Brevet FR3146279A1 — publié le 20240906

PROCÉDÉ DE PRÉPARATION D’UNE COMPOSITION ISSUE D’HOLOTHURIES VIVANTES L’invention concerne un procédé de préparation d’une composition issue d’holothuries, ledit procédé étant caractérisé en ce que : (E1) on choisit au moins deux holothuries vivantes ; dans une étape (E2) de mise en contact avec de l’eau douce, on dispose lesdites holothuries dans un récipient contenant de l’eau présentant au maximum 15 grammes de sels dissous par litre pendant une durée prédéterminée comprise entre 20 minutes et 4 heures, chaque holothurie étant vivante à l’issue de cette étape de mise en contact avec de l’eau douce ; à l’issue de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce, on retire (E3) lesdites holothuries dudit récipient et on récupère (E4), à titre de composition issue d’holothuries vivantes, ladite eau contenue dans ledit récipient ; on filtre (E5) ladite composition ainsi récupérée ; on récupère (E6) le filtrat. Figure pour l’abrégé : figure 1 PROCÉDÉ DE PRÉPARATION D’UNE COMPOSITION ISSUE D’HOLOTHURIES VIVANTES Domaine technique de l’invention L’invention concerne un procédé de préparation d’une composition issue d’holothuries. L’invention est particulièrement destinée à un usage dans le domaine cosmétique, pharmaceutique ou nutraceutique. En particulier l’invention concerne un tel procédé permettant la préparation d’une composition issue d’holothuries susceptible d’être utilisée à titre d’actif cosmétique et/ou pharmaceutique et/ou nutraceutique. Arrière-plan technologique Les holothuries, ou concombres de mer, sont des invertébrés marins présents dans de nombreuses zones marines en général à proximité du fonds des mers et des océans. Les holothuries jouent un rôle de premier plan dans la protection des récifs coralliens notamment contre les effets dévastateurs du changement climatique. Les holothuries préservent en partie la croissance corallienne des effets délétères de l’acidification de l’océan. Les excréments des holothuries, résultant de la digestion naturelle du sable qu’elles ingèrent, font grimper le pH des eaux récifales, contrecarrant ainsi l’impact de l’acidification de l’océan. Lorsque l’holothurie digère du sable, elle libère du carbonate de calcium (CaCO 3 ), composant clé dans la constitution des coraux. Pour survivre, les récifs coralliens doivent accumuler suffisamment de carbonate de calcium pour compenser ou neutraliser les pertes occasionnées par l’érosion. Des recherches montrent que, dans un système récifal en bonne santé, la dissolution des sédiments riches en carbonate de calcium par les holothuries et d’autres organismes responsables de la bioérosion semble contribuer de façon essentielle au renouvellement naturel des substrats carbonatés. De plus, l’ammoniac que rejettent les holothuries enrichit les eaux environnantes et stimule la croissance corallienne par cet apport en nutriments. Cependant, les holothuries sont largement prélevées et exploitées dans le monde entier, et plus particulièrement en Asie. Elle sont notamment consommées en tant que mets culinaire et considérées comme un remède traditionnel tonique. Le document WO2005120185 décrit par exemple la récupération de glycosides triterpéniques à partir de tissus lyophilisés, séchés par pulvérisation de l'eau de cuisson ou encore réduits en poudre sèche, de concombres de mer Cucumaria frondosa ayant subi un traitement industriel par extraction à l’aide d'éthylacétate et d’eau, suivi d'une chromatographie afin de séparer les glycosides de triterpène. Un tel procédé est complexe et implique de cuire et/ou de réduire en poudre les holothuries en tant que telles. Les inventeurs ont cherché à proposer un procédé de préparation d’une composition issue d’holothuries présentant un intérêt pour des applications dans le domaine cosmétique, pharmaceutique ou nutraceutique tout en évitant de menacer les holothuries et leur écosystème naturel. Objectifs de l’invention L’invention vise à fournir un procédé de préparation d’une composition issue d’holothuries qui pallie au moins certains des inconvénients des solutions connues. L’invention vise aussi à fournir, dans au moins un mode de réalisation, un procédé de préparation d’une composition issue d’holothuries qui soit non seulement durable et respectueux de l’environnement mais évite également toute souffrance aux holothuries. L’invention vise aussi à fournir, dans au moins un mode de réalisation, un procédé de préparation d’une composition issue d’holothuries vivantes, qui peut être mis en œuvre pour des applications dans le domaine cosmétique, dans le domaine pharmaceutique et dans le domaine nutraceutique. L’invention vise aussi à fournir, dans au moins un mode de réalisation, une composition susceptible d’être utilisée à titre d’actif cosmétique et/ou pharmaceutique et/ou nutraceutique. Pour ce faire, l’invention concerne un procédé de préparation d’une composition issue d’holothuries vivantes, ledit procédé étant caractérisé en ce que : - on choisit au moins deux holothuries vivantes ; - dans une étape, dite étape de mise en contact en eau douce, on dispose lesdites holothuries dans un récipient contenant de l’eau présentant au maximum 15 grammes de sels dissous par litre, pendant une durée prédéterminée comprise entre 20 minutes et 4 heures, chaque holothurie étant vivante à l’issue de cette étape de mise en contact avec de l’eau douce ; - à l’issue de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce, on retire lesdites holothuries dudit récipient et on récupère, à titre de composition issue d’holothuries vivantes, ladite eau contenue dans ledit récipient. Les holothuries sont dépourvues de moyens de défense visibles à l’œil nu. Pour se défendre face aux prédateurs dans leur milieu naturel, elles synthétisent des molécules de défense qu’elles relarguent dans l’eau. De façon surprenante, les inventeurs ont constaté qu’il est possible de déterminer les conditions permettant de récupérer des composés d’intérêt relargués spontanément par les holothuries sans altérer (irréversiblement) leur état de santé. L’eau récupérée à l’issue de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce après avoir retiré les holothuries contient donc les molécules relarguées par les holothuries vivantes. En effet, en particulier, les inventeurs ont constaté qu’il était nécessaire de ne pas dépasser une durée de 4 heures consécutives au contact d’une eau présentant moins de 15 grammes de sels dissous par litre. Ainsi, chaque holothurie est encore vivante à l’issue de l’étape de mise en contact avec de l’eau douce, et en particulier ne présente pas de signe de détérioration de son état de santé tel qu’une éviscération ou un blanchissement du tégument ou encore la présence d’ulcères sur le tégument des holothuries. Un procédé selon l’invention permet donc de préparer une composition issue d’holothuries vivantes sans nécessiter le sacrifice de celles-ci et donc « sans cruauté ». L’état de santé des holothuries soumises à un procédé selon l’invention, et en particulier à une étape de mise en contact selon l’invention, n’est donc pas durablement affecté. Ceci permet même de réutiliser ultérieurement les mêmes individus d’holothuries une nouvelle fois pour répéter le procédé et donc de répéter l’étape de mise en contact avec de l’eau douce. Les étapes d’un procédé selon l’invention peuvent donc être répétées une ou plusieurs fois en réutilisant les mêmes holothuries (individus identiques). Il est bien sûr également possible de répéter l’ensemble des étapes du procédé avec des holothuries différentes (en totalité ou en partie). Le réflexe de relargage des composés d’intérêt par les holothuries est causé par la mise en contact avec une eau dite douce, et par le fait de baigner, au moins par leur partie ventrale (en particulier de la bouche à l’anus), dans une telle eau douce qui se distingue de l’eau de mer (« salée ») correspondant à leur milieu naturel habituel. Utiliser une eau comprenant moins de 15 grammes de sels dissous par litre suffit à permettre un tel relargage des composés souhaités, l’eau de mer dans laquelle les holothuries peuvent vivre pouvant par exemple comprendre de l’ordre de 28 à 36 g/L de sels dissous. Lorsqu’on parle de moins de 15 grammes de sels dissous par litre, il s’agit de tous sels confondus (y compris le chlorure de sodium NaCl). On peut également utiliser une eau présentant un titre en sels inférieur, par exemple moins de 8 grammes de sels dissous par litre ou encore moins de 4 grammes de sels dissous par litre. Avantageusement et selon l’invention, au cours de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce, on utilise une eau contenant au maximum 1 gramme de sels dissous par litre. Un tel titre peut correspondre à de l’eau pure ou de l’eau dite osmosée. Avantageusement et selon l’invention, au cours de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce, on utilise une eau osmosée. L’utilisation d’une telle eau présentant très peu de sels dissous permet de contrôler la qualité et la nature de la composition issue d’holothuries vivantes obtenue, en assurant une meilleure reproductibilité du procédé selon l’invention. Ainsi, avantageusement et selon l’invention, au cours de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce, on utilise une eau, dite eau osmosée, obtenue par une étape d’osmose inverse et contenant au maximum 1 gramme de sels dissous par litre. Plusieurs holothuries peuvent être placées ensemble dans le même récipient utilisé pour ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce. Le volume d’eau utilisé doit être suffisant pour que chaque holothurie puisse être au contact de celle-ci, au moins au début de l’étape de mise en contact, c’est-à-dire que chaque holothurie baigne au moins en partie dans ladite eau sans nécessairement être entièrement immergée dans celle-ci. Avantageusement et selon l’invention, au cours de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce, chaque holothurie est entièrement immergée dans l’eau douce. Avantageusement et selon l’invention, au cours de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce, on dispose dans chaque récipient un volume d’eau au moins égal à 1 litre d’eau pour 30 holothuries à disposer dans ledit récipient. Ceci permet d’éviter tout inconfort ou gêne entre elles desdites holothuries présentes dans un même récipient. Plus particulièrement, au cours de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce, on dispose dans chaque récipient un volume d’eau au moins égal à 1 litre d’eau pour 5 à 25 holothuries à disposer dans ledit récipient. Rien n’empêche également de prévoir un récipient présentant plusieurs compartiments ou cloisons susceptibles de séparer les holothuries les unes des autres, individuellement ou non. Avantageusement et selon l’invention, au cours de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce, on dispose dans chaque récipient un nombre d’holothuries tel que la masse d’holothurie disposée dans 1 litre d’eau soit comprise entre 50 grammes et 10 000 grammes (10 kg), notamment entre 300 grammes et 3 000 grammes (3 kg), et en particulier entre 1 000 grammes (1 kg) et 2 000 grammes (2kg). Les récipients utilisés peuvent présenter toute forme adaptée à leur utilisation et permettant l’introduction et l’enlèvement (le retrait) des holothuries au début et à la fin de ladite étape de mise en contact. Chaque récipient présente au moins un fond et des parois latérales périphériques. Chaque récipient peut être au moins partiellement ouvert en partie supérieure (« à l’air libre ») ou bien encore totalement fermé (par exemple à l’aide d’un couvercle ou à la façon d’une boîte, hermétiquement ou non). La température de l’eau utilisée peut varier et être constante ou non tout au long de ladite étape de mise en contact. En général, l’eau utilisée est à température ambiante. Avantageusement et selon l’invention, au cours de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce, on utilise une eau à une température comprise entre 0°C et 50°C, notamment entre 15°C et 35°C. Toutes les espèces d’holothuries peuvent être utilisées dans un procédé selon l’invention. Il est possible d’utiliser des holothuries d’une même espèce ou d’espèces différentes au cours de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce. Avantageusement et selon l’invention, on choisit chaque holothurie dans le groupe formé de l’espèce Holothuria fuscogilva (holuthuries à mamelles blanches) et de l’espèce Holothuria whitmaei (holuthuries à mamelles noires). Avantageusement et selon l’invention, on choisit chaque holothurie de telle sorte que chaque holothurie présente une masse comprise entre 5 grammes et 5 000 grammes (5 kg), notamment entre 15 grammes et 2 000 grammes (2 kg), en particulier de telle sorte que chaque holothurie présente une masse comprise entre 100 grammes et 250 grammes. Chaque holothurie utilisée dans un procédé selon l’invention peut être issue d’un prélèvement en milieu naturel ou bien conservée au sein d’une ferme aquacole et/ou être issue d’une écloserie aquacole. Avantageusement et selon l’invention, à l’issue de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce, on dispose lesdites holothuries retirées dudit récipient dans une eau présentant au moins 20 grammes de sels dissous par litre. Afin de préserver au mieux l’état de santé des holothuries, il est utile de les remettre dans un environnement présentant des conditions proches de leurs conditions de vie naturelles (ou identiques) à l’issue de chaque étape de mise en contact avec de l’eau douce. Avantageusement et selon l’invention, après ladite étape de mise en contact en eau douce, on laisse chaque holothurie dans une eau présentant au moins 20 grammes de sels dissous par litre pendant au moins 12 heures de façon à permettre à chaque holothurie de pouvoir être soumise à une éventuelle nouvelle étape de mise en contact avec de l’eau douce. On peut par exemple prévoir une période de repos desdites holothuries de 24 heures ou encore de 48 heures entre plusieurs étapes successives de mise en contact avec de l’eau douce dans le cadre d’un procédé selon l’invention. Avantageusement et selon l’invention, après avoir retiré les holothuries et récupéré la composition issue d’holothuries vivantes, on filtre ladite composition ainsi récupérée et on récupère le filtrat issu de cette filtration. L’étape de filtration de la composition issue d’holothuries vivantes récupérée à l’issue de l’étape de mise en contact avec de l’eau douce permet de séparer tout éventuel débris ou objet non désiré tel que des grains de sable ou des fragments d’algues éventuellement transportés par les holothuries. Toute technique de filtration peut être utilisée (tamis, papier filtre…) ou encore une technique de séparation par décantation et/ou sédimentation. Avantageusement et selon l’invention, on réalise au moins une étape de filtration de la composition récupérée à l’issue de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce à l’aide d’un dispositif de filtration dont les pores présentent un diamètre moyen compris entre 0,45 µm et 800 µm, en particulier entre 40 µm et 600 µm. La composition issue d’holothuries vivantes obtenue après filtration peut être conservée en l’état ou être concentrée ou séchée par toute technique appropriée telle que la lyophilisation. Ainsi, avantageusement et selon l’invention, après avoir récupéré ledit filtrat on lyophilise ledit filtrat. La composition issue d’holothuries vivantes obtenue après filtration peut être conservée, par exemple à l’abri de la lumière, pendant une durée de plusieurs jours à plusieurs mois, voire plusieurs années, en vue de son utilisation à titre d’actif cosmétique et/ou pharmaceutique et/ou nutraceutique. Un procédé selon l’invention respectant les holothuries et n’entrainant pas d’effet irréversible sur leur état de santé, il est tout à fait possible et particulièrement avantageux de pouvoir réutiliser les mêmes holothuries plusieurs fois. Selon une variante de réalisation, après avoir récupéré ladite composition issue d’holothuries vivantes on répète lesdites étapes à partir de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce. L'invention concerne également un procédé et une composition, caractérisés en combinaison par tout ou partie des caractéristiques mentionnées ci-dessus ou ci-après. Liste des figures D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture de la description suivante donnée à titre uniquement non limitatif et qui se réfère à la figure annexée dans laquelle : est une vue schématique d’un procédé selon un premier mode de réalisation de l’invention. Description détaillée d’un mode de réalisation de l’invention Un procédé de préparation d’une composition issue d’holothuries comprend les étapes suivantes illustrées en : - dans une première étape E1 on choisit au moins deux holothuries vivantes ; - dans une deuxième étape E2 de mise en contact en eau douce, on dispose les holothuries dans un récipient contenant de l’eau présentant au maximum 15 grammes de sels dissous par litre pendant une durée prédéterminée comprise entre 20 minutes et 4 heures, chaque holothurie étant vivante et sans signe de détérioration importante de son état de santé à l’issue de cette étape de mise en contact avec de l’eau douce ; - à l’issue de l’étape de mise en contact avec de l’eau douce, dans une troisième étape E3, on retire chaque holothurie du récipient et dans une quatrième étape E4, on récupère, à titre de composition comprenant une composition issue d’holothuries vivantes, l’eau contenue dans ledit récipient ; - dans une cinquième étape E5, on filtre la composition récupérée à l’étape E4 ; - puis, dans une sixième étape E6, on récupère le filtrat issu de la filtration opérée à l’étape E5, - dans une septième étape facultative E7, on réalise une nouvelle filtration du filtrat récupéré à l’étape E6, et - dans une huitième étape facultative E8, on récupère le filtrat issu de la filtration opérée à l’étape E7. Utiliser une eau comprenant moins de 15 grammes de sels dissous par litre suffit à permettre un tel relargage des composés souhaités. On peut également utiliser une eau présentant un titre en sels inférieur, par exemple moins de 8 grammes de sels dissous par litre ou encore moins de 4 grammes de sels dissous par litre. On utilise par exemple une eau contenant au maximum 1 gramme de sels dissous par litre. Un tel titre peut correspondre à de l’eau pure ou de l’eau dite osmosée. On dispose dans chaque récipient un nombre d’holothuries tel que la masse d’holothurie disposée dans 1 litre d’eau soit comprise entre 50 g et 10 kg, notamment entre 300 g et 3 kg, et en particulier entre 1 kg et 2 kg. Chaque holothurie présente une masse comprise entre 5 g et 5 kg, en particulier entre 15 g et 2 kg, entre 25 g et 1kg et plus particulièrement une masse comprise entre 100 g et 250 g. Il est possible de répéter les étapes E1 à E4, ou E1 à E6 ou E1 à E8, après avoir laissé au repos dans de l’eau de mer (ou de l’eau présentant au moins 20 grammes de sels dissous par litre) au moins quelques heures (par exemple 12 à 48 heures) les holothuries. EXEMPLE 1 On choisit 40 holothuries juvéniles âgées de 20 mois et appartenant à l’espèce Holothuria fuscogilva . Ces holothuries juvéniles ont été produites en écloserie puis ont été transférées en nurserie (dans des bassins sur terre) situés au centre Ifremer du Pacifique à Vairao (Tahiti, Polynésie française). A la suite de l’étape en nurserie, ces holothuries sont transférées en enclos en mer pour les phases de pré-grossissement et de grossissement. Ces enclos situés en mer permettent à ces holothuries d’évoluer à une profondeur comprise entre 0,50 m et 1,50 m sous le niveau de la mer. On dispose de 4 récipients chacun d’une contenance de 1,5 L. Chaque holothurie récoltée est disposée directement dans un des 4 récipients sans les nettoyer (c’est-à-dire sans leur ôter le sable éventuellement présent sur leur corps pour ne pas les stresser). On dispose 10 holothuries par récipient. Un litre d’eau osmosée (à 25°C) est versé dans chaque récipient. Chaque récipient est un bac plastique refermé par un couvercle après avoir ajouté l’eau osmosée dans chaque bac dès de début de l’étape de mise en contact avec de l’eau douce. Le tableau ci-dessous indique la durée pendant laquelle les holothuries ont été mises en contact avec de l’eau osmosée et leurs poids mesuré à l’issue de l’étape de mise en contact avec de l’eau osmosée. On retire les holothuries de chaque bac à la fin de l’étape de mise en contact avec de l’eau douce et on récupère la composition restante dans chaque bac. On filtre chaque composition récupérée à l’aide d’un tamis-filtre présentant des mailles de 500 µm et on conserve chaque filtrat recueilli. Chaque composition issue d’holothuries vivantes ainsi recueillie présente une coloration brune. Chaque composition issue d’holothuries vivantes est conservée dans un sac souple étanche dans un congélateur à -18°C. L’état général des holothuries est surveillé pendant 3 jours suivant la fin de l’immersion dans l’eau osmosée. Pour ce faire, elles sont conservées dans des bacs de stabulation durant ces 3 jours avant d’être ramenées dans leur enclos d’origine. Durée du bain en eau osmosée (en heures) Poids total des 10 holothuries (en grammes) Poids moyen (en grammes) Survie après 3 jours Bac n°1 1 804 80,40 100 % Bac n°2 2 981 98,10 100 % Bac n°3 3 1085 108,50 100 % Bac n°4 4 786 78,60 100 % On observe donc qu’un tel procédé permet d’obtenir une composition comprenant des composés d’intérêt relargués par les holothuries, non seulement sans entraîner leur mort (ni durant l’étape de mise en contact avec de l’eau douce elle-même, ni des suites de celle-ci), mais également sans porter atteinte à leur état de santé. Les holothuries utilisées pouvant être réutilisées ultérieurement pour renouveler les mêmes étapes du procédé. EXEMPLE 2 On choisit 40 holothuries juvéniles âgées de 21 mois et appartenant à l’espèce Holothuria fuscogilva . Ces holothuries juvéniles ont été produites en écloserie puis ont été transférées en nurserie (dans des bassins sur terre) situés au centre Ifremer du Pacifique à Vairao (Tahiti, Polynésie française). A la suite de l’étape en nurserie, ces holothuries sont transférées en enclos en mer pour les phases de pré-grossissement et de grossissement. Ces enclos situés en mer permettent à ces holothuries d’évoluer à une profondeur comprise entre 0,50 m et 1,50 m sous le niveau de la mer. On dispose d’un récipient en acier inoxydable d’une contenance de 10,18 L. Chaque holothurie récoltée est disposée directement dans le récipient après les avoir délicatement nettoyées pour les débarrasser des algues et du sable éventuellement accrochés à elles. On dispose les 40 holothuries dans le récipient (bac en acier inoxydable) en les plaçant les unes à côtés des autres et évitant de les superposer les unes sur les autres. On verse 4 litres d’eau préalablement osmosée (à 25°C) dans le récipient avant de disposer un couvercle refermant l’ouverture du récipient. Au début de l’étape de mise en contact avec de l’eau douce, chaque holothurie est entièrement immergée. On laisse les holothuries dans l’eau osmosée pendant 3 heures (à l’abri des rayonnements ultraviolets en veillant à éviter toute autre perturbation extérieure). On retire les holothuries du bac en acier inoxydable à la fin de l’étape de mise en contact en eau douce et on récupère la composition restante. On filtre la composition récupérée à l’aide d’un premier tamis-filtre présentant des mailles de 100 µm, suivi d’un deuxième tamis-filtre présentant des mailles de 41 µm et on conserve le filtrat recueilli dans un bocal en verre. Chaque composition issue d’holothuries vivantes est directement congelée dans des plateaux en acier inoxydable dans un congélateur à -10°C et lyophilisée. EXEMPLE 3 On choisit 30 holothuries juvéniles présentant une masse moyenne de 84 grammes et appartenant à l’espèce Holothuria fuscogilva . Ces holothuries étant issues de la même écloserie et vivants dans les mêmes conditions que celles des exemples 1 et 2 précédents. On dispose de 3 récipients chacun d’une contenance de 1,5 L. On dispose 10 holothuries par récipient. Dans chaque récipient, on ajoute une quantité différente d’eau osmosée (1L (bac n°5), 0,75 L (bac n°6) et 0,5 L (bac n°7)). Chaque récipient est un bac plastique refermé par un couvercle après avoir ajouté l’eau osmosée dans chaque bac dès le début de l’étape de mise en contact. La durée de l’étape de mise en contact en eau douce est de 3 heures. On retire les holothuries de chaque bac à la fin de l’étape de mise en contact en eau douce et on récupère la composition restante dans chaque bac. On filtre chaque composition récupérée à l’aide d’un tamis-filtre présentant des mailles de 41 µm et on conserve chaque filtrat recueilli. Chaque composition issue d’holothuries vivantes est directement congelée dans un plateau en acier inoxydable dans un congélateur à -20°C pendant 24 heures puis lyophilisée à l’aide d’un lyophilisateur commercialisé par la société CRYOTECH (Saint-Gély-du-Fesc, France) sous la référence COSMOS® et présentant une capacité de 3 kg. Les volumes de compositions issues d’holothuries vivantes filtrés sont respectivement de 1,10 L, 0,78 L et 0, 55 L pour les bacs n°5, 6 et 7. Les masses de compositions lyophilisées sont respectivement de 9,36 g, 11,05 g et 7,78 g pour les bacs n°5, 6 et 7. On observe donc une augmentation du rendement proportionnelle à l’augmentation du nombre d’holothuries par litre d’eau douce (osmosée ici). L’état général des holothuries est surveillé pendant 24 heures suivant la fin de l’immersion dans l’eau osmosée. Pour ce faire, elles sont conservées en bassin avant d’être ramenées dans leur enclos d’origine. Des tests de retournement sont effectués immédiatement à l’issue de l’étape de mise en contact dans l’eau osmosée. Ils permettent d’apprécier l’état de santé de chaque holothurie, une holothurie posée sur sa partie dorsale ayant le réflexe de se retourner afin d’être partie ventrale vers le fond du récipient dans lequel elle se trouve. Le tableau suivant regroupe les durées mesurées jusqu’au retournement complet de chaque holothurie. A titre comparatif, la durée de retournement a également été mesurée pour 10 holothuries n’ayant pas subi d’étape préalable de mise en contact avec de l’eau douce. Cette durée moyenne est de 12 minutes (avec un écart type entre les 10 mesures égal à 14). A titre comparatif, la durée de retournement a également été mesurée pour 10 holothuries dans un litre d’eau osmosée après 1 minute de mise en contact et 1 heure de mise en contact. Cette durée moyenne de retournement est de 19 minutes (avec un écart type entre les 10 mesures égal à 17) après 1 minute de mise en contact, et la durée moyenne de retournement est de 60 minutes (avec un écart type entre les 10 mesures égal à 30) après 1 heure de mise en contact. Ces mesures montrent que l’étape de mise en contact en eau douce allonge la durée de retournement des holothuries mais ne l’inhibe pas. Le retournement des holothuries n’est donc qu’uniquement retardé par la mise en contact avec de l’eau douce pendant une durée inférieure à 4 heures. Ces résultats montrent également qu’un nombre croissant d’holothuries par litre d’eau (10 holothuries pour 1 litre à 20 holothuries pour 1 litre d’eau osmosée) n’impacte pas négativement ce réflexe de retournement. Récipient Bac n° 5 Bac n°6 Bac n° 7 Durée jusqu’au retournement de l’holothurie en minutes 35,83 29,50 28,58 36,43 31,00 31,00 47,17 33,33 31,00 49,67 40,15 33,50 63,68 41,58 35,83 64,43 43,17 42,43 64,83 45,08 43,98 67,10 48,73 47,17 74,23 49,00 51,98 56 56,78 55,82 Temps moyen en minutes 56 40 38 Ecart type 14 9 10 Des analyses histologiques du tégument de podias des parties dorsales et ventrales des holothuries (après 1 heure de mise en contact dans un litre d’eau osmosée et celles des bacs n°5, n°6 et n°7) ont également été effectuées. Le tégument des podias est composé de cinq couches superposées, dont la cuticule qui est acellulaire constitue la couche la plus externe. Sous-jacente à la cuticule se trouve une couche cellulaire formant un épithélium. Au niveau dorsal, le sous-épithélium se démarque par de large alvéole vide (ossicule lacunae) suite au traitement de décalcification. On retrouve ensuite deux couches laminaires confondues qui se différencient par leurs densité, dont la couche la plus dense est située sous le sous-epithélium. On retrouve, que ce soit dans le tégument dorsal ou ventral, des pigments marron distribués de manière non-homogène dans l’épithélium et dans le sous épithélium. A la différence du tégument dorsal, la partie ventrale contient moins d’ossicul lacunae et plus de glandes de sécrétion dans le sous-épithélium. Les glandes sont caractérisées par un alignement de noyaux délimitant cette structure de sécrétion avec une plus forte concentration de noyaux sur la cuticule. Dès 1 heure de mise en contact dans un litre d’eau osmosée, on observe un décollement de la cuticule sur les téguments dorsaux et ventraux. Associé à cela on observe également une lyse des cellules des épithéliums. Dans le tégument ventral, on peut voir une atrophie des glandes situées dans le sous-épithélium dans les traitements correspondants aux bac n°6 et bac n°7. Cependant, la morphologie des zones laminaires (dense et diffuse) n’est pas affectée par la mise en contact avec l’eau douce osmosée. Ainsi, une mise en contact avec de l’eau douce provoque un décollement de la cuticule du tégument et une lyse des cellules de l’épithélium, dès 1 heure de traitement sans affecter les couches profondes du tégument et cela est également vrai pour les mises en contact pendant 3 heures aux différentes densités d’holothuries par litre d’eau osmosée. On en conclue que les traitements ne stressent le tégument que de manière superficielle et montrent que les molécules de défenses contenues dans le tégument sont relarguées par la lyse des cellules de l’épithélium. En prenant en compte le réflexe de retournement, le taux de récupération 24 heures post-mise en contact et l’état du tégument, on a pu constater que le stress subi par les juvéniles traités par un procédé selon l’invention est superficiel. Un traitement d’1 h ralentit effectivement le réflexe de retournement mais ne l’abolit pas. On retrouve un taux d’éviscération, similaire entre les juvéniles mis en balnéation dans de l’eau osmosée ou de l’eau de mer. Procédé de préparation d’une composition issue d’holothuries vivantes, ledit procédé étant caractérisé en ce qu’il comprend les étapes suivantes : (E1) on choisit au moins deux holothuries vivantes ; dans une étape, dite étape (E2) de mise en contact avec de l’eau douce, on dispose lesdites holothuries dans un récipient contenant de l’eau présentant au maximum 15 grammes de sels dissous par litre, pendant une durée prédéterminée comprise entre 20 minutes et 4 heures, chaque holothurie étant vivante à l’issue de cette étape de mise en contact avec de l’eau douce ; à l’issue de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce, (E3) on retire lesdites holothuries dudit récipient et (E4) on récupère, à titre de composition issue d’holothuries vivantes, ladite eau contenue dans ledit récipient. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu’il comprend en outre les étapes suivantes : (E5) on filtre ladite composition récupérée à l’étape (E4) ; (E6) on récupère ledit filtrat. Procédé selon l’une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu’au cours de ladite étape de mise en contact avec de l’eau douce, on utilise une eau, dite eau osmosée, obtenue par une étape d’osmose inverse et contenant au maximum 1 gramme de sels dissous par litre. Procédé selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu’au cours de ladite étape (E2) de mise en contact avec de l’eau douce, on dispose dans chaque récipient un volume d’eau au moins égal à 1 litre d’eau pour 30 holothuries à disposer dans ledit récipient. Procédé selon l’une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu’au cours de ladite étape (E2) de mise en contact avec de l’eau douce, on utilise une eau à une température comprise entre 0°C et 50°C, notamment une eau à une température comprise entre 15°C et 35°C. Procédé selon l’une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu’on choisit chaque holothurie dans le groupe formé de l’espèce Holothuria fuscogilva et de l’espèce Holothuria whitmaei . Procédé selon l’une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu’on choisit chaque holothurie de telle sorte que chaque holothurie présente une masse comprise entre 5 grammes et 5 000 grammes, en particulier de telle sorte que chaque holothurie présente une masse comprise entre 100 grammes et 250 grammes. Procédé selon l’une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu’à l’issue de ladite étape (E2) de mise en contact avec de l’eau douce, on dispose lesdites holothuries retirées dudit récipient dans une eau présentant au moins 20 grammes de sels dissous par litre. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce qu’après ladite étape (E2) de mise en contact avec de l’eau douce, on laisse chaque holothurie dans une eau présentant au moins 20 grammes de sels dissous par litre pendant au moins 12 heures. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu’après avoir récupéré ledit filtrat on lyophilise ledit filtrat. Procédé selon l’une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce qu’après avoir récupéré ladite composition issue d’holothuries vivantes on répète lesdites étapes à partir de ladite étape (E2) de mise en contact avec de l’eau douce.