Brevet FR3154121A1 — publié le 20250418

Dispositif (10) pour la distribution de liquide dans une enceinte de culture cellulaire de type T-flask caractérisé en ce qu’il comprend : - un bouchon (20) apte à obturer une enceinte de culture (30) de type T-Flask, - une première canalisation (40) s’étendant de l’extérieur vers l’intérieur dudit bouchon (20) et associée audit bouchon (20), caractérisé en ce que ladite première canalisation (40) s’étend sensiblement parallèlement à l’axe longitudinal dudit bouchon (20) et en ce que l’extrémité interne de ladite première canalisation (40) débouche dans une tête de distribution (44), et une enceinte de culture (30) de type T-Flask associée audit bouchon (20).. Système de distribution de milieu de culture pour automate de culture cellulaire. Domaine technique de l’invention La présente invention appartient au domaine de l’appareillage scientifique. Plus particulièrement, la présente invention appartient au domaine du contrôle de la circulation de fluide. Le dispositif selon l’invention est plus particulièrement destiné à la distribution de milieu de culture à des boites de culture cellulaire de type T-Flask. Etat de la technique La culture cellulaire est un élément essentiel de la recherche en biologie. Elle est utilisée notamment pour l’étude du comportement cellulaire et la production de protéines recombinantes ou de virus. A cet effet, les cellules adhérentes ou en suspension sont cultivées dans un milieu liquide à l’intérieur d’étuves régulées en gaz et en température. En dehors des dispositifs de production industrielle, la culture cellulaire nécessite de nombreuses manipulations humaines. Les cellules sont cultivées dans des enceintes (couramment appelées boites de culture) placées dans une étuve dédiée. Pour alimenter les cellules et évacuer les déchets produits, un opérateur doit régulièrement renouveler le milieu de culture en prélevant du milieu usagé et en réintroduisant du milieu frais. De plus, la densité cellulaire doit être contrôlée. Une trop faible ou une trop forte densité empêche leur croissance homogène. En conséquence, l’opérateur doit régulièrement prélever les cellules en trop grande quantité pour les jeter ou les distribuer dans d’autres boites de culture. Toutes ces manipulations sont consommatrices de temps (week-end et vacances compris) et de matériels (e.g. pipettes). Par ailleurs l’ouverture et la fermeture régulières des boites de culture et des bouteilles contenant le milieu de culture sont des sources importantes de contaminations bactériennes. Il existe donc un besoin important pour éliminer au maximum les interventions humaines dans le processus de la culture cellulaire in vitro . Des dispositifs automatisés sont déjà disponibles commercialement. Toutefois, ils coutent plusieurs centaines de milliers d’euros à l’installation et nécessitent de nombreux consommables dédiés. Ces dispositifs sont adaptés à une production industrielle mais pas à l’échelle du laboratoire de recherche et développement. Idéalement, un automate de culture cellulaire doit pouvoir s’adapter au matériel déjà existant à l’intérieur du laboratoire. Plus particulièrement, un automate de culture cellulaire doit pouvoir s’adapter aux boites de culture disponibles dans le commerce. On connait deux types principaux d’enceintes de culture selon le type de cellules cultivés. Tout d’abord, il existe des enceintes de culture dédiées à la culture de cellules non-adhérentes. Ces boites prennent souvent la forme de bouteilles cylindriques. Il existe également des boites dédiées à la culture de cellules adhérentes. Ces dernières présentent une partie parallélépipédique comprenant une face interne plane sur laquelle les cellules vont adhérer, croitre et se diviser. La partie parallélépipédique est prolongée par un prisme, formant le col, puis par un goulot fileté recevant le bouchon de ladite boite. L’axe longitudinal de ce goulot fileté forme un angle par rapport au plan de la surface de culture. Ces dernières sont également connues sous le nom de T-Flask. Le remplissage et le renouvellement manuel, en milieu de culture, des T-Flask est réalisé en plaçant les boites verticalement. Dans cette position, le milieu de culture vient se déposer au fond de la boite (i.e. sur la face perpendiculaire à la face de culture). Quand la boite est repositionnée à l’horizontale, le milieu de culture vient se répartir équitablement sur la surface de culture et recouvre l’ensemble des cellules. Dans le cadre de l’utilisation de T-Flask dans un système de culture cellulaire automatisé, il n’est pas souhaitable d’avoir à manipuler ou à agiter les boites pour répartir uniformément le milieu de culture à la surface des cellules. C’est particulièrement pertinent pour la culture de certains types cellulaires comme les neurones qui sont particulièrement sensibles à l’agitation. Toutefois, en l’absence de manipulation, ou d’agitation le milieu de culture peut se répartir de façon aléatoire, en raison notamment de la tension superficielle, à l’intérieur de la boite formant des zones hétérogènes au niveau desquelles les cellules vont mourir. Dans les cas de renouvellement partiel de milieu, il existe également un besoin pour que le milieu neuf ne se concentre pas en des zones particulières de la boite et entraîne une croissance hétérogène des cellules. Il existe donc un besoin pour un dispositif permettant la distribution uniforme de milieu de culture à l’intérieur de T-Flask sans agitation de ces dernières. La présente invention concerne un dispositif pour la distribution de liquide dans une enceinte de culture cellulaire de type T-flask caractérisé en ce qu’il comprend : - un bouchon apte à obturer une enceinte de culture de type T-Flask, - une première canalisation s’étendant de l’extérieur vers l’intérieur dudit bouchon et associée audit bouchon, caractérisé en ce que ladite première canalisation s’étend sensiblement parallèlement à l’axe longitudinal dudit bouchon et en ce que l’extrémité interne de ladite première canalisation débouche dans une tête de distribution. Dans le cadre de la présente invention, le terme « T-Flask » fait référence à une enceinte de culture cellulaire, comprenant une portion polygonale, préférentiellement sensiblement parallélépipédique, comprenant une surface de culture cellulaire plane pour la culture de cellules adhérentes. Dans le cadre de la présente invention, le terme « bouchon » fait référence à une pièce amovible congruente de l’ouverture de ladite enceinte de culture et apte à obturer en tout ou partie ladite ouverture de ladite enceinte. Dans le cadre de la présente invention, le terme « associer » entend signifier que ladite canalisation et ledit bouchon sont solidairement liés. Dans le cadre de la présente invention, le terme « interne » entend désigner l’extrémité de la canalisation destinée à être disposée à l’intérieur de la T-Flask. Selon un mode de réalisation préféré, ladite tête de distribution comprend au moins une buse d’aspersion. Dans le cadre de la présente invention, le terme « buse d’aspersion » fait référence à une pièce connectée d’une part à ladite première canalisation et comprenant une ouverture communiquant vers l’extérieur. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ladite tête de distribution comprend plusieurs buses d’aspersion distribuées sur au moins deux plans . Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ledit dispositif comprend en outre une enceinte de culture de type T-Flask associée audit bouchon. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ladite tête de distribution est disposée à l’aplomb de la surface de culture. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ladite tête de distribution est à l’aplomb de l’extrémité proximale de la surface de culture de ladite T-Flask . Dans le cadre de la présente invention, le terme « proximale » fait référence à la position d’un élément par rapport audit bouchon. L’élément le plus proche du bouchon est dit « proximal ». Par opposition, l’élément le plus éloigné est dit « distal ». Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ledit dispositif comprend en outre une deuxième canalisation, destinée à extraire le liquide de ladite T-flask. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, la deuxième canalisation s’étend sensiblement parallèlement à l’axe longitudinal dudit bouchon et est associée audit bouchon et débouche dans une tête d’aspiration. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ladite tête d’aspiration est disposée au niveau de la surface de culture. De façon encore plus préféré, ladite tête d’aspiration est disposée à l’intersection de la surface de culture et de la paroi latérale de la T-Flask. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ledit dispositif comprend en outre une pompe disposée de telle sorte à ce qu’elle soit apte à faire circuler du liquide dans ladite canalisation en direction de ladite tête de distribution. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ladite pompe est une pompe à débit variable. La présente invention concerne également un procédé de distribution d’un milieu de culture dans une enceinte de culture cellulaire de type T-Flask mettant en œuvre un dispositif selon l’invention caractérisé en ce qu’il comprend une étape consistant à faire circuler, via ladite pompe, du milieu de culture dans ladite première canalisation en faisant varier, de façon continu ou discontinu, le débit de travail de ladite pompe entre deux débits préalablement définies. Brève description des figures La FIG. 1 est une vue du dessus d’un mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention. La FIG. 2 est une vue de face du même mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention. La FIG. 3 est une vue de gauche du même mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention. La FIG. 4 est une vue de face du même mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention dans lequel la T-flask a été retirée. La FIG. 5 est une vue du dessus du même mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention dans lequel la T-flask a été retirée. La FIG. 6 est une vue de droite du même mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention dans lequel la T-flask a été retirée. Description détaillée de l’invention En référence aux FIG. 1 - FIG. 6 le dispositif 10 selon l’invention comprend un bouchon 20 obturant l’ouverture d’une T-flask 30. Les T-Flask 30 sont bien connues du spécialiste de la culture cellulaire. On peut trouver différents modèles vendus sous ce nom par des sociétés comme Sigma-Aldrich®, Thermo-Fisher scientific® ou Ciba-Corning®. Elles sont généralement vendues avec un bouchon apte à être vissé sur leur goulot 31. Le dispositif 10 selon l’invention va venir remplacer ce bouchon et permettre à la fois l’obturation de la T-Flask et le passage des fluides nécessaires à la culture cellulaire. Le bouchon 20 va indifféremment pouvoir s’associer à la T-Flask 30 en se vissant sur l’extérieur du goulot 31 et/ou par friction à l’intérieur du goulot 31. Préférentiellement le bouchon 20 est associé par vissage au goulot 31. Nativement, le goulot 31 d’une T-flask est pourvu d’un filet 32. En conséquence, le bouchon 20 comprend préférentiellement un filet 21 congruent du filet 32. Le bouchon 20 s’inscrit préférentiellement dans un cylindre dont l’axe longitudinal se confond avec l’axe de rotation du bouchon 20 autour du goulot 31. Le bouchon 20 présente préférentiellement une paroi externe latérale 24, délimitant un volume interne 25 destinée à recevoir le goulot 31. Le bouchon 20 présente également à une de ses extrémités une paroi externe dite paroi d’obturation 26 obturant le volume interne 25, et à son autre extrémité une ouverture 27 permettant le passage du goulot 31. Avantageusement, la paroi d’obturation 26 comprend un filtre permettant le passage des gaz entre l’intérieur et l’extérieur de la T-Flask. Selon un autre mode de réalisation de l’invention non représenté, le bouchon 20 peut comprendre un corps cylindrique souple destiné à s’insérer à l’intérieur du goulot 31 et à l’obturer totalement. Le bouchon 20 est préférentiellement constitué de plastique et encore plus préférentiellement de polypropylène. Le bouchon 20 peut notamment être fabriqué par moulage ou par synthèse additive. La surface externe du bouchon 21 peut avantageusement comprendre des moyens de préhension 22, 23 facilitant sa manipulation et/ou sa mise place sur le goulot 31. Lesdits moyens de préhension 22, 23 peuvent notamment prendre la forme d’une ou plusieurs portions de section externe hexagonale disposées à la surface externe dudit bouchon 20. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention le bouchon 20 comprend une portion de section externe 22 hexagonales à proximité de l’ouverture 27 et une portion de section externe 23 hexagonale à proximité de la paroi d’obturation 26. Le bouchon 20 comprend une et avantageusement au moins deux canalisations 40, 50. La première canalisation 40 est destinée à amener le milieu de culture à l’intérieur de la T-Flask 30. La canalisation 50 est destinée à prélever le milieu de culture à l’intérieur de la T-Flask 30. La première canalisation 40 s’étend de l’extérieur vers l’intérieur du bouchon 20. Elle comprend préférentiellement de son extrémité externe à son extrémité interne un moyen de connexion 41 destiné à permettre le raccordement de la canalisation 40 à un tube flexible, et une portion 42 s’étendant à l’intérieur du bouchon 20. Le moyen de connexion 41 s’étend préférentiellement depuis la face externe de la paroi d’obturation 26 et encore plus préférentiellement perpendiculairement à celle-ci. Le moyen de connexion 41 est préférentiellement constitué d’un tube rigide comprenant à son extrémité un renflement externe 43. Ce dernier a un diamètre externe supérieur au diamètre interne au repos du tube flexible destiné à venir s’associer audit moyen de connexion 43. Ce faisant, le renflement externe 43 va permettre l’association par frottement lorsque le moyen de connexion 43 est inséré ledit tube flexible. La portion 42 communique avec le moyen de connexion 43. Elle est préférentiellement rigide et rectiligne et s’étend depuis l’intérieur de la paroi d’obturation et encore plus préférentiellement perpendiculairement à cette dernière. La portion 42 a préférentiellement un diamètre compris entre 1.5 et 3mm. Préférentiellement, la portion 42 s’étend au-delà de l’ouverture 27 du bouchon 20 de sorte à ce que son extrémité soit positionnée, en condition normale d’utilisation, à l’aplomb de l’extrémité proximale de la surface de culture. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, la portion 42 débouche dans une tête de distribution 44 comprenant une ou plusieurs buses d’aspersion 45. La tête de distribution 44 communique d’une part avec la portion 42 et s’ouvre d’autre part, vers l’extérieur de la tête de distribution 44, via les buses d’aspersion 45. Le rôle de la tête de distribution 44 est de scinder, quand cela est nécessaire, le flux provenant de la portion 42 en plusieurs flux débouchant dans les têtes d’aspersion 45. Pour se faire, la tête de distribution 44 comprend préférentiellement une chambre creuse communiquant d’une part à la portion 42 et d’autre part avec les têtes d’aspersion 45. Préférentiellement, ladite chambre creuse a un volume compris entre 300 et 900 mm 3 , encore plus préférentiellement entre 450 et 750 mm 3 et tout à fait préférentiellement entre 550 et 600 mm 3 . La tête de distribution 44 a préférentiellement la forme d’un disque ou d’un parallélépipédique. Dans le cas d’un disque, Encore plus préférentiellement, ledit disque présente une entrée de flux disposée sur sa tranche et une série d’au moins une buse d’aspersion sur la portion de- cette même tranche à l’opposé de ladite entrée de flux. Dans le cas d’un parallélépipède, ledit parallélépipède présente préférentiellement une entrée de flux disposée sur une de ses faces et une série d’au moins une buse d’aspersion sur la face opposée. Les buses d’aspersion 45 sont orientées de sorte à pouvoir, selon le débit d’alimentation, envoyer le milieu de culture sur une zone prédéfinie de la surface de culture. La présente invention peut comprendre plusieurs buses d’aspersion 45 ayant chacune une orientation différente pour permettre une répartition homogène du milieu de culture sur l’ensemble de la surface de culture. Préférentiellement, lesdites buses d’aspersion 45 sont une canalisation ouverte sur l’extérieur. Encore plus préférentiellement elles ont une section droite circulaire et un diamètre compris entre 0.5 et 1 mm. Dans le cadre de la présente invention, « orientation » entend désigner l’angle que fait, en condition normale d’utilisation, la portion de la canalisation directement en amont de l’ouverture externe de la buse d’aspersion 45 par rapport à l’horizontale et à la verticale. Avantageusement, cette dernière portion a une longueur comprise entre 3 et 5 mm. D’autres répartition des buses d’aspersion 45 sont envisageables. On peut notamment répartir les buses d’aspersion 45 en plusieurs séries, chacune d’au moins deux buses d’aspersion 45, chacune des séries étant à des hauteurs différentes. Les buses d’aspersion 45 de deux séries différentes peuvent être placées en quinconce ou alignées avec la buse contigüe directement au-dessus ou en-dessous. Ci-après sont présentés trois modes de réalisation préférés d’une tête d’aspersion selon l’invention. Selon un premier mode de réalisation, la tête d’aspersion comprend six buses d’aspersion 45 orientées de sorte à former un angle compris entre 18 et 22° et préférentiellement un angle de 20° avec l’horizontale. Par ailleurs, lesdites buses d’aspersion 45 sont orientées par rapport au plan de symétrie longitudinal dudit dispositif de sorte à former un angle de 17.1°, 10.5° et 3,5°. Le modèle étant symétrique, les angles sont donc identiques de l’autre côté par rapport audit plan. Selon un deuxième mode de réalisation, la tête d’aspersion comprend six buses d’aspersion 45. Les six ouvertures sont disposées sur deux rangées superposées de trois ouvertures. Les orifices de la rangée supérieure permettent d’atteindre le fond du flacon lorsque le débit est maximal. les buses d’aspersion 45 de la rangée supérieure sont orientées de sorte à former un angle de 20◦ avec l’horizontale. La buse d’aspersion 45 centrale de cette rangée suit une trajectoire dans le plan azimutal. Les deux buses 45 latérales sont disposées de sorte à former un angle de 17,3° de part et d’autre de ce plan. Les buses d’aspersion 45 de la rangée inférieure permettent d’atteindre le milieu du flacon. Elles forment un angle de −1◦ avec l’horizontale. Le jet issu du trou central de cette rangée suit une trajectoire dans le plan azimutal. La buse d’aspersion 45 centrale de cette rangée suit une trajectoire dans le plan azimutal. Les deux buses 45 latérales sont disposées de sorte à former un angle un angle de 29,4° de part et d’autre de ce plan. Selon un troisième mode de réalisation, la tête d’aspersion comprend six buses d’aspersion 45 disposés sur un seul plan horizontal. Les deux buses centrales sont orientées de sorte à former un angle compris entre 18 et 22° et préférentiellement un angle de 20° avec l’horizontale. Les deux buses suivantes sont orientées de sorte à former un angle de 9° avec l’horizontale. Les deux buses externes sont orientées de sorte à former un angle de -6° avec l’horizontale. Par ailleurs, lesdites buses d’aspersion 45 sont orientées par rapport au plan de symétrie longitudinal dudit dispositif de sorte à former un angle de 30.2°, 12.6° et 9.7°. Le modèle étant symétrique, les angles sont donc identiques de l’autre côté par rapport audit plan. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ledit dispositif comprend en outre une deuxième canalisation, destinée à extraire le liquide de ladite T-flask. La deuxième canalisation 50 s’étend de l’extérieur vers l’intérieur du bouchon 20. Elle comprend préférentiellement de son extrémité externe à son extrémité interne un moyen de connexion 51 destiné à permettre le raccordement de la deuxième canalisation 50 à un tube flexible, et une portion 52 s’étendant à l’intérieur du bouchon 20. Le moyen de connexion 51 s’étend préférentiellement depuis la face externe de la paroi d’obturation 26 et encore plus préférentiellement perpendiculairement à celle-ci. Le moyen de connexion 51 est préférentiellement constitué d’un tube rigide comprenant à son extrémité un renflement externe 53. Ce dernier a un diamètre externe supérieur au diamètre interne au repos du tube flexible destiné à venir s’associer audit moyen de connexion 53. Ce faisant, le renflement externe 53 va permettre l’association par frottement lorsque le moyen de connexion 53 est inséré dans ledit tube flexible. La portion 52 communique avec le moyen de connexion 53. Elle est indifféremment rigide ou souple et s’étend depuis l’intérieur de la paroi d’obturation vers l’intérieur de l’enceinte de la T-Flask. Préférentiellement, la portion 52 s’étend au-delà de l’ouverture 27 du bouchon 20 de sorte à ce que son extrémité soit positionnée, en condition normale d’utilisation, à l’aplomb de l’extrémité proximale de la surface de culture. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, la portion 52 débouche dans une tête de d’aspiration 54 dont l’extrémité distale est disposée au contact de la surface de culture et encore plus préférentiellement au croisement de la surface de culture et d’une des parois latérales de l’enceinte de culture. Ce faisant ladite tête d’aspiration 54 va pouvoir prélever l’intégralité du milieu de culture usagée présent dans l’enceinte de culture. Avantageusement, la tête d’aspiration 54 est une canalisation rigide communiquant avec une portion 52 souple. La connexion entre la tête d’aspiration 54 et la portion 52 sont avantageusement disposées de façon coulissante dans un cylindre de guidage fixe 55.. Dans ce dernier mode de réalisation, en coulissant dans le cylindre de guidage 55, la tête d’aspiration 54 va pouvoir s’adapter à toutes les tailles de T-Flask. Ainsi selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ladite tête d’aspiration à une longueur comprise entre 50 et 100mm et encore plus préférentiellement une longueur comprise entre 60 et 80mm . La tête d’aspiration 54 communique d’une part avec la portion 52 et s’ouvre d’autre part, vers l’extérieur de la tête d’obturation 54 au niveau de son extrémité 55. La première canalisation 40 et/ou la deuxième canalisation 50 sont avantageusement reliées à au moins une pompe permettant l’apport et le retrait du milieu de culture. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ladite pompe est une pompe à débit variable et encore plus préférentiellement une pompe péristaltique. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, ladite pompe a un débit de travail compris entre 10 et 300 mL/min et encore plus préférentiellement entre 250 et 300 mL/min. On comprend ainsi qu’en condition normale d’utilisation, le bouchon fourni avec la T-flask va être remplacé par un dispositif selon l’invention. Ce faisant, la première canalisation 40 et la deuxième canalisation 50 vont s’étendre à l’intérieur du goulot. Les portions 42, 52 de chacune des canalisations 40, 50 vont préférentiellement s’arrêter au niveau de l’intersection du goulot 31 et de l’enceinte de culture 30. Pour alimenter l’enceinte en milieu de culture, la pompe va alimenter la première canalisation 40 pendant une première durée prédéfinie avec un premier débit prédéfini. Ce faisant, le milieu de culture va former un jet à la sortie des buses d’aspersion 45 et rejoindre la surface de culture en des points précis. Durant cette première étape vont se former une ou plusieurs « flaques » de milieu de culture sur la surface de culture. En faisant varier de manière continu ou discontinu le débit de la pompe, on va obtenir un déplacement du point d’impact du jet de milieu de culture sur la surface de culture et ainsi permettre une répartition égale du milieu de culture sur toute la surface de culture. La pompe reliée à la première canalisation 40 et la pompe reliée à la deuxième canalisation 50 peuvent indifféremment être identiques ou différentes. Afin de retirer le milieu de culture de l’enceinte de culture, la pompe reliée à la deuxième canalisation 50 est mise en mouvement. La tête d’aspiration 54 se trouvant au niveau de la surface de culture, elle permet un retrait totale ou partielle du milieu de culture présent dans l’enceinte 30. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention la pompe est contrôlée par un dispositif informatique programmé et/ou programmable de sorte à faire effectuer à la pompe différent cycles d’alimentation/retrait en milieu de culture. Dispositif (10) pour la distribution de liquide dans une enceinte de culture cellulaire de type T-flask caractérisé en ce qu’il comprend : - un bouchon (20) apte à obturer une enceinte de culture (30) de type T-Flask, - une première canalisation (40) s’étendant de l’extérieur vers l’intérieur dudit bouchon (20) et associée audit bouchon (20), caractérisé en ce que ladite première canalisation (40) s’étend sensiblement parallèlement à l’axe longitudinal dudit bouchon (20) et en ce que l’extrémité interne de ladite première canalisation (40) débouche dans une tête de distribution (44), et une enceinte de culture (30) de type T-Flask associée audit bouchon (20).. Dispositif (10) selon la revendication précédente caractérisé en ce que ladite tête de distribution (44) comprend au moins une buse d’aspersion (45). Dispositif (10) selon l’une des revendications 1 à 2 précédente caractérisé en ce que ladite tête de distribution (44) comprend plusieurs buses d’aspersion (45) distribuées sur au moins deux plans . Dispositif (10) selon l’une des revendications précédentes caractérisé en ce que ladite tête de distribution (44) est disposée à l’aplomb de la surface de culture. Dispositif (10) selon la revendication précédente caractérisé en ce que ladite tête de distribution (44) est à l’aplomb de l’extrémité proximale de la surface de culture de ladite T-Flask (30) . Dispositif (10) selon l’une des revendications précédentes caractérisé en ce que ledit dispositif (10) comprend en outre une deuxième canalisation (50), destinée à extraire le liquide de ladite T-Flask (30). Dispositif (10) selon la revendication précédente caractérisé en ce que la deuxième canalisation (50) s’étend sensiblement parallèlement à l’axe longitudinal dudit bouchon (20) et est associée audit bouchon (20) et débouche dans une tête d’aspiration (54). Dispositif (10) selon la revendication précédente caractérisé en ce que ladite tête d’aspiration (54) est disposée au niveau de la surface de culture. Dispositif (10) selon l’une des revendications précédentes caractérisé en ce que ledit dispositif (10)comprend en outre une pompe disposée de telle sorte à ce qu’elle soit apte à faire circuler du liquide dans ladite canalisation (40) en direction de ladite tête de distribution (44). Dispositif (10) selon la revendication précédente caractérisé en ce que ladite pompe est une pompe à débit variable. Procédé de distribution d’un milieu de culture dans une enceinte de culture (30) cellulaire de type T-Flask mettant en œuvre un dispositif (10) selon la revendication 10 caractérisé en ce qu’il comprend une étape consistant à faire circuler, via ladite pompe, du milieu de culture dans ladite canalisation (40) en faisant varier, de façon continu ou discontinu, le débit de travail de ladite pompe entre deux débits préalablement définies.