Brevet FR3164385A1 — publié le 20260116

Nano-composition à base de l ’ EG CG à puissants effets antioxydant et anti-photovieillissement, procédé de préparation et applications de celle-ci La présente invention propose une nano-composition à base de l’EGCG à puissants effets antioxydant et anti-photovieillissement, un procédé de préparation et des applications de celle-ci, la nano-composition à base de l’EGCG est préparée par encapsulation de la substance active fonctionnelle EGCG par auto-assemblage avec phospholipides fonctionnalisés en deux étapes, consistant à préparer d’abord un précurseur de la nano-composition pour encapsuler l’EGCG et puis effectuer un auto-assemblage sur le précurseur de la nano-composition avec les phospholipides pour une protection, obtenant ainsi la nano-composition à base de l’EGCG. La nano-composition à base d'EGCG présente une excellente stabilité, un rendement d’encapsulation élevé, des effets antioxydants, une libération prolongée et une bonne perméabilité cutanée. Elle offre aussi une réparation efficace des dommages à l'ADN et inhibe la carbonylation des protéines, ce qui améliore les effets antioxydants, anti-photovieillissement et éclaircissants dans les formulations dermiques, surpassant la solution aqueuse d'EGCG. Nano-composition à base de l’EGCG à puissants effets antioxydant et anti-photovieillissement, procédé de préparation et applications de celle-ci La présente invention appartient au domaine technique des matériaux nanoporteurs, et concerne plus particulièrement une nano-composition à base de l’EGCG à puissants effets antioxydant et anti-photovieillissement, ainsi qu'un procédé de préparation et ses applications. CONTEXTE TECHNIQUE Comme le plus grand organe de l'organisme humain, la peau est directement exposée à l’environnement extérieur, et lorsque la peau est exposée à des stimulations nocives telles que la pollution de l’air, l’oxydation et les rayons ultraviolets à long terme, les signes du vieillissement cutané se produisent souvent. Le vieillissement cutané se manifeste principalement par la sécheresse et le relâchement de la peau, les rides, la pigmentation et d’autres manifestations, Ainsi, « l’anti-âge » attire toujours l’attention des gens. Parmi celles-ci, le jaunissement de la peau est principalement causé par l’accumulation des protéines carbonylées dans la peau, ainsi, l’inhibition de la carbonylation des protéines permet d’améliorer efficacement le problème du jaunissement de la peau. Le gallate d’épigallocatéchine (EGCG) est un composé catéchique, qui est un composant le plus abondant des catéchines, représentant un pourcentage de 50 à 60%. L’EGCG a une structure stéréochimique spéciale et présente une activité antioxydante extrêmement puissante ainsi qu’une action d’élimination des radicaux libres actifs nettement supérieure à celle de la vitamine C et de la vitamine E, qui peut protéger les cellules et l’ADN des dommages, retardant ainsi le vieillissement de la peau. Cependant, lorsque l’EGCG est utilisé comme additif anti-âge dans les produits cosmétiques, il présente des inconvénients tels qu’une faible stabilité, une changement de couleur et une faible absorption transdermique et une faible disponibilité. Par exemple, les produits cosmétiques contenant l’EGCG présentent souvent le problème de changement de couleur, ce qui est dû au fait que la structure moléculaire de l’EGCG est riche en groupes hydroxyles phénoliques, qui sont faciles à oxyder dans des conditions photothermiques et causent la formation des quinones, et causent finalement la rougissementdes produits et l’affaiblissement de l’effet anti-âge. Deuxièmement, étant donné de sa bonne solubilité dans l’eau, l’EGCG présente une faible absorption transdermique et une faible disponibilité et ne peut pas pénétrer efficacement dans la couche kéralique de la peau, avec une pénétrabilité de seulement 0,44% (Drug Delivery, 2017, 24 : 61-74). Afin d’améliorer la stabilité et la pénétration percutanée de l’EGCG, dans l’art antérieur, on encapsule généralement l’EGCG. Chunhua Liu (Université agricole de Chine du Sud, 2020) a proposé une nanoparticule à base de l’EGCG préparée par encapsulation de l’EGCG en utilisant le caséinate de sodium et la gomme arabique comme matériaux de paroi du nanoporteur, et a étudié son application dans l’antioxydation dans le suc gastrique et le liquide intestinal, mais le rendement d’encapsulation de la nanoparticule à base de l’EGCG par cette technologie était faible, de seulement 62,8 %. Liu Hong (Université industrielle et commerciale du Zhejiang, 2015) a proposé un nano-éthosome à base de l’EGCG préparé par méthode ultrasonique pour renforcer l'effet anti-UV. Sun Xiang (Université Jiangnan, 2019) a proposé un liposome à base de l’EGCG préparé par injection d’éthanol. Les deux méthodes existantes ci-dessus utilisent toutes deux de l’éthanol absolu comme solvant, qui peut provoquer une irritation sur la peau lorsqu’il est appliqué sur la peau. De plus, la plupart des technologies existantes d’encapsulation de l’EGCG présentent souvent les problèmes tels qu’une faible efficacité de l’encapsulation et une forte irritation, de plus, la plupart des technologies existantes d’encapsulation de l’EGCG ne visent que les propriétés physiques et chimiques (telles que la taille des particules, le rendement d’encapsulation, etc.) des produits encapsulés et la recherche fondamentale sur le domaine anticancéreux, aucune étude sur l’application de produits encapsulés à base de l’EGCG dans l’amélioration du photovieillissement et le jaunissement de la peau n’a été rapportée. DIVULGATION DE L’INVENTION Pour remédier aux inconvénients ci-dessus dans l’art existant, un premier objet de la présente invention est de fournir un procédé de préparation d’une nano-composition à base de l’EGCG à puissants effets antioxydant et anti-photovieillissement. Un autre objet de la présente invention est de fournir une nano-composition à base de l’EGCG ayant de puissants effets antioxydants, anti-photovieillissement et inhibiteurs de la carbonylation des protéines, obtenue par le procédé de préparation ci-dessus. La présente invention fournit également des applications de la nano-composition à base de l’EGCG à puissants effets antioxydants, anti-photovieillissement et inhibiteurs de la carbonylation des protéines, obtenue par le procédé de préparation ci-dessus. Les objets de la présente invention sont attendus par une solution technique suivante : La nano-composition à base de l’EGCG selon la présente invention est préparée en encapsulant la substance active fonctionnelle EGCG par auto-assemblage de phospholipides fonctionnalisés en deux étapes, comprenant une première étape de préparation d’un précurseur de la nano-composition et une deuxième étape de préparation d’une nano-composition à double phospholipide. Un procédé de préparation d’une nano-composition à base de l’EGCG à puissants effets antioxydant et anti-photovieillissement comprend les étapes suivantes : (1) Préparation d’un précurseur de la nano-composition : ajouter un phospholipide et l’EGCG à un solvant organique et agiter uniformément pour obtenir une phase organique ; ajouter un polyol à l’eau et agiter uniformément pour obtenir une phase aqueuse ; ajouter goutte à goutte la phase organique à la phase aqueuse à vitesse constante, et une fois l'ajout terminé, agiter encore pour obtenir une solution mélangée ; éliminer le solvant organique de la solution mélangée ; et effectuer un traitement de séchage pour obtenir un précurseur de la nano-composition ; En exprimant en pourcentage massique, la teneur en phospholipide dans la solution mélangée est de 1% à 10%; (2) Préparation d’une nano-composition avec double phospholipide : Ajouter un phospholipide, un stabilisant de membrane rigide et un stabilisant de membrane souple au polyol, et agiter uniformément pour obtenir une phase alcoolique ; ajouter le précurseur de la nano-composition à l’eau, agiter et disperser jusqu’à obtenir une dispersion homogène pour obtenir une phase aqueuse ; ajouter goutte à goutte la phase aqueuse à la phase alcoolique à vitesse constante, et une fois l'ajout terminé, agiter encore pour obtenir une solution mélangée ; et effectuer un traitement de nanonisation sur la solution mélangé pour obtenir une nano-composition à base de l’EGCG, l’EGCG représentant un pourcentage massique de 0,6 % à 6,0 % de la nano-composition à base de l’EGCG ; En exprimant en pourcentage massique, la teneur en phospholipides dans la solution mélangée est de 0,1 % à 1,0 %, la teneur en stabilisant de membrane rigide est de 0,1 % à 0,3 % et la teneur en stabilisant de membrane souple est de 0,5 % à 2,0 % ; La structure moléculaire dudit stabilisant de membrane rigide comprend une unité de structure polycyclique ou une unité de structure de type cycle benzénique ; la structure moléculaire dudit stabilisant de membrane souple est une structure à chaîne linéaire ou un composé à chaîne linaire. De préférence, le stabilisant de membrane rigide comprend un ou plusieurs parmi le cholestérol, le phytostérol, le cholate de sodium, la vitamine D, le résorcinol, la phénylalanine et le phénylpropanol. De préférence, le stabilisant de membrane souple comprend un ou plusieurs parmi le triglycéride caprylique/caprique, le triglycéride d’acide caprylique/caprique/linoléique, le triglycéride caprylique/caprique/laurique, l’acide oléique, l’acide linoléique, l’octyldodécanol et l’oléate d’octyldodécyle. De préférence, l’EGCG représente un pourcentage massique de 1% à 5% de la nano-composition à base de l’EGCG. De préférence, en exprimant en pourcentage massique, à l’étape (1), la teneur en phospholipide dans la solution mélangée est de 3 % à 7 %, la teneur en EGCG est de 10 à 20 %, la teneur en polyol est de 1 à 10 %, la teneur en solvant organique est de 10 à 50 % et la teneur en eau est de 13 à 78 %. De préférence, en exprimant en pourcentage massique, à l’étape (2), la teneur en phospholipide dans la solution mélangée est de 0,1 % à 0,5 %, la teneur en stabilisant de membrane rigide est de 0,1 % à 0,2 %, la teneur en stabilisant de membrane souple est de 1 % à 2 %, la teneur en polyol est de 5 % à 50 %, la teneur en précurseur de la nano-composition est de 1,0 % à 10 % et la teneur en eau est de 37,3 % à 88,4 %. De préférence, le phospholipide à l’étape (1) est au moins un parmi la lécithine de soja, la lécithine de soja hydrogénée, la lécithine hydrolysée enzymatiquement, la dipalmitoylphosphatidylcholine, la palmitoylphosphatidylglycérol et la lécithine de jaune d’œuf. De préférence, le phospholipide à l’étape (2) est au moins un parmi la lécithine de soja, la lécithine de soja hydrogénée, la dipalmitoylphosphatidylcholine, la palmitoylphosphatidylglycérol et la lécithine de jaune d’œuf. De préférence, le solvant organique à l’étape (1) est un ou plusieurs parmi l’éthanol absolu, le méthanol, le dichlorométhane, le trichlorométhane, l’acétone, le tétrahydrofurane, le n-hexane, l’éther de pétrole et l’acétate d’éthyle. De préférence, le polyol à l’étape (1) est un alcool de sucre, qui est un ou plusieurs parmi le maltitol, le D-sorbitol, le xylitol, l’érythritol, le mannitol et le lactitol. De préférence, le polyol à l’étape (2) est au moins un parmi le glycérol, 1,2-propanediol, 1,3-propanediol, 1,2-butanediol, 1,2-hexanediol, l’éthoxydiéthylène glycol, le dipropylène glycol et le polyéthylène glycol (Mn = 400). De préférence, les conditions des deux premières agitations à l’étape (1) : la vitesse d’agitation est de 100 à 800 tr/min ; la température d’agitation est de 30 à 80°C ; la durée d’agitation est de 20 à 60 min ; et la vitesse d’ajout goutte à goutte est de 1 à 10 ml/min ; les conditions de la troisième agitation: la vitesse d’agitation est de 100 à 800 tr/min ; la température d’agitation est de 30 à 80°C ; la durée d’agitation est de 10 à 30 min ; le solvant organique est éliminé de la solution mélangée par évaporation rotative à une vitesse d’évaporation rotative de 100 à 350 tr/min ; la température d’évaporation rotative est de 30 à 80 °C ; et la durée d’évaporation rotative est de 1 à 3 h. Le mode de séchage peut être la lyophilisation, le séchage sous vide et le séchage à l’air, de préférence la lyophilisation ; la durée de séchage est de 24 à 72 h. De préférence, les conditions des deux premières agitations à l’étape (2) : la vitesse d’agitation est de 100 à 800 tr/min ; la température d’agitation est de 10 à 50°C ; la durée d’agitation est de 20 à 60 minutes ; et la vitesse d’ajout goutte à goutte est de 1 à 10 ml/min ; les conditions de la troisième agitation : la vitesse d’agitation est de 100 à 800 tr/min ; la température d’agitation est de 10 à 50°C ; et la durée d’agitation est de 10 à 30 minutes. De préférence, le traitement de nanonisation à l’étape (2) comprend une dispersion par cisaillement à grande vitesse et/ou une homogénéisation à microfluide ; la vitesse de rotation de la dispersion par cisaillement à grande vitesse est de 6000 à 12000 tr/min et la durée de dispersion par cisaillement est de 10 à 30 min ; une pression d’homogénéisation de l’homogénéisation à microfluide est de 50 à 120 MPa et un nombre de cycle d’homogénéisation est de 2 à 6. Le mode d’agitation aux étapes (1) et (2) est l’agitation mécanique ou l’agitation magnétique. Comparé avec les techniques existantes, la présente invention présente les avantages et effets bénéfiques suivants : (1) La présente invention adopte une encapsulation de la substance active fonctionnelle EGCG par auto-assemblage avec phospholipides fonctionnalisés en deux étapes, consistant à préparer d’abord un précurseur de la nano-composition pour encapsuler l’EGCG et puis effectuer un auto-assemblage sur le précurseur de la nano-composition avec les phospholipides pour une protection, obtenant ainsi la nano-composition à base de l’EGCG. La nano-composition à base de l’EGCG selon la présente invention présente une bonne stabilité, un bon rendement d’encapsulation, un bon effet antioxydant, une bonne capacité de libération prolongée et une bonne perméabilité percutanée. (2) Dans la présente invention, deux stabilisants de membrane à propriétés différentes sont utilisés pour ajuster la composition des membranes phospholipidiques, par conséquent, la nano-composition à base de l’EGCG obtenue présente une stabilité, un rendement d’encapsulation, un effet antioxydant, une capacité de libération prolongée et une perméabilité percutanée améliorés. (3) La nano-composition à base de l’EGCG selon la présente invention a également un bon effet de réparation des dommages à l’ADN et un bon effet d’inhibition de la carbonylation des protéines, et peut jouer un rôle antioxydant, anti-photovieillissement et anti-jaunissement de la peau dans les formulations dermiques topiques à effets meilleurs que ceux de la solution aqueuse à base de l’EGCG. DESCRIPTION DES FIGURES FIG. 1 est une vue illustrant les résultats de la réparation des dommages à l’ADN par la méthode γ-H2AX de la présente invention. FIG. 2 est une vue illustrant les résultats du test de l’inhibition de la carbonylation des protéines de la présente invention. DESCRIPTION DÉTAILLÉE DE L’INVENTION La présente invention sera décrite en plus détaillé ci-après en se référant aux modes de réalisation, mais la mise en œuvre de la présente invention ne se limite pas à ceux. Sauf indication contraire claire, les conditions dans les modes de réalisation sont les conditions conventionnelles ou les conditions indiquées par le fabricant. Sauf indication contraire claire sur le fabricant, les réactifs ou les instruments sont les produits commerciaux achetés sur le marché. Sauf indication contraire claire, les réactifs utilisés dans les modes de réalisation peuvent être achetés facilement sur le marché. Dans les modes de réalisation de la présente invention, l’EGCG (pureté 98%), le maltitol (pureté 98%), le D-sorbitol (pureté 98%), le xylitol (pureté 98%) utilisés peuvent être achetés directement auprès la société anonyme biotechnologique Aladdin de Shanghai. Exemple 1 (1) Préparation du précurseur de la nano-composition : ajouter 5,0 % en pourcentage massique de lécithine de soja et 15 % en pourcentage massique d’EGCG à 30 % en pourcentage massique d’éthanol absolu, et agiter (à une vitesse de 300 tr/min) à 60 °C pendant 30 min jusqu’à la dissolution complète des matières premières ci-dessus pour obtenir une phase organique. Ajouter 5% en pourcentage massique de maltitol à 45% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et agiter (à une vitesse de 300 tr/min) à 60 °C pendant 30 min jusqu’à la dissolution complète des matières premières ci-dessus pour obtenir une phase aqueuse. En maintenant la température à 60 °C, ajouter goutte à goutte la phase organique ci-dessus à la phase aqueuse à une vitesse constante de 3 ml/min, et une fois l’ajout goutte à goutte terminée, agiter encore à 60 °C (à une vitesse de 300 tr/min) pendant 15 min pour obtenir une solution mélangée. Éliminer l’éthanol absolu de la solution mélangée par évaporation rotative à une vitesse d’évaporation rotative de 150 tr/min, une température d’évaporation rotative de 40 °C et une durée d’évaporation rotative de 2 h. Lyophiliser pendant 48 heures pour obtenir un précurseur de la nano-composition. Dans le précurseur de la nano-composition, en exprimant en pourcentage massique, phospholipide : EGCG : maltitol = 20% : 60% : 20%. (2) Préparation de la nano-composition : ajouter 0,3% en pourcentage massique de lécithine hydrogénée, 0,15% en pourcentage massique de cholestérol et 1,5% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique à une solution mélangée composée de 25% en pourcentage massique de glycérol et de 10% en pourcentage massique de 1,2-hexanediol, et agiter (à une vitesse de 300 tr/min) à 30℃ pendant 30 min jusqu’à la dissolution complète des matières premières ci-dessus pour obtenir une phase alcoolique. ajouter 5% en pourcentage massique de précurseur de la nano-composition à 58,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et agiter (à une vitesse de 300 tr/min) à 30℃ pendant 30 min jusqu’à la dispersion homogène du précurseur de la nano-composition pour obtenir une phase aqueuse. En maintenant la température à 30℃, ajouter goutte à goutte la phase aqueuse ci-dessus à la phase alcoolique à une vitesse constante de 3 ml/min, et une fois l’ajout goutte à goutte terminée, agiter encore à 30℃ (à une vitesse de 300 tr/min) pendant 15 min pour obtenir une solution mélangée. Disperser la solution mélangée par cisaillement à grande vitesse (10000 tr/min) pendant 20 min ; puis effectuer une homogénéisation à microfluide à haute pression, avec une pression d’homogénéisation de 80 MPa et un nombre de cycle d’homogénéisation de 4, obtenant ainsi la nano-composition à base de l’EGCG. Dans l’exemple 1 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 2 (exemples 2 à 5, les quantités de phosphatide ajouté dans la nano-composition étaient différentes) (1) Préparation du précurseur de la nano-composition : préparer le précurseur de la nano-composition en substituant 1% en pourcentage massique de lécithine de soja à 5% en pourcentage massique de lécithine de soja de l’exemple 1, substituant 49% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 45% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenant les autres composants inchangés. Dans le précurseur de la nano-composition du présent exemple, en exprimant en pourcentage massique, phospholipide : EGCG : maltitol = 4,8% : 71,4% : 23,8%. (2) Préparation de la nano-composition à base de l’EGCG : préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 4,2% en pourcentage massique de précurseur de la nano-composition préparé ci-dessus à 5% en pourcentage massique de précurseur de la nano-composition de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés. Dans l’exemple 2 de la présente invention, dans la nano-composition à base de l’EGCG, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage identique à celui de l’exemple 1, soit 3%. Exemple 3 (1) Préparation du précurseur de la nano-composition : préparer le précurseur de la nano-composition en substituant 3% en pourcentage massique de lécithine de soja à 5% en pourcentage massique de lécithine de soja de l’exemple 1, substituant 47% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 45% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenant les autres composants inchangés. Dans le précurseur de la nano-composition du présent exemple, en exprimant en pourcentage massique, phospholipide : EGCG : maltitol = 13% : 65,2% : 21,8%. (2) Préparation de la nano-composition à base de l’EGCG : préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 4,6% en pourcentage massique de précurseur de la nano-composition préparé ci-dessus à 5% en pourcentage massique de précurseur de la nano-composition de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés. Dans l’exemple 3 de la présente invention, dans la nano-composition à base de l’EGCG, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage identique à celui de l’exemple 1, soit 3%. Exemple 4 (1) Préparation du précurseur de la nano-composition : préparer le précurseur de la nano-composition en substituant 7% en pourcentage massique de lécithine de soja à 5% en pourcentage massique de lécithine de soja de l’exemple 1, substituant 43% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 45% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenant les autres composants inchangés. Dans le précurseur de la nano-composition du présent exemple, en exprimant en pourcentage massique, phospholipide : EGCG : maltitol = 25,9% : 55,6% : 18,5%. (2) Préparation de la nano-composition à base de l’EGCG : préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 5,4% en pourcentage massique de précurseur de la nano-composition préparé ci-dessus à 5% en pourcentage massique de précurseur de la nano-composition de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés. Dans l’exemple 4 de la présente invention, dans la nano-composition à base de l’EGCG, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage identique à celui de l’exemple 1, soit 3%. Exemple 5 (1) Préparation du précurseur de la nano-composition : préparer le précurseur de la nano-composition en substituant 10% en pourcentage massique de lécithine de soja à 5% en pourcentage massique de lécithine de soja de l’exemple 1, substituant 40% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 45% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenant les autres composants inchangés. Dans le précurseur de la nano-composition du présent exemple, en exprimant en pourcentage massique, phospholipide : EGCG : maltitol = 33,3% : 50% : 16,7%. (2) Préparation de la nano-composition à base de l’EGCG : préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 6% en pourcentage massique de précurseur de la nano-composition préparé ci-dessus à 5% en pourcentage massique de précurseur de la nano-composition de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés. Dans l’exemple 3 de la présente invention, dans la nano-composition à base de l’EGCG, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage identique à celui de l’exemple 1, soit 3%. Exemple 6 (exemples 6 à 9, les quantités de lécithine hydrogénée ajouté étaient différentes) (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Substituer 0,1% en pourcentage massique de lécithine hydrogénée à 0,3% en pourcentage massique de lécithine hydrogénée de l’exemple 1, substituer 60,25% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenir les autres composants inchangés pour un pourcentage massique total de 100%. Préparer la nano-composition à base de l’EGCG avec les traitements suivants inchangés. Dans l’exemple 6 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 7 (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Substituer 0,5% en pourcentage massique de lécithine hydrogénée à 0,3% en pourcentage massique de lécithine hydrogénée de l’exemple 1, substituer 59,85% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenir les autres composants inchangés pour un pourcentage massique total de 100%. Préparer la nano-composition à base de l’EGCG avec les traitements suivants inchangés. Dans l’exemple 7 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 8 (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Substituer 0,7% en pourcentage massique de lécithine hydrogénée à 0,3% en pourcentage massique de lécithine hydrogénée de l’exemple 1, substituer 59,65% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenir les autres composants inchangés pour un pourcentage massique total de 100%. Préparer la nano-composition à base de l’EGCG avec les traitements suivants inchangés. Dans l’exemple 8 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 9 (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Substituer 1,0% en pourcentage massique de lécithine hydrogénée à 0,3% en pourcentage massique de lécithine hydrogénée de l’exemple 1, substituer 59,35% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenir les autres composants inchangés pour un pourcentage massique total de 100%. Préparer la nano-composition à base de l’EGCG avec les traitements suivants inchangés. Dans l’exemple 9 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 10 (exemples 10 à 12, les types de stabilisant rigide étaient différents) (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 0,15% en pourcentage massique de cholate de sodium à 0,15% en pourcentage massique de cholestérol de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés. Dans l’exemple 10 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 11 (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 0,15% en pourcentage massique de résorcinol à 0,15% en pourcentage massique de cholestérol de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés. Dans l’exemple 11 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 12 (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 0,15% en pourcentage massique de phénylalanine à 0,15% en pourcentage massique de cholestérol de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés. Dans l’exemple 12 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 13 (exemples 13 à 15, les quantités de stabilisant rigide ajouté étaient différentes) (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Substituer 0,1% en pourcentage massique de cholestérol à 0,15% en pourcentage massique de cholestérol de l’exemple 1, substituer 60,10% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenir les autres composants inchangés pour un pourcentage massique total de 100%. Préparer la nano-composition à base de l’EGCG avec les traitements suivants inchangés. Dans l’exemple 13 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 14 (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Substituer 0,2% en pourcentage massique de cholestérol à 0,15% en pourcentage massique de cholestérol de l’exemple 1, substituer 60,00% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenir les autres composants inchangés pour un pourcentage massique total de 100%. Préparer la nano-composition à base de l’EGCG avec les traitements suivants inchangés. Dans l’exemple 14 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 15 (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Substituer 0,3% en pourcentage massique de cholestérol à 0,15% en pourcentage massique de cholestérol de l’exemple 1, substituer 59,90% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenir les autres composants inchangés pour un pourcentage massique total de 100%. Préparer la nano-composition à base de l’EGCG avec les traitements suivants inchangés. Dans l’exemple 15 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 16 (exemples 16 à 18, les types de stabilisant souple étaient différents) (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 1,5% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique/linoléique à 1,5% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés. Dans l’exemple 16 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 17 (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 1,5% en pourcentage massique d’acide linoléique à 1,5% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés. Dans l’exemple 17 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 18 (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 1,5% en pourcentage massique d’octyldodécanol à 1,5% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés. Dans l’exemple 18 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 19 (exemples 19 à 21, les quantités de stabilisant souple étaient différentes) (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Substituer 0,5% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique à 1,5% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique de l’exemple 1, substituer 61,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenir les autres composants inchangés pour un pourcentage massique total de 100%. Préparer la nano-composition à base de l’EGCG avec les traitements suivants inchangés. Dans l’exemple 19 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 20 (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Substituer 1,0% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique à 1,5% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique de l’exemple 1, substituer 60,55% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenir les autres composants inchangés pour un pourcentage massique total de 100%. Préparer la nano-composition à base de l’EGCG avec les traitements suivants inchangés. Dans l’exemple 20 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 21 (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Substituer 2,0% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique à 1,5% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique de l’exemple 1, substituer 59,55% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenir les autres composants inchangés pour un pourcentage massique total de 100%. Préparer la nano-composition à base de l’EGCG avec les traitements suivants inchangés. Dans l’exemple 21 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 22 (exemples 22 à 23, les quantités de précurseur de la nano-composition ajouté étaient différentes) (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Substituer 1% en pourcentage massique de précurseur de la nano-composition à 5% en pourcentage massique de précurseur de la nano-composition de l’exemple 1, substituer 64,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenir les autres composants inchangés pour un pourcentage massique total de 100%. Préparer la nano-composition à base de l’EGCG avec les traitements suivants inchangés. Dans l’exemple 22 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 0,6% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 23 (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Substituer 10% en pourcentage massique de précurseur de la nano-composition à 5% en pourcentage massique de précurseur de la nano-composition de l’exemple 1, substituer 55,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et maintenir les autres composants inchangés pour un pourcentage massique total de 100%. Préparer la nano-composition à base de l’EGCG avec les traitements suivants inchangés. Dans l’exemple 23 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 6% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 24 (exemples 24 à 25, les types et les quantités des autres matériaux ajoutés étaient différents) La différence entre le présent exemple et l’exemple 1 consiste en ce que : (1) Le précurseur de la nano-composition comprend les composants en pourcentage massique suivants : dipalmitoylphosphatidylcholine 5 %, EGCG 10 %, méthanol 10 %, D-sorbitol 5 % et eau déminéralisée 70 %. Le précurseur de la nano-composition est obtenu en maintenant les autres composants inchangés. Dans le précurseur de la nano-composition du présent exemple, en exprimant en pourcentage massique, dipalmitoylphosphatidylcholine : EGCG : D-sorbitol = 25% : 50% : 25%. (2) La nano-composition à base de l’EGCG comprend les composants en pourcentage massique suivants : Palmitoylphosphatidylglycérol 0,3%, chostérol 0,15%, triglycéride caprylique/caprique 1,5%, 1,3-propanediol 5%, éthoxydiéthylène glycol 5%, précurseur de la nano-composition 5% et eau déminéralisée 83,05%. La nano-composition à base de l’EGCG est obtenue en maintenant les autres composants inchangés. Dans l’exemple 24 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 2,5% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple 25 La différence entre le présent exemple et l’exemple 1 consiste en ce que : (1) Le précurseur de la nano-composition comprend les composants en pourcentage massique suivants : lécithine de jaune d’œuf 5 %, EGCG 20%, trichlorométhane 50 %, xylitol 5 % et eau déminéralisée 20%. Le précurseur de la nano-composition est obtenu en maintenant les autres composants inchangés. Dans la nano-composition du présent exemple, en exprimant en pourcentage massique, lécithine de jaune d’œuf : EGCG : xylitol = 25% : 66,7% : 25%. (2) La nano-composition à base de l’EGCG comprend les composants en pourcentage massique suivants : dipalmitoylphosphatidylcholine 0,3%, chostérol 0,15%, triglycéride caprylique/caprique 1,5%, 1,2-butanediol 35%, polyéthylène glycol (Mn = 400) 15%, précurseur de la nano-composition 5% et eau déminéralisée 43,05%. La nano-composition à base de l’EGCG est obtenue en maintenant les autres composants inchangés. Dans l’exemple 25 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3,3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple comparatif 1 (Liposome traditionnel - lécithine de soja - monocouche) Préparer un liposome traditionnel par méthode de membrane mince en utilisant la lécithine de soja comme matériau de paroi. Par rapport le poids de matériaux chargés, dissoudre 1,5 g de lécithine de soja, 0,15 g de cholestérol et 3 g d’EGCG dans 30 g d’éthanol absolu, agiter (à une vitesse de 300 tr/min) pendant 30 min jusqu’à la dissolution complète des matières premières ci-dessus pour obtenir une phase alcoolique. Éliminer l’éthanol absolu de la phase alcoolique par évaporation rotative à une vitesse d’évaporation rotative de 150 tr/min, une température d’évaporation rotative de 40 °C et une durée d’évaporation rotative de 2 h, formant ainsi une couche de membrane de phospholipide de couleur jaune clair sur la paroi de la cuve d’évaporation rotative. Ajouter 95,35 g d’eau déminéralisée dans la cuve d’évaporation rotative, agiter (à une vitesse de 300 tr/min) pendant 30 min pour hydrater la membrane de phospholipide jusqu’à ce que la membrane de phospholipide sur la paroi de la cuve soit complètement décollée, obtenant ainsi un liposome à EGCG traditionnel. Dans l’exemple comparatif 1 de la présente invention, dans la nano-composition à base de l’EGCG, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage identique à celui de l’exemple 1, soit 3%. Exemple comparatif 2 (Liposome traditionnel - lécithine hydrogénée - monocouche) Préparer un liposome traditionnel par méthode de membrane mince en utilisant la lécithine hydrogénée comme matériau de paroi. Par rapport le poids de matériaux chargés, dissoudre 1,5 g de lécithine hydrogénée, 0,15 g de cholestérol et 3 g d’EGCG dans 30 g d’éthanol absolu, agiter (à une vitesse de 300 tr/min) pendant 30 min jusqu’à la dissolution complète des matières premières ci-dessus pour obtenir une phase alcoolique. Éliminer l’éthanol absolu de la phase alcoolique par évaporation rotative à une vitesse d’évaporation rotative de 150 tr/min, une température d’évaporation rotative de 40 °C et une durée d’évaporation rotative de 2 h, formant ainsi une couche de membrane de phospholipide de couleur jaune clair sur la paroi de la cuve d’évaporation rotative. Ajouter 95,35 g d’eau déminéralisée dans la cuve d’évaporation rotative, agiter (à une vitesse de 300 tr/min) pendant 30 min pour hydrater la membrane de phospholipide jusqu’à ce que la membrane de phospholipide sur la paroi de la cuve soit complètement décollée, obtenant ainsi un liposome à EGCG traditionnel. Dans l’exemple comparatif 2 de la présente invention, dans la nano-composition à base de l’EGCG, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage identique à celui de l’exemple 1, soit 3%. Exemple comparatif 3 (seul ligand rigide ajouté) (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 1,5% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 1,5% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés et les traitements suivants inchangés. Par rapport à l’exemple 1, la différence consiste à ce que seul le stabilisant de membrane rigide, soit le cholestérol est ajouté dans l’exemple comparatif 3, sans stabilisant de membrane souple. Exemple comparatif 4 (seul ligand souple ajouté) (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 0,15% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 0,15% en pourcentage massique de cholestérol de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés et les traitements suivants inchangés. Par rapport à l’exemple 1, la différence consiste à ce que seul le stabilisant de membrane souple, soit le triglycéride d’acide caprylique/caprique est ajouté dans l’exemple comparatif 4, sans stabilisant de membrane rigide. Exemple comparatif 5 (sans stabilisant de membrane ajouté) (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 1,65% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 0,15% en pourcentage massique de cholestérol et 1,5% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés et les traitements suivants inchangés. Par rapport à l’exemple 1, la différence consiste à ce qu’aucun stabilisant de membrane n’est ajouté dans l’exemple comparatif 5. Exemple comparatif 6 (l ’ EGCG était ajouté pendant le processus d ’ auto-assemblage avec phospholipides à la deuxième étape) (1) Préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 15% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 15% en pourcentage massique d’EGCG de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés. (2) ajouter 0,3% en pourcentage massique de lécithine hydrogénée, 0,15% en pourcentage massique de cholestérol, 1,5% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique et 3% d’EGCG à une solution mélangée composée de 25% en pourcentage massique de glycérol et de 10% en pourcentage massique de 1,2-hexanediol, et agiter (à une vitesse de 300 tr/min) à 30℃ pendant 30 min jusqu’à la dissolution complète des matières premières ci-dessus pour obtenir une phase alcoolique. En maintenant la température à 30℃, ajouter goutte à goutte 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à la phase alcoolique à une vitesse constante de 3 ml/min, et une fois l’ajout goutte à goutte terminée, agiter encore à 30℃ (à une vitesse de 300 tr/min) pendant 15 min pour obtenir une solution mélangée. Disperser la solution mélangée par cisaillement à grande vitesse (10000 tr/min) pendant 20 min ; puis effectuer une homogénéisation à microfluide à haute pression, avec une pression d’homogénéisation de 80 MPa et un nombre de cycle d’homogénéisation de 4, obtenant ainsi la nano-composition à base de l’EGCG. Dans l’exemple comparatif 6 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple comparatif 7 (La technique d ’ encapsulation n ’ était pas utilisée, et l ’ EGCG était supplémentairement ajouté après la préparation de la nano-composition à base de d ’ EGCG) (1) Préparer la nano-composition à base de l’EGCG en substituant 15% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à 15% en pourcentage massique d’EGCG de l’exemple 1, et maintenant les autres composants inchangés. (2) Les étapes de la préparation de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (3) Ajouter 3% en pourcentage massique d’EGCG à 97% en pourcentage massique de nano-composition, et agiter (à une vitesse de 300 tr/min) à 30℃ pendant 30 min pour obtenir une composition à base de l’EGCG. Exemple comparatif 8 (l ’ EGCG n ’ était encapsulé avec phospholipides en une seule étape, sans précurseur de la nano-composition) Ajouter 0,3% en pourcentage massique de lécithine hydrogénée, 0,15% en pourcentage massique de cholestérol, 1,5% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique et 3% d’EGCG à une solution mélangée composée de 25% en pourcentage massique de glycérol et de 10% en pourcentage massique de 1,2-hexanediol, et agiter (à une vitesse de 300 tr/min) pendant 30 min jusqu’à la dissolution complète des matières premières ci-dessus pour obtenir une phase alcoolique. Ajouter goutte à goutte la phase alcoolique ci-dessus à 60,05% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à une vitesse constante de 3 ml/min, et une fois l’ajout goutte à goutte terminée, agiter encore (à une vitesse de 300 tr/min) pendant 15 min pour obtenir une solution mélangée. Disperser la solution mélangée par cisaillement à grande vitesse (10000 tr/min) pendant 20 min ; puis effectuer une homogénéisation à microfluide à haute pression, avec une pression d’homogénéisation de 80 MPa et un nombre de cycle d’homogénéisation de 4. La nano-composition à base de l’EGCG est obtenue. Par rapport à l’exemple 1, la différence consiste à ce que la nano-composition à base de l’EGCG était préparée par encapsulation avec phospholipides en une seule étape dans l’exemple comparatif 8. Dans l’exemple comparatif 8 de la présente invention, la substance active fonctionnelle EGCG représente un pourcentage de 3% dans la nano-composition à base de l’EGCG. Exemple comparatif 9 (l ’ EGCG était dissous à la phase aqueuse, puis mélangé avec la phase alcoolique) (1) Préparation du précurseur de la nano-composition : ajouter 5,0 % en pourcentage massique de lécithine de soja à 30 % en pourcentage massique d’éthanol absolu, et agiter (à une vitesse de 300 tr/min) à 60 °C pendant 30 min jusqu’à la dissolution complète des matières premières ci-dessus pour obtenir une phase organique. Ajouter 5% en pourcentage massique de maltitol et 15% en pourcentage massique d’EGCG à 45% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et agiter (à une vitesse de 300 tr/min) à 60 °C pendant 30 min jusqu’à la dissolution complète des matières premières ci-dessus pour obtenir une phase aqueuse. En maintenant la température à 60 °C, ajouter goutte à goutte la phase organique à la phase aqueuse à une vitesse constante de 3 ml/min, et une fois l’ajout goutte à goutte terminée, agiter encore à 60 °C (à une vitesse de 300 tr/min) pendant 15 min pour obtenir une solution mélangée. Éliminer l’éthanol absolu de la solution mélangée par évaporation rotative à une vitesse d’évaporation rotative de 150 tr/min, une température d’évaporation rotative de 40 °C et une durée d’évaporation rotative de 2 h. Lyophiliser pendant 48 heures pour obtenir un précurseur de la nano-composition. Dans le précurseur de la nano-composition, en exprimant en pourcentage massique, phospholipide : EGCG : maltitol = 20% : 60% : 20%. (2) Les étapes de la préparation de la nano-composition à base de l’EGCG étaient identiques à celles de l’exemple 1. Par rapport à l’exemple 1, la différence consiste à ce que pendant la préparation du précurseur de la nano-composition dans l’exemple comparatif 9, l’EGCG était dissous d’abord à l’eau déminéralisée, puis mélangé avec la phase alcoolique. Exemple comparatif 10 (Modification de la surface avec le chitosane) (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Préparer la nano-composition à base de l’EGCG modifiée avec le chitosane en substituant 0,3% en pourcentage massique de chitosane à 0,3% en pourcentage massique de lécithine hydrogénée, et maintenant les autres composants inchangés et les traitements suivants inchangés. Par rapport à l’exemple 1, la différence consiste à ce que le précurseur de la nano-composition était modifié avec le chitosane dans l’exemple comparatif 10. Exemple comparatif 11 (Modification de la surface avec la gomme arabique) (1) Les étapes de la préparation du précurseur de la nano-composition sont identiques à celles de l’exemple 1. (2) Préparer la nano-composition à base de l’EGCG modifiée avec la gomme arabique en substituant 0,3% en pourcentage massique de la gomme arabique à 0,3% en pourcentage massique de lécithine hydrogénée, et maintenant les autres composants inchangés et les traitements suivants inchangés. Par rapport à l’exemple 1, la différence consiste à ce que le précurseur de la nano-composition était modifié avec la gomme arabique dans l’exemple comparatif 11. Exemple comparatif 12 (Nano-émulsion à base de l ’ EGCG) Mélanger 3% en pourcentage massique d’EGCG et 15% en pourcentage massique de triglycéride d’acide caprylique/caprique et chauffer à 85℃ jusqu’à la dissolution complète de l’EGCG, puis ajouter 10% en pourcentage massique de butanediol pour obtenir les composants de la phase huileuse. Ajouter goutte à goutte la phase huileuse ci-dessus à 72% en pourcentage massique d’eau déminéralisée à une vitesse constante de 3 ml/min, et une fois l’ajout goutte à goutte terminée, agiter encore (à une vitesse de 300 tr/min) pendant 15 min pour obtenir une solution mélangée. Disperser la solution mélangée par cisaillement à grande vitesse (10000 tr/min) pendant 20 min ; puis effectuer une homogénéisation à microfluide à haute pression, avec une pression d’homogénéisation de 80 MPa et un nombre de cycle d’homogénéisation de 4, obtenant ainsi une nano-émulsion à base de l’EGCG. Exemple comparatif 13 (Solution aqueuse de l ’ EGCG à 3%) Ajouter 3% en pourcentage massique d’EGCG à 97% en pourcentage massique d’eau déminéralisée, et agiter (à une vitesse de 300 tr/min) pendant 15min jusqu’à la dissolution complète de l’EGCG pour obtenir une solution aqueuse de l’EGCG. Exemple de test 1 (test de la taille des particules) On a caractérisé la taille des particules des échantillons des exemples 1 à 25 et des exemples comparatifs 1 à 12 à l’aide d’un analyseur de taille des particules à diffusion dynamique de la lumière Malvern Nano-ZS90, avec l’angle de test de 90° et la température de test de 25°C, on a effectué trois tests parallèles pour chaque groupe et fait les valeurs moyennes arithmétiques sur les résultats de test. Exemple de test 2 (test du rendement d ’ encapsulation de l ’ EGCG) On a effectué les tests du rendement d’encapsulation de l’EGCG sur les échantillons des exemples 1 à 25 et des exemples comparatifs 1 à 12. Prélever 200 μL d’échantillon de la nano-composition à base de l’EGCG, effectuer une centrifugation par ultrafiltration (9000 tr/min, 30 min), et prélever 5 μL de filtrat et déterminer la teneur en EGCG à l’aide d’un chromatographe en liquide à haute performance (HPLC, Shimadzu, Japon), c’est-à-dire la teneur en EGCG non encapsulée dans la nano-composition à base d’EGCG. Prélever encore la nano-composition à base d’EGCG ci-dessus, ajouter une solution mélangée composé du méthanol et de l’eau à raison d’échantillon : méthanol : eau = 1:4:5 (v/v), désémulsifier par ultrasons pendant 30 min, filtrer sur une membrane de filtre organique de 0,45 μm, prélever 5 μL de solution d’échantillon et déterminer la teneur en EGCG à l’aide d’un chromatographe en liquide à haute performance (HPLC, Shimadzu, Japon), c’est-à-dire la teneur en EGCG dans la nano-composition à base d’EGCG. Calculer le rendement d’encapsulation de l’EGCG (EE) de la nano-composition à base de l’EGCG selon la formule (1). La colonne d’analyse utilisée dans le système HPLC était une colonne C18 non polaire, la phase mobile était l’acétonitrile, le débit était de 1,0 ml/min et la température de la colonne était de 30 °C. On a effectué trois tests parallèles pour chaque groupe et fait les valeurs moyennes arithmétiques sur les résultats de test. C 1 représente la concentration d’EGCG non encapsulé dans l’échantillon ; C 0 représente la concentration d’EGCG dans l’échantillon après désémulsification par ultrasons avec la solution mélangé de méthanol et d’eau déminéralisée. Exemple de test 3 (test de la stabilité de stockage) Après avoir laissé les échantillons des exemples 1 à 25 et des exemples comparatifs 1 à 12 à température ambiante pendant 1 mois, 2 mois et 3 mois, on a déterminé la taille des particules et le rendement d’encapsulation des échantillons respectivement par les méthodes décrites dans les exemples de test 1 et 2, et testé la stabilité de stockage des échantillons. Tableau 1 Caractérisation de la taille des particules et du rendement d’encapsulation des échantillons, ainsi que la stabilité de stockage à température ambiante pendant 0 à 3 mois Échantillons Durée de stockage (mois) Taille des particules (nm) Taux de variation de la taille des particules (%) Rendement d’encapsulation (%) Taux de variation du rendement d’encapsulation (%) Exemple 1 0 83,4 — 89,2 — 1 82,1 1,46 88,1 1,18 2 81,1 2,66 86,4 3,14 3 80,2 3,77 85,4 4,31 Exemple 2 0 105,2 — 77,7 — 1 98,7 6,16 74,1 4,61 2 93,8 10,87 69,8 10,23 3 91,6 12,93 67,3 13,40 Exemple 3 0 97,7 — 80,8 — 1 92,3 5,49 78,1 3,33 2 88,4 9,50 74,5 7,77 3 85,4 12,53 72,0 10,82 Exemple 4 0 126,2 — 73,1 — 1 116,2 7,98 68,5 6,28 2 108,8 13,81 65,4 10,57 3 104,1 17,55 62,6 14,40 Exemple 5 0 169,4 — 67,4 — 1 151,9 10,30 61,9 8,14 2 143,8 15,12 59,6 11,63 3 136,0 19,70 56,1 16,78 Exemple 6 0 88,4 — 68,5 — 1 84,2 4,80 63,1 8,01 2 80,5 8,96 60,0 12,42 3 77,5 12,31 54,8 20,10 Exemple 7 0 105,3 — 78,5 — 1 98,2 6,69 74,5 5,14 2 92,8 11,85 68,9 12,27 3 88,7 15,73 65,6 16,41 Exemple 8 0 134,2 — 74,3 — 1 124,3 7,39 68,5 7,69 2 117,6 12,40 64,2 13,57 3 112,7 16,03 60,6 18,40 Exemple 9 0 145,9 — 70,0 — 1 131,6 9,81 64,5 7,84 2 123,7 15,24 60,0 14,24 3 117,0 19,79 56,3 19,52 Exemple 10 0 102,9 — 78,7 — 1 98,9 3,89 74,7 5,12 2 97,2 5,52 70,9 9,96 3 95,2 7,47 69,2 12,09 Exemple 11 0 98,0 — 67,8 — 1 95,0 3,10 62,3 8,10 2 93,2 4,90 58,6 13,55 3 89,1 9,06 56,9 16,03 Exemple 12 0 106,9 — 74,1 — 1 100,6 5,91 69,0 6,95 2 97,5 8,76 65,3 11,93 3 96,0 10,18 63,7 14,05 Exemple 13 0 88,5 — 68,9 — 1 83,1 6,06 64,9 5,85 2 79,8 9,76 62,6 9,11 3 74,9 15,37 59,9 13,01 Exemple 14 0 107,0 — 74,3 — 1 100,7 5,83 70,3 5,28 2 96,9 9,42 67,3 9,35 3 93,0 13,09 66,2 10,86 Exemple 15 0 125,0 — 70,3 — 1 116,1 7,11 66,2 5,89 2 112,7 9,80 63,3 10,03 3 104,6 16,26 60,7 13,69 Exemple 16 0 98,8 — 76,6 — 1 92,4 6,48 72,2 5,70 2 89,5 9,39 71,2 7,02 3 86,9 12,06 67,4 11,99 Exemple 17 0 103,1 — 74,1 — 1 96,1 6,83 69,9 5,74 2 93,0 9,78 67,3 9,21 3 84,6 18,00 63,7 14,05 Exemple 18 0 105,1 — 72,5 — 1 95,7 8,98 66,8 7,88 2 90,2 14,23 64,4 11,13 3 85,8 18,42 61,0 15,77 Exemple 19 0 120,4 — 68,8 — 1 114,3 5,05 63,3 7,88 2 110,8 7,97 61,1 11,13 3 106,2 11,83 57,9 15,77 Exemple 20 0 105,1 — 76,4 — 1 98,7 6,09 72,0 5,72 2 95,4 9,21 69,2 9,38 3 88,9 15,45 64,9 15,10 Exemple 21 0 112,6 — 67,5 — 1 104,6 7,04 60,8 9,95 2 98,6 12,37 56,8 15,92 3 93,6 16,84 54,0 20,07 Exemple 22 0 97,0 — 67,6 — 1 91,0 6,19 61,8 8,61 2 88,7 8,50 60,0 11,26 3 84,6 12,71 55,1 18,54 Exemple 23 0 133,4 — 71,3 — 1 124,2 6,95 66,3 7,06 2 116,5 12,71 64,3 9,89 3 112,2 15,95 61,1 14,29 Exemple 24 0 134,0 — 65,4 — 1 118,0 11,94 57,6 11,99 2 108,6 18,93 53,4 18,32 3 103,7 22,63 50,2 23,29 Exemple 25 0 150,7 — 70,2 — 1 134,8 10,56 64,0 8,93 2 122,7 18,58 60,4 14,04 3 111,4 26,06 57,3 18,34 Exemple comparatif 1 0 164,5 — 41,5 — 1 197,2 19,88 31,5 24,10 2 217,2 32,04 28,4 31,57 3 230,5 40,12 13,8 66,75 Exemple comparatif 2 0 212,7 — 38,7 — 1 263,4 23,84 27,8 28,17 2 287,2 35,03 22,4 42,12 3 304,5 43,16 12,4 67,96 Exemple comparatif 3 0 212,8 — 48,6 — 1 270,2 26,97 38,6 20,58 2 297,1 39,61 34,9 28,19 3 329,8 54,98 27,7 43,00 Exemple comparatif 4 0 143,7 — 40,3 — 1 178,2 24,01 29,8 26,05 2 198,3 38,00 26,6 34,00 3 218,4 51,98 21,5 46,65 Exemple comparatif 5 0 155,6 — 34,5 — 1 202,2 29,95 24,6 28,70 2 220,9 41,97 20,6 40,29 3 245,8 57,97 16,7 51,59 Exemple comparatif 6 0 148,6 — 55,4 — 1 175,3 17,97 43,2 22,02 2 190,4 28,13 36,1 34,84 3 197,8 33,11 32,1 42,06 Exemple comparatif 7 0 137,2 — 22,8 — 1 161,9 18,00 13,5 40,79 2 172,8 25,95 8,2 64,04 3 186,6 36,01 4,8 78,95 Exemple comparatif 8 0 155,3 — 53,7 — 1 189,6 22,09 41,5 22,72 2 203,4 30,97 34,4 35,94 3 214,3 37,99 30,1 43,95 Exemple comparatif 9 0 188,6 — 50,3 — 1 246,8 30,86 38,1 24,25 2 254,3 34,84 32,2 35,98 3 272,6 44,54 26,5 47,32 Exemple comparatif 10 0 212,8 — 43,6 — 1 294,6 38,44 31,4 27,98 2 312,3 46,76 26,2 39,91 3 353,1 65,93 18,8 56,88 Exemple comparatif 11 0 201,6 — 48,2 — 1 274,1 35,96 35,7 25,93 2 286,3 42,01 27,8 42,32 3 328,5 62,95 21,2 56,02 Exemple comparatif 12 0 415,8 — 40,2 — 1 540,1 29,89 27,6 31,34 2 602,6 44,93 22,1 45,02 3 664,3 59,76 14,8 63,18 Le tableau 1 montre les résultats des tests de caractérisation de la taille des particules et du rendement d’encapsulation des échantillons des exemples 1 à 25 et des exemples comparatifs 1 à 12, ainsi que la variation de la taille des particules et du rendement d’encapsulation des échantillons des exemples 1 à 25 et des exemples comparatifs 1 à 12 après avoir laissé à température ambiante pendant 1 mois, 2 mois et 3 mois. En comparant les exemples 1 à 5, on peut voir que dans les précurseurs de la nano-composition, les quantités de lécithine de soja ajouté étaient différentes, et que la taille des particules, le rendement d’encapsulation et la stabilité de stockage des nano-compositions à base de l’EGCG finalement préparées étaient différents. Dans les exemples 1 à 5, le pourcentage massique en lécithine de soja était de 5 %, 1 %, 3 %, 7 % et 10 % respectivement, avec l’augmentation de la quantité de lécithine de soja ajouté dans le précurseur de la nano-composition, la taille des particules de la nano-composition à base de l’EGCG finalement préparée diminuait d’abord puis augmentait et le rendement d’encapsulation augmentait d’abord puis diminuait, lorsque le pourcentage massique en lécithine de soja dans le précurseur de la nano-composition attendait 5 % (l’exemple 1), la taille des particules de la nano-composition à base de l’EGCG finalement préparée était la plus petite, soit de 83,4 nm, et le rendement d’encapsulation était la plus élevé, soit de 89,2 %. De plus, la stabilité de stockage de la nano-composition à base de l’EGCG de l’exemple 1 était meilleure que celle des exemples 2 à 5, et lorsque l’échantillon était stocké à température ambiante pendant trois mois, le taux de variation de la taille des particules et le taux de variation du rendement d’encapsulation de la nano-composition à base de l’EGCG étaient les plus faibles, soient de 3,77 % et de 4,31 % respectivement. Par conséquent, l’échantillon de l’exemple 1 présentait le meilleur effet d’encapsulation de l’EGCG. En comparant les exemples 1 et 6 à 9, on peut voir qu’en raison que les quantités de lécithine hydrogénée ajouté étaient différentes, la tailles des particules, le rendement d’encapsulation et la stabilité de stockage des nano-compositions à base de l’EGCG finalement préparées étaient différents. Dans les exemples 1 et 6 à 9, le pourcentage massique en lécithine hydrogénée était de 0,3%, 0,1%, 0,5%, 0,7% et 1,0% respectivement, avec l’augmentation de la quantité de lécithine hydrogénée ajouté, la taille des particules de la nano-composition à base de l’EGCG augmentait progressivement, tandis que le rendement d’encapsulation augmentait d’abord puis diminuait. Lorsque le pourcentage massique en lécithine hydrogénée dans la nano-composition à base de l’EGCG est de 0,3 % (exemple 1), l’effet d’encapsulation de l’EGCG était le meilleur. En comparant les exemples 1 et 10 à 12, on peut voir qu’en raison que les types du stabilisant de membrane rigide étaient différents, la tailles des particules, le rendement d’encapsulation et la stabilité de stockage des nano-compositions à base de l’EGCG finalement préparées étaient différents. Dans les exemples 1 et 10 à 12, le stabilisant de membrane rigide était le cholestérol, le cholate de sodium, le résorcinol et la phénylalanine respectivement. Les résultats montrent que lorsque le cholestérol était choisi comme stabilisant de membrane rigide, le produit final présentait le meilleur effet d’encapsulation de l’EGCG. En comparant les exemples 1 et 13 à 15, on peut voir que la quantité du stabilisant de membrane rigide ajouté affectait la taille des particules, le rendement d’encapsulation et la stabilité de stockage du produit final. Dans les exemples 1 et 13 à 15, le pourcentage massique en stabilisant de membrane rigide était de 0,15 %, 0,1 %, 0,2 % et 0,3 % respectivement. Les résultats montrent qu’avec l’augmentation de la quantité du stabilisant de membrane rigide ajouté, la taille des particules du produit augmentait progressivement, tandis que le rendement d’encapsulation augmentait d’abord puis diminuait. Lorsque le pourcentage massique en stabilisant de membrane rigide dans la nano-composition à base de l’EGCG était de 0,15% (exemple 1), l’effet d’encapsulation de l’EGCG était le meilleur. En comparant les exemples 1 et 16 à 18, on peut voir que le type du stabilisant de membrane souple affectait la taille des particules, le rendement d’encapsulation et la stabilité de stockage du produit final. Dans les exemples 1 et 16 à 18, le stabilisant de membrane souple était le triglycéride caprylique/caprique, le triglycéride caprylique/caprique/linoléique, l’acide linoléique, l’octyldodécanol respectivement. Les résultats montrent que lorsque le triglycéride caprylique/caprique était choisi comme stabilisant de membrane souple, le produit final présentait le meilleur effet d’encapsulation de l’EGCG. En comparant les exemples 1 et 19 à 21, on peut voir que la quantité du stabilisant de membrane souple ajouté affectait la taille des particules et le rendement d’encapsulation du produit final. Dans les exemples 1 et 19 à 21, le pourcentage massique en stabilisant de membrane souple était de 1,5%, 0,5%, 1,0% et 2,0% respectivement. Les résultats montrent qu’avec l’augmentation de la quantité du stabilisant de membrane souple ajouté, la taille des particules du produit diminuait puis augmentait, tandis que le rendement d’encapsulation augmentait d’abord puis diminuait. Lorsque le pourcentage massique en stabilisant de membrane souple dans la nano-composition à base de l’EGCG était de 1,5% (exemple 1), l’effet d’encapsulation de l’EGCG était le meilleur. En comparant les exemples 1, 22 et 23, on peut voir qu’en raison que les quantités des précurseurs de la nano-composition ajoutés étaient différentes, la taille des particules, le rendement d’encapsulation et la stabilité de stockage des nano-compositions à base de l’EGCG finalement préparées étaient différents. Dans les exemples 1, 22 et 23, les pourcentages de masse en précurseur de la nano-composition étaient respectivement de 5%, 1% et 10%. Les résultats montrent qu’avec l’augmentation de la quantité du précurseur de la nano-composition ajouté, la taille des particules du produit diminuait puis augmentait, tandis que le rendement d’encapsulation augmentait d’abord puis diminuait. Lorsque le pourcentage massique en précurseur de la nano-composition dans la nano-composition à base de l’EGCG était de 5% (exemple 1), l’effet d’encapsulation de l’EGCG était le meilleur. En comparant l’exemple 1, l’exemple comparatif 1 et l’exemple comparatif 2, on peut voir que, par rapport aux liposomes traditionnels, la présente demande adopte un auto-assemblage avec phospholipides en deux étapes, consistant à préparer d’abord un précurseur de la nano-composition pour encapsuler l’EGCG et puis effectuer un auto-assemblage sur le précurseur de la nano-composition avec les phospholipides pour une protection hydrogénée, ce qui permet d’obtenir finalement une nano-composition à base de l’EGCG présentant une taille des particules réduite, un rendement d’encapsulation élevé et la meilleure stabilité de stockage. En comparant l’exemple 1 et les exemples comparatifs 3 à 5, on peut voir que, par rapport à l’utilisation d’un seul stabilisant de membrane rigide (exemple comparatif 3) ou l’utilisation d’un seul stabilisant de membrane souple (exemple comparatif 4) ou sans stabilisant de membrane ajouté (exemple comparatif 5), dans l’exemple 1 de la présente invention, le stabilisant de membrane rigide et le stabilisant de membrane souple étaient utilisés pour ajuster la composition des membranes phospholipidiques, ce qui permet d’obtenir finalement une nano-composition à base de l’EGCG présentant une taille des particules réduite, un rendement d’encapsulation élevé et la meilleure stabilité de stockage. En comparant l’exemple 1 et les exemples comparatifs 6 à 7, on peut voir que, pendant la préparation des échantillons, la quantité de l’EGCG ajouté affectait la taille des particules, le rendement d’encapsulation et la stabilité de stockage du produit final. Par rapport à l’exemple 6 dans lequel l’EGCG était ajouté à la deuxième étape de l’auto-assemblage avec phospholipides de la préparation de la nano-composition à base de l’EGCG ou par rapport à l’exemple 7 dans lequel l’EGCG était ajouté après la préparation de la nano-composition à base de l’EGCG, dans l’exemple 1 de la présente demande, la nano-composition à base de l’EGCG était préparé en encapsulant d’abord l’EGCG pour préparer un précurseur de la nano-composition et en effectuant un auto-assemblage avec phospholipides en deux étapes, ce qui permet d’obtenir un échantillon finalement préparé présentant une taille des particules réduite, un rendement d’encapsulation élevé et une meilleure stabilité de stockage. Par rapport à l’exemple 1 et l’exemple comparatif 8 dans lesquels l’EGCG était encapsulé en une seule étape, dans l’exemple 1 de la présente demande, la nano-composition à base de l’EGCG était préparé en encapsulant d’abord l’EGCG pour préparer un précurseur de la nano-composition et en effectuant un auto-assemblage avec phospholipides en deux étapes, ce qui permet d’obtenir un échantillon finalement préparé présentant une taille des particules réduite, un rendement d’encapsulation élevé et une meilleure stabilité de stockage, c’est-à-dire que le procédé de l’exemple 1 de la présente demande a un meilleur effet d’encapsulation de l’EGCG. Par rapport à l’exemple 1 et l’exemple comparatif 9 dans lesquels l’EGCG était ajouté à la phase aqueuse et mélangé avec une phase huileuse pour préparer un précurseur de la nano-composition, dans l’exemple 1 de la présente demande, l’EGCG était ajouté à une phase huileuse et mélangé avec une phase aqueuse pour préparer un précurseur de la nano-composition, ce qui permet d’obtenir une nano-composition à base de l’EGCG finalement préparée présentant une taille des particules réduite, un rendement d’encapsulation élevé et une meilleure stabilité de stockage. Par rapport à l’exemple 1, l’exemple comparatif 10 et l’exemple comparatif 11 dans lesquels le précurseur de la nano-composition était modifié avec le chitosane (exemple comparatif 10) et la gomme arabique (exemple comparatif 11), dans l’exemple 1 de la présente demande, le lécithine hydrogénée était utilisé pour protéger le précurseur de la nano-composition, ce qui permet d’obtenir finalement une nano-composition à base de l’EGCG présentant une taille des particules réduite, un rendement d’encapsulation élevé et la meilleure stabilité de stockage. Par rapport à l’exemple 1 et l’exemple comparatif 12 dans lesquels une forme de nano-émulsion était adoptée pour l’encapsulation de l’EGCG, dans l’exemple 1 de la présente demande, la nano-composition à base de l’EGCG était préparé en encapsulant d’abord l’EGCG pour préparer un précurseur de la nano-composition et en effectuant un auto-assemblage avec phospholipides en deux étapes, ce qui permet d’obtenir un échantillon finalement préparé présentant une taille des particules réduite, un rendement d’encapsulation élevé et une meilleure stabilité de stockage. Exemple de test 4 (test de la capacité de déformation des vésicules) Prélever 1 ml de nano-composition à base de l’EGCG et le charger dans une seringue, et insérer la seringue dans une canule d’une extrudeuse fixée à un support vertical, avec l’aiguille vers le bas, le segment du piston étant en contact avec une unité de chargement de 50 N. Mettre une sonde en contact avec le piston de la seringue à une vitesse constante de 1 mm/s, et forcer la nano-composition à base de l’EGCG à travers une membrane de polycarbonate de 50 nm à l’intérieur de la canule de l’extrudeuse. Pré-traiter la membrane de polycarbonate avec l’eau ultrapure avant chaque test. On a caractérisé la taille des particules sur la nano-composition à base de l’EGCG avant et après le pressage à l’aide d’un analyseur de taille des particules à diffusion dynamique de la lumière Malvern Nano-ZS90, l’angle de test étant de 90° et la température de test étant de 25°C, on a effectué trois tests parallèles pour chaque groupe et fait les valeurs moyennes arithmétiques sur les résultats de test. Calculer taux de variation de la taille des particules de la nano-composition à base de l’EGCG avant et après le pressage selon la formule (2). où, D h0 représente la taille des particules de la nano-composition à base de l’EGCG avant le pressage D he représente la taille des particules de la nano-composition à base de l’EGCG après le pressage. Tableau 2 : Variation de la taille des particules de l’échantillon avant et après le pressage Échantillons Taille des particules avant pressage (nm) Taille des particules après pressage (nm) Taux de variation (%) Exemple 1 83,4 80,8 3,08 Exemple 2 105,2 94,3 10,40 Exemple 3 97,7 86,4 11,56 Exemple 4 126,2 108,2 14,32 Exemple 5 169,4 141,9 16,20 Exemple 6 88,4 79,0 10,68 Exemple 7 105,3 91,8 12,77 Exemple 8 134,2 116,6 13,11 Exemple 9 145,9 120,9 17,16 Exemple 10 102,9 95,1 7,54 Exemple 11 98,0 88,9 9,31 Exemple 12 106,9 96,1 10,10 Exemple 13 88,5 75,4 14,74 Exemple 14 107,0 93,2 12,86 Exemple 15 125,0 105,3 15,75 Exemple 16 98,8 87,8 11,09 Exemple 17 103,1 87,3 15,36 Exemple 18 105,1 87,4 16,89 Exemple 19 120,4 104,6 13,09 Exemple 20 105,1 93,0 11,49 Exemple 21 112,6 94,8 15,78 Exemple 22 97,0 85,8 11,47 Exemple 23 133,4 113,8 14,69 Exemple 24 134,0 105,1 21,55 Exemple 25 150,7 115,8 23,20 Exemple comparatif 1 164,5 95,9 41,70 Exemple comparatif 2 212,7 119,5 43,82 Exemple comparatif 3 212,8 91,9 56,81 Exemple comparatif 4 143,7 68,5 52,33 Exemple comparatif 5 155,6 65,6 57,84 Exemple comparatif 6 148,6 99,3 33,18 Exemple comparatif 7 137,2 86,9 36,66 Exemple comparatif 8 155,3 97,2 37,41 Exemple comparatif 9 188,6 104,3 44,70 Exemple comparatif 10 212,8 71,9 66,21 Exemple comparatif 11 201,6 74,4 63,10 Exemple comparatif 12 415,8 168,9 59,38 Comme présentée le tableau 2, en comparant les exemples 1 à 5, on peut voir que dans les précurseurs de la nano-composition, les quantités de lécithine de soja ajouté étaient différentes, et que les capacités de déformation des nano-compositions à base de l’EGCG finalement préparées étaient différentes. Avec l’augmentation de la quantité de lécithine de soja ajouté dans le précurseur de la nano-composition, la capacité de déformation de la nano-composition à base de l’EGCG finalement préparée augmentait d’abord puis diminuait, lorsque le pourcentage massique en lécithine de soja dans le précurseur de la nano-composition attendait 5 % (l’exemple 1), la capacité de déformation de la nano-composition à base de l’EGCG finalement préparée était la meilleure, et le taux de variation de la taille des particules de l’échantillon avant et après le pressage était le plus petit, soit de 3,08%, par conséquent, l’échantillon de l’exemple 1 pourrait efficacement éviter la libération soudaine d’EGCG due à la destruction de sa structure, c’est-à-dire que la nano-composition à base de l’EGCG de l’exemple 1 présentait une meilleure résistance au pressage et une meilleure stabilité. En comparant les exemples 1 et 6 à 9, on peut voir qu’en raison que les quantités de lécithine hydrogénée ajouté étaient différentes, la capacité de déformation des nano-compositions à base de l’EGCG finalement préparées étaient différents. Avec l’augmentation de la quantité de lécithine hydrogénée ajouté, la capacité de déformation de la nano-composition à base de l’EGCG finalement préparée augmentait d’abord puis diminuait, lorsque le pourcentage massique en lécithine hydrogénée dans la nano-composition à base de l’EGCG attendait 0,3% (l’exemple 1), la capacité de déformation de la nano-composition à base de l’EGCG finalement préparée était la meilleure. En comparant les exemples 1 et 10 à 12, on peut voir qu’en raison que les types du stabilisant de membrane rigide étaient différents, la capacité de déformation des nano-compositions à base de l’EGCG finalement préparées étaient différents. Dans les exemples 1 et 10 à 12, le stabilisant de membrane rigide était le cholestérol, le cholate de sodium, le résorcinol et la phénylalanine respectivement. Les résultats montrent que lorsque le cholestérol était choisi comme stabilisant de membrane rigide, la nano-composition à base de l’EGCG final présentait la meilleure capacité de déformation, une meilleure résistance au pressage et une meilleure stabilité. En comparant les exemples 1 et 13 à 15, on peut voir que la quantité du stabilisant de membrane rigide ajouté affectait la capacité de déformation du produit final. Les résultats montrent que, avec l’augmentation de la quantité du stabilisant de membrane rigide ajouté, la capacité de déformation de la nano-composition à base de l’EGCG finalement préparée augmentait d’abord puis diminuait, lorsque le pourcentage massique en stabilisant de membrane rigide dans la nano-composition à base de l’EGCG attendait 0,15% (l’exemple 1), la nano-composition à base de l’EGCG finalement préparée présentait la meilleure capacité de déformation, une meilleure résistance au pressage et une meilleure stabilité. En comparant les exemples 1 et 16 à 18, on peut voir que le type du stabilisant de membrane rigide ajouté affectait la capacité de déformation du produit final. Les résultats montrent que lorsque le triglycéride caprylique/caprique était choisi comme stabilisant de membrane souple (l’exemple 1), le produit final présentait la meilleure capacité de déformation, une meilleure résistance au pressage et une meilleure stabilité. En comparant les exemples 1 et 19 à 21, on peut voir que la quantité du stabilisant de membrane souple ajouté affectait la capacité de déformation du produit final. Les résultats montrent que, avec l’augmentation de la quantité du stabilisant de membrane souple ajouté, la capacité de déformation du produit augmentait d’abord puis diminuait, lorsque le pourcentage massique en stabilisant de membrane souple dans la nano-composition à base de l’EGCG attendait 1,5% (l’exemple 1), la nano-composition à base de l’EGCG finalement préparée présentait la meilleure capacité de déformation, une meilleure résistance au pressage et une meilleure stabilité. En comparant les exemples 1, 22 et 23, on peut voir qu’en raison que les quantités des précurseurs de la nano-composition ajoutés étaient différentes, les capacités de déformation des nano-compositions à base de l’EGCG finalement préparées étaient différents. Les résultats montrent que, avec l’augmentation de la quantité du précurseur de la nano-composition ajoutée, la capacité de déformation du produit augmentait d’abord puis diminuait, lorsque le pourcentage massique en précurseur de la nano-composition dans la nano-composition à base de l’EGCG attendait 5% (l’exemple 1), la nano-composition à base de l’EGCG finalement préparée présentait la meilleure capacité de déformation, une meilleure résistance au pressage et une meilleure stabilité. En comparant l’exemple 1, l’exemple comparatif 1 et l’exemple comparatif 2, on peut voir que, par rapport aux liposomes traditionnels, la présente demande adopte un auto-assemblage avec phospholipides en deux étapes, consistant à préparer d’abord un précurseur de la nano-composition pour encapsuler l’EGCG et puis effectuer un auto-assemblage sur le précurseur de la nano-composition avec les phospholipides pour une protection hydrogénée, ce qui permet d’obtenir finalement une nano-composition à base de l’EGCG présentant la meilleure capacité de déformation, une meilleure résistance au pressage et une meilleure stabilité. En comparant l’exemple 1 et les exemples comparatifs 3 à 5, on peut voir que, par rapport à l’utilisation d’un seul stabilisant de membrane rigide (exemple comparatif 3) ou l’utilisation d’un seul stabilisant de membrane souple (exemple comparatif 4) ou sans stabilisant de membrane ajouté (exemple comparatif 5), la présente demande utilise le stabilisant de membrane rigide et le stabilisant de membrane souple pour ajuster la composition des membranes phospholipidiques, ce qui permet d’obtenir finalement une nano-composition à base de l’EGCG présentant la meilleure capacité de déformation, une meilleure résistance au pressage et une meilleure stabilité. En comparant l’exemple 1 et les exemples comparatifs 6 et 7, on peut voir que, pendant la préparation des échantillons, la quantité de l’EGCG ajouté affectait la capacité de déformation du produit final. Par rapport à l’exemple 6 dans lequel l’EGCG était ajouté à la deuxième étape de l’auto-assemblage avec phospholipides de la préparation de la nano-composition à base de l’EGCG ou par rapport à l’exemple 7 dans lequel l’EGCG était ajouté après la préparation de la nano-composition à base de l’EGCG, dans l’exemple 1 de la présente demande, la nano-composition à base de l’EGCG était préparé en encapsulant d’abord l’EGCG pour préparer un précurseur de la nano-composition et en effectuant un auto-assemblage avec phospholipides en deux étapes, ce qui permet d’obtenir un échantillon finalement préparé présentant la meilleure capacité de déformation, une meilleure résistance au pressage et une meilleure stabilité. Par rapport à l’exemple 1 et l’exemple comparatif 8 dans lesquels l’EGCG était encapsulé en une seule étape, dans l’exemple 1 de la présente demande, la nano-composition à base de l’EGCG était préparé en encapsulant d’abord l’EGCG pour préparer un précurseur de la nano-composition et en effectuant un auto-assemblage avec phospholipides en deux étapes, ce qui permet d’obtenir un échantillon finalement préparé présentant la meilleure capacité de déformation, une meilleure résistance au pressage et une meilleure stabilité. Par rapport à l’exemple 1 et l’exemple comparatif 9 dans lesquels l’EGCG était ajouté à la phase aqueuse et mélangé avec une phase huileuse pour préparer un précurseur de la nano-composition, dans l’exemple 1 de la présente demande, l’EGCG était ajouté à une phase huileuse et mélangé avec une phase aqueuse pour préparer un précurseur de la nano-composition, ce qui permet d’obtenir une nano-composition à base de l’EGCG finalement préparée présentant la meilleure capacité de déformation, une meilleure résistance au pressage et une meilleure stabilité. Par rapport à l’exemple 1, l’exemple comparatif 10 et l’exemple comparatif 11 dans lesquels le précurseur de la nano-composition était modifié avec le chitosane (exemple comparatif 10) et la gomme arabique (exemple comparatif 11), dans l’exemple 1 de la présente demande, le lécithine hydrogénée était utilisé pour protéger le précurseur de la nano-composition, ce qui permet d’obtenir finalement une nano-composition à base de l’EGCG présentant la meilleure capacité de déformation, une meilleure résistance au pressage et une meilleure stabilité. Exemple de test 5 (test d ’ absorption transdermique) On a évalué la capacité d’absorption transdermique (perméabilité) de la nano-composition à base de l’EGCG des exemples 1 à 21 et des exemples comparatifs 1 à 13 à travers les tests d’absorption transdermique (perméabilité), comprenant les étapes suivantes : Dans les tests d’absorption transdermique in vitro, un pool de diffusion verticale était utilisé et la peau de souris nue était utilisé comme modèle (la peau abdominale, la couche de graisse sous-cutanée et les vaisseaux sanguins étaient éliminés). La solution PBS était utilisé comme solution de réception. Fixer une pièce de peau entre le pool d’alimentation et le pool de réception, avec la couche de peau vers le haut, et équilibrer pendant 20 min. Prélever les échantillons et les ajouter au pool d’alimentation, et extraire les solutions de réception après 1h, 4h, 8h et 24h. Désémulsifier les solutions de réception par ultrasons avec une solution mélangée composé du méthanol et de l’eau pendant 30 min, à raison de solution de réception : méthanol : eau = 1 :4 :5 (v/v), filtrer sur une membrane de filtre organique de 0,45 μm, déterminer la teneur en EGCG à l’aide d’un chromatographe en liquide à haute performance (HPLC, Shimadzu, Japon), et calculer la quantité de pénétration cumulée d’aire unitaire selon la formule (3). Effectuer trois tests parallèles pour chaque groupe et faire les valeurs moyennes arithmétiques sur les résultats de test. Où, Q n représente la pénétrabilité cumulée d’aire unitaire de l’échantillon au moment t ( μ g/cm 2 ), A représente la surface de pénétration, C n représente la valeur mesurée de la concentration en EGCG au moment t, C i représente la valeur mesurée de la concentration en EGCG prélevé au moment t, V représente le volume total de la solution de réception et V 0 représente le volume de prélèvement à chaque point de temps. Tableau 3 Résultats du test transdermique Échantillons Quantité de pénétration cumulée d’aire unitaire ( μ g/cm 2 ) 1 h 4 h 8 h 24 h Exemple 1 4,31 15,68 28,12 89,32 Exemple 2 3,5 12,4 23 73,4 Exemple 3 3,7 13,5 24,7 78,5 Exemple 4 3,4 12,1 22,1 71,4 Exemple 5 3,3 12,3 21,8 70,2 Exemple 6 3,6 13,6 24,1 76,3 Exemple 7 3,4 12,7 22,4 72,1 Exemple 8 3,5 12,5 22,2 72,7 Exemple 9 3,3 12,1 21,6 68,8 Exemple 10 3,9 14,5 25,3 80,1 Exemple 11 3,7 13,7 24,1 77,6 Exemple 12 3,6 13,6 24,0 75,4 Exemple 13 3,5 12,1 22,9 71,6 Exemple 14 3,5 12,8 22,7 72,6 Exemple 15 3,4 12,6 22,1 70,2 Exemple 16 3,5 12,7 23,0 73,1 Exemple 17 3,4 12,5 22,2 70,4 Exemple 18 3,3 12,1 21,9 69,7 Exemple 19 3,5 12,0 23,5 73,5 Exemple 20 3,5 13,1 23,6 74,2 Exemple 21 3,3 12,5 21,9 69,8 Exemple comparatif 1 1,9 7,1 12,6 42,5 Exemple comparatif 2 2,2 7,5 13,4 40,1 Exemple comparatif 3 1,7 6,3 11,2 35,4 Exemple comparatif 4 1,8 6,4 11,6 36,7 Exemple comparatif 5 1,4 5,6 10,3 32,6 Exemple comparatif 6 2,1 7,4 13,7 43,5 Exemple comparatif 7 2,1 7,5 13,5 44,2 Exemple comparatif 8 2,2 7,2 14,1 44,8 Exemple comparatif 9 1,9 7,1 13,1 41,3 Exemple comparatif 10 1,6 5,7 10,7 33,7 Exemple comparatif 11 1,6 5,1 9,9 31,5 Exemple comparatif 12 1,8 6,5 12,3 38,7 Exemple comparatif 13 (Solution aqueuse de l’EGCG) 0,45 2,67 5,18 14,71 Comme présentée le tableau 3, en comparant les exemples 1 à 5, on peut voir que dans les précurseurs de la nano-composition, les quantités de lécithine de soja ajouté étaient différentes, et que la capacité transdermique des nano-compositions à base de l’EGCG finalement préparées étaient différentes. Avec l’augmentation de la quantité de lécithine de soja ajouté dans le précurseur de la nano-composition, la capacité transdermique de la nano-composition à base de l’EGCG finalement préparée augmentait d’abord puis diminuait, lorsque le pourcentage massique en lécithine de soja dans le précurseur de la nano-composition attendait 5 % (l’exemple 1), la quantité de pénétration cumulée d’aire unitaire de l’EGCG dans le produit final à 1h, 4h, 8h et 24 était de 4,31 μ g/cm 2 , 15,68 μ g/cm 2 , 28,12 μ g/cm 2 et 89,32 μ g/cm 2 respectivement, supérieure à celle des échantillons des exemples 2 à 5, ce qui montrait que la capacité transdermique de l’exemple 1 était la meilleure. En comparant les exemples 1 et 6 à 9, on peut voir qu’en raison que les quantités de lécithine hydrogénée ajouté étaient différentes, la capacité transdermique des nano-compositions à base de l’EGCG finalement préparées étaient différents. Dans l’exemple 1 de la présente demande, le pourcentage massique en lécithine hydrogénée était de 0,3 %, et la quantité de pénétration cumulée d’aire unitaire de l’EGCG dans le produit final était la plus élevée, ce qui montrait que la capacité transdermique de l’exemple 1 était la meilleure. En comparant les exemples 1 et 10 à 15, le type et la quantité du stabilisant de membrane rigide ajouté affectaient tous deux la capacité transdermique du produit final. Lorsque le cholestérol était choisi comme stabilisant de membrane rigide à un pourcentage massique de 0,15% (exemple 1), la quantité de pénétration cumulée d’aire unitaire de l’EGCG dans le produit final était la plus élevée, ce qui montrait que la capacité transdermique correspondante était la meilleure. En comparant les exemples 1 et 16 à 21, le type et la quantité du stabilisant de membrane souple ajouté affectaient tous deux la capacité transdermique du produit final. Lorsque le triglycéride d’acide caprylique/caprique était choisi comme stabilisant de membrane rigide à un pourcentage massique de 1,5% (exemple 1), la quantité de pénétration cumulée d’aire unitaire de l’EGCG dans le produit final était la plus élevée, ce qui montrait que la capacité transdermique correspondante était la meilleure. En comparant l’exemple 1, l’exemple comparatif 1 et l’exemple comparatif 2, on peut voir que, par rapport aux liposomes traditionnels, la présente demande adopte un auto-assemblage avec phospholipides en deux étapes, consistant à préparer d’abord un précurseur de la nano-composition pour encapsuler l’EGCG et puis effectuer un auto-assemblage sur le précurseur de la nano-composition avec les phospholipides pour une protection hydrogénée, ce qui permet d’obtenir un produit final présentant la quantité de pénétration cumulée d’aire unitaire de l’EGCG la plus élevée, montrant que la capacité transdermique correspondante était la meilleure. En comparant l’exemple 1 et les exemples comparatifs 3 à 5, on peut voir que, par rapport à l’utilisation d’un seul stabilisant de membrane rigide (exemple comparatif 3) ou l’utilisation d’un seul stabilisant de membrane souple (exemple comparatif 4) ou sans stabilisant de membrane ajouté (exemple comparatif 5), la présente demande utilise le stabilisant de membrane rigide et le stabilisant de membrane souple pour ajuster la composition des membranes phospholipidiques, ce qui permet d’obtenir un produit final présentant la quantité de pénétration cumulée d’aire unitaire de l’EGCG la plus élevée, montrant que la capacité transdermique correspondante était la meilleure. En comparant l’exemple 1 et les exemples comparatifs 6 et 7, par rapport à l’exemple 6 dans lequel l’EGCG est ajouté à la deuxième étape de l’auto-assemblage avec phospholipides de la préparation de la nano-composition à base de l’EGCG ou par rapport à l’exemple 7 dans lequel l’EGCG est ajouté après la préparation de la nano-composition à base de l’EGCG, dans l’exemple 1 de la présente demande, la nano-composition à base de l’EGCG était préparé en encapsulant d’abord l’EGCG pour préparer un précurseur de la nano-composition et en effectuant un auto-assemblage avec phospholipides en deux étapes, ce qui permet d’obtenir un produit final présentant la quantité de pénétration cumulée d’aire unitaire de l’EGCG la plus élevée, montrant que la capacité transdermique correspondante était la meilleure. Par rapport à l’exemple 1 et l’exemple comparatif 8 dans lesquels l’EGCG était encapsulé en une seule étape, dans l’exemple 1 de la présente demande, la nano-composition à base de l’EGCG était préparé en encapsulant d’abord l’EGCG pour préparer un précurseur de la nano-composition et en effectuant un auto-assemblage avec phospholipides en deux étapes, ce qui permet d’obtenir un produit final présentant la quantité de pénétration cumulée d’aire unitaire de l’EGCG la plus élevée, montrant que la capacité transdermique correspondante était la meilleure. Par rapport à l’exemple 1 et l’exemple comparatif 9 dans lesquels l’EGCG était ajouté à la phase aqueuse et mélangé avec une phase huileuse pour préparer un précurseur de la nano-composition, dans l’exemple 1 de la présente demande, l’EGCG était ajouté à une phase huileuse et mélangé avec une phase aqueuse pour préparer un précurseur de la nano-composition, ce qui permet d’obtenir un produit final présentant la quantité de pénétration cumulée d’aire unitaire de l’EGCG la plus élevée, montrant que la capacité transdermique correspondante était la meilleure. Par rapport à l’exemple 1, l’exemple comparatif 10 et l’exemple comparatif 11 dans lesquels le précurseur de la nano-composition était modifié avec le chitosane (exemple comparatif 10) et la gomme arabique (exemple comparatif 11), dans l’exemple 1 de la présente demande, le lécithine hydrogénée était utilisé pour protéger le précurseur de la nano-composition, ce qui permet d’obtenir un produit final présentant la quantité de pénétration cumulée d’aire unitaire de l’EGCG la plus élevée, montrant que la capacité transdermique correspondante était la meilleure. Par rapport à l’exemple 1 et les exemples comparatifs 12 et 13 dans lesquels une forme de nano-émulsion était adoptée pour l’encapsulation de l’EGCG (exemple comparatif 12) et une solution aqueuse de l’EGCG était adoptée (exemple comparatif 13), dans l’exemple 1 de la présente demande, la nano-composition à base de l’EGCG était préparé en encapsulant d’abord l’EGCG pour préparer un précurseur de la nano-composition et en effectuant un auto-assemblage avec phospholipides en deux étapes, ce qui permet d’obtenir un produit final présentant la quantité de pénétration cumulée d’aire unitaire de l’EGCG la plus élevée, montrant que la capacité transdermique correspondante était la meilleure. Exemple de test 6 (test d ’ antioxydation- d ’ inhibition d ’ espèces d ’ oxygène réactives ROS) Digérer les Kératinocytes de la peau humaine (HaCaT), préparer une suspension cellulaire et inoculer dans une plaque de 96 puits à 1,0×10 5 à 2,0×10 5 cellules/puits. Cultiver dans un milieu DMEM pendant 24 h, changer le milieu, définir un groupe blanc (ajouter le tampon PBS, sans exposition à la lumière), un groupe témoin (ajouter le tampon PBS, avec l’exposition à la lumière) et un groupe de test (ajouter les échantillons des exemples et des exemples comparatifs avec une quantité d’ajout de 10% de la quantité de milieu de culture cellulaire), et cultiver pendant 24 h, puis exposer le groupe témoin et le groupe de test au rayon UVA (dose de 6 à 10 J/cm 2 ). Éliminer la culture cellulaire à la fin de l’exposition à la lumière, laver 3 fois avec le PBS, ajouter 100 μL de DCFH-DA à 10 μmol/L à chaque puits et incuber dans un incubateur à CO 2 pendant 20 min. Laver 3 fois avec le PBS à la fin de l’incubation, ajouter le milieu DMEM sans sérum, et déterminer la teneur en ROS à l’aide d’un lecteur de microplaques à fluorescence, avec une longueur d’onde d’excitation de 488 nm et une longueur d’onde d’émission de 525 nm. Le niveau relatif de ROS des cellules est le rapport de la valeur DO du groupe de test (ou la valeur DO du groupe témoin) à la valeur DO du groupe blanc. Tableau 4 : Niveaux relatifs de ROS des cellules HaCaT subies d’un photo-dommage et traitées avec le l’échantillon Échantillons Niveau relatif de ROS des cellules (%) Exemple 1 102,2 Exemple 2 111,5 Exemple 3 109,7 Exemple 4 112,8 Exemple 5 113,1 Exemple 6 109,2 Exemple 7 112,4 Exemple 8 113,7 Exemple 9 113,8 Exemple 10 107,5 Exemple 11 109,2 Exemple 12 110,6 Exemple 13 112,8 Exemple 14 111,1 Exemple 15 113,1 Exemple 16 110,9 Exemple 17 113,3 Exemple 18 112,4 Exemple 19 110,8 Exemple 20 110,4 Exemple 21 113,5 Exemple comparatif 1 121,3 Exemple comparatif 2 122,4 Exemple comparatif 3 125,1 Exemple comparatif 4 123,2 Exemple comparatif 5 123,7 Exemple comparatif 6 119,5 Exemple comparatif 7 120,2 Exemple comparatif 8 120,0 Exemple comparatif 9 123,8 Exemple comparatif 10 125,6 Exemple comparatif 11 125,5 Exemple comparatif 12 123,7 Exemple comparatif 13 (Solution aqueuse de l’EGCG) 124,2 Groupe blanc 100 Groupe témoin 152,3 On peut voir dans le tableau 4 que, le niveau relatif de ROS des cellules HaCaT subies d’un photo-dommage et traitées avec la nano-composition à base de l’EGCG obtenue dans les exemples 1 à 21 était inférieure à celle du groupe témoin, ce qui indique une bonne effet antioxydant pour réduire les dommages dus à la lumière. De plus, le niveau relatif de ROS des cellules HaCaT subies d’un photo-dommage et traitées avec la nano-composition à base de l’EGCG obtenue dans les exemples 1 à 21 était inférieure à celles des exemples comparatifs 1 à 13, ce qui indique un meilleur effet antioxydant des exemples 1 à 21, dans lesquels, le niveau relatif de ROS des cellules HaCaT subies d’un photo-dommage et traitées avec la nano-composition à base de l’EGCG de l’exemple 1 était le plus bas, soit de102,2%, ce qui indique que la nano-composition à base de l’EGCG de l’exemple 1 présentait le meilleur effet antioxydant et pouvait réduire efficacement les photodommages. Exemple de test 7 Réparation de dommages à l ’ ADN-Anti-photovieillissement (1) La rupture de double brin ADN est considérée comme la lésion la plus grave ADN, H2AX, le nom complet « H2A histone family member X », également appelé H2AX, est l’une des variantes de l’histone chromosomique H2A. Une fois le double brin ADN de cellule coupé, une modification de phosphorylation se produit à H2AX et H2AX phosphorylé est formé, soit γ-H2AX. Le niveau de teneur en γ-H2AX peut clairement refléter le degré de dommages et de réparation de l’ADN, et a été largement utilisé dans la recherche sur les dommages à l’ADN et l’apoptose, devenant un marqueur important des dommages à l’ADN. Le présent exemple de test de réparation des dommages à l’ADN utilise un kit de détection de dommages à l’ADN (immunofluorescence γ-H2AX, anticorps monoclonal murin, vert), qui peut être acheté directement auprès la société anonyme biotechnologique Biyuntian de Shanghai. Digérer les Kératinocytes de la peau humaine (HaCaT), préparer une suspension cellulaire et inoculer dans une plaque de 96 puits à 1,0×10 5 à 2,0×10 5 cellules/puits. Cultiver dans un milieu DMEM pendant 24 h, et exposer un groupe témoin blanc et un groupe de test au rayon UVA (dose de 6 à 10 J/cm 2 ). Éliminer la culture cellulaire à la fin de l’exposition à la lumière et laver 3 fois avec le PBS. Collecter les cellules par centrifugation et laver 1 fois avec PBS. Absorber complètement le PBS et disperser les cellules. Ajouter la solution de fixation fournie avec le kit, mettre doucement les cellules en suspension et fixer pendant 10 min. Centrifuger, éliminer la solution de fixation, ajouter la solution de lavage fournie avec le kit et laver 1 fois. Remettre les cellules en suspension avec une petite quantité de solution de lavage et ajouter la suspension goutte à goutte sur une lamelle ou une diapositive pour obtenir un étalement. Bien sécher, laver 2 fois avec la solution de lavage, ajouter 1 ml de solution de blocage de l’immunocoloration, et laisser à température ambiant pendant 15 minutes. Absorber la solution de blocage immunologique, ajouter 1 ml d’anticorps monoclonal murin γ-H2AX et incuber à température ambiante pendant 1 h. Laver 3 fois avec la solution de lavage, ajouter 1 ml d’anticorps murin 488 et incuber à température ambiante pendant 1 h. Laver 2 fois avec la solution de lavage, ajouter 1 ml de solution de coloration nucléaire (DAPI), colorer à température ambiante pendant 5 min, absorber la solution de coloration nucléaire et laver 3 fois avec la solution de lavage. Enfin, photographier les échantillons par méthode confocale laser et analyser. Les résultats de la réparation des dommages à l’ADN (méthode γ-H2AX) de l’exemple 1, de l’exemple comparatif 13 (solution aqueuse EGCG) et de la vitamine C (VC) sont montrés comme la FIG. 1 . Les résultats montrent que les cellules étaient exposées à la lumière (rayon ultraviolet) qui cause des dommages à l’ADN, et présentaient une teneur en fluorescence verte significativement réduite après un traitement par les groupes de test de l’exemple 1 et de l’exemple comparatif 13 et inférieure à celle du groupe VC, ce qui indique que l’effet de réparation du groupe de test (exemple 1 et exemple comparatif 13) sur les cellules endommagées à l’ADN était meilleur que celui du groupe témoin VC. De plus, après le traitement de l’exemple 1, la teneur en fluorescence verte des cellules était significativement inférieure à celle de l’exemple comparatif 13, ce qui indique que la nano-composition à base de l’EGCG dans l’exemple 1 avait un effet de réparation sur les cellules endommagées à l’ADN meilleur que la solution aqueuse d’EGCG sans traitement d’enveloppement. Exemple de test 8 Inhibition de la carbonylation des protéines -Test d ’ effet anti-jaunissement de la peau La carbonylation des protéines est une modification de carbonylation irréversible non enzymatique des protéines et les voies de formation des protéines carbonylées sont groupées en deux types en fonction de la participation des ROS ou non : (1) les ROS oxydent directement les acides aminés de la chaîne latérale des protéines pour former les protéines carbonylées (soit l’oxydation des radicaux libres) ; (2) Les protéines sont transformées en protéines carbonylées après les processus d’oxydation des lipides et de glycosylation non enzymatique (soit la glycosylation). Principe de détection de l’indice : Coloration DNPH : la teneur en carbonyle des protéines est un indice sensible à dommages oxydatifs des protéines. La colorimétrie à 2,4-dinitrophénylhydrazine (DNPH) est la méthode classique pour déterminer la teneur en carbonyle des protéines. La teneur en carbonyle des protéines oxydées augmente, et le carbonyle peut réagir avec 2,4-dinitrophénylhydrazide pour former 2,4-dinitrophénylhydrazone, qui présente une fluorescence verte après une coloration par fluorescence, et la capacité d’anti-carbonylation de l’échantillon peut être évaluée en analysant l’intensité de fluorescence de l’échantillon à tester, plus l’intensité de fluorescence verte étant faible, moins de produits carbonylés. Le carbonyle des protéines est un marqueur précoce d’une variété d’acides aminés dans le processus de modification par oxydation des protéines, et sa teneur indique le degré de dommages dus à l’oxydation des protéines, qui est le principal indice pour évaluer les dommages dus à l’oxydation des protéines. Inoculer les cellules L929 en phase de croissance logarithmique dans une plaque de 6 puits (100 000/puits), exposer les puits au rayon ultraviolet à raison de 10 min /puits une fois les cellules adhérées sur la paroi, administrer les échantillons différents à la même concentration aux puits différents et traiter les cellules après 48 h après l’administration. Le groupe carbonyle réagit avec 2,4-dinitrophénylhydrazine pour former 2,4-dinitrophénylhydrazone rouge présentant un pic d’absorption caractéristique à 370 nm. Les cellules qui ont été exposées au rayonnement pendant 10 min sans administration des échantillons constituaient le groupe témoin positif ; les cellules normales en phase de croissance logarithmique et les cellules sans exposition au rayonnement ultraviolet et sans administration des échantillons constituaient les groupes témoins négatifs. Les échantillons ajoutés au groupe de test sont les échantillons de l’exemple 1, de l’exemple comparatif 13 (solution aqueuse EGCG)) et la vitamine C (VC), et les résultats du test d’inhibition de la carbonylation des protéines sont montrés comme la FIG. 2 . Les résultats montrent que l’exposition des cellules (au rayon ultraviolet) causait l’augmentation significative de la teneur en carbonyle des protéines, la teneur en carbonyle des protéines significativement diminuait après un traitement par le groupe de test de l’exemple 1 et le groupe de test de l’exemple comparatif 13, qui était inférieure à celle du groupe VC, ce qui indique que l’effet d’inhibition de la carbonylation des protéines de l’exemple 1 et de l’exemple comparatif 13 était meilleur que celui du groupe de test VC, c’est-à-dire que l’EGCG avait un effet d’inhibition de la carbonylation des protéines meilleur que celui de la VC. De plus, après le traitement par le groupe de test de l’exemple 1, la teneur en carbonyle des protéines était significativement inférieure à celle du groupe de test de l’exemple comparatif 13, ce qui indique que la nano-composition à base de l’EGCG dans l’exemple 1 avait un effet d’inhibition de la carbonylation des protéines meilleures que celui de la solution aqueuse d’EGCG sans traitement d’enveloppement. Ainsi, la nano-composition à base de l’EGCG de la présente invention peut jouer un rôle antioxydant, anti-photovieillissement et anti-jaunissement de la peau. Procédé de préparation d’une nano-composition à base de l’EGCG à puissants effets antioxydant et anti-photovieillissement, caractérisé en ce qu’il comprend les étapes suivantes: (1) Préparation d’un précurseur de la nano-composition : Ajouter un phospholipide et l’EGCG à un solvant organique et agiter uniformément pour obtenir une phase organique ; ajouter un polyol à l’eau et agiter uniformément pour obtenir une phase aqueuse ; ajouter goutte à goutte la phase organique à la phase aqueuse à une vitesse constante, et une fois l’addition goutte à goutte terminée, agiter encore pour obtenir une solution mélangée; éliminer le solvant organique de la solution mélangée; et effectuer un traitement de séchage pour obtenir un précurseur de la nano-composition; En exprimant en pourcentage massique, la teneur en phospholipide dans la solution mélangée est de 1% à 10% ; (2) Préparation d’une nano-composition avec double phospholipide: Ajouter un phospholipide, un stabilisant de membrane rigide et un stabilisant de membrane souple au polyol, et agiter uniformément pour obtenir une phase alcoolique ; ajouter le précurseur de la nano-composition à l’eau, agiter et disperser jusqu’à obtenir une dispersion homogène pour obtenir une phase aqueuse; ajouter goutte à goutte la phase aqueuse à la phase alcoolique à une vitesse constante, et une fois l’addition goutte à goutte terminée, agiter encore pour obtenir une solution mélangée ; et effectuer un traitement de nanonisation sur la solution mélangée pour obtenir une nano-composition à base de l’EGCG, l’EGCG représentant un pourcentage massique de 0,6 % à 6,0 % de la nano-composition à base de l’EGCG; En exprimant en pourcentage massique, la teneur en phospholipide dans la solution mélangée est de 0,1 % à 1,0 %, la teneur en stabilisant de membrane rigide est de 0,1 % à 0,3 % et la teneur en stabilisant de membrane souple est de 0,5 % à 2,0 %; La structure moléculaire dudit stabilisant de membrane rigide comprend une unité de structure polycyclique ou une unité de structure à anneau benzénique ; la structure moléculaire dudit stabilisant de membrane souple est une structure à chaîne linaire ou un composé à chaîne linaire. Procédé de préparation selon la revendication 1, caractérisé en ce que, le stabilisant de membrane rigide comprend un ou plusieurs parmi le cholestérol, le phytostérol, le cholate de sodium, la vitamine D, le résorcinol, la phénylalanine et le phénylpropanol ; le stabilisant de membrane souple comprend un ou plusieurs parmi le triglycéride d’acide caprylique/caprique, le triglycéride d’acide caprylique/caprique/linoléique, le triglycéride caprylique/caprique/laurique, l’acide oléique, l’acide linoléique, l’octyldodécanol et l’oléate d’octyldodécyle. Procédé de préparation selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l’EGCG représente un pourcentage massique de 1% à 5% de la nano-composition à base de l’EGCG. Procédé de préparation selon la revendication 3, caractérisé en ce que, en exprimant en pourcentage massique, - à l’étape (1), la teneur en phospholipide dans la solution mélangée est de 3% à 7%, la teneur en EGCG est de 10 à 20 %, la teneur en polyol est de 1 à 10 %, la teneur en solvant organique est de 10 à 50 % et la teneur en eau est de 13 à 78 % ; - à l’étape (2), la teneur en phospholipide dans la solution mélangée est de 0,1 % à 0,5 %, le stabilisant de membrane rigide est de 0,1 % à 0,2 %, la teneur en stabilisant de membrane souple est de 1 % à 2 %, la teneur en polyol est de 5 % à 50 %, la teneur en précurseur de la nano-composition est de 1,0 % à 10 % et la teneur en eau est de 37,3 % à 88,4 %. Procédé de préparation selon la revendication 4, caractérisé en ce que, le phospholipide à l’étape (1) est au moins un parmi la lécithine de soja, la lécithine de soja hydrogénée, la lécithine hydrolysée enzymatiquement, la dipalmitoylphosphatidylcholine, la palmitoylphosphatidylglycérol et la lécithine de jaune d’œuf ; le phospholipide à l’étape (2) est au moins un parmi la lécithine de soja, la lécithine de soja hydrogénée, la dipalmitoylphosphatidylcholine, la palmitoylphosphatidylglycérol et la lécithine de jaune d’œuf. Procédé de préparation selon la revendication 5, caractérisé en ce que, le solvant organique à l’étape (1) est un ou plusieurs parmi l’éthanol absolu, le méthanol, le dichlorométhane, le trichlorométhane, l’acétone, le tétrahydrofurane, le n-hexane, l’éther de pétrole et l’acétate d’éthyle ; - le polyol à l’étape (1) est un alcool de sucre, qui est un ou plusieurs parmi le maltitol, le D-sorbitol, le xylitol, l’érythritol, le mannitol et le lactitol ; - le polyol à l’étape (2) est au moins un parmi le glycérol, 1,2-propanediol, 1,3-propanediol, 1,2-butanediol, 1,2-hexanediol, l’éthoxydiéthylène glycol, le dipropylène glycol et le polyéthylène glycol. Procédé de préparation selon la revendication 6, caractérisé en ce que, - les conditions des premières deux agitations à l’étape (1) : la vitesse d’agitation est de 100 à 800 tr/min ; la température d’agitation est de 30 à 80°C ; la durée d’agitation est de 20 à 60 min ; et la vitesse d’ajout goutte à goutte est de 1 à 10 ml/min ; les conditions de la troisième agitation : la vitesse d’agitation est de 100 à 800 tr/min ; la température d’agitation est de 30 à 80°C ; la durée d’agitation est de 10 à 30 min ; le solvant organique est éliminé de la solution mélangée par évaporation rotative à une vitesse d’évaporation rotative de 100 à 350 tr/min ; la température d’évaporation rotative est de 30 à 80 °C ; et la durée d’évaporation rotative est de 1 à 3 h ; - les conditions des premières deux agitations à l’étape (2) : la vitesse d’agitation est de 100 à 800 tr/min ; la température d’agitation est de 10 à 50°C ; la durée d’agitation est de 20 à 60 minutes ; et la vitesse d’ajout goutte à goutte est de 1 à 10 ml/min ; les conditions de la troisième agitation : la vitesse d’agitation est de 100 à 800 tr/min ; la température d’agitation est de 10 à 50°C ; et la durée d’agitation est de 10 à 30 minutes. Procédé de préparation selon la revendication 7, caractérisé en ce que, le traitement de nanonisation à l’étape (2) comprend une dispersion par cisaillement à grande vitesse et/ou une homogénéisation à microfluide ; la vitesse de rotation de la dispersion par cisaillement à grande vitesse est de 6000 à 12000 tr/min et la durée de dispersion par cisaillement est de 10 à 30 min ; une pression d’homogénéisation de l’homogénéisation à microfluide est de 50 à 120 MPa et un nombre de cycle d’homogénéisation est de 2 à 6. Nano-composition à base de l’EGCG préparée par le procédé de préparation selon l’une quelconque des revendications 1 à 8. Applications de la nano-composition à base de l’EGCG selon la revendication 9 dans les formulations dermiques topiques.