Brevet FR3158885A1 — publié le 20250808

L’invention se rapporte au domaine de la cosmétique. L’invention concerne plus particulièrement un procédé de soin cosmétique d’une peau sensible, caractérisé en ce qu’il comprend l’application sur ladite peau sensible d’une composition comprenant de la flocculosine à titre d’agent actif, pour obtenir un effet apaisant par stimulation de la production de bêta-endorphine et/ou de l’expression du récepteur CB2 par les cellules de ladite peau sensible, ladite composition étant éventuellement incorporée dans un excipient cosmétiquement acceptable. L’invention concerne également l’utilisation non thérapeutique de la flocculosine pour stimuler la production de la bêta-endorphine et/ou l’expression du récepteur CB2 par les cellules de la peau. Figure à publier avec l’abrégé : Figure 2 Composition cosmétique topique à destination des peaux sensibles DOMAINE DE L’INVENTION Le secteur technique de la présente invention concerne la cosmétique. Plus particulièrement, le secteur technique concerne le traitement cosmétique des peaux sensibles. ETAT DE LA TECHNIQUE Le champignon microscopique Pseudozyma flocculosa a été découvert pour la première fois en 1988 à la surface de feuilles de trèfles. (Traquair et coll. (1988). Ce champignon a la particularité de vivre de manière épiphyte à la surface de certaines plantes comme le trèfle tout en protégeant cette plante contre l’agression de pathogènes en produisant une molécule appelée flocculosine (Cheng et coll. ,2003 ). Structure moléculaire de la flocculosine La flocculosine (selon la nomenclature de l'(Union internationale de chimie pure et appliquée : acide 16-[(2R,3R,4R,5S,6R)-5-[(2S,3R,4S,5R,6R)-4-acétyloxy-5-hydroxy-6-(hydroxyméthyl)-3-(3-hydroxyoctanoyloxy)oxan-2-yl]oxy-6-(acétyloxyméthyl)-3,4-dihydroxyoxan-2-yl]oxy-3,15-dihydroxyhexadécanoïque, composé référencé dans la base de données PubChem sous le numéro : 11679497), est un glycolipide de 854 Daltons et est principalement connue aujourd’hui pour ses propriétés antibactériennes. Elle permet de protéger de manière naturelle certaines plantes contre l’agression de microorganismes pathogènes. Cette molécule produite par la nature est donc particulièrement intéressante pour protéger de manière totalement naturelle certaines plantes contre l’agression de microorganismes pathogènes. Ses activités antifongiques sont bien documentées (Mimee et coll., 2005). Certaines activités antibactériennes ont également été démontrées en utilisant cette molécule (Brevet WO2004007514, également B. Mimee (2008)). Cette molécule, par ses propriétés antibactériennes, peut trouver une application complémentaire dans des formules pour aider à lutter contre les caries dentaires (WO2009129525). De manière totalement fortuite en travaillant sur la flocculosine, la demanderesse a constaté lors d’études sur les peaux ou cuir chevelu que cette molécule avait un grand intérêt pour une application dans le domaine du soin des peaux sensibles. Actuellement, cette problématique est majeure au niveau mondial aussi bien sur des peaux jeunes que matures. En effet, selon les sources, 45 à 60% des peaux seraient concernées par des problèmes de sensibilité. La peau est l’organe le plus vaste de notre organisme avec une surface de 1.8 m 2 et un poids de 3 kg en moyenne chez l’homme adulte de 70 kg. La peau humaine adulte se divise en 3 compartiments : l’épiderme, le derme et l’hypoderme. L’épiderme est en contact avec l’environnement extérieur et constitue l’épithélium pluristratifié, kératinisé, squameux non vascularisé ; il est principalement composé de couches de kératinocytes qui représentent 90 à 95 % des cellules épidermiques (Démarchez et coll. : https://biologiedelapeau.fr/). Le système nerveux cutané est riche et complexe avec une voie afférente et une voie efférente, les trois compartiments cutanés, hypoderme, derme, et épiderme (sauf la couche cornée), étant innervés. En contact direct avec l’environnement extérieur, la peau est donc un organe sensoriel majeur. Des contacts étroits entre fibres nerveuses et cellules cutanées ont été observés en microscopie électronique ou confocale. Les fibres nerveuses de la peau produisent des neuromédiateurs (dont les endorphines) et des neurohormones. Les cellules épidermiques et dermiques peuvent également produire des neuromédiateurs et des enzymes pouvant les dégrader ; elles expriment des récepteurs aux neuromédiateurs et sont donc également sensibles à l’action des neuromédiateurs (Démarchez et coll. : https://biologiedelapeau.fr/). Les connexions entre les cellules cutanées comme les kératinocytes sont donc en première ligne pour envoyer des signaux de la peau au système nerveux. Les kératinocytes épidermiques dialoguent avec les neurones sensoriels via des contacts de type synaptique. Ces contacts présentent les caractéristiques ultra structurales et les caractéristiques moléculaires des contacts chimiques de type synaptique. (Misery L. et coll. Keratinocytes Communicate with Sensory Neurons via Synaptic-like Contacts. Ann Neurol. 2020 Dec. 88(6):1205-1219). Les endorphines sont des neurotransmetteurs libérés dans le cerveau, l'hypophyse et dans tout le système nerveux pour combattre la douleur et le stress. Les endorphines interagissent avec les récepteurs opiacés du cerveau – tout comme la morphine et la codéine – pour réduire naturellement la perception de la douleur. Les endorphines sont libérées par exemple lors d'exercices vigoureux ou lors de la dégustation de certains aliments, comme le chocolat et les piments, ou avec des senteurs telles que la lavande ou la vanille et les endorphines ont d’incroyables capacités à réduire le stress et soulager la douleur. L'activation du récepteur cannabinoïde 2 (CB2) entraîne la libération de bêta-endorphine (β-endorphine) par les kératinocytes, qui agit ensuite sur les neurones afférents primaires pour inhiber la nociception (Gao F. et Coll., 2016). Dans le cadre de la présente invention, il a maintenant été découvert de manière totalement fortuite par la demanderesse que la flocculosine, ou un extrait la contenant, est capable de stimuler la production de β-endorphine dans la peau, d’une part en stimulant la production de β-endorphine par les kératinocytes de la peau et également en augmentant la présence de récepteurs CB2 dans la peau. Ainsi, la présente invention a pour but de stimuler la production de β-endorphine dans la peau, et notamment de stimuler la production de β-endorphine par les kératinocytes de la peau. Un autre but de l’invention est de stimuler l’expression des de récepteurs CB2 dans la peau. Un autre but de la présente invention est la fourniture d’un nouveau procédé de soin cosmétique des peaux sensibles, permettant de combattre la sensibilité cutanée et les réactions d’inconfort des peaux sensibles, et ainsi de procurer des sensations de bien-être et/ou d’avoir un effet apaisant. L’utilisation de la flocculosine, d’un extrait la contenant ou encore d’une composition cosmétique la contenant constitue une solution simple, fiable et reproductible, biologique et utilisable à l’échelle industrielle dans le domaine de la cosmétique en réponse aux problèmes susmentionnés. Comme illustré dans la partie expérimentale, la demanderesse a mis en évidence que la flocculosine, un glycolipide membranaire produit naturellement par le champignon Pseudozyma flocculosa , stimule la production de la bêta-endorphine et l’expression du récepteur CB2 par les cellules de la peau. Ainsi selon un premier aspect l’invention concerne l’utilisation non thérapeutique de la flocculosine pour stimuler la production de la bêta-endorphine (β-endorphine) et/ou l’expression du récepteur CB2 par les cellules de la peau. La flocculosine utilisée dans le domaine cosmétique apporte une solution efficace au problème des peaux sensibles en permettant d’une part une stimulation de la sécrétion de la β-endorphine mais également une amplification de l’expression des récepteurs CB2 connus impliqués dans la production de la β-endorphine. En outre, la flocculosine est un composé naturel, synthétisé sans chimie de synthèse, ce qui est d’un avantage particulier dans le domaine du soin cosmétique, encore plus particulièrement du soin des peaux sensibles. Ainsi, selon un deuxième aspect l’invention concerne également un procédé de soin cosmétique d’une peau sensible, caractérisé en ce qu’il comprend l’application sur ladite peau sensible d’une composition comprenant de la flocculosine à titre d’agent actif, pour obtenir un effet apaisant par stimulation de la production de β-endorphine et/ou de l’expression du récepteur CB2 par les cellules de ladite peau sensible, ladite composition comprenant éventuellement au moins un excipient cosmétiquement acceptable. Selon d’autres caractéristiques optionnelles du procédé, ce dernier peut inclure facultativement une ou plusieurs des caractéristiques suivantes, seules ou en combinaison : - la flocculosine est comprise dans la composition, à une concentration comprise entre 0,5 partie par million et 25 parties par million, de préférence entre 1,00 partie par million et 15,00 parties par million en masse de ladite composition, - la flocculosine est incorporée dans la composition sous forme dissoute dans un solvant sélectionné parmi : le propanediol, de la glycérine ou le butylène glycol, - la composition comprend de 0,1% à 5% en masse d’une préparation à 0,50 gramme par litre de flocculosine, - la préparation à 0,50 gramme par litre de flocculosine est du propanediol comprenant 0,50 gramme par litre de flocculosine, - la composition se présente sous forme d’une crème, d’un baume, d’une lotion, d’une huile, d’un beurre ou d’un spray, - la flocculosine est combinée à une autre substance active cosmétiquement acceptable, choisie parmi, désignées selon leur dénomination INCI : maltodextrine (et) biosaccharide gomme-1; biosaccharide gomme-1; esters d’aminopropanediol huile de lin/huile de palme ; biosaccaride gomme-4 (et) 1,2-hexanediol; propylène glycol / eau / extrait de cacao Théobroma; Butylène glycol (et) eau (et) extrait de feuilles d’Ageratum conyzoides ; ou propanediol (et) eau (et) extrait de jus de raisin Vitis vinifera, ou leurs mélanges, - l’effet apaisant obtenu par stimulation de la production de la β-endorphine par les cellules de la peau comprend la prévention et/ou la diminution d’au moins une sensation cutanée sélectionnée parmi : des picotements, des fourmillements, des sensations de tiraillement, des sensations de chaleur voire des sensations de brûlure, des démangeaisons et/ou l’apparition de rougeur cutanées. D’autres caractéristiques, avantages et détails de l’invention seront mieux compris à la lecture du complément de description qui va suivre en rapport avec les dessins dans lesquels : FIG. 1 représente un graphique illustrant l’effet de la flocculosine sur l’expression du récepteur CB2 en pourcentage de surface dans l’épiderme humain (ns : non significatif ; test t de Student *p FIG. 2 représente un graphique illustrant l’effet de la flocculosine sur la libération de la β-endorphine par des kératinocytes humains en culture monocouche (ns : non significatif ; test t de Student *p DESCRIPTION DETAILLEE DE MODES DE REALISATION DE L’INVENTION Une « peau sensible » au sens de l’invention est notamment une peau qui réagit à des stimuli qui, en conditions normales (c’est-à-dire chez un individu ne présentant pas une peau sensible), sont sans effet pour d’autres types de peau. Ces stimuli, très divers, peuvent être les rayonnements UV, le chaud, le froid, l’exposition au vent, variations de température, frottements, l’exposition à différents produits cosmétiques ou chimiques (savons, shampoing, maquillage, crèmes de soin), certaines qualités d’eau, des agents chimiques (présents par exemple dans les lessives), le stress ou les émotions, des états hormonaux (cycle menstruel, stress etc…), un aliment, etc… La réaction de la peau sensible au stimulus comprend une sensation cutanée généralement désagréable telle que des picotements, des fourmillements, des sensations de tiraillement, des sensations de chaleur voire de brûlure, des démangeaisons et/ou l’apparition de rougeur cutanées. Cette au moins une sensation peut être transitoire. Cette sensation désagréable ou cet inconfort peut être spontané, sans cause particulière identifiée. Elle peut également être en lien avec un contact de la peau avec une matière particulière, ou une exposition au soleil (sans entrainer une brulure de type coup de soleil), à du vent, un agent chimique tel qu’un détergent, un savon ou toute autre composition cosmétique. Dans un mode de réalisation particulier, la peau sensible est une peau présentant une déshydratation (au sens de l’invention, une peau présentant une déshydratation n’est pas une peau brulée ou préalablement exposée à un rayonnement thermique ou UV). En effet la déshydratation cutanée contribue à l’exacerbation de la sensibilité cutanée. Dans un autre mode de réalisation particulier, la peau sensible est une peau dite sèche ou très sèche, qui est une peau qui présente une altération du film hydro-lipidique, (le sébum), qui protège la peau des agressions extérieures et évite les pertes en eau. Lorsque la couche supérieure de l'épiderme n'est pas équilibrée en eau et en lipides, elle ne peut plus jouer efficacement son rôle de barrière et devient inconfortable à des degrés divers tel que cela est détaillé plus haut. Dans un autre mode réalisation particulier, le sujet présentant une peau sensible ne souffre pas de pathologies affectant sa peau (telles qu’une rosacée, un eczéma, une dermatite séborrhéique, une infection). Néanmoins il est entendu que certaines peaux particulièrement enclines à déclencher (mais ne souffrant pas de) des rosacées, des eczémas ou des dermatites peuvent constituer des peaux sensibles au sens de l’invention. La peau sensible peut être présente sur toute partie du corps ; ce peut être le cuir chevelu, la peau du visage, voire plus précisément, les lèvres, ou le contour des yeux, des mains, ou tout autre région de la peau étant ou susceptible d’être le siège d’une sensation d’inconfort telle que décrite ci-dessus. Un « effet apaisant », tel que celui induit par l’exposition à la flocculosine, comprend une prévention, une diminution voire une suppression d’une sensation désagréable ou d’un inconfort tel qu’une démangeaison, des picotements, des fourmillements, des sensations de tiraillement, des sensations de chaleur voire des sensations de brûlure. L’expression « partie par million » , ou ppm, telle qu’utilisée ici, et selon l’acceptation usuelle, signifie 10 −6 en valeur relative, ou 1 × 10 −6 , et concerne, sauf mention contraire, les rapports massiques des composés des préparations décrites. Sauf s’il en est disposé autrement, les concentrations massiques données en pourcentage s’entendent en unité de masse par rapport au volume de la solution (par exemple, en g/l). Le « récepteur cannabinoïde 2 » (CB2) s’entend du récepteur membranaire codé par le gène CNR2 (référence NCBI : Gene: 1269). Ce récepteur, couplé à la protéine G, est impliqué dans de nombreux mécanismes. Il est notamment connu pour être exprimé dans les cellules du système immunitaire, et son activation serait à l’origine d’effets antiinflammatoires. Ces récepteurs sont également impliqués dans la médiation des effets analgésiques dans le système nerveux périphérique (Gao F. et Coll., 2016. Les composés cosmétiques sont désignés ici en accord avec La nomenclature internationale des ingrédients cosmétiques ou « dénomination INCI » (pour, en terminologie anglosaxonne, International Nomenclature of Cosmetic Ingredients) dont l’utilisation est obligatoire en Europe pour désigner ces composés depuis 1998. La traduction française de certains des termes de cette nomenclature est cependant proposée. La présente invention trouve son origine dans la découverte fortuite par la demanderesse que la flocculosine induit dans des explants de peau humaine, une augmentation de l’expression de CB2 ainsi que de la sécrétion de la β-endorphine par les kératinocytes. Ainsi, la flocculosine est d’un intérêt tout particulier dans le traitement de la sensibilité cutanée car elle induit i) d’une part la sécrétion de β-endorphine au niveau de la peau, la β-endorphine pouvant donc produire son effet analgésique localement, au niveau de l’épiderme et ii) d’autre part, une augmentation de l’expression du récepteur CB2 dans la peau, dont l’activation est notamment responsable de l’expression de la β-endorphine par les kératinocytes. Ainsi, il peut être attendu une amplification de l’effet apaisant de la flocculosine. Utilisation non thérapeutique de la flocculosine Ainsi, dans un premier aspect, l’invention concerne une utilisation non thérapeutique de la flocculosine pour stimuler la production de la β-endorphine et/ou l’expression du récepteur CB2 par les cellules de la peau. Comme démontré à la FIG. 1 , une augmentation significative de l’expression de CB2 en lien avec l’exposition des explants à la flocculosine de peau humaine est observée. La FIG. 2 montre quant à elle une augmentation dose dépendante de la sécrétion de la β-endorphine par les kératinocytes exposés à la flocculosine Les récepteurs CB2 sont impliqués dans de nombreux mécanismes physiologiques et leur régulation dans la peau est d’un intérêt particulier, notamment dans des modèles expérimentaux dans le domaine cosmétique. Aussi dans un mode de réalisation particulier, l’invention concerne l’utilisation non thérapeutique de la flocculosine pour stimuler l’expression du récepteur CB2 dans des kératinocytes in-vitro ou ex-vivo . « Ex-vivo » comprend des modèles d’explant de peau tels qu’illustrés dans la partie expérimentale. « In-vitro » comprend l’utilisation dans des cultures de kératinocytes isolés. En effet, une telle utilisation permet une stimulation de l’expression de CB2 par exemple sans manipulation génétique, et donc une étude des mécanismes physiologiques et/ou moléculaires impliquant CB2 dans la peau proche des conditions physiologiques. Dans un autre mode de réalisation, cette utilisation non thérapeutique vise à obtenir in-vivo localement un effet apaisant sur la peau, notamment à la zone d’application de la flocculosine sur la peau. Plus particulièrement, l’effet apaisant local est ressenti au niveau de la zone pour laquelle une augmentation de la sécrétion de β-endorphine et/ou une augmentation de l’expression de CB2 est observée. Cet effet apaisant n’est pas obtenu dans un contexte pathologique. Ainsi cet effet apaisant n’est pas un traitement d’un état pathologique de la peau ou de ses symptômes. Procédé de soin cosmétique d’une peau sensible Dans un second aspect, l’invention concerne un procédé de soin cosmétique d’une peau sensible. Dans un mode de réalisation, ledit procédé comprend l’application sur ladite peau sensible d’une composition comprenant de la flocculosine à titre d’agent actif, pour obtenir un effet apaisant par stimulation de la production de β-endorphine et/ou de l’expression du récepteur CB2 par les cellules de ladite peau sensible, ladite composition comprenant éventuellement un excipient cosmétiquement acceptable. Dans un mode de réalisation particulier, ledit procédé est mis en œuvre sur une peau ne souffrant pas d’une pathologie spécifique. La préparation de flocculosine peut être obtenue tel que cela est illustré dans la partie expérimentale. Dans un mode de réalisation, la préparation contient la flocculosine dans un solvant tel que la glycérine, le butylène glycol, le propanediol, de préférence le propanediol. En effet, le propanediol est particulièrement adapté aux préparations de flocculosine. Un excipient s’entend de toute substance autre que le principe actif dans la composition. Dans un mode de réalisation particulier, la préparation de flocculosine est incorporée dans une composition cosmétique, qui comprend, donc, des excipients acceptables cosmétiquement. Dans un mode de réalisation encore plus particulier, cette composition peut comprendre d’autres principes actifs. Dans un mode de réalisation du procédé de soin d’une peau sensible selon l’invention, la composition comprenant la flocculosine à titre d’agent actif comprend de 0,5 ppm à 25 ppm, de préférence entre 1,00 ppm et 15,00 ppm, de manière encore plus préférée entre 5,00 ppm et 10,00 ppm. Dans un mode de réalisation avantageux du procédé de soin d’une peau sensible selon l’invention, la composition comprenant la flocculosine à titre d’agent actif comprend entre 0,1% et 5,0% en masse, entre 1,0% et 4,0% en masse, voire entre 2,0% et 3,0% en masse, d’une solution de 0,50 g par litre de flocculosine Dans un mode particulier de réalisation, la flocculosine dans le procédé selon l’invention, est le seul agent actif de la composition. Dans un autre mode de réalisation, la composition comprenant de la flocculosine à titre d’agent actif comprend également d’autres agents actifs dont les effets peuvent être avantageusement combinés à ceux de la flocculosine. Par exemple, la composition peut comprendre : au moins un composé antioxydant sélectionné parmi : la vitamine E ou le palmitate d’ascorbyle, seul ou leurs mélanges, du Fucogel®Poudre (dénomination INCI : maltodextrin & biosaccharide gum-1), ou du Fucogel® (dénomination INCI : maltodextrin & biosaccharide gum-1, soit en français :maltodextrine et biosaccharide gomme-1), le Fugogel® est connu pour avoir notamment également des propriétés apaisantes, de l’Omega 3 Ceramide® Lin (dénomination INCI : linseed oil/palm oil aminopropanediol esters, soit en français : esters d’aminoproandiol huile de lin/huile de palme), connu pour rétablir la barrière protectrice de la peau, du Pollustop® (dénomination INCI : Biosaccharide gum-4 (and) 1,2-hexanediol, soit en français : biosaccharide gomme-4(et) 1.2-haxanediol), tel que dans l’exemple 3 , qui est connu former une barrière contre les UV, les polluants atmosphériques et chimiques, du Caophenol® (dénomination INCI : Propylene glycol / Aqua / Theobroma cacao extract, soit en français : Propylène glycol / eau / extrait de cacao Theobroma ) , qui est connu pour protéger la peau contre le stress urbain, de l’Ageraline® (dénomination INCI : Butylene glycol (and) Water (and) Ageratum conyzoides leaf extract, soit en français : Butylène glycol (et) eau (et) extrait de feuilles d’Ageratum conyzoides), ou du Viniderm® (dénomination INCI : Propanediol (and) Water (and) Vitis vinifera grape juice extract, soit en français : Propanediol (et) eau (et) extrait de jus de raisin de Vitis vinifera), ou un de leurs mélanges. La composition cosmétique utilisée dans le procédé selon l’invention peut comprendre tout autre composé, ou excipient, usuellement utilisé dans des compositions cosmétiques tel que, désigné selon son nom INCI : au moins un conservateur par exemple sélectionné parmi : le phénoxyéthanol, éthylhexylglycérine, l’hexanediol seul ou leurs mélanges au moins un agent texturant tels que : un beurre, par exemple choisi parmi, désignés selon leur dénomination INCI : soybean glycerides/butyrospermum parkii (shea) /butter unsaponifiables (soit en français : glycérides de soja/butyrospermum parkii (karité) /insaponifiables de beurre; Theobroma cacao (cocoa) seed butter (soit en français : beurre de graines de théobroma cacao (cacao)):, seul ou leurs mélanges, une huile, par exemple choisie parmi : Argania spinosa kernel oil ; une huile de tournesol, une huile de pépins de framboises, une huile de pépins de kiwi, seule ou leurs mélanges , une cire, choisie parmi : alcool béhénylique; cire de tournesol, seule ou leurs mélanges, ou un gélifiant, choisi parmi, désignés selon leur dénomination INCI : hydoxyethyl acrylate/sodium acryloyldimethyl taurate copolymer/aqua(water)/C15-23 alkane/ decyl glucoside D/C13-14 alkane/ glycerin (soit en français Copolymère d'acrylate d'hydoxyéthyle/acryloyldiméthyl taurate de sodium/ aqua (eau)/alcane en C15-23/ D-glucoside de décyle/alcane en C13-C14/glycérine) ; gomme de Sclerotium rolfssii ; la gomme xanthane, seuls ou leurs mélanges, au moins un agent émollient, par exemple choisi parmi : dicaprylil carbonate ; éthylhexylglycérine ; isocétyl stéarate ; cire de tournesol ; l’huile de graines de tournesol ; le tryglycéride caprylique/caprique ; l’huile végétale ; l’huile de graine de fruit de la passion ; le coco-caprylate ; l’octyldodécanol, seuls ou leurs mélanges, ou au moins un émulsionnant, par exemple choisi parmi : distearate de polyglycéryl-3 méthylglucose, cetearyl olivate, l’olivate de sorbitan, le polyglycéryl-6 distéarate, les esters de jojoba, polyglyceryl-3 cire d’abeille, l’alcool cétylique, le citrate de stéarate de glycéryle, le polyglycéryl-3 diiostéarate, la glycérine, le palmitate de sorbitan, , le sorbitol, le sucrose laurate, le sucrose dilaurate et le sucrose trilaurate, seuls ou leur mélanges , ou tout autre excipient cosmétique usuel. Ainsi, la composition comprenant de la flocculosine à titre d’agent actif peut prendre la forme d’une crème, d’un baume, d’une lotion, d’une huile, d’un beurre ou d’un spray selon, par exemple, la partie du corps à laquelle est destinée, les moments de la journée ou encore les conditions extérieures auxquelles est soumise la peau sensible. D’autres buts, avantages de l’invention apparaîtront clairement à la lumière des exemples de réalisations de l’invention donnés à titre d’illustration et non limitatifs. Sauf indications contraires, les pourcentages sont donnés en poids, les températures sont en degrés Celsius, et la pression est la pression atmosphérique à température ambiante. Exemple 1 : la flocculosine induit une augmentation de l’expression de CB2 dans la peau. Méthodologie du test. Le test est réalisé sur des explants de peau humaine issus d'une abdominoplastie d'une femme caucasienne de 50 ans de phototype III (selon la classification de Fitzpatrick). Au jour J0, les explants ont survécu en milieu de culture à 37 ° C dans une atmosphère humide, enrichie de 5% de CO 2 . A J0, J2, J5 et J7, la formule placebo ou la préparation de flocculosine formulée à 2% (tableau 1) ont été appliquées en topique, à raison de 2µL par 1cm² d'explant (≈ 2mg/cm²) et étalées à l'aide d'une petite spatule. Les explants des lots témoins n'ont reçu aucun traitement, hormis le renouvellement du milieu. Le milieu a été renouvelé de moitié (1 mL/puits) à J2, J5, J7 pour toutes les conditions. Toutes les conditions sont réalisées en triple. Compositions testées formule Composition (m/v) placebo Phase A : Phase B : microcare PM3 à 0,5%. flocculosine Phase A : Phase B : Phase C : 2% d’une préparation à 0,5 g/l de flocculosine dans du propanediol. A J0, 3 explants non traités ont été prélevés et coupés en deux. La moitié de chaque punch a été fixée dans une solution tamponnée de formol et l'autre a été congelée (-80°C). Au jour 9, 3 explants de chaque lot ont été prélevés et traités de la même manière qu'à J0. Après 24 heures dans le formol tamponné, les échantillons ont été déshydratés et imprégnés de paraffine à l'aide d'un automate de déshydratation Leica PEARL. Ils ont été assemblés à l'aide d'une centrale d'asphalte Leica EG 1160. Des coupes de 5 µm ont été réalisées à l'aide d'un microtome de type Minot, Leica RM 2125 et montées sur des lames de verre histologiques Superfrost®. Pour les explants congelés, des coupes de 7 µm ont été réalisées à l'aide d'un cryostat Leica CM 3050 et montées sur des lames de verre histologique silané Superfrost® Plus. Les observations microscopiques ont été réalisées par microscopie optique, à l'aide d'un microscope Leica type DMLB, Olympus BX43 ou Olympus BX63. Les photos ont été prises avec un appareil photo Olympus DP72 ou DP74 et le logiciel cellSens. La viabilité cellulaire des structures épidermiques et dermiques a été observée sur des coupes paraffinées après coloration avec la variante trichrome Masson de Goldner. Le marquage a été apprécié par examen microscopique. L'immunomarquage CB2 a été réalisé sur coupe congelée avec un anticorps polyclonal anti-CB2 (NSJ Bioreagents, réf. F40838) dilué au 1:50 dans du PBS-BSA 0,3%%-Tween 20 (0,05%) pendant 1 nuit à température ambiante, et a révélé dans Alexa Fluor AF488 (Lifetechnologies, réf. A11008). L'immunomarquage a été évalué par observation microscopique. L'analyse des images CB2 a été réalisée à l'aide du logiciel cellSens (Olympus). Zone analysée : épiderme entier. Nombre d'images analysées par lot : 9. Résultats Viabilité: Au jour 0, la viabilité cellulaire est bonne au niveau de l'épiderme et du derme papillaire. Au jour 9, la viabilité cellulaire est assez bonne au niveau de l'épiderme et bonne au niveau du derme papillaire. Les traitements avec la formule placebo et celle contenant la flocculosine n'ont induit aucun changement de viabilité par rapport au contrôle au jour 9. Marquage CB2 ( FIG. 1 ): à J0, le marquage CB2 est présent sur 69,9% de la surface de l'épiderme. à J9, le marquage CB2 est présent à 61% de la surface de l'épiderme. Une diminution non significative de 1% est observée pour les échantillons traités avec la formule placebo. La formule contenant de la flocculosine induit une augmentation significative de 49% du marquage de CB2 à la surface de l’épiderme par rapport à J0 et une augmentation significative de 50% par rapport au placebo. Exemple 2 : la flocculosine induit une augmentation de la production de β-endorphine dans la peau. Méthodologie du test. Des kératinocytes humains obtenus respectivement chez une femme de 49 ans et une femme de 39 ans sont soumis à un test de libération de β-endorphine. Pour réaliser les expériences, ces cellules ont été cultivées en monocouche jusqu'à atteindre la confluence. Viabilité : effet cytotoxique de la flocculosine sur les kératinocytes humains normaux en culture monocouche Les cellules ont été incubées pendant 24 heures en absence (témoin) ou en présence de concentrations croissantes du composé testé. La préparation de flocculosine (préparation à 0,5g/l de flocculosine dans du propanediol) a été testée à 0,0003 %, 0,001 %, 0,003 %, 0,01 %, 0,03 %, 0,1 %, 0,3 %, 1 % et 3 % (v/v). La préparation de flocculosine, a été re diluée directement dans le milieu d'incubation afin d'atteindre les différentes concentrations décrites ci-dessus. A la fin de la période d'incubation, la viabilité cellulaire a été évaluée par une méthode spectro-colorimétrique basée sur la mesure de l'activité de la phosphatase alcaline (Yang et al. (1996)). Dosage de la β-endorphine : Le chlorhydrate d’amantadine à 0,1 µM a été utilisé comme activateur de référence de la β-endorphine. Les cellules ont été incubées pendant 24 heures en absence (témoin) ou en présence de produit de référence ou de concentrations croissantes de flocculosine (0,1% et 0,5%, v/v). La flocculosine et la référence ont été diluées directement dans le milieu d'incubation pour atteindre les différentes concentrations décrites ci-dessus. A la fin de la période d'incubation de 24 heures, la bêta-endorphine libérée dans le milieu de culture a été quantifiée à l'aide d'un kit ELISA sensible et spécifique (fournisseur : Antibodies-online ; référence ABIN6963481, Human bêta-EP (Beta-endorphin) ELISA Kit). A la fin de la période d'incubation, les protéines contenues dans les lysats cellulaires ont été quantifiées par une méthode spectro-colorimétrique (méthode Bradford). Les résultats sont exprimés en picogrammes (pg) de β-endorphine par milligrammes (mg) de protéines totales (moyenne ± écart-type). Analyse statistique : Le niveau de significativité entre « Contrôle » et « produit de référence » a été évalué à l'aide d'un test t de Student (* : p Résultats Viabilité: Aucun problème de viabilité cellulaire n’a été détecté même à la concentration maximale de l’expérience. Dosage de la β-endorphine( FIG. 2 ): Dans ces conditions expérimentales, la flocculosine est capable d'induire la sécrétion de β-endorphine de manière dose-dépendante. Une forte tendance d’augmentation de la sécrétion β-endorphine est observée pour les cellules incubées avec 0,1% de flocculosine. Une augmentation très significative de la synthèse de β-endorphine est observée pour les cellules incubées avec 0,5% de flocculosine ( FIG. 2 : + 44,08% (p Conclusions : Ces résultats montrent dans le contexte cutané une activité apaisante de la flocculosine, en induisant l'expression des récepteurs CB2 et la sécrétion de β-endorphine. Cette molécule est donc un grand intérêt pour des applications cosmétiques dans le domaine des peaux sensibles. Exemple 3 : Exemples de compositions cosmétiques adaptées au procédé selon l’invention. Plusieurs exemples de préparation cosmétiques sont proposés ci-dessous. Ces formulations sont particulièrement adaptées au soin des peaux sensibles. Formulation 1 : Lotion micellaire anti-pollution pour peau sensible. Composé Fournisseur Noms INCI % en masse de la composition Eau déminéralisée / AQUA (WATER) 90,1 PHENOXYETHANOL IMCD PHENOXYETHANOL 0,9 FLOCCULOSINE SOLABIA - 3,0 1,3 PROPANEDIOL COSMOS CONNECT CHEMICALS PROPANEDIOL 1,0 ORAMIX CG 110 SEPPIC CAPRYLYL/CAPRYL GLUCOSIDE AQUA (WATER) 1,0 NATPURE SOL SENSIENT COSMETIC TECHNOLOGIES GLYCERIN SUCROSE LAURATE SUCROSE DILAURATE SUCROSE TRILAURATE SORBITOL 1,0 POLLUSTOP SOLABIA Group - SOLABIA AQUA (WATER) 1,2-HEXANEDIOL BIOSACCHARIDE GUM-4 3,0 TOTAL 100,0 Les lotions micellaires sont particulièrement adaptées au soin de la peau et à son nettoyage. En outre, la combinaison de l’effet apaisant de la flocculosine avec l’effet protecteur d’un composé protecteur, tel que par exemple Pollustop®, contre les pollutions atmosphérique, UV et/ou chimique qui agressent particulièrement les peaux sensibles est d’un intérêt tout particulier, car elle confère d’une part une barrière protectrice et d’autre part un effet apaisant en prévention ou lors de cette exposition. Formulation 2 : Brume protectrice pour peau sensible Composé Fournisseur Nom INCI % en masse de la composition EAU DEMINERALISEE / AQUA (WATER) 96,97 PHENOXYETHANOL SAFIC-ALCAN PHENOXYETHANOL 0,90 MICROCARE EHG THOR ETHYLHEXYLGLYCERIN 0,10 FLOCCULOSINE SOLABIA PROPANEDIOL / GLYCOLIPIDS 2,00 SODIUM HYDROXYDE, SOLUTION 1% / AQUA (WATER) / SODIUM HYDROXIDE 0,03 TOTAL 100,00 Les formulations de type Brumes sont adaptées au soin de la peau du visage et/ou du corps mais également au soin du cuir chevelu. Par exemple une telle brume contenant de la flocculosine présente un intérêt particulier pour apaiser la peau et/ou prévenir les démangeaisons en lien avec, par exemple, l’exposition à la chaleur de moyens de séchage, le port d’une perruque, la repousse des cheveux ou encore l’exposition à des agents de type après shampoing. Formulation 3 : Baume visage pour peau sensible Composé Fournisseur Nom INCI % en masse de la composition EAU DEMINERALISEE / AQUA (WATER) 66,07 PHENOXYETHANOL SAFIC-ALCAN PHENOXYETHANOL 0,90 TEGO CARE 450 MB EVONIK INDUSTRIES POLYGLYCERYL-3 METHYLGLUCOSE DISTEARATE 3,00 LIPEX L’SENS AARHUSKARLSHAMN SOYBEAN GLYCERIDES / BUTYROSPERMUM PARKII (SHEA) / BUTTER UNSAPONIFIABLES 3,00 CETIOL CC BASF DICAPRYLYL CARBONATE 5,00 BEURRE DE CACAO INTERCHIMIE THEOBROMA CACAO (COCOA) SEED BUTTER 5,00 NACOL 22-98 SASOL BEHENYL ALCOHOL 2,00 HUILE D´ARGAN VIERGE DESODORISEE BIOLOGIQUE OLVEA VEGETABLE OILS ARGANIA SPINOSA KERNEL OIL 3,00 DUB SIS16 STEARINERIE DUBOIS ISOCETYL STEARATE 5,00 MICROCARE EHG THOR ETHYLHEXYLGLYCERIN 0,20 OMEGA 6 CERAMIDE CARTHAME SOLABIA SAFFLOWER OIL/PALM OIL / AMINOPROPANEDIOL ESTERS 0,50 GLYCERINE INTERCHIMIE GLYCERIN 3,00 SOLAGUM TARA SEPPIC CAESALPINIA SPINOSA GUM 0,15 SENSOGEL NOVUS APPLECHEM HYDROXYETHYL ACRYLATE/SODIUM ACRYLOYLDIMETHYL TAURATE COPOLYMER / AQUA (WATER) / C15-23 ALKANE / DECYL GLUCOSIDE / C13-14 ALKANE / GLYCERIN 1,00 FLOCCULOSINE SOLABIA PROPANEDIOL / GLYCOLIPIDS 2,00 ACIDE CITRIQUE SOLUTION 10% / AQUA (WATER) / CITRIC ACID 0,18 TOTAL 100,00 Les formulations de type baumes sont adaptées au soin de la peau du visage et/ou du corps. Les baumes ont une structure plus riche que les crèmes ou les laits. Ils permettent notamment une application ciblée des agents actifs contenus dans le baume et sont généralement utilisés pour nourrir et hydrater les peaux en profondeur. Les baumes sont notamment d’un intérêt particulier pour les zones de corps exposées aux agressions environnementales (telles que le visage et les mains). Ainsi un baume contenant de la flocculosine est particulièrement adapté pour apaiser la peau siège de sensations de tiraillements, picotements ou tout autre sensation d’inconfort et/ou à prévenir lesdites sensations. Exemple 4 :Préparation de la flocculosine La flocculosine utilisée dans les exemples précités été produite selon le procédé comprenant les étapes suivantes : i-précultures de Pseudozyma flocculosa Un milieu gélosé à base d’extrait végétal (BK205, BIOKAR diagnostics) est ensemencé à partir d’un échantillon de culture conservé à -80°C. Les boites de cultures sont incubées en étuve 24 h à 30°C. Des cultures en milieu liquide sont par la suite effectuées de manière à obtenir un inoculum d’un volume suffisant pour ensemencer la culture principale. ii-culture en milieu liquide La culture principale a lieu en bioréacteur pendant 3 jours, sous agitation à 35 rpm à 25 degrés et en conditions aérobies. iii-fermentation aérobie La troisième étape du procédé consiste en la mise en fermentation de la culture de façon à obtenir une culture fermentée. Elle est réalisée en aérobie et sous agitation de la culture dans les conditions précisées précédemment. iv-lyse des cellules Lorsqu’au moins 85% de la source de carbone du milieu de culture est consommée. La culture est arrêtée et les cellules lysées en appliquant un traitement thermique à 100°C de la culture. Le lysat ainsi obtenu comprend tous les composants issus du champignon Pseudozyma flocculosa dont la flocculosine. v-séparation solide liquide Le lysat est soumis à une étape de séparation solide liquide de façon à obtenir la flocculosine solubilisée dans un solvant tel que du propanediol. vi-séparation solide liquide La flocculosine solubilisée est filtrée de façon à éliminer les composants indésirables. Cette étape est réalisée au moyen d’une membrane de filtration présentant une taille de pore d’au plus 22 μm. A l’issue de cette dernière étape, on obtient une composition comprenant de la flocculosine à une concentration comprise entre 0,02% et 0,08% en masse, soit entre 0,2g/L et 0,8g/L, dans un solvant avec une pureté minimale de 80%. Pour les expérimentations des exemples 1 à 3 la préparation de flocculosine a été est normalisée à 0,5 g/L de flocculosine dans le propanediol. Bibliographie Cheng Y, McNally DJ, Labbé C, Voyer N, Belzile F, Bélanger RR. Insertional mutagenesis of a fungal biocontrol agent led to discovery of a rare cellobiose lipid with antifungal activity. Appl Environ Microbiol. 2003 May;69(5):2595-602. Démarchez et coll. Biologie de la peau : https://biologiedelapeau.fr/). Gao F, Zhang LH, Su TF, Li L, Zhou R, Peng M, Wu CH, Yuan XC, Sun N, Meng XF, Tian B, Shi J, Pan HL, Li M. Signaling Mechanism of Cannabinoid Receptor-2 Activation-Induced β-Endorphin Release. Mol Neurobiol. 2016 Aug;53(6):3616-3625. Mimee B, Labbé C, Pelletier R, Bélanger RR. Antifungal activity of flocculosin, a novel glycolipid isolated from Pseudozyma flocculosa. Antimicrob Agents Chemother. 2005 Apr;49(4):1597-9. Mimee B, Détermination du spectre d'activité et du mode d'action de la flocculosine, une molécule antimicrobienne isolée de Pseudozyma flocculosa. Thèse de doctorat de biologie végétale, Université Laval, 2008. https://corpus.ulaval.ca/entities/publication/66aa8ec9-db70-4031-9c37-3c25445b23db. Traquair J.A., Shaw L.A., Jarvis W.R.. New species of Stephanoascus with Sporothrix anamorphs. Can. J. Bot. 1988, 69, pp. 926-933. Yang TT, Sinai P, Kain SR. An acid phosphatase assay for quantifying the growth of adherent and nonadherent cells. Anal Biochem. 1996 Oct 1;241(1):103-8. Procédé de soin cosmétique apaisant d’une peau sensible, caractérisé en ce qu’il comprend l’application sur ladite peau sensible d’une composition comprenant de la flocculosine à titre d’agent actif quistimule la production de bêta-endorphine et/ou de l’expression du récepteur CB2 par les cellules de ladite peau sensible, ladite composition comprenant éventuellement au moins un excipient cosmétiquement acceptable. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que la flocculosine est comprise dans la composition, à une concentration comprise entre 0,5 partie par million et 25 parties par million, de préférence entre 1,00 partie par million et 15,00 parties par million en masse de ladite composition. Procédé selon l’une quelconque des revendications 2 à 3, caractérisé en ce que la flocculosine est incorporée dans la composition sous forme dissoute dans un solvant sélectionné parmi : le propanediol, de la glycérine ou le butylène glycol. Procédé selon l’une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisé en ce que la composition comprend de 0,1% à 5% en masse d’une préparation à 0,50 gramme par litre de flocculosine. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que la préparation à 0,50 gramme par litre de flocculosine est du propanediol comprenant 0,50 gramme par litre de flocculosine. Procédé selon l’une quelconque l’une des revendications 2 à 6, caractérisé en ce que la composition se présente sous forme d’une crème, d’un baume, d’une lotion, d’une huile, d’un beurre ou d’un spray. Procédé selon l’une quelconque des revendications 2 à 7, caractérisé en ce que la flocculosine est combinée à une autre substance active cosmétiquement acceptable, choisie parmi, désignées selon leur dénomination INCI : maltodextrine (et) biosaccharide gomme-1; biosaccharide gomme-1; esters d’aminopropanediol huile de lin/huile de palme ; biosaccaride gomme-4 (et) 1,2-hexanediol; propylène glycol / eau / extrait de cacao Théobroma; Butylène glycol (et) eau (et) extrait de feuilles d’Ageratum conyzoides ; ou propanediol (et) eau (et) extrait de jus de raisin Vitis vinifera, ou leurs mélanges . Procédé selon l’une quelconque des revendications 2 à 7, caractérisé en ce que l’effet apaisant obtenu par stimulation de la production de la bêta-endorphine par les cellules de la peau comprend la prévention et/ou la diminution d’au moins une sensation cutanée sélectionnée parmi : des picotements, des fourmillements, des sensations de tiraillement, des sensations de chaleur voire des sensations de brûlure, des démangeaisons et/ou l’apparition de rougeur cutanées en réaction à des stimuli qui, chez un individu ne présentant pas une peau sensible, sont sans effet pour d’autres types de peau.