FR 2013051 A1 19700327 FR 6924060 A 19690715 69 24060 1 2013051 Le cytosine-arabinoside est connu depuis un certain temps pour être un agent efficace dans le traitement de certaines espèces de tumeurs. Son utilisation a toutefois été entravée par les difficultés éprouvées à établir et maintenir un contact efficace et soutenu 5 entre le composé et les cellules soumises au traitement. Il a été découvert que le 5'-0- adamantoylcytosine-arabino-side (AdOCa) était nettement plus efficace que le cytosine-arabino-side non-estérifié en raison des propriétés d'absorption modifiées qui rendent ce composé nouveau apte à des traitements dans lesquels 10 un dégagement prolongé de médicament, c'est-à-dire un effet de "dépôt-", est désirable. On fait la synthèse de ce composé par acylation directe du cytosine-arabinoside pour obtenir d'abord le composé bis-acylé, le 51-OfK"-bis(l-adamantane-carboxylate) de 1-bêta-D-arabinofurano-15 sylcytosine. Le produit est alors soumis à une hydrolyse sélective pour produire le composé nouveau (AdOCa) selon l'invention. L'hydrolyse partielle peut être effectuée par des procédés connus, par exemple à l'aide d'une solution méthanolique d'une base aqueuse comme l'hydroxyde de potassium ou l'hydroxyde de sodium. 20 L'estérification peut être effectuée à l'aide de chlorure ou autre halogénure d'acide 1-adamantane-carboxylique et de cytosine-arabinoside dans un milieu de réaction contenant de la pyridine ou une autre base organique. Un composé nouveau selon l'invention, c'est-à-dire le composé 25 bis-acylé précédemment mentionné, constitue un intermédiaire utile dans la préparation du 5'-O-adamantoylcytosine-arabinoside. Ce dernier est utile, comme on l'a dit, sous forme de base libre et l'est également sous forme de sels avec des acides pharmaceutiquement acceptables comme le chlorhydrate, le sulfate, le phosphate, l'acé-30 tate etc. Ces sels peuvent être préparés par simple réaction entre la base libre et l'acide désiré dans un système solvant approprié» EXEMPLE - Préparation du 5'-O-adamantoyl-cytosine-arabinoside (AdOCa). On chauffe au reflux pendant une demi-heure une solution de 35 18 g (0,10 mol) d'acide 1-adamantane-carboxylique dans 200 ml de chlorure de thionyle» On chasse la matière volatile par évaporation sous vide. On dissout le résidu dans 50 ml de benzène sec et on évapore de nouveau à siccité sous vide. On recommence ce procédé. On dissout le résidu, le chlorure d'acide 1-adamantane-carboxyli-40 que, et 3,1 g (0,04 mol) de cytosine-arabinoside dans 2,25 1 de gAP ORIGINAL 69 24060 2 2013051 pyridine sèche et on chauffe la solution au reflux pendant cinq heures. On chasse la pyridine par distillation sous pression réduite à 30°C. On répartit le résidu entre 300 ml d'eau et 300 ml de chloroforme..On sépare la couche chloroformique et on épuise la 5 couche aqueuse au moyen de deux portions de 300 ml de chloroforme» On lave le mélange des extraits chloroformiques successivement à l'aide de 200 ml d'eau, 200 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium, puis deux portions de 200 ml d'eau et on sèche sur du sulfate de magnésium, la filtration et 1'évaporation sous vide 10 donnent 29,4 g de résidu. On soumet le résidu à la chromâtographie sur 1,5 kg de gel de silice tassé dans un mélange 96/4 de chloroforme et de méthanol et on procède à l'élution dans le même solvant en recueillant des fractions de 20 ml» On mélange les fractions 436 à 630 d'après une analyse pondérale et on évapore à siccité sous 15 vide. Le résidu pèse 13»8 g» Un échantillon pour analyse du produit, le 5'-0,N-bis(l-ada-mantane-carboxylate) de 1-bêta-D-arabinofuranosyl-cytosine, possède les caractéristiques suivantes. Analyse. Calculé pour C^H^N^O^ : C = 65,80; H = 7,28; N = 7,40%. 20 Trouvé : C = 64,62; H = 7,37; N = 7,05$. Point de fusion de l'échantillon ci-dessus 178 - 193°C. UV (CH^OH) Amax. f 214 15.900 25 249 13.300 3-00 8»730 IR 3410, 3360, 1710, 1650, 1615, 1555, 1310, 1270, 1230, 1130, 1065 cm-ï. 30 On dissout dans 150 ml de méthanol une solution de 1 g du produit ci-dessus, le 5'-0,N-bis(1-adamantane-carboxylate) de 1-bêta-D-arabinofuranosyl-cytosine, et on ajoute 50 ml d'hydroxyde de sodium N/10, On laisse la solution reposer à la température ambiante pendant quarante cinq minutes puis on règle à pH 7,9 à 35 l'aide d'acide chlorhydrique N» On évapore la solution sous vide jusqu'à formation d'une quantité considérable de précipité. On réfrigère le mélange et on le filtre. On obtient 0,56 g d'un solide qu'on fait recristalliser par dissolution dans 100 ml de méthanol et concentration jusqu'à ce qu'apparaisse une grande quantité de 40 matière cristalline. On réfrigère le mélange et on le filtre. SAD ORIGINAL ' 69 24060 5 -ri en /P* P3 t5 2us 303 i ce qui donne 272 mg de produit, pt. f. 290-291°C. On purifie par cristallisation un échantillon de ce 5'-0-ada-mantoylcytosine-arabinoside au sein de diméthylformamide et de méthanol ; il fond à 300 - 301°C. 5 Analyse. Calculé pour : C = 59,25; H = 6,71; N = 10,37 i°. Trouvé : C = 59,34; H = 7,19; N = 10,16 & UV (CH^OH) X max. £ 232 Cép.) 7.790 10 272 9.400 IR 3350, 3230, 3150, 1690, 1655, 1630, 1005, 1525. 1295, 1240, 1105, 1080, 1055, 1015, 990, 960, 928, 876 et 808. RMN ( Réaonanne magnétique du noyau) 15 Pointes maxima multiples à ^1,55 -S 2,0 (15H), multiplets à ^*3,8 - S 4,3 (5H) dûs à C2', C^', C^' et C^'H, pointe large centrée à 6 5 ,53 (2H) due à H sur oxygène, doublet à 4$ 5,68 (1H), .doublet à é 5 ,68 (1H), doublet à 6 6,12 (lH, H anomère), large pointe à ,08 (2H) due à -MHg, doublet à 7,47 (1H). 20 L'activité contre les tumeurs du 51-O-adamantoylcytosine- arabinoside QldOCa) a été démontrée -par un essai in vivo à l'aide de leucémie lympho'ide L1210 chez la souris. La méthode suit de très près le protocole établi par le Cancer Chemotherapy Reports, N° 25, p. 1-67, 1962. On implante le fluide ascitique (contenant un nombre 25 connu, de cellules leucémiques L1210) d'une souris donneuse par voie intrapéritonéale dans la souris d'essai. Les souris d'essai sont de même race (BDP^), sexe, source et poids (19 ± 2 g). Elles sont prélevées au hazard dans des groupes de 8 à 10 animaux, y compris un groupe témoin. On commence le traitement vingt-quatre heures après 30 l'implantation de la tumeur et on continue selon le programme de traitement. Les agents contre les tumeurs à essayer sont dissous ou mis en suspension dans un véhicule stérile (méthylcellulose saline ou aqueuse à 0,25%). La solubilité dans l'c-i.u de AdOCa est très faible, de sorte que ce composé est administré sous forme de sus-35 pension. Les agents sont administrés par voie intrapéritonéale ou BAD ORIGINAL 69 24060 4 2013051 orale sous un volume uniforme de 0,2 ni. Les animaux témoins ne reçoivent que le véhicule approprié. Les souris sont observées et les décès sont enregistrés deux fois par jour. Pour déterminer l'efficacité du traitement on calcule les temps moyens de survie 5 et l'augmentation pour cent de la survie en comparaison avec des animaux témoins selon le protocole CCNSC. Une étude complète a révélé une valeur critère de pourcentage minimum(% ils)pour l'activité contre les tumeurs de 25. Cette valeur signifie que l'animal moyen du groupe traité vit 25 % de plus que l'animal moyen du 10 groupe non-traité (témoin). Voici les résultats obtenus,, (Voir tableau ci-après.) — - * n ORIGNAL. Essai Traitement 1 Tempe de rsurvie O vO co -fc* O O* c> Agent Voie Dose mg/kg Dose totale mg/kg Programme Jours jours ^ (moyenne) (gamme) Jours Témoin AdOCa , i.p. Doses journalières- 1 à 7 5,2 10,4 20,7 41,3 36 73 145 290 Témoin AdOCa M I! p.0 Doses journalières- 1 à 7 60 80 1 20 420 560 840 7,5 7,0-8,0 8,5 7,5-9,5 13 9,5 9,5-10,5 27 10,5 9,5-11,0 40 15,0 1^,5-18,0 100 7,5 7,0-8,0 10,5 7,5-14,5 40 15,5 13,5 Témoin If Ca. HCL' M AdOCa n i0p» 300 100 300 100 ;uu 300 300 300 Une seule dose, jour 1 Doses aux jours 1, 4 et 7 Une seule dose, jour 1 Doses aux jours 1, 4 et 7 Une seule dose, jour 1 Doses aux jours 1 , 4 et 7 12,0-1^,5 10 ,0-1'/ ,0 106 80 7,5 8,5-8,0 — 7,5 6,5-9,5 8,0 7,5-8,5 6 10,0 9,5-11,5 33 19,5 10,5-23,5 160 23,0 18,5-34,0 206 1) Traitement commencé 24 heures après implantation intrapéritonéale de cellules L1210 2) io ils de 25 considéré comme une inhibition significative du développement de la tumeur 3) AdOCa = adamantoylcytosine-arabinoside. Ca.HCl = chlorhydrate de cytosine-arabinoside 4) Agent d'administration : i.p = intrapéritonéal - p.o = orale 5) Temps de survie mesurés à partir du jour de l'implantation de la tumeur (jour zéro) NJ O UJ O en « ~l "• ■ itfBÉhili Hi 69 24060 6 2013051 L'activité prononcée contre les tumeurs du 5'-O-adamantoyl-cytosine-arabinoside est montrée pur l'augmentation des temps de survie des animaux traités. La propriété de mise en liberté prolongée est montrée par la valeur de pourcentage de survie (ils fo) 5 de 160 pour AdOCa avec l'administration d'une seule dose au jour 1, alors que le cytosine-arabinoside lui-même ne donne qu'une valeur de 6 (ils % = 6) pour cette administration. Le chlorhydrate du 51-O-adamantoyl-cytosine-arabinoside se prépare par réaction du 5'-O-adamantoyl-cytosine-arabinoside en 10 suspension aqueuse avec de l'acide chlorhydrique puis élimination de l'eau, par exemple par évaporation. On peut l'utiliser au lieu de la base libre dans l'essai décrit dans les paragraphes précédents. BAD ORIGINAL 69 24060 7 2013051 REVENDICATIONS 1. Un composé tel que le 51-O.N-bis(l-adamentane-carboxylate) de 1-bêta-D-arabinofuranosyl-cytosine et le 5'-(l-adamentane-carbo-xylate)de 1-bêta-D-arabinofuranosyl-cytosine et les sels d'addition 5 avec les acides de ces composés. 2. 51 — Cl -adamentane-carboxylate) de 1-bêta-D-arabinofuranosyl-cytosine selon la revendication 1• 3. 5'-0,N-bis(l-adamantane-carboxylate) de 1-bêta-D-arabinofura-nosyl-cytos.ine selon la revendication 1. 10 4» Un procédé consistant à faire réagir un halogénure de l'acide 1-adamentane-carboxylique avec la 1-bêta-D-arabinofuranosyl-cyto-sine en présence d'une base organique pour former du 5'-0,N-bis(l-adamantane-carboxylate) de 1-bêta-D-arabinofuranosyl-cytosine puis à hydrolyser ce composé pour former le 5'-(1-adamantane-carboxylate) 15 de 1-bê ta-D-arabinofuranoxyl-cyt o sine„ BAD ORIGINAL