Brevet FR3162623A1 — publié le 20251205

L’invention concerne des compositions comprenant du D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate. Ces compositions peuvent être utilisées en tant que médicament, notamment dans la prévention ou le traitement d’infection aux virus utilisant les syndécanes et/ou glypicanes comme récepteurs cellulaire. Ces compositions peuvent également être utilisées en cosmétique ou en tant que complément alimentaire. Composition comprenant du D-xylose-2-Phosphate et leurs utilisations en tant que médicament, complément alimentaire, ou en cosmétique L’invention concerne des compositions comprenant du D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate. Ces compositions peuvent être utilisées en tant que médicament, notamment dans la prévention ou le traitement d’infection aux virus utilisant les syndécanes et/ou glypicanes comme récepteurs cellulaire. Ces compositions peuvent également être utilisées en cosmétique ou en tant que complément alimentaire. Art Antérieur Plusieurs études ont montré que les infections virales, le diabète de type 2 et les cancers s'accompagnent d'une dégradation des glycosaminoglycanes (GAG), notamment de l'héparane sulfate (HS), du dermatane sulfate (DS) et du chondroïtines sulfate (CS). Plusieurs études ont également montré l'importance de contrer la dégradation des HS/CS/DS lors des infections virales et le diabète de type 2. En parallèle, plusieurs études ont montré que les « protéine cœur » des protéoglycannes (sur les quels sont attachés les HS/CS/DS), plus particulièrement les syndécanes, augmentent anormalement (upregulation) lors de plusieurs cancers, tel que : carcinome hépatocellulaire, cancer du côlon, cancer du sein, cancer de la prostate… (voir Tableau 1). D’autres études ont relevés une perte excessive des syndécanes à la surface de la cellule, c’est le cas par exemple pour le cancer des poumons (voir Table 1) Type de cancer Modifications des « protéines coeur » Héparanase à la surface des cellules (HPSE) Association avec le diabète de type 2 Carcicome hépatique Le glypican-3 est surexprimé dans le carcicome hépatocellulaire [T6]. Le syndécane-1 augmente dans le dysfonctionnement du foie dans le carcicome hépatocellulaire HVC [T7]. Surexpression de l'héparanase (2 fois plus) [T18] Il existe une forte association entre le carcinome hépatocellulaire et le diabète de type 2 [T27;T28;T29] Cancer du poumon La perte (shedding) excessive du syndécanes-1 est associée à des cancers de grade supérieur et à un pronostic clinique plus défavorable [T5]. Surexpression de l'héparanase [T19] Le diabète préexistant augmente le risque de mortalité parmi les patients atteints de cancer poumons, en particulier les femmes [T30;T31;T32]. Cancer du colon / colorectal Régulation à la hausse du syndécanes-2 [T4;T10] et diminution du syndécanes-1 [T11] corrélation entre l'expression de l'héparanase et l'invasion séreuse [T20;T11] Le diabète de type 2 augmente le risque de cancer colorectal [T33;T34;T35] Cancer du sein La régulation à la hausse du syndécanes-1, du syndécanes-2 et du syndécanes-4 est observée dans le cancer du sein et est corrélée à un mauvais pronostic et à un phénotype agressif. "[T1;T2;T3] Surexpression de l'héparanase [T21] Le diabète de type 2 augmente le risque de cancer du sein [T36;T37;T38] Cancer de la prostate Le syndécane-2 et le syndécane-1 sont surexprimés dans le cancer de la prostate et sont associés à un mauvais pronostic [T8;T9]. surexpression de l'héparanase [T22] Le diabète de type 2 augmente le risque de cancer de la prostate [T39;T40;T41] Cancer de la peau Régulation à la hausse du syndécanes-2 [T12] Régulation à la hausse de l'héparanase qui exerce des propriétés protumorigènes [T23] Le diabète de type 2 augmente le risque de cancer de la peau [T42;T43] Cancer du pancréas Régulation à la hausse du syndécanes-2 [T13] Surexpression de l'héparanase [T24] Le diabète de type 2 augmente le risque de cancer du pancréas [T44;T45;T46;T47] Cancer de l'ovaire Modification de l'expression du syndécanes-1 et du perlecan [T15] Surexpression de l'héparanase [T14] Le diabète de type 2 augmente le risque de cancer de l'ovaire [T48;T49] Cancer du cerveau Régulation à la hausse du syndécanes-1 [T16] Surexpression de l'héparanase [T25;T26] Cancer de l'œsophage Perte du syndécanes-1 [T17] Surexpression de l'héparanase [T17] Le diabète de type 2 augmente le risque de cancer de l'œsophage [T50;T51] Plusieurs études in vitro ont montré l’implication des GAG, plus précisément des HS, lors de l’attachement virale. En outre, l’implication des HS sur l’attachement viral de plus d’une dizaine de virus à enveloppe ont été reportés dans la littérature (voir Cheudjeu, 2021). Une revue de la littérature (Cheudjeu, 2021) explique pourquoi les sites de fixation des HS/CS/DS, appelés « HS attachement sites » sont les points d’attaches de certains virus (ceux utilisant les protéines coeur comme récepteurs à la surface de la cellule ». Les « HS attachement sites » sont les groupes hydroxyles des résidus Sérine et Thréonine sur lesquels viennent se fixer le D-xylose (via l’UDP-xylose, ou une molecule de D-xylose libre ou même Xylosides). Les virus utilisant les syndécanes et/ou glypicanes comme récepteurs cellulaire via les protéines cœur comme récepteurs à la surface de la cellule (se fixant donc sur les sites d’attachement des HS, Cheudjeu 2021) sont potentiellement à l’origine de plusieurs cancers. (Voir Tableau 2) En effet plusieurs études ont montré que les virus étaient une cause probable (prévalence forte) de plusieurs cancers (voir Tableau 2). Ces virus utilisent les protéines coeur comme récepteurs pour s’accrocher et pénétrer dans la cellule (Voir Tableau 2). Type de Cancer Virus apparentés/associés Virus utilisant les protéines cœur comme récepteurs? leucémie-lymphome à cellules T adultes (ATLL) HTLV-1: Human T-cell leukemia virus type-1 [T53] Oui lymphome de Burkett chez l'homme HSV-2: herpes simplex virus type 2 [T54] Oui, Syndécaness, [T70] cancer du nasopharynx chez l'homme HSV-2: herpes simplex virus type 2 [T54] cancer du col de l'utérus HPV-16: human papillomavirus type 16 [T59 ;T60] épidémiologiquement associé au HSV-2 également [T54;T56] Oui, Syndécaness, [T70] Cancer de la bouche HSV-1: herpes simplex virus type 1 [T55 ;T56] Oui, Syndécaness, [T70] le carcinome hépatocellulaire (CHC) HVC: Hepatitis C virus [T58] Oui, Syndécaness, [T70] Sarcome de Kaposi HIV-1: human immunodeficiency virus type 1 [T57] Oui, Syndécaness, [T70] human herpesvirus 8 (HHV8) [T57] Carcinogenèse du cancer du sein HCMV: human cytomegalovirus [T61] Oui, Syndécaness, [T70] cancer colorectal HCMV: human cytomegalovirus [T62] glioblastome multiforme (GBM) HCMV: human cytomegalovirus [T63] carcinome du poumon DENV: Dengue virus [T69] Oui, Syndécaness, [T70] cancer du poumon HPV: human papillomavirus [T64] Oui, Syndécaness, [T70] carcinome hépatocellulaire HVB: hepatitis B virus [T65] Oui, Glypicane [T70] Lymphome de Burkitt et carcinome nasopharyngé Epstein–Barr virus [T66;T67] carcinome hépatocellulaire HVD: hepatitis D virus [T68] Oui, Glypicane [T70] Il perdure ainsi le besoin de composés permettant de traiter ces pathologies. Il perdure également le besoin de nouvelles compositions cosmétiques et de compléments alimentaires, pour augmenter la concentration des glycosaminoglycanes chez les sujets sains. Le Demandeur a précédemment développé des formulations comprenant du D-xylose. Cependant, l’efficacité de ces formulations n’était envisageable qu’à dose élevée (EC50 élevé). Le Demandeur a ainsi développé un composé, le D-xylose-2-Phosphate, pour lequel aucune utilisation, médicamenteuse, en complément alimentaire, ou en cosmétique, n’est rapportée à ce jour. De manière surprenante, le Demandeur a pu développer une formulation à base de D-xylose modifié, D-xylose-2-Phosphate ou d’un de ses dérivés, permettant d’inhiber les virus utilisant les syndécanes et/ou glypicanes comme récepteurs cellulaires, de manière plus efficace que le D-xylose. Le concept inventif commun dans le cadre de cette invention est l’utilisation d’au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate, pour augmenter la synthèse des glycosaminoglycanes, impliqués dans des pathologies, ou chez le sujet sain dans des compléments alimentaires ou des compositions cosmétiques. Description de l’invention Selon un premier aspect, l’invention concerne une composition comprenant au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate. Selon un autre aspect, l’invention concerne une composition comprenant au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate pour utilisation en tant que médicament. Selon un mode de réalisation, ladite composition est pour utilisation dans la prévention ou le traitement d’une infection virale utilisant les syndécanes et/ou glypicanes comme récepteurs cellulaire, de préférence ladite infection virale étant choisie parmi les infections au HSV-1, HSV-2, HPV-16, HPV-31, HVB, HVC, HIV-1, HTLV-1, SARS-CoV-2, HCMV, EBOLA, RSV, DENV-1, et DENV-2. Selon un mode de réalisation, ladite composition est pour utilisation dans le traitement du diabète de type 2. Selon un mode de réalisation, ladite composition est pour utilisation dans le traitement du cancer, de préférence le cancer du côlon, le cancer du poumon, le cancer du sein, le cancer du foie, la leucémie-lymphome à cellules T adultes (ATLL), le lymphome de Burkett chez l'homme, le cancer du nasopharynx chez l'homme, le cancer du col de l'utérus, le cancer de la bouche, le carcinome hépatocellulaire (CHC), le sarcome de Kaposi, la carcinogenèse du cancer du sein, le cancer colorectal, le glioblastome multiforme (GBM), le carcinome du poumon ou le carcinome nasopharyngé. Selon un mode de réalisation, ladite composition est pour utilisation dans le traitement des maladies articulaires, de préférence l'arthrose, l'arthrite, la polyarthrite rhumatoïde ou la goutte. Selon un mode de réalisation, ladite composition est pour utilisation en tant qu’anticoagulant. Selon un mode de réalisation, ladite composition est pour utilisation dans le traitement des maladies dermatologiques. Selon un autre aspect, l’invention concerne une formulation comprenant au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate, dans un milieu physiologiquement acceptable pour utilisation chez un patient humain dans la stimulation de la biosynthèse des glycosaminoglycannes. De manière encore plus préférée, ladite formulation est pour utilisation dans la prévention ou le traitement de l’infection au SARS-CoV-2. De manière encore plus préférée, ladite formulation est pour utilisation dans la prévention ou le traitement de l’infection congénitale au CMV. De manière encore plus préférée, ladite formulation est pour utilisation dans la prévention ou le traitement de l’infection au HIV-1. Selon un mode de réalisation, ladite formulation est pour utilisation dans la prévention ou le traitement du COVID-19. Selon un mode de réalisation, ladite formulation est pour utilisation dans la prévention ou le traitement du diabète de type 2. Selon un mode de réalisation, les compositions pour utilisation et les formulations selon l’invention sont sous une forme adaptée pour une administration par voie orale, par voie nasale ou par voie parentérale. Selon un mode de réalisation, les compositions pour utilisation et les formulations selon l’invention sont sous une forme adaptée pour une administration parentérale par voie sous-cutanée, intradermique, intraveineuse ou intramusculaire. Selon un mode de réalisation, les compositions pour utilisation et les formulations selon l’invention sont pour l’administration orale, et sont formulées sous forme de capsules, de gélules, de comprimés, de comprimés effervescents, de poudres, de granules, de solutions orales ou des suspensions. Selon un mode de réalisation, les compositions pour utilisation et les formulations selon l’invention sont pour l’administration nasale, et sont formulées sous forme de solution sous forme d’aérosol. De manière préférée, ledit au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate, de manière plus préférée du D-xylose-2-Phosphate. Selon un mode de réalisation, les compositions pour utilisation et les formulations selon l’invention comprennent en outre au moins un autre ingrédient pharmaceutique actif acceptable et/ou au moins un excipient et/ou au moins un support pharmaceutique acceptable et/ou tout composé pharmaceutiquement acceptable. De manière préférée, ledit au moins un autre ingrédient pharmaceutique est un actif antiviral. De manière préférée, ledit au moins un autre ingrédient pharmaceutique est un actif permettant la prévention ou le traitement du COVID-19. De manière préférée, ledit au moins un autre ingrédient pharmaceutique est un actif permettant la prévention ou le traitement du diabète de type 2. De manière préférée, ledit au moins un autre ingrédient pharmaceutique est un actif permettant la prévention ou le traitement de l’insulinorésistance. De manière préférée, ledit au moins un autre ingrédient pharmaceutique est un actif permettant la prévention ou le traitement du VIH. De manière préférée, ledit au moins un autre ingrédient pharmaceutique est un actif permettant la prévention ou le traitement des infections congénitales au CMV. De manière préférée, ledit au moins un autre ingrédient pharmaceutique est un actif permettant la prévention ou le traitement du cancer. De manière préférée, les compositions pour utilisation et les formulations selon l’invention comprennent en outre un actif permettant d’accélérer le transfert dudit au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-phosphate, ses esters, les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-phosphate vers les cellules, de préférence ledit actif étant de l’insuline. Selon un mode de réalisation de l’invention, les compositions pour utilisation et les formulations selon l’invention comprennent également au moins un antibiotique. Selon un mode de réalisation de l’invention, les compositions pour utilisation et les formulations selon l’invention comprennent une hormone accélérant le transport du D-xylose-2-phosphate ou de ses dérivés dans la cellule, à l’instar de l’insuline ou également toutes enzymes pharmaceutiquement acceptable facilitant le transport du D-xylose-2-phosphate dans la cellule, par exemple les xylose transporteurs. Selon un mode de réalisation de l’invention, les compositions pour utilisation et les formulations selon l’invention comprennent également un composé permettant de réduire au moins un effet secondaire de la prise de D-xylose-2-phosphate. Selon un mode de réalisation de l’invention, les compositions et les formulations selon l’invention comprennent comprend également de la Vitamine C. Dans le cadre des compositions pour utilisations thérapeutiques et des formulations, ledit composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate est dans un milieu physiologiquement acceptable pour utilisation chez un patient humain Selon un autre aspect, l’invention concerne une méthode thérapeutique comprenant l’administration d’une composition ou d’une formulation comprenant du D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate. Dans le cadre des compositions pour utilisations en tant que médicament, des formulations et des méthodes thérapeutiques selon l’invention, l’administration par voie orale, par voie sous-cutanée, intradermique, intraveineuse ou intramusculaire est réalisée en administrant entre 1 et 4 doses par jour d’une composition ayant une masse de 200 mg à 2 g, d’au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate. Dans le cadre des compositions pour utilisations en tant que médicament, des formulations et des méthodes thérapeutiques selon l’invention, l’administration par voie orale, par voie sous-cutanée, intradermique, intraveineuse ou intramusculaire est réalisée en administrant entre 1 et 4 doses par jour d’une composition ayant une masse de 200 mg à 2 g, de D-xylose-2-Phosphate. Dans le cadre des compositions pour utilisations en tant que médicament, des formulations et des méthodes thérapeutiques selon l’invention, l’administration par voie nasale est réalisée en administrant entre 1 et 4 doses par jour d’une composition ayant une masse de 200 mg à 2 g d’ au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate Dans le cadre des compositions pour utilisations en tant que médicament, des formulations et des méthodes thérapeutiques selon l’invention, l’administration par voie nasale est réalisée en administrant entre 1 et 4 doses par jour d’une composition ayant une masse de 200 mg à 2 de D-xylose-2-Phosphate. Selon un autre aspect, l’invention concerne une composition cosmétique topique non-thérapeutique de soin d’une zone de la peau d’un sujet sain comprenant au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate. De manière préférée, ladite composition cosmétique comprend en outre un milieu cosmétiquement acceptable. La composition cosmétique selon l’invention pourront ainsi se présenter sous les formes qui sont habituellement connues pour une administration topique, c’est-à-dire notamment les lotions, les laits, les émulsions, les sérums, les baumes, les masques, les crèmes, les dispersions, les gels, les mousses ou les sprays. De manière préférée, ladite composition cosmétique comprend en outre des agents tensioactifs, des agents complexants, des conservateurs, des agents stabilisants, des émulsifiants, des épaississants, des gélifiants, des humectants, des émollients, des oligoéléments, des huiles essentielles, des parfums, des colorants, des agents matifïants, des filtres chimiques ou minéraux, des agents hydratants, ou des eaux thermales. Selon un autre aspect, l’invention concerne une composition de complément alimentaire à prise orale ou nasale pour le sujet sain, comprenant au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate dans un milieu physiologiquement acceptable pour stimuler la biosynthèse de glycosaminoglycannes, de préférence au moins un choisi parmi l’héparane sulfate, le dermatane sulfate et la chondroïtine sulfate. De manière préférée, ledit glycosaminoglycanne est un glycosaminoglycanne sulfaté. De manière préférée, ledit glycosaminoglycannes est au moins un choisi parmi l’héparane sulfate, le dermatane sulfate et la chondroïtine sulfate. De manière préférée, ladite composition de complément alimentaire à prise orale ou nasale chez le sujet sain comprend au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate dans un milieu physiologiquement acceptable, dans la stimulation de la biosynthèse des glycosaminoglycannes. De manière préférée, la composition de complément alimentaire est sous une forme adaptée pour une administration par voie orale en administrant entre 1 et 2 doses par jour d’une composition ayant une masse de 500 mg à 1 g d’au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate. De manière préférée, la composition de complément alimentaire est sous une forme adaptée pour une administration par voie orale en administrant entre 1 et 2 doses par jour d’une composition ayant une masse de 500 mg à 1 g de D-xylose-2-Phosphate. De manière préférée, la composition de complément alimentaire est sous une forme adaptée pour une administration par voie nasale en administrant entre 1 et 2 doses par jour d’une composition ayant une masse de 500 mg à 1 g d’ au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate De manière préférée, la composition de complément alimentaire est sous une forme adaptée pour une administration par voie nasale en administrant entre 1 et 2 doses par jour d’une composition ayant une masse de 500 mg à 1 g de D-xylose-2-Phosphate. Dans tous les aspects de l’invention, ledit oligosaccharide comprenant du D-xylose-2-Phosphate peut être choisi parmi le Galactose-β1–4-D-xylose-2-Phosphate, le Galactose-β1–3-Galactose-β1–4-D-xylose-2-Phosphate, ou l’Acide Glucuronique-β1–3-Galactose-β1–3-Galactose-β1–4-D-xylose-2-Phosphate. Le D-xylose-2-Phosphate administré permet d’occuper les sites d’attache des HS, CS et DS sur les protéines coeur, et ainsi augmenter la synthèse des glycosaminoglycanes. Ceci permet d’inhiber l’attachement des virus utilisant les syndécanes et/ou glypicanes comme récepteurs cellulaire. En se fixant sur les sites d’attachement des HS/CS/DS, le D-xylose-2-Phosphate, ses esters ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate stimule la biosynthèse des GAGs. De manière préférée, la biosynthèse des glycosaminoglycanes est augmentée d’au moins 1%, de préférence d’au moins 5%, de préférence d’au moins 10%, de préférence d’au moins 20%, de préférence d’au moins 30%, de préférence d’au moins 40%, de préférence d’au moins 50%, de préférence d’au moins 60%, de préférence d’au moins 70%, de préférence d’au moins 80%, de préférence d’au moins 90%, de préférence d’au moins 100%, de préférence d’au moins 150%, de préférence d’au moins 200%, de préférence d’au moins 500%, de préférence d’au moins 1000%. Figures FIG. 1 sont des images d’immunofluorescence d’une plaque 96 puits avec une disposition de la plaque conforme au Tableau 4 - SARS-CoV-2. FIG. 2 sont des images d’immunofluorescence d’une plaque 96 puits avec une disposition de la plaque conforme au Tableau 10 – HIV-1. FIG. 3 sont des images d’immunofluorescence d’une plaque 96 puits avec une disposition de la plaque conforme au Tableau 7 – RSV-A2. FIG. 4 est un graphique présentant les pourcentages d’inhibitions du SARS-CoV-2 en fonction de la concentration en SODIUM D-XYLOSE-2-PHOSPHATE ou de REMDESIVIR (utilisé comme contrôle). FIG. 5 est un graphique présentant les pourcentages d’inhibitions du HIV NL43 en fonction de la concentration en SODIUM D-XYLOSE-2-PHOSPHATE ou de AZT (utilisé comme contrôle). FIG. 6 est une représentation schématique de la procédure expérimentale permettant la synthèse de D-xylose-2-phosphate. Définitions Le D-xylose-2-Phosphate est un composé issue de la phosphorylation d’un glucide, le D-xylose. C’est un monosaccharide à cinq atomes de carbone (un pentose), comprenant un groupe phosphate attaché au deuxième carbone du xylose. Le D-xylose-2-Phosphate n’est pas disponible sur le marché. Le D-xylose-2-phosphate peut être synthétisé par la méthode présentée en exemple 3. Il en est de même pour les oligosaccharide comprenant du D-xylose-2-Phosphate tel que : Galactose-β1–4-D-xylose-2-Phosphate, Galactose-β1–3-Galactose-β1–4-D-xylose-2-Phosphate ; Acide Glucuronique-β1–3-Galactose-β1–3-Galactose-β1–4-D-xylose-2-Phosphate. Par « D-xylose-2-Phosphate » est entendu au sens de l’invention le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate. Dans l’organisme, le D-xylose, dont est issu le D-xylose-2-Phosphate, est utilisé au niveau des glycosaminoglycanes sulfatés (GAGs), qui sont de longues chaînes linéaires constituées d'unités répétitives disaccharidiques présentes dans la matrice extracellulaire (MEC), à la surface des cellules endothéliales, des cellules épithéliales, des fibroblastes, des macrophages et des hépatocytes (R.R. Vivès, Héparanes sulfate : structure, fonctions, régulation, 11 April 2020). Il existe six types de glycosaminoglycanes : le sulfate d'héparane (HS), le sulfate de chondroïtine (CS), le sulfate de dermatane (DS), le sulfate de kératane, l'héparine (Hep) et l'acide hyaluronique. Parmi eux, HS, CS, DS et Hep partagent la même région de liaison, constituée de trisaccharides : acide glu-curonique-β1–3-galactose-β1–3-galactose-β1–4-xylose-β1 lié à une sérine ou à un Résidu thréo-neuf d'un noyau protéique (syndécaness, glypicans, etc.). Ainsi, HS/CS/DS et HP sont des chaînes de sucre dont le D-Xylose est le premier élément des chaînes et est lié via 1_OH au résidu Serine ou thréonine de la protéine centrale. Ainsi, par sites d'attachement HS (HSAS) on entend alors les résidus sérine ou thréonine destinés à recevoir la molécule D-xylose pour initier les chaînes HS). Les principales protéines centrales des protéoglycanes dans la matrice extracellulaire sont le perlécan (avec des chaînes de type HS), l'agrine (protéoglycane héparane sulfate [HSPG]), l'aggrécane (protéoglycane chondroïtine sulfate [CSPG]/protéoglycane dermatane sulfate [DSPG]) et la décorine. Les protéines membranaires centrales des PG sont classées en deux catégories : les syndécanes et les glypicanes. Les syndécanes sont des protéines transmembranaires, contrairement aux glypicanes, qui sont des protéines entièrement extracellulaires (fixées sur la membrane cellulaire par un ancrage de type glycosyl-phosphatidyl inositol (GPI). Les PGs membranaires sont des HSPGs, CSPGs, et DSPGs, mais sont principalement des HSPGs. On trouve les HSPG à la surface de plusieurs types de cellules, comme les cellules endothéliales, les cellules épithéliales, les fibroblastes et les tissus neuronaux (R.R. Vivès, Héparanes sulfate : structure, fonctions, régulation, 11 April 2020 & S. Sarrazin, W.C. Lamanna, J.D. Esko, Heparan sulfate proteoglycans, Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 3 (2011)) À l'exception du KS, tous les autres GAG sulfatés sont reliés aux protéines centrales par une région de liaison identique, constituée de la séquence trisaccharidique xylose-galactose-galactose. La biosynthèse de la chaîne HS (et également des chaînes CS, DS et Hep) commence par la fixation d'une molécule de D-xylose à des résidus sérine et occasionnellement thréonine spécifiques placés sur la protéine centrale (syndécanes, glypican, décorine, etc.). Cette initiation de la biosynthèse des HS/CS/DS est réalisée soit par les enzymes xylosyltransférase 1 et xylosyltransférase 2 (R.R. Vivès, Héparanes sulfate : structure, fonctions, régulation, 11 April 2020 & S. Sarrazin, W.C. Lamanna, J.D. Esko, Heparan sulfate proteoglycans, Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 3 (2011)) ou soit directement par les molécules libres (contrairement à l’UDP-Xyl) de D-xylose (Cheudjeu, 2022). Après la mise en place de la molécule de D-xylose, la liaison de deux molécules de galactose suit. La chaîne ainsi formée constitue la région de liaison. Celle-ci est ensuite complétée par une répétition de la même unité de base spécifique à chaque type de GAGs sulfatés (HS/CS/DS/Hep). L'unité de base du HS est un acide D-glucuronique lié à la N-acétylglucosamine. L'unité de base du CS est une N-acétylgalactosamine liée à un acide D-glucuronique. L'acide hyaluronique est le seul GAG non sulfaté ; ce type de glycosaminoglycane n'est pas lié à une protéine centrale. Les disaccharides qui le composent sont eux-mêmes constitués d'acide D-glucuronique et de D-N-acétylglucosamine (R.R. Vivès, Héparanes sulfate: structure, fonctions, régulation, 11 April 2020). Les HSPGs sont rapidement recyclées et renouvelées à la surface de la cellule ; leur demi-vie est d'environ 2-3 h (M. Egeberg, R. Kjeken, S.O. Kolset, T. Berg, K. Prydz, Internalization and stepwise degradation of heparan sulfate proteoglycans in rat hepatocytes, Biochim. Biophys. Acta 1541 (2001) 135–149). La dégradation des HSPGs à la surface des cellules dépend de l'action de plusieurs enzymes extracellulaires et lysosomales, et en particulier de l'héparanase qui clive les chaînes HS (R.R. Vivès, Héparanes sulfate: structure, fonctions, régulation, 11 April 2020 & S. Sarrazin, W.C. Lamanna, J.D. Esko, Heparan sulfate proteoglycans, Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 3 (2011)). Diabète de type 2, insulinoresistance et mécanisme d’action Le diabète de type 2 (T2DM) est une maladie métabolique qui est souvent un des symptômes de certaines infections virales, comme c’est le cas pour le SARS-CoV-2, HIV-1, HVC… (Cheudjeu 2021). Plusieurs explications de l’apparition du T2DM lors d’infections virales ont été données, telles que : l’inflammation (tempête de cytokines) due à des infections qui causent des dommages aux cellules β du pancréas, conduisant à l’homéostasie de l’insuline. Cependant, si c’était la seule explication, la supplémentation en insuline serait suffisante définitivement, mais ce n’est pas toujours le cas. Cette incapacité de l’insuline à réduire la glycémie est appelée résistance à l’insuline (ou insulinoresistance) et est largement reporté lors des infections virales qui utilisent les protéines cœur comme récepteurs à la surface des cellules : SRAS-CoV-2 (Govender N et al,2021 : PMID: 33849817) , le HVC (Desai D.V et al, 2010 : https://doi.org/10.1096/fasebj.24.1_supplement.659.4 ), HIV-1 (Pedro M.N et al., 2018 : PMID: 30233499) etc…La résistance à l’insuline est également souvent observée chez certains patients obèses atteints de T2DM (Kahn, B.B., and Flier, J.S, 2000). La présente invention décrit pour la première fois comment la résistance à l’insuline est liée à la capacité du D-xylose à stimuler les GAG. La plupart des sucres constituant les chaînes des GAGS sont des métabolites du glucose (Cheudjeu 2022). En cas d'insuffisance de D-xylose dans l'organisme (ou dans le cas de certaines infections virales), l'une des premières conséquences est une augmentation de la glycémie. En effet, certains emplacements de sérine qui devraient être occupés par le d-xylose sur les protéines centrales (synde- cans, glypicans, etc.) pour initier la production de GAGs (HS/Hep/CS/ DS) sont libres en raison d'un manque de d-xylose (ou sont occupés en raison de la glycosylation des virus dans le cas de certaines infections virales), empêchant ainsi l'initiation de la biosynthèse des GAGs qui devrait avoir lieu à ces emplacements. Les sucres qui devraient être utilisés dans la production de ces GAGs (acide D-glu- curonique, galactose, N-acétylglucosamine, N-acétylgalactosamine) se trouvent dans la circulation sanguine (Cheudjeu 2020 ; Cheudjeu 2021 ; Cheudjeu 2022). Une étude de 2011 a montré que les GAG sulfatés étaient altérés au cours du diabète de type 2, avec des taux d'HS et de sulfates de chondroïtine et de dermatane (CS/ DS) diminués d'environ 14% (D. Joladarashi, P.V. Salimath, N.D. Chilkunda, Diabetes results in structural al- teration of chondroitin sulfate/dermatan sulfate in the rat kidney: effects on the binding to extracellular matrix components, Glycobiology 21 (2011) 960-972). Plusieurs autres études ont rapporté la dégradation des HS au cours du diabète (L.M. Hiebert, J. Han, A.K. Mandal, Glycosaminoglycans, hyperglycemia, and dis- ease, Antioxid. Redox Signal. 21 (2014) 1032-1043 & L.M. Hiebert, Proteoglycans and diabetes, Curr. Pharm. Des. 23 (2017) 1500-1509). Aussi, compte tenu de la demi-vie des GAGs à la surface de la cellule, qui est de 2-3 heures, cette dégradation contribue à l'origine des problèmes d'accumulation des chaînes de HS/CS/DS, sources de certaines maladies cardiovasculaires. D'autres études ont déjà montré que le taux de N-acétylglucosamine augmente au cours du diabète de type 2 et que la N-acétylglucosamine peut être utilisée comme biomarqueur du diabète de type 2 (Z. Wang, K. Park, F. Comer, L.C. Hsieh-Wilson, C.D. Saudek, G.W. Hart, Site- specific GlcNAcylation of human erythrocyte proteins: potential biomarker(s) for diabetes, Diabetes 58 (2009) 309-317, & L. Wells, K. Vosseller, G.W. Hart, A role for N-acetylglucosamine as a nutrient sensor and mediator of insulin resistance, Cell. Mol. Life Sci. 60 (2003) 222-228. Une autre conséquence est l'augmentation d'autres types de GAGs, comme l'acide hyaluronique (AH). En effet, l'acide hyaluronique non lié à une protéine centrale peut agir pour fixer l'excès de sucre non utilisé pour la synthèse de HS/CS/Hep/ DS. Une étude a montré que les niveaux d'acide hyaluronique pour le diabète de type 2 étaient plus élevés et que ces niveaux pouvaient être utilisés comme biomarqueur (S. Mine, Y. Okada, C. Kawahara, T. Tabata, Y. Tanaka, Serum hyaluronan con- centration as a marker of angiopathy in patients with diabetes mellitus, Endocr. J. 53 (2006) 761-766). Cette accumulation d'AH a déjà été rapportée dans le poumon dans le syndrome de détresse respiratoire de l'adulte, où elle est environ six fois plus élevée que chez les patients témoins (R. HaÃàllgren, T. Samuelsson, T.C. Laurent, J. Modig, Accumulation of hyaluronan (hyaluronic acid) in the lung in adult respiratory distress syndrome, Am. Rev. Respir. Dis. 139 (1989) 682-687). Une étude de 2010 a également montré qu'il existe une augmentation d'environ 66% de l'acide D-glucuronique dans le sang des personnes diabétiques par rapport aux personnes non diabétiques. Une autre conséquence est une diminution de l'activité des enzymes xylosyltransférases (XYLT1, XYLT2) due à la diminution des positions d'attachement des xyloses (causée par le manque de D-xylose ou par la glycosylation des virus à ces positions). En effet, Götting et al, dans une étude portant sur 100 patients diabétiques (Type 1 et Type 2) et 100 dons de sang de personnes non diabétiques, ont démontré que le sérum de xylosyltransférase des patients diabétiques était significativement plus faible que celui des patients non diabétiques. Ces chercheurs ont conclu que l'activité sérique de la xylosyltransférase pouvait être utilisée comme biomarqueur de la réduction de la biosynthèse des GAGs chez les diabétiques (C. Götting, J. Kuhn, K. Kleesiek, Serum xylosyltransferase activity in diabetic patients as a possible marker of reduced proteoglycan biosynthesis, Diabetes Care 31 (2008) 2018-2019). En outre, une étude réalisée sur des rats a montré qu'une telle variation de l'activité de l'enzyme xylosyltransférase 2 induisait des lésions pulmonaires (R. Koslowski, U. Pfeil, H. Fehrenbach, M. Kasper, E. Skutelsky, K.W. Wenzel, Changes in xylosyltransferase activity and in proteoglycan deposition in bleo- mycin-induced lung injury in rat, Eur. Respir. J. 18 (2001) 347-356). Ceci confirme une fois de plus les propriétés anti-inflammatoires du D-xylose et fournit une explication du procédé conduisant à l'inflammation au cours du diabète (S. Tsalamandris, A.S. Antonopoulos, E. Oikonomou, G.A. Papamikroulis, G. Vogiatzi, S. Papaioannou, S. Deftereos, D. Tousoulis, The role of inflammation in diabetes: current concepts and future perspectives, Eur. Cardiol. 14 (2019) 50-59). Les propriétés antivirales du D-xylose confirmés par des essais effectués dans le cadre de la présente invention, viennent corroborer le binding-sites du SARS-CoV-2 virus utilisant les protéines coeur. Basé sur des études antérieures, Il a été expliqué pourquoi les propriétés anti-glycémique du D-xylose n’étaient pas liées à l’insuline, mais que l’inverse était possible. Vu que l’insuline augmente le taux de pénétration du D-xylose dans les cellules de deux à cinq fois, et à l’équilibre, en présence de l’insuline le xylose est présent à 80 % au lieu de 50 % à 55 % dans le cytosol, et 20 % dans le plasma (Kipnis, D.M, 1957). L’incapacité de l’insuline à réduire la glycémie est appelée résistance à l’insuline (ou insulinorésistance) et est largement rencontrée lors des infections virales des virus qui utilisent les protéines de base du protéoglycane (PG) comme récepteurs à la surface des cellules, comme le SRAS-CoV-2, lors du diabète en générale. La notion de résistance à l’insuline reflète ainsi une sous-estimation des capacités de stockage (poids) des GAG contenant du D-xylose par rapport aux capacités de stockage du glycogène hépatique. Lorsque le foie est rempli de glycogène et que le corps n’a pas suffisamment de molécules de D-xylose pour stimuler la thèse de biosynthèse de HS/CS/DS, toute supplémentation à l’insuline ne baisse plus la glycémie, résultant ainsi la situation connue sous le nom de résistance à l’insuline. En effet, dans cette condition, les GAGs n’agissent pas comme des « réservoirs » des métabolites du glucose, et puisque l’autre réservoir (le foie, où le glycogène est stocké) est plein, la supplémentation en insuline n’aura aucun effet sur la glycémie. Ainsi, puisque l’activité des enzymes de xylosyltransférase est réduite pendant le T2DM, l’augmentation des molécules libres de D-xylose permet de maintenir la biosynthèse des GAGs lors de l’insuline résistance et ainsi de réduire la glycémie. Ceci d’autant plus que le glucose est un inhibiteur compétitif de l’entrée du D-xylose dans la cellule (où les GAGs sont biosynthétisé dans l’appareil de Golgi). L’hémoglobine glyquée ou hémoglobine glycosylée (HbA1c) est l’un des biomarqueurs d’hyperglycémie pour le diabète. Il est utilisé pour l’évaluation, pour le contrôle du diabète à long terme et pour le diagnostic du diabète. L’action du D-xylose ou du xylitol son métabolite directe sur le taux d’hémoglobine glyquée (HbA1c) a déjà fait l’objet de plusieurs études antérieures, qui ont montré que, la prise du D-xylose ou du Xylitol son métabolite directe n’affecte quasiment pas ou peu le niveau d’hémoglobine glyquée chez une personne sain (Bae Y.J. et al, PMID: 22259678 ; Bordier V.et al, PMID: 34836205). Virus utilisant les syndécane s et/ou glypicanes comme récepteurs cellulaire, ( HSV-1, HSV-2, HPV-16, HPV-31, HVB, HVC, HIV-1, HTLV-1, SARS-CoV-2, HCMV, DENV-1, et DENV-2 ) et mécanisme d’action Les virus interagissent avec les protéoglycanes (PGs) à la surface des cellules hôtes pour s'y attacher (A. Jinno, et al. Methods Mol. Biol. 1229 (2015) 567-585 ; V. Cagno, et al. Viruses 11 (2019) 596). Plusieurs études ont porté sur ces interactions, en particulier sur les molécules de surface que sont les glycosaminoglycanes (GAG) et l'héparane sulfate (HS) (A. Jinno, et al. Methods Mol. Biol. 1229 (2015) 567-585 ; V. Cagno, et al. Viruses 11 (2019) 596). Cependant, même lorsque les virus interagissent avec l'HS, les protéines centrales de la plupart des virus sont les récepteurs viraux auxquels l'HS se fixe de manière covalente (tableau 1). Cela indique que l'interaction observée entre le HS et certains virus sont dues à leur liaison aux mêmes éléments : les protéines centrales (tableau 1). Beaucoup de ces virus utilisent d'autres molécules comme co-recepteurs en plus des protéines centrales, comme c'est le cas pour le SRAS-CoV- 2, qui utilise les syndécanes et l'enzyme de conversion de l'angiotensine 2 (ACE 2) comme corecepteurs (M. Bermejo-Jambrina, J. Eder, et al., bioRxiv (2020)). Le VIH-1 utilise également les syndécanes ainsi que le CD4 comme récepteurs (A.C. Saphire, et al., J. Virol. 75 (2001) 9187-9200). Le virus de l'hépatite C (HVC) possède plusieurs autres corécepteurs en plus des syndécanes (Q.Shi, et al., J. Virol. 87 (2013) 6866-6875). Les différentes possibilités de modifications post-traductionnelles (PTM) des protéines de surface cellulaire peuvent expliquer la capacité des virus à utiliser différents récepteurs (J. Hu, et al. Front. Microbiol. 11 (2020), 517461), en particulier si l'on considère la diversité des glycoprotéines présentes sur les enveloppes virales et la capacité des virus à interagir avec les protéines cibles de l'hôte et à utiliser ces protéines pour pénétrer dans la cellule (S. Maya & A. Ploss, Hepatology 71 (2020) 380-382 ; K. Azarm, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, New York, NY, 2020.). Bermejo-Jambrina et al. (M. Bermejo-Jambrina, J. Eder, et al., bioRxiv (2020)) ont récemment montré dans une étude in vitro que le SARS-CoV-2 se fixe d'abord aux protéoglycanes à sulfate d'héparane (HSPG) avant d'interagir avec ACE2. Cependant, un travail récent de Clausen et al. (T.M. Clausen et al. Cell 183 (2020) 1043-1057) a montré que la protéine spike du SARS-CoV-2 pouvait se lier simultanément à la surface cellulaire via les HSPG et le récepteur de la protéine ACE2. Le consensus de ces études citées est que les HSPG sont nécessaires à l'attachement du SARS-CoV-2 à la surface cellulaire. Zhang et al. (Q. Zhang, et al., Cell Discov 6 (2020), 80) sont également arrivés à la même conclusion après une étude in vitro. C’est également le cas pour le VIH-1. Saphire et al. (A.C. Saphire, et al., J. Virol. 75 (2001) 9187-9200) ont montré dans une étude in vitro que les CD4 seuls sont insuffisants pour l'infection des macrophages par le VIH-1 et que l'attachement aux HSPGs est également nécessaire. [Table 3] Virus, protéines centrales et leurs associations avec le diabète de type 2. Virus Protéines de base des protéoglycanes à héparane sulfate Association avec le diabète SARS-CoV-2 : coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS) Syndecan 1 and 4 comme récepteurs [(M. Bermejo-Jambrina, J. Eder, et al., bioRxiv (2020) ; A.Hudak et al. Res. Sq, 2020] Diabète induit par le SRAS-CoV-2 (F. Rubino et al. , N. Engl. J. Med. 383 (2020) 789–790) ; T. Sathish et al. Prim. Care Diabetes 15 (2020) 194). SARS-CoV Les HSPG sont des sites d'attachement préliminaires du SRAS-CoV (J. Lang, et al. PLoS One 6 (2011)). HCoV-NL63 : coronavirus humain NL63 Les HSPG sont essentielles pour la liaison HCoV-NL63 (A. Milewska, et al. J. Virol. 88 (2014) 13221–13230) HSV-1 : virus de l'herpès simplex de type 1 Les syndécanes 1 et 2 comme récepteurs (S. Bacsa, et al. J. Gen. Virol. 92 (2011) 733–743). Forte association entre l'infection par le HSV-1 et le diabète de type 2 (Y. Sun et al. Diabetes Care 28 (2) (2005) 435–436) HPV-16 : papillomavirus humain de type 16 Le syndécane 1 comme récepteur (Z. Surviladze et al J. Gen. Virol. 96 (2015) 2232) Mauvais pronostic (A.Sobti, et al. PLoS One 14 (2019),). HVC : virus de l'hépatite C Le syndécane 1 comme récepteur (Q.Shi, et al., J. Virol. 87 (2013) 6866-6875). Forte association entre l'infection par le VHC et une prévalence plus élevée de diabète de type 2 (S.S. Hammerstad, et al. Front. Endocrinol. 6 (2015) 134) HIV-1 : virus de l'immunodéficience humaine de type 1 Les syndécanes et les bêtaglycanes comme récepteurs (A.C. Saphire, et al., J. Virol. 75 (2001) 9187-9200). Le VIH est un facteur de risque élevé pour la prévalence du diabète de type 2 (A.D. Duncan, et al. PLoS One 13 (2018)). HCMV : cytomégalovirus humain Forte supposition selon laquelle les syndécanes sont les récepteurs du virus CMV, d'après une étude in vitro (M. Silvestri, et al. J. Immunol. 53 (2001) 282–289). Rapport de risque relatif allant jusqu'à 12 d'avoir un diabète de type 2 pour les personnes précédemment exposées au CMV (B.W. Roberts, I. Cech, South. Med. J. 98 (2005) 686–692). DENV : virus de la dengue Syndécanes 2 comme récepteur (K. Okamoto, et al. J. Gen. Virol. 93 (2012) 761–770). Forte association entre le diabète et la gravité de la dengue (M. Aamir, et al. Med. Heal. Sci 9 (2015) 99–101.) HTLV-1 : virus de la leucémie à cellules T humaines de type 1 Les HSPG sont essentiels à la liaison du HTLV-1 (K.S.Jones, et al. J. Virol. 79 (2005) 12692–12702). Rapport de risque relatif de HTLV-1 supérieur à 5 pour les personnes atteintes de diabète de type 2 (M. Taghavi et al. Br. J. Diabetes Vasc. Dis. 9 (2009) 81–83). HVB : virus de l'hépatite B Glypican-5 comme facteur d'entrée dans la cellule hôte pour les hépatites B et D (E.R. Verrier et al. , Hepatology (Baltimore, MD.) 63 (2016) 35–48). Le HBV est associé à la prévalence du diabète (Y.S. Hong et al. Sci. Rep. 7 (2017), 4606). HVD : virus de l'hépatite D Selon l’invention, le terme « Composition » réfère à un assemblage de composés, permettant de former un mélange ayant un intérêt thérapeutique, cosmétique, ou de complément alimentaire notamment. Selon l’invention, le terme « Formulation » indique la présentation finale d’une composition, telle qu’elle sera donnée au patient. Selon l’invention le terme « stimulation de la biosynthèse des gycosaminoglycanes » indique que la biosynthèse des glycosaminoglycanes est supérieure à ce qu’elle était avant l’administration de la formulation ou du complément alimentaire selon l’invention. Par « glycosaminoglycane » est entendu la famille de molécules résultant de la polycondensation linéaire d’unités d’osamines et d’acides uroniques (remplacés parfois par du galactose), présents essentiellement dans la matrice extracellulaire des tissus conjonctifs. Les glycosaminoglycannes (GAGs) peuvent être sulfatés ou non. Il existe une seule classe de GAG non sulfaté, l’acide hyaluronique, mais 4 classes de GAGs sulfatés : les chondroïtines-sulfate, les dermatanes-sulfate, les kératanes-sulfate et les héparanes-sulfate/héparines. L’acide hyaluronique est libre dans les tissus, alors que les GAGs sulfatés sont accrochés sur des protéines porteuses (« protéines-cœur ») pour former de volumineux complexes appelé protéoglycannes. Les GAGs jouent un rôle important dans l’hydratation des tissus et dans la signalisation cellulaire. Par « héparane sulfate » sont désignés ces polysaccharides complexes appartenant à la famille des glycosaminoglycanes (GAGs), présents en abondance à la surface cellulaire et dans les matrices interstitielles. C’est un polyoside sulfaté de masse moléculaire élevée formé par un enchaînement par des liaisons α (1-4) d'acides uroniques et de glucosamines, où alternent l'acide D-glucuronique ou L-iduronique et la glucosamine N-acétylée ou N-sulfatée. Ce mucopolysaccharide ou glycosaminoglycane porte des restes sulfuriques sur le deuxième carbone des acides iduroniques et sur le sixième carbone de la glucosamine, ainsi que sur la fonction amine en 2. Ce glycane, synthétisé dans les fibroblastes, est un constituant du tissu conjonctif (derme, aorte), faisant partie de la membrane basale, dans laquelle il est lié au collagène et à la laminine. Par « dermatane sulfate » est entendu ce glycosaminoglycane sulfaté dont la structure polyosidique ne contient pas d'acide glucuronique, mais de l'acide L-iduronique qui alterne avec les molécules de N-acétylgalactosamine, formant des maillons dihexosidiques (L-iduronosido-3-β-N-acétylgalactosamine) attachés au C4 de l’acide iduronique du maillon suivant. Les radicaux sulfuriques sont attachés au C4 des galactosamines. Comme la plupart des glycosaminoglycanes, les dermatane-sulfates font partie des édifices glycoprotéiniques, les protéoglycanes, des tissus conjonctifs, en particulier du derme, du cartilage et de la cornée. Selon les tissus, la longueur des chaînes varie de 10 à 50 maillons ; elles sont liées à un polypeptide de la même manière que les chaînes glucidiques des glycoprotéines. Ces dermatane-sulfates sont soit localisés sur la surface externe des membranes cellulaires, soit associés sous forme de complexes macromoléculaires dans la substance fondamentale extracellulaire. Par « chondroïtines sulfate » est entendu ce glycosaminoglycane sulfaté dont la structure polyosidique contient des acides glucuroniques, qui alternent avec des molécules de N-acétylgalactosamine, formant des maillons dihexosidiques (β-glucuronosido-3-β-N-acétylgalactosamine) attachés au C4 de l'acide glucuronique du maillon suivant. Les radicaux sulfuriques sont attachés au C4 ou au C6 des galactosamines. Comme la plupart des glycosaminoglycanes, les chondroïtine-sulfates font partie des édifices glycoprotéiniques, les protéoglycanes, des tissus conjonctifs, en particulier du derme, du cartilage et de la cornée. Selon les tissus, la longueur des chaines varie de 10 à 50 maillons ; elles sont liées à un polypeptide de la même manière que les chaines glucidiques des glycoprotéines. Ces chondroïtine-sulfates sont localisés soit sur la surface externe des membranes cellulaires, soit associés sous forme de complexes macromoléculaires dans la substance fondamentale extracellulaire. Concernant les pathologies articulaires [T71]) , le cartilage, avec environ 70 g de sulfate de chondroïtine, est de loin le principal contributeur de la masse des GAGs ayant du D-xylose comme élément de liaison sur les protéines coeur. En 1987, Kleesiek et al. [T72], dans une étude in vivo, ont montré que le sérum de l’enzyme xylosyltransférase, qui catalyse le transfert du D-xylose de l’UDP-xylose au groupe hydroxyle des résidus sérine des protéines coeur, était un biomarqueur de la destruction du cartilage dans les maladies articulaires chroniques [T72]. Cela reflète l’importance du CS, qui est le seul GAG contenant du D-xylose présent dans le cartilage, pour la protection du cartilage. En effet, le CS des chondrocytes a des effets protecteurs en régulant la synthèse du collagène de type II et de l’acide hyaluronique, en inhibant la mort cellulaire et en augmentant la production de PG [T73, T74]. Ainsi, il protège le glycocalyx chondrocyte et réduit l’inflammation. Les propriétés anti-inflammatoires du CS des chondrocytes ont été bien démontrées [T75, T76]. Concernant les cancers, le tableau 1 montre que lors des cancers il y a une augmentation anormale des protéiques cœur sur lesquelles se fixent les glycosaminoglycanes HS/CS/DS, de même qu’une surexpression de l’heparanase lors de ses cancers (Table 1). Le D-xylose-2-phosphate, par la stimulation des HS/CS/DS, a des propriétés antivirales (plus efficace que le D-xylose, voir exemples 1 et 2) contre les virus associés aux cancers (Table 2). De plus, la stimulation de la biosynthèse des glycosaminoglycanes HS/CS/DS régule le niveau de l’heparanase (HPSE) à la surface de la cellule. En effet, Les cellules avec moins de HS absorbent moins de HPSE et ont donc plus de HPSE à la surface cellulaire (Gingis-Velitski et al., J. Biol. Chem., 279 (2004), pp. 44084-44092). De ce fait le D-xylose-2-phosphate en régulant le niveau de HPSE participe à un meilleur prognostique des cancers (Table 1). De même, la stimulation de la biosynthèse des glycosaminoglycanes HS/CS/DS régule le niveau des protéines cœur, notamment syndécanes, à la surface de la cellule. En effet, il a été démontré que les HS régulent la biosynthèse des syndécanes et de leur « shedding » (perte) à la surface de la cellule (V.C. Ramani et al., J. Biol. Chem., 287 (2012), pp. 9952-9961; E.P. Schmidt et al., Nat. Med., 18 (2012), pp. 1217-1223). De ce fait le D-xylose-2-phosphate participe à un meilleur prognostique des cancers (Table 1). Par « esters du D-xylose-2-Phosphate » sont entendu des esters au sens du terme bien connu de l’Homme du métier, du D-xylose-2-Phosphate. Sont également avantageusement compris dans le cadre de l’invention des esters d'acides gras comprenant de 16 à 24 atomes de carbone, en particulier les esters d'acides gras naturels. Parmi ces esters d'acide gras, on choisira avantageusement les esters des acides palmitique, stéarique, oléique, linoléique, linolénique, arachidonique, érucique, lignocérique. Par « oligosaccharides contenant du D-xylose-2-Phosphate » sont entendu les holosides constitués d'un petit nombre d'oses (2, 3, 4, 5, 6), comprenant du D-xylose-2-Phosphate. Par oligosaccharide au sens de l'invention, on entend des chaînes de sucres contenant de 2 à 6 sucres. De préférence, selon la présente invention, l'oligosaccharide contenant du D-xylose-2-Phosphate parmi les oligosaccharides tels que définis précédemment comprend au moins un xylose ou un galactose et de 1 à 6 sucres. De tels oligosaccharides sont avantageusement choisis parmi le xylobiose, le xylobiose hexaacétate, le méthyl-β-xylobioside, le xylotriose, le xylotétraose, le xylopentaose et le xylohexaose. Un ou plusieurs xyloses ont été phosphorylé à la position 2 sur ces oligosaccharides. De manière encore plus préférée, le xylobiose est l’oligosaccharide est utilisé, qui est composé de deux molécules de D-xylose-2-Phosphate liées par une liaison 1-4 ainsi que les acétates de xylobiose tels que le xylobiose hexaacétate. Selon un mode de réalisation, ledit oligosaccharide comprenant du D-xylose-2-Phosphate est choisi parmi le Galactose-β1–4-D-xylose-2-Phosphate, le Galactose-β1–3-Galactose-β1–4-D-xylose-2-Phosphate, ou l’Acide Glucuronique-β1–3-Galactose-β1–3-Galactose-β1–4-D-xylose-2-Phosphate. Par « patient humain » est entendu un individu humain atteint d’une pathologie ou à risque d’être atteint d’une pathologie, et dont la prévention ou le traitement est nécessaire. Par « sujet sain » est entendu un individu humain n’étant pas atteint d’une pathologie, et ne nécessitant donc pas de traitement. Par « non-thérapeutique » est entendu au sens de l’invention, une application cosmétique n’ayant pas vocation à traiter un patient, mais permettant d’améliorer l’aspect visuel superficiel de la peau. Par « soin d’une zone de la peau » est entendu selon l’invention que la composition cosmétique selon l’invention améliore l’aspect de la peau, de préférence du visage. Par « cosmétiquement acceptable », on entend au sens de la présente invention ce qui est utile dans la préparation d’une composition cosmétique, qui est généralement sûr, non toxique et ni biologiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation cosmétique, notamment par application topique au niveau de la peau. Par « en administrant » est entendu l’action de l’introduction dans l’organisme du patient ou le sujet sain des compositions ou formulations thérapeutiques ou du complément alimentaire selon l’invention. Par « nombre d’administration » est entendu le nombre de fois où l’administration est réalisée, par exemple par jour, au patient ou au sujet sain de la formulation ou du complément alimentaire selon l’invention. Par « ingrédient pharmaceutique actif acceptable » est entendu une substance médicamenteuse active connue pour avoir un effet thérapeutique particulier. Par « actif antiviral » est entendu selon l’invention un composé connu pour ses propriétés d’élimination des virus, en particulier des virus mentionnés dans le cadre de l’invention. Par « actif permettant la prévention ou le traitement du diabète de type 2 » est entendu selon l’invention un composé connu pour ses propriétés de prévention ou de traitement du diabète de type 2. Par « actif permettant la prévention ou le traitement de l’insulinoresistance » est entendu selon l’invention un composé connu pour ses propriétés de prévention ou de traitement de l’insulinoresistance. Par « antibiotique » est entendu selon l’invention un composé qui agit soit en empêchant le développement des bactéries (antibiotiques bactériostatiques), soit en les tuant (antibiotiques bactéricides). Par « dose » est entendu une unité de prise de la formulation ou du complément alimentaire selon l’invention. Par « jour » est entendu l’unité horaire de 24h débutant à 00h00 et se terminant à 23h59. Les « protéoglycannes » sont des glycoprotéines composées d'une proteine centrale appelée également « protéine porteuse », « protéine cœur » ou « core protéine » sur laquelle sont attachées une ou plusieurs chaînes de glycosaminoglycannes sulfatés, liées généralement par une liaison osidique aux fonctions alcool de certains acides aminés sérine ou occasionnellement thréonine de la protéine. On distingue actuellement plus de 40 protéines porteuses différentes et 5 grandes classes de protéoglycannes : 1- les petits protéoglycannes riches en leucine (Small Leucin-Rich Proteoglycans, SLRP) , servant essentiellement à la stabilisation des fibres de collagène et à la régulation des activités cellulaires; les principaux sont la décorine, le lumicane et la fibromoduline; 2-les gros protéoglycannes extracellulaires, dont certains sont capables de s'agréger à l'acide hyaluronique pour former de très volumineux complexes permettant l'hydratation des tissus et l'amortissement des chocs; les principaux sont le versicane et l'agrécane; 3-les protéoglycannes associés au membranes basales, qui participent à la cohésion des tissus et à la filtration des molécules; les principaux sont le perlécane et l'agrine; 4-les protéoglycannes de la membrane cellulaire, qui jouent un rôle important dans la signalisation cellulaire et favorisent l'action des cytokines et facteurs de croissance. Cette classe se compose des syndécaness, dont la protéine porteuse est transmembranaire, et des glypicanes, pour lesquels la protéine porteuse est ancrée à la surface de la cellule; 5- un petit protéoglycanne appelé serglycine présent dans les granulations intracellulaires des mastocytes et des macrophages, qui porte des chaînes d'héparine, anticoagulant majeur. Par « syndécanes » est entendu le protéoglycane étant un constituant important des membranes de certaines cellules telles que les membranes sinusoïdales des hépatocytes, des cellules musculaires, des macrophages. Les syndécanes forment une famille de molécules transmembranaires dont le domaine extracellulaire est glycanique, et possédant une extrémité intracellulaire dans le cytoplasme. Des syndécaness sont impliqués dans l'internalisation des lipoprotéines athérogènes. Par « glypicane » est entendu le protéoglycane pour lequel la protéine porteuse est ancrée à la surface de la cellule. Le « HSV-1 » est le virus Herpès simple de type 1. Le « HSV-2 » est le virus Herpès simplex de type 2. Le « HPV-16 » est le papillomavirus humain 16. Le « HPV-31 » est le papillomavirus humain 31. Le « HVB » est le virus de l’hépatite B. Le « HVC » est le virus de l’hépatite C. Le « HIV-1 » ou VIH-1 est le virus de l'immunodéficience humaine. Le « HTLV-1 » est le virus Virus T-lymphotropique humain 1. Le « SARS-CoV-2 » est le virus associé au COVID-19. Le « HCMV » est le cytomégalovirus humain Le « DENV-1 » est le virus de la dengue dans son premier sérotype. Le « DENV-2 » est le virus de la dengue dans son deuxième sérotype. Par « administration par voie orale » ou voie gastro-intestinale ou per os (expression latine qui signifie « par la bouche ») est entendu la voie d’administration à destination entérale, qui consiste à les avaler par la bouche. Par « administration par voie nasale » est entendu selon l’invention la voie d’administration de médicaments au niveau du nez et des cavités nasales. Par « administration par voie parentérale » est entendu la voie d’administration au moyen d’une injection, par le biais d’une effraction cutanée. Par « voie sous-cutanée » est entendu une injection continue ou discontinue de dans le tissu sous-cutané (hypoderme). Par « voie intradermique » est entendu une injection dans la peau entre l’épiderme et le derme. Par « voie intraveineuse » est entendu une injection dans une veine. Par « voie intramusculaire » est entendu une injection dans un muscle. Selon l'invention, le terme " prévenir " ou la « prévention » indique une réduction du risque de développer des formes sévères desdites pathologies. Selon l'invention, le terme "traiter" ou « traitement » signifie l'atténuation des symptômes associés à un trouble ou un état spécifique et/ou l'élimination desdits symptômes. Par « actif permettant d’accélérer le transfert dudit au moins un composé vers les cellules » est entendu une molécule permettant de faciliter l’accès dudit au moins composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate, aux cellules cibles grâce à son action propre. De préférence, ledit actif est l’insuline. Par « sous une forme adaptée » est entendu une forme galénique permettant la bonne administration de la formulation ou du complément alimentaire selon l’invention, permettant à la substance active d'atteindre l'organe visé le plus vite et le mieux possible. Par « complément alimentaire » est entendu selon l'invention un produit pouvant apporter un bénéfice nutritionnel. Ce complément peut être pris seul ou être formulé avec d'autres composés afin de rendre la composition plus attrayante à consommer en étant plus similaire à un produit alimentaire courant. Ce complément peut être un facteur contribuant à prévenir ou à diminuer tout problème de douleur viscérale superficielle qui ne nécessite pas de traitement thérapeutique. La composition selon l'invention comprend un « milieu physiologiquement acceptable », c'est-à-dire compatible avec l’administration orale, nasale ou parentérale. En d'autres termes, le milieu utilisé présente des composés permettant la non-dégradation du d-xylose ou de ses dérivés, et ne présentant aucun risque pour le patient ou le consommateur susceptible de le détourner d'utiliser cette composition, ou aucun risque qui pourrait lui causer des effets secondaires néfastes. Dans la description et dans les exemples suivants, sauf indication contraire, les pourcentages sont des pourcentages en poids et les plages de valeurs libellées sous la forme « entre ... et ... » incluent les bornes inférieure et supérieure précisées. Les exemples ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif du domaine de l'invention. Exemples Exemple 1 : Test de l'activité antivirale et cytotoxique d'un e composition selon l’invention contre le S ARS -CoV2 , VIH-1, RSV . Six essais ont été réalisés pour étudier la Cytotoxicité du D-xylose-2-Phosphate (avec 48% de pureté par mol) et son action antivirale contre le SARS-CoV-2, HIV-1, RSV. La cytotoxicité des concentrations de D-xylose-2-Phosphate a été déterminée dans les mêmes conditions d’essai, mais en l’absence d’infection virale. Introduction Une dilution en série de 8 points et 2 fois d'un composé à petite molécule (Sodium D-Xylose-2-phosphate ; concentration de test la plus élevée : 10 mM) est ajoutée aux cellules de test (Vero, A549 et HeLa Tzmbl) en même temps que l'infection par SARS-CoV-2, RSV-A2 et VIH-1, respectivement. Le composé est laissé sur les cellules pendant toute la durée de l'expérience (24h-48h, selon le virus), après quoi l’inhibition de l’infection est mesurée en quantifiant le pourcentage de cellules infectées à l’aide d’un test basé sur l’immunofluorescence. Le Remdesivir (SARS-CoV-2 et RSV-A2) et l'AZT (VIH-1) sont inclus comme contrôles d’analyse. En parallèle, la cytotoxicité des mêmes concentrations sera déterminée dans les mêmes conditions de test, mais en l'absence d'infection virale en utilisant une lecture MTT. Objectif Le but de cette étude est de tester les propriétés antivirales et cytotoxiques de 8 concentrations du D-Xylose-2-phosphate, contre un isolat précoce de SARS-CoV2, VIH-1, RSV. Contrôles - Cellules non traitées et non infectées - Cellules infectées non traitées - VIH-1 : AZT - SRAS-CoV-2 : Remdesivir - RSV : Remdésivir Système d'essai - Cellules : RSV : A549 10000 cellules par puits VIH-1 : TZMBL 8000 cellules par puits SARS-CoV-2 : Vero AD 8000 cellules par puits - Virus : RSV : VRS stock P2, lot 27/06/2022 (7,8x10 6 IFU/ml) VIH-1 : lot NL4-3 du 22/12/2023 (4,58x10 6 IFU/ml) SARS-CoV-2 : Angleterre 02/2020 (stock VRS S2P1, Titre 3,2x10 6 IFU/ml). - Lecture : IF pour le test antiviral ; Test MTT pour test de cytotoxicité. Réactifs - Média complet: RSV/A549: DMEM + 10% FBS + 1% P/S HIV-1/TZMBL: DMEM + 10% FBS + 1% P/S SARS-CoV-2/VeroAD: M199 +5% FBS + 1% P/S - media d’infection: RSV/A549: DMEM + 0.1% FBS + 20mM HEPES + 0.3% BSA + 1% P/S HIV-1/TZMBL: DMEM + 10% FBS + 1% P/S SARS-CoV-2/VeroAD: M199 + 0.4% BSA + 1% P/S - Contrôles RSV et SARS-CoV-2 : Remdesivir 10mM Stock HIV-1: AZT 10mM Réactifs Traitement avec le composé Méthode expérimentale : Préparer du D-Xylose-2-phosphate de sodium 400 mM (Masse molaire = 274,07 g/mol ; 1,2 g fourni) : Peser 200 mg de Sodium D-Xylose-2-phosphate et dissoudre dans 1 824,8 μl de DMEM + p/s (pas d'autres suppléments). Réchauffer à 37°C et vortexer. Filtrer et stériliser à travers un filtre de 0,22 μM. Après utilisation, conserver le reste à -20°C. Préparer 20 mM de D-Xylose-2-phosphate de sodium (= 2x concentration maximale finale de 10 mM) dans 2 000 μl : - 50 μl de D-Xylose-2-phosphate de sodium 400 mM + 950 μl de milieu d'infection (vol total = 1 000 μl). Ceci est répété pour chaque virus, dans les supports d'infection respectifs. Les concentrations de Remdesivir et d'AZT sont à 10 mM dans du DMSO. Préparez 10 μM de Remdesivir (= 2x concentration maximale finale de 5 μM) : - 2 µl de Remdesivir 10 mM + 1998 µl de milieu d'infection RSV. Préparez 40 μM de Remdesivir (= 2x concentration maximale finale de 20 μM) : - 3 µl de Remdesivir 10 mM + 747 µl de milieu d'infection par le SRAS-CoV-2. Préparez 10 μM d’AZT (= 2x concentration maximale finale de 5 μM) : - 2 μl d'AZT 10 mM + 1 998 μl de milieu d'infection par le VIH Comme il s'agit du contrôle et a un diluant différent de celui des composés testés, et la concentration du diluant est de 0,4 % à la concentration maximale du Remdesivir, le diluant n'est pas pris en compte. Aux puits 4 à 6 de la rangée A sur toutes les plaques, ajoutez 240 µl de D-Xylose-2-phosphate de sodium 20 mM. Aux puits 4 à 6 des rangées B à H, ajouter 120 µl de milieu d’infection spécifique au virus. Diluez en série les échantillons de test 2 fois en descendant 120 µl de la rangée A (puits 4 à 6) jusqu'à H, en mélangeant 10 fois. Aux puits 7 à 9 de la rangée A, ajouter 180 µl de composé témoin. Aux puits 7 à 9 des rangées B à H, ajouter 120 µl de milieu d’infection spécifique au virus. Diluez en série les composés de contrôle 3 fois en descendant 60 µl de la rangée A (puits 7 à 9) jusqu’à H, en mélangeant 10 fois. Aux colonnes 1 à 3 et 10 à 12, ajoutez 120 µl de milieu d’infection spécifique au virus. Cytotoxicité Retirez les médias des cellules dans la plaque de cytotoxicité à l’aide d’un multicanal. Remplacer par 50 μl de dilutions de composés provenant de la plaque à fond rond, immédiatement suivis par 50 μl d'infection. Incuber les cellules pendant 24 heures (Vero AD) ou 48 heures (HeLa Tzmbl et A549) à 37°C et 5 % de CO2. Infection Calculez le volume de stock de virus nécessaire à l’aide de la formule ci-dessous : [(Nombre de cellules/puits*) x (nombre de puits + ≥10 % nombre de puits en excès) x MOI] /virus UI/ml * Doubler le nombre de cellules étalées la veille RSV = (20 000 x 110 x 0,2)/7,8 x 10 6 x 1 000 = 56 μl de virus + 5 444 μl de milieu d'infection Décongeler une aliquote de virus et ajouter 56 μl de virus + 5 444 μl de milieu d’infection (volume total 110*50 μl = 5 500 μl). VIH = (16000x110x0,25)/4,58x10 6 x1000 = 96 μl de virus + 5 404 μl de milieu d'infection Décongeler une aliquote de virus et ajouter 96 μl de virus + 5 404 μl de milieu d’infection (volume total 110*50 μl = 5 500 μl). SRAS-CoV-2 = (16 000 x 110 x 0,0014/3,2 x 105 x 1 000 = 7,7 μl de virus + 5 492,3 μl de milieu d'infection Diluer le virus 10 fois, en ajoutant 10 μl de stock de virus à 90 μl de milieu d'infection pour un titre de travail de 3,2x10 5 /UI/ml. Ajouter 7,7 μl de virus dilué + 5 492,3 μl de milieu d’infection (volume total 110*50 μl = 5 500 μl). Retirez les médias des cellules dans les plaques antivirales. Remplacer par 50 μl de dilutions de composés provenant de la plaque à fond rond, immédiatement suivis par 50 μl de virus dilué ou des milieux d’infection selon la disposition des plaques ci-dessus. Incuber le RSV et le VIH pendant 48 heures et le SRAS-CoV-2 pendant 24 heures à 37 °C et 5 % de CO2. Fixation et développement Après 24 ou 48 heures d'incubation, procéder à la fixation (test antiviral) ou au test MTT (test de cytotoxicité). Pour le test MTT, ajouter du Triton dans la colonne 11 (cellules non traitées +/- diluant) comme contrôle. Immunocoloration Colorer la plaque antivirale en utilisant : RSV : Plaque de coloration utilisant l'anticorps anti-RSV de chèvre (Abcam AB20745) à 1 : 500, suivi par l'anticorps anti-chèvre d'âne (Abcam AB150135) au 1:800, avec coloration nucléaire par Hoechst au 1:1000. SARS-CoV-2 : Plaque de coloration utilisant l'anticorps de lapin anti-SARS-CoV-2 Nucleocapsid (HL448) (Thermo Fisher MA5-36271) à 1:500, suivi de chèvre anti-lapin 488 (Thermo Fisher A11034) à 1:800, avec coloration nucléaire par Hoechst à 1:1000. VIH : plaque de coloration utilisant l'anticorps de lapin anti-gag p55 p24 (ARP432 NIBSC) à 1 : 500, suivi de l'anticorps de chèvre anti-lapin 488 (Thermo Fisher A11034) à 1 : 800, avec coloration nucléaire par Hoechst à 1 : 1000. Résultats des essais de cytotoxicité. Analyse (effectué par VRS) Cellules : VeroAD Résultats pour la cytotoxicité : absorbance à 570 nm, Remdesivir (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Remdesivir (µM) non traité Triton Vide 20.000 10000.000 0.264 0.244 0.257 0.23 0.24 0.23 0.244 0.040 6.667 5000.000 0.269 0.268 0.273 0.26 0.26 0.25 0.263 0.038 2.222 2500.000 0.265 0.265 0.264 0.27 0.27 0.27 0.260 0.044 0.741 1250.000 0.279 0.265 0.273 0.27 0.26 0.26 0.268 0.039 0.247 625.000 0.261 0.257 0.262 0.26 0.25 0.26 0.248 0.040 0.082 312.500 0.276 0.265 0.269 0.27 0.25 0.27 0.250 0.054 0.027 156.250 0.251 0.253 0.250 0.24 0.26 0.24 0.235 0.045 0.009 78.125 0.223 0.225 0.226 0.21 0.22 0.21 0.196 0.048 Moyenne pour la colonne infectée non traitée = 0,246 Moyenne pour la colonne infectée non traitée : = 0.044 Ecart-type de Pearson pour la colonne infectée non traitée et la colonne infectée non traitée : (Ecart-type standard : 0.023) Pourcentages de viabilité , Cellules = VeroAD Remdesivir (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Remdesivir (µM) non traité Triton Vide 20.000 10000.000 109.26 99.33 105.69 92.64 98.46 92.44 99.33 -1.68 110.46 6.667 5000.000 111.77 111.15 113.80 108.39 106.95 103.92 108.50 -2.89 104.98 2.222 2500.000 109.80 109.73 109.18 110.35 111.99 110.02 107.20 0.11 102.96 0.741 1250.000 116.34 109.47 113.80 113.32 106.87 109.00 110.93 -2.07 81.10 0.247 625.000 107.81 105.69 108.10 105.30 101.56 105.59 101.14 -1.53 89.71 0.082 312.500 115.10 109.73 111.77 111.48 103.88 110.38 102.40 5.32 89.94 0.027 156.250 102.58 103.92 102.08 97.26 104.80 96.71 94.94 0.70 83.34 0.009 78.125 88.72 89.64 90.10 83.50 85.05 84.37 75.57 2.04 77.47 Pourcentages de cytotoxicité, Cellules = VeroAD Remdesivir (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Remdesivir (µM) non traité Triton Vide 20.000 10000.000 -9.26 0.67 -5.69 7.36 1.54 7.56 0.67 101.68 -10.46 6.667 5000.000 -11.77 -11.15 -13.80 -8.39 -6.95 -3.92 -8.50 102.89 -4.98 2.222 2500.000 -9.80 -9.73 -9.18 -10.35 -11.99 -10.02 -7.20 99.89 -2.96 0.741 1250.000 -16.34 -9.47 -13.80 -13.32 -6.87 -9.00 -10.93 102.07 18.90 0.247 625.000 -7.81 -5.69 -8.10 -5.30 -1.56 -5.59 -1.14 101.53 10.29 0.082 312.500 -15.10 -9.73 -11.77 -11.48 -3.88 -10.38 -2.40 94.68 10.06 0.027 156.250 -2.58 -3.92 -2.08 2.74 -4.80 3.29 5.06 99.30 16.66 0.009 78.125 11.28 10.36 9.90 16.50 14.95 15.63 24.43 97.96 22.53 Cellules : A549 Résultats pour la cytotoxicité : absorbance à 570 nm, Remdesivir (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Remdesivir (µM) non traité Triton Vide 5.000 10000.000 0.403 0.398 0.396 0.325 0.321 0.342 0.348 0.041 1.667 5000.000 0.379 0.359 0.353 0.329 0.332 0.333 0.342 0.059 0.556 2500.000 0.319 0.322 0.302 0.353 0.335 0.340 0.357 0.042 0.185 1250.000 0.355 0.341 0.316 0.341 0.319 0.352 0.341 0.042 0.062 625.000 0.334 0.335 0.337 0.351 0.329 0.349 0.330 0.044 0.021 312.500 0.347 0.350 0.337 0.385 0.362 0.409 0.416 0.043 0.007 156.250 0.347 0.342 0.353 0.436 0.322 0.404 0.440 0.045 0.002 78.125 0.277 0.293 0.279 0.368 0.325 0.331 0.351 0.042 Moyenne pour la colonne infectée non traitée = 0,366 Moyenne pour la colonne infectée non traitée : = 0.045 Ecart-type de Pearson pour la colonne infectée non traitée et la colonne infectée non traitée : (Ecart-type standard : 0.040) Pourcentages de viabilité , Cellules A549 Remdesivir (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Remdesivir (µM) non traité Triton Vide 5.000 10000.000 111.54 110.04 109.27 87.40 86.01 92.62 94.55 -1.24 1.667 5000.000 104.25 97.89 96.03 88.67 89.56 89.75 92.70 4.32 0.556 2500.000 85.49 86.49 80.14 95.95 90.38 91.98 97.39 -0.97 0.185 1250.000 96.75 92.19 84.45 92.25 85.57 95.78 92.17 -0.70 0.062 625.000 90.20 90.41 91.13 95.37 88.52 94.79 88.96 -0.08 0.021 312.500 94.03 95.01 90.99 106.02 98.82 113.54 115.53 -0.56 0.007 156.250 94.19 92.68 95.89 121.97 86.47 111.98 123.24 0.06 0.002 78.125 72.48 77.46 72.90 100.58 87.32 89.22 95.45 -0.83 Pourcentages de cytotoxicité , Cellules A549 Remdesivir (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Remdesivir (µM) non traité Triton Vide 5.000 10000.000 -11.54 -10.04 -9.27 12.60 13.99 7.38 5.45 101.24 1.667 5000.000 -4.25 2.11 3.97 11.33 10.44 10.25 7.30 95.68 0.556 2500.000 14.51 13.51 19.86 4.05 9.62 8.02 2.61 100.97 0.185 1250.000 3.25 7.81 15.55 7.75 14.43 4.22 7.83 100.70 0.062 625.000 9.80 9.59 8.87 4.63 11.48 5.21 11.04 100.08 0.021 312.500 5.97 4.99 9.01 -6.02 1.18 -13.54 -15.53 100.56 0.007 156.250 5.81 7.32 4.11 -21.97 13.53 -11.98 -23.24 99.94 0.002 78.125 27.52 22.54 27.10 -0.58 12.68 10.78 4.55 100.83 Cellules : HeLa TZM-bl Résultats pour la cytotoxicité : absorbance à 570 nm, AZT (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) AZT (µM) non traité Triton Vide 5.000 10000.000 0.750 0.848 0.725 0.881 0.777 0.745 0.761 0.052 1.667 5000.000 0.887 0.937 0.804 1.052 0.845 0.820 0.895 0.058 0.556 2500.000 1.037 0.907 0.777 1.087 1.002 0.797 0.818 0.071 0.185 1250.000 0.791 0.787 0.773 1.055 0.867 0.812 0.759 0.053 0.062 625.000 0.812 0.770 0.781 0.970 0.824 0.787 0.754 0.057 0.021 312.500 0.948 0.879 0.827 0.993 0.843 0.854 0.808 0.057 0.007 156.250 0.889 0.856 0.842 0.737 0.852 0.826 0.819 0.064 0.002 78.125 0.830 0.901 0.828 0.990 0.858 0.880 0.820 0.068 Moyenne pour la colonne infectée non traitée = 0,804 Moyenne pour la colonne infectée non traitée : = 0.060 Ecart-type de Pearson pour la colonne infectée non traitée et la colonne infectée non traitée : (Ecart-type standard : 0.047) Pourcentages de viabilité , Cellules HeLa TZM-bl AZT (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) AZT (µM) non traité Triton Vide 5.000 10000.000 92.76 105.84 89.42 110.32 96.34 92.09 94.19 -1.08 1.667 5000.000 111.08 117.82 99.99 133.26 105.55 102.16 112.17 -0.32 0.556 2500.000 131.28 113.88 96.28 137.96 126.53 98.97 101.82 1.41 0.185 1250.000 98.22 97.70 95.75 133.70 108.40 101.07 93.89 -0.89 0.062 625.000 101.07 95.38 96.85 122.28 102.72 97.70 93.21 -0.36 0.021 312.500 119.33 110.08 103.11 125.33 105.25 106.66 100.53 -0.36 0.007 156.250 111.44 106.92 105.11 90.99 106.47 102.93 102.03 0.49 0.002 78.125 103.46 112.96 103.25 124.92 107.26 110.20 102.16 1.12 Pourcentages de cytotoxicité , HeLa TZM-bl AZT (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) AZT (µM) non traité Triton Vide 5.000 10000.000 7.24 -5.84 10.58 -10.32 3.66 7.91 5.81 101.08 1.667 5000.000 -11.08 -17.82 0.01 -33.26 -5.55 -2.16 -12.17 100.32 0.556 2500.000 -31.28 -13.88 3.72 -37.96 -26.53 1.03 -1.82 98.59 0.185 1250.000 1.78 2.30 4.25 -33.70 -8.40 -1.07 6.11 100.89 0.062 625.000 -1.07 4.62 3.15 -22.28 -2.72 2.30 6.79 100.36 0.021 312.500 -19.33 -10.08 -3.11 -25.33 -5.25 -6.66 -0.53 100.36 0.007 156.250 -11.44 -6.92 -5.11 9.01 -6.47 -2.93 -2.03 99.51 0.002 78.125 -3.46 -12.96 -3.25 -24.92 -7.26 -10.20 -2.16 98.88 Résultats pour les tests antiviraux Résultats pour le SARS-CoV-2 Données brutes : Remdesivir (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Remdesivir (µM) Infecté non traité Non-infecté non-traité Triton Vide 20.000 10000.000 12.59 11.35 6.29 0.00 0.46 0.30 28.34 0.18 6.667 5000.000 33.06 34.91 14.02 3.09 2.36 2.46 62.70 0.01 2.222 2500.000 19.11 28.47 29.72 18.44 20.67 36.93 48.27 0.00 0.741 1250.000 35.30 33.92 55.92 49.18 30.03 84.64 42.08 0.01 0.247 625.000 47.52 50.40 46.38 49.21 73.02 49.74 60.69 0.74 0.082 312.500 37.65 42.15 48.02 65.26 53.83 54.72 40.48 0.00 0.027 156.250 45.74 60.48 54.28 51.91 56.14 60.01 49.59 0.00 0.009 78.125 42.50 61.03 76.75 56.97 80.01 79.51 90.05 0.35 Analyses (effectué par VRS) Absorbance - SARS-CoV-2 Moyenne pour la colonne infectée non traitée : 52.78 Ecart-type standard pour la colonne infectée non traitée : 18.68 Moyenne pour la colonne non infectée non traitée : 0,16 Ecart-type standard pour la colonne non infectée non traitée : 0,26 Pourcentages d’inhibition Remdesivir (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Remdesivir (µM) Infecté non traité Non-infecté non-traité Triton Vide 20.000 10000.000 76.38 78.73 88.35 100.31 99.43 99.74 46.43 99.97 6.667 5000.000 37.47 33.95 73.66 94.43 95.82 95.64 -18.85 100.28 2.222 2500.000 63.99 46.20 43.83 65.25 61.03 30.12 8.57 100.31 0.741 1250.000 33.22 35.84 -5.98 6.84 43.23 -60.57 20.33 100.28 0.247 625.000 10.00 4.51 12.16 6.77 -38.47 5.78 -15.04 98.91 0.082 312.500 28.75 20.19 9.03 -23.73 -2.01 -3.70 23.36 100.31 0.027 156.250 13.37 -14.64 -2.85 1.65 -6.39 -13.74 6.05 100.31 0.009 78.125 19.53 -15.69 -45.57 -7.97 -51.76 -50.81 -70.84 99.64 [Table 15] Nombre de cellules Remdesivir (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Remdesivir (µM) Infecté non traité Non-infecté non-traité Triton Vide 20.000 10000.000 13593 13951 14131 13796 13447 13661 13417 14086 6.667 5000.000 15664 15054 15078 14745 14577 14704 14682 14753 2.222 2500.000 15152 15573 15214 14862 15087 14693 15099 15436 0.741 1250.000 14846 14959 15050 14619 14441 14429 15019 14649 0.247 625.000 15279 15234 14931 14585 14910 14615 14627 15868 0.082 312.500 14935 14903 14647 14390 14361 15480 14762 14973 0.027 156.250 14296 14218 13870 14325 13955 14077 14163 14826 0.009 78.125 12836 12733 12613 12724 11616 12039 11588 13491 Une photographie de la plaque décrite dans le tableau 15 est présentée en FIG. 1 . Résultats pour le VIH-1 Données brutes : AZT (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) AZT (µM) Infecté non traité Non-infecté non-traité Triton Vide 5.000 10000.000 37.63 34.05 33.79 1.41 1.89 1.86 46.60 0.26 1.667 5000.000 36.33 34.52 35.16 3.65 3.24 3.84 41.07 0.21 0.556 2500.000 37.95 36.83 34.62 8.65 7.19 9.04 39.93 0.02 0.185 1250.000 26.06 30.80 29.63 16.45 15.98 16.40 39.54 0.07 0.062 625.000 31.30 24.61 29.78 22.06 23.94 27.28 41.67 0.08 0.021 312.500 33.59 35.54 39.47 31.62 34.39 33.16 41.46 0.05 0.007 156.250 38.33 38.00 41.59 36.78 37.63 37.82 45.87 0.09 0.002 78.125 44.84 41.60 44.08 43.52 46.62 50.50 46.31 0.24 Analyses (effectué par VRS) Absorbance – VIH-1 Moyenne pour la colonne infectée non traitée : 42,81 Ecart-type standard pour la colonne infectée non traitée : 2,95 Moyenne pour la colonne non infectée non traitée : 0,13 Ecart-type standard pour la colonne non infectée non traitée : 0,09 Pourcentages d’inhibition AZT (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) AZT (µM) Infecté non traité Non-infecté non-traité Triton Vide 5.000 10000.000 12.12 20.51 21.12 96.99 95.86 95.93 -8.88 99.69 1.667 5000.000 15.18 19.41 17.91 91.74 92.71 91.29 4.07 99.81 0.556 2500.000 11.38 14.01 19.18 80.03 83.45 79.11 6.74 100.26 0.185 1250.000 39.25 28.13 30.88 61.75 62.86 61.86 7.64 100.13 0.062 625.000 26.96 42.64 30.51 48.62 44.21 36.37 2.67 100.11 0.021 312.500 21.59 17.03 7.81 26.21 19.73 22.60 3.15 100.18 0.007 156.250 10.48 11.27 2.85 14.13 12.13 11.69 -7.18 100.09 0.002 78.125 -4.77 2.82 -2.98 -1.68 -8.92 -18.02 -8.22 99.74 [Table 18] Nombre de cellules AZT (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) AZT (µM) Infecté non traité Non-infecté non-traité Triton Vide 5.000 10000.000 14660 14506 15344 25367 21291 23026 9902 27357 1.667 5000.000 15030 16471 15946 30107 28262 26739 10377 26460 0.556 2500.000 15865 15599 14249 29883 27103 24598 10872 25328 0.185 1250.000 14622 15158 13978 22972 21462 22536 11668 25143 0.062 625.000 15418 15033 14625 17577 16926 17949 11025 24506 0.021 312.500 13021 13503 13688 13963 13502 13869 11514 25758 0.007 156.250 12960 13291 12685 13557 12578 12528 12239 32498 0.002 78.125 11429 11973 12673 12223 9928 10541 10634 30470 Une photographie de la plaque décrite dans le tableau 18 est présentée en FIG. 2 . Résultats pour le RSV-A2 Données brutes : Remdesivir (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Remdesivir (µM) Infecté non traité Non-infecté non-traité Triton Vide 5.000 10000.000 47.82 51.04 55.09 1.07 1.32 1.38 44.30 0.04 1.667 5000.000 44.83 45.98 49.74 4.37 3.63 3.42 50.07 0.03 0.556 2500.000 30.29 32.10 36.60 6.45 6.44 3.67 51.28 0.00 0.185 1250.000 33.05 43.63 42.57 15.97 13.68 14.02 46.75 0.00 0.062 625.000 43.94 46.19 46.10 32.55 29.69 25.55 56.29 0.04 0.021 312.500 55.97 60.14 57.79 52.85 50.33 44.51 60.67 0.00 0.007 156.250 51.66 57.39 58.49 51.15 47.39 49.08 54.03 0.01 0.002 78.125 51.62 57.90 59.52 50.88 48.28 46.78 49.00 0.03 Analyses (effectué par VRS) Absorbance – RSV-A2 Moyenne pour la colonne infectée non traitée : 51.55 Ecart-type standard pour la colonne infectée non traitée : 5.29 Moyenne pour la colonne non infectée non traitée : 0,02 Ecart-type standard pour la colonne non infectée non traitée : 0,02 Pourcentages d’inhibition Remdesivir (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Remdesivir (µM) Infecté non traité Non-infecté non-traité Triton Vide 5.000 10000.000 7.24 1.00 -6.87 97.97 97.47 97.37 14.07 99.96 1.667 5000.000 13.04 10.82 3.51 91.55 93.00 93.40 2.86 99.98 0.556 2500.000 41.26 37.74 29.01 87.53 87.53 92.92 0.52 100.04 0.185 1250.000 35.90 15.37 17.42 69.04 73.48 72.82 9.31 100.04 0.062 625.000 14.77 10.41 10.58 36.87 42.42 50.45 -9.19 99.96 0.021 312.500 -8.57 -16.66 -12.12 -2.53 2.36 13.66 -17.70 100.04 0.007 156.250 -0.22 -11.34 -13.48 0.77 8.07 4.79 -4.81 100.02 0.002 78.125 -0.14 -12.32 -15.46 1.30 6.34 9.25 4.95 99.98 [Table 21] Nombre de cellules Remdesivir (µM) Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Vide Sodium D-Xylose-2-phosphate(µM) Remdesivir (µM) Infecté non traité Non-infecté non-traité Triton Vide 5.000 10000.000 13145 13269 12906 13598 13481 13381 12783 10610 1.667 5000.000 14993 14338 15428 13739 13786 13190 12959 10369 0.556 2500.000 14960 13813 14590 13683 14089 4691 13864 10573 0.185 1250.000 13631 14463 14192 14819 14141 13948 13800 10772 0.062 625.000 13870 13842 14318 14451 13870 14329 13250 10094 0.021 312.500 14255 14301 13664 14909 14666 14134 13110 10436 0.007 156.250 12802 12841 12492 13117 12219 13115 12914 11464 0.002 78.125 10209 10106 11585 11871 10584 11555 11598 9839 Une photographie de la plaque décrite dans le tableau 21 est présentée en FIG. 3 . Interprétation des résultats SARS-CoV-2 Les précédents essais des activités antivirales du D-xylose (non modifié) contre le SARS-CoV-2 effectué par le même laboratoire avait revélé une EC50 = 26,22 mM Une telle concentration est très élevée (si on la convertie en dose). Les résultats obtenus avec le D-xylose-2-Phosphate de Sodium donne une concentration EC50 du produit non purifié de 4,411 mM. ( FIG. 4 ) La pureté du produit obtenu de APEX molecular est de 46%, soit EC50 = 2.03 mM (Pour le D-xylose-2-Phosphate de Sodium) Les propriétés antivirales du D-xylose-2-Phosphate de Sodium contre le SARS-CoV-2 sont donc de : EC50(D-xylose)/EC50(D-xylose-2-Phosphate) = 12.9 fois plus efficace que ceux du D-xylose. HIV-1 NL4-3 Les précédents essais des activités antivirales du D-xylose (non modifié) contre le HIV-1 NL4-3 effectué par le même laboratoire avait révélé une EC50 = 124,4 Mm. La concentration maximale du D-xylose-2-Phosphate de Sodium testée dans le présent exemple est de 10mM et avec cette concentration, la concentration qui inhibe 30% du virus est EC30 comprise entre 0.625 mM et 1.25mM Les résultats obtenus avec le D-xylose (non modifié) : EC30 autour de 104 Mm (inhibition de 28,85%, moyenne de 3 puits) ( FIG. 5 ). La pureté du produit obtenu de APEX molecular est de 46%, soit EC30 autour de = 0,43 mM (Pour le D-xylose-2-Phosphate de Sodium). Les propriétés antivirales du D-xylose-2-Phosphate de Sodium contre le HIV-1 sont donc de : EC30(D-xylose)/EC30(D-xylose-2-Phosphate) = 241,9 fois plus efficace que ceux du D-xylose. Exemple 2 : Test in vitro de l'activité antivirale et cytotoxique d'un composé seul ou en combinaison avec un deuxième composé contre le HCMV. Cet essai a été réalisé pour étudier la Cytotoxicité du D-xylose-2-Phosphate (avec une pureté par mol de 46%). La cytotoxicité des concentrations de Sodium-D-xylose-2-Phosphate a été déterminée dans les mêmes conditions d’essai, mais en l’absence d’infection virale. L’administration du Sodium-D-xylose-2-phosphate (non purifiée) et du virus simultanément permet d’étudier les propriétés d’inhibiteur compétitif du D-xylose vis-à-vis du HCMV. La concentration maximale testé était de 1mM. Introduction Une dilution en série de 8 points, avec un facteur de dilution de 2 fois d'un composé à petite molécule (Sodium-D-Xylose-2-phosphate avec une purété de 46%; concentration d'essai la plus élevée : 10 mM), ajouté aux cellules de test (Human foreskin fibroblasts (HFFs)) en même temps que l'infection par le HCMV, suivant le schéma de dilution ci-dessous : Sodium-D-Xylose-2-Phosphate (mM) 10.000000 10.000000 10.000000 1.000000 1.000000 1.000000 0.100000 0.100000 0.100000 0.010000 0.010000 0.010000 0.001000 0.001000 0.001000 0.000100 0.000100 0.000100 0.000010 0.000010 0.000010 0.000001 0.000001 0.000001 Le composé (Sodium-D-Xylose-2-Phosphate) a été laissé sur les cellules pendant toute la durée de l'expérience (48h, après quoi l'inhibition de l'infection a été mesurée en quantifiant le pourcentage des cellules infectées à l'aide d'un test basé sur l’immunofluorescence. En parallèle, la cytotoxicité des mêmes concentrations de composés a été déterminée dans les mêmes conditions d'essai mais en l'absence d'infection virale à l'aide du test MTT. Objectif Le but de cette étude est de tester les propriétés antivirales et cytotoxiques de 8 concentrations de Sodium-D-Xylose-2-Phosphate seul contre le HCMV. Échantillons d'essai - Identité : D Sodium D-Xylose-2-phosphate (Masse molaire 274.07g/mol). Batch utilisé : Batch 2 (APEX-000122-5-1, 947mg) reçu de APEX Molecular - Reçu : 28 Mars 202 3 - Stocké : Température ambiante Contrôles - Ganciclovir (HCMV). Système d'essai Human foreskin fibroblasts (HFFs) - HCMV, Merlin, VRS stock P2 June 2022 (1x10 6 TCID50/ml). - Lecture : IF (Immunofluorescence) pour le test antiviral & MTT assay pour le test de cytotoxicité Réactifs - media complet: HFF - DMEM (Gibco 10566016) + 10% FBS (Gibco 10500064) + 1x p/s (Gibco 15070063) - media d’infection: HFF - DMEM low glucose pyruvate (Gibco 11885084) + 5% FBS + 1x p/s. - Control Drug stock: Ganciclovir 50mM in DMSO (G2536-100MG Lot 0000132914 Source 000091795). Procédure expérimentale Placage cellulaire La veille de l'expérience, plaquer 5 000 cellules HFF/puits dans 2 plaques de 96 puits, dont une plaque Perkin Elmer noire pour le test antiviral et une plaque Sarstedt transparente pour l'étude de cytotoxicité. Préparation du composé Alternativement préparer 400 mM de sodium D-Xylose-2-phosphate (Masse molaire = 274,07 g/mol). Dissoudre 947 mg de D-Xylose-2-phosphate dans un milieu d'infection à un volume final de 8,64 ml. Réchauffer à 37°C et vortexer. Filtrer et stériliser à travers un filtre de 0,22 μM. Après utilisation, conserver le reste à -20°C. Préparer 20 mM de D-Xylose-2-phosphate de sodium (=2x concentration maximale finale de 10 mM) dans 1 000 μl : • 50 µl de D-Xylose-2-phosphate de Sodium 400 mM + 950 µl de milieu d'infection (vol = 1000 µl). Le stock de ganciclovir est de 50 mM dans le DMSO. Préparez 200 μM de Ganciclovir (= 2x concentration maximale finale de 100 μM) : • 4μl de Ganciclovir 50mM + 996μl de milieu d'infection. Comme il s'agit du contrôle et qu'il contient un diluant différent de celui des composés testés, et que la concentration finale du diluant est de 0,2 % à la concentration supérieure en ganciclovir, le diluant n'est pas pris en compte. Aux puits 4 à 6 de la rangée A, ajoutez 170 µl de D-Xylose-2-phosphate de sodium 20 mM. Aux puits 4 à 6 des rangées B à H, ajouter 153 μl de milieu d’infection. Diluez en série les échantillons de test 10 fois en descendant 17 µl de la rangée A (puits 4 à 6) jusqu'à H, en mélangeant 10 fois. Aux puits 7 à 9 de la rangée A, ajouter 240 µl de composé témoin. Aux puits 7 à 9 des rangées B à H, ajouter 160 µl de milieu d’infection. Diluez en série les échantillons de test 3 fois en descendant 80 µl de la rangée A (puits 7 à 9) jusqu'à H, en mélangeant 10 fois. Aux colonnes 1 à 3 et 10 à 12, ajoutez 150 µl de milieu d’infection Cytotoxicité Retirez les médias des cellules dans la plaque de cytotoxicité. Remplacer par 50 μl de dilutions de composés provenant de la plaque à fond rond immédiatement suivis par 50 μl de milieu d’infection. Incuber HFF pendant 5 jours à 37°C et 5% de CO2. Infection Calculez le volume de stock de virus nécessaire à l’aide de la formule ci-dessous : [(Nombre de cellules/puits*) x (nombre de puits + ≥10 % nombre de puits en excès) x MOI] /virus UI/ml * Doubler le nombre de cellules étalées la veille HCMV = (10 000 x 110 x 2)/1 x 10 6 x 1 000 = 2 200 μl Décongeler une aliquote de virus et ajouter 2 200 μl de virus + 3,3 ml de milieu d'infection (volume total 110*50 μl = 5 500 μl). Retirez les médias des cellules dans la plaque antivirale. Remplacez par 50 μl de dilutions de composés provenant de la plaque à fond rond, immédiatement suivis par 50 μl de virus dilué ou milieux d’infection selon la disposition des plaques ci-dessus. Incuber le HCMV pendant 5 jours à 37°C et 5 % de CO2. Fixation et développement Après 48 heures ou 5 jours d'incubation, procéder à la fixation (dosage antiviral) ou au test MTT (dosage de cytotoxicité). Pour le Test MTT, ajouter du Triton dans la colonne 11 (cellules non traitées +/- diluant) comme contrôle. Immunocoloration Colorer la plaque antivirale en utilisant : HCMV (souris) : Anti-gB, (The Native Antigen Company, n° de catalogue MAB12192) ; 1 mg/ml. Utiliser à 2 µg/ml (1:500). Suivi par Goat anti-souris 488, (Invitrogen, n° de catalogue A11001); 2 mg/ml utiliser à 2,5 μg/ml (1:800). Résultats des essais. Résultats pour les tests antiviraux et analyses (effectuée par VRS) % Infection Sodium-D-Xylose-2-Phosphate (mM) Ganciclovir (µM). Vide Sodium-D-Xylose-2-Phosphate (mM) Ganciclovir (µM). Infecté + Diluant Non infecté + Diluant Vide 10.000000 100.000 4.41 33.64 7.04 9.70 6.46 7.24 37.16 0.14 1.000000 33.333 5.95 5.76 8.13 11.20 11.15 8.74 40.35 0.42 0.100000 11.111 43.43 43.64 41.90 22.94 21.01 24.52 50.88 0.48 0.010000 3.704 41.49 49.93 47.60 37.67 26.93 32.46 36.49 0.15 0.001000 1.235 47.07 49.23 47.36 38.45 41.48 38.64 40.92 0.44 0.000100 0.412 44.99 38.07 41.48 48.82 44.51 48.54 39.61 0.08 0.000010 0.137 41.49 45.99 38.80 53.72 48.45 52.42 45.19 0.08 0.000001 0.046 39.90 45.31 42.37 45.49 47.12 39.31 42.49 0.15 Moyenne pour la colonne infectée +diluant : 41,64 Écart-type standard pour la colonne infectée +diluant : 4,65 Moyenne pour la colonne non infectée +diluant : 0,24 Écart-type standard pour la colonne non infectée +diluant : 0,17 Pourcentages de viabilité Sodium-D-Xylose-2-Phosphate (mM) Ganciclovir (µM). Vide Sodium-D-Xylose-2-Phosphate (mM) Ganciclovir (µM). Infecté + Diluant Non infecté + Diluant Vide Numéro des lignes 10.000000 100.000 89.93 19.31 83.57 77.15 84.97 83.10 10.81 100.25 A 1.000000 33.333 86.21 86.68 80.95 73.52 73.65 79.48 3.11 99.58 B 0.100000 11.111 -4.33 -4.84 -0.64 45.17 49.84 41.35 -22.33 99.42 C 0.010000 3.704 0.35 -20.04 -14.40 9.58 35.52 22.17 12.43 100.23 D 0.001000 1.235 -13.13 -18.35 -13.82 7.69 0.38 7.24 1.74 99.53 E 0.000100 0.412 -8.10 8.61 0.38 -17.35 -6.95 -16.67 4.89 100.39 F 0.000010 0.137 0.35 -10.51 6.86 -29.19 -16.47 -26.06 -8.59 100.39 G 0.000001 0.046 4.19 -8.88 -1.78 -9.32 -13.25 5.61 -2.06 100.22 H Numéro de colonne 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Interprétation des résultats Les précédents essais des activités antivirales du D-xylose (non modifié) contre le HCMV effectué par le même laboratoire avait revélé une IC50 = 86.4 mM Une telle concentration est très élévée (si on la convertie en dose) Les résultats obtenus avec le D-xylose-2-Phosphate de Sodium donne une concentration IC50 du produit non purifié de 0.7722 mM. La pureté du produit obtenu de APEX molecular est de 48%, soit IC50 = 0.371 mM (Pour le D-xylose-2-Phosphate de Sodium) Les propriétés antivirales du D-xylose-2-Phosphate de Sodium contre le HCMV sont donc de : IC50(D-xylose)/IC50(D-xylose-2-Phosphate) = 232.9 fois plus efficace que ceux du D-xylose. Exemple 3 : Méthode de synthèse et de purification du Sodium D-Xylose-2-phosphate . Une représentation schématique de cette méthode de synthèse est présentée en FIG. 6 . Procédure expérimentale Formule du diamidophosphate de sodium pentahydraté (DAP pentahydraté) Le phosphorodiamidate de phényle (33,7 g, 196 mmol) a été dissous dans de l'hydroxyde de sodium aqueux 4 M chaud (98 ml) et le mélange a été chauffé à 110 ° C et agité à cette température pendant 10 minutes. Le mélange a été laissé refroidir à env. 40 ° C, avant d'ajouter goutte à goutte de l'IMS (490 ml) sur une période de 20 minutes. Le mélange résultant contenait à ce stade une huile gris foncé et a été refroidi à -30 ° C sous agitation, et le mélange a été ensemencé avec certains des cristaux d'un lot précédent, après quoi une grande masse de solide s'est formée dans le mélange. La masse a été brisée mécaniquement avec une spatule, brièvement soniquée et agitée pendant 10 minutes à -5 °C. La suspension résultante a été filtrée et les solides collectés ont été lavés avec de l'IMS glacé (2 x 150 ml) et séchés sous vide sur fritté pendant 4 h pour donner du DAP pentahydraté (32,22 g, 155 mmol, rendement de 79 %) sous la forme d'un produit gris pâle. solide. RMN 31P (202 MHz, D2O) δ 13,86. Formule du Sodium D-xylose-2-phosphate Avant utilisation, toutes les résines commerciales utilisées dans cette synthèse ont d'abord été lavées séquentiellement avec de l'eau/MeOH/eau (2 CV chacune) pour éliminer toute couleur résiduelle et impuretés du processus de fabrication. Un pH-mètre calibré a été utilisé tout au long de cette expérience pour garantir des mesures précises. Le D-Xylose (1 g, 6,66 mmol) et le pentahydrate de DAP (832 mg, 4,00 mmol) ont été dissous dans de l'eau (8 mL) [pH initial de ~ 9,4], puis ajustés et maintenus à un pH de ~ 7 tout au long de la réaction par l'ajout partiel d'Amberlite IR 120 (H+) toutes les quelques heures, sous agitation à température ambiante. La réaction a été contrôlée par CCM [5:3:2 n-butanol/AcOH/eau. Plaques visualisées dans 5 w/v% de molybdate d'ammonium tétrahydraté dans 1M H2SO4]. Après 24 heures, une deuxième portion de DAP pentahydraté (832 mg, 4,00 mmol) a été ajoutée, et le mélange a été agité à température ambiante pendant 28 heures supplémentaires, après quoi l'analyse TLC a montré qu'une quantité mineure de produit de départ était encore présente. Le mélange a été acidifié à un pH de 2,1 par l'ajout de HCl concentré et agité à température ambiante pendant 17 heures supplémentaires, après quoi le pH a augmenté à 4,5 et le mélange est devenu trouble. Le pH a été ajusté à 1,3 par l'ajout goutte à goutte de HCl concentré, ce qui a fait disparaître le trouble. Le mélange a été agité à température ambiante pendant 27 heures supplémentaires et neutralisé par l'ajout goutte à goutte de NaOH aqueux 2M. Le mélange résultant a été filtré pour éliminer la résine, et le ballon et le bouchon ont été lavés avec une solution 0,05M de bicarbonate de triéthylammonium (TEAB, 20 mL). Une colonne de verre de 4 cm de diamètre a été garnie de résine Dowex 1X8 200-400 mesh (forme Cl-) jusqu'à une profondeur de 9 cm, et la résine a été prélavée comme décrit ci-dessus. La colonne a été éluée avec une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium (3 CV) pour convertir complètement la résine à la forme bicarbonate. La colonne a été lavée avec de l'eau désionisée (3 CV) et finalement équilibrée par élution d'une solution 0,05M de TEAB (100 mL ; ~ 1 CV). Les filtrats combinés ci-dessus contenant le mélange réactionnel brut ont été ajoutés à la colonne ainsi préparée, et la colonne a été éluée séquentiellement avec une solution de TEAB de 0,06M à 0,4M (par incréments croissants de 0,02M de 50 mL [~ 0,5 CV] chacun) en utilisant une très légère pression positive pour assurer un taux d'élution de 1-3 gouttes par seconde. 47 fractions de 20 mL ont été collectées. Le produit de départ n'ayant pas réagi a été élué dans les fractions 5-9. Les fractions 24-41 contenant le produit ont été combinées, puis traitées avec 51 g de résine Dowex 50WX8 (forme H+) fraîchement lavée (comme indiqué précédemment) jusqu'à ce que toute effervescence ait cessé et que le pH soit de 2,5. Le mélange a été agité pendant 10 minutes supplémentaires, filtré pour éliminer la résine et le pH des filtrats a été ajusté à 7,0 par l'ajout goutte à goutte de NaOH aqueux 1M. Le mélange résultant a été lyophilisé pendant une nuit pour obtenir un solide blanc (1,7 g) contenant 4 équivalents de triéthylamine. Le matériau a été redissous dans de l'eau (50 ml) et traité avec davantage de résine Dowex 50WX8 (H+) (25 g), ce qui a permis d'obtenir un pH de 1,1. Le mélange a été agité pendant 30 minutes, puis filtré, et le ballon et le lit de résine ont été lavés avec de l'eau. Les filtrats combinés ont été neutralisés à un pH de 7,0 par l'ajout prudent de NaOH aqueux 1M, puis lyophilisés pendant une nuit pour obtenir le composé du titre (1,20 g, 3,20 mmol, 48% de rendement, 73% de pureté), un solide blanc, sous forme d'un mélange 1:1 d'anomères alpha et bêta. LC-MS-3 (méthode 2A) : Rt 0,18 min ; MS m/z 228,9 = [M-H]- de l'acide libre parent [pas de chromophore UV] RMN 1H (500 MHz, D2O) δ 5,28 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 4,62 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 3,96 – 3,91 (m, 2H), 3,81 (t, J = 8,6 Hz , 1H), 3,73 – 3,64 (m, 5H), 3,57 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 3,37 – 3,32 (m, 1H). RMN 31P (202 MHz, D2O) δ 4,18 (d, J = 7,5 Hz), 3,68 (d, J = 8,7 Hz). Résultats Ont été obtenus avec cette méthode du Sodium D-Xylose-2-phosphate contenant quelques impuretés après chromatographie par échange d'ions et lyophilisation. L'impureté majeure est l'excès de réactif DAP (ou un dérivé d'hydrolyse apparenté), qui ne peut pas être entièrement séparé par chromatographie échangeuse d'ions. Composés obtenus : Mélange 1:1 d’anomères alpha/bêta. Contient 0,12 équiv. triéthylamine, 0,75 équiv. DAP, 0,05 équiv. Isomère présumé du 3-phosphate. La pureté du produit par mole est de 48.58% ;Triethylamine HCL (18.14%) ; DAP by product (33.28%). Mélange 1:1 d’anomères alpha/bêta. Contient 0,11 équiv. triéthylamine, 0,75 équiv. DAP, 0,06 équiv. Isomère présumé du 3-phosphate. La pureté du produit par mole est de 46.33% ;Triethylamine HCL (21.24%) ; DAP by product (32.43%). Composition comprenant au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate pour utilisation en tant que médicament. Composition pour utilisation selon la revendication précédente, dans la prévention ou le traitement d’infection aux virus utilisant les syndécanes et/ou glypicanes comme récepteurs cellulaire, de préférence ladite infection virale étant choisie parmi les infections au HSV-1, HSV-2, HPV-16, HPV-31, HVB, HVC, HIV-1, HTLV-1, SARS-CoV-2, HCMV, EBOLA, RSV, DENV-1, et DENV-2. Composition pour utilisation selon la revendication 1, dans le traitement du diabète de type 2. Composition pour utilisation selon la revendication 1, dans le traitement du cancer, de préférence le cancer du côlon, le cancer du poumon, le cancer du sein, le cancer du foie, la leucémie-lymphome à cellules T adultes (ATLL), le lymphome de Burkett chez l'homme, le cancer du nasopharynx chez l'homme, le cancer du col de l'utérus, le cancer de la bouche, le carcinome hépatocellulaire (CHC), le sarcome de Kaposi, la carcinogenèse du cancer du sein, le cancer colorectal, le glioblastome multiforme (GBM), le carcinome du poumon ou le carcinome nasopharyngé. Composition pour utilisation selon la revendication 1, dans le traitement des maladies articulaires, de préférence l'arthrose, l'arthrite, la polyarthrite rhumatoïde ou la goutte. Composition pour utilisation selon la revendication 1, en tant qu’anticoagulant. Composition pour utilisation selon la revendication 1, dans le traitement des maladies dermatologiques. Composition pour utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, sous une forme adaptée à l’administration par voie orale, par voie sous-cutanée, intradermique, intraveineuse ou intramusculaire. Composition cosmétique topique non-thérapeutique de soin d’une zone de la peau d’un sujet sain comprenant au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate. Composition de complément alimentaire à prise orale ou nasale pour le sujet sain, comprenant au moins un composé choisi parmi le D-xylose-2-Phosphate, ses esters, et/ou les oligosaccharides comprenant du D-xylose-2-Phosphate dans un milieu physiologiquement acceptable pour stimuler la biosynthèse de glycosaminoglycannes, de préférence au moins un choisi parmi l’héparane sulfate, le dermatane sulfate et la chondroïtine sulfate.