Brevet FR3135327A1 — publié le 20231110

PROCEDE DE SELECTION DE LYMPHOCYTES La présente invention concerne un procédé de sélection de lymphocytes reconnaissant un antigène protéique à partir d’une population de cellules, comprenant une étape d’identification d’au moins un lymphocyte se liant à au moins deux peptides distincts comprenant des séquences issues de l’antigène protéique, notamment au moins trois peptides distincts comprenant des séquences issues de l’antigène protéique. ( Pas de figure ) PROCEDE DE SELECTION DE LYMPHOCYTES Domaine de l’invention La présente invention concerne un procédé de sélection de lymphocytes, notamment de lymphocytes B ou T, ainsi qu’un procédé de préparation d’anticorps à partir des lymphocytes B sélectionnés. Arrière-plan technique L'intérêt pour les anticorps monoclonaux thérapeutiques ne cesse de croître, année après année. En effet, leur affinité hautement spécifique des antigènes permet de fournir des traitements médicaux très efficaces. Ainsi, de 2005 à 2017 le nombre d’anticorps monoclonaux approuvés par l’agence américaine du médicament est passé de 2 à 64. Toutefois, il reste un obstacle critique à surmonter pour préparer des anticorps monoclonaux efficaces. En effet, la sélection des Lymphocytes B à partir desquels sont dérivés les anticorps monoclonaux se fait souvent vis-à-vis de la structure primaire des antigènes protéiques cibles, c’est à dire des épitopes linéaires auxquels se fixent les anticorps, et ce alors que ce sont des épitopes issus de la structure tridimensionnelle, tertiaire ou quaternaire, des protéines qui permettent le plus souvent d’obtenir la meilleure affinité pour les anticorps et ainsi d’assurer au mieux leurs fonctions biologiques. Ainsi, permettre l’obtention d’anticorps monoclonaux spécifiques d’épitopes conformationnels, reconnaissant donc la structure tridimensionnelle des antigènes cibles, devrait améliorer l’avidité de ces anticorps, et donc leur utilisation comme outils à usage expérimental, comme marqueurs à usage diagnostic, ou comme traitements immunothérapeutiques. Dans ce cadre, Tsumoto et al . (2019) Immunotherapy 11 :119–127 proposent de préparer des anticorps monoclonaux dirigés contre des épitopes conformationnels d’un antigène en immunisant des souris à l’aide de molécules d’ADN codant l’antigène, d’isoler les lymphocytes B puis de les fusionner avec des cellules de myélome exprimant cet antigène pour obtenir des hybridomes produisant des anticorps monoclonaux spécifiques de la structure tridimensionnelle de l’antigène. Toutefois, si ce procédé permet bien d’obtenir des anticorps monoclonaux dirigés contre des épitopes conformationnels, il est relativement complexe à mettre en œuvre. Il reste donc à fournir un procédé simple à mettre œuvre permettant d’obtenir des anticorps monoclonaux dirigés contre des épitopes conformationnels. La présente invention découle de la mise en évidence inattendue, par les inventeurs, qu’il était possible de sélectionner des lymphocytes B spécifiques d’un épitope conformationnel d’un antigène en utilisant deux peptides distincts issus de l’antigène et tridimensionnellement proches dans la structure de l’antigène. Ainsi, la présente invention concerne un procédé de sélection de lymphocytes, notamment B ou T, reconnaissant un antigène protéique à partir d’une population de cellules, comprenant une étape d’identification d’au moins un lymphocyte, notamment B ou T, se liant à au moins deux peptides distincts comprenant des séquences issues de l’antigène protéique, notamment au moins trois peptides distincts comprenant des séquences issues de l’antigène protéique. La présente invention concerne également un procédé de préparation d’au moins un anticorps, ou fragment d’anticorps, dirigé contre un antigène protéique, dans lequel l’anticorps, ou le fragment d’anticorps, est préparé à partir d’au moins un lymphocyte B obtenu par la mise en œuvre du procédé de sélection de lymphocytes B tel que défini ci-dessus. La présente invention concerne également un procédé de préparation d’au moins un TCR, ou fragment de TCR, dirigé contre un antigène protéique, dans lequel le TCR, ou le fragment de TCR, est préparé à partir d’au moins un lymphocyte T obtenu par la mise en œuvre du procédé de sélection de lymphocytes T tel que défini ci-dessus. La présente invention concerne également les anticorps, ou fragments d’anticorps, et les TCR, ou fragments de TCR, susceptibles d’être obtenus par la mise en œuvre des procédés de préparation selon l’invention. La présente invention concerne également les anticorps, ou fragments d’anticorps, et les TCR, ou fragments de TCR, susceptibles d’être obtenus par la mise en œuvre des procédés de préparation selon l’invention pour leur utilisation à titre de médicament ou d’agent diagnostic. La présente invention concerne également l’utilisation in vitro des anticorps, ou fragments d’anticorps, et des TCR, ou fragments de TCR, susceptibles d’être obtenus par la mise en œuvre des procédés de préparation selon l’invention à des fins expérimentales ou de diagnostic. Procédé de sélection de lymphocytes reconnaissant un épitope conformationnel d’un antigène protéique à partir d’une population de cellules, comprenant une étape d’identification d’au moins un lymphocyte se liant à au moins deux peptides distincts comprenant des séquences issues de l’antigène protéique, notamment au moins trois peptides distincts comprenant des séquences issues de l’antigène protéique. Procédé de sélection selon la revendication 1, comprenant une étape antérieure de sélection de lymphocytes parmi la population de cellules. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel les lymphocytes sont des lymphocytes B ou des lymphocytes T. Procédé selon l’une des revendications 1 à 3, dans lequel les lymphocytes sont des lymphocytes B. Procédé de sélection selon l’une des revendications 1 à 4, dans lequel la population de cellules est une population de cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC). Procédé de sélection selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel les au moins deux peptides distincts comprennent respectivement de 6 à 30 résidus d’acides aminés. Procédé de sélection selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel les au moins deux peptides distincts comprennent des séquences non chevauchantes issues de l’antigène protéique. Procédé de sélection selon l’une quelconque des revendications 1 à 7, dans lequel les au moins deux peptides distincts sont à une distance entre eux de 3.10 -9 m ou moins dans la structure tridimensionnelle de l’antigène protéique. Procédé de sélection selon l’une quelconque des revendications 1 à 8, comprenant une étape supplémentaire d’isolement d’au moins un lymphocyte se liant aux au moins deux peptides distincts. Procédé de sélection selon l’une quelconque des revendications 1 à 9, dans lequel l’étape d’identification, et éventuellement d’isolement, est mise en œuvre par cytométrie en flux, avec éventuellement triage de cellules. Procédé de sélection selon l’une quelconque des revendications 1 à 10, dans lequel l’antigène protéique est issu d’un agent infectieux ou d’une protéine humaine ou animale. Procédé de préparation d’au moins un anticorps, ou fragment d’anticorps, dirigé contre un antigène protéique, dans lequel l’anticorps, ou le fragment d’anticorps, est préparé à partir d’au moins un lymphocyte B obtenu par la mise en œuvre du procédé de sélection de lymphocytes tel que défini dans l’une des revendications 1 à 11.