Brevet FR3153829A1 — publié le 20250411

La présente invention concerne une souche de champignon filamenteux appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle un gène codant pour une perméase à arginine (CAN1), ou un variant ou un gène orthologue a été invalidé. L’invention concerne également les différentes utilisations de cette souche, ainsi que le procédé de modification génétique permettant d’obtenir une souche selon l’invention. L’invention porte aussi sur l’utilisation de la L-canavanine pour comme marqueur de sélection de transformants dans lesquelles un gène codant une perméase à arginine (CAN1), ou un variant ou un gène orthologue a été invalidé. (pas de figure) MARQUEUR DE SELECTION NON ANTIBIOTIQUE POUR LES CHAMPIGNONS FILAMENTEUX La présente invention concerne une souche de champignon filamenteux appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle un gène codant pour une perméase à arginine (CAN1), notamment le gène ID 18487637 (TRI67806), ou un variant ou un gène orthologue, a été invalidé. L’invention concerne également les différentes utilisations de cette souche, ainsi que le procédé de modification génétique permettant d’obtenir une souche selon l’invention. L’invention porte aussi sur l’utilisation de la L-canavanine comme marqueur de sélection de transformants dans lesquelles ledit gène codant pour une perméase à arginine CAN1, ou un variant ou un gène orthologue, a été invalidé. Contexte de l’invention Les souches de champignon filamenteux, tel que le champignon Trichoderma reesei, sont aujourd’hui de plus en plus utilisées pour la production de protéines d’intérêt. Le développement des souches fongiques industrielles requiert l’usage de marqueurs de sélection afin de sélectionner les souches transformées, porteuses de la marque génétique d’intérêt. Les souches transformées sont classiquement sélectionnées à l’aide de gènes marqueurs tels qu’un gène de résistance à un antibiotique. Cependant, l’utilisation de tels marqueurs antibiotiques est parfois proscrit ou non souhaitable. Le marqueur auxotrophique URA peut être utilisé au lieu d’un marqueur antibiotique pour cribler les souches de champignon transformées, de même que le marqueur dominant amdS . Cependant, ces derniers possèdent des inconvénients : l’utilisation du gène URA comme marqueur de sélection est recyclable, mais cela entraine une accumulation de copies de gène invalide, et le marqueur amdS n’est en pratique pas recyclable. Il existe ainsi un besoin pour un nouveau marqueur de sélection non antibiotique. La L-canavanine, l’analogue structurel guanidinooxy de la L-arginine, est un acide aminé non protéique synthétisé par les plantes supérieures. Elle a été isolée pour la première fois en 1932 du haricot gris (Kitagawa et al.), et a permis de mieux comprendre les effets biologiques et le mode d’action des acides aminés non protéiques qui agissent comme analogues des acides aminés protéiques. Les arginyl-ARNt synthétases de nombreuses espèces exemptes de L-canavanine l’utilisent et l’incorporent dans la chaîne polypeptidique naissante. La production de protéines contenant de la L-canavanine perturbe les réactions critiques du métabolisme de l’ARN et de l’ADN et de la synthèse des protéines. La L-canavanine affecte également les réactions régulatrices et catalytiques du métabolisme de l’arginine et modifie les réactions biochimiques essentielles. Elle devient un puissant antimétabolite de l’arginine dans un large éventail d’espèces. Ces propriétés délétères de la L-canavanine en font un constituant végétal secondaire hautement toxique qui fonctionne probablement comme un agent allélochimique qui dissuade l’activité alimentaire des insectes phytophages et d’autres herbivores. Dès 1946, la L-canavanine est utilisée avec succès comme antimétabolite pour limiter la croissance chez les bactéries (Volcani et al.), puis en 1948 chez les champignons (Horowitz et SRB, 1948). Sa première utilisation chez la levure Saccharomyces cerevisiae (SRB, 1955) est rapportée en 1954. L’étude de la levure va permettre de comprendre le mécanisme d’action de la L-canavanine (Grenson et al.). Cette dernière est importée du milieu de culture vers l’intérieur de la cellule via la perméase à l’arginine dont le gène porte la dénomination CAN1. La L-canavanine en pénétrant dans le cytoplasme va être incorporée aux protéines naissantes et les rendre non fonctionnelles, entrainant la mort cellulaire. L’inactivation de la perméase par mutation empêche la L-canavanine de pénétrer dans la cellule et de fait la rend résistante. En 1979 pour la première fois la L-canavanine est utilisée dans la levure comme marqueur de sélection (Broach et al.), en invalidant le gène CAN1 . En 1986, La séquence nucléique complète du gène CAN1 (Broach et al. ; Ahmad et Bussey) est publiée. Le gène CAN1 a déjà été utilisé comme marqueur de sélection chez la levure (Broach et al. ; Wong et al.) mais jamais chez d’autres champignons, et encore moins chez des champignons appartenant au genre Trichoderma. La présente invention repose ainsi sur les résultats des Inventeurs qui ont montré que la L-canavanine pouvait être utilisée comme marqueur de sélection de souches de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. Bref exposé de l’invention La présente invention concerne donc une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue, a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. La présente invention concerne aussi un procédé de modification génétique d’une souche de champignon selon l’invention, appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, comprenant une étape d’invalidation : - du gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue, ou - du gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue. La présente invention concerne aussi l’utilisation de la L-canavanine comme marqueur de sélection d’une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. La présente invention concerne aussi un procédé de sélection d’une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé comprenant : - (i) la mise en contact d’une souche avec un milieu de culture comprenant de la L-canavanine, et - (ii) la sélection de la souche si celle-ci est capable de croitre dans le milieu de culture. La présente invention concerne aussi un procédé de production de biomasse de champignon, comprenant une étape de culture, dans un milieu de culture comprenant un substrat approprié, d'une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. La présente invention concerne également un procédé de production de protéines d’intérêt, notamment des enzymes, comprenant une étape de culture, dans un milieu de culture comprenant un substrat approprié, d'une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. La présente invention concerne en outre un procédé de production de produits biosourcés à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, comprenant une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. La présente invention concerne aussi un procédé de production d'un jus sucré ou de sucres à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques comprenant une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. La présente invention concerne aussi un procédé de production d'un biocarburant à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, comprenant une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. La présente invention concerne également différentes utilisations de la souche selon l’invention, appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, -dans laquelle le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue, ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé-, pour la production de biomasse, pour la production de protéines d’intérêt, pour l'hydrolyse de la cellulose ou de la lignocellulose en glucose, pour la production de produits biosourcés à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, ou pour la production d’un jus sucré ou de sucres à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, ou encore pour la production de biocarburant à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques. Dans un premier aspect, la présente invention concerne ainsi une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle (a) le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant, ou un gène orthologue de ce gène ou (b) le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. Ainsi, dans la souche selon l’invention, le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue n’est jamais exprimé ou n’est plus fonctionnel. Cela signifie également que dans la souche selon l’invention le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue est invalidé. La présente invention concerne ainsi une souche variante de champignon, dans laquelle (a) le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue a été invalidé ou (b ) le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue a été invalidé. En d’autres termes, cela signifie par exemple que dans la souche selon l’invention la protéine correspondant au gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue n’est pas produite. Alternativement, la protéine correspondant au gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue peut être produite, mais elle n’est pas fonctionnelle. La souche selon l’invention est ainsi une souche ayant une perméase à arginine déficiente. Selon l’invention, le terme « souche variante » s’entend d’une souche modifiée génétiquement par rapport à une souche parente. Selon l’invention, le terme « souche parente » s’entend ainsi d’une souche dont est issue ou dérivée la souche variante, et dans laquelle le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue n’a pas été invalidé, ou dans laquelle le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue n’a pas été invalidé. La souche selon l’invention correspond ainsi à une souche variante dérivée d’une souche parente, ladite souche variante étant capable de croitre dans un milieu minimum comprenant de la L-canavanine tandis que la souche parente n’est pas capable de croitre dans un milieu minimum comprenant de la L-canavanine. Selon l’invention, le terme « gène fonctionnel » s’entend notamment d’un gène qui permet de produire une protéine fonctionnelle. Selon l’invention, le terme « protéine fonctionnelle » s’entend notamment d’une protéine qui possède une activité, par exemple avec la protéine codée par le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, il s’agit d’une activité de perméase à arginine. Selon l’invention, une souche de champignon s’entend d’un champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes. Selon un mode de réalisation, la souche de champignon selon l’invention s’entend d’un champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes ou à la classe des Eurotiomycètes. Selon un mode de réalisation, la souche de champignon selon l’invention s’entend d’un champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes ou à la classe des Eurotiomycètes ou à l’ordre des Sordariales. De préférence il s’agit d’une souche appartenant à l’ordre des Hypocréales, notamment au genre Trichoderma , et plus particulièrement à l’espèce Trichoderma reesei . Lorsque le champignon appartient à l’espèce Trichoderma reesei , selon l’invention, la souche parente de Trichoderma reesei peut être la souche QM6a (déposée sous le numéro ATCC 13631), ou encore une souche issue de l’isolat naturel QM6a (notamment obtenue par mutagénèse aléatoire ou dirigée), telle que la souche Rut-C30 (déposée sous le numéro ATCC 56765), la souche NG14 (déposée sous le numéro ATCC 56767) ou encore la souche QM9414 (déposée sous le numéro ATCC 26921). Typiquement, les souches selon l’invention peuvent être sélectionnées dans un milieu comprenant de la L-canavanine tout en conservant leur capacité à produire des protéines d’intérêt. Le gène CAN1, qui est annoté gène ID 18487637 dans le génome de référence de Trichoderma reesei ( TRIREDRAFT_67806 ou TRI67806), code pour une protéine qui appartient à la famille des perméases à arginine. Ces perméases permettent d’importer la L-canavanine à l’intérieur des cellules. Dans un tel cas la L-canavanine va ensuite être incorporée aux protéines synthétisées, les rendre non fonctionnelles et entrainer la mort cellulaire. Dans les souches selon l’invention la L-canavanine ne peut pas être incorporée et n’entraine donc pas la mort cellulaire. Selon l’invention, le gène ID 18487637 ( CAN1 ) est représenté par la SEQ ID NO : 1, mais peut également correspondre à un variant de ce gène ou à un gène orthologue. Préférentiellement, le gène ID 18487637 ( CAN1 ) est uniquement représenté par la SEQ ID NO : 1. Selon l’invention, « un variant de gène ou un gène orthologue » s’entend d’un gène qui code également pour une protéine qui appartient à la famille des perméases à arginine. Le variant du gène ID 18487637 ( CAN1 ) ou un gène orthologue du gène ID 18487637 ( CAN1 ) est de préférence représenté par une séquence ayant au moins 80% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1. Le variant du gène ID 18487637 ( CAN1 ) ou un gène orthologue du gène ID 18487637 ( CAN1 ) correspond ainsi à un gène dérivé de la séquence représentée par SEQ ID NO : 1. Plus particulièrement, le variant du gène ID 18487637 ( CAN1 ) ou un gène orthologue du ID 18487637 ( CAN1 ) est représenté par une séquence ayant au moins 90% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1, notamment au moins 95%, de préférence au moins 98% ou 99%. Selon l’invention, la protéine de SEQ ID NO : 2 correspond à une perméase à arginine. Les termes « protéine variante, ou une protéine orthologue », s’entendent ainsi de protéines ayant également cette activité de perméase à arginine. De préférence, une protéine variante d’une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine orthologue d’une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, correspond ainsi à une protéine ayant au moins 80% d’identité avec ladite SEQ ID NO : 2, notamment au moins 90%, plus particulièrement au moins 95%, 98% ou 99%. Le gène ID 18487637 ( CAN1 ) est représenté par la SEQ ID NO : 1, et la protéine codée par le gène ID 18487637 ( CAN1 ) est représentée par la SEQ ID NO : 2. Ainsi, le variant du gène ID 18487637 ( CAN1 ) ou un gène orthologue du gène ID 18487637 ( CAN1 ) peut coder soit pour la protéine de SEQ ID NO : 2, soit pour une protéine ayant au moins 80% d’identité avec ladite SEQ ID NO : 2, notamment au moins 90%, plus particulièrement au moins 95%, 98% ou 99%. Selon l’invention le terme « au moins 80% » signifie toutes les valeurs comprises entre 80% et 100%, notamment les valeurs de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% et 100%. L’homme du métier sait calculer un pourcentage d’identité entre deux séquences. Par exemple, selon l’invention, le pourcentage d'identité d'une séquence donnée par rapport à SEQ ID NO : 1 ou SEQ ID NO : 2 s’entend du pourcentage d’identité par rapport à la longueur totale des séquences. Le pourcentage correspond ainsi au nombre de nucléotides/résidus identiques entre cette séquence donnée et SEQ ID NO : 1 ou 2 divisé par le nombre de nucléotides ou résidus dans la plus longue des deux séquences. Ainsi, dans un mode de réalisation, dans ladite souche selon l’invention, le gène ID 18487637 ( CAN1 ) invalidé correspond à un gène représenté par la SEQ ID NO : 1 ou à un gène ayant au moins 80% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1, notamment au moins 90% et plus particulièrement au moins 95%. Dans un mode de réalisation encore plus préféré, dans ladite souche selon l’invention, le gène ID 18487637 ( CAN1 ) invalidé correspond à un gène représenté par la SEQ ID NO : 1. Selon ce dernier mode de réalisation, la souche selon l’invention comprend ainsi une délétion du gène codant pour la protéine représentée par la SEQ ID NO : 2. Selon un mode de réalisation, ladite souche de l’invention correspond ainsi à une souche dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ) représenté par la SEQ ID NO : 1, ou un gène ayant au moins 80% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1, a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine ayant au moins 80% d’identité avec la protéine de SEQ ID NO : 2, a été invalidé. Selon un mode de réalisation préféré, l’invention concerne une souche de champignon filamenteux appartenant à l’ordre des Hypocréales, notamment au genre Trichoderma , et plus particulièrement à l’espèce Trichoderma reesei , dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ) représenté par la SEQ ID NO : 1, ou un gène ayant au moins 80% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1, a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine ayant au moins 80% d’identité avec la protéine de SEQ ID NO : 2, a été invalidé. Selon l’invention, le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. Toutes les techniques d’invalidation de gène peuvent être utilisées pour obtenir une souche selon l’invention. A titre d’exemples non limitatifs, l’invalidation peut être réalisée par mutagénèse par PCR, mutagénèse dirigée par oligonucléotide, interférence à ARN, à l’aide de méganucléases ou nucléases à doigts de zinc, TALEN (Transcription activator-like effector nucleases), ou encore la technologie CRISPR/cas, ... De préférence, l’invalidation du gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue, ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, est réalisée par édition génomique. Une telle édition génomique peut être réalisée avec ou sans matrice de réparation. Selon un mode de réalisation, l’invalidation est une délétion de tout ou partie du gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue. De préférence, l’invalidation est une délétion de tout ou partie du gène ID 18487637 ( CAN1 ) représenté par SEQ ID NO : 1 ou une délétion de tout ou partie du gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2. Dans un deuxième aspect, l’invention concerne également un procédé de modification génétique d’une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, comprenant une étape d’invalidation du gène ID 18487637 ( CAN1 ) ou un variant ou un gène orthologue ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue. Le procédé de modification génétique selon l’invention permet ainsi d’obtenir des souches pouvant être sélectionnées dans un milieu comprenant de la L-canavanine par rapport à la souche de champignon parent. Selon un mode de réalisation, l’invention concerne ainsi un procédé de modification génétique d’une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, comprenant une étape d’invalidation : - du gène ID 18487637 ( CAN1 ) représenté par la SEQ ID NO : 1, ou un gène ayant au moins 80% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1, ou - du gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine ayant au moins 80% d’identité avec la protéine de SEQ ID NO : 2. Dans un troisième aspect, la présente invention concerne aussi l’utilisation de la L-canavanine comme marqueur de sélection d’une souche de champignon selon l’invention appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. Selon un mode de réalisation, l’invention concerne ainsi l’utilisation de la L-canavanine comme marqueur de sélection d’une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ) représenté par la SEQ ID NO : 1, ou un gène ayant au moins 80% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1 a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine ayant au moins 80% d’identité avec la protéine de SEQ ID NO : 2 a été invalidé. De préférence, l’invention concerne l’utilisation de la L-canavanine comme marqueur de sélection d’une souche dans laquelle le gène ID 18487637 ( CAN1 ) ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2 a été invalidé. Selon l’invention, la L-canavanine s’entend de l’acide aminé non protéinogène représentée par la formule semi-développée : (NH 2 ) 2 C=N-O-CH 2 -CH 2 -CH(NH 2 )-COOH, ou encore par la formule chimique suivante : [Chem 1] . Cela s’entend également de la L-canavanine sous forme de sel. L’expression « marqueur de sélection » s’entend ici que la L-canavanine permet de sélectionner les souches ayant intégré une modification génétique par rapport à celles qui ne l’ont pas intégrée (en l’occurrence l’invalidation du gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue). De préférence, la L-canavanine est présente dans un milieu de culture d’une souche de champignon. De préférence, le milieu de culture est dépourvu d’arginine, optionnellement également dépourvu d’alanine, d’aspartate et/ou de glutamate. Le milieu de culture peut ainsi être dépourvu d’arginine, d’alanine, d’aspartate et/ou de glutamate. Selon un mode de réalisation préféré, la L-canavanine est présente dans un milieu minimum de culture d’une souche de champignon, notamment un milieu minimum dépourvu d’arginine, optionnellement également dépourvu d’alanine, d’aspartate et/ou de glutamate. Selon un autre mode de réalisation préféré, la L-canavanine est présente dans un milieu synthétique de culture d’une souche de champignon dépourvu d’arginine, optionnellement également dépourvu d’alanine, d’aspartate et/ou de glutamate. Selon l’invention, un « milieu minimum » s’entend d’un milieu comportant uniquement les éléments nécessaires à la croissance de la souche de champignon, et un « milieu synthétique » s’entend d’un milieu dont la quantité et la qualité de chaque élément présent dans le milieu est bien définie. Le milieu synthétique peut comprendre des éléments non nécessaires à la croissance du microorganisme. Les milieux minimum et synthétique s’opposent à un « milieu riche », qui ne contient pas uniquement des éléments nécessaires à la croissance de la souche de champignon, et dont les quantité et qualité des éléments ne sont pas bien définies. Un milieu minimum pour Trichoderma est décrit par exemple par Penttilä et al. Selon un mode de réalisation la L-canavanine est utilisée à une concentration comprise entre 50 et 200 µg/mL dans le milieu de culture. Dans un quatrième aspect, la présente invention concerne aussi un procédé de sélection d’une souche de champignon, appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé, comprenant : - (i) la mise en contact d’une souche avec un milieu de culture comprenant de la L-canavanine, et - (ii) la sélection de la souche si celle-ci est capable de croitre dans le milieu de culture. Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne ainsi un procédé de sélection d’une souche de champignon, appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ) représenté par la SEQ ID NO : 1, ou un gène ayant au moins 80% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1 a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine ayant au moins 80% d’identité avec la protéine de SEQ ID NO : 2 a été invalidé, comprenant : - (i) la mise en contact d’une souche avec un milieu de culture comprenant de la L-canavanine, et - (ii) la sélection de la souche si celle-ci est capable de croitre dans le milieu de culture minimum ou un milieu synthétique dépourvu d’arginine, optionnellement également dépourvu d’alanine, d’aspartate et/ou de glutamate. Selon un mode de réalisation, ledit procédé comprend avant l’étape (i) une étape d’invalidation du gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou d’un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, dans une souche de champignon, appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes. Selon ce mode de réalisation, ledit champignon appartient de préférence à l’ordre des Hypocréales. Selon un mode de réalisation préféré, la présente invention concerne ainsi un procédé de sélection d’une souche dans laquelle le gène ID 18487637 ( CAN1 ) représenté par SEQ ID NO : 1 ou le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, a été invalidé, comprenant : - une étape d’invalidation du gène ID 18487637 ( CAN1 ) représenté par SEQ ID NO : 1 ou du gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2 dans une souche, - la mise en contact de ladite souche avec un milieu de culture comprenant de la L-canavanine, et - la sélection de la souche si celle-ci est capable de croitre dans le milieu de culture, notamment le milieu de culture minimum ou ledit milieu synthétique de culture dépourvu d’arginine, optionnellement également dépourvu d’alanine, d’aspartate et/ou de glutamate. Le procédé de sélection selon l’invention permet ainsi de sélectionner les souches correctement transformées. Dans un cinquième aspect, la présente invention concerne aussi un procédé de production de biomasse de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, comprenant une étape de culture, dans un milieu de culture comprenant un substrat approprié, d'une souche de champignon selon l’invention, dans laquelle le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. Cette étape permet ainsi la croissance de la souche de champignon selon l’invention, permettant en particulier l’obtention de la biomasse. L’homme du métier connait les substrats appropriés à la croissance des souches de champignon. Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne ainsi un procédé de production de biomasse de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, comprenant une étape de culture, dans un milieu de culture comprenant un substrat approprié, d'une souche de champignon selon l’invention, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ) représenté par la SEQ ID NO : 1, ou un gène ayant au moins 80% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1 a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine ayant au moins 80% d’identité avec la protéine de SEQ ID NO : 2 a été invalidé. Dans un sixième aspect, la présente invention concerne également un procédé de production de protéines d’intérêt, notamment des enzymes, comprenant une étape de culture, dans un milieu de culture comprenant un substrat approprié, d'une souche de champignon selon l’invention appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue a été invalidé. L’invention concerne ainsi l’utilisation d’une souche de champignon selon l’invention, pour la production de protéines d’intérêt. Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne ainsi un procédé de production de protéines d’intérêt, notamment des enzymes, comprenant une étape de culture, dans un milieu de culture comprenant un substrat approprié, d’une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ) représenté par la SEQ ID NO : 1, ou un gène ayant au moins 80% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1 a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine ayant au moins 80% d’identité avec la protéine de SEQ ID NO : 2 a été invalidé. De façon avantageuse, ledit procédé comprend ainsi une phase de croissance d’une souche de champignon selon l’invention, puis une phase de croissance et de production de protéines d’intérêt par ladite souche. Encore plus préférentiellement, ladite phase de croissance est réalisée en présence d’un substrat de croissance et ladite phase de croissance et de production de protéines d’intérêt est réalisée en présence d’un substrat inducteur. Le substrat de croissance et le substrat inducteur sont de préférence des substrats carbonés. Ainsi, le substrat carboné de croissance est choisi de préférence parmi le lactose, le glucose, le xylose, les résidus obtenus après fermentation éthanolique des sucres monomères des hydrolysats enzymatiques de biomasse cellulosique, et/ou un extrait brut de pentoses hydrosolubles provenant du prétraitement d’une biomasse cellulosique. Le substrat carboné inducteur est ainsi choisi de préférence parmi le lactose, le cellobiose, le sophorose, les résidus obtenus après fermentation éthanolique des sucres monomères des hydrolysats enzymatiques de biomasse cellulosique, et/ou un extrait brut de pentoses hydrosolubles provenant du prétraitement d’une biomasse cellulosique. Selon l’invention, les protéines d’intérêt sont toutes les protéines pouvant être produites par un champignon, de façon naturelle ou bien par modification génétique (par exemple après transformation à l’aide d’un vecteur approprié). De façon avantageuse, les protéines d’intérêt selon l’invention sont des enzymes, notamment des enzymes cellulolytiques telles que des cellulases ou des hémicellulases. De façon préférée, les enzymes sont des cellulases. Selon l’invention, le terme « cellulases » s’entend plus particulièrement des enzymes choisies parmi les endoglucanases, les exoglucanases et les glucosidases, et plus particulièrement la β-glucosidase. Le terme « cellulase » fait plus particulièrement référence à une enzyme adaptée à l'hydrolyse de la cellulose et permettant aux microorganismes (tels que Trichoderma reesei ) qui les produisent d'utiliser la cellulose comme source de carbone, en hydrolysant ce polymère en sucres simples (glucose). Selon un mode de réalisation l’invention concerne ainsi l’utilisation d’une souche de champignon selon l’invention, pour la production de protéines d’intérêt, plus particulièrement des enzymes, notamment des enzymes cellulolytiques telles que des cellulases. Dans un septième aspect, la présente invention concerne également un procédé de production de produits biosourcés à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, comprenant une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche de champignon selon l’invention appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. L’invention concerne donc également l’utilisation d’une souche de champignon selon l’invention, pour la production de produits biosourcés à partir de de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques. Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne ainsi un procédé de production de produits biosourcés à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, comprenant une étape de production d’enzymes cellulolytiques, par une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ) représenté par la SEQ ID NO : 1, ou un gène ayant au moins 80% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1 a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine ayant au moins 80% d’identité avec la protéine de SEQ ID NO : 2 a été invalidé. Dans un huitième aspect, la présente invention concerne également un procédé de production d’un jus sucré ou de sucres à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, comprenant une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche de champignon selon l’invention appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. L’invention concerne donc également l’utilisation d’une souche de champignon selon l’invention, pour la production de jus sucré ou de sucres à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques. Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne ainsi un procédé de production d’un jus sucré ou de sucres à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, comprenant une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche de champignon appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ) représenté par la SEQ ID NO : 1, ou un gène ayant au moins 80% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1 a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine ayant au moins 80% d’identité avec la protéine de SEQ ID NO : 2 a été invalidé. Dans un aspect préféré, le procédé de production d’un jus sucré ou de sucres à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques selon l’invention, comprend : i) une étape de prétraitement d’un substrat cellulosique ou lignocellulosique afin d’obtenir un substrat prétraité, ii) une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche selon l’invention, iii) une étape d’hydrolyse enzymatique du substrat prétraité obtenu à l’étape i), en présence des enzymes cellulolytiques obtenues à l’étape ii), afin d’obtenir un hydrolysat. Les sucres (ou jus sucré, les sucres se trouvant généralement sous forme de solution aqueuse) sont ainsi obtenus à l’issue de l’étape d’hydrolyse. De préférence ce sont des sucres avec 5 carbones (dits sucres en C5) et/ou des sucres avec 6 carbones (dits sucres en C6). Le procédé selon l’invention permet ainsi de traiter la biomasse (ligno)cellulosique pour produire des jus sucrés dits de seconde génération (2G). Ces jus sucrés peuvent être utilisés pour produire d’autres produits par voie biochimique, notamment par voie fermentaire (par exemple des alcools comme l‘éthanol, le butanol), ou d’autres molécules, par exemple des solvants tels que l’acétone etc…), ou être valorisés tels quels, après d’éventuelles étapes de séparation/ traitements, par exemple dans l’industrie chimique/agroalimentaire. Dans un neuvième aspect, la présente invention concerne un procédé de production d’un biocarburant à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, comprenant une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche de champignon selon l’invention appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle le gène ID 18487637 ( CAN1 ), ou un variant ou un gène orthologue ou un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé. L’invention concerne ainsi l’utilisation d’une souche de champignon selon l’invention, pour la production de biocarburant à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques. Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne un procédé de production d’un biocarburant à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, comprenant une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche de champignon selon l’invention appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637 ( CAN1 ) représenté par la SEQ ID NO : 1, ou un gène ayant au moins 80% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1 a été invalidé, ou - le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine ayant au moins 80% d’identité avec la protéine de SEQ ID NO : 2 a été invalidé. Selon l’invention, le terme « biocarburant » s’entend plus particulièrement d’un biocarburant de seconde génération, c’est-à-dire issu de ressources non alimentaires. Selon l’invention, le terme « biocarburant » peut également être défini comme étant tout produit issu de la transformation de la biomasse et pouvant être utilisé à des fins énergétiques. D’une part et sans vouloir se limiter, on peut citer à titre d’exemple des biogaz, des produits pouvant être incorporés (éventuellement après transformation ultérieure) à un carburant ou être un carburant à part entière, tels que des alcools (l’éthanol, le butanol et/ou l’isopropanol selon le type d’organisme fermentaire utilisé), des solvants (acétone), des acides (butyrique), des lipides et leurs dérivés (acides gras à courtes ou longues chaînes, esters d’acides gras), ainsi que l’hydrogène. De manière préférée, le biocarburant selon l’invention est un alcool, par exemple l’éthanol, le butanol et/ou l’isopropanol. Plus préférentiellement, le biocarburant selon l’invention est l’éthanol. Dans un autre mode de réalisation, le biocarburant est du biogaz. Dans un autre mode de réalisation, le produit est une molécule intéressant l'industrie chimique, comme par exemple, un autre alcool tel que le 1,2-propane diol, le 1,3-propane diol, le 1,4-butane diol, le 2,3-butane diol, des acides organiques comme l'acide acétique, propionique, acrylique, butyrique, succinique, malique, fumarique, citrique, itaconique, ou des hydroxyacides comme l'acide glycolique, hydroxypropionique, ou lactique. Dans un aspect préféré, le procédé de production d'un biocarburant à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques selon l’invention, comprend : i) une étape de prétraitement d'un substrat cellulosique ou lignocellulosique afin d’obtenir un substrat prétraité, ii) une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche selon l’invention, iii) une étape d'hydrolyse enzymatique du substrat prétraité obtenu à l’étape i), en présence des enzymes cellulolytiques obtenues à l’étape ii), afin d’obtenir un hydrolysat, iv) une étape de fermentation alcoolique de l'hydrolysat obtenu, v) une étape de séparation, notamment par distillation. Dans un aspect encore plus préféré, le procédé de production d'un biocarburant à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, selon l’invention, comprend : i) une étape de prétraitement d'un substrat cellulosique ou lignocellulosique afin d’obtenir un substrat prétraité, ii) une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche selon l’invention iii) une étape d'hydrolyse enzymatique du substrat prétraité obtenu à l’étape i), en présence des enzymes cellulolytiques obtenues à l’étape ii), afin d’obtenir un hydrolysat, iv) une étape de fermentation alcoolique de l'hydrolysat obtenu, v) une étape de séparation, notamment par distillation, lesdites étapes iii) et iv) étant réalisées simultanément. Cela est typiquement le cas dans les procédés de production dits « SSF » (Simultaneous Saccharification and Fermentation). Selon un mode de réalisation particulier, l’étape de prétraitement d'un substrat cellulosique ou lignocellulosique est une étape de mise en suspension en phase aqueuse dudit substrat cellulosique ou lignocellulosique. Selon un mode de réalisation particulier, l’hydrolysat obtenu à l’étape iii) est un hydrolysat contenant du glucose. Selon un mode de réalisation particulier, l’étape de fermentation alcoolique de l'hydrolysat obtenu est une étape de fermentation, en présence d'un organisme fermentaire, du glucose issu de l'hydrolysat de manière à produire un moût de fermentation. Un organisme fermentaire est par exemple une levure. Selon un mode de réalisation particulier, l’étape de séparation est une séparation du biocarburant et du moût de fermentation, notamment par distillation. Selon un mode de réalisation encore plus préféré, le substrat cellulosique ou lignocellulosique à hydrolyser est mis en suspension en phase aqueuse à raison de 6 à 40% de matière sèche, de préférence 20 à 30%. Le pH est ajusté entre 4 et 5,5, de préférence entre 4,8 et 5,2 et la température entre 40°C et 60°C, de préférence entre 45°C et 50°C. La réaction d'hydrolyse est démarrée par l'ajout des enzymes agissant sur le substrat prétraité. La quantité d’enzymes habituellement utilisée est de 10 à 30 mg de protéines excrétées par gramme de substrat prétraité ou moins. La réaction dure généralement de 15 à 48 heures. La réaction est suivie par dosage des sucres libérés, notamment le glucose. La solution de sucres est séparée de la fraction solide non hydrolysée, essentiellement constituée de lignine, par filtration ou centrifugation et ensuite traitée dans une unité de fermentation. Selon un autre mode de réalisation encore plus préféré, lorsque l’étape d’hydrolyse et de fermentation sont réalisées conjointement, les enzymes et l'organisme fermentaire sont ajoutés simultanément puis incubés à une température comprise entre 30°C et 35°C pour produire un moût de fermentation. Selon ce mode de réalisation, la cellulose présente dans le substrat pré-traité est convertie en glucose, et en même temps, dans le même réacteur, l'organisme fermentaire (par exemple une levure) convertit le glucose en produit final selon un procédé de SSF (Simultaneous Saccharification and Fermentation) connu de l'homme du métier. Selon les capacités métaboliques et hydrolytiques de l'organisme fermentaire, le bon déroulement de l'opération peut nécessiter l'addition d'une quantité plus ou moins importante de mélange cellulolytique exogène. Dans un dixième aspect, l’invention concerne également l’utilisation d’une souche de champignon selon l’invention appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, pour l'hydrolyse de la cellulose ou de la lignocellulose en glucose. Dans la présente description, les définitions et préférences indiquées dans un aspect s’appliquent mutatis mutandis aux autres aspects. Par exemples, toutes les définitions et préférences indiquées dans le premier aspect de l’invention ci-dessus s’appliquent également aux deuxième, troisième, quatrième, cinquième, sixième, septième, huitième, neuvième et dixième aspect. Brève description des Figures D’autres caractéristiques, détails et avantages de l’invention apparaîtront à la lecture des Figures annexées. Fig. 1 FIG. 1 représente le test de sensibilité de spores de Trichoderma dans un milieu PDA (colonne de gauche, sans L-Canavanine ; colonne de droite, avec 200 µg/mL de L-canavanine) et un milieu minimum (MM) (colonne de gauche, sans L-Canavanine ; colonne de droite, avec 50 µg/mL de L-canavanine). Les chiffres représentent le nombre de spores étalées sur chaque milieu . Fig. 2 FIG. 2 représente le schéma de la matrice de réparation utilisée dans l’Example 2. MR5’ et MR3’ représentent les deux flanques de 1kb de séquences identiques aux deux régions de 1kb flanquant le gène ciblé, ici ID 18487637 (67806-TrF1047C) ; Prom cpc représente le promoteur CPC ; IM7 représente le promoteur IM7 ; Term TrpC représente le terminateur TrPC et Hygromycine représente le gène de résistance à l’hygromycine. Le terme « Cas9 437 » fait référence à l’outil CRISPR-Cas9 utilisé. Séquences de la présente invention Nom de la séquence Séquence SEQ ID NO : 1 ATGACGGACGAGAAGCTCGTCCACGGCATCAGCGACAAGCCCGCCGGCGATGTCTCCAACCCGGACGTCGAGACGGGCCAGACCGACGAGGGCCTGAAGCGCGAGCTGCACTCGCGGCACCTGCAGTTCATCGCCATCGGCGCGGCCCTCGGCACGGGCCTGTTCCTGGGCATCGGCGGCGCCCTGTCCAAGGCCGGCCCCGGGTCGCTCTTCATCTCGTTCCTGTTCCTCGGCTCCGTCGTCTTCTCCATCATGACGGCGCTGGGCGAGATGGCGTCGTACATCCCCGTGACGGGCGCCTTCACCGTGTACGCCTCGCGCTTCATCGACCCGACGCTGGGTTTCGCCATGGGCTGGATCTACTGGTTCAGCTGGGTCATCACCATCGGGCTGGAGCTGACGGCCAGCGGGCTCATCATCCAGTACTGGACCGAGTCGGTCAGCATCGGCGTCTGGATCGCCATCTTCTGGGTCGTCTTCACGGCCGCGCAGTTCCTGCCCACCTTCGTCTTTGGCGAGATGGAGGCGTACCTGTCGAGCATCAAGGTCGTCACCATTGTCGGCTTCGTCATCTTCGGCATCTGCGTCAACGCTGGCGTCGGCGACCAGGGCTACATTGGCTTCAAGTACTGGCGCGAGCCGGGCGCCTTTGCCGAGTACATGGTCGACGGCGCCATTGGCAAGTTTGTCGGCTTCTGGACGGTGCTCGTGACGGCGGGCTTCAGCTTCCAGGGCACGGAGCTGGTCGTCGTCGGCGCGGGCGAGACGGCCAACCCGCGCACGGCGATCCCGTCGGCCATCCGCTGGACCTTTTGGGCCGTCTTTTTGCTCTTCAACTGCACCGTCTTCTTCGTCGGCATCAACGTCCCCTACGACAACCCGGACCTGCAAAACGGCTCGACCAACGCGTCCGCATCGCCGCTCGTCATCGTCGCCAAGCTGGCCGGCATCCAGGCGCTGCCGTCCATCATCAACGCCGTCCTGCTGACCGCCGTCCTGTCCGCCGCCAACTCGGACATCTACTCGAGCAGCCGCATCCTCGTCGCCATGGCCGGCGAGGGCCACGCGCCCGCCTTCTTCAAGCGCACCAACAAGTACGGCACCCCCTACTACGCCGTCGCCTGCTGCTCCGCCTTTGGCCTGCTGGCCTTTCTCAACCTCAGCAACAACGGCACCGTCGTCTTCAACTGGCTGCTCAACATCACCGCCGTCGCCGGCTTCATCAGCTGGGCCCTCATCAACCTGTGCCACATCCGCTTCATGCGCGTCCTCAAGTACCAGAACATCCCCCGCGACGAGCTGCCCTACAAGGCCCCCTTCCAGCCCTACCTGTCCTGGTTCGGCTTCTTCTTCAACGTCCTCATCCTGCTGACCAACGGCTTCACCGTCTTCATCGACTGGGACACGAGCACCTTTTTCGCCTGCTACGTCAGCGTCATGCTCTTTATCGTGCTGTACGTCGGCCACAAGCTTGTCTACAGGACAAAGATTATTCCCGTGTCCGAGGTGGACATTTCCAAGGGCCGGTCAGGGCAGTAA SEQ ID NO : 2 MTDEKLVHGISDKPAGDVSNPDVETGQTDEGLKRELHSRHLQFIAIGAALGTGLFLGIGGALSKAGPGSLFISFLFLGSVVFSIMTALGEMASYIPVTGAFTVYASRFIDPTLGFAMGWIYWFSWVITIGLELTASGLIIQYWTESVSIGVWIAIFWVVFTAAQFLPTFVFGEMEAYLSSIKVVTIVGFVIFGICVNAGVGDQGYIGFKYWREPGAFAEYMVDGAIGKFVGFWTVLVTAGFSFQGTELVVVGAGETANPRTAIPSAIRWTFWAVFLLFNCTVFFVGINVPYDNPDLQNGSTNASASPLVIVAKLAGIQALPSIINAVLLTAVLSAANSDIYSSSRILVAMAGEGHAPAFFKRTNKYGTPYYAVACCSAFGLLAFLNLSNNGTVVFNWLLNITAVAGFISWALINLCHIRFMRVLKYQNIPRDELPYKAPFQPYLSWFGFFFNVLILLTNGFTVFIDWDTSTFFACYVSVMLFIVLYVGHKLVYRTKIIPVSEVDISKGRSGQ SEQ ID NO : 3 CATCCAGTACTGGACCGAGT CGG SEQ ID NO : 4 TTCTTTTCTTCTTGTCTGTTGCTTTTTTTGCGCTCTTTTTTTGCTCTCAAGGCCTCGAGGCTTCTAGCAGCCGCAAAAATGGGTGTAGAGCCAAGCGCTAGAGAAGGCCGCTAGAAGGATGCAGAGAAGGGCGAAAAGAGTCGTGCTTGTTGTAGTCGAGCTTGTTTAGGTCAGGGGGAGAGGATCTCTGTAGGTACCTATTACAGTACTACGCCCTTACGATGACGACTATGGTAATGTTTGATTTCGAATTGCTTCTTGTTGATGTTGTTGTTGTTGTTGTATCTTGACGACGTCTCGAGGTCAACTGAAGTTGTTGGAGGTGCCCTGGCCAAGAGTCTCCGTGTCATCGGCATCAACGCCTTACGAGTGACGCATTCCAGAGAGAACATGGCATGGCTTTGCCTCGTCTCCATGGCTTGACCGGCTTTGCTGTGCCGAGGACTGAAGTAGCCTAGTCTCCATCAGAGTCTTCATCGATGGGGCTTATATGGGGCGGCAAGTGAGGGTCTCGCCAGCAGGTGATAAGCCAGCGTGTATGTAGCTGTTCTTAGTGTAGCAGCCCGACAATAAGGTAACGTTGATGTGTCCGAGTTTTTATTATTGGAAGGGCAATGTGACGCTCTCTAGTCTCTACTCTAGTATGTATATAGATTGAGCGCCCCAGAGGTTGTCGAGCCCTTTTCCGCCTTGTTTTTCTTCCGTCTTGCGGATGGTTTTGGTTGCTTTGCGGGCGATATAGAGAGAGGTCTTGCCTTTCGCCCCCTCCTTGTCCGGAAGCGTCGTTATATATACTACTCTTCGTTTTTCTCTCAATTGCCACACCGACGAGCCGATTTCGATTGAATTTTTTCTCTTCTGTCTTTCTTTCGCTCTCAATCTTGAAAGTTTGACTCATCTCTCTCTCTCTCTCTTCTGTTCAATCCGTCGCGCGGCCCTTCAGACGACCAAACGATGGCCGACGACGAAAAGACCCCGACGCCTCCCCCCGTCGGCCCCCTC GGTGGGGCAGTGCTAGTGTGTGTACCGACCCGCAGGATTGGTGCTTTGCCCAGAGCTCTACAGAATAGCGCGCGCATCCATATGTTAGTTCTGCAATTTTCTTGTATCGGTGCTGTGACTCATACTTCCCCCTTTGGCTGGCCTTGCGGCAACCAATAAGAACGCACAGTGAAATCTTGCGGGTGGGGAGTGCATGGCGCCTGCATTGGCTTGGGGACGCGCACTGTCGCACACTTCCATCTGACCTTTCAGAAGGGTTTCGTGGTGGGCAAGGACCAACCGGTTGCGCGGCCGTGCGTGGGTGCCTCGCCCGGCACTGCCAGGGCCACTGCAGTGGCAGTTTGCTGCCTGATACAAAATCCTTCCCTCCGCCCAGTTTTCCCTCTTTGACCTTCCTTTCTCTTCTCTGCAACCAAATCCACCCTATCAAACCAAAACAGTGTCTCGACCGAGGTATCAACCTGAATCAGCAACATCGTAGCCAGCATTTGTCTCCGTCTCTGCAGAACCAGCGAGTTGCAAACATTATCCAGGCAACAGGGCACCAACTCACTTCTTCGGCTTTCACCAATCGGTACAGCTCTTCTCAGAACTCGCGTCCGCAACAGTTCTACGCTTCCTCAGCACCTTCTTCAGCTTCAATCCTGAACACTCAGAACCGCGCACAGCAGCGCCCTCCTGTTCCCTTGTTTCCCAAAAGTACCGGTAGTATTTCGCACGGAAAGCAGGGCAACAC GTAAGTGATATCTACTAGTTGTGACCGGCGCCTAGTGTTGACAATTAATCATCGGCATAGTATATCGGCATAGTATAATACGACTCACTATAGGAGGGCCACCATGTCGACTACTAACCTTCTTCTCTTTCCTACAGCTGAGATCACCGGTAGGAGGGCCATC ATGAAAAAGCCTGAACTCACCGCGACGTCTGTCGCGAAGTTTCTGATCGAAAAGTTCGACAGCGTCTCCGACCTGATGCAGCTCTCGGAGGGCGAAGAATCTCGTGCTTTCAGCTTCGATGTAGGAGGGCGTGGATATGTCCTGCGGGTAAATAGCTGCGCCGATGGTTTCTACAAAGATCGTTATGTTTATCGGCACTTTGCATCGGCCGCGCTCCCGATTCCGGAAGTGCTTGACATTGGGGAATTCAGCGAGAGCCTGACCTATTGCATCTCCCGCCGTGCACAGGGTGTCACGTTGCAAGACCTGCCTGAAACCGAACTGCCCGCTGTTCTGCAACCCGTCGCGGAGCTCATGGATGCGATCGCTGCGGCCGATCTTAGCCAGACGAGCGGGTTCGGCCCATTCGGACCGCAAGGAATCGGTCAATACACTACATGGCGTGATTTCATATGCGCGATTGCTGATCCCCATGTGTATCACTGGCAAACTGTGATGGACGACACCGTCAGTGCGTCCGTCGCGCAGGCTCTCGATGAGCTGATGCTTTGGGCCGAGGACTGCCCCGAAGTCCGGCACCTCGTGCACGCGGATTTCGGCTCCAACAATGTCCTGACGGACAATGGCCGCATAACAGCGGTCATTGACTGGAGCGAGGCGATGTTCGGGGATTCCCAATACGAGGTCGCCAACATCTTCTTCTGGAGGCCGTGGTTGGCTTGTATGGAGCAGCAGACGCGCTACTTCGAGCGGAGGCATCCGGAGCTTGCAGGATCGCCGCGGCTCCGGGCGTATATGCTCCGCATTGGTCTTGACCAACTCTATCAGAGCTTGGTTGACGGCAATTTCGATGATGCAGCTTGGGCGCAGGGTCGATGCGACGCAATCGTCCGATCCGGAGCCGGGACTGTCGGGCGTACACAAATCGCCCGCAGAAGCGCGGCCGTCTGGACCGATGGCTGTGTAGAAGTACTCGCCGATAGTGGAAACCGACGCCCCAGCACTCGTCCGAGGGCAAAGGAA CCGGAGTTGAGACAAATGGTGTTCAGGATCTCGATAAGATACGTTCATTTGTCCAAGCAGCAAAGAGTGCCTTCTAGTGATTTAATAGCTCCATGTCAACAAGAATAAAACGCGTTTCGGGTTTACCTCTTCCAGATACAGCTCATCTGCAATGCATTAATGCATTGGACCTCGCAACCCTAGTACGCCCTTCAGGCTCCGGCGAAGCAGAAGAATAGCTTAGCAGAGTCTATTTTCATTTTCGGGAGACGAGATCAAGCAGATCAACGGTCGTCAAGAGACCTACGAGACTGAGGAATCCGCTCTTGGCTCCACGCGACTATATATTTGTCTCTAATTGTACTTTGACATGCTCCTCTTCTTTACTCTGATAGCTTGACTATGAAAATTCCGTCACCAGCCCCTGGGTTCGCAAAGATAATTGCACTGTTTCTTCCTTGAACTCTCAAGCCTACAGGACACACATTCATCGTAGGTATAAACCTCGAAAATCATTCCTACTAAGATGGGTATACAATAGTAACCATGCATGGTTGCCTAGTGAATGCTCCGTAACACCCAATACGCCGGCCGAAACTTTTTTACAACTCTCCTATGAGTCGTTTACCCAGAATGCACAGGTACACTTGTTTAGAGGTAATCCTTCTTTCATG AGAAAGAAGAGGAAAGGAAGAAAAAGAGAACACTTTGAGGAGATGAGACGACTGTACAAGTGTTTGAGTGTTGTGTGTATGCATGTTGGGAATAGCGAGTAATGGCTGTATTTTTGAATATCTCTGATTTTTTTTGTTCATATCATTCATGCTGTACGAGTGTCATGATCTACCGATAGTAATTGATACCCCTTTTTTGTGAGAAATTGGAGAGCTGGAGTCGCGTGTTCTTATGGGAGAATTTCCCTCACTTGGCACTGTCACATGTCAGACATGCAGGAGAACAGCGTATTCCTTTTTTTGTTGGGCAATCGGATTGAATCTGTTGGACAAAAAAAAAAAAAAAATAGAACCACGACAATTAGCCTCAATGGAGCACACACGATACCCCACGCTTCGCCTCAGCTCTCCACGATCGACGATTTGATGTCATTTCAGTGAGAGGAAACAGAAACGGGATCAACGCATAAGATGCTCGTCAGCGTGGCTGCTTAGAGCCAGAGACAAACAAACCTTGAAAATCAATGTCGACTTTCTCTTCTGCCCCCCTTGAACCCGAGTCGTTATATCCGAGAGACGTGCAGACGTTCAAGAACATTACAGAACAATACAGAACCTCCAAAACAGCAAAAGGCCACGCGACACCCAACAACACGAACAGTGCTACATTGCCAAAGAGCTAAACTCGATAGGGGGAAACGCAGCAGGTCGAGGCAGCAAGATTCACATGCAAGGCCAATCACGGCGCTTCAAGCAGCAACGGATTCCAATTGATAAGAGCCCCACGAACGGACATTTTTAGCTTGTTAAACCCAGTAAAAGCTGCTTGGGCCGTTGAATTTACCACATGTTACTTAAAGGTCGGTCCTGTATGTGTGTGTGACGGGCTGCGTGGGTGGTGTGTACTATAGCTTCAGCTTCTTCCTCTTTCCCCCCCTTTACAACCTTTTTTTGCCTTTTTTGATAACTTGTCCTCACATCAGCATTGGCATCGTTGTAA SEQ ID NO : 5 TTCTTTTCTTCTTGTCTGTTGCTTTTTTTGCGCTCTTTTTTTGCTCTCAAGGCCTCGAGGCTTCTAGCAGCCGCAAAAATGGGTGTAGAGCCAAGCGCTAGAGAAGGCCGCTAGAAGGATGCAGAGAAGGGCGAAAAGAGTCGTGCTTGTTGTAGTCGAGCTTGTTTAGGTCAGGGGGAGAGGATCTCTGTAGGTACCTATTACAGTACTACGCCCTTACGATGACGACTATGGTAATGTTTGATTTCGAATTGCTTCTTGTTGATGTTGTTGTTGTTGTTGTATCTTGACGACGTCTCGAGGTCAACTGAAGTTGTTGGAGGTGCCCTGGCCAAGAGTCTCCGTGTCATCGGCATCAACGCCTTACGAGTGACGCATTCCAGAGAGAACATGGCATGGCTTTGCCTCGTCTCCATGGCTTGACCGGCTTTGCTGTGCCGAGGACTGAAGTAGCCTAGTCTCCATCAGAGTCTTCATCGATGGGGCTTATATGGGGCGGCAAGTGAGGGTCTCGCCAGCAGGTGATAAGCCAGCGTGTATGTAGCTGTTCTTAGTGTAGCAGCCCGACAATAAGGTAACGTTGATGTGTCCGAGTTTTTATTATTGGAAGGGCAATGTGACGCTCTCTAGTCTCTACTCTAGTATGTATATAGATTGAGCGCCCCAGAGGTTGTCGAGCCCTTTTCCGCCTTGTTTTTCTTCCGTCTTGCGGATGGTTTTGGTTGCTTTGCGGGCGATATAGAGAGAGGTCTTGCCTTTCGCCCCCTCCTTGTCCGGAAGCGTCGTTATATATACTACTCTTCGTTTTTCTCTCAATTGCCACACCGACGAGCCGATTTCGATTGAATTTTTTCTCTTCTGTCTTTCTTTCGCTCTCAATCTTGAAAGTTTGACTCATCTCTCTCTCTCTCTCTTCTGTTCAATCCGTCGCGCGGCCCTTCAGACGACCAAACGATGGCCGACGACGAAAAGACCCCGACGCCTCCCCCCGTCGGCCCCCTC SEQ ID NO : 6 GGTGGGGCAGTGCTAGTGTGTGTACCGACCCGCAGGATTGGTGCTTTGCCCAGAGCTCTACAGAATAGCGCGCGCATCCATATGTTAGTTCTGCAATTTTCTTGTATCGGTGCTGTGACTCATACTTCCCCCTTTGGCTGGCCTTGCGGCAACCAATAAGAACGCACAGTGAAATCTTGCGGGTGGGGAGTGCATGGCGCCTGCATTGGCTTGGGGACGCGCACTGTCGCACACTTCCATCTGACCTTTCAGAAGGGTTTCGTGGTGGGCAAGGACCAACCGGTTGCGCGGCCGTGCGTGGGTGCCTCGCCCGGCACTGCCAGGGCCACTGCAGTGGCAGTTTGCTGCCTGATACAAAATCCTTCCCTCCGCCCAGTTTTCCCTCTTTGACCTTCCTTTCTCTTCTCTGCAACCAAATCCACCCTATCAAACCAAAACAGTGTCTCGACCGAGGTATCAACCTGAATCAGCAACATCGTAGCCAGCATTTGTCTCCGTCTCTGCAGAACCAGCGAGTTGCAAACATTATCCAGGCAACAGGGCACCAACTCACTTCTTCGGCTTTCACCAATCGGTACAGCTCTTCTCAGAACTCGCGTCCGCAACAGTTCTACGCTTCCTCAGCACCTTCTTCAGCTTCAATCCTGAACACTCAGAACCGCGCACAGCAGCGCCCTCCTGTTCCCTTGTTTCCCAAAAGTACCGGTAGTATTTCGCACGGAAAGCAGGGCAACAC SEQ ID NO : 7 GTAAGTGATATCTACTAGTTGTGACCGGCGCCTAGTGTTGACAATTAATCATCGGCATAGTATATCGGCATAGTATAATACGACTCACTATAGGAGGGCCACCATGTCGACTACTAACCTTCTTCTCTTTCCTACAGCTGAGATCACCGGTAGGAGGGCCATC SEQ ID NO : 8 ATGAAAAAGCCTGAACTCACCGCGACGTCTGTCGCGAAGTTTCTGATCGAAAAGTTCGACAGCGTCTCCGACCTGATGCAGCTCTCGGAGGGCGAAGAATCTCGTGCTTTCAGCTTCGATGTAGGAGGGCGTGGATATGTCCTGCGGGTAAATAGCTGCGCCGATGGTTTCTACAAAGATCGTTATGTTTATCGGCACTTTGCATCGGCCGCGCTCCCGATTCCGGAAGTGCTTGACATTGGGGAATTCAGCGAGAGCCTGACCTATTGCATCTCCCGCCGTGCACAGGGTGTCACGTTGCAAGACCTGCCTGAAACCGAACTGCCCGCTGTTCTGCAACCCGTCGCGGAGCTCATGGATGCGATCGCTGCGGCCGATCTTAGCCAGACGAGCGGGTTCGGCCCATTCGGACCGCAAGGAATCGGTCAATACACTACATGGCGTGATTTCATATGCGCGATTGCTGATCCCCATGTGTATCACTGGCAAACTGTGATGGACGACACCGTCAGTGCGTCCGTCGCGCAGGCTCTCGATGAGCTGATGCTTTGGGCCGAGGACTGCCCCGAAGTCCGGCACCTCGTGCACGCGGATTTCGGCTCCAACAATGTCCTGACGGACAATGGCCGCATAACAGCGGTCATTGACTGGAGCGAGGCGATGTTCGGGGATTCCCAATACGAGGTCGCCAACATCTTCTTCTGGAGGCCGTGGTTGGCTTGTATGGAGCAGCAGACGCGCTACTTCGAGCGGAGGCATCCGGAGCTTGCAGGATCGCCGCGGCTCCGGGCGTATATGCTCCGCATTGGTCTTGACCAACTCTATCAGAGCTTGGTTGACGGCAATTTCGATGATGCAGCTTGGGCGCAGGGTCGATGCGACGCAATCGTCCGATCCGGAGCCGGGACTGTCGGGCGTACACAAATCGCCCGCAGAAGCGCGGCCGTCTGGACCGATGGCTGTGTAGAAGTACTCGCCGATAGTGGAAACCGACGCCCCAGCACTCGTCCGAGGGCAAAGGAA SEQ ID NO : 9 CCGGAGTTGAGACAAATGGTGTTCAGGATCTCGATAAGATACGTTCATTTGTCCAAGCAGCAAAGAGTGCCTTCTAGTGATTTAATAGCTCCATGTCAACAAGAATAAAACGCGTTTCGGGTTTACCTCTTCCAGATACAGCTCATCTGCAATGCATTAATGCATTGGACCTCGCAACCCTAGTACGCCCTTCAGGCTCCGGCGAAGCAGAAGAATAGCTTAGCAGAGTCTATTTTCATTTTCGGGAGACGAGATCAAGCAGATCAACGGTCGTCAAGAGACCTACGAGACTGAGGAATCCGCTCTTGGCTCCACGCGACTATATATTTGTCTCTAATTGTACTTTGACATGCTCCTCTTCTTTACTCTGATAGCTTGACTATGAAAATTCCGTCACCAGCCCCTGGGTTCGCAAAGATAATTGCACTGTTTCTTCCTTGAACTCTCAAGCCTACAGGACACACATTCATCGTAGGTATAAACCTCGAAAATCATTCCTACTAAGATGGGTATACAATAGTAACCATGCATGGTTGCCTAGTGAATGCTCCGTAACACCCAATACGCCGGCCGAAACTTTTTTACAACTCTCCTATGAGTCGTTTACCCAGAATGCACAGGTACACTTGTTTAGAGGTAATCCTTCTTTCATG SEQ ID NO : 10 AGAAAGAAGAGGAAAGGAAGAAAAAGAGAACACTTTGAGGAGATGAGACGACTGTACAAGTGTTTGAGTGTTGTGTGTATGCATGTTGGGAATAGCGAGTAATGGCTGTATTTTTGAATATCTCTGATTTTTTTTGTTCATATCATTCATGCTGTACGAGTGTCATGATCTACCGATAGTAATTGATACCCCTTTTTTGTGAGAAATTGGAGAGCTGGAGTCGCGTGTTCTTATGGGAGAATTTCCCTCACTTGGCACTGTCACATGTCAGACATGCAGGAGAACAGCGTATTCCTTTTTTTGTTGGGCAATCGGATTGAATCTGTTGGACAAAAAAAAAAAAAAAATAGAACCACGACAATTAGCCTCAATGGAGCACACACGATACCCCACGCTTCGCCTCAGCTCTCCACGATCGACGATTTGATGTCATTTCAGTGAGAGGAAACAGAAACGGGATCAACGCATAAGATGCTCGTCAGCGTGGCTGCTTAGAGCCAGAGACAAACAAACCTTGAAAATCAATGTCGACTTTCTCTTCTGCCCCCCTTGAACCCGAGTCGTTATATCCGAGAGACGTGCAGACGTTCAAGAACATTACAGAACAATACAGAACCTCCAAAACAGCAAAAGGCCACGCGACACCCAACAACACGAACAGTGCTACATTGCCAAAGAGCTAAACTCGATAGGGGGAAACGCAGCAGGTCGAGGCAGCAAGATTCACATGCAAGGCCAATCACGGCGCTTCAAGCAGCAACGGATTCCAATTGATAAGAGCCCCACGAACGGACATTTTTAGCTTGTTAAACCCAGTAAAAGCTGCTTGGGCCGTTGAATTTACCACATGTTACTTAAAGGTCGGTCCTGTATGTGTGTGTGACGGGCTGCGTGGGTGGTGTGTACTATAGCTTCAGCTTCTTCCTCTTTCCCCCCCTTTACAACCTTTTTTTGCCTTTTTTGATAACTTGTCCTCACATCAGCATTGGCATCGTTGTAA Liste des références citées dans la présente demande de brevet Kitagawa, M., and Yamada, H., Studies on the diamino acid, canavanin (II). J. Biochem. (Tokyo) 16, 339-349 (1932). Benjamin E. Volcani, Esmond E. Snell - THE EFFECTS OF CANAVANINE, ARGININE, AND RELATED COMPOUNDS ON THE GROWTH OF BACTERIA – J. Biol. Chem. 174: 893-901 Horowitz (N. H.), SRB (A. M.), Growth inhibition of Neurospora by canavanine and its reversal. Journ. biol. Cbem., 1948, 174, 371 SRB, A. M., 1954 Effect antihiotique de la canavanine sur la levure. Academie de Sciences Paris Compt. Rend. 239: 447-448. - ,1955 Spontaneous and chemically-induced mutations giving rise to canavanine-resistance in yeast. Compt. Rend. Lab Carlesberg, Ser. Physiol. 23: 363 Grenson M, Mousset M, Wiame JM, Bechet J. - Multiplicity of the amino acid permeases in Saccharomyces cerevisiae. I. Evidence for a specific arginine-transporting system. Biochim Biophys Acta 127(2):325-38 Broach JR, Strathern JN, Hicks JB. Transformation in yeast: development of a hybrid cloning vector and isolation of the CAN1 gene. Gene. 1979 Dec;8(1):121-33. doi: 10.1016/0378-1119(79)90012-x Ahmad M, Bussey H. Yeast arginine permease: nucleotide sequence of the CAN1 gene. Curr Genet. 1986;10(8):587-92. doi: 10.1007/BF00418125. PMID: 3327612. Wong L, Holdridge B, Engel J, Xu P. Genetic Tools for Streamlined and Accelerated Pathway Engineering in Yarrowia lipolytica. Methods Mol Biol. 2019;1927:155-177. doi: 10.1007/978-1-4939-9142-6_11 M. Penttilä, H. Nevalainen, M. Ratto, E. Salminen, J. Knowles. A versatile transformation system for the cellulolytic filamentous fungus Trichoderma reesei. Gene, 61 (1987), pp. 155-164, https://doi.org/10.1016/0378-1119(87)90110-7 Exemples Exemple 1 : Test de sensibilité à la L-canavanine des souches de Trichoderma reesei Ce test consiste à vérifier si la croissance de Trichoderma reesei est altérée en culture sur un milieu contenant de la L-canavanine, afin de valider l’utilisation de L-canavanine comme marqueur de sélection. Des quantités variables de spores de Trichoderma reesei , issues d’une culture fraiche faite sur PDA (Potatoe Dextrose Agar) sont étalées sur deux milieu différents : - un milieu riche dit PDA contenant notamment de l’arginine, dans lequel de la L-canavanine à une concentration de 200 µg/mL est ajoutée. - un milieu minimum utilisé pour la culture de Trichoderma sans arginine dans lequel de la L-canavanine à une concentration de 50 µg/mL est ajoutée. La culture des spores est observée et les résultats sont présentés en FIG. 1 . Les résultats sont observés à 4 jours pour le milieu riche et à 8 jours pour le milieu minimum. Les spores croissent normalement sur le milieu PDA (qui est un milieu riche). Sur milieu PDA, complémenté par l’ajout de L-canavanine à 200 µg/mL, les spores ne sont pas affectées par la présence de L-canavanine. Le milieu riche ne permet donc pas d’observer d’inhibition de la croissance suite à l’ajout de l’antimétabolite. Sur milieu minimum, les spores croissent moins vite que sur milieu PDA. Ce résultat est attendu. Sur milieu minimum, complémenté par l’ajout de L-canavanine à 50 µg/mL, la croissance est très différente des témoins sur milieu minimum (MM) seul. Les thalles sont très petits, frêles, et plus la concentration en L-canavanine va augmenter plus l’inhibition de la croissance sera importante. Le milieu MM, un milieu minimum notamment dépourvu d’arginine, permet d’observer un effet important sur la croissance des thalles suite à l’ajout de L-canavanine, et ce dès une faible concentration (50 µg/mL). Ce résultat confirme que l’ajout de L-canavanine à un milieu minimum, notamment dépourvu d’arginine, a bien un effet délétère sur la croissance de Trichoderma reesei . L’ajout de L-canavanine peut ainsi être utilisé comme un marqueur de sélection, sous réserve de distinguer les souches sensibles ou non sensibles à l’ajout de L-canavanine dans le milieu. Exemple 2 : Transformation et sélection des souches transformées à l’aide la L-canavanine Le but de cette expérience est d’invalider le gène ID 18487637 de Trichoderma reesei , et vérifier si son invalidation permet de sélectionner les transformants TRI67806 - (les souches dans lesquelles le gène ID 18487637 a été invalidé) des souches TRI67806+ (les souches dans lesquelles le gène ID 18487637 n’a pas été invalidé). L’invalidation est réalisée à l’aide de l’outil CRISPR-Cas9, avec les composants suivants : - Une nucléase : Alt-R™ S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3 - Un guide : Alt-R™ CRISPR-Cas9 sgRNA (représenté par SEQ ID NO : 3, CATCCAGTACTGGACCGAGT CGG) Une matrice de réparation (SEQ ID NO : 4) est aussi utilisée. Celle-ci est composée : - D’un marqueur de sélection : une cassette Hygromycine composée [Promoteur CPC (SEQ ID NO : 6), Promoteur IM7 (SEQ ID NO : 7), Gène de résistance à l’Hygromycine (SEQ ID NO : 9), Terminateur TrpC (SEQ ID NO : 9)], - De deux flanques de 1kb de séquences identiques aux deux régions de 1kb flanquant le gène ciblé, ici ID 18487637 (SEQ ID NO : 5 et SEQ ID NO :10). Toutes autres techniques permettant l’invalidation du gène ID 18487637, notamment celles citées précédemment, peuvent aussi être utilisées à la place de l’outil CRISPR-Cas9. Le protocole et le résultat de la transformation est présentée dans le Tableau 2. Composition Sous couche Sur couche Nombre de souches (protoplastes) Témoin régénération 50 µL de souches (dilution 1/1000) + 50 µL de CTS50 Milieu PDA + 0,2 M saccharose Milieu PDA + 0,8 M saccharose 77 Témoin – Sensibilité Hygromycine 50 µL de souches + 50 µL de CTS50 Milieu Minimum + 0,2 M saccharose + 100 mg/mL Hygromycine Milieu Minimum + 0,8 M saccharose + 100 mg/mL Hygromycine 0 Témoin – Sensibilité L - canavanine 50 µL de souches + 50 µL de CTS50 Milieu Minimum + 0,2 M saccharose + 100 mg/mL L-canavanine Milieu Minimum + 0,8 M saccharose + 100 mg/mL L-canavanine 0 Transformation 50 µL de souches + 43 µL de CTS50 + 5 µL du complexe RNP + 2 µL de matrice de réparation Milieu Minimum + 0,2 M saccharose + 100 mg/mL L-canavanine Milieu Minimum + 0,8 M saccharose + 100 mg/mL L-canavanine 142 Protocole et résultat CTS50 correspond à une solution de dilution comprenant 50 mM de CaCl2 ; 0,1M de Tris-HCl ; 0,4M de Saccharose, pH 7.5. Le témoin régénération permet d’évaluer la toxicité du protocole de transformation. Les protoplastes produits ne sont pas soumis aux agents mutagènes (le complexe RNP CRISPR-Cas9 (nucléase et guide de SEQ ID NO : 3) et la matrice de réparation comme indiqués ci-dessus), ni à une croissance sur milieu sélectif. Son étude reportée et comparée aux autres transformations permet de renseigner sur la qualité du protocole de transformation. Les témoins sensibilités permettent d’évaluer le nombre de faux positifs sur le milieu de sélection. Les protoplastes produits ne sont pas soumis aux agents mutagènes (le complexe RNP CRISPR-Cas9 (nucléase et guide de SEQ ID NO : 3) et la matrice de réparation comme indiqués ci-dessus), mais ils sont cultivés sur le milieu sélectif mis en place pour sélectionner les mutants génétiques. Ces témoins permettent d’évaluer le taux de faux positifs, soit le nombre de mutants spontanés permettant une croissance sur le crible. Pour les deux témoins sensibilités et dans le cadre de la transformation ci-dessus, aucun protoplaste n’a été capable de croitre sur un milieu contenant de l’Hygromycine ou de la L-canavanine. Transformation Les protoplastes produits sont transformés afin que la mutation du gène ID 18487637transportant l’arginine et son antimétabolite ne soit plus fonctionnelle. Ainsi le transport de l’arginine et de son antimétabolite, du milieu de culture au sein de la cellule n’est plus possible. La mutation au site ID 18487637 repose sur l’action du complexe RNP (outil CRISPR-Cas9 : nucléase et guide de SEQ ID NO : 3 comme indiqués ci-dessus)) et sur l’insertion de la matrice de réparation (SEQ ID NO : 4), en lieu et place du gène ID 18487637. En sélectionnant les transformants sur un milieu minimum (MM) + L-canavanine, seuls ceux portant une mutation délétère au gène ID 18487637 ont la capacité de croitre sur un milieu contenant l’antimétabolite. Le témoin sensibilité L-canavanine ne présente aucun thalle, ce qui confirme que les transformants correspondent à la mutation génétique attendue (l’invalidation du gène ID 18487637par son éviction par la matrice de réparation). 142 transformants ont été obtenus. Souche de champignon filamenteux appartenant à la division Ascomycètes, à l’exclusion d’un champignon appartenant à la classe des Saccharomycètes, dans laquelle : - le gène ID 18487637, ou un variant ou un gène orthologue, a été invalidé, ou - un gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue, a été invalidé, ledit gène ID 18487637, ou un variant ou un gène orthologue, correspondant à un gène représenté par la SEQ ID NO : 1, ou un gène ayant au moins 80% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1. Souche de champignon selon la revendication précédente, dans laquelle le champignon appartient à l’ordre des Hypocréales notamment au genre Trichoderma , et encore plus particulièrement à l’espèce Trichoderma reesei . Souche de champignon selon l’une quelconque des revendications 1 à 2, dans laquelle le gène ID 18487637, ou un variant ou un gène orthologue, correspond à un gène ayant au moins 90% d’identité avec le gène de SEQ ID NO : 1, plus particulièrement au moins 95%. Souche de champignon selon l’une quelconque des revendications 1 à 2, dans laquelle le gène codant pour une protéine représentée par SEQ ID NO : 2, ou une protéine variante, ou une protéine orthologue correspond à un gène codant pour une protéine représentée par la SEQ ID NO : 2, ou une protéine ayant au moins 80% d’identité avec la protéine de SEQ ID NO : 2, notamment au moins 90% et plus particulièrement au moins 95%. Procédé de modification génétique d’une souche de champignon selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, comprenant une étape d’invalidation dudit gène, un variant ou un gène orthologue. Utilisation de la L-canavanine comme marqueur de sélection des souches selon l’une quelconque des revendications 1 à 4. Utilisation de la L-canavanine selon la revendication 6, en présence d’un milieu minimum ou d’un milieu synthétique dépourvu d’arginine, optionnellement également dépourvu d’alanine, d’aspartate et/ou de glutamate. Procédé de sélection d’une souche selon l’une quelconque des revendications 1 à 4 comprenant : - la mise en contact d’une souche avec un milieu de culture comprenant de la L-canavanine, - la sélection de la souche si celle-ci est capable de croitre dans le milieu de culture. Procédé de production de biomasse de champignon, comprenant une étape de culture d'une souche de champignon selon l’une quelconque des revendications 1 à 4 dans un milieu de culture comprenant un substrat approprié. Procédé de production de protéines d’intérêt, notamment des enzymes, comprenant une étape de culture d'une souche de champignon selon l’une quelconque des revendications 1 à 4 dans un milieu de culture comprenant un substrat approprié. Procédé de production de produits biosourcés à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, comprenant une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche de champignon selon l’une quelconque des revendications 1 à 4. Procédé de production d'un jus sucré ou de sucres à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, comprenant : - i) une étape de prétraitement d'un substrat cellulosique ou lignocellulosique afin d’obtenir un substrat prétraité, - ii) une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, - iii) une étape d'hydrolyse enzymatique du substrat prétraité, en présence des enzymes cellulolytiques obtenues à l’étape ii), afin d’obtenir un hydrolysat. Procédé de production d'un biocarburant à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, comprenant une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche de champignon selon l’une quelconque des revendications 1 à 4. Procédé de production d'un biocarburant à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques selon la revendication 13, comprenant : - i) une étape de prétraitement d'un substrat cellulosique ou lignocellulosique afin d’obtenir un substrat prétraité, - ii) une étape de production d’enzymes cellulolytiques par une souche selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, - iii) une étape d'hydrolyse enzymatique du substrat prétraité, en présence des enzymes cellulolytiques obtenues à l’étape ii), afin d’obtenir un hydrolysat, - iv) une étape de fermentation alcoolique de l'hydrolysat obtenu, l’étape iv) étant optionnellement réalisée en simultané avec l’étape iii). - v) une étape de séparation, notamment par distillation. Utilisation d’une souche de champignon selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, pour l'hydrolyse de la cellulose ou de la lignocellulose en glucose, pour la production de produits biosourcés, de biocarburant, d'un jus sucré ou de sucres, à partir de substrats cellulosiques ou lignocellulosiques, et/ou pour la production de protéines d’intérêt, plus particulièrement des enzymes, notamment des enzymes cellulolytiques telles que des cellulases.