Brevet FR3160469A1 — publié le 20250926

La présente invention concerne des méthodes de diagnostic du cancer du rein et des trousses pour le diagnostic du cancer du rein. Méthodes et trousses pour le diagnostic du cancer du rein La présente invention concerne des méthodes de diagnostic du cancer du rein. La présente invention concerne également des trousses pour le diagnostic du cancer du rein. Arrière-plan technologique Les carcinomes à cellules rénales (RCC) sont responsables de 80 à 85 % de tous les néoplasmes rénaux primitifs. Selon les données enregistrées dans la base de données GLOBOCAN 2018, 403 262 nouveaux cas de cancer du rein ont été diagnostiqués dans le monde, avec un taux standardisé pour l'âge (TSA) de 9,1 cas pour 100 000 personnes par an [1]. Le carcinome à cellules rénales est la 8 ème tumeur la plus fréquente chez les hommes et la 12 ème chez les femmes. En outre, 174 098 décès dus au cancer du rein ont été enregistrés dans le monde en 2018, ce qui représente un rapport incidence/mortalité > 40%. Le RCC survient principalement au cours de la sixième décennie de la vie, l'âge médian au moment du diagnostic étant d'environ 67 ans. Avec la généralisation des méthodes d'imagerie, la fréquence des détections fortuites a augmenté. Ainsi, plus de 75 % des RCC sont détectés de manière fortuite et très peu de patients (6-10 %) présentent les symptômes classiques de la triade (douleur lombaire, hématurie, masse abdominale palpable). Plus rarement, les patients présentent des symptômes résultant d'une maladie métastatique, notamment des douleurs osseuses ou une toux persistante. Le diagnostic de RCC est généralement suggéré par l'échographie abdominale, mais la tomodensitométrie abdominale représente la norme de référence du diagnostic [2]. La sensibilité de la tomodensitométrie pour les petites masses rénales est supérieure à 90 %, approchant 100 % pour les lésions de plus de 2 cm. Toutefois, cette méthode n’est pas spécifique pour la détermination du sous-type des RCC. Elle est en outre coûteuse, longue et irradiante. La biopsie d'une tumeur rénale est une méthode très sensible et spécifique pour l'identification des tumeurs malignes. Elle est indispensable avant traitement ablatif ainsi que chez les patients à un stade avancé de la maladie avant traitement systémique [3]. Réalisée sous guidage radiologique (échographie ou TDM), elle requiert les compétences d’un radiologue interventionnel et d’un anatomopathologiste. La biopsie tumorale est toutefois non contributive dans 5 à 10 % des cas. De plus, cette méthode est invasive et peut parfois être à l’origine de complications hémorragiques ou infectieuses. Le diagnostic histopathologique final, la stadification et l'évaluation des facteurs pronostiques sont basés sur le spécimen opératoire [3]. Les techniques diagnostiques à disposition (tomodensitométrie, IRM et biopsie) présentent donc des limites pour pouvoir envisager une stratégie de dépistage ou de diagnostic précoce du cancer du rein en raison de leur coût, des compétences spécialisées à mobiliser, de leur manque de spécificité ou de leur caractère invasif. L'urine est un échantillon biologique idéal pour le diagnostic des maladies urologiques, en raison de la facilité et de la nature non invasive du prélèvement. En outre, elle contient des protéines d'origine rénale et peut représenter l'état physiopathologique du rein et du tractus urologique [4]. Une étude a été réalisée par Di Meo et al. pour chercher des biomarqueurs urinaires précoces de la progression du carcinome à cellules rénales [7]. En effectuant une analyse du protéome urinaire par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem, les auteurs de cette étude ont notamment identifié EPS8L2 comme un biomarqueur permettant de distinguer les patients avec un carcinome rénal à cellules claires (ccRCC) dit progressif de ceux avec un ccRCC dit non-progressif et de distinguer les sujets à un stade précoce de ccRCC des patients avec un oncocytome rénal. En l’absence de biomarqueur validé, il existe un besoin médical réel de développer une méthode non-invasive, simple, fiable et précise de diagnostic précoce du cancer du rein, et en particulier de son entité la plus fréquente (75%) : le carcinome à cellules rénales claires. Le diagnostic différentiel des sous-types histologiques de tumeurs rénales ainsi que l’intérêt pronostique d’un tel biomarqueur sont des questions d’intérêt complémentaire certain. Le premier aspect de la présente invention concerne une méthode in vitro pour le diagnostic et/ou le pronostic du cancer du rein chez un sujet en se basant sur les niveaux d’expression de quatre marqueurs, à savoir l’anhydrase carbonique IX (CAIX), la podocalyxine (PODLX), la protéine 4 contenant le domaine EH (EHD4) et le transducteur 2 du signal calcique associé aux tumeurs (TROP2), dans un échantillon d’urine provenant dudit sujet. Dans un mode de réalisation particulier, l’invention propose une méthode in vitro permettant de diagnostiquer ou différencier un oncocytome et un carcinome à cellules rénales (RCC). Dans un mode de réalisation plus particulier, l’invention propose une méthode in vitro permettant de diagnostiquer ou différencier un carcinome rénal à cellules claires (ccRCC), un carcinome rénal à cellules chromophobes, ou un carcinome rénal papillaire. Dans un autre mode de réalisation plus particulier, l’invention propose une méthode in vitro pour déterminer le stade d’un cancer du rein, notamment d’un carcinome rénal à cellules claires. Dans un mode particulier de réalisation, l’invention concerne une méthode in vitro qui comprend les étapes suivantes : déterminer les niveaux des marqueurs CAIX, PODLX, EHD4 et TROP2 dans des vésicules extracellulaires (VEs) présentes dans un échantillon d’urine provenant dudit sujet, comparer les niveaux de ces quatre marqueurs avec des niveaux de références de ces marqueurs. Un autre aspect de l’invention porte sur une trousse de diagnostic et/ou pronostic du cancer du rein. Dans un mode de réalisation, ladite trousse peut être utilisée pour détecter ou quantifier les niveaux de CAIX, PODLX, EHD4 et TROP2 présents dans les VEs. Avantageusement, ladite trousse permet de mettre en œuvre les méthodes de diagnostic ou de pronostic de l’invention. Dans un mode particulier de réalisation, ladite trousse comprend : un support solide sur la surface duquel est greffé un ligand capable de se lier aux vésicules extracellulaires ; et des moyens de détection ou de quantification de PODLX, EHD4, TROP2 et CAIX. Les figures 1A-1F représentent la détection par Western blot et la quantification des marqueurs de normalisation Annexine (A5) et TSG 101 ( FIG. 1 ) et des protéines PODLX ( FIG. 1 ), CAIX ( FIG. 1 ), EHD4 ( FIG. 1 ), TROP2 ( FIG. 1 ) et EPS8L2 ( FIG. 1 ), dans un pool d’urines de sujets sains et un pool d’urines de patients atteints de ccRCC. Les intensités des marqueurs d’intérêt et des marqueurs de normalisation (exprimées en unité arbitraire [A.U.]) dans un même pool d’urines sont mesurées à l’aide du logiciel Fiji et intégrés dans un ratio « intensité du marqueur d’intérêt / intensité de marqueur de normalisation ». Les FIG. 2 et 2B représentent une quantification des niveaux d’expression de PODLX, EHD4, TROP2, EPS8L2 et CAIX dans un pool d’urines de patients atteints de RCC par rapport à un pool d’urines de sujets sains. Les niveaux des marqueurs sont mesurés par western blot. Le niveau d’expression de chaque marqueur est d'abord converti en un ratio « marqueur / TSG 101 » ( FIG. 2 ) ou un ratio « marqueur / A5 » ( FIG. 2 ). L’axe des ordonnées représente un rapport entre un ratio d’un marqueur obtenu du pool d’urines de patients et un ratio du même marqueur obtenu du pool d’urines de sujets sains. La FIG. 3 représente une comparaison des niveaux d’expression de PODLX, CAIX, EHD4 et TROP2 mesurés dans un pool d’urines de sujets sains, un pool d’urines de patients atteints de ccRCC, un pool d’urines de patients atteints d’un oncocytome, un pool de patients atteints de RCC chromophobe, et un pool d’urines de patients atteints de RCC papillaire. Un ratio marqueur /A5 a d'abord été calculé, à partir de mesures réalisées dans un même pool d’urines. L’axe des ordonnées représente le niveau d’expression d’un marqueur dans un pool d’urines par rapport à son niveau dans le pool d’urines de sujets sains. La FIG. 3 représente le ratio de surexpression des marqueurs chez des sujets avec une tumeur bénigne (oncocytome) ou une tumeur rénale maligne (ccRCC, chromophobe, papillaires) par rapport aux sujets sains. Les niveaux d’expression des marqueurs sont mesurés par Western blot. Sont représentés les ratios de marqueur /A5, mesurés dans un même pool d’urines pour chaque pathologie (oncocytomes, ccRCC, RCC chromophobes, RCC papillaires). L’axe des ordonnées représente l’expression des marqueurs pour chaque pathologie concernée par rapport à l’expression des contrôles sains. La FIG. 4 représente le niveau d’expression de PODLX, CAIX, EHD4 et TROP2 mesurés dans un pool d’urines de sujets sains, d’un pool d’urines de patients atteints de ccRCC de stade pT1 et d’un pool d’urines de patients atteints de ccRCC de stade pT3. Les résultats sont exprimés comme un ratio marqueur/A5, mesurés dans un même pool d'urines. L’axe des ordonnées représente le niveau d’expression d’un marqueur / A5 dans un pool d’urines par rapport à son niveau par rapport à l’A5 dans le pool d’urines de sujets sains. La FIG. 5 représente la quantification des niveaux de A5, PODLX, EHD4, EPS8L2 et TROP2 par des tests ELISA-like effectués sur un pool d'urines de patients atteints de ccRCC et un pool d’urines de sujets sains. La quantité d’un marqueur détecté par ELISA-like est rapportée à la quantité d’Annexine 5 détectée par ELISA-like dans le même échantillon. La FIG. 6 représente la quantification des niveaux de CAIX par des tests ELISA-like effectués sur un pool d'urines de patients atteints de ccRCC stades pT1 et pT3 et un pool d’urines de sujets sains. La quantité de CAIX détecté par ELISA-like est rapportée à la quantité d’Annexine 5 détectée par ELISA-like dans le même échantillon. DESCRIPTION DETAILLEE DE L’INVENTION Les vésicules extracellulaires sont des vésicules bicouches lipidiques de taille nanométrique qui sont sécrétées dans l'espace extracellulaire par presque tous les types de cellules, y compris les cellules cancéreuses et les cellules non cancéreuses. Les vésicules extracellulaires transportent de nombreuses molécules, telles que des protéines, ADNs, ARNs, miARNs et liquides. En effectuant des travaux de recherche sur des biomarqueurs dans des vésicules extracellulaires extraites des urines de patients atteints de cancer du rein, les Inventeurs ont réussi à identifier quatre protéines qui sont surexprimées sur ou dans les vésicules extracellulaires issues des urines de ces patients par rapport à leurs niveaux chez les sujets sains. Ces quatre protéines sont l’anhydrase carbonique IX (CAIX, Uniprot ID Q16790 / A0A0S2Z3D0), la podocalyxine (PODLX, Uniprot ID O00592), la protéine 4 contenant le domaine EH (EHD4, Uniprot ID Q9H223), et le transducteur 2 du signal calcique associé aux tumeurs (TROP2, Uniprot ID P09758). La surexpression de ces quatre protéines dans des vésicules extracellulaires n'était pas prévisible, car les résultats des Inventeurs montrent que le niveau d’expression d’une protéine dans des vésicules extracellulaires urinaires n’a pas de rapport direct avec son niveau d’expression libre dans l’urine. En effet, contrairement à ce qui a été observé pour la protéine EPS8L2, pour laquelle une surexpression dans l’urine à l'état libre a été constatée [7], aucune différence d’expression d'EPS8L2 n’a été observée lors de la comparaison entre des vésicules extracellulaires à partir d'échantillons de donneurs sains et de patients atteints d'un cancer rénal (par Western-blot et ELISA-like). D’une manière plus surprenante, les Inventeurs ont constaté que les profils d’expression de ces marqueurs dans les différents sous-types de cancers du rein ou différents stades d’un même cancer du rein sont différents et ont réussi à identifier les profils spécifiques corrélés avec les différents sous-types ou stades de cancers du rein. Particulièrement, les Inventeurs ont observé que les niveaux de TROP2, EHD4 et CAIX augmentent dans tous types de carcinomes à cellules rénales, alors que seuls les niveaux de EHD4, TROP2 et PODLX augmentent dans un oncocytome. Plus particulièrement, les Inventeurs ont observé que : l’augmentation du niveau de TROP2 dans les urines de patients atteints du carcinome rénal à cellules claires est plus importante par rapport aux augmentations de POLDX, EHD4 et CAIX ; l’augmentation du niveau de EHD4 dans les urines de patients atteints du carcinome à cellules chromophobes est plus importante par rapport aux augmentations de TROP2 et CAIX ; et l’augmentation des niveaux de TROP2 et EHD4 dans les urines de patients atteints du carcinome rénal papillaire est plus importante par rapport à celles de CAIX et PODLX. Le changement des niveaux d’expression de ces marqueurs par rapport aux niveaux de référence peut donc être utilisé pour le diagnostic, le diagnostic différentiel ou le diagnostic précoce d’un cancer du rein, et aussi pour la classification d’un sous-type de cancer du rein ou la détermination du stade ou de la gravité d’un cancer du rein, pour la surveillance d’évolution ou le pronostic d’un cancer du rein, et/ou pour l’évaluation de l’efficacité d’un traitement de cancer du rein. Un premier aspect de la présente invention concerne une méthode in vitro pour le diagnostic et/ou le pronostic du cancer du rein chez un sujet, en se basant sur la détermination des niveaux des marqueurs CAIX, PODLX, EHD4 et TROP2 dans des vésicules extracellulaires présentes dans un échantillon d’urine provenant dudit sujet. Au sens de la présente invention, on entend par « diagnostic » toute identification d’une pathologie symptomatique ou asymptomatique, de la gravité ou du stade d’une pathologie, ou de la classification, différenciation ou distinction d’une pathologie par rapport d’autres pathologies similaires. Au sens de la présente invention, le « pronostic » signifie l’appréciation de l’évolution probable d’une maladie et de son issue. De manière générale, le pronostic est basé sur la connaissance de l'évolution habituelle de la maladie, qui se combine avec la prise en compte de facteurs pouvant influencer cette évolution, tel que le sous-type et/ou le stade de cancer du rein. La méthode de l’invention permet de diagnostiquer et/ou différencier un cancer du rein. Ledit cancer du rein peut être une tumeur bégnine, telle qu’un oncocytome ou une tumeur maligne, telle qu’un carcinome à cellules rénales. Plus particulièrement, la méthode de l’invention permet de diagnostiquer et/ou différencier un carcinome à cellules rénales. Ledit carcinome à cellules rénales peut être un carcinome rénal à cellules claires, un carcinome rénal à cellules chromophobes, ou un carcinome rénal papillaire ou tubulo-papillaire. Encore plus particulièrement, la méthode de l’invention permet de diagnostiquer et/ou déterminer le stade d’un cancer du rein, notamment le stade d’un carcinome à cellules rénales, plus particulièrement le stade d’un carcinome rénal à cellules claires. L’oncocytome est une tumeur bénigne du rein dérivant des cellules des tubes collecteurs. Le carcinome à cellules rénales (RCC) est la tumeur rénale maligne la plus fréquente et peut se distinguer en plusieurs sous-types généralement en fonction du type de cellule où apparaissent les cellules cancéreuses. Les principaux sous-types de RCC sont le carcinome à cellules claires (ccRCC), le carcinome rénal papillaire ou tubulo-papillaire, et le carcinome rénal à cellules chromophobe. Le carcinome rénal à cellules claires (ccRCC) est une tumeur rénale qui se développe à partir de cellules épithéliales des tubules proximaux du cortex rénal, caractérisée histologiquement par des cellules épithéliales malignes dont le cytoplasme mis en évidence par les méthodes de coloration conventionnelles apparaît typiquement clair, en raison d'une teneur élevée en glycogène et en lipides, présentant une architecture de croissance en nids. Le carcinome rénal papillaire est un sous-type rare de carcinome rénal qui se développe à partir de l'épithélium tubulaire et présente une architecture microscopique papillaire. Dans le contexte de la présente invention, les termes « carcinome rénal papillaire » et « carcinome rénal tubulo-papillaire » sont interchangeables. Le carcinome rénal à cellules chromophobe est un sous-type rare de carcinome rénal. Il se manifeste sur le plan macroscopique par une tumeur solide très lobulée et bien circonscrite. Dans un mode de réalisation, l’invention porte sur une méthode in vitro pour le diagnostic et/ou le pronostic du cancer du rein chez un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : déterminer les niveaux de marqueurs CAIX, PODLX, EHD4, et TROP2 dans des vésicules extracellulaires présentes dans un échantillon d'urine provenant dudit sujet, comparer les niveaux de ces quatre marqueurs avec des niveaux de référence de ces marqueurs. Au sens de la présente invention, on entend par « un échantillon d’urine » soit un prélèvement urinaire unique d’un sujet soit un pool d’urines constitué par plusieurs prélèvements urinaires du même sujet. Dans un mode de réalisation, ledit échantillon d’urine est un pool d’urines constitué par 2, 3 ou 4 prélèvements. Ces prélèvements peuvent être effectués pendant une courte période de temps, par exemple entre une semaine et 24 heures. Selon la présente invention, un échantillon d’urine peut être analysé immédiatement après avoir été prélevé, ou être stocké dans un environnement froid, par exemple dans un réfrigérateur (notamment pendant une ou plusieurs, heures, notamment pendant un maximum de 4h) et /ou dans un congélateur, en vue d'une analyse ultérieure. Les vésicules extracellulaires (VEs) sont récupérées à partir d’un échantillon d’urine pour la mise en œuvre de la méthode de l’invention. Les vésicules extracellulaires sont définies comme des particules naturellement libérées de la cellule, délimitées par une bicouche lipidique et qui ne peuvent pas se répliquer. Les VEs sont hétérogènes et peuvent être classées en fonction de leur taille et de leur biogenèse. Les VEs comprennent notamment les exosomes, les microvésicules et les corps apoptotiques [6]. Les exosomes sont une sous-population de VEs dont le diamètre varie de 30 à 150 nm. Les exosomes sont générés par la fusion d'un corps multivésiculaire (MVB), un organite endosomal tardif, avec la membrane plasmique. Les microvésicules (MVs) sont définies comme des vésicules extracellulaires avec des diamètres allant de 100 à 1000 nm qui bourgeonnent directement de la membrane plasmique dans l'espace extracellulaire. Quant aux corps apoptotiques, ils sont secrétés par des cellules apoptotiques et possèdent un diamètre allant de 500 à 5000 nm [6]. Dans un mode de réalisation particulier, la méthode de l’invention comprend la détermination des niveaux de marqueurs CAIX, PODLX, EHD4, et TROP2 dans des microvésicules présentes dans un échantillon d'urine provenant d’un sujet. Les vésicules extracellulaires, notamment les microvésicules, peuvent être isolées ou capturées par tout moyen connu de l’homme du métier qui permet de réduire le volume d’urine et de concentrer des VEs dans un échantillon d’urine. Dans un mode de réalisation particulier, les VEs sont isolées par centrifugation. Dans un autre mode de réalisation particulier, les VEs sont isolées par filtration, par exemple filtration séquentielle ou filtration sélective par taille. Dans un autre mode de réalisation particulier, les VEs sont isolées par affinité, notamment par purification en utilisant une protéine capable de se lier à la phosphatidylsérine. Plus particulièrement, dans un mode de réalisation les VEs sont isolées par purification en utilisant la protéine TIM4. A titre illustratif, il peut être fait emploi d'une protéine de fusion TIM4-Fc, notamment conjuguée à des billes. Dans un autre mode de réalisation particulier, les VEs sont isolées par précipitation de polymères. Dans un autre mode de réalisation particulier, les Vésicules Extracellulaires (VEs) sont isolées en étant reconnues par des billes magnétiques qui ciblent les protéines tetraspanines CD9, CD63 ou CD81. Dans un autre mode de réalisation particulier, les VEs sont capturées au moyen d’un support solide sur la surface duquel est greffé un ligand capable de se lier aux VEs. A titre d’exemple, ledit ligand peut être un ligand décrit dans la demande WO/2012/127175 ou la demande WO/2021/005167 . Dans un mode de réalisation particulier, ledit ligand est un composé de formule (I) ou (II) suivante : (I) (II) dans laquelle M +i représente un ion métallique et i est 1, 2 ou 3 ; L représente un ligand échangeable ; X représente un groupe –(CH 2 ) m –NH 2 , ou un groupe –CH 2 –NHC(O)–R–NH 2 dans lequel R est un groupe alkyle en C 2 -C 10, en particulier en C 5 -C 10 , substitué ou non substitué, linéaire ou ramifié ; m = 1 à 12 ; n = 1, 2 ou 3 ; et Y représente H ou (CH 2 ) p -NH 2 , où p = 0 à 12. Dans un autre mode de réalisation particulier, ledit ligand est un composé comprenant au moins un groupement, de préférence au moins deux groupements, de formule (III) (III) dans laquelle M est un cation métallique choisi de préférence dans le groupe constitué par Zn 2+ , Mn 2+ , Co 2+ , Ni 2+ , Cu 2+ and Fe 2+ . Dans un mode de réalisation préféré, ledit ligand est le ligand C4 de formule ci-après : Ledit ligand est greffé sur un support solide par une liaison covalente. Le support solide employé dans le cadre de l’invention peut notamment être une plaque de microtitration, une feuille, un cône, un tube, un puits, une bille, une particule ou microparticule, une bandelette, un film, un fil, une vis ou une aiguille. De manière générale, le support solide utilisé dans le cadre de la présente invention peut être employé pour la fabrication de tout type de matériau à géométrie et porosité variable. Dans un mode particulier de réalisation, le support solide est un support polymérique, métallique ou céramique, fonctionnalisé au moyen d’un ligand, tel qu’un composé de formule (I), (II) ou (III) décrit ci-dessus. Selon un mode particulier de réalisation, le support est un support polymérique, notamment un support en poly(chlorure de vinyle) (ou PVC), en poly(téréphtalate d’éthylène) (ou PET), ou en polystyrène (ou PS). Dans le contexte de l'invention, on entend par "greffé à sa surface", en référence au greffage d’un ligand, notamment du composé de formule (I), (II) ou (III), sur le support, par une liaison covalente entre le support et un ligand. Le composé de formule (I), (II) ou (III) peut être lié de manière covalente au support de manière directe ou indirecte. Dans le cas d'une liaison covalente indirecte, le composé de formula (I), (II) ou (III) est lié de manière covalente à une fonction réactive apportée à la surface du support par un agent de pré-fonctionnalisation, qui a également été lié de manière covalente au support. La détermination de la présence ou de la quantité de CAIX, PODLX, EHD4, et TROP2 sur ou dans les vésicules extracellulaires peut être réalisée par tout moyen connu de l’homme du métier. Des techniques immunologiques peuvent être employées, mettant en œuvre des anticorps spécifiques dudit marqueur protéique. On peut notamment citer les techniques d’ELISA, de ELISA-like, de CLIA(chemiluminescence immunoassay), de LFIA (lateral flow immunoassay) ou de Western blot. Les marqueurs détectés par ces techniques peuvent être comparés par rapport à des niveaux de référence. Suivant la technique utilisée une quantification à l’aide d’un logiciel d’analyse d’image, d’un dispositif de lecture (colorimétrie, fluorescence, chemiluminescence) sera effectuée. Les niveaux de référence des marqueurs peuvent être soit des niveaux mesurés dans des vésicules extracellulaires d'échantillons d’urines provenant de sujets sains soit des niveaux mesurés dans des vésicules extracellulaires d'échantillons d’urines provenant de patients avec un cancer du rein confirmé ou un type ou un stade de cancer du rein confirmé. Les niveaux de référence des marqueurs peuvent être une valeur moyenne calculée à partir des valeurs mesurées chez une population de sujets sains ou une population de patients avec un même type ou stade de cancer du rein. Les niveaux de référence des marqueurs peuvent également être mesurés dans un pool d’urines de sujets sains ou un pool d’urines de patients avec un même type ou stade de cancer du rein. Avantageusement, une normalisation peut être réalisée sur la base de la quantification d'un marqueur de normalisation présent sur ou dans les vésicules extracellulaires. Un tel marqueur peut être toute protéine dont le niveau d’expression est constant entre les VEs extraites des sujets sains et des patients atteints de cancer du rein. Le marqueur de normalisation peut notamment être choisi parmi l'annexine-A5 et la protéine TSG-101. Selon un mode particulier de réalisation, la quantification des marqueurs d’intérêt sera réalisée de manière relative par quantification parallèle d'un marqueur de normalisation tel que l'annexine-A5 et la protéine TSG-101. Ainsi, selon un mode particulier de réalisation, la méthode selon l'invention comprend la détermination de la quantité de PODLX, EHD4, TROP2 et CAIX et la détermination de la quantité d'un marqueur de normalisation dans un même échantillon d’urine. Dans un mode de réalisation plus particulier, le niveau d’un marqueur d’intérêt est exprimé par un ratio « quantité d’un marqueur d’intérêt/quantité d’un marqueur de normalisation ». Ce ratio peut ensuite être comparé avec un ratio de référence, tel qu’un ratio obtenu des sujets sains ou des patients avec un même sous-type ou stade de cancer du rein, pour un diagnostic, un diagnostic différentiel, un pronostic, du suivi de l’évolution du cancer du rein. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une méthode in vitro pour le diagnostic ou le diagnostic différentiel de l’oncocytome chez un sujet, dans laquelle les niveaux de CAIX, PODLX, EHD4, et TROP2 étant comparés avec les niveaux de référence mesurés dans des échantillons provenant de sujets sains, l’augmentation des niveaux de EHD4, TROP2 et PODLX avec l’absence de changement significatif des niveaux de CAIX indique la présence d'un oncocytome. Selon un autre mode de réalisation particulier, l’invention concerne une méthode in vitro pour le diagnostic d’un carcinome à cellules rénales chez un sujet, dans laquelle les niveaux de CAIX, PODLX, EHD4, et TROP2 étant comparés avec les niveaux de référence mesurés dans des échantillons provenant de sujets sains, l’augmentation des niveaux d’au moins de TROP2, EHD4 et CAIX indique la présence d'un carcinome à cellules rénales. Selon un mode de réalisation plus particulier, l’invention concerne une méthode in vitro pour le diagnostic ou le diagnostic différentiel d'un carcinome rénal à cellules claires chez un sujet, dans laquelle les niveaux de CAIX, PODLX, EHD4, et TROP2 étant comparés avec les niveaux de référence mesurés dans des échantillons provenant de sujets sains, une augmentation plus importante du niveau de TROP2 par rapport aux augmentations de PODLX, EHD4 et CAIX indique la présence du carcinome rénal à cellules claires. Par "augmentation plus importante", il peut notamment être fait référence à une augmentation d'au moins 10 fois, notamment au moins 20 fois, par exemple au moins 25 fois de la quantité de TROP2 chez les sujets atteints de ccRCC par rapport aux sujets sains, au regard d'une augmentation moindre de la quantité de chacun de PODLX, EDH4 et CAIX, notamment une augmentation d'environ 3,5 fois chez les sujets atteints de ccRCC par rapport aux sujets sains. Selon un autre mode de réalisation plus particulier, l’invention concerne une méthode in vitro pour le diagnostic ou le diagnostic différentiel d'un carcinome rénal à cellules chromophobes chez un sujet, dans laquelle les niveaux de CAIX, PODLX, EHD4, et TROP2 étant comparés avec les niveaux de référence mesurés dans des échantillons provenant de sujets sains, une augmentation plus importante des niveaux de EHD4, par rapport aux augmentations de TROP2 et CAIX, avec l’absence de changement des niveaux de PODLX, indique la présence du carcinome rénal à cellules chromophobes. Dans ce cas, par "augmentation plus importante", il peut notamment être fait référence à une augmentation d'environ 8 fois de la quantité de EDH4 chez les sujets atteints d'un carcinome rénal à cellules chromophobes par rapport aux sujets sains, au regard d'une augmentation moindre de la quantité de chacun de TROP2 et CAIX, notamment une augmentation d'environ 5 et 6 fois, respectivement, chez les sujets atteints d'un carcinome rénal à cellules chromophobes par rapport aux sujets sains. Selon un autre mode de réalisation plus particulier, l’invention concerne une méthode in vitro pour le diagnostic ou le diagnostic différentiel d'un carcinome à cellules rénales papillaire chez un sujet, dans laquelle les niveaux de CAIX, PODLX, EHD4, et TROP2 étant comparés avec les niveaux de référence mesurés dans des échantillons provenant de sujets sains, une augmentation plus importante du niveau de TROP2 et EHD4 par rapport à celle de CAIX et PODLX indique la présence du carcinome rénal papillaire. Dans ce cas, par "augmentation plus importante" il peut notamment être fait référence à une augmentation de la quantité de PODLX et CAIX d'environ 3 fois chez les sujets atteints d'un carcinome à cellules rénales papillaires par rapport aux sujets sains, au regard d'une augmentation d'au moins 5 fois, en particulier 14 fois, en particulier au moins 16 fois de EDH4 et TROP-2 chez les sujets atteints d'un carcinome à cellules rénales papillaires par rapport aux sujets sains. Selon un autre mode de réalisation plus particulier, l’invention concerne une méthode in vitro pour le diagnostic, le diagnostic différentiel, le pronostic, la surveillance de la progression de la maladie et/ou la détermination du stade d’un cancer du rein chez un sujet, dans laquelle les niveaux de référence des marqueurs sont des niveaux prédéterminés dans des échantillons d’urines provenant de patients avec un stade de cancer du rein confirmé. Avantageusement, les niveaux de référence pour chaque marqueur sont une série de niveaux prédéterminés correspondant à différents stades d’un cancer du rein. Plus avantageusement, chaque niveau de référence d’un marqueur correspond à une fourchette de valeurs. Dans un mode de réalisation plus particulier, les niveaux de CAIX, PODLX, EHD4, et TROP2 identiques aux niveaux de référence d’un stade de cancer du rein indique le stade de cancer du rein dudit sujet. Par « les niveaux de CAIX, PODLX, EHD4, et TROP2 identiques aux niveaux de référence d’un stade de cancer du rein», on entend que les niveaux de CAIX, PODLX, EHD4, et TROP2 mesurés chez un sujet correspondent aux niveaux de référence respectifs de chaque marqueur, ou ne sont pas significativement différents de ces niveaux de référence, ou entrent dans les fourchettes de valeurs respectives de charque marqueur. Un autre aspect de l’invention concerne une trousse de diagnostic et/ou pronostic du cancer du rein. Avantageusement, ladite trousse comprend des réactifs nécessaires pour la mise en œuvre des méthodes de diagnostic et/ou pronostic de la présente invention. Dans un mode de réalisation particulier, la trousse de l’invention comprend : un support solide sur la surface duquel est greffé un ligand capable de se lier aux vésicules extracellulaires ; et des moyens de détection ou de quantification de PODLX, EHD4, TROP2 et/ou CAIX. Dans un mode de réalisation avantageux, la trousse de l’invention comprend un support solide sur la surface duquel est greffé un composé de formule (I), (II) ou (III) décrit ci-dessus. Avantageusement, la trousse de l’invention comprend un support solide sur la surface duquel est greffé le ligand C4 de formule ci-après : . Par "moyens de détection ou de quantification", on entend tout moyen connu de l’homme du métier pour détecter ou quantifier un marqueur. Bien entendu, les moyens employés dépendront de la nature du marqueur. Par exemple, un marqueur protéique peut notamment être détecté par des techniques immunologiques (notamment ELISA, LFIA, CLIA et Western-blot). D’autres moyens qui peuvent être cités incluent par exemple des tests chromogéniques. Dans un mode de réalisation particulier, ladite trousse comprend un anticorps spécifique dirigé contre PODLX, un anticorps spécifique dirigé contre EHD4, un anticorps spécifique dirigé contre TROP2, et/ou un anticorps spécifique dirigé contre CAIX. Dans un mode de réalisation, ladite trousse peut comprendre en outre des moyens de détection ou de quantification d’un marqueur de normalisation. Dans un mode de réalisation particulier, ladite trousse comprend des moyens de détection ou de quantification de l’Annexine 5 (A5) ou de la protéine TSG-101. Avantageusement, ladite trousse comprend un anticorps spécifique dirigé contre l’Annexine 5 et/ou un anticorps spécifique dirigé contre la protéine TSG-101. Ces anticorps peuvent être des anticorps monoclonaux, polyclonaux et/ou conjugués dirigés spécifiquement contre leurs cibles. Avantageusement, ces anticorps sont des anticorps monoclonaux conjugués avec une molécule qui peut émettre un signal détectable en condition appropriée, telle qu’une enzyme, une toxine ou un composé inorganique. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une trousse comprenant : un support solide sur la surface duquel est greffé le ligand C4, un anticorps spécifique dirigé contre PODLX, un anticorps spécifique dirigé contre EHD4, un anticorps spécifique dirigé contre TROP2, un anticorps spécifique dirigé contre CAIX, et un anticorps spécifique dirigé contre la protéine TSG-101 et/ou un anticorps spécifique dirigé contre l’Annexine 5. Une telle trousse peut comprendre en outre des anticorps secondaires qui reconnaissent les susdits anticorps spécifiques. Avantageusement, les anticorps fournis dans la trousse peuvent être des anticorps couplés. Par ailleurs, une telle trousse peut comprendre des tampons et des réactifs pour la mise en œuvre d’un test ELISA-like ou d’un test Western blot. Avantageusement, une trousse de l’invention peut comprendre en outre au moins un système de référence pour quantifier un ou plusieurs marqueurs. A titre d’exemples, un tel système de référence peut comprendre un ou plusieurs contrôles positifs pour chaque marqueur, un ou plusieurs contrôles négatifs pour chaque marqueur, et/ou une gamme étalon pour chaque marqueur. Selon un autre mode de réalisation, une trousse de l’invention peut comprendre en outre un système de référence de la fonction rénale. A titre d’exemple, une trousse de l’invention peut comprendre des réactifs nécessaires pour réaliser un bilan rénal. Par exemple, une trousse de l’invention peut comprendre des réactifs nécessaires pour faire un dosage de créatininurie. Par ailleurs, la trousse selon l'invention peut comprendre une notice fournissant à son utilisateur des directives pour mettre en œuvre la méthode selon l'invention au moyen de la trousse. L’invention va maintenant être illustrée de manière non-limitative par les exemples suivants. Exemples Matériels et méthodes Les ligands utilisés dans cette partie expérimentale sont les complexes qui ont été synthétisés selon les modalités présentées dans la demande WO/2012/127175 et la demande WO/2021/005167 , notamment le complexe C4 de formule: . Greffage du ligand sur plaque DNA-BIND® L’immobilisation des ligands sur des plaques commerciales 96 puits DNA-BIND ® de Costar a été réalisée. Cette plaque est en polystyrène pré-fonctionnalisé par des fonctions N-oxysuccinimide (NOS). Cette plaque contient 68 x 10 14 NOS/cm 2 . 1) On prépare une solution à 10 -3 M de C4 (PM 2008 g/mol) dans DMSO - eau MilliQ 10/90v/v. 200 µL de cette solution sont déposés dans chaque puits de la microplaque DNA-Bind. La réaction de greffage est effectuée pendant 16h à température ambiante à l’abri de la lumière. 2) Après ce temps de réaction, la solution est retirée des puits et les puits sont rincés plusieurs fois avec 200 µl d’eau MilliQ pendant 48h. Procédure de collecte et acheminement des urines Les urines de donneurs sains et de patients sont collectées dans des pots pour prélèvement. Ils sont anonymisés, placés dans un emballage scellé puis congelés à -20°C dans les 4 heures suivant la collection. Les pots sont stockés à -80°C à leur réception et répertoriés dans un répertoire informatisé. Les prélèvements d’urines sont conservés à -80°C jusqu’à utilisation. Procédure pour la constitution des pools d’urines Dans certaines expériences de la présente invention, les échantillons d’urines de plusieurs patients atteints de la même pathologie sont regroupés avant l’étape d’isolement des vésicules extracellulaires pour obtenir un volume suffisant permettant la réalisation de tous les tests Western-blot et ELISA-like. Les échantillons d’urines à regrouper sont transférés dans un laboratoire de confinement de niveau 2 (L2) où ils sont mis à décongeler pendant toute la nuit à 4°C. Les échantillons d’urines décongelés sont alors homogénéisés par vortex ou retournement selon les volumes dans les pots. Sous un Poste à Sécurité Microbiologique (PSM), les urines sont transférées à l’aide de pipettes à usage unique dans un grand récipient stérile. Le mélange d’urines est ensuite homogénéisé et réparti dans des tubes stériles identifiés. Les volumes répartis peuvent être compris entre 0,25 mL et jusqu’à 45 mL / tube selon l’utilisation ultérieure prévue. Les tubes sont rapidement remis au congélateur à -80°C en vue de leur utilisation ultérieure. Les échantillons d’urines ne sont pas décongelés plus de 2 fois en vue de leur utilisation. Le nombre de patients nécessaire pour un regroupement d’urines peut être différent suivant la pathologie rénale. En effet, certaines tumeurs rénales sont plus fréquentes que d’autres. Isolement de microvésicules à partir de prélèvements d’urines humaines Les échantillons d’urines sont décongelés et l’isolement des microvésicules est effectué par centrifugations différentielles : une première centrifugation est réalisée à 3000g pendant 15 minutes à 4°C afin d’éliminer des débris et agrégats. Le surnageant est centrifugé à 12000g pendant 2 minutes à 4°C. Le surnageant obtenu est centrifugé à 20000g pendant 90 minutes à 4°C afin de sédimenter les microvésicules. Le culot de microvésicules obtenu est lavé par re-suspension dans 1,5 mL de tampon HEPES froid, transféré dans un microtube LoBind ® de 1,5 mL puis centrifugé à 20000g pendant 90 minutes à 4°C. Cette étape de lavage est renouvelée une fois. Le culot de microvésicules obtenu est conservé dans un tampon de HEPES ou de PBS1X selon les besoins. Le tampon HEPES est utilisé pour conserver des microvésicules destinées à un test ELISA-like et d’autres expériences qui ont besoin des microvésicules avec les ligands. Le tampon PBS1X est utilisé pour conserver des microvésicules destinées à des expériences qui ont besoin des microvésicules sans ligand. L’échantillon est conservé à -80°C jusqu’à utilisation. Western blot La première étape consiste en la lyse de microvésicules obtenues. Les échantillons de microvésicules sont décongelés brièvement à température ambiante et ensuite soumis à la centrifugation brève afin de faire tomber les microgouttes des parois. Ajouter un volume de tampon RIPA10X (Ref.ab156034) en fonction du volume de l’échantillon de microvésicules (volume de RIPA est d’environ 1/10 ème du volume de l’échantillon) et ensuite homogénéiser l’échantillon par vortex à la vitesse maximale pendant 10 secondes. L’échantillon est soumis à la centrifugation à 10000g pendant 10 minutes à 4°C. Le surnageant est récupéré dans un tube neuf, dans lequel est ajouté1/10 ème du volume final d’un agent réducteur d’échantillons (Bolt™ Sample Reducing Agent). Un agent dénaturant (4X Laemmli sample buffer, Biorad Ref. 1610747) est ensuite ajouté dans ce tube (volume de tampon Laemmli = volume du tube avant rajout divisé par 3). L’échantillon dans le tube est homogénéisé par vortex à la vitesse maximale pendant 10 secondes. L’échantillon est placé au bain sec chauffant pendant 10 minutes à 95°C et ensuite remis sur glace pour arrêter la réaction. La lyse de microvésicules est ainsi obtenue et prête pour Western blot. Le lysat dénaturé peut être conservé à -80°C avant utilisation. Les lysats dénaturés de microvésicules sont déposés sur gel d’acrylamide en conditions dénaturantes SDS-PAGE à gradient. La migration est réalisée sous tension constante de 120 V pendant 1-2 heures environs (jusqu’à que le front de migration atteigne l’extrémité du bas du gel). Le transfert du gel est effectué sur une membrane de nitrocellulose avec un kit de transfert (Trans-Blot ® Turbo™, BioRad Ref : 1704158). La membrane est saturée par incubation d’environ de 45 minutes à 1h à température ambiante dans une solution de lait 5% ou de BSA 3% dans du tampon TBS-tween 0.1% ou pendant 30 minutes dans un tampon bloquant EveryBlot® Blocking buffer (BioRad Ref : 12010020). Les anticorps primaires sont dilués dans la solution utilisée pour la saturation de la membrane. La membrane saturée est ensuite incubée avec les anticorps dilués pendant une nuit à 4°C. Les dilutions utilisées sont les suivantes : anticorps dirigé contre PODLX (Santacruz, sc-23904) 1/2000 ; anticorps contre la beta-actine (SIGMA, A1978-100UL) 1/5000 ou 1/10000 ; anticorps contre l’annexine-A5 (SIGMA, A8604-100UL) 1/5000 ; anticorps contre CAIX (Abnova, Ab00414-1.1) 1/50; anticorps contre TSG 101 (Santa Cruz Biotechnology, sc-7964) 1/800; anticorps contre EHD4 (Santa Cruz Biotechnology, sc-376373) 1/800; anticorps contre EPS8L2 (Sigma, HPA041143) 1/5000; anticorps contre TROP2 (Biotechne, AF-650-SP) 1/1000. Après trois lavages en tampon TBS-tween 0.1%, les anticorps secondaires couplés à l’enzyme HorseRadish Peroxidase, HRP, et à la dilution 1/5000, sont incubés 1h à température ambiante dans la solution utilisée pour la saturation de la membrane. Après trois lavages en tampon TBS-tween 0.1%, la révélation par chemiluminescence est réalisée en utilisant les réactifs « Western ECL Substrate » (Biorad, Ref :17065060 ou 1705062). Le signal est capté par une caméra CCD. Les photos sont analysées par le logiciel Fiji. Les intensités des bandes sont mesurées sur une même membrane et exposées afin de pouvoir comparer les signaux de différents échantillons à analyser. Les mesures des intensités sont effectuées pour chaque marqueur d’intérêt à l’aide du logiciel Excell afin de corriger les valeurs à celle des marqueurs de normalisation (A5 et/ou TSG 101) détectées par Western Blot. Afin de quantifier les niveaux des marqueurs d’intérêt en fonction du nombre de microvésicules présentes dans un pool d’urines, un ratio « intensité du marqueur d’intérêt / intensité de marqueur de normalisation » est calculé. Les deux pools d’urines à comparer sont traités de façon identique pour pouvoir comparer les valeurs obtenues (même gel de migration, même transfert, même immuno-détection). ELISA-like Les microvésicules resuspendues dans un tampon HEPES après isolement à partir d’urines de patients ou d’individus sains sont déposées dans les puits de la plaque de 96 puits en polystyrène (DNA-BIND® Costar) greffés avec le complexe C4. Une incubation de la plaque est effectuée pendant 1 heure à 37°C en protégeant de la lumière et de l’évaporation. Suite à trois lavages en HEPES, la solution de saturation composée de 5% de protéine « Bovine Serum Albumin» (BSA) en HEPES est déposée dans tous les puits de la plaque et incubée pendant 1 heure à température ambiante à l’abri de la lumière et sous agitation douce. Puis, les anticorps primaires dilués dirigés soit contre un marqueur d’intérêt, soit contre un marqueur de normalisation, sont mis en contact avec les microvésicules captées dans les puits pendant 2h à température ambiante sous agitation horizontale douce et à l’abri de la lumière. Suite à trois lavages, si nécessaire, la plaque est ensuite incubée avec les anticorps secondaires conjugués (avec l’enzyme HRP en détection par colorimétrie et chémiluminescence ou avec un fluorochrome en détection par fluorescence) et dilués en HEPES +BSA pendant 1h à température ambiante sous agitation horizontale douce et à l’abri de la lumière. Après trois lavages, une détection est réalisée : lecture directe en cas de fluorescence ou par le biais d’un substrat de l’enzyme HRP (colorimétrique ou chémiluminescent). Dans ce dernier cas, à titre d’exemple 100 µL de révélateur chromogène TMB (3,3’,5,5’-tétraméthylbenzidine) sont déposés dans les puits pour une durée de 30 minutes à température ambiante sous agitation horizontale douce et à l’abri de la lumière. La réaction est stoppée par l’ajout de 50 µL d’acide sulfurique à 2M et l’absorbance de chaque puit est mesurée à l’aide d’un spectrophotomètre à 450nm. Le contrôle utilisé dans ce test ELISA-like peut être : 1) un tampon HEPES sans microvésicules lorsque l’anticorps de détection du marqueur est directement couplé au système de révélation ; 2) tout le système de détection en omettant l’anticorps primaire lorsqu’on utilise un anticorps secondaire couplé au système de révélation. Ceci permet d’enregistrer le bruit de fond. Les anticorps primaires conjugués avec l’enzyme HRP utilisés dans les expériences sont contre PODLX (SANTA CRUZ, sc-23904 HRP), EPS8L2 (ABCAM, ABIN7360859), EHD4 (SANTA CRUZ, sc-376373 HRP), et TROP2 (Bio-Techne, NBP2-89494H), respectivement. Les anticorps primaires non conjugués avec l’enzyme HRP utilisés dans les expériences sont contre PODLX (SANTA CRUZ, sc-23904), Annexine 5 (Sigma, A8604), et CAIX (SANTA CRUZ sc-365900 et Abnova Ab00414-1.1), respectivement. Un anticorps secondaire conjugué avec l’enzyme HRP (BioRAD , #1706516) est également utilisé. Exemple 1 : Surexpression des marqueurs chez les patients atteint du cancer du rein Afin de déterminer quels marqueurs pourraient être utilisés pour le diagnostic et le pronostic d'un cancer du rein, des expériences préalables de détermination du protéome, notamment par spectrométrie de masse, dans ou à la surface de microvésicules capturées dans des échantillons d'urine ont été mises en œuvre. A partir de ces expériences, les inventeurs ont choisi de focaliser plus particulièrement leur attention sur les protéines PODLX, CAIX, EHD-4, et TROP2. Les inventeurs ont également retenu le marqueur EPS8L2 déjà décrit dans l'état de l'art. Un pool d’urines de 10 sujets sains et un pool d’urine de 10 patients atteints d’un carcinome à cellules rénales claires (ccRCC) sont constitués. Des microvésicules dans les pools d’urines sont isolées selon le protocole décrit dans la partie « Matériels et Méthodes ». Après la lyse des microvésicules capturées, l’analyse par Western blot est effectuée afin de détecter et quantifier les marqueurs PODLX, CAIX, EHD-4, TROP2 et EPS8L2. Afin de quantifier ces marqueurs en fonction du nombre de microvésicules présentes dans un pool d’urines, les intensités des marqueurs d’intérêt sont rapportées à celles des marqueurs de normalisation, à savoir Annexin 5 (A5) ou TSG 101 ( FIG. 1 ). Les résultats sont montrés dans les figures 1B, 1C, 1D, 1E et 1F. Nous pouvons constater que le niveau d’un marqueur d’intérêt évalué quel que soit le marqueur de normalisation (A5 ou TSG 101) est constant. Nous observons une nette augmentation de niveaux de marqueurs PODLX, CAIX, EHD-4 et TROP2 chez les patients atteints de ccRCC par rapport aux sujets sains ( FIG. 1 , C, D et E). En revanche, le niveau de EPS8L2 chez les patients atteints de ccRCC n’est pas modifié de manière significative par rapport au niveau chez les sujets sains ( FIG. 1 ) Afin de quantifier les niveaux d’expression des marqueurs d’intérêt, 7 expériences indépendantes ont été réalisées sur 2 pools d’urines de patients atteints de ccRCC pour les marqueurs PODLX, EHD4, TROP2 et EPS8L2 et 2 expériences indépendantes ont été réalisées sur 1 pool d’urines de patients atteints de ccRCC pour le marqueur CAIX. Les niveaux de PODLX, EHD4, TROP2, EPS8L2 et CAIX sont également mesurés dans un pool d’urines de sujets sains. Chaque pool est constitué d’urines provenant de 20 individus. Les résultats sont rapportés soit à TSG 101 soit à A5 (voir figures 2A ou 2B). Quel que soit le marqueur de normalisation choisi, nous observons toujours une surexpression de PODXL, EHD4, TROP2 et CAIX pour les patients atteints de ccRCC par rapport aux sujets sains. En revanche, le niveau de EPS8L2 chez les patients atteints de ccRCC n’est pas modifié de manière significative par rapport à celui chez les sujets sains. Ces expériences valident les marqueurs PODLX, CAIX, EHD-4 et TROP2 comme les marqueurs permettant de diagnostiquer un carcinome du rein à cellules claires (ccRCC). De manière surprenante, ces résultats montrent également que le marqueur EPS8L2 ne permet pas un diagnostic d'un cancer du rein, lorsqu'il est quantifié à partir de microvésicules rénales. Ainsi, les inventeurs ont mis en évidence un ensemble de marqueur dont la pertinence diagnostique n'avait pas été rapportée dans l'état de la technique. Example 2 : Surexpression des marqueurs dans différents sous-types de cancers du rein Les expériences rapportées dans cet exemple ont été mises en œuvre afin de déterminer si les niveaux de PODLX, CAIX, EHD-4 et TROP2 varient en fonction du sous-type histologique des tumeurs du rein. Les pools d’urines de patients atteints d’un même type de tumeur du rein ont été constitués. Il s’agit d’un pool d’urines de 3 patients atteints d’une tumeur bénigne oncocytome, un pool d’urines de 5 patients atteints d’un RCC papillaire, un pool d’urines de 5 patients atteints d’un RCC chromophobe, et un pool d’urines de 10 patients atteints d’un ccRCC. Un pool d’urines de sujets sains est également constitué. Les niveaux de PODLX, CAIX, EHD-4 et TROP2 dans ces cinq pools d’urines sont évalués par Western blot. Les niveaux de ces marqueurs chez les patients atteints de différents types de cancers de rein sont comparés à ceux chez les sujets sains. Les résultats sont montrés dans les figures 3A et 3B. D’abord, nous constatons que seuls les niveaux de PODXL, EHD4 et TROP2 augmentent chez les patients atteints d’un oncocytome (une tumeur bénigne), alors que les niveaux d’au moins CAIX, EHD-4 et TROP2 augmentent tous chez les patients atteints de RCC quel qu’en soit le type. En revanche, le niveau de surexpression respective des quatre marqueurs varie selon le sous-type histologique des tumeurs rénales (ccRCC, RCC chromophobe, ou RCC papillaire) : la surexpression de TROP2 chez les patients atteints de ccRCC est plus importante que celle de PODLX, EHD4 et CAIX ; la surexpression de EHD4 chez les patients atteints de RCC chromophobe est plus importante que celle de TROP2 et de CAIX ; et la surexpression du niveau de TROP2 et EHD4 chez les patients atteints de RCC papillaire est plus importante que celle de PODLX et CAIX. Cette variation unique des niveaux d’expression de quatre marqueurs dans chaque sous-type de RCC constitue une signature moléculaire permettant de diagnostiquer les sous-types de RCC. Ces résultats montrent que les marqueurs identifiés permettent de réaliser un diagnostic différentiel des différents sous-types de tumeurs rénales. Example 3 : Surexpression des marqueurs chez les patients avec différents stades de carcinome rénal à cellules claires Les niveaux de PODLX, CAIX, EHD-4 et TROP2 sont quantifiés par Western blot dans un pool d’urines de 10 sujets sains, un pool d’urines de 3 patients atteints de ccRCC de stade pT1 et un pool d’urines de 3 patients atteints de ccRCC de stade pT3. Les niveaux d’expression de PODLX, CAIX, EHD-4 et TROP2 chez les patients de stade pT3 sont tous plus importants que les niveaux de ces marqueurs chez les patients de stade pT1 ( FIG. 4 ). Ce résultat suggère une relation entre les niveaux d’expression de PODLX, CAIX, EHD-4 et TROP2 et le stade ainsi que l’agressivité de la maladie. Exemple 4 : détection/quantification des marqueurs par kit ELISA-like Un pool d’urines de 10 sujets sains et un pool d’urines de 10 patients atteints de carcinome à cellules rénales claires (ccRCC) sont constitués. Les microvésicules dans les pools d’urines sont isolées selon le protocole décrit dans la partie « Matériels et Méthodes ». Les marqueurs d’intérêt PODLX, EHD-4 et TROP2, ainsi que le marqueur de normalisation A5, sont quantifiés respectivement par un kit ELISA-like selon le protocole décrit dans la partie « Matériels et Méthodes ». Afin de pouvoir comparer les valeurs obtenues par ELISA-like, un marqueur d’intérêt et un marqueur de normalisation ou de référence sont mesurés en même temps pour un pool d’urines de patients et un pool d’urines de sujets sains, sur une même plaque ELISA. Les valeurs obtenues d’un marqueur détecté par ELISA-like sont normalisés par rapport aux valeurs obtenues par ELISA-like de l’A5 comme marqueur de référence. L’expression d’un marqueur est représentée par un ratio marqueur d’intérêt/A5 multiplié par 100. Les résultats présentés dans la FIG. 5 montrent que le test ELISA-like, comme le test Western blot, permettent de détecter et quantifier les niveaux de PODLX, EHD-4 et TROP2 chez les patients atteints d’un carcinome du rein à cellules claires (ccRCC). Les résultats présentés dans la FIG. 6 montrent que le test ELISA-like, comme le test Western blot, permettent de détecter et quantifier les niveaux de CAIX chez les patients atteints d’un carcinome du rein à cellules claires (ccRCC) à des stades pT1 et pT3. Méthode in vitro pour le diagnostic et/ou le pronostic du cancer du rein chez un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : - déterminer les niveaux des marqueurs anhydrase carbonique IX (CAIX), podocalyxine (PODLX), protéine 4 contenant le domaine EH (EHD4) , et transducteur 2 du signal calcique associé aux tumeurs (TROP2) dans des vésicules extracellulaires présentes dans un échantillon d'urine provenant dudit sujet, - comparer les niveaux de ces quatre marqueurs avec des niveaux de référence de ces marqueurs. Méthode selon la revendication 1, dans laquelle ledit cancer du rein est un carcinome à cellules rénales ou un oncocytome. Méthode selon la revendication 2, dans laquelle ledit carcinome à cellules rénales est un carcinome rénal à cellules claires, un carcinome rénal à cellules chromophobes, ou un carcinome rénal papillaire. Méthode selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les niveaux de référence des marqueurs sont des niveaux mesurés dans des échantillons provenant de sujets sains. Méthode selon la revendication 4 pour le diagnostic de l’oncocytome, dans laquelle l’augmentation des niveaux de EHD4, TROP2 et PODLX et l’absence de changement des niveaux de CAIX indique la présence d'un oncocytome. Méthode selon la revendication 4 pour le diagnostic d’un carcinome à cellules rénales, dans laquelle l’augmentation des niveaux d’au moins de TROP2, EHD4 et CAIX indique la présence d'un carcinome à cellules rénales. Méthode selon la revendication 6 pour le diagnostic d'un carcinome rénal à cellules claires, dans laquelle une augmentation plus importante du niveau de TROP2 par rapport aux augmentations de PODLX, EHD4 et CAIX indique la présence du carcinome rénal à cellules claires. Méthode selon la revendication 6 pour le diagnostic d'un carcinome rénal à cellules chromophobes, dans laquelle une augmentation plus importante des niveaux de EHD4, par rapport aux augmentations de TROP2 et CAIX et l’absence de changement des niveaux de PODLX indique la présence du carcinome rénal à cellules chromophobes. Méthode selon la revendication 6 pour le diagnostic d'un carcinome à cellules rénales papillaires, dans laquelle une augmentation plus importante du niveau de TROP2 et EHD4 par rapport à celle de CAIX et PODLX indique la présence du carcinome rénal papillaire. Méthode selon l’une quelconque des revendications 1 à 3 pour déterminer le stade d’un cancer du rein, notamment d’un carcinome rénal à cellules claires, dans laquelle les niveaux de référence des marqueurs sont des niveaux prédéterminés dans des échantillons d’urines provenant de patients avec un stade de cancer du rein confirmé. Méthode selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les niveaux de PODLX, EHD4, TROP2 et CAIX dans un échantillon sont déterminés par rapport au niveau d’un marqueur de normalisation, notamment l’Annexine 5 (A5) ou la protéine TSG-101, mesuré dans le même échantillon. Méthode selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les niveaux de PODLX, EHD4, TROP2 et CAIX sont déterminés par des techniques immunologiques, notamment la technique d’ELISA. Méthode selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle des vésicules extracellulaires présentes dans ledit échantillon sont capturées au moyen d'un support solide sur la surface duquel est greffé un ligand capable de se lier aux microvésicules. Méthode selon la revendication 13, dans laquelle ledit ligand est un composé de formule (I) ou (II) suivante : (I) (II) dans laquelle - M +i représente un ion métallique et i est 1, 2 ou 3 ; - L représente un ligand échangeable ; - X représente un groupe –(CH 2 ) m –NH 2 , ou un groupe –CH 2 –NHC(O)–R–NH 2 dans lequel R est un groupe alkyle en C 2 -C 10, en particulier en C 5 -C 10 , substitué ou non substitué, linéaire ou ramifié ; - m = 1 à 12 ; - n = 1, 2 ou 3 ; et - Y représente H ou (CH 2 ) p -NH 2 , où p = 0 à 12 ; ou - un composé comprenant au moins un groupement, de préférence au moins deux groupements, de formule (III) (III) dans laquelle M est un cation métallique choisi de préférence dans le groupe constitué par Zn 2+ , Mn 2+ , Co 2+ , Ni 2+ , Cu 2+ and Fe 2+ . Trousse comprenant : un support solide sur la surface duquel est greffé un ligand capable de se lier aux vésicules extracellulaires ; et des moyens de détection ou de quantification de PODLX, EHD4, TROP2 et CAIX. Trousse selon la revendication 15, comprenant en outre des moyens de détection ou de quantification d'un marqueur de normalisation, notamment l’Annexine 5 (A5) ou la protéine TSG-101. Trousse selon la revendication 15 ou 16, dans laquelle ledit ligand est un composé de formule (I), (II) ou (III) telle que décrit dans la revendication 14. Trousse selon l’une quelconque des revendications 15-17, comprenant : un support solide sur la surface duquel est greffé le ligand C4 C4, un anticorps spécifique dirigé contre PODLX, un anticorps spécifique dirigé contre EHD4, un anticorps spécifique dirigé contre TROP2, un anticorps spécifique dirigé contre CAIX, et un anticorps spécifique dirigé contre TSG-101 et/ou un anticorps spécifique contre A5. Trousse selon l’une quelconque des revendications 15-18, comprenant en autre au moins un système de référence pour quantifier les marqueurs, tel qu’un contrôle positif pour chaque marqueur, un contrôle négatif pour chaque marqueur, et/ou une gamme étalon pour chaque marqueur, et/ou un système de référence de la fonction rénale, tel qu’un dosage biologique type créatinine.