Brevet FR3153664A1 — publié le 20250404

Méthode de diagnostic d’une peau exposée à l’ozone La présente invention concerne une méthode de diagnostic d’une exposition à l'ozone de la peau ainsi qu'une méthode d’identification de composé actif et une méthode d'évaluation de l'efficacité d'un composé, afin de prévenir et/ou de traiter les effets délétères liés à l'oxydation des composés de la peau et à la modulation de l'expression de biomarqueurs en réponse à une exposition à l'ozone. Figure pour l'abrégé : néant Méthode de diagnostic d’une peau exposée à l’ozone La présente invention concerne une méthode de diagnostic d’une exposition de la peau à l'ozone ainsi qu'une méthode d’identification de composé actif et une méthode d'évaluation de l'efficacité d'un composé, afin de prévenir et/ou de traiter les effets délétères liés à l'oxydation de certains constituants de la peau et à la modulation de l'expression de biomarqueurs en réponse à une exposition à l'ozone. L'ozone ou trioxygène a pour formule chimique O 3 , c’est une variété allotropique de l'oxygène, bien moins stable que le dioxygène O 2 , en lequel il tend naturellement à se décomposer. L'ozone est naturellement présent dans l'atmosphère terrestre, formant dans la stratosphère une couche d'ozone qui intercepte les rayons ultraviolets du Soleil. Cependant, dans les basses couches de l'atmosphère (la troposphère) c’est un des polluants de l’air les plus dangereux pour la santé. Cet oxydant très puissant peut être produit par les feux de forêts, les fortes températures, il est aussi produit dans les zones industrielles ou les centres urbains ayant un fort ensoleillement. Ainsi certains milieux sont régulièrement soumis à des pics d’ozone. L’individu dans son environnement quotidien et particulièrement en zone urbaine, peut être soumis à de multiples agressions au niveau des matières kératiniques, et notamment la peau, par ce polluant aérien. En effet l’ozone a des effets délétères liés à l’oxydation de certains constituants de la peau et à la modulation de l’expression des biomarqueurs qu’il induit. De ce qui précède, on comprend l'importance de trouver des biomarqueurs permettant de détecter l’exposition à l’ozone de la peau, afin de pouvoir traiter la peau de manière ciblée. La présente invention a pour objet de satisfaire à ce besoin. La demanderesse a découvert de manière surprenante plusieurs biomarqueurs modulés significativement dans des peaux exposées à l'ozone. Ces biomarqueurs sont des produits issus de l’oxydation des lipides de la peau, ils comprennent des aldéhydes et des formes oxydées du cholestérol encore appelées oxystérols. La liste de biomarqueurs est la suivante : le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et le 7-cétocholestérol. Les méthodes selon l’invention sont donc basées sur la mesure de biomarqueurs modulés de façon significative, dans des tissus reconstruits exposés à l’ozone et/ou sur des échantillons de peaux exposés à l’ozone. De nombreuses publications décrivent les produits de dégradation de lipides de la peau par l’ozone. La réaction de l’ozone sur des liaisons insaturées provoque la formation d’aldéhydes. Les produits qui peuvent être formés, de façon théorique, à partir du squalène ont déjà été décrits. Cependant, compte tenu de la réactivité de l’ozone, de la complexité des lipides de la peau et aussi de la stabilité relative des produits formés, il n’est pas évident de prédire dans la famille des aldéhydes, lesquels pourraient être le ou les bons marqueurs de stress induit par l’ozone. Le stress induit par l’ozone pouvant avoir un impact sur plusieurs heures, il est important d’analyser des marqueurs qui s’accumulent sur la peau. A cause de la faible rétention sur la peau des molécules volatiles, la recherche de biomarqueurs s’est concentrée sur les aldéhydes et les oxystérols. A la connaissance des inventeurs, parmi les nombreux aldéhydes retrouvés sur la peau, de manière surprenante, le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal n’ont jamais été divulgués dans la littérature comme étant corrélés significativement au stress induit par l’ozone. En outre, le nonanal, décanal et/ou de dodécanal sont également corrélés significativement au stress induit par l’ozone. De la même manière, parmi les formes oxydées du cholestérol, le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et le 7-cétocholestérol n’ont jamais été divulgués dans la littérature comme étant corrélés significativement au stress induit par l’ozone. Ainsi, selon un premier de ses aspects, l'invention a pour objet une méthode de diagnostic, préférentiellement in vitro ou ex vivo , d’une exposition à l’ozone de la peau, chez un sujet, ladite méthode comprenant l’étape suivante : a.mesurer la quantité d’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau choisi parmi le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal, le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et le 7-cétocholestérol, dans un échantillon de peau dudit sujet. Eventuellement cette méthode de diagnostic selon l’invention comprend en outre l’étape suivante : b.sur la base de la quantité mesurée à l’étape a., déterminer si la peau dudit sujet a été exposée à l’ozone. L’invention concerne également une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : mesurer la quantité d’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau choisi parmi le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal, le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et le 7-cétocholestérol dans un échantillon de peau d’un sujet, ledit échantillon étant traité avec ledit composé; comparer ladite quantité mesurée à l’étape a) à la quantité correspondante dans un échantillon de peau non traité avec ledit composé ; identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé. L’invention concerne également une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : effectuer un traitement d'un échantillon de peau choisi parmi des kératinocytes, un épiderme reconstruit et une peau reconstruite, par la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé; effectuer une exposition à l’ozone de l’échantillon de peau ; mesurer la quantité d’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau choisi parmi le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal, le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et/ou le 7-cétocholestérol dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé ; comparer ladite quantité mesurée à l’étape c) à la quantité correspondante dans un échantillon de peau exposé à l’ozone et non traité avec ledit composé ; identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé ; étant entendu que l’étape b peut être réalisée après l’étape a et inversement, et que les étapes a et b peuvent être répétées au moins 2 fois. L’invention concerne aussi une méthode d’évaluation de l’efficacité d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau d’un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : mesurer la quantité d’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau choisi parmi le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal, le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et/ou le 7-cétocholestérol dans un échantillon de peau dudit sujet avant le traitement avec ledit composé. traiter la peau dudit sujet avec ledit composé, après l’étape b., mesurer la quantité du ou des mêmes produit(s) issu de l’oxydation des lipides de la peau dans un second échantillon de peau dudit sujet; comparer lesdites quantités mesurées à l’étape a. et à l’étape c. ; évaluer l’efficacité dudit composé candidat quant à la prévention et/ou le traitement des effets délétères de l’ozone sur la peau. L’invention apparaîtra plus clairement à la lecture de la description qui va suivre, donnée uniquement à titre d’exemple non limitatif. Définition s générales Par « sujet » on comprend un être humain, de préférence âgé de 1 mois à 90 ans. Avantageusement, le sujet est susceptible d’avoir été exposé à l’ozone, en particulier à une exposition chronique ou aigue. Par « exposition à l’ozone » on entend ici une exposition chronique ou aigue à l’ozone. Par « exposition chronique », on entend ici une exposition régulière, en particulier journalière, pendant une période donnée, de préférence une période de plus d’un an, en particulier une période de douze mois éventuellement interrompue à une ou plusieurs reprises pendant de courtes durées, typiquement des durées de moins d’un mois, de préférence de moins d’une semaine. Par « exposition aigue », on entend ici une exposition momentanée, en particulier de 12 heures à 5 jours, à au moins un niveau d’ozone supérieur à 0,05 ppm, de préférence supérieur à 0,07 ppm, plus préférentiellement supérieur à 0,09 ppm, encore mieux supérieur à 0,1 ppm. Le stratum corneum est la couche la plus éloignée de l'épiderme, et comprend la surface de la peau. Elle est composée principalement de cellules mortes. Par « échantillon de stratum corneum », on entend ici un échantillon prélevé dans cette couche. Par exemple un tel échantillon peut être prélevé en frottant la surface de la peau ou en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame® appliquée sur la peau. Par « produit issu de l’oxydation des lipides de la peau », on entend ici les lipides oxydés qui peuvent être utilisés comme biomarqueurs d’après l’invention, c’est-à-dire : le nonanal, le décanal, le dodécanal, le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal, le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et le 7-cétocholestérol. Par « aldéhyde », on entend ici le nonanal, le décanal, le dodécanal, le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal. Par « oxystérol », on entend ici le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et le 7-cétocholestérol. Le tridécenal est un aldéhyde de formule C 13 H 24 O avec une insaturation. De préférence le tridécénal est choisi parmi le 2 tridécenal, le 4 tridécenal, le 5 tridécenal, et leurs mélanges. Le pentadécanal est un aldéhyde de formule CH 3 (CH 2 ) 13 CHO. L’octadécanal est un aldéhyde également connu sous le nom d'aldéhyde stéarylique de formule CH 3 (CH 2 ) 16 CHO. Le nonanal également appelé nonanaldéhyde, pélargonaldéhyde ou aldéhyde C-9, est un aldéhyde de formule CH 3 (CH 2 ) 7 CHO. Le décanal est un aldéhyde de formule CH 3 (CH 2 ) 8 CHO. Le dodécanal également appelé lauraldéhyde or dodécyl aldéhyde est un aldéhyde de formule CH 3 (CH 2 ) 10 CHO. Le 5α-6α-epoxycholestérol, et le 5β-6β-epoxycholestérol sont des stéréoisomères. Le 5α-6α-epoxycholestérol a pour formule la formule (I) suivante : Formule (I) Le 5β-6β-epoxycholestérol a pour formule la formule (II) suivante : Formule (II) Le 7-cétocholestérol a pour formule la formule (III) suivante : Formule (III) Par « quantité correspondante », on entend la quantité du même aldéhyde ou du même oxystérol que celui dont la quantité a été mesurée dans une étape précédente. Par « effets délétères de l’ozone », on entend des irritations ou des réactions d’inconfort au niveau de la peau (incluant également la peau du cuir chevelu) qui peuvent se traduire en particulier par des rougeurs, des démangeaisons, des sensations de chaleur de picotement et de tiraillement. La mesure de la quantité des lipides oxydés peut être réalisée par toute technique connue de l’homme du métier et en particulier par chromatographie liquide couplée à un détecteur UV (LC-UV) ou par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse haute résolution (LC-HRMS). Pour la mesure des aldéhydes, les mesures sont effectuées de préférence après dérivatisation au 2,4-dinitrophénylhydrazine (DNPH). De manière préférée, cette mesure est réalisée à partir d’un échantillon de peau et non dans l’air à proximité de la peau. Méthode de diagnostic d’une exposition à l’ozone de la peau La présente invention concerne une méthode de diagnostic d’une exposition à l’ozone de la peau, chez un sujet, ladite méthode comprenant l’étape suivante : mesurer la quantité d’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau choisi parmi le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal, le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et le 7-cétocholestérol, dans un échantillon de peau dudit sujet. De préférence l’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau est choisi parmi le 5α-6α-epoxycholestérol, le tridécenal, le pentadécanal et l’octadécanal. Préférentiellement, cette méthode de l’invention est une méthode de diagnostic d’une exposition chronique ou aigue à l’ozone. La méthode de l’invention est de préférence mise en œuvre in vitro ou ex vivo . L’étape a. de cette méthode peut comprendre en outre la mesure de la quantité de nonanal, de décanal et/ou de dodécanal dans l’échantillon de peau dudit sujet. L’échantillon de peau du sujet utilisé dans la méthode de diagnostic selon l’invention, est un échantillon prélevé, de préférence de manière non-invasive, sur la peau du sujet, préférentiellement sur le visage du sujet, en particulier sur la joue du sujet. Préférentiellement l’échantillon de peau est une biopsie, une microbiopsie notamment réalisée à l’aide d’une aiguille, ou un échantillon de stratum corneum. Ainsi selon un mode de réalisation, cette méthode selon l’invention comprend une étape de prélèvement de l’échantillon de peau du sujet. Cette étape est préférentiellement effectuée de manière non-invasive, et en particulier ne nécessite pas d’anesthésie locale. Selon un mode de réalisation préféré, l’étape de prélèvement de l’échantillon est effectuée en frottant la surface de la peau et/ou en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame® et/ou en essuyant la peau avec un papier absorbant (comme un papier filtre). Dans un mode de réalisation de l’invention, pour mesurer la quantité d’un ou plusieurs aldéhyde(s), l’étape de prélèvement de l’échantillon est effectuée en frottant la surface de la peau avec un papier absorbant, de préférence imbibé avec un monoalcool tel que l’éthanol. Dans un mode de réalisation de l’invention, pour mesurer la quantité d’un ou plusieurs oxystérol(s), l’étape de prélèvement de l’échantillon est effectuée en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame®. Eventuellement la méthode de diagnostic selon l’invention comprend en outre l’étape suivante : b. sur la base la quantité mesurée à l’étape a., déterminer si la peau dudit sujet a été exposée à l’ozone. Dans un mode de réalisation particulier, l'étape b. est réalisée après comparaison de la quantité mesurée de cet aldéhyde ou oxystérol à l’étape a. avec une valeur de référence. Dans un mode de réalisation, la valeur de référence est déterminée par la quantité moyenne de cet aldéhyde ou oxystérol mesurée dans une population déterminée, qui n’a pas été soumise à une exposition à l’ozone, notamment une exposition aigue ou chronique à l’ozone. Dans un mode de réalisation particulier, la valeur de référence est déterminée par la quantité moyenne de cet aldéhyde ou oxystérol mesurée chez des êtres humains âgées de 1 mois à 90 ans. Conformément à l’invention une valeur de référence peut être déterminée par une pluralité d'échantillons, de préférence plus de 20, 30, 50, 100, 200 ou 500 échantillons. Le terme « comparaison » ici fait référence au fait de déterminer si la quantité de cet aldéhyde est essentiellement identique à une valeur de référence ou diffère de celle-ci. De préférence, la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol est considérée comme différente d'une valeur de référence si la différence observée est statistiquement significative. Si la différence n’est pas statistiquement significative, la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol et la valeur de référence sont essentiellement identiques. Sur la base de cette comparaison, on peut déterminer si la peau a été exposée à l’ozone. Typiquement, la peau est considérée comme ayant été exposée à l’ozone lorsque la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol est significativement supérieure à la valeur de référence et la peau n’est pas considérée comme ayant été exposée à l’ozone lorsque la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol est essentiellement identique ou significativement inférieure à la valeur de référence. Préférentiellement, la méthode selon l’invention comprend une étape de traitement de l’échantillon afin de préparer la mesure de la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol. Par exemple si l’échantillon de peau a été obtenu en essuyant la peau avec un papier absorbant (comme un papier filtre par exemple imbibé d’éthanol), l’échantillon peut être évaporé puis repris dans une solution d’acétonitrile afin de réaliser une dérivatisation par exemple une dérivatisation au DNPH. Eventuellement la méthode de diagnostic selon l’invention comprend en outre l’étape suivante : c. si la peau dudit sujet est déterminée comme ayant été exposée à l’ozone à l’étape b., traiter la peau dudit sujet avec une composition cosmétique permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone. Par « composition cosmétique permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone » on comprend toute composition cosmétique connue de l’homme du métier permettant de réduire et/ou de ralentir l’apparition des effets délétères de l’ozone tels que les irritations ou les réactions d’inconfort au niveau de la peau, les rougeurs, les démangeaisons, les sensations de chaleur, de picotement et de tiraillement provoqués par l’ozone. Dans un mode de réalisation de l’invention, la composition cosmétique comprend un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau identifiée par la méthode de l’invention. Méthode s d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau L’invention porte également sur une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : mesurer la quantité d’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau choisi parmi le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal, le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et le 7-cétocholestérol, dans un échantillon de peau d’un sujet, ledit échantillon étant traité avec ledit composé; comparer ladite quantité mesurée à l’étape a) à la quantité correspondante dans un échantillon de peau non traité avec ledit composé ; identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé. De préférence l’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau est choisi parmi le 5α-6α-epoxycholestérol, le tridécenal, le pentadécanal et l’octadécanal. La méthode d’identification selon l’invention peut également comprendre la mesure de la quantité de nonanal et/ou de décanal et/ou de dodécanal dans l’échantillon de peau dudit sujet à l’étape a, cette mesure pourra alors être comparée à la quantité correspondante dans un échantillon de peau non traité avec ledit composé à l’étape b, afin d’identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau. Selon un mode de réalisation préféré, les échantillons de peau d’un sujet utilisés dans la méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau ci-dessus, sont choisis parmi un explant de peau humaine, une biopsie cutanée, une microbiopsie notamment réalisée à l’aide d’une aiguille, cutanée et un échantillon de stratum corneum. La méthode selon l’invention comprend une étape de prélèvement de l’échantillon de peau du sujet. Cette étape est préférentiellement effectuée de manière non-invasive, et en particulier ne nécessite pas d’anesthésie locale. Selon un mode de réalisation préféré, l’étape de prélèvement de l’échantillon est effectuée en frottant la surface de la peau et/ou en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame®, et/ou en essuyant la peau avec un papier absorbant (comme un papier filtre). Dans un mode de réalisation de l’invention, pour mesurer la quantité d’un ou plusieurs aldéhyde(s), l’étape de prélèvement de l’échantillon est effectuée en frottant la surface de la peau avec un papier absorbant, de préférence imbibé avec un monoalcool tel que l’éthanol. Dans un mode de réalisation de l’invention, pour mesurer la quantité d’un ou plusieurs oxystérol(s), l’étape de prélèvement de l’échantillon est effectuée en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame®. Préférentiellement, la méthode selon l’invention comprend une étape de traitement des échantillons afin de préparer la mesure de la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol. Par exemple si l’échantillon de peau a été obtenu en utilisant essuyant la peau avec un papier absorbant (comme un papier filtre par exemple imbibé d’éthanol), l’échantillon peut être évaporé puis repris dans une solution d’acétonitrile puis réaliser une dérivatisation par exemple une dérivatisation au 2,4-dinitrophénylhydrazine (DNPH). Dans un mode de réalisation particulier, la méthode selon l’invention comprend une étape supplémentaire d‘exposition des échantillons à l’ozone. Cette étape est préférentiellement réalisée sur les deux échantillons dans les mêmes conditions. Elle peut être réalisée avant ou après traitement de l’échantillon de peau avec ledit composé. L’invention concerne également une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : effectuer un traitement d'un échantillon de peau choisi parmi des kératinocytes, un épiderme reconstruit et une peau reconstruite, par la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé; effectuer une exposition à l’ozone de l’échantillon de peau ; mesurer la quantité d’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau choisi parmi le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal, le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et/ou le 7-cétocholestérol dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé ; comparer ladite quantité mesurée à l’étape c) à la quantité correspondante dans un échantillon de peau exposé à l’ozone et non traité avec ledit composé ; identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé ; étant entendu que l’étape b peut être réalisée après l’étape a et inversement, et que les étapes a et b peuvent être répétées au moins 2 fois. De préférence l’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau est choisi parmi le 5α-6α-epoxycholestérol, le tridécenal, le pentadécanal et l’octadécanal. Préférentiellement, la méthode selon l’invention comprend une étape de traitement des échantillons afin de préparer la mesure de la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol. Par exemple si l’échantillon de peau a été obtenu en utilisant essuyant la peau avec un papier absorbant (comme un papier filtre par exemple imbibé d’éthanol), l’échantillon peut être évaporé puis repris dans une solution d’acétonitrile puis réaliser une dérivatisation par exemple une dérivatisation au 2,4-dinitrophénylhydrazine (DNPH). Dans un mode de réalisation préféré, la méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, comprend les étapes suivantes : effectuer un premier traitement d'un échantillon de peau choisi parmi des kératinocytes, un épiderme reconstruit et une peau reconstruite, par la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé; effectuer une première exposition à l’ozone dudit échantillon de peau ; effectuer un second traitement de l’échantillon de peau par la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé ; effectuer une seconde exposition à l’ozone dudit échantillon de peau ; effectuer un troisième traitement de l’échantillon de peau par la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé ; effectuer une troisième exposition à l’ozone dudit échantillon de peau ; mesurer la quantité d’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau choisi parmi le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et le 7-cétocholestérol dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé ; comparer ladite quantité mesurée à l’étape g) à la quantité correspondante dans un échantillon de peau exposé à l’ozone et non traité avec ledit composé ; identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé. De préférence l’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau est le 5α-6α-epoxycholestérol, Dans un autre mode de réalisation préféré, la méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, comprend les étapes suivantes : effectuer un traitement d'un échantillon de peau choisi parmi des kératinocytes, un épiderme reconstruit et une peau reconstruite, par la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé; effectuer une exposition à l’ozone de l’échantillon de peau ; mesurer la quantité d’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau choisi parmi le tridécenal, le pentadécanal et l’octadécanal dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé ; comparer ladite quantité mesurée à l’étape c) à la quantité correspondante dans l’échantillon de peau exposé à l’ozone et non traité avec ledit composé ; identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité d’aldéhyde mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité d’aldéhyde mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé ; étant entendu que l’étape b peut être réalisée après l’étape a et inversement. Préférentiellement, la méthode selon l’invention comprend une étape de traitement des échantillons afin de préparer la mesure de la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol. Par exemple si l’échantillon de peau a été obtenu en utilisant essuyant la peau avec un papier absorbant (comme un papier filtre par exemple imbibé d’éthanol), l’échantillon peut être évaporé puis repris dans une solution d’acétonitrile puis réaliser une dérivatisation par exemple une dérivatisation au 2,4-dinitrophénylhydrazine (DNPH). Les méthodes d’identification d’un composé de l’invention sont de préférence mises en œuvre in vitro ou ex vivo . Les étapes de mesure a, c ou g de ces méthodes d’identification d’un composé selon l’invention peuvent comprendre en outre la mesure de la quantité de nonanal, décanal et/ou de dodécanal dans l’échantillon de peau. Cette mesure pourra alors être comparée à la quantité correspondante dans un échantillon de peau non traité avec ledit composé, afin d’identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau. De préférence, dans les méthodes d’identification d’un composé de l’invention, la seule différence entre l’échantillon de peau traité avec ledit composé et l’échantillon de peau non traité avec ledit composé est ledit (ou lesdits) traitement(s) avec le composé. Dans un mode de réalisation particulier, ledit épiderme reconstruit ou peau reconstruite peut être recouvert de squalène avant la ou les étapes d’exposition à l’ozone, par exemple les étapes b, d ou f, notamment dans le cas où les aldéhydes sont mesurés aux étapes a, c ou g. Typiquement, le traitement de l’échantillon avec ledit composé comprend la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé pendant au moins 5 minutes, au moins 10 minutes ou encore au moins 20 minutes. Typiquement, la mesure de la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol est réalisée au moins 5 minutes, au moins 10 minutes ou encore au moins 20 minutes après le dernier traitement de l’échantillon avec ledit composé. Les étapes b, d ou h de comparaison des méthodes d’identification ici font référence au fait de déterminer si la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée aux étapes de mesure a, c ou g est essentiellement identique à la quantité de ce même aldéhyde ou oxystérol mesurée dans un échantillon de peau non traité avec ledit composé. De préférence, la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol est considérée comme différente si la différence observée est statistiquement significative. Si la différence n’est pas statistiquement significative, les deux quantités de cet aldéhyde ou oxystérol sont essentiellement identiques. Sur la base de cette comparaison, on peut déterminer si le composé permet de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau. Typiquement, le composé est considéré comme permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol est significativement inférieure dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé par rapport à la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol mesurée dans l’échantillon qui n’a pas été traité avec ledit composé, alternativement le composé n’est pas considéré comme permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol mesurée est essentiellement identique ou significativement supérieure dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé par rapport la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol mesurée dans l’échantillon qui n’a pas été traité avec ledit composé. Dans un mode de réalisation, les étapes d’exposition à l’ozone b, d ou f durent au moins 5 heures, plus particulièrement au moins 10 heures et de manière préférée au moins 18 heures. Ces étapes peuvent également être entrecoupées par des périodes d’incubation dans une atmosphère normale, ambiante. Typiquement les échantillons sont incubés dans une atmosphère enrichie en ozone pendant 18h puis une atmosphère normale pendant les 6 heures suivantes et ensuite à nouveau dans une atmosphère enrichie en ozone pendant 18h. Dans un autre mode de réalisation, les étapes d’exposition à l’ozone b, d et f durent de 10 à 120 minutes, de préférence de 20 à 60 minutes. Ces étapes peuvent également être entrecoupées par des périodes d’incubation dans une atmosphère normale, ambiante. Par « atmosphère » dans lequel l’échantillon de peau est incubé, on entend le gaz ou mélange de gaz dans lequel l’échantillon est placé. De préférence l’échantillon est incubé dans une atmosphère similaire à l’air ambiant. Par « atmosphère enrichie en ozone », on entend une atmosphère similaire à l’air ambiant comprenant au moins 0,05 ppm (partie par million) d’ozone, de préférence au moins 0,07 ppm d’ozone, au moins 0,1 ppm d’ozone ou encore au moins 0,3 ppm d’ozone. Méthode d’évaluation de l’efficacité d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau L’invention porte également sur une méthode d’évaluation de l’efficacité d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau d’un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : mesurer la quantité d’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau choisi parmi le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal, le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et le 7-cétocholestérol, dans un échantillon de peau dudit sujet avant le traitement avec ledit composé. traiter la peau dudit sujet avec ledit composé, après l’étape b., mesurer la quantité du ou des mêmes produit(s) issu de l’oxydation des lipides de la peau, , dans un second échantillon de peau dudit sujet; comparer lesdites quantités mesurées à l’étape a. et à l’étape c. ; évaluer l’efficacité dudit composé candidat quant à la prévention et/ou le traitement des effets délétères de l’ozone sur la peau. La méthode de l’invention est de préférence mise en œuvre in vitro ou ex vivo . De préférence l’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau est choisi parmi le 5α-6α-epoxycholestérol, le tridécenal, le pentadécanal et l’octadécanal. Les étapes a. et c. de cette méthode peuvent comprendre en outre la mesure de la quantité de nonanal, et/ou de décanal et/ou de dodécanal dans les échantillons de peau dudit sujet. La comparaison de ces mesures permettant d’évaluer l’efficacité dudit composé candidat quant à la prévention et/ou le traitement des effets délétères de l’ozone sur la peau. Les échantillons de peau du sujet utilisés dans la méthode d’évaluation selon l’invention, sont prélevés de préférence de manière non-invasive, sur la peau du sujet, préférentiellement sur le visage du sujet, en particulier sur la joue du sujet. Préférentiellement l’échantillon de peau est une biopsie, une microbiopsie notamment réalisée à l’aide d’une aiguille, ou un échantillon de stratum corneum. Ainsi selon un mode de réalisation, cette méthode selon l’invention comprend plusieurs étapes de prélèvement d’échantillon de peau du sujet. Cette étape est préférentiellement effectuée de manière non-invasive, et en particulier ne nécessite pas d’anesthésie locale. Selon un mode de réalisation préféré, l’étape de prélèvement de l’échantillon est effectuée en frottant la surface de la peau ou en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame®, et/ou en essuyant la peau avec un papier absorbant (comme un papier filtre). Dans un mode de réalisation de l’invention, pour mesurer la quantité d’un ou plusieurs aldéhyde(s), les étapes de prélèvement de l’échantillon sont effectuées en frottant la surface de la peau avec un papier absorbant, de préférence imbibé avec un monoalcool tel que l’éthanol. Dans un mode de réalisation de l’invention, pour mesurer la quantité d’un ou plusieurs oxystérol(s), les étapes de prélèvement de l’échantillon sont effectuées en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame®. De préférence, la seule différence entre l’échantillon de peau de l’étape a. et l’échantillon de peau de l’étape c. est ledit traitement avec le composé. L’échantillon de peau de l’étape c. est prélevé après que la peau dudit sujet ait été traité avec ledit composé. Dans un mode de réalisation, l’échantillon de peau de l’étape c. est prélevé après que la peau dudit sujet ait été traitée avec ledit composé pendant au moins 14 jours, de préférence au moins 28 jours. Typiquement, cet échantillon est prélevé au moins 5 minutes, au moins 10 minutes ou encore au moins 20 minutes après le dernier traitement de l’échantillon avec ledit composé. Préférentiellement, la méthode selon l’invention comprend une étape de traitement des échantillons afin de préparer la mesure de la quantité de lipide oxydé mesuré. Par exemple si l’échantillon de peau a été obtenu en utilisant essuyant la peau avec un papier absorbant (comme un papier filtre par exemple imbibé d’éthanol), l’échantillon peut être évaporé puis repris dans une solution d’acétonitrile puis réaliser une dérivatisation par exemple une dérivatisation au DNPH. L’étape d. de comparaison ici fait référence au fait de déterminer si la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée à l’étape a. est essentiellement identique à la quantité de ce même aldéhyde ou oxystérol mesurée à l’étape c. De préférence, la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol est considérée comme différente si la différence observée est statistiquement significative. Si la différence n’est pas statistiquement significative, les deux quantités de cet aldéhyde ou oxystérol sont essentiellement identiques. Sur la base de cette comparaison, on peut évaluer l’efficacité d’un composé à prévenir et/ou traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau. Typiquement, plus la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol est inférieure dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé par rapport à la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol mesurée dans l’échantillon qui n’a pas été traité avec ledit composé, plus le composé est considéré efficace pour prévenir et/ou traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau. Alternativement le composé n’est pas considéré efficace pour prévenir et/ou traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol mesurée est essentiellement identique ou significativement supérieure dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé par rapport la quantité de cet aldéhyde ou oxystérol mesurée dans l’échantillon qui n’a pas été traité avec ledit composé. Exemple: Exemple 1 : Etude et analyse des aldéhydes Matériel et méthode : 1-Système d’exposition à l’ozone in vitro 1.1- Dispositif externe à l’incubateur : Pour mimer une pollution à l’ozone le laboratoire utilise un analyseur/générateur d’ozone MEGATEC 49i couplé à une pompe externe, et relié également à un incubateur de culture régulé à 37°C, 5% CO 2 et saturé en humidité (environ 95%). La pompe externe permet de prélever de l’air ambiant et d’alimenter l’analyseur/générateur d’ozone MEGATEC. L’air va alors passer devant la lampe UV de l’appareil (réglée à la longueur d’onde de 185nm) qui va transformer une partie des molécules d’oxygène (O 2 ) de l’air en molécules d’ozone (O 3 ). L’air est alors enrichi en ozone. Cet air enrichi en ozone va pouvoir alors être transféré dans l’incubateur contenant les plaques de culture avec le modèle de peau reconstruite T-Skin TM . L’analyseur/générateur MEGATEC permet de régler et de contrôler : Le débit d’air enrichi en ozone (alimentant l’incubateur) au moyen d’un détendeur placé en amont du circuit dans l’analyseur/générateur MEGATEC. La concentration en ozone généré en réglant la puissance de la lampe UV de l’analyseur/générateur MEGATEC. Par ailleurs l’analyseur/générateur MEGATEC possède une seconde pompe et un système d’analyse en interne qui permettent de mesurer la concentration réelle en ozone : soit en sortie d’appareil (concentration générée, en amont de l’exposition dans l’incubateur), soit dans l’incubateur (concentration résiduelle, en aval de l’exposition). 1.2- Dispositif interne à l’incubateur : Au sein de l’incubateur un système de fluidique développé au laboratoire permet de distribuer la même quantité d’ozone sur chaque insert de peau reconstruite. Ce système est semi-ouvert pour permettre à la fois : une distribution homogène de l’ozone sur le dessus des plaques, et une bonne régulation des conditions de culture des peaux reconstruites. Par ailleurs, le couvercle de chaque plaque de culture (généralement en polystyrène, matériel sensible à l’ozone) est remplacé par un couvercle spécifique pour l’exposition : il s’agit d’un couvercle en PTFE ou en PEEK percé au-dessus de chaque insert de peau reconstruite, et permettant ainsi une exposition directe de la surface des peaux reconstruites à l’air enrichi en ozone. De plus ce couvercle permet de protéger le milieu de culture pour éviter son oxydation par l’ozone, afin de ne réaliser qu’une exposition de la surface des peaux. 2-Exposition à l’ozone de peaux reconstruites in vitro pour les analyses des aldéhydes 2.1- Réception et culture du modèle de peau reconstruite T-Skin TM Le modèle de peau reconstruite utilisé est le modèle de peau reconstruite T-Skin TM produit et fourni par la société EPISKIN SA (FR-69007, Lyon). Il s’agit d’un modèle de peau reconstruite composé : D’un derme reconstruit constitué d’une lattice de collagène 1, contenant des fibroblastes d’origine humaine extraits de plasties mammaires issues de donneurs sains adultes (déchet chirurgical obtenu avec le consentement des patientes lors d’interventions de chirurgie esthétique de réductions mammaires). D’un épiderme reconstruit réalisé à partir de kératinocytes d’origine humaine extraits de plasties mammaires issues de donneurs sains adultes (déchet chirurgical obtenu avec le consentement des patientes lors d’interventions de chirurgie esthétique de réductions mammaires). Ce modèle est cultivé dans un insert de culture de 4,5cm² qui permet de le suspendre au-dessus du milieu de culture et de le cultiver à l’interface air liquide. Dans cet insert la lattice de collagène, ou équivalent dermique, recouvre une surface qui peut varier de 2 à 2,5 cm² au centre de l’insert. L’épiderme lui recouvre généralement l’ensemble des 4,5cm² de l’insert. Le modèle T-Skin TM est réceptionné au laboratoire après 12 jours de culture du derme (J12). L’épiderme lui est à 7 jours de culture et il est relativement immature (peu différencié). Durant le transport ces inserts sont posés sur un milieu de culture nutritif semi-solide adapté au transport. A réception, les inserts sont rapidement transférés dans des nouvelles plaques de culture 6 puits dites « deep well » permettant de mettre 8,5ml de milieu de culture liquide sous chaque insert (culture à l’interface air liquide). Ces plaques peuvent être les plaques de la marque Corning référence 355467. Le milieu de culture utilisé est celui fourni par la société EPISKIN pour les kits T-Skin TM : milieu dénommé « Culture medium for T-Skin ». Les peaux reconstruites sont placées ensuite dans un incubateur de culture régulé à 37°C, 5% CO 2 et avec une humidité saturée (environ 95% d’humidité). Le milieu de culture est ensuite remplacé de la même manière à J13 et J15 (derme). Enfin à J18, les inserts sont placés dans des plaques de culture 6 puits standards au format SBS (type plaque de la marque COSTAR référence 3506) avec 2,5ml de milieu culture pour T-Skin TM sous chaque insert. Par la suite ces plaques sont remplacées avec le milieu de culture également à J19 avant exposition. 2.2- Préparation de la solution de squalène pour application topique sur le modèle de peaux reconstruites Le squalène est un composé lipidique spécifique du sébum présent en quantité relativement importante dans le sébum (environ 12-20% selon M. Picardo et al., Sebaceous gland lipids, Dermato-endocrinology 2009) Le squalène est un lipide insaturé qui présente 6 doubles liaisons. Formule (IV) La référence commerciale S3626 fournie par SIGMA-ALDRICH est utilisée. Ce squalène est mis en solution dans de l’éthanol absolu à la concentration de 0,378 mg/ml. Lors de l’étalement sur T-Skin TM on applique 30µL de cette solution par insert, et cette solution est répartie uniquement sur la zone du modèle où se trouve la lattice de collagène. On estime cette surface à 2,27cm² en moyenne. On obtient par conséquent environ 5µg de sébum/cm². 2.3- Protocole d’application topique du squalène sur T-Skin TM : La solution de squalène est appliquée à J19 avant exposition à l’ozone selon le protocole suivant : On dépose un volume de solution précis de 30µL au centre du modèle, On prend une tige en verre avec une extrémité ronde que l’on pré-mouille avec un petit volume de solution de squalène, On vient au contact de la goutte de solution placée au centre du modèle de peau, et on entraine la goutte dans un mouvement circulaire qui s’écarte progressivement du centre vers le bord de la peau. Le contact entre la tige en verre et le modèle de peau doit être le plus faible possible pour ne pas engendrer un stress sur le modèle. 2.4- Protocole d’exposition à l’ozone du modèle T-Skin TM : Pour ce type d’exposition le générateur d’ozone est réglé sur des valeurs basses : Ozone généré en sortie d’appareil : environ 0,18ppm pour une concentration mesurée à l’intérieur de l’incubateur inférieure à 0,1ppm Le débit de sortie de l’air enrichi en ozone au-dessus de chaque peau reconstruite est d’environ 30 ml/min (à noter que les sorties d’ozone sont à plus de 10cm des peaux reconstruites à l’intérieur de l’incubateur pour éviter un stress direct du flux de sortie). Dans ce protocole nous réalisons une seule exposition très courte de 20 ou de 60 min au stade T-Skin TM J19. Pour modéliser la présence d’un sébum très simplex, certains échantillons subissent une application de la solution de squalène à raison de 5µg/cm² (30µL d’une solution à 0,378mg/ml de squalène étalés sur environ 2,27cm² correspondant à la surface du modèle de peau complet) préparée selon le protocole décrit plus haut. Une fois les peaux prêtes à être exposées, les couvercles standards en polystyrène sont remplacés par des couvercles percés en PEEK ou en PTFE. Une partie des échantillons sont traités sous ozone, et une autre partie, les témoins, sont préparés exactement de la même façon, mais incubés dans un incubateur classique sans ozone. Une fois l’exposition terminée, les peaux reconstruites sont prélevées dès J19 en séparant épiderme et derme afin d’analyser les différents aldéhydes sur les épidermes. 3-Exposition de volontaires sains à l’ozone en mini-zone in vivo L’étude clinique a inclus 10 volontaires (8 femmes et 3 hommes), ayant un âge moyen de 36,2 ans, de phototype III-IV et une quantité de sébum mesurée sur le front supérieur à 140 µg/cm 2 (casual level de 146 à 299 µg/cm 2 ). Les expositions en mini-zones ont été réalisées à l’aide de cloches reliées à un générateur d’ozone, d’air médical ou à l’air ambiant, posées sur la peau du dos des volontaires (Controlled Pollution Exposure System (CPES)). Le système de génération d’ozone et les cloches utilisées sont décrits dans la publication Curpen et al., 2020 (A novel method for evaluating the effect of pollution on the human skin under controlled conditions, Skin Res Technol.). Les expositions à l’ozone et à l’air médical ont été réalisées de façon aléatoire gauche-droite sur chaque volontaire. 3 conditions ont été réalisées : 6 expositions à 0,3 ppm (débit de gaz : 0.2-0.3 l/min), trois fois par semaine pendant 2 semaines. Chaque exposition a duré 2 heures. 6 expositions à de l’air médical (débit de gaz : 0.2-0.3 l/min), selon le même protocole. 6 expositions à de l’air ambiant (cloche sans flux de gaz), selon le même protocole. Des échantillons de sébum sur papier filtre ont été prélevés avant et 1h après chaque exposition à J1 (1 exposition), J5 (3 expositions) et J12 (6 expositions). Le sébum est absorbé sur un filtre Millipore 0,45 µm humidifié avec de l'éthanol et essuyé sur la peau 10 fois avec application de pression. 4-Analyse des aldéhydes sur des prélèvements in vitro et in vivo 4.1- Extraction des échantillons in vitro d’épiderme des peaux reconstruites T-skin Ajout 400µl d’acétonitrile (ACN) dans l’Eppendorf qui contient l’épiderme Agiter 5 cycles au vibro-broyeur (30Hz, 2min) Centrifuger 5min à 10000 tours/min Récupérer 200µl de surnageant dans un flacon en verre ambré Ajouter 20µl d’une solution de 2,4-dinitrophénylhydrazine (DNPH) (à 500µg/ml ACN avec HCl 1M) Attendre 1h Les aldéhydes dérivés au DNPH seront prêts à être analysés 4.2- Extraction des prélèvements de Sébum in vivo après exposition à l’ozone Les prélèvements sont réalisés juste après les expositions à l’ozone Mode de prélèvement : par essuyage avec un papier filtre (Durapore HVLP04700) imbibé par 150µl Ethanol. Mettre dans un flacon à scintillation et conserver à -20°C jusqu’au jour de l’analyse Extraction les papiers filtres en ajoutant 4ml de MeOH. Evaporer à sec puis reprendre dans 200µl ACN Réaliser la dérivatisation au DNPH (comme au 4.1) puis analyser par LC-UV et MS 4.3- Analyse et quantification des aldéhydes par chromatographie liquide couplée à un détecteur UV, LC-UV Conditions LC : -colonne ACENTIS RP Amide Express (2.1x150mm, 2.7µm Supelco 53914-u) -Eluant (0.5ml/min) [Table 1] Tableau 1 : Temps (min) H 2 O/ACN (50/50) ACN initial 0.2 10 14 19 60 60 0 0 60 40 40 100 100 40 -Injection 3µl, Détection UV 360nm 4.4- Analyse et quantification des aldéhydes par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse haute résolution (LC-HRMS) Conditions LC semblables au paragraphe 4.3 Détecteur HRMS Orbitrap modèle Exploris 120, permettant l’identification sous forme des dérivés DNPH. Résultats Aldéhydes in vitro Le tableau 2 montre que la quantité des 5 aldéhydes présentés (nonanal C9:0, pentadécanal C15:0, octadécanal C18:0, décanal C10 :0 et dodécanal C12 :0) augmente suite à une exposition des peaux reconstruites à l’ozone de 20 ou 60 minutes à 0,2 ppm, en présence de squalène, par rapport au contrôle non exposé à l’ozone (0 min). [Table 2] Tableau 2 : - Ozone + Squalène + Ozone + Squalène + Ozone + Squalène Temps exposition à l’ozone 0 min 20 min 60 min Nonanal C9:0 Médiane 3334433 2075700 8632513 DMA 229002 187521 892111 Décanal C10:0 Médiane 246962 266033 936877 DMA 90450 19494 37774 Dodécanal C12:0 Médiane 159394 290253 696688 DMA 14793 52725 105947 Pentadécanal C15:0 Médiane 2251134 2760404 6739628 DMA 474091 67636 269975 Octadécanal C18:0 Médiane 11310100 15271789 40903397 DMA 900111 479028 4997848 Tableau 2 : Aldéhydes quantifiés en unité arbitraire in vitro sur le modèle T-skin exposé à l’ozone (20 ou 60 minutes à 0,2 ppm), en présence ou non de squalène en application topique à 5000 ng/cm 2 . - : sans ; + : avec ; DMA Déviation Moyenne Absolue Aldéhydes in vivo Les tableaux 3-5 montrent que la quantité des aldéhydes présentés (nonanal C9:0, tridecenal, pentadécanal C15:0, octadécanal C18:0, décanal C10 :0 et dodécanal C12 :0) augmente dans des échantillons prélevés par papier filtre sur la peau de volontaires exposés à l’ozone par rapport à ceux non exposés ou exposés à de l’air médical. Les résultats sont similaires à J1, J5 et J12. La variabilité inter-individuelle montre des déviations moyennes absolues importantes. Cependant une analyse statistique à l’aide d’un test de Wilcoxon en conditions appariées montre une significativité entre les conditions Air médical et ozone. [Table 3] Tableau 3 : Jour 1 Air médical Non exposé Ozone Air médical vs Ozone Aldéhyde Médiane DMA Médiane DMA Médiane DMA p-value Nonanal C9:0 1221,4 283,0 1144,0 208,1 1359,5 485,2 0,0153 Décanal C10:0 1155,2 215,5 1081,6 323,1 3228,1 2523,5 0,000036 Dodécanal C12:0 2111,7 785,9 2417,5 840,1 3530,0 2787,4 0,000105 Tridécenal 1,0 0,0 1,0 0,0 1553,3 1472,6 0,000254 Pentadécanal C15 0 2644,3 768,5 2581,0 753,5 5040,6 3514,3 0,0000095 Octadécanal C18:0 3043,0 1284,4 3113,8 708,8 5280,8 3261,5 0,0000057 [Table 4] Tableau 4 : Jour 5 Air médical Non exposé Ozone Air médical vs Ozone Aldéhyde Médiane DMA Médiane p-value Médiane DMA Nonanal C9:0 1271,9 209,7 1109,7 199,2 1507,8 280,9 0,0266 Décanal C10:0 1103,0 289,7 969,2 256,8 1724,2 908,7 0,0136 Dodécanal C12:0 2254,6 1016,3 2368,7 747,6 3829,9 1624.4 0,0023 Tridecenal C13 :1 1,0 0,0 1,0 0,0 810,8 723,5 0,01018 Pentadécanal C15:0 2503,0 1176,0 2456,9 687,3 6060,9 3219,3 0,003654 Octadécanal C18:0 2801,0 1567,1 2845,4 872,0 6526,0 3173,5 0,002325 [Table 5] Tableau 5 : Jour 12 Air médical Non exposé Ozone Air médical vs Ozone Aldéhyde Médiane DMA Médiane p-value Médiane DMA Nonanal C9:0 1208,7 173,9 1187,7 356,7 1431,4 406,3 0,0023 Dodécanal C12:0 1989,6 563,4 2459,8 957,0 3437,6 1772,4 0,00032 Tridecenal C13 :1 1,0 0,0 1,0 0,0 614,2 909,1 0,00166 Pentadécanal C15:0 2322,3 632,3 2794,8 999,0 4386,7 2878,5 0,000168 Octadécanal C18:0 2805,6 751,2 3203,7 1092,2 4759,5 2847,8 0,000105 Tableau x 3-5 : Aldéhydes quantifiés en unité arbitraire à Jour 1, Jour 5 ou Jour 12 in vivo sur des volontaires sains exposés à l’ozone. DMA = Déviation Moyenne Absolue. L’analyse statistique a été réalisée à l’aide d’un test de Wilcoxon en conditions appariées entre les conditions Air médical et Ozone. Exemple 2 : Etude et analyse des oxystérols Matériel et méthode : 1-Système d’exposition à l’ozone in vitro et modèle de peau Le dispositif externe et le dispositif interne à l’incubateur sont les mêmes que ceux décrits dans l’exemple 1 partie 1.1 et 1.2. Le modèle de peau reconstruite utilisé est le modèle de peau reconstruite T-Skin TM produit et fourni par la société EPISKIN SA (FR-69007, Lyon) préparé tel que décrit au point 2.1 de l’exemple précédent. A partir de J18 le milieu des plaques est remplacé avec le milieu de culture tous les jours. 2-Expositions répétées du modèle T-Skin TM à l’ozone 0,1 ppm : Pour ce type d’exposition le générateur d’ozone est réglé sur des valeurs basses : Ozone généré en sortie d’appareil : environ 0,130 ppm pour une concentration mesurée à l’intérieur de l’incubateur inférieure à 0,1 ppm Le débit de sortie de l’air enrichi en ozone au-dessus de chaque peau reconstruite est d’environ 20 ml/min (à noter que les sorties d’ozone sont à plus de 10cm des peaux reconstruites à l’intérieur de l’incubateur pour éviter un stress direct du flux de sortie). Les expositions sont réalisées trois fois successivement : 18h entre J18 et J19, 18h entre J19 et J20, et 18h entre J20 et J21. Entre chaque exposition le modèle est à l’incubateur sans ozone pendant un peu moins de 6h. Une fois les peaux prêtes à être exposées, les couvercles standards en polystyrène sont remplacés par des couvercles percés en PEEK ou en PTFE. Une partie des échantillons sont traités sous ozone, et une autre partie, les témoins, sont préparés exactement de la même façon, mais incubés dans un incubateur classique sans ozone. A J22, les échantillons de peaux reconstruites ont été prélevés, l’épiderme a été séparé du derme, coupé en deux et congelé à -80°C pour les analyses. 3- Expositions répétées du modèle T-Skin TM à l’ozone 0,4 ppm : Pour ce type d’exposition le générateur d’ozone est réglé sur des valeurs modérées en ozone mais un peu supérieures à des pics réalistes d’ozone : Ozone généré en sortie d’appareil : environ 0,4ppm pour une concentration mesurée à l’intérieur de l’incubateur inférieure à 0,3ppm Le débit de sortie de l’air enrichi en ozone au-dessus de chaque peau reconstruite est d’environ 20 ml/min (à noter que les sorties d’ozone sont à plus de 10cm des peaux reconstruites à l’intérieur de l’incubateur pour éviter un stress direct du flux de sortie). Les expositions sont réalisées deux fois successivement : 18h entre J18 et J19, et 18h entre J20 et J21. Entre J19 et J20 et entre J21 et J22 les peaux reconstruites sont placées dans un incubateur sans ozone. Une fois les peaux prêtes à être exposées, les plaques et milieux de culture sont à nouveau remplacés (pour éviter le risque d’avoir de la solution de matière première qui soit passée dans le milieu de culture sous l’insert durant l’application), et les couvercles standards en polystyrène sont remplacés par des couvercles percés en PEEK ou en PTFE. Une partie des échantillons sont traités sous ozone, et une autre partie, les témoins, sont préparés exactement de la même façon, mais incubés dans un incubateur classique sans ozone. A J22, les échantillons de peaux reconstruites ont été prélevés, l’épiderme a été séparé du derme, coupé en deux et congelé à -80°C pour les analyses. 4-Exposition de volontaires sains à l’ozone en mini-zone in vivo L’étude clinique a inclus 10 volontaires (8 femmes et 3 hommes), ayant un âge moyen de 36,2 ans, de phototype III-IV et une quantité de sébum mesurée sur le front supérieur à 140 µg/cm 2 (casual level de 146 à 299 µg/cm 2 ). Les expositions en mini-zones ont été réalisées à l’aide de cloches reliées à un générateur d’ozone, d’air médical ou à l’air ambiant, posées sur la peau du dos des volontaires (Controlled Pollution Exposure System (CPES)). Le système de génération d’ozone et les cloches utilisées sont décrits dans la publication Curpen et al., 2020 – A novel method for evaluating the effect of pollution on the human skin under controlled conditions, Skin Res Technol.). Les expositions à l’ozone et à l’air médical ont été réalisées de façon aléatoire gauche-droite sur chaque volontaire. 3 conditions ont été réalisées : 6 expositions à 0,3 ppm (débit de gaz : 0.2-0.3 l/min), trois fois par semaine pendant 2 semaines. Chaque exposition a duré 2 heures. 6 expositions à de l’air médical (débit de gaz : 0.2-0.3 l/min), selon le même protocole. 6 expositions à de l’air ambiant (cloche sans flux de gaz), selon le même protocole. Des D-squames ont été prélevés avant et 1h après chaque exposition à J1 (1 exposition), J5 (3 expositions) et J12 (6 expositions). 5-Analyse des oxystérols sur des échantillons de peaux reconstruites in vitro ou des D-squames in vivo 5.1- Extraction pour l’analyse des oxystérols Pour extraire les oxystérols, du méthanol est ajouté à chaque tissu ou D-squame en petit flacon (1 mL). Il est agité durant 30 minutes à 37 °C, pour être ensuite repris en tube à hémolyse et évaporé à l’aide d’un concentrateur à vide. L’extrait évaporé, est repris avec 200 µL d’un mélange methanol:isopropanol 2:1. Les échantillons sont mis au bain à ultrasons pendant 5 min et filtrés à 0,2 µm. 5.2- Méthode chromatographique pour l’analyse des oxystérols : UPLC Vanquish (Thermofischer) [Table 6] Tableau 6 : Colonne Four °C Eluants Débit mL/min %B T0 % B à T x Durée Acquity BEH C8 2,1 mm X 100 mm x 1,7 µm Waters 50 A : Eau/MeOH 30/70 B: Isopropanol + 0,1 % formic acid 0,2 0 % 0-3 min 3-18 min montée de 0 à 35 % 18 à 25 min montée à 100% 25-30 min 0% 30 min % B T0 : pourcentage du solvant B à T0 = 0-3 min %B à Tx : pourcentage de solvant B aux différents temps indiqués dans le tableau 5.3- Paramètres du Spectromètre de masse Orbitrap Tribrid IDX Thermofisher Les différents analytes sont détectés à l’aide du détecteur Orbitrap, avec une résolution de 60 000. RESULTATS Formes oxydées du cholestérol in vitro Le tableau 7 montre que la quantité des trois formes oxydées du cholestérol présentées (5α-6α-epoxycholestérol; 5β-6β-epoxycholestérol; et 7-cétocholestérol) augmente dans des peaux reconstruites exposées à 0,1 ou 0,4 ppm d’ozone. [Table 7] Tableau 7 : Formes oxydées du cholestérol quantifiées en unité arbitraire in vitro sur peaux reconstruites après exposition à l’ozone à 0,1 ou 0,4 ppm. Métabolite Non exposé Ecart-type Ozone 0,4 ppm Ecart-type Ozone 0,1 ppm Ecart-type 7-cétocholestérol 1 0.091 1.706 0.075 1.368 0.294 5α-6α-epoxycholestérol 1 0.069 1.175 0,07 4 0,34 5β-6β-epoxycholestérol 1 0.0003 4,174 0,008 4,123 0,344 Formes oxydées du cholestérol in vivo Le tableau 8 montre que la quantité de 5α-6α-epoxycholestérol augmente dans des D-squames prélevés sur des volontaires exposés à l’ozone par rapport à ceux exposés à de l’air médical à J12 chez 7 volontaires sur 10. [Table 8] Tableau 8 : 5α-6α-epoxycholestérol quantifié en unité arbitraire in vivo à Jour 12 après 6 expositions à l’ozone. 5α-6α-epoxycholestérol Air médical Ozone Volontaire 1 0,797 3,679 Volontaire 2 1,946 1,357 Volontaire 3 0,582 1,010 Volontaire 4 0,953 1,625 Volontaire 5 1,851 1,427 Volontaire 6 0,558 0,542 Volontaire 7 2,629 3,254 Volontaire 8 0,502 0,686 Volontaire 9 4,890 15,886 Volontaire 10 0,631 1,007 Méthode de diagnostic d’une exposition à l’ozone de la peau, chez un sujet, ladite méthode comprenant l’étape suivante : mesurer la quantité d’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau choisi parmi le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal, le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et le 7-cétocholestérol, dans un échantillon de peau dudit sujet. Méthode selon la revendication 1, dans laquelle l’étape a. comprend en outre la mesure de la quantité de nonanal, de décanal et/ou de dodécanal dans l’échantillon de peau dudit sujet. Méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : mesurer la quantité d’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau choisi parmi le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal, le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et le 7-cétocholestérol dans un échantillon de peau d’un sujet, ledit échantillon de peau étant traité avec ledit composé; comparer ladite quantité mesurée à l’étape a) à la quantité correspondante dans un échantillon de peau non traité avec ledit composé ; identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé. Méthode selon la revendication 3 dans laquelle l’étape a. comprend en outre la mesure de la quantité de nonanal, décanal et/ou de dodécanal dans l’échantillon de peau dudit sujet. Méthode selon la revendication 3 ou 4, dans laquelle lesdits échantillons de peau sont choisi parmi : un explant de peau humaine, une biopsie cutanée, une microbiopsie et un échantillon de stratum corneum. Méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : effectuer un traitement d'un échantillon de peau choisi parmi des kératinocytes, un épiderme reconstruit et une peau reconstruite, par la mise en contact de l’échantillon de peau avec ledit composé; effectuer une exposition à l’ozone de l’échantillon de peau ; mesurer la quantité d’au moins un produit issu de l’oxydation des lipides de la peau choisi parmi le tridécenal, le pentadécanal, l’octadécanal, le 5α-6α-epoxycholestérol, le 5β-6β-epoxycholestérol et/ou le 7-cétocholestérol dans l’échantillon de peau traité avec ledit composé ; comparer ladite quantité mesurée à l’étape c) à la quantité correspondante dans un échantillon de peau exposé à l’ozone et non traité avec ledit composé ; identifier ledit composé candidat comme un composé permettant de prévenir et/ou de traiter les effets délétères de l’ozone sur la peau lorsque la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui a été traité avec ledit composé est inférieure à la quantité d’aldéhyde ou d’oxystérol mesurée dans l’échantillon de peau qui n’a pas été traité avec ledit composé ; étant entendu que l’étape b peut être réalisée après l’étape a et inversement, et que les étapes a et b peuvent être répétées au moins 2 fois.