Brevet FR3153241A1 — publié le 20250328

L’invention vise une préparation pharmaceutique comprenant un surnageant obtenu à partir d'une coculture entre des phagocytes et des leucocytes irradiés caractérisée en ce qu’elle comprend en outre un polymère choisi parmi le groupe constitué d’hydroxylpropylméthylcellulose (HPMC), d’acide hyaluronique (HA), de carboxyméthylcellulose (CMC) et de polycarbophile (PC) ou un mélange de ceux-ci (HPMC). Figure d’abrégé : Figure 4 PRÉPARATION PHARMACEUTIQUE PRO-RÉSOLUTIVE SOUS FORME DE GEL L’invention se rapporte à une préparation pharmaceutique comprenant un surnageant obtenu à partir d'une coculture entre des phagocytes et des leucocytes irradiés. Une réaction inflammatoire (ou une inflammation) est un processus biologique impliqué dans des réactions naturelles de défense de l'organisme mais aussi associé à une multitude de réactions pathologiques. Ainsi, une maladie inflammatoire est généralement due à une inflammation prolongée et non résolue au sein d’un organe spécifique ou d’une partie du corps humain ou animal. Une telle maladie peut être provoquée par divers facteurs génétiques, immunologiques, infectieux ou encore associée au cancer. Le traitement thérapeutique d’une maladie inflammatoire repose classiquement sur le ciblage des symptômes à l’aide de médicaments dits anti-inflammatoires. On connaît des maladies inflammatoires et dégénératives dont l’inflammation non-résolue semble être à l’origine de des maladies inflammatoires chroniques. En effet, l’inflammation est une réaction naturelle qui s’auto régule et s’arrête par le biais du processus biologique appelé la résolution de l’inflammation. La résolution de l’inflammation fait intervenir différents partenaires cellulaires et facteurs moléculaires et abouti à l’arrêt de la réaction inflammatoire et à la réparation/régénération des tissus lésés. Un dérèglement du processus de résolution conduit en revanche à une inflammation non contrôlée, subsistante à fort ou bas bruit, de façon localisée ou systémique et favorisant l’installation d’une pathologie inflammatoire chronique ou dégénérative. Un des mécanismes clé du processus de résolution est la libération de facteurs pro-résolutifs par les cellules phagocytaires éliminant les cellules mourantes des sites de la réaction inflammatoire. Ainsi ces facteurs ont la capacité d’arrêter la réaction inflammatoire en cours et d’initier la réparation et la régénération des tissus. Parmi l’ensemble des facteurs pro-résolutifs, l’état de la technique décrit notamment dans le document EP 3 810 157 de la Demanderesse, un sous-ensemble de facteurs appelé "résolutome" capables de déclencher la résolution de l'inflammation. EP 2 941 257 décrit une préparation pharmaceutique en vue de son utilisation dans la prévention ou le traitement d'une réponse immunitaire pathologique. Cette préparation pharmaceutique comprend un surnageant, parfois appelé "sécrétome", pouvant être obtenu à partir de la coculture de phagocytes avec des cellules apoptotiques. L’application de cette préparation pharmaceutique vise le traitement d'une pathologie telle qu'une maladie auto-immune, par exemple de la polyarthrite rhumatoïde (PR), des maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI) ou la régénération de tissue. L’état de la technique a ainsi démontré que les facteurs pro-résolutifs, ou encore un résolutome, produits par les phagocytes éliminant les cellules mourantes, ont une activité thérapeutique qui réenclenche le processus de résolution défaillant dans le contexte de pathologies inflammatoires. Dans certaines conditions, ceci peut permettre l’arrêt de la maladie. Toutefois, l’ensemble des effets thérapeutiques par rapport aux différentes situations pathologiques n’ont pu être observé que via une administration par voie intra-veineuse de facteurs pro-résolutifs. Ceci pose des problèmes, en particulier pour le ciblage spécifique d’une inflammation tissulaire locale. En effet, on retrouve par exemple des inflammations tissulaires localisées dans les pathologies de la maladie de Crohn ou de la rectocolite inflammatoire. Dans ces maladies, l’inflammation touche particulièrement la muqueuse intestinale. L’état de la technique, qui utilise une approche systémique, n’est pas optimal pour le traitement de ce type d’inflammations tissulaires localisées. De plus, la production de facteurs pro-résolutif de type sécrétome et/ou résolutome est complexe et coûteuse. Il existe un besoin de diminuer le dosage et/ou la quantité thérapeutiquement efficace de ces facteurs. La présente invention vient améliorer la situation. Ainsi, l’invention vise une préparation pharmaceutique comprenant un surnageant obtenu à partir d'une coculture entre des phagocytes et des leucocytes irradiés. La préparation pharmaceutique de l’invention comprend en outre un polymère choisi parmi le groupe constitué d’hydroxylpropylméthylcellulose (HPMC), d’acide hyaluronique (HA), de carboxyméthylcellulose (CMC) et de polycarbophile (PC) ou un mélange de ceux-ci. L’invention permet en particulier de diminuer la quantité de surnageant nécessaire pour obtenir un effet thérapeutique. En d’autres termes, la combinaison du principe actif surnageant avec l’un ou plusieurs des polymères choisis parmi l’hydroxylpropylméthylcellulose (HPMC), l’acide hyaluronique (HA), la carboxyméthylcellulose (CMC) ou le polycarbophile (PC), permet d’abaisser la quantité nécessaire du surnageant pour être thérapeutiquement efficace. Un effet de synergie est observé en combinant un surnageant et un polymère de l’invention. De plus, le polymère utilisé dans une quantité prédéfinie en poids (concentration ou %) selon la nature du polymère choisi, résulte en la préparation pharmaceutique de l’invention sous forme de gel. Un avantage de la préparation sous forme de gel est qu’elle peut être administrée localement de manière ciblée. Plus généralement, l’invention concerne l’addition de polymères permettant d’augmenter la viscosité et l’adhésion de produits thérapeutiques de type sécrétome ou résolutome, afin de pouvoir l’appliquer directement sur une muqueuse atteinte. L’invention permet ainsi de cibler la zone inflammatoire atteinte, augmenter la résidence du produit sur cette zone et obtenir un effet thérapeutique au moins identique mais avec une quantité de produit inférieure par rapport à l’injection systémique intraveineuse. Notamment, l’invention permet de cibler la zone inflammatoire et d’exercer l’arrêt de l’inflammation tissulaire et de déclencher la réparation de la zone lésée. L’invention permet en particulier le traitement de la muqueuse intestinale lors de colite inflammatoire. Dans un mode de réalisation, la teneur en poids du polymère dans la préparation pharmaceutique est choisie de sorte à conférer une forme gélifiée à ladite préparation pharmaceutique. Dans un autre mode de réalisation, le polymère est l’hydroxylpropylméthylcellulose (HPMC). De préférence, teneur en HPMC est comprise entre 0,5% à 1,5% en poids. Dans un premier mode particulièrement préféré, la teneur en HPMC est de 0,5% en poids. Dans un deuxième mode particulièrement préféré, la teneur en HPMC est de 1,5% en poids. Dans le mode de réalisation dans lequel le polymère est de l’acide hyaluronique (HA) sa teneur est de préférence de 0,5% en poids. Dans le mode de réalisation dans lequel le polymère est de la carboxyméthylcellulose (CMC) sa teneur est de préférence de 0,4% en poids. Dans le mode de réalisation dans lequel le polymère est de la polycarbophile (PC) sa teneur en est de préférence de 0,1% en poids. Dans un mode de réalisation, la préparation pharmaceutique de l’invention est pour une utilisation en tant que médicament. Dans un mode de réalisation particulier, la préparation pharmaceutique de l’invention est pour l’utilisation dans le traitement de maladies inflammatoires et dégénératives. Dans un autre mode de réalisation particulier, la préparation de l’invention est pour l’utilisation dans le traitement de la muqueuse colique inflammée au cours d’une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. La maladie inflammatoire chroniques de l'intestin peut être la colite inflammatoire, la maladie de Crohn (MC) ou la rectocolite hémorragique (RCH). D’une manière plus générale, la préparation pharmaceutique de l’invention est pour l’utilisation dans le traitement d’une inflammation des muqueuses. Dans un mode de réalisation préféré, le surnageant de la préparation pharmaceutique est le Résolvix®. Le produit Résolvix® est disponible auprès de la Demanderesse. D’autres avantages et caractéristiques de l’invention apparaîtront à la lecture de la description détaillée ci-après et sur les dessins annexés sur lesquels : FIG. 1 montre une représentation graphique de l’évolution de la viscosité d’un surnageant de l’invention (c’est-à-dire obtenu à partir d'une coculture entre des phagocytes et des leucocytes irradiés) en fonction de l’ajout de différents polymères ; FIG. 2 montre des représentations graphiques de l’effet pro-résolutif d’un surnageant de l’invention en présence de polymères sur la cicatrisation de blessures sur des cellules MODE-K et Caco-2 ; et FIG. 3 montre un diagramme de l’effet anti-inflammatoire d’un surnageant de l’invention dans un modèle inflammatoire intestinal in vitro ; FIG. 4 montre une représentation graphique de l’effet thérapeutique d’un surnageant de l’invention dans un modèle expérimental de colite inflammatoire ; FIG. 5 montre des diagrammes de la réduction de biomarqueurs inflammatoires associés à la colite inflammatoire aigue suite à différents traitements utilisant la préparation pharmaceutique selon l’invention ; FIG. 6 montre des représentations graphiques de l’effet thérapeutique par les scores cliniques de colite inflammatoire chronique, ainsi que la survie après traitements par la préparation pharmaceutique selon l’invention sous forme de gel ; et FIG. 7 montre des diagrammes de la réduction de biomarqueurs inflammatoires associés à la colite chronique suite aux traitements avec la préparation pharmaceutique selon l’invention. Les figures, tableaux et la description ci-après contiennent, pour l’essentiel, des éléments de caractère certain. Les figures et tableaux font partie intégrante de la description, et pourront donc non seulement servir à mieux faire comprendre la présente invention, mais aussi contribuer à sa définition, le cas échéant. La préparation pharmaceutique de l’invention comporte un surnageant obtenu à partir d'une coculture entre des phagocytes et des leucocytes irradiés. Un surnageant adapté pour la réalisation de la présente invention est disponible auprès de la Demanderesse sous la référence Résolvix®. Le document EP3810157B1, auquel le lecteur est prié de se référer, décrit en détail le produit Résolvix® ainsi que son procédé d’obtention. Selon un mode de réalisation, un procédé d’obtention d’un surnageant peut comprendre les étapes suivantes : (i) générer des phagocytes dérivés de monocytes à partir de leucocytes du sang, (ii) la mise en contact de ces phagocytes avec des leucocytes du sang préalablement irradiés, notamment par rayons X, (iii) la coculture des phagocytes avec les leucocytes irradiés pendant un temps prédéterminé, et (iv) la collecte de facteurs contenus dans le surnageant produits par les cellules en coculture. Un mode de réalisation préféré pour obtenir le surnageant de l’invention est décrit ci-après. Des leucocytes sont isolés (J0) par gradient de densité à partir de couches leuco-plaquettaires issues de sang total. Les leucocytes sont lavés, puis re-suspendus dans un milieu de culture défini, de préférence celui connu sous le nom RPMI 1640. D’autres milieux de cultures peuvent être utilisés, en particulier ceux à base de sels, d'acides aminés et de vitamines. Le milieu de culture comportant les leucocytes est ensuite réparti dans deux poches : 60% dans une première poche et à 40% dans une deuxième poche. La première poche reçoit un facteur de différenciation, de préférence le facteur dénommé Macrophages Colony-Stimulating Factor (M-CSF). La première poche est conservée dans des conditions préservant la viabilité cellulaire, par exemple à 37°C, 5% de CO 2 , pendant plusieurs jours, préférentiellement 3 jours, puis reçoit de nouveau du milieu de culture frais. La première poche est laissée en l'état, ce qui permet la production de phagocytes après plusieurs jours de conservation, préférentiellement 4 jours, dans des conditions préservant la viabilité cellulaire (par exemple à 37°C, et 5% de CO 2 ). La deuxième poche est conservée à basse température, préférentiellement à une température inférieure à +10°C, et encore plus préférentiellement inférieure à +5°C. Au septième jour (J7), la deuxième poche est irradiée, de préférence par rayons X. Les milieux de culture respectifs des première et deuxième poches sont ensuite éliminés. Puis, un milieu de sécrétion est ajouté dans la deuxième poche. Le milieu de sécrétion contient en particulier des acides aminés et des vitamines. De préférence le milieu de sécrétion est de type M inimum E ssential M edium (MEM). L’ensemble du contenu de la deuxième poche est ensuite transféré dans la première poche en vue d’un stockage dans des conditions préservant la viabilité cellulaire (37°C, 5% de CO 2 par exemple). Lors de ce stockage la coculture a lieu aboutissant à la production d'un surnageant conditionné, ce qui peut prendre plusieurs jours, préférentiellement 2 jours. Dans la présente description, on entend par « surnageant conditionné » un surnageant contenant des facteurs dérivés des cellules. À l'issue de cette période de coculture, le surnageant est collecté dans une nouvelle poche, filtré puis conservé à très basse température, préférentiellement aux environs de -80°C. Le surnageant est alors avantageusement mélangé avec d'autres surnageants produits, selon la méthode décrite ci-avant, à partir de couches leuco-plaquettaires, puis ce mélange est réparti en doses unitaires, lyophilisées ou non, puis stockées. L'Homme du métier, sait appliquer au procédé décrit ici toutes les précautions pour répondre au critères dits de "bonne pratique de fabrication" encadrant la production et la libération de médicaments biologiques complexes humains dérivés du sang définis par l'Agence Européenne du Médicament. Dans un mode de réalisation, le surnageant de l’invention provient d'un mélange de surnageants obtenus selon le procédé de production décrit ci-avant à partir de plusieurs sources leucocytaires. La présente invention combine un surnageant de type Résolvix® avec un polymère. Le polymère peut être choisi parmi des polysaccharides, des polyacrylates ou des polymères cellulosiques. Parmi les polysaccharides on peut citer des hétéropolyosides linéaires, dont les dérivés cellulosiques, tels que l’hydroxypropylcellulose (ou HPMC, qui est non ionique), la carboxymethylcellulose (ou CMC qui est anionique), et les autres polysaccharides, tels que la gomme géllane (anionique) et l’acide hyaluronique (anionique). Parmi les polysaccharides on peut également citer des hétéropolyosides ramifiés, dont notamment la gomme xanthane (anionique). Parmi les polyacrylates (également appelés les polymères d’acide acrylique) on peut citer le polycarbophil (anionique). La combinaison du surnageant de type Résolvix® avec un ou plusieurs polymères augmente la viscosité du surnageant (parfois appelé "Résolutome"). De préférence, l’augmentation de la viscosité est réalisée de sorte à obtenir un surnageant gélifié, c’est-à-dire sous forme de gel. La FIG. 1 montre une représentation graphique de la viscosité de Résolvix® en présence de différents polymères selon le taux de cisaillement. La viscosité (mPa par seconde) a été évaluée selon le taux de cisaillement (s-1) à l’aide d’un rhéomètre Kinexus Pro+ (NETZSCH) dans les différentes préparations de Résolvix® seul ou combiné (%m/V) à : de l’hydroxypropyl méthylcellulose (HPMC) à 0,5% (1X) ; de l’hydroxypropyl méthylcellulose (HPMC) à 1,5% (3X) ; de l’acide hyaluronique (HA) à 0,5% ; de la carboxyméthylcellulose (CMC) à 0,4% ; de la gomme gellane (GG) à 0,3% ; de la gomme xanthane (GX) à 0,4% ; et du polycarbophile (PC) à 0,1%. Les données de la FIG. 1 sont issues de 3 expériences indépendantes représentées en moyenne +/- l’erreur standard sur la moyenne et montrent que l’ajout d’un polymère à Resolvix®, hormis l’ajout de PC, permet d’obtenir une viscosité statistiquement supérieure à la condition Resolvix® seul selon le taux de cisaillement – selon l’analyse de la variance à un facteur [ou en anglais "one-way analysis of variance" (ANOVA)] suivi d’un test de comparaison multiple de Tukey. La combinaison de Résolvix® avec le PC à 0,1% ne permet pas d’obtenir une gélification de Résolvix®. A des concentrations de PC supérieures, le produit n’a pas montré de gélification supérieur (et au contraire un pouvoir cicatrisant inferieur, voir ci-dessous). Plus particulièrement, il semble que l’augmentation de la concentration en PC ne permet pas d’augmenter la viscosité car il existe une interaction ionique avec les sels du milieu qui défavorise la gélification. De plus, à un taux de PC d’environ 0,5% un effet négatif sur la cicatrisation a été observé. Dans un mode de réalisation préférentiel, la préparation pharmaceutique de l’invention est sous forme de gel. La Demanderesse a étudié l’effet pro-résolutif du produit Résolvix® en combinaison avec différents polymères. La FIG. 2 montre des représentations graphiques de l’effet pro-résolutif, ici pro-cicatrisant, de Résolvix® mélangé ou non à des polymères sur la capacité de comblement d’une blessure réalisée sur une monocouche de es cellules MODE-K (Figure 2a) ou Caco-2 (Figure 2b). Résolvix® seul ou gélifié au moyen de différents polymères, i.e. hydroxypropyl méthylcellulose (HPMC) à 0,5% (1X) ou 1,5% (3X), acide hyaluronique (HA) à 0,5%, carboxyméthylcellulose (CMC) à 0,4%, gomme gellane (GG) à 0,3% ou xanthane (GX) à 0,4% ou polycarbophile (PC) à 0,1%, a été ajouté sur une monocouche de cellules MODE-K (Figure 2a) et Caco-2 (Figure 2b) à confluence (c’est-à-dire couvrant l’intégralité de la surface de culture), après la réalisation d’une blessure tout au long de la surface de culture, créant ainsi une plaie à combler.. Le potentiel de comblement de la blessure des cellules en présence des différentes combinaisons de Résolvix® seul ou mélangé avec les polymères a été évalué régulièrement pendant 40 heures. Les données de la FIG. 2 (figures 2a et 2b) sont cumulées et issues de 3 expériences réalisées de manière indépendante et représentées en moyenne. Toutes les conditions sont statistiquement différentes de la condition contrôle MEM. Les conditions Résolvix®+CMC, +GX et +GG sont également statistiquement différentes de la condition Résolvix® seul (selon l’analyse de la variance à un facteur [ou en anglais "one-way analysis of variance" (ANOVA)] suivi d’un test de comparaison multiple de Tukey). Ainsi, la Demanderesse a découvert non sans surprise que l’ajout des différents polysaccharides, polyacrylates ou polymères cellulosiques n’altère pas l’effet pro-résolutif de Résolvix®. En particulier, Résolvix® combiné à certains polymères conserve ses propriétés pro-cicatrisantes tant sur des cellules épithéliales Humaines (Caco-2) que sur des cellules épithéliales de rongeurs (MODE-K). Les propriétés pro-cicatrisantes étant particulièrement conservées avec l’hydroxypropyl méthylcellulose (HPMC) et l’acide hyaluronique (HA). Les combinaisons de Résolvix® avec HPMC et HA ont été conservées pour évaluer les propriétés pro-résolutives dans le contrôle de l’inflammation à l’aide d’un modèle in vitro tripartite mimant l’inflammation de la muqueuse intestinale. La FIG. 3 montre un histogramme de l’effet anti-inflammatoire de Résolvix®, seul d’une part, et gélifié avec de l’hydroxypropyl méthylcellulose ou avec l’acide hyaluronique d’autre part, dans un modèle inflammatoire intestinal in vitro . Résolvix® seul et sa version gélifiée avec les différents polymères, à savoir avec l’hydroxypropyl méthylcellulose à 0,5% (HPMC-1X) et avec l’acide hyaluronique à 0,5% (HA), a été ajouté dans des puits de culture contenant des cellules leucocytaires et épithéliales séparées par une membrane hémiperméable de pores de 5 µm (CORNING TM ), pendant 24h à 37°C en atmosphère contrôlée (5% de CO2). En fin de culture, les cytokines TNF-α, IL-1β, IL-6 et IL-8 ont été quantifiées par ELISA dans le surnageant de culture. Données cumulées issues de 3 expériences indépendantes représentées en moyenne +/- SEM. Toutes les conditions « stim » montrent pour chaque cytokine une quantité statistiquement augmentée par rapport à la condition contrôle "no stim". Les conditions +Résolvix, +Résolvix/HPMC-1X et +Résolvix/HA montrent quant à elles des quantités de cytokines significativement réduites par rapport à la condition "stim". Les significativité ont été déterminées par tests statistiques, analyse de la variance à deux facteurs suivi d’un test de comparaison multiple de Tukey. Les résultats montrent que Résolvix® gélifié avec HPMC ou HA permet une réduction drastique de l’inflammation associée au cellules leucocytaires (TNF-α et IL-1β) et aux cellules épithéliales (IL-6 et IL-8). L’invention permet donc de conserver l’effet thérapeutique de Résolvix®, en particulier ses propriétés pro-résolutives, notamment régénératives et réparatrices, in vitro . De façon surprenante, au-delà de la conservation de l’effet thérapeutique, un gain d’efficacité est observé dans un modèle murin expérimental de colite inflammatoire. Le modèle utilisé permet l’induction d’une inflammation de la muqueuse intestinale par addition de dextran-sodium-sulfate dans l’eau de boisson (3.5% poids/volume) de souris BALB/c de 8 semaines d’âge, pendant 10 jours, suivi d’un cycle d’eau normale de 3 jours. À travers le suivi du score clinique journalier des animaux, score clinique tenant compte de la perte de poids, de la consistance des selles et du saignement au niveau de l’anus, l’invention (Résolvix® combiné à certains polymères) démontre une réduction significative du score clinique de colite. En effet, le produit administré au dixième jour (J10), soit dans sa version standard (par voie intra-veineuse, 1 mL de Résolvix®/animal), soit dans sa version gélifié (par voie intra-rectale, 100 µL/animal) avec de l’HPMC, de l’HA, de la CMC ou avec un mélange HPMC/PC (le PC seul ne permettant pas d’obtenir une gélification satisfaisante de Résolvix®, voir FIG. 1 ) permet une réduction significative du score clinique par rapport au groupe contrôle, comme représenté dans la FIG. 4 qui montre une représentation graphique de l’effet thérapeutique de Résolvix® dans sa version connue et dans sa version selon l’invention, c’est-à-dire dans une version gélifié au moyen de polymères sélectionnés, dans un modèle expérimental de colite inflammatoire. L’expérience a duré 13 jours. Des souris BALB/c de 8 semaines ont reçues du dextran-sodium-sulfate (DSS ; 3.5% w/V) dans leur eau de boisson pendant 10 jours puis de l’eau non complémentée pendant 3 jours. Au jour 10, les souris ont reçu (flèche noire sur la FIG. 4 ) soit 1 mL de Résolvix® (Colite + Resolvix) soit un soluté contrôle (PBS ; Colite + véhicule) par voie intra-veineuse, ou 100 µL de Résolvix® gélifié selon l‘invention par voie intra-rectale à l’aide d’une canule (Colite + Resolvix/CMC ; Colite + Resolvix/HPMC-1X ; Colite + Resolvix/HA ; Colite + Resolvix/HPMC/PC ; Colite + Resolvix/HPMC-3X). Les animaux ont été suivis quotidiennement et le score clinique quantifié. Le score clinique tient compte de plusieurs facteurs de façon cumulative. Il tient compte de la perte de poids (0=pas de différence de poids, 1=perte de poids de 1 à 5%, 2=de 5 à 10%, 3=de 10 à 20%, 4=plus de 20%), la consistance des selles (0=normales, 2=semi formées et pultacées, 4=liquides et collées à l’anus), et le saignement au niveau de l’anus (0=absence de saignement, 2=léger saignement, 4=présence de sang dans les selles). Les données sont présentées sous forme cumulées issues de 3 expériences réalisées de façon indépendante, avec 5 souris par groupe par expérience, et représentées en moyenne de groupe +/- l’erreur standard sur la moyenne. Aux jours 11, 12 et 13, tous les groupes montrent un score clinique de colite statistiquement différents du groupe "Colite + véhicule", excepté le groupe "Résolvix/CMC" au jour 11, d’après l’analyse de la variance à deux facteurs suivi d’un test de comparaison multiple de Tukey. Les résultats montrent que la gélification de Résolvix® selon l’invention avec de l’HPMC, de l’HA, de la CMC ou avec un mélange HPMC/PC, permet d’obtenir une efficacité thérapeutique équivalente pour une quantité de Résolvix® 10 fois inférieure par rapport à la quantité de Résolvix® nécessaire dans sa version connue (1 mL vs. 100 µL). L’effet thérapeutique du principe actif Résolvix® est drastiquement augmenté au moyen des polymères sélectionnés par la Demanderesse. Par ailleurs, l’invention sous forme de gel permet de s’affranchir de la voie intra-veineuse pour l’administration de Résolvix®. L’invention permet ainsi d’administrer localement, de manière ciblée, Résolvix®. De façon très surprenante, gélifier Résolvix® avec de l’HPMC à 1,5% potentialise davantage l’effet thérapeutique de Résolvix®. Un effet de synergie est observé. En résumé, les résultats montrent que l’invention permet d’augmenter l’activité thérapeutique de Résolvix®, voire de la potentialiser par un effet de synergie, et ce avec une quantité diminuée du principe actif principal Résolvix®. De plus, la voie d’administration de Résolvix® est drastiquement améliorée et/ou simplifiée dans sa forme selon l’invention. La Demanderesse a confirmé les résultats précliniques obtenus, de manière ex vivo par la quantification de biomarqueurs associés à la colite expérimentale dans la muqueuse intestinale, 3 jours après le traitement. Ainsi, le ratio poids/longueur de l’intestin, les molécules inflammatoires TNF-α et MPO, et l’infiltrat leucocytaire (neutrophiles et macrophages), au sacrifice des animaux ont été étudiés. La FIG. 5 montre des diagrammes de la réduction de biomarqueurs inflammatoires associés à la colite inflammatoire aigue suite à différents traitements utilisant du Résolvix®. Les biomarqueurs inflammatoires associés à la colite inflammatoire aigue induite au DSS (cf. FIG. 4 ) ont été quantifiés au terme des 13 jours d’expérimentation au niveau du colon, son ratio poids/longueur (figure 5a), l’activité myéloperoxidase (MPO ; figure 5b), la quantité de TNF-α (figure 5c), et le nombre de neutrophiles (figure 5d) et de macrophages (figure 5e). Données cumulées issues de trois expériences réalisées de façon indépendante avec 5 animaux par groupe par expérience, représentées en moyenne de groupe +/- erreur standard sur la moyenne. Toutes les conditions sont statistiquement différentes de la condition "colite" selon une analyse de variance à deux facteurs suivi d’un test de comparaisons multiples de Tukey. Les résultats montrent que les différents biomarqueurs sont réduits non seulement avec le traitement Résolvix® utilisé seul en administration intraveineuse, mais également avec les traitements Résolvix® gélifié selon l’invention (et qui contient une quantité réduite en surnageant). Tout particulièrement, les résultats montrent que les différents biomarqueurs sont réduits avec les traitements de Résolvix® sous sa forme gélifiée selon l’invention avec HPMC, HA, HMPC/PC. Les modes de réalisation de l’invention avec HPMC 1X et HPMC 3X sont particulièrement efficaces. Les résultats avec le polymère CMC sont moins évidents, mais néanmoins satisfaisants compte tenu de la quantité réduite en principe actif Résolvix® dans sa version gélifiée selon l’invention. Une gélification particulièrement adaptée du surnageant, notamment du type Résolvix®, est obtenu avec le polymère HPMC. Le mode de réalisation au HPMC améliore en outre particulièrement l’activité thérapeutique in vivo . Ainsi, ce mode de réalisation est utilisé dans un modèle expérimental de colite inflammatoire chronique chez la souris. La colite inflammatoire chronique est induite des cycles répétés d’eau de boisson additionnée dextran-sodium-sulfate et d’eau non complémentée. Dans ce modèle chronique, le traitement au Résolvix® dans sa version seule et dans sa version gélifiée de l’invention ont été étudiées. Pour cela, le Résolvix®, sous ses deux versions, est administré en début d’expérience (à J0), ou au dixième jour (J10), par voie intra-rectale. La FIG. 6 montre des représentations graphiques de scores cliniques de colite inflammatoire chronique, ainsi que la survie des souris après traitements par Résolvix® gélifié ou sous sa forme originale. Des souris BALB/c de 8 semaines ont reçues du dextran-sodium-sulfate (DSS ; 3% w/V) dans leur eau de boisson pendant 10 jours puis de l’eau non complémentée pendant 10 jours, et chaque cycle a été répété 1 fois. Les souris ont reçu à J0 (figure 6a et figure 6b) ou au jour 10 (figure 6c et figure 6d), 100 µL de Résolvix® (+ Resolvix), de soluté contrôle (PBS ; Colite) ou de Résolvix® gélifié à 0,5% et à 1,5% en poids de HPMC (respectivement +Resolvix/HPMC-1X et +Resolvix/HPMC-3X) par voie intra-rectal à l’aide d’une canule (voire flèches noires sur la FIG. 6 ). Le score clinique (figures 6a et 6c), ainsi que la survie (figures 6b et 6d) ont été évalués et quantifiés quotidiennement (comme en FIG. 4 ), jusqu’au sacrifice. Données issues de deux expériences représentatives (traitements à j0 ou à j10) avec 5 animaux par groupe, et représentées en moyenne de groupe +/- erreur standard sur la moyenne. Sur la figure 6a, les conditions "+Resolvix/HPMC-1X" et "+Resolvix/HPMC-3X" sont statistiquement différentes de la condition "Colite" selon un test Friedman suivi d’un test de comparaisons multiples de Dunn). Sur la figure 6c, les conditions "+Resolvix" et "+Resolvix/HPMC-1X" sont statistiquement différentes de la condition "Colite" selon un test Friedman suivi d’un test de comparaisons multiples de Dunn. Les résultats montrent que la forme de Résolvix® gélifié en HPMC à 0,5% en poids, permet un effet thérapeutique préventif (figures 6a et 6b) et thérapeutique (figures 6c et 6d) supérieur à celui obtenus avec Résolvix® seul, non gélifié. Les résultats de l’invention du Résolvix® gélifié au moyen de HPMC à une teneur de 1,5% en poids sont moins satisfaisants et suggèrent également une certaine toxicité de cette formulation avec une survie réduite dans le cadre d’une utilisation thérapeutique. Ainsi, dans un mode de réalisation particulièrement préférée, l’invention vise une préparation pharmaceutique comprenant un surnageant obtenu à partir d'une coculture entre des macrophages et des leucocytes irradiés (Résolvix®) comprenant 0,5% en poids d’hydroxylpropylméthylcellulose (HPMC). L’effet thérapeutique est confirmé ex vivo par la quantification des biomarqueurs relatifs à la colite inflammatoire. Pour cela, le ratio poids/longueur de l’intestin et les molécules inflammatoires TNF-α et MPO sont étudiés en fin d’expérience, au sacrifice des animaux. La FIG. 7 montre des diagrammes de la réduction de biomarqueurs inflammatoires associés à la colite chronique suite aux traitements avec Résolvix® classique et la version de l’invention. Les biomarqueurs inflammatoires associés à la colite chronique induite au DSS (cf. FIG. 4 ) ont été quantifiés au terme du modèle de colite inflammatoire chronique et notamment au niveau du colon son ratio poids/longueur (figure 7a), l’activité myéloperoxidase ou "MPO" (figure 7b) et la quantité de TNF-α (figure 7c). Données issues d’une expérience représentative avec 5 animaux par groupe, représentées en moyenne de groupe +/- erreur standard sur la moyenne. Les données montrent que l’effet de Résolvix® seul est au moins conservé, voire amélioré lorsque Résolvix® est gélifié avec HPMC à raison de 0,5% et 1,5% en poids. L’invention permet une amélioration du ratio poids/longueur du colon des animaux traités, une réduction de l’activité MPO et la réduction du taux tissulaire de TNF-α. Il a été décrit ci-avant des modes particulièrement préférés pour la réalisation de l’invention : teneur en HA de préférence de 0,5% en poids, teneur en CMC de préférence de 0,4% en poids ou teneur en PC de 0,1% en poids. L’homme du métier pourra toutefois adapter la présente invention sur la base de ce qui suit. En particulier, pour la formation d’un gel adapté du point de vue de la guérison de plaie (en anglais : "wound healing") l’HA peut être utilisé en une teneur d’environ 0,3 à environ Il ressort de ce qui précède, que la présente invention permet de conserver les propriétés pro-résolutives du résolutome de Résolvix® et d’en augmenter son efficacité. Le surnageant de type Résolvix® gélifié selon l’invention trouve notamment une application dans le traitement de l’inflammation tissulaire des muqueuses comme l’intestin et la peau, seul ou en complément d’autres thérapies, en médecine humaine ou vétérinaire. En particulier, l’invention trouve une application dans les Maladies Inflammatoires Chroniques de l'Intestin ou "MICI" (Inflammatory Bowel Disease en anglais ou "IBD"). Parmi les MICI on peut notamment citer la maladie de Crohn (MC) et la rectocolite hémorragique (RCH). Plus généralement, l’invention est pour une utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une réponse immunitaire pathologique. L'utilisation de la préparation pharmaceutique selon l'invention se fait en particulier au moment d'une résolution défaillante afin de rétablir une résolution efficace et permettre un arrêt de la réaction inflammatoire. Un autre objet de l’invention est une préparation pharmaceutique pour utilisation dans la prévention ou le traitement d'une réponse immunitaire pathologique, comprenant un surnageant obtenu à partir de la coculture de phagocytes avec des cellules apoptotiques, et comprenant en outre un polymère choisi parmi le groupe constitué d’hydroxylpropylméthylcellulose (HPMC), d’acide hyaluronique (HA), de carboxyméthylcellulose (CMC) et de polycarbophile (PC) ou un mélange de ceux-ci. Ce mode de réalisation vise la combinaison du produit Résolvix® de la Demanderesse avec un polymère de l’invention. Il s’ensuit une version améliorée du produit Résolvix®, et ce sous forme de gel. Préparation pharmaceutique comprenant un surnageant obtenu à partir d'une coculture entre des phagocytes et des leucocytes irradiés, caractérisée en ce qu’elle comprend en outre un polymère choisi parmi le groupe constitué d’hydroxylpropylméthylcellulose (HPMC), d’acide hyaluronique (HA), de carboxyméthylcellulose (CMC) et de polycarbophile (PC) ou un mélange de ceux-ci. Préparation pharmaceutique selon la revendication 1, dans laquelle la teneur en poids du polymère est choisie de sorte à conférer une forme gélifiée à ladite préparation pharmaceutique. Préparation pharmaceutique selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle le polymère est l’hydroxylpropylméthylcellulose (HPMC). Préparation pharmaceutique selon la revendication 3, dans laquelle la teneur en hydroxylpropylméthylcellulose (HPMC) est comprise entre 0,5% à 1,5% en poids. Préparation pharmaceutique selon la revendication 3, dans laquelle la teneur en hydroxylpropylméthylcellulose (HPMC) est de 0,5% en poids. Préparation pharmaceutique selon la revendication 3, dans laquelle la teneur en hydroxylpropylméthylcellulose (HPMC) est de 1,5% en poids. Préparation pharmaceutique selon les revendications 1 et 2, dans laquelle, lorsque le polymère est de l’acide hyaluronique (HA) sa teneur est de 0,5% en poids, lorsque le polymère est de la carboxyméthylcellulose (CMC) sa teneur est de 0,4% en poids, et lorsque le polymère est de la polycarbophile (PC) sa teneur en est de 0,1% en poids. Préparation pharmaceutique selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle les phagocytes sont des leucocytes, de préférence dérivés de la couche leuco-plaquettaire issue du sang total. Préparation pharmaceutique selon l’une des revendications précédentes, pour utilisation en tant que médicament. Préparation pharmaceutique selon l’une des revendications précédentes, pour l’utilisation dans le traitement de maladies inflammatoires. Préparation pharmaceutique selon l’une des revendications précédentes, pour l’utilisation dans le traitement d’une maladie inflammatoire chronique de l'intestin. Préparation pharmaceutique selon la revendication 11, dans laquelle ladite maladie inflammatoire chroniques de l'intestin est choisie parmi la maladie de Crohn (MC) et la rectocolite hémorragique (RCH). Préparation pharmaceutique selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle ledit surnageant est le Résolvix®.