FR 2011711 A1 19700306 FR 6919046 A 19690610 69 19046 i 2011711 La présente invention concerne de nouveaux dérivés médicamenteux de 2-hydroxy- et 2-alkoxy-5-nitrobenzylJiexaméthylènëtétrâmma-nium antimicrobiens de formule générale : R-O où. S représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle inférieur et de préférence un radical méthyle, ï~ représente un ion halogé-15 nure et de préférence chlorure ou bromure ou un ion nitrate sulfate ou sulfonate, de même que le procédé pour la préparation de ces nouveaux composés. On a découvert que ces composés conviennent comme agents actifs pour le traitement des infections de l'intestin et des voies 20 urinaires par les germes pathogènes* Jusqu'à présent, on a.utilisé pour le traitement des maladies infectieuses des intestins de préférence des hydrosyquinoléines ha-logénées et, en particulier, la 7-iodo-5-chloro-8-hydroxyquinoléine connue depuis 1899 ou la suifagnanidine» le premier composé cité 25 peut provoguer des réactions allergiques chez les patients sensibles à l'iode. La sulfaguanidine a un effet souvent insuffisant. Comme antiseptiques des voies urinaires, on a utilisé l'hexa-méthylènetétramine et les sels de l'acide mandélique et plus récemment aussi les combinaisons de ces deux agents actifs. Leur effet 30 est souvent insuffisant. 1 On recherche donc depuis plusieurs années un agent chimiothé-rapeutique ayant une action spécifique sur les germes pathogènes des intestins et/ou des voies urinaires. Il serait particulièrement souhaitable de disposer d'un agent actif permettant également de 35 combattre des maladies aussi redoutables que le choléra et le typhus abdominal. Une chimiothérapie assez efficace pour ces maladies répandues dans le monde entier constituerait un progrès important, parce qu'il n'existe dans le commerce aucune préparation qu'on puisse utiliser avec un succès suffisant contre le choléra et le 40 typhus abdominal. 69 19046 2 2011711 Les nouveaux dérivés de 2-h.ydroxy- et 2-alkoxy«-5-nitro"benzyl-hexaméthylènetétrammonium dë" "formulé générale I ont un effet bacté-rïô'statiquë marqué sûr le viBrlon/cHolérique" et "là Sâlmonelle; du typhus, mais également contre Shigella, qui est un agent fréquent 5 de la dysentrie» En outre, ces composés ont une action efficace contre un certain nombre d'autres germes pathogènes de l'intestin. Par exemple, un milieu nutritif convenable ne contenant que 25 mg/$ de ces composés empêche déjà la croissance des souches bactériennes suivantes : . - 10 Y. Cholerae 34580, Shigella'n° 108, Staphylococcus Wood-n° 46, tandis que la croissance de Salmonella typhi Ty; 2728 est très freinée. A des concentrations de 50 et 100 mg/%f la croissance et la multiplication de tous ces agents patliogènes est complètement empêchée. Ces données sont relatives à une durée d'incubation 15 de 2 heures à peine. Pour une durée d'incubation de 6 heures, les résultats sont encore meilleurs. On trouvera au tableau ï ci-après les données relevées pour l'activité bactériostatique de deux composés de l'invention (â et B) et de deux"composés déjà connus utilisés de façon analogue 20 (C et D), les données précisées ont été relevées " simultanément et dans des conditions identiques. Les composés sont les suivants : -A * chlorure de 2-méthoxy~5-nitrobenzylhexaméthylènetétràmmônium B s chlorure de 2-hydroxy-5-nitrobensylh.examéthylènetétraffimonium 25 0 : 7-iodo-5-chloro-8-hydrpzyquinoléine B î sulfagaanidine Technique : on mesure les activités bactériostatiques sur des cultures sur agar-agar. On applique sur les plaques d'agar-agar ensemencées des rondelles de"papier-filtre, 30.- stérilisées à l'autoclave, d'un diamètre de 9 mm et ;; après dépôt de 0,025 ml de composé en solution ou suspension (ce qui correspond à 2,5 mg''!dé-rcômpOsé~-pàrrondelle) on exécute l'incubation à + 37°C. Les diamètres précisés pour les zones d'inhibition correspondent au. 35 diamètre total. Un-diamètre total de 9 mm est prati quement équivalent à "inhibition nulle®. RésuJL-tats t Ceux-ci sont donnés au tableau I. Une zone dfinh.ibi- . tion étendue correspond à une haute activité bactériostatique . Un diamètre de 9 mm correspond à une activité 40 nulle » 69 19046 5 2011711 TABLEAU I 10 15 20 25 le tableau II indique les activités bactériostatiques des composés A et B de l'invention en comparaison de l'activité de l'hexaraéthylènetétr aminé déjà connue (substance E)o La détermina-tion est exécutée sur un milieu nutritif solide au sang avec des concentrations de 25, de 50 et de 100 mg/lOO ml pour une série de germes pathogènes. Germe pathogène Diamètre total de la zone d' inhibition en nrm A B C D Esch.erich.ia Coli 12 9 14 11 Klebsiella 28 22 9 11 Pseudomonas aeruginosa 13 16 9 11 Proteus. mirabilis 25 22 9 10 Proteus vulgaris 22 11 9 11 Salmonella typhi Ty 2 23 22 9 9 Salm. paratyphi A 21 13 9 12 B 17 24 9 9 G 25 24 9 9 Salmonella typhi murium 21 14 9 9 Shigella n° 108 30 25 15 11 Shigella shigae n° 401 34 33 15 10 Vibrio cholerae El Tor - n° 1418 30 28 18 11 Tibrio Cholerae 569 B 40 35 17 14 Staphylococcus aureus 31 26 16 10 Staphylococcus Wood 46 24 22 12 9 TABLEAU II Essai bactériostatique des composés B 1 A E Concentration en mg/100 ml 25 50 100 25 50 100 100 Témoin Escheriqhia coli + *»»# (±) _ (±) (±) + *+* Klebsiella ± - (±) - - — + P s eud♦ aeruginosa (±) - - (±) — - + + Salm.&yphi Ty 2/728 (±) - - - - - - + S. paratyphi A 105 - - - - - « (±) S« parauyphi B 223 » _ - - - - - + S, paratyphi C 502 - - - _ - - - + S » typhi murium (±) ~ - + — — ± + Salm, erçteritidis + - - ± — — + + 'Shigella n° 108 - - - - - — — + Sh.Shigae n° 4-01 - - - — — — + Sh.Shigae n° 406 - - - — — — + Sh.flexnerl 102 Typ IB - - - - — -, (±) + Staph. aureus + - _ i — — Hr + Staph. Wood 46 - -, - (±) — — — + Vibrio cholerae 1418 - - - — _ — — + Vibrio oholerae 38383 _ MM mm + Vibrio cholerae 34580 _ — mm mm mm mm "t" (Nelss.gonorrhoe) (±) - — - 1 ~ C±) + Légende ; ' - = pas de orolasance + » faible croissance (■+) s= très faible croissance + #s croissance ^(ijQpnajl.©) bp^n^ 69 19046 5 2011711 Les conclusions à tirer des tableaux I et II sont les suivantes ï Les composés A et B de l'invention ont des activités bactériostatique s relativement très élevées contre un nombre plus grand 5 de germes pathogènes que les composés déjà connus 0, D et E. Par contre, la flore de colibacilles existant naturellement et normalement dans les intestins n'est que peu influencée par les composés A et B. Outre l'activité bonne et largement supérieure à l'égard des 10 germes provoquant le typhus et à l'égard des Shigella, qui sont les agents fréquents de la dysentrie, une activité d'une importance particulière; est l'activité relativement très élevée contre les vibrions cholériques -voir, par exemple, l5effet du composé A sur "Vibrio cholerae 569 B-. 15 Une attaque de choléra et une vaccination anticholérique n'assurent qu'une immunité transitoire. Dans les Indes et les régions avoisinantes, plus d*un mil lard de gens sont par conséquent exposés en. permanence à un risque potentiel de choléra. - Une chimiothérapie efficace contre le choléra est une nécessité dans ces ré-20 gions et il convient de citer également l'importance d'un antiseptique intestinal efficace pour le traitement et la prévention du typhus et de la dysentrie, qui sont dans ces régions permanents dans 1*entourage de l'homme et menacent sa santé. Tolérance : . 25 Les composés de lfinvention sont uoù. seulement plus actifs que les composés déjà connus comparable&, ïûaie ont également, comme on l'a constaté avec surprise, la propriété df être tolérés de façon inhabituellement bonne et relativement plus élevée. Les composés A et B se sont révélés pratiquement non toxiques 30 lors des essais sur les animaux. Ainsi., la dose létale moyenne (DL^q) pour la souris est de plus de SOOO mg/kg de poids du corps . en administration par voie orale. 3es doses plus élevées,ne peuvent être administrées pour, des raisons techniques; Même lors de l'administration de-doses plus impox-tantes, les animaux ne manifestent 35- pas d'effets secondaires"apparents* Dans les essais de toxicité subchronique au cours desquels le composé estadministré " quotidiennement pendant 30 jours à raison dé lûO mg/kg à dix rats .:au moyen - - •* d'une sonde oesophagienne, on n'a constaté aucun effet secondaire . sensible chez ces animaux,, A titre' de "témoin, ~ofi a tft'ilisé dix au-40 très rats recevant uniquement de l'eau en quantité équivalente. 69 19046 6 2011711 Tous les animaux disposaient d'aliments et d'eau de buvée en quantité normale. Tant les vérifications de poids régulières que les analyses sanguines exécutées à trois reprises n'ont indiqué d'écarts par rapport à la normale ni chez les animaux d*essai ni chez les 5 animaux témoins.» Au terme de l'essai, tous les animaux ont été sacrifiés et leurs organes les plus importants comme le foie, les poumons, la rate, le thymus, les reins, les ovaires, les testicules et les vaisseaux, entre autres, ont été soumis à tui examen histo-logique. Aucune altération pathologique n'a pu. être mise en évidence 10 dans les organes des rats, les composés A et B sont donc bien tolérés à tout point de vue. Au contraire, la dose létale (DL^q) pour la 7-iodo-5-chloro-8-hydroxyquinoléine (substance G) est de 7200 mg/kg chez la souris. On a administré le composé A sous forme de dragées ën doses 15 de 250 mg à des patients souffran^d'entérite ou d'entérocolite. Ils ont toléré le nouveau.: médicament sans effet secondaire aucun. L'effet a été. également bon et la plupart des patients ont manifesté une amélioration rapide de leurs maux. La dose était en moyenne de 3 à 4 x 2 dragées, c'est-à-dire 1,5 g par jour. 20 Les nouveaux composés de formule générale X peuvent être uti lisés en raison de leurs propriétés remarquables comme agents thérapeutiques et en particulier comme agents chimiothérapeutiques pour le traitement des infections de l'intestin et des voies urinaires. . v 25 Le procédé de synthèse des nouveaux dérivés de.2rhydroxy- et :2«»alkoxy~5-nitroben3yllïexamétbylènetétrajnmoniïua de formule I est caractérisé en ce qus on fait réagir un ester 2-hydroxy- ou 2-alkoxF-5-nitrobenzylique réactif de formule générale ï 30 0Hg-X II 35 où E représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle inférieur et de préférence le radical ,m0hyle et X représente un atome d'halogène et .v&e préférenee_un .'atomef d'e -chlore: -ou.dè brome ou un radical 40 sulfate oy. sulfonaté-j"" avec, "de I?hexaméthylènététraminë. BAD ORIQÎNJAL 69 19046 7 2011711 Dans la forme de réalisation préférée du procédé de l'invention, on fait réagir un halogénure de 2-hydroxy- ou 2-méthoxy-5-nitrobenzyle avec de l'hexaméthylènetétramine. lia préparation est exécutée le plus avantageusement par 5 réaction de quantités équimoléculaires des deux composés de départ dans un solvant inerte à l'égard des réactifs, de préférence le chloroformé. La réaction est exécutée avantageusement à une température d'environ 0 à 100°C et, de préférence, s'échelonnant de la tempé- y * \ 10 rature ambiante à une température modérément élevée, à savoir d'environ 20 à 50°0. EXEMPLE 1 Chlorure de 2-méthoxv-5-nit r obenzvlhexamsthy 1 èn atéti-ammon lum. On dissout dans 400 ml de chloroforme, 70 g de chlorure de 15 2-méthoxy-5-nitrobenzyle très pur (0,348 mole) et sous agitation on y ajoute par fractions 48,7 g d'hexaméthylènetétra.mine (0,348 mole). Il en résulte une dissolution progressive pratiquement complète de l'hexaméthylènetétramine ajoutée. le produit commence à se séparer après 2 heures. 20 On agite le mélange pendant 3 jours à la température, ambiante. On sépare ensuite le produit par filtration sous vide et on le sèche eous vide. Quantité obtenue : 102,7 g, soit 86,3 $ de la valeur théorique Point de fusion : 184°C (décomposition) 25 Microanalyse : pour O^ŒïgO C : calculé : 49,19 f» ; trouvé : 49,10 $ H : calculé : 20,49 ; trouvé : 20,23 % 01: calculé : 10,37 % î trouvé : 10,24 $> Poids équivalent (déterminé au moyen de 30 HCIO^ dans l'acide acétique en présence d'acétate de mercure) calculé ; 341,80 ; trouvé : 339,8. Le chlorure de 2-méthoxy-5-nitrobenzylhexaméthylènetétrammo-nium est très facilement soluble dans l'eau et- le méthanol, bien 35 soluble dans l'acide acétique glacial, quelque peu soluble dans l'éthanol et peu soluble dans la plupart des autres solvants organiques courants. EXEMPLE 2 GTiloru-r& de 2-hydroxv-5-nitrobenzylliexaméthylèttf>tétraTfimonlum. 40 On dissout 9,38 g de chlorure de 2-hydroxy-5-nitrobenzyle BAD ORIGINAL 69 19046 8 201171î très pur (0,05 mole) dans 250 ml de chloroforme» Sous agitation ? on ajoute la solution obtenue à une solution de 7,01 g d ®hexam&'ttXP" lènetétraminé pure (0,05 mole) dans 120 ml de chloroforme# Par léger chauffage, on amorce la réaction et le dérivé 5 d'hexaméthylènetétrammonium formé commence alors aussitôt à se déposer sous la forme d'un précipité jaune. On agite le mélange pendant eirore 18 heures à la température ambiante, puis on recueille par filtration sous vide le produit séparé qu'on sèche sous vide à la température ambiante. 10 Quantité obtenue î 16,4 g, soit 100 % de la valeur théorique Point de fusion : 195°G (décomposition) Microanalyse : pour C13H18CIV3 G : calculé : 47,65 f<> ; trouvé : 47,44 $ îï : calculé î 21,38 $> ; trouvé : 21,13 % 15 Cl: calculé : 10,82 $ ; trouvé : 10,55 $> Poids équivalent (déterminé au moyen de HClO^ dans l'acide acétique en présence d'acétate de mercure) : calculé : 327,69 ; trouvé : 329,8. 20 le chlorure de 2-hydroxy-5-nitrobenzylh.examéthylènetétram~ monium est peu soluble dans l'eau froide et pratiquement insolubl® dans la plupart dès solvants organiques habituels. Dans l'exemple 2 ci-dessus, on peut remplacer le chloroform® comme solvant par du méthanol ou de lréthanol. 25 EXMPLB 3 Bromure de 2-aiéthoxy-5-nitrQbenzyltét-yammnni nm. On obtient ce composé par réaction de bromure de 2-méthoxy~ 5-nitrobenzyle (8,55 g) avec de l'hexaméthylènetétramine (4,87 g) dans 40 ml de chloroforme. 30 Point de fusion % environ 200°G avec décomposition. D'une manière analogue à celle décrite dans les exemples ei~ dessus, on obtient par réaction du bromure de 2-hydroxy-5-nitrc=> benzyle avec l'hexaméthylènetétramine le bromure d'hexaméthylènetétrammonium correspondant et par réaction de sulfate ou de métha-35 nesulfonate de 2-hydroxy- ou -2-alkoxy-5-nitrobenzyle avec l'hexa^ métliylènetétramine le sulfate ou le sulfonate de 2-hydroxy- ou 2-alkQxy-5-nitrohenzylhexaméthylènet étrammonium. EXEMPLE 4 Comprimés •pharmaceutiques. 40 On granule 2,5 kg de chlorure de 2-méthoxy-5-nitrobenzylîie.xa- I BAD ORIGINAL 69 19046 9 adw.n méthylènetétrammonium ou.de 2-hydroxy-5-nitrobenzylhexaméthylène-tétr ammonium avec de l'amidon et de la gélatine et on presse .le mélange en 10.000 comprimés. . Au moyen des comprimés, on fourme des dragées à l'aide de sirop 5 de sucre et on les enrobe d'une couche résistant au suc.gastrique. EXEMPLE 5 2-méthoxy-5-nitro-benzyl-hesaméthylène-tétrafflmonium-sulfate. On ajoute à 5 g de 2-méth02y-5-nitr0-benzyl-hexaméthylène-tétrammonium-chlorure (0,0146 mole) dans 30 cm3 d'eau, 2,3 g de 10 sulfate d'argent pulvérisé (AggSO^) (0,0073 mole). On secoue ce mélange pendant 2 heures. On sépare par filtration le chlorure d'argent formé. On évapore à sec le filtrat à la température ordinaire. Résidu : 4,48 g ou 86 % de la théorie. 15 PiP : 90 - 91° Microanalyse : calculé pour ®^H40^10®10^ C : calculé 47,45 # » . Trouvé 47,62 $> K : calculé 19,75 % s Trouvé 19,49 $> S : calculé 4,53 j Trouvé 4,6 %» 20 Le sulfate est facilement soluble dans l'eau, dans le méthanol et dans l'éthanel chaud, mais peu soluble dans le chloroforme et dans les essences. EXEMPLE 6 2Hnéthoxy-5-^^ t^rft-.benzvl-hfi-!rflTriéthvlène-tétrninmon3iiiii-Ti-i -h-PQ-fcft . 25 On ajoute à 10 g de 2-méthoxy-5-nitro~benzyl-hexaméthylène- tétrammonium-chlorure (0,0292 mole) dans 50 cm3 d'eau en agitant, 5 g de nitrate d'argent (0,0292 mole)» On élimine par- filtration le chlorure d'argent formé. On évapore à sec le filtrat à la température ordinaire. 30 Résidu : 8,5 g P.F. x 167°C affaissement / 168 - 168,5°C fusion. Microanalyse : Calculé pour W6°6- C ï calculé 45,65 % î trouvé 45,51 $ H : calculé 22,82 % \ trouvé 22,56 fo9 .. 35 Ce nitrate est facilement soluble.dans l'eau, mais peu soluble dans les solvants organiques. ï r Jbad 69 19046 10 2011711 - bevmdications - 1.- Dérivés médicamenteux de 2-hydroxy- et 2-alkoxy-5-nitro-benzylhexaméthylènet étrammonium de formule générale : E-0 ,GOr/"N4(CH2)6_7 X" 10 où E représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle inférieur et de préférence le radical méthyle et X" représente un ion halogé-15 nure et de préférence chlorure ou bromure, ou un ion nitrate sulfate ou sulfonate. 2.-le chlorure de 2-méthoxy-5-nitrobenzylhexaméthylène-t étrammonium. 3o- le chlorure de 2-hydrosy-5-nitrobenzylhexaBiéthylène-20 tétrammoniuiiu 4*- Procédé de préparation de dérivés médicamenteux de 2-hydroxy- et 2-alkoxy-5-nitrobenzylhexaméthylènetétrammoniu» de formule générale 1 indiquée dans la revendication 1, caractérisé en ce qu'on fait réagir avec l'hexaméthylènetétramine un ester 2-hydroxy-25 ou 2-alkoxy-5-nitrobenzylique réactif de formule générale x R-0 30 II 35 où R représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle inférieur et de préférence le radical méthyle, et X représente un atome d'halogène et de préférence un atome de chlore ou' de brome, ou un radical sulfate ou sulfonate. 5»- Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce 40 qu'on fait réagir un halogénure de 2-hydroxy- ou 2-méthoxy-5-nitro- 69 19046 11 2011711 benzyle avec l'hexaméthylènetétramine-' 6o- Procédé suivant la revendication 5» caractérisé en ce qu'on fait réagir le chlorure de 2-méthoxy-5-nitrobenzyle avec l'hexaméthylènetétramine. 5 7.- Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce qu'on fait réagir les quantités équimoléculaires dès deux composés de départ dans un solvant inerte à l'égard de la réaction. 8.- Procédé suivant la revendication 7, caractérisé en ce qu'on exécute la réaction dans le chloroforme. 20 9.- Désinfectant intestinal, caractériêé en ce qu'il contient comme agent actif un composé répondant à la formule générale I indiquée dans la revendication 1. 10.- Désinfectant intestinal, caractérisé en ce qu'il contient comme agent actif 5 à 98 ^ de chlorure de 2-méth.oxy-5-nitrobenzyl- 25 hexaméthylènetétrammonium. 11.- Application du chlorure de 2-méthoxy-5-nitrobenzylhexa-méthylènetetrammonium et du chlorure de 2-hydroxy-5-nitrobenzyl-hexaméthylènetétrammonium comme désinfectants intestinaux.