Brevet FR3126617A1 — publié le 20230310

compositions comprenant des vésicules extracellulaires, des biomolécules sécrétées et/ou des milieux conditionnés, et procédés pour les produire La divulgation concerne de nouvelles compositions comprenant des 1) milieux conditionnés, 2) des combinaisons de biomolécules sécrétées/molécules organiques, et/ou 3) des vésicules extracellulaires sécrétées/exosomes prélevées à partir d'une culture de cellules épithéliales différenciées, tous uniques, ainsi que des procédés de fabrication et d'utilisation de telles compositions. Figure pour l'abrégé : 1 compositions comprenant des vÉsicules extracellulaires, des biomolÉcules sécrÉtÉes et/ou des milieux conditionnÉs, et procÉdÉs pour les produire La divulgation concerne des compositions et des procédés de fabrication de compositions à partir de milieux conditionnés produits par des cellules épithéliales différenciées, et des procédés d'utilisation de celles-ci. CONTEXTE Les kératinocytes représentent le type de cellule majeur de l'épiderme, la plus externe des couches de la peau, constituant environ 90 % des cellules. Ils prennent naissance dans la couche la plus profonde de l'épiderme, la couche basale, et remontent jusqu'à la dernière couche barrière de la peau, le stratum corneum (couche cornée). Là, les kératinocytes se présentent sous la forme de cellules squameuses sans noyau, plates et hautement kératinisées. La fonction principale des kératinocytes est la formation d'une barrière contre les dommages environnementaux causés par la chaleur, le rayonnement UV, la perte d'eau, les bactéries pathogènes, les champignons, les parasites et les virus. Les kératinocytes jouent donc un rôle important dans nombre de processus physiologiques dont le vieillissement, la protection contre les coups de soleil et la modulation des réponses immunitaires. Les kératinocytes sécrètent une variété de biomolécules qui jouent un rôle dans ces processus. Le prélèvement de ces biomolécules pourrait s'avérer précieuse pour le traitement de diverses affections. Cependant, le prélèvement de quantités et de combinaisons biologiquement utiles de ces biomolécules est entravé par la source des kératinocytes. Dans certains cas, les lignées cellulaires sont cultivées en monocouche ou sur des billes, par opposition aux cellules cultivées en trois dimensions (3D). Le milieu de culture cellulaire conditionné conventionnel produit par les lignées cellulaires cultivées en monocouche ou sur des billes est généralement jeté. Dans d'autres cas, les cellules sont intégrées dans une matrice ou mises en suspension dans un milieu, tel qu'un milieu concentré, qui soutient les cellules dans un format tridimensionnel. Voir, par exemple, le document U.S. 8 138 147. Cependant, les tissus comportant des couches épithéliales différenciées, telles qu'une couche basale, un stratum spinosum, une couche granulaire et un stratum corneum (comme on le trouve in vivo), ne sont pas divulgués dans l'art en employant ces procédés de culture cellulaire tridimensionnelle. Ainsi, il n'existe actuellement aucune composition contenant la variété ou le niveau de facteurs de croissance ou de biomolécules que l'on trouve dans les milieux conditionnés préparés selon les procédés décrits ici. RÉSUMÉ Une composition comprenant des vésicules extracellulaires et un vecteur cosmétique acceptable a maintenant été développée de manière étonnante et inattendue. Dans un mode de réalisation, les vésicules extracellulaires sont dérivées d'un milieu conditionné prélevé de kératinocytes cultivés à une interface air-liquide dans un milieu nutritif suffisant pour répondre aux besoins nutritionnels nécessaires à la croissance des cellules in vitro pour former des cellules épithéliales différenciées. Dans un mode de réalisation, la composition comprend des vésicules extracellulaires dérivées du milieu conditionné prélevé par les kératinocytes et un vecteur cosmétique acceptable, dans lequel les kératinocytes sont cultivés à une interface air-liquide dans un milieu nutritif suffisant pour répondre aux besoins nutritionnels nécessaires à la croissance des cellules in vitro pour former des cellules épithéliales différenciées. Dans un mode de réalisation, les cellules épithéliales différenciées sont confluentes à au moins 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 %. Dans un autre mode de réalisation, les cellules épithéliales différenciées comprennent en moyenne au moins 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25 couches de cellules vivantes. Par exemple, les cellules épithéliales différenciées peuvent comprendre en moyenne 1 à 2 couches de cellules, telles que 2 couches de cellules vivantes, ou en moyenne 3 à 5 couches de cellules, telles que 3 à 4 couches de cellules vivantes, ou en moyenne 5 à 8 couches de cellules, telles que 6 à 7 couches de cellules vivantes, ou en moyenne 8 à 10 couches de cellules vivantes. Les cellules épithéliales différenciées peuvent former des couches de cellules comprenant une couche basale, un stratum spinosum, une couche granulaire et un stratum corneum. Dans un mode de réalisation, les cellules épithéliales différenciées ont une épaisseur de couches de cellules vivantes d'au moins environ 2 µm, d'au moins environ 3 µm, d'au moins environ 4 µm, d'au moins environ 5 µm, d'au moins environ 6 µm, d'au moins environ 7 µm, d'au moins environ 8 µm, d'au moins environ 9 µm, d'au moins environ 10 µm, d'au moins environ 11 µm, d'au moins environ 12 µm, au moins environ 13 µm, au moins environ 14 µm, au moins environ 15 µm, au moins environ 16 µm, au moins environ 17 µm, au moins environ 18 µm, au moins environ 19 µm, au moins environ 20 µm, au moins environ 21 µm, au moins environ 22 µm, au moins environ 23 µm, au moins environ 24 µm, au moins environ 25 µm, au moins environ 26 µm, au moins environ 27 µm, au moins environ 28 µm, au moins environ 29 µm, au moins environ 30 µm, au moins environ 31 µm, au moins environ 32 µm, au moins environ 33 µm, au moins environ 34 µm, au moins environ 35 µm, au moins environ 36 µm, au moins environ 37 µm, au moins environ 38 µm, au moins environ 39 µm, au moins environ 40 µm, au moins environ 41 µm, au moins environ 42 µm, au moins environ 43 µm, au moins environ 44 µm, au moins environ 45 µm, au moins environ 46 µm, au moins environ 47 µm, au moins environ 48 µm, au moins environ 49 µm, au moins environ 50 µm, au moins environ 51 µm, au moins environ 52 µm, au moins environ 53 µm, au moins environ 54 µm, au moins environ 55 µm, au moins environ 56 µm, au moins environ 57 µm, au moins environ 58 µm, au moins environ 59 µm, au moins environ 60 µm, au moins environ 61 µm, au moins environ 62 µm, au moins environ 63 µm, au moins environ 64 µm, au moins environ 65 µm, au moins environ 66 µm, au moins environ 67 µm, au moins environ 68 µm, au moins environ 69 µm, au moins environ 70 µm, au moins environ 71 µm, au moins environ 72 µm, au moins environ 73 µm, au moins environ 74 µm, au moins environ 75 µm, au moins environ 76 µm, au moins environ 77 µm, au moins environ 78 µm, au moins environ 79 µm, au moins environ 80 µm, au moins environ 81 µm, au moins environ 82 µm, au moins environ 83 µm, au moins environ 84 µm, au moins environ 85 µm, au moins environ 86 µm, au moins environ 87 µm, au moins environ 88 µm, au moins environ 89 µm, au moins environ 90 µm, au moins environ 91 µm, au moins environ 92 µm, au moins environ 93 µm, au moins environ 94 µm, au moins environ 95 µm, au moins environ 96 µm, au moins environ 97 µm, au moins environ 98 µm, au moins environ 99 µm, au moins environ 100 µm, au moins environ 101 µm, au moins environ 102 µm, au moins environ 103 µm, au moins environ 104 µm, au moins environ 105 µm, au moins environ 106 µm, au moins environ 107 µm, au moins environ 108 µm, au moins environ 109 µm, au moins environ 110 µm, au moins environ 111 µm, au moins environ 112 µm, au moins environ 113 µm, au moins environ 114 µm, au moins environ 115 µm, au moins environ 116 µm, au moins environ 117 µm, au moins environ 118 µm, au moins environ 119 µm, ou au moins environ 120 µm. Par exemple, les cellules épithéliales différenciées peuvent avoir une épaisseur de couches de cellules vivantes d'environ 2 µm à environ 141 µm, d'environ 2 µm à environ 140 µm, d'environ 2 µm à environ 139 µm, d'environ 2 µm à environ 138 µm, d'environ 2 µm à environ 137 µm, d'environ 2 µm à environ 136 µm, d'environ 2 µm à environ 135 µm, d'environ 2 µm à environ 134 µm, d'environ 2 µm à environ 133 µm, d'environ 2 µm à environ 132 µm, d'environ 2 µm à environ 131 µm, d'environ 2 µm à environ 130 µm, d'environ 2 µm à environ 129 µm, d'environ 2 µm à environ 128 µm, d'environ 2 µm à environ 127 µm, d'environ 2 µm à environ 126 µm, d'environ 2 µm à environ 125 µm, d'environ 2 µm à environ 124 µm, d'environ 2 µm à environ 123 µm, d'environ 2 µm à environ 122 µm, d'environ 2 µm à environ 121 µm, ou d'environ 2 µm à environ 120 µm. Par exemple, les cellules épithéliales différenciées peuvent avoir une épaisseur de couches de cellules vivantes d'environ 70 µm à environ 141 µm, d'environ 70 µm à environ 140 µm, d'environ 70 µm à environ 139 µm, d'environ 70 µm à environ 138 µm, d'environ 70 µm à environ 137 µm, d'environ 70 µm à environ 136 µm, d'environ 70 µm à environ 135 µm, d'environ 70 µm à environ 134 µm, d'environ 70 µm à environ 133 µm, d'environ 70 µm à environ 132 µm, d'environ 70 µm à environ 131 µm, d'environ 70 µm à environ 130 µm, d'environ 70 µm à environ 129 µm, d'environ 70 µm à environ 128 µm, d'environ 70 µm à environ 127 µm, d'environ 70 µm à environ 126 µm, d'environ 70 µm à environ 125 µm, d'environ 70 µm à environ 124 µm, d'environ 70 µm à environ 123 µm, d'environ 70 µm à environ 122 µm, d'environ 70 µm à environ 121 µm, ou d'environ 70 µm à environ 120 µm, comme d'environ 71 µm à environ 120 µm, d'environ 72 µm à environ 120 µm, d'environ 73 µm à environ 120 µm, d'environ 74 µm à environ 120 µm, d'environ 75 µm à environ 120 µm, d'environ 76 µm à environ 120 µm, d'environ 77 µm à environ 120 µm, d'environ 78 µm à environ 120 µm, d'environ 79 µm à environ 120 µm, d'environ 80 µm à environ 120 µm, comme d'environ 81 µm à environ 120 µm, d'environ 82 µm à environ 120 µm, d'environ 83 µm à environ 120 µm, d'environ 84 µm à environ 120 µm, d'environ 85 µm à environ 120 µm, d'environ 86 µm à environ 120 µm, d'environ 87 µm à environ 120 µm, d'environ 88 µm à environ 120 µm, d'environ 89 µm à environ 120 µm, ou d'environ 90 µm à environ 120 µm. Par exemple, les cellules épithéliales différenciées peuvent avoir une épaisseur de couches de cellules vivantes d'environ 2 µm à environ 70 µm, d'environ 2 µm à environ 69 µm, d'environ 2 µm à environ 68 µm, d'environ 2 µm à environ 67 µm, d'environ 2 µm à environ 66 µm, d'environ 2 µm à environ 65 µm, d'environ 2 µm à environ 64 µm, d'environ 2 µm à environ 63 µm, d'environ 2 µm à environ 62 µm, d'environ 2 µm à environ 61 µm, d'environ 2 µm à environ 60 µm, d'environ 2 µm à environ 59 µm, d'environ 2 µm à environ 58 µm, d'environ 2 µm à environ 57 µm, d'environ 2 µm à environ 56 µm, d'environ 2 µm à environ 55 µm, d'environ 2 µm à environ 54 µm, d'environ 2 µm à environ 53 µm, d'environ 2 µm à environ 52 µm, d'environ 2 µm à environ 51 µm, d'environ 2 µm à environ 50 µm, d'environ 2 µm à environ 49 µm, d'environ 2 µm à environ 48 µm, d'environ 2 µm à environ 47 µm, d'environ 2 µm à environ 46 µm, d'environ 2 µm à environ 45 µm, d'environ 2 µm à environ 44 µm, d'environ 2 µm à environ 43 µm, d'environ 2 µm à environ 42 µm, d'environ 2 µm à environ 41 µm, d'environ 2 µm à environ 40 µm, d'environ 2 µm à environ 39 µm, d'environ 2 µm à environ 38 µm, d'environ 2 µm à environ 37 µm, d'environ 2 µm à environ 36 µm, d'environ 2 µm à environ 35 µm, d'environ 2 µm à environ 34 µm, d'environ 2 µm à environ 33 µm, d'environ 2 µm à environ 32 µm, d'environ 2 µm à environ 31 µm, d'environ 2 µm à environ 30 µm, d'environ 2 µm à environ 29 µm, d'environ 2 µm à environ 28 µm, d'environ 2 µm à environ 27 µm, d'environ 2 µm à environ 26 µm, d'environ 2 µm à environ 25 µm, d'environ 2 µm à environ 24 µm, d'environ 2 µm à environ 23 µm, d'environ 2 µm à environ 22 µm, d'environ 2 µm à environ 21 µm, d'environ 2 µm à environ 20 µm, d'environ 2 µm à environ 19 µm, d'environ 2 µm à environ 18 µm, d'environ 2 µm à environ 17 µm, d'environ 2 µm à environ 16 µm, d'environ 2 µm à environ 15 µm, d'environ 2 µm à environ 14 µm, d'environ 2 µm à environ 13 µm, d'environ 2 µm à environ 12 µm, d'environ 2 µm à environ 11 µm, d'environ 2 µm à environ 10 µm, d'environ 2 µm à environ 9 µm, d'environ 2 µm à environ 8 µm, d'environ 2 µm à environ 7 µm, d'environ 2 µm à environ 6 µm, d'environ 2 µm à environ 5 µm, d'environ 2 µm à environ 4 µm, ou d'environ 2 µm à environ 3 µm. Par exemple, les cellules épithéliales différenciées peuvent avoir une épaisseur de couches de cellules vivantes d'environ 3 µm à environ 70 µm, d'environ 4 µm à environ 70 µm, d'environ 5 µm à environ 70 µm, d'environ 6 µm à environ 70 µm, d'environ 7 µm à environ 70 µm, d'environ 8 µm à environ 70 µm, d'environ 9 µm à environ 70 µm, d'environ 10 µm à environ 70 µm, d'environ 11 µm à environ 70 µm, d'environ 12 µm à environ 70 µm, d'environ 13 µm à environ 70 µm, d'environ 14 µm à environ 70 µm, d'environ 15 µm à environ 70 µm, d'environ 16 µm à environ 70 µm, d'environ 17 µm à environ 70 µm, d'environ 18 µm à environ 70 µm, d'environ 19 µm à environ 70 µm, d'environ 20 µm à environ 70 µm, d'environ 21 µm à environ 70 µm, d'environ 22 µm à environ 70 µm, d'environ 23 µm à environ 70 µm, d'environ 24 µm à environ 70 µm, d'environ 25 µm à environ 70 µm, d'environ 26 µm à environ 70 µm, d'environ 27 µm à environ 70 µm, d'environ 28 µm à environ 70 µm, d'environ 29 µm à environ 70 µm, d'environ 30 µm à environ 70 µm, d'environ 31 µm à environ 70 µm, d'environ 32 µm à environ 70 µm, d'environ 33 µm à environ 70 µm, d'environ 34 µm à environ 70 µm, d'environ 35 µm à environ 70 µm, d'environ 36 µm à environ 70 µm, d'environ 37 µm à environ 70 µm, d'environ 38 µm à environ 70 µm, d'environ 39 µm à environ 70 µm, d'environ 40 µm à environ 70 µm, d'environ 41 µm à environ 70 µm, d'environ 42 µm à environ 70 µm, d'environ 43 µm à environ 70 µm, d'environ 44 µm à environ 70 µm, d'environ 45 µm à environ 70 µm, d'environ 46 µm à environ 70 µm, d'environ 47 µm à environ 70 µm, d'environ 48 µm à environ 70 µm, d'environ 49 µm à environ 70 µm, d'environ 50 µm à environ 70 µm, d'environ 51 µm à environ 70 µm, d'environ 52 µm à environ 70 µm, d'environ 53 µm à environ 70 µm, d'environ 54 µm à environ 70 µm, d'environ 55 µm à environ 70 µm, d'environ 56 µm à environ 70 µm, d'environ 57 µm à environ 70 µm, d'environ 58 µm à environ 70 µm, d'environ 59 µm à environ 70 µm, d'environ 60 µm à environ 70 µm, d'environ 61 µm à environ 70 µm, d'environ 62 µm à environ 70 µm, d'environ 63 µm à environ 70 µm, d'environ 64 µm à environ 70 µm, d'environ 65 µm à environ 70 µm, d'environ 66 µm à environ 70 µm, d'environ 67 µm à environ 70 µm, d'environ 68 µm à environ 70 µm, ou d'environ 69 µm à environ 70 µm. Dans un mode de réalisation, les kératinocytes sont des kératinocytes humains. Dans un mode de réalisation, les kératinocytes peuvent être cultivés pendant au moins 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 ou 35 jours. Les kératinocytes peuvent être cultivés sur un substrat poreux. Par exemple, les kératinocytes peuvent être incubés pendant au moins 3 heures. Les kératinocytes peuvent être incubés à une température d'environ 36°C à environ 38°C. Les kératinocytes peuvent être incubés à environ 4 %-6 % de CO 2 . Dans un mode de réalisation, les kératinocytes sont incubés à une humidité d'environ 10 % à environ 100 %, de préférence d'environ 20 % à environ 99 %, de préférence d'environ 30 % à environ 99 %, de préférence d'environ 40 % à environ 99 %, de préférence d'environ 50 % à environ 99 %, de préférence d'environ 60 % à environ 99 %, de préférence d'environ 70 % à environ 99 %, de préférence d'environ 80 % à environ 99 %, de préférence d'environ 85 % à environ 99 %, d'environ 90 % à environ 98 %, d'environ 92 % à environ 97 %, ou d'environ 94 % à environ 96 %. Dans certains modes de réalisation, le milieu conditionné comprenant les vésicules extracellulaires est concentré, filtré et/ou purifié avant de combiner les vésicules extracellulaires avec un vecteur acceptable pour former la composition. Les vésicules extracellulaires peuvent être isolées du milieu conditionné avant de combiner les vésicules extracellulaires avec un vecteur acceptable pour former la composition. Les vésicules extracellulaires peuvent être lysées avant d'être combinées avec un vecteur acceptable. Dans un mode de réalisation, le milieu nutritif est un milieu chimiquement défini. Les kératinocytes peuvent être cultivés en culture discontinue. Dans un mode de réalisation, les vésicules extracellulaires comprennent de grandes vésicules extracellulaires ayant un diamètre supérieur à 150 nm et de petites vésicules extracellulaires ayant un diamètre de 150 nm ou moins, et dans lequel le rapport moyen des petites vésicules extracellulaires sur les grandes vésicules extracellulaires n'est pas supérieur à 20,5:1, pas supérieur à 20:1, non supérieur à environ 19,5:1, non supérieur à environ 19:1, non supérieur à environ 18,5:1, non supérieur à environ 18:1, non supérieur à environ 17,5:1, non supérieur à environ 17:1, non supérieur à environ 16,5:1, non supérieur à environ 16:1, non supérieur à environ 15,5:1, non supérieur à environ 15:1, non supérieur à environ 14,5:1, non supérieur à environ 14:1, non supérieur à environ 13,5:1, non supérieur à environ 13:1, non supérieur à environ 12,5:1, non supérieur à environ 12:1, non supérieur à environ 11,5:1, non supérieur à environ 11:1, non supérieur à environ 10,5:1, non supérieur à environ 10:1, non supérieur à environ 9,5:1, non supérieur à environ 9:1, non supérieur à environ 8,5:1, non supérieur à environ 8:1, non supérieur à environ 7,5:1, non supérieur à environ 7:1, non supérieur à environ 6,5:1, non supérieur à environ 6:1, non supérieur à environ 5,5:1, non supérieur à environ 5:1, non supérieur à environ 4,5:1, non supérieur à environ 4:1, non supérieur à environ 3. 5:1, non supérieur à environ 3:1, non supérieur à environ 2,5:1, non supérieur à environ 2:1, non supérieur à environ 1,5:1, ou non supérieur à environ 1:1 lorsque les petites vésicules extracellulaires sont détectées dans le milieu conditionné en utilisant une combinaison de filtration à flux tangentiel (TFF pour « Tangential Flow Filtration »)) et de chromatographie d’exclusion diffusion (SEC pour « Size Exclusion Chromatography »), et lorsque les grandes vésicules extracellulaires sont détectées dans le milieu conditionné par TFF. Dans un mode de réalisation, les vésicules extracellulaires comprennent de grandes vésicules extracellulaires ayant un diamètre supérieur à 150 nm et de petites vésicules extracellulaires ayant un diamètre de 150 nm ou moins, et dans lequel le rapport moyen des petites vésicules extracellulaires sur les grandes vésicules extracellulaires est compris entre environ 1 : 1 à environ 20:1, d'environ 1:1 à environ 19:1, d'environ 1:1 à environ 18:1, d'environ 1:1 à environ 17:1, d'environ 1:1 à environ 16:1, d'environ 1:1 à environ 15:1, d'environ 1:1 à environ 14:1, d'environ 1:1 à environ 13 : 1, d'environ 1:1 à environ 12:1, d'environ 1:1 à environ 11:1, d'environ 1:1 à environ 10:1, d'environ 1:1 à environ 9:1, d'environ 1:1 à environ 8:1, d'environ 1:1 à environ 7:1, d'environ 1:1 à environ 6:1, d'environ 1:1 à environ 5:1, d'environ 1:1 à environ 4:1, d'environ 1:1 à environ 3:1, d'environ 1:1 à environ 2:1, d'environ 2:1 à environ 20:1, d'environ 2:1 à environ 19:1, d'environ 2:1 à environ 18:1, d'environ 2:1 à environ 17:1, d'environ 2:1 à environ 16:1, d'environ 2:1 à environ 15:1, d'environ 2:1 à environ 14 : 1, d'environ 2:1 à environ 13:1, d'environ 2:1 à environ 12:1, d'environ 2:1 à environ 11:1, d'environ 2:1 à environ 10:1, d'environ 2:1 à environ 9:1, d'environ 2:1 à environ 8:1, d'environ 2:1 à environ 7:1, d'environ 2:1 à environ 6:1, d'environ 2:1 à environ 5 : 1, d'environ 2:1 à environ 4:1, d'environ 2:1 à environ 3:1, d'environ 3:1 à environ 20:1, d'environ 3:1 à environ 19:1, d'environ 3:1 à environ 18:1, d'environ 3:1 à environ 17:1, d'environ 3:1 à environ 16:1, d'environ 3:1 à environ 15:1, d'environ 3:1 à environ 14:1, d'environ 3:1 à environ 13:1, d'environ 3:1 à environ 12:1, d'environ 3:1 à environ 11:1, d'environ 3:1 à environ 10:1, d'environ 3:1 à environ 9:1, d'environ 3:1 à environ 8:1, d'environ 3:1 à environ 7:1, d'environ 3:1 à environ 6:1, d'environ 3:1 à environ 5:1, ou d'environ 3:1 à environ 4:1 lorsque les petites vésicules extracellulaires sont détectées dans le milieu conditionné par filtration à flux tangentiel (TFF) et chromatographie d’exclusion diffusion (SEC), et lorsque les grandes vésicules extracellulaires sont détectées dans le milieu conditionné par TFF. Dans un mode de réalisation, la composition comprend un rapport des vésicules extracellulaires positives CD63 détectées sur les vésicules extracellulaires positives CD81 détectées allant d'au moins environ 0,2:1, d'au moins environ 0,3:1, d'au moins environ 0,4:1, d'au moins environ 0. 5:1, d'au moins environ 0,6:1, d'au moins environ 0,7:1, d'au moins environ 0,8:1, d'au moins environ 0,9:1, ou d'au moins environ 1:1, ou d'au moins environ 1,1, ou d'au moins environ 1,2:1, ou d'au moins environ 1,3:1, ou d'au moins environ 1,4:1, ou d'au moins environ 1. 5:1, ou d'au moins environ 1,6:1, ou d'au moins environ 1,7:1, ou d'au moins environ 1. 9:1, ou d'au moins environ 2:1, lorsque CD63 et CD81 sont détectés sur de petites vésicules extracellulaires comprenant CD9 et ayant un diamètre de 150 nm ou moins, dans lequel CD9 est capturé par des dosages immuno-enzymatiques après que les vésicules ont été isolées du milieu conditionné en utilisant une combinaison de filtration à flux tangentiel et de chromatographie d’exclusion diffusion, et dans lequel les concentrations relatives de CD63 et CD81 sont déterminées en utilisant des dosages immuno-enzymatiques. Dans un mode de réalisation, la composition comprend un rapport des vésicules extracellulaires positives CD63 détectées sur les vésicules extracellulaires positives CD81 détectées d'environ 0,2:1 à environ 2,8:1, d'environ 0,2:1 à environ 2,7:1, d'environ 0,3:1 à environ 2,6:1, d'environ 0,3:1 à environ 2. 5:1, d'environ 0,4:1 à environ 2,4:1, d'environ 0,4:1 à environ 2,3:1, d'environ 0,5:1 à environ 2,2:1, d'environ 0,6:1 à environ 2,1:1, d'environ 0,6:1 à environ 2,0:1, d'environ 0,6:1 à environ 1,9:1, d'environ 0,7:1 à environ 1,8:1, d'environ 0,7:1 à environ 1,7:1, d'environ 0. 8:1 à environ 1,6:1, d'environ 0,8:1 à environ 1,5:1, d'environ 0,9:1 à environ 1,4:1, ou d'environ 0,9:1 à environ 1. 3:1 lorsque CD63 et CD81 sont détectés sur de petites vésicules extracellulaires comprenant CD9 et ayant un diamètre de 150 nm ou moins, dans lequel CD9 est capturé par des dosages immuno-enzymatiques après que les vésicules ont été isolées du milieu conditionné en utilisant une combinaison de filtration à flux tangentiel et de chromatographie d’exclusion diffusion, et dans lequel les concentrations relatives de CD63 et CD81 sont déterminées en utilisant des dosages immuno-enzymatiques. Dans un mode de réalisation, la composition comprend en outre des petites molécules, produits biologiques, agents thérapeutiques, conservateurs ou enzymes. Sont également divulgués des procédés de fabrication d'une composition comprenant des vésicules extracellulaires et un vecteur cosmétique acceptable, dans lesquels les vésicules extracellulaires sont dérivées d'un milieu conditionné prélevé de kératinocytes cultivés à une interface air-liquide dans un milieu nutritif suffisant pour répondre aux besoins nutritionnels nécessaires à la croissance des cellules in vitro pour former des cellules épithéliales différenciées. Des procédés de traitement comprenant l'application des compositions sur des cellules épithéliales sont également divulgués. Des procédés de culture de cellules épidermiques comprenant l'application de la composition sur un épiderme sont également divulgués. Dans un mode de réalisation, les compositions peuvent être utilisées dans un procédé pour favoriser la croissance cellulaire comprenant l'application de la composition sur des cellules épithéliales. Dans un mode de réalisation, les compositions peuvent être utilisées dans un procédé pour favoriser la croissance cellulaire comprenant l'application de la composition sur la peau. Sont également divulgués des procédés pour favoriser la réparation cellulaire comprenant l'application de la composition sur la peau, ainsi que l'utilisation de la composition comme cosmétique et/ou médicament. Un procédé d'utilisation comprenant l'application de la composition sur la peau est également divulgué ici. Il est entendu que la description générale précédente et la description détaillée suivante présentent diverses réalisations de la divulgation, et sont censées fournir une vue d'ensemble ou un cadre pour comprendre la nature et le caractère des revendications. BRÈVE DESCRIPTION DES FIGURES La divulgue une coupe verticale colorée de l'architecture tissulaire d'un épiderme humain reconstruit au jour 17 de la culture cellulaire. La divulgue l'épaisseur moyenne des couches de cellules vivantes de deux lots (4 échantillons par lot) de cultures de kératinocytes différenciés aux jours 3, 6 et 17 de la culture cellulaire. [Fig.3A-3D] Les figures 3A-3D démontrent l'expression différentielle des marqueurs de surface des exosomes sur les CD9+ comprenant de petites vésicules extracellulaires prélevées de milieux conditionnés de kératinocytes différenciés à différents moments (A-C) par rapport aux petites vésicules extracellulaires prélevées de kératinocytes 2D (D), comme mesuré à l'aide de dosages immuno-enzymatiques. [Fig.4A-4D] Les figures 4A-4D démontrent l'expression différentielle des marqueurs de surface exosomaux sur les grandes vésicules extracellulaires provenant de milieux conditionnés de kératinocytes différenciés (A-C) et de kératinocytes 2D (D), comme mesuré à l'aide d'ELISA. Les quantités inférieures au « seuil », ou bruit de fond, indiquent peu ou pas de marqueurs de surface exosomaux. [Fig.5A-5D] Les figures 5A-5D démontrent l'expression différentielle des marqueurs internes de petites vésicules extracellulaires prélevées de milieux conditionnés de kératinocytes différenciés, telle que mesurée en utilisant des dosages immuno-enzymatiques. [Fig.6A-6D] Les figures 6A-6D montrent l'expression différentielle des marqueurs internes des grandes vésicules extracellulaires prélevées de milieux conditionnés de kératinocytes différenciés, comme mesuré à l'aide de dosages immuno-enzymatiques. Il est entendu que les descriptions précédentes et suivantes ne sont qu'exemplaires et explicatives, et ne sont pas censées retreindre un sujet revendiqué quelconque. Composition comprenant des vésicules extracellulaires et un vecteur cosmétique acceptable, dans laquelle les vésicules extracellulaires sont dérivées d'un milieu conditionné prélevé de kératinocytes cultivés à une interface air-liquide dans un milieu nutritif suffisant pour répondre aux besoins nutritionnels nécessaires à la croissance des cellules in vitro pour former des cellules épithéliales différenciées. Composition selon la revendication 1, dans laquelle les cellules épithéliales différenciées comprennent en moyenne au moins 2 couches de cellules vivantes. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les cellules épithéliales différenciées forment des couches de cellules comprenant une couche basale, un stratum spinosum, une couche granuleuse et un stratum corneum. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les cellules épithéliales différenciées ont une épaisseur de couches de cellules vivantes d'environ 2 µm à environ 141 µm. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les kératinocytes sont des kératinocytes humains. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les kératinocytes sont cultivés pendant au moins 1 jour. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les kératinocytes sont cultivés sur un substrat poreux. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les vésicules extracellulaires sont isolées du milieu conditionné avant de combiner les vésicules extracellulaires avec un vecteur acceptable pour former la composition. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les vésicules extracellulaires comprennent de grandes vésicules extracellulaires ayant un diamètre supérieur à 150nm et de petites vésicules extracellulaires ayant un diamètre de 150nm ou moins, et dans laquelle le rapport des petites vésicules extracellulaires sur les grandes vésicules extracellulaires n'est pas supérieur à 20,5:1 lorsque les petites vésicules extracellulaires sont détectées dans le milieu conditionné en utilisant une combinaison de filtration à flux tangentiel (TFF) et de chromatographie d’exclusion diffusion (SEC), et lorsque les grandes vésicules extracellulaires sont détectées dans le milieu conditionné par TFF. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la composition comprend un rapport des vésicules extracellulaires positives CD63 détectées sur les vésicules extracellulaires positives CD81 détectées valant au moins environ 0,2:1, dans laquelle le CD9 est capturé par des dosages immuno-enzymatiques après que les vésicules sont isolées du milieu conditionné en utilisant a) une filtration à flux tangentiel puis b) une chromatographie d’exclusion diffusion, et dans laquelle les concentrations relatives en CD63 et CD81 sont déterminées en utilisant des dosages immuno-enzymatiques.