Brevet FR3146900A1 — publié le 20240927

La présente invention concerne un hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange, en particulier comprenant un acide hyaluronique réticulé, un acide hyaluronique non réticulé ou leur mélange, et comprenant en outre du zinc et des ions citrates ainsi que son procédé de préparation. Figure d’abrégé : Figure 1 Procédé de préparation d’un hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé, non réticulé ou leur mélange DOMAINE DE L’INVENTION La présente invention concerne un hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange, en particulier comprenant un acide hyaluronique réticulé, un acide hyaluronique non réticulé ou leur mélange, et comprenant en outre du zinc et des ions citrates ainsi que son procédé de préparation. ARRIERE PLAN TECHNOLOGIQUE Les polysaccharides, tels que les glycosaminoglycanes, sont largement utilisés dans les domaines médical et esthétique, notamment pour le comblement des tissus mous. En particulier, la majorité des produits commercialisés pour des applications esthétiques sont à base d’acide hyaluronique. Pour améliorer la qualité de la peau, les hydrogels préparés à partir d’acide hyaluronique non modifié sont intéressants car ils présentent l’avantage d’être parfaitement biocompatibles. Il est également possible d’utiliser des hydrogels à base d’acide hyaluronique modifié, l’acide hyaluronique étant habituellement modifié par réticulation. Cette réticulation présente l’avantage d’augmenter la durabilité in vivo et la résistance à la dégradation in vivo des hydrogels. Des hydrogels à base d’acide hyaluronique réticulé peuvent être obtenus par différents procédés de préparation. Aujourd’hui, les besoins sont de plus en plus forts pour la mise à disposition d’hydrogels capables d’améliorer leur profil de biocompatibilité et de délivrer des effets biologiques bénéfiques pour la qualité de la peau. Dans un tel contexte, le zinc s’avère être un élément de choix. Il s’agit d’un micronutriment qui présente de nombreux effets biologiques bénéfiques en tant que cofacteur de nombreuses enzymes, notamment impliquées dans les processus de cicatrisation et de reconstruction de la matrice extracellulaire. Outre des activités cicatrisantes, des activités anti-inflammatoires et anti-infectieuses ont également été associées au zinc. Le zinc peut donc s’avérer intéressant pour diminuer les éventuels effets secondaires dus à la réponse inflammatoire associée à l’administration des hydrogels. Cependant la préparation d’hydrogels comprenant du zinc n’est pas aisée, le zinc pouvant précipiter en présence de certains sels notamment de phosphates, de carbonates et/ou de sulfates. Son incorporation au sein des hydrogels demeure donc difficile. Ainsi, un besoin demeure pour la mise à disposition d’un procédé permettant de préparer des hydrogels comprenant un polysaccharide réticulé et/ou non réticulé et comprenant en outre du zinc, en particulier à des concentrations où le zinc est biologiquement actif, sans précipitation de ce dernier. De manière avantageuse, le procédé proposé sera le plus respectueux possible des propriétés des hydrogels, c’est-à-dire qu’il entrainera le moins de dégradations possibles des propriétés rhéologiques des hydrogels lors de la stérilisation à la chaleur. BREVE DESCRIPTION DE L'INVENTION La présente invention porte sur un procédé de préparation d’un hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange et comprenant en outre des ions zinc, le procédé comprenant les étapes suivantes : (1) préparation d’un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange, la préparation de l’hydrogel comprenant les étapes suivantes : - mise en contact du polysaccharide réticulé, du polysaccharide non réticulé, ou de leur mélange, avec une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges, - addition d’ions citrates au polysaccharide réticulé, au polysaccharide non réticulé, ou à leur mélange, en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrates d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel, - addition d’ions zinc au polysaccharide réticulé, au polysaccharide non réticulé, ou à leur mélange, en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions zinc d’au plus 20 mM dans l’hydrogel, l’addition des ions citrates et des ions zinc étant réalisée dans un ratio molaire [ions citrates] / [ions zinc] allant de 1 à 20, et à la condition que l’addition des ions zinc ne soit pas réalisée avant l’addition des ions citrates lorsque la mise en contact avec la solution physiologique saline, de préférence, tamponnée, est réalisée avant l’addition des ions citrates ; (2) stérilisation, de préférence à la chaleur, de l’hydrogel obtenu à l’issue de l’étape (1) pour obtenir un hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange et comprenant en outre des ions zinc. L’invention porte également sur un procédé de préparation d’un hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé et éventuellement un polysaccharide non réticulé et comprenant en outre des ions zinc, le procédé comprenant les étapes suivantes : (0) préparation d’un polysaccharide réticulé à partir d’un milieu réactionnel de réticulation comprenant un ou plusieurs polysaccharide(s), un ou plusieurs agent(s) réticulant, un solvant et des ions zinc en une quantité permettant la préparation d’un hydrogel comprenant au plus 20 mM d’ions zinc ; (1) préparation d’un hydrogel à partir du polysaccharide réticulé obtenu à l’issue de l’étape (0) et éventuellement d’un polysaccharide non réticulé, la préparation de l’hydrogel comprenant une étape de mise en contact du polysaccharide réticulé avec une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges ; (2) stérilisation, de préférence à la chaleur, de l’hydrogel obtenu à l’issue de l’étape (1) pour obtenir un hydrogel stérile ; dans lequel : - le milieu réactionnel de réticulation comprend en outre des ions citrates en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrate d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel, le ratio molaire [ions citrates présents dans le milieu réactionnel] / [ions zinc présents dans le milieu réactionnel] allant de 1 à 20 ; ou - l’étape (1) comprend en outre, avant l’étape de mise en contact du polysaccharide réticulé avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, une étape d’addition d’ions citrates en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrates d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel, le ratio molaire [ions citrates ajoutés] / [ions zinc présents dans le milieu réactionnel] allant de 1 à 20 ; ou - la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprend en outre des ions citrates en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrates d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel, le ratio molaire [ions citrates présents dans la solution physiologique saline, de préférence tamponnée] / [ions zinc présents dans le milieu réactionnel] allant de 1 à 20. L’invention porte également sur un hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange, en particulier comprenant un acide hyaluronique réticulé, un acide hyaluronique non réticulé ou leur mélange, et comprenant en outre du zinc et des ions citrates obtenu par les procédés selon l’invention. L’invention porte sur l’utilisation des ions citrates pour protéger un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange, éventuellement un agent anesthésiant, et en outre des ions zinc, de la dégradation de ses propriétés rhéologiques lors de sa stérilisation, de préférence par la chaleur ou pour préserver la stabilité dans le temps des propriétés rhéologiques d’un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange, éventuellement un agent anesthésiant, et en outre des ions zinc. Enfin, l’invention porte sur l’utilisation d’une solution comprenant des ions zinc et des ions citrates pour protéger un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé et/ou non réticulé, éventuellement un agent anesthésiant, de la dégradation de ses propriétés rhéologiques lors de sa stérilisation, de préférence par la chaleur, ou pour préserver la stabilité dans le temps d’un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange, éventuellement un agent anesthésiant. D’autres aspects de l’invention sont tels que décrits ci-dessous et dans les revendications. FIGURES hydrogel obtenu selon le procédé de l’invention (microscope : : Olympus SZX16, le logiciel : OLYMPUS Stream Start) hydrogel hors invention (microscope : : Olympus SZX16, le logiciel : OLYMPUS Stream Start) DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Définitions Le terme « gel » désigne un réseau de polymères qui est dilaté dans tout son volume par un fluide. Cela signifie qu'un gel est formé de deux milieux, l’un « solide » et l’autre « liquide », dispersés l'un dans l'autre. Le milieu dit « solide » est constitué des longues molécules polymères connectées entre elles par des liaisons faibles (par exemple des liaisons hydrogène) ou par des liaisons covalentes (réticulation). Le milieu liquide est constitué d’un solvant. Un gel correspond généralement à un produit viscoélastique qui possède un angle de phase δ inférieur 90°, de préférence inférieur ou égal à 70°, de préférence inférieur ou égal à 45°, à 1Hz pour une déformation de 0,1% ou une pression de 1 Pa, de préférence un angle de phase δ allant de 2° à 45° ou allant de 20° à 45°. Le terme « hydrogel » désigne un gel tel que défini ci-dessus dans lequel le solvant constituant le milieu liquide est majoritairement de l'eau (par exemple au moins 90%, en particulier au moins 95%, notamment au moins 97%, notamment au moins 98% en poids du milieu liquide) et présentant un pH allant de 6,8 à 7,8. Le terme « hydrogel injectable » désigne un hydrogel qui peut s’écouler et être injecté manuellement au moyen d’une seringue munie d'une aiguille de diamètre allant de 0,1 à 0,5 mm, par exemple d’une aiguille hypodermique de 32G, 30 G, 27 G, 26 G, 25 G. Préférentiellement, un « hydrogel injectable » est un hydrogel présentant une force d’extrusion moyenne inférieure ou égale à 25N, de préférence allant de 5 à 25 N, encore de préférence allant de 8 à 15 N, lors d’une mesure avec un dynamomètre, à une vitesse fixe d’environ 12,5 mm/min, dans des seringues de diamètre externe supérieur ou égal à 6,3 mm, avec une aiguille de diamètre externe inférieur ou égal à 0,4 mm (27 G) et de longueur ½ ’’, à température ambiante. Une « application superficielle » désigne l’administration, par exemple par mésothérapie, d’une composition superficiellement dans la peau, ou sur la peau, pour le traitement des couches superficielles de la peau, de l’épiderme et des parties les plus superficielles du derme, pour réduire les rides superficielles et/ou améliorer la qualité de la peau (telle que son éclat, sa densité ou sa structure) et/ou rajeunir la peau. Une « application médiane » désigne l’administration d’une composition dans la partie médiane de la peau pour traiter les couches médianes de la peau, ainsi que pour réduire les rides médianes. Une « application profonde » désigne l’administration d’un hydrogel dans les couches les plus profondes de la peau, l’hypoderme et la partie la plus profonde du derme, et/ou sous la peau (au-dessus du périoste) pour « apporter du volume », tels que pour le comblement des rides les plus profondes et/ou des régions partiellement atrophiées du contour du visage et/ou du corps. Les hydrogels dit « volumateur » peuvent typiquement être administrés pour une application profonde. Un « polysaccharide réticulé » désigne un polysaccharide modifié au cours d’une réaction de réticulation. A contrario, un « polysaccharide non réticulé » désigne un polysaccharide non modifié avec un agent réticulant et qui donc n’a pas subi de réaction de réticulation. Le terme « agent réticulant » désigne tout composé capable d’introduire une réticulation entre différentes chaines de polysaccharide. Le « taux de réticulation molaire » (TR), exprimé en %, désigne le rapport molaire de la quantité d’agent réticulant par rapport à la quantité d’unité de répétition du polysaccharide introduite dans le milieu réactionnel de réticulation exprimé pour 100 moles d’unités de répétition du polysaccharide dans le milieu de réticulation. Par exemple, un taux de réticulation molaire de 1% signifie qu’il y a une molécule d’agent réticulant introduite dans le milieu réactionnel pour 100 unités de répétition de polysaccharide. L’expression « unité de répétition » d’un polysaccharide désigne un motif structurel constitué d’un ou plusieurs (généralement 1 ou 2) monosaccharides dont la répétition produit la chaîne de polysaccharide complète. Le « degré de modification » (MOD) d’un polysaccharide, tel que l’acide hyaluronique, correspond à la quantité molaire d’agent réticulant liée au polysaccharide, par une ou plusieurs de ses extrémités, exprimée pour 100 moles d’unités de répétition du polysaccharide. Il peut être déterminé par des méthodes connues de l’homme du métier telle que la spectroscopie de Résonance Magnétique Nucléaire (RMN). Par exemple, un degré de modification de 1% signifie qu’il y a une molécule d’agent réticulant pour 100 unités de répétition de polysaccharide. Le terme « polysaccharide » désigne un polymère composé de monosaccharides (préférentiellement des énantiomères D) joints entre eux par des liaisons glycosidiques. Par « température ambiante » , il est entendu une température allant de 20 à 25°C, plus particulièrement 21°C. Le domaine de viscoélasticité linéaire (Linear ViscoElastic Region ou LVER) correspond à la gamme de déformations de l’hydrogel allant d’une valeur initiale de module élastique G' jusqu’à la valeur du module élastique G’ diminué de 10% de sa valeur initiale. La mesure du LVER consiste en une mesure de balayage à contrainte oscillatoire en mode compression à une fréquence d’oscillation donnée pour déterminer la région viscoélastique linéaire. Procédés Les inventeurs ont mis au point deux procédés alternatifs répondant aux besoins exprimés. Selon une première variante (méthode 1), la préparation d’un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé et/ou non réticulé et comprenant en outre du zinc est rendue possible par l’addition d’ions citrates lors de la phase de préparation de l’hydrogel. Selon une deuxième variante (méthode 2), lorsque l’hydrogel comprend un polysaccharide réticulé, la préparation d’un hydrogel comprenant du zinc est rendue possible en conduisant la réticulation du polysaccharide dans un milieu réactionnel comprenant des ions zinc et en ajoutant des ions citrates soit durant l’étape de réticulation soit ultérieurement mais avant tout contact des ions zinc avec une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate, seuls ou leurs mélanges. Il a été observé que l’addition d’ions citrates, en particulier d’acide citrique, au zinc permet de prévenir la précipitation du zinc, notamment en présence d’une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges. De manière inattendue, il a été observé que le procédé proposé (variantes 1 et 2) permet par ailleurs de protéger efficacement l’hydrogel d’une dégradation de ses propriétés rhéologiques lors de la stérilisation, en particulier lors de la stérilisation par la chaleur. Les hydrogels obtenus par le procédé de la présente invention présentent ainsi des modifications moindres de leur propriétés rhéologiques après stérilisation (meilleure préservation du module élastique G’, meilleure préservation de l’angle de phase) par rapport à des hydrogels préparés par un procédé équivalent sans addition d’ions zinc et citrates, en particulier sans addition d’ions zinc et citrates sous forme d’une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges. De manière inattendue, cet effet de protection se prolonge dans le temps. Les hydrogels obtenus par le procédé de la présente invention présentent une meilleure stabilité dans le temps, c’est-à-dire qu’ils maintiennent plus efficacement dans le temps leurs propriétés rhéologiques, notamment après stérilisation, que des hydrogels préparés par un procédé équivalent sans addition d’ions zinc et citrates, en particulier sans addition d’ions zinc et citrates sous forme d’une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges, et des ions zinc et des ions citrates. En effet, les hydrogels selon l’invention présentent une meilleure conservation dans le temps de leurs propriétés rhéologiques , notamment après stérilisation, et ne présentent pas de précipitation du zinc. Par ailleurs, il est connu que la présence additionnelle d’anesthésiant dans un hydrogel lors de la stérilisation, de préférence à la chaleur, entraine des dégradations des propriétés rhéologiques des hydrogels à base de polysaccharide réticulé et/ou non réticulé, en particulier des hydrogels à base d’acide hyaluronique réticulé et/ou non réticulé. L’addition des ions citrates et zinc permet de limiter ces effets. Les hydrogels obtenus par le procédé de la présente invention comprenant un agent anesthésiant présentent des dégradations moindres de leur propriétés rhéologiques après stérilisation par rapport à des hydrogels, comprenant un agent anesthésiant, préparés par un procédé équivalent sans addition d’ions zinc et citrates, en particulier sans addition d’ions zinc et citrates sous forme d’une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges. Méthode 1 La présente invention porte ainsi sur un procédé de préparation d’un hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé et/ou non réticulé et comprenant en outre des ions zinc, le procédé comprenant les étapes suivantes : (1) préparation d’un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé et/ou non réticulé, la préparation de l’hydrogel comprenant les étapes suivantes : - mise en contact d’un polysaccharide réticulé et/ou non réticulé avec une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, la solution saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges ; - additions d’ions zinc et d’ions citrates au polysaccharide réticulé et/ou non réticulé dans un ratio molaire ions citrates/ ions zinc allant de 1 à 20 et en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrates d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel et une concentration en ions zinc d’au plus 20 mM dans l’hydrogel, à la condition que l’addition des ions zinc ne soit pas réalisée avant l’addition des ions citrates lorsque la mise en contact avec la solution physiologique saline est réalisée avant l’addition des ions citrates ; (2) stérilisation, de préférence à la chaleur, de l’hydrogel obtenu à l’issue de l’étape (1) pour obtenir un hydrogel stérile. Il est entendu que la préparation de l’hydrogel à partir du polysaccharide réticulé et/ou non réticulé (étape (1)) comprend au moins les étapes indiquées ci-dessus, l’ordre de ces étapes étant indifférent. D’autres étapes peuvent être mises en œuvre. Le polysaccharide réticulé et/ou non réticulé Le polysaccharide peut être tout polymère composé de monosaccharides joints entre eux par des liaisons glycosidiques ou leurs mélanges. De préférence, le polysaccharide est choisi parmi la pectine et les substances pectiques; le chitosan; la chitine; la cellulose et ses dérivés; l’agarose; les glycosaminoglycanes tels que l’acide hyaluronique, l’héparosane, le dermatane sulfate, le kératane sulfate, la chondroïtine et la chondroïtine sulfate; et leurs mélanges. De manière encore plus préférée, le polysaccharide est choisi parmi l’acide hyaluronique, l’héparosane, la chondroïtine et leurs mélanges, encore plus préférentiellement le polysaccharide est l’acide hyaluronique ou un de ses sels, en particulier un sel physiologiquement acceptable tel que le sel de sodium, le sel de potassium, le sel de zinc, le sel de calcium, le sel de magnésium, le sel d’argent, le sel de calcium et les mélanges de ceux-ci. Plus particulièrement, l’acide hyaluronique est sous sa forme acide ou sous forme de sel de sodium (NaHA). L’hydrogel peut ainsi être un hydrogel à base d’acide hyaluronique et/ou d’un de ses sels. De préférence, si le polysaccharide est l’acide hyaluronique ou un de ses sels, il a une masse moléculaire moyenne en poids (Mw) allant de 0,05 à 10 MDa, préférentiellement allant de 0,5 à 5 MDa, par exemple allant de 2 à 4 MDa ou allant de 1 à 5 MDa. Le polysaccharide peut être fourni sous forme hydratée (totalement ou partiellement hydratée), ou sous forme sèche, telle que sous forme de poudre ou de fibres. Lorsque le polysaccharide est fourni sous forme hydratée, il se présente typiquement sous forme de gel. Un polysaccharide réticulé peut être préparé par toute méthode connue de l’homme du métier. Par exemple, le polysaccharide réticulé peut être préparé tel que décrit dans WO2010131175A1 ou WO201277054A1. Le procédé de la présente invention peut ainsi comprendre, avant l’étape de préparation de l’hydrogel, une étape de préparation d’un polysaccharide réticulé. Le polysaccharide réticulé est de préférence un polysaccharide réticulé dont le taux de réticulation molaire est inférieur ou égal à 10%. Préférentiellement, le polysaccharide réticulé est un polysaccharide réticulé dont le taux de réticulation molaire est supérieur à 0 et inférieur ou égal à 6%. Encore plus préférentiellement, le polysaccharide réticulé est un polysaccharide réticulé dont le taux de réticulation molaire est supérieur à 0 et inférieur ou égal à 4%. De manière encore plus préférée, le polysaccharide réticulé est un polysaccharide réticulé dont le taux de réticulation molaire est supérieur à 0 et inférieur ou égal à 2%, de préférence inférieur ou égal à 1%, encore préférentiellement inférieur ou égal à 0,8%, notamment allant de 0,1% à 0,5% (nombre de moles d’agent(s) réticulant pour 100 moles d’unité de répétition du ou des polysaccharides). Le polysaccharide peut être réticulé par réaction d’un polysaccharide ayant été au préalable modifié. Le polysaccharide peut avoir été modifié par greffage au moyen d’une molécule permettant la réticulation ultérieure du polysaccharide ainsi modifié. Par exemple, le polysaccharide peut avoir été modifié par greffage d’une molécule silylée, d’un acide aminé, d’un dérivé d’acide aminé ou d’une protéine. Le polysaccharide est de préférence réticulé au moyen d’un agent réticulant choisi parmi les agents réticulant bi- ou multi-fonctionnels époxydiques ou non époxydiques, c’est-à-dire préparé par réaction du polysaccharide avec un agent réticulant. Parmi les agents époxydiques peuvent être cités le 1,4-butanediol diglycidyl éther (BDDE), le 1,2,7,8-diépoxy-octane, le 1,2-bis(2,3-époxypropyl)-2,3-éthane (EGDGE), le poly(éthylèneglycol)-diglycidyl éther (PEGDE), et leurs mélanges. Parmi les agents non époxydiques peuvent être cités les polyamines endogènes telles que la spermine, la spermidine et la putrescine, les aldéhydes tel que le glutaraldéhyde, les carbodiimides et la divinylsulfone, les dérivés d’hydrazide tel que l’acide adipique dihydrazide, les bisalkoxyamines, les dithiols tels que le polyéthylène glycol dithiol et leurs mélanges. Parmi les agents non époxydiques peuvent être cités les acides aminés tels que la cystéine, la lysine ; des peptides ou protéines contenant des acides aminés tels que la cystéine, la lysine ; le poly(diméthylsiloxane); des trimétaphosphates, comme par exemple le trimétaphosphate de sodium, le trimétaphosphate de calcium, ou encore le trimétaphosphate de barium. Dans certains modes de réalisation, l’agent réticulant est un agent époxydique, de préférence le 1,4-butanediol diglycidyl éther (BDDE) ou le polyéthylèneglycol-diglycidyl éther. Préférentiellement l’agent réticulant est le 1,4-butanediol diglycidyl éther (BDDE). Dans certains modes de réalisation, l’agent réticulant est un agent non époxydique, de préférence choisi parmi les polyamines endogènes, les aldéhydes, les carbodiimides, la divinylsulfone, les acides aminés, les peptides et leurs mélanges. Le polysaccharide réticulé est de préférence un polysaccharide réticulé présentant un degré de modification (MOD) inférieur ou égal à 10%, de préférence inférieur ou égal à 6%, de préférence inférieur ou égal à 4%, de manière préférée inférieur ou égal à 2%, de manière plus préférée inférieur ou égal à 1%. Avantageusement, le polysaccharide réticulé est un polysaccharide réticulé présentant un degré de modification (MOD) inférieur ou égal à 1,8%, de manière plus préférée inférieur ou égal à 1,5%, préférentiellement inférieur ou égal à 1,2%, encore plus préférentiellement inférieur à 1%. Le polysaccharide réticulé peut en particulier être préparé par un procédé comprenant les étapes suivantes : (a1) préparer un milieu réactionnel de réticulation comprenant un ou plusieurs polysaccharide(s), un ou plusieurs agent(s) réticulant et un solvant ; et (a2) faire réagir le milieu réactionnel pour obtenir un polysaccharide réticulé. Le polysaccharide est tel que décrit ci-dessus. De préférence, le polysaccharide est l’acide hyaluronique ou un sel d’acide hyaluronique, de préférence un sel de sodium. Dans l’étape (a1), le polysaccharide peut être fourni sous forme sèche telle que sous forme de poudre ou de fibres. Lorsque le polysaccharide est fourni sous forme hydratée, il se trouve sous forme d’un gel non réticulé ou d’une solution. En particulier, lorsque le polysaccharide est sous forme hydratée, il s’agit d’un gel non réticulé aqueux ou d’une solution aqueuse. Plus particulièrement, le polysaccharide est mélangé à de l’eau, éventuellement additionnée d’un milieu alcalin adapté pour la réticulation ou d’un tampon phosphate ou d’un tampon phosphate supplémenté, c’est-à-dire comprenant possiblement des composants additionnels tels que définis ci-dessus. L’agent réticulant est tel que décrit ci-dessus. Le solvant est typiquement de l’eau ou un mélange comprenant de l’eau et un solvant organique (typiquement un mélange comprenant au moins 90% en poids d’eau, ou au moins 95% ou au moins 99% en poids d’eau par rapport au poids total du solvant). Par exemple, un solvant organique tel qu’un alcool, en particulier l’éthanol, ou le DMSO, peut être utilisé pour solubiliser l’agent réticulant, par exemple lorsqu’il s’agit du poly(diméthylsiloxane) terminé à chaque extrémité par un diglycidyl éther (numéro CAS : 130167-23-6), avant son addition au milieu réactionnel aqueux. Le milieu réactionnel peut en outre comprendre des sels, des ajusteurs de pH, par exemple une base de Bronsted, plus préférentiellement un sel d’hydroxyde, tel que l’hydroxyde de sodium ou de potassium, des composants additionnels tels que décrits ci-dessus et leurs mélanges. L’addition d’une base de Bronsted peut être tout particulièrement nécessaire lorsque les groupements fonctionnels de l’agent réticulant présentent un groupement époxyde ou un groupement vinyle. Dans ces cas, la réticulation a lieu à un pH supérieur ou égal à 10, plus avantageusement supérieur ou égal à 12, ce qui requiert l’addition d’une base de Bronsted au milieu réactionnel, typiquement à une concentration comprise entre 0,10M et 0,30M. La quantité totale d’agent réticulant dans le milieu réactionnel varie typiquement de 0,001 à 0,10 moles pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide, de préférence de 0,001 à 0,08 ou de 0,001 à 0,06 pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide, préférentiellement de 0,001 à 0,04 pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide, de manière préférée de 0,001 à 0,03 pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide, de manière préférée 0,001 à 0,02 moles pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide, de manière plus préférée de 0,001 à 0,01 moles pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide, de manière encore plus préférée de 0,001 à 0,005 pour 1 mole d’unité de répétition du polysaccharide. Lorsque le polysaccharide est un glycosaminoglycane tel qu’un acide hyaluronique, l’unité de répétition est une unité disaccharidique. La concentration massique en polysaccharide ou en sel de polysaccharide dans le milieu réactionnel varie avantageusement de 50 à 300 mg/g de solvant, de préférence de 80 à 200 mg/g. L’étape (a1) du procédé comprend typiquement une étape d’homogénéisation du milieu réactionnel. L’homogénéisation est généralement réalisée par agitation tridimensionnelle, agitation avec un mélangeur, agitation avec pales ou agitation à la spatule. L’étape (a1) est typiquement réalisée à une température allant de 4 à 35°C, de préférence 15°C à 25°C. De préférence, la durée de l’étape (1) n’excède pas 5 heures. Elle varie généralement de 15 minutes à 4 heures, de préférence de 30 min à 2 heures. L’étape (a2) consiste à faire réagir le milieu réactionnel pour obtenir un polysaccharide réticulé. Avantageusement, l’étape (a2) est réalisée directement après l’étape (a1). Cette étape permet de réticuler les chaines polysaccharidiques entre elles. Les groupes fonctionnels de l’agent réticulant réagissent avec des groupements fonctionnels présents sur les polysaccharides de sorte à lier les chaines polysaccharidiques entre elles et à les réticuler en formant des liaisons intermoléculaires. L’agent réticulant peut également réagir avec des groupements fonctionnels présents sur une même molécule de polysaccharide de sorte à former des liaisons intramoléculaires. Notamment, les groupements fonctionnels de l’agent réticulant réagissent avec les groupes -OH ou -COOH, ou encore -CHO, présents sur les polysaccharides tels que l’acide hyaluronique. Des polysaccharides réticulés comprenant au moins un lien de réticulation entre deux chaines polysaccharidiques, ledit lien de réticulation étant le résidu de l’agent réticulant sont ainsi obtenus. La réticulation peut être réalisée en présence de plusieurs agents réticulant. Lorsque la réticulation est réalisée en présence de plusieurs agents réticulant, les agents réticulant peuvent être ajoutés de manière simultanée ou séparée dans le temps au milieu réactionnel. L’étape (a2) peut ainsi comprendre des étapes de réticulation répétées, avantageusement l’étape (a2) comprend une seule étape de réticulation. La réticulation est alors réalisée en présence d’une quantité totale d’agents réticulant allant typiquement de 0,1 à 10 moles, ou de 0,1 à 8 moles, ou de 0,1 à 6 moles, ou de 0,1 à 4 moles, ou de 0,1 à 3 moles, ou de 0,1 à 2 moles ou de 0,1 à 1 mole ou de 0,1 à 0,8 moles, ou de 0,1 à 0,5 moles d’agents réticulant (ou leurs sels) pour 100 moles d’unité de répétition du polysaccharide. Les conditions de réticulation, en particulier les teneurs en agent réticulant, durée et températures ainsi que les masses moléculaires moyennes en poids (Mw) du polysaccharide, utilisées sont interdépendantes. Plus la teneur en agent réticulant est faible, plus la durée de réaction doit être longue pour obtenir des propriétés mécaniques analogues du polysaccharide réticulé résultant, et in fine de l’hydrogel préparé. Autrement dit, plus le pourcentage molaire en agent réticulant est faible, moins il y a de fonctions réactives dans le milieu réactionnel et plus la probabilité que 2 groupes se rencontrent et réagissent ensemble est faible, ainsi plus la durée de réaction doit être longue pour permettre aux fonctions de réagir entre elles et former des liens de réticulation, et ainsi obtenir un polysaccharide réticulé, et in fine un hydrogel avec des propriétés souhaitables. Dans certains modes de réalisation, l’étape (a2) peut être réalisée en plaçant le milieu réactionnel directement obtenu à l’issue de l’étape (a1), à une température inférieure ou égale à 30°C, de préférence inférieure ou égale à 25°C. La température est typiquement supérieure à 0°C ou supérieure à 5°C ou encore supérieure à 10°C. De manière encore plus préférée, l’étape (a2) peut être réalisée en plaçant le milieu réactionnel directement obtenu à l’issue de l’étape (a1) à une température égale à la température ambiante. Lorsque l’étape (a2) est réalisée à une température inférieure ou égale à 30°C et supérieure à 0°C, la durée de réticulation est d’au moins 1 minute, de préférence d’au moins 10 minutes, de manière encore plus préférée d’au moins 1 heure. De préférence, la durée de réticulation est d’au plus 5 jours. Dans certains modes de réalisation, l’étape (a2) peut être réalisée en plaçant le milieu réactionnel directement obtenu à l’issue de l’étape (a1), à une température supérieure à 30°C, ou supérieure ou égale à 35°C, ou supérieure ou égale à 40°C, ou supérieure ou égale à 45°C, ou supérieure ou égale à 50°C. La température est typiquement inférieure à 60°C. Lorsque la température est supérieure à 30°C, la durée de l’étape de réticulation est au moins supérieure ou égale à 1 minute, de préférence au moins supérieure ou égale à 10 minutes, de manière encore plus préférée au moins 1 heure, de préférence comprise entre 1 heure et 5 heures. Dans certains modes de réalisation, l’étape (a2) peut être réalisée en plaçant le milieu réactionnel directement obtenu à l’issue de l’étape (a1), à une pression P inférieure ou égale à la pression atmosphérique et à une température T supérieure à la température du point eutectique du milieu réactionnel telle que mesurée à la pression P et inférieure à la température du point de congélation du milieu réactionnel telle que mesurée à la pression P, de préférence pendant une durée d’au moins 1 heure. Les hydrogels à base de polysaccharide réticulé préparés par un tel procédé sont hautement biocompatibles. En effet, les polysaccharides réticulés peuvent être préparés avec des quantités moindres d’agent réticulant, par exemples des quantités allant de 0,001 à 0,02 moles pour 1 moles d’unité de répétition du polysaccharide. La température du point de congélation du milieu réactionnel désigne la température à laquelle le mélange des composants du milieu réactionnel, à l’échelle macroscopique, se solidifie, c’est-à-dire qu’il devient non fluide. En dessous du point de congélation, le mélange est dans un état de congélation qui se caractérise par la coexistence de composants sous forme solide et liquide. L’état de congélation est maintenu jusqu’à la température du point eutectique du milieu réactionnel. La température du point eutectique du milieu réactionnel désigne la température en dessous de laquelle le mélange des composants du milieu réactionnel passe d’un état congelé (coexistence de phases liquides et solides) à un état complètement solide, c’est-à-dire un état dans lequel tous les composants du mélange sont sous forme solide. Le point de congélation et le point eutectique d’un mélange dépendent de la pression à laquelle le mélange est soumis donc le point de congélation et le point eutectique sont mesurés à la pression P. Le point de congélation et le point eutectique peuvent être déterminés par calorimétrie différentielle à balayage. Cette méthode permet de déterminer les transitions de phase. Pour cela, le produit à étudier est progressivement refroidi jusqu’à observer ses transitions de phases. La température T est de préférence supérieure ou égale à -55°C et inférieure ou égale à -5°C, de préférence elle va de -35°C à -10°C. De manière encore plus préférée, la température T est d’environ -20°C. La pression P est de préférence, la pression atmosphérique. La « pression atmosphérique » est la pression qu'exerce l’air constituant l’atmosphère sur une surface quelconque en contact avec elle. Elle varie en fonction de l’altitude. A une altitude de 0m, la pression moyenne atmosphérique est de 101 325 Pa. De préférence, la pression P est la pression atmosphérique et la température T est supérieure ou égale à -55°C et inférieure ou égale à -5°C, de préférence T varie de -35°C à -10°C ou est d’environ -20°C. De préférence, lors de l’étape (a2) de réticulation, lorsque la température T est supérieure ou égale à -55°C et inférieure ou égale à -5°C le milieu réactionnel obtenu à l’issue de l’étape (1) est placé pendant une durée d’au moins 1 heure, de préférence d’au moins 3 heures, de préférence d’au moins 72 heures, de préférence d’au plus 27 semaines. De préférence, l’étape (a2) de réticulation est conduite pendant une durée allant de 2 à 25 semaines, de préférence allant de 2 à 20 semaines ou 2 à 17 semaines, de manière encore plus préférée de 3 à 8 semaines ou 4 à 7 semaines et à la température T, à la pression P. A l’issue de l’étape (a2), le polysaccharide réticulé se présente typiquement sous forme de gel. Ce gel est généralement directement engagé dans la suite du procédé de l’invention (étape (1)). Les polysaccharides réticulés et/non réticulés décrits précédemment sont utiles pour la mise en œuvre des procédés de l’invention et ainsi préparer des hydrogels comprenant un polysaccharide réticulé et/ou non réticulé. Le polysaccharide réticulé, ou non réticulé, ou leur mélange, va constituer le réseau de polymères de l’hydrogel. L’hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé, ou non réticulé, ou leur mélange peut ainsi être dit être à base d’un polysaccharide réticulé, ou d’un polysaccharide non réticulé, ou de leur mélange. Un hydrogel comprenant, comme seul polysaccharide, un polysaccharide non réticulé, est préparé à partir d’un polysaccharide non réticulé. Un hydrogel comprenant, comme seul polysaccharide, un polysaccharide réticulé, est préparé à partir d’un polysaccharide réticulé. Lorsque l’hydrogel comprend le mélange d’un polysaccharide réticulé et non réticulé, l’hydrogel est préparé à partir d’un polysaccharide réticulé et d’un polysaccharide non réticulé. Le polysaccharide non réticulé est typiquement ajouté au polysaccharide réticulé au cours de la préparation de l’hydrogel. Préparation de l’hydrogel (étape (1)) Le procédé de la présente invention selon la méthode 1 comprend la préparation d’un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé et/ou non réticulé. La préparation de l’hydrogel comprend les étapes suivantes : - mise en contact du polysaccharide réticulé et/ou non réticulé avec une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges ; - addition d’ions zinc et citrates au polysaccharide réticulé et/ou non réticulé dans un ratio molaire ions citrates / ions zinc allant de 1 à 20 et en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrates d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel et une concentration en ions zinc d’au plus 20 mM dans l’hydrogel, à la condition que l’addition des ions zinc ne soit pas réalisée avant l’addition des ions citrates lorsque la mise en contact du polysaccharide réticulé et/ou non réticulé avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, est réalisée avant l’addition des ions citrates. Lorsque la solution physiologique saline est tamponnée, elle est taponnée par des sels de phosphate et/ou carbonate et/ou sulfate présente généralement un pH physiologique (6,8-7,8). Généralement, la solution physiologique saline tamponnée est une solution physiologique saline tamponnée comprenant des sels de phosphate, de préférence la solution physiologique saline tamponnée peut être un tampon phosphate. Le tampon phosphate peut être un tampon PBS avec un pH autour du pH physiologique (6,8-7,8) (CAS No: 7647-14-5, 7447-40-7). Préférentiellement, le tampon est un tampon phosphate, particulièrement un tampon de solution saline de NaH 2 PO 4 /Na 2 HPO 4 ou de KH 2 PO 4 /K 2 HPO 4 . Lors de la préparation d’un hydrogel, la mise en contact du polysaccharide réticulé et/ou non réticulé avec une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges peut se produire à différentes étapes. Par exemple, la mise en contact du polysaccharide réticulé et/ou non réticulé avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, peut se produire au moment de l’ajustement de la concentration en polysaccharide réticulé et/ou non réticulé dans l’hydrogel préparé. Cette étape est communément désignée « dilution ». Ainsi, lors de la préparation de l’hydrogel, une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges est typiquement ajoutée lors de la dilution. De manière alternative ou complémentaire, la mise en contact du polysaccharide réticulé et/ou non réticulé avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, peut se produire au moment de l’ajustement du pH ou encore au moment de l’addition d’un ou plusieurs composants additionnels (voir ci-après). De préférence, dans le procédé de la présente invention, la mise en contact avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges se fait au moins lors de l’étape d’ajustement de la concentration en polysaccharide réticulé et/ou non réticulé (dilution). La quantité d’ions citrates ajoutée permet d’atteindre une concentration en ions citrates dans l’hydrogel d’au moins 0,1 mM. De préférence, la quantité d’ions citrates ajoutée permet d’atteindre une concentration en ions citrates dans l’hydrogel variant de 0,1 à 20 mM ou de 0,1 à 15 mM ou de 0,3 à 15 mM ou de 0,5 à 15 mM ou de 1 à 10 mM ou de 1,5 à 10 mM ou de 2 à 10 mM ou de 3 à 10 mM ou de 3 à 8 mM ou encore de 5 à 8 mM. La quantité d’ions zinc ajoutée permet d’atteindre une concentration en ions zinc dans l’hydrogel n’excédant pas 20 mM, ou n’excédant pas 7 mM ou n’excédant pas 5 mM ou n’excédant pas 3,5 mM ou n’excédant pas 2 mM ou n’excédant pas 1,6 mM, ou n’excédant pas 1,15 mM, ou n’excédant pas 0,8 mM. La quantité d’ions zinc ajoutée permet d’atteindre une concentration en ions zinc dans l’hydrogel allant typiquement de 0,10 à 20 mM ou de 0,10 à 7 mM ou de 0,10 à 5 mM ou de 0,10 à 3,5 mM ou de 0,10 à 2 mM ou de 0,10 à 1,6mM, ou de 0,10 à 1,15 mM ou de 0,10 à 0,8 mM. Dans certains modes de réalisation, la quantité d’ions zinc ajoutée permet d’atteindre une concentration en ions zinc dans l’hydrogel allant de 0,10 à 1,6 mM, de manière plus préférée de 0,10 à 1,15 mM, de manière encore plus préférée de 0,1 à 0,8 mM, préférentiellement de 0,3 à 0,8 mM. Le ratio molaire ions citrates/zinc ajouté varie de 1 à 20, de préférence de 5 à 20 ou de 5 à 15 ou de 6 à 15 ou de 6 à 10. Les ions citrates et zinc peuvent être ajoutés avant ou après la mise en contact du polysaccharide réticulé et/ non réticulé avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges. Les ions citrates et zinc peuvent être ajoutés séquentiellement, que ce soit avant ou après la mise en contact du polysaccharide réticulé et/ non réticulé avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée. Par exemple, les ions citrates peuvent être ajoutés puis les ions zinc, ou les ions zinc peuvent être ajoutés puis les ions citrates. Néanmoins, l’addition des ions zinc avant l’addition des ions citrates ne peut se faire que lorsque l’addition des ions citrates et zinc est réalisée avant la mise en contact du polysaccharide réticulé et/ non réticulé avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée. De manière alternative, les ions citrates et zinc peuvent être ajoutés concomitamment, que ce soit avant ou après l’étape de mise en contact du polysaccharide réticulé et/ non réticulé avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée. Dans d’autres modes de réalisation, l’addition des ions citrates et zinc est concomitante à la mise en contact du polysaccharide réticulé et/ non réticulé avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée. Dans ce cas, la solution physiologique saline, de préférence tamponnée peut comprendre des sels de phosphate et/ou de carbonate et/ou de sulfate ou leurs mélanges, et comprendre en outre des ions citrates et zinc. Les ions citrates peuvent être ajoutés sous forme de poudre ou sous forme d’une solution. La solution peut être préparée par addition d’acide citrique dans de l’eau ou dans une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, par exemple dans une solution physiologique saline tamponnée comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges. Les ions zinc peuvent être ajoutés sous forme de poudre ou sous forme d’une solution. La solution peut être préparée par addition d’acétate de zinc et/ou de chlorure de zinc et/ou de sulfate de zinc et/ou d’oxyde de zinc et/ou de gluconate de zinc dans de l’eau. De manière préférée, les ions zinc et citrates peuvent être ajoutés sous forme d’une solution comprenant des ions zinc et citrates. Une solution comprenant à la fois des ions citrates et zinc est alors ajoutée lors de la préparation de l’hydrogel. La solution peut être préparée par addition d’acide citrique dans de l’eau puis addition de sels de zinc (ex. : acétate de zinc et/ou chlorure de zinc et/ou sulfate de zinc et/ou oxyde de zinc et/ou gluconate de zinc), de préférence par addition de chlorure de zinc. De manière alternative, la solution peut être préparée par addition d’acide citrique dans une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, puis addition de sels de zinc (ex. : acétate de zinc et/ou chlorure de zinc et/ou sulfate de zinc et/ou oxyde de zinc et/ou gluconate de zinc). De préférence, le sel de zinc est le chlorure de zinc. La solution physiologique tamponnée peut être par exemple un tampon phosphate. Le tampon phosphate peut être un tampon PBS avec un pH autour du pH physiologique (6,8-7,8) (CAS No: 7647-14-5, 7447-40-7). Préférentiellement le tampon est un tampon phosphate, particulièrement un tampon de solution saline de NaH 2 PO 4 /Na 2 HPO 4 ou de KH 2 PO 4 /K 2 HPO 4 . Au besoin, le pH de la solution peut être ajustée pour atteindre un pH physiologique (6,8-7,8), par exemple au moyen d’addition de soude. Ainsi, dans certains modes de réalisation, une solution tampon phosphate comprenant du zinc et de l’acide citrique, dont le pH varie de 6,8 à 7,8, est ajoutée lors de la préparation de l’hydrogel. La préparation d’un hydrogel à partir du polysaccharide réticulé et/ou non réticulé peut être réalisée de manière conventionnelle, à la différence près que des ions zinc et des ions citrates sont ajoutés lors de la préparation de l’hydrogel. Ainsi, la préparation d’un hydrogel à partir du polysaccharide réticulé et/ou non réticulé peut comprendre une ou plusieurs des étapes conventionnelles suivantes : Ajustement du pH (1); Dilution (2); Purification (3); Addition d’au moins un composant additionnel (4); Homogénéisation (5). Ces étapes bien connues de l’homme du métier peuvent être telles que décrites ci-après. Ces étapes bien connues de l’homme du métier peuvent être telles que décrites ci-après. Les étapes conventionnelles peuvent être réalisées de manière concomitante. Les étapes conventionnelles peuvent être réalisées de la manière séquentielle suivante : éventuel ajustement du pH (1) puis éventuelle dilution (2) puis éventuelle purification (3) puis éventuelle addition d’un composant additionnel (4) puis éventuelle homogénéisation (5). Elles peuvent être également réalisées dans un ordre différent. Avantageusement, l’étape d’homogénéisation (5) est réalisée en dernier lieu, lorsqu’au moins une des autres étapes conventionnelles est mise en œuvre. Elle peut aussi être effectuée à plusieurs reprises et s’intercaler entre les autres étapes conventionnelles décrites. Par exemple, étapes conventionnelles peuvent être réalisées de la manière séquentielle suivante : (1), (2), (3), (4), (5) ; ou (2), (1), (3), (4), (5); ou (2) (1), (4), (5) ; ou (2), (4), (5) ; ou (1), (4), (5) ; ou (2), (4), (3), (5) ; ou (2), (4), (1), (5) ; ou (2), (4), (5) ; ou (4), (2), (1) ; ou (4), (1), (2) ou (2), (3), (4), (5) ; ou (4), (2), (3), (5) ; ou (2), (4), (1) ; ou (1), (5), (3), (4) ; ou (1), (5), (4) ; ou (2), (4). Les étapes (2), (3), (4) et (5) peuvent être concomitantes. Par exemple, la préparation de l’hydrogel, peut comprendre la séquence suivante : (2) et (4) sont réalisées de manière concomitante. Les ions citrates (sous forme de poudre ou en solution) et zinc (sous forme de poudre ou en solution) peuvent être ajoutés au moment de, avant ou après l’une de ces étapes conventionnelles. Typiquement lorsque l’ajout d’ions citrates sous forme de poudre est réalisé, une neutralisation de l’effet des ions citrates sur le pH de l’hydrogel peut être réalisée. Les ions citrates et zinc sont de préférence ajoutés sous forme d’une solution comprenant des ions zinc et citrates. La solution est telle que décrite ci-dessus. Les ions citrates (sous forme de poudre ou en solution) et/ou les ions zinc (sous forme de poudre ou en solution) sont ajoutés de préférence lors de l’étape (2) ou (4), préférentiellement lors de l’étape (4). Les étapes (2) et (4) peuvent être réalisées concomitamment. Dans une variante, les ions citrates et/ou les ions zinc sont ajoutés avant l’étape d’homogénéisation (5) de façon à obtenir un gel homogène. Lorsqu’une étape de purification (3) est mise en œuvre, les ions citrates et/ou les ions zinc sont avantageusement ajoutés après l’étape de purification (3). L’addition des ions citrates et/ou les ions zinc après l’étape de purification assure un meilleur contrôle de la concentration en ions citrates et/ou les ions zinc dans l’hydrogel préparé. De préférence, les ions citrates et/ou les ions zinc sont ajoutés entre les étapes de purification (3) et d’homogénéisation (5). L’addition des ions citrates et zinc peut être réalisée après l’étape de dilution (2) ou lors de l’étape de dilution (2), par exemple les ions citrates peuvent être ajoutés dans le solvant aqueux de dilution. De préférence, les ions citrates sous forme de poudre ou en solution (avantageusement la solution comprenant des ions citrates) et/ou les ions zinc sont (est) ajouté(e)(s) lors de l’étape de dilution (2) et/ou lors de l’étape d’addition d’au moins d’un composant additionnel (4), préférentiellement lors de l’étape d’addition d’au moins d’un composant additionnel (4). En particulier, dans certains modes de réalisation, l’addition des ions citrates et/ou des ions zinc (avantageusement de la solution comprenant des ions citrates et zinc) est concomitante à l’étape d’addition d’au moins un composant additionnel (4). De préférence, les ions citrates sous forme de poudre ou en solution (avantageusement la solution comprenant des ions citrates) et/ou les ions zinc sont (est) ajouté(e)(s) lors de l’étape de dilution (2) et/ou lors de l’étape d’addition d’au moins d’un composant additionnel (4), préférentiellement lors de l’étape d’addition d’au moins d’un composant additionnel (4). En particulier, dans certains modes de réalisation, l’addition des ions citrates et/ou des ions zinc (avantageusement de la solution comprenant des ions citrates et zinc) est concomitante à l’étape d’addition d’au moins un composant additionnel (4). En particulier, dans certains modes de réalisation, l’addition des ions zinc et des ions citrates, de préférence sous forme d’une solution comprenant des ions citrates et zinc, est concomitante à l’addition d’une solution d’anesthésiant. En particulier, dans certains modes de réalisation, l’addition des ions zinc et des ions citrates, de préférence sous forme d’une solution comprenant des ions citrates et zinc, est concomitante à l’addition d’un agent lubrifiant. Dans certains modes de réalisation, la solution comprenant des ions zinc et des ions citrates ajoutée peut comprendre d’autres composants, en particulier un agent lubrifiant, par exemple de l’acide hyaluronique non réticulé, de l’héparosan non réticulé ou leur mélange. Les étapes de dilution (2), d’addition d’au moins d’un composant additionnel (4) et d’addition des ions citrates et/ou zinc peuvent être concomitantes. Les ions citrates et/ou zinc peuvent être ajoutés après l’étape de d'ajustement du pH (1). Les ions citrates peuvent être ajoutés entre les étapes de d'ajustement du pH (1) et d’homogénéisation (5) lorsque ces deux étapes sont mises en œuvre. Ajustement du pH (1) Le procédé de préparation de l’hydrogel peut comprendre une étape d’ajustement du pH de l’hydrogel pour atteindre le pH désiré (pH de 6,8-7,8). Dilution (2) Le procédé de préparation de l’hydrogel peut comprendre une étape de dilution du polysaccharide réticulé et/ou non réticulé. L’étape de dilution permet d’adapter la concentration en polysaccharide réticulé et/ou non réticulé dans l’hydrogel préparé. En particulier, un solvant aqueux est ajouté au polysaccharide réticulé et/ou non réticulé, par exemple, une solution physiologique saline, possiblement tamponnée par la présence de sels, tels que des sels phosphates ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges. Plus particulièrement, le solvant aqueux ajouté a un pH autour du pH physiologique (6,8-7,8). La concentration en polysaccharide obtenue suite à l’étape de dilution varie avantageusement de 1 mg/g à 50 mg/g d’hydrogel, plus avantageusement de 5 mg/g à 35 mg/g d’hydrogel, encore plus avantageusement de 10 mg/g à 30 mg/g d’hydrogel. Purification (3) Le procédé de préparation de l’hydrogel peut comprendre au moins une étape de purification. L’étape de purification vise à éliminer les éventuelles impuretés indésirables. Ces impuretés indésirables peuvent résulter de la réticulation du polysaccharide, par exemple de l’étape (a2) décrite ci-avant. De telles impuretés peuvent comprendre, par exemple, l’agent de réticulation résiduel, en particulier de type époxydique, qui n’aurait pas réagi. Cette étape peut également permettre d’effectuer un échange de liquide, par exemple un échange de tampon. L’étape de purification peut donc tout particulièrement être mise en œuvre lorsque l’hydrogel comprend un polysaccharide réticulé. La purification peut être réalisée par dialyse ou encore par filtration, par exemple par filtration tangentielle dynamique (« DCF » pour Dynamic Cross-flow Filtration). Addition de composants additionnels (4) Le procédé de préparation de l’hydrogel peut comprendre une étape d’ajout d’au moins un composant additionnel. Le composant additionnel peut être choisi parmi les agents anesthésiants, les antioxydants, les agents lubrifiants, les acides aminés, les peptides, les protéines, les vitamines, les minéraux, les acides nucléiques, les nucléotides, les nucléosides, les co-enzymes, les dérivés adrénergiques, le dihydrogénophosphate de sodium mono-hydraté et/ou di-hydraté, le chlorure de sodium et un de leurs mélanges. Les polysaccharides non réticulés, en particulier l’acide hyaluronique non réticulé, l’héparosan non réticulé ou leur mélange, peuvent être cités à titre d’exemple d’agent lubrifiant. Des exemples d’anesthésiants incluent de manière non limitative l’Ambucaïne, l’Amoxécaïne, l’Amyléine, l’Aprindine, l’Aptocaïne, l’Articaïne, la Benzocaïne, la Bétoxycaïne, la Bupivacaïne, la Butacaïne, le Butamben, la Butanilicaïne, le Chlorobutanol, la Chloroprocaïne, la Cinchocaïne, la Clodacaïne, la Cocaïne, la Cryofluorane, la Cyclométhycaïne, la Dexivacaïne, la Diamocaïne, le Dipérodon, la Dyclonine, l’Etidocaïne, l’Euprocine, la Fébuvérine, la Fomocaïne, le Guafécaïnol, l’Heptacaïne, l’Hexylcaïne, l’Hydroxyprocaïne, l’Hydroxytétracaïne, l’Isobutamben, la Leucinocaïne, la Lévobupivacaïne, le Lévoxadrol, le Lidamidine, la Lidocaïne, la Lotucaïne, le Menglytate, la Mépivacaïne, la Méprylcaïne, la Myrtécaïne, l’Octacaïne, l’Octodrine, l’Oxétacaïne, l’Oxybuprocaïne, la Paréthoxycaïne, la Paridocaïne, la Phénacaïne, la Pipérocaïne, la Piridocaïne, le Polidocanol, la Pramocaïne, la Prilocaïne, la Procaïne, la Propanocaïne, la Propipocaïne, la Propoxycaïne, la Proxymétacaïne, la Pyrrocaïne, la Quatacaïne, la Quinisocaïne, la Risocaïne, la Rodocaïne, la Ropivacaïne, la Tétracaïne, la Tolycaïne, la Trimécaïne, et un de leurs sels, en particulier un sel de chlorhydrate, ou un mélange de ceux-ci. De préférence, l’hydrogel selon l’invention comprend un agent anesthésiant tel que défini ci-dessus et en particulier la lidocaïne, la mépivacaïne ou l’un de leurs sels tel que le chlorhydrate. Des exemples d’antioxydants incluent de manière non limitative le glutathion, le glutathion réduit, l’acide ellagique, la spermine, le resvératrol, le rétinol, la L-carnitine, les polyols, les polyphénols, les flavonols, les théaflavines, les catéchines, la caféine, l’ubiquinol, l’ubiquinone, l’acide alpha-lipoïque et leurs dérivés, et un mélange de ceux-ci. Des exemples d’acides aminés incluent de manière non limitative l’arginine (e.g., L-arginine), l’isoleucine (e.g., L-isoleucine), la leucine (e.g., L-leucine), la lysine (e.g., L-lysine ou L-lysine monohydratée), la glycine, la valine (e.g., L-valine), la thréonine (e.g., L-thréonine), la proline (e.g., L-proline), la méthionine, l’histidine, la phénylalanine, le tryptophane, la cystéine, leurs dérivés (e.g., dérivés N-acétylés comme la N-acétyl-L-cystéine) et un mélange de ceux-ci. Des exemples de vitamines et de leurs sels incluent de manière non limitative les vitamines E, A, C, B, spécialement les vitamines B6, B8, B4, B5, B9, B7, B12, et mieux la pyridoxine et ses dérivées et/ou sels, de préférence le chlorhydrate de pyridoxine. Des exemples de minéraux incluent de manière non limitative les sels de zinc (par exemple l’acétate de zinc, notamment déshydraté), les sels de magnésium, les sels de calcium (par exemple l’hydroxyapatite, notamment sous forme de bille), les sels de potassium, les sels de manganèse, les sels de sodium, les sels de cuivre (par exemple le sulfate de cuivre, notamment pentahydraté), éventuellement sous une forme hydratée, et les mélanges de ceux-ci. Des exemples d’acides nucléiques incluent de manière non limitative l’adénosine, la cytidine, la guanosine, la thymidine, la cytodine, leurs dérivés et un mélange de ceux-ci. En tant que co-enzymes, la coenzyme Q10, la CoA, le NAD, le NADP, et les mélanges de ceux-ci peuvent être cités. En tant que dérivés d’adrénaline, l’adrénaline, la noradrénaline et un mélange de ceux-ci, peuvent être cités. Homogénéisation (5) Le procédé de préparation de l’hydrogel peut comprendre une ou plusieurs étapes d’homogénéisation. Cette étape d’homogénéisation permet d’obtenir un hydrogel plus homogène, en particulier avec une force d’extrusion la plus constante possible, i.e ., la plus régulière possible. Par exemple, l’étape d’homogénéisation peut consister en une étape d’extrusion, plus particulièrement au moyen d’un tamis dont les performations présentent un diamètre compris entre 50 et 2000 µm. L’homme du métier sait sélectionner le diamètre de perforation en fonction des propriétés mécaniques de l’hydrogel recherchées. Stérilisation de l’hydrogel (étape (2)) Le procédé de la présente invention comprend une étape de stérilisation de l’hydrogel préparé. La stérilisation est réalisée de préférence par la chaleur, par exemple en autoclave. La stérilisation est généralement effectuée en augmentant la température du milieu de stérilisation jusqu’à une température dite « température au plateau », qui est maintenue pendant une durée déterminée dite « durée au plateau ». La stérilisation est de préférence réalisée à une température au plateau allant de 121°C à 135°C, de préférence à une durée au plateau allant de 1 minute à 20 minutes avec F0 ≥ 15. La valeur stérilisatrice F0 correspond au temps nécessaire, en minutes, à 121°C, pour inactiver 90% de la population de microorganismes présente dans le produit à stériliser. Alternativement, la stérilisation peut être notamment réalisée par radiation aux rayons gamma, UV ou au moyen oxyde d’éthylène. L’hydrogel obtenu à l’issue du procédé présente typiquement un pH allant de 6,8 à 7,8 (pH physiologique). Méthode 2 La présente invention porte également sur un procédé de préparation d’un hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé et éventuellement un polysaccharide non réticulé, et comprenant en outre des ions zinc, le procédé comprenant les étapes suivantes : (0) préparation d’un polysaccharide réticulé à partir d’un milieu réactionnel de réticulation comprenant un ou plusieurs polysaccharide(s), un ou plusieurs agent(s) réticulant, un solvant et des ions zinc en une quantité permettant la préparation d’un hydrogel comprenant au plus 20 mM d’ions zinc ; (1) préparation d’un hydrogel à partir du polysaccharide réticulé obtenu à l’issue de l’étape (0) et éventuellement d’un polysaccharide non réticulé, la préparation de l’hydrogel comprenant la mise en contact du polysaccharide réticulé avec une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges ; (2) stérilisation, de préférence à la chaleur, de l’hydrogel obtenu à l’issue de l’étape (1) pour obtenir un hydrogel stérile ; dans lequel : - le milieu réactionnel de réticulation comprend en outre des ions citrates en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrates d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel, le ratio molaire [ions citrates présents dans le milieu réactionnel] / [ions zinc présents dans le milieu réactionnel] allant de 1 à 20 ; ou - l’étape (1) comprend en outre, avant la mise en contact du polysaccharide réticulé avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, une étape d’addition d’ions citrates en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrate d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel, le ratio molaire [ions citrates ajoutés] / [ions zinc présents dans le milieu réactionnel] allant de 1 à 20 ; ou - la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprend en outre des ions citrates en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrates d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel, le ratio molaire [ions citrates présents dans la solution physiologique saline, de préférence tamponnée] / [ions zinc présents dans le milieu réactionnel] allant de 1 à 20. Le polysaccharide réticulé peut en particulier être préparé par un procédé comprenant les étapes suivantes : (a1) préparer un milieu réactionnel de réticulation comprenant un ou plusieurs polysaccharide(s), un ou plusieurs agent(s) réticulant, un solvant, des ions zinc en une quantité permettant la préparation d’un hydrogel comprenant au plus 20 mM d’ions zinc et éventuellement des ions citrates en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrates d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel ; et (a2) faire réagir le milieu réactionnel pour obtenir un polysaccharide réticulé. Les étapes (0), (a1) et (a2) du procédé selon la méthode 2 sont telles que décrites précédemment dans la section « Le polysaccharide réticulé et/ou non réticulé », à la différence que le milieu réactionnel de réticulation comprend en outre des ions zinc et éventuellement des ions citrates. Lorsque les ions citrates ne sont pas présents dans le milieu réactionnel de réticulation, ils sont ajoutés avant l’étape de mise en contact du polysaccharide réticulé avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée ou dans la solution physiologique saline, de préférence tamponnée. Le polysaccharide est tel que décrit dans la section « Le polysaccharide réticulé et/ou non réticulé ». Les ions zinc sont présents dans le milieu réactionnel en une quantité permettant de ne pas excéder une concentration en ions zinc dans l’hydrogel de 20mM, ou de 7 mM ou de 5 mM ou de 3,5 mM ou de 2 mM ou de 1,6mM, ou de 1,15 mM, ou de 0,8 mM. Les ions zinc sont typiquement présents dans le milieu réactionnel en une quantité permettant d’atteindre une concentration en ions zinc dans l’hydrogel variant de 0,10 à 20mM ou de 0,10 à 7 mM ou de 0,10 à 5 mM ou de 0,10 à 3,5 mM ou de 0,10 à 2 mM ou de 0,10 à 1,6mM, ou de 0,10 à 1,15 mM ou de 0,10 à 0,8 mM. Dans certains modes de réalisation, les ions zinc sont présents dans le milieu réactionnel en une quantité permettant d’atteindre une concentration en ions zinc dans l’hydrogel variant de 0,10 à 1,6 mM, de manière plus préférée de 0,10 à 1,15 mM, de manière encore plus préférée de 0,1 à 0,8 mM, préférentiellement de 0,3 à 0,8 mM. Lorsque les ions citrates sont présents dans le milieu réactionnel, ils sont présents en une quantité permettant d’atteindre une concentration en ions citrates dans l’hydrogel d’au moins 0,1 mM et généralement d’au plus 20 mM ou 15 mM. De préférence, ils sont présents en une quantité permettant d’atteindre une concentration en ions citrates dans l’hydrogel variant de 0,1 à 15 mM ou de 0,3 à 15 mM ou de 0,5 à 15 mM ou de 1 à 10 mM ou de 1,5 à 10 mM ou de 2 à 10 mM ou de 3 à 10 mM ou de 3 à 8 mM ou encore de 5 à 8 mM. Lorsque les ions citrates ne sont pas présents dans le milieu réactionnel, ils sont ajoutés avant la mise en contact avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, ou dans la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, en une quantité suffisante pour atteindre les concentrations indiquées ci-dessus. Le ratio molaire [ions citrates présents dans le milieu réactionnel] / [ions zinc présents dans le milieu réactionnel] ou [ions citrates ajoutés]/[ions zinc présents dans le milieu réactionnel] ou [ions citrates présents dans la solution physiologique saline, de préférence tamponnée] / [ions zinc présents dans le milieu réactionnel] varie de 1 à 20, de préférence de 5 à 20 ou de 5 à 15 ou de 6 à 15 ou de 6 à 10. Les ions zinc présents dans le milieu réactionnel peuvent résulter de l’addition de sels de zinc au milieu réactionnel tels que le sulfate de zinc, chlorure de zinc, le gluconate de zinc, préférentiellement le chlorure de zinc. Les ions citrates présents dans le milieu réactionnel peuvent résulter de l’addition d’acide citrique, sous forme de poudre ou sous forme d’une solution aqueuse au milieu réactionnel. Lorsque les ions citrates ne sont pas présents dans le milieu réactionnel, ils sont ajoutés avant l’étape de mise en contact avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, ou dans la solution physiologique saline, de préférence tamponnée. Ils peuvent être ajoutés sous forme d’une solution. La solution peut être préparée par addition d’acide citrique dans de l’eau ou dans une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, par exemple une solution saline, de préférence tamponnée comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges. Dans d’autres modes de réalisation, la solution physiologique saline, de préférence tamponnée ajoutée lors de la préparation de l’hydrogel comprend des ions citrates. A l’issue de l’étape (0) ou (a2), le polysaccharide réticulé se présente typiquement sous forme d’un gel comprenant des ions zinc, et éventuellement des ions citrates. Ce gel est généralement directement engagé dans la suite du procédé de l’invention (étape (1)). La préparation d’un hydrogel (étape (1)) à partir du polysaccharide réticulé obtenu à l’issue de l’étape (0) ou (a2) peut être réalisée de manière conventionnelle. En particulier, la préparation d’un hydrogel à partir du polysaccharide réticulé obtenu à l’issue de l’étape (0) ou (a2) comprend typiquement une ou plusieurs des étapes conventionnelles suivantes : Ajustement du pH (1); Dilution (2); Purification (3); Addition d’au moins un composant additionnel (4); Homogénéisation (5). Ces étapes bien connues de l’homme du métier peuvent être telles que décrites ci-avant en relation avec la méthode 1. Elles peuvent être mises en œuvre selon les manières séquentielles décrites précédemment. La stérilisation (étape (2)) est telle que décrite en relation avec l’étape (2) de la méthode 1. Méthode 1 ou 2 : Etape optionnelle Le procédé de la présente invention (méthode 1 ou 2) peut en outre comprendre une étape de conditionnement de l’hydrogel. Le conditionnement de l’hydrogel est typiquement réalisé dans un dispositif d’injection. Le conditionnement est de préférence réalisé juste avant l’étape de stérilisation (étape (2)). Ainsi, l’hydrogel stérile peut se présenter sous forme d’un dispositif d’injection pré-rempli avec l’hydrogel, par exemple une seringue pré-remplie avec l’hydrogel. Hydrogel stérile La présente invention porte également sur un hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé et/ou non réticulé obtenu ou susceptible d’être obtenu par le procédé de la présente invention (méthode 1 ou 2). L’hydrogel stérile comprend des ions zinc et des ions citrates dans un ratio molaire ions citrates/ions zinc allant de 1 à 20, la concentration en ions citrates dans l’hydrogel étant d’au moins 0,1 mM et la concentration en zinc dans l’hydrogel n’excédant pas 20 mM. De préférence, la concentration en ions zinc dans l’hydrogel varie de 0,10 à 20mM ou de 0,10 à 7 mM ou de 0,10 à 5 mM ou de 0,10 à 3,5 mM ou de 0,10 à 2 mM ou de 0,10 à 1,6 mM, ou de 0,10 à 1,15 mM ou de 0,10 à 0,8 mM. Dans certains modes de réalisation, la concentration en ions zinc dans l’hydrogel varie de 0,10 à 1,6 mM, de manière plus préférée de 0,10 à 1,15 mM, de manière encore plus préférée de 0,1 à 0,8 mM, préférentiellement de 0,3 à 0,8 mM. De préférence, la concentration en ions citrates dans l’hydrogel varie de 0,1 à 20 mM ou de 0,1 à 15 mM ou 0,3 à 15 mM ou de 0,5 à 15 mM ou de 1 à 10 mM ou de 1,5 à 10 mM ou de 2 à 10 mM ou de 3 à 10 mM ou de 3 à 8 mM ou encore de 5 à 8 mM. L’hydrogel stérile obtenu ou susceptible d’être obtenu par le procédé de la présente invention (méthode 1 ou 2) a un pH physiologique, i.e., allant de 6,8 à 7,8. Le pH de l‘hydrogel stérile est de préférence supérieur ou égal à 6.9 et inférieur ou égal à 7,4 ; 7,3 ; 7,2 ;7,1 ou 7. L’hydrogel stérile obtenu par le procédé de la présente invention (méthode 1 ou 2) et comprenant un polysaccharide réticulé, possède avantageusement un angle de phase δ inférieur ou égal à 45°, à 1Hz pour une déformation de 0,1% ou une pression de 1 Pa, de préférence un angle de phase δ allant de 2° à 45° ou allant de 20° à 45°. L’hydrogel obtenu ou susceptible d’être obtenu par le procédé de la présente invention est de préférence un hydrogel injectable, c’est-à-dire qui peut s’écouler et être injecté manuellement au moyen d’une seringue munie d'une aiguille de diamètre allant de 0,1 à 0,5 mm, par exemple d’une aiguille hypodermique de 32G, 30 G, 27 G, 26 G, 25 G. L’hydrogel obtenu ou susceptible d’être obtenu par le procédé de la présente invention peut comprendre de 0,1 à 5% en poids, de préférence de 1 à 3% en poids, de polysaccharide (poids total de polysaccharide, c’est-à-dire poids total de polysaccharide réticulé et/ou non réticulé, par exemple d’acide hyaluronique réticulé et/ou non réticulé), par rapport au poids total de l’hydrogel. Ainsi, lorsque l’hydrogel comprend, comme seul polysaccharide, un polysaccharide non réticulé, l’hydrogel obtenu par le procédé de la présente invention peut donc comprendre de 0,1 à 5% en poids, de préférence de 1 à 3% en poids, de polysaccharide non réticulé (par exemple d’acide hyaluronique non réticulé), par rapport au poids total de l’hydrogel. Lorsque l’hydrogel comprenant, comme seul polysaccharide, un polysaccharide réticulé, l’hydrogel obtenu par le procédé de la présente invention peut donc comprendre de 0,1 à 5% en poids, de préférence de 1 à 3% en poids, de polysaccharide réticulé (par exemple d’acide hyaluronique réticulé), par rapport au poids total de l’hydrogel. Lorsque l’hydrogel comprend le mélange d’un polysaccharide réticulé et non réticulé, l’hydrogel obtenu par le procédé de la présente invention peut donc comprendre de 0,1 à 5% en poids, de préférence de 1 à 3% en poids, d’un mélange de polysaccharide non réticulé et réticulé (par exemple d’acide hyaluronique non réticulé et/ou réticulé), par rapport au poids total de l’hydrogel. En particulier, la teneur en polysaccharide (par exemple en acide hyaluronique) non réticulé peut varier de 0,5 à 40% en poids, préférentiellement de 1 à 40% en poids, plus préférentiellement de 5 à 30% en poids, par rapport au poids total de polysaccharide (par exemple d’acide hyaluronique) présent dans l’hydrogel. La concentration en polysaccharide totale dans l’hydrogel obtenu par le procédé de la présente invention varie avantageusement de 1 mg/g à 50 mg/g d’hydrogel, plus avantageusement de 5 mg/g à 35 mg/g d’hydrogel, encore plus avantageusement de 10 mg/g à 30 mg/g d’hydrogel. Préférablement le polysaccharide est de l’acide hyaluronique, encore plus préférentiellement du hyaluronate de sodium. La concentration en polysaccharide totale dans l’hydrogel obtenu par le procédé de la présente invention varie avantageusement de 1 mg/g à 50 mg/g d’hydrogel, plus avantageusement de 5 mg/g à 35 mg/g d’hydrogel, encore plus avantageusement de 10 mg/g à 30 mg/g d’hydrogel. Préférablement le polysaccharide est de l’acide hyaluronique, encore plus préférentiellement du hyaluronate de sodium. Lorsque l’hydrogel comprend un polysaccharide réticulé, le polysaccharide réticulé présente de préférence un taux de réticulation molaire inférieur ou égal à 10%. Préférentiellement, l’hydrogel comprend un polysaccharide réticulé dont le taux de réticulation molaire est supérieur à 0 et inférieur ou égal à 6%. Encore plus préférentiellement, l’hydrogel comprend un polysaccharide réticulé dont le taux de réticulation molaire est supérieur à 0 et inférieur ou égal à 4%. De manière encore plus préférée, l’hydrogel comprend un polysaccharide réticulé dont le taux de réticulation molaire est supérieur à 0 et inférieur ou égal à 2%, de préférence inférieur ou égal à 1%, encore préférentiellement inférieur ou égal à 0,8%, notamment allant de 0,1% à 0,5% (nombre de moles d’agent(s) réticulant pour 100 moles d’unité de répétition du ou des polysaccharides). Lorsque l’hydrogel comprend un polysaccharide réticulé, le polysaccharide réticulé présente de préférence un degré de modification (MOD) inférieur ou égal à 10%, de préférence inférieur ou égal à 6%, de préférence inférieur ou égal à 4%, de manière préférée inférieur ou égal à 2%, de manière plus préférée inférieur ou égal à 1%. Avantageusement, le polysaccharide réticulé présente un degré de modification (MOD) inférieur ou égal à 1,8%, de manière plus préférée inférieur ou égal à 1,5%, préférentiellement inférieur ou égal à 1,2%, encore plus préférentiellement inférieur à 1%. Dans certains modes de réalisation, l’hydrogel comprend un agent anesthésiant. L’agent anesthésiant peut être tel que décrit ci-dessus, en particulier l’agent anesthésiant peut être la mépivacaïne, la lidocaïne ou un de leurs sels ; plus particulièrement sous forme d’un sel de chlorhydrate ; préférablement dans des quantités allant de 0,1 à 30 mg/ml, par exemple de 0,5 à 10 mg/ml ou plus préférentiellement de 2 à 6 mg/ml. Les hydrogels stériles préparés selon le procédé de l’invention sont tout particulièrement utiles pour le comblement et/ou le remplacement de tissus, en particulier de tissus mous, notamment par injection de l’hydrogel dans le tissu. Outre le comblement des tissus mous, ils permettent de délivrer des effets biostimulants. Ils peuvent être injectés en utilisant l’un quelconque des modes connus de l'homme du métier. Notamment, ils peuvent être administrés au moyen d'un dispositif d'injection adapté à une injection intra-épidermique et/ou intradermique et/ou sous-cutanée et/ou supra-périostée. Le dispositif d'injection peut notamment être choisi parmi une seringue, un ensemble de micro-seringues, un fil, un dispositif laser ou hydraulique, un pistolet d'injection, un dispositif d'injection sans aiguille, ou un rouleau à micro-aiguilles. Les hydrogels stériles préparés selon le procédé de l’invention sont de préférence injectés en sous-cutané. Ils peuvent concerner des applications profondes, des applications médianes et/ou des applications superficielles. Ils peuvent avoir des applications thérapeutiques et/ou cosmétiques et/ou cosméceutiques. Dans le domaine cosmétique, les hydrogels peuvent tout particulièrement être utiles pour compenser des pertes de volume des tissus dues au vieillissement. Ils peuvent être utilisés dans la prévention et/ou le traitement cosmétique d’une altération de l’aspect de surface de la peau. Par exemple, les hydrogels peuvent être utilisés dans le domaine cosmétique pour prévenir et/ou traiter l’altération des propriétés viscoélastiques ou biomécaniques de la peau ; pour combler des défauts volumiques de la peau, notamment pour combler des rides, des ridules et des cicatrices ; pour atténuer les sillons naso-géniens et plis d’amertumes ; pour augmenter le volume des pommettes, du menton ou des lèvres ; pour rétablir les volumes du visage, notamment des joues, des tempes, de l’ovale du visage, et du pourtour de l’œil ; pour réduire l’apparition des rides et ridules. La présente invention porte également sur l’utilisation cosmétique d’un hydrogel tel que décrit précédemment pour le comblement des tissus, en particulier des tissus mous, en particulier pour compenser des pertes de volume des tissus dues au vieillissement. Les exemples qui suivent sont donnés à titre illustratif, mais ne doivent en aucun cas être considérés comme limitatifs de la présente invention. EXEMPLES 1. Matériels - Hyaluronate de sodium non réticulé - BDDE (Sigma Aldrich) - Acide citrique (Sigma Aldrich) - Chlorure de zinc (Sigma Aldrich) - Zinc citrate commercial (CAS 5990-32-9 – Thermo Fisher) - NaOH 0,25M - HCl 1M - Tampon Phosphate PBS (BBraun), - Chlorhydrate de Lidocaïne - Agitateur tridimensionnel - Rhéomètre DHR-2 - Dynamomètre et banc d’essai - Homogénéisateur Broyeur à palettes - Poche stérile en polyéthylène 2. Méthodes Mesure des propriétés viscoélastiques Les propriétés viscoélastiques des hydrogels obtenus ont été mesurées en utilisant un rhéomètre (DHR-2) ayant un cône en acier inoxydable (1° - 40 mm) à géométrie cône-plan et un plan peltier en aluminium anodisé (42 mm) (entrefer 24 μm). 0,5 g d’hydrogel stérilisé est déposé entre le plan peltier et ledit cône. Puis un balayage en contraintes est effectué à 1 Hz et 25°C. Le module élastique G’, le module visqueux G’’ et l’angle de phase δ sont reportés pour une contrainte de 5 Pa. Les mesures sont réalisées dans le domaine linéaire LVER. La contrainte au croisement de G’ et G’’, τ, est déterminée au croisement des courbes des modules G’ et G’’ et est exprimée en Pascal. 3. Exemples 3.1 Exemple 1a Un hydrogel d’acide hyaluronique réticulé est préparé à partir d’un acide hyaluronique de haut poids moléculaire 4 MDa et du BDDE dans une solution aqueuse de soude à 0,25M. Le polysaccharide réticulé présente un taux de réticulation de 2% et une concentration de 15 mg d'acide hyaluronique par gramme d’hydrogel. Du tampon phosphate et une solution d’HCl 1N est ensuite ajoutée au polysaccharide réticulé jusqu’à obtenir un pH de 7,3 ± 0,5. L’hydrogel obtenu est homogénéisé au moyen d’un agitateur tridimensionnel. L’hydrogel est dialysé. Aux hydrogels obtenus, sont ensuite ajoutées : - une solution de hyaluronate de sodium de haut poids moléculaire en tant que lubrifiant (même quantité dans les différents mélanges) ; - une solution aqueuse de chlorhydrate de lidocaïne pour obtenir 0,3% en poids de chlorhydrate de lidocaïne par rapport au poids de l’hydrogel final ; - éventuellement une solution comprenant du zinc et des ions citrates. La solution comprenant du zinc et des ions citrates est préparée comme suit. L'acide citrique (sous forme de poudre) est d'abord dissout dans du tampon phosphate puis le chlorure de zinc est dissout (poudre de ZnCl 2 ) et enfin du NaOH 5M est ajouté pour ajuster le pH à un niveau physiologique. L'objectif est de faire une solution concentrée 100 fois (en zinc et en ions citrates) par rapport à la concentration réelle souhaitée dans l’hydrogel final. Cela permet d'éviter un trop fort effet de dilution de l’hydrogel dû à l'ajout de la solution de zinc et d’acide citrique. La solution comprenant du zinc et des ions citrates est ajoutée au même moment que la solution d'anesthésiant, et ce après addition de la solution de hyaluronate de sodium de haut poids moléculaire. Les hydrogels obtenus ont été tamisés puis conditionnés en seringue. Enfin, les hydrogels obtenus ont été stérilisés à l’autoclave (température au plateau comprise entre 121°C et 135°C avec F0 ≥ 15). Après stérilisation, les hydrogels A1-A6 ont été analysés. Aucun hydrogel ne présente une précipitation. Le module élastique G’ et l’angle de phase δ ont été déterminés. Les résultats sont présentés dans le Tableau 1 ci-dessous. Les hydrogels présentent un taux de réticulation molaire de 2%. Hydrogels A1 A2 A3 A4 A5 A6 Concentration molaire en ions citrates dans l’hydrogel final (mM) 0,00 0,77 2,30 3,83 5,74 7,65 Pourcentage massique en ions citrates dans l’hydrogel final (%w/w) 0,00 0,02 0,05 0,08 0,12 0,16 Concentration molaire en zinc dans l’hydrogel final (mM) 0,00 0,15 0,46 0,77 1,15 1,53 Pourcentage massique en zinc dans l’hydrogel final (%w/w) 0,00 0,0010 0,00300 0,0050 0,0075 0,0100 G’ (1 Hz) avant stérilisation 127,7 125,8 129,1 125,5 124,6 123,3 δ avant stérilisation 14,0 14,8 13,6 14,9 15,3 15,5 ΔG’ (%) 1 -40,0 -36,5 -29,2 -22,5 -23,2 -18,2 Δ δ (%) 2 50,3 42,2 34,8 27,0 26 22,2 Tableau 1 1 ΔG’ (%)= (G’ après stérilisation – G’ avant stérilisation)/(G’ avant stérilisation) *100 2 Δ δ (%)= (δ après stérilisation – δ avant stérilisation)/( δ avant stérilisation) *100 Il est observé que les hydrogels préparés à partir d’un procédé selon l’invention comprenant une étape d’addition d’une solution comprenant des ions zinc et des ions citrates présentent des modifications moindres de leurs propriétés rhéologiques après stérilisation par rapport à des hydrogels préparés par un procédé équivalent sans addition d’une telle solution. 3.2 Exemple 1b Un hydrogel d’acide hyaluronique réticulé est préparé à partir d’un acide hyaluronique de haut poids moléculaire 4MDa et du BDDE dans une solution aqueuse de soude à 0,25M. Le polysaccharide réticulé présente un taux de modification de 2% et une concentration de 15 mg d'acide hyaluronique par gramme de produit. Du tampon phosphate PBS et une solution d’HCl 1N est ensuite ajoutée au polysaccharide réticulé jusqu’à obtenir un pH de 7,3 ± 0,5. L’hydrogel obtenu est homogénéisé au moyen d’un agitateur tridimensionnel. L’hydrogel est dialysé. Aux hydrogels obtenus, sont ensuite ajoutées : - une solution de hyaluronate de sodium de haut poids moléculaire non réticulé en tant que lubrifiant (même quantité dans les différents mélanges) ; - éventuellement une solution comprenant du zinc et des ions citrates. La solution comprenant du zinc et des ions citrates est préparée comme suit. L'acide citrique (sous forme de poudre) est d'abord dissout dans du tampon phosphate puis le chlorure de zinc est dissout (poudre de ZnCl 2 ) et enfin du NaOH 5M est ajouté pour ajuster le pH à un niveau physiologique. L'objectif est de faire une solution concentrée 100 fois (en zinc et en ions citrates) par rapport à la concentration réelle souhaitée dans l’hydrogel final. Cela permet d'éviter un trop fort effet de dilution de l’hydrogel dû à l'ajout de la solution de zinc et d’acide citrique. La solution comprenant du zinc et des ions citrates est ajoutée après addition de la solution de hyaluronate de sodium de haut poids moléculaire. Les hydrogels obtenus ont été tamisés puis conditionnés en seringue. Enfin, les hydrogels obtenus sont stérilisés à l’autoclave (température au plateau comprise entre 121°C et 135°C avec F0 ≥ 15). Après stérilisation, les hydrogels B1-B4 ont été analysés. Aucun hydrogel ne présente une précipitation. Le module élastique G’, l’angle de phase δ et la contrainte au croisement de G’ et G’’, τ ont été déterminés. Les résultats sont présentés dans le Tableau 2 ci-dessous. Les hydrogels présentent un taux de réticulation molaire de 2%. Hydrogels B1 B2 B3 B4 Acide citrique Concentration molaire en ions citrates dans l’hydrogel final (mM) 0,00 1,53 4,59 7,65 Pourcentage massique en ions citrate dans l’hydrogel final (%w/w) 0,00 0,03 0,10 0,16 Zinc Concentration molaire zinc dans l’hydrogel final (mM) 0,00 1,53 1,53 1,53 Pourcentage massique zinc dans l’hydrogel final (%w/w) 0,00 0,01 0,01 0,01 G’ (1 Hz) avant stérilisation 137,8 134,7 132,5 133,7 δ avant stérilisation 13,8 14,8 16,2 15,4 ΔG’ (%) 1 -40,8 -28,4 -24,6 -19,7 Δ δ (%) 2 49,6 28,0 13,9 15,8 Tableau 2 1 ΔG’ (%)= (G’ après stérilisation – G’ avant stérilisation)/(G’ avant stérilisation) *100 2 Δ δ (%)= (δ après stérilisation – δ avant stérilisation)/( δ avant stérilisation) *100 Il est observé que les hydrogels préparés à partir d’un procédé selon l’invention comprenant une étape d’addition d’une solution comprenant du zinc et des ions citrates présentent des modifications moindres de leurs propriétés rhéologiques après stérilisation par rapport à des hydrogels préparés par un procédé équivalent sans addition d’une telle solution. Par ailleurs, il a été observé que l’addition d’une solution comprenant du zinc et des ions citrates permet de préserver la structure des hydrogels de la dégradation au cours du temps (tableau 3). Hydrogels B1 B4 G’ (1 Hz) à T0 mois 81,5 107,3 G’ (1 Hz) T3 mois 71,0 106,0 G’ (1 Hz) T6 mois 59,2 97,0 ΔG’ (%) 1 à 3 mois -12,9 -1,2 ΔG’ (%) 2 à 6 mois -27,4 -9,6 Tableau 3 1 ΔG’ (%)= (G’ T3mois – G’ T0)/(G’ T0) *100 2 ΔG’ (%)= (G’ T6mois – G’ T0)/(G’ T0) *100 Après 3 mois et 6 mois à 40°C, les hydrogels préparés à partir d’un procédé selon l’invention comprenant une étape d’addition d’une solution comprenant du zinc et des ions citrates présentent des modifications moindres de leurs propriétés rhéologiques après stérilisation par rapport à des hydrogels préparés par un procédé équivalent sans addition d’une telle solution. Pour l’hydrogel B4 préparé à partir d’un procédé selon l’invention comprenant une étape d’addition d’une solution comprenant du zinc et des ions citrates aucune précipitation n’est observée ni au bout de 3 mois, ni au bout de 6 mois. 3.3 Exemple 2 Pour comparaison, un hydrogel selon l’exemple 1b est réalisé avec l’incorporation de 0,47g de zinc citrate commercial (sous forme de poudre, ratio molaire ions citrates/ions zinc dans l’hydrogel = 0,667) dans du tampon. La solution comprenant du zinc citrate commercial est préparée comme suit. Le zinc citrate est d'abord dissout dans du tampon phosphate puis est ajouté à du NaOH 5M pour ajuster le pH à un niveau physiologique. L'objectif est de faire une solution concentrée 100 fois (en zinc et en ions citrates) par rapport à la concentration réelle souhaitée dans l’hydrogel final. Cela permet d'éviter un trop fort effet de dilution de l’hydrogel dû à l'ajout de la solution comprenant le zinc citrate commercial. La solution comprenant du zinc citrate commercial est ajoutée après addition de la solution de hyaluronate de sodium de haut poids moléculaire. Les hydrogels obtenus ont été tamisés puis conditionnés en seringue. Enfin, les hydrogels obtenus ont été stérilisés à l’autoclave (température au plateau comprise entre 121°C et 135°C avec F0 ≥ 15). Les résultats des hydrogels observés au microscope sont présentés aux figures 1 et 2. Le microscope utilisé est : Olympus SZX16, le logiciel : OLYMPUS Stream Start. L’hydrogel obtenu en accord avec le procédé selon l’invention ( – prototype C3) est transparent. Un précipité est observé dès sortie de la stérilisation de l’hydrogel incorporant du zinc citrate commercial ( ), ce qui n’est pas souhaitable pour un hydrogel. 3.4 Exemple 3 Une étude conduite par le laboratoire d’analyses médicales NAMSA, selon la norme ISO 10993-23 « Biological Evaluation of Medical Devices, Part 23 (2021) : Tests for Irritations », a permis d’évaluer le potentiel irritant des hydrogels selon l’invention après injection intradermique dans des lapins. Les hydrogels contrôle C1 et selon l’invention C2 testés sont préparés comme suit : L’hydrogel d’acide hyaluronique réticulé est préparé à partir d’un acide hyaluronique de haut poids moléculaire 1,5MDa et du BDDE dans une solution aqueuse de soude à 0,25M. Le polysaccharide réticulé présente un taux de modification de 4% et une concentration de 23 mg d'acide hyaluronique par gramme de produit. Du tampon phosphate PBS et une solution d’HCl 1N est ensuite ajoutée au polysaccharide réticulé jusqu’à obtenir un pH de 7,3 ± 0,5. L’hydrogel obtenu est homogénéisé au moyen d’un agitateur tridimensionnel. L’hydrogel est par la suite dialysé. L’hydrogel à base d’un polysaccharide réticulé obtenu est par la suite divisé en 2. Aux hydrogels obtenus, sont ensuite ajoutées : - pour l’hydrogel C1 et C2 une solution aqueuse de chlorhydrate de lidocaïne pour obtenir 0,3% en poids de chlorhydrate de lidocaïne par rapport au poids de l’hydrogel final et une solution de hyaluronate de sodium de haut poids moléculaire non réticulé en tant que lubrifiant (même quantité dans les différents mélanges) ; - pour l’hydrogel C2, une solution comprenant 0,46 mM d’ions zinc et 2,3 mM d’ions citrates. La solution comprenant du zinc et des ions citrates est préparée comme suit. L'acide citrique (sous forme de poudre) est d'abord dissout dans du tampon phosphate puis le chlorure de zinc est dissout (poudre de ZnCl 2 ) et enfin du NaOH 5M est ajouté pour ajuster le pH à un niveau physiologique. L'objectif est de faire une solution concentrée 100 fois (en zinc et en ions citrates) par rapport à la concentration réelle souhaitée dans l’hydrogel final. Cela permet d'éviter un trop fort effet de dilution de l’hydrogel dû à l'ajout de la solution de zinc et d’acide citrique. La solution comprenant du zinc et des ions citrates est ajoutée après addition de la solution de hyaluronate de sodium de haut poids moléculaire. Les hydrogels obtenus ont été tamisés puis conditionnés en seringue. Enfin, les hydrogels obtenus sont stérilisés à l’autoclave (température au plateau comprise entre 121°C et 135°C avec F0 ≥ 15). Aucun hydrogel ne présente une précipitation. Une dose de 0,2 mL de chacun des hydrogels stérilisés C1 et C2 est injectée en intradermique dans 5 sites distincts sur les côtés du dos de trois lapins. Les sites d’injection sont observés à 24, 48 et 72h après injection pour les signes d’érythème et d’œdème, puis de façon journalière jusqu’à 28 jours. Les signes d’érythème et d’œdème ont été mesurés via une échelle de score de 0-4 pour chaque site d’injection et pour chaque animal. La moyenne de score global a été déterminée en divisant la somme des scores par le nombre total de sites évaluées. L’hydrogel selon l’invention C2 présente, sur toute la durée du test, une moyenne de score d’irritation inférieure à l’hydrogel C1 contrôle. Cela indique ainsi que l’hydrogel C2 préparé selon l’invention présente un caractère moins irritant que l'hydrogel contrôle. Procédé de préparation d’un hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange et comprenant en outre des ions zinc, le procédé comprenant les étapes suivantes : (1) préparation d’un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange, la préparation de l’hydrogel comprenant les étapes suivantes : - mise en contact du polysaccharide réticulé, du polysaccharide non réticulé, ou de leur mélange, avec une solution physiologique saline, de préférence tamponnée, la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges, - addition d’ions citrates au polysaccharide réticulé, au polysaccharide non réticulé, ou à leur mélange, en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrates d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel, - addition d’ions zinc au polysaccharide réticulé, au polysaccharide non réticulé, ou à leur mélange, en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions zinc d’au plus 20 mM dans l’hydrogel, l’addition des ions citrates et des ions zinc étant réalisée dans un ratio molaire [ions citrates] / [ions zinc] allant de 1 à 20, et à la condition que l’addition des ions zinc ne soit pas réalisée avant l’addition des ions citrates lorsque la mise en contact avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, est réalisée avant l’addition des ions citrates ; (2) stérilisation, de préférence à la chaleur, de l’hydrogel obtenu à l’issue de l’étape (1) pour obtenir un hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange et comprenant en outre des ions zinc. Procédé selon la revendication 1 dans lequel l’addition des ions citrates et l’addition des ions zinc sont réalisées après l’étape de mise en contact avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée. Procédé selon la revendication 1 ou 2 dans lequel l’addition des ions citrates et l’addition des ions zinc sont réalisées de manière concomitante, les ions citrates et les ions zinc étant ajoutés sous forme d’une solution comprenant des ions zinc et des ions citrates. Procédé selon la revendication 3 dans lequel la solution est une solution physiologique saline tamponnée, de préférence un tampon phosphate, comprenant des ions zinc et des ions citrates. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 4 dans lequel l’étape (1) de préparation d’un hydrogel comprend une ou plusieurs des étapes conventionnelles suivantes : Ajustement du pH; Dilution; Purification; Addition d’au moins un composant additionnel; Homogénéisation. Procédé de préparation d’un hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé et éventuellement un polysaccharide non réticulé et comprenant en outre des ions zinc, le procédé comprenant les étapes suivantes : (0) préparation d’un polysaccharide réticulé à partir d’un milieu réactionnel de réticulation comprenant un ou plusieurs polysaccharide(s), un ou plusieurs agent(s) réticulant, un solvant et des ions zinc en une quantité permettant la préparation d’un hydrogel comprenant au plus 20 mM d’ions zinc ; (1) préparation d’un hydrogel à partir du polysaccharide réticulé obtenu à l’issue de l’étape (0) et éventuellement d’un polysaccharide non réticulé, la préparation de l’hydrogel comprenant une étape de mise en contact du polysaccharide réticulé avec une solution physiologique saline, de préférence tamponnée comprenant des sels de phosphate ou de carbonate ou de sulfate ou leurs mélanges ; (2) stérilisation, de préférence à la chaleur, de l’hydrogel obtenu à l’issue de l’étape (1) pour obtenir un hydrogel stérile ; dans lequel : - le milieu réactionnel de réticulation comprend en outre des ions citrates en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrate d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel, le ratio molaire [ions citrates présents dans le milieu réactionnel] / [ions zinc présents dans le milieu réactionnel] allant de 1 à 20 ; ou - l’étape (1) comprend en outre, avant l’étape de mise en contact du polysaccharide réticulé avec la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, une étape d’addition d’ions citrates en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrates d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel, le ratio molaire [ions citrates ajoutés] / [ions zinc présents dans le milieu réactionnel] allant de 1 à 20 ; ou - la solution physiologique saline, de préférence tamponnée, comprend en outre des ions citrates en une quantité suffisante pour atteindre une concentration en ions citrates d’au moins 0,1 mM dans l’hydrogel, le ratio molaire [ions citrates présents dans la solution physiologique saline, de préférence tamponnée] / [ions zinc présents dans le milieu réactionnel] allant de 1 à 20. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 dans lequel le polysaccharide est un acide hyaluronique. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 7 dans lequel la solution physiologique saline est une solution physiologique saline tamponnée comprenant des sels de phosphate, de préférence un tampon phosphate. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 8 dans lequel l’étape (1) comprend en outre une étape d’addition d’un agent anesthésiant. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 9 comprenant en outre une étape de conditionnement de l’hydrogel, de préférence dans un dispositif d’injection, après l’étape (1) et avant l’étape (2). Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 10 dans lequel la stérilisation est une stérilisation à la chaleur, de préférence réalisée en autoclave. Hydrogel stérile comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange, en particulier un acide hyaluronique réticulé, un acide hyaluronique non réticulé ou leur mélange, et comprenant en outre du zinc et des ions citrates obtenu par le procédé selon l’une des revendications 1 à 11. Hydrogel selon la revendication 12 comprenant en outre un agent anesthésiant. Utilisation des ions citrates pour protéger un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange, éventuellement un agent anesthésiant, et en outre des ions zinc, de la dégradation de ses propriétés rhéologiques lors de sa stérilisation, de préférence par la chaleur. Utilisation des ions citrates pour préserver la stabilité dans le temps des propriétés rhéologiques d’un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange, éventuellement un agent anesthésiant, et en outre des ions zinc. Utilisation d’une solution comprenant des ions zinc et des ions citrates pour protéger un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé et/ou non réticulé, éventuellement un agent anesthésiant, de la dégradation de ses propriétés rhéologiques lors de sa stérilisation, de préférence par la chaleur. Utilisation d’une solution comprenant des ions zinc et des ions citrates pour préserver la stabilité dans le temps d’un hydrogel comprenant un polysaccharide réticulé, un polysaccharide non réticulé ou leur mélange et éventuellement un agent anesthésiant.