Brevet FR3159229A1 — publié le 20250815

Technique de stimulation d’objets cellulaires (11A, 11B), par exemple d’objets en lévitation acoustique ou soutenus par une matrice d’hydrogel, par modulation d’amplitude et/ou de fréquence d’une onde acoustique. Figure pour l’abrégé : Fig. 4 Stimulation acoustique d’objets cellulaires La présente invention se rapporte à une technique de stimulation de cellules ou particules micrométriques, par exemple en vue de reconstruire ou de modéliser des tissus vivants. L’invention présente un intérêt particulier, nullement limitatif, dans les secteurs de la thérapie cellulaire, de la modélisation pharmacologique, de l’agro-alimentaire par exemple pour la culture de viande, de microalgues ou de végétaux, ou encore de l’aérospatial, notamment pour la culture cellulaire en conditions de microgravité. État de la technique Dans le contexte de la recherche portant sur la reconstruction et la modélisation d’organes sur puces (« organ-on-a-chip » en anglais) et d’organoïdes, un nombre croissant d’approches expérimentales visent à permettre la structuration d’ensembles cellulaires. Les techniques les plus utilisées dans cet objectif incluent la manipulation de cellules au sein de dispositifs microfluidiques et la formation de tissus par fabrication additive. Une autre technique connue, décrite dans le document suivant, consiste à structurer des feuillets cellulaires par lévitation acoustique dans des hydrogels : Bouyer et al. A bio-Acoustic Levitational (BAL) Assembly Method for Engineering of Multilayered, 3D Brain-Like Constructs, Using Human Embryonic Stem Cell Derived Neuro-Progenitors, Adv. Mater. 2016, 28, 161-167. Cette technique permet d’assembler dans un hydrogel des cellules sous forme de couches ou feuillets dans l’objectif d’établir des connexions entre cellules de différentes couches. Cependant, cette technique ne permet pas de contrôler le développement de telles connexions de manière satisfaisante. La présente invention vise à surmonter tout ou partie des inconvénients des techniques connues dans l’art antérieur en procurant un procédé de stimulation acoustique d’objets reçus dans un milieu fluide ou semi-solide au sein d’une cavité, comprenant : une étape de génération d’une onde acoustique stationnaire de manière à former, dans le milieu, un ou plusieurs nœuds et/ou anti-nœuds de pression à des positions axiales respectives dites de référence, afin de produire une force de radiation acoustique qui s’exerce sur les objets, à partir d’une configuration dite de référence dans laquelle les objets sont positionnés sur un ou plusieurs desdits nœuds et/ou anti-nœuds de pression, une étape de modification, au cours du temps, d’un ou plusieurs paramètres de l’onde acoustique afin de modifier la force de radiation acoustique et/ou de déplacer selon une direction axiale un ou plusieurs desdits nœuds et anti-nœuds de pression par rapport à leur position de référence. L’invention permet ainsi de contrôler au cours du temps la déformation mécanique d’objets qui peuvent typiquement former des tissus fabriqués ou reconstitués au sein d’un système de culture tridimensionnel et d’améliorer la modélisation et/ou la reproduction de déformations physiologiques et/ou pathologiques de tels tissus. La majorité des tissus d’un organisme vivant sont en effet soumis en continu à des déformations mécaniques causées par des mouvements corporels, des activités péristaltiques pulsatiles (p. ex. poumons, cœur) ou contractiles (p. ex. intestins), ou encore des mouvements de liquides (p. ex. ondes de pouls, flux sanguins lymphatiques) provoquant une déformation pulsatile de veines et artères se répercutant sur tous les tissus et organes irrigués. L’invention permet notamment d’implémenter des déformations mécaniques contrôlées dans un système de culture cellulaire de sorte à mimer des réponses cellulaires et accélérer la différenciation des cellules qui y sont soumises, dans des conditions similaires à celles d’un organisme vivant. Les paramètres de l’onde acoustique sont de préférence choisis dans une liste incluant une amplitude et une fréquence. Selon un mode de mise en œuvre du procédé, l’étape de modification d’un ou plusieurs desdits paramètres de l’onde acoustique comprend une modification de l’amplitude de l’onde acoustique à fréquence fixe au cours du temps. Selon un autre mode de mise en œuvre du procédé, l’étape de modification d’un ou plusieurs desdits paramètres de l’onde acoustique comprend une modification de la fréquence de l’onde acoustique à amplitude fixe au cours du temps. Bien entendu, ces différents modes peuvent être mis en œuvre successivement et n’excluent pas d’autres modes de mise en œuvre, par exemple un mode dans lequel l’étape de modification d’un ou plusieurs desdits paramètres de l’onde acoustique comprend une modification simultanée de la fréquence et de l’amplitude de l’onde acoustique. L’étape de modification d’un ou plusieurs desdits paramètres de l’onde acoustique peut comprendre une modification périodique d’un ou plusieurs desdits paramètres. L’étape de modification d’un ou plusieurs desdits paramètres de l’onde acoustique peut notamment comprendre une modification d’un ou plusieurs desdits paramètres à une fréquence de modulation qui est relativement basse par rapport à une fréquence relativement haute de l’onde acoustique. À titre indicatif, la fréquence de l’onde acoustique peut être supérieure à 0,5 MHz et ladite fréquence de modulation peut être inférieure à 100 kHz, la fréquence de modulation pouvant par exemple être de l’ordre de quelques Hz, ou de l’ordre de quelques dizaines de Hz, ou encore de l’ordre de quelques kHz. Les objets peuvent être maintenus dans la cavité, en particulier dans la configuration de référence avant mise en œuvre de l’étape de modification d’un ou plusieurs desdits paramètres de l’onde acoustique et/ou dans différentes configurations pendant cette étape, de plusieurs façons incluant celles décrites ci-dessous. Suivant une première variante, les objets sont maintenus dans la cavité sous l’action de la force de radiation acoustique. Dans le cadre de cette première variante, les objets peuvent en particulier être maintenus en lévitation acoustique dans le milieu, le milieu pouvant à cet effet être liquide, par exemple aqueux, au moins dans la configuration de référence. Suivant une deuxième variante, les objets sont maintenus dans la cavité en étant supportés par le milieu, le milieu pouvant par exemple être semi-solide (ou semi-liquide) au moins dans la configuration de référence. Suivant une troisième variante, les objets sont maintenus dans la cavité en étant supportés par, et/ou en contact avec, une ou plusieurs structures de contact qui s’étendent dans la cavité. De manière non limitative, chacune de ces structures de contact peut être choisie dans une liste incluant une paroi, un pilier et une électrode. De telles structures de contact peuvent former une ou plusieurs surfaces s’étendant le long de la direction axiale et/ou une ou plusieurs surfaces s’étendant le long d’une direction transversale. Le procédé peut être mis en œuvre de sorte que, dans une configuration initiale, les objets sont en suspension dans le milieu qui est fluide dans cette configuration initiale. L’étape de génération de l’onde acoustique peut être réalisée de manière à déplacer les objets sous l’action de la force de radiation acoustique pour les placer dans ladite configuration de référence, par exemple à partir de la configuration initiale précitée ou d’une autre configuration. Dans un mode de réalisation, les objets comprennent des objets présentant un contraste acoustique positif par rapport au milieu et/ou des objets présentant un contraste acoustique négatif par rapport au milieu. De manière connue en soi, une force de radiation acoustique, en particulier une composante axiale de cette force, qui s’exerce sur des objets ayant un contraste acoustique positif permet de déplacer ces objets vers des nœuds de pression formés par l’onde acoustique, c’est-à-dire des endroits où la pression du milieu est nulle. Une force de radiation acoustique, en particulier une composante axiale de cette force, qui s’exerce sur des objets ayant un contraste acoustique négatif permet de déplacer ces objets vers des anti-nœuds de pression formés par l’onde acoustique, c’est-à-dire des endroits où cette pression est maximale. Le procédé peut comprendre une étape d’incubation des objets. L’étape d’incubation peut être réalisée à des fins de différenciation et/ou d’auto-organisation et/ou de maturation d’agrégats d’objets cellulaires. Une telle étape d’incubation peut être réalisée pendant que les objets sont soumis à l’effort de radiation acoustique. Une telle étape d’incubation peut être réalisée avant et/ou pendant mise en œuvre de l’étape de modification d’un ou plusieurs desdits paramètres de l’onde acoustique. Selon un autre aspect, l’invention a aussi pour objet un dispositif de stimulation acoustique d’objets configuré pour mettre en œuvre un procédé tel que décrit ci-dessus. Le dispositif peut à cet effet comprendre une cavité apte à contenir ledit milieu recevant les objets, un transducteur configuré pour générer ladite onde acoustique et un organe de commande du transducteur configuré pour modifier un ou plusieurs desdits paramètres de l’onde acoustique. Le transducteur est de préférence un transducteur ultrasonore. Dans des modes de réalisation, le dispositif peut comprendre une ou plusieurs structures de contact telles que définies ci-dessus. D’autres avantages et caractéristiques de l’invention apparaîtront à la lecture de la description détaillée, non limitative, qui suit. Brève description des figures La description détaillée qui suit fait référence aux dessins annexés sur lesquels : la FIG. 1 est une vue schématique d’un dispositif comprenant une cavité qui contient un fluide avec des objets en suspension, incluant des objets à contraste acoustique positif et des objets à contraste acoustique négatif ; la FIG. 2 est une vue schématique du dispositif de la FIG. 1 dans lequel les objets à contraste acoustique positif sont positionnés sous forme d’agrégats sur deux nœuds de pression formés par une onde acoustique stationnaire et les objets à contraste acoustique négatif sont positionnés sous forme d’agrégat sur un anti-nœud de pression formé par cette onde acoustique stationnaire ; la FIG. 3 est une vue schématique d’un dispositif comprenant une cavité et une paroi s’étendant verticalement dans la cavité, la cavité contenant un fluide et des agrégats d’objets à contraste acoustique positif qui sont positionnés sous forme d’agrégats sur quatre nœuds de pression formés par une onde acoustique stationnaire, sous l’action d’une force de radiation acoustique, et qui sont en appui sur la paroi pour y adhérer ; la FIG. 4 est une vue schématique du dispositif de la FIG. 3 dans lequel les agrégats d’objets sont, après adhésion à la paroi, soumis à une première contrainte mécanique sous l’action d’une variation de la force de radiation acoustique, entraînant les objets verticalement vers le haut ; la FIG. 5 est une vue schématique du dispositif de la FIG. 3 dans lequel les agrégats d’objets sont soumis à une deuxième contrainte mécanique sous l’action d’une nouvelle variation de la force de radiation acoustique, entraînant les objets verticalement vers le bas ; la FIG. 6 est une vue schématique d’un dispositif comprenant une cavité et une membrane s’étendant horizontalement dans la cavité, la cavité contenant un fluide et des agrégats d’objets qui sont en appui sur la membrane sous l’action d’une force de radiation acoustique ; la FIG. 7 est une vue schématique du dispositif de la FIG. 6 dans lequel les agrégats d’objets et la membrane sont déplacés sous l’action d’une variation de la force de radiation acoustique. Description détaillée de modes de réalisation Les figures 1 et 2 représentent de manière schématique un dispositif 1 conforme à l’invention. Le dispositif 1 forme une cavité 2 prévue pour contenir un milieu qui peut généralement être fluide, en particulier liquide, ou semi-solide du type hydrogel. De manière générale, la cavité 2 s’étend le long d’une direction axiale A1, qui s’étend dans cet exemple verticalement lors de l’utilisation du dispositif 1. La cavité 2 a une dimension B1 selon la direction A1, qui définit une hauteur de la cavité 2. Dans cet exemple, la cavité 2 a une forme globalement cylindrique, la direction A1 formant un axe de symétrie de la cavité 2. Le dispositif 1 est équipé d’un système de génération d’ondes acoustiques qui comprend dans cet exemple un transducteur 3 disposé au niveau d’une première extrémité de la cavité 2 selon la direction A1, en l’occurrence verticalement en-dessous de la cavité 2, ainsi qu’un réflecteur acoustique 4 qui délimite une deuxième extrémité de la cavité 2 selon la direction A1, le réflecteur 4 étant en l’occurrence disposé verticalement au-dessus de la cavité 2. En référence à la FIG. 2 , ce système est configuré pour pouvoir générer dans la cavité 2, et en particulier dans le milieu qu’elle contient, une onde acoustique stationnaire 6, le long de la direction A1. Dans la configuration illustrée à la FIG. 2 , l’onde 6 a une fréquence identique à la fréquence de résonance de la cavité 2 qui forme un résonateur. La hauteur B1 de la cavité 2 est un multiple de la demi longueur d’onde acoustique. Cette onde acoustique peut avoir une fréquence différente de la fréquence de résonance de la cavité 2, notamment dans certaines phases lors desquelles des agrégats d’objets sont acoustiquement stimulés (voir plus loin ci-dessous). Le système est généralement configuré pour pouvoir générer, notamment, une onde 6 formant le long de la direction A1 au moins un nœud de pression et/ou au moins un ventre ou anti-nœud de pression. Dans cet exemple, le transducteur 3 est un transducteur piézoélectrique à large bande équipé d’une source ultrasonore. Un tel transducteur 3 permet notamment de modifier la position axiale du ou des nœuds et anti-nœuds formés par l’onde 6 et/ou la distance entre ces nœuds et anti-nœuds, en jouant sur la fréquence de cette onde 6. Le dispositif 1 des figures 1 et 2 comprend un organe (non représenté) de commande du transducteur 3, qui est configuré pour pouvoir modifier un ou plusieurs paramètres de l’onde qu’il génère (voir plus loin ci-dessous). Il va maintenant être décrit un procédé conforme à l’invention, permettant de stimuler des objets à l’aide du dispositif 1 des figures 1 et 2, ou d’un dispositif analogue. La FIG. 1 illustre une configuration initiale dans laquelle des objets 11 et 12 sont en suspension dans un milieu liquide, en l’occurrence aqueux, au sein de la cavité 2. À titre indicatif, chacun des objets 11 et 12 peut avoir une taille comprise entre 1 µm et 100 µm et la hauteur B1 de la cavité 2 peut être de plusieurs millimètres à plusieurs centimètres. Dans cet exemple nullement limitatif, les objets 11 sont des cellules biologiques ayant une masse volumique supérieure à la masse volumique du milieu (contraste acoustique > 0), tandis que les objets 12 sont des billes de polydiméthylsiloxane ayant une masse volumique inférieure à la masse volumique du milieu (contraste acoustique Les objets 11 sont choisis de sorte que la vitesse de propagation d’une onde acoustique dans ces objets 11 soit supérieure à la vitesse de propagation de cette onde acoustique dans le milieu. Les objets 12 sont quant à eux choisis de sorte que la vitesse de propagation d’une onde acoustique dans ces objets 12 soit inférieure à la vitesse de propagation de cette onde acoustique dans le milieu. À partir de la configuration initiale de la FIG. 1 , le transducteur 3 est actionné de manière à générer dans la cavité 2 une onde acoustique stationnaire 6 (voir FIG. 2 ). L’onde 6 ainsi générée produit une force de radiation acoustique qui s’exerce sur les objets 11 et 12. Cette force de radiation acoustique FRA peut notamment être décrite par le modèle suivant, connu en soi, de K. Yosioka et Y. Kawasima : où est la vitesse de l’onde 6, le nombre d’onde, le facteur de contraste acoustique et la position de l’objet 11 ou 12 considéré le long de la direction A1. Le facteur de contraste acoustique, ou de densité-compressibilité, peut être défini de la manière suivante : où est la masse volumique de l’objet 11 ou 12 considéré et la vitesse de propagation de l’onde au sein de l’objet 11 ou 12 considéré. Compte tenu de la vitesse respective de propagation de l’onde acoustique et de la masse volumique respective des objets 11 et 12 par rapport au milieu, les objets 11 présentent un facteur de densité-compressibilité, ou contraste acoustique, positif par rapport au milieu, tandis que les objets 12 présentent un facteur de densité-compressibilité, ou contraste acoustique, négatif par rapport au milieu. Dans l’exemple de la FIG. 2 , l’onde 6 a une longueur d’onde λ égale à la hauteur B1 de la cavité 2, formant le long de la direction A1 un premier nœud de pression N1, un anti-nœud de pression AN1 et un deuxième nœud de pression N2, à des positions axiales respectives dites de référence. Compte tenu des propriétés respectives précitées du milieu et des objets 11 et 12, à partir de la configuration initiale de la FIG. 1 dans laquelle les objets 11 et 12 sont distribués de manière relativement homogène dans la cavité 2, la force de radiation acoustique produite par l’onde 6 entraîne un déplacement des objets 11 vers les nœuds N1 et N2 et un déplacement des objets 12 vers l’anti-nœud AN1, de manière à atteindre la configuration illustrée à la FIG. 2 , aussi appelée configuration de référence. Le procédé comprend ainsi une étape de génération de l’onde acoustique 6 qui, dans cet exemple non limitatif, est réalisée de manière à déplacer les objets 11 et 12 sous l’action de la force de radiation acoustique pour les placer dans ladite configuration de référence. Dans la configuration de référence de la FIG. 2 , les objets 11 et 12 sont spatialement organisés sous forme de couches, ou feuillets, espacées le long de la direction A1. Dans cet exemple, l’étape de génération de l’onde 6 est poursuivie pour maintenir les objets 11 et 12 ainsi positionnés, c’est-à-dire pour les maintenir dans la configuration de référence, en lévitation acoustique. Dans la configuration de la FIG. 2 , les objets 12 forment une couche intermédiaire, située à mi-hauteur de la cavité 2, tandis que les objets 11 forment deux couches s’étendant de part et d’autre de la couche intermédiaire. Les objets 12 étant ici des billes de polydiméthylsiloxane, leur agrégation ou regroupement sous forme de couche permet de constituer une barrière poreuse qui autorise le développement d’interactions entre les couches de cellules 11, cela sans contact avec les parois de la cavité 2, le milieu formant dans cet exemple un milieu de culture pour ces cellules 11. Selon l’invention, le procédé est mis en œuvre pour stimuler les objets à partir d’une telle configuration de référence, dans cet exemple après le processus de développement d’interactions entre les couches de cellules 11. Pour ce faire, il est mis en œuvre une opération dite d’actionnement ou d’actuation ou de stimulation, qui comprend au moins une étape de modification, au cours du temps, d’un ou plusieurs paramètres de l’onde acoustique 6 afin de modifier la force de radiation acoustique et/ou de déplacer selon la direction A1 les nœuds N1 et N2 et l’anti-nœud AN1 par rapport à leur position de référence. Les paramètres sont dans cet exemple choisis dans une liste incluant l’amplitude et la fréquence de l’onde 6. Selon une première variante, l’opération d’actuation comprend une modification de l’amplitude de l’onde 6 à fréquence fixe au cours du temps, autrement dit une modulation en amplitude de l’onde 6. À titre d’exemple, le signal fourni au transducteur 3 peut comprendre une modification périodique d’amplitude, faisant varier l’amplitude de l’onde 6 entre une valeur minimale et une valeur maximale selon une fonction périodique prédéterminée à plus basse fréquence, par exemple une fonction sinusoïdale, carrée, triangulaire ou encore en dents de scie. À titre indicatif, la valeur minimale et la valeur maximale de l’amplitude appliquée au transducteur 3 peuvent être de 5 V et 10 V, respectivement, et la fonction peut être une fonction sinusoïdale ayant une période ou cycle d’une seconde. Une telle modulation de l’amplitude de l’onde 6 permet d’exercer sur les cellules 11 une force de radiation acoustique ayant une composante axiale qui peut varier dans une plage allant de 5 pN à 20 pN toutes les secondes, mimant typiquement l’effet de contraintes mécaniques résultant d’un battement cardiaque d’un individu. Selon une deuxième variante, l’opération d’actuation comprend une modification de la fréquence de l’onde acoustique 6 à amplitude fixe au cours du temps, autrement dit une modulation en fréquence de l’onde 6. À titre d’exemple, le signal fourni au transducteur 3 peut comprendre une modification périodique de fréquence, faisant varier la fréquence de l’onde 6 entre une valeur minimale et une valeur maximale selon une fonction périodique prédéterminée, par exemple une fonction en dents de scie faisant varier au sein de chaque cycle la fréquence de façon linéaire ou selon une autre fonction, par exemple de façon logarithmique. À titre indicatif, la valeur minimale et la valeur maximale de la fréquence peuvent être de 1,9 MHz et 2,0 MHz, respectivement, et la fonction peut être une fonction en dents de scie ayant une période ou cycle de quatre secondes. Une telle modification de la fréquence de l’onde 6 permet d’exercer sur les cellules 11 une force qui peut varier dans une plage allant de 3 pN à 9 pN toutes les quatre secondes, mimant typiquement l’effet de contraintes mécaniques résultant d’une activité respiratoire d’un individu. Une modification de la fréquence de l’onde 6 produit un déplacement des nœuds et anti-nœuds de pression le long de la direction A1 par rapport à leur position de référence, entraînant un déplacement correspondant des objets 11 et 12 le long de la direction A1 qui subissent ainsi une contrainte dépendant à la fois de la variation de la force de radiation acoustique et de la viscosité du milieu. Il est bien entendu possible de modifier à la fois l’amplitude et la fréquence de l’onde 6, par exemple pour déplacer les nœuds et anti-nœuds de pression par rapport à leur position de référence tout en soumettant les objets à une force de radiation acoustique sensiblement constante au cours du temps. L’invention permet ainsi de stimuler, acoustiquement, des objets qui sont notamment regroupés sous forme d’agrégats au sein de la cavité 2. Dans les exemples non limitatifs décrits ci-dessus, cette stimulation vise à mimer des processus physiologiques en réalisant une actuation périodique. Dans un exemple alternatif, la stimulation peut être destinée à mimer un traumatisme, par exemple en modifiant un ou plusieurs paramètres de l’onde 6 de manière à dépasser un seuil correspondant critique et/ou en réalisant cette modification sur une durée inférieure à une durée prédéterminée. Le dispositif 1 de l’invention peut ainsi être utilisé pour former un bioréacteur acoustique actif. Dans la description qui précède, la stimulation acoustique des objets est réalisée à partir d’une configuration de référence dans laquelle les objets sont regroupés en agrégats et maintenus dans cette configuration en lévitation acoustique. La stimulation acoustique selon l’invention peut généralement être déclenchée après formation de tels agrégats, ou pendant leur formation. Dans une variante de réalisation, la stimulation acoustique est réalisée sur des objets qui sont maintenus dans la configuration de référence, par exemple dans la configuration illustrée à la FIG. 2 , non pas en lévitation acoustique dans un milieu liquide mais en étant supportés par un milieu semi-solide (ou semi-liquide). Cette variante est décrite ci-après uniquement selon ses différences par rapport à la description qui précède et qui s’applique par analogie. Dans le cadre de cette variante, les objets 12 comprennent des particules d’hydrogel et le procédé comprend, après positionnement des objets 11 et 12 selon la configuration de la FIG. 2 , une étape de chauffage / polymérisation des particules d’hydrogel, par exemple à l’aide d’une nappe laser, de manière à les fusionner pour constituer une matrice de soutien des objets 11. Autrement dit, le procédé peut comprendre une étape de transformation du milieu liquide en milieu semi-solide. Le maintien des objets 11 dans la configuration de référence – et dans des configurations résultant de leur stimulation acoustique – peut ainsi être assuré par le milieu qui peut comprendre une matrice d’hydrogel et/ou un autre type de matrice de soutien. De nombreuses variantes peuvent être envisagées sur cette base. Par exemple, la matrice de soutien peut être formée par introduction dans la cavité 2 d’une substance photopolymérisable et stimulation lumineuse de cette substance afin d’entraîner la polymérisation. La stimulation acoustique peut en outre être réalisée sur des objets supportés par un tel milieu semi-solide, par exemple pendant une phase d’incubation permettant le développement de phénomènes de différenciation, d’auto-organisation et de maturation d’agrégats des objets. Par exemple, une modulation de la fréquence de l’onde acoustique, en particulier autour de la fréquence de résonance, permet de déformer ou contraindre mécaniquement des agrégats d’objets, notamment pour mimer des processus physiologiques développementaux ou pathologiques tels que mentionnés ci-dessus. Les figures 3 à 5 représentent de manière schématique un mode de réalisation dans lequel le dispositif 1 se distingue de celui des figures 1 et 2 en ce qu’il comprend en outre une paroi 20 agencée dans la cavité 2. Le mode de réalisation des figures 3 à 5 est décrit uniquement selon ses différences par rapport à celui des figures 1 et 2, la description qui précède s’appliquant par analogie. En référence à la FIG. 3 , la paroi 20 s’étend dans la cavité 2 de manière à la séparer en deux chambres 21 et 22. La paroi 20 comprend une première surface 25 qui délimite la chambre 21 et une deuxième surface 26 qui délimite la chambre 22. La paroi 20 ainsi que ses surfaces 25 et 26 s’étendent le long de la direction A1, en l’occurrence parallèlement à cette direction. Dans cet exemple, la paroi 20 est une membrane en nitrocellulose qui comprend des pores formant des ouvertures traversant la membrane 20 de part en part, de manière à déboucher sur les surfaces 25 et 26. À titre indicatif, la paroi 20 peut avoir une épaisseur, définie comme la distance entre les surfaces 25 et 26, de 150 µm et des pores ayant un diamètre de 3 µm. De manière non limitative, la dimension de tels pores peut aller de l’échelle nanométrique à l’échelle micrométrique. Les chambres 21 et 22 sont dans cet exemple remplies d’un fluide contenant des objets 11A et 11B ayant chacun une taille comprise entre 1 µm et 100 µm et présentant un contraste acoustique positif. Dans cet exemple non limitatif, les objets 11A sont des cellules biologiques d’un premier type qui sont reçues dans la chambre 21 tandis que les objets 11B sont des cellules biologiques d’un deuxième type reçues dans la chambre 22. Le fluide forme un milieu de culture pour les objets cellulaires 11A et 11B. De manière non limitative, les objets 11A et 11B peuvent être des neurones ou des cellules gliales, tumorales, endothéliales, épithéliales, osseuses ou encore immunitaires. Dans cet exemple, chacun des objets 11A et 11B a une masse volumique supérieure à la masse volumique du fluide et ces objets sont choisis de sorte que la vitesse de propagation d’une onde acoustique dans ces objets soit supérieure à la vitesse de propagation de cette onde acoustique dans le fluide. À partir d’une configuration initiale (non représentée) dans laquelle les objets 11A et 11B sont en suspension dans le fluide, respectivement dans les chambres 21 et 22, le transducteur 3 est mis en œuvre de manière à générer une onde acoustique stationnaire dans la cavité 2, le long de la direction A1, dans cet exemple avec une longueur d’onde formant quatre nœuds de pression N11, N12, N13 et N14, produisant une force de radiation acoustique ayant une composante axiale qui s’exerce sur les objets 11A et 11B de manière à les positionner en agrégats sur les nœuds N11, N12, N13 et N14. Le transducteur 3 est dans cet exemple configuré pour maintenir les objets 11A et 11B en lévitation acoustique le temps nécessaire pour obtenir une auto-organisation suffisante des agrégats ainsi formés, qui constituent dans cet exemple des structures tridimensionnelles sensiblement ovoïdes, puis pour produire une force de radiation acoustique ayant une composante transversale afin de déplacer les objets 11A et 11B en direction de la paroi 20 selon la configuration de référence illustrée à la FIG. 3 . Pour ce faire, le transducteur 3 peut comprendre des éléments piézoélectriques disposés côte à côte transversalement, qui peuvent être progressivement activés en direction de la paroi 20. Dans cet exemple, en configuration de référence, les objets 11A forment des agrégats plaqués sur la surface 25 de la membrane 20 et les objets 11B forment des agrégats plaqués sur la surface 26 de la membrane 20. La paroi 20 permet notamment de contrôler les interactions entre les objets 11A et 11B, à travers ses pores qui peuvent constituer des passages pour des connexions du type axones lorsque les objets 11A et 11B sont des neurones primaires. Dans cet exemple, la stimulation acoustique est réalisée à partir de la configuration de référence de la FIG. 3 , dans laquelle les agrégats d’objets sont fixés à la paroi 20 par adhésion cellulaire en lévitation acoustique. La stimulation acoustique peut comprendre une modulation en fréquence autour de la fréquence de résonance, les figures 4 et 5 montrant d’une part les nœuds de pression N11-N14 à la fréquence de résonance et, d’autre part, un déplacement relatif des agrégats d’objets sous l’action d’une variation de fréquence positive et négative, respectivement. Plus généralement, la modification d’un ou plusieurs paramètres de l’onde générée dans la cavité 2 permet de stimuler les agrégats d’objets en contact avec la paroi 20 et d’exercer sur ceux-ci des efforts de traction et/ou de compression et/ou de torsion contrôlés. Les principes décrits ci-dessus en référence aux figures 3 à 5 peuvent être mis en œuvre avec d’autres types de structures de contact que la paroi 20. Par exemple, la paroi 20 du dispositif 1 des figures 3 à 5 peut être une paroi en verre ou plus généralement une structure non poreuse, permettant notamment d’utiliser des fluides différents dans chacune des chambres 21 et 22 de la cavité 2. Une telle paroi peut bien entendu être fonctionnalisée et/ou cellularisée et/ou être perméable aux gaz. Pour autre exemple, le dispositif 1 peut comprendre une structure de contact comprenant non pas une mais deux parois verticales et perpendiculaires l’une à l’autre, formant quatre chambres dans la cavité 2, afin de réaliser des assemblages avec un plus grand nombre de types d’objets. La ou les parois formant une telle structure de contact peuvent être de nature physico-chimique variée, en étant par exemple formées d’un hydrogel, d’un élastomère ou encore d’un matériau inorganique, et/ou peuvent comprendre des textures de taille micrométrique ou nanométrique. Pour autre exemple de structure de contact, la cavité 2 peut comporter un ou plusieurs piliers, ou encore un ou plusieurs éléments de contact creux, aussi appelés « électrodes », afin de pouvoir injecter et piéger dans de tels éléments de contact et perfuser dans les agrégats d’objets des solutés tels que des composés ou agents biologiques et physiques, des cellules ou encore des virus. Le dispositif peut comprendre une ou plusieurs structures de contact qui peuvent généralement former une ou plusieurs surfaces s’étendant le long de la direction axiale A1 et/ou une ou plusieurs surfaces s’étendant le long d’une direction transversale. Les figures 6 et 7 illustrent à cet égard un mode de réalisation dans lequel le dispositif 1 comprend une membrane 30, réalisée par exemple en polydiméthylsiloxane, s’étendant transversalement, en l’occurrence perpendiculairement à la direction A1 lorsque le dispositif 1 est dans la configuration de référence illustrée à la FIG. 6 . Dans cet exemple, des objets 11C qui présentent un contraste acoustique positif sont maintenus en lévitation acoustique et plaqués contre la membrane 30 sous l’action de la force de radiation acoustique qui est générée en configuration de référence de manière à former un nœud de pression N21 axialement au niveau de la membrane 30. Les objets 11C ainsi plaqués contre la membrane 30 peuvent se fixer à celle-ci, par exemple par adhésion cellulaire. La FIG. 7 montre le dispositif 1 dans une configuration de stimulation dans laquelle la fréquence est modulée de sorte à déplacer les objets 11C sous l’action d’un déplacement axial dudit nœud de pression N21, la membrane 30 étant déformée sous l’action du déplacement des objets 11C. La description qui précède s’applique bien entendu par analogie au mode de réalisation des figures 6 et 7. Bien entendu l’invention n’est pas limitée aux exemples qui viennent d’être décrits. Par exemple, la cavité peut avoir une géométrie différente de celle décrite ci-dessus. Notamment, dans une variante de réalisation, la cavité peut être configurée pour exciter des modes différents à des fréquences distinctes, afin de moduler le champ acoustique, par exemple à l’aide d’une lentille acoustique ou transducteur multi-éléments, et la répartition de la force de radiation acoustique qui s’exerce sur les objets lorsque l’onde acoustique passe d’une fréquence à une autre fréquence. Pour autre exemple, la stimulation acoustique peut être réalisée sur des objets de différentes natures et/ou formant différents types d’agrégats. Par exemple, le procédé peut être mis en œuvre pour stimuler un agrégat comprenant un groupe de premiers objets formant un noyau encapsulé par un groupe de deuxièmes objets formant une coque de protection poreuse, lesdits deuxièmes objets pouvant par exemple être introduits dans la cavité après agrégation desdits premiers objets en lévitation acoustique. Procédé de stimulation acoustique d’objets (11, 11A, 11B, 11C, 12) reçus dans un milieu fluide ou semi-solide au sein d’une cavité (2), comprenant : une étape de génération d’une onde acoustique stationnaire (6) de manière à former, dans le milieu, un ou plusieurs nœuds (N1, N2, N11-N14, N21) et/ou anti-nœuds (AN1) de pression à des positions axiales respectives dites de référence, afin de produire une force de radiation acoustique qui s’exerce sur les objets, à partir d’une configuration dite de référence dans laquelle les objets sont positionnés sur un ou plusieurs desdits nœuds et/ou anti-nœuds de pression, une étape de modification, au cours du temps, d’un ou plusieurs paramètres de l’onde acoustique afin de modifier la force de radiation acoustique et/ou de déplacer selon une direction axiale un ou plusieurs desdits nœuds et anti-nœuds de pression par rapport à leur position de référence. Procédé selon la revendication 1, dans lequel les paramètres de l’onde acoustique sont choisis dans une liste incluant une amplitude et une fréquence. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel l’étape de modification d’un ou plusieurs desdits paramètres de l’onde acoustique comprend une modification de l’amplitude de l’onde acoustique à fréquence fixe au cours du temps. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel dans lequel l’étape de modification d’un ou plusieurs desdits paramètres de l’onde acoustique comprend une modification de la fréquence de l’onde acoustique à amplitude fixe au cours du temps. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel l’étape de modification d’un ou plusieurs desdits paramètres de l’onde acoustique comprend une modification périodique d’un ou plusieurs desdits paramètres, de préférence selon une fréquence de modulation relativement basse par rapport à une fréquence relativement haute de l’onde acoustique. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel, notamment pendant l’étape de modification d’un ou plusieurs desdits paramètres de l’onde acoustique, les objets sont maintenus dans la cavité (2) : sous l’action de la force de radiation acoustique, par exemple en lévitation acoustique dans le milieu qui peut être liquide dans la configuration de référence, et/ou en étant supportés par le milieu, le milieu pouvant par exemple être semi-solide dans la configuration de référence, et/ou en étant supportés par, et/ou en contact avec, une ou plusieurs structures de contact (20, 30) qui s’étendent dans la cavité (2), chacune de ces structures de contact pouvant être choisie dans une liste incluant une paroi, un pilier et une électrode. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel, dans une configuration initiale, les objets sont en suspension dans le milieu qui est fluide dans cette configuration initiale, l’étape de génération de l’onde acoustique étant réalisée de manière à déplacer les objets sous l’action de la force de radiation acoustique pour les placer dans ladite configuration de référence. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 7, dans lequel les objets comprennent des objets (11, 11A, 11B, 11C) présentant un contraste acoustique positif par rapport au milieu et/ou des objets (12) présentant un contraste acoustique négatif par rapport au milieu. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 8, comprenant une étape d’incubation des objets pendant qu’ils sont soumis à l’effort de radiation acoustique. Dispositif (1) de stimulation acoustique d’objets (11, 11A, 11B, 11C, 12) configuré pour mettre en œuvre un procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 9, le dispositif (1) comprenant une cavité (2) apte à contenir ledit milieu recevant les objets, un transducteur (3) configuré pour générer ladite onde acoustique (6) et un organe de commande du transducteur (3) configuré pour modifier un ou plusieurs desdits paramètres de l’onde acoustique.