Brevet FR3162756A1 — publié le 20251205

TITRE : UTILISATION D’UNE SOUCHE DE L’ESPÈCE BACILLUS SIAMENSIS À TITRE DE BIOSOLUTION EN CULTURE DE TOMATES La présente invention concerne l’utilisation d’une espèce bactérienne particulière à titre de biosolution dans la production et la culture de tomates. Plus particulièrement, l’invention concerne l’utilisation d’une souche de Bacillus siamensis , déposée auprès de la Collection Nationale de Culture des Microorganismes (CNCM) sous le numéro d’ordre CNCM I-5921, dans la stimulation du développement et de la croissance d’une semence et d’un plant de tomate ou l’amélioration des rendements des cultures de tomates, et dans l’amélioration de la résistance et de la tolérance au stress abiotique d’une semence, d’un plant de tomate et des cultures de tomates. [Fig. 1] UTILISATION D’UNE SOUCHE DE L’ESPÈCE BACILLUS SIAMENSIS À TITRE DE BIOSOLUTION EN CULTURE DE TOMATES La présente invention concerne l’utilisation d’une espèce bactérienne particulière à titre de biosolution dans la production et la culture de tomates. Plus particulièrement, l’invention concerne l’utilisation d’une souche de Bacillus siamensis , déposée auprès de la Collection Nationale de Culture des Microorganismes (CNCM) sous le numéro d’ordre CNCM I-5921, dans la stimulation du développement et de la croissance d’une semence et d’un plant de tomate ou l’amélioration des rendements des cultures de tomates, et dans l’amélioration de la résistance et de la tolérance au stress abiotique d’une semence, d’un plant de tomate et des cultures de tomates. La tomate, ou Solanum lycopersicum , est une solanacée originaire du Mexique dont la production mondiale est aujourd’hui la plus importante parmi les légumes-fruits, avec un marché estimé à 192 milliards d’Euros en 2023. Deux filières de production se distinguent, avec la tomate de marché pour la consommation en frais et la tomate d’industrie destinée à la transformation. Cette culture en pleine expansion s’est développée sur tous les continents, grâce notamment à la conduite hors-sol et sous abri, en conditions ultra-contrôlées et réalisée de manière automatisée. Le semis demeure la technique de multiplication la plus courante, mais reste une étape cruciale pour la culture et un stade particulièrement sensible pour le bon développement des plantules. En effet, leur qualité et leur capacité de résistance aux stress abiotiques sont en partie conditionnées par les premières semaines de croissance post-semis. À la demande des consommateurs, les agriculteurs sont aujourd’hui en recherche de biosolutions efficaces et respectueuses de l’environnement, qui puissent les aider à traverser plus sereinement la transition agroécologique en cours. Dans ce sens, il est devenu nécessaire pour nos sociétés de s’appuyer sur le savoir-faire des micro-organismes naturellement présents dans l’environnement, pour stimuler la croissance des cultures agricoles et augmenter les rendements, tout en préservant la qualité sanitaire des récoltes. L’utilisation de biostimulants dans les méthodes de productions agricoles est en plein développement. Les biostimulants sont des substances capables de stimuler le métabolisme d’une plante et ses processus naturels d’absorption des nutriments. Plus précisément, le Règlement (UE) 2019/1009 du parlement européen et du conseil du 5 juin 2019 entrant en vigueur le 22 juillet 2022 définit un biostimulant comme « un produit qui stimule les processus de nutrition des végétaux indépendamment des éléments nutritifs qu’il contient, dans le but d’améliorer une ou plusieurs des caractéristiques suivantes des végétaux ou de leur rhizosphère : a) l’efficacité d’utilisation des éléments nutritifs, b) la tolérance au stress abiotique, c) les caractéristiques qualitatives, d) la disponibilité des éléments nutritifs confinés dans le sol ou la rhizosphère ». Le but de la présente invention est ainsi d’identifier et de proposer un biostimulant efficace et adapté aux méthodes de production et à la culture de tomates. En particulier, un biostimulant selon l’invention devra permettre de stimuler le développement et la croissance d’une semence et d’un plant de tomate ou d’améliorer les rendements des cultures de tomates, tout au moins, d’éviter de limiter le développement et la perte des rendements, et d’améliorer la résistance et la tolérance au stress abiotique d’une semence, d’un plant de tomate et des cultures de tomates, tout au moins, d’éviter d’abaisser cette résistance et cette tolérance au stress abiotique. Enfin, le biostimulant selon l’invention devra être utilisable dans les méthodes classiques de production de substrats et de production des tomates. C’est dans ce but que la société déposante a mené ses recherches et a découvert qu’une espèce de Bacillus , présentait des capacités de biostimulation surprenantes sur le développement et la croissance des semences et des plants de tomates ou sur l’amélioration des rendements des cultures de tomates, ainsi que dans l’amélioration de la résistance et de la tolérance au stress abiotique d’une semence, d’un plant de tomate et des cultures de tomates, en particulier lorsqu’elle est ajoutée dans leurs substrats ou en solution de trempage des semences, et pouvait donc être utilisée dans les procédés et méthodes de culture de tomates. À cet effet, l’invention concerne une souche isolée de l’espèce Bacillus siamensis déposée auprès de la CNCM sous le numéro d’ordre CNCM I-5921. L’invention concerne encore l’utilisation d’une souche bactérienne de Bacillus siamensis , ou de la souche bactérienne isolée de Bacillus siamensis déposée auprès de la CNCM sous le numéro d’ordre CNCM I-5921, pour la stimulation du développement et de la croissance d’une semence et d’un plant de tomate ou dans l’amélioration des rendements des cultures de tomates. L’invention concerne encore l’utilisation d’une souche bactérienne de Bacillus siamensis , ou de la souche bactérienne isolée de Bacillus siamensis déposée auprès de la CNCM sous le numéro d’ordre CNCM I-5921, pour l’amélioration de la résistance et de la tolérance au stress abiotique d’une semence, d’un plant de tomate et des cultures de tomates. La souche bactérienne isolée en France par la société déposante, a été identifiée comme Bacillus siamensis selon la base de données NCBI (National Center for Biotechnology Information), après identification génotypique par séquençage de Sanger. Cette bactérie à Gram positif est aérobie et anaérobie-facultative, et capable de produire des endospores ellipsoïdales. Elle est fortement mobile avec des flagelles entourant la cellule, à ciliature péritriche. Cette espèce se distingue notamment par sa capacité à se diviser sur une large plage de températures variant de 4°C à 55°C, avec une température optimale de croissance de 37°C. Elle forme des colonies blanc-crème, muqueuses, semi-opaques, semi-bombées, et se développant de 3 à 4 mm autour du point d’inoculation après 2 à 3 jours en incubation à 25°C sur PDA. Le genre Bacillus est prisé en biotechnologie et très présent en fermentation microbienne à échelle industrielle car sa robustesse et sa rapidité de croissance en bioréacteur lui permettent de supporter des procédés agressifs comme le séchage par atomisation, bien moins coûteux que la lyophilisation pour obtenir une poudre de cellules déshydratées, particulièrement stable dans le temps. La société déposante a déposé la souche bactérienne à la CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes) de l’Institut Pasteur, qui l’a validé et lui a attribué le numéro d’ordre CNCM I-5921. En culture de tomates, la souche CNCM I-5921 s’est montrée capable d’augmenter significativement le taux de germination des semences, la hauteur des plantules et la quantité de biomasse fraîche et sèche moyenne des plantules. Après une unique application à 2,5.10 7 cellules par litre de substrat au semis, la biomasse sèche moyenne des plantules est supérieure de 102% à celles de la modalité témoin. Par simple trempage des semences à 1.10 8 cellules par millilitre de solution, la biomasse sèche moyenne des plantules est augmentée de 48% comparativement à celles de la modalité témoin. En conditions de stress abiotique, la souche selon l’invention permet d’améliorer la capacité de résistance et d’adaptation des cultures de tomates, lorsque celles-ci sont soumises à un stress hydrique. Après une unique application à 2,5.10 7 cellules par litre de substrat au semis, la biomasse fraîche moyenne des plantules est significativement supérieure de 34% à celles de la modalité témoin, et de 20% en biomasse sèche. La souche bactérienne CNCM I-5921 permet également une augmentation significative de 30% de l’aire foliaire moyenne des plantules, ainsi qu’un périmètre moyen de leurs feuilles de 8%. Ces paramètres mettent en évidence une meilleure adaptation de la plante à une carence hydrique, en optimisant la quantité de tissus racinaires, et en réduisant l’évapotranspiration pour limiter les pertes en eau. Les multiples effets bénéfiques de la souche CNCM I-5921 sur la culture de tomates démontrent sa capacité à produire des phytohormones telles que des auxines comme l’IAA (Acide Indole 3-Acétique), des gibbérellines ou des cytokinines, dont la présence explique notamment l’augmentation de biomasse sèche des plantules et l’élongation de leur système racinaire. En parallèle, certaines bactéries comme la souche CNCM I-5921 peuvent produire de l’ACC-désaminase, une enzyme qui dégrade un précurseur dans la synthèse de l’éthylène, une hormone végétale qui induit une oxydation et la sénescence des tissus végétatifs, ce qui limite les effets du stress et optimise le développement des plantules. Il existe dans la nature, des bactéries dites PGPB (Plant-Growth-Promoting-Bacteria) ou FGPB (Fungal-GPB), voire exceptionnellement MGPB (Mycelium-GPB et/ou Mushroom-GPB). La souche bactérienne CNCM I-5921 de la société déposante s’avère être à la fois PGPB et MGPB, par le biais de mécanismes biologiques dont certains ont pu être mis en lumière par un travail conduit en interne. Cette double capacité est d’autant plus intéressante que Bacillus siamensis peut également améliorer les rendements d’une culture agricole amendée avec du substrat de fin de culture de tomates, sur lequel il aurait été précédemment appliqué. L’utilisation de biostimulants microbiens à large spectre d’action présents dans l’environnement, est une réelle innovation pour la production de tomates. L’utilisation de produits à effet biostimulant a un impact majeur sur la production de tomates. La principale limite des agriculteurs réside en effet dans leur capacité à produire rapidement, stocker et distribuer leurs fruits et légumes auprès de leurs clients. L’utilisation du biostimulant microbien selon l’invention permet aux producteurs de raccourcir leurs cycles de production en augmentant la vigueur germinative et la pousse des jeunes plantules, renforçant ainsi leurs cultures dès les premières semaines après semis. En conditions de stress abiotique, la souche selon l’invention permet d’éviter une fragilisation des plantules par un meilleur développement des tissus végétatifs et une élongation du système racinaire. Ces adaptations permettent ainsi aux agriculteurs de générer des économies en eau et de leur assurer des taux de pertes inférieurs. Les périodes de sécheresses et de restrictions en eau étant de plus en plus fréquentes dans le monde, la capacité pour les producteurs à préserver leurs cultures en conditions critiques, tout en maintenant des rendements suffisants, deviendra rapidement vital. L’espèce de Bacillus siamensis sélectionnée dans le cadre de l’invention a la particularité de présenter des effets significativement positifs sur plusieurs paramètres du métabolisme de plants de tomates. La souche selon l’invention est efficace sur une large plage de concentrations, en application par trempage des semences, ou par arrosage ou par pulvérisation dans la masse du substrat ou à la surface d’une culture d’une tomate. Ainsi, la présente invention concerne l’utilisation d’une souche bactérienne de Bacillus siamensis , ou de la souche CNCM I-5921, pour la stimulation du développement et de la croissance d’une semence et d’un plant de tomate ou l’amélioration des rendements des cultures de tomates, et dans l’amélioration de la résistance et de la tolérance au stress abiotique d’une semence, d’un plant de tomate et des cultures de tomates. De plus, lors de la culture des tomates, l’apport de la souche CNCM I-5921 selon l’invention permet d’augmenter le taux de germination des semences et la quantité de biomasse sèche moyenne des plantules. En conditions de stress hydrique, la souche selon l’invention permet également une augmentation de l’aire foliaire moyenne des plantules, ainsi qu’un périmètre supérieur de leurs feuilles. Les effets sur la filière tomate s’accompagnent donc de bénéfices économiques et pratiques pour les producteurs, à chacune des étapes : Économies d’énergie liées à la possibilité de raccourcir les cycles de production, en réduisant le temps d’obtention des jeunes plants de tomates tout en améliorant leur qualité, Économies de matières premières par la meilleure valorisation des substrats liée à l’augmentation de la biomasse aérienne et racinaire des plantules sur une même unité de surface, Économies de semences de tomates, particulièrement coûteuses, par la vigueur germinative induite par la souche selon l’invention et la réduction du taux de pertes résultant du retard à la levée, Économies d’eau et d’intrants par la meilleure résistance induite et l’amélioration de la tolérance au stress hydrique des semences et des cultures, Économies de temps de main d’œuvre et d’espace par l’application par trempage des semences en amont du semis, Application par arrosage et pulvérisation dans la masse du substrat ou à la surface de la culture, facilement adaptable à toutes les méthodes de production et combinable avec l’utilisation d’autres types de biostimulants comme les champignons mycorhiziens. Application d’une biosolution pérenne et respectueuse de l’environnement, sur la culture du légume-fruit le plus cultivé dans le monde. L’espèce bactérienne Bacillus siamensis, formulée dans le cadre de l’invention, peut être utilisée de manière simple et efficace dans les méthodes classiques de cultures de semences ou plants de tomates, sans qu’il soit nécessaire de complexifier ces méthodes. Avantageusement, la souche bactérienne est sous une forme solide telle qu’une poudre ou des granules, ou sous une forme liquide, préférentiellement aqueuse. Un produit contenant la souche bactérienne selon l’invention peut ainsi se présenter sous forme liquide, comme une suspension concentrée (SC), ou sous forme solide, comme une poudre sèche obtenue par fermentation en bioréacteur puis par séchage par atomisation (spray-drying) ou par l’ajout d’un cryoprotecteur avant lyophilisation (freeze-drying). La poudre sèche peut prendre la forme d’une poudre mouillable (WP ou WDP = Water Dispersible Powder) ou de granulés solubles (WG ou WDG = Water Dispersible Granules). L’espèce Bacillus siamensis peut éventuellement être produite sous une des formes décrites précédemment, puis ensuite être encapsulée. À titre d’exemple, la poudre soluble contenant des cellules déshydratées de bactérie est préparée comme suit : Sortie de cryoconservation de la souche bactérienne, Repiquage de la souche sur milieux de culture PDA, Croissance de la souche en incubateur à 37°C, Mise en solution nutritive en bioréacteur de 5 litres, Centrifugation de la solution après un cycle de 48h, Récupération et lavage du culot, Pulvérisation de l’entrant liquide en chambre d’atomisation, Séchage sous pression réduite, Obtention d’une poudre sèche, Conditionnement. L’invention concerne encore une méthode d’obtention d’une semence de tomate qui se caractérise en ce qu’elle comprend les étapes suivantes : préparation d’une solution de trempage contenant une souche bactérienne de Bacillus siamensis , ou une souche isolée de Bacillus déposée auprès de la CNCM sous le numéro d’ordre CNCM I-5921, trempage d’une semence dans la solution de trempage, filtration et séchage de la semence, obtention d’une semence, conditionnement d’une semence. Avantageusement selon cette méthode, la souche bactérienne est appliquée de façon à ce que la concentration soit comprise entre 10 5 à 10 10 cellules / mL de solution de trempage. L’invention concerne encore une méthode de culture de tomates à partir d’une semence de tomate, éventuellement obtenue selon la méthode d’obtention d’une semence décrite précédemment, qui se caractérise en ce qu’elle comprend les étapes suivantes : préparation d’un substrat, ensemencement du substrat par une semence de tomate, éventuellement obtenue selon une méthode d’obtention d’une semence décrite précédemment, éventuellement, incorporation dans le substrat, de champignons mycorhiziens, d’amendements ou mélanges de matières nutritives spécifiques de la culture de tomates, germination, croissance, repiquage, floraison, fructification, récoltes, fin de récolte, la méthode étant caractérisée en ce qu’une souche bactérienne de Bacillus siamensis, ou qu’une souche isolée de Bacillus déposée auprès de la CNCM sous le numéro d’ordre CNCM I-5921, ou une composition en comprenant, est appliquée au moins une fois lors d’au moins l’une des étapes (a), (b), (d), (e), (f) (i) et (j). Avantageusement selon cette méthode, la souche bactérienne est appliquée dans la masse du substrat ou à la surface d’une culture d’une tomate, de façon à ce que la concentration soit comprise entre 10 5 cellules et 10 10 cellules / L de substrat ou entre 5.10 6 cellules et 5.10 11 cellules / m 2 . Avantageusement encore selon cette méthode, la souche bactérienne est appliquée par trempage ou par arrosage ou par pulvérisation d’une solution liquide. L’invention concerne encore l’utilisation d’un substrat de fin de culture d’une tomate obtenue par une méthode décrite précédemment comme amendement ou fertilisant pour une culture agricole. L’invention concerne encore l’utilisation d’une souche bactérienne de Bacillus siamensis , ou d’une souche isolée de Bacillus déposée auprès de la CNCM sous le numéro d’ordre CNCM I-5921, pour prévenir la synthèse de l’éthylène produit par une semence ou par un plant de tomate. L’invention concerne encore l’utilisation d’une souche bactérienne de Bacillus siamensis , ou d’une souche isolée de Bacillus déposée auprès de la CNCM sous le numéro d’ordre CNCM I-5921, pour produire une phytohormone telle qu’une auxine ou une gibbérelline ou une cytokinine. Les caractéristiques de l'invention mentionnées ci-dessus, ainsi que d'autres, apparaîtront plus clairement à la lecture de la description suivante d'exemples de réalisation. Exemple 1 : Évaluation de l’impact de la souche bactérienne CNCM I-5921 appliquée selon l’invention sur le développement de plants de Solanum lycopersicum 1.1 Préparation d’une solution comprenant la souche selon l’invention La solution est formulée à partir des éléments suivants : Micro-organisme : Souche bactérienne Bacillus siamensis déposée auprès de la CNCM sous le numéro d’ordre CNCM I-5921 sous la forme d’une poudre sèche, obtenue par séchage par atomisation. Une poudre sèche est obtenue comme suit : multiplication de la souche bactérienne par fermentation, séchage par atomisation en fin de fermentation, conditionnement. La poudre sèche obtenue est destinée à être mise en solution avec de l’eau avant application. Celle-ci sera nommée dans la suite « solution CNCM I-5921 ». 1.2 Protocole expérimental d’application en mélange au substrat Application de la solution CNCM I-5921 en phase de semis de jeunes plants de tomates Préparation de 2 litres de substrat, composé de 35 % de substrat horticole pour semis et de 65 % de vermiculite. Mélange au substrat de la solution CNCM I-5921 (telle que décrite au point 1.1 ), de façon à obtenir une concentration de 2,5.10 7 cellules mises en solution dans 200 mL d’eau, par litre de substrat. Dépôt de 1 litre de substrat pré-mélangé par plaque de semis de 50 alvéoles, soit 20 mL de substrat par alvéole. Dépôt d’une semence de tomate par alvéole pour chaque plaque. Dépôt des plaques en salle de germination à 20°C pendant 4 semaines, en conditions d’hygrométrie et de luminosité contrôlées. Mesure du taux de germination à 6 et 7 jours après le semis. Mesure des hauteurs des plantules, du collet à la base de l’apex, 3 semaines après le semis. Mesure du taux de recouvrement du système foliaire avec un logiciel d’analyse d’images, 3 et 4 semaines après le semis. Prises de photos des plaques de culture. Extraction des plantules du substrat, nettoyage du système racinaire à l’eau et absorption de l’excédent d’eau. Séchage des plantules en étuve à 80°C pendant 24 heures. Mesure de la biomasse sèche du système racinaire et de la partie aérienne pour chaque plantule. Chaque modalité décrite précédemment a été conduite sur une plaque expérimentale identique de 50 trous, correspondant donc à un effectif de 50 semences par modalité. La variété de tomates utilisée pour l’ensemble des essais expérimentaux est la variété commerciale de Solanum lycopersicum de marque Sweetbaby, produite en agriculture biologique par la société française Girerd. 1.3 Résultats Le tableau 1 ci-dessous présente le taux de germination exprimé en pourcentage à partir du nombre de semences germées, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. Le taux de germination est également exprimé en pourcentage, rapporté à la modalité témoin. [Tab.1] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Taux de germination à J+6 post-semis % / témoin Taux de germination à J+7 post-semis % / témoin Aucun Témoin 89,80 % - 95,92 % - CNCM I-5921 2,5.10 7 cellules / L 93,88 % + 4,54 % 97,96 % + 2,13 % Le tableau 2 ci-dessous présente la hauteur moyenne des plantules exprimée en centimètres, et mesurée du collet à la base de l’apex, 3 semaines après le semis, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. La hauteur moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.2] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Hauteur moyenne (cm / pl.) % / témoin Aucun Témoin 4,274 b - CNCM I-5921 2,5.10 7 cellules / L 4,756 a + 11,28 % Test de Student (seuil 5%) Le tableau 3 ci-dessous présente le taux de recouvrement du système foliaire exprimé en pourcentage, calculé avec un logiciel d’analyse d’images, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. Le taux de recouvrement est également exprimé en pourcentage, rapporté à la modalité témoin. [Tab.3] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Taux de recouvrement à 3 semaines post-semis % / témoin Taux de recouvrement à 4 semaines post-semis % / témoin Aucun Témoin 24,80 % - 17,37 % - CNCM I-5921 2,5.10 7 cellules / L 30,74 % + 23,95 % 29,77 % + 71,39 % Le tableau 4 ci-dessous présente la biomasse sèche moyenne du système racinaire, de la partie aérienne et cumulées des plantules, exprimées en milligrammes, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. La masse sèche moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.4] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Biomasse sèche racinaire moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche aérienne moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche totale moyenne (mg / pl.) % / témoin Aucun Témoin 15,19 b - 85,13 b - 100,32 b - CNCM I-5921 2,5.10 7 cellules / L 21,54 a + 41,80 % 181,23 a + 112,89 % 202,77 a + 102,12 % Test de Student (seuil 5%) Les Figures 1 et 2 illustrent l’impact de la souche bactérienne CNCM I-5921 sur la croissance et le développement des plantules de tomates, 4 semaines après le semis, appliquée à une concentration de 2,5.10 7 cellules / Litre de substrat. Selon les résultats des essais expérimentaux de l’Exemple 1, il peut être observé des effets bénéfiques multiples et durables sur les plantules de tomates, lorsque la solution contenant la souche CNCM I-5921 est appliquée en mélange au substrat avant le semis. La solution selon l’invention permet d’améliorer le taux de germination des semences de tomates dès la première semaine, d’augmenter significativement la hauteur des plantules après 3 semaines (+11%), et d’améliorer progressivement leur taux de recouvrement après 3 puis 4 semaines (+71%). La solution CNCM I-5921 permet surtout une augmentation significative de la biomasse sèche moyenne (Test de Student au seuil de risque de 5%) des plantules lorsqu’elle est simplement pré-mélangée au substrat. Après une unique application à 2,5.10 7 cellules par litre de substrat, les plantules contiennent une biomasse sèche moyenne supérieure de 102% à celles de la modalité témoin, dans le cadre de cet essai expérimental. En conclusion, la souche selon l’invention permet aux producteurs d’améliorer le taux de levée et la vigueur germinative de leurs semis, et de renforcer leurs cultures dès les premières semaines de production, lorsque les plantules sont les plus fragiles. En effet, les plantules qui développent mieux leur système foliaire et racinaire se renforceront d’autant plus rapidement par l’action de la photosynthèse et une meilleure absorption de l’eau et des nutriments contenus dans le substrat. Une fois repiquées en plein terre, ces mêmes plantules seront bien plus résistantes aux stress abiotiques et aux attaques de ravageurs, ce qui permet aux agriculteurs de générer des économies d’eau et d’intrants, en plus de leur assurer des taux de pertes inférieurs. Exemple 2 : Évaluation de l’impact de la souche bactérienne CNCM I-5921 appliquée selon l’invention sur le développement de plants de Solanum lycopersicum 2.1 Protocole expérimental d’application en mélange au substrat Application de la souche CNCM I-5921 en phase de semis de jeunes plants de tomates Préparation de 4 litres de substrat, composé de 35 % de substrat horticole pour semis et de 65 % de vermiculite. Mélange au substrat de la solution CNCM I-5921 (telle que décrite au point 1.1 ), de façon à obtenir une concentration de 1.10 6 , 1.10 7 et 5.10 7 cellules mises en solution dans 200 mL d’eau, par litre de substrat. Dépôt de 1 litre de substrat pré-mélangé par plaque de semis de 50 alvéoles, soit 20 mL de substrat par alvéole. Dépôt d’une semence de tomate par alvéole pour chaque plaque. Dépôt des plaques en salle de germination à 20°C pendant 4 semaines, en conditions d’hygrométrie et de luminosité contrôlées. Mesure du taux de germination à 6 et 7 jours après le semis. Mesure du taux de recouvrement du système foliaire avec un logiciel d’analyse d’images, 3 semaines après le semis. Extraction des plantules du substrat, nettoyage du système racinaire à l’eau et absorption de l’excédent d’eau. Séchage des plantules en étuve à 80°C pendant 24 heures. Mesure de la longueur du système racinaire de chaque plantule. Mesure de la biomasse sèche du système racinaire et de la partie aérienne pour chaque plantule. Chaque modalité décrite précédemment a été conduite sur une plaque expérimentale identique de 50 trous, correspondant donc à un effectif de 50 semences par modalité. La variété de tomates utilisée pour l’ensemble des essais expérimentaux est la variété commerciale de Solanum lycopersicum de marque Sweetbaby, produite en agriculture biologique par la société française Girerd. 2.2 Résultats Le tableau 5 ci-dessous présente le taux de germination exprimé en pourcentage à partir du nombre de semences germées, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. Le taux de germination est également exprimé en pourcentage, rapporté à la modalité témoin. [Tab.5] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Taux de germination à J+6 post-semis % / témoin Taux de germination à J+7 post-semis % / témoin Aucun Témoin 16,67 % - 82,29 % - CNCM I-5921 1.10 6 cellules / L 24,47 % + 46,79 % 81,91 % - 0,00 % CNCM I-5921 1.10 7 cellules / L 39,36 % + 136,11 % 97,87 % + 18,93 % CNCM I-5921 5.10 7 cellules / L 58,33 % + 249,91 % 93,73 % + 13,90 % Le tableau 6 ci-dessous présente le taux de recouvrement du système foliaire exprimé en pourcentage, calculé avec un logiciel d’analyse d’images, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. Le taux de recouvrement est également exprimé en pourcentage, rapporté à la modalité témoin. [Tab.6] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Taux de recouvrement à 3 semaines post-semis % / témoin Aucun Témoin 18,74 % - CNCM I-5921 1.10 6 cellules / L 19,06 % + 1,71 % CNCM I-5921 1.10 7 cellules / L 20,47 % + 9,23 % CNCM I-5921 5.10 7 cellules / L 18,92 % + 0,96 % Le tableau 7 ci-dessous présente la longueur moyenne du système racinaire après séchage des plantules exprimée en centimètres, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. La longueur moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.7] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Longueur système racinaire moyenne (cm / pl.) % / témoin Aucun Témoin 9,00 c - CNCM I-5921 1.10 6 cellules / L 9,85 b + 9,44 % CNCM I-5921 1.10 7 cellules / L 10,89 a + 21,00 % CNCM I-5921 5.10 7 cellules / L 10,65 ab + 18,33 % Test de Student (seuil 5%) Le tableau 8 ci-dessous présente la biomasse sèche moyenne du système racinaire, de la partie aérienne et cumulées des plantules, exprimées en milligrammes, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. La masse sèche moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.8] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Biomasse sèche racinaire moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche aérienne moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche totale moyenne (mg / pl.) % / témoin Aucun Témoin 6,79 b - 19,79 c - 26,58 bc - CNCM I-5921 1.10 6 cellules / L 4,77 c - 29,75 % 23,66 b + 19,56 % 28,43 bc + 6,96 % CNCM I-5921 1.10 7 cellules / L 5,15 c - 24,15 % 23,32 b + 17,84 % 28,47 b + 7,11 % CNCM I-5921 5.10 7 cellules / L 7,52 ab + 10,75 % 24,90 a + 25,82 % 32,42 a + 21,97 % Test de Student (seuil 5%) Selon les résultats des essais expérimentaux de l’Exemple 2, il peut être observé des effets bénéfiques multiples et durables sur les plantules de tomates, lorsque la solution CNCM I-5921 est appliquée en mélange au substrat avant le semis. La souche selon l’invention permet d’améliorer le taux de germination des semences de tomates particulièrement 6 jours après le semis, d’améliorer le taux de recouvrement des plantules après 3 semaines, et d’augmenter significativement la longueur du système racinaire des plantules (+21%). La souche CNCM I-5921 permet d’augmenter significativement la biomasse sèche moyenne (Test de Student au seuil de risque de 5%) des plantules, et s’avère efficace sur une large plage de concentrations. Après une seule application à 5.10 7 cellules par litre de substrat, les plantules contiennent en moyenne une biomasse sèche supérieure de 22% à celles de la modalité témoin, dans cet essai expérimental. En conclusion, la souche selon l’invention permet aux producteurs d’ajuster la dose d’application de la souche CNCM I-5921 en fonction des besoins de leurs cultures végétales, pour adapter leur développement aux itinéraires techniques suivis, tout en réalisant des économies d’intrants. Exemple 3 : Évaluation de l’impact de la souche bactérienne CNCM I-5921 appliquée selon l’invention sur le développement de plants de Solanum lycopersicum , avec application combinatoire de champignons mycorhiziens 3.1 Protocole expérimental d’application en mélange au substrat Application de la solution CNCM I-5921 en phase de semis de jeunes plants de tomates Préparation de 2 litres de substrat, composé de 35 % de substrat horticole pour semis et de 65 % de vermiculite. Mélange au substrat de la solution CNCM I-5921 (telle que décrite au point 1.1 ), de façon à obtenir une concentration de 2.10 9 cellules mises en solution dans 200 mL d’eau, par litre de substrat. Dépôt de 1 litre de substrat pré-mélangé par plaque de semis de 50 alvéoles, soit 20 mL de substrat par alvéole. Dépôt d’une semence de tomate par alvéole pour chaque plaque. Dépôt des plaques en salle de germination à 20°C pendant 4 semaines, en conditions d’hygrométrie et de luminosité contrôlées. Mesure du taux de germination à 5 et 6 jours après le semis. Mesure des hauteurs des plantules, du collet à la base de l’apex, 3 semaines après le semis. Mesure du taux de recouvrement du système foliaire avec un logiciel d’analyse d’images, 3 et 4 semaines après le semis. Extraction des plantules du substrat, nettoyage du système racinaire à l’eau et absorption de l’excédent d’eau. Séchage des plantules en étuve à 80°C pendant 24 heures. Mesure de la biomasse sèche du système racinaire et de la partie aérienne pour chaque plantule. Chaque modalité décrite précédemment a été conduite sur une plaque expérimentale identique de 50 trous, correspondant donc à un effectif de 50 semences par modalité. La variété de tomates utilisée pour l’ensemble des essais expérimentaux est la variété commerciale de Solanum lycopersicum de marque Sweetbaby, produite en agriculture biologique par la société française Girerd. L’espèce de champignons mycorhiziens utilisée est Glomus intraradices sous sa forme commerciale de marque AGTIV SC-P, produite par la société canadienne Premier Tech. 3.2 Résultats Le tableau 9 ci-dessous présente le taux de germination exprimé en pourcentage à partir du nombre de semences germées, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. Le taux de germination est également exprimé en pourcentage, rapporté à la modalité témoin. [Tab.9] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Taux de germination à J+5 post-semis % / témoin Taux de germination à J+6 post-semis % / témoin Mycorhizes Témoin 53,06 % - 97,96 % - Mycorhizes + CNCM I-5921 2.10 9 cellules / L 69,39 % + 30,78 % 100,00 % + 2,08 % Le tableau 10 ci-dessous présente la hauteur moyenne des plantules exprimée en centimètres, et mesurée du collet à la base de l’apex, 3 semaines après le semis, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. La hauteur moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.10] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Hauteur moyenne (cm / pl.) % / témoin Mycorhizes Témoin 4,317 - Mycorhizes + CNCM I-5921 2.10 9 cellules / L 4,435 + 2,73 % Le tableau 11 ci-dessous présente le taux de recouvrement du système foliaire exprimé en pourcentage, calculé avec un logiciel d’analyse d’images, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. Le taux de recouvrement est également exprimé en pourcentage, rapporté à la modalité témoin. [Tab.11] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Taux de recouvrement à 3 semaines post-semis % / témoin Taux de recouvrement à 4 semaines post-semis % / témoin Mycorhizes Témoin 25,41 % - 14,00 % - Mycorhizes + CNCM I-5921 2.10 9 cellules / L 26,37 % + 3,78 % 18,59 % + 32,79 % Le tableau 12 ci-dessous présente la biomasse sèche moyenne du système racinaire, de la partie aérienne et cumulées des plantules, exprimées en milligrammes, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. La masse sèche moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.12] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Biomasse sèche racinaire moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche aérienne moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche totale moyenne (mg / pl.) % / témoin Mycorhizes Témoin 14,47 b - 61,08 b - 75,55 b - Mycorhizes + CNCM I-5921 2.10 9 cellules / L 17,14 a + 18,45 % 96,84 a + 58,55 % 113,98 a + 50,87 % Test de Student (seuil 5%) Selon les résultats des essais expérimentaux de l’Exemple 3, il peut être observé des effets bénéfiques sur les plantules de tomates, lorsque la solution CNCM I-5921 est appliquée en mélange au substrat avant le semis, en combinatoire avec des champignons mycorhiziens. La souche selon l’invention permet d’améliorer le taux de germination des semences de tomates dès 5 jours après le semis (+31%), et d’améliorer très nettement leur taux de recouvrement après 4 semaines (+33%). La souche CNCM I-5921, combinée à l’application de mycorhizes, permet surtout une augmentation significative de la biomasse sèche moyenne (Test de Student au seuil de risque de 5%) des plantules, comparativement à l’ajout de mycorhizes seules. L’application de 2.10 9 cellules par litre de substrat augmente de 51% en moyenne la quantité de biomasse sèche des plantules, comparées à celles produites uniquement avec des champignons mycorhiziens. En conclusion, la souche selon l’invention permet aux producteurs de la combiner avec d’autres produits biostimulants pour améliorer et optimiser davantage le développement et la qualité de leur production végétale. Exemple 4 : Évaluation de l’impact de la souche bactérienne CNCM I-5921 appliquée selon l’invention sur le développement de plants de Solanum lycopersicum , en conditions de stress abiotique 4.1 Protocole expérimental d’application en mélange au substrat Application de la solution CNCM I-5921 en phase de semis de jeunes plants de tomates Préparation de 2 litres de substrat, composé de 35 % de substrat horticole pour semis et de 65 % de vermiculite. Mélange au substrat de la solution CNCM I-5921 (telle que décrite au point 1.1 ), de façon à obtenir une concentration de 2,5.10 7 cellules mises en solution dans 200 mL d’eau, par litre de substrat. Dépôt de 1 litre de substrat pré-mélangé par plaque de semis de 40 alvéoles, soit 25 mL de substrat par alvéole. Dépôt d’une semence de tomate par alvéole pour chaque plaque. Dépôt des plaques en salle de germination à 20°C pendant 4 semaines, en conditions d’hygrométrie et de luminosité contrôlées. Extraction des plantules du substrat et nettoyage du système racinaire. Repiquage des plantules en substrat inerte, composé de perlite. Culture en serre pendant 4 semaines, maintenue à 25°C le jour et 16°C la nuit, en conditions de stress hydrique. Extraction des plantules du substrat inerte et nettoyage du système racinaire. Mesure de la biomasse fraîche du système racinaire et de la partie aérienne pour chaque plantule. Mesure de l’aire foliaire et du périmètre des feuilles des plantules, avec un logiciel d’analyse d’images. Séchage du système racinaire et de la partie aérienne de chaque plantule en étuve à 80°C pendant 24 heures. Mesure de la biomasse sèche du système racinaire et de la partie aérienne pour chaque plantule. Chaque modalité décrite précédemment a été conduite sur une plaque expérimentale identique de 40 trous, correspondant donc à un effectif de 40 semences par modalité. La variété de tomates utilisée pour l’ensemble des essais expérimentaux est la variété commerciale de Solanum lycopersicum de marque Sweetbaby, produite en agriculture biologique par la société française Girerd. 4.2 Résultats Le tableau 13 ci-dessous présente la biomasse fraîche moyenne du système racinaire, de la partie aérienne et des deux biomasses cumulées des plantules, exprimées en milligrammes, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. La masse fraîche moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.13] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Conditions de culture Biomasse fraîche racinaire moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse fraîche aérienne moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse fraîche totale moyenne (mg / pl.) % / témoin Aucun Témoin Stress 1508 b - 6000 b - 7508 b - CNCM I-5921 2,5.10 7 cellules / L Stress 2025 a + 34,33 % 7775 a + 29,58 % 9800 a + 30,54 % Test de Student (seuil 5%) Le tableau 14 ci-dessous présente la biomasse sèche moyenne du système racinaire, de la partie aérienne et des deux biomasses cumulées des plantules, exprimées en milligrammes, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. La masse sèche moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.14] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Conditions de culture Biomasse sèche racinaire moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche aérienne moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche totale moyenne (mg / pl.) % / témoin Aucun Témoin Stress 113 b - 593 b - 705 b - CNCM I-5921 2,5.10 7 cellules / L Stress 135 a + 19,78 % 703 a + 18,57 % 837 a + 18,76 % Test de Student (seuil 5%) Le tableau 15 ci-dessous présente l’aire foliaire moyenne des plantules, exprimée en centimètres carrés, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. L’aire foliaire moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.15] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Conditions de culture Aire moyenne (cm 2 / pl.) % / témoin Aucun Témoin Stress 31,89 b - CNCM I-5921 2,5.10 7 cellules / L Stress 41,36 a + 29,70 % Test de Student (seuil 5%) Le tableau 16 ci-dessous présente le périmètre moyen des feuilles des plantules, exprimé en centimètres, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. Le périmètre moyen est également exprimé en pourcentage, rapporté à la modalité témoin. [Tab.16] Traitement appliqué Dosage appliqué (par Litre de substrat) Conditions de culture Périmètre moyen (cm / pl.) % / témoin Aucun Témoin Stress 71,42 b - CNCM I-5921 2,5.10 7 cellules / L Stress 76,98 a + 7,78 % Test de Student (seuil 10%) Selon les résultats des essais expérimentaux de l’Exemple 4, il peut être observé des effets bénéfiques multiples sur les plantules de tomates soumises à un stress abiotique, lorsque la solution CNCM I-5921 est appliquée en mélange au substrat avant le semis. La souche selon l’invention permet, en conditions de stress hydrique, d’augmenter significativement la biomasse fraîche et la biomasse sèche moyenne (Test de Student au seuil de risque de 5%) des plantules lorsqu’elle est simplement pré-mélangée au substrat. Après une unique application à 2,5.10 7 cellules par litre de substrat, les plantules contiennent une biomasse fraîche moyenne supérieure de 31%, et une biomasse sèche moyenne supérieure de 19% à celles de la modalité témoin. À noter que le gain de biomasse est davantage marqué sur la partie racinaire des plantules, avec une augmentation de 34% en biomasse fraîche et de 20% en biomasse sèche, ce qui traduit leur meilleure adaptation au stress hydrique que les plantules témoins. La solution bactérienne CNCM I-5921 permet également une augmentation significative de 30% de l’aire foliaire moyenne des plantules, ainsi qu’un périmètre moyen de leurs feuilles de 8%. Une fois de plus, ces paramètres mettent en évidence une meilleure adaptation de la plante à une carence hydrique, en réduisant l’évapotranspiration pour limiter la perte en eau. En conclusion, la souche selon l’invention permet aux producteurs d’améliorer la capacité de résistance et d’adaptation de leurs cultures, lorsque celles-ci sont soumises à un stress hydrique. En effet, les plantules qui développent et renforcent plus rapidement leur système racinaire, augmentent leur chance de survie en cas de carence en eau. Dans ce sens, la souche CNCM I-5921 appliquée en mélange au substrat avant semis, permet ainsi aux agriculteurs de générer des économies en eau et de leur assurer des taux de pertes inférieurs. Les périodes de sécheresses et de restrictions en eau étant de plus en plus fréquentes dans le monde, la capacité pour les producteurs à préserver leurs cultures en conditions critiques, tout en maintenant des rendements suffisants, deviendra rapidement vital. Exemple 5 : Évaluation de l’impact de la souche bactérienne CNCM I-5921 appliquée selon l’invention sur le développement de plants de Solanum lycopersicum 5.1 Protocole expérimental d’application en trempage des semences Application de la solution CNCM I-5921 en phase de semis de jeunes plants de tomates Préparation de 5 litres de substrat, composé de 35 % de substrat horticole pour semis et de 65 % de vermiculite. Dépôt de 1 litre de substrat préparé par plaque de semis de 50 alvéoles, soit 20 mL de substrat par alvéole. Mise en solution de la solution CNCM I-5921 (telle que décrite au point 1.1 ), de façon à obtenir une concentration de 1.10 7 et 1.10 8 cellules par millilitre d’eau. Trempage de lots de 50 semences de tomate dans 100 mL de solutions, pendant 20 et 40 minutes. Filtration et séchage des lots de semences. Dépôt d’une semence de tomate par alvéole pour chaque plaque. Dépôt des plaques en salle de germination à 20°C pendant 4 semaines, en conditions d’hygrométrie et de luminosité contrôlées. Mesure des hauteurs des plantules, du collet à la base de l’apex, 3 semaines après le semis. Mesure du taux de recouvrement du système foliaire avec un logiciel d’analyse d’images, 3 et 4 semaines après le semis. Extraction des plantules du substrat, nettoyage du système racinaire à l’eau et absorption de l’excédent d’eau. Mesure de la biomasse fraîche des lots de plantules. Séchage des plantules en étuve à 80°C pendant 24 heures. Mesure de la longueur du système racinaire de chaque plantule. Mesure de la biomasse sèche du système racinaire et de la partie aérienne pour chaque plantule. Chaque modalité décrite précédemment a été conduite sur une plaque expérimentale identique de 50 trous, correspondant donc à un effectif de 50 semences par modalité. La variété de tomates utilisée pour l’ensemble des essais expérimentaux est la variété commerciale de Solanum lycopersicum de marque Sweetbaby, produite en agriculture biologique par la société française Girerd. 5.2 Résultats Les tableaux 17 et 18 ci-dessous présentent la hauteur moyenne des plantules exprimée en centimètres, et mesurée du collet à la base de l’apex, 3 semaines après le semis, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. La hauteur moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.17] Traitement appliqué Dosage appliqué (par mL de solution de trempage) Temps de trempage (minutes) Hauteur moyenne (cm / pl.) % / témoin Aucun Témoin 20 7,31 b - CNCM I-5921 1.10 8 cellules / mL 20 8,10 a + 10,81 % Test de Student (seuil 5%) [Tab.18] Traitement appliqué Dosage appliqué (par mL de solution de trempage) Temps de trempage (minutes) Hauteur moyenne (cm / pl.) % / témoin Aucun Témoin 40 8,28 - CNCM I-5921 1.10 7 cellules / mL 40 8,56 + 3,38 % CNCM I-5921 1.10 8 cellules / mL 40 8,71 + 5,19 % Les tableaux 19 et 20 ci-dessous présentent le taux de recouvrement du système foliaire exprimé en pourcentage, calculé avec un logiciel d’analyse d’images, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. Le taux de recouvrement est également exprimé en pourcentage, rapporté à la modalité témoin. [Tab.19] Traitement appliqué Dosage appliqué (par mL de solution de trempage) Temps de trempage (minutes) Taux de recouvrement à 3 semaines post-semis % / témoin Taux de recouvrement à 4 semaines post-semis % / témoin Aucun Témoin 20 39,71 % - 32,85 % - CNCM I-5921 1.10 8 cellules / mL 20 42,93 % + 8,11 % 41,25 % + 25,57 % [Tab.20] Traitement appliqué Dosage appliqué (par mL de solution de trempage) Temps de trempage (minutes) Taux de recouvrement à 3 semaines post-semis % / témoin Taux de recouvrement à 4 semaines post-semis % / témoin Aucun Témoin 40 37,72 % - 34,31 % - CNCM I-5921 1.10 7 cellules / mL 40 43,19 % + 14,50 % 43,07 % + 25,53 % CNCM I-5921 1.10 8 cellules / mL 40 45,11 % + 19,59 % 44,95 % + 31,01 % Les tableaux 21 et 22 ci-dessous présentent la biomasse fraîche moyenne par plantule après extraction du substrat, nettoyage du système racinaire et absorption de l’excédent d’eau, exprimée en milligrammes, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. La masse fraîche moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.21] Traitement appliqué Dosage appliqué (par mL de solution de trempage) Temps de trempage (minutes) Biomasse fraîche moyenne (mg / pl.) % / témoin Aucun Témoin 20 869,58 - CNCM I-5921 1.10 8 cellules / mL 20 1037,61 + 19,32 % [Tab.22] Traitement appliqué Dosage appliqué (par mL de solution de trempage) Temps de trempage (minutes) Biomasse fraîche moyenne (mg / pl.) % / témoin Aucun Témoin 40 882,29 - CNCM I-5921 1.10 7 cellules / mL 40 1115,11 + 26,39 % CNCM I-5921 1.10 8 cellules / mL 40 1134,79 + 28,62 % Les tableaux 23 et 24 ci-dessous présentent la longueur moyenne du système racinaire après séchage des plantules exprimée en centimètres, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. La longueur moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.23] Traitement appliqué Dosage appliqué (par mL de solution de trempage) Temps de trempage (minutes) Longueur système racinaire moyenne (cm / pl.) % / témoin Aucun Témoin 20 10,96 - CNCM I-5921 1.10 8 cellules / mL 20 12,17 + 11,04 % [Tab.24] Traitement appliqué Dosage appliqué (par mL de solution de trempage) Temps de trempage (minutes) Longueur système racinaire moyenne (cm / pl.) % / témoin Aucun Témoin 40 10,83 - CNCM I-5921 1.10 7 cellules / mL 40 11,87 + 9,60 % CNCM I-5921 1.10 8 cellules / mL 40 12,13 + 12,00 % Les tableaux 25 et 26 ci-dessous présentent la biomasse sèche moyenne du système racinaire, de la partie aérienne et des deux biomasses cumulées des plantules, exprimées en milligrammes, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. La masse sèche moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.25] Traitement appliqué Dosage appliqué (par mL de solution de trempage) Temps de trempage (minutes) Biomasse sèche racinaire moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche aérienne moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche totale moyenne (mg / pl.) % / témoin Aucun Témoin 20 15,67 b - 129,25 b - 144,92 b - CNCM I-5921 1.10 8 cellules / mL 20 18,70 a + 19,34 % 154,17 a + 19,28 % 172,87 a + 19,29 % [Tab.26] Traitement appliqué Dosage appliqué (par mL de solution de trempage) Temps de trempage (minutes) Biomasse sèche racinaire moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche aérienne moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche totale moyenne (mg / pl.) % / témoin Aucun Témoin 40 15,48 - 123,15 b - 138,63 b - CNCM I-5921 1.10 7 cellules / mL 40 17,57 + 13,50 % 168,89 a + 37,14 % 186,46 a + 34,50 % CNCM I-5921 1.10 8 cellules / mL 40 17,69 + 14,28 % 187,23 a + 52,03 % 204,92 a + 47,82 % Test de Student (seuil 5%) Selon les résultats des essais expérimentaux de l’Exemple 4, il peut être observé des effets bénéfiques multiples et durables sur les plantules de tomates, lorsque la solution CNCM I-5921 est appliquée en solution de trempage des semences avant le semis. La souche selon l’invention permet d’augmenter significativement la hauteur des plantules après 3 semaines (+11%), d’améliorer progressivement leur taux de recouvrement après 3 puis 4 semaines (+31%), et d’augmenter significativement la longueur du système racinaire des plantules (+12%). La souche CNCM I-5921 augmente la biomasse fraîche (+29%) mais permet surtout une augmentation significative de la biomasse sèche moyenne (Test de Student au seuil de risque de 5%) des plantules lorsqu’elle est appliquée en trempage des semences. Après un trempage de 40 minutes à une concentration de 1.10 8 cellules par millilitre de solution, les plantules contiennent une biomasse sèche moyenne supérieure de 48% à celles de la modalité témoin, dans le cadre de cet essai expérimental. En conclusion, la souche selon l’invention permet aux producteurs de traiter leurs semences en grande quantité, par simple trempage en amont du semis. Cette pratique particulièrement simple dans sa mise en œuvre permet un gain en temps et en efficacité, dans un volume de travail considérablement réduit. Les semences ainsi traitées pourront être semées immédiatement ou bien stockées et réservées à des semis échelonnés dans le temps. L’application par trempage des semences permet donc aux agriculteurs de faire des économies en temps de main d’œuvre, en place et en énergie par la réduction des équipements requis à sa mise en place. Exemple 6 : Évaluation de l’impact de la souche bactérienne CNCM I-5921 appliquée selon l’invention sur le développement de plants de Solanum lycopersicum , en conditions de stress abiotique 6.1 Protocole expérimental d’application en mélange au substrat Application de la solution CNCM I-5921 en phase de semis de jeunes plants de tomates Préparation de 4 litres de substrat, composé de 35 % de substrat horticole pour semis et de 65 % de vermiculite. Dépôt de 1 litre de substrat préparé par plaque de semis de 40 alvéoles, soit 25 mL de substrat par alvéole. Mise en solution de la souche CNCM I-5921 (telle que décrite au point 1.1 ), de façon à obtenir une concentration de 2.10 8 cellules par millilitre d’eau. Trempage de lots de 40 semences de tomate dans 100 mL de solutions, pendant 40 minutes. Filtration et séchage des lots de semences. Dépôt d’une semence de tomate par alvéole pour chaque plaque. Dépôt des plaques en salle de germination à 20°C pendant 4 semaines, en conditions d’hygrométrie et de luminosité contrôlées. Extraction des plantules du substrat et nettoyage du système racinaire. Repiquage des plantules en substrat inerte, composé de perlite. Culture en serre pendant 4 semaines, maintenue à 25°C le jour et 16°C la nuit, en conditions d’irrigation normale et en conditions de stress hydrique. Extraction des plantules du substrat inerte et nettoyage du système racinaire. Mesure de l’aire foliaire des plantules, avec un logiciel d’analyse d’images. Séchage du système racinaire et de la partie aérienne de chaque plantule en étuve à 80°C pendant 24 heures. Mesure de la biomasse sèche du système racinaire et de la partie aérienne pour chaque plantule. Chaque modalité décrite précédemment a été conduite sur une plaque expérimentale identique de 40 trous, correspondant donc à un effectif de 40 semences par modalité. La variété de tomates utilisée pour l’ensemble des essais expérimentaux est la variété commerciale de Solanum lycopersicum de marque Sweetbaby, produite en agriculture biologique par la société française Girerd. 6.2 Résultats Les tableaux 27 et 28 ci-dessous présentent la biomasse sèche moyenne du système racinaire, de la partie aérienne et des deux biomasses cumulées des plantules, exprimées en milligrammes, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment. La masse sèche moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.27] Traitement appliqué Dosage appliqué (par mL de solution de trempage) Conditions de culture Biomasse sèche racinaire moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche aérienne moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche totale moyenne (mg / pl.) % / témoin Aucun Témoin Normale 169 - 1188 - 1357 - CNCM I-5921 2.10 8 cellules / mL Normale 179 + 5,77 % 1260 + 6,11 % 1439 + 6,06 % [Tab.28] Traitement appliqué Dosage appliqué (par mL de solution de trempage) Conditions de culture Biomasse sèche racinaire moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche aérienne moyenne (mg / pl.) % / témoin Biomasse sèche totale moyenne (mg / pl.) % / témoin Aucun Témoin Stress 130 - 660 - 790 - CNCM I-5921 2.10 8 cellules / mL Stress 131 + 0,19 % 725 + 9,85 % 856 + 8,26 % Le tableau 29 ci-dessous présente l’aire foliaire moyenne des plantules, exprimée en centimètres carrés, pour chaque modalité expérimentée décrite précédemment, en conditions de stress hydrique. L’aire foliaire moyenne est également exprimée en pourcentage, rapportée à la modalité témoin. [Tab.29] Traitement appliqué Dosage appliqué (par mL de solution de trempage) Conditions de culture Aire moyenne (cm 2 / pl.) % / témoin Aucun Témoin Stress 35,26 - CNCM I-5921 2.10 8 cellules / mL Stress 37,85 + 7,35 % Selon les résultats des essais expérimentaux de l’Exemple 6, il peut être observé des effets bénéfiques multiples sur les plantules de tomates soumises à un stress abiotique, lorsque la souche CNCM I-5921 est appliquée en solution de trempage des semences avant le semis. La souche selon l’invention permet d’augmenter la biomasse sèche moyenne des plantules lorsqu’elle est appliquée en trempage des semences. Après un trempage de 40 minutes à une concentration de 2.10 8 cellules par millilitre de solution, les plantules contiennent une biomasse sèche moyenne supérieure de 6% à celles de la modalité témoin en conditions normales, et supérieures de 8% en conditions de stress hydrique. La solution bactérienne CNCM I-5921 permet également une augmentation de 7% de l’aire foliaire moyenne des plantules. Ces paramètres traduisent une meilleure adaptation de la plante à une carence en eau, par un renforcement des tissus par l’assimilation des éléments nutritifs. En conclusion, la souche selon l’invention permet aux producteurs d’améliorer la capacité de résistance et d’adaptation de leurs cultures, par un simple traitement de leurs semences par trempage. Cette technique peu coûteuse et facile à mettre en œuvre, permettra aux agriculteurs de stocker leurs semences prétraitées en amont du semis, tout en générant des économies en temps de main d’œuvre et en eau. Les périodes de sécheresses et de restrictions en eau étant de plus en plus fréquentes dans le monde, la capacité pour les producteurs à préserver leurs cultures en conditions critiques, tout en maintenant des rendements suffisants, deviendra rapidement vitale. Souche isolée de l’espèce Bacillus siamensis déposée auprès de la CNCM sous le numéro d’ordre CNCM I-5921. Utilisation de la souche bactérienne selon la revendication 1, pour la stimulation du développement et de la croissance d’une semence et d’un plant de tomate ou l’amélioration des rendements d’une culture de tomates. Utilisation de la souche bactérienne selon la revendication 1, pour l’amélioration de la résistance et de la tolérance au stress abiotique d’une semence, d’un plant de tomate et d’une culture de tomates. Utilisation selon l’une des revendications 2 à 3, dans laquelle la souche bactérienne est sous une forme solide telle qu’une poudre ou des granules, ou sous une forme liquide, préférentiellement aqueuse. Méthode d’obtention d’une semence de tomate caractérisée en ce qu’elle comprend les étapes suivantes : préparation d’une solution de trempage contenant une souche selon la revendication 1, trempage d’une semence dans la solution de trempage, filtration et séchage de la semence, obtention d’une semence, conditionnement d’une semence. Méthode selon la revendication 5, dans laquelle la souche bactérienne est appliquée de façon à ce que la concentration soit comprise entre 10 5 à 10 10 cellules / mL de solution de trempage. Méthode de culture de tomates à partir d’une semence de tomate, éventuellement obtenue selon les conditions de la revendication 6, caractérisée en ce qu’elle comprend les étapes suivantes : préparation d’un substrat, ensemencement du substrat par une semence de tomate, éventuellement obtenue selon une méthode selon la revendication 5 ou 6, éventuellement, incorporation dans le substrat, de champignons mycorhiziens, d’amendements ou mélanges de matières nutritives spécifiques de la culture de tomates, germination, croissance, repiquage, floraison, fructification, récoltes, fin de récolte, caractérisée en ce que la souche bactérienne selon la revendication 1, ou une composition en comprenant, est appliquée au moins une fois lors d’au moins l’une des étapes (a), (b), (d), (e), (f) (i) et (j). Méthode selon la revendication 7, dans laquelle la souche bactérienne est appliquée dans la masse du substrat ou à la surface d’une culture d’une tomate, de façon à ce que la concentration soit comprise entre 10 5 cellules et 10 10 cellules / L de substrat ou entre 5.10 6 cellules et 5.10 11 cellules / m 2 . Méthode selon l’une des revendications 7 à 8, dans laquelle la souche bactérienne est appliquée par trempage ou par arrosage ou par pulvérisation d’une solution liquide. Utilisation d’un substrat de fin de culture d’une tomate obtenu par une méthode selon les revendications 7 à 9 comme amendement ou fertilisant pour une culture agricole. Utilisation d’une souche bactérienne selon la revendication 1, pour prévenir la synthèse de l’éthylène produit par une semence ou par un plant de tomate. Utilisation d’une souche bactérienne selon la revendication 1, pour produire une phytohormone telle qu’une auxine ou une gibbérelline ou une cytokinine.