Brevet FR3142883A1 — publié le 20240614

La présente invention a pour objet un extrait d’algue du genre Ulva et son utilisation en nutrition humaine et animale, pour le traitement de l’inflammation, préférentiellement l’inflammation associée à un syndrome métabolique, ainsi que pour le traitement de troubles cognitifs et/ou émotionnels induits par un syndrome métabolique. La présente invention a également pour objet des compléments alimentaires et des compositions alimentaires comprenant un extrait d’algue du genre Ulva . Extrait d’algue du genre Ulva pour le traitement de l’inflammation et des troubles cognitifs et/ou émotionnels induits par un syndrome métabolique La présente invention a pour objet un extrait d’algue du genre Ulva et son utilisation en nutrition humaine et animale, pour le traitement de l’inflammation, préférentiellement l’inflammation associée à un syndrome métabolique, ainsi que pour le traitement de troubles cognitifs et/ou émotionnels induits par un syndrome métabolique. La présente invention a également pour objet des compléments alimentaires et des compositions alimentaires comprenant un extrait d’algue du genre Ulva . La prédisposition génétique, la sédentarité, les habitudes alimentaires, les facteurs environnementaux et l'altération du métabolisme sont les facteurs principaux et convergents de l'apparition de l'obésité, une pathologie complexe et multifactorielle bien connue qui a atteint des proportions pandémiques. L'incidence de l'obésité a augmenté très rapidement au cours des 30 dernières années, ce qui suggère que des facteurs comportementaux et environnementaux, en particulier une plus grande disponibilité et une plus grande consommation d'aliments à forte teneur en graisses (régime HFD de l’anglais « High Fat Diet »), ont fortement alimenté cette affection. L'obésité induite par un régime riche en graisses est liée à plusieurs conditions pathologiques telles que le diabète, les maladies cardiovasculaires, l'hypertension, les maladies du foie, certaines formes de cancer (côlon, vésicule biliaire, sein, etc.). La caractéristique commune de toutes les maladies métaboliques induites par l'obésité est une inflammation, en particulier une inflammation chronique de bas grade qui est étroitement liée à la physiopathologie du tissu adipeux. En effet, l'obésité induite par un régime riche en graisses se caractérise par une inflammation de bas grade, et également une résistance à l’insuline, un stress oxydatif et des dysfonctionnements mitochondriaux. Il existe ainsi un besoin de développer des molécules ciblant l’inflammation afin de traiter l’inflammation et également pour traiter les troubles cognitifs et/ou émotionnels induits par un syndrome métabolique. De nombreuses compositions ont été développées pour prévenir ou traiter ces pathologies. Toutefois, les produits ou méthodes existants pour répondre à ces besoins sont limités par : - soit la complexité, et donc le coût de la formulation de ces compositions comprenant des ingrédients de niveaux de pureté très variés, - soit le manque de démonstration factuelle de l’activité anti-inflammatoire ou de l’activité neuro-protectrice des extraits. Dans ce contexte, les algues présentent un intérêt croissant pour ce marché, en demande de nouveaux produits d’origine naturelle. En effet, si elles ont été valorisées depuis des décennies, majoritairement comme source d’alimentation, pour les propriétés texturantes des polysaccharides qu’elles produisent ou, plus récemment, pour leurs propriétés dermo-cosmétiques, les macroalgues marines, notamment, présentent une large diversité de molécules encore peu étudiées. Sur la période 1999-2015, 99 composés purifiés provenant de macroalgues marines et présentant une activité neuroprotectrice ont été identifiés. Parmi ces composés, 57 proviennent de macroalgues brunes, 28 proviennent de macroalgues rouges et seulement 14 proviennent de macroalgues vertes. Du point de vue des macroalgues marines vertes, il existe une littérature fournie mettant en évidence les propriétés de composés isolés à partir d’algues vertes ou d’extraits d’algues vertes complexes dans les domaines nutraceutique ou pharmaceutique. Mais aucune donnée relative à des activités anti-inflammatoires de ces mêmes composés ou extraits n’est retrouvée. Il apparaît donc que les macroalgues marines, et en particulier les algues vertes, peuvent encore être considérées à ce jour comme un réservoir sous-exploité de composés anti-inflammatoires. Les inventeurs ont démontré qu’un extrait d’algue du genre Ulva présente des propriétés anti-inflammatoires. Ainsi, la présente invention concerne un extrait d’algue du genre Ulva , caractérisé en ce que : - la teneur en protéines est comprise entre 5 et 60% en masse, préférentiellement entre 15 et 50% en masse, préférentiellement entre 25 et 35% en masse, par rapport à la masse sèche totale de l’extrait, - la teneur en composés phénoliques totaux est comprise entre 0,5 et 40% en masse, préférentiellement entre 1 et 20% en masse, préférentiellement entre 1 et 10% en masse, par rapport à la masse sèche totale de l’extrait, - la teneur en sucres totaux est comprise entre 0,5 et 80% en masse, préférentiellement entre 1 et 50% en masse, préférentiellement entre 5 et 15% en masse, par rapport à la masse sèche totale de l’extrait. Dans un mode de réalisation, l’extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention a une teneur en protéines comprise entre 28 et 32% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait. Dans un mode de réalisation, l’extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention a une teneur en composés phénoliques totaux comprise entre 2 et 6% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait. Dans un mode de réalisation, l’extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention a une teneur en sucres totaux comprise entre 5 et 15% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait. Dans un mode de réalisation, l’extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention est un extrait d’algue du genre Ulva choisie parmi Ulva lactuca , Ulva conglobata , Ulva ohnoi , Ulva reticulata , Ulva prolifera , Ulva flexuosa et Ulva intestinalis . L’effet anti-inflammatoire in vitro de l’extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention a été évalué sur une lignée cellulaire de macrophages murins Raw 264,7 fournies par ATCC Cell (« American Type Culture Collection ») : code ATCC-TIB-71. Il s’agit de macrophages immortalisés de souris utilisés comme modèles d’étude biologique de référence dans les maladies métaboliques, pour mesurer une activité anti/pro-inflammatoire. Avantageusement, les inventeurs ont démontré qu’après 6 h de pré-incubation avec l’extrait selon l’invention, la production d’oxyde nitrique (NO) induite par le LPS est drastiquement réduite, par rapport aux conditions contrôles inflammatoires impliquant le LPS seul. Ces résultats indiquent que l’extrait selon l’invention est très fortement anti-inflammatoire car il induit une réduction de la sécrétion de NO proche de celle induite par la dexaméthasone, à très faible concentration. En effet, l’oxyde nitrique (NO) est un médiateur central du processus inflammatoire, qui régule l'activité, la croissance et la mort de nombreux types de cellules immunitaires et inflammatoires. Une réduction de la sécrétion de NO est le reflet d’une activité anti-inflammatoire. De plus, la modulation des voies de signalisation protéiques impliquées dans l’inflammation par l’extrait selon l’invention a été évaluée. Avantageusement, les inventeurs ont démontré que l’extrait selon l’invention induit une réduction drastique de l’expression des protéines NLRP3 et iNOS, impliquées dans le processus inflammatoire dans les macrophages Raw 264,7 en culture. Pour compléter ces tests, la modulation par l’extrait selon l’invention de la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires dans le milieu extracellulaire a été évaluée. Avantageusement encore, les inventeurs ont démontré que l’extrait d’algue selon l’invention induit, après 6 h de pré-incubation, une diminution drastique de la sécrétion du TNF-α et de l’IL-6 induite par le LPS, atteignant un niveau similaire à celui obtenu en présence de la dexaméthasone, composé anti-inflammatoire de référence, et ce y compris à la très faible concentration de 0,1 µg/ml. Ces résultats démontrent l’effet anti-inflammatoire de l’extrait selon l’invention vis-à-vis de la production de NO, de l’expression des protéines clés impliquées dans les cascades de signalisation liées au processus inflammatoire (NLRP-3 et iNOS), et de la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires. Ainsi, la présente invention a également pour objet un extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention pour son utilisation pour le traitement de l’inflammation. Dans un mode de réalisation, l’inflammation est une inflammation induite par un syndrome métabolique. Les inventeurs ont également évalué l’effet de l’extrait selon l’invention sur les altérations métaboliques et comportementales par l’évaluation des paramètres métaboliques (poids, masse grasse et masse maigre) et comportementaux (comportement de type anxieux, capacités mnésiques) dans un modèle de syndrome métabolique. Le comportement de type anxieux des animaux a été évalué au moyen du test du labyrinthe en croix surélevé. Les inventeurs ont démontré que la supplémentation en extrait selon l’invention restaure le temps d’exploration des animaux dans les bras ouverts (F (2, 20) = 7,376, p Les souris ont également été testées dans le labyrinthe aquatique de Morris afin d’évaluer les effets chroniques du traitement sur la mémoire. De façon intéressante, la supplémentation en extrait selon l’invention permet de restaurer les capacités cognitives des animaux sous régime HFD. En effet, ils discriminent le quadrant cible de façon statistiquement significative par rapport au hasard (p Les inventeurs ont ainsi démontré que l’extrait selon l’invention permet de protéger contre une dégradation des capacités cognitives et une altération émotionnelle induites par un syndrome métabolique. Ainsi, la présente invention a également pour objet un extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention pour son utilisation pour le traitement de troubles cognitifs et/ou émotionnels induits par un syndrome métabolique. Selon un mode de réalisation, les troubles cognitifs et émotionnels sont choisis parmi les troubles de mémoire à long terme hippocampo-dependants et les troubles de type anxieux. La présente invention concerne également un complément alimentaire ou une composition alimentaire pour l’homme ou les animaux de compagnie comprenant un extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention. En effet, l’extrait d’algue selon l’invention peut être utilisé en nutrition humaine mais également en nutrition animale. D’autres caractéristiques, détails et avantages apparaîtront à la lecture de la description détaillée ci-après, et à l’analyse des dessins annexés, sur lesquels : Fig. 1 montre l’effet de la fraction P sur la viabilité de macrophages murins Raw 264,7 en culture, après 24 h d’incubation (A) ou après 6 h de pré-incubation puis 18 h d’incubation en présence de LPS (1 µg/ml) (B). Les résultats expriment le pourcentage moyen relatif de macrophages viables par rapport aux conditions contrôles (100%) ± ETM. Les différences significatives obtenues entre les échantillons et les conditions contrôles (A) ou entre les échantillons et les conditions avec LPS seul (B) sont indiquées par (n = 4) : ns (non significatif : p>0,05) (One-WAY ANOVA). Fig. 2 montre l’effet de la fraction P sur la sécrétion d’oxyde nitrique (NO) par des macrophages murins Raw 264,7 en culture, après 24 h d’incubation (A) ou après 6 h de pré-incubation puis 18 h d’incubation en présence de LPS (1 µg/ml) (B). Les résultats expriment la concentration de NO secrétée dans le milieu de culture ± ETM. Les différences significatives obtenues entre les échantillons et les conditions contrôles (A) ou entre les échantillons et les conditions avec LPS seul (B) sont indiquées par (n = 4) : ns (non significatif : p>0,05), *** (p Fig. 3 montre l’effet de la fraction P sur l’expression respective des protéines NLRP3 (A) et iNOS (B), par des macrophages murins Raw 264,7 en culture, après 6 h de pré-incubation puis 18 h d’incubation en présence de LPS. Les résultats expriment le niveau d’expression des protéines cibles ± ETM, rapporté au niveau d’expression de la β-actine, en tant que protéine de ménage. Les différences significatives obtenues entre les échantillons et les conditions avec LPS seul sont indiquées par (n = 6) : ns (non significatif : p>0,05), * (p Fig. 4 montre l’effet de la fraction P sur la sécrétion de TNF-α et IL-6 par des macrophages murins Raw 264,7 en culture, après 24 h d’incubation (A, C) ou après 6 h de pré-incubation puis 18 h d’incubation en présence de LPS (B, D). Les résultats expriment la concentration de TNF-α et IL-6 secrétées dans le milieu de culture ± ETM. Les différences significatives obtenues entre les échantillons et les conditions contrôles (A, C) ou entre les échantillons et les conditions avec LPS seul (B, D) sont indiquées par (n = 4) : ns (non significatif : p>0,05), * (p Fig. 5 montre l’effet de la supplémentation en fraction P sur les paramètres métaboliques d’animaux obèses et diabétiques nourris avec un régime HFD : poids corporel (A), masse maigre (B) et masse grasse (C) de souris C57BL/6J nourries avec un régime HFD ou standard A04 pendant 16 semaines et supplémentées les 4 dernières semaines avec la solution de fraction P à 1 mg/ml dans l’eau de boisson ou avec de l’eau (contrôles). Les différences significatives sont indiquées par (n = 12/groupe) : ns (non significatif : p>0,05), ** (p Fig. 6 montre l’effet de la supplémentation en fraction P sur la durée d’exploration des bras ouverts (BO) anxiogènes du labyrinthe en croix surélevé, chez des animaux obèses et diabétiques nourris avec un régime HFD : souris C57BL/6J nourries avec un régime HFD ou standard A04 pendant 16 semaines et supplémentées les 4 dernières semaines avec la solution de fraction P à 1 mg/ml dans l’eau de boisson ou avec de l’eau (contrôles). Les différences significatives sont indiquées par (n = 12/groupe) : * (p Fig. 7 montre la représentation schématique du protocole du test comportemental du labyrinthe aquatique de Morris. Fig. 8 montre l’effet de la supplémentation en fraction P sur la mémoire d’animaux obèses et diabétiques nourris avec un régime HFD. La mémoire est évaluée selon le temps passé dans le cadran opposé à la plateforme (Opp (E)), les cadrans adjacents à la plateforme (Adj (N ou S)) ou dans le cadran cible où se trouve la plateforme (Cible (W)) par des souris C57BL/6J nourries avec un régime HFD ou standard A04 pendant 16 semaines, et supplémentées durant les 4 dernières semaines avec la fraction P à 1 mg/ml dans l’eau de boisson ou avec de l’eau (contrôles). Les différences significatives entre les valeurs obtenues et le hasard (valeur indicative de 25%) sont indiquées par (n = 12/groupe) : * (p Description Détaillée Extrait d’algue du genre Ulva La présente invention concerne un extrait d’algue du genre Ulva caractérisé en ce que : - la teneur en protéines est comprise entre 5 et 60% en masse, préférentiellement entre 15 et 50% en masse, préférentiellement entre 25 et 35% en masse, par rapport à la masse sèche totale de l’extrait, - la teneur en composés phénoliques totaux est comprise entre 0,5 et 40% en masse, préférentiellement entre 1 et 20% en masse, préférentiellement entre 1 et 10% en masse, par rapport à la masse sèche totale de l’extrait, - la teneur en sucres totaux est comprise entre 0,5 et 80% en masse, préférentiellement entre 1 et 50% en masse, préférentiellement entre 5 et 15% en masse, par rapport à la masse sèche totale de l’extrait. Teneur en protéines Selon un mode de réalisation, l’extrait d’algue du genre Ulva est caractérisé par une teneur en protéines comprise entre 5 et 60% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait, préférentiellement comprise entre 25 et 35% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait et de manière préférée, la teneur en protéine est comprise entre 28 et 32% en masse, de manière encore préférée d’environ 30% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait. La teneur en protéines pourra être mesurée par toute méthode connue de l’homme du métier. A titre illustratif, on citera les méthodes de Lowry (Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J Biol Chem. 1951 Nov;193(1):265–75), Smith (Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, Mallia AK, Gartner FH, Provenzano MD, et al. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Anal Biochem. 1985 Oct;150(1):76–85) et Kjeldahl (Kirk PL. Kjeldahl Method for Total Nitrogen. Anal Chem. 1950 Feb 15;22(2):354–8). Ces protocoles pourront être indépendamment et alternativement utilisés pour mesurer la teneur en protéines. Teneur en composés phénoliques totaux Selon un mode de réalisation, l’extrait d’algue du genre Ulva est caractérisé par une teneur en composés phénoliques totaux comprise entre 0,5 et 40% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait, préférentiellement comprise entre 1 et 10% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait et de manière préférée, la teneur en composés phénoliques totaux est comprise entre 2 et 6% en masse, de manière préférée encore d’environ 4% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait. On entend par « composés phénoliques totaux » l’ensemble des métabolites secondaires caractérisés par la présence d’un cycle aromatique portant des groupements hydroxyles libres ou engagés avec un glucide, présents dans toutes les parties des végétaux supérieurs, les plus représentés étant les anthocyanes, les flavonoïdes et les tannins. La teneur en composés phénoliques totaux pourra être mesurée par toute méthode connue de l’homme du métier. A titre illustratif, on citera la méthode de Singleton et Rossi (Singleton VL, Rossi JA. Colorimetry of total phenolics with phosphomolybdic-phosphotungstic acid reagents. Am J Enol Vitic. 1965 Jan 1;16(3):144), avec quelques modifications. Teneur en sucres totaux Selon un mode de réalisation, l’extrait d’algue du genre Ulva est caractérisé par une teneur en sucres totaux comprise entre 0,5 et 80% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait, préférentiellement comprise entre 5 et 15% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait et de manière préférée, la teneur en sucres totaux est d’environ 10% en masse, par rapport à la masse sèche totale de l’extrait. On entend par « sucres totaux » l’ensemble des glucides : mono-, oligo-, poly-saccharides et leurs dérivés. La teneur en sucres totaux pourra être mesurée par toute méthode connue de l’homme du métier. A titre illustratif, on citera la méthode au mélange phénol/acide sulfurique introduite par Dubois (Dubois M, Gilles K, Hamilton JK, Rebers PA, Smith F. A Colorimetric Method for the Determination of Sugars. Nature. 1951 Jul;168(4265):167–167). Selon un mode de réalisation préféré, l’extrait d’algue du genre Ulva est caractérisé en ce que : - La teneur en protéines est d’environ 30% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait, - La teneur en composés phénoliques totaux est d’environ 4% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait, - La teneur en sucres totaux est d’environ 10% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait. Dans la présente invention, le terme "environ", lorsqu'il se réfère à un nombre ou à une plage numérique, signifie que le nombre ou la plage numérique en question est une approximation dans les limites de la variabilité expérimentale (ou dans les limites de l'erreur expérimentale statistique), et donc que le nombre ou la plage numérique peut varier entre 1 % et 15 % du nombre ou de la plage numérique indiqué(e). Par exemple, l'utilisation de "environ X" englobe +/-1 pour cent, 2 pour cent, 3 pour cent, 4 pour cent, 5 pour cent, 6 pour cent, 7 pour cent, 8 pour cent, 9 pour cent, 10 pour cent, 11 pour cent, 12 pour cent, 13 pour cent, 14 pour cent et 15 pour cent de la valeur X. Algue du genre Ulva Les algues du genre Ulva sont les ulves, des algues vertes multicellulaires réparties dans les océans avec environ 400 espèces. Selon un mode de réalisation, l’algue du genre Ulva est choisie parmi l’ensemble des espèces du genre Ulva , de préférence dans le groupe constitué par les espèces Ulva lactuca , Ulva rigida , Ulva fasciata , Ulva pertusa , Ulva californica , Ulva gigantea , Ulva pseudocurvata , Ulva conglobata , Ulva armoricana , Ulva fasciculata , Ulva ohnoi , Ulva pseudolinza , Ulva reticulata , Ulva rotundata , Ulva elegans , Ulva prolifera , Ulva scandinavica , Ulva umbilicata , Ulva flexuosa , Ulva clathrata , Ulva compressa et Ulva intestinalis . Selon un mode de réalisation préférée, l’algue du genre Ulva est choisie parmi Ulva lactuca , Ulva conglobata , Ulva ohnoi , Ulva reticulata , Ulva prolifera , Ulva flexuosa et Ulva intestinalis . Selon un mode de réalisation, l’algue du genre Ulva est Ulva lactuca . Selon un mode de réalisation, l’extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention est susceptible d’être obtenu par le procédé décrit ci-après. Inflammation Les inventeurs ont avantageusement démontré l’effet anti-inflammatoire de l’extrait selon l’invention vis-à-vis de la production de NO, de l’expression des protéines clés impliquées dans les cascades de signalisation liées au processus inflammatoire (NLRP-3 et iNOS), et de la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires. Ainsi, la présente invention concerne un extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention pour son utilisation dans le traitement de l’inflammation. Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne un extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention pour son utilisation dans le traitement de l’inflammation induite par un syndrome métabolique. Le terme « syndrome métabolique » désigne usuellement les troubles du métabolismes énergétiques (hyperglycémie à jeun, insulino-résistance, hypertension, hypertriglycéridémie, accumulation de graisse viscérale, faible taux plasmatique de cholestérol HDL) associés à l’obésité ou au surpoids. On parle de syndrome métabolique lorsque sont présentes au moins trois des anomalies listées ci-dessus. Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne un extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention pour son utilisation pour l’amélioration d’au moins un symptôme ou trouble associé à un syndrome métabolique. Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne un extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention pour son utilisation dans le traitement de l’inflammation induite par l’obésité ou le surpoids. L’obésité et le surpoids peuvent notamment être déterminés par le calcul de l’indice de masse corporelle (IMC). L’IMC s’obtient en calculant le rapport entre le poids et la taille au carré. Par exemple, une personne mesurant 1,62 m et pesant 55 kg a un IMC égal à 20 (c’est-à-dire : 55/1,62²). De manière générale, on dit qu’une personne a un poids normal lorsque son IMC est compris entre 18 et 25 kg/m², est en surpoids lorsque son IMC est compris entre 25 et 30 kg/m², et est obèse si son IMC dépasse 30 kg/m². La présente invention concerne également une méthode pour le traitement de l’inflammation, comprenant l’administration d’un extrait d’algue selon l’invention à un mammifère en ayant besoin. La présente invention concerne également l’utilisation d’un extrait d’algue selon l’invention pour l’obtention d’un médicament destiné au traitement de l’inflammation. La présente invention concerne également une composition pharmaceutique ou vétérinaire comprenant un extrait d’algue selon l’invention pour son utilisation pour le traitement de l’inflammation. T raitement des troubles cognitifs et /ou émotionnels induits par un syndrome métabolique. Les inventeurs ont en effet démontré que l’extrait selon l’invention permet de protéger contre une dégradation des capacités cognitives et/ou une altération émotionnelle induites par un syndrome métabolique. En effet, il a été démontré que l’extrait selon l’invention protège de la mise en place des troubles de type anxieux induits par le régime HFD et qu’il permet de restaurer les capacités cognitives des animaux nourris avec un régime HFD. Ainsi, la présente invention concerne également un extrait d’algue selon l’invention pour le traitement de troubles cognitifs et/ou émotionnels induits par un syndrome métabolique. Parmi les troubles cognitifs et émotionnels, on citera les troubles de mémoire à long terme hippocampo-dependants et les troubles de type anxieux. Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne un extrait d’algue selon l’invention pour le traitement des troubles de mémoire à long terme hippocampo-dépendants et/ou les troubles de type anxieux. La présente invention concerne également une méthode de traitement des troubles cognitifs et/ou émotionnels induits par un syndrome métabolique comprenant l’administration d’un extrait d’algue selon l’invention à un mammifère en ayant besoin. La présente invention concerne également l’utilisation d’un extrait d’algue selon l’invention pour l’obtention d’un médicament destiné au traitement de troubles cognitifs et/ou émotionnels induits par un syndrome métabolique. La présente invention concerne également une composition pharmaceutique ou vétérinaire comprenant un extrait d’algue selon l’invention pour son utilisation pour le traitement de troubles cognitifs et/ou émotionnels induits par un syndrome métabolique. Traitement Les termes « traitement » ou « méthode de traitement » ne sont pas des termes absolus et, lorsqu’ils sont appliqués à l’inflammation ou à des troubles cognitifs et/ou émotionnels induits par un syndrome métabolique, désignent une procédure ou un plan d’action conçu, même avec une probabilité de succès faible, devant induire un effet bénéfique global tel que le retard d’apparition de la pathologie, ou la diminution de la gravité d’un ou plusieurs symptômes. Typiquement, dans le cas de l’inflammation le traitement peut s’entendre de la diminution de la réponse inflammatoire. Typiquement, dans le cas de l’inflammation le traitement peut s’entendre de la diminution de troubles cognitifs et/ou émotionnels. Typiquement, dans le cas de l’inflammation le traitement peut s’entendre comme l’amélioration des capacités mnésiques et/ou la diminution de l’anxiété. Les expressions « induite par un syndrome métabolique » et « associée à un syndrome métabolique » peuvent être utilisées de manière interchangeable. Selon un mode de réalisation, l’invention vise l’utilisation d’un extrait d’algue selon l’invention pour l’amélioration d’au moins un symptôme associé à un syndrome métabolique, dans laquelle ladite amélioration comprend la diminution de l’inflammation, la diminution de troubles cognitifs et/ou émotionnels, l’amélioration des capacités mnésiques et/ou la diminution de l’anxiété. Que ce soit pour le traitement de l’inflammation ou le traitement des troubles cognitifs et/ou émotionnels induits par un syndrome métabolique, le mammifère est choisi parmi les humains et les animaux de compagnie. L’extrait d’algue selon l’invention peut en effet être utilisé en nutrition humaine mais également en nutrition animale. Selon un mode de réalisation, le mammifère est un humain. Selon un autre mode de réalisation, le mammifère est un animal de compagnie tel qu’un chien ou un chat. Selon un mode de réalisation, l’extrait d’algue selon l’invention pourra être administré sous forme d’une composition pharmaceutique ou vétérinaire comprenant, outre l’extrait d’algue, un excipient pharmaceutiquement acceptable. On entend par « pharmaceutiquement acceptable » une substance qui n'est pas biologiquement ou autrement indésirable, c'est-à-dire qui peut être incorporée dans une composition pharmaceutique administrée à un patient ou un animal sans causer d'effets biologiques indésirables ou sans interagir de manière délétère avec l'un des autres composants de la composition dans laquelle elle est contenue, par exemple en inhibant ou diminuant les propriétés anti-inflammatoires de l’extrait d’algue. Typiquement, l’excipient pharmaceutiquement acceptable pourra être choisi parmi un diluant, un désintégrant, un liant, un agent de glissement, un agent lubrifiant, un agent mouillant, un agent tampon, un agent de suspension, un adjuvant, un émulsifiant, un absorbant, un conservateur, un agent de surface, un agent édulcorant, un antioxydant, ou un mélange de ceux-ci. Ces excipients sont par exemple décrits dans « The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pa ». La quantité de l’extrait d’algue selon l’invention dans les compositions peut varier de manière à administrer une quantité efficace de l’extrait d’algue pour obtenir la réponse thérapeutique souhaitée pour un mammifère particulier. Par « quantité efficace » ou « quantité thérapeutiquement efficace » d’un composé, on entend une quantité non toxique mais suffisante du composé pour fournir l’effet souhaité. Typiquement, la quantité administrée ou dose, dépend de l’activité de l’extrait d’algue selon l’invention, de la voie d’administration, de la gravité de la pathologie, ainsi que de l’état de santé et des antécédents médicaux du mammifère traité, de divers facteurs tels que le poids corporel, du régime alimentaire, de l’éventuelle combinaison avec d’autres agents thérapeutiques. Il est toutefois de la compétence de l’homme du métier de déterminer le dosage adéquat et d’initier le traitement à un dosage inférieur à celui requis pour obtenir l’effet thérapeutique souhaité puis d’augmenter progressivement la dose jusqu’à ce que l’effet souhaité soit obtenu. L’extrait d’algue pourra être administré par voie orale. Typiquement, les compositions pharmaceutiques ou vétérinaires pourront se présenter sous forme de complément alimentaire à destination de l’homme ou des animaux de compagnie ou de compositions alimentaires pour l’homme ou les animaux de compagnie. Procédé d’obtention de l’extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention Avantageusement, l’extrait d’algue selon l’invention pourra être obtenu selon les étapes du procédé décrit dans le brevet FR 2 998 894 de la société SEPROSYS, qui décrit un procédé de traitement d’algues comprenant : - une étape de broyage, - de diffusion à l’eau des algues à traiter, - de filtration des pulpes récupérées après l’étape de diffusion de façon à obtenir un jus de pressage d’une part et des pulpes de pressage d’autre part, - d’ultrafiltration du jus de pressage de façon à obtenir un rétentat d’une part et un perméat d’autre part. Les inventeurs ont avantageusement découvert que le perméat obtenu en mettant en œuvre un tel procédé sur des algues du genre Ulva présentait des propriétés anti-inflammatoires. Ainsi, la présente invention concerne également un procédé d’obtention d’un extrait d’algue du genre Ulva comprenant les étapes : - de broyage des algues - d’extraction des algues - de filtration afin d’obtenir un extrait d’algue présentant des propriétés anti-inflammatoires. On entend par « extrait d’algue présentant des propriétés anti-inflammatoires », un extrait d’algue permettant de : - diminuer la production de NO, ou - réduire l’expression des protéines NLRP3 et iNOS, ou - réduire la sécrétion du TNF-α et de l’IL-6. Selon un mode de réalisation, l’étape de broyage des algues permet d’obtenir des particules d’algues d’un diamètre inférieur à 10 mm, préférentiellement inférieur à 5 mm, préférentiellement inférieur à 2 mm. Typiquement, les algues pourront être broyées dans de l’eau déminéralisée, à une température comprise entre 25 et 100°C, préférentiellement entre 40 et 90°C, préférentiellement entre 55 et 75°C, et préférentiellement, à une température d’environ 65°C. Tout ustensile connu de l’homme du métier pourra être utilisé pour broyer les algues, typiquement un broyeur à couteau. Selon un mode de réalisation, le procédé pourra comprendre une étape préalable au broyage, de lavage des algues, typiquement dans de l’eau brute pendant 10 min à température ambiante, suivi d’un essorage. Selon un mode de réalisation, l’étape d’extraction des algues ou de diffusion est réalisée à une température comprise entre 25 et 100°C, préférentiellement entre 40 et 90°C et préférentiellement, à une température d’environ 80°C. Selon un mode de réalisation, la durée de l’étape d’extraction des algues ou de diffusion est comprise entre 15 min et 5 h, préférentiellement entre 1 h et 4 h, préférentiellement entre 1 h et 3 h. Selon un mode de réalisation préféré, la durée de l’étape d’extraction est d’environ 2 h. Selon un mode de réalisation, l’étape d’extraction est réalisée dans un volume d’eau réduit. Selon un mode de réalisation, l’extraction est réalisée sous agitation constante. A titre illustratif, l’extraction est réalisée sous agitation constante à l’aide d’un agitateur à pales, à une vitesse de rotation de 10 tours/min. L’étape d’extraction permet d’obtenir un extrait aqueux et des pulpes d’algue. Selon un mode de réalisation, l’extrait aqueux obtenu suite à l’extraction est filtré. Selon un mode de réalisation, les étapes de filtration pourront être réalisées selon le procédé décrit dans le brevet FR 2 998 894 de la société SEPROSYS. Ainsi, le procédé comprend les étapes : - de filtration des pulpes récupérées après l’étape de diffusion, de façon à obtenir un jus de pressage d’une part et des pulpes de pressage d’autre part, - d’ultrafiltration du jus de pressage de façon à obtenir un rétentat d’une part et un perméat d’autre part. Alternativement, les étapes suivantes de filtration pourront être réalisées après l’étape d’extraction. Typiquement, l’extrait aqueux obtenu après l’étape d’extraction pourra subir une première étape de filtration et être filtré au moyen d’un tamis vibrant présentant un seuil de coupure de 50 µm. Cette étape de filtration de l’extrait aqueux permet d’éliminer les résidus d’algues. Selon un mode de réalisation, les pulpes obtenues après l’étape d’extraction sont pressées. Cette étape permet avantageusement d’obtenir un jus de pressage d’une part et des pulpes de pressage d’autre part, et d’extraire le plus de jus possible. Selon un mode de réalisation, le jus de pressage est adjoint à l’extrait aqueux. Selon un mode de réalisation, le procédé comprend, suite à la première étape de filtration, trois étapes supplémentaires de filtration. Selon un mode de réalisation, le procédé selon l’invention comprend une première étape de microfiltration. A titre illustratif, une unité de microfiltration de type filtre à plaques équipée de deux filtres de 1,2 µm puis 0,8 µm (3M, 40*40, taille de pores 15 HN et 50 HN) pourra être utilisée. L’étape de microfiltration permet d’obtenir, à partir du jus de pressage, un rétentat d’une part et un perméat d’autre part. Le perméat obtenu suite à l’étape de microfiltration pourra être filtré via une unité d’ultrafiltration. Ainsi, selon un mode de réalisation, le procédé selon l’invention comprend une étape d’ultrafiltration. Selon un mode de réalisation, le procédé selon l’invention comprend une étape d’ultrafiltration du perméat obtenu suite à la microfiltration de façon à obtenir un rétentat d’une part et un perméat d’autre part. Selon un mode de réalisation, l’étape d’ultrafiltration est réalisée entre 60 et 100°C, préférentiellement à environ 80°C, à une pression comprise entre 2 et 10 bars, préférentiellement à environ 5 bars et à un débit de circulation compris entre 300 l/h et 600 l/h, préférentiellement à 450 l/h. Selon un mode de réalisation, l’étape d’ultrafiltration est réalisée jusqu’à l’obtention d’un rétentat d’environ 4 Bx. 4 Bx ou Brix correspond à environ 4% de matière sèche mesuré par l’indice de réfraction et exprimé en degré brix échelle saccharose. Le rétentat pourra être soutiré de l’unité et le perméat pourra être récupéré puis osmosé une unité d’osmose inverse. A titre illustratif, l’ultrafiltration pourra être réalisée sur une unité d’ultrafiltration équipée d’une membrane de type Kerasep KBW 15 kDa (Novasep Process). Selon un mode de réalisation, le procédé selon l’invention comprend une étape d’osmose inverse. Selon un mode de réalisation, le procédé selon l’invention comprend une étape d’osmose inverse du perméat d’ultrafiltration. Selon un mode de réalisation, l’étape d’osmose inverse est réalisée entre 20 et 50°C, préférentiellement entre 25 et 40°C et de manière préférée, l’étape d’osmose inverse est réalisée à environ 30°C, à une pression comprise entre 10 et 50 bars, préférentiellement entre 20 et 30 bars et à un débit de circulation compris entre 80 l/h et 150 l/h, préférentiellement à 120 l/h. A titre illustratif, l’étape d’osmose inverse pourra être réalisée sur une unité d’osmose inverse équipée d’une membrane de type SW 30 HR (Dow). Selon un mode de réalisation, l’étape d’osmose inverse est poursuivie jusqu’à l’obtention d’un rétentat d’environ 13 Bx correspondant au perméat d’ultrafiltration osmosé. 13 Bx ou Brix correspond à environ 13% de matière sèche mesuré par l’indice de réfaction et exprimé en degré brix échelle saccharose. Selon un mode de réalisation, le perméat d’ultrafiltration osmosé obtenu subira une étape de séchage, par exemple par lyophilisation. La fraction obtenue de type perméat d’ultrafiltration osmosé sera ci-après dénommée l’extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention ou encore perméat ou encore « fraction P ». Ainsi, selon un mode de réalisation, le procédé d’obtention d’un extrait d’algue du genre Ulva comprend les étapes suivantes : a) Lavage des algues à traiter b) Broyage des algues lavées c) Extraction à l’eau des algues lavées dans un volume d’eau réduit d) Filtration des pulpes récupérées après l’étape c) puis pressage des pulpes de façon à obtenir un jus de pressage d’une part et des pulpes de pressage d’autre part e) Microfiltration du jus de pressage obtenu à l’étape d) de façon à obtenir un rétentat d’une part et un perméat d’autre part f) Ultrafiltration du perméat de microfiltration obtenu à l’étape e) de façon à obtenir un rétentat d’une part et un perméat d’autre part g) Osmose inverse du perméat d’ultrafiltration obtenu à l’étape f) h) Lyophilisation du perméat d’ultrafiltration osmosé obtenu à l’étape g). Selon un mode de réalisation, l’extrait d’algue obtenu par le procédé et ayant des propriétés anti-inflammatoires présente les caractéristiques suivantes : une teneur en protéines d’environ 30%, une teneur moyenne en composés phénoliques totaux d’environ 4% et environ 10% de sucres totaux. Complément alimentaire Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne également un complément alimentaire comprenant un extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention. L’extrait d’algue du genre Ulva est tel que ci-avant défini. On entend par « complément alimentaire » des denrées alimentaires dont le but est de compléter un régime alimentaire normal et qui constituent une source concentrée de nutriments ou d’autres substances ayant un effet nutritionnel ou physiologique. Selon un mode de réalisation, le complément alimentaire comprend, outre l’extrait d’algue selon l’invention, au moins un ingrédient choisi parmi les nutriments tels que les vitamines et les minéraux, les plantes et/ou extraits de plantes, les substances à but nutritionnel ou physiologique, les adjuvants ou additifs alimentaires tels que les colorants, les arômes, les agents conservateurs. Le complément alimentaire pourra comprendre en outre tout l’excipient pharmaceutiquement acceptable tel que préalablement défini. Le complément alimentaire selon l'invention peut se présenter sous n'importe quelle forme compatible avec une absorption orale en une ou plusieurs prises journalières. Il peut se présenter notamment sous forme de gélules, de capsules, de comprimés, de pastilles ou de poudre libre, cette dernière étant conditionnée de préférence en sachets unitaires. Il est particulièrement intéressant d'utiliser le complément alimentaire comprenant un extrait du genre Ulva selon l'invention dans un complément alimentaire, destiné au patient en surpoids ou obèse, mais également à l’animal de compagnie en surpoids ou obèse. Selon un mode de réalisation, le complément alimentaire destiné à l’humain se présente sous la forme de doses unitaires, par exemple sous la forme de gélules, de capsules, de comprimés, de pastilles ou de poudre libre conditionnée en sachets unitaires, chaque dose unitaire comprenant entre 0,05 g et 2 g d’extrait d’algue selon l’invention, préférentiellement entre 0,1 et 1 g, et de manière préférée encore entre 0,2 et 0,8 g. Selon un autre mode de réalisation, le complément alimentaire destiné aux animaux de compagnie se présente sous la forme de doses unitaires, par exemple sous la forme de poudre libre conditionnée en sachets unitaires, chaque dose unitaire comprenant entre 0,01 g et 2 g d’extrait d’algue selon l’invention, préférentiellement entre 0,025 et 1,5 g, et de manière préférée encore entre 0,03 et 1 g. De manière surprenante, l’extrait selon l’invention présente une activité significative à de très faibles concentrations. Sans vouloir être liés par une quelconque théorie, il est de l’avis des inventeurs que des mécanismes d’induction et d’inhibition concentration-dépendantes interviennent ou s’annulent en dessous d’une concentration seuil de l’extrait selon l’invention étant donné que cet extrait est un mélange complexe de molécules différentes qui peuvent logiquement associer des effets de synergie et/ou d’antagonisme. Composition alimentaire pour l’homme L’extrait d’algue selon l’invention pourra être intégré dans toute composition alimentaire destinée à l’alimentation humaine. Aussi, l’extrait d’algue selon l’invention pourra être intégré dans des boissons, des substituts de repas, des biscuits, des céréales, des desserts, des préparations lactées, etc. Il sera particulièrement intéressant d'utiliser la composition alimentaire comprenant un extrait du genre Ulva selon l'invention dans une composition alimentaire, destinée au patient en surpoids ou obèse. Composition alimentaire pour animaux de compagnie La présente invention concerne également une composition alimentaire pour animaux de compagnies comprenant un extrait d’algue du genre Ulva selon l’invention. Ces compositions alimentaires ne sont pas destinées à être limitées à une liste spécifique d'ingrédients car ces ingrédients dépendront de facteurs tels que, par exemple, l'équilibre nutritionnel souhaité pour le type spécifique d'animal de compagnie, et la disponibilité des ingrédients. En plus de l’extrait d’algue selon l’invention, la composition alimentaire pour animaux de compagnie peut généralement inclure des vitamines, des minéraux et d'autres additifs tels que des arômes, des conservateurs, des émulsifiants et des humectants. L'équilibre nutritionnel, y compris les proportions relatives de l’extrait d’algue selon l’invention et des autres ingrédients, est déterminé selon les normes diététiques connues dans l'art vétérinaire. Par exemple, l'équilibre nutritionnel d'une composition alimentaire pour chats est déterminé en fonction des besoins alimentaires connus des chats. Il sera particulièrement intéressant d'utiliser la composition alimentaire comprenant un extrait du genre Ulva selon l'invention dans une composition alimentaire, destinée aux animaux de compagnie en surpoids ou obèses. Exemples Exemple 1 : Production et caractérisation d’un extrait d’algue du genre Ulva A. Production de l’extrait Cette méthode correspond à une adaptation du procédé d’extraction et de fractionnement décrit dans le brevet FR2998894B1 de la société Seprosys, permettant de purifier des fractions protéique et polysaccharidique issues de macroalgues marines vertes. Le procédé comprend la succession des étapes suivantes : a) Lavage des algues à traiter b) Broyage des algues lavées c) Diffusion à l’eau des algues lavées dans un volume d’eau réduit d) Filtration des pulpes récupérées après l’étape c) puis pressage des pulpes de façon à obtenir un jus de pressage d’une part et des pulpes de pressage d’autre part e) Microfiltration du jus de pressage obtenu à l’étape d) de façon à obtenir un rétentat d’une part et un perméat d’autre part f) Ultrafiltration du perméat de microfiltration obtenu à l’étape e) de façon à obtenir un rétentat d’une part et un perméat d’autre part g) Osmose inverse du perméat d’ultrafiltration obtenu à l’étape f) h) Lyophilisation du perméat d’ultrafiltration osmosé obtenu à l’étape g). 1 kg d’algues sèches est trempé dans 30 l d’eau brute pendant 10 min à température ambiante. Les algues sont ensuite essorées et pressées à l’aide d’un cône en tissu afin de retirer le plus d’eau possible. Les algues lavées sont alors broyées dans 5 l d’eau déminéralisée à 65°C, à l’aide d’un broyeur à couteau, jusqu’à l’obtention de particules de moins de 2 mm de diamètre. Les 5 l de broyat sont transférés dans une cuve thermostatée à 80°C contenant 10 l d’eau déminéralisée à température. L’extraction est réalisée sous agitation constante à l’aide d’un agitateur à pales, à une vitesse de rotation de 10 tours/min pendant 2 h. L’extrait aqueux est ensuite filtré au moyen d’un tamis vibrant présentant un seuil de coupure de 50 µm (toile inox, NEGOFILTRE), afin d’éliminer les résidus d’algues. Les pulpes d’algues sont quant à elles soutirées de la cuve puis pressées à l’aide d’un pressoir (60 hl/h), afin d’extraire le plus de jus possible. Le jus issu du pressoir est alors associé à l’extrait aqueux initial filtré et environ 15 l de jus total d’extraction sont récupérés puis filtrés via une unité de microfiltration de type filtre à plaques équipée de deux filtres de 1,2 µm puis 0,8 µm (3M, 40*40, taille de pores 15 HN et 50 HN). Environ 15 l de perméat sont récupérés, puis filtrés à nouveau via une unité d’ultrafiltration équipée d’une membrane de type Kerasep KBW 15 kDa (Novasep Process). La filtration est réalisée à 80°C, 5 bars et à un débit de circulation de 450 l/h, soit une vitesse de circulation de 5 m/s. La filtration est poursuivie jusqu’à obtenir un rétentat d’environ 4 Bx, qui est alors soutiré de l’unité. Le perméat est quant à lui récupéré puis osmosé sur une unité d’osmose inverse équipée d’une membrane de type SW 30 HR (Dow), permettant de concentrer la fraction. L’osmose inverse est réalisée à 30°C, entre 20 et 30 bars et à un débit de circulation de 120 l/h, soit une vitesse de circulation de 1,3 m/s. L’osmose inverse est poursuivie jusqu’à obtenir un rétentat d’environ 13 Bx, qui est alors soutiré de l’unité, puis lyophilisé. Cette fraction obtenue de type perméat d’ultrafiltration osmosé sera ci-après dénommée extrait d’algue du genre Ulva de type perméat ou « fraction P ». B. Caractérisation de l’extrait a) Solubilité Plusieurs solvants différents sont utilisés pour évaluer la solubilité de l’extrait d’algue du genre Ulva de type perméat (fraction P) : eau, acétonitrile (ACN), méthanol, éthanol, acétone, hexane, mélange eau/ACN (1:1, v/v), et mélange méthanol/acétone (1:1, v/v). Différentes quantités massiques d’extrait solide sont mélangées sous vortex avec les différents solvants puis l’absorbance de la solution ou suspension obtenue est mesurée à 600 nm au moyen d’un spectrophotomètre microplaque FLUOstar Omega (BMG LABTECH). Après soustraction du blanc obtenu à partir de chaque solvant pur, la solution est considérée limpide et l’extrait soluble si l’absorbance obtenue est inférieure à 0,02. La fraction P est soluble uniquement dans l’eau et le mélange eau/ACN (1:1, v/v) (Tableau 1), sa solubilité étant maximale dans l’eau (1 g/l), et minimale dans le mélange eau/ACN (1:1, v/v). Solvant Solubilité de la fraction P (mg/ml) Eau 1 Eau/ACN (1:1, v/v) 0,33 Tableau 1 : Solubilité de la fraction P dans l’eau et le mélange eau/acétonitrile (1:1, v/v). b) Caractérisation biochimique Deux solvants, eau et mélange eau/ACN (1:1, v/v), sont utilisés pour préparer deux solutions de fraction P à 20 mg/ml. Celles-ci sont ensuite centrifugées à 15000 rpm durant 2 min puis filtrées sur 0,22 µm afin d’obtenir une solution finale contenant uniquement les composés solubles. En raison de l’influence de la couleur de ces deux solutions sur la mesure d’absorbance, celles-ci sont ensuite diluées au 1/18 au moyen du même solvant, avant analyse. L’ensemble des analyses est réalisé sous forme de triplicatas. Teneurs en protéines La teneur en protéines est évaluée au moyen de trois protocoles biochimiques, issus respectivement des méthodes de Lowry (Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J Biol Chem. 1951 Nov;193(1):265–75), Smith (Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, Mallia AK, Gartner FH, Provenzano MD, et al. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Anal Biochem. 1985 Oct;150(1):76–85) et Kjeldahl (Kirk PL. Kjeldahl Method for Total Nitrogen. Anal Chem. 1950 Feb 15;22(2):354–8). - Méthode de Lowry : Celle-ci implique l’utilisation de deux réactifs : le réactif de Lowry qui consiste en un mélange de 100 µl de solution de tartrate double de potassium et sodium à 2% (m/v), 100 µl de solution de sulfate de cuivre à 1% (m/v) et 10 ml de solution de carbonate de sodium à 2% (m/v) dans NaOH 0,1 M ; et le réactif de Folin, correspondant à une dilution au 1/20 du réactif au phénol de Folin-Ciocalteu dans l’eau ultrapure. Dans une microplaque 96 puits (NUNC 96 A/S, Danemark), 25 µl de solution à doser sont ajoutés à 75 µl de réactif de Lowry avant incubation durant 20 min à température ambiante et dans l’obscurité. Puis 125 µl de réactif de Folin sont ajoutés au mélange réactionnel. Une seconde incubation de 30 min, à température ambiante et à l’obscurité, est appliquée avant mesure de l’absorbance à 750 nm au moyen d’un spectrophotomètre microplaque FLUOstar Omega (BMG LABTECH). Une gamme étalon d’albumine de sérum bovin (ASB) de 50 à 600 µg.ml-1 est réalisée simultanément dans les mêmes conditions. - Méthode de Smith, à l’acide bicinchoninique (BCA) : Dans une microplaque 96 puits (NUNC 96 A/S, Danemark), sont ajoutés 200 µl de réactif BCA (acide bicinchoninique/sulfate de cuivre à 4% (m/v) (50:1, v/v)), et 10 µl de solution à doser. Après incubation à 37°C dans une étuve durant 30 min, l’absorbance à 562 nm est mesurée en utilisant un spectrophotomètre microplaque FLUOstar Omega (BMG LABTECH). Une gamme-étalon d’ASB allant de 50 à 600 mg/l est réalisée simultanément dans les mêmes conditions. - Méthode de Kjeldahl : Cette méthode implique deux étapes successives, une première de minéralisation et une seconde de distillation. Pour la minéralisation, 1 g d’échantillon est ajouté dans un matra, avec 2 comprimés de catalyseur. Un matra contenant uniquement les comprimés est utilisé à blanc et un autre matra contenant une quantité connue d'urée ainsi que les 2 comprimés de catalyseur est utilisé comme témoin. 10 ml d'acide sulfurique 96% sont ajoutés dans le matra. La solution est ensuite chauffée durant 2 h à environ 400°C. Après la minéralisation, la distillation est effectuée durant 6 min après addition de 50 ml de NaOH 30% (m/v) et de 50 ml d'eau ultrapure. Le liquide est ensuite recueilli dans une solution d'acide borique (4% (m/v), pH 4,65) et titré avec de l’HCl 1 M. Teneur en sucres totaux Le dosage des sucres totaux est effectué par la méthode au mélange phénol/acide sulfurique introduite par Dubois (Dubois M, Gilles K, Hamilton JK, Rebers PA, Smith F. A Colorimetric Method for the Determination of Sugars. Nature. 1951 Jul;168(4265):167–167). Dans des vials en verre, 40 µl de la solution à doser sont ajoutés à 40 µl de phénol 5% (m/v) et à 200 µl d’acide sulfurique 96%. Le mélange réactionnel est incubé durant 30 min, à 90°C et dans l’obscurité. Les échantillons sont par la suite refroidis dans la glace. L’absorbance est ensuite mesurée à 485 nm dans une microplaque 96 puits, au moyen d’un spectrophotomètre microplaque FLUOstar Omega (BMG LABTECH). Une gamme-étalon de rhamnose, monomère représentatif, allant de 0,025 à 0,6 mg/ml, est réalisée simultanément dans les mêmes conditions. Teneur en composés phénoliques totaux Le dosage des composés phénoliques totaux est effectué en utilisant la méthode de Singleton et Rossi (Singleton VL, Rossi JA. Colorimetry of total phenolics with phosphomolybdic-phosphotungstic acid reagents. Am J Enol Vitic. 1965 Jan 1;16(3):144), avec quelques modifications. Dans des tubes à centrifuger sont introduits 10 µl d’échantillon à doser et 790 µl d’eau ultrapure. Après mélange, 20 µl de Na2CO3 20% (m/v) puis 50 µl de réactif de Folin-Ciocalteu 2 N sont ajoutés. Les tubes sont incubés à température ambiante, à l’obscurité, durant 2 h. 200 µl de milieu réactionnel sont ensuite transférés dans une microplaque 96 puits et l’absorbance à 730 nm est mesurée en utilisant un spectrophotomètre microplaque FLUOstar Omega (BMG LABTECH). Une gamme-étalon d’acide gallique, composé phénolique de référence, allant de 10 à 150 µg/ml, est réalisée simultanément dans les mêmes conditions. La caractérisation biochimique de la fraction P montre que cette fraction présente une teneur importante en protéines, allant de 28,6% à 31,6% en fonction de la méthode de dosage appliquée et de la nature du solvant utilisé pour sa solubilisation. Ces résultats très proches permettent de moyenner cette teneur en protéines totales à environ 30%. De la même manière, les composés phénoliques totaux sont quantifiés à des valeurs très similaires, quel que soit le solvant utilisé, donnant une teneur moyenne d’environ 4%. Les résultats obtenus en termes de teneur en sucres totaux sont en revanche très différents, la teneur mesurée dans le mélange eau/ACN (1:1, v/v) étant beaucoup plus faible (3,3%) que celle mesurée dans l’eau (10,0%). Ceci est cohérent, compte-tenu de la moindre solubilité des oligo- et/ou poly-saccharides resuspendus dans un mélange composé d’eau et d’ACN, qui est un solvant moins polaire, alors qu’ils ont été initialement extraits dans l’eau pure. En conclusion, l’extrait contient 10% de sucres totaux. Echantillon Teneur (% ms) Protéines Sucres totaux (n=3) Composés phénoliques (n=3) Méthode de Lowry (n=3) Méthode au BCA (n=3) Méthode de Kjehldal (n=5) Fraction P Eau 28,6 ± 7,4% 29,8 ± 8,9% 29,6 ± 6,2% 10,0 ± 8,2% 4,6 ± 5,1% Eau/ACN (1:1, v/v) 29,3 ± 4,2% 31,6 ± 9,4% non déterminée 3,3 ± 3,7% 4,1 ± 3,3% Exemple 2 : Production et caractérisation d’un extrait d’algue du genre Ulva Afin d’évaluer l’effet anti-inflammatoire in vitro de l’extrait d’algue du genre Ulva de type perméat (fraction P), ce dernier a été testé sur une lignée cellulaire de macrophages murins Raw 264,7 fournies par ATCC Cell (« American Type Culture Collection ») : code ATCC-TIB-71. Il s’agit de macrophages immortalisés de souris utilisés comme modèles d’étude biologique de référence dans les maladies métaboliques, pour mesurer une activité anti/pro-inflammatoire (Jones E, Adcock IM, Ahmed BY, Punchard NA. Modulation of LPS stimulated NF-kappaB mediated Nitric Oxide production by PKCε and JAK2 in RAW macrophages. Journal of Inflammation. 2007 Nov 24;4(1):23). Pour l’ensemble de ces évaluations, un test statistique one-way ANOVA a été réalisé à l’aide du logiciel Origin 6 (OriginLab Corporation). A. Effet d’un extrait d’algue du genre Ulva (perméat) sur la viabilité cellulaire de macrophages Raw 264,7 en culture : Les cellules sont cultivées dans un milieu Dulbecco’s ModifiedEagle Medium (DMEM) (PAN Biotech, Dutscher) supplémenté par 10% (v/v) de sérum de veau fœtal (PAN Biotech, Dutscher) et 1% (v/v) d’une solution antibiotique (10,000 U/ml de pénicilline, 10 mg/ml de streptomycine) (PAN Biotech, Dutscher). Ce milieu, ci-après dénommé « milieu complet », est stérilisé par filtration sur 0,22 μm. Les cellules sont cultivées dans un incubateur à température contrôlée de 37°C, avec 5% de CO 2 , sous atmosphère humide, dans des flasques ventilées de 75 cm 2 (BD Biosciences), et entretenues par arrachage mécanique avec scrapeur (Sarstedt). Le milieu de culture est renouvelé tous les 2 ou 3 jours. Toutes les manipulations sont effectuées sous un poste de sécurité microbiologique de classe 2. Pour les expériences, les cellules sont utilisées entre les 11 ème et 16 ème passages. L’effet de l’extrait d’algue du genre Ulva de type perméat (fraction P) sur la viabilité cellulaire est déterminé via la conversion enzymatique du MTT (bromure de 3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium) (Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J Immunol Methods. 1983 Dec 16;65(1–2):55–63). Ce test repose sur la réduction du sel de tétrazolium par la succinate déshydrogènase mitochondriale en cristaux de Formazan. Les cellules sont ensemencées dans des microplaques 96 puits stériles (BD Biosciences), à une concentration de 5x10 4 cellules/ml dans un volume de 100 µl de milieu complet. Après 24 h d’incubation, le milieu complet est remplacé par 100 µl de milieu complet contenant la fraction P à différentes concentrations (comprises entre 0,01 et 500 µg/ml), ou de la dexaméthasone à 1 µM (composé médicamenteux anti-inflammatoire, utilisé comme témoin positif. Un témoin négatif contenant uniquement du milieu complet est également utilisé. Après 24 h d’exposition, 25 µl d’une solution de MTT à 5 mg/ml dans le PBS sont ajoutés dans chaque puits, lesquels sont alors incubés pendant 4 h dans l’étuve de culture. Le milieu est ensuite retiré puis 200 µl de DMSO (diméthyl-sulfoxide) sont ajoutés dans chaque puits afin de solubiliser les cristaux de Formazan formés. Après 10 min d’incubation à température ambiante, l’absorbance à 550 nm est mesurée à l’aide d’un lecteur de microplaque Fluostar Omega (BMG LABTECH). La viabilité cellulaire est déterminée selon la formule suivante : La figure 1A montre l’impact de la fraction P sur la viabilité des macrophages Raw 264,7, comparée aux conditions contrôles, après 24h d’exposition. La figure 1B montre la même expérience en présence de lipopolysaccharide (LPS) de salmonelle à 1 µg/ml (LPS O111, référence L2630, Merck), après 6 h de pré-incubation avec la fraction P à différentes concentrations. Dans les deux cas, l’effet d’un anti-inflammatoire de référence utilisé en tant que témoin positif, la dexaméthasone (1 µM), est également comparé. Les résultats obtenus démontrent que ni la fraction P, quelle que soit sa concentration, ni la dexaméthasone à 1 µM ne présentent d’effet significatif sur la viabilité cellulaire des macrophages Raw 264,7, qu’ils soient cultivés en présence de LPS ou non. B. Effet d’un extrait d’algue du genre Ulva (perméat) sur la sécrétion d’oxyde nitrique (NO) par des macrophages Raw 264,7 en culture, en conditions basales ou pro-inflammatoires L’oxyde nitrique (NO) est un médiateur central du processus inflammatoire, qui régule l'activite, la croissance et la mort de nombreux types de cellules immunitaires et inflammatoires (Grisham MB, Jourd’Heuil D, Wink DA. Nitric oxide. I. Physiological chemistry of nitric oxide and its metabolites:implications in inflammation. Am J Physiol. 1999 Feb;276(2):G315-321, Lee M, Rey K, Besler K, Wang C, Choy J. Immunobiology of Nitric Oxide and Regulation of Inducible Nitric Oxide Synthase. Results Probl Cell Differ. 2017;62:181–207). Le dosage du NO peut être réalisé à partir des surnageants de culture des macrophages RAW 264.7 selon le protocole décrit par Li et Shah (Li S, Shah NP. Characterization, Anti-Inflammatory and Antiproliferative Activities of Natural and Sulfonated Exo-Polysaccharides from Streptococcus thermophilus ASCC 1275. Journal of Food Science. 2016;81(5):M1167–76), qui implique la réaction du réactif de Griess avec le NO, donnant lieu à la formation d’un chromophore stable absorbant à 540 nm. Les cellules et les conditions de culture sont les mêmes que celles décrites dans l’exemple 2, partie A. Les cellules sont ensemencées dans des microplaques 96 puits stériles (BD Biosciences), à raison de 1,5.10 6 cellules/ml, dans du milieu DMEM complet. Après 24 h d’incubation, le milieu initial est remplacé par 100 µl de milieu complet contenant la fraction P à différentes concentrations (comprises entre 0,01 et 100 µg/ml), ou de la dexaméthasone à 1 µM (composé anti-inflammatoire de référence utilisé comme témoin positif), avant à nouveau 6 h d’incubation. Un témoin négatif contenant uniquement du milieu complet est également réalisé. Pour évaluer les effets anti-inflammatoires de l’extrait d’algue du genre Ulva de type perméat (fraction P), la même expérience est menée en parallèle, cette fois avec 6 h de prétraitement en présence de perméat à diverses concentrations, ou de dexaméthasone à 1 µM, suivi d’une incubation en présence de lipopolysaccharide (LPS) de salmonelle à 1 µg/ml (LPS O111, référence L2630, Merck) durant 18 h. Le kit « Griess Reagent Kit for Nitrite Determination » (G-7921, Invitrogen™, Thermo Fischer Scientific), est utilisé afin de doser la concentration en NO dans les surnageants de culture cellulaire, selon le protocole donné par le fournisseur. 150 µl de surnageant cellulaire sont prélevés pour être dosés à l’aide d’un volume équivalent de réactif de Griess. Après incubation à température ambiante pendant 30 min, l’absorbance est mesurée à 540 nm à l’aide d’un lecteur de microplaque Fluostar Omega (BMG LABTECH). La montre l’effet de la fraction P sur la sécrétion de NO dans le milieu de culture en conditions basales (A) ou inflammatoires (B). Une augmentation de la sécrétion de NO par rapport aux conditions contrôles est observée en présence de LPS (contrôle positif), ainsi que pour les deux concentrations les plus importantes en fraction P (10 et 100 µg/ml) (figure 2A). Au contraire, la fraction P induit une diminution très significative de la production de NO en présence de LPS (figure 2B), la concentration de NO dans le surnageant de culture étant divisée par deux à la concentration de 1 µg/ml et par environ 1,5 aux concentrations de 0,01 et 0,1 g/ml, par rapport aux conditions contrôles inflammatoires impliquant le LPS seul. Ces résultats indiquent que la fraction P est très fortement anti-inflammatoire car elle induit une réduction de la sécrétion de NO proche de celle induite par la dexaméthasone, à très faible concentration. C. Effet d’un extrait d’algue du genre Ulva (perméat) sur l’expression de protéines clés impliquées dans les voies de signalisation liées à l’inflammation provoquée par le LPS, par des macrophages Raw 264,7 en culture L’évaluation de la modulation par l’extrait d’algue du genre Ulva de type perméat (fraction P) de voies de signalisation protéiques impliquées dans l’inflammation, vient compléter et préciser celle de la sécrétion d’oxyde nitrique par les macrophages Raw 264,7 en culture. Celle-ci est réalisée par analyse Western Blot de biomarqueurs protéiques impliqués dans le processus inflammatoire : NLRP-3 et iNOS. NLRP-3, aussi dénommé inflammasome, appartient à une classe de complexes protéiques cytoplasmiques (NLRP) qui modulent l’activation des médiateurs inflammatoires. NLRP-3 joue un rôle pivot parmi la classe des NLRP, et est activé après stimulation par des facteurs microbiens et non microbiens tels que des toxines bactériennes, des micro-particules ou des LPS. Il promeut l’expression, la maturation et la sécrétion d’une multitude de cytokines pro-inflammatoires (Wang Z, Zhang S, Xiao Y, Zhang W, Wu S, Qin T, et al. NLRP3 Inflammasome and Inflammatory Diseases. Oxid Med Cell Longev. 2020 Feb 17;2020:4063562). L’oxyde nitrique synthase inductible (iNOS) catalyse la synthèse de l’oxyde nitrique (NO), qui est un médiateur cle de l’inflammation. Le LPS, l’interféron gamma (IFN-γ), le TNF-α et l'IL-1β peuvent induire l'expression de l’iNOS. (Lee M, Rey K, Besler K, Wang C, Choy J. Immunobiology of Nitric Oxide and Regulation of Inducible Nitric Oxide Synthase. Results Probl Cell Differ. 2017;62:181–207). La méthode Western Blot est un procédé d’analyse semi-quantitative d’expression des protéines présentes dans les cellules. Les cellules et les conditions de culture sont les mêmes que celles décrites dans l’exemple 2, partie A. Les cellules Raw 264,7 sont ensemencées dans des microplaques 6 puits stériles (BD Biosciences), à 1x10 6 cellules/ml, dans 1 ml de milieu DMEM complet. Après 24 h d’incubation, le milieu initial est remplacé par 1 ml de milieu complet contenant la fraction P à différentes concentrations ou de la dexaméthasone à 1 µM (composé anti-inflammatoire de référence utilisé comme témoin positif), avant à nouveau 6 h d’incubation. Un témoin négatif contenant uniquement du milieu complet est également réalisé. Le LPS à 1 µg/ml est alors ajouté dans tous les puits, excepté celui correspondant aux conditions contrôles, puis l’incubation est poursuivie pendant 18 h. Le surnageant cellulaire est éliminé puis un lysat cellulaire est préparé dans le tampon de lyse (RIPA, Thermo Fisher Scientific) supplémenté avec un inhibiteur de phosphatase (Cell Signaling). Le lysat cellulaire est centrifugé durant 5 min à 10000 g, à 4°C. La concentration protéique dans le surnageant est ensuite obtenue par application de la méthode de Smith, à l’acide bicinchoninique (BCA), selon le protocole donné dans l’exemple 1. Une quantité équivalente de protéines pour chaque échantillon (25 µg) est mélangée avec du tampon de charge (Bio-Rad) et du β-mercaptoethanol (Merck) de manière à atteindre un volume final de 50 µl. Les échantillons sont alors chauffés à 95 °C pendant 5 min puis 10 µl sont déposés, après retour après température ambiante, dans des gels à différentes concentrations de polyacrylamide en fonction du poids moléculaire de la protéine étudiée. Des marqueurs de taille sont également ajoutés dans le gel (Seeblue® plus 2, Thermo Fisher Scientific). La migration est effectuée à 150 V pendant 45 min dans un tampon de migration. Les protéines sont ensuite transférées du gel à une membrane de nitrocellulose (Bio-Rad), à 100 V pendant 7 min dans un tampon de transfert grâce au procédé de transfert semi-liquide (Bio-Rad). La membrane est ensuite bloquée pendant 1h30 à température ambiante, à l’aide d’une solution de blocage contenant 5% d’albumine de sérum bovin (ASB) dans du TBS-Tween 20 (Merck). La membrane est incubée en présence de l’anticorps primaire, durant une nuit à 4°C, puis en présence de l’anticorps secondaire couplé à la peroxydase de raifort, durant 1h30 à température ambiante (15). Dénomination de l’anticorps Dilution Fournisseur NLRP3 (D4D8T) Rabbit mAb 1/500 Cell Signaling iNOS Rabbit Polyclonal antibody 1/1000 Proteintech β-Actin (13E5) Rabbit mAb 1/1000 Cell Signaling HRP secondary IgG antibody 1/10000 Thermo Fisher Scientific Tableau 3 : Anticorps primaires et secondaire utilisés pour l’analyse Western Blot des voies de signalisation impliquées dans l’inflammation induite par le LPS. La solution de révélation (SuperSignal™ West Femto Maximum Sensitivity Substrate, Thermo Fischer Scientific) est appliquée à la membrane pendant 1 min, puis l’acquisition est réalisée par un système Chemidoc (Bio-Rad). L’analyse des densités des bandes est réalisée par le logiciel ImageLab (Bio-Rad) et les résultats sont exprimés par rapport à la quantité de la protéine β-actine présente dans les échantillons, choisie comme protéine de ménage. Cette analyse par western blot prouve que la fraction P induit une réduction drastique de l’expression des protéines NLRP3 et iNOS, impliquées dans le processus inflammatoire dans les macrophages Raw 264,7 en culture ( ). Cet effet est obtenu de manière dose-dépendante pour NLRP-3, la fraction P inhibant son expression dès la concentration de 1 µg/ml. A l’inverse, l’expression de iNOS n’est réduite qu’à faible concentration (0,1 et 1 µg/ml), la fraction P n’ayant pas d’activité significative à 10 µg/ml. Cet effet dose-réponse inversé peut trouver son origine dans deux causes principales. Soit l’intervention de mécanismes d’induction et d’inhibition concentration-dépendants, qui interviennent ou s’annulent en dessous d’une concentration seuil, la fraction P étant en effet un mélange très complexe de molécules différentes qui peuvent logiquement associer des effets de synergie ou/et d’antagonisme. Soit l'éventuelle implication d’un phénomène d’hormésis, terme de toxicologie désignant une réponse biologique en deux phases à un composé, caractérisée par une stimulation à faible dose associée à un effet bénéfique, et par une inhibition à forte dose associée à un effet toxique. La seconde hypothèse est très peu probable, compte-tenu que la fraction P n'est pas cytotoxique aux concentrations étudiées, comme l’a prouvé le test de viabilité cellulaire MTT communément utilisé, présenté dans l’exemple 2 (partie A), et ce en présence ou non de LPS. Dans leur ensemble, ces résultats corroborent totalement l’effet anti-inflammatoire démontré par la fraction P vis-à-vis de la production de NO par les macrophages Raw 264,7 en culture, présenté dans l’exemple 1 (partie B). D. Effet d’un extrait d’algue du genre Ulva (perméat) sur la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires par des macrophages Raw 264,7 en culture, en présence de LPS : L’évaluation de la modulation par la fraction P de la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires dans le milieu extracellulaire vient également compléter et préciser celle de la sécrétion d’oxyde nitrique par les macrophages Raw 264,7 en culture, ainsi que des voies de signalisation protéiques impliquées dans l’inflammation. Celle-ci est réalisée par méthode ELISA, pour l’analyse quantitative de deux cytokines pro-inflammatoires sécrétées par les cellules et présentes dans le milieu extracellulaire : le TNF-α et l’IL-6. Les cellules et les conditions de culture sont les mêmes que celles décrites dans l’exemple 2, partie A. Les cellules Raw 264,7 sont ensemencées dans des microplaques 6 puits stériles (BD Biosciences), à 1x10 6 cellules/ml, dans 1 ml de milieu DMEM complet. Après 24 h d’incubation, le milieu initial est remplacé par 1 ml de milieu complet contenant la fraction P à différentes concentrations (comprises entre 0,01 et 100 µg/ml), ou de la dexaméthasone à 1 µM (composé anti-inflammatoire de référence utilisé comme témoin positif) avant à nouveau 6 h d’incubation. Un témoin négatif contenant uniquement du milieu complet est également réalisé. Le LPS à 1 µg/ml est alors ajouté dans tous les puits, excepté celui correspondant aux conditions contrôles, puis l’incubation est poursuivie pendant 18 h. Le surnageant de culture est ensuite retiré et congelé à -80°C. Les concentrations de TNF-α et IL-6 dans ce surnageant sont alors déterminées selon la méthode indiquée par le fournisseur du kit (Peprotech), impliquant deux mesures finales d’absorbance, l’une d’évaluation, à 405 nm, et l’autre de correction, à 650 nm, effectuées à l’aide d’un lecteur de microplaque Fluostar Omega (BMG LABTECH). La sécrétion des deux cytokines pro-inflammatoires est considérablement augmentée en présence du LPS, comparé aux conditions contrôles ( ). La fraction P présente également cet effet pro-inflammatoire à forte concentration : à partir de 1 µg/ml pour la sécrétion du TNF-α et 10 µg/ml pour la sécrétion de l’IL-6. En-dessous de ces concentrations seuils, aucune différence significative n’est observée par rapport aux conditions contrôles. Après 6 h de pré-incubation avec la fraction P et en présence de LPS, la sécrétion du TNF-α et de l’IL-6 est drastiquement réduite, atteignant un niveau similaire à celui obtenu en présence de la dexaméthasone, composé anti-inflammatoire de référence, et ce y compris à la très faible concentration de 0,1 µg/ml. Dans leur ensemble, ces résultats démontrent l’effet anti-inflammatoire de la fraction P vis-à-vis de la production de NO, de l’expression des protéines clés impliquées dans les cascades de signalisation liées au processus inflammatoire (NLRP-3 et iNOS), et de la production de cytokines pro-inflammatoires. Exemple 3 : Démonstration d’efficacité in vivo d’un extrait d’algue du genre Ulva (perméat) sur un modèle d’altérations comportementales induites par un régime hypercalorique Des souris adultes mâles C57Bl/6J, fournies par la société Janvier et hébergées au sein de l’animalerie du laboratoire NutriNeuro, ont été nourries soit avec un régime nutritionnellement équilibré (régime A04), soit avec un régime hypercalorique enrichi en gras et en sucre (régime HFD) pendant 12 semaines afin d’induire une prise de poids associée à un syndrome métabolique et à des altérations comportementales selon un protocole classiquement décrit dans la littérature et utilisé au sein du laboratoire NutriNeuro (Zemdegs J, Quesseveur G, Jarriault D, Pénicaud L, Fioramonti X, Guiard BP. High-fat diet-induced metabolic disorders impairs 5-HT function and anxiety-like behavior in mice. Br J Pharmacol. 2016 Jul;173(13):2095–110, Zemdegs J, Martin H, Pintana H, Bullich S, Manta S, Marqués MA, et al. Metformin Promotes Anxiolytic and Antidepressant-Like Responses in Insulin-Resistant Mice by Decreasing Circulating Branched-Chain Amino Acids. J Neurosci. 2019 Jul 24;39(30):5935–48). Afin d’évaluer l’effet de l’extrait d’algue du genre Ulva de type perméat (fraction P) sur les altérations métaboliques et comportementales, une supplémentation en fraction P à 1 mg/ml est apportée aux animaux via l’eau de boisson pendant 4 semaines à la suite des 12 semaines de régime HFD. A l’issue de cette supplémentation, les paramètres métaboliques (poids, masse grasse et masse maigre) et comportementaux (comportement de type anxieux, capacité mnésique) sont évalués. Pour l’ensemble de ces évaluations, un test statistique one-way ANOVA associé à un test Tuckey post-hoc a été réalisé à l’aide du logiciel GraphPad Prism 7 (GraphPadSotfware). A . Impact d’une supplémentation en extrait d’algue du genre Ulva (perméat) sur les paramètres métaboliques A l’issue de la supplémentation, les animaux sont pesés afin d’évaluer l’impact de la supplémentation sur la prise de poids. Comme attendu, les souris nourries avec un régime HFD présentent un poids significativement plus important que les souris nourries avec le régime contrôle (AO4) (F (2, 22) = 12,34, p ). De plus, la supplémentation en fraction P induit une perte de poids statistiquement significative chez les souris HFD supplémentées par rapport aux souris ne recevant pas la supplémentation (p Une analyse via un dispositif d’IRM 3T à séquences en écho de spin a permis de quantifier la masse maigre et la masse grasse des souris. Comme attendu, les souris nourries avec un régime HFD présentent une quantité de masse maigre significativement plus faible que les souris contrôles (F (2, 22) = 35,11, p La supplémentation en fraction P protège ainsi contre la prise de masse grasse induite par le régime HFD. B. Impact d’une supplémentation en extrait d’algue du genre Ulva (perméat) sur les paramètres comportementaux a) Evaluation des troubles de type anxieux Le comportement de type anxieux des animaux a été évalué dans le test du labyrinthe en croix surélevé. Deux bras opposés sont sans parois (ouverts) et les deux autres ont des parois de 10 cm de haut (fermés). Au centre se situe une plateforme ouverte sur les quatre bras. Les souris sont placées sur la plateforme centrale au début du test et sont libres d’explorer le labyrinthe pendant 5 min. Le temps passé dans les différentes zones a été mesuré par le système de vidéo-tracking SMART (Bioseb). Ce dispositif permet de déterminer l’état d’anxiété des animaux qui vont spontanément éviter les bras ouverts naturellement anxiogènes et préférer les bras fermés. Il a été montré au moyen de ce dispositif que des traitements pharmacologiques par des anxiolytiques étaient efficaces pour contrecarrer l’aversion naturelle procurée par les bras ouverts. Comme attendu, les animaux nourris avec un régime HFD et non supplémentés présentent une diminution significative du temps passé dans les bras ouverts du labyrinthe en croix surélevé (F (2, 20) = 7,376, p ). La supplémentation en fraction P restaure le temps d’exploration des animaux dans les bras ouverts (F (2, 20) = 7,376, p Evaluation des altérations mnésiques Afin d’évaluer les effets chroniques du traitement sur la mémoire, les souris sont testées dans le labyrinthe aquatique de Morris. Le test du labyrinthe aquatique mis au point par Morris (Morris R. Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat. J Neurosci Methods. 1984 May;11(1):47–60.), permet de mesurer les capacités d’apprentissage et de mémoire spatiale chez l’animal. Dans ce protocole expérimental, cette épreuve met plus particulièrement en jeu la mémoire spatiale de référence dépendante de l’hippocampe. L’animal est placé dans une piscine et doit apprendre à localiser une plateforme refuge en utilisant les indices visuels répartis sur les murs de la salle. Pour effectuer ce test, nous disposons d’une piscine circulaire (150 cm de diamètre), remplie d’eau (35 cm de profondeur, température : 22±2°C), rendue opaque par l’ajout de peinture blanche. La plateforme (10 cm de diamètre) est immergée à 5 cm sous la surface de l’eau et se trouve à 30 cm du bord de la piscine. Le protocole choisi se déroule en 4 étapes ( ) : 1-l’habituation : permet aux souris de se familiariser à la nage et au fait de monter sur une plateforme. Cette étape se déroule dans une bassine circulaire (65 cm de diamètre) remplie d’eau claire. 2-l’apprentissage indicé : permet d’évaluer la présence de déficits moteurs ou visuels et accentue la familiarisation. Les animaux doivent trouver la plateforme immergée indiquée par un indice. 3-l’apprentissage spatial de référence : les animaux doivent trouver une plateforme immergée et non visible en utilisant les indices visuels distaux. 4-le test de restitution : permet d’évaluer la mémoire spatiale. Les souris sont placées dans la piscine en absence de plateforme et doivent chercher pendant 1 min l’endroit où la plateforme était initialement positionnée. Les déplacements de la souris sont enregistrés par un système de vidéo-tracking (SMART), qui permet pour chaque essai d’obtenir la latence pour atteindre la plateforme ainsi que la distance totale parcourue dans la piscine. La vitesse de nage des souris est déduite de ces valeurs. Le temps passé dans les différents quadrants ainsi que la distance parcourue et le nombre d’entrées dans le quadrant cible sont calculés. Dans notre protocole, les animaux contrôles nourris avec un régime équilibré ne présentent pas d’altération cognitive et discriminent de façon significative le quadrant cible par rapport à une exploration au hasard (p ). De façon intéressante, la supplémentation en fraction P permet de restaurer les capacités cognitives des animaux puisqu’ils différencient de façon statistiquement significative le quadrant cible par rapport au hasard (p Extrait d’algue du genre Ulva caractérisé en ce que : - la teneur en protéines est comprise entre 5 et 60% en masse, préférentiellement entre 15 et 50% en masse, préférentiellement entre 25 et 35% en masse, par rapport à la masse sèche totale de l’extrait, - la teneur en composés phénoliques totaux est comprise entre 0,5 et 40% en masse, préférentiellement entre 1 et 20% en masse, préférentiellement entre 1 et 10% en masse, par rapport à la masse sèche totale de l’extrait, - la teneur en sucres totaux est comprise entre 0,5 et 80% en masse, préférentiellement entre 1 et 50% en masse, préférentiellement entre 5 et 15% en masse, par rapport à la masse sèche totale de l’extrait. Extrait d’algue selon la revendication 1, caractérisé en ce que la teneur en protéines est comprise entre 28 et 32% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait. Extrait d’algue selon la revendication 1, caractérisé en ce que la teneur en composés phénoliques totaux est comprise entre 2 et 6% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait. Extrait d’algue selon la revendication 1, caractérisé en ce que la teneur en sucres totaux est comprise entre 5 et 15% en masse par rapport à la masse sèche totale de l’extrait. Extrait d’algue du genre Ulva selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l’algue du genre Ulva est choisie parmi Ulva lactuca , Ulva conglobata , Ulva ohnoi , Ulva reticulata , Ulva prolifera , Ulva flexuosa et Ulva intestinalis . Extrait d’algue du genre Ulva selon l’une quelconque des revendications 1 à 5 pour son utilisation pour le traitement de l’inflammation. Extrait d’algue du genre Ulva pour son utilisation selon la revendication 6 caractérisé en ce que l’inflammation est induite par un syndrome métabolique. Extrait d’algue du genre Ulva pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 à 5 pour son utilisation pour le traitement de troubles cognitifs et/ou émotionnels induits par un syndrome métabolique. Extrait d’algue du genre Ulva pour son utilisation selon la revendication 8 caractérisé en ce que les troubles cognitifs et émotionnels sont choisis parmi les troubles de mémoire à long terme hippocampo-dependants et les troubles de type anxieux. Complément alimentaire ou composition alimentaire pour l’homme ou pour les animaux de compagnie comprenant un extrait d’algue du genre Ulva selon l’une quelconque des revendications 1 à 5.