FR 2011565 A1 19700306 FR 6920922 A 19690623 69 20922 2011565 La présente invention a trait à des dérivés de phénazine de la formule générale dans laquelle R est un groupe alcoyle inférieur, de préférence 5 méthyle, éthyle ou propyle, et à un procédé pour leur préparation. Le composé préféré est un complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazinol-5,10-dioxyde, c'est-à-dire un composé de la formule I, dans laquelle R est un groupe méthyle. 10 Le procédé selon l'invention pour la préparation des nouveaux composés de la formule I est caractérisé en ce qu'on traite une solution d'un 6-alcoxy inférieur-l-phénazinol-5,10-dioxyde avec une solution d'un sel cuivrique. Le complexe cuivrique .peut être isolé sous forme de cristaux 15 par précipitation à partir des liqueurs-mères. Pour choisir un solvant approprié pour les réactifs, on détermine les solubilités relatives, ce qui peut être réalisé facilement par les spécialistes. Comme solvant, on préfère utiliser- un solvant dans lequel le 6-alcoxy inférieur-l-phénazinol-5,10-dioxyde et le sel cuivrique sont 20 plus solubles que le produit réactionnel complexe formé. Comme solvants pouvant être employé de manière appropriée, on peut citer des solvants organiques inertes, tei que 1racétonitrile, le diméthyl-formamide, le dioxane etc. Tout sel cuivrique peut être employé comme substance de départ. Cependant, étant donné que dans la formation du 25 complexe cuivrique de la formule I il se forme aussi l'acide correspondant au radical anionique des sels cuivriques et étant donné que le complexe cuivrique est moins stable dans des conditions fortement acides, on préfère utiliser un sel cuivrique d'un acide faible. 69 20922 2011565 Comme séL cuivrique .approprié on peut utiliser un sel cuivrique d'un des acides faibles, par exemple d'un acide ayant un pKa d'environ 4,2 ou supérieur. Comme acides appropriés on peut citer les acides organiques, tels que les acides alcanoïque inférieurs, par exemple 5 l'acide acétique, l'acide propionique etc, l'acide benzoïque etc. On peut aussi employer des sels cuivriques d'acidesminéraux tels que, par exemple, le sulfate cuivrique. lorsqu'on emploie un sel d'acide minéral, on préfère utiliser un système de solvant tamponné de manière à éviter des conditions trop acides. On peut facilement pré-10 parer le complexe cuivrique de la formule I en combinant simplement une solution saturée du 6-alcoxy inférieur-l-phénazinol-5,10-dioxyde de départ dans un solvant approprié avec une solution saturée d'un sel cuivrique dans le même solvant à la température ambiante- et en séparant le complexe cuivrique qui précipite. On peut employer des 15 températures supérieures à la température ambiante de manière à faciliter la dissolution et à réduire ainsi la quantité de solvant nécessaire . On peut aussi facilité la précipitation du complexe par « refroidissement. La séparation du complexe cristallisé précipité est effectuée grâce aux techniques habituelles pour -1'élimination de 20 solvants, par exemple par filtration, par déplacement du solvant suivi de filtration etc. Les 6-alcoxy inférieur -1-phénazino1-5,10-dioxyde de départ employés dans la préparation des complexes de cuivre de cette invention sont des composés connus ou des analogues de composés connus qu'on 25 peut préparer facilement en alcoylant sélectivement le composé connu dénominé 1,6-phénazinol-5510-dioxyde (iodinine). On peut facilement effectuer 11alcoylation sélective en traitant le 1,6-phénazinediol-5,10-dioxyde avec un agent alcoylant, tel que le sulfate de dial-coyle inférieur en présence d'un alcali aqueux tel que l'hydroxyde 30 de sodium. Dans un mode d'exécution préféré, on réalise ce procédé en préparant d'abor'd le sel de sodium du 1,6-phénazinediol-5,10-dioxyde et en traitant ensuite avec un agent alcoylant dans un solvant non aqueux. On a trouvé que les nouveaux composés cuivriques de la formule I 35 présentent un large domaine d'activité anti-microbienne. En particuliers le complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazinol-5,10-dioxyde s'est montré très actif envers une grande variété de bactéries de G-ram positives et négative» telle que 69 20922 2011565 Streptococeus pyogenes, Streptococcus a^ala.ctiae, Diplococcus pneumcniae, Staphyloeoccus aureus, Escherlchia coll., Klebsiella pneumonlae, Proteus vulgaris, Pseudc-monas aeruginosa, Salmonella typhosa, Salmonella schottmuelleri , Pasteure3,3 a. mu3tgcida, 5 Moraxella. bovis, Erysipelothrix indis j osa , Kyocba j" eriura tubcrculo-sis et Mycoplasma galliaepticuir.. Ils sont aussi actifs envers les champignons microscopiques ot 3 os 2':vure.7 te-le que Car.dida albi ,'ar.s, Trichophyton mentagrer-hytes, Eicro:.-t?cru.r. car.is, Kicrospcrum audeuini, Ustilago ceae, Fusarj-an oxysporum, 2ctryJ; g paeor.i-a'--, As ver (ri 13 us 10 flavus et Aspergillus niger; envers les protozoaires tels que Trichomonas vaginalis et Trichomonas foetus; et envers les helminthes, tels que Syphacia obvelata et Ascaris suum. les nouveaux composés cuivriques de cette invention sont aussi actifs envers- des agents phytopathogènes et peuvent être employés comme fongicides 15 des feuilles ou comme fongicides du sol. Ces composés ont, par exemple, présentés une forte activité envers Phytophthora infestans, l'organisme actif au stade avancé de la flétrissure généralisée des tomates et envers Xanthomonas vesicatoria, l'agent actif de la septoriose de la tomate et envers Pirlcularia oryzae, l'agent pa-20 thogène actif dans la brunissure du riz. Les nouveaux composés de cette invention sont particulièrement utiles dans le traitement des maladies des plantes ou des animaux d'origine microbienne, étant donné leur faible toxicité vis-à-vis des mammiphères et leur phytotoxicité infime. Lorsqu'on emploie les 25 nouveaux composés de cette invention pour le traitement d'infections microbiennes, par exemple bactérienne^ helminthiqueset/ou protozoaires, tels que des infestions ectoparasitiques ou infestations , on les utilise commodément en combinaison avec des supports appropriés de manière à pouvoir les utiliser comme agents chimiothérapeutiques. 30 dans les maladies des mammifères. Cn les met sous forme de formulations en les dispersant uniformément dans un support chimiquement compatible avec le composé choisi, n'inhibant pas l'activité de l'ingrédient actif et n'étant ras cfei^ureux- peror les tissus vivants dans les conditions de l'utilisation. Lorsaue les composés se trou-35 vent dans des compositions appropriées à l'administration topique, les nouveaux composes de la formule I sent employés de préférence «-r. de:: j4 c'ï or.t; : environ 0,1 et C, t" • n reids .de la •v-mpeai- ■l ; ; r. H .. r BAD ORIGINAL 4 69 20922 2011565 onguents, des suspensions, des suppositoires etc. Lorsqu'on emploie les composés de l'invention sous les formes appropriées à l'administration topique, on peut utiliser diverses formulations: par exemple des formulations solides comprenant des poudres finement divisées 5 ou des substances granulaires; des formulations liquides comprenant des suspensions, des concentrats, des "bouillies, des teintures, des aérosols etc, selon le mode d'administration préconisé et le milieu de formulation désiré. Ils peuvent être employés comme crème, gel, vaseline, onguent, pommade, etc. Lorsqu'on utilise des formulations 10 dans lesquelles les composés de l'invention présentent une solubilité partielle, par exemple les formulations' contenant du propylène-glycol, le rapport molaire de la myxine et du cuivre change dans le complexe dissous, étant donné qu'une partie des substances présentes par exemple le solvant, peut jouer le rôle d'agent liant. Cette in-15 vention a trait à de telles compositions. Un autre aspect de l'invention a trait à l'utilisation des nouveaux complexes cuivriques pour une variété d'applications anti-microbiennes industrielles. Ainsi, les propriétés chimiques, physiques et biologiques de ces complexes les rendent appropriés aux 20 usages suivants: traitement d'étoffes contre le mildiou, par exemple des textiles, des toiles et d'autres substances tissées ou non tissées; comme fongicides dans les couleurs; comme adjuvants de carburant pour empêcher le développement microbien; comme agents préservatifs d'habit et de chaussure; comme antiseptiques topiques; comme 25 agents désinfectants; comme liquides à pulvériser sur les plantes et sur les arbres, comme agents .anti-mycotiques pour les savons; comme agents actifs contre le mildiou dans les plastiques, le carton, les planches de fibre, le papier etc; comme agents antiglaire dans les liqueurs de pulpe etc; comme préservatifs d'aliment; comme adjuvants 30 pour les savons et les détergents etc; comme adjuvants dans les cosmétiques, les shampooings, les agents désodorants, l'eau dentifrice etc. Le terme "activité anti-microbienne" tel qu'il est utilisé ici, désigne toutes les activités mentionnées ci-dessus. 35 Selon un aspect des plus particulier^ les complexes cuivriques de cette invention, en particulier le 6-méthoxy-l-phénazino1-5,10-dioxyde, ont montré une activité forte à la fois in vitro et in vivo contre les agents pathogènes, en particulier contre les bactéries et BAD ORIGINAL 69 20922 2011565 les levures qui sont les agents étiologiques de la mammite bovine. Les agents anti-mammites connus ne sont pas entièrement satisfaisants, leur efficacité étant limitée vu que leur activité antibactérienne s'étend à un domaine très restreint et qu'iisprovoquent 5 une irritation. Ainsi, les composés de cette invention, étant donné leur grand spectre d'activité anti-microbienne et leurs propriétés non irritantes sont particulièrement efficaces comme agents anti-mammites. On a trouvé que les composés de l'invention, en particulier le complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazinol-5,10-dioxyde, 10 lorsqu'il est appliqué au pis des ruminants, en particulier des vaches, n'ont pas des propriétés irritantes et sont des agents anti-mammite puissants. Lorsqu'ils sont utilisés comme agents anti-mammite, les composés de la formule I peuvent être appliqués directement au pis de l'animal par administration topique, par 15 exemple par insertion ou par infusion dans le pis. Ainsi, dans un mode d'exécution plus spécifique, cette invention comprend l'utilisation d'un composé de la formule I comme agent anti-mammite ainsi que des compositions comprenant un composé de la formule I avec des supports appropriés à l'administration topique ou 20 à l'administration par le pis. Pour l'utilisation comme agents anti-mammites, les composés de la formule I sont employés efficacement en des quantités entre environ 5 *sg et environ 50 mg par dose, laquelle est administrée deux fois par jour pendant environ 1 à 2 jours ou jusqu'à obtention d'un effet thérapeutique, lequel peut 25 déjà se faire sentir après une seule administration. Un domaine de dosage préféré se situe entre environ 5 et 40 mg par dose administrée avec un support approprié, les doses étant de 20 ml. La dose optimale est une dose simple contenant 20 mg de substance active. Les préparations pour infusion dans le pis contiennent habituel-30 lement des supports pouvant être dispersés dans l'huile ou dans l'eau. Les véhicules contiennent des ingrédients inertes, par exemple des agents tensio-aet-if3, antioxydants etc» ainsi que des supports végétaux aqueux eu huileux. Comme ingrédients typiques pharmaeeuti-quement acceptables pour l'utilisation dans les oospesitions utili-35 sées pour l'infusion dans le p±3, on peut citer le citrate de sodium, l'acide citrique, le silicate de .magnésium aluminium,- la carboxy-méthyl-cellulose, le monooléate de pùlyoryéthylene (20) sortitan, le sorbitol, là glycérine-3 la cellulose mierocristallisée, le BAD ORIGINAL b 69 20922 2011565 propylèneglycol, l'alcool benzylique, le monostéarate de polyoxy-éthylène (20) sodium, l'hydroxyanisole butylé, l'hydroxytoluène butylé, la lécithine, de la silice finement divisée, de l'huile de ricin hydrogéné^ du méthyl parabène, du propyl parabène, le chloro-5 butanol, le monostéarate d'aluminium, le monostéarate de sorbitan, la 1-hydroxy stéarine modifiée, le monostéarate de glycérol, le tri-stéarate de polyoxyéth.ylène-sorbitol, le dichlorofluorométhane, le tétrafluorure de carbone et le diméthyl-polysiloxane. Des tests in vivo pratiqués sur des souris infectées avec des 10 cultures de mammites ont montré l'efficacité anti-mammite d'agents anti-mammite connus et les résultats de tels tests ici vivo illustrent bien l'activité anti-mammite-chez les animaux susceptibles d'infections mammitiques, par exemple chez les vaches laitières, le test comprend la détermination de l'activité en pré-15 sence de lait pour garantir l'efficacité en présence de liquides organiques. La méthode du test in vivo employée pour la. détermination de l'activité anti-mammite des composés de la formule I est la suivant e : Substances et méthodes 20 Milieu On prépare du lait stérile contenant moins de 1 bactérie/5 ml. Cultures Les souches de bactéries utilisées pour contaminer le lait sont des cultures de mamraite bovine provenant des champs et sont mainte-25 nues sur du tryptose agar, On utilise des cultures de 24 heures sur le tryptose agar pour contaminer le lait. Les concentrations finales des organismes dans le lait sont les suivantes: a) Streptococcus agalactiae 5 x 10 organismes par ml. Q b) Staphylococcus aureus: 2 x 10 organismes par ml. . Q' 30 c) Sscherichia coli: 2 x 10 organismes par ml. O d) Pseudomonas-aeruginosa; 5 x 10 organismes par ml. L'injection sous-cutanée dans des souris de 18 à 20 g de 0,5 ml de lait contaminé avec les souches susmentionnées provoque des lésions. Les souris devant être infectées avec Streptococcus 35 agalactiae sont préalablement traitées avec de l'acétonide de triamcinolone de manière à faire apparaître des lésions bien définies. ' 7 69 20922 2011565 Mode d'exécution du test 50 mg de complexe cuivrique du 6-métlioxy-l-phénazinol-5,10-dioxyde sont moulus dans 10 ml d'eau distillée stérile (pH entre 7 et 7,2); on prépare d'autres dilutions contenant 1, 0,2, 0,04 et-5 0,008 mg de composé par ml. dans de l'eau distillée stérile. 0,5 ml de chaque dilution de composé est ajouté à un tube contenant 4,5 ml de lait contaminé (l tube/dilution) de sorte que les concentrations finales du composé dans le lait sont de 500, 100, 20, 4 et 0,8 mi-crogrammes par ml. Après agitation vigoureuse jusqu'à répartition 10 uniforme du composé dans le lait, 0,5 ml de chaque combinaison (lait contaminé plus composé) est injecté par voie sous-cutanée dans 4 souris blanches de 18 à 20 g. On utilise dès souris normales pour les injections au Staphylococcus, Coli et Pseudomonas, alors qu'ai utilise des souris préalablement traitées (on a ajouté par voie 15 sous-cutanée 24 heures plus tôt 1 mg d'acétonide de triamcinolone) pour l'infection au Streptococcus. Chaque groupe de souris est maintenu dans une cage séparée et reçoit de la nourriture normale en boulette et de l'eau à discrétion, les animaux sont observés 2 fois par jour pendant 2 jours après injection et tués le troisième jour. 20 On enregistre les symptômes et les décès. On pratique l'autopsie sur toutes les souris mortes durant le test et sur tous les sur-vivants tués le troisième jour du test, l'activité du composé envers les quatre souches de bactériesest évalué comme suit: Streptococcus: absence de pus et de nécrose à l'emplacement de l'infection; 25 Staphylococcus: absence de nécrosis à l'emplacement de l'injection et absence de symptômes et de décès; Coli: absence d'infiltration fibreuse importante à l'emplacement de l'injection; Pseudomonas: absence d'oedème gélatineux et de nécrose à l'emplacement de l'injection, absence de symptômes et de décès. 30 Témoins Dans chaque test on effectue des contrôles avec des témoins: 1, stérilité du lait, de la solution saline et de l'eau distillée utilisée dans le test; 2. nombre de bactéries dans le lait contaminé; 35 3- pureté des souches utilisées pour contaminer le lait; 4. titration de l'inoculum infectant les souris; 5. absence d'effet pathogène du lait non-contaminé. 69 20922 8 2011565 Evaluation des résultats Lorsqu'on utilise les méthodes décrites, on obtient les critères et paramètres suivants: 1. protection des animaux contre les lésions locales provoquées 5 par inoculation de lait contaminé avec Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus, Escherichia coli et Pseudomonas aeruginosa; 2. protection contre le décès et les symptômes cliniques provoqués par Staphylococcus et Pseudomonas. 10 Résultats Lorsqu'on utilise ce mode d'exécution, l'activité des formulations anti-mammites est mise en évidence pour quatre souches de bactéries. Nous donnons ci-après les résultats du test d'un composé choisi à titre d'exemple et utilesdans les compositions de cette 15 invention. Les tableaux I et II font apparaître l'efficacité antibactérienne in vitro et in vivo. Tableau I Activité in vitro du 6-alcoxy-1-phényzino1-5,10-dioxyde ( complexes cuivriç[ue^ 20 25 CONCENTRATION INHIBITRICE MINIMALE (mcg/ml) 6-jnéthoxy-l-phénazinol 5,10-dioxyde 6-éthoxy-l-phénazinol 5,10-dioxyde Organisme complexe cuivrique complexe cuivrique Streptococcus agalactiae Staphylococcus aureus Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa moins de 0,16 0,16 • 2,4 12 moins de 4 moins de 4' 20 100 69 20922 9 2011565 Tableau II Activité antibactérienne in vivo DE^q (dose efficace) mcg/ml _ _ , _ _ 5 Composé . agalactiae aureus coli aeruginosa 6-méthoxy-l-phénazino1-5,10-dioxyde, complexe cuivrique 0,8 60 12 60 •En plus de leur utilité comme agents anti-mammite, .-les compo-10 sés de la formule I sont utiles dans le traitement d'un grand nombre d'infections animales et végétales. On a trouvé que les composés de la formule I sont particulièrement utiles dans le traitement d'infections animales localisées provoquées par un grand nombre d'organismes. Les nouveaux complexes cuivriques de cette" invention 15 peuvent être employés efficacement dans des thérapies telles que le traitement d'infections bactériennes, de levures et/du mycotiques chez les hommes et chez les animaux lorsque la peau, les cheveux, les ongles et/ou d'autres surfaces du corps sont infectées. Ainsi, selon un autre mode d'exécution, cette invention comprend 20 l'utilisation de composés de la formule I et des nouvelles compositions contenant ces composés pour le traitement d'infections de la peau, des oreilles, des yeux et des organes génitaux des animaux. L'activité antibactérienne de ces composés contre des infections de la peau provoquées par Staphylococcus aureus et Pseudomonas 25 aeruginosa a été mise en évidence par les tests in vivo suivants. Activité antibactérienne Scarification de la peau de lapin suivi de l'infection avec Staphylococcus aureus et Pseudomonas aeruginosa. Deux lapins/infection; traitement: 4 jours, traitement complet: 7 jours; l'effica-30 cité thérapeutique est mise en évidence d'après des observations cliniques enregistrées après 1, 2 et 3 jours de traitement et 3 jours après la fin du traitement et par comparaison des surfaces traitées avec les surfaces non traitées et avec les surfaces traitées avec du placébo. T -A.VJ 69 20922 2011565 EFFICACITE THERAPEUTIQUE pour cent S. P. Composé aureus aeruginosa 5 6-méthoxy-l-phénazinol- 5,10-dioxyde, complexe cuivrique 0,5 pour cent 70 48 0,1 pour cent 57 78 L'activité contre les levures est démontrée par le test suivant 10 sur des animaux. Des lapins blancs de Nouvelle-Zélande traités préalablement avec de l'acétonide de triamcinolone sont infectés par scarification avec une souche de Candida albicans et traités pendant deux cycles de 5 jours avec des formulations expérimentales. On 15 évalue l'efficacité thérapeutique en comptant les lésions à des intervalles d'une semaine et en comparant les surfaces- de la peau • traitéesavec les surfaces non traitées et les surfaces traitées avec du placébo. '11 69 20922 2011565 EFFICACITE THERAPEUTIQUE POUR CENT Pour 1 semaine 2 semaines 1 semaine Composé cent traitement traitement après 6-méthoxy-l-ph.énazinol— 5 5,10-dioxyde, complexe cuivrique - gel 0,5 73 58 100 0,1 47 34 45 0,02 60 92 89 Placébo - gel -40 0 11 10 6-méthoxy-l-phénazinol— 5,10-dioxyde, complexe cuivrique - crème 0,1 50 44 33 Placébo - crème - 33 22 12 6-méthoxy-l-phénazinol— 15 5,10-dioxyde, complexe cuivrique dans la vaseline 0,5 74 89 100 Placébo - vaseline - 40 11 33 l'activité anti-fongique a été mise en évidence chez les ani-20 maux par le test suivant. Des cobayes albincs traités préalablement avec de l'acétonide de triamcinolone sont infectés par plusieurs blessures cutanées avec une suspension de spore de Trichophyton mentagrophytes et traités durant deux périodes de 5 jours avec les formulations expérimentées. 25 On évalue l'efficacité thérapeutique en comptant le nombre de lésions à des intervalles d'une semaine et en comparant les surfaces de peau traitées avec les surfaces non traitées et les surfaces traitées avec du placébo. 69 20922 12 2011565 ACTIVITE ANTI-TRICHOPHYTON MENTAGROPHYTES Composé Efficacité thérapeutique pour cent 1 semaine 2 semaines Pour 2 semaines après après cent traitement traitement traitement 5 6-méthoxy-l-phénazinol— 5,10-dioxyde, complexe cuivrique - gel 0,5 96 0,1 75 0,05 65 99,5 77 65 98,5 71 61 10 6-méthoxy-l-phénazinol— 5,10-dioxyd e, complexe cuivrique - crème 0,5 0,1 87 42 86 82 94 81 Placébo - crème 23 32 15 6-méthoxy-l-phénazinol— 5,10-dioxyde, complexe cuivrique dans la vaseline 0,5 Placébo - vaseline - 78 -11 89 -20 79 -30 20 l'activité fongicide sur les feuilles des nouveaux composés de l'invention a été mise en évidence à l'aide de tests standards de l'activité fongicide sur les feuilles. A titre d'exemples, nous donnons les résultats de tels tests avec le complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazino 1-5,10-dioxyde dans le tableau suivant. 69 20922 J-S 2011565 Concentration Agent phytopathogène Composé (PPM) pourcent de témoins: endommagemert des plantes* 6-méthoxy-l- 5 phénazinol-5,10- dioxyde, complexe 100 Phytophthora infestans cuivrique 74:0 Xanthomonas vesicatoria 82:0 10 • Piricularia oryzae 66:0 *0 indique : pas d1 effet visible l'activité contre les protozoaires a été mise en évidence par les tests suivants effectués sur des animaux infectés avec Trichomonas 15 vaginal!s : Des groupes de 7 à 8 souris albinos pesant 18 à 20 grammes sont infectés par voie souscutanée sur la surface abdominale avec environ 500'000 cellules, les animaux sont traités par infiltration à l'emplacement de l'infection de composés de la formule I, les doses 20 étant de 2 mcg à 1000 mcg par ml de solution, le jour même de l'infection et le jour suivant. Les souris sont examinées le troisième jour après l'infection pour mettre en évidence des lésions à l'emplacement de l'infection, le nombre d'animaux présentant des lésions et le nombre d'animaux sans lésions sont déterminés pour 25 chaque dose testée. la DCj-q (dose curative) est calculée à l'aide de la méthode de Reed et Muench [American Journal Hygiène, Vol. 27, page 493 (1938)]. 69 20922 -i-4 2011565 Dose Pas de Composé mcg./ml. s. c. lésion 6-méthoxy-l- 1000 35 phénazinol 5,10- 400 22 5 dioxyde, complexe 200 19 cuivrique 100 . 11 40 11 20 11 10 7 10 "4 3 2 2 Cumulatif Pas de lésion lésion lésion 5 121 5 10 86 15 12 64 27 5 45 32 5 34 37 5 23 42 1 12 43 5 5 48 6 2 54 la DC[-q est de 48 mcg./ml. (s.c.) d'après les résultats du test. 69 20922 2011565 Exemple 1 Préparation du complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazinol-5.10-dioxyde A une solution de 6 g de 6-méthoxy-l-phénazinol-5,10-dioxyde dans 5 3 litres d'acétonitrile on ajoute avec agitation une solution de 75° de 3 g d'acétate cuivrique monohydraté dans 900 ml d'acétonitrile. On laisse le mélange refroidir et on le maintient à la température ambiante pendant 3 heures. le complexe cuivrique précipité est recueilli par filtration et lavé vigoureusement sur le filtrat, 10 d'abord avec 1'acétonitrile, puis avec l'éther. Ainsi, on obtient 6,1 g du complexe sous forme de cristaux fins vert sombre, les bandes d'absorption dans le spectre infra-rouge se trouvent à: 1365 cm (dans Fluorolube); 1059, 776, 578 cm-"'" (dans Nujol); les maximas d'absorption du spectre ultra-violet dans le suifoxyde de 15 diméthyle se situent à: 287 mu, (£.= 68 500): 300 mu, (£.= 63 200) 356 mu, (£.= 10 000) 408 mm (£ = 10 400): 20 610 m^i, '(£.= 9 500). Analyse Calculé pour C^H-, „0oCu: * 26 18 4 8 C, 54,03; H, 3,14; H, 9,69; Cu, 10,99 trouvé: C, 53,71; H, 3,31; N, 9,66; Cu, 10,92 25 Exemple 2 Conformément au mode d'exécution décrit das l'exemple 1 ci-dessus, on prépare aussi le 6-éthoxy-l-phénazinol-5,10-dioxyde (complexe cuivrique) à partir du 6-éthoxy-l-phénazinol-5,10-dioxyde. Analyse 30 Calculé pour C^gH^If^OgCu: N, 9,25 trouvé: N, 9,12 Exemple 3 Qi prépare une suspension.de 6 ml en mélangeant les composés suivants: 16 2011565 69 20922 complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazinol 5,10-dioxyde 10 mg éthylènediamine 57 mg monoglycérides distillés ' 60 mg polyéthylène glycol 400 q.s. 5 Infuser 6 ml dans le trayon de chaque quart infecté; répéter au besoin après 12 heures et/ou après 24 heures. Exemple 4 On prépare des suspensions de 20 mL en utilisant les formulations suivantes : 10 a) complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazinol- 5,10-dioxyde 20 mg carboxyméthyl-cellulose 2 pour cent méthylparabène • 0,1 pour cent propylparabène 0,025 pour cent 15 eau distillée q.s. 20 b) complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazinol— 5,10-dioxyde carboxyméthyl-cellulose méthylparabène propylparabène monooléate de polyoxyéthylène (20) sorbitan eau distillée 30 mg 2 pour cent 0,1 pour cent 0,025 pour cent 2 pour cent q.s. c) complexe cuivrique du^6-méthoxy-l-phénazinol-5,10-dioxyde 25 carboxyméthyl-cellulose chlorobutanol eau distillée 40 mg 2 pour cent 0,5 pour- cent q.s. d) complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazinol-5,10-dioxyde 30 carboxyméthyl-cellulose chlorobutanol monooléate de polyoxyéthylène (20) sorbitan eau distillée 10 mg 2 pour cent 0,5 pour cent 2 pour cent q.s. 69 20922 2011565 Des vaches laitières sont traitées avec 20 jiiI de suspension dans chaque quart infecté immédiatement après la traite. On laisse la suspension dans le quart jusqu'à la;prochaine traite. Le traitement est répété au besoin après 24 heures. 5 Exemple 5 Complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazinol—5«10-dioxyde; préparation anti-mammite à 0,1 pour cent Grammes/litre complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazinol 10 5,10-dioxyde 1,00 monooléate de polyoxyéthylène (20) sorbitan 60,00 monooléate de sorbitan 40,00 alcool benzylique 10,00' acétate de sodium 2,00 15 hydroxypropyl-cellulose non-ionique 19,0 eau distillée q.s. 1 litre Mod e d'ex écuti on: Le complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazinol— 5,10-dioxyde et l'alcool benzylique sont triturés dans un récipient d'acier 20 inoxydable de grandeur appropriée de manière à former une base. Le monooléate de ptilyoxyéthylèœ (20) sorbitan,lemonoofeie^de sxtÊtan et l'acétate de sodium sont ajoutés doucement dans l'ordre de leur énumération et le tout est constamment agité. L'hydroxypropyl—cellulose non-ionique est dispersé dans 850 ml d'eau distillée à 50°, puis refroidi à 30°* 25 Cette substance est ensuite ajoutée aux ingrédients précédents et agitée jusqu'à homogénéité. La préparation est alors amenée au volume final avec de l'eau distillée. Exemple 6 Complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazinol— 5,10-dioxyde; crème 30 topique à 0,1 pour cent "Grammes par kilo Mg par gramme Partie I: alcool stéarylique 125,00 35 vaseline 100,00 Nipasol 0,50 69 20922 2011565 Grammes par kilo Mg par gramme polyoxyéthylène glycol ' 40,00 Le polyoxyéthylène glycol devra être d'une qualité telle qu'il 5 soit soluble dans l'eau et dans l'éthanol, insoluble dans l'huile de graine de coton et dans l'huile minérale, et laiteux dans le 'propylène-glycol. Grammes par kilo Mg par gramme Partie IÏ: 10 complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phénazinol- 5,10-dioxyde 1,00 éau distillée . 612,00 propylène-glycol 120,00 Ripagine 2,00 15 Mode d'exécution: 1. L'alcool stéarylique, la vaseline, le nipazol et le poly-oxyéthylène-glycol sont chauffés à 75° dans un récipient en acier inoxydable de taille appropriée. 2. L'eau distillée, le propylène glycol et la nipagine sont 20 chauffés à 75° dans un récipient en acier inoxydable de taille appropriée et bien agités. Le complexe cuivrique du 6-méthoxy-l-phéna-zinol-5,10-dioxyde est alors ajouté et bien agité. 3. La partie 2 est ajoutée doucement à la partie 1; on mélange doucement avec agitation continue. L'agitation est continuée à pe- 25 tite vitesse jusqu'à ce que la crème soit refroidie à 35°. La crème est empaquetée dans des récipients pour onguent en verre opalin. Les crèmes appropriées à l'application topique suivant le procédé de cette invention contiennent d'ordinaire entre environ 30 0,1 à environ 1 % en poids d'ingrédients actifs, de préférence entre environ 0,1 à environ 0,5 pour cent en poids. 19 69 20922 2011565 Revendications 1. Procédé pour la préparation de dérivés de phénazine de la formule générale dans laquelle R est un groupe alcoyle inférieur, 5 caractérisé en ce qu'on traite une solution d'un 6-alcoxy inférieur-l-phénazinol- 5j10-dioxyde avec une solution d'un sel cuivrique. 2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'une solution saturée du 6-alcoxy inférieur-l-phénazinol dans un solvant organique inerte est traitéeavec une solution saturée du sel cuivri- 10 que dans le même solvant organique inerte. 3. Procédé suivant l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'on emploie un sel cuivrique d'un acide ayant un pKa d'environ 4,2 ou supérieur. 15 ce que le produit résultant est séparé sous forme de cristaux. 5. Procédé suivant l'une des revendications 1-4, caractérisé en ce qu'on utilise comme composé de départ un 6-alcoxy inférieur-l-phénazinol-5,10-dioxyde dans lequel le groupe alcoxy inféieur représente m groupe méthyle, éthoxy ou propoxy. 20 6. Procédé suivant la revendication 5, caractérisé en ce qu'on utilise comme composé de départ le 6-éthoxy-l-phénazinol-5,10-dioxyde . 7. Procédé pour la fabrication de préparations ayant des propriétés anti-microbiennes, caractérisé en ce qu'un dérivé de 25 phénazine de la formule générale R-0 0 I 4. Procédé suivant l'une des revaxlications 1-3, caractérisé en 69 20922 20 2011565 R-0 0 0-R dans laquelle R est un groupe alcoyle inférieur, est mélangé, comme substance active, avec des supports solides ou liquides, inertes, non-t'oxiques, habituellement utilisés dans de 5 telles préparations. 8. Procédé suivant la revendication 7 pour la fabrication de préparations appropriées à la lutte contre la mammite du bétail, caractérisé en ce qu'une quantité efficace du dérivé de phénazine est mélangée avec un support pharmaceutiquement acceptable utilisé 10 dans les préparations anti-mammites. 9. Procédé suivant les revendications 7 et 8, caractérisé en ce qu'on utilise un dérivé de phénazine de la formule I dans lequel R est un groupe méthyle. 10. Compositions ayant des propriétés anti-microbiennes, conte-15 nant un dérivé de phénazine dê la formule générale R-0 20922 2011565 dans laquelle R est un groupe alcoyle inférieur, et un support. 11. Composition suivant la revendication 10 appropriée à la lutte contre la mammite du bétail contenant comme ingrédient actif une quantité efficace du dérivé de phénazine de même qu'un support pharmaceutiquement acceptable. 12. Composition suivant les revendications 10 et 11, caractérisée en ce qu'elle contient un dérivé de phénazine de la formule I dans laquelle R est un groupe méthyle. 13. Dérivés de phénazine de la formule générale dans laquelle R est un groupe alcoyle inférieur. 14. le composé suivant la revendication 13? caractérisé en ce que R est un groupe méthyle, éthyle ou propyle. 15. le composé suivant la revendication 13, caractérisé en ce que R est un groupe méthyle. 16. Le composé suivant' la revendication 15 sous forme cristalline. 17. A titre de nouveaux agents anti-microbiens, les composés suivant les revendications 13-16. 18. Utilisation des composés suivant les revendications 13-16 comme agents anti-microbiens.