Brevet FR3160704A1 — publié le 20251003

La présente invention concerne une nouvelle endolysine isolée d’un phage et son utilisation thérapeutique tel que dans le traitement de pathologies cutanées causées par Staphylococcus en particulier la pyodermite chez le chien ou le chat. [Fig. **] NOUVELLE ENDOLYSINE DE PHAGE ET SES UTILISATIONS La présente invention concerne une nouvelle endolysine et son utilisation pour son activité anti-staphylocoque. Elle peut ainsi être utilisée dans une solution désinfectante, en sécurité alimentaire ou en thérapie par exemple dans le traitement de pathologies causées par Staphylococcus telles que des pathologies cutanées comme la pyodermite chez le chien ou le chat. Les phages, également appelés « bactériophages », sont des virus infectant uniquement les bactéries. Considérés comme les entités les plus abondants dans la nature, ils présentent une spécificité plus ou moins importante, leur permettant d’infecter au sein d’une même espèce plusieurs souches bactériennes mais ils sont que rarement capables d’infecter plusieurs espèces bactériennes. Cet aspect rend les phages particulièrement intéressant pour le développement de thérapies antibactériennes personnalisées. Suite à l’attachement à la bactérie, les phages injectent leurs génomes dans la bactérie et détournent la machinerie bactérienne pour produire les protéines virales nécessaires à leurs réplications et à la génération de nouveaux phages. Lors des étapes finales du cycle, les phages infectant des bactéries Gram-positives produisent deux protéines impliquées dans la lyse de leur hôte : les endolysines et les holines. Les holines forment des trous dans la membrane bactérienne afin de permettre aux endolysines d’accéder et de couper la paroi bactérienne entraînant la lyse et le relargage de la progéniture virale. La plupart des endolysines contient un ou deux domaines enzymatiques actifs (EAD) en N-terminal qui clivent des liaisons dans le peptidoglycane bactérien et un domaine de fixation à la paroi cellulaire (CBD) impliqué dans la reconnaissance bactérienne. Les deux domaines EAD et CBD sont reliés par un Linker. L'activité enzymatique des endolysines est influencée par la composition des parois cellulaires. Pour les bactéries Gram-positives, la paroi cellulaire est constituée d'une membrane cellulaire cytoplasmique qui est entourée d'une couche épaisse de peptidoglycane. Pour les applications exogènes, les endolysines accèdent facilement à la couche de peptidoglycane et hydrolysent les liaisons basiques du peptidoglycane (au niveau du glycan ou de la liaison amide), entraînant une lyse osmotique et la mort bactérienne. Les EAD qui compose les endolysines sont ainsi classés en plusieurs groupes en fonction de leurs sites de clivage : - Les Glycosidases clivant de la partie glycane du peptidoglycane (MurNAc-GlcNAc) ; - les Amidases clivant la liaison amide entre le fragment glycane (MurNAc) et le fragment peptidique (L-alanine) ; - les Endopeptidase, clivant la liaison peptidique entre deux acides aminés ; - les transglycosylases dégradent le peptidoglycane en clivant la liaison glycosidique β-(1→4) entre les résidus MurNAc et GlcNAc ; - CHAP (Cysteine, Histidine-dependent Amidohydrolase/Peptidase) : Ce type de domaine enzymatique est non classés en fonction de la liaison du peptidoglycane qu'il clive, mais de leur mécanisme catalytique. Comme son nom l’indique, il possède un résidu cystéine et histidine dans leur site actif impliqué dans la coupure du clivage. Les endolysines sont identifiables selon différentes méthodes d’analyse du génome des phages. Il est par la suite possible de cloner le gène codant pour les endolysines dans un vecteur d’expression bactérien inductible et de produire la protéine ainsi que de la purifier à l’aide d’étiquettes d’affinités (polyhistidines, GST, …). Elles ont montré des résultats prometteurs dans l’élimination des bactéries dans différents domaines : la sécurité alimentaire, la désinfection des surfaces, la thérapeutique, notamment pour traiter les bactéries résistantes aux antibiotiques. Il est important de noter que certaines endolysines sont également efficaces pour éliminer les bactéries intracellulaires et pour détruire les biofilm bactériens (1, 2). La Lys38 a été identifiée pour une activité anti- Staphylococcus pseudintermedius . La pyodermite canine est l’une des infections cutanées les plus fréquemment consultées chez les vétérinaires. Elle se traduit par les rougeurs, les lésions, les douleurs et les inflammations. La bactérie S. pseudintermedius est l'agent pathogène le plus couramment associé aux infections cutanées, elle prédomine dans jusqu'à 92 % des cas de pyodermite canine. Le taux de la résistance à la méticilline des S. pseudintermedius (MRSP) peut être jusqu'à 59 % des cas de pyodermite canine (3). Il était donc nécessaire de trouver un nouveau traitement efficace pour les pathologies causées par S. pseudintermedius . Dans la littérature, les endolysines ont souvent été citées pour l’application anti- Staphylococcus en générale ou pour une application ciblée sur des espèces particulières de Staphylocoques telles que Staphylococcus aureus ( S. aureus ) dans la plupart des cas, ou d’autres espèces telles que Staphylococcus homilis ou Staphylococcus epidermis , mais rarement pour cibler S. pseudintermedius . Jusqu’à présent, l’activité d’endolysines de phages spécifiques de S. pseudintermedius n’a pas été démontrée ni sur S. pseudintermedius , ni sur S. aureus . Les inventeurs ont pu identifier à partir d’un bactériophage, une nouvelle endolysine de séquence SEQ ID NO :1, également appelée ci-après Lys38, qui présente une activité anti- S . pseudintermedius remarquable. Cette nouvelle endolysine est très prometteuse pour la mise au point d’un nouveau traitement efficace contre S. pseudintermedius . En particulier, les résultats ont démontré que la Lys38 a une activité spécifique sur les souches S. pseudintermedius à faible concentration et qu’à certaines concentrations elle est active également sur S. aureus . Résumé Dans un premier aspect, la présente divulgation porte sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 2 et une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 3. Dans un deuxième aspect, la présente divulgation porte sur l’utilisation d’une endolysine telle que décrite ci-dessus comme médicament. Dans un troisième aspect, la présente divulgation porte sur une endolysine telle que décrite ci-dessus pour son utilisation dans le traitement d’une infection causée par un staphylocoque, en particulier par S. aureus ou par S. pseudintermedius . Dans un quatrième aspect, la présente divulgation porte sur l’utilisation non thérapeutique d’une une endolysine telle que décrite ci-dessus comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- Staphylococcus aureus , en particulier anti- Staphylococcus pseudintermedius . Dans un cinquième aspect, la présente divulgation porte sur l’utilisation non thérapeutique d’une une endolysine telle que décrite ci-dessus comme composé antibactérien. Dans un sixième aspect, la présente divulgation porte sur l’utilisation non thérapeutique d’une une endolysine telle que décrite ci-dessus dans une solution anti-biofilm. Dans un septième aspect, la présente divulgation porte sur l’utilisation non thérapeutique d’une une endolysine telle que décrite ci-dessus en sécurité alimentaire. Dans un huitième aspect, la présente divulgation porte sur l’utilisation non thérapeutique d’une une endolysine telle que décrite ci-dessus dans un produit cosmétique ou dans une préparation pharmaceutique. Fig. 1 FIG. 1 montre une analyse par SDS-Page d’une production de l’endolysine de séquence SEQ ID NO : 1 (Lys38). Détection de la bande à environ 50 kDa (indiquée par la flèche). Fig. 2 FIG. 2 montre la comparaison de l’activité de l’endolysine de séquence SEQ ID NO : 1 (Lys38) avec l’activité de l’endolysine du phage K sur différentes souches de Staphylococcus aureus et de Staphylococcus pseudintermedius par appréciation de la densité optique (DO) à 600 nm (en ordonnée) après 30 min d’incubation à 37°C. Fig. 3 FIG. 3 montre la comparaison de la moyenne de l’activité de l’endolysine de séquence SEQ ID NO : 1 (Lys38) avec la moyenne de l’activité de l’endolysine du phage K sur 23 souches de Staphylococcus aureus et 23 souches de Staphylococcus pseudintermedius par appréciation de la densité optique (DO) à 600 nm (en ordonnée) après 30 min d’incubation à 37°C. Moyennes des résultats de la FIG. 2 . Concentration en Lys38 et Lys K : 1 µg/ml. Fig. 4 FIG. 4 montre l’activité de l’activité de Lys38 sur différentes espèces bactériennes (en abscisse). La densité optique (DO) est lue à 600 nm (en ordonnée). Concentration en Lys38 : 1 µg/ml. Fig. 5 FIG. 5 montre la comparaison de l’activité de l’endolysine de séquence SEQ ID NO : 1 (Lys38) avec l’activité de l’endolysine du phage K sur différentes souches de Staphylococcus aureus , par l’appréciation de la diminution de la densité optique (DO) à 600 nm (en ordonnée), initialement à 1, après 30 min d’incubation à 37°C. Concentration en Lys38 : 10µg/ml. Fig. 6 FIG. 6 montre la comparaison de l’activité de l’endolysine de séquence SEQ ID NO : 1 (Lys38) avec l’activité de l’endolysine du phage K sur différentes souches de Staphylococcus pseudintermedius par l’appréciation de la diminution de la densité optique (DO) à 600 nm (en ordonnée), initialement à 1, après 30 min d’incubation à 37°C. Concentration en Lys38 : 10µg/ml. Fig. 7 FIG. 7 montre la réduction de S. pseudintermedius après traitement avec l’endolysine de séquence SEQ ID NO : 1 (Lys38) sur des souris présentant une lésion induite par une infection à S. pseudintermedius et traitées avec deux doses de 75µg par jour, en application topique. Fig. 8 FIG. 8 montre la diminution de la taille de la lésion induite chez la souris par une infection à S. pseudintermedius au cours des 9 jours de traitement (D1 à D9) avec l’administration de deux doses de 75µg par jour de l’endolysine de séquence SEQ ID NO : 1 (Lys38), en application topique. Fig. 9 FIG. 9 montre les résultats d’activité des différents domaines de l’endolysine Lys38 (SEQ IDNO :1), i.e. CHAP (SEQ ID NO :3), CHAP_Am (SEQ ID NO :2), Am (SEQ ID NO : 4) et Am_SH3 (SEQ ID NO :5), testés à des concentrations de 18nM, 90nM, 180nM, 450nM et 900nM pendant 1h30 sur une culture de la souche SP1 de S. pseudintermedius . Fig. 10 FIG. 10 montre les résultats d’activité des différents domaines de l’endolysine Lys38 (SEQ IDNO :1), i.e. CHAP (SEQ ID NO :3), CHAP_Am (SEQ ID NO :2), Am (SEQ ID NO : 4) et Am_SH3 (SEQ ID NO :5), testés à des concentrations de 18nM, 90nM, 180nM, 450nM et 900nM pendant 1h30 sur une culture de la souche C24 de S. aureus . Description de l’invention Selon un premier aspect, la présente invention porte sur une endolysine comprenant la séquence SEQ ID NO :2 et la séquence SEQ ID NO :3 ou ses variants comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 2 et une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 3. SEQ ID NO :2 MVASLSKKEFISFLKSSEGKQFNEDGWYGYQCFDFANTGWLKLFGHKLMGLGAKDIPFNSINKNYFKTEAKVYSNTPEFLAEAGDMVVFGENYGGGYGHVAWVIEATLDYIVVLEQNWLGGGWTDGIEQPGSGWESVTRRKHAYDFPMWFIRPNFK SEQ ID NO :3 KLNYIRDEIKGYNMDKRGYKPRGIVLHNDAGSAGATAEAYHKGLVNADYNRLEKGVAHSYVSGSTVYQALPEGKIAWHVANRIGNRDYYGIEICQSVGATDKQFLANEQSAFQEAARMLKKWGLPANRNTVRLHVEFYNTACPHRSMLLHTGFDPTVKGIPPQAMQLKLKDYFIKQIRAYMDGKVPVATV Au sens de la présente demande, un pourcentage d’identité d’au moins 80%, peut être en particulier d’au moins 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%. Cela s’applique en particulier aux séquences des variants ayant au moins 80% d’identité avec les séquences SEQ NO :2, SEQ ID NO :3 ou SEQ ID NO :4. Le pourcentage d'identité entre deux séquences d'acides aminés peut être déterminé à l'aide de l'algorithme de E. Meyers et W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4:11-17, 1988) qui a été incorporé dans le programme ALIGN (version 2.0), en utilisant une table de résidus de poids PAM120, une pénalité de longueur d'espace de 12 et une pénalité d'espace de 4. Alternativement, le pourcentage d'identité entre deux séquences d'acides aminés peut être déterminé en utilisant des techniques publiées et des programmes informatiques largement disponibles, tels que BLASTP, FASTA (Atschul et al., J. Molecular Biol. 215:403, 1990) ou l'algorithme de Needleman et Wunsch (J. Mol, Biol. 48:444-453, 1970) qui a été incorporé dans le programme GAP du progiciel GCG (Devereux et al.), Nucleic Acids Res. 12:387, 1984, généralement disponible à l'adresse http://www.gcg.com), en utilisant soit une matrice Blossom 62, soit une matrice PAM250, et un poids d'espace de 16, 14, 12, 10, 8, 6 ou 4 et un poids de longueur de 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Par variant, on entend une endolysine comprenant la séquence SEQ ID NO :2 et la séquence SEQ ID NO :3 comprenant au moins une mutation par substitution, délétion ou addition d’acides aminés. En particulier, l’invention porte sur des variants fonctionnels qui conservent une activité similaire à celle de la protéine comprenant la séquence SEQ ID NO :2 et la séquence SEQ ID NO :3, selon le test d’activité présenté dans le dernier exemple de la présente demande Ce test d’activité comprend les étapes suivantes : - Culture d’une souche de S. pseudintermedius ou d’une souche S. aureus pour obtenir une DO=1 ; - Prélèvement de 300 µl et ajout du variant à différentes concentrations : 1, 5, 10, 25, 50µg/mL ; - Incubation du mélange 90 minutes à 37°C ; - Transfert sur glace pour arrêter la réaction ; - Mesure de la DO ; - Comparaison avec la DO obtenue pour une protéine comprenant la séquence SEQ ID NO : 2 et la séquence SEQ ID NO :3, en particulier comparaison avec la DO de la protéine SEQ ID NO :4 ou la DO de la protéine SEQ ID NO :1, mesurée au sein du même test. De préférence, les variants fonctionnels comprennent uniquement des mutations par substitution, de préférence par substitution conservative. Dans la présente demande, l'expression "substitution conservatrice d'un acide aminé" signifie qu'un acide aminé donné peut être remplacé par un résidu ayant des caractéristiques physiochimiques similaires, par exemple en substituant un résidu aliphatique à un autre (comme Ile, Val, Leu ou Ala), ou en substituant un résidu polaire à un autre (comme entre Lys et Arg ; Glu et Asp ; ou Gln et Asn). D'autres substitutions conservatrices de ce type, par exemple des substitutions de régions entières présentant des caractéristiques d'hydrophobie similaires, sont connues. Les polypeptides comprenant des substitutions conservatrices d'acides aminés peuvent être testés dans l'un des essais décrits ici pour confirmer qu'une activité souhaitée, par exemple l'activité de liaison à l'antigène et la spécificité d'un polypeptide natif ou de référence, est conservée. Les acides aminés peuvent être regroupés en fonction des similitudes dans les propriétés de leurs chaînes latérales (dans A. L. Lehninger, in Biochemistry, deuxième édition, pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)) : (1) non polaires : Gly (G), Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M) ; (2) polaires non chargées : Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q) ; (3) acide : Asp (D), Glu (E) ; (4) basique : Lys (K), Arg (R), His (H). Les résidus naturels peuvent également être divisés en groupes sur la base des propriétés communes des chaînes latérales : (1) hydrophobes : Norleucine, Met, Ala, Val, Leu, Ile ; (2) hydrophile neutre : Cys, Ser, Thr, Asn, Gln ; (3) acide : Asp, Glu ; (4) basique : His, Lys, Arg ; (5) résidus qui influencent l'orientation de la chaîne : Gly, Pro ; (6) aromatiques : Trp, Tyr, Phe. Les substitutions non conservatrices impliquent l'échange d'un membre de l'une de ces classes contre un membre d'une autre classe. Les substitutions conservatrices particulières comprennent, par exemple, Ala en Gly ou en Ser ; Arg en Lys ; Asn en Gln ou en His ; Asp en Glu ; Cys en Ser ; Gln en Asn ; Glu en Asp ; Gly en Ala ou en Pro ; His en Asn ou en Gln ; Ile en Leu ou en Val ; Leu en Ile ou en Val ; Lys en Arg, en Gln ou en Glu ; Met en Leu, en Tyr ou en Ile ; Phe en Met, en Leu ou en Tyr ; Ser en Thr ; Thr en Ser ; Trp en Tyr ; Tyr en Trp ; et/ou Phe en Val, en Ile ou en Leu. Des variants préférés sont des variants comprenant des substitutions conservatrices sur 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 acides aminés de la séquence. Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention porte sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 2 et une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 3. La présente invention porte également sur une endolysine comprenant une séquence SEQ ID NO :4 ou ses variants comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 4. SEQ ID NO : 4 MVASLSKKEFISFLKSSEGKQFNEDGWYGYQCFDFANTGWLKLFGHKLMGLGAKDIPFNSINKNYFKTEAKVYSNTPEFLAEAGDMVVFGENYGGGYGHVAWVIEATLDYIVVLEQNWLGGGWTDGIEQPGSGWESVTRRKHAYDFPMWFIRPNFKSETTLLSAQSVTKQKSKQPAKKPKKLNYIRDEIKGYNMDKRGYKPRGIVLHNDAGSAGATAEAYHKGLVNADYNRLEKGVAHSYVSGSTVYQALPEGKIAWHVANRIGNRDYYGIEICQSVGATDKQFLANEQSAFQEAARMLKKWGLPANRNTVRLHVEFYNTACPHRSMLLHTGFDPTVKGIPPQAMQLKLKDYFIKQIRAYMDGKVPVATV Par variant, on entend une endolysine de séquence SEQ ID NO :4 comprenant au moins une mutation par substitution, délétion ou addition d’acides aminés. En particulier, l’invention porte sur des variants fonctionnels qui conservent une activité similaire à celle de la protéine de séquence SEQ ID NO :4 selon le test d’activité présenté dans le dernier exemple de la présente demande La présente invention porte également sur une endolysine de séquence SEQ ID NO :1 ou ses variants comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1. SEQ ID NO : 1 MVASLSKKEFISFLKSSEGKQFNEDGWYGYQCFDFANTGWLKLFGHKLMGLGAKDIPFNSINKNYFKTEAKVYSNTPEFLAEAGDMVVFGENYGGGYGHVAWVIEATLDYIVVLEQNWLGGGWTDGIEQPGSGWESVTRRKHAYDFPMWFIRPNFKSETTLLSAQSVTKQKSKQPAKKPKKLNYIRDEIKGYNMDKRGYKPRGIVLHNDAGSAGATAEAYHKGLVNADYNRLEKGVAHSYVSGSTVYQALPEGKIAWHVANRIGNRDYYGIEICQSVGATDKQFLANEQSAFQEAARMLKKWGLPANRNTVRLHVEFYNTACPHRSMLLHTGFDPTVKGIPPQAMQLKLKDYFIKQIRAYMDGKVPVATVSNKTSASSNTVKPIAGAWQVNSYGTYYMKESATFVCGNKPITTRTVGPFTTCPEGYMFQPGGWCEYDEVMLQDGHVWIGYDWQGQRYYLPIRKWNGVAPPNQGLGDLWGTIK Au sens de la présente demande, les variants peuvent présenter un pourcentage d’identité avec la séquence SEQ ID NO :1 d’au moins 70%, en particulier d’au moins 75%, d’au moins 80%, d’au moins 85%, plus particulièrement d’au moins 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%. Par variant, on entend une endolysine de séquence SEQ ID NO :1 comprenant au moins une mutation par substitution, délétion ou addition d’acides aminés. En particulier, l’invention porte sur des variants fonctionnels qui conservent une activité similaire à celle de la protéine de séquence SEQ ID NO :1 selon le test d’activité présenté dans le dernier exemple de la présente demande En particulier, la présente demande porte sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1, et comprenant une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :2 et une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :3. Dans un mode de réalisation plus particulier, la présente demande porte sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1, et comprenant une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :4. Dans un mode de réalisation plus particulier, la présente demande porte sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1, et comprenant la séquence SEQ ID NO :2 et la séquence SEQ ID NO :3. Dans un mode de réalisation plus particulier, la présente demande porte sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1, et comprenant la séquence SEQ ID NO :4. Dans un mode de réalisation plus particulier, la présente invention porte sur une endolysine de séquence SEQ ID NO : 1. La protéine de séquence SEQ ID NO :1 est une endolysine isolée à partir d’un bactériophage, et est également dénommée Lys38 dans la présente demande. La présente invention porte également sur une composition pharmaceutique comprenant une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 2 et une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 3. La présente invention porte aussi sur une composition pharmaceutique comprenant une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 4. La présente invention porte aussi sur une composition pharmaceutique comprenant une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1. En particulier, elle porte sur une composition pharmaceutique comprenant une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :2 et une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :3. En particulier, la composition pharmaceutique comprend une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :4. En particulier, la composition pharmaceutique comprend une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend la séquence SEQ ID NO :2 et la séquence SEQ ID NO :3. En particulier, la composition pharmaceutique comprend une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend la séquence SEQ ID NO :4. Dans un mode de réalisation plus particulier, ladite composition comprend l’endolysine de séquence SEQ ID NO :1. La présente demande porte également sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 2 et une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 3, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . La présente demande porte aussi sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 4, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . La présente demande porte aussi sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . Au sens de la présente demande, par « agent anti-staphylocoque », on entend que ladite endolysine a une activité anti-staphylocoque c’est-à-dire qu’elle permet d’inhiber la croissance de cette espèce bactérienne, voire de détruire ces bactéries dans un contexte non thérapeutique. En particulier, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :2 et une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :3, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . En particulier, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :4, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . En particulier, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend la séquence SEQ ID NO :2 et la séquence SEQ ID NO :3, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . En particulier, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend la séquence SEQ ID NO :4, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . En particulier, le présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine de séquence SEQ ID NO : 1 comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . La présente invention porte également sur l’utilisation non-thérapeutique d’une composition comprenant une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 2 et une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 3, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . La présente invention porte aussi sur l’utilisation non-thérapeutique d’une composition comprenant une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 4, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . La présente invention porte aussi sur l’utilisation non-thérapeutique d’une composition comprenant une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . En particulier, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une composition comprenant une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :2 et une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :3, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . En particulier, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une composition comprenant une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :4, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . En particulier, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une composition comprenant une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend la séquence SEQ ID NO :2 et la séquence SEQ ID NO :3, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . En particulier, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une composition comprenant une endolysine qui comprend une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend la séquence SEQ ID NO :4, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . Dans un mode de réalisation plus particulier, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une composition comprenant l’endolysine de séquence SEQ ID NO :1, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- S . aureus , en particulier anti- S . pseudintermedius . Selon un autre aspect, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine de phage dans une solution désinfectante. Par solution désinfectante, on entend une solution qui détruit les microorganismes tels que bactéries, en particulier S. aureus ou S. pseudintermedius , se trouvant sur des surfaces inertes telles que du matériel médical. Ainsi, la présente demande porte aussi sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine de phage comme composé antibactérien. Selon un autre aspect, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine de phage dans une solution anti-biofilm. Un biofilm est un amas structuré de micro-organismes adhérant entre eux et à une surface et marqué par la sécrétion d’une matrice adhésive et protectrice. Il se forme généralement dans l’eau ou en milieu aqueux. Une solution anti-biofilm est une solution permettant, après son application, de détruire ou limiter la formation des biofilms. Selon un autre aspect, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine de phage en sécurité alimentaire, comme conservateur alimentaire par exemple, afin de lutter contre le développement de staphylocoques tels que S. aureus , dans des produits agroalimentaires. Selon un autre aspect, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine de phage en cosmétique, par exemple dans un produit cosmétique comme conservateur en cosmétique, afin de lutter contre le développement de staphylocoques dans des produits cosmétiques. Selon un autre aspect, la présente demande porte sur l’utilisation non-thérapeutique d’une endolysine de phage dans une préparation pharmaceutique, comme conservateur par exemple, afin de lutter contre le développement de staphylocoques dans des produits pharmaceutiques. Dans un mode de réalisation, ladite endolysine de phage pour son utilisation non thérapeutique dans une solution désinfectante, comme composé antibactérien, dans une solution anti-biofilm, en sécurité alimentaire, en cosmétique, ou dans une préparation pharmaceutique, est une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 2 et une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 3. Dans un mode de réalisation, ladite endolysine de phage pour son utilisation non thérapeutique dans une solution désinfectante, comme composé antibactérien, dans une solution anti-biofilm, en sécurité alimentaire, en cosmétique, ou dans une préparation pharmaceutique, est une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 4. Dans un mode de réalisation, ladite endolysine de phage pour son utilisation non thérapeutique dans une solution désinfectante, comme composé antibactérien, dans une solution anti-biofilm, en sécurité alimentaire, en cosmétique, ou dans une préparation pharmaceutique, est une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1. Dans un mode de réalisation, ladite endolysine de phage pour son utilisation non thérapeutique dans une solution désinfectante, comme composé antibactérien, dans une solution anti-biofilm, en sécurité alimentaire, en cosmétique ou dans une préparation pharmaceutique, est une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :2 et une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :3. Dans un mode de réalisation, ladite endolysine de phage pour son utilisation non thérapeutique dans une solution désinfectante, comme composé antibactérien, dans une solution anti-biofilm, en sécurité alimentaire, en cosmétique ou dans une préparation pharmaceutique, est une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :4. Dans un mode de réalisation, ladite endolysine de phage pour son utilisation non thérapeutique dans une solution désinfectante, comme composé antibactérien, dans une solution anti-biofilm, en sécurité alimentaire, en cosmétique ou dans une préparation pharmaceutique, est une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend la séquence SEQ ID NO :2 et la séquence SEQ ID NO :3. Dans un mode de réalisation, ladite endolysine de phage pour son utilisation non thérapeutique dans une solution désinfectante, comme composé antibactérien, dans une solution anti-biofilm, en sécurité alimentaire, en cosmétique ou dans une préparation pharmaceutique, est une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend la séquence SEQ ID NO :4. Dans un mode de réalisation, ladite endolysine de phage pour son utilisation non thérapeutique dans une solution désinfectante, comme composé antibactérien, dans une solution anti-biofilm, en sécurité alimentaire en cosmétique ou dans une préparation pharmaceutique, est une endolysine de séquence SEQ ID NO :1. La présente demande porte également sur l’utilisation non thérapeutique d’une composition telle que décrite précédemment, dans une solution désinfectante, comme composé antibactérien, dans une solution anti-biofilm, en sécurité alimentaire, en cosmétique ou dans une préparation pharmaceutique. Selon un autre aspect, la présente demande porte sur l’utilisation thérapeutique d’une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 2 et une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 3. La présente demande porte aussi sur l’utilisation thérapeutique d’une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 4. La présente demande porte aussi sur l’utilisation thérapeutique d’une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1. En particulier, elle porte sur l’utilisation thérapeutique d’une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :2 et une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :3, en particulier une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :4, plus particulièrement l’endolysine de SEQ ID NO :1. La présente demande porte ainsi sur une endolysine comprenant une séquence comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 2 et une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 3, pour son utilisation comme principe actif dans une solution thérapeutique. La présente demande porte donc aussi sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 4 pour son utilisation comme principe actif dans une solution thérapeutique. La présente demande porte aussi sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 pour son utilisation comme principe actif dans une solution thérapeutique. En particulier, elle porte sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :2 et une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :3, en particulier une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :4, plus particulièrement l’endolysine de SEQ ID NO :1, pour son utilisation comme principe actif dans une solution thérapeutique. Ainsi, la présente demande porte sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 2 et une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 3, pour son utilisation comme médicament. La présente demande porte donc aussi sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 4, pour son utilisation comme médicament. La présente demande porte donc aussi sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1, pour son utilisation comme médicament. En particulier, elle porte sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :2 et une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :3, en particulier une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :4, plus particulièrement l’endolysine de SEQ ID NO :1, pour son utilisation comme médicament. En particulier, il s’agit d’une utilisation thérapeutique dans le traitement d’une infection causée par un staphylocoque. Par « infection », on entend la pénétration et prolifération dans le corps d'un micro-organisme tels que bactérie ou virus, susceptible de provoquer un problème de santé. Une infection peut être locale ou généralisée (septicémie). Dans un mode de réalisation, ladite infection est causée par S. aureus . Dans un mode de réalisation, ladite infection est causée par S. pseudintermedius . Cela peut être chez l’homme ou l’animal de compagnie tel que le chien ou le chat. En particulier ladite infection causée par un staphylocoque est une infection cutanée telle que la pyodermite. Dans un mode de réalisation particulier, il s’agit du traitement de la pyodermite chez le chien ou le chat, en particulier causée par S. pseudintermedius . L’endolysine peut être administrée par voie topique, voie orale ou voie parentérale. En particulier, elle est administrée par voie topique c’est-à-dire qu’elle est administrée sur un point externe du corps, sur une surface du corps telle que la peau ou les muqueuses. On parle aussi d’application cutanée. Lorsqu’elle est appliquée par voie topique, cela peut être sous forme de lotion, de crème, de gel, d’hydrogel, d’émulsion, de baume ou de spray. Dans un mode de réalisation, elle est appliquée à une concentration entre 10 µg/mL et 500 µg/mL, en particulier entre 50 et 250 µg/mL, plus particulièrement entre 100 et 150 µg/mL. Dans un mode de réalisation, la dose journalière d’endolysine administrée est entre 10 µg et 300 µg, en particulier entre 100 et 250 µg, plus particulièrement entre 150 et 200 µg. La dose journalière peut être administrée en une fois ou divisée en plusieurs prises sur la journée. Elle peut par exemple être divisée en 2 prises. Les prises sont espacées entre 6 et 8 heures. Typiquement, le traitement peut durer entre une et deux semaines. L’homme du métier saura adapter la dose et la durée du traitement selon la gravité des symptômes et l’efficacité du traitement au cours du temps. La présente divulgation porte également sur une méthode de traitement d’une infection causée par un staphylocoque comprenant l’administration d’une endolysine de phage au sujet à traiter. Les modes de réalisations relatifs à une endolysine de phage pour son utilisation dans le traitement d’une infection causée par staphylocoque décrits précédemment, s’appliquent tous et sans exception à cette méthode de traitement. La présente demande porte aussi sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 2 et une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 3, pour son utilisation thérapeutique dans une solution lavante désinfectante pour nettoyer la peau ou les muqueuses. La présente demande porte aussi sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1, pour son utilisation thérapeutique dans une solution lavante désinfectante pour nettoyer la peau ou les muqueuses. En particulier, elle porte sur une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :2 et une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :3, en particulier une endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :4, plus particulièrement l’endolysine de SEQ ID NO :1, pour son utilisation thérapeutique dans une solution lavante désinfectante pour nettoyer la peau ou les muqueuses. Exemples Matériel et Méthodes Milieux de cultures, boites de cultures et antibiotiques Les milieux de cultures Brain Heart Infusion (BHI ; BIOKAR #BK015HA) et Lysogeny Broth (LB ; BD Difco #240230) sont réalisés suivant les indications des fabricants et autoclavés. Clonage et constructions plasmidiques Les lysines sont clonées par assemblage in vitro (Garcia-Nafria et al. 2016) dans un plasmide pET28a (+) pour générer des protéines recombinantes marquées par une étiquette hexahistidine en position N-terminale et sous l’activité du promoteur T7 qui est contrôlé par un lac opéron. Surexpression et purification des protéines Des bactéries BL21(DE3)Star transformées avec le plasmide codant pour la Lys38 ont été utilisées pour produire et purifier l’endolysine. L’induction est effectuée quand les bactéries atteignent un densité optique ~ 0.5. Après induction à l’IPTG, les bactéries sont incubées à 18°C sur la nuit, sous agitation. Les cultures sont centrifugées puis resuspendues et concentrées dans un tampon de lyse puis lysées au sonicateur. Par la suite, les protéines solubles sont séparées des protéines insolubles par centrifugation pour ensuite être purifiées à l’aide d’une résine Ni-NTA. Enfin, avant utilisation, le tampon d’élution contenant de l’imidazole est échangé par du PBS 1X à l’aide d’une colonne PD-10. Les fractions dialysées sont ensuite centrifugées à 21100g à 4°C, les surnageants sont récupérés et regroupés puis conservées à -80°C. Les protéines sont quantifiées au Nanodrop et le degré de pureté par SDS-PAGE à l’aide du logiciel ImageJ. Comparaison de la spécificité de la Lys 38 et Lys K (protéine de référence) (Figures 2, 3, 5 et 6) La protéine LysK de séquence SEQ ID NO : 6, est une endolysine ayant 40% d'homologie avec Lys38. SEQ ID NO :6 MAKTQAEINKRLDAYAKGTVDSPYRVKKATSYDPSFGVMEAGAIDADGYYHAQCQDLITDYVLWLTDNKVRTWGNAKDQIKQSYGTGFKIHENKPSTVPKKGWIAVFTSGSYEQWGHIGIVYDGGNTSTFTILEQNWNGYANKKPTKRVDNYYGLTHFIEIPVKAGTTVKKETAKKSASKTPAPKKKATLKVSKNHINYTMDKRGKKPEGMVIHNDAGRSSGQQYENSLANAGYARYANGIAHYYGSEGYVWEAIDAKNQIAWHTGDGTGANSGNFRFAGIEVCQSMSASDAQFLKNEQAVFQFTAEKFKEWGLTPNRKTVRLHMEFVPTACPHRSMVLHTGFNPVTQGRPSQAIMNKLKDYFIKQIKNYMDKGTSSSTVVKDGKTSSASTPATRPVTGSWKKNQYGTWYKPENATFVNGNQPIVTRIGSPFLNAPVGGNLPAGATIVYDEVCIQAGHIWIGYNAYNGNRVYCPVRTCQGVPPNQIPGVAWGVFK A partir d’une préculture faite sur la nuit, les différentes souches bactériennes sont cultivées pendant 3 heures à 37°C avec agitation, dans du milieu BHI. Elle est ensuite centrifugée et resuspendue pour obtenir une DO de 1 dans du tampon (Tris 20mM, 2.5mM CaCl2, 100 mM NaCl, pH 7.5). Dans des cuves pour spectrophotomètre, 1mL de suspension bactérienne est déposé avec 1µg/mL de protéines totales purifiées pour l’obtention des Figures 2 et 3, et avec 10 µg/mL de protéines totales purifiées pour l’obtention des Figures 5 et 6. Les bactéries sont incubées à 37°C et une lecture de la DO est faite à 30 minutes. L’activité des endolysines Lys38 et LysK sur chaque souche bactérienne est traduite par la diminution de la DO. Evaluation de l’activité antimicrobienne de Lys38 sur Staphylococcus aureus et Staphylococcus pseudintermedius à 10 µg/ mL ( FIG. 4 ) De façon similaire, les différentes souches sont préparées comme décrite précédemment et diluées pour obtenir une DO bactérienne de 1 dans le tampon (Tris 20mM, 2.5mM CaCl2, 100 mM NaCl, pH 7.5). L’endolysine Lys38 est ajoutée à 10µg/mL. Les bactéries sont incubées 30 minutes à 37°C et sont mises sur glace afin d’arrêter la réaction. L’activité de l’endolysine Lys38 sur chaque souche bactérienne est traduite par la diminution de la DO. Etude toxicologique de Lys38 sur modèle animal (souris) L’ensemble des expérimentations animales ont été effectuées par une CRO (société de recherche contractuelle) et en accord avec leurs protocoles développés et approuvés par un comité d’éthique. Des souris BALB/c mâles âgées de 7 semaines ont été obtenues de Janvier Labs (France) et identifiées par un numéro unique. Elles ont été logées dans des cages ventilées et enrichies, avec de la sciure irradiée comme litière avec des conditions contrôlées de lumière (12 heures de jour et nuit), température (22 ± 2 °C) et humidité (50 ± 10%). Les paramètres d'hébergement étaient enregistrés quotidiennement, et les souris avaient accès librement à la nourriture et à l'eau. Les souris ont été soumises au même régime alimentaire, avant et pendant l'expérimentation. Que ce soit les matériaux de litière, la nourriture et l'eau, tous ont été contrôlés pour la contamination microbienne. L'acclimatation des animaux a duré 1 semaine avant dosage. Pour l'étude de toxicologie, les souris ont par la suite été divisées en 4 groupes expérimentaux aléatoires recevant divers traitements via une injection sous-cutanée : - Groupe 1 : Véhicule seul (PBS 1X) (n=3) - Groupe 2 : Protéine Lys38 à 25µg/200µL, deux fois par jour (total de 50µg/jour) (n=3) - Groupe 3 : Protéine Lys38 à 50µg/200µL, deux fois par jour (total de 100µg/jour) (n=3) - Groupe 4 : Protéine Lys38 à 100µg/200µL, deux fois par jour (total de 200µg/jour) (n=3) La molécule Lys38 a été diluée dans le véhicule (PBS 1X) pour atteindre un volume final de 200µL pour chaque traitement, avec deux injections par jour à un intervalle de 8 heures. La durée de l'étude était de 7 jours. Tous les animaux ont été maintenus dans des conditions identiques conformément à la réglementation. Un examen visuel du site d'injection pour observer toute inflammation, ainsi qu'un suivi du poids et de la mortalité sur 7 jours a enfin été réalisé pour observer l'absence de toxicité de la molécule chez la souris. Etude d’efficacité de Lys38 sur modèle animal (souris) ( Figures 7 et 8) Afin d’évaluer l’efficacité de la molécule Lys38 pour un traitement cutané d'infection par Staphylococcus pseudintermedius , des souris BALB/c ont été anesthésiées à l'isoflurane puis rasées le long de la ligne dorsale médiane 24 heures avant infection puis infectées par la souche SP1 de VETOPHAGE. Pour l’infection, 5x10 9 CFU/mL ont été injectés dans le tissu sous-cutané dorsal juste en arrière de la région interscapulaire. L’injection a été faite avec une aiguille de calibre 26 munie d'un guide d'aiguille de 5 mm pour garantir une profondeur d'injection standardisée. Au cours de l'étude, l’évolution du poids et la longueur de la lésion observée sur l'axe le plus long, ainsi que pour toute manifestation clinique de maladie, ont été consignées dans des données brutes. Des photos ont été prises chaque jour pour suivre l'évolution des lésions. L'apparence et le comportement des animaux ont aussi évalués au moins une fois par jour du début à la fin de la phase expérimentale. Pour le traitement cutané, deux applications différentes ont été réalisées au lendemain de l’infection, pour chaque groupe, et ce pendant 7 jours : - Groupe 1 : Véhicule seul (PBS 1X) (n=5) - Groupe 2 : 75 µg de Lys38 par traitement, pour un total de 150 µg par jour (n=5). Il y a un intervalle de 8 heures entre la première et la dernière application. Chaque application de 50 µl est divisée en trois gouttes appliquées sur la lésion induite par l'infection. Après les 7 jours de traitement, les animaux ont été gardés pour 2 jours d’observations supplémentaires. A la fin de l'expérimentation, les animaux ont été euthanasiés et des lésions cutanées excisées pour déterminer la charge bactérienne. Ces échantillons de peau ont été mis en suspension dans 1 ml de PBS dans des tubes à matrice de lyse D contenant des sphères céramiques de 1.4 mm. L’homogénéisation des échantillons de peau a été effectuée par pulsation à 4.0 m/s deux fois, pendant 20 secondes par pulsation, avec une pause d'une minute entre les pulsations. Des dilutions en série ont ensuite été préparées à partir de l'homogénat et ensemencées pour le comptage de la charge bactérienne. Test d’activité (Figures 9 et 10) La protéine Lys38 a été découpée en plusieurs domaines d’activité, qui ont ensuite été comparés pour leur efficacité. La séquence SEQ ID NO :4 contient les séquences SEQ ID NO :2 et SEQ ID NO :3. La séquence SEQ ID NO :1 contient la séquence SEQ ID NO :4, et donc contient également les séquences SEQ ID NO :2 et SEQ NO :3. L’activité antimicrobienne de ces différentes parties de la protéine Lys38 a été évaluée sur une souche Staphylococcus aureus (C24) et sur une souche de Staphylococcus pseudintermedius (SP1) à différentes concentrations : 1, 5, 10, 25, 50µg/mL qui correspondent respectivement à 18nM, 90nM, 180nM, 450nM, 900nM. A partir d’une préculture faite sur la nuit, les deux souches bactériennes ont été cultivées pendant 3 heures à 37°C avec agitation, dans du milieu BHI. Elles ont ensuite été centrifugées et resuspendues pour obtenir une DO de 1 dans du tampon (Tris 20mM, 2.5mM CaCl2, 100 mM NaCl, pH 7.5). 300µL de cette solution bactérienne ont ensuite été disposées dans une plaque de culture 96 puits. Chaque protéine a été rajoutée à différentes concentrations : 1, 5, 10, 25, 50µg/mL. La solution est incubée 90 minutes à 37°C et mises sur glace afin d’arrêter la réaction. L’activité de la lysine sur chaque souche bactérienne est traduite par la diminution de la DO. RESULTATS Surexpression et purification des protéines Suite à l’induction, une bande intense qui migre aux alentours de 50 kDa est visible ( FIG. 1 ) et correspond à la Lys38. Comparaison de la spécificité de la Lys 38 et Lys K (protéine de référence) Afin de déterminer la spécificité de Lys38, plusieurs souches de plusieurs espèces bactériennes ont été testées avec une concentration en Lys38 de 1µg/ML. Pour les Gram-négative, Escherichia coli (n=5) a été utilisée comme espèce modèle. Plusieurs endolysines ont auparavant montré un spectre d’activité plus étendu que les phages dont elles étaient issues. C’est pourquoi, qu’en plus des souches de Staphylococcus xylosus (n=2), Staphylococcus epidermis (n=2), Staphylococcus haemolyticus (n=2) Staphylococcus aureus (n=23), Staphylococcus pseudintermedius (n=23), des souches de Streptoccocus uberis ont aussi été testée (n=5). A noter que pour les souches issues des espèces Escherichia coli et Streptococcus uberis , 10µg/mL de Lys38 ont été utilisé afin de s’assurer qu’il n’y a pas d’effets sur ces espèces. Les résultats sont ensuite normalisés par rapport au témoin (DO initiale = 1 environ) et présentés sous la forme d’histogramme ( FIG. 2 ). Les résultats ont montré que LysK a une activité similaire entre les bactéries Staphylococcus aureus (SA) et Staphylococcus pseudintermedius (SP) alors Lys38 est plus active sur les souches SP et moins active sur les souches SA (Figures 2 et 3). Les résultats sur la FIG. 4 confirment que Lys38 a une spécificité pour l’espèce Staphylococcus pseudintermedius à une faible concentration, par exemple 1µg/mL. Les résultats sur le FIG. 5 et 6 confirment que Lys 28 à une concentration de 10 µg/mL active sur les souches bactériennes Staphylococcus aureus (SA) et Staphylococcus pseudintermedius (SP). Etude toxicologique de Lys38 sur modèle animal (souris) Au cours de l’expérimentation, la molécule sous forme d’injection sous cutanée, n’as montré aucune toxicité, et ce, à toutes les doses testées. En effet, l’ensemble des animaux ont survécu pendant le temps de l’expérimentation, et tous, ont pris du poids de façon similaire au groupe contrôle. L’analyse des courbes de poids montre que même à la dose la plus élevée, les souris ont continuellement pris du poids allant de 1% du poids initial gagné jusqu’à 13,4%. Aucune rougeur ou inflammation n’a été détectée au site d’injection (données non montrées) durant le temps de l’étude. Ces résultats démontrent que l’injection est bien tolérée et qu’elle ne semble ne pas être toxique. Etude d’efficacité de Lys38 sur modèle animal (souris) L’analyse de l’évolution de la taille des lésions, montre une diminution significative de celles-ci, avec en moyenne une diminution de 40% de leurs tailles au bout de 9 jours de traitement par rapport à la condition traitée sans l’endolysine (p-value 0,023 ; Mann-Whitney test) (Figures 7 et 8). Cet effet est aussi observé lors de la quantification de la charge bactérienne, où une perte moyenne de 93,76% de la charge bactérienne a été constaté par rapport à la condition contrôle (p-value = 0.007, Mann-Whitney test). Ces résultats permettent de conclure sur une efficacité significative de la molécule Lys38 dans le cadre de traitement cutanée d’infection causée par une souche de Staphylococcus pseudintermedius . Identification du site d’activité de la protéine Lys38 La FIG. 9 présente les résultats de l’activité de chacune des parties de la protéine Lys38 sur Staphylococcus pseudintermedius (SP1) et montre que : - La meilleure activité est obtenue pour la protéine entière Lys 38 (SEQ ID NO :1) ; - La séquence responsable de la lyse de S. pseudintermedius est CHAP-Am (SEQ ID NO :2) ; - CHAP conserve une activité lytique mais reste moins efficace que CHAP-Am (SEQ ID NO :3) ; - Am (SEQ ID NO :4) ou AM-SH3 (SEQ ID NO :5) démontre seulement une légère activité sur S. pseudintermedius . La FIG. 10 présente les résultats de l’activité de chacune des parties de la protéine Lys38 sur Staphylococcus aureus (C24) et montre que : - La meilleure activité est obtenue pour la protéine entière Lys 38 (SEQ ID NO :1) ; - La séquence responsable de la lyse de S. aureus est CHAP-Am (SEQ ID NO :2); - CHAP conserve une activité lytique mais moins que CHAP-Am (SEQ ID NO :3); - Am (SEQ ID NO :4) ou AM-SH3 (SEQ ID NO :5) démontre seulement une faible activité sur S. aureus . Endolysine comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 2 et une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence SEQ ID NO : 3. Endolysine selon la revendication 1, comprenant une séquence ayant un pourcentage d’identité d’au moins 70% avec la séquence SEQ ID NO : 1 et qui comprend une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :2 et une séquence ayant au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :3. Endolysine selon la revendication 1 ou la revendication 2, pour son utilisation comme médicament. Endolysine selon la revendication 1 ou la revendication 2, pour son utilisation dans le traitement d’une infection causée par un staphylocoque, en particulier par S . aureus ou par S . pseudintermedius . Endolysine pour son utilisation selon la revendication 4, dans laquelle ladite infection causée par un staphylocoque est une infection cutanée, telle que la pyodermite. Endolysine pour son utilisation selon la revendication 4 ou 5, dans laquelle l’infection est causée chez un animal de compagnie tel que le chien ou le chat. Endolysine pour son utilisation selon l’une des revendications 3 à 6, caractérisée en ce que ladite endolysine est sous une forme adaptée à l’administration par voie topique par exemple sous forme de lotion, de crème, de gel, d’hydrogel, d’émulsion, de baume ou de spray. Utilisation non thérapeutique d’une endolysine selon la revendication 1 ou la revendication 2, comme agent anti-staphylocoque, en particulier anti- Staphylococcus aureus , en particulier anti- Staphylococcus pseudintermedius . Utilisation non thérapeutique d’une endolysine selon la revendication 1 ou la revendication 2 comme composé antibactérien. Utilisation non thérapeutique d’une endolysine selon la revendication 1 ou la revendication 2 dans une solution anti-biofilm. Utilisation non thérapeutique d’une endolysine selon la revendication 1 ou la revendication 2 en sécurité alimentaire. Utilisation non thérapeutique d’une endolysine selon la revendication 1 ou la revendication 2 dans un produit cosmétique ou dans une préparation pharmaceutique.