Brevet FR3159967A1 — publié le 20250912

L’invention se situe dans le domaine des immunothérapies passives pour la prophylaxie et le traitement d’intoxications provoquées intentionnellement ou accidentellement par ingurgitation ou inhalation de la ricine, toxine issue de la plante de ricin Ricinus communis . La présente invention concerne plus précisément un anticorps possédant une affinité élevée pour la chaîne A de la ricine et qui permet une neutralisation in vitro de la toxine ainsi qu’une protection à court et long terme contre cette intoxication. La présente invention concerne également un anticorps chimérique murin / humain et un anticorps humanisé pour la prévention ou le traitement d’intoxications à la ricine. Anticorps neutralisant à haute affinité dirigé contre la ricine L’invention se situe dans le domaine des immunothérapies passives pour la prophylaxie et le traitement d’intoxications provoquées intentionnellement ou accidentellement par ingurgitation ou inhalation de la ricine, toxine issue de la plante de ricin Ricinus communis . La présente invention concerne plus précisément un anticorps possédant une affinité élevée pour la chaîne A de la ricine et qui permet une neutralisation in vitro de la toxine ainsi qu’une protection à court et long terme contre cette intoxication. La présente invention concerne également un anticorps chimérique murin / humain et un anticorps humanisé pour la prévention ou le traitement d’intoxications à la ricine. Description de l’art antérieur La ricine est une toxine inhibitrice de la synthèse protéique, produite par un arbrisseau de la famille des euphorbiacées, le ricin. La ricine est une glycoprotéine très toxique d'un poids moléculaire d'environ 60-65 kDa, qui est formée de deux chaînes polypeptidiques A et B, reliées entre elles par un pont disulfure. La chaîne B est une lectine qui se lie aux glycoprotéines contenant du galactose et aux glycolipides exprimés à la surface cellulaire, facilitant l'entrée de la ricine dans le cytosol. La chaîne A inhibe la synthèse protéique en inactivant de façon irréversible la sous unité ribosomale 28S. La ricine est toxique par voie orale, parentérale, et pulmonaire. La ricine dispersée sous forme de poudre ou d'aérosol peut entrainer dans un délai variant de quelques minutes à plusieurs heures des signes d'irritation oculaire (sensation de brûlure, larmoiement, conjonctivite plus ou moins sévère) et pharyngée ainsi qu'une irritation respiratoire plus ou moins marquée : toux, dyspnée, œdème pulmonaire pouvant conduire à un syndrome de détresse respiratoire aigu. La ricine est aujourd’hui classée comme un agent biologique de catégorie B par les Centers for Disease Control and prevention aux Etats-Unis (CDC ricine page web : https://emergency.cdc.gov/agent/ricin/clinicians/epidemiology.asp) et de catégorie 1 par l’Organisation pour l’Interdiction des Armes Chimiques (OIAC) (Tableau 1 OIAC = https://www.opcw.org/fr/convention-sur-linterdiction-des-armes-chimiques/annexes/annex-chemicals/tableau-1). Ces dernières années, une recrudescence d’attaques terroristes à la ricine, jusqu’alors déjouées (aux Etats-Unis en 2013, en France en 2018, en Allemagne en 2018 et en 2023), a pu être observée, sans compter les cas d’empoisonnements intentionnels (suicides) ou accidentels ponctuels chez les enfants, adultes ou les animaux. À ce jour, aucune contremesure médicale efficace n’a été approuvée ou n’est commercialisée pour la prévention ou le traitement d’intoxications à la ricine. Les autorités dont le rôle est d’assurer la sécurité du territoire et de la population doivent donc être préparées à l’éventualité d’une attaque à la ricine. Dans ce cadre de lutte contre le bioterrorisme, disposer d’une contre-mesure médicale, capable de protéger contre ou diminuer les effets d’une intoxication à la ricine, rapidement administrable et efficace est une nécessité. De plus, la ricine existe sous deux isoformes différentes (dites D et E) et peut être extraite et purifiée à partir de différents cultivars, contenant des proportions variables de ces deux isoformes, et peuvent présenter de légères variations de séquences peptidiques d’un cultivar à l’autre. Il est donc indispensable que les contre-mesures médicales produites présentent le même niveau de protection, indistinctement du cultivar d’origine et de l’isoforme. Après une exposition à la ricine, les antidotes suivants peuvent être utilisés : analogues de sucre empêchant la liaison de la ricine à sa cible ou inhibiteurs de la sous-unité catalytique tels que l'azidothymidine. Une autre stratégie pour le traitement d'une intoxication à la ricine est d’administrer des anticorps anti-ricine. Cependant, une immunothérapie passive avec des anticorps ne serait efficace qu’en disposant d’anticorps neutralisants à large spectre anti-ricine (i.e., reconnaissant les deux isoformes D et E, pour des ricines de différents cultivars de ricin). Le développement de nouveaux anticorps permettant de neutraliser les deux isoformes de ricine est ainsi d'un intérêt général pour une prévention et un traitement efficace d'une intoxication à la ricine. Plusieurs anticorps anti-ricine ont déjà été décrits dans la littérature ([1] – [22]). Selon les auteurs de ces études, ces anticorps présentent de bonnes capacités de neutralisation in vitro et de protection in vivo. Cependant, à ce jour, aucune de ces molécules n’a été testée en phase clinique : elles ne peuvent pas être utilisées comme un traitement après exposition à la toxine . Seuls des vaccins contre la ricine ont été testés en phase clinique I (RiVax, RVEc TM ) . Ces produits n’ont qu’une visée prophylactique. De plus, ils nécessitent d’être injectés de façon répétée pour induire une protection et plusieurs jours à semaines avant l’intoxication présumée, ce qui est incompatible avec une situation d’urgence. Les anticorps anti-ricine connus à ce jour ont des structures différentes et ont été obtenus par différentes méthodes. Certains sont monoclonaux (un anticorps de séquence unique, produit par un clone cellulaire unique, ne reconnaissant qu’un seul épitope de l’antigène (ici la ricine)) et d’autres sont polyclonaux (mélange de plusieurs séquences d’anticorps, produits par différents clones cellulaires, et reconnaissant plusieurs épitopes de la ricine). Ces anticorps polyclonaux à activité protectrice contre une intoxication à la ricine peuvent être issus d’immunisations d’animaux, le plus souvent des chevaux ou de chèvres . Pour cela, des administrations répétées de la cible (soit l’une des deux chaines de la ricine, soit la ricine entière inactivée (toxoïde)) sont réalisées, en présence d’adjuvants. Le plasma des animaux est ensuite préparé à partir de ponctions sanguines, puis les anticorps sont purifiés, et lorsqu’ils sont utilisés à des fins thérapeutiques, sont traités par voie enzymatique pour retirer les parties constantes Fc et ainsi obtenir une forme de F(ab’) 2 qui est mieux tolérée par les patients . Les anticorps monoclonaux à activité protectrice anti-ricine sont des immunoglobulines G (IgG) d’origine murine , ou humanisées , ou des nanobodies ou V H Hs, anticorps à domaine unique qui ne comportent que la partie variable de la chaine lourde . Un autre anticorps décrit dans la littérature, appelé JJX12, est un anticorps bispécifique constitué de 2 V H Hs anti-ricine d’épitopes distincts, reliés par un peptide 15-mer . FR2922212 décrit quant à lui l’anticorps anti-ricine appelé « 43RCA-G1 ». Les constantes de dissociation (K D ) des anticorps les plus affins publiés sont de l’ordre du nM, lorsque la dissociation est mesurable (voir Tableau 1). En général, il n’est pas précisé l’isoforme et/ou le cultivar dont est issue la ricine testée , ce qui est une limitation, étant donné le niveau de spécificité des anticorps. Tableau 1 : affinités des anticorps décrits dans la littérature pour la ricine (cultivar source, isoformes D ou E), et méthode utilisée pour les mesurer (Surface Plasmonic Resonance = SPR et BioLayer Interferometry = BLI). Ces tests consistent à mettre des cellules en présence de la ricine (les études de l’art antérieur ne précisent pas l’origine de la ricine ni l’isoforme ou les isoformes utilisée(s)), à une certaine concentration, avec différentes concentrations de l’anticorps à évaluer. À la suite d’un temps d’incubation variable d’un test à l’autre, la viabilité cellulaire est mesurée. La lignée cellulaire, le temps d’incubation, le cultivar de ricine, et la méthode employée pour mesurer la viabilité cellulaire variant d’un test à l’autre, il n’est pas pertinent de comparer les IC 50 (Inhibitory Concentration 50% : concentration en anticorps nécessaire pour avoir 50% de viabilité cellulaire en présence de ricine) calculés dans des tests différents. De plus, la variation d’un seul acide aminé dans l’épitope de reconnaissance peut abolir complètement la liaison d’un anticorps. Il est donc indispensable de caractériser précisément les affinités des anticorps vis-à-vis des isoformes D et E de la ricine, et de connaitre le cultivar d’origine utilisé pour déterminer cette affinité. Le Tableau 2 résume les données disponibles publiées sur les performances de protection in vivo des quelques anticorps anti-ricine décrits comme ayant potentiellement un effet thérapeutique ( i.e. l’anticorps est administré post-exposition à une certaine dose de ricine) : Tableau 2 : performances de protection in vivo des anticorps décrits dans la littérature. i.p : intrapéritonéal ; i.n : intranasal ; i.v : intraveineux ; n.d : non déterminé Il est cependant difficile de comparer ces résultats entre eux. En effet, les souches de souris utilisées peuvent être différentes, les doses de ricine administrées aussi, les équivalences en Doses Létales 50% (DL 50 , doses nécessaires pour tuer 50% des souris) et le cultivar d’origine ou l’isoforme ne sont pas toujours précisés, les voies d’administration de la ricine et/ou de l’anticorps peuvent varier, ainsi que les quantités d’anticorps. Enfin, il est fréquent que les expériences soient arrêtées trop précocement, ce qui est favorable en termes de taux de survie, quand les animaux sont encore dans une phase non stabilisée et que de la mortalité est encore observée. Ces anticorps monoclonaux anti-ricine permettent au mieux un taux de survie supérieur à 50% chez la souris. Cependant, ils ont été injectés très vite après l’exposition à la ricine (maximum 6h post exposition) (Tableau 2), ce qui n’est pas forcément compatible avec des situations de terrain (le délai entre l’intoxication et l’accès au traitement étant souvent supérieur à 6h, le temps que le diagnostic soit effectué et le patient pris en charge par une structure disposant du traitement). Seuls les F(ab’) 2 polyclonaux d’origine équine permettent une survie de 65% 24h post-exposition chez la souris. Or la production à l’échelle industrielle d’anticorps polyclonaux équins présentent plusieurs inconvénients non négligeables comparé à la production de monoclonaux (reproductibilité inter-lots, immunisations coûteuses …) et le format F(ab’) 2 des anticorps peut également soulever d’autres problématiques, notamment de biodisponibilité. Ainsi, il est important aujourd’hui d’identifier des anticorps monoclonaux anti-ricine facilement productibles à grande échelle, qui permettent une neutralisation in vitro des deux isoformes de la toxine ainsi qu’une forte protection à court et long terme chez l’homme intoxiqué intentionnellement ou accidentellement avec cette toxine, ou de manière prophylactique pour empêcher tout effet pathologique en cas de réexposition ou de première exposition. Description détaillée de l’invention Anticorps selon l’invention Pour identifier un anticorps anti-ricine plus efficace que ceux déjà existants, les inventeurs ont immunisé des souris BALB/c avec de la ricine (isoforme E) inactivée, puis, une fois la réponse immunitaire enclenchée, avec de la ricine (isoforme E) non inactivée. Les lymphocytes B spléniques de ces souris ont été prélevés et fusionnés avec des cellules NS1 pour former des hybridomes, sécréteurs d’anticorps dans le surnageant de culture. Ils ont ensuite sélectionné plusieurs hybridomes par criblage de leurs surnageants au moyen de tests EIA (Enzyme Immuno-Assays) afin d’évaluer la spécificité des anticorps sécrétés par ces hybridomes vis-à-vis des isoformes de ricine D et E du cultivar R. carmencita (l’objectif étant in fine d’obtenir des anticorps capables de reconnaitre indifféremment les deux isoformes). Les hybridomes dont les surnageants ont donné les meilleures réponses en EIA ont ensuite été clonés en dilution limite, afin d’obtenir des populations monoclonales d’hybridomes. La capacité neutralisante des anticorps présents dans ces surnageants a, par la suite, été testée avec des cellules Jurkat mises en présence de dilutions de ces surnageants et d’une dose cytotoxique de ricine (environ 10 CD 50 : 10 fois la dose de ricine capable de provoquer 50% de mort cellulaire). L’hybridome sécrétant l’anticorps nommé ERA5 a été finalement sélectionné car présentant une excellente capacité de neutralisation spécifique des deux isoformes D et E de la ricine. Comme le démontrent les exemples ci-dessous, ERA5 a des affinités équivalentes pour les deux isoformes D et E, et du même ordre de grandeur que les anticorps les plus affins publiés, soit un K D de l’ordre du picomolaire (mesuré par BLI). De plus, ses performances de neutralisation et de protection sont bien supérieures à celles des anticorps déjà existants. Bien que les résultats soient difficilement comparables, en moyenne, après quatre répétitions à l’identique de l’expérience, 92% de survie a été observée chez des souris exposées à 5DL 50 de ricine par voie intranasale (~2 µg par souris) et traitées 6h après avec l’anticorps ERA5 à 10mg/kg en i.v. Trois de ces expériences ont démontré un taux de survie de 100%. Ces résultats ont été obtenus en mesurant la survie des souris pendant 21 jours, durée plus longue que celle qui est analysée dans les publications (voir Tableau 2), et moins favorable en termes de survie (il arrive en effet souvent que les expériences soient arrêtées au bout de 6 à 14 jours dans les publications, alors même que des animaux meurent encore au-delà de 14 jours - ce qui favorise les données de survie présentées). Des taux de survie de 50% et 35% ont été également observés avec ERA5 (10mg/kg) injecté en i.v. 18h et 24h respectivement après l’exposition à 5DL 50 de ricine. Ces taux de survie sont supérieurs à tous ceux publiés jusqu’à maintenant avec des anticorps monoclonaux et pour une fenêtre thérapeutique aussi large. Les souris survivantes de ces expériences de protection induite par ERA5 ont été réexposées à la même dose de ricine (5 DL 50 ) 10 à 12 mois après la première intoxication, sans aucun traitement associé. Le taux de survie des souris dans ces expériences de réexposition tardive a été de 100%, indépendamment de l’intervalle de temps entre l’exposition à la ricine et l’administration de ou des anticorps lors de la première expérience ( FIG. 7 ). De plus, un bilan clinique moins lourd à la deuxième exposition a pu être observé. En résumé, les souris semblent physiologiquement moins affectées par la deuxième intoxication, et une immunité active à long terme vis-à-vis de la ricine a donc été induite après le traitement de l’intoxication à l’aide de nos anticorps. La présente invention vise à protéger l’anticorps ERA5 identifié par ces expérimentations, ainsi que ses dérivés fonctionnels et toutes les utilisations prophylactiques et thérapeutiques l’impliquant. Comme il est bien connu, seule une partie de l'anticorps, la région variable, est impliquée dans la liaison de l'anticorps à son épitope. Les régions constantes de l'anticorps activent les effecteurs immunitaires, notamment les phagocytes, les cellules tueuses et le complément, ainsi que d'autres récepteurs tels que le récepteur de Brambell impliqué dans le recyclage biologique des anticorps ; ces régions constantes ne sont pas impliquées dans la liaison à l'antigène. Dans la région variable, on trouve les régions déterminant la complémentarité (CDRs, complementary determining régions), aussi appelées régions hypervariables, qui interagissent directement avec l'antigène. Modifier les CDRs peut donc permettre de modifier l'affinité d'un anticorps. Les régions CDR3 appartenant aux régions variables de la chaîne lourde et de la chaîne légère sont particulièrement importantes pour la reconnaissance de l'antigène. Les CDRs de l’anticorps de l’invention sont résumés dans le tableau 3 ci-dessous : SEQ ID NO : Séquence d’acides aminés CDR1 V L 1 QDISNY CDR2 V L 2 YTS CDR3 V L 3 QQYSKRLPT CDR1 V H 4 GYSITSDYY CDR2 V H 5 ISYDGSN CDR3 V H 6 ARDAHYSNYFDF Tableau 3: CDR de l’anticorps selon l’invention La séquence SEQ ID NO : 2 n’a pas la longueur minimale requise selon la norme WIPO ST26. Elle est donc renseignée en tant que séquence omise dans le listage des séquences XML. Par conséquent, la séquence proprement dite n’est pas renseignée dans la liste des séquences ; à la place de la séquence apparait l’indication « 000 ». La séquence SEQ ID NO : 2 fait néanmoins bien partie de l’invention et présente la séquence YTS, comme indiqué dans le tableau 3 ci-dessus. Selon un premier aspect, la présente invention vise un anticorps ou un fragment fonctionnel d’anticorps, isolé et purifié, capable de reconnaitre et de neutraliser les isoformes D et E de la ricine, et comprenant, ou consistant essentiellement en, ou consistant en : une chaine légère comprenant les CDRs ayant pour séquences SEQ ID NO :1, SEQ ID NO :2 et SEQ ID NO :3 ou ayant une identité de séquence d’au moins 80% avec SEQ ID NO :1, SEQ ID NO :2 ou SEQ ID NO :3, et une chaine lourde comprenant les CDRs ayant pour séquences SEQ ID NO :4, SEQ ID NO :5 et SEQ ID NO :6 ou ayant une identité de séquence d’au moins 80% avec SEQ ID NO :4, SEQ ID NO :5 ou SEQ ID NO :6. Les fragments fonctionnels d’un anticorps donné sont bien connus de l’homme de l’art. Un anticorps dont la région constante (Fc) a été enzymatiquement clivée de façon à en préserver la région charnière est désigné comme un fragment F(ab')2 et conserve les deux sites de liaison à l'antigène. De même, un anticorps dont la région constante, y compris la région charnière a été enzymatiquement clivée, ou qui a été produit sans cette région, est désigné comme un fragment Fab et conserve un des deux sites de liaison à l'antigène. Les fragments Fab consistent en une chaîne légère qui est liée de façon covalente à une portion de la chaîne lourde appelée Fd. Un fragment scFv consiste en la région variable de la chaîne lourde et la région variable de la chaîne légère reliées entre elles par un lien peptidique qui permet aux deux régions variables de s'associer pour former un site de liaison à l'antigène. Dans certains modes de réalisation de l'invention, les fragments Fab ou scFv sont préférés pour les raisons suivantes : a) comme les fragments Fab ou scFv ne possèdent qu'un seul site de liaison à l'antigène, les complexes immuns de grande taille ne peuvent pas se former, b) l'absence de région Fc empêche l'apparition d'une réaction inflammatoire activée par le Fc, telle que l'activation de la cascade du complément, c) la pénétration dans les tissus d'une petite molécule Fab ou scFv est plus facile, et d) la production de Fab ou scFv est facilement réalisée et à faible coût dans des bactéries telles que E. coli. Ainsi, un objet de la présente invention est de fournir des Fabs de l'anticorps anti-ricine selon l'invention, des fragments de cet anticorps plus petits ou plus grands que des fragments Fabs ou encore des peptides de liaison à l'épitope, et en particulier des peptides dérivés des régions hypervariables de l'anticorps anti-ricine selon l'invention. La chaine légère de l’anticorps ERA5 murin a pour séquence (CDR surlignés) : DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRAS QDISNY LNWYQQKPDGTVKLLIY YTS RLHSGVPSRFSGSGSGTEYSLTISNLEPEDIATYYC QQYSKRLPT FGGGTKLEIK = SEQ ID NO : 7 La chaine lourde de l’anticorps ERA5 murin a pour séquence (CDR surlignés) : DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVT GYSITSDYY WNWIRQFPGNKLEWMGY ISYDGSN NYNPSLNNRISITRDVIKNQFFLKLNSVTTEDTATYYC ARDAHYSNYFDF WGQGTTLTVSS = SEQ ID NO : 8 De manière préférentielle, l’anticorps ou le fragment d’anticorps de l’invention est caractérisé en ce que sa chaine légère contient le domaine variable V L de séquence SEQ ID NO :7, ou une séquence d’acides aminés ayant au moins 80% d’identité avec SEQ ID NO :7. De manière préférentielle, l’anticorps ou le fragment d’anticorps de l’invention est caractérisé en ce que sa chaine lourde contient le domaine variable V H de séquence SEQ ID NO :8, ou une séquence d’acides aminés ayant au moins 80% d’identité avec SEQ ID NO :8. Les inventeurs ont pu démontrer que l’affinité de l’anticorps ERA5 envers la ricine D et envers la ricine E du cultivar R. carmencita est inférieure à 10 -12 , lorsqu’elle est mesurée par exemple par interférométrie bi-couche (BLI). Ainsi, l’anticorps ou le fragment d’anticorps de l’invention est de préférence caractérisé en ce que son affinité avec la ricine D et/ou avec la ricine E du cultivar R. carmencita est comprise entre 10 -9 et 10 -12 , voire inférieure à 10 -12 mesurée par interférométrie bi-couche (BLI). La présente invention fournit également des anticorps chimériques dans lesquels la partie Fc et/ou les régions constantes de l'anticorps provient de séquences homologues humaines ou non humaines. Selon un mode de l'invention, la partie Fc de l'anticorps peut être choisie de façon à produire des IgA, des IgM ou des IgG. Selon un autre mode de l'invention, la partie Fc de l'anticorps peut être une partie Fc provenant de souris, chevaux, ovins, bovins ou autres mammifères. La présente invention couvre également des fragments scFv fusionnés à des régions Fc. Après avoir découvert l’excellente protection induite par l’anticorps ERA5 contre une intoxication à la ricine, les inventeurs ont entrepris d’humaniser les séquences polypeptidiques des anticorps ERA5 murins en vue de pouvoir les administrer chez l’homme. Sont également compris par anticorps selon la présente invention, les anticorps « chimériques » ou « humanisés ». Par anticorps « chimérique », on entend désigner un anticorps qui contient une région variable (chaîne légère et chaîne lourde) naturelle dérivée d’un anticorps d’une espèce donnée en association avec les régions constantes de chaîne légère et chaîne lourde d’un anticorps d’une espèce hétérologue à ladite espèce donnée. Les anticorps ou leurs fragments de type chimérique selon l’invention peuvent être préparés en utilisant les techniques de recombinaison génétique. Par exemple, l’anticorps chimérique pourra être réalisé en clonant un ADN recombinant comportant un promoteur et une séquence codant pour la région variable d’un anticorps monoclonal non humain, notamment murin, selon l’invention, et une séquence codant pour la région constante d’anticorps humain. Un anticorps chimérique de l’invention codé par un tel gène recombinant sera par exemple une chimère souris-homme, la spécificité de cet anticorps étant déterminée par la région variable dérivée de l’ADN murin et son isotype déterminé par la région constante dérivée de l’ADN humain. Pour les méthodes de préparation d’anticorps chimériques, on pourra par exemple se référer au document Verhoeyn et al. (BioEssays, 8:74, 1988). Par anticorps « humanisés », on entend désigner un anticorps qui contient des régions CDRs dérivées d’un anticorps d’origine non humaine, les autres parties de la molécule d’anticorps étant dérivée d’un (ou de plusieurs) anticorps humains. En outre, certains des résidus des segments du squelette (dénommés FR) peuvent être modifiés pour conserver l’affinité de liaison (Jones et al., Nature, 321:522-525, 1986 ; Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536, 1988 ; Riechmann et al., Nature, 332:323-327, 1988). Les anticorps humanisés selon l’invention ou leurs fragments peuvent être préparés par des techniques connues de l’homme de l’art (comme par exemple celles décrites dans les documents Singer et al., J. Immun. 150:2844-2857, 1992 ; Mountain et al., Biotechnol. Genet. Eng. Rev., 10:1-142, 1992 ; ou Bebbington et al., Bio/Technology, 10:169-175, 1992). De tels anticorps humanisés selon l’invention sont préférés pour leur utilisation de traitement prophylactique et/ou thérapeutique in vivo. D’autres techniques d’humanisation sont également connues de l’homme de l’art comme par exemple la technique du « CDR Grafting » décrite par PDL faisant l’objet des brevets EP 0 451 261, EP 0 682 040, EP 0 939 127, EP 0 566 647 ou encore US 5,530,101, US 6,180,370, US 5,585,089 et US 5,693,761. Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, l'anticorps anti-ricine selon l'invention possède une partie Fc d'origine humaine. De tels anticorps entiers sont préférés pour l'administration chez l'homme car ils présentent une demi-vie plus longue que des fragments d'anticorps tels que les Fab, et sont plus adaptés à une administration intraveineuse, intra-péritonéale, intramusculaire, sous-cutanée, transdermale ou par aérosol. Comme le montrent les exemples ci-dessous, une forme chimérique murine/humaine a été produite de façon recombinante en cellules ExpiCHO. Cette version d’ERA5 possède des parties variables murines et des fragments constants CH1, CH2, CH3 des anticorps humains. La capacité de neutralisation de l’anticorps ERA5 initial n’a pas été impactée par cette modification ( FIG. 8 ). Un premier lot d’anticorps humanisé à partir d’ERA5 a ensuite été produit (version 1 = v1). Les chaines légères et lourdes de l’anticorps humanisé v1 produit par les inventeurs ont les séquences suivantes (les mutations par rapport aux séquences de l’anticorps ERA5 murin sont soulignées, tandis que les CDRs sont surlignés en gris) : Chaine légère (LC): DIQMTQ SP SSLSAS V GDRVTI T CRASQDISNYLNWYQQKP GKAP KLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGT D Y T LTIS S L Q PED F ATYYCQQYSKRLPTFG Q GTK V EIK = SEQ ID NO : 9 Chaine lourde (HC) : Q VQLQESGPGLVKPSQ T LSLTCSV S GYSITSDYYWNWIRQ P PG KG LEW I GYISYDGSNNYNPSLNNRISI SV D TS KNQF S LKLNSVT AA DTA V YYCARDAHYSNYFDFWGQGT LV TVSS = SEQ ID NO : 10 Cette première forme humanisée v1, produite de façon recombinante, neutralise la ricine in vitro mais avec une IC 50 10 fois plus importante que son parent murin ( FIG. 8 ). Afin de pallier cette perte de neutralisation, une maturation d’affinité par ingénierie moléculaire a été effectuée sur la version humanisée de ERA5. Une nouvelle version humanisée a donc été produite : il s’agit de l’anticorps « ERA5 humanisé v2 » dont la séquence des chaines reprend la séquence d’ERA5 humanisée v1, mais avec 2 substitutions dans la chaine lourde variable : S71T et V72R. Un second lot d’anticorps humanisé à partir d’ERA5 a ensuite été produit (version 2 = v2). Les chaines légères et lourdes de l’anticorps humanisé v2 produit par les inventeurs ont les séquences suivantes (les mutations par rapport aux séquences de l’anticorps ERA5 murin sont soulignées, tandis que les CDRs sont surlignés en gris) : Chaine légère (LC, identique à celle de v1) : DIQMTQ SP SSLSAS V GDRVTI T CRASQDISNYLNWYQQKP GKAP KLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGT D Y T LTIS S L Q PED F ATYYCQQYSKRLPTFG Q GTK V EIK = SEQ ID NO : 9 Chaine lourde (HC, différente de v1 par S71T et V72R ) Q VQLQESGPGLVKPSQ T LSLTCSV S GYSITSDYYWNWIRQ P PG KG LEW I GYISYDGSNNYNPSLNNRISI TR D TS KNQF S LKLNSVT AA DTA V YYCARDAHYSNYFDFWGQGT LV TVSS = SEQ ID NO : 11 De manière intéressante, lorsque l’IC 50 de l’anticorps humanisé v2 est comparée avec l’IC 50 de l’anticorps murin ERA5 et à celle de la v1, on constate que la capacité de neutralisation de l’anticorps humanisé v2 est meilleure que celle de l’anticorps humanisé v1 (bien que moins grande que celle de l’anticorps ERA5 murin décrit ci-dessus). L’anticorps ERA5 est un anticorps monoclonal murin. Pour être administrable chez l’homme, l’anticorps de l’invention est de préférence un anticorps chimérique, humanisé ou humain obtenu à partir de l’anticorps ERA5 humain par des techniques classiques d’humanisation d’anticorps. L’anticorps de l’invention peut également être un anticorps polyclonal, sous réserve que ses CDRs aient pour séquences SEQ ID NO :1-6, ou soient identiques à au moins 80% avec SEQ ID NO :1-6. La présente invention a de préférence pour objet un anticorps anti-ricine selon l'invention qui a été humanisé, en ce sens qu’il comprend, dans la région variable de la chaîne lourde, en comparaison avec la séquence SEQ ID NO :8 d’ERA5 murin, au moins une, de préférence deux, de manière préférée 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, voire 17 mutations sélectionnées dans le groupe constitué par: -D/Q (1) : l’acide aminé Q (glutamine) remplace l'acide aminé D (acide aspartique) à la position 1 - S/T (17) : l'acide aminé T (thréonine) remplace l'acide aminé S (Serine) à la position 17. - T/S (25) : l'acide aminé S (sérine) remplace l'acide aminé T (thréonine) à la position 25. - F/P (41) : l'acide aminé P (proline) remplace l'acide aminé F (Phénylalanine) à la position 41. - N/K (44) : l'acide aminé K (lysine) remplace l'acide aminé N (Asparagine) à la position 44. - K/G (45) : l'acide aminé G (glycine) remplace l'acide aminé K (lysine) à la position 45. - M/I (49) : l'acide aminé I (isoleucine) remplace l'acide aminé M (méthionine) à la position 49. - T/S (71) : l'acide aminé S (sérine) remplace l'acide aminé T (thréonine) à la position 71. - R/V (72) : l'acide aminé V (valine) remplace l'acide aminé R (arginine) à la position 72. - V/T (74) : l'acide aminé T (thréonine) remplace l'acide aminé V (valine) à la position 74. - I/S (75) : l'acide aminé S (sérine) remplace l'acide aminé I (isoleucine) à la position 75. - F/S (80) : l'acide aminé S (sérine) remplace l'acide aminé F (phénylalanine) à la position 80. - T/A (88) : l'acide aminé A (alanine) remplace l'acide aminé T (thréonine) à la position 88. - E/A (89) : : l'acide aminé A (alanine) remplace l'acide aminé E (acide glutamique) à la position 89. - T/V (93) : l'acide aminé V (valine) remplace l'acide aminé T (thréonine) à la position 93. - T/L (115) : l'acide aminé L (leucine) remplace l'acide aminé T (thréonine) à la position 115. - L/V (116) : l'acide aminé V (Valine) remplace l'acide aminé L (leucine) à la position 116. Dans un autre mode de réalisation de l'invention, l'anticorps anti-ricine selon l'invention est humanisé, en ce sens qu’il comprend, dans la région variable de sa chaîne légère, en comparaison avec la séquence SEQ ID NO :7 d’ERA5 murin, au moins une, de préférence deux, de manière préférée 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, ou bien 15 mutations sélectionnées dans le groupe constitué par: - T/S (7) : l'acide aminé S (sérine) remplace l'acide aminé T (thréonine) à la position 7. - T/P (8) : l'acide aminé P (proline) remplace l'acide aminé T (Thréonine) à la position 8. - L/V (15) : l'acide aminé V (valine) remplace l'acide aminé L (leucine) à la position 15. - S/T (22) : l'acide aminé T (thréonine) remplace l'acide aminé S (Serine) à la position 22. - D/G (41) : l'acide aminé G (Glycine) remplace l'acide aminé D (acide aspartique) à la position 41. - G/K (42) : l'acide aminé K (lysine) remplace l'acide aminé G (glycine) à la position 42. - T/A (43) : l'acide aminé A (alanine) remplace l'acide aminé T (thréonine) à la position 43. - V/P (44) : l'acide aminé P (proline) remplace l'acide aminé V (valine) à la position 44. - E/D (70) : l'acide aminé D (acide aspartique) remplace l'acide aminé E (acide glutamique) à la position 70. - S/T (72) : l'acide aminé S (sérine) remplace l'acide aminé E (acide glutamique) à la position 72. - N/S (77) : l'acide aminé N (asparagine) remplace l'acide aminé S (Serine) à la position 77. - E/Q (79) : l'acide aminé E (Acide glutamique) remplace l'acide aminé Q (glutamine) à la position 79. - I/F (83) : l'acide aminé I (isoleucine) remplace l'acide aminé F (phénylalanine) à la position 83. - G/Q (100) : l'acide aminé Q (glutamine) remplace l'acide aminé G (glycine) à la position 100. - L/V (104) : l'acide aminé V (valine) remplace l'acide aminé L (leucine) à la position 104. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, l'anticorps anti-ricine selon l'invention, lorsqu’il est humanisé, comprend au moins une, de préférence deux, de manière préférée 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, voire 17 mutations telles que définies ci-dessus dans la région variable de sa chaîne lourde telle que décrite ci-dessus et au moins une, de préférence deux, de manière préférée 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, ou bien 15 mutations telles que définies ci-dessus dans la région variable de sa chaîne légère telle que décrite ci-dessus. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps ou fragment d’anticorps selon l’invention est humanisé ou complètement humain, et est caractérisé en ce que sa chaine légère contient le domaine variable V L de séquence SEQ ID NO :9, ou une séquence d’acide aminé ayant au moins 80% d’identité avec SEQ ID NO :9, et en ce que sa chaine lourde contient le domaine variable V H de séquence SEQ ID NO :10, ou une séquence d’acide aminé ayant au moins 80% d’identité avec SEQ ID NO :10. Dans un mode de réalisation particulier, l’anticorps ou fragment d’anticorps selon l’invention est humanisé ou complètement humain, et est caractérisé en ce que sa chaine légère contient le domaine variable V L de séquence SEQ ID NO :9, ou une séquence d’acide aminé ayant au moins 80% d’identité avec SEQ ID NO :9, et en ce que sa chaine lourde contient le domaine variable V H de séquence SEQ ID NO :11, ou une séquence d’acide aminé ayant au moins 80% d’identité avec SEQ ID NO :11. Des variants de la séquence d'acides aminés de l'anticorps de la présente invention peuvent être préparés par utilisation d'une partie seulement des séquences nucléotidiques ou peptidiques présentées dans le présent texte. De tels variants comprennent par exemple des délétions et/ou insertions et/ou substitutions de résidus dans la séquence d'acides aminés de l'anticorps. La présente invention concerne tout variant obtenu à partir des séquences présentées dans ce texte dès lors que l'expression de la construction finale possède les caractéristiques attendues d'un anticorps anti-ricine selon l’invention, à savoir un anticorps capable de se lier aux isoformes E et D de la ricine de plusieurs cultivars avec une affinité d’au maximum 10 -9 M. En général, la séquence d'acides aminés des variants de l'anticorps de la présente invention a au moins 80% d'identité de séquence avec la séquence originale de la région variable de l'anticorps anti-ricine, de préférence au moins 85%, 87%, 90% et plus préférablement 95% d'identité de séquence avec la séquence originale de la région variable de l'anticorps anti-ricine ERA5 décrite ci-dessus. Des exemples de variants selon l’invention sont par exemple des variants résultant de l’insertion d'acides aminés en position N ou C-terminale, allant de un résidu à des polypeptides comprenant plus de 100 résidus, ainsi que de l’insertion à l'intérieur de la séquence de un ou plusieurs acides aminés. Des exemples d'insertions terminales sont un anticorps avec un résidu N-terminal méthionine ou un anticorps fusionné avec un épitope marqueur (HA, c-myc, séquence poly-histidine, glycoprotéine D de HSV) ou encore un anticorps fusionné à un polypeptide qui augmente la capacité neutralisante de l'anticorps. Des exemples de variants selon l’invention sont par exemple des variants résultant de la substitution de certains acides aminés originellement présents dans les anticorps de l’invention, par des acides aminés plus favorables à leur production ou à leur effet biologique. Ces variants sont par exemple obtenus par mutagénèse substitutionnelle dans les régions hypervariables ou charpentes de l'anticorps. Des modifications substantielles dans les propriétés biologiques de l'anticorps de la présente invention peuvent être obtenues par sélection de substitutions qui diffèrent significativement dans leur effet sur le maintien (a) de la structure du squelette polypeptidique au niveau de la substitution, (b) de la charge ou de l'hydrophobicité de la molécule au site cible, ou (c) le volume de la chaîne latérale. Les résidus naturels peuvent être divisés en différents groupes selon leurs propriétés : (1) résidus hydrophobes: norleucine, met, ala, val, leu, ile; (2) résidus neutres hydrophiles: cys, ser, thr; (3) résidus acides: asp, glu; (4) résidus basiques: asn, gln, his, lys, arg; (5) résidus influençant l'orientation de la chaîne: gly, pro; et (6) résidus aromatiques: trp, tyr, phe. Les substitutions conservatives sont bien connues. Elles impliquent le remplacement d'un acide aminé avec un autre membre du même groupe (ledit groupe étant un des groupes (1) à (6) tels que définis ci-dessus), tandis que les substitutions non conservatives impliquent le remplacement d'un des groupes par un membre d'un autre groupe. Des exemples de substitutions conservatives au sein de ces six groupes, mais également d’autres exemples de substitutions conservatives, sont montrées dans le tableau 4 ci-dessous. Acide aminé original Substitutions possibles Substitutions préférées Ala (A) Val, Leu, Ile Val Arg (R) Lys, Gln, Asn Lys Asn (N) Gln, His, Asp, Lys, Gln Asp Asp (D) Glu, Asn Glu Cys (C) Ser, Ala Ser Gln (Q) Asn, Ala Ser Glu (E) Asp, Gln Asp Gly (G) Ala Ala His (H) Asn, Gln, Lys, Arg Ile (I) Leu, Val, Met, Ala, Phe Leu, Norleucine Leu (L) Norleucine, Ile, Val, Met, Ala, Phe Ile Lys (K) Arg, Gln, Asn Arg Met (M) Leu, Phe, Ile Leu Phe (F) Leu, Val, Ile, Ala, Tyr Pro (P) Ala Ala Ser (S) Thr Thr Thr (T) Ser Ser Trp (W) Tyr, Phe Tyr Tyr (Y) Trp, Phe, Thr, Ser Phe Val (V) Ile, Leu, Met, Phe, Ala, Norleucine Leu Tableau 4: Exemples de substitutions conservatives N'importe quel résidu cystéine non impliqué dans le maintien de la conformation de l'anticorps peut aussi être substitué, en général par une sérine, pour augmenter la stabilité oxydative de la molécule. De même, des liaisons cystéines peuvent être ajoutées pour augmenter la stabilité de l'anticorps (en particulier dans le cas de fragment Fv). Les variants préférés selon l’invention sont par exemple des variants résultant d’une ou plusieurs mutations induisant une substitution conservative. Les variants selon l’invention peuvent également avoir été obtenus par maturation d'affinité. La maturation d'affinité implique la préparation et le criblage de variants d'anticorps qui possèdent des mutations (délétions, insertions, ou substitutions) dans les régions variables de l'anticorps parental, ainsi que la sélection des variants ayant des propriétés biologiques améliorées telle qu'une meilleure affinité de liaison par rapport à l'anticorps parental ou une meilleure tolérance lors de l'administration à l'homme. Une méthode conventionnelle de génération de tels variants d'affinité améliorée est la maturation d'affinité utilisant les techniques de mutagenèse suivies de sélection, par exemple par « phage display ». Immunoconjugués La présente invention a également pour objet un immunoconjugué comprenant un anticorps anti-ricine selon l'invention lié, de façon directe ou indirecte, à un agent thérapeutique. De tels agents thérapeutiques comprennent des agents chimiques, des radionucléides, des agents immunothérapeutiques, des cytokines, des chimiokines, des toxines ou des inhibiteurs d'enzyme. Des exemples de toxines sont la chaîne A de la diphtérie, la chaîne A de l'exotoxine, la chaîne A de Tabrine, la chaîne A de la modeccin, l'alpha- sarcin, les protéines Aleurites fordii, les protéines dianthines, les protéines Phytolaca americana, l'inhibiteur momordica charantia, la curcine, la crotine, l'inhibiteur sapaonaria officinalis, la gélonine, la mitogélline, la restrictocine, la phénomycine, l'énomycine et le tricothecenes. Des exemples de radionucléide sont 212 Bi, 131 I, 131 In, 90 Y, et 186 Re. Les inventeurs ont identifié un immunoconjugué présentant des propriétés particulièrement avantageuses. Il s’agit d’un anticorps « ERA5-E5 » bispécifique, qui est une version bispécifique où le VHH E5 (séquence publique de VHH E5, telle que décrite dans Rudolph et al., 2014 ([11], https://doi.org/10.1016/j.jmb.2014.05.026)), et dont la structure est décrite dans la base de données Protein Data Bank (PDB) sous le numéro 4LGP (https://www.rcsb.org/structure/4LGP))) a été greffé en position C-terminale de la chaine lourde d’ERA5 humanisé v2 décrit ci-dessus. Ils ont démontré que la capacité de neutralisation de l’anticorps humanisé v2 bispécifique couplé à E5 est bien meilleure que celle de l’anticorps ERA5 murin initial, et, a fortiori, de celle des anticorps humanisés v1 et v2 monospécifiques. Le greffage du VHH E5 sur ERA5 humanisé v2 permet donc d’améliorer considérablement ses capacités neutralisantes, dépassant même celles de la version murine initiale. L'anticorps VHH E5 a pour séquence (PDB 4LGP) : QVQLVETGGGLVQPGGSLTLSCAGSGGTLEHYAIGWFRQAPGKEHEWLVCNRGEYGSTVYVDSVKGRFTASRDNAKNTVYLQLNSLKPDDTGIYYCVSGCYSWRGPWGQGTQVTVSS = SEQ ID NO : 12 Dans un mode de réalisation particulier, la présente invention vise donc un anticorps ou fragment d’anticorps selon l’invention, ledit anticorps étant bispécifique et couplé à l’anticorps VHH E5 ; de préférence dans lequel ledit anticorps VHH E5 comprend, ou consiste essentiellement, ou consiste en, une séquence ayant de préférence au moins 80% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :12, de préférence encore au moins 85% d’identité », de préférence encore au moins 90% d’identité, de préférence encore au moins 95% d’identité avec la séquence SEQ ID NO :12 ; de manière davantage préférée, ledit anticorps VHH E5 comprend, ou consiste essentiellement, ou consiste en, la séquence SEQ ID NO :12. Hybridome Dans un autre aspect, la présente invention protège l’hybridome qui permet de produire les anticorps murins ERA5 de l’invention, tels que décrits ci-dessus. Cet hybridome a été déposé à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes de l’Institut Pasteur, (ayant pour adresse CNCM, Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, F-75724 Paris Cedex 15), le 14 février 2024, sous le numéro CNCM I-6035. Il produit l’anticorps monoclonal ERA5 murin de l’invention. La présente invention vise également l’anticorps monoclonal produit par cet hybridome. Acides nucléiques et cellules hôtes D'après la description ci-dessus des séquences d'acides aminés de la région variable de la chaîne lourde et de la région variable de la chaîne légère des anticorps anti-ricine selon l'invention, l'homme du métier est capable de synthétiser, ou de faire synthétiser, des acides nucléiques qui codent ces séquences d'acides aminés. La présente invention a donc pour objet un acide nucléique codant un anticorps anti-ricine selon l'invention, ou pour un de ses fragments fonctionnels ou immunoconjugués. Plus particulièrement, la présente invention vise donc un acide nucléique isolé, choisi parmi : a) un acide nucléique, ADN ou ARN, codant pour l’anticorps ou un de ses fragments ou immunoconjugués tel que définis dans la présente description ; b) un acide nucléique présent dans les cellules déposées à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes de l’Institut Pasteur, le 14 février 2024, sous le numéro CNCM I-6035, ledit acide nucléique codant pour l’anticorps ou un de ses fragments tel que défini dans la présente description ; et c) un acide nucléique dont la séquence présente un pourcentage d’identité d’au moins 80% après alignement optimal avec l’une des séquences a) ou b). Ces acides nucléiques pourront être compris dans un vecteur recombinant pour le clonage ou pour l'expression des anticorps de l'invention. La présente invention a également pour objet un vecteur comprenant ledit acide nucléique. Ces acides nucléiques pourront être compris dans un vecteur recombinant pour le clonage ou pour l'expression des anticorps de l'invention. Ces vecteurs sont généralement introduits dans des cellules hôtes pour permettre leur clonage ou leur expression. La présente invention vise donc également un vecteur ou une cellule hôte comprenant l’un des acides nucléiques décrits ci-dessus. La présente invention inclut tous les vecteurs recombinants contenant des séquences codantes pour la transformation, transfection ou thérapie génique eucaryote ou procaryote. De tels vecteurs pourront être préparés selon les techniques conventionnelles de biologie moléculaire et comprendront en outre un promoteur approprié, optionnellement une séquence signal pour l'export ou la sécrétion, et des séquences régulatrices nécessaires pour la transcription de la séquence nucléotidique. Un polypeptide de fusion peut être utile pour la purification des anticorps de la présente invention. Le domaine de fusion peut par exemple inclure une queue poly-histidine qui permet la purification sur des colonnes Ni+, ou une ancre membranaire de phage filamenteux qui est particulièrement utile pour le screening de banque, selon la technologie du « phage display ». Le terme «vecteur » se réfère à un acide nucléique dans lequel la séquence d'intérêt peut être insérée par restriction puis ligation pour le transport entre différents environnements génétiques ou pour l'expression dans une cellule hôte. Les vecteurs sont par exemple les plasmides, les cosmides, les chromosomes artificiels de levures (YAC), les chromosomes artificiels de bactéries (BAC) et les chromosomes artificiels dérivés du bactériophage P 1 (PAC), les vecteurs dérivés de virus. Un vecteur de clonage est un vecteur capable de se répliquer dans une cellule hôte et qui est de plus caractérisé par la présence d’un ou plusieurs sites de restrictions par les endonucléases. Un vecteur d'expression est un vecteur dans lequel la séquence d'ADN d'intérêt peut être insérée par restriction ou ligation de telle façon qu'elle puisse être répliquée et/ou transcrite en ARN. Les vecteurs peuvent contenir en outre un ou plusieurs marqueurs de sélection ou d'identification des cellules ayant été transformées ou transfectées avec le vecteur. Un des vecteurs appropriés dans le cadre de l'invention est une molécule d'ADN recombinante adaptée pour recevoir et exprimer une première et une seconde séquence d'ADN, de façon à permettre l'expression d'anticorps hétérodimérique tel qu'un anticorps de longueur complète ou des fragments F(ab')2 ou Fab selon l'invention. Un tel vecteur fournit un système pour indépendamment cloner les deux séquences d'ADN dans deux cassettes séparées présentes dans le vecteur, de façon à former deux cistrons séparés pour l'expression d'un premier et d'un second polypeptide de l'anticorps hétérodimérique. Un tel vecteur d'expression est appelé vecteur di-cistronique. Les anticorps modifiés de la présente invention peuvent être produits dans des cellules eucaryotes telles que des CHO ou des cellules végétales. Compositions comprenant l’anticorps selon l’invention Un autre objet de la présente invention est de fournir une composition comprenant au moins un anticorps anti-ricine selon l'invention, ou un de ses fragments fonctionnels, ou immunoconjugués, tels que décrits ci-dessus. De préférence, cette composition est une composition pharmaceutique, qui contient, outre l’anticorps ou le fragment d’anticorps ou l’immunoconjugué de l’invention, un excipient pharmaceutiquement acceptable. En d’autres termes, la présente invention vise donc un médicament comprenant l’anticorps ou le fragment d’anticorps ou l’immunoconjugué de l’invention et un excipient pharmaceutiquement acceptable. Dans la présente description, on entend désigner par « excipient pharmaceutiquement acceptable » un composé ou une combinaison de composés non toxiques entrant dans une composition pharmaceutique qui 1) n'interfère pas avec l'efficacité de l'activité biologique des ingrédients actifs de la composition et 2) ne provoque pas de réactions secondaires et qui permet par exemple la facilitation de l’administration de l’anticorps de l’invention, l’augmentation de sa durée de vie et/ou de son efficacité dans l’organisme, l’augmentation de sa solubilité en solution ou encore l’amélioration de sa conservation. Ils sont compatibles avec les systèmes biologiques tels qu'une cellule, une culture cellulaire, un tissu ou un organisme. Ces excipients pharmaceutiquement acceptables sont bien connus et seront adaptés par l’homme de l’art en fonction de la nature et du mode d’administration du ou des composés actifs choisis. Prévention / traitement La présente invention vise également une de ces compositions pour son utilisation pour protéger contre (dans le cas d’une administration préventive de l’anticorps) ou pour diminuer (dans le cas d’un traitement administré après l’intoxication) les effets d’une intoxication à la ricine. Par ailleurs, elle vise l’utilisation d’un anticorps selon l’invention, ou d’un de ses fragments fonctionnels, ou un de ses immunoconjugués, pour préparer un médicament destiné au traitement ou à la prévention d'une intoxication par la ricine. La présente invention vise également une méthode de traitement d'un sujet, de préférence un humain, susceptible d'être intoxiqué par la ricine, dans laquelle une quantité thérapeutiquement efficace d’un anticorps selon l’invention, ou d’un de ses fragments fonctionnels, ou d’un de ses immunoconjugués est administré audit sujet. Une quantité thérapeutiquement efficace correspond à une quantité suffisante pour diminuer les symptômes et l'évolution de l'intoxication. Cette quantité peut varier avec l'âge, le sexe du sujet et le stade de l’intoxication et sera déterminée par l'homme du métier. Une quantité thérapeutiquement efficace de l’anticorps selon l’invention, ou d’un de ses fragments fonctionnels, ou d’un de ses immunoconjugués, peut varier entre 0.01 mg/kg et 50 mg/kg. préférablement entre 0.1 mg/kg et 20 mg/kg, et plus préférablement entre 0.1 mg/kg et 10 mg/kg, en une ou plusieurs administrations, pendant un ou plusieurs jours. Le terme « intoxication à la ricine » se réfère à toute maladie causée, directement ou indirectement, par une ingestion, perfusion, inhalation, ou application cutanée, intentionnelle ou accidentelle, de ricine par un individu. La ricine ne présente aucune sélectivité pour un type spécifique de cellules. Comme tous les types de cellules peuvent être affectés, les symptômes dépendent du lieu d'entrée de la toxine dans le corps humain. Selon la dose, les premiers symptômes apparaissent après une période de latence de 2 à 24h. Après inhalation d'une dose importante de ricine, la victime peut présenter des troubles généraux (fièvre, sudation, nausées) et des difficultés respiratoires, allant jusqu'à tableau d'œdème pulmonaire. Les troubles des échanges gazeux peuvent conduire à la mort. Après une ingestion orale de la ricine, la victime souffre de vomissements et de diarrhées pouvant devenir sanguinolentes, engendrant une forte déshydratation voire un collapsus. En quelques jours, les fonctions spléniques, hépatiques et rénales peuvent être considérablement dégradées. La mort due à une intoxication à la ricine peut survenir dans les 36 à 72h après intoxication, selon la dose de ricine et la voie d'intoxication. Le mode d'administration peut être par injection ou par perfusion graduelle. L'injection peut être intraveineuse, intra-péritonéale, intramusculaire, sous-cutanée ou transdermale. Un autre mode d'administration peut être par aérosol. Les préparations pour une administration parentérale peuvent inclure des solutions aqueuses ou non-aqueuses stériles, des suspensions ou des émulsions. Des exemples de solvants non-aqueux sont le propylène glycol, le polyéthylène glycol, des huiles végétales, telle que l'huile d'olive, ou des esters organiques injectables tels que l'éthyl oléate. Des véhicules aqueux comprennent l'eau, des solutions alcool/eau, des émulsions ou des suspensions. Tel qu'utilisé ici, le terme « traiter » ou « traitement » désigne une amélioration de la maladie, du trouble ou de l'état du patient, qui peut être observée au niveau clinique, histologique et/ou biochimique après que la ricine a été ingérée ou administrée au patient. Les termes « traiter » ou « traitement » incluent notamment le non-développement ou l'amélioration d'un symptôme ou d'un paramètre clinique, histologique et/ou biochimique associé à la maladie, au trouble ou à l'état du patient ou l'inhibition, la réduction ou le retardement de la progression ou de l'exacerbation de la maladie, du trouble du patient ou un état (y compris un dommage secondaire causé par la maladie, le trouble ou l'état) soit à un degré statistiquement significatif, soit à un degré détectable par l'homme du métier, une fois que la ricine a été administrée au patient. Tels qu'utilisés ici, les termes « prévenir », « prévention » et « prévenir » font référence à la réduction du risque pour un sujet d'acquérir ou de développer des symptômes d’une intoxication à la ricine, lorsqu’il sera mis en contact avec de la ricine. Les termes « prévenir », « prévention » et « prévenir » comprennent également le retardement de l'apparition et/ou la réduction de la fréquence et/ou de l'intensité des symptômes ou paramètres cliniques, histologiques et/ou biochimiques associés à une intoxication subséquente à la ricine. En particulier, les compositions et méthodes de l’invention permettent de retarder voire empêcher les symptômes d’une seconde intoxication à la ricine après une première intoxication ( FIG. 7 ). Dans ce cas, le principe de prévention s’applique vis-à-vis de la seconde intoxication, bien que l’administration des compositions de l’invention permettent également de « traiter » la première intoxication. Ainsi, les compositions et méthodes de l’invention lorsqu’elles sont utilisées entre deux mises en contact avec la ricine, sont à la fois prophylactiques et thérapeutiques. Utilisations et kits pour détecter la ricine Selon un mode de réalisation particulier, l'anticorps anti-ricine de l'invention peut être utilisé in vitro , par exemple dans des tests diagnostiques immunologiques dans lesquels ils sont utilisés en phase liquide ou liés à un véhicule de phase solide. Des exemples de véhicules bien connus sont le verre, le polystyrène, le polypropylène, le polyéthylène, le dextran, le nylon, l'amylase, la cellulose naturelle ou modifiée, le polyacrylamide, l'agarose ou la magnétite. Des exemples de tests immunologiques utilisant l'anticorps de l'invention sont des radioimmunoessais, des marquages histoimmunologiques, des ELlSA, des western- blots, des essais d'immuno-précipitation, des essais d'immuno-diffusion, des essais de fixation du complément, des analyses au FACS ou encore des analyses par puces à protéines. La présente invention a également pour objet de fournir des méthodes de détection in vitro de la ricine, dans un échantillon biologique, ladite méthode comprenant : la mise en contact de l'échantillon avec au moins un anticorps anti-ricine selon l'invention, et la détection dudit anticorps anti-ricine comme indicateur de la présence de ladite ricine. L'échantillon biologique peut être liquide : par exemple de la salive, de l’urine, du fluide cérébrospinal, du sérum ou du sang, ou solide ou semi-solide, par exemple des tissus ou des matières fécales ou un tissu solide tel qu'utilisé couramment en diagnostic histologique. Dans ce type d’applications, l'anticorps anti-ricine selon l'invention peut être marqué. Des exemples de marqueurs comprennent les enzymes, les radio-isotopes, les composés fluorescents, les métaux colloïdes, les composés chimioluminescents, et les composés bioluminescents. Les méthodes de liaison d'un marqueur à un anticorps sont bien connues de l'homme du métier. Une autre technique de marquage consiste à coupler l'anticorps à des haptènes de faibles poids moléculaire, ces haptènes pouvant être spécifiquement modifiés au moyen d'une seconde réaction. Des exemples d'haptènes sont la biotine, qui réagit avec l'avidine, ou le dinitrophenol, le pyridoxal ou la fluorescéine, qui peuvent réagir avec des anticorps spécifiques anti-haptènes. La présente invention a également pour objet de fournir une méthode de détection in vivo de la ricine, dans laquelle un anticorps anti-ricine selon la présente invention, marqué, est administré à un sujet. La quantité d'anticorps marqué administrée doit être suffisante pour permettre la détection de la liaison de l'anticorps à la toxine. La quantité d'anticorps marqué administrée dépendra des facteurs tels que l'âge et le sexe du sujet, ainsi que du stade de la maladie. La quantité administrée peut varier entre 0.01 mg/kg et 50 mg/kg préférablement entre 0.1 mg/kg et 20 mg/kg, et plus préférablement entre 0.1 mg/kg et 2 mg/kg. Pour effectuer le diagnostic in vivo , l'anticorps anti-ricine de l'invention peut être lié à un radioisotope directement ou indirectement par l'intermédiaire de groupes fonctionnels. Des groupes fonctionnels couramment utilisés sont par exemple l'acide diéthylène-triamine-pentacétique (DTPA) et T acide éthylène-diamine-tétraacétique (EDTA). Des exemples d'ions métalliques radioisotopes sont 111 In, 97 Ru, 67 Ga, 68 Ga, 72 As, 89 Zr et 201 Tl. Les anticorps anti-ricine de l'invention peuvent aussi être marqués avec un isotope paramagnétique pour le diagnostic par imagerie de résonance magnétique (IRM) ou par résonance de spin électronique (ESR). Des radioisotopes gamma émetteurs de positrons peuvent également être utilisés, tels que 157 Gd, 55 Mn, 162 Dy, 68 Ga, 52 Cr, et 56 Fe. Les anticorps anti-ricine de l'invention peuvent également être utilisés in vitro ou in vivo pour suivre l'évolution du traitement de la maladie, par exemple en déterminant l'augmentation ou la diminution du nombre de cellules ciblées par la ricine ou les changements dans la concentration de ricine dans un échantillon biologique. Un objet de la présente invention est enfin de fournir un kit pour la détection in vitro ou in vivo de la ricine. Ce kit peut contenir notamment : un récipient comprenant au moins un anticorps anti-ricine selon l'invention, qui peut être (ou non) marqué, optionnellement, un récipient comprenant des solutions tampons et optionnellement un récipient comprenant des moyens de détection dudit anticorps anti-ricine marqué, tel qu'une protéine de liaison à la biotine (par exemple l'avidine ou la streptavidine) éventuellement liée à un marqueur détectable, telle qu'un marqueur fluorescent ou enzymatique. Ce récipient peut aussi comprendre des moyens de détection dudit anticorps anti-ricine non marqué, en pratique par exemple des anticorps ou des fragments d'anticorps. Légendes des figures FIG. 1 : Courbes de neutralisation de la ricine D+E équimolaire par ERA5 comparées à un anticorps décrit dans la littérature : RB34. Pour ce dernier, chaque point correspond à la moyenne sur le triplicat technique de l’expérience, les barres d’erreur sont l’écart-type standard sur ces triplicats. Pour ERA5, chaque point correspond à la moyenne sur plus de trois expériences distinctes et les barres d’erreur sont les écart-type correspondants. Les anticorps ont été administrés avec 10CD 50 de ricine D+E sur des cellules Jurkat. La viabilité a été mesurée 72h après. Figure 2 : Graphes représentant les paramètres cinétiques de l’anticorps murin ERA5 mesurés par BLI. (Figure 2 A) Courbe de liaison à l’isoforme D de la ricine ; (Figure 2 B) Courbe de liaison à l’isoforme E de la ricine. FIG. 3 : Courbes de neutralisation de la ricine D/E (proportions équimolaires) par ERA5 sur différents types cellulaires. Chaque point sur les courbes correspond à la moyenne sur au moins trois expériences distinctes. Les barres d’erreur correspondent à l’écart-type standard. FIG. 4 : Neutralisation de ricine issue de différentes préparations et cultivars par ERA5. Le mélange équimolaire de ricines D et E purifiées à partir du cultivar R. carmencita est utilisé comme référence de comparaison. La neutralisation de la ricine issue des différents cultivars par ERA5 n’est pas significativement différente de la neutralisation de la ricine de référence (test non paramétrique de Kruskal-Wallis). FIG. 5 : Pourcentage de survie des souris traitées avec ERA5 (10 mg/kg) à différents temps de traitement (6h, 10h, 18h et 24h) après intoxication à 5 DL 50 de ricine D+E (100 μg/kg) Ces courbes représentent la moyenne des pourcentages de survie effectuée sur plusieurs expériences distinctes dont le nombre n’est pas précisé dans la légende du graphe. Chaque condition a été testée sur au moins 10 souris BALB/c. Le groupe contrôle ricine correspond aux groupes qui ont reçu 5DL 50 de ricine en i.n. suivi d’aucun traitement. Ce contrôle a été effectué avec 5 ou 10 souris pour chaque expérience distincte. Le test statistique de Mantel-Cox a été appliqué aux groupes traités comparés au groupe contrôle ricine: * p FIG. 6 : Pourcentage de survie de souris traitées avec différents cocktails d'anticorps (10 mg/kg i.v) 6h après intoxication à 5DL 50 de ricine D+E (100 μg/kg i.n.). Ces pourcentages de survie ont été calculés à partir de groupes de 10 souris BALB/c sur une ou plusieurs expériences distinctes (nombre de répétitions n précisé dans la légende). Le test statistique de Mantel-Cox a été appliqué aux groupes traités comparés au groupe contrôle ricine: * p FIG. 7 : Pourcentage de survie des souris ré-intoxiquées, pour la seconde fois, à 5DL 50 de ricine, 10 mois après leur première exposition. Dans la légende du graphe est indiqué le traitement que 10 BALB/c avaient eu lors de leur première intoxication (10 mg/kg d’anticorps i.v). Pour chaque groupe, le nombre de souris ré-intoxiquées était de : ERA5 6h : 7 ; ERA5 10h : 3, ERA5 18h : 5 ; ERA5 24h : 4. Le test statistique de Mantel-Cox a été appliqué aux groupes traités comparés au groupe contrôle ricine: * p FIG. 8 : Courbes de neutralisation de la ricine D+E par différentes formes d'ERA5 (humanisé = v1). Chaque point correspond à la moyenne de 3 réplicats techniques et les barres d’erreur sont les écart-types standards associés. FIG. 9 : Courbes de neutralisation de la ricine par différentes formes d'ERA5. Exemples Production de l’anticorps de l’invention ERA5 est un anticorps issu de souris BALB/c d’abord immunisées avec de la ricine (isoforme E) inactivée, puis une fois la réponse immunitaire enclenchée, avec la ricine isoforme E non inactivée. Les lymphocytes B spléniques de ces souris ont été prélevés et fusionnés avec des cellules NS1 pour former des hybridomes, sécréteurs d’anticorps dans le surnageant de culture. Les hybridomes ont ensuite été sélectionnés par criblage de leurs surnageants au moyen de tests EIA (Enzyme Immuno-Assays) afin d’évaluer la spécificité des anticorps sécrétés vis-à-vis des isoformes de ricine D et E du cultivar R. carmencita (l’objectif étant in fine d’obtenir des anticorps capables de reconnaitre indifféremment les deux isoformes). Les hybridomes dont les surnageants ont donné les meilleures réponses en EIA ont ensuite été clonés en dilution limite, afin d’obtenir des populations monoclonales d’hybridomes. La capacité neutralisante des anticorps présents dans ces surnageants a, par la suite, été testée avec des cellules Jurkat mises en présence de dilutions de ces surnageants et d’une dose cytotoxique de ricine (environ 10 CD 50 : 10 fois la dose de ricine capable de provoquer 50% de mort cellulaire). L’hybridome sécrétant ERA5 a été finalement sélectionné car présentant une excellente capacité de neutralisation spécifique de la ricine. Cet hybridome a été déposé à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes de l’Institut Pasteur, (ayant pour adresse CNCM, Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, F-75724 Paris Cedex 15), le 14 février 2024, sous le numéro CNCM I-6035. Après production de volumes plus importants de surnageants de culture et purification des anticorps par chromatographie d’affinité sur protéine G, une caractérisation plus approfondie a ensuite été entreprise. Leurs paramètres cinétiques (affinité, reflétée par la mesure du K D , vitesses d’association et de dissociation (respectivement k a et k d )) pour la ricine D et la ricine E ont été mesurés par interférométrie bi-couche (BLI) ( Tableau 5 et Figure 2). La mesure d’affinité par interférométrie bi-couche consiste à immobiliser les anticorps à une concentration fixe sur des biosenseurs contenant de la fibre optique et parcourus par un faisceau de lumière blanche. Ces bio-senseurs vont ensuite plonger dans différentes concentrations de ricine (D ou E). L’association ou dissociation de molécules va modifier l’épaisseur de la bio-couche à la surface de ces senseurs et changer la façon dont la lumière incidente blanche est réfléchie à l’intérieur du senseur. Le décalage spectral des interférences créées (en nm sur les graphes de la Figure 2) permet de mesurer la cinétique d’interaction entre les molécules. Tableau 5 : Mesures des paramètres cinétiques de l’anticorps ERA5 murin par BLI pour les deux isoformes de la ricine. Performances de neutralisation in vitro (anticorps murin) La capacité de neutralisation de la ricine par ERA5 a ensuite été évaluée avec trois modèles cellulaires : cellules Jurkat (lignée cellulaire immortalisée de lymphocytes T CD4 humains), cellules A549 (cellules de l’épithélium pulmonaire alvéolaire de type II humain) et cellules Vero (cellules épithéliales de rein de singe vert). La ricine à 10 CD 50 (CD 50 préalablement déterminée pour chaque type cellulaire, Tableau 6) est incubée 1h à 37°C avec différentes concentrations d’anticorps (100 µg/mL, 667 nM, puis dilution de tiers en tiers sur 12 points au maximum). À la suite de cette incubation les cellules sont ajoutées à raison de 1000 cellules par puits. Après 72h à 37°C, 5% CO 2 et 90% d’humidité, la viabilité cellulaire a été évaluée par mesure de l’ATP résiduel (CellTiterGlo® luminescence Cell Viability Assay, #G7570, Promega). L’IC 50 est déterminée comme la concentration d’anticorps nécessaire pour avoir 50% de viabilité cellulaire en présence de 10 CD 50 de ricine. Dans un même test cellulaire, la viabilité de cellules Jurkat a été mesurée après mise en contact avec de la ricine D+E équimolaire et plusieurs anticorps différents anti-ricine. Plus précisément, les viabilités ont été mesurées en présence de l’anticorps ERA5 de l’invention ou en présence de différents anticorps de l’art antérieur [6] (anticorps RB34, RB37 et RA36, FIG. 1 et tableau 6). Ces résultats montrent que l’anticorps de l’invention a une bien meilleure capacité de neutralisation de la ricine D+E que les deux autres anticorps testés. Tableau 6 : Comparaison des IC 50 d’anticorps publiés avec ERA5, testés sur cellules Jurkat en présence de ricine D+E (équimolaire) à 10CD 50 . n.d. : non déterminé car RB34 et RB37 ne reconnaissent que l’isoforme D de la ricine. Avec ces anticorps, les cellules n’atteignent pas les 50% de viabilité en présence équimolaire de ricine D et E. De plus, l’efficacité anti-ricine de cet anticorps a pu être évaluée dans différents modèles cellulaires (Jurkat, A549, Vero) : Tableau 7 : Détermination de la dose cytotoxique 50% pour chaque type cellulaire (Jurkat, A549, Vero) Ces résultats montrent que l’anticorps de l’invention ERA5 a de bonnes capacités de neutralisation pour les trois types cellulaires testés ( FIG. 3 ). Il a été possible également de déterminer de façon exhaustive les IC 50 d’ERA5 vis-à-vis de différents cultivars de ricine (ricine purifiée de chaque isoforme D et E du cultivar R. Carmencita utilisée comme référence, et ricine provenant de plusieurs autres cultivars). Les résultats sont présentés dans la FIG. 4 . Ainsi, il a pu être démontré que l’anticorps ERA5 de l’invention neutralise de façon équivalente la ricine issue de sept cultivars, malgré des différences de cytotoxicité . Il s’agit du premier anticorps anti-ricine décrit permettant de neutraliser la ricine issue de cultivars différents. Performances in vivo (anticorps murin) Plusieurs expériences in vivo ont été menées afin d’évaluer la capacité protectrice de l’anticorps de l’invention. Des souris BALB/c ont été intoxiquées à 5 fois la DL 50 de ricine D+E (DL 50 = dose nécessaire pour tuer 50% des souris, préalablement déterminée à 20 µg/kg), par voie intranasale. À différents temps après l’intoxication (6, 10, 18, 24h), les souris ont été traitées par injection intraveineuse d’un ou plusieurs anticorps à 10 mg/kg (quantité totale, quelles que soient les combinaisons d’anticorps administrés, 10 souris par groupe de traitement). Elles ont été, par la suite, suivies pendant 21 jours où les signes cliniques et la mortalité ont été relevés quotidiennement. Comme en témoignent les résultats présentés sur la FIG. 5 , l’anticorps de l’invention ERA5 possède d’excellentes capacités de protection contre l’intoxication à la ricine. De plus, en comparaison à d’autres anticorps de l’art antérieur (RB34), la protection induite par ERA5 est bien supérieure ( FIG. 6 ) . La FIG. 6 présente également l’effet d’une combinaison d’ERA5 avec RB34. Dans cette expérience, la quantité d’ERA5 a été divisée par 2 pour que la quantité totale d’anticorps soit égale à la quantité d’un anticorps testé seul. La survie observée n’est cependant pas divisée par 2, ce qui montre un potentiel effet additif entre les deux anticorps (ou une potentielle saturation liée à la dose 10mg/kg utilisée pour ERA5). Les souris survivantes de ces expériences de protection induite par ERA5 ont été réexposées à la même dose de ricine (5 DL 50 ) 10 à 12 mois après la première intoxication, sans aucun autre traitement associé. Toutes les souris ainsi réexposées ont survécu, avec des signes cliniques (dont la perte de poids) moins importants que lors de leur première exposition (à titre indicatif, voir l’expérience de réexposition dont les résultats sont présentés sur la FIG. 7 ). Conclusion : Comme pour les résultats de neutralisation in vitro , il est difficile de comparer entre eux les résultats obtenus in vivo avec ceux obtenus avec les anticorps décrits dans la littérature. En effet, les souches de souris utilisées ont pu être différentes, ainsi que les doses de ricine administrées et les équivalences en Doses Létales 50% (DL 50 ). De plus, le cultivar d’origine ou l’isoforme ne sont pas toujours précisés, les voies d’administration de la ricine et/ou de l’anticorps peuvent varier, ainsi que les quantités d’anticorps. Enfin, il est fréquent que les expériences soient arrêtées trop précocement, ce qui est favorable en termes de taux de survie, quand les animaux sont encore dans une phase non stabilisée et que de la mortalité est encore observée. Bien que les résultats soient difficilement comparables, en moyenne, après quatre répétitions à l’identique de l’expérience, 92% de survie a été observée chez des souris exposées à 5DL 50 de ricine par voie intranasale (~2 µg par souris) et traitées 6h après avec l’anticorps ERA5 à 10 mg/kg en i.v. Trois de ces expériences ont démontré un taux de survie de 100%. Ces résultats ont été obtenus en mesurant la survie des souris pendant 21 jours, durée plus longue que celle qui est analysée dans les publications (voir Tableau 2), et moins favorable en termes de survie (il arrive en effet souvent que les expériences soient arrêtées au bout de 6 à 14 jours dans les publications, alors même que des animaux meurent encore au-delà de 14 jours - ce qui favorise les données de survie présentées). Des taux de survie de 50% et 35% ont été également observés avec ERA5 (10 mg/kg) injecté en i.v. 18h et 24h respectivement après l’exposition à 5DL 50 de ricine. Ces taux de survie sont supérieurs à tous ceux publiés jusqu’à maintenant avec des anticorps monoclonaux et pour une fenêtre thérapeutique aussi large. Immunité active et prolongée induite par l’immunothérapie passive Les souris survivantes de ces expériences de protection induite par ERA5 ont été réexposées à la même dose de ricine (5 DL 50 ) 10 à 12 mois après la première intoxication, sans aucun traitement associé. Le taux de survie des souris dans ces expériences de réexposition tardive a été de 100%, indépendamment de l’intervalle de temps entre l’exposition à la ricine et l’administration de ou des anticorps lors de la première expérience ( FIG. 7 ). De plus, un bilan clinique moins lourd à la deuxième exposition a pu être observé. En résumé, les souris semblent physiologiquement moins affectées par la deuxième intoxication, et une immunité active à long terme vis-à-vis de la ricine a donc été induite après le traitement de l’intoxication à l’aide de nos anticorps. Peu de publications abordent ce genre d’effet concernant la ricine, et ce jamais à aussi long terme, dans un modèle murin. Néanmoins, W-G Hu et collaborateurs mentionnent une immunité active prolongée 5 mois après la première exposition . N.J. Mantis et collaborateurs ont montré une immunité active induite par l’administration de complexes immuns de leurs anticorps avec la ricine par voie intranasale ou intrapéritonéale dans leur modèle murin . Cette immunité n’a été démontrée que jusqu’à 3 mois après l’administration des complexes immuns, par exposition de ces souris à 5 DL 50 (1 µg ) de ricine non complexée 90 jours après et évaluation de leur survie ainsi que par un suivi régulier des titres en anticorps anti-ricine dans le sérum de ces souris durant les 3 mois. Dans cet article, il a également été démontré que l’injection de ricine seule à faible dose ne suffisait pas pour induire une immunité prolongée, et que cette immunité dépendait bien des anticorps utilisés pour la formation des complexes . Ces observations suggèrent qu’après la protection immédiate vis-à-vis de l’intoxication à la ricine, une immunité active induite à long terme pourrait également être possible chez l’homme. Conclusion Dans l’hypothèse (très peu probable) d’une deuxième ré-exposition à la ricine de personnes ayant été exposées et traitées avec ERA5 une première fois, ces personnes présenteraient très probablement une protection immunitaire à cette deuxième exposition. Ces données suggèrent également que des complexes immuns anticorps (ERA5)/ricine, administrés à des personnes, permettraient une protection long terme de type vaccinale. Version murine ERA5 Les chaines variables lourde (VH) et légère (VL) de l’anticorps murin ont été séquencées par séquençage de type SANGER: VL ERA5 murin (CDR surlignés) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRAS QDISNY LNWYQQKPDGTVKLLIY YTS RLHSGVPSRFSGSGSGTEYSLTISNLEPEDIATYYC QQYSKRLPT FGGGTKLEIK = SEQ ID NO : 7 VH ERA5 murin (CDR surlignés) DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVT GYSITSDYY WNWIRQFPGNKLEWMGY ISYDGSN NYNPSLNNRISITRDVIKNQFFLKLNSVTTEDTATYYC ARDAHYSNYFDF WGQGTTLTVSS = SEQ ID NO : 8 Tableau des CDRs des anticorps (murins) de l’invention Tableau 8 : CDRs des anticorps (murins) de l’invention Version chimérique de ERA5 Une forme chimérique murine/humaine a été produite de façon recombinante en cellules ExpiCHO. Cette version d’ERA5 possède des parties variables murines et des fragments constants CH1, CH2, CH3 des anticorps humains. La capacité de neutralisation n’a pas été impactée par cette modification ( FIG. 8 ). Humanisation de l’anticorps ERA5 Après avoir découvert l’excellente protection induite par l’anticorps ERA5 contre une intoxication à la ricine, une première séquence humanisée (v1) des fragments variables d’ERA5 a été produite et testée ( FIG. 8 ). Séquences humanisées (mutations en gras souligné ) v1 VL ERA5 humanisée v1 DIQMTQ SP SSLSAS V GDRVTI T CRASQDISNYLNWYQQKP GKAP KLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGT D Y T LTIS S L Q PED F ATYYCQQYSKRLPTFG Q GTK V EIK = SEQ ID NO : 9 VH ERA5 humanisée v1 Q VQLQESGPGLVKPSQ T LSLTCSV S GYSITSDYYWNWIRQ P PG KG LEW I GYISYDGSNNYNPSLNNRISI SV D TS KNQF S LKLNSVT AA DTA V YYCARDAHYSNYFDFWGQGT LV TVSS = SEQ ID NO : 10 Cette première forme humanisée, produite de façon recombinante, neutralise la ricine in vitro mais avec une IC 50 9 fois plus importante que son parent murin ( FIG. 8 ). Afin de pallier cette perte de neutralisation, une maturation d’affinité par ingénierie moléculaire a été effectuée sur la version humanisée de ERA5. Le fragment Fab de cette forme humanisée ainsi que le fragment Fab murin d’origine ont été exprimés à la surface de levures en YSD et une analyse combinatoire a été effectuée par cytométrie en flux. Cinq positions mutées de la forme humanisée ont été remplacées, une à une, par l’acide aminé murin afin de déterminer les positions essentielles pour regagner l’affinité d’origine (voir Tableau 9 ). Les clones permettant d’avoir une affinité équivalente à la forme murine ont été triés puis séquencés par NGS. Tableau 9 : acides aminés murins et humains, et leurs positions dans la séquence d'ERA5, qui ont varié pour effectuer la maturation d'affinité. Parmi l’ensemble des levures triées qui ont permis de regagner l’affinité de liaison d’origine à la ricine, la population la plus fréquente (19% du total) exprime les acides aminés T et R murins aux positions 71 et 72 de la séquence VH d’ERA5. Deux nouvelles versions humanisées ont donc été produites : Un anticorps « ERA5 humanisé v2 » dont la séquence des chaines reprend la séquence d’ERA5 humanisée v1, mais avec 2 substitutions dans la chaine lourde variable : S71T et V72R. Un anticorps « ERA5-E5 » bispécifique, qui est une version bispécifique où le VHH E5 (ayant pour séquence SEQ ID NO : 12 ; séquence publique telle que décrite dans Rudolph et al., 2014 ([11], https://doi.org/10.1016/j.jmb.2014.05.026)), et dont la structure est décrite dans la base de données Protein Data Bank (PDB) sous le numéro 4LGP (https://www.rcsb.org/structure/4LGP)) a été greffé sur la chaine lourde en position C-terminale d’ERA5 humanisé v2. Séquences humanisées (mutations en gras souligné) v2 VL ERA5 humanisée v2 (identique à v1) DIQMTQ SP SSLSAS V GDRVTI T CRASQDISNYLNWYQQKP GKAP KLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGT D Y T LTIS S L Q PED F ATYYCQQYSKRLPTFG Q GTK V EIK = SEQ ID NO : 9 VH ERA5 humanisée v2 (différente de v1 par S71T et V72R ) Q VQLQESGPGLVKPSQ T LSLTCSV S GYSITSDYYWNWIRQ P PG KG LEW I GYISYDGSNNYNPSLNNRISI TR D TS KNQF S LKLNSVT AA DTA V YYCARDAHYSNYFDFWGQGT LV TVSS = SEQ ID NO : 11 Les IC 50 de tous les anticorps produits dans le cadre de ces travaux ont été testés sur des cellules Jurkat mises en contact avec de la ricine D+E équimolaire à 10 CD 50 . Les anticorps (à différentes concentrations) ont été pré-incubés pendant 1h avec de la ricine D+E équimolaire (concentration fixe 10CD 50 ) puis les cellules Jurkat ont été ajoutées (1000 cellules/condition). L’incubation a duré 72h et l’ATP produit a été mesuré par réaction luminescente (puis converti en viabilité par rapport aux contrôles sans ricine). Si on compare l’IC 50 de l’anticorps humanisé v1 avec l’IC 50 de l’anticorps murin ERA5, on constate que cette première valeur est 9 fois plus élevée que la deuxième. Ainsi, on peut dire que la capacité de neutralisation de l’anticorps humanisé v1 est 9 fois moins grande que celle de l’anticorps ERA5 murin décrit ci-dessus. ERA5 murin ERA5 hum v1 IC50 (nM) 0,610 5,307 IC50 (µg/mL) 0,092 0,796 ERA5 murin ERA5 hum v2 ERA5-E5 IC50 (nM) 0,448 1,841 0,012 IC50 (µg/mL) 0,067 0,276 0,002 De plus, si on compare l’IC 50 de l’anticorps humanisé v2 avec l’IC 50 de l’anticorps murin ERA5, on constate que cette première valeur n’est plus que 4 fois plus élevée que la deuxième. Ainsi, on peut dire que la capacité de neutralisation de l’anticorps humanisé v2 est meilleure que celle de l’anticorps humanisé v1 (bien que moins grande que celle de l’anticorps ERA5 murin décrit ci-dessus). En revanche, si on compare l’IC 50 de l’anticorps humanisé v2 couplé à E5 avec l’IC 50 de l’anticorps murin ERA5, on constate que cette première valeur est 37 fois plus faible que la deuxième. Ainsi, on peut dire que la capacité de neutralisation de l’anticorps humanisé v2 bispécifique couplé à E5 est bien meilleure que celle de l’anticorps ERA5 murin décrit ci-dessus, et, a fortiori, de celle des anticorps humanisés v1 et v2 monospécifiques. Conclusion : la version 2 humanisée d’ERA5 a permis de diminuer l’écart de performance observé entre la version 1 et la version murine sans toutefois regagner complètement les capacités neutralisantes. Le greffage du VHH E5 sur ERA5 humanisé v2 permet d’améliorer considérablement les capacités neutralisantes, dépassant même celles de la version murine. Références bibliographiques [2] E. S. Vitetta, J. E. Smallshaw, and J. Schindler, “Pilot phase IB clinical trial of an alhydrogel-adsorbed recombinant ricin vaccine,” Clin. 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Anticorps ou fragment d’anticorps selon la revendication 1, caractérisé en ce que sa chaine légère contient le domaine variable V L de séquence SEQ ID NO :7, ou une séquence d’acides aminés ayant au moins 80% d’identité avec SEQ ID NO :7. Anticorps ou fragment d’anticorps selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que sa chaine lourde contient le domaine variable V H de séquence SEQ ID NO :8, ou une séquence d’acides aminés ayant au moins 80% d’identité avec SEQ ID NO :8. Anticorps ou fragment d’anticorps selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que son affinité avec la ricine D et avec la ricine E du cultivar R. carmencita est inférieure à 10 -12 mesurée par interférométrie bi-couche (BLI). Anticorps ou fragment d’anticorps selon la revendication 4, ledit anticorps étant humanisé, ou humain, caractérisé en ce que sa chaine légère contient le domaine variable V L de séquence SEQ ID NO :9, ou une séquence d’acides aminés ayant au moins 80% d’identité avec SEQ ID NO :9, et en ce que sa chaine lourde contient le domaine variable V H de séquence SEQ ID NO :11, ou une séquence d’acides aminés ayant au moins 80% d’identité avec SEQ ID NO :11. Anticorps ou fragment d’anticorps selon la revendication 4, ledit anticorps étant humanisé, ou humain, caractérisé en ce que sa chaine légère contient le domaine variable V L de séquence SEQ ID NO :9, ou une séquence d’acides aminés ayant au moins 80% d’identité avec SEQ ID NO :9, et en ce que sa chaine lourde contient le domaine variable V H de séquence SEQ ID NO :10, ou une séquence d’acides aminés ayant au moins 80% d’identité avec SEQ ID NO :10. Anticorps ou fragment d’anticorps selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, ledit anticorps étant bispécifique et couplé à l’anticorps VHH E5. Composition pharmaceutique comprenant l’anticorps ou le fragment d’anticorps tel que décrit dans les revendications 1 à 7, et un excipient pharmaceutiquement acceptable. Composition pharmaceutique selon la revendication 8, pour son utilisation pour protéger contre ou diminuer les effets d’une intoxication à la ricine. Un acide nucléique isolé, choisi parmi : a) un acide nucléique, ADN ou ARN, codant pour l’anticorps ou un de ses fragments tel que défini dans les revendications 1 à 7 ; b) un acide nucléique dont la séquence présente un pourcentage d’identité d’au moins 80% après alignement optimal avec l’une des séquences a).