Brevet FR3160186A1 — publié le 20250919

Vecteur non-viral pour transcription augmentée Vecteur non-viral comprenant un gène d’intérêt fonctionnellement lié à un promoteur eucaryote et à un promoteur d’un virus à réplication cytoplasmique. Composition comprenant : - un virus à réplication cytoplasmique - un vecteur non-viral comprenant un gène d’intérêt fonctionnellement lié à au moins un promoteur eucaryote et à au moins un promoteur viral fonctionnelle dans ledit virus à réplication cytoplasmique. VECTEUR NON-VIRAL POUR TRANSCRIPTION AUGMENTEE La présente invention concerne un vecteur non-viral comprenant un gène d’intérêt fonctionnellement lié à un promoteur eucaryote et à un promoteur d’un virus à réplication cytoplasmique et une composition pharmaceutique caractérisée en ce qu’elle comprend au moins un vecteur non-viral comprenant un gène d’intérêt fonctionnellement lié à un promoteur eucaryote et à un promoteur natif dudit virus à réplication cytoplasmique. Les méthodes de traitement et/ou de prévention des maladies basées sur l’injection d’un gène codant une protéine d’intérêt font l’objet d’études et d’essais cliniques depuis une trentaine d’années. Au départ envisagées pour remplacer un gène muté, ces méthodes ont été de plus en plus utilisées pour induire une réponse immunitaire contre des antigènes spécifiques de maladies infectieuses ou de cellules tumorales. A ce jour, le plus grand succès obtenu via ces méthodes est la vaccination contre la maladie à coronavirus 2019 par des compositions comprenant un ARNm codant la protéine spike du Sars-CoV2. Plus généralement, dans le cadre des maladies infectieuses, l’idée est de reproduire l’effet obtenu par des vaccinations classiques en faisant exprimer par les cellules de l’hôte un ou plusieurs antigènes spécifiques du pathogène responsable de la maladie. Par rapport à une vaccination par un virus atténué ou par une protéine recombinante, ces produits présentent l’avantage d’être plus facile à produire et d’engendrer moins d’effets secondaires. Dans le cadre du traitement du cancer, la thérapie génique a été utilisée selon trois axes principaux. Le premier a consisté à injecter sur le site de la tumeur des gènes codant des molécules immunostimulatrices aptes à lever l’inhibition locale du système immunitaire. Par exemple, des gènes codant des interleukines ont été injectés directement à l’intérieur des tumeurs. La production locale d’interleukines est supposée permettre l’activité normale du système immunitaire et la destruction des cellules cancéreuses. Toutefois, les résultats obtenus avec ce type de stratégie ont été décevants. L’idée d’immuniser contre des cellules cancéreuses préexistantes est basée sur l’observation que les cellules cancéreuses expriment des protéines mutées, des protéines glycosilées de façons aberrantes ou, dans le cas de tumeurs induites par infection virale, des protéines virales. Au sein de la tumeur, l’expression de ces protéines n’entraine pas la production d’une réponse immunitaire efficace. En effet, la tumeur est notamment capable de créer un microenvironnement qui empêche l’initiation d’une réponse immunitaire ciblant ces antigènes et/ou les cellules qui les expriment. De plus, même si une réponse immunitaire est induite, elle n’arrive pas toujours à être efficace en raison de l’anergie qui règne dans la tumeur. Il a donc été postulé qu’il est plus efficace, en termes de réponse immunitaire générée d’injecter les antigènes associés aux cellules tumorales en une zone où le système immunitaire est actif. Parmi les antigènes associés aux tumeurs, on peut également citer les néoantigènes tumoraux issus de l’accumulation de mutations dans une population cellulaire ce qui conduit à la cancérisation. Ces mutations peuvent résulter par exemple de l’exposition aux rayons ultra-violets ou bien des substances cancérigènes du tabac ou d’autre nature. Certaines sont directement impliquées dans la cancérogenèse, d’autres sont simplement en situation de « passager » mais toutes, du fait du changement d’acides aminés dans la séquence d’une protéine ont le potentiel d’être considérées par le système immunitaire comme différentes du soi et donc antigéniques. Un deuxième axe de recherche consiste à injecter dans les cellules cancéreuses des gènes codant des molécules cytotoxiques ou entrainant la production directe ou indirecte de molécules cytotoxiques. Cette stratégie est censée permettre la destruction des cellules tumorales et éventuellement le relargage d’antigènes dans l’organisme permettant ainsi l’activation du système immunitaire. Le dernier axe de recherche a consisté à utiliser des acides nucléiques codant des antigènes associés aux tumeurs pour vacciner les patients. En effet, la production de l’antigène par les cellules du patient, plutôt que leur injection in situ, permet d’envisager une meilleure présentation de l’antigène plus conforme à ce qui se passe au niveau des cellules cancéreuses. Toutefois, la réponse anti tumorale observée dans le cadre de ces différents traitements, n’est pas meilleure que les réponses cliniques observées dans le cadre de traitements classiques. Il est par conséquent souhaitable de disposer de nouveaux produits et/ou de nouvelles méthodes permettant d’améliorer la réponse immunitaire contre la protéine d’intérêt codée par le gène injecté. La demande EP16794685.4 décrit des compositions comprenant un vecteur ADN ou ARN comprenant un gène codant une protéine d’intérêt, un poxvirus et un anticorps contre le CTLA4. Ainsi, la présente invention concerne, un vecteur non-viral comprenant un gène d’intérêt fonctionnellement lié à un promoteur eucaryote et à un promoteur d’un virus à réplication cytoplasmique. Dans le cadre de la présente invention, le terme « virus à réplication cytoplasmique » entend désigner un virus dont la réplication en cellule eucaryote se fait en tout ou partie et préférentiellement totalement dans le cytoplasme. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention le virus à réplication cytoplasmique est choisi dans le groupe constitué de Megaviricetes, Algavirales, Phycodnaviridae, Imitervirales, Mimiviridae, Pimascovirales, Ascoviridae, Iridoviridae, Marseilleviridae, Pokkesviricetes, Asfuvirales, Asfarviridae, Chitovirales et Poxviridae. Selon un mode de réalisation tout à fait préféré de l’invention ledit virus à réplication cytoplasmique est un poxviridae (également appelé poxvirus). Dans le cadre de la présente invention, le terme « promoteur d’un virus à réplication cytoplasmique » fait référence à une séquence d’acides nucléiques sur laquelle peut se fixer et être activée une ARN polymérase d’un virus à réplication cytoplasmique. Dans le cadre de la présente invention, le terme « promoteur eucaryote » fait référence à toute séquence d’acide nucléique sur laquelle peut se fixer et être activée l’ARN polymérase endogène d’une cellule eucaryote pour induire l’initiation de la transcription. Dans le cadre de la présente invention, le terme « fonctionnellement lié » entend indiquer que la fixation et l’activation d’une ARN polymérase sur ledit promoteur va entrainer la transcription dudit gène d’intérêt. Généralement, pour être liée fonctionnellement, le promoteur est placé en amont de la séquence d’acide nucléique du gène d’intérêt. Dans le cadre de la présente invention, le terme « vecteur non-viral » entend désigner une séquence d’acide nucléique Cette séquence d’acides nucléiques n’est pas incluse dans un génome viral, ni encapsulée dans une particule virale. Dans le cadre de la présente invention, le terme « séquence d’acide nucléique » fait référence à une séquence d’acide nucléique codante de type ADN. Dans le cadre de la présente invention, l’expression « gène d’intérêt » fait référence à toute séquence d’acide nucléique transcrite en un ARNm pouvant avoir une activité prophylactique ou thérapeutique. Préférentiellement, ledit gène d’intérêt code un antigène spécifique d’une cellule tumorale ou d’un micro-organisme responsable d’une maladie infectieuse. Selon un mode de réalisation de l’invention, ladite séquence d’acide nucléique est sélectionnée dans le groupe comprenant les plasmides et les vecteurs d’ADN linéaire ou d’ARN. Selon un mode de réalisation de l’invention, ladite séquence d’acide nucléique est nue c'est-à-dire qu’elle n’est pas associée à des molécules favorisant sa pénétration dans des cellules eucaryotes comme, par exemple, des polymères cationiques, des protéines virales, des lipides et/ou des liposomes. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ladite séquence d’acide nucléique est un acide nucléique linéaire fermé double-brin. De plus, les acides nucléique linéaires fermés par leur mode de production s’accompagnent de très peu de résidus de production, en particulier bactériens, ce qui permet d’éviter de lourdes étapes de purification et permet une utilisation plus rapide et moins onéreuse. Les acides nucléiques linéaires fermés sont bien connus de l’homme du métier, leur structure, leurs fonctions et les procédés permettant leur production sont notamment décris dans les documents CN103080337, EP2601312, GB201013153, JP2013535210, US2013216562, WO12017210, AU2010209532, CA2751130, CN102301010, DK2391731, EA021069, EA201101141, EP2391731, EP2612925, ES2400890, GB200901593, HK1159693, IL213930, IN05006CN2011, JP2012516147, KR20110107846, MX2011007937, NZ594004, SG173102, US2012282283, US9109250, WO10086626. La présente invention concerne également une composition comprenant : - un virus à réplication cytoplasmique, - un vecteur non-viral comprenant un gène d’intérêt fonctionnellement lié au moins un promoteur eucaryote et au moins un promoteur viral fonctionnelle dans ledit virus à réplication cytoplasmique. La présente invention concerne également un ensemble de parties pour une utilisation séquentielle ou simultanée comprenant : - un virus à réplication cytoplasmique, - un vecteur non-viral comprenant un gène d’intérêt fonctionnellement lié à au moins un promoteur eucaryote et à au moins un promoteur viral fonctionnelle dans ledit virus à réplication cytoplasmique. Dans le cadre de la présente invention, le terme « fonctionnelle dans ledit virus à réplication cytoplasmique » entend désigner un promoteur sur lequel peut se fixer et être activée une ARN polymérase codée par le génome dudit virus. Préférentiellement, ledit virus est non-recombinant et le gène codant ladite ARN polymérase est naturellement présent dans ledit virus. On comprend ainsi que l’injection simultanée du virus et du vecteur non-viral comportant un promoteur eucaryote et un promoteur virus à réplication cytoplasmique va permettre l’expression du gène d’intérêt dans le cytoplasme et dans le noyau de la cellule dans laquelle ils sont injectés. Dans un vecteur non-viral dont le gène d’intérêt est lié fonctionnellement à un promoteur eucaryote, la transcription du gène d’intérêt est soumise à la pénétration préalable du vecteur dans le noyau de la cellule. En effet la machinerie enzymatique nécessaire à ladite transcription est absente du cytoplasme de la cellule. Par ailleurs, la présence d’un virus à réplication cytoplasmique va permettre la transcription du gène d’intérêt dans le cytoplasme, car le virus va fournir les éléments nécessaires à la transcription du gène d’intérêt en utilisant le promoteur viral lié fonctionnellement audit gène d’intérêts. Cette combinaison permet d’augmenter significativement l’expression du gène d’intérêt dans les cellules transfectées et ainsi d’augmenter l’effet produit par cette expression. Cet effet pouvant être notamment une augmentation de la réponse immunitaire contre la protéine exprimée à partir du gène d’intérêt ou une augmentation de l’activité propre de ladite protéine. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention ledit virus à réplication cytoplasmique est un poxvirus. Ce mode de réalisation est particulièrement préféré dans le cas où le gène d’intérêt code une protéine immunogène car les poxvirus sont connus pour avoir une activité adjuvante qui va s’ajouter à la surexpression de l’immunogène pour améliorer la réponse immunitaire de l’organisme transfecté. Selon un mode de réalisation préféré, le virus à réplication cytoplasmique ne comprend pas de séquences hétérologues. Selon un mode de réalisation préféré, le poxvirus dérive d’un virus de la vaccine, d’un canaripox ou d’un fowlpox. Selon un mode de réalisation préféré, ledit poxvirus dérive d’un virus de la vaccine sélectionné parmi les souches Copenhague, Wyeth et Ankara modifiée (MVA). Selon un mode de réalisation préféré, ledit poxvirus dérive d’un virus de la vaccine de la souche Copenhague. Selon un mode de réalisation préféré, ledit poxvirus dérive d’un virus de la vaccine de la souche MVA. Dans le cadre de la présente invention, le terme « dérive » entend signifier que ledit virus appartient à ladite souche. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ledit promoteur eukaryote est le promoteur CMV. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ledit vecteur non-viral comprend en outre les éléments de régulation assurant l’expression dudit gène d’intérêt. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ledit vecteur non-viral est choisie dans le groupe constitué par les plasmides, les vecteurs d’ADN linéaire fermé, ou encore les vecteurs d’ARNm. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, les éléments de régulation assurant l’expression dudit gène d’intérêt dans les cellules eucaryotes est une région d’initiation de la traduction dans les cellules hôtes. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention ledit virus à réplication cytoplasmique est non-recombinant. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, le virus à réplication cytoplasmique est vivant ou tué. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ladite composition comprend un support pharmaceutiquement acceptable permettant son administration par injection à l’homme ou à l’animal. Ladite invention concerne également un vecteur, une composition ou un ensemble de parties selon l’invention, destinée à être utilisée pour le traitement d’un cancer ou d’une tumeur. Ladite invention concerne également une composition selon l’invention, destinée à être utilisée pour le traitement d’un cancer du col de l’utérus, de la sphère ORL ou de toute autre tumeur induite par le virus HPV, d’un cancer du foie lié au virus de l’hépatite chronique C, ou d’un cancer exprimant la protéine MUC1. Ladite invention concerne également un vecteur, une composition ou un ensemble de partie selon l’invention, destinée à être utilisée pour le traitement d’une maladie infectieuse. Ladite invention concerne également une composition selon l’invention pour utilisation dans une méthode permettant de vacciner contre la protéine codée par le gène d’intérêt. Description détaillée de l’invention Les vecteurs non-viraux pour l’expression dans les cellules eucaryotes sont bien connus de l’homme du métier et sont disponibles commercialement. Parmi ceux-ci on peut notamment citer les plasmides pCI-neo (numéro d'accès GenBank® U47120, Promega® 1841), pVIVO2-mcs (Invivogen®, pvivo2-mcs), pVAX1 (ThermoFisher® V26020), pIRES (Clontech®, PT3266-5) et pcDNA 3.1 (ThermoFisher® V79020). Les promoteurs eucaryotes utilisables dans un vecteur non-viral sont bien connus de l’homme du métier. On peut notamment les trouver dans l’Eukaryotic promoter database. Dans le cadre de la présente invention le promoteur eucaryote est préférentiellement choisi dans le groupe constitué du promoteur CMV, du promoteur EF1a, du promoteur SV40, du promoteur PGK1, du promoteur Ubc, du promoteur de la b actine humaine, du promoteur CAG, du promoteur TRE, du promoteur UAS, du promoteur Ac5, du promoteur polyhédrine, du promoteur CaMKIIa, du promoteur GAL1, 10, du promoteur TEF1, du promoteur GDS, du promoteur ADH1, du promoteur CaMV35S, du promoteur Ubi, du promoteur H1 et du promoteur U6. Préférentiellement, ledit promoteur eucaryotes est un promoteur CMV. Les promoteurs poxviraux utilisables dans le vecteur non-viral sont connus de l’homme du métier et ont notamment été décrits par Alharbi et al. ((2019) Poxviral promoters for improving the immunogenicity of MVA delivered vaccines, Human Vaccines & Immunotherapeutics, 15:1, 203-209). Dans le cadre de la présente invention le promoteur poxviral est préférentiellement choisi dans le groupe constitué des promoteurs P11, I1L, p7.5, TK, F7L, H5R, mH5, pSyn, SSP, pHyb, LEO, pB8, pF11, B8R, K6L, A44L, C1IR, B2R, et FP4b. Ledit vecteur non-viral comprend en plus desdits promoteurs les éléments de régulation assurant l’expression du ou des gènes d’intérêt dans les cellules eucaryotes. Préférentiellement, les éléments de régulation assurant l’expression du ou des gènes d’intérêt dans les cellules eucaryotes sont choisies dans le groupe comprenant les sites de fixation des ribosomes, le codon start, le codon de terminaison, les séquences de Kozak, les poly A et les introns. Ledit vecteur non-viral peut comprendre plusieurs gènes d’intérêt codant chacun une protéine différente. Dans le cas d’une pluralité de gènes d’intérêt, ces derniers peuvent être placées sous la dépendance d’éléments de régulation identiques ou différents. Selon un mode de réalisation préféré ledit gène d’intérêt code une protéine choisie dans le groupe consistant en tout ou partie de Brachyury, CA125, CEA, EGFR, HER-2/neu, KSA, Mesothéline, MUC-1, NY-ESO, p53, PAGE-4, PAP, PSA, PSCA, PSMA, Ras, sTn, TARP, VEGF, la protéine Aberrant class II, Anti-idiotype, B1, CD19, CD20, CD22, CD25, CD36, la protéine MAGE, MART, gp100, Tyrosinase, CD2, CD3, GM2, des protéines du virus HRV-H et HRV-V. Préférentiellement ledit gène d’intérêt code l’intégralité de ladite protéine. Alternativement, ledit gène d’intérêt code une portion de ladite protéine d’intérêt comprenant au moins un épitope spécifique de ladite protéine. Selon un autre mode de réalisation préféré ledit gène d’intérêt code pour tout ou partie d’un antigène choisi dans le groupe consistant en les antigènes du bacille du choléra, du Sars-Cov2, de la dengue, de Corynebacteriumdiphtheriae, du virus de l’hépatite, de l’haemophilus influenzae de type b (Hib), du papillomavirus humain (HPV), du virus de l’influenza, du virus de l’encéphalite japonaise, du plasmodium, du virus de la rougeole, de Neisseria meningitidis, du virus ourlien, de Bordetella pertussis, de Bordetella parapertussis., du poliovirus, du virus de la rage, du rotavirus, du rubivirus, de la bactérie Clostridium tetani, du virus de la méningo-encéphalite à tiques, de Mycobacterium tuberculosis, de Salmonella enterica, du virus de la varicelle, d’Escherichia coli entérotoxique, des Streptocoques du groupe B (SGB), du virus de l'herpès simplex, du VIH, de Neisseria gonorrhoeae, dela salmonelle non typhoïde, du norovirus, du virus respiratoire syncytial (VRS), de schistosoma, de shigella, du streptocoque du groupe a (sga). Préférentiellement ledit gène d’intérêt code l’intégralité dudit antigène. Alternativement, ledit gène d’intérêt code une portion dudit antigène comprenant au moins un épitope spécifique de ladite protéine. Selon un autre mode de réalisation préféré de l’invention, ledit gène d’intérêt code un néo-antigène. En effet, les techniques actuelles permettent de séquencer intégralement le patrimoine génétique des cellules cancéreuses d’un patient et d’identifier les mutations spécifiques par comparaison constitutionnel du patient. Si ces mutations sont non-synonymes, appartiennent à des séquences codantes et exprimées par la tumeur, et sont de par leurs caractéristiques supposées immunogènes alors ces dernières peuvent être utilisées pour induire l’immunisation contre la tumeur. Les mutations dans le génome des tumeurs et les néoantigènes qui en résultent sont une combinatoire unique restreinte à la tumeur d’un patient donné, voire aux clones qui composent cette tumeur. Pour ce faire, les cellules cancéreuses d’un patient à traiter sont analysées à partir d’une biopsie ou pièce opératoire. L’ADN et l’ARN des cellules cancéreuses, ainsi que l’ADN constitutionnel issu d’une prise de sang, sont extraits et séquencés. La séquence ADN des cellules saines est comparée à la séquence ADN des cellules cancéreuses et les mutations somatiques comprises dans des régions codantes et exprimées sont identifiées. Les séquences mutées codantes et exprimées sont traitées à l’aide d’algorithmes permettant de définir pour chaque patients quelles mutations sont potentiellement les plus antigéniques et peuvent servir de cible. Ces séquences mutées, non synonymes, codantes, exprimées, spécifiques des cellules cancéreuses du patient, appelées néoantigènes, sont ensuite générées par synthèse d’ADN ou d’ADN puis mises sous la forme d’un vecteur d’expression (plasmide ou acide nucléique linéaire fermé ou ARN). Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, en utilisant la méthode décrite dans la demande de brevet EP2391731. Le poxvirus utilisé dans la composition est préférentiellement un virus MVA. Ce dernier dérive de la souche Ankara du virus de la vaccine par passages successifs sur des cellules d’embryons de poulet. Ces différents passages ont entrainé l’atténuation de ce virus qui a ainsi pu être utilisé dans les dernières campagnes de vaccination contre la variole. La description des différentes souches de MVA, les méthodes permettant d’insérer éventuellement des gènes exogènes dans son génome ainsi que les méthodes de production, et de purification de ce virus sont notamment accessibles dans les documents WO0168820, WO0242480, WO03008533, WO03048184, WO03053463, WO03054175, WO03088994, WO03097675, WO03097844, WO03097845, WO03097846, WO04048582, WO04048606, 15 WO05054484, WO06089690, WO08028665, WO08045346, WO08131926, WO08131927, WO08138533, WO09052328, WO09152969, WO10057650, WO10060632, WO10102822, WO11042180, WO11092029, WO12010280, WO12048817, WO12059243, WO13083254, WO13189611, WO14019718, WO14037124, WO14062778, WO14063832, WO9813500, WO9915692. De façon préférée, la composition selon l’invention comprend en outre un support pharmaceutiquement acceptable. Dans le cadre de la présente invention, le terme "support pharmaceutiquement acceptable" entend désigner tous les supports, solvants, diluants, excipients, adjuvants, milieux de dispersion, et analogues, compatibles avec une administration pharmaceutique. La composition à utiliser dans l’invention est convenablement tamponnée afin d’être appropriée pour une utilisation humaine à un pH physiologique ou légèrement basique. La composition selon l’invention peut être administrée au patient par une variété de modes d’administration comme par exemple les voies sous-cutanée, intradermique, intramusculaire, intraveineuse, intrapéritonéale, intratumorale, intravasculaire, intra-artérielle. Les injections peuvent être faites avec des seringues et des aiguilles conventionnelles, mais préférentiellement via un dispositif d’injection sans aiguilles de types bioject(r). L’administration de la composition selon l’invention peut avoir lieu en dose unique ou répétée après un certain intervalle de temps allant d’un jour à un an. Préférentiellement l’administration aura lieu de façon hebdomadaire sept fois de suite puis ensuite une fois toutes les trois semaines. Le dosage approprié peut être adapté en fonction de divers paramètres, en particulier le mode d’administration, la composition utilisée, l’âge, la santé, et le poids de l’organisme hôte, la nature et l’étendue des symptômes, le type de traitement associé, la fréquence du traitement. L’homme du métier est capable de déterminer les quantités adaptées de chaque élément à l’intérieur de la composition selon l’invention. A titre d’exemple, le poxvirus peut être utilisé à une quantité comprise entre 10 4 à 10 9 pfu, la séquence d’acide nucléique en une quantité comprise entre 1 µg et 10 mg par injection. De façon préférentielle, la composition selon l’invention peut être utilisée en conjonction avec la radiothérapie, la chimiothérapie la chirurgie et/ou d’autres produits d’immunothérapie tels les anticorps anti PD1 et anti-PDL1, ou la combinaison de plusieurs de ces traitements à la fois. Ladite invention concerne également une composition selon l’invention, destinée à être utilisée pour le traitement d’un cancer ou d’une tumeur. Préférentiellement ledit cancer est un carcinome est ledit gène d’intérêt code une protéine choisie dans le groupe consistant en tout ou partie des protéines Brachyury, CA125, CEA, EGFR, HER-2/neu, KSA, Mesothéline, MUC-1, NY-ESO, p53, PAGE-4, PAP, PSA, PSCA, PSMA, Ras, sTn, TARP et VEGF. Préférentiellement ledit cancer est une leucémie est ledit gène d’intérêt code une protéine choisie dans le groupe consistant en tout ou partie des protéines aberrantes du CMH class II, Anti-idiotype, B1, CD19, CD20, CD22, CD25 et CD36. Préférentiellement ledit cancer est un mélanome est ledit gène d’intérêt code une protéine choisie dans le groupe consistant en tout ou partie de la protéine MAGE, MART, gp100, Tyrosinase, CD2, CD3, GM2. Préférentiellement ledit cancer est induit par un rétrovirus est ledit gène d’intérêt code une protéine choisie dans le groupe consistant en tout ou partie des protéines du virus HRV-H et HRV-V. Préférentiellement ledit gène d’intérêt code pour l’intégralité de ladite protéine. Alternativement, ledit gène d’intérêt code pour une portion de ladite protéine d’intérêt comprenant au moins un épitope spécifique de ladite protéine. Ladite invention concerne également une composition ou un ensemble de partie selon l’invention, destinée à être utilisée pour le traitement d’un cancer du col de l’utérus, de la sphère ORL ou de toute autre tumeur induite par le virus HPV, d’un cancer du foie lié au virus de l’hépatite chronique C, ou d’un cancer exprimant la protéine MUC1. Ladite invention concerne également une composition ou un ensemble de parties selon l’invention pour utilisation dans une méthode permettant de vacciner contre la protéine codée par le gène d’intérêt. Préférentiellement, ladite maladie infectieuse est choisie dans le groupe comprenant le choléra, la COVID-19, la dengue, la diphtérie, l’hépatite, l’haemophilus influenzae de type b (Hib), le papillomavirus humain (HPV), l’influenza, l’encéphalite japonaise, le paludisme, la rougeole, la méningite à méningocoques, les oreillons, la coqueluche, la maladie pneumococcique, la poliomyélite, la rage, les maladies causées par le rotavirus, la rubéole, le tétanos, l’encéphalite à tiques, la tuberculose, la typhoïde, la varicelle, les maladies causées par l’Escherichia coli entérotoxique, les maladies causées par le Streptocoque du groupe B (SGB), les maladies causées par le virus de l'herpès simplex, le SIDA, le paludisme, les maladies causées par le Neisseria gonorrhoeae, les maladies causées par la salmonelle non typhoïde, les maladies causées par le norovirus, la fièvre paratyphoïde, les maladies causées par le virus respiratoire syncytial (VRS), la maladie de la schistosomiase, les maladies causées par la shigella, les maladies causées par le streptocoque du groupe a (sga), la tuberculose et la fièvre jaune. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, la composition ou l’ensemble de partie selon l’invention est destiné à être injecté par voie sous-cutanée, intra-musculaire, orale, nasale ou intra-tumorale. Selon un mode de réalisation tout à fait préféré de l’invention, la composition ou l’ensemble de partie selon l’invention est destiné à être injecté par voie sous-cutanée. Préférentiellement, ladite composition ou ledit ensemble de partie selon l’invention comprend de 1 µg à 20 mg µg de vecteur non-viral selon l’invention. Préférentiellement, ladite composition ou ledit ensemble de partie selon l’invention comprend de 10 4 à 10 9 pfu de virus à réplication cytoplasmique. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ladite composition ou ledit ensemble de partie comprend en outre un anticorps ou un fragment d’anticorps anti-CTLA4. La co-administration d’un anticorps ou fragment d’anticorps anti-CTLA4, est de nature à renforcer la réponse immunitaire induite par une immunothérapie. Pour cela des doses réduites jusqu’à 1/10 de la dose systémique usuelle sont supposées suffisantes. A ces doses et après co-injection la concentration dans le ganglion de drainage du point d’injection est supposée être plus élevée que par voie systémique alors que la concentration systémique elle-même est grandement réduite, le risque d’effet indésirable également. Enfin, la composition selon l’invention comprendra préférentiellement un anticorps ou fragment d’anticorps anti-CTLA4, encore plus préférentiellement de l’ipilimumab. Dans le cadre de la présente invention, le terme anticorps désigne également les anticorps bispécifiques comprenant au moins un paratope spécifique du CTLA-4. La présente invention concerne également un vaccin comprenant une composition ou un ensemble de partie selon l’invention. Ledit vaccin peut être destiné à une première injection (prime) chez un individu naïf et/ou à une injection ultérieure (boost) chez un individu ayant reçu une injection identique ou différente dirigée contre le même épitope. Ainsi ladite invention concerne également un ensemble de partie pour la vaccination comprenant : - un premier vaccin selon l’invention pour une première injection (prime), - un deuxième vaccin selon l’invention pour une injection ultérieure (boost). Les compositions, ensemble de partie et vaccin selon l’invention sont préférentiellement compris dans un milieu pharmaceutiquement acceptable. Exemples Exemple 1 L’efficacité des compositions selon l’invention à stimuler le système immunitaire a été mesurée chez des souris C57BL/6. Les vecteurs non-viraux utilisés comprennent le gène codant l’ovalbumine lié fonctionnellement au promoteur CMV (pVax1-OVA) ou le gène codant l’ovalbumine lié fonctionnellement au promoteur CMV et au promoteur VVH5 (pVax1-VVH5-OVA). Quatre groupes comprenant chacun 5 souris femelles âgées de 8 semaines ont reçu respectivement : - 200µL comprenant 100 µg du vecteur pVax1-OVA, 50µg d’anti-CTLA4 dans du PBS. - 200µl comprenant 100 µg du vecteur pVax1-VVH5-OVA, 50µg d’anti-CTLA4 dans du PBS - 200µl comprenant 100 µg du vecteur pVax1-VVH5-OVA 2.5 10 5 pfu de MVA, 50µg d’anti-CTLA4 dans du PBS, - 200µL de PBS. Les différentes compositions ont été injectées en sous cutanées dans le flanc gauche des souris. Les injections ont eu lieu à J0, J5, J10 et J17. Les animaux ont été sacrifiés à J25, leur rate a été recueilli. Le nombre de Lymphocyte T, exprimant l’IFNg, spécifique de l’ovalbumine a été mesurée. On observe une augmentation de ce nombre chez les souris ayant reçu le vecteur pVax1-VVH5-OVA en combinaison avec le MVA. Vecteur non-viral comprenant un gène d’intérêt fonctionnellement lié à un promoteur eucaryote et à un promoteur d’un virus à réplication cytoplasmique. Composition comprenant : - un virus à réplication cytoplasmique - un vecteur non-viral comprenant un gène d’intérêt fonctionnellement lié à au moins un promoteur eucaryote et à au moins un promoteur viral fonctionnelle dans ledit virus à réplication cytoplasmique. Ensemble de parties pour une utilisation séquentielle ou simultanée comprenant - un virus à réplication cytoplasmique - un vecteur non-viral comprenant un gène d’intérêt fonctionnellement lié à au moins un promoteur eucaryote et à au moins un promoteur viral fonctionnelle dans ledit virus à réplication cytoplasmique. Vecteur selon la revendication 1, composition selon la revendication 2 ou ensemble de partie selon la revendication 3 caractérisé en ce que ledit virus à réplication cytoplasmique est un poxvirus et encore plus préférentiellement un MVA. Vecteur selon la revendication 1, composition selon la revendication 2 ou ensemble de partie selon la revendication 3 caractérisé en ce que ledit promoteur d’un virus à réplication cytoplasmique est choisie dans le groupe constitué des promoteurs P11, I1L, p7.5, TK, F7L, H5R, mH5, pSyn, SSP, pHyb, LEO, pB8, pF11, B8R, K6L, A44L, C1IR, B2R, et FP4b. Vecteur selon la revendication 1, composition selon la revendication 2 ou ensemble de partie selon la revendication 3 caractérisé en ce que ledit promoteur eukaryote est choisi dans le groupe constitué du promoteur CMV, du promoteur EF1a, du promoteur SV40, du promoteur PGK1, du promoteur Ubc, du promoteur de la b actine humaine, du promoteur CAG, du promoteur TRE, du promoteur UAS, du promoteur Ac5, du promoteur polyhédrine, du promoteur CaMKIIa, du promoteur GAL1, 10, du promoteur TEF1, du promoteur GDS, du promoteur ADH1, du promoteur CaMV35S, du promoteur Ubi, du promoteur H1 et du promoteur U6. Vecteur selon la revendication 1, composition selon la revendication 2 ou ensemble de partie selon la revendication 3 c aractérisé e en ce que ledit vecteur non-viral comprend en outre les éléments de régulation assurant l’expression dudit gène d’intérêt. Vecteur selon la revendication 1, composition selon la revendication 2 ou ensemble de partie selon la revendication 3 caractérisée en ce que vecteur non-viral est choisie dans le groupe constitué par les plasmides, les vecteurs d’ADN linéaire. Vecteur selon la revendication 7, composition selon la revendication 7 ou ensemble de partie selon la revendication 7, caractérisé en ce que les éléments de régulation assurant l’expression dudit gène d’intérêt dans les cellules eucaryotes est une région d’initiation de la traduction dans les cellules hôtes. Vecteur selon la revendication 1, composition selon la revendication 2 ou ensemble de partie selon la revendication 3, caractérisé en ce que ledit virus à réplication cytoplasmique est non-recombinant. Composition selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle comporte un support pharmaceutiquement acceptable permettant son administration par injection à l’homme ou à l’animal. Vecteur selon la revendication 1, composition selon la revendication 2 ou ensemble de partie selon la revendication 3, pour son utilisation pour le traitement d’un cancer ou d’une tumeur. Vecteur, composition ou ensemble de partie selon la revendication 12 caractérisé en ce que ledit cancer est un carcinome et ledit gène d’intérêt code une protéine choisie dans le groupe consistant en tout ou partie des protéines Brachyury, CA125, CEA, EGFR, HER-2/neu, KSA, Mesothéline, MUC-1, NY-ESO, p53, PAGE-4, PAP, PSA, PSCA, PSMA, Ras, sTn, TARP et VEGF. Vecteur, composition ou ensemble de partie selon la revendication 12 caractérisé en ce que ledit cancer est une leucémie est ledit gène d’intérêt code une protéine choisie dans le groupe consistant en tout ou partie des protéines aberrantes du CMH class II, Anti-idiotype, B1, CD19, CD20, CD22, CD25 et CD36. Vecteur, composition ou ensemble de partie selon la revendication 12 caractérisé en ce que ledit cancer est un mélanome est ledit gène d’intérêt code une protéine choisie dans le groupe consistant en tout ou partie de la protéine MAGE, MART, gp100, Tyrosinase, CD2, CD3, GM2. Vecteur, composition ou ensemble de partie selon la revendication 12 caractérisé en ce que ledit cancer est induit par un rétrovirus est ledit gène d’intérêt code une protéine choisie dans le groupe consistant en tout ou partie des protéines du virus HRV-H et HRV-V. Vecteur, composition ou ensemble de partie selon la revendication 12 caractérisé en ce que ledit gène d’intérêt code un néo-antigène. Vecteur selon la revendication 1, composition selon la revendication 2 ou ensemble de partie selon la revendication 3 pour son utilisation pour la vaccination contre une maladie infectieuse. Vecteur, composition ou ensemble de partie selon la revendication 18 caractérisée en ce que ladite maladie infectieuse est choisie dans le groupe comprenant le choléra, la COVID-19, la dengue, la diphtérie, l’hépatite, l’haemophilus influenzae de type b (Hib), le papillomavirus humain (HPV), l’influenza, l’encéphalite japonaise, le paludisme, la rougeole, la méningite à méningocoques, les oreillons, la coqueluche, la maladie pneumococcique, la poliomyélite, la rage, les maladies causées par le rotavirus, la rubéole, le tétanos, l’encéphalite à tiques, la tuberculose, la typhoïde, la varicelle, les maladies causées par l’Escherichia coli entérotoxique, les maladies causées par le Streptocoque du groupe B (SGB), les maladies causées par le virus de l'herpès simplex, le SIDA, le paludisme, les maladies causées par le Neisseria gonorrhoeae, les maladies causées par la salmonelle non typhoïde, les maladies causées par le norovirus, la fièvre paratyphoïde, les maladies causées par le virus respiratoire syncytial (VRS), la maladie de la schistosomiase, les maladies causées par la shigella, les maladies causées par le streptocoque du groupe a (sga), la tuberculose et la fièvre jaune.