Brevet FR3158432A1 — publié le 20250725

La présente invention concerne des compositions solides comprenant une neurotoxine de Clostridium botulinum de sérotype A (BoNT/A) et de l’albumine sérique humaine (HSA), les compositions solides comprenant une faible quantité d’agrégats de HSA. La présente invention concerne en outre des procédés de production de compositions solides comprenant une BoNT/A et de la HSA par séchage d’une solution comprenant une BoNT/A de sorte que la solution ne subit pas de congélation lors du séchage. Figure pour l’abrégé : 2A Compositions de neurotoxine de clostridium botulinum de sérotype A et processus de séchage ameliorés RÉFÉRENCE CROISÉE AUX DEMANDES APPARENTÉES La présente demande revendique le bénéfice de la demande provisoire U.S. No. 63/623 130, déposée le 19 janvier 2024. RÉFÉRENCE À UNE LISTE DE SÉQUENCES SOUMISE PAR VOIE ÉLECTRONIQUE La présente demande incorpore par référence une liste de séquences déposée avec la demande comme fichier XML intitulé « ABV21538 FR L2_SEQLISTING.xml », créé le 3 janvier 2024 et ayant une taille ayant une taille de 7 270 octets. 1. DOMAINE La présente invention concerne des compositions solides comprenant une neurotoxine de Clostridium botulinum de sérotype A (BoNT/A) et de l’albumine sérique humaine (HSA), les compositions solides comprenant une faible quantité d’agrégats de HSA. La présente invention concerne en outre des procédés de production de compositions solides comprenant une BoNT/A et de la HSA par séchage d’une solution comprenant une BoNT/A de sorte que la solution ne subit pas de congélation lors du séchage. 2. ARRIÈRE-PLAN Une neurotoxine de Clostridium botulinum de sérotype A (BoNT/A) est une toxine très puissante qui provoque la relaxation musculaire par inhibition de l’amarrage et de la fusion des vésicules synaptiques, bloquant ainsi la libération de l’acétylcholine au niveau des jonctions neuromusculaires. Une BoNT/A est produite par des souches de Clostridium botulinum de type A par synthèse d’un complexe d’une neurotoxine de 150 kDa conjointement avec un groupe de protéines non toxiques associées (NAP). Le BOTOX ® , ou onabotulinumtoxinA, est un produit de BoNT/A qui a été approuvé en 1989 aux États-Unis par la Food and Drug Administration (FDA) pour une variété d’indications thérapeutiques et cosmétiques. De nombreuses étapes sont mises en œuvre lors de la fabrication de compositions pharmaceutiques à base de protéines destinées à des applications biopharmaceutiques. Des paramètres impliqués dans certaines étapes de fabrication peuvent avoir des conséquences sur les propriétés ou fonctionnalités des protéines. Il existe encore aujourd’hui un besoin pour l’élaboration de compositions pharmaceutiques de toxines botuliques présentant des propriétés améliorées. La citation d’une référence ici ne sera pas interprétée comme une reconnaissance de l’antériorité de cette référence par rapport à la présente description. 3. RÉSUMÉ DE L’INVENTION La présente description concerne de nouvelles compositions solides comprenant une neurotoxine de Clostridium botulinum de sérotype A (BoNT/A) présentant des propriétés avantageuses, ainsi que de nouveaux procédés de production de telles compositions. Plus spécifiquement, la présente description concerne des compositions solides comprenant une neurotoxine de Clostridium botulinum de sérotype A (BoNT/A) et de l’albumine sérique humaine (HSA), les compositions solides comprenant une faible quantité d’agrégats de HSA. La présente description concerne également des procédés de production de compositions solides comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans lesquels les procédés comprennent une étape de séchage d’une solution comprenant une BoNT/A et de la HSA afin de produire ladite composition solide, dans lesquels la solution ne subit pas de congélation lors de l’étape de séchage. La présente description concerne en outre des compositions solides qui sont produites par un tel procédé. La HSA a été utilisée comme excipient dans des formulations thérapeutiques à base de protéines pour améliorer la stabilité et la résistance aux stress externes, par exemple, en empêchant l’agrégation, l’oxydation et l’adsorption de surface. La HSA est un stabilisant particulièrement important dans la formulation de BOTOX ® à dosage élevé et à faible volume de remplissage, compte tenu de sa capacité à réduire potentiellement le mauvais repliement et l’agrégation de BoNT/A en partie grâce à sa propriété de recouvrement de surface. En dehors de tout lien avec une théorie quelconque, la présente description enseigne que la congélation lors du séchage conduit, de manière inattendue, à une augmentation significative de la quantité d’agrégation de la HSA dans une composition solide de BoNT/A par comparaison au séchage sans congélation, que certaines mesures peuvent être utilisées pour éviter la congélation pendant le séchage sous vide de compositions de BoNT/A, et que des compositions solides de BoNT/A séchées sans subir de congélation présentent des propriétés avantageuses telles qu’une qualité visuelle constante du produit et une baisse d’activité beaucoup plus lente pendant le stockage, par exemple, à température ambiante ou plus. Par conséquent, la présente invention propose de nouvelles compositions solides comprenant une BoNT/A et une faible quantité d’agrégats de HSA ainsi que des procédés de fabrication avec un processus de séchage amélioré pour l’obtention de telles compositions solides. Selon un aspect, il est proposé une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle le pourcentage d’agrégats de HSA, de polymère de HSA, d’oligomère de HSA ou de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est réduit. L’invention propose spécifiquement une composition solide comprenant un complexe de BoNT/A de 900 kDa, de la HSA et du chlorure de sodium (NaCl), dans laquelle la HSA comprend un monomère de HSA et des agrégats de HSA, dans laquelle au moins une partie de la HSA est sous la forme de HSA soluble lorsque la composition solide est reconstituée dans un milieu aqueux, et dans laquelle moins de 34 % de HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA. Il est également proposé un procédé de production d’une composition solide comprenant un complexe de BoNT/A de 900 kDa, de la HSA et du NaCl, ledit procédé comprenant une étape de séchage d’une solution comprenant une BoNT/A, de la HSA et du NaCl afin de produire ladite composition solide, dans lequel la solution ne subit pas de congélation lors de l’étape de séchage. Selon un autre aspect, il est proposé une composition solide produite par un procédé décrit ici. Selon un autre aspect, il est proposé un procédé de traitement d’un patient le nécessitant, comprenant l’administration d’une composition solide décrite ici. 4. BRÈVE DESCRIPTION DES FIGURES FIG. 1 Copie d’une partie du certificat d’analyse d’un lot de HSA, CSL Behring. FIG. 2 Données représentatives d’un cycle de séchage sous vide. La température du produit (lot n o 4) a été mesurée par des sondes de température Ellab FIG. 2 Données représentatives de cycles de lyophilisation. La température du produit (lot n o 9) a été mesurée par des sondes de température Ellab. FIG. 3 , FIG. 3 , FIG. 3 Chromatogrammes SEC représentatifs de la HSA avec différents procédés de détection : fluorescence (excitation 280 nm/émission 350 nm) ( FIG. 3 ), UV 280 nm ( FIG. 3 ) et UV 220 nm ( FIG. 3 ). FIG. 4 Chromatogrammes SEC représentatifs de produits reconstitués produits par séchage sous vide (procédé 1), par lyophilisation (procédé 2) et par lyophilisation avec stockage pré-filtration et post-filtration (procédé 3) (détecteur UV 220 nm). L’encart montre un graphique représentant le pourcentage d’agrégation sous la forme de polymère de HSA (barres de gauche) et de dimère de HSA (barres de droite) dans trois échantillons de produit fini (lots n o 7, n o 9 et n o 4) et dans la HSA « pure » (lot n o 1). FIG. 4 Chromatogrammes SEC représentatifs de produits reconstitués produits par séchage sous vide (procédé 1), par lyophilisation (procédé 2) et par lyophilisation avec stockage pré-filtration et post-filtration (procédé 3) (détecteur UV 280 nm). L’encart montre un graphique représentant le pourcentage d’agrégation sous la forme de polymère de HSA (barres de gauche) et de dimère de HSA (barres de droite) dans trois échantillons de produit fini (lots n o 7, n o 9 et n o 4) et dans la HSA « pure » (lot n o 1). FIG. 4 Chromatogrammes SEC représentatifs de produits reconstitués produits par séchage sous vide (procédé 1), par lyophilisation (procédé 2) et par lyophilisation avec stockage pré-filtration et post-filtration (procédé 3) (détecteur de fluorescence). L’encart montre un graphique représentant le pourcentage d’agrégation sous la forme de polymère de HSA (barres de gauche), d’oligomère de HSA (barres du milieu) et de dimère de HSA (barres de droite) dans trois échantillons de produit fini (lots n o 7, n o 9 et n o 4) et dans la HSA « pure » (lot n o 1). FIG. 5 , FIG. 5 , FIG. 5 , FIG. 5 , FIG. 5 , FIG. 5 , FIG. 5 Agrégation de HSA totale déterminée par SEC dans les lots de produit fini fabriqués avec 3 procédés de production (par séchage sous vide ( soit « état de référence, pas de stockage intermédiaire, pas de congélation »), par lyophilisation ( soit « stress, congélation uniquement »), et par lyophilisation avec stockage de la solution préalablement au séchage ( soit « stress, stockage intermédiaire à température ambiante et congélation »)). Les données pour les lots de HSA pure sont également incluses. Les figures 5A, 5C et 5E présentent les graphiques obtenus respectivement avec un détecteur UV 220 nm, un détecteur UV 280 nm, et un détecteur de fluorescence. Les figures 5B, 5D et 5F présentent les valeurs des données correspondantes obtenues respectivement avec un détecteur UV 220 nm, un détecteur UV 280 nm, et un détecteur de fluorescence. Les données de certains lots sont présentées à la FIG. 5 . FIG. 6 , FIG. 6 Résultats de comptage de particules pour trois lots placebo produits à l’aide de différents procédés de fabrication. FIG. 6 : Un nombre moyen de particules par image est représenté. Solution saline (à gauche, n = 1), état de référence ( soit séchage sous vide, deuxième à partir de la gauche, n = 5, lot n o 6), après soumission à un stress (stockage intermédiaire à température ambiante et congélation) (deuxième à partir de la droite, n = 4, lot n o 11), après soumission à un stress (congélation uniquement) (à droite, n = 4, lot n o 8). FIG. 6 : Représentation des distributions de taille de particules (résultats moyens). Solution saline, état de référence ( soit séchage sous vide, lot n o 6), après soumission à un stress (stockage à température ambiante et congélation) (lot n o 11), après soumission à un stress (congélation uniquement) (lot n o 8). FIG. 7 Modifications de pH et de température pendant la congélation et le séchage par évaporation de la solution placebo. La flèche bleue dans le présent graphique indique la température de la cristallisation NaCl*2 H 2 O + eau comme observé dans une expérience de diffusion de rayons X aux grands angles (WAXS pour « wide-angle X-ray scattering » en anglais) menée séparément. FIG. 7 Modifications de pH pendant le séchage par évaporation de la solution placebo. FIG. 8 Motifs de diffraction WAXS pendant le refroidissement d’une solution placebo aqueuse NaCl 0,9 %/HSA 0,5 %. Flèche : trace de NaCl*2 H 2 O. FIG. 8 Motifs de diffraction WAXS pendant le refroidissement d’une solution placebo aqueuse NaCl 0,9 %. FIG. 8 Images de diffraction SAXS pendant le refroidissement d’une solution NaCl 0,9 %/HSA0,5 %. FIG. 9 Images représentatives par MEB obtenues à deux grossissements. Les zones sombres représentent la HSA, et les zones plus claires correspondent au NaCl ou au NaCl + HSA. De gauche à droite : séchage sous vide (procédé 1), lyophilisation (procédé 2) et lyophilisation avec stockage pré-séchage (procédé 3). FIG. 10 Motifs de diffraction des rayons X de lots placebo séchés. Courbe de dessous : séchage sous vide (procédé 1, lot n o 6), courbe de dessus : lyophilisation avec stockage pré-séchage (procédé 3, lot n o 11). Les positions des pics des lots placebo et de NaCl (USP, J.T. Baker, lot 0000207378) sont fournis dans l’encart. FIG. 11 Données de stabilité relatives au test d’activité dans des conditions de stockage à 25 °C. Courbe supérieure dans chaque vue : procédé 1, séchage sous vide. Courbe inférieure dans chaque vue : procédé 3, lyophilisation + stockage intermédiaire. Vue de dessus : vue fusionnée. Vue de dessous : vue éclatée. 5. DESCRIPTION DÉTAILLÉE La présente invention propose des compositions solides comprenant une BoNT/A et de la HSA présentant des propriétés améliorées ainsi que des procédés de fabrication avec un processus de séchage amélioré pour l’obtention de telles compositions solides. D’autres avantages de la présente description apparaîtront à la personne du métier. Les modes de réalisation et aspects présentés dans la présente description sont destinés à illustrer l’invention et ne doivent pas être considérés comme limitant la portée de l’invention. 5.1. Définitions Le terme « et/ou » tel qu’utilisé dans une expression telle que « A et/ou B » est ici destiné à signifier « A et B », « A ou B », « A » ou « B ». Les termes « environ » et « approximativement » désignent généralement une plage de nombres que la personne du métier considérera équivalents à la valeur citée ( à savoir ayant la même fonction ou le même résultat). Dans de nombreux cas, les termes « environ » et « approximativement » peuvent comporter des nombres qui sont arrondis au chiffre significatif le plus proche. Dans des modes de réalisation spécifiques, les termes « environ » et « approximativement » doivent être interprétés de façon à permettre une variation jugée comme normale par une personne du métier, comme, par exemple, une variation de l’ordre de 20 % ou 10 % ou 5 %. Dans des modes de réalisation spécifiques, les termes « environ » et « approximativement » englobent la valeur exacte énoncée. Les expressions « exempt de produits d’origine animale » (« APF » pour « animal product free » en anglais) ou « sensiblement exempt de produits d’origine animale » englobent, respectivement, l’absence ou l’absence substantielle de produits ou de composés dérivés du sang, issus de pools sanguins ainsi que d’autres produits ou composés dérivés d’animaux. Le terme « animal » exclut les micro-organismes, tels que les bactéries. Ainsi, un milieu ou un procédé APF ou un milieu ou un procédé sensiblement APF dans le cadre de la présente invention peuvent inclure une toxine botulique ou une bactérie de Clostridium botulinum . Par exemple, un procédé APF ou un procédé sensiblement APF désigne un procédé qui est soit sensiblement exempt soit principalement soit entièrement exempt de protéines d’origine animale, telles que : immunoglobulines, digestat de viande, sous-produits de viande et lait, produits laitiers ou digestats. Par « neurotoxine de Clostridium botulinum de sérotype A » ou « BoNT/A », il est fait référence à une neurotoxine produite par des souches de type A de Clostridium botulinum . Une telle souche de type A de Clostridium botulinum est la souche de type A nommée Hall, par exemple la souche Hall de type A (Allergan). cf. Zhang et al . (2003) Gene 315:21. BoNT/A englobe à la fois un complexe de BoNT/A ( par exemple , les complexes de 300, 500, 760 et 900 kDa) ainsi que la toxine BoNT/A pure ( c’est-à-dire la molécule neurotoxique d’environ 150 kDa). Par « complexes de BoNT/A », il est fait référence à des complexes de neurotoxine de Clostridium botulinum de sérotype A comprenant une molécule de BoNT/A (le composant neurotoxique) et une ou plusieurs protéines hémagglutinantes (HA) et/ou protéines non-toxiques et non-hémagglutinantes (NTNH). Les complexes de BoNT/A peuvent être, par exemple , sous les formes suivantes : complexes d’environ 900 kDa, 760 kDa, 500 kDa ou 300 kDa. Dans un mode de réalisation, le complexe de BoNT/A est sous la forme d’un complexe d’environ 900 kDa comprenant une molécule de BoNT/A d’environ 150 kDa, les protéines hémagglutinantes HA70, HA34 et HA17, et des protéines non-toxiques et non-hémagglutinantes (NTNH). Dans un mode de réalisation, le complexe de BoNT/A est une forme sensiblement complète du complexe de BoNT/A de 900 kDa. Dans un mode de réalisation, le complexe de BoNT/A est l’onabotulinumtoxinA. Par « neurotoxine de Clostridium botulinum de sérotype A de 150 kDa » ou « BoNT/A de 150 kDa » il est fait référence à une neurotoxine d’environ 150 kDa obtenue à partir d’une culture d’une souche de type A de Clostridium botulinum ( par exemple , la souche Hall de Clostridium botulinum ). Les séquences préférées de toxine botulique de type A (BoNT/A) de 150 kDa utilisées dans le cadre de la présente description sont indiquées dans le tableau 1. Par exemple, dans un mode de réalisation, la BoNT/A de 150 kDa utilisée dans le cadre de la présente description comprend ( par exemple , consiste en) une chaîne légère ayant une séquence d’acides aminés présentée dans la SEQ ID NO. 2 et une chaîne lourde ayant une séquence d’acides aminés présentée dans SEQ ID NO. 3, avec des ponts disulfures situés entre les positions 429 et 453 et entre les positions 1234 et 1279. Le terme « composition de BoNT/A » se réfère à toute composition comprenant une BoNT/A et englobe à la fois des compositions solides et des compositions liquides. Dans certains modes de réalisation, une composition de BoNT/A ( par exemple , une composition solide ou une composition liquide) décrite ici est une composition pharmaceutique. Dans des modes de réalisation particuliers, une composition de BoNT/A ( par exemple , une composition solide ou une composition liquide) décrite ici est un produit fini de médicament ( c’est-à-dire , une forme pharmaceutique finie). Dans un mode de réalisation préféré, une composition de BoNT/A décrite ici est sous la forme de poudre ( par exemple , poudre séchée sous vide). Le terme « vecteur » utilisé en relation avec un excipient pharmaceutique désigne tout solvant, milieu de dispersion, conservateur, enrobage, agent retardateur d’absorption et agent isotonique, et tout élément assimilé, qui est compatible avec une administration pharmaceutique. Les termes « patient », « sujet », « individu » et analogues désignent l’être humain. Le terme « composition pharmaceutique » désigne une formulation dans laquelle un principe actif peut être une BoNT/A. Le mot « formulation » signifie qu’il y a au moins un ingrédient supplémentaire (tel que par exemple, mais sans s’y limiter, une albumine (telle qu’une albumine sérique humaine (HSA) ou une albumine humaine recombinante) et/ou du chlorure de sodium) dans la composition pharmaceutique en plus d’un principe actif de BoNT/A. L’excipient d’albumine sérique humaine peut être dérivé de plasma humain ou produit par voie recombinante. Une composition pharmaceutique est donc une formulation appropriée à des fins de diagnostic et d’administration thérapeutique et/ou cosmétique ( par exemple , par injection intramusculaire ou sous-cutanée ou par insertion d’une forme retard ou d’un implant) à un sujet, tel qu’un patient humain. Dans un mode de réalisation, le principe actif est l’onabotulinumtoxinA. Des procédés donnés à titre d’exemple pour formuler une composition pharmaceutique à principe actif de BoNT/A sont décrits dans la demande de brevet US publiée 2003/0118598, déposée le 5 novembre 2002. Dans un mode de réalisation préféré, une composition pharmaceutique décrite ici est sous une forme séchée ( par exemple , une forme séchée sous vide). Les compositions pharmaceutiques peuvent être séchées sous vide et appropriées à une administration par injection soit sous-cutanée soit intra-musculaire après reconstitution avec une solution saline normale, comprenant une BoNT/A de 900 kDa, de l’albumine sérique humaine (HSA), et du chlorure de sodium. Préférentiellement, de telles compositions pharmaceutiques comprennent 0,5 mg de HSA et 0,9 mg de chlorure de sodium pour 100 unités de BoNT/A. Plus préférentiellement, de telles compositions pharmaceutiques comprennent 50, 100 ou 200 unités de BoNT/A. Une « unité » ou « U » se réfère à la dose létale DL 50 ou à la dose déterminée par un test d’activité sur cellules (CBPA pour « cell-based potency assay » en anglais). La dose létale DL 50 est définie comme la quantité de BoNT/A qui cause la mort de 50 % d’une population de souris ayant reçu des injections de BoNT/A. La dose CBPA est déterminée comme décrit dans les brevets US 8 618 261, 8 198 034, 9 249 216, 10 703 806, 11 261 240 et 11 332 518. Sauf si le contexte s’y oppose, les termes « comprennent », « comprend » et « comprenant » sont utilisés sur la base et la compréhension claire qu’ils doivent être interprétés inclusivement, plutôt qu’exclusivement, de sorte qu’ils indiquent l’inclusion de la caractéristique citée, mais sans exclure une ou plusieurs autres caractéristiques de ce type. Cependant, il convient de comprendre que partout où les aspects et modes de réalisation sont décrits ici avec le terme « comprennent » (ou « comprend » ou « comprenant »), des aspects autrement analogues décrits en termes de « constitués de » (ou « consiste en » ou « constitué de ») et/ou « constitué principalement de » (ou « consiste principalement en » ou « constitué principalement de ») sont également fournis. 5.2. Neurotoxine de Clostridium Botulinum de sérotype A (BoNT/A) Une bactérie de l’ordre des Clostridiales peut produire des complexes de toxine botulique de type A sous diverses formes, qui incluent, mais sans s’y limiter, des complexes de 900 kDa, 760 kDa, 500 kDa et 300 kDa (masses moléculaires approximatives). Dans un mode de réalisation, la BoNT/A décrite ici est présente comme un complexe de BoNT/A de 900 kDa. Dans un mode de réalisation, la BoNT/A décrite ici est présente comme un complexe de BoNT/A de 900 kDa formé par la molécule de BoNT/A de 150 kDa et les protéines hémagglutinantes HA70, HA34 et HA17, et des protéines non-toxiques et non-hémagglutinantes (NTNH). Dans un mode de réalisation particulier, la BoNT/A décrite ici ( par exemple le complexe de BoNT/A de 900 kDa) est produite à partir d’une souche de Clostridium botulinum de type A. Dans un mode de réalisation particulier, la BoNT/A décrite ici ( par exemple le complexe de BoNT/A de 900 kDa) est produite à partir d’une souche Hall de Clostridium botulinum de type A. Dans un mode de réalisation préféré, la BoNT/A décrite ici est l’onabotulinumtoxinA. Dans un mode de réalisation, la molécule de BoNT/A de 150 kDa apte à être utilisée dans le cadre de la présente description a une séquence représentée dans le tableau 1. Dans un mode de réalisation, la molécule de BoNT/A de 150 kDa comprend une chaîne légère (LC pour « light chain » en anglais : résidus 2 à 438, environ 50 kDa) et une chaîne lourde (HC pour « heavy chain » en anglais : résidus 449 à 1296, environ 100 kDa). Les résidus 439 à 448 sont le site d’entaille et sont en italique. [Tableau 1]. Séquences préférées de molécules de BoNT/A SEQ ID NO. 1 : Séquence d’acides aminés de la molécule de BoNT/A de 150 kDa MPFVNKQFNY KDPVNGVDIA YIKIPNAGQM QPVKAFKIHN KIWVIPERDT 50 FTNPEEGDLN PPPEAKQVPV SYYDSTYLST DNEKDNYLKG VTKLFERIYS 100 TDLGRMLLTS IVRGIPFWGG STIDTELKVI DTNCINVIQP DGSYRSEELN 150 LVIIGPSADI IQFECKSFGH EVLNLTRNGY GSTQYIRFSP DFTFGFEESL 200 EVDTNPLLGA GKFATDPAVT LAHELIHAGH RLYGIAINPN RVFKVNTNAY 250 YEMSGLEVSF EELRTFGGHD AKFIDSLQEN EFRLYYYNKF KDIASTLNKA 300 KSIVGTTASL QYMKNVFKEK YLLSEDTSGK FSVDKLKFDK LYKMLTEIYT 350 EDNFVKFFKV LNRKTYLNFD KAVFKINIVP KVNYTIYDGF NLRNTNLAAN 400 FNGQNTEINN MNFTKLKNFT GLFEFYKLLC VRGIITSKTK SLDKGYNKAL 450 NDLCIKVNNW DLFFSPSEDN FTNDLNKGEE ITSDTNIEAA EENISLDLIQ 500 QYYLTFNFDN EPENISIENL SSDIIGQLEL MPNIERFPNG KKYELDKYTM 550 FHYLRAQEFE HGKSRIALTN SVNEALLNPS RVYTFFSSDY VKKVNKATEA 600 AMFLGWVEQL VYDFTDETSE VSTTDKIADI TIIIPYIGPA LNIGNMLYKD 650 DFVGALIFSG AVILLEFIPE IAIPVLGTFA LVSYIANKVL TVQTIDNALS 700 KRNEKWDEVY KYIVTNWLAK VNTQIDLIRK KMKEALENQA EATKAIINYQ 750 YNQYTEEEKN NINFNIDDLS SKLNESINKA MININKFLNQ CSVSYLMNSM 800 IPYGVKRLED FDASLKDALL KYIYDNRGTL IGQVDRLKDK VNNTLSTDIP 850 FQLSKYVDNQ RLLSTFTEYI KNIINTSILN LRYESNHLID LSRYASKINI 900 GSKVNFDPID KNQIQLFNLE SSKIEVILKN AIVYNSMYEN FSTSFWIRIP 950 KYFNSISLNN EYTIINCMEN NSGWKVSLNY GEIIWTLQDT QEIKQRVVFK 1000 YSQMINISDY INRWIFVTIT NNRLNNSKIY INGRLIDQKP ISNLGNIHAS 1050 NNIMFKLDGC RDTHRYIWIK YFNLFDKELN EKEIKDLYDN QSNSGILKDF 1100 WGDYLQYDKP YYMLNLYDPN KYVDVNNVGI RGYMYLKGPR GSVMTTNIYL 1150 NSSLYRGTKF IIKKYASGNK DNIVRNNDRV YINVVVKNKE YRLATNASQA 1200 GVEKILSALE IPDVGNLSQV VVMKSKNDQG ITNKCKMNLQ DNNGNDIGFI 1250 GFHQFNNIAK LVASNWYNRQ IERSSRTLGC SWEFIPVDDG WGERPL 1296 SEQ ID NO. 2 : séquence d’acides aminés de la chaîne légère (LC) de molécule de BoNT/A PFVNKQFNY KDPVNGVDIA YIKIPNAGQM QPVKAFKIHN KIWVIPERDT 50 FTNPEEGDLN PPPEAKQVPV SYYDSTYLST DNEKDNYLKG VTKLFERIYS 100 TDLGRMLLTS IVRGIPFWGG STIDTELKVI DTNCINVIQP DGSYRSEELN 150 LVIIGPSADI IQFECKSFGH EVLNLTRNGY GSTQYIRFSP DFTFGFEESL 200 EVDTNPLLGA GKFATDPAVT LAHELIHAGH RLYGIAINPN RVFKVNTNAY 250 YEMSGLEVSF EELRTFGGHD AKFIDSLQEN EFRLYYYNKF KDIASTLNKA 300 KSIVGTTASL QYMKNVFKEK YLLSEDTSGK FSVDKLKFDK LYKMLTEIYT 350 EDNFVKFFKV LNRKTYLNFD KAVFKINIVP KVNYTIYDGF NLRNTNLAAN 400 FNGQNTEINN MNFTKLKNFT GLFEFYKLLC VRGIITSK SEQ ID NO. 3 : séquence d’acides aminés de la chaîne lourde (HC) de molécule de BoNT/A AL 450 NDLCIKVNNW DLFFSPSEDN FTNDLNKGEE ITSDTNIEAA EENISLDLIQ 500 QYYLTFNFDN EPENISIENL SSDIIGQLEL MPNIERFPNG KKYELDKYTM 550 FHYLRAQEFE HGKSRIALTN SVNEALLNPS RVYTFFSSDY VKKVNKATEA 600 AMFLGWVEQL VYDFTDETSE VSTTDKIADI TIIIPYIGPA LNIGNMLYKD 650 DFVGALIFSG AVILLEFIPE IAIPVLGTFA LVSYIANKVL TVQTIDNALS 700 KRNEKWDEVY KYIVTNWLAK VNTQIDLIRK KMKEALENQA EATKAIINYQ 750 YNQYTEEEKN NINFNIDDLS SKLNESINKA MININKFLNQ CSVSYLMNSM 800 IPYGVKRLED FDASLKDALL KYIYDNRGTL IGQVDRLKDK VNNTLSTDIP 850 FQLSKYVDNQ RLLSTFTEYI KNIINTSILN LRYESNHLID LSRYASKINI 900 GSKVNFDPID KNQIQLFNLE SSKIEVILKN AIVYNSMYEN FSTSFWIRIP 950 KYFNSISLNN EYTIINCMEN NSGWKVSLNY GEIIWTLQDT QEIKQRVVFK 1000 YSQMINISDY INRWIFVTIT NNRLNNSKIY INGRLIDQKP ISNLGNIHAS 1050 NNIMFKLDGC RDTHRYIWIK YFNLFDKELN EKEIKDLYDN QSNSGILKDF 1100 WGDYLQYDKP YYMLNLYDPN KYVDVNNVGI RGYMYLKGPR GSVMTTNIYL 1150 NSSLYRGTKF IIKKYASGNK DNIVRNNDRV YINVVVKNKE YRLATNASQA 1200 GVEKILSALE IPDVGNLSQV VVMKSKNDQG ITNKCKMNLQ DNNGNDIGFI 1250 GFHQFNNIAK LVASNWYNRQ IERSSRTLGC SWEFIPVDDG WGERPL 1296 5. 3 . Production de BoNT/A et production de compositions de BoNT/A Une toxine botulique de type A a été approuvée par la Food and Drug Administration (FDA) des États-Unis pour le traitement du blépharospasme essentiel, du strabisme et du spasme hémifacial chez les patients de plus de douze ans, de la dystonie cervicale, des rides de la ligne glabellaire (visage) ainsi que pour le traitement de l’hyperhidrose. Une composition pharmaceutique disponible sur le marché et contenant de la toxine botulique de type A est commercialisée sous la marque BOTOX ® (onabotulinumtoxinA). Elle est disponible commercialement auprès de Allergan, une société du groupe AbbVie, North Chicago, Illinois, États-Unis. BOTOX ® contient un complexe purifié de 900 kDa de toxine botulique de type A, de l’albumine sérique humaine, et du chlorure de sodium conditionné sous forme stérile, séchée sous vide. Le complexe de toxine botulique de type A dans BOTOX ® est produit à partir d’une culture de la souche Hall de Clostridium botulinum amenée à croître dans un milieu contenant de la caséine amine N-Z et de l’extrait de levure ( soit , un procédé non-APF) et purifiée à partir de la solution de culture par une série d’étapes de précipitation (y compris une précipitation acide) jusqu’à obtention d’un complexe cristallin constitué de la protéine de toxine active de haut poids moléculaire et d’une protéine hémagglutinante associée. Le complexe cristallin est de nouveau dissous dans une solution contenant une solution saline et de l’albumine et filtré par filtration stérile à l’aide d’un filtre traité par irradiation gamma (0,2 micron) avant séchage sous vide. BOTOX ® peut être reconstitué avec une solution saline stérile sans conservateur avant injection par voie intramusculaire. Chaque flacon de 100 unités de BOTOX ® est constitué d’environ 5 ng de complexe de toxine botulique de type A, 0,5 mg d’albumine sérique humaine, et 0,9 mg de chlorure de sodium, sous forme séchée sous vide et destinée à une reconstitution avec une solution saline normale stérile sans conservateur (injection de chlorure de sodium 0,9 %). En général, la production d’une composition pharmaceutique de BoNT/A implique d’abord la fabrication de la substance active de BoNT/A, puis le mélange de la substance active de BoNT/A avec un (des) excipient(s). Une étape de séchage est souvent utilisée à la fin du procédé de production afin de produire une forme séchée de la composition pharmaceutique pour en faciliter le stockage et/ou le transport. La présente description présente des étapes et des mesures qui peuvent être mises en place afin d’assurer que le produit fini ne subit pas de congélation lors du processus de séchage, dans la mesure où la congélation lors du séchage conduit, de manière inattendue, à une augmentation significative de la quantité d’agrégation de la HSA dans les compositions de BoNT/A. Un certain nombre d’étapes sont nécessaires pour la fabrication des substances actives de BoNT/A ( c’est-à-dire pour l’obtention de BoNT/A purifiée). Une première étape peut consister en la culture de bactéries Clostridiales ( par exemple, la souche Hall de Clostridium botulinum ), typiquement sur des boîtes de gélose, dans un environnement favorable à la croissance bactérienne, par exemple dans une atmosphère chauffée anaérobie. L’étape de culture permet d’obtenir des colonies Clostridiales selon une morphologie et autres caractéristiques souhaitées. L’étape de culture peut également être réalisée avec des bactéries provenant d’une banque de cellules de travail exempte de produits d’origine animale. Dans une deuxième étape, des colonies Clostridiales cultivées sélectionnées peuvent être fermentées dans un milieu approprié. Après un certain temps de fermentation, les bactéries Clostridiales subissent généralement une lyse et libèrent une toxine Clostridiale ( par exemple , BoNT/A) dans le milieu. Dans un troisième temps, la toxine peut être purifiée à partir du milieu de culture pour obtenir une substance active de toxine BoNT/A brute ou en vrac. Préférentiellement, la substance active de toxine BoNT/A n’a pas été soumise à une précipitation ( par exemple , précipitation à l’éthanol à froid, à l’acide chlorhydrique et/ou au sulfate d’ammonium), par exemple , lors de la purification. Dans certains aspects de l’invention, la substance active de toxine BoNT/A est purifiée par chromatographie sur colonne incluant une colonne de chromatographie par interaction hydrophobe (HIC pour « hydrophobic interaction chromatography » en anglais). Dans certains aspects de l’invention, lorsque plusieurs colonnes de chromatographie sont utilisées pour purifier la BoNT/A, la toxine est purifiée à l’aide d’un processus dans lequel une colonne HIC est utilisée préalablement à toute autre colonne de chromatographie. Préférentiellement, une substance active de BoNT/A est produite par un procédé qualifié pour son utilisation selon la réglementation relative aux bonnes pratiques de fabrication promulguée par la Food and Drug Administration des États-Unis. Dans certains modes de réalisation, la substance active de BoNT/A est obtenue en utilisant un procédé sensiblement, principalement ou totalement, exempt de protéines d’origine animale (APF). Le procédé peut comprendre des processus de culture et de fermentation dits APF ou sensiblement APF. Un processus et un système chromatographiques dits APF ou sensiblement APF peuvent être utilisés pour purifier une culture clarifiée de Clostridium botulinum obtenue à partir des processus de culture et de fermentation APF ou sensiblement APF. Dans certains modes de réalisation, le processus de purification par chromatographie est tel que décrit dans le brevet US 8 129 139. La substance active de BoNT/A peut être produite par des procédés donnés à titre d’exemple tels que décrits dans l’exemple 1 du brevet US 8 129 139, l’exemple 2 du brevet US 8 129 139 ou l’exemple 1 du brevet US 9 469 849, ou en utilisant une ou plusieurs étapes telles que décrites dans l’un ou plusieurs de ces exemples. Dans certains modes de réalisation, la substance active de BoNT/A est produite par un procédé qui comprend une ou plusieurs étapes de chromatographie sur colonne ( par exemple , une ou plusieurs étapes de chromatographie sur colonne réalisées lors de la purification de la substance active de BoNT/A). Dans des modes de réalisation préférés, les une ou plusieurs étapes de chromatographie sur colonne ( par exemple , réalisées lors de la purification de la substance active de BoNT/A) comprennent une chromatographie par interaction hydrophobe, une chromatographie par échange d’anions et/ou une chromatographie par échange de cations, la chromatographie par interaction hydrophobe étant préférentiellement réalisée avant la chromatographie par échange d’anions et/ou la chromatographie par échange de cations. Dans certains modes de réalisation, la substance active de BoNT/A est produite par un procédé qui ne comprend pas une étape de précipitation à l’éthanol à froid, à l’acide chlorhydrique ou au sulfate d’ammonium ( par exemple , lors de la purification de la substance active de BoNT/A). Dans certains modes de réalisation, la substance active de BoNT/A est produite par un procédé qui n’implique pas l’utilisation d’un inhibiteur de protéase. Dans certains modes de réalisation, la substance active de BoNT/A est produite par un procédé qui n’implique pas l’utilisation de chlorhydrate de benzamidine. Après la production de la substance active de BoNT/A, cette dernière peut être stabilisée dans une solution appropriée. La substance active de BoNT/A en vrac peut ensuite être mélangée à un ou plusieurs excipients ( par exemple , l’albumine sérique humaine, telle que l’albumine sérique humaine recombinante, et le chlorure de sodium) et peut en outre être filtrée par filtration stérilisante pour fabriquer une composition pharmaceutique apte à être administrée à un être humain. Les compositions pharmaceutiques peuvent être réalisées sous forme solide ( par exemple , en poudre) par séchage ( par exemple , séchage sous vide). Des compositions pharmaceutiques solides peuvent être stockées et reconstituées avant injection. Les compositions pharmaceutiques de BoNT/A décrites ici peuvent comprendre un complexe de BoNT/A de sérotype A de 900 kDa en tant que principe actif pharmaceutique. La composition pharmaceutique peut également inclure un ou plusieurs excipients, tampons, vecteurs, stabilisants, conservateurs et/ou diluants. De telles compositions pharmaceutiques sont préférentiellement stables chimiquement et physiquement de sorte que le principe pharmaceutique actif de BoNT/A reste apte à une utilisation en tant que produit pharmaceutique après stockage. Les produits de BoNT/A peuvent être stockés à température ambiante, dans des conditions réfrigérées, ou à une température inférieure à 0 °C. Préférentiellement, la BoNT/A est stable lors du stockage pendant au moins environ 12 mois, plus préférentiellement au moins environ 18 mois. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide de BoNT/A décrite ici est séchée à partir d’une solution comprenant une substance active de BoNT/A (par exemple, une substance active de BoNT/A produite par un procédé décrit ici) et de la HSA. En particulier, la présente description propose un procédé de production d’une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA, ledit procédé comprenant une étape de séchage d’une solution comprenant une BoNT/A et de la HSA afin de produire ladite composition solide, dans lequel la solution ne subit pas de congélation lors de l’étape de séchage. Dans des modes de réalisation spécifiques, le procédé produit une composition solide décrite ici. Pour déterminer si une solution décrite ici (ou une solution de référence décrite ici, le cas échéant) subit une congélation pendant le séchage, il est possible de suivre sa température pendant le séchage (par exemple, comme décrit dans l’exemple 1). Le suivi peut être réalisé par insertion d’une sonde de température dans la solution (ou solution de référence, selon le cas). Le suivi peut être réalisé à l’aide d’une jauge de Pirani ou d’une sonde de température Ellab. Si une pluralité de flacons de la solution (ou de la solution de référence, selon le cas) sont séchés ensemble ( par exemple , dans la même chambre de séchage ou sur le même plateau de séchage), alors le suivi peut être réalisé pour un ou plusieurs flacons représentatifs ( par exemple , un ou deux) et ne nécessite pas d’être réalisé pour tous les flacons. Dans certains modes de réalisation, un processus de séchage pendant lequel une solution ne subit pas de congélation comprend le maintien de la température de la solution au-dessus de son point de congélation lors du séchage. Dans certains modes de réalisation, un processus de séchage pendant lequel une solution ne subit pas de congélation comprend le maintien de la température de la solution au-dessus de 0 °C lors du séchage. Pour déterminer si une solution décrite ici (ou une solution de référence décrite ici, le cas échéant) subit une congélation pendant le séchage, il est possible d’examiner la composition solide séchée (ou la composition solide séchée de référence, selon le cas) à l’aide d’un microscope électronique à balayage (MEB) (par exemple, tel que décrit dans l’exemple 1). Si une pluralité de flacons de la solution (ou de la solution de référence, selon le cas) sont séchés ensemble ( par exemple , dans la même chambre de séchage ou sur le même plateau de séchage), alors l’analyse peut être réalisée sur un ou plusieurs flacons représentatifs de la composition solide séchée ( par exemple , un ou deux) et ne nécessite pas d’être réalisée pour tous les flacons. Dans certains modes de réalisation, l’absence de pores dans une composition solide séchée indique qu’elle est séchée à partir d’une solution qui n’a pas subi de congélation lors du séchage. Dans divers modes de réalisation et aspects, l’étape de séchage est au moins partiellement régulée manuellement. Dans divers modes de réalisation et aspects, l’étape de séchage est entièrement régulée manuellement. Dans divers modes de réalisation et aspects, l’étape de séchage est au moins partiellement régulée numériquement. Dans divers modes de réalisation et aspects, l’étape de séchage est entièrement régulée numériquement. Dans divers modes de réalisation et aspects, l’étape de séchage est un séchage sous vide, un séchage par pulvérisation, un séchage par convection, un séchage par micro-ondes ou une combinaison de ceux-ci. Dans divers modes de réalisation et aspects, l’étape de séchage est un séchage sous vide. Pour éviter la congélation de la solution de produit fini, une phase régulée de dépressurisation/mise sous vide peut être mise en œuvre. Des mesures qui peuvent être prises pendant la phase régulée de dépressurisation/mise sous vide pour contribuer à empêcher la congélation comprennent : l’utilisation d’une vitesse de dépressurisation de chambre plus lente, la mise en œuvre d’une dépressurisation par paliers, le suivi de la solution de produit fini (par exemple, pour s’assurer que sa température est de quelques degrés au-dessus du point de congélation), et/ou l’utilisation d’une température d’étagère élevée (par exemple, réglage de la température d’étagère entre 20 °C et 25 °C environ). Les vitesses exactes de dépressurisation de chambre et les étapes à utiliser peuvent dépendre de l’équipement de séchage, de la taille de chambre, de la capacité de condenseur, de la charge de chambre et/ou de la performance de pompe à vide, etc ., et peuvent être déterminées par une personne du métier lambda et peuvent impliquer un réglage manuel. Par exemple, dans certains modes de réalisation, l’étape de séchage sous vide peut comprendre une étape de mise sous vide échelonnée, qui peut être effectuée de sorte que la température d’une solution décrite ici est autorisée à diminuer sous vide jusqu’à atteindre une température qui est toujours au-dessus du point de congélation de la solution et préférentiellement proche du point de congélation de la solution ( par exemple , d’environ 2 °C à 5 °C au-dessus du point de congélation de la solution), puis le vide est arrêté jusqu’à ce que la température de la solution revienne à une température plus élevée ( par exemple , d’environ 20 °C à 25 °C), puis le vide est de nouveau appliqué. L’étape précédente peut être répétée une fois ou plus d’une fois, tandis que la température exacte à laquelle la mise sous vide est arrêtée ou reprise n’a pas besoin d’être la même pour chaque répétition. Dans certains autres modes de réalisation, l’étape de séchage sous vide peut comprendre une étape de mise sous vide lente. 5.4. Compositions de BoNT/A La présente invention concerne des compositions solides comprenant une neurotoxine de Clostridium botulinum de sérotype A (BoNT/A) et de l’albumine sérique humaine (HSA), les compositions solides comprenant une faible quantité d’agrégats de HSA. La HSA contenue dans une composition de BoNT/A peut exister sous la forme de monomère de HSA ou d’agrégats de HSA. Il existe deux types d’agrégats de HSA, à savoir les agrégats de HSA solubles et les agrégats de HSA insolubles. Les agrégats de HSA solubles peuvent se rencontrer sous la forme de polymère de HSA, d’oligomère de HSA, de dimère de HSA ou de mélange de ceux-ci. Dans certains modes de réalisation, un polymère de HSA soluble, un oligomère de HSA soluble, un dimère de HSA soluble et un monomère de HSA soluble peuvent être séparés par chromatographie par perméation de gel (SEC pour « size-exclusion chromatography » en anglais). Par exemple, des pics sur un chromatogramme SEC peuvent être attribués à un polymère de HSA soluble, un oligomère de HSA soluble, un dimère de HSA soluble et un monomère de HSA soluble, respectivement, sur la base de temps de rétention obtenus en analysant un étalon de référence sur la même colonne (par exemple, un étalon pour la perméation de gel constitué de thyroglobuline bovine (PM 670 kDa), gammaglobuline bovine (PM 158 kDa), albumine de poulet (PM 44 kDa), myoglobuline de cheval (PM 17 kDa), et vitamine B12 (PM 1350 Da), tel que l’étalon pour la perméation de gel de Bio-Rad (réf. 151-1901)). Dans un mode de réalisation spécifique, des pics sur un chromatogramme SEC peuvent être assignés à un polymère de HSA soluble, un oligomère de HSA soluble, un dimère de HSA soluble et un monomère de HSA soluble, respectivement, comme décrit dans l’exemple 1. Des méthodes appropriées pour mesurer le niveau d’agrégats de HSA solubles et/ou insolubles comprennent, mais sans s’y limiter, la diffusion dynamique de la lumière (DLS pour « dynamic light scattering » en anglais), l’électrophorèse sur gel ( par exemple , l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de dodécylsulfate de sodium (SDS-PAGE pour « sodium dodecyl-sulfate polyacrylamide gel electrophoresis » en anglais)), la microscopie électronique à transmission (MET), l’ultracentrifugation ( par exemple , l’ultracentrifugation analytique (AUC pour « analytical ultracentrifugation » en anglais), telle que l’ultracentrifugation analytique selon la méthode de la vitesse de sédimentation (SV–AUC)), le fractionnement par couplage flux-force à flux asymétrique (FFF pour « field flow fractionation » en anglais ou AF4 pour « asymmetric flow field-flow fractionation » en anglais) et des mesures de turbidité. Des méthodes appropriées pour mesurer le niveau d’agrégats, de polymère, d’oligomère ou de dimère de HSA dans la HSA soluble comprennent, mais sans s’y limiter, la chromatographie en phase liquide haute performance HPLC ( par exemple , SEC), la DLS, l’électrophorèse sur gel ( par exemple , SDS-PAGE), l’ultracentrifugation ( par exemple , AUC, telle que SV–AUC), le fractionnement par couplage flux-force à flux asymétrique (FFF ou AF4) et des mesures de turbidité. Des méthodes appropriées pour mesurer le niveau d’agrégats de HSA insolubles comprennent, mais sans s’y limiter, la DLS, l’électrophorèse sur gel ( par exemple , SDS-PAGE), la microscopie électronique à transmission (MET), l’ultracentrifugation ( par exemple , AUC, telle que SV-AUC), le fractionnement par couplage flux-force à flux asymétrique (FFF ou AF4), la microscopie ( par exemple , la microscopie optique), l’imagerie de microflux (MFI pour « micro-flow imaging » en anglais), les mesures de turbidité, l’obscurcissement de la lumière ( par exemple , par compteur de particules de haute précision HIAC (pour « high accuracy liquid particle counter » en anglais)), et la détection de particules subvisibles (de sorte que le pourcentage d’agrégats de HSA insolubles est ou est représenté par le pourcentage de particules subvisibles) (par exemple, une méthode de détection de particules subvisibles non invasive ( par exemple , une méthode de détection de particules subvisibles non invasive décrite dans l’exemple 1 ou décrite dans le brevet US 10 132 736 B2, la microscopie optique, la MFI ou l’obscurcissement de la lumière ( par exemple , par HIAC)). Dans certains modes de réalisation, le pourcentage d’agrégats de HSA ou le pourcentage d’un type d’agrégats de HSA dans une composition solide décrite ici est déterminé après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. La reconstitution de la composition solide (ou d’une partie de celle-ci) peut être réalisée en mélangeant la composition solide (ou une partie de celle-ci) avec un liquide (par exemple, de l’eau ou une solution saline). Dans des modes de réalisation spécifiques, la composition reconstituée comprend entre environ 0,01 mg/mL et environ 100 mg/mL, entre environ 0,1 mg/mL et environ 10 mg/mL, entre environ 0,25 mg/mL et environ 2 mg/mL, environ 0,25 mg/mL, environ 0,5 mg/mL, environ 1 mg/mL ou environ 2 mg/mL de HSA. Dans certains modes de réalisation, le pourcentage d’agrégats de HSA ou le pourcentage d’un type d’agrégats de HSA dans une composition solide décrite ici est déterminé par SEC après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Des détecteurs qui peuvent être utilisés pour détecter des agrégats de HSA solubles (par exemple, lors d’une analyse SEC) comprennent, mais sans s’y limiter, des détecteurs UV ( par exemple , des détecteurs UV avec une longueur d’onde d’environ 220 nm, des détecteurs UV avec une longueur d’onde d’environ 280 nm, des détecteurs UV avec une longueur d’onde d’environ 254 nm, et des détecteurs UV avec une longueur d’onde comprise entre 220 nm et 280 nm) et des détecteurs de fluorescence ( par exemple , des détecteurs de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation d’environ 280 nm et une longueur d’onde d’émission d’environ 350 nm). La présente invention propose des compositions solides comprenant une BoNT/A et de la HSA, les compositions solides comprenant un faible pourcentage d’agrégats de HSA, incluant polymère, oligomère et/ou dimère de HSA. Comme le montre l’exemple 1, une composition de BoNT/A séchée sans congélation présente non seulement un faible pourcentage global d’agrégats de HSA, mais présente également de faibles pourcentages de chacun des polymère, oligomère et dimère de HSA. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA, le pourcentage de polymère de HSA, le pourcentage d’oligomère de HSA et/ou le pourcentage de dimère de HSA, dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA, le pourcentage de polymère de HSA, le pourcentage d’oligomère de HSA et/ou le pourcentage de dimère de HSA, dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA, le pourcentage de polymère de HSA, le pourcentage d’oligomère de HSA et/ou le pourcentage de dimère de HSA, dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Selon un aspect, il est proposé une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle la HSA comprend un monomère de HSA et des agrégats de HSA, dans laquelle au moins une partie de la HSA est sous la forme de HSA soluble lorsque la composition solide est reconstituée dans un milieu aqueux, et dans laquelle moins de 34 % de HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA. Il est entendu dans la présente description que les agrégats de HSA solubles décrits ici comprennent tous les types d’agrégats de HSA solubles ( c’est-à-dire , dimère de HSA soluble, polymère de HSA soluble et oligomère de HSA soluble). Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 33 %, moins de 32 %, moins de 31 %, moins de 30 %, moins de 29 %, moins de 28 %, moins de 27 %, moins de 26 %, moins de 25 %, moins de 24 %, moins de 23 %, moins de 22 %, moins de 21 %, moins de 20 %, moins de 19 %, moins de 18 %, moins de 17 %, moins de 16 %, moins de 15 %, moins de 14 %, moins de 13 %, moins de 12 %, moins de 11 %, moins de 10 %, moins de 9 %, moins de 8 %, moins de 7 %, moins de 6 %, moins de 5 %, moins de 4 %, moins de 3 %, moins de 2 % ou moins de 1 % de HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 1 % à environ 4 %, environ 4 % à environ 6 %, environ 6 % à environ 10 %, environ 4 % à environ 10 %, environ 10 % à environ 12 %, environ 10 % à environ 15 %, environ 15 % à environ 18 %, environ 15 % à environ 20 %, environ 20 % à environ 25 %, environ 25 % à environ 30 % ou environ 30 % à environ 33 % de HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 19 % de HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 18 %, moins de 17 %, moins de 16 %, moins de 15 %, moins de 14 %, moins de 13 %, moins de 12 %, moins de 11 %, moins de 10 %, moins de 9 %, moins de 8 %, moins de 7 %, moins de 6 %, moins de 5 %, moins de 4 %, moins de 3 %, moins de 2 % ou moins de 1 % de HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC avec un détecteur UV à la longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 1 % à environ 4 %, environ 4 % à environ 6 %, environ 6 % à environ 10 %, environ 4 % à environ 10 %, environ 10 % à environ 12 %, environ 10 % à environ 15 % ou environ 15 % à environ 18 % de HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC avec un détecteur UV à la longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 34 % de HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 33 %, moins de 32 %, moins de 31 %, moins de 30 %, moins de 29 %, moins de 28 %, moins de 27 %, moins de 26 %, moins de 25 %, moins de 24 %, moins de 23 %, moins de 22 %, moins de 21 %, moins de 20 %, moins de 19 %, moins de 18 %, moins de 17 %, moins de 16 %, moins de 15 %, moins de 14 %, moins de 13 %, moins de 12 %, moins de 11 %, moins de 10 %, moins de 9 %, moins de 8 %, moins de 7 %, moins de 6 %, moins de 5 %, moins de 4 %, moins de 3 %, moins de 2 % ou moins de 1 % de HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 1 % à environ 4 %, environ 4 % à environ 6 %, environ 6 % à environ 10 %, environ 4 % à environ 10 %, environ 10 % à environ 12 %, environ 10 % à environ 15 %, environ 15 % à environ 18 %, environ 15 % à environ 20 %, environ 20 % à environ 25 %, environ 25 % à environ 30 % ou environ 30 % à environ 33 % de HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 20 % de HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 19 %, moins de 18 %, moins de 17 %, moins de 16 %, moins de 15 %, moins de 14 %, moins de 13 %, moins de 12 %, moins de 11 %, moins de 10 %, moins de 9 %, moins de 8 %, moins de 7 %, moins de 6 %, moins de 5 %, moins de 4 %, moins de 3 %, moins de 2 % ou moins de 1 % de HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 1 % à environ 4 %, environ 4 % à environ 6 %, environ 6 % à environ 10 %, environ 4 % à environ 10 %, environ 10 % à environ 12 %, environ 10 % à environ 15 % ou environ 15 % à environ 18 % de HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Selon un autre aspect, il est proposé une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle au moins une partie de la HSA est sous la forme de HSA soluble lorsque la composition solide est reconstituée dans un milieu aqueux, et dans laquelle moins de 30 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 29 %, moins de 28 %, moins de 27 %, moins de 26 %, moins de 25 %, moins de 24 %, moins de 23 %, moins de 22 %, moins de 21 %, moins de 20 %, moins de 19 %, moins de 18 %, moins de 17 %, moins de 16 %, moins de 15 %, moins de 14 %, moins de 13 %, moins de 12 %, moins de 11 %, moins de 10 %, moins de 9 %, moins de 8 %, moins de 7 %, moins de 6 %, moins de 5 %, moins de 4 %, moins de 3 %, moins de 2 % ou moins de 1 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 1 % à environ 4 %, environ 4 % à environ 6 %, environ 6 % à environ 10 %, environ 4 % à environ 10 %, environ 10 % à environ 12 %, environ 10 % à environ 15 %, environ 15 % à environ 18 %, environ 15 % à environ 20 %, environ 20 % à environ 25 % ou environ 25 % à environ 29 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 13 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 12 %, moins de 11 %, moins de 10 %, moins de 9 %, moins de 8 %, moins de 7 %, moins de 6 %, moins de 5 %, moins de 4 %, moins de 3 %, moins de 2 % ou moins de 1 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC avec un détecteur UV à la longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 1 % à environ 4 %, environ 4 % à environ 6 %, environ 6 % à environ 10 %, environ 4 % à environ 10 % ou environ 10 % à environ 12 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC avec un détecteur UV à la longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 30 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 29 %, moins de 28 %, moins de 27 %, moins de 26 %, moins de 25 %, moins de 24 %, moins de 23 %, moins de 22 %, moins de 21 %, moins de 20 %, moins de 19 %, moins de 18 %, moins de 17 %, moins de 16 %, moins de 15 %, moins de 14 %, moins de 13 %, moins de 12 %, moins de 11 %, moins de 10 %, moins de 9 %, moins de 8 %, moins de 7 %, moins de 6 %, moins de 5 %, moins de 4 %, moins de 3 %, moins de 2 % ou moins de 1 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 1 % à environ 4 %, environ 4 % à environ 6 %, environ 6 % à environ 10 %, environ 4 % à environ 10 %, environ 10 % à environ 12 %, environ 10 % à environ 15 %, environ 15 % à environ 18 %, environ 15 % à environ 20 %, environ 20 % à environ 25 % ou environ 25 % à environ 29 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 13 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 12 %, moins de 11 %, moins de 10 %, moins de 9 %, moins de 8 %, moins de 7 %, moins de 6 %, moins de 5 %, moins de 4 %, moins de 3 %, moins de 2 % ou moins de 1 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 1 % à environ 4 %, environ 4 % à environ 6 %, environ 6 % à environ 10 %, environ 4 % à environ 10 % ou environ 10 % à environ 12 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Selon un autre aspect, il est proposé une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle au moins une partie de la HSA est sous la forme de HSA soluble lorsque la composition solide est reconstituée dans un milieu aqueux, et dans laquelle moins de 0,8 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 0,7 %, moins de 0,6 %, moins de 0,5 %, moins de 0,4 %, moins de 0,3 %, moins de 0,2 % ou moins de 0,1 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 0,1 % à environ 0,2 %, environ 0,2 % à environ 0,3 %, environ 0,3 % à environ 0,4 %, environ 0,4 % à environ 0,5 %, environ 0,5 % à environ 0,6 % ou environ 0,6 % à environ 0,7 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 0,8 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 0,7 %, moins de 0,6 %, moins de 0,5 %, moins de 0,4 %, moins de 0,3 %, moins de 0,2 % ou moins de 0,1 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC avec un détecteur UV à la longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 0,1 % à environ 0,2 %, environ 0,2 % à environ 0,3 %, environ 0,3 % à environ 0,4 %, environ 0,4 % à environ 0,5 %, environ 0,5 % à environ 0,6 % ou environ 0,6 % à environ 0,7 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC avec un détecteur UV à la longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 0,8 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 0,7 %, moins de 0,6 %, moins de 0,5 %, moins de 0,4 %, moins de 0,3 %, moins de 0,2 % ou moins de 0,1 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC avec un détecteur UV à la longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 0,1 % à environ 0,2 %, environ 0,2 % à environ 0,3 %, environ 0,3 % à environ 0,4 %, environ 0,4 % à environ 0,5 %, environ 0,5 % à environ 0,6 % ou environ 0,6 % à environ 0,7 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC avec un détecteur UV à la longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 0,8 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 0,7 %, moins de 0,6 %, moins de 0,5 %, moins de 0,4 %, moins de 0,3 %, moins de 0,2 % ou moins de 0,1 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 0,1 % à environ 0,2 %, environ 0,2 % à environ 0,3 %, environ 0,3 % à environ 0,4 %, environ 0,4 % à environ 0,5 %, environ 0,5 ù à environ 0,6 % ou environ 0,6 % à environ 0,7 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Selon un autre aspect, il est proposé une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle au moins une partie de la HSA est sous la forme de HSA soluble lorsque la composition solide est reconstituée dans un milieu aqueux, et dans laquelle moins de 4,8 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 4,5 %, moins de 4 %, moins de 3,5 %, moins de 3 %, moins de 2,5 %, moins de 2 %, moins de 1,5 %, moins de 1 %, ou moins de 0,5 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 0,5 % à environ 1 %, environ 1 % à environ 1,5 %, environ 1,5 % à environ 2 %, environ 2 % à environ 2,5 %, environ 2,5 % à environ 3 %, environ 3 % à environ 3,5 %, environ 3,5 % à environ 3,6 %, environ 3,5 % à environ 4 %, environ 4 % à environ 4,5 % ou environ 4,5 % à environ 4,7 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 4,6 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 4,5 %, moins de 4 %, moins de 3,5 %, moins de 3 %, moins de 2,5 %, moins de 2 %, moins de 1,5 %, moins de 1 % ou moins de 0,5 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC avec un détecteur UV à la longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 0,5 % à environ 1 %, environ 1 % à environ 1,5 %, environ 1,5 % à environ 2 %, environ 2 % à environ 2,5 %, environ 2,5 % à environ 3 %, environ 3 % à environ 3,5 %, environ 3,5 % à environ 3,6 %, environ 3,5 % à environ 4 % ou environ 4 % à environ 4,5 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 3,7 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 3,5 %, moins de 3 %, moins de 2,5 %, moins de 2 %, moins de 1,5 %, moins de 1 % ou moins de 0,5 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC avec un détecteur UV à la longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 0,5 % à environ 1 %, environ 1 % à environ 1,5 %, environ 1,5 % à environ 2 %, environ 2 % à environ 2,5 %, environ 2,5 % à environ 3 %, environ 3 % à environ 3,5 % ou environ 3,5 % à environ 3,6 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 4,8 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, moins de 4,5 %, moins de 4 %, moins de 3,5 %, moins de 3 %, moins de 2,5 %, moins de 2 %, moins de 1,5 %, moins de 1 % ou moins de 0,5 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, environ 0,5 % à environ 1 %, environ 1 % à environ 1,5 %, environ 1,5 % à environ 2 %, environ 2 % à environ 2,5 %, environ 2,5 % à environ 3 %, environ 3 % à environ 3,5 %, environ 3,5 % à environ 3,6 %, environ 3,5 % à environ 4 %, environ 4 % à environ 4,5 % ou environ 4,5 % à environ 4,7 % de HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. La présente invention propose également une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle la HSA est formulée dans la composition solide à partir d’une matière de départ. Comme le montre l’exemple 1, une composition de BoNT/A séchée sans congélation présente non seulement une plus faible augmentation du pourcentage global d’agrégats de HSA par rapport au matériau de départ de HSA, mais présente également une plus faible augmentation des pourcentages de chacun des polymère, oligomère et dimère de HSA par rapport au matériau de départ de HSA, par comparaison avec une composition de BoNT/A séchée à l’aide d’un processus qui implique une congélation. Dans certains modes de réalisation, la matière de départ est un produit de HSA disponible dans le commerce. Dans certains modes de réalisation, la matière de départ est sous forme liquide (par exemple, sous la forme d’une solution à 25 %). Dans d’autres modes de réalisation, la matière de départ est sous forme solide. Le pourcentage d’agrégats, de polymère, d’oligomère ou de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans une composition solide décrite ici et le pourcentage d’agrégats, de polymère, d’oligomère ou de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ correspondante sont préférentiellement déterminés avec la même méthode. Lorsque la matière de départ de HSA est sous forme solide, dans certains modes de réalisation, le pourcentage d’agrégats, de polymère, d’oligomère ou de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ est déterminé après reconstitution d’au moins une partie de la matière de départ, et la reconstitution peut être effectuée comme décrit ci-dessous. Selon un aspect, il est proposé une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle la HSA est formulée dans la composition solide à partir d’une matière de départ et comprend un monomère de HSA et des agrégats de HSA, dans laquelle au moins une partie de la HSA est sous la forme de HSA soluble lorsque la composition solide est reconstituée dans un milieu aqueux, et dans laquelle le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 6,8 fois le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 6,5 fois, à 6 fois, à 5,5 fois, à 5 fois, à 4,5 fois, à 4 fois, à 3,5 fois, à 3 fois, à 2,5 fois, à 2 fois, à 1,9 fois, à 1,8 fois, à 1,7 fois, à 1,6 fois, à 1,5 fois, à 1,4 fois, à 1,3 fois, à 1,2 fois ou à 1,1 fois le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois, de 2,5 à 3 fois, de 3 à 3,5 fois, de 3,5 à 4 fois, de 4 à 4,5 fois, de 4,5 à 5 fois, de 5 à 5,5 fois, de 5,5 à 6 fois, de 6 à 6,5 fois ou de 6,5 à 6,8 fois le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 4,9 fois le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 4,5 fois, à 4 fois, à 3,5 fois, à 3 fois, à 2,5 fois, à 2 fois, à 1,9 fois, à 1,8 fois, à 1,7 fois, à 1,6 fois, à 1,5 fois, à 1,4 fois, à 1,3 fois, à 1,2 fois ou à 1,1 fois le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois, de 2,5 à 3 fois, de 3 à 3,5 fois, de 3,5 à 4 fois, de 4 à 4,5 fois ou de 4,5 à 4,9 fois le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 6,8 fois le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 6,5 fois, à 6 fois, à 5,5 fois, à 5 fois, à 4,5 fois, à 4 fois, à 3,5 fois, à 3 fois, à 2,5 fois, à 2 fois, à 1,9 fois, à 1,8 fois, à 1,7 fois, à 1,6 fois, à 1,5 fois, à 1,4 fois, à 1,3 fois, à 1,2 fois ou à 1,1 fois le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois, de 2,5 à 2,6 fois, de 2,5 à 3 fois, de 3 à 3,5 fois, de 3,5 à 4 fois, de 4 à 4,5 fois, de 4,5 à 5 fois, de 5 à 5,5 fois, de 5,5 à 6 fois, de 6 à 6,5 fois ou de 6,5 à 6,8 fois le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 1,9 fois le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 1,8 fois, 1,7 fois, 1,6 fois, 1,5 fois, 1,4 fois, 1,3 fois, 1,2 fois ou 1,1 fois le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,7 fois ou de 1,7 à 1,9 fois le pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Selon un autre aspect, il est proposé une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle la HSA est formulée dans la composition solide à partir d’une matière de départ, dans laquelle au moins une partie de la HSA est sous la forme de HSA soluble lorsque la composition solide est reconstituée dans un milieu aqueux, et dans laquelle le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 6,4 fois le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 6 fois, à 5,5 fois, à 5 fois, à 4,5 fois, à 4 fois, à 3,5 fois, à 3 fois, à 2,5 fois, à 2 fois, à 1,9 fois, à 1,8 fois, à 1,7 fois, à 1,6 fois, à 1,5 fois, à 1,4 fois, à 1,3 fois, à 1,2 fois ou à 1,1 fois le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois, de 2,5 à 2,6 fois, de 2,5 à 3 fois, de 3 à 3,5 fois, de 3,5 à 4 fois, de 4 à 4,5 fois, de 4,5 à 5 fois, de 5 à 5,5 fois, de 5,5 à 6 fois ou de 6 à 6,4 fois le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 5,2 fois le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 5 fois, 4,5 fois, à 4 fois, à 3,5 fois, à 3 fois, à 2,5 fois, à 2 fois, à 1,9 fois, à 1,8 fois, à 1,7 fois, à 1,6 fois, à 1,5 fois, à 1,4 fois, à 1,3 fois, à 1,2 fois ou à 1,1 fois le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois, de 2,5 à 2,6 fois, de 2,5 à 3 fois, de 3 à 3,5 fois, de 3,5 à 4 fois, de 4 à 4,5 fois, de 4,5 à 5 fois ou de 5 à 5,2 fois le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 6,4 fois le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 6 fois, à 5,5 fois, à 5 fois, à 4,5 fois, à 4 fois, à 3,5 fois, à 3 fois, à 2,5 fois, à 2 fois, à 1,9 fois, à 1,8 fois, à 1,7 fois, à 1,6 fois, à 1,5 fois, à 1,4 fois, à 1,3 fois, à 1,2 fois ou à 1,1 fois le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois, de 2,5 à 2,6 fois, de 2,5 à 3 fois, de 3 à 3,5 fois, de 3,5 à 4 fois, de 4 à 4,5 fois, de 4,5 à 5 fois, de 5 à 5,5 fois, de 5,5 à 6 fois ou de 6 à 6,4 fois le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 1,6 fois le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 1,5 fois, à 1,4 fois, à 1,3 fois, à 1,2 fois ou à 1,1 fois le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois ou de 1,5 à 1,6 fois le pourcentage de polymère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Selon un autre aspect, il est proposé une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle la HSA est formulée dans la composition solide à partir d’une matière de départ, dans laquelle au moins une partie de la HSA est sous la forme de HSA soluble lorsque la composition solide est reconstituée dans un milieu aqueux, et dans laquelle le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 3,9 fois le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 3,5 fois, à 3 fois, à 2,5 fois, à 2 fois, à 1,9 fois, à 1,8 fois, à 1,7 fois, à 1,6 fois, à 1,5 fois, à 1,4 fois, à 1,3 fois, à 1,2 fois ou à 1,1 fois le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois, de 2,5 à 2,6 fois, de 2,5 à 3 fois, de 3 à 3,5 fois ou de 3,5 à 3,9 fois le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 3,9 fois le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 3,5 fois, à 3 fois, à 2,5 fois, à 2 fois, à 1,9 fois, à 1,8 fois, à 1,7 fois, à 1,6 fois, à 1,5 fois, à 1,4 fois, à 1,3 fois, à 1,2 fois ou à 1,1 fois le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois, de 2,5 à 2,6 fois, de 2,5 à 3 fois, de 3 à 3,5 fois ou de 3,5 à 3,9 fois le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 3,9 fois le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 3,5 fois, à 3 fois, à 2,5 fois, à 2 fois, à 1,9 fois, à 1,8 fois, à 1,7 fois, à 1,6 fois, à 1,5 fois, à 1,4 fois, à 1,3 fois, à 1,2 fois ou à 1,1 fois le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois, de 2,5 à 2,6 fois, de 2,5 à 3 fois, de 3 à 3,5 fois ou de 3,5 à 3,9 fois le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 3,9 fois le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 3,5 fois, 3 fois, 2,5 fois, 2 fois, 1,9 fois, 1,8 fois, 1,7 fois, 1,6 fois, 1,5 fois, 1,4 fois, 1,3 fois, 1,2 fois ou 1,1 fois le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois, de 2,5 à 2,6 fois, de 2,5 à 3 fois, de 3 à 3,5 fois ou de 3,5 à 3,9 fois le pourcentage d’oligomère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Selon un autre aspect, il est proposé une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle la HSA est formulée dans la composition solide à partir d’une matière de départ, dans laquelle au moins une partie de la HSA est sous la forme de HSA soluble lorsque la composition solide est reconstituée dans un milieu aqueux, et dans laquelle le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 4,6 fois le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 4,5 fois, à 4 fois, à 3,5 fois, à 3 fois, à 2,5 fois, à 2 fois, à 1,9 fois, à 1,8 fois, à 1,7 fois, à 1,6 fois, à 1,5 fois, à 1,4 fois, à 1,3 fois, à 1,2 fois ou à 1,1 fois le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois, de 2,5 à 2,6 fois, de 2,5 à 3 fois, de 3 à 3,5 fois, de 3,5 à 4 fois, de 4 à 4,5 fois ou de 4,5 à 4,6 fois le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 3,5 fois le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 3 fois, à 2,5 fois, à 2 fois, à 1,9 fois, à 1,8 fois, à 1,7 fois, à 1,6 fois, à 1,5 fois, à 1,4 fois, à 1,3 fois, à 1,2 fois ou à 1,1 fois le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois, de 2,5 à 2,6 fois, de 2,5 à 3 fois ou de 3 à 3,5 fois le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 4,6 fois le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 4,5 fois, à 4 fois, à 3,5 fois, à 3 fois, à 2,5 fois, à 2 fois, à 1,9 fois, à 1,8 fois, à 1,7 fois, à 1,6 fois, à 1,5 fois, à 1,4 fois, à 1,3 fois, à 1,2 fois ou à 1,1 fois le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois, de 2,5 à 2,6 fois, de 2,5 à 3 fois, de 3 à 3,5 fois, de 3,5 à 4 fois, de 4 à 4,5 fois ou de 4,5 à 4,6 fois le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 280 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 2,6 fois le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus égal à 2,5 fois, 2 fois, 1,9 fois, 1,8 fois, 1,7 fois, 1,6 fois, 1,5 fois, 1,4 fois, 1,3 fois, 1,2 fois ou 1,1 fois le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est inférieur ou égal au pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans des modes de réalisation spécifiques, le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est au plus de 1,1 à 1,3 fois, de 1,3 à 1,5 fois, de 1,5 à 1,6 fois, de 1,5 à 1,7 fois, de 1,7 à 1,9 fois, de 1,1 à 1,5 fois, de 1,5 à 2 fois, de 2 à 2,5 fois ou de 2,5 à 2,6 fois le pourcentage de dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la matière de départ, tel que déterminé par chromatographie SEC à l’aide d’un détecteur de fluorescence avec une longueur d’onde d’excitation de 280 nm et une longueur d’onde d’émission de 350 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide. Dans divers modes de réalisation et aspects, il est proposé une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle la composition solide a une, deux, trois, quatre, cinq, ou plus des propriétés décrites ci-dessus. Dans divers modes de réalisation et aspects, il est proposé une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle la composition solide est produite par un procédé décrit à la section 5.3. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition décrite ici est exempte de produits d’origine animale. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide décrite ici est séchée à partir d’une solution comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle la solution est exempte de produits d’origine animale. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide décrite ici peut être reconstituée, par exemple, avec de l’eau ou une solution saline, en une solution comprenant une BoNT/A et de la HSA, dans laquelle la solution reconstituée est exempte de produits d’origine animale. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide décrite ici ne contient pas d’inhibiteur de protéase. Dans certains modes de réalisation, une composition solide décrite ici ne contient pas de chlorhydrate de benzamidine. Dans divers modes de réalisation et aspects, une solution décrite ici comprenant une BoNT/A et de la HSA ne contient pas d’inhibiteur de protéase. Dans certains modes de réalisation, une solution décrite ici comprenant une BoNT/A et de la HSA ne contient pas de chlorhydrate de benzamidine. Dans divers modes de réalisation et aspects, à la fois la composition solide et la solution comprenant une BoNT/A et de la HSA ne contiennent pas d’inhibiteur de protéase. Dans certains modes de réalisation, à la fois la composition solide et la solution comprenant une BoNT/A et de la HSA ne contiennent pas de chlorhydrate de benzamidine. Dans divers modes de réalisation et aspects, la HSA décrite ici est une HSA recombinante. Dans un mode de réalisation spécifique, la HSA recombinante est exempte de produits d’origine animale. Dans un mode de réalisation spécifique, la HSA recombinante n’est pas produite à partir d’un animal. Dans un mode de réalisation spécifique, la HSA recombinante est produite à partir d’un micro-organisme, tel qu’une bactérie. Dans un mode de réalisation spécifique, la HSA recombinante est produite à partir d’un système d’expression à base de plantes. Dans divers modes de réalisation et aspects, la HSA décrite ici est une HSA dérivée du plasma humain. Dans un mode de réalisation spécifique, la HSA contenue dans une composition solide décrite ici est d’environ 0,5 mg pour 100 unités de BoNT/A. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide décrite ici comprend en outre un ou plusieurs vecteurs pharmaceutiquement acceptables. Dans divers modes de réalisation et aspects, une solution décrite ici comprenant une BoNT/A et de la HSA comprend en outre un ou plusieurs vecteurs pharmaceutiquement acceptables. Dans des modes de réalisation spécifiques, les un ou plusieurs vecteurs pharmaceutiquement acceptables comprennent du chlorure de sodium ( par exemple , environ 0,9 mg de chlorure de sodium pour 100 unités de BoNT/A). Dans des modes de réalisation spécifiques, la composition solide décrite ici comprend environ 0,9 mg de chlorure de sodium pour 100 unités de BoNT/A. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide décrite ici est séchée à partir d’une solution comprenant une BoNT/A et de la HSA de sorte que la solution ne subit pas de congélation lors du séchage. Dans divers modes de réalisation et aspects, le fait qu’une solution décrite ici (ou une solution de référence décrite ici, selon le cas) subit ou non une congélation lors du séchage est déterminé tel que décrit à la section 5.3. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide décrite ici comprend environ 50 unités, environ 100 unités ou environ 200 unités de BoNT/A. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide décrite ici a une activité comprise entre environ 2,4 x 10 7 unités/mg et environ 6,0 x 10 7 unités/mg. La présente invention propose une composition solide comprenant une BoNT/A et de la HSA qui est séchée sans subir de congélation. Une telle composition solide présente des propriétés avantageuses telles qu’une qualité visuelle constante du produit et une baisse d’activité beaucoup plus lente pendant le stockage, par exemple , à température ambiante ou plus, par comparaison avec une composition solide de référence stockée dans les mêmes conditions. Une composition solide de référence est séchée à partir de la même composition liquide que la composition solide étudiée, la seule différence étant le processus de séchage : la composition solide de référence subit des conditions de congélation lors du processus de séchage. Autrement dit, une composition solide de référence a un pourcentage d’agrégats de HSA dans la HSA plus élevé, un pourcentage d’agrégats, de polymère, d’oligomère ou de dimère de HSA dans la HSA soluble plus élevé et/ou un pourcentage d’agrégats de HSA insolubles dans la HSA plus élevé que dans la composition solide étudiée, mais elle est par ailleurs sensiblement identique à la composition solide étudiée. Le terme « sensiblement identique » est utilisé dans ce contexte ou contexte similaire pour signifier que la composition solide de référence est identique ou suffisamment similaire à la composition solide (par exemple, concernant leurs ingrédients et les concentrations respectives des ingrédients), de sorte que la composition solide de référence peut servir de témoin de comparaison appropriée. L’activité d’une composition solide qui est séchée sans congélation atteint un état stable après stockage pendant une certaine période de temps, et l’activité à l’état stable de la composition solide est supérieure à l’activité à l’état stable d’une composition solide de référence stockée dans les mêmes conditions. Dans certains modes de réalisation, à la fois la composition solide et la composition solide de référence sont stockées à environ 5 °C, à environ 25 °C (et éventuellement à environ 60 % d’humidité relative), ou à environ 40 °C (et éventuellement à environ 75 % d’humidité relative). Dans divers modes de réalisation et aspects, l’activité d’une composition solide décrite ici atteint un état stable après stockage pendant une certaine période de temps, et l’activité à l’état stable de la composition solide est supérieure ( par exemple , au moins 1 fois supérieure, au moins 1,5 fois supérieure, au moins 2 fois supérieure, au moins 2,5 fois supérieure, au moins 3 fois supérieure, au moins 3,5 fois supérieure, au moins 4 fois supérieure, au moins 4,5 fois supérieure ou au moins 5 fois supérieure) à l’activité à l’état stable d’une composition solide de référence comprenant une BoNT/A et de la HSA dans les mêmes conditions de stockage. Dans divers modes de réalisation et aspects, l’activité d’une composition solide décrite ici atteint un état stable après stockage pendant une certaine période de temps, et la perte d’activité de la composition solide à l’état stable par rapport au début du stockage est inférieure ( par exemple , inférieure à 10 %, inférieure à 15 %, inférieure à 20 %, inférieure à 25 %, inférieure à 30 %, inférieure à 35 %, inférieure à 40 %, inférieure à 45 % inférieure, inférieure à 50 %, inférieure à 55 %, inférieure à 60 %, inférieure à 65 %, inférieure à 70 %, inférieure à 75 %, inférieure à 80 %, inférieure à 85 %, inférieure à 90 %, ou inférieure à 95 %) à la perte d’activité d’une composition solide de référence. Une personne du métier est apte à déterminer si l’activité d’une composition solide a atteint ou non un état stable. Par exemple, l’activité d’une composition solide peut être considérée comme ayant atteint un état stable si l’activité de la composition solide ne diminue pas plus de 20 % après 3 mois de stockage. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide décrite ici est une composition pharmaceutique en poudre. Selon un autre aspect, il est proposé une composition liquide comprenant une BoNT/A et de la HSA, qui est dérivée d’une composition solide décrite ici, par exemple, une forme dissoute ou reconstituée d’une composition solide décrite ici. Selon un autre aspect, il est proposé un procédé de traitement d’un patient le nécessitant (préférentiellement un patient humain), comprenant l’administration d’une composition solide décrite ici. 5.4.1. Caractérisation des compositions de BoNT/A Dans un mode de réalisation, des compositions de BoNT/A décrites ici ont une activité d’au moins environ 1,5×10 7 unités/mg, par exemple , environ 1,5×10 7 à environ 6,0×10 7 unités/mg, environ 2,0×10 7 à environ 6,0×10 7 unités/mg, environ 2,4×10 7 à environ 6,0×10 7 unités/mg, environ 2,4×10 7 à environ 5,9×10 7 unités/mg, environ 2,4×10 7 à environ 5,8×10 7 unités/mg, environ 2,4×10 7 à environ 5,7×10 7 unités/mg, environ 2,4×10 7 à environ 5,6×10 7 unités/mg, environ 2,4×10 7 à environ 5,5×10 7 unités/mg, environ 2,4×10 7 à environ 5,4×10 7 unités/mg, environ 2,5×10 7 à environ 6,0×10 7 unités/mg, environ 2,6×10 7 à environ 6,0×10 7 unités/mg, environ 2,7×10 7 à environ 6,0×10 7 unités/mg, environ 2,8×10 7 à environ 6,0×10 7 unités/mg, environ 2,9×10 7 à environ 6,0×10 7 unités/mg, environ 3,0×10 7 à environ 6,0×10 7 unités/mg, ou toute valeur comprise dans de telles plages. Dans un mode de réalisation, des compositions de BoNT/A décrites ici ont une activité d’environ 2,4 x 10 7 unités/mg à environ 5,4 x 10 7 unités/mg. Dans des modes de réalisation préférés, le terme « unité » utilisé ici se réfère à la dose létale DL 50 . Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide décrite ici est un produit séché d’une solution comprenant une BoNT/A et de la HSA et a une activité supérieure à celle d’une composition solide de référence, dans laquelle la composition solide de référence est produite à partir d’une solution de référence comprenant une BoNT/A et de la HSA par un processus de séchage réalisé de sorte que la solution de référence subit une congélation lors du séchage et dans laquelle la solution de référence est sensiblement identique à la solution. Le terme « sensiblement identique » peut être compris comme décrit ci-dessus. Une description supplémentaire concernant une composition solide de référence est fournie ci-dessus dans la section 5.3. Dans certains modes de réalisation, la composition solide décrite ici a une activité qui est au moins 10 %, au moins 20 %, au moins 30 %, au moins 40 %, au moins 50 %, au moins 60 %, au moins 70 %, au moins 80 %, au moins 90 %, au moins 100 %, au moins 1,5 fois ou au moins 2 fois supérieure à l’activité de la composition solide de référence. Dans certains modes de réalisation, la composition solide décrite ici a une activité qui est d’au moins 0,1 x 10 7 unités/mg, d’au moins 0,2 x 10 7 unités/mg, d’au moins 0,3 x 10 7 unités/mg, d’au moins 0,4 x 10 7 unités/mg, d’au moins 0,5 x 10 7 unités/mg, d’au moins 0,6 x 10 7 unités/mg, d’au moins 0,7 x 10 7 unités/mg, d’au moins 0,8 x 10 7 unités/mg, d’au moins 0,9 x 10 7 unités/mg, d’au moins 1 x 10 7 unités/mg, d’au moins 1,5 x 10 7 unités/mg, d’au moins 2 x 10 7 unités/mg, d’au moins 3 x 10 7 unités/mg ou d’au moins 4 x 10 7 unités/mg supérieure à l’activité de la composition solide de référence. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide décrite ici est un produit séché d’une solution comprenant une BoNT/A et de la HSA et a une diminution d’activité moindre que celle d’une composition solide de référence, dans laquelle la composition solide de référence est produite à partir d’une solution de référence comprenant une BoNT/A et de la HSA par un processus de séchage réalisé de sorte que la solution de référence subit une congélation lors du séchage et dans laquelle la solution de référence est sensiblement identique à la solution. Le terme « sensiblement identique » peut être compris comme décrit ci-dessus. Une description supplémentaire concernant une composition solide de référence est fournie ci-dessus dans la section 5.3. Dans certains modes de réalisation, la composition solide décrite ici a une diminution d’activité moindre d’au moins 10 %, d’au moins 20 %, d’au moins 30 %, d’au moins 40 %, d’au moins 50 %, d’au moins 60 %, d’au moins 70 %, d’au moins 80 %, d’au moins 90 %, d’au moins 95 % par rapport à celle de la composition solide de référence. L’activité des compositions de BoNT/A décrites ici peut être déterminée avec des méthodes connues dans l’état de la technique, incluant, mais sans s’y limiter, par exemple un test d’activité des chaînes légères par chromatographie liquide haute performance (LCA-HPLC pour « Light-Chain Activity HPLC » en anglais), test de la DL 50 chez la souris, test d’abduction des doigts chez la souris (DAS pour « Digit Abduction Score » en anglais), test de la protéine SNAP-25, test d’activité sur cellules (CBPA pour « « Cell Based Potency Assay » en anglais), etc . Le test LCA-HPLC mesure la spécificité du clivage de la SNAP-25. Des échantillons sont mis en réaction avec un substrat fluorescent de BoNT/A disponible dans le commerce dérivé de la séquence de la SNAP-25. Les produits de clivage marqués par fluorescence sont séparés et détectés par une méthode d’HPLC en phase inverse (RP-HPLC pour « reverse-phase HPLC » en anglais). Une description supplémentaire du test LCA-HPLC peut être consultée dans les publications Hunt et al . (2010) Toxins 2(8):2198-2212 et Rupp et al. (2020) Toxins 12(6):393. Dans un mode de réalisation, l’activité est déterminée à l’aide d’un test de la DL 50 chez la souris. Le test de la dose létale 50 % (DL 50 ) chez la souris a été décrit dans, par exemple , Schantz et Kautter (1978) Journal of the AOAC 61(1):96-99, Hunt et Kenneth (2009) Neuropharmacologie clinique 32(1):28-31, le brevet US 7 160 699 et le brevet US 9 725 705. Un test de la dose létale 50 % (DL 50 ) chez la souris est une méthode pour mesure l’activité d’une toxine botulique par injection intrapéritonéale de la toxine botulique chez des souris femelles (âgées d’environ quatre semaines) pesant de 17 à 22 grammes chacune au début du test. Chaque souris est maintenue dans une position allongée avec sa tête inclinée vers le bas et reçoit une injection intrapéritonéale dans la partie inférieure droite de l’abdomen selon un angle d’environ 30 degrés à l’aide d’une aiguille de jauge 25 à 27 et de 3/8’’ à 5/8", d’une parmi plusieurs dilutions en série de la toxine botulique en solution saline. Les taux de décès sur les 72 heures qui suivent pour chaque dilution sont enregistrés. Les dilutions sont préparées de sorte que la dilution la plus concentrée produit un taux de décès d’au moins 80 % des souris injectées, et la dilution la moins concentrée produit un taux de décès n’excédant pas 20 % des souris injectées. Il doit y avoir un minimum de quatre dilutions qui se situent dans la plage de décroissance monotone des taux de décès. La plage de décroissance monotone commence avec un taux de décès supérieur ou égal à 80 %. Parmi les quatre taux de décroissance monotone ou plus, les deux taux les plus importants et les deux taux les plus faibles doivent être décroissants ( c’est-à-dire , non équivalents). La dilution à laquelle 50 % des souris meurent dans la période d’observation post-injection de trois jours est définie comme une dilution qui comprend une unité (1 U) de la toxine botulique. Le test d’abduction des doigts chez la souris (DAS) est une évaluation in vivo de la paralysie musculaire induite par la toxine à la suite de l’injection de toxine BoNT/A dans le muscle du membre postérieur d’un rongeur. Le test DAS peut être utilisé pour évaluer l’activité de compositions de BoNT/A sur la paralyse musculaire, ainsi que la durée d’action. Des protocoles détaillés de test DAS ont été décrits dans Aoki et al . (1999) Eur. J. Neurol. 6:s3-s10, Aoki (2001), Toxicon 39 : 1815-1820, Broide et al . (2013) Toxicon 71:18-24 et Rupp et al . (2020) Toxins 12(6):393. Par exemple, le test DAS peut être effectué par injection d’une composition de BoNT/A décrite ici dans le complexe gastrocnémien-soléaire de la souris, suivi d’une évaluation du score d’abduction des doigts en utilisant la méthode de Aoki (2001) Toxicon 39:1815-1820. Dans le test DAS, les souris sont suspendues brièvement par la queue dans l’objectif de provoquer une réponse de surprise caractéristique dans laquelle la souris étend ses membres postérieurs et écarte ses doigts postérieurs. Après l’injection de composition de BoNT/A, les différents degrés d’abduction des doigts sont évalués sur une échelle à 5 niveaux (de 0 pour une abduction normale à 4 pour une réduction maximale de l’abduction des doigts et de l’extension de la patte). Le rapport dit de sécurité est le rapport entre la quantité d’une toxine requise pour une perte de 10 % de poids corporel (mesurée à son maximum dans les sept premiers jours suivant l’administration chez la souris) et la quantité de toxine requise pour un score DAS égal à 2. Il peut également être déterminé pour évaluer l’index thérapeutique de la composition de BoNT/A décrite ici, comme décrit dans le brevet US 9 920 310. Des scores élevés de rapport de sécurité sont donc souhaités et indiquent qu’une toxine est apte à paralyser efficacement un muscle cible avec peu d’effets indésirables en dehors de la cible. Le test SNAP-25 est une méthode basée sur la technique ELISA pour mesurer l’activité protéolytique de la toxine botulique vis-à-vis de la protéine SNAP-25. Le test utilise une protéine SNAP-25 tronquée (peptide de 206 résidus d’acide aminé) fixée sur des plaques 96 puits de microtitration en polystyrène et un anticorps monoclonal qui reconnaît le produit clivé (un peptide de 197 résidus d’acide aminé) qui est obtenu par hydrolyse enzymatique entre les acides aminés 197 et 198 de la SNAP-25 par la toxine botulique de type A réduite. L’anticorps monoclonal fixé au produit clivé est ensuite détecté avec un anticorps secondaire (anticorps de chèvre anti-IgG de souris conjugué à la peroxydase de raifort HRP) qui produit un changement de couleur en présence d’un substrat chromogène (TMB). Des méthodes SNAP-25 données à titre d’exemple sont décrites dans Ekong et al. (1997) Microbiology 143:3337-3347 et dans le brevet US 7 160 699. Un test d’activité sur cellules (CBPA) a été décrit dans, par exemple , Fernández-Salas et al. (2012) PLOS ONE 7(11):e49516, Rupp et al. (2020) Toxins 12(6):393, WO 2010/105234 et WO 2009/114748. Dans un mode de réalisation, le test CBPA SNAP-25 197 SiMa H1 par électrochimiluminescence (ECL) est utilisé pour déterminer l’activité des compositions de BoNT/A décrites ici. Le test CBPA SNAP-25 197 SiMa H1 par électrochimiluminescence (ECL) est un test in vitro sur cellules qui évalue les étapes clés de l’intoxication par BoNT/A : liaison cellulaire médiée par des récepteurs et internalisation, translocation du domaine protéase (chaîne légère) dans le cytosol, et clivage protéolytique de la SNAP-25, permettant une comparaison directe de l’activité biologique in vitro des produits de BoNT/A (Fernandez-Salen et al. (2012) PLOS ONE 7(11):e49516 ; Rupp et al. (2020) Toxins 12(6):393). Pour résumer, des cellules humaines de neuroblastome SiMa H1 sont déposées sur des plaques 96 puits traitées à la polyD-lysine (PDL) dans des milieux sans sérum (SFM pour « serum-free media » en anglais) avec 25 µg/mL de GT 1 b pendant trois jours et traités avec des échantillons de toxine pendant 24 heures. Après traitement, les toxines sont éliminées, les cellules sont lysées et les lysats sont transférés vers des plaques « MSD High Bind » enduites d’un anticorps monoclonal (mAb) 2E2A6 anti-SNAP-25 197 . Les plaques sont ensuite lavées et incubées avec un anticorps polyclonal (pAb) anti-SNAP-25 marqué SULFO-TAG NHS-Ester pour la détection. La SNAP-25 clivée par la toxine BoNT/A ainsi capturée est ensuite quantifiée sur un lecteur de plaques MSD. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide décrite ici est un produit séché d’une solution comprenant une BoNT/A et de la HSA et a une qualité visuelle de produit supérieure ( par exemple , moins ou pas de flocons) par rapport à une composition solide de référence, dans laquelle la composition solide de référence est produite à partir d’une solution de référence comprenant une BoNT/A et de la HSA par un processus de séchage réalisé de sorte que la solution de référence subit une congélation lors du séchage et dans laquelle la solution de référence est sensiblement identique à la solution. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide décrite ici est un produit séché d’une solution comprenant une BoNT/A et de la HSA et a une qualité visuelle de produit plus constante ( par exemple , avec, de manière plus constante, moins ou pas de flocons) par rapport à une composition solide de référence. Le terme « sensiblement identique » peut être compris comme décrit ci-dessus. Une description supplémentaire concernant une composition solide de référence est fournie ci-dessus dans la section 5.3. Dans divers modes de réalisation et aspects, une composition solide décrite ici est un produit séché d’une solution comprenant une BoNT/A et de la HSA et a une immunogénicité inférieure à celle d’une composition solide de référence, dans laquelle la composition solide de référence est produite à partir d’une solution de référence comprenant une BoNT/A et de la HSA par un processus de séchage réalisé de sorte que la solution de référence subit une congélation lors du séchage et dans laquelle la solution de référence est sensiblement identique à la solution. Le terme « sensiblement identique » peut être compris comme décrit ci-dessus. Une description supplémentaire concernant une composition solide de référence est fournie ci-dessus dans la section 5.3. L’immunogénicité d’une composition de BoNT/a peut être mesurée par n’importe quelle méthode décrite ici ou connue dans l’état de la technique et appropriée pour mesurer l’immunogénicité d’une composition de BoNT/A, telle que, mais sans s’y limiter, la détection d’anticorps neutralisants ( par exemple , anticorps anti-HSA et/ou anticorps anti-BoNT/a). 6. MODES DE REALISATION ILLUSTRATIFS La présente description comporte les modes de réalisation illustratifs et non limitatifs suivants : Composition solide comprenant un complexe de neurotoxine de Clostridium botulinum de sérotype A (BoNT/A) de 900 kDa, de l’albumine sérique humaine (HSA) et du chlorure de sodium (NaCl), dans laquelle la HSA comprend un monomère de HSA et des agrégats de HSA, dans laquelle au moins une partie de la HSA est sous la forme de HSA soluble lorsque la composition solide est reconstituée dans un milieu aqueux, et dans laquelle moins de 34 % de la HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA. Composition solide selon le mode de réalisation 1, dans laquelle les agrégats de HSA comprennent un polymère de HSA, un oligomère de HSA et un dimère de HSA. Composition solide selon le mode de réalisation 1 et le mode de réalisation 2, dans laquelle moins de 30 % de la HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA. Composition solide selon le mode de réalisation 1 et le mode de réalisation 2, dans laquelle moins de 0,8 % de la HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA. Composition solide selon le mode de réalisation 1 et le mode de réalisation 2, dans laquelle moins de 4,8 % de la HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 5, dans laquelle le pourcentage des agrégats de HSA, du polymère de HSA, de l’oligomère de HSA et/ou du dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est déterminé par chromatographie par perméation de gel (SEC) après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide avec de l’eau. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 6, dans laquelle la composition solide est une composition pharmaceutique en poudre. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 7, dans laquelle le pourcentage des agrégats de HSA, du polymère de HSA, de l’oligomère de HSA et/ou du dimère de HSA dans la HSA soluble contenue dans la composition solide est déterminé par chromatographie par perméation de gel (SEC) à l’aide d’un détecteur UV à une longueur d’onde de 220 nm après reconstitution d’au moins une partie de la composition solide avec de l’eau. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 8, dans laquelle la composition solide est exempte de produits d’origine animale. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 9, dans laquelle la HSA est une HSA recombinante. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 10, dans laquelle la composition solide comprend environ 0,5 mg de HSA pour 100 unités de BoNT/A. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 11, dans laquelle la composition solide comprend environ 0,9 mg de NaCl pour 100 unités de BoNT/A. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 12, dans laquelle la BoNT/A est l’onabotulinumtoxinA. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 13, dans laquelle la BoNT/A est produite par l’intermédiaire d’un processus de purification par chromatographie sur colonne. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 14, dans laquelle la BoNT/A est produite par l’intermédiaire d’un processus de purification par chromatographie sur colonne, dans laquelle le processus de purification par chromatographie sur colonne comprend une chromatographie d’interaction hydrophobe. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 15, dans laquelle le processus de purification par chromatographie sur colonne comprend en outre une chromatographie par échange d’anions. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 16, dans laquelle le processus de purification par chromatographie sur colonne comprend en outre une chromatographie par échange de cations. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 17, dans laquelle la composition solide ne comprend pas d’inhibiteur de protéase. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 18, dans laquelle la composition solide ne comprend pas de chlorhydrate de benzamidine. Composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 19, dans laquelle la composition solide a une activité comprise entre environ 1,5 x 10 7 unités/mg et environ 6,0 x 10 7 unités/mg. Procédé de production d’une composition solide comprenant un complexe de BoNT/A de 900 kDa, de la HSA et du NaCl, ledit procédé comprenant une étape de séchage d’une solution comprenant une BoNT/A, de la HSA et du NaCl afin de produire ladite composition solide, dans lequel la solution ne subit pas de congélation lors de l’étape de séchage. Procédé selon le mode de réalisation 21, dans lequel l’étape de séchage est au moins partiellement régulée manuellement. Procédé selon le mode de réalisation 21 ou le mode de réalisation 22, dans lequel l’étape de séchage est un séchage sous vide. Procédé selon le mode de réalisation 23, dans lequel l’étape de séchage sous vide comprend une étape de mise sous vide échelonnée. Procédé selon l’un quelconque des modes de réalisation 21 à 24, dans lequel le procédé produit une composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 20. Composition solide produite par le procédé selon l’un quelconque des modes de réalisation 21 à 25. Procédé de traitement d’un patient le nécessitant, comprenant l’administration de la composition solide selon l’un quelconque des modes de réalisation 1 à 20 et 26. Procédé sensiblement tel que décrit ici. Composition sensiblement telle que décrite ici. 7. EXEMPLE Certains modes de réalisation de la présente invention sont illustrés par les exemples non limitatifs suivants, qui décrivent différents procédés d’obtention de BoNT/A et démontrent que la congélation lors du séchage conduit à une augmentation significative de la quantité d’agrégation de HSA dans une composition solide de BoNT/A, par comparaison au séchage sans congélation, et que des compositions solides de BoNT/A séchées sans subir de congélation ont une baisse d’activité plus lente pendant le stockage. 7 .1. Exemple 1 — Stabilité chimique et physique de l’albumine sérique humaine pendant la fabrication de produit fini de toxine botulique : étude à l’échelle du laboratoire. 7.1.1. Introduction La majorité des produits finis à base de neurotoxine disponibles sur le marché contiennent de l’albumine sérique humaine (HSA) en tant qu’excipient. La compréhension du phénomène d’agrégation de la HSA peut être importante pour la mise au point et la commercialisation de produits à base de neurotoxine. Des agrégats de HSA peuvent être introduits dans un produit fini (DP pour « drug product » en anglais) à partir de HSA entrante qui est utilisée dans la fabrication de la DP. La monographie de la Pharmacopée Européenne relative à la HSA indique que la surface totale des pics dus aux polymères et aux agrégats de HSA doit représenter au maximum 10 % de la surface totale (http://www.uspbpep.com/ep60/human%20albumin%20solution%200255e.pdf, PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 6.0, Solution d’albumine humaine). Les fabricants de HSA de qualité pharmaceutique peuvent également imposer des normes plus strictes sur le niveau d’agrégation. Par exemple, CSL Behring — l’un des fournisseurs de HSA — spécifie pour les agrégats une norme ≤ 8 % ( FIG. 1 ). La présente étude cherche à déterminer si des agrégats de HSA peuvent également être produits lors de la fabrication de produit fini (DP). Comme pour toute fabrication de produit biopharmaceutique stérile, il y a plusieurs étapes dans la fabrication d’une DP de BoNT/A. Dans la présente étude, l’agrégation de HSA a été mesurée dans des lots de DP de BoNT/A produits en laboratoire et dans des lots placebo qui ont été fabriqués selon les trois ensembles de conditions sur la base de la même formulation, contenant de la HSA et du NaCl, avec (pour les lots de DP de BoNT/A) et sans (pour les lots placebo) BoNT/A, le principe actif. Les principales différences dans les procédés de fabrication concernent le processus de séchage et le stockage de la solution de vrac avant l’étape de séchage. Les produits finis de BoNT/A disponibles sur le marché sont produits soit avec une lyophilisation soit avec un séchage sous vide. Les deux procédés de fabrication peuvent mettre en œuvre le même équipement de lyophilisation, tandis que la différence principale concerne l’étape de congélation utilisée dans cette dernière. Le refroidissement par évaporation lors du séchage sous vide peut toutefois également conduire à une congélation. Une autre différence éventuelle dans les conditions de fabrication concerne les durées pendant lesquelles un produit fini en vrac est stocké avant de débuter la filtration stérilisante, ainsi qu’entre la filtration et la fin du remplissage en flacons. De tels temps de stockage pour une fabrication en laboratoire, où quelques dizaines à quelques centaines de flacons sont produits, peuvent être réduits à moins d’une heure. À l’inverse pour une production à l’échelle commerciale, avec un nombre de flacons produits s’élevant à plusieurs milliers voire dizaines de milliers, un temps de stockage pré-séchage serait beaucoup plus long. De plus, un procédé commercial est généralement validé pour des temps de stockage étendus afin de prévoir l’éventualité de retards imprévus, par exemple , un dysfonctionnement de l’équipement de remplissage. Par conséquent, les conséquences du stockage pré-séchage du produit fini en vrac ont également été évaluées dans la présente étude. La formulation contient de la HSA et du NaCl. Des lots ont été produits avec le principe actif, à savoir BoNT/A (lots actifs de DP) et sans BoNT/A (lots placebo). 7.1.2. Matériaux et procédés 7.1.2.1 Matériaux La HSA provient de CSL Behring et se présente en tant que solution à 25 %. Une solution stérile de NaCl à 0,9 % en poids (qualité USP, EP, BP, JP, Terumo BCT Ltd), des granules de NaCl (Baker JT, qualité USP, EP, JP, BP) et de l’eau MilliQ ont été utilisés pour la fabrication. Une solution concentrée de substance active de BoNT/A (DS pour « drug substance » en anglais) a été fournie par AbbVie. Des flacons (verre type 1, 10 mL, Gerresheimer) ont été lavés et dépyrogénés. Des bouchons (20 mm Lyotec West S-87-J, 4432/50 GRY, prêts à stériliser) ont été stérilisés et séchés. Pour les lots avec un principe actif, une solution de substance active de BoNT/A a été ajoutée à la solution d’excipient (0,5 % en poids de HSA et 0,9 % en poids de NaCl) en utilisant un facteur de dilution de 23 000, filtrée à l’aide d’un filtre stérilisant 0,2 µm Millipak-20 traité par irradiation gamma, remplie de manière aseptique dans des flacons de verre de type 1 de 10 mL à raison de 0,1 mL/flacon, lesquels bouchés partiellement, chargés dans un lyophilisateur LyoStar2, soumis à séchage sous vide ou lyophilisation, bouchés sous vide à la fin du processus de séchage et scellés avec une capsule aluminium. Les lots placebo ont été fabriqués de la même manière, à l’exception de l’ajout de DS et d’un volume de remplissage plus important à 0.2 mL/flacon. La température de produit lors du séchage sous vide a été mesurée avec des sondes de température (Ellab, Danemark) en temps réel. Les données de température ont également été consignées avec les enregistreurs de données. Trois ensembles de conditions de fabrication ont été utilisés : les différences principales sont présentées dans le tableau 2 et des informations plus détaillées sont fournies dans la section 7.1.2.2 ci-dessous. Cinq lots de produits finis et trois lots placebo ont été fabriqués. Les figures 2A et 2B montrent des cycles représentatifs pour le séchage sous vide et pour la lyophilisation. Référence du procédé de fabrication Stockage pré-filtration/post-filtration du produit fini (DP) en vrac Procédé de séchage Nombre de lots produits Actif/Placebo 1 Séchage sous vide 2/1 2 Lyophilisation 1/1 3 24 h / 24 h Lyophilisation 2/1 7.1.2.2. Procédés 7.1.2.2.1. Procédures de séchage Le cycle du procédé 1 ( soit séchage sous vide) est présenté dans le tableau 3. La mise sous vide du lyophilisateur entraîne le refroidissement des flacons. Pour empêcher la congélation des solutions dans les flacons, une procédure spécifique échelonnée a été adoptée permettant à la chambre du lyophilisateur d’être mise sous vide sans entraîner la congélation des solutions dans les flacons. Spécifiquement, avant de commencer le cycle de séchage sous vide automatisé du tableau 3 (soit avant l’étape de mise sous vide et après l’étape de pré-congélation), le vide a été régulé manuellement, tel que décrit ci-dessous, afin de réduire le risque de congélation pour les solutions dans les flacons lié à une mise sous vide trop rapide dans la chambre d’échantillon du lyophilisateur. La principale raison de cette régulation manuelle échelonnée est que le LyoStar 2 ne permet pas de contrôler la vitesse de mise sous vide lors du cycle. À la place, le vide a été appliqué, avec la vitesse de mise sous vide non contrôlée, et il a été stoppé à différents intervalles pour permettre à la température de produit de revenir à une température plus élevée (telle que 20 °C) avant d’être appliqué à nouveau. Deux thermocouples de température ont été insérés dans 2 flacons à proximité du milieu du plateau, afin de suivre la température de produit. Le cycle manuel a été lancé. La température d’étagère a été réglée à 20 °C. Le condenseur a été mis en marche. Le vide a ensuite été appliqué et arrêté manuellement à 20 000 mTorr. La température de produit, obtenue à partir des relevés des thermocouples, était de 16 °C. La température de produit a été autorisée à monter à 20 °C et le vide de nouveau appliqué jusqu’à ce que le relevé de pression Pirani ait atteint 5 000 mTorr, moment où le vide a été arrêté. La température de produit était de 2 °C. De nouveau, la température du produit a été autorisée à monter à 18 °C. À ce stade, le cycle automatisé présenté dans le tableau 3 ci-dessous a été lancé. Une fois que le cycle de séchage sous vide a été achevé, les flacons ont été complètement bouchés, capsulés et stockés dans un congélateur à -20 °C. [Tableau 3] Paramètre de cycle — Procédé 1 Étape Température °C Montée en température °C/min Durée de stockage intermédiaire min Pression mTorr Pré-congélation 20 1 15 ambiante Congélation NA NA NA ambiante Congélation supplémentaire NA NA NA ambiante Mise sous vide 20 0 15 84 Séchage primaire 20 1 300 84 Séchage secondaire NA NA NA NA Stockage intermédiaire 5 NA NA 84 NA = non applicable Le cycle du procédé 2 ( soit lyophilisation) est présenté dans le tableau 4. Spécifiquement, un cycle de congélation à -50 °C, pendant 120 minutes, a été inclus dans ce cycle. Le cycle du procédé 2 n’incluait pas d’étape de mise sous vide échelonnée. Une fois le cycle terminé, les flacons ont été complètement bouchés sous vide et le lyophilisateur a été ramené à des conditions ambiantes. Les flacons ont été capsulés et stockés à -20 °C jusqu’à analyse. [Tableau 4] Paramètre de cycle — Procédé 2 Étape Température °C Montée en température °C/min Durée de stockage intermédiaire min Pression mTorr Pré-congélation 2 1 15 ambiante Congélation -50 1 120 ambiante Congélation supplémentaire NA NA NA ambiante Mise sous vide -50 0 15 84 Séchage primaire 20 1 300 84 Séchage secondaire NA NA NA NA Stockage intermédiaire 5 NA NA 84 NA = non applicable Le cycle du procédé 3 ( soit lyophilisation + stockage intermédiaire à température ambiante) est présenté dans le tableau 5. Spécifiquement, un cycle de congélation à -50 °C, pendant 120 minutes, a été inclus dans ce cycle. Le cycle du procédé 3 n’incluait pas d’étape de mise sous vide échelonnée. Une fois le cycle terminé, les flacons ont été complètement bouchés sous vide et le lyophilisateur a été ramené à des conditions ambiantes. Les flacons ont été capsulés et stockés à -20 °C jusqu’à analyse. Avant le cycle de séchage, la solution de produit a été stockée à température ambiante pendant 24 heures avant filtration puis de nouveau 24 heures après filtration. [Tableau 5] Paramètre de cycle — Procédé 3 Étape Température °C Montée en température °C/min Durée de stockage intermédiaire min Pression mTorr Pré-congélation 2 1 15 ambiante Congélation -50 1 120 ambiante Congélation supplémentaire NA NA NA ambiante Mise sous vide -50 0 15 84 Séchage primaire 20 1 300 84 Séchage secondaire NA NA NA NA Stockage intermédiaire 5 NA NA 84 NA = non applicable 7.1.2.2.2. Analyse de l’agrégation de HSA par SEC L’agrégation de l’albumine sérique humaine (HSA) a été mesurée par chromatographie par perméation de gel (SEC). Les échantillons séchés ont été reconstitués par ajout de 0,25 mL d’eau par flacon. Les solutions de HSA pure à 25 % ont été diluées avec de l’eau à 0,25 mg/mL avant injection HPLC. Des étalons de vérification de conformité du système ont été injectés 5 fois avant les injections d’échantillon puis toutes les 10 injections pour vérifier la conformité du système. Les paramètres HPLC sont présentés dans le tableau 6. Les échantillons ont été lancés et analysés avec Empower. Cinq lots actifs et trois lots placebo ont été testés par SEC. L’analyse statistique des données SEC a été effectuée à l’aide du logiciel statistique JMP 10.0. [Tableau 6] Paramètres SEC Paramètre Méthode Volume d’injection 50 µL Température de colonne Température ambiante Colonne Superdex 200 10/300 Débit 0,5 mL/min Phase mobile Phosphate de potassium 50 mM + NaCl 150 mM, pH 7,0 Temps d’exécution 60 minutes Préparation de l’échantillon Flacons reconstitués à 0,25 mg/mL dans l’eau Détection Fluorescence (excitation 280 nm, émission 350 nm) 280 nm 220 nm 7.1.2.2.3. Dosage Karl Fischer Le dosage coulométrique de Karl Fischer (KF) a été utilisé pour quantifier la teneur en eau résiduelle dans le produit séché. Un titrateur KF avec four et échantillonneur automatique a été utilisé. Les échantillons ont été analysés en triplicate. Des flacons scellés ont été chauffés dans le four KF à 115 °C. De l’azote gazeux a été utilisé pour purger les flacons et transporter toute humidité dans l’espace de tête vers la cuve de réaction, contenant le réactif KF. La réaction s’est déroulée jusqu’à ce qu’à diminution du taux en dessous de 20 µg/min. Des flacons vides, qui ont subi les mêmes cycles de lyophilisation ou de séchage sous vide, ont également été testés, et la teneur en eau des témoins a été soustraite pour obtenir la teneur en eau dans le matériau séché. Quatre lots représentatifs ont été testés. 7.1.2.2.4. Microscopie électronique à balayage (MEB) Trois lots de gâteau séché placebo ont été examinés à l’aide d’un MEB à émission de champ FEI Quanta-450 (Thermo Fisher Scientific, Hillsboro, OR) avec un détecteur d’électrons rétrodiffusés. Les conditions d’imagerie étaient les suivantes : 10 kV et 10 mm de distance de travail sous faible vide. Les échantillons n’étaient pas revêtus. L’imagerie par MEB de la morphologie de gâteau séché placebo a nécessité la rupture du flacon de verre pour isoler les parties gâteau séché/verre. Pour ce faire, le flacon a été entaillé près du talon à l’aide d’une pointe en diamant, puis le verre a été brisé d’un coup sec. Des parties appropriées de chaque échantillon ont ensuite été montées sur un porte-échantillon du MEB à l’aide de ruban adhésif en carbone. Trois lots placebo ont été testés par MEB. 7.1.2.2.5. Analyse des particules subvisibles Pour le test des particules subvisibles, trois lots placebo, produits respectivement par les procédés 1, 2 et 3, ont été testés. Les flacons contenant le placebo séché ont été reconstitués par ajout de 2 mL de solution saline par flacon et délicatement mélangés. Des flacons de chaque lot ont été testés à l’aide d’un système d’imagerie des particules subvisibles non invasif de laboratoire, tel que décrit dans le brevet US 10 132 736 B2. Lors de la mesure des particules, une solution reconstituée dans un flacon a été partiellement éclairée par un faisceau laser focalisé en une fine feuille de lumière. Les images vidéo ont été enregistrées à l’aide d’une caméra vidéo numérique sensible dotée d’un système d’objectif spécialement conçu pour compenser la distorsion de l’image causée par la forme cylindrique du récipient. L’utilisation de ce système permet de compter de manière non invasive des particules subvisibles dans des seringues ou des flacons. Le logiciel développé au laboratoire peut mesurer le nombre de particules, leur taille et leur intensité dans chaque image en temps réel. Le nombre absolu de particules et leur taille peuvent être calibrés à l’aide d’échantillons de particules étalons. 7.1.2.2.6. Diffraction des rayons X sur XRPD Les diffractogrammes XRPD ont été obtenus avec un diffractomètre à rayons X MiniFlex 600 (Rigaku, Texas, États-Unis) avec un rayonnement Cu Kα (λ = 1.54 Å, 40 kV/15 mA). L’instrument a été étalonné avec un étalon de silicium avec un pic de référence à 28,44° (2θ). Des échantillons solides ont été préparés sur un support Si à faible bruit de fond par application d’une légère pression pour maintenir la surface de l’échantillon à plat et au niveau de la surface de référence du porte-échantillon. Chaque échantillon a été analysé de 3 à 45° (2θ) à l’aide d’un balayage continu de 1° (2θ) par minute avec un pas de 0,01° (2θ). L’analyse des données a été effectuée à l’aide du logiciel PDXL. 7.1.2.2.7. Diffusion de rayons X aux petits angles/diffusion de rayons X aux grands angles (SAXS/WAXS) Les analyses SAXS/WAXS de deux solutions (NaCl 0,9%/HSA 0.5 % et NaCl 0,9 % dans l’eau) ont été réalisées sur la ligne de lumière ID02 de l’Installation européenne de rayonnement synchrotron (ESRF pour « European Synchrotron Radiation Facility » en anglais). Les solutions ont été remplies dans des capillaires de 1 mm, et chargées sur une platine Linkam pour des analyses à températures variables. Des images SAXS et WAXS bidimensionnelles ont été obtenues à l’aide de deux détecteurs différents. Le temps d’exposition a été ajusté pour utiliser la dynamique maximale des détecteurs pour chaque échantillon et était inférieur à 1 seconde dans la majorité des cas. Les images bidimensionnelles ont été normalisées à une échelle d’intensité absolue après mise en œuvre des corrections de détecteur standard et intégrées de manière azimutale afin d’obtenir les courbes de diffraction de rayons X unidimensionnelles correspondantes. Les calibrations de q pour les analyses SAXS et WAXS ont été réalisées avec des poudres de béhénate d’argent et de silicium, respectivement. Les mesures SAXS/WAXS combinées ont toutes été normalisées. 7.1.2.2.8. Modifications du pH apparent Pour suivre les modifications de pH apparent pendant la congélation de la formulation, une électrode pH basse température, InLab ® Cool (pH 1 à 11, température -30 °C à 80 °C, électrolyte PRISCOLYT-B ® ) (METTLER TOLEDO), a été utilisée. L’électrode de pH a été étalonnée à température ambiante à l’aide d’étalons tampons traçables NIST — pH 4,01, pH 7,00 et pH 10,00 (solutions Aqua). Un bécher en verre avec 50 mL de solution placebo a été transféré dans un lyophilisateur (Lyostar III, SP Scientific). La sonde de température et l’électrode de pH basse température ont été placées dans le bécher de solution placebo. La porte du lyophilisateur a été fermée et le refroidissement a été lancé en mode manuel avec une température d’étagère réglée à -55 °C. La lecture du pH a été consignée à chaque changement d’unité de la température d’échantillon. Une fois la température d’échantillon à -50 °C, le point de consigne d’étagère a été augmenté par incréments de 10 °C jusqu’à ce que la température d’échantillon se situe dans une fourchette de 2 ºC par rapport à la température d’étagère, ce qui a permis à l’échantillon de décongeler jusqu’à 20 ºC. Le pH a également été mesuré lors de l’évaporation, en utilisant une microélectrode InLab®Micro (pH 0 à 14, température 0 °C à 80 °C, électrolyte 3 M KCl) (METTLER TOLEDO), tandis que la masse d’échantillon a été déterminée à intervalles réguliers avec le placebo sous évaporation sous flux d’azote. La microélectrode de pH a été calibrée à température ambiante à l’aide des mêmes étalons tampons traçables NIST que ceux cités précédemment. Environ 7,3 g de solution placebo ont été placés dans un flacon en verre et soumis à flux d’azote sous hotte. Le flacon d’échantillon a été retiré de la hotte par intermittence afin de consigner les données de pH et de masse. 7.1.3. Résultats 7.1.3.1. Caractérisation de la HSA « pure ». Des chromatogrammes SEC représentatifs pour une solution de HSA (matière première) sont présentés dans les figures 3A à 3C. Outre le pic de monomère de HSA (temps de rétention, RT ~ 27 min), trois pics d’espèces de poids moléculaire plus élevé ont été identifiés en tant que dimère (RT ~ 23,5 min), oligomère de HSA (RT ~ 21 min), et polymère de HSA (RT ~ 16 min). L’assignation des pics de polymère, d’oligomère, de dimère et de monomère a été réalisée en référence aux temps de rétention obtenus lors de l’analyse de l’étalon Bio-Rad pour la perméation de gel (réf. 151-1901) sur la même colonne. L’étalon pour la perméation de gel est constitué de thyroglobuline bovine (PM 670 kDa), de gammaglobuline bovine (PM 158 kDa), d’albumine de poulet (PM 44 kDa), de myoglobuline de cheval (PM 17 kDa) et de vitamine B12 (PM 1350 Da). En fonction de la méthode de détection, une agrégation totale dans la HSA soluble soumise à analyse chromatographique SEC comprise entre environ 4 % et environ 10 % a été observée, avec l’obtention des valeurs les plus élevées par détection de fluorescence suivie de la détection UV à une longueur d’onde de 280 nm. Des oligomères ont été détectés par fluorescence, mais pas par le détecteur UV, probablement en lien avec la meilleure sensibilité du détecteur de fluorescence. Parmi les trois lots de HSA utilisés dans cette étude, les niveaux d’agrégation étaient similaires (tableaux 7 à 9). [Tableau 7] : Analyse SEC d’agrégats dans une solution de HSA (A220 nm) N o de lot HSA A220 nm Polymère (%) Oligomère (%) Dimère (%) Total des agrégats (%) 1 2,6 ± 0,5 0,0 ± 0,0 1,3 ± 0,2 3,83 ± 0,06 2 2,4 ± 0,5 0,0 ± 0,0 1,8 ± 0,2 4,2 ± 0,0 3 2,9 ± 0,0 0,0 ± 0,0 1,3 ± 0,0 4,2 ± 0,0 [Tableau 8] : Analyse SEC d’agrégats dans une solution de HSA (A280 nm) N o de lot HSA A220 nm Polymère (%) Oligomère (%) Dimère (%) Total des agrégats (%) 1 4,8 ± 0,9 0,0 ± 0,0 0,8 ± 0,3 5,67 ± 0,15 2 4,5 ± 0,8 0,0 ± 0,0 1,4 ± 0,7 5,9 ± 0,21 3 5,4 ± 0,1 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0 5,33 ± 0,12 [Tableau 9] : Analyse SEC d’agrégats dans une solution de HSA (fluorescence) N o de lot HSA Fluorescence Polymère (%) Oligomère (%) Dimère (%) Total des agrégats (%) 1 8,5 ± 1,4 0,2 ± 0,1 1,8 ± 0,1 10,4 ± 0,1 2 7,8 ± 1,0 0,2 ± 0,1 1,9 ± 1 9,9 ± 0,07 3 9,7 ± 0,1 0,2 ± 0,0 1,8 ± 0,0 11,63 ± 0,06 7.1.3.2. Agrégation de la HSA dans des lots actifs de DP et dans des lots placebo. L’agrégation de la HSA dans des lots de DP de BoNT/A a été caractérisée par chromatographie SEC. Des exemples de chromatogrammes SEC pour des lots de produit fini produits avec trois procédés de fabrication différents sont présentés dans les figures 4A à 4C. Une diminution significative du pic a été observée dans les lots lyophilisés produits à la fois avec le procédé 2 et le procédé 3, par comparaison avec le lot séché sous vide (procédé 1). Les pics de dimère et de polymère de HSA étaient plus importants dans les échantillons lyophilisés que dans le produit séché sous vide. Par ailleurs, deux pics de polymère de faible résolution ont été observés dans les échantillons lyophilisés, en particulier avec la détection UV aux deux longueurs d’onde de 220 nm et 280 nm. Les diagrammes à barres en encart dans les figures 4A à 4C montrent le pourcentage de différents types d’agrégats de HSA dans la HSA soluble soumise à analyse chromatographique SEC pour trois lots de DP ainsi que pour la HSA « pure ». Les valeurs des figures 4A à 4C sont présentées respectivement dans les tableaux 10 à 12 ci-dessous. Les niveaux des trois types d’agrégats étaient similaires entre la HSA « pure » et les lots de DP séchés sous vide (procédé de fabrication 1), tandis qu’une augmentation significative de l’agrégation a été observée pour les deux lots de DP lyophilisés. La quantification de l’agrégation détectée était fonction du type de détecteur ( voir figures 4A à 4C et tableaux 10 à 12). [Tableau 10] : Pourcentage des différents types d’agrégation de HSA (A220 nm) polymère % polymère % d’erreur (SD) dimère % dimère % d’erreur (SD) HSA pure 2,6 0,5 1,3 0,2 Séchage sous vide 2,3 0,1 2 0,1 Lyophilisation 13,7 0,6 4,6 0,5 Lyophilisation avec stockage intermédiaire 15,3 0,6 6,2 0,3 [Tableau 11] : Pourcentage des différents types d’agrégation de HSA (A280 nm) polymère % polymère % d’erreur (SD) dimère % dimère % d’erreur (SD) HSA pure 4,8 0,9 0,8 0,3 Séchage sous vide 4,3 0,1 1,5 0,1 Lyophilisation 30,8 0,7 3,7 0,3 Lyophilisation avec stockage intermédiaire 32,7 0,8 4,8 0,3 [Tableau 12] : Pourcentage des différents types d’agrégation de HSA (fluorescence) polymère % polymère % d’erreur (SD) oligomère % oligomère % d’erreur (SD) dimère % dimère % d’erreur (SD) HSA pure 8,5 1,4 0,2 0,1 1,8 0,1 Séchage sous vide 8 0,3 0,2 0,1 2,4 0,1 Lyophilisation 13,8 0,4 0,8 0,1 4,8 0,4 Lyophilisation avec stockage intermédiaire 15 0,5 1,1 0,1 6,3 0,2 L’agrégation de HSA totale représentant la somme des trois types d’agrégats dans la HSA soluble soumis à analyse chromatographique SEC pour une pluralité de lots de DP est présentée en figures 5A à 5G. Il n’y a pas eu d’augmentation significative dans l’agrégation des lots de DP produits avec le procédé de fabrication 1 (séchage sous vide), tandis que le lot de DP produit avec le procédé de fabrication 2 (lyophilisation) a présenté une augmentation significative de l’agrégation de HSA. Le temps de stockage pré-séchage plus long (procédé 3) n’a pas entraîné d’augmentation supplémentaire significative de l’agrégation de HSA. Le test des particules subvisibles a été réalisé avec des lots placebo séchés. Les résultats de comptage des particules sont présentés dans les figures 6A et 6B et dans le tableau 13. Le nombre total moyen de particules était inférieur dans le lot séché sous vide, tandis que les deux lots lyophilisés présentaient des niveaux plus élevés de particules subvisibles. Entre les deux lots lyophilisés, les nombres moyens de particules étaient similaires et compris dans la variation expérimentale. Les résultats sur les particules subvisibles étaient cohérents avec les données obtenues par analyse SEC pour les agrégats de HSA solubles (figures 5A à 5G), où il a été observé un niveau d’agrégation supérieur dans les échantillons lyophilisés par comparaison aux lots séchés sous vide. [Tableau 13] :Résultats de l’analyse des particules subvisibles Solution saline Référence (lot n o 6) Stress (stockage à température ambiante et congélation) (lot n o 11) Stress (congélation uniquement) (lot n o 8) Nombre moyen de particules (n = 1) Écart-type (SD) Nombre moyen de particules (n = 5) Écart-type (SD) Nombre moyen de particules (n = 1) Écart-type (SD) Nombre moyen de particules (n = 5) Écart-type (SD) 2,867 40,1802 19,71 260,067 94,77 370,459 85,93 7.1.3.3. Caractérisation physique du produit fini Afin d’appréhender les mécanismes possibles entraînant l’augmentation de l’agrégation de HSA lors de la lyophilisation, des analyses physiques supplémentaires ont été menées. Le pH apparent pendant la congélation a été mesuré à l’aide d’électrodes de pH basse température, InLab ® Cool (pH 1 à 11, température -30 °C à 80 °C, électrolyte PRISCOLYT-B ® ) (METTLER TOLEDO). Les résultats sont présentés en figures 7A à 7B. Une augmentation relativement faible, mais néanmoins notable du pH a été observée entre un pH initial de 6,7 et un pH de 7 lors du refroidissement de la solution entre la température ambiante et -10 °C. La nucléation de la glace, qui a été détectée à -10 °C, lors du pic de température de produit, n’a pas entraîné de modification de pH notable. Lors d’un refroidissement supplémentaire à -35 °C, le pH est resté compris entre 6,9 et 7,1, tandis que le pH a augmenté jusqu’à environ 8,1 lors d’un refroidissement de -35 °C à -50 °C. Cette augmentation du pH peut être liée à la cristallisation secondaire de NaCl*2H 2 O + eau, qui a été détectée à -35 °C lors d’une expérience WAXS distincte. Tandis que la température du produit n’a indiqué aucune preuve d’effet exothermique dû à la cristallisation secondaire, l’absence de l’effet thermique pourrait s’expliquer par une notion de sensibilité en lien avec une faible concentration de NaCl (0,9 % en poids). Il convient toutefois de noter que la plage de température de l’électrode de pH, selon les spécifications du fabricant, ne s’étend que jusqu’à -30 °C ; par conséquent, les résultats de pH en dessous de -30°C doivent être confirmés par une méthode orthogonale. Lors de l’expérience sous vide, une légère augmentation du pH, de 6,8 à 7,1, a été observée, la concentration totale de soluté passant de 1,4 % en poids dans la solution initiale à environ 8 % en poids. Les transitions de phase des solutions dans eau/NaCl et eau/NaCl/HSA lors du refroidissement ont été étudiées par diffusion de rayons X aux petits angles/diffusion de rayons X aux grands angles (SAXS/WAXS). Deux solutions aqueuses de placebo ont été testées, l’une contenant du NaCl 0,9 % et de la HSA 0,5 %, et l’autre contenant uniquement du NaCl 0,9 %. Les données obtenues par diffraction WAXS ont montré la formation de glace hexagonale que ce soit à -20 °C (solution de HSA+NaCl) ou à -15 °C (solution de NaCl) (figures 8A et 8B). Après poursuite du refroidissement, des pics caractéristiques du dihydrate de NaCl ont été détectés à -35 °C (solution HSA+NaCl) et à -25 °C (solution de NaCl). Les résultats obtenus par diffraction WAXS indiquent que la HSA peut faire obstacle à la cristallisation du dihydrate de NaCl. Les motifs de diffraction SAXS sont présentés à la FIG. 8 . Un pic lié à l’interaction des protéines a été observé dans une solution non congelée, tandis que la congélation entraîne la « disparition » du pic. Outre des modifications relatives au pic d’interaction des protéines, la congélation, selon une observation par diffraction WAXS à -20 °C, a entraîné une augmentation de l’intensité de diffraction aux faibles angles, indicative de la formation d’interfaces supplémentaires, c’est-à-dire d’interfaces glace/solution et probablement glace/air/solution. La poursuite du refroidissement jusqu’à -35 °C a entraîné une augmentation supplémentaire de la diffraction aux faibles angles qui a indiqué la formation de nouvelles interfaces. Cette augmentation d’interface a coïncidé avec la cristallisation de NaCl*2H 2 O telle qu’observée par WAXS. Deux approches ont été utilisées pour confirmer que le matériau ne congèle pas lors du séchage sous vide (procédé de fabrication 1) : le contrôle de la température de produit pendant le séchage sous vide et l’analyse des produits séchés au moyen de la microscopie électronique à balayage (MEB). Des données représentatives de la température de produit ( FIG. 2 ) montrent que la température est restée supérieure à 0 °C pendant toute la durée du cycle de séchage sous vide. Par conséquent, une congélation ne pourrait pas avoir lieu dans les flacons. Pour confirmer plus avant l’absence de congélation lors du séchage sous vide, des analyses par MEB ont été réalisées sur des produits en flacons sans thermocouples. Les images obtenues par MEB pour les produits lyophilisés ( FIG. 9 ) démontrent la morphologie poreuse des deux lots lyophilisés (images de droite et du milieu), comme attendu. Les pores dans les produits séchés représentent une « signature » liée à des cristaux de glace qui ont été sublimés lors du séchage primaire. L’absence de pores dans le produit séché sous vide (images de gauche) a confirmé que ce type de produit n’a pas subi de congélation. Une autre différence majeure entre les échantillons séchés sous vide et les échantillons lyophilisés concerne l’aspect des cristaux de NaCl, qui se présente sous des formes cubiques tapissant les parois internes d’interstices de la HSA dans le produit séché sous vide. Les lots lyophilisés ne présentaient aucun signe évident de la présence de cristaux de NaCl, possiblement parce qu’ils étaient plus petits que dans le lot séché sous vide. La taille réduite des cristaux est cohérente avec les résultats XRPD (ci-dessous) qui montrent des pics plus larges pour le lot lyophilisé comme attendu pour des cristaux plus petits et plus désordonnés. Les motifs de diffraction des rayons X (XRPD) pour deux lots placebo, qui ont été produits par des procédés de fabrication différents, sont présentés à la FIG. 10 . Deux pics fins de NaCl cristallin et un halo de HSA amorphe ont été observés dans les deux lots. Le lot séché sous vide (procédé 1) présente des pics cristallins plus intenses et plus fins, tandis que les pics de NaCl cristallin apparaissaient plus larges dans l’échantillon lyophilisé (procédé 3), reflétant probablement un plus haut degré de désordre. Ce résultat est cohérent avec les données MEB qui montrent des cristaux de NaCl plus importants dans le lot séché sous vide. En outre, des cristaux de NaCl anhydre ont été formés par déshydratation du dihydrate de NaCl lors de la lyophilisation, tandis que le NaCl cristallise directement en solution lors du séchage sous vide. Cette différence peut également contribuer à un plus haut degré de désordre cristallin du NaCl dans le produit lyophilisé. 7.1.3.4. Etude de stabilité de l’activité Dans une étude distincte, la congélation lors du séchage sous vide n’a pas semblé entraîner de modification statistiquement significative de l’activité de DP de BoNT/A après 6 mois de stockage à 5 °C par comparaison à un processus sans congélation (données non fournies). Outre les résultats à 5 °C, l’étude de cet exemple a également testé la stabilité de l’activité à température ambiante et à des températures plus élevées. Spécifiquement, la stabilité de deux lots de DP — lot n o 9 (procédé 3, lyophilisation + stockage intermédiaire) et lot n o 4 (procédé 1, séchage sous vide) — a été évaluée à 5 °C, 25 °C et 40 °C, respectivement. Des flacons de chaque lot ont été prélevés à différents intervalles entre 0 et 6 mois et analysés pour la récupération d’activité par un test d’activité sur cellules (CBPA). Les résultats sont présentés dans le tableau 14 ci-dessous. Les données du test dans des conditions de stockage à 25 °C sont également présentées à la FIG. 11 . [Tableau 14] Résultats de l’étude de stabilité de l’activité. N o de lot DP Processus de séchage Conditions de stockage Durée du stockage mois Récupération d’activité cible U/flacon Récupération d’activité mesurée U/flacon Récupération d’activité % de la valeur initiale 9 Procédé 3 5 C 0 100 73 100 9 Procédé 3 5 C 6 100 44 60,27 4 Procédé 1 5 C 0 100 153 100 4 Procédé 1 5 C 6 100 190 124,18 9 Procédé 3 25 °C, 60 % HR 0 100 73 100 9 Procédé 3 25 °C, 60 % HR 1 100 28 38,36 9 Procédé 3 25 °C, 60 % HR 3 100 20 27,4 9 Procédé 3 25 °C, 60 % HR 6 100 20 27,4 4 Procédé 1 25 °C, 60 % HR 0 100 153 100 4 Procédé 1 25 °C, 60 % HR 1 100 115 75,16 4 Procédé 1 25 °C, 60 % HR 3 100 136 88,89 4 Procédé 1 25 °C, 60 % HR 6 100 110 71,9 9 Procédé 3 40 °C, 75 % HR 0 100 73 100 9 Procédé 3 40 °C, 75 % HR 1 100 8 10,96 9 Procédé 3 40 °C, 75 % HR 3 100 6 8,22 9 Procédé 3 40 °C, 75 % HR 6 100 2 2,74 4 Procédé 1 40 °C, 75 % HR 0 100 153 100 4 Procédé 1 40 °C, 75 % HR 1 100 132 86,27 4 Procédé 1 40 °C, 75 % HR 3 100 117 76,47 4 Procédé 1 40 °C, 75 % HR 6 100 68 44,44 RH : humidité relative (destinée à simuler le stockage dans des conditions accélérées). Comme présenté, tandis que l’activité du lot de DP produit avec le procédé 3 diminue légèrement à 5 °C après 6 mois, elle diminue de façon spectaculaire à 25 °C et à 40 °C après seulement 3 mois. À l’inverse, l’activité du lot de DP produit avec le procédé 1 diminue beaucoup plus lentement à 25 °C et à 40 °C. 7.1.4. Discussion Un niveau élevé d’agrégation de HSA a été observé dans les lots lyophilisés, tandis que le séchage sous vide sans congélation n’a pas entraîné d’augmentation significative dans l’agrégation de HSA. L’agrégation de HSA n’a pas augmenté lors du séchage sous vide en l’absence de congélation. Le niveau des agrégats solubles a augmenté d’une teneur initiale comprise entre environ 4 % et environ 10 % dans la HSA « pure » jusqu’à une teneur comprise entre environ 20 % et environ 35 % (valeurs spécifiques en fonction du détecteur SEC, voir figures 5A à 5G) après lyophilisation et reconstitution. Les agrégats insolubles ont également augmenté significativement dans les produits lyophilisés par rapport aux produits séchés sous vide. Les résultats montrent qu’en régulant précisément des conditions de fabrication spécifiques, l’agrégation de HSA peut être significativement réduite, avec une détection de niveaux plus faibles d’agrégats de HSA à la fois solubles et insolubles lorsque la congélation est évitée lors du séchage. Les résultats montrent également que la congélation lors du séchage peut entraîner une baisse d’activité pus rapide lors du stockage. La déstabilisation et l’agrégation des protéines peuvent éventuellement être reliées à la concentration des protéines et à la force ionique. Toutefois, la faible agrégation de HSA dans les lots de produits séchés sous vide indique que ni une augmentation de concentration des protéines ni la force ionique ne constituent les mécanismes principaux dans l’agrégation de HSA observée en tant que telle. En dehors de tout lien avec une théorie quelconque, les résultats de la présente étude suggèrent que l’agrégation de HSA observée peut être liée à NaCl*2H 2 O. En particulier, la cristallisation secondaire (NaCl*2H 2 O + eau) pourrait créer des conditions favorables de pression induite par la congélation, dans la mesure où elle intervient dans une « enceinte » rigide de cristaux de glace, qui a été formée lors d’un événement de congélation primaire, contribuant ainsi possiblement à la déstabilisation des protéines lors de la congélation. La cristallisation de NaCl*2H 2 O peut également contribuer à l’agrégation de HSA par l’intermédiaire d’un mécanisme différent. Tandis que la cristallisation de NaCl anhydre lors du séchage sous vide n’a pas entraîné d’agrégation de HSA, une forme cristalline différente de NaCl — un dihydrate — a été formée lors de la lyophilisation. Le NaCl anhydre formé lors du séchage sous vide peut présenter des propriétés de surface différentes de celles du dihydrate formé lors de la congélation. Tandis que la charge de surface n’est pas connue pour les cristaux de NaCl et de NaCl*2H 2 O formés lors du séchage sous vide et de la lyophilisation, respectivement, une différence significative dans l’interaction électrostatique de ces deux types de cristaux avec la HSA peut être un facteur contributif à l’agrégation de HSA induite par la congélation. Enfin, des modifications de pH ont été observées dans cette étude lors de la congélation qui pourraient également contribuer à l’agrégation de HSA. 7.1.5. Conclusions Bien que la majorité des formulations de neurotoxine disponibles sur le marché contiennent de la HSA, les conséquences du procédé de fabrication du produit fini sur les propriétés de la HSA sont mal connues. Dans la présente étude, une augmentation significative de l’agrégation de HSA a été observée lors de la lyophilisation, tandis que l’agrégation de HSA dans une DP séchée sous vide sans congélation n’a pas augmenté significativement et est restée similaire à celle de la solution initiale de HSA. Ces observations suggèrent que les conditions de fabrication des formulations de neurotoxine peuvent avoir des conséquences significatives sur les propriétés du produit fini. Ainsi, des analyses supplémentaires de la DP à base de toxine, en particulier l’agrégation de la HSA, peuvent être avantageuses lors de la mise au point et de la commercialisation des produits à base de neurotoxine contenant de la HSA. Les résultats indiquent en outre que la congélation était la cause principale d’agrégation de HSA. Sur le mécanisme d’agrégation de HSA lors de la lyophilisation, l’étude indique que la pression induite par la congélation, l’interaction avec les cristaux de NaCl*2H 2 O et les modifications de pH induites par la congélation pouvaient être des facteurs contributifs. 7.2. Exemple 2 – Conséquences de la congélation sur des produits finis de toxine botulique séchés sous vide Dans la présente étude, des lots de DP de BoNT/A produits avec un processus de séchage sous vide qui n’a pas impliqué de congélation des solutions de produit fini ont été comparés à des lots de DP de BoNT/A produits avec un processus de séchage sous vide qui a impliqué une congélation des solutions de produit fini. Les deux types de lots de DP de BoNT/A sont désignés dans cet exemple en tant que lots de DP séchés sous vide par évaporation et lots de DP lyophilisés sous vide, respectivement. Les deux lyophilisateurs — le lyophilisateur Lyostar-3 à échelle pilote et le lyophilisateur Lyomax 40 à échelle industrielle — ont été testés. Pour les deux lyophilisateurs, les lots de DP séchés sous vide par évaporation ont présenté de manière répétée une morphologie visuellement plus homogène, ce qui entraîne une qualité visuelle constante du produit pour le patient, tandis que les lots de DP lyophilisés sous vide étaient sujets à la formation de flocons. Un produit floconné est susceptible de migrer près du bouchon lors de la reconstitution du flacon de produit fini, entraînant ainsi une perte de produit par rapport à la dose prescrite pour le patient. Ainsi, les lots de DP séchés sous vide par évaporation sont plus avantageux que les lots de DP lyophilisés sous vide. Des résultats supplémentaires de la présente étude ont montré que l’utilisation d’une vitesse de dépressurisation de chambre plus lente et d’une température d’étagère plus élevée (température d’étagère de 20 °C au lieu de 5 °C) peut contribuer à empêcher la congélation du produit fini (bien que la vitesse exacte de dépressurisation de chambre à utiliser soit propre à l’équipement de séchage et dépende de la taille de la chambre, de la capacité du condenseur, de la charge de la chambre et de la performance de la pompe à vide). Les résultats de cette étude ont montré que le taux de dépressurisation rapide de la chambre et la faible température d’étagère étaient des facteurs significatifs contribuant à la baisse de la température de produit. Composition solide comprenant un complexe de neurotoxine de Clostridium botulinum de sérotype A (BoNT/A) de 900 kDa, de l’albumine sérique humaine (HSA) et du chlorure de sodium (NaCl), dans laquelle la HSA comprend un monomère de HSA et des agrégats de HSA, dans laquelle au moins une partie de la HSA est sous la forme de HSA soluble lorsque la composition solide est reconstituée dans un milieu aqueux, et dans laquelle moins de 34 % de la HSA soluble contenue dans la composition solide sont des agrégats de HSA. Composition solide selon la revendication 1, dans laquelle les agrégats de HSA comprennent un polymère de HSA, un oligomère de HSA et un dimère de HSA. Composition solide selon la revendication 1 et la revendication 2, dans laquelle moins de 30 % de la HSA soluble contenue dans la composition solide est un polymère de HSA. Composition solide selon la revendication 1 et la revendication 2, dans laquelle moins de 0,8 % de la HSA soluble contenue dans la composition solide est un oligomère de HSA. Composition solide selon la revendication 1 et la revendication 2, dans laquelle moins de 4,8 % de la HSA soluble contenue dans la composition solide est un dimère de HSA. Composition solide selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle la composition solide est une composition pharmaceutique en poudre. Composition solide selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, dans laquelle la composition solide est exempte de produits d’origine animale. Composition solide selon l’une quelconque des revendications 1 à 7, dans laquelle la HSA est une HSA recombinante. Composition solide selon l’une quelconque des revendications 1 à 7, dans laquelle la composition solide comprend environ 0,5 mg de HSA pour 100 unités de BoNT/A. Composition solide selon l’une quelconque des revendications 1 à 9, dans laquelle la composition solide comprend environ 0,9 mg de NaCl pour 100 unités de BoNT/A. Composition solide selon l’une quelconque des revendications 1 à 10, dans laquelle la BoNT/A est l’onabotulinumtoxinA. Composition solide selon l’une quelconque des revendications 1 à 11, dans laquelle la BoNT/A est produite par l’intermédiaire d’un processus de purification par chromatographie sur colonne. Composition solide selon l’une quelconque des revendications 1 à 12, dans laquelle la BoNT/A est produite par l’intermédiaire d’un processus de purification par chromatographie sur colonne, dans laquelle le processus de purification par chromatographie sur colonne comprend une chromatographie d’interaction hydrophobe. Composition solide selon l’une quelconque des revendications 12 à 13, dans laquelle le processus de purification par chromatographie sur colonne comprend en outre une chromatographie par échange d’anions. Composition solide selon l’une quelconque des revendications 12 à 14, dans laquelle le processus de purification par chromatographie sur colonne comprend en outre une chromatographie par échange de cations. Composition solide selon l’une quelconque des revendications 1 à 15, dans laquelle la composition solide ne comprend pas d’inhibiteur de protéase. Composition solide selon l’une quelconque des revendications 1 à 16, dans laquelle la composition solide ne comprend pas de chlorhydrate de benzamidine. Composition solide selon l’une quelconque des revendications 1 à 17, dans laquelle la composition solide a une activité comprise entre environ 1,5 x 10 7 unités/mg et environ 6,0 x 10 7 unités/mg. Procédé de production d’une composition solide comprenant un complexe de BoNT/A de 900 kDa, de la HSA et du NaCl, ledit procédé comprenant une étape de séchage d’une solution comprenant une BoNT/A, de la HSA et du NaCl afin de produire ladite composition solide, dans lequel la solution ne subit pas de congélation lors de l’étape de séchage. Procédé selon la revendication 19, dans lequel l’étape de séchage est au moins partiellement régulée manuellement. Procédé selon la revendication 19 ou la revendication 20, dans lequel l’étape de séchage est un séchage sous vide. Procédé selon la revendication 21, dans lequel l’étape de séchage sous vide comprend une étape de mise sous vide échelonnée. Procédé selon l’une quelconque des revendications 19 à 22, dans lequel le procédé produit une composition solide selon l’une quelconque des revendications 1 à 18. Composition solide produite par le procédé selon l’une quelconque des revendications 19 à 23. Composition selon l’une quelconque des revendication 1 à 18 et 24 pour son utilisation comme médicament.