Brevet FR3153996A1 — publié le 20250418

Utilisation cosmétique d'au moins l’urolithine C sur une peau sensible La présente invention concerne l’utilisation cosmétique d'au moins l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates pour prévenir et/ou traiter une manifestation cutanée au niveau d’une peau sensible. Figure pour l'abrégé : néant Utilisation cosmétique d'au moins l’urolithine C sur une peau sensible La présente invention concerne l’utilisation cosmétique d'au moins l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates pour prévenir et/ou traiter une manifestation cutanée au niveau d’une peau sensible. La peau a la capacité de répondre à des stimuli externes physicochimiques et mécaniques, engendrant des sensations d’alerte telles que des picotements et des démangeaisons. Ces stimuli sont d’origine variée. En particulier, les sujets présentant une peau sensible sont plus sensibles à de tels stimuli. La peau sensible est définie comme une peau non pathologique, qui peut présenter des manifestations cutanées indésirables. D’une manière générale, les manifestations cutanées indésirables peuvent se manifester sous deux aspects, à savoir sensations d’inconfort ressenties au niveau de la peau et/ou apparition de signes cutanés visibles. Pour ce qui est des sensations d’inconfort, il peut typiquement s’agir de démangeaisons, d’échauffement, de sensations de picotement et/ou de tiraillement. A titre représentatif des signes cutanés visibles, on peut notamment citer les rougeurs. Ces manifestations cutanées sont plus fréquentes dans les zones les plus exposées de l'organisme, à savoir les mains, les pieds, le visage et le cuir chevelu. Cette réactivité cutanée se traduit classiquement par la manifestation de signes d’inconfort en réponse à la mise en contact du sujet avec un élément déclenchant qui peut avoir diverses origines. Ces réactions cutanées peuvent survenir notamment sur des zones soumises à certains gestes d'hygiène quotidienne ou fréquemment renouvelés tels que le rasage, l'épilation, la détersion par des produits de toilette ou des produits ménagers, l'application d'adhésifs (pansements, patchs, fixation de prothèses) ou dans le cas de gestes sportifs, professionnels ou simplement liés au mode de vie et à l'utilisation de vêtements, d'outils ou d'équipements générant des frottements localisés à la prise de certains aliments. Elles peuvent également être amplifiées par des variations de température, le vent et du stress psychologique. On sait en outre que le risque de manifestation de ces réactions cutanées est exacerbé dans le cas des peaux sensibles. Ainsi, l’apparition des signes d’inconfort, qui apparaissent dans les minutes qui suivent la mise en contact du sujet avec l’élément déclenchant, est une des caractéristiques essentielles des peaux sensibles. Il s’agit principalement de sensations dysesthésiques. On entend par sensations dysesthésiques, des sensations plus ou moins douloureuses ressenties dans une zone cutanée comme les picotements, fourmillements, démangeaisons, échauffements, inconforts, tiraillements, etc. Ces signes subjectifs existent le plus souvent en l’absence de signes cliniques visibles tels que les rougeurs ou les desquamations. La réactivité d’une peau sensible ne relève pas d’un processus menant à une réponse inflammatoire. Elle est donc à totalement distinguer des peaux manifestant des réactions inflammatoires de type dermatose, eczéma et/ou ichtyoses, et vis-à-vis desquelles un certain nombre de traitements ont déjà été proposés. Pour des raisons évidentes, il serait avantageux de disposer de compositions aptes à prévenir et/ou traiter ces manifestations cutanées indésirables. La présente invention a précisément pour objet de répondre à ce besoin. La présente invention vise ainsi l’utilisation cosmétique d'au moins l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates, pour prévenir et/ou traiter une manifestation cutanée au niveau d’une peau sensible. L’urolithine C, ou 3,8,9-trihydroxy-6H-benzo[c]chromen-6-one, est le composé le formule générale (I) suivante : (I). L’urolithine C est un métabolite microbien produit par catabolisme enzymatique dans des bactéries commensales à partir de l’acide ellagique et des ellagitanines à une faible biodisponibilité. L’acide ellagique et les ellagitanines sont issus de plantes comestibles telles que des baies, des fruits tropicaux comme la grenade et des plantes médicinales comme Camellia sinensis . On peut citer par exemple l’urolithine C commercialisée par la société Sigma-Aldrich sous la référence commerciale SML3047-50mg. On entend par « sel » d’une urolithine C selon l’invention un sel formé par une base inorganique ou organique. Comme exemples de sels de base, on peut citer les hydroxydes de métal alcalin comme sodium, potassium et lithium ; les hydroxydes de métal alcalino-terreux comme calcium et magnésium ; les hydroxydes d’autres métaux, comme aluminium et zinc ; l’ammoniaque et les amines organiques telles que les mono-, di- ou tri-alkylamines non substituées ou hydroxy-substituées ; les dicyclohexylamines ; les tributyl amines ; pyridine ; N-methyl-N-ethylamine ; diéthylamine ; triéthylamine ; mono-, bis- ou tris-(2-hydroxy-alkylamines) telles que mono-, bis- ou tris-(2-hydroxyéthyl)amine, 2-hydroxy-tert-butylamine, tris-(hydroxymethyl)méthylamine, les N,N-di-alkyl-N-(hydroxyalkyl)-amines, telles que N,N-dimethyl-N-(2-hydroxyethyl)amine ou tri-(2-hydroxyethyl)amine ; N-methyl-D-glucamine ; et les acides aminés tels que arginine et lysine. Un sel de l’urolithine C selon l’invention est de préférence un sel de base, et en particulier un sel de sodium ou de potassium. Au sens de l’invention, l’expression « manifestation cutanée » couvre les sensations d’inconfort, chez un sujet notamment de peau sensible, ainsi que les signes cutanés visibles et inesthétiques temporaires susceptibles d’affecter ce même sujet. Ainsi, de préférence, la manifestation cutanée est une sensation d’inconfort. Le sujet (ou la personne) est un sujet de peau sensible, de préférence un sujet humain. Par « la peau », on entend l'ensemble de la peau du corps, et de manière préférée la peau du visage, du cuir chevelu, du décolleté, du cou, des bras et avant-bras, voire de manière plus préférée encore, la peau du visage (en particulier du front, nez, joues, menton), du décolleté et du cou. Comme précisé précédemment, les sensations d’inconfort peuvent être des démangeaisons, échauffements, picotements et/ou tiraillements. Ces manifestations indésirables concernent tout particulièrement les personnes dites à peau sensible, qui possèdent un seuil de réactivité abaissé ; ces peaux vont donc présenter ces sensations et ces signes cliniques beaucoup plus rapidement et fréquemment que les autres types de peaux. De préférence, la manifestation cutanée au niveau d’une peau sensible selon l’invention se traduit par la manifestation d’un ou plusieurs signes cutanés visibles tels que les rougeurs et les desquamations. Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne l’utilisation cosmétique d'au moins l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates, comme agent apaisant. Par « agent apaisant », on entend un agent capable de diminuer une manifestation cutanée au niveau d’une peau sensible, en particulier capable de diminuer une rougeur et/ou une sensation d’inconfort. Selon un autre de ses aspects, elle vise l’utilisation cosmétique d'au moins l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates pour prévenir et/ou traiter les manifestations de sensations dysesthétiques au niveau des peaux sensibles. L’invention vise donc notamment à prévenir et/ou diminuer les sensations d’inconfort cutané, telles que par exemple les picotements, fourmillements, démangeaisons, échauffements, inconforts et/ou tiraillements, en particulier chez les personnes à peaux sensibles. De préférence, l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates selon l’invention est administrée par voie topique. Selon un autre de ses aspects, l'invention a pour objet un procédé de traitement cosmétique comprenant l’application topique sur une peau sensible d’un sujet d’une composition cosmétique comprenant au moins l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates. Un tel procédé est cosmétique, donc non-thérapeutique. Il en est de même pour les différentes utilisations visées dans la présente demande. Au sens de la présente invention, « prévenir » signifie diminuer le risque de manifestation d’un phénomène. Au sens de la présente invention, le terme « traiter » signifie suppléer à un dysfonctionnement physiologique et plus généralement à diminuer, voire supprimer, un désordre indésirable, dont la manifestation est notamment une conséquence de ce dysfonctionnement. Pour des raisons évidentes, l’absence de signes visibles rend difficile le diagnostic de peau sensible. Le plus souvent ce diagnostic repose sur l’interrogatoire du sujet. En conséquence, la mise au point de produits "peaux sensibles" a nécessité de disposer d’outils d’évaluation de la réaction sensorielle de la peau. Les premiers outils se sont inspirés dès leur conception de la caractéristique essentielle des peaux sensibles à savoir la présence de signes d’inconfort induits par une application topique. Ainsi, le « stinging test » à l’acide lactique a été le premier test proposé. Il est réalisé par relevé des sensations de picotements rapportées par un volontaire après application d’une solution d’acide lactique à 10 % sur les ailes du nez. Les sujets rapportant des sensations modérées ou fortes de picotements sont appelés « stingers » et considérés comme étant à peau sensible. En raison de cette sensibilité cutanée à l’application topique de produit, ces sujets sont alors sélectionnés pour tester des produits dits peaux sensibles. D’autres outils, notamment in vitro , permettant l’identification de composés d’intérêt pour traiter les peaux sensibles, existent. En effet, il a été démontré dans la littérature que cette condition de peau sensible peut être associée à une réponse exacerbée du canal calcique TRPV1 (transient receptor potential vanilloid 1) par son activation indirecte. Cette activation indirecte peut résulter en particulier d’une fixation de l’histamine sur les récepteurs H1R et H4R et/ou d’une fixation d’une protéase telle que la SLIGRL sur le récepteur PAR2 (Protease-Activated Receptor-2) appartenant tous deux à la famille des récepteurs transmembranaires GPCRs et d’une activation de ces derniers. Une fois ce(s) récepteur(s) activé(s), il s’en suit une activation de la voie PKC/PLC qui elle-même va activer certains canaux calciques dont les TRPV1 (Gouin, O., et al., TRPV1 and TRPA1 in cutaneous neurogenic and chronic inflammation: pro-inflammatory response induced by their activation and their sensitization. Protein Cell, 2017. 8(9): p. 644-661). L’activation de ces canaux aboutit à la genèse d’un flux calcique intracellulaire, au relargage de neuromédiateurs et à l’activation d’une cascade de signalisation à l’origine de la sensation d’inconfort. Ainsi, diminuer cette cascade de signalisation en limitant les flux calciques intracellulaires générés par l’activation indirecte de ces canaux à la surface des kératinocytes via une action sur les récepteurs H1R et H4R et/ou le récepteur PAR2, constitue un outil particulièrement utile pour l’identification de composés d’intérêt pour traiter les peaux sensibles. Au sens de la présente invention, l’expression « peaux sensibles » couvre les peaux réactives et les peaux intolérantes. Une peau intolérante est une peau qui réagit au moins par des sensations d’échauffement, de tiraillements, de fourmillements et/ou de rougeurs, à différents facteurs tels que l’application de produits cosmétiques ou dermatologiques ou de savon. En général, ces signes sont associés à une peau hyper-séborrhéique. Une peau réactive est une peau qui réagit par des démangeaisons ou par des picotements, à différents facteurs tels que l’environnement, les émotions, les aliments, le vent, les frottements, le rasoir, l’eau dure à forte concentration de calcaire, les variations de température, l’humidité ou la laine. Il est entendu que ces sensations peuvent parallèlement être associées à la manifestation de signes cutanés. Ainsi, d’une manière générale, ce type de peau peut être associé à une sécheresse cutanée ou à une peau qui présente une rougeur. La sècheresse cutanée se manifeste pour l’essentiel par une sensation de tiraillements et/ou de tension. Celle-ci est aussi rugueuse au toucher et apparaît couverte de squames. Lorsque la peau est légèrement sèche, ces squames sont abondantes mais peu visibles à l’œil nu. Elles sont de moins en moins nombreuses mais de plus en plus visibles à l’œil nu lorsque ce désordre s’aggrave. Dans le cadre de la présente invention, les peaux sensibles considérées ne manifestent aucun caractère inflammatoire. L’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates peut être formulée dans une composition à raison d'au moins 0,00001% en poids, en particulier à raison de 0,0001 à 20% en poids et plus particulièrement à raison de 0,001 à 2 % en poids par rapport au poids total de composition. Les compositions selon l’invention peuvent se présenter sous toutes les formes galéniques normalement disponibles pour le mode d’administration retenu. Le support peut être de nature diverse selon le type de composition considérée. De préférence, l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates selon l’invention est administrée par voie topique, c'est-à-dire à la surface de la peau. A titre de compositions topiques, on peut citer les solutions aqueuses, hydroalcooliques ou huileuses, les dispersions du type lotion ou sérum, les émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, les suspensions ou émulsions du type crème, de gel aqueux ou anhydre, les microémulsions, les microcapsules, les microparticules ou les dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique. Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles. Ces compositions peuvent notamment constituer des crèmes de nettoyage, de protection, de traitement ou de soin pour le visage, pour les mains, pour les pieds, pour les grands plis anatomiques ou pour le corps (par exemple crèmes de jour, crèmes de nuit, crèmes démaquillantes, crèmes de fond de teint, crèmes solaires), des produits de maquillage comme des fonds de teint fluides, des laits de démaquillage, des laits corporels de protection ou de soin, des laits après-soleil, des lotions, gels ou mousses pour le soin de la peau, comme des lotions de nettoyage ou de désinfection, des lotions solaires, des lotions de bronzage artificiel, des compositions pour le bain, des compositions déodorantes contenant un agent bactéricide, des gels ou lotions après-rasage, des crèmes épilatoires ou des compositions contre les piqûres d’insectes. Les compositions selon l’invention peuvent également consister en des préparations solides constituant des savons ou des pains de nettoyage. Elles peuvent être également utilisées pour le cuir chevelu sous forme de solutions, de crèmes, de gels, d’émulsions, de mousses ou encore sous forme de compositions pour aérosol contenant également un agent propulseur sous pression. Les compositions selon l’invention peuvent comprendre un ou plusieurs adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, tels que les solvants organiques, les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les corps gras tels que les huiles, les émulsionnants, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres solaires, les absorbeurs d’odeur, les matières colorantes et leurs mélanges. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés, et par exemple de 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse ou dans la phase aqueuse. Ces adjuvants, ainsi que leurs concentrations, doivent être tels qu’ils ne nuisent pas aux propriétés avantageuses de l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates. Comme solvants organiques utilisables dans la composition de l’invention, on peut citer les solvants organiques miscibles dans l’eau. Par « solvant miscible dans l’eau » selon la présente invention, on entend désigner un composé liquide à température ambiante et miscible à l’eau ayant notamment une miscibilité dans l’eau supérieure à 50% en poids à 25°C et pression atmosphérique. Les solvants organiques miscibles dans l’eau peuvent être choisis parmi les monoalcools inférieurs ayant de 1 à 5 atomes de carbone tels que l’éthanol et l’isopropanol, les glycols ayant de 2 à 8 atomes de carbone tels que l’éthylène glycol, l’héxylène glycol, le propylène glycol, le 1,3-butylène glycol, le pentylène glycol, le dipropylène glycol, et la glycérine. Comme huiles utilisables dans la composition de l’invention, on peut citer par exemple : - les huiles hydrocarbonées d'origine animale ; - les huiles hydrocarbonées d’origine végétale ; - les esters et les éthers de synthèse, notamment d'acides gras, comme les huiles de formules R1COOR2 et R1OR2 dans laquelle R1 représente le reste d’un acide gras comportant de 8 à 29 atomes de carbone, et R2 représente une chaîne hydrocarbonée, ramifiée ou non, contenant de 3 à 30 atomes de carbone ; - les hydrocarbures linéaires ou ramifiés, d’origine minérale ou synthétique ; - les alcools gras ayant de 8 à 26 atomes de carbone ; - les huiles fluorées partiellement hydrocarbonées et/ou siliconées ; - les huiles de silicone ; - leurs mélanges. On entend par huile hydrocarbonée dans la liste des huiles citées ci-dessus, toute huile comportant majoritairement des atomes de carbone et d'hydrogène, et éventuellement des groupements ester, éther, fluoré, acide carboxylique et/ou alcool. Les autres corps gras pouvant être présents dans la phase huileuse sont par exemple les acides gras comportant de 8 à 30 atomes de carbone ; les cires ; les résines de silicone ; et les élastomères de silicone. Ces corps gras peuvent être choisis de manière variée par l'homme du métier afin de préparer une composition ayant les propriétés, par exemple de consistance ou de texture souhaitées. Selon un mode particulier de réalisation de l’invention, la composition utilisée dans le cadre de l’invention est anhydre. Par « anhydre », on entend une composition comprenant moins de 5% en poids d’eau par rapport au poids total de la composition, de préférence moins de 3% en poids, encore mieux moins de 1% en poids par rapport au poids total de la composition, voire totalement exempte d’eau (0%). Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, la composition utilisée dans le cadre de l’invention est une émulsion eau-dans-huile (E/H) ou huile-dans-eau (H/E). La proportion de la phase huileuse de l'émulsion peut aller de 5 à 90% en poids, et de préférence de 5 à 60% en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsions contiennent généralement au moins un émulsionnant choisi parmi les émulsionnants amphotères, anioniques, cationiques ou non ioniques, utilisés seuls ou en mélange, et éventuellement un co-émulsionnant. Les émulsionnants sont choisis de manière appropriée suivant l'émulsion à obtenir (E/H ou H/E). L'émulsionnant et le co-émulsionnant sont généralement présents dans la composition, en une proportion allant de 0,3 à 30% en poids, et de préférence de 0,5 à 20% en poids par rapport au poids total de la composition. Comme émulsionnants et co-émulsionnants utilisables dans l'invention, on peut citer par exemple les émulsionnants H/E notamment les émulsionnants non ioniques tels que les esters d’acide gras et de polyéthylène glycol, les esters d’acide gras et de glycérine ainsi que les émulsionnants E/H tels que les dimethicone copolyols, les alkyl-dimethicone copolyols, les organopolysiloxanes solides élastomères réticulés comportant au moins un groupement oxyalkyléné. Comme gélifiants hydrophiles, on peut citer en particulier les polymères carboxyvinyliques (carbomer), les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les polysaccharides, les gommes naturelles et les argiles ; comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d'acides gras, la silice hydrophobe et les polyéthylènes. Comme charges qui peuvent être utilisées dans la composition de l'invention, on peut citer, outre les pigments, la poudre de silice ; le talc ; l'amidon ; les particules de polyamide ; les poudres de polyéthylène ; les microsphères à base de copolymères acryliques ; les poudres expansées telles que les microsphères creuses ; les microbilles de résine de silicone ; et leurs mélanges. Ces charges peuvent être présentes dans des quantités allant de 0,1 à 20% en poids et de préférence de 1 à 10% en poids par rapport au poids total de la composition ou de la préparation selon l'invention. L’invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique comprenant l’application topique sur une peau sensible d’un sujet d’une composition cosmétique comprenant au moins l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates. Le procédé de traitement cosmétique de l’invention peut être mis en œuvre notamment en administrant les compositions cosmétiques et/ou dermatologiques telles que définies ci-dessus, selon la technique d’utilisation habituelle de ces compositions. Par exemple : applications de crèmes, de gels, de sérums, de lotions, de laits de démaquillage ou de compositions après-soleil sur la peau ou sur le cuir chevelu sec, application d’une lotion pour cheveux ou de shampooings sur le cuir chevelu mouillé, pour ce qui est de l’application topique. Le procédé de traitement cosmétique selon l'invention peut être ainsi mis en œuvre par administration topique, journalière par exemple, de l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates. Le procédé selon l’invention peut comprendre une administration unique. Selon un autre mode de réalisation, l’administration est répétée par exemple 2 à 3 fois quotidiennement sur une journée ou plus, et généralement sur une durée prolongée d’au moins 4 semaines, voire 4 à 15 semaines, avec le cas échéant une ou plusieurs périodes d’interruption. L’invention est maintenant illustrée par les exemples suivants, non limitatifs. Exemple 1 : Effet apaisant de l’urolithine C Principe de la m éthode de mesure de l’effet apaisant Le suivi de l’activation de certains récepteurs de type canaux calciques (qu’elle soit directe ou indirecte) est rendu possible via la mesure de l’influx calcique dans le cytoplasme des cellules cutanées. Un effet apaisant est obtenu si une inhibition du flux calcique intracellulaire est observée. En l’occurrence, les récepteurs à canaux calciques étudiés sont ceux de la voie histamine, i.e. H1R et H4R, et ceux de la voie PAR2. Récepteurs H1 (H1R) et H4 (H4R) (voie histamine) Quatre récepteurs à l’histamine sont aujourd’hui décrits dont les récepteurs H1 et H4 exprimés par les kératinocytes. Il s’agit de récepteurs transmembranaires appartenant à la famille des GPCR et couplés à un canal calcique, ils sont directement activés par l’histamine endogène. Au niveau du kératinocyte, la fixation d’histamine sur ces récepteurs spécifiques active la voie de la PLC et PIP2 et ces mécanismes se traduisent in vivo par des sensations de démangeaisons pouvant être parfois accompagnées de picotements et/ou de rougeurs. Dans le cas de la peau sensible et dans une optique apaisante, la neutralisation de cette voie pourrait avoir pour conséquence de diminuer principalement les démangeaisons. Récepteur PAR2 (voie PAR2) PAR2 (Protease-Activated Receptor-2) est également un récepteur transmembranaire de la famille des GPCR largement exprimé au niveau de la peau et plus particulièrement par les kératinocytes. Son activation par des protéases de type sérine protéase (e.g. famille des kallikréines) entraine l’ouverture des TRP (V1 et V3) et la genèse d’un influx calcique. Activé également par le poil à gratter (mucosaïne), il est impliqué dans les réactions de démangeaisons. L’inhibition de PAR2 pourrait cliniquement diminuer les démangeaisons, les picotements, mais aussi contribuer à une meilleure fonction barrière de la peau dans la peau sensible. Protocole de mise en culture des cellules pour la préparation de la mesure d e flux calcique intracellulaire Cellules kératinocytaires de l’épiderme de cornée Les cellules ont été isolées à partir du tissu épidermique selon le protocole Mat’Tek décrit en 2006 (Development of a method for assessing micronucleus induction in a 3D human skin model (Epiderm), Rodger D.Curren and al, Volume 607, Issue 2, 5 September 2006, Pages 192-204). Les cellules HCE (Human Corneal Epithelial cells ou cellules de cornée humaine) sont ensemencées dans des plaques 96 puits noires stériles Advanced TC (Greiner) à la densité cellulaire de 20 000 cellules/puits/0,2ml pour la réalisation du test 48h après ensemencement, et à 10 000 cellules/puits/0,2ml pour une réalisation du test 72h après ensemencement. Mesure du [Ca 2+ ] intracellulaire & Expression des résultats Les molécules testées sont l’urolithine A de Sigma Aldrich (SML-1791), et l’urolithine C. Solubilité de s molécules à évaluer La solubilité de chaque molécule est prioritairement testée dans du tampon HBSS (Gibco-Invitrogen) complété avec 20mM d’HEPES (Gibco-Invitrogen) et ajusté à pH 7,4. Pour les molécules non hydrosolubles, le DMSO (Sigma‐Aldrich) est utilisé en première intention, puis ensuite l’éthanol (Prolabo). Pour une molécule soluble dans le DMSO, la concentration finale de DMSO administrée aux kératinocytes est de 2% alors que pour une molécule soluble en éthanol, la concentration finale d’éthanol ne doit pas dépasser 1%. Chaque molécule est testée dans la version agoniste du test afin de s’assurer de la non-activation des récepteurs par la molécule avant de procéder à l’évaluation de ses propriétés apaisantes. La dose maximale testée est déterminée en fonction de la non-activation des récepteurs mais aussi de la solubilité des molécules et/ou de leur cytotoxicité sur les cellules. Au minimum trois concentrations sont testées par molécule et sont réalisées par dilutions successives. Pour des molécules solubles, non agonistes et non cytotoxiques, la dose maximale testée sur les cellules kératinocytes HCE est de 1mg/ml. Préparation de la sonde calcique fluorescente La concentration calcique est mesurée en utilisant la sonde fluorescente fura-2AM Ester (Molecular Probes) à 5µM. La sonde est préalablement solubilisée dans du DMSO. Un volume égal de surfactant Pluronic F-127 à 10% (Molecular Probes) est ajouté pour une meilleure solubilisation de la sonde. Traitement des cellules Après 48 ou 72 heures d’ensemencement, les cellules sont lavées 2 fois en tampon HBSS puis incubées 30 minutes à 37°C en présence de la sonde calcique préalablement préparée. 2 lavages en tampon HBSS sont effectuées avant de traiter ensuite les cellules 30 minutes à température ambiante et à l’abri de la lumière avec les solutions de molécules à évaluer aux concentrations déterminées. Préparation de la solution d’agoniste de référence En parallèle, les solutions d’agonistes de référence de la voie H1R et H4R, et de la voie PAR2, sont préparées extemporanément puis déposées dans une plaque 96 puits permettant l’injection automatique sur les cellules afin d’effectuer le suivi en temps réel de l’influx calcique. L’agoniste de référence de la voie H1R et H4R est l’histamine (Sigma-Aldrich), soluble en tampon HBSS, utilisé à 4,5 mM. L’agoniste de référence de la voie PAR2 est SLIGRL (R&D Systems), soluble en tampon HBSS, utilisé à 75 µM. Suivi en temps réel de l’influx calcique La fluorescence est mesurée sur un lecteur de microplaque FlexStation 3 (Molecular Devices) à une double longueur d’onde d’excitation : 340 nm (Ca 2+ lié), 380nm (Ca 2+ libre) et à une longueur d’émission de 510 nm. Les mesures s’effectuent pendant 30 secondes - niveau basal - et pendant 3 minutes après l’injection automatique par la Flexstation des agonistes de référence (agonistes ou tampon HBSS ou DMSO ou éthanol, volume de 50µl/puits). 7 témoins sont réalisés en parallèle : Témoin HBSS ; Témoin DMSO et éthanol si nécessaire, et Témoin Activation pour chacune des 2 voies. Chaque condition est répliquée sur au moins 2 essais indépendants avec 6 puits par condition et par essai. Résultats Les résultats sont exprimés en ratio de l’intensité de fluorescence de 2 longueurs d’onde (340nm/380nm) et exploités en % de variation du ratio sur une cinétique de 10 à 300 secondes. Le pic de réponse obtenu avec la molécule à évaluer en combinaison avec l’agoniste correspondant est comparé avec celui de l’agoniste seul, et le pourcentage d’inhibition est ensuite déterminé. Effet de l’urolithine C supérieur à l’urolithine A sur les récepteurs à l’histamine (H1R et H4R) On observe pour chaque urolithine une capacité à diminuer le flux calcique induit par l’agoniste des récepteurs H1R et H4R à l’histamine aux concentrations testées par rapport au contrôle 0 µM (Tableau 1). On observe ensuite les pourcentages d’inhibition du flux calcique normalisé par rapport à la condition 0 µM (Tableau 2). L’urolithine C a un pourcentage d’inhibition du flux calcique après activation de H1R et H4R qui est de 79% à 4 µM, alors que l’urolithine A présente une inhibition qui s’élève à seulement 65% à 4,4 µM et 80% à 22 µM (Tableau 2). L’urolithine C a des capacités d’inhibition de H1R et H4R qui seraient de 5 fois supérieures à l’urolithine A. L’urolithine C présente donc un potentiel fort pour diminuer les démangeaisons dans la peau sensible. Pourcentage de la variation du flux calcique en réponse à l’histamine et après ajout de différentes concentrations d’urolithine A et d’urolithine C Le pourcentage de variation du flux calcique de la Table 1 est calculé de la manière suivante : % Variation flux calcique = ((intensité de flurorescence à 340nm pour x seconde(s) / intensité de flurorescence à 380nm pour x seconde(s)) - (intensité de flurorescence à 340nm t0 / intensité de flurorescence à 380nm t0)) / (intensité de flurorescence à 340nm t0 / intensité de flurorescence à 380nm t0). Histamine R µg/ml µM Moyenne des pourcentages de variation du flux calcique (%) Urolithine A (hors invention) 0 0 101 1 4,4 38 5 22 20 Urolithine C (selon l’invention) 0 0 124,7 0,5 2 39,0 5 4 25,7 Pourcentage d'inhibition du flux calcique en réponse à l’histamine et après ajout de différentes concentrations d’urolithine A et d’urolithine C Le pourcentage d’inhibition de la Table 2 est calculé de la manière suivante : % d’inhibition = 100 - ((% Variation du flux calcique composé « X » x 100) / % Variation du flux calcique de l’agoniste des récepteurs H1R et H4R, l’histamine) Histamine R µg/ml µM Moyenne des pourcentages d’inhibition de la variation du flux calcique (%) Urolithine A (hors invention) 1 4,4 65,1 5 22 80,6 Urolithine C (selon l’invention) 0,5 2 68,7 5 4 79,4 Effet des urolithines sur PAR2 On observe pour chacune des urolithines A et C une capacité inhibitrice du flux calcique induit par l’agoniste de PAR2 aux concentrations testées par rapport au contrôle 0 µM (Tableau 4). L’urolithine C présente un effet à 4 µM supérieur (36,7% d’inhibition) comparé à l’urolithine A à concentration molaire équivalente (30,2% d’inhibition). L’urolithine C, par l’inhibition de l’activation de PAR2, est donc un composé permettant de diminuer les démangeaisons, les picotements, mais aussi de contribuer à une meilleure fonction barrière de la peau dans la peau sensible. Pourcentage de la variation du flux calcique en réponse à SLIGRL (agoniste PAR2) et après ajout de différentes concentrations d’urolithine A et d’urolithine C Le pourcentage de variation du flux calcique de la Table 3 est calculé de la manière suivante : % Variation flux calcique = ((intensité de flurorescence à 340nm pour x seconde(s) / intensité de flurorescence à 380nm pour x seconde(s)) - (intensité de flurorescence à 340nm t0 / intensité de flurorescence à 380nm t0)) / (intensité de flurorescence à 340nm t0 / intensité de flurorescence à 380nm t0). PAR2 µg/ml µM Moyenne des pourcentages de variation du flux calcique (%) Urolithine A (hors invention) 0 0 165,3 1 4,4 113,7 Urolithine C (selon l’invention) 0 0 178,7 5 4 113,7 Pourcentage d'inhibition du flux calcique en réponse à SLIGRL (agoniste PAR2) et après ajout de différentes concentrations d’urolithine A et d’urolithine C Le pourcentage d’inhibition de la Table 4 est calculé de la manière suivante : % d’inhibition = 100 - ((% Variation du flux calcique composé « X » x 100) / % Variation du flux calcique de l’agoniste du récepteur PAR2, la protéase SLIGRL) PAR2 µg/ml µM Moyenne des pourcentages d’inhibition de la variation du flux calcique (%) Urolithine A (hors invention) 1 4,4 30,2 Urolithine C (selon l’invention) 5 4 36,7 Conclusion L’urolithine C a la capacité de diminuer les démangeaisons et les picotements en ciblant les 2 voies principales passant par l’activation initiale de PAR2 et H1R et H4R. Il apparaît que l’urolithine C présente un effet inhibiteur supérieur à l’urolithine A sur H1R et H4R, suggérant un effet antagoniste de l’urolithine C sur H1R et H4R plus fort que celui observé avec l’urolithine A. Sur PAR2, l’urolithine C présente, à plus faible concentration molaire, un effet supérieur à l’urolithine A, suggérant un effet antagoniste de l’urolithine C sur PAR2 (à plus faible concentration molaire) plus fort que celui observé avec l’urolithine A. L’urolithine C a un effet apaisant et pourrait être utilisée sur les conditions de peau suivantes : picotements, tiraillements, inconfort, démangeaisons, rougeurs et/ou sensation d’échauffement de la peau (incluant le cuir chevelu). Utilisation cosmétique d'au moins l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates pour prévenir et/ou traiter une manifestation cutanée au niveau d’une peau sensible. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle la manifestation cutanée est une sensation d’inconfort. Utilisation selon la revendication 2, dans laquelle la sensation d’inconfort est une démangeaison, un échauffement, une sensation de picotement, et/ou une sensation de tiraillement. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la manifestation cutanée se traduit par la manifestation d’un ou plusieurs signes cutanés visibles. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates, est destinée à prévenir et/ou traiter les manifestations de sensations dysesthétiques au niveau des peaux sensibles. Utilisation cosmétique d'au moins l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates comme agent apaisant. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates est administrée par voie topique. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes dans laquelle l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates est formulée dans une composition à raison d'au moins 0,00001 % en poids, en particulier à raison de 0,0001 à 20% en poids et plus particulièrement à raison de 0,001 à 2 % en poids par rapport au poids total de composition. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes dans laquelle l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates est formulée dans une composition choisie parmi les solutions aqueuses, hydroalcooliques ou huileuses, les dispersions du type lotion ou sérum, les émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, les suspensions ou émulsions du type crème, de gel aqueux ou anhydre, les microémulsions, les microcapsules, les microparticules et les dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique. Procédé de traitement cosmétique comprenant l’application topique sur une peau sensible d’un sujet d’une composition cosmétique comprenant au moins l’urolithine C et/ou l’un de ses sels et/ou l’un de ses isomères et/ou l’un de ses solvates tels que les hydrates.