Brevet FR3137573A1 — publié le 20240112

La présente invention concerne une composition cosmétique pour le soin anti-âge de la peau, comprenant de la caulerpine dans un milieu physiologiquement acceptable. De manière préférée, ladite caulerpine est obtenue à partir de Caulerpa Racemosa . L’invention concerne également un procédé non-thérapeutique de soin anti-âge d’une zone de la peau, comprenant une étape d’application topique de la composition selon l’invention. Enfin, selon un autre aspect, l’invention concerne également une méthode d’extraction et de purification de la caulerpine. Composition cosmétique de soin anti-âge comprenant de la caulerpine. La présente invention concerne une composition cosmétique pour le soin anti-âge de la peau, comprenant de la caulerpine dans un milieu physiologiquement acceptable. De manière préférée, ladite caulerpine est obtenue à partir de Caulerpa Racemosa . L’invention concerne également un procédé non-thérapeutique de soin anti-âge d’une zone de la peau, comprenant une étape d’application topique de la composition selon l’invention. Enfin, selon un autre aspect, l’invention concerne également une méthode d’extraction et de purification de la caulerpine. Art antérieur Le maintien d'une apparence juvénile est de nos jours un souci constant. Au cours du temps, et notamment du vieillissement chronologique et/ou photo-induit, la peau subit de nombreuses modifications et dégradations qui se traduisent, au niveau tissulaire, par une désorganisation de l'architecture de l'épiderme, de la jonction dermo-épidermique, du derme, ainsi que des systèmes d'irrigation sanguine et d'innervation, et un ralentissement ou dérèglement de différents métabolismes cellulaires, tels que ceux mis en jeu dans l'équilibre de la fonction barrière ou impliqués dans la mélanogénèse. Au niveau cellulaire, le vieillissement se traduit ainsi par une altération de la physiologie ou du métabolisme des principaux types cellulaires tels que les fibroblastes du derme, des kératinocytes de l'épiderme, et également des mélanocytes. Le vieillissement cutané résulte de deux processus distincts et indépendants qui font intervenir des facteurs intrinsèques ou extrinsèques. Le vieillissement intrinsèque ou chrono-biologique correspond au vieillissement normal ou physiologique lié à l'âge. Le vieillissement intrinsèque se traduit notamment par un ralentissement du renouvellement des cellules de l'épiderme et l'apparition de fines rides ou ridules. Au niveau du derme, la biosynthèse des macromolécules telles que le collagène diminue avec l'âge changeant les propriétés mécaniques du derme, d'où le relâchement cutané, un des signes cliniques du vieillissement. Le vieillissement extrinsèque correspond au vieillissement provoqué d'une manière générale par l'environnement extérieur et correspond notamment au photo-vieillissement dû à l'exposition au soleil. Le vieillissement cutané photo-induit, c'est-à-dire provoqué suite à une exposition au soleil est encore nommé photo-vieillissement ou héliodermie. Le photo-vieillissement est le résultat, au niveau du derme, de la dégradation des fibres de collagène ayant notamment pour conséquence des altérations cliniques telles que des rides épaisses et la formation d'une peau molle et tannée. Le vieillissement de la peau est donc accéléré par une exposition chronique aux UVs. Le vieillissement extrinsèque peut également être dû au tabagisme, à une alimentation trop riche en graisse ou encore à la consommation d’alcool. Ces éléments influencent notamment le changement graduel de l’environnement redox vers un état pro-oxydant, et contribuent ainsi à un changement progressif des facteurs endothéliaux menant à la dysfonction endothéliale. Il existe ainsi un grand nombre de soins cosmétiques dits « anti-âge » destinés à prévenir et/ou traiter le vieillissement, en particulier le photo-vieillissement et leurs signes, notamment à prévenir l'apparition des rides et à réduire de façon visible les rides déjà présentes, mais aussi atténuer ou supprimer les tâches de sénescence (dues à l’âge). Parmi ces soins cosmétiques on peut citer, par exemple, l'application régulière de lotions ou de crèmes dites « anti-âge » ou « antirides », comprenant différents actifs cosmétiques. Il perdure néanmoins le besoin constant de nouveaux actifs anti-âge efficaces à inclure dans des compositions cosmétiques de soin de la peau. La Demanderesse a ainsi identifié de manière inattendue un nouvel actif cosmétique permettant un soin anti-âge de la peau efficace, la caulerpine. Ainsi, selon un premier aspect, l’invention concerne une composition cosmétique pour le soin anti-âge de la peau, comprenant de la caulerpine dans un milieu physiologiquement acceptable. Par « composition cosmétique » est entendu selon l’invention une composition « non-thérapeutique », qui n’a donc pas vocation à traiter un patient. De fait, la composition cosmétique selon l’invention n’agit pas comme un médicament pour le traitement de diverses maladies telles que l’acné, la xérose, le psoriasis ou encore l’eczéma, mais permet d’améliorer l’aspect visuel superficiel de la peau, afin de lui donner un aspect rajeunit. Les ingrédients de ladite composition cosmétique pour le soin anti-âge de la peau sont combinés dans des quantités efficaces. Par « quantité efficace », on entend au sens de la présente invention une quantité suffisante pour obtenir l'effet attendu, pouvant être déterminé par l’Homme du métier. La caulerpine est un pigment jaune métabolisé par certaines espèces de caulerpes. Le genre Caulerpa, de la famille des Caulerpaceae, est représenté par 87 espèces d’algues, appelées les Caulerpes. Elles sont très majoritairement réparties dans l’hémisphère sud, seules sept espèces étant présentes en Méditerranée dont quatre dans le bassin occidental : C. taxifolia, C. racemosa , C. prolifera et C. olliveri (1) . Certaines espèces telles que C. racemosa ou C. taxifolia sont aujourd’hui considérées comme espèces invasives, leur prolifération fulgurante affectant négativement l’écosystème marin. Caulerpa racemosa est une espèce où la plante a des ramifications radiales, avec des ramules cylindriques compactes (2, 3). Caulerpa taxifolia, Caulerpa racemosa , Caulerpa prolifera , Caulerpa sertularioides sont toutes riches en métabolites secondaires. Elles sont connues pour développer des stratégies efficaces contre les brouteurs et les épiphytes, en synthétisant des métabolites secondaires répulsifs (4). Ces derniers ont largement été étudiés depuis leur introduction en mer Méditerranée, notamment ceux de C. taxifolia (1). Les plus représentées sont la caulerpine, la caulerpicine et la caulerpényne. La caulerpine est plus spécifique de Caulerpa racemosa . La caulerpine est un alcaloïde dit « bisindolique » car il contient deux groupes indoles reliés entre eux par un cycle de huit carbones contenant deux groupes carboxyles (5). Structure chimique de la caulerpine. Trois métabolites isolés de C. racemosa se distinguent par les points suivants : La CLP (I) (Mw = 398 g.mol-1) a été isolée à partir d’algues vertes (comme Codium decorticarum et Halimeda incrassate), dont 80 % des espèces de Caulerpa, ainsi qu’à partir de quelques algues rouges (dont Chondrus armatus (Harvey) Okamura) (6, 7, 8, 9). Les pourcentages de CLP I dans les différentes espèces de Caulerpa seraient : 15 % pour C. lentilifera, 5 % pour C. racemosa, 2 % pour C. microphysa et 8 % pour C. sertulariodes (10). Néanmoins, ces taux, sans doute surévalués, dépendent probablement d’autres facteurs comme l’origine géographique, l’ensoleillement ou le substrat. Des quantités allant de 1 à 5.47 mg par gramme d’algue pour les espèces C. cupressoides, C. paspaloides, C. prolifera et C. sertulaioides ont été trouvées (17). La CLP (II) (mW = 370 g.mol-1) est un diacide, qui se présente sous la forme de copeaux de couleur rouge à brun sombre. Sa température de fusion est comprise entre 254 et 256 °C La CLP (III) (Mw = 384 g.mol-1) est un pigment jaune orangé, qui se présente sous la forme d’aiguilles. Il ressemble à la caulerpine mais n’a qu’un seul groupement -CO2Me. Sa température de fusion est comprise entre 158 et 161 °C (5). De nombreuses méthodes d’extraction/purification de la caulerpine existent dans la littérature. Pour la caulerpine, ces méthodes ont généralement en commun : Un passage par différents solvants (extraction) : il peut s’agir de méthanol (CH3OH), dichlorométhane (CH2Cl2), chloroforme, acétone (Me2CO), acétate d’éthyle (EtOAc), butanol (C4H10O), n-butanol (C4H9OH), hexane, n-hexane (C6H14) Une séparation sur une colonne chromatographique (purification) : les colonnes employées étant par exemple les colonnes Sephadex LH-20, Amberlite XAD 1180, Silica gel 60 Merck, ou Honsul Un passage dans un spectrophotomètre (identification). Selon un mode de réalisation, la caulerpine peut être obtenue par extraction à l’éthanol ou au diméthylsulfoxyde. Des méthodes d’extraction de la caulerpine sont connues de l’Homme du métier et sont disponibles dans la littérature, notamment dans les documents indiqués dans la rubrique « Références ». . Une autre technique connue d’extraction de la caulerpine est la suivante : L’extrait éthanolique de Caulerpa racemosa a été chromatographié sur une colonne de gel de silice et élué successivement avec du n-hexane, n-hexane-chloroforme, chloroforme, chloroforme-méthanol et pur méthanol. Les fractions éluées avec l’hexane-chloroforme (1:1) ont donné des cristaux rouges de caulerpine avec le chloroforme. De manière préférée, la caulerpine selon l’invention est extraite par le procédé suivant : Les lots d’algues échantillonnés sont lyophilisés. Chaque lot, traité séparément, est ensuite broyé pour conduire à une fine poudre et extrait avec de l’éthanol à 96° sous ultrasons (3×15 min) à l’abris de l’air, de la lumière et à température ambiante. Chaque lot est filtré sous vide pour séparer le squelette de l’algue du filtrat. Chaque filtrat est évaporé sous pression réduite (T Sur les fractions dichlorométhane est réalisé une phase de purification, pour obtenir de la caulerpine pure. Pour cela, des colonnes chromatographiques silice diol sont de préférences utilisées. Des solvants de polarité croissante sont de préférence utilisées : cyclohexane, acetate d’éthyle, méthanol. Les fractions contenant la caulerpine sont ensuite lavées au moyen de cyclohexane. La caulerpine est ainsi obtenue. De manière alternative, la fraction cyclohexane peut également être éluée de la même façon pour obtenir de la caulerpine, mais en plus petite quantité. Ce type d’extraction et de purification est détaillée dans l’Exemple 1. Par « soin anti-âge de la peau » est entendu que la composition objet de l’invention a un effet technique non-thérapeutique permettant d’améliorer l’aspect visible de la peau, de préférence du visage, afin que celle-ci paraisse plus jeune. La composition selon l’invention permet ainsi d’hydrater, de repulper, de nourrir, de revitaliser, de lisser, de régénérer, de raffermir, de défroisser, de détoxifier la peau, d’illuminer le teint, d’atténuer les marques de l’âge, de lisser et/ou réduire la visibilité des rides et ridules. Ladite composition cosmétique selon l’invention permet également de lifter le contour des yeux, de lisser les zones fragiles du contour des yeux et des lèvres, d’harmoniser et de rendre le teint plus éclatant, de rafraichir le regard et/ou de réduire les poches sous les yeux et/ou les cernes. De manière plus spécifique, la composition selon l’invention démontre : - un effet anti-âge curatif non-thérapeutique via un effet bénéfique sur : la synthèse et la structure de la matrice extracellulaire ; la cohésion cellulaire et la lame basale ; - un effet anti-âge préventif non-thérapeutique via un effet bénéfique sur : la survie, la croissance et le renouvellement cellulaire ; la protection antioxydante ; - un effet anti-âge préventif et curatif non-thérapeutique via un effet bénéfique, en lien avec la différenciation cellulaire et la fonction barrière. Ainsi, les effets rapportés de la composition comprenant de la caulerpine selon l’invention permettent une régénération du derme, un effet antiride, la restructuration et le raffermissement du derme, une régénération et une revitalisation cellulaire, et d’améliorer et/ou renforcer la fonction barrière de la peau. En particulier, la composition selon l’invention comprenant de la caulerpine a pour effet, tel qu’illustré dans l’Exemple 2, de surexprimer d’au moins 50% les gènes codant pour les protéines suivantes, en lien avec la synthèse et la structure de la matrice extracellulaire : COL1A1, FBN2, LOXL1, PLOD3. De manière plus spécifique, le collagène alpha-1 de type I codée par le gène COL1A1 est le composant principal du collagène de type I, le collagène fibrillaire présent dans la plupart des tissus conjonctifs, y compris le cartilage. La Fibrilline 2 (FBN2) renforce les fibres élastiques de la matrice Extracellulaire. Elle permet la transmission homogène des forces de l’épiderme au derme. La Lysyl oxydase like 1 (LOXL1) est une enzyme qui initie la liaison entre les microfibres et l’élastine et assure la fonctionnalité des fibres élastiques. La Pro-Collagène-Lysine, 2-Oxoglutarate 5-Dioxygénase 3 (PLOD3) est une enzyme essentielle à la stabilité des liaisons intermoléculaire. Elle structure les fibres de collagène. En particulier, la composition selon l’invention comprenant de la caulerpine a pour effet, tel qu’illustré dans l’Exemple 2, de surexprimer d’au moins 50% les gènes codant pour les protéines suivantes, en lien avec la cohésion cellulaire et la lame basale :CD44, PXN, SDC4. CD44 est le récepteur de l’acide hyaluronique, également capable d’interagir avec les collagènes. Il est impliqué dans les interactions cellule/cellule et cellules/matrice extracellulaire. La Paxilline (PXN) est une protéine du cytosquelette située sur la face cytoplasmique des régions spécialisées pour l'attachement des cellules à la matrice extracellulaire. Le Syndécan 4 (SDC4) est un protéoglycane de la matrice dermique ayant un rôle dans l'adhésion cellulaire mais qui module également la prolifération des cellules du derme. En particulier, la composition selon l’invention comprenant de la caulerpine a pour effet, tel qu’illustré dans l’Exemple 2, de surexprimer d’au moins 50% les gènes codant pour les protéines suivantes, en lien avec la survie, la croissance et le renouvellement cellulaire : HBEGF, INSR, TP63. De manière plus spécifique, le facteur de croissance de type EGF lié à l'héparine (HBEGF) est un facteur de croissance qui participe au renouvellement de l'épiderme. Le récepteur de l’insuline (INSR) est impliqué dans le renouvellement de la peau, la synthèse des constituants du derme et la différenciation épidermique. La protéine TP63 est une protéine impliquée dans le renouvellement des kératinocytes et des fibroblastes, elle protège les cellules de la senescence et participe à la différenciation. En particulier, la composition selon l’invention comprenant de la caulerpine a pour effet, tel qu’illustré dans l’Exemple 2, de surexprimer d’au moins 50% les gènes codant pour les protéines suivantes, en lien avec protection antioxydante : GLRX, HMOX1, SOD2. De manière plus spécifiques, la glutaredoxine (GLRX) participe à l'élimination des radicaux oxygénés. L'hème oxygénase (HMOX1) est impliquée dans la résistance aux stress environnementaux. Elle agit comme une enzyme cytoprotectrice. La Superoxyde Dismutase 2 (SOD2) est une enzyme mitochondriale ayant une activité antioxydante. Elle est également connue pour réduire la pigmentation induite par les UV En particulier, la composition selon l’invention comprenant de la caulerpine a pour effet, tel qu’illustré dans l’Exemple 2, de surexprimer d’au moins 50% les gènes codant pour les protéines suivantes, avec la différenciation cellulaire et la fonction barrière : CASP14, IVL, LOR, TGM1. De manière plus spécifique, la Caspase-14 (CASP14) est une protéase qui est principalement exprimée dans les couches épidermiques suprabasales et activée lors de la formation de la couche cornée. Elle est nécessaire à la dégradation de la filaggrine en facteurs d'hydratation naturels de la peau. L'Involucrine (IVL) est une protéine essentielle de la couche cornée qui active la fonction barrière. La Loricrine (LOR) est un précurseur de l'enveloppe cornée, marqueur de la différenciation terminale La Transglutaminase 1 (TGM1) est une enzyme clé de la différenciation qui catalyse la liaison entre les précurseurs de la couche cornée et la membrane cellulaire. Elle favorise la formation de la barrière cutanée. De manière préférée selon l’invention, la caulerpine est extraite de Caulerpa Racemosa . Caulerpa racemosa comprend plusieurs variétés, dont cylindracea, laetevirens, et macrophysa. Selon un mode de réalisation, la caulerpine est présente dans la composition cosmétique de soin anti-âge de la peau selon l’invention à une concentration entre 0,01 % et 10 %, de préférence entre 0,1% et 5 %, de manière encore plus préférée 1%, en poids de la composition. Selon un mode de réalisation, ladite composition cosmétique comprend 0,01%, 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1%, 1,1%, 1,2%, 1,3%, 1,4%, 1,5%, 1,6%, 1,7%, 1,8%, 1,9%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, ou 10% en poids de la composition de caulerpine. La composition selon l'invention comprend un milieu physiologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau du visage et/ou du corps. En d'autres termes, le milieu utilisé présente une couleur, une odeur et un toucher agréables et ne génère pas d'inconforts inacceptables (tels que notamment picotements, tiraillements, rougeurs), susceptibles de détourner le consommateur d'utiliser cette composition. Selon un mode de réalisation, la composition cosmétique selon l’invention comprend en outre au moins un agent cosmétiquement acceptable. De manière préférée, ledit au moins un agent cosmétiquement acceptable est choisi parmi les agents apaisants, les agents restructurant, les agents régénérants, les agents revitalisants, les filtres solaires, les agents antirides, les agents hydratants, les agents anti-âges, les agents tensioactifs, les corps gras, les solvants organiques, les agents solubilisant, les agents épaississants et gélifiants, les lissants, les agents renforçant la fermeté, l’élasticité et/ou l’effet barrière de la peau, les antioxydants, les opacifiants, les eaux thermales, les agents matifiants, les filtres chimiques ou minéraux, les oligoéléments, les agents stabilisants, les agents moussants, les parfums, les émulsionnants ioniques ou non, les charges, les séquestrants et les chélateurs, les parfums, les filtres, les huiles essentielles, les matières colorantes, les pigments, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les vésicules lipidiques encapsulant un ou plusieurs actifs et/ou les conservateurs. De manière préférée, la caulerpine est solubilisée dans au moins un agent solubilisant choisi parmi : 2,3-butanediol, le 1,2-hexanediol, l’acétate d’éthyle, le 2-propanol, le propylène glycol, le pentylène glycol, et le dichlorométhane. De manière préférée, la caulerpine est solubilisée dans une association des solvants : 1,2-hexanediol/dichlorométhane ou pentylène glycol/dichlorométhane, suivi d’une étape d’évaporation sous pression réduire du dichlorométhane. Le dichlorométhane serait utilisé de façon temporaire en guise de co-solvant afin de faciliter la solubilisation de la caulerpine dans le 1,2-hexanediol ou le pentylène glycol. Par filtre solaire ou filtre UV est entendu un agent qui permet de protéger la peau des UVA et/ou des UVB. Elle constitue à ce titre un moyen de photoprotection externe passive, fonctionnant comme un filtre ultraviolet. Il existe deux types de filtres UV, présent ensemble ou séparément dans les produits commercialisés, à savoir les filtres minéraux comme l’oxyde de zinc, ou le dioxyde de titane, se présentant sous forme de poudres microscopiques qui agissent en réfléchissant les rayons UV, et les filtres chimiques, qui sont des composés chimiques organiques formant un mélange de plusieurs chromophores qui absorbent la lumière ultraviolette (comme l'oxybenzone, le butyl méthoxydibenzoylméthane, l’octyl-méthoxycinnamate, le salicylate d'octyle). Chacun des chromophores possède une bande d'absorption d'UV spécifique (d'où les filtres à bande étroite ou à large bande). De manière encore plus préférée, ledit filtre solaire est choisi parmi l’homosalate, l’oxybenzone, l’ensulizole, l’ecamsul, l’avobenzone, l’acide benzylidene camphor sulfonic, l’octocrylène, le polyacrylamidomethyl benzylidène camphor, l’ octinoxate, le peg 25-PABA, le PABA, l’isomamyl p- methoxycinnamate, l’octyl triazone, le drometrizole trisiloxane, diethylhexyl butamido triazone, ethylhexyl salicilate, ethylhexyl dimethyl PABA, 4-methylbenzylidene camphor, le 3-benzylidène camphor, l’octisalate, le padimate o, isoamyl p-Methoxycinnamate, benzophenone-4, le méthylène bis-benzotriazolyl tetra- methylbutylphenol, disodium phenyl dibenzimidazole tetrasulfonate, le bis-ethylhexyloxyphenol methoxyphenyl triazine, le polysilicone-15, le dioxyde de titane, l’oxyde de zinc, le butyl méthoxydibenzoylméthane, l’octyl-méthoxycinnamate, le salicylate d'octyle et/ou le diethylamino hydroxybenzoyl hexyl benzoate. De manière préférée, ladite composition cosmétique est formulé sous forme de crème, d'une pommade, d’un onguent, d’un baume, d’un masque, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d’un spray, d'une pâte, d'une mousse, d'un aérosol, d’un stick, d’un shampooing, d’un après-shampooing, de patchs, d'une solution aqueuse hydroalcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple, d'un gel aqueux ou huileux, d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide, et/ou d'une dispersion d'huile dans une phase aqueuse à l'aide de sphérules, ces sphérules pouvant être des nanoparticules polymériques telles que les nanosphères et les nanocapsules ou des vésicules lipidiques de type ionique et/ou non-ionique. Selon un deuxième aspect, l’invention concerne un procédé cosmétique de soin anti-âge d’une zone de la peau, de préférence du visage, comprenant une étape d’application de la composition selon les revendications précédentes sur la peau, de préférence du visage. Par « application topique », on entend au sens de la présente invention une application sur la peau (dont le cuir chevelu). De manière préférée, une quantité d’environ 0,1 à 50 mg/cm 2 , de préférence environ 0,25 à 25 mg/cm 2 , de manière encore plus préférée d’environ 2 à 10 mg/cm 2 , de composition cosmétique selon l’invention est appliqué sur la zone de la peau. De manière préférée, la composition cosmétique selon l’invention est appliquée une à deux fois par jour, de préférence 2 fois par jour, pendant au moins 7 jours, de préférence au moins 15 jours, de manière encore préférée au moins un mois, et de manière particulièrement préférée au moins 2 mois. De manière tout particulièrement préférée, la composition cosmétique est appliquée dans le procédé selon l’invention 2 fois par jour pendant au moins 1 mois, de préférence 2 mois. De manière préférée selon l’invention, ladite zone de la peau est le visage. Selon un troisième aspect, l’invention concerne l’utilisation de la composition selon l’invention pour le soin anti-âge d’une zone de la peau, de préférence du visage. Selon un quatrième aspect, l’invention concerne une méthode d’extraction et de purification de la caulerpine comprenant les étapes de : Lyophilisation et broyage de plants de Caulerpa Racemosa , permettant l’obtention d’une poudre ; Extraction de la poudre par mise en contact avec de l’éthanol à 96° et traitement aux ultrasons, à l’abris de l’air, de la lumière et à température ambiante ; Filtration sous vide pour séparer le squelette de l’algue du filtrat ; Évaporation du filtrat pour obtenir un extrait brut éthanolique ; Incorporation de l’extrait brut dans un mélange eau/méthanol 30/70 % ; Extraction liquide/liquide avec successivement : un solvant cyclohexane ; un solvant dichlorométhane ; et un solvant l’acétate d’éthyle ; Purification de la fraction dichlorométhane, et optionnellement de la fraction cyclohexane ; Obtention de la caulerpine. De manière préférée, le traitement aux ultrasons réalisé à l’étape b. comprend l’application d’une à cinq séquences d’ultrasons, de préférence 2 à 4 séquences, de manière encore plus préférée 3 séquences d’ultrasons. De manière préférée, à l’étape b., chaque séquence dure entre 1 et 30 minutes, de manière préférée entre 10 et 20 minutes, de manière encore plus préférée 15 minutes. De manière préférée, à l’étape b., la puissance des ultrasons est de 40 KHz. Cette puissance permet de garantir que quasiment toute la caulerpine a été extraite. Par « séquences d’ultrasons » est entendu que le mélange obtenu à l’étape b. subit des périodes d’ultrasons entrecoupées de pauses où ledit mélange n’est pas soumis aux ultrasons. Par exemple trois séquences d’ultrasons signifie qu’une première application d’ultrason est réalisée, suivie d’une pause, puis d’une deuxième application d’ultrason, suivie d’une pause, et enfin une dernière application d’ultrason. De manière préférée, l’étape d. d’évaporation du filtrat est réalisée sous pression, de préférence entre 10 et 15 mbar. De manière préférée, l’étape d. d’évaporation du filtrat est réalisée à une température comprise entre 28°C et 35°C. Selon un mode de réalisation, ladite étape de purification est réalisée par chromatographie. Selon un mode de réalisation, ladite étape de purification est réalisée grâce à des colonnes chromatographiques silice diol en utilisant les solvants : cyclohexane, acétate d’éthyle, méthanol ; suivi d’une étape de lavage au cyclohexane. Par « extraction » est entendu selon l’invention que la caulerpine est séparée du reste de la plante qui la contenait. Par « purification » est entendu selon l’invention le fait de séparer, la (les) substance(s) voulue(s) du reste des substances présentes. Par « lyophilisation » est entendu selon l’invention le processus de séchage à basse température permettant de retirer l'eau contenue dans un produit. Cela consiste en trois étapes : la congélation puis la sublimation et enfin la désorption. Par « broyage » est entendu selon l’invention l’action consistant à réduire une matière, par exemple par action mécanique. Par « incorporation » de l’extrait brut dans un mélange eau/méthanol 30/70 % est entendu que l’extrait brut obtenu est mélangé avec un mélange pré-préparé comprenant mélange eau/méthanol 30/70 % Par « extraction liquide/liquide » est entendu selon l’invention une extraction par transfert entre deux phases liquides. Selon un cinquième aspect, l’invention concerne une composition comprenant de la caulerpine, pour utilisation dans le traitement des muqueuses. De manière préférée, cette composition pour utilisation permet de traiter les muqueuses lésées. Par « muqueuse » est entendue selon l’invention la membrane qui tapisse les cavités de l'organisme (tube digestif, fosses nasales, bronches, anus…) qui se raccorde avec la peau au niveau des orifices naturels, et qui est lubrifiée par la sécrétion de mucus. Ces lésions de la muqueuse peuvent résulter d'un trouble ou d'une maladie ; dans le cas de la muqueuse intestinale, la lésion peut être provoquée par le syndrome du côlon irritable. Dans cet aspect, l'extrait peut être administré par voie topique ou par voie orale. Selon un sixième aspect, l’invention concerne un complément alimentaire à prise orale comprenant de la caulerpine dans un milieu physiologiquement acceptable. Par " complément alimentaire ", on entend selon l'invention un produit pouvant apporter un bénéfice nutritionnel. Ce complément peut être pris seul ou être formulé avec d'autres composés afin de rendre la composition plus attrayante à consommer en étant plus similaire à un produit alimentaire courant. Ce complément peut être un facteur contribuant à prévenir ou à diminuer tout problème de douleur viscérale superficielle qui ne nécessite pas de traitement thérapeutique. Selon un mode de réalisation, la prise du complément alimentaire est effectuée par une ou plusieurs doses successives. Selon un mode de réalisation, les doses successives sont séparées d'au moins 12 heures, de préférence d'au moins un jour, plus préférablement d'au moins deux jours, encore plus préférablement d'au moins 3 jours, encore plus préférablement d'au moins 4 jours, encore plus préférablement d'au moins 5 jours, encore plus préférablement d'au moins 6 jours. Selon un mode de réalisation, la prise orale du complément alimentaire est faite par des capsules, des gélules, des comprimés, des poudres, des granules, des solutions orales ou des suspensions. Selon un mode de réalisation, la prise orale du complément nutritionnel est effectuée par des produits alimentaires, une boisson, un additif alimentaire ou un produit laitier, contenant ledit complément nutritionnel. Figures [Fig 1] : Chromatogrammes HPLC-UV à 214 nm, 254 nm et 280 nm des fractions Cyclohexane (a), Dichlorométhane (b) et Acétate d’éthyle (c) (Macherey-Nagel propylphényl-C18, 250 x 4,6 mm ; 5 μm, gradient : CH3CN + 0,1% d’acide formique (AF), H2O + 0,1% AF, 10:90 à 100:0 en 30 mn). : Chromatogramme HPLC-DAD-DEDL à 214 nm, 254 nm et 280 nm de la caulerpine (Macherey-Nagel propylphényl-C18, 250 x 4,6 mm ; 5 μm, gradient : CH 3 CN + 0,1% d’acide formique (AF), H 2 O + 0,1% AF, 10:90 à 100:0 en 30 mn) Exemples Exemple 1 : Procédé d’extraction et de purification de l’extrait brut de Caulerpa racemosa selon l’invention : Extraction Des lots d’algues échantillonnés à Saint Jean Cap/La Ciotat (11 288 g, lots algues égouttées mais non rincées) et Agde (8 500 g, lots algues égouttées mais non rincées) sont lyophilisés pour conduire respectivement à 4 800 g (poids sec total des lots échantillonnés à Saint Jean Cap/La Ciotat) et 3 200 g de matières sèches algales (poids sec total des lots échantillonnés à Saint Jean Cap/la Ciotat). Chaque lot, traité séparément, est broyé pour conduire à une fine poudre et extrait avec de l’éthanol à 96° sous ultrasons (3×15 min) à l’abris de l’air, de la lumière et à température ambiante. Chaque lot est filtré sous vide pour séparer le squelette de l’algue du filtrat. Chaque filtrat est évaporé sous pression réduite (T Chaque extrait brut organique a alors été repris dans un mélange eau/méthanol (30/70), puis soumis à une Extraction liquide/liquide avec des solvants de polarité croissante : cyclohexane puis dichlorométhane et enfin acétate d’éthyle. Ces différentes fractions, ainsi que la fraction résiduelle eau/méthanol, ont alors été évaporées sous pression réduite (T Des analyses HPLC-DAD-DEDL et HPLC-UV-HRMS62 des différentes fractions ont été réalisées. Les résultats en termes d’HPLC-DAD-UV à 214 nm, 254 nm et 280 nm pour les factions cyclohexane (a), dichlorométhane (b) et acétate d’éthyle (c) ont été obtenus et sont présentés en [Fig 1]. Ces résultats montrent que la fraction cyclohexane contient majoritairement des corps gras, ainsi que des pigments tels que de la chlorophylle, très faiblement détectés par HPLC en phase inverse. Les fractions dichlorométhane contiennent quant a elles majoritairement de la caulerpine, ainsi que des corps gras co-élués avec la caulerpine, alors que les fractions acétate d’éthyle semblaient contenir majoritairement des composés polaires non identifiés. Enfin, la fraction eau/méthanol résiduelle semblait contenir majoritairement des sels, ainsi que quelques composés polaires non identifiés. Nous avons également pu noter que les fractions cyclohexane, dichlorométhane et eau/méthanol résiduelle présentaient des profils HPLC-DAD-DEDL sensiblement proches, que l’algue provienne de Saint Jean Cap/La Ciotat ou d’Agde. Purification Sur les fractions dichlorométhane est réalisé une phase de purification, pour obtenir de la caulerpine pure. Pour cela, des colonnes chromatographiques silice diol sont réalisées sur : 1 g (C1) et 550 mg (C2) de fraction, de manière automatisée (à l'aide de la PuriFlash) 6 g (C3) de fraction, de manière manuelle, par impossibilité de purifier une quantité si importante par PuriFlash Après dépôt de l’échantillon en haut de la colonne, nous avons alors utilisé différents solvants de polarité croissante selon la méthode d’élution suivante : Volume de colonne % Cyclohexane % Acetate d’éthyle % Méthanol 0 100 0 0 2 100 0 0 12 0 100 0 14 0 100 0 24 0 0 100 29 0 0 100 Tableau 1 : Méthode d’élution pour purification de la caulerpine sur colonne Les colonnes chromatographiques sont ensuite analysées par CCM (chromatographie couche mince), afin de rassembler les tubes contenant la caulerpine. Les autres tubes ayant des analyses CMM similaires ont été rassemblés pour obtenir des fractions. Différents lavages des fractions contenant la caulerpine sont ensuite réalisés, au moyen de cyclohexane. Selon les méthodes de purification utilisées, les quantités de caulerpine obtenues sont présentées dans le tableau 2. Colonne chromatographique C1 C2 C3 Méthode de purification PuriFlash PuriFlash PuriFlash Quantité de fraction dichlorométhane utilisée (g) 1 0,550 6 Quantité de caulerpine obtenue (mg) 144 67 765 Tableau 2 : Quantité de caulerpine obtenue selon les fractions purifiées En parallèle, une colonne chromatographique silice diol sur 3.5 g de fraction cyclohexane a été réalisée, de manière automatisée (à l’aide de la PuriFlash), selon la même méthode d’élution. Seuls 15 mg de caulerpine pure ont pu être obtenus. L’isolement de la caulerpine est confirmée par les analyses HPLC-DAD-DEDL, HPLC-UV-HRMS et RMN. L’analyse HPLC-DAD-DEDL a permis de confirmer la pureté de la molécule, le chromatogramme obtenu est présenté à la . La formule brute de la caulerpine, C 24 H 18 N 2 O 4 , a été confirmée par analyse par spectrométrie de masse haute résolution en mode positif HRESI(+)MS (ion pseudomoléculaire [M+H] + de m/z 399,1315 ; Δppm = -7,52). L’ensemble de ces données spectrales (HRMS, RMN), couplé aux données de la bibliographie, a permis d’identifier la structure comme étant celle de la caulerpine. Exemple 2 : Évaluation de la composition cosmétique de soin anti-âge de la peau selon l’invention, sur l’expression de gènes au sein d’explants de peau humaine. L’étude est réalisée par le laboratoire Syntivia. 1. OBJECTIF DE L’ETUDE L’objectif de l’étude est d’étudier l’efficacité de la composition selon l’invention sur un modèle ex-vivo prospectif de type cosmétogénomique. La technologie RT-qPCR microfluidique sera utilisée. La puce utilisée permet dans cette étude de faire l'analyse d’un produit en triplicata versus 90 gènes sur explants de peau. 2. PROTOCOLE DE TEST GENOMIQUE 2.1 Modèle biologique Le test a été mené sur explants de peau : une biopsie de peau baignée dans une matrice solide et nourrissante tandis que sa surface épidermique est conservée en contact avec l'air. La biopsie de la peau est fermement ancrée dans la matrice et scellée pour empêcher toute diffusion latérale de formulation destinée a une application topique. Les explants sont issus d’une abdominoplastie de femme de 50 ans correspondant a un phototype de II sur l’échelle de Fitzpatrick. 2.2 Évaluation des produits L’expérience a été menée en triplicata (n=3) dans les conditions suivantes : - Explant de peau non traité - Explant de peau + solvant (90% eau/10% éthanol) - Explant de peau + caulerpine Les produits ont été préparés comme suit : Solvant : Prendre 100 μl d’éthanol et ajouter 900μl d’eau = 10% éthanol/90% eau. Ce produit sera dépose sur explant en topique (10μl, 48h). Caulerpine : Prendre 3mg de caulerpine pure disponible et ajouter 300 μl d’éthanol = 10 mg/ml de composé pur dans 100% éthanol Puis prendre 100μl de caulerpine pure 10mg/ml et ajouter 900μl d’eau = 1 mg/ml de composé pur dans 10% éthanol/90% eau. Ce produit sera déposé sur explant en topique (10μl, 48h). Les explants ont été traités avec le produit durant 2 jours. A l’issus de la phase de culture, les explants ont été retirés de leurs inserts et les ARNm ont été extraits. Ces ARNs ont ensuite été reverse-transcrits en cDNA. Enfin, les étapes spécifiques de préparation pour la puce (96 gènes) selon le protocole de Fluidigm sont entreprises. Une étape de pré-amplification en présence de l’ensemble des amorces utilisées sur la puce est réalisée. Chaque échantillon d’ADNc préamplifié est ensuite disposé dans une plaque de 96 puits suivant le plan de plaque avec le mix permettant la PCR en temps réel. En parallèle sur une autre plaque 96 puits chaque paire d’amorces est disposée dans un puits suivant le plan de plaque. Ensuite chaque mix est déposé de part et d’autre de la puce. Le mélange des deux mix est effectué par l’IFC Controller puis la puce est disposée dans le BioMark pour réaliser la PCR en temps réel. 2.5 Méthode d’analyse des résultats La spécificité de chaque couple de primer est vérifiée pour toutes les conditions par analyse des courbes de dissociation et les points problématiques présentant des doubles pics sont retirés de l’analyse. Chaque CT est ensuite ramené aux gènes de référence et à la condition cellulaire contrôle pour calculer le ∆∆CT et l’expression relative est calculée en fonction du ∆∆CT grâce a la formule 2-∆∆CT. Pour chaque condition, l’erreur standard à la moyenne (SEM) est calculée et les points avec des SEM trop importantes (>40% d’écart entre la SEM et la moyenne des 3 valeurs) sont retirés de l’analyse. Les résultats sont exprimés en pourcentage de surexpression ou de sous-expression par rapport a la condition de référence. Les gènes sont ensuite classés par activité biologique pour faciliter la lecture. 3. RESULTATS : EFFET DES PRODUITS SUR L'EXPRESSION DES GENES Les résultats sont présentés ci-dessous. L’expression basale de chaque gène est a 100%, sont présentés ici les modifications d’expression génique supérieures a 50% d’induction et inférieures a 50% d’inhibition. Les gènes suivants sont surexprimés concernant l’anti-âge curatif : Concernant la Synthèse et structure de la Matrice ExtraCellulaire (Derme) : COL1A1 +120% FBN2 +80% LOXL1 +280% PLOD3 +90% La caulerpine démontre une augmentation de l’expression de nombreux gènes en lien avec la Synthèse et la structure de la Matrice ExtraCellulaire (Derme) Concernant la cohésion et la Lame Basale : CD44 +50% PXN+80% SDC4 +90% La caulerpine démontre une augmentation de l’expression de nombreux gènes en lien avec la cohésion et la Lame Basale. Les gènes suivants sont surexprimés concernant l’anti-âge préventif : Concernant la Survie, la Croissance et le renouvellement cellulaire : HBEGF +150% INSR +60% TP63 +50% Ces gènes sont liés aux activités suivantes : HBEGF : Facteur de croissance qui participe au renouvellement de l'épiderme INSR : Récepteur de l'insuline impliqué dans le renouvellement de la peau, la synthèse des constituants du derme et la différenciation épidermique TP63 : TP63 est une protéine impliquée dans le renouvellement des kératinocytes et des fibroblastes, elle protège les cellules de la senescence et participe à la différenciation. La caulerpine démontre une augmentation de l’expression de nombreux gènes en lien avec la survie, la croissance et le renouvellement cellulaire. Concernant la protection antioxydante : GLRX +80% HMOX1 +130% SOD2 +230% La caulerpine démontre une augmentation de l’expression de nombreux gènes en lien avec la protection antioxydante. Les gènes suivants sont surexprimés concernant l’anti-âge préventif et curatif, en lien avec la différenciation cellulaire et la fonction barrière : CASP14 +170% IVL +80% LOR+80% TGM1 +230% La caulerpine démontre une augmentation de l’expression de nombreux gènes en lien avec différenciation cellulaire et la fonction barrière. 5. CONCLUSION GLOBALE DE L’ETUDE La caulerpine montre des effets positifs en anti-âge, en particulier dans la différenciation cellulaire et la fonction barrière, la protection antioxydante, la survie, la croissance et le renouvellement cellulaire, et la synthèse et structure de la matrice extracellulaire. Composition cosmétique pour le soin anti-âge de la peau, comprenant de la caulerpine dans un milieu physiologiquement acceptable. Composition cosmétique pour le soin anti-âge de la peau selon la revendication précédente, où la caulerpine est extraite de Caulerpa Racemosa . Composition cosmétique selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la caulerpine est présente à une concentration entre 0,01 % et 10 %, de préférence entre 0,1% et 5 %, de manière encore plus préférée 1%, en poids de la composition. Composition cosmétique selon l’une quelconque des revendications précédentes, comprenant en outre au moins un agent cosmétiquement acceptable choisi parmi les agents apaisants, les agents restructurant, les agents régénérants, les agents revitalisants, les filtres solaires, les agents antirides, les agents hydratants, les agents anti-âges, les agents tensioactifs, les corps gras, les solvants organiques, les agents solubilisant, les agents épaississants et gélifiants, les lissants, les agents renforçant la fermeté, l’élasticité et/ou l’effet barrière de la peau, les antioxydants, les opacifiants, les eaux thermales, les agents matifiants, les filtres chimiques ou minéraux, les oligoéléments, les agents stabilisants, les agents moussants, les parfums, les émulsionnants ioniques ou non, les charges, les séquestrants et les chélateurs, les parfums, les filtres, les huiles essentielles, les matières colorantes, les pigments, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les vésicules lipidiques encapsulant un ou plusieurs actifs et/ou les conservateurs. Composition cosmétique selon la revendication précédente, où ledit au moins un agent cosmétiquement acceptable comprend au moins un agent solubilisant choisi parmi : 2,3-butanediol, le 1,2-hexanediol, l’acétate d’éthyle, le 2-propanol, le propylène glycol, le pentylène glycol, et le dichlorométhane, de préférence une association 1,2-hexanediol/dichlorométhane ou pentylène glycol/dichlorométhane. Composition cosmétique selon l’une quelconque des revendications précédentes, où ladite composition cosmétique est formulée sous forme de crème, d'une pommade, d’un onguent, d’un baume, d’un masque, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d’un spray, d'une pâte, d'une mousse, d'un aérosol, d’un stick, d’un shampooing, d’un après-shampooing, de patchs, d'une solution aqueuse hydroalcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple, d'un gel aqueux ou huileux, d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide, et/ou d'une dispersion d'huile dans une phase aqueuse à l'aide de sphérules, ces sphérules pouvant être des nanoparticules polymériques telles que les nanosphères et les nanocapsules ou des vésicules lipidiques de type ionique et/ou non-ionique. Procédé cosmétique non-thérapeutique de soin anti-âge d’une zone de la peau, de préférence du visage, comprenant une étape d’application topique de la composition selon les revendications précédentes sur la peau, de préférence du visage. Utilisation cosmétique non-thérapeutique de la composition selon les revendications 1 à 6 pour le soin anti-âge d’une zone de la peau, de préférence du visage. Méthode d’extraction et de purification de la caulerpine comprenant les étapes de : Lyophilisation et broyage de plants de Caulerpa Racemosa , permettant l’obtention d’une poudre ; Extraction de la poudre par mise en contact avec de l’éthanol à 96° et traitement aux ultrasons, à l’abris de l’air, de la lumière et à température ambiante ; Filtration sous vide pour séparer le squelette de l’algue du filtrat ; Évaporation du filtrat pour obtenir un extrait brut éthanolique ; Incorporation de l’extrait brut dans un mélange eau/méthanol 30/70 % ; Extraction liquide/liquide avec successivement : un solvant cyclohexane ; un solvant dichlorométhane ; et un solvant l’acétate d’éthyle ; Purification de la fraction dichlorométhane, et optionnellement de la fraction cyclohexane ; Obtention de la caulerpine. Méthode d’extraction de la caulerpine selon la revendication précédente, où l’étape de purification est réalisée grâce à des colonnes chromatographiques silice diol en utilisant les solvants : cyclohexane, acétate d’éthyle, méthanol ; suivi d’une étape de lavage au cylohexane.