Brevet FR3135267A1 — publié le 20231110

L’invention concerne un polypeptide dont la taille est inférieure ou égale à 60 acides aminés et qui comprend la séquence choisie parmi la séquence C-terminale de la protéine GPRC5A (G protein-coupled receptor class C group 5 member A) allant du résidu 321 au résidu 357 de la protéine GPRC5A humaine (SEQ ID NO :1), ses orthologues, leurs fragments ou leurs dérivés ; et leur utilisation pour favoriser et/ou accélérer la cicatrisation d’une lésion cutanée chez un sujet, de préférence pour favoriser et/ou accélérer la ré-épithélisation. Nouvel actif de cicatrisation et son utilisation Domaine de l’invention La présente a pour objet un nouvel actif peptidique et son utilisation pour favoriser la cicatrisation. Etat de l’art L’épiderme, connu aussi sous le nom d’épiderme interfolliculaire (EIF), forme la couche la plus externe de la peau qui est constitué à 90% de kératinocytes. Les 10% restants sont représentés par les mélanocytes, cellules responsables de la pigmentation cutanée et de la photoprotection des rayons ultraviolets, les cellules de Langerhans, cellules immunes, et les cellules de Merkel, cellules sensorielles de l’épiderme. Les kératinocytes expriment et synthétisent différentes protéines structurales et lipidiques au cours de leur maturation. Les kératinocytes au niveau de la couche basale donnent naissance à des cellules qui vont entamer un processus de différenciation terminale durant lequel elles subissent un grand nombre de modifications morphologiques et d’expressions géniques. Cette différenciation orientée vers l’extérieur conduit à la stratification de l’épiderme et donne ainsi lieu à 4 couches distinctes : la couche basale, la couche épineuse, la couche granuleuse et la couche cornée. L’épiderme interfolliculaire est le siège d’un processus de renouvellement continu, lequel processus est assuré par des cellules souches épidermiques au niveau de la couche basale. Au sein de cette couche, les kératinocytes prolifèrent puis finissent par sortir du cycle cellulaire, par quitter la couche basale et migrer dans les couches suprabasales pour se différencier. Pour assurer le renouvellement constant et donc l’homéostasie de l’épiderme, un équilibre fin entre les processus de prolifération et de différenciation est primordial. Dans le cas d’une lésion de la peau, le processus de cicatrisation va exiger une série d’évènements contrôlés avec précision au sein de l’épiderme et du derme. La cicatrisation est ainsi divisée en quatre phases : l’hémostase, l’inflammation, la prolifération et le remodelage. En lien avec l’hémostase, un caillot fibrino-plaquettaire est formé immédiatement après la lésion, lequel caillot constitue une matrice provisoire composée de fibrine, de fibronectine, de vitronectine et de thrombospondine. Cette matrice sert de réservoir de facteurs de croissance et de structure d’échafaudage pour la migration des cellules immunes, des kératinocytes, des fibroblastes et des cellules endothéliales. La présence de médiateurs chimiques conduit, lors de la phase inflammatoire, au recrutement de cellules immunes telles que les polynucléaires neutrophiles et les monocytes, au niveau de la zone lésionnelle, assurant le nettoyage de la plaie. Ces cellules sont responsables de la synthèse de nombreuses cytokines qui permettent d’amplifier la réponse immunitaire et de stimuler la formation du tissu de granulation. S’ensuit une phase de prolifération au cours de laquelle des fibroblastes prolifèrent et migrent vers le centre de la plaie. Une fois en place, ces derniers vont synthétiser et remodeler une nouvelle matrice extracellulaire (MEC). En parallèle, une néoangiogénèse se met en place, laquelle a été déclenchée par la migration et la réorganisation de cellules endothéliales environnantes. Tous ces changements entrainent la différenciation des fibroblastes en myofibroblastes et la formation du tissu de granulation. Il en résulte une augmentation des propriétés mécaniques qui, sous l’influence des facteurs de croissance environnants, induit la multiplication active des kératinocytes et leur migration du bord des berges vers le centre de la plaie. Une fois la zone recouverte d’une monocouche de kératinocytes, les kératinocytes se différencient pour donner lieu à un nouvel épithélium stratifié. Enfin, la MEC est progressivement remodelée, du fait d’un équilibre entre sa dégradation par les métalloprotéinases matricielles (MMPs) et la synthèse de ses constituants. Le réseau vasculaire se modifie alors que le tissu de granulation disparait et laisse place à une cicatrise plus ou moins fibreuse. Cette phase a pour but d’obtenir un tissu ayant une structure et une fonction aussi proche que possible du tissu d’origine. Le processus de fermeture de la plaie, correspondant à la contraction puis la ré-épithélialisation, hors remodelage, peut durer pendant une période de quelques jours à quelques semaines en fonction de l’étendue de la plaie et de l’état physiopathologique de l’individu. Durant cette période, qu’elle soit de courte ou de longue durée, la plaie peut être sujette à tout type d’invasions (organismes pathogènes ou substance étrangères) jusqu’à la régénération d’un nouvel épiderme qui ferme complètement la brèche. Pour éviter toute infection, la plaie est habituellement traitée afin d’enlever tout contaminant susceptible d’introduire une matière pathogène au niveau de la zone lésée. On effectue ensuite un débridement des tissus au niveau de cette zone et une aseptisation. Dans certains cas, on réalise en outre un certain nombre de points de suture afin de faciliter la fermeture de la plaie. Une fois ces étapes réalisées, la plaie est maintenue dans un environnement favorable à la cicatrisation. Pour se faire, différents types de pansements sont utilisés afin d’éviter l’intrusion de pathogènes et/ou leur prolifération. Il est donc important, lorsque l’on traite une plaie, de favoriser le phénomène de fermeture de celle-ci afin d’éviter, par exemple, l’invasion de la plaie par des microorganismes ou des substances étrangères et, par voie de conséquence, l’infection de cette même plaie. Sommaire de l’invention : Afin d’induire ou d’accélérer la cicatrisation de la plaie, on peut administrer un certain nombre d’actifs susceptibles d’agir à différents niveaux et à différentes phases de la cicatrisation. Maintenant, les inventeurs ont découvert qu’un polypeptide issu de la région C-terminale de la protéine GPRC5A (G protein-coupled receptor class C group 5 member A) avait la capacité, comme la protéine entière GPRC5A, d’induire la perte d’adhérence des kératinocytes et, de ce fait, de faciliter leur mobilité cellulaire au sein de la plaie et, de ce fait la ré-épithélialisation. En conséquence, un premier objet de l’invention porte sur un polypeptide dont la taille est inférieure ou égale à 60 acides aminés et qui comprend la séquence choisie parmi la séquence C-terminale de la protéine GPRC5A allant du résidu 321 au résidu 357 de la protéine GPRC5A humaine (SEQ ID NO :1), ses orthologues, leurs fragments ou leurs dérivés. Un deuxième objet de l’invention porte sur un polynucléotide (ADN ou ARN) codant pour un polypeptide tel que décrit précédemment. Un troisième objet de l’invention porte sur un vecteur comprenant le polynucléotide tel que décrit précédemment. Un quatrième objet de l’invention porte sur une cellule transformée par un vecteur tel que décrit précédemment. Un sixième objet de l’invention porte sur une composition comprenant un tel polypeptide. Un septième objet de l’invention porte sur un pansement comprenant une telle composition. Un huitième objet de l’invention porte sur une composition pharmaceutique comprenant un tel polypeptide et un support pharmaceutiquement acceptable. Un neuvième objet de l’invention porte sur une composition comprenant un tel polypeptide pour son utilisation pour favoriser et/ou accélérer la cicatrisation d’une lésion d’un épithélium chez un sujet, de préférence pour favoriser et/ou accélérer la ré-épithélialisation. représente un alignement de la séquence allant du résidu 321 à 357 de la séquence de GPRC5A d’ Homo sapiens (SEQ ID NO :2), avec les séquences correspondantes de GPRC5A de Mus musculus (SEQ ID NO :5), de Camelus bactrianus (SEQ ID NO :6), de Felis catus (SEQ ID NO :7), de Canis lupus familiaris (SEQ ID NO :8), de Talpa occidentalis (SEQ ID NO :9), de Halichoerus grypus (SEQ ID NO :10), de Tursiops truncatus (SEQ ID NO :11), de Loxodonta africana (SEQ ID NO :12) , de Gallus gallus (SEQ ID NO :13), de Cygnus olor (SEQ ID NO :14), d’ Aptenodytes patagonicus (SEQ ID NO :15), de Haliaeetus leucocephalus (SEQ ID NO :16) , de Chelonia mydas (SEQ ID NO :17), de Trachemys scripta elegans (SEQ ID NO :18), de Pseudonaja textilis (SEQ ID NO :19), de Python bivittatus (SEQ ID NO :20) et de Ranitomeya imitator (SEQ ID NO :21). représente un alignement de la séquence allant du résidu 321 à 357 de la séquence de GPRC5A d’ Homo sapiens (SEQ ID NO :2), avec les séquences correspondantes de GPRC5A de Mus musculus (SEQ ID NO :5), de Camelus bactrianus (SEQ ID NO :6), de Felis catus (SEQ ID NO :7), de Canis lupus familiaris (SEQ ID NO :8), de Talpa occidentalis (SEQ ID NO :9), de Halichoerus grypus (SEQ ID NO :10), de Tursiops truncatus (SEQ ID NO :11) et de Loxodonta africana (SEQ ID NO :12) ., montre le résultat d’un test d’adhérence pour des kératinocytes primaires et des kératinocytes immortalisés N/TERT-1, dont le gène GPRC5A a été partiellement invalidé ou non. montre le résultat d’un test de migration cellulaire pour des kératinocytes primaires et des kératinocytes immortalisés N/TERT-1, dont le gène GPRC5A a été partiellement invalidé ou non. montre la relocalisation de la région C-terminale de GPRC5A dans le noyau dans des kératinocytes primaires. montre les profils électrophorétiques d’un polypeptide recombinant mimant la région C-terminale de GPRC5A et ses sites de clivage. montre les effets du polypeptide recombinant sur la migration et l’adhérence de cellules N/TERT-1 partiellement invalidées pour le gène GPRC5A. Un polypeptide dont la taille est inférieure ou égale à 60 acides aminés et qui comprend la séquence choisie parmi la séquence C-terminale de la protéine GPRC5A (G protein-coupled receptor class C group 5 member A) allant du résidu 321 au résidu 357 de la protéine GPRC5A humaine (SEQ ID NO :1), ses orthologues, leurs fragments ou leurs dérivés; où : - les orthologues sont choisis dans le groupe comprenant la séquence de la GPRC5A de Mus musculus ( NP_852109.2), de Camelus bactrianus (XP_010944750.1), de Felis catus (XP_019690106.1), de Canis lupus familiaris (XP_038294887.1), de Talpa occidentalis (XP_037370212.1), d’ Halichoerus grypus (XP_035967917.1), de Tursiops truncatus (XP_033722915.1), de Loxodonta africana (XP_023410262.1), de Gallus gallus (XP_040516431.1), de Cygnus olor (XP_040411303), d’ Aptenodytes patagonicus (KAF1666521.1), de Haliaeetus leucocephalus (XP_010564139.1), de Chelonia mydas (XP_043400668.1), de Trachemys scripta elegans (XP_034630427.1), de Pseudonaja textilis (XP_006024224.1), de Python bivittatus (XP_025019164.1), et de Ranitomeya imitator (CAF4926718.1) ; - les fragments sont choisis dans le groupe consistant en les séquences allant du résidu 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334 ou 335 au résidu 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356 ou 357 de la protéine GPRC5A humaine (SEQ ID NO :1) ou leurs orthologues, à l’exception naturellement de la séquence allant du résidu 321 au résidu 357 de la protéine GPRC5A humaine (SEQ ID NO :1) et de ses orthologues ; et - les dérivés sont choisi dans le groupe consistant en les séquences présentant une identité de séquence d’au moins 80% avec la séquence allant du résidu 321 au résidu 357 de la protéine GPRC5A humaine (SEQ ID NO :1)et avec les séquences orthologues de celle-ci . Le polypeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu’il comprend la séquence X 1 X 2 HX 3 QX 4 X 5 X 6 X 7 X 8 X 9 X 10 X 11 X 12 FSIPRX 13 X 14 X 15 X 16 X 17 SPYX 18 X 19 Y X 20 X 21 X 22 X 23 X 24 X 25 X 26 (SEQ ID NO :3), leurs fragments et leurs dérivés; dans laquelle: - X 1 est S, A ou Y; - X 2 est T, A ou P ; - X 3 est F ou L ; - X 4 est M ou L ; - X 5 est Q, K ou E ; - X 6 est N, T ou S ; - X 7 est Q, H, R, L ou I ; - X 8 est P, N, T, A, S, D, K, E ou aucun acide aminé ; - X 9 est P, S, A, T ou aucun acide aminé ; - X 10 est Q, P, K ou R ; - X 11 est K, R, N, Q ou E ; - X 12 est E, D ou N ;X 13 est A ou P ; - X 14 est H, Q ou K ; - X 15 est S, A, T ou aucun acide aminé ; - X 16 est W, P, R, H, Q ou aucun acide aminé ; - X 17 est P, A, T, V ou L ; - X 18 est K, N, S, H, Q ou E ; - X 19 est D, N ou E ; - X 20 est E, T, S ou A ; - X 21 est V ou G ; - X 22 est K, R ou G ; - X 23 est K, N ou Q ; - X 24 est E, G, D ou V ; - X 25 est G, D, V, P, T ou I ; et - X 26 est S, M ou K. Le polypeptide selon l’une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu’il comprend une séquence choisie parmi les séquences SEQ ID NO : 2 et SEQ ID NO : 5 à SEQ ID NO : 21, leurs fragments et leurs dérivés. Le polypeptide selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu’il comprend une séquence choisie parmi la séquence sthfqlqnqp pqkefsipra hawpspykdy evkkegs (SEQ ID NO :2), ses fragments et ses dérivés. Le polypeptide selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que lesdits fragment sont choisis dans le groupe consistant en les séquences allant du résidu 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334 ou 335 au résidu 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356 ou 357 de la protéine GPRC5A humaine (SEQ ID NO :1) ou leurs orthologues, à l’exception naturellement de la séquence allant du résidu 321 au résidu 357 de la protéine GPRC5A humaine (SEQ ID NO :1) et de ses orthologues. Le polypeptide selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que lesdits dérivés sont choisis dans le groupe consistant en les séquences présente un pourcentage d’identité d’au moins 80% avec la séquence allant du résidu 321 au résidu 357 de la protéine GPRC5A humaine (SEQ ID NO :1), avec les séquences orthologues de celle-ci, avec la séquence SEQ ID NO :3 avec la séquence SEQ ID NO :4 ou avec les séquences de leurs fragments. Un polynucléotide codant pour un polypeptide tel que défini à l’une quelconque des revendications précédentes. Un vecteur comprenant le polynucléotide tel que défini à la revendication précédente. Une cellule transformée par un vecteur tel que défini à la revendication précédente. Une composition comprenant un polypeptide tel que défini à l’une quelconque des revendications 1 à 6. Un pansement comprenant une composition telle que définie à la revendication précédente. Une composition pharmaceutique comprenant un polypeptide tel que défini à l’une quelconque des revendications 1 à 6, un polynucléotide selon la revendication 7, un vecteur selon la revendication 8 ou une cellule selon la revendication 9 et un support pharmaceutiquement acceptable. Une composition comprenant un polypeptide tel que défini à l’une quelconque des revendications 1 à 6, un polynucléotide selon la revendication 7, un vecteur selon la revendication 8 ou une cellule selon la revendication 9 pour son utilisation pour favoriser et/ou accélérer la cicatrisation d’une lésion d’un épithélium chez un sujet, de préférence pour favoriser et/ou accélérer la ré-épithélisation.