Brevet FR3163078A1 — publié le 20251212

TITRE : Méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères d’un stress sur la peau La présente invention concerne une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères d’un stress sur la peau, en particulier un stress lié à la pollution et/ou aux UVs. La présente invention concerne le diagnostic d’une exposition chronique d’un sujet à un stress, en particulier un stress affectant la peau d’un sujet. Figure pour l'abrégé : aucune Méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères d’un stress sur la peau La présente invention concerne une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères d’un stress sur la peau, en particulier un stress lié à la pollution et/ou aux UVs. La présente invention concerne le diagnostic d’une exposition chronique d’un sujet à un stress, en particulier un stress affectant la peau d’un sujet. De nombreux facteurs peuvent générer des imperfections au niveau de la peau et de son teint. Ces imperfections du teint de la peau sont une cause de plus en plus fréquente de consultations auprès de centres de soins esthétiques ou de cabinets dermatologiques. Parmi les facteurs de stress susceptibles d’affecter le teint de la peau, on peut citer l’exposition au soleil, l’exposition aux variations de températures et/ou d’humidité, l’exposition aux polluants ou à la fumée de cigarette. Ces différents stress tendent à brouiller le teint, le rendre inhomogène, terne, cireux ou jaunâtre et à provoquer, voire favoriser, la présence de désordres pigmentaires. Parmi les facteurs de stress affectant le teint de la peau, on peut aussi citer le stress, la fatigue, des changements hormonaux, une déshydratation de l’épiderme, une altération de la fonction barrière de la peau, le vieillissement ou une sécrétion excessive de sébum. Or, pour prévenir et/ou traiter les effets délétères sur la peau, il peut être utile d’en connaître la cause, en particulier parmi les différents stress mentionnés ci-dessus. Certains milieux urbains sont régulièrement soumis à des pics de pollution. L’individu dans son environnement quotidien et particulièrement en zone urbaine, peut être soumis à de multiples stress au niveau des matières kératiniques, et notamment la peau, par différents polluants aériens. Parmi les polluants connus, on citera en premier lieu les gaz d’échappement devenus un enjeu majeur dans les grandes villes, les métaux lourds mais aussi les particules fines ou encore les hydrocarbures aromatiques polycycliques tels que benzopyrène ou benzoanthracène. Ces polluants vont notamment entraîner au niveau de la peau, le dépôt de particules à la surface de l’épiderme, et entre autres conséquences, induire un teint de peau terne et/ou des désordres pigmentaires. Le soleil émet de nombreux rayonnements, dont 10 % sont constitués par des rayons ultraviolets (UVs). Seuls les rayons ultraviolets B (UVB, 280 à 320 nm) et les ultraviolets A (UVA, de 320 à 400 nm) atteignent la surface de la terre. Les UVA sont subdivisés en UVA courts (320 à 340 nm) et UVA longs (340 à 400 nm). La grande majorité des UVs reçus sur terre sont des UVA puisqu’ ils constituent en moyenne 95 % au moins des UVs reçus ; les UVB n’en représentant que 5 %. Parmi les 95 % d’UVA reçus, ce sont les UVA longs qui prédominent, représentant au moins 77 % des UV reçus sur Terre. Comparés aux UVB, les UVA sont plus abondants et plus permanents tout au long de l’année. Les UVA peuvent traverser l’épiderme et pénétrer profondément dans le derme. Les UVA génèrent dans les cellules de la peau des espèces réactives de l’oxygène, responsables de stress oxydatif. Par ces mécanismes, les UVA induisent des altérations profondes dans le derme et il a été clairement mis en évidence qu’ils sont responsables des signes de photo-vieillissement (taches de vieillesse, rides, sécheresse cutanée …). Le fait d’identifier l’exposition à la pollution et/ou aux UVs comme facteur responsable d’effets délétères sur la peau pourrait permettre de prévenir et/ou traiter ces effets de manière plus efficace. Il existe donc un besoin important de méthodes de diagnostic d’une exposition chronique d’un sujet à un stress, en particulier un stress affectant la peau. Il existe également un besoin important d’identifier les composés permettant de prévenir et/ou de traiter ces effets délétères. La présente invention répond à ce besoin. La présente invention résulte de la découverte inattendue par les inventeurs que des fibroblastes de la peau exposés à un stress présentaient des caractéristiques biologiques significativement différentes, notamment au niveau de leur capacité de prolifération, leur contractilité et l’organisation de la matrice extracellulaire formée par ceux-ci, par rapport à des individus non-exposés à un tel stress. La présente invention concerne ainsi une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères d’un stress sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : mettre en contact un composé candidat avec un échantillon biologique comprenant au moins un fibroblaste, puis évaluer au moins une des caractéristiques biologiques de fibroblastes dudit échantillon; dans laquelle les caractéristiques biologiques de fibroblastes sont choisies parmi : la capacité de prolifération des fibroblastes, la contractilité des fibroblastes et l’organisation de la matrice extracellulaire formée par ces fibroblastes ; comparer ladite caractéristique évaluée à l’étape a) à la même caractéristique dans un échantillon biologique comprenant au moins un fibroblaste, non mis en contact avec ledit composé ; et identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères dudit stress sur la peau, lorsque l’une au moins des conditions ci-dessous est remplie : une augmentation de la capacité de prolifération des fibroblastes, une diminution de la contractilité des fibroblastes, et/ou une diminution de la taille et/ou de l’aire de la surface des pores de la matrice extracellulaire formées par les fibroblastes ; dans l’échantillon biologique qui a été mis en contact avec ledit composé candidat par rapport à l’échantillon biologique qui n’a pas été mis en contact avec le composé candidat ladite méthode comprenant en outre une étape d’exposition desdits échantillons biologiques à un stress. Dans un mode de réalisation particulier, l’étape d’exposition desdits échantillons biologiques à un stress est une étape d’exposition aux hydrocarbures polycycliques aromatiques (PAHs) et/ou aux ultraviolets A (UVA). L’invention concerne également une méthode de diagnostic d’une exposition chronique d’un sujet à un stress, en particulier un stress affectant la peau d’un sujet, comprenant la mesure d’au moins une des caractéristiques biologiques de fibroblastes d’un échantillon de peau dudit sujet, dans laquelle les caractéristiques biologiques de fibroblastes sont choisies parmi la capacité de prolifération des fibroblastes, la contractilité des fibroblastes et l’organisation de la matrice extracellulaire formée par ceux-ci. Un autre objet l’invention concerne une méthode d’exposition d’un modèle, de préférence un modèle de peau ou de derme, à un stress chronique comprenant l‘exposition dudit modèle: à au moins un hydrocarbure polycyclique aromatique, de préférence à du benzo-a-pyrène (BaP), et/ou à une irradiation d’UVA. Ainsi l’invention concerne également un modèle de peau ou de derme d’une exposition chronique à un stress susceptible d’être obtenu par cette méthode. Toutes les méthodes décrites dans la présente invention sont de préférence des méthodes in vitro . Description détaillée de l’invention Fibroblastes Le derme fournit à l'épiderme un support solide. C'est également son élément nourricier. Il est principalement constitué de fibroblastes et d'une matrice extracellulaire. Par « fibroblastes » ici on entend "fibroblaste dermique", c’est à dire tout fibroblaste provenant du derme. Le derme contient plus précisément deux couches distinctes : la couche superficielle papillaire (300-400 µm, qui est située au contact de l'épiderme) et la couche réticulaire sous-jacente (qui s'étend jusqu'à l'hypoderme). Des travées conjonctives de derme peuvent en outre s'étendre dans l'hypoderme. De préférence les fibroblastes selon l’invention sont choisi parmi les fibroblastes papillaires, les fibroblastes réticulaires, les fibroblastes de la jonction dermo-hypodermique et leurs mélanges. De manières particulièrement préférée les fibroblastes selon l’invention sont des fibroblastes papillaires. Par "fibroblaste papillaire", on entend ici un fibroblaste du derme papillaire, le derme papillaire étant caractérisé par une matrice extracellulaire relativement fine et une forte densité cellulaire. Les fibroblastes papillaires en culture ont typiquement une morphologie mince et fusiforme. Par "fibroblaste réticulaire", on entend ici un fibroblaste du derme réticulaire, le derme réticulaire étant caractérisé par un réseau très dense de fibres matricielles et une faible densité cellulaire. Les fibroblastes réticulaires en culture ont typiquement une apparence étendue et plus étoilée. Par « fibroblaste de la jonction dermo-hypodermique » ou « FJDH », on entend ici on entend ici un fibroblaste de la zone se trouvant au niveau des travées conjonctives émises par le derme dans l'hypoderme (voir Haydont V, et al., Fibroblasts from the Human Skin Dermo-Hypodermal Junction are Distinct from Dermal Papillary and Reticular Fibroblasts and from Mesenchymal Stem Cells and Exhibit a Specific Molecular Profile Related to Extracellular Matrix Organization and Modeling. Cells. 2020 Feb 5;9(2):368). Les fibroblastes FJDH en culture ont typiquement une morphologie très hétérogène. Ainsi, des formes très diverses peuvent être observées dans le tapis cellulaire allant de toutes petites cellules tricuspides, à de très larges cellules multipolaires présentant un réseau trabéculaire intracellulaire fortement marqué (visible en microscopie optique). Le type de fibroblaste (papillaire, réticulaire ou autre) peut être déterminé au vu de sa morphologie, de sa provenance ou de biomarqueurs détectés. Par « caractéristiques biologiques de fibroblastes » on entend des caractéristiques phénotypiques des fibroblastes qui peuvent être mise en évidence par leur culture et/ou par des tests. De préférence les caractéristiques biologiques selon l’invention comprennent la capacité de prolifération, la contractilité et/ou l’organisation de la matrice extracellulaire formée par les fibroblastes. La capacité de prolifération des fibroblastes est la capacité de se multiplier des dites cellules. La mesure de la prolifération cellulaire est une mesure de routine pour l’homme du métier. Elle peut notamment se faire, dans le cas des fibroblastes, en estimant le temps doublement de la population cellulaire lors de la culture des fibroblastes ou encore en estimant le nombre de doublement de population observé sur un temps donné par exemple entre chaque passage. Le nombre de doublement de population de fibroblastes (ou DP) est notamment calculé selon la formule suivante : DP = log (nombre de cellules comptées à l’issue de l’expansion / nombre de cellules ensemencées) / log2. Puis, le nombre de doublement de population de fibroblastes cumulé (ou DP cumulé) est obtenu en additionnant les DP de chaque passage des fibroblastes, par exemple : DP cumulé = DP passage 1 + DP passage 2 + DP passage 3. Un passage correspond à l’obtention d’une confluence des cellules dans leur support de culture d’environ 80%, puis au détachement des cellules du support de culture, notamment à l’aide de la trypsine, puis à leur dilution et réensemencement dans un nouveau support de culture. La contractilité des fibroblastes est leur capacité à contracter un gel de collagène. Cette caractéristique des fibroblastes est bien connue et plusieurs techniques sont utilisées pour la mesurer. La contraction du gel peut notamment être induite par différents moyens, comme par exemple par stimulation par TGFβ, par l'acide lysophosphatidique (LPA), ou par détachement du gel de son contenant. A titre d’agents bloquant cette contraction on peut citer les composés de la famille des inhibiteurs de ROCK (pour « Rho-associated protein kinase ») tel que le Y-27632. La contractilité des fibroblastes peut être estimée à partir du diamètre mesuré d’un équivalent de derme formé par la mise en culture de fibroblastes à tester dans une solution de collagène, en particulier de collagène de type I, puis après polymérisation du collagène, l’induction de la contraction du gel obtenu. De préférence on ajoute 50 000, 75 000, 100 000 fibroblastes à une solution de collagène pour un ratio poids/volume compris entre 15 et 30%, de préférence compris entre 20 et 27%. De préférence on ajoute 50 000, 75000, 100 000 fibroblastes à une solution de collagène pour un volume final compris entre 3 et 7 ml, de préférence compris entre 4 et 6 ml. Les fibroblastes du derme sont connus pour générer une matrice extracellulaire qui sert de support à l’épiderme. Cette matrice extracellulaire est notamment composée de collagène. Par « l’organisation de la matrice extracellulaire » formée par les fibroblastes, on entend ici le réseau de collagène et plus particulièrement de collagène de type I formée par ceux-ci. En effet, le réseau moléculaire constitué par le collagène de type I se compose d’une organisation de fibre plus ou moins denses et enchevêtrées. Ces fibres dessinent parfois le contour de pores (absence de fibres). Le nombre, la taille moyenne et l’aire de la surface couverte par ces pores peuvent être plus ou moins important selon les conditions de stress auxquels les fibroblastes ont été préalablement exposés. Le nombre, l’aire de la surface couverte, la taille moyenne de ces pores caractéristiques peuvent être étudiés par analyse d’image acquise par microscopie de la matrice extracellulaire. De préférence par « l’organisation de la matrice extracellulaire formée par les fibroblastes », on entend la taille et/ou l’aire de la surface des pores, de préférence la taille moyenne et/ou la moyenne des aires de surface des pores, de préférence l’aire de la surface des pores supérieure à 0,04 mm 2 . Par « taille des pores » on entend le diamètre des pores lorsque la surface des pores est circulaire, la longueur et la largeur étant identiques ; ou encore la longueur et/ou la largeur lorsque la surface des pores est ovale ou elliptique, la longueur et la largeur correspondent respectivement au grand axe et au petit axe d’une ellipse. Par « surface des pores » on entend un ensemble de points créé par l’enchevêtrement de fibres de collagène, notamment de fibres de collagène de type I, délimitant un espace en deux dimensions, cet espace est encore appelé pore. Plus préférentiellement, la surface de pores est créée par l’intersection d’au moins deux fibres de collagène, encore mieux, la surface de pores est créée par l’intersection d’au moins trois fibres de collagène. De préférence, la surface des pores est plane. L’aire de la surface des pores peut être mesurée à l’aide du logiciel Image J qui est un logiciel multiplate-forme, libre et open source de traitement et d'analyse d'images développé par les National Institutes of Health, en 1997. L’aire de la surface des pores est de préférence exprimée en mm 2 . Echantillons et équivalents L’échantillon de peau d’un sujet selon l’invention est un échantillon de peau ex vivo . Typiquement, l’échantillon de peau du sujet peut être prélevé par biopsie ou par échantillonnage, ce dernier est préférentiellement effectué de manière non invasive, et en particulier ne nécessite pas d’anesthésie locale. De préférence l’échantillon de peau d’un sujet est choisi parmi un explant de peau humaine, une biopsie cutanée, et une microbiopsie. Par « sujet », on entend ici un être humain, âgé de 18 à 80 ans, de préférence âgé de 20 à 40 ans. De préférence, le sujet est une femme. De préférence, le sujet est de type caucasiens. Dans un mode de réalisation préféré le sujet ne souffre pas de pathologies de la peau. Dans un mode de réalisation particulier, le sujet a entre 20 et 40 ans. Dans la présente demande, l’équivalent de peau et l’équivalent de derme sont également appelés modèle de peau et modèle de derme, respectivement. Le modèle de peau ou d’épiderme est tout modèle in vitro de peau reconstruite ou de derme reconstruit comprenant au moins un fibroblaste. L’équivalent de peau comprend un équivalent de derme et un équivalent d’épiderme. En particulier, l'équivalent de peau selon l'invention comprend, sur l'équivalent de derme, un équivalent d'épiderme comprenant au moins des kératinocytes. L’équivalent de derme comprend au moins des fibroblastes, il peut être un modèle cellulaire (aussi appelé modèle 2D) comprenant au moins un fibroblaste mis en culture. Les kératinocytes et les fibroblastes peuvent provenir de toute origine mais sont préférentiellement d'origine humaine. Ils peuvent être préparés par n'importe quelle méthode bien connue de l'homme du métier. De préférence, les kératinocytes et/ou les fibroblastes sont des cellules de peau humaine normale. Stress Par « stress » on entend ici une pression ou une contrainte environnementale. Les stress ont typiquement des effets délétères sur l’organisme. De préférences les stress selon l’invention induisent des effets délétères sur la peau tels qu’un teint de peau terne, des désordres pigmentaires, des taches de vieillesse, des rides et une sécheresse cutanée. De préférence un stress selon l’invention est une exposition, de préférence chronique, à la pollution et/ou aux UVs, particulièrement aux hydrocarbures aromatiques polycycliques (PAH) et/ou aux UVA. Par « exposition chronique » d’un sujet, on entend ici une exposition régulière, en particulier journalière, pendant une période donnée, de préférence une période de plus d’un an, éventuellement interrompue à une ou plusieurs reprises pendant de courtes durées, typiquement des durées de moins d’un mois, de préférence de moins d’une semaine. Par « pollution », on entend ici l’exposition à des agents polluants, en particulier à des particules de matière, et préférentiellement à des hydrocarbures aromatiques polycycliques (PAH). Comme il est bien connu de l’homme du métier les PAH sont une sous-famille des hydrocarbures aromatiques dont la structure comprend au moins 2 cycles aromatiques condensés. Ils sont produits par la combustion incomplète de matière organique (charbon, pétrole, gaz, déchets et biomasse, cigarette) et libérés comme contaminants environnementaux. Les PAH incluent typiquement l’acénaphtylène, l’acénaphtène, le fluorène, le phénanthrène, l’anthracène, le fluoranthène, le pyrène, le benz[a]anthracène, le chryzène, le benzo-b-fluoranthène, le benzo-k-fluoranthène, le benzo[a]pyrène, l’indéno[1,2,3- cd ]pyrène, le dibenz-a-h-anthracène, le benzo-g-h-i-pérylène. Dans un mode de réalisation particulier, les PAH sont sélectionnés parmi l’acénaphtylène, le fluorène, le phénanthrène, l’anthracène, le fluoranthène, le pyrène, le benz[a]anthracène et le benzo[a]pyrène (BaP). Dans un mode de réalisation particulier, le PAH est le benzo[a]pyrène (BaP). Par « UVs » on entend ici un rayonnement de longueur d’onde allant de 400 à 100 nm. Lorsque le stress selon l’invention est une exposition aux UVs, celle-ci est de préférence dues à une exposition solaire ou à des UVs dits artificiels, par exemple en cabine de bronzage. Par définition, les UVA longs désignent des rayonnements UVs de longueurs d’onde allant de 340 à 400 nm, les UVA courts désignent des rayonnements UVs de longueurs d’onde allant de 315 à 339 nm. Un « rayonnement comprenant des UVA longs » désigne donc un rayonnement comprenant des rayonnements de longueurs d’onde allant de 340 à 400 nm. Le rayonnement comprenant des UVA longs peut être un rayonnement constitué de, ou comprenant essentiellement, des rayonnements de longueurs d’onde de 320 nm à 450 nm (UVA totaux et une partie de rayonnement dans le domaine du visible de 400 à 450 nm). Ce type de rayonnement peut être obtenu par exemple à l’aide d’un simulateur solaire équipé d’une lampe xénon et d’un filtre WG 335 / 3 mm délivrant un spectre compris entre 320 et 450 nm. Le rayonnement comprenant des UVA longs peut être un rayonnement constitué de, ou comprenant essentiellement, des rayonnements de longueurs d’onde de 340 nm à 450 nm (UVA longs et une partie de rayonnement dans le domaine du visible de 400 à 450 nm). Ce type de rayonnement peut être obtenu par exemple à l’aide d’un simulateur solaire équipé d’une lampe xénon et d’un filtre WG 360 / 2 mm supprimant les longueurs d’onde inférieures à 340 nm. Par rayonnement comprenant « essentiellement » des rayonnements de longueurs d’onde spécifiées, on entend que l’irradiance spectrale (exprimée en mW.cm -2 .nm -1 en fonction de la longueur d’onde en nm) entre les longueurs d’ondes spécifiées représente au moins 80%, de préférence au moins 90%, de l’irradiance spectrale totale. De préférence, le rayonnement comprenant des UVA longs est constitué majoritairement d’UVA longs, c'est-à-dire que l’irradiance spectrale (exprimée en mW.cm - 2 .nm -1 en fonction de la longueur d’onde en nm) pour les longueurs d’ondes de 340 à 400 nm représente au moins 50%, de préférence au moins 60%, de l’irradiance spectrale totale. L’exposition d’échantillon à un stress selon l’invention peut être réalisé par diverses méthodes connues de l’homme du métier. De préférence l’échantillon est exposé à la pollution et/ou aux UVs, encore plus particulièrement aux hydrocarbures polycycliques aromatiques (PAHs) et/ou aux UVA. Cette exposition peut être réalisée par la mise en culture de fibroblastes issus de l’échantillon biologique : en présence d’au moins un hydrocarbure polycyclique aromatique, de préférence en présence de benzo-a-pyrène (BaP), et/ou avec une exposition des fibroblastes à une irradiation d’UVA. De préférence ledit au moins un hydrocarbure polycyclique aromatique est présent en une concentration comprise entre 0,1 nM et 100 nM, plus particulièrement entre 0,5 nM et 50 nM, entre 1 nM et 10nM, et plus particulièrement entre 3 nM et 8 nM, pendant au moins 7 jours, au moins 14 jours, au moins 21 jours, au moins 28 jours. Ledit au moins un hydrocarbure polycyclique aromatique pouvant être ajouté directement dans le milieu de culture, de préférence après dilution dans du diméthylsulfoxyde (DMSO). De préférence l’irradiation est réalisée avec un rayonnement comprenant des UVA et plus particulièrement comprenant des UVA longs, pendant au moins 10 minutes, au moins 20 minutes, de préférence au moins 30 minutes. Cette exposition est de préférence réalisée à intervalle régulier, de préférence au moins une fois par semaine, deux fois par semaine ou trois fois par semaine, sur une durée totale d’au moins 7 jours, au moins 14 jours, au moins 21 jours, au moins 28 jours. Pendant l’irradiation, le milieu de culture est de préférence remplacé pour ne pas contenir d’hydrocarbure polycyclique aromatique. Méthode d’identification d’un composé La présente invention concerne ainsi une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères d’un stress sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : mettre en contact un composé candidat avec un échantillon biologique comprenant au moins un fibroblaste, puis évaluer au moins une des caractéristiques biologiques de fibroblastes dudit échantillon; dans laquelle les caractéristiques biologiques de fibroblastes sont choisies parmi : la capacité de prolifération des fibroblastes, la contractilité des fibroblastes et l’organisation de la matrice extracellulaire formée par ces fibroblastes ; comparer ladite caractéristique évaluée à l’étape a) à la même caractéristique dans un échantillon biologique comprenant au moins un fibroblaste, non mis en contact avec ledit composé ; et identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères dudit stress sur la peau, lorsque l’une au moins des conditions ci-dessous est remplie : une augmentation de la capacité de prolifération des fibroblastes, une diminution de la contractilité des fibroblastes, et/ou une diminution de la taille et/ou de l’aire de la surface des pores de la matrice extracellulaire formées par les fibroblastes ; dans l’échantillon biologique qui a été mis en contact avec ledit composé candidat par rapport à l’échantillon biologique qui n’a pas été mis en contact avec le composé candidat, ladite méthode comprenant en outre une étape d’exposition desdits échantillons biologiques à un stress. La méthode d’identification de l’invention est de préférence mise en œuvre ex vivo . Le composé ou composé candidat pour l’identification peut être n’importe quelle molécule ou actif, par exemple de nature organique, minérale ou particulaire. L'échantillon biologique selon l’invention comprend au moins un fibroblaste dermique, tel que défini dans la section " Fibroblastes " ci-dessus. L'échantillon biologique peut en particulier être une culture in vitro de fibroblastes dermiques ou d'un mélange de fibroblastes dermiques, un échantillon de peau d’un sujet, ou un échantillon provenant d'un équivalent de derme ou de peau. L’étape c) comprend l’identification dudit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères d’un stress sur la peau, lorsque l’une au moins des conditions ci-dessous est remplie : une augmentation de la capacité de prolifération des fibroblastes, une diminution de la contractilité des fibroblastes, et/ou une diminution de la taille et/ou de l’aire de la surface des pores de la matrice extracellulaire formées par les fibroblastes ; De préférence lesdites augmentations ou diminutions sont significatives, c’est-à-dire que la variation est statistiquement significative, typiquement avec une p-value inférieure à 0,01, plus préférentiellement inférieure à 0,001, après application du test statistique approprié. De préférence, dans la méthode d’identification d’un composé selon l’invention, si le ratio de contractilité du gel est diminué de plus de 10% par rapport à la contractilité obtenue avec l’échantillon biologique qui n’a pas été mis en contact avec ledit composé candidat (aussi appelé échantillon contrôle), de préférence diminué de plus de 12%, encore mieux diminué de plus de 15%, alors le composé est identifié comme permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères d'un stress sur la peau. Le ratio de contractilité est de préférence calculé à partir du diamètre mesuré d’un équivalent de derme formé par la mise en culture de fibroblastes dans une solution de collagène, en particulier de collagène de type I, obtenu avec l’échantillon biologique qui a été mis en contact avec ledit composé candidat divisé par le diamètre mesuré d’un équivalent de derme formé par la mise en culture de fibroblastes dans une solution de collagène, en particulier de collagène de type I, obtenu avec l’échantillon biologique qui n’a pas été mis en contact avec ledit composé candidat (aussi appelé échantillon contrôle), De préférence, dans la méthode d’identification d’un composé selon l’invention, si le nombre de doublement de population cumulé de fibroblastes est augmenté d’au moins 1,5 par rapport au nombre de doublement de population cumulé de fibroblastes obtenu avec l’échantillon biologique qui n’a pas été mis en contact avec ledit composé candidat (aussi appelé échantillon contrôle), de préférence, augmenté d’au moins 2, encore mieux, augmenté d’au moins 2,4, alors le composé est identifié comme permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères d’un stress sur la peau. De préférence, dans la méthode d’identification d’un composé selon l’invention, si l’aire de la surface de pores, notamment l’aire de la surface des pores supérieure à 0,04 mm 2 est diminuée d’un facteur d’au moins 1,1 par rapport à l’aire de la surface des pores obtenue avec l’échantillon biologique qui n’a pas été mis en contact avec ledit composé candidat (aussi appelé échantillon contrôle), de préférence, diminuée d’un facteur compris entre 1,1 et 3, encore mieux diminuée d’un facteur compris entre 1,1 et 2,9 alors le composé est identifié comme permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères d’un stress sur la peau. De préférence, dans la méthode d’identification d’un composé selon l’invention, si l’aire de la surface de pores, notamment l’aire de la surface des pores supérieure à 0,04 mm 2 est diminuée d’un facteur compris entre 1,2 entre 2,7 par rapport à l’aire de la surface des pores obtenue avec l’échantillon biologique qui n’a pas été mis en contact avec ledit composé candidat (aussi appelé échantillon contrôle), de préférence, diminuée d’un facteur compris entre 1,2 et 2,69, alors le composé est identifié comme permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères d’un stress sur la peau tel que la pollution, de préférence, l’exposition aux hydrocarbures polycycliques aromatiques (PAHs) comme le benzo[a]pyrène. De préférence, dans la méthode d’identification d’un composé selon l’invention, si l’aire de la surface de pores, notamment l’aire de la surface des pores supérieure à 0,04 mm 2 est diminuée d’un facteur compris entre 1,1 entre 2,9 par rapport à l’aire de la surface des pores obtenue avec l’échantillon biologique qui n’a pas été mis en contact avec ledit composé candidat (aussi appelé échantillon contrôle), de préférence, diminuée d’un facteur compris entre 1,1 et 2,87, alors le composé est identifié comme permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères d’un stress sur la peau tel que la pollution et les UV, de préférence, l’exposition aux hydrocarbures polycycliques aromatiques (PAHs) comme le benzo[a]pyrène et aux UVA. La méthode d’identification comprend une étape d’exposition desdits échantillons biologiques à un stress, et plus particulièrement une étape d’exposition à la pollution et/ou aux UVs, encore plus particulièrement aux hydrocarbures polycycliques aromatiques (PAHs) et/ou aux UVA. L’exposition des échantillons à un stress selon l’invention peut être réalisée: avant la mise contact de l’étape a) ; et /ou après la mise en contact mais avant l’évaluation des caractéristiques biologiques de fibroblastes dudit échantillon. Méthode de diagnostic La présente invention concerne une méthode de diagnostic d’une exposition chronique d’un sujet à un stress, en particulier un stress affectant la peau d’un sujet, comprenant la mesure d’au moins une des caractéristiques biologiques de fibroblastes d’un échantillon de peau dudit sujet, dans laquelle les caractéristiques biologiques de fibroblastes sont choisies parmi la capacité de prolifération des fibroblastes, la contractilité des fibroblastes et l’organisation de la matrice extracellulaire formée par ceux-ci. De préférence cette méthode comprend en outre les étapes consistant à : comparer le niveau de la caractéristique biologique mesurée avec un contrôle, et sur la base de la comparaison de l’étape (a), déterminer si le sujet, en particulier la peau du sujet, a subi une exposition chronique à un stress. Par « contrôle » ou « niveau contrôle », on entend ici une valeur de référence correspondant de préférence au niveau de la caractéristique biologique mesuré dans un échantillon de peau connu comme n’étant pas exposé à un stress et en particulier à un stress chronique selon l’invention. Le niveau contrôle étant typiquement le niveau de la caractéristique biologique mesuré chez un sujet vivant dans une ville peu polluée, en particulier une ville présentant un index de qualité d’air concernant les particules fines ( Dans un mode de réalisation particulier, le contrôle est une valeur de référence. Dans un mode de réalisation particulier, la valeur de référence est déterminée par la valeur moyenne du niveau de la caractéristique biologique dans une population déterminée, par exemple une population dans une tranche d’âge déterminée, et/ou ayant un type de peau défini. Dans un mode de réalisation particulier, la valeur de référence est la valeur moyenne du niveau de ladite caractéristique biologique chez une population de sujets vivants dans une ville peu polluée, en particulier une ville présentant un index de qualité d’air concernant les particules fines ( Dans un mode de réalisation particulier, la valeur de référence est déterminée par une étude ROC (« La courbe ROC (receiver operating characteristic) principes et principales applications en biologie clinique », H. Delacour et al., Ann Biol Clin 2005 ; 63 (2) : 145-54). Dans un mode de réalisation particulier de l’invention, la méthode est une méthode de diagnostic d’une exposition d’un sujet aux UV, comprenant la mesure d’au moins une des caractéristiques biologiques de fibroblastes d’un échantillon de peau exposé aux UVs dudit sujet et dans lequel le contrôle est un échantillon de peau dudit sujet sur une partie du corps peu exposée aux UVs. L’étape b) comprend la détermination du sujet, et en particulier de la peau du sujet, comme ayant subi une exposition chronique à un stress, lorsque l’une au moins des conditions ci-dessous est remplie : une diminution de la capacité de prolifération des fibroblastes, une augmentation de la contractilité des fibroblastes, et/ou une augmentation de la taille et/ou de l’aire de la surface des pores de la matrice extracellulaire formées par les fibroblastes ; est observée par rapport au contrôle. De préférence lesdites augmentations ou diminutions sont significatives, c’est-à-dire que la variation est statistiquement significative, typiquement avec une p-value inférieure à 0,01, plus préférentiellement inférieure à 0,001, après application du test statistique approprié. De préférence, dans la méthode de diagnostic selon l’invention, si le ratio de contractilité du gel est augmenté de plus de 10% par rapport au contrôle, de préférence augmenté de plus de 12%, encore mieux augmenté de plus de 15%, alors le sujet est déterminé comme ayant subi une exposition chronique à un stress. Le ratio de contractilité est de préférence calculé à partir du diamètre mesuré d’un équivalent de derme formé par la mise en culture de fibroblastes dans une solution de collagène, en particulier de collagène de type I, obtenu avec l’échantillon de peau du sujet, De préférence, dans la méthode de diagnostic selon l’invention, si le nombre de doublement de population cumulé de fibroblastes est diminué d’au moins 1,5 par rapport au contrôle, de préférence, diminué d’au moins 2, encore mieux, diminué d’au moins 2,4, alors le sujet est déterminé comme ayant subi une exposition chronique à un stress. De préférence, dans la méthode de diagnostic selon l’invention, si l’aire de la surface de pores, notamment l’aire de la surface des pores supérieure à 0,04 mm 2 est augmentée d’un facteur d’au moins 1,1 par rapport au contrôle, de préférence, augmentée d’un facteur compris entre 1,1 et 3, encore mieux augmentée d’un facteur compris entre 1,1 et 2,9 alors le sujet est déterminé comme ayant subi une exposition chronique à un stress. De préférence, dans la méthode de diagnostic selon l’invention, si l’aire de la surface de pores, notamment l’aire de la surface des pores supérieure à 0,04 mm 2 est augmentée d’un facteur compris entre 1,2 entre 2,7 par rapport au contrôle, de préférence, augmentée d’un facteur compris entre 1,2 et 2,69, alors le sujet est déterminé comme ayant subi une exposition chronique à un stress sur la peau tel que la pollution, de préférence, l’exposition aux hydrocarbures polycycliques aromatiques (PAHs) comme le benzo[a]pyrène. De préférence, dans la méthode de diagnostic selon l’invention, si l’aire de la surface de pores, notamment l’aire de la surface des pores supérieure à 0,04 mm 2 est augmentée d’un facteur compris entre 1,1 entre 2,9 par rapport au contrôle, de préférence, augmentée d’un facteur compris entre 1,1 et 2,87, alors le sujet est déterminé comme ayant subi une exposition chronique à un stress sur la peau tel que la pollution et les UV, de préférence, l’exposition aux hydrocarbures polycycliques aromatiques (PAHs) comme le benzo[a]pyrène et aux UVA. Méthode d’exposition d’un modèle L’invention concerne une méthode d’exposition d’un modèle, de préférence un modèle de peau ou de derme, à un stress chronique comprenant l‘exposition dudit modèle: à au moins un hydrocarbure polycyclique aromatique, de préférence à du benzo-a-pyrène (BaP), et/ou à une irradiation d’UVA. De préférence ledit au moins un hydrocarbure polycyclique aromatique est présent en une concentration comprise entre 0,1 nM et 100 nM, plus particulièrement entre 0,5 nM et 50 nM, entre 1 nM et 10nM, et plus particulièrement entre 3 nM et 8 nM, pendant au moins 7 jours, au moins 14 jours, au moins 21 jours, au moins 28 jours. Ledit au moins un hydrocarbure polycyclique aromatique pouvant être ajouté directement sur le modèle de peau ou de derme, de préférence après dilution dans du diméthylsulfoxyde (DMSO). De préférence l’irradiation est réalisée avec un rayonnement comprenant des UVs et plus particulièrement comprenant des UVA longs, pendant au moins 10 minutes, au moins 20 minutes, de préférence au moins 30 minutes. Cette exposition est de préférence réalisée à intervalle régulier, de préférence au moins une fois par semaine, deux fois par semaine ou trois fois par semaine, sur une durée totale d’au moins 7 jours, au moins 14 jours, au moins 21 jours, au moins 28 jours. Pendant l’irradiation, le modèle est de préférence pas exposé audit au moins un hydrocarbure polycyclique aromatique. L’invention concerne également le modèle de peau ou de derme d’une exposition chronique à un stress, celui-ci de préférence est obtenu par la méthode d’exposition d’un modèle de peau ou de derme, à un stress chronique selon l’invention. Dans toute la description ci-dessus, sauf mention contraire, le terme "compris(e) entre x et y" ou "allant de x à y" correspond à une gamme inclusive, c’est-à-dire que les valeurs x et y sont incluses dans la gamme. La présente invention sera illustrée plus en détail par l'exemple ci-dessous. Figure : FIG. 1 FIG. 1 : Représentation schématique du protocole de stress chronique appliqué sur des cultures de fibroblastes papillaire issu de donneurs jeunes. FIG. 2 FIG. 2 : A gauche : Image représentative d’un réseau de collagène produit par des fibroblastes, acquise sur un microscope optique à transmission Leica couplé à une caméra. On observe la complexité du réseau collagène (filament blanc) et la présence de pores (noir). A droite : Exemple d’image générée après application du logiciel de segmentation d’image sur l’image de gauche. On observe la catégorisation des pores : les pores sont colorés en différentes nuance de gris selon l’aire de surface. FIG. 3 FIG. 3 : Histogramme représentant en ordonné le nombre de doublement de population cumulé après 3 semaines de culture et d’exposition au stress avec ou sans application de vitamine C. Préparation des cellules Les fibroblastes papillaire (Fp) ont été isolés à partir de peaux humaines non dégraissées. Ces prélèvements sont collectés après réduction mammaire pour cause esthétique. Quatre donneuses (22, 22, 25 et 31 ans) ont été incluses. L’isolement des Fp s’effectue sur tissu dermatomé à 300 µm puis dé-épidermisé après action de dispase pendant 16h à 4°C. Après dilacération, les fragments de derme sont digérés sous l’action de collagénase de type II à 0,2% à 37°C. Les cellules sont ensuite amplifiées en milieu essentiel minimum (MEM) – 10% sérum de veau fœtal (SVF) complémenté en Glutamine, sodium pyruvate, acide-aminés non essentiel, pénicilline, streptomycine et fungizone, sous atmosphère humide, à 37°C et 5% de CO 2 . Les cellules isolées ont été validées comme étant des fibroblastes papillaires sur la base de leur niveau d’expression relative de gènes signatures. Pour cela, les ARNm sont extraits sur colonne QIAgen selon les consignes données par le fournisseur après une phase d’expansion (entre 7 et 10 doublements de population). Puis les niveaux d’expression des gènes signatures sont mesurés par PCR. Exposition à un stress chronique in vitro Après expansion des cellules (entre 7 et 10 doublements de population), les Fp sont mis en culture en présence de polluants (BaP). Le polluant est ajouté au milieu de culture à une concentration de 6 nM après dilution en DMSO. Le milieu est changé tous les jours sauf le week-end. En parallèle, les cellules sont exposées à une irradiation de type UVA long (340 / 400nm - 7,5 J/cm² - 35 min d’exposition) en moyenne 2 fois par semaine (pour un totale de 6 irradiations cumulées), voir FIG. 1 . Pendant l’irradiation, le milieu de culture est remplacé par du tampon phosphate salin (PBS) ne contenant pas le polluant. Les cellules sont maintenues en culture dans ces conditions pendant 21 jours. Lorsque les cellules atteignent 80% de confluences, elles sont trypsinées et réensemencées dans les mêmes conditions de stress. Le BaP étant dilué dans du DMSO, des cultures contrôles recevant la même concentration de DMSO que les cultures en présence de BaP ont été réalisées. Ainsi, selon les tests effectués, 4 conditions de cultures ont été mises en place : Contrôle : sans stress DMSO : culture en présence de la teneur d’un petit volume de DMSO équivalent à celui permettant l’adjonction de BaP (1/2000). BaP 6 nM UV cellules irradiées 2 fois par semaines + BaP 6 nM I/- Suivi de la prolifération Le calcul du doublement de population cumulé a été utilisé afin d’estimer les capacités de prolifération des fibroblastes. Pour ce faire, le nombre de doublement de population (DP) pour chaque passage a été calculé par la formule : DP = log (nombre de cellules comptées à l’issue de l’expansion / nombre de cellules ensemencées) / log2. Le nombre de DP cumulé est obtenue en additionnant les DP de chaque passage : DP cumulé = DP passage 1 + DP passage 2 + DP passage 3 Contrôle DMSO UVA + BaP 6 nM Moyenne DP cumulés 15,64 15,56 13,22 Ecart type 2,26 2,23 2,13 SEM 1,13 1,12 1,07 Le tableau ci-dessus montre le nombre de doublement de population cumulé calculés pour chacune des conditions après 21 jours d’exposition à un stress. Une double exposition au BaP et aux UVA affecte le potentiel de prolifération des fibroblastes avec une réduction moyenne de 2,42 +/- 0,33 doublement n=7, p II/- Test de contractilité cellulaire Les dermes équivalent (lattices) sont produits en ajoutant 100 000 fibroblastes à une solution de collagène bovin de type I dilué dans du milieu de culture (MEM 10% SVF) pour un ratio de 26% en poids/volume. Le mélange constitué, d’un volume final de 5 ml, est coulé en boite de pétri de 34 mm de diamètre. Une polymérisation spontanée du collagène apparait dans les premières heures. Après 48h de maintien en incubateur, les lattices sont détachées de leur support pour être rendues flottantes. Ce détachement du support induit la contraction des lattices. Celui-ci se matérialise par une diminution du diamètre des lattices. La progression du processus est suivie dans le temps par une mesure du diamètre des lattices effectuée avec un double décimètre. Plus le diamètre de la lattice sera petit, plus les propriétés contractiles des cellules seront importantes. Trois lattices sont préparées pour chaque conditions. La moyenne de ces trois diamètres établie la valeur de référence de la condition. Les variations de pourcentage de contractilité sont calculées en rapportant les valeurs mesurées dans les conditions exposées au stress à celles obtenues dans la condition contrôle. 5 donneurs ont été analysés. [Table 2] Moyenne des valeurs mesurées sur les 5 donneurs après normalisation au contrôle Contrôle DMSO BaP 6 nM UVA + BaP 6 nM Ratio de contractilité 1,00 1,00 0,85 0,84 Ecart type 0,00 0,00 0,12 0,11 SEM 0,00 0,00 0,05 0,05 Le tableau ci-dessus montre les résultats de l’évaluation des propriétés contractiles des fibroblastes papillaires ayant été préalablement exposés à différents stress chronique pendant 21 jours. Valeurs normalisées sur la condition contrôle. Les cellules ayant été exposées au BaP voient leur capacité contractile accrue (+15,4% avec le BaP seul, +16% avec UVA + BaP, n=5, p III/- Analyse de l’organisation du réseau de collagène de type I Préparation des matrices extracellulaires Après 21 jours d’exposition au stress, les fibroblastes sont ensemencés en milieu simple (utilisé pour l’expansion). La culture est maintenue pendant 48h post-confluence. Puis les cellules sont lysées grâce à un tampon contenant 0,5% de Triton X100 et 20mM de NH 4 OH dilué en PBS. Immunomarquage des matrices extracellulaires La présence de collagène de type I est mise en évidence par immunomarquage des matrices extracellulaires sans procédure de fixation préalable. Pour cela, une saturation en PBS / albumine sérum bovin (BSA) 3% de 15 minutes à température en ambiante est réalisée. Puis les matrices extracellulaires sont exposés à un anticorps anti-Collagène de type I pendant 30 min à température ambiante. Les échantillons sont ensuite lavés 2 fois en PBS 0,5% de BSA. Le marquage est révélé par un anticorps secondaire anti-chèvre couplé à de l’Alexa 488 dilué au 1/250 en PBS / BSA 3%. Après 3 lavages, les échantillons sont montés entre lame et lamelle. Les images sont acquises sur un microscope optique à transmission Leica couplé à une caméra ORCA-Flash4.0 LT+ (Hamamatsu Photonics K.K.). Analyse de l’organisation du réseau de collagène de type I Pour définir l’aire de la surface occupée par les pores au sein d’une condition donnée, un logiciel de segmentation d’image a été développé (voir FIG. 2 ). Celui-ci repose sur un principe d’anti-granulométrie. Ainsi, cinq catégories de pore ont été définies. Chaque catégorie correspond à une fourchette d’aire de surface qui peut se définir comme ceci : Inférieur à 0,004mm², compris entre 0,004 et 0,02 mm², compris entre 0,02 et 0,04mm², compris entre 0,04 et 0,07 mm², supérieur à 0,07mm². Il est alors possible de connaitre l’aire de surface occupée pour chaque catégorie de taille de pore ou bien la somme des aires de surfaces occupées par l’ensemble des pores présents dans un échantillon. Après mesure des aires de surfaces couvertes par les pores pour chaque catégorie, il est possible de comparer les évolutions de répartitions par donneur. Les ratios des moyennes des aires de surfaces des pores (moyenne des aires de surface des pores obtenue dans condition contrôle / moyenne des aires de surface des pores obtenue dans condition de stress), établies entre les différentes conditions de préexposition des cellules aux stress, ont été calculées lorsque cela est possible. Ils sont présentés dans le tableau ci-dessous. Lorsque, la différence entre les deux conditions comparées est significativement augmentée (p Pre-exposition au stress Donneur Aires de surface des pores 0,004 à 0,02mm² 0,02 à 0,04 mm² 0,04 à 0,07 mm² > à 0,07mm² somme Contrôle / BaP Donneur A 1,13 1,20* 1,24* 0,73 0,64 0,98 Contrôle / BaP Donneur B 0,99 1,08 1,36 1,36 2,08* 1,35* Contrôle / BaP Donneur C 1er essai 1,07 1,38* 1,42 2,69* NC 1,23* Contrôle / BaP Donneur C 2eme essai 0,92 1,17 1,83* 2,65* NC 1,23* Contrôle / UVA + BaP Donneur A 1,22* 1,10 1,04 0,88 0,73 0,99 Contrôle / UVA + BaP Donneur B 1,22* 1,39* 1,09 1,46 0,98 1,22* Contrôle / UVA + BaP Donneur C 1er essai 0,97 0,97 0,78 2,87* NC 1,02 Contrôle / UVA + BaP Donneur C 2eme essai 0,90 0,85 1,26 1,51 NC 0,96 Une modification significative de l’aire de la surface des pores est observée pour tous les donneurs lorsque les cellules ont été préalablement exposées au BaP. Selon les catégories et les donneurs, l’aire de la surface des pores est augmentée d’un facteur allant de 1,2 à 2,69 fois par rapport à celles mesurées dans les cellules non préalablement exposées. En ce qui concerne la double préexposition au UVA et au BaP, une légère augmentation de l’aire de la surface des pores est observée que ce soit en comparaison avec la condition contrôle (1,2 Ces observations montrent que chacun des stress appliqués induit une modification, dans la capacité des fibroblastes à organiser les fibres de collagène de type I, qui lui est spécifique. IV/ - Effet d’une molécule de référence : la vitamine C La Vitamine C (L-acide ascorbique) est un agent antioxydant hydrosoluble. Elle intervient dans plusieurs voies métaboliques importante et notamment comme cofacteur pour l’hydroxylation des résidus prolyl et lysyl présents sur les chaines de pro-collagène. Elle permet ainsi de stabiliser sa structure tertiaire. Dans ce protocole, la vitamine C a été utilisée en traitement curatif. Prolifération Les tests de prolifération (voir FIG. 3 ), de synthèse et d’organisation du réseau de collagène I ont été déployés pour visualiser l’impact de la vitamine C sur des cellules préalablement exposées à un stress. Les protocoles utilisés pour ces évaluations sont les mêmes que ceux décrit ci-dessus. Quantification de l’aire de la surface des pores Comparaison des valeurs obtenues pour des matrices synthétisées par des fibroblastes préalablement exposés à un stress pendant 21 jours +/- vitamine C utilisée pendant la phase de synthèse de la matrice extracellulaire. Les ratios des moyennes des aires de surfaces des pores, établies entre les conditions traitées ou non à la vitamine C, ont été calculées. Ils sont présentés dans le tableau ci-dessous. Lorsque, la différence entre les deux conditions comparées est significativement diminuée (*** = p Pre-exposition au stress + / - Vitamine C Aires de surface des pores 0,004 à 0,02 mm² 0,02 à 0,04 mm² 0,04 à 0,07 mm² > à 0,07mm² Contrôle 1,15 0,80 0,63 0,39 0,09 BaP 0,87 0,58 0,84 0,74 0,17 UVA + BaP 0,99 0,89 0,83 0,47 0,15 Un post-traitement à la vitamine C réduit significativement l’aire de la surface des pores et ce quel que soit le stress auquel les cellules ont été préalablement exposées. Ainsi, plus la taille des pores est grande et plus l’effet de réduction des aires de surfaces sera visible. La vitamine C semble donc efficace pour réduire les effets produits par un stress tel que le BaP, et le BaP avec les UVA. Test statistique Pour les tests de prolifération et de contractilité le test utilisé est un test de Student sur valeurs appariées. Pour les analyses des aires de surfaces des pores, d’anisotropie et d’indice de circularité des bassins versants un test de Mann Withney-Wilcoxon a été utilisé. Méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères d’un stress sur la peau chez un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : mettre en contact un composé candidat avec un échantillon biologique comprenant au moins un fibroblaste, puis évaluer au moins une des caractéristiques biologiques de fibroblastes dudit échantillon; dans laquelle les caractéristiques biologiques de fibroblastes sont choisies parmi : la capacité de prolifération des fibroblastes, la contractilité des fibroblastes et l’organisation de la matrice extracellulaire formée par ces fibroblastes ; comparer ladite caractéristique évaluée à l’étape a) à la même caractéristique dans un échantillon biologique comprenant au moins un fibroblaste, non mis en contact avec ledit composé ; et identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères dudit stress sur la peau, lorsque l’une au moins des conditions ci-dessous est remplie : une augmentation de la capacité de prolifération des fibroblastes, une diminution de la contractilité des fibroblastes, et/ou une diminution de la taille et/ou de l’aire de la surface des pores de la matrice extracellulaire formées par les fibroblastes ; dans l’échantillon biologique qui a été mis en contact avec ledit composé candidat par rapport à l’échantillon biologique qui n’a pas été mis en contact avec le composé candidat ladite méthode comprenant en outre une étape d’exposition desdits échantillons biologiques à un stress. Méthode selon la revendication 1, dans laquelle les échantillons biologiques sont des échantillons de peau d’un sujet. Méthode selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle l’étape d’exposition desdits échantillons biologiques à un stress est une étape d’exposition aux hydrocarbures polycycliques aromatiques (PAHs) et/ou aux ultraviolets A (UVA). Méthode selon la revendication 3, ladite méthode comprenant en outre l’étape suivante: mise en culture de fibroblastes issus des échantillons biologique, en présence d’au moins un hydrocarbure polycyclique aromatique, dans une concentration comprise entre 0,1 et 100 nM, et/ou avec une exposition des fibroblastes à une irradiation d’UVA pendant au moins 10 minutes, au moins une fois par semaine. Méthode de diagnostic d’une exposition chronique d’un sujet à un stress, en particulier un stress affectant la peau d’un sujet, comprenant la mesure d’au moins une des caractéristiques biologiques des fibroblastes d’un échantillon de peau dudit sujet, dans laquelle les caractéristiques biologiques de fibroblastes sont choisies parmi la capacité de prolifération des fibroblastes, la contractilité des fibroblastes et l’organisation de la matrice extracellulaire formée par ceux-ci. Méthode selon l’une quelconque des revendications 2 à 5, dans laquelle lesdits échantillons de peau sont choisis parmi : un explant de peau humaine, une biopsie cutanée, et une microbiopsie. Méthode de diagnostic selon la revendication 5 ou 6, la méthode comprenant en outre les étapes consistant à : comparer le niveau de la caractéristique biologique mesurée à un contrôle, et sur la base de la comparaison de l’étape (a), déterminer si le sujet, en particulier la peau du sujet, a subi une exposition chronique à un stress. Méthode selon la revendication 5 ou 7, dans laquelle le stress est due à une exposition chronique aux hydrocarbures polycycliques aromatiques (PAHs) et/ou aux UVA.