Brevet FR3131192A1 — publié le 20230630

La présente invention concerne la production d’un implant de valvule et son utilisation dans le traitement de cardiopathies congénitales, de valvulopathies cardiaques, veineuses et lymphatiques, en particulier de la tétralogie de Fallot. Figure d’abrégé : figure 1 PRODUCTION D’UN IMPLANT DE VALVULE ET SON UTILISATION Domaine technique de l’invention La présente invention concerne la production d’un implant de valvule et son utilisation dans le traitement de cardiopathies congénitales, de valvulopathies cardiaques, veineuses et lymphatiques, en particulier de la tétralogie de Fallot. Dans la description ci-dessous, les références entre parenthèses [ ] renvoient à la liste des références présentée à la fin du texte. Etat de la technique Une cardiopathie congénitale correspond à une malformation du cœur présente à la naissance. Sa gravité peut varier, allant d’une forme tout à fait mineure qui ne causera jamais de problème cardiaque, à une forme très grave nécessitant un traitement. Une cardiopathie congénitale survient lorsque les cavités, les parois ou les valvules du cœur – ou les vaisseaux sanguins près du cœur – ne se développent pas normalement avant la naissance. On peut classer la majorité des cardiopathies congénitales en deux grandes catégories : cyanogènes et non cyanogènes (le mot cyanogène découlant de la couleur bleuâtre de la peau des patients atteints). Ces atteintes sont de gravité variable selon les cas. Les cardiopathies congénitales non cyanogènes peuvent résulter de différentes malformations : trous dans le cœur ou malformations septales (communication interauriculaire CIA, communication interventriculaire CIV) et l’obstruction de la circulation sanguine (sténose, atrésie). Parmi les cardiopathies congénitales cyanogènes, la tétralogie de Fallot est l’une des formes les plus communes. Elle représente 7 à 10% des nouveau-nés souffrant d’une cardiopathie congénitale [1, 2]. Elle associe une sténose de la valve pulmonaire, une hypertrophie du ventricule droit, une communication interventriculaire (CIV), et une dextroposition de l'aorte. Ces anomalies affecteront la structure et les capacités cardiaques pulsatiles, qui provoqueront une sténose sur la voie de sortie ventriculaire droite (RVOT), et finalement une désaturation en oxygène dans le sang artériel. La réparation chirurgicale consiste à fermer la CIV et à enlever la sténose de la RVOT vers l'âge de 6 mois de la vie du patient. Dans plus de 70% des cas, la sténose de la RVOT est corrigée en positionnant un patch transannulaire, qui malheureusement conduit à une fuite de la valve pulmonaire [3, 4]. En l'absence de traitement, cette fuite de la valve pulmonaire entraîne une dilatation et un dysfonctionnement du ventricule droit, qui seront associés à des arythmies ventriculaires et à une augmentation des risques de mort subite à l'âge adulte. L’utilisation de valves biologiques montées sur un stent ou de valves mécaniques fournies par l'industrie dans cette population de nourrissons reste totalement impossible [5]. Des techniques ont été développées afin de limiter ces fuites de la valve pulmonaire, comme l'utilisation d'une valve monocuspide [6]. Cette valve peut être réalisée à partir de matériaux biologiques, notamment par l'utilisation de péricarde bovin traité chimiquement pour éviter le rejet [5] ou de membranes de polytétrafluoroéthylène (PTFE) synthétiques [6]. Cependant ces matériaux sont sujets à des limitations. Bien que relativement flexible, extrêmement solide et facile à manipuler, le péricarde bovin traité au glutaraldéhyde et les membranes synthétiques sont associées à des complications thromboemboliques et/ou à une endocardite infectieuse [7-9]. En outre, ces matériaux sont reconnus comme des corps étrangers qui causent des réactions inflammatoires chroniques. Les membranes de polytétrafluoroéthylène (PTFE), comme tous matériaux synthétiques sont aussi une cause d’infection graves. Enfin, les options actuelles ont montré des résultats inefficaces à court et moyen terme pour limiter la fuite de la valve pulmonaire. Il existe donc un réel besoin de développer un nouveau matériau permettant de réparer les valves telles que les valves cardiaques, et ne présentant pas les effets indésirables décrits. Les inventeurs proposent d’utiliser un biomatériau complètement biologique composé d’une matrice extracellulaire (MEC) sécrétée par des fibroblastes dermiques humains, qui est véritablement biocompatible [10-13]. De plus, cette MEC, produite sous forme de feuille à la surface du flacon de culture, est manipulable et mécaniquement robuste après 6 à 8 semaines de culture [13,14]. De plus, ce biomatériau a déjà été utilisé dans des applications vasculaires chez l’Homme [15-18]. Dans ce contexte, des feuilles de MEC ont été enroulées et fusionnées pour former des vaisseaux, qui ont ensuite été implantées chez des patients souffrant d'insuffisance rénale terminale [17, 18]. Les résultats d’implantation ont montré un taux élevé de perméabilité transluminale (jusqu'à 3 ans) [17, 18]. En outre, ce travail a démontré que la feuille de MEC construite sans composants synthétiques peut réellement s'intégrer au tissu natif, être remodelée par les cellules hôtes et être résistante aux infections. Sa structure biologique, son origine humaine, et l’absence de traitements chimiques a permis à ce biomatériau d’être accepté par le patient sans risque de rejet ou d’inflammation chronique. En outre, les données ont montré que le biomatériau produit par des fibroblastes allogéniques (à partir d’un donneur diffèrent du receveur) n’induit pas de réponse immunitaire spécifique [15]. En outre, une nouvelle génération de fils biologiques a été produite, en coupant une feuille de MEC en plusieurs rubans. Ces rubans peuvent être torsadés pour former des fils plus denses avec des propriétés mécaniques différentes des rubans [14]. De récents travaux ont démontré la faisabilité d’utiliser ces fils ou rubans de MEC comme suture pour la fermeture de plaies cutanées [14]. Ce biomatériau ayant une résistance à la perforation qui peut atteindre 2 à 6 kgf a également été utilisé dans la construction d’un implant de valve comprenant une structure tubulaire et au moins deux morceaux de feuille de MEC (cuspides ou valvules) connectés à ladite structure ; la feuille étant telle que définie ci-dessus (cf. « single-layer tissue sheet » de la Demande internationale WO 20123/142879) [19]. Cet implant biologique n’a jamais été proposé pour la réparation de valvules chez les enfants souffrant d’une cardiopathie congénitale, en particulier atteints de la tétralogie de Fallot. Description de l’invention La présente invention répond précisément à ce besoin en proposant un implant biologique comprenant ou constitué de l’association d’une feuille de tissu constituée d’une matrice extracellulaire (MEC) secrétée par des cellules en culture et éventuellement des cellules elles-mêmes (ci-après également dénommée feuille de MEC), avec des fils ou rubans biologiques modifiés, synthétiques et/ou issus du même matériau biologique. Cet implant biologique sert à la constitution d’un implant de valvule de type poche dans lequel un échantillon biologique et/ou un principe actif peu(ven)t être inséré(s) avant implantation, afin d’optimiser la régénération tissulaire. Pour ce faire, les Inventeurs ont développé un procédé de fabrication d’un implant de valvule complètement biologique ( ) à partir d’une feuille de MEC telle que définie précédemment dont ils ont découpé un morceau qui a été plié une fois sur lui-même afin de former une valvule de type poche. En parallèle, des feuilles de MEC ont également été découpées en rubans pour produire des fils de MEC biologiques. Une fois le morceau et les fils ou rubans de MEC obtenus, optionnellement, des cuspides ou valvules de valves pulmonaires natives contenant des cellules vivantes ont été extraites, particularisées et positionnées dans la valvule en forme de poche. Puis, la poche a été fermée et la construction a été suturée au niveau de la voie de sortie pulmonaire en utilisant les fils ou rubans biologiques ou synthétiques. Cette association innovante a permis la production d’un implant de valvule entièrement biologique qui peut être facilement accepté par l’hôte, remodelé après implantation, et qui peut évoluer avec le patient. Production d’une feuille de matrice extracellulaire (MEC) sécrétée par les cellules Les cellules sont ensemencées sur un substrat avec un milieu de culture afin de générer une feuille de MEC après une longue période de culture. La feuille de MEC est, optionnellement, traitée pour le stockage. La feuille de MEC peut être détachée, ou pas, du substrat en utilisant un dispositif d’ancrage. Ce dispositif évite la contraction tissulaire pendant la culture et le traitement pour le stockage. Enfin, la feuille de MEC est découpée en un morceau de feuille de MEC. Les cellules peuvent être d’origine humaine ou animale ( e.g. ovine, bovine, équine, canine, murine, de rat, de lapin, etc…). Les cellules peuvent être autologues, allogéniques ou xénogéniques. Le type de cellules peut être par exemple : cellules souche mésenchymateuses, cellules souche pluripotentes induites, cellules mésenchymateuses primaires adultes (comme des fibroblastes de peaux), cellules immortalisées, ou un mélange de celles-ci. La concentration d’ensemencement dépend du type cellulaire et peut être comprise entre 1000 cellules/cm 2 à 100000 cellules/cm 2 . Le substrat peut être choisi parmi : un flacon en plastique standard traité pour la culture, un flacon de culture thermosensible, une MEC différente ou similaire ( e.g. une MEC humaine autologue, humaine allogénique, xénogénique, etc…), une membrane biologique traitée ( e.g . péricarde de diverses origines traités chimiquement, une membrane amniotique, etc…), une membrane synthétique ( e.g . polytétrafluoroéthylène, dacron, silicone, etc…), un hydrogel ( e.g . collagène, alginate, fibrine, etc…), un hybride des substrats précédents. Le substrat peut être recouvert, entre autres, de protéines d'adhésion ( e.g. peptides RGD, fibrine, etc…) ou de gélatine pour faciliter l'adhésion des cellules. Le substrat peut avoir différentes formes ( e.g. personnalisée, ronde, rectangulaire, carrée, triangulaire, octogonale, pentagonale, etc…) afin d’obtenir le format de feuille de MEC souhaité. Le milieu de culture contient, sans y être limité, des composés ascorbiques et du sérum pour la production de la MEC et son assemblage. Sa composition dépend du type cellulaire et est changée typiquement trois fois par semaine. La période de culture varie entre 4 et 24 semaines, de préférence de 16 à 20 semaines, préférentiellement de 6 à 8 semaines. Pour son stockage, la MEC peut être non-traitée, déshydratée, dévitalisée (procédé consistant à congeler la feuille de MEC à -80°C, la décongeler à température ambiante, la déshydrater de préférence durant la nuit à température ambiante sous le flux stérile d'une hotte et enfin la réhydrater à température ambiante avant son utilisation), décellularisée, traitée avec une solution de glutaraldéhyde, ou une combinaison de ceux-ci. La MEC décellularisée peut être recellularisée avec les cellules décrites ci-dessus, ou endothélialisée en utilisant des cellules autologues ou allogéniques ( e.g. cellules endothéliales de la veine du cordon ombilical (HUVECs), cellules de la fraction vasculaire stromale (FVS) dérivées du tissu adipeux, cellules microvasculaires, etc…). Selon le traitement, la MEC peut être stockée à -80°C, -20°C, 4°C ou à température ambiante. Le dispositif d'ancrage peut être un support stérile en acier inoxydable, un support stérile en plastique, un support stérile en papier, et dépend du flacon de culture. Production de fils ou rubans à partir de la MEC La feuille de MEC est découpée en rubans qui peuvent être torsadés (par exemple de 0 à 10 tours/cm) pour former des fils. La feuille de MEC peut être découpée à l’aide d’une machine possédant des lames circulaires espacées, d’un système laser, d’un système à ultrasons, d’un système à arc électrique, d’une lame de scalpel, ou de ciseaux. Les rubans peuvent avoir une largeur d’environ 0,1 à 10 mm, leur longueur dépendant du substrat utilisé. Les rubans peuvent être formés directement sur les flacons de culture au format désiré. Les rubans peuvent être torsadés pour modifier leurs propriétés. Au moins deux rubans peuvent être assemblés ensemble à l’aide d’une méthode de torsion, d’une colle biologique, d’un dépôt de la MEC en culture, ou d’une combinaison de ceux-ci, pour améliorer les propriétés mécaniques. Puis, les fils ou rubans peuvent être montées sur une aiguille chirurgicale ( e.g. nouées au niveau du chas ; le chas pouvant être serti afin de fixer le fil ou ruban sur l’aiguille). Pour leur stockage, les fils ou rubans peuvent être non-traités, déshydratés, dévitalisés, décellularisés, traités au glutaraldéhyde, ou une combinaison de ceux-ci. Les fils ou rubans décellularisés peuvent être recellularisés avec les cellules décrites ci-dessus, ou endothélialisés en utilisant des cellules autologues ou allogéniques ( e.g. HUVECs, cellules de la fraction vasculaire stromale du sang, cellules microvasculaires, etc…). Selon le traitement, les fils ou rubans peuvent être stockés à -80°C, -20°C, 4°C ou à température ambiante. Production et insertion des particules Des particules contenant des cellules vivantes peuvent être particularisées et positionnées à l’intérieur de l’implant de valvule en forme de poche. Par exemple, les particules peuvent provenir de : valvule de valve pulmonaire native, derme natif (autologue, allogénique ou xénogénique), MEC d’ingénierie tissulaire, toute matrice d’ingénierie tissulaire, suspension cellulaire (cellules primaires, cellules souches mésenchymateuses, cellules souches pluripotentes induites (iPSCs), etc…), agrégat cellulaire ( e.g. sphéroïdes, organoïdes), vésicule extracellulaire ou principe actif ( e.g. médicament), ou une combinaison de ceux-ci. Les particules peuvent être obtenues à l’aide d’une machine possédant des lames circulaires espacées, d’un système laser, d’un système à ultrasons, d’un système à arc électrique, d’une lame de scalpel, d’une grille, de ciseaux ou d’un broyeur. Les particules peuvent être placées à l’intérieur de la poche à l’aide d’une cuillère (matériel chirurgical), une pipette ou d’une seringue. Ainsi, selon un aspect, l’invention concerne un implant de valvule de type poche comprenant : un morceau d'une feuille de tissu constituée d’une matrice extracellulaire secrétée par des cellules en culture et éventuellement des cellules elles-mêmes, replié sur lui-même une fois de manière à former une zone de poche, dans lequel tout ou partie des bords opposés dudit morceau plié sont joints ensemble. On entend par « valvule » au sens de la présente invention, la partie d’une valve qui est constituée d’un feuillet de tissu qui se déplace avec un fluide (de préférence du sang) pour lui permettre de circuler dans une direction et qui l’empêche de circuler dans l’autre. Il peut y avoir une, mais plus habituellement deux ou trois, ou même un nombre plus élevé de valvules dans une valve. On entend par « valvule de type poche » au sens de la présente invention, une valvule comprenant une structure creuse qui permet de retenir un ou plusieurs objets qui peuvent y être placés, par exemple des cellules, des petits morceaux de tissus, des particules de biomatériaux, etc. On entend par « feuille de tissu constituée d’une matrice extracellulaire secrétée par des cellules en culture » au sens de la présente invention, le dépôt de protéines insolubles qui s’accumule à la surface intérieure de la paroi du fonds d’un contenant dans lequel on cultive des cellules dans des conditions qui favorise ce dépôt. Il s’agit plus particulièrement d’une feuille de tissue lorsque ce dépôt est détaché de la surface. On entend par « zone de poche » au sens de la présente invention, l’espace vide (structure creuse) créé par le repliement d’un morceau d’une feuille de MEC et la fermeture de toute ou partie des bords opposés dudit morceau. On entend par « bords opposés » au sens de la présente invention, les bords d’un morceau de feuille de MEC dont les parties planes adjacentes sont essentiellement parallèles et apposées l’une contre l’autre de tel façon à pouvoir les joindre. Selon un mode de réalisation particulier de la présente invention, tout ou partie des bords opposés dudit morceau plié sont joints ensemble par suture avec du fil ou ruban biologique modifié (soie, chitosane, collagène, paroi intestinale animale, etc…), synthétique et/ou issu d’une feuille de tissu telle que définie dans la présente invention. On entend par « fil ou ruban (synthétique) » au sens de la présente invention, un fil ou ruban fait d’un matériau issu de synthèse chimique utilisé pour la chirurgie ou la préparation de dispositifs médicaux. Selon un mode de réalisation particulier de la présente invention, ledit implant comprend à l’intérieur de la zone de poche un échantillon biologique et/ou un principe actif. On entend par “échantillon biologique” au sens de la présente invention, de préférence, une partie de la valvule dysfonctionnelle du patient prélevée et coupée en petits morceaux dans la salle d’opération en utilisant un outil chirurgical commun (des ciseaux par exemple). La taille des morceaux peut varier. Ces morceaux sont les échantillons biologiques qui seront placés dans la zone de poche de la valve pour fournir une population cellulaire pour recoloniser le tissue. D’autres tissus peuvent être utilisés comme le derme, le tissue conjonctif, la moelle osseuse, un vaisseau sanguin, du sang, le tissu adipeux, etc. D’autres source de cellules sont envisagées comme des cellules du même patient mais qui auront été cultivées in vitro et peuvent avoir subi différents traitements comme, par exemple, une différentiation, ou une dédifférenciation. Ces cellules peuvent venir de différentes parties du corps. Elles peuvent être assemblées en amas plus ou moins gros (organoïdes). Plusieurs types de cellules peuvent être combinés. Les cellules peuvent aussi être combinées à un ou plusieurs biomatériaux (biologique ou synthétique) pour favoriser leur survie ou fonctions selon de nombreuses stratégies de délivrance. Les cellules peuvent aussi venir d’un autre individu (allogénique) ou d’une autre espèce (xénogénique). Les options mentionnées plus haut peuvent être combinés. On entend par “principe actif” au sens de la présente invention, un agent pharmacologique (non-vivant) qui aura un effet positif sur la fonction de la valvule en, par exemple, favorisant la migration ou prolifération des cellules du patient pour obtenir une recolonisation du tissue plus rapide ou efficace. L’agent pharmacologique pourrait aussi avoir un effet anti-thrombotique. Selon un mode de réalisation particulier de la présente invention, l’échantillon biologique provient d’au moins une valvule d’une valve d’un sujet. On entend par “valve” au sens de la présente invention, une structure tubulaire qui possède, dans sa lumière, une ou plusieurs valvules qui permet à un fluide de circuler dans une direction mais pas l’autre. Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de fabrication d’un implant de valvule selon la présente invention, ledit procédé comprenant : a) la culture d’une feuille de tissu telle que définie ci-dessus ; b) la découpe d’un morceau de ladite feuille de tissu obtenue à l’étape a) ; c) le pliage dudit morceau de l’étape b), sur lui-même, une fois, de sorte à former une zone de poche ; d) la jonction de tout ou partie des bords opposés dudit morceau plié de l’étape c). Selon un mode de réalisation particulier du procédé de la présente invention, la jonction de l’étape d) est réalisée par suture avec du fil ou ruban biologique modifié, synthétique et/ou issu d’une feuille de tissu telle que définie dans la présente invention. Selon un mode de réalisation particulier du procédé de la présente invention, ledit procédé comprend en outre une étape d’) de remplissage de la zone de poche avec un échantillon biologique et/ou un principe actif, avant la jonction complète de l’étape d). Selon un mode de réalisation particulier du procédé de la présente invention, l’échantillon de tissu biologique provient d’au moins une valvule d’une valve d’un sujet. Selon encore un autre aspect de la présente invention, l’implant de valvule selon la présente invention est pour une utilisation comme médicament. Selon encore un autre aspect de la présente invention, l’implant de valvule selon la présente invention est pour une utilisation dans le traitement d’une pathologie choisie parmi les cardiopathies congénitales, les valvulopathies cardiaques, veineuses et lymphatiques. Selon un mode de réalisation particulier de la présente invention, la cardiopathie congénitale est la tétralogie de Fallot. Des avantages autres que ceux décrits dans la présente Demande pourront encore apparaître à l’homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous donnés à titre illustratif. BREVE DESCRIPTION DES FIGURES représente le procédé de fabrication d’un implant de valvule selon l’invention. représente le patron utilisé pour découper le ruban biologique d’une longueur de 2,4m et d’une largeur de 5mm. représente les étapes conduisant au sertissage du fil de suture biologique. Le ruban biologique hydraté est torsadé à 5 révolutions/cm sur environ 2 cm de longueur à l’une de ses extrémités pour former un fil. Durant cette étape, la zone torsadée est délicatement massée jusqu’à son séchage complet pour répartir les torsades et obtenir un fil sec avec un diamètre homogène. Cette zone homogène est ensuite insérée dans le chas d’une aiguille chirurgical pour être sertie. représente un fil de suture biologique hydraté et prêt à l’emploi. représente les étapes nécessaires à l’obtention de la valvule en forme de poche. (A) La feuille de tissu constituée d’une MEC secrétée par des cellules en culture (hydratée) est placée sur une surface de découpe incluant un patron (ligne pleine de couleur noire) de forme ovale (longueur : 8 cm et largeur : 3 cm) pour être séchée. (B) Une fois sèche, la feuille de tissu est découpée en suivant le patron. (C) Le tissu est réhydratée à l’aide d’une solution d’eau stérile. (D-E) Une fois réhydratée, le morceau de feuille de tissu peut être détachée du support de découpe et pliée sur lui-même en suivant la ligne noire en pointillé pour former la valvule en forme de poche. représente la fermeture de la valvule en forme de poche réalisée à l’aide d’un surjet fait avec le fil de suture biologique de la . EXEMPLES EXEMPLE 1 : PROCEDE DE FABRICATION D’UN IMPLANT DE VALVULE COMPLETEMENT BIOLOGIQUE ET SES CARACTERISTIQUES Cet exemple décrit une approche pour fabriquer un implant de valvule complètement biologique. Dans cet exemple, la valvule résultante est composée d’un tissu non vivant (dévitalisé) et produit stérilement, ce qui exclut l'utilisation d'une étape de stérilisation terminale ou de fixation. Ainsi, toutes les étapes d'assemblage sont réalisées dans un environnement stérile, avec des liquides et des instruments stériles. Cette description n'est pas destinée à limiter la portée de cette invention en ce qui concerne la méthode de production de la valvule, les types cellulaires, la source cellulaire, l’âge cellulaire, la lignée cellulaire, les conditions de culture, la forme de la feuille ou du morceau de feuille, le nombre de feuilles ou de morceaux de feuille, le matériel de suture, la méthode de suture ou l’utilisation prévue de la valvule. L’homme du métier comprendra aisément que diverses modifications peuvent être apportées au procédé sans sortir du cadre et de l’esprit de l'invention. Dans cet exemple, les feuilles de tissu ont été obtenues en cultivant des fibroblastes de peau humaine normale dans des flacons T- 225 cm 2 . Pour chaque flacon, les cellules ont été ensemencées à une densité de 10 000 cellules/cm 2 et cultivées dans un milieu de culture composé de DMEM-F12, du sérum bovin (20%) et de l’ascorbate de sodium (500 mM). L’ensemble a été placé dans un incubateur avec une atmosphère à 37°C composée de 5% CO2 et 95% d'air. Le milieu de culture a été changé 3 fois par semaine. Après environ trois jours, des tiges composées d’acier inoxydable 304 en forme de L. Après une période de culture de 16 semaines, le flacon de culture a été coupé en deux parties dans sa longueur avec un fil chaud et la feuille a été sortie du flacon à l'aide du cadre intérieur (système d’ancrage qui sert aussi à la manipulation de la feuille) pour être utilisée dans la fabrication du fil biologique et de la valvule en forme de poche. Une étude mécanique a permis d’établir que cette feuille était capable de résister à une force de perforation d’environ 2300 grammes-force. Pour la fabrication du fil de suture biologique, une feuille de tissu humide a été posée sur une surface de découpe incluant un patron de forme double spirale permettant de faire un ruban d’une largeur de 5 mm et d’une longueur de 2,4 m ( ). La feuille de tissu a ensuite été séchée sur la surface de découpe durant au moins 2 heures sous une hotte à flux laminaire. Une fois séché, le ruban a alors été découpé manuellement à l’aide de ciseaux courbés chirurgicaux et ensuite réhydraté afin de le séparer de la surface de découpe. Une extrémité du ruban a alors été torsadé sur lui-même avec un moteur rotatif à une valeur de 5 révolutions par cm sur une longueur de 2 cm pour former un fil ( ). Cette zone torsadée a été massée doucement durant le torsadage et jusqu’au séchage complet de l’extrémité réduisant alors au maximum le diamètre du fil ( ). Cette zone sèche et fine a alors été introduite dans le chas d’une aiguille chirurgical et l’encastrement a été serti grâce à une sertisseuse pneumatique ( ). Le fil biologique serti a ensuite été enroulé sec autour d’un tube en silicone et placé dans un tube Eppendorf pour être préservé à -80°C jusqu’à son utilisation. Pour son utilisation, le fil de suture biologique a été réhydraté avec de l’eau durant au moins 10 minutes ( ). Pour l’obtention des particules contenant des cellules vivantes, les valvules natives de la valve pulmonaire du patient ont été réséquées chirurgicalement puis particularisées à l’aide d’une lame de scalpel. Les particules ont ensuite été aspirées dans une seringue qui a permis leur délivrance dans la valvule en forme de poche. Pour la formation de la valvule en forme de poche, une feuille de tissu humide a été posée sur une surface de découpe incluant un patron de forme ovale (longueur : 8 cm et largeur : 3 cm) et séchée sous une hotte à flux laminaire durant au moins 2 heures. La feuille séchée a ensuite été découpée suivant le patron à l’aide de ciseaux incurvés. Une fois découpé, le tissu a été réhydraté avec de l’eau durant au moins 30 minutes et les particules contenant des cellules vivantes ont été disposées sur la moitié de la surface du morceau de feuille formant la valvule en forme de poche à l’aide de la seringue. Enfin, le morceau de feuille a été replié sur lui-même le long du petit axe (3 cm) de la forme ovale pour donner une valvule de type poche avec les dimensions suivantes : hauteur de 4 cm et largeur de 3 cm. Un fil biologique a alors été utilisé pour fermer les bords libres de la valvule de type poche à l’aide d’une méthode de suture dite de « surjet » ( ). Afin de prévenir la fuite pulmonaire du patient créée suite à l’élargissement de la voie de sortie pulmonaire lors de la correction chirurgicale de la tétralogie de Fallot, la valvule serait finalement suturée environ 1 cm au-dessus de l’anneau pulmonaire à l’aide d’un fil ou ruban de suture biologique similaire à celui utilisé pour fermer la poche ou un fil ou ruban synthétique. Liste des références Apitz et al., Lancet, 374 : 1462-1471, 2009 Warnes et al., ACC Cardiosource Rev. J., 17 : 19-23, 2008 Singh et al., Congenit. Heart Dis., 13 : 935-943, 2018 Scavo et al., ASAIO J., 44 : M480-M485, 1998 Gundry et al., Pediatr. Card. 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Med., 357: 1451-1453, 2007 McAllister et al., Lancet, 373: 1440-1446, 2009 Demande internationale WO 20123/142879 Implant de valvule de type poche comprenant : un morceau d'une feuille de tissu constituée d’une matrice extracellulaire secrétée par des cellules en culture et éventuellement des cellules elles-mêmes, replié sur lui-même une fois de manière à former une zone de poche, dans lequel tout ou partie des bords opposés dudit morceau plié sont joints ensemble, attendu que lesdites cellules ne sont pas des cellules souches embryonnaires humaines, génétiquement modifiées ou non. Implant de valvule selon la revendication 1, où tout ou partie des bords opposés dudit morceau plié sont joints ensemble par suture avec du fil ou ruban biologique modifié, synthétique et/ou issu de la feuille de tissu. Implant de valvule selon la revendication 1 ou 2, ledit implant comprenant à l’intérieur de la zone de poche un échantillon biologique et/ou un principe actif, attendu que l’échantillon biologique ne sont pas des cellules souches embryonnaires humaines, génétiquement modifiées ou non. Implant de valvule selon la revendication 3, où l’échantillon biologique provient d’au moins une valvule d’une valve d’un sujet. Procédé de fabrication d’un implant de valvule selon la revendication 1, ledit procédé comprenant : a) la culture de la feuille de tissu ; b) la découpe d’un morceau de ladite feuille de tissu obtenue à l’étape a) ; c) le pliage dudit morceau de l’étape b), sur lui-même, une fois, de sorte à former une zone de poche ; d) la jonction de tout ou partie des bords opposés dudit morceau plié de l’étape c). Procédé selon la revendication 5 où la jonction de l’étape d) est réalisée par suture avec du fil ou ruban biologique modifié, synthétique et/ou issu de la feuille de tissu. Procédé selon la revendication 5 ou 6, ledit procédé comprenant en outre une étape d’) de remplissage de la zone de poche avec un échantillon biologique préalablement prélevé et/ou un principe actif, avant la jonction complète de l’étape d). Procédé selon la revendication 7, où l’échantillon de tissu biologique préalablement prélevé provient d’au moins une valvule d’une valve d’un sujet.