Brevet FR3159905A1 — publié le 20250912

Procédé et dispositif de tri de gouttes d’organoïdes par actuation acoustique La présente invention est relative à un procédé de tri de gouttes d’organoïdes selon un paramètre prédéfini par actuation acoustique. La présente demande concerne également un dispositif pour le tri de gouttes d’organoïdes. Procédé et dispositif de tri de gouttes d’organoïdes par actuation acoustique La présente invention concerne le domaine technique des organoïdes. Elle concerne plus particulièrement le domaine du tri des organoïdes. Arrière-plan technologique Le tri de cellules est une opération clé dans un certain nombre de procédés biotechnologiques. La microfluidique a émergé au cours des dernières années comme une technologie permettant la miniaturisation et l’automatisation des tests biologiques à très haut débit, à des échelles de taille permettant l’analyse de cellules individuelles. Au cours des dernières années, des modèles cellulaires de plus en plus proches de la réalité biologique ont été développés, tels que les organes sur puces (OoCs), les organoïdes et les sphéroïdes. Ces structures permettent notamment, à partir de cellules humaines, immortalisées, primaires ou dérivées de cellules souches, d’établir des modèles biologiques, conçus pour reproduire certaines caractéristiques et fonctions physiologiques et physiopathologiques des tissus humains. Les organoïdes et organes sur puces reproduisent les fonctionnalités d’organes et les cellules les constituant s’auto-organisent selon l’environnement 3D dans lequel elles sont plongées. Ces nouveaux modèles pourraient ainsi à terme contribuer à faire progresser la compréhension du corps humain, révolutionner la recherche pharmaceutique en servant de support au développement de candidats médicaments, tester la toxicité et l’efficacité des candidats, améliorer le taux de succès des essais cliniques tout en limitant les tests animaux et réduire les coûts et les délais de développement des molécules candidates à une mise sur le marché. Les organoïdes, sphéroïdes, ou organes sur puces ont une taille de l’ordre de 10 à 1000 fois plus grande que celle des cellules individuelles. Les techniques qui ont été développées et optimisées pour la manipulation et l’utilisation de cellules individuelles ne peuvent être simplement transposées aux organoïdes et sphéroïdes sans tenir compte du défi de changement d’échelle. En particulier, les systèmes microfluidiques, qui sont largement utilisés et optimisés pour la manipulation de cellules individuelles, ne sont pas optimisés pour fonctionner de manière fiable, robuste et rapide à des échelles plus grandes. En général, les objets tels que les organoïdes ou les sphéroïdes sont analysés et/ou triés à la main, ou éventuellement à l’aide de robots de pipetage. Ces méthodes sont efficaces mais limitées par le temps nécessaire à leur mise en œuvre et leur reproductibilité. Le développement récent de méthodes de fabrication de sphéroïdes et organoïdes à haut débit impose en outre de développer des techniques d’analyse et/ou de tri plus rapides, automatisées, et de préférence opérant de façon plus reproductible. Comme décrit ci-avant, les techniques classiquement utilisées pour le tri des cellules telles que l’analyse par cytométrie de flux avec le FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting), ne peuvent être simplement transposées à des objets plus gros tels que les organoïdes sans tenir compte du changement d’échelle. La publication Freyer et al. Cytometry 1987 , 8 :427-436 décrit une méthode de cytométrie en flux pour le tri de sphéroïdes de 41 à 96 micromètres de diamètre en utilisant un dispositif commercial modifié. Néanmoins, de tels systèmes, et en particulier les buses, ne sont pas vraiment adaptés pour de telles tailles. En outre, cette technique n’est pas utilisable pour des objets plus gros, notamment à cause du bouchage des canaux et de la sédimentation des objets dans les canaux. En outre, les organoïdes produits par un même procédé peuvent varier en termes de propriétés physiques, notamment leur taille ou leur forme. Le besoin d’analyse et de tri existe donc en cours de production, et les organoïdes doivent pouvoir être remis en culture après l’étape de tri et/ou d’analyse. C’est pourquoi il serait utile de pouvoir utiliser des techniques n’impliquant pas leur marquage, par exemple avec des marqueurs fluorescents ou des particules magnétiques. De même, les techniques de tri impliquant l’utilisation d’un champ électrique requièrent la génération d’un contraste diélectrique qui est obtenu par encapsulation des agrégats cellulaires dans des gouttes d’eau dans de l’huile. La présence de l’huile, ou d’autres agents cytotoxiques, est incompatible avec la remise en culture des organoïdes après l’étape de tri. Certaines forces utilisables pour le tri des organoïdes, telles que les champs électriques de hautes intensités ou les forces de cisaillement, peuvent en outre impacter la prolifération cellulaire, ce qui peut également poser problème pour la remise en culture des organoïdes après le tri. Il serait donc utile de pouvoir disposer d’une méthode pour trier des organoïdes en fonction de paramètres prédéfinis, adaptée pour une gamme d’échelle allant de la dizaine de microns au millimètre, n’impliquant aucun marquage et aucun agent cytotoxique. Avantageusement, cette méthode devrait être applicable pour trier les organoïdes selon différents paramètres. Dans ce cadre, les Inventeurs ont démontré de façon surprenante qu’il était possible de trier efficacement et simplement des gouttes contenant des organoïdes selon un ou des paramètres prédéfinis en utilisant des ondes acoustiques. La méthode permet ainsi de récupérer dans différents contenants des gouttes de phase continue contenant des organoïdes présentant une valeur prédéfinie d’au moins un paramètre prédéfini. Cette méthode est versatile et peut être mise en œuvre pour trier les organoïdes selon une large variété de paramètres, en adaptant simplement le dispositif de détection et/ou d’analyse. En outre, le procédé selon l’invention n’affecte pas les propriétés des organoïdes ni la viabilité cellulaire, ce qui permet la remise en culture des organoïdes après l’étape de tri. Ainsi, un premier objet de la présente invention est un procédé de tri de gouttes comprenant une phase continue aqueuse comprenant des organoïdes, comprenant, pour chaque goutte, les étapes suivantes : Génération d’une goutte de la phase continue aqueuse contenant des organoïdes, Détermination d’une valeur P d’au moins un paramètre de la goutte, Comparaison de la valeur P déterminée à l’étape b. à une valeur de référence, Application sur la goutte d’un champ acoustique dont l’intensité et/ou la phase dépend du résultat de la comparaison de l’étape c., et Récupération de la goutte dans un contenant. Dans certains modes de réalisation, le champ acoustique appliqué à l’étape d. est d’intensité nulle si la valeur P est inférieure à la valeur de référence, et d’intensité non nulle si la valeur P est supérieure ou égale à la valeur de référence. Dans certains modes de réalisation, l’intensité et/ou la phase du champ acoustique appliqué à l’étape d. peut prendre n valeurs différentes, n étant un entier supérieur ou égal à 2, et le procédé permet de trier les gouttes dans n contenants différents selon les n valeurs d’intensité et/ou de phase du champ acoustique. Dans certains modes de réalisation, la goutte est générée à l’étape a. par acheminement de la phase continue aqueuse comprenant des organoïdes dans un capillaire en verre, notamment un capillaire en verre de section carrée, en sortie duquel ils sont encapsulés dans des gouttes d’eau. Dans certains modes de réalisation, le paramètre dont la valeur est déterminée à l’étape b. est choisi dans le groupe constitué par la présence d’un organoïde dans la goutte, la forme d’un organoïde présent dans la goutte, la taille d’un organoïde présent dans la goutte, l’épaisseur d’un organoïde présent dans la goutte, la sphéricité d’un organoïde présent dans la goutte, le nombre d’organoïdes présents dans la goutte, la nature des cellules d’un organoïde présent dans la goutte, la fluorescence d’un organoïde et/ou de la capsule d’un organoïde présent dans la goutte et l’intensité lumineuse transmise ou absorbée par un organoïde présent dans la goutte. Dans certains modes de réalisation, les organoïdes sont formés dans une coque d’alginate. Dans certains modes de réalisation, le diamètre des organoïdes est compris entre 50 micromètres et 4 mm, de préférence entre 300 micromètres et 400 micromètres. Dans certains modes de réalisation, le dispositif permettant la détermination de la valeur P du paramètre à l’étape b. comprend un capteur, tel qu’une caméra, et un dispositif d’analyse d’image tel qu’un logiciel d’analyse d’images. Un second objet de l’invention est un dispositif de tri de gouttes pour la mise en œuvre du procédé de tri de gouttes selon l’invention, ledit dispositif comprenant un système de génération de gouttes d’une phase continue aqueuse comprenant des organoïdes, un système de génération d’un champ acoustique, un dispositif de mesure et/ou d’analyse d’au moins un paramètre, et au moins deux contenants de récupération des gouttes. Dans certains modes de réalisation, le dispositif de mesure et/ou d’analyse d’au moins un paramètre comprend une caméra associée à un logiciel d’analyse d’images. La FIG. 1 est un schéma présentant un dispositif de tri des gouttes par actuation acoustique selon l’invention. La phase continue aqueuse comprenant des organoïdes est introduite au niveau de l’extrémité A du capillaire. Les gouttes sont formées au niveau de l’extrémité B du capillaire. Les capteurs C et D permettent de mesurer au moins un paramètre des gouttes et/ou des organoïdes dans le capillaire juste avant la formation de la goutte. Les transducteurs acoustiques situés sur des matrices hémisphériques E génèrent un champ acoustique permettant de dévier les gouttes et de les récupérer dans les contenants F et G. La FIG. 2 présente les résultats de tri de sphéroïdes selon leur taille avec un procédé selon l’invention. B représente la population triée positivement pour le critère R 0 où R est le rayon du sphéroïde et R 0 le rayon moyen des sphéroïdes, et C représente la population triée négativement pour ce critère. Description détaillée Un premier objet de l’invention est un procédé de tri de gouttes comprenant une phase continue aqueuse comprenant des organoïdes, comprenant, pour chaque goutte, les étapes suivantes : Génération d’une goutte de la phase continue aqueuse contenant des organoïdes, Détermination d’une valeur P d’au moins un paramètre de la goutte, Comparaison de la valeur P déterminée à l’étape b. à une valeur de référence, Application sur la goutte d’un champ acoustique dont l’intensité et/ou la phase dépend du résultat de la comparaison de l’étape c., et Récupération de la goutte dans un contenant. Par « paramètre de la goutte », on entend soit un paramètre de la goutte en tant que telle qui est formée à l’étape a., tel que par exemple le nombre d’organoïdes dans la goutte, soit un paramètre d’un organoïde qui est présent dans la goutte après sa génération, en particulier dans le cas où la goutte comprend exactement un organoïde. Les étapes a. à c. du procédé selon l’invention peuvent être mises en œuvre dans n’importe quel ordre, sous réserve que l’étape c. de comparaison soit mise en œuvre après l’étape b. de détermination. En particulier, l’étape b. de détermination de la valeur P d’au moins un paramètre peut être mise en œuvre après génération de la goutte (étape a.). Cependant, dans certains modes de réalisation préférés, l’étape b. et l’étape c. sont mises en œuvre avant l’étape a. de génération de la goutte. Dans de tels modes de réalisation, la valeur P d’au moins un paramètre est déterminée et éventuellement comparée à une valeur de référence lorsque l’organoïde est dans la phase continue aqueuse, avant génération de la goutte. La valeur P d’au moins un paramètre est attribuée à la goutte après génération de celle-ci. Le procédé de tri de gouttes comprenant une phase aqueuse continue comprenant des organoïdes selon l’invention permet un tri rapide et efficace sans nécessiter de matériel onéreux. En outre, le dispositif pour mettre en œuvre ce procédé est compact, ce qui permet par exemple de l’installer sous le flux d’un poste de sécurité microbiologique. Définitions Un « organoïde » est un agrégat de cellules croissant de manière tridimensionnelle en suspension et développant des interactions complexes entre cellules ou avec une matrice tridimensionnelle. Il s’agit ainsi d’une structure 3D cohésive. Leur intérêt premier est de reproduire une architecture similaire à celle du tissu d’origine qui va générer en son sein différents gradients de pression partielle en gaz. Les organoïdes, le plus souvent proches de la forme sphérique pour des raisons de tension superficielle, peuvent cependant prendre d’autres formes. Les organoïdes ont une taille caractéristique pouvant aller de la dizaine de microns au millimètre. Dans la présente demande, le terme « organoïde » est employé au sens large et peut inclure aussi bien des organoïdes au sens strict que des sphéroïdes. Les organoïdes sont des amas complexes de cellules spécifiques à un organe. Ils sont constitués de cellules souches ou de cellules progénitrices et s'auto-assemblent lorsqu'ils sont soumis à un environnement extracellulaire d’échafaudage, tel que la matrice Corning® Matrigel® ou le collagène. Lorsque cela se produit, ils se transforment en versions microscopiques d’organes parents viables pour une étude 3D. Bien que les organoïdes soient largement utilisés dans la recherche sur les pathologies telles que les cancers, les cellules présentes dans les organoïdes ne sont pas nécessairement des cellules pathologiques. Les « sphéroïdes » sont des structures 3D plus simples préparées à partir de lignées cellulaires immortalisées, notamment de lignées cellulaires cancéreuses immortalisées. Une « goutte » est une très petite quantité de liquide dispersée dans un milieu externe distinct tel que l’air et qui se détache sous forme plus ou moins sphérique. Le volume d’une goutte peut notamment être compris entre 10 microlitres et 100 microlitres, de préférence entre 15 microlitres et 30 microlitres. Une « phase continue aqueuse contenant des organoïdes » est une solution ou une suspension d’organoïdes en milieu aqueux. La concentration des organoïdes dans la phase continue aqueuse est de préférence comprise entre 1 et 50 organoïdes par mL, de préférence elle est d’environ 5 organoïdes par mL. La concentration des organoïdes dans la phase continue aqueuse peut être ajustée par l’homme du métier notamment en fonction du volume des gouttes et/ou du nombre d’organoïdes souhaité par goutte. Dans certains modes de réalisation, la concentration des organoïdes dans la phase continue aqueuse est ajustée de sorte à éviter d’avoir plus d’un organoïde par goutte, par exemple de sorte à avoir environ un organoïde toutes les 10 gouttes. Gouttes L’étape a. du procédé est la génération d’une goutte de phase continue aqueuse contenant des organoïdes. Chaque goutte de phase continue aqueuse comprenant des organoïdes peut contenir soit de la phase continue aqueuse sans organoïdes, soit de la phase continue aqueuse et un ou plusieurs organoïdes en raison notamment de la distribution aléatoire de la dispersion des organoïdes dans la phase continue. Dans un mode de réalisation préféré, chaque goutte contient soit aucun organoïde, soit exactement un organoïde. La phase continue aqueuse comprenant des organoïdes peut être une suspension d’organoïdes dans un milieu aqueux. Le milieu aqueux peut être tout milieu aqueux adapté, notamment de l’eau, un milieu de culture ou une solution aqueuse tampon. Dans certains modes de réalisation, notamment dans le cas où les organoïdes comprennent des cellules vivantes, le milieu aqueux est de préférence une solution aqueuse évitant les chocs osmotiques, calciques, ou générant des stress oxydants. Il peut s’agir notamment d’un milieu de culture optimisé pour la culture cellulaire, de préférence dépourvu de facteurs de croissance ou autres hormones. Par exemple, le milieu aqueux peut être choisi dans le groupe constitué par le Milieu Essentiel Minimum (MEM), le milieu de Eagle modifié par Dulbecco (DMEM), le milieu RPMI (Roswell Park Memorial Institute medium) et les solutions salines tamponnées autour de pH 7 telles que le tampon phosphate salin (PBS) et le tampon HEPES. La génération des gouttes peut se faire par tout moyen adapté, notamment à l’aide d’un dispositif microfluidique. Dans certains modes de réalisation, notamment lorsque la détermination de la valeur P du au moins un paramètre est mise en œuvre avant la génération de la goutte, le dispositif de génération de goutte, en particulier le dispositif microfluidique, doit permettre la mesure de la valeur P. Ainsi, dans le cas où la technique de mesure est une prise d’images, le dispositif de génération de goutte doit permettre la prise d’images. Il s’agit ainsi de préférence d’un dispositif de génération de goutte dont au moins une partie de la paroi est transparente. Le rayon de chaque goutte peut varier en fonction de la nature de la phase aqueuse, de la concentration en organoïdes dans la phase continue aqueuse, du dispositif de génération de goutte utilisé, et du débit de phase continue aqueuse comprenant des organoïdes notamment. Dans certains modes de réalisation, le rayon des gouttes est compris entre 120 micromètres et 5 millimètres, de préférence entre 300 micromètres et 5 millimètres, de préférence entre 500 micromètres et 2mm, en particulier il est d’environ 1,5 mm. Dans certains modes de réalisation, notamment dans le cas où les organoïdes ne comprennent pas de cellules vivantes, le rayon des gouttes peut être modulé par d’autres facteurs tels que la présence d’au moins un surfactant dans la phase continue aqueuse. L’analyse et le tri sont en général facilités dans le cas où chaque goutte comprend au maximum un organoïde. Ainsi, l’utilisation de gouttes plus petites permet d’augmenter la concentration en organoïdes dans la phase aqueuse continue comprenant des organoïdes. Dans certains modes de réalisation, un champ électrique est appliqué sur la phase continue aqueuse comprenant des organoïdes au niveau de l’endroit où les gouttes sont générées. Ceci permet notamment de réduire la taille des gouttes. Dans certains modes de réalisation, les gouttes sont générées sous la forme d’un flux continu, notamment un flux continu de l’ordre de 200 microlitres par seconde. Les gouttes peuvent être générées dans tout milieu adapté, notamment sous atmosphère inerte ou sous air, à pression atmosphérique, à pression réduite ou en conditions hyperbares notamment selon la nature des organoïdes et le but du tri. Dans certains modes de réalisation, les gouttes générées sont des gouttes d’eau qui sont générées dans l’air à pression atmosphérique. Les gouttes peuvent être générées dans toute direction et dans tout sens adapté en fonction des caractéristiques du procédé, notamment en fonction du ou des dispositifs de mesure ou d’analyse utilisés pour déterminer les paramètres. Dans un mode de réalisation préféré, les gouttes sont générées dans une direction verticale ou à peu près verticale, et vers le bas, sous l’action de la gravité. De préférence, les gouttes sont en chute libre entre leur génération et leur entrée dans le champ acoustique, et entre leur sortie du champ acoustique et leur récupération dans un contenant. Dans certains modes de réalisation, les organoïdes sont acheminés sous la forme d’une solution ou une suspension aqueuse dans un capillaire en verre, notamment un capillaire en verre de section rectangulaire ou carrée, en sortie duquel ils sont encapsulés dans des gouttes d’eau. Le côté du capillaire est de préférence de l’ordre de 500 micromètres à 1 millimètre. La mise en flux dans le capillaire peut être réalisée à l’aide d’une unité de contrôle de pression ou d’un système de pousse-seringue. Dans un tel mode de réalisation, le débit maximal en sortie du capillaire est de l’ordre de 1 mL/seconde. En effet, le débit utilisé doit être compatible avec la formation de gouttes, en évitant la génération de jets continus. Organoïdes Les organoïdes présents dans les gouttes de phase continue triées selon l’invention peuvent être de toute taille et de toute forme. Chaque goutte soumise au procédé selon l’invention peut comprendre un ou plusieurs organoïdes ; elle peut alternativement ne comprendre aucun organoïde. De préférence, chaque goutte soumise au procédé selon l’invention comprend aucun ou exactement un organoïde. Dans un mode de réalisation, les organoïdes ont un diamètre compris entre 50 micromètres et 4 mm, de préférence entre 50 micromètres et 700 micromètres, en particulier entre 200 micromètres et 400 micromètres. Dans un mode de réalisation, les organoïdes ont une forme approximativement sphérique. Dans certains modes de réalisation, les organoïdes sont sous forme pleine, comme des boules par exemple. Dans d’autres modes de réalisation, les organoïdes sont sous forme de cystes, c’est-à-dire qu’ils présentent une enveloppe de cellules, qui entoure un cœur « vide », qui ne comprend pas de cellules. Dans un mode de réalisation, les organoïdes sont formés dans une coque telle qu’une coque d’hydrogel, notamment une coque d’alginate. Dans un tel cas, ce qu’on appelle la taille de l’organoïde dans la présente invention est la taille de la coque, c’est-à-dire en comptant l’épaisseur de la coque, notamment la coque d’alginate, en plus de la taille de l’organoïde en tant que tel. Dans un tel mode de réalisation, le paramètre P de l’organoïde (ou de la goutte) qui est déterminé dans le procédé selon l’invention ne tient de préférence pas compte de la coque, c’est-à-dire que si le paramètre dont une mesure P est déterminée est une dimension de l’organoïde, il s’agit de préférence de la dimension sans la coque. Les organoïdes peuvent être produits par toute méthode adaptée connue dans l’art. Dans certains modes de réalisation, les organoïdes sont produits par une technique à haut débit, telle que celles décrites dans M. Trossbach, al., High- throughput cell spheroid production and assembly analysis by microfluidics and deep learning , SLAS Technology 2023, 28(6), 423-432, K. Alessandri et al., Cellular capsules as a tool for multicellular spheroid production and for investigating the mechanics of tumor progression in vitro , PNAS 2013, 110 (37), 14843-14848 ou N. Brandenberg et al. High-throughput automated organoid culture via stem-cell aggregation in microcavity arrays, Nat Biomed Eng. 2020;4(9):863-874. Le procédé selon l’invention peut être mis en œuvre avec des organoïdes comprenant n’importe quel type de cellules, de préférence des cellules de mammifères. Paramètres Le procédé selon l’invention permet de trier des gouttes de phase continue aqueuse comprenant des organoïdes selon la valeur d’au moins un paramètre. L’étape b) du procédé selon l’invention est la détermination d’une valeur P du au moins un paramètre de la goutte, et l’étape c) du procédé est la comparaison de cette valeur P à une valeur de référence. Parmi les paramètres qui peuvent être déterminés pour une goutte et/ou pour un organoïde par le procédé selon l’invention, on peut citer notamment : La présence d’un organoïde dans la goutte, La forme d’un organoïde présent dans la goutte, La taille d’un organoïde présent dans la goutte, L’épaisseur d’un organoïde présent dans la goutte, La sphéricité d’un organoïde présent dans la goutte, Le nombre d’organoïdes présents dans la goutte, La nature des cellules d’au moins un organoïde présent dans la goutte, La fluorescence d’au moins un organoïde et/ou de la capsule d’au moins un organoïde présent dans la goutte, et L’intensité lumineuse transmise ou absorbée par au moins un organoïde présent dans la goutte. D’autres paramètres peuvent être déterminés, à partir du moment où il existe un dispositif de mesure et/ou d’analyse dudit paramètre permettant de déterminer une valeur du paramètre et/ou de comparer cette valeur à une valeur de référence. Dans certains modes de réalisation, le paramètre n’est pas l’absorbance optique, ni la fluorescence. Dans certains modes de réalisation, le paramètre détecté est la présence d’un organoïde dans la goutte, la valeur P est égale à 0 si aucun organoïde n’est présent dans la goutte, et la valeur P est égale à 1 si un organoïde est présent dans la goutte. Dans ce cas, la valeur de référence peut être la valeur 1. Ainsi, si aucun organoïde n’est présent dans la goutte (P=0), l’intensité du champ acoustique appliqué à l’étape d. peut être nulle. Si un organoïde est présent dans la goutte (P=1), l’intensité du champ acoustique appliqué à l’étape d. peut être non nulle. Ainsi, le procédé selon l’invention comprend dans certains modes de réalisation les étapes suivantes : a’. Génération d’une goutte de la phase continue aqueuse contenant des organoïdes, b’. Détermination de la présence ou de l’absence d’au moins un organoïde dans la goutte, c’. Application d’un champ acoustique sur la goutte d’intensité non nulle si la présence d’au moins un organoïde dans la goutte est déterminée à l’étape b’, et d’intensité nulle si l’absence de organoïdes dans la goutte est déterminée à l’étape b’, et d’. Récupération de la goutte dans un contenant, de préférence un contenant différent selon si l’absence ou la présence d’organoïdes dans la goutte est détectée. L‘étape a’. peut être mise en œuvre avant ou après l’étape b’. De préférence, elle est mise en œuvre après l’étape b’., c’est-à-dire que la présence ou l’absence d’organoïdes dans le volume de solution aqueuse continue correspondant à une goutte est déterminée avant la génération de la goutte. Les modes de réalisation particuliers sont décrits en attribuant des valeurs d’intensité respectivement nulle et non nulle au champ acoustique en fonction de la valeur P du paramètre détecté, mais le procédé peut être mis en œuvre avec n’importe quelles intensités et/ou phases du champ acoustique à partir du moment où des intensités et/ou phases différentes sont appliquées pour des valeurs du paramètre détecté différentes. De préférence, les intensités et/ou les phases du champ acoustique diffèrent suffisamment pour permettre une déviation des gouttes permettant leur récupération dans des contenants positionnés à des emplacements distincts. L’homme du métier peut aisément déterminer, en fonction des conditions de mise en œuvre du procédé, les intensités et/ou les phases du champ acoustique à appliquer pour chaque valeur déterminée du paramètre et pour chaque résultat de comparaison de celle-ci avec une valeur de référence. Dans certains modes de réalisation, le paramètre détecté est la forme d’un organoïde dans la goutte, la valeur P est égale à 0 si la forme de l’organoïde ne correspond pas à une forme prédéfinie, et la valeur P est égale à 1 si la forme de l’organoïde correspond à une forme prédéfinie. Dans ce cas, la valeur de référence peut être la valeur 1. Ainsi, si l’organoïde n’a pas la forme prédéfinie, l’intensité du champ acoustique appliqué à l’étape d. peut être nulle. Si l’organoïde a la forme prédéfinie, l’intensité du champ acoustique appliqué à l’étape d. peut être non nulle. Dans certains modes de réalisation le paramètre détecté est l’intensité lumineuse transmise par un organoïde. La détection de ce paramètre peut permettre notamment de séparer les organoïdes qui sont pleins de ceux qui sont sous forme de cyste. Détermination des paramètres Les paramètres peuvent être déterminés par l’utilisation de tout dispositif de mesure et/ou d’analyse adapté aux paramètres, ou de toute combinaison adaptée de tels dispositifs. Le dispositif de mesure et/ou d’analyse est de préférence situé au niveau de la zone de formation des gouttes. Ainsi, dans le cas où les gouttes de solution ou suspension aqueuse d’organoïdes sont formées en sortie d’un capillaire, le dispositif de mesure et/ou d’analyse est de préférence situé au niveau de la sortie du capillaire, de préférence pour mesure le paramètre à l’intérieur du capillaire. La fréquence de détermination des paramètres doit être assez rapide pour que les paramètres soient déterminés pour chaque goutte, en particulier lorsque les gouttes forment un flux continu. Dans certains modes de réalisation, la détermination du ou des paramètres est réalisée par analyse d’image. Le dispositif de mesure et/ou d’analyse peut notamment comprendre une caméra, notamment une caméra rapide, en particulier une caméra permettant d’acquérir au moins 200 images par seconde, par exemple 500 images par seconde. Dans certains modes de réalisation, le dispositif de mesure et/ou d’analyse comprend d’une part un capteur, tel qu’une caméra, et d’autre part un dispositif d’analyse, par exemple un logiciel d’analyse ou de reconnaissance d’image qui peut être basé sur un script écrit en Python. Dans certains modes de réalisation, le logiciel de reconnaissance d’images implique de l’apprentissage profond (deep learning). Dans certains modes de réalisation, le dispositif de mesure et/ou d’analyse comprend une interface utilisateur permettant de définir le ou les paramètre(s) déterminé(s), et/ou la ou les valeur(s) de référence associée(s). Champ acoustique Le champ acoustique utilisé selon la présente invention est notamment un champ ultrasonique stationnaire. La fréquence du champ acoustique peut notamment être comprise entre 20 et 100 kHz. L’homme du métier est à même d’ajuster la fréquence en fonction notamment de la taille des gouttes. En effet, pour une fréquence f donnée, on peut dévier des gouttes avec un diamètre maximal de c/2f, où c est la célérité du son dans l’air. De préférence, la fréquence est de l’ordre de 40 kHz, elle permet ainsi de dévier des gouttes d’une taille allant jusqu’à 4 mm environ. Le champ acoustique permet de dévier la goutte de sa direction initiale en fonction de la valeur d’au moins un paramètre déterminé à l’étape b. Ainsi, les gouttes peuvent être récoltées dans des contenants différents en fonction de la valeur dudit ou desdits paramètre(s). La force de radiation acoustique dérivant du champ d’ultrasons peut notamment dévier la goutte en chute libre dans une direction orthogonale à son axe de chute. L’intensité et la phase du champ acoustique appliqué à la goutte en fonction de la valeur du paramètre sont adaptées pour que la goutte tombe dans le contenant adapté. De préférence, les gouttes tombent en suivant les lignes de champ du champ acoustique. Dans certains modes de réalisation, le champ acoustique est focalisé grâce à l’arrangement des transducteurs ultrasonores sur deux matrices, en particulier deux matrices sphériques ou hémisphériques. Les matrices peuvent être obtenues simplement et à bas coût, par exemple en impression 3D. Procédé Dans certains modes de réalisation, le procédé est mis en œuvre dans un environnement stérile. Le procédé de tri de gouttes selon l’invention est mis en œuvre pour chaque goutte que l’on souhaite trier. Dans un mode de réalisation préféré, le procédé selon l’invention est mis en œuvre successivement pour toutes les gouttes de phase continue aqueuse générées. Dans d’autres modes de réalisation, le procédé est mis en œuvre uniquement sur certaines des gouttes générées. Par exemple, le procédé peut être mis en œuvre uniquement sur les gouttes ayant une caractéristique particulière, ou bien uniquement sur une goutte sur deux, ou une goutte sur trois. La sélection des gouttes sur lesquelles le procédé est mis en œuvre, qui correspondent aux gouttes que l’on souhaite trier, est à la portée de l’homme du métier en fonction notamment des conditions dans lesquelles le procédé est mis en œuvre et du tri que l’on cherche à effectuer. Le procédé de tri de gouttes selon l’invention peut être mis en œuvre plusieurs fois d’affilée sur un même volume de solution ou suspension aqueuse d’organoïdes, notamment si l’on cherche à trier les organoïdes et/ou les gouttes les contenant selon plusieurs paramètres. Ainsi, dans un mode de réalisation, le procédé de tri de gouttes selon l’invention est mis en œuvre une première fois sur chaque goutte d’un volume de solution ou suspension aqueuse d’organoïdes, puis le contenu d’un des contenants dans lequel certaines gouttes ont été récupérées est à nouveau soumis au procédé selon l’invention. De préférence, le ou les paramètre(s) de tri ou leur(s) valeur(s) lorsque le procédé est mis en œuvre pour la seconde fois est/sont différent(e)s de ceux ou celles lorsque le procédé est mis en œuvre pour la première fois. Dans certains modes de réalisation, le ou les paramètre(s) de tri ou leur(s) valeur(s) lorsque le procédé est mis en œuvre pour la seconde fois est/sont identique(s) à ceux ou celles lorsque le procédé est mis en œuvre pour la première fois. Ceci permet notamment d’augmenter la pureté de l’échantillon trié. Dans certains modes de réalisation, le champ acoustique appliqué à l’étape d. du procédé varie non seulement en termes d’intensité, mais également en termes de phase, ce qui joue sur la direction de déviation des gouttes. Ceci permet de récupérer les gouttes, en fonction de la valeur du paramètre analysé, dans plus de deux contenants différents. Dispositif Un second objet de l’invention est un dispositif adapté pour la mise en œuvre du procédé selon la présente invention. Le dispositif selon l’invention comprend : Un système de génération de gouttes d’une solution ou une suspension aqueuse d’organoïdes, Un système de génération d’un champ acoustique, Un dispositif de mesure et/ou d’analyse d’au moins un paramètre, et Au moins deux contenants de récupération des gouttes. Chaque élément du dispositif est tel que décrit dans la section relative au procédé. Le dispositif peut également comprendre d’autres éléments, lesdits éléments étant adaptés pour mettre en œuvre chacune des étapes décrites dans la section relative au procédé. Exemples Exemple 1 : Mise en œuvre d’un procédé selon l’invention Une suspension de 252 sphéroïdes de tailles variables a été triée selon l’invention avec un dispositif similaire à celui représenté sur la FIG. 1 . Les gouttes ont été générées en sortie d’un capillaire. Le paramètre détecté était le rayon des sphéroïdes R, la valeur de référence R 0 à laquelle la valeur mesurée a été comparée étant de 140 micromètres, soit 0,8 fois le rayon moyen dans l’échantillon (175 micromètres). L’intensité seuil choisie pour la détection était de 160 sur une échelle de gris de 0 à 255. La suspension était constituée de 252 sphéroïdes de cellules 293T dans 50 millilitres de milieu de culture DMEM transparent, soit 1 sphéroïde pour 10 unités de volumes correspondant à 1 goutte (20 microlitres). La suspension a été mise en mouvement dans un capillaire de section carrée et de 800 μm de côté avec un débit constant de 60 microlitres par seconde, imposé par un contrôleur de pression. Le flacon contenant la suspension a été agité continûment durant l’expérience pour maintenir les sphéroïdes en suspension homogène. Les gouttes contenant les sphéroïdes ont été récupérées dans 2 contenants différents selon si le rayon des sphéroïdes mesuré était inférieur à 0,8 x R 0 , ou supérieur ou égal à 0,8 x R 0 . Les gouttes ne contenant pas de sphéroïdes ont été récupérées dans le même contenant que les gouttes contenant des sphéroïdes dont le rayon mesuré était inférieure à 0,8 x R 0 . Les images ont été acquises à la cadence de 400 images par seconde et traitées en temps réel avec un script Python permettant de mesurer la taille des objets présents sur les images. Les gouttes ont été déviées par un champ acoustique généré par 72 transducteurs opérant à 40 kHz et produisant chacun un champ de 120 dB, se faisant face et deux à deux et séparés de 8,4 millimètres (correspondant à 10 longueurs d’ondes à 24 degrés Celsius). Les transducteurs ont été disposés sur deux surfaces hémisphériques imprimées en 3D. L’intensité du champ était nulle (0 dB) lorsqu’aucun sphéroïde de diamètre supérieur ou égal à 0,8 x R 0 n’était identifié, et non nulle sinon. L’intensité et la phase du champ ont été adaptées pour permettre la récupération des gouttes dans les deux contenants. La FIG. 2 présente la distribution de tailles dans la population de sphéroïdes avant tri, et les distributions de tailles dans les populations triées positivement et négativement. Le procédé permet de trier efficacement les sphéroïdes selon leur taille. Procédé de tri de gouttes comprenant une phase continue aqueuse comprenant des organoïdes, comprenant, pour chaque goutte, les étapes suivantes : a. Génération d’une goutte de la phase continue aqueuse contenant des organoïdes, b. Détermination d’une valeur P d’au moins un paramètre de la goutte, c. Comparaison de la valeur P déterminée à l’étape b. à une valeur de référence, d. Application sur la goutte d’un champ acoustique dont l’intensité et/ou la phase dépend du résultat de la comparaison de l’étape c., et e. Récupération de la goutte dans un contenant. Procédé de tri de gouttes selon la revendication 1, dans lequel le champ acoustique appliqué à l’étape d. est d’intensité nulle si la valeur P est inférieure à la valeur de référence, et d’intensité non nulle si la valeur P est supérieure ou égale à la valeur de référence. Procédé de tri de gouttes selon la revendication 1 ou la revendication 2, dans lequel l’intensité et/ou la phase du champ acoustique appliqué à l’étape d. peut prendre n valeurs différentes, n étant un entier supérieur ou égal à 2, et dans lequel le procédé permet de trier les gouttes dans n contenants différents selon les n valeurs d’intensité et/ou de phase du champ acoustique. Procédé de tri de gouttes selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel la goutte est générée à l’étape a. par acheminement de la phase continue aqueuse comprenant des organoïdes dans un capillaire en verre, notamment un capillaire en verre de section carrée, en sortie duquel ils sont encapsulés dans des gouttes d’eau. Procédé de tri de gouttes selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel le paramètre dont la valeur est déterminée à l’étape b. est choisi dans le groupe constitué par la présence d’un organoïde dans la goutte, la forme d’un organoïde présent dans la goutte, la taille d’un organoïde présent dans la goutte, l’épaisseur d’un organoïde présent dans la goutte, la sphéricité d’un organoïde présent dans la goutte, le nombre d’organoïdes présents dans la goutte, la nature des cellules d’un organoïde présent dans la goutte, la fluorescence d’un organoïde et/ou de la capsule d’un organoïde présent dans la goutte et l’intensité lumineuse transmise ou absorbée par un organoïde présent dans la goutte. Procédé de tri de gouttes selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel les organoïdes sont formés dans une coque d’alginate. Procédé de tri de gouttes selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel le diamètre des organoïdes est compris entre 50 micromètres et 4 mm, de préférence entre 300 micromètres et 400 micromètres. Procédé de tri de gouttes selon l’une quelconque des revendications 1 à 7, dans lequel le dispositif permettant la détermination de la valeur P du paramètre à l’étape b. comprend un capteur, tel qu’une caméra, et un dispositif d’analyse d’image tel qu’un logiciel d’analyse d’images. Dispositif de tri de gouttes pour la mise en œuvre du procédé de tri de gouttes selon l’une quelconque des revendications 1 à 8, ledit dispositif comprenant un système de génération de gouttes d’une phase continue aqueuse comprenant des organoïdes, un système de génération d’un champ acoustique, un dispositif de mesure et/ou d’analyse d’au moins un paramètre, et au moins deux contenants de récupération des gouttes. Dispositif selon la revendication 9, dans lequel le dispositif de mesure et/ou d’analyse d’au moins un paramètre comprend une caméra associée à un logiciel d’analyse d’images.