Brevet FR3131632A1 — publié le 20230707

Une carte d'analyse (1) pour l'analyse d'un échantillon biologique au moyen d'un instrument de diagnostic in vitro, la carte d'analyse (1) comprenant une pluralité de puits (2) formés dans une plaque (3), chaque puits (2) contenant au moins un réactif (4) , la carte d’analyse (1) comprenant un canal d'amenée (5) d’un échantillon liquide au puits (2), caractérisée en ce que chaque puits (2) forme dans ladite plaque (3) un espace interne défini par une surface latérale, ladite surface latérale comprenant au moins une paroi, et en ce que chaque puits (2) présente le au moins un réactif (4) déposé uniquement sur sa surface latérale. Figure pour l'abrégé : figure 1 Carte d’analyse d'un échantillon biologique, procédé de fabrication et de contrôle qualité La présente invention se rapporte au domaine de l'analyse d'échantillons biologiques, et plus précisément concerne une carte d’analyse pour l'analyse d'un échantillon biologique, en particulier pour la détection d’endotoxines, au moyen d'un instrument de diagnostic in vitro et les procédés de fabrication de la carte d’analyse et de contrôle qualité d’une plaque d’une carte d’analyse. Arrière-plan technologique L’analyse d’échantillon biologique, comme par exemple les tests de détection d’endotoxines, repose sur une ou plusieurs réactions entre l’échantillon biologique et un ou une pluralité de réactifs. Il existe des systèmes et procédés microfluidiques qui permettent de réaliser ces analyses d’échantillon biologique. Les réactifs sont déposés dans des puits et l’échantillon biologique est par exemple introduit via un canal d’amenée. Cela nécessite la préparation de multiples dilutions standards et contrôles internes. Dans le cadre de la détection d’endotoxines, par exemple, les tests sont exigeants et requièrent beaucoup d’étapes de manipulation par l’opérateur. Ces étapes manuelles de préparation sont longues et peuvent entraîner des résultats variables voire invalides. En outre, il n’existe pas de solution pour contrôler la préparation des tests et ainsi déterminer rapidement si une erreur a été commise. Ainsi, un éventuel problème ne pourra être détecté qu'à la fin d’une durée de mesure, préalablement choisie afin d'être suffisamment longue pour permettre l'achèvement complet des diverses réactions susceptibles de se produire avec différentes dynamiques, lorsqu'il sera tenté d'exploiter des résultats erronés. Il existe des microplaques tel que le système « GOPLATE™ » comprenant 96 puits préremplis avec des quantités standards requises de réactifs et ayant été soumis à des contrôles de concentrations. Ce dispositif permet de réduire de plus de 50 % le temps de manipulation par rapport aux tests traditionnels d'endotoxines sur microplaques. Néanmoins, la mise en œuvre d’analyse d’échantillon biologique via ce dispositif nécessite de nombreux accessoires annexes et impose encore de multiples étapes manuelles. Il existe également des microplaques intégrées à des systèmes consommables tel que le « FilmArray® » qui exigent peu d’opérations manuelles. Ces microplaques préremplies permettent aussi de limiter l’intervention humaine dans le processus d’analyse d’échantillon biologique et donc de réduire les risques d’erreurs humaines. Cependant, les microplaques préremplies de l'art antérieur ne sont pas adaptées à certaines réactions nécessitant l’usage de différents réactifs qui ne doivent pas réagir entre eux et donc se mélanger avant l’introduction d’un échantillon biologique dans les puits de la microplaque. En outre, dans l’état de la technique antérieur, un réactif est déposé le plus souvent au fond des puits des microplaques. Cela impose une multiplicité d’étapes comprenant, entre autres, la dépose de réactifs sur un film collé à l’une des faces de la microplaque faisant office de fond pour les puits, l’application de films adhésifs double-face sur chacune des faces de la microplaque puis l’insertion de la plaque entre deux films d’une poche d’analyse. Ces différentes couches de films plastiques contribuent à augmenter le coût du consommable, et complexifient la fabrication de celui-ci. Ainsi, il n’existe pas de solution permettant de déposer des gouttes ( Présentation de l'invention L'invention vise donc à permettre d’analyser un échantillon biologique, en particulier pour la détection d’endotoxines, de façon plus fiable, rapide et moins onéreuse. A cet effet, l'invention propose une carte d’analyse pour l'analyse d'un échantillon biologique au moyen d'un instrument de diagnostic in vitro, la carte d’analyse comprenant une pluralité de puits formés dans une plaque, des puits contenant au moins un réactif, la carte d’analyse comprenant un canal d’amenée d’un échantillon liquide au puits, caractérisée en ce que chaque puits forme dans ladite plaque un espace interne défini par une surface latérale, ladite surface latérale comprenant au moins une paroi, et en ce que le réactif d'un puits est déposé et séché uniquement sur la surface latérale dudit puits. L'invention est avantageusement complétée par les différentes caractéristiques suivantes prises seules ou selon leurs différentes combinaisons possibles : Chaque puits traverse la plaque d’une face à une autre face de ladite plaque. Chaque puits présente plusieurs réactifs différents déposés, préférentiellement uniquement, sur sa surface latérale, lesdits réactifs différents comprenant un premier réactif et un deuxième réactif. Le premier réactif est susceptible d’être activé par le deuxième réactif puis de réagir avec l’échantillon liquide. Chaque puits comprend une pluralité de lobes et une pluralité de jonctions connectant les lobes. Chaque puits présente plusieurs réactifs différents déposés uniquement sur sa surface latérale, lesdits réactifs différents comprenant un premier réactif et un deuxième réactif, et dans laquelle un puits contient au moins le premier réactif déposé sur une paroi d’un premier lobe dudit puits et le deuxième réactif déposé sur une paroi d’un deuxième lobe dudit puits. Les lobes d’un puits ont une forme elliptique et les jonctions d’un puits sont rectilignes selon une direction de jonction. Une jonction connecte seulement deux lobes d'un puits et l’ensemble des lobes et des jonctions d’un puits forme une chaîne ouverte. La carte d’analyse est associée à une orientation d'analyse imposée à la carte d’analyse lors de l'analyse de l'échantillon biologique au moyen de l'instrument de diagnostic in vitro, cette orientation d'analyse étant caractérisée en ce que les faces de la plaque s’étendent dans la direction déterminée, préférentiellement une direction verticale, et dans laquelle un premier lobe d'un puits est connecté à un deuxième lobe dudit puits par une jonction selon une direction de jonction et l’angle entre la direction déterminée et ladite direction de jonction est de préférence supérieur à 10°. Le diamètre des lobes des puits est supérieur à 0,1 mm, la largeur des jonctions est inférieure à 1 mm et la longueur des jonctions est supérieure à 0,05 mm. Chaque face de la plaque est recouverte d'un film transparent au moins sur une face destinée à permettre l’analyse de la carte d’analyse. Les réactifs d'analyse sont aptes à causer une réaction de luminescence en présence d'endotoxines. L'invention concerne également un procédé de fabrication d'une carte d’analyse comprenant les étapes suivantes : a) fourniture d'une plaque pourvue d'une pluralité de puits, b) disposition de la plaque dans une orientation d'analyse dans laquelle les faces de la plaque s’étendent dans la direction déterminée, c) dépose d'au moins une goutte de liquide de réactif en contact avec surface latérale une paroi de la surface latérale du puits, d) séchage de la au moins une goutte de de réactif et obtention de réactif déposé sur la paroi de la surface latérale du puits. Ce procédé de fabrication est avantageusement complété par les différentes caractéristiques suivantes prises seules ou selon leurs différentes combinaisons possibles : Le procédé de fabrication comprend une étape e) d’insertion de la plaque entre deux films, et adhésion des films sur la plaque. L'étape c) de dépose de la goutte de réactif comprend des étapes de : c1) mise en place d'une aiguille avec une extrémité de l’aiguille dans l'espace interne d'un puits, c2) formation d'une goutte à l'extrémité de l'aiguille, jusqu'à contact avec une paroi de la surface latérale, c3) retrait de l'aiguille. L'invention concerne également un procédé de contrôle qualité d’une plaque pourvue d'une pluralité de puits, chaque puits formant dans ladite plaque un espace interne défini par une surface latérale, des puits présentant une pluralité de dépôts de réactifs liquides déposés séparément sur sa surface latérale, comprenant des étapes de : Q1) acquisition d’une image de ladite plaque, Q2) vérification d’absence de liquide entre des dépôts de réactif liquide. Ce procédé de contrôle qualité est avantageusement complété par les différentes caractéristiques suivantes prises seules ou selon leurs différentes combinaisons possibles : Le procédé de contrôle qualité comprend une étape Q0) d’acquisition d’une image de ladite plaque vide, et l’étape Q2) comprend la comparaison de pixels de l’image acquise à l’étape Q1) et de pixels de l’image acquise à l’étape Q0). L’image de la plaque est une image ombroscopique. Le procédé de contrôle qualité comprend une étape a1) de reconnaissance par un algorithme de détection des puits de la plaque et identification de régions d’intérêt pour chaque puits de la plaque pour lesquelles est vérifiée l'absence de liquide. Chaque puits comprend une pluralité de lobes et une pluralité de jonctions connectant les lobes, les lobes étant destinés à recevoir les dépôts de réactifs liquides, et les régions d'intérêt comprennent les jonctions, l'absence de liquide dans lesdites jonctions étant vérifiée. Présentation des figures D'autres caractéristiques, buts et avantages de l'invention ressortiront de la description qui suit, qui est purement illustrative et non limitative, et qui doit être lue en regard des dessins annexés sur lesquels : la montre un exemple de carte d'analyse ; la illustre schématiquement un puits de la carte d'analyse selon un mode de réalisation possible de l'invention ; la illustre schématiquement un puits de la carte d'analyse comportant trois lobes selon un mode de réalisation possible de l'invention ; la montre schématiquement une carte d’analyse disposée dans une orientation d’analyse, la carte d’analyse comportant des puits de trois lobes selon un mode de réalisation possible de l'invention ; la est un diagramme montrant des étapes du procédé de fabrication de la carte d’analyse selon un mode de réalisation possible de l'invention ; la illustre deux aiguilles positionnées jusque dans l’espace interne d’un puits ; la illustre la formation de deux gouttes de réactifs à l'extrémité des aiguilles ; la illustre le dépôt de deux gouttes de réactif sur la surface latérale des lobes du même puits réactionnel ; la illustre deux aiguilles retirées hors de l’espace interne d’un puits après dépôt de deux gouttes de réactif sur la surface latérale des lobes du même puits réactionnel ; la est un diagramme montrant des étapes du procédé de contrôle qualité d’une plaque pourvue d'une pluralité de puits selon un mode de réalisation possible de l'invention, la est un schéma du système de contrôle, la est une représentation de la plaque de la carte d’analyse, après dépôt de gouttes de réactif, la est une image acquise à l’étape Q0 du procédé de contrôle selon l’invention, la est une image acquise à l’étape Q1 du procédé de contrôle selon l’invention, la est une image représentant l’Identification algorithmique de régions d’intérêt des lobes pour chaque puit, où sera vérifié la présence de liquide, la est une image représentant l’Identification algorithmique de régions d’intérêt des jonctions pour chaque puit, où sera vérifié la présence de liquide dans ces jonctions, la représente l’extraction des régions d’intérêt des lobes et la vérification algorithmique de la présence de liquide, la représente l’extraction des régions d’intérêt des jonctions et la vérification algorithmique de la présence de liquide. Carte d’analyse (1) pour l'analyse d'un échantillon biologique au moyen d'un instrument de diagnostic in vitro, la carte d’analyse (1) comprenant une pluralité de puits (2) formés dans une plaque (3), des puits (2) contenant au moins un réactif (4), la carte d’analyse (1) comprenant un canal d’amenée (5) d’un échantillon liquide au puits (2), caractérisée en ce que chaque puits (2) forme dans ladite plaque (3) un espace interne (6) défini par une surface latérale (7), ladite surface latérale (7) comprenant au moins une paroi (8), et en ce que le réactif (4) d'un puits est déposé et séché uniquement sur la surface latérale (7) dudit puits (2). Carte d’analyse (1) selon la revendication 1, dans laquelle chaque puits (2) traverse la plaque (3) d’une face (3a) à une autre face (3b) de ladite plaque (3). Carte d’analyse (1) selon l’une quelconque des revendications 1 ou 2, dans laquelle chaque puits (2) présente plusieurs réactifs (4) différents déposés, préférentiellement uniquement, sur sa surface latérale (7), lesdits réactifs (4) différents comprenant un premier réactif (4a) et un deuxième réactif (4b). Carte d’analyse (1) selon la revendication 3, dans laquelle le deuxième réactif (4b) est un agent d’activation du premier réactif (4a) et le premier réactif (4a) activé est apte à réagir avec l’échantillon liquide lorsque le premier réactif (4a) activé est mis en contact avec l’échantillon liquide. Carte d’analyse (1) selon l’une des revendications précédentes, dans laquelle chaque puits (2) comprend une pluralité de lobes (9) et une pluralité de jonctions (10) connectant les lobes (9). Carte d’analyse (1) la revendication 5, dans laquelle chaque puits (2) présente plusieurs réactifs (4) différents déposés uniquement sur sa surface latérale (7), lesdits réactifs (4) différents comprenant un premier réactif (4a) et un deuxième réactif (4b), et dans laquelle un puits (2) contient au moins le premier réactif (4a) déposé sur une paroi (8a) d’un premier lobe (9a) dudit puits (2) et le deuxième réactif (4b) déposé sur une paroi (8b) d’un deuxième lobe (9b) dudit puits (2). Carte d’analyse (1) selon l'une des revendications 5 à 6, dans laquelle les lobes (9) d’un puits (2) ont une forme elliptique et les jonctions (10) d’un puits (2) sont rectilignes selon une direction de jonction. Carte d’analyse (1) selon l'une des revendications 5 à 7, dans laquelle une jonction (10) connecte seulement deux lobes (9) d'un puits (2) et l’ensemble des lobes (9) et des jonctions (10) d’un puits (2) forme une chaîne ouverte. Carte d’analyse (1) selon l'une quelconque des revendications 5 à 8, dans laquelle la carte d’analyse (1) est associée à une orientation d'analyse imposée à la carte d’analyse (1) lors de l'analyse de l'échantillon biologique au moyen de l'instrument de diagnostic in vitro, cette orientation d'analyse étant caractérisée en ce que les faces (3a, 3b) de la plaque (3) s’étendent dans la direction déterminée, préférentiellement une direction verticale, et dans laquelle un premier lobe (9a) d'un puits (2) est connecté à un deuxième lobe (9b) dudit puits (2) par une jonction (10) selon une direction de jonction et l’angle entre la direction déterminée et ladite direction de jonction est de préférence supérieur à 10°. Carte d’analyse (1) selon l'une quelconque des revendications 5 à 9, dans laquelle le diamètre des lobes (9) des puits (2) est supérieur à 0,1 mm, la largeur des jonctions (10) est inférieure à 1 mm et la longueur des jonctions (10) est supérieure à 0,05 mm. Carte d’analyse (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle chaque face de la plaque (3) est recouverte d'un film transparent au moins sur une face destinée à permettre l’analyse de la carte d’analyse. Carte d’analyse (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les réactifs (4) d'analyse sont aptes à causer une réaction de luminescence en présence d'endotoxines. Procédé de fabrication d'une carte d’analyse (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, comprenant les étapes suivantes : a) fourniture d'une plaque (3) pourvue d'une pluralité de puits (2), b) disposition de la plaque (3) dans une orientation d'analyse dans laquelle les faces (3a, 3b) de la plaque (3) s’étendent dans la direction déterminée, c) dépose d'au moins une goutte de liquide de réactif (4) en contact avec une paroi (8) de la surface latérale (7) du puits (2), d) séchage de la au moins une goutte de de réactif (4) et obtention de réactif (4) déposé sur la paroi (8) de la surface latérale (7) du puits (2). Procédé selon la revendication précédente, comprenant une étape e) d’insertion de la plaque (3) entre deux films, et adhésion des films sur la plaque (3). Procédé selon l’une des revendications 13 et 14, dans lequel l'étape c) de dépose de la goutte de réactif (4) comprend des étapes de : c1) mise en place d'une aiguille avec une extrémité de l’aiguille (11a) dans l'espace interne (6) d'un puits (2), c2) formation d'une goutte à l'extrémité de l'aiguille (11a), jusqu'à contact avec une paroi (8) de la surface latérale (7), c3) retrait de l'aiguille (11). Procédé de contrôle qualité d’une plaque (3) pourvue d'une pluralité de puits (2), chaque puits (2) formant dans ladite plaque (3) un espace interne (6) défini par une surface latérale (7), des puits (2) présentant une pluralité de dépôts de réactifs (4) liquides déposés séparément sur sa surface latérale (7), comprenant des étapes de : Q1) acquisition d’une image de ladite plaque (3), Q2) vérification d’absence de liquide entre des dépôts de réactif (4) liquide. Procédé de contrôle qualité selon la revendication précédente, comprenant une étape Q0) d’acquisition d’une image de ladite plaque (3) vide, et l’étape Q2) comprend la comparaison de pixels de l’image acquise à l’étape Q1) et de pixels de l’image acquise à l’étape Q0). Procédé de contrôle qualité selon l'une quelconque des revendications 16 ou 17, dans lequel l’image de la plaque est une image ombroscopique. Procédé de contrôle qualité selon l’une quelconque des revendications 16 à 18, comprenant une étape a1) de reconnaissance par un algorithme de détection des puits (2) de la plaque (3) et identification de régions d’intérêt pour chaque puits (2) de la plaque (3) pour lesquelles est vérifiée l'absence de liquide. Procédé de contrôle qualité selon la revendication 19, dans lequel chaque puits (2) comprend une pluralité de lobes (9) et une pluralité de jonctions (10) connectant les lobes (9), les lobes étant destinés à recevoir les dépôts de réactifs (4) liquides, et les régions d'intérêt comprennent les jonctions (10), l'absence de liquide dans lesdites jonctions (10) étant vérifiée.