Brevet FR3147293A1 — publié le 20241004

Méthode de pronostic et/ou de diagnostic de la qualité de la fonction barrière de la peau La présente invention concerne une méthode de diagnostic d’une fonction barrière cutanée diminuée ou altérée comprenant la mesure du niveau d’expression de la protéase Prolyl Oligopeptidase (PREP) et/ou de son activité enzymatique dans un échantillon de peau d’un sujet. Elle concerne également une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée chez un sujet. Figure pour l'abrégé : néant Méthode de pronostic et/ou de diagnostic de la qualité de la fonction barrière de la peau La présente invention concerne une méthode de diagnostic d’une fonction barrière cutanée diminuée ou altérée comprenant la mesure du niveau d’expression de la protéase Prolyl Oligopeptidase (PREP ou POP) et/ou de son activité enzymatique dans un échantillon de peau d’un sujet. Elle concerne également une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée chez un sujet. La peau humaine est constituée de deux compartiments tissulaires à savoir un compartiment superficiel, l'épiderme, et un compartiment profond, le derme. Elle comprend aussi des glandes sébacées, des glandes sudoripares et les follicules pileux. L’épiderme est un tissu dont les cellules sont jointives et solidaires les unes des autres. L’épiderme est un épithélium à renouvellement continuel. Le renouvellement est un processus coordonné et finement régulé aboutissant à l’élimination des cellules superficielles par le mécanisme de desquamation, de façon insensible et non visible. L’épiderme est conventionnellement divisé en une couche basale de kératinocytes constituant la couche germinative de l’épiderme, une couche dite épineuse constituée de plusieurs couches de cellules polyhédriques disposées sur la couche germinative, une à trois couches dites granuleuses constituées de cellules aplaties contenant des inclusions cytoplasmiques distinctes, les grains de kératohyaline, et enfin, un ensemble de couches superficielles appelées couche cornée (ou stratum corneum) formée de kératinocytes au stade terminal de leur différenciation appelés cornéocytes. Les cornéocytes sont des cellules anucléées principalement constituées d’une matière fibreuse contenant des kératines et entourée d’une enveloppe cornée. Il y a en permanence production de nouveaux kératinocytes pour compenser la perte en continu de cellules épidermiques au niveau de la couche cornée au cours du processus de desquamation. Toutefois, un déséquilibre entre la production des cellules au niveau de la couche basale et le taux de desquamation peut notamment conduire à la formation d’écailles à la surface de la peau. De même, un déficit de différenciation terminale des cellules du stratum corneum, pour diverses raisons, peut conduire à la formation d’amas de cellules de grandes tailles, épais, visibles à l’œil nu, et dénommés « squames », ou dans d’autres situations, à un amincissement du stratum corneum. Cela peut aboutir à une fragilité des propriétés de barrières de l’épiderme, à une déshydratation chronique du stratum corneum, une perte d’élasticité mécanique, des tiraillements, ainsi qu’à un manque d’éclat et de transparence de la peau. A titre d’exemples de facteurs favorisant cette diminution de la qualité de surface de la peau, on peut mentionner le stress, la période hivernale, le vieillissement, l’exposition aux UV, l’emploi de détergents anioniques, un défaut de sébum ou un défaut d’hydratation. Ainsi une fragilité de la barrière cutanée peut se produire en présence d’agressions externes de type agents irritants (détergents, acides, bases, oxydants, réducteurs, solvants concentrés, gaz ou fumées nocives), déséquilibres thermiques ou climatiques (froid, sécheresse, radiations), xénobiotiques (micro-organismes indésirables, allergènes) ou d’agressions internes de type stress psychologique. L'une des étapes critiques dans le processus de différenciation terminale du kératinocyte est la réticulation des précurseurs protéiques de l'enveloppe cornée. Ce phénomène joue un rôle essentiel dans le développement et le maintien de la cohésion cutanée, les propriétés physiques de la peau comme dans la fonction barrière. L'enveloppe cornée est un composant essentiel des cornéocytes. Enfin, les peaux sèches, qui manquent d'éclat, sont souvent traitées par des actifs hydratants qui ont un effet sur la différenciation et la maturation du stratum corneum. La filaggrine (FLG) est une protéine essentielle à la régulation de l'homéostasie épidermique. Il s’agit d’une protéine qui peut être incorporée à l'enveloppe cornée ou se lier aux fibres de kératines pour faciliter la formation de la matrice fibreuse des cornéocytes. La dégradation de la FLG permet une libération dans la couche cornée supérieure d’acides aminés libres qui participent à la production du Facteur Naturel d’Hydratation (FNH) responsable de l’hydratation de la couche cornée. Le processus de dégradation de la FLG est donc pour la cosmétique une cible privilégiée pour favoriser l’hydratation de la peau, en particulier par stimulation des enzymes favorisant cette dégradation. La FLG dérive d'un précurseur de grande taille, la profilaggrine, synthétisée par les kératinocytes granuleux et stockée sous forme de granules, les grains de kératohyaline, dans le cytoplasme de ces cellules. La profilaggrine est formée de 10 à 12 sous-unités de FLG reliées entre-elles par un court peptide de liaison hydrophobe (séquence d’acides aminés FLYQVST, SEQ ID NO :1) et flanquées de deux sous-unités tronquées, d’un domaine NH2-terminal homologue aux protéines S100A et d’une queue COOH-terminale unique (Rawlings et al., J. Invest. Dermatol., 2005; Sandilands et al., J. Cell Sci., 2009; Le Lamer et al., Biol. Chem., 2015). À la transition couche granuleuse/couche cornée, la profilaggrine est découpée au niveau des peptides de liaison pour former les monomères basiques de FLG (324 acides aminés) selon au moins deux étapes de protéolyse réalisées par des endo- et des exo-peptidases dont la nature n’est pas encore complètement connue (Thulin et al., Biochemistry, 1995). La calpaïne 1 et la SASPase pourraient être impliquées (Resing et al., J. Biol. Chem., 1993 ; Bernard et al., Identification and characterization of a novel retroviral-like aspartic protease specifically expressed in human epidermis. J Invest Dermatol. 2005;125(2):278-87. Epub 2005/08/16). Après avoir facilité l’agrégation des filaments de kératines pour former la matrice intracornéocytaire, la FLG est dégradée en acides aminés qui contribuent à la formation du FNH (Rawlings et al., 2005; Sandilands et al., 2009; Le Lamer et al. 2015). Si la calpaïne 1, la caspase 14 et l’hydrolase de la bléomycine, trois protéases à cystéine cytosoliques, semblent impliquées (Le Lamer et al., Biol. Chem., 2015; Denecker et al., 2007; Kamata et al., J. Biol. Chem., 2011; Hsu et al., J. Biol. Chem., 2011; Méchin et al., Cell. Mol. Life Sci., 2005), elles ne suffisent cependant pas à rendre compte à elles seules de cette dégradation totale appelée filaggrinolyse. Il existe donc un besoin pour des méthodes d’évaluation de la fonction barrière cutanée, qui soient efficaces et fiables. Il existe également un besoin pour des actifs cosmétiques capables d’améliorer l’hydratation et/ou de renforcer la fonction barrière de l’épiderme. La présente invention répond à ce besoin. De façon surprenante et inattendue, la Demanderesse a découvert que l’expression d’une protéase, la protéase Prolyl Oligopeptidase (PREP), mise en évidence par la mesure de son activité et/ou son immunodétection, est liée à l’état de la fonction barrière de la peau d’un sujet. Comme montré dans les exemples, la PREP est un nouvel acteur de la filaggrinolyse. En effet, PREP est co-localisée avec la FLG. Quand l’expression de PREP est éteinte dans des épidermes humains reconstruits en trois dimensions (RHEs), la barrière épidermique mesurée par la résistance électrique trans-épidermique (TEER) diminue drastiquement. De même l’abondance d’enzymes-clés du métabolisme de la filaggrine est diminuée dans ces modèles. De surcroît, quand PREP est éteinte, une modification de l’expression et de l’abondance de nombreuses protéines exprimées au cours des étapes tardives de la différenciation kératinocytaire et importante pour la formation de l’enveloppe cornée est observée. La protéase Prolyl Oligopeptidase (POP) ou prolyl endopeptidase (PE ou PREP) est exprimée plus fortement dans les kératinocytes granuleux. Elle clive les liaisons peptidiques du côté C-terminal des résidus proline et est codée par le gène PREP chez l'homme. Le gène PREP humain est accessible sous la référence GenBank ID 5550 dans NCBI (et son ARNm est disponible sous la référence NM_002726 dans NCBI Reference Sequence). Son activité est limitée à l'action sur les oligopeptides de moins de 10 kDa et elle a une exigence absolue pour la trans-configuration de la liaison peptidique précédant la proline. Son pH optimum de 5,8 et le contenu de la FLG en proline font aussi de PREP une très bonne candidate pour sa protéolyse. L’ensemble de ces résultats fait de PREP une excellente cible à la fois pour la typologie de la fonction barrière cutanée, des peaux sèches et/ou des peaux déshydratées, et également pour leur traitement cosmétique. La présente invention a ainsi pour objet une méthode de pronostic et/ou de diagnostic d’une fonction barrière cutanée diminuée ou altérée, comprenant a) la mesure du niveau d’expression de la protéase Prolyl Oligopeptidase (PREP) et/ou de son activité enzymatique dans un échantillon de peau d’un sujet. L’invention a également pour objet une méthode d’évaluation de l’efficacité d’un traitement cosmétique visant à prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou visant à renforcer la fonction barrière cutanée chez un sujet, comprenant les étapes suivantes : a) le traitement cosmétique d’un sujet, puis la mesure du niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP dans un échantillon de peau dudit sujet ; puis b) la comparaison de la mesure de l’étape a avec un échantillon contrôle. L’invention a également pour objet une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée chez un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : a) mettre en contact au moins un composé candidat avec un échantillon de peau du sujet, ou avec un modèle de peau ou d’épiderme dans lequel le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP est diminué, puis mesurer le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP dans ledit échantillon ou modèle ; b) comparer l’expression mesurée à l’étape a) à l’expression de PREP dans un échantillon de peau du sujet, ou avec un modèle de peau ou d’épiderme, non exposé audit composé ; et c) identifier ledit composé candidat comme permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée, lorsqu’une activation de l’expression de PREP dans l’échantillon de peau du sujet ou le modèle de peau ou d’épiderme qui a été exposé audit composé candidat est détectée, par rapport à l’expression de PREP dans l’échantillon de peau du sujet ou le modèle de peau ou d’épiderme qui n’a pas été exposé au composé candidat. L’invention a également pour objet une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée chez un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : a) mettre en contact au moins un composé candidat avec une PREP recombinante en présence de filaggrine ou d’un de ses fragments peptidiques contenant une proline, puis mesurer le niveau de l’activité enzymatique de PREP ; b) comparer l’activité enzymatique mesurée à l’étape a) à l’activité enzymatique de PREP en l’absence dudit composé ; et c) identifier ledit composé candidat comme permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée, lorsqu’une activation de l’activité enzymatique de PREP est détectée, par rapport à l’activité enzymatique de PREP qui n’a pas été mise en contact avec le composé candidat. L’invention a également pour objet un équivalent de peau ou un équivalent d’épiderme, dans lequel le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP est diminué, par exemple suite à un knock-down du gène PREP. L’invention a enfin pour objet l’utilisation cosmétique d’au moins un actif permettant de stimuler le niveau d’expression de PREP et/ou l’activité enzymatique de PREP, pour prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou renforcer la fonction barrière cutanée. Toutes les méthodes décrites dans la présente invention sont des méthodes in vitro. Méthode de pronostic et/ou diagnostic La présente invention a pour objet une méthode de pronostic et/ou de diagnostic d’une fonction barrière cutanée diminuée ou altérée chez un sujet, comprenant la mesure du niveau d’expression de PREP et/ou de son activité enzymatique dans un échantillon de peau dudit sujet. En particulier, la fonction barrière cutanée diminuée ou altérée est liée à une peau sèche et/ou déshydratée. Par « fonction barrière cutanée », on entend la fonction barrière de l’épiderme. Le sujet est de préférence un sujet humain, de préférence un sujet humain âgé entre 20 ans et 80 ans, de préférence entre 40 ans et 75 ans. L’échantillon de peau du sujet est un échantillon de peau ex vivo. Typiquement, l’échantillon de peau du sujet peut être prélevé par biopsie ou par échantillonnage, ce dernier est préférentiellement effectué de manière non invasive, et en particulier ne nécessite pas d’anesthésie locale. Selon un mode de réalisation préféré, l’étape de prélèvement de l’échantillon est effectuée en frottant la surface de la peau ou en utilisant une surface adhésive telle qu’un disque D-squame®. Par « niveau d’expression de PREP », on entend la quantité d’ARNm produite, ou bien la quantité de protéine produite, par l’expression de ce gène PREP. Cette quantité peut être exprimée en tant que telle, ou sous forme de concentration ou de ratio. Par « activité enzymatique de PREP », on entend toute activité enzymatique de PREP dans la filaggrinolyse, notamment le clivage des liaisons peptidiques du côté C-terminal des résidus proline. Ainsi, l’activité enzymatique de PREP peut être mesurée grâce à la quantité de filaggrine clivée ou bien la quantité de fragments de filaggrine clivés. Cette quantité peut être exprimée en tant que telle, ou sous forme de concentration ou de ratio. Le niveau d’expression de PREP ou de son activité enzymatique peut être mesuré par toute technique appropriée connue de l’art antérieur. Pour mesurer la quantité d'ARNm, les ARN peuvent être extraits par n'importe quelle méthode d'extraction d'ARN de la peau, par exemple par la méthode décrite dans le paragraphe Matériels et Méthodes de l’exemple ci-dessous, puis peuvent être traités pour une quantification spécifique de l'ARNm par n'importe quelle méthode de quantification de l'ARNm, par exemple par PCR quantitative. Pour mesurer la quantité de protéine PREP ou l’activité enzymatique de PREP, il peut être fait mention du Western-blot, du Slot-blot, du Dot-blot, des méthodes ELISA (Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay) de type singleplex ou multiplex, des méthodes de protéomique ou de glycomique, de coloration de polypeptides dans un gel de polyacrylamide par un colorant à base d’Argent, par le bleu de Coomassie ou par le SYPRO, de l’immunofluorescence, de l’absorption UV, de méthodes immunohistochimiques en microscopie classique, électronique ou confocale, de FRET (fluorescence resonance energy transfer/transfert d’énergie par résonance de fluorescence), des méthodes de TR-FRET (time resolved FRET/FRET en résolution de temps), des méthodes de FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy/imagerie par microscopie en temps de fluorescence), des méthodes de FSPIM (fluorescence spectral imaging microscopy/imagerie par microscopie en spectre de fluorescence), des méthodes de FRAP (fluorescence recovery after photobleaching/recouvrement de fluorescence après photoblanchiment), des méthodes par gène rapporteur, des méthodes d’AFM (atomic force microscopy/microscopie par force atomique), des méthodes de résonance plasmonique de surface, des méthodes de microcalorimétrie, des méthodes de cytométrie en flux, des méthodes de biosenseurs, des méthodes de radioimmuno-essais (RIA), des méthodes de focalisation isoélectrique, et des tests enzymatiques notamment à l’aide de peptides fluorsecents, des méthodes mettant en œuvre des puces à peptides, des puces à sucre, des puces d’anticorps, des méthodes de spectrométrie de masse quantitatives de type iTRAQ, MS/MS, MRM ou SWATH, des méthodes de spectrométrie de type MALDI-TOF. Pour mesurer l’activité enzymatique de PREP, on peut évaluer la quantité de fragments peptidiques de filaggrine contenant une proline. Par « fragments peptidiques de filaggrine », on entend tous peptides dérivés de la séquence d’acides aminés de la filaggrine contenant une proline. La filaggrine étant très polymorphe, de nombreuses séquences existent. La séquence de la profilaggrine humaine est accessible dans UniProtKB sous le numéro P20930, ou bien dans GnomAD browser/FLG. De préférence, le fragment est choisi parmi les fragments suivants : SHTTPQGRS (SEQ ID NO : 2), GQSAPSTGG (SEQ ID NO : 3), GWTGPSTRG (SEQ ID NO : 4), GWTGPSTGV (SEQ ID NO : 5), IRGHPGSSR (SEQ ID NO : 6), GSRHPRSHH (SEQ ID NO : 7), QSGTPHAET (SEQ ID NO : 8), ARSSPGERH (SEQ ID NO : 9), HSGIPRRQA (SEQ ID NO : 10), GQDGPHQQS (SEQ ID NO : 11), IRAHPGSRR (SEQ ID NO : 12), GSRHPGFHQ (SEQ ID NO : 13), GQAGPHQQS (SEQ ID NO : 14), GQAGPHQQS (SEQ ID NO : 15), GQTAPSTGG (SEQ ID NO : 16), GQSGPRSAS (SEQ ID NO : 17), RHHEPSTRA (SEQ ID NO : 18), GSRNPRSHQ (SEQ ID NO : 19), GRTGPSTGG (SEQ ID NO : 20), QSSGPRTSR (SEQ ID NO : 21), GSRHPGSHH (SEQ ID NO : 22), GKAGPHQQS (SEQ ID NO : 23), IRGHPGPSRGG (SEQ ID NO : 24), RTSRPRGSS (SEQ ID NO : 25), IHGHPGSSS (SEQ ID NO : 26), QSEGPRTSR (SEQ ID NO : 27), GSRHPRSHQ (SEQ ID NO : 28), HSGIPRGQA (SEQ ID NO : 29), QSAGPRTSR (SEQ ID NO : 30), et GSRHPTSHH (SEQ ID NO : 31). De préférence, le fragment est choisi parmi les fragments SHTTPQGRS (SEQ ID NO : 2), GQSAPSTGG (SEQ ID NO : 3) et GWTGPSTRG (SEQ ID NO : 4). En particulier, le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP est mesuré(e) par PCR quantitative, Western blot, des méthodes de spectrométrie de masse quantitatives de type iTRAQ, MS/MS, des tests enzymatiques notamment à l’aide de peptides fluorescents ou ELISA. Dans un mode de réalisation particulier, la méthode de pronostic et/ou diagnostic selon l’invention comprend en outre les étapes suivantes : b) déduire de l’étape a) si la fonction barrière cutanée dudit sujet est diminuée ou altérée ; et c) si la fonction barrière cutanée est identifiée comme diminuée ou altérée à l’étape b), traiter la peau avec une composition cosmétique contre la diminution ou l’altération de la fonction barrière. Dans un mode de réalisation particulier, la peau dudit sujet est diagnostiquée comme présentant une fonction barrière cutanée diminuée ou altérée, lorsque le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP mesuré à l’étape a) dans l’échantillon de peau du sujet est inférieur, en particulier significativement inférieur, à un contrôle. Dans un mode de réalisation particulier, le contrôle est une valeur de référence. Dans un mode de réalisation particulier, la valeur de référence est déterminée par la valeur moyenne du niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP, mesurée dans une population déterminée, par exemple une population âgée de 20 à 80 ans, et/ou ayant une fonction barrière cutanée satisfaisante. De préférence, la peau dudit sujet est diagnostiquée comme présentant une fonction barrière cutanée diminuée ou altérée, lorsque le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP mesuré à l’étape a) dans l’échantillon de peau du sujet est au moins 1,2 fois inférieur à un contrôle. Dans un mode de réalisation particulier, la valeur de référence est déterminée par une étude ROC (« La courbe ROC (receiver operating characteristic) principes et principales applications en biologie clinique », H. Delacour et al., Ann Biol Clin 2005 ; 63 (2) : 145-54). Par « significativement inférieur » au sens de l’invention, on entend une variation statistiquement significative du niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP. Méthode de traitement cosmétique La présente invention a également pour objet une méthode de pronostic et/ou diagnostic d’une fonction barrière cutanée diminuée ou altérée chez un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : a) mesurer le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de la protéase Prolyl Oligopeptidase (PREP) dans un échantillon de peau dudit sujet ; b) déduire de l’étape a) si la fonction barrière cutanée dudit sujet est diminuée ou altérée ; et c) si la fonction barrière cutanée est identifiée comme diminuée ou altérée à l’étape b), traiter la peau avec une composition cosmétique contre la diminution ou l’altération de la fonction barrière. La mesure de l’étape a) est de préférence effectuée comme décrit dans la section « Méthode de pronostic et/ou de diagnostic » ci-dessus. L’échantillon de peau dudit sujet et le sujet peuvent être comme décrits dans la section « Méthode de pronostic et/ou de diagnostic » ci-dessus. Dans un mode de réalisation particulier, la peau dudit sujet est diagnostiquée comme présentant une fonction barrière cutanée diminuée ou altérée, lorsque le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP mesuré à l’étape a) dans l’échantillon de peau du sujet est inférieur, en particulier significativement inférieur, à un contrôle. Si la fonction barrière cutanée est identifiée comme diminuée ou altérée à l’étape b), alors on traite la peau avec une composition cosmétique contre la diminution ou l’altération de la fonction barrière : c’est l’étape c). De préférence, cette composition comprend au moins un actif permettant de stimuler l'activité de PREP. Par « composition cosmétique contre la diminution ou l’altération de la fonction barrière », on entend ici tout type de composition cosmétique (topique ou orale par exemple) censée améliorer la fonction barrière cutanée. La composition cosmétique peut être appliquée par toute voie d’administration appropriée, en particulier par voie topique ou par voie orale. Elle peut se présenter par exemple sous forme de crème, de lotion, de gel ou de suspension. Dans un mode de réalisation particulier, la composition cosmétique de l’étape c) comprend au moins un actif permettant de stimuler l'activité de PREP. De préférence, l’actif permettant de stimuler l'activité de PREP est l’acide D-aspartique (ou D-aspartate) ou une protéine PREP recombinante. Des compositions cosmétiques permettant de renforcer la fonction barrière cutanée comprennent ainsi de préférence au moins un actif permettant de stimuler l'activité de PREP tel que l’acide D-aspartique (ou D-aspartate) ou une protéine PREP recombinante. Une telle protéine PREP recombinante est par exemple commercialisée sous le nom de Tolerase G par Therascience. Méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée La présente invention concerne aussi une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée chez un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : a) mettre en contact au moins un composé candidat avec un échantillon de peau du sujet, ou avec un modèle de peau ou d’épiderme dans lequel le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP est diminué, puis mesurer le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP dans ledit échantillon ou modèle ; b) comparer l’expression mesurée à l’étape a) à l’expression de PREP dans un échantillon de peau du sujet, ou avec un modèle de peau ou d’épiderme, non exposé audit composé ; et c) identifier ledit composé candidat comme permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée, lorsqu’une activation de l’expression de PREP dans l’échantillon de peau du sujet ou le modèle de peau ou d’épiderme qui a été exposé audit composé candidat est détectée, par rapport à l’expression de PREP dans l’échantillon de peau du sujet ou le modèle de peau ou d’épiderme qui n’a pas été exposé au composé candidat. La méthode d’identification de l’invention est de préférence mise en œuvre ex vivo . Selon un mode de réalisation, l’échantillon de peau utilisé dans la méthode d’identification selon l’invention est tel que décrit ci-dessus. Le modèle de peau ou d’épiderme dans lequel le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP est diminué est tout modèle in vitro de peau reconstruite ou d’épiderme reconstruit, dans lequel le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP est diminué. La mesure de l’étape a) est de préférence effectuée comme décrit dans la section « Méthode de pronostic et/ou de diagnostic » ci-dessus. Dans une variante, l’invention concerne une méthode d’évaluation de l’efficacité d’un traitement cosmétique contre la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou pour le renforcement de la fonction barrière cutanée chez un sujet, ladite méthode comprenant, après une étape d’application de la composition cosmétique, une étape (a) de mesure du niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP, dans un échantillon de peau dudit sujet. De préférence cette méthode d’évaluation comprend en outre les étapes consistant à : b) comparer ladite quantité mesurée à l’étape a) avec un contrôle ; c) déterminer si ledit traitement cosmétique contre la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou pour le renforcement de la fonction barrière cutanée, est efficace chez ledit sujet. La méthode d’évaluation de l’efficacité est de préférence mise en œuvre in vitro ou ex vivo . Le sujet est de préférence tel que décrit ci-dessus. De préférence, la fonction barrière cutanée diminué ou altérée est observée chez un sujet ayant une peau sèche et/ou déshydratée. Dans un mode de réalisation particulier, le contrôle est le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP dans un échantillon de peau dudit sujet avant l’application dudit traitement cosmétique. De préférence, ledit traitement cosmétique est évalué comme étant efficace chez ledit sujet, si le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP mesuré à l’étape a) dans l’échantillon de peau du sujet est supérieur, en particulier significativement supérieur, au contrôle. L’invention a également pour objet une méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée chez un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : a) mettre en contact au moins un composé candidat avec une PREP recombinante en présence de filaggrine ou d’un de ses fragments peptidiques contenant une proline, puis mesurer le niveau de l’activité enzymatique de PREP ; b) comparer l’activité enzymatique mesurée à l’étape a) à l’activité enzymatique de PREP en l’absence dudit composé ; et c) identifier ledit composé candidat comme permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée, lorsqu’une activation de l’activité enzymatique de PREP est détectée, par rapport à l’activité enzymatique de PREP qui n’a pas été mise en contact avec le composé candidat. La méthode d’identification de l’invention est de préférence mise en œuvre ex vivo . La mesure de l’étape a) est de préférence effectuée comme décrit dans la section « Méthode de pronostic et/ou de diagnostic » ci-dessus. De préférence, les fragments peptidiques de filaggrine contenant une proline sont tels que décrits ci-dessus. Utilisation cosmétique L’invention concerne aussi l’utilisation cosmétique d’au moins un actif permettant de stimuler le niveau d’expression de PREP et/ou l’activité enzymatique de PREP, ou bien d’une protéine PREP recombinante, pour prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou renforcer la fonction barrière cutanée. De préférence, l’actif permettant de stimuler le niveau d’expression de PREP est l’acide D-aspartique (ou D-aspartate). En effet, l’acide D-aspartique ou D-aspartate est décrit comme un actif permettant de stimuler le niveau d’expression de PREP dans les cellules Leydig et Sertoli et les spermatogonies des rats (Santillo A et al., Reproduction, 2019). Comme exemple de protéine PREP recombinante, on peut citer par exemple la protéine commercialisée sous le nom de Tolerase G par Therascience, ainsi que la composition Gluterase commercialisée par Energetica Natura. Equivalent de peau et équivalent d’épiderme L’invention a également pour objet un équivalent de peau ou un équivalent d’épiderme, dans lequel le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP est diminué, par exemple suite à un knock-down du gène PREP . Dans la présente demande, l’équivalent de peau et l’équivalent d’épiderme sont également appelés modèle de peau et modèle d’épiderme, respectivement. Ils peuvent être utilisés dans la « Méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée » décrite ci-dessus. L’équivalent de peau comprend un équivalent de derme et un équivalent d’épiderme. En particulier, l'équivalent de peau selon l'invention comprend, sur l'équivalent de derme, un équivalent d'épiderme comprenant au moins des kératinocytes. L’équivalent d’épiderme comprend au moins des kératinocytes. Les kératinocytes peuvent provenir de toute origine mais sont préférentiellement des kératinocytes d'origine humaine. Ils peuvent être préparés par n'importe quelle méthode bien connue de l'homme du métier. Ainsi, les kératinocytes peuvent être préparés par culture d'épiderme dissocié provenant de prélèvement de peau normale ou par culture de kératinocytes issus de la gaine du follicule pileux. De préférence, les kératinocytes sont des kératinocytes de peau humaine normale. L’équivalent de peau et l’équivalent d’épiderme selon l’invention présentent un niveau d’expression et/ou d’activité enzymatique de PREP diminué. Par « niveau d’expression et/ou d’activité enzymatique de PREP diminué », on entend un niveau d’expression et/ou d’activité enzymatique de PREP significativement diminué par rapport à un contrôle. De préférence, le contrôle est un échantillon de peau normale, de préférence de peau humaine normale (i.e. présentant une fonction barrière). Par exemple, le niveau d’expression et/ou d’activité enzymatique de PREP est diminué suite à un knock-down du gène PREP. Par « knock-down », on entend une diminution artificielle de l’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP, de préférence une diminution significative, par rapport à un contrôle, de préférence le contrôle est le niveau d’expression et/ou d’activité enzymatique de PREP dans une peau humaine normale. Cette diminution peut se faire soit par modification génétique, soit par traitement avec un oligonucléotide court d'ADN ou d'ARN dont la séquence est complémentaire du gène PREP ou de l'ARNm de PREP. Le knock-down peut être notamment fait par « transient knockdown », par ARN interférent ou bien en utilisant les technologies CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) ou TALENs (nucléases effectrices de type activateur de transcription). La présente invention sera décrite plus en détail par les exemples ci-dessous. Figures La présente le fait que PREP et la filaggrine colocalisent dans l’épiderme interfolliculaire. Des coupes de peaux humaines normales ont été analysées en double marquage par microscopie confocale avec un anticorps monoclonal spécifique de la profilaggrine et de la filaggrine et avec un anticorps anti-PREP. Le profil des deux fluorochromes a été enregistré le long de la ligne blanche sur l’agrandissement de la superposition des deux marquages (merge). Les coefficients de Pearson et Manders ont été calculés à partir de 30 images différentes produites à partir de 3 donneurs. La présente l’e fficacité de l’extinction de PREP . Des épidermes humains reconstruits en 3D (RHEs) ont été produits avec des kératinocytes transduits avec des shRNAs ciblant PREP (sh-PREP) ou un shRNA contrôle (Ctrl). L’expression de PREP a été analysée par RT-qPCR. n = 5 RHEs différents. La présente l’e fficacité de l’extinction de PREP au niveau protéique. Des épidermes humains reconstruits en 3D (RHEs) ont été produits avec des kératinocytes transduits avec des shRNAs ciblant PREP (shPREP-1, shPREP-2 et shPREP-3) ou un shRNA contrôle (Ctrl). L’expression de PREP a été analysée par Western blotting. Les protéines totales ont été séparées par SDS-PAGE, transférées sur membranes et colorées au Rouge Ponceau ou immunodétectées avec un anticorps anti-PREP et un anticorps anti-actine. Un exemple est montré à gauche, la quantification à droite. n = 8 RHEs contrôles produits avec des kératinocytes provenant de 2 donneurs différents, et 10 RHEs produits avec des kératinocytes provenant de 2 donneurs différents et transduits avec des shPREP. La présente le fait que l ’extinction de PREP affecte profondément la fonction de barrière épidermique. Des épidermes humains reconstruits en 3D ont été produits avec des kératinocytes transduits avec des shRNAs ciblant PREP (shPREP-1, shPREP-2 et shPREP-3) ou un shRNA contrôle (Ctrl). La résistance électrique trans-épithéliale (TEER) a été mesurée. La présente le fait que l ’extinction de PREP affecte la morphologie des épidermes. Des épidermes humains reconstruits en 3D ont été produits avec des kératinocytes transduits avec des shRNAs ciblant PREP (shPREP) ou un shRNA contrôle (Ctrl). Ils ont été analysés par microscopie électronique à transmission. Des images représentatives de la couche granuleuse sont montrées, les flèches indiquant les kératinocytes granuleux et la barre d’échelle correspondant à 5 µm. Le nombre d’assises de kératinocytes granuleux a été quantifié. La présente le fait que l ’extinction de PREP affecte l’expression de la filaggrine. Des épidermes humains reconstruits en 3D ont été produits avec des kératinocytes transduits avec des shRNAs ciblant PREP (shPREP) ou un shRNA contrôle (Ctrl). L’expression du gène de la filaggrine (FLG) a été analysée par RT-qPCR (partie gauche); n = 5. La profilaggrine (proFLG) et la filaggrine (FLG) ont été immunodétectées : un exemple est montré ainsi que la quantification des bandes immunoréactives (relativement à la détection de l’actine). n.s., non significatif. n = 3. La présente le fait que l ’extinction de PREP affecte l’expression des gènes des enzymes impliquées dans la dégradation de la filaggrine. Des épidermes humains reconstruits en 3D ont été produits avec des kératinocytes transduits avec des shRNAs ciblant PREP (shPREP) ou un shRNA contrôle (Ctrl). L’expression des gènes de l’hydrolase de la bléomycine ( BLMH ), de la caspase 14 ( CASP14 ), de la calpaïne 1 ( CAPN 1), de la kallikréine 7 ( KLK 7) et des peptidyl-arginine désiminases de type 1 et 3 ( PAD 1 et PAD 3) a été analysée par RT-qPCR. n = 5. La présente le fait que l ’extinction de PREP affecte l’expression des gènes des protéines de l’enveloppe cornée. Des épidermes humains reconstruits en 3D ont été produits avec des kératinocytes transduits avec des shRNAs ciblant PREP (shPREP) ou un shRNA contrôle (Ctrl). L’expression des gènes des transglutaminases ( TGM) 1, 3 et 5, de l’involucrine ( IVL ), de la loricrine ( LOR ), et de la cornéodesmosine ( CDSN ) a été analysée par RT-qPCR. n = 5. La présente le fait que l ’extinction de PREP affecte l’expression de l’hydrolase de la bléomycine (BLMH) et de la loricrine (LOR) au niveau protéique. Des épidermes humains reconstruits en 3D ont été produits avec des kératinocytes transduits avec des shRNAs ciblant PREP (shPREP) ou un shRNA contrôle (Ctrl). L’involucrine (IVL), la BLMH et la LOR ont été immunodétectées : un exemple est montré et l’intensité des bandes immunoréactives a été quantifiée (relativement à la détection de l’actine). n = 3. La présente le fait que PREP clive plusieurs peptides dérivés de la séquence de la filaggrine humaine et contenant une proline. Les peptides, dont la séquence (la séquence correspondant à la filaggrine ou au peptide de liaison est soulignée) est indiquée au-dessus des graphes, ont été incubés en absence ou en présence de PREP pendant 1h à 37°C et la fluorescence a été mesurée toutes les 5 minutes. n = 3. La présente le fait que PREP clive des peptides dérivés de la séquence de la filaggrine humaine et contenant une proline. Les peptides dont la séquence est indiquée (les groupements dabcyl et EDANS ainsi que le glutamate en C-ter ne sont pas montrés; la proline quand elle est présente est soulignée) ont été incubés en présence de PREP pendant 1h à 37°C et la fluorescence a été mesurée toutes les 5 minutes. La pente moyenne de chacune des courbes a été calculée. n = 3. Exemples : Evaluation selon l’invention 1. Colocalisation de PREP avec la filaggrine Une analyse par microscopie confocale en double marquage a été réalisée pour déterminer le degré de colocalisation de PREP avec la filaggrine. L’analyse en microscopie confocale a montré que PREP présente des coefficients de colocalisation robustes : un coefficient moyen de Pearson égal à 0,40 ; et des coefficients moyens de Manders compris entre 0,25 et 0,52. On peut donc parler de colocalisation occasionnelle ou partielle de cette protéase avec la (pro)filaggrine. La colocalisation occasionnelle entre PREP et la (pro)filaggrine était distribuée pour 60% au niveau de la couche granuleuse, 30% au niveau de la couche cornée et 10% à l’interface des deux couches. 2. Plusieurs peptides synthétiques dérivés de la séquence de la filaggrine humaine sont in vitro des substrats de PREP Afin d’étudier la protéolyse in vitro de la filaggrine par PREP cinq peptides fluorogéniques de 7 à 8 acides aminés de long couplés à un groupement Dabcyl en N-ter et un groupement EDANS en C-ter via un acide glutamique (Table 1) ont été synthétisés (JPT Peptide Technologies) selon le rationnel suivant. Le peptide 1 correspond à une séquence répétée de la filaggrine (Swiss-Prot #P20930 ; positions 2754-2761 et 3078-3085) avec une proline (Pro) centrale. Le peptide 3 correspond au peptide de liaison entre les sous-unités de filaggrine. Les peptides 4 et 6 correspondent à deux autres régions de la séquence du monomère de filaggrine (Swiss-Prot #P20930 ; positions 1522-1528 et 2106-2113) contenant une proline, et donc potentiels substrats de PREP. Le peptide 7 dérive du peptide 1 dans lequel la proline a été substituée par une sérine (Ser). Quand les peptides sont excités à 340 nm en absence de coupure enzymatique, le Dabcyl (4-(dimethylaminoazo)benzene-4-carboxylic acid) joue le rôle d’accepteur (quencher) dans la réaction de transfert d’énergie par résonance de fluorescence (FRET) et il n’y a pas de lumière émise. Lorsque les peptides sont clivés, l’émission de fluorescence par l’EDANS à 490 nm est alors quantifiable. Peptide séquence note 1 Dabcyl-WTGPSTRG-Glu-EDANS Dérive de la séquence de la filaggrine 3 Dabcyl-FLYQVST-Glu-EDANS Peptide de liaison entre monomères de filaggrine 4 Dabcyl-TTPQGRS-Glu-EDANS Dérive d’une autre partie de la séquence de la filaggrine 6 Dabcyl-QSAPSTGG-Glu-EDANS Dérive d’une autre partie de la séquence de la filaggrine 7 Dabcyl-WTG S STRG-Glu-EDANS Peptide 1 avec la proline substituée par une sérine Séquence des peptides fluorogéniques. Les peptides sont incubés en absence ou en présence de PREP et la fluorescence est enregistrée au cours du temps. Quand le peptide 1 a été incubé en absence de la protéase aucune émission de fluorescence n’a été observée. Par contre, la fluorescence augmentait en fonction du temps en présence de PREP | ]. Quand la proline du peptide 1 était remplacée par une sérine (peptide 7), la fluorescence restait au niveau du bruit de fond, confirmant la spécificité de la protéase pour la proline. PREP coupe les peptides 4 et 6, ce qui indique que PREP a un large spectre d’action sur plusieurs peptides issus de la filaggrine. Les inventeurs n’ont pas observé de clivage du peptide 3. Le calcul des pentes moyennes confirme l’ensemble de ces résultats . 3 . Extinction de l’expression de PREP dans des RHEs Pour définitivement prouver l’implication de PREP dans la filaggrinolyse et l’homéostasie épidermique, son expression a été inhibée individuellement par la technique d’interférence à l’ARN, comme décrit précédemment (Pendaries et al, J Invest Dermatol, 2014) en utilisant des shRNAs (small hairpin RNA) transduits dans les kératinocytes primaires à l’aide de particules lentivirales (Merck-Sigma-Aldrich). Des RHEs ont ensuite été produits en humidité relative réduite, condition dans laquelle le métabolisme de la filaggrine est accru (Cau et al, J Dermatol Sci, 2017). Trois shRNAs différents ciblant des exons distincts du gène PREP ont été utilisés (Table 2), ainsi qu’un shRNA contrôle (noté Ctrl) ne ciblant aucune séquence humaine. L’efficacité d’extinction a été analysée en Western Blot et confirmée en RT-qPCR. Les conséquences de cette inhibition ont été analysées aux niveaux morphologiques, moléculaires et fonctionnels. Nom Identifiant du transcrit #sh-RNA-1* séquence cible (exon cible) #sh-RNA-2* séquence cible (exon cible) sh-RNA-3* séquence cible (exon cible) PREP NM_002726 shPREP-1 CCAGCTTTCTTATATGGCTAT (exon 11) shPREP-2 CCCAACATACTGTCTGACGAT (exon 4) shPREP-3 CCTGACCTCTTTGGTTGTGTT (exon 14) Caractéristiques des shRNAs utilisés pour éteindre l’expression de PREP ; shRNA, small hairpin RNA. Les trois shRNAs ont induit une très forte diminution de l’expression de la protéase PREP [Fig 2 et Fig 3], aussi bien au niveau ARN (diminution de 85%) que protéique (diminution de 78%). Ceci a entrainé une très forte diminution de la TEER . La morphologie des RHEs, après coloration à l'hématoxyline et à l'éosine (H&E), était normale. L’expression du mRNA de FLG était légèrement diminuée d’environ 40% et la détection de la profilaggrine et de la filaggrine était diminuée . Une analyse par microscopie électronique à transmission montre une diminution du nombre d’assises de kératinocytes granuleux et, possiblement, de la taille des granules de kératohyaline . Pour savoir si l’extinction de PREP impacte les enzymes du métabolisme de la profilaggrine et de la filaggrine et plus largement la différenciation des kératinocytes, l’expression des protéases hydrolase de la bléomycine (BLMH), caspase-14, kallikréine 7 et calpaïne 1 ; des peptidylarginine désiminases, des transglutaminases et de quelques autres marqueurs de la différenciation est analysée par RT-qPCR [Fig 7 et Fig 8] et/ou Western blot . Les taux d’ARNm de BLMH et de la caspase-14 diminuent respectivement de 60% et 50%, ceux de la calpaïne-1 et de la kallikréine-7 diminuent légèrement (30%). Cette diminution a été confirmée par Western blot pour BLMH. Au niveau ARNm, l’expression de l’involucrine, l’hornerine et la cornéodesmosine, trois composants des enveloppes cornées, n’est pas modifiée, alors que la loricrine est moins exprimée (diminution de 60%). Les mêmes résultats sont obtenus au niveau protéique. Une diminution de l’expression des ARNm codant les transglutaminases 3 (moins 60%) et 5 (moins 40%) est notée alors que l’expression de la transglutaminase 1 n’est pas modifiée. Conclusion Cette étude a permis de mettre en évidence une nouvelle protéase importante pour la production du facteur naturel d’hydratation et de manière plus générale la cornification : PREP. PREP est un nouvel acteur de la filaggrinolyse. Quand PREP est éteinte dans des RHEs, l’abondance d’enzymes clés du métabolisme de la filaggrine, comme BLMH et la caspase 14, est diminuée. De surcroit, quand PREP est éteinte, une modification de l’expression et de l’abondance de nombreuses protéines exprimées au cours des étapes tardives de la différenciation kératinocytaire est observée, suggérant que PREP pourrait également être impliquée au-delà, dans le contrôle de la cornification. Méthode de pronostic et/ou diagnostic d’une fonction barrière cutanée diminuée ou altérée, comprenant a) la mesure du niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de la protéase Prolyl Oligopeptidase (PREP) dans un échantillon de peau d’un sujet. Méthode selon la revendication 1, comprenant en outre les étapes suivantes : b) déduire de l’étape a) si la fonction barrière cutanée dudit sujet est diminuée ou altérée ; et c) si la fonction barrière cutanée est identifiée comme diminuée ou altérée à l’étape b), traiter l’échantillon de peau du sujet avec une composition cosmétique contre la diminution ou l’altération de la fonction barrière. Méthode selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle la peau dudit sujet est diagnostiquée comme présentant une fonction barrière cutanée diminuée ou altérée, lorsque le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP mesuré à l’étape a) dans l’échantillon de peau du sujet est inférieur, en particulier significativement inférieur, à un contrôle. Méthode selon la revendication 3, dans laquelle le contrôle est une valeur de référence déterminée par la valeur moyenne du niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP, mesurée dans une population déterminée, par exemple une population âgée de 20 à 80 ans, et/ou ayant une fonction barrière cutanée satisfaisante. Méthode selon l’une des revendications 2 à 4, dans laquelle la composition cosmétique contre la diminution ou l’altération de la fonction barrière comprend au moins un actif permettant de stimuler l'activité de PREP, de préférence l’actif permettant de stimuler l'activité de PREP est l’acide D-aspartique (ou D-aspartate) ou une protéine PREP recombinante. Méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée chez un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : a) mettre en contact au moins un composé candidat avec un échantillon de peau du sujet, ou avec un modèle de peau ou d’épiderme dans lequel le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP est diminué, puis mesurer le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP dans ledit échantillon ou modèle ; b) comparer l’expression mesurée à l’étape a) à l’expression de PREP dans un échantillon de peau du sujet, ou avec un modèle de peau ou d’épiderme, non exposé au dit composé ; et c) identifier ledit composé candidat comme permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée, lorsqu’une activation de l’expression de PREP dans l’échantillon de peau du sujet ou le modèle de peau ou d’épiderme qui a été exposé audit composé candidat est détectée, par rapport à l’expression de PREP dans l’échantillon de peau du sujet ou le modèle de peau ou d’épiderme qui n’a pas été exposé au composé candidat. Méthode d’identification d’un composé permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée chez un sujet, ladite méthode comprenant les étapes suivantes : a) mettre en contact au moins un composé candidat avec une PREP recombinante en présence de filaggrine ou d’un de ses fragments peptidiques contenant une proline, puis mesurer le niveau de l’activité enzymatique de PREP ; b) comparer l’activité enzymatique mesurée à l’étape a) à l’activité enzymatique de PREP en l’absence dudit composé ; et c) identifier ledit composé candidat comme permettant de prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou de renforcer la fonction barrière cutanée, lorsqu’une activation de l’activité enzymatique de PREP est détectée, par rapport à l’activité enzymatique de PREP qui n’a pas été mise en contact avec le composé candidat. Méthode selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle la fonction barrière cutanée diminué ou altérée est observée chez un sujet ayant une peau sèche et/ou déshydratée. Méthode selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle l’échantillon de peau d’un sujet est un échantillon préalablement obtenu à l’aide d’une biopsie ou par échantillonnage. Méthode selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle le niveau d’expression est soit la quantité d’ARNm produite, soit la quantité de protéine produite, par l’expression du gène de PREP ; et/ou l’activité enzymatique de PREP est la quantité de filaggrine clivée, ou bien la quantité de fragments de filaggrine clivés, de préférence le fragment est choisi parmi les fragments de séquence SEQ ID NO :2 à 4. Méthode selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP est mesurée par PCR quantitative, Western blot, par des méthodes de spectrométrie de masse quantitatives de type iTRAQ, MS/MS, par des tests enzymatiques notamment à l’aide de peptides fluorescents ou ELISA. Utilisation cosmétique d’au moins un actif permettant de stimuler le niveau d’expression et/ou l’activité enzymatique de PREP, pour prévenir la diminution de la fonction barrière cutanée et/ou renforcer la fonction barrière cutanée. Utilisation selon la revendication 12 dans laquelle l’actif est choisi parmi une protéine PREP recombinante et l’acide D-aspartique. Equivalent de peau ou équivalent d’épiderme, dans lequel le niveau d’expression et/ou de l’activité enzymatique de PREP est diminué suite à un knock-down du gène PREP , de préférence par rapport à un contrôle.