Brevet FR3155897A1 — publié le 20250530

L’invention concerne un système optique de surveillance d'un échantillon par fluorescence, comprenant une source lumineuse (2) d'excitation générant un faisceau lumineux d’excitation (F1) et une carte microfluidique (1), ledit échantillon étant placé dans un circuit microfluidique intégré dans ladite carte microfluidique, ledit système comprenant un dispositif de détection (3) des signaux de fluorescence (F2) générés par ledit échantillon après excitation, caractérisé en ce que : Le système comporte des moyens de polarisation optique positionnés sur le trajet dudit faisceau lumineux (F1), Les moyens de polarisation optique étant composés d’au moins un premier polariseur optique (P1) et un deuxième polariseur optique (P2), Les moyens de polarisation optique étant configurés pour sélectionner et éclairer une zone de visualisation en jouant sur l’orientation de la direction de polarisation du premier polariseur optique (P1) et sur la direction de polarisation du deuxième polariseur optique (P2). Figure à publier avec l'abrégé : Figure 2 Système optique de surveillance d'un échantillon par fluorescence Domaine technique de l'invention La présente invention se rapporte à un système optique de surveillance d'un échantillon par fluorescence lors d'une réaction en carte microfluidique. Etat de la technique La microfluidique est un domaine scientifique et technique ayant notamment pour objectif la manipulation de petits volumes de fluide à l'intérieur d'un réseau microfluidique. Ses applications sont diverses, comme le diagnostic médical, l’environnement, l’agroalimentaire ou le vétérinaire. Les technologies microfluidiques sont capables d’intégrer des protocoles complexes de manière autonome. Dans le cadre du diagnostic médical par exemple, une cartouche microfluidique réalise toutes les opérations depuis le dépôt de l’échantillon liquide (sang, urine, salive), sa manipulation (transfert, mise en contact avec les réactifs biologiques) jusqu’à la lecture du résultat d’analyse et son interprétation (assistée par ordinateur). Les analyses peuvent par exemple être mises en œuvre à l'aide de protocoles d’amplification d’acides nucléiques, par exemple de type PCR ("Polymerase Chain Reaction") ou LAMP ("Loop Mediated Isothermal Amplification"). De tels protocoles sont utilisés pour détecter des pathogènes dans diverses matrices (sang, aliments, salive etc…) et sont basés sur le principe d’amplification exponentielle d’acides nucléiques. A partir d’une séquence d’ADN, des réactifs biochimiques conçus de manière adéquate permettent de répliquer la séquence d’ADN de manière exponentielle en créant des millions de copies, grâce à un chauffage de la solution. Une manière de visualiser la multiplication des séquences d’ADN en temps réel consiste à ajouter une sonde fluorescente dans la solution. Au cours de l’amplification, la fluorescence libérée est proportionnelle au nombre de copie d’ADN crées. Ainsi, en suivant l’évolution de la fluorescence au cours du temps, il est possible de tracer les courbes d’amplification associées et ainsi de remonter à la concentration initiale d’ADN avant amplification, et parfois à la concentration initiale en pathogène recherché (qPCR). Aujourd’hui, les protocoles d’amplification d’acides nucléiques sont réalisés en routine sur des instruments commerciaux, réalisant les étapes de chauffage de la solution et d’enregistrement des données de fluorescence, jusqu’au traitement des données avec l’affichage des courbes d’amplification et des concentrations d’analytes associées. La réalisation de protocoles d’amplification d’acides nucléiques en carte microfluidique est le sujet de nombreuses recherches et présente de nombreux avantages (rapidité des transferts de chaleur, réduction des volumes de réactifs, temps d’analyse réduits). La solution contenant l’ADN et le mix réactionnel pour l’amplification se trouve dans des chambres microfluidiques dédiées, et un réactif fluorescent est utilisé dans la solution d’amplification. Plus la quantité d’ADN est importante, plus la fluorescence est importante. Afin de suivre l’évolution de la fluorescence en fonction du temps, la solution se trouvant dans les chambres microfluidiques est excitée par un éclairage (LED + filtre par exemple) centré sur le spectre d’absorption du fluorophore. Après excitation, des signaux de fluorescence sont émis par les fluorophores présents dans la solution et enregistrés par une caméra dotée d'un filtre à la longueur d’onde choisie. Le traitement de ces données (courbes de fluorescence en fonction du temps) permet de connaître la concentration en ADN dans l’échantillon. Comme décrit dans la demande de brevet CN109187367 et dans la publication référencée "High- sensitivity , disposable lab -on-a-chip with thin -film organic electronics for fluorescence detection " - Andrea Pais, Ansuman Banerjee, David Klotzkin, Ian Papautsky - Department of Electrical and Computer Engineering, University of Cincinnati, 814 Rhodes Hall, ML030, Cincinnati, OH, USA - Publication DOI:10.1039/b715143h , le montage optique utilisé est arrangé en transmission, avec une lumière excitatrice polarisée et un analyseur en sortie de carte fluidique pour couper la longueur d’onde d’excitation. La source d'excitation est placée d'un côté de la carte et éclaire les chambres microfluidiques, et la caméra est positionnée de l'autre côté de la carte pour capturer les images. Cette architecture ne fonctionne pas pour certains systèmes dans lesquels la carte microfluidique est fabriquée à l'aide de matériaux biréfringents ou bien lorsque la carte microfluidique est elle-même composée d'un matériau non-transparent aux longueurs d'ondes considérés (comme le silicium dans le visible). Le but de l'invention est de proposer un système qui puisse mesurer les signaux de fluorescence dans une chambre microfluidique après excitation, sans avoir les limitations des principes par transmission de l'état de la technique. La solution de l'invention pourra également être adaptée pour visualiser des parties distinctes du circuit microfluidique d'une carte, même celles qui sont dans des couches inférieures de la carte. Ce but est atteint par un système optique de surveillance d'un échantillon par fluorescence, comprenant une source lumineuse d'excitation contrôlée pour générer un faisceau lumineux et une carte microfluidique, ledit échantillon étant placé dans un circuit microfluidique intégré dans ladite carte microfluidique, ledit système comprenant un dispositif de détection des signaux de fluorescence générés par ledit échantillon après excitation par ledit faisceau lumineux, ledit système étant caractérisé en ce que : La source lumineuse d'excitation et le dispositif de détection sont arrangés par rapport au circuit microfluidique selon un montage en réflexion, Le système comporte des moyens de polarisation optique positionnés sur le trajet dudit faisceau lumineux, Les moyens de polarisation optique étant composés d’au moins un premier polariseur optique et d’un deuxième polariseur optique, Les moyens de polarisation optique étant configurés pour sélectionner et éclairer une zone de visualisation en jouant sur l’orientation de la direction de polarisation du premier polariseur optique et sur la direction de polarisation du deuxième polariseur optique. Selon une particularité, la zone de visualisation inclut au moins une partie du circuit microfluidique. Selon une autre particularité, la zone de visualisation est une zone non polarisée par le deuxième polariseur optique ou une zone polarisée avec un troisième polariseur optique ayant une direction de polarisation distincte de celle du deuxième polariseur optique. Selon une réalisation particulière, les moyens de polarisation optique sont passifs de sorte que la direction de polarisation du premier polariseur optique et la direction de polarisation du deuxième polariseur optique disposent d’une orientation donnée et figée. Selon une autre réalisation particulière, les moyens de polarisation optique sont actifs, de sorte que le système comporte des moyens de réglage de l’orientation de la direction de polarisation du premier polariseur optique et/ou de l’orientation de la direction de polarisation du deuxième polariseur optique. Selon une réalisation particulière, les moyens de polarisation actifs comportent des moyens mécaniques configurés pour faire tourner un ou plusieurs desdits polariseurs optiques en vue d’orienter leur direction de polarisation suivant une orientation donnée selon la zone de visualisation à éclairer. Selon une réalisation particulière, la carte microfluidique est réalisée par l'assemblage d’une ou de plusieurs couches superposées, une ou plusieurs couches intégrant ledit circuit microfluidique de la carte microfluidique. Selon une autre réalisation particulière, les moyens de polarisation optique comportent au moins un quatrième polariseur optique inséré entre au moins deux couches de la carte microfluidique. Selon une particularité, le quatrième polariseur optique est réalisé sous la forme d'une couche de la carte microfluidique. Selon une autre particularité, le quatrième polariseur optique comporte au moins une ouverture positionnée en vis-à-vis d'au moins une deuxième partie du circuit microfluidique. Selon une autre réalisation particulière, les moyens de polarisation optique comportent un cinquième polariseur optique placé dans ladite ouverture. Selon une particularité, chaque couche de la carte située au-dessus d'un polariseur optique est réalisée dans un matériau non biréfringent. Selon une réalisation particulière, les moyens de polarisation optique actifs comportent au moins une partie à cristaux liquides positionnée entre le premier polariseur optique et le deuxième polariseur optique et contrôlée en tension pour transmettre ou bloquer le faisceau lumineux entre la source lumineuse d’excitation et la carte microfluidique et permettre de sélectionner une ou plusieurs zones à éclairer de la carte microfluidique. Selon une particularité, la partie à cristaux liquides est monopixel ou pixelisé. Selon une autre particularité, le dispositif de détection comporte une caméra. L’invention concerne également un procédé de surveillance d'un échantillon liquide par fluorescence, mis en œuvre à l'aide d'un système optique de surveillance tel que défini ci-dessus, le procédé consistant à : Activer la source lumineuse d'excitation pour orienter le faisceau lumineux en direction de la carte microfluidique, Positionner le dispositif de détection par rapport au circuit microfluidique de la carte selon un montage en réflexion, Capturer les signaux de fluorescence émis par l'échantillon liquide présent dans le circuit microfluidique, après excitation, Le premier polariseur optique et le deuxième polariseur optique étant orientés avec une direction de polarisation adaptée pour que la zone de visualisation comporte au moins une partie du circuit microfluidique. Brève description des figures D'autres caractéristiques et avantages vont apparaître dans la description détaillée qui suit faite en regard des dessins annexés dans lesquels : La FIG. 1 montre un exemple de réalisation d'une carte microfluidique pouvant être employée dans le système de l'invention ; La FIG. 2 montre de manière schématique l'architecture du système de l'invention ; La FIG. 3 montre, par une vue en éclaté, un premier exemple de réalisation de la carte microfluidique employée dans le système de l'invention ; La FIG. 4 montre une réalisation du système de l'invention intégrant la carte microfluidique de la FIG. 3 ; Les figures 5A à 5C illustrent le principe de fonctionnement du système avec la carte microfluidique de la FIG. 3 ; Les figures 6A et 6B montrent en vue de dessus un autre exemple de réalisation de la carte microfluidique de l'invention et illustrent son principe de fonctionnement ; La FIG. 7 montre, par une vue en éclaté, un autre exemple de réalisation de la carte microfluidique employée dans le système de l'invention ; Les figures 8A à 8C illustrent, par des vues de dessus de la carte microfluidique, différents modes de fonctionnement du système de l'invention avec une carte microfluidique de la FIG. 7 ; Les figures 9A et 9B exposent un premier exemple de principe de fonctionnement d’un dispositif à cristaux liquides ; Les figures 10A à 10F montrent de manière schématique plusieurs autres variantes de réalisation du système de l'invention ; Description détaillée d'au moins un mode de réalisation Pour la suite de la description, on définit un repère orthonormé X, Y, Z pour représenter les trois dimensions. Les termes "supérieur", "inférieur", "au-dessus", "au-dessous" et équivalents sont à considérer suivant l'axe Z du repère. L'invention s'applique à un système de surveillance d'un échantillon par fluorescence et comporte principalement une carte microfluidique 1, une source lumineuse 2 d'excitation et un dispositif de détection 3. Carte microfluidique FIG. 1 Une carte microfluidique 1 est notamment employée dans le domaine médical pour analyser un fluide, tel qu'un échantillon liquide (du sang par exemple) en venant se connecter sur un automate d'analyse. La carte microfluidique 1 peut ainsi intégrer tout un réseau microfluidique composé d'éléments microfluidiques tels que des vannes, des chambres et des canaux microfluidiques. Une carte microfluidique peut être réalisée en une seule couche ou par l'assemblage de plusieurs couches 10 entre elles. Ses couches 10 sont par exemple assemblées entre elles par scellement thermique. Chaque couche 10 peut être usinée de manière à y créer au moins une partie du réseau microfluidique de la carte 1, l'assemblage des couches 10 par empilement permettant de former l'ensemble du réseau microfluidique de la carte microfluidique 1. Selon les matériaux utilisés, l’application de contraintes mécaniques lors de la réalisation de cartes microfluidiques peut engendrer de la photoélasticité et rendre le matériau de la carte biréfringent même s’il est de nature isotrope. La carte microfluidique 1 comporte deux faces opposées, s'étendant chacune dans les deux dimensions X, Y et présente par exemple une épaisseur faible (quelques mm) suivant Z au regard des deux autres dimensions. La carte microfluidique 1 est avantageusement réalisée dans un matériau transparent de type COP (Cyclo-Oléfine Polymère), COC (Cyclo-Oléfine Copolymère), PMMA (Polyméthacrylate de Méthyle Acrylique), PDMS (Polydiméthyl Siloxane), Silicium…. Mais on verra que, dans certaines réalisations, le matériau de la carte devra répondre à certaines exigences (non biréfringence) pour que le principe de l'invention fonctionne au mieux. Pour rappel, un matériau possède la propriété physique de biréfringence lorsque la lumière se propage à travers ce matériau de façon anisotrope. Dans le cadre de l'invention, on s'intéresse à un réseau microfluidique comportant au moins une chambre microfluidique 11, utilisée pour mettre en œuvre une surveillance optique par fluorescence d'un échantillon liquide placé dans ladite chambre microfluidique 11. A minima, la chambre microfluidique 11 possède sur le dessus une paroi transparente au faisceau lumineux F1 émis par la source lumineuse 2 d'excitation et aux signaux de fluorescence F2 émis après excitation. Source lumineuse d'excitation FIG. 2 Il s'agit d'une source lumineuse 2, pouvant être associée à un filtre (non représenté), pour émettre un faisceau lumineux F1 sur une plage de longueurs d'ondes centrée sur le spectre d'absorption des composés fluorophores présents dans l'échantillon à surveiller. La source lumineuse 2 est placée au-dessus de la carte microfluidique 1 pour venir éclairer une zone Z1 de la carte microfluidique 1 incluant la chambre microfluidique 11. De manière non limitative, la source lumineuse 2 peut être composée d'une ou plusieurs diodes électroluminescentes, par exemple de type OLED (pour "Organic Light Emitting Diode"). La source peut être également un laser, ce qui permet - pour certains types de lasers - de s’affranchir du filtre spectral et du premier polariseur optique P1 (voir ci-après). Dispositif de détection FIG. 2 Le dispositif de détection 3 peut comporter une caméra pour lire et enregistrer les signaux de fluorescence émis par les composés fluorophores présents dans l'échantillon et excités par le faisceau lumineux F1 émis par la source lumineuse 2 d'excitation. La caméra peut notamment inclure un capteur de type CMOS (Complementary Metal-Oxide-Semiconductor) ou CCD (Charge Coupled Device). Associé à la caméra, le dispositif de détection 3 peut intégrer une lentille de tube, un filtre spectral et un objectif (non illustrés) pour obtenir une image nette sur le capteur de la caméra. Montage optique - principe La source lumineuse 2 d'excitation et le dispositif de détection 3 sont arrangés par rapport à la carte microfluidique 1 et la chambre microfluidique 11 selon un montage en réflexion. L'excitation et la détection sont donc placées du même côté par rapport à la carte microfluidique 1, par exemple au-dessus de la carte microfluidique 1. Le faisceau lumineux F1 est émis par la source lumineuse en direction de la carte, du côté de sa face supérieure, et les signaux de fluorescence F2 générés sont émis en direction du dispositif de détection 3, situé également au-dessus de la carte, du côté de sa face supérieure. La source lumineuse 2 est orientée de manière à éclairer une zone Z1 de la carte incluant la chambre microfluidique 11, et le dispositif de détection 3 est positionné pour acquérir des images de cette zone Z1 éclairée ou d'au moins une partie de celle-ci (incluant par exemple à minima une partie du circuit microfluidique de la carte), afin de pouvoir visualiser les signaux de fluorescence F2 émis par l'échantillon, par exemple lorsqu’il est placé dans la chambre microfluidique 11 en présence d'une excitation (comme sur la FIG. 2 ). Selon l'invention, le montage optique du système incorpore également des moyens de polarisation optique. Les moyens de polarisation optique sont utilisés pour venir mettre en évidence et sélectionner certaines zones de la carte microfluidique 1, en faisant en sorte que le faisceau lumineux F1 émis par la source lumineuse 2 ne traverse pas toute la carte microfluidique 1, mais qu'il pénètre uniquement dans la zone choisie, par exemple la chambre microfluidique 11 contenant les fluorophores (zone Z3 par exemple sur la FIG. 2 décrite ci-dessous). Les moyens de polarisation peuvent être choisis passifs, c’est-à-dire qu’ils conservent toujours la même configuration lors de l’expérience ou choisis actifs, c’est-à-dire qu’ils peuvent être activés pour sélectionner une zone particulière de la carte microfluidique 1. Pour la suite de description, on définit la configuration dite croisée lorsque deux polariseurs ont leurs directions de polarisation à la perpendiculaire et la configuration dite alignée lorsque deux polariseurs ont leurs directions de polarisation parallèles. La direction de polarisation est définie par l’orientation parallèle des lignes de polarisation du polariseur considéré. Moyens de polarisation optique passifs FIG. 2 Dans cette configuration, le système comporte au moins deux polariseurs optiques P1, P2, dits premier polariseur optique P1 et deuxième polariseur optique P2. Les deux polariseurs optiques P1, P2 sont par exemple des polariseurs linéaires, c'est-à-dire qu'ils comportent chacun une direction de polarisation donnée et figée. Le montage optique tel que présenté en FIG. 2 a pour objectif de faire en sorte que le faisceau lumineux F1 émis par la source lumineuse 2 ne traverse pas toute la carte microfluidique 1, mais qu'il pénètre uniquement dans la chambre microfluidique 11 contenant les fluorophores (zone Z3 par exemple sur la FIG. 2 ). Premier polariseur optique FIG. 2 Dans le cadre de la configuration présentée en FIG. 2 , le premier polariseur optique P1 est positionné devant la source lumineuse 2 d'excitation de manière à polariser le faisceau lumineux F1 émis par la source lumineuse 2. Il est donc placé entre la source lumineuse 2 d'excitation et la carte microfluidique 1. Sa direction de polarisation est par exemple orientée suivant une première direction (par exemple selon X). Deuxième polariseur optique FIG. 2 FIG. 3 Le deuxième polariseur optique P2 est agencé entre le premier polariseur optique P1 et la carte microfluidique 1. Sa direction de polarisation est orientée suivant une deuxième direction distincte de la première direction, de manière à former des lignes croisées avec celles du premier polariseur optique P1. Sa direction de polarisation est avantageusement orientée à la perpendiculaire par rapport à celle du premier polariseur optique P1 (selon Y pour l’exemple précédent). Selon l'invention, ce deuxième polariseur optique P2 est configuré pour former une deuxième zone Z2 où la lumière est polarisée selon la direction imposée par le deuxième polariseur optique P2 et une troisième zone Z3 comportant ou ne comportant pas de polariseur, et où la lumière est de facto polarisée différemment de celle présente au niveau de la zone Z2 (voir FIG. 6 ). Autrement dit, ce deuxième polariseur P2 optique ne s'étend pas sur toute la surface de la zone Z1 éclairée. La troisième zone Z3 inclut avantageusement la chambre microfluidique 11 contenant l'échantillon à surveiller par fluorescence. La troisième zone Z3 est par exemple formée par la réalisation d'une ouverture O en vis-à-vis de la chambre microfluidique 11. De cette manière, le faisceau lumineux F1 émis par la source lumineuse 2 ne traverse pas la carte microfluidique sur la zone Z2 et ne vient traverser que la zone Z3 pour éclairer la chambre microfluidique 11 de la carte microfluidique. Le dispositif de détection 3 peut ainsi facilement distinguer la zone réactionnelle pertinente (celle qui contient la chambre microfluidique d’analyse) de la carte, des autres zones non pertinentes, et ainsi capter les signaux de fluorescence F2 émis par les fluorophores présents dans l'échantillon lorsqu'ils sont excités. Premier mode de réalisation FIG. 2 FIG. 3 FIG. 4 FIG. 5 FIG. 5 FIG. 5 De manière avantageuse, en liaison avec les figures 2 et 3, le deuxième polariseur optique P2 se présente sous la forme d'un film appliqué sur la face supérieure de la carte microfluidique 1, ce film présentant l'ouverture O réalisée autour de la chambre microfluidique 11, cette partie, par exemple découpée et retirée du film formant la zone Z3 définie ci-dessus. Le film peut être appliqué sur la carte microfluidique 1 par collage, à l’aide de vis, d’aimants ou simplement déposé par effet électrostatique. Ce polariseur P2 peut également être réalisé par un dépôt en couche mince avec un masquage de la zone Z3 pendant le dépôt, rendant cette zone non polarisée. En référence à la FIG. 4 , la source lumineuse 2 d'excitation peut être positionnée pour émettre son faisceau F1 dans un plan parallèle aux directions X, Y et un dispositif optique 4 (cube + miroir dichroïque) peut être positionné au-dessus de la carte pour orienter le faisceau lumineux F1 généré par la source lumineuse 2 d'excitation en direction de la carte microfluidique 1, selon l'axe Z. Le dispositif de détection 3 peut être positionné au-dessus de la carte microfluidique 1, la surface de son capteur perpendiculaire à l'axe Z. Le dispositif optique 4 est choisi pour laisser passer les signaux de fluorescence F2 générés par l'excitation. Les figures 5A à 5C illustrent le fonctionnement de l'invention avec la carte microfluidique de la FIG. 3 . FIG. 5 : Source lumineuse 2 d'excitation éteinte. FIG. 5 : Le premier polariseur optique P1 et le deuxième polariseur optique P2 sont en configuration croisée, permettant au faisceau lumineux F1 de ne traverser que l’ouverture O, permettant ainsi de sélectionner la zone Z3, dans laquelle est située la chambre microfluidique 11. FIG. 5 : Le premier polariseur optique P1 et le deuxième polariseur optique P2 sont en configuration alignée, permettant au faisceau lumineux F1 de traverser toute la carte et donc de visualiser les zones Z2 et Z3 et de suivre les mouvements fluidiques dans l’ensemble de la carte. Autres modes de réalisation FIG. 6 FIG. 6 FIG. 7 FIG. 8 FIG. 8 FIG. 8 Selon une autre variante de réalisation illustrée par les figures 6A et 6B, il est également possible d'ajouter un polariseur optique P20 au sein de chaque ouverture O réalisée à travers le deuxième polariseur optique P2, ce polariseur P20 ayant une direction de polarisation orientée croisée par rapport à celle du polariseur optique P2. Grâce à cette configuration, la zone Z3 est également polarisée, ce qui permet, selon l'orientation de la polarisation appliquée à la source lumineuse 2 via le premier polariseur optique P1, de sélectionner la zone à "allumer" ou à "éteindre" entre la zone Z2 et la zone Z3. La FIG. 6 montre ainsi que lorsque la source lumineuse 2 est polarisée par le premier polariseur optique P1, de manière alignée avec le polariseur optique P20, celle-ci vient "allumer" la chambre microfluidique 11. Dans le cas où la polarisation de P1 se trouve dans une orientation intermédiaire, par exemple à 45° entre alignée et croisée, toute la carte est illuminée avec cependant une transmission du faisceau diminuée sur les différentes zones polarisées. La FIG. 6 montre une autre configuration dans laquelle le premier polariseur optique P1 et le deuxième polariseur optique P2 sont en configuration alignée, et le polariseur P20 est en configuration croisée par rapport à eux. Dans cette configuration, il est possible de venir observer la zone Z2 en masquant la zone Z3, ce qui permet de suivre la circulation fluidique dans la carte sans exciter les fluorophores contenus dans la chambre microfluidique 11 et ainsi d’éviter le photoblanchiment. Selon une autre réalisation avantageuse illustrée par la FIG. 7 , il est possible de venir intégrer des polariseurs optiques (par exemple deux polariseurs optiques P2, P3) à plusieurs niveaux dans les couches de la carte microfluidique 1, en vue de venir mettre en évidence différentes couches du réseau microfluidique de la carte microfluidique 1 et plusieurs zones Z3, Z4 de la carte. En jouant sur l'orientation de la direction de polarisation de chaque polariseur optique P2, P3 intégré à la carte microfluidique 1, il est possible de venir visualiser les différentes couches 10 de la carte microfluidique 1 et de sélectionner des zones d'intérêt. A titre d'exemple, une couche de la carte microfluidique peut comporter au moins une chambre microfluidique 11 et une autre couche de la carte microfluidique peut comporter au moins une autre chambre microfluidique 12. Le polariseur optique P2 peut comporter une ouverture O1 réalisée autour de la chambre microfluidique 11 et le polariseur optique P3 peut comporter une autre ouverture O2 réalisée autour de la chambre microfluidique 12. Chaque ouverture peut avantageusement intégrer un polariseur optique P20, P30 orienté différemment (en configuration croisée par exemple), comme décrit ci-dessus selon la configuration de la FIG. 7 . Dans les différentes configurations proposées, il faut cependant s'assurer que la couche supérieure ou les couches supérieures de la carte microfluidique 1 situées au-dessus de chaque polariseur optique P2, P3 sont réalisées dans un matériau non biréfringent. En revanche, la couche inférieure ou les couches inférieures se trouvant sous le polariseur optique le plus bas (P3 dans cette configuration) peuvent être réalisées dans un matériau biréfringent. Pour rappel, un matériau non biréfringent est un matériau dit isotrope, qui ne dépend pas de la direction de polarisation de l’onde lumineuse. Il peut par exemple s'agir de verre. Les figures 8A à 8C montrent ainsi différentes configurations de fonctionnement selon l'état de la source lumineuse 2 et son type de polarisation, pour une carte microfluidique 1 ayant deux chambres microfluidiques 11 arrangées dans une couche de la carte microfluidique située entre le polariseur optique P2 et le troisième polariseur optique P3, et deux autres chambres microfluidiques 12 arrangées dans une couche inférieure de la carte microfluidique située sous le troisième polariseur optique P3. Le deuxième polariseur optique P2 est par exemple un film ayant par exemple une direction de polarisation orientée selon Y et le troisième polariseur optique P3 est un film ayant une direction de polarisation croisée, par exemple orientées selon X. Le premier polariseur optique P1 est placé devant la source lumineuse 2 d'excitation. On ajoute également le polariseur P20 dans chaque ouverture du polariseur P2, en configuration croisée par rapport au polariseur P2, et le polariseur P30, en configuration croisée par rapport au polariseur P3. FIG. 8 : Source lumineuse 2 d'excitation éteinte. FIG. 8 : Source lumineuse 2 d'excitation allumée et premier polariseur P1 en configuration alignée avec le polariseur P20 et croisée avec le deuxième polariseur P2. La caméra observe la fluorescence émise au niveau de chaque zone Z3 occupée par les deux chambres microfluidiques 11 de la couche supérieure. FIG. 8 : Source lumineuse 2 d'excitation allumée et premier polariseur P1 en configuration alignée avec le polariseur P2 et avec le polariseur P30, et croisée avec le polariseur P20 et avec le polariseur P3. La caméra observe la fluorescence émise au niveau de chaque zone Z4 occupée par les deux chambres microfluidiques 12 de la couche inférieure. Système de r otation mécanique des polariseurs pour sélection des zones de visualisation De manière avantageuse, il est possible de prévoir des moyens techniques actifs pour faire tourner mécaniquement le premier polariseur optique P1 et/ou éventuellement de chaque autre polariseur optique, et ainsi régler l'orientation de leurs directions de polarisation et ajuster le niveau de polarisation, soit entre les deux situations extrêmes de polarisation, c'est-à-dire la polarisation alignée et la polarisation croisée à 90°, soit en position intermédiaire (typiquement à 45°). Dans le cas du premier polariseur optique P1, des moyens mécaniques peuvent par exemple être ajoutés au système pour contrôler son orientation. Par le terme « actif », on entend qu’il est possible de jouer à tout instant sur la direction de polarisation appliquée au faisceau lumineux F1. Cette rotation mécanique permet de manière avantageuse de sélectionner les zones de visualisation en fonction du besoin et de pouvoir notamment retrouver les mêmes configurations que celles décrites ci-dessus : FIG. 5 : illumination de la zone Z3 uniquement si les directions de polarisation des polariseurs P1 et P2 sont croisées FIG. 5 : illumination des zones Z2+Z3 si les directions de polarisation des polariseurs P1 et P2 sont alignées. FIG. 6 : illumination de la zone Z3 si les directions de polarisation des polariseurs P1 et P20 sont alignées et celle du polariseur P2 est croisée. FIG. 6 : illumination de la zone Z2 seule si les directions de polarisation des polariseurs P1 et P2 sont alignées et celle du polariseur P20 est croisée. Une configuration intermédiaire permet d’illuminer les zones Z2+Z3 si la direction de polarisation de P1 est en position intermédiaire (typiquement 45°) par rapport aux directions de polarisation de P2 et P20 (qui sont en configuration croisée). Il faut noter que l’illumination de la zone Z2 uniquement peut être avantageuse lorsque l’on veut suivre la circulation fluidique dans la carte sans exciter les fluorophores contenus dans la chambre fluidique (11) - délimitée par la zone Z3 et ainsi éviter le photoblanchiment. Moyens de polarisation actifs FIG. 9 FIG. 9 FIG. 10 FIG. 10 FIG. 10 FIG. 10 FIG. 10 FIG. 10 Dans des réalisations particulièrement avantageuses, il est également possible d'utiliser des moyens de polarisation actifs, de manière à pouvoir contrôler les directions de polarisations sans aucun mouvement mécanique de polariseur. Par le terme « actif », on entend qu’il est possible de jouer à tout instant sur la direction de polarisation appliquée au faisceau lumineux F1. Pour cela, on peut aussi utiliser le principe des cristaux liquides. De manière connue, un dispositif à cristaux liquides permet de contrôler la polarisation de la lumière au moyen d’un champ électrique appliqué aux cristaux. Ces rotateurs sont basés sur une variation des propriétés de biréfringence des cristaux liquides sous l’effet d’un champ électrique. Différents types d’architectures de rotateur de polarisation à cristaux liquides sont possibles. Une configuration particulière utilisable dans le cadre de l’invention est décrite de manière simplifiée sur les figures 9A et 9B : La partie cristaux liquides comporte deux substrats en verre (non représentés), entre lesquels est placé le cristal liquide 52. De part et d’autre de ces substrats, le dispositif comporte un analyseur 50 et un polariseur 51. L’analyseur et le polariseur présentent des directions de polarisation en configuration croisée. Les deux substrats en verre sont recouverts d’une électrode transparente (typiquement en ITO). Lorsque l'on applique un champ électrique V entre les deux électrodes, les molécules du cristal liquide 52 s'alignent progressivement suivant la direction du champ généré entre les deux électrodes ( FIG. 9 ). La lumière n'est plus déviée par les molécules, elle est donc stoppée par l'analyseur 50 car celui-ci est en configuration croisée par rapport au polariseur 51. Le dispositif est éteint. Si on désactive le champ électrique, les molécules du cristal liquide 52 forment une structure en hélice, et le dispositif se rallume ( FIG. 9 ). Ce type de composant permet donc, lorsqu'on lui applique une tension, de modifier la direction de polarisation de la manière souhaitée (selon l’architecture de rotateur de polarisation choisie, on peut obtenir une polarisation alignée, ou croisée à 90°, ou selon une autre orientation). Cette solution à base de cristaux liquides présente l’avantage de pouvoir illuminer ou non des chambres sans mouvement mécaniques des différents polariseurs. On distingue le dispositif à cristaux liquides dit monopixel, c’est-à-dire qui peut être allumé ou éteint sur toute sa surface, du dispositif à cristaux liquides pixellisé, c’est-à-dire disposant de plusieurs pixels contrôlables en tension individuellement. Les figures 10A à 10F montrent plusieurs configurations envisageables – basées sur l’architecture des figures 9A et 9B de cellules nématiques en hélice, à considérer de manière non limitative. FIG. 10 : La source lumineuse 2 d’excitation est non polarisée. Un dispositif 5 à cristaux liquides de type monopixel est positionné sur la carte avec une ouverture O formant la zone Z3 au niveau de la chambre microfluidique 11. Il peut être déposé directement sur la face supérieure de la carte microfluidique ou positionné juste au-dessus de la carte 1, proche de la face supérieure de celle-ci. Le dispositif 5 comporte ainsi ses trois « couches » superposées, analyseur 50, partie à cristaux liquides (cellules nématiques en hélice) 52 et polariseur 51. En fonctionnement, et en fonction de la tension appliquée sur le dispositif 5, on peut ainsi venir éclairer uniquement la zone Z3 ou l'ensemble de la carte microfluidique 1 (zones Z2+Z3). FIG. 10 : Il s'agit d'une configuration similaire à celle de la FIG. 10 , à l'exception du fait que la source lumineuse 2 d’excitation est polarisée avec le premier polariseur P1 mis directement devant la source lumineuse 2, ce polariseur P1 remplaçant celui du dispositif 5 à cristaux liquides. FIG. 10 : Il s’agit d’une configuration identique à celle de la FIG. 10 , à l’exception que la partie 52 à cristaux liquides est déportée devant la source lumineuse 2 d’excitation, devant le polariseur P1. On maintient uniquement l’analyseur 50 sur la carte microfluidique 1 (dans ce cas l’analyseur peut se présenter sous la forme d’un film collé sur la carte fluidique) ou à proximité de celle-ci. Le fonctionnement est identique à celui de la configuration de la FIG. 10 . FIG. 10 : Dans cette configuration, le dispositif 5 à cristaux liquides est pixélisé, c'est-à-dire qu'il est possible de venir allumer ou éteindre chaque pixel du dispositif 5 de manière individualisée, pour laisser passer ou non la lumière. L'agencement est identique à celui de la FIG. 10 décrit ci-dessus, à l’exception qu’il n’est pas nécessaire de venir créer l’ouverture et la zone Z3 pour visualiser la chambre microfluidique. L'avantage de cette configuration est de pouvoir s'adapter au réseau microfluidique de la carte microfluidique 1. FIG. 10 : Il s’agit d’une configuration similaire à celle de la FIG. 10 , à l’exception que l’on utilise un dispositif 5 à cristaux liquides pixelisé. Le polariseur P1 est positionné devant la source lumineuse 2 d’excitation et il n’est pas nécessaire de créer une ouverture en vis-à-vis de la chambre microfluidique, étant donné que le dispositif 5 est pixelisé. Chaque pixel du dispositif 5 peut être activé/désactivé individuellement pour laisser passer ou non la lumière dans la carte microfluidique 1. FIG. 10 : On vient poser un premier dispositif 5a à cristaux liquide sur une première carte microfluidique 1a, puis une deuxième carte microfluidique 1b sur ce premier dispositif 5a à cristaux liquides, puis un deuxième dispositif 5b à cristaux liquides sur la deuxième carte microfluidique 1b. La deuxième carte microfluidique 1b doit être réalisée dans un matériau non-biréfringent pour que le principe fonctionne. Dans cette configuration, chaque pixel peut être activé/désactivé individuellement pour laisser passer ou non la lumière dans chacune des cartes microfluidiques 1a, 1b. L’orientation du polariseur du dispositif 5a à cristaux liquides doit être obligatoirement la même que celle de l’analyseur du dispositif 5b à cristaux liquides. Tant que la ou les cartes microfluidiques supérieures sont réalisées dans des matériaux non biréfringents et que les analyseurs et polariseurs des dispositifs à cristaux liquides consécutives sont alignées, il est possible d’ajouter des couches supplémentaires. Le polariseur du deuxième dispositif 5b peut être déporté devant la source lumineuse 2 d’excitation. De manière avantageuse, le dispositif 5 à cristaux liquides est par exemple connecté à une unité de contrôle chargée de générer les tensions adaptées pour afficher le motif de polarisation, selon la configuration souhaitée. Il faut noter que l’utilisation d’une solution à cristaux liquides offre beaucoup de possibilités et que de nombreuses autres variantes de réalisation pourraient être imaginées, combinant éventuellement les différentes configurations présentées ci-dessus. L'invention présente ainsi de nombreux avantages listés ci-dessous. La solution de l'invention permet d’obtenir plusieurs modes de visualisation optique sur des cartes microfluidiques. L’utilisation d’un masque polarisant permet de choisir certaines zones que l’on veut exciter et/ou visualiser, et ouvre donc des perspectives intéressantes pour l’utilisation de tels systèmes optiques en combinaison avec d’autres parties de cartes microfluidiques où la fluorescence n’est pas excitée. La solution de l'invention - où seule la zone d’intérêt est éclairée - permet de s’affranchir des problèmes de bruits parasites présents sur les technologies de cartes microfluidiques utilisées (par exemple de l’autofluorescence ou du Raman), et inhérentes aux matériaux utilisés. La résolution du problème du bruit permet d’envisager des améliorations dans divers protocoles biologiques. A titre d’exemple nous pouvons citer : Les protocoles d’amplification d’acides nucléique (PCR, LAMP). Les données de fluorescence en fonction du temps donnent un temps "Ct" ("cycle threshold"), correspondant au seuil où le niveau de fluorescence augmente significativement, et permet à l’homme du métier de calculer la concentration initiale en matrice ADN. La réduction des bruits parasites sur la carte microfluidique devrait permettre une meilleure distinction du signal par rapport au bruit de fond, et donc une détection plus rapide. Les protocoles de détection utilisant une amplification linéaire du signal fluorescent, par exemple de type ELISA. L’amélioration du contraste et la réduction du bruit permet d’agrandir la gamme linéaire de tels tests. Système optique de surveillance d'un échantillon par fluorescence, comprenant une source lumineuse (2) d'excitation contrôlée pour générer un faisceau lumineux (F1) et une carte microfluidique (1), ledit échantillon étant placé dans un circuit microfluidique intégré dans ladite carte microfluidique, ledit système comprenant un dispositif de détection (3) des signaux de fluorescence (F2) générés par ledit échantillon après excitation par ledit faisceau lumineux (F1), caractérisé en ce que : La source lumineuse (2) d'excitation et le dispositif de détection (3) sont arrangés par rapport au circuit microfluidique selon un montage en réflexion, Le système comporte des moyens de polarisation optique positionnés sur le trajet dudit faisceau lumineux (F1), Les moyens de polarisation optique étant composés d’au moins un premier polariseur optique (P1) et un deuxième polariseur optique (P2), Les moyens de polarisation optique étant configurés pour sélectionner et éclairer une zone de visualisation en jouant sur l’orientation de la direction de polarisation du premier polariseur optique (P1) et sur la direction de polarisation du deuxième polariseur optique (P2). Système selon la revendication 1, caractérisé en ce que la zone de visualisation inclut au moins une partie du circuit microfluidique. Système selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la zone de visualisation est une zone non polarisée par le deuxième polariseur optique (P2) ou une zone polarisée avec un troisième polariseur optique (P20) ayant une direction de polarisation distincte de celle du deuxième polariseur optique (P2). Système selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les moyens de polarisation optique sont passifs de sorte que la direction de polarisation du premier polariseur optique (P1) et la direction de polarisation du deuxième polariseur optique (P2) disposent d’une orientation donnée et figée. Système selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les moyens de polarisation optique sont actifs, de sorte que le système comporte des moyens de réglage de l’orientation de la direction de polarisation du premier polariseur optique (P1) et/ou de l’orientation de la direction de polarisation du deuxième polariseur optique (P2). Système selon la revendication 5, caractérisé en ce que les moyens de polarisation actifs comportent des moyens mécaniques configurés pour faire tourner un ou plusieurs desdits polariseurs optiques en vue d’orienter leur direction de polarisation suivant une orientation donnée selon la zone de visualisation à éclairer. Système selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la carte microfluidique (1) est réalisée par l'assemblage de plusieurs couches (10) superposées, une ou plusieurs couches intégrant ledit circuit microfluidique de la carte microfluidique (1). Système selon la revendication 7, caractérisé en ce que les moyens de polarisation optique comportent au moins un quatrième polariseur optique (P3) inséré entre au moins deux couches de la carte microfluidique. Système selon la revendication 8, caractérisé en ce que le quatrième polariseur optique (P3) est réalisé sous la forme d'une couche de la carte microfluidique. Système selon la revendication 9, caractérisé en ce que le quatrième polariseur optique (P3) comporte au moins une ouverture (O2) positionnée en vis-à-vis d'au moins une deuxième partie du circuit microfluidique. Système selon la revendication 10, caractérisé en ce que les moyens de polarisation optique comportent un cinquième polariseur optique (P30) placé dans ladite ouverture (O2). Système selon l’une des revendications 7 à 11, caractérisé en ce que chaque couche de la carte située au-dessus d'un polariseur optique est réalisée dans un matériau non biréfringent. Système selon la revendication 5, caractérisé en ce que les moyens de polarisation optique actifs comportent au moins une partie (52) à cristaux liquides positionnée entre le premier polariseur optique (P1) et le deuxième polariseur optique (P2) et contrôlé en tension pour transmettre ou bloquer le faisceau lumineux (F1) entre la source lumineuse (2) d’excitation et la carte microfluidique (1) et permettre de sélectionner une ou plusieurs zones à éclairer de la carte microfluidique. Système selon la revendication 13, caractérisé en ce que la partie (52) à cristaux liquides est monopixel ou pixelisé. Système selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisé en ce que le dispositif de détection (3) comporte une caméra. Procédé de surveillance d'un échantillon liquide par fluorescence, mis en œuvre à l'aide d'un système optique de surveillance tel que défini dans l'une des revendications 1 à 15, caractérisé en ce qu'il consiste à : Activer la source lumineuse (2) d'excitation pour orienter le faisceau lumineux en direction de la carte microfluidique (1), Positionner le dispositif de détection (3) par rapport au circuit microfluidique de la carte selon un montage en réflexion, Capturer les signaux de fluorescence (F2) émis par l'échantillon liquide présent dans le circuit microfluidique, après excitation, Le premier polariseur optique (P1) et le deuxième polariseur optique (P2) étant orientés avec une direction de polarisation adaptée pour que la zone de visualisation comporte au moins une partie du circuit microfluidique.