FR 2003518 A1 19691107 FR 6906461 A 19690307 69 06461 i 2005518 Cette invention concerne des compositions et des méthodes pour réduire la concentration du cholestérol dans le sang, par administration aux animaux de certains dérivés d'indole. On a maintenant découvert que l'administration aux animaux à 5 sang chaud de dérivés d'indole ayant la formule suivante ou de sels pharmaceutiquement acceptables et non toxiques de la forme acide (où R est H dans la formule ci-dessous) avec des bases minérales ou organiques, a pour effet de réduire la concentration du cholestérol dans le sérum sanguin : 10 où X est un halogène et R est l'hydrogène ou un radical alcoyle inférieur. Les radicaux alcoyle inférieur représentés par R ont de 1 à 4 atomes de carbone, et sont par exemple un radical méthyle, 20 éthyle, propyle, butyle, isopropyle, isobutyle ou tertiobutyle. Les dérivés d'indole employés sont des composés connus ou peuvent être préparés par des méthodes connues. Par exemple, l'ester éthylique de l'acide 5-bromoindole-2-carboxylique destiné à servir d'intermédiaire chimique, est révélé par 6. Cavallini et V. Ravenna 25 II Farmaco, Ed. Sci., 13. 113-116 (1958). La synthèse de l'acide 5-chloroindole-2-carboxylique et de son ester éthyiique est décrite par H. Rydon et J. Tweddle, J. Chem. Soc. (1955). Le brevet E.U.A. 3.332.846, délivré le 25 Juillet 1967 à S. Gordon, révèle des composés, dont certains sont des isomères de ceux qui sont employés 30 dans cette invention, pour provoquer l'hypoglycémie.. Une voie avantageuse pour préparer,les composés de cette inven tion emploie la synthèse de Fischer de 1'indole à partir de la phé-nyl hydrazine substituée de façon appropriée et de l'acide pyruvi-que, suivie par 1'estérification et le traitement du pyruvate de 35 phénylhydrazone obtenu par 1'acide polyphosphorique pour donner l'ester de l'acide indole-2-carboxylique désiré. Une autre voie bien connue part de 1*o-nitrotoluène substitué de façon appropriée et du diéthyloxalate, en présence d'éthoxyde de potassium éthanoli-que, pour donner l'acide o-nitrophénylpyruvique substitué qu'on 40 cyclise en acide indole-2-carboxylique en utilisant l'hydroxyde 69 06461 2 2003518 ferreux en solution diluée dans l'hydroxyde d'ammonium. Dans les composés de Formule I, l'halogène peut être le chlore, le brome, l'iode ou le fluor . L'halogène est de préférence un halogène moyen, c'est-à-dire le chlore ou le brome. Des sels de 5 base appropriés de la forme acide des composés ci-dessus sont ceux qui sont formés avec des bases organiques ou minérales telles que celles de métaux alcalins, de sodium ou de potassium par exemple; de métaux alcalino-terreux, par exemple de calcium ou de magnésium, ou de métaux légers du groupe 3(a), d'aluminium par exemple? 10 d1aminés organiques telles que les aminés primaires, secondaires ou tertiaires, par exemple de cyclohexylamine, d'éthylamine ou de pyridine. Les sels peuvent être préparés par des moyens conventionnels, par exemple en faisant réagir et en neutralisant une solution dans un solvant polaire du dérivé d'indole contenant un grou-15 pement acide carboxylique, avec la quantité stoechiométrique d'une base, NaOH par exemple. Un composé préféré comme ingrédient actif dans les méthodes et les compositions de cette invention est l'acide 5-chloroindole-2-carboxylique. Comme composés représentatifs qu'on peut utiliser 20 dans cette invention, on peut aussi mentionner : l'acide 5-bromo-indole-2-carboxylique; le 5-chloroindole-2-carboxylate de méthyle; le 5-bromoindole-2-carboxylate de méthyle; le 5-chloroindole-2-carboxylate d'éthyle; le 5-bromoindole-2-carboxylate d'êthyle; et les composés de ce genre. 25 Pour abaisser le taux de cholestérol dans le sang il vaut mieux administrer les dérivés d'indole par voie buccale. Bien que la méthode d'administration des ingrédients actifs des nouvelles compositions pharmaceutiques de la présente invention ne se limite pas à 1' administration par voie buccale, un avantage décisif 30 de la présente invention est qu'on peut administrer les ingrédients actifs par voie buccale de n'importe quelle manière commode. On peut les prendre par voie buccale, par exemple avec un diluant inerte ou un excipient pharmaceutique, ou encore avec un excipient comestible assimilable, ou enfin on peut les incorporer par des 35 moyens connus dans des formulations telles que comprimés, capsules, suspension^ émulsionç» solutions ou poudres dispersibles. En outre, on peut administrer les ingrédients actifs soit individuellement soit sous forme de mélanges de plusieurs de ces ingrédients actifs. 40 Dans la méthode d'administration, on peut administrer des doses 69 06461 3 2003518 quotidiennes du dérivé d'indole aux animaux, par exemple aux animaux à sang chaud, pendant une durée suffisante pour abaisser le taux de cholestérol sanguin. La dose quotidienne nécessaire pour provoquer un degré donné d'hypocholestérolémie variera avec la 5 taille ou le poids de l'animal à sang chaud, par exemple rats, chiens, ou autres animaux à sang chaud à traiter. En général, elle sera telle qu'elle donnera une dose proportionnée d'environ 2 à 250 milligrammes (mg) par kilogramme (kg) de poids corporel et par jour pendant 5 jours ou plus, par exemple pendant 10 ou 15 10 jours. On administre de préférence le dérivé d'indole pour avoir quotidiennement d'environ 3 mg à environ 50 mg par kg de poids corporel pendant au moins 10 jours. Un dosage quotidien pendant au moins 5 ou 10 jours est conseillé pour maintenir des niveaux de concentration suffisants. Chez les animaux de laboratoire, on 15 y est parvenu en mélangeant un dérivé d'indole au régime. Chez las animaux de laboratoire (rats), on a constaté qu'une dose unique des dérivés d'indole à raison de 50 mg par kg de poids corporel était sans effet pour réduire le taux de cholestérol du plasma. Aussi, comme on l'a dit plus haut, des doses répétées sont conseil-20 lées. Les formes de doses unitaires telles que capsules, comprimés, pilules et formes de ce genre, peuvent contenir d'environ 0,1 g à environ 1 g ou plus des dérivés d'indole, suivant le type de dose unitaire, de préférence avec une quantité appréciable d'un excipient 25 pharmaceutique. Ainsi, pour l'administration par voie buccale, les capsules peuvent contenir drenviron 0,1 à 1,0 gramme du dérivé d'indole, avec ou sans diluant pharmaceutique. Les comprimés, qu'ils soient effervescents ou non-effervescents, peuvent contenir entre environ 0,1 et 1,0 g du dérivé d'indole en compagnie d'excipients 30 pharmaceutiquesconventionnels. Ainsi, les comprimés qui peuvent être revêtus et qui sont effervescents ou non-effervescents peuvent être préparés selon la techniqueconnue. Des diluants ou des excipients inertes, par exemple du carbonate de magnésium ou du lactose, peuvent être utilisés en compagnie d'agents de désagrégation conven-35 tionnels, par exemple d'amidon de mais ou d'acide alginique, et d'agents de lubrification, de stéarate de magnésium par exemple. Les sirops ou les élixirs convenant à l'administration par voie buccale peuvent être préparés avec des sels solubles dans l'eau, par exemple avec le sel de sodium de l'acide 5-chloroindole-40 2-carboxylique, et ils peuvent contenir avec avantage du glycérol 69 06461 4 2003518 et de l'alcool éthylique comme solvants ou agents de conservation. Ils peuvent contenir en outre des agents édulcorants et des agents parfumants, par exemple des huiles essentielles, et des matières colorantes. Les dérivés d'indole contenant un groupement carboxyle 5 libre peuvent être administrés en mélange avec des matières solides qui ont un effet de tampon, par exemple l'hydroxyde d'aluminium colloïdal ou- le phosphate acide de calcium. Les compositions de l'invention peuvent aussi être sous la forme d'une préparation nutritive dans laquelle l'ingrédient actif 10 est mélangé à des protéines et des carbohydrates à de là caséine par exemple. Les compositions décrites ci-dessus peuvent contenir en outre des suppléments diététiques, par exemple des vitamines, des sels d'acide glycêrophosphorique, de la choline et de l'inositol, et 15 des amino acides, de la méthionine par exemple. Il suffit de quantités relativement petites des dérivés d'indole pour produire l'effet hypocholestérolémiant voulu, et les composés sont actifs par la voie d'administration buccale. On peut utiliser ces dérivés d'indole simplement pour abaisser la concen-20 tration du cholestérol sanguin quand des concentrations sensiblemert normales existent dans le sérum sanguin des animaux, ou bien pour abaisser la concentration du cholestérol chez les animaux ayant un taux excessif de cholestérol. Dans tous les cas les doses, les méthodes et les durées d'administration peuvent être les mêmes. 25 On a constaté que les échantillons de plasma d'animaux aux quels on avait administré les dérivés d'indole de l'invention étaient dépourvus de stérols précurseurs de la biosynthèse du cholestérol. Bien qu'on ne sache pas par quel mécanisme d'action ces composés abaissent le taux de cholestérol du plasma, ils n'a-30 gissent pas en bloquant l'une des dernières étapes de la biosynthèse du cholestérol. Les composés de cette invention font preuve de propriétés avantageuses et inattendues en comparaison des composés très voisins. Ainsi, l'activité de réduction du taux de cholestérol était 35 inexistante ou insignifiante dans des expériences de laboratoire analogues à celle de l'Exemple 1, ci-dessous, avec les acides 3-chloro-, 7-chloro-, l'-méthyl-, 5-benzyloxy-, 5-méthoxy-, 4-chloro-, et 6-chloro-indole-2-carboxyliques. En outre, les dérivés d'indole de cette invention manifestent une activité hypoglycémiante mais 40 pas d'activité utérotrophique, anorexique, sur le système nerveux 69 06461 5 2003518 central, antifaigique ou antibactérienne. Les composés de cette invention ont l'avantage de ne pas provoquer d'augmentation de la taille ou du poids du foie des animaux d'expérience. 5 Les Exemples suivants sont destinés à illustrer cette invention. EXEMPLE 1 ACTIVITE HYPOCHOLESTEROLEMIANTE DE L'ACIDE 5-CHLOROINDOLE-2-CARBOXYLIQUE CHEZ LES RATS NOS APUI.TES On a laissé à des rats non adultes, de race Sprague-Dawley 10 et pesant au départ à peu près 75 g, le libre accès à un régime auquel on avait ajouté la quantité indiquée d'acide 5-chloroindole-2-carboxylique. On a préparé ce régime en pulvérisant uniformément sur du Purina Lab Chow commercial ( Ralston Purina CompanY, St Louis, Mo.) une solution éthérée ou méthanolique d'une quantité 15 donnée d'acide 5-chloroindole-2-carboxylique et en laissant le solvant s'évaporer. On a ainsi traité" des groupes de 6 animaux pendant une durée de 10 jours avec différentes doses d'acide 5-chloroindole-2 carboxylique, en conservant un groupe témoin non traité. On a mesuré par pesée la consommation alimentaire quoti-20 dienne pour déterminer la dose réelle d'acide 5-chloroindole-2-carboxylique. Au bout de lo jours, on a sacrifié les animaux et on a prélevé des échantillons sanguins par ponction cardiaque, puis on a analysé.le taux de cholestérol du plasma à l'AutoAnalyseur Technicon (Technicon Controls, Inc., Ardsley, New York). Les ré-25 sultats sont donnés dans le Tableau I. TABLEAU I ACTIVITE HYPOCHOLESTEROLEMIANTE DE L'Arma 5.DROTNDOT.F!—2 — CARBOXYLIQUE AU BOUT DE 10 JOURS CHEZ DES RATS NON ADULTES 1 30 __ Dose Taux de cholestérol quotidienne du plasma % administré dans Consommée % de le régime 2 en mg/kg mg %^ réduction 0,0625% 75 61,9 + 4,46 12,3% 0,125% 150,8 56/8 + 4,35 19,5% 0,250% 266 49,5 + 1,61 29,9% Témoin 0 70,6 + 3,39 0 4o 1 Six rats par groupe 69 06461 6 2003518 2 Déterminés en mesurant la consommation alimentaire 3 Moyenne + erreur étalonnée sur la moyenne Pour déterminer s'il s'était formé des stérols précurseurs de la biosynthèse du cholestérol, on a réuni des échantillons de 5 plasma d'animaux traités à l'acide 5-chloroindole-2-carboxylique à raison de 0,250% dans le régime, on les a soumis à une hydrolyse pour transformer les esters de stérol.- en stérols libres qu'on a ensuite extraits dans l'éther de pétrole. On â transformé des portions aliquotesen dérivés de triméthylsilyéther et on les 10 a analysées par chromatographie gaz-liquide en utilisant du cho-lestane comme étalon interne.On ria observé qu'un pic prononcé correspondant au cholestérol. L'effet hypocholestérolémiant de l'acide 5-chloroindole-2-carboxylique à raison de 0,250 et 0,125% dans le régime, ainsi que l'absence de stérols précurseurs du 15 cholestérol, ont été confirmés par des expériences doublées. On a excisé les foies des trois groupes de rats traités de l'Exemple 1, on les a séchés sur papier buvard et on les a pesés. On n'a pas observé de changement du poids des foies par rapport au groupe témoin. On a déterminé la concentration du cholestérol dans le foie 20 et on a constaté qu'elle était pratiquement inchangée par rapport au témoin. Par conséquent, la réduction du taux du cholestérol du plasma ne peut être attribuée à une redistribution dans le foie du cholestérol circulant. EXEMPLE 2 25 ACTIVITE HYPOCHOLESTEROLEMIANTE DE L'ACIDE 5-CHLOROINDOLE-2- CARBOXYLIQUE CHEZ DES RATS ADULTES On a laissé à dix rats adultes, de race Sprague-Dawley et pesant à peu près 300 g, libre accès à un régime contenant 0,125% d'acide 5-chloroindole-2-carboxylique pendant 11 jours. On a pré-30 levé des échantillons sanguins par ponction cardiaque et on a analysé le taux de cholestérol du plasma à l'AutoAnalyseur Technicon. Les résultats sont indiqués dans le Tableau II 69 06461 7 2003518 TABLEAU II ACTIVITE HYPOCHOLESTEROLEMIANTE DE L'ACIDE 5yCHL0R0IND0LE-2-CARBOXYLIOUE AU BOUT DE 11 JOURS CHEZ DES RATS ADULTES1 Dose quotidienne Taux de cholestérol du plasma % administré dans Consommée mg °/ % de le régime en mg/kg^ réduction 0,125 53 51,6 + 3,1 28,5% Témoin 0 72,2 + 5,2 0 10 1 Dix rats par groupe 2 Déterminée en mesurant la consommation alimentaire 15 3 Moyenne + erreur étalonnée sur la moyenne. EXEMPLE 3 ACTIVITE HYPOCHOLESTEROLEMIANTE D'AUTRES ACIDES ET ESTERS INDOLE- 2-CARBOXYLIQUES De la manière décrite à l'Exemple 1, on a aussi constaté 20 qu'un certain nombre d'acides et d'esters indole-2-carboxyliques abaissaient les taux de cholestérol du sérum chez les rats. Les résultats sont donnés dans le Tableau III. TABLEAU III 25 ACTIVITE HYPOCHOLESTEROLEMIANTE D'ACIDES ET D'ESTERS INDOLE-2-CARBOXYLIQUES CHEZ DES RATS NON ADULTES1 Composé Dose quotidienne administrée en % dans le régime % de réduction du cholestérol du plasma 30 acide 5-bromoindole-2-carboxylique 5-bromoindole-2-carboxylate d1éthy1e 0,250% 0,250% 26% 21% 35 1 Six rats par groupe EXEMPLE 4 Une composition représentative pour capsules de gélatine dure est la suivante : m • • /• . 4 69 06461 8 2003518 Par Capsule (a) Acide 5-chioroindole-2-carboxylique 200 mg (b) Talc 35 mg On prépare la formulation en faisant passer les poudres sèches 5 de (a) et (b) à travers un tamis à fines mailles et en mélangeant bien. On bourre ensuite la poudre dans des capsules de gélatine dure avec une charge nette de 235 mg par capsule. EXEMPLE 5 Une composition représentative pour comprimés est la suivante : 10 Par Comprimé (a) Acide 5-chloroindole-2-carboxylique 100 mg (b) Amidon de blé 15 mg (c) Lactose 33,5 mg (d) Stéarate de magnésium 1,5 mg 15 Préparation : On sèche une granulation obtenue en mélangeant du lactose à de l'amidon et à de la pâte d'amidon granulée, on la tamise et on la mélange à l'ingrédient actif et au stérate de magnésium. On comprime le mélange pour former des comprimés pesant 150 mg chacun. 20 EXEMPLE 6 Une composition représentative pour pilules est la suivante : Par Pilule (a) 5-bromoindole-2-carboxylate d'éthyle ÎOO mg (b) Amidon de maïs 90 mg 25 (c) Glucose liquide 10 mg On prépare les pilules en mélangeant l'ingrédient actif et l'amidon puis en ajoutant le glucose liquide en pétrissant soigneusement pour former une masse plastique. On découpe ensuite les pilules et on les forme à partir de la masse plastique. 30 EXEMPLE 7 A un mélange de 40 parties d'acide 5-bromoindole-2-carboxylique et de 33,7 parties de paraffine liquide, on ajoute 3 parties de gomme acacia et 1,5 partie de gomme adragante. Au mélange soigneusement trituré on ajoute lentement et en agitant une solution de 35 0,1 partie d'un condensât d'alcool cétylique et de polyoxyéthylène, 40 parties de sucre de canne, 0,03 partie de p-hydroxybenzoate de propyle, 0,3 partie de p-hydroxybenzoate de méthyle et 0,002 partie d'une dènrée alimentaire comestiblé dans 110 parties d'eau. Après incorporation d'un agent parfumant approprié, on homogénéise 40 le mélange en le faisant passer à travers un homogénéiseur 69 06461 9 2003518 conventionnel, et on obtient ainsi une émulsion convenant à l'ad-minstration par voie buccale. EXEMPLE 8 On mélange intimement 25 parties de glycérophosphate de sodium, 5 25 parties de glycérophosphate de calcium et 50 parties de sel de calcium d'acide 5-chloroindole-2-carbo:xylique. on ajoute progressivement le mélange à 900 parties de caséine soluble dans un mélangeur conventionnel et on continue le mélange jusqu'à homogénéisation. On obtient ainsi un supplément diététique convenant à l'ad-10 mnistration par voie buccale. 69 06461 10 2003518 REVENDICATIONS 1. Une composition pharmaceutique ayant une action de réduction du taux de cholestérol et contenant, sous forme de dose unitaire, d'environ 0,1 à 1 gramme d'un dérivé d'indole de formule ; dans laquelle X est un halogène et R est l'hydrogène ou un radical alcoyle inférieur; ou,quand R est l'hydrogène, les sels pharmaceu-tiquement acceptables desdits dérivés d'indole avec des bases orga-15 niques ou minérales; et une quantité appréciable d'un excipient pharmaceutique. 2. Une composition selon la Revendication 1, dans laquelle X est le chlore et R est l'hydrogène. 3. Une composition selon la Revendication 1, dans laquelle le 20 dérivé d'indole est l'acide 5-chloroindole-2-carboxylique. 4. Une composition selonla Revendication 1, dans laquelle le dérivé d'indole est l'acide 5-bromoindole-2-carboxylique. 5. Une composition selon n'importe laquelle des Revendications précédentes, dans laquelle la forme de dose est une capsule. 25 6. Une composition selon n'importe laquelle des Revendications 1 à 4, dans laquelle la dose est un comprimé. 7. Une composition selon n'importe laquelle des Revendications précédentes, dans laquelle les doses unitaires sont telles qu'elles donnent une dose quotidienne d'environ 3 à 250 mg par kg de poids 30 corporel, et de préférence d'environ 3 à 50 mg par kg de poids corporel. 5 10 H