en ce que Y est un groupe méthyle. 30 que R et R" sont des groupes hydroxy et R' et R'11 des atomes d'hydrogène. 5 - Les stéroîdes selon la revendication 1, caractérisés en ce que R et R' pris ensembles et R" et R''' pris ensembles sont des restes oxo. 6 - Le stéroîde selon la revendication 1, caractérisé en ce que 35 Y est un groupe méthyle, R et R" des groupes hydroxy et R' et R''r des atomes d'fr-drogène. . 4 - Les stéroîdes selon la revendication 1, caractérisés en ce 69 15760 11 2008759 7 - Le stéroîde selon la revendication 1, caractérisé en ce que Y est un groupe méthyle et R et R' pris ensembles et R" et R''1 pris ensembles sont des restes oxo. 8 - Le stéroîde- selon la revendication 1, caractérisé en ce que 5 Y est un groupe méthyle, R et R" des groupes acétoxy et R1 et R''' des atomes d'hydrogène. 9 - Compositions thérapeutiques contenant comme ingrédient actif principal l'un au moins des stéroîdes selon l'une des revendications 1 à 8, associé à un support pharmaceutiquement acceptable. 10 10 - Les formes d'administration des compositions selon la reven dication 9. 11 - TIn procédé de préparation d'un stéroîde de formule : R 15 20 R' (I) 25 30 35 dans laquelle Y représente un groupe alkyle inférieur, aryle, aryl-alkyle inférieur, halogénoalkyle inférieur, halogénoaryle, halogénoaryl-alkyle inférieur ou trifluorométhylaryle, R et R" représentent chacun un groupe hydroxy ou un radical acyloxy dérivé d'un acide carboxylique hydrocarboné ayant moins de 12 atomes de carbone ; R' représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur, vinyle, éthynyle, halogénovinyle, halogéno- éthynyle ou trifluorométhyléthynyle, R''' représente un atome d'hydrogène ou bien R et R' pris ensembles et R" et R''' pris ensembles représentent des restes oxo, caractérisé en ce que l'on soumet un composé de formule : R —R' (II) 15760 12 2008759 dans laquelle Y, R et R' sont tels que définis ci-dessus, à l'action des enzymes du microrganisme Colletotrichum linicola, la réaction s'effectuant par culture dudit microrganisme en présénce dudit stéroîde ou par traitement du stéroîde par des cellules non-proliférantes du microrganisme ou par mélange du stéroîde avec les enzymes hydroxylants préalablement obtenus à partir du microrganisme. 12 - A titre de produits industriels nouveaux, utiles notamment comme agents tensioactifg antioxydant^ inhibiteur de corrosion et absorbeurs d'ultraviolets, les stéroîdes selon l'une des revendications 1 à 8.