Brevet FR3145479A1 — publié le 20240809

L’invention concerne l’utilisation du 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou du 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol comme agent pigmentant de la peau et les compositions cosmétiques ou dermatologiques correspondantes. ( Pas de figure) « Utilisation du cardol pour une application déterminée à visée cosmétique ou pharmaceutique » L’invention concerne une nouvelle utilisation du cardol pour une application déterminée à visée cosmétique ou pharmaceutique, sur la peau. L’invention concerne une composition cosmétique ou dermatologique présentant une action sur la pigmentation de la peau. CONTEXTE DE L’INVENTION Les cardols sont des constituants naturels, présents dans diverses plantes et fruits exotiques dont l’ Anarcardium occidentale., et notamment dans le CNSL (Cashew Nut Shell Liquid), le liquide extrait des coques de noix de cajou. Les cardols se trouvent sous différentes formes se distinguant par le degré de saturation de la chaine aliphatique de 15 atomes de carbone. Comme les autres constituants du CNSL tels que les acides anacardiques et les cardanols, les cardols sont connus pour présenter diverses propriétés. La valorisation de l’huile CNSL reste à faire, compte tenu du potentiel présenté par les composants qui la constituent, notamment dans le domaine cosmétique. Il a été reporté dans l’art antérieur l’activité inhibitrice des constituants du CNSL sur la tyrosinase. Il est connu que la tyrosinase est une enzyme qui joue un rôle essentiel dans le procédé de biosynthèse de la mélanine, une molécule à l’origine de la pigmentation de la peau. Les inhibiteurs de la tyrosinase sont donc des agents dépigmentants. Il est donc attendu une activité dépigmentante des constituants du CNSL. Des substances présentant une activité dépigmentante sont commercialement très recherchées dans le domaine cosmétique et pharmaceutique. A l’inverse, des substances ayant une activité pigmentante sur la peau sont aussi recherchées pour des applications esthétiques telles que l’autobronzage, l’utilisation dans des produits cosmétiques pour avoir bonne mine, tels que les fonds de teint. Les substances ayant une activité pigmentante peuvent aussi être utilisées afin de traiter une dépigmentation pathologique de la peau induisant une dyschromie cutanée, telle que celle induite par le vitiligo. Parmi les différentes formes du cardol, la forme totalement saturée de la chaine aliphatique du cardol, le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol, de formule (A) suivante, aussi nommé cardol saturé ou cardol hydrogéné, est une molécule a priori intéressante, ainsi que son dérivé méthylé le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol, de formule (B) aussi nommé méthyl-cardol hydrogéné ou 2-méthyl-5-pentadécylrésorcinol. Le cardol hydrogéné est connu aussi sous divers noms tels que l’ Adipostatine A, le pentadécylresorcinol ou le tétrahydrocardol. Avantageusement le cardol hydrogéné et le méthyl-cardol hydrogéné peuvent être obtenus par extraction de substances d’origine naturelle, suivie d’une purification. Le cardol hydrogéné et le méthyl-cardol hydrogéné peuvent être obtenus à partir de fractions d’extraction des cardols ou des méthyl-cardols à chaine aliphatique insaturée en C15, en saturant cette dernière par hydrogénation. Le cardol hydrogéné peut aussi être synthétisé par voie chimique. Il existe un besoin de valoriser les composés du CNSL et notamment le cardol hydrogéné et son dérivé méthyl-cardol. Il existe un besoin de valoriser l’utilisation d’un constituant du CNSL dans le domaine cosmétique. Il existe un besoin de nouvelles compositions cosmétiques ou dermatologiques présentant une action favorisant la pigmentation de la peau. L’un des buts de l’invention est de fournir des compositions cosmétiques comprenant des composés dérivés de sources végétales et naturelles comme substances actives cosmétiques. Un autre but de l’invention est la valorisation des composés du CNSL, issus des déchets de la production agricole, dans le domaine cosmétique. Un autre but de l’invention est la valorisation du cardol hydrogéné ou du méthyl-cardol hydrogéné, en particulier issu du CNSL, dans le domaine cosmétique. Un autre but de l’invention est l’utilisation du cardol hydrogéné ou du méthyl-cardol hydrogéné pour induire une action favorisant la pigmentation de la peau saine d’un individu sain. Un autre but de l’invention est de fournir une méthode de traitement cosmétique de pigmentation de la peau saine d’un individu sain. Un autre but de l’invention est de fournir une composition dermatologique permettant de pigmenter la peau d’un individu présentant une dyschromie cutanée entrainant une dépigmentation pathologique de la peau, tel que le vitiligo. Un premier objet de la présente invention concerne l’utilisation du 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou du 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol comme agent pigmentant de la peau. Les inventeurs ont de façon inattendue observé que le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol et son dérivé méthylé le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol, à savoir le cardol hydrogéné et le méthyl-cardol hydrogéné, présentent une activité de pigmentation de la peau. Les résultats des études réalisées démontrent de façon surprenante que contrairement aux enseignements de l’art antérieur sur les cardols et les autres constituants du CNSL tels que les acides anacardiques et les cardanols, le cardol hydrogéné et son dérivé méthylé n’ont pas un effet inhibiteur de la tyrosinase entrainant une activité dépigmentante de la peau. L’effet de l’application du cardol hydrogéné ou du méthyl-cardol hydrogéné est bien pigmentante. De plus, les inventeurs ont de façon surprenante observé que l’application du 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou du 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol, sur des explants de peau favorise la production de cellules tyrosinase positives et en conséquence une action non-inhibitrice de la tyrosinase. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne l’utilisation du 5-pentadécylbenzène-1,3-diol comme agent pigmentant de la peau. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne l’utilisation du 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol comme agent pigmentant de la peau. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne l’utilisation par application topique du 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou du 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol comme agent pigmentant de la peau. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne l’utilisation par application topique sur peau saine d’un individu sain du 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou du 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol comme agent pigmentant de la peau. Par « agent pigmentant » on entend une substance ou un produit ayant une action de pigmentation de la peau. Un autre objet de la présente invention concerne une composition cosmétique comprenant, dans un milieu cosmétiquement acceptable, du 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou du 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol comme substance active, à raison de 0,05 à 5,00 g/L ou à raison de 0,15 à 15,00 mmol/L. Les études ex vivo sur explants de peau réalisées ont montré une pigmentation de la peau avec une bonne viabilité cellulaire pour des compositions comprenant une concentration de cardol hydrogéné de 0,05 à 5,00 g/L ou de 0,15 à 15,00 mmol/L. La gamme de 0,05 à 5,00 g/L comprend les gammes suivantes : de 0,05 à 0,10 g/L ; de 0,10 à 0,50 g/L ; de 0,50 à 1,00 g/L ; de 1,00 à 1,50 g/L ; de 1,50 à 2,00 g/L ; de 2,00 à 2,50 g/L ; de 2,50 à 3,00 g/L ; de 3,00 à 3,50 g/L ; de 3,50 à 4,00 g/L ; de 4,00 à 4,50 g/L ; de 4,50 à 5,00 g/L. La gamme de 0,15 à 15,00 mmol/L (ou millimole par litre) comprend les gammes suivantes : de 0,15 à 0,25 mmol/L ; de 0,25 à 0,50 mmol/L ; de 0,50 à 1,00 mmol/L ; de 1,00 à 5,00 mmol/L ; de 5,00 à 10,00 mmol/L ; de 10,00 à 15,00 mmol/L. Par « composition cosmétique » on entend toute composition à visée cosmétique, notamment une composition pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain, la peau, en particulier l'épiderme, les muqueuses et le cuir chevelu, d’un individu sain. Au sens de la présente invention, on entend par « composition cosmétique » composition non pharmaceutique, c'est-à-dire qui ne nécessite pas de traitement thérapeutique, c'est-à-dire destinée à toute zone de peau saine. Par « un milieu cosmétiquement acceptable », on entend au sens de l'invention un milieu compatible avec une utilisation en cosmétique, notamment un milieu pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain, la peau, en particulier l'épiderme, les muqueuses et le cuir chevelu, d’un individu sain. Ledit milieu cosmétiquement acceptable présente une couleur, une odeur et un toucher agréables et ne génère pas d'inconforts inacceptables, c'est-à-dire picotements, tiraillements, rougeurs, susceptibles de détourner l'utilisateur d'appliquer cette composition. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est présent à raison de 0,05 à 2,50 g/L ou à raison de 0,15 à 7,50 mmol/L. La gamme de 0,05 à 2,50 g/L comprend les gammes suivantes : de 0,05 à 0,10 g/L ; de 0,10 à 0,20 g/L ; de 0,20 à 0,30 g/L ; de 0,30 à 0,40 g/L ; de 0,40 à 0,50 g/L ; de 0,50 à 0,60 g/L ; de 0,60 à 0,70 g/L ; de 0,70 à 0,80 g/L ; de 0,80 à 0,90 g/L ; de 0,90 à 1,00 g/L ; de 1,00 à 1,10 g/L ; de 1,10 à 1,20 g/L ; de 1,20 à 1,30 g/L ; de 1,30 à 1,40 g/L ; de 1,40 à 1,50 g/L ; de 1,50 à 1,60 g/L ; de 1,60 à 1,70 g/L ; de 1,70 à 1,80 g/L ; de 1,80 à 1,90 g/L ; de 1,90 à 2,00 g/L ; de 2,00 à 2,10 g/L ; de 2,10 à 2,20 g/L ; de 2,20 à 2,30 g/L ; de 2,30 à 2,40 g/L ; de 2,40 à 2,50 g/L ; La gamme de 0,05 à 0,10 g/L comprend les gammes suivantes : de 0,05 à 0,06 g/L ; de 0,06 à 0,07 g/L ; de 0,07 à 0, 08 g/L ; de 0,08 à 0,09 g/L ; de 0,09 à 0,10 g/L. La gamme de 0,15 à 7,50 mmol/L comprend les gammes suivantes : de 0,15 à 0,30 mmol/L ; de 0,30 à 0,50 mmol/L ; de 0,50 à 1,00 mmol/L ; de 1,00 à 1,50 mmol/L ; de 1,50 à 2,00 mmol/L ; de 2,00 à 2,50 mmol/L ; de 2,50 à 3,00 mmol/L ; de 3,00 à 3,50 mmol/L ; de 3,50 à 4,00 mmol/L ; de 4,00 à 4,50 mmol/L ; de 4,50 à 5,00 mmol/L ; de 5,00 à 5,50 mmol/L ; de 5,50 à 6,00 mmol/L ; de 6,00 à 6,50 mmol/L ; de 6,50 à 7,00 mmol/L ; de 7,00 à 7,50 mmol/L. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est présent à raison de 0,10 à 0,50 g/L ou à raison de 0,30 à 1,50 mmol/L. La gamme de 0,10 à 0,50 g/L comprend les gammes suivantes : de 0,100 à 0,125 g/L ; de 0,125 à 0,150 g/L ; de 0,150 à 0,175 g/L ; de 0,175 à 0,200 g/L ; de 0,200 à 0,225 g/L ; de 0,225 à 0,250 g/L ; de 0,250 à 0,275 g/L ; de 0,275 à 0,300 g/L ; de 0,300 à 325 g/L ; de 0,325 à 0,350 g/L ; de 0,350 à 0,375 g/L ; de 0,375 à 0,400 g/L ; de 0,400 à 0,425 g/L ; de 0,425 à 0,450 g/L ; de 0,450 à 0,475 g/L ; de 0,475 à 0,500 g/L. La gamme de 0,30 à 1,50 mmol/L comprend les gammes suivantes : de 0,30 à 0,40 mmol/L ; de 0,40 à 0,50 mmol/L ; de 0,50 à 0,60 mmol/L ; de 0,60 à 0,70 mmol/L ; de 0,70 à 0,80 mmol/L ; de 0,80 à 0,90 mmol/L ; de 0,90 à 1,00 mmol/L ; de 1,00 à 1,10 mmol/L ; de 1,10 à 1,20 mmol/L ; de 1,20 à 1,30 mmol/L ; de 1,30 à 1,40 mmol/L ; de 1,40 à 1,50 mmol/L. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est présent à raison de 0,50 à 5,00 g/L ou à raison de 1,50 à 15,00 mmol/L. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est présent à raison de 1,50 à 5,00 g/L ou à raison de 5,00 à 15,00 mmol/L. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est présent à raison de 0,05 à 0,25 g/L ou à raison de 0,15 à 0,75 mmol/L. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est présent à raison de 0,30 à 5,00 g/L ou à raison de 0,90 à 15,00 mmol/L. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est d’origine naturelle, en particulier d’origine végétale. A titre d’exemple non limitatif, le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol et le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol sont issus des noix de cajou, notamment de la coque de noix de cajou. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est issu d’un extrait d’ Anacardium occidentale . Les noix de cajou comprennent de 55 à 65 % en poids de coques et de 35 à 45 % en poids de noyau. Les coques de noix de cajou constituent donc un déchet agricole généré par les usines de transformation de noix de cajou et ainsi un matériau de départ non coûteux. Notamment les coques de noix de cajou contiennent une huile caustique brun rougeâtre foncé, de l’ordre de 15 à 40 %, en poids riche en lipides phénoliques et présentent un potentiel pour la production de carburants et de produits chimiques à haute valeur ajoutée, permettant une alternative éco-responsable et locale aux produits issus de l’industrie pétrolière. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est issu du liquide de coques des noix de cajou (CNSL). Le « Cashew Nut Shell Liquid » ou CNSL est une huile naturelle issue de coques de noix de cajou. Les composants principaux du CNSL brut (naturel) sont des composés phénoliques : l’acide anacardique, le cardol et le cardanol. Le méthyl cardol est également présent, mais à l’état de traces ( Chacun de ces composés est lui-même un mélange de produits, comportant une chaine alkyle ou alcényle, ladite chaine alcényle possédant 1, 2 ou 3 doubles liaisons (Schéma 1) : Schéma 1 - structures chimiques des constituants principaux du CNSL naturel. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition telle que définie ci-dessus, ladite composition étant formulée pour une application topique, ladite composition étant en particulier sous la forme d’un aérosol, d’une émulsion, d’une crème, d’un gel, d’une dispersion, d’un sérum, d’une mousse, d’un lait corporel ou d’un baume anhydre, de préférence sous forme d’un lait corporel ou d’une crème. Un autre objet de la présente invention concerne l’utilisation cosmétique d’une composition de l’invention telle que définie ci-dessus pour pigmenter la peau saine d’un individu sain. On entend par « peau saine », une zone de peau, sur laquelle est appliquée l’association ou la composition selon l’invention dite « non pathologique » par un dermatologue, c’est-à-dire ne présentant pas d'infection, de maladie, ou de plaies ou de blessures et/ou autres dermatoses. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne l’utilisation cosmétique telle que définie ci-dessus d’une composition de l’invention telle que définie ci-dessus comme autobronzant. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne l’utilisation cosmétique telle que définie ci-dessus d’une composition de l’invention telle que définie ci-dessus pour une coloration de la peau avant une exposition au soleil ou pour un prolongement du bronzage ou pour induire un effet bonne mine. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne l’utilisation cosmétique telle que définie ci-dessus d’une composition de l’invention telle que définie ci-dessus comme produit de maquillage, en particulier comme fond de teint. Un autre objet de la présente invention concerne une méthode de traitement cosmétique, comprenant l’application topique sur une peau saine d’une composition cosmétique de l’invention telle que définie ci-dessus pour induire une coloration assimilable au bronzage ou une pigmentation de la peau. Au sens de la présente invention, on entend par « méthode de traitement cosmétique » une méthode de traitement non thérapeutique, c'est-à-dire destinée à toute zone de peau saine. Un autre objet de la présente invention concerne une composition dermatologique comprenant, dans un milieu pharmaceutiquement acceptable, du 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou du 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol à raison de 0,05 à 5,00 g/L ou à raison de 0,15 à 15,00 mmol/L, pour son utilisation pour traiter une dépigmentation pathologique de la peau induisant une dyschromie cutanée, en particulier pour traiter le vitiligo. Par « composition dermatologique » on entend toute composition à visée pharmaceutique pouvant être mise en contact avec les parties superficielles du corps humain, la peau, en particulier l'épiderme. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pour son utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est présent à raison de 0,05 à 2,50 g/L ou à raison de 0,15 à 7,50 mmol/L. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pour son utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est présent à raison de 0,10 à 0,50 g/L ou à raison de 0,30 à 1,50 mmol/L. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pour son utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est présent à raison de 0,50 à 5,00 g/L ou à raison de 1,50 à 15,00 mmol/L. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pour son utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est présent à raison de 1,50 à 5,00 g/L ou à raison de 5,00 à 15,00 mmol/L. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pour son utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est d’origine naturelle, en particulier d’origine végétale. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pour son utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est issu du liquide de coques des noix de cajou (CNSL). Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pour son utilisation telle que définie ci-dessus, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est issu d’un extrait d’ Anacardium occidentale . Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pour son utilisation telle que définie ci-dessus, ladite composition étant formulée pour une application topique et étant notamment sous la forme d’un aérosol, d’une émulsion, d’une crème, d’un gel, d’une dispersion, d’un sérum, d’une mousse, d’un lait corporel ou d’un baume anhydre, de préférence sous forme d’un lait corporel ou d’une crème. Selon un mode de réalisation particulier, l’invention concerne une composition pour son utilisation telle que définie ci-dessus, comprenant en outre une ou plusieurs substances actives choisies parmi les agents qui luttent contre la glycation, les agents stimulant la synthèse de collagène ou d’élastine ou prévenant leur dégradation, les agents stimulant la synthèse de glycosaminoglycanes ou de protéoglycanes ou prévenant leur dégradation, les agents anti-radicalaires ou anti-pollution, les agents drainants ou détoxifiants, les agents desquamants, les agents apaisants et/ou anti-irritants, les agents astringents, les agents agissant sur la microcirculation, et leurs mélanges. La liste de substances actives ci-dessus est donnée de façon non limitative. Les compositions selon l’invention peuvent en outre comprendre une ou plusieurs autres substances actives additionnelles, l’homme du métier veillant toutefois à ce que les éventuels composés complémentaires actifs, ainsi que leurs proportions, soient choisis de telle manière à ce que les propriétés avantageuses reconnues aux compositions selon l’invention ne soient altérées et soient compatibles avec le principe actif de l’invention. Les exemples et figures suivants illustrent l’invention, sans en limiter la portée. FIGURES ET EXEMPLES La représente des micrographies de coupes de tissus Fontana Masson : sans traitement avec le cadol hydrogéné (figure 1a), avec un traitement du cardol hydrogéné à une concentration de 50 µg/mL (figure 1b), et avec un traitement du cardol hydrogéné à une concentration de 500 µg/mL (figure 1c). La représente les résultats de calcul de l’indice de pigmentation basés sur l’analyse des pixels relatifs à la mélanine avec et sans traitement avec le cardol hydrogéné aux concentrations de 50 µg/mL et 500 µg/mL. L’étude décrite dans les exemples 1 et 2 vise à étudier l’action pigmentante du cardol hydrogéné. Une étude préliminaire sur la cytotoxicité sur les cellules de la peau (kératinocytes et fibroblastes) est décrite dans l’exemple 1 afin de déterminer les concentrations d’étude ex vivo . L’étude de pigmentation de la peau ex vivo a été réalisée aux concentrations de cardol hydrogéné de 50 µg/mL et 500 µg/mL sélectionnées et est décrite dans l’exemple 2. Exemple 1 : Evaluation de la cytotoxicité a) Culture cellulaire et traitement La culture cellulaire a été réalisée sur des cellules primaires fraîchement isolées de biopsies. Les cellules ont été ensemencées dans les conditions résumées dans le tableau 1, comme suit : Type de cellule Equipement Nombre de cellules par puit Milieu Kératinocytes normaux de l’épiderme humain normal (NHEKs) Plaques de 48-puits préenrobés de collagène de type I 20 000 Milieu EpiLife TM (ThermoFischer) supplémenté avec du HKGS (Human Keratinocytes Growth Supplement) Fibroblastes normaux du derme humain (NHDFs) Plaques de 96-puits 15 000 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) supplémenté avec 10% FBS et 1% ATB Tableau 1 : Culture cellulaire et traitement pour l’étude de cytotoxicité Après 48h de culture à 37°C à 5% de CO 2 , les cellules ont été traitées dans le milieu de base sans SVF (Sérum de Veau Fœtal) et/ou facteurs de croissance avec 8 concentrations décroissantes du cardol hydrogéné indiquées dans le tableau 2. Concentration en mg/mL du cardol hydrogéné 0,1 0,05 0,03 0,01 0,005 0,003 0,001 0,0005 Tableau 2 : Concentrations du cardol hydrogéné testées dans l’étude de cytotoxicité L'actif est dilué dans le milieu de culture avec une prédilution préalable à 10 mg/mL dans l'éthanol. Les cellules uniquement cultivées avec du milieu de base ont été utilisées comme contrôle négatif. Les cellules ont ensuite été incubées 24 heures et 48 heures à 37°C, 5% CO 2 . b) Méthode : Test MTT Le test MTT est une méthode rapide de numération des cellules vivantes. Le réactif utilisé est le sel de tétrazolium MTT (bromure de 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium). Le cycle de tétrazolium qu’il contient est réduit, par la succinate déshydrogénase mitochondriale des cellules vivantes actives, en formazan. Ceci forme un précipité dans la mitochondrie de couleur violette. La quantité de précipité formé est proportionnelle à la quantité de cellules vivantes (mais également à l'activité métabolique de chaque cellule). Il suffit donc après l'incubation des cellules avec du MTT pendant un certain temps à 37 °C (environ trois heures) de dissoudre les cellules, leurs mitochondries et donc les précipités de Formazan violets dans du DMSO 100 %. Un simple dosage de la densité optique à 560 nm par spectroscopie permet de connaître la quantité relative de cellules vivantes et actives métaboliquement. Une solution de MTT préparée à 6 mg/mL en milieu de base a été ajoutée dans chaque puits pour une concentration finale à 1 mg/mL et incubée pendant 3 heures à 37°C, 5% CO 2 . Ensuite, le milieu a été retiré et le diméthylsulfoxyde (DMSO) a été ajouté dans chaque puits pour dissoudre les cristaux de formazan. L'homogénéisation a été faite sous agitation orbitale pendant quelques minutes. La densité optique a été mesurée à une longueur d'onde de 560 nm avec un lecteur de microplaque. c) Résultats de l’évaluation de la cytotoxicité La dose maximale non cytotoxique du cardol hydrogéné a été déterminée à 5 µg/mL sur les kératinocytes et à 100 µg/mL sur les fibroblastes. Comme les kératinocytes, constituant l'épiderme qui est la première couche cutanée en contact avec le principe actif, présentent une cytotoxicité au-dessus de 5 μg/mL in vitro , cette dose de 5 μg/mL a été sélectionnée et multipliée par 10 et par 100 pour les tests ci-après d’étude de pigmentation ex vivo. Les doses sélectionnées sont indiquées dans le tableau 3. Kératinocytes Fibroblastes In vitro 5 µg/mL 100 µg/mL Ex vivo 50-500 µg/mL Tableau 3 : Doses sélectionnées Exemple 2 : Evaluation de la pigmentation de la peau ex vivo par le cardol hydrogéné a) Traitement des explants de peau Des explants de peau fraîche humaine provenant d'une donneuse âgée de 50 ans ayant subi une abdominoplastie ont été utilisés dans cette étude. Des explants de peau ont été cultivés en survie dans une interface air-liquide avec un milieu de culture de peau composé d’un milieu DMEM riche en glucose et supplémenté d'antibiotiques, d'antifongiques et de facteurs de croissance. Le milieu de culture de peau a été renouvelé quotidiennement et les explants de peau ont été quotidiennement traités par voie topique avec le cardol hydrogéné à une concentration de 50 et 500 µg/mL dans de l'eau stérilisé, correspondant respectivement à 0,156 et 1,56 mmol/L. D'autres explants de peau n'ont pas été traités, n'ayant qu'un renouvellement moyen quotidien, représentant le témoin de base non traité. Ces conditions ont été répétées quotidiennement pendant 7 jours. Après l’échantillonnage, les explants de peau ont été fixés dans du formol avant d’être déshydratés et enrobés dans de la paraffine pour la coloration Fontana-Masson. b) Quantification de la mélanine par la coloration de Fontana-Masson La coloration de Fontana-Masson identifie la mélanine, notamment présente dans la peau. Le protocole de coloration Fontana-Masson approprié montre les granules de cellules de mélanine en brun/noir, les noyaux en rose/rouge et le cytoplasme en rose pâle. Analyse histologique par coloration de Fontana Des sections de 4 μm d'épaisseur ont été déparaffinées puis colorées par la méthode Fontana-Masson à l'argent pour la mélanine. Les images ont été recueillies avec le microscope à fluorescence inversé Axio Observer (Zeiss) en mode fond clair. Quantification de la teneur en mélanine par analyse d'imagerie La mélanine a été quantifiée à l'aide de deux logiciels d'imagerie optique open source : GIMP-GNU et ImageJ. Les photomicrographies (en fichier de format jpeg) de coupes de tissus Fontana-Masson ont été traitées dans le programme de manipulation d'images GIMP-GNU. Les signaux de couleur brun-noir correspondants aux grains de mélanine sur les sections colorées ont été sélectionnés, copiés et collés dans une nouvelle image qui a été enregistrée dans un autre fichier jpeg ; ce fichier jpeg est composé uniquement de signaux noir/marron, correspondants aux grains de mélanine, sur fond blanc. Cette image a ensuite été traitée à l'aide du programme ImageJ. Un histogramme de l'image a été créé en séparant le nombre total de pixels de l'image en 255 catégories de couleurs couvrant le spectre visible. Le signal du pigment correspondant à la couleur brun-noir (mélanine) a été déterminé par découpage et par sommation à des signaux appropriés relatifs de la mélanine. Alternativement, les données peuvent aussi être traitées sous forme numérique dans un fichier excel. L'indice de pigmentation a été obtenu en prenant le nombre absolu de pixels noirs dans un champ représentatif de grossissement X20 tel que déterminé par l'image J et en le multipliant par 10 −3 . c) Résultats : Une hyperpigmentation de la peau par application du cardol hydrogéné a été constatée par la méthode de coloration de Fontana-Masson. Une coloration de Fontana-Masson pour visualiser la teneur en mélanine dans la peau avec ou sans application du cardol hydrogéné a été réalisée dans cette étude, comme illustrée dans la qui comprend respectivement des photomicrographies de coupes de tissus Fontana-Masson : sans traitement avec le cardol hydrogéné (figure 1a), avec un traitement du cardol hydrogéné à une concentration de 50 µg/mL soit de 0,156 mmol/L (figure 1b), et avec un traitement du cardol hydrogéné à une concentration de 500 µg/mL soit de 1,56 mmol/L (figure 1c). L'indice de pigmentation par analyse d'imagerie a été déterminé comme reporté ci-dessus par traitement des photomicrographies de coupes de tissus. Les résultats sont reportés dans la . L’indice de pigmentation indiqué est relatif à celle d’une peau non traitée avec le cardol hydrogéné. Il a été démontré qu'il y avait une hyper pigmentation de +52% avec du cardol hydrogéné à 500 μg/mL, soit 1,56 mmol/L avec un résultat statistiquement significatif de p . Ainsi cette étude a permis de mettre en évidence que l'application topique du cardol hydrogéné pendant 7 jours augmentait significativement la teneur en mélanine dans la peau par rapport à une peau non traitée dans les mêmes conditions comme illustré dans les figures 1 et 2. Les résultats de cette étude révèlent que le cardol hydrogéné présente une activité pigmentante de la peau, notamment en favorisant la production de la mélanine. Utilisation du 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou du 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol comme agent pigmentant de la peau. Composition cosmétique comprenant, dans un milieu cosmétiquement acceptable, du 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou du 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol comme substance active, à raison de 0,05 g/L à 5,00 g/L ou à raison de 0,15 à 15,00 mmol/L. Composition selon la revendication 2, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est présent : à raison de 0,05 à 2,50 g/L, de préférence de 0,10 à 0,50 g/L, ou à raison de 0,15 à 7,50 mmol/L, de préférence de 0,30 à 1,50 mmol/L, ou à raison de 0,50 à 5,00 g/L, de préférence de 1,50 à 5,00 g/L. . ou à raison de 1,50 à 15,00 mmol/L, de préférence de 5,00 à 15,00 mmol/L. Composition selon l’une des revendications 2 à 3, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est d’origine naturelle, en particulier d’origine végétale, de préférence issu d’un extrait d’ Anacardium occidentale . Composition selon l’une des revendications 2 à 4, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est issu du liquide de coques des noix de cajou (CNSL) Composition selon l’une des revendications 2 à 5, ladite composition étant formulée pour une application topique, ladite composition étant en particulier sous la forme d’un aérosol, d’une émulsion, d’une crème, d’un gel, d’une dispersion, d’un sérum, d’une mousse, d’un lait corporel ou d’un baume anhydre, de préférence sous forme d’un lait corporel ou d’une crème. Utilisation cosmétique d’une composition selon l’une des revendications 2 à 6 pour pigmenter la peau saine d’un individu sain. Utilisation cosmétique selon la revendication 7 d’une composition selon l’une des revendications 2 à 6 comme autobronzant, ou pour une coloration de la peau avant une exposition au soleil ou pour un prolongement du bronzage ou pour induire un effet bonne mine. Utilisation cosmétique selon la revendication 7 d’une composition selon l’une des revendication 2 à 6 comme produit de maquillage, en particulier comme fond de teint. Méthode de traitement cosmétique, comprenant l’application topique sur une peau saine d’une composition cosmétique selon l’une des revendications 2 à 6 pour induire un bronzage ou une pigmentation de la peau. Composition dermatologique comprenant, dans un milieu pharmaceutiquement acceptable, du 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou du 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol à raison de 0,05 à 5,00 g/l ou à raison de 0,15 à 15,00 mmol/L, pour son utilisation pour traiter une dépigmentation pathologique de la peau induisant une dyschromie cutanée, en particulier pour traiter le vitiligo. Composition pour son utilisation selon la revendication 11, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est présent : à raison de 0,05 à 2,50 g/L, de préférence de 0,10 à 0,50 g/L, ou à raison de 0,15 à 7,50 mmol/L, de préférence de 0,30 à 1,50 mmol/L, ou à raison de 0,50 à 5,00 g/L, de préférence de 1,50 à 5,00 g/L, ou à raison de 1,50 à 15,00 mmol/L, de préférence de 5,00 à 15,00 mmol/L. Composition pour son utilisation selon l’une des revendications 11 à 12, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est d’origine naturelle, en particulier d’origine végétale, de préférence issu d’un extrait d ’Anacardium occidentale . Composition pour son utilisation selon l’une des revendications 11 à 13, dans laquelle le 5-pentadécylbenzène-1,3-diol ou le 2-méthyl-5-pentadécylbenzène-1,3-diol est issu du liquide de coques des noix de cajou (CNSL). Composition pour son utilisation selon l’une des revendications 11 à 14, ladite composition étant formulée pour une application topique et étant notamment sous la forme d’un aérosol, d’une émulsion, d’une crème, d’un gel, d’une dispersion, d’un sérum, d’une mousse, d’un lait corporel ou d’un baume anhydre, de préférence sous forme d’un lait corporel ou d’une crème.